KR20160022912A - 항-fcrh5 항체 - Google Patents

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앨런 제이. 주니어 에벤스
메레디쓰 씨. 하젠
조-앤 홍고
제니퍼 더블유. 존스턴
티무 티. 준틸라
지 리
앤드류 쥐. 폴슨
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제넨테크, 인크.
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Abstract

본 발명은 항-FcRH5 항체 및 면역접합체 및 이들을 사용하는 방법을 제공한다.

Description

항-FCRH5 항체{ANTI-FCRH5 ANTIBODIES}
관련 출원
본원은 그것의 개시내용의 전문이 본원에 참고로 편입된, 2013년 6월 24일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 61/838,534의 35 U.S.C. § 119 하의 이익을 청구한다.
서열목록
본원은 ASCII 형식의 서열목록을 포함하며, 본원에 그 전문이 참조로 편입된다. ASCII 텍스트 파일은 2014년 6월 9일에 생성되었고, GNE-0413WO_SL.txt로 명명되며, 67,909 바이트 크기이다.
발명의 분야
항-FcRH5 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및 면역접합체 그리고 그 이용 방법이 본원에 제공된다.
Fc 수용체-유사 5(FcRL5, 또한 FcRH5 및 IRTA2로 공지됨)는 면역글로불린 슈퍼패밀리(IgSF)의 최근 확인된 6개 유전자 패밀리에 속한다. 상기 패밀리의 유전자는 보존된 게놈 구조, 세포외 Ig 도메인 조성 및 ITIM- 및 ITAM-유사 신호전달 모티프를 갖는 Fc 수용체와 밀접하게 관련된다(Davis RS 등, Eur J Immunol(2005) 35:674-80). 상기 패밀리의 멤버는 IFGP(Ig 수퍼-패밀리, FcR, gp42에서 유래) 및 SPAP(SH2 도메인-함유 포스파타제 앵커 단백질)로도 불린다. FcRH/IRTA 수용체 패밀리의 6개의 멤버 FcRH1/IRTA5, FcRH2/IRTA4, FcRH3/IRTA3, FcRH4/IRTA1, FcRH5/IRTA2 및 FcRH6이 기재되었다(Polson AG 등, Int . Immunol .(2006) 18(9):1363-1373). 모든 FcRH/IRTA는 표준 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프 및 '면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프-유사' 신호전달 모티프의 일부 조합을 함유한다. FcRH cDNA는 다중 Ig-유사 세포외 도메인 및 공통 면역수용체 티로신-기반 활성화 및/또는 억제 신호전달 모티프를 함유하는 세포질 도메인을 갖는 I형 막통과 당단백질을 인코딩한다. FcRH 유전자는 구조적으로 관련되며, 그것의 단백질 생성물은 서로 28-60%의 세포외 동일성을 공유한다. 이들은 또한 그 가장 가까운 FcR 동족과 15-31% 동일성을 공유한다. 상이한 FcRH 간에는 고도의 상동성이 존재한다.
FcRH5에 대한 리간드(들)는 공지되어 있지 않지만, FcRH5는 항원-감작된 B-세포의 발생 동안 다운스트림 아이소타입 발현 및 증대된 증식에 연관되었다(Dement-Brown J. 등 J Leukoc Biol(2012) 91:59-67). FcRH5 유전자위는 3개의 주요 mRNA 동형체(FcRH5a, FcRH5b, 및 FcRH5c)를 갖는다. 이들 전사체에 의해 인코딩된 주요 FcRH5 단백질 동형체는 공통 신호 펩타이드 및 6개의 세포외 Ig-유사 도메인을 특징으로 하는 잔기 560까지 공통의 아미노산 서열을 공유한다. FcRH5a는 8개의 Ig-유사 도메인에 이어, 그 C-말단에 13개의 독특한, 주로 극성인 아미노산을 갖는 759개 아미노산의 분비된 당단백질을 나타낸다. FcRH5b는 아미노산 잔기 560에서 FcRH5a로부터 발산되며, 그 소수성이 GPI 앵커를 통한 원형질막으로의 고정과 호환가능한 32개 추가 잔기의 짧은 신장물에 대해 연장된다. FcRH5c는 그 서열이 아미노산 746에서 FcRH5a로부터 일탈하는 가장 긴 동형체이다. FcRH5c는 8개의 잠재적인 N-연결된 당화 부위를 보유하는 9개의 세포외 Ig-형 도메인, 23개 아미노산 막통과, 및 ITIM 공통을 포함하는 3개의 공통 SH2 결합 모티프를 갖는 104개 아미노산 세포질 도메인을 포함하는 977개 aa의 I형 막통과 당단백질을 인코딩한다.
FcRH 유전자는 염색체 1의 1q21-23 영역에서 고전적 FcR 유전자, FcγRI, FcγRII, FcγRIII, 및 FcεRI 중에 함께 군집되어 있다. 상기 영역은 조혈 종양, 특히 다발성 골수종에서 악성 표현형과 연관된 가장 빈번한 이차 염색체 이상 중 하나를 포함한다(Hatzivassiliou G. 등 Immunity(2001) 14:277-89). FcRH5는 전구-B세포만큼 일찍부터 시작해서 B-세포 계통에서만 발현되지만, 성숙한 B-세포 단계까지는 완전 발현을 획득하지 않는다. 대부분의 공지된 다른 B-세포 특이적 표면 단백질(예를 들면, CD20, CD19, 및 CD22)과는 달리, FcRH5는 계속 형질 세포에서 발현되는 반면, 다른 B-세포 특이적 마커는 하향조절된다(Polson AG 등, Int Immunol(2006) 18:1363-73). 또한, FcRH5 mRNA는 올리고뉴클레오타이드 어레이에 의해 검출되는 바와 같이 1q21 이상을 갖는 다발성 골수종 세포주에서 과발현된다(Inoue J., Am J Pathol(2004) 165:71-81). 발현 패턴은 FcRH5가 다발성 골수종의 치료를 위한 항체-기반 요법에 대한 표적이 될 수 있음을 시사한다. 다발성 골수종은 골격 병변, 신부전, 빈혈, 및 고칼슘혈증을 특징으로 하는 형질 세포의 악성종양이다. 이는 본질적으로 현재 요법에 의해 치유가 불가능하다. 다발성 골수종에 대한 현재의 약물 치료에는 프로테오좀 억제제 보르테조밉(Velcade), 면역조절물질 레날리도마이드(Revlimid), 및 스테로이드 덱사메타존의 조합이 포함된다.
FcRH5c 특이적 항체-기반 요법 및 검출 방법은 이들이 FcRH5의 가용성 및 막 동형체를 둘 다 인식하는 항체에 비해 표적 세포, 막-연관된 FcRH5를 특이적으로 인식하므로, 특히 유효할 수 있다. 그러나, FcRH5의 마지막 Ig-유사 도메인(Ig-유사 도메인 9)만 FcRH5의 3가지 주요 동형체 간을 구별하는 독특한 세포외 영역이며, FcRH5 내의 Ig-유사 도메인 간에는 상당한 상동성이 존재한다. 게다가, 마지막 Ig-유사 도메인은 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및 FcRH5 간에 고도로 보존되어 있다. FcRH5를 특이적으로 표적화한 임의의 항체-기반 요법은 부정적이고 표적을 벗어난 효과를 배제하기 위해(예를 들면, FcRH3은 정상 NK 세포 상에서 발현됨) 다른 FcRH와 최소 교차-반응성을 가져야 할 것이다. 암, 예컨대 FcRH5-연관된 암의 진단 및 치료를 보조하는 제제가 당해기술에서 요구된다.
