BR112021007626A2 - Receptores antigênicos quiméricos específicos pa-ra receptor acoplado à proteína g receptor de classe c, grupo 5, membro d (gprc5d) - Google Patents
Receptores antigênicos quiméricos específicos pa-ra receptor acoplado à proteína g receptor de classe c, grupo 5, membro d (gprc5d) Download PDFInfo
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Abstract
receptores antigênicos quiméricos específicos para receptor acoplado à proteína g receptor de classe c, grupo 5, membro d (gprc5d). a presente invenção refere-se a receptores antigênicos quiméricos (cars), os quais contêm porções de anticorpo específicas para o receptor acoplado à proteína g de classe c, grupo 5, membro d (gprc5d) e polinucleotídeos que codificam cars específicos para gprc5d. a invenção refere-se ainda a células geneticamente manipuladas as quais contêm tais receptores de ligação a gprc5d e usos das mesmas em terapia celular adotiva.
Description
Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "RECEP- TORES ANTIGÊNICOS QUIMÉRICOS ESPECÍFICOS PARA RECEP- TOR ACOPLADO À PROTEÍNA G RECEPTOR DE CLASSE C, GRU- PO 5, MEMBRO D (GPRC5D)". Referência Cruzada a Pedidos Relacionados
[0001] O presente pedido reivindica prioridade aos Pedidos Provi- sórios Norte-Americanos: 62/754.576, depositado em 1 de novembro de 2018, intitulado "CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS SPECIFIC FOR G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR CLASS C GROUP 5 MEM- BER D (GPRC5D)"; 62/774.159, depositado em 30 de novembro de 2018, intitulado "CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS SPECIFIC FOR G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR CLASS C GROUP 5 MEMBER D (GPRCB5D)"; 62/819.422, depositado em 15 de março de 2019, intitulado "CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS SPECIFIC FOR G PROTEIN- COUPLED RECEPTOR CLASS C GROUP 5 MEMBER D (GPRCB5D)"; 62/904.197, depositado em 23 de setembro de 2019, intitulado "CHI- MERIC ANTIGEN RECEPTORS SPECIFIC FOR G PROTEIN- COUPLED RECEPTOR CLASS C GROUP 5 MEMBER D (GPRCB5D)"; e 62/904.187, depositado em 23 de setembro de 2019, intitulado "BICIS-
TRONIC POLYNUCLEOTIDE CONSTRUCTS ENCODING CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS", cujos conteúdos são incorporados a título de referência na íntegra para todas as finalidades. Incorporação a Título de Referência de Listagem de Sequências
[0002] O presente pedido está sendo depositado juntamente com uma Listagem de Sequências em formato eletrônico. A Listagem de Se- quências é fornecida como um arquivo intitulado 735042013740 Se- aqList.TXT, criado em 31 de outubro de 2019, o qual tem 294 kilobytes de tamanho. As informações no formato eletrônico da Listagem de Se- quências são incorporadas a título de referência na íntegra.
Campo
[0003] A presente invenção refere-se, em alguns aspectos, a re- ceptores antigênicos quiméricos (Chimeric Antigen Receptors, CARs), os quais contêm porções de anticorpo específicas para o Receptor Acoplado à Proteína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D) e polinucleotídeos que codificam CARs específicos para GPRC5D. À invenção refere-se ainda a células geneticamente modificadas que contêm tais receptores de ligação a GPRC5D e seus usos em terapia celular adotiva. Antecedentes
[0004] O Receptor Acoplado à Proteína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D) é um receptor acoplado à proteína G cuja fun- ção específica ainda não foi determinada. A expressão de GPRC5D é elevada em amostras de medula óssea de pacientes com mieloma múltiplo (MM) comparado com a expressão mínima de GPRC5D em amostras de medula óssea de pacientes com outras doenças hemato- lógicas. Com base em sua expressão, a proteína GPRC5D pode ser um marcador de tumores MM e um alvo terapêutico. Vários receptores antigênicos quiméricos (CARs) de ligação a GPRC5D e células que expressam tais CARs estão disponíveis. No entanto, permanece uma necessidade de CARs de ligação a GPRC5D aprimorados e células para terapia-alvo que expressam GPRC5D-CAR manipuladas, tal co- mo para uso em terapia celular adotiva. São fornecidas no presente documento modalidades que atendem a estas necessidades. Sumário
[0005] São fornecidos no presente documento receptores antigê- nicos quiméricos que contêm: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente ao receptor acoplado à prote- ína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região vari-
ável de cadeia pesada (Vs) que contém uma sequência de aminoáci- dos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região Vx apresentada em qualquer uma de SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NO: 22, 24,2 6, 28, 30, 32 ou 34; (2) um espaçador de pelo menos 125 aminoácidos de comprimento; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[0006] Também são fornecidos receptores antigênicos quiméricos que contêm: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região variável de cadeia pe- sada (Vr) que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas den- tro da sequência de aminoácidos da região Vx selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24,2 6, 28, 30, 32 ou 34; (2) um espaçador de pelo menos 125 aminoácidos de comprimento; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de si- nalização intracelular.
[0007] Também são fornecidos receptores antigênicos quiméricos que contêm: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região variável de cadeia pe- sada (Vx) que contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1) que contém a sequência de aminoáci- dos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 75, 78, 80, 82, 90, 93, 95, 97, 105, 108, 110, 112, 120, 123, 125, 127, 135, 138, 140, 142, 135, 152, 162, 165, 167 ou 169; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 76, 79, 81, 83, 91, 94, 96, 98, 106, 109, 111, 113, 121, 124, 126, 128, 136, 139, 141, 143, 150, 153, 154, 155, 163, 166, 169 ou 170; e (c) uma região determinante de complementaridade de ca- deia pesada 3 (CDR-H3) que contém a sequência de aminoácidos se- lecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 77, 84, 92, 99, 107, 114, 133, 129, 137, 144, 151, 156, 164 ou 171; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que contém a sequên- cia de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 85, 88, 100, 103, 115, 118, 130, 133, 145, 148, 157, 160, 172 ou 174; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 86, 89, 101, 104, 116, 119, 131, 134, 146, 149, 158 ou 161; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que contém a sequên- cia de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 87, 102, 117, 132, 147, 159, 173, 175 ou 297; (2) um espaçador de pelo menos 125 aminoácidos de comprimento; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[0008] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno extracelular do receptor antigênico quimérico contém: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que contém: uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região Vx apresen- tada em qualquer uma de SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32 ou 34.
[0009] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o espaçador tem um comprimento a partir de ou a partir de cerca de 125 a 300 aminoácidos de comprimento, 125 a 250 aminoácidos de comprimento, 125 a 230 aminoácidos de comprimento, 125 a 200 ami- noácidos de comprimento, 125 a 180 aminoácidos de comprimento, 125 a 150 aminoácidos de comprimento, 150 a 300 aminoácidos de comprimento, 150 a 250 aminoácidos de comprimento, 150 a 230 ami- noácidos de comprimento, 150 a 200 aminoácidos de comprimento, 150 a 180 aminoácidos de comprimento, 180 a 300 aminoácidos de comprimento, 180 a 250 aminoácidos de comprimento, 180 a 230 ami- noácidos de comprimento, 180 a 200 aminoácidos de comprimento, 200 a 300 aminoácidos de comprimento, 200 a 250 aminoácidos de comprimento, 200 a 230 aminoácidos de comprimento, 230 a 300 ami- noácidos de comprimento, 230 a 250 aminoácidos de comprimento ou 250 a 300 aminoácidos de comprimento. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o espaçador tem pelo menos ou pe- lo menos cerca de ou tem ou tem cerca de 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 ou 229 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimento entre qual- quer um dos anteriores.
[0010] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas,
o espaçador é derivado de uma imunoglobulina. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, o espaçador contém uma se- quência de uma região de dobradiça, uma região CH2 e CH3. Em al- gumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, uma ou mais da dobradiça, CH2 e CH3 são derivadas, no todo ou em parte, de IgG4 ou IgG2, opcionalmente I9gG4 humana ou IgG2 humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a dobradiça, CH2 e CH3 são derivadas de IgG4. Em algumas de qualquer uma das modalida- des fornecidas, uma ou mais da dobradiça, CH2 e CH3 são quiméricas e contêm uma sequência derivada de IgG4 e IgG2. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o espaçador contém uma dobradiça quimérica de I9gG4/2 ou uma IgG4 modificada que contém pelo menos uma substituição de aminoácido comparado com a Ig9G4 humana, uma CH2 quimérica de I9G2/4 e uma região CH3 de IgG4.
[0011] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o espaçador é ou contém (i) a sequência apresentada em SEQ ID NO: 17; (li) uma variante funcional de SEQ ID NO: 17 que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 17; ou (iii) uma porção contígua de (i) ou (ii) que tem pelo menos 125 aminoácidos de comprimento. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o espaçador é ou contém a sequên- cia apresentada em SEQ ID NO: 17. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o espaçador é ou contém uma sequência codificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 48 (também apresentada em SEQ ID NO: 74).
[0012] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vx e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 22, respectivamente, ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID
NOS: 21 e 22, respectivamente; as regiões Vx e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente; as regi- Ões Vr e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NOS: 25 e 26, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOS: 25 e 26, respectivamente; as regiões Vu e as regiões V. contêm a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 28, res- pectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente; as regiões Vn e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 29 e 30, respectivamente, ou uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOS: 29 e 30, res- pectivamente; as regiões Vx e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 32, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOS: 31 e 32, respectivamente; ou as regiões Vu e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 33 e 34, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOS: 33 e 34, respecti- vamente.
[0013] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 80, 81 e 77, respectiva- mente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente; a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR- H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 82, 83 e 84, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 88, 89 e 87, respectivamente; a região Vu contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 95, 96, 92, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente; a região Vu contém uma CDR- H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 97, 98 e 99, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 103, 104 e 102, respectivamente; a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NOS: 110, 111 e 107, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente; a região Vu contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 112, 113 e 114, respectiva- mente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 118, 119 e 117, respectivamente; a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR- H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; a região Vu contém uma CDR- H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de
SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoá- cidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente; a região Vn contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 141 e 137, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectiva- mente; a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que con- têm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 142, 143 e 144, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR- L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 148, 149 e 147, respectivamente; a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente; a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 142, 155 e 156, respectivamente, e a região V. con- tém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 160, 161 e 159, respectivamente; a re- gião Vu contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 167, 168 e 164, respectiva- mente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 172, 86, 173, respectivamente; a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR- H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 169, 170 e 171, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 174, 89 e 175, respectivamente; ou a região Vi contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 169, 170 e 171, respectivamente, e a região V. con- tém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 174, 89 e 297, respectivamente.
[0014] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vx e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 22, respectivamente; as regiões Vm e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente; as regiões Vr e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: e 26, respectivamente; as regiões Vx e as regiões V. contêm a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 28, res- pectivamente; as regiões Vu e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 29 e 30, respectivamente; as regiões Vx e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 32, respectivamente; ou as regi- Ões Vn e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NOS: 33 e 34, respectivamente.
[0015] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vx e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 22, respectivamente, ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOS: 21 e 22, respectivamente; as regiões Vx e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente; as regi- Ões Vn e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %,
95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente; ou as regiões Vx e as regiões V. contêm a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 32, res- pectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOS: 31 e 32, respectivamente.
[0016] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 80, 81 e 77, respectiva- mente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente; a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR- H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 82, 83 e 84, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 88, 89 e 87, respectivamente; a região Vu contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 95, 96, 92, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente; a região Vu contém uma CDR- H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 97, 98 e 99, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 103, 104 e 102, respectivamente; a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; a região Vu contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectiva-
mente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente; a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR- H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente; ou a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 142, 155 e 156, respectivamente, e a região V. con- tém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 160, 161 e 159, respectivamente.
[0017] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vx e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 22, respectivamente; as regiões Vm e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente; as regiões Vr e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente; ou as regiões V" e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 32, respectivamente.
[0018] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno extracelular tem reatividade cruzada com ou se liga à proteína GPRC5D de camundongo e/ou tem reativi- dade cruzada com ou se liga à proteína GPRC5D de cynomolgus. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno extracelular não tem reatividade cruzada com ou não se liga à proteína GPRC5D de camundongo ou GPRC5D de cynomolgus.
[0019] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vx e as regiões V. contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente, ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade com SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente.
[0020] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o receptor antigênico quimérico contém uma cadeia pesada variável (VH) que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vx apresentada em SEQ ID NO: 27; e uma cadeia leve variável (V.) que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 28. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vu contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente, e a região V. con- tém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vn contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a se-
quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectiva- mente. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vx e as regiões V. contêm a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente.
[0021] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno extracelular é um fragmento de anti- corpo com uma única cadeia. Em algumas de qualquer uma das mo- dalidades fornecidas, o fragmento é ou contém um fragmento variável com uma única cadeia (scFv).
[0022] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vu e as regiões V. são unidas através de um ligante flexi- vel. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as re- giões Vu e as regiões V. são unidas através de um ligante que contém a sequência de aminoácidos GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 52). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as re- giões Vn e as regiões V. são unidas através de um ligante flexível. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vn e as regiões V, são unidas através de um ligante que contém a se- quência de aminoácidos GGGGSCGGGGSCGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 320).
[0023] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vu é amino-terminal à região V.. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11 ou 13 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a se- quência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11 ou 13. Em algumas de qualquer uma das mo- dalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno contém a se-
quência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11 ou 13. Em algumas de qualquer uma das mo- dalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno contém a se- quência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 1, 3, 7 ou 11 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos sele- cionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 1, 3,7 ou 11. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 1, 3, 7 ou 11. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a an- tígeno contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identi- dade de sequência com a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7. Em algumas de qualquer uma das modalidades forne- cidas, o domínio de ligação a antígeno contém a sequência de amino- ácidos apresentada em SEQ ID NO: 7.
[0024] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx é carbóxi-terminal à região Vi. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a se- quência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de
SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 2, 4,8 ou 12 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 2, 4, 8 ou 12. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno contém a sequência de aminoácidos seleciona- da a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 2, 4, 8 ou 12. Em algu- mas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de liga- ção a antígeno contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresenta- da em SEQ ID NO: 8. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 264.
[0025] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização intracelular contém um domínio de sinalização citoplásmico intracelular. Em algumas de qualquer uma das modalida- des fornecidas, o domínio de sinalização intracelular é capaz de indu- zir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do receptor de células T (TOR) e/ou contém um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM). Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, o domínio de sinalização intra- celular é ou contém um domínio de sinalização citoplásmico de uma cadeia zeta de CD3 (CD3C) ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma.
[0026] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de sinalização intracelular é humano ou é derivado de uma proteína humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades for- necidas, o domínio de sinalização intracelular é ou contém a sequên- cia apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoáci- dos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20.
[0027] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização intracelular contém ainda uma região de sinali- zação coestimuladora. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora contém um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T ou a porção de sinalização da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimula- dora contém um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou a porção de sinalização das mesmas. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização co- estimuladora contém um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora é humana ou é derivada de uma proteína humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização co- estimuladora contém um domínio de sinalização intracelular de CD28, tal como um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana.
[0028] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora é ou contém a sequência apre- sentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %,
98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresen- tada em SEQ ID NO: 46. Em algumas de qualquer uma das modalida- des fornecidas, a região de sinalização coestimuladora contém um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimula- dora é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de se- quência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.
[0029] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora está entre o domínio trans- membrana e a região de sinalização intracelular. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, o domínio transmembrana é ou contém um domínio transmembrana derivado de CD4, CD28 ou CD8. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio transmembrana é ou contém um domínio transmembrana derivado de CD28. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio transmembrana é humano ou é derivado de uma proteína humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio transmembrana é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo me- nos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18.
[0030] Também são fornecidos receptores antigênicos quiméricos que contêm: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente ao receptor acoplado à proteína G (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que contém uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região Vu apresentada em SEQ ID NO: 27; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NO: 28; (2) um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana derivado de CD28 humana; e (4) uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização citoplásmico de uma cadeia zeta de CD3 (CD36) e um domínio de sinalização intracelular de uma molécula co- estimuladora de células T.
[0031] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vu contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vx apresentada em SEQ ID NO: 27; e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 conti- das dentro da sequência de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 28; ou a região Vu contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR- H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; a região Vu contém uma CDR- H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoá- cidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente; a região Vn contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectiva- mente; ou a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR- L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente. Em algumas de qualquer uma das modalida- des fornecidas, a região Vi contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vn apresenta- da em SEQ ID NO: 27; e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 28; ou a região Vx contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.
[0032] Também são fornecidos receptores antigênicos quiméricos que contêm: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente ao receptor acoplado à proteína G (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: uma região variável pesada (Vx) que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vn apresentada em SEQ ID NO: 27; e uma região variável leve (V.) que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequên- cia de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 28; ou uma região Vx que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que con- têm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; uma região Vx que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente; uma região Vx que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que con- têm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; ou uma região Vx que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; (2) um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio trans- membrana derivado de CD28 humana; e (4) uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização citoplásmico de uma cadeia zeta de CD3 humana (CD36) e um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana ou 4-1BB humana.
[0033] Também são fornecidos receptores antigênicos quiméricos que contêm: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente ao receptor acoplado à proteína G (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: uma região variável pesada (Vx) que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vn apresentada em SEQ ID NO: 27; e uma região variável leve (V.) que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequên- cia de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 28; ou uma região Vx que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que con- têm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; (2) um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana derivado de CD28 humana; e (4) uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização citoplásmico de uma cadeia zeta de CD3 hu- mana (CD3C7) e um domínio de sinalização intracelular de uma CD28 humana. Também são fornecidos receptores antigênicos quiméricos que contêm: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente ao receptor acoplado à proteína G (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: uma região variável pesada (Vx) que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vn apresentada em SEQ ID NO: 27; e uma região variável leve (V.) que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequên- cia de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 28; ou uma região Vx que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que con- têm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; (2) um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana derivado de CD28 humana; e (4) uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização citoplásmico de uma cadeia zeta de CD3 hu- mana (CD37) e um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB hu- mana.
[0034] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno extracelular contém a Vu apresentada em SEQ ID NO: 27 e a região V. apresentada em SEQ ID NO: 28; e/ou, em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno extracelular contém um scFv apresen- tado em SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO: 8. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno ex- tracelular contém a Vu apresentada em SEQ ID NO: 27 e a região Vi.
apresentada em SEQ ID NO: 28; e o domínio de ligação a antígeno extracelular contém um scFv apresentado em SEQ ID NO: 7. Em al- gumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno extracelular contém a Vu apresentada em SEQ ID NO: 27 e a região V. apresentada em SEQ ID NO: 28; e o domínio de ligação a antígeno extracelular contém um scFv apresentado em SEQ ID NO: 8.
[0035] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio transmembrana é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo me- nos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio transmembrana é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18.
[0036] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização intracelular contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20 e a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apre- sentada em SEQ ID NO: 46. Em algumas de qualquer uma das moda- lidades fornecidas, a região de sinalização intracelular é ou contém as sequências apresentadas em SEQ ID NO: 20 e SEQ ID NO: 46. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização intracelular contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identi- dade de sequência com SEQ ID NO: 20 e a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização intracelular é ou contém as sequências apre- sentadas em SEQ ID NO: 20 e SEQ ID NO: 19.
[0037] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o receptor antigênico quimérico contém, a partir de seu N para C tér- mino, na ordem: o domínio de ligação a antígeno, o espaçador, o do- mínio transmembrana e a região de sinalização intracelular.
[0038] Também são fornecidos polinucleotídeos que contêm uma sequência de nucleotídeos que codifica qualquer um dos receptores antigênicos quiméricos fornecidos no presente documento.
[0039] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o ácido nucleico que codifica o espaçador contém pelo menos um sítio doador de splicing e/ou aceitador de splicing modificado, o dito sítio doador e/ou aceitador de splicing modificado contendo uma ou mais modificações de nucleotídeo que correspondem a um sítio doador de Splicing de referência e/ou um sítio aceitador de splicing de referência contidos em uma sequência apresentada em SEQ ID NO: 73. Em al- gumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a uma ou mais modificações de nucleotídeo contêm uma substituição de aminoácido. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o sítio do- ador de splicing de referência e/ou o sítio aceitador de splicing de refe- rência são sítios de splicing canônicos, não canônicos ou crípticos. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o(s) sítio(s) doador(es) de splicing de referência e/ou o(s) sítio(s) aceitador(es) de Splicing de referência têm uma pontuação de previsão de sítio de spli- cing de pelo menos ou cerca de 0,4, 0,5, 0,6, 0,70, 0,75, 0,80, 0,85, 0,90, 0,95, 0,99 ou 1,0; e/ou o(s) sítio(s) doador(es) de splicing de re-
ferência e/ou o(s) sítio(s) aceitador(es) de splicing de referência são previstos como estando envolvidos em um evento de splicing com uma probabilidade de pelo menos 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 99 % ou 100 %.
[0040] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o sítio doador de splicing de referência contém a sequência aatctaag- tacggac (SEQ ID NO: 176), teaactagtacgtag (SEQ ID NO: 177), acaat- tagtaaggca (SEQ ID NO: 178) e/ou accacaggtatatac (SEQ ID NO: 179); e/ou o sítio aceitador de splicing de referência contém a sequên- cia aagtttctttctatattecaggctgacegtagataaatcete (SEQ ID NO: 180) e/ou gggcaacgtgttctettgcagtgteatagcacgaagecetae (SEQ ID NO: 181).
[0041] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o(s) sítio(s) doador(es) de splicing de referência e/ou o(s) sítio(s) acei- tador(es) de splicing de referência têm uma pontuação de previsão de sítio de splicing de pelo menos ou cerca de 0,70, 0,75, 0,80, 0,85, 0,90, 0,95, 0,99 ou 1,0; e/ou, em algumas de qualquer uma das moda- lidades fornecidas, o(s) sítio(s) doador(es) de splicing de referência e/ou o(s) sítio(s) aceitador(es) de splicing de referência são previstos como estando envolvidos em um evento de splicing com uma probabi- lidade de pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 99 % ou 100 %.
[0042] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o sítio doador de splicing de referência contém a sequência tcaactgg- tacgtag (SEQ ID NO: 177); e/ou o sítio aceitador de splicing de refe- rência contém a sequência aagtttctttetatattccaggctgaccegtaggataaatcte (SEQ ID NO: 180).
[0043] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, pelo menos uma dentre a uma ou mais modificações de nucleotídeo estão dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 resíduos da união do sítio de splicing do sítio aceitador de splicing de referência e/ou sítio doador de splicing de referência.
[0044] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a uma ou mais modificações de nucleotídeo são silenciosas e/ou resul- tam em um códon degenerado comparado com SEQ ID NO: 73 e/ou não alteram a sequência de aminoácidos do espaçador codificado.
[0045] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o sítio doador de splicing modificado é apresentado em agtctaaatacg- gac (SEQ ID NO: 182), tcaactagtatatag (SEQ ID NO: 183), ac- catctccaaggec (SEQ ID NO: 184) e/ou gececaggtttacac (SEQ ID NO: 185); e/ou o sítio aceitador de splicing modificado é apresentado em cagtttcttectgtatagtagactcacegtggataaatcaa (SEQ ID NO: 186), ggo- caacgtgttcagctgcagegtgatgcacgaggecetge (SEQ ID NO: 187) e/ou cgccttgtectecttgtecegetectectattaceggacet (SEQ ID NO: 188). Em algu- mas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o sítio doador de splicing modificado é apresentado em tcaactagtatatag (SEQ ID NO: 183) e/ou o sítio aceitador de splicing modificado é apresentado em cagtttcttectgtatagtagactcacegtggataaatcaa (SEQ ID NO: 186) e/ou cgccttgtectecttgtecegetectectattaceggacect (SEQ ID NO: 188).
[0046] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o espaçador é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresen- tada em SEQ ID NO: 74 (também apresentada em SEQ ID NO: 48) ou uma porção da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalida- des fornecidas, o espaçador é codificado por uma sequência de nucle- otídeos apresentada em SEQ ID NO: 73 ou uma porção da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o espaça- dor é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 74 ou uma porção da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o espaçador é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 283 ou uma porção da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o espaçador é codificado por uma sequência de nucleotí- deos apresentada em SEQ ID NO: 284 ou uma porção da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o espaçador é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305 ou uma porção da mesma.
[0047] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, quando de expressão do polinucleotídeo em uma célula, o RNA trans- crito, opcionalmente RNA mensageiro (mMRNA), a partir do polinucleo- tídeo, exibe pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de homogeneidade de RNA.
[0048] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, quando de expressão em uma célula, o RNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro (mMRNA), a partir do polinucleotídeo exibe heteroge- neidade reduzida comparado com a heterogeneidade do mRNA trans- crito a partir de um polinucleotídeo de referência, o dito polinucleotídeo de referência codificando a mesma sequência de aminoácidos que o polinucleotídeo, em que o polinucleotídeo de referência difere pela presença de um ou mais sítios doadores de splicing e/ou um ou mais sítios aceitadores de splicing no ácido nucleico que codifica o espaça- dor e/ou contém uma ou mais modificações de nucleotídeo comparado com o polinucleotídeo e/ou contém o espaçador apresentado em SEQ ID NO: 73. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a heterogeneidade de RNA é reduzida em mais de ou mais de cerca de 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 % ou mais. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o RNA transcrito, opci- onalmente RNA mensageiro (mMRNA), a partir do polinucleotídeo de referência exibe mais de ou mais de cerca de 10 %, 15 %, 20 %, 25%, %, 40 %, 50 % ou mais de heterogeneidade de RNA. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a homogeneidade e/ou heterogeneidade de RNA é determinada por meio de eletroforese em gel de agarose, eletroforese capilar com base em chip, ultracentrifuga- ção analítica, fracionamento por fluxo de campo ou cromatografia de líquido.
[0049] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o polinucleotídeo tem códons otimizados para expressão em uma célu- la humana.
[0050] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o receptor quimérico é um primeiro receptor quimérico e o polinucleo- tídeo contém ainda uma sequência de nucleotídeos que codifica um segundo receptor antigênico quimérico. Assim, também são fornecidos no presente documento polinucleotídeos que codificam um primeiro receptor quimérico que é dirigido contra a proteína GPRC5D, incluindo qualquer um conforme fornecido no presente documento, e um segun- do receptor quimérico. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, os primeiro e segundo receptores quiméricos são separa- dos por um ou mais elemento(s) multicistrônico(s). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o um ou mais elementos multicistrônicos são ou contêm uma sequência de salto ribossômico. Em algumas modalidades, a sequência de salto ribossômico é um elemento T2A, P2A, E2A ou F2A. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o um ou mais elementos multicistrônicos con- têm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 37. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o um ou mais elementos multicistrônicos são codificados por uma sequência de nu- cleotídeos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 44, 45 e 319. Em al- gumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a sequência de nucleotídeos que codifica o um ou mais elementos multicistrônicos tem códons divergentes. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a sequência de nucleotídeos que codifica o elemento mul- ticistrônico é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID
NO: 319.
[0051] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo receptor quimérico contém um domínio de ligação a antíge- no extracelular que se liga especificamente a um segundo antígeno, tal como outro diferente da proteína GPRC5D, expresso em ou associado ao mieloma múltiplo. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR contém um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga ao segundo antígeno, um espaçador, um do- mínio transmembrana e uma região de sinalização intracelular. Em al- gumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo antí- geno é selecionado a partir de antígeno de maturação de células B (B Cell Maturation Antigen, BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI ou FcRH5. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo antígeno é a proteína BCMA.
[0052] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR contém: (1) um domínio de ligação a antígeno extra- celular que se liga especificamente à proteína BCMA, em que o domí- nio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região Vx apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx do segundo CAR con-
tém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vx apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e a região V. contém uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 190, 192, 194, 196 ou 198.
[0053] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR contém: (1) um domínio de ligação a antígeno extra- celular que se liga especificamente à proteína BCMA, em que o domí- nio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região Vu apresentada em SEQ ID NO: 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma sequência de ami- noácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequên- cia de aminoácidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NO: 198; (2) um espaçador; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR contém: (1) um do- mínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos da região Vx apresentada em SEQ ID NO: 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região V. apresen- tada em qualquer uma de SEQ ID NO: 198; (2) um espaçador apre- sentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana derivado de CD28 humana; e (4) uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização citoplásmico de uma cadeia zeta de CD3 humana (CD37) e um domínio de sinalização intracelular de 4- 1BB humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades forneci- das, a região Vi do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vn apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 197; e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequên- cia de aminoácidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 198. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR é ou compreende a sequência de aminoá- cidos apresentada em SEQ ID NO: 251. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR é codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 246.
[0054] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR contém: (1) um domínio de ligação a antígeno extra- celular que se liga especificamente à proteína BCMA, em que o domí- nio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vr) que contém uma região determinante de com- plementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1) que contém a sequên- cia de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 199, 202, 206, 209, 212 ou 215; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que contém a se- quência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 200, 203, 207, 210, 213 ou 216; e (c) uma região determinan- te de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de
SEQ ID NOS: 201, 204, 205, 208, 211, 214 ou 217; e (li) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que contém a sequên- cia de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 218, 221, 224, 227, 230, 233 ou 235; (b) uma região determinan- te de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 219, 222, 225, 228, 231, 234 ou 236; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 220, 223, 226, 229 ou 232; (2) um espaçador; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intra- celular.
[0055] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR- H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente; a região Vn do se- gundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respecti- vamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente; a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respecti- vamente; a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS:
206, 207, 208, respectivamente, e a região V. do segundo CAR con- tém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente; a região Vn do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que con- têm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NOS: 212, 213 e 214, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 233, 234 e 229, respectivamente; ou a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respecti- vamente.
[0056] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vu do segundo CAR codificado contêm uma CDR-H1, CDR- H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região Vu do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, a região Vx do segundo CAR codificado contêm uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respecti- vamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Va do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respecti- vamente.
[0057] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vu e Vi do segundo CAR codificado contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; ou as regiões Vu e Vi do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO:
198.
[0058] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vu e Vi do segundo CAR codificado contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; as regiões Vu e V. do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; as regiões Vu e V. do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; as regiões Vu e Vi do segundo CAR contêm as sequências de amino- ácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; as regi- ões Vu e V. do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamen- te. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regi- ões Vnx e Vi do segundo CAR é codificado contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.
[0059] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno extracelular do segundo CAR codifi- cado é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia. Em algu- mas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o fragmento codifi- cado é ou contém um fragmento variável com uma única cadeia (scFv). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vx e as regiões Vi. do segundo CAR é codificado são unidas através de um ligante flexível. Em algumas de qualquer uma das mo- dalidades fornecidas, o scFv do segundo CAR codificado contêm um ligante que contém a sequência de aminoácidos GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 52). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o scFv do segundo CAR codificado contêm um ligante que contém a sequência de aminoácidos GGGGSCGGGGSCGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 320). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx é amino- terminal à região V. no segundo CAR codificado. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, a região Vr é carbóxi-terminal à região V. no segundo CAR codificado.
[0060] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR codificado contêm a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241 ou uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241. Em algumas de qualquer uma das modali- dades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR codificado contêm a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241. Em algu- mas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de liga- ção a antígeno do segundo CAR codificado contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241. Em algu- mas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de liga- ção a antígeno do segundo CAR codificado contêm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241.
[0061] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR- H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respec- tivamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente; e/ou as regiões Vx e VL do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de liga- ção a antígeno do segundo CAR contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241. Em algumas de qualquer uma das modalidades forneci- das, a região Vi do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR con- tém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; e/ou as re- giões Vu e VL do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamen- te; e/ou o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequên-
cia apresentada em SEQ ID NO: 241. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Va do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contém a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respec- tivamente; e/ou as regiões Vx e VL do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.
[0062] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio transmembrana do segundo CAR codificado é ou contém um domínio transmembrana derivado de CD4, CD28 ou CDB8, opcio- nalmente a partir de uma CD4 humana, uma CD28 humana ou uma CD8 humana.
[0063] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio transmembrana do segundo CAR codificado é ou contém um domínio transmembrana derivado de CD28 humana e/ou é ou con- tém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18. Em algumas de qualquer uma das modalidades for- necidas, o domínio transmembrana do segundo CAR codificado é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18.
[0064] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização intracelular do segundo CAR codificado con- têm um domínio de sinalização intracelular. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de sinalização intracelular do segundo CAR codificado é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do receptor de células T (TOR) e/ou contém um motivo de ativação com base em tirosina imu- norreceptora (ITAM). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de sinalização intracelular do segundo CAR co- dificado é ou contém um domínio de sinalização citoplásmico de uma cadeia zeta de CD3 (CD3C) ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta huma- na. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a regi- ão de sinalização intracelular do segundo CAR codificado contêm a sequência apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de ami- noácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20.
[0065] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização intracelular do segundo CAR codificado con- têm ainda uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização co- estimuladora do segundo CAR codificado contêm um domínio de sina- lização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T ou a porção de sinalização da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR codificado contêm um domínio de sinalização intracelu- lar de CD28, 4-1BB ou ICOS ou a porção de sinalização das mesmas, opcionalmente uma CD28 humana, uma 4-1BB humana ou uma ICOS humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR codificado con- têm um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalida-
des fornecidas, pelo menos um do primeiro receptor antigênico quimé- rico e do segundo receptor antigênico quimérico contém uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização intrace- lular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente de 4-1BB humana.
[0066] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR codificado contém: um domínio de sinalização intracelular de uma CD28 humana; e/ou a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.
[0067] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR codificado contém: um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB humana; e/ou a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.
[0068] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo receptor antigênico quimérico codificado contém, a partir de seu N para C término, na ordem: o domínio de ligação a antígeno, o espaçador, o domínio transmembrana e a região de sinalização intra- celular.
[0069] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, pelo menos uma da sequência polinucleotídica que codifica o primeiro receptor antigênico quimérico e a sequência polinucleotídica que codi- fica o segundo receptor antigênico quimérico têm códons divergentes. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a sequên- cia polinucleotídica que codifica o primeiro receptor antigênico quimé-
rico e a sequência polinucleotídica que codifica o segundo receptor antigênico quimérico têm não mais do que cerca de 30, não mais do que cerca de 20 ou não mais do que cerca de 10 pares de base con- secutivos de homologia de sequência.
[0070] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a sequência de nucleotídeos que codifica o CAR é operativamente |i- gada a um promotor para controlar a expressão do CAR codificado quando expresso a partir de uma célula na qual o polinucleotídeo foi introduzido, opcionalmente em que o promotor é um promotor heteró- logo, opcionalmente em que o promotor heterólogo é ou contém um promotor de fator 1 alfa de alongamento (EF1a) humano ou um promo- tor MND ou uma variante dos mesmos.
[0071] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas em que o polinucleotídeo codifica dois CARs, a sequência de nucleotí- deos que codifica o primeiro CAR é operativamente ligada a um pri- meiro promotor para controlar a expressão do primeiro CAR quando expresso a partir de uma célula na qual o polinucleotídeo foi introduzi- do e a sequência de nucleotídeos que codifica o segundo CAR é ope- rativamente ligada a um segundo promotor para controlar a expressão do segundo CAR quando expresso a partir de uma célula na qual o polinucleotídeo foi introduzido. Em algumas modalidades, os primeiro e segundo promotores são independentemente um promotor heterólo- go, tal como onde o promotor heterólogo é ou contém um promotor de fator 1 alfa de alongamento (EF1a) humano ou um promotor MND ou uma variante dos mesmos. Em algumas de tais modalidades, os pri- meiro e segundo promotores são os mesmos. Em algumas de tais modalidades, os primeiro e segundo promotores são diferentes.
[0072] Também são fornecidos vetores que contêm qualquer um dos polinucleotídeos fornecidos. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o vetor é um vetor viral. Em algumas de qual-
quer uma das modalidades fornecidas, o vetor viral é um vetor lentivi- ral ou um vetor retroviral.
[0073] Também são fornecidas células manipuladas que contêm qualquer um dos receptores antigênicos quiméricos fornecidos no pre- sente documento. Em algumas de qualquer uma das modalidades for- necidas, a célula manipulada contém um receptor antigênico quimérico fornecido no presente documento e contém ainda um polinucleotídeo que contém uma sequência de nucleotídeos que codifica um segundo receptor antigênico quimérico.
[0074] Também são fornecidas células manipuladas que contêm qualquer um dos polinucleotídeos fornecidos no presente documento.
[0075] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo receptor quimérico da célula fornecida contém um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente a um segundo antígeno expresso em ou associado ao mieloma múltiplo. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR contém o domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga ao segundo antígeno, um espaçador, um domínio transmembrana e uma região de sinalização intracelular. Em algumas de qualquer uma de tais modalidades, o segundo antígeno é selecionado a partir de an- tígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI ou FcRH5. Em algumas de qualquer uma das modali- dades fornecidas, o segundo antígeno é a proteína BCMA.
[0076] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o segundo CAR contém: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que contém uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região Vu apresentada em qual- quer uma de SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma regi- ão variável de cadeia leve (V.) que contém uma sequência de aminoá- cidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular. Em al- gumas de tais modalidades, a região Vx contém uma CDR-H1, CDR- H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V+ apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 conti- das dentro da sequência de aminoácidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 190, 192, 194, 196 ou 198.
[0077] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o segundo CAR contém: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qual- quer uma de SEQ ID NOS: 199, 202, 206, 209, 212 ou 215; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR- H2) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 200, 203, 207, 210, 213 ou 216; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a par- tir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 201, 204, 205, 208, 211, 214 ou 217; e (li) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma re- gião determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1)
que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qual- quer uma de SEQ ID NOS: 218, 221, 224, 227, 230, 233 ou 235; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a par- tir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 219, 222, 225, 228, 231, 234 ou 236; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 220, 223, 226, 229 ou 232; (2) um espaçador; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[0078] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respecti- vamente; as regiões Vu do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR- H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente; a re- gião Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente; a região Vn do se- gundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respecti- vamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID
NOS: 227, 228 e 229, respectivamente; a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; a região Vu do segundo CAR contém uma CDR- H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 212, 213 e 214, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 233, 234 e 229, respecti- vamente; ou a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR- H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[0079] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respecti- vamente; ou a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR- H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[0080] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, as regiões Vx e V. do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; as regiões Vu e Vi do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198.
[0081] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, as regiões Vx e V. do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; as regiões Vx e V. do segundo CAR con- têm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; as regiões Vu e Vi. do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; as regiões Vu e V. do segundo CAR contêm as sequên- cias de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.
[0082] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o domínio de ligação a antígeno extracelular do segundo CAR é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia. Em algumas de qualquer uma de tais modalidades, o fragmento é ou contém um fragmento variável com uma única cadeia (scFv).
[0083] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, as regiões Vx e V. do segundo CAR são uni- das através de um ligante flexível. Em algumas de tais modalidades, o ligante contém a sequência de aminoácidos GGGGSGGGGSGCGGGGS (SEQ ID NO: 52). Em algumas de tais modalidades, o ligante contém a sequência de aminoácidos GGGGSGGGGSCGGGGSGCGGGGS (SEQ ID NO: 320).
[0084] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, a região Vx é amino-terminal à região VL no segundo CAR. Em algumas de qualquer uma das modalidades forne- cidas de células manipuladas, a região Vu é carbóxi-terminal à região V. no segundo CAR. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR contém a sequência de aminoácidos selecionada a par- tir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241.
[0085] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241. Em algu- mas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipu- ladas, a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR con- tém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região Vu do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente; e/ou as regiões Vn e VL do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apre- sentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR contém a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma se- quência que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.
[0086] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respecti-
vamente; e/ou as regiões Vu e VL do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.
[0087] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o domínio transmembrana do segundo CAR é ou contém um domínio transmembrana derivado de CD4, CD28 ou CDB8, opcionalmente a partir de uma CD4 humana, uma CD28 humana ou uma CD8 humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o domínio transmembrana do se- gundo CAR é ou contém um domínio transmembrana derivado de CD28 humana; e/ou o domínio transmembrana é ou contém a sequên- cia apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoáci- dos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o domínio transmembrana do segundo CAR é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18.
[0088] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, a região de sinalização intracelular do segun- do CAR contém um domínio de sinalização intracelular.
[0089] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o domínio de sinalização intracelular do se- gundo CAR é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do receptor de células T (TOR) e/ou con- tém um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o domínio de sinalização intracelular do segundo CAR é ou contém um domínio de sinalização citoplásmico de uma ca- deia zeta de CD3 (CD37) ou uma variante funcional ou porção de sina- lização da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, a região de sinalização intracelular do segundo CAR contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequên- cia de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20.
[0090] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, a região de sinalização intracelular do segun- do CAR contém ainda uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células ma- nipuladas, a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR contém um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coes- timuladora de células T ou a porção de sinalização da mesma. Em al- gumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células mani- puladas, a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR con- tém um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou a porção de sinalização das mesmas, opcionalmente uma CD28 humana, uma 4-1BB humana ou uma ICOS humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR contém um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinaliza- ção da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalidades forne- cidas, pelo menos um do primeiro receptor antigênico quimérico e do segundo receptor antigênico quimérico contém uma região de sinaliza- ção intracelular que contém um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente de 4-1BB humana.
[0091] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, a região de sinalização coestimuladora do se- gundo CAR contém: um domínio de sinalização intracelular de uma CD28 humana; e/ou a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de se- quência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.
[0092] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, a região de sinalização coestimuladora do se- gundo CAR contém: um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB humana; e/ou a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de se- quência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.
[0093] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas de células manipuladas, o segundo receptor antigênico quimérico codi- ficado contém, a partir de seu N para C término, na ordem: o domínio de ligação a antígeno, o espaçador, o domínio transmembrana e a re- gião de sinalização intracelular.
[0094] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a célula manipulada é um linfócito. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a célula manipulada é uma célula NK ou uma célula T. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a célula manipulada é uma célula T e a célula T é uma célula T CD4* ou CD8*.
[0095] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a célula manipulada foi manipulada a partir de uma célula primária ob- tida a partir de um indivíduo.
[0096] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas,
a célula manipulada está dentre uma pluralidade das células manipu- ladas, onde menos de ou menos de cerca de 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 % ou 1 % das células na pluralidade contêm um recep- tor antigênico quimérico que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno.
[0097] Também são fornecidas composições que contêm qualquer um dos receptores quiméricos fornecidos no presente documento. Também são fornecidas composições que contêm qualquer uma das células manipuladas fornecidas no presente documento. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a composição contém células T CD4* e CD8* e a proporção de células T CD4* para CD8* é a partir de ou a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente 1:2 a 2:1. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a composição contém células T CD4* e CD8* e a proporção de células T CD4* para CDB8* é cerca de 1:1.
[0098] Também são fornecidas composições que contêm: uma pluralidade de primeiras células manipuladas que contêm um primeiro receptor antigênico quimérico que é qualquer um dos receptores anti- gênicos quiméricos fornecidos no presente documento ou codificados por qualquer um dos polinucleotídeos fornecidos no presente docu- mento; e uma pluralidade de segundas células manipuladas que con- têm um segundo receptor antigênico quimérico. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, dentre a pluralidade das primei- ras células manipuladas, menos de ou menos de cerca de 10 %, 9 %, 8 %, 7 Y%, 5%, 4 %, 3 %, 2 % ou 1 % das células na pluralidade con- têm um receptor antigênico quimérico que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, dentre a pluralidade das segundas células manipuladas, menos de ou menos de cerca de 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 5%, 4 %, 3 %, 2 % ou 1 % das células na pluralida-
de contêm um receptor antigênico quimérico que exibe sinalização tô- nica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno.
[0099] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo receptor quimérico na pluralidade de segundas células ma- nipuladas na composição contém um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente a um segundo antígeno ex- presso em ou associado ao mieloma múltiplo. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR na pluralidade de segundas células manipuladas na composição contém o domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga ao segundo antígeno, um espaçador, um domínio transmembrana e uma região de sinaliza- ção intracelular. Em algumas de qualquer uma das modalidades forne- cidas, o segundo antígeno na pluralidade de segundas células manipu- ladas na composição é selecionado a partir de antígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI ou FcRH5. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo antígeno na pluralidade de segundas células manipuladas na compo- sição é a proteína BCMA.
[00100] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR na pluralidade de segundas células manipuladas na composição contém: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região variável de ca- deia pesada (Vx) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região Vu apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região V. apresen- tada em qualquer uma de SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular. Em algumas de tais modalidades, a região Vn contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequên- cia de aminoácidos da região Vx apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoá- cidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 190, 192, 194, 196 ou 198.
[00101] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR na pluralidade de segundas células manipuladas na composição contém: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular contém: (i) uma região variável de ca- deia pesada (Vx) que contém uma região determinante de complemen- taridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 199, 202, 206, 209, 212 ou 215; (b) uma região determinante de com- plementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que contém a sequên- cia de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 200, 203, 207, 210, 213 ou 216; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 201, 204, 205, 208, 211, 214 ou 217; e (li) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que contém a sequên- cia de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 218, 221, 224, 227, 230, 233 ou 235; (b) uma região determinan- te de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 219, 222, 225, 228, 231, 234 ou 236; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 220, 223, 226, 229 ou 232; (2) um espaçador; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intra- celular.
[00102] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx do segundo CAR da composição contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região Vi do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente; a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR- H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoá- cidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente; a região Vn do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que con- têm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, res- pectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente; a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR- L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente; a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respecti- vamente; a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 212, 213 e 214, respectivamente, e a região V. do segundo CAR con- tém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 233, 234 e 229, respectivamente; ou a região Vu do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[00103] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx do segundo CAR na composição contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região Vi do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR con- tém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[00104] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vu e V. do segundo CAR na composição contém as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as se-
quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; as regiões Vu e Vi do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198.
[00105] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões Vu e V. do segundo CAR na composição contém as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; as regiões Vu e Vi do segundo CAR na composição contém as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; as regiões Vu e V. do segundo CAR na composição contém as sequências de aminoácidos apresen- tadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; as regiões Vx e Vi do segundo CAR na composição contém as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; as regiões Vx e
V. do segundo CAR na composição contém as sequências de aminoá- cidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respecti- vamente.
[00106] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno extracelular do segundo CAR na com- posição é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia. Em algu- mas de tais modalidades, o fragmento é ou contém um fragmento variá- vel com uma única cadeia (scFv). Em algumas de qualquer uma das mo- dalidades fornecidas, as regiões Vx e V. no segundo CAR na composi- ção são unidas através de um ligante flexível. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o ligante no segundo CAR na com- posição contém a sequência de aminoácidos GGGGSGGGGSGCGGGGS (SEQ ID NO: 52). Em algumas de qualquer uma das modalidades for- necidas, o ligante no segundo CAR na composição contém a sequên- cia de aminoácidos GGGGSGGGGSCGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 320).
[00107] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vu é amino-terminal à região V. no segundo CAR na compo- sição. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região V é carbóxi-terminal à região V. no segundo CAR na composi- ção. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o do- mínio de ligação a antígeno no segundo CAR na composição contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241 ou uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241. Em algumas de qualquer uma das modali- dades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno no segundo CAR na composição contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241.
[00108] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx do segundo CAR na composição contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região Vi do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR con- tém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente; e/ou as regiões Vx e VL do segundo CAR na composição contém as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR na composição contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241. Em algumas de qualquer uma das modalidades forneci- das, a região Vx do segundo CAR na composição contém uma CDR- H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respecti- vamente; e/ou as regiões Vu e VL do segundo CAR na composição contém as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR na composição contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.
[00109] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio transmembrana do segundo CAR na composição é ou con- tém um domínio transmembrana derivado de CD4, CD28 ou CD8, op- cionalmente a partir de uma CD4 humana, uma CD28 humana ou uma CD8 humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades forneci- das, o domínio transmembrana do segundo CAR na composição é ou contém um domínio transmembrana derivado de CD28 humana; e/ou o domínio transmembrana do segundo CAR na composição é ou con- tém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18. Em algumas de qualquer uma das modalidades for- necidas, o domínio transmembrana do segundo CAR na composição é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18.
[00110] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização intracelular do segundo CAR na composição contém um domínio de sinalização intracelular. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, o domínio de sinalização intra- celular do segundo CAR na composição é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do receptor de células T (TOR) e/ou contém um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de sinalização intracelular do se- gundo CAR na composição é ou contém um domínio de sinalização citoplásmico de uma cadeia zeta de CD3 (CD36) ou uma variante fun- cional ou porção de sinalização da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização intracelular do segundo CAR na composição contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de se- quência com SEQ ID NO: 20.
[00111] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização intracelular do segundo CAR na composição contém ainda uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR na composição contém um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T ou a porção de sinalização da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimula- dora do segundo CAR na composição contém um domínio de sinaliza- ção intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou a porção de sinalização das mesmas, opcionalmente uma CD28 humana, uma 4-1BB humana ou uma ICOS humana. Em algumas de qualquer uma das modalida- des fornecidas, a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR na composição contém um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente uma 4- 1BB humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades forneci- das, pelo menos um do primeiro receptor antigênico quimérico e do segundo receptor antigênico quimérico contém uma região de sinaliza- ção intracelular que contém um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente de 4-1BB humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR na composição contém: um domínio de sinalização intracelular de uma CD28 humana; e/ou a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %,
95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimula- dora do segundo CAR na composição contém: um domínio de sinali- zação intracelular de 4-1BB humana; e/ou a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.
[00112] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo receptor antigênico quimérico codificado da composição contém, a partir de seu N para C término, na ordem: o domínio de liga- ção a antígeno, o espaçador, o domínio transmembrana e a região de sinalização intracelular.
[00113] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a pluralidade de primeiras células manipuladas na composição contém células T, opcionalmente em que as células T incluem células T CD4* e CD8”*, opcionalmente em que a proporção de células T CD4* para CD8* é a partir de ou a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente 1:2 a 2:1. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a pluralidade de primeiras células manipuladas na composição contém células T, opcionalmente em que as células T incluem células T CD4* e CD8”, opcionalmente em que a proporção de células T CD4* para CDB8* é cerca de 1:1.
[00114] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a pluralidade de segundas células manipuladas na composição con- tém células T, opcionalmente em que as células T incluem células T CD4* e CD8*, opcionalmente em que a proporção de células T CD4* para CD8* é a partir de ou a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmen- te 1:2 a 2:1. Em algumas de qualquer uma das modalidades forneci-
das, a pluralidade de segundas células manipuladas na composição contém células T, opcionalmente em que as células T incluem células T CD4* e CD8*, opcionalmente em que a proporção de células T CD4* para CD8* é cerca de 1:1.
[00115] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a composição contém uma proporção da primeira pluralidade de célu- las manipuladas e a segunda pluralidade de células manipuladas que é a partir de ou a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente 1:2 a 21, opcionalmente é ou é cerca de 1:1. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a composição contém a primeira pluralidade de células que expressam o primeiro receptor antigênico quimérico e a segunda pluralidade de células que expressam o segundo receptor antigênico quimérico em uma proporção que é a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente cerca de 1:2 a 2:1. Em modalidades particulares, a proporção da primeira pluralidade de células manipuladas e a se- gunda pluralidade de células manipuladas na composição é ou é cerca de 1:1. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a composição contém ainda um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a compo- sição é estéril.
[00116] Também são fornecidos no presente documento usos de qualquer uma das composições fornecidas no presente documento. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a compo- sição é para uso no tratamento de um indivíduo com uma doença ou condição. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a doença ou condição é um câncer. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a doença ou condição é mieloma múltiplo, opcionalmente mieloma múltiplo recidivante/resistente. Os usos forne- cidos e composições para uso fornecidas no presente documento po- dem ser para o tratamento de um indivíduo de acordo com aspectos de qualquer um dos métodos fornecidos.
[00117] Também são fornecidos no presente documento métodos de tratamento que compreendem administrar qualquer uma das com- posições fornecidas no presente documento que contêm qualquer uma das células manipuladas fornecidas no presente documento ou qual- quer uma das composições fornecidas no presente documento que contêm qualquer um dos receptores antigênicos quiméricos fornecidos no presente documento a um indivíduo que tem uma doença ou trans- torno. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a dose das células contém entre em ou cerca de 1,0 x 107 células T que expressam CAR e 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre cer- ca de 1,25 x 107 células T que expressam CAR e 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre cerca de 1,5 x 107 células T que expres- sam CAR e 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e 4,5 x 108 células T que ex- pressam CAR, entre cerca de 1,5 x 10º células T que expressam CAR e 3,0 x 10º células T que expressam CAR. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a dose das células contém entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e 1,2 x 10º célu- las T que expressam CAR, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e 4,5 x 108 células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 1,5 x 10º células T que expressam CAR e 3,0 x 108 células T que expressam CAR.
[00118] Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém entre em ou cerca de 1 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 2 x 10º células T que expressam CAR. Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 4,5 x 108 células T que ex-
pressam CAR ou entre em ou cerca de 1,5 x 10º células T que expres- sam CAR e em ou cerca de 3,0 x 10º células T que expressam CAR. Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém em ou cerca de 1,0 x 107, em ou cerca de 1,5 x 107, em ou cerca de 2,5 x 107, em ou cerca de 5,0 x 10”, em ou cerca de 7,5 x 10”, em ou cerca de 1,5 x 108, em ou cerca de 2,25 x 108, em ou cerca de 3,0 x 108, em ou cerca de 4,5 x 108, em ou cerca de 6,0 x 108, em ou cerca de 8,0 x 108 ou em ou cerca de 1,2 x 10º células T que expressam CAR. Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células con- tém em ou cerca de 5,0 x 107, em ou cerca de 1,5 x 108, em ou cerca de 3,0 x 10º ou em ou cerca de 4,5 x 108 células T que expressam CAR. Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células con- tém em ou cerca de 5,0 x 107, em ou cerca de 1,5 x 108, em ou cerca de 3,0 x 108 ºº em ou cerca de 4,5 x 10º células T que expressam CAR. Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR.
[00119] “Também são fornecidos no presente documento usos de uma primeira composição que contém uma pluralidade de primeiras células manipuladas que contêm um primeiro receptor antigênico qui- mérico que é qualquer receptor antigênico quimérico fornecido no pre- sente documento ou codificado por qualquer um dos polinucleotídeos fornecidos no presente documento e uma segunda composição que contém uma pluralidade de segundas células manipuladas que contêm um segundo receptor antigênico quimérico. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as composições são usadas juntas para uso no tratamento de um indivíduo com uma doença ou condição. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a doença ou condição é um câncer. Em algumas de qualquer uma das modali- dades fornecidas, a doença ou condição é mieloma múltiplo, opcio- nalmente mieloma múltiplo recidivante/resistente. Os usos fornecidos e composições para uso fornecidas no presente documento podem ser para o tratamento de um indivíduo de acordo com aspectos de qual- quer um dos métodos fornecidos.
[00120] Também são fornecidos no presente documento métodos de tratamento que incluem: administrar uma composição que contém uma pluralidade de primeiras células manipuladas que contêm um primeiro receptor antigênico quimérico que é qualquer receptor antigê- nico quimérico fornecido no presente documento ou codificado por qualquer um dos polinucleotídeos fornecidos no presente documento a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno; e administrar ao indi- víduo uma composição que contém uma pluralidade de segundas cé- lulas manipuladas que contêm um segundo receptor antigênico quimé- rico. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a do- se da pluralidade de primeiras células manipuladas e a dose da plura- lidade de segundas células manipuladas contêm independentemente entre em ou cerca de 1,0 x 107 células T que expressam CAR e 1,5 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 1,25 x 107 células T que expressam CAR e 0,6 x 108 células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 2,5 x 10 células T que expressam CAR e 2,25 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 7,5 x 107 células T que expressam CAR e 1,5 x 108 células T que expres- sam CAR, entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e 4,5 x 108 células T que ex- pressam CAR, entre em ou cerca de 1,5 x 108 células T que expres- sam CAR e 3,0 x 10º células T que expressam CAR. Em algumas de quaisquer modalidades, a dose da pluralidade de primeiras células manipuladas e a dose da pluralidade de segundas células manipula- das contêm independentemente entre em ou cerca de 1 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 2 x 10º células T que expres-
sam CAR. Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 4,5 x 108 células T que expressam CAR ou entre em ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam CAR e em ou cerca de 3,0 x 10º células T que expressam CAR. Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém em ou cerca de 1,5 x 107, em ou cerca de 2,5 x 107, em ou cerca de 5,0 x 107, em ou cerca de 7,5 x 10”, em ou cerca de 1,5 x 108, em ou cerca de 2,25 x 108, em ou cerca de 3,0 x 108, em ou cerca de 4,5 x 108, em ou cerca de 6,0 x 10º, em ou cerca de 8,0 x 10º ou em ou cerca de 1,2 x 10º células T que expressam CAR. Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém em ou cerca de 5,0 x 107, em ou cerca de 1,5 x 108, em ou cerca de 3,0 x 10º ou em ou cerca de 4,5 x 10º células T que expressam CAR. Em algu- mas de quaisquer modalidades, a dose das células contém em ou cer- ca de 5,0 x 107, em ou cerca de 1,5 x 108, em ou cerca de 3,0 x 108 ou em ou cerca de 4,5 x 10º células T que expressam CAR. Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR.
[00121] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a composição que contém a pluralidade de primeiras células manipu- ladas e a composição que contém a pluralidade de segundas células manipuladas são administradas simultânea, sequencial ou intermiten- temente. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a composição que contém a pluralidade de primeiras células manipula- das e a composição que contém a pluralidade de segundas células manipuladas são administradas sequencialmente em qualquer ordem.
[00122] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, dentre a pluralidade das primeiras células manipuladas nas composi-
ções nos métodos de tratamento ou para usos no tratamento forneci- dos, menos de ou menos de cerca de 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 5%, 4%, 3 %, 2 % ou 1 % das células na pluralidade contêm um receptor anti- gênico quimérico que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinali- zação independente de antígeno.
[00123] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, dentre a pluralidade das segundas células manipuladas nas composi- ções nos métodos de tratamento ou para usos no tratamento forneci- dos, menos de ou menos de cerca de 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 5%, 4%, 3 %, 2 % ou 1 % das células na pluralidade contêm um receptor anti- gênico quimérico que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinali- zação independente de antígeno.
[00124] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo receptor quimérico nas células manipuladas nas composi- ções nos métodos de tratamento ou para usos no tratamento de con- tém um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especi- ficamente a um segundo antígeno expresso em ou associado ao mi- eloma múltiplo.
[00125] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos méto- dos ou para usos no tratamento fornecidos contém o domínio de liga- ção a antígeno extracelular que se liga ao segundo antígeno, um es- paçador, um domínio transmembrana e uma região de sinalização in- tracelular.
[00126] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo antígeno alvo do segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos métodos ou para usos no tratamento fornecidos é selecionado a partir de antígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI ou FcRH5. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, o segundo antígeno nos méto-
dos fornecidos é a proteína BCMA.
[00127] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos méto- dos ou para usos no tratamento fornecidos de contém: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente à prote- ína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular con- tém: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região Vu apresentada em qual- quer uma de SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma regi- ão variável de cadeia leve (V.) que contém uma sequência de aminoá- cidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular. Em al- gumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região Vx do segundo CAR nos métodos fornecidos contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vn apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 190, 192, 194, 196 ou 198.
[00128] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos méto- dos ou para usos no tratamento fornecidos de contém: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente à prote- ína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular con- tém: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região Vu apresentada em SEQ ID NO: 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 198; (2) um espaçador; (3) um domínio transmembra- na; e (4) uma região de sinalização intracelular. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, a região Vx do segundo CAR nos métodos fornecidos contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vn apresenta- da em SEQ ID NO: 197; e a região V. contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 198.
[00129] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos méto- dos ou para usos no tratamento fornecidos de contém: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente à prote- ína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular con- tém: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR- H1) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 199, 202, 206, 209, 212 ou 215; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a par- tir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 200, 203, 207, 210, 213 ou 216; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesa- da 3 (CDR-H3) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 201, 204, 205, 208, 211, 214 ou 217; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qual- quer uma de SEQ ID NOS: 218, 221, 224, 227, 230, 233 ou 235; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a par- tir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 219, 222, 225, 228, 231, 234 ou 236; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 220, 223, 226, 229 ou 232; (2) um espaçador; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[00130] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos méto- dos ou para usos no tratamento fornecidos de contém um domínio de ligação a antígeno extracelular no qual a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente; a região Vu do segundo CAR contém uma CDR- H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região V. do segun- do CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectiva- mente; a região Vu do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região V. do segundo CAR con- tém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente; a re-
gião Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente; a região Vn do se- gundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respecti- vamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 212, 213 e 214, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 233, 234 e 229, respectivamente; ou a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respecti- vamente.
[00131] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos méto- dos ou para usos no tratamento fornecidos de contém um domínio de ligação a antígeno extracelular no qual a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região Vx do segundo CAR nos métodos fornecidos contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respecti- vamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos métodos ou para usos no tratamento fornecidos de contém um domínio de ligação a antígeno extracelular no qual a região Vu do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.
[00132] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos méto- dos ou para usos no tratamento fornecidos de contém um domínio de ligação a antígeno extracelular no qual as regiões Vx e V. contém as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e
SEQ ID NO: 194; as regiões Vu e Vi do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; as regiões Vx e Vi do segundo CAR contêm as se- quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198.
[00133] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos méto- dos ou para usos no tratamento fornecidos de contém um domínio de ligação a antígeno extracelular no qual as regiões Vu e V. contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198.
[00134] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos méto- dos ou para usos no tratamento fornecidos de contém um domínio de ligação a antígeno extracelular no qual as regiões Vu e V. contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; as regiões Vx e V. do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; as regiões Vx e V. do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; as regiões Vu e Vi do segundo CAR contêm as se-
quências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; as regiões Vu e V. do segundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente. Em algumas de qualquer uma das modalidades for- necidas, o segundo CAR nas células manipuladas nas composições nos métodos ou para usos no tratamento fornecidos de contém um domínio de ligação a antígeno extracelular no qual a região Vi e V. contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.
[00135] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de ligação a antígeno extracelular do segundo CAR nas cé- lulas manipuladas nas composições nos métodos ou para usos no tra- tamento fornecidos é um fragmento de anticorpo com uma única ca- deia. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o fragmento é ou contém um fragmento variável com uma única cadeia (scFv).
[00136] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no tratamento fornecidos, as regiões Vx e V. do domínio de ligação a antígeno extracelular do segundo CAR nas células manipuladas nas composições são unidas através de um ligan- te flexível. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o ligante do segundo CAR nas células manipuladas nas composições contém a sequência de aminoácidos GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 52). Em algumas de qualquer uma das modalidades forneci- das, o ligante do segundo CAR nas células manipuladas nas composi- ções contém a sequência de aminoácidos GGGGSCGGGGSCGGGGSGCGGGGS (SEQ ID NO: 320).
[00137] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no tratamento fornecidos, a região Vn é amino-terminal à região V. no domínio de ligação a antígeno extracelu-
lar do segundo CAR. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, a região Vn é carbóxi-terminal à região V. no segundo CAR.
[00138] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no tratamento fornecidos, o domínio de li- gação a antígeno extracelular do segundo CAR contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241. Em algumas de qualquer uma das modalidades forneci- das dos métodos fornecidos, o domínio de ligação a antígeno do se- gundo CAR contém a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241. Em al- gumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no tratamento fornecidos, o domínio de ligação a antígeno extracelular do segundo CAR contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, o do- mínio de ligação a antígeno do segundo CAR contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241.
[00139] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no tratamento fornecidos, o domínio de li- gação a antígeno extracelular do segundo CAR tem uma região Vx e uma região VL no qual a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respecti- vamente; ou a região Vx do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR- H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente; e/ou as regiões Vu e Vi do segundo CAR contêm as sequências de amino- ácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respec- tivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR con- tém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no trata- mento fornecidos, o domínio de ligação a antígeno extracelular do se- gundo CAR tem uma região Vx e uma região V. no qual a região Vu do segundo CAR contém uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respec- tivamente, e a região V. do segundo CAR contém uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 que contêm a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; e/ou as regiões Vn e V. do se- gundo CAR contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR contém a sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.
[00140] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no tratamento fornecidos, o domínio trans- membrana do segundo CAR é ou contém um domínio transmembrana derivado de CD4, CD28 ou CD8, opcionalmente a partir de uma CD4 humana, uma CD28 humana ou uma CD8 humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, o domínio transmembrana do segundo CAR é ou contém um domínio transmembrana derivado de CD28 humana; e/ou o domínio trans- membrana é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, o domínio trans- membrana do segundo CAR é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18.
[00141] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no tratamento fornecidos, a região de sina- lização intracelular do segundo CAR contém um domínio de sinaliza- ção intracelular. Em algumas de qualquer uma das modalidades forne- cidas dos métodos fornecidos, o domínio de sinalização intracelular do segundo CAR é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do receptor de células T (TOR) e/ou contém um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, o domínio de sinalização intracelular do segundo CAR é ou contém um domínio de sinalização citoplásmico de uma ca- deia zeta de CD3 (CD37) ou uma variante funcional ou porção de sina- lização da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos méto- dos fornecidos, a região de sinalização intracelular do segundo CAR contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequên- cia de aminoácidos que tem pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20.
[00142] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no tratamento fornecidos, a região de sina- lização intracelular do segundo CAR contém ainda uma região de sina- lização coestimuladora. Em algumas de qualquer uma das modalida- des fornecidas dos métodos fornecidos, a região de sinalização coes- timuladora do segundo CAR contém um domínio de sinalização intra- celular de uma molécula coestimuladora de células T ou a porção de sinalização da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalida- des fornecidas dos métodos fornecidos, a região de sinalização coes- timuladora do segundo CAR contém um domínio de sinalização intra- celular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou a porção de sinalização das mesmas, opcionalmente uma CD28 humana, uma 4-1BB humana ou uma ICOS humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, a região de sinalização coestimu- ladora do segundo CAR contém um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente uma 4-1BB humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades forne- cidas, pelo menos um do primeiro receptor antigênico quimérico e do segundo receptor antigênico quimérico contém uma região de sinaliza- ção intracelular que contém um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente de 4-1BB humana.
[00143] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no tratamento fornecidos, a região de sina- lização coestimuladora do segundo CAR contém: um domínio de sina- lização intracelular de uma CD28 humana; e/ou a sequência apresen-
tada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.
[00144] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no tratamento fornecidos, a região de sina- lização coestimuladora do segundo CAR contém: um domínio de sina- lização intracelular de 4-1BB humana; e/ou a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.
[00145] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos ou para usos no tratamento fornecidos, o segundo recep- tor antigênico quimérico codificado contém, a partir de seu N para C término, na ordem: o domínio de ligação a antígeno, o espaçador, o domínio transmembrana e a região de sinalização intracelular.
[00146] Dentre os polinucleotídeos, são fornecidos no presente do- cumento polinucleotídeos que contêm (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro receptor antigênico quiméri- co (CAR) que contém um primeiro domínio de ligação a antígeno; e (ii) uma segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica um segundo receptor antigênico quimérico (CAR) que contém um segundo domínio de ligação a antígeno; em que o primeiro CAR e o segundo CAR con- têm, cada um, o seguinte: (a) o primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno, (b) um espaçador, (c) um domínio transmembrana e (d) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular e uma região de sinalização coestimuladora; em que um ou mais de (b) a (d) no pri- meiro CAR e os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR contêm a sequência de aminoácidos idêntica; e em que a(s) sequên- cia(s) de nucleotídeos que codifica(m) o um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR difere, quanto à sequência, da(s) sequência(s) de nucle- otídeos que codifica(m) os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segun- do CAR.
[00147] Também são fornecidos no presente documento polinucleo- tídeos que contêm (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro receptor antigênico quimérico (CAR) que contém um primeiro domínio de ligação a antígeno capaz de ligação a uma das proteínas GPRC5D ou BCMA e (ii) uma segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica um segundo receptor antigênico quiméri- co (CAR) que contém um segundo domínio de ligação a antígeno ca- paz de ligação à outra das proteínas GPRC5D ou BCMA; em que o primeiro CAR e o segundo CAR contêm, cada um, o seguinte: (a) o primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de liga- ção a antígeno, (b) um espaçador, (c) um domínio transmembrana e (d) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular e uma região de sinalização coestimuladora; em que um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR e os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR contêm a sequência de aminoáci- dos idêntica; e em que a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifi- ca(m) o um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR difere, quanto à se- quência, da(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) os mes- mos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR.
[00148] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, os primeiro e segundo domínios de ligação a antígeno se ligam ao mesmo antígeno. Em algumas de qualquer uma das modalidades for- necidas, os primeiro e segundo domínios de ligação a antígeno se |i- gam a diferentes epítopos do mesmo antígeno. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, os primeiro e segundo domí-
nios de ligação a antígeno se ligam a antígenos diferentes. Em algu- mas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o primeiro domínio de ligação a antígeno se liga um primeiro antígeno expresso por ou associado a células de uma doença ou condição e o segundo domínio de ligação a antígeno se liga a um segundo antígeno expresso por ou associado a células da mesma doença ou condição.
[00149] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a doença ou condição é um câncer. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a doença ou condição é um câncer que ex- pressa a proteína GPRC5D. Em algumas de qualquer uma das moda- lidades fornecidas, a doença ou condição é um câncer que expressa a proteína BCMA. Em algumas de qualquer uma das modalidades for- necidas, a doença ou condição é um câncer que expressa a proteína GPRCS5D e que expressa a proteína BCMA. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o câncer é uma malignidade de cé- lulas plasmáticas e a malignidade de células plasmáticas é mieloma múltiplo (MM) ou plasmacitoma. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o câncer é mieloma múltiplo. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o câncer é mieloma múlti- plo recidivante/resistente.
[00150] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, os primeiro e segundo domínios de ligação a antígeno se ligam inde- pendentemente a um antígeno selecionado a partir do grupo que con- siste em GPRC5D, BCMA, CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI e FcRH5. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o primeiro domínio de ligação a antígeno se liga ao antígeno de matura- ção de células B (BCMA). Em algumas de qualquer uma das modali- dades fornecidas, o primeiro domínio de ligação a antígeno se liga ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D). Em algumas de qualquer uma das modalidades forneci-
das, o segundo domínio de ligação a antígeno se liga à proteína BCMA. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o segundo domínio de ligação a antígeno se liga à proteína GPRC5D.
[00151] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (a) é ou contém o primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segun- do domínio de ligação a antígeno, (b) é ou contém um espaçador, (c) é ou contém um domínio transmembrana e (d) é ou contém uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização in- tracelular e uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o um ou mais de (b) a (d) é um de (b) a (d). Em algumas de qualquer uma das modalidades forne- cidas, o um ou mais de (b) a (d) é dois de (b) a (d). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o um ou mais de (b) a (d) é cada um de (b) a (d).
[00152] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (a) é ou contém o primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segun- do domínio de ligação a antígeno, (b) é ou contém um espaçador, (c) é ou contém um domínio transmembrana e (d) é ou contém uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização in- tracelular e uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a(s) sequência(s) de nu- cleotídeos que codifica(m) o um ou mais de (a) a (d) no primeiro CAR e a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) os mesmos um ou mais de (a) a (d) no segundo CAR compreende não mais do que cerca de 20 pares de base consecutivos com homologia de sequência; e/ou a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR contêm não mais do que cerca de 20 pares de base consecutivos com homologia de sequência. Em algumas de qualquer uma das mo- dalidades fornecidas, a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifi-
ca(m) o um ou mais de (a) a (d) no primeiro CAR e a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) os mesmos um ou mais de (a) a (d) no segundo CAR contêm não mais do que entre cerca de 5 e cerca de pares de base consecutivos com homologia de sequência; e/ou a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR contêm não mais do que cerca de 5 e cerca de 15 pares de base con- secutivos com homologia de sequência. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) o um ou mais de (a) a (d) no primeiro CAR e a(s) sequên- cia(s) de nucleotídeos que codifica(m) os mesmos um ou mais de (a) a (d) no segundo CAR contêm não mais do que cerca de 10 pares de base consecutivos com homologia de sequência; e/ou a primeira se- quência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR contêm não mais do que cerca de 10 pares de base consecutivos com homo- logia de sequência.
[00153] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR são separadas por uma sequência de nucleotídeos que codifica um elemento multicistrônico, opcionalmente em que o elemento multi- cistrônico é um elemento bicistrônico. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o elemento multicistrônico é um IRES ou é uma sequência de salto ribossômico ou peptídeo de autoclivagem. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o elemento multicistrônico é uma sequência de salto ribossômico ou peptídeo de autoclivagem e a sequência de salto ribossômico ou peptídeo de auto- clivagem é um elemento T2A, P2A, E2A ou F2A. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, a sequência de nucleotídeos que codifica o um ou mais elementos multicistrônicos tem códons di- vergentes. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a sequência de nucleotídeos que codifica o T2A tem códons divergen- tes. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a se- quência de nucleotídeos que codifica o T2A é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID NO: 319.
[00154] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR tem códons otimizados para expressão em uma célula humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a segunda se- quência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR tem códons otimizados para expressão em uma célula humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o polinucleotídeo tem có- dons otimizados para expressão em uma célula humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, após transcrição do po- linucleotídeo em uma célula humana, opcionalmente uma célula T hu- mana, o MRNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro, do polinu- cleotídeo, exibe pelo menos cerca de 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de homogeneidade de RNA. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, após transcrição de a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR do polinucleotídeo em uma célula humana, opcionalmente uma célula T humana, o MRNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro, proveniente do primeiro ácido nucleico exibe pelo menos cerca de 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de homogeneidade de RNA. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, após transcrição de a segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR do polinucleotídeo em uma célula humana, opcionalmente uma célula T humana, o MRNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro, proveniente do se- gundo ácido nucleico exibe pelo menos cerca de 70 %, 75 %, 80 %, 85
%, 90 % ou 95 % de homogeneidade de RNA.
[00155] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, qualquer sítio doador de splicing e/ou aceitador de splicing potencial presentes na primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR exibe uma pontuação de previsão de splicing de cerca de ou pelo menos cerca de menos de 0,70, 0,65, 0,60, 0,55, 0,50, 0,45, 0,40, 0,35, 0,30, 0,25, 0,20 e/ou são previstos como estando en- volvidos em um evento de splicing com uma probabilidade de menos de 70 %, menos de 65 %, menos de 60 %, menos de 55 %, menos de 50 %, menos de 45 %, menos de 40 %, menos de 35 %, menos de 30 %, menos de 25 % ou menos de 20 %. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, qualquer sítio doador ou aceitador de Splicing potencial na segunda sequência de ácidos nucleicos que codi- fica o segundo CAR exibe uma pontuação de previsão de splicing de cerca de ou pelo menos cerca de menos de 0,70, 0,65, 0,60, 0,55, 0,50, 0,45, 0,40, 0,35, 0,30, 0,25, 0,20 e/ou são previstos como estan- do envolvidos em um evento de splicing com uma probabilidade de menos de 70 %, menos de 65 %, menos de 60 %, menos de 55 %, menos de 50 %, menos de 45 %, menos de 40 %, menos de 35 %, menos de 30 %, menos de 25 % ou menos de 20 %. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, quaisquer sítios doadores ou aceitadores de splicing potenciais no polinucleotídeo exibe uma pontuação de previsão de splicing de cerca de ou pelo menos cerca de menos de 0,70, 0,65, 0,60, 0,55, 0,50, 0,45, 0,40, 0,35, 0,30, 0,25, 0,20 e/ou são previstos como estando envolvidos em um evento de Splicing com uma probabilidade de menos de 70 %, menos de 65 %, menos de 60 %, menos de 55 %, menos de 50 %, menos de 45 %, menos de 40 %, menos de 35 %, menos de 30 %, menos de 25 % ou menos de 20 %.
[00156] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas,
os primeiro e/ou segundo domínios de ligação a antígeno de (a) é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, os primeiro e/ou segundo do- mínios de ligação a antígeno de (a) é ou contém um fragmento variá- vel com uma única cadeia (scFv). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, os primeiro e/ou segundo domínios de ligação a antígeno de (a) contém uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL).
[00157] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de li- gação a antígeno contém uma região VH que contém uma CDR-H1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 209, uma CDR-H2 conforme apresentado em SEQ ID NO: 210 e uma CDR-H3 conforme apresen- tado em SEQ ID NO: 211 e uma região VL que contém uma CDR-L1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 230, uma CDR-L2 conforme apresentado em SEQ ID NO: 231 e uma CDR-L3 conforme apresenta- do em SEQ ID NO: 232. Em algumas de qualquer uma das modalida- des fornecidas, um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o se- gundo domínio de ligação a antígeno contém uma região VH e uma região VL que contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOS: 197 e 198, respectivamente. Em qualquer uma das modalidades fornecidas, o primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno contém a sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de ami- noácidos que exibe pelo menos em ou cerca de 90 %, pelo menos cerca de ou cerca de 91 %, pelo menos em ou cerca de 92 %, pelo menos em ou cerca de 93 %, pelo menos em ou cerca de 94 %, pelo menos em ou cerca de 95 %, pelo menos em ou cerca de 96 %, pelo menos em ou cerca de 97 %, pelo menos em ou cerca de 98 %, pelo menos em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID
NO: 241.
[00158] Em qualquer uma das modalidades fornecidas, um do pri- meiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno contém uma região VH contém uma CDR-H1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 125, uma CDR-H2 conforme apresenta- do em SEQ ID NO: 126 e uma CDR-H3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 127 e uma região VL que contém uma CDR-L1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 130, uma CDR-L2 conforme apresentado em SEQ ID NO: 131 e uma CDR-L3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 132. Em qualquer uma das modalidades fornecidas, um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de liga- ção a antígeno contém uma região VH e uma região VL que contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente. Em qualquer uma das modalidades fornecidas, um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos em ou cerca de 90 %, pelo menos cerca de ou cerca de 91 %, pelo menos em ou cerca de 92 %, pelo menos em ou cerca de 93 %, pelo menos em ou cerca de 94 %, pelo menos em ou cerca de 95 %, pelo menos em ou cerca de 96 %, pelo menos em ou cerca de 97 %, pelo menos em ou cerca de 98 %, pelo menos em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 8.
[00159] Em qualquer uma das modalidades fornecidas, um do pri- meiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno contém uma região VH que contém uma CDR-H1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 209, uma CDR-H2 conforme apresenta- do em SEQ ID NO: 210 e uma CDR-H3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 211 e uma região VL que contém uma CDR-L1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 230, uma CDR-L2 conforme apresentado em SEQ ID NO: 231 e uma CDR-L3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 232; e o outro do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno contém uma CDR-H1 confor- me apresentado em SEQ ID NO: 125, uma CDR-H2 conforme apre- sentado em SEQ ID NO: 126 e uma CDR-H3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 127 e uma região VL que contém uma CDR-L1 con- forme apresentado em SEQ ID NO: 130, uma CDR-L2 conforme apre- sentado em SEQ ID NO: 131 e uma CDR-L3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 132. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segun- do domínio de ligação a antígeno contém uma região VH e uma região VL que contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOS: 197 e 198, respectivamente; e o outro do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno con- tém uma região VH e uma região VL que contêm as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamen- te. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, um dos primeiro ou segundo domínios de ligação a antígeno contém a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 e o outro dos primeiro ou segundo domínios de ligação a antígeno contém a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8.
[00160] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, um dos primeiro ou segundo domínios de ligação a antígeno é codifi- cado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO:
310. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, um dos primeiro ou segundo domínios de ligação a antígeno é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 264 ou SEQ ID NO: 311. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, os primeiro ou segundo domínios de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID
NO: 310 e o outro dos primeiro ou segundo domínios de ligação a an- tígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 311
[00161] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (b) é ou contém um espaçador. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (b) contém uma porção de uma imunoglobuli- na. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (b) contém uma sequência de uma região de dobradiça, uma região CH2 e CH3. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de dobradiça contém a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4 e/ou uma região de dobradiça de I9G2, em que a região de dobradiça de IgG4 é opcionalmente uma região de dobra- diça de IgG4 humana e a região de dobradiça de IgG2 é opcionalmen- te uma região de dobradiça de IgG2 humana; a região CH2 contém a totalidade ou uma porção de uma CH2 de IgG4 e/ou uma CH2 de I9gG2, em que a CH2 de IgG4 é opcionalmente uma CH2 de IgG4 hu- mana e a CH2 de IgG2 é opcionalmente uma CH2 de IgG2 humana; e/ou a região CH3 contém a totalidade ou uma porção de uma CH3 de IgG4 e/ou uma CH3 de IgG2, em que a CH3 de IgG4 é opcionalmente uma CH3 de IgG4 humana e a CH3 de IgG2 é opcionalmente uma CH3 de IgG2 humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, as regiões de dobradiça, CH2 e CH3 contêm a totalidade ou uma porção de uma dobradiça, a totalidade ou uma porção de uma CH? e a totalidade ou uma porção de uma CH3 de IgG4 humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, uma ou mais das regiões de dobradiça, CH2 e CH3 são quiméricas e contêm uma dobradiça, CH2 e CH3 de IgG4 humana e IgG2 humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (b) contém uma região de dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma região de dobradiça de IgG4 modificada que contém pelo menos uma substituição de aminoá-
cido comparado com a região de dobradiça de IgG4 humana; uma re- gião CH2 quimérica de I9gG2/4; e uma região CH3 de IgG4.
[00162] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (b) é ou contém um espaçador. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas (b) tem um comprimento a partir de ou a partir de cerca de 125 a 300 aminoácidos de comprimento, 125 a 250 ami- noácidos de comprimento, 125 a 230 aminoácidos de comprimento, 125 a 200 aminoácidos de comprimento, 125 a 180 aminoácidos de comprimento, 125 a 150 aminoácidos de comprimento, 150 a 300 ami- noácidos de comprimento, 150 a 250 aminoácidos de comprimento, 150 a 230 aminoácidos de comprimento, 150 a 200 aminoácidos de comprimento, 150 a 180 aminoácidos de comprimento, 180 a 300 ami- noácidos de comprimento, 180 a 250 aminoácidos de comprimento, 180 a 230 aminoácidos de comprimento, 180 a 200 aminoácidos de comprimento, 200 a 300 aminoácidos de comprimento, 200 a 250 ami- noácidos de comprimento, 200 a 230 aminoácidos de comprimento, 230 a 300 aminoácidos de comprimento, 230 a 250 aminoácidos de comprimento ou 250 a 300 aminoácidos de comprimento, opcional- mente em que o espaçador é em ou cerca de 224, em ou cerca de 225, em ou cerca de 226, em ou cerca de 227, em ou cerca de 228 ou em ou cerca de 229 aminoácidos de comprimento. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (b) é ou contém a sequên- cia de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 17. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (b) em um do primeiro CAR ou o segundo CAR codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 48 e (b) no outro do primeiro CAR ou o segundo CAR codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305.
[00163] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (c) é ou contém um domínio transmembrana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (c) é ou contém um domínio trans- membrana de CD4, CD28 ou CD8, opcionalmente um domínio trans- membrana de CD4 humana, CD28 humana ou CD8 humana. Em al- gumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (c) é ou contém uma CD28 humana domínio transmembrana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (c) é ou contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, (c) em um do primeiro CAR ou o segundo CAR codificado pela sequência de nucleotídeos apresenta- da em SEQ ID NOS: 56 e (c) no outro do primeiro CAR ou segundo CAR é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 307.
[00164] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (d) é ou contém uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização intracelular e uma região de sinalização coes- timuladora. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de sinalização intracelular de (d) é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do re- ceptor de células T (TOR) e/ou contém um motivo de ativação com ba- se em tirosina imunorreceptora (ITAM). Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de sinalização intracelular de (d) é ou contém um domínio de sinalização citoplásmico de a CD3- zeta (CD36) ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta humana.). Em algu- mas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de sina- lização intracelular de (d) é ou contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o domínio de sinalização intracelular de (d) em um do primeiro CAR ou o segundo CAR codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 58 e o domínio de sina-
lização intracelular de (d) no outro do primeiro CAR ou o segundo CAR codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 309.Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (d) é ou contém uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização intracelular e uma região de sinalização coes- timuladora. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora de (d) contém um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T ou a porção de sinalização da mesma. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora de (d) contém um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou a porção de sinalização das mesmas, opcionalmente de CD28 humana, 4-1BB humana ou ICOS humana. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização co- estimuladora de (d) contém um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização coestimuladora de (d) é ou contém a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a região de sinalização co- estimuladora de (d) em um do primeiro CAR ou o segundo CAR codifi- cado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NOS: 60 e a região de sinalização coestimuladora de (d) no outro do primei- ro CAR ou o segundo CAR codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 308.
[00165] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, (a) é ou contém o primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segun- do domínio de ligação a antígeno, (b) é ou contém um espaçador, (c) é ou contém um domínio transmembrana e (d) é ou contém uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização in- tracelular e uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, um do primeiro CAR ou o segundo CAR contém (a) um primeiro domínio de ligação a antígeno que se liga à proteina GPRC5D, opcionalmente em que o primeiro domínio de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleo- tídeos apresentada em SEQ ID NO: 311, (b) um espaçador codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305, (c) um domínio transmembrana codificado pela sequência de nucleotí- deos apresentada em SEQ ID NO: 307 e (d) uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização intracelular codifi- cado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 309 e uma região de sinalização coestimuladora codificada pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 308; o outro do primeiro CAR ou o segundo CAR contém (a) um domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína BCMA, opcionalmente em que o domí- nio de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 310, (b) um espaçador codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 48, (c) um domínio transmembrana codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 56 e (d) uma região de sinalização intra- celular que contém um domínio de sinalização intracelular codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 58 e uma região de domínio de sinalização coestimuladora codificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 60.
[00166] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR está localizada em direção à extremidade 5' do polinucleotídeo em re- lação à segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o primeiro CAR contém um domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína GPRC5D e o segundo CAR contém um domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína BCMA. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o primeiro CAR contém um domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína BOCMA e o segundo CAR contém um domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína GPRCS5D.
[00167] Também são fornecidos no presente documento polinucleo- tídeos que contêm (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro receptor antigênico quimérico (CAR), (ii) uma se- gunda sequência de ácidos nucleicos que codifica um segundo recep- tor antigênico quimérico (CAR) e (iii) uma sequência de nucleotídeos que codifica um elemento multicistrônico, em que a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequên- cia de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR são separadas por o elemento multicistrônico; em que o primeiro CAR contém um primeiro domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína GPRCS5D, opcionalmente em que o primeiro domínio de ligação a antí- geno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 311; um espaçador codificado pela sequência de nucleo- tídeos apresentada em SEQ ID NO: 305; um domínio transmembrana codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 307; e uma região de sinalização intracelular que contém um do- mínio de sinalização intracelular codificado pela sequência de nucleo- tídeos apresentada em SEQ ID NO: 309 e uma região de sinalização coestimuladora codificada pela sequência de nucleotídeos apresenta- da em SEQ ID NO: 308; em que o segundo CAR contém um segundo domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína BCMA opcional- mente em que o segundo domínio de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 310; um espaçador codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 48; um domínio transmembrana codificado pela sequên-
cia de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 56; e uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização intrace- lular codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 58 e uma região de domínio de sinalização coestimuladora co- dificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 60; e em que a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR está localizada em direção à extremidade 5' do polinu- cleotídeo em relação à segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR.
[00168] Também são fornecidos no presente documento polinucleo- tídeos que contêm (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro receptor antigênico quimérico (CAR), (ii) uma se- gunda sequência de ácidos nucleicos que codifica um segundo recep- tor antigênico quimérico (CAR) e (iii) uma sequência de nucleotídeos que codifica um elemento multicistrônico, em que a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequên- cia de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR são separadas por o elemento multicistrônico; em que o primeiro CAR contém um primeiro domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína BCMA, opcionalmente em que o primeiro domínio de ligação a antígeno é co- dificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 310, um espaçador codificado pela sequência de nucleotídeos apre- sentada em SEQ ID NO: 48, um domínio transmembrana codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 56 e uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de si- nalização intracelular codificado pela sequência de nucleotídeos apre- sentada em SEQ ID NO: 58 e uma região de domínio de sinalização coestimuladora codificada pela sequência de nucleotídeos apresenta- da em SEQ ID NO: 60 em que o segundo CAR contém um segundo domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína GPRC5D, opcio-
nalmente em que o segundo domínio de ligação a antígeno é codifica- do pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 311, um espaçador codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305, um domínio transmembrana codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 307 e uma regi- ão de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização intracelular codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 309 e uma região de sinalização coestimuladora codifica- da pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 308; em que a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o pri- meiro CAR está localizada em direção à extremidade 5' do polinucleo- tídeo em relação à segunda sequência de ácidos nucleicos que codifi- ca o segundo CAR.
[00169] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o elemento multicistrônico contém a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 37. Em algumas de qualquer uma das moda- lidades fornecidas, o elemento multicistrônico é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NOS: 44 ou SEQ ID NO: 45. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o elemento multicistrônico é codificado por uma sequência de nucleo- tídeos apresentada em SEQ ID NO: 44. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o elemento multicistrônico é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 45. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o elemento multicistrônico é codificado por uma sequência de nucleotídeos apre- sentada em SEQ ID NO: 319.
[00170] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o polinucleotídeo contém a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 299. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o polinucleotídeo codifica a sequência apresentada em
SEQ ID NO: 298.
[00171] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o polinucleotídeo contém a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 302. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o polinucleotídeo codifica a sequência apresentada em SEQ ID NO: 301.
[00172] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o polinucleotídeo contém a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 315. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o polinucleotídeo contém a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 316.
[00173] Também são fornecidos no presente documento polinucleo- tídeos, em que um polinucleotídeo codifica um domínio de ligação à proteína GPRC5D, um domínio de ligação à proteína BCMA e uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinaliza- ção intracelular de 4-1BB. Em algumas de qualquer uma das modali- dades fornecidas, o polinucleotídeo contém a sequência de nucleotí- deos apresentada em SEQ ID NO: 317.
[00174] Também são fornecidos vetores que contêm qualquer um dos polinucleotídeos fornecidos. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, o vetor é um vetor viral. Em algumas de qual- quer uma das modalidades fornecidas, o vetor viral é um vetor lentivi- ral ou um vetor retroviral.
[00175] Também são fornecidas células manipuladas que contêm qualquer um dos receptores antigênicos quiméricos fornecidos no pre- sente documento. Em algumas de qualquer uma das modalidades for- necidas, a célula manipulada contém um receptor antigênico quimérico fornecido no presente documento e contém ainda um polinucleotídeo que contém uma sequência de nucleotídeos que codifica um segundo receptor antigênico quimérico.
[00176] Também são fornecidas células manipuladas que contêm qualquer um dos polinucleotídeos fornecidos no presente documento.
[00177] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a célula manipulada é um linfócito. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a célula manipulada é uma célula NK ou uma célula T. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a célula manipulada é uma célula T e a célula T é uma célula T CD4* ou CD8*.
[00178] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a célula manipulada foi manipulada a partir de uma célula primária ob- tida a partir de um indivíduo.
[00179] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a célula manipulada está dentre uma pluralidade das células manipu- ladas, onde menos de ou menos de cerca de 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 % ou 1 % das células na pluralidade contêm um recep- tor antigênico quimérico que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno.
[00180] “Também são fornecidas composições que contêm qualquer um dos receptores quiméricos fornecidos no presente documento. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a composição contém células T CD4* e CD8* e a proporção de células T CD4* para CDB8* é a partir de ou a partir de cerca de 1:3 a 3:1. Em algumas mo- dalidades, a proporção de células T CD4* e CD8* na composição é 1:2 a 2:1. Em algumas modalidades, a proporção de células T CD4* e CDB8* na composição é 1:1. Em algumas de qualquer uma das modali- dades fornecidas, a composição contém ainda um excipiente farma- ceuticamente aceitável. Em algumas de qualquer uma das modalida- des fornecidas, a composição é estéril.
[00181] Também são fornecidos no presente documento métodos de tratamento que incluem administrar qualquer uma das composições fornecidas no presente documento que contêm qualquer uma das cé- lulas manipuladas fornecidas no presente documento ou qualquer uma das composições fornecidas no presente documento que contêm qualquer um dos receptores antigênicos quiméricos fornecidos no pre- sente documento a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno.
Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a dose das células contém entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expres- sam CAR e 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cer- ca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e 4,5 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 1,5 x 108 células T que ex- pressam CAR e 3,0 x 10º células T que expressam CAR.
Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém entre em ou cerca de 1 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 2 x 10º células T que expressam CAR.
Em algumas de quaisquer modali- dades, a dose das células contém entre em ou cerca de 2,5 x 107 célu- las T que expressam CAR e em ou cerca de 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expres- sam CAR e em ou cerca de 4,5 x 10º células T que expressam CAR ou entre em ou cerca de 1,5 x 10º células T que expressam CAR e em ou cerca de 3,0 x 10º células T que expressam CAR.
Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém em ou cerca de 1,5 x 107, em ou cerca de 2,5 x 107, em ou cerca de 5,0 x 107, em ou cerca de 7,5 x 107, em ou cerca de 1,5 x 10º, em ou cerca de 2,25 x 108, em ou cerca de 3,0 x 108, em ou cerca de 4,5 x 108, em ou cerca de 6,0 x 108, em ou cerca de 8,0 x 10º ou em ou cerca de 1,2 x 10º células T que expressam CAR.
Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém em ou cerca de 5,0 x 107, em ou cerca de 1,5 x 108, em ou cerca de 3,0 x 108º em ou cerca de 4,5 x 108 células T que expressam CAR.
Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém em ou cerca de 5,0 x 107, em ou cerca de 1,5 x 10º,
em ou cerca de 3,0 x 10º º*º em ou cerca de 4,5 x 108 células T que ex- pressam CAR. Em algumas de quaisquer modalidades, a dose das células contém em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR.
[00182] Também são fornecidos no presente documento métodos de tratamento que incluem administrar qualquer uma das composições fornecidas no presente documento que contêm qualquer uma das cé- lulas manipuladas fornecidas no presente documento ou qualquer uma das composições fornecidas no presente documento que contêm qualquer um dos receptores antigênicos quiméricos fornecidos no pre- sente documento a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a dose das células contém entre em ou cerca de 1,0 x 107 células T que expres- sam CAR e 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cer- ca de 1,5 x 107 células T que expressam CAR e 4,5 x 108 células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 2,0 x 107 células T que ex- pressam CAR e 3,0 x 10º células T que expressam CAR.
[00183] “Também são fornecidos no presente documento métodos de tratamento que incluem: administrar uma composição que contém uma pluralidade de células manipuladas que contêm um primeiro re- ceptor antigênico quimérico e um segundo receptor antigênico quimé- rico, em que cada um é qualquer receptor antigênico quimérico forne- cido no presente documento ou codificado por qualquer um dos poli- nucleotídeos fornecidos no presente documento, a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno; e administrar ao indivíduo uma com- posição que contém uma pluralidade de segundas células manipula- das que contêm um segundo receptor antigênico quimérico. Em algu- mas de qualquer uma das modalidades fornecidas, a dose da plurali- dade de primeiras células manipuladas e a dose da pluralidade de se- gundas células manipuladas contêm independentemente entre em ou cerca de 1,0 x 107 células T que expressam CAR e 1,5 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 1,25 x 10º células T que expressam CAR e 0,6 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e 2,25 x 10º célu- las T que expressam CAR, entre em ou cerca de 7,5 x 107 células T que expressam CAR e 1,5 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e 4,5 x 10º células T que expressam CAR, en- tre em ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam CAR e 3,0 x 108 células T que expressam CAR.
[00184] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, a doença ou transtorno está associado à ex- pressão do receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D).
[00185] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, a doença ou transtorno está ainda associado à expressão do antígeno de maturação de células B (BCMA).
[00186] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, a doença ou transtorno é um transtorno rela- cionados a células B. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, a doença ou transtorno associado à proteína BCMA é uma doença ou transtorno autoimune. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, a doença ou transtorno autoimune é lúpus eritematoso sistêmico (Sys- temic Lupus Erythematosus, SLE), nefrite por lúpus, doença inflamató- ria intestinal, artrite reumatoide, vasculite associada a ANCA, púrpura trombocitopênica idiopática (Idiopathic Thrombocytopenia Purpura, ITP), púrpura trombocitopênica trombótica (Thrombotic Thrombocyto- penia Purpura, TTP), trombocitopenia autoimune, doença de Chagas,
doença de Grave, granulomatose de Wegener, poliarterite nodosa, síndrome de Sjogren, pênfigo comum, escleroderma, esclerose múlti- pla, psoríase, nefropatia por IgA, polineuropatias por IgM, vasculite, diabetes mellitus, síndrome de Reynaud, síndrome antifosfolipídica, doença de Goodpasture, doença de Kawasaki, anemia hemolítica au- toimune, miastenia grave ou glomerulonefrite progressiva.
[00187] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, a doença ou transtorno é um câncer. Em al- gumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos for- necidos, o câncer é um câncer que expressa a proteína GPRC5D. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, o câncer é uma malignidade de células plasmáticas e a malignidade de células plasmáticas é mieloma múltiplo (MM) ou plas- macitoma. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, o câncer é mieloma múltiplo (MM). Em algu- mas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos forne- cidos, o câncer é a mieloma múltiplo recidivante/resistente.
[00188] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, o indivíduo é resistente a ou teve uma recaí- da após administração de uma terapia que tem como alvo a proteína BCMA, opcionalmente após administração de células T que compre- endem um CAR que se liga especificamente à proteína BCMA. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, é selecionado para tratamento um indivíduo que é resisten- te a ou teve uma recaída após administração de uma terapia que tem como alvo a proteína BCMA, opcionalmente após administração célu- las T que compreendem um CAR que se liga especificamente à prote- ína BCMA. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, antes de administração da dose das células, o indivíduo recebeu anteriormente a administração de uma terapia que tem como alvo a proteína BCMA para tratamento de uma doença ou transtorno. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, antes de administração da primeira dose de células e da segunda dose de células, o indivíduo recebeu anterior- mente a administração de uma terapia que tem como alvo a proteína BCMA para tratamento de uma doença ou transtorno.
[00189] Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, a terapia que tem como alvo a proteína BCMA compreende uma composição que compreende células T que compreendem um CAR que se liga especificamente à proteína BCMA. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos méto- dos fornecidos, o indivíduo é resistente a ou teve uma recaída após administração de a terapia que tem como alvo a proteína BCMA, opci- onalmente após administração de células T que compreendem um CAR que se liga especificamente à proteína BCMA. Em algumas de qualquer uma das modalidades fornecidas dos métodos fornecidos, o indivíduo compreende células de mieloma múltiplo que exibem perda de antígeno BCMA ou epítopo, regulação negativa da proteína BCMA e/ou células tumorais negativas para a proteína BCMA após uma ad- ministração anterior. Breve Descrição dos Desenhos
[00190] A Figura 1A mostra dados de expressão de mRNA da Cancer Cell Line Encyclopedia CD138 (escala log2). Tipo de câncer, da esquerda para a direita: aerodigestivo superior (32); esôfago (25); próstata (7); mieloma múltiplo (30); duto biliar (8); pulmão (131); pân- creas (44); rim (34); mama (58); colorretal (61); estômago (38); menin- gioma (3); fígado (28); glioma (62); osteossarcoma (10); tireoide (12); endométrio (27); tecido mole (21); mesotelioma (11); ovário (51); con- drossarcoma (4); puimão de pequenas células (53); melanoma (61); neuroblastoma (17); meduloblastoma (4); Sarcoma de Ewing (12); Lin-
foma de Hodgkin (12); DLBCL (18); outro linfoma (28); Célula B (15); CML (15); Linfoma de Burkitt (11); Célula T (16); AML (34); outra leu- cemia (1).
[00191] A Figura 1B mostra a expressão de MRNA de GPRC5D em linhagens de células malignas [n = 1036; Cancer Cell Line En- cyclopedia (CCLE)]. RMA, média robusta de múltiplas matrizes; DLBCL, linfoma difuso de células B grandes; CML, leucemia mieloide crônica; ALL, leucemia linfoblástica aguda; AML, leucemia mieloide aguda; NSC, células não pequenas. Tipo de câncer, da esquerda para a direita: mieloma múltiplo (30); outra leucemia (1); DLBCL (18); CML (15); meningioma (3); outro linfoma (28); Linfoma de Burkitt (11); Lin- foma de Hodgkin (12); Célula T (16); Célula B (15); duto biliar (8); AML (34); pâncreas (44); tireoide (12); colorretal (61); rim (34); osteossar- coma (10); trato urinário (27); mama (58); neuroblastoma (17); pulmão de células não pequenas (131); Sarcoma de Ewing (12); próstata (7); melanoma (61); aerodigestivo superior (32); endométrio (27); medulo- blastoma (4); fígado (28); ovário (51); estômago (38); glioma (62); pul- mão de pequenas células (53); mesotelioma (11); esôfago (25); outro (150); condrossarcoma (4).
[00192] A Figura 2A mostra dados de expressão de CD138 por GTEx RNASeg para vários órgãos. Tipo de tecido, da esquerda para a direita: cerebelo, hemisfério cerebral, córtex cingulado anterior, córtex frontal, córtex, amígdala, hipocampo, nucleus accumbens, caudato, putâmen, cólon sigmoide, nervo tibial, músculo esquelético, útero, músculo do esôfago, junção gastroesofágica do esôfago, hipotálamo, adiposo, colo do útero, artéria coronária, medula espinhal cervical, substância negra, ovário, artéria tibial, tecido mamário, trompa de Fa- lópio, adiposo, rim, ventrículo esquerdo, colo do útero, glândula adre- nal, bexiga, sangue total, pele (exposta ao sol), pele (não exposta ao sol), artéria aórtica, amígdala, intestino delgado, pâncreas, fígado,
apêndice atrial, vagina, estômago, próstata, baço, sangue do cordão umbilical, tireoide, cólon transverso, hipófise, mucosa do esôfago, tes- tículo, glândula salivar menor, pulmão, medula óssea.
[00193] A Figura 2B mostra a expressão de MRNA de GPRC5D em tecidos normais de acordo com dados de Gtex RNASegq (Gtex 708 ENSGOO0000111291.4). A linha tracejada representa o nível de expres- são da proteína GPRC5D em células de MM primárias classificadas em CD138 (Blueprint RNAseg; n = 9). FPKM, fragmentos por quiloba- se de transcrição por milhão de leituras mapeadas. Tipo de tecido, da esquerda para a direita: cerebelo, hemisfério cerebral, córtex cingulado anterior, córtex frontal, córtex, amígdala, hipocampo, nucleus accum- bens, caudato, putâmen, cólon sigmoide, nervo tibial, músculo esque- lético, útero, músculo do esôfago, junção gastroesofágica do esôfago, hipotálamo, adiposo, colo do útero, artéria coronária, medula espinhal cervical, substância negra, ovário, artéria tibial, tecido mamário, trom- pa de Falópio, tecido adiposo, rim, ventrículo esquerdo, colo do útero, glândula adrenal, bexiga, sangue total, pele (exposta ao sol), pele (não exposta ao sol), artéria aórtica, amígdala, intestino delgado, pâncreas, fígado, apêndice atrial, vagina, estômago, próstata, baço , sangue do cordão umbilical, tireoide, cólon transverso, hipófise, mucosa do esô- fago, testículo, glândula salivar menor, pulmão, MM primário (medula Óssea).
[00194] A Figura 2C mostra a expressão de MRNA de GPRC5D por Blueprint RNAsegq para tipos de células de tecido humano primário. FPKM, fragmentos por quilobase de transcrição por milhão de leituras mapeadas.
[00195] A Figura 3A mostra curvas de Kaplan-Meier para sobrevida sem progressão (Progession Free Survival, PFS) estratificada por indi- víduos com MM cuja expressão da proteína GPRC5D por RNAsegq es- tava acima (>) ou abaixo (< ) da expressão média da proteína
GPRCB5D. A significância foi determinada por meio do teste log-rank de riscos iguais (p = 0,0031; n = 765).
[00196] A Figura 3B mostra pontuações do sistema de estadiamen- to internacional (International Staging System, ISS) para indivíduos com MM, estratificados pelo nível de expressão da proteína GPRC5D (n = 369 acima da mediana, 374 abaixo da mediana).
[00197] As Figuras 3C-3H mostram a frequência de anormalidades citogenéticas comuns entre indivíduos com MM, estratificadas pelo ní- vel de expressão da proteína GPRC5D (n = 287-291 acima da media- na, 280-282 abaixo da mediana).
[00198] A Figura 4A mostra a quantificação boxplot de valores atí- picos (outlier) para a proteína GPRC5D em linhagens de células após detecção imuno-histoquímica. Os boxplots de valores atípicos indicam densidade óptica mediana da membrana e intervalo interquartil (Inter- Quartile Range, IQR); whiskers são 1,5x1QR. A intensidade média de fluorescência (Mean Fluorescence Intensity, MFI) da expressão da proteína GPRC5D em células K562 concebidas para expressar a pro- teína é dada pelo número após a linhagem de células designada K562-GPRCB5D.
[00199] A Figura 4B mostra a imunofluorescência quantitativa au- tomatizada em 83 amostras de medula óssea de pacientes com MM. Cada coluna representa uma amostra individual do paciente.
[00200] A Figura 4C mostra a porcentagem de amostras de pacien- tes nas quais mais de 50 % das células CD138* expressaram as prote- ínas BCMA, GPRC5D ou BCMA ou GPRC5D, conforme determinado por meio de imunofluorescência quantitativa automatizada em 83 amostras de medula óssea de pacientes com MM.
[00201] A Figura 4D mostra a correlação de expressão das proteí- nas BCMA e GPRC5D em células CD138*; R2 = 0,156.
[00202] A Figura 5 mostra a ligação de epítopo linear, conformaci-
onal e descontínua de um subconjunto de scFvs que têm como alvo a proteína GPRC5D avaliados por meio da tecnologia com base em ELISA.
[00203] As Figuras 6A e 6B mostram a sinalização independente de antígeno (tônica) de CARs que contêm os scFvs e espaçadores indicados. As células repórter Jurkat Nur77-RFP foram transduzidas com 1 de 42 construções bicistrônicas de CAR/GFP. 5x105º células Jurkat GFP* viáveis foram semeadas e monitoradas quanto à expres- são de RFP 11 dias após a transdução na ausência de antígeno alvo. A expressão de RFP e GFP indicou sinalização tônica; a expressão de GFP apenas indicou CAR transduzido sem sinalização tônica.
[00204] As Figuras 6C-6E representam a sinalização dependente de antígeno vs. independente de antígeno de CARs candidatos com espaçadores longos (Figura 6C), médios (Figura 6D) e curtos (Figura 6E), medidos após cultura de células repórter Jurkat Nur77-RFP a 2:1 com células MM.1S (que expressam a proteína GPRC5D endógena) durante 20h. Porcentagem de sinalização de células T CAR determi- nada por: RFP*GFP*/total de células GFP*. Dados representativos de 2 experimentos.
[00205] A Figura 6F mostra células transduzidas por CAR indica- das como GFP"* ao longo do eixo y. RFP, um substituto para a expres- são de Nur77, é mostrado ao longo do eixo x. As porcentagens mos- tradas são de células GFP* transduzidas apenas (apenas quadrantes superiores) que são RFP*.
[00206] A Figura 7A representa a ligação de células HEK293 que expressam transitoriamente uma de uma biblioteca de receptores aco- plados à proteína G humana (GPCR) com GFP citoplasmático a célu- las HEK293 cocultivadas que expressam transitoriamente o clone de scFv anti-GPRC5D 203, um espaçador longo e mCherry 761 citoplas- mático (ambos em suspensão), quantificado por meio de análise cito-
métrica de fluxo automatizada. Limiar pré-especificado para significân- cia (linha vermelha): pontuação Z 3; p < 0,0027.
[00207] A Figura 7B mostra a ligação do anticorpo quimérico de clone de scFv-Fc de mlgG2a anti-GPRC5D 203 a células HEK293 que expressam as proteínas da superfície celular indicadas. É mostrada a confirmação de ligação a potenciais proteínas fora-do-alvo e ligantes não específicos identificados em uma triagem de microarranjo de > 4400 proteínas transmembrana. ZsGreen1, controle de transfecção; Isotipo, controle negativo de scFv-Fc de mIgG2a irrelevante; Interação CTLA-4/CD86, controle positivo.
[00208] A Figura7C mostra os resultados da avaliação de poten- ciais proteínas fora-do-alvo PCDH1A ou FOGR2A de ativação através do CAR anti-GPRC5D (203). Células repórter de ativação Jurkat Nur77-RFP que expressam um plasmídeo bicistrônico que contém um CAR anti-GPRC5D (203) e GFP foram cocultivadas com células K562 que expressam os antígenos indicados, GPRC5D (controle positivo) ou BCMA (controle negativo). A ativação foi determinada como % RFP*GFP"*/total de células GFP*.
[00209] A Figura 7D mostra que o silenciamento (knockout) media- do por CRISPR-Cas9 da proteína GPRC5D de uma linhagem de célu- las de MM aboliu a ativação de células repórter CAR anti-GPRC5D (203)-Jurkat Nur77, conforme avaliado ao medir as alterações na ex- pressão de RFP por meio de citometria de fluxo.
[00210] A Figura 8A mostra a expressão de MRNA de GPRC5D em linhagens de células de MM e células de MM primárias (em cai- xas).
[00211] A Figura 8B mostra resultados de citotoxicidade de células T CAR que expressam a proteína GPRC5D (203) contra células alvo MM1.S, OPM2 e RPMI-8226 após 24 h de cocultura, conforme indica- do pela porcentagem de lise, normalizada para células T CAR de doa-
dor correspondente, transduzidas de forma simulada (triplicatas técni- cas em cada um dos dois doadores; média + DP).
[00212] A Figura 9A mostra a morte celular de células OPM2-ffLuc MM induzida por células T CAR que incorporam o scFv indicado após 24 h de cocultura, conforme indicado pela bioluminescência dependen- te de ATP após adição de luciferina; normalizado para controle de cé- lulas tumorais apenas (dados agrupados de 2 experimentos, cada um realizado em triplicata, média + SEM; p < 0,001).
[00213] As Figuras 9B e 9C representam a análise de citometria de fluxo que descreve a morte de células mononucleares da medula ós- sea (Bone Marrow Mononuclear Cells, BMMCs) primárias de um paci- ente com MM recidivante após cocultura durante a noite com células T CAR anti-GPRC5D em uma proporção de 1:1 células T CAR*:BMMCSs. Células de MM, CD138*/CD38hi; gráficos delimitados em células CD3- viáveis.
[00214] A Figura 9D representa a análise de citometria de fluxo de BMMCs primárias de pacientes adicionais, representados para CD138*/CD3-.
[00215] As Figuras 10A a 10C mostram citocinas produzidas por células T CAR que incorporam o scFv indicado após cocultura a 1:1 com células de MM OPM? ou isoladamente, durante 24h, medidas no sobrenadante por ensaio multiplex Luminex.
[00216] As Figuras 11A e 11B mostram proliferação e as Figuras 11C e 11D mostram a ativação de células T CAR simuladas ou que expressam a proteína GPRC5D (203) cultivadas isoladamente, com células B-ALL (Nalm6; GPRC5D-) ou MM (OPM2; GPRC5D* endóge- no) em uma proporção de 1:1. As células T foram coradas com Cell- Trace Violet (CTV) antes de cocultura e coradas para CD4, CD8 e CD25 após 72 h. (A, B) A proliferação é indicada pela diluição da fluo- rescência de CTV. (C, D) A ativação é indicada pela fluorescência de
CD25 aumentada.
[00217] A Figura 12A representa a análise FACS representativa da expressão de CAR em células T CAR, medida usando um anticorpo específico para o espaçador.
[00218] A Figura 12B representa a sobrevida de camundongos tra- tados 14 dias após a injeção de OPM2 com 3x10º células T CAR que contêm 4-1BB que incorporam os clones scFv anti-GPRC5D indicados (n = 8/braço).
[00219] A Figura 12C representa o volume do tumor de camundon- gos e a sobrevida em um modelo de xenoenxerto RPMI-8226 de um de dois experimentos; dias medianos de sobrevida 29 vs. 50 (p < 0,05; n = 5/braço, representativo de dois experimentos).
[00220] A Figura 12D representa o volume de tumor de camundon- gos e a expansão de células T CAR em um modelo de xenoenxerto RPMI|-8226, monitorado por meio de citometria de fluxo de sangue pe- riférico usando um anticorpo para o espaçador para detectar o CAR (p < 0,001; n = 10/braço; ambos os pontos de tempo).
[00221] A Figura 13A representa a sobrevida de camundongos tra- tados em 21 dias após a injeção de OPM2 com 3x10º células T modifi- cadas para expressar uma construção bicistrônica que codifica ex- tGLuc e um CAR que incorpora scFv anti-CD19 (SJ25C1) ou GPRC5D (203) e um domínio coestimulador de 4-1BB ou CD28 (n = 5/braço).
[00222] As Figuras 13B, C e D representam a carga tumoral (ima- gem de bioluminescência de D-luciferina [BLI] de OPM-ffLuc) de ca- mundongos da Figura 13A.
[00223] A Figura 13E mostra resultados de homing de células T CAR (coelenterazina BLI de células T CAR extGLuc) de camundongos da Figura 13A realizado no dia 7 pós-tratamento com células T CAR.
[00224] As Figuras 14A e 14B mostram a resposta à dose de tera- pia com células T CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D e têm como alvo a proteína BCMA, administrada 14 dias após a injeção de OPM? (n = 8 camundongos/braço). Na Figura 14A, é mostrada a carga tumoral avaliada por BLI de OPM-fíLuc. Na Figura 14B, a porcentagem de sobrevida é mostrada (os p valores mostrados são vs. células T CAR transduzidas de forma simulada ou que têm um alvo irrelevante).
[00225] As Figuras 15A-15C representam os níveis de IFN-gama (Figura 15A), TNF-alfa (Figura 15B) e I|L-2 (Figura 15C) após 20 horas de cocultura de células T anti-GPRC5D (203), anti-BCMA ou proces- sadas de forma simulada com vinte tipos diferentes de células huma- nas primárias normais ou células OPM2 (média + DP).
[00226] A Figura 15D representa os resultados da triagem de clo- nes de scFv de reação cruzada de murino e cynomolgus para sinaliza- ção tônica. % RFP* indica ativação após cocultura em uma proporção de efetor: alvo de 1:1 (em relação às células transduzidas por CAR GFP*).
[00227] As Figuras 16A-C mostram a variação de massa corporal (Figura 16A), temperatura corporal (Figura 16B) ou BLI de células OPM?2-fíLuc (Figura 16C) após a injeção em camundongos de 3 x 10º células T humanas que expressam um CAR que contém um scFv anti- GPRCS5D (clone 205) humano/murino de reação cruzada.
[00228] A Figura 17A mostra a análise de FACs representativa da expressão de CAR conforme medido usando um marcador substituto de receptor truncado em células T de primatas não humanos (Non- Human Primate, NHP) transduzidas para expressar o CAR anti- GPRC5D de reatividade cruzada de cynomolgus ou a proteína GPRCS5D de cynomolgus.
[00229] A Figura 17B mostra a lise do alvo e a Figura 17C mostra a produção de IFNy por células T de NHP transduzidas para expressar tanto o CAR anti-GPRC5D de reação cruzada de cynomolgus como células T simuladas contra células apresentadoras de antígeno alvo
(target Antigen Presenting Cells, tAPCs) autólogas em várias propor- ções de efetor para alvo (E:T).
[00230] A Figura 17D mostra a lise do alvo e a Figura 17E mostra a produção de IFNy por células T de NHP transduzidas para expressar tanto o CAR anti-GPRC5D de reação cruzada de cynomolgus como células T simuladas contra células alvo K562 ou K562-GPRC5D em várias proporções de efetor para alvo (E:T).
[00231] A Figura 18A mostra resultados de PCR para o DNA que codifica o CAR como uma medida da persistência de células T CAR no sangue periférico e na medula óssea no dia 21 após a infusão. Células T de NHP transduzidas por CAR foram usadas como um controle posi- tivo.
[00232] As Figuras 18B-D mostram resultados de avaliação pato- lógica 1 a 21 dias após a injeção em macacos cynomolgus de células T de cynomolgus modificadas para expressar um CAR que contém um clone 202 de scFv anti-cGPRC5D de reação cruzada huma- no/cynomolgus. A Figura 18B representa a temperatura corporal, a Fi- gura 18C representa a variação de massa corporal e a Figura 18D re- presenta a massa corporal.
[00233] A Figura 19A representa imagens BLI nos dias 7e I5ea Figura 19B representa imagens no dia 34 de camundongos injetados no dia O com 1x10º população mista de células OPM2WT e células OPM28ºCMA-KO (GFP/fíLuc*) e injetados nos dias 8 e 16 com 3x10º das células T CAR indicadas. n = 5 camundongos/braço, representativo de 2 experimentos.
[00234] As Figuras 20A e 20B mostram células OPM2 na medula óssea de camundongos injetados com uma população mista de célu- las OPM?2 e células T CAR, conforme descrito nas Figuras 19A e 19B. Gráficos representativos de 3 camundongos por braço. Gráfico de vi- vo/morto obtido, mas não mostrado (n = 2 experimentos replicados com resultados comparáveis).
[00235] A Figura 21A mostra a sinalização tônica mínima através de um CAR anti-BCMA exembplificativo.
[00236] A Figura 21B mostra a lise de células alvo por células T humanas primárias que expressam o CAR anti-BCMA exemplificativo.
[00237] A Figura 21C mostra a secreção de IFN-gama por células T humanas primárias que expressam o CAR anti-BCMA exemplificati- vo após cocultura com células alvo.
[00238] A Figura 22A mostra uma perda de expressão da proteína GPRC5D ou expressão da proteína BCMA, conforme avaliado por meio de citometria de fluxo, em células OPM2 com silenciamento das proteínas GPRC5D ou BCMA, respectivamente.
[00239] A Figura 22B mostra a ativação específica para antígeno de CARs anti-BCMA e anti-GPRC5D exembplificativos.
[00240] A Figura 23 mostra os níveis de expressão dos genes de BCMA e GPRC5D em linhagens de células de mieloma múltiplo.
[00241] A Figura 24 mostra os níveis de expressão das proteínas BCMA e GPRC5D em mieloma múltiplo e linhagens de células de con- trole.
[00242] As Figuras 25A e 25B mostram a carga tumoral OPM2 em camundongos injetados com células OPM2 WT (Figura 25A), células OPM2 BCMA KO (Figura 25B; painel superior) ou células OPM2 GPRC5D KO (Figura 25B; painel inferior). Os camundongos foram tra- tados com composições de células que contêm células que expressam um CAR anti-BCMA (BCMA) ou um CAR anti-GPRC5D (GPRC5D) ou que contêm um pool de células gerado para conter células que ex- pressam CAR anti-BCMA e CAR anti-GPRC5D que expressam células em uma proporção de 1:1 (células GPRC5D e BCMA agrupadas).
[00243] A Figura 26 mostra a porcentagem de sobrevida de ca- mundongos injetados com células tumorais OPM?2 e tratados com três diferentes doses de células que expressam um CAR anti-GPRC5D (GPRC5D) ou um CAR anti-BCMA (BCMA) ou um pool de células que expressam CAR anti-BCMA e células que expressam CAR anti- GPRCS5D (células GPRC5D e BCMA agrupadas).
[00244] A Figura 27 mostra o volume do tumor em camundongos injetados com células RPMI8226 e tratados com três doses diferentes de células que expressam um CAR anti-GPRC5D (GPRC5D) ou um CAR anti-BCMA (BCMA) ou um pool de células que expressam CAR anti-wBCMA e células que expressam CAR anti-GPRC5D (células GPRC5D e BCMA agrupadas).
[00245] A Figura 28 mostra a porcentagem de sobrevida de ca- mundongos da Figura 27.
[00246] A Figura 29 representa estratégias de terapia-alvo dupla anti-BCMA e anti-GPRCB5D. (i) e (ii) representam pools de células que expressam CAR anti-BCMA e células que expressam CAR anti- GPRCS5D (células GPRC5D e BCMA agrupadas). (iii) e (iv) represen- tam construções bicistrônicas, cada uma contendo um CAR anti- BCMA e um CAR anti-GPRC5D separados por um peptídeo de auto- clivagem. (v) representa uma abordagem de CAR de "haste única", em que um scFv anti-BCMA e um scFv anti-GPRC5D estão em tandem, separados apenas por um ligante.
[00247] A Figura 30 mostra a expressão da construção indicada na superfície das células, após transdução retroviral de células com as respectivas construções da Figura 29.
[00248] A Figura 31 mostra a eficiência de transdução retroviral de cada uma das construções representadas na Figura 29, conforme ava- liado por meio de análise de citometria de fluxo.
[00249] A Figura 32A representa a citotoxicidade de células T que expressam as construções representadas na Figura 29 após cocultura com uma linhagem de células de mieloma múltiplo OPM?2 de tipo sel-
vagem, conforme indicado pela porcentagem de células tumorais lisa- das. Células T que expressam CAR e células alvo foram cultivadas em proporções E:T crescentes.
[00250] A Figura 32B representa a citotoxicidade de células que expressam as construções representadas na Figura 29 após cocultura com uma linhagem de células OPM2 com silenciamento da proteína BCMA, conforme indicado pela porcentagem de células tumorais lisa- das. Células T que expressam CAR e células alvo foram cultivadas em proporções E:T crescentes.
[00251] A Figura 33A mostra a capacidade de células T que ex- pressam as construções de CAR indicadas de secretar várias citocinas quando cocultivadas com células alvo que expressam as proteínas BCMA e GPRCB5D durante 24 horas.
[00252] A Figura 33B mostra a capacidade de células T que ex- pressam as construções de CAR indicadas de secretar várias citocinas quando cocultivadas com células alvo negativas para a proteína GPRCB5D que expressam a proteína BCMA durante 24 horas.
[00253] A Figura 33C mostra a capacidade de células T que ex- pressam as construções de CAR indicadas de secretar várias citocinas quando cocultivadas com células alvo negativas para a proteína BCMA que expressam a proteína GPRC5D durante 24 horas.
[00254] A Figura 34A representa a sobrevida de camundongos in- jetados com células OPM?2 de tipo selvagem após tratamento com cé- lulas T que expressam o(s) CAR(s) indicado(s).
[00255] A Figura 34B representa a sobrevida de camundongos da Figura 34A após uma segunda injeção de células OPM2 com silenci- amento de BCMA após tratamento com células T que expressam o(s) CAR(s) indicado(s).
[00256] As Figuras 35A-C representam o crescimento do tumor, conforme avaliado por meio de imagens de bioluminescência, em ca-
mundongos 30 dias (Figura 35A) ou 105 dias (Figura 35B) após uma injeção inicial de células OPM2 com silenciamento de BCMA (2 x 10º) ou 36 dias (Figura 35C) após uma segunda injeção de células OPM2 com silenciamento da proteína BCMA (3 x 106) após tratamento com 3 x 10º células T que expressam CAR.
[00257] A Figura 36 mostra a sobrevida de camundongos tratados com uma dose menor (5 x 105) de células que expressam o(s) CAR(s) indicado(s) após injeção de 2 x 10º células OPM?2 de tipo selvagem.
[00258] As Figuras 37A-C representam a carga tumoral em ca- mundongos, conforme avaliado por meio de imagens de biolumines- cência, injetados com células OPM?2 de tipo selvagem após 0 dias (Fi- gura 37A), 15 dias (Figura 37B) ou 22 dias (Figura 37C) de tratamento com células que expressam o(s) CAR(s) indicado(s).
[00259] A Figura 38 representa a carga tumoral em camundongos injetados com uma composição mista de 5-10 % de células OPM2 de tipo selvagem e células OPM2 com silenciamento da proteína BCMA, conforme avaliado por meio de imagem de bioluminescência de célu- las OPM?2 de tipo selvagem (painel esquerdo) e células OPM2 com silenciamento de BCMA (painel direito), após tratamento com 5 x 10º células que expressam o(s) CAR(s) indicado(s).
[00260] A Figura 39 mostra a sobrevida de camundongos injetados com uma composição mista de 5-10 % de células OPM?2 de tipo selva- gem e células OPM2 com silenciamento de BCMA após tratamento com 2,5 x 105 células que expressam o(s) CAR(s) indicado(s).
[00261] As Figuras 40A-C representam a carga tumoral em ca- mundongos, conforme avaliado por meio de imagens de biolumines- cência, injetados com uma composição mista de 5-10 % de células OPM? de tipo selvagem e células OPM2 com silenciamento de BCMA, O dias (Figura 40A), 22 dias (Figura 40B) ou 34 dias (Figura 40C) após o tratamento com 5 x 10º células que expressam o(s) CAR(s) indica-
do(s).
[00262] As Figuras 41A e 41B mostram perda de expressão de CAR trailing (BCMA e GPRC5D, respectivamente) em construções bi- cistrônicas sem códons divergentes.
[00263] As Figuras 42A e 42B mostram que a divergência de có- don das construções bicistrônicas resgata a expressão de CAR trailing (BCMA e GPRCS5D, respectivamente).
[00264] A Figura 43 mostra a estimulação de células repórter Jur- kat Nur77-RFP que expressam o(s) CAR(s) indicado(s) após cocultura com células alvo.
[00265] As Figuras 44A-C mostram a expressão de IFN-gama, IL-2 e TNF-alfa (respectivamente) por células T humanas primárias que expressam o(s) CAR(s) indicado(s), após cocultura com células alvo.
[00266] A Figura 45 mostra a ativação específica para antígeno de células repórter Jurkat Nur77-RFP transduzidas com o(s) CAR(s) indi- cado(s), após cocultura com células OPM2 WT, células OPM2 BCMA KO ou células OPM2 GPRC5D KO.
[00267] As Figuras 46A-C mostram a expressão de IFN-gama, IL-2 e TNF-alfa (respectivamente) por células T humanas primárias que expressam o(s) CAR(s) indicado(s), quando cultivadas com células OPM2 WT, células OPM2 BCMA KO ou células OPM2 GPRC5D KO.
[00268] A Figura 47A mostra a carga tumoral (conforme avaliado por BLI) em camundongos injetados com células OPM2 WT e tratados com células que expressam o(s) CAR(s) indicado(s). As Figuras 47B e 47C mostram a carga tumoral (conforme avaliado por BLI) em ca- mundongos injetados com uma combinação de células OPM2 WT e BCMA KO (Figura 47B) ou uma combinação de células OPM2 WT e GPRC5D KO (Figura 47C) e tratados com células que expressam o(s) CAR(s) indicado(s).
[00269] A Figura 48 mostra a sobrevida percentual de camundon-
gos das Figuras 47A-C. Descrição Detalhada
[00270] São fornecidos no presente documento receptores antigê- nicos quiméricos (CARs) que têm como alvo ou são direcionados ao Receptor Acoplado à Proteína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D) e células e doenças que expressam GPRC5D. Também são fornecidas células, tais como células T, concebidas para expressar um CAR anti-GPRC5D e composições que contêm tais células. Deve ser observado que a proteína GPRC5D é expressa, por exemplo, ex- pressa de forma heterogênea, em determinadas doenças e condições, tais como malignidades, ou em tecidos ou células dos mesmos, por exemplo, em células plasmáticas malignas, tais como de pacientes com mieloma recidivante ou recém-diagnosticado, por exemplo, com pouca expressão em tecidos normais. Dentre as modalidades forneci- das estão abordagens úteis no tratamento de doenças e condições e/ou que têm como alvo tais tipos de células, incluindo moléculas de ácidos nucleicos que codificam receptores de ligação à proteína GPRCS5D, incluindo receptores antigênicos quiméricos (CARs) e os receptores codificados, tais como os CARs codificados, e composições e artigos de manufatura que compreendem os mesmos. Os receptores podem, em geral, conter anticorpos (incluindo fragmentos de anticor- pos de ligação a antígeno, tais como regiões variáveis de cadeia pe- sada (VH), fragmentos de anticorpo com um único domínio e fragmen- tos com uma única cadeia, incluindo scFvs) específicos para GPRCB5D. Também são fornecidas células, tais como células manipu- ladas ou recombinantes, que expressam tais receptores de ligação à proteína GPRCB5D, por exemplo, CARs anti-GPRC5D e/ou que contêm ácidos nucleicos que codificam tais receptores e composições e arti- gos de manufatura e doses terapêuticas que contêm tais células.
[00271] As terapias de células T adotiva, tal como as terapias de células CAR-T, têm se mostrado promissoras para o tratamento de mieloma múltiplo, com esforços clínicos focados principalmente em atingir o antígeno de maturação de células B (BCMA). No entanto, embora a proteína BCMA seja expressa em muitas células plasmáti- cas malignas, os níveis de expressão, em alguns casos, podem ser heterogêneos. Em alguns aspectos, a heterogeneidade na expressão do antígeno alvo pode levar a uma resposta variável ou inconsistente. Em alguns aspectos, também foi observado que a expressão da prote- ína BOCMA na superfície celular varia ao longo do tempo em virtude da liberação mediada por gama secretase do domínio extracelular. Similar às observações com antígenos CAR CD19 e CDZ22, foi relatado que a regulação negativa do antígeno BCMA ocorre em pacientes com mi- eloma múltiplo (MM) que tiveram recidiva após terapia com células T que têm como alvo a proteína BCMA (Brudno et al. (2018) J. Clin. On- col., JOO20187 78084; Cohen et al. (2017) Blood 130: 505). Além dis- so, em alguns contextos, os receptores recombinantes podem exibir atividade ou sinalização independente de antígeno (também conhecida como "sinalização tônica"), o que pode levar a efeitos indesejáveis, tal como em virtude do aumento da diferenciação e/ou exaustão de célu- las T que expressam o receptor recombinante. Em alguns aspectos, tais atividades podem limitar a atividade, efeito ou potência das células T. Em alguns casos, durante a manipulação e a expansão ex vivo das células para expressão do receptor recombinante, as células podem exibir fenótipos indicativos de exaustão em virtude de sinalização tôni- ca através do receptor recombinante. Em alguns casos, abordagens alternativas ou adicionais de terapia com células T que têm como alvo o MM são necessárias.
[00272] As modalidades fornecidas referem-se à proteína GPRC5D como um alvo de células T CAR para mieloma múltiplo. A proteína GPRCS5D (Acesso Uniprot Nº Q9NZD1, por exemplo, apresentada em
SEQ ID NO: 49) é um receptor de acoplado à proteína G classe C, grupo 5, membro D que pertence à família RAIG (gene-1 indutível por ácido retinoico). Ela é uma hélice transmembrana de sete receptores acoplados à proteína G de 39 kDa com duas isoformas relatadas, com as diferenças das isoformas ocorrendo no C-término intracelular da proteína. Os resultados apresentados no presente documento mos- tram que a proteína GPRC5D é expressa em níveis elevados em mi- eloma múltiplo e, em geral, é expressa em níveis baixos na maioria dos tecidos normais.
[00273] As observações no presente documento demonstram a ex- pressão da proteína GPRC5D em células de mieloma múltiplo, susten- tando-a como um alvo de células T CAR viável para o tratamento de MM, incluindo com base na avaliação do potencial de toxicidade no alvo/fora do tumor. Além disso, dentre os receptores antigênicos qui- méricos fornecidos estão receptores quiméricos que exibem baixa si- nalização tônica, deste modo, minimizando a possibilidade de sinaliza- ção independente de antígeno (tônica). Em particular, os CARs anti- GPRCB5D fornecidos no presente documento incluem CARs que têm alta ativação dependente de antígeno e sinalização tônica mínima. Em particular, descobriu-se que determinadas construções, incluindo aquelas com uma orientação particular das cadeias pesada variável (VH) e leve variável (VL) na porção extracelular do fragmento de anti- corpo do CAR e/ou que contêm um espaçador de um determinado comprimento, exibem propriedades vantajosas, incluindo alta ativação dependente de antígeno e baixa sinalização tônica comparado com formatos de CAR anti-GPRC5D alternativos, tais como aqueles com espaçadores mais curtos.
[00274] Em algumas modalidades, o espaçador é, em geral, uma sequência de aminoácidos localizada entre, tal como que conecta, o domínio de ligação a antígeno extracelular e o domínio transmembra-
na do CAR. Em modalidades particulares de CARs anti-GPRC5D, o espaçador é uma porção de uma imunoglobulina, por exemplo, de IgG4 ou IgG2, tal como uma porção que contém um domínio de do- bradiça, um domínio CH2 e um domínio CH3. Dentre estes espaçado- res estão porções de imunoglobulinas humanas ou formas modificadas das mesmas, incluindo aquelas que têm um comprimento maior do que 125 aminoácidos, tal como mais de 150 aminoácidos, mais de 180 aminoácidos, mais de 200 aminoácidos ou mais de 200 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, um espaçador de imuno- globulina é um espaçador híbrido ou quimérico e/ou é modificado de modo a reduzir ou prevenir a glicosilação. Em algumas modalidades, um CAR anti-GPRC5D fornecido inclui um espaçador híbrido/modi- ficado de dobradiça de imunoglobulina IgG4/I9G2 — CH2 de IgG4/I9G2 — CH3 de IgG4, conforme apresentado em SEQ ID NO: 17.
[00275] Em algumas modalidades, dentre os CARs fornecidos no presente documento estão aqueles codificados por polinucleotídeos que são otimizados ou contêm determinadas características concebi- das para otimização, tal como quanto ao uso de códons, para reduzir a heterogeneidade do RNA e/ou para modificar, por exemplo, aumentar ou tornar a expressão mais consistente entre os lotes de produtos de células, tal como expressão na superfície, do receptor codificado. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos que codificam proteínas sobre a superfície celular que se ligam à proteína GPRC5D, são modi- ficados comparado com um polinucleotídeo de referência, tal como para remover sítios de splicing ocultos ou crípticos de modo a reduzir a heterogeneidade do RNA. Em algumas modalidades, os polinucleotí- deos que codificam proteínas sobre a superfície celular que se ligam à proteína GPRC5D têm códons otimizados, tal como para expressão em um mamífero, por exemplo, uma célula humana, tal como em uma célula T humana. Em alguns aspectos, os polinucleotídeos modifica-
dos resultam em um nível de expressão aprimorado, por exemplo, aumentado ou mais uniforme ou mais consistente, por exemplo, ex- pressão na superfície, quando expressos em uma célula. Estes polinu- cleotídeos podem ser usados em construções para a geração de célu- las modificadas que expressam a proteína sobre a superfície celular que se ligam à proteína GPRC5D codificada. Assim, também são for- necidas células que expressam os receptores recombinantes codifica- dos pelos polinucleotídeos fornecidos no presente documento e seus usos em terapia celular adotiva, tal como para o tratamento de doen- ças e transtornos associados à expressão da proteína GPRC5D, por exemplo, mieloma múltiplo.
[00276] São fornecidas abordagens de monoterapia que usam um CAR anti-GPRC5D expresso em células T primárias autólogas para uso como um agente terapêutico contra células plasmáticas de mielo- ma múltiplo. Em algumas modalidades, uma abordagem de monotera- pia pode ser desejável em indivíduos conhecidos ou suspeitos ou se- lecionados como tendo células plasmáticas de MM com baixa ou ne- nhuma expressão da proteína BCMA e/ou que tiveram recidiva após remissão, são resistentes, falharam no tratamento ou são intolerantes ao tratamento com um CAR anti-BCMA.
[00277] Também são fornecidas no presente documento estratégias de multi-direcionamento que têm como alvo um primeiro antígeno e um segundo antígeno associado a uma doença ou condição especiífi- ca, tal como mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, vários recep- tores recombinantes que se ligam especificamente ou têm como alvo diferentes antígenos são codificados pelas mesmas construções poli- nucleotídicas ou incluídos nas mesmas células, composições e méto- dos fornecidos no presente documento. Em algumas modalidades, a pluralidade de antígenos, por exemplo, o primeiro antígeno e o segun- do antígeno, são expressos ou suspeitos de serem expressos na célu-
la, tecido ou doença ou condição em questão, tal como na célula can- cerosa. Em alguns aspectos, a célula, tecido, doença ou condição é mieloma múltiplo ou uma célula de mieloma múltiplo.
[00278] Por exemplo, também é fornecida no presente documento uma abordagem de terapia dupla de células que expressam CAR anti- GPRC5D em combinação com células que expressam CAR anti- BMCA para uso como um agente terapêutico contra células plasmáti- cas de MM. Em alguns aspectos, uma abordagem de direcionamento duplo pode ser vantajosa para superar as limitações associadas à ex- pressão heterogênea das proteínas BCMA e/ou GPRC5D em células plasmáticas de MM. É observado que as proteínas GPRC5D e BCMA são expressas, por exemplo, expressas de forma heterogênea, em de- terminadas doenças e condições, tais como malignidades ou em teci- dos ou células dos mesmos, por exemplo, em células plasmáticas ma- lignas, tal como de pacientes com mieloma em recidiva ou recém- diagnosticados, por exemplo, com pouca expressão em tecidos nor- mais. Em virtude das funções das proteínas GPRC5D e BCMA em vá- rias doenças e condições, incluindo câncer, tanto a proteína GPRC5D quanto a proteína BCMA são alvos terapêuticos.
[00279] Em alguns casos, o direcionamento simultâneo de ambos os antígenos, conforme fornecido no presente documento, pode me- lhorar a profundidade e a durabilidade das respostas entre os pacien- tes, além de minimizar a recaída em virtude de escape antigênico. Um mecanismo de resistência às terapias com células T CAR, conforme evidenciado por dados de ensaios de células T CAR em malignidades de células B, pode ser a perda ou regulação negativa ("escape") do antígeno alvo (Robbie G. Majzner e Crystal L. Mackall, Cancer Discov, 22 de agosto de 2018; DOI 10.1158/2159-8290.CD-18-0442). Tal combinação ou estratégia de direcionamento duplo pode alcançar res- postas tumorais sinérgicas ou aprimoradas com base no direciona-
mento de dois antígenos comparado com abordagens de monoterapia que envolvem apenas o direcionamento de um único antígeno. Na verdade, estudos no presente documento demonstram que a expres- são das proteínas BCMA e GPRC5D é independente uma da outra. Uma abordagem de direcionamento duplo pode ser vantajosa para supe- rar problemas em virtude do potencial de perda antigênica e/ou maximi- zar o direcionamento de antígenos em MM. As observações no presente documento demonstram a expressão das proteínas GPRC5D, BCMA, ou ambas, em células de mieloma múltiplo, sustentando ambos os an- tígenos como alvos viáveis de células T CAR para o tratamento de MM, incluindo com base na avaliação do potencial de toxicidade no alvo/fora do tumor.
[00280] Dentre as modalidades fornecidas estão abordagens úteis no tratamento de doenças e condições e/ou para direcionar tais tipos de células, incluindo moléculas de ácido nucleico que codificam recep- tores que se ligam à proteína GPRC5D e receptores que se ligam à proteína BCMA, incluindo receptores antigênicos quiméricos (CARs), e os receptores codificados, tais como os CARs codificados, e composi- ções e artigos de manufatura que compreendem os mesmos. Os re- ceptores podem, em geral, conter anticorpos (incluindo fragmentos de anticorpos de ligação a antígeno, tais como regiões variáveis de ca- deia pesada (VH), fragmentos de anticorpo com um único domínio e fragmentos com uma única cadeia, incluindo fragmentos variáveis com uma única cadeia (scFvs)) específicos para as proteínas GPRC5D ou BCMA. Também são fornecidas células, tais como células modificadas ou recombinantes, que expressam tais receptores que se ligam à pro- teína GPRC5D, por exemplo, CARs anti-GPRC5D, e receptores que se ligam à proteína BCMA, por exemplo, CARs anti-BCMA e/ou que contêm ácidos nucleicos que codificam tais receptores e composições e artigos de manufatura e doses terapêuticas que contêm tais células.
Dentre as modalidades fornecidas estão polinucleotídeos que são bi- cistrônicos para a expressão de vários CARs, tal como um CAR anti- GPRC5D e um CAR anti-BCMA. As observações no presente docu- mento demonstram que esta expressão de vários CARs, por exemplo, um CAR anti-GPRC5D e um CAR anti-BCMA, em uma célula, pode ser aprimorada ao executar uma divergência de códons em uma se- quência polinucleotídica que codifica um ou mais dos CARs. Desco- briu-se que a divergência de códons de uma construção polinucleotídi- ca que codifica dois CARs melhora a expressão de uma sequência de nucleotídeos que codifica um CAR que é 3'inicial (ou C-terminal) em relação à sequência de nucleotídeos que codifica o outro CAR.
[00281] Além disso, descobriu-se que CARs fornecidos que contêm um espaçador de um determinado comprimento exibem propriedades vantajosas, incluindo alta ativação dependente de antígeno e baixa sinalização tônica comparado com formatos alternativos de CAR anti- GPRCB5D ou anti-BCMA, tais como aqueles CARs com formatos de espaçadores mais curtos. Em algumas modalidades, o componente espaçador de um CAR é, em geral, uma sequência de aminoácidos localizada entre, tal como que conecta, o domínio de ligação a antíge- no extracelular e o domínio transmembrana do CAR. Em modalidades particulares de um CAR anti-GPRC5D ou um anti-BCMA, o espaçador é uma porção de uma imunoglobulina, por exemplo, de IgG4 ou IgG2, tal como uma porção contendo, um domínio de dobradiça, um domínio CH2 e um domínio CH3. Dentre estes espaçadores estão porções de imunoglobulinas humanas ou formas modificadas das mesmas, inclu- indo aquelas que têm um comprimento de mais de 125 aminoácidos de comprimento, tal como mais de 150 aminoácidos, mais de 180 ami- noácidos, mais de 200 aminoácidos ou mais de 200 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, um espaçador de imunoglo- bulina é um espaçador híbrido ou quimérico e/ou é modificado de mo-
do a reduzir ou prevenir a glicosilação. Em algumas modalidades, um CAR anti-GPRC5D ou anti-BCMA fornecido inclui um espaçador híbri- do/modificado de dobradiça de IgG4/I9G2 - CH2de IgG4/I9G2 — CH3 de IgG4, conforme apresentado em SEQ ID NO: 17. Em modalidades particulares, o polinucleotídeo que codifica o CAR contém uma região espaçadora que foi modificada para eliminar sítios de splicing, tais co- mo sítios de splicing e/ou aceitadores crípticos. São descritos nucleo- tídeos exemplificativos que codificam o espaçador. Em algumas moda- lidades, a sequência codificante para o espaçador compreende a se- quência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID NO: 48 (também apresentada em SEQ ID NO: 74). Em algumas modalidades, os CARs fornecidos exibem heterogeneidade de RNA reduzida quando expres- sos em células (por exemplo, células T). Em algumas modalidades, os polinucleotídeos fornecidos que codificam os CARs também podem ter códons otimizados para melhorar ainda mais a expressão.
[00282] Todas as publicações, incluindo documentos de patentes, artigos científicos e bancos de dados, citados no presente pedido são incorporados a título de referência na íntegra para todas as finalida- des, na mesma medida como se cada publicação individual fosse indi- vidualmente incorporada a título de referência. Se uma definição apre- sentada no presente documento for contrária ou de outra forma incon- sistente com uma definição apresentada nas patentes, pedidos, pedi- dos publicados e outras publicações que são incorporadas ao presente documento a título de referência, a definição apresentada no presente documento prevalece em relação à definição que é incorporada ao presente documento a título de referência.
[00283] Os títulos das seções usados no presente documento são apenas para fins organizacionais e não devem ser interpretados como limitando o assunto descrito.
|. Receptores que se Ligam à Proteína GPRC5D e Polinucleotí- deos Codificantes
[00284] São fornecidos, em alguns aspectos, agentes receptores que se ligam à proteína GPRC5D, tais como receptores recombinantes ou receptores antigênicos quiméricos, que se ligam a moléculas de GPRCB5D e polinucleotídeos que codificam proteínas sobre a superfí- cie celular que se ligam à proteína GPRC5D, tais como receptores re- combinantes (por exemplo, CARs) e células que expressam tais recep- tores. As proteínas sobre a superfície celular que se ligam à proteína GPRC5D geralmente contêm anticorpos (por exemplo, fragmentos de anticorpo de ligação a antígeno) e/ou outros peptídeos de ligação que se ligam especificamente à proteína GPRC5D, tais como proteínas GPRCS5D, tal como a proteína GPRC5D humana. Em alguns aspectos, os agentes se ligam a uma porção extracelular da proteína GPRC5D.
[00285] Dentre os polinucleotídeos fornecidos estão aqueles que codificam receptores recombinantes, tais como receptores antigênicos, que se ligam especificamente à proteína GPRC5D. Em alguns aspec- tos, os receptores codificados, tais como aqueles que contêm polipep- tídeos de ligação à proteína GPRC5D e composições e artigos de ma- nufatura e usos dos mesmos, também são fornecidos.
[00286] Dentre os polipeptídeos de ligação à proteína GPRC5D es- tão anticorpos, tais como anticorpos com uma única cadeia (por exemplo, fragmentos de anticorpo de ligação a antígeno) ou porções dos mesmos. Em alguns exemplos, os receptores recombinantes são receptores anti- gênicos quiméricos, tais como aqueles que contêm anticorpos anti- GPRCS5D ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. Os polinu- cleotídeos fornecidos podem ser incorporados em construções, tais como construções de ácido desoxirribonucleico (DNA) ou RNA, tais como aquelas que podem ser introduzidas em células para expressão dos re- ceptores de ligação à proteína GPRC5D recombinantes codificados.
1. Componentes de Receptores de Ligação à Proteína GPRC5D Recombinantes Codificados.
[00287] Os receptores de ligação à proteína GPRC5D fornecidos contêm, em geral, uma molécula de ligação extracelular e um domínio de sinalização intracelular. Dentre os receptores fornecidos estão poli- peptídeos que contêm anticorpos, tais como receptores na superfície de células recombinantes, que contêm anticorpos anti-GPRC5D. Estes receptores incluem receptores antigênicos quiméricos que contêm tais anticorpos.
[00288] Dentre os receptores recombinantes fornecidos estão re- ceptores antigênicos que incluem um fragmento de ligação à proteína GPRCS5D. Os receptores recombinantes incluem receptores antigêni- cos que se ligam especificamente à proteína GPRC5D, tais como re- ceptores antigênicos que contêm anticorpos anti-GPRC5D, por exem- plo, fragmentos de ligação a antígeno GPRC5D. Dentre os receptores antigênicos estão receptores antigênicos não-TCR funcionais, tais co- mo os receptores antigênicos quiméricos (CARs). Também são forne- cidas células que expressam os receptores recombinantes e seus usos em terapia celular adotiva, tal como para o tratamento de doen- ças e transtornos associados à expressão da proteína GPRC5D, por exemplo, mieloma múltiplo. a. Domínio de Ligação a Antígeno Extracelular
[00289] “Dentre os receptores quiméricos estão receptores antigêni- cos quiméricos (CARs). Os receptores quiméricos, tais como CARs, geralmente incluem um domínio de ligação a antígeno extracelular que inclui, é ou compreende um anticorpo anti-GPRC5D. Assim, os recep- tores quiméricos, por exemplo, CARs, normalmente incluem, em suas porções extracelulares, uma ou mais moléculas de ligação à proteína GPRCS5D, tais como um ou mais fragmentos de ligação a antígeno, domínio ou porção ou uma ou mais regiões variáveis de anticorpo,
e/ou moléculas de anticorpo, tais como aquelas descritas no presente documento.
[00290] O termo "anticorpo" no presente documento é usado no sentido mais amplo e inclui anticorpos policlonais e monoclonais, inclu- indo anticorpos intactos e fragmentos de anticorpos funcionais (ligação a antígeno), incluindo fragmentos de ligação a antígeno (Fab), frag- mentos F(ab'),, fragmentos Fab', fragmentos Fv, fragmentos de IgG recombinante (rlgG), regiões variáveis de cadeia pesada (VH) capazes de se ligar especificamente ao antígeno, fragmentos de anticorpo com uma única cadeia, incluindo fragmentos variáveis com uma única ca- deia (scFv) e anticorpos com um único domínio (por exemplo, sdAb, sdFv, nanocorpo). O termo abrange formas geneticamente modifica- das e/ou manipuladas de imunoglobulinas, tais como intracorpos, pep- ticorpos, anticorpos quiméricos, anticorpos totalmente humanos, anticor- pos humanizados e anticorpos heteroconjugados, anticorpos multiespecí- ficos, por exemplo, biespecíficos ou triespecíficos, diacorpos, triacorpos e tetracorpos, di-scFv em tandem, tri-scFv em tandem. A menos que indi- cado de outra forma, o termo "anticorpo" deve ser entendido como abrangendo fragmentos de anticorpos funcionais dos mesmos, tam- bém denominados no presente documento como "fragmentos de liga- ção a antígeno". O termo também abrange anticorpos intactos ou de comprimento total, incluindo anticorpos de qualquer classe ou subclas- se, incluindo IgG e suas subclasses, IgM, IgE, IgA e IgD.
[00291] Os termos "região determinante de complementaridade" e "CDR", sinônimos de "região hipervariável" ou "HVR", são conhecidos na técnica por referir-se a sequências não contíguas de aminoácidos dentro de regiões variáveis de anticorpo as quais conferem especifici- dade e/ou afinidade de ligação a antígeno. Em geral, há três CDRs em cada região variável de cadeia pesada (CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3) e três CDRs em cada região variável de cadeia leve (CDR-L1, CDR-L2,
CDR-L3). "Regiões estruturais" e "FR" são conhecidas na técnica para referir-se às porções diferentes das CDRs das regiões variáveis de cadeias pesadas e leves. Em geral, há quatro FRs em cada região va- riável de cadeia pesada de comprimento total (FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4) e quatro FRs em cada região variável de cadeia leve de com- primento total (FR- L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4).
[00292] Os limites precisos da sequência de aminoácidos de uma determinada CDR ou FR podem ser facilmente determinados usando qualquer um de uma série de esquemas bem conhecidos, incluindo aqueles descritos por Kabat et a/. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5º Ed. Public Health Service, National Institu- tes of Health, Bethesda, MD (esquema de numeração de "Kabat"); Al- Lazikani et a/l., (1997) JMB 273,927-948 (esquema de numeração de "Chothia"); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996), "Anti- body-antigen interactions: Contact Analysis and Binding Site Topogra- phy", J. Mol. Biol. 262, 732-745" (Esquema de numeração "Contact"); Lefranc M.P. et al., "MGT Unique Numbering for Immunoglobulin and T Cell Receiver Variables and Ig Superfamily V-Like Domains", Dev Comp Immunol, Janeiro de 2003; 27 (1): 55-77 (esquema de numer- ação "IMGT"); Honegger A e Plúckthun A, "Yet Another Numbering Scheme for Immunoglobulin Variable Domains: An Automatic Modeling and Analysis Tool", J Mol Biol, 08 de junho de 2001; 309 (3): 657-70 (esquema de numeração "Aho"); e Martin et a/., "Modeling Antibody Hypervariable Loops: A Associated Algorithm", PNAS, 1989, 86 (23): 9268-9272, (esquema de numeração "AbM").
[00293] Os limites de uma determinada CDR ou FR podem variar dependendo do esquema usado para identificação. Por exemplo, o esquema de Kabat se baseia em alinhamentos estruturais, enquanto que o esquema de Chothia se baseia em informações estruturais. À numeração para os esquemas de Kabat e Chothia é com base nos comprimentos de sequência de regiões de anticorpo mais comuns, com inserções acomodadas por letras de inserção, por exemplo, "30a" e eliminações aparecendo em alguns anticorpos. Os dois esquemas colocam determinadas inserções e exclusões ("indels") em posições diferentes, resultando em numeração diferencial. O esquema Contact se baseia na análise de estruturas cristalinas complexas e é similar, em muitos aspectos, ao esquema de numeração de Chothia. O es- quema AbM é um meio-termo entre as definições de Kabat e Chothia com base naquelas usadas pelo software de modelagem de anticorpos AbM da Oxford Molecular.
[00294] A Tabela 1, abaixo, lista limites de posição exemplificativos de CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 e CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3 conforme identificado pelos esquemas de Kabat, Chothia, ADM e Contact, res- pectivamente. Para CDR-H1, a numeração de resíduos é listada usan- do os esquemas de numeração de Kabat e Chothia. FRs estão locali- zadas entre as CDRs, por exemplo, com FR-L1 localizada antes de CDR-L1, FR-L2 localizada entre CDR-L1 e CDR-L2, FR-L3 localizada entre CDR-L2 e CDR-L3 e assim por diante. Deve ser observado que, uma vez que o esquema de numeração de Kabat mostrado coloca in- serções em H35A e H35B, o final do loop da CDR-H1 de Chothia, quando numerado usando a convenção de numeração de Kabat mos- trada, varia entre H32 e H34, dependendo do comprimento do loop. Tabela 1. Limites das CDRs de acordo com vários esquemas de numeração. feoR Rea [oro — [AMO [conta | CDR-L1 L24--L34 L24--L34 L24--L34 L30--L36 CDR-L2 L50--L56 L50--L56 L50--L56 L46--L55 CDR-L3 L89--L97 L89--L97 L89--L97 L89--L96 CPRH H31--H35B | H26--H32.34 —|H26-H35B | H30--H35B (Numeração de Kabat') CDR-H1 H31--H35 | H26--H32 H26--H35 H30--H35 (Numeração de Chothia?) 7 " " ” CDR-H2 H50--H65 | H52--H56 H50--H58 H47--H58 CDR-H3 H95--H102 | H95--H102 H95--H102 — | H93--H101 1 - Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5º Ed. Public
Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD 2 - Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948
[00295] Assim, a menos que especificado de outra forma, uma "CDR" ou "região determinante de complementaridade" ou CDRs es- pecíficas individuais (por exemplo, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3) de um determinado anticorpo ou região do mesmo, tal como uma região vari- ável do mesmo, deve ser entendida como abrangendo uma (ou a es- pecífica) região determinante de complementaridade conforme defini- do por qualquer um dos esquemas supracitados ou outros esquemas conhecidos. Por exemplo, onde é afirmado que uma CDR particular (por exemplo, uma CDR-H3) contém a sequência de aminoácidos de uma CDR correspondente em uma determinada sequência de amino- ácidos da região VH ou VL, deve ser entendido que tal CDR tem uma sequência da CDR correspondente (por exemplo, CDR-H3) dentro da região variável, conforme definido por qualquer um dos esquemas su- pracitados ou outros esquemas conhecidos. Em algumas modalida- des, sequências de CDR específicas são especificadas. Sequências de CDR exemplificativas de anticorpos fornecidos são descritas usan- do vários esquemas de numeração, embora seja entendido que um anticorpo fornecido pode incluir CDRs conforme descrito de acordo com qualquer um dos outros esquemas de numeração supracitados ou outros esquemas de numeração conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00296] Da mesma forma, a menos que especificado de outra for- ma, uma FR ou FR(s) individual(is) especificada(s) (por exemplo, FR- H1, FR-H2, FR-H3, FR-H4) de um determinado anticorpo ou região do mesmo, tal como uma região variável da mesma, deve ser entendida como abrangendo uma (ou a específica) região estrutural conforme definido por qualquer um dos esquemas conhecidos. Em alguns ca- sos, o esquema para identificação de uma determinada CDR, FR ou FRs ou CDRs é especificado, tal como a CDR conforme definido por meio do método Kabat, Chothia, ADM ou Contact ou outros esquemas conhecidos. Em outros casos, é fornecida a sequência de aminoácidos particular de uma CDR ou FR.
[00297] O termo "região variável" ou "domínio variável" refere-se ao domínio de uma cadeia pesada ou leve de anticorpo que está envolvi- da na ligação do anticorpo ao antígeno. As regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve (Vr e V., respectivamente) de um anticorpo nati- vo geralmente têm estruturas similares, com cada domínio que com- preende quatro regiões estruturais (FRs) conservadas e três CDRs (consulte, por exemplo, Kindt et al. Kuby Immunology, 6º ed., WH Fre- eman and Co., página 91 (2007). Um único domínio Vu ou V. pode ser suficiente para conferir especificidade de ligação a antígeno. Além dis- So, os anticorpos que se ligam a um antígeno particular podem ser iso- lados usando um domínio Vx ou V. de um anticorpo que se liga ao an- tígeno para rastrear uma biblioteca de domínios Vx ou Vi. complemen- tares, respectivamente (consulte, por exemplo, Portolano et al., J. Immunol. 150: 880-887 ( 1993); Clarkson et al., Nature 352: 624-628 (1991)).
[00298] Dentre os anticorpos incluídos nos CARs fornecidos estão fragmentos de anticorpos. Um "fragmento de anticorpo" ou "fragmento de ligação a antígeno" refere-se a uma molécula diferente de um anti- corpo intacto que compreende uma porção de um anticorpo intacto que se liga ao antígeno ao qual o anticorpo intacto se liga. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, porém sem limitações, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')z; diacorpos; anticorpos lineares; regiões variáveis de cadeia pesada (Vr), moléculas de anticorpo com uma única cadeia, tais como scFvs e anticorpos com um único domínio que compreen- dem apenas a região Vr; e anticorpos multiespecíficos formados a par- tir de fragmentos de anticorpos. Em algumas modalidades, o domínio de ligação a antígeno nos CARs fornecidos é ou compreende um fra-
gmento de anticorpo que compreende uma região de cadeia pesada variável (Vs) e uma cadeia leve variável (V1). Em modalidades particu- lares, os anticorpos são fragmentos de anticorpos com uma única ca- deia que compreendem uma região variável de cadeia pesada (Vr) e/ou uma região variável de cadeia leve (V.), tais como scFvs.
[00299] — Anticorpos com um único domínio (sdAbs) são fragmentos de anticorpos que compreendem a totalidade ou uma parte da região variável de cadeia pesada ou a totalidade ou uma parte da região vari- ável de cadeia leve de um anticorpo. Em determinadas modalidades, um anticorpo com um único domínio é um anticorpo com um único domínio humano.
[00300] Os fragmentos de anticorpos podem ser produzidos por meio de várias técnicas incluindo, porém sem limitações, digestão pro- teolítica de um anticorpo intacto, bem como a produção por células hospedeiras recombinantes. Em algumas modalidades, os anticorpos são fragmentos produzidos de forma recombinante, tais como frag- mentos que compreendem arranjos que não ocorrem naturalmente, como aqueles com duas ou mais regiões ou cadeias de anticorpos unidas através de ligantes sintéticos, por exemplo, ligantes peptídicos e/ou que podem não ser produzidos através de digestão enzimática de um anticorpo intacto de ocorrência natural. Em alguns aspectos, os fragmentos de anticorpo são scFvs.
[00301] Um anticorpo "humanizado" é um anticorpo em que todos ou substancialmente todos os resíduos de aminoácidos das CDRs são derivados de CDRs não humanas e todos ou substancialmente todos os resíduos de aminoácidos da FR são derivados de FRs humanas. Um anticorpo humanizado opcionalmente pode incluir pelo menos uma porção de uma região constante de anticorpo derivada de um anticor- po humano. Uma "forma humanizada" de um anticorpo não humano refere-se a uma variante do anticorpo não humano que foi submetido à humanização, tipicamente para reduzir a imunogenicidade para seres humanos, ao mesmo tempo em que retém a especificidade e afinidade do anticorpo não humano precursor. Em algumas modalidades, alguns resíduos da FR em um anticorpo humanizado são substituídos por re- síduos correspondentes de um anticorpo não humano (por exemplo, o anticorpo a partir do qual os resíduos da CDR são derivados), por exemplo, para restaurar ou melhorar a especificidade ou afinidade do anticorpo.
[00302] Dentre os anticorpos anti-GPRCB5D incluídos nos CARs for- necidos estão os anticorpos humanos. Um "anticorpo humano" é um anticorpo que tem uma sequência de aminoácidos que corresponde àquela de um anticorpo produzido por uma célula humana ou fonte humana ou não humana que usa repertórios de anticorpos humanos ou outras sequências codificantes de anticorpos humanos, incluindo bibliotecas de anticorpos humanos. O termo exclui formas humaniza- das de anticorpos não humanos que compreendem regiões de ligação a antígeno não humanas, tais como aquelas em que todas ou subs- tancialmente todas as CDRs são não humanas. O termo inclui frag- mentos de ligação a antígeno de anticorpos humanos.
[00303] Os anticorpos humanos podem ser preparados pela admi- nistração de um imunógeno a um animal transgênico que foi modifica- do para produzir anticorpos humanos intactos ou anticorpos intactos com regiões variáveis humanas em resposta ao desafio antigênico. Estes animais normalmente contêm todos ou uma parte dos /oci de imunoglobulina humana, os quais substituem os /oci da imunoglobulina endógena ou que estão presentes extracromossomicamente ou inte- grados aleatoriamente nos cromossomos do animal. Em tais animais transgênicos, os loci de imunoglobulina endógena foram geralmente inativados. Os anticorpos humanos também podem ser derivados de bibliotecas de anticorpos humanos, incluindo bibliotecas de exibição em fagos e bibliotecas isentas de células, as quais contêm sequências codificantes de anticorpos derivadas de um repertório humano.
[00304] Dentre os anticorpos incluídos nos CARs fornecidos estão aqueles que são anticorpos monoclonais, incluindo fragmentos de an- ticorpos monoclonais. O termo "anticorpo monoclonal", conforme usa- do no presente documento, refere-se a um anticorpo obtido de ou den- tro de uma população de anticorpos substancialmente homogênea, isto é, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos, exceto quanto a possíveis variantes que contêm mutações de ocorrência natural ou que surgem durante a produção de uma pre- paração de anticorpos monoclonais, tais variantes geralmente estando presentes em quantidades menores. Em contraste com as prepara- ções de anticorpos policlonais, as quais normalmente incluem diferen- tes anticorpos direcionados contra diferentes epítopos, cada anticorpo monoclonal de uma preparação de anticorpo monocional é dirigido contra um único epítopo em um antígeno. O termo não deve ser inter- pretado como requerendo a produção do anticorpo através de qual- quer método particular. Um anticorpo monoclonal pode ser produzido através de uma variedade de técnicas incluindo, porém sem limita- ções, geração a partir de um hibridoma, métodos de DNA recombinan- te, exibição em fagos e outros métodos de exibição de anticorpo.
[00305] Em algumas modalidades, o CAR inclui uma porção de |i- gação à proteína GPRC5D ou porções da molécula de anticorpo, tal como uma região variável de cadeia pesada (Vx) e/ou região variável de cadeia leve (V.) do anticorpo, por exemplo, um fragmento scFv de anticorpo. Em algumas modalidades, os CARs de ligação à proteína GPRCB5D fornecidos contêm um anticorpo, tal como um anticorpo anti- GPRCS5D ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo que con- fere as propriedades de ligação à proteína GPRC5D do CAR forneci- do. Em algumas modalidades, o anticorpo ou domínio de ligação a an-
tígeno pode ser qualquer anticorpo anti-GPRC5D descrito ou derivado de qualquer anticorpo anti-GPRC5D descrito (consulte, por exemplo, documentos WO 2016/090312, WO 2016/090329, WO 2018/017786). Qualquer um destes anticorpos anti-GPRC5D ou fragmentos de liga- ção a antígeno podem ser usados nos CARs fornecidos. Em algumas modalidades, o CAR anti-GPRC5D contém um domínio de ligação a antígeno que é um scFv que contêm uma região variável pesada (Vr) e/ou variável leve (V.) derivada de um anticorpo descrito nos docu- mentos WO 2016/090312, WO 2016/090329 ou WO 2018/017786.
[00306] Em algumas modalidades, o anticorpo, por exemplo, o anti- corpo anti-GPRC5D ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, contém uma sequência de região variável de cadeia pesada e/ou leve (VrH ou V.) conforme descrito ou uma porção de ligação a antígeno su- ficiente das mesmas. Em algumas modalidades, o anticorpo anti- GPRCS5D, por exemplo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma sequência de região VH ou porção de ligação a antígeno suficiente da mesma que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 conforme descrito. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-GPRC5D, por exemplo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma sequência de região V. ou porção de ligação a antígeno suficiente que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 conforme descrito. Em algumas moda- lidades, o anticorpo anti-GPRC5D, por exemplo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma sequência de região Vx que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 conforme descrito e contém uma se- quência de região V. que contém uma CDR -L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 conforme descrito. Também dentre os anticorpos estão aqueles que têm sequências pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % idênticas a tal sequência.
[00307] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de an- ticorpo, no CAR fornecido, tem uma região Vu de qualquer um dos an- ticorpos ou fragmentos de ligação de anticorpo descritos em qualquer um dos documentos WO 2016/090312, WO 2016/090329 e WO 2018/017786.
[00308] Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tem uma região variá- vel de cadeia pesada (Va) que tem a sequência de aminoácidos sele- cionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de ami- noácidos da região Vn selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33 ou contém a CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 presentes em tal sequência de Vu.
[00309] Em algumas modalidades, a região Vx de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR- H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 de acordo com a numeração de Kabat. Em algumas modalidades, a região Vu de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 de acordo com a numeração de Chothia. Em algumas modalidades, a região Vu de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 de acordo com a numeração AbM.
[00310] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende a Vx que compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 75, 76 e 77, respectivamente; SEQ ID
NOS: 78, 79 e 77, respectivamente; SEQ ID NOS: 80, 81 e 77, respec- tivamente; SEQ ID NOS: 82, 83 e 84, respectivamente; SEQ ID NOS: 90, 91 e 92, respectivamente; SEQ ID NOS: 93, 94 e 92, respectiva- mente; SEQ ID NOS: 95, 96 e 92, respectivamente; SEQ ID NOS: 97, 98 e 99, respectivamente; SEQ ID NOS: 105, 106 e 107, respectiva- mente; SEQ ID NOS: 108, 109 e 107, respectivamente; SEQ ID NOS: 110, 111 e 107, respectivamente; SEQ ID NOS: 112, 113 e 114, res- pectivamente; SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente; SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente; SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente; SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente; SEQ ID NOS: 135, 136 e 137, respectivamente; SEQ ID NOS: 138, 139 e 137, respectivamente; SEQ ID NOS: 140, 141 e 137, respectivamente; SEQ ID NOS: 142, 143 e 144, respectivamente; SEQ ID NOS: 135, 150 e 151, respectivamente; SEQ ID NOS: 152, 153 e 151, respecti- vamente; SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente; SEQ ID NOS: 142, 155 e 156, respectivamente; SEQ ID NOS: 162, 163 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 165, 166 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 167, 168 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 169, 170 e 171, respectivamente.
[00311] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende uma região Vx que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 75, 76 e 77, res- pectivamente; SEQ ID NOS: 78, 79 e 77, respectivamente; SEQ ID NOS: 80, 81 e 77, respectivamente; SEQ ID NOS: 82, 83 e 84, respec- tivamente; SEQ ID NOS: 90, 91 e 92, respectivamente; SEQ ID NOS: 93, 94 e 92, respectivamente; SEQ ID NOS: 95, 96 e 92, respectiva- mente; SEQ ID NOS: 97, 98 e 99, respectivamente; SEQ ID NOS: 105, 106 e 107, respectivamente; SEQ ID NOS: 108, 109 e 107, respecti- vamente; SEQ ID NOS: 110, 111 e 107, respectivamente; SEQ ID NOS: 112, 113 e 114, respectivamente; SEQ ID NOS: 120, 121 e 122,
respectivamente; SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente; SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente; SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente; SEQ ID NOS: 135, 136 e 137, respectivamente; SEQ ID NOS: 138, 139 e 137, respectivamente; SEQ ID NOS: 140, 141 e 137, respectivamente; SEQ ID NOS: 142, 143 e 144, respecti- vamente; SEQ ID NOS: 135, 150 e 151, respectivamente; SEQ ID NOS: 152, 153 e 151, respectivamente; SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente; SEQ ID NOS: 142, 155 e 156, respectivamente; SEQ ID NOS: 162, 163 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 165, 166 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 167, 168 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 169, 170 e 171, respectivamente.
[00312] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3, respectivamente, que compreendem a sequência de amino- ácidos da CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vx apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33.
[00313] Em algumas modalidades de o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo fornecido no presente documento, a re- gião Vx compreende qualquer uma da CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 conforme descrito e compreende uma região estrutural 1 (FR1), a FR2, a FR3 e/ou a FR4 que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência, respectivamente com a FR1, a FR2, a FR3 e/ou a FR4 conti- das dentro da sequência de aminoácidos da região Vw apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33.
[00314] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende uma região Vx que compre-
ende a sequência de aminoácidos apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33.
[00315] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de an- ticorpo, no CAR fornecido (por exemplo, um CAR anti-GPRC5D), que compreende uma região Vx compreende ainda uma cadeia leve ou uma porção de ligação a antígeno suficiente da mesma. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno do mesmo contém uma região Vx e uma região V. ou uma por- ção de ligação a antígeno suficiente de uma região Vn e V.. Em tais modalidades, uma sequência de região Vn pode ser qualquer uma das sequências de V" descritas acima. Em algumas destas modalidades, o anticorpo é um fragmento de ligação a antígeno, tal como um Fab ou um scFv. Em algumas destas modalidades, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total que também contém uma região constante.
[00316] Em algumas modalidades, um CAR fornecido no presente documento contém um anticorpo, tal como um anticorpo anti-GPRC5D ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, que contém qualquer uma da região Vx acima e contém uma região de cadeia leve variável ou uma porção de ligação a antígeno suficiente da mesma. Por exem- plo, em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo ou frag- mento de ligação a antígeno do mesmo que contém uma região Vx e uma região de cadeia leve variável (V.) ou uma porção de ligação a antígeno suficiente de uma região Vx e V.. Em tais modalidades, uma sequência de região Vu pode ser qualquer uma das sequências de Vn descritas acima. Em algumas destas modalidades, o anticorpo é um fragmento de ligação a antígeno, tal como um Fab ou um scFv. Em algumas destas modalidades, o anticorpo é um anticorpo de compri- mento total que também contém uma região constante.
[00317] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno tem uma região V. descrita em qualquer um dos do-
cumentos WO 2016/090312, WO 2016/090329 e WO 2018/017786.
[00318] Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tem uma região variá- vel de cadeia leve (V.) que tem a sequência de aminoácidos selecio- nada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequên- cia de aminoácidos da região V. selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69 ou contém uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 presentes em tal sequência de V.. Em algumas modalidades, o CAR contém um anti- corpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tem uma re- gião variável de cadeia leve (V.) que tem a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32 ou 34 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de ami- noácidos da região V. selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32 ou 34 ou contém uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 presentes em tal sequência de V.. Em algumas modali- dades, o CAR contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antíge- no do mesmo que tem uma região variável de cadeia leve (V.) que tem a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69 ou uma sequência de ami- noácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91
%, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região V. selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69 ou contém uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 presentes em tal sequência de V..
[00319] Em algumas modalidades, a região V. de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-L1, CDR-L2, e/ou CDR-L3 de acordo com a numeração de Kabat. Em al- gumas modalidades, a região V. de um anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-L1, CDR-L2, e/ou CDR-L3 de acordo com a numeração de Chothia. Em algumas moda- lidades, a região V. de um anticorpo ou fragmento de ligação a antíge- no do mesmo compreende uma CDR-L1, CDR-L2, e/ou CDR-L3 de acordo com a numeração AbM.
[00320] Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tem uma região variá- vel de cadeia leve (VL) que compreende uma CDR-L1 que compreen- de a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 85, 88, 100, 103, 115, 118, 130, 133, 145, 148, 157, 160, 172 e 174; (b) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos seleci- onada a partir de SEQ ID NOS: 86, 89, 101, 104, 116, 119, 131, 134, 146, 149, 158 e 161; e (c) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 87, 102, 117, 132, 147, 159, 173 e 175.
[00321] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende a V. que compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente; SEQ ID NOS: 88, 89 e 87, respectivamente; SEQ ID NOS: 100, 101 e 102,
respectivamente; SEQ ID NOS: 103, 104 e 102, respectivamente; SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente; SEQ ID NOS: 118, 119 e 117, respectivamente; SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente; SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectivamente; SEQ ID NOS: 148, 149 e 147, respecti- vamente; SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente; SEQ ID NOS: 160, 161 e 159, respectivamente; SEQ ID NOS: 172, 86 e 173, respectivamente; SEQ ID NOS: 174, 89 e 175, respectivamente; SEQ ID NOS: 174, 89 e 297, respectivamente.
[00322] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende uma região V.L que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, res- pectivamente; SEQ ID NOS: 88, 89 e 87, respectivamente; SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente; SEQ ID NOS: 103, 104 e 102, respectivamente; SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente; SEQ ID NOS: 118, 119 e 117, respectivamente; SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente; SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectivamente; SEQ ID NOS: 148, 149 e 147, respectivamente; SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respecti- vamente; SEQ ID NOS: 160, 161 e 159, respectivamente; SEQ ID NOS: 172, 86 e 173, respectivamente; SEQ ID NOS: 174, 89 e 175, respectivamente; SEQ ID NOS: 174, 89 e 297, respectivamente.
[00323] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3, respectivamente, contidas dentro da sequência de aminoácidos da re- gião V. selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69. Em algumas modalida- des, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo con- tém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3, respectivamente, contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32 ou 34. Em algu- mas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém a CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3, respectivamente, conti- das dentro da sequência de aminoácidos da região V. selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69.
[00324] Dentre os CARs fornecidos no presente documento está um CAR no qual o anticorpo, tal como um anticorpo ou fragmento de anticorpo anti-GPRC5D, no CAR fornecido, compreende uma sequên- cia de aminoácidos de região Vx que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresenta- da em qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33 ea V.L que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69.
[00325] Em algumas modalidades, a região Vu do anticorpo ou fra- gmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2, uma CDR-H3, respectivamente, que compreendem as sequências de aminoácidos de CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vx selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33; e compreende a CDR-L1, a CDR-L2, a CDR-L3, respectivamente, que compreende as sequências de aminoácidos de CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3, respectivamente contidas dentro da sequência de aminoáci-
dos da região V. selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69.
[00326] Em algumas modalidades, a região Vu do anticorpo ou fra- gmento de ligação a antígeno do mesmo compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33 e a região V. do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno compreende a se- quência de aminoácidos 22, 24, 26, 28, 30, 32 ou 34. Em algumas modalidades, as regiões Vx e V. do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 21 e 22, respectivamente; SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente; SEQ ID NOS: 25 e 26, respectivamente; SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente; SEQ ID NOS: 29 e 30, respectiva- mente; SEQ ID NOS: 31 e 32, respectivamente; ou SEQ ID NOS: 33 e 34, respectivamente, ou qualquer anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tem pelo menos 90 % de identidade de se- quência com qualquer uma das Vx e V. acima, tal como pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de identidade de sequência com as mesmas.
[00327] Por exemplo, as regiões Vx e V. do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contidas no mesmo compreendem as sequências de aminoácidos selecionadas a partir de: SEQ ID NOS: 21 e 22; SEQ ID NOS: 23 e 24; SEQ ID NOS: 25 e 26; SEQ ID NOS: 27 e 28; SEQ ID NOS: 29 e 30; SEQ ID NOS: 31 e 32; SEQ ID NOS: 33 e 34, respectivamente. Em outros exemplos, as regiões Vx e V. do anti- corpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contidas no mesmo compreendem as sequências de aminoácidos selecionadas a partir de: SEQ ID NOS: 21 e 63; SEQ ID NOS: 23 e 64; SEQ ID NOS: e 65; SEQ ID NOS: 27 e 66; SEQ ID NOS: 29 e 67; SEQ ID NOS: 31 e 68; SEQ ID NOS: 33 e 69, respectivamente.
[00328] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i-
gação a antígeno do mesmo, no CAR fornecido, é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um fragmento variável com uma única cadeia (scFv) ou um diacorpo ou um anticorpo com um úni- co domínio (sdAb). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmen- to de ligação a antígeno é um anticorpo com um único domínio que compreende apenas a região Vu. Em algumas modalidades, o anticor- po ou fragmento de ligação a antígeno é um scFv que compreende uma região variável de cadeia pesada (Vx) e uma região variável de cadeia leve (V.). Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo com uma única cadeia (e.g., scFv) inclui um ou mais ligantes que unem dois domínios ou regiões de anticorpos, tal como uma região variável de cadeia pesada (Vx) e uma região variável de cadeia leve (V.). O ligante é, tipicamente, um ligante peptídico, e.g., um ligante peptídico flexível e/ou solúvel. Dentre os ligantes estão aqueles ricos em glicina e serina e/ou, em alguns casos, treonina. Em algumas mo- dalidades, os ligantes incluem ainda resíduos carregados, tais como lisina e/ou glutamato, os quais podem melhorar a solubilidade. Em al- gumas modalidades, os ligantes incluem ainda uma ou mais resíduos de prolina.
[00329] “Consequentemente, os CARs fornecidos contêm anticorpos anti-GPRC5D que incluem fragmentos de anticorpo com uma única cadeia, tais como scFvs e diacorpos, particularmente fragmentos de anticorpo com uma única cadeia humanos, tipicamente que compre- endem ligante(s) que une(m) dois domínios ou regiões de anticorpos, tais como regiões Vx e V.. O ligante é, tipicamente, um ligante peptídi- co, e.g., um ligante peptídico flexível e/ou solúvel, tal como um rico em glicina e serina.
[00330] Em alguns aspectos, os ligantes ricos em glicina e serina (e/ou treonina) incluem pelo menos 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de tal(is) aminoácido(s).
Em algumas modalidades, eles incluem pelo menos em ou cerca de 50 %, 55 %, 60 %, 70 % ou 75 % de glicina, serina e/ou treonina. Em algumas modalidades, o ligante é compreendido totalmente de forma substancial de glicina, serina e/ou treonina. Os ligantes têm, em geral, entre cerca de 5 e cerca de 50 aminoácidos de comprimento, tipica- mente entre em ou cerca de 10 e em ou cerca de 30, e.9g., 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 e, em alguns exemplos, entre 10 e 25 aminoácidos de comprimento. Ligantes exemplificativos incluem ligantes que tem vários números de repetições da sequência GGGGS (4GS; SEQ ID NO: 50) ou GGGS (3GS; SEQ ID NO: 51), tal como entre 2, 3, 4 e 5 repetições de tal se- quência. Ligantes exemplificativos incluem aqueles que têm ou consis- tem em uma sequência apresentada em SEQ ID NO: 52 (GGGGSGGGGSGGGGS). Ligantes exemplificativos incluem ainda aqueles que têm ou consistem na sequência apresentada em SEQ ID NO: 53 (GSTSGSGKPGSGEGSTKG). Ligantes exemplificativos inclu- em ainda aqueles que têm ou consistem na sequência apresentada em SEQ ID NO: 54 (SRGGGGSGGGGSCGGGGSLEMA). Um ligante exemplificativo inclui aqueles que têm ou consistem na sequência apresentada em SEQ ID NO: 47 (GSRGGGGSCGGGGSCGGGGSLE- MA).
[00331] — Consequentemente, em algumas modalidades, as modali- dades fornecidas incluem fragmentos de anticorpo com uma única ca- deia, e.g., scFvs, que compreendem um ou mais dos ligantes supraci- tados, tais como ligantes ricos em glicina/serina, incluindo ligantes que tem repetições de GGGS (SEQ ID NO: 51) ou GGGGS (SEQ ID NO: 50), tal como o ligante apresentado em SEQ ID NO: 47, 52 ou 54.
[00332] Em algumas modalidades, a região Vx pode ser amino ter- minal à região V.. Em algumas modalidades, a região Vx pode ser carbóxi terminal à região V.. Em modalidades particulares, o fragmen-
to, e.g., scFv, pode incluir uma região Vx ou porção da mesma, segui- do pelo ligante, seguido por uma região V. ou porção da mesma. Em outras modalidades, o fragmento, e.g., o scFv, pode incluir a região V. ou porção da mesma, seguido pelo ligante, seguido pela região Vn ou porção da mesma.
[00333] Em alguns aspectos, um scFv fornecido no presente docu- mento compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 1-14 ou tem uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 1-14.
[00334] DentreosCARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 22 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 22. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em
SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e contém uma região V. que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 63 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 63. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 75, 76 e 77, res- pectivamente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 78, 79 e 77, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente.
Em algumas modali- dades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 80, 81 e 77, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente.
Em algumas modali- dades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne-
cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 82, 83 e 84, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 88, 89 e 87, respectivamente.
Em algumas modali- dades, a região Vu compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 21 e a região Vi compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 22. Em algumas modalidades, a região Vu compreende a se- quência apresentada em SEQ ID NO: 21 e a região Vi. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 63. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de an- ticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modali- dades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 1 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 1. Em algumas modali- dades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apre- sentada em SEQ ID NO: 257 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 257. Em algu- mas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 2 ou uma sequência de aminoácidos pe- lo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 2. Em algu-
mas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotí- deos apresentada em SEQ ID NO: 258 ou uma sequência de nucleotí- deos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 258.
[00335] Dentre os (CARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 24 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e contém uma região V. que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 64 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 90, 91, 92, respec- tivamente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 93, 4 e 92, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 95, 96 e 92, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 97, 98 e 99, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 103, 104 e 102, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, a região Vx compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 23 e a região Vi compreende a sequência apresentada em SEQ
ID NO: 24. Em algumas modalidades, a região Vu compreende a se- quência apresentada em SEQ ID NO: 23 e a região Vi. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de an- ticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modali- dades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 3 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 3. Em algumas modali- dades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apre- sentada em SEQ ID NO: 259 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 259. Em algu- mas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 4 ou uma sequência de aminoácidos pe- lo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 4. Em algu- mas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotí- deos apresentada em SEQ ID NO: 260 ou uma sequência de nucleotí- deos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 260.
[00336] DentreosCARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 25; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 26 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 25; e contém uma região V. que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 65 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 65. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 105, 106, 107,
respectivamente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 108, 109 e 107, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 110, 111 e 107, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRLI1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente.
Em algu- mas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 112, 113 e 114, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 118, 119 e 117, respectiva- mente.
Em algumas modalidades, a região Vx compreende a sequên- cia apresentada em SEQ ID NO: 25 e a região Vi. compreende a se- quência apresentada em SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, a região Vx compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 25 e a região V. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 65. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 5 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 5. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 261 ou uma se- quência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cer- ca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 261. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 6 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 6. Em algumas modalidades, o scFv é codifi- cado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 262 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 262.
[00337] DentreosCARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 %
de identidade com SEQ ID NO: 27; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 28 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 28. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e contém uma região V. que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 66 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 66. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma
CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRLI1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.
Em algu- mas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectiva- mente.
Em algumas modalidades, a região Vx compreende a sequên- cia apresentada em SEQ ID NO: 27 e a região Vi. compreende a se- quência apresentada em SEQ ID NO: 28. Em algumas modalidades, a região Vx compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 27 e a região V. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 66. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 263 ou uma se- quência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cer-
ca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 263. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, o scFv é codifi- cado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 264 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 264.
[00338] DentreosCARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 29; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 30 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 30. Em algumas modalidades, o CAR forneci-
do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 29; e contém uma região V. que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 67 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 135, 136 e 137, respectivamente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 138, 139 e 137, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 141 e 137, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRLI1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de amino-
ácidos de SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectivamente.
Em algu- mas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 142, 143 e 144, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 148, 149 e 147, respectiva- mente.
Em algumas modalidades, a região Vx compreende a sequên- cia apresentada em SEQ ID NO: 29 e a região Vi. compreende a se- quência apresentada em SEQ ID NO: 30. Em algumas modalidades, a região Vx compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 29 e a região V. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 9 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 9. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 265 ou uma se- quência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cer- ca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 265. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 10 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 10. Em algumas modalidades, o scFv é codifi- cado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 266 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 266.
[00339] DentreosCARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 31; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 32 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 32. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 31; e contém uma região V. que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 68 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 68. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 135, 150 e 151, respectivamente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 152, 153 e 151, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRLI1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente.
Em algu- mas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 142, 155 e 156, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 160, 161 e 159, respectiva-
mente.
Em algumas modalidades, a região Vx compreende a sequên- cia apresentada em SEQ ID NO: 31 e a região Vi. compreende a se- quência apresentada em SEQ ID NO: 32. Em algumas modalidades, a região Vx compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 31 e a região V. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 68. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 11 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 11. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 267 ou uma se- quência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cer- ca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 267. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 12 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 12. Em algumas modalidades, o scFv é codifi- cado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 268 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 268.
[00340] Dentre os CARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 33 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 33; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 34 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 34. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 33 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 33; e contém uma região V. que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 69 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 69. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 162, 163 e 164, respectivamente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 172, 86, 173, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 165, 166 e 164, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 172, 86 e 173, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 167, 168 e 164, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRLI1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NOS: 172, 86 e 173, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDORH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 169, 170, 171, respectivamente, e uma região V. que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 174, 89 e 175, respectiva- mente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 169, 170, 171, respectivamente, e uma re- gião V. que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 174,89 e 297, respectivamente.
Em algumas modalidades, a região Vs compre-
ende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 33 e a região V. com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 34. Em algumas modalidades, a região Va compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 33 e a região V. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 69. Em algumas modalidades, o anticorpo ou frag- mento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 13 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 13. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 269 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cer- ca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 269. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 14 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 14. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 270 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 270.
[00341] Dentre os anticorpos, e.g., fragmentos de ligação a antíge- no, no CAR fornecidos, estão anticorpos humanos. Em algumas moda- lidades de um anticorpo anti-GPRC5D humano fornecido, e.g., frag- mentos de ligação a antígeno, o anticorpo humano contém uma região VH que compreende uma porção que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma se- quência de aminoácidos codificada por um segmento V de cadeia pe- sada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa, uma porção que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de iden- tidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por um segmento D de cadeia pesada humana de nucleotídeos de |i- nhagem germinativa e/ou uma porção que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por um segmento J de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa; e/ou con- tém uma região VL que compreende uma porção que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por um segmento V de cadeia capa ou lambda humana de nucleotídeos de linhagem germina- tiva e/ou uma porção que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de ami- noácidos codificada por um segmento J de cadeia capa ou lambda humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Em algumas moda- lidades, a porção da região Vx corresponde à CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3. Em algumas modalidades, a porção da região Vr correspon- de à região estrutural 1 (FR1), FR2, FR2 e/ou FR4. Em algumas mo- dalidades, a porção da região V. corresponde à CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3. Em algumas modalidades, a porção da região V. correspon- de à FR1, FR2, FR2 e/ou FRA4.
[00342] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, e.g., frag- mento de ligação a antígeno, contém uma CDR-H1 que tem pelo me- nos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de se- quência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-H1 cor- respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-H1 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-H1 correspondente dentro de uma se- quência codificada por um segmento V de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa.
[00343] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, e.g., frag- mento de ligação a antígeno, contém uma CDR-H2 que tem pelo me- nos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de se- quência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-H2 cor- respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-H2 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-H2 correspondente dentro de uma se- quência codificada por um segmento V de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa.
[00344] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, e.g., frag- mento de ligação a antígeno, contém uma CDR-H3 que tem pelo me- nos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de se- quência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-H3 cor- respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V, segmento D e segmento J de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algu- mas modalidades, contém uma CDR-H3 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferen- ças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-H3 corres- pondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V, segmento D e segmento J de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa.
[00345] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, e.g., frag- mento de ligação a antígeno, contém uma CDR-L1 que tem pelo me- nos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de se- quência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-L1 cor- respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V de cadeia leve humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-L1 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-L1 correspondente dentro de uma se- quência codificada por um segmento V de cadeia leve humana de nu- cleotídeos de linhagem germinativa.
[00346] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, e.g., frag- mento de ligação a antígeno, contém uma CDR-L2 que tem pelo me- nos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de se- quência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-L2 cor- respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V de cadeia leve humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-L2 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-L2 correspondente dentro de uma se- quência codificada por um segmento V de cadeia leve humana de nu-
cleotídeos de linhagem germinativa.
[00347] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, e.g., frag- mento de ligação a antígeno, contém uma CDR-L3 que tem pelo me- nos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de se- quência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-L3 cor- respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V e um segmento J de cadeia leve humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modali- dades, contém uma CDR-L3 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-L3 corresponden- te dentro de uma sequência codificada por um segmento V e um seg- mento J de cadeia leve humana de nucleotídeos de linhagem germina- tiva.
[00348] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, e.g., frag- mento de ligação a antígeno, contém uma região estrutural que con- tém sequências de segmentos gênicos de linhagem germinativa hu- mana. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo humano contém uma região V" na qual a região estrutural, e.g., FR1, FR2, FR3 e FRA4, tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma região estrutural codificada por um segmento de anticorpo de linhagem germinativa, tal como um segmen- to V e/ou um segmento J. Em algumas modalidades, o anticorpo hu- mano contém uma região V. na qual a região estrutural, e.g.FR1, FR2, FR3 e FRA4, tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma região estrutural codificada por um segmento de anticorpo de linhagem germinativa, tal como um segmento V e/ou um segmento J. Por exemplo, em algumas de tais modalidades, a sequência de região estrutural contida dentro da se- quência de aminoácidos da região Vx e/ou região V. difere em não mais do que 10 aminoácidos, tal como não mais do que 9,8,7,6,5,4, 3, 2 ou 1 aminoácido, comparado com a sequência de região estrutural codificada por um segmento de anticorpo de linhagem germinativa. b. Espaçador
[00349] Em algumas modalidades, o receptor recombinante, tal co- mo um CAR que compreende um anticorpo (e.g., fragmento de ligação a antígeno) fornecido no presente documento, inclui ainda um espaça- dor, o qual pode ser ou incluir pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou variante ou versão modificada da mesma. Em algumas modalidades, a porção da região constante de imunoglobulina inclui uma região de dobradiça, e.g9., uma região de dobradiça de I9gG4 e/ou uma região CH1, CH2 ou CH3 e/ou Fc. Em al- gumas modalidades, a região constante ou porção é de uma IgG hu- mana, tal como IgG4 ou IgG1. Em alguns aspectos, a porção da região constante serve como uma região espaçadora entre o componente de reconhecimento antigênico, tal como domínio de ligação a antígeno (e.g., scFv) e o domínio transmembrana. Em algumas modalidades, o comprimento do espaçador é ajustado para otimizar a distância de si- napse biofísica entre a célula que expressa o CAR, tal como uma célu- la que expressa o CAR e o alvo do CAR, tal como uma célula tumoral que expressa GPRC5D. Em algumas modalidades, o CAR é expresso por uma célula T e o comprimento do espaçador é ajustado para um comprimento que é compatível para ativação de células T ou para oti- mizar o desempenho da célula T CAR.
[00350] Em algumas modalidades, o espaçador pode ser de um comprimento que permite responsividade aumentada da célula após ligação ao antígeno, quando comparado com na ausência do espaça- dor ou quando comparado com um espaçador alternativo de um com- primento diferente (e.g., de menor comprimento). Em alguns exem- plos, o espaçador tem em ou cerca de 12 aminoácidos de comprimen-
to ou não tem mais de 12 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o espaçador é pelo menos 100 aminoácidos de compri- mento, tal como pelo menos 110, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 ou 250 aminoácidos de com- primento. Espaçadores exemplificativos incluem aqueles que têm pelo menos cerca de 10 a 300 aminoácidos, cerca de 10 a 200 aminoáci- dos, cerca de 50 a 175 aminoácidos, cerca de 50 a 150 aminoácidos, cerca de 10 a 125 aminoácidos, cerca de 50 a 100 aminoácidos, cerca de 100 a 300 aminoácidos, cerca de 100 a 250 aminoácidos, cerca de 125 a 250 aminoácidos ou cerca de 200 a 250 aminoácidos e incluem qualquer número inteiro entre os limites de qualquer uma das faixas listadas. Em algumas modalidades, uma região espaçadora tem pelo menos cerca de 12 aminoácidos, pelo menos cerca de 119 aminoáci- dos ou menos, pelo menos cerca de 125 aminoácidos, pelo menos cerca de 200 aminoácidos ou pelo menos cerca de 220 aminoácidos ou pelo menos cerca de 225 aminoácidos de comprimento.
[00351] Em algumas modalidades, o espaçador tem um compri- mento de 125 a 300 aminoácidos de comprimento, 125 a 250 aminoá- cidos de comprimento, 125 a 230 aminoácidos de comprimento, 125 a 200 aminoácidos de comprimento, 125 a 180 aminoácidos de compri- mento, 125 a 150 aminoácidos de comprimento, 150 a 300 aminoáci- dos de comprimento, 150 a 250 aminoácidos de comprimento, 150 a 230 aminoácidos de comprimento, 150 a 200 aminoácidos de compri- mento, 150 a 180 aminoácidos de comprimento, 180 a 300 aminoáci- dos de comprimento, 180 a 250 aminoácidos de comprimento, 180 a 230 aminoácidos de comprimento, 180 a 200 aminoácidos de compri- mento, 200 a 300 aminoácidos de comprimento, 200 a 250 aminoáci- dos de comprimento, 200 a 230 aminoácidos de comprimento, 230 a 300 aminoácidos de comprimento, 230 a 250 aminoácidos de compri- mento ou 250 a 300 aminoácidos de comprimento. Em algumas moda-
lidades, o espaçador tem pelo menos ou pelo menos cerca de ou tem ou tem cerca de 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 ou 229 aminoácidos de com- primento ou um comprimento entre qualquer um dos anteriores.
[00352] “Espaçadores exemplificativos incluem uma dobradiça de IgG apenas, uma dobradiça de IgG ligada a um ou mais de um domí- nio Cx2 e CH3 ou uma dobradiça de IgG ligada ao domínio Cx3. Em algumas modalidades, a dobradiça de IgG , CH2 e/ou Cx3 pode ser derivada, no todo ou em parte, de IgG4 ou IgG2, tal como no todo ou em parte de IgG4 humana ou IgG2 humana. Em algumas modalida- des, o espaçador pode ser um polipeptídeo quimérico que contém um ou mais de uma sequência de dobradiça, CH2 e/ou ChH3 derivadas de IgG4, I9gG2 e/ou IgG2 e IgG4. Em algumas modalidades, a região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4 e/ou de uma região de dobradiça de I9G2, em que a região de dobradiça de IgG4 é opcionalmente uma região de dobra- diça de IgG4 humana e a região de dobradiça de IgG2 é opcionalmen- te uma região de dobradiça de IgG2 humana; a região CH2 compreen- de a totalidade ou uma porção de uma Região Cr2 de IgG4 e/ou de uma região Cx2 de IgG2, em que a Região Cx2 de IgG4 é opcional- mente uma região Cx2 de IgG4 humana e uma região Cr2 de IgG2 é opcionalmente uma região Cx2 de IgG2 humana; e/ou a região Cr3 compreende a totalidade ou uma porção de uma região Cx3 de Ig9G4 e/ou de uma região CH3 de IgG2, em que a região Cx3 de IgG4 é op- cionalmente uma região CH3 de IgG4 humana e uma região Cr3 de IgG2 é opcionalmente uma Cn3 de I9gG2 humana region. Em algumas modalidades, a dobradiça, CxH2 e CH3 compreende a totalidade ou uma porção de cada uma das regiões de dobradiça, Cx2 e Cx3 de IgG4. Em algumas modalidades, a região de dobradiça é quimérica e com- preende uma região de dobradiça de IgG4 humana e IgG2 humana; a região CH2 é quimérica e compreende uma região Crx2 de IgG4 huma- na e IgG2 humana; e/ou a região CK3 é quimérica e compreende uma região CH3 de IgG4 humana e IgG2 humana. Em algumas modalida- des, o espaçador compreende uma dobradiça quimérica de I9G4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada que compreende pelo menos uma substituição de aminoácido comparado com uma região de dobradiça de IgG4 humana; uma região Ch3/4 de IgG2 humana quimérica; e uma região CH3 de IgG4 humana.
[00353] Em algumas modalidades, o espaçador pode ser derivado, no todo ou em parte, de IgG4 e/ou IgG2 e pode conter mutações, tal como uma ou mais mutações de um único aminoácido em um ou mais domínios. Em alguns exemplos, a modificação de aminoácido é uma substituição de uma prolina (P) por uma serina (S) na região de dobra- diça de uma IgG4. Em algumas modalidades, a modificação de ami- noácido é uma substituição de uma glutamina (Q) por uma asparagina (N) para reduzir a heterogeneidade de glicosilação, tal como uma mu- tação N177Q na posição 177, na região CH2, da sequência de Fc de IgG4 de comprimento completo apresentada em SEQ ID NO: 281 ou uma mutação N176Q na posição 176, na região CH2, da sequência de Fc de IgG2 de comprimento completo apresentada em SEQ ID NO:
282. Em algumas modalidades, o espaçador é ou compreende uma dobradiça quimérica de I9G4/2 ou uma dobradiça de I9G4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4. Em algumas modalidades, o espaçador tem cerca de 228 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o espaçador é apresentada em SEQ ID NO: 17. Em algumas modalidades, o espaçador compre- ende a sequência de aminoácidos:
KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 17)
[00354] Em algumas modalidades, o espaçador é codificado por um polinucleotídeo que tem foi otimizado quanto à expressão de códons e/ou para eliminar sítios de splicing, tais como sítios de splicing crípti- cos. Em algumas modalidades, a sequência codificante para o espa- çador compreende a sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, a sequência codificante para o espaçador compreende a sequência de ácidos nucleicos apre- sentada em SEQ ID NO: 73. Em algumas modalidades, a sequência codificante para o espaçador compreende a sequência de ácidos nu- cleicos apresentada em SEQ ID NO: 283. Em algumas modalidades, a sequência codificante para o espaçador compreende a sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID NO: 284.
[00355] “Espaçadores exemplificativos adicionais incluem, porém sem limitações, aqueles descritos em Hudecek et a/. (2013) Clin. Can- cer Res., 19:3153, Hudecek et al. (2015) Cancer Immunol. Res., 3(2):125-135 ou Publicação de Pedido de Patente Internacional núme- ro WO2014031687. Em algumas modalidades, a sequência de nucleo- tídeos do espaçador é otimizada para reduzir a heterogeneidade de RNA quando de expressão. Em algumas modalidades, a sequência de nucleotídeos do espaçador é otimizada para reduzir sítios de splicing crípticos ou reduzir a probabilidade de um evento de splicing em um sítio de splicing.
[00356] Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 15 e é codificado pela se- quência de polinucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 285. Em al- gumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 16. Em algumas modalidades, o espaça-
dor tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO:
286. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 288 e é codificado pela se- quência de polinucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 287. Em al- gumas modalidades, o espaçador tem uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 17, codificada pela sequência de polinu- cleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 73, 74, 283 ou 284 ou um po- linucleotídeo que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais de identidade de sequência com SEQ ID NO: 73, 74, 283 ou 284.
[00357] Em algumas modalidades, o espaçador tem uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais de identidade de sequência com SEQ ID NO: 17, codificada por uma sequência de polinucleotídeos que foi opcionalmente otimizada para uso de códons e/ou para reduzir a heterogeneidade de RNA. Métodos para reduzir a heterogeneidade de RNA, tal como ao remover sítios doadores e/ou aceitadores de splicing crípticos, são descritos abaixo, tal como na Seção |.B.2.b. Observações mostraram que sítios doado- res e/ou aceitadores de splicing crípticos estão presentes na região espaçadora de determinados espaçadores de imunoglobulina quanto presentes em um CAR. Em algumas modalidades, o espaçador em um CAR fornecido é codificado por um polinucleotídeo no qual um ou mais sítios doadores e/ou aceitadores de splicing crípticos são eliminados e/ou são modificados para reduzir a heterogeneidade do RNA transcri- to a partir da construção, tal como mMRNA, após expressão em uma célula. Em algumas modalidades, o espaçador é codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 74 (também apresentada em SEQ ID NO: 48). Em algumas modalidades, o espa- çador é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em
SEQ ID NO: 283. Em algumas modalidades, o espaçador é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 284. Em algumas modalidades, o espaçador é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305. c. Domínio Transmembrana e Componentes de Sinalização Intracelular
[00358] O componente de reconhecimento antigênico geralmente está ligado a um ou mais componentes de sinalização intracelular, tais como componentes de sinalização que mimetizam a ativação por meio de um complexo de receptor antigênico, tal como um complexo de TCR, no caso de um CAR e/ou sinal via outro receptor na superfície celular. Assim, em algumas modalidades, uma molécula de ligação à proteína GPRC5D (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo) é ligada a um ou mais domínios transmembrana, tais como aqueles descritos no presente documento e domínios de si- nalização intracelular que compreendem um ou mais componentes intracelulares, tais como aqueles descritos no presente documento. Em algumas modalidades, o domínio transmembrana é fundido ao domínio extracelular. Em uma modalidade, um domínio transmembra- na que naturalmente está associado a um dos domínios no receptor, por exemplo, CAR, é usado. Em alguns casos, o domínio transmem- brana é selecionado ou modificado por meio de substituição de amino- ácidos para evitar a ligação de tais domínios aos domínios transmem- brana das mesmas ou diferentes proteínas da membrana na superfície para minimizar as interações com outros membros do complexo recep- tor.
[00359] O domínio transmembrana, em algumas modalidades, é derivado de uma fonte natural ou sintética. Quando a fonte é natural, o domínio é, em alguns aspectos, derivado de qualquer proteína ligada à membrana ou transmembrana. Os domínios transmembrana incluem aqueles derivados (ou seja, que compreendem pelo menos o(s) domí-
nio(s) transmembrana(s) da cadeia alfa, beta ou zeta do receptor de células T, CD3 épsilon, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 e/ou CD1I5A4. Por exemplo, o domínio transmembrana pode ser um domínio trans- membrana de CD28 que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18, codificada pela sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID NO: 55 ou SEQ ID NO: 56. Alterna- tivamente, o domínio transmembrana, em algumas modalidades, é sin- tético. Em alguns aspectos, o domínio transmembrana sintético com- preende resíduos predominantemente hidrofóbicos, tais como leucina e valina. Em alguns aspectos, um tripleto de fenilalanina, triptofano e valina será encontrado em cada extremidade de um domínio trans- membrana sintético. Em algumas modalidades, a ligação é através de ligantes, espaçadores e/ou domínio(s) transmembrana(s).
[00360] Dentre os domínios de sinalização intracelular estão aque- les que imitam ou se aproximam um sinal através de um receptor anti- gênico natural, um sinal através de tal receptor em combinação com um receptor coestimulador e/ou um sinal através de um receptor coes- timulador apenas. Em algumas modalidades, um ligante de oligo- ou polipeptídeo curto, por exemplo, um ligante de entre 2 e 10 aminoáci- dos de comprimento, tal como um que contêm glicinas e serinas, por exemplo, uma dupla de glicina-serina, está presente e forma uma liga- ção entre o domínio transmembrana e o domínio de sinalização intra- celular do CAR.
[00361] O receptor, por exemplo, o CAR, geralmente inclui uma re- gião de sinalização intracelular que compreende pelo menos um com- ponente ou componentes de sinalização intracelular. Em algumas mo- dalidades, o receptor inclui um componente intracelular ou domínio de sinalização de um complexo TCR, tal como uma cadeia CD3 de TCR, que media a ativação de células T e citotoxicidade, por exemplo, ca-
deia de CD3 zeta (CD3-7). Assim, em alguns aspectos, o anticorpo de ligação à proteína GPRC5D está ligado a um ou mais módulos de si- nalização celular. Em algumas modalidades, os módulos de sinaliza- ção celular incluem domínio transmembrana de CD3, domínios de si- nalização intracelular de CD3 e/ou outros domínios transmembrana de CD. Em algumas modalidades, o receptor, por exemplo, CAR, inclui ainda uma porção de uma ou mais moléculas adicionais, tais como receptor Fcy, CD8, CD4, CD25 ou CD16. Por exemplo, em alguns as- pectos, o CAR inclui uma molécula quimérica entre CD3-zeta (CD3-6) ou receptor Fcy e CD8, CD4, CD25 ou CD16.
[00362] Em algumas modalidades, quando de ligação do CAR, o domínio citoplasmático ou domínio de sinalização intracelular do CAR estimula e/ou ativa pelo menos uma das funções efetoras ou respostas normais da célula imune, por exemplo, célula T concebida para ex- pressar o CAR. Por exemplo, em alguns contextos, o CAR induz a uma função de uma célula T, tal como atividade citolítica, ou atividade T auxiliar, tal como secreção de citocinas ou outros fatores. Em algu- mas modalidades, uma porção truncada de um domínio de sinalização intracelular de um componente receptor antigênico ou molécula coes- timuladora é usado no lugar de uma cadeia imunoestimuladora intacta, por exemplo, se transduz o sinal da função efetora. Em algumas mo- dalidades, o domínio ou domínios de sinalização intracelular incluem as sequências citoplasmáticas do receptor de células T (TOR) e, em alguns aspectos, também aquelas de correceptores que, no contexto natural, atuam em conjunto com este receptor para iniciar a transdu- ção de sinal após o envolvimento do receptor antigênico e/ou qualquer derivado ou variante de tais moléculas e/ou qualquer sequência sinté- tica que tenha a mesma capacidade funcional.
[00363] No contexto de um TCR natural, a ativação completa ge- ralmente requer não apenas a sinalização por meio do TCR, mas tam-
bém um sinal coestimulador. Assim, em algumas modalidades, para promover a ativação completa, um componente para gerar um sinal secundário ou coestimulador também está incluído no CAR. Em outras modalidades, o CAR não inclui um componente para gerar um sinal coestimulador. Em alguns aspectos, um CAR adicional é expresso na mesma célula e fornece o componente para gerar o sinal secundário ou coestimulador.
[00364] A ativação de células T é, em alguns aspectos, descrita como sendo mediada por duas classes de sequências de sinalização citoplasmática: aquelas que iniciam a ativação primária dependente de antígeno por meio do TCR (sequências de sinalização citoplasmática primárias) e aquelas que atuam de maneira independente do antígeno para fornecer um sinal secundário ou coestimulador (sequências de sinalização citoplasmática secundárias). Em alguns aspectos, o CAR inclui uma ou ambas as classes de sequências de sinalização cito- plasmática.
[00365] Em alguns aspectos, o CAR inclui uma sequência de sinali- zação citoplasmática primária que regula a estimulação primária e/ou ativação do complexo TCR. As sequências de sinalização citoplasmá- tica primárias que atuam de maneira estimuladora podem conter moti- vos de sinalização que são conhecidos como motivos de ativação com base em tirosina imunorreceptoras ou ITAMs. Exemplos de ITAMs que contêm sequências de sinalização citoplasmática primárias incluem aqueles derivados de TCR ou CD3 zeta, FcR gama, CD3 gama, CD3 delta e CD3 épsilon. Em algumas modalidades, a região de sinalização intracelular no CAR contém um domínio de sinalização citoplasmático, uma porção do mesmo ou uma sequência derivada de CD3 zeta. Em algumas modalidades, a CD3 zeta compreende a sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 20, codificada pela sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID NO: 57 ou SEQ ID NO:
58.
[00366] Em algumas modalidades, o CAR inclui um domínio de si- nalização (por exemplo, um domínio de sinalização intracelular ou ci- toplasmático) e/ou porção transmembrana de uma molécula coestimu- ladora, tal como uma molécula coestimuladora de células T. Moléculas coestimuladoras exemplificativas incluem CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 e ICOS. Por exemplo, uma molécula coestimuladora pode ser derivada de 4-1BB e pode compreender a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 19, codificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 59 ou SEQ ID NO: 60. Em alguns aspec- tos, o mesmo CAR inclui os componentes estimuladores ou de ativa- ção (por exemplo, sequência de sinalização citoplasmática) e compo- nentes coestimuladores.
[00367] Em algumas modalidades, os componentes estimuladores ou ativadores estão incluídos em um CAR, enquanto que o componen- te coestimulador é fornecido por outro CAR que reconhece outro antí- geno. Em algumas modalidades, os CARs incluem CARs ativadores ou estimuladores e CARs coestimuladores, ambos expressos na mesma célula (consulte documento WO 2014/055668). Em alguns as- pectos, o CAR que tem como alvo a proteína GPRC5D é o CAR esti- mulador ou ativador; em outros aspectos, ele é o CAR coestimulador. Em algumas modalidades, as células incluem ainda CARs inibidores (iCARs, consulte Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5 (215) (dezem- bro de 2013), tal como um CAR que reconhece um antígeno diferente da proteína GPRC5D, em que um sinal estimulador ou de ativação dis- tribuído através do CAR de que tem como alvo a proteína GPRC5D é diminuído ou inibido pela ligação do CAR inibidor ao seu ligante, por exemplo, para reduzir os efeitos fora-do-alvo.
[00368] Em determinadas modalidades, a região de sinalização in- tracelular compreende um domínio transmembrana de CD28 e um domínio de sinalização ligado a um domínio intracelular de CD3 (por exemplo, CD3-zeta). Em algumas modalidades, o domínio de sinaliza- ção intracelular compreende um domínio coestimulador de CD28 e 4- 1BB (CD137; TNFRSF9) quimérico ligado a um domínio intracelular de CD3 zeta.
[00369] Em algumas modalidades, o CAR abrange um ou mais, por exemplo, dois ou mais, domínios coestimuladores e um domínio esti- mulador ou de ativação, por exemplo, domínio de ativação primário, na porção citoplasmática. CARs exemplificativos incluem componentes intracelulares de CD3-zeta, CD28 e 4-1BB.
[00370] Em algumas modalidades, modalidades do CAR anti- GPRCS5D fornecido contêm um domínio de ligação a antígeno extrace- lular que contém qualquer um dos anticorpos anti-GPRC5D ou frag- mentos de ligação a antígeno descritos no presente documento, tal como na Seção |.1a; um espaçador que compreende uma dobradiça quimérica de I9gG4/2 ou uma dobradiça de I9gG4 modificada; uma regi- ão CH2 quimérica de Ig9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, tal como uma que tem cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espa- çador apresentado em SEQ ID NO: 17, tal como codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 73, 74, 283 ou 284; um domínio transmembrana, tal como um domínio transmembrana de uma CD28 humana; e uma região de sina- lização intracelular que compreende um domínio de sinalização cito- plásmico de CD3-zeta (CD36) e um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T. Também são forneci- dos polinucleotídeos que codificam tal receptor antigênico quimérico. Em algumas modalidades, o domínio transmembrana é ou compreen- de a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18. Em algumas modali- dades, o domínio de sinalização intracelular de uma molécula coesti- muladora de células T é um domínio de sinalização intracelular de
CD28 humana, 4-1BB humana ou ICOS humana ou a porção de sina- lização da mesma. Em modalidades particulares, o domínio de sinali- zação intracelular é um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB humana. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intrace- lular é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização citoplasmático é um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta humana, confor- me apresentado em SEQ ID NO: 20. Em algumas modalidades, a re- gião de sinalização intracelular compreende as sequências apresenta- das em SEQ ID NO: 20 e SEQ ID NO: 19.
[00371] Em algumas modalidades, um CAR anti-GPRC5D fornecido têm uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 289 ou uma sequência de aminoácidos que é pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 289. Em algumas modalidades, um CAR anti- GPRCB5D fornecido é codificado pela sequência de nucleotídeos apre- sentada em SEQ ID NO: 290 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequên- cia apresentada em qualquer uma de SEQ ID NO: 290.
2. Características Exemplificativas
[00372] Em algumas das modalidades fornecidas, o domínio de |li- gação a antígeno do CAR anti-GPRC5D e/ou anti-GPRC5D, se liga especificamente à proteína GPRCB5D, tal como a proteína GPRC5D, na superfície de uma célula plasmática de mieloma múltiplo. Em qual-
quer uma das modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno, nos CARs fornecidos, se liga especificamente à proteína GPRC5D. Em algumas modalidades, a ligação pode ser a uma proteí- na GPRC5D humana, uma proteína GPRC5D de camundongo ou uma proteína GPRC5D de um primata não humano (por exemplo, macaco cynomolgus). Em algumas modalidades, entre os domínios de ligação a antígeno do CAR anti-GPRC5D e/ou anti-GPRC5D fornecidos estão aqueles que se ligam à proteína GPRC5D humana. A observação de que um anticorpo ou outra molécula de ligação se liga à proteína GPRCS5D ou se liga especificamente à proteína GPRC5D não significa necessariamente que ela se liga a uma proteína GPRC5D de todas as espécies. Por exemplo, em algumas modalidades, características de ligação à proteína GPRC5D, tal como a capacidade de se ligar especi- ficamente à mesma e/ou competir pela ligação à mesma com um anti- corpo de referência e/ou de se ligar com uma afinidade particular ou competir em um determinado grau, em algumas modalidades, refere- se à capacidade em relação a uma proteína GPRC5D humana e o an- ticorpo pode não ter esta característica em relação a uma proteína GPRCS5D de outra espécie, tal como camundongo.
[00373] Em algumas modalidades, os anticorpos se ligam especifi- camente à proteína GPRC5D humana, tal como a um epítopo ou regi- ão da proteína GPRC5D humana, tal como a proteína BCMA humana que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 49 (Uniprot Q9NZD1) ou uma variante alélica ou variante de splicing da mesma.
[00374] Em uma modalidade, a extensão da ligação de um anticor- po anti-GPRC5D ou domínio de ligação a antígeno ou CAR a uma pro- teína diferente de GPRC5D não relacionada, tal como uma proteína GPRCB5D não humana ou outra proteína diferente de GPRC5D, é me- nor do que em ou cerca de 10 % da ligação do anticorpo ou domínio de ligação a antígeno ou CAR à proteína GPRC5D humana ou proteí- na GPRC5D ligada à membrana humana conforme medido, por exem- plo, por meio de um radioimunoensaio (RadiolMmunoAssay, RIA). Em algumas modalidades, dentre os anticorpos ou domínios de ligação a antígeno nos CARs fornecidos, estão anticorpos ou domínios de liga- ção a antígeno ou CARs nos quais a ligação à proteína GPRC5D de camundongo é menor do que ou igual ou cerca de 10 % da ligação do anticorpo à proteína GPRC5D humana. Em algumas modalidades, dentre os anticorpos ou domínios de ligação a antígeno nos CARs for- necidos, estão anticorpos nos quais a ligação à proteína GPRC5D de macaco cynomolgus é menor do que ou igual ou cerca de 10 % da li- gação do anticorpo à proteína GPRC5D humana. Em algumas modali- dades, dentre os anticorpos ou domínios de ligação a antígeno nos CARs fornecidos, estão anticorpos nos quais a ligação à proteína GPRC5D de macaco cynomolgus e/ou uma proteína GPRC5D de ca- mundongo é igual ou quase igual à ligação do anticorpo à proteína GPRC5D humana.
[00375] Em algumas modalidades, os anticorpos, nos CARs forne- cidos, são capazes de se ligar à proteína GPRC5D, tal como a proteí- na GPRC5D humana, com pelo menos uma determinada afinidade, conforme medido por meio de qualquer um de uma série de métodos conhecidos. Em algumas modalidades, a afinidade é representada por uma constante de dissociação em equilíbrio (Ko); em algumas modali- dades, a afinidade é representada pela ECso.
[00376] Uma variedade de ensaios são conhecidos para avaliar a afinidade de ligação e/ou determinar se uma molécula de ligação (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo) se liga especifica- mente a um ligante em particular (por exemplo, um antígeno, tal como uma proteína GPRC5D). Está dentro do nível daqueles versados na técnica determinar a afinidade de ligação de uma molécula de ligação,
por exemplo, um anticorpo, por um antígeno, por exemplo, a proteína GPRCB5D, tal como a proteína GPRC5D humana ou a proteína GPRC5D de cynomolgus ou a proteína GPRC5D de camundongo, tal como usando qualquer um de um série de ensaios de ligação que são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, em algumas modalidades, um instrumento BIAcore& pode ser usado para determinar a cinética de ligação e constantes de um complexo entre duas proteínas (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo, e um antígeno, tal como uma proteína GPRC5D), usando análise de ressonância plas- mônica em superfície (Surface Plasmon Resonance, SPR) (consulte, por exemplo, Scatchard et al., Ann. NY Acad. Sci. 51: 660, 1949; Wil- son, Science 295: 2103, 2002; Wolff et al., Cancer Res. 53: 2560, 1993; e Patentes Norte-Americanas Nº 5.283.173, 5.468.614 ou equi- valente).
[00377] ASPR mede variações na concentração de moléculas so- bre uma superfície do sensor à medida que as moléculas se ligam ou se dissociam da superfície. A variação no sinal de SPR é diretamente proporcional à variação na concentração de massa próximo à superfí- cie, deste modo, permitindo medição da cinética de ligação entre duas moléculas. A constante de dissociação para o complexo pode ser de- terminada ao monitorar as variações no índice de refração em relação ao tempo à medida o tampão é passado sobre o chip. Outros ensaios adequados para medir a ligação de uma proteína à outra incluem, por exemplo, imunoensaios, tais como ensaios de imunoabsorção enzimá- tica (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA) e radioimunoen- saios (RIA) ou determinação de ligação ao monitorar a variação nas propriedades espectroscópicas ou ópticas das proteínas através de fluorescência, absorção de UV, dicroísmo circular ou ressonância magnética nuclear (Nuclear Magnetic Resonance, NMR). Outros en- saios exemplificativos incluem, porém sem limitações, Western blot,
ELISA, ultracentrifugação analítica, espectroscopia, citometria de fluxo, sequenciamento e outros métodos para a detecção de polinucleotí- deos expressos ou ligação de proteínas.
[00378] Em algumas modalidades, a molécula de ligação, por exemplo, anticorpo ou fragmento do mesmo ou domínio de ligação a antígeno de um CAR, se liga, tal como se liga especificamente, a um antígeno, por exemplo, uma proteína GPRC5D ou um epítopo na mesma, com uma afinidade ou Ka (isto é, uma constante de associa- ção em equilíbrio de uma interação de ligação particular com unidades de 1/M; igual à proporção da taxa de ativação [Kon ou Ka] para a taxa de desativação [kor ou ka] para esta reação de associação, assumindo uma interação bimolecular) igual ou maior do que 10º M. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento do mesmo ou domínio de liga- ção a antígeno de um CAR exibe uma afinidade de ligação pelo epíto- po do peptídeo com uma Kp (isto é, uma constante de dissociação em equilíbrio de uma interação de ligação particular com unidades de M; igual à proporção da taxa de desativação [Kor ou ka] para a taxa de ati- vação [Kon Ou Ka] para esta reação de associação, assumindo uma inte- ração bimolecular) igual ou menor do que 10º M. Por exemplo, a cons- tante de dissociação em equilíbrio Kp varia a partir de 10º M a 107º M, tal como 107 M a 10º M, 108 M a 10º M ou 10º M a 10º M. A taxa de ativação (constante de taxa de associação; Kon ou Ka; unidades de 1/Ms) e a taxa de dissociação (constante de taxa de dissociação; kKor ou ka; unidades de 1/s) podem ser determinadas usando qualquer um dos métodos de ensaio conhecidos na técnica, por exemplo, resso- nância plasmônica em superfície (SPR).
[00379] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação (ECso) e/ou a constante de dissociação do anticorpo (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) ou domínio de ligação a antígeno de um CAR pela proteína GPRC5D, tal como a proteína GPRC5D humana, é a partir de ou a partir de cerca de 0,01 nM a cerca de 500 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,01 nM a cerca de 400 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,01 nM a cerca de 100 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,01 nM a cerca de 50 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,01 NM a cerca de 10 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,01 nM a cerca de 1 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,01 nM a cerca de 0,1 NM, é a partir de ou a partir de cerca de 0,1 nM a cerca de 500 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,1 nM a cerca de 400 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,1 nM a cerca de 100 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,1 nM a cerca de 50 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,1 nM a cerca de 10 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,1 NM a cerca de 1 nM, a partir de ou a partir de cerca de 0,5 nM a cerca de 200 nM, a partir de ou a partir de cerca de 1 nM a cerca de 500 nM, a partir de ou a partir de cerca de 1 nM a cerca de 100 nM, a partir de ou a partir de cerca de 1 nM a cerca de 50 nM, a partir de ou a partir de cerca de 1 nM a cerca de 10 nM, a partir de ou a partir de cerca de 2 nM a cerca de 50 nM, a partir de ou a partir de cerca de 10 NM a cerca de 500 nM, a partir de ou a partir de cerca de 10 nM a cer- ca de 100 nM, a partir de ou a partir de cerca de 10 nM a cerca de 50 NM, a partir de ou a partir de cerca de 50 nM a cerca de 500 nM, a par- tir de ou a partir de cerca de 50 nM a cerca de 100 nM ou a partir de ou a partir de cerca de 100 nM a cerca de 500 nM.
Em determinadas modalidades, a afinidade de ligação (EC5o) e/ou a constante de disso- ciação de equilíbrio, Ko, do anticorpo por uma proteína GPRCB5D, tal como a proteína GPRC5D humana, é igual ou menor do que cerca de 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 NM, 15 nM, 14 NM, 13 NM, 12 0M, 11 NM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 NM, 6 NM, 5 NM, 4 NM, 3 NM, 2 NM ou 1 nM ou menos.
Em algumas modalidades, os anticorpos se ligam a uma proteína GPRC5D, tal como a proteína GPRC5D humana, com uma afinidade de ligação sub-nanomolar, por exemplo, com uma afinidade de ligação de menos de cerca de 1 nM, tal como menos de cerca de 0,9 nM, cerca de 0,8 nM, cerca de 0,7 nM, cerca de 0,6 nM, cerca de 0,5 nM, cerca de 0,4 nM, cerca de 0,3 nM, cerca de 0,2 nM ou cerca de 0,1 nM ou menos.