요약
이중특이적 항체를 포함하는 항-FcRH5 항체, 면역접합체, 및 그것을 사용하는 방법이 본원에서 제공된다. FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합하는 단리된 항-FcRH5 항체가 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 Ig-유사 도메인 9를 포함한다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 아미노산 743-850을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:38의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:86의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:74의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:98의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:99의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:88의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:89의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:77의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:101의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:90의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:78의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:102의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:91의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:79의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:103의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:68의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:92의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:80의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:69의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:93의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:81의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:105의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:94의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:106의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:71의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:95의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:83의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:107의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:96의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:108의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:49의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:97의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:109의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 서열식별번호:111의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:110의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; b) 서열식별번호:113의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:112의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; c) 서열식별번호:115의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:114의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; d) 서열식별번호:117의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:116의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; e) 서열식별번호:119의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:118의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; f) 서열식별번호:121의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:120의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; g) 서열식별번호:123의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:122의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; h) 서열식별번호:125의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:124의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; i) 서열식별번호:127의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호: 126의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; j) 서열식별번호:129의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:128의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; k) 서열식별번호:131의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:130의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; l) 서열식별번호:133의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:132의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; 또는 서열식별번호:135의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:134의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열.
항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: a) 서열식별번호:111의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:110의 VL 서열; b) 서열식별번호:113의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:112의 VL 서열; c) 서열식별번호:115의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:114의 VL 서열; d) 서열식별번호:117의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:116의 VL 서열; e) 서열식별번호:119의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:118의 VL 서열; f) 서열식별번호:121의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:120의 VL 서열; g) 서열식별번호:123의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:122의 VL 서열; h) 서열식별번호:125의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:124의 VL 서열; i) 서열식별번호:127의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:126의 VL 서열; j) 서열식별번호:129의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:128의 VL 서열; k) 서열식별번호:131의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:130의 VL 서열; l) 서열식별번호:133의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:132의 VL 서열, 또는 m) 서열식별번호:135의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:134의 VL 서열.
항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 단클론성 항체이다. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 인간, 인간화된, 또는 키메라성 항체이다. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5에 결합하는 항체 단편이다. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 IgG1, IgG2a 또는 IgG2b 항체이다.
항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 갖는다: a) 전장 인간 및 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있고, b) FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차 반응하지 않고, c) 내인성 FcRH5에 결합하고, d) FcRH5a와 교차 반응하지 않고, 그리고 e) FcRH5의 또 하나의 Ig-유사 도메인과 교차 반응하지 않음.
항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 이중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 FcRH5 및 CD3에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에서 기재된 항체를 인코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 핵산을 포함하는 숙주세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에서 기재된 항체를 생산하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 항체를 인코딩하는 상기 핵산을 포함하는 숙주세포를 배양하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 면역접합체가 제공된다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 항-FcRH5 항체 및 세포독성 약물을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 식 Ab-(L-D)p을 가지며, 여기서: (a) Ab는 본원에서 기재된 항체이고; (b) L은 링커이고; (c) D는 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 칼리키아마이신, 피롤로벤조디아제핀, 및 네모루비신 유도체로부터 선택된 약물이고; 그리고 (d) p는 1 내지 8의 범위이다. 일부 구현예에서, D는 아우리스타틴이다. 일부 그와 같은 구현예에서, D는 식 DE를 갖는다:
Figure pct00001
여기서 R2 및 R6 각각은 메틸이고, R3 및 R4 각각은 이소프로필이고, R5는 H이고, R7는 sec-부틸이고, 각각의 R8은 CH3, O-CH3, OH, 및 H로부터 독립적으로 선택되고; R9는 H이고; 그리고 R18는 -C(R8)2-C(R8)2-아릴이다. 일부 구현예에서, D는 아래의 구조를 갖는 MMAE이다:
Figure pct00002
일부 구현예에서, D는 식 A의 피롤로벤조디아제핀이다:
Figure pct00003
여기서 상기 점선은 C1과 C2 또는 C2와 C3 사이의 이중 결합의 임의의 존재를 나타내고; R2은 H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R 및 COR로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 할로 또는 디할로로부터 임의로 추가로 선택되고, 여기서 RD은 R, CO2R, COR, CHO, CO2H, 및 할로로부터 독립적으로 선택되고; R6 및 R9은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되고; R7은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되고; Q은 O, S 및 NH로부터 독립적으로 선택되고; R11은 H, 또는 R이거나, 여기서 Q는 O, SO3M이고, 여기서 M은 금속 양이온이고; R 및 R' 각각은 임의로 치환된 C1-8 알킬, C1-12 알킬, C3-8　헤테로사이클릴, C3-20 헤테로사이클릴, 및 C5-20 아릴 그룹로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 임의로 그룹 NRR’과 관련하여, R 및 R'는, 이들이 부착된 질소 원자와 함께, 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고; R12, R16, R19 및 R17는 R2, R6, R9 및 R7 각각에 대해 정의된 바와 같고; R"는 C3-12 알킬렌 그룹이고, 그 사슬은 임의로 치환된 하나 이상의 헤테로원자 및/또는 방향족 고리에 의해 방해될 수 있고; 그리고 X 및 X'은 O, S 및 N(H)로부터 독립적으로 선택된다. 일부 그와 같은 구현예에서, D는 하기이다:
Figure pct00004
여기서 n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, D는 네모루비신 유도체이다. 일부 구현예에서, D는 아래로부터 선택된 구조를 갖는다:
Figure pct00005
및
Figure pct00006
일부 구현예에서, 면역접합체는 프로테아제에 의해 절단가능한 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 val-cit 디펩타이드 또는 Phe-homoLys 디펩타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역접합체는 산-불안정한 링커를 포함한다. 일부 그와 같은 구현예에서, 링커는 하이드라존을 포함한다.
일부 구현예에서, 면역접합체는 하기로부터 선택된 식을 갖는다:
Figure pct00007
여기서 S는 황 원자이고;
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
및
Figure pct00012
일부 구현예에서, p는 2 내지 5의 범위이다.
일부 구현예에서, 약제학적 제형이 제공된다. 일부 그와 같은 구현예에서, 약제학적 제형은 예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 FcRH5에 결합하는 항체를 포함하는 면역접합체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다. 일부 구현예에서, 약제학적 제형은 추가의 치료제를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, FcRH5 (예를 들면, FcRH5c)-양성 암을 갖는 개인을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 그와 같은 구현예에서, 본 방법은 예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 FcRH5 및/또는 FcRH5 이중특이적 항체에 결합하는 항체를 포함하는 면역접합체를 포함하는 약제학적 제형를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, FcRH5 이중특이적 항체는 FcRH5 결합 아암 및 CD3 결합 아암을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다. 일부 구현예에서, FcRH5-양성 암은 B-세포 증식성 장애이다. 일부 구현예에서, FcRH5-양성 암은 형질 세포 신생물. 일부 구현예에서, 형질 세포 신생물은 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가의 치료제를 개체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, FcRH5 (예를 들면, FcRH5c)-양성 세포의 증식을 억제하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 세포를 FcRH5 및/또는 FcRH5 이중특이적 항체에 결합하는 항체를 포함하는 면역접합체에, 항체의 세포의 표면 상의 FcRH5에의 결합을 허용하는 조건 하에서 노출시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, FcRH5 이중특이적 항체는 FcRH5 결합 아암 및 CD3 결합 아암을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다. 일부 구현예에서, FcRH5에 결합하는 항체는 본원에서 기재된 항체이다. 일부 구현예에서, FcRH5-양성 암은 B-세포 증식성 장애이다. 일부 구현예에서, FcRH5-양성 암은 형질 세포 신생물. 일부 구현예에서, 형질 세포 신생물은 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가의 치료제를 개인에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, FcRH5에 결합하는 항체는 표지에 접합된다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다. 일부 구현예에서, FcRH5에 결합하는 항체는 본원에서 기재된 항체이다. 일부 구현예에서, 표지는 양전자 에미터이다. 일부 구현예에서, 양전자 에미터는 89Zr이다.