[00380] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação pode ser classificada como alta afinidade ou baixa afinidade. Em alguns casos, a molécula de ligação (por exemplo, anticorpo ou fragmento do mes- mo) ou domínio de ligação a antígeno de um CAR que exibe ligação de afinidade baixa a moderada exibe uma Ka de até 107 M, até 10º M 1, até 10º M!. Em alguns casos, uma molécula de ligação (por exem- plo, anticorpo ou fragmento do mesmo) que exibe ligação de alta afini- dade a um epítopo particular interage com tal epítopo com uma Ka de pelo menos 107 M, pelo menos 108º M, pelo menos 10º M, pelo menos 10º*º M!, pelo menos 10º? M, pelo menos 10º? M ou pelo menos 10º? M. Em algumas modalidades, a afinidade de ligação (EC50o) e/ou a constante de dissociação de equilíbrio, Ko, da molécula de ligação, por exemplo, anticorpo anti-GPRC5D ou fragmento do mesmo ou domínio de ligação a antígeno de um CAR, para uma prote- ína GPRC5D, é de ou de cerca de 0,01 nM a cerca de 1 uM, 0,1 NM a 1 UM, 1 NM a 1 UM, 1 NM a 500 nM, 1 nM a 100 nM, 1 nM a 50 nM, 1 nM a 10 nM, 10 nM a 500 nM, 10 nM a 100 nM, 10 nM a 50 nM, 50 nM a 500 nM, 50 nM a 100 nM ou 100 nM a 500 nM. Em determinadas modalidades, a afinidade de ligação (EC5o) e/ou a constante de disso- ciação da constante de dissociação de equilíbrio, Ko, da molécula de ligação, por exemplo, anticorpo anti-GPRC5D ou fragmento do mesmo ou domínio de ligação a antígeno de um CAR, para uma GPRCB5D pro- teína é igual ou menor do que ou cerca de 1 uM, 500 nM, 100 nM, 50 NM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 NM, 14 nM, 13 NM, 12 nM, 11 NM, 10 nM, 9 nM, 8 NM, 7 NM, 6 NM, 5
NM, 4 nM, 3 nM, 2 nM ou 1 NM ou menos. O grau de afinidade de um determinado anticorpo pode ser comparado com a afinidade de um anticorpo conhecido, tal como um anticorpo de referência.
[00381] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação de uma molécula de ligação, tal como um anticorpo anti-GPRC5D ou domínio de ligação a antígeno de um CAR, por diferentes antígenos, por exemplo, proteínas GPRC5D de diferentes espécies, pode ser compa- rada para determinar a reatividade cruzada entre espécies. Por exem- plo, a reatividade cruzada entre espécies pode ser classificada como alta reatividade cruzada ou baixa reatividade cruzada. Em algumas modalidades, a constante de dissociação em equilíbrio, Ko, para dife- rentes antígenos, por exemplo, proteínas GPRC5D de diferentes es- pécies, tais como ser humano, macaco cynomolgus ou camundongo, pode ser comparada para determinar a reatividade cruzada entre es- pécies. Em algumas modalidades, a reatividade cruzada entre espé- cies de um anticorpo anti-GPRC5D ou domínio de ligação a antígeno de um CAR pode ser alta, por exemplo, o anticorpo anti-GPRC5D se liga à proteína GPRC5D humana e uma variante de proteína GPRC5D de outra espécie em um grau similar, por exemplo, a proporção de Kp para a proteína GPRC5D humana e a Kp para a variante de proteína GPRCS5D de outra espécie é ou é cerca de 1. Em algumas modalida- des, a reatividade cruzada entre espécies de um anticorpo anti- GPRC5D ou domínio de ligação a antígeno de um CAR pode ser bai- xa, por exemplo, o anticorpo anti-GPRC5D tem uma alta afinidade pela GPRC5D humana, mas uma baixa afinidade por uma variante de pro- teína GPRC5D de outra espécie ou vice-versa. Por exemplo, a propor- ção da Kp para a variante de proteína GPRC5D de outra espécie e a Kp para a proteína GPRC5D humana é mais do que 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 ou mais, e o anti- corpo anti-GPRC5D tem baixa reatividade cruzada entre espécies. O grau de reatividade cruzada entre espécies pode ser comparado com a reatividade cruzada entre espécies de um anticorpo conhecido, tal como um anticorpo de referência.
[00382] Dentre os CARs fornecidos estão CARs que exibem ativi- dade ou sinalização dependente de antígeno, ou seja, atividade de si- nalização que está mensuravelmente ausente ou em níveis de base na ausência e de antígeno, por exemplo, GPRC5D. Assim, em alguns as- pectos, os CARs fornecidos não exibem ou exibem não mais do que um nível de base ou um nível tolerável ou baixo nível de sinalização tônica ou atividade independente de antígeno ou sinalização na au- sência de antígeno, por exemplo, GPRC5D, estando presente. Em al- gumas modalidades, as células que expressam CAR anti-GPRC5D fornecidas exibem atividade ou função biológica, incluindo atividade citotóxica, produção de citocinas e capacidade de proliferar.
[00383] Em algumas modalidades, a atividade biológica ou ativida- de funcional de um receptor quimérico, tal como a atividade citotóxica, pode ser medida usando qualquer um de uma série de métodos co- nhecidos. A atividade pode ser avaliada ou determinada in vitro ou in vivo. Em algumas modalidades, a atividade pode ser avaliada uma vez que as células são administradas ao indivíduo (por exemplo, ser hu- mano). Parâmetros para avaliar incluem a ligação específica de uma célula T manipulada ou natural ou outra célula imune ao antígeno, por exemplo, in vivo, por exemplo, através de imagiologia, ou ex vivo, por exemplo, por meio de ELISA ou citometria de fluxo. Em determinadas modalidades, a capacidade das células modificadas de destruir células alvo pode ser medida usando qualquer método adequado conhecido na técnica, tal como ensaios de citotoxicidade descritos, por exemplo, em Kochenderfer et al., J. Inmunotherapy, 32 (7): 689-702 (2009) e Herman et al., J. Immunological Methods, 285 (1): 25-40 (2004). Em determinadas modalidades, a atividade biológica das células também pode ser medida pelo ensaio de expressão e/ou secreção de determi- nadas citocinas, tais como interleucucina-2 (IL-2), interferon-gama (IFNy), interleucina-4 (IL- 4), TNF-alfa (TNFa), interleucina-6 (IL-6), in- terleucina-10 (IL-10), interleucina-12 (IL-12), fator estimulador de colô- nia de granulócitos-macrófagos (Granulocyte-Macrophage Colony- Stimulating Factor, GM-CSF), CD107a e/ou TGF-beta (TGFB). Ensaios para medir citocinas são bem conhecidos na técnica e incluem, porém sem limitações, ELISA, coloração de citocina intracelular, matriz de grânulos citométrica, RT-PCR, ELISPOT, citometria de fluxo e bioen- saios em que as células responsivas à citocina relevante são testadas quanto à capacidade de resposta (por exemplo, proliferação) na pre- sença de uma amostra de teste. Em alguns aspectos, a atividade bio- lógica é medida ao avaliar o resultado clínico, tal como a redução no fardo ou carga tumoral.
[00384] Em alguns aspectos, uma linhagem de células repórter po- de ser empregada para monitorar a atividade independente de antíge- no e/ou sinalização tônica através de células que expressam CAR anti- GPRC5D. Em algumas modalidades, uma linhagem de células T, tal como uma linhagem de células Jurkat, contém uma molécula repórter, tal como uma proteína fluorescente ou outra molécula detectável, tal como uma proteína fluorescente vermelha, expressa sob o controle dos elementos reguladores de transcrição Nur77 endógenos. Em al- gumas modalidades, a expressão do repórter Nur77 é intrínseca à cé- lula e dependente da sinalização por meio de um repórter recombinan- te que contêm um sinal de ativação primário em uma célula T, um do- mínio de sinalização de um componente de receptor de célula T (TCR) e/ou um domínio de sinalização que compreende um motivo de ativa- ção com base em tirosina imunorreceptora (ITAM), tal como uma ca- deia de CD37. A expressão de Nur77 geralmente não é afetada por outras vias de sinalização, tal como sinalização à citocinas ou sinaliza-
ção ao receptor toll-like (Toll-Like Receptor, TLR), o qual pode atuar de maneira celular extrínseca e pode não depender da sinalização por meio do receptor recombinante. Assim, apenas células que expressam o receptor recombinante exógeno, por exemplo, CAR anti-GPRC5D, que contêm as regiões de sinalização apropriadas, são capazes de expressar Nur77 mediante estimulação (por exemplo, ligação ao antí- geno específico). Em alguns casos, a expressão de Nur77 também pode mostrar uma resposta dependente da dose à quantidade de es- timulação (por exemplo, antígeno).
[00385] Em algumas modalidades, os CARs anti-GPRC5D forneci- dos exibem expressão aprimorada sobre a superfície das células, quando comparado com um CAR alternativo que tem uma sequência de aminoácidos idêntica, mas que é codificada por sítio de não-splicing eliminado e/ou um sequência de nucleotídeos que não tem códons otimizados. Em algumas modalidades, a expressão do receptor re- combinante sobre a superfície celular pode ser avaliada. Abordagens para determinar a expressão do receptor recombinante sobre a super- fície da célula podem incluir o uso de anticorpos específicos para o receptor antigênico quimérico (CAR) (por exemplo, Brentjens et al., Sci. Transl. Med. Março de 2013; 5 (177): 177ra38), Proteína L (Zheng et al., J. Transl. Med. Fevereiro de 2012; 10: 29), marcadores de epí- topo e anticorpos monoclonais que se ligam especificamente a um po- lipeptídeo CAR (consulte Pub. de Pedido de Patente Internacional Nº WOZ2014190273). Em algumas modalidades, a expressão do receptor recombinante sobre a superfície da célula, por exemplo, célula T pri- mária, pode ser avaliada, por exemplo, por meio de citometria de fluxo, usando moléculas de ligação que podem se ligar ao receptor recombi- nante ou uma porção dele que pode ser detectado. Em algumas mo- dalidades, as moléculas de ligação usadas para detectar a expressão do receptor recombinante um anticorpo anti-idiotípico, por exemplo,
um anticorpo agonista anti-idiotípico específico para um domínio de ligação, por exemplo, scFv ou uma porção do mesmo. Em algumas modalidades, a molécula de ligação é ou compreende um antígeno isolado ou purificado, por exemplo, antígeno expresso de forma re- combinante. A. Receptor(es) Antigênico(s) Quimérico(s) que Tem/Têm Como Alvo um Antígeno Duplo
[00386] Também são fornecidos polinucleotídeos que codificam os receptores antigênicos quiméricos e/ou porções, por exemplo, cadeias, dos mesmos. Dentre os polinucleotídeos fornecidos estão aqueles que codificam receptores antigênicos quiméricos que se ligam às proteínas BCMA e GPRC5D (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) descritas no presente documento, tais como um receptor antigênico quimérico que compreende um scFv anti-BCMA e um scFv anti- GPRCS5D (um receptor antigênico quimérico de "haste única"). Os poli- nucleotídeos podem incluir aqueles que abrangem nucleotídeos e ba- ses naturais e/ou não naturais, por exemplo, incluindo aqueles com modificações no esqueleto. Os termos "molécula de ácidos nucleicos", "ácido nucleico" e "polinucleotídeo" podem ser usados indistintamente e referem-se a um polímero de nucleotídeos. Estes polímeros de nu- cleotídeos podem conter nucleotídeos naturais e/ou não naturais e in- cluem, porém sem limitações, DNA, RNA e PNA. "Sequência de áci- dos nucleicos" refere-se à sequência linear de nucleotídeos que com- preende a molécula de ácidos nucleicos ou polinucleotídeos. Em al- guns casos, o polinucleotídeo pode compreender a sequência apre- sentada em SEQ ID NO: 317.
[00387] Em alguns casos, o polinucleotídeo que codifica as molécu- las de ligação à proteína GPRCB5D e ligação à proteína BCMA contém uma sequência sinalizadora que codifica um peptídeo sinalizador, em alguns casos codificada a montante das sequências de ácidos nuclei-
cos que codificam as moléculas de ligação à proteína GPRCB5D e liga- ção à proteína BCMA ou unidos no terminal 5' das sequências de áci- dos nucleicos que codificam os domínios de ligação a antígeno.
Em alguns casos, o polinucleotídeo que contém sequências de ácidos nu- cleicos que codificam o receptor de ligação à proteína GPRC5D e liga- ção à proteína BCMA, por exemplo, receptor antigênico quimérico (CAR), contém uma sequência sinalizadora que codifica um peptídeo sinalizador.
Em alguns aspectos, a sequência sinalizadora pode codifi- car um peptídeo sinalizador derivado de um polipeptídeo nativo.
Em outros aspectos, a sequência sinalizadora pode codificar um peptídeo sinalizador heterólogo ou não nativo.
Em alguns aspectos, o peptídeo sinalizador exemplificativo não limitativo inclui um peptídeo sinalizador da cadeia capa de IgG apresentada em SEQ ID NO: 271 ou codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 272 ou 273-276. Em alguns aspectos, um peptídeo sinalizador exemplificativo não limitativo inclui um peptídeo sinalizador de uma cadeia alfa de GMCSFR apresentada em SEQ ID NO: 278 e codificado pela sequên- cia de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 277. Em alguns as- pectos, um peptídeo sinalizador exemplificativo não limitativo inclui um peptídeo sinalizador de um peptídeo sinalizador de CD8 alfa apresen- tado em SEQ ID NO: 279. Em alguns aspectos, um peptídeo sinaliza- dor exemplificativo não limitativo inclui um peptídeo sinalizador de CD33 apresentado em SEQ ID NO: 280. Em alguns casos, o polinu- cleotídeo que codifica o receptor de ligação à proteína GPRC5D e |li- gação à proteína BCMA pode conter uma sequência de ácidos nuclei- cos que codifica moléculas adicionais, tal como um marcador substitu- to ou outros marcadores, ou pode conter componentes adicionais, tais como promotores, elementos reguladores e/ou elementos multicistrô- nicos.
Em algumas modalidades, a sequência de ácidos nucleicos que codifica o receptor de ligação à proteína GPRC5D e ligação à proteína
BCMA pode ser operativamente ligada a qualquer um dos componen- tes adicionais. Em alguns casos, o scFv anti-GPRC5D e o scFv anti- BCMA são separados por uma sequência de nucleotídeos que codifica um ligante flexível, tal como a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 320. Em alguns casos, a construção que compreende um receptor de ligação à proteína GPRC5D e ligação à proteína BCMA compreende ainda um domínio coestimulador de 4-1BB (SEQ ID NO: 60, a qual codifica SEQ ID NO: 19).
[00388] Em algumas modalidades, células expressam um CAR que se liga às proteínas GPRC5D e BCMA como um agente terapêutico contra células plasmáticas de MM. Em algumas modalidades, as cons- truções polinucleotídicas têm códons divergentes para melhorar a ex- pressão de um ou mais dos scFvs codificados pelo polinucleotídeo.
[00389] Em algumas modalidades, dentre os CARs fornecidos no presente documento estão aqueles codificados por polinucleotídeos que são otimizados ou contêm determinados elementos concebidos para otimização, tal como para o uso de códons, para reduzir a hete- rogeneidade do RNA e/ou para modificar, por exemplo, aumentar ou tornar mais consistente os lotes de produtos celulares, a expressão, tal como expressão sobre a superfície, do receptor codificado, conforme descrito na Seção IB abaixo. Assim, também são fornecidas células que expressam os receptores recombinantes codificados pelos polinu- cleotídeos fornecidos no presente documento e seus usos em terapia celular adotiva, tal como o tratamento de doenças e transtornos asso- ciados à expressão das proteínas GPRC5D e/ou BCMA, por exemplo, mieloma múltiplo.
[00390] Também são fornecidas células, tais como células T, con- cebidas para expressar um polinucleotídeo que codifica um polinucleo- tídeo fornecido, incluindo polinucleotídeos que codificam um primeiro e segundo scFv e composições que contêm tais células. Em algumas modalidades, as construções polinucleotídicas são modificadas con- forme descrito na Seção |B abaixo. B. Polinucleotídeos que Codificam Receptor(es) Recombinante(s)
[00391] “Também são fornecidos polinucleotídeos que codificam os receptores antigênicos quiméricos e/ou porções, por exemplo, cadeias, dos mesmos. Dentre os polinucleotídeos fornecidos estão aqueles que codificam os receptores antigênicos quiméricos anti-GPRC5D (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) descritos no presente do- cumento. Os polinucleotídeos podem incluir aqueles que abrangem nucleotídeos e bases naturais e/ou não naturais, por exemplo, incluin- do aqueles com modificações no esqueleto. Os termos "molécula de ácidos nucleicos", "ácido nucleico" e "polinucleotídeo" podem ser usa- dos indistintamente e referem-se a um polímero de nucleotídeos. Es- tes polímeros de nucleotídeos podem conter nucleotídeos naturais e/ou não naturais e incluem, porém sem limitações, DNA, RNA e PNA. "Sequência de ácidos nucleicos" refere-se à sequência linear de nu- cleotídeos que compreende a molécula de ácidos nucleicos ou polinu- cleotídeo.
[00392] Em alguns casos, o polinucleotídeo que codifica o receptor de ligação à proteína GPRC5D contém uma sequência sinalizadora que codifica um peptídeo sinalizador, em alguns casos codificado a montante das sequências de ácidos nucleicos que codificam o recep- tor de ligação à proteína GPRC5D ou unido no terminal 5' das sequên- cias de ácidos nucleicos que codificam o domínio de ligação a antíge- no. Em alguns casos, o polinucleotídeo que contém sequências de ácidos nucleicos que codificam o receptor de ligação à proteína GPRCS5D, por exemplo, receptor antigênico quimérico (CAR), contém uma sequência sinalizadora que codifica um peptídeo sinalizador. Em alguns aspectos, a sequência sinalizadora pode codificar um peptídeo sinalizador derivado de um polipeptídeo nativo. Em outros aspectos, a sequência sinalizadora pode codificar um peptídeo sinalizador heteró- logo ou não nativo. Em alguns aspectos, o peptídeo sinalizador exem- plificativo não limitativo inclui um peptídeo sinalizador da cadeia capa de IgG apresentada em SEQ ID NO: 271 ou codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 272 ou 273-276. Em al- guns aspectos, um peptídeo sinalizador exemplificativo não limitativo inclui um peptídeo sinalizador de uma cadeia alfa de GMCSFR apre- sentada em SEQ ID NO: 278 e codificado pela sequência de nucleotí- deos apresentada em SEQ ID NO: 277. Em alguns aspectos, um pep- tídeo sinalizador exemplificativo não limitativo inclui um peptídeo sina- lizador de CD8 alfa apresentado em SEQ ID NO: 279. Em alguns as- pectos, um peptídeo sinalizador exemplificativo não limitativo inclui um peptídeo sinalizador de CD33 apresentado em SEQ ID NO: 280. Em alguns casos, o polinucleotídeo que codifica o receptor de ligação à proteína GPRC5D pode conter uma sequência de ácidos nucleicos que codifica moléculas adicionais, tal como um marcador substituto ou outros marcadores, ou pode conter componentes adicionais, tal como promotores, elementos reguladores e/ou elementos multicistrônicos. Em algumas modalidades, a sequência de ácidos nucleicos que codifi- ca o receptor de ligação à proteína GPRC5D pode ser operativamente ligada a qualquer um dos componentes adicionais.
[00393] Também são fornecidos no presente documento constru- ções polinucleotídicas que codificam um primeiro CAR que tem um primeiro domínio de ligação a antígeno e um segundo CAR que tem um segundo domínio de ligação a antígeno, incluindo construções po- linucleotídicas que têm códons divergentes. Em algumas modalidades, o primeiro CAR e o segundo CAR codificados por uma construção po- linucleotídica são capazes de se ligar a diferentes antígenos. Em al- gumas modalidades, uma construção polinucleotídica codifica um pri- meiro CAR capaz de se ligar à proteína GPRC5D, tal como qualquer
CAR descrito no presente documento, e um segundo CAR capaz de se ligar à proteína BCMA. CARs exemplificativos que se ligam à prote- ína BCMA são descritos no presente documento, tal como na Seção |l. Em algumas modalidades, as células expressam um CAR anti- GPRC5D e um CAR anti-BCMA como um agente terapêutico contra células plasmáticas de MM. Em algumas modalidades, as construções polinucleotídicas têm códons divergentes para melhorar a expressão de um ou mais dos CARs codificados pelo polinucleotídeo.
[00394] Em algumas modalidades, dentre os CARs fornecidos no presente documento estão aqueles codificados por polinucleotídeos que são otimizados ou contêm determinados elementos concebidos para otimização, tal como para o uso de códons, para reduzir a hete- rogeneidade do RNA e/ou para modificar, por exemplo, aumentar ou tornar mais consistente os lotes de produtos celulares, expressão, tal como expressão sobre a superfície, do receptor codificado. Em algu- mas modalidades, os polinucleotídeos, os quais codificam proteínas sobre a superfície celular de ligação à proteína GPRC5D, são modifi- cados comparado com um polinucleotídeo de referência, tal como para remover sítios de splicing ocultos ou crípticos, para reduzir a hetero- geneidade do RNA. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos que codificam proteínas sobre a superfície celular de ligação à proteína GPRCS5D e ligação à proteína BCMA têm códons otimizados, tal como para expressão em um mamífero, por exemplo, uma célula humana, tal como em uma célula T humana. Em alguns aspectos, os polinu- cleotídeos modificados resultam em um nível aprimorado, por exem- plo, aumentado ou mais uniforme ou mais consistente, de expressão, por exemplo, expressão sobre a superfície, quando expressos em uma célula. Estes polinucleotídeos podem ser usados em construções para a geração de células modificadas que expressam a proteína na super- fície celular de ligação à proteína GPRC5D e ligação à proteína BCMA codificada. Assim, também são fornecidas células que expressam os receptores recombinantes codificados pelos polinucleotídeos forneci- dos no presente documento e seus usos em terapia celular adotiva, tal como para o tratamento de doenças e transtornos associados à ex- pressão das proteínas GPRC5D e/ou BCMA, por exemplo, mieloma múltiplo.
[00395] Também são fornecidas células, tais como células T, con- cebidas para expressar um polinucleotídeo que codifica um polinucleo- tídeo fornecido, incluindo polinucleotídeos que codificam um primeiro e segundo CAR, e composições que contêm tais células. Em algumas modalidades, as construções polinucleotídicas têm códons otimizados para expressão em uma célula humana. Em algumas modalidades, um ou mais sítios doadores e/ou aceitadores de splicing em uma constru- ção polinucleotídica são modificados para reduzir a heterogeneidade do RNA transcrito a partir da construção, tal como mRNA, após ex- pressão em uma célula.
1. Polinucleotídeos Bicistrônicos
[00396] São fornecidos, em alguns aspectos, polinucleotídeos que codificam um primeiro receptor antigênico quimérico capaz de se ligar, tal como se ligar especificamente, a um primeiro antígeno e um se- gundo receptor antigênico quimérico capaz de se ligar, tal como se |i- gar especificamente, a um segundo antígeno. São fornecidos no pre- sente documento polinucleotídeos que são bicistrônicos para a ex- pressão de vários CARs, tal como um CAR anti-GPRC5D e um CAR anti-BCMA. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo pode conter um ácido nucleico que codifica um CAR anti-GPRC5D fornecido no presente documento e um ácido nucleico que codifica um segundo CAR, tal como um CAR anti-BCMA, separados por um elemento multi- cistrônico para expressão de ambos os CARs na mesma célula. Em alguns aspectos, os receptores antigênicos quiméricos codificados,
tais como aqueles que contêm polipeptídeos de ligação à proteína BCMA ou polipeptídeos de ligação à proteína GPRC5D, e composi- ções e artigos de manufatura e usos dos mesmos também são forne- cidos e podem ser para uso como um agente terapêutico contra célu- las plasmáticas de MM.
[00397] Dentre os polipeptídeos de ligação à proteína BCMA e poli- peptídeos de ligação à proteína GPRC5D estão anticorpos, tais como anticorpos com uma única cadeia (por exemplo, fragmentos de anti- corpos de ligação a antígeno) ou porções dos mesmos. Em alguns exemplos, os receptores antigênicos quiméricos contêm anticorpos anti-BCMA ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. Em al- guns exemplos, os receptores antigênicos quiméricos contêm anticor- pos anti-GPRC5D ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. Os polinucleotídeos fornecidos podem ser incorporados em constru- ções, tais como construções de ácido desoxirribonucleico (DNA) ou RNA, tais como aquelas que podem ser introduzidas em células para expressão dos CARs anti-BCMA e anti-GPRC5D recombinantes codi- ficados.
[00398] Em alguns aspectos, são fornecidos agentes de ligação à proteína BCMA, tais como receptores recombinantes ou receptores antigênicos quiméricos que se ligam a moléculas de BCMA e polinu- cleotídeos que codificam proteínas sobre a superfície celular de liga- ção à proteína BCMA, tais como receptores recombinantes (por exem- plo, CARs) e células que expressam tais receptores. As proteínas so- bre a superfície celular de ligação à proteína BCMA geralmente con- têm anticorpos (por exemplo, fragmentos de anticorpos de ligação a antígeno) e/ou outros peptídeos de ligação que se ligam especifica- mente à proteína BCMA, tais como proteínas BCMA, tal como a prote- ína BCMA humana. Em alguns aspectos, os agentes se ligam a uma porção extracelular da proteína BCMA.
[00399] São fornecidos, em alguns aspectos, agentes de ligação à proteína GPRC5D, tais como receptores recombinantes ou receptores antigênicos quiméricos, que se ligam a moléculas de GPRC5D e poli- nucleotídeos que codificam proteínas sobre a superfície celular de li- gação à proteína BCMA, tais como receptores recombinantes (por exemplo, CARs) e células que expressam tais receptores. As proteí- nas sobre a superfície celular de ligação à proteína GPRC5D geral- mente contêm anticorpos (por exemplo, fragmentos de anticorpo de ligação a antígeno) e/ou outros peptídeos de ligação que se ligam es- pecificamente à proteína GPRCB5D, tais como proteínas GPRC5D, tal como a proteína GPRC5D humana. Em alguns aspectos, os agentes se ligam a uma porção extracelular da proteína GPRC5D.
[00400] Em algumas modalidades, os primeiro e/ou segundo recep- tores antigênicos quiméricos incluem um ou mais de um domínio de ligação a antígeno, um espaçador, um domínio transmembrana e uma região de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, as cons- truções polinucleotídicas têm códons divergentes para melhorar a ex- pressão de um ou mais dos CARs codificados pelo polinucleotídeo. Em algumas modalidades, uma sequência de nucleotídeos que codifi- ca um ou mais componentes ou os primeiro e/ou segundo receptores antigênicos quiméricos tem códons divergentes. Em algumas modali- dades, a divergência de códons melhora a expressão de um ou mais dos receptores antigênicos quiméricos. Em algumas modalidades, a divergência de códons melhora a expressão do receptor antigênico quimérico codificado por uma sequência de nucleotídeos que é 3' em relação a uma sequência de nucleotídeos que codifica o outro receptor antigênico quimérico. Em algumas modalidades, as construções poli- nucleotídicas têm códons otimizados para expressão em uma célula humana. Em algumas modalidades, um ou mais sítios doadores e/ou aceitadores de splicing em uma construção polinucleotídica são modi-
ficados para reduzir a heterogeneidade do RNA transcrito a partir da construção, tal como mMRNA, após expressão em uma célula.
[00401] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente do- cumento construções polinucleotídicas que têm códons divergentes que codificam os dois CARs. Deve ser observado, no presente docu- mento, que a expressão de um CAR codificado por uma sequência de nucleotídeos de uma construção polinucleotídica é reduzida compara- do com o outro CAR codificado por uma sequência de nucleotídeos da construção polinucleotídica. Em algumas modalidades, o CAR codifi- cado por uma sequência de nucleotídeos que é 3' em relação ao outro CAR codificado é identificado como o CAR "trailing". Da mesma forma, o CAR codificado pela sequência de nucleotídeos que é 5' em relação ao outro CAR codificado é identificado como o CAR "trailing". Em al- gumas modalidades, o CAR "leading" corresponde ao CAR que é ex- presso no N-término em relação ao outro CAR, e o CAR "posterior" corresponde ao CAR que é expresso no C-término em relação ao ou- tro CAR.
[00402] Deve ser observado, no presente documento, que a ex- pressão de um CAR codificado por uma sequência de nucleotídeos localizada 3' (o CAR "trailing") em relação ao CAR codificado por outra sequência de nucleotídeos (o CAR "leading") é reduzida.
[00403] Em algumas modalidades, considera-se que a recombina- ção de DNA resulta na perda da sequência de nucleotídeos que codifi- ca o CAR que está localizado 3' em relação à sequência de nucleotí- deos que codifica o outro CAR, perda de expressão do CAR codificado por uma sequência de nucleotídeos que é 3' em relação a uma se- quência de nucleotídeos que codifica o outro CAR ou ambos.
[00404] Em algumas modalidades, as construções polinucleotídicas fornecidas no presente documento têm códons divergentes para evitar tal perda, tal como uma divergência de códons em relação à sequên-
cia de nucleotídeos que codifica um dos CAR, por exemplo, o CAR "leading" ou o CAR "trailing". Em algumas modalidades, a sequência de nucleotídeos que codifica um dos CARs tem divergência de có- dons, de modo que a sequência de nucleotídeos que codifica um pri- meiro CAR compartilha não mais do que 20 pares de bases, 15 pares de bases, 10 pares de bases ou 5 pares de bases, de homologia de sequência com a sequência de nucleotídeos que codifica o segundo CAR. Em algumas modalidades, a sequência de nucleotídeos que co- difica o CAR anti-GPRC5D ou seus componentes, tais como compo- nentes incluindo um scFv de ligação à proteína GPRC5D, um espaça- dor, um domínio transmembrana e uma região de sinalização intrace- lular, tem códons divergentes.
[00405] Estes polinucleotídeos com códons divergentes podem ser usados em construções para a geração de células modificadas que expressam a proteína na superfície celular de ligação à proteína GPRCB5D e a proteína na superfície celular de ligação à proteína BCMA codificadas. Assim, também são fornecidas células que expres- sam os receptores recombinantes codificados pelos polinucleotídeos com códons divergentes fornecidos no presente documento e seus usos em terapia celular adotiva, tal como para o tratamento de doen- ças e transtornos associados à expressão das proteínas GPRC5D e/ou BCMA, por exemplo, mieloma múltiplo. a. Divergência de Códons
[00406] Em qualquer uma das modalidades fornecidas, uma cons- trução polinucleotídica tem divergência de códons para melhorar a ex- pressão de um ou mais dos CARs codificados pelo polinucleotídeo. As observações no presente documento demonstram ainda que a expres- são de vários CARs, por exemplo, um CAR anti-GPRC5D e um CAR anti-BCMA, em uma célula, pode ser aprimorada pela divergência de códons em uma sequência polinucleotídica que codifica um ou mais dos CARs. Descobriu-se no presente documento que a divergência de códons de uma construção polinucleotídica que codifica dois CARs melhora a expressão de uma sequência de nucleotídeos que codifica um CAR que é 3'inicial (ou C-terminal) em relação à sequência de nu- cleotídeos que codifica o outro CAR, por exemplo, a expressão do CAR final é aprimorada pela divergência de códons.
[00407] Em algumas modalidades, são fornecidos no presente do- cumento construções polinucleotídicas com divergência de códons que codificam dois CARS. Deve ser observado no presente documento que a expressão de um CAR codificado por uma sequência de nucleo- tídeos de uma construção polinucleotídica é reduzida comparado com o outro CAR codificado por uma sequência de nucleotídeos da cons- trução polinucleotídica. Em particular, é observado no presente docu- mento que o CAR codificado por uma sequência de nucleotídeos loca- lizada em 3' em relação ao CAR codificado por outra sequência de nu- cleotídeos é reduzido.
[00408] Em algumas modalidades, considera-se que a recombina- ção de DNA resulta em perda de parte ou toda a sequência de nucleo- tídeos que codifica o CAR que está localizado 3' em relação à sequên- cia de nucleotídeos que codifica o outro CAR, perda de expressão de CAR codificado pela sequência de nucleotídeos que é 3' em relação à sequência de nucleotídeos que codifica o outro CAR ou ambos. Con- sidera-se que a recombinação de DNA resulta nesta perda em virtude da homologia de sequência entre as sequências de nucleotídeos que codificam os dois CARs.
[00409] Em algumas modalidades, as construções polinucleotídicas fornecidas no presente documento têm códons divergentes para evitar tal perda, tal como por divergência de códons da sequência de nucleo- tídeos que codifica um dos CARs. Em algumas modalidades, a se- quência de nucleotídeos que codifica um dos CARs tem divergência de códons para reduzir a homologia entre as sequências de nucleotí- deos que codificam os dois CARs. Em algumas modalidades, a redu- ção na homologia entre as sequências de nucleotídeos que codificam os dois CARS reduz a probabilidade de recombinação homóloga e a perda de parte ou toda a sequência de nucleotídeos que codifica o CAR "trailing". Em algumas modalidades, a divergência de códons in- clui a modificação da sequência de nucleotídeos do CAR "leading" pa- ra evitar a perda da sequência que codifica o CAR "trailing", perda de expressão de CAR "trailing" ou ambos. Em algumas modalidades, a divergência de códons inclui a modificação da sequência de nucleotí- deos do CAR "trailing" para evitar a perda da sequência que codifica o CAR "trailing", perda de expressão de CAR "trailing" ou ambos.
[00410] Em algumas modalidades, a sequência de nucleotídeos que codifica um dos CARs tem divergência de códons, de modo que a sequência de nucleotídeos que codifica um primeiro CAR compartilhe não mais do que cerca de 20 pares de bases, cerca de 15 pares de bases, cerca de 10 pares de bases ou cerca de 5 pares de bases, de homologia de sequência com a sequência de nucleotídeos que codifi- ca o segundo CAR. Em algumas modalidades, a sequência de nucleo- tídeos que codifica um dos CARs tem divergência de códons, de modo que as sequências de nucleotídeos que codificam os dois CARs com- partilhem não mais do que cerca de 20, não mais do que cerca de 15, não mais do que cerca de 10 ou não mais do que cerca de 5 bases consecutivas idênticas em qualquer sequência encontrada nas se- quências de nucleotídeos que codificam dos dois CARs.
[00411] Em algumas modalidades, as sequências de nucleotídeos que codificam um ou mais dos seguintes componentes do CAR têm códons divergentes: (a) um domínio de ligação a antígeno; (b) um es- paçador; (c) um domínio transmembrana; (d) uma região de sinaliza- ção intracelular. Em algumas modalidades, as sequências de nucleotí-
deos que codificam um ou mais dos componentes (b) a (d) têm códons divergentes, resultando em um ou mais componentes do primeiro CAR tendo uma sequência de nucleotídeos diferente daquela do mesmo componente do segundo CAR. Em algumas modalidades, a sequência de nucleotídeos que codifica um ou mais dos componentes (b) a (d) no primeiro CAR é diferente da sequência de nucleotídeos que codifica o mesmo componente no segundo CAR, mas a sequência de nucleotí- deos que codifica o componente no o primeiro CAR e a sequência de nucleotídeos que codifica o mesmo componente no segundo CAR co- dificam a mesma sequência de aminoácidos.
[00412] Em algumas modalidades, a sequência de nucleotídeos que codifica um espaçador em um primeiro CAR é dada por SEQ ID NO: 305 e a sequência de nucleotídeos que codifica o mesmo espa- çador em um segundo CAR é dada por SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, o espaçador é fornecido pela sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 17. Em algumas modalidades, a sequên- cia de nucleotídeos que codifica um domínio transmembrana em um primeiro CAR é dada por SEQ ID NO: 307 e a sequência de nucleotí- deos que codifica o mesmo domínio transmembrana em um segundo CAR é dada por SEQ ID NO: 56. Em algumas modalidades, o domínio transmembrana é dado pela sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18. Em algumas modalidades, a sequência de nucleo- tídeos que codifica um endodomínio de 4-1BB da região de sinalização intracelular em um primeiro CAR é dada por SEQ ID NO: 308 e a se- quência de nucleotídeos que codifica o mesmo endodomínio de 4-1BB da região de sinalização intracelular em um segundo CAR é fornecido pela SEQ ID NO: 60. Em algumas modalidades, o endodomínio de 4- 1BB é dado pela sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19. Em algumas modalidades, a sequência de nucleotídeos que codifica um endodomínio de CD3zeta da região de sinalização intrace-
lular em um primeiro CAR é dada por SEQ ID NO: 309 e a sequência de nucleotídeos que codifica o mesmo endodomínio de CD3zeta da região de sinalização intracelular em um segundo CAR é dada por SEQ ID NO: 58. Em algumas modalidades, o endodomínio de CD3zeta é dado pela sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20.
[00413] Em algumas modalidades, o domínio de ligação a antígeno do primeiro CAR se liga a um antígeno diferente do domínio de ligação a antígeno do segundo CAR. Em algumas modalidades, o domínio de ligação a antígeno do primeiro ou segundo CAR tem divergência de códons comparado com sua sequência original. Em algumas modali- dades, a sequência de nucleotídeos com divergência de códons que codifica o domínio de ligação a antígeno do primeiro ou segundo CAR é dada por SEQ ID NO: 311 e a sequência de nucleotídeos original que codifica o mesmo domínio de ligação a antígeno é dada por SEQ ID NO: 264. Em algumas modalidades, o domínio de ligação a antíge- no do primeiro ou segundo CAR é dado por SEQ ID NO: 8. Em algu- mas modalidades, o domínio de ligação a antígeno do outro do primei- ro ou segundo CAR não tem divergência de códons comparado com sua sequência original. Em algumas modalidades, a sequência de nu- cleotídeos que codifica o domínio de ligação a antígeno do outro do primeiro ou segundo CAR é dada por SEQ ID NO: 310. Em algumas modalidades, o domínio de ligação a antígeno do outro do primeiro ou segundo CAR é dado por SEQ ID NO: 241.
[00414] Em algumas modalidades, a sequência de nucleotídeos que codifica o CAR anti-GPRC5D ou seus componentes, tais como componentes incluindo um scFv de ligação à proteína GPRC5D, um espaçador, um domínio transmembrana e uma região de sinalização intracelular, tem divergência de códons. Estes polinucleotídeos com divergência de códons podem ser usados em construções para a ge-
ração de células modificadas que expressam a proteína na superfície celular de ligação às proteínas GPRC5D e BCMA codificadas. Assim, também são fornecidas células que expressam os receptores recom- binantes codificados pelos polinucleotídeos com códons divergentes fornecidos no presente documento e seus usos em terapia celular ado- tiva, tal como para o tratamento de doenças e transtornos associados à expressão das proteínas GPRC5D e/ou BCMA, por exemplo, mielo- ma múltiplo. b. Elementos Multicistrônicos
[00415] Em qualquer uma das modalidades fornecidas, o polinucle- otídeo contém ainda um sítio de entrada ribossômica interno (Internal Ribosome Entry Site, IRES) entre as primeira e segunda sequências de ácidos nucleicos para produzir produtos de tradução das primeira e segunda sequências de ácidos nucleicos após a tradução. Por exem- plo, em algumas modalidades, as unidades de transcrição podem ser concebidas como uma unidade bicistrônica que contêm um IRES (sítio de entrada ribossômica interno) que permite a coexpressão de produ- tos gênicos (por exemplo, que codifica um primeiro e um segundo re- ceptor quimérico) através de uma mensagem a partir de um único promotor. Por exemplo, em algumas modalidades, o vetor ou constru- ção pode conter um ácido nucleico que codifica um receptor anti- GPRCS5D (por exemplo, um CAR anti-GPRC5D) fornecido no presente documento e um ácido nucleico que codifica um receptor anti-BCMA (por exemplo, um CAR anti-BCMA), separados por IRES, sob o contro- le de um único promotor.
[00416] Alternativamente, em qualquer uma das modalidades for- necidas, o polinucleotídeo contém uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um peptídeo de ligação entre as primeira e segunda se- quências de ácidos nucleicos, em que o peptídeo de ligação separa os produtos de tradução das primeira e segunda sequências de ácidos nucleicos durante ou após a tradução. Em alguns aspectos, o peptídeo de ligação contém um peptídeo de autoclivagem ou um peptídeo que causa salto do ribossomo, opcionalmente um peptídeo T2A. Em algu- mas modalidades, um único promotor pode controlar a expressão de um RNA que contém, em um único quadro de leitura aberta (Open Reading Frame, ORF), dois ou três genes (por exemplo, que codifica uma primeira e uma segunda moléculas de ligação, por exemplo, re- ceptor de anticorpo recombinante) separados entre si por sequências que codificam um peptídeo de autoclivagem (por exemplo, sequências de clivagem 2A) ou um sítio de reconhecimento de protease (por exemplo, furina). O ORF codifica, assim, um único polipeptídeo o qual, durante (no caso de T2A) ou após a tradução, é clivado nas proteínas individuais. Em alguns casos, o peptídeo, tal como T2A, pode fazer com que o ribossomo pule (salto ribossômico) a síntese de uma liga- ção peptídica no C-término de um elemento 2A, levando à separação entre o final da sequência 2A e o próximo peptídeo a jusante (consulte, por exemplo, deFelipe. Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) e de- Felipe et al. Traffic 5: 616-626 (2004)). Muitos elementos 2A são co- nhecidos. Exemplos de sequências 2A que podem ser usadas nos mé- todos e polinucleotídeos descritos no presente documento incluem, sem limitação, sequências 2A do vírus da febre aftosa (F2A, por exemplo, SEQ ID NO: 42 ou 43), vírus da rinite A equina (E2A, por exemplo, SEQ ID NO: 40 ou 41), vírus Thosea asigna (T2A, por exem- plo, SEQ ID NO: 35, 36 ou 37) e teschovírus-1 suíno (P2A, por exem- plo, SEQ ID NO: 38 ou 39), conforme descrito na Publicação de Paten- te Norte-Americana Nº 20070116690.
[00417] Em qualquer uma das construções polinucleotídicas forne- cidas, uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro CAR e uma segunda sequência de ácidos nucleicos que codi- fica um segundo CAR são separadas por uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um elemento de salto ribossômico, tal como um T2A. Assim, durante ou após a tradução, o primeiro receptor antigêni- co quimérico e o segundo receptor antigênico quimérico são clivados em proteínas separadas. Em qualquer uma das construções polinucle- otídicas fornecidas, a sequência de nucleotídeos que codifica o T2A pode ter códons divergentes.
2. Características dos Polinucleotídeos a. Otimização de Códons
[00418] Em algumas modalidades, os polinucleotídeos são modifi- cados pela otimização dos códons para expressão em seres humanos. Em alguns aspectos, a otimização de códons pode ser considerada antes e/ou após as etapas para a identificação do sítio de splicing e/ou eliminação do sítio de splicing e/ou em cada uma das etapas iterativas para reduzir a heterogeneidade do RNA. A otimização de códons ge- ralmente envolve o equilíbrio das porcentagens de códons seleciona- dos com a abundância, por exemplo, abundância publicada, de RNAs de transferência humanos, por exemplo, de modo que nenhum seja sobrecarregado ou limitativo. Em alguns casos, este equilíbrio é ne- cessário ou útil porque a maioria dos aminoácidos são codificados por mais de um códon, e o uso de códons geralmente varia de organismo para organismo. As diferenças no uso de códons entre genes ou áci- dos nucleicos transfectados ou transduzidos e células hospedeiras po- dem ter efeitos sobre a expressão da proteína a partir da molécula de ácidos nucleicos. A Tabela 2 abaixo apresenta uma tabela de frequên- cia de uso de códons humanos exemplificativa. Em algumas modali- dades, para gerar sequências de ácidos nucleicos com códons otimi- zados, códons são escolhidos para selecionar aqueles códons que es- tão em equilíbrio com a frequência de uso humano. A redundância de códons para aminoácidos é tal que diferentes códons codificam um aminoácido, conforme representado na Tabela 2. Ao selecionar um códon para substituição, é desejado que a mutação resultante seja uma mutação silenciosa, de modo que a variação de códon feita não afete a sequência de aminoácidos.
Em geral, o último nucleotídeo do códon (por exemplo, na terceira posição) pode permanecer inalterado sem afetar a sequência de aminoácidos.
Tabela 2. Frequência de Uso de Códons Humanos Códon Amino- | freq./ Códon Amino- | freq./ humano | ácido 1000 humano | ácido 1000
Tabela 2. Frequência de Uso de Códons Humanos Códon Amino- | freq./ Códon Amino- | freq./ humano | ácido 1000 humano | ácido 1000
[00419] Por exemplo, os códons TCT, TCC, TCA, TOG, AGT e AGC codificam todos Serina (observe que T no DNA é equivalente a U no RNA). A partir de uma frequência de uso de códons humano, conforme apresentado na Tabela 2 acima, as frequências de uso corresponden- tes para estes códons são 15,2, 17,7, 12,2, 4,4, 12,1 e 19,5, respecti- vamente. Uma vez que TCG corresponde a 4,4 %, se este códon fos- se comumente usado em uma síntese de genes, o tRNA para este có- don seria limitativo. Na otimização de códons, o objetivo é equilibrar o uso de cada códon com a frequência normal de uso nas espécies ani- mais nas quais o transgene se destina a ser expresso. b. Sítios de Splicing
[00420] São fornecidos no presente documento polinucleotídeos em que um ou mais sítios doadores de splicing e/ou aceitadores de spli- cing potenciais foram identificados e a sequência de ácidos nucleicos em ou próximo a um ou mais dos sítios doadores de splicing identifi- cados foi modificada. Em algumas modalidades, a(s) sequência(s) de ácidos nucleicos modificada(s) resultante(s) é/são, então, sintetiza- da(s) e usada(s) para transduzir células para testar a splicing, confor- me indicado pela heterogeneidade de RNA.
[00421] “Também são fornecidos no presente documento polinucleo- tídeos, tais como aqueles que codificam qualquer um dos anticorpos, receptores (tais como receptores antigênicos, tais como receptores antigênicos quiméricos) e/ou proteínas de ligação à proteína GPRC5D específicas e/ou proteína BCMA específicas fornecidas no presente documento, os quais são ou foram modificados para reduzir a hetero- geneidade ou conter uma ou mais sequências de ácidos nucleicos descritas no presente documento (tal como por meio dos métodos de otimização) para resultar em características aprimoradas dos polipep- tídeos, tais como os CARs, comparado com aqueles que contêm se- quências distintas, de referência ou que não foram modificadas. Den- tre estas características incluem melhorias na heterogeneidade do RNA, tal como resultante da presença de um ou mais sítios de spli- cing, tal como um ou mais sítios de splicing crípticos, e/ou expressão aprimorada e/ou expressão sobre a superfície da proteína codificada, tal como aumento de níveis, uniformidade ou consistência de expres- são entre as células ou diferentes composições de células terapêuticas concebidas para expressar os polipeptídeos.
[00422] Os sítios de splicing podem ser identificados em sequên- cias polinucleotídicas pela coleta de RNA das células de expressão, amplificando por meio de reação em cadeia de polimerase de transcri- ptase reversa (RT-PCR) e decompondo através de eletroforese em gel de agarose para determinar a heterogeneidade do RNA comparado com a sequência inicial. Em alguns casos, as sequências aprimoradas podem ser reenviadas ao fornecedor da síntese gênica para posterior otimização de códons e remoção do sítio de splicing, seguido por mais avaliação, modificação, síntese e testagem do sítio de splicing críptico, até que o RNA no gel de agarose exiba heterogeneidade mínima de RNA.
[00423] Também são fornecidos polinucleotídeos que foram modifi-
cados para eliminar sítios de splicing, tal como sítios de splicing crípti- cos. As sequências de ácidos nucleicos genômicas geralmente, na na- tureza, em uma célula de mamífero, sofrem processamento de co- transcrição ou imediatamente após a transcrição, em que um ácido ribonucleico mensageiro precursor nascente (pré-mRNA), transcrito a partir de uma sequência de ácidos desoxirribonucleicos (DNA) genô- mica é, em alguns casos, editada por meio de splicing para remover íntrons, seguido pela ligação dos éxons em células eucariotas. Se- quências de consenso para sítios de splicing são conhecidas, porém, em alguns aspectos, as informações sobre nucleotídeos específicos que definem um sítio de splicing podem ser complexas e podem não ser prontamente aparentes com base nos métodos disponíveis. Os sítios de splicing crípticos são sítios de splicing que não são previstos com base nas sequências de consenso padrão e são ativados de for- ma variável. Portanto, o splicing variável de pré-mRNA em sítios de Splicing crípticos leva à heterogeneidade nos produtos de mMRNA transcritos após a expressão em células eucariotas.
[00424] Os polinucleotídeos gerados para a expressão de transge- nes são, tipicamente, construídos a partir de sequências de ácidos nu- cleicos, tal como DNA complementar (cDNA), ou porções das mes- mas, que não contêm íntrons. Assim, não se espera que ocorra o spli- cing de tais sequências. No entanto, a presença de sítios de splicing crípticos dentro da sequência de cDNA pode levar a reações de spli- cing não intencionais ou indesejadas e heterogeneidade no mMRNA transcrito. Tal heterogeneidade resulta na tradução de produtos protei- cos indesejados, tais como produtos proteicos truncados com sequên- cias de aminoácidos variáveis que exibem expressão e/ou atividade modificada.
[00425] Em algumas modalidades, a eliminação de sítios de spli- cing, tal como sítios de splicing crípticos, pode melhorar ou otimizar a expressão de um produto transgênico, tal como um polipeptídeo tradu- zido a partir do transgene, tal como um polipeptídeo de CAR anti- GPRCB5D.
O splicing em sítios de splicing crípticos de um transgene codificado, tal como uma molécula de CAR anti-GPRC5D codificada, pode levar a uma expressão reduzida da proteína, por exemplo, ex- pressão sobre superfícies celulares e/ou função reduzida, por exem- plo, sinalização intracelular reduzida.
São fornecidos no presente do- cumento polinucleotídeos que codificam proteínas CAR anti-GPRC5D que foram otimizadas para reduzir ou eliminar sítios de splicing crípti- cos.
Também são fornecidos no presente documento polinucleotídeos que codificam proteínas CAR anti-GPRC5D que foram otimizados quanto à expressão de códons e/ou em que uma ou mais sequências, tal como aquela identificada pelos métodos ou observações no presen- te documento relacionadas aos sítios de splicing, estão presentes e/ou na qual um sítio de splicing identificado, tal como qualquer um dos sí- tios de splicing identificados no presente documento, não está presen- te.
Dentre os polinucleotídeos fornecidos estão aqueles que exibem abaixo de um determinado grau de heterogeneidade de RNA ou for- mas de splicing quando expressos sob determinadas condições e/ou introduzidos em um tipo de célula especificado, tal como uma célula T humana, tal como uma célula T humana primária, e células e composi- ções e artigos de manufatura que contêm tais polipeptídeos e/ou que exibem tais propriedades.
Em algumas modalidades, a heterogeneida- de de RNA do RNA transcrito é reduzida em mais ou mais do que cer- ca de 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 % ou mais comparado com um polinucleotídeo que não foi modificado para remover sítios de Splicing crípticos e/ou por meio de otimização de códons.
Em algumas modalidades, os polinucleotídeos fornecidos que codificam um CAR anti-GPRC5D exibem homogeneidade de RNA do RNA transcrito que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % ou mais.
[00426] Em algumas modalidades, a eliminação de sítios de spli- cing, tal como sítios de splicing crípticos, pode melhorar ou otimizar a expressão de um produto transgênico, tal como um polipeptídeo tradu- zido a partir do transgene, tal como um polipeptídeo de CAR anti- BCMA.
O splicing em sítios de splicing crípticos de um transgene codi- ficado, tal como uma molécula de CAR anti-BCMA codificada, pode levar a uma expressão reduzida da proteína, por exemplo, expressão sobre superfícies celulares e/ou função reduzida, por exemplo, sinali- zação intracelular reduzida.
São fornecidos no presente documento polinucleotídeos que codificam proteínas CAR anti-BCMA que foram otimizadas para reduzir ou eliminar sítios de splicing crípticos.
Tam- bém são fornecidos no presente documento polinucleotídeos que codi- ficam proteínas CAR anti-BCMA que foram otimizados quanto à ex- pressão de códons e/ou em que uma ou mais sequências, tal como uma identificada pelos métodos ou observações no presente docu- mento relacionadas aos sítios de splicing, estão presentes e/ou nas quais um sítio de splicing identificado, tal como qualquer um dos sítios de splicing identificados no presente documento, não está presente.
Dentre os polinucleotídeos fornecidos estão aqueles que exibem abai- xo de um determinado grau de heterogeneidade de RNA ou formas de Splicing quando expressos sob determinadas condições e/ou introdu- zidos em um tipo de célula especificado, tal como uma célula T huma- na, tal como uma célula T humana primária, e células e composições e artigos de manufatura que contêm tais polipeptídeos e/ou que exibem tais propriedades.
Em algumas modalidades, a heterogeneidade de RNA do RNA transcrito é reduzida em mais ou mais do que cerca de %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 40 %, 50 % ou mais comparado com um polinucleotídeo que não foi modificado para remover sítios de spli- cing crípticos e/ou por meio de otimização de códon.
Em algumas mo- dalidades, os polinucleotídeos fornecidos que codificam um CAR anti-
BCMA exibem homogeneidade de RNA do RNA transcrito que é pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % ou mais.
[00427] A heterogeneidade do RNA pode ser determinada por meio de qualquer um de uma série de métodos fornecidos ou descritos no presente documento ou conhecidos. Em algumas modalidades, a hete- rogeneidade do RNA de um ácido nucleico transcrito é determinada pela amplificação do ácido nucleico transcrito, tal como por meio de reação em cadeia de polimerase de transcriptase reversa (RT-PCR), seguido pela detecção de uma ou mais diferenças, tais como diferen- ças de tamanho, em um ou produtos mais amplificados. Em algumas modalidades, a heterogeneidade do RNA é determinada com base no número de produtos amplificados de diferentes tamanhos ou na pro- porção de vários produtos amplificados de diferentes tamanhos. Em algumas modalidades, o RNA, tal como o RNA total ou RNA poliadeni- lado citoplasmático, é coletado de células que expressam o transgene a ser otimizado e amplificado pela reação em cadeia da polimerase de transcriptase reversa (RT-PCR) usando um iniciador específico para a região 5' não traduzida (5' UTR), em alguns casos correspondendo a uma porção da sequência do promotor no vetor de expressão, locali- zada a montante do transgene no RNA transcrito, e um iniciador espe- cífico para a região 3' não traduzida (3' UTR), localizada a jusante do transgene expresso na sequência de RNA transcrita ou um iniciador específico para uma sequência dentro do transgene. Em modalidades particulares, pelo menos um iniciador complementar a uma sequência na região 5' não traduzida (UTR) e pelo menos um iniciador comple- mentar a uma sequência na região 3' não traduzida (UTR) são empre- gados para amplificar o transgene. Aqueles versados na técnica po- dem decompor RNA, tal como RNA mensageiro, e analisar a hetero- geneidade do mesmo através de vários métodos. Métodos exemplifi- cativos não limitativos incluem eletroforese em gel de agarose, eletro-
forese capilar com base em chip, centrifugação analítica, fracionamen- to por fluxo de campo e cromatografia, tal como cromatografia de ex- clusão por tamanho ou cromatografia de líquido.
[00428] Em alguns aspectos, a presença de sítios de splicing crípti- cos potenciais (sítios doadores e/ou aceitadores de splicing que estão presentes em um transcrito, tal como um transcrito transgênico) pode resultar na heterogeneidade do RNA do transcrito após expressão em uma célula. Em algumas modalidades, os um ou mais sítios de splicing potenciais que podem estar presentes no transcrito transgênico que não são desejados e/ou que podem ser criados em um transcrito transgênico a partir de várias sequências subjacentes são identificados após otimização de códons de um transcrito e/ou por meio de mutação ou engano ou erro na transcrição. Em alguns aspectos das modalida- des fornecidas, os sítios doadores de splicing e os sítios aceitadores de splicing são identificados de forma independente. Em algumas mo- dalidades, os sítios aceitadores e/ou doadores de splicing é/são sítios doadores ou aceitadores de splicing canônicos, não canônicos e/ou crípticos.
[00429] Em algumas modalidades, um ou mais sítios de splicing potenciais (por exemplo, sítios aceitadores e/ou doadores de splicing ca- nônicos, não canônicos e/ou crípticos ou sítios de ramificação) em um polinucleotídeo, tal como um polinucleotídeo que codifica um transgene, tal como um receptor recombinante, que pode exibir heterogeneidade de RNA são identificados e/ou modificados. Também são fornecidos polipeptídeos com números reduzidos de tais sítios de splicing compa- rado com tais polinucleotídeos de referência.
[00430] Em alguns aspectos, a identificação de um ou mais sítios de splicing em uma sequência de ácidos nucleicos é um processo ite- rativo. Em algumas modalidades, os sítios de splicing podem ser iden- tificados usando uma ferramenta de previsão de otimização de códons e/ou sítio de splicing, tal como ao submeter a sequência inicial ou de referência que codifica o transgene, tal como um receptor de ligação às proteínas GPRC5D ou BCMA, por exemplo, CAR anti-GPRC5D ou anti-BCMA, a um banco de dados, um fornecedor de síntese gênica ou outra fonte capaz de comparar computacional ou algoritmicamente a sequência inicial ou de referência para identificar ou prever sítios de Splicing e/ou para otimização de códons e/ou remoção de sítios de Splicing. Em algumas modalidades, após modificar a sequência para otimização de códons e/ou remoção do sítio de splicing, uma ou mais avaliações adicionais de uma sequência, tal como uma sequência de ácidos nucleicos revisada ou modificada, é realizada para avaliar ainda mais a remoção do sítio de splicing, tais como sítios de splicing crípti- cos, usando uma ou mais outras ferramentas ou ferramentas adicio- nais de previsão de sítios de splicing.
[00431] Em alguns aspectos, a heterogeneidade do RNA pode ser um resultado da atividade do splicingossomo presente em uma célula eucariota. Em alguns aspectos, o splicing é, tipicamente, realizado em uma série de reações catalisadas pelo splicingossomo. Sequências de consenso para sítios de splicing são conhecidas, porém, em alguns aspectos, as informações sobre nucleotídeos específicos que definem um sítio de splicing podem ser complexas e podem não ser pronta- mente aparentes com base nos métodos disponíveis. Os sítios de spl/i- cing crípticos são sítios de splicing que não são previstos com base nas sequências de consenso padrão e são ativados de forma variável. Assim, o splicing variável de pré-mRNA em sítios de splicing críptico leva à heterogeneidade nos produtos de mRNA transcritos após ex- pressão em células eucariotas. Em alguns casos, dentro dos íntrons Ssplicingossômicos, um sítio doador (geralmente na extremidade 5' do íntron), um sítio de ramificação (próximo à extremidade 3' do íntron) e um sítio aceitador (extremidade 3' do íntron) são necessários para um evento de splicing. O sítio doador de splicing pode incluir uma sequên- cia GU na extremidade 5' do íntron, com uma grande região menos altamente conservada. O sítio aceitador de splicing na extremidade 3' do íntron pode terminar com uma sequência AG.
[00432] Em algumas modalidades, os sítios de splicing, incluindo sítios de splicing crípticos potenciais, podem ser identificados pela comparação de sequências com sequências de sítios de splicing co- nhecidas, tais como aquelas em um banco de dados de sequências. Em algumas modalidades, os sítios de splicing podem ser identificados computacionalmente, enviando sequências de nucleotídeos para aná- lise por ferramentas de predição de sítios de splicing, tal como Human Splicing Finder (Desmet et al., Nucl. Acids Res. 37 (9): e67 (2009)), uma ferramenta de previsão de sítios de splicing de rede neural, NNS- plicing (Reese et al., J. Comput. Biol., 4 (4): 311 (1997)), GeneSplicingr (Pertea et al., Nucleic Acids Res. 2001 29 (5): 1185-1190) ou NetUTR (Eden e Brunak, Nucleic Acids Res. 32 (3): 1131 (2004)), as quais identificam sítios de splicing potenciais e a probabilidade de um evento de splicing em tais sítios. Ferramentas adicionais de previsão de spli- cing incluem RegRNA, ESEtfinder e MIT Splice Predictor. Ferramentas de previsão de sítios de splicing, tal como GeneSplicingr, foram treina- das e/ou testadas com sucesso em bancos de dados para diferentes espécies, tal como ser humano, Drosophila melanogaster, Plasmodium falciparum, Arabidopsis thaliana e arroz. Em algumas modalidades, diferentes ferramentas de previsão podem ser adaptadas para diferen- tes extensões em diferentes bancos de dados e/ou para diferentes es- pécies. Em algumas modalidades, uma ou mais ferramentas de previ- são são selecionadas com base em sua utilidade em determinados bancos de dados e/ou para determinadas espécies. Consulte, por exemplo, Saxonov et al., (2000) Nucleic Acids Res., 28, 185-190.
[00433] Em algumas modalidades, uma ou mais ferramentas de previsão de sítios de splicing são usadas para determinar sítios doado- res e/ou aceitadores de splicing potenciais. Em algumas modalidades, ferramentas de previsão de sítios de splicing que podem ser executa- das localmente; que pode ser retreinadas com um conjunto de dados no site do usuário; que podem usar bancos de dados para espécies particulares (tais como humanos), que podem ser compiladas para múltiplas plataformas, que permitem previsões em tempo real para se- leções de sequência e/ou que são um software de código aberto certi- ficado pela OSI de modo que ferramentas ou plug-ins específicos pos- sam ser modificados, podem ser empregadas. Ferramentas exemplifi- cativas que podem ser empregadas incluem NNSplicing, GeneSpli- cingr ou ambas.
[00434] Em alguns aspectos, as ferramentas de previsão de sítios de splicing podem ser usadas para identificar uma lista de sítios doa- dores de splicing e/ou sítios aceitadores de splicing potenciais em uma sequência, tal como uma sequência de polinucleotídeos que contêm sequências transgênicas. Em alguns aspectos, as ferramentas de pre- visão também podem gerar uma ou mais pontuações de previsão para uma ou mais sequências no polinucleotídeo, as quais podem indicar a probabilidade de uma ou mais sequências serem uma sequência de um sítio doador ou aceitador de splicing.
[00435] Em algumas modalidades, a pontuação de previsão para um determinado sítio de splicing é comparada com uma pontuação limite ou pontuação de referência para determinar ou identificar um determinado sítio de splicing que é candidato para eliminação ou re- moção. Por exemplo, em algumas modalidades, o sítio de splicing pre- visto é identificado como um sítio de splicing potencial quando a pon- tuação de previsão é maior ou não menor do que a pontuação limite ou pontuação de referência. Em alguns aspectos, as considerações para eliminar ou remover um determinado sítio de splicing incluem a pontuação de previsão comparado com uma pontuação de referência ou uma pontuação limite; e se um determinado sítio de splicing é dese- jado ou intencional (por exemplo, quando o evento de splicing é mais vantajoso ou é necessário para a regulação da transcrição e/ou tradu- ção). Em alguns aspectos, a probabilidade de que a variante de spli- cing resultante perca a função desejada ou tenha a função comprome- tida também pode ser considerada ao determinar sítios doadores e/ou receptores específicos para eliminação ou remoção. Em alguns aspec- tos, um ou mais sítios doadores de splicing e/ou aceitadores de spli- cing exibem uma pontuação de cerca de ou pelo menos cerca de 0,7, 0,75, 0,8, 0,85, 0,9, 0,95 ou 1,0 (por exemplo, em uma escala com um máximo de 1,0) de um evento de splicing ou probabilidade de um evento de splicing, e o sítio pode ser um candidato para eliminação ou remoção de sítio de splicing. Em alguns aspectos, a pontuação, por exemplo, usada pela GeneSplicingr, em um ou mais sítios doadores e/ou aceitadores de splicing potenciais é com base na diferença entre a pontuação de log-odds retornada para esta sequência através do modelo de Markov verdadeiro e a pontuação é calculada através do modelo falso de Markov. Em modalidades particulares, os sítios doa- dores de splicing e os sítios aceitadores de splicing são avaliados in- dependente ou individualmente. Em algumas modalidades, os sítios doadores de splicing e os sítios aceitadores de splicing são avaliados como um par de doador/aceitador de splicing.
[00436] Em algumas modalidades, um ou mais sítios doadores de Splicing e/ou aceitadores de splicing, tais como os sítios doadores e/ou aceitadores de splicing potenciais que podem estar envolvidos em um evento de splicing críptico que não é desejado ou que resulta em hete- rogeneidade indesejada de RNA, são eliminados. Em algumas modali- dades, a eliminação de um ou mais sítios de splicing compreende a modificação de um ou mais nucleotídeos (por exemplo, por meio de troca ou substituição) que contêm ou próximos aos sítios doadores e/ou aceitadores de splicing que são candidatos para remoção. Em alguns aspectos, um nucleotídeo específico dentro de um códon que está em, contém ou está próximo ao sítio de splicing é modificado (por exemplo, trocado ou substituído). Em alguns aspectos, a modificação (tal como troca ou substituição) retém ou preserva o aminoácido codi- ficado pelo códon particular no sítio, ao mesmo tempo em que remove os sítios doador e/ou aceitadores de splicing potenciais.
[00437] Em algumas modalidades, o códon em ou próximo ao sítio de splicing para modificação compreende um ou mais códons que en- volvem um ou ambos os nucleotídeos no sítio de splicing potencial (em alguns casos, denominado como "códon de sítio de splicing"). Quando é previsto que o splicing potencial ocorra entre dois nucleotídeos em um códon, o códon é o único códon do sítio de splicing para este sítio de splicing. Se for previsto que o splicing potencial ocorre entre dois códons adjacentes, por exemplo, entre o último nucleotídeo do primei- ro códon e o primeiro nucleotídeo do códon seguinte, os dois códons são códons de sítio de splicing. Por exemplo, para sítios de splicing que estão previstos para estarem nos limites de dois códons, os dois códons adjacentes podem ser candidatos à modificação de nucleotí- deos. Em algumas modalidades, um ou mais códons compreendem um códon de sítio de splicing. Em algumas modalidades, um ou mais códons compreendem ambos os códons do sítio de splicing. Em algu- mas modalidades, um sítio doador de splicing potencial é eliminado ao modificar um ou ambos os códons do sítio de splicing. Em algumas modalidades, um sítio doador e/ou aceitador de splicing potencial é eliminado ao modificar um ou ambos os códons do sítio de splicing. Em algumas modalidades, um ou ambos os códons no sítio de splicing não são modificados, por exemplo, quando não há códon sinônimo para o códon do sítio de splicing. Em algumas modalidades, se não houver códons sinônimos disponíveis para o códon do sítio de splicing particular, um ou mais nucleotídeos em um códon próximo podem ser modificados. Em algumas modalidades, um ou mais códons que são modificados incluem um códon de sítio de splicing, em que a modifica- ção compreende trocar um ou ambos os nucleotídeos no sítio de spli- cing por um nucleotídeo diferente ou nucleotídeos diferentes. Em al- gumas modalidades, em algumas modalidades, o sítio doador de spli- cing é eliminado pela modificação de um ou ambos os códons do sítio de splicing, em que a modificação não troca um ou dois dos nucleotí- deos do sítio de splicing por um nucleotídeo diferente, mas um próxi- mo nucleotídeo, por exemplo, uma parte de um códon adjacente ao sítio de splicing é modificada. Em algumas modalidades, os nucleotí- deos próximos ou adjacentes que podem ser modificados incluem a modificação de um nucleotídeo que faz parte de um códon próximo ou adjacente, tal como um códon que está dentro de um, dois, três, qua- tro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez códons a montante ou a jusante do códon do sítio de splicing.
[00438] Em alguns casos, os polinucleotídeos podem ser modifica- dos manualmente, embora preservando a sequência de aminoácidos codificada, para reduzir a probabilidade de um sítio de splicing previs- to. Em algumas modalidades, um ou mais dos sítios de splicing previs- tos com pelo menos 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de probabilidade de um sítio de splicing são modificados manualmente para reduzir a pro- babilidade do evento de splicing. Em algumas modalidades, uma ou mais modificações é/são através de troca ou substituição de 1, 2,3,4, 5, 6 ou 7 nucleotídeos. Em algumas modalidades, a(s) modifica- ção(ões) é/estão na junção do sítio doador de splicing ou está/estão na junção do sítio aceitador de splicing. Em algumas modalidades, pe- lo menos uma das uma ou mais modificações de nucleotídeos está dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 resíduos da junção do sítio de
Splicing do sítio aceitador de splicing e/ou doador de splicing. Em al- gumas modalidades, bibliotecas de sequências de ácidos nucleicos modificadas podem ser geradas com probabilidade reduzida de sítios de splicing crípticos. Em algumas modalidades, os sítios doadores de Splicing e os sítios aceitadores de splicing são avaliados como um par de doador/aceitador de splicing. Em modalidades particulares, os sítios doadores de splicing e os sítios aceitadores de splicing são avaliados independente ou individualmente, e não fazem parte de um par de do- ador/aceitador de splicing. Em algumas modalidades, um ou mais sí- tios de splicing previstos não são eliminados. Em algumas modalida- des, os sítios de splicing, tal como sítios de splicing conhecidos ou previstos, dentro da região do promotor do transcrito não são elimina- dos.
[00439] Em algumas modalidades, um ou mais sítios doadores de Splicing potenciais são eliminados pela modificação de um ou dois có- dons de sítios de splicing ou um ou mais códons próximos ou adjacen- tes (por exemplo, se um códon sinônimo não estiver disponível para o códon de sítio de splicing). Em algumas modalidades, um ou mais sí- tios aceitadores de splicing potenciais são eliminados ao modificar um ou dois códons de sítios de splicing ou um ou mais códons próximos ou adjacentes (por exemplo, se um códon sinônimo não estiver dispo- nível para o códon de sítio de splicing). Em algumas modalidades, o códon próximo ou adjacente que está sujeito à modificação inclui um códon que está dentro de um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou dez códons a montante ou a jusante do códon do sítio de sp/i- cing, tal como um códon que está dentro de um, dois ou três códons do sítio de splicing. Em algumas modalidades, um sítio doador de spli- cing potencial é removido ou eliminado. Em alguns aspectos, um nu- cleotídeo dentro do códon ou próximo ao sítio de ramificação pode ser modificado, por exemplo, trocado ou substituído, para eliminar o spli-
cing críptico e/ou reduzir a heterogeneidade do RNA. Em algumas modalidades, a modificação de um ou mais nucleotídeos pode envol- ver uma troca ou substituição de um dos nucleotídeos que podem es- tar envolvidos no splicing (tal como no sítio doador de splicing, sítio de aceitador de splicing ou sítio de ramificação de splicing), de modo que o aminoácido codificado pelo códon seja preservado e a troca ou subs- tituição do nucleotídeo não altere a sequência polipeptídica que é codi- ficada pelo polinucleotídeo. Em alguns casos, a terceira posição no códon é mais degenerada do que as outras duas posições. Assim, vá- rios códons sinônimos podem codificar um aminoácido particular (con- sulte, por exemplo, Seção |.B.2.a. acima). Em algumas modalidades, a modificação inclui a substituição do códon por um códon sinônimo usado na espécie da célula na qual o polinucleotídeo é introduzido (por exemplo, ser humano). Em algumas modalidades, a espécie é huma- na. Em algumas modalidades, um ou mais códons são substituídos por códons sinônimos correspondentes que são mais frequentemente usados nas espécies ou códons sinônimos que têm uma frequência de uso similar (por exemplo, frequência de uso mais próxima) ao códon correspondente (consulte, por exemplo, Seção IB2.a. acima).
[00440] Em algumas modalidades, a candidatura do transgene para a remoção de sítios de splicing é avaliada após a modificação propos- ta inicial. Em alguns aspectos, a modificação proposta pode ser avali- ada novamente para avaliar a modificação proposta e identificar quaisquer outros sítios de splicing potenciais após a modificação e/ou otimização de códons. Em alguns aspectos, após modificar a sequên- cia para otimização de códons e/ou remoção de sítios de splicing, uma ou mais avaliações adicionais de uma sequência, tal como uma se- quência de ácidos nucleicos revisada ou modificada, é realizada para avaliar ainda mais a remoção do sítio de splicing, tais como sítios de Splicing crípticos, usando a mesma ou uma ou mais de outras ferra-
mentas adicionais de previsão de sítios de splicing. Em alguns aspec- tos, as modificações propostas são consideradas para as etapas sub- sequentes e uma otimização iterativa pode ser usada. Em alguns as- pectos, os métodos de qualquer uma das etapas de identificação e/ou modificação podem ser repetidos, por exemplo, até que a heteroge- neidade do transcrito seja reduzida comparado com a heterogeneida- de do transcrito conforme inicialmente determinado. Em algumas mo- dalidades, uma modificação adicional ou diferente, tal como uma subs- tituição de nucleotídeo diferente no mesmo códon ou uma modificação em uma posição ou códon diferente, pode ser feita após uma avalia- ção e análise iterativas. Em algumas modalidades, o códon sinônimo diferente correspondente pode ser usado, tal como o segundo mais frequentemente usado na espécie particular ou um códon que tem uma frequência de uso similar (por exemplo, a próxima frequência de uso mais próxima) ao códon correspondente (consulte, por exemplo, Seção II.B.2 abaixo).
[00441] Em alguns aspectos, uma modificação proposta pode ser avaliada adicionalmente, por exemplo, para avaliar se a modificação gera um sítio de restrição indesejado ou adicional no polinucleotídeo. Em alguns aspectos, um sítio de restrição adicional pode não ser de- sejado e uma modificação adicional ou diferente (por exemplo, com uma substituição de nucleotídeo diferente no mesmo códon ou uma modificação em uma posição ou códon diferente) pode ser considera- da. Em alguns aspectos, um sítio de restrição específico, tal como um sítio de restrição designado, é evitado. Em alguns aspectos, se a mo- dificação não reduzir substancialmente a pontuação de previsão do sítio de splicing, uma modificação adicional ou alternativa pode ser proposta. Em algumas modalidades, a pontuação de previsão do sítio de splicing pode ser reduzida ou diminuída em pelo menos cerca de 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60
%, 65 %, 70 % ou 75 %, após uma ou mais iterações dos métodos.
[00442] Em algumas modalidades, um sistema de computador pode ser usado para executar uma ou mais etapas, ferramentas, funções, processos ou scripts. Em algumas modalidades, a previsão, avaliação e modificação do sítio de splicing para eliminação ou remoção de um sítio de splicing podem ser realizadas por meio de métodos implemen- tados por computador e/ou métodos que incluem etapas que são eta- pas implementadas por computador. Em algumas modalidades, a comparação das sequências com um banco de dados conhecido, o cálculo de uma pontuação de previsão de sítio de splicing, a determi- nação de modificações de nucleotídeos potenciais, a otimização de códons e/ou qualquer uma das etapas iterativas pode ser implementa- da por um computador ou usando etapas, ferramentas, funções, pro- cessos ou scripts implementados por computador. Em modalidades particulares, é fornecido um sistema de computador que compreende um processador e memória, em que a memória contém instruções operáveis para fazer com que o processador execute qualquer uma ou mais das etapas dos métodos fornecidos no presente documento. Em algumas modalidades, etapas, funções, processos ou scripts são reali- zados computacionalmente, por exemplo, realizados usando um ou mais programas de computador e/ou por meio do uso de algoritmos computacionais
[00443] Etapas, funções, processos ou scripts exemplificativos para identificar e/ou remover possíveis sítios de splicing incluem uma ou mais etapas de: seleção de sequência, gravação de sequências de formato FASTA, carregamento de tabela de códons (por exemplo, a partir de www.kKazusa.or.jp/codon, execução de GeneSplicingr, previ- sões de carregamento, análise de códons, determinação de sobrepo- sições na previsão, identificação do próximo códon sinônimo de uso mais alto, revisão do sítio de restrição, criação de anotações ou avali-
ação de outros códons e etapas específicas que possam avaliar as fitas direta e reversa. Modificações de sítio de splicing anotadas tam- bém podem ser consideradas para permitir a otimização iterativa. Em algumas modalidades, qualquer uma ou mais das etapas, funções, processos ou scripts podem ser repetidos.
[00444] Em algumas modalidades, um polinucleotídeo fornecido que codifica um CAR anti-GPRC5D fornecido no presente documento ou uma construção fornecida no presente documento inclui modifica- ções para remover um ou mais doadores de splicing e/ou sítios aceita- dores que podem contribuir para eventos de splicing e/ou expressão reduzida e/ou maior heterogeneidade de RNA. Em algumas modalida- des, os polinucleotídeos fornecidos são modificados em um ou mais polinucleotídeos na região espaçadora para eliminar ou reduzir even- tos de splicing. Dentre os sítios doadores e/ou aceitadores de splicing potenciais que são modificados ou não incluídos em um CAR forneci- do estão aqueles apresentados em SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 ou 181. Em algumas modalidades, os nucleotídeos modificados de tais sítios para reduzir ou eliminar sítios doadores e/ou aceitadores de splicing potenciais são apresentados em SEQ ID NO: 182, 183, 184, 185, 186, 187 ou 188. Em algumas modalidades, um polinucleotí- deo fornecido que codifica um CAR anti-GPRC5D ou outro CAR con- tém uma ou mais sequências de nucleotídeos apresentadas em SEQ ID NO: 182, 183, 184, 185, 186, 187 ou 188. Em algumas modalida- des, um CAR anti-GPRC5D fornecido inclui a sequência de nucleotí- deos apresentada em SEQ ID NO: 74. Em algumas modalidades, o espaçador é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 283. Em algumas modalidades, o espaçador é codifi- cado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO:
284. Em algumas modalidades, o espaçador é codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305.
c. Outras Características
[00445] “Também são fornecidos vetores que contêm os polinucleo- tídeos e células hospedeiras que contêm os vetores, por exemplo, pa- ra a produção de receptores antigênicos quiméricos. Também são for- necidos métodos para a produção de receptores antigênicos quiméri- cos. O ácido nucleico pode codificar um receptor antigênico quimérico que compreende uma região V. e/ou uma região Vu de um anticorpo (por exemplo, as cadeias leve e/ou pesada do anticorpo). O ácido nu- cleico pode codificar um ou mais receptores antigênicos quiméricos, cada um compreendendo uma região V. e/ou uma região Vx de um anticorpo (por exemplo, as cadeias leve e/ou pesada do anticorpo). Em uma outra modalidade, são fornecidos um ou mais vetores (por exemplo, vetores de expressão) que compreendem tais polinucleotí- deos. Em uma outra modalidade, é fornecida uma célula hospedeira que compreende tais polinucleotídeos. Em tal modalidade, uma célula hospedeira compreende (por exemplo, foi transformada com) um vetor que compreende um ácido nucleico que codifica o receptor antigênico quimérico que compreende a região Vx de um anticorpo. Em outra de tais modalidades, uma célula hospedeira compreende (por exemplo, foi transformada com) (1) um vetor que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor antigênico quimérico que compreende a regi- ão V. do anticorpo e a região Vx do anticorpo ou (2) um primeiro vetor que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor antigêni- co quimérico que compreende um primeiro anticorpo e um segundo vetor que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor an- tigênico quimérico que compreende um segundo anticorpo. Em algu- mas modalidades, uma célula hospedeira compreende (por exemplo, foi transformada com) um ou mais vetores que compreendem um ou mais ácidos nucleicos que codificam um ou mais receptores antigêni- cos quiméricos. Em algumas modalidades, são fornecidas uma ou mais destas células hospedeiras. Em algumas modalidades, é forneci- da uma composição que contêm uma ou mais destas células hospe- deiras. Em algumas modalidades, uma ou mais células hospedeiras podem expressar diferentes receptores antigênicos quiméricos ou o mesmo receptor antigênico quimérico. Em algumas modalidades, cada uma das células hospedeiras pode expressar mais de um receptor an- tigênico quimérico.
[00446] Também são fornecidos métodos para produzir os recepto- res antigênicos quiméricos anti-GPRC5D. Para a produção recombi- nante dos receptores quiméricos, uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um anticorpo de receptor quimérico, por exemplo, confor- me descrito no presente documento, pode ser isolada e inserida em um ou mais vetores para posterior clonagem e/ou expressão em uma célula hospedeira. Estas sequências de ácidos nucleicos podem ser prontamente isoladas e sequenciadas usando procedimentos conven- cionais (por exemplo, usando sondas de oligonucleotídeos que são capazes de se ligar especificamente a genes que codificam as cadeias pesada e leve do anticorpo). Em algumas modalidades, é fornecido um método de preparação do receptor antigênico quimérico anti-GPRC5D, em que o método compreende cultivar uma célula hospedeira que compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica o anti- corpo, conforme fornecido acima, sob condições adequadas para a expressão do receptor.
[00447] Também são fornecidos métodos para produzir os recepto- res antigênicos quiméricos anti-BCMA. Para a produção recombinante dos receptores quiméricos, uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um anticorpo de receptor quimérico, por exemplo, conforme descrito no presente documento, pode ser isolada e inserida em um ou mais vetores para posterior clonagem e/ou expressão em uma célula hospedeira. Estas sequências de ácidos nucleicos podem ser facil-
mente isoladas e sequenciadas usando procedimentos convencionais (por exemplo, usando sondas de oligonucleotídeos que são capazes de se ligar especificamente a genes que codificam as cadeias pesada e leve do anticorpo). Em algumas modalidades, é fornecido um méto- do de preparação do receptor antigênico quimérico anti-BCMA, em que o método compreende cultivar uma célula hospedeira que com- preende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica o anticorpo, conforme fornecido acima, sob condições adequadas para a expres- são do receptor.
[00448] “Também são fornecidos métodos de produção de constru- ções antigênicas quiméricas que compreendem um receptor antigêni- co quimérico anti-GPRC5D e um receptor antigênico quimérico anti- BCMA. Para a produção recombinante dos receptores quiméricos, uma sequência de ácidos nucleicos que codifica ambos os anticorpos do receptor quimérico, por exemplo, conforme descrito no presente documento, pode ser isolada e inserida em um ou mais vetores para posterior clonagem e/ou expressão em uma célula hospedeira. Estas sequências de ácidos nucleicos podem ser facilmente isoladas e se- quenciadas usando procedimentos convencionais (por exemplo, usan- do sondas de oligonucleotídeos que são capazes de se ligar especifi- camente a genes que codificam as cadeias pesada e leve do anticor- po). Em algumas modalidades, é fornecido um método de produção de CARs duplos, em que o método compreende cultivar uma célula hos- pedeira que compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codi- fica os anticorpos, conforme fornecido acima, sob condições adequa- das para a expressão do receptor.
[00449] “Também são fornecidos métodos de produção de recepto- res antigênicos quiméricos que se ligam às proteínas GPRC5D e BCMA. Para a produção recombinante dos receptores quiméricos, uma sequência de ácidos nucleicos que codifica ambos os anticorpos do receptor quimérico, por exemplo, conforme descrito no presente documento, pode ser isolada e inserida em um ou mais vetores para posterior clonagem e/ou expressão em uma célula hospedeira. Estas sequências de ácidos nucleicos podem ser prontamente isoladas e sequenciadas usando procedimentos convencionais (por exemplo, usando sondas de oligonucleotídeos que são capazes de se ligar es- pecificamente a genes que codificam as cadeias pesada e leve do an- ticorpo). Em algumas modalidades, é fornecido um método de produ- ção do receptor antigênico quimérico que se liga às proteínas BOCMA e GPRCB5D, em que o método compreende cultivar uma célula hospedei- ra que compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica o anticorpo, conforme fornecido acima, sob condições adequadas para a expressão do receptor.
[00450] Em algumas modalidades, é fornecido um método de pro- dução de uma composição celular que compreende células que ex- pressam o receptor antigênico quimérico anti-BCMA e células que ex- pressam o receptor antigênico quimérico anti-GPRC5D.
[00451] Além de procariotas, micróbios eucariotas, tais como fun- gos filamentosos ou leveduras, são hospedeiros de clonagem ou ex- pressão adequados para vetores que codificam anticorpos, incluindo fungos e cepas de levedura cujas vias de glicosilação foram modifica- das para imitar ou se aproximar daquelas em células humanas, resul- tando na produção de um anticorpo com um padrão de glicosilação parcial ou totalmente humano. Consulte Gerngross, Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004) e Li et al., Nat. Biotech. 24: 210-215 (2006).
[00452] Células eucariotas exemplificativas que podem ser usadas para expressar polipeptídeos incluem, porém sem limitações, células COS, incluindo células COS 7; células 293, incluindo células 293-6E; células CHO, incluindo CHO-S, DG44, células Lec13 CHO e células FUT8 CHO; células PER.C6G8; e células NSO. Em algumas modalida-
des, as cadeias pesadas e/ou cadeias leves do anticorpo (por exem- plo, região Vn e/ou região V.) podem ser expressas em levedura (con- sulte, por exemplo, Publicação Norte-Americana Nº US 2006/0270045 A1). Em algumas modalidades, uma célula hospedeira eucariota parti- cular é selecionada com base em sua capacidade de fazer as modifi- cações pós-traducionais desejadas nas cadeias pesadas e/ou cadeias leves (por exemplo, região Vrx e/ou região V.). Por exemplo, em algu- mas modalidades, as células CHO produzem polipeptídeos que têm um nível mais alto de sialilação do que o mesmo polipeptídeo produzi- do em células 293. Em exemplos particulares, células imunes, tais como células imunes humanas, são usadas para expressar os polipep- tídeos fornecidos que codificam receptores antigênicos quiméricos. Em alguns exemplos, as células imunes são células T, tais como células imunes CD4* e/ou CD8*. Il. Receptores de Ligação à Proteína BCMA e Polinucleotídeos Codificantes
[00453] São fornecidos, em alguns aspectos, agentes de ligação à proteína BCMA, tais como receptores recombinantes ou receptores antigênicos quiméricos que se ligam a moléculas de BCMA e polinu- cleotídeos que codificam proteínas sobre a superfície celular de liga- ção à proteína BCMA, tais como receptores recombinantes (por exem- plo, CARs) e células que expressam tais receptores. As proteínas so- bre a superfície celular de ligação à proteína BCMA geralmente con- têm anticorpos (por exemplo, fragmentos de anticorpos de ligação a antígeno) e/ou outros peptídeos de ligação que se ligam especifica- mente à proteína BCMA, tais como proteínas BCMA, tal como a prote- ína BCMA humana. Em alguns aspectos, os agentes se ligam a uma porção extracelular da proteína BCMA.
[00454] Dentre os polinucleotídeos fornecidos estão aqueles que codificam receptores recombinantes, tais como receptores antigênicos,
que se ligam especificamente à proteína BCMA. Em alguns aspectos, receptores codificados, tais como aqueles que contêm polipeptídeos de ligação à proteína BCMA e composições e artigos de manufatura e usos dos mesmos, também são fornecidos.
[00455] Dentre os polipeptídeos de ligação à proteína BCMA estão anticorpos, tais como anticorpos com uma única cadeia (por exemplo, fragmentos de anticorpo de ligação a antígeno) ou porções dos mes- mos. Em alguns exemplos, os receptores recombinantes são recepto- res antigênicos quiméricos, tais como aqueles que contêm anticorpos anti-BCMA ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. Os poli- nucleotídeos fornecidos podem ser incorporados em construções, tais como construções de ácido desoxirribonucleico (DNA) ou RNA, tais como aqueles que podem ser introduzidos em células para expressão dos receptores de ligação à proteína BOCMA recombinantes codifica- dos.
[00456] Os polinucleotídeos que codificam polipeptídeos de ligação à proteína BCMA compreendem as características conforme apresen- tado nas seções anteriores similares, incluindo a Seção | (por exem- plo, Seção 1.C.).
[00457] Os receptores de ligação à proteína BCMA fornecidos ge- ralmente contêm uma molécula de ligação extracelular e um domínio de sinalização intracelular. Dentre os receptores fornecidos estão poli- peptídeos que contêm anticorpos, tais como receptores na superfície celular recombinantes, que contêm um anticorpo anti-BCMA. Estes receptores incluem receptores antigênicos quiméricos que contêm tais anticorpos.
[00458] Dentre os receptores recombinantes fornecidos estão re- ceptores antigênicos quiméricos que incluem um fragmento de ligação à proteína BCMA. Os receptores recombinantes incluem receptores antigênicos quiméricos que se ligam especificamente à proteína
BCMA, tais como receptores antigênicos que contêm os anticorpos anti-BCMA, por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno BCMA. Dentre os receptores antigênicos estão receptores antigênicos não- TCR funcionais, tais como os receptores antigênicos quiméricos (CARs). Também são fornecidas células que expressam os receptores recombinantes e seus usos em terapia celular adotiva, tal como para o tratamento de doenças e transtornos associados à expressão de BCMA, por exemplo, mieloma múltiplo.
[00459] “Dentre os receptores quiméricos estão receptores antigêni- cos quiméricos (CARs). Os receptores quiméricos, tais como CARs, geralmente incluem um domínio de ligação a antígeno extracelular que inclui, é ou compreende um anticorpo anti-BCMA. Assim, os recepto- res quiméricos, por exemplo, CARs, normalmente incluem, em suas porções extracelulares, uma ou mais moléculas de ligação à proteína BCMA, tais como um ou mais fragmentos de ligação a antígeno, do- mínio ou porção ou uma ou mais regiões variáveis de anticorpo, e/ou moléculas de anticorpo, tais como aquelas descritas no presente do- cumento.
[00460] Em algumas modalidades, o primeiro CAR inclui uma por- ção de ligação à proteína GPRC5D ou porções da molécula de anti- corpo, tal como uma região variável de cadeia pesada (Vr) e/ou região variável de cadeia leve (V.) do anticorpo, por exemplo, um fragmento de anticorpo scFv. Em algumas modalidades, os CARs de ligação à proteína GPRCB5D fornecidos contêm um anticorpo, tal como um anti- corpo anti-GPRC5D ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo que confere as propriedades de ligação à proteína GPRC5D ao CAR fornecido. Em algumas modalidades, o anticorpo ou domínio de liga- ção a antígeno pode ser qualquer anticorpo anti-GPRC5D descrito ou derivado de qualquer anticorpo anti-GPRC5D descrito (consulte, por exemplo, documentos WO 2016/090312, WO 2016/090329, WO
2018/017786). Qualquer um destes anticorpos anti-GPRC5D ou frag- mentos de ligação a antígeno podem ser usados nos CARs fornecidos. Em algumas modalidades, o CAR anti-GPRC5D contém um domínio de ligação a antígeno que é um scFv que contêm uma região variável pesada (Vr) e/ou variável leve (V.) derivada de um anticorpo descrito nos documentos WO 2016/090312, WO 2016/090329 ou WO 2018/017786.
[00461] Em algumas modalidades, o anticorpo, por exemplo, o anti- corpo anti-GPRC5D ou fragmento de ligação a antígeno, contém a uma sequência de região variável de cadeias pesada e/ou leve (VH ou VL) conforme descrito ou uma porção de ligação a antígeno suficiente da mesma. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-GPRC5D, por exemplo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma sequência de região VH ou porção de ligação a antígeno suficiente da mesma que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 conforme descrito. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-GPRC5D, por exemplo, frag- mento de ligação a antígeno, contém uma sequência de região VL ou porção de ligação a antígeno suficiente da mesma que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 conforme descrito. Em algumas moda- lidades, o anticorpo anti-GPRC5D, por exemplo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma sequência de região VH que contém uma CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 conforme descrito e contém uma se- quência de região VL que contém uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 conforme descrito. Também dentre os anticorpos estão aqueles que têm sequências pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % idênticas a tal sequência.
[00462] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de an- ticorpo, no CAR fornecido, tem uma região VH de qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação de anticorpo descritos em qual- quer um dos documentos WO 2016/090312, WO 2016/090329 e WO 2018/017786.
[00463] Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tem uma região variá- vel de cadeia pesada (VH) que tem a sequência de aminoácidos sele- cionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de ami- noácidos da região VH selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33 ou contém uma CDR-H1, CDR- H2 e/ou CDR-H3 presentes em tal sequência de VH.
[00464] Em algumas modalidades, a região VH de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR- H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 de acordo com a numeração de Kabat. Em algumas modalidades, a região VH de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 de acordo com a numeração de Chothia. Em algumas modalidades, a região VH de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 de acordo com a numeração AbM.
[00465] Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tem uma região variá- vel de cadeia pesada (VH) que compreende uma CDR-H1 que com- preende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 75, 78, 80, 82, 90, 93, 95, 97, 105, 108, 110, 112, 120, 123, 125, 127, 135, 138, 140, 142, 152, 162, 165, 167 e 169; (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 76, 79, 81, 83, 91, 94, 96, 98, 106, 109, 111, 113, 121, 124, 126, 128, 136, 139, 141, 143, 150, 153, 154, 155, 163, 166, 168 e 170; e (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 77, 84, 92, 99, 107, 114, 122, 129, 137, 144, 151, 156, 164 e 171.
[00466] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende uma região VH que compre- ende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NOS: 75, 76 e 77, respectivamente; SEQ ID NOS: 78, 79 e 77, respectivamente; SEQ ID NOS: 80, 81 e 77, respectivamente; SEQ ID NOS: 82, 83 e 84, respectivamente; SEQ ID NOS: 90, 91 e 92, respectivamente; SEQ ID NOS: 93, 94 e 92, respec- tivamente; SEQ ID NOS: 95, 96 e 92, respectivamente; SEQ ID NOS: 97, 98 e 99, respectivamente; SEQ ID NOS: 105, 106 e 107, respeciti- vamente; SEQ ID NOS: 108, 109 e 107, respectivamente; SEQ ID NOS: 110, 111 e 107, respectivamente; SEQ ID NOS: 112, 113 e 114, respectivamente; SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente; SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente; SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente; SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente; SEQ ID NOS: 135, 136 e 137, respectivamente; SEQ ID NOS: 138, 139 e 137, respectivamente; SEQ ID NOS: 140, 141 e 137, respecti- vamente; SEQ ID NOS: 142, 143 e 144, respectivamente; SEQ ID NOS: 135, 150 e 151, respectivamente; SEQ ID NOS: 152, 153 e 151, respectivamente; SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente; SEQ ID NOS: 142, 155 e 156, respectivamente; SEQ ID NOS: 162, 163 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 165, 166 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 167, 168 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 169, 170 e 171, respectivamente.
[00467] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i-
gação a antígeno do mesmo compreende uma região VH que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 75, 76 e 77, res- pectivamente; SEQ ID NOS: 78, 79 e 77, respectivamente; SEQ ID NOS: 80, 81 e 77, respectivamente; SEQ ID NOS: 82, 83 e 84, respec- tivamente; SEQ ID NOS: 90, 91 e 92, respectivamente; SEQ ID NOS: 93, 94 e 92, respectivamente; SEQ ID NOS: 95, 96 e 92, respectiva- mente; SEQ ID NOS: 97, 98 e 99, respectivamente; SEQ ID NOS: 105, 106 e 107, respectivamente; SEQ ID NOS: 108, 109 e 107, respecti- vamente; SEQ ID NOS: 110, 111 e 107, respectivamente; SEQ ID NOS: 112, 113 e 114, respectivamente; SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente; SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente; SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente; SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente; SEQ ID NOS: 135, 136 e 137, respectivamente; SEQ ID NOS: 138, 139 e 137, respectivamente; SEQ ID NOS: 140, 141 e 137, respectivamente; SEQ ID NOS: 142, 143 e 144, respecti- vamente; SEQ ID NOS: 135, 150 e 151, respectivamente; SEQ ID NOS: 152, 153 e 151, respectivamente; SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente; SEQ ID NOS: 142, 155 e 156, respectivamente; SEQ ID NOS: 162, 163 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 165, 166 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 167, 168 e 164, respectivamente; SEQ ID NOS: 169, 170 e 171, respectivamente.
[00468] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende a CDR-H1, CDR-H2 e CDR- H3, respectivamente, que compreende a sequência de aminoácidos de a CDR-H1, a CDR-H2 e a CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VH apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33.
[00469] Em algumas modalidades do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo fornecido no presente documento, a re- gião VH compreende qualquer uma da CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 conforme descrito e compreende uma região estrutural 1 (FR1), a FR2, a FR3 e/ou a FR4 que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência, respectivamente, com a FR1, a FR2, a FR3 e/ou a FR4 conti- das dentro da sequência de aminoácidos da região VH apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33.
[00470] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende uma região VH que compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33.
[00471] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de an- ticorpo, no CAR fornecido (por exemplo, um CAR anti-GPRC5D), que compreende uma região VH compreende ainda uma cadeia leve ou uma porção de ligação a antígeno suficiente da mesma. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno do mesmo contém uma região VH e uma região VL ou uma por- ção de ligação a antígeno suficiente da mesma das regiões VH e VL. Em tais modalidades, a sequência da região VH pode ser qualquer uma das sequências de VH descritas acima. Em algumas de tais mo- dalidades, o anticorpo é um fragmento de ligação a antígeno, tal como a Fab ou um scFv. Em algumas de tais modalidades, o anticorpo é um anticorpo de comprimento completo que também contém uma região constante.
[00472] Em algumas modalidades, o CAR fornecido no presente documento contém um anticorpo, tal como um anticorpo anti-GPRC5D ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, que contém qualquer uma das regiões VH acima e contém uma região variável de cadeia leve ou uma porção de ligação a antígeno suficiente da mesma. Por exemplo, em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que contém uma região VH e uma região variável de cadeia leve (VL) ou uma porção de liga- ção a antígeno suficiente da mesma das regiões VH e VL. Em tais modalidades, a sequência da região VH pode ser qualquer uma das sequências de VH descritas acima. Em algumas de tais modalidades, o anticorpo é um fragmento de ligação a antígeno, tal como a Fab ou um scFv. Em algumas de tais modalidades, o anticorpo é um anticorpo de comprimento completo que também contém uma região constante.
[00473] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno tem uma região VL descrita em qualquer um dos do- cumentos WO 2016/090312, WO 2016/090329 e WO 2018/017786.
[00474] Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tem uma região variá- vel de cadeia leve (VL) que tem a sequência de aminoácidos selecio- nada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequên- cia de aminoácidos da região VL selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69 ou contém uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 presentes em tal sequência de VL. Em algumas modalidades, o CAR contém um anti- corpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tem uma re- gião variável de cadeia leve (VL) que tem a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32 ou 34 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de ami- noácidos da região VL selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32 ou 34 ou contém uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 presentes em tal sequência de VL. Em algumas modali- dades, o CAR contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antíge- no do mesmo que tem uma região variável de cadeia leve (VL) que tem a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos da região VL selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69 ou contém uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 presentes em tal se- quência de VL.
[00475] Em algumas modalidades, a região VL de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 de acordo com a numeração de Kabat. Em al- gumas modalidades, a região VL de um anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 de acordo com a numeração de Chothia. Em algumas moda- lidades, a região VL de um anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno do mesmo compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 de acordo com a numeração AbM.
[00476] Em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tem uma região variá- vel de cadeia leve (VL) que compreende uma CDR-L1 que compreen-
de a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 85, 88, 100, 103, 115, 118, 130, 133, 145, 148, 157, 160, 172 e 174; (b) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos seleci- onada a partir de SEQ ID NOS: 86, 89, 101, 104, 116, 119, 131, 134, 146, 149, 158 e 161; e (c) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 87, 102, 117, 132, 147, 159, 173 e 175.
[00477] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende a VL que compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente; SEQ ID NOS: 88, 89 e 87, respectivamente; SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente; SEQ ID NOS: 103, 104 e 102, respectivamente; SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente; SEQ ID NOS: 118, 119 e 117, respectivamente; SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente; SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectivamente; SEQ ID NOS: 148, 149 e 147, respecti- vamente; SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente; SEQ ID NOS: 160, 161 e 159, respectivamente; SEQ ID NOS: 172, 86 e 173, respectivamente; SEQ ID NOS: 174, 89 e 175, respectivamente; SEQ ID NOS: 174, 89 e 297, respectivamente.
[00478] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo compreende a VL que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamen- te; SEQ ID NOS: 88, 89 e 87, respectivamente; SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente; SEQ ID NOS: 103, 104 e 102, respectivamen- te; SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente; SEQ ID NOS: 118, 119 e 117, respectivamente; SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respecti- vamente; SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente; SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectivamente; SEQ ID NOS: 148, 149 e 147,
respectivamente; SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente; SEQ ID NOS: 160, 161 e 159, respectivamente; SEQ ID NOS: 172, 86 e 173, respectivamente; SEQ ID NOS: 174, 89 e 175, respectivamente; SEQ ID NOS: 174, 89 e 297, respectivamente.
[00479] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3, respectivamente, contidas dentro da sequência de aminoácidos da re- gião VL selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69. Em algumas modalida- des, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo con- tém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3, respectivamente, contidas den- tro da sequência de aminoácidos da região VL selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32 ou 34. Em algu- mas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3, respectivamente, contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VL seleciona- da a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou
69.
[00480] Dentre os CARs fornecidos no presente documento está um CAR no qual o anticorpo, tal como um anticorpo ou fragmento de anticorpo anti-GPRC5D, no CAR fornecido, compreende uma sequên- cia de aminoácidos de região VH que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresenta- da em qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33 ea VL que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em
Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresentada em qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69.
[00481] Em algumas modalidades, a região VH do anticorpo ou fra- gmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2, uma CDR-H3, respectivamente, que compreendem as sequências de aminoácidos de CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VH selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33; e compreende a CDR-L1, a CDR-L2, a CDR-L3, respectivamente, que compreende as sequências de aminoácidos de CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3, respectivamente contidas dentro da sequência de aminoáci- dos da região VL selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69.
[00482] Em algumas modalidades, a região VH do anticorpo ou fra- gmento de ligação a antígeno do mesmo compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33 e a região VL do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno compreende a se- quência de aminoácidos 22, 24, 26, 28, 30, 32 ou 34. Em algumas modalidades, as regiões VH e VL do anticorpo ou fragmento de liga- ção a antígeno do mesmo compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 21 e 22, respectivamente; SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente; SEQ ID NOS: 25 e 26, respectivamente; SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente; SEQ ID NOS: 29 e 30, respectiva- mente; SEQ ID NOS: 31 e 32, respectivamente; ou SEQ ID NOS: 33 e 34, respectivamente, ou qualquer anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tem pelo menos 90 % de identidade de se- quência com qualquer uma das sequências de VH e VL acima, tal co- mo pelo menos 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98
% ou 99 % de identidade de sequência com as mesmas.
[00483] Por exemplo, as regiões VH e VL do anticorpo ou fragmen- to de ligação a antígeno do mesmo contidas no mesmo compreendem as sequências de aminoácidos selecionadas a partir de: SEQ ID NOS: 21 e 22, SEQ ID NOS: 23 e 24; SEQ ID NOS: 25 e 26; SEQ ID NOS: 27 e 28, SEQ ID NOS: 29 e 30; SEQ ID NOS: 31 e 32; SEQ ID NOS: 33 e 34, respectivamente. Em outros exemplos, as regiões VH e VL do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contidas no mesmo compreendem as sequências de aminoácidos selecionadas a partir de: SEQ ID NOS: 21 e 63; SEQ ID NOS: 23 e 64; SEQ ID NOS: e 65; SEQ ID NOS: 27 e 66; SEQ ID NOS: 29 e 67; SEQ ID NOS: 31 e 68; SEQ ID NOS: 33 e 69, respectivamente.
[00484] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de |i- gação a antígeno do mesmo, no CAR fornecido, é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um fragmento variável com uma única cadeia (scFv) ou um diacorpo ou um anticorpo com um úni- co domínio (sdAb). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmen- to de ligação a antígeno é um anticorpo com um único domínio que compreende apenas a região VH region. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um scFv que compre- ende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL). Em algumas modalidades, o fragmento de anti- corpo com uma única cadeia (por exemplo, scFv) inclui um ou mais ligantes que unem dois domínios ou regiões de anticorpos, tal como uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL). O ligante é, tipicamente, um ligante peptídico, por exemplo, um ligante peptídico flexível e/ou solúvel. Dentre os ligantes estão aqueles ricos em glicina e serina e/ou, em alguns casos, treoni- na. Em algumas modalidades, os ligantes incluem ainda resíduos car- regados, tais como lisina e/ou glutamato, os quais podem melhorar a solubilidade. Em algumas modalidades, os ligantes incluem ainda uma ou mais prolinas.
[00485] —“Consequentemente, os CARs fornecidos contêm anticorpos anti-GPRC5D que incluem fragmentos de anticorpo com uma única cadeia, tal como scFvs e diacorpos, particularmente fragmentos de anticorpo com uma única cadeia humanos, tipicamente que compre- ende ligante(s) que unem dois domínios ou regiões de anticorpos, tais como regiões VH e VL. O ligante é, tipicamente, um ligante peptídico, por exemplo, um ligante peptídico flexível e/ou solúvel, tal como um rico em glicina e serina.
[00486] Em alguns aspectos, os ligantes ricos em glicina e serina (e/ou treonina) incluem pelo menos 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % ou 99 % de tal(is) aminoácido(s). Em algumas modalidades, eles incluem pelo menos em ou cerca de 50 %, 55 %, 60 %, 70 % ou 75 %, glicina, serina e/ou treonina. Em al- gumas modalidades, o ligante é compreendido totalmente de forma substancial de glicina, serina e/ou treonina. Os ligantes têm, em geral, entre cerca de 5 e cerca de 50 aminoácidos de comprimento, tipica- mente entre em ou cerca de 10 e em ou cerca de 30, por exemplo, 10, 11,12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 e, em alguns exemplos, entre 10 e 25 aminoácidos de compri- mento. Ligantes exemplificativos incluem ligantes que tem vários nú- meros de repetições da sequência GGGGS (4GS; SEQ ID NO: 50) ou GGGS (3GS; SEQ ID NO: 51), tal como entre 2, 3, 4 e 5 repetições de tal sequência. Ligantes exemplificativos incluem aqueles que têm ou consistem em uma sequência apresentada em SEQ ID NO: 52 (GGGGSGGGGSGGGGS). Ligantes exemplificativos incluem ainda aqueles que têm ou consistem na sequência apresentada em SEQ ID NO: 53 (GSTSGSGKPGSGEGSTKG). Ligantes exemplificativos inclu- em ainda aqueles que têm ou consistem na sequência apresentada em SEQ ID NO: 54 (SRGGGGSGGGGSCGGGGSLEMA). Um ligante exemplificativo inclui aqueles que têm ou consistem na sequência apresentada em SEQ ID NO; 47 (GSRGGGGSCGGGGSCGGGGSLE- MA).
[00487] —“Consequentemente, em algumas modalidades, as modali- dades fornecidas incluem fragmentos de anticorpo com uma única ca- deia, por exemplo, scFvs, que compreende um ou mais dos ligantes supracitados, tais como ligantes ricos em glicina/serina, incluindo |i- gantes que tem repetições de GGGS (SEQ ID NO: 51) ou GGGGS (SEQ ID NO: 50), tal como o ligante apresentado em SEQ ID NO: 47, 52 ou 54.
[00488] Em algumas modalidades, a região VH pode ser amino terminal à região VL region. Em algumas modalidades, a região VH pode ser carbóxi terminal à região VL region. Em modalidades particu- lares, o fragmento, por exemplo, scFv, pode incluir uma região VH ou porção da mesma, seguido pelo ligante, seguido por uma região VL ou porção da mesma. Em outras modalidades, o fragmento, por exemplo, o scFv, pode incluir a região VL ou porção da mesma, seguido pelo ligante, seguido pela região VH ou porção da mesma.
[00489] Em alguns aspectos, um scFv fornecido no presente docu- mento compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 1-14 ou tem uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 1-14.
[00490] Dentre os CARs anti-GPRCB5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi-
ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e contém uma região VL que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 22 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 22. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e contém uma região VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 63 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 63. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 75, 76 e 77, res- pectivamente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ
ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 78, 79 e 77, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente.
Em algumas modali- dades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 80, 81 e 77, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente.
Em algumas modali- dades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 82, 83 e 84, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 88, 89 e 87, respectivamente.
Em algumas modali- dades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 21 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 22. Em algumas modalidades, a região VH compreende a se- quência apresentada em SEQ ID NO: 21 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 63. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de an- ticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modali- dades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 1 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 1. Em algumas modali- dades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apre- sentada em SEQ ID NO: 257 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 257. Em algu- mas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 2 ou uma sequência de aminoácidos pe- lo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 2. Em algu- mas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotí- deos apresentada em SEQ ID NO: 258 ou uma sequência de nucleotí- deos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 258.
[00491] Dentre os CARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e contém uma região VL que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 24 ou uma se-
quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e contém uma região VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 64 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 64. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 90, 91, 92, respec- tivamente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 93, 4 e 92, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente.
Em algumas moda-
lidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 95, 96 e 92, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 97, 98 e 99, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 103, 104 e 102, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 23 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 24. Em algumas modalidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 23 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 64. Em algumas modalida- des, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 3 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 259 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98
% ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 259. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoáci- dos apresentada em SEQ ID NO: 4 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 4. Em al- gumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucle- otídeos apresentada em SEQ ID NO: 260 ou uma sequência de nucle- otídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 260.
[00492] Dentre os CARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 25; e contém uma região VL que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 26 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 26. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em
SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 25; e contém uma região VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 65 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 65. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 105, 106, 107, respectivamente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente.
Em algumas modali- dades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 108, 109 e 107, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 110, 111 e 107, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respecti- vamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de liga-
ção a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 112, 113 e 114, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 118, 119 e 117, respectivamente.
Em algumas modalidades, a região VH com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 25 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 26. Em algu- mas modalidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 25 e a região VL compreende a sequência apresenta- da em SEQ ID NO: 65. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fra- gmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 5 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 5. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 261 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cer- ca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 261. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 6 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99
% de identidade com SEQ ID NO: 6. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 262 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cer- ca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 262.
[00493] DentreosCARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e contém uma região VL que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 28 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 28. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e contém uma região VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 66 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 66. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.
Em algumas modali- dades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respecti- vamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de liga- ção a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente.
Em algumas modalidades, a região VH com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 27 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 28. Em algu- mas modalidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 27 e a região VL compreende a sequência apresenta- da em SEQ ID NO: 66. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fra- gmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 7. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 263 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cer- ca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 263. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 8. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 264 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cer- ca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 264.
[00494] DentreosCARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 29; e contém uma região VL que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 30 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 30. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 29; e contém uma região VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 67 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 135, 136 e 137,
respectivamente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectivamente.
Em algumas modali- dades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 138, 139 e 137, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 141 e 137, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respecti- vamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de liga- ção a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 142, 143 e 144, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 148, 149 e 147, respectivamente.
Em algumas modalidades, a região VH com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 29 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 30. Em algu- mas modalidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 29 e a região VL compreende a sequência apresenta- da em SEQ ID NO: 67. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fra- gmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID
NO: 9 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 9. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 265 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cer- ca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 265. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 10 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 10. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 266 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 266.
[00495] Dentre os (CARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 %
de identidade com SEQ ID NO: 31; e contém uma região VL que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 32 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 32. Em algumas modalidades, o CAR forneci- do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 31; e contém uma região VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 68 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 68. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 135, 150 e 151, respectivamente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente.
Em algumas modali- dades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 152, 153 e 151, respectivamente, e uma região VL que contém uma
CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antí- geno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respecti- vamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de liga- ção a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 142, 155 e 156, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 160, 161 e 159, respectivamente.
Em algumas modalidades, a região VH com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 31 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 32. Em algu- mas modalidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 31 e a região VL compreende a sequência apresenta- da em SEQ ID NO: 68. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fra- gmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 11 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 11. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 267 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cer-
ca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 267. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 12 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 12. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 268 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 268.