일부 구현예에서, 생물학적 샘플에서 인간 FcRH5를 검출하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 상기 생물학적 샘플을 항-FcRH5 항체와, 상기 항-FcRH5 항체의 천연 발생 인간 FcRH5에의 결합을 위해 허용된 조건 하에서 접촉시키는 단계, 및 복합체가 생물학적 샘플에서 상기 항-FcRH5 항체와 천연 발생 인간 FcRH5 사이에서 형성되는 지를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 본원에서 기재된 항체이다.
일부 구현예에서, FcRH5-양성 암을 검출하는 방법이 제공된다. 일부 그와 같은 구현예에서, 본 방법은 (i) 표지된 항-FcRH5 항체를 FcRH5-양성 암을 가지고 있거나 가진 것으로 의심되는 대상체에게 투여하는 단계, 및 (ii) 상기 대상체에서 상기 표지된 항-FcRH5 항체를 검출하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 표지된 항-FcRH5 항체의 검출은 상기 대상체에서 FcRH5-양성 암을 나타낸다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 본원에서 기재된 항체이다.
도면의 간단한 설명
도 1(a)는 FcRH5의 3가지 주요 동형체, FcRH5a(IRTA2a; UniProt 식별자 Q96RD9-3), FcRH5b(IRTA2b; UniProt 식별자 Q96RD9-4), 및 FcRH5c(IRTA2c; UniProt 식별자 Q96RD9-1)를 도시한다. Ig-유사 도메인이 넘버링되고 UniProt 식별자 Q69RD9-1(서열식별번호:1): Ig-유사 도메인 1(aa("아미노산") 23-100), Ig-유사 도메인 2(aa 105-185), Ig-유사 도메인 3(aa 188-271), Ig-유사 도메인 4(287-373), Ig-유사 도메인 5(aa 380-466), Ig-유사 도메인 6(aa 490-555), Ig-유사 도메인 7(aa 568-652), Ig-유사 도메인 8(aa 658-731), 및 Ig-유사 도메인 9(aa 754-835)의 아미노산 서열에 대응한다. 도 1(b)는 FcRH5의 일부(서열식별번호:136) 및 FcRH5c의 FcRH5 아미노산 735 내지 977(서열식별번호:2)의 구조 및 상동성을 도시한다.
도 2는 상이한 농도로 (a) 인간 FcRH5 및 (b) 사이노 FcRH5로 형질감염된 SVT2 세포에 대한 FcRH5 항체의 결합을 나타낸다.
도 3은 (a) EJM 세포 또는 (b) 인간 FcRH5로 형질감염된 OPM2 세포에 대한 FcRH5 항체의 결합, 및 FcRH5를 내인성으로 발현하는 MOLP2 세포에 대한 서브클론 상청액 (c) 5A10.1, (d) 5F1.1, (e) 3G7.1, 및 (f) 6D2.2의 결합을 나타낸다.
도 4는 (a) WT로 형질감염된 293 세포에 대한 FcRH5 서브클론 상청액 또는 (b) 4 막 근위 세포외 도메인의 결실을 포함하는 변종 FcRH5의 결합을 나타낸다.
도 5는 (a) ELISA에 의한 FcRH5 항체의 FcRH5a에 대한 결합, 및 (b) 서브클론 상청액의 인간 B 세포에 대한 결합을 나타낸다.
도 6은 (a) FcRH1, (b) FcRH2, (c) FcRH3, 또는 (d) FcRH4로 형질감염된 SVT2 세포에 대한 FcRH5 서브클론 상청액의 결합을 나타낸다.
도 7은 FcRH5 항체 서브클론 상청액의 NK 세포에 대한 결합을 나타낸다.
도 8은 FcRH5 형질감염된 293 세포 상에서 (a) FcRH5 비스Fab, FcRH5-TDB(클론 10A8) 및 (b) HER2-TDB의 사멸 활성 및 (c) FcRH5-비스Fab 및 (d) FcRH5-TDB의 사멸 활성을 나타낸다.
도 9는 MOLP-2 세포 상에서 FcRH5 비스Fab 및 FcRH5-TDB의 (a) 사멸 활성 및 (b) T-세포 활성화를 나타낸다.
상세한 설명
I. 정의
용어 "FcRH5"는 본원에서 사용된 바와 같이, 세포에서 FcRH5 전구체 단백질의 가공으로 생성되는 임의의 원상태, 성숙 FcRH5를 나타낸다. 용어에는 다르게 지적되지 않으면 포유동물, 예컨대 영장류(예를 들면 인간 및 사이노몰구스 원숭이) 및 설치류(예를 들면, 마우스 및 랫트)를 포함하는 임의의 척추동물 원천으로부터의 FcRH5가 포함된다. 용어에는 또한 FcRH5의 천연 발생 변이체, 예를 들면 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체가 포함된다. 일부 구현예에서, 아미노산 서열 인간 FcRH5 단백질은 FcRH5a(IRTA2a; UniProt 식별자 Q96RD9-3; 759 aa), FcRH5b(IRTA2b; UniProt 식별자 Q96RD9-4; 592 aa), FcRH5c(IRTA2c; UniProt 식별자 Q96RD9-1; 977 aa(서열식별번호:1), UniProt 식별자 Q96RD9-2(124 aa), 및/또는 FcRH5d(IRTA2d; UniProt 식별자 Q96RD9-5; 152 aa)이다.
용어 "FcRH5의 당화된 형태"는 탄수화물 잔기의 부가에 의해 번역 후 개질된 FcRH5의 천연 발생 형태를 나타낸다.
참조 폴리펩타이드 서열에 대한 "아미노산 서열 동일성 퍼센트(%)"는 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않고 서열을 정렬하고 필요하면 최대 서열 동일성 퍼센트를 달성하기 위해 갭을 도입한 후, 참조 폴리펩타이드 서열에서의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서의 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 퍼센트를 결정하기 위한 목적의 정렬은 당해기술 수준의 범위 내인 다양한 방식으로, 예를 들면 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어를 이용하여 달성될 수 있다. 당해분야의 숙련가는 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하기 위해 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열 정렬을 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나 본원에서의 목적을 위해, 아미노산 서열 동일성% 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 이용해서 산출된다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 Genentech, Inc.에서 저작하였고, 소스 코드는 U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559에서 사용자 문서와 함께 출원되었으며, U.S. 저작권 등록 번호 TXU510087 하에 등록되었다. ALIGN-2 프로그램은 Genentech, Inc., South San Francisco, California에서 공개적으로 이용가능하거나, 소스 코드에서 컴파일링될 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 디지털 UNIX V4.0D를 포함하는 UNIX 운영 체제에서 이용하기 위해서는 컴파일링되어야 한다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며, 변하지 않는다.
ALIGN-2가 아미노산 서열 비교를 위해 이용되는 경우, 주어진 아미노산 서열 A의 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 와의, 또는 대비 아미노산 서열 동일성%(대안적으로 주어진 아미노산 서열 B에 대한, 와의, 또는 대비 특정 아미노산 서열 동일성%를 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로서 표현될 수 있음)는 하기와 같이 계산된다:
100 x 분수 X/Y (식 중, X는 A 및 B의 프로그램 정렬에서 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의한 동일 매치로 스코어링되는 아미노산 잔기의 수이며, Y는 B에서의 아미노산 잔기의 총 수이다). 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 같지 않은 경우, A의 B에 대한 아미노산 서열 동일성%가 B의 A에 대한 아미노산 서열 동일성%와 같지 않을 것임이 이해될 것이다. 다르게 구체적으로 언급되지 않으면, 본원에서 사용된 모든 아미노산 서열 동일성% 값은 ALIGN-2 컴퓨터 프로그램을 이용해서 바로 앞 단락에 기재된 바와 같이 수득된다.
용어들 "항-FcRH5 항체" 및 "FcRH5에 결합하는 항체"는 항체가 FcRH5의 표적화에서 진단제 및/또는 치료제로 유용하도록 충분한 친화도를 가지고 FcRH5에 결합할 수 있는 항체를 나타낸다. 일 구현예에서, 관련되지 않은 비-FcRH5 단백질에 대한 항-FcRH5 항체의 결합 정도는, 예를 들면 방사선면역분석(RIA)에 의해 측정되는 FcRH5에 대한 항체 결합의 약 10% 미만이다. 특정 구현예에서, FcRH5에 결합하는 항체는 ≤1 μM, ≤100 nM, ≤10 nM, , ≤5 Nm, , ≤4 nM, , ≤3 nM, , ≤2 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤0.01 nM, 또는 ≤0.001 nM(예를 들면, 10-8 M 이하, 예를 들면 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들면 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수(Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 상이한 종으로부터의 FcRH5 간에 보존된 FcRH5의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 RcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 본원에서 사용되며 이들이 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 한, 비제한적으로 단클론성 항체, 다클론성 항체, 다중특이적 항체(예를 들면, 이중특이적 항체), 및 항체 단편을 포함하는 다양한 항체 구조를 포괄한다.
"항체 단편"은 온전한 항체의 일부를 포함하며 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는, 온전한 항체와 다른 분자를 나타낸다. 항체 단편의 예에는 비제한적으로 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 단일-사슬 항체 분자(예를 들면, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체가 포함된다.
용어 "에피토프"는 항체가 결합하는 항원 분자 상의 특정 부위를 나타낸다.
참조 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 분석에서 그 항원에 대한 참조 항체의 결합을 50% 이상 차단하고, 반대로 참조 항체가 경쟁 분석에서 그 항원에 대한 항체의 결합을 50% 이상 차단하는 항체를 나타낸다. 예시적인 경쟁 분석이 본원에 제공된다.
용어 "단클론성 항체"는 본원에서 사용된 바와 같이 실질적으로 균질 항체 집단에서 수득된 항체를, 즉 예를 들면 일반적으로 소량으로 존재하는 변이체인, 천연 발생 돌연변이를 포함하거나 단클론성 항체 제조물의 생산 동알 발생하는 가능한 변이체 항체를 제외하고, 집단을 구성하는 개별 항체가 동일하고/하거나 동일한 에피토프에 결합한다는 것을 나타낸다. 전형적으로 상이한 결정인자(에피토프)에 대해 유도된 상이한 항체를 포함하는 다클론성 항체 제조물과는 대조적으로, 단클론성 항체 제조물의 각각의 단클론성 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 유도된다. 따라서, 수식어 "단클론성"은 실질적으로 균질 집단의 항체에서 수득된 항체의 특징을 시사하며, 임의의 특정 방법에 의한 항체 생산을 필요로 하는 것으로 해석되지 않는다. 예를 들면, 본 발명에 따라 사용될 단클론성 항체는 비제한적으로 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 파지-디스플레이 방법, 및 인간 면역글로불린 유전자위의 전부 또는 일부를 포함하는 트랜스제닉 동물을 이용하는 방법을 포함하는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있고, 단클론성 항체의 제조를 위한 그와 같은 방법 및 다른 예시적인 방법이 본원에 기재된다.
용어들 "전장 항체", "온전한 항체" 및 "전체 항체"는 본원에서 상호교환적으로 사용되어 원상태 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 본원에서 정의된 바와 같은 Fc 영역을 포함하는 중쇄를 갖는 항체를 나타낸다.
"네이키드 항체"는 이종성 모이어티(예를 들면, 세포독성 모이어티) 또는 방사성표지에 접합되지 않은 항체를 나타낸다. 네이키드 항체는 약제학적 제형에 존재할 수 있다.
"원상태 항체"는 다양한 구조를 갖는 천연 발생 면역글로불린 분자를 나타낸다. 예를 들면, 원상태 IgG 항체는 디설파이드-결합된 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄로 이루어진 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. N- 부터 C-말단까지, 각각의 중쇄는 가변 중쇄 도메인 또는 중쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역(VH), 그 다음 3개의 불변 도메인(CH1, CH2, 및 CH3)을 갖는다. 유사하게, N- 에서 C-말단으로, 각각의 경쇄는 가변 경쇄 도메인 또는 경쇄 가변 도메인으로도 불리는 가변 영역(VL), 그 다음 불변 경쇄(CL) 도메인을 갖는다. 항체의 경쇄는 그 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여 카파(κ) 및 람다(λ)로 불리는 두 유형 중 하나로 할당될 수 있다.
용어 "키메라성" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 원천 또는 종에서 유도된 반면, 나머지 중쇄 및/또는 경쇄는 상이한 원천 또는 종에서 유도된 항체를 나타낸다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생산되거나 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-인코딩 서열을 이용하는 비-인간 원천에서 유도된 항체에 대응하는 아미노산 서열을 보유하는 것이다. 인간 항체의 상기 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 구체적으로 제외한다.
"인간화된" 항체는 비-인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라성 항체를 나타낸다. 특정 구현예에서, 인간화된 항체는 적어도 하나, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 전부 포함할 것이며, 모든 또는 실질적으로 모든 HVR(예를 들면, CDR)은 비-인간 항체의 것들에 대응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 항체의 것들에 대응한다. 인간화된 항체는 선택적으로 인간 항체에서 유도된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체, 예를 들면 비-인간 항체의 "인간화된 형태"는 인간화를 거친 항체를 나타낸다.
항체의 "클래스"는 그 중쇄가 보유하는 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 나타낸다. 항체에는 5가지 주요 클래스: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이 존재하며, 이들 몇몇은 서브클래스(아이소타입), 예를 들면 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가 구분될 수 있다. 상이한 클래스의 면역글로불린에 대응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 불변 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하기 위해 사용된다. 용어에는 원상태 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역이 포함된다. 일 구현예에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226, 또는 Pro230부터 중쇄의 카복실-말단으로 연장된다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 라이신(Lys447)은 존재할 수도 있고 존재하지 않을 수도 있다. 본원에서 다르게 구체화되지 않으면, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 넘버링은 [Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991]에 기재된 바와 같이 EU 인덱스로도 불리는 EU 넘버링 시스템을 따른다
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 항원에 대한 결합에 관여되는 항체 중쇄 또는 경쇄 도메인을 나타낸다. 원상태 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인(VH 및 VL, 각각)은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인이 4개의 보존된 프레임워크 영역(FRs) 및 3개의 초가변 영역(HVRs)을 포함한다(예를 들면, Kindt Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91(2007) 참고). 단일 VH 또는 VL 도메인이 항원-결합 특이성을 부여하기 충분할 수 있다. 더욱이, 특정 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적 VL 또는 VH 도메인 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터 VH 또는 VL 도메인을 이용하여 단리될 수 있다. 예를 들면, [Portolano 등, J. Immunol . 150:880-887(1993); Clarkson 등, Nature 352:624-628(1991)] 참고.