[00496] Dentreos CARs anti-GPRC5D fornecidos está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma regi- ão VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 33 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 33; e contém uma região VL que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 34 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 34. Em algumas modalidades, o CAR forneci-
do é um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 33 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 33; e contém uma região VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 69 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 69. Em algumas modalidades, o an- ticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compre- ende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 162, 163 e 164, respectivamente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 172, 86, 173, respectivamente.
Em algumas modalida- des, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 165, 166 e 164, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 172, 86 e 173, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR forne- cido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 167, 168 e 164, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 172, 86 e 173, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 169, 170, 171, respectivamente, e uma região VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 174, 89 e 175, respecti- vamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de liga- ção a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 169, 170, 171, respectivamente, e uma re- gião VL que contém uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 174,89 e 297, respectivamente.
Em algumas modalidades, a região VH com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 33 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 34. Em algu- mas modalidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 33 e a região VL compreende a sequência apresenta- da em SEQ ID NO: 69. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fra- gmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 13 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 13. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 269 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cer- ca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 269. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 14 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 14. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 270 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 270.
[00497] Dentre os anticorpos, por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno, no CAR fornecidos, estão anticorpos humanos. Em algumas modalidades de um anticorpo anti-cGPRC5D humano fornecido, por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno, o anticorpo humano con- tém uma região VH que compreende uma porção que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por um segmento V de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa, uma porção que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codi- ficada por um segmento D de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa e/ou uma porção que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por um segmento J de ca- deia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa; e/ou contém uma região VL que compreende uma porção que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de se- quência com uma sequência de aminoácidos codificada por um seg- mento V de cadeia capa ou lambda humana de nucleotídeos de linha- gem germinativa e/ou uma porção que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma se- quência de aminoácidos codificada por um segmento J de cadeia capa ou lambda humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Em al- gumas modalidades, a porção da região VH corresponde à CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3. Em algumas modalidades, a porção da região VH corresponde à região estrutural 1 (FR1), FR2, FR2 e/ou FR4. Em algumas modalidades, a porção da região VL corresponde à CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3. Em algumas modalidades, a porção da região VL corresponde à FR1, FR2, FR2 e/ou FRA4.
[00498] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, por exem- plo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma CDR-H1 que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-H1 cor- respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-H1 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-H1 correspondente dentro de uma se- quência codificada por um segmento V de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa.
[00499] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, por exem- plo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma CDR-H2 que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-H2 cor-
respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-H2 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-H2 correspondente dentro de uma se- quência codificada por um segmento V de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa.
[00500] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, por exem- plo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma CDR-H3 que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-H3 cor- respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V, segmento D e segmento J de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algu- mas modalidades, contém uma CDR-H3 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferen- ças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-H3 corres- pondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V, segmento D e segmento J de cadeia pesada humana de nucleotídeos de linhagem germinativa.
[00501] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, por exem- plo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma CDR-L1 que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-L1 cor- respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V de cadeia leve humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-L1 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-L1 correspondente dentro de uma se- quência codificada por um segmento V de cadeia leve humana de nu- cleotídeos de linhagem germinativa.
[00502] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, por exem- plo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma CDR-L2 que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-L2 cor- respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V de cadeia leve humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-L2 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-L2 correspondente dentro de uma se- quência codificada por um segmento V de cadeia leve humana de nu- cleotídeos de linhagem germinativa.
[00503] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, por exem- plo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma CDR-L3 que tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-L3 cor- respondente dentro de uma sequência codificada por um segmento V e um segmento J de cadeia leve humana de nucleotídeos de linhagem germinativa. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modali- dades, contém uma CDR-L3 que tem uma sequência que é 100 % idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos quando comparado com a região CDR-L3 corresponden- te dentro de uma sequência codificada por um segmento V e um seg- mento J de cadeia leve humana de nucleotídeos de linhagem germina- tiva.
[00504] Em algumas modalidades, o anticorpo humano, por exem- plo, fragmento de ligação a antígeno, contém uma região estrutural que contém sequências de segmentos gênicos de linhagem germinati- va humana. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo hu- mano contém uma região VH na qual a região estrutural, e.g.FR1, FR2, FR3 e FRA4, tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma região estrutural codifica- da por um segmento de anticorpo de linhagem germinativa, tal como um segmento V e/ou um segmento J. Em algumas modalidades, o an- ticorpo humano contém uma região VL na qual a região estrutural e.g.FR1, FR2, FR3 e FRA, tem pelo menos 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 % de identidade de sequência com uma região estrutural codificada por um segmento de anticorpo de linhagem germinativa, tal como um segmento V e/ou um segmento J. Por exemplo, em algumas de tais modalidades, a sequência de região estrutural contida dentro da sequência de aminoácidos da região VH e/ou região VL difere em não mais do que 10 aminoácidos, tal como não mais do que 9, 8,7,6, 5, 4, 3, 2 ou 1 aminoácido, comparado com a sequência de região es- trutural codificada por um segmento de anticorpo de linhagem germi- nativa.
[00505] Em algumas modalidades, o outro receptor recombinante é um receptor anti-BCMA, tal como um CAR anti-BCMA. O uso ou a in- corporação de qualquer CAR anti-BCMA nas células, métodos e usos fornecidos no presente documento é considerado. Polinucleotídeos que codifica um receptor anti-GPRC5D fornecido no presente docu- mento e outro receptor, por exemplo, em um vetor de expressão multi- cistrônico (por exemplo, bicistrônico), também são considerados da mesma forma. Moléculas de CAR anti-BCMA exemplificativas são descritas nos documentos WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/ 021450, WO 2017/083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO
2018/085690, WO 2018/028647, WO 2019/090003.
[00506] Em algumas modalidades, o CAR é um CAR anti-BCMA que é específico para a proteína BCMA, por exemplo, proteína BCMA humana. Receptores antigênicos quiméricos que contêm anticorpos anti-BCMA, incluindo anticorpos anti-5BCMA humana de camundongo e anticorpos anti-BCMA humana humanos, e células que expressam tais receptores quiméricos foram descritos anteriormente. Consulte Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19(8):2048-2060, documentos WO 2016/ 090320, WO2016090327, WO2010104949A2 e WOZ2017173256. Em algumas modalidades, o CAR anti-BCMA contém um domínio de liga- ção a antígeno, tal como um scFv, que contém uma região variável pesada (VH) e/ou região variável leve (VL) derivadas de um anticorpo descrito nos documentos WO2016/090320 ou WO2016090327.
[00507] Dentre um CAR anti-BCMA fornecido está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 189 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 189; e contém uma região VL que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 190 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 190. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 201, respectiva-
mente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente. Em algumas modalidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 189 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO:
190. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 237 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 237. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 242 ou uma se- quência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cer- ca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 242. Em algumas modalidades, o CAR anti-<BCMA tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ NO: 247 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 247.
[00508] Dentreum CAR anti-BCMA fornecido está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 191 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90
%, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 191; e contém uma região VL que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 192 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 192. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectiva- mente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222, 223, respectivamente. Em algumas modalidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 191 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO:
192. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 238 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 238. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 243 ou uma se- quência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cer- ca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 243. Em algumas modalidades, o CAR anti-<BCMA tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ NO: 248 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 248.
[00509] Dentre um CAR anti-BCMA fornecido está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 193 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 193; e contém uma região VL que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 194 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 194. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 205, respectiva- mente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente. Em algumas modalidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 193 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO:
194. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 239 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 239. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 244 ou uma se- quência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cer- ca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 244. Em algumas modalidades, o CAR anti-<BCMA tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ NO: 249 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 249.
[00510] Dentre um CAR anti-BCMA fornecido está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 195 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 195; e contém uma região VL que com-
preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 196 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 196. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207 e 208, respectiva- mente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 212, 213 e 214, respectivamente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 233, 234 e 229, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 195 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 196. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única ca- deia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreen- de a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 240 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 240. Em algumas modalidades, o scFv é codi- ficado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID
NO: 245 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 245. Em algumas modalidades, o CAR anti-BCMA tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ NO: 250 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 250.
[00511] Dentre um CAR anti-BCMA fornecido está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 197 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 197; e contém uma região VL que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 198 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 198. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectiva- mente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID
NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e uma região VL que tem uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236, 232, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, a região VH compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 197 e a região VL compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 198. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única ca- deia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreen- de a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 241. Em algumas modalidades, o scFv é codi- ficado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 246 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 246. Em algumas modalidades, o CAR anti-BCMA tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ NO: 251 ou 252 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 251 ou 252.
[00512] Em algumas modalidades, o receptor recombinante, tal co- mo um CAR que compreende um anticorpo anti-BCMA (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) fornecido no presente documento, inclui ainda um espaçador, tal como qualquer um descrito na Seção
1.1.b. acima.
[00513] Em algumas modalidades, o receptor recombinante, tal co- mo um CAR que compreende um anticorpo anti-BCMA (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) fornecido no presente documento, inclui ainda um domínio transmembrana, tal como qualquer um des- crito na Seção |.1.c. acima. Ill. Células Manipuladas
[00514] Também são fornecidas células, tais como células modifi- cadas, que contêm um receptor recombinante (por exemplo, um recep- tor antigênico quimérico), tal como um que contém um domínio extra- celular que inclui um receptor anti-GPRC5D, conforme fornecido no presente documento. Também são fornecidas populações de tais célu- las, composições que contêm tais células e/ou enriquecidas por tais células, tais como em que as células que expressam o receptor de |i- gação à proteína GPRC5D perfazem pelo menos 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou mais por cento do total de células na composição ou células de um determinado tipo, tais como células T, células CD8* ou células CD4*.
[00515] Também são fornecidas células, tais como células manipu- ladas que são concebidas para conter um receptor anti-GPRC5D re- combinante (por exemplo, um CAR anti-GPRC5D) e pelo menos um segundo receptor recombinante. Em algumas modalidades, o segundo receptor é um receptor anti-BCMA. Em algumas modalidades, o se- gundo receptor é um CAR. Em algumas modalidades, o receptor anti- GPRCS5D é um CAR e o segundo receptor é um CAR. Em algumas mo- dalidades, as células manipuladas contêm um receptor anti-GPRC5D recombinante (por exemplo, um CAR anti-GPRC5D), conforme forne- cido no presente documento, e um receptor anti-BCMA (por exemplo, um CAR anti-BCMA). O receptor anti-BCMA pode ser qualquer recep- tor anti-BCMA conhecido, tal como um CAR anti-BCMA descrito no presente documento ou em outro lugar (consulte, por exemplo, docu- mentos WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/021450, WO 2017/ 083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO 2018/085690, WO 2018/028647). CARs anti-BCMA exemplificativos são descritos na Se- ção Il. Considera-se que qualquer um dos CARs anti-BCMA descritos pode ser usado como um segundo CAR em qualquer uma das abor- dagens multi-direcionamento fornecidas com um CAR anti-GPRC5D para ter como alvo tanto a proteína GPRC5D como a proteína BCMA.
[00516] Em algumas modalidades, as células manipuladas forneci- das no presente documento podem ser combinadas com uma ou mais populações de células manipuladas que expressam um ou mais de outros receptores recombinantes. Estas populações de células modifi- cadas podem ser formuladas nas mesmas composições ou em com- posições separadas. Dentre as composições estão composições far- macêuticas e formulações para administração, tal como para terapia celular adotiva. Também são fornecidos métodos terapêuticos para administração de qualquer uma das células ou composições forneci- das no presente documento a indivíduos, por exemplo, pacientes.
[00517] Assim, também são fornecidas células geneticamente modi- ficadas que expressam os receptores recombinantes que contêm os anticorpos, por exemplo, células que contêm os CARs. As células são, em geral, células eucariotas, tais como células de mamíferos e, nor- malmente, são células humanas. Em algumas modalidades, as células são derivadas do sangue, medula óssea, linfa ou órgãos linfoides, são células do sistema imunológico, tais como células da imunidade inata ou adaptativa, por exemplo, células mieloides ou linfoides, incluindo linfócitos, tipicamente T células e/ou células NK. Outros exemplos de células incluem células-tronco, tais como células-tronco multipotentes e pluripotentes, incluindo células-tronco pluripotentes induzidas (indu- ced Pluripotent Stem Cells, iPSCs). As células são, tipicamente, célu- las primárias, tais como aquelas isoladas diretamente de um indivíduo e/ou isoladas de um indivíduo e congeladas. Em algumas modalida- des, as células incluem um ou mais subconjuntos de células T ou ou- tros tipos de células, tal como populações de células T inteiras, células CDA4*, células CD8* e subpopulações das mesmas, tais como aquelas definidas por função, estado de ativação, maturidade, potencial para capacidades de diferenciação, expansão, recirculação, localização e/ou persistência, especificidade antigênica, tipo de receptor antigêni- co, presença em um órgão ou compartimento particular, perfil de se- creção de marcador ou citocinas e/ou grau de diferenciação. Com refe- rência ao indivíduo a ser tratado, as células podem ser alogênicas e/ou autólogas. Dentre os métodos incluem-se os métodos prontos para uso (off-the-shelf). Em alguns aspectos, tal como para tecnologias prontas para uso, as células são pluripotentes e/ou multipotentes, tais como células-tronco, tais como células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs). Em algumas modalidades, os métodos incluem isolar células do indivíduo, preparar, processar, cultivar e/ou e manipulá-las, confor- me descrito no presente documento, e reintroduzi-las no mesmo paci- ente, antes ou após criopreservação.
[00518] Dentre os subtipos e subpopulações de células T e/ou de células T CD4* e/ou células T CD8* estão células naíve T (TN), células T efetoras (TEFF), células T de memória e seus subtipos, tais como células T de memória de células-tronco (TSCM), células T de memória central (TCM), células T de memória efetoras (TEM) ou células T de memória efetoras terminalmente diferenciadas, linfócitos infiltrantes de tumor (TIL), células T imaturas, células T maduras, células T auxilia- res, células T citotóxicas, células T invariantes associadas à mucosa (MAIT), células T reguladoras adaptativas e de ocorrência natural (Treg), células T auxiliares, tais como células TH1, células TH2, célu- las TH3, células TH17, células TH9, células TH22, células T auxiliares foliculares, células T alfa/beta e células T delta/gama.
[00519] Em algumas modalidades, as células são células assassi- nas naturais (NK). Em algumas modalidades, as células são monócitos ou granulócitos, por exemplo, células mieloides, macrófagos, neutrófi- los, células dendríticas, mastócitos, eosinófilos e/ou basófilos.
[00520] Em algumas modalidades, as células incluem um ou mais polinucleotídeos introduzidos por meio de engenharia genética e, as- sim, expressam produtos recombinantes ou geneticamente modifica- dos de tais polinucleotídeos. Em algumas modalidades, os polinucleo- tídeos são heterólogos ou seja, normalmente não estão presentes em uma célula ou amostra obtida a partir da célula, tal como uma obtida de outro organismo ou célula a qual, por exemplo, normalmente não é encontrada na célula que está sendo manipulada e/ou um organismo do qual tal célula é derivada. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos não ocorrem naturalmente, tal como um polinucleotídeo não encontrado na natureza, incluindo um que compreende combinações quiméricas de polinucleotídeos que codificam vários domínios de vários tipos de células diferentes. Em algumas modalidades, as células (por exemplo, células modificadas) compreendem um vetor (por exemplo, um vetor viral, vetor de expressão, etc.) conforme descrito no presente documento, tal como um vetor que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor recombinante descrito no presente documento. A. Vetores e Métodos Para Engenharia Genética
[00521] Também são fornecidos métodos, polinucleotídeos, compo-
sições e kits para expressar os receptores recombinantes anti- GPRC5D (por exemplo, CARs) e para produzir as células genetica- mente modificadas que expressam tais receptores. Em algumas moda- lidades, um ou mais receptores recombinantes (por exemplo, CARs) podem ser geneticamente modificados em células ou uma pluralidade de células. A engenharia genética geralmente envolve a introdução de um ácido nucleico que codifica o(s) componente(s) recombinante(s) modificado(s) na célula, tal como por meio de transdução lentiviral, transdução retroviral, transfecção ou transformação.
[00522] Em algumas modalidades, a transferência gênica é realiza- da ao estimular primeiro a célula, por exemplo, combiná-la com um estímulo que induz a uma resposta, tal como proliferação, sobrevida e/ou ativação, por exemplo, conforme medido pela expressão de uma citocina ou marcador de ativação, seguido pela transdução das células ativadas e expansão em cultura para números suficientes para aplica- ções clínicas.
[00523] Em alguns contextos, a superexpressão de um fator estimu- lador (por exemplo, uma linfocina ou uma citocina) pode ser tóxica pa- ra um indivíduo. Assim, em alguns contextos, as células modificadas incluem segmentos gênicos que fazem com que as células sejam sus- cetíveis à seleção negativa in vivo, tal como após administração em imunoterapia adotiva. Por exemplo, em alguns aspectos, as células são concebidas de modo que possam ser eliminadas como um resul- tado de uma variação na condição in vivo do paciente ao qual elas são administradas. O fenótipo selecionável negativo pode resultar da in- serção de um gene que confere sensibilidade a um agente administra- do, por exemplo, um composto. Genes selecionáveis negativos inclu- em o gene da timidina quinase do vírus do Herpes simplex de tipo | (HSV-I TK) (Wigler et al., Cell 2: 223, 1977), o qual confere sensibilidade ao ganciclovir; o gene celular de hipoxantina fosforibosil transferase
(HPRT), o gene celular de adenina fosforibosil transferase (APRT), ci- tosina desaminase bacteriana, (Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992)).
[00524] Em alguns aspectos, as células são adicionalmente conce- bidas para promover a expressão de citocinas ou outros fatores. Vá- rios métodos para a introdução de componentes geneticamente modi- ficados, por exemplo, receptores antigênicos, por exemplo, CARs, são bem conhecidos e podem ser usados com os métodos e composições fornecidos. Métodos exemplificativos incluem aqueles para transferên- cia de polinucleotídeos que codificam os receptores, incluindo via viral, por exemplo, retroviral ou lentiviral, transdução, transposons e eletro- poração.
[00525] Em algumas modalidades, polinucleotídeos recombinantes são transferidos para células usando partículas virais infecciosas re- combinantes tais como, por exemplo, vetores derivados do vírus Símio 40 (SV40), adenovírus, vírus adeno-associado (Adeno-Associated Vi- rus, AAV). Em algumas modalidades, os polinucleotídeos recombinan- tes são transferidos para células T usando vetores lentivirais recombi- nantes, tais como vetores com base em lentivírus de HIV-1 (lentiveto- res; consulte, por exemplo, Amado et al., Science. 30 de julho de 1999; 285 (5428): 674-676) ou vetores retrovirais, tais como vetores retrovirais gama (consulte, por exemplo, Koste et al. (2014) Gene The- rapy, 03 de abril de 2014. Doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28 (10): 1137-46; Alonso-Camino et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. 29 de novembro de 2011 (11): 550557).
[00526] Em algumas modalidades, o vetor retroviral ou vetor lentivi- ral tem uma sequência de repetição terminal (LTR) longa. Em algumas modalidades, o vetor é derivado do vírus da leucemia de Moloney de murinos (Moloney Murine Leukemia Virus, MoMLV), vírus do sarcoma mieloproliferativo (MyeloProliferative Sarcoma Virus, MPSV), vírus da célula-tronco embrionária de murinos (Murine Embryonic Stem Cell Virus, MESV), vírus da célula-tronco de murinos (Murine Stem Cell Vi- rus, MSCV), vírus formador de focos no baço (Spleen Focus Forming Virus, SFFV), vírus da imunodeficiência humana de tipo 1 (Human Immunodeficiency Virus type 1, HIV-1), vírus da imunodeficiência hu- mana de tipo 2 (Human Immunodeficiency Virus type 2, HIV-2/SIV) ou vírus adeno-associado (AAV). Em algumas modalidades, os vetores são de autoinativação (Self-INactivating, SIN). Em algumas modalida- des, os vetores são vetores de replicação condicional (mobilizáveis). À maioria dos vetores lentivirais são derivados de lentivírus humanos, felinos ou símios. A maioria dos vetores retrovirais são derivados de retrovírus de murino. Em algumas modalidades, os lentivírus ou retro- vírus incluem aqueles derivados de qualquer fonte de células de aves ou mamíferos. Os lentivírus ou retrovírus são, tipicamente, anfotrópi- cos, o que significa que são capazes de infectar células hospedeiras de várias espécies, incluindo seres humanos. Em uma modalidade, o gene a ser expresso substitui as sequências retrovirais gag, pol e/ou env. Métodos de transdução lentiviral são conhecidos. Métodos exem- plificativos são descritos, por exemplo, em Wang et al. (2012) J. Im- munother. 35 (9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637- 1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; e Cava- lieri et al. (2003) Blood. 102 (2): 497-505. Uma série de sistemas retro- virais ilustrativos também foram descritos (por exemplo, Amado et al., (1999) Science 285 (5428): 674-676, Patentes Norte-Americanas Nº
5.219.740; 6.207.453; 5.219.740; Miller e Rosman (1989) BioTechni- ques 7: 980-990; Miller (1990) Human Gene Therapy 1: 5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180: 849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 8033-8037; e Boris-Lawrie e Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3: 102-109).
[00527] Em algumas modalidades, polinucleotídeos recombinantes são transferidos para células T via eletroporação (consulte, por exem- plo, Chicaybam et a/. (2013) PLoS ONE 8 (3): e60298 e Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7 (16): 1431-1437). Em algumas modalida- des, os polinucleotídeos recombinantes são transferidos para células T via transposição (consulte, por exemplo, Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21 (4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Ac- ids 2, e74; e Huang et al. (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126). Ou- tros métodos de introdução e expressão de material genético em célu- las imunes incluem transfecção de fosfato de cálcio (por exemplo, con- forme descrito em Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.), fusão de protoplastos, transfecção mediada por lipossoma catiônico; bombardeamento de micropartículas facilitado por partículas de tungstênio (Johnston (1990) Nature 346: 776-777); e coprecipitação com DNA de fosfato de estrôncio (Brash et a/l., (1987) Mol. Cell Biol. 7: 2031-2034). Outras abordagens e vetores para a transferên- cia dos polinucleotídeos que codificam os produtos recombinantes são aqueles descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente Internacional Nº: WO2014055668 e Patente Norte-Americana Nº
7.446.190.
[00528] Dentre os polinucleotídeos adicionais, por exemplo, os ge- nes para introdução são aqueles para melhorar o resultado da terapia, tal como por meio da promoção da viabilidade e/ou função das células transferidas; genes para fornecer um marcador genético para seleção e/ou avaliação das células, tal como para avaliar a sobrevida ou locali- zação in vivo; genes para melhorar a segurança, por exemplo, tornar a célula suscetível à seleção negativa in vivo, conforme descrito por Lup- ton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11: 6 (1991); e Riddell et al., Human Gene Therapy 3: 319-338 (1992); consulte também as publicações PCT/US91/08442 e PCT/US94/05601 para Lupton et a/. que descre-
vem o uso de genes de fusão selecionáveis bifuncionais derivados da fusão de um marcador selecionável positivo dominante com um mar- cador selecionável negativo. Consulte, por exemplo, Riddell et al., Pa- tente Norte-Americana Nº 6.040.177, nas colunas 14-17.
[00529] Em algumas modalidades, um ou mais receptores recombi- nantes (por exemplo, CARs) podem ser geneticamente modificados para serem expressos em células ou pluralidade de células. Em algu- mas modalidades, um primeiro receptor recombinante e uma segunda molécula de ligação, por exemplo, receptor recombinante, são codifi- cados pelas mesmas ou por moléculas de ácidos nucleicos separadas. Em algumas modalidades, moléculas de ligação adicionais são conce- bidas para serem expressas em células ou uma pluralidade de células. Em algumas modalidades, a segunda molécula de ligação é um receptor anti-BCMA, tal como um CAR anti-BCMA descrito no presente documen- to ou nos documentos WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/ 021450, WO 2017/083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO 2018/085690, WO 2018/028647.
[00530] Em algumas modalidades, o vetor ou construção pode con- ter um promotor e/ou intensificador ou elementos reguladores para re- gular a expressão do receptor recombinante codificado. Em alguns exemplos, o promotor e/ou intensificador ou elementos reguladores podem ser promotores, intensificadores e/ou elementos reguladores dependentes da condição. Em alguns exemplos, estes elementos con- trolam a expressão do transgene. Em alguns exemplos, o transgene do CAR pode ser operativamente ligado a um promotor, tal como um promotor EF1alfa com um intensificador de HTLV1 (SEQ ID NO: 61). Em alguns exemplos, o transgene do CAR está operativamente ligado a um Elemento Regulador Pós-transcricional do Vírus da Hepatite da
Marmota (WHP) (WPRE; SEQ ID NO: 62), localizado a jusante do transgene.
[00531] Em algumas modalidades, o vetor ou construção pode con- ter um único promotor que controla a expressão de uma ou mais mo- léculas de ácidos nucleicos. Em algumas modalidades, tais moléculas de ácidos nucleicos, por exemplo, transcritos, podem ser multicistrôni- cas (bicistrônicas ou tricistrônicas; consulte, por exemplo, Patente Nor- te-Americana Nº 6.060.273). Por exemplo, em algumas modalidades, as unidades de transcrição podem ser concebidas como uma unidade bicistrônica que contêm um IRES (sítio de entrada ribossômica inter- no), o qual permite a coexpressão de produtos gênicos (por exemplo, que codifica um primeiro e um segundo receptor quimérico) a partir de uma mensagem de um único promotor. Por exemplo, em algumas mo- dalidades, o vetor ou construção pode conter um ácido nucleico que codifica um receptor anti-GPRC5D (por exemplo, um CAR anti- GPRCS5D) fornecido no presente documento e um ácido nucleico que codifica um receptor anti-BCMA (por exemplo, um CAR anti-BCMA), separados por IRES, sob o controle de um único promotor.
[00532] —Alternativamente, em alguns casos, um único promotor po- de controlar a expressão de um RNA que contém, em um único qua- dro de leitura aberta (ORF), dois ou três genes (por exemplo, que codi- ficam uma primeira e uma segunda moléculas de ligação, por exem- plo, receptor de anticorpo recombinante) separados entre si por se- quências que codificam um peptídeo de autoclivagem (por exemplo, sequências de clivagem 2A) ou um sítio de reconhecimento de pro- tease (por exemplo, furina). O ORF codifica, assim, um único polipep- tídeo o qual, durante (no caso de T2A) ou após tradução, é clivado nas proteínas individuais. Em alguns casos, o peptídeo, tal como T2A, po- de fazer com que o ribossomo pule (salto ribossômico) a síntese de uma ligação peptídica no C-término de um elemento 2A, levando à se-
paração entre o final da sequência 2A e o próximo peptídeo a jusante (consulte, por exemplo, deFelipe. Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) e deFelipe et al. Traffic 5: 616-626 (2004)). Muitos elementos 2A são conhecidos. Exemplos de sequências 2A que podem ser usa- das nos métodos e polinucleotídeos descritos no presente documento incluem, sem limitação, sequências 2A do vírus da febre aftosa (F2A, por exemplo, SEQ ID NO: 42 ou 43), vírus da rinite A equina (E2A, por exemplo, SEQ ID NO: 40 ou 41), vírus Thosea asigna (T2A, por exem- plo, SEQ ID NO: 35, 36 ou 37) e teschovírus-1 suíno (P2A, por exem- plo, SEQ ID NO: 38 ou 39), conforme descrito na Publicação de Paten- te Norte-Americana Nº 20070116690. Em algumas modalidades, um ou mais promotores diferentes ou separados controlam a expressão de uma ou mais moléculas de ácidos nucleicos que codificam uma ou mais moléculas de ligação, por exemplo, receptores recombinantes.
[00533] “Qualquer um dos receptores recombinantes fornecidos no presente documento, por exemplo, receptores anti-GPRC5D recombi- nantes e/ou os receptores recombinantes adicionais, podem ser codifi- cados por polinucleotídeos que contêm uma ou mais moléculas de ácidos nucleicos que codificam os receptores, em quaisquer combina- ções ou configurações. Por exemplo, um, dois, três ou mais polinu- cleotídeos podem codificar um, dois, três ou mais receptores ou domí- nios diferentes. Em algumas modalidades, um vetor ou construção contém moléculas de ácidos nucleicos que codificam um ou mais re- ceptores recombinantes, e um vetor ou construção separada contém moléculas de ácidos nucleicos que codificam uma molécula de ligação adicional, por exemplo, anticorpo e/ou receptor recombinante, tal como um receptor anti-BCMA (por exemplo, CAR anti-BCMA). Cada uma das moléculas de ácidos nucleicos também pode codificar um ou mais marcadores substitutos, tal como proteína fluorescente (por exemplo, proteína fluorescente verde (Green Fluorescent Protein, GFP)) ou um marcador na superfície celular (por exemplo, um marcador truncado na superfície, tal como EGFR truncado (tEGFR), o qual pode ser usado para confirmar a transdução ou manipulação da célula para expressar o receptor. Por exemplo, em alguns aspectos, genes marcadores ex- trínsecos são usados em relação a terapias celulares concebidas para permitir a detecção ou seleção de células e, em alguns casos, também para promover o suicídio celular por ADCC. Genes marcadores exem- plificativos incluem receptor de fator de crescimento epidérmico trun- cado (EGFRt), o qual pode ser coexpresso com um transgene de inte- resse (por exemplo, um CAR ou TCR) em células transduzidas (con- sulte, por exemplo, Patente Norte-Americana Nº 8.802.374). O EGFRt contém um epítopo reconhecido pelo anticorpo cetuximabe (Erbitux&). Por esta razão, o Erbitux& pode ser usado para identificar ou selecio- nar células que foram concebidas com a construção de EGFRTt, inclu- indo em células também concebidas com o outro receptor recombinan- te, tal como um receptor antigênico quimérico (CAR).
[00534] Em algumas modalidades, o marcador é uma molécula, por exemplo, proteína na superfície celular, não encontrada naturalmente nas células T ou não encontrada naturalmente sobre a superfície das células T ou uma porção das mesmas.
[00535] Em algumas modalidades, a molécula é uma molécula não própria (non-self), por exemplo, proteína não própria, ou seja, uma que não é reconhecida como "própria" pelo sistema imune do hospedeiro para o qual as células serão transferidas de forma adotiva.
[00536] Em algumas modalidades, o marcador não tem função te- rapêutica e/ou não produz nenhum efeito além de ser usado como um marcador para engenharia genética, por exemplo, para selecionar cé- lulas manipuladas com sucesso. Em outras modalidades, o marcador pode ser uma molécula terapêutica ou molécula que exerce algum efeito desejado, tal como um ligante para uma célula a ser encontrada in vivo, tal como uma molécula do ponto de verificação imune ou coes- timuladora para aumentar e/ou amortecer as respostas das células após a transferência adotiva e encontro com o ligante.
[00537] “Também são fornecidas composições que contêm uma ou mais das moléculas de ácidos nucleicos, vetores ou construções, tais como qualquer um descrito acima. Em algumas modalidades, as mo- léculas de ácidos nucleicos, vetores, construções ou composições po- dem ser usados para manipular células, tais como células T, para ex- pressar qualquer uma das moléculas de ligação, por exemplo, anticor- po ou receptor recombinante e/ou as moléculas de ligação adicionais. B. Preparação de Células Para Manipulação
[00538] Em algumas modalidades, a preparação das células mani- puladas inclui uma ou mais etapas de cultura e/ou preparação. As cé- lulas para introdução do receptor recombinante (por exemplo, CAR) podem ser isoladas de uma amostra, tal como uma amostra biológica, por exemplo, uma obtida ou derivada de um indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo do qual a célula é isolada é aquele que tem a doença ou condição ou precisa de uma terapia celular ou ao qual a terapia celular será administrada. O indivíduo, em algumas modalida- des, é um ser humano que precisa de uma intervenção terapêutica particular, tal como terapia celular adotiva para a qual as células estão sendo isoladas, processadas e/ou concebidas.
[00539] “Consequentemente, as células em algumas modalidades são células primárias, por exemplo, células humanas primárias. As amostras incluem tecido, fluido e outras amostras retiradas diretamen- te do indivíduo, bem como amostras resultantes de uma ou mais eta- pas de processamento, tal como separação, centrifugação, engenharia genética (por exemplo, transdução com vetor viral), lavagem e/ou in- cubação. A amostra biológica pode ser uma amostra obtida diretamen- te de uma fonte biológica ou uma amostra que é processada. As amostras biológicas incluem, porém sem limitações, fluidos corporais, tais como sangue, plasma, soro, líquido cefalorraquidiano, líquido si- novial, urina e suor, amostras de tecido e órgãos, incluindo amostras processadas derivadas dos mesmos.
[00540] Em alguns aspectos, a amostra da qual as células são deri- vadas ou isoladas é sangue ou uma amostra derivada de sangue ou é ou é derivada de um produto de aferese ou leucaferese. Amostras exemplificativas incluem sangue total, células mononucleares de san- gue periférico (Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs), leucóci- tos, medula óssea, timo, biópsia de tecido, tumor, leucemia, linfoma, nódulo linfático, tecido linfoide associado ao intestino, tecido linfoide associado à mucosa, baço, outros tecidos linfoides, fígado, pulmão, estômago, intestino, cólon, rim, pâncreas, mama, osso, próstata, colo do útero, testículos, ovários, amígdalas ou outro órgão e/ou células derivadas dos mesmos. As amostras incluem, no contexto da terapia celular, por exemplo, terapia celular adotiva, amostras de fontes autó- logas e alogênicas.
[00541] Em algumas modalidades, as células são derivadas de |i- nhagens de células, por exemplo, linhagens de células T. As células, em algumas modalidades, são obtidas de uma fonte xenogênica, por exemplo, de camundongo, rato, primata não humano ou porco.
[00542] Em algumas modalidades, o isolamento das células inclui uma ou mais etapas de separação de células com base em prepara- ção e/ou não afinidade. Em alguns exemplos, as células são lavadas, centrifugadas e/ou incubadas na presença de um ou mais reagentes, por exemplo, para remover componentes indesejados, enriquecer para componentes desejados, lisar ou remover células sensíveis a reagen- tes específicos. Em alguns exemplos, as células são separadas com base em uma ou mais propriedades, tal como densidade, propriedades aderentes, tamanho, sensibilidade e/ou resistência a componentes es-
pecíficos.
[00543] Em alguns exemplos, as células do sangue circulante de um indivíduo são obtidas, por exemplo, por meio de aferese ou leuca- ferese. As amostras, em alguns aspectos, contêm linfócitos, incluindo células T, monócitos, granulócitos, células B, outros glóbulos brancos nucleados, glóbulos vermelhos e/ou plaquetas e, em alguns aspectos, contêm células diferentes de glóbulos vermelhos e plaquetas.
[00544] Em algumas modalidades, as células sanguíneas coletadas do indivíduo são lavadas, por exemplo, para remover a fração plasmá- tica, e colocar as células em um tampão ou meio apropriado para as etapas de processamento subsequentes. Em algumas modalidades, as células são lavadas com solução salina tamponada com fosfato (Phosphate Buffered Saline, PBS). Em algumas modalidades, a solu- ção de lavagem carece de cálcio e/ou magnésio e/ou muitos ou todos os cátions divalentes. Em alguns aspectos, uma etapa de lavagem é realizada em uma centrífuga de "fluxo direto" semiautomática (por exemplo, o processador de células Cobe 2991, Baxter) de acordo com as instruções do fabricante. Em alguns aspectos, uma etapa de lava- gem é realizada por meio de filtração de fluxo tangencial (Tangential Flow Filtration, TFF) de acordo com as instruções do fabricante. Em algumas modalidades, as células são ressuspensas em uma varieda- de de tampões biocompatíveis após a lavagem tais como, por exem- plo, PBS isento de Ca**/Mg**. Em determinadas modalidades, os componentes de uma amostra de células sanguíneas são removidos e as células diretamente ressuspensas no meio de cultura.
[00545] Em algumas modalidades, os métodos incluem métodos de separação de células com base na densidade, tal como a preparação de glóbulos brancos a partir do sangue periférico por meio de lise dos glóbulos vermelhos e centrifugação através de um gradiente de Percoll ou Ficoll.
[00546] Em algumas modalidades, os métodos de isolamento inclu- em a separação de diferentes tipos de células com base na expressão ou presença na célula de uma ou mais moléculas específicas, tais co- mo marcadores na superfície, por exemplo, proteínas na superfície, marcadores intracelulares ou ácido nucleico. Em algumas modalida- des, qualquer método conhecido para separação com base em tais marcadores pode ser usado. Em algumas modalidades, a separação é uma separação com base em afinidade ou imunoafinidade. Por exem- plo, o isolamento, em alguns aspectos, inclui a separação de células e populações de células com base na expressão das células ou nível de expressão de um ou mais marcadores, normalmente marcadores na superfície celular, por exemplo, por meio de incubação com um anti- corpo ou parceiro de ligação que se liga especificamente a tais marca- dores, seguido geralmente por etapas de lavagem e separação de cé- lulas que se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação daquelas célu- las que não se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação.
[00547] Estas etapas de separação podem ser com base em sele- ção positiva, na qual as células que se ligaram aos reagentes são reti- das para uso posterior, e/ou seleção negativa, na qual as células que não se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação são retidas. Em al- guns exemplos, ambas as frações são retidas para uso posterior. Em alguns aspectos, a seleção negativa pode ser particularmente útil onde não está disponível nenhum anticorpo que identifique especificamente um tipo de célula em uma população heterogênea, de modo que a se- paração seja melhor realizada com base em marcadores expressos por células diferentes da população desejada.
[00548] A separação não precisa resultar em 100 % de enriqueci- mento ou remoção de uma determinada população de células ou célu- las que expressam um determinado marcador. Por exemplo, seleção positiva ou enriquecimento por células de um tipo particular, tais como aquelas que expressam um marcador, refere-se ao aumento do núme- ro ou porcentagem de tais células, mas não precisa resultar em uma ausência completa de células que não expressam o marcador. Da mesma forma, a seleção negativa, remoção ou esgotamento de célu- las de um tipo particular, tais como aquelas que expressam um mar- cador, refere-se à diminuição do número ou porcentagem de tais célu- las, mas não precisa resultar na remoção completa de todas estas cé- lulas.
[00549] Em alguns exemplos, vários ciclos de etapas de separação são realizados, onde a fração positiva ou negativamente selecionada de uma etapa é submetida à outra etapa de separação, tal como uma seleção positiva ou negativa subsequente. Em alguns exemplos, uma única etapa de separação pode esgotar células que expressam vários marcadores simultaneamente, tal como por meio da incubação de cé- lulas com uma pluralidade de anticorpos ou parceiros de ligação, cada um específico para um marcador direcionado para seleção negativa. Da mesma forma, vários tipos de células podem ser positivamente se- lecionados de modo simultâneo ao incubar as células com uma plura- lidade de anticorpos ou parceiros de ligação expressos nos vários ti- pos de células.
[00550] — Por exemplo, em alguns aspectos, subpopulações especifi- cas de células T, tais como células positivas ou que expressam altos níveis de um ou mais marcadores na superfície, por exemplo, células T CD28*, CD62L*, COCR7*, CD27*, CD127*, CD4*, CD8*, CD45RA* e/ou CD45RO”, são isoladas por meio de técnicas de seleção positiva ou negativa.
[00551] — Por exemplo, células T CD3*, CD28* podem ser positivamen- te selecionadas usando esferas magnéticas conjugadas de CD3/CD28 (por exemplo, DYNABEADSG& M-450 CD3/CD28 T Cell Expander, MACSiBeadsY, etc.).
[00552] Em algumas modalidades, o isolamento é realizado por meio de enriquecimento por uma determinada população de células através de seleção positiva e/ou depleção de uma determinada popu- lação de células através de seleção negativa. Em algumas modalida- des, a seleção positiva ou negativa é realizada ao incubar as células com um ou mais anticorpos ou outros agentes de ligação que se ligam especificamente a um ou mais marcadores expressos na superfície ou expressos (marcador*) em um nível relativamente mais alto (marcador high) nas células positiva ou negativamente selecionadas, respectiva- mente.
[00553] Em algumas modalidades, as células T são separadas de uma amostra de PBMCs por meio de seleção negativa de marcadores expressos em células não T, tais como células B, monócitos ou outros glóbulos brancos, tal como CD14. Em alguns aspectos, uma etapa de seleção de CD4* ou CD8* é usada para separar células T auxiliares CD4* e CD8'* citotóxicas. Estas populações CD4* e CD8* podem ser ainda classificadas em subpopulações por meio de seleção positiva ou negativa quanto a marcadores expressos ou expressos em um grau relativamente mais alto em uma ou mais subpopulações de células T não expostas (naíve), de memória e/ou efetoras.
[00554] Em algumas modalidades, as células CD8* são ainda enri- quecidas ou esgotadas de células-tronco não expostas, de memória central, de memória efetoras e/ou de memória centrais, tal como atra- vés de seleção positiva ou negativa com base em antígenos na super- fície associados à respectiva subpopulação. Em algumas modalida- des, o enriquecimento por células T de memória centrais (Central Me- mory T, TOM) é realizado para aumentar determinadas características, tal como melhorar a sobrevida de longo prazo, expansão e/ou enxertia após a administração o que, em alguns aspectos, é particularmente robusto em tais subpopulações (consulte Terakura et a/. (2012) Blood.
1: 72-82; Wang et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 689-701). Em al- gumas modalidades, a combinação de células T CD8* enriquecidas com TCM e células T CD4* aumenta ainda mais a resposta.
[00555] Em modalidades, as células T de memória estão presentes em ambos os subconjuntos CD62L* e CD62L' de linfócitos de sangue periférico CD8*. PBMCs podem ser enriquecidas ou esgotadas de fra- ções CD62L'CD8* e/ou CD62L*CD8*, tal como o uso de anticorpos anti-CD8 e anti-CD62L.
[00556] Em algumas modalidades, o enriquecimento por células T de memória centrais (TCM) se baseia na expressão positiva ou eleva- da de sobre a superfície de CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 e/ou CD127; em alguns aspectos, se baseia na seleção negativa por célu- las que expressam ou expressam CD45RA e/ou granzima B. Em al- guns aspectos, o isolamento de uma população CD8* enriquecida por células TOM é realizado por meio de depleção de células que expres- sam CD4, CD14, CD45RA, e seleção positiva ou enriquecimento por células que expressam CD62L. Em um aspecto, o enriquecimento por células T de memória centrais (TCM) é realizado começando com uma fração de células negativamente selecionadas com base na expressão de CDA, a qual é submetida a uma seleção negativa com base na ex- pressão de CD14 e CD45RA, e uma seleção positiva com base em CD62L. Estas seleções, em alguns aspectos, são realizadas simulta- neamente e, em outros aspectos, são realizadas sequencialmente, em qualquer ordem. Em alguns aspectos, a mesma etapa de seleção com base na expressão de CD4 usada na preparação da população ou subpopulação de células CD8* também é usada para gerar a popula- ção ou subpopulação de células CD4*, de modo que ambas as frações positivas e negativas da separação com base em CD4 sejam retidas e usadas em etapas subsequentes dos métodos, opcionalmente após uma ou mais etapas de seleção positiva ou negativa adicionais.
[00557] Em um exemplo particular, uma amostra de PBMCs ou ou- tra amostra de glóbulos brancos é submetida à seleção de células CD4*, onde ambas as frações negativas e positivas são retidas. A fra- ção negativa é, então, submetida à seleção negativa com base na ex- pressão de CD14 e CDA45RA, e seleção positiva com base em um marcador característico de células T de memória centrais, tal como CD62L ou CCR7, onde as seleções positiva e negativa são realizadas em qualquer ordem.
[00558] As células T auxiliares CD4* são classificadas em células não expostas, de memória central e efetoras por meio da identificação de populações de células que possuem antígenos na superfície celu- lar. Linfócitos CD4* podem ser obtidos por meio de métodos padrão. Em algumas modalidades, os linfócitos T CD4* não expostos são células T CD45RO, CD45RA*, CD62L*, CD4*. Em algumas modalidades, as células CD4* de memória central são CD62L* e CD45RO*. Em algu- mas modalidades, as células efetoras CD4* são CD62L' e CD45RO-.
[00559] Em um exemplo, para enriquecimento por células CD4* através de seleção negativa, um coquetel de anticorpos monoclonais inclui, tipicamente, anticorpos para CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA- DR e CD8. Em algumas modalidades, o anticorpo ou parceiro de liga- ção é ligado a um suporte sólido ou matriz, tal como uma esfera mag- nética ou esfera paramagnética, para permitir a separação de células para seleção positiva e/ou negativa. Por exemplo, em algumas moda- lidades, as células e as populações de células são separadas ou iso- ladas usando técnicas de separação imunomagnética (ou afinidade magnética) (revisadas em Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Me- tastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In vitro e In vivo, pá- ginas 17-25 Editado por: S.A. Brooks e U. Schumacherº Humana Press Inc., Totowa, NJ).
[00560] Em alguns aspectos, a amostra ou composição de células a ser separada é incubada com material pequeno, magnetizável ou magneticamente responsivo, tais como partículas magneticamente responsivas ou micropartículas, tais como esferas paramagnéticas (por exemplo, tais como esferas Dynabeads& ou MACSQO). O material magneticamente responsivo, por exemplo, partícula é, em geral, direta ou indiretamente ligado a um parceiro de ligação, por exemplo, um an- ticorpo, que se liga especificamente a uma molécula, por exemplo, marcador na superfície, presente na célula, células ou população de células que se deseja separar, por exemplo, que se deseja selecionar negativa ou positivamente.
[00561] Em algumas modalidades, a partícula ou esfera magnética compreende um material magneticamente responsivo ligado a um elemento de ligação específico, tal como um anticorpo ou outro parcei- ro de ligação. Há muitos materiais magneticamente responsivos bem conhecidos usados em métodos de separação magnética. Partículas magnéticas adequadas incluem aquelas descritas em Molday, Patente Norte-Americana Nº 4.452.773, e no Relatório Descritivo da Patente Europeia EP 452342 B, as quais são incorporadas ao presente docu- mento a título de referência. Partículas de tamanho coloidal, tais como aquelas descritas em Owen, Patente Norte-Americana Nº 4.795.698, e Liberti et a/., Patente Norte-Americana Nº 5.200.084, são outros exemplos.
[00562] A incubação é, em geral, realizada sob condições pelas quais os anticorpos ou parceiros de ligação ou moléculas, tais como anticorpos secundários ou outros reagentes, que se ligam especifica- mente a tais anticorpos ou parceiros de ligação, os quais estão ligados à partícula ou esfera magnética, se liguem especificamente às molécu- las na superfície celular, se presentes nas células da amostra.
[00563] Em alguns aspectos, a amostra é colocada em um campo magnético e as células com partículas magneticamente responsivas ou magnetizáveis ligadas à mesma serão atraídas para o ímã e sepa- radas das células não marcadas. Para a seleção positiva, as células que são atraídas pelo ímã são retidas; para a seleção negativa, as cé- lulas que não são atraídas (células não marcadas) são retidas. Em al- guns aspectos, uma combinação de seleção positiva e negativa é rea- lizada durante a mesma etapa de seleção, onde as frações positivas e negativas são retidas e posteriormente processadas ou submetidas a outras etapas de separação.
[00564] Em determinadas modalidades, as partículas magnetica- mente responsivas são revestidas com anticorpos primários ou outros parceiros de ligação, anticorpos secundários, lectinas, enzimas ou es- treptavidina. Em determinadas modalidades, as partículas magnéticas são ligadas às células por meio de um revestimento de anticorpos pri- mários específicos para um ou mais marcadores. Em determinadas modalidades, as células, em vez dos esferas, são marcadas com um anticorpo primário ou parceiro de ligação e, em seguida, partículas magnéticas revestidas de anticorpo secundário específico para o tipo de célula ou outro parceiro de ligação (por exemplo, estreptavidina) são adicionadas. Em determinadas modalidades, partículas magnéti- cas revestidas com estreptavidina são usadas em conjunto com anti- corpos primários ou secundários biotinilados.
[00565] Em algumas modalidades, as partículas magneticamente responsivas são deixadas ligadas às células que serão subsequente- mente incubadas, cultivadas e/ou manipuladas; em alguns aspectos, as partículas são deixadas ligadas às células para administração a um paciente. Em algumas modalidades, as partículas magnetizáveis ou magneticamente responsivas são removidas das células. Métodos pa- ra remover partículas magnetizáveis de células são conhecidos e in- cluem, por exemplo, o uso de anticorpos não marcados concorrentes, partículas magnetizáveis ou anticorpos conjugados a ligantes cliváveis,
etc. Em algumas modalidades, as partículas magnetizáveis são biode- gradáveis.
[00566] Em algumas modalidades, a seleção com base em afinida- de é via classificação de células magneticamente ativadas (MACSQO) (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). Os sistemas Magnetic Activated Cell Sorting (MACSQG) são capazes de seleção de alta pureza de células com partículas magnetizadas ligadas às mesmas. Em determinadas modalidades, o MACSQO opera através de um modo pelo qual as espé- cies não alvo e alvo são sequencialmente eluídas após aplicação do campo magnético externo. Ou seja, as células ligadas às partículas magnetizadas são mantidas no lugar, enquanto que as espécies não ligadas são eluídas. Então, após conclusão desta primeira etapa de eluição, as espécies que ficaram ligadas no campo magnético e foram impedidas de serem eluídas são liberadas de alguma maneira para que possam ser eluídas e recuperadas. Em determinadas modalida- des, as células não-alvo são marcadas e esgotadas da população he- terogênea de células.
[00567] Em determinadas modalidades, o isolamento ou separação é realizada usando um sistema, dispositivo ou aparelho que realiza uma ou mais das etapas de isolamento, preparação de células, sepa- ração, processamento, incubação, cultura e/ou formulação dos méto- dos. Em alguns aspectos, o sistema é usado para realizar cada uma destas etapas em um ambiente fechado ou estéril, por exemplo, para minimizar o erro, manuseio do usuário e/ou contaminação. Em um exemplo, o sistema é um sistema conforme descrito na Publicação de Pedido de Patente Internacional Número WOZ2009/072003 ou US 20110003380 A1.
[00568] Em algumas modalidades, o sistema ou aparelho realiza uma ou mais, por exemplo, todas as etapas de isolamento, processa- mento, engenharia e formulação em um sistema integrado ou inde-
pendente e/ou de forma automatizada ou programável. Em alguns as- pectos, o sistema ou aparelho inclui um computador e/ou programa de computador em comunicação com o sistema ou aparelho, o que permi- te que um usuário programe, controle, avalie o resultado e/ou ajuste vários aspectos do processamento, isolamento, engenharia e etapas de formulação.
[00569] Em alguns aspectos, a separação e/ou outras etapas são realizadas usando o sistema CIiniMACSQO (Miltenyi Biotec), por exem- plo, para separação automatizada de células em um nível de escala clínica em um sistema fechado e estéril. Os componentes podem in- cluir um microcomputador integrado, unidade de separação magnética, bomba peristáltica e várias válvulas de aperto. O computador integra- do, em alguns aspectos, controla todos os componentes do instrumen- to e comanda o sistema para executar procedimentos repetidos em uma sequência padronizada. A unidade de separação magnética, em alguns aspectos, inclui um ímã permanente móvel e um suporte para a coluna de seleção. A bomba peristáltica controla a vazão em todo o conjunto de tubos e, juntamente com as válvulas de aperto, assegura o fluxo controlado de tampão através do sistema e a suspensão contí- nua das células.
[00570] O sistema CIliniMACSG,, em alguns aspectos, usa partícu- las magnetizáveis acopladas a anticorpos que são fornecidas em uma solução estéril não pirogênica. Em algumas modalidades, após marca- ção das células com partículas magnéticas, as células são lavadas pa- ra remover o excesso de partículas. Um saco de preparação de célu- las é, então, conectado ao conjunto de tubos o qual, por sua vez, é conectado a um saco que contêm tampão e um saco de coleta de cé- lulas. O conjunto de tubos consiste em tubos estéreis pré-montados, incluindo uma pré-coluna e uma coluna de separação, e são para uso único. Após o início do programa de separação, o sistema aplica au-
tomaticamente a amostra de células na coluna de separação. As célu- las marcadas são retidas na coluna, enquanto que as células não mar- cadas são removidas através de uma série de etapas de lavagem. Em algumas modalidades, as populações de células para uso com os mé- todos descritos no presente documento não são marcadas e não são retidas na coluna. Em algumas modalidades, as populações de células para uso com os métodos descritos no presente documento são mar- cadas e são retidas na coluna. Em algumas modalidades, as popula- ções de células para uso com os métodos descritos no presente do- cumento são eluídas da coluna após remoção do campo magnético e são coletadas dentro do saco de coleta de células.
[00571] Em determinadas modalidades, a separação e/ou outras etapas são realizadas usando o sistema CIiniMACS Prodigy& (Miltenyi Biotec). O sistema CIiniMACS Prodigy&, em alguns aspectos, é equi- pado com uma unidade de processamento de células que permite a lavagem e fracionamento automatizado de células por meio de centri- fugação. O sistema CIliniMACS Prodigy& também pode incluir uma câmera integrada e um software de reconhecimento de imagem que determina o ponto final de fracionamento de célula ideal por meio do discernimento das camadas macroscópicas do produto da célula de origem. Por exemplo, o sangue periférico pode ser automaticamente separado em camadas de eritrócitos, glóbulos brancos e plasmática. O sistema CIliniMACS Prodigy& também pode incluir uma câmara de cul- tura de células integrada que realiza protocolos de cultura de células tais como, por exemplo, diferenciação e expansão de células, carre- gamento de antígeno e cultura de células de longo prazo. As aberturas de entrada podem permitir a remoção estéril e a reposição de meio e as células podem ser monitoradas usando um microscópio integrado (consulte, por exemplo, Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 651-—660, Terakura et a/. ( 2012) Blood. 1: 72-82 e Wang et al. (2012)
J Immunother. 35 (9): 689-701).
[00572] Em algumas modalidades, uma população de células des- crita no presente documento é coletada e enriquecida (ou esgotada) por meio de citometria de fluxo, na qual as células coradas para múlti- plos marcadores na superfície celular são transportadas em uma cor- rente fluídica. Em algumas modalidades, uma população de células descrita no presente documento é coletada e enriquecida (ou esgota- da) por meio de classificação em escala preparativa (FACS). Em de- terminadas modalidades, uma população de células descrita no pre- sente documento é coletada e enriquecida (ou esgotada) pelo uso de chips de sistemas microeletromecânicos (MEMS) em combinação com um sistema de detecção baseado em FACS (consulte, por exemplo, WO 2010/033140, Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573; e Godin et al. (2008) J Biophoton. 1 (5): 355-376. Em ambos os casos, as célu- las podem ser marcadas ed com vários marcadores, permitindo o iso- lamento de subconjuntos de células T bem definidos em alta pureza.
[00573] Em algumas modalidades, os anticorpos ou parceiros de ligação são marcados com um ou mais marcadores detectáveis, para facilitar a separação para seleção positiva e/ou negativa. Por exemplo, a separação pode ser com base na ligação a anticorpos marcados com fluorescência. Em alguns exemplos, a separação de células com base na ligação de anticorpos ou outros parceiros de ligação especiífi- cos para um ou mais marcadores de superfície celular são transporta- dos em uma corrente fluídica, tal como por classificação de células ati- vadas por fluorescência (FACS), que inclui escala preparativa (FACS) e/ou chips de sistemas microeletromecânicos (MEMS), por exemplo, em combinação com um sistema de detecção por citometria de fluxo. Estes métodos permitem a seleção positiva e negativa com base em vários marcadores simultaneamente.
[00574] Em algumas modalidades, os métodos de preparação in-
cluem etapas para congelamento, por exemplo, criopreservação, das células, antes ou após o isolamento, incubação e/ou manipulação. Em algumas modalidades, a etapa de congelamento e descongelamento subsequente remove granulócitos e, até determinado ponto, monócitos na população de células. Em algumas modalidades, as células são suspensas em uma solução de congelamento, por exemplo, após uma etapa de lavagem, para remover o plasma e as plaquetas. Qualquer uma de uma variedade de soluções e parâmetros de congelamento conhecidos pode, em alguns aspectos, ser usada. Um exemplo envol- ve o uso de PBS que contêm DMSO a 20 % e albumina de soro hu- mano (Human Serum Albumin, HSA) a 8 % ou outro meio de conge- lamento de células adequado. Este é, então, diluído a 1:1 com meio de modo que a concentração final de DMSO e HSA seja de 10 % e 4 %, respectivamente. As células são, então, congeladas a -80 ºC em uma taxa de 1 ºC por minuto e armazenadas na fase de vapor de um tan- que de armazenamento de nitrogênio líquido.
[00575] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos incluem etapas de cultivo, incubação, cultura e/ou engenharia genética. Por exemplo, em algumas modalidades, são fornecidos métodos para in- cubar e/ou manipular as populações de células esgotadas e composi- ções iniciadoras de cultura.
[00576] Assim, em algumas modalidades, as populações de células são incubadas em uma composição iniciadora de cultura. A incubação e/ou manipulação pode ser realizada em um recipiente de cultura, tal como uma unidade, câmara, cavidade, coluna, tubo, conjunto de tubu- lação, válvula, frasco, disco de cultura, saco ou outro recipiente para cultura ou cultivo de células.
[00577] Em algumas modalidades, as células são incubadas e/ou cultivadas antes de ou juntamente com a engenharia genética. As eta- pas de incubação podem incluir cultura, cultivo, estimulação, ativação e/ou propagação. Em algumas modalidades, as composições ou célu- las são incubadas na presença de condições estimulantes ou um agente estimulador. Tais condições incluem aquelas concebidas para induzir à proliferação, expansão, ativação e/ou sobrevida de células na população, para imitar a exposição ao antígeno e/ou para preparar as células para engenharia genética, tal como para a introdução de um receptor antigênico recombinante.
[00578] As condições podem incluir um ou mais de meios particula- res, temperatura, teor de oxigênio, teor de dióxido de carbono, tempo, agentes, por exemplo, nutrientes, aminoácidos, antibióticos, íons e/ou fatores estimuladores, tais como citocinas, quimiocinas, antígenos, parceiros de ligação, proteínas de fusão, receptores solúveis recombi- nantes e quaisquer outros agentes concebidos para ativar as células.
[00579] Em algumas modalidades, as condições ou agentes estimu- lantes incluem um ou mais agentes, por exemplo, ligantes, os quais são capazes de ativar um domínio de sinalização intracelular de um complexo de TCR. Em alguns aspectos, o agente liga ou inicia a cas- cata de sinalização intracelular de TOR/CD3 em uma célula T. Tais agentes podem incluir anticorpos, tais como aqueles específicos para um componente de TCR e/ou receptor coestimulador, por exemplo, anti-CD3, anti-CD28, por exemplo, ligado a um suporte sólido, tal co- mo uma esfera e/ou uma ou mais citocinas. Opcionalmente, o método de expansão pode compreender ainda a etapa de adicionar o anticor- po anti-CD3 e/ou anti-CD28 ao meio de cultura (por exemplo, em uma concentração de pelo menos cerca de 0,5 ng/ml). Em algumas modali- dades, os agentes estimulantes incluem IL-2 e/ou IL-15, por exemplo, em uma concentração de I|L-2 de pelo menos cerca de 10 unida- des/mL.
[00580] Em alguns aspectos, a incubação é realizada de acordo com técnicas tais como aquelas descritas na Patente Norte-Americana
Nº 6.040.177 para Riddell et a/., Klebanoff et al. (2012) J Immunother. (9): 651—660, Terakura et al. (2012) Blood. 1: 72-82 e/ou Wang et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 689-701.
[00581] Em algumas modalidades, as células T são expandidas ao adicionar à composição iniciadora de cultura células alimentadoras, tais como células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) sem divisão (por exemplo, de modo que a população de células resultante contenha pelo menos cerca de 5, 10, 20 ou 40 ou mais células alimen- tadoras de PBMCs para cada linfócito T na população inicial a ser ex- pandida); e incubar a cultura (por exemplo, durante um tempo suficien- te para expandir o número de células T). Em alguns aspectos, as célu- las alimentadoras sem divisão podem compreender células alimenta- doras de PBMCs gamar-irradiadas. Em algumas modalidades, as PBMCs são irradiadas com raios gama na faixa de cerca de 3000 a 3600 rads para evitar a divisão celular. Em alguns aspectos, as células alimentadoras são adicionadas ao meio de cultura antes da adição das populações de células T.
[00582] Em algumas modalidades, as condições de estimulação incluem uma temperatura adequada para o crescimento de linfócitos T humanos, por exemplo, pelo menos cerca de 25 graus Celsius, geral- mente pelo menos cerca de 30 graus e, tipicamente, cerca de 37 graus Celsius. Opcionalmente, a incubação pode ainda compreender a adi- ção de células linfoblastoides transformadas por EBV sem divisão (LCL) como células alimentadoras. As LCLs podem ser irradiadas com raios gama na faixa de cerca de 6.000 a 10.000 rads. As células ali- mentadoras LCL, em alguns aspectos, são fornecidas em qualquer quantidade adequada, tal como uma proporção de células alimentado- ras LCL para linfócitos T iniciais de pelo menos cerca de 10:1.
[00583] Em modalidades, células T específicas para antígeno, tais como células T CD4* e/ou CD8* específicas para antígeno, são obti-
das ao estimular linfócitos T não expostos ou específicos para antíge- no com antígeno. Por exemplo, clones ou linhagens de células T es- pecíficas para antígeno podem ser geradas para antígenos de citome- galovírus ao isolar células T de indivíduos infectados e estimular as células in vitro com o mesmo antígeno. C. Células Manipuladas, Vetores e Composições Para Multi-Direci- onamento
[00584] “Também são fornecidas células, tais como células modifi- cadas, que podem se ligar a e/ou ter como alvo vários antígenos. Em algumas modalidades, a seletividade e especificidade aprimoradas são alcançadas por meio de estratégias que têm como alvo vários antíge- nos. Estas estratégias envolvem, em geral, vários domínios de ligação a antígeno, os quais normalmente estão presentes em receptores an- tigênicos geneticamente modificados distintos e se ligam especifica- mente a antígenos distintos. Em algumas modalidades, as células são manipuladas para a capacidade de se ligar a mais de um antígeno. Por exemplo, em algumas modalidades, as células são manipuladas para expressar moléculas de ligação multiespecíficas. Em algumas modalidades, as células expressam múltiplas moléculas de ligação, por exemplo, receptores recombinantes, cada um dos quais pode ter como alvo um antígeno ou vários antígenos, por exemplo, um receptor que tem como alvo a proteína GPRC5D, tal como qualquer um des- crito no presente documento, e outro receptor que tem como alvo outro antígeno, tal como um antígeno tumoral, por exemplo, BCMA. Recep- tores anti-BCMA exemplificativos são descritos no presente documen- to e nos documentos WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/ 021450, WO 2017/083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO 2018/085690, WO 2018/028647.
[00585] Em alguns aspectos, uma pluralidade de receptores antigê- nicos geneticamente modificados é introduzida na célula, os quais se ligam especificamente a diferentes antígenos, cada um expresso em ou na doença ou condição a ser direcionada com as células ou tecidos ou células dos mesmos. Tais características podem, em alguns aspec- tos, abordar ou reduzir a probabilidade de efeitos fora-do-alvo e/ou aumentar a resposta. Por exemplo, quando um único antígeno expres- so em uma doença ou condição também é expresso em ou em células normais ou não doentes, tais abordagens de multi-direcionamento po- dem permitir seletividade para os tipos de células desejados, reque- rendo a ligação através de múltiplos receptores antigênicos, a fim de ativar a célula ou induzir a uma função efetora particular. Em algumas modalidades, uma pluralidade de células pode ser manipulada para expressar uma ou mais moléculas de ligação diferentes, por exemplo, receptores recombinantes, cada um dos quais pode ter como alvo um antígeno ou vários antígenos.
[00586] “Também são fornecidas células ou composições multiespe- cíficas, tais como aquelas que contêm uma ou mais de qualquer uma das moléculas ou células de ligação fornecidas no presente documen- to. Em alguns aspectos, as células multiespecíficas, tais como células que contêm uma proteína na superfície celular, incluindo o receptor anti-GPRC5D ou domínio do mesmo, e uma proteína na superfície ce- lular adicional ou domínio do mesmo, tal como um receptor quimérico adicional ou domínio do mesmo, que se liga a um antígeno diferente ou um epítopo diferente na proteína GPRC5D. Em algumas modalida- des, o receptor quimérico adicional se liga a um antígeno BCMA ou um epítopo de BCMA ou o antígeno adicional é BCMA. Em algumas mo- dalidades, são fornecidas composições de células que expressam re- ceptores recombinantes, em que uma ou mais das moléculas de liga- ção, moléculas de ligação multiespecíficas e/ou receptores recombi-
nantes se ligam e/ou têm como alvo a proteína GPRC5D. Em algumas modalidades, as moléculas de ligação multiespecíficas e/ou receptores e/ou células ou composições recombinantes têm como alvo um ou mais epítopos diferentes na proteína GPRC5D. Em algumas modali- dades, as moléculas de ligação multiespecíficas e/ou receptores ou células ou composições recombinantes têm como alvo um ou mais epítopos diferentes na proteína GPRC5D e um ou mais epítopos na proteína BCMA.
[00587] Em algumas modalidades, são fornecidas composições de células, em que as células dentro da composição expressam uma ou mais moléculas de ligação, por exemplo, receptores recombinantes. Em algumas modalidades, a célula compreende (e, em alguns casos, foi transformada ou transfectada ou transduzida com) um ou mais ve- tores ou construções que compreendem um ou mais ácidos nucleicos que codificam uma ou mais sequências de aminoácidos que compre- endem um ou mais anticorpos e/ou porções dos mesmos, por exem- plo, fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. Em algumas mo- dalidades, uma ou mais destas células são fornecidas. Em algumas modalidades, é fornecida uma composição que contém uma ou mais destas células. Em algumas modalidades, uma ou mais células podem expressar diferentes receptores ou o mesmo receptor. Em algumas modalidades, as células dentro da composição expressam uma molé- cula de ligação multiespecífica, por exemplo, um receptor multiespecí- fico, por exemplo, CAR.
[00588] Em alguns aspectos, as modalidades fornecidas incluem estratégias de multi-direcionamento que têm como alvo a proteína GPRC5D e um segundo ou antígeno adicional associado a uma doen- ça ou condição específica. Em algumas modalidades, o segundo ou antígeno adicional é controlado por uma molécula de ligação multies- pecífica e/ou moléculas de ligação múltiplas e/ou uma pluralidade de células, por exemplo, uma ou mais células, cada uma manipulada para expressar um ou mais receptores recombinantes. Em algumas modali- dades, um receptor recombinante que tem como alvo um segundo an- tígeno ou adicional é expresso na mesma célula que uma molécula de ligação à proteína GPRC5D, por exemplo, um CAR anti-GPRC5D ou em uma célula diferente.
[00589] “Em algumas modalidades, outros receptores recombinantes que se ligam especificamente ou têm como alvo um segundo antígeno estão incluídos nas células, composições e métodos fornecidos no presente documento. Em algumas modalidades, a pluralidade de antí- genos, por exemplo, o primeiro antígeno, por exemplo, GPRC5D, e o segundo ou antígenos adicionais, por exemplo, BCMA, são expressos ou suspeitos de serem expressos na célula, tecido ou doença ou con- dição-alvo, tal como na célula cancerosa. Em alguns aspectos, a célu- la, tecido, doença ou condição é mieloma múltiplo ou uma célula de mieloma múltiplo.
[00590] Em alguns aspectos, o segundo antígeno, por exemplo, an- tígeno adicional, tal como o antígeno específico para doença e/ou an- tígeno relacionado, é expresso em mieloma múltiplo, tal como BCMA, CD38 (ADP ribose hidrolase cíclica), CD138 (sindecana-1, sindecana, SYN-1), CS-1 (CS1, CD2 subconjunto 1, CRACC, SLAMF7, CD319 e 19A24), BAFF-R, TACI e/ou FcRH5. Outros antígenos de mieloma múltiplo exemplificativos incluem CD56, TIM-3, CD33, CD123, CD4, CD20, CD40, CD74, CD200, EGFR, B2-Microglobulina, HM1.24, IGF- 1R, IL-6R, TRAIL-R1I e o receptor de activina de tipo IIA (ActRIIA) (consulte Benson e Byrd, J. Clin. Oncol. (2012) 30 (16): 2013-15; Tao e Anderson, Bone Marrow Research (2011): 924058; Chu et al., Leu- kemia (2013) 28 (4): 917-27; Garfall et al., Discov Med. (2014) 17 (91): 37-46). Em algumas modalidades, os antígenos incluem aqueles pre- sentes em tumores linfoides, mieloma, linfoma associado à AIDS e/ou linfoproliferações pós-transplante, tal como CD38. Os anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dirigidos contra tais antígenos são conhecidos e incluem, por exemplo, aqueles descritos nas Patentes Norte-Americanas Nº* 8.153.765; 8.603477, 8.008.450; Publicações Norte-Americanas Nº US20120189622 ou US20100260748; e/ou Publi- cações PCT Internacional Nºº WO 2006/099875, WO 2009/080829, WO 2012/092612, WO2014210064, WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/ 014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/021450, WO 2017/083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO 2018/085690, WO 2018/028647. Em algumas modalidades, tais anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos (por exemplo, scFv) estão contidos em anticorpos multiespecíficos, recep- tores quiméricos multiespecíficos, tais como CARs multiespecíficos e/ou células multiespecíficas.
[00591] Em algumas modalidades, as células fornecidas expressam os CARs fornecidos e um ou mais outros receptores recombinantes, tal como um receptor recombinante anti-BCMA (por exemplo, um CAR anti-BCMA). Em algumas modalidades, as células fornecidas contêm polinucleotídeos que codificam um ou mais de outros receptores re- combinantes (por exemplo, um CAR anti-BCMA), além de um ou mais polinucleotídeos que codificam o receptor anti-GPRC5D fornecido no presente documento. Em algumas modalidades, as células fornecidas são combinadas com outras células manipuladas que expressam um receptor recombinante que não é um receptor anti-GPRC5D, tais como células manipuladas que expressam um receptor anti-BCMA (por exemplo, um CAR anti-BCMA), na mesma ou em composições sepa- radas e podem ser administrados em conjunto ou separadamente em qualquer um dos métodos ou usos fornecidos. Qualquer receptor re- combinante pode ser combinado com o receptor anti-GPRC5D forne-
cido em qualquer uma das células fornecidas, de modo que as células fornecidas expressem tanto o receptor anti-GPRC5D fornecido no pre- sente documento quanto outro receptor. As células que expressam um receptor anti-GPRC5D (por exemplo, CAR anti-GPRC5D) podem ser combinadas com células que expressam qualquer receptor recombi- nante, na mesma composição ou em uma composição separada para uso nos métodos ou usos fornecidos no presente documento. Estas células, composições e polinucleotídeos são descritos em outra parte no presente documento.
[00592] Em algumas modalidades, o outro receptor recombinante é um receptor anti-BCMA, tal como um CAR anti-BCMA. O uso ou a in- corporação de qualquer CAR anti-BCMA nas células, métodos e usos fornecidos no presente documento é considerado. Polinucleotídeos que codifica um receptor anti-GPRC5D fornecido no presente docu- mento e outro receptor, por exemplo, em um vetor de expressão multi- cistrônico (por exemplo, bicistrônico), também são considerados da mesma forma. Moléculas de CAR anti-BCMA exemplificativas são descritas nos documentos WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/ 021450, WO 2017/083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO 2018/085690, WO 2018/028647.
[00593] Em algumas modalidades, o CAR é um CAR anti-BCMA que é específico para a proteína BCMA, por exemplo, proteína BCMA humana. Receptores antigênicos quiméricos que contêm anticorpos anti-BCMA, incluindo anticorpos anti-5BCMA humana de camundongo e anticorpos anti-BCMA humana humanos, e células que expressam tais receptores quiméricos foram descritos anteriormente. Consulte Car- penter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19(8): 2048-2060, documentos WO 2016/090320, WO2016090327, WO2010104949A2 e WO2017
173256. Em algumas modalidades, o CAR anti-BCMA contém um do- mínio de ligação a antígeno, tal como um scFv, que contém uma regi- ão variável pesada (VH) e/ou região variável leve (VL) derivadas de um anticorpo descrito nos documentos WOZ2016/090320 ou WO2016
090327.
[00594] “Dentre um CAR anti-BCMA fornecido está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 189 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 189; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 190 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 190. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 201, respectiva- mente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente. Em algumas modalidades, a região Vu compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 189 e a região V. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO:
190. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 237 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 237. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 242 ou uma se- quência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cer- ca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 242. Em algumas modalidades, o CAR anti-<BCMA tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ NO: 247 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 247.
[00595] “Dentre um CAR anti-BCMA fornecido está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 191 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 191; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 192 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 192. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectiva- mente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222, 223, respectivamente. Em algumas modalidades, a região Vx compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 191 e a região V. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO:
192. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 238 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 238. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 243 ou uma se- quência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cer- ca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 243. Em algumas modalidades, o CAR anti-<BCMA tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ NO: 248 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden-
tidade com SEQ ID NO: 248.
[00596] Dentreum CAR anti-BCMA fornecido está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 193 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 193; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 194 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 194. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 205, respectiva- mente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente. Em algumas modalidades, a região Vu compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 193 e a região V. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO:
194. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um scFv. Em algumas modalidades, o scFv compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 239 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 239. Em algumas modalidades, o scFv é codificado por uma se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 244 ou uma se- quência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cer- ca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 244. Em algumas modalidades, o CAR anti-<BCMA tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ NO: 249 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 249.
[00597] Dentre um CAR anti-BCMA fornecido está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 195 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 195; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 196 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 196. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a se-
quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207 e 208, respectiva- mente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente.
Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 212, 213 e 214, respectivamente, e uma região Vi. que tem uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 233, 234 e 229, respectivamente.
Em algumas moda- lidades, a região Vx compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 195 e a região V. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 196. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única ca- deia, tal como um scFv.
Em algumas modalidades, o scFv compreen- de a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 240 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 240. Em algumas modalidades, o scFv é codi- ficado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 245 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 245. Em algumas modalidades, o CAR anti-BCMA tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ NO: 250 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 250.
[00598] Dentreum CAR anti-BCMA fornecido está um CAR no qual o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno contém uma região VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 197 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 197; e contém uma região V. que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 198 ou uma se- quência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 198. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido contém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectiva- mente, e uma região V. que tem uma CDRL1, uma CDRL2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do CAR fornecido con- tém uma região VH que tem a CDRH1, a CDRH2 e a CDRH3 que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e uma região Vi. que tem uma CDRL1, uma CDRL?2 e uma CDRL3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236, 232, respectivamente. Em algumas moda- lidades, a região Vx compreende a sequência apresentada em SEQ ID
NO: 197 e a região V. compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 198. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo com uma única ca- deia, tal como um scFv. Em algumas modalidades, o scFv compreen- de a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade com SEQ ID NO: 241. Em algumas modalidades, o scFv é codi- ficado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 246 ou uma sequência de nucleotídeos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 246. Em algumas modalidades, o CAR anti-BCMA tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ NO: 251 ou 252 ou uma sequência de aminoácidos pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 251 ou 252.
[00599] Em algumas modalidades, as células e os métodos incluem estratégias de multi-direcionamento, tal como a expressão de dois ou mais receptores geneticamente modificados na célula, cada um reco- nhecendo um antígeno diferente e, em alguns aspectos, cada um in- cluindo um componente de sinalização intracelular diferente. Tais es- tratégias de multi-direcionamento são descritas, por exemplo, na Pu- blicação de Pedido de Patente Internacional Nº WO 2014/055668 (a qual descreve combinações de CARs ativadores e coestimuladores,
por exemplo, que têm como alvo dois antígenos diferentes presentes individualmente em células fora-do-alvo, por exemplo, células normais, mas presentes juntos apenas nas células da doença ou condição a ser tratada) e Fedorov et al. (2013) Sci. Transl. Medicine, 5 (215) (o qual descreve células que expressam um CAR ativador e um CAR inibidor, tais como aqueles nos quais o CAR ativador se liga a um antígeno ex- presso em células normais ou não doentes e células da doença ou condição a ser tratada, e o CAR inibidor se liga a outro antígeno ex- presso apenas nas células normais ou nas células que não se deseja tratar).
[00600] Em algumas modalidades, é fornecida uma pluralidade de células, cada uma concebida para expressar um ou mais receptores recombinantes. Por exemplo, em algumas modalidades, uma célula é manipulada para expressar uma molécula de ligação que se liga e/ou tem como alvo a proteína GPRC5D, e outra célula é concebida para expressar uma molécula de ligação que se liga e/ou tem como alvo um segundo antígeno adicional. Em algumas modalidades, o segundo an- tígeno adicional é a proteína BCMA. Em algumas modalidades, as cé- lulas podem, cada uma, expressar cada uma molécula de ligação mul- tiespecífica, por exemplo, um receptor recombinante multiespecífico, onde um ou mais antígenos alvo é a proteína GPRC5D. Em algumas destas modalidades, a pluralidade de células pode ser administrada em conjunto ou separadamente. Em algumas modalidades, a plurali- dade de células é administrada simultânea, concorrente ou subse- quentemente com as células, por exemplo, administrada no mesmo dia e/ou sequencial ou intermitentemente com, em qualquer ordem, outra célula manipulada na pluralidade. Por exemplo, em algumas mo- dalidades, uma célula manipulada que expressa um receptor de liga- ção à proteína GPRC5D, por exemplo, CAR, é administrada simultà- nea ou sequencialmente, em qualquer ordem, com outra célula modifi-
cada que expressa uma molécula de ligação que se liga a um antígeno alvo diferente, por exemplo, BCMA, ou um epítopo diferente na proteí- na GPRC5D. Em algumas modalidades, a pluralidade de células pode estar na mesma composição.
4. Composições Farmacêuticas
[00601] “Também são fornecidas composições que incluem os re- ceptores recombinantes anti-GPRC5D (por exemplo, CARs anti- GPRCS5D) e células modificadas, incluindo composições e formulações farmacêuticas. Dentre estas composições estão aquelas que incluem células manipuladas, tal como uma pluralidade de células manipula- das, que expressam os receptores recombinantes anti-GPRC5D for- necidos (por exemplo, CARs).
[00602] “Também são fornecidas composições que incluem os re- ceptores recombinantes anti-GPRC5D (por exemplo, CARs anti- GPRC5D) e um segundo receptor recombinante (por exemplo, CAR), tal como um receptor recombinante anti-BCMA (por exemplo, CAR an- ti-BCMA) e células modificadas, incluindo composições e formulações farmacêuticas. Dentre estas composições estão aquelas que incluem células manipuladas, tal como uma pluralidade de células manipula- das, que expressam os receptores recombinantes anti-GPRC5D for- necidos (por exemplo, CARs) e/ou o segundo receptor recombinante (por exemplo, CAR), tal como um receptor anti-BCMA recombinante (por exemplo, CAR anti-BCMA). Em algumas modalidades, as compo- sições fornecidas incluem células manipuladas, tal como uma plurali- dade de células manipuladas, que expressam os CARs anti-GPRC5D fornecidos e também que expressam CARs anti-BCMA. Em algumas modalidades, as composições fornecidas incluem células manipuladas que expressam os CARs fornecidos que se ligam às proteínas GPRCB5D e BCMA, tal como aqueles que compreendem um scFv anti- GPRCS5D e um scFv anti-BCMA.
[00603] São fornecidas formulações farmacêuticas que compreen- dem um receptor antigênico quimérico recombinante de ligação à pro- teína GPRC5D e células modificadas que expressam os ditos recepto- res, uma pluralidade de células modificadas que expressam os ditos receptores e/ou agentes adicionais para tratamento ou terapia combi- nada. As composições e formulações farmacêuticas incluem, em geral, um ou mais carreadores ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis opcionais. Em algumas modalidades, a composição inclui pelo menos um agente terapêutico adicional.
[00604] O termo "formulação farmacêutica" refere-se a uma prepa- ração que está em uma forma que permite que a atividade biológica de um ingrediente ativo contido na mesma seja eficaz e que não contém componentes adicionais que são inaceitavelmente tóxicos para um in- divíduo ao qual o formulação será administrada.
[00605] “Um "carreador farmaceuticamente aceitável" refere-se a um ingrediente em uma formulação farmacêutica, diferente de um ingredi- ente ativo, que não é tóxico para um indivíduo. Um carreador farma- ceuticamente aceitável inclui, porém sem limitações, um tampão, exci- piente, estabilizante ou conservante.
[00606] Em alguns aspectos, a escolha do carreador é determina- da, em parte, pela célula, molécula de ligação e/ou anticorpo particular e/ou por meio do método de administração. Consequentemente, há uma variedade de formulações adequadas. Por exemplo, a composi- ção farmacêutica pode conter conservantes. Conservantes adequados podem incluir, por exemplo, metilparabeno, propilparabeno, benzoato de sódio e cloreto de benzalcônio. Em alguns aspectos, uma mistura de dois ou mais conservantes é usada. O conservante ou misturas do mesmo estão, tipicamente, presentes em uma quantidade a partir de cerca de 0,0001 % a cerca de 2 % em peso da composição total. Car- readores são descritos, por exemplo, por Remington's Pharmaceutical
Sciences 16º edição, Osol, A. Ed. (1980). Os carreadores farmaceuti- camente aceitáveis são, em geral, não tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações empregadas e incluem, porém sem limita- ções: tampões, tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzilamônio; cloreto de hexame- tônio; cloreto de benzalcônio; cloreto de benzetônio; fenol, álcool butí- lico ou benzílico; alquilparabenos, tais como metil ou propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptí- deos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); prote- íÍnas, tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; políme- ros hidrofílicos, tal como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossaca- rídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, tal como EDTA; açúcares, tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons formadores de sal, tal como sódio; complexos metálicos (por exemplo, complexos de Zn- proteína); e/ou tensoativos não iônicos, tal como polietileno glicol (PEG).
[00607] Agentes de tamponamento, em alguns aspectos, estão in- cluídos nas composições. Agentes de tamponamento adequados in- cluem, por exemplo, ácido cítrico, citrato de sódio, ácido fosfórico, fos- fato de potássio e vários outros ácidos e sais. Em alguns aspectos, é usada uma mistura de dois ou mais agentes de tamponamento. O agente de tamponamento ou misturas do mesmo estão, tipicamente, presentes em uma quantidade a partir de cerca de 0,001 % a cerca de 4 % em peso da composição total. Métodos para preparar composi- ções farmacêuticas administráveis são conhecidos. Métodos exempli- ficativos são descritos em mais detalhes, por exemplo, em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins;
21º ed. (01 de maio de 2005).
[00608] As formulações dos anticorpos descritos no presente do- cumento podem incluir formulações liofilizadas e soluções aquosas.
[00609] A formulação ou composição também pode conter mais de um ingrediente ativo útil para a indicação, doença ou condição particu- lar a ser tratada com as moléculas ou células de ligação, de preferên- cia aquelas com atividades complementares à molécula ou célula de ligação, onde as respectivas atividades não afetam adversamente uma à outra. Tais ingredientes ativos estão, adequadamente, presentes em combinação em quantidades que são eficazes para a finalidade pre- tendida. Assim, em algumas modalidades, a composição farmacêutica inclui ainda outros agentes ou fármacos farmaceuticamente ativos, tais como agentes quimioterapêuticos, por exemplo, asparaginase, busul- fan, carboplatina, cisplatina, daunorrubicina, doxorrubicina, fluorouraci- la, gencitabina, hidroxiureia, metotrexato, paclitaxel, ritublastinexel, ri- tublastinebe, vincristina, etc. Em algumas modalidades, as células ou anticorpos são administrados na forma de um sal, por exemplo, um sal farmaceuticamente aceitável. Sais de adição de ácido farmaceutica- mente aceitáveis adequados incluem aqueles derivados de ácidos mi- nerais, tais como ácidos clorídrico, bromídrico, fosfórico, metafosfórico, nítrico e sulfúrico, e ácidos orgânicos, tais como ácidos tartárico, acéti- co, Cítrico, málico, láctico, fumárico, benzoico, glicólico, glucônico, suc- cínico e arilsulfônico, por exemplo, ácido p-toluenossulfônico.
[00610] Os ingredientes ativos podem ser retidos em microcápsu- las, em sistemas de distribuição de fármaco coloidais (por exemplo, lipossomas, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Em determinadas modalida- des, a composição farmacêutica é formulada como um complexo de inclusão, tal como o complexo de inclusão de ciclodextrina ou como um lipossoma. Os lipossomas podem servir para direcionar as células hospedeiras (por exemplo, células T ou células NK) a um tecido espe- cífico. Muitos métodos estão disponíveis para preparar lipossomas, tais como aqueles descritos, por exemplo, em Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9: 467 (1980) e Patentes Norte-Americanas Nº
4.235.871, 4.501.728, 4.837.028 e 5.019.369.
[00611] A composição farmacêutica, em alguns aspectos, pode empregar sistemas de liberação prolongada, liberação retardada e |i- beração sustentada, de modo que a administração da composição ocorra antes e com um tempo suficiente para causar a sensibilização do local a ser tratado. Muitos tipos de sistemas de liberação controlada estão disponíveis e são conhecidos. Tais sistemas podem evitar admi- nistrações repetidas da composição, deste modo, aumentando a con- veniência para o indivíduo e o médico.
[00612] A composição farmacêutica, em algumas modalidades, contém as moléculas de ligação e/ou células em quantidades eficazes para tratar ou prevenir a doença ou condição, tal como uma quantida- de terapeuticamente eficaz ou profilaticamente eficaz. A eficácia tera- pêutica ou profilática, em algumas modalidades, é monitorada por meio de uma avaliação periódica dos indivíduos tratados. Para admi- nistrações repetidas durante vários dias ou mais, dependendo da con- dição, o tratamento é repetido até que ocorra a supressão desejada dos sintomas da doença. No entanto, outros regimes de dosagem po- dem ser úteis e podem ser determinados. A dosagem desejada pode ser distribuída por uma única administração em bolus da composição, por múltiplas administrações em bolus da composição ou através de administração por meio de infusão contínua da composição.
[00613] Em determinadas modalidades, no contexto de células ge- neticamente modificadas que contêm as moléculas de ligação, um in- divíduo recebe na faixa de cerca de um milhão a cerca de 100 bilhões de células tal como, por exemplo, 1 milhão a cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, cerca de 5 milhões de células, cerca de 25 mi- lhões de células, cerca de 500 milhões de células, cerca de 1 bilhão de células, cerca de 5 bilhões de células, cerca de 20 bilhões de células, cerca de 30 bilhões de células, cerca de 40 bilhões de células ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores anteriores), tal como cer- ca de 10 milhões a cerca de 100 bilhões de células (por exemplo, cer- ca de 20 milhões de células, cerca de 30 milhões de células, cerca de 40 milhões de células, cerca de 60 milhões de células, cerca de 70 mi- lhões de células, cerca de 80 milhões de células, cerca de 90 milhões de células, cerca de 10 bilhões de células, cerca de 25 bilhões de célu- las, cerca de 50 bilhões de células, cerca de 75 bilhões de células, cerca de 90 bilhões de células ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores anteriores) e, em alguns casos, cerca de 100 milhões de células a cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, cerca de 120 milhões de células, cerca de 250 milhões de células, cerca de 350 mi- lhões de células, cerca de 450 milhões de células, cerca de 650 mi- lhões de células, cerca de 800 milhões de células, cerca de 900 mi- lhões de células, cerca de 3 bilhões de células, cerca de 30 bilhões de células, cerca de 45 bilhões de células) ou qualquer valor entre estas faixas, e/ou tal número de células por quilograma de peso corporal do indivíduo. Em alguns aspectos, no contexto de células geneticamente modificadas que expressam as moléculas de ligação, por exemplo, CAR, uma composição pode conter pelo menos o número de células para administração para uma dose de terapia celular, tal como cerca de ou pelo menos um número de células descrito no presente docu- mento para administração.
[00614] A composição ser administrada usando técnicas de admi- nistração, formulações e/ou dispositivos padrão. São fornecidas formu- lações e dispositivos, tais como seringas e frascos, para armazena- mento e administração das composições. A administração das células pode ser autóloga ou heteróloga. Por exemplo, células imunorrespon- sivas ou progenitoras podem ser obtidas a partir de um indivíduo e administradas ao mesmo indivíduo ou a um indivíduo compatível dife- rente. Células imunorresponsivas derivadas de sangue periférico ou sua progênie (por exemplo, derivadas in vivo, ex vivo ou in vitro) po- dem ser administradas por meio de injeção localizada, incluindo admi- nistração por meio de um cateter, injeção sistêmica, injeção localizada, injeção intravenosa ou administração parentérica. Ao administrar uma composição terapêutica (por exemplo, uma composição farmacêutica que contêm uma célula imunorresponsiva geneticamente modificada), ela geralmente será formulada em uma forma de dosagem unitária in- jetável (solução, suspensão, emulsão).
[00615] As formulações incluem aquelas para administração oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutânea, pulmonar, transdérmica, in- tramuscular, intranasal, bucal, sublingual ou supositório. Em algumas modalidades, as populações de células são administradas através da via parentérica. O termo "parentérica", conforme usado no presente documento, inclui administração intravenosa, intramuscular, subcutâà- nea, retal, vaginal, intracraniana, intratorácica e intraperitoneal. Em algumas modalidades, as populações de células são administradas a um indivíduo usando distribuição sistêmica periférica por meio de inje- ção intravenosa, intraperitoneal ou subcutânea.
[00616] As composições, em algumas modalidades, são fornecidas como preparações líquidas estéreis, por exemplo, soluções, suspen- sões, emulsões, dispersões ou composições aquosas isotônicas vis- cosas as quais podem, em alguns aspectos, ser tamponadas para um pH selecionado. As preparações líquidas normalmente são mais fáceis de preparar do que géis, outras composições viscosas e composições sólidas. Além disso, as composições líquidas são um pouco mais con- venientes para administrar, especialmente através de injeção. As composições viscosas, por outro lado, podem ser formuladas dentro da faixa de viscosidade apropriada para fornecer períodos de contato mais longos com tecidos específicos. As composições líquidas ou vis- cosas podem compreender veículos, os quais podem ser um solvente ou meio de dispersão que contém, por exemplo, água, solução salina, solução salina tamponada com fosfato, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, polietileno glicol líquido) e misturas adequadas dos mesmos.
[00617] Podem ser preparadas soluções injetáveis estéreis que in- corporam a molécula de ligação em um solvente, tal como em mistura com um carreador, diluente ou excipiente adequado, tal como água estéril, soro fisiológico, glicose, dextrose ou similar. As composições também podem ser liofilizadas. As composições podem conter subs- tâncias auxiliares, tais como agentes umectantes, dispersantes ou emulsificantes (por exemplo, metilcelulose), agentes para tampona- mento de pH, aditivos gelificantes ou para aumento de viscosidade, conservantes, agentes aromatizantes, colorantes e assim por diante, dependendo da via de administração e da preparação desejada. Tex- tos padrão podem ser consultados, em alguns aspectos, para preparar preparações adequadas.
[00618] Vários aditivos que aumentam a estabilidade e esterilidade das composições, incluindo conservantes antimicrobianos, antioxidan- tes, agentes quelantes e tampões, podem ser adicionados. A preven- ção da ação de micro-organismos pode ser assegurada por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clo- robutanol, fenol, ácido sórbico e assim por diante. A absorção prolon- gada da forma farmacêutica injetável pode ser conseguida pelo uso de agentes que retardam a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.
[00619] “Podem ser preparadas preparações de liberação sustenta-
da. Exemplos adequados de preparações de liberação sustentada in- cluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos que contêm o anticorpo, matrizes estas que estão na forma de artigos mol- dados, por exemplo, filmes ou microcápsulas.
[00620] As formulações a serem usadas para administração in vivo são, em geral, estéreis. A esterilidade pode ser facilmente alcançada, por exemplo, por meio de filtração através de membranas de filtração estéreis.
[00621] Também são fornecidas composições farmacêuticas para terapia combinada. Qualquer um dos agentes adicionais para terapia combinada descritos no presente documento, tais como agentes des- critos na Seção Il.C, podem ser preparados e administrados como uma ou mais composições farmacêuticas com o receptor recombinan- te anti-cGPRC5D (por exemplo, receptor antigênico quimérico) e/ou cé- lulas modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, re- ceptor recombinante) descritas no presente documento. A terapia combinada pode ser administrada em uma ou mais composições far- macêuticas, por exemplo, onde o elemento de ligação, por exemplo, células, receptores e/ou células recombinantes, está na mesma com- posição farmacêutica que o agente adicional ou em composições far- macêuticas separadas. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente adicional é uma célula manipulada adicional, por exemplo, cé- lula manipulada para expressar um receptor recombinante diferente, tal como um receptor recombinante que tem como alvo a proteína BCMA, e é administrado na mesma composição ou em uma composi- ção separada. Em algumas modalidades, cada uma das composições farmacêuticas é formulada em uma formulação adequada de acordo com a molécula de ligação, receptor recombinante, célula, por exem- plo, célula manipulada e/ou agente adicional particular e o regime de dosagem e/ou método de distribuição particular.
V. Métodos e Usos
[00622] “Também são fornecidos métodos de uso e usos dos recep- tores recombinantes que têm como alvo a proteína GPRC5D, células modificadas e composições farmacêuticas e formulações dos mesmos, tal como no tratamento de doenças, condições e transtornos em que a proteína GPRC5D é expressa, e/ou métodos de detecção, diagnóstico e prognóstico. Dentre estes métodos e usos estão aqueles que envol- vem a administração, a um indivíduo, de células manipuladas, tal co- mo uma pluralidade de células manipuladas, que expressam os recep- tores recombinantes anti-GPRC5D fornecidos (por exemplo, CARs). Também são fornecidos métodos de terapia e/ou tratamento combina- do. A. Métodos e Usos Terapêuticos e Profiláticos
[00623] “Também são fornecidos métodos de administração e usos, tais como usos terapêuticos e profiláticos, dos receptores recombinan- tes anti-GPRC5D (por exemplo, CARs), células modificadas que ex- pressam os receptores recombinantes (por exemplo, CARs), a plurali- dade de células modificadas que expressam os receptores e/ou com- posições que compreendem as mesmas. Tais métodos e usos incluem métodos e usos terapêuticos, por exemplo, que envolvem a adminis- tração das moléculas (por exemplo, receptores recombinantes), célu- las (por exemplo, células modificadas) ou composições que contêm as mesmas a um indivíduo que tem uma doença, condição ou transtorno associado à proteína GPRC5D, tal como uma doença, condição ou transtorno associado à expressão da proteína GPRC5D e/ou no qual as células ou tecidos expressam, por exemplo, expressam especifica- mente, a proteína GPRC5D. Em algumas modalidades, a molécula, célula e/ou composição é/são administradas em uma quantidade efi- caz para efetuar o tratamento da doença ou transtorno. São fornecidos no presente documento usos dos receptores recombinantes (por exemplo, CARs) e células (por exemplo, células modificadas) em tais métodos e tratamentos e na preparação de um medicamento a fim de realizar tais métodos terapêuticos. Em algumas modalidades, os mé- todos são realizados ao administrar as moléculas ou células de ligação ou composições que compreendem as mesmas ao indivíduo que tem, teve ou suspeito de ter a doença ou condição. Em algumas modalida- des, os métodos, deste modo, tratam a doença ou condição ou trans- torno no indivíduo. Também é fornecido no presente documento o uso de qualquer uma das composições, tais como composições farmacêu- ticas fornecidas no presente documento, para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína GPRCB5D, tal como o uso em um regime de tratamento.
[00624] “Também são fornecidos métodos de administração e usos, tais como usos terapêuticos e profiláticos, dos receptores recombinan- tes anti-GPRC5D e anti-BCMA (por exemplo, CARs), células modifica- das que expressam os receptores recombinantes (por exemplo, CARSs), a pluralidade de células modificadas que expressam os recep- tores e/ou composições que compreendem as mesmas. Tais métodos e usos incluem métodos e usos terapêuticos, por exemplo, que envol- vem a administração das moléculas (por exemplo, receptores recom- binantes), células (por exemplo, células modificadas) ou composições que contêm as mesmas a um indivíduo que tem uma doença, condi- ção ou transtorno associado às proteínas GPRC5D e/ou BCMA, tal como uma doença, condição ou transtorno associado à expressão das proteínas GPRC5D e/ou BCMA e/ou em que as células ou tecidos ex- pressam, por exemplo, expressam especificamente, as proteínas GPRC5D e/ou BCMA. Em algumas modalidades, a molécula, célula e/ou composição é/são administradas em uma quantidade eficaz para efetuar o tratamento da doença ou transtorno. São fornecidos no pre- sente documento os usos dos receptores recombinantes (por exemplo,
CARs) e células (por exemplo, células modificadas) em tais métodos e tratamentos e na preparação de um medicamento a fim de realizar tais métodos terapêuticos. Em algumas modalidades, os métodos são rea- lizados ao administrar as moléculas ou células de ligação ou composi- ções que compreendem as mesmas ao indivíduo que tem, teve ou suspeito de ter a doença ou condição. Em algumas modalidades, os métodos, deste modo, tratam a doença ou condição ou transtorno no indivíduo. Também é fornecido no presente documento o uso de qual- quer uma das composições, tais como composições farmacêuticas fornecidas no presente documento, para o tratamento de uma doença ou transtorno associado às proteínas GPRC5D e/ou BCMA, tal como o uso em um regime de tratamento.
[00625] “Conforme usado no presente documento, "tratamento" (e variações gramaticais do mesmo, tal como "tratar" ou "tratando") refe- re-se à melhora ou redução completa ou parcial de uma doença ou condição ou transtorno ou um sintoma, efeito adverso ou resultado ou fenótipo associado ao mesmo. Os efeitos desejáveis do tratamento incluem, porém sem limitações, prevenção da ocorrência ou recorrên- cia da doença, alívio dos sintomas, diminuição de quaisquer conse- quências patológicas diretas ou indiretas da doença, prevenção de metástase, diminuição da taxa de progressão da doença, melhora ou paliação do estado patológico e remissão ou um prognóstico melhor. Os termos não implicam na cura completa de uma doença ou na elimi- nação completa de qualquer sintoma ou efeito(s) em todos os sinto- mas ou resultados.
[00626] Conforme usado no presente documento, "retardar o de- senvolvimento de uma doença" significa adiar, impedir, diminuir, retar- dar, estabilizar, suprimir e/ou adiar o desenvolvimento da doença (tal como câncer). Este retardo pode ser de vários períodos de tempo, de- pendendo do histórico da doença e/ou do indivíduo a ser tratado. Um retardo suficiente ou significativo pode, na verdade, abranger a pre- venção, onde o indivíduo não desenvolve a doença. Por exemplo, um câncer em estágio avançado, tal como o desenvolvimento de metásta- ses, pode ser retardado.
[00627] "Prevenção", conforme usado no presente documento, in- clui o fornecimento de profilaxia com relação à ocorrência ou recorrên- cia de uma doença em um indivíduo que possa estar predisposto à doença, mas ainda não foi diagnosticado com a doença. Em algumas modalidades, as moléculas e composições fornecidas são usadas para retardar o desenvolvimento de uma doença ou para retardar a pro- gressão de uma doença.
[00628] Conforme usado no presente documento, "suprimir" uma função ou atividade é reduzir a função ou atividade quando comparado com as mesmas condições, exceto quanto uma condição ou parâme- tro de interesse ou, alternativamente, comparado com outra condição. Por exemplo, um anticorpo ou composição ou célula que suprime o crescimento do tumor reduz a taxa de crescimento do tumor compara- do com a taxa de crescimento do tumor na ausência do anticorpo ou composição ou célula.
[00629] “Uma "quantidade eficaz" de um agente, por exemplo, uma formulação farmacêutica, molécula de ligação, anticorpo, células ou composição, no contexto da administração, refere-se a uma quantida- de eficaz, em dosagens/quantidades e durante períodos de tempo ne- cessários, para alcançar um resultado desejado, tal como um resulta- do terapêutico ou profilático.
[00630] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de um agente, por exemplo, uma formulação farmacêutica, molécula de ligação, anti- corpo, células ou composição refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e durante períodos de tempo necessários, para atingir um resultado terapêutico desejado, tal como para o tratamento de uma doença, condição ou transtorno e/ou efeito farmacocinético ou farma- codinâmico do tratamento. A quantidade terapeuticamente eficaz pode variar de acordo com fatores tais como o estado patológico, idade, se- xo e peso do indivíduo e as populações de células administradas. Em algumas modalidades, os métodos fornecidos envolvem a administra- ção de moléculas, anticorpos, células e/ou composições em quantida- des eficazes, por exemplo, quantidades terapeuticamente eficazes.
[00631] Uma "quantidade profilaticamente eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e durante períodos de tempo neces- sários, para atingir o resultado profilático desejado. Normalmente, mas não necessariamente, uma vez que uma dose profilática é usada em indivíduos antes ou em um estágio inicial da doença, a quantidade pro- filaticamente eficaz será menor do que a quantidade terapeuticamente eficaz.
[00632] Conforme usado no presente documento, um "indivíduo" ou uma "paciente" é um mamífero. Em algumas modalidades, um "mamí- fero" inclui seres humanos, primatas não humanos, animais domésti- cos e de fazenda e zoológico, animais esportivos ou animais de esti- mação, tais como cães, cavalos, coelhos, gado, porcos, hamsters, gerbos, camundongos, furões, ratos, gatos, macacos, etc. Em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano.
[00633] “Métodos para administração de células para terapia celular adotiva são conhecidos e podem ser usados em relação aos métodos e composições fornecidos. Por exemplo, métodos de terapia com célu- las T adotivas são descritos, por exemplo, nos Pedido de Pat. Nº 2003/0170238 para Gruenberg et al; Patente Norte-Americana Nº
4.690.915 para Rosenberg; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8 (10): 577-85). Consulte, por exemplo, Themeli et a/. (2013) Nat Bio- technol. 31 (10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438 (1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8 (4):
e61338.
[00634] Dentre as doenças a serem tratadas está qualquer doença ou transtorno associado à proteína GPRC5D ou qualquer doença ou transtorno no qual a proteína GPRC5D seja especificamente expressa e/ou na qual a proteína GPRC5D seja um alvo para tratamento (tam- bém denominada no presente documento como um "doença ou trans- torno associado à proteína GPRC5D"). Os cânceres associados à ex- pressão da proteína GPRC5D incluem doenças hematológicas malig- nas, tal como mieloma, por exemplo, mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, a doença ou transtorno associado à proteína GPRC5D é um transtorno relacionado a células B. Em algumas modalidades, a doença ou transtorno associado à proteína GPRC5D é mieloma múlti- plo ou macroglobulinemia de Waldenstrom. Em determinadas modali- dades, a doença ou transtorno é mieloma múltiplo.
[00635] Dentre as doenças a serem tratadas está qualquer doença ou transtorno associado às proteínas GPRC5D e/ou BCMA ou qual- quer doença ou transtorno no qual as proteínas GPRC5D e/ou BCMA são especificamente expressas e/ou nos quais as proteínas GPRC5D e/ou BCMA sejam um alvo para tratamento (também denominada no presente documento indistintamente como uma "doença ou transtorno associado à proteína GPRC5D" ou uma "doença ou transtorno associ- ado à proteína BCMA"). Os cânceres associados à expressão das pro- teínas GPRC5D e/ou BCMA incluem doenças hematológicas malig- nas, tal como mieloma, por exemplo, mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, a doença ou transtorno associado às proteínas GPRC5D e/ou BCMA é um transtorno relacionado a células B. Em algumas mo- dalidades, a doença ou transtorno associado às proteínas GPRC5D e/ou BCMA é mieloma múltiplo ou macroglobulinemia de Waldens- trom. Em determinadas modalidades, a doença ou transtorno é mielo- ma múltiplo.
[00636] Em algumas modalidades, a doença ou transtorno está as- sociado à expressão das proteínas GPRC5D e BCMA. Em algumas modalidades, suspeita-se que as células da doença expressam ambos os antígenos. Em algumas modalidades, um ou ambos os antígenos são suscetíveis à perda antigênica, em que algumas células da doen- ça podem não expressar mais ambos os antígenos. Assim, em algu- mas modalidades, uma abordagem de direcionamento duplo, que tem como alvo as proteínas GPRC5D e BCMA, pode ser vantajosa.
[00637] Em algumas modalidades, os métodos podem identificar um indivíduo que tem, é suspeito de ter ou está em risco de desenvol- ver uma doença ou transtorno associado à proteína GPRC5D. Portan- to, são fornecidos métodos para identificar indivíduos com doenças ou transtornos associados à expressão da proteína GPRC5D e selecioná- los para tratamento com os receptores recombinantes de ligação à proteína GPRC5D fornecidos (por exemplo, CARs) e/ou células modi- ficadas que expressam os receptores recombinantes.
[00638] Em algumas modalidades, os métodos podem identificar um indivíduo que tem, é suspeito de ter ou está em risco de desenvol- ver uma doença ou transtorno associado às proteínas GPRC5D e/ou BCMA. Assim, são fornecidos métodos para identificar indivíduos com doenças ou transtornos associados à expressão das proteínas GPRCB5D e/ou BCMA e selecioná-los para tratamento com os recepto- res recombinantes de ligação à proteína GPRC5D e ligação à proteína BCMA fornecidos (por exemplo, CARs) e/ou células modificadas que expressam o recombinante receptores.
[00639] Por exemplo, um indivíduo pode ser rastreado quanto à presença de uma doença ou transtorno associado à expressão eleva- da de GPRCB5D, tal como um câncer que expressa a proteína GPRC5D. Em algumas modalidades, os métodos incluem rastrear ou detectar a presença de uma doença associada à proteína GPRC5D,
por exemplo, um tumor. Assim, em alguns aspectos, uma amostra po- de ser obtida de um paciente com suspeita de ter uma doença ou transtorno associado à expressão elevada da proteína GPRC5D e tes- tada quanto ao nível de expressão da proteína GPRC5D. Em alguns aspectos, um indivíduo com teste positivo para uma doença ou trans- torno associado à proteína GPRC5D pode ser selecionado para trata- mento por meio dos presentes métodos e pode receber uma quantida- de terapeuticamente eficaz de um receptor recombinante (por exem- plo, CAR) que compreende uma molécula de ligação à proteína GPRCB5D, células que contêm um receptor recombinante ou uma composição farmacêutica das mesmas, conforme descrito no presente documento.
[00640] Por exemplo, um indivíduo pode ser rastreado quanto à presença de uma doença ou transtorno associado à expressão eleva- da das proteínas GPRC5D e/ou BCMA, tal como um câncer que ex- pressa as proteínas GPRC5D e/ou BCMA. Em algumas modalidades, os métodos incluem a triagem ou detecção da presença de uma doen- ça associada às proteínas GPRC5D e/ou BCMA, por exemplo, um tu- mor. Assim, em alguns aspectos, uma amostra pode ser obtida de um paciente com suspeita de ter uma doença ou transtorno associado à expressão elevada das proteínas GPRC5D e/ou BCMA e testada quanto ao nível de expressão das proteínas GPRC5D e/ou BCMA. Em alguns aspectos, um indivíduo com um teste positivo para uma doença ou transtorno associado às proteínas GPRC5D e/ou BCMA pode ser selecionado para tratamento por meio dos presentes métodos e pode receber uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição que compreende células que expressam um receptor recombinante ( por exemplo, CAR) que compreende uma molécula de ligação à prote- ína GPRC5D e que expressam um receptor recombinante que com- preende uma molécula de ligação à proteína BCMA ou uma composi-
ção farmacêutica das mesmas, conforme descrito no presente docu- mento. Em alguns aspectos, um indivíduo com um teste positivo para uma doença ou transtorno associado às proteínas GPRC5D e/ou BCMA pode ser selecionado para tratamento por meio dos presentes métodos e pode receber uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição que compreende células que expressam um receptor recombinante (por exemplo, CAR) que compreende uma molécula de ligação à proteína GPRC5D e uma molécula de ligação à proteína BCMA, células que expressam um receptor recombinante que com- preende uma molécula de ligação à proteína GPRC5D e um receptor recombinante que compreende uma molécula de ligação à proteína BCMA ou uma composição farmacêutica das mesmas, conforme des- crito no presente documento.
[00641] Em algumas modalidades, o indivíduo tem doença persis- tente ou recidivante, por exemplo, após o tratamento com um anticor- po específico para a proteína GPRC5D e/ou células que expressam um receptor quimérico que tem como alvo a proteína GPRC5D e/ou outra terapia, incluindo quimioterapia, radiação e/ou transplante de cé- lulas-tronco hematopoéticas (Hematopoietic Stem Cell Transplantation, HSCT), por exemplo, HSCs T alogênicas ou HSCTs autóloga. Em al- gumas modalidades, a administração trata efetivamente o indivíduo, apesar do indivíduo ter se tornado resistente à outra terapia que tem como alvo a proteína GPRC5D. Em algumas modalidades, o indivíduo não teve uma recaída, mas foi determinado como estando em risco de recaída, tal como um alto risco de recaída e, assim, o composto ou composição é administrado profilaticamente, por exemplo, para reduzir a probabilidade de ou prevenir a recaída.
[00642] Em algumas modalidades, o indivíduo recebeu uma terapia anterior que é uma terapia com CAR anti-BCMA ou outra terapia que tem como alvo a proteína BCMA. Em algumas modalidades, o indiví-
duo é resistente ou recidivante após a terapia com o CAR anti-BCMA ou outra terapia que tem como alvo a proteína BCMA. Em alguns ca- sos, o indivíduo é resistente ou recidivante em virtude de células tumo- rais negativas para o antígeno BCMA e/ou perda do antígeno/epítopo de BCMA após a terapia.
[00643] Em algumas modalidades, o indivíduo tem doença persis- tente ou recidivante após o tratamento com outra terapia, tal como pa- ra o tratamento com um anticorpo específico para BCMA, receptor que tem como alvo a proteína BCMA e/ou células que expressam um re- ceptor quimérico que tem como alvo a proteína BCMA. Em algumas modalidades, a administração trata efetivamente o indivíduo, apesar de o indivíduo ter se tornado resistente à outra terapia, tal como uma terapia que tem como alvo a proteína BCMA. Em algumas modalida- des, o indivíduo não teve uma recaída, mas foi determinado como es- tando em risco de recaída, tal como um alto risco de recaída e, assim, o composto ou composição é administrado profilaticamente, por exemplo, para reduzir a probabilidade de ou prevenir a recaída.
[00644] Em algumas modalidades, o indivíduo é aquele que é ele- gível para um transplante, tal como é elegível para um transplante de células-tronco hematopoiéticas (HSCT), por exemplo, HSCTs alogêni- cas ou HSCTs autólogas. Em algumas de tais modalidades, o indiví- duo não recebeu anteriormente um transplante, apesar de ser elegível, antes da administração dos receptores recombinantes anti-GPRC5D (por exemplo, CARs), células modificadas que expressam os recepto- res recombinantes (por exemplo, CARs), pluralidade de receptores modificados células que expressam os receptores e/ou composições que compreendem os mesmos, conforme fornecido no presente do- cumento.
[00645] Em algumas modalidades, o indivíduo é aquele que não é elegível para um transplante, tal como não é elegível para um trans-
plante de células-tronco hematopoiéticas (HSCT), por exemplo, HSCTs alogênicas ou HSCTs autólogas. Em algumas de tais modali- dades, tal indivíduo é administrado com os receptores recombinantes anti-GPRC5D (por exemplo, CARs), células modificadas que expres- sam os receptores recombinantes (por exemplo, CARs), pluralidade de células modificadas que expressam os receptores e/ou composições que compreende os mesmos, de acordo com as modalidades forneci- das no presente documento.
[00646] Em algumas modalidades, antes do início da administração das células manipuladas, o indivíduo recebeu uma ou mais terapias anteriores. Em algumas modalidades, o indivíduo recebeu pelo menos 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 ou mais terapias anteriores. Em algumas modalidades, o indivíduo rece- beu pelo menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais terapias anteriores.
[00647] Em alguns aspectos, o indivíduo teve uma recaída após ou era resistente a uma ou mais, por exemplo, cada uma individualmente, de uma ou mais terapias anteriores. Em alguns aspectos, as terapias anteriores incluem tratamento com transplante de células-tronco autó- logas (Autologous Stem Cell Transplant, ASCT); um agente imunomo- dulador; um inibidor de proteassoma; e um anticorpo anti-CD38; a me- nos que o indivíduo não fosse candidato ou contra-indicado a uma ou mais das terapias. Em algumas modalidades, o agente imunomodula- dor é selecionado a partir de talidomida, lenalidomida ou pomalidomi- da. Em algumas modalidades, o inibidor de proteassoma é seleciona- do a partir de bortezomibe, carfilzomibe ou ixazomibe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD38 é ou compreende daratumumabe. Em algumas modalidades, o indivíduo deve ter se submetido a pelo menos 2 ciclos consecutivos de tratamento para cada regime, a menos que a doença progressiva seja a melhor resposta ao regime.
[00648] Em algumas modalidades, o método pode envolver a inclu-
são ou exclusão de determinados indivíduos para terapia com os anti- corpos anti-GPRC5D, receptores recombinantes e/ou células que compreendem tais receptores fornecidos, com base em critérios, diag- nóstico ou indicação específicos. Em algumas modalidades, no mo- mento da administração da dose de células, o indivíduo não tinha his- tórico ativo ou de leucemia de células plasmáticas (Plasma Cell Leu- cemia, PCL). Em algumas modalidades, se o indivíduo tinha um histó- rico ou PCL ativa no momento da administração, o indivíduo pode ser excluído de ser tratado de acordo com os métodos fornecidos. Em al- gumas modalidades, se o indivíduo desenvolver uma PCL, tal como PCL secundária, no momento da administração, o indivíduo pode ser excluído de ser tratado de acordo com os métodos fornecidos. Em al- gumas modalidades, a avaliação dos critérios, diagnóstico ou indica- ção pode ser realizada no momento da triagem dos indivíduos quanto à elegibilidade ou adequabilidade do tratamento de acordo com os mé- todos fornecidos, em várias etapas do regime de tratamento, no mo- mento de receber a terapia de linfodepleção e/ou no momento ou ime- diatamente antes do início da administração das células manipuladas ou composição das mesmas.
[00649] Em algumas modalidades, o método pode envolver a inclu- são ou exclusão de determinados indivíduos para terapia com os anti- corpos anti-GPRC5D e anti-BCMA, receptores recombinantes e/ou cé- lulas que compreendem tais receptores fornecidos, com base em crité- rios, diagnóstico ou indicação específicos. Em algumas modalidades, no momento da administração da dose de células, o indivíduo não ti- nha histórico ativo ou de leucemia de células plasmáticas (PCL). Em algumas modalidades, se o indivíduo tinha um histórico ou PCL ativa no momento da administração, o indivíduo pode ser excluído de ser tratado de acordo com os métodos fornecidos. Em algumas modalida- des, se o indivíduo desenvolve uma PCL, tal como PCL secundária, no momento da administração, o indivíduo pode ser excluído de ser trata- do de acordo com os métodos fornecidos. Em algumas modalidades, a avaliação dos critérios, diagnóstico ou indicação pode ser realizada no momento da triagem dos indivíduos quanto à elegibilidade ou adequa- bilidade ao tratamento de acordo com os métodos fornecidos, em vá- rias etapas do regime de tratamento, no momento de receber a terapia de linfodepleção e/ou no momento ou imediatamente antes do início da administração das células manipuladas ou composição das mes- mas.
[00650] Em algumas modalidades, o tratamento não induz a uma resposta imune pelo indivíduo à terapia e/ou não induz a tal resposta em um grau que impeça o tratamento eficaz da doença ou condição. Em alguns aspectos, o grau de imunogenicidade e/ou resposta enxerto versus hospedeiro é menor do que aquele observado com um trata- mento diferente, mas comparável. Por exemplo, no caso de terapia celular adotiva usando células que expressam CARs que inclui os an- ticorpos anti-GPRC5D fornecidos, o grau de imunogenicidade, em al- gumas modalidades, é reduzido comparado com CARs que incluem um anticorpo diferente que se liga a um epítopo similar, por exemplo, epítopo sobreposto e/ou que compete pela ligação à proteína GPRC5D com o anticorpo, tal como um anticorpo de camundongo ou macaco ou coe- lho ou humanizado.
[00651] Em algumas modalidades, os métodos incluem terapia ce- lular adotiva, em que células geneticamente modificadas que expres- sam os receptores recombinantes fornecidos que compreendem uma molécula de ligação à proteína GPRC5D (por exemplo, CARs que compreendem anticorpo anti-GPRC5D ou fragmento de ligação a antí- geno do mesmo) são administradas aos indivíduos. Tal administração pode promover a ativação das células (por exemplo, ativação de célu- las T) de uma maneira que tem como alvo a proteína GPRC5D, de modo que as células da doença ou transtorno sejam direcionadas para destruição.
[00652] Em algumas modalidades, os métodos incluem terapia ce- lular adotiva, em que células geneticamente modificadas que expres- sam os receptores recombinantes fornecidos que compreendem uma molécula de ligação à proteína GPRC5D (por exemplo, CARs que compreendem um anticorpo anti-GPRC5D ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo) e células geneticamente modificadas que expres- sam os receptores recombinantes fornecidos que compreendem uma molécula de ligação à proteína BCMA (por exemplo, CARs que com- preendem um anticorpo anti-BCMA ou fragmento de ligação a antíge- no do mesmo) são administrados a indivíduos. Em algumas modalida- des, os métodos incluem terapia celular adotiva, em que células gene- ticamente modificadas que expressam os receptores recombinantes fornecidos que compreendem uma molécula de ligação à proteína GPRC5D e uma molécula de ligação à proteína BCMA (por exemplo, CARs que compreendem anticorpos anti-GPRC5D e anti-<BCMA ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo).
[00653] Assim, os métodos e usos fornecidos incluem métodos e usos para terapia celular adotiva. Em algumas modalidades, os méto- dos incluem administrar as células ou uma composição que contêm as células a um indivíduo, tecido ou célula, tal como aquele que tem, está em risco ou é suspeito de ter a doença, condição ou transtorno. Em algumas modalidades, as células, populações e composições são ad- ministradas a um indivíduo com a doença ou condição específica a ser tratada, por exemplo, por meio de terapia com células adotivas, tal como terapia com células T adotivas. Em algumas modalidades, as células ou composições são administradas ao indivíduo, tal como um indivíduo com ou em risco da doença ou condição. Em alguns aspec- tos, assim, os métodos tratam, por exemplo, melhoram, um ou mais sintomas da doença ou condição, tal como diminuem a carga tumoral em um câncer que expressa GPRC5D.
[00654] “Métodos para administração de células para terapia com células adotivas são conhecidos e podem ser usados em relação aos métodos e composições fornecidos. Por exemplo, métodos de terapia com células T adotivas são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente Norte-Americana Nº 2003/0170238 para Gruenberg et al; Patente Norte-Americana Nº 4.690.915 para Rosenberg; Rosen- berg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8 (10): 577-85). Consulte, por exem- plo, Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31 (10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438 (1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8 (4): e61338.
[00655] Em algumas modalidades, a terapia celular, por exemplo, terapia com células adotivas, por exemplo, terapia com células T ado- tivas, é realizada por meio de transferência autóloga, em que as célu- las são isoladas e/ou de outra forma preparadas a partir do indivíduo que deve receber a terapia celular ou a partir de uma amostra derivada de tal indivíduo. Assim, em alguns aspectos, as células são derivadas de um indivíduo, por exemplo, paciente, que precisa de um tratamento e as células, após isolamento e processamento, são administradas ao mesmo indivíduo.
[00656] Em algumas modalidades, a terapia celular, por exemplo, terapia celular adotiva, por exemplo, terapia adotiva com células T, é realizada por meio de transferência alogênica, em que as células são isoladas e/ou preparadas a partir de um indivíduo diferente de um indi- víduo que deve receber ou que, em última análise, recebe a terapia celular, por exemplo, um primeiro indivíduo. Em tais modalidades, as células são administradas a um indivíduo diferente, por exemplo, um segundo indivíduo da mesma espécie. Em algumas modalidades, os primeiro e segundo indivíduos são geneticamente idênticos. Em algu-
mas modalidades, os primeiro e segundo indivíduos são geneticamen- te similares. Em algumas modalidades, o segundo indivíduo expressa a mesma classe HLA ou supertipo que o primeiro indivíduo.
[00657] Em algumas modalidades, o indivíduo a quem as células, populações de células ou composições são administradas é um prima- ta, tal como um ser humano. Em algumas modalidades, o indivíduo a quem as células, populações de células ou composições são adminis- tradas é um primata não humano. Em algumas modalidades, o primata não humano é um macaco (por exemplo, macaco cynomolgus) ou um chimpanzé. O indivíduo pode ser homem ou mulher e pode ter qual- quer idade adequada, incluindo crianças, jovens, adolescentes, adul- tos e indivíduos geriátricos. Em algumas modalidades, o indivíduo é um mamífero não primata, tal como um roedor (por exemplo, camun- dongo, rato, etc.). Em alguns exemplos, o paciente ou indivíduo é um modelo animal validado para doença, terapia celular adotiva e/ou para avaliar resultados tóxicos, tal como síndrome de liberação de citocinas (Cytokine Release Syndrome, CRS).
[00658] Os receptores recombinantes de ligação à proteína GPRC5D (por exemplo, CARs) e células que expressam os mesmos podem ser administrados através de qualquer meio adequado, por exemplo, atra- vés de injeção, por exemplo, injeções intravenosas ou subcutâneas, injeção intraocular, injeção periocular, injeção sub-retiniana, injeção intravítrea, injeção trans-septal, injeção subescleral, injeção intracoroi- dal, injeção intracameral, injeção subconjuntival, injeção subtenoniana, injeção retrobulbar, injeção peribulbar ou distribuição justaescleral pos- terior. Os receptores recombinantes de ligação à proteína GPRC5D, receptores recombinantes de ligação à proteína BOCMA e receptores recombinantes de ligação às proteínas GPRC5D e BCMA (por exem- plo, CARs) e células que expressam os mesmos podem ser adminis- trados através de qualquer meio adequado, por exemplo, através de injeção, por exemplo, intravenosa ou injeções subcutâneas, injeção intraocular, injeção periocular, injeção sub-retiniana, injeção intravítrea, injeção transseptal, injeção subescleral, injeção intracoroidal, injeção intracameral, injeção subconjuntival, injeção subtenoniana, injeção re- trobulbar, injeção peribulbar ou distribuição justaescleral posterior. Em algumas modalidades, eles são administrados através da via parenté- rica, intrapulmonar e intranasal e, se desejado para tratamento local, administração intralesional. As infusões parentéricas incluem adminis- tração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, intra- craniana, intratorácica ou subcutânea. A dosagem e a administração podem depender, em parte, se a administração é breve ou crônica. Vários esquemas de dosagem incluem, porém sem limitações, admi- nistrações únicas ou múltiplas ao longo de vários pontos de tempo, administração de bolus e infusão pulsada.
[00659] Para a prevenção ou tratamento da doença, a dosagem apropriada da molécula de ligação, receptor ou célula recombinante pode depender do tipo de doença a ser tratada, do tipo de molécula de ligação ou receptor recombinante, da gravidade e do curso da doença, se a molécula de ligação ou receptor recombinante é administrado pa- ra fins preventivos ou terapêuticos, terapia anterior, histórico clínico do paciente e resposta ao receptor ou célula recombinante e a critério do médico que faz o atendimento. As composições e moléculas e células são, em algumas modalidades, adequadamente administradas ao pa- ciente em um momento ou ao longo de uma série de tratamentos.
[00660] Em algumas modalidades, a dose e/ou frequência de admi- nistração é/são determinadas com base na eficácia e/ou resposta. Em algumas modalidades, a eficácia é determinada ao avaliar o estado da doença. Métodos exemplificativos para avaliar o estado da doença in- cluem: medição da proteína M em fluidos biológicos, tal como sangue e/ou urina, por meio de eletroforese e imunofixação; quantificação de
SFLC (K e A) no sangue; levantamento esquelético; e imagens por to- mografia por emissão de pósitrons (PET)/tomografia computadorizada (TC) em indivíduos com doença extramedular. Em algumas modalida- des, o estado da doença pode ser avaliado por meio de exame da me- dula óssea.
[00661] Em alguns exemplos, a dose e/ou frequência de adminis- tração são determinadas pela expansão e persistência do receptor ou célula recombinante no sangue e/ou medula óssea. Em algumas mo- dalidades, a dose e/ou frequência de administração são determinadas com base na atividade antitumoral do receptor recombinante ou célula modificada. Em algumas modalidades, a atividade antitumoral é de- terminada pela taxa de resposta global (Overall Response Rate, ORR) e/ou Critérios de Resposta Uniforme do International Myeloma Wor- king Group (IMWG) (consulte Kumar et a/. (2016) Lancet Oncol 17 (8): e328-346). Em algumas modalidades, a resposta é avaliada usando avaliação de doença residual mínima (Minimal Residual Disease, MRD). Em algumas modalidades, a MRD pode ser avaliada por meio de métodos tais como citometria de fluxo e sequenciamento de alto rendimento, por exemplo, sequenciamento profundo. Em algumas mo- dalidades, a resposta é avaliada com base na duração da resposta após administração do receptor ou células recombinantes. Em alguns exemplos, a dose e/ou frequência de administração podem ser deter- minadas com base na toxicidade. Em algumas modalidades, a dose e/ou frequência podem ser determinadas com base na qualidade de vida relacionada à saúde (Health-Related Quality of Life, HRQoL) do indivíduo ao qual o receptor e/ou células recombinantes são adminis- trados. Em algumas modalidades, a dose e/ou frequência de adminis- tração podem ser alteradas, ou seja, aumentadas ou diminuídas com base em qualquer um dos critérios acima.
[00662] Em algumas modalidades, a doença ou transtorno a ser tratado é mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, os critérios de doença mensuráveis para mieloma múltiplo podem incluir (1) proteína M sérica de 1 g/dL ou superior; (2) Proteína M na urina de 200 mg ou mais/24 horas; (3) nível sérico de cadeia leve livre (serum Free Light Chain, sFLC) de 10 mg/dL ou superior, com proporção anormal de K para À. Em alguns casos, a relação da cadeia leve é aceitável apenas para indivíduos sem doença mensurável no soro ou na urina.
[00663] Em algumas modalidades, o indicador de estado de de- sempenho do Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) pode ser usado para avaliar ou selecionar indivíduos para tratamento, por exemplo, indivíduos que tiveram baixo desempenho em terapias ante- riores (consulte, por exemplo, Oken et al. ( 1982) Am J Clin Oncol. 5: 649-655). A Escala ECOG de Estado de Desempenho descreve o ní- vel de funcionalidade de um paciente em termos de sua capacidade de cuidar de si mesmo, atividade diária e capacidade física (por exemplo, caminhar, trabalhar, etc.). Em algumas modalidades, um estado de desempenho ECOG de 0 indica que um indivíduo pode realizar uma atividade normal. Em alguns aspectos, os indivíduos com um estado de desempenho ECOG de 1 exibem alguma restrição na atividade físi- ca, mas o indivíduo é totalmente deambulante. Em alguns aspectos, os pacientes com um estado de desempenho ECOG de 2 são mais de 50 % ambulatoriais. Em alguns casos, o indivíduo com um estado de desempenho ECOG de 2 também pode ser capaz de cuidar de si mesmo; consulte, por exemplo, Sgrensen et a/., (1993) Br J Cancer 67 (4) 773-775. Em algumas modalidades, o indivíduo que deve receber os métodos ou regime de tratamento fornecidos no presente documen- to inclui aqueles com um estado de desempenho ECOG de 0 ou 1.
[00664] Em algumas modalidades, a administração pode tratar o indivíduo, apesar do indivíduo ter se tornado resistente à outra terapia. Em algumas modalidades, quando administrada a indivíduos de acor-
do com as modalidades descritas no presente documento, a dose ou a composição é capaz de atingir a resposta objetiva (Objective Respon- se, OR) em pelo menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % ou 95 % de indivíduos que foram administrados.
Em algumas modalidades, a OR inclui indivíduos que alcançam resposta completa rigorosa (stringent Complete Response, sCR), resposta completa (Complete Response, CR), resposta parcial muito boa (Very Good Partial Response, VGPR), resposta parcial (PR) e resposta mínima (MR). Em algumas modalida- des, quando administrada a indivíduos de acordo com as modalidades descritas no presente documento, a dose ou a composição é capaz de alcançar resposta completa rigorosa (sSCR), resposta completa (CR), resposta parcial muito boa (VGPR) ou resposta parcial (PR) em pelo menos 50 %, 60 %, 70 %, 80 % ou 85 % dos indivíduos que recebe- ram a administração.
Em algumas modalidades, quando administrada a indivíduos de acordo com as modalidades descritas no presente do- cumento, a dose ou a composição é capaz de alcançar resposta com- pleta rigorosa (SCR) ou resposta completa (CR) pelo menos 20 %, 30 %, 40 % 50 %, 60 % ou 70 % dos indivíduos que receberam a admi- nistração.
Em algumas modalidades, doses exemplificativas incluem cerca de 5,0 x 107, 1,5 x 108, 3,0 x 108 ou 4,5 x 108 células T que ex- pressam CAR.
Em algumas modalidades, doses exemplificativas in- cluem cerca de 5,0 x 107, 1,5 x 108, 3,0 x 108 º 4,5 x 108 células T que expressam CAR.
Em algumas modalidades, doses exemplificativas incluem cerca de 1,0 x 107, 1,25 x 107, 1,5 x 107, 2,0 x 107, 2,0 x 107, 2,5 x 107, 3,0 x 107, 3.5 x 107, 4.0 x 107, 4,5x 107, 5,0 x 107, 7,5 x 107, 1,5 x 108, 2,25 x 108, 3,0 x 108, 4,5x 10º ou 6,0 x 10º células T que ex- pressam CAR.
Em alguns aspectos, a resposta particular ao tratamen- to, por exemplo, de acordo com os métodos fornecidos no presente documento, pode ser avaliada com base nos Critérios de Resposta Uniforme do International Myeloma Working Group (IMWG) (consulte
Kumar et al. (2016) Lancet Oncol 17 (8): e328-346). Em algumas mo- dalidades, doses exemplificativas para atingir resultados específicos, tal como OR, incluem cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR.
[00665] Em algumas modalidades, a toxicidade e/ou efeitos colate- rais do tratamento podem ser monitorados e usados para ajustar a do- se e/ou a frequência de administração do receptor recombinante, por exemplo, CAR, células e/ou composições. Por exemplo, eventos ad- versos e anormalidades laboratoriais podem ser monitorados e usados para ajustar a dose e/ou frequência de administração. Os eventos ad- versos incluem reações à infusão, síndrome de liberação de citocinas (SRC), neurotoxicidade, síndrome de ativação macrofágica e síndrome de lise tumoral (Tumor Lysis Syndrome, TLS). Qualquer um destes eventos pode estabelecer toxicidades limitativas da dose e justificar a redução da dose e/ou o término do tratamento. Outros efeitos colate- rais ou eventos adversos que podem ser usados como uma diretriz para estabelecer a dose e/ou frequência de administração incluem eventos adversos não hematológicos os quais incluem, porém sem limitações, fadiga, febre ou neutropenia febril, aumento das transami- nases por um determinado período (por exemplo, menos de ou igual a 2 semanas ou menos de ou igual a 7 dias), dor de cabeça, dor óssea, hipotensão, hipóxia, calafrios, diarreia, náusea/vômito, neurotoxicidade (por exemplo, confusão, afasia, convulsões, convulsões, letargia e/ou estado mental alterado), coagulação intravascular disseminada, outras anormalidades laboratoriais clínicas não hematológicas assintomáti- cas, tais como anormalidades eletrolíticas. Outros efeitos colaterais ou eventos adversos que podem ser usados como uma diretriz para esta- belecer a dose e/ou frequência de administração incluem eventos ad- versos hematológicos incluindo, porém sem limitações, neutropenia, leucopenia, trombocitopenia, animal e/ou aplasia de células B e hipo-
gamaglobinemia.
[00666] Em algumas modalidades, o tratamento de acordo com os métodos fornecidos pode resultar em uma taxa e/ou grau mais baixo de toxicidade, resultado ou sintoma tóxico, perfil promotor de toxicida- de, fator ou propriedade, tal como um sintoma ou resultado associado com ou indicativo de síndrome de liberação de citocinas (CRS) ou neu- rotoxicidade, tal como CRS grave ou neurotoxicidade grave, por exemplo, comparado com a administração de outras terapias.
[00667] Em determinadas modalidades, no contexto de células ge- neticamente modificadas que contêm as moléculas de ligação ou re- ceptores recombinantes, um indivíduo recebe uma faixa de cerca de um milhão a cerca de 100 bilhões de células e/ou tal quantidade de células por quilograma de peso corporal tal como, por exemplo, cerca de 1 milhão a cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, cerca de 5 milhões de células, cerca de 10 milhões, cerca de 12,5 milhões, cerca de 15 milhões, cerca de 20 milhões de células, cerca de 25 milhões de células, cerca de 500 milhões de células, cerca de 1 bilhões de célu- las, cerca de 5 bilhões de células, cerca de 20 bilhões de células, cer- ca de 30 bilhões de células, cerca de 40 bilhões de células ou uma fai- xa definida por quaisquer dois dos valores anteriores), tal como cerca de 10 milhões a cerca de 100 bilhões de células (por exemplo, cerca de 10 milhões de células, cerca de 12,5 milhões de células, cerca de milhões de células, 20 milhões de células, cerca de 25 milhões de células, cerca de 30 milhões de células, cerca de 40 milhões de célu- las, cerca de 50 milhões de células, cerca de 60 milhões de células, cerca de 70 milhões de células, cerca de 80 milhões de células, cerca de 90 milhões células de íons, cerca de 10 bilhões de células, cerca de bilhões de células, cerca de 50 bilhões de células, cerca de 75 bi- lhões de células, cerca de 90 bilhões de células ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores anteriores) e, em alguns casos, cerca de 100 milhões de células a cerca de 50 bilhões de células (por exem- plo, cerca de 120 milhões de células, cerca de 150 milhões de células, cerca de 250 milhões de células, cerca de 300 milhões de células, cer- ca de 350 milhões de células, cerca de 450 milhões de células, cerca de 500 milhões de células, cerca de 600 milhões de células, cerca de 650 milhões células, cerca de 800 milhões de células, cerca de 900 milhões de células, cerca de 1 bilhão de células, cerca de 1,2 bilhão de células, cerca de 3 bilhões de células, cerca de 30 bilhões de células, cerca de 45 bilhões de células ou cerca de 50 bilhões de células) ou qualquer valor entre estas faixas e/ou por quilograma de peso corpo- ral. Novamente, as dosagens podem variar dependendo dos atributos específicos da doença ou transtorno e/ou paciente e/ou outros trata- mentos.
[00668] Em algumas modalidades, os métodos compreendem ad- ministrar uma dose das células manipuladas ou uma composição que compreende uma dose das células manipuladas. Em algumas modali- dades, as células manipuladas ou composições que contêm células manipuladas podem ser usadas em um regime de tratamento, em que o regime de tratamento compreende administrar uma dose das células manipuladas ou uma composição que compreende uma dose das cé- lulas manipuladas. Em algumas modalidades, a dose pode conter, por exemplo, um determinado número ou faixa de células T que expres- sam o receptor recombinante, células T totais ou células mononuclea- res de sangue periférico (PBMCs) totais, tal como qualquer número destas células descritas no presente documento. Em algumas modali- dades, uma composição que contêm uma dose das células pode ser administrada. Em alguns aspectos, o número, quantidade ou propor- ção de células que expressam CAR em uma população de células ou uma composição de células podem ser avaliados pela detecção de um marcador substituto, por exemplo, por meio de citometria de fluxo ou outros meios ou pela detecção de ligação de uma molécula marcada, tal como um antígeno marcado, que pode se ligar especificamente às moléculas de ligação ou receptores fornecidos no presente documen- to.
[00669] Em algumas modalidades, por exemplo, quando o indivíduo é um ser humano, a dose inclui mais de cerca de 1 x 106 células que expressam o receptor recombinante total (por exemplo, CAR), células T ou células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) e menos de cerca de 2 x 10º células que expressam o receptor recombinante total (por exemplo, CAR), células T ou células mononucleares do san- gue periférico (PBMCs), por exemplo, na faixa de cerca de 2,5 x 10º a cerca de 1,2 x 10º de tais células, tais como 2,5 x 107, 5x 107, 1,5 x 108, 3 x 108, 4,5 x 108, 8 x 108 ou 1,2 x 10º no total de tais células ou o intervalo entre quaisquer dois dos valores anteriores. Em algumas mo- dalidades, por exemplo, quando o indivíduo é um humano, a dose in- clui mais de cerca de 1 x 10º células que expressam o receptor re- combinante total (por exemplo, CAR), células T ou células mononucle- ares do sangue periférico (PBMCs) e menos de cerca de 2 x 10º célu- las que expressam o receptor recombinante total (por exemplo, CAR), células T ou por células mononucleares de sangue periférico (PBMCs), por exemplo, na faixa de cerca de cerca de 2,5 x 10º a cerca de 1,2 x 10º de tais células, tal como 2,5 x 107, 5x 107, 1,5 x 108, 3 x 108, 4,5 x 108, 8 x 108 ou 1,2 x 10º no total de tais células ou uma faixa entre quaisquer dois dos valores anteriores. Em algumas modalidades, por exemplo, quando o indivíduo é um ser humano, a dose inclui mais de cerca de 1 x 10º células que expressam o receptor recombinante total (por exemplo, CAR), células T ou células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) e menos de cerca de 2 x 10º células que expres- sam o receptor recombinante total (por exemplo, CAR), células T ou células mononucleares de sangue periférico (PBMCs), por exemplo,
na faixa de cerca de 1,0 x 107 a cerca de 6,5 x 10º de tais células, cer- ca de 1,5 x 107 a cerca de 6,0 x 10º de tais células, cerca de 1,5 x 107 a cerca de 6,5 x 10º de tais células, cerca de 2,5 x 107 a cerca de 6,0 x 10º de tais células ou cerca de cerca de 5,0 x 107 a cerca de 6,0 x 10º de tais células.
[00670] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente modificadas compreende entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) totais e em ou cerca de 1,2 x 10º células T que ex- pressam CAR, células T totais ou PBMCs totais, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 4,5 x 108 células T que expressam CAR, células T totais ou células mononuclea- res de sangue periférico (PBMCs) totais, entre em ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam CAR e em ou cerca de 3,0 x 10º células T que expressam CAR, células T totais ou PBMCs totais, cada um in- clusive. Em algumas modalidades, o número é com referência ao nú- mero total de células CD3* ou CD8*, em alguns casos também células que expressam CAR (por exemplo, CAR*). Em algumas modalidades, a dose compreende um número de células a partir de ou de cerca de 2,5 x 107 a ou a cerca de 1,2 x 10º células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8”, a partir de ou cerca de 5,0 x 107 a cerca de 4,5 x 108 células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8* ou a partir de ou cerca de 1,5 x 10º a ou cerca de 3,0 x 10º células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8*, cada um inclusive.
[00671] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente manipuladas compreende entre em ou cerca de 1,0 x 10” células T que expressam CAR, células T totais ou células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) totais e em ou cerca de 1,2 x 10º células T que expressam CAR, células T totais ou PBMCs totais, entre em ou cerca de 2,0 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 4,5 x 10º células T que expressam CAR, células T totais ou células mono- nucleares de sangue periférico (PBMCs) totais, entre em ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam CAR e em ou cerca de 3,0 x 108 células T que expressam CAR, células T totais ou PBMCs totais, cada um inclusive.
Em algumas modalidades, o número é com referência ao número total de células T CD3* ou CD8*, em alguns casos também células que expressam CAR (por exemplo, CAR*). Em algumas moda- lidades, a dose compreende um número de células a partir de ou a partir de cerca de 1,0 x 107 a cerca de 1,2 x 10º células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8”, a partir de ou a partir de cerca de 1,5 x 107 a cerca de 1,2 x 10º células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8”, a partir de ou a partir de cerca de 2,5 x 107 a cerca de 1,2 x 10º células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8*, a partir de ou a partir de cerca de 1,5 x 107 a cerca de 8,0 x 10º células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8*, a partir de ou a partir de cerca de 2,5 x 107 a cerca de 8,0 x 108 células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8*, a partir de ou a partir de cerca de 1,5 x 107 a cerca de 6,0 x 10º células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8*, a partir de ou a partir de cerca de 2,5 x 107 a cerca de 6,0 x 108 células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8*, a partir de ou a partir de cerca de 5,0 x 107 a cerca de 6,0 x 108 células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8*, a partir de ou a partir de cerca de 5,0 x 107 a cerca de 4,5 x 10º células T CD3* ou CD8* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8*ou a partir de ou a partir de cerca de 1,5 x 10º a cerca de 3,0 x 10º células T CD3* ou CD8'* totais ou células que expressam CAR CD3* ou CD8”*, cada um inclusive.
[00672] Em algumas modalidades, por exemplo, onde o indivíduo é um ser humano, a dose de células T CD8*, incluindo a dose que inclui células T CD4* e CDB8*, inclui entre em ou cerca de 1 x 10º e em ou cerca de 2 x 10º de receptor recombinante total (por exemplo, células CD8* que expressam o CAR), por exemplo, na faixa de em ou cerca de 5 x 107 a em ou cerca de 4,5 x 10º de tais células, tal como em ou cerca de 2,5 x 107, em ou cerca de 5 x 107, em ou cerca de 1,5 x 108, em ou cerca de 3 x 108, em ou cerca de 4,5 x 108, em ou cerca de 8 x 108 ou em ou cerca de 1,2 x 10º total no total de tais células ou uma faixa entre quaisquer dois dos anteriores valores.
[00673] Em algumas modalidades, por exemplo, onde o indivíduo é um ser humano, as células T CD8* da dose, incluindo uma dose que inclui células T CD4* e CD8*, inclui entre cerca de 1 x 10º e cerca de 2 x 10º de receptor recombinante total (por exemplo, células CD8* que expressam o CAR), por exemplo, na faixa de em ou cerca de 1 x 10º a em ou cerca de 4,5 x 10º de tais células , tal como em ou cerca de 1,0 x 107, em ou cerca de 1,25 x 107, em ou cerca de 1,5 x 107, em ou cer- ca de 2,0 x 107, em ou cerca de 2,5 x 107, em ou cerca de 5 x 107, em ou cerca de 7,5 x 107, em ou cerca de 1,5 x 108, em ou cerca de 3 x 108, em ou cerca de 4,5 x 108, em ou cerca de 6,0 x 108, em ou cerca de 8 x 108 ou em ou cerca de 1,2 x 10º no total de tais células ou uma faixa entre quaisquer dois dos valores anteriores.
[00674] Em algumas modalidades, a dose de células, por exemplo, células T que expressam o receptor recombinante, é administrada ao indivíduo como uma dose única ou é administrada apenas uma vez dentro de um período de duas semanas, um mês, três meses, seis meses, | ano ou mais. Em algumas modalidades, o paciente recebe doses múltiplas e cada uma das doses ou a dose total pode estar den- tro de qualquer um dos valores anteriores.
[00675] Em algumas modalidades, as células manipuladas para administração ou composição de células manipuladas para adminis- tração exibem propriedades indicativas ou consistentes com a saúde celular. Em algumas modalidades, em ou cerca de ou pelo menos em ou cerca de 70, 75, 80, 85 ou 90 % das células CAR* de tal dose exi- bem uma ou mais propriedades ou fenótipos indicativos de saúde celu- lar ou célula CAR biologicamente ativa, tal como ausência de expres- são de um marcador apoptótico.
[00676] Em modalidades particulares, o fenótipo é ou inclui uma ausência de apoptose e/ou uma indicação de que a célula está pas- sando pelo processo apoptótico. A apoptose é um processo de morte celular programada que inclui uma série de eventos morfológicos e bioquímicos estereotipados que levam a variações celulares caracte- rísticas e morte, incluindo formação de bolha, retração celular, frag- mentação nuclear, condensação da cromatina, fragmentação do DNA cromossômico e decadência global do MRNA. Em alguns aspectos, os estágios iniciais da apoptose podem ser indicados pela ativação de determinadas caspases, por exemplo, 2, 8, 9 e 10. Em alguns aspec- tos, estágios intermediários a tardios da apoptose são caracterizados por perda adicional de integridade da membrana, condensação da cromatina, e a fragmentação do DNA inclui eventos bioquímicos, tal como ativação das caspases 3, 6 e 7.
[00677] Em modalidades particulares, o fenótipo é a expressão ne- gativa de um ou mais fatores associados à morte celular programada, por exemplo, fatores pró-apoptóticos conhecidos por iniciar a apopto- se, por exemplo, membros da via do receptor de morte, membros ati- vados da via mitocondrial (intrínseca), tal como membros da família Bcl-2, por exemplo, Bax, Bad e Bid e caspases. Em determinadas mo- dalidades, o fenótipo é a ausência de um indicador, por exemplo, uma molécula de anexina V ou coloração de TUNEL que se ligará preferen- cialmente a células em apoptose quando incubado ou em contato com uma composição celular. Em algumas modalidades, o fenótipo é ou inclui a expressão de um ou mais marcadores que são indicativos de um estado apoptótico na célula. Em algumas modalidades, o fenótipo é a falta de expressão e/ou ativação de uma caspase, tal como cas- pase 3. Em alguns aspectos, a ativação de caspase-3 é indicativa de um aumento ou ressurgimento de apoptose. Em determinadas modali- dades, a ativação da caspase pode ser detectada por meio de méto- dos conhecidos. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga especificamente a uma caspase ativada (ou seja, se liga especifica- mente ao polipeptídeo clivado) pode ser usado para detectar a ativa- ção de caspase. Em modalidades particulares, o fenótipo é ou inclui caspase 3- ativa. Em algumas modalidades, o marcador de apoptose é um reagente que detecta uma característica em uma célula que está associada à apoptose. Em determinadas modalidades, o reagente é uma molécula de anexina V.
[00678] Em algumas modalidades, as composições que contêm as células manipuladas para administração contêm um determinado nú- mero ou quantidade de células que exibem fenótipos indicativos ou consistentes com a saúde celular. Em algumas modalidades, menos de cerca de 25 %, 20 %, 15 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6%, 5%, 4%, 3 %, 2 % ou 1 % das células T que expressam CAR na dose de células T manipuladas expressam um marcador de apoptose, opcionalmente anexina V ou Caspase 3. Em algumas modalidades, menos de 5 %, 4 %, 3 %, 2 % ou 1 % das células T que expressam CAR na dose de células T modificadas expressam Anexina V ou Caspase 3 ativa.
[00679] Em algumas modalidades, as células administradas são células imunes manipuladas para expressar o receptor recombinante de ligação à proteína GPRC5D, por exemplo, CAR. Em algumas mo- dalidades, as células imunes são células T. Em algumas modalidades, as células administradas são células T CD4*. Em algumas modalida-
des, as células administradas são células T CD8*. Em algumas moda- lidades, as células administradas são uma combinação de células T CD4* e CD8*, tais como células T CAR. Em alguns exemplos, a pro- porção de células CD4* para células CD8* (CD4: CD8) é 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1 :2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:91, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1.
[00680] Em algumas modalidades, as células, moléculas de ligação ou receptores recombinantes são administrados como parte de um tra- tamento combinado, tal como simultânea ou sequencialmente, em qualquer ordem, com outra intervenção terapêutica, tal como outro an- ticorpo ou célula manipulada ou receptor ou agente, tal como um agente citotóxico ou terapêutico.
[00681] As células, moléculas de ligação e/ou receptores recombi- nantes, em algumas modalidades, são coadministrados com um ou mais agentes terapêuticos adicionais ou conjuntamente com outra in- tervenção terapêutica, simultânea ou sequencialmente em qualquer ordem. Em alguns contextos, as células são coadministradas com ou- tra terapia suficientemente próxima no tempo, de modo que as popula- ções de células aumentem o efeito de um ou mais agentes terapêuti- cos adicionais ou vice-versa. Em algumas modalidades, as células, moléculas de ligação e/ou receptores recombinantes são administra- dos antes de um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Em algumas modalidades, as células, moléculas de ligação e/ou receptores recom- binantes são administrados após um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
[00682] Em algumas modalidades, o indivíduo pode receber uma terapia de ponte após a leucaferese e antes de quimioterapia de linfo- depleção. Um médico que faz o atendimento pode determinar se a te- rapia de ponte é necessária, por exemplo, para o controle da doença, durante a fabricação da composição ou células fornecidas. Em algu-
mas modalidades, as terapias de ponte não incluem agentes biológi- cos, tais como anticorpos (por exemplo, daratumumabe). Em algumas modalidades, as terapias de ponte são interrompidas antes do início da linfodepleção. Em algumas modalidades, as terapias de ponte são interrompidas 1 dia, 2 dias 3 dias, 4 dias, 5 dias, 7 dias, 10 dias, 14 dias, 21 dias, 28 dias, 45 dias ou 60 dias antes da linfodepleção.
[00683] Uma vez que as células são administradas a um mamífero (por exemplo, um ser humano), a atividade biológica das populações de células manipuladas e/ou anticorpos, em alguns aspectos, é medi- da por meio de qualquer um de uma série de métodos conhecidos. Os parâmetros a serem avaliados incluem a ligação específica de uma célula T manipulada ou natural ou outra célula imune ao antígeno, in vivo, por exemplo, por meio de imagiologia ou ex vivo, por exemplo, através de ELISA ou citometria de fluxo. Em determinadas modalida- des, a capacidade das células modificadas de destruir células alvo po- de ser medida usando qualquer método adequado conhecido na técni- ca, tal como ensaios de citotoxicidade descritos, por exemplo, em Ko- chenderfer et al., J. Imnmunotherapy, 32 (7): 689-702 (2009) e Herman et al., J. Immunological Methods, 285 (1): 25-40 (2004). Em determi- nadas modalidades, a atividade biológica das células também pode ser medida por meio do ensaio de expressão e/ou secreção de deter- minadas citocinas, tais como CD107a, IFNy, IL-2 e TNF. Em alguns aspectos, a atividade biológica é medida ao avaliar o resultado clínico, tal como a redução no fardo ou carga tumoral.
[00684] Em determinadas modalidades, as células manipuladas são modificadas de várias maneiras, de modo que sua eficácia terapêutica ou profilática seja aumentada. Por exemplo, o CAR ou TCR manipula- do expresso pela população, em algumas modalidades, são conjuga- dos direta ou indiretamente por meio de um ligante a uma porção para terapia-alvo. A prática de conjugação de compostos, por exemplo, o
CAR ou TCR, para ter como alvo determinadas porções é conhecida na técnica. Consulte, por exemplo, Wadwa et al., J. Drug Targeting, 3 (2): 111 (1995) e Patente Norte-Americana Nº 5.087.616. B. Terapia Combinada
[00685] “Também são fornecidos métodos de terapia combinada que incluem administração e usos, tais como usos terapêuticos e profiláti- cos, dos receptores recombinantes de ligação à proteína GPRC5D (por exemplo, CARs), células modificadas que expressam os recepto- res recombinantes (por exemplo, CARs), a pluralidade de células mo- dificadas que expressam os receptores e/ou composições que com- preendem os mesmos. Também são fornecidos métodos de terapia combinada que incluem administração e usos, tais como usos terapêu- ticos e profiláticos, dos receptores recombinantes de ligação às proteí- nas GPRC5D e BCMA (por exemplo, CARs), células modificadas que expressam os receptores recombinantes (por exemplo, CARs), a plu- ralidade de células modificadas que expressam os receptores e/ou composições que compreendem os mesmos.
[00686] Em algumas modalidades, o receptor recombinante de liga- ção à proteína GPRC5D (por exemplo, CAR) e/ou células modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recombinan- te) descritas no presente documento são administrados como parte de um tratamento combinado ou terapia combinada, tal como simultane- amente com, sequencialmente com ou intermitentemente com, em qualquer ordem, uma ou mais intervenções terapêuticas adicionais. Em algumas modalidades, uma ou mais intervenções terapêuticas adi- cionais incluem, por exemplo, um anticorpo, uma célula modificada, um receptor e/ou um agente, tal como uma célula que expressa um receptor recombinante e/ou agente citotóxico ou terapêutico, por exemplo, um agente quimioterapêutico. Em algumas modalidades, a terapia combinada inclui administrar um ou mais agentes, terapias e/ou tratamentos adicionais, por exemplo, qualquer um dos agentes, terapia e/ou tratamentos adicionais descritos no presente documento. Em algumas modalidades, a terapia combinada inclui administrar um ou mais agentes adicionais para tratamento ou terapia, tais como um agente imunomodulador, inibidor do ponto de verificação imune, via de adenosina ou agonista ou antagonista do receptor de adenosina e ini- bidores de quinase. Em algumas modalidades, o tratamento combina- do ou terapia combinada inclui um tratamento adicional, tal como um tratamento cirúrgico, transplante e/ou radioterapia. Também são forne- cidos métodos de tratamento combinado ou terapia combinada que inclui receptores recombinantes de ligação à proteína GPRC5D (por exemplo, CARs), células e/ou composições descritas no presente do- cumento e uma ou mais intervenções terapêuticas adicionais.
[00687] Em algumas modalidades, o receptor recombinante de liga- ção à proteína GPRC5D, o receptor recombinante de ligação à proteí- na BCMA, receptor recombinante de ligação às proteínas GPRC5D e BCMA (por exemplo, CAR) e/ou células modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recombinante) descritos no presente documento são administrados como parte de um tratamento combinado ou terapia combinada, tal como simultânea, sequencial ou intermitentemente, em qualquer ordem, com uma ou mais interven- ções terapêuticas adicionais. Em algumas modalidades, uma ou mais intervenções terapêuticas adicionais incluem, por exemplo, um anti- corpo, uma célula modificada, um receptor e/ou um agente, tal como uma célula que expressa um receptor recombinante e/ou agente cito- tóxico ou terapêutico, por exemplo, um agente quimioterapêutico. Em algumas modalidades, a terapia combinada inclui administrar um ou mais agentes, terapias e/ou tratamentos adicionais, por exemplo, qualquer um dos agentes, terapia e/ou tratamentos adicionais descri- tos no presente documento. Em algumas modalidades, a terapia com-
binada inclui administrar um ou mais agentes adicionais para o trata- mento ou terapia, tal como um agente imunomodulador, inibidor do ponto de verificação imune, via de adenosina ou agonista ou antago- nista do receptor de adenosina e inibidores de quinase. Em algumas modalidades, o tratamento combinado ou terapia combinada inclui um tratamento adicional, tal como um tratamento cirúrgico, transplante e/ou radioterapia. Também são fornecidos métodos de tratamento combinado ou terapia combinada que inclui receptores recombinantes de ligação à proteína GPRC5D, receptores recombinantes de ligação à proteína BCMA, receptores recombinantes de ligação às proteínas GPRC5D e BCMA (por exemplo, CARs), células e/ou composições descritas no presente documento e uma ou mais intervenções terapêu- ticas adicionais.
[00688] Em algumas modalidades, o agente adicional para trata- mento combinado ou terapia combinada aumenta, aumenta e/ou pro- move a eficácia e/ou segurança do efeito terapêutico de moléculas de ligação, receptores recombinantes, células e/ou composições. Em al- gumas modalidades, o agente adicional aumenta ou melhora a eficá- cia, sobrevida ou persistência das células administradas, por exemplo, células que expressam a molécula de ligação ou um receptor recombi- nante. Em algumas modalidades, o agente adicional é selecionado a partir de um inibidor de proteína fosfatase, um inibidor de quinase, uma citocina, um imunomodulador ou um agente que diminui o nível ou atividade de uma célula T reguladora (Treg). Em algumas modali- dades, o agente adicional aumenta a segurança, em virtude da redu- ção ou melhora dos efeitos adversos das moléculas de ligação, recep- tores, células e/ou composições recombinantes administradas. Em al- gumas modalidades, o agente adicional pode tratar a mesma doença, condição ou comorbidade. Em algumas modalidades, o agente adicio- nal pode melhorar, reduzir ou eliminar uma ou mais toxicidades, efei-
tos adversos ou efeitos colaterais que estão associados à administra- ção dos receptores, células e/ou composições recombinantes, por exemplo, células que expressam CAR.
[00689] Em algumas modalidades, uma medicação para o controle da dor, tal como paracetamol ou anti-histamínico, tal como difenidra- mina, pode ser administrada antes, durante ou após a administração do receptor, célula ou composição recombinante fornecidos no presen- te documento para melhorar ou reduzir ou eliminar efeitos colaterais menores associado ao tratamento. Em alguns exemplos, transfusões de glóbulos vermelhos e plaquetas e/ou fatores estimuladores de colô- nia podem ser administrados para reduzir ou eliminar uma ou mais to- xicidades, efeitos adversos ou efeitos colaterais que estão associados à administração dos receptores, células e/ou composições recombi- nantes, por exemplo, células que expressam CAR. Em algumas moda- lidades, agentes anti-infecciosos profiláticos ou empíricos (por exem- plo, trimetoprim/sulfametoxazol para a profilaxia de pneumocistite por pneumonia [PCP], antibióticos de amplo espectro, antifúngicos ou agentes antivirais para neutropenia febril) podem ser administrados para tratar os efeitos colaterais resultantes do tratamento. Em alguns exemplos, quando necessário, a profilaxia pode ser fornecida para tra- tar linfopenia e/ou neutropenia que ocorre como um resultado do tra- tamento.
[00690] Em algumas modalidades, a terapia, tratamento ou agente adicional inclui quimioterapia, radioterapia, cirurgia, transplante, terapia celular adotiva, anticorpos, agentes citotóxicos, agentes quimiotera- pêuticos, citocinas, agentes inibidores de crescimento, agentes anti- hormonais, inibidores de quinase, agentes antiangiogênicos, cardio- protetores, agentes imunoestimuladores, agentes imunossupressores, inibidores do ponto de verificação imune, antibióticos, inibidores de angiogênese, moduladores metabólicos ou outros agentes terapêuti-
cos ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma proteína, um peptídeo, um ácido nucleico, um agente de pequena molécula, uma célula, uma toxina, um lipídio, um carboidrato ou combinações dos mesmos ou qualquer outro tipo de agente terapêutico, por exemplo, radiação. Em algumas modalidades, a terapia, agente ou tratamento adicional inclui cirurgia, quimioterapia, radioterapia, transplante, administração de células que expressam um receptor recombinante, por exemplo, CAR, inibidor de quinase, inibidor do ponto de verificação imune, inibidor da via MTOR, agentes imunos- supressores, imunomoduladores, anticorpos, agentes imunoablativos, anticorpos e/ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, conju- gados de anticorpos, outras terapias de anticorpos, citotoxinas, este- roides, citocinas, vacinas peptídicas, terapia hormonal, antimetabólitos, moduladores metabólicos, fármacos que inibem a fosfatase calcineuri- na dependente de cálcio ou a quinase p70S6 FK506) ou inibir de qui- nase p70S6, agentes alquilantes, antraciclinas, vinca alcaloides, inibi- dores de proteassoma, agonistas de GITR, inibidores de proteína tiro- sina fosfatase, inibidores de proteína quinase, um vírus oncolítico e/ou outros tipos de imunoterapia. Em algumas modalidades, o agente ou tratamento adicional é transplante de medula óssea, terapia ablativa de células T usando agentes quimioterapêuticos, tal como fludarabina, radioterapia de feixe externo (External-beam Radiation Therapy, XRT), ciclofosfamida e/ou terapia com anticorpos.
[00691] Em algumas modalidades, as células, receptores e/ou composições recombinantes de ligação à proteína GPRC5D, por exemplo, células que expressam CAR, são administradas em combi- nação com outras células modificadas, por exemplo, outras células que expressam CAR. Em algumas modalidades, as células, receptores e/ou composições recombinantes de ligação à proteína GPRC5D, por exemplo, células que expressam CAR, são administradas em combi-
nação com um agente adicional. Em algumas modalidades, as células, receptores e/ou composições recombinantes de ligação à proteína GPRCB5D, por exemplo, células que expressam CAR, são administra- das em combinação com outras células modificadas, por exemplo, ou- tras células que expressam CAR, bem como em combinação com um agente adicional. Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de quinase, por exemplo, um inibidor de tirosina quinase de Bruton (Btk), por exemplo, ibrutinibe. Em algumas modalidades, o agente adicional é um antagonista ou agonista do receptor de adeno- sina. Em algumas modalidades, o agente adicional é um imunomodu- lador, tal como talidomida ou um derivado de talidomida (por exemplo, lenalidomida). Em algumas modalidades, o agente adicional é um ini- bidor de gama secretase, tal como um inibidor de gama secretase que inibe ou reduz a clivagem intramembrana de um alvo de uma gama secretase, por exemplo, GPRC5D, em uma célula (tal como uma célu- la tumoral/cancerosa). Em algumas modalidades, a terapia, agente ou tratamento adicional é um agente citotóxico ou quimioterapêutico, uma terapia biológica (por exemplo, anticorpo, por exemplo, anticorpo mo- noclonal ou terapia celular) ou um inibidor (por exemplo, inibidor de quinase).
[00692] Em algumas modalidades, as células, receptores recombi- nantes de ligação à proteína GPRC5D, receptores recombinantes de ligação à proteína BCMA, receptores recombinantes de ligação às pro- teínas GPRC5D e BCMA e/ou composições, por exemplo, células que expressam CAR, são administradas em combinação com outras célu- las manipuladas células, por exemplo, outras células que expressam CAR. Em algumas modalidades, as células, receptores recombinantes de ligação à proteína GPRC5D, receptores recombinantes de ligação à proteína BCMA, receptores recombinantes de ligação às proteínas GPRC5D e BCMA e/ou composições, por exemplo, células que ex-
pressam CAR, são administradas em combinação com um agente adi- cional. Em algumas modalidades, as células, receptores recombinan- tes de ligação à proteína GPRC5D, receptores recombinantes de liga- ção à proteína BCMA, receptores recombinantes de ligação às proteí- nas GPRC5D e BCMA e/ou composições, por exemplo, células que expressam CAR, são administradas em combinação com outras célu- las modificadas, por exemplo, outras células que expressam CAR, bem como em combinação com um agente adicional. Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de quinase, por exem- plo, um inibidor de tirosina quinase de Bruton (Btk), por exemplo, ibru- tinibe. Em algumas modalidades, o agente adicional é um antagonista ou agonista do receptor de adenosina. Em algumas modalidades, o agente adicional é um imunomodulador, tal como talidomida ou um derivado da talidomida (por exemplo, lenalidomida). Em algumas mo- dalidades, o agente adicional é um inibidor de gama secretase, tal co- mo um inibidor de gama secretase que inibe ou reduz a clivagem in- tramembrana de um alvo de gama secretase, por exemplo, GPRC5D e/ou BCMA, em uma célula (tal como uma célula tumoral/cancerosa). Em algumas modalidades, a terapia, agente ou tratamento adicional é um agente citotóxico ou quimioterapêutico, uma terapia biológica (por exemplo, anticorpo, por exemplo, anticorpo monoclional ou terapia ce- lular) ou um inibidor (por exemplo, inibidor de quinase).
[00693] Em algumas modalidades, o agente adicional é um agente quimioterapêutico. Os agentes quimioterapêuticos exemplificativos in- cluem uma antraciclina (por exemplo, doxorrubicina, tal como doxorru- bicina lipossômica); um vinca alcaloide (por exemplo, vinblastina, vin- cristina, vindesina, vinorelbina); um agente alquilante (por exemplo, ciclofosfamida, decarbazina, melfalano, ifosfamida, temozolomida); um anticorpo de célula imune (por exemplo, alemtuzumabe, gemtuzuma- be, rituximabe, tositumomabe); um antimetabólito (incluindo, por exemplo, antagonistas de ácido fólico, análogos de pirimidina, análo- gos de purina e inibidores de adenosina desaminase, tal como fluda- rabina); um agonista da proteína relacionada ao TNFR induzida por glucocorticoides (GITR); um inibidor de proteassoma (por exemplo, aclacinomicina A, gliotoxina ou bortezomibe); um imunomodulador, tal como talidomida ou um derivado de talidomida (por exemplo, lenali- domida).
[00694] Em algumas modalidades, a terapia ou tratamento adicional é terapia celular, por exemplo, terapia celular adotiva. Em algumas modalidades, a terapia adicional inclui administrar células modificadas, por exemplo, células adicionais que expressam CAR. Em algumas modalidades, a célula manipulada adicional é uma célula que expressa CAR que expressa o mesmo ou um receptor recombinante diferente das células manipuladas fornecidas no presente documento, por exemplo, células que expressam CAR anti-GPRC5D. Em algumas modalidades, o receptor recombinante, por exemplo, CAR, expresso na célula adicional modificada, reconhece um antígeno e/ou epítopo diferente. Em algumas modalidades, o receptor recombinante, por exemplo, CAR, expresso na célula manipulada adicional, reconhece um epítopo diferente do mesmo antígeno que os receptores recombi- nantes descritos no presente documento, por exemplo, GPRC5D. Em algumas modalidades, receptor recombinante, por exemplo, CAR, ex- presso na célula adicional modificada, reconhece um antígeno diferen- te, por exemplo, um antígeno tumoral ou combinação de antígenos diferentes. Por exemplo, em algumas modalidades, o receptor recom- binante, por exemplo, CAR, expresso na célula adicional modificada, tem como alvo células cancerosas que expressam marcadores de |i- nhagem inicial, por exemplo, células-tronco cancerosas, enquanto que outras células que expressam CAR têm como alvo células cancerosas que expressam marcadores de linhagem posterior. Em tais modalida-
des, a célula manipulada adicional é administrada antes, simultanea- mente ou após a administração (por exemplo, infusão) das células que expressam CAR descritas no presente documento. Em algumas moda- lidades, a célula manipulada adicional expressa um CAR alogênico.
[00695] Em algumas modalidades, as configurações de uma ou mais das moléculas CAR compreendem um domínio de sinalização intracelular primário e dois ou mais, por exemplo, 2, 3, 4 ou 5 ou mais, domínios de sinalização coestimuladores. Em algumas modalidades, uma ou mais das moléculas de CAR podem ter o mesmo ou um domí- nio de sinalização intracelular primário diferente, o mesmo ou diferen- tes domínios de sinalização coestimuladores ou o mesmo número ou um número diferente de domínios de sinalização coestimuladores. Em algumas modalidades, uma ou mais das moléculas CAR podem ser configuradas como um CAR dividido, em que uma das moléculas de CAR compreende um domínio de ligação a antígeno e um domínio co- estimulador (por exemplo, 4-1BB), enquanto que a outra molécula de CAR compreende um domínio de ligação a antígeno e um domínio de sinalização intracelular primário (por exemplo, CD3 zeta).
[00696] Em algumas modalidades, o agente adicional é qualquer uma das células manipuladas para expressar uma ou mais das molé- culas de ligação anti-GPRC5D e/ou células manipuladas para expres- sar moléculas de ligação adicionais, por exemplo, receptores recombi- nantes, por exemplo, CAR, que têm como alvo um antígeno diferente. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui qualquer uma das células ou pluralidade de células descritas no presente documento, por exemplo, na Seção |.C. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma célula manipulada para expressar um receptor recombinante, por exemplo, CAR, que tem como alvo um epítopo e/ou antígeno dife- rente, por exemplo, um antígeno diferente associado a uma doença ou condição. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma célula manipulada para expressar um receptor recombinante, por exemplo, CAR, que tem como alvo um segundo ou antígeno adicional expresso em mieloma múltiplo, por exemplo, CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TA- CI e/ou FCRH5.
[00697] Em algumas modalidades, o agente adicional é um agente imunomodulador. Em algumas modalidades, a terapia combinada in- clui um agente imunomodulador que pode estimular, amplificar e/ou de outra forma aumentar uma resposta imune antitumoral, por exemplo, resposta imune antitumoral das células manipuladas administradas, tal como inibir a sinalização imunossupressora ou aumentar a sinalização imunoestimulante. Em algumas modalidades, o agente imunomodula- dor é um peptídeo, proteína ou uma pequena molécula. Em algumas modalidades, a proteína pode ser uma proteína de fusão ou uma pro- teína recombinante. Em algumas modalidades, o agente imunomodu- lador se liga a um alvo imune, tal como um receptor na superfície celu- lar expresso em células imunes, tais como células T, células B ou célu- las apresentadoras de antígeno. Por exemplo, em algumas modalida- des, o agente imunomodulador é um anticorpo ou fragmento de anti- corpo de ligação a antígeno, uma proteína de fusão, uma pequena mo- lécula ou um polipeptídeo. Em algumas modalidades, os receptores, células e/ou composições recombinantes são administrados em com- binação com um agente adicional que é um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo, tal como um anticorpo monoclonal.
[00698] Em algumas modalidades, o agente imunomodulador blo- queia, inibe ou neutraliza um componente da via do ponto de verifica- ção imune. O sistema imune possui múltiplas vias inibidoras que estão envolvidas na manutenção da autotolerância e na modulação das res- postas imunes. Os tumores podem usar determinadas vias do ponto de verificação imune como um mecanismo principal de resistência imune, particularmente contra células T que são específicas para antí-
genos tumorais (Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12: 252-264), por exemplo, células modificadas, tais como células que expressam CAR. Uma vez que muitos destes pontos de verificação imune são ini- ciados por interações ligante-receptor, eles podem ser facilmente blo- queados por anticorpos contra os ligantes e/ou seus receptores.
[00699] Portanto, a terapia com moléculas antagonistas que blo- queiam uma via do ponto de verificação imune, tais como pequenas moléculas, inibidores de ácido nucleico (por exemplo, RNAi) ou molé- culas de anticorpo, estão se tornando caminhos promissores de imu- noterapia para câncer e outras doenças. Em contraste com a maioria dos agentes anticâncer, os inibidores do ponto de verificação não têm necessariamente como alvo as células tumorais diretamente, mas sim os receptores de linfócitos ou seus ligantes, a fim de aumentar a ativi- dade antitumoral endógena do sistema imune.
[00700] “Conforme usado no presente documento, o termo "inibidor do ponto de verificação imune" refere-se a moléculas que reduzem, inibem, interferem ou modulam uma ou mais proteínas do ponto de verificação total ou parcialmente. Proteínas do ponto de verificação regulam a ativação ou função de células T. Estas proteínas são res- ponsáveis pelas interações coestimuladoras ou inibidoras das respos- tas das células T. As proteínas do ponto de verificação imune regulam e mantêm a autotolerância e a duração e amplitude das respostas imunes fisiológicas. Em algumas modalidades, o indivíduo pode rece- ber um agente adicional que pode aumentar ou aumentar a resposta imune, por exemplo, resposta imune efetuada pelos receptores re- combinantes de ligação à proteína GPRC5D, células e/ou composi- ções fornecidas no presente documento, contra uma doença ou condi- ção, por exemplo, um câncer, tal como qualquer um descrito no pre- sente documento.
[00701] Os inibidores do ponto de verificação imune incluem qual-
quer agente que bloqueia ou inibe de uma maneira estatisticamente significativa as vias inibidoras do sistema imune. Tais inibidores podem incluir inibidores de pequenas moléculas ou podem incluir anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos que se ligam a e bloqueiam ou inibem os receptores do ponto de verificação imune, li- gantes e/ou interação receptor-ligante. Em algumas modalidades, a modulação, o aumento e/ou a estimulação de receptores específicos podem superar os componentes da via do ponto de verificação imune. Moléculas do ponto de verificação imune ilustrativas que podem ser dire- cionadas para bloqueio, inibição, modulação, aumento e/ou estimulação incluem, porém sem limitações, PD-1 (CD279), PD-L1 (CD274, B7-H1), PDL2 (CD273, B7-DC), CTLA-4, LAG-3 (CD223), TIM-3, 4-1BB (CD137), 4-1BBL (CD137L), GITR (TNFRSF18, AITR), CD40, OX40 (CD134, TNFRSF4), CXCR2, antígenos associados a tumor (TAA), B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, B7H3, B7H4, VISTA, KIR, 2B4 (pertencem à família de moléculas CD2 e expressos em todas as célu- las T NK, yô e de memória CD8+ (aB)), CD160 (também denominada como BY55), CGEN-15049, CEACAM (por exemplo, CEACAM-1, CEACAM-3 e/ou CEACAM-5), TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CDB80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 ou CD270), KIR, A2aR, MHC classe |, MHC classe Il, GAL9, adenosina e um receptor de fator de crescimento transformante (TGFR; por exem- plo, TGFR beta). Os inibidores do ponto de verificação imune incluem anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos ou outras proteínas de ligação que se ligam a e bloqueiam ou inibem e/ou au- mentam ou estimulam a atividade de uma ou mais de qualquer uma das ditas moléculas.
[00702] Inibidores do ponto de verificação imune exemplificativos incluem Tremelimumabe (anticorpo bloqueador de CTLA-4, também conhecido como Ticilimumabe, CP-675,206), anti-OX40, anticorpo monoclonal PD-L1 (Anti-B7-H1; MEDI4736), MK-3475 (bloqueador de PD-1), Nivolumabe (anticorpo anti-PD-1), CT-011 (anticorpo anti-PD- 1), anticorpo monoclonal BY55, AMP224 (anticorpo anti-PD-L1), BMS- 936559 (anticorpo anti-PD-L1), MPLDL3280A (anticorpo anti-PD-L1), MSBO010718C (anticorpo anti-PD-L1) e Ipilimumabe (anticorpo anti- CTLA-4, também conhecido como Yervoy&, MDX-010 e MDX-101). Anticorpos imunomoduladores exemplificativos incluem, porém sem limitações, Daclizumabe (Zenapax), Bevacizumabe (Avastin&), Basili- ximabe, Ipilimumabe, Nivolumabe, Pembrolizumabe, MPDL3280A, Pi- dilizumabe (CT-011), MMS-9332z0l (A), MMS-9332z01/75, B), Tre- melimumabe, IMP321, BMS-986016, LAG525, Urelumabe, PF- 05082566, TRX518, MK-4166, Dacetuzumabe (SGN-40), Lucatumu- mabe (HCD122), SEA-CD40, CP-870, CP-893, MEDI6469, MEDI6383, MOXRO916, AMP-224, MSBOO010718C (Avelumabe) MEDI4736, PDROO01, rHIgM12B7, Ulocuplumabe, BKT140, Varlilumabe (CDX-1127), ARGX-110, MGA271, lirlumabe (BMS-986015, IPH2101), IPH2201, ARGX-115, Emactuzumabe, CC-90002 e MNRP1685A ou um frag- mento de ligação a anticorpo dos mesmos. Outros imunomoduladores exemplificativos incluem, por exemplo, afutuzumabe (disponível a par- tir da Roche&); pegfilgrastim (Neulasta&); lenalidomida (CC-5013, Re- vlimid&); talidomida (ThalomidO&), actimida (CC4047); e IRX-2 (mistura de citocinas humanas que inclui interleucina 1, interleucina 2 e interfe- ron gama, CAS 951209-71-5, disponível a partir da IRX Therapeutics).
[00703] A morte celular programada 1 (PD-1) é uma proteína do ponto de verificação imune que é expressa em células B, células NK e células T (Shinohara et a/., 1995, Genomics 23: 704-6; Blank et al., 2007, Cancer Immunol Immunother 56: 739-45; Finger et al., 1997, Gene 197: 177-87; Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12: 252- 264). O principal papel da PD-1 é limitar a atividade das células T nos tecidos periféricos durante a inflamação em resposta à infecção, bem como limitar a autoimunidade.
A expressão de PD-1 é induzida em cé- lulas T ativadas e a ligação de PD-1 a um de seus ligantes endógenos atua para inibir a ativação de células T, inibindo quinases estimulado- ras.
A PD-1 também atua ao inibir o "sinal de parada" do TCR.
A PD-1 é altamente expressa em células Treg e pode aumentar sua prolifera- ção na presença de ligante (Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12: 252-264). Anticorpos anti-PD-1 têm sido usados para o tratamento de melanoma, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de be- xiga, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer de cabeça e pesco- ço, câncer de mama triplo-negativo, leucemia, linfoma e câncer de cé- lulas renais (Topalian et a/., 2012, N Engl J Med 366: 2443-54; Lipson et al., 2013, Clin Cancer Res 19: 462-8; Berger et al., 2008, Clin Can- cer Res 14: 3044-51; Gildener-Leapman et al., 2013, Oral Oncol 49: 1089-96; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5: 278-85). Anti- corpos anti-PD-1 exemplificativos incluem nivolumabe (Opdivo da BMS), pembrolizumabe (Keytruda da Merck), pidilizumabe (CT-011 da Cure Tech), lambrolizumabe (MK-3475 da Merck) e AMP-224 (Merck), nivolumabe (também denominado como Opdivo, BMS-936558 ou MDX1106; Bristol-Myers Squibb) é um anticorpo monoclonal de I9gG4 totalmente humano que bloqueia especificamente a PD-1. O nivolu- mabe (clone 5C4) e outros anticorpos monoclonais humanos que se ligam especificamente à PD-1 são descritos na Patente Norte- Americana Nº 8.008.449 e documento WOZ2006/121168. O pidilizumabe (CT-011; Cure Tech) é um anticorpo monoclonal de I9gG1k humanizado que se liga à PD-1. O pidilizumabe e outros anticorpos monoclionais anti- PD-1 humanizados são descritos no documento WO2009/101611. O pembrolizumabe (anteriormente conhecido como lambrolizumabe, e também denominado como Keytruda, MK03475; Merck) é um anticor- po monoclonal de IgG4 humanizado que se liga à PD-1. O pembroli- zumabe e outros anticorpos anti-PD-1 humanizados são descritos na
Patente Norte-Americana Nº 8.354.509 e documento WO2009/114335. Outros anticorpos anti-PD-1 incluem AMP 514 (Amplimmune), dentre outros, por exemplo, anticorpos anti-PD-1 descritos nos documentos US
8.609.089, US 2010028330, US 20120114649 e/ou US 20150210769. AMP-224 (B7-DClg; Amplimmune; por exemplo, descrito nos docu- mentos WO2010/027827 e WO2011/066342) é um receptor solúvel de fusão PD-L2 Fc que bloqueia a interação entre PD-1 e B7-H1.
[00704] PD-L1 (também conhecida como CD274 e B7-H1) e PD-L2 (também conhecida como CD273 e B7-DC) são ligantes para PD-1 encontrados em células T ativadas, células B, células mieloides, ma- crófagos e alguns tipos de células tumorais. As terapias antitumorais têm se concentrado em anticorpos anti-PD-L1. O complexo de PD-1 e PD-L1 inibe a proliferação de células T CD8* e reduz a resposta imune (Topalian et a/., 2012, N Engl J Med 366: 2443-54; Brahmer et al., 2012, N Eng J Med 366: 2455-65). Os anticorpos anti-PD-L1 têm sido usados para o tratamento de câncer de pulmão de células não peque- nas, melanoma, câncer colorretal, câncer de células renais, câncer de pâncreas, câncer gástrico, câncer de ovário, câncer de mama e malig- nidades hematológicas (Brahmer et a/., 2012, N Eng J Med 366: 2455- 65; Ott et al., 2013, Clin Cancer Res 19: 5300-9; Radvanyi et a/., 2013, Clin Cancer Res 19: 5541; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med On- col 5: 278-85; Berger et al., 2008, Clin Cancer Res 14: 13044-51). An- ticorpos anti-PD-L1 exemplificativos incluem MDX-1105 (Medarex), MEDI4736 (Medimmune) MPDL3280A (Genentech), BMS-935559 (Bristol-Myers Squibb) e MSBOO010718C. MEDI4736 (Medimmune) é um anticorpo monoclonal humano que se liga à PD-L1 e inibe a intera- ção do ligante com PD-1. MDPL3280A (Genentech/Roche) é um anti- corpo monocional de IgG1 otimizado para Fc humana que se liga à PD-L1. MDPL3280A e outros anticorpos monoclonais humanos anti- PD-L1 são descritos na Patente Norte-Americana Nº 7.943.743 e Publi-
cação Norte-Americana Nº 20120039906. Outros agentes de ligação an- ti-PD-L1 incluem YW243.55.870 (consulte documento WO2010/ 077634) e MDX-1105 ( também denominado como BMS-936559 e, por exemplo, agentes de ligação anti-PD-L1 descritos no documento WOZ2007/005874).
[00705] O antígeno associado a linfócitos T citotóxicos (CTLA-4), também conhecido como CD152, é uma molécula coinibidora que fun- ciona para regular a ativação de células T. CTLA-4 é um membro da superfamília das imunoglobulinas que é expressa exclusivamente em células T. A CTLA-4 atua ao inibir a ativação das células T e é relatado que inibe a atividade de células T auxiliares e aumenta a atividade imunossupressora de células T reguladoras. Embora o mecanismo de ação preciso da CTLA-4 permaneça sob investigação, foi sugerido que ela inibe a ativação de células T ao superar a competição de CD28 quanto à ligação à CD80 e CD86, bem como distribuição ativa de si- nais inibidores à célula T (Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12: 252-264). Os anticorpos anti-CTLA-4 têm sido usados em ensaios clí- nicos para o tratamento de melanoma, câncer de próstata, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células não peque- nas (Robert & Ghiringhelli, 2009, Oncologist 14: 848-61; Ott et al, 2013, Clin Cancer Res 19: 5300; Weber, 2007, Oncologist 12: 864-72; Wada et al., 2013, J Trans! Med 11:89). Uma característica significati- va do anticorpo anti-CTLA-4 é a cinética do efeito antitumoral, com um período de latência de até 6 meses após o tratamento inicial necessá- rio para a resposta fisiológica. Em alguns casos, os tumores podem realmente aumentar de tamanho após o início do tratamento antes que uma redução seja observada (Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12: 252-264). Anticorpos anti-CTLA-4 exemplificativos incluem ipi- limumabe (Bristol-Myers Squibb) e tremelimumabe (Pfizer). O ipilimu- mabe recebeu recentemente a aprovação da FDA para o tratamento de melanoma metastático (Wada et a/l., 2013, J Transl Med 11:89).
[00706] O gene de ativação de linfócitos-3 (LAG-3), também conhe- cido como CD223, é outra proteína do ponto de verificação imune. À LAG-3 foi associada à inibição da atividade de linfócitos e, em alguns casos, à indução da anergia de linfócitos. A LAG-3 é expressa em vá- rias células do sistema imune, inclui células B, células NK e células dendríticas. A LAG-3 é um ligante natural para o receptor MHC de classe Il, o qual é substancialmente expresso em células T que se infil- tram em melanoma, incluindo aquelas dotadas de potente atividade imunossupressora. Anticorpos anti-LAG-3 exemplificativos incluem BMS-986016 (Bristol-Myers Squib), o qual é um anticorpo monoclional que tem como alvo a LAG-3. O IMP701 (Immutep) é um anticorpo an- tagonista de LAG-3 e o IMP731 (Immutep e GlaxoSmithKline) é um anticorpo de depleção LAG-3. Outros inibidores de LAG-3 incluem IMP321 (Immutep), o qual é uma proteína de fusão recombinante de uma porção solúvel de LAG-3 e lg que se liga a moléculas de MHC de classe || e ativa células apresentadoras de antígeno (APC). Outros an- ticorpos são descritos, por exemplo, nos documentos WO2010/019570 e US 2015/0259420
[00707] —Foimostrado que o domínio de imunoglobulina de células T e o domínio de mucina 3 (TIM-3), inicialmente identificados em células Th1 ativadas, é um regulador negativo da resposta imune. O bloqueio de TIM-3 promove a imunidade antitumoral mediada por células T e possui atividade antitumoral em uma variedade de modelos de tumor de camundongo. As combinações de bloqueio de TIM-3 com outros agentes imunoterapêuticos, tals como TSR-042, anticorpos anti- CD137 e outros, podem ser aditivas ou sinérgicas no aumento dos efeitos antitumorais. A expressão de TIM-3 foi associada a uma série de tipos de tumor diferentes, incluindo melanoma, NSCLC e câncer renal e, além disso, foi mostrado que a expressão de TIM-3 intratumo-
ral se correlacionarcom mau prognóstico em uma variedade de tipos de tumor, incluindo NSCLC, câncer cervical e câncer gástrico. O blo- queio de TIM-3 também é interessante para promover o aumento da imunidade a uma série de doenças virais crônicas. Também foi de- monstrado que a TIM-3 interage com uma série de ligantes, incluindo galectina-9, fosfatidil serina e HMGB1, embora quais destes, se hou- ver, seriam relevantes na regulação de respostas antitumorais não es- teja claro no momento. Em algumas modalidades, anticorpos, frag- mentos de anticorpos, pequenas moléculas ou inibidores peptídicos que têm como alvo a TIM-3 podem se ligar ao domínio IgV de TIM-3 para inibir a interação com seus ligantes. Anticorpos e peptídeos exemplificativos que inibem a TIM-3 são descritos nos documentos US 2015/0218274, WO2013/006490 e US 2010/0247521. Outros anticor- pos anti-TIM-3 incluem versões humanizadas de RMT3-23 (Ngiow et al., 2011, Cancer Res, 71: 3540-3551) e o clone 8B.2C12 (Monney et al., 2002, Nature, 415: 536 -541). Anticorpos biespecíficos que inibem TIM-3 e PD-1 são descritos no documento US 2013/0156774.
[00708] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de CEACAM (por exemplo, inibidor de CEACAM-1, CEACAM-3 e/ou CEACAM-5). Em algumas modalidades, o inibidor de CEACAM é uma molécula de anticorpo anti-cCEACAM. Anticorpos anticCCEACAM-1 exemplificativos são descritos nos documentos WO 2010/125571, WO 2013/082366 WO 2014/059251 e WO 2014/022332, por exemplo, um anticorpo monoclonal 34B1, 26H7 e 5F4; ou uma forma recombinante do mesmo conforme descrito, por exemplo, nos documentos US 2004/0047858, US 7.132.255 e WO 99/052552. Em algumas modali- dades, o anticorpo anti-cCEACAM se liga à CEACAM-5 conforme des- crito, por exemplo, em Zheng et al., PLoS One. (2011) 6 (6): e21146) ou reage de forma cruzada com a CEACAM-1 e CEACAM-5 conforme descrito, por exemplo, nos documentos WO 2013/054331 e US
2014/0271618.
[00709] A4-1BB, também conhecida como CD137, é uma glicopro- teína transmembrana pertencente à superfamília TNFR. Os receptores de 4-1BB estão presentes em células T ativadas e células B e monóci- tos. Um exemplo de anticorpo anti-4-1BB é o urelumabe (BMS- 663513), o qual tem atividades imunoestimulantes e antineoplásicas potenciais.
[00710] A superfamília do receptor do fator de necrose tumoral, membro 4 (TNFRSF4), também conhecida como OX40 e CD134, é outro membro da superfamília TNFR. A OX40 não é expressa constituti- vamente em células T não expostas em repouso e atua como uma molé- cula do ponto de verificação imunológica coestimuladora secundária. An- ticorpos anti-OX40 exemplificativos são MEDI6469 e MOXRO0916 (RG7888, Genentech).
[00711] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui uma molécula que diminui a população de células T reguladoras (Treg). Métodos que diminuem o número de células Treg (por exemplo, esgo- tam) são conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, depleção de CD25, administração de ciclofosfamida e modulação da função do ge- ne relacionado à família TNFR induzido por glicocorticoide (GITR). À GITR é um membro da superfamília TNFR que é positivamente regu- lada em células T ativadas, o que melhora o sistema imune. A redução do número de células Treg em um indivíduo antes de aferese ou antes da administração de células modificadas, por exemplo, células que ex- pressam CAR, pode reduzir o número de células imunes indesejadas (por exemplo, Tregs) no microambiente tumoral e reduz o risco de re- caída do indivíduo. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui uma molécula que tem como alvo a GITR e/ou que modula funções da GITR, tal como um agonista de GITR e/ou um anticorpo anti-GITR que esgota células T reguladoras (Tregs). Em algumas modalidades, o agente adicional inclui ciclofosfamida. Em algumas modalidades, a molécula de ligação à GITR e/ou molécula moduladora da função de GITR (por exemplo, agonista de GITR e/ou anticorpos anti-GITR de depleção de Treg) é administrada antes das células manipuladas, por exemplo, células que expressam CAR. Por exemplo, em algumas mo- dalidades, o agonista de GITR pode ser administrado antes de aferese das células. Em algumas modalidades, a ciclofosfamida é administra- da ao indivíduo antes da administração (por exemplo, infusão ou rein- fusão) das células manipuladas, por exemplo, células que expressam CAR ou antes de aferese das células. Em algumas modalidades, a ci- clofosfamida e um anticorpo anti-GITR são administrados ao indivíduo antes da administração (por exemplo, infusão ou reinfusão) das célu- las manipuladas, por exemplo, células que expressam CAR ou antes de aferese das células.
[00712] Em algumas modalidades, o agente adicional é um agonis- ta de GITR. Agonistas de GITR exemplificativos incluem, por exemplo, proteínas de fusão de GITR e anticorpos anti-GITR (por exemplo, anti- corpos anti-GITR bivalentes) tais como, por exemplo, uma proteína de fusão de GITR descrita na Patente Norte-Americana Nº 6.111.090, Pa- tente Europeia Nº 090505B 1, Patente Norte-Americana Nº 8.586.023, Publicações PCT Nºs: WO 2010/003118 e 2011/090754 ou um anticor- po anti-GITR descrito, por exemplo, na Patente Norte-Americana Nº
7.025.962, Patente Europeia Nº 1947183B 1, Patente Norte-Americana Nº 7.812.135, Patente Norte-Americana Nº 8.388.967, Patente Norte- Americana Nº 8.591.886, Patente Europeia Nº EP 1866339, Publica- ção PCT Nº WO 2011/028683, Publicação PCT Nº WO 2013/039954, Publicação PCT Nº WO2005/007190, Publicação PCT Nº WO 2007/ 133822, Publicação PCT Nº WO2005/055808, Publicação PCT Nº WO 99/40196, Publicação PCT Nº WO 2001/03720, Publicação PCT Nº WO99/20758, Publicação PCT Nº WO2006/083289, Publicação PCT
Nº WO 2005/115451, Patente Norte-Americana Nº 7.618.632 e Publi- cação PCT Nº WO 2011/051726. Um exemplo de anticorpo anti-GITR é TRX518.
[00713] Em algumas modalidades, o agente adicional aumenta a infiltração tumoral ou transmigração das células administradas, por exemplo, células que expressam CAR. Por exemplo, em algumas mo- dalidades, o agente adicional estimula CDA40, tal como CDA40L, por exemplo, CD40L humana recombinante. O agrupamento de diferenci- ação 40 (CD40) também é membro da superfamília TNFR. A CD40 é uma proteína coestimuladora encontrada em células apresentadoras de antígeno e media uma ampla variedade de respostas imunes e in- flamatórias. A CD40 também é expressa em algumas doenças malig- nas, onde ela promove a proliferação. Anticorpos anti-CD40 exemplifi- cativos são dacetuzumabe (SGN-40), lucatumumabe (Novartis, anta- gonista), SEA-CD40 (Seattle Genetics) e CP-870.893. Em algumas modalidades, o agente adicional que aumenta a infiltração tumoral in- clui o inibidor de tirosina quinase sunitnibe, heparanase e/ou recepto- res de quimiocina, tais como CCR2, CCR4 e CCR7.
[00714] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui fárma- cos de talidomida ou análogos e/ou derivados da mesma, tais como lenalidomida, pomalidomida ou apremilaste. Consulte, por exemplo, Bertilaccio et a/l., Blood (2013) 122: 4171, Otahal et al., Oncoimmuno- logy (2016) 5 (4): e1115940; Fecteau et al., Blood (2014) 124 (10): 1637-1644 e Kuramitsu et al., Cancer Gene Therapy (2015) 22: 487- 495). A lenalidomida ((RS)-3-(4-Amino-1-0x0-1,3-di-hidro-2H-isoindol- 2-il)piperidina-2,6-diona; também conhecida como Revlimid) é um de- rivado sintético de talidomida e tem múltiplos efeitos imunomodulado- res, incluindo reforço da formação de sinapses imunes entre a célula T e as células apresentadoras de antígeno (APCs). Por exemplo, em al- guns casos, a lenalidomida modula as respostas das células T e resul-
ta no aumento da produção de interleucina (IL) -2 em células T CD4* e CD8”*, induz ao deslocamento das respostas T auxiliares (Th) de Th2 para Th1, inibe a expansão do subconjunto regulador de células T (Tregs) e melhora o funcionamento das sinapses imunes em linfoma folicular e leucemia linfocítica crônica (CLL) (Otahal et al., Oncoimmu- nology (2016) 5 (4): e1115940). A lenalidomida também tem atividade tumoricida direta em pacientes com mieloma múltiplo (MM) e modula direta e indiretamente a sobrevida das células tumorais de CLL ao afe- tar células de suporte, tais como células nurse-like encontradas no mi- croambiente de tecidos linfoides. A lenalidomida também pode aumen- tar a proliferação de células T e a produção de interferon-y em respos- ta à ativação de células T por meio de ligação à CD3 ou ativação me- diada por células dendríticas. A lenalidomida também pode induzir as células B malignas a expressarem níveis mais elevados de moléculas imunoestimuladoras, tais como CD80, CD86, HLA-DR, CD95 e CD40 (Fecteau et al., Blood (2014) 124 (10): 1637-1644). Em algumas moda- lidades, a lenalidomida é administrada em uma dosagem a partir de cerca de 1 mg a cerca de 20 mg por dia, por exemplo, a partir de cerca de 1 mg a cerca de 10 mg, a partir de cerca de 2,5 mg a cerca de 7,5 mg, a partir de cerca de 5 mg a cerca de 15 mg, tal como cerca de 5 mg, 10 mg, 15 mg ou 20 mg por dia. Em algumas modalidades, a lena- lidomida é administrada em uma dose a partir de cerca de 10 ug/kg a 5 mg/kg, por exemplo, cerca de 100 ug/kg to cerca de 2 mg/kg, cerca de 200 upg/kg a cerca de 1 mg/kg, cerca de 400 ug/kg a cerca de 600 uvg/Kkg, tal como cerca de 500 ug/kg. Em algumas modalidades, o ritu- ximabe é administrado em uma dosagem de cerca de 350-550 mg/m? (por exemplo, 350-375, 375-400, 400-425, 425-450, 450-475 ou 475- 500 mg/m2), por exemplo, por via intravenosa. Em algumas modalida- des, a lenalidomida é administrada em uma dose baixa.
[00715] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de células B. Em algumas modalidades, o agente adicional é um ou mais inibidores de células B selecionados a partir de inibidores de CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 ou ROR1 ou uma combinação dos mesmos. Em algumas moda- lidades, o inibidor de células B é um anticorpo (por exemplo, um anti- corpo mono ou biespecífico) ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma célula manipulada que expressa receptores recombinantes que têm como alvo células B, por exemplo, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 ou ROR1.
[00716] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de CD20, por exemplo, um anticorpo anti-CD20 (por exemplo, um anti- corpo mono ou biespecífico anti-CD20) ou um fragmento do mesmo. Anticorpos anti-CD20 exemplificativos incluem, porém sem limitações, rituximabe, ofatumumabe, ocrelizumabe (também conhecido como GA101 ou RO5072759), veltuzumabe, obinutuzumabe, TRU-015 (Tru- bion Pharmaceuticals), ocaratuzumabe (também conhecido como AME-133v ou ocaratuzumabe) e Pro131921 (Genentech). Consulte, por exemplo, Lim et al., Haematologica. (2010) 95 (1): 135-43. Em al- gumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 compreende rituximabe. O rituximabe é um anticorpo monoclonal de IgG1 capa de camundon- go/humano quimérico que se liga à CD20 e causa citólise de uma célu- la que expressa a CD20. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui rituximabe. Em algumas modalidades, o inibidor de CD20 é uma pequena molécula.
[00717] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de CD22, por exemplo, um anticorpo anti-CD22 (por exemplo, um anti- corpo anti-CD22 mono ou biespecífico) ou um fragmento do mesmo. Anticorpos anti-CD22 exemplificativos incluem epratuzumabe e RFB4. Em algumas modalidades, o inibidor de CD22 é uma pequena molécu-
la. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo monoespeci- fico, opcionalmente conjugado a um segundo agente, tal como um agente quimioterapêutico. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo é um conjugado de anticorpo monoclional anti-CD22-MMAE (por exemplo, DCDT2980S). Em algumas modalidades, o anticorpo é um scFv de um anticorpo anti-CD22, por exemplo, um scFv do anti- corpo RFB4. Em algumas modalidades, o scFv é fundido à totalidade ou a um fragmento da exotoxina-A de Pseudomonas (por exemplo, BL22). Em algumas modalidades, o scFv é fundido a todo ou um frag- mento (por exemplo, um fragmento de 38 kDa) da exotoxina A de Pseudomonas (por exemplo, moxetumomabe pasudotox). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD22 é um anticorpo anti-CD19/CD22 biespecífico, opcionalmente conjugado a uma toxina. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD22 compreende uma porção biespecífica anti-CD19/CD22, (por exemplo, dois ligantes de scFv que reconhecem CD19 e CD22 humanas) opcionalmente ligado a toda ou uma porção da toxina da difteria (DT), por exemplo, os primeiros 389 aminoácidos da toxina da difteria (DT), DT 390, por exemplo, uma to- xina controlada por ligante, tal como DT2219ARL). Em algumas moda- lidades, a porção biespecífica (por exemplo, anti-CD19/anti-CD22) es- tá ligada a uma toxina, tal como cadeia A de ricina desglicosilada (por exemplo, Combotox).
[00718] Em algumas modalidades, o agente imunomodulador é uma citocina. Em algumas modalidades, o agente imunomodulador é uma citocina ou é um agente que induz ao aumento da expressão de uma citocina no microambiente tumoral. As citocinas têm funções im- portantes relacionadas à expansão, diferenciação, sobrevida e ho- meostase das células T. As citocinas que podem ser administradas ao indivíduo que recebe os receptores, células e/ou composições recom- binantes de ligação à proteína GPRC5D fornecidos no presente docu-
mento incluem um ou mais de IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, I1L-15, IL- 18 e IL-
21. As citocinas que podem ser administradas ao indivíduo que recebe os receptores recombinantes de ligação à proteína GPRC5D, recepto- res recombinantes de ligação à proteína BCMA, receptores recombi- nantes de ligação às proteínas GPRC5D e BCMA, células e/ou com- posições fornecidos no presente documento incluem um ou mais de IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, 11-15, 11-18 e 11-21. Em algumas modalidades, a citocina administrada é IL-7, I1L-15 ou I1L-21 ou uma combinação das mesmas. Em algumas modalidades, a administração da citocina ao pode melhorar determinados aspectos, tal como resposta ou atividade antitumoral das células administradas, por exemplo, células que ex- pressam CAR.
[00719] Citocina pode referir-se a proteínas liberadas por uma po- pulação de células que atuam em outra célula como mediadores inter- celulares. Exemplos de tais citocinas são linfocinas, monocinas e hor- mônios polipeptídicos tradicionais. Incluídos dentre as citocinas estão os hormônios do crescimento, tal como o hormônio de crescimento humano, o hormônio de crescimento humano N-metionila e o hormônio de crescimento bovino; hormônio da paratireoide; tiroxina; insulina; pró-insulina; relaxina; prorrelaxina; hormônios glicoproteicos, tais como hormônio estimulante folicular (FSH), hormônio estimulador da tiroide (TSH) e hormônio luteinizante (LH); fator de crescimento hepático; fa- tor de crescimento de fibroblastos; prolactina; lactogênio placentário; fator de necrose tumoral alfa e beta; substância inibidora Mulleriana; peptídeo associado à gonadotropina de camundongo; inibina; activina; fator de crescimento endotelial vascular; integrina; trombopoietina (TPO); fatores de crescimento de nervo, tal como NGF-beta; fator de crescimento plaquetário; fatores de crescimento transformantes (TGFs), tais como TGF-alfa e TGF-beta; fatores de crescimento | e |l similares à insulina; eritropoietina (EPO); fatores osteoindutivos; inter-
ferons, tais como interferons alfa, beta e gama; fatores estimuladores de colônias (CSFs), tais como macrófago-CSF (M-CSF); granulócito- macrófago-CSF (GM-CSF); e granulócito-CSF (G-CSF); interleucinas (ILs), tais como IL-1, IL-1alfa, IL-2, I1L-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, I1L-8, IL-9, I1L-10, IL-11, I1L-12; 11-15, um fator de necrose tumoral, tal como TNF- alfa ou TNF-beta; e outros fatores polipeptídicos que incluem LIF e li- gante kit (KL). Conforme usado no presente documento, o termo cito- cina inclui proteínas provenientes de fontes naturais ou de cultura de células recombinantes e equivalentes biologicamente ativos das citoci- nas de sequência nativa. Por exemplo, o agente imunomodulador é uma citocina e a citocina é IL-4, TNF-a, GM-CSF ou IL-2.
[00720] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui um po- lipeptídeo de interleucina-15 (IL-15), um polipeptídeo de receptor alfa de interleucina-15 (IL-15Ra) ou uma combinação dos mesmos, por exemplo, hetlL-15 (Admune Therapeutics, LLC). O hetlL-15 é um complexo heterodimérico não covalente de IL-15 e IL-15Ra. O hetlL-15 é descrito, por exemplo, nos documentos U.S. 8.124.084, U.S. 2012/0177598, U.S. 2009/0082299, U.S. 2012/0141413 e US. 2011/0081311. Em algumas modalidades, o agente imunomodulador pode conter uma ou mais citocinas. Por exemplo, a interleucina pode incluir injeção de interleucina leucocitária (Multikine), a qual é uma combinação de citocinas naturais. Em algumas modalidades, o agente imunomodulador é um agonista do receptor Toll-like (TLR), um adju- vante ou uma citocina.
[00721] Em algumas modalidades, o agente adicional é um agente que melhora ou neutraliza uma ou mais toxicidades ou efeitos colate- rais associados à terapia celular. Em algumas modalidades, o agente adicional é selecionado a partir de um esteroide (por exemplo, corti- costeroide), um inibidor de TNFa e um inibidor de IL-6. Um exemplo de um inibidor de TNFa é uma molécula de anticorpo anti-TNFa, tal como infliximabe, adalimumabe, certolizumabe pegol e golimumabe. Outro exemplo de um inibidor de TNFa é uma proteína de fusão, tal como entanercepte. Inibidores de pequenas moléculas de TNFa incluem, porém sem limitações, derivados de xantina (por exemplo, pentoxifili- na) e bupropiona. Um exemplo de um inibidor de IL-6 é uma molécula de anticorpo anti-IL-6, tal como tocilizumabe, sarilumabe, elsilimoma- be, CNTO 328, ALD518/BMS-945429, CNTO 136, CPSI-2364, CDP6038, VX30, ARGX-109, FE301 e FM101. Em algumas modalida- des, a molécula de anticorpo anti-IL-6 é tocilizumabe. Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de IL-1R, tal como ana- kinra.
[00722] Em algumas modalidades, o agente adicional é um modu- lador dos níveis de adenosina e/ou um componente da via de adeno- sina. A adenosina pode funcionar como um agente imunomodulador no corpo. Por exemplo, a adenosina e alguns análogos de adenosina que ativam não seletivamente os subtipos de receptor de adenosina diminuem a produção de neutrófilos de produtos oxidativos inflamató- rios (Cronstein et al., Ann. NY Acad. Sci. 451: 291, 1985; Roberts et al., Biochem. J., 227: 669, 1985; Schrier et al., J. Immunol. 137: 3284, 1986; Cronstein et al., Clinical Immunol. Immunopath. 42:76, 1987). Em alguns casos, a concentração de adenosina extracelular ou análo- gos de adenosina pode aumentar em ambientes específicos, por exemplo, microambiente tumoral (Tumor MicroEnvironment, TME). Em alguns casos, a sinalização à adenosina ou análogo de adenosina de- pende da hipóxia ou fatores envolvidos na hipóxia ou sua regulação, por exemplo, fator induzível por hipóxia (Hypoxia Inducible Factor, HIF). Em algumas modalidades, o aumento na sinalização à adenosi- na pode aumentar o cAMP intracelular e proteína quinase dependente de cAMP que resulta na inibição da produção de citocinas pró- inflamatórias e pode levar à síntese de moléculas imunossupressoras e ao desenvolvimento de Tregs (Sitkovsky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2 (7): 598-605). Em algumas modalidades, o agente adicional pode reduzir ou reverter os efeitos imunossupressores da adenosina, análogos da adenosina e/ou sinalização à adenosina. Em algumas modalidades, o agente adicional pode reduzir ou reverter a imunossu- pressão de células T adenossinérgicas A2 induzida por hipóxia. Em algumas modalidades, o agente adicional é selecionado a partir de an- tagonistas de receptores de adenosina, agentes extracelulares de de- gradação da adenosina, inibidores da geração de adenosina por ecto- enzimas CD39/CD73 e inibidores da sinalização de hipóxia-HIF-10a. Em algumas modalidades, o agente adicional é um antagonista ou agonista do receptor de adenosina.
[00723] —Inibição ou redução da adenosina extracelular ou do recep- tor de adenosina em virtude de um inibidor da adenosina extracelular (tal como um agente que previne a formação, degrada, torna inativo e/ou diminui a adenosina extracelular) e/ou um inibidor do receptor de adenosina (tal como um antagonista do receptor de adenosina) pode aumentar a resposta imune, tal como uma resposta mediada por ma- crófagos, neutrófilos, granulócitos, células dendríticas, células T e/ou B. Além disso, inibidores da via intracelular dependente de CAMP me- diada por proteína G e inibidores das vias intracelulares mediadas por proteína G desencadeada pelo receptor de adenosina associado, tam- bém podem aumentar a inflamação aguda e crônica.
[00724] Em algumas modalidades, o agente adicional é um antago- nista ou agonista do receptor de adenosina, por exemplo, um antago- nista ou agonista de um ou mais dos receptores de adenosina A2a, A2b, A1 e A3. A1 e A3 inibem, e A2a e A2b estimulam, respectivamen- te, a atividade de adenilato ciclase. determinados receptores de ade- nosina, tais como A2a, A2b e A3, podem suprimir ou reduzir a respos- ta imune durante a inflamação. Assim, antagonizar os receptores de adenosina imunossupressores pode aumentar, reforçar ou melhorar a resposta imune, por exemplo, a resposta imune de células administra- das, por exemplo, células T que expressam CAR. Em algumas moda- lidades, o agente adicional inibe a produção de adenosina extracelular e sinalização desencadeada por adenosina por meio de receptores de adenosina. Por exemplo, o aumento de uma resposta imune, a infla- mação local do tecido e a destruição direcionada do tecido podem ser aumentados pela inibição ou redução da hipóxia local do tecido produ- tor de adenosina; degradar (ou tornar inativa) a adenosina extracelular acumulada; prevenir ou diminuir a expressão de receptores de adeno- sina em células imunes; e/ou inibir/antagonizar a sinalização por ligan- tes de adenosina através de receptores de adenosina.
[00725] Um antagonista é qualquer substância que tende a anular a ação de outra, tal como um agente que se liga a um receptor celular sem desencadear uma resposta biológica. Em algumas modalidades, o antagonista é um composto químico que é um antagonista para um receptor de adenosina, tal como o receptor A2a, A2b ou A3. Em algu- mas modalidades, o antagonista é um peptídeo ou um pepidomiméti- co, o qual se liga ao receptor de adenosina, mas não desencadeia uma via intracelular dependente da proteína G. Antagonistas exempli- ficativos são descritos nas Patentes Norte-Americanas Nº 5.565.566;
5.545, 627, 5.981.524; 5.861.405; 6.066.642; 6.326.390; 5.670.501;
6.117.998; 6.232.297; 5.786.360; 5.424.297; 6.313.131, 5.504.090; e
6.322.771.
[00726] Em algumas modalidades, o agente adicional é um antago- nista do receptor A2 (A2R), tal como um antagonista de A2a. Antagonis- tas de A2R exemplificativos incluem KW6002 (istradefilina), SCH58261, cafeína, paraxantina, 3,7-dimetil-1-propargilxantina (DMPX), 8-(m- cloroestiril)cafeína (CSC), MSX-2, MSX-3, MSX- 4, CGS-15943, ZM- 241385, SCH-442416, pré-adenante, vipadenante (BlI014), V2006,
ST-1535, SYN-115, PSB-1115, ZM241365, FSPTP e um inibidor de ácido nucleico que tem como alvo a expressão de A2R, por exemplo, SIiRNA ou shRNA ou quaisquer anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos que têm como alvo o A2R. Em algumas modali- dades, o agente adicional é um antagonista de A2R descrito, por exemplo, em Ohta et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2006) 103: 13132- 13137; Jin et al., Cancer Res. (2010) 70 (6): 2245-2255; Leone et al., Computational and Structural Biotechnology Journal (2015) 13: 265- 272; Beavis et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2013) 110: 14711-14716; e Pinna, A., Expert Opin Investig Drugs (2009) 18: 1619-1631; Sitkov- sky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2 (7): 598-605; documentos US
8.080.554; US 8.716.301; US 20140056922; WO2008/147482; US
8.883.500; US 20140377240; WO02/055083; US 7.141.575; US
7.405.219; US 8.883.500; US 8.450.329 e US 8.987.279).
[00727] Em algumas modalidades, o antagonista é uma molécula antissenso, molécula de ácidos nucleicos inibidora (por exemplo, pe- queno RNA inibidor (SiRNA)) ou molécula de ácidos nucleicos catalíti- ca (por exemplo, uma ribozima) que se liga especificamente ao MRNA que codifica um receptor de adenosina. Em algumas modalidades, a molécula antissenso, a molécula de ácidos nucleicos inibidora ou a molécula de ácidos nucleicos catalítica se liga aos ácidos nucleicos que codificam A2a, A2b ou A3. Em algumas modalidades, uma molé- cula antissenso, molécula de ácidos nucleicos inibidora ou molécula de ácidos nucleicos catalítica tem como alvo as vias bioquímicas a jusan- te do receptor de adenosina. Por exemplo, a molécula antissenso ou a molécula de ácidos nucleicos catalítica pode inibir uma enzima envol- vida na via intracelular dependente da proteína Gs ou Gi. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui a forma mutante negativa domi- nante de um receptor de adenosina, tal como A2a, A2b ou A3.
[00728] Em algumas modalidades, o agente adicional que inibe a adenosina extracelular inclui agentes que tornam a adenosina extrace- lular não funcional (ou diminuem esta função), tal como uma substân- cia que modifica a estrutura da adenosina para inibir a capacidade da adenosina de sinalizar através de receptores de adenosina. Em algu- mas modalidades, o agente adicional é uma enzima extracelular gera- dora de adenosina ou degradante de adenosina, uma forma modifica- da da mesma ou um modulador da mesma. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente adicional é uma enzima (por exemplo, adeno- sina desaminase) ou outra molécula catalítica que se liga e destrói se- letivamente a adenosina, abolindo ou diminuindo significativamente a capacidade da adenosina formada endogenamente de sinalizar atra- vés dos receptores de adenosina e encerrar a inflamação.
[00729] Em algumas modalidades, o agente adicional é uma ade- nosina desaminase (ADA) ou uma forma modificada da mesma, por exemplo, ADA recombinante e/ou ADA modificada com polietileno gli- col (ADA-PEG), a qual pode inibir o acúmulo tecidual local de adenosi- na extracelular. ADA-PEG foi usado no tratamento de pacientes com ADA SCID (Hershfield (1995) Hum Mutat. 5: 107). Em algumas moda- lidades, um agente que inibe a adenosina extracelular inclui agentes que previnem ou diminuem a formação de adenosina extracelular e/ou previnem ou diminuem o acúmulo de adenosina extracelular, abolindo ou diminuindo substancialmente os efeitos imunossupressores da adenosina. Em algumas modalidades, o agente adicional inibe especi- ficamente enzimas e proteínas que estão envolvidas na regulação da síntese e/ou secreção de moléculas pró-inflamatórias, incluindo modu- ladores de fatores de transcrição nuclear. A supressão da expressão do receptor de adenosina ou expressão da via intracelular dependente da proteína Gs ou Gi ou da via intracelular dependente de CAMP pode resultar em um aumento/intensificação da resposta imune.
[00730] Em algumas modalidades, o agente adicional pode ter co-
mo alvo ectoenzimas que geram ou produzem adenosina extracelular. Em algumas modalidades, o agente adicional tem como alvo as ecto- enzimas CD39 e CD73, as quais funcionam em conjunto para gerar adenosina extracelular. A CD39 (também denominada de ectonucleo- sídeo trifosfato difosfo-hidrolase) converte ATP extracelular (ou ADP) em 5'AMP. Posteriormente, a CD73 (também denominada 5'nucle- otidase) converte AMP em adenosina. A atividade de CD39 é rever- sível pelas ações da NDP quinase e adenilato quinase, enquanto que a atividade da CD73 é irreversível. CD39 e CD73 são expressas em células tumorais do estroma, incluindo células endoteliais e Tregs, e também em muitas células cancerosas. Por exemplo, a expressão de CD39 e CD73 em células endoteliais é aumentada sob condições de hipóxia do microambiente tumoral. A hipóxia tumoral pode resultar de suprimento sanguíneo inadequado e vasculatura tumoral desorganiza- da, prejudicando a distribuição de oxigênio (Carroll e Ashcroft (2005), Expert. Rev. Mol. Med. 7 (6): 1-16). A hipóxia também inibe a adenilato quinase (AK), a qual converte a adenosina em AMP, levando a uma concentração extracelular muito alta de adenosina. Assim, a adenosi- na é liberada em altas concentrações em resposta à hipóxia, a qual é uma condição que ocorre com frequência no microambiente tumoral (TME), dentro ou ao redor de tumores sólidos. Em algumas modalida- des, o agente adicional é um ou mais de um anticorpo anti-CD39 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD73 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, por exemplo, MEDI9447 ou TY/23, a-B-metileno-adenosina difosfato (ADP), ARL 67156, POM- 3, IPH52 (consulte, por exemplo, Allard et al., Clin Cancer Res (2013) 19 (20): 5626-5635; Hausler et al., Am J Transl Res (2014) 6 (2): 129- 139; Zhang, B., Cancer Res. (2010) 70 (16): 6407-6411).
[00731] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de sinalização ao fator 1 alfa indutível por hipóxia (HIF-10). Inibidores exemplificativos de HIF-1a incluem digoxina, acriflavina, sirtuína-7 e ganetespibe.
[00732] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui um ini- bidor de proteína tirosina fosfatase, por exemplo, um inibidor de prote- ína tirosina fosfatase descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína tirosina fosfatase é um inibidor de SHP-1, por exemplo, um inibidor de SHP-1 descrito no presente do- cumento tal como, por exemplo, estibogluconato de sódio. Em algu- mas modalidades, o inibidor de proteína tirosina fosfatase é um inibi- dor de SHP-2, por exemplo, um inibidor de SHP-2 descrito no presente documento.
[00733] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de quinase. Inibidores de quinase, tais como um inibidor de quinase CDKA, um inibidor de quinase BTK, um inibidor de quinase MNK ou um inibidor de quinase DGK, podem regular as vias de sobrevida constitutivamente ativas que existem nas células tumorais e/ou modu- lar a função das células imunes. Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK), por exemplo, ibrutinibe. Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de fosfatidilinositol-4,5-bifosfato 3-quinase (PISK). Em al- gumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de CDKA, por exemplo, um inibidor de CDK4/6. Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de mMTOR tal como, por exemplo, rapamicina, um análogo de rapamicina, OSI-027. O inibidor de MTOR pode ser, por exemplo, um inibidor de MTORC1 e/ou um inibidor de MTORC?, por exemplo, um inibidor de MTORC1 e/ou inibidor de MTORC2. Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de MNK ou um inibidor duplo de PISK/MTOR. Em algumas modalidades, outros inibidores de quinase exemplificativos incluem o inibidor de AKT peri- fosina, o inibidor de mMTOR temsirolímus, os inibidores de quinase Src dasatinibe e fostamatinibe, os inibidores de JAK2 pacritinibe e ruxoliti- nibe, os inibidores de PKCB enzastaurina e briostatina e um inibidor de AAK.
[00734] Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibi- dor de BTK selecionado a partir de ibrutinibe (PCI-32765); GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX- 774; e LEM-A13. Em algumas modalidades, o inibidor de BTK não re- duz ou inibe a atividade de quinase de interleucina-2 indutível por qui- nase (ITK) e é selecionado a partir de GDC-0834; RN-486; CGlI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; e LFEM-A13.
[00735] Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibi- dor de BTK, por exemplo, ibrutinibe (1-[(3R)-3- [4-Amino-3- (4-fenoxi- fenil)-1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-1-il]piperidin-1-il]prop-2-en-1-ona; tam- bém conhecido como PClI-32765). Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de BTK, por exemplo, ibrutinibe (PCI-32765) e o ibrutinibe é administrado em uma dose de cerca de 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 420 mg, 440 mg, 460 mg, 480 mg, 500 mg, 520 mg, 540 mg, 560 mg, 580 mg, 600 mg (por exemplo, 250 mg, 420 mg ou 560 mg) diariamente durante um período de tempo, por exemplo, diariamente durante um ciclo de 21 dias ou diariamente durante um ciclo de 28 dias. Em algumas modalidades, são administrados 1, 2,3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou mais ciclos de ibrutinibe. Em algumas modalidades, o inibidor de BTK é um inibidor de BTK descrito no pedi- do internacional WO 2015/079417.
[00736] Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibi- dor de PI3K. PI3K é a via central para a via de PISK/AKVmTOR envol- vida na regulação do ciclo celular e sobrevida do linfoma. O inibidor de PI3K exemplificativo inclui idelalisibe (inibidor de PISK5). Em algumas modalidades, o agente adicional é idelalisibe e rituximabe.
[00737] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor do alvo mamífero da rapamicina (nNTOR). Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de MTOR selecionado a partir de temsirolímus; ridaforolímus (também conhecido como AP23573 e MHK8669); everolímus (RADO01); rapamicina (AY22989); simapimode; AZD8055; PFO4691502; SF1126; e XL765. Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor da proteína quinase ativada por mito- gênio (MAPK), tal como vemurafenibe, dabrafenibe e trametinibe.
[00738] Em algumas modalidades, o agente adicional é um agente que regula proteínas pró- ou anti-apoptóticas. Em algumas modalida- des, o agente adicional inclui um inibidor de linfoma 2 de células B (BCL-2) (por exemplo, venetoclax, também denominado de ABT-199 ou GDC-0199; ou ABT-737). O Venetoclax é uma pequena molécula (4-(4-1[2-(4-clorofenil)-4,4-dimetil-1-ciclohexen-1-il]metil)-1-piperazinil)- N-(f3-nitro-4-[(tetra-hidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]fenil)sulfonil)-2-(1H- pirrolo[2,3-b]piridin-5-iloxi)benzamida) que inibe a proteína anti-apoptó- tica, BCL-2. Outros agentes que modulam a proteína pró- ou anti- apoptótica incluem o inibidor BCL-2 ABT-737, navitoclax (ABT-263); SIiRNA de Mcl-1 ou inibidor retinoide de Mcl-1 N-(4-hidroxifenil) retina- mida (4-HPR) para eficácia máxima. Em algumas modalidades, o agente adicional fornece um estímulo pró-apoptótico, tal como o ligan- te indutor de apoptose relacionado ao fator de necrose tumoral recom- binante (TRAIL), o qual pode ativar a via de apoptose pela ligação aos receptores de morte TRAIL DR-4 e DR-5 sobre a superfície da célula tumoral ou anticorpos agonísticos TRAIL-R2.
[00739] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui um ini- bidor de indolamina 2,3-dioxigenase (IDO). A IDO é uma enzima que catalisa a degradação do aminoácido L-triptofano em quinurenina. Mui- tos cânceres superexpressam IDO, por exemplo, câncer de próstata, colorretal, pancreático, cervical, gástrico, de ovário, de cabeça e de pulmão. As células dendríticas plasmocitoides (pDCs), macrófagos e células dendríticas (DCs) podem expressar IDO. Em alguns aspectos, uma diminuição no L-triptofano (por exemplo, catalisado por IDO) re- sulta em um meio imunossupressor que induz à anergia de células T. Assim, em alguns aspectos, um inibidor de IDO pode aumentar a efi- cácia dos receptores, células e/ou composições recombinantes de |i- gação à proteína GPRC5D descritos no presente documento, por exemplo, ao diminuir a supressão ou morte da célula que expressa CAR administrada. Inibidores exemplificativos de IDO incluem, porém sem limitações, 1-metil-triptofano, indoximode (New Link Genetics) (consulte, por exemplo, Identificadores de Ensaio Clínico Nº NCTO1191216; NCTO1792050) e INCB024360 (Incyte Corp.) (consul- te, por exemplo, Identificador de Ensaio Clínico Nº: NOCTO1604889; NCTO1685255).
[00740] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui um agente citotóxico, por exemplo, CPX-351 (Celator Pharmaceuticals), citarabina, daunorrubicina, vosaroxina (Sunesis Pharmaceuticals), sa- pacitabina (Cyclacel Pharmaceuticals), idarrubicina ou mitoxantrona. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui um agente hipo- metilante, por exemplo, um inibidor de DNA metiltransferase, por exemplo, azacitidina ou decitabina.
[00741] Em outra modalidade, a terapia adicional é transplante, por exemplo, um transplante de células-tronco alogênicas.