"프레임워크" 또는 "FR"은 초가변 영역(HVR) 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 나타낸다. 가변 도메인의 FR은 일반적으로 4개의 FR 도메인: FR1, FR2, FR3, 및 FR4로 구성된다. 따라서, HVR 및 FR 서열은 일반적으로 VH(또는 VL)에서 하기 순서로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
"인간 공통 프레임워크"는 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택에서 가장 통상적으로 일어나는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 면역글로불린 VL 또는 VH 서열은 가변 도메인 서열의 하위그룹에서 선택된다. 일반적으로, 서열의 하위그룹은 [Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3]에서의 하위그룹이다. 일 구현예에서, VL에 대한 하위그룹은 [Kabat 등, 상기 문헌]에서의 하위그룹 카파 I이다. 일 구현예에서, VH에 대한 하위그룹은 [Kabat 등, 상기 문헌]에서의 하위그룹 III이다.
용어 "초가변 영역" 또는 "HVR"은 본원에서 사용된 바와 같이, 서열이 초가변적이고/이거나 구조적으로 정의된 루프("초가변 루프")를 형성하는 항체 가변 도메인의 각각의 영역을 나타낸다. 일반적으로, 원상태 4-사슬 항체는 6개의 HVR을; 3개는 VH에(H1, H2, H3), 그리고 3개는 VL에(L1, L2, L3) 포함한다. HVR은 일반적으로 초가변 루프로부터의 및/또는 "상보성 결정 영역"(CDR)으로부터의 아미노산 잔기를 포함하며, 후자가 최고 서열 가변성을 갖고/갖거나 항원 인식에 관여된다. 예시적인 초가변 루프는 아미노산 잔기 26-32(L1), 50-52(L2), 91-96(L3), 26-32(H1), 53-55(H2), 및 96-101(H3)에서 생긴다(Chothia and Lesk, J. Mol . Biol . 196:901-917(1987)). 예시적인 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3)은 L1의 아미노산 잔기 24-34, L2의 50-56, L3의 89-97, H1의 31-35B, H2의 50-65 및 H3의 95-102에서 생긴다(Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)). VH에서의 CDR1은 예외로 하고, CDR은 일반적으로 초가변 루프를 형성하는 아미노산 잔기를 포함한다. CDR은 또한 "특이성 결정 잔기" 또는 "SDR"을 포함하며, 이는 항원과 접촉하는 잔기이다. SDR은 단축된-CDR, 또는 a-CDR로 불리는 CDR 영역 내에 함유된다. 예시적인 a-CDR(a-CDR-L1, a-CDR-L2, a-CDR-L3, a-CDR-H1, a-CDR-H2, 및 a-CDR-H3)은 L1의 아미노산 잔기 31-34, L2의 50-55, L3의 89-96, H1의 31-35B, H2의 50-58 및 H3의 95-102에서 일어난다(Almagro 및 Fransson, Front. Biosci . 13:1619-1633(2008) 참고). 다르게 지적되지 않는 한, 가변 도메인에서의 HVR 잔기 및 다른 잔기(예로, FR 잔기)는 본원에서 [Kabat 등, 상기 문헌]에 따라 넘버링된다.
본원에서의 목적을 위한 "수신체 인간 프레임워크"는 아래에서 정의된 바와 같이 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크에서 유도된 경쇄 가변 도메인(VL) 프레임워크 또는 중쇄 가변 도메인(VH) 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 면역글로불린 프레임워크 또는 인간 공통 프레임워크"에서 유도된" 수신체 인간 프레임워크는 이들의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수도 있고, 또는 아미노산 서열 변화를 함유할 수도 있다. 일부 구현예에서, 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하이다. 일부 구현예에서, VL 수신체 인간 프레임워크는 VL 인간 면역글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 공통 프레임워크 서열과 동일한 서열이다.
"친화도"는 분자(예를 들면, 항체)의 단일 결합 부위 및 그것의 결합 파트너(예를 들면, 항원) 간 비공유 상호작용의 총합 강도를 나타낸다. 다르게 지시되지 않으면, 본원에서 사용된 바와 같이 "결합 친화도"는 결합 쌍 멤버(예를 들면, 항체 및 항원) 간 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 나타낸다. 분자 X의 그 파트너 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수(Kd)로 나타낼 수 있다. 친화도는 본 명세서에서 기재된 것을 포함하여, 당해분야에서 공지된 일반적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 결합 친화도를 측정하기 위한 구체적인 예증적 및 예시적 구현예가 하기에 기재된다.
"친화도 성숙된" 항체는 그와 같은 변경을 보유하지 않는 모 항체에 비해 하나 이상의 초가변 영역(HVRs)에 하나 이상의 변경을 포함하는 항체를 나타내며, 그와 같은 변경은 항원에 대한 항체의 친화도 개선을 일으킨다.
"면역접합체"는 비제한적으로 세포독성 제제를 포함하는 하나 이상의 이종성 분자(들)에 접합된 항체를 나타낸다.
용어 "세포독성 제제"는 본원에서 사용된 바와 같이 세포 기능을 억제하거나 예방하고/하거나 세포사 또는 파괴를 유도하는 물질을 나타낸다. 세포독성 제제에는 비제한적으로 방사성 동위원소(예를 들면, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소); 화학치료 제제 또는 약물(예를 들면, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 빈카 알카로이드(빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포사이드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로르암부실, 다우노루비신 또는 다른 개재 제제); 성장 억제 제제; 효소 및 그것의 단편, 예컨대 핵산분해 효소; 항생제; 독소, 예컨대 소분자 독소 또는 이들의 단편 및/또는 변이체를 포함하는 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소; 및 아래 개시된 다양한 항종양 또는 항암 제제가 포함된다.
"효과기 기능"은 항체의 Fc 영역에 기인하는 생물학적 활성을 나타내며, 이는 항체 아이소타입과 함께 변한다. 항체 효과기 기능의 예에는 하기가 포함된다: C1q 결합 및 보체 의존적 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체-의존적 세포-매개된 세포독성(ADCC); 식균작용; 세포 표면 수용체(예를 들면 B-세포 수용체)의 하향 조절; 및 B-세포 활성화.
"단리된 항체"는 그 천연 환경 성분으로부터 분리된 것이다. 일부 구현예에서, 항체는, 예를 들면 전기영동(예를 들면, SDS-PAGE, 등전점 포커싱(IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예를 들면, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 결정되는, 95% 또는 99% 초과 순도로 정제된다. 항체 순도의 평가 방법 검토를 위해서는, 예를 들면 [Flatman 등, J. Chromatogr . B 848:79-87(2007)]을 참고하라.
"단리된 핵산"은 그 천연 환경 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 나타낸다. 단리된 핵산에는 대개 핵산 분자를 함유하지만, 핵산 분자가 염색체외로 존재하거나 그 천연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 있는 세포에 함유된 핵산 분자가 포함된다.
"항-FcRH5 항체를 인코딩하는 단리된 핵산"은 단일 벡터 또는 별도 벡터 내의 그와 같은 핵산 분자(들)를 포함하는 항체 중쇄 및 경쇄(또는 그것의 단편)를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 분자를 나타내며, 그와 같은 핵산 분자(들)는 숙주 세포에서 하나 이상의 위치에 존재한다.