[00742] Em algumas modalidades, a terapia adicional é uma terapia de linfodepleção. Acredita-se que a quimioterapia de linfodepleção me- lhora a enxertia e a atividade das células que expressam o receptor recombinante, tais como as células T CAR. Em algumas modalidades, a quimioterapia de linfodepleção pode aumentar as células T específi- cas para tumor transferidas de forma adotiva para proliferar in vivo através da proliferação homeostática (Grossman 2004, Stachel 2004). Em algumas modalidades, a quimioterapia pode reduzir ou eliminar células T reguladoras CD4* CD25*, as quais podem suprimir a função de células T transferidas adotivamente que têm como alvo o tumor (Turk 2004). Em algumas modalidades, a quimioterapia de linfodeple- ção antes da terapia com células T adotivas pode aumentar a expres- são do fator 1 derivado de células-tronco (SDF-1) na medula óssea, aumentando o retorno de células T modificadas para o local do tumor primário por meio da ligação de SDF-1 ao CXCR-4 expresso sobre a superfície das células T (Pinthus 2004). Em algumas modalidades, a quimioterapia de linfodepleção pode reduzir ainda mais a carga tumo- ral do indivíduo e, potencialmente, diminuir o risco e a gravidade de SRC.
[00743] Em algumas modalidades, a linfodepleção é realizada em um indivíduo, por exemplo, antes da administração de células modifi- cadas, por exemplo, células que expressam CAR. Em algumas moda- lidades, a linfodepleção compreende administrar um ou mais melfala- no, citoxano, ciclofosfamida e/ou fludarabina. Em algumas modalida- des, uma quimioterapia de linfodepleção é administrada ao indivíduo antes, simultaneamente ou após a administração (por exemplo, infu- são) de células manipuladas, por exemplo, células que expressam CAR. Em um exemplo, a quimioterapia de linfodepleção é administra- da ao indivíduo antes da administração de células modificadas, por exemplo, células que expressam CAR. Em algumas modalidades, a quimioterapia de linfodepleção é administrada 1 a 10 dias antes da administração de células manipuladas, tal como 1, 2, 3, 4, 5,6,7,8,9 ou 10 dias antes do início da administração de células manipuladas células ou pelo menos 2 dias antes, tal como pelo menos 3, 4, 5, 6 ou 7 dias antes, do início da administração da célula manipulada. Em al- gumas modalidades, o indivíduo recebe um agente de precondiciona- mento não mais do que 7 dias antes, tal como não mais do que 6, 5,4, 3 ou 2 dias antes do início da administração da célula modificada. O número de dias após a quimioterapia de linfodepleção durante os quais as células manipuladas são administradas pode ser determinado com base nas circunstâncias clínicas ou logísticas. Em alguns exem- plos, ajustes de dose ou outras variações no regime de quimioterapia de linfodepleção podem ser implementados em virtude da saúde de um indivíduo, tal como a função do órgão subjacente do indivíduo, conforme determinado pelo médico que faz o atendimento.
[00744] Em algumas modalidades, a quimioterapia de linfodepleção compreende administrar um agente de linfodepleção, tal como ciclo- fosfamida, fludarabina ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, o indivíduo recebe ciclofosfamida em uma dose entre ou entre cerca de 20 mg/kg e 100 mg/kg de peso corporal do indivíduo, tal como entre ou entre cerca de 40 mg/kg e 80 mg/kg. Em alguns aspec- tos, o indivíduo recebe cerca de 60 mg/kg de ciclofosfamida. Em al- gumas modalidades, a ciclofosfamida é administrada uma vez ao dia durante um ou dois dias. Em algumas modalidades, onde o agente de linfodepleção compreende ciclofosfamida, o indivíduo recebe ciclofos- famida em uma dose entre ou entre cerca de 100 mg/m? e 500 mg/m? da área de superfície corporal do indivíduo, tal como entre ou entre cerca de 200 mg/m? e 400 mg/m? ou 250 mg/m? e 350 mg/m?, inclusi- ve. Em alguns casos, o indivíduo recebe cerca de 300 mg/m? de ciclo- fosfamida. Em algumas modalidades, a ciclofosfamida pode ser admi- nistrada em uma dose única ou pode ser administrada em uma plurali- dade de doses, tal como fornecida diariamente, em dias alternados ou a cada três dias. Em algumas modalidades, a ciclofosfamida é admi- nistrada diariamente, por exemplo, durante 1-5 dias, por exemplo, du- rante 2 a 4 dias. Em alguns casos, o indivíduo recebe cerca de 300 mg/m? de ciclofosfamida, diariamente, durante 3 dias, antes de início da terapia celular.
[00745] Em algumas modalidades, onde o agente de linfodepleção compreende fludarabina e o indivíduo recebe fludarabina em uma do- se entre ou entre cerca de 1 mg/m? e 100 mg/m? da área de superfície corporal do indivíduo, tal como entre ou entre cerca de 10 mg/m? e 75 mg/m?, 15 mg/m? e 50 mg/m?, 20 mg/m? e 40 mg/m? ou 24 mg/m? e 35 mg/m?, inclusive. Em alguns casos, o indivíduo recebe cerca de 30 mg/m? de fludarabina. Em algumas modalidades, a fludarabina pode ser administrada em uma dose única ou pode ser administrada em uma pluralidade de doses, tal como fornecida diariamente, em dias alternados ou a cada três dias. Em algumas modalidades, a fludarabi- na é administrada diariamente, tal como durante 1-5 dias, por exem- plo, durante 2 a 4 dias. Em alguns casos, o indivíduo recebe cerca de mg/m? de fludarabina, diariamente, durante 3 dias, antes de início da terapia celular.
[00746] Em algumas modalidades, o agente de linfodepleção com- preende uma combinação de agentes, tal como uma combinação de ciclofosfamida e fludarabina. Assim, a combinação de agentes pode incluir ciclofosfamida em qualquer dose ou esquema de administração, tais como aqueles descritos acima, e fludarabina em qualquer dose ou esquema de administração, tais como aqueles descritos acima. Por exemplo, em alguns aspectos, o indivíduo recebe fludarabina em ou cerca de 30 mg/m?, diariamente, e ciclofosfamida em ou cerca de 300 mg/m?, diariamente, durante 3 dias.
[00747] Em algumas modalidades, uma terapia antiemética, exceto dexametasona ou outros esteroides, pode ser administrada antes da quimioterapia de linfodepleção. Em algumas modalidades, Mesna po- de ser usado para indivíduos com histórico de cistite hemorrágica.
[00748] Em algumas modalidades, o agente adicional é um vírus oncolítico. Em algumas modalidades, os vírus oncolíticos são capazes de se replicar seletivamente e desencadear a morte ou retardar o crescimento de uma célula cancerosa. Em alguns casos, os vírus on-
colíticos não têm efeito ou têm efeito mínimo sobre as células não cancerosas. Um vírus oncolítico inclui, porém sem limitações, um ade- novírus oncolítico, vírus do Herpes Simplex oncolítico, retrovírus onco- lítico, parvovírus oncolítico, vírus vaccinia oncolítico, vírus Sinbis onco- lítico, vírus de influenza oncolítico ou vírus de RNA oncolítico (por exemplo, vírus reovírus oncolítico de doença de Newcastle (NDV), ví- rus oncolítico do sarampo ou vírus oncolítico da estomatite vesicular (Vesicular Stomatitis Virus, VSV)).
[00749] Outros exemplos de terapia, tratamento e/ou agentes com- binados incluem agentes antialérgicos, antieméticos, analgésicos e terapias auxiliares. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui agentes citoprotetores, tais como neuroprotetores, captadores de radi- cais livres, cardioprotetores, neutralizadores de extravasamento de antraciclina e nutrientes.
[00750] Em algumas modalidades, um anticorpo usado como um agente adicional é conjugado ou de outra forma ligado a um agente terapêutico, por exemplo, um agente quimioterapêutico (por exemplo, Cytoxan, fludarabina, inibidor de histona desacetilase, agente desmeti- lante, vacina peptídica, antibiótico antitumoral, inibidor de tirosina qui- nase, agente alquilante, agente antimicrotúbulo ou antimitótico), agen- te anti-alérgico, agente antináusea (ou antiemético), analgésico ou agente citoprotetor descrito no presente documento. Em algumas mo- dalidades, o agente adicional é um conjugado de anticorpo-fármaco.
[00751] Em algumas modalidades, o agente adicional pode modu- lar, inibir ou estimular fatores específicos nos níveis de DNA, RNA ou proteína, tal como para aumentar ou aumentar determinados aspectos. Em algumas modalidades, o agente adicional pode modular os fatores no nível de ácido nucleico, por exemplo, DNA ou RNA, dentro das cé- lulas administradas, por exemplo, células manipuladas para expressar receptores recombinantes, por exemplo, CAR. Em algumas modalida-
des, um ácido nucleico inibidor, por exemplo, um dsRNA, por exemplo, um siRNA ou shRNA ou um agrupamento de repetições palindrômicas curtas regularmente espaçadas (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats, CRISPR), uma nuclease efetora similar a ativa- dor de transcrição (Transcription-Activator Like Effector Nuclease, (TALEN) ou uma endonuclease de dedo de zinco (Zinc Finger Endo- nuclease, ZFN), pode ser usada para inibir a expressão de uma molé- cula inibidora na célula modificada, por exemplo, célula que expressa CAR. Em algumas modalidades, o inibidor é um sShRNA. Em algumas modalidades, a molécula inibidora é inibida dentro da célula manipula- da, por exemplo, célula que expressa CAR. Em algumas modalidades, uma molécula de ácido nucleico que codifica uma molécula de dsRNA que inibe a expressão da molécula que modula ou regula, por exem- plo, inibe, a função da célula T está operativamente ligada a um pro- motor, por exemplo, um promotor derivado de HI ou U6, de modo que a molécula de dsRNA que inibe a expressão da molécula inibidora seja expressa dentro da célula modificada, por exemplo, célula que expres- sa CAR. Consulte, por exemplo, Brummelkamp T.R. et a/. (2002) Sci- ence 296: 550-553; Miyagishi M. et a/. (2002) Nat. Biotechnol. 19: 497-
500.
[00752] Em algumas modalidades, o agente adicional é capaz de romper o gene que codifica uma molécula inibidora, tal como quais- quer inibidores do ponto de verificação imune descritos no presente documento. Em algumas modalidades, a ruptura é por meio de elimi- nação, por exemplo, eliminação de todo um gene, éxon ou região e/ou substituição por uma sequência exógena, e/ou através de mutação, por exemplo, mutação por desvio de quadro ou missense, dentro do gene, tipicamente dentro um éxon do gene. Em algumas modalidades, a ruptura resulta em um códon terminal prematuro sendo incorporado ao gene, de modo que a molécula inibidora não seja expressa ou não seja expressa de uma forma que seja capaz de ser expressa sobre a superfície das células e/ou capaz de mediar a sinalização celular. À ruptura é geralmente realizada no nível do DNA. A ruptura é, em geral, permanente, irreversível ou não transitória.
[00753] Em alguns aspectos, a ruptura é realizada por edição gêni- ca, tal como o uso de uma proteína de ligação ao DNA ou ácido nu- cleico de ligação ao DNA que se liga ou hibridiza especificamente com o gene em uma região alvo da ruptura. Em alguns aspectos, a proteína ou ácido nucleico é acoplado a ou colocado em complexo com uma nuclease, tal como em uma proteína quimérica ou de fusão. Por exemplo, em algumas modalidades, a ruptura é efetuada usando uma fusão que compreende uma proteína que tem como alvo o DNA e uma nuclease, tal como uma nuclease de dedo de zinco (ZFN) ou nuclease efetora TAL (TALEN) ou uma nuclease guiada por RNA, tal como um sistema de CAS-agrupamento de repetições palindrômicas curtas re- gularmente espaçadas (CRISPR), tal como o sistema CRISPR-Cas9, específico para o gene que está sendo rompido. Em algumas modali- dades, os métodos de produção ou geração de células geneticamente modificadas, por exemplo, células que expressam CAR, incluem intro- duzir em uma população de células moléculas de ácidos nucleicos que codifcam um receptor antigênico geneticamente modificado (por exemplo, CAR) e moléculas de ácidos nucleicos que codificam um agente que tem como alvo uma molécula inibidora a qual é uma nu- clease de edição gênica, tal como uma fusão de uma proteína de que tem como alvo o DNA e uma nuclease, tal como uma ZFN ou TALEN ou uma nuclease guiada por RNA, tal como o sistema CRISPR-Cas9, específico para uma molécula inibidora.
[00754] “Qualquer um dos agentes adicionais descritos no presente documento pode ser preparado e administrado como terapia combina- da com o receptor recombinante de ligação à proteína GPRC5D (por exemplo, receptor antigênico quimérico) e/ou células modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recombinante) descrito no presente documento, tal como em composições farmacêu- ticas que compreendem um ou mais agentes para terapia combinada e um carreador farmaceuticamente aceitável, tal como qualquer um des- crito no presente documento.
Qualquer um dos agentes adicionais descritos no presente documento pode ser preparado e administrado como terapia combinada com o receptor recombinante de ligação à proteína GPRC5D (e ligação à proteína BOCMA) (por exemplo, receptor antigênico quimérico) e/ou células modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recombinante) descrito no presente documento, tal como em composições farmacêuticas que compreen- dem um ou mais agentes para terapia combinada e um carreador far- maceuticamente aceitável, tal como qualquer um descrito no presente documento.
Em algumas modalidades, o receptor recombinante de ligação à proteína GPRC5D (por exemplo, receptor antigênico quimé- rico), células manipuladas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recombinante), a pluralidade de células manipula- das que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recom- binante) podem ser administrados simultânea, sequencial ou concor- rentemente, em qualquer ordem, com os agentes, terapia ou tratamen- to adicionais, em que tal administração fornece níveis terapeuticamen- te eficazes de cada um dos agentes ao corpo do indivíduo.
Em algu- mas modalidades, o agente adicional pode ser coadministrado com os receptores, células e/ou composições recombinantes de ligação à pro- teína GPRC5D descritos no presente documento, por exemplo, tal co- mo parte da mesma composição farmacêutica ou usando o mesmo método de distribuição.
Em algumas modalidades, o agente adicional é administrado simultaneamente com os receptores, células e/ou com- posições recombinantes de ligação à proteína GPRC5D descritos no presente documento, mas em composições separadas. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma célula manipulada adicional, por exemplo, célula manipulada para expressar um receptor recombi- nante diferente, e é administrado na mesma composição ou em uma composição separada. Em algumas modalidades, o agente adicional é incubado com a célula manipulada, por exemplo, células que expres- sam CAR, antes de administração das células.
[00755] Em alguns exemplos, um ou mais agentes adicionais são administrados subsequentemente ou antes da administração dos re- ceptores, células e/ou composições recombinantes de ligação à prote- ína GPRC5D descritos no presente documento, separados por um pe- ríodo de tempo selecionado. Em alguns exemplos, um ou mais agen- tes adicionais são administrados subsequentemente ou antes da ad- ministração dos receptores, células e/ou composições recombinantes de ligação à proteína GPRC5D (e ligação à proteína BCMA) descritos no presente documento, separados por um período de tempo selecio- nado. Em alguns exemplos, o período de tempo é de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 1 mês, 2 meses ou 3 meses. Em alguns exemplos, um ou mais agentes adici- onais são administrados várias vezes e/ou os receptores, células e/ou composições recombinantes de ligação à proteína GPRC5D descritos no presente documento são administrados várias vezes. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente adicional é administrado antes dos receptores, células e/ou composições recombinantes de ligação à pro- teína GPRC5D descritos no presente documento, por exemplo, duas semanas, 12 dias, 10 dias, 8 dias, uma semana, 6 dias, 5 dias, 4 dias, 3 dias, 2 dias ou 1 dia antes da administração. Por exemplo, em algu- mas modalidades, o agente adicional é administrado após os recepto- res, células e/ou composições recombinantes de ligação à proteína GPRCB5D descritos no presente documento, por exemplo, duas sema-
nas, 12 dias, 10 dias, 8 dias, uma semana, 6 dias, 5 dias, 4 dias, 3 di- as, 2 dias ou 1 dia após a administração.
[00756] A dose do agente adicional pode ser qualquer quantidade terapeuticamente eficaz, por exemplo, qualquer quantidade de dose descrita no presente documento, e a dosagem apropriada do agente adicional pode depender do tipo de doença a ser tratada, o tipo, a do- se e/ou frequência do receptor, célula e/ou composição recombinante administrada, a gravidade e o curso da doença, se o receptor, célula e/ou composição recombinante é administrado para fins preventivos ou terapêuticos, terapia anterior, histórico clínico do paciente e respos- ta ao receptor, célula e/ou composição recombinante, e a critério do médico que faz o atendimento. O receptor, célula e/ou composição re- combinante e/ou o agente e/ou terapia adicional podem ser adminis- trados ao paciente de uma vez, repetidos ou administrados ao longo de uma série de tratamentos. VI. Artigos de Manufatura ou Kits
[00757] Também são fornecidos artigos de manufatura ou kits que contêm os receptores recombinantes fornecidos (por exemplo, CARs), células geneticamente modificadas e/ou composições que compreen- dem os mesmos. Os artigos de manufatura podem incluir um recipien- te e um rótulo ou bula no recipiente ou associado ao mesmo. Recipien- tes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascos, seringas, tu- bos de ensaio, sacos de solução IV, etc. Os recipientes podem ser formados a partir de uma variedade de materiais, tal como vidro ou plástico. Em algumas modalidades, o recipiente tem uma abertura de acesso estéril. Recipientes exemplificativos incluem sacos de solução intravenosa, frascos, incluindo aqueles com rolhas perfuráveis por uma agulha para injeção. O artigo de manufatura ou kit pode incluir ainda uma bula indicando que as composições podem ser usadas para tratar uma condição particular, tal como uma condição descrita no presente documento (por exemplo, mieloma múltiplo). Alternativa ou adicional- mente, o artigo de manufatura ou kit pode incluir ainda outro ou o mesmo recipiente que compreende um tampão farmaceuticamente aceitável. Ele pode ainda incluir outros materiais, tais como outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e/ou seringas.
[00758] O rótulo ou bula informativa pode indicar que a composição é usada para tratar a doença, transtorno ou condição associada à pro- teína GPRC5D ou que expressa GPRC5D em um indivíduo. O rótulo ou a bula que está no recipiente ou associada ao mesmo pode indicar instruções para reconstituição e/ou uso da formulação. O rótulo ou bu- la pode ainda indicar que a formulação é útil ou se destina à adminis- tração subcutânea, intravenosa ou outros modos de administração pa- ra tratar ou prevenir uma doença, transtorno ou condição associada à proteína GPRC5D ou que expressa GPRC5D em um indivíduo.
[00759] O recipiente, em algumas modalidades, contém uma com- posição que é por si só ou combinada com outra composição eficaz para tratar, prevenir e/ou diagnosticar a condição. O artigo de manufa- tura ou kit pode incluir (a) um primeiro recipiente com uma composição contida no mesmo (isto é, primeiro medicamento), em que a composi- ção inclui o receptor recombinante (por exemplo, CAR ou célula mani- pulada que contêm o CAR); e (b) um segundo recipiente com uma composição contida no mesmo (isto é, segundo medicamento), em que a composição inclui um outro agente, tal como um agente citotóxi- co ou terapêutico, e cujo artigo ou kit compreende ainda instruções no rótulo ou bula para tratar o indivíduo com o segundo medicamento em uma quantidade eficaz.
[00760] Em algumas modalidades, o artigo de manufatura ou kit pode incluir (a) um primeiro recipiente com uma composição contida no mesmo (ou seja, primeiro medicamento), em que a composição in- clui o receptor recombinante anti-GPRC5D (por exemplo, CAR ou cé-
lula modificada que contêm o CAR); (b) um segundo recipiente com uma composição contida no mesmo (isto é, segundo medicamento), em que a composição inclui um segundo receptor recombinante (por exemplo, CAR ou célula modificada que contêm o CAR) que tem como alvo um epítopo diferente de GPRC5D ou um antígeno diferente (por exemplo, BCMA), e cujo artigo ou kit compreende ainda instruções no rótulo ou bula para tratar o indivíduo com o segundo medicamento em uma quantidade eficaz. Em algumas modalidades, o artigo de manufa- tura ou kit pode incluir ainda (c) um terceiro recipiente com uma com- posição contida no mesmo (isto é, terceiro medicamento), em que a composição inclui um outro agente, tal como um agente citotóxico ou terapêutico, e cujo artigo ou kit compreende ainda instruções no rótulo ou bula para tratar o indivíduo com o terceiro medicamento em uma quantidade eficaz.
[00761] A menos que definido de outra forma, todos os termos da técnica, notações e outros termos técnicos e científicos ou terminolo- gia usados no presente documento se destinam a ter o mesmo signifi- cado conforme é comumente entendido por aqueles versados na téc- nica à qual o assunto reivindicado se refere. Em alguns casos, termos com significados comumente compreendidos são definidos no presen- te documento para clareza e/ou para pronta referência, e a inclusão de tais definições no presente documento não deve necessariamente ser interpretada como representando uma diferença substancial em rela- ção ao que é geralmente entendido na técnica.
[00762] Conforme usado no presente documento, referência a uma "forma correspondente" de um anticorpo significa que, ao comparar uma propriedade ou atividade de dois anticorpos, a propriedade é comparada usando a mesma forma do anticorpo. Por exemplo, se for afirmado que um anticorpo tem maior atividade comparado com a ati-
vidade da forma correspondente de um primeiro anticorpo, isto signifi- ca que uma forma particular, tal como um scFv deste anticorpo, tem maior atividade comparado com a forma scFv do primeiro anticorpo.
[00763] O termo "região Fc", no presente documento, é usado para definir uma região C-terminal de uma cadeia pesada de imunoglobuli- na que contém pelo menos uma porção da região constante. O termo inclui regiões Fc de sequência nativa e regiões Fc variantes. Em uma modalidade, uma região Fc de cadeia pesada de IgG humana se es- tende a partir de Cys226 ou de Pro230, até o terminal carboxila da ca- deia. No entanto, a lisina C-terminal (Lys447) da região Fc pode ou não estar presente. A menos que especificado de outra forma no pre- sente documento, a numeração de resíduos de aminoácidos na região Fc ou região constante está de acordo com o sistema de numeração EU, também denominado de índice EU, conforme descrito em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5º Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
[00764] Os termos "anticorpo de comprimento total", "anticorpo in- tacto" e "anticorpo inteiro" são usados indistintamente no presente do- cumento para referir-se a um anticorpo que tem uma estrutura subs- tancialmente similar a uma estrutura de anticorpo nativo ou que tem cadeias pesadas que contêm uma região Fc conforme definido no pre- sente documento.
[00765] Um anticorpo "isolado" é aquele que foi separado de um componente de seu ambiente natural. Em algumas modalidades, um anticorpo é purificado para mais de 95 % ou 99 % de pureza, conforme determinado, por exemplo, por meio de eletroforese (por exemplo, SDS-PAGE, focagem isoelétrica (IEF), eletroforese capilar) ou croma- tográfica (por exemplo, troca iônica ou HPLC de reversa fase). Para uma revisão de métodos de avaliação da pureza do anticorpo consul- te, por exemplo, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848: 79-87 (2007).
[00766] Um ácido nucleico "isolado" refere-se a uma molécula de ácidos nucleicos que foi separada de um componente de seu ambiente natural. Um ácido nucleico isolado inclui uma molécula de ácidos nu- cleicos contida em células que normalmente contêm a molécula de ácidos nucleicos, mas a molécula de ácidos nucleicos está presente extracromossomicamente ou em uma localização cromossômica que é diferente de sua localização cromossômica natural.
[00767] "Ácido nucleico isolado que codifica um anticorpo anti- GPRCB5D" refere-se a uma ou mais moléculas de ácidos nucleicos que codificam cadeias pesada e leve de anticorpo (ou fragmentos dos mesmos), incluindo tais moléculas de ácidos nucleicos em um único vetor ou vetores separados, e tais moléculas de ácidos nucleicos pre- sentes em um ou mais locais em uma célula hospedeira.
[00768] Os termos "célula hospedeira", "linhagem de células hos- pedeira" e "cultura de células hospedeiras" são usados indistintamente e referem-se a células nas quais o ácido nucleico exógeno foi introdu- zido, incluindo a progênie de tais células. As células hospedeiras in- cluem "transformantes" e "células transformadas", incluindo a célula transformada primária e a progênie derivada da mesma, independen- temente do número de passagens. A progênie pode não ser comple- tamente idêntica quanto ao teor de ácidos nucleicos a uma célula-mãe, mas pode conter mutações. A progênie mutante que tem a mesma função ou atividade biológica conforme rastreado ou selecionado na célula originalmente transformada está incluída no presente documen- to.
[00769] Os termos "polipeptídeo" e "proteína" são usados indistintamente para referir-se a um polímero de resíduos de aminoá- cidos e não estão limitados a um comprimento mínimo. Os polipeptí- deos, incluindo os anticorpos e cadeias de anticorpos e outros peptí- deos, por exemplo, ligantes, podem incluir resíduos de aminoácidos,
incluindo resíduos de aminoácidos naturais e/ou não naturais. Os ter- mos também incluem modificações pós-expressão do polipeptídeo, por exemplo, glicosilação, sialilação, acetilação, fosforilação e assim por diante. Em alguns aspectos, os polipeptídeos podem conter modifica- ções em relação a uma sequência nativa ou natural, contanto que a proteína mantenha a atividade desejada. Estas modificações podem ser deliberadas, tal como por meio de mutagênese sítio dirigida, ou podem ser acidentais, tal como por meio de mutações de hospedeiros que produzem as proteínas ou erros em virtude de amplificação por PCR.
[00770] Conforme usado no presente documento, "porcentagem (%) de identidade de sequência de aminoácidos" e "porcentagem de identidade" e "identidade de sequência", quando usado em relação a uma sequência de aminoácidos (sequência polipeptídica de referên- cia), é definido como a porcentagem de resíduos de aminoácidos em uma sequência candidata (por exemplo, o anticorpo ou fragmento em questão) que são idênticos aos resíduos de aminoácidos na sequência polipeptídica de referência após alinhamento das sequências e intro- dução de lacunas, se necessário, para atingir a porcentagem máxima de identidade de sequência, e não considerando quaisquer substitui- ções conservativas como parte da identidade de sequência. O alinha- mento para fins de determinação da identidade percentual da sequên- cia de aminoácidos pode ser alcançado de várias maneiras que estão dentro da perícia na técnica, por exemplo, usando software de compu- tador publicamente disponível, tal como o software BLAST, BLAST-?2, ALIGN ou Megalign (DNASTAR). Aqueles versados na técnica podem determinar os parâmetros apropriados para o alinhamento de sequên- cias, incluindo quaisquer algoritmos necessários para atingir o alinha- mento máximo ao longo de todo o comprimento das sequências que estão sendo comparadas.
[00771] Uma substituição de aminoácido pode incluir a substituição de um aminoácido em um polipeptídeo por outro aminoácido. As subs- tituições de aminoácidos podem ser introduzidas em uma molécula de ligação, por exemplo, anticorpo, de interesse e os produtos seleciona- dos quanto a uma atividade desejada, por exemplo, ligação a antígeno retida/aprimorada ou imunogenicidade diminuída.
[00772] Os aminoácidos podem, em geral, ser agrupados de acordo com as seguintes propriedades em comum da cadeia lateral: (1) hidrofóbicos: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, lle; (2) hidrofílicos neutros: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) ácidos: Asp, Glu; (4) básicos: His, Lys, Arg; (5) resíduos que influenciam a orientação da cadeia: Gly, Pro; (6) aromáticos: Trp, Tyr, Phe.
[00773] Substituições não conservativas de aminoácidos envolve- rão a troca de um membro de uma destas classes por outra classe.
[00774] O termo "vetor", conforme usado no presente documento, refere-se a uma molécula de ácido nucleico capaz de propagar outro ácido nucleico ao qual ele está ligado. O termo inclui o vetor como uma estrutura de ácidos nucleicos autorreplicante, bem como o vetor incorporado no genoma de uma célula hospedeira na qual ele foi intro- duzido. Determinados vetores são capazes de controlar a expressão de ácidos nucleicos aos quais eles estão operativamente ligados. Tais vetores são denominados no presente documento como "vetores de expressão".
[00775] O termo "bula" é usado para referir-se às instruções nor- malmente incluídas em embalagens comerciais de produtos terapêuti- cos, as quais contêm informações sobre as indicações, uso, dosagem, administração, terapia combinada, contra-indicações e/ou advertências relativas ao uso de tais produtos terapêuticos.
[00776] Conforme usado no presente documento, as formas no sin- gular "um", "uma" e "o/a" incluem as referências no plural, a menos que o contexto dite claramente o contrário. Por exemplo, "um" ou "uma" significa "pelo menos um(a)" ou "um(a) ou mais". Deve ser en- tendido que aspectos, modalidades e variações descritos no presente documento incluem "que compreende(m)", "que consiste(m)" e/ou "que consiste(m) essencialmente em" aspectos, modalidades e variações.
[00777] Aolongo da presente invenção, vários aspectos do objeto reivindicado são apresentados em um formato de faixa. Deve ser en- tendido que a descrição em formato de faixa é meramente por conve- niência e brevidade e não deve ser interpretada como uma limitação inflexível no escopo do assunto reivindicado. Consequentemente, a descrição de uma faixa deve ser considerada como tendo descrito es- pecificamente todas as subfaixas possíveis, bem como valores numé- ricos individuais dentro desta faixa. Por exemplo, onde uma faixa de valores é fornecida, deve ser entendido que cada valor intermediário, entre o limite máximo e mínimo desta faixa e qualquer outro valor de- clarado ou intermediário nesta faixa declarada, está abrangido no as- sunto reivindicado. Os limites máximo e mínimo destas faixas menores podem ser independentemente incluídos nas faixas menores e tam- bém são abrangidos dentro do assunto reivindicado, sujeito a qualquer limite especificamente excluído na faixa declarada. Quando a faixa de- clarada inclui um ou ambos os limites, faixas que excluem um ou am- bos os limites incluídos também estão incluídos no assunto reivindica- do. Isto se aplica independentemente da amplitude da faixa.
[00778] O termo "cerca de", conforme usado no presente documen- to, refere-se à faixa de erro usual para o respectivo valor prontamente conhecido pelo especialista neste campo técnico. A referência a "cerca de" um valor ou parâmetro no presente documento inclui (e descreve)
modalidades que são direcionadas a este valor ou parâmetro per se. Por exemplo, a descrição referente a "cerca de X" inclui a descrição de "x".
[00779] Conforme usado no presente documento, uma "composi- ção" refere-se a qualquer mistura de dois ou mais produtos, substân- cias ou compostos, incluindo células. Ela pode ser uma solução, uma suspensão, líquido, pó, uma pasta, solução aquosa, não aquosa ou qualquer combinação dos mesmos.
[00780] Conforme usado no presente documento, uma afirmação de que uma célula ou população de células é "positiva" para um mar- cador específico refere-se à presença detectável na célula de um mar- cador específico, tipicamente um marcador na superfície. Quando de referência a um marcador na superfície, o termo refere-se à presença de expressão sobre a superfície detectada por meio de citometria de fluxo, por exemplo, através de coloração com um anticorpo que se liga especificamente ao marcador e detecção do dito anticorpo, em que a coloração é detectável por meio de citometria de fluxo em um nível substancialmente acima da coloração detectada realizando o mesmo procedimento com um controle de isotipo sob condições idênticas e/ou em um nível substancialmente similar àquele da célula conhecida co- mo positiva para o marcador e/ou em um nível substancialmente mais alto do que para uma célula conhecidamente negativa para o marca- dor.
[00781] Conforme usado no presente documento, uma afirmação de que uma célula ou população de células é "negativa" para um mar- cador específico refere-se à ausência de presença detectável substan- cial na célula de um marcador específico, tipicamente um marcador na superfície. Quando de referência a um marcador na superfície, o termo refere-se à ausência de expressão sobre a superfície detectada por meio de citometria de fluxo, por exemplo, através de coloração com um anticorpo que se liga especificamente ao marcador e detecção do dito anticorpo, em que a coloração não é detectada por meio de cito- metria de fluxo em um nível substancialmente acima da coloração de- tectada realizando o mesmo procedimento com um controle compatí- vel com isotipo sob condições idênticas e/ou em um nível substancial- mente inferior àquele da célula conhecida por ser positiva para o mar- cador e/ou em um nível substancialmente similar àquele de uma célula conhecida por ser negativa para o marcador. VIII. MODALIDADES EXEMPLIFICATIVAS
[00782] Dentre as modalidades fornecidas estão:
[00783] 1.Um receptor antigênico quimérico que compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69;
(2) um espaçador de pelo menos 125 aminoácidos de com- primento; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[00784] 2.Um receptor antigênico quimérico que compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma região determinante de complementaridade de cadeia pe- sada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complemen- taridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VH selecionada a partir de SEQ ID NOS: 21, 23,25, 27,29,31 e33;e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VL selecionada a partir de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 e 69; (2) um espaçador de pelo menos 125 aminoácidos de com- primento; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[00785] 3. Um receptor antigênico quimérico que compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especifi- camente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5,
Membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antíge- no extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos se- lecionada a partir de SEQ ID NOS: 75, 78, 80, 82, 90, 93, 95, 97, 105, 108, 110, 112, 120, 123, 125, 127, 135, 138, 140, 142, 152, 162, 165, 167 e 169; (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoá- cidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 76, 79, 81, 83, 91, 94, 96, 98, 106, 109, 111, 113, 121, 124, 126, 128, 136, 139, 141, 143, 150, 153, 154, 155, 163, 166, 168 e 170; e (c) uma CDR-H3 que compre- ende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 77, 84, 92, 99, 107, 114, 122, 129, 137, 144, 151, 156, 164 e 171;e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos seleci- onada a partir de SEQ ID NOS: 85, 88, 100, 103, 115, 118, 130, 133, 145, 148, 157, 160, 172 e 174; (b) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 86, 89, 101, 104, 116, 119, 131, 134, 146, 149, 158 e 161; e (c) uma CDR- L3 que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 87, 102, 117, 132, 147, 159, 173, 175 e 297; (2) um espaçador de pelo menos 125 aminoácidos de com- primento; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[00786] 4.O receptor antigênico quimérico de acordo com a moda- lidade 2 ou a modalidade 3, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende: uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69.
[00787] 5.O receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-4, em que o espaçador tem um comprimento de entre 125 e 300 ou de entre cerca de 125 e cerca de 300, de entre 125 e 250 ou de entre cerca de 125 e cerca de 250, de entre 125 e 230 ou de entre cerca de 125 e cerca de 230, de entre 125 e 200 ou de entre cerca de 125 e cerca de 200, de entre 125 e 180 ou de entre cerca de 125 e cerca de 180, de entre 125 e 150 ou de entre cerca de 125 e cerca de 150, de entre 150 e 300 ou de entre cerca de 150 e cerca de 300, de entre 150 e 250 ou de entre cerca de 150 e cerca de 250, de entre 150 e 230 ou de entre cerca de 150 e cerca de 230, de entre 150 e 200 ou de entre cerca de 150 e cerca de 200, de entre 150 e 180 ou de entre cerca de 150 e cerca de 180, de entre 180 e 300 ou de entre cerca de 180 e cerca de 300, de entre 180 e 250 ou de entre cerca de 180 e cerca de 250, de entre 125 e 300 ou de entre cerca de 125 e cerca de 300, de entre 180 e 230 ou de entre cerca de 180 e cerca de 230, de entre 180 e 200 ou de entre cerca de 180 e cerca de 200, de entre 200 e 300 ou de entre cerca de 200 e cerca de 300, de entre 200 e 250 ou de entre cerca de 200 e cerca de 250, de entre 200 e 230 ou de entre cerca de 200 e cerca de 230, de entre 230 e 300 ou de entre cerca de 230 e cerca de 300, de entre 230 e 250 ou de entre cerca de 230 e cerca de 250 ou de entre 250 e 300 ou de entre cerca de 250 e cerca de 300.
[00788] 6.O receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-5, em que:
[00789] o espaçador tem ou tem pelo menos cerca de 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 ou 229 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimen- to entre qualquer um dos anteriores; ou
[00790] o espaçador tem ou tem pelo menos cerca de 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 ou 229 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimen- to entre qualquer um dos anteriores.
[00791] 7.O receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-6, em que o espaçador compreende uma por- ção de uma imunoglobulina.
[00792] 8.O receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-7, em que o espaçador compreende uma se- quência de uma região de dobradiça, uma região CH2 e CH3.
[00793] 9. O receptor antigênico quimérico de acordo com a moda- lidade 8, em que: a região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4 e/ou uma região de dobradiça de I1gG2, em que a região de dobradiça de IgG4 é opcionalmente uma região de dobradiça de IgG4 humana e a região de dobradiça de I9gG2 é opcio- nalmente uma região de dobradiça de IgG2 humana; a região CH2 compreende a totalidade ou uma porção de uma CH2 de IgG4 e/ou uma CH2 de IgG2, em que a CH2 de IgG4 é opcionalmente uma CH2 de IgG4 humana e a CH2 de IgG2 é opcionalmente uma CH2 de IgG2 humana; e/ou a região CH3 compreende a totalidade ou uma porção de uma CH3 de IgG4 e/ou uma CH3 de IgG2, em que a CH3 de IgG4 é opcionalmente uma CH3 de IgG4 humana e a CH3 de IgG2 é opcionalmente uma CH3 de IgG2 humana.
[00794] 10.O receptor antigênico quimérico de acordo com a moda- lidade 8 ou a modalidade 9, em que as regiões de dobradiça, CH2 e CH3 compreendem a totalidade ou uma porção de uma dobradiça, a totalidade ou uma porção de uma CH2 e a totalidade ou uma porção de uma CH3 de IgG4 humana.
[00795] 11.0 receptor antigênico quimérico de acordo com a moda- lidade 8 ou a modalidade 9, em que uma ou mais das regiões de do- bradiça, CH2 e CH3 são quiméricas e compreendem uma dobradiça, CH2 e CH3 de IgG4 humana e IgG2 humana.
[00796] 12. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-11, em que o espaçador compreende a região de dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma região de dobradiça de IgG4 modificada que compreende pelo menos uma substituição de aminoácido comparado com a região de dobradiça de IgG4 humana; uma região CH2 quimérica de I9gG2/4; e uma região CH3 de IgG4.
[00797] 13. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-12, em que o espaçador é ou compreen- de (i) a sequência apresentada em SEQ ID NO: 17; (ii) uma variante funcional de SEQ ID NO: 17 que tem pelo menos ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 17; ou (iii) uma porção contígua de (i) ou (ii) que tem pelo menos 125 ami- noácidos de comprimento.
[00798] 14. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual-
quer uma das modalidades 1-13, em que o espaçador é ou compreen- de a sequência apresentada em SEQ ID NO: 17.
[00799] 15. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-14, em que o espaçador é ou compreen- de a sequência de aminoácidos codificada pela sequência de nucleotí- deos apresentada em SEQ ID NO: 48.
[00800] 16. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-15, em que: a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 22 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 22; a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 63 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de
95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 63;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 24;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 64 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 64;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 25; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 26 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 26;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 25; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 65 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 65;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de
95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 28;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 66 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 66;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 29; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 30;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 29; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 67 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 67;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 31; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 32 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 32;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 31; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 68 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de
95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 68; a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 33 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 33; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 34 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 34; ou a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 33 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 33; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 69 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 69.
[00801] 17. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-16, em que: a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS:
80, 81 e 77, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 82, 83 e 84, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 88, 89 e 87, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 95, 96, 92, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 97, 98 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 103, 104 e 102, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 110, 111 e 107, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 112, 113 e 114, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 118, 119 e 117, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS:
125, 126 e 122, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 141 e 137, respectivamente, e a região VL compreende a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectiva- mente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 142, 143 e 144, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 148, 149 e 147, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 142, 155 e 156, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 160, 161 e 159, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS:
167, 168 e 164, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 172, 86, 173, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 169, 170 e 171, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 174, 89 e 175, respectivamente; ou a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 169, 170 e 171, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 174, 89 e 297, respectivamente.
[00802] 18. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-17, em que: a região VH e a região VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 22, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 63, respectivamente; a região VH e a região VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 64, respectivamente; a região VH e a região VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 25 e 26, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 25 e 65, respectivamente; a região VH e a região VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e
66, respectivamente; a região VH e a região VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 29 e 30, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 29 e 67, respectivamente; a região VH e a região VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 32, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 68, respectivamente; ou a região VH e a região VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 33 e 34 ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 33 e 69, respectivamente, respectivamente.
[00803] 19. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-18, em que: a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 22 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 22; a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 63 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 63;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 24;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 64 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 64;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 28;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 66 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 66;
a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 31; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 32 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 32; ou a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 31; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 68 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 68.
[00804] 20. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-19, em que: a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 80, 81 e 77, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS:
82, 83 e 84, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 88, 89 e 87, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 95, 96, 92, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 97, 98 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 103, 104 e 102, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente;
a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente; ou a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS:
142, 155 e 156, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 160, 161 e 159, respectivamente.
[00805] 21.0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-20, em que: a região VH e a região VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 22, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 63, respectivamente; a região VH e a região VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 64, respectivamente; a região VH e a região VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 66, respectivamente; ou a região VH e a região VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 32, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 68, respectivamente.
[00806] 22.0 receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-21, em que o domínio de ligação a antí- geno extracelular tem reatividade cruzada com ou se liga ao GPRC5D de camundongo.
[00807] 23.0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-22, em que o domínio de ligação a antí- geno extracelular tem reatividade cruzada com ou se liga ao GPRC5D de cynomolgus.
[00808] 24.0 receptor antigênico quimérico de acordo com qual-
quer uma das modalidades 1-21, em que o domínio de ligação a antí- geno extracelular não tem reatividade cruzada com ou não se liga ao GPRC5D de camundongo ou GPRC5D de cynomolgus.
[00809] 25.0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-21 e 24, em que: a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 28; ou a região VH compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a região VL compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 66 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 66.
[00810] 26.0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual-
quer uma das modalidades 1-21, 24 e 25, que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende uma CDR-H1, CDR- H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID NO: 27; e uma região variável de cadeia leve (VL) que compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID NO: 28 ou 66;
[00811] 27. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-21 e 24-26, em que a região VH com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região VL compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.
[00812] 28. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-21 e 24-26, em que a região VH com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e a região VL compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente.
[00813] 29. 0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-21 e 24-26, em que a região VH com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente, e a região VL compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.
[00814] 30. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-21 e 24-26, em que a região VH com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente, e a região VL compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.
[00815] 31.O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-21 e 24-30, em que a região VH e a re- gião VL compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em
SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente, ou a sequência de aminoáci- dos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 66, respectivamente.
[00816] 32. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-31, em que o domínio de ligação a antí- geno extracelular é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia.
[00817] 33. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-32, em que o fragmento de anticorpo com uma única cadeia é ou compreende um fragmento variável com uma única cadeia (scFv).
[00818] 34. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-33, em que a região VH e a região VL são unidas através de um ligante flexível.
[00819] 35.O receptor antigênico quimérico de acordo com a moda- lidade 34, em que o ligante compreende a sequência de aminoácidos GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 52).
[00820] 36.O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-35, em que a região VH é amino-terminal à região VL.
[00821] 37.O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-36, em que: o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende uma sequência de aminoácidos selecionado a partir de SEQ ID NOS: 1,3, 5, 7, 9, 11 e 13 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionado a partir de SEQ ID NOS: 1,3, 5,7,9, 11 e 13; e/ou o domínio de ligação a antígeno extracelular é codificado pela sequência de nucleotídeos selecionado a partir de SEQ ID NOS: 257, 259, 261, 263, 265, 267 e 269 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de nucleotídeos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 257, 259, 261, 263, 265, 267 e 269.
[00822] 38. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-37, em que o domínio de ligação a antí- geno extracelular compreende a sequência de aminoácidos seleciona- da a partir de SEQ ID NOS: 1,3, 5,7,9, 11 e 13.
[00823] 39. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-37, em que o domínio de ligação a antí- geno extracelular compreende a sequência de aminoácidos seleciona- da a partir de SEQ ID NOS: 1, 3, 7 e 11 ou uma sequência de aminoá- cidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 1,3,7 e 11.
[00824] 40. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-37 e 39, em que o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos selecionada a par- tir de SEQ ID NOS: 1,3,7 e 11.
[00825] 41. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-36 e 38, em que o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 7.
[00826] 42. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-37, 39 e 41, em que o domínio de liga- ção a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7.
[00827] 43. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-35, em que a região VH é carbóxi- terminal à região VL region.
[00828] 44. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-35 e 43, em que: o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2,4, 6, 8, 10, 12 e 14 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12 e 14; e/ou o domínio de ligação a antígeno extracelular é codificado pela sequência de nucleotídeos selecionado a partir de SEQ ID NOS: 258, 260, 262, 264, 266, 268 e 270 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de nucleotídeos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 258, 260, 262, 264, 266, 268 e 270.
[00829] 45. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-35, 43 e 44, em que o domínio de liga- ção a antígeno extracelular compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2, 4, 6,8, 10, 12 e 14.
[00830] 46. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-35, 43 e 44, em que o domínio de liga- ção a antígeno extracelular compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2, 4, 8 e 12 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2, 4,8 e 12.
[00831] 47. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-35, 43, 44 e 46, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende a sequência de aminoáci- dos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2,4,8 e 12.
[00832] 48. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-35, 43, 44 e 46, em que o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8.
[00833] 49. 0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual-
quer uma das modalidades 1-35, 43, 44, 46 e 48, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende a sequência de aminoáci- dos apresentada em SEQ ID NO: 8.
[00834] 50. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-49, em que a região de sinalização intra- celular compreende um domínio de sinalização citoplásmico intracelu- lar.
[00835] 51.0 receptor antigênico quimérico de acordo com a moda- lidade 50, em que o domínio de sinalização intracelular é capaz de in- duzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um compo- nente do receptor de células T (TCR) e/ou compreende um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM).
[00836] 52.0 receptor antigênico quimérico de acordo com a moda- lidade 50 ou a modalidade 51, em que o domínio de sinalização intra- celular é ou compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta (CD37) ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma.
[00837] 53. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 50-52, em que o domínio de sinalização intracelular é humano ou é proveniente de uma proteína humana.
[00838] 54. 0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 50-53, em que o domínio de sinalização intracelular é ou compreende a sequência de aminoácidos apresenta- da em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pe- lo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20.
[00839] 55.0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 50-54, em que a região de sinalização in-
tracelular compreende ainda uma região de sinalização coestimulado- ra.
[00840] 56.O receptor antigênico quimérico de acordo com a moda- lidade 55, em que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimulado- ra de células T ou a porção de sinalização da mesma.
[00841] 57.0 receptor antigênico quimérico de acordo com a moda- lidade 55 ou a modalidade 56, em que a região de sinalização coesti- muladora compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas.
[00842] 58. 0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 55-57, em que a região de sinalização co- estimuladora é humano ou é proveniente de uma proteína humana.
[00843] 59. 0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 55-58, em que a região de sinalização co- estimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28.
[00844] 60. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 55-59, em que a região de sinalização co- estimuladora é ou compreende a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.
[00845] 61. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 55-58, em que a região de sinalização co- estimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de 4- 1BB.
[00846] 62. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 55-58 e 61, em que a região de sinalização coestimuladora é ou compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequên- cia apresentada em SEQ ID NO: 19.
[00847] 63. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 55-62, em que a região de sinalização co- estimuladora está entre o domínio transmembrana e a região de sinali- zação intracelular.
[00848] 64. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-63, em que o domínio transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CD8.
[00849] 65.0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-64, em que o domínio transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana derivado de CD28.
[00850] 66. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-65, em que o domínio transmembrana é humano ou é proveniente de uma proteína humana.
[00851] 67. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-66, em que o domínio transmembrana é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresen-
tada em SEQ ID NO: 18.
[00852] 68. Um receptor antigênico quimérico que compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 27; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 28 ou 66; (2) um espaçador que compreende uma dobradiça quiméri- ca de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresen- tado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana de CD28 humana; e (4) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta (CD36) e um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T.
[00853] 69.O receptor antigênico quimérico de acordo com a moda- lidade 68, em que: a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VH apresen- tada em SEQ ID NO: 27; e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID NO: 28 ou 66; ou a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; ou a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.
[00854] —70.Um receptor antigênico quimérico que compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C,
Grupo 5, Membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende:
uma região VH que compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID NO: 27; e uma região variável leve (VL) que compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da se- quência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID NO: 28 ou 66; ou uma região VH que compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e uma região VL que compre- ende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente;
uma região VH que compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e uma região VL que compre- ende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente;
uma região VH que compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente, e uma região VL que compre- ende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; ou uma região VH que compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente, e uma região VL que compre- ende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente;
(2) um espaçador que compreende uma dobradiça quiméri- ca de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresen- tado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana de CD28 humana; e (4) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3 humana (CD36) e um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana ou 4-1BB huma- na.
[00855] 71.0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 68-70, em que: o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende a região VH apresentada em SEQ ID NO: 27 e a região VL apresentada em SEQ ID NO: 28 ou 66; e/ou o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende um scFv apresentado em SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO: 8.
[00856] 72. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 68-71, em que o domínio transmembrana é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18.
[00857] 73.O receptor antigênico quimérico de acordo com a moda- lidade 72, em que o domínio transmembrana é ou compreende a se- quência apresentada em SEQ ID NO: 18.
[00858] 74. 0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 68-73, em que a região de sinalização in- tracelular compreende (a) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20 e (b) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.
[00859] 75.0O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 68-74, em que a região de sinalização in- tracelular é ou compreende as sequências apresentadas em SEQ ID NO: 20 e SEQ ID NO: 46.
[00860] 76. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 68-73, em que a região de sinalização in- tracelular compreende (a) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20 e (b) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.
[00861] 77. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 68-73 e 76, em que a região de sinalização intracelular é ou compreende as sequências apresentadas em SEQ ID NO: 20 e SEQ ID NO: 19.
[00862] 78. O receptor antigênico quimérico de acordo com qual- quer uma das modalidades 1-77, em que receptor antigênico quiméri- co codificado compreende, a partir de seu N para C término, na ordem: o domínio de ligação a antígeno, o espaçador, o domínio transmem- brana e a região de sinalização intracelular.
[00863] 79. Um polinucleotídeo que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica o receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-78.
[00864] 80. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 79, em que o ácido nucleico que codifica o espaçador compreende pelo me- nos um sítio doador de splicing e/ou aceitador de splicing modificado, o dito sítio doador e/ou aceitador de splicing modificado que compre- ende uma ou mais modificações de nucleotídeo que correspondem a um sítio doador de splicing de referência e/ou um sítio aceitador de splicing de referência contidos em uma sequência apresentada em SEQ ID NO: 73.
[00865] 81.O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 80, em que a uma ou mais modificações de nucleotídeo compreendem uma substituição de aminoácido.
[00866] 82.0O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 80 ou a modalidade 81, em que o sítio doador de splicing de referência e/ou o sítio aceitador de splicing de referência são sítios de splicing canôni- cos, não canônicos ou crípticos.
[00867] 83.O polinucleotídeo de qualquer de acordo com a modali- dade 80-82, em que: o(s) sítio(s) doador(es) de splicing de referência e/ou o(s)
sítio(s) aceitador(es) de splicing de referência têm uma pontuação de previsão de sítio de splicing de pelo menos em ou cerca de 0,4, em ou cerca de 0,5, em ou cerca de 0,6, em ou cerca de 0,70, em ou cerca de 0,75, em ou cerca de 0,80, em ou cerca de 0,85, em ou cerca de 0,90, em ou cerca de 0,95, em ou cerca de 0,99 ou em ou cerca de 1,0; e/ou o(s) sítio(s) doador(es) de splicing de referência e/ou o(s) sítio(s) aceitador(es) de splicing de referência são previstos como es- tando envolvidos em um evento de splicing com uma probabilidade de pelo menos em ou cerca de 40 %, em ou cerca de 50 %, em ou cerca de 60 %, em ou cerca de 70 %, em ou cerca de 75 %, em ou cerca de 80 %, em ou cerca de 85 %, em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 99 % ou em ou cerca de 100 %.
[00868] 84. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 80-83, em que: o sítio doador de splicing de referência compreende a se- quência aatctaagtacggac (SEQ ID NO: 176), teaactagtacgtag (SEQ ID NO: 177), acaattagtaaggca (SEQ ID NO: 178) e/ou accacaggtgatatac (SEQ ID NO: 179); e/ou o sítio aceitador de splicing de referência compreende a sequência aagtttctttetatatteccaggcetgacegtggataaatete (SEQ ID NO: 180) e/ou gggcaacgtgttctettgcagtateatacacgaagecetgo (SEQ ID NO: 181).
[00869] 85.O polinucleotídeo de qualquer de acordo com a modali- dade 80-84, em que: o(s) sítio(s) doador(es) de splicing de referência e/ou o(s) sítio(s) aceitador(es) de splicing de referência têm uma pontuação de previsão de sítio de splicing de pelo menos em ou cerca de 0,70, em ou cerca de 0,75, em ou cerca de 0,80, em ou cerca de 0,85, em ou cerca de 0,90, 0.95, em ou cerca de 0,99 ou em ou cerca de 1,0; e/ou o(s) sítio(s) doador(es) de splicing de referência e/ou o(s)
sítio(s) aceitador(es) de splicing de referência são previstos como es- tando envolvidos em um evento de splicing com uma probabilidade de pelo menos em ou cerca de 70 %, em ou cerca de 75 %, em ou cerca de 80 %, em ou cerca de 85 %, em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 99 % ou em ou cerca de 100 %.
[00870] 86. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 80-85, em que: o sítio doador de splicing de referência compreende a se- quência tcaactggtacgtag (SEQ ID NO: 177); e/ou o sítio aceitador de splicing de referência compreende a sequência aagtttctttetatatteccaggctgacegtggataaatcte (SEQ ID NO: 180).
[00871] 87. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 80-86, em que pelo menos uma dentre a uma ou mais modificações de nucleotídeo estão dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6,7, 8, 9 ou resíduos da união do sítio de splicing do sítio aceitador de splicing de referência e/ou sítio doador de splicing de referência.
[00872] 88. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 80-87, em que a uma ou mais modificações de nucleotí- deo são silenciosas e/ou resultam em um códon degenerado compa- rado com SEQ ID NO: 73 e/ou não alteram a sequência de aminoáci- dos do espaçador codificado.
[00873] 89. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 80-88, em que: o sítio doador de splicing modificado é apresentado em ag- tctaaatacggac (SEQ ID NO: 182), teaactagtatatag (SEQ ID NO: 183), accatctccaaggec (SEQ ID NO: 184) e/ou geccecaggtttacac (SEQ ID NO: 185); e/ou o sítio aceitador de splicing modificado é apresentado em cagtttcttectgtatagtagactcacegtggataaatcaa (SEQ ID NO: 186), ggo- caacgtgttcagctgcagegtgatgcacgaggecetge (SEQ ID NO: 187) e/ou cgccttgtectecttgtecegetectectattaceggacect (SEQ ID NO: 188).
[00874] 90. 0O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 80-89, em que o sítio doador de splicing modificado é apresentado em tcaactggtatatag (SEQ ID NO: 183) e/ou o sítio aceita- dor de splicing modificado é apresentado em cagtttcttectatatagtagact- caccgtggataaatcaa (SEQ ID NO: 186) e/ou cgccettgtectectigteceg- ctcetectatigceggacect (SEQ ID NO: 188).
[00875] 91.0O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 80-90, em que o espaçador é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 74 ou uma porção da mesma.
[00876] 92. 0O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 79-91, em que quando de expressão do polinucleotídeo em uma célula, o RNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro (MRNA), a partir do polinucleotídeo, exibe pelo menos em ou cerca de 70 %, em ou cerca de 75 %, em ou cerca de 80 %, em ou cerca de 85 %, em ou cerca de 90 % ou em ou cerca de 95 % de homogeneidade de RNA.
[00877] 93. 0O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 79-92, em que, quando de expressão em uma célula, o RNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro (mMRNA), a partir do polinucleotídeo exibe heterogeneidade reduzida comparado com a he- terogeneidade do mMRNA transcrito a partir de um polinucleotídeo de referência, o dito polinucleotídeo de referência codificando a mesma sequência de aminoácidos que o polinucleotídeo, em que o polinucleo- tídeo de referência difere pela presença de um ou mais sítios doadores de splicing e/ou um ou mais sítios aceitadores de splicing no ácido nu- cleico que codifica o espaçador e/ou compreende uma ou mais modifi- cações de nucleotídeo comparado com o polinucleotídeo e/ou com- preende o espaçador apresentado em SEQ ID NO: 73.
[00878] 94.0O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 93, em que a heterogeneidade de RNA é reduzida em mais de em ou cerca de 10 %, em ou cerca de 15 %, em ou cerca de 20 %, em ou cerca de %, em ou cerca de 30 %, em ou cerca de 40 %, em ou cerca de 50 % ou mais.
[00879] 95.0 polinucleotídeo de acordo com a modalidade 93 ou a modalidade 94, em que o RNA transcrito, opcionalmente RNA mensa- geiro (mMRNA), a partir do polinucleotídeo de referência exibe mais de em ou cerca de 10 %, em ou cerca de 15 %, em ou cerca de 20 %, em ou cerca de 25 %, em ou cerca de 30 %, em ou cerca de 40 %, em ou cerca de 50 % ou mais de heterogeneidade de RNA.
[00880] 96. 0O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 79-95, em que a homogeneidade e/ou heterogeneidade de RNA é determinada por meio de eletroforese em gel de agarose, eletroforese capilar com base em chip, ultracentrifugação analítica, fracionamento por fluxo de campo ou cromatografia de líquido.
[00881] 97. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 79-96, em que o polinucleotídeo tem códons otimizados para expressão em uma célula humana.
[00882] 98. 0O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 79-96, em que o receptor antigênico quimérico é um pri- meiro receptor antigênico quimérico e o polinucleotídeo compreende ainda uma sequência de nucleotídeos que codifica um segundo recep- tor antigênico quimérico.
[00883] 99.0 polinucleotídeo de acordo com a modalidade 98, em que os primeiro e segundo receptores antigênicos quiméricos são se- parados por um ou mais elemento(s) multicistrônico(s).
[00884] 100.O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 99, em que o um ou mais elementos multicistrônicos são ou compreendem uma sequência de salto ribossômico, opcionalmente em que a se-
quência de salto ribossômico é um elemento T2A, P2A, E2A ou F2A.
[00885] 101. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 100, em que a sequência de nucleotídeos que codifica o um ou mais ele- mentos multicistrônicos tem códons divergentes.
[00886] 102.0 polinucleotídeo de acordo com a modalidade 100 ou a modalidade 101, em que a sequência de nucleotídeos que codifica o um ou mais elementos multicistrônicos são ou compreendem a se- quência apresentada em SEQ ID NO: 319. 103. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 98-102, em que o segun- do receptor antigênico quimérico (CAR) compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente a um se- gundo antígeno expresso em ou associado ao mieloma múltiplo.
[00887] 104. O polinucleotídeo de 103, em que o segundo CAR compreende ainda um espaçador, um domínio transmembrana e uma região de sinalização intracelular.
[00888] 105.O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 103 ou a modalidade 104, em que o segundo antígeno é selecionado a partir de antígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI e FCRH5.
[00889] 106. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 103-105, em que o segundo antígeno é BCMA.
[00890] 107. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 103-106, em que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %,
em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[00891] 108.O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 107, em que a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 1950u 197; e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198.
[00892] 109. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 103-106, em que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre-
ende uma região determinante de complementaridade de cadeia pe- sada 1 (CDR-H1) que compreende a sequência de aminoácidos sele- cionada a partir de SEQ ID NOS: 199, 202, 206, 209, 212 e 215; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 200, 203, 207, 210, 213 e 216; e (c) uma re- gião determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR- H3) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 201, 204, 205, 208, 211, 214 e 217; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 218, 221, 224, 227, 230, 233 e 235; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 219, 222, 225, 228, 231, 234 e 236; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 220, 223, 226, 229 e 232; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é em ou cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[00893] 110. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 107-109, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 212, 213 e 214, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 233, 234 e 229, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[00894] 111. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 107-109, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[00895] 112. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 107-111, em que: a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %,
em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 190;
a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 192;
a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em
Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 194; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 196; ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 198.
[00896] 113. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 107-112, em que: a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.
[00897] 114. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 107-113, em que o domínio de ligação a antígeno extra- celular do segundo CAR é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia.
[00898] 115. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 114, em que o fragmento de anticorpo com uma única cadeia é ou compre- ende um fragmento variável com uma única cadeia (scFv).
[00899] 116. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 107-115, em que a região VH e a região VL do segundo CAR são unidas através de um ligante flexível.
[00900] 117. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 116, em que o ligante do segundo CAR compreende a sequência de ami- noácidos GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 52).
[00901] 118. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 107-117, em que a região VH é amino-terminal à região VL no segundo CAR.
[00902] 119. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 107-117, em que a região VH é carbóxi-terminal à região VL no segundo CAR.
[00903] 120. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 107-119, em que o domínio de ligação a antígeno do se- gundo CAR compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos selecionado a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.
[00904] 121. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 107-120, em que o domínio de ligação a antígeno do se- gundo CAR compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.
[00905] 122. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 107-121, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente; e/ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreende as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno extracelular do segundo CAR compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresen- tada em SEQ ID NO: 241.
[00906] 123. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 104-122, em que o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compreende um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CDB8, opcionalmente de CD4 humana, CD28 humana ou CD8 humana.
[00907] 124. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 104-123, em que: o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compre- ende um domínio transmembrana de CD28 humana; e/ou o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18.
[00908] 125. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 124, em que o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18.
[00909] 126. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 104-125, em que a região de sinalização intracelular do segundo CAR compreende um domínio de sinalização intracelular.
[00910] 127. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 126, em que o domínio de sinalização intracelular do segundo CAR é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do receptor de células T (TOR) e/ou compreende um mo- tivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM).
[00911] 128.0O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 126 ou a modalidade 127, em que o domínio de sinalização intracelular do se- gundo CAR é ou compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta (CD36) ou uma variante funcional ou porção de sinaliza- ção da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta humana.
[00912] 129. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 126-128, em que a região de sinalização intracelular do segundo CAR compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20.
[00913] 130.O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 126-129, em que a região de sinalização intracelular do segundo CAR compreende ainda uma região de sinalização coestimu- ladora.
[00914] 131. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 130, em que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR com- preende um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coes- timuladora de células T ou a porção de sinalização da mesma.
[00915] 132.O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 130 ou a modalidade 131, em que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas, opcionalmente de CD28 humana, 4-1BB humana ou ICOS humana.
[00916] 133. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 98-132, em que pelo menos um do primeiro receptor an- tigênico quimérico e do segundo receptor antigênico quimérico com- preende uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinaliza- ção da mesma, opcionalmente de 4-1BB humana.
[00917] 134. O polinucleotídeo de qualquer de embodiments130- 132, em que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR compreende: um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.
[00918] 135. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 130-133, em que a região de sinalização coestimuladora compreende: um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96
%, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.
[00919] 136. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 104-135, em que o segundo receptor antigênico quiméri- co compreende, a partir de seu N para C término, na ordem: o domínio de ligação a antígeno extracelular, o espaçador, o domínio transmem- brana e a região de sinalização intracelular.
[00920] 137. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 79-97, em que a sequência de nucleotídeos que codifica o CAR é operativamente ligada a um promotor para controlar a ex- pressão do CAR codificado quando expresso a partir de uma célula na qual o polinucleotídeo foi introduzido, opcionalmente em que o promo- tor é um promotor heterólogo, opcionalmente em que o promotor hete- rólogo é ou compreende um promotor de fator 1 alfa de alongamento (EF1a) humano ou um promotor MND ou uma variante dos mesmos.
[00921] 138. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 98-136, em que a sequência de nucleotídeos que codifica o primeiro CAR é operativamente ligada a um primeiro promotor para controlar a expressão do primeiro CAR quando expresso a partir de uma célula na qual o polinucleotídeo foi introduzido e a sequência de nucleotídeos que codifica o segundo CAR é operativamente ligada a um segundo promotor para controlar a expressão do segundo CAR quando expresso a partir de uma célula na qual o polinucleotídeo foi introduzido, opcionalmente em que os primeiro e segundo promotores são independentemente um promotor heterólogo, opcionalmente em que o promotor heterólogo é ou compreende um promotor de fator 1 alfa de alongamento (EF1a) humano ou um promotor MND ou uma variante dos mesmos.
[00922] 139. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 138,
em que os primeiro e segundo promotores são os mesmos.
[00923] 140. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 138, em que os primeiro e segundo promotores são diferentes.
[00924] 141. Um polinucleotídeo que compreende: (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro receptor antigênico quimérico (CAR) que compreende um primeiro domínio de ligação a antígeno; e (ii) uma segunda sequência de ácidos nucleicos que codifi- ca um segundo receptor antigênico quimérico (CAR) que compreende um segundo domínio de ligação a antígeno; em que o primeiro CAR e o segundo CAR compreendem, cada um, o seguinte: (a) o primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno, (b) um espaçador, (c) um do- mínio transmembrana e (d) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular e uma região de sinalização coestimuladora; em que um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR e os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR compreende a se- quência de aminoácidos idêntica; e em que a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) o um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR difere, quanto à sequência, da(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR.
[00925] 142. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 141, em que os primeiro e segundo domínios de ligação a antígeno se |i- gam ao mesmo antígeno.
[00926] 143.O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 141 ou a modalidade 142, em que os primeiro e segundo domínios de ligação a antígeno se ligam a diferentes epítopos do mesmo antígeno.
[00927] 144. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 141,
em que os primeiro e segundo domínios de ligação a antígeno se |i- gam a antígenos diferentes.
[00928] 145. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-144, em que o primeiro domínio de ligação a antíge- no se liga um primeiro antígeno expresso por ou associado a células de uma doença ou condição e o segundo domínio de ligação a antíge- no se liga a um segundo antígeno expresso por ou associado a células da mesma doença ou condição.
[00929] 146. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 145, em que a doença ou condição é um câncer.
[00930] 147. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 146, em que a doença ou condição é um câncer que expressa GPRC5D ou um câncer que expressa BCMA.
[00931] 148.0O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 146 ou a modalidade 147, em que o câncer é uma malignidade de células plasmáticas e a malignidade de células plasmáticas é mieloma múltiplo (MM) ou plasmacitoma.
[00932] 149. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 146-148, em que o câncer é mieloma múltiplo.
[00933] 150. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 146-149, em que o câncer é mieloma múltiplo recidivan- te/resistente.
[00934] 151. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-150, em que os primeiro e segundo domínios de |i- gação a antígeno se ligam independentemente a um antígeno selecio- nado a partir do grupo que consiste em GPRC5D, BCMA, CD38 CD138, CS-1, BAFF-R, TACI e FcRH5.
[00935] 152. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-151, em que o primeiro domínio de ligação a antíge- no se liga ao antígeno de maturação de células B (BCMA).
[00936] 153. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-151, em que o primeiro domínio de ligação a antíge- no se liga ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D).
[00937] 154.0 polinucleotídeo de acordo com a modalidade 152 ou a modalidade 153, em que o segundo domínio de ligação a antígeno se liga ao BCMA.
[00938] 155.O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 152 ou a modalidade 153, em que o segundo domínio de ligação a antígeno se liga ao GPRC5D.
[00939] 156. Um polinucleotídeo que compreende: (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro receptor antigênico quimérico (CAR) que compreende um primeiro domínio de ligação a antígeno capaz de ligação a um de GPRCB5D ou BCMA; e (ii) uma segunda sequência de ácidos nucleicos que codifi- ca um segundo receptor antigênico quimérico (CAR) que compreende um segundo domínio de ligação a antígeno capaz de ligação ao outro de GPRC5D ou BCMA; em que o primeiro CAR e o segundo CAR compreendem, cada um, o seguinte: (a) o primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno, (b) um espaçador, (c) um do- mínio transmembrana e (d) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular e uma região de sinalização coestimuladora; em que um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR e os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR compreende a se- quência de aminoácidos idêntica; e em que a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) o um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR difere(m), quanto à sequên-
cia, da(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR.
[00940] 157. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-156, em que o um ou mais de (b) a (d) é um de (b) a (d).
[00941] 158. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-156, em que o um ou mais de (b) a (d) é dois de (b) a (d).
[00942] 159. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-156, em que o um ou mais de (b) a (d) é cada um de (b) a (d).
[00943] 160. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-159, em que: a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) o um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR e a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR compreende não mais do que cerca de 20 pares de base consecutivos com homologia de sequência; e/ou a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR compreende não mais do que cerca de 20 pares de base consecutivos com homologia de sequência.
[00944] 161. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-160, em que: a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) o um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR e a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR compreende não mais do que entre cerca de 5 e cerca de 15 pares de base consecutivos com homologia de sequência; e/ou a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR compreende não mais do que cerca de 5 e cerca de pares de base consecutivos com homologia de sequência.
[00945] 162. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-161, em que: a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) o um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR e a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR compreende não mais do que cerca de 10 pares de base consecutivos com homologia de sequência; e/ou a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR compreende não mais do que cerca de 10 pares de base consecutivos com homologia de sequência.
[00946] 163. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-162, em que a primeira sequência de ácidos nuclei- cos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nu- cleicos que codifica o segundo CAR são separadas por uma sequên- cia de nucleotídeos que codifica um elemento multicistrônico, opcio- nalmente em que o elemento multicistrônico é um elemento bicistrôni- Co.
[00947] 164. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 163, em que o elemento multicistrônico é um IRES ou é uma sequência de salto ribossômico ou peptídeo de autoclivagem.
[00948] 165. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 164, em que o elemento multicistrônico é uma sequência de salto ribossô- mico ou peptídeo de autoclivagem e a sequência de salto ribossômico ou peptídeo de autoclivagem é um elemento T2A, P2A, E2A ou F2A.
[00949] 166. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-165, em que a primeira sequência de ácidos nuclei-
cos que codifica o primeiro CAR tem códons otimizados para expres- são em uma célula humana.
[00950] 167. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-166, em que a segunda sequência de ácidos nuclei- cos que codifica o segundo CAR tem códons otimizados para expres- são em uma célula humana.
[00951] 168. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-167, em que o polinucleotídeo tem códons otimiza- dos para expressão em uma célula humana.
[00952] 169. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-168, em que após transcrição do polinucleotídeo em uma célula humana, opcionalmente uma célula T humana, o MRNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro, do polinucleotídeo, exibe pelo menos cerca de 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de ho- mogeneidade de RNA.
[00953] 170. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-169, em que após transcrição de a primeira sequên- cia de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR do polinucleotídeo em uma célula humana, opcionalmente uma célula T humana, o mMRNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro, proveniente do primeiro ácido nucleico exibe pelo menos cerca de 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de homogeneidade de RNA.
[00954] 171. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-170, em que após transcrição de a segunda sequên- cia de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR do polinucleotí- deo em uma célula humana, opcionalmente uma célula T humana, o MRNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro, proveniente do se- gundo ácido nucleico exibe pelo menos cerca de 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 % ou 95 % de homogeneidade de RNA.
[00955] 172. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-171, em que qualquer sítio doador de splicing e/ou aceitador de splicing potencial presentes na primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR exibe uma pontuação de previsão de spli- cing de cerca de ou pelo menos cerca de menos de 0,70, 0,65, 0,60, 0,55, 0,50, 0,45, 0,40, 0,35, 0,30, 0,25, 0,20 e/ou são previstos como estando envolvidos em um evento de splicing com uma probabilidade de menos de 70 %, menos de 65 %, menos de 60 %, menos de 55 %, menos de 50 %, menos de 45 %, menos de 40 %, menos de 35 %, menos de 30 %, menos de 25 % ou menos de 20 %.
[00956] 173. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-172, em que qualquer sítio doador ou aceitador de splicing po- tencial na segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o se- gundo CAR exibe uma pontuação de previsão de splicing de cerca de ou pelo menos cerca de menos de 0,70, 0,65, 0,60, 0,55, 0,50, 0,45, 0,40, 0,35, 0,30, 0,25, 0,20 e/ou são previstos como estando envolvi- dos em um evento de splicing com uma probabilidade de menos de 70 %, menos de 65 %, menos de 60 %, menos de 55 %, menos de 50 %, menos de 45 %, menos de 40 %, menos de 35 %, menos de 30 %, menos de 25 % ou menos de 20 %.
[00957] 174. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-173, em que quaisquer sítios doadores ou aceitado- res de splicing potenciais no polinucleotídeo exibe uma pontuação de previsão de splicing de cerca de ou pelo menos cerca de menos de 0,70, 0,65, 0,60, 0,55, 0,50, 0,45, 0,40, 0,35, 0,30, 0,25, 0,20 e/ou são previstos como estando envolvidos em um evento de splicing com uma probabilidade de menos de 70 %, menos de 65 %, menos de 60 %, menos de 55 %, menos de 50 %, menos de 45 %, menos de 40 %, menos de 35 %, menos de 30 %, menos de 25 % ou menos de 20 %.
[00958] 175. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-174, em que os primeiro e/ou segundo domínios de ligação a antígeno de (a) é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia.
[00959] 176. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-175, em que os primeiro e/ou segundo domínios de ligação a antígeno de (a) é ou compreende um fragmento variável com uma única cadeia (scFv)
[00960] 177. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-176, em que os primeiro e/ou segundo domínios de ligação a antígeno de (a) compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL).
[00961] 178. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-177, em que um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno compreende uma região VH que compreende uma CDR-H1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 209, uma CDR-H2 conforme apresentado em SEQ ID NO: 210 e uma CDR-H3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 211 e uma região VL que compreende uma CDR-L1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 230, uma CDR-L2 conforme apresentado em SEQ ID NO: 231 e uma CDR-L3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 232.
[00962] 179. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-178, em que um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno compreende uma região VH e uma região VL que compreende as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOS: 197 e 198, respectiva- mente.
[00963] 180. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-179, em que um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos em ou cerca de 90 %, pelo menos cerca de ou cerca de 91 %, pelo menos em ou cerca de 92 %, pelo menos em ou cerca de 93 %, pelo menos em ou cerca de 94 %, pelo menos em ou cerca de 95 %, pelo menos em ou cerca de 96 %, pelo menos em ou cerca de 97 %, pelo menos em ou cerca de 98 %, pelo menos em ou cerca de 99 % de identidade de sequên- cia com SEQ ID NO: 241.
[00964] 181. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-180, em que um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno compreende uma região VH compreende uma CDR-H1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 125, uma CDR-H2 conforme apresentado em SEQ ID NO: 126 e uma CDR-H3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 127 e uma região VL que compreende uma CDR-L1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 130, uma CDR-L2 conforme apresentado em SEQ ID NO: 131 e uma CDR-L3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 132.
[00965] 182. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-181, em que um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno compreende uma região VH e uma região VL que compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamen- te.
[00966] 183.O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-182, em que um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8 ou uma se- quência de aminoácidos que exibe pelo menos em ou cerca de 90 %, pelo menos cerca de ou cerca de 91 %, pelo menos em ou cerca de 92 %, pelo menos em ou cerca de 93 %, pelo menos em ou cerca de
94 %, pelo menos em ou cerca de 95 %, pelo menos em ou cerca de 96 %, pelo menos em ou cerca de 97 %, pelo menos em ou cerca de 98 %, pelo menos em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 8.
[00967] 184. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-183, em que: um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno compreende uma região VH que com- preende uma CDR-H1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 209, uma CDR-H2 conforme apresentado em SEQ ID NO: 210 e uma CDR- H3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 211 e uma região VL que compreende uma CDR-L1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 230, uma CDR-L2 conforme apresentado em SEQ ID NO: 231 e uma CDR- L3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 232; e o outro do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o se- gundo domínio de ligação a antígeno compreende uma CDR-H1 con- forme apresentado em SEQ ID NO: 125, uma CDR-H2 conforme apre- sentado em SEQ ID NO: 126 e uma CDR-H3 conforme apresentado em SEQ ID NO: 127 e uma região VL que compreende uma CDR-L1 conforme apresentado em SEQ ID NO: 130, uma CDR-L2 conforme apresentado em SEQ ID NO: 131 e uma CDR-L3 conforme apresenta- do em SEQ ID NO: 132.
[00968] 185. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-184, em que: um do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno compreende uma região VH e uma re- gião VL que compreende as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOS: 197 e 198, respectivamente; e o outro do primeiro domínio de ligação a antígeno ou o se- gundo domínio de ligação a antígeno compreende uma região VH e uma região VL que compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente.
[00969] 186. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-185, em que um dos primeiro ou segundo domínios de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 241 e o outro dos primeiro ou segundo domí- nios de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8.
[00970] 187. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-186, em que um dos primeiro ou segundo domínios de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 310.
[00971] 188. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-187, em que um dos primeiro ou segundo domínios de ligação a antígeno é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 264 ou SEQ ID NO: 311.
[00972] 189. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-188, em que os primeiro ou segundo domínios de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apre- sentada em SEQ ID NO: 310 e o outro dos primeiro ou segundo domí- nios de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotí- deos apresentada em SEQ ID NO: 311.
[00973] 190. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-189, em que (b) compreende uma porção de uma imunoglobulina.
[00974] 191. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-190, em que (b) compreende uma sequência de uma região de dobradiça, uma região CH2 e CH3.
[00975] 192. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 191, em que :
a região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4 e/ou uma região de do- bradiça de IgG2, em que a região de dobradiça de I9gG4 é opcional- mente uma região de dobradiça de IgG4 humana e a região de dobra- diça de IgG2 é opcionalmente uma região de dobradiça de I9G2 hu- mana; a região CH2 compreende a totalidade ou uma porção de uma CH2 de IgG4 e/ou uma CH2 de IgG2, em que a CH2 de IgG4 é opcionalmente uma CH2 de IgG4 humana e a CH2 de IgG2 é opcio- nalmente uma CH2 de IgG2 humana; e/ou a região CH3 compreende a totalidade ou uma porção de uma CH3 de IgG4 e/ou uma CH3 de IgG2, em que a CH3 de IgG4 é opcionalmente uma CH3 de IgG4 humana e a CH3 de IgG2 é opcio- nalmente uma CH3 de IgG2 humana.
[00976] 193.O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 191 ou a modalidade 192, em que as regiões de dobradiça, CH2 e CH3 com- preendem a totalidade ou uma porção de uma dobradiça, a totalidade ou uma porção de uma CH2 e a totalidade ou uma porção de uma CH3 de IgG4 humana.
[00977] 194.O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 191 ou a modalidade 193, em que uma ou mais das regiões de dobradiça, CH2 e CH3 são quiméricas e compreendem uma dobradiça, CH2 e CH3 de IgG4 humana e IgG2 humana.
[00978] 195. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-194, (b) compreende a região de dobradiça quiméri- ca de IgG4/2 ou uma região de dobradiça de IgG4 modificada que compreende pelo menos uma substituição de aminoácido comparado com a região de dobradiça de IgG4 humana; uma região CH2 quiméri- ca de I9gG2/4; e uma região CH3 de IgG4.
[00979] 196. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-195, em que (b) tem um comprimento a partir de ou a partir de cerca de 125 a 300 aminoácidos de comprimento, 125 a 250 aminoácidos de comprimento, 125 a 230 aminoácidos de compri- mento, 125 a 200 aminoácidos de comprimento, 125 a 180 aminoáci- dos de comprimento, 125 a 150 aminoácidos de comprimento, 150 a 300 aminoácidos de comprimento, 150 a 250 aminoácidos de compri- mento, 150 a 230 aminoácidos de comprimento, 150 a 200 aminoáci- dos de comprimento, 150 a 180 aminoácidos de comprimento, 180 a 300 aminoácidos de comprimento, 180 a 250 aminoácidos de compri- mento, 180 a 230 aminoácidos de comprimento, 180 a 200 aminoáci- dos de comprimento, 200 a 300 aminoácidos de comprimento, 200 a 250 aminoácidos de comprimento, 200 a 230 aminoácidos de compri- mento, 230 a 300 aminoácidos de comprimento, 230 a 250 aminoáci- dos de comprimento ou 250 a 300 aminoácidos de comprimento, opci- onalmente em que o espaçador é em ou cerca de 224, em ou cerca de 225, em ou cerca de 226, em ou cerca de 227, em ou cerca de 228 ou em ou cerca de 229 aminoácidos de comprimento.
[00980] 197. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-196, em que (b) é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 17.
[00981] 198. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-197, em que (b) em um do primeiro CAR ou o se- gundo CAR codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 48 e (b) no outro do primeiro CAR ou o segundo CAR codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305.
[00982] 199. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-198, em que (c) é ou compreende um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CD8, opcionalmente um domínio transmembrana de CD4 humana, CD28 humana ou CD8 humana.
[00983] 200. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-199, em que (c) é ou compreende uma CD28 huma- na domínio transmembrana.
[00984] 201. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-200, em que (c) é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18.
[00985] 202. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 141- 201, em que (c) em um do primeiro CAR ou o segundo CAR codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NOS: 56 e (c) no outro do primeiro CAR ou segundo CAR é codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 307.
[00986] 203. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141202, em que o domínio de sinalização intracelular de (d) é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do receptor de células T (TCR) e/ou compreende um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM).
[00987] 204. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-203, em que o domínio de sinalização intracelular de (d) é ou compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3- zeta (CD36) ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta humana.
[00988] 205. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-204, em que o domínio de sinalização intracelular de (d) é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20.
[00989] 206. 0O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-205, em que o domínio de sinalização intracelular de (d) em um do primeiro CAR ou o segundo CAR codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 58 e o domínio de sinalização intracelular de (d) no outro do primeiro CAR ou o se-
gundo CAR codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 309.
[00990] 207. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-206, em que a região de sinalização coestimuladora de (d) compreende um domínio de sinalização intracelular de uma mo- lécula coestimuladora de células T ou a porção de sinalização da mesma.
[00991] 208. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 14120, em que a região de sinalização coestimuladora de (d) compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4- 1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas, opcional- mente de CD28 humana, 4-1BB humana ou ICOS humana.
[00992] 209. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-208, em que a região de sinalização coestimuladora de (d) compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB.
[00993] 210. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-209, em que a região de sinalização coestimuladora de (d) é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19.
[00994] 211. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-210, em que a região de sinalização coestimuladora de (d) em um do primeiro CAR ou o segundo CAR codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NOS: 60 e a região de sinalização coestimuladora de (d) no outro do primeiro CAR ou o segundo CAR codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 308.
[00995] 212. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-211, em que: um do primeiro CAR ou o segundo CAR compreende (a) um primeiro domínio de ligação a antígeno que se liga ao GPRC5D,
opcionalmente em que o primeiro domínio de ligação a antígeno é co- dificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 311; (b) um espaçador codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305, (c) um domínio transmembrana co- dificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 307 e (d) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular codificado pela sequência de nu- cleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 309 e uma região de sinaliza- ção coestimuladora codificada pela sequência de nucleotídeos apre- sentada em SEQ ID NO: 308; o outro do primeiro CAR ou o segundo CAR compreende (a) um domínio de ligação a antígeno que se liga ao BCMA, opcional- mente em que o domínio de ligação a antígeno é codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 310, (b) um es- paçador codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 48, (c) um domínio transmembrana codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 56 e (d) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de si- nalização intracelular codificado pela sequência de nucleotídeos apre- sentada em SEQ ID NO: 58 e uma região de domínio de sinalização coestimuladora codificada pela sequência de nucleotídeos apresenta- da em SEQ ID NO: 60.
[00996] 213. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-212, em que a primeira sequência de ácidos nuclei- cos que codifica o primeiro CAR está localizada em direção à extremi- dade 5' do polinucleotídeo em relação à segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR.
[00997] 214. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-213, em que o primeiro CAR compreende um domí- nio de ligação a antígeno que se liga ao GPRC5D e o segundo CAR compreende um domínio de ligação a antígeno que se liga ao BCMA.
[00998] 215. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-213, em que o primeiro CAR compreende um domínio de ligação a antígeno que se liga ao BOCMA e o segundo CAR compre- ende um domínio de ligação a antígeno que se liga ao GPRC5D.
[00999] 216. Um polinucleotídeo que compreende (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro receptor anti- gênico quimérico (CAR), (ii) uma segunda sequência de ácidos nuclei- cos que codifica um segundo receptor antigênico quimérico (CAR) e (iii) uma sequência de nucleotídeos que codifica um elemento multicis- trônico, em que a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nucleicos que codifi- ca o segundo CAR são separadas pelo elemento multicistrônico; em que o primeiro CAR compreende um primeiro domínio de ligação a antígeno que se liga ao GPRC5D, opcionalmente em que o primeiro domínio de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 311; um espaçador codi- ficado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305; um domínio transmembrana codificado pela sequência de nucleo- tídeos apresentada em SEQ ID NO: 307; e uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 309 e uma região de sinalização coestimuladora codificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 308; em que o segundo CAR compreende um segundo domínio de ligação a antígeno que se liga ao BCMA opcionalmente em que o segundo domínio de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 310; um espaçador codifi- cado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 48; um domínio transmembrana codificado pela sequência de nucleotí-
deos apresentada em SEQ ID NO: 56; e uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 58 e uma região de domínio de sinalização coestimuladora codifi- cada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 60; e em que a primeira sequência de ácidos nucleicos que co- difica o primeiro CAR está localizada em direção à extremidade 5' do polinucleotídeo em relação à segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR.
[001000] 217. Um polinucleotídeo que compreende (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro re- ceptor antigênico quimérico (CAR), (ii) uma segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica um segundo receptor antigênico quiméri- co (CAR) e (iii) uma sequência de nucleotídeos que codifica um ele- mento multicistrônico, em que a primeira sequência de ácidos nuclei- cos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nu- cleicos que codifica o segundo CAR são separadas pelo elemento multicistrônico; em que o primeiro CAR compreende um primeiro domínio de ligação a antígeno que se liga ao BCMA, opcionalmente em que o primeiro domínio de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 310, um espaçador codifi- cado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 48, um domínio transmembrana codificado pela sequência de nucleotí- deos apresentada em SEQ ID NO: 56 e uma região de sinalização in- tracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular co- dificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 58 e uma região de domínio de sinalização coestimuladora codificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 60; em que o segundo CAR compreende um segundo domínio de ligação a antígeno que se liga ao GPRC5D, opcionalmente em que o segundo domínio de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 311, um espaçador codi- ficado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305, um domínio transmembrana codificado pela sequência de nucleo- tídeos apresentada em SEQ ID NO: 307 e uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 309 e uma região de sinalização coestimuladora codificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 308; em que a primeira sequência de ácidos nucleicos que codi- fica o primeiro CAR está localizada em direção à extremidade 5' do polinucleotídeo em relação à segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR.
[001001] 218. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 163-217, em que o elemento multicistrônico compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 37.
[001002] 219. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 163-218, em que o elemento multicistrônico é codificado por uma sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NOS: 44 ou SEQ ID NO: 45.
[001003] 220. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-75 e 217-219, que compreende a sequência de nu- cleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 299.
[001004] 221. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-215 e 217-219, em que o polinucleotídeo codifica a sequência apresentada em SEQ ID NO: 298.
[001005] 222. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-216, 218 e 219, que compreende a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 302.
[001006] 223.O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 141-216, 218, 219 e 222, em que o polinucleotídeo codi- fica a sequência apresentada em SEQ ID NO: 301.
[001007] 224. Um vetor que compreende o polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 79-223.
[001008] 225.O vetor de acordo com a modalidade 224, o qual é um vetor viral.
[001009] 226. O vetor de acordo com a modalidade 225, em que o vetor viral é um vetor lentiviral ou um vetor retroviral.
[001010] 227. Uma célula que compreende o receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-78.
[001011] 228. A célula de acordo com a modalidade 141, em que o receptor antigênico quimérico é um primeiro receptor quimérico e a célula compreende ainda um polinucleotídeo que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um segundo receptor antigêni- co quimérico.
[001012] 229. Uma célula que compreende o polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 79-223.
[001013] 230. Uma célula que compreende o polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 79-97, o qual é o primeiro polinucleotídeo e em que a célula compreende ainda um segundo po- linucleotídeo que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um segundo receptor antigênico quimérico (CAR).
[001014] 231.A célula de acordo com a modalidade 228 ou a moda- lidade 230, em que o segundo receptor antigênico quimérico (CAR) compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente a um segundo antígeno expresso em ou associado ao mieloma múltiplo.
[001015] 232. A célula de acordo com a modalidade 231, em que o segundo CAR compreende ainda um espaçador, um domínio trans-
membrana e uma região de sinalização intracelular.
[001016] 233. A célula de acordo com a modalidade 231 ou a moda- lidade 232, em que o segundo antígeno é selecionado a partir de antí- geno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF- R, TACI e FcRH5.
[001017] 234. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 231-233, em que o segundo antígeno é BCMA.
[001018] 235. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 142-234, em que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é em ou cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[001019] 236. A célula de acordo com a modalidade 235, em que a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da se- quência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198.
[001020] 237. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 231-234, em que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma região determinante de complementaridade de cadeia pe- sada 1 (CDR-H1) que compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 199, 202, 206, 209, 212 ou 215; (b) uma re- gião determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR- H2) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 200, 203, 207, 210, 213 ou 216; e (c) uma região deter- minante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 201, 204, 205, 208, 211, 214 ou 217; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 218, 221, 224, 227, 230, 233 ou 235; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 219, 222, 225, 228, 231, 234 ou 236; e (c) uma região determi- nante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 220, 223, 226, 229 ou 232; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[001021] 238. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 228-237, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente; a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente; a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com-
preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente; a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente; a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 212, 213 e 214, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 233, 234 e 229, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[001022] 239. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 235-238, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[001023] 240. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 235-239, em que: a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 190; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 192;
a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 194;
a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 196;
ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 198.
[001024] 250. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 235-249, em que: a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.
[001025] 251. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 231-250, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular do segundo CAR é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia.
[001026] 252. A célula de acordo com a modalidade 251, em que o fragmento de anticorpo com uma única cadeia é ou compreende um fragmento variável com uma única cadeia (scFv).
[001027] 253. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 235-252, em que a região VH e a região VL do segundo CAR são unidas através de um ligante flexível.
[001028] 254. A célula de acordo com a modalidade 253, em que o ligante do segundo CAR compreende a sequência de aminoácidos GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 52).
[001029] 255. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 235-254, em que a região VH é amino-terminal à região VL no se- gundo CAR.
[001030] 256. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 235-254, em que a região VH é carbóxi-terminal à região VL no segundo CAR.
[001031] 257. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 231-256, em que o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241 ou uma sequência de aminoá- cidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.
[001032] 258. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 231-257, em que o domínio de ligação a antígeno do segundo
CAR compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.
[001033] 259. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 235-258, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente; e/ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.
[001034] 260. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 231-259, em que o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compreende um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CDB8, op- cionalmente de CD4 humana, CD38 humana ou CD8 humana.
[001035] 260. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 232-259, em que: o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compreen- de um domínio transmembrana de CD28 humana; e/ou o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compreen- de a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com SEQ ID NO: 18.
[001036] 261. A célula de acordo com a modalidade 260, em que o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compreende a se- quência apresentada em SEQ ID NO: 18.
[001037] 262. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 232-261, em que a região de sinalização intracelular do segundo CAR compreende um domínio de sinalização intracelular.
[001038] 263. A célula de acordo com a modalidade 262, em que o domínio de sinalização intracelular é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do receptor de células T (TOR) e/ou compreende um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM).
[001039] 264.A célula de acordo com a modalidade 262 ou a moda- lidade 263, em que o domínio de sinalização intracelular é ou compre- ende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta (CD36) ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma, opcional- mente uma cadeia de CD3 zeta humana.
[001040] 265. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 262-264, em que a região de sinalização intracelular compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade de sequência com SEQ ID NO: 20.
[001041] 266. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 262-265, em que a região de sinalização intracelular compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora.
[001042] 267. A célula de acordo com a modalidade 266, em que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de si- nalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T ou a porção de sinalização da mesma.
[001043] 268. A célula de acordo com a modalidade 266 ou a moda- lidade 267, em que a região de sinalização coestimuladora compreen- de um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas, opcionalmente CD28 huma- na, 4-1BB humana ou ICOS humana.
[001044] 269. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 266-268, em que a região de sinalização coestimuladora compre- ende: um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.
[001045] 270. A célula de acordo com qualquer uma das modalida-
des 266-269, em que a região de sinalização coestimuladora compre- ende: um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.
[001046] 271. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 228-270, em que o segundo receptor antigênico quimérico com- preende, a partir de seu N para C término, na ordem: o domínio de li- gação a antígeno, o espaçador, o domínio transmembrana e a região de sinalização intracelular.
[001047] 272. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 227-271, a qual é um linfócito.
[001048] 273. A célula de acordo com a modalidade 272, a qual é uma célula NK ou uma célula T.
[001049] 274.A célula de acordo com a modalidade 272 ou a moda- lidade 273, em que a célula é uma célula T e a célula T é uma célula T CDA4+ ou CD8+.
[001050] 275. A célula de acordo com qualquer uma das modalida- des 227-274, em que a célula é uma célula primária obtida a partir de um indivíduo.
[001051] 276. A célula de acordo com as modalidades 227-275, em que, dentre uma pluralidade das células, menos de em ou cerca de 10 %, em ou cerca de 9 %, em ou cerca de 8 %, em ou cerca de 7 %, em ou cerca de 5 %, em ou cerca de 4 %, em ou cerca de 3 %, em ou cerca de 2 % ou em ou cerca de 1 % das células na pluralidade com- preende um receptor antigênico quimérico que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno.
[001052] 277. Uma composição que compreende o receptor antigê- nico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-78.
[001053] 278. Uma composição que compreenda célula de acordo com qualquer uma das modalidades 227-277 ou uma pluralidade das células de acordo com qualquer uma das modalidades 227-277.
[001054] 279. A composição de acordo com a modalidade 278, em que a composição compreende células T CD4+ e CD8+ e a proporção de células T CD4+ para CD8+ é a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcio- nalmente cerca de 1:2 a 2:1.
[001055] 280. Uma composição que compreende: uma pluralidade de primeiras células que compreendem um primeiro receptor antigênico quimérico que é o receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-78 ou codi- ficada pelo polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modali- dades 79-97; e uma pluralidade de segundas células que compreendem um segundo receptor antigênico quimérico.
[001056] 281. A composição de acordo com a modalidade 280, em que, dentre uma pluralidade das primeiras células, menos de em ou cerca de 10 %, em ou cerca de 9 %, em ou cerca de 8 %, em ou cerca de 7 %, em ou cerca de 5 %, em ou cerca de 4 %, em ou cerca de 3 %, em ou cerca de 2 % ou em ou cerca de 1 % das células na plurali- dade compreende um receptor antigênico quimérico que exibe sinali- zação tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno.
[001057] 282. A composição de acordo com a modalidade 280 ou a modalidade 281, em que, dentre uma pluralidade das segundas célu- las, menos de em ou cerca de 10 %, em ou cerca de 9 %, em ou cerca de 8 %, em ou cerca de 7 %, em ou cerca de 5 %, em ou cerca de 4 %, em ou cerca de 3 %, em ou cerca de 2 % ou em ou cerca de 1 % das células na pluralidade compreende um receptor antigênico quimé- rico que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização inde- pendente de antígeno.
[001058] 283. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 280-282, em que o segundo receptor quimérico compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especifica- mente a um segundo antígeno expresso em ou associado ao mieloma múltiplo.
[001059] 284. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 280-283, em que o segundo CAR compreende o domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga ao segundo antígeno, um espaçador, um domínio transmembrana e uma região de sinalização intracelular.
[001060] 285. A composição de acordo com a modalidade 283 ou a modalidade 284, em que o segundo antígeno é selecionado a partir de antígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI e FCRH5.
[001061] 286. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 280-285, em que o segundo antígeno é BCMA.
[001062] 287. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 280-286, em que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %,
em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[001063] 288. A composição de acordo com a modalidade 287, em que a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da se- quência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198.
[001064] 289. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 280-286, em que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre-
ende uma região determinante de complementaridade de cadeia pe- sada 1 (CDR-H1) que compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 199, 202, 206, 209, 212 ou 215; (b) uma re- gião determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR- H2) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 200, 203, 207, 210, 213 ou 216; e (c) uma região deter- minante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 201, 204, 205, 208, 211, 214 ou 217; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 218, 221, 224, 227, 230, 233 ou 235; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 219, 222, 225, 228, 231, 234 ou 236; e (c) uma região determi- nante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 220, 223, 226, 229 ou 232; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[001065] 290. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-289, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 212, 213 e 214, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 233, 234 e 229, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[001066] 291. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-290, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[001067] 292. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-291, em que: a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %,
em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 190;
a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 192;
a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em
Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 194; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 196; ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 198.
[001068] 293. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-292, em que: a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.
[001069] 294. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-293, em que o domínio de ligação a antígeno extracelu- lar do segundo CAR é um fragmento de anticorpo com uma única ca- deia.
[001070] 295. A composição de acordo com a modalidade 294, em que o fragmento de anticorpo com uma única cadeia é ou compreende um fragmento variável com uma única cadeia (scFv).
[001071] 296. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-295, em que a região VH e a região VL do segundo CAR são unidas através de um ligante flexível.
[001072] 297. A composição de acordo com a modalidade 296, em que o ligante do segundo CAR compreende a sequência de aminoáci- dos GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 52).
[001073] 298. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-297, em que a região VH é amino-terminal à região VL no segundo CAR.
[001074] 299. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-298, em que a região VH é carbóxi-terminal à região VL no segundo CAR.
[001075] 300. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-299, em que o domínio de ligação a antígeno do segun- do CAR compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241 ou uma sequência de ami- noácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.
[001076] 301. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 386-300, em que o domínio de ligação a antígeno do segun- do CAR compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.
[001077] 302. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-301, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente; e/ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.
[001078] 303. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-302, em que o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compreende um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CDB8, opcionalmente de CD4 humana, CD38 humana ou CD8 humana.
[001079] 304. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 286-303, em que: o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compre- ende um domínio transmembrana de CD28 humana; e/ou o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18.
[001080] 305. A composição de acordo com a modalidade 304, em que o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18.
[001081] 306. A composição de acordo com qualquer uma das mo-
dalidades 286-305, em que a região de sinalização intracelular do se- gundo CAR compreende um domínio de sinalização intracelular.
[001082] 307. A composição de acordo com a modalidade 306, em que o domínio de sinalização intracelular do segundo CAR é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um compo- nente do receptor de células T (TCR) e/ou compreende um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM).
[001083] 308. A composição de acordo com a modalidade 306 ou a modalidade 307, em que o domínio de sinalização intracelular do se- gundo CAR é ou compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta (CD36) ou uma variante funcional ou porção de sinaliza- ção da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta humana.
[001084] 309. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 306-308, em que a região de sinalização intracelular do se- gundo CAR compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20.
[001085] 310. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 306-309, em que a região de sinalização intracelular do se- gundo CAR compreende ainda uma região de sinalização coestimula- dora.
[001086] 311. A composição de acordo com a modalidade 310, em que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR compre- ende um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coesti- muladora de células T ou a porção de sinalização da mesma.
[001087] 312. A composição de acordo com a modalidade 310 ou a modalidade 311, em que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas, opcionalmente CD28 humana, 4-1BB humana ou ICOS humana.
[001088] 313. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 310-312, em que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR compreende: um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO:
46.
[001089] 314. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 280-312, em que pelo menos um do primeiro receptor anti- gênico quimérico e do segundo receptor antigênico quimérico compre- ende uma região de sinalização intracelular que compreende um do- mínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente de 4-1BB humana
[001090] 315. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 310-312, em que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR compreende: um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99
% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.
[001091] 316. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 280-315, em que o segundo receptor antigênico quimérico codificado compreende, a partir de seu N para C término, na ordem: o domínio de ligação a antígeno, o espaçador, o domínio transmembra- na e a região de sinalização intracelular.
[001092] 317. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 208-316, em que a pluralidade de primeiras células compre- ende células T, opcionalmente em que as células T compreendem cé- lulas T CD4+ e CD8+, opcionalmente em que a proporção de células T CD4+ para CD8+ é a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente 1:2 a 2:1.
[001093] 318. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 186-222, em que a pluralidade de segundas células com- preende células T, opcionalmente em que as células T compreendem células T CD4+ e CD8+, opcionalmente em que a proporção de célu- las T CD4+ para CD8+ é a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente cerca de 1:2 a 2:1.
[001094] 319. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 280-318, em que a composição compreende a proporção da primeira pluralidade de células e a segunda pluralidade de células é a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente cerca de 1:2 a 2:1, opcio- nalmente cerca de 1:1.
[001095] 320. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 280-319, em que a composição compreenda primeira plura- lidade de células que expressam o primeiro receptor antigênico quimé- rico e a segunda pluralidade de células que expressam o segundo re- ceptor antigênico quimérico em uma proporção que é a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente cerca de 1:2 a 2:1, opcionalmente cerca de 1:1.
[001096] 321. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 277-320, que compreende ainda um excipiente farmaceuti- camente aceitável.
[001097] 322. A composição de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 277-321, a qual é estéril.
[001098] 323. Uma composição farmacêutica para uso no tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente um câncer, que contém a células de acordo com qualquer uma das modalidades 227-276 co- mo um ingrediente ativo.
[001099] 324. Uma composição farmacêutica para uso no tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente um câncer, que contém a composição de acordo com qualquer uma das modalidades 277-322 ou 388 como um ingrediente ativo.
[001100] 325. Uma composição farmacêutica para uso no tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente um câncer, que contém uma composição que compreende uma primeira dose de uma plurali- dade de primeiras células que compreendem um primeiro receptor an- tigênico quimérico que é o receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-67 ou codificada pelo polinucle- otídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 68-79 e uma composição que compreende uma segunda dose de uma pluralidade de segundas células que compreendem um segundo receptor antigê- nico quimérico como um ingrediente ativo.
[001101] 326. Um método de tratamento, que compreende adminis- trar uma composição que compreende uma dose de células de acordo com qualquer uma das modalidades 79-97 ou a composição de acordo com qualquer uma das modalidades 280-325 e 388 a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno.
[001102] 327. Um uso das células de acordo com qualquer uma das modalidades 227-276 para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a doença ou condição é um câncer.
[001103] 328. Um uso da composição de acordo com qualquer uma das modalidades 277-322 ou 388 para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a doença ou condição é um câncer.
[001104] 329. O uso das células de acordo com qualquer uma das modalidades 227-276 para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a do- ença ou condição é um câncer.
[001105] 330. O uso da composição de acordo com qualquer uma das modalidades 277-322 ou 388 para a fabricação de um medica- mento para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a doença ou condição é um câncer.
[001106] 331. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 326-330 ou a composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer uma das modalidades 323-325, em que a dose das células compreende entre cerca de 1,0 x 107 células T que ex- pressam CAR e 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre cerca de 1,0 x 107 células T que expressam CAR e 6,5 x 10º células T que expressam CAR, entre cerca de 1,5 x 10” células T que expressam CAR e 6,5 x 10º células T que expressam CAR, entre cerca de 1,5 x 107 células T que expressam CAR e 6,0 x 10º células T que expres- sam CAR, entre cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e 6,0 x 108 células T que expressam CAR, entre cerca de 5,0 x 107 célu- las T que expressam CAR e 6,0 x 108 células T que expressam CAR, entre cerca de 1,25 x 107 células T que expressam CAR e 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre cerca de 1,5 x 107 células T que expressam CAR e 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre cer- ca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e 4,5 x 108 células T que expressam CAR ou entre cerca de 1,5 x 108 células T que expres-
sam CAR e 3,0 x 10º células T que expressam CAR, cada um inclusi- ve.
[001107] 331. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 326-330 ou a composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer uma das modalidades 323-325, em que a dose das células compreende em ou cerca de 1,5 x 10”, em ou cerca de 2,5 x 107, em ou cerca de 5,0 x 107, em ou cerca de 7,5 x 107, em ou cerca de 1,5 x 108, em ou cerca de 2,25 x 108, em ou cerca de 3,0 x 108, em ou cerca de 4,5 x 108, em ou cerca de 6,0 x 10º, em ou cerca de 8,0 x 108 ou em ou cerca de 1,2 x 10º células T que expressam CAR.
[001108] 332. Um uso de uma composição que compreende uma primeira dose de uma pluralidade de primeiras células que compreen- dem um primeiro receptor antigênico quimérico que é o receptor anti- gênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-67 ou codificada pelo polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 68-79 e uma composição que compreende uma segunda dose de uma pluralidade de segundas células que compreendem um segundo receptor antigênico quimérico para o tratamento de uma do- ença ou transtorno, opcionalmente em que a doença ou condição é um câncer.
[001109] 333. O uso de uma composição que compreende uma pri- meira dose de uma pluralidade de primeiras células que compreendem um primeiro receptor antigênico quimérico que é o receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-67 ou codi- ficada pelo polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modali- dades 68-79 e uma composição que compreende uma segunda dose de uma pluralidade de segundas células que compreendem um se- gundo receptor antigênico quimérico para a fabricação de um medica- mento para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a doença ou condição é um câncer.
[001110] 334. Um método de tratamento, que compreende: administrar uma composição que compreende uma primeira dose de uma pluralidade de primeiras células que compreendem um primeiro receptor antigênico quimérico que é o receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-78 ou codificada pelo polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 79-97 a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno; e administrar ao indivíduo uma segunda dose de uma composição que compreende uma pluralidade de segundas células que compreendem um segundo receptor antigênico quimérico.
[001111] 335. O método ou uso de acordo com a modalidade 334em que a primeira dose da pluralidade de primeiras células e a segunda dose da pluralidade de segundas células compreendem independen- temente entre em ou cerca de 1,0 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 1,5 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de cerca de 1,0 x 10º células T que expressam CAR e em ou cerca de 6,5 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 1,25 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 0,6 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 1,5 x 107 cé- lulas T que expressam CAR e em ou cerca de 6,5 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 1,5 x 107 células T que expres- sam CAR e em ou cerca de 6,0 x 108 células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 2,25 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 6,0 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 6,0 x 10º células T que ex- pressam CAR, entre em ou cerca de 7,5 x 107 células T que expres- sam CAR e em ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 4,5 x 10º células T que expressam CAR ou entre em ou cerca de 1,5 x 10º célu- las T que expressam CAR e em ou cerca de 3,0 x 10º células T que expressam CAR, cada um inclusive.
[001112] 336. O método ou uso de qualquer de acordo com a moda- lidade 334 ou 335 ou a composição farmacêutica de acordo com qual- quer uma das modalidades 323-325, em que a composição que com- preenda pluralidade de primeiras células e a composição que compre- enda pluralidade de segundas células são administradas simultânea, sequencial ou intermitentemente.
[001113] 337. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 334-336, em que a composição que compreenda pluralidade de primeiras células e a composição que compreenda pluralidade de se- gundas células são administradas sequencialmente em qualquer or- dem.
[001114] 338. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 334-337, em que, dentre uma pluralidade das primeiras células, menos de em ou cerca de 10 %, em ou cerca de 9 %, em ou cerca de 8 %, em ou cerca de 7 %, em ou cerca de 5 %, em ou cerca de 4 %, em ou cerca de 3 %, em ou cerca de 2 % ou em ou cerca de 1 % das células na pluralidade compreende um receptor antigênico quimérico que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independen- te de antígeno.
[001115] 339. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 334-338, em que, dentre uma pluralidade das segundas células, menos de em ou cerca de 10 %, em ou cerca de 9 %, em ou cerca de 8 %, em ou cerca de 7 %, em ou cerca de 5 %, em ou cerca de 4 %, em ou cerca de 3 %, em ou cerca de 2 % ou em ou cerca de 1 % das células na pluralidade compreende um receptor antigênico quimérico que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independen- te de antígeno.
[001116] 340. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 334-339, em que o segundo receptor quimérico compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente a um segundo antígeno expresso em ou associado ao mieloma múlti- plo.
[001117] 341. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 334-339, em que o segundo CAR compreende o domínio de liga- ção a antígeno extracelular que se liga ao segundo antígeno, um es- paçador, um domínio transmembrana e uma região de sinalização in- tracelular.
[001118] 342. O método de acordo com a modalidade 340 ou a mo- dalidade 341, em que o segundo antígeno é selecionado a partir de antígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI e FCRH5.
[001119] 343. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 334-342, em que o segundo antígeno é BCMA.
[001120] 344. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 334-343, em que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e
(ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[001121] 345. O método de acordo com a modalidade 344, em que a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198.
[001122] 346. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344 ou 345, em que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma região determinante de complementaridade de cadeia pe- sada 1 (CDR-H1) que compreende a sequência de aminoácidos sele- cionada a partir de SEQ ID NOS: 199, 202, 206, 209, 212 e 215; (b)
uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 200, 203, 207, 210, 213 e 216; e (c) uma re- gião determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR- H3) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 201, 204, 205, 208, 211, 214 e 217; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 218, 221, 224, 227, 230, 233 e 235; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 219, 222, 225, 228, 231, 234 e 236; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 220, 223, 226, 229 e 232; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[001123] 347. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-346, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218,
219 e 220, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 212, 213 e 214, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 233,
234 e 229, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[001124] 347. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-346, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[001125] 348. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-347, em que: a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 190;
a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 192;
a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 194;
a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem
(a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 196; ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198.
[001126] 349. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-348, em que: a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e
SEQ ID NO: 194; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.
[001127] 350. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-349 em que o domínio de ligação a antígeno extracelular do segundo CAR é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia.
[001128] 351. O método de acordo com a modalidade 350, em que o fragmento de anticorpo com uma única cadeia é ou compreende um fragmento variável com uma única cadeia (scFv).
[001129] 352. O método de qualquer de acordo com as modalida- des344-351, em que a região VH e a região VL são unidas através de um ligante flexível.
[001130] 353. O método de acordo com a modalidade 352, em que o li- gante compreende a sequência de aminoácidos GGGGSGGGGSGCGGGGS (SEQ ID NO: 52).
[001131] 354. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-353, em que a região VH é amino-terminal à região VL region.
[001132] 355. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-354, em que a região VH é carbóxi-terminal à região VL re- gion.
[001133] 356. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-355, em que o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %,
em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionado a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.
[001134] 357. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-356, em que o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.
[001135] 358. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-357, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR com- preende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as se- quências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respecti- vamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente; e/ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se-
quência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.
[001136] 359. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-358, em que o domínio transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CD8, opcionalmente de CD4 humana, CD38 humana ou CD8 humana.
[001137] 360. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-359, em que: o domínio transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana de CD28 humana; e/ou o domínio transmembrana é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com SEQ ID NO: 18.
[001138] 361. O método de acordo com a modalidade 360, em que o domínio transmembrana é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18.
[001139] 362. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 344-361, em que a região de sinalização intracelular compreende um domínio de sinalização intracelular.
[001140] 363. O método de acordo com a modalidade 362, em que o domínio de sinalização intracelular é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do receptor de células T (TOR) e/ou compreende um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM).
[001141] 364. O método de acordo com a modalidade 362 ou a mo- dalidade 363, em que o domínio de sinalização intracelular é ou com- preende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta (CD37)
ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma, opcio- nalmente uma cadeia de CD3 zeta humana.
[001142] 365. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 362-364, em que a região de sinalização intracelular compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20.
[001143] 366. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 362-365, em que a região de sinalização intracelular compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora.
[001144] 367. O método ou uso de acordo com a modalidade 366, em que a região de sinalização coestimuladora compreende um domí- nio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de cé- lulas T ou a porção de sinalização da mesma.
[001145] 368. O método ou uso de acordo com a modalidade 366 ou a modalidade 367, em que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas, opcionalmente CD28 humana, 4-1BB humana ou ICOS humana.
[001146] 369. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 366-368, em que a região de sinalização coestimuladora compreende: um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de
93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.
[001147] 370. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 366-369, em que a região de sinalização coestimuladora compreende: um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.
[001148] 371. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 344-370, em que o segundo receptor antigênico quiméri- co codificado compreende, a partir de seu N para C término, na ordem: o domínio de ligação a antígeno, o espaçador, o domínio transmem- brana e a região de sinalização intracelular.
[001149] 372. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 326-371, em que a doença ou transtorno está associado à expressão do GPRC5D.
[001150] 373. O método ou uso de acordo com a modalidade 372, em que a doença ou transtorno está ainda associado à expressão do antígeno de maturação de células B (BCMA).
[001151] 374. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 326-373, em que a doença ou transtorno é um transtorno relacionados a células B.
[001152] 375. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 326-374, em que a doença ou transtorno associado ao BCMA é uma doença ou transtorno autoimune.
[001153] 376. O método ou uso de acordo com a modalidade 375, em que a doença ou transtorno autoimune é lúpus eritematoso sistê- mico (SLE), nefrite por lúpus, doença inflamatória intestinal, artrite reumatoide, vasculite associada a ANCA, púrpura trombocitopênica idiopática (ITP), púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), tromboci- topenia autoimune, doença de Chagas, doença de Grave, granuloma- tose de Wegener, poliarterite nodosa, síndrome de Sjogren, pênfigo comum, escleroderma, esclerose múltipla, psoríase, nefropatia por IgA, polineuropatias por IgM, vasculite, diabetes mellitus, síndrome de Reynaud, síndrome antifosfolipídica, doença de Goodpasture, doença de Kawasaki, anemia hemolítica autoimune, miastenia grave ou glo- merulonefírite progressiva.
[001154] 377. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 326-376, em que a doença ou transtorno é um câncer.
[001155] 378. O método ou uso de acordo com a modalidade 377, em que o câncer é um câncer que expressa GPRC5D.
[001156] 379. O método ou uso de acordo com a modalidade 377 ou a modalidade 378, em que o câncer é uma malignidade de células plasmáticas e a malignidade de células plasmáticas é mieloma múltiplo (MM) ou plasmacitoma.
[001157] 380. O método ou uso de qualquer de acordo com qualquer uma das modalidades 377-379, em que o câncer é mieloma múltiplo (MM).
[001158] 381. O método ou uso de acordo com a modalidade 380, em que o câncer é a mieloma múltiplo recidivante/resistente.
[001159] 382. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 326-381, em que:
o indivíduo é resistente a ou teve uma recaída após admi- nistração de uma terapia que tem como alvo BCMA, opcionalmente após administração de células T que compreendem um CAR que se liga especificamente ao BCMA; ou o método compreende selecionar um indivíduo para o tra- tamento que é resistente a ou teve uma recaída após administração de uma terapia que tem como alvo BCMA, opcionalmente após adminis- tração células T que compreendem um CAR que se liga especifica- mente ao BCMA.
[001160] 383. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 326-333 e 335-382, em que antes de administração da dose das células, o indivíduo recebeu anteriormente a administração de uma terapia que tem como alvo BCMA para tratamento de uma do- ença ou transtorno.
[001161] 384. O método de acordo com qualquer uma das modalida- des 334, em que antes de administração da primeira dose de células e da segunda dose de células, o indivíduo recebeu anteriormente a ad- ministração de uma terapia que tem como alvo BCMA para tratamento de uma doença ou transtorno.
[001162] 385. O método ou uso de acordo com a modalidade 383 ou a modalidade 383, em que a terapia que tem como alvo BCMA com- preende uma composição que compreende células T que compreen- dem um CAR que se liga especificamente ao BCMA.
[001163] 386. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 383-385, em que o indivíduo é resistente a ou teve uma recaída após administração de a terapia que tem como alvo BCMA, opcionalmente após administração de células T que compreendem um CAR que se liga especificamente ao BCMA.
[001164] 387. O método ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 326-386, em que o indivíduo compreende células de mi-
eloma múltiplo que exibem perda de antígeno BCMA ou epítopo, regu- lação negativa de BCMA e/ou células tumorais negativas para BOMA após uma administração anterior.
[001165] 388. A composição de acordo com a modalidade 278 ou a modalidade 279, em que a composição compreende uma pluralidade de células, em que pelo menos uma porção das células compreende o primeiro CAR que se liga especificamente GPRC5D, uma porção das células compreende um segundo CAR que se liga especificamente a um segundo antígeno que é expresso em ou associado ao mieloma múltiplo, opcionalmente em que o segundo antígeno é BOCMA e uma porção das células compreende tanto o primeiro CAR como o segundo CAR.
[001166] 389. Uma combinação que compreende: uma pluralidade de primeiras células que compreendem um primeiro receptor antigênico quimérico que é o receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das modalidades 1-78 e/ou codificada pelo polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 79-97; e uma pluralidade de segundas células que compreendem um segundo receptor antigênico quimérico.
[001167] 390. A combinação de acordo com a modalidade 389, em que, dentre uma pluralidade das primeiras células, menos de cerca de %, 9 %, 8 %, 7 %, 5%, 4 %, 3 %, 2 % ou 1 % das células na plura- lidade compreende um receptor antigênico quimérico que exibe sinali- zação tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno.
[001168] 391. A combinação de acordo com a modalidade 389 ou a modalidade 390, em que, dentre uma pluralidade das segundas célu- las, menos de em ou cerca de 10 %, em ou cerca de 9 %, em ou cerca de 8 %, em ou cerca de 7 %, em ou cerca de 5 %, em ou cerca de 4 %, em ou cerca de 3 %, em ou cerca de 2 % ou em ou cerca de 1 %
das células na pluralidade compreende um receptor antigênico quimé- rico que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização inde- pendente de antígeno.
[001169] 392. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 389-391, em que o segundo receptor quimérico compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especifica- mente a um segundo antígeno expresso em ou associado ao mieloma múltiplo.
[001170] 393. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 389-391, em que o segundo CAR compreende o domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga ao segundo antígeno, um espaçador, um domínio transmembrana e uma região de sinalização intracelular.
[001171] 394. A combinação de acordo com a modalidade 392 ou embodiment393, em que o segundo antígeno é selecionado a partir do grupo que consiste em antígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI e FCRH5.
[001172] 395. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 389-394, em que o segundo antígeno é BCMA.
[001173] 396. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 389-395, em que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen-
tada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em qualquer uma de SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento e/ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[001174] 397. A combinação de acordo com a modalidade 396, em que a região VH compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 conti- das dentro da sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e a região VL compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198.
[001175] 398. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396 ou 397, em que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma cadeia pesada variável (VH) que compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR- H1) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em
SEQ ID NO: 199, 202, 206, 209, 212 ou 215; (b) uma região determi- nante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que com- preende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 200, 203, 207, 210, 213 ou 216; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 201, 204, 205, 208, 211, 214 ou 217; e (ii) uma região variável de cadeia leve (VL) que compreen- de uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 218, 221, 224, 227, 230, 233 ou 235; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 219, 222, 225, 228, 231, 234 ou 236; e (c) uma região determi- nante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 220, 223, 226, 229 ou 232; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento e/ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.
[001176] 399. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-398 em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região VL do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente;
a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 212, 213 e 214, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 233, 234 e 229, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[001177] 400. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-399, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente.
[001178] 401. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-400, em que: a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 %, em ou cerca de 99 % ou em ou cerca de 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com SEQ ID NO: 190;
a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 192;
a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 194; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 196; ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 %de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 198.
[001179] 402. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-401, em que: a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e
SEQ ID NO: 190, respectivamente; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.
[001180] 403. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-402, em que o domínio de ligação a antígeno extracelu- lar do segundo CAR é um fragmento de anticorpo com uma única ca- deia.
[001181] 404. A combinação de acordo com a modalidade 403, em que o fragmento de anticorpo com uma única cadeia é ou compreende um fragmento variável com uma única cadeia (scFv).
[001182] 405. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-404, em que a região VH e a região VL são unidas atra- vés de um ligante flexível.
[001183] 406. A combinação de acordo com a modalidade 3405, em que o ligante compreende a sequência de aminoácidos GGGGSG GGGSGGGGS (SEQ ID NO: 52).
[001184] 407. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-406, em que a região VH é amino-terminal à região VL region.
[001185] 408. A combinação de acordo com qualquer uma das mo-
dalidades 396-406, em que a região VH é carbóxi-terminal à região VL
409. A combinação de acordo com qualquer uma das modalidades 396-408, em que o domínio de ligação a antígeno compreende a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 ou 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NOS: 227, 238, 239, 240 ou 241.
[001186] 410. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-409, em que o domínio de ligação a antígeno compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 ou 241.
[001187] 411. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-410, em que: a região VH do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; ou a região VH do segundo CAR com- preende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as se- quências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 215, 216 e 217, respecti- vamente, e a região VL do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 235, 236 e 232, respectivamente; e/ou a região VH e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.
[001188] 412. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-411, em que o domínio transmembrana é ou compreen- de um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CD8, opcionalmente de CD4 humana, CD38 humana ou CD8 humana.
[001189] 413. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-412, em que: o domínio transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana de uma CD28 humana; e/ou o domínio transmembrana é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com SEQ ID NO: 18.
[001190] 414. A combinação de acordo com a modalidade 413, em que o domínio transmembrana é ou compreende a sequência apresen- tada em SEQ ID NO: 18.
[001191] 415. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 396-414, em que a região de sinalização intracelular com- preende um domínio de sinalização intracelular.
[001192] 416. A combinação de acordo com a modalidade 415, em que o domínio de sinalização intracelular é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do receptor de células T (TOR) e/ou compreende um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM).
[001193] 417. A combinação de acordo com a modalidade 415 ou a modalidade 416, em que o domínio de sinalização intracelular é ou compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta (CD3%) ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta humana.
[001194] 418. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 415-417, em que a região de sinalização intracelular com- preende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20.
[001195] 419. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 415-418, em que a região de sinalização intracelular com- preende ainda uma região de sinalização coestimuladora.
[001196] 420. A combinação de acordo com a modalidade 419, em que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T ou a porção de sinalização da mesma.
[001197] 421. A combinação de acordo com a modalidade 419 ou a modalidade 420, em que a região de sinalização coestimuladora com- preende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas, opcionalmente CD28 humana, 4-1BB humana ou ICOS humana.
[001198] 422. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 419-421, em que a região de sinalização coestimuladora compreende: um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.
[001199] 423. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 419-422, em que a região de sinalização coestimuladora compreende: um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.
[001200] 424. A combinação de acordo com qualquer uma das mo- dalidades 389-423, em que o segundo receptor antigênico quimérico codificado compreende, a partir de seu N para C término, na ordem: o domínio de ligação a antígeno, o espaçador, o domínio transmembra- na e a região de sinalização intracelular.
[001201] 425. Um kit que compreende a combinação de acordo com qualquer uma das modalidades 389-424 e instruções para uso, opcio- nalmente em que as instruções são para administração de uma dose das primeira e segunda pluralidades de células, opcionalmente de acordo com o método ou uso de acordo com qualquer uma das moda- lidades 326-387.
[001202] 426. Um artigo de manufatura que compreende a combina- ção de acordo com qualquer uma das modalidades 389-424 ou o kit de acordo com a modalidade 425.
[001203] 427. O artigo de manufatura de acordo com a modalidade 426 que compreende um primeiro recipiente que compreende uma do- se da pluralidade de primeiras células e um segundo recipiente que compreende uma dose da pluralidade de segundas células, opcional- mente em que os primeiro e segundo recipientes são independente- mente um frasco ou bolsa.
[001204] 428. Use de a combinação de acordo com qualquer uma das modalidades 389-424 para o tratamento de uma doença ou trans- torno, opcionalmente em que a doença ou transtorno é um câncer.
[001205] 429.0O uso de a combinação de acordo com qualquer uma das modalidades 389-424 para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a doença ou transtorno é um câncer.
[001206] 430. Uma composição farmacêutica para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente um câncer, que contém a combinação de acordo com qualquer uma das modalidades 389-424 como um ingrediente ativo.
[001207] Os exemplos a seguir são incluídos apenas para fins ilus- trativos e não se destinam a limitar o escopo da invenção.
Exemplo 1: Expressão de Receptor Acoplado à Proteína G de Clas- se C, Grupo 5, Membro D (GPRC5D) em Mieloma Múltiplo (MM) A. Expressão de mRNA de GPRC5D
[001208] Para identificar e avaliar potenciais alvos na superfície celu-
lar para imunoterapia de mieloma múltiplo (MM), a expressão de MRNA em > 1.000 diferentes linhagens de células malignas, incluindo linhagens de células de MM, foi avaliada in silico usando a Cancer Cell Line Encyclopedia (CCLE; Barretina et al., Nature. (2012) 483 (7391): 603-607). O banco de dados do projeto Genotype-Tissue Ex- pression (GTEx) (The GTEx Consortium, Nat Genet. (2013) 45 (6): 580-—585) também foi pesquisado para avaliar a expressão de MRNA em tipos de tecidos primários não malignos, além de células tumorais.
[001209] CD138 foi usada como um marcador de controle, uma vez que a CD138 é um comarcador de superfície comum usado para iden- tificar células plasmáticas normais e malignas. A CD138 foi expressa em níveis elevados em linhagens de células de MM e em linhagens de células da maioria dos tipos de tumor, com a expressão média mais elevada em tumores da via aerodigestiva superior (Figura 1A). O mMRNA de GPRCB5D foi altamente expresso em linhagens de células de MM (n = 30); no entanto, em contraste com a CD138, nenhum outro tipo de tumor exibiu expressão significativa (Figura 1B).
[001210] A análise de expressão em tipos de tecido normal primário (não maligno) a partir de dados do banco de dados Genotype-Tissue Expression (GTEx) revelou alta expressão de mRNA de CD138 no esôfago, pele, pulmão e fígado, dentre outros tecidos (Figura 2A). Em contraste, o MRNA de GPRCB5D não foi altamente expresso em quais- quer tecidos normais além da expressão variável em amostras de pele (Figura 2B). A análise da expressão de mRNA de GTEx em amostras de medula óssea humana mostrou expressão de MRNA de GPRC5D 1000 e 500 vezes maior em células plasmáticas malignas primárias e normais do que em células B de sangue periférico, respectivamente (Figura 2C).
[001211] Para avaliar a relação entre a expressão de mMRNA de GPRCSB5D e os resultados clínicos, foram analisados dados de expressão de RNAsegq classificados por CD138 (research.mmrf.org; versão IA13) de 765 pacientes no ensaio clínico MMRF CoMMpass (NCT0145429). Os pacientes foram estratificados em dois grupos: (1) aqueles com ex- pressão da proteína GPRC5D acima da mediana e (2) aqueles com expressão da proteína GPRC5D abaixo da mediana. A expressão da proteína GPRC5D mais alta foi significativamente correlacionada com a sobrevida sem progressão reduzida (Figura 3A). No entanto, a ex- pressão da proteína GPRC5D não foi correlacionada com a pontuação do sistema de estadiamento internacional (ISS) (Figura 3B; n = 369 acima da mediana, 374 abaixo da mediana) ou qualquer anormalidade citogenética comum avaliada, incluindo amplificação, eliminações e translocações gênicas (Figura 3C- 3H; n = 287-291 acima da mediana, 280-282 abaixo da mediana).
E. Expressão da Proteína GPRC5D
1. Ensaio Imuno-histoquímico (IHC)
[001212] Relatórios anteriores que avaliaram a proteína GPRC5D em células de mieloma múltiplo foram incapazes de identificar a expressão na superfície celular usando análises de citometria de fluxo (Frigyesi et al., Robust Isolation of Malignant Plasm Cells in Multiple Myeloma. Blood 123, 1336-40 (2014). Estes resultados negativos foram confir- mados usando vários reagentes disponíveis. Em vez disso, para avali- ar a expressão da proteina GPRC5D, um ensaio de imuno- histoquímica (IHC) anti-GPRC5D foi realizado em células K562 mani- puladas para expressar GPRC5D (K562-GPRCS5D) e linhagens de cé- lulas humanas MM (OPM-2 e NCI-H929) que expressam a proteína GPRC5D endógena usando um anticorpo monoclonal humano anti- GPRC5D (Abcam, catálogo Nº ab55044). As lâminas foram tratadas com um sistema multimérico de anticorpo-ligante conjugado com pero- xidase de rábano e cromógeno 3,3'-Diaminobenzidina (vista como co- loração marrom para visualizar a imunorreatividade de GPRC5D) e contrastadas com hematoxilina. As células que expressam GPRC5D demonstraram coloração positiva, nenhuma coloração foi observada nas células precursoras K562, e coloração de apenas raros plasmóci- tos foi observada em tecido de tonsila humana primária. A quantifica- ção de valores atípicos boxplot por meio de análise de imagem digital (Halo) da densidade óptica da membrana (média + intervalo interquar- til) em imagens IHC de cada linhagem de células foi usada para de- terminar a concentração de anticorpo que mostra a maior faixa (Figura 4A).
2. Expressão de Proteínas GPRC5D e BCMA em Mieloma Múltiplo (MM)
[001213] A expressão de CD138, BCMA e GPRCS5D foi quantificada usando imunofluorescência quantitativa multiplex (Q-IF) em amostras de medula óssea primária de 83 pacientes com mieloma. Seções fixa- das em formalina e embebidas em parafina de 83 amostras de medula óssea de pacientes com mieloma múltiplo foram submetidas à recupe- ração de antígeno antes da análise por meio de imunofluorescência multiplex usando: (1) anticorpo de coelho anti-CD138 humana e fluoro- foro rodamina 6G, (2) anticorpo de camundongo anti-antígeno de ma- turação de células B humano (BCMA) e fluoroforo DCC e (3) anticorpo de camundongo anti-família do receptor C acoplado à proteína G, gru- po 5, membro D humana (GPRCB5D) e fluoroforo CY5. Seções inteiras de amostras de medula óssea coradas foram digitalizadas usando um scanner de lâminas Pannoramic P250 na exposição definida (SDHISTECH, Perkin Elmer, Waltham, MA). A porcentagem de células positivas foi com base na definição de um limite de positividade para cada marcador usando a plataforma de análise de imagem Halo 2.0 (Indica Labs, Corrales, NM). As células positivas e negativas foram contadas. As células positivas foram selecionadas entre as células tu- morais CD138* e a porcentagem positiva foi normalizada para células tumorais CD138*. A prevalência de BCMA e GPRCS5D foi medida entre células tumorais CD138* com positividade de 1 % ou mais.
[001214] Conforme mostrado na Figura 4B, 98 % das amostras de medula óssea avaliadas exibiram coloração positiva para GPRC5D em pelo menos um subconjunto de células CD138*. Em todas as amos- tras, a maioria das células CD138* foram positivas para BOCMA e GPRC5D, mas havia várias amostras em que a população predomi- nante de células CD138* expressava apenas um dos dois antígenos e não ambos. A porcentagem de amostras em que mais de 50 % das células CD138* também foram positivas para BCMA, GPRC5D ou BCMA ou GPRC5D também foi avaliada entre as 83 amostras primá- rias de pacientes (Figura 4C). Especificamente, usando um ponto de corte maior ou igual a cinquenta por cento da expressão do antígeno em células CD138* que foi usado em alguns ensaios de terapia com células T CAR que têm como alvo a proteína BCMA (NCT02215967, NCTO02658929), foi observado que 65 % (54/83) das amostras tinham expressão da proteína GPRC5D acima deste nível, 73 % (61/83) das amostras atingiram este limite para BCMA, enquanto 88 % (73/83) atingiram este limite quando a expressão de BCMA ou GPRCB5D foi considerada (Figura 4C)
[001215] A análise de correlação de Pearson foi usada para avaliar a significância da correlação entre a expressão BCMA e GPRC5D com R2 mostrando ajuste à linha de regressão. A análise indicou que a ex- pressão da proteína GPRC5D em células CD138* era independente da expressão de BCMA (R2 = 0,156; Figura 4D).
3. Expressão da Proteína GPRC5D em Tecidos Não Malignos
[001216] A expressão da proteína GPRCB5D foi avaliada em tecido normal. As biópsias nucleares de 30 tecidos normais primários diferen- tes, cada um de três doadores humanos, foi avaliada por meio de imu- nocoloração. Destes, 24 não expressaram a proteína GPRC5D (adre-
nal, medula óssea, mama (n = 5), cérebro (cerebelo), cérebro (cére- bro), cérebro (pituitária), esôfago, coração, fígado, pulmão (sem glân- dulas peribrônquicas), célula mesotelial, ovário, nervo periférico, pla- centa, próstata, glândula salivar, baço, músculo esquelético, testículo, timo, tireoide, tonsila, útero e tecidos do colo do útero).
[001217] Para os tipos de tecido que mostraram qualquer sinal de coloração positiva em IHC, a coloração foi repetida usando amostras de primatas não humanos (macaco cynomolgus; 96 % de homologia de aminoácidos com seres humanos; anticorpo de reatividade cruza- da), que produziu resultados similares. Os resultados da expressão de IHC foram confirmados por meio de hibridização in situ de RNA (RNA- ISH) e, em alguns casos qPCR, em tecidos humanos, de cynomolgus e murinos (Tabela E1). Dentre os tecidos normais de células não plasmáticas, a IHC foi positiva em células, incluindo o bulbo do folículo piloso e as glândulas peri-brônquicas, com o bulbo do folículo piloso como o único tecido no qual a expressão foi confirmada por meio de hibridização in situ de RNA (ISH) e PCR quantitativa. A POR quantita- tiva da pele foi fracamente positiva (Tabela E1), consistente com a ex- pressão limitada a um tipo de célula rara na pele.
o o o E) 7 8 s E E 3 |2 lê 3 SE uu Zz => O |E o o o o Bl - 212 Ss. | E/S 3| > = mm = oO oO o o o NT) Zz Zz ZziZ => > = o 2 o E $ ? ã >= 8 us o o o o 2 Ss w S8 8 8 = 2 Sis FNE 3 | 2 Ss 2/8) o 8 |8 = Elm Zz u|=
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O E o E Ss vv = 2 E 2 FSC S s 188 a S Eli o o 3, gia =|? PD "O Ss o SS [8 o o 918 o na 3 E 8 ala o o g8 =| é a é TI5/2 2/8 - O VIA/5 0/5356 //0/5|3 o 8 na os o Si SE S|s Cc o o | o|&S 8|& E/S 2 |S o = ax | S/S TT wa sl 2 o Fr lijo &lo Eh w3/0|, E Õ vê . ss o nn &- uU n Ss 6 o - 8 E a o Ss f = & = 5/0 à 3ú S 3 lp 2/2 Se 5 E jaass Sô r | iz
Exemplo 2: Geração e Mapeamento de Epítopos de scFvs Anti- GPRC5D A. Geração de scFvs Anti-GPRC5D
[001218] Uma biblioteca de exibição em fagos de scFv derivada de células B humanas foi usada para identificar scFvs específicos para GPRCS5D que se ligam a células que expressam GPRC5D, mas não a células que expressam uma proteína diferente de GPRC5D. Para ge- rar células que expressam GPRC5D para triagem, fibroblastos NIH- 3T3 foram transduzidos de forma estável com cDNA de GPRC5D hu- mana por meio de um retrovírus para gerar células apresentadoras de antígenos artificiais estáveis (hnGPRC5D-aAPCs) para panning de uma biblioteca de exibição em fagos. A expressão da proteína GPRC5D nas hGPRC5D-aAPCs foi confirmada por meio de citometria de fluxo e um subclone de alta expressão foi expandido. A exibição em fagos foi realizada por meio de seleção de uma biblioteca de exibição em fagos de scFv derivada de células B humanas contra as nGPRC5D-aAPCSs.
[001219] Após a triagem da biblioteca de fagos, os clones positivos foram sequenciados e os clones únicos foram submetidos a uma se- gunda etapa de validação de ligação às linhagens de células de MM humanas MM.1S e NCI-H929, mas não à linhagem de células SET2 de Leucemia Mieloide Aguda (AML). Trinta e dois (32) clones únicos foram identificados com CDRs de cadeia leve e pesada cobrindo 5 e 3 subfamílias, respectivamente, e com comprimentos de HCDR3 varian- do a partir de 6-23 aminoácidos. Sete clones que exibiram a maior |li- gação específica a célulasMM.1S e NCI-H929, mas não linhagens de células negativas para GPRC5D (derivadas de outras doenças hema- tológicas malignas), foram selecionados para desenvolvimento em construções de CAR, conforme descrito abaixo. B. Mapeamento de Epítopo
[001220] Uma biblioteca de peptídeos 15-meros sobrepostos cobrin-
do os domínios extracelulares de GPRC5D foi sintetizada e quimica- mente ligada a estruturas flexíveis para avaliar a ligação a epítopo |i- near, conformacional e descontínuo (via ligação química de peptídeos em armações) de um subconjunto dos scFvs que têm como alvo a pro- teína GPRC5D gerados acima usando métodos com base em ELISA. Os scFvs se ligaram a diversos epítopos, com todas as alças extrace- lulares da proteína GPRC5D de sete domínios transmembrana ligadas por pelo menos um dos scFvs identificados (Figura 5). Exemplo 3: Geração de Receptores Antigênicos Quiméricos (CARs) Anti-GPRC5D e Células Que Expressam CARs Anti- GPRC5D
[001221] Foram concebidos receptores antigênicos quiméricos (CARs) os quais incorporam scFv humano que tem como alvo a prote- ína GPRC5D de 7 candidatos identificados acima em diferentes forma- tos estruturais (Tabela E3).
[001222] Foram geradas construções polinucleotídicas que codificam um CAR que codificavam um domínio de ligação a antígeno que con- têm cada scFv descrito acima, no qual a cadeia pesada variável (VH) e a cadeia leve variável (VL) foram conectadas através de um ligante (que contêm resíduos apresentados em SEQ ID NO: 52) e em que ca- da scFv foi gerado para estar na orientação VH/VL e orientação VL/VH.
[001223] Cada construção de CAR gerada continha o domínio de ligação a antígeno do scFv; um de três domínios espaçadores deriva- dos de imunoglobulina de comprimento diferente [curto (apenas do- bradiça, 12aa; SEQ ID NO: 15); intermediário (dobradiça-CH3, 119aa; SEQ ID NO: 16); ou longo (dobradiça-CH2-CH3, 228aa; SEQ ID NO: 17, codificado pela sequência apresentada em SEQ ID NO: 73) com modificações de CH2 para limitar a ligação ao receptor Fc]; um domí- nio transmembrana derivado de CD28 humana (SEQ ID NO: 18); um domínio de sinalização intracelular derivado de 4-1BB humana (SEQ ID NO: 19); e um domínio de sinalização intracelular derivado de CD3zeta humana (SEQ ID NO: 20).
[001224] A Tabela E3 apresenta os componentes, e SEQ ID NO, das construções de CAR anti-GPRC5D exemplificativas geradas. Tabela E3. Componentes de construções CAR anti-GPRC5D Construção de car | [SEEN (scFv - espaçado |9FY [| | [Rs | aa jnt TVJV.| Espaçador | CD28 TM | 4-1BB CD3T GPRC5D-200 Vr/V. 1 21/22/15 18 19 20 — curto GPRC5D-200 VuVH 2 21/22/15 18 19 20 — curto GPRC5D-201 VV. 3 23 | 24 |15 18 19 20 — curto GPRC5D-201 VuVr 4 23 | 24 |15 18 19 20 — curto GPRC5D-202 VV. 25/26/15 18 19 20 — curto GPRC5D-202 VuVr 25/26/15 18 19 20 — curto GPRC5D-203 VV. 7 27 | 28/15 18 19 20 — curto GPRC5D-203 VuVr 27 | 28/15 18 19 20 — curto GPRC5D-204 Vr/V. 29 [30 | 15 18 19 20 — curto GPRC5D-204 VuVH 29 [30 | 15 18 19 20 — curto GPRC5D-205 Vr/V. n 31 [32] 15 18 19 20 — curto GPRC5D-205 VuVH 12 31 [32] 15 18 19 20 — curto GPRC5D-206 Vr/V. 13 33 |34 | 15 18 19 20 — curto GPRC5D-206 VuVH 14 33 |34 | 15 18 19 20 — curto
Construção de car | [SEEN (scFv — espaçador) [ser 9 | aa|nt |VvsJV.| Espaçador | CD28 TM | 4-1BB CD37 GPRC5D-200 Vn/V. 1 21 /22|16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-200 VuUVr 2 21 /22|16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-201 Vu/VL 3 23/24 |16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-201 VUVr 4 23/24 |16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-202 Vn/V. 25/26/16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-202 VUVH- 25/26/16 18 19 20 intermediário GPRC5D-203 Vn/V. 7 27 [28 16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-203 VuUVr 27 [28 16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-204 Vu/V. 29 [30 | 16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-204 VuUVr 29 [30 | 16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-205 Va/V.
EE 31/32/16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-205 VuUVK 12 31/32/16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-206 Vn/VL 13 33 [34 | 16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-206 VuUVr 14 33 [34 | 16 18 19 20 — intermediário GPRC5D-200 Vn/V. 1 [257 | 21/22 | 17 18 19 20 — longo GPRC5D-200 VuUVr 2 |258/21/22|17 18 19 20 — longo GPRC5D-201 Vu/VL 3 |259/23/24|/17 18 19 20 — longo GPRC5D-201 VUVr 4 260/23 /24|17 18 19 20 — longo
Construção de car TSE NO | (scFv — espaçador) [ser 9 | aa|nt |VvsJV.| Espaçador | CD28 TM | 4-1BB CD37 GPRC5D-202 VwVL 261/25 /26|17 18 19 20 — longo GPRC5D-202 VuVr 262 | 25 | 26 | 17 18 19 20 — longo GPRC5D-203 VwVL 7 263/27 /28|17 18 19 20 — longo GPRC5D-203 VuVr 264 | 27 [28 | 17 18 19 20 — longo GPRC5D-204 VwVL 265 | 29 | 30 | 17 18 19 20 — longo GPRC5D-204 VuVr | 266 | 29 | 30 | 17 18 19 20 — longo GPRC5D-205 VwVL 11 | 267 | 31 | 32 | 17 18 19 20 — longo GPRC5D-205 VuVr 12 | 268 | 31 | 32 | 17 18 19 20 — longo GPRC5D-206 VwVL 13 | 269 | 33 | 34 | 17 18 19 20 — longo GPRC5D-206 VuVr 14 | 270 [| 33 | 34 | 17 18 19 20 — longo
[001225] As construções de ácidos nucleicos que codificam os CARs foram geradas como construções bicistrônicas que codificam ainda uma proteína fluorescente verde (GFP) repórter exemplificativa, a qual foi separada da sequência do CAR por uma sequência T2A de autocli- vagem (sequência apresentada em SEQ ID NO: 44, a qual codifica a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 37).
[001226] As construções de ácidos nucleicos foram clonadas em um vetor de expressão lentiviral ou um vetor de expressão retroviral para transdução de células. Para construções lentivirais, a sequência de nucleotídeos que codifica os CARs anti-GPRC5D que contêm o espa- çador longo tinha códons otimizados e foi avaliada quanto a potenciais sítios de splicing e modificada de uma maneira conservativa, incluindo a remoção de potenciais sítios de splicing previstos. Após a otimização de códons para expressão em células humanas, a sequência de DNA foi, então, analisada quanto a sítios de splicing (por exemplo, ferra- menta de previsão de sítio de splicing online NNSPLICING versão 0.9; fruitfly.org, Berkeley Drosophila Genome Project, Berkeley, CA). Os sítios doadores de splicing e os sítios aceitadores de splicing foram avaliados independentemente. Os sítios doadores e aceitadores de splicing identificados com uma pontuação de sítio de splicing de > 0,7 (> 70 % de probabilidade de um evento de splicing), por exemplo, na região do promotor e região espaçadora longa), foram modificados por meio de mutação silenciosa para reduzir a pontuação do sítio de spli- cing para menos de 0,7. Dentre estas regiões modificadas posterior- mente após otimização de códons para eliminação do sítio de splicing estavam aquelas dentro de sequências de regiões espaçadoras mais longas. As sequências de nucleotídeos da sequência de nucleotídeos modificada que codifica o espaçador longo do CAR são apresentadas em SEQ ID NO: 74.
[001227] Para a transdução de células T humanas primárias, con- forme descrito nos estudos abaixo, as células T humanas primárias foram isoladas de sangue total obtido de doadores saudáveis ou do New York Blood Center (New York, NY). As células T foram estimula- das com fito-hemaglutinina (2 mg/mL) ou esferas magnéticas anti- CD3/anti-CD3 na proporção de 1:1 durante 24 horas, na presença de IL-2, IL-7 e IL-15 recombinantes. As células T foram transduzidas por meio de espinoculação com vírus nos dias 2 a 3 após o início da esti- mulação, expandidas e as células foram coletadas e, em alguns casos, criopreservadas e descongeladas antes de uso. A eficiência de trans- dução foi determinada por meio de análise de citometria de fluxo nos dias 4 a 10.
Exemplo 4: Avaliação da Sinalização Independente de Antígeno (Tônica) de Diferentes Receptores Antigênicos Quiméricos Anti- GPRCS5D (CARs)
[001228] Uma linha repórter de células T Jurkat estável foi gerada que contêm um repórter Nur77 knock-in por meio de integração direci- onada via reparo dependente de homologia (Homology Dependent Repair, HDR), onde as sequências de ácidos nucleicos que codificam a molécula repórter foram inseridas no locus Nur77 endógeno. Uma molécula repórter de proteína fluorescente vermelha (Red Fluorescent Protein, RFP) exemplificativa foi direcionada via HDR para ser inserida em um clone de células T Jurkat E6-1 (ATCCGE TIB-1527") em quadro a jusante do gene endógeno Nr4a1 (Nur77), antes do códon terminar e após um elemento T2A de "autoclivagem" (sequência apresentada em SEQ ID NO: 45, a qual codifica a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 37), para permitir a coexpressão de RFP como um repórter da expressão de Nur77.
[001229] A linhagem de células T Nur77-RFP Jurkat foi transduzida de forma estável com uma construção bicistrônica que contém GFP e uma das 42 construções de CAR diferentes descritas no Exemplo 3 acima. A linhagem de células Nur77-repórter foi usada para avaliar a ativação de células T em células modificadas com CAR, uma vez que Nur77 é um produto de gene precoce imediato em linfócitos T; a trans- crição é iniciada especificamente a jusante da sinalização à CD3 zeta e não é influenciada por citocinas ou sinais mediados por TLR. Neste modelo, a sinalização tônica foi indicada pela expressão de RFP na ausência de estimulação do antígeno GPRC5D.
[001230] 5x10º de cada uma das células T Nur77-RFP Jurkat trans- duzidas por CAR foram incubadas na ausência de células que expres- sam GPRCB5D. A transdução de CAR foi medida pelo sinal de GFP e a sinalização tônica foi determinada como a porcentagem de células que expressam GFP (isto é, transduzidas por CAR) que expressaram RFP nos dias 2, 7 e 11 pós-transdução. A sinalização tônica e não tônica detectada a partir de células GFP* está resumida nas Figuras 6A-6B. Os resultados do ensaio demonstraram sinalização tônica variada en- tre as construções de CAR, com as construções que incorporam scFvs anti-GPRC5D-203 humana (V/Vrn e VH/V.) exibindo a sinalização tôni- ca mais baixa. Determinadas construções de CAR que foram associa- das aos níveis mais altos de sinalização tônica em células que expres- sam tais CARs também foram observadas como associadas a um crescimento fraco da linhagem de células repórter Jurkat e foram ex- cluídas de avaliação adicional (GPRC5D-204 VH/V.L e Vu/VH com espa- çador curto e GPRC5D-206 V./Vn com espaçador intermediário).
[001231] A sinalização independente de antígeno e a sinalização de- pendente de antígeno das construções de CAR foram comparadas. Células T Nur77-RFP Jurkat transduzidas por CAR ou células precur- soras não transduzidas foram incubadas sem a presença de antígeno ou na presença de células de mieloma MM.1S que expressam GPRC5D em uma proporção de efetor:alvo (E:T) de 1:2. O sinal de GFP e RFP foi avaliado após 20 horas como uma medida de transdu- ção do CAR ou como uma medida de sinalização a células T, respecti- vamente. A porcentagem de células Jurkat transduzidas por CAR (GFP*) que exibem sinal de RFP na ausência de antígeno foi repre- sentada contra tais células que exibem sinal de RFP na presença de antígeno (Figura 6C-6E). Os resultados deste ensaio demonstraram que a incorporação de um espaçador longo aumentou a sinalização mediada por antígeno através do CAR, mas era menos provável de induzir à sinalização independente de antígeno (tônica), o que foi ob- servado com construções de CAR com espaçadores mais curtos.
[001232] A Figura 6F representa fluxogramas representativos de construções que expressam CAR anti-GPRC5D exemplificativas que contêm o espaçador longo ou células precursoras não transduzidas após incubação na ausência (linha superior dos painéis; sinalização tônica independente de antígeno) ou presença de antígeno GPRC5D (células de mieloma MM.18) (linha inferior dos painéis, sinalização de- pendente de antígeno). As células transduzidas por CAR são indica- das ao longo do eixo y como GFP'* e a sinalização é indicada ao longo do eixo x como RFP*. Os valores mostrados no quadrante superior di- reito de cada painel são a porcentagem de células GFP* que eram RFP*. Dentre os CARs testados, GPRC5D-203 V./Vx com o espaçador longo teve a maior porcentagem de ativação após a exposição ao an- tígeno, ao mesmo tempo em que manteve a menor porcentagem de sinalização tônica. Exemplo 5: Especificidade do CAR Anti-GPRC5D Humana
[001233] O domínio de ligação a antígeno do scFv CAR de espaça- dor longo, GPRC5D-203 V/Vu, foi testado quanto à especificidade de ligação e ligação fora-do-alvo. A. Ensaio de Interação Célula-Célula
[001234] O CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 VuVn, mas sem os domínios de sinalização, foi testado quanto à especificidade de |i- gação entre os receptores acoplados à proteína G (GPCRs). O CAR de não sinalização foi transitoriamente expresso em células HEK293 usando um vetor de expressão sobre a superfície celular que incluiu mCherry citoplasmático. Em paralelo, o cDNA de receptores individu- ais de uma biblioteca de GPCRs humanas, em um vetor que expressa GFP citoplasmático, foi transitoriamente expresso nas células HEK293. Destes, 202 GPCRs passaram no controle de qualidade de > % de transdução e foram selecionados para ligação fora-do-alvo. À ligação foi determinada usando um ensaio citométrico de fluxo auto- matizado que detecta a interação célula-célula. O CAR anti-GPRC5D exemplificativo interagiu exclusivamente com a proteína GPRC5D comparado com todos os GPCRs avaliados (Figura 7A; limiar pré- especificado para significância (linha horizontal): pontuação Z = 3; P < 0,0027). B. Ensaio de Microarranjo Celular
[001235] A especificidade do CAR de espaçador longo, GPRC5D- 203 VuVnu, foi confirmada em um ensaio de IHC scFv-Fc. Populações de células HEK293 individuais, cada uma expressando uma das 4.417 proteínas da membrana plasmática humana, foram cultivadas em pon- tos de microarranjo de células em uma lâmina para microscópio e se- lecionadas com o scFv anti-GPRC5D-203 Vu/Vn (SEQ ID NO: 8) fundi- do a uma Fc de mIlgG2a, um controle negativo do isotipo de Fc de mlgG2a. Os microarranjos celulares foram avaliados quanto à ligação por meio de microscopia de fluorescência automática com um anticor- po secundário anti-mlgG2a marcado com fluorescência.
[001236] Os resultados indicaram forte ligação à proteína GPRC5D e ligação fora-do-alvo com potencial fraco a médio a duas proteínas adicio- nais, protocaderina alfa 1 (PCDH1A) e receptor Fc gama 2A (CD32a; FCGR2A), uma proteína com potencial conhecida pela interação com Fc. Uma segunda triagem em pequena escala de células que expres- sam estas proteínas indicou potencial para ligação (Figura 7B). C. Ativação Dependente de Antígeno Fora-do-Alvo
[001237] Para avaliar a atividade funcional com base nos efeitos fo- ra-do-alvo, os ligantes potenciais fora-do-alvo, PCDH1IA e FCGR?2A, foram expressos em células K562 e cocultivados com as células repór- ter Jurkat Nur77/RFP transduzidas para expressar o CAR de espaça- dor longo, GPRC5D-203 Vuw/Vn, usando o ensaio descrito no Exemplo
4. Células K562 que expressam BCMA foram usadas como um contro- le negativo. As células foram incubadas em proporções E:T de 5:1, 1:1 e 1:5. A porcentagem de células RFP* das células transduzidas com CAR GFP* foi determinada para cada condição. Conforme mostrado na Figura 7C, apenas a cocultura com células K5S62-GPRC5D resultou na ativação das células repórter que expressam CAR anti-GPRC5D; a cocultura de K562-PCDH1A, K562-FCGR2A ou K562-BCMA não ati- vou o repórter que expressa CAR anti-GPRCB5D.
D. Ativação Dependente de Proteína GPRC5D
[001238] Para determinar ainda se o CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 Vw/Vun, reconhece especificamente a proteína GPRC5D, a proteína GPRC5D foi eliminada das células OPM2 usando um sis- tema CRISPR-Cas9. Resumidamente, cinco guias de RNA CRISPR (crRNA) (gRNA) foram escolhidos proximal e dentro do éxon 1 da pro- teína GPRC5D (SEQ ID NO: 292-296). Os crRNAs foram colocados em complexo com o crRNA transativador de AItR CRISP-Cas9 (tracrRNA) em uma proporção de 1:1 para gerar gRNAs de duas par- tes. Todos os 5 gRNAs foram agrupados e incubados com Cas9 em uma proporção de 2:1 para gerar complexos de ribonucleoproteína (RNP). As células OPM2 foram eletroporadas com Cas9 RNP que tem como alvo a proteína GPRC5D. As células eletroporadas foram ex- pandidas e clonadas, com clones expandidos rastreados por meio de reação em cadeia de polimerase (PCR) para confirmar exclusões no locus da proteína GPRC5D.
[001239] Células precursoras OPM2 ou GPRC5D-knockout foram cultivadas em uma proporção de 1:1 com células Jurkat Nur77RFP (descritas no Exemplo 4) que remanipulamos para expressar o CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 VuVn, ou um CAR anti-BCMA e incubadas durante 20 horas. A ativação do CAR foi avaliada ao medir as variações na expressão de RFP por meio de citometria de fluxo. Conforme mostrado na Figura 7D, a ativação de células repórter Jurkat Nur77/RFP mediada pelo CAR GPRC5D-203 VV após cocultura com células OPM?2 foi abolida quando elas foram cocultivadas com células OPM2 nas quais a proteína GPRCB5D foi silenciada usando
CRISPR-Cas9.
[001240] Estes resultados revelaram que o CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 Vu/Vr, reconhece especificamente a proteína GPRC5D. Exemplo 6: Atividade /n Vitro de Terapia com Células T CAR que Têm Como Alvo a Proteína GPRC5D
[001241] Células T CAR que incorporam o CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 Vw/Vu, foram testadas quanto à atividade funcional com base na atividade citotóxica e capacidade de induzir à produção de citocinas na presença de antígeno. Para gerar células T que expres- sam CAR anti-GPRCS5D, as células T foram isoladas por meio de enri- quecimento com base em imunoafinidade a partir de amostras de leu- caferese de indivíduos doadores humanos. As células T isoladas fo- ram ativadas e transduzidas com vetores retrovirais que contêm a construção polinucleotídica que codifica o CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 VuwVr, conforme descrito no Exemplo 3. Como contro- les, as células T do mesmo doador também foram transduzidas com um CAR que incorpora um scFv anti-<BCMA ou um scFv anti-CD19 que tem alvos irrelevantes ou foram transduzidas de forma simulada. A. Citotoxicidade
[001242] Um painel de linhagens de células de mieloma múltiplo e células de mieloma múltiplo primárias foi avaliado quanto à expressão de mRNA de GPRC5D por meio de CCLE RNAseg para linhagens de células MM ou Blueprint RNAsegq para células de MM primárias (Figura 8A; células primárias de mieloma múltiplo mostradas na caixa). As cé- lulas T CAR foram cocultivadas com as linhagens de células MM1.S, OPM?2 e RPMI-8226 em uma faixa de proporções de efetor para alvo (E:T) durante 24 horas, e a lise celular foi monitorada. Conforme mos- trado na Figura 8B, células T que expressam CAR anti-GPRC5D indu- ziram à citotoxicidade em todas as três linhagens de células, normali- zadas para células T correspondentes de doador transduzidas de for-
ma simulada.
[001243] Células T CAR foram cocultivadas com linhagem de célu- las-alvo OPM2 de MM humanas (que expressam as proteínas BCMA e GPRC5D endógenas) manipuladas para expressar luciferase de vaga- lume (OPM2-ffLuc MM) em uma faixa de proporções E:T durante 24 horas. A morte das células-alvo foi determinada por meio de biolumi- nescência dependente de ATP após a adição de luciferina, e foi nor- malizada para matar em culturas com células tumorais-alvo apenas (N = 3, média + desvio padrão). Conforme mostrado na Figura 9A, as cé- lulas T que expressam CAR anti-GPRC5D induzem à citotoxicidade em uma ampla faixa de proporções de efetor para alvo (E:T) a partir de 80 % na proporção E:T de 0,03:1 a 98 % na proporção E:T de 1:1. Es- tes resultados foram comparáveis à cocultura com as células T CAR anti-BCMA, com citotoxicidade de ambas as coculturas que têm como alvo o antígeno MM significativamente acima da citotoxicidade de base observada quando as células de MM OPM2-fíLuc foram cocultivadas com células T CAR anti-CD19 que têm alvos irrelevantes.
[001244] A citotoxicidade contra células primárias também foi avalia- da por meio de cocultura durante a noite, por exemplo, 24-48 horas, de células T CAR com células mononucleares da medula óssea primárias (BMMCs) dos aspirados de pacientes com MM recidivante múltiplo em células T CAR* 1:1: BMMCSs. A morte de células de MM de aspirado de medula óssea primária de um doador foi avaliada por meio de citome- tria de fluxo com base na porcentagem de BMMCSs viáveis que eram CD138*/CD38"' após ativação em células CD3 negativas. As análises de citometria de fluxo que demonstram a morte de células de MM de aspirado de medula óssea primárias (CD138*/CD38"') são representa- das na Figura 9B. A cocultura de células BMMCs com células T CAR que têm como alvo as proteínas GPRC5D ou BCMA, mas não células T CAR que têm como alvo a CD19 ("que têm um alvo irrelevante"), do mesmo doador reduziu a morte da porção CD138*/CD38"'em > 90 % ( Figura 9B; caixa). Para evitar a contribuição por expansão de células T ou eficiência de transdução, a porcentagem de BMMCs que eram CD138*/CD3' foi determinada, conforme representado na Figura 9C. As análises de citometria de fluxo de BMMCs cocultivadas com células T que incorporam um CAR que tem como alvo a proteína BCMA sem domínios de sinalização ("del CAR") ou os scFvs que têm como alvo as proteínas BCMA ou GPRC5D indicadas, de doadores adicionais, são mostradas na Figura 9D. Em todos os casos, as células CAR-T anti-GPRC5D induziram à citotoxicidade significativamente acima da média das células T com o CAR sem domínio de sinalização ("del CAR"), e comparativamente com as células T CAR que têm como alvo a proteína BCMA. B. Secreção de Citocinas
[001245] As células T CAR foram cocultivadas a 1:1 com células de MM OPM? ou isoladamente, durante 24 horas, e o sobrenadante foi coletado para análise de citocinas por meio do ensaio multiplex Lumi- nexê.
[001246] Conforme mostrado nas Figuras 10A a 10C, os perfis de secreção de citocinas após cocultura com a linhagem de células de MM OPM? foram comparáveis entre as células T CAR que têm como alvo as proteínas GPRC5D ou BCMA através das citocinas avaliadas. Particularmente, as células T CAR que têm como alvo qualquer antí- geno secretaram um perfil de citocinas polifuncionais com os maiores aumentos de IFNy, MIP-1a, TNFa (efetor); GM-CSF, IL2 (estimulador); MIP-1b (quimio-atraente); citocinas sSCD40L e IL13 (reguladoras) quando comparado com as células T CAR de controle que têm como alvo a CD19 cocultivadas com células OPM2 ou células T CAR culti- vadas na ausência de células-alvo.
Exemplo 7: Atividade de Proliferação e Ativação da Terapia com Células T CAR que Têm Como Alvo a Proteína GPRC5D
[001247] Células T CAR que incorporam o CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 Vuw/Vu, foram testadas quanto à proliferação e atividade de ativação após cocultura com células que expressam antígeno. Para gerar células T que expressam CAR anti-GPRC5D, as células T foram isoladas por meio de enriquecimento com base em imunoafinidade a partir de amostras de leucaferese de indivíduos doadores humanos. As células T isoladas foram ativadas e transduzidas com vetores lenti- virais que contêm a construção polinucleotídica que codifica o CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 VV, conforme descrito no Exemplo 3, exceto que a construção não incluiu nucleotídeos que codificam o marcador GFP. Como controles, as células T do mesmo doador tam- bém foram transduzidas com um CAR que incorpora um scFv anti- BCMA ou foram transduzidas de forma simulada.
[001248] Células T transduzidas de forma simulada ou com CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 V/Vn, foram cultivadas isoladamente (sem alvo), com células de leucemia linfoblástica aguda de células B (B-ALL) (Nalm6; GPRC5D") ou células de MM (OPM2; GPRC5D*) em uma proporção de efetor (célula T):alvo (linhagem de células) de 1:1. As células T foram coradas com CellTrace Violet (CTV) antes da cocul- tura e coradas para CD4, CD8 e CD25 após 72 horas. A proliferação foi medida como uma diluição da fluorescência de CTV em células T CD4* e CD8*, e a ativação foi medida pelo aumento da fluorescência de CD25 (receptor alfa de interleucina-2; IL2RA), indicando regulação positiva de CD25.
[001249] Os dados representativos são apresentados nas Figu- ras11A-D, as quais mostraram que as respostas eram igualmente es- pecíficas. As células T CAR anti-GPRC5D proliferaram (conforme indi- cado pela diluição de CellTrace Violet nas Figuras 11A e 11B) e regu-
laram positivamente o marcador de ativação CD25 na presença de cé- lulas OPM2, mas não após cocultura com células B-ALL Nalm6 (con- forme mostrado nas Figuras 11C e 11D). As células transduzidas de forma simulada não responderam às células-alvo de MM. Exemplo 8: Atividade /n Vivo de Terapia com Células T CAR que Têm Como Alvo a Proteína GPRC5D
[001250] Um modelo de xenoenxerto de linhagem de células de mi- eloma humano OPM?2, que leva à doença predominante da medula óssea, foi usado para avaliar os efeitos in vivo da terapia com células T CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D. Camundongos NOD scid gama (NSGTY) foram injetados através da veia da cauda com 2 x 10º células OPM2-fíLuc, as quais puderam enxertar e expandir durante 14 ou 21 dias antes de um único tratamento com uma injeção na veia da cauda de 3 x 10º células T CAR. Os camundongos de controle não receberam células T ("tumor apenas") ou receberam células T proces- sadas de forma simulada do mesmo doador ("simulação"). Imagiologia bioluminescente (BLI) de ffLuc foi usada para monitorar a carga tumo- ral.
[001251] Os vetores lentivirais que contêm polinucleotídeos que codi- ficam o CAR anti-GPRC5D conforme descrito no Exemplo 3, exceto sem nucleotídeos que codificam o marcador GFP, foram usados para transduzir células T que foram isoladas por meio de enriquecimento com base em imunoafinidade a partir de amostras de leucaferese de indivíduos doadores humanos. Os CARs avaliados incluíram um de três scFv anti-GPRC5D, scfv GPRC5D-200 VuV+n (SEQ ID NO: 2), scFv GPRC5D-202 Vu/V. (SEQ ID NO: 5) ou scFv GPRC5D-203 Vu/VH (SEQ ID NO: 8); um espaçador longo, um domínio transmembrana de- rivado de CD28 humana, um domínio coestimulador 4-1BB humana e um domínio de sinalização intracelular de CD3zeta, conforme descrito no Exemplo 3. Como mostrado na Figura 12A, a análise FACS revelou que os diferentes vetores de CAR foram expressos comparativamente sobre a superfície das células T, conforme medido usando um anticor- po específico para o espaçador.
[001252] A sobrevida de camundongos com tumor que receberam 3 x 10º células T CAR foi monitorada 14 dias após a injeção de OPM?2 (8 camundongos por construção de CAR). Conforme mostrado na Figura 12B, o tratamento com cada uma das células T CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D aumentou a sobrevida dos camundongos neste modelo comparado com nenhum tratamento ou tratamento com células T simuladamente transfectadas. Em 100 dias após a injeção de células T CAR, apenas os camundongos tratados com o CAR que in- corpora o espaçador longo, GPRC5D-203 VuVr , mantiveram 100 % de sobrevida.
[001253] Além do modelo OPM2, o modelo de xenoenxerto de uma linhagem de células de mieloma múltiplo humano que expressa baixo mMRNA de GPRC5D, RPMI-8226, foi usado para avaliar os efeitos in vivo da terapia com células T CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D. Os camundongos NSG foram injetados subcutaneamente com células RPMI-8226. Quando os tumores eram palpáveis (dia O), os camundongos foram estratificados em grupos de tratamento e con- trole com volumes tumorais comparáveis e tratados com uma única injeção intravenosa de 3 x 10º células que expressam o espaçador longo, GPRC5D-203 Vu/Vr. Os camundongos de controle não recebe- ram células T ("apenas tumor") ou receberam células T processadas de forma simulada ("simulação"). A eficácia antitumoral precoce foi monitorada pelo volume do tumor e a expansão das células T CAR foi monitorada por meio de citometria de fluxo de sangue periférico nos dias 3 e 14. Conforme mostrado nas Figuras 12C e 12D, células T ge- neticamente modificadas para expressar uma atividade antitumoral mediada por CAR que tem como alvo a proteína GPRC5D e expansão de células T CAR in vivo foram observadas. Exemplo 9: Efeitos de Diferentes Domínios Coestimuladores So- bre a Atividade /n Vivo da Terapia Com Células T CAR que Têm Como Alvo a Proteína GPRC5D
[001254] Um modelo de xenoenxerto de linhagem de células de mi- eloma humano OPM?2, que leva à doença predominante da medula óssea, foi usado para avaliar a efeitos da terapia com células T CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D. Camundongos NOD scid ga- ma (NSGTY) foram injetados através da veia da cauda com 2 x 10º cé- lulas OPM2-ffLuc que foram enxertadas e expandidas durante 14 ou 21 dias antes de um único tratamento com uma injeção na veia da cauda de 3 x 10º células T CAR. Os camundongos de controle não re- ceberam células T ou receberam células T simuladamente processa- das do mesmo doador. Imagiologia bioluminescente (BLI) de fíLuc foi usada para monitorar a carga tumoral.
[001255] Para gerar células T que expressam CAR anti-GPRC5D, construções de polinucleotídeos que codificam CARs conforme des- crito no Exemplo 3, seguido por nucleotídeos que codificam luciferase gaussiana externa (extGLuc) para rastreamento in vivo, foram clona- das em vetores retrovirais e usadas para transduzir T células que fo- ram isoladas por meio de enriquecimento com base em imunoafinida- de a partir de amostras de leucaferese de indivíduos doadores huma- nos. O CAR avaliado incluía scFv GPRC5D-203 Vu/Vr (SEQ ID NO: 8); um espaçador longo, um domínio transmembrana derivado de CD28 humana, um domínio coestimulador de 4-1BB humana e um domínio de sinalização intracelular de CD3zeta, conforme descrito no Exemplo
3. Uma construção de CAR que incorpora o scFv GPRC5D-203 Vu/Vr também foi gerada conforme descrito acima, exceto pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora de 4-1BB foi substituída por uma região de sinalização coestimuladora de CD28 (SEQ ID NO: 46).
[001256] A sobrevida e o crescimento do tumor foram monitorados após o tratamento de camundongos portadores de tumor OPM2 com 3 x 106 células T CAR anti-GPRC5D que contêm um domínio de sinali- zação coestimulador de 4-1BB ou um domínio de sinalização coesti- mulador derivado de CD28 para comparar a atividade de células T CAR que contêm diferentes regiões de sinalização coestimuladoras. Neste exemplo, os camundongos foram tratados 21 dias após a inje- ção de OPM?2 para fornecer uma carga maior de tumor antes do trata- mento, e 5 camundongos foram tratados com a construção de CAR.
[001257] Células T CAR continham um CAR que incorporam o CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 Vu/Vn, com um domínio coestimu- lador derivado de 4-1BB (designado GD-41BBz) ou o mesmo CAR, mas com um domínio de sinalização coestimulador derivado de CD28 (designado GD-CD282z). O tratamento com células T CAR que expres- sam um CAR que tem como alvo uma proteína irrelevante, CD19, com o espaçador longo e domínio coestimulador de CD28 (designado 19- CD282z) também foi estudado como um controle negativo. Neste expe- rimento, os vetores de expressão de CAR usados para transduzir célu- las T também incluíram um gene quimérico de luciferase gaussiano externo (extGLuc) com um domínio transmembrana de CD8 separado da sequência codificante do CAR por um elemento P2A. As células que expressam ExtGLuc podem ser visualizadas após injeção de coe- lenterazina, um substrato distinto da luciferina necessário para BLI de fíLuc, que permitiu BLI in vivo de células tumorais (via fíLuc) e células T CAR (via ExtGLuc) no mesmo camundongo.
[001258] A sobrevida dos camundongos tratados foi comparativa- mente estendida após o tratamento com a construção de CAR anti- GPRCB5D, independentemente do domínio de sinalização coestimula- dor, comparado com camundongos tratados com células T CAR anti- CD19 (Figura 13A).
[001259] BLI com luciferina de células tumorais OPM2-fíLuc indicou que as construções de CAR anti-GPRC5D com o domínio coestimula- dor erradicaram células OPM?2 entre os dias 2 e 7 após injeção de cé- lulas T CAR, e a erradicação foi predominantemente durável (Figuras 13B-D). Em contraste, o crescimento do tumor continuou em camun- dongos após o tratamento com células T CAR anti-CD19. As mortes de camundongos tratados com células T CAR anti-GPRC5D por volta do dia 60 na ausência de sinal BLI de OPM2 foram secundárias ao GvHD xenogênico, uma limitação conhecida, dependente de doador, da injeção de células T humanas em camundongos NSG (King et al. (2009) Clin. Exp. Immunol. 157: 104-118; Covassin et al. (20110 Clin. Exp. Immunol. 166: 269-280).
[001260] A capacidade das células T CAR de se alojarem em MM foi avaliada ao monitorar a BLI de coelenterazina de células T CAR que expressam extGLuc 7 dias após o tratamento com células T CAR. Conforme mostrado na Figura 13E, GPRC5D teve como alvo células T CAR, com qualquer domínio coestimulador, localizado no local do xe- noenxerto de MM, visualizado após injeção de coelenterazina uma semana após o tratamento. Exemplo 10: Resposta à Dose de Terapia com Células T Anti- GPRCS5D e CAR Anti-BCMA /n Vivo em Modelo de Mieloma
[001261] Em um estudo adicional, as terapias com células T CAR anti-GPRC5D e anti-<BCMA, com uma estrutura de CAR idêntica, foram avaliadas no modelo de xenoenxerto de linhagem de células de mi- eloma humano OPM2. O CAR anti-GPRC5D continha o scFv GPRC5D-203 VuVr (SEQ ID NO: 8) com um espaçador longo, um domínio transmembrana derivado de CD28 humana, um domínio coes- timulador de 4-1BB humana e um domínio de sinalização intracelular de CD3zeta, conforme descrito no Exemplo 3. O CAR anti-BCMA foi gerado no mesmo esqueleto, exceto que contêm um scFv anti-BCMA,
em vez de um scFv anti-GPRC5D. As construções polinucleotídicas que codificam os CARs foram clonadas em um vetor lentiviral e usa- das para transduzir células T que foram isoladas por meio de enrique- cimento com base em imunoafinidade a partir de amostras de leucafe- rese de um doador humano.
[001262] Cerca de 2 x 10º células OPM2-ffLuc foram injetadas em camundongos NOD scid gama (NSGTY) para gerar um modelo de xe- noenxerto de linhagem de células de mieloma humano OPM?2 subs- tancialmente conforme descrito no Exemplo 7. Quatorze (1 4) dias após a injeção de OPM2, os camundongos receberam uma dose baixa (3,3 x 105) ou uma dose mais alta (1 x 106º) de células T que expres- sam CAR anti-GPRC5D ou células T que expressam CAR anti-<BCMA (N = 8/doença). Camundongos não tratados e camundongos que re- ceberam células T transduzidas de forma simulada também foram mo- nitorados para comparação (N = 8/condição). A sobrevida e a carga tumoral (BLI de OPM-fíLuc) foram monitoradas a cada 3 a 9 dias por até 90 dias.
[001263] As células T CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D eram comparáveis ou melhores do que as células T CAR que têm co- mo alvo a proteína BCMA na indução de regressão do tumor (Figura 14A; triângulos vs. quadrados, respectivamente) e a extensão da so- brevida (Figura 14B; triângulos vs. quadrados) em ambas as doses em camundongos tratados. Uma resposta à dose foi observada na cinética de regressão do tumor para ambos os tipos de terapia com células T CAR (Figura 14A). Exemplo 11: Avaliação dos Efeitos Sobre o Alvo/Fora do Alvo do Tumor
[001264] Os efeitos não tumorais sobre o alvo da terapia com células T CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D foram estudados em sistemas modelo de primatas celulares, murinos e não humanos, em parte em virtude da expressão da proteína GPRC5D detectada no folí- culo piloso (consulte Exemplo 1, Tabela E1). A. Efeito de Células Normais Essenciais sobre Células T CAR que Têm Como Alvo a Proteína GPRC5D
[001265] Para avaliar a ativação potencial de células T CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D por células normais essenciais, células T humanas primárias foram geneticamente modificadas para expres- sar o CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 VW/Vn, e cocultivadas com um painel de humanos primários isolados tipos de células, após o que a liberação de citocinas foi medida. Enquanto a cocultura de célu- las T que expressam o CAR de espaçador longo, GPRC5D-203 VuVr, com células de MM de controle positivo OPM?2 levou à liberação subs- tancial de IFNy, I1L-2 e TNFa, as quantidades de citocinas no meio após cocultura com qualquer um dos vinte tipos de tecido normais in- vestigados foram mínimos (Figuras 15A-15C). Por exemplo, o IFNy foi
2.600 vezes maior após cocultura de OPM2 quando comparado ao valor mais alto após cocultura com células isoladas de tecido normal. B. Efeitos Sobre o Alvo/Fora do Alvo do Tumor em Células Repór- ter
[001266] Para estudar os efeitos não tumorais sobre o alvo em ca- mundongos e primatas não humanos, foram identificados CARs anti- GPRC5D que apresentavam reatividade cruzada para a proteína GPRC5D de murino (mMGPRC5D) e/ou a proteína de cynomolgus (CGPRC5D), que tinham 82 % e 96 % de homologia de aminoácidos com a proteína GPRC5D humana (hGPRCB5D), respectivamente. Célu- las K562 foram transduzidas para expressar (hnGPRC5D), cGPRC5D ou mMGPRC5D humana. A linhagem repórter de ativação Jurkat Nur77- RFP descrita acima foi transduzida com construções polinucleotídicas que codificam os CARs descritos no Exemplo 3. A ativação do CAR foi medida como % de células RFP* das células transduzidas com CAR
GFP* após cocultura de cada tipo de célula alvo com cada célula re- pórter que expressa CAR anti-GPRC5D em uma proporção de efe- tor:alvo de 1:1. As células repórter também foram incubadas com célu- las precursoras K562 como um controle negativo.
[001267] Os resultados são fornecidos na Figura 15B para CARs exemplificativos que contêm um espaçador longo e um scFV selecio- nado a partir de GPRC5D-200 VU/Vx, GPRC5D-201 Vu/Vn, GPRC5D- 202 VuV., GPRC5D-203 V/Vx, GPRC5D-205 V.W/Vr e GPRC5D-206 VH/V.. Células que expressam a CAR que contém scFv GPRC5D-203 VuV+ não tiveram reação cruzada com MGPRC5D ou cGPRC5D. Cé- lulas que expressam um CAR que contém scFv GPRC5D-205 Vu/Vr tiveram reação cruzada com mGPRC5D e cGPRCB5D, e os outros 4 CARs mostrados na Figura 15D se ligaram à proteína GPRC5D. C. Efeitos Sobre o Alvo/Fora do Alvo do Tumor em um Modelo de Camundongos
[001268] Células T CAR humanas que expressam um CAR que in- corpora o CAR de espaçador longo, GPRC5D-205 Vu/Vu, scFv, de rea- tividade cruzada com mGPRCB5D ou scFv VW/Vr sem reatividade cru- zada, CAR de espaçador longo GPRC5D-203, foram testadas em um modelo de tumor em murinos. As células OPM2-ffíLuc foram injetadas em camundongos NOD scid gama (NSG'Y) para gerar um modelo de xenoenxerto de linhagem de células de mieloma humano OPM?2, con- forme descrito acima. Os camundongos foram injetados com 3 x 10º células T CAR* humanas 14 dias após a linhagem de células de MM OPM?2. O tratamento com células T não tratadas e transduzidas de forma simulada serviu como controle. As observações clínicas, incluin- do temperatura e peso corporal, foram feitas diariamente durante 13 dias, e a carga tumoral (avaliada por BLI de OPM2) foi medida a cada 2-3 dias durante 14 dias.
[001269] Células T que contêm CAR de reatividade cruzada
GPRC5D-205 VuVr e GPRC5D-203 V.W/V+ sem reatividade cruzada foram bem toleradas, conforme observado pelas curvas de peso e temperatura corporal que não diferiram significativamente entre os grupos não tratado e os diferentes grupos tratados com células T CAR (Figura 16A e Figura 16B, respectivamente). Além disso, as terapias com células T que contêm CAR de GPRC5D-205 V./Vn com reativida- de cruzada e GPRC5D-203 V./Vr sem reatividade cruzada mostraram atividade sobre a redução da carga tumoral OPM2 (Figura 16C). Além disso, nenhuma perda de pele ou outro sinal clínico evidente de toxici- dade foi observada para qualquer uma das condições de tratamento. D. Efeitos Sobre o Alvo/Fora do Alvo do Tumor em um Modelo de Primata Não Humano (NHP)
[001270] Células CAR humanas que expressam um CAR de reativi- dade cruzada que incorpora a CGPRC5D, CAR de espaçador longo, scFv, GPRC5D-202 Vi/wvu, foram testadas em um modelo de tumor em primatas. As células T foram coletadas e isoladas de três (3) primatas não humanos machos (NHPs; macacos cynomolgus), designadas 1001, 1002 e 1003, e transduzidas com retrovírus que contêm um po- linucleotídeo que codifica CGPRC5D de reatividade cruzada, CAR GPRC5D-202 VH/V.. Conforme mostrado na Tabela E11A, a taxa de transdução do CAR em células T de NHP foi de 36-49 % das células CD3*. Após a transferência gênica, as células T de NHP permanece- ram viáveis (80-92 %). A Figura 17A fornece análise FACs representa- tiva da expressão de CAR, conforme medido com base no receptor truncado coexpresso usado como um marcador substituto, o qual foi separado da sequência de ácidos nucleicos de CAR codificante por um elemento de salto de ribossomo.
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[001271] As células T de NHP foram avaliadas quanto à atividade citolítica e produção de citocinas contra células apresentadoras de an- tígeno alvo autólogas (tAPCs) e células K562-cCGPRC5D. Conforme mostrado nas Figuras 17B-E, as células T de NHP foram determinadas como funcionais, exibindo atividade citolítica (Figuras 17B e D) e libe- ração de interferon gama (se aproximando de 10.000 pg/mL de sobre- nadante após cocultura com células que expressam GPRC5D em uma proporção E:T de 1:1) em resposta à exposição ao antígeno (Figuras 17CeEE).
[001272] Os três (3) NHPs (ou seja, 1001, 1002 e 1003, a partir dos quais as células T CAR foram geradas acima) foram pré-tratados com ciclofosfamida condicionadora de linfodepleção (40 mg/kg) 2 e 4 dias antes da Injeção de células T CAR e, em seguida, receberam 10 x 10º células T autólogas de cynomolgus CAR* caspase 3/kg, geradas con- forme descrito acima. As observações clínicas, incluindo temperatura e peso corporal, foram feitas a cada 2-7 dias, começando 8 dias antes da injeção de células T e continuando durante 21 dias após a injeção de células T. Todos os três NHPs também foram expostos ao irritante cutâneo imiquimode 4 dias antes da injeção de células T CAR em vir- tude da preocupação com a expressão da proteína GPRC5D no folícu- lo capilar, a fim de aumentar a sensibilidade de detecção de possível toxicidade. Quatro dias após a injeção de células T CAR, cada NHP recebeu 10 x 10º células T apresentadoras de antígeno artificiais autó- logas CcGPRC5D* caspase”/kg para atuar como um reservatório antigê- nico e aumentar a expansão das células T CAR. Em 21 dias após a administração de células T CAR, os NHPs foram sacrificados para exame macroscópico e histológico.
[001273] PCR para o DNA que codifica o CAR que contém GPRC5D-202 VH/V. foi usada para monitorar a persistência de células T no dia 21 após a infusão no sangue periférico e na medula óssea. O
RNA total foi isolado de 2 a 4 cachos (20 um de espessura) de pelotas de células FFPE ou amostras de tecido, e o cDNA foi sintetizado usando um kit de síntese de cDNA. PCR foi realizada usando iniciado- res quantificados como segue: 0,25 uM de cada um dos iniciadores diretos de GPRC5D (5-ACTGCATCGAGTCCACTGGAGA-3'; SEQ ID NO: 253) e iniciadores reversos (5"-GGATCTTTCGCATGAGGAAGAG- 3', SEQ ID NO: 254), e 0,25 uM de cada iniciador direto de B-actina do gene de manutenção (S-AGCATCCCCCAAAGTTCAC-3'; SEQ ID NO: 255) e iniciador reverso (S-AAGGGACTTCCTGTAACAACG-3', SEQ ID NO: 256). As reações de PCR foram realizadas em duplicata em placas de PCR com 384 cavidades. Células T de NHP transduzidas por CAR foram usadas como um controle positivo. Conforme mostrado na Figura 18A, a persistência de células T CAR pós-infusão foi detec- tada no sangue periférico em 3/8 NHPs e na medula óssea em 2/3 NHPs no momento do sacrifício para exame macroscópico e histológi- co.
[001274] GPRC5D-202 Vx4/V. que contêm a terapia com células T CAR foi bem tolerado, conforme determinado por observação clínica, temperatura corporal (Figura 18B) e curvas de peso (Figuras 18C, D), os quais permaneceram estáveis após o tratamento com células T CAR. Um resumo dos achados microscópicos é fornecido na Tabela E11B. Não houve aumento de IFN-gama, IL-6 ou outras citocinas pró- inflamatórias, bem como nenhuma alteração relevante observada na química clínica. Não houve perda de pelos ou outros sinais clínicos de danos à pele, pulmões ou outros tecidos observados clínica ou patolo- gicamente. Juntos, estes dados são consistentes com uma observa- ção de que a administração de células T CAR específicas para a pro- teína GPRC5D no modelo NHP não causou qualquer toxicidade evi- dente ou patologia tecidual relacionada à presença de células T CAR.
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Exemplo 12: Avaliação de Células T CAR que Têm Como Alvo a Proteína GPRC5D em um Modelo de Perda de Antígeno BCMA em Murinos
[001275] Um modelo de murino para mieloma múltiplo negativo para a proteína BCMA foi gerado e usado para avaliar os efeitos das células T CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D quando administradas aos animais do modelo.
[001276] Para gerar células tumorais com silenciamento de BMCA, células OPM2 que expressam GFP/Luciferase Cas9 foram transduzi- das com um lentivírus que contém RNA guia exclusivo para a proteína BCMA (sgRNA). O saRNA de BCMA, dirigido contra uma sequência alvo apresentada em SEQ ID NO: 291, foi clonado no plasmídeo pLen- tiv2 e subsequentemente cotransfectado com plasmídeos de empaco- tamento (Pax2 e Vsvg) em células 293T. A transdução foi realizada na presença de 10 ug/mL de polibreno. As células transduzidas foram se- lecionadas com 40 mg/mL de puromicina durante 10 dias e as células individuais foram reproduzidas em uma placa com 96 cavidades. Co- lônias individuais foram expandidas e coradas com anticorpo anti- BCMA para confirmar o silenciamento da proteína BCMA. Os clones de células OPM2-GL-Cas9 com silenciamento da proteína BCMA con- firmado foram posteriormente expandidos para experimentos.
[001277] Para modelar a presença de células tumorais negativas ao antígeno BCMA no cenário de mieloma múltiplo (o que poderia poten- cialmente levar a uma recaída ou progressão após o tratamento com um agente que tem como alvo a proteína BCMA), camundongos NSG foram injetados com uma população mista de células OPM2WT não manipuladas (cerca de 75 %) e OPM28ºMA-KO mediado por GFP/ffLuc* CRISPR (cerca de 25 %) (1x10º células OPM2 no total) no dia 0. À população de células OPM?2 foi deixada enxertar e expandir durante 7 dias. No dia 8, os camundongos foram injetados com 4x10º células T
CAR que têm como alvo as proteínas CD19 ou BCMA. No dia 16, os camundongos previamente injetados com células T CAR que têm co- mo alvo a proteína BCMA foram injetados com 4x10º células T que expressam um CAR anti-BCMA ou o CAR de espaçador longo GPRC5D-203 VuVr.
[001278] BLI foi usada para imagiologia de camundongos para de- tectar células OPM28ºMA-KO (a população de células que expressam GFP/fíLUC). A imagiologia de camundongos no dia 34 revelou que a subpopulação OPM28ºMA-KO progrediu em camundongos que recebe- ram injeções de células T CAR que têm como alvo a proteína BCMA nos dias 8 e 16. Em contraste, os camundongos que receberam célu- las T CAR que têm como alvo a proteína BCMA no dia 16 não exibi- ram luminescência no dia 34 (Figuras 19A e 19B). Os resultados foram consistentes com a descoberta de que as células T CAR anti-GPRC5D podem exibir atividade antitumoral em mieloma múltiplo, mesmo no contexto de células tumorais que não expressam o antígeno BCMA ou não respondem às células CAR-T que têm como alvo a proteína BCMA; o escape do tumor pode ser resgatado pelas células T que ex- pressam o CAR GPRC5D-203 Vu/Vn.
[001279] A porcentagem de células CD138hi/GFP* na medula óssea foi analisada por meio de citometria de fluxo no dia 35 para avaliar a composição das células OPM2 (hCD138*; WT: GFP; BCMA-KO: GFP*) na medula óssea de camundongos em progressão. A composi- ção de OPM2 (hcD138*) (WT: GFP; BCMAHKº: GFP*) foi avaliada a partir de medulas ósseas lavadas de camundongos tratados com célu- las T CAR CD19, BCMA' ou GPRC5D-' (Figuras 20A e B; representan- te de 3 camundongos/braço; n = 2 experimentos repetidos com resul- tados comparáveis). A ativação vivo e morto foi executada, mas não é mostrada. A maioria das células da medula óssea de camundongos que receberam uma injeção de células T CAR que têm como alvo a proteína BCMA no dia 8 eram CD138"/GFP* (Figuras 20A e B) no dia
35. Os resultados foram consistentes com a capacidade de células T CAR que têm como alvo a proteína BCMA de erradicar células OPM2WT, apesar da persistência e/ou progressão da subpopulação OPM28ºMA-KO de células tumorais. Exemplo 13: Geração de Composições de Células T Manipuladas- Receptor Antigênico Quimérico de Direcionamento Duplo (CAR) para as Proteínas GPRC5D e BCMA
[001280] Composições de células T de direcionamento duplo foram geradas, em que as composições continham células que expressam receptores antigênicos quiméricos (CARs) para direcionamento duplo das proteínas BCMA e GPRC5D. Duas composições separadas de células T manipuladas foram geradas nas quais uma foi manipulada para expressar o CAR anti-BCMA e a outra foi manipulada para ex- pressar o CAR anti-GPRC5D e as composições de células separadas foram agrupadas.
[001281] O CAR anti-BCMA exemplificativo continha um scFv com domínio de ligação a antígeno capaz de se ligar a células que expres- sam a proteína BCMA (por exemplo, scFv BCMA-55 VW/Vn (SEQ ID NO: 241); uma dobradiça-CH2-CH3 de imunoglobulina apresentada em SEQ ID NO: 17, codificada pela sequência apresentada em SEQ ID NO: 73; um domínio transmembrana derivado de CD28 humana (por exemplo, SEQ ID NO: 18); um domínio de sinalização intracelular derivado de 4-1BB humana (por exemplo, SEQ ID NO : 19); e um do- mínio de sinalização intracelular derivado de CD3zeta humana (por exemplo, SEQ ID NO: 20).
[001282] O CAR anti-GPRC5D exemplificativo continha um scFv com domínio de ligação a antígeno capaz de se ligar à proteína GPRC5D (por exemplo, scFv GPRC5D-203 V./Vr (SEQ ID NO: 8); uma dobradi- ça-CH2-CH3 de imunoglobulina apresentada em SEQ ID NO: 17, codi-
ficada pela sequência apresentada em SEQ ID NO: 73; um domínio transmembrana derivado de CD28 humana (por exemplo, SEQ ID NO: 18); um domínio de sinalização intracelular derivado de 4-1BB humana (por exemplo, SEQ ID NO: 19); e um domínio de sinalização intracelu- lar derivado de CD3zeta humana (por exemplo, SEQ ID NO: 20). A. Geração de Células T Agrupadas que Expressam CARs Anti- GPRCS5D e Anti-BCMA
[001283] Os polinucleotídeos que codificam cada CAR individual fo- ram ligados a um elemento de salto ribossômico a jusante (tal como uma sequência T2A autoclivável (sequência apresentada em SEQ ID NO: 44, a qual codifica a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 37) e clonado em um vetor de expressão lentiviral. As composições de células T foram manipuladas separadamente para expressar o CAR anti-BCMA ou o CAR anti-GPRC5D. Para cada um, uma linhagem de células T Jurkat Nur77-RFP ou células T primárias isoladas por meio de enriquecimento com base em imunoafinidade de amostras de leucaferese de indivíduos doadores humanos foram transduzidas com um dos vetores lentivirais que contêm ácido nucleico que codifica o CAR anti-BCMA ou o CAR anti-GPRC5D. Após a trans- dução e, em alguns casos, expansão, as células T foram coradas com um anticorpo específico para o respectivo CAR e analisadas por meio de citometria de fluxo, confirmando a transdução das células e expres- são de CAR.
[001284] Antes de uso, células T humanas primárias coletadas transduzidas com o CAR anti-BCMA ou o CAR anti-GPRC5D foram agrupadas em uma proporção de 1:1 de células que expressam CAR anti-BCMA para células que expressam CAR anti-GPRC5D ("células aGPRC5D e aBCMA agrupadas"). Exemplo 14: Avaliação do CAR Anti-BCMA
[001285] O CAR anti-BCMA exemplificativo descrito no exemplo acima foi avaliado quanto à sinalização independente de antígeno (tô- nica), bem como proliferação e ativação na presença de células que expressam e não que expressam a proteína BCMA. A. Sinalização Independente de Antígeno (Tônica)
[001286] A linhagem de células repórter Nur77-RFP descrita nos exemplos anteriores foi transduzida com um vetor viral que codifica o CAR anti-CD19 (controle) ou o CAR anti-BCMA exemplificativo, con- forme descrito no Exemplo 13, exceto que o marcador substituto para a transdução foi a proteína fluorescente verde super-dobrada, síGFP. Neste modelo, a sinalização tônica foi indicada pela expressão de RFP na ausência de estimulação do antígeno BCMA. As células que ex- pressam CAR foram incubadas sem estimulação com antígeno para avaliar o grau de sinalização independente de antígeno (tônica) duran- te 3 dias e avaliadas quanto à expressão de RFP por meio de citome- tria de fluxo.
[001287] Conforme mostrado na Figura 21A, células que expressam CARs anti-BCMA exemplificativos exibiram baixa expressão de RFP na ausência de estimulação com antígeno, conforme determinado pela porcentagem de células RFP* (indicativo de ativação tônica de repór- ter) entre células que expressam CAR (indicado por células GFP*). B. Proliferação e Ativação de Células T CAR que Têm Como Alvo a Proteína BCMA
[001288] A atividade citolítica, a liberação de citocinas e a prolifera- ção foram avaliadas após a incubação de células T que expressam o CAR anti-BCMA exemplificativo com células que expressam a proteína BCMA que expressavam diferentes níveis de proteína BCMA. Toda a atividade foi avaliada na presença ou ausência de proteína BCMA so- lúvel.
[001289] Uma proporção de 1:1 de células T primárias CD4* e CD8”, coletadas de dois doadores humanos (D *1 e D *2), foi estimulada com esferas de CD3/CD28 e transduzida com um vetor lentiviral para expressar estavelmente o CAR BMCA-55. As células transduzidas fo- ram cultivadas na presença de células alvo que expressam a proteína BCMA em uma proporção E:T de 1:3, 1:1 ou 3:1. Células T processa- das de forma simulada provenientes dos mesmos doadores também foram misturadas com células-alvo para uso como controle. As células alvo BCMA*, Daudi, RPMI-8226 e células K562-BCMA exibiram dife- rentes níveis de densidade do antígeno BCMA na superfície (densida- de do antígeno: Daudi (< 1000 moléculas BCMA/célula) < RPM/I-8226 < K562-BCMA) e foram corados com éster succinimidílico de carboxi- fluoresceína (CFSE) antes de incubação com células T. Um número igual de células negativas para o alvo, que não expressam a proteína BCMA e coradas com Cell Trace Violet (CTV), também foram incluídas nas culturas com as células T e células alvo BCMA*. Após uma incu- bação de 24 horas, as células-alvo BCMA* vs BCMA' restantes foram medidas por meio de citometria de fluxo e o grau de lise das células- alvo, indicativo de citotoxicidade, foi avaliado.
[001290] As células T que expressam CAR anti-BCMA exibiram ati- vidade citolítica similar quando cultivadas com células alvo, indepen- dentemente dos níveis de expressão da proteína BCMA (Figura 21B). Além disso, resultados similares foram observados para células alvo (NCI-H929) que expressam mais de 100.000 moléculas por célula. Cé- lulas T processadas de forma simulada não mostraram atividade con- tra qualquer uma das linhagens de células-alvo BCMA*. As células- alvo negativas para a expressão da proteína BCMA não foram lisadas pelas células T CAR anti-BCMA de nenhum dos doadores testados (dados não mostrados).
[001291] Os sobrenadantes após a incubação foram analisados quanto ao acúmulo de IFN-y, TNF-a e citocinas IL-2. Os dados foram consistentes com a conclusão de que as células T CAR anti-<BCMA liberaram uma variedade de citocinas após o envolvimento com célu- las-alvo que expressam BCMA; com o nível de citocinas liberadas ge- ralmente correspondendo ao aumento do nível de antígeno (isto é, Daudi < RPMI 8226 < K562-BCMA). Os resultados para IFN-y são mostrados na Figura 21C; dados similares foram observados para TNF-a e IL-2 (dados não mostrados). As células T CAR anti-BCMA não liberaram citocinas em resposta a alvos negativos para BCMA, nem expressaram citocinas sem a presença de quaisquer células-alvo, demonstrando especificidade para células-alvo BCMA* e falta de sina- lização tônica.
[001292] A atividade das células T que expressam o CAR anti-BCMA na presença vs. ausência da proteína BCMA solúvel foi avaliada. Célu- las T que expressam o CAR anti-BCMA exemplificativo foram coculti- vadas com células tumorais RPMI-8226, com BCMA-Fc recombinante ou com sobrenadante de cultura celular derivado de células de mielo- ma múltiplo NCI-H929 (linhagem de células secretora de proteína BCMA, o sobrenadante que contêm proteína BCMA solúvel). Nem a lise das células tumorais nem a produção de citocinas foram afetadas por qualquer uma das concentrações de proteína BCMA solúvel deri- vada de NCI-H929 (até 1000 ng/mL). A lise das células tumorais e a produção de citocinas diminuíram apenas minimamente em níveis fisi- ológicos igualmente elevados de proteína BCMA recombinante.
[001293] A proliferação em resposta à proteína BCMA foi medida em células T que expressam CAR anti-BCMA e células T processadas de forma simulada. As células T transduzidas foram marcadas com Cell Trace Violet (CTV) e cultivadas na presença de células-alvo BOCMA* ativas, células-alvo negativas para a proteína BCMA ou nenhuma célu- la, em uma proporção de efetor para alvo (E:T) de 1:1 durante 72 ho- ras. A proliferação foi medida por meio de citometria de fluxo. A prolife- ração de células T (células T CD4* e CD8*) foi observada apenas para células T que expressam CAR anti-BCMA em resposta à incubação com células-alvo positivas para a proteína BCMA (dados não mostra- dos). Exemplo 15: Avaliação In Vitro de Composições de Células T Ma- nipuladas que Contêm Células que Expressam CAR Anti-GPRC5D e Anti-BCMA A. Atividade Dependente de Antígeno na Presença de Células BCMA ou GPRC5D KO
[001294] Para compreender a especificidade dos CARs anti-BCMA e anti-GPRC5D, proteína GPRC5D ou BCMA foi eliminada das células OPM? conforme descrito anteriormente nos Exemplos 5 e 12, respec- tivamente. Conforme mostrado na Figura 22A, a análise de citometria de fluxo confirmou a falta de expressão da proteína GPRC5D nas célu- las OPM2 GPRC5D KO e a falta de expressão de proteína BCMA nas células OPM2 BCMA KO. As células OPM?2 de tipo selvagem (OPM2 WT) serviram como um controle, mostrando a expressão das proteínas GPRC5D e BCMA.
[001295] As composições de células repórter Jurkat Nur77-RFP que contêm células manipuladas para expressar apenas o CAR anti- GPRC5D (aGPRC5D) ou apenas o CAR anti-BCMA (aBCMA) foram avaliadas quanto à atividade específica para antígeno. As composi- ções de células repórter Jurkat Nur77-RFP foram cocultivadas com células OPM2 WT, OPM2 GPRC5D KO ou OPM2 BCMA KO em uma proporção de 1:1 durante 20 horas. A estimulação específica para an- tígeno dos CARs expressos pelas composições de células foi avaliada ao medir as variações na expressão de RFP por meio de citometria de fluxo.
[001296] Conforme mostrado na Figura 22B, a ativação de células repórter Jurkat Nur77-RFP que expressam apenas o CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D (aGPRC5D) ou apenas o CAR que têm como alvo a proteína BCMA (aBCMA) não foi observada quando foram cocultivadas com células OPM2 nas quais a proteína GPRC5D ou BCMA foi eliminada, respectivamente. Este resultado é consistente com a descoberta de que os CARs anti-BCMA e anti-GRPC5D são específicos para seus respectivos antígenos. Exemplo 16: Avaliação /n Vivo de Composições de Células Agru- padas de Direcionamento Duplo que Contêm Células que Expres- sam CARs que Têm Como Alvo as Proteínas GPRC5D e BCMA
[001297] Vários modelos de mieloma múltiplo de murino foram gera- dos e usados para avaliar os efeitos in vivo de composições de células T que contêm (1) células manipuladas para expressar apenas o CAR anti-GPRC5D (aGPRC5D), (2) células manipuladas para expressar apenas o CAR anti-BCMA (aBCMA) ou (3) células agrupadas que con- têm células modificadas separadamente para expressar o CAR anti- BCMA ou o CAR anti-GPRC5D agrupadas na proporção de 1:1 de cé- lulas que expressam CAR anti-BCMA para células que expressam CAR anti-GPRC5D (células aAGPRC5D e aBCMA agrupadas). A. Expressão das Proteínas GPRC5D e BCMA por Linhagens de Células de Mieloma Múltiplo
[001298] Os níveis relativos de expressão de mRNA de proteínas GPRC5D e BCMA foram avaliados entre várias linhagens de células de mieloma múltiplo antes da criação dos modelos de mieloma múlti- plo de murino.
[001299] Os níveis de expressão de mRNA para proteínas GPRC5D e BCMA, conforme fornecido pela Cancer Cell Line Enecylopedia (CCLE), foram determinados por meio de sequenciamento de RNA (RNAsegq) nas seguintes linhagens de células de mieloma múltiplo: KMS12BM, RPMI8226, U266B1, MM.1S, OPM2 e NCI-H929. Confor- me mostrado na Figura 23, as linhagens de células KMS12BM e RPMI8226 exibiram os níveis mais baixos de expressão para ambos os genes dentre todas as linhagens de células analisadas. A linhagem de células U266B1 exibiu níveis moderados de expressão dos genes de GPRC5D e BCMA, comparado com as outras linhagens de células. As linhagens de células MM.1S e OPM?2 exibiram altos níveis de ex- pressão do gene de GPRC5D e níveis moderados de expressão do gene de BCMA, comparado com as outras células. Finalmente, NCI- H929 exibiu os níveis de expressão gênica mais altos para as proteí- nas GPRC5D e BCMA dentre todas as linhagens de células testadas.
[001300] Conforme mostrado na Figura 24, os níveis de expressão de proteína para GPRC5D e BCMA foram adicionalmente analisados nas seguintes linhagens de células: células precursoras K562, células K562 manipuladas para expressar GPRC5D, KMS12BM, MM.1S, NCI- H929, OPM2 e RPMI8226. 5 x 10º células totais foram comarcadas com um anticorpo anti-BCMA ou anti-GPRC5D e um marcador de via- bilidade, e a expressão foi determinada por meio de citometria de flu- xo. Em termos de expressão da proteína GPRC5D, as células K562 manipuladas para expressar a proteína GPRC5D serviram como um controle positivo, demonstraram o nível mais alto de expressão da pro- teína GPRC5D, enquanto que as células K562 precursoras que ser- vem como controle negativo expressaram níveis insignificantes de pro- teína GPRC5D. Em geral, de acordo com os dados de expressão de MRNA, KMS12BM e RPMI8226 expressaram níveis relativamente bai- xos de proteína GPRC5D. NCI-H929 expressou um nível moderado, enquanto que MM.1S e OPM-2 expressaram níveis relativamente altos de proteína GPRC5D. Em termos de expressão da proteína BCMA, KMS12BM, MM1S e RPMI8226 expressaram níveis baixos a modera- dos da proteína BCMA, enquanto que OPM-2 expressou um alto nível da proteína BCMA. Ainda assim, as células NCI-H929 expressaram o nível mais alto de proteína BCMA.
[001301] Tomados em conjunto, os resultados são consistentes com a descoberta de que a linhagem de células RPMI8226 exibe expres- são da proteína GPRC5D relativamente baixa, enquanto que a linha- gem de células OPM?2 exibe expressão da proteína GPRCB5D relativa- mente alta.
B. Avaliação de Composições de Células T que Expressam CARs Anti-BCMA e Anti-GPRC5D em um Modelo de Xenoenxerto de Mu- rino OPM2
[001302] Composições de células T humanas primárias que têm co- mo alvo duplo as proteínas BCMA e GPRC5D que contêm (1) células que expressam apenas o CAR anti-GPRC5D, (2) células que expres- sam o CAR anti-BCMA ou (3) células agrupadas manipuladas separa- damente para expressar o CAR anti-<BCMA ou o CAR anti-GPRC5D agrupadas na proporção de 1:1 de células que expressam CAR anti- BCMA para células que expressam CAR anti-GPRC5D (células aG- PRC5D e aBCMA agrupadas) foram testados em um modelo de tumor de murino com expressão em tumores de um ou ambos os antígenos- alvo.
[001303] Para gerar o modelo de tumor, as proteínas GPRC5D e BCMA foram silenciadas separadamente em células OPM2-rFLuc, conforme descrito nos Exemplos 5 e 12, para gerar linhagens de célu- las OPM2 com silenciamento individual de proteínas GPRC5D e BCMA ("OPM2 GPRC5D KO" e "OPM2 BCMA KO", respectivamente). Como um controle, as células OPM2-rFLuc que expressam proteínas GPRC5D e BCMA (OPM2 WT) foram comparadas com as linhagens com silenciamento individual. Camundongos NOD scid gama (NSGTY) foram injetados com 2 x 10º células totais OPM2, OPM2 GPRC5D KO ou OPM2 BCMA KO. No dia 14 pós-injeção (dia O), a bioluminescência dos tumores foi determinada e camundongos com tamanhos de tumor similares foram tratados com as composições de células T primárias que contêm células modificadas para expressar o CAR anti-GPRC5D
(aGPRC5D) ou o CAR anti-BCMA (aBCMA) ou que contêm células aGPRC5D e aBCMA agrupadas. Os camundongos foram injetados com uma das três doses das composições de células T 14 dias após a injeção com células OPM2: 5 x 10º células T CAR totais, 1 x 10º célu- las T CAR totais ou 2 x 10º células T CAR totais. Composições de cé- lulas T não tratadas e transduzidas de forma simulada serviram como controles.
[001304] Conforme mostrado nas Figuras 25A e 25B, em camun- dongos administrados com 3 x 10º células T CAR totais, a carga tumo- ral (avaliada por meio de BLI de OPM2) permaneceu baixa em ca- mundongos tratados com as células aAGPRC5D e aBCMA agrupadas, independentemente do tipo de célula OPM?2 injetada. Em contraste, os camundongos tratados apenas com células que expressam o CAR an- ti-BCMA (aBCMA) demonstraram aumento da carga tumoral quando injetados com células OPM2 BCMA KO (Figura 25B, painel superior). Da mesma forma, camundongos tratados apenas com células que ex- pressam o CAR anti-GPRC5D (a«GPRC5D) demonstraram aumento da carga tumoral quando injetados com células OPM2 GPRC5D KO (Fi- gura 25B, painel inferior). Este resultado está de acordo com a conclu- são geral de que os CARs individuais são específicos para seu antíge- no-alvo.
[001305] Em um experimento similar, camundongos NOD scid gama (NSGTY) foram tratados com 5 x 105, 1 x 10º ou 2 x 10º células T hu- manas primárias totais em composições que contêm (1) células mani- puladas para expressar o CAR anti-BCMA, (2) células manipuladas para expressar o CAR anti-GPRC5D ou (3) células aAGPRC5D e aB- CMA agrupadas, após injeção com células OPM2 que expressam pro- teínas BCMA e GPRC5D. Como um controle, os camundongos tam- bém foram tratados com composições de células T humanas primárias de transdução simulada. A sobrevida foi avaliada até 100 dias, con-
forme mostrado na Figura 26. Conforme mostrado, a administração da composição de células T que contêm células aAGPRC5D e aBCMA agrupadas melhorou a eficácia antitumoral neste modelo comparado com a administração de uma composição de células T que contêm cé- lulas que expressam apenas o CAR anti-BCMA. C. Avaliação das Composições de Células T em um Modelo de Xenoenxerto RPMI8226 de Murino
[001306] Além do modelo OPM2, um modelo RPMI-8226 de baixa expressão da proteína GPRC5D foi usado para avaliar os efeitos in vivo de composições de células T humanas que contêm células que expressam o CAR anti-GPRC5D («GPRC5D) ou células que expres- sam o CAR anti-BCMA (aBCMA) ou que contêm ambos.
[001307] Um total de 1 x 10” células RPMI8226 foi injetado por via subcutânea em camundongos NOD scid gama (NSGTY). Cerca de 25 dias após a injeção de células RPMI226, foram administradas compo- sições de células T que expressam CAR que contêm (1) células mani- puladas para expressar o CAR anti-GPRC5D (a«GPRCB5D), (2) células manipuladas para expressar o CAR anti-BCMA (aBCMA) ou (3) célu- las agrupadas geradas em uma proporção de 1:1 de células que ex- pressam o CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D para células que expressam o CAR que têm como alvo a proteína BCMA (células aGPRC5D e a«BCMA agrupadas). Os camundongos foram tratados com uma das três doses das composições de células T 25 dias após a injeção com as células RPMI8226: 1,25 x 10º células T CAR totais, 2,5 x 106 células T CAR totais ou 5 x 10º células T CAR totais. O tratamen- to com células T não tratadas e transduzidas de forma simulada serviu como controle.
[001308] Conforme mostrado na Figura 27, o volume do tumor au- mentou de forma dependente da dose em camundongos tratados com células que expressam apenas o CAR anti-GPRC5D. Em contraste, os camundongos tratados com células que expressam apenas o CAR an- ti-BCMA ou com as células aAGPRC5D e aBCMA agrupadas, demons- traram aumentos mínimos no volume do tumor. Particularmente, os resultados indicaram que em todas as doses testadas (5 x 106, 2,5 x 10º e 1,25 x 1086), as células aAGPRC5D e aBCMA agrupadas tiveram uma eficácia similar às células T que expressam apenas o CAR anti- BCMA, apesar da contribuição do CAR anti-BCMA ser metade na composição de células T combinadas. Este resultado indica que as células que expressam anti-GPRC5D-CAR na composição combinada estão contribuindo de uma forma maior do que sua dose única. A so- brevida foi avaliada até o dia 100, conforme mostrado na Figura 28. À análise de sobrevida revelou resultados similares, em que camundon- gos tratados com células que expressam apenas o CAR anti-GPRC5D exibiram sobrevida diminuída ao longo do tempo, mas em doses mais altas, camundongos tratados com células aAGPRC5D e aBCMA agru- padas exibiram eficácia similar a camundongos tratados com T células que expressam apenas o CAR anti-BCMA. Estes resultados estão de acordo com a descoberta geral de que o tratamento com células que expressam apenas um CAR anti-GPRC5D pode ser menos eficaz em um modelo de tumor que expressa GPRC5D"""”, mas que o CAR anti- GPRCS5D pode estar contribuindo para a eficácia antitumoral pelo dire- cionamento duplo de composições de células que expressam CAR. Exemplo 17: Geração de Composições de Células T CAR Anti- BCMA e Anti-GPRC5D Bicistrônicas
[001309] As composições de células T humanas primárias foram manipuladas para produzir composições de células T de direciona- mento duplo, nas quais as composições continham células que ex- pressam receptores antigênicos quiméricos (CARs) para direciona- mento duplo de proteínas BCMA e GPRC5D. Cinco composições se- paradas de células T manipuladas foram geradas, conforme resumido na Figura 29. Cada construção de CAR gerada continha um domínio de ligação a antígeno scFv exemplificativo contra as proteínas GPRCB5D (por exemplo, SEQ ID NO: 8) ou BCMA (por exemplo, SEQ ID NO: 241); um espaçador longo (dobradiça-CH2-CH3, 228aa; SEQ ID NO: 17; com modificações de CH2 para limitar a ligação ao receptor Fc); um domínio transmembrana derivado de CD28 humana (SEQ ID NO: 18); um domínio de sinalização intracelular derivado de 4-1BB humana (SEQ ID NO: 19) ou um domínio de sinalização intracelular derivado de CD28 humana (SEQ ID NO: 18); e um domínio de sinali- zação intracelular derivado de CD3zeta humana (SEQ ID NO: 20).
[001310] Em uma estratégia (mostrada por (i) e (ii) da Figura 29), cé- lulas que expressam um único CAR contra as proteínas BCMA ou GPRCS5D foram fabricadas em paralelo e agrupadas em uma única composição que contêm células que expressam CAR anti-BCMA e cé- lulas que expressam CAR anti-GPRC5D em uma proporção de 1:1 (células GPRC5D e BCMA agrupadas). As células T que expressam CAR anti-BCMA da composição combinada foram manipuladas para expressar um CAR anti-BCMA que incorpora um domínio coestimula- dor de 4-1BB (SEQ ID NO: 312). As células T que expressam CAR anti-GPRC5D da composição combinada foram manipuladas para ex- pressar um CAR anti-GPRC5D que incorpora um domínio coestimula- dor de 4-1BB (SEQ ID NO: 313) ou um domínio coestimulador de CD28 (SEQ ID NO: 314). Isto resultou em duas composições agrupa- das diferentes. A primeira composição continha células que expressam um CAR anti-BCMA que incorpora um domínio coestimulador de 4- 1BB e células que expressam um CAR anti-GPRC5D que incorpora um domínio coestimulador de 4-1BB (células BCMA-41BB e GPRC5D- 41BB agrupadas). A segunda composição continha células que ex- pressam um CAR anti-BCMA que incorpora um domínio coestimulador de 4-1BB e células que expressam um CAR anti-GPRC5D que incor-
pora um domínio coestimulador de CD28 (células BCMA-41BB e GPRC5D-CD28 agrupadas). Composições separadas que contêm cé- lulas que expressam apenas o CAR anti-BCMA ou apenas o CAR anti- GPRCB5D foram geradas para servir como controles.
[001311] Em outra estratégia de direcionamento duplo, mostrada em (iii) e (iv) da Figura 29, foram geradas construções bicistrônicas que codificaram dois CARs separados (anti-BCMA e anti-GPRC5D), em que as sequências de nucleotídeos que codificam o CAR anti-BCMA e o CAR anti-GPRC5D foram separadas por uma sequência de nucleo- tídeos que codifica um peptídeo de autoclivagem bicistrônico T2A (SEQ ID NO: 319, a qual codifica SEQ ID NO: 37). Os polinucleotídeos que codificam os diferentes CARs tinham códons divergentes para re- duzir a recombinação homóloga dos nucleotídeos que codificam os CARs anti-BCMA e anti-GPRC5D. Na construção representada em (iii), ambos os CARs incorporaram um domínio coestimulador de 4- 1BB (BCMA-41BB-GPRC5D-41BB; SEQ ID NO: 315). Na construção representada em (iv), o CAR anti-BCMA incorporava um domínio coes- timulador de 4-1BB e o CAR anti-GPRC5D incorporava um domínio coestimulador de CD28 (BCMA-41BB-GPRC5D-CD28; SEQ ID NO: 316).
[001312] Em uma estratégia de direcionamento duplo, uma constru- ção de CAR de "haste única" foi gerada conforme mostrado em (v), a qual codifica um scFv específico para a proteína BCMA e um scFv es- pecífico para a proteína GPRC5D em tandem (GPRC5D-BCMA-41BB; SEQ ID NO: 317), em que as sequências que codificam os dois scFvs foram separadas por um ligante flexível (SEQ ID NO: 320). A constru- ção exemplificativa incorporava um domínio coestimulador de 4-1BB (SEQ ID NO: 60, a qual codifica SEQ ID NO: 19).
[001313] Construções de ácidos nucleicos que codificam os vários CARs foram clonadas em vetores de expressão retrovirais para trans-
dução de células T humanas primárias, substancialmente conforme descrito no Exemplo 3. Após a transdução retroviral de células, a ex- pressão das várias construções foi avaliada por meio de análises de citometria de fluxo com reagentes específicos para o CAR anti- GPRC5D ou anti-BCMA ou um anticorpo para o domínio espaçador em comum a todas as construções de CAR. Conforme mostrado na Figura 30, todas as construções testadas foram expressas comparati- vamente por células T humanas primárias. O controle negativo de fluo- rescência menos um (FMO) não exibiu expressão.
[001314] Quatro a dez dias após a transdução, as células T humanas primárias foram avaliadas quanto à transdução e deficiência usando um reagente específico para cada CAR. Os resultados são mostrados na Figura 31. Para todos os doadores avaliados, a eficiência de trans- dução retroviral para células manipuladas com construções bicistrôni- cas de direcionamento duplo (mostrado por iii e iv da Figura 31) ou construções de "haste única" (mostrado por v da Figura 31) foi deter- minada como estando entre 50-70 %, comparado com células manipu- ladas para expressar um único CAR conforme presente nas composi- ções de CAR agrupadas (mostrado por i e ii da Figura 31). Os resulta- dos apresentados são de um doador representativo.
Exemplo 18: Avaliação !n Vitro de Receptores Antigênicos Quimé- ricos Anti-BCMA e Anti-GPRC5D Bicistrônicos A. Citotoxicidade de Composições de Células T
[001315] Células T humanas primárias que expressam CAR, geradas conforme descrito no Exemplo 17, foram cocultivadas com uma linha- gem de células de mieloma múltiplo de tipo selvagem OPM?2 ou uma linhagem de células OPM2 com silenciamento (KO) de proteína BCMA durante 24 horas em proporções E:T crescentes e lise celular foi avali- ada. Composições de células que expressam CAR de direcionamento único serviram como controles da seguinte forma: um CAR anti-BCMA com um domínio coestimulador de 4-1BB (BCMA-41BB), um CAR anti- GPRC5D com um domínio coestimulador de 4-1BB (GPRC5D -41BB) ou um CAR anti-GPRC5D com um domínio coestimulador de CD28 (GPRC5D-CD28). Como controle negativo, foi gerada uma composi- ção celular na qual as células expressaram o mesmo CAR anti-BCMA, mas sem os domínios de sinalização de 4-1BB e CD3zeta (CAR BCMA del; SEQ ID NO: 318).
[001316] Conforme mostrado na Figura 32A, todas as composições de células geradas exemplificativas foram capazes de lisar eficazmen- te as células-alvo OPM?2 de tipo selvagem, exceto células que expres- sam o CAR BCMA del. Conforme mostrado na Figura 32B, todas as composições celulares geradas exemplificativas foram capazes de |i- sar as células-alvo BCMA KO OPM?, exceto células que expressam o CAR BCMA del e células que expressam o CAR de alvo único BCMA- 41BB, consistente com a seletividade do CAR anti-BCMA por o seu antígeno-alvo. Os resultados são fornecidos como média + SEM e são apresentados para um experimento representativo que foi executado em triplicata. B. Secreção de Citocinas de Composições de Células T
[001317] As composições de células geradas exemplificativas foram cocultivadas em uma proporção de 1:1 durante 24 horas com células- alvo que expressam tanto BCMA quanto GPRC5D (Figura 33A), BCMA apenas (Figura 33B) ou GPRC5D apenas (Figura 33C). O so- brenadante foi coletado para análise de citocinas pelo ensaio multiplex Luminex&. Os resultados são mostrados nas Figuras 33A-C para cito- cinas exemplificativas GM-CSF, IFNy, IL-13 e IL-2 (da esquerda para a direita); as concentrações são em pg/mL, com entalhes na escala re- presentando 50.000 pg/mL e 100.000 pg/mL.
[001318] Quando cultivadas com células-alvo que expressam ambos os antígenos, todas as composições celulares exemplificativas gera-
das exibiram secreção de citocinas, exceto quanto a células que ex- pressam o CAR BCMA del. Quando cultivadas com células-alvo que expressam apenas BCMA, as composições celulares que expressam apenas um CAR anti-GRPC5D de direcionamento único (GPRC5D- 41BB e GPRC5D-CD28) não secretam as citocinas avaliadas em ní- veis detectáveis. Da mesma forma, quando cultivadas com células- alvo que expressam apenas GPRC5D, a composição celular que ex- pressa apenas um único CAR anti-BCMA (BCMA-41BB) não secretou as citocinas avaliadas em níveis detectáveis. Estes resultados são ge- ralmente consistentes com a descoberta de que as células T manipu- ladas para expressar as construções de CAR exemplificativas geradas são capazes de secreção de citocinas específicas para antígeno. Exemplo 19: Avaliação /n Vivo de Receptores Antigênicos Quimé- ricos Anti-BCMA e Anti-GPRC5D Bicistrônicos
[001319] Modelos de mieloma múltiplo de murino foram usados para avaliar os efeitos in vivo de composições de células T que contêm cé- lulas manipuladas para expressar as construções de CAR que têm como alvo um único antígeno e antígenos duplos geradas exemplifica- tivas descritas nos Exemplos 17 e 18. Os estudos foram realizados em um modelo de xenoenxerto OPM2 de murino. A linhagem de células OPM?2 foi manipulada para expressar luciferase de vaga-lume (OPM2- fíLuc) ou luciferase de ciprinda ligada à membrana (OPM2 Cyprinda Luc). Camundongos NOD scid gama (NSGY) foram injetados no dia O através da veia da cauda com 2 x 10º células OPM2-ffíLuc, que pude- ram enxertar e expandir durante 14 dias. A. Efeito de CARs de Direcionamento Duplo Sobre um Modelo de Xenoenxerto OPM2 de Murino
[001320] Composições de células T humanas primárias que contêm (1) células que expressam apenas o CAR anti-BCMA del; CAR BCMA del, (2) células que expressam apenas o CAR anti-BCMA que incorpo-
ra um domínio coestimulador de 4-1BB; BCMA-41BB, (3) células que expressam a construção de "haste única" que tem como alvo as prote- ínas BCMA e GPRC5D; GPRC5D-BCMA-41BB; ou (4) células que ex- pressam uma construção bicistrônica que codifica um CAR anti-BCMA e um CAR anti-GPRC5D separados por um elemento bicistrônico, no formato BCMA-41BB-GPRC5D-41BB ou no formato BCMA-41BB- GPRC5D-CD28, foram testados em um modelo de xenoenxerto OPM2 de murino.
[001321] No dia 14 após a enxertia de células OPM2-ffLuc, os ca- mundongos foram tratados com uma injeção na veia da cauda de 3 x 108º células T que expressam uma das seguintes construções de CAR: (1) CAR BCMA del; (2) CAR BCMA-41BB; (3) CAR BCMA-41BB- GPRC5D-41BB; (4) CAR BCMA-41BB-GPRC5D-CD28; ou (5) GPRC5D-BCMA-41BB. O CAR BCMA del e o CAR de direcionamento único serviram como controles.
[001322] A Figura 34A mostra a curva de sobrevida dos camundon- gos tratados. A sobrevida global mediana (median Overall Survival, mOS) de camundongos tratados com o CAR BCMA del (controle ne- gativo) foi de 32 dias, enquanto que a mOS dos outros grupos não foi atingida quando monitorada até o dia 105 (p < 0,05).
[001323] Em um experimento relacionado, foi gerada uma linhagem de células OPM2 com silenciamento de BCMA (KO), substancialmente conforme descrito nos exemplos anteriores. Camundongos sobrevi- ventes da Figura 34A foram desafiados novamente com uma segunda injeção de 2 x 10º células BCMA KO OPM?2. Conforme mostrado na Figura 34B, a mOS de camundongos tratados com células que ex- pressam o CAR BCMA-41BB de direcionamento único foi 37 dias após o novo desafio, enquanto que a mOS de camundongos tratados com qualquer uma das construções de CAR de direcionamento duplo não foi atingida (p < 0,05).