용어 "벡터"는 본원에서 사용된 바와 같이, 이것이 연결된 또 하나의 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 나타낸다. 용어에는 자가복제 핵산 구조로서의 벡터뿐만 아니라 이것이 도입된 숙주 세포 게놈 내로 편입된 벡터가 포함된다. 특정 벡터는 이들이 작동가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 그와 같은 벡터는 본원에서 "발현 벡터"로 불린다.
용어들 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양"은 상호교환적으로 사용되어 그와 같은 세포의 자손을 포함하여 외인성 핵산이 도입된 세포를 나타낸다. 숙주 세포에는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"가 포함되며, 여기에는 일차 형질전환된 세포 및 계대 수와 무관하게 이로부터 유도된 자손이 포함된다. 자손은 모 세포와 핵산 함량이 완전히 동일하지 않을 수도 있지만, 돌연변이를 함유할 수도 있다. 본래 형질전환된 세포에 대해 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 변종 자손이 본원에 포함된다.
본원에서 사용된 바와 같이, "치료"(및 이들의 문법적 변형, 예컨대 "치료한다" 또는 "치료하는")는 치료받는 개체의 자연스러운 과정을 변형하고자 하는 시도의 임상 중재를 나타내며, 임상 병리 과정 동안 또는 예방을 위해 수행될 수 있다. 바람직한 치료 효과에는 비제한적으로 질환의 발생 또는 재발 예방, 증상 완화, 질환의 임의의 직접적 또는 간접적 병리 결과의 약화, 전이 예방, 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 개선 또는 경감, 및 진정 또는 개선된 예진이 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 질환의 발생을 지연시키거나 질환의 진행을 완화시키기 위해 사용된다.
용어들 "암" 및 "암성"은 전형적으로 조절되지 않은 세포 성장/증식을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리적 상태를 나타내거나 설명한다. 암의 예에는 비제한적으로 암종, 림프종(예를 들면, 호지킨 및 비-호지킨 림프종), 모세포종, 육종, 및 백혈병이 포함된다. 그와 같은 암의 보다 구체적인 예에는 편평상피 세포암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암종, 폐의 편평상피 암종, 복막암, 간세포암, 위암, 췌장암, 신경아교종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 결장직장암, 작은 창자암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액샘 암종, 신장암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상샘암, 간 암종, 백혈병 및 다른 림프증식성 장애, 및 다양한 유형의 두경부암이 포함된다.
본원에서 "B-세포 악성종양"에는 저등급/여포성 NHL, 소형 림프구(SL) NHL, 중간 등급/여포성 NHL, 중간 등급 확산성 NHL, 고등급 면역아세포성 NHL, 고등급 림프아세포성 NHL, 고등급 소형 비-절단 세포 NHL, 대부피 질환 NHL, 외투 세포 림프종, AIDS-관련된 림프종, 및 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 비-호지킨 림프종(NHL), 림프구 우세 호지킨 질환(LPHD), 소형 림프구 림프종(SLL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 재발된 무통 NHL 및 리툭시맙-난치성 무통 NHL을 포함하는 무통 NHL을 포함하는 비-호지킨 림프종(NHL); 급성 림프아세포성 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), 모발 세포 백혈병, 만성적 골수아세포 백혈병을 포함하는 백혈병; 외투 세포 림프종; 및 다른 혈액 악성종양이 포함된다. 그와 같은 악성종양은 B-세포 표면 마커, 예컨대 FcRH5(예를 들면, FcRH5c)에 대해 유도된 항체로 치료될 수 있다. 그와 같은 질환은 본원에서 B-세포 표면 마커, 예컨대 FcRH5(예를 들면, FcRH5c)에 대해 유도된 항체 투여에 의해 치료되기 위해 고려되며, 접합되지 않은("네이키드") 항체 또는 본원에서 개시된 바와 같은 세포독성 제제에 접합된 항체의 투여가 포함된다. 그와 같은 질환은 또한 동시에 또는 연속적으로 투여된 또 하나의 항체 또는 항체 약물 접합체, 또 하나의 세포독성 제제, 방사선 또는 다른 치료와 조합된 항-FcRH5 항체(FcRH5 이중특이적 항체 포함) 또는 항-FcRH5 항체 약물 접합체를 포함하는 병용 요법에 의해 치료되기 위해 본원에서 고려된다.
용어 "비-호지킨 림프종" 또는 "NHL"은 본원에서 사용된 바와 같이, 호지킨 림프종 이외의 림프계 암을 나타낸다. 일반적으로 호지킨 림프종에서 리드-스테른베르그 세포의 존재 및 비-호지킨 림프종에서 상기 세포의 부재에 의해 호지킨 림프종이 비-호지킨 림프종과 구별될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같은 용어에 포괄된 비-호지킨 림프종의 예에는 당해기술에 공지된 분류 방식, 예컨대 [Color Atlas of Clinical Hematology(3rd edition), A. Victor Hoffbrand and John E. Pettit(eds.)(Harcourt Publishers Ltd., 2000)]에 기재된 개정된 유럽-미국 림프종(REAL) 방식에 따라 당해분야의 숙련가(예를 들면, 종양학자 또는 병리학자)가 그와 같이 확인할 임의의 것이 포함된다. 특히, 도 11.57, 11.58 및 11.59의 리스트를 참고하라. 보다 구체적인 예에는 비제한적으로 재발된 또는 난치성 NHL, 선두 저등급 NHL, III/IV 등급 NHL, 화학요법 내성 NHL, 전구체 B 림프아세포성 백혈병 및/또는 림프종, 소형 림프구 림프종, B-세포 만성 림프구성 백혈병 및/또는 전림프구 백혈병 및/또는 소형 림프구 림프종, B-세포 전림프구 림프종, 림프구종 및/또는 림프형질세포 림프종, 림프형질세포 림프종, 변연부 B-세포 림프종, 비장 변연부 림프종, 림프절외 변연부--MALT 림프종, 림프절 변연부 림프종, 모발 세포 백혈병, 형질세포종 및/또는 형질 세포 골수종, 저등급/여포성 림프종, 중간 등급/여포성 NHL, 외투 세포 림프종, 소포 중심 림프종(여포성), 중간 등급 확산성 NHL, 확산성 대형 B-세포 림프종, 공격성 NHL(공격성 선두 NHL 및 공격성 재발 NHL 포함), 자가조직 줄기 세포 이식 후 재발성 또는 난치성 NHL, 원발성 종격동 대형 B-세포 림프종, 일차 삼출 림프종, 고등급 면역아세포성 NHL, 고등급 림프아세포성 NHL, 고등급 소형 비-절단 세포 NHL, 대부피 질환 NHL, 버킷 림프종, 전구체(말초) 대형 과립성 림프구 백혈병, 균상 식육종 및/또는 세자리(Sezary) 증후군, 피부 림프종, 역형성 대세포 림프종, 혈관중심성 림프종이 포함된다.
형질 세포 장애는 형질 세포 클론의 조절되지 않는 분열 또는 증식에서 야기된다. 형질 세포는 활성화된 B 림프구(즉, B-세포)에서 생성된다. 각각의 B-세포는 이물질, 즉 항원에 대해 특이적인, 그 세포 표면 상에 배열된 B-세포 수용체로도 공지된 독특한 수용체를 생산한다. B-세포 수용체가 그 동족 항원에 결합하면, 수용체를 발현하는 세포가 세포 주기에 재진입하도록 활성화되어 자신의 많은 클론 카피를 생산한다. 클론은 주로 골수에 거주하며 항체로서 혈류 내로 방출되는 B-세포 수용체 카피를 생산하도록 특화되는 형질 세포로 성숙한다. 형질 세포 장애에서, 형질 세포 또는 모 B-세포는 세포 분열 및/또는 활성에 대한 정상적 제약의 억제 또는 무감각으로 야기되는 유전적 손상을 겪는다. 그와 같은 세포로부터 유도된 딸 형질 세포는 이들이 체크받지 않고 분열되고/되거나 과량의 동일한 면역글로불린(항체)을 생성할 수 있다는 점에서 악성이다. 종종 생산된 면역글로불린은 혈청, 조직 또는 기관(특히 신장) 내 단백질(특정 장애에 의존적인 단클론성 단백질, M 단백질, 파라단백질 또는 아밀로이드 단백질로도 공지됨) 축적을 일으킬 수 있는 부정확한 형태를 갖거나 불완전하여 기관 기능이상 및/또는 부전으로 이어진다. 형질 세포 장애에는 클론의 증식 성질, 골수 관여 정도 및 발현된 M 단백질 유형에 기반하여 구별되는 중요도 불명(MGUS)의 단클론성 감마글로불린병증, 다발성 골수종(MM), 거대글로불린혈증, 중쇄 질환, 및 전신 경쇄 아밀로이드증(AL)이 포함된다. 추가의 형질 세포 장애는 고립성 형질세포종, 골수외 형질세포종, 다중 고립성 형질세포종, 형질 세포 백혈병, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, B-세포 비-호지킨 림프종, B-세포 만성 림프구성 백혈병이다.
용어 "FcRH5-양성 암"은 그것의 표면 상에 FcRH5를 발현하는 세포를 포함하는 암을 나타낸다. 세포가 표면 상에 FcRH5를 발현하는지를 결정하기 위한 목적으로, FcRH5 mRNA 발현이 세포 표면 상의 FcRH5 발현에 관련되는 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, FcRH5 mRNA의 발현은 원위치 하이브리드화 및 RT-PCR(정량적 RT-PCR 포함)로부터 선택된 방법에 의해 결정된다. 대안적으로, 세포 표면 상의 FcRH5의 발현은, 예를 들면 면역조직화학, FACS 등과 같은 방법에서 FcRH5에 대한 항체를 이용하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, FcRH5는 FcRH5a, FcRH5b, FcRH5c, UniProt 식별자 Q96RD9-2, 및/또는 FcRH5d 중 하나 이상이다. 일부 구현예에서, FcRH5는 FcRH5c이다.
용어 "FcRH5-양성 세포"는 그 표면 상에 FcRH5를 발현하는 세포를 나타낸다. 일부 구현예에서, FcRH5는 FcRH5a, FcRH5b, FcRH5c, UniProt 식별자 Q96RD9-2, 및/또는 FcRH5d 중 하나 이상이다. 일부 구현예에서, FcRH5는 FcRH5c이다.
제제, 예를 들면 약제학적 제형의 "효과적인 양"은 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기 위해 필요한 기간 동안 투여량으로 효과적인 양을 나타낸다.
"개체" 또는 "대상체"는 포유동물이다. 포유동물에는 비제한적으로 사육된 동물(예를 들면, 소, 양, 고양이, 개, 및 말), 영장류(예를 들면, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼, 및 설치류(예를 들면, 마우스 및 랫트)가 포함된다. 특정 구현예에서, 개체 또는 대상체는 인간이다.
용어 "패키지 삽입물"은 관례상 그와 같은 치료 제품의 사용에 관한 적응증, 용법, 투여량, 투여, 병용 요법, 금기 및/또는 경고에 대한 정보를 함유하는 치료 제품의 상업적 패키지에 포함된 설명서를 나타내기 위해 사용된다.
용어 "약제학적 제형"은 내부에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성을 효과적이 되도록 허용하기 위해 그와 같은 형태이며, 제형이 투여될 대상체에 허용불가능한 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 않는 제조물을 나타낸다.
"약제학적으로 허용가능한 담체"는 대상체에 비독성인, 활성 성분 이외의 약제학적 제형 중 성분을 나타낸다. 약제학적으로 허용가능한 담체에는 비제한적으로 버퍼, 부형제, 안정제, 또는 보존제가 포함된다.
"알킬"은 노르말, 2차, 3차 또는 사이클릭 탄소 원자르르 함유하는 C1-C18 탄화수소이다. 그 예는 하기이다: 메틸 (Me, -CH3), 에틸 (Et, -CH2CH3), 1-프로필 (n-Pr, n-프로필, -CH2CH2CH3), 2-프로필 (i-Pr, i-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸 (n-Bu, n-부틸, -CH2CH2CH2CH3), 2-메틸-1-프로필 (i-Bu, i-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸 (s-Bu, s-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필 (t-Bu, t-부틸, -C(CH3)3), 1-펜틸 (n-펜틸, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸 (-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸 (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸 (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸 (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-헥실 (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실 (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실 (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸 (-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸 (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸 (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸 (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-디메틸-2-부틸 (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-디메틸-2-부틸 (-CH(CH3)C(CH3)3. 용어 "C1-C8 알킬"은, 본원에서 사용된 바와 같이, 1 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형, 포화된 또는 불포화된 탄화수소를 의미한다. 대표적인 "C1-C8 알킬" 그룹은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: -메틸, -에틸, -n-프로필, -n-부틸, -n-펜틸, -n-헥실, -n-헵틸, -n-옥틸, -n-노닐 및 -n-데실; 반면에 분지형 C1-C8 알킬은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: -이소프로필, -sec-부틸, -이소부틸, - tert -부틸, -이소펜틸, 2-메틸부틸, 불포화된 C1-C8 알킬은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: -비닐, -알릴, -1-부테닐, -2-부테닐, -이소부틸레닐, -1-펜테닐, -2-펜테닐, -3-메틸-1-부테닐, -2-메틸-2-부테닐, -2,3-디메틸-2-부테닐, 1-헥실, 2-헥실, 3-헥실,-아세틸레닐, -프로피닐, -1-부티닐, -2-부티닐, -1-펜티닐, -2-펜티닐, -3-메틸-1 부티닐. C1-C8 알킬 그룹은 비치환되거나 하기를 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 그룹으로 치환될 수 있다: -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2 -NHC(O)R', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN; 여기서 각각의 R'은 H, -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
용어 "C1-C12 알킬"은, 본원에서 사용된 바와 같이, 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형, 포화된 또는 불포화된 탄화수소를 의미한다. C1-C12 알킬 그룹은 비치환되거나 하기를 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 그룹으로 치환될 수 있다: -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2 -NHC(O)R', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN; 여기서 각각의 R'은 H, -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
용어 "C1-C6 알킬"은, 본원에서 사용된 바와 같이, 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형, 포화된 또는 불포화된 탄화수소를 의미한다. 대표적인 "C1-C6 알킬" 그룹은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: -메틸, -에틸, -n-프로필, -n-부틸, -n-펜틸, 및 -n-헥실; 반면에 분지형 C1-C6 알킬은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: -이소프로필, -sec-부틸, -이소부틸, - tert -부틸, -이소펜틸, 및 2-메틸부틸; 불포화된 C1-C6 알킬은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: -비닐, -알릴, -1-부테닐, -2-부테닐, 및 -이소부틸레닐, -1-펜테닐, -2-펜테닐, -3-메틸-1-부테닐, -2-메틸-2-부테닐, -2,3-디메틸-2-부테닐, 1-헥실, 2-헥실, 및 3-헥실. C1-C6 알킬 그룹은, C1-C8 알킬 그룹 에 대해 상기에서 기재된 바와 같이 비치환되거나 하나 이상의 그룹으로 치환될 수 있다.