[001324] A carga tumoral de camundongos tratados foi avaliada por meio de imagiologia de bioluminescência (BLI) nos dias 30 e 105 após a injeção original de células OPM2, e no dia 36 após novo desafio com as células BOCMA KO OPM? (Figuras 35A-C). Conforme mostrado nas Figuras 35A e Figura 35B, apenas camundongos tratados com CAR BCMA del exibiram carga tumoral antes do novo desafio. Conforme mostrado na Figura 35C, camundongos tratados com células que ex- pressam um CAR BCMA-41BB de direcionamento único exibiram car- ga tumoral substancial após novo desafio com células BCMA KO OPM?2, comparado com os camundongos tratados com células que expressam construções de CAR de direcionamento duplo.
[001325] Estes resultados são consistentes com a descoberta de que um CAR anti-BCMA de direcionamento único é menos eficaz no con- trole de células tumorais que não expressam BCMA, comparado com as abordagens que têm como alvo as proteínas BCMA e GPRC5D. B. Comparação de Domínios de Sinalização Coestimuladores do CAR em um Modelo de Mieloma Múltiplo em Murinos
[001326] Após a enxertia e expansão de células tumorais OPM2- fíLuc, os camundongos foram tratados com 5 x 10º células T que ex- pressam uma das seguintes construções de direcionamento único ou duplo: (1) CAR BCMA del; (2) BCMA-41BB; (3) GPRC5D-41BB; (4) GPRC5D-CD28; (5) GPRC5D-BCMA-41BB; (6) BCMA-41BB- GPRC5D-41BB; ou (7) BCMA-41BB-GPRC5D-CD28. O CAR BCMA del e os CARs de direcionamento único serviram como controles.
[001327] A sobrevida dos camundongos é mostrada na Figura 36. À mOS dos camundongos tratados com o CAR BCMA del (controle ne- gativo) foi de 38 dias. Em contraste, a mOS de camundongos em to- dos os outros grupos de tratamento aumentou significativamente além de 38 dias (p < 0,05). O tratamento com células que expressam o CAR anti-GPRC5D de direcionamento único que incorpora um domínio co-
estimulador de CD28 foi associado a uma mOS mais curta comparado com o tratamento com células que expressam as outras construções (p < 0,05).
[001328] A carga tumoral foi avaliada por meio de imagiologia de bio- luminescência (BLI) em 14 dias (Figura 37A), 29 dias (Figura 37B) e 36 dias (Figura 37C) após a injeção de células OPM2. Conforme mos- trado na Figura 37A, todos os grupos de camundongos demonstraram carga tumoral substancial no momento do tratamento com composi- ções de células T CAR. A Figura 37B e Figura 37C mostram que, no dia 29 ou dia 36, respectivamente, após a injeção de células OPM?2, camundongos tratados com células que expressam o CAR BCMA del (controle negativo) exibiram carga tumoral substancial. Além disso, os camundongos tratados com células que expressam o CAR GPRC5D- CD28 de direcionamento único demonstraram carga tumoral mínima. Em contraste, todos os outros grupos tratados reduziram a carga tu- moral no dia 29 e não exibiram carga tumoral apreciável no dia 36. C. Comparação de Domínios de Sinalização Coestimuladores de CAR em um Modelo de Escape Antigênico de Mieloma Múltiplo em Murinos
[001329] Para compreender os efeitos de diferentes domínios coes- timuladores em um modelo de escape antigênico de mieloma múltiplo em murinos, camundongos NSG foram injetados no dia O via veia da cauda com 2 x 10º células OPM2 manipuladas para expressar lucife- rase ciprinda ligada à membrana (OPM2 Cyprinda Luc), enriquecida com células BOCMA KO OPM?2 a 5-10 % manipuladas para expressar luciferase de vaga-lume (Firefly Luc). As diferentes luciferases usadas permitiram a imagiologia diferencial de células OPM2 de tipo selvagem e células BOMA KO OPM?2. As células tumorais foram enxertadas e expandidas durante 14 dias.
[001330] No dia 14, os camundongos foram tratados com 5 x 10º cé-
lulas T manipuladas para expressar uma das seguintes construções: (1) CAR BCMA del; (2) BCMA-41BB; (3) células BCMA-41BB e GPRC5D-41BB agrupadas; (4) células BOCMA-41BB e GPRC5D-CD28 agrupadas; (5) BCMA-41BB-GPRC5D-41BB; (6) BCMA-41BB- GPRC5D-CD28; ou (7) GPRC5D-BCMA-41BB. O CAR BCMA del e os CARs de direcionamento único serviram como controles.
[001331] A carga tumoral foi avaliada em camundongos por meio de BLI no dia 28. Conforme mostrado na Figura 38, o tratamento com cé- lulas T CAR erradicou as células OPM2 de tipo selvagem em todos os grupos. Em contraste, as células T CAR que expressam um CAR anti- GPRCS5D que incorpora um domínio coestimulador de CD28, seja in- cluído em uma composição de células T agrupadas ou em uma cons- trução bicistrônica, não erradicaram as células BCMA KO OPM?2.
[001332] Em um experimento similar, camundongos NSG foram inje- tados por via intravenosa no dia O com a composição mista de células OPM? de tipo selvagem e BCMA KO OPM? para estabelecer um mo- delo de xenoenxerto de mieloma múltiplo com tropismo para a medula óssea. As células foram enxertadas e expandidas durante 14 dias, e, então, os camundongos foram tratados com uma única injeção intra- venosa de 2,5 x 10º células T que expressam uma das seguintes cons- truções: (1) CAR BCMA del; (2) células BCMA-41BB e GPRC5D-41BB agrupadas; (3) BCMA-41BB-GPRC5D-41BB; e (4) GPRC5D-BCMA- 41BB. Os camundongos tratados com células que expressam o CAR BCMA del serviram como controle negativo. Neste experimento, todas as construções CAR, exceto o controle negativo, incorporaram um domínio coestimulador de 4-1BB.
[001333] A sobrevida de camundongos tratados com as composi- ções de células indicadas 14 dias após a injeção de OPM?2 é mostrada na Figura 39. Comparado com camundongos tratados com células que expressam o CAR BCMA del, todos os outros grupos de tratamento mostraram aumentos significativos na sobrevida (p < 0,001 para todos os CARs vs. controle). Particularmente, camundongos tratados com células que expressam o CAR de haste única GPRCS5D-BCMA-41BB exibiram sobrevida significativamente mais curta quando comparado com camundongos tratados com (1) células que expressam a constru- ção BCMA-41BB-GPRC5D-41BB ou (2) células que expressam o CAR GPRC5D-41BB e células que expressam o CAR BCMA-41BB, agru- padas em uma proporção de 1:1 (p < 0,05 para a construção de haste única comparado com qualquer uma das outras duas abordagens de direcionamento duplo).
[001334] A carga tumoral do modelo com tropismo para a medula óssea foi avaliada por meio de BLI 14 dias (Figura 40A), 36 dias (Figu- ra 40B) e 48 dias (Figura 40C) após a injeção de células tumorais. To- dos os grupos de tratamento exibiram carga tumoral no momento do tratamento com células T CAR, conforme mostrado na Figura 40A. Conforme mostrado na Figura 40B, todos os tratamentos foram capa- zes de controlar eficazmente as células OPM?2 de tipo selvagem no dia
36. No entanto, conforme mostrado na Figura 40C, no dia 48, a com- posição de células GPRC5D-4-1BB/CAR BCMA-41BB agrupadas e a composição de células da construção bicistrônica BCMA-41BB- GPRC5D-41BB foram mais eficazes do que uma composição que con- têm células que expressam a construção CAR de haste única (GPRC5D-BCMA -41BB). Exemplo 20: Geração de Polinucleotídeos Bicistrônicos Adicio- nais que Codificam Receptores Antigênicos Quiméricos Anti- GPRCS5D e Anti-BCMA
[001335] Polinucleotídeos bicistrônicos adicionais que codificam um CAR anti-GPRC5D e um CAR anti-BCMA foram gerados.
[001336] O CAR anti-GPRC5D exemplificativo continha um scFv com domínio de ligação a antígeno capaz de se ligar à proteína GPRC5D
(por exemplo, ScFv GPRC5D-203 Vu/Vn (SEQ ID NO: 8); uma dobra- diça-CH2-CH3 de imunoglobulina apresentada em SEQ ID NO: 17, codificada pela sequência apresentada em SEQ ID NO: 73; um domí- nio transmembrana derivado de CD28 humana (por exemplo, SEQ ID NO: 18); um domínio de sinalização intracelular derivado de 4-1BB humana (por exemplo, SEQ ID NO: 19); e um domínio de sinalização intracelular derivado de CD3zeta humana (por exemplo, SEQ ID NO: 20).
[001337] O CAR anti-BCMA exemplificativo continha um scFv com domínio de ligação a antígeno capaz de se ligar às células que ex- pressam BCMA (por exemplo, scfv BCMA-55 Vu/Vrn (SEQ ID NO: 241); uma dobradiça-CH2-CH3 de imunoglobulina apresentada em SEQ ID NO: 17, codificada pela sequência apresentada em SEQ ID NO: 73; um domínio transmembrana derivado de CD28 humana (por exemplo, SEQ ID NO: 18); um domínio de sinalização intracelular deri- vado de 4-1BB humana (por exemplo, SEQ ID NO: 19); e um domínio de sinalização intracelular derivado de CD3zeta humana (por exemplo, SEQ ID NO: 20).
[001338] As sequências de nucleotídeos que codificam cada um dos CARs foram separadamente otimizadas para códons antes de sua combinação em uma única construção polinucleotídica bicistrônica.
[001339] Os polinucleotídeos bicistrônicos foram gerados em dois formatos. O primeiro formato foi gerado com a sequência de nucleotí- deos que codifica o CAR anti-GPRC5D localizada na extremidade 5' do polinucleotídeo (N-término de um polipeptídeo) em relação à se- quência de nucleotídeos que codifica o CAR anti-BCMA ("GPRC5D- aBCMA"; SEQ ID NO: 303 que codifica SEQ ID NO: 301). O segundo formato foi gerado com a sequência de nucleotídeos que codifica o CAR anti-BCMA localizada em direção à extremidade 5' do polinucleo- tídeo (N-término de um polipeptídeo) em relação à sequência de nu-
cleotídeos que codifica o CAR anti-GPRC5D ("aBCMA-aGPRC5D"; SEQ ID NO: 300 que codifica SEQ ID NO: 298). As sequências de nu- cleotídeos que codificam o CAR anti-GPRC5D e o CAR anti-<BCMA foram separadas por uma sequência de nucleotídeos que codifica um elemento de salto ribossômico a jusante (tal como um peptídeo T2A autoclivável; SEQ ID NO: 44 ou 45 que codifica SEQ ID NO: 37)
[001340] As construções polinucleotídicas foram clonadas em um vetor de expressão lentiviral para transdução de células T. As células Jurkat foram transduzidas de forma estável com o vetor lentiviral que contêm as construções polinucleotídicas bicistrônicas que contêm o formato de CAR a«GPRC5D-aBCMA ou o formato de CAR aBCMA- aGPRC5D. Como um controle, as células Jurkat também foram trans- duzidas com construções que codificam o CAR anti-GRPC5D ou CAR anti-BCMA que tem como alvo um único antígeno. A transdução foi realizada com 5 x 10º células/cavidade e a expressão de CAR foi de- terminada no dia 3. A expressão dos CARs foi avaliada por meio de citometria de fluxo usando um reagente de ligação específico para o domínio de ligação a antígeno de cada CAR.
[001341] Análise de citometria de fluxo mostrou que a expressão de CAR codificado pela sequência de nucleotídeos localizada em 3' (CAR à direita) foi significativamente diminuída em ambos os formatos bicis- trônicos comparado com o CAR codificado pela sequência de nucleo- tídeos localizada em 5' (CAR "leading") ou comparado com a expres- são de uma construção que codifica apenas um único CAR. Em parti- cular, a Figura 41A representa os resultados para a expressão percen- tual de CAR anti-BCMA entre os formatos avaliados e a Figura 41B mostra a expressão de CAR anti-GPRC5D entre os formatos avalia- dos. A análise POR do DNA genômico de células Jurkat transduzidas indicou que a sequência de nucleotídeos que codifica o CAR localiza- do em 3' foi perdida por meio de recombinação (dados não mostra-
dos). Exemplo 21: Divergência de Códons de Polinucleotídeos Bicistrô- nicos que Codificam Receptores Antigênicos Quiméricos Anti- GPRCS5D e Anti-BCMA
[001342] Para reduzir a possível recombinação e perda da sequência de nucleotídeos codificantes de CAR localizada em 3', a sequência de ácidos nucleicos que codifica um dos CARs sofreu divergência de có- dons. Neste exemplo, a sequência de ácidos nucleicos que codifica o CAR anti-GPRC5D que sofreu divergência de códons foi comparada com a sequência descrita no Exemplo 20.
[001343] Especificamente, as porções da sequência de nucleotídeos que codificam o scFv, espaçador de imunoglobulina, o domínio trans- membrana de CD28, o endodomínio de 4-1BB e o endodomínio de CD3zeta sofreram divergência de códons, de modo que os nucleotí- deos que codificam cada um destes componentes diferiam ao nível de nucleotídeos comparado com a sequência de nucleotídeos que codifi- ca o mesmo componente no CAR anti-BCMA, embora ainda codifique as sequências de aminoácidos idênticas. A sequência de nucleotídeos sofreu divergência de códons de modo que não houvesse mais de 10 pares de bases consecutivos (ou contíguos) de homologia de sequên- cia entre a sequência de nucleotídeos que codifica o CAR anti- GPRC5D e a sequência de nucleotídeos que codifica o CAR anti- BCMA da construção bicistrônica. Após a divergência de códons do CAR anti-GPRC5D, os polinucleotídeos foram analisados quanto a sí- tios de splicing (por exemplo, NNSPLICING, versão 0.9, ferramenta de previsão de sítios de splicing online; fruitfly.org, Berkeley Drosophila Genome Project, Berkeley, CA). Os sítios doadores de splicing e os sítios aceitadores de splicing foram avaliados independentemente. Os sítios doador e aceitador de splicing identificados com uma pontuação de sítio de splicing de > 0,7 (> 70 % de probabilidade de um evento de splicing), por exemplo, na região do promotor e região espaçadora longa), foram modificados por meio de mutação silenciosa para reduzir a pontuação do sítio de splicing para menos de 0,7.
[001344] Vetores lentivirais que contêm as construções polinucleotí- dicas bicistrônicas foram usados para transduzir células T Jurkat e a expressão na superfície celular dos CARs foi monitorada por meio de citometria de fluxo usando um reagente de ligação específico para ca- da domínio de ligação de um CAR antigênico.
[001345] Conforme mostrado nas Figuras 42A e 42B, a divergência de códons da construção polinucleotídica bicistrônica melhorou subs- tancialmente a expressão de CAR codificado pela sequência de nucle- otídeos localizada em 3' comparado com a expressão do mesmo CAR codificado pelo polinucleotídeo bicistrônico original. Por exemplo, con- forme mostrado na Figura 42A, a expressão de CAR anti-BCMA tinha um teor relativamente baixo de células que foram transduzidas com a construção bicistrônica «GPRC5D-aBCMA original, mas esta expres- são foi substancialmente aprimorada em células que foram transduzi- das com a respectiva construção com divergência de códons (CD). Da mesma forma, conforme mostrado na Figura 42B, a expressão de CAR anti-GPRC5D foi relativamente baixa em células que foram transduzidas com a construção bicistrônica aBCMA-aGPRC5D origi- nal, mas esta expressão foi substancialmente aprimorada em células que foram transduzidas com a respectiva construção com divergência de códons (CD). Exemplo 22: Avaliação In Vitro de Composições de Células T Ma- nipuladas por CAR de Direcionamento Duplo GPRC5D/BCMA
[001346] Composições de células T, repórter Jurkat Nur77-RFP ou células T primárias que contêm (1) células manipuladas para expres- sar apenas o CAR anti-GPRC5D (aGPRC5D), (2) células manipuladas para expressar apenas o CAR anti-BCMA ( aBCMA) ou (3) células de direcionamento duplo que expressam ambos os CARs através de transdução de construções bicistrônicas com códons divergentes, con- forme descrito no Exemplo 5, nos formatos aABCMA-aGPRC5D ou aG- PRC5D-aBCMA foram avaliadas quanto à atividade específica para antígeno após cocultura com células que expressam antígeno. Tanto uma linhagem de células T Jurkat Nur77-RFP como células T primá- rias isoladas por meio de enriquecimento com base em imunoafinidade de amostras de leucaferese de indivíduos doadores humanos foram transduzidas com o vetor lentiviral que codifica as construções de CAR único ou que contêm a construção bicistrônica que codifica o CAR an- ti-BCMA e o CAR anti-GPRC5D (células de direcionamento duplo). Após a transdução, e em alguns casos expansão, as células T foram coradas com um anticorpo específico para cada CAR e analisadas por meio de citometria de fluxo, confirmando a transdução das células e a expressão dos CARs.
[001347] Em alguns experimentos, uma composição de células T agrupadas que contêm células que expressam separadamente o CAR anti-BCMA e CAR anti-GPRC5D, conforme descrito no Exemplo 13, foi avaliada ("células aAGPRC5D e aBCMA agrupadas"). A. Atividade Dependente de Antígeno na Presença de Linhagens de Células de Mieloma Múltiplo
[001348] As células Jurkat manipuladas foram cocultivadas em uma proporção E:T de 1:1 durante 20 horas com linhagens de células de mieloma múltiplo que expressam quantidades variáveis de proteínas BCMA e GPRCB5D. As linhagens de células de mieloma múltiplo incluí- ram KMS12BM, MM.1S, NCI-H929, OPM-2 e RPMI8226 (consulte Exemplo 16 o qual descreve os níveis de expressão das proteínas GPRC5D e BCMA nas linhagens de células). A linhagem de células de leucemia mieloide crônica (CML) K562, bem como uma linhagem de células K562 manipulada para expressar GPRC5D, foram incluídas como controles negativos e positivos, respectivamente. A estimulação específica do antígeno do CAR foi avaliada ao medir variações na ex- pressão de RFP por meio de citometria de fluxo.
[001349] Conforme mostrado na Figura 43, as células repórter Jurkat Nur77/RFP que expressam os CARs aBCMA, aGPRC5D, aBCMA- aGPRC5D ou aAGPRC5D-aBCMA foram estimuladas através de cocul- tura com as várias linhagens de células de mieloma múltiplo, conforme evidenciado pela porcentagem de células positivas para o sinal de RFP (% Nur77). Conforme mostrado, as células que expressam ape- nas o CAR aGPRC5D foram menos responsivas a determinadas célu- las-alvo, tal como a linhagem de células KMS12BM, mas a atividade do repórter foi aumentada em composições de células que expressam os CARs de direcionamento duplo. B. Secreção de Citocinas na Presença de Linhagens de Células de Mieloma Múltiplo
[001350] Composições de células T humanas primárias que contêm (1) células T manipuladas para expressar apenas o CAR anti-GPRC5D (aGPRCB5D), (2) células T manipuladas para expressar apenas o CAR anti-BCMA (aBCMA), (3) células T que contêm células para terapia- alvo dupla que expressam ambos os CARs através de transdução de construções bicistrônicas nos formatos aBCMA-aGPRC5D ou aG- PRC5D-aBCMA ou (4) células T agrupadas separadamente manipula- das para expressar o CAR anti-BCMA ou o CAR anti-GPRC5D agru- padas em uma proporção de 1:1 de células que expressam CAR anti- BCMA para células que expressam CAR anti-GPRC5D (células aG- PRC5D e aBCMA agrupadas) foram avaliadas quanto à atividade es- pecífica para antígeno. Como um controle, as composições de células T humanas primárias foram simuladas transduzidas. As células T fo- ram cocultivadas em uma proporção E:T de 1:1 durante 24 horas com as linhagens de células de mieloma múltiplo KMS12BM, MM.1S, NCI-
H929, OPM2 e RPMI8226, e os sobrenadantes foram coletados para análise de citocinas por meio do ensaio multiplex Luminex&.
[001351] Os níveis de secreção de IFNy, IL-2, TNFa foram avaliados após cocultura das composições de células T humanas primárias com as várias linhagens de células de mieloma múltiplo, conforme mostra- do nas Figuras 44A, 44B e 44C, respectivamente. Secreção de citoci- nas foi observada para todas as composições de células T humanas primárias testadas, exceto quanto à composição de células T transdu- zidas de forma simulada. Para determinadas linhagens de células, a secreção de citocinas foi aumentada para composições celulares que contêm direcionamento duplo nos formatos aBCMA-aGPRC5D ou aGPRC5D-aBCMA ou células aAGPRC5D e aBCMA agrupadas, com- parado com composições celulares manipuladas para expressar ape- nas CARs aAGPRCB5D ou apenas CARs aBCMA. D. Atividade Dependente de Antígeno na Presença de Células BCMA ou GPRC5D KO
[001352] Para compreender a atividade dependente de antígeno dos CARs anti-BCMA e anti-GPRC5D no contexto de perda antigênica, um modelo de perda antigênica foi criado por meio de silenciamento de GPRC5D ou BCMA de células OPM?2. A proteína GPRCB5D foi elimina- da das células OPM2 conforme descrito no Exemplo 5. A proteína BMCA foi eliminada das células OPM2 conforme descrito no Exemplo
12.
[001353] Análise de citometria de fluxo confirmou a falta de expres- são da proteína GPRC5D nas células OPM2 GPRCB5D KO e a falta de expressão de proteína BCMA nas células OPM2 BCMA KO. Células OPM? de tipo selvagem (OPM2 WT) serviram como um controle, mos- trando a expressão das proteínas GPRC5D e BCMA (consulte, por exemplo, Figura 22A).
[001354] Composições de células repórter Jurkat Nur77-RFP que contêm células manipuladas para expressar apenas o CAR anti- GPRC5D (aGPRC5D) ou apenas o CAR anti-BCMA (aBCMA) ou que contêm células de direcionamento duplo que expressam ambos os CARs por meio de transdução de construções bicistrônicas nos forma- tos aABCMA-aGPRC5D ou aAGPRC5D-aBCMA foram avaliadas quanto à atividade específica para antígeno. As várias composições de célu- las repórter Jurkat Nur77-RFP foram cocultivadas com células OPM2 WT, OPM2 GPRC5D KO ou OPM2 BCMA KO em uma proporção de 1:1 durante 20 horas. A estimulação específica para antígeno dos CARs expressos pelas composições de células foi avaliada ao medir as variações na expressão de RFP por meio de citometria de fluxo.
[001355] Conforme mostrado na Figura 45, a ativação de células re- pórter Jurkat Nur77-RFP não agrupadas que expressam apenas Oo CAR que têm como alvo a proteína GPRC5D (aGPRC5D) ou apenas o CAR que têm como alvo a proteína BCMA (aBCMA) não foi observada quando foram cocultivadas com células OPM?2 nas quais as proteínas GPRC5D ou BCMA foram eliminadas, respectivamente. Em contraste, a ativação foi mantida em composições de células repórter Jurkat Nur77-RFP de direcionamento duplo que contêm células que expres- sam os CARs aBCMA-aGPRC5D ou aGPRC5D-aBCMA quando as proteínas BCMA ou GPRCB5D foram eliminadas das células OPM2. Estes resultados demonstram que as composições de células T de di- recionamento duplo manipuladas que contêm os formatos de CAR aBCMA-aGPRC5D e aGPRC5D-aBCMA são capazes de mediar a ati- vação, mesmo na ausência de um dos antígenos-alvo. E. Secreção de Citocinas na Presença de Células BCMA ou GPRC5D KO
[001356] Para avaliar ainda mais os efeitos da perda antigênica, as células OPM2 WT, OPM2 GPRC5D KO ou OPM2 BCMA KO foram cultivadas em uma proporção de 1:1 durante 24 horas com composi-
ções de células T humanas primárias, e a secreção de citocinas pelas células T foi avaliada. As composições de células T humanas primá- rias continham (1) células manipuladas para expressar apenas o CAR anti-GPRC5D («GPRCB5D), (2) apenas o CAR anti-BCMA (aBCMA), (3) células de direcionamento duplo que expressam ambos os CARs através de transdução de construções bicistrônicas nos formatos aB- CMA-aGPRC5D ou aGPRC5D-aBCMA ou (4) células agrupadas ma- nipuladas separadamente para expressar o CAR anti-<BCMA ou o CAR anti-GPRC5D agrupadas na proporção de 1:1 de células que expres- sam CAR anti-BCMA para células que expressam CAR anti-GPRC5D (células aAGPRC5D e aBCMA agrupadas). Composições de células T transduzidas de forma simulada serviram como um controle.
[001357] Após a cocultura com as células OPM?2, os sobrenadantes foram coletados para análise de citocinas por meio do ensaio multiplex Luminex&. Os níveis de secreção de IFNy, IL-2, TNFa foram avalia- dos, conforme mostrado nas Figuras 46A, 46B e 46C, respectivamen- te. A secreção de citocinas por células T que expressam apenas o CAR anti-GPRC5D («GPRC5D) ou apenas o CAR anti-BCMA (aBCMA) não foi observada quando foram cocultivadas com células OPM? nas quais as proteínas GPRC5D ou BCMA foram eliminadas, respectivamente. No entanto, a secreção de citocinas foi mantida em células T em composições que contêm células de direcionamento du- plo que expressam os CARs aBCMA-«GPRC5D ou aGPRC5D- aBCMA, e nas composições de células aAGPRC5D e aBCMA agrupa- das quando as proteínas GPRC5D ou BCMA foram eliminadas de cé- lulas OPM?2. Estes resultados indicam que as células de direcionamen- to duplo, nas quais as células são cotransduzidas com os formatos de CAR aBCMA-aGPRC5D ou aGPRC5D-aBCMA ou incluem células aGPRC5D e aBCMA agrupadas, são capazes de secretar citocinas, apesar da ausência de um dos antígenos.
Exemplo 23: Avaliação /n Vivo de Composições de Células de Di- recionamento Duplo que Contêm Células que Expressam CARs que Têm Como Alvo as Proteínas GPRC5D e BCMA
[001358] Um modelo de mieloma múltiplo de murino OPM?2 foi gera- do e usado para avaliar os efeitos in vivo de composições de células T que contêm (1) células manipuladas para expressar apenas o CAR anti-GPRC5D (aGPRC5D), (2) células manipuladas para expressar apenas o CAR anti-BCMA (aBCMA), (3) células de direcionamento duplo que expressam ambos os CARs através de transdução de uma construção bicistrônica no formato aAGPRC5D-aBCMA ou (4) células agrupadas separadamente manipuladas para expressar o CAR anti- BCMA ou o CAR anti-GPRC5D agrupadas na proporção de 1:1 de cé- lulas que expressam CAR anti-BCMA para células que expressam CAR anti-GPRC5D (células aAGPRC5D e aBCMA agrupadas). A. Avaliação de Composições de Células T que Expressam CARs Anti-BCMA e Anti-GPRC5D em um Modelo de Xenoenxerto OPM2 de Murino
[001359] Foi conduzido um experimento no qual camundongos NOD scid gama (NSGTY) foram tratados com 3 x 10º células T humanas primárias totais de composições que contêm (1) células que expres- sam o CAR anti-BCMA (aBCMA), (2) células que expressam o CAR anti-GPRC5D (aGPRCB5D), (3) células de direcionamento duplo gera- das com uma construção bicistrônica que codifica ambos os CARs no formato aAGPRC5D-aBCMA ou (4) células agrupadas separadamente manipuladas para expressar o CAR anti-wBCMA ou o CAR anti- GPRC5D agrupadas na proporção de 1:1 de células que expressam CAR anti-BCMA para células que expressam CAR anti-GPRCB5D (célu- las aAGPRC5D e aBCMA agrupadas). As composições de células T fo- ram administradas 14 dias após a injeção com composições de células OPM?. Neste experimento, os camundongos foram injetados com 100
% de células OPM2 WT, 95 % de células OPM2 WT e 5 % de células OPM2 BCMA KO ou 95 % de células OPM2 WT e 5 % de células OPM2 GPRC5D KO. Como um controle, os camundongos também foram tratados com composições de células T humanas primárias transduzidas de forma simulada.
[001360] Conforme mostrado na Figura 47A, a carga tumoral avalia- da por BLI aumentou substancialmente em camundongos não tratados e injetados de forma simulada que receberam 100 % de células OPM2 WT. Aumentos na carga tumoral também foram observados no dia 40 em camundongos tratados com células que expressam apenas o CAR anti-BCMA. Em contraste, conforme mostrado na Figura 47B, o trata- mento com uma composição de células T que contêm células que ex- pressam apenas o CAR anti-BCMA resultou em aumento da carga tu- moral antes do dia 20 em camundongos injetados com 5 % de células OPM2 BCMA KO. Da mesma forma, os camundongos tratados com uma composição de células T que contêm células que expressam apenas o CAR anti-GPRCS5D resultaram no aumento da carga tumoral antes do dia 10 em camundongos injetados com 5 % de células OPM2 GPRC5D KO (Figura 47C). Camundongos tratados com a composição que contêm células aAGPRC5D e aBCMA agrupadas, bem como ca- mundongos tratados com a composição que contêm células para tera- pia-alvo dupla que expressam CARs da construção bicistrônica aG- PRC5D-aBCMA, exibiram aumentos relativamente mínimos na carga tumoral até o dia 60. Além disso, carga tumoral em camundongos tra- tados com 5 % de células OPM2 GPRC5D KO foi melhor controlada através de tratamento com células que expressam a construção bicis- trônica aAGPRC5D-aBCMA.
[001361] Resultados similares foram observados neste estudo a par- tir da análise de sobrevida de camundongos após o dia 80 pós-injeção de células T CAR (Figura 48). Conforme mostrado, a sobrevida foi di-
minuída em camundongos que foram injetados com 5 % de células OPM2 GPRC5D KO e tratados apenas com células que expressam o CAR anti-GPRC5D. A sobrevida também diminuiu em camundongos que foram injetados com 5 % de células OPM2 BCMA KO e tratados apenas com células que expressam o CAR anti-BCMA. Os outros gru- pos de tratamento exibiram.
[001362] A presente invenção não se destina a estar limitada, quanto ao escopo, às modalidades particulares descritas as quais são forne- cidas, por exemplo, para ilustrar vários aspectos da invenção. Várias modificações nas composições e métodos descritos se tornarão evi- dentes a partir da descrição e dos ensinamentos no presente docu- mento. Tais variações podem ser praticadas sem se afastar do verda- deiro escopo e espírito da invenção e se destinam a cair dentro do es- copo da presente invenção.
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Claims (1)
- REIVINDICAÇÕES1. Receptor antigênico quimérico, caracterizado pelo fato de que compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresenta- da em SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou 69; (2) um espaçador de pelo menos 125 aminoácidos de com- primento; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.2. Receptor antigênico quimérico, caracterizado pelo fato de que compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C,Grupo 5, membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma região determinante de complementaridade de cadeia pe- sada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complemen- taridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vn selecionada a partir de SEQ ID NOS: 21, 23,25, 27,29,31 e33;e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. selecionada a partir de SEQ ID NOS: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 e 69; (2) um espaçador de pelo menos 125 aminoácidos de com- primento; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.3. Receptor antigênico quimérico, caracterizado pelo fato de que compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma CDR-H1 que compreende a sequência de aminoácidos se- lecionada a partir de SEQ ID NOS: 75, 78, 80, 90, 93, 95, 105, 108, 110, 120, 123, 125, 135, 138, 140, 152, 162, 165 e 167; (b) uma CDR-H2 que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 76, 79, 81, 91, 94, 96, 106, 109, 111, 121, 124, 126, 136, 139, 141, 150, 153, 154, 163, 166 e 168; e (c) uma CDR-H3 que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 77, 92, 107, 122, 137, 151 e 164; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência de aminoácidos selecio- nada a partir de SEQ ID NOS: 85, 100, 115, 130, 145, 157 e 172; (b) uma CDR-L2 que compreende a sequência de aminoácidos selecio- nada a partir de SEQ ID NOS: 86, 101, 116, 131, 146 e 158; e (c) uma CDR-L3 que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 87, 102, 117, 132, 147, 159, 173 e 297; (2) um espaçador de pelo menos 125 aminoácidos de com- primento; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.4. Receptor antigênico quimérico de acordo com a reivindi- cação 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende: uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 21, 23, 25, 27, 29, 31 ou 33; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresenta- da em SEQ ID NO: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 ou69.5. Receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o espa- çador tem um comprimento de entre 125 e 300 ou de entre cerca de 125 e cerca de 300, de entre 125 e 250 ou de entre cerca de 125 e cerca de 250, de entre 125 e 230 ou de entre cerca de 125 e cerca de 230, de entre 125 e 200 ou de entre cerca de 125 e cerca de 200, de entre 125 e 180 ou de entre cerca de 125 e cerca de 180, de entre 125 e 150 ou de entre cerca de 125 e cerca de 150, de entre 150 e 300 ou de entre cerca de 150 e cerca de 300, de entre 150 e 250 ou de entre cerca de 150 e cerca de 250, de entre 150 e 230 ou de entre cerca de 150 e cerca de 230, de entre 150 e 200 ou de entre cerca de 150 e cerca de 200, de entre 150 e 180 ou de entre cerca de 150 e cerca de 180, de entre 180 e 300 ou de entre cerca de 180 e cerca de 300, de entre 180 e 250 ou de entre cerca de 180 e cerca de 250, de entre 125 e 300 ou de entre cerca de 125 e cerca de 300, de entre 180 e 230 ou de entre cerca de 180 e cerca de 230, de entre 180 e 200 ou de entre cerca de 180 e cerca de 200, de entre 200 e 300 ou de entre cerca de 200 e cerca de 300, de entre 200 e 250 ou de entre cerca de 200 e cerca de 250, de entre 200 e 230 ou de entre cerca de 200 e cerca de 230, de entre 230 e 300 ou de entre cerca de 230 e cerca de 300, de entre 230 e 250 ou de entre cerca de 230 e cerca de 250 ou de entre 250 e 300 ou de entre cerca de 250 e cerca de 300.6. Receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que: o espaçador tem, ou tem pelo menos cerca de 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226,227, 228 ou 229 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimen- to entre qualquer um dos anteriores; ou o espaçador tem cerca de, ou tem pelo menos cerca de 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 ou 229 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimento entre qualquer um dos anteriores.7. Receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que o espa- çador compreende uma porção de uma imunoglobulina.8. Receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o espa- çador compreende uma sequência de uma região de dobradiça, uma região CH2 e CH3.9. Receptor antigênico quimérico de acordo com a reivindi- cação 8, caracterizado pelo fato de que: a região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4 e/ou uma região de do- bradiça de IgG2, em que a região de dobradiça de I9gG4 é opcional- mente uma região de dobradiça de IgG4 humana e a região de dobra- diça de IgG2 é opcionalmente uma região de dobradiça de I9G2 hu- mana; a região CH2 compreende a totalidade ou uma porção de uma Cr2 de IgG4 e/ou uma Cr2 de IgG2, em que a Cr2 de IgG4 é op- cionalmente uma Cr2 de IgG4 humana e a Cr2 de IgG2 é opcional- mente uma Cr2 de IgG2 humana; e/ou a região CH3 compreende a totalidade ou uma porção de uma Cr3 de IgG4 e/ou uma Cr3 de IgG2, em que a Cx3 de IgG4 é op- cionalmente uma CH3 de IgG4 humana e a Cr3 de IgG2 é opcional- mente uma Cx3 de IgG2 humana.10. Receptor antigênico quimérico de acordo com a reivin-dicação 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que as regiões de dobradi- ça, CH2 e CH3 compreendem a totalidade ou uma porção de uma do- bradiça, a totalidade ou uma porção de uma Cr2 e a totalidade ou uma porção de uma Cr3 de IgG4 humana.11. Receptor antigênico quimérico de acordo com a reivin- dicação 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que uma ou mais das regi- ões de dobradiça, Cx2 e Ch3 são quiméricas e compreendem uma do- bradiça, Ch2 e Ch3 de IgG4 humana e IgG2 humana.12. Receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o espa- çador compreende uma região de dobradiça quimérica de I9gG4/2 ou uma região de dobradiça de I9gG4 modificada que compreende pelo menos uma substituição de aminoácido comparada com a região de dobradiça de IgG4 humana; uma região Cr2 quimérica de I9G2/4; e uma região Crx3 de IgG4.13. Receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o espa- çador é ou compreende (i) a sequência apresentada em SEQ ID NO: 17; (li) uma variante funcional de SEQ ID NO: 17 que tem pelo menos ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 17; ou (iii) uma porção contígua de (i) ou (ii) que tem pelo menos 125 aminoácidos de comprimento.14. Receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o espa- çador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID NO: 17.15. Receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o espa- çador é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 74.16. Receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que:a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 22 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 22;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 63 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 63;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 24;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 64 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 64;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 25; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 26 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, emOu cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 26;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 25 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 25; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 65 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 65;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 28;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 66 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 66;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 29; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 30 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 30;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 29 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 29; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 67 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, emOu cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 67;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 31; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 32 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 32;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 31; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 68 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 68;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 33 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 33; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 34 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 34; ou a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 33 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 33; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 69 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 69.17. Receptor antigênico quimérico de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que: a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 80, 81 e 77, respectivamente, e a região V. compreende as sequên- cias de aminoácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente; a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 95, 96, 92, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente;a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 110, 111 e 107, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 115, 116 e 117, respectivamente;a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente;a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 141 e 137, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 145, 146 e 147, respectivamente;a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente;a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 167, 168 e 164, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 172, 86, 173, respectivamente; ou a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 169, 170 e 171, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci-dos de SEQ ID NOS: 174, 89 e 297, respectivamente.18. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17, caracterizado pelo fato de que: a região Vx e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 22, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 63, respectivamente; a região Vx e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 64, respectivamente; a região Vx e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 25 e 26, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 25 e 65, respectivamente; a região Vx e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 66, respectivamente; a região Vx e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 29 e 30, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 29 e 67, respectivamente; a região Vx e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 32, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 68, respectivamente; ou a região Vx e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 33 e 34 ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 33 e 69, respectivamente,respectivamente.19. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 18, caracterizado pelo fato de que: a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 22 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 22; a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 21 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 21; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 63 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 63; a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 24 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 24;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 23 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 23; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 64 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 64;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %,em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 28;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 66 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 66;a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 31; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 32 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 32; ou a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 31 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 31; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 68 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 68.20. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, caracterizado pelo fato de que: a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 80, 81 e 77, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 85, 86 e 87, respectivamente; a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 95, 96, 92, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 100, 101 e 102, respectivamente; a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci- dos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; ou a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 140, 154 e 151, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR- L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoáci-dos de SEQ ID NOS: 157, 158 e 159, respectivamente.21. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que: a região Vx e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 22, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 21 e 63, respectivamente; a região Vx e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 24, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 23 e 64, respectivamente; a região Vx e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 66, respectivamente; ou a região Vx e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 32, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 31 e 68, respectivamente.22. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que: a região Vr compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a região V. compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 28 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 28; ou a região Va compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 27 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 27; e a re- gião V. compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 66 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade com SEQ ID NO: 66.23. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que com- preende uma região variável de cadeia pesada (VH) que compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vx apresentada em SEQ ID NO: 27; e uma re- gião variável de cadeia leve (V.) que compreende uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 28 ou 66.24. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que a região VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região V. compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.25. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que a regiãoVH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 127, 128 e 129, respectivamente, e a região V. compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 133, 134 e 132, respectivamente.26. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que a região VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente, e a região V. compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.27. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que a região VH compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente, e a região V. compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.28. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, caracterizado pelo fato de que a região Vr e a região V. compreendem a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NOS: 27 e 28, respectivamente, ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOS: 27 e 66, respectivamente.29. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 28, caracterizado pelo fato de que o domí- nio de ligação a antígeno extracelular é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia.30. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo fato de que o frag- mento de anticorpo com uma única cadeia é ou compreende um frag- mento variável com uma única cadeia (scFv).31. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 30, caracterizado pelo fato de que a região Vn e a região V. são unidas através de um ligante flexível.32. Receptor antigênico quimérico, de acordo com a reivin-dicação 31, caracterizado pelo fato de que o ligante compreende a se- quência de aminoácidos GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 52).33. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, caracterizado pelo fato de que a região V+n é amino-terminal à região V..34. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 33, caracterizado pelo fato de que: o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende uma sequência de aminoácidos selecionado a partir de SEQ ID NOS: 1,3, 5,7,9, 11 e 13 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionado a partir de SEQ ID NOS: 1,3, 5,7,9, 11 e 13; e/ou o domínio de ligação a antígeno extracelular é codificado pela sequência de nucleotídeos selecionado a partir de SEQ ID NOS: 257, 259, 261, 263, 265, 267 e 269 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de nucleotídeos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 257, 259, 261, 263, 265, 267 e 269.35. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 34, caracterizado pelo fato de que o domí- nio de ligação a antígeno extracelular compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 1,3, 5,7,9, 11 e18.36. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 34, caracterizado pelo fato de que o domí- nio de ligação a antígeno extracelular compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 1, 3,7 e 11 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 1,3,7 e 11.37. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 36, caracterizado pelo fato de que o domí- nio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 1,3, 7 e 11.38. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 34 ou 37, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoáci- dos apresentada em SEQ ID NO: 7 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7.39. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 38, caracterizado pelo fato de que o domí- nio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 7.40. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, caracterizado pelo fato de que a região Vn é carbóxi-terminal à região V..41. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32 e 40, caracterizado pelo fato de que: o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2,4, 6, 8, 10, 12 e 14 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo me- nos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12 e 14; e/ou o domínio de ligação a antígeno extracelular é codificado pela sequência de nucleotídeos selecionado a partir de SEQ ID NOS: 258, 260, 262, 264, 266, 268 e 270 ou uma sequência de nucleotídeos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de nucleotídeos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 258, 260, 262, 264, 266, 268 e 270.42. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, 40 e 41, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12 e 14.43. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, 40 e 41, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2,4,8 e 12 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90%, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2,4,8 e 12.44. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32 ou 40 a 43, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende a se- quência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 2,4,8 e12.45. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32, 40, 41 e 43, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de ami- noácidos apresentada em SEQ ID NO: 8 ou uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8.46. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 32 ou 40 a 45, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 8.47. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização intracelular compreende um domínio de sinalização ci- toplásmico intracelular.48. Receptor antigênico quimérico, de acordo com a reivin- dicação 47, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinalização intracelular é ou compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta (CD36) ou uma variante funcional ou porção de sinaliza- ção da mesma.49. Receptor antigênico quimérico, de acordo com a reivin- dicação 47 ou 48, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinali- zação intracelular é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20.50. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 47 a 49, caracterizado pelo fato de que a regi- ão de sinalização intracelular compreende ainda uma região de sinali- zação coestimuladora.51. Receptor antigênico quimérico, de acordo com a reivin- dicação 50, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização co- estimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas.52. Receptor antigênico quimérico, de acordo com a reivin- dicação 50 ou 51, caracterizado pelo fato de que a região de sinaliza- ção coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelu- lar de CD28.53. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 50 a 52, caracterizado pelo fato de que a regi- ão de sinalização coestimuladora é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %,em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.54. Receptor antigênico quimérico, de acordo com a reivin- dicação 50 ou 51, caracterizado pelo fato de que a região de sinaliza- ção coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelu- lar de 4-1BB.55. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 50, 51 e 54, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.56. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 50 a 55, caracterizado pelo fato de que a regi- ão de sinalização coestimuladora está entre o domínio transmembrana e a região de sinalização intracelular.57. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 56, caracterizado pelo fato de que o domí- nio transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana de CDA4, CD28 ou CD8.58. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 57, caracterizado pelo fato de que o domí- nio transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana de- rivado de CD28.59. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58, caracterizado pelo fato de que o domí- nio transmembrana é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 18.60. Receptor antigênico quimérico, caracterizado pelo fato de que compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 27; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresenta- da em SEQ ID NO: 28 ou 66; (2) um espaçador que compreende uma dobradiça quiméri- ca de I9gG4/2 ou uma dobradiça de I9G4 modificada; uma região Ch2 quimérica de I9G2/4; e uma região Cx3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresen-tado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana de CD28 humana; e (4) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta (CD36) e um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T.61. Receptor antigênico quimérico, de acordo com a reivin- dicação 60, caracterizado pelo fato de que: a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vn apresenta- da em SEQ ID NO: 27; e a região Vi compreende uma CDR-L1, CDR- L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V, apresentada em SEQ ID NO: 28 ou 66; ou a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; ou a região Va compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente, e a região V. compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente.62. Receptor antigênico quimérico, caracterizado pelo fato de que compreende:(1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente ao receptor acoplado à proteína G de Classe C, Grupo 5, membro D (GPRC5D) humano, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende:uma região Vx que compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vn apresentada em SEQ ID NO: 27; e uma região variável leve (V.) que compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da se- quência de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 28 ou 66; ou uma região Vx que compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 125, 126 e 122, respectivamente, e uma região V. que compre- ende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente;uma região Vx que compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 120, 121 e 122, respectivamente, e uma região V. que compre- ende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente; ou uma região Vx que compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 123, 124 e 122, respectivamente, e uma região V. que compre- ende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 130, 131 e 132, respectivamente;(2) um espaçador que compreende uma dobradiça quiméri- ca de I9gG4/2 ou uma dobradiça de I9G4 modificada; uma região Ch2 quimérica de I9G2/4; e uma região Cx3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresen- tado em SEQ ID NO: 17;(3) um domínio transmembrana de CD28 humana; e (4) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3 humana (CD36) e um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana ou 4-1BB huma- na.63. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 60 a 62, caracterizado pelo fato de que: o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende a região Vu apresentada em SEQ ID NO: 27 e a região V. apresentada em SEQ ID NO: 28 ou 66; e/ou o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende um scFv apresentado em SEQ ID NO: 7 ou SEQ ID NO: 8.64. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 60 a 63, caracterizado pelo fato de que o do- mínio transmembrana é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18.65. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 60 a 64, caracterizado pelo fato de que a regi- ão de sinalização intracelular compreende (a) a sequência de aminoá- cidos apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoá- cidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20 e (b) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apre- sentada em SEQ ID NO: 46.66. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 60 a 65, caracterizado pelo fato de que a regi- ão de sinalização intracelular é ou compreende as sequências apre- sentadas em SEQ ID NO: 20 e SEQ ID NO: 46.67. Receptor antigênico quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 60 a 64, caracterizado pelo fato de que a regi- ão de sinalização intracelular compreende (a) a sequência de aminoá- cidos apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoá- cidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 20 e (b) a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apre- sentada em SEQ ID NO: 19.68. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que compre- ende uma sequência de nucleotídeos que codifica um receptor antigê- nico quimérico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a67.69. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 68, ca-racterizado pelo fato de que o ácido nucleico que codifica o espaçador compreende pelo menos um sítio doador de splicing e/ou aceitador de Splicing modificado, o dito sítio doador e/ou aceitador de splicing modi- ficado que compreende uma ou mais modificações de nucleotídeo que correspondem a um sítio doador de splicing de referência e/ou um sítio aceitador de splicing de referência contidos em uma sequência apre- sentada em SEQ ID NO: 73.70. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 69, ca- racterizado pelo fato de que uma ou mais modificações de nucleotí- deo compreendem uma substituição de aminoácido.71. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 69 e 70, caracterizado pelo fato de que: o(s) sítio(s) doador(es) de splicing de referência e/ou o(s) sítio(s) aceitador(es) de splicing de referência têm uma pontuação de previsão de sítio de splicing de pelo menos em ou cerca de 0,4, em ou cerca de 0,5, em ou cerca de 0,6, em ou cerca de 0,70, em ou cerca de 0,75, em ou cerca de 0,80, em ou cerca de 0,85, em ou cerca de 0,90, em ou cerca de 0,95, em ou cerca de 0,99 ou em ou cerca de 1,0; e/ou o(s) sítio(s) doador(es) de splicing de referência e/ou o(s) sítio(s) aceitador(es) de splicing de referência são previstos como es- tando envolvidos em um evento de splicing com uma probabilidade de pelo menos em ou cerca de 40 %, em ou cerca de 50 %, em ou cerca de 60 %, em ou cerca de 70 %, em ou cerca de 75 %, em ou cerca de 80 %, em ou cerca de 85 %, em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 99 % ou em ou cerca de 100 %.72. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 69 a 71, caracterizado pelo fato de que: o sítio doador de splicing de referência compreende a se- quência aatctaagtacggac (SEQ ID NO: 176), teaactagtacgtag (SEQ IDNO: 177), acaattagtaaggca (SEQ ID NO: 178) e/ou accacaggtgatatac (SEQ ID NO: 179); e/ou o sítio aceitador de splicing de referência compreende a sequência aagtttctttetatatteccaggcetgacegtggataaatete (SEQ ID NO: 180) e/ou gggcaacgtgttctettgcagtateatacacgaagecetgo (SEQ ID NO: 181).73. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 69 a 72, caracterizado pelo fato de que: o sítio doador de splicing de referência compreende a se- quência tcaactggtacgtag (SEQ ID NO: 177); e/ou o sítio aceitador de splicing de referência compreende a sequência aagtttctttetatatteccaggctgacegtggataaatcte (SEQ ID NO: 180).74. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 69 a 73, caracterizado pelo fato de que a uma ou mais modificações de nucleotídeo são silenciosas e/ou resultam em um có- don degenerado comparado com SEQ ID NO: 73 e/ou não alteram a sequência de aminoácidos do espaçador codificado.75. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 69 a 74, caracterizado pelo fato de que: o sítio doador de splicing modificado é apresentado em ag- tctaaatacggac (SEQ ID NO: 182), teaactagtatatag (SEQ ID NO: 183), accatctccaaggec (SEQ ID NO: 184) e/ou geccecaggtttacac (SEQ ID NO: 185); e/ou o sítio aceitador de splicing modificado é apresentado em cagtttcttectgtatagtagactcacegtggataaatcaa (SEQ ID NO: 186), ggo- caacgtgttcagctgcagegtgatgcacgaggecetge (SEQ ID NO: 187) e/ou cgccttgtectecttgtecegetectectattaceggacect (SEQ ID NO: 188).76. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 69 a 75, caracterizado pelo fato de que o sítio doador de splicing modificado é apresentado em tcaactagtatatag (SEQ ID NO: 183) e/ou o sítio aceitador de splicing modificado é apresentado em cagtttcttectgtatagtagactcacegtggataaatcaa (SEQ ID NO: 186) e/ou cgccttgtectecttgtecegetectectattaceggacect (SEQ ID NO: 188).77. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 69 a 76, caracterizado pelo fato de que o espaçador é co- dificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO:74.78. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 68 a 77, caracterizado pelo fato de que, quando de ex- pressão em uma célula, o RNA transcrito, opcionalmente RNA mensa- geiro (mMRNA), a partir do polinucleotídeo exibe heterogeneidade redu- zida comparado com a heterogeneidade do mMRNA transcrito a partir de um polinucleotídeo de referência, o dito polinucleotídeo de referên- cia codificando a mesma sequência de aminoácidos que o polinucleo- tídeo, em que o polinucleotídeo de referência difere pela presença de um ou mais sítios doadores de splicing e/ou um ou mais sítios aceita- dores de splicing no ácido nucleico que codifica o espaçador e/ou compreende uma ou mais modificações de nucleotídeo comparado com o polinucleotídeo e/ou compreende o espaçador apresentado em SEQ ID NO: 73.79. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 68 a78, caracterizado pelo fato de que o polinucleotídeo é códon otimizado para expressão em uma célula humana.80. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 68 a 78, caracterizado pelo fato de que o receptor antigê- nico quimérico é um primeiro receptor antigênico quimérico e o polinu- cleotídeo compreende ainda uma sequência de nucleotídeos que codi- fica um segundo receptor antigênico quimérico.81. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 80, ca- racterizado pelo fato de que os primeiro e segundo receptores antigê- nicos quiméricos são separados por um ou mais elemento(s) multicis-trônico(s).82. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 81, ca- racterizado pelo fato de que o um ou mais elementos multicistrônicos são ou compreendem uma sequência de salto ribossômico, opcional- mente em que a sequência de salto ribossômico é um elemento T2A, P2A, E2A ou F2A.83. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 82, ca- racterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos que codifica o um ou mais elementos multicistrônicos é códons divergentes.84. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 82 ou 83, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos que codifica o um ou mais elementos multicistrônicos são ou compreen- dem a sequência apresentada em SEQ ID NO: 319.85. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 80 a 84, caracterizado pelo fato de que o segundo recep- tor antigênico quimérico (CAR) compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente a um segundo antí- geno expresso em ou associado ao mieloma múltiplo.86. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 85, ca- racterizado pelo fato de que o segundo CAR compreende ainda um espaçador, um domínio transmembrana e uma região de sinalização intracelular.87. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 85 ou 86, caracterizado pelo fato de que o segundo antígeno é selecionado a partir de antígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI e FcRH5.88. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 85 a 87, caracterizado pelo fato de que o segundo antíge- no é a proteína BCMA.89. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei-vindicações 85 a 88, caracterizado pelo fato de que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresenta- da em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região Cr2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de com- primento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.90. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 89, ca- racterizado pelo fato de que a região Vu do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vu apresentada em SEQ ID NO: 189, 191, 193,195 ou 197; e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198.91. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 85 a 88, caracterizado pelo fato de que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma região determinante de complementaridade de cadeia pe- sada 1 (CDR-H1) que compreende a sequência de aminoácidos sele- cionada a partir de SEQ ID NOS: 199, 202, 206 e 209; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 200, 203, 207 e 210; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 201, 204, 205, 208 e 211;e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 218, 221, 224, 227 e 230; (b) uma região de- terminante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID NOS: 219, 222, 225, 228 e 231; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 220, 223 e 226; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com-preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região Cr2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é em ou cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.92. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 89 a 91, caracterizado pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com-preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente; ou a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.93. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 89 a 91, caracterizado pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.94. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 89 a 93, caracterizado pelo fato de que: a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 190;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 192;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 194;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 196; ou a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 198.95. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 89 a 94, caracterizado pelo fato de que: a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; ou a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.96. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 89 a 95, caracterizado pelo fato de que a região Vx do se- gundo CAR é amino-terminal à região V..97. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 89 a 95, caracterizado pelo fato de que a região Vx do se- gundo CAR é carbóxi-terminal à região V. .98. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 89 a 97, caracterizado pelo fato de que o domínio de liga- ção a antígeno do segundo CAR compreende a sequência de aminoá- cidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecio- nado a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.99. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 89 a 98, caracterizado pelo fato de que o domínio de liga- ção a antígeno do segundo CAR compreende a sequência de aminoá- cidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.100. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 89 a 99, caracterizado pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; e/ou a região Vu e a região VL do segundo CAR compreende as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno extracelular do segundo CAR compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresen- tada em SEQ ID NO: 241.101. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 86 a 100, caracterizado pelo fato de que o domínio trans- membrana do segundo CAR é ou compreende um domínio transmem- brana de CD4, CD28 ou CD8, opcionalmente de CD4 humana, CD28 humana ou CD8 humana.102. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 86 a 101, caracterizado pelo fato de que: o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compre- ende um domínio transmembrana de CD28 humana; e/ou o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18.103. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 86 a 102, caracterizado pelo fato de que a região de sina- lização intracelular do segundo CAR compreende um domínio de sina- lização intracelular.104. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 103, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinalização intracelular do segundo CAR é ou compreende um domínio de sinalização citoplás- mico de CD3-zeta (CD36) ou uma variante funcional ou porção de si- nalização da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta huma- na.105. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 103 ou 104, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização intracelular do segundo CAR compreende a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO:20.106. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 103 a 105, caracterizado pelo fato de que a região de si- nalização intracelular do segundo CAR compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora.107. Polinucleotídeo, de acordo com a reivindicação 106, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas, opcionalmente de CD28 humana, 4-1BB humana ou ICOS humana.108. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei-vindicações 80 a 107, caracterizado pelo fato de que pelo menos um do primeiro receptor antigênico quimérico e do segundo receptor anti- gênico quimérico compreende uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente de 4-1BB humana.109. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 106 a 108, caracterizado pelo fato de que a região de si- nalização coestimuladora do segundo CAR compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente 4-1BB humana.110. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 106 a 108, caracterizado pelo fato de que a região de si- nalização coestimuladora do segundo CAR compreende: um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.111. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 106 a 109, caracterizado pelo fato de que a região de si- nalização coestimuladora do segundo CAR compreende: um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.112. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que com- preende: (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro receptor antigênico quimérico (CAR) que compreende um primeiro domínio de ligação a antígeno; e (ii) uma segunda sequência de ácidos nucleicos que codifi- ca um segundo receptor antigênico quimérico (CAR) que compreende um segundo domínio de ligação a antígeno; em que o primeiro CAR e o segundo CAR compreendem, cada um, o seguinte: (a) o primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno, (b) um espaçador, (c) um do- mínio transmembrana e (d) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular e uma região de sinalização coestimuladora; em que um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR e os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR compreende a se- quência de aminoácidos idêntica; e em que a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) o um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR difere, quanto à sequência, da(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR.113. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que com- preende: (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro receptor antigênico quimérico (CAR) que compreende um primeiro domínio de ligação a antígeno capaz de ligação a uma das proteínas GPRC5D ou BCMA; e (ii) uma segunda sequência de ácidos nucleicos que codifi- ca um segundo receptor antigênico quimérico (CAR) que compreende um segundo domínio de ligação a antígeno capaz de ligação à outra das proteínas GPRC5D ou BCMA; em que o primeiro CAR e o segundo CAR compreendem, cada um, o seguinte: (a) o primeiro domínio de ligação a antígeno ou o segundo domínio de ligação a antígeno, (b) um espaçador, (c) um do- mínio transmembrana e (d) uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular e uma região de sinalização coestimuladora; em que um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR e os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR compreende a se- quência de aminoácidos idêntica; e em que a(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) o um ou mais de (b) a (d) no primeiro CAR difere, quanto à sequência, da(s) sequência(s) de nucleotídeos que codifica(m) os mesmos um ou mais de (b) a (d) no segundo CAR.114. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 80 a 113, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma da sequência de nucleotídeos que codifica o primeiro receptor antigê- nico quimérico e a sequência de nucleotídeos que codifica o segundo receptor antigênico quimérico tem códons divergentes.115. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que com- preende (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro receptor antigênico quimérico (CAR), (ii) uma segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica um segundo receptor anti- gênico quimérico (CAR) e (iii) uma sequência de nucleotídeos que co- difica um elemento multicistrônico, em que a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR são separadas por o elemento multicistrônico; em que o primeiro CAR compreende um primeiro domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína GPRC5D, opcionalmente em que o primeiro domínio de ligação a antígeno é codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 311; um espa- çador codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305; um domínio transmembrana codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 307; e uma região de sina- lização intracelular que compreende um domínio de sinalização intra- celular codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 309 e uma região de sinalização coestimuladora codifica- da pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 308; em que o segundo CAR compreende um segundo domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína BCMA opcionalmente em que o segundo domínio de ligação a antígeno é codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 310; um espa- çador codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 74; um domínio transmembrana codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 56; e uma região de sinali- zação intracelular que compreende um domínio de sinalização intrace- lular codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 58 e uma região de domínio de sinalização coestimuladora co- dificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 60; e em que a primeira sequência de ácidos nucleicos que co- difica o primeiro CAR está localizada em direção à extremidade 5' do polinucleotídeo em relação à segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR.116. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que com-preende (i) uma primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica um primeiro receptor antigênico quimérico (CAR), (ii) uma segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica um segundo receptor anti- gênico quimérico (CAR) e (iii) uma sequência de nucleotídeos que co- difica um elemento multicistrônico, em que a primeira sequência de ácidos nucleicos que codifica o primeiro CAR e a segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR são separadas por o elemento multicistrônico;em que o primeiro CAR compreende um primeiro domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína BCMA, opcionalmente em que o primeiro domínio de ligação a antígeno é codificado pela se- quência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 310, um espa- çador codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 74, um domínio transmembrana codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 56 e uma região de sinali- zação intracelular que compreende um domínio de sinalização intrace- lular codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 58 e uma região de domínio de sinalização coestimuladora co- dificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 60 em que o segundo CAR compreende um segundo domínio de ligação a antígeno que se liga à proteína GPRC5D, opcionalmente em que o segundo domínio de ligação a antígeno é codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 311, um es- paçador codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 305, um domínio transmembrana codificado pela sequên- cia de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 307 e uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 309 e uma região de sinalização coestimuladora codifica-da pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID NO: 308; em que a primeira sequência de ácidos nucleicos que codi- fica o primeiro CAR está localizada em direção à extremidade 5' do polinucleotídeo em relação à segunda sequência de ácidos nucleicos que codifica o segundo CAR.117. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 80 a 116, caracterizado pelo fato de que a sequência de nucleotídeos que codifica o primeiro receptor antigênico quimérico e a sequência de nucleotídeos que codifica o segundo receptor antigênico quimérico têm não mais do que cerca de 30, não mais do que cerca de ou não mais do que cerca de 10 pares de base consecutivos com homologia de sequência.118. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende o polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 68 a 117.119. Vetor, de acordo com a reivindicação 118, caracteriza- do pelo fato de que é um vetor viral.120. Célula, caracterizada pelo fato de que compreende o receptor antigênico quimérico como definido em qualquer uma das rei- vindicações 1 a 67.121. Célula, de acordo com a reivindicação 120, caracteri- zada pelo fato de que o receptor antigênico quimérico é um primeiro receptor quimérico e a célula compreende ainda um polinucleotídeo que compreende um nucleotídeo que codifica um segundo receptor antigênico quimérico.122. Célula, caracterizada pelo fato de que compreende um polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 68 a 117.123. Célula que compreende um polinucleotídeo como defi- nido em qualquer uma das reivindicações 68 a 79, o qual é o primeiro polinucleotídeo, caracterizada pelo fato de que a célula compreende ainda um segundo polinucleotídeo que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um segundo receptor antigênico quimérico (CAR).124. Célula, de acordo com a reivindicação 121 ou 123, ca- racterizada pelo fato de que o segundo receptor antigênico quimérico (CAR) compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especificamente a um segundo antígeno expresso em ou asso- ciado ao mieloma múltiplo.125. Célula, de acordo com a reivindicação 124, caracteri- zada pelo fato de que o segundo CAR compreende ainda um espaça- dor, um domínio transmembrana e uma região de sinalização intrace- lular.126. Célula, de acordo com a reivindicação 124 ou 125, ca- racterizada pelo fato de que o segundo antígeno é selecionado a partir de antígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI e FCRH5.127. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 124 a 126, caracterizada pelo fato de que o segundo antígeno é a proteína BCMA.128. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 121 a 127, caracterizada pelo fato de que o segundo CAR com- preende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %,em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NOS: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresenta- da em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região Cr2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é em ou cerca de 228 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.129. Célula, de acordo com a reivindicação 128, caracteri- zada pelo fato de que a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de amino- ácidos da região Vu apresentada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e a região V. compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. apresenta- da em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198.130. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 121 a 127, caracterizada pelo fato de que o segundo CAR com- preende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende:(i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma região determinante de complementaridade de cadeia pe- sada 1 (CDR-H1) que compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 199, 202, 206 ou 209; (b) uma região deter- minante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 200, 203, 207 ou 210; e (c) uma região determinante de comple- mentaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreende a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 201, 204, 205, 208 ou 211;e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 218, 221, 224, 227 ou 230; (b) uma região determi- nante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 219, 222, 225, 228 ou 231; e (c) uma região determinante de complementa- ridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 220, 223 ou 226; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região Cr2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de com- primento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.131. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 128 a 130, caracterizada pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente; ou a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.132. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 128 a 131, caracterizada pelo fato de que:a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.133. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 128 a 132, caracterizada pelo fato de que: a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 190; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, emOu cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 192;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 194;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 196; ou a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino-ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 198.134. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 128 a 133, caracterizada pelo fato de que: a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; ou a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.135. Célula, de acordo com a reivindicação 128 a 134, ca- racterizada pelo fato de que o fragmento de anticorpo com uma única cadeia é ou compreende um fragmento variável com uma única cadeia (scFv).136. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 128 a 135, caracterizada pelo fato de que a região Vx do segun- do CAR é amino-terminal à região V. do segundo CAR.137. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 128 a 135, caracterizada pelo fato de que a região Vx do segun- do CAR é carbóxi-terminal à região V. do segundo CAR.138. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 128 a 137, caracterizada pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.139. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 128 a 138, caracterizada pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos selecionada a par- tir de SEQ ID NOs: 237, 238, 239, 240 e 241.140. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 128 a 139, caracterizada pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; e/ou a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.141. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 125 a 140, caracterizada pelo fato de que o domínio transmem- brana do segundo CAR é ou compreende um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CD8, opcionalmente de CD4 humana, CD28 huma- na ou CD8 humana.142. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 125 a 141, caracterizada pelo fato de que a região de sinalização intracelular do segundo CAR compreende ainda uma região de sinali- zação coestimuladora.143. Célula, de acordo com a reivindicação 142, caracteri- zada pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora compre- ende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas, opcionalmente CD28 hu- mana, 4-1BB humana ou ICOS humana.144. Célula, de acordo com a reivindicação 142 ou 143, ca- racterizada pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente 4-1BB humana.145. Composição, caracterizada pelo fato de que compre- ende um receptor antigênico quimérico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 67.146. Composição, caracterizada pelo fato de que compre- ende a célula como definida em qualquer uma das reivindicações 120 a 144 ou uma pluralidade das células como definidas em qualquer uma das reivindicações 120 a 144.147. Composição, de acordo com a reivindicação 143, ca- racterizada pelo fato de que a composição compreende células T CD4* e CD8* e a proporção de células T CD4* para CD8* é a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente cerca de 1:2 a 2:1.148. Composição, caracterizada pelo fato de que compre- ende: uma pluralidade de primeiras células que compreendem um primeiro receptor antigênico quimérico que é um receptor antigênico quimérico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 67 ou codificado por um polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 68 a 79; e uma pluralidade de segundas células que compreendem um segundo receptor antigênico quimérico.149. Composição, de acordo com a reivindicação 148, ca- racterizada pelo fato de que o segundo receptor quimérico compreen- de um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especifi- camente a um segundo antígeno expresso em ou associado ao mi- eloma múltiplo.150. Composição, de acordo com a reivindicação 148 ou 149, caracterizada pelo fato de que o segundo CAR compreende o domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga ao segundo an- tígeno, um espaçador, um domínio transmembrana e uma região de sinalização intracelular.151. Composição, de acordo com a reivindicação 149 ou 150, caracte- rizada pelo fato de que o segundo antígeno é selecionado a partir de antígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI e FCRH5.152. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 149 a 151, caracterizada pelo fato de que o segundo antíge- no é a proteína BCMA.153. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 148 a 152, caracterizada pelo fato de que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresenta- da em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região Cr2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de com- primento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17;(3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.154. Composição, de acordo com a reivindicação 153, ca- racterizada pelo fato de que a região Vu do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vu apresentada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e a região Vi compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR- L3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região V. apre- sentada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198.155. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 148 a 152, caracterizada pelo fato de que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma região determinante de complementaridade de cadeia pe- sada 1 (CDR-H1) que compreende a sequência de aminoácidos apre- sentada em SEQ ID NO: 199, 202, 206 ou 209; (b) uma região deter- minante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 200, 203, 207 ou 210; e (c) uma região determinante de comple- mentaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreende a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 201, 204, 205, 208 ou 211;e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 218, 221, 224, 227 ou 230; (b) uma região determi- nante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compre-ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 219, 222, 225, 228 ou 231; e (c) uma região determinante de complementa- ridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 220, 223 ou 226; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região Cr2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de com- primento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.156. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 153 a 155, caracterizada pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e226, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente; ou a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.157. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 153 a 156, caracterizada pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.158. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 153 a 157, caracterizada pelo fato de que: a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 190;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 192;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 194;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem(a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 196; ou a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 198.159. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 153 a 158, caracterizada pelo fato de que: a região Vx e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; ou a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.160. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 153 a 159, caracterizada pelo fato de que a região Vr do se- gundo CAR é amino-terminal à região V. do segundo CAR.161. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 153 a 159, caracterizada pelo fato de que a região Vr do se- gundo CAR é carbóxi-terminal à região V. do segundo CAR.162. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 153 a 161, caracterizada pelo fato de que o domínio de liga- ção a antígeno do segundo CAR compreende a sequência de aminoá- cidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 237, 238, 239, 240 e 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecio- nada a partir de SEQ ID NOs: 237, 238, 239, 240 e 241.163. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 153 a 162, caracterizada pelo fato de que o domínio de liga- ção a antígeno do segundo CAR compreende a sequência de aminoá-cidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 237, 238, 239, 240 e 241.164. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 153 a 163, caracterizada pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; e/ou a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.165. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 150 a 164, caracterizada pelo fato de que o domínio trans- membrana do segundo CAR é ou compreende um domínio transmem- brana de CD4, CD28 ou CD8, opcionalmente de CD4 humana, CD28 humana ou CD8 humana.166. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 150 a 165, caracterizada pelo fato de que: o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compre- ende um domínio transmembrana de CD28 humana; e/ou o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18.167. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 150 a 166, caracterizada pelo fato de que a região de sinali- zação intracelular compreende um domínio de sinalização intracelular, em que o domínio de sinalização intracelular é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente do re- ceptor de células T (TOR) e/ou compreende um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptora (ITAM).168. Composição, de acordo com a reivindicação 167, ca- racterizada pelo fato de que o domínio de sinalização intracelular é ou compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta (CD3%) ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta humana.169. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 150 a 168, caracterizada pelo fato de que a região de sinali- zação intracelular do segundo CAR compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora.170. Composição, de acordo com a reivindicação 169, ca- racterizada pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas, opcionalmente CD28 humana, 4-1BB humana ou ICOS humana.171. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 148 a 170, caracterizada pelo fato de que um dentre o pri- meiro receptor antigênico quimérico e o segundo receptor antigênico quimérico compreende uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou uma porção de sinalização da mesma, opcionalmente de 4-1BB humana.172. Composição de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 169 a 171, caracterizada pelo fato de que a região de sinali- zação coestimuladora do segundo CAR compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mes- ma, opcionalmente 4-1BB humana.173. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 148 a 172, caracterizada pelo fato de que a pluralidade de primeiras células compreende células T, opcionalmente em que as cé- lulas T compreendem células T CD4* e CD8*, opcionalmente em que a proporção de células T CD4* para CD8* é a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente 1:2 a 2:1.174. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 148 a 173, caracterizada pelo fato de que a pluralidade de segundas células compreende células T, opcionalmente em que as células T compreendem células T CD4* e CD8*, opcionalmente em que a proporção de células T CD4* para CD8* é a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente cerca de 1:2 a 2:1.175. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 148 a 174, caracterizada pelo fato de que a proporção da primeira pluralidade de células e a segunda pluralidade de células na composição é a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente cerca de 1:2 a 2:1, opcionalmente cerca de 1:1.176. Composição, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 148 a 175, caracterizada pelo fato de que a composição compreenda primeira pluralidade de células que expressam o primeiro receptor antigênico quimérico e a segunda pluralidade de células que expressam o segundo receptor antigênico quimérico em uma propor- ção que é a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente cerca de 1:2 a2:1, opcionalmente cerca de 1:1.177. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 145 a 176, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de um indivíduo com uma doença ou condição, opcionalmente em que a doença ou condição é um câncer.178. Composição farmacêutica para uso no tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente um câncer, caracterizada pelo fato de que contém as células como definidas em qualquer uma das reivindicações 120 a 144 como um ingrediente ativo.179. Composição farmacêutica para uso no tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente um câncer, caracterizada pelo fato de que contém a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 145 a 176, 233 ou 234 como um ingrediente ativo.180. Composição farmacêutica para uso no tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente um câncer, caracterizada pelo fato de que contém uma composição que compreende uma pri- meira dose de uma pluralidade de primeiras células que compreendem um primeiro receptor antigênico quimérico que é um receptor antigêni- co quimérico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 67 ou codificado por um polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 68 a 79 e uma composição que compreende uma segunda dose de uma pluralidade de segundas células que com- preendem um segundo receptor antigênico quimérico como um ingre- diente ativo.181. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma composição que compreende a dose de células como definidas em qualquer uma das reivindicações 120 a 144 ou a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 145 a 180, 233 ou 234 a um indivíduo que tem uma doença ou trans-torno.182. Uso das células como definidas em qualquer uma das reivindicações 120 a 144, caracterizado pelo fato de que é para o tra- tamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a doen- ça ou condição é um câncer.183. Uso da composição, como definida em qualquer uma das reivindicações 145 a 180, 233 ou 234, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a doença ou condição é um câncer.184. Uso das células, como definidas em qualquer uma das reivindicações 120 a 144, caracterizado pelo fato de que é para a fa- bricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a doença ou condição é um câncer.185. Uso da composição, como definida em qualquer uma das reivindicações 145 a 180, 233 ou 234, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a doença ou condi- ção é um câncer.186. Método ou uso de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 181 a 185 ou a composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 177 a 180, caracterizado pelo fato de que a dose das células compreende entre cerca de 1,0 x 107 células T que expressam CAR e 1,2 x 10º células T que expres- sam CAR, entre cerca de 1,0 x 107 células T que expressam CAR e 6,5 x 108 células T que expressam CAR, entre cerca de 1,5 x 107 célu- las T que expressam CAR e 6,5 x 10º células T que expressam CAR, entre cerca de 1,5 x 107 células T que expressam CAR e 6,0 x 10º cé- lulas T que expressam CAR, entre cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e 6,0 x 10º células T que expressam CAR, entre cer- ca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e 6,0 x 10º células T que expressam CAR, entre cerca de 1,25 x 107 células T que expres- sam CAR e 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre cerca de 1,5 x 107 células T que expressam CAR e 1,2 x 10º células T que ex- pressam CAR, entre cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e 4,5 x 10º células T que expressam CAR ou entre cerca de 1,5 x 10º células T que expressam CAR e 3,0 x 10º células T que expressam CAR, cada um inclusive.187. Método ou uso de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 181 a 186 ou a composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 177 a 180, caracterizado pelo fato de que a dose das células compreende em ou cerca de 1,5 x 107, em ou cerca de 2,5 x 107, em ou cerca de 5,0 x 10”, em ou cerca de 7,5 x 107, em ou cerca de 1,5 x 108, em ou cerca de 2,25 x 108, em ou cerca de 3,0 x 108, em ou cerca de 4,5 x 108, em ou cerca de 6,0 x 108, em ou cerca de 8,0 x 10º ou em ou cerca de 1,2 x 10º células T que expressam CAR.188. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende: administrar uma composição que compreende uma primei- ra dose de uma pluralidade de primeiras células que compreendem um primeiro receptor antigênico quimérico que é um receptor antigênico quimérico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 67 ou codificado por um polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 68 a 79 a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno; e administrar ao indivíduo uma composição que compreende uma segunda dose de uma pluralidade de segundas células que com- preendem um segundo receptor antigênico quimérico.189. Uso de uma composição que compreende uma primei- ra dose de uma pluralidade de primeiras células que compreendem um primeiro receptor antigênico quimérico que é um receptor antigênico quimérico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 67 ou codificado por um polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 68 a 79 e uma composição que compreende uma segunda dose de uma pluralidade de segundas células que compre- endem um segundo receptor antigênico quimérico, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcio- nalmente em que a doença ou condição é um câncer.190. Uso de uma composição que compreende uma primei- ra dose de uma pluralidade de primeiras células que compreendem um primeiro receptor antigênico quimérico que é um receptor antigênico quimérico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 67 ou codificado por um polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 68 a 79 e uma composição que compreende uma segunda dose de uma pluralidade de segundas células que compre- endem um segundo receptor antigênico quimérico, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a doença ou condição é um câncer.191. Método ou uso de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 188 a 190, caracterizado pelo fato de que a primeira dose da pluralidade de primeiras células e a segunda dose da pluralidade de segundas células compreendem independentemente entre em ou cerca de 1,0 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 1,5 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de cerca de 1,0 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 6,5 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 1,25 x 10º célu- las T que expressam CAR e em ou cerca de 0,6 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 1,5 x 107 células T que expres- sam CAR e em ou cerca de 6,5 x 10º células T que expressam CAR,entre em ou cerca de 1,5 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 6,0 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 2,25 x 108 células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 2,5 x 107 cé- lulas T que expressam CAR e em ou cerca de 6,0 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expres- sam CAR e em ou cerca de 6,0 x 108 células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 7,5 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 1,5 x 108 células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 2,5 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 1,2 x 10º células T que expressam CAR, entre em ou cerca de 5,0 x 107 células T que expressam CAR e em ou cerca de 4,5 x 10º células T que ex- pressam CAR ou entre em ou cerca de 1,5 x 10º células T que expres- sam CAR e em ou cerca de 3,0 x 108 células T que expressam CAR, cada um inclusive.192. Método ou uso de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 188 a 190 ou composição farmacêutica para uso de acor- do com a reivindicação 180, caracterizado pelo fato de que o segundo receptor quimérico compreende um domínio de ligação a antígeno ex- tracelular que se liga especificamente a um segundo antígeno expres- so em ou associado ao mieloma múltiplo.193. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 192, caracterizados pelo fato de que o segundo antígeno é selecionado a partir de antígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI e FcRH5.194. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 188 a 193, caracteri- zados pelo fato de que o segundo antígeno é a proteína BCMA.195. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 188 a 194, caracteri-zados pelo fato de que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresenta- da em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região Cr2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de com- primento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.196. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 195, caracterizados pelo fato de que a região Vi do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vn apresentada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e a região V.compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas dentro da se- quência de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198.197. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 188 a 196, caracteri- zados pelo fato de que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma região determinante de complementaridade de cadeia pe- sada 1 (CDR-H1) que compreende a sequência de aminoácidos sele- cionada a partir de SEQ ID NOs: 199, 202, 206 e 209; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 200, 203, 207 e 210; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 201, 204, 205, 208 e 211;e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 218, 221, 224, 227 e 230; (b) uma região de- terminante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 219, 222, 225, 228 e 231, 234; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 220, 223 e 226; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com-preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região Cr2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de com- primento ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.198. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 197, caracteri- zados pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região V. do se-gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente; ou a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.199. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 198, caracteri- zados pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.200. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 199, caracteri- zados pelo fato de que: a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %,em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 190;a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 192;a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 194;a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino-ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 196; ou a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198.201. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 200, caracteri- zados pelo fato de que: a região Vu e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194;a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; ou a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.202. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 201, caracteri- zados pelo fato de que a região Vu do segundo CAR é carbóxi-terminal à região V..203. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 202, caracteri- zados pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 237, 238, 239, 240 e 241 ou uma sequência de aminoá- cidos que tem pelo menos em ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos selecionado a partir de SEQ ID NOS: 237, 238, 239, 240 e 241.204. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 203, caracteri- zados pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR compreende a sequência de aminoácidos selecionada a partir de SEQ ID NOs: 237, 238, 239, 240 e 241.205. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 204, caracteri- zados pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1,CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; e/ou a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno do segundo CAR compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.206. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 188 a 205, caracteri- zados pelo fato de que pelo menos um do primeiro receptor antigênico quimérico e do segundo receptor antigênico quimérico compreende uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mes- ma, opcionalmente de 4-1BB humana.207. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 206, caracteri- zados pelo fato de que o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compreende um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CDB8, opcionalmente de CD4 humana, CD38 humana ou CD8 humana.208. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 207, caracteri-zados pelo fato de que: o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compre- ende um domínio transmembrana de CD28 humana; e/ou o domínio transmembrana do segundo CAR é ou compre- ende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 18 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 18.209. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 195 a 208, caracteri- zados pelo fato de que a região de sinalização intracelular do segundo CAR compreende um domínio de sinalização intracelular.210. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 209, caracterizados pelo fato de que o domínio de sinalização intracelular do segundo CAR é ou compreende um domínio de sinalização citoplásmico de CD3-zeta (CD36) ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma, opcionalmente uma cadeia de CD3 zeta humana.211. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com a reivindicação 209 ou 210, caracterizados pelo fato de que a região de sinalização intracelular do segundo CAR compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 20 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de iden- tidade de sequência com SEQ ID NO: 20.212. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso,de acordo com qualquer uma das reivindicações 209 a 211, caracteri- zados pelo fato de que a região de sinalização intracelular do segundo CAR compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora.213. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 212, caracterizados pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização das mesmas, opcionalmente CD28 huma- na, 4-1BB humana ou ICOS humana.214. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 212 ou 213, caracterizados pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR compre- ende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente 4-1BB humana.215. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 212 ou 213, caracterizados pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora do segundo CAR com- preende: um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 46 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 46.216. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 212 a 214, caracteri- zados pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora do se-gundo CAR compreende: um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB humana; e/ou a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 19 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 19.217. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 181 a 216, caracteri- zados pelo fato de que a doença ou transtorno está associado à ex- pressão do GPRC5D.218. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 217, caracterizados pelo fato de que a doença ou transtorno está ainda associado à expressão do antígeno de maturação de células B (BCMA).219. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 181 a 218, caracteri- zados pelo fato de que a doença ou transtorno é um transtorno relaci- onados a células B.220. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 181 a 219, caracteri- zados pelo fato de que a doença ou transtorno associado à proteína BCMA é uma doença ou transtorno autoimune.221. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 220, caracterizados pelo fato de que a doença ou transtorno autoimune é lúpus eritematoso sistêmico (SLE), nefrite por lúpus, doença inflamatória intestinal, artrite reumatoide,vasculite associada a ANCA, púrpura trombocitopênica idiopática (ITP), púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), trombocitopenia au- toimune, doença de Chagas, doença de Grave, granulomatose de Wegener, poliarterite nodosa, síndrome de Sjogren, pênfigo comum, escleroderma, esclerose múltipla, psoríase, nefropatia por IgA, poli- neuropatias por IgM, vasculite, diabetes mellitus, síndrome de Rey- naud, síndrome antifosfolipídica, doença de Goodpasture, doença de Kawasaki, anemia hemolítica autoimune, miastenia grave ou glomeru- lonefrite progressiva.222. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 181 a 221, caracteri- zados pelo fato de que a doença ou transtorno é um câncer.223. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 222, caracterizados pelo fato de que o câncer é um câncer que expressa a proteína GPRC5D.224. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 222 ou 223, caracterizados pelo fato de que o câncer é uma malignidade de células plasmáticas e a maligni- dade de células plasmáticas é mieloma múltiplo (MM) ou plasmacito- ma.225. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 222 a224, caracteri- zados pelo fato de que o câncer é mieloma múltiplo (MM).226. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 225, caracterizados pelo fato de que o câncer é a mieloma múltiplo recidivante/resistente.227. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 181 a 226, caracteri- zados pelo fato de que: o indivíduo é resistente a ou teve uma recaída após admi-nistração de uma terapia que tem como alvo a proteína BCMA, opcio- nalmente após administração de células T que compreendem um CAR que se liga especificamente à proteína BCMA; ou o método compreende selecionar um indivíduo para o tra- tamento que é resistente a ou teve uma recaída após administração de uma terapia que tem como alvo a proteína BCMA, opcionalmente após administração células T que compreendem um CAR que se liga espe- cificamente à proteína BCMA.228. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 181 a 187 e 191 a 227, caracterizados pelo fato de que, antes de administração da dose das células, o indivíduo recebeu anteriormente a administração de uma terapia que tem como alvo a proteína BCMA para tratamento de uma doença ou transtorno.229. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 188 a 228, caracteri- zados pelo fato de que, antes de administração da primeira dose de células e da segunda dose de células, o indivíduo recebeu anterior- mente a administração de uma terapia que tem como alvo a proteína BCMA para tratamento de uma doença ou transtorno.230. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso de acordo com a reivindicação 228 ou 229, caracterizados pelo fato de que a terapia que tem como alvo a proteína BCMA compreende uma composição que compreende células T que compreendem um CAR que se liga especificamente à proteína BCMA.231. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 228 a 230, caracteri- zados pelo fato de que o indivíduo é resistente a ou teve uma recaída após administração de a terapia que tem como alvo a proteína BCMA, opcionalmente após administração de células T que compreendem umCAR que se liga especificamente à proteína BCMA.232. Método ou uso ou composição farmacêutica para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 181 a 231, caracteri- zados pelo fato de que o indivíduo compreende células de mieloma múltiplo que exibem perda de antígeno BCMA ou epítopo, regulação negativa de BCMA e/ou células tumorais negativas para BCMA após uma administração anterior.233. Composição, de acordo com a reivindicação 146 ou 147, caracterizada pelo fato de que a composição compreende uma pluralidade de células, em que pelo menos uma porção das células compreende o primeiro CAR que se liga especificamente GPRC5D, uma porção das células compreende um segundo CAR que se liga es- pecificamente a um segundo antígeno que é expresso em ou associa- do ao mieloma múltiplo, opcionalmente em que o segundo antígeno é a proteína BCMA e uma porção das células compreende tanto o pri- meiro CAR como o segundo CAR.234. Composição, de acordo com a reivindicação 233, ca- racterizada pelo fato de que a proporção de células que expressam o primeiro CAR para células que expressam o segundo CAR é a partir de ou a partir de cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente 1:2 a 2:1, opcio- nalmente é ou é cerca de 1:1.235. Combinação, caracterizada pelo fato de que compre- ende: uma pluralidade de primeiras células que compreendem um primeiro receptor antigênico quimérico que é um receptor antigênico quimérico como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 67 e/ou codificado por um polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 68 a 79; e uma pluralidade de segundas células que compreendem um segundo receptor antigênico quimérico.236. Combinação, de acordo com a reivindicação 235, ca- racterizada pelo fato de que o segundo receptor quimérico compreen- de um domínio de ligação a antígeno extracelular que se liga especifi- camente a um segundo antígeno expresso em ou associado ao mi- eloma múltiplo.237. Combinação, de acordo com a reivindicação 236, ca- racterizada pelo fato de que o segundo antígeno é selecionado a partir do grupo que consiste em antígeno de maturação de células B (BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI e FcRH5.238. Combinação, de acordo com a reivindicação 236 ou 237, caracterizada pelo fato de que o segundo antígeno é a proteína BCMA.239. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 235 a 238, caracterizada pelo fato de que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma região variável de cadeia pesada (Vx) que compre- ende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresen- tada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 ou 197; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos apresenta- da em qualquer uma de SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região Cr2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de com- primento e/ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.240. Combinação, de acordo com a reivindicação 239, ca- racterizada pelo fato de que a região Vx compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 contidas dentro da sequência de aminoácidos da região Vu apresentada em SEQ ID NO: 189, 191, 193, 195 0u 197; e a região V. compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 contidas den- tro da sequência de aminoácidos da região V. apresentada em SEQ ID NO: 190, 192, 194, 196 ou 198.241. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 235 a 240, caracterizada pelo fato de que o segundo CAR compreende: (1) um domínio de ligação a antígeno extracelular que se |li- ga especificamente à proteína BCMA, em que o domínio de ligação a antígeno extracelular compreende: (i) uma cadeia pesada variável (Vx) que compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR- H1) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 199, 202, 206 ou 209; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 200, 203, 207 ou 210; e (c) uma região determinante de complementaridade de ca- deia pesada 3 (CDR-H3) que compreende a sequência de aminoáci-dos apresentada em SEQ ID NOs: 201, 204, 205, 208 ou 211; e (ii) uma região variável de cadeia leve (V.) que compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOs: 218, 221, 224, 227, 230, 233 ou 235; (b) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOs: 219, 222, 225, 228 ou 231; e (c) uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreende a se- quência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOs: 220, 223 ou 226; (2) um espaçador, opcionalmente um espaçador que com- preende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região Cr2 quimérica de I9G2/4; e uma região CH3 de IgG4, opcionalmente que é cerca de 228 aminoácidos de com- primento e/ou um espaçador apresentado em SEQ ID NO: 17; (3) um domínio transmembrana; e (4) uma região de sinalização intracelular.242. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 239 a 241, caracterizada pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200 e 201, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 218, 219 e 220, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 202, 203, 204, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com-preendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOS: 221, 222 e 223, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 199, 200, 205, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 224, 225 e 226, respectivamente; a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 206, 207, 208, respectivamente, e a região V. do se- gundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que com- preendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 227, 228 e 229, respectivamente; ou a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.243. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 239 a 242, caracterizada pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente.244. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 240 a 243, caracterizada pelo fato de que:a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 %, em ou cerca de 99 % ou em ou cerca de 100 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 189 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com SEQ ID NO: 190;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 191 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 192;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 193 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 194;a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 195 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em Ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 196; ou a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem (a) as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente, ou (b) uma sequência de amino- ácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 197 e uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, emOu cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de sequência com SEQ ID NO: 198.245. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 239 a 244, caracterizada pelo fato de que: a região Vx e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 189 e SEQ ID NO: 190, respectivamente; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 191 e SEQ ID NO: 192; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 193 e SEQ ID NO: 194; a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 195 e SEQ ID NO: 196; ou a região Vu e a região V. do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente.246. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 239 a 245, caracterizada pelo fato de que o domínio de liga- ção a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOs: 237, 238, 239, 240 ou 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOs: 227, 238, 239, 240 ou 241.247. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin-dicações 239 a 246, caracterizada pelo fato de que o domínio de liga- ção a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NOs: 237, 238, 239, 240 ou 241.248. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 239 a 247, caracterizada pelo fato de que: a região Vx do segundo CAR compreende uma CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 209, 210 e 211, respectivamente, e a região V. do segundo CAR compreende uma CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 que compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 230, 231 e 232, respectivamente; e/ou a região Vx e a região VL do segundo CAR compreendem as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID NO: 197 e SEQ ID NO: 198, respectivamente; e/ou o domínio de ligação a antígeno compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 241 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos ou cerca de 90 %, em ou cerca de 91 %, em ou cerca de 92 %, em ou cerca de 93 %, em ou cerca de 94 %, em ou cerca de 95 %, em ou cerca de 96 %, em ou cerca de 97 %, em ou cerca de 98 % ou em ou cerca de 99 % de identidade de se- quência com a sequência apresentada em SEQ ID NO: 241.249. Combinação, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 235 a 248, caracterizada pelo fato de que pelo menos um do primeiro receptor antigênico quimérico e do segundo receptor antigêni- co quimérico compreende uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB ou a porção de sinalização da mesma, opcionalmente de 4-1BB humana.250. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende a combinação como definida em qualquer uma das reivindicações 235 a 249 e instruções para uso, opcionalmente em que as instruções são para administração de uma dose das primeira e segunda pluralidades de células, opcionalmente de acordo com método ou uso ou composi- ção farmacêutica para uso como definidos em qualquer uma das rei- vindicações 174 a 216.251. Artigo de fabricação, caracterizado pelo fato de que compreende a combinação como definida em qualquer uma das rei- vindicações 235 a 249 ou o kit como definido na reivindicação 250.252. Artigo de fabricação, de acordo com a reivindicação 251, caracterizado pelo fato de que compreende um primeiro recipien- te que compreende uma dose da pluralidade de primeiras células e um segundo recipiente que compreende uma dose da pluralidade de se- gundas células, opcionalmente em que os primeiro e segundo recipi- entes são independentemente um frasco ou bolsa.253. Uso da combinação, como definida em qualquer uma das reivindicações 235 a 249, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a do- ença ou transtorno é um câncer.254. Uso da combinação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 235 a 249, caracterizado pelo fato de que é para a fa- bricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente em que a doença ou transtorno é um cân- cer.255. Composição farmacêutica para o tratamento de uma doença ou transtorno, opcionalmente um câncer, caracterizada pelo fato de que contém a combinação como definida em qualquer uma das reivindicações 235 a 249 como um ingrediente ativo.
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| US4837028A (en) | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
| US5219740A (en) | 1987-02-13 | 1993-06-15 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy |
| US5565566A (en) | 1987-04-24 | 1996-10-15 | Discovery Therapeutics, Inc. | N6 -substituted 9-methyladenines: a new class of adenosine receptor antagonists |
| US5298508A (en) | 1988-07-19 | 1994-03-29 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Irreversible inhibitors of adenosine receptors |
| DE68919715T2 (de) | 1988-12-28 | 1995-04-06 | Stefan Miltenyi | Verfahren sowie materialien zur hochgraduierten magnetischen abspaltung biologischer materialien. |
| US5283173A (en) | 1990-01-24 | 1994-02-01 | The Research Foundation Of State University Of New York | System to detect protein-protein interactions |
| US5200084A (en) | 1990-09-26 | 1993-04-06 | Immunicon Corporation | Apparatus and methods for magnetic separation |
| US5424297A (en) | 1992-04-27 | 1995-06-13 | University Of Virginia Alumni Patents Foundation | Adenosine dextran conjugates |
| DE4228458A1 (de) | 1992-08-27 | 1994-06-01 | Beiersdorf Ag | Multicistronische Expressionseinheiten und deren Verwendung |
| WO1994025462A1 (en) | 1993-05-03 | 1994-11-10 | The United States Of America, Represented By The | 8-substituted 1,3,7-trialkyl-xanthine derivatives as a2-selective adenosine receptor antagonists |
| US5504090A (en) | 1994-03-30 | 1996-04-02 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for the prevention and treatment of ischemia-reperfusion organ injury |
| US5827642A (en) | 1994-08-31 | 1998-10-27 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes |
| US5670501A (en) | 1994-09-01 | 1997-09-23 | Discovery Therapeutics, Inc. | N-substituted 9-alkyladenines |
| EP2311806A3 (en) | 1996-01-29 | 2011-08-10 | The United States of America, Represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Dihydropyridine-, pyridine-, benzopyranone- and triazoloquinazoline derivatives, their preparation and their use as adenosine receptor antagonists |
| DE19608753C1 (de) | 1996-03-06 | 1997-06-26 | Medigene Gmbh | Transduktionssystem und seine Verwendung |
| WO1998006842A1 (en) | 1996-08-16 | 1998-02-19 | Schering Corporation | Mammalian cell surface antigens; related reagents |
| US6111090A (en) | 1996-08-16 | 2000-08-29 | Schering Corporation | Mammalian cell surface antigens; related reagents |
| US5786360A (en) | 1996-11-19 | 1998-07-28 | Link Technology Incorporated | A1 adenosine receptor antagonists |
| WO1999020758A1 (en) | 1997-10-21 | 1999-04-29 | Human Genome Sciences, Inc. | Human tumor necrosis factor receptor-like proteins tr11, tr11sv1, and tr11sv2 |
| JP2002502607A (ja) | 1998-02-09 | 2002-01-29 | ジェネンテク・インコーポレイテッド | 新規な腫瘍壊死因子レセプター相同体及びそれをコードする核酸 |
| EP1073465B1 (en) | 1998-04-15 | 2005-06-22 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | T cell inhibitory receptor compositions and uses thereof |
| US6326390B1 (en) | 1998-08-25 | 2001-12-04 | King Pharmaceuticals Reseach And Development, Inc. | Use of adenosine A3 receptor antagonists to inhibit tumor growth |
| US6232297B1 (en) | 1999-02-01 | 2001-05-15 | University Of Virginia Patent Foundation | Methods and compositions for treating inflammatory response |
| US6313131B1 (en) | 1999-02-16 | 2001-11-06 | Upsher-Smith Laboratories, Inc. | Method of kidney treatment |
| US6322771B1 (en) | 1999-06-18 | 2001-11-27 | University Of Virginia Patent Foundation | Induction of pharmacological stress with adenosine receptor agonists |
| CA2378179A1 (en) | 1999-07-12 | 2001-01-18 | Genentech, Inc. | Promotion or inhibition of angiogenesis and cardiovascularization by tumor necrosis factor ligand/receptor homologs |
| GB0100624D0 (en) | 2001-01-10 | 2001-02-21 | Vernalis Res Ltd | Chemical compounds VII |
| US7939059B2 (en) | 2001-12-10 | 2011-05-10 | California Institute Of Technology | Method for the generation of antigen-specific lymphocytes |
| ES2528384T3 (es) | 2001-12-12 | 2015-02-09 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Healt | Métodos de utilización de inhibidores del receptor de adenosina para potenciar la respuesta inmunitaria y la inflamación |
| US20030170238A1 (en) | 2002-03-07 | 2003-09-11 | Gruenberg Micheal L. | Re-activated T-cells for adoptive immunotherapy |
| US7446190B2 (en) | 2002-05-28 | 2008-11-04 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors |
| US20040047858A1 (en) | 2002-09-11 | 2004-03-11 | Blumberg Richard S. | Therapeutic anti-BGP(C-CAM1) antibodies and uses thereof |
| CN101899114A (zh) | 2002-12-23 | 2010-12-01 | 惠氏公司 | 抗pd-1抗体及其用途 |
| US20050025763A1 (en) | 2003-05-08 | 2005-02-03 | Protein Design Laboratories, Inc. | Therapeutic use of anti-CS1 antibodies |
| CA2525717A1 (en) | 2003-05-23 | 2004-12-09 | Wyeth | Gitr ligand and gitr ligand-related molecules and antibodies and uses thereof |
| EP1660126A1 (en) | 2003-07-11 | 2006-05-31 | Schering Corporation | Agonists or antagonists of the clucocorticoid-induced tumour necrosis factor receptor (gitr) or its ligand for the treatment of immune disorders, infections and cancer |
| WO2005040395A1 (en) | 2003-10-22 | 2005-05-06 | Keck Graduate Institute | Methods of synthesizing heteromultimeric polypeptides in yeast using a haploid mating strategy |
| WO2005055808A2 (en) | 2003-12-02 | 2005-06-23 | Genzyme Corporation | Compositions and methods to diagnose and treat lung cancer |
| AU2005235811B2 (en) | 2004-02-06 | 2011-11-03 | Morphosys Ag | Anti-CD38 human antibodies and uses therefor |
| GB0409799D0 (en) | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Isis Innovation | Method of generating improved immune response |
| WO2006083289A2 (en) | 2004-06-04 | 2006-08-10 | Duke University | Methods and compositions for enhancement of immunity by in vivo depletion of immunosuppressive cell activity |
| SG10201912554TA (en) | 2005-03-23 | 2020-02-27 | Genmab As | Antibodies against cd38 for treatment of multiple myeloma |
| ES2432091T5 (es) | 2005-03-25 | 2022-03-18 | Gitr Inc | Moléculas de unión GITR y usos de las mismas |
| CA2970873C (en) | 2005-05-09 | 2022-05-17 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics |
| MX2007014474A (es) | 2005-05-17 | 2008-02-07 | Univ Connecticut | Composiciones y metodos para inmunomodulacion en un organismo. |
| CN104356236B (zh) | 2005-07-01 | 2020-07-03 | E.R.施贵宝&圣斯有限责任公司 | 抗程序性死亡配体1(pd-l1)的人单克隆抗体 |
| NZ569541A (en) | 2006-01-13 | 2012-05-25 | Us Gov Health & Human Serv | Codon optimized IL-15 and IL-15R-alpha genes for expression in mammalian cells |
| EP1981969A4 (en) | 2006-01-19 | 2009-06-03 | Genzyme Corp | ANTI-GITRANT ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF CANCER |
| EP1914242A1 (en) | 2006-10-19 | 2008-04-23 | Sanofi-Aventis | Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer |
| WO2008147482A2 (en) | 2007-02-13 | 2008-12-04 | Northeastern University | Methods and compositions for improving immune responses |
| EP3222634A1 (en) | 2007-06-18 | 2017-09-27 | Merck Sharp & Dohme B.V. | Antibodies to human programmed death receptor pd-1 |
| NZ599338A (en) | 2007-06-27 | 2013-11-29 | Marinepolymer Tech Inc | Complexes of il-15 and il-15ralpha and uses thereof |
| ES2591281T3 (es) | 2007-07-12 | 2016-11-25 | Gitr, Inc. | Terapias de combinación que emplean moléculas de enlazamiento a GITR |
| JP2011500730A (ja) | 2007-10-26 | 2011-01-06 | ガバニング カウンセル オブ ザ ユニバーシティ オブ トロント | Ｔｉｍ−３を用いた治療および診断方法 |
| ES2374863T3 (es) | 2007-12-07 | 2012-02-22 | Miltenyi Biotec Gmbh | Centrífuga para separar una muestra en por lo menos dos componentes. |
| CN101952315B (zh) | 2007-12-26 | 2015-04-01 | 生物测试股份公司 | 靶向cd138的试剂及其应用 |
| US8747847B2 (en) | 2008-02-11 | 2014-06-10 | Curetech Ltd. | Monoclonal antibodies for tumor treatment |
| EP2262837A4 (en) | 2008-03-12 | 2011-04-06 | Merck Sharp & Dohme | PD-1 BINDING PROTEINS |
| US20120164718A1 (en) | 2008-05-06 | 2012-06-28 | Innovative Micro Technology | Removable/disposable apparatus for MEMS particle sorting device |
| GB0906579D0 (en) | 2009-04-16 | 2009-05-20 | Vernalis R&D Ltd | Pharmaceuticals, compositions and methods of making and using the same |
| MX2011000039A (es) | 2008-07-02 | 2011-05-31 | Emergent Product Dev Seattle | Proteinas antagonistas del factor-beta de crecimiento transformante (tgf-beta), que se unen a multiples objetivos. |
| AR072999A1 (es) | 2008-08-11 | 2010-10-06 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos |
| WO2010027423A2 (en) | 2008-08-25 | 2010-03-11 | Amplimmune, Inc. | Compositions of pd-1 antagonists and methods of use |
| KR20110074850A (ko) | 2008-08-25 | 2011-07-04 | 앰플리뮨, 인크. | Ｐｄ-１ 길항제 및 그의 사용 방법 |
| WO2010030002A1 (ja) | 2008-09-12 | 2010-03-18 | 国立大学法人三重大学 | 外来性ｇｉｔｒリガンド発現細胞 |
| KR20110096536A (ko) | 2008-10-31 | 2011-08-30 | 애보트 바이오테라퓨틱스 코포레이션 | 희귀 림프종의 치료를 위한 항ｃｓ1 항체의 용도 |
| US8883500B2 (en) | 2008-12-05 | 2014-11-11 | Northeastern University | Method of preparing adenosine-resistant anti-tumor T lymphocytes for adoptive immunotherapy |
| PE20120341A1 (es) | 2008-12-09 | 2012-04-24 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-pd-l1 y su uso para mejorar la funcion de celulas t |
| WO2010089411A2 (en) | 2009-02-09 | 2010-08-12 | Universite De La Mediterranee | Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof |
| JP6061469B2 (ja) | 2009-03-10 | 2017-01-25 | バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． | 抗ｂｃｍａ抗体 |
| CN102471380B (zh) | 2009-04-01 | 2015-01-14 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 抗FcRH5抗体和免疫偶联物及使用方法 |
| EP2990421B1 (en) | 2009-04-30 | 2018-02-21 | Tel HaShomer Medical Research Infrastructure and Services Ltd. | Anti ceacam1 antibodies and methods of using same |
| CA2768965C (en) | 2009-08-14 | 2019-06-04 | George N. Pavlakis | Use of il-15 to increase thymic output and to treat lymphopenia |
| US8709424B2 (en) | 2009-09-03 | 2014-04-29 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Anti-GITR antibodies |
| GB0919054D0 (en) | 2009-10-30 | 2009-12-16 | Isis Innovation | Treatment of obesity |
| PL2496698T3 (pl) | 2009-11-03 | 2019-07-31 | City Of Hope | Skrócony receptor naskórkowego czynnika wzrostu (EGFRt) do selekcji transdukowanych komórek T |
| WO2011066342A2 (en) | 2009-11-24 | 2011-06-03 | Amplimmune, Inc. | Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2 |
| SI2519543T1 (sl) | 2009-12-29 | 2016-08-31 | Emergent Product Development Seattle, Llc | Beljakovine, ki se vežejo s heterodimeri in njihova uporaba |
| WO2011159877A2 (en) | 2010-06-18 | 2011-12-22 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Bi-specific antibodies against tim-3 and pd-1 for immunotherapy in chronic immune conditions |
| JOP20210044A1 (ar) | 2010-12-30 | 2017-06-16 | Takeda Pharmaceuticals Co | الأجسام المضادة لـ cd38 |
| WO2013006490A2 (en) | 2011-07-01 | 2013-01-10 | Cellerant Therapeutics, Inc. | Antibodies that specifically bind to tim3 |
| WO2013039954A1 (en) | 2011-09-14 | 2013-03-21 | Sanofi | Anti-gitr antibodies |
| WO2013054320A1 (en) | 2011-10-11 | 2013-04-18 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Antibodies to carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule (ceacam) |
| CA2892371C (en) | 2011-12-01 | 2021-01-19 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Anti-ceacam1 recombinant antibodies for cancer therapy |
| WO2013109759A1 (en) | 2012-01-17 | 2013-07-25 | Northeastern University | Methods and compositions for expanding immunosuppressive t regulatory cells in vitro and uses thereof |
| US9765342B2 (en) | 2012-04-11 | 2017-09-19 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Chimeric antigen receptors targeting B-cell maturation antigen |
| CA2916638C (en) | 2012-07-31 | 2021-01-12 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Modulation of the immune response |
| IL293944A (en) | 2012-08-20 | 2022-08-01 | Hutchinson Fred Cancer Res | Method and preparations for cellular immunotherapy |
| KR102198058B1 (ko) | 2012-10-02 | 2021-01-06 | 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 | 면역치료용 조성물 및 방법 |
| JP6356134B2 (ja) | 2012-10-12 | 2018-07-11 | ザ ブリガム アンド ウィメンズ ホスピタル インコーポレイテッドＴｈｅ Ｂｒｉｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ， Ｉｎｃ． | 免疫応答の増強 |
| US9405601B2 (en) | 2012-12-20 | 2016-08-02 | Mitsubishi Electric Corporation | In-vehicle apparatus and program |
| EP3004168A4 (en) | 2013-05-24 | 2017-03-01 | Board of Regents, The University of Texas System | Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies |
| AR096687A1 (es) | 2013-06-24 | 2016-01-27 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-fcrh5 |
| US9108442B2 (en) | 2013-08-20 | 2015-08-18 | Ricoh Company, Ltd. | Image forming apparatus |
| GB201317929D0 (en) | 2013-10-10 | 2013-11-27 | Ucl Business Plc | Chimeric antigen receptor |
| US9512084B2 (en) | 2013-11-29 | 2016-12-06 | Novartis Ag | Amino pyrimidine derivatives |
| AU2014368383B2 (en) | 2013-12-20 | 2020-01-16 | Cellectis | Method of engineering multi-input signal sensitive T cell for immunotherapy |
| WO2015090229A1 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | Novartis Ag | Regulatable chimeric antigen receptor |
| JOP20200094A1 (ar) | 2014-01-24 | 2017-06-16 | Dana Farber Cancer Inst Inc | جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها |
| JOP20200096A1 (ar) | 2014-01-31 | 2017-06-16 | Children’S Medical Center Corp | جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها |
| ME03558B (me) | 2014-03-14 | 2020-07-20 | Novartis Ag | Molekuli anti-lag-3 antiтela i njihove upotrebe |
| CA2945620C (en) | 2014-04-14 | 2022-12-06 | Cellectis | Bcma (cd269) specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy |
| US10174095B2 (en) | 2014-07-21 | 2019-01-08 | Novartis Ag | Nucleic acid encoding a humanized anti-BCMA chimeric antigen receptor |
| AU2015292590B2 (en) | 2014-07-24 | 2020-01-16 | 2Seventy Bio, Inc. | BCMA chimeric antigen receptors |
| RU2725819C2 (ru) | 2014-12-05 | 2020-07-06 | Мемориал Слоан-Кеттеринг Кэнсер Сентер | Антитела, нацеленные на рецептор, связанный с g-белками, и способы их применения |
| KR20170109538A (ko) | 2014-12-05 | 2017-09-29 | 메모리얼 슬로안-케터링 캔서 센터 | B-세포 성숙화 항원을 표적화하는 키메라 항원 수용체 및 그의 용도 |
| EP3872094A3 (en) | 2014-12-05 | 2021-12-08 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Antibodies targeting b-cell maturation antigen and methods of use |
| AU2015357518B2 (en) * | 2014-12-05 | 2021-10-07 | Eureka Therapeutics, Inc. | Chimeric antigen receptors targeting G-protein coupled receptor and uses thereof |
| DK3230321T3 (da) | 2014-12-12 | 2019-10-28 | Bluebird Bio Inc | Kimære bcma-antigenreceptorer |
| WO2016166630A1 (en) | 2015-04-13 | 2016-10-20 | Pfizer Inc. | Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen |
| KR20180042271A (ko) | 2015-08-03 | 2018-04-25 | 잉맵 에스에이알엘 | Bcma에 대응하는 단일클론 항체 |
| CN105384825B (zh) | 2015-08-11 | 2018-06-01 | 南京传奇生物科技有限公司 | 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用 |
| JP6901493B2 (ja) | 2015-11-13 | 2021-07-14 | アメリカ合衆国 | 抗ｂｃｍａポリペプチド及びタンパク質 |
| WO2017130223A2 (en) | 2016-01-29 | 2017-08-03 | Virocan Therapeutics Pvt. Ltd. | A chimeric antigen receptor specific to b-cell maturation antigen, a recombinant expression vector and a method thereof |
| KR20230148844A (ko) * | 2016-03-29 | 2023-10-25 | 유니버시티 오브 써던 캘리포니아 | 암을 표적하는 키메라 항원 수용체 |
| TW202313671A (zh) | 2016-04-01 | 2023-04-01 | 美商凱特製藥公司 | 嵌合抗原和ｔ細胞受體及使用方法 |
| WO2017211900A1 (en) | 2016-06-07 | 2017-12-14 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin | Chimeric antigen receptor and car-t cells that bind bcma |
| US20200283534A1 (en) * | 2016-06-24 | 2020-09-10 | iCell Gene Therapeuticics LLC | CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS (CARs), COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF |
| TWI781108B (zh) | 2016-07-20 | 2022-10-21 | 比利時商健生藥品公司 | 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗體、結合ｇｐｒｃ５ｄ與ｃｄ３之雙特異性抗原結合分子及其用途 |
| CA3042424A1 (en) | 2016-11-04 | 2018-05-11 | Bluebird Bio, Inc. | Anti-bcma car t cell compositions |
| CN111902159A (zh) | 2017-11-01 | 2020-11-06 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 对b细胞成熟抗原（bcma）具有特异性的嵌合抗原受体 |
| CN108239144B (zh) * | 2018-01-26 | 2021-05-25 | 重庆精准生物技术有限公司 | 改造的铰链及其在构建car骨架中的应用 |
-
2019
- 2019-10-31 AU AU2019374103A patent/AU2019374103A1/en active Pending
- 2019-10-31 TW TW108139583A patent/TW202021981A/zh unknown
- 2019-10-31 SG SG11202103873VA patent/SG11202103873VA/en unknown
- 2019-10-31 KR KR1020217016651A patent/KR20210102888A/ko active Search and Examination
- 2019-10-31 CA CA3116413A patent/CA3116413A1/en active Pending
- 2019-10-31 WO PCT/US2019/059285 patent/WO2020092854A2/en active Application Filing
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