용어 "C1-C4 알킬"은, 본원에서 사용된 바와 같이, 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형, 포화된 또는 불포화된 탄화수소를 의미한다. 대표적인 "C1-C4 알킬" 그룹은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: -메틸, -에틸, -n-프로필, -n-부틸; 반면에 분지형 C1-C4 알킬은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: -이소프로필, -sec-부틸, -이소부틸, - tert -부틸; 불포화된 C1-C4 알킬은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: -비닐, -알릴, -1-부테닐, -2-부테닐, 및 -이소부틸레닐. C1-C4 알킬 그룹은, C1-C8 알킬 그룹 에 대해 상기에서 기재된 바와 같이 비치환되거나 하나 이상의 그룹으로 치환될 수 있다.
"알콕시"는 알킬 그룹은 단독으로 산소에 결합된다. 예시적인 알콕시 그룹은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 메톡시 (-OCH3) 및 에톡시 (-OCH2CH3). "C1-C5 알콕시"는 1 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 알콕시 그룹이다. 알콕시 그룹은, 알킬 그룹에 대해 상기에서 기재된 바와 같이 비치환되거나 하나 이상의 그룹으로 치환될 수 있다.
"알케닐"은 불포화, 즉 탄소-탄소, sp 2 이중 결합의 적어도 하나의 부위를 갖는 노르말, 2차, 3차 또는 사이클릭 탄소 원자를 함유하는 C2-C18 탄화수소이다. 그 예는, 비제한적으로 하기를 포함한다: 에틸렌 또는 비닐 (-CH=CH2), 알릴 (-CH2CH=CH2), 사이클로펜테닐 (-C5H7), 및 5-헥세닐 (-CH2 CH2CH2CH2CH=CH2). "C2-C8 알케닐"은 불포화, 즉 탄소-탄소, sp 2 이중 결합의 적어도 하나의 부위를 갖는 2 내지 8개의 노르말, 2차, 3차 또는 사이클릭 탄소 원자를 함유하는 탄화수소이다.
"알키닐"은 불포화, 즉 탄소-탄소, sp 삼중 결합의 적어도 하나의 부위를 갖는 노르말, 2차, 3차 또는 사이클릭 탄소 원자를 함유하는 C2-C18 탄화수소이다. 그 예는, 비제한적으로 하기를 포함한다: 아세틸렌성 (-C≡CH) 및 프로파르길 (-CH2C≡CH). "C2-C8 알키닐"은 불포화, 즉 탄소-탄소, sp 삼중 결합의 적어도 하나의 부위를 갖는 2 내지 8개의 노르말, 2차, 3차 또는 사이클릭 탄소 원자를 함유하는 탄화수소이다.
"알킬렌"은 1-18개의 탄소 원자의 포화된, 분지형 또는 직쇄 또는 사이클릭 탄화수소 라디칼을 의미하고, 모 알칸의 동일 또는 2개의 상이한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자의제거에 의해 유도된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알킬렌 라디칼은, 비제한적으로 하기를 포함한다: 메틸렌 (-CH2-) 1,2-에틸 (-CH2CH2-), 1,3-프로필 (-CH2CH2CH2-), 1,4-부틸 (-CH2CH2CH2CH2-), 등.
"C1-C10 알킬렌"은 식 -(CH2)1-10-의 직쇄, 포화된 탄화수소 그룹이다. C1-C10 알킬렌의 예는 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 부틸렌, 펜틸렌, 헥실렌, 헵틸렌, 옥시틸렌, 노닐렌 및 데칼렌을 포함한다.
"알케닐렌"은 2-18개의 탄소 원자의 불포화된, 분지형 또는 직쇄 또는 사이클릭 탄화수소 라디칼을 의미하고, 모 알켄의 동일 또는 2개의 상이한 탄소 원자 2개의 수소 원자의 제거에 의해 유도된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알케닐렌 라디칼은, 비제한적으로 하기를 포함한다: 1,2-에틸렌 (-CH=CH-).
"알키닐렌"은 2-18개의 탄소 원자의 불포화된, 분지형 또는 직쇄 또는 사이클릭 탄화수소 라디칼을 의미하고, 모 알킨의 동일 또는 2개의 상이한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자의 제거에 의해 유도된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는다. 전형적인 알키닐렌 라디칼은, 비제한적으로 하기를 포함한다: 아세틸렌 (-C≡C-), 프로파르길 (-CH2C≡C-), 및 4-펜티닐 (-CH2CH2CH2C≡C-).
"아릴"은 카보사이클릭 방향족 그룹을 의미한다. 아릴 그룹의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 페닐, 나프틸 및 안트라세닐. 카보사이클릭 방향족 그룹 또는 헤테로사이클릭 방향족 그룹은 비치환되거나 하기를 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 그룹으로 치환될 수 있다: -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2 -NHC(O)R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN; 여기서 각각의 R'은 H, -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"C5-C20 아릴"은 카보사이클릭 방향족 고리에서 5 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 아릴 그룹이다. C5-C20 아릴 그룹의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 페닐, 나프틸 및 안트라세닐. C5-C20 아릴 그룹은 아릴 그룹에 대해 상기에서 기재된 바와 같이 치환되거나 비치환될 수 있다. "C5-C14 아릴"은 카보사이클릭 방향족 고리에서5 내지 14개의 탄소 원자를 갖는 아릴 그룹이다. C5-C14 아릴 그룹의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 페닐, 나프틸 및 안트라세닐. C5-C14 아릴 그룹은 아릴 그룹에 대해 상기에서 기재된 바와 같이 치환되거나 비치환될 수 있다.
"아릴렌"은 2개의 공유 결합을 가지며 하기 구조에서와 같이 오르토, 메타, 또는 파라 입체배치일 수 있는 아릴 그룹이다:
Figure pct00013
여기서 상기 페닐 그룹은 비치환되거나 하기를 비제한적으로 포함하는 최대 4개의 그룹으로 치환될 수 있다: -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2 -NHC(O)R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN; 여기서 각각의 R'은 H, -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"아릴알킬"은 비환식 알킬 라디칼을 의미하고, 여기서 탄소 원자, 전형적으로 말단 또는 sp3 탄소 원자에 결합된 수소 원자 중의 하나는, 아릴 라디칼로 치환된다. 전형적인 아릴알킬 그룹은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 벤질, 2-페닐에탄-1-일, 2-페닐에텐-1-일, 나프틸메틸, 2-나프틸에탄-1-일, 2-나프틸에텐-1-일, 나프토벤질, 2-나프토페닐에탄-1-일 등으로 치환된다. 아릴알킬 그룹은 6 내지 20개의 탄소 원자를 포함하고, 예를 들면 아릴알킬 그룹의, 알카닐, 알케닐 또는 알키닐 그룹을 포함하는 알킬 모이어티는 1 내지 6개의 탄소 원자이고 상기 아릴 모이어티는 5 내지 14개의 탄소 원자이다.
"헤테로아릴알킬"은 비환식 알킬 라디칼을 의미하고, 여기서 탄소 원자, 전형적으로 말단 또는 sp3 탄소 원자에 결합된 수소 원자 중의 하나는, 헤테로아릴 라디칼로 치환된다. 전형적인 헤테로아릴알킬 그룹은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 2-벤즈이미다졸릴메틸, 2-퓨릴에틸, 등. 헤테로아릴알킬 그룹은 6 내지 20개의 탄소 원자를 포함하고, 예를 들면 헤테로아릴알킬 그룹의, 알카닐, 알케닐 또는 알키닐 그룹을 포함하는 알킬 모이어티는 1 내지 6개의 탄소 원자이고 헤테로아릴 모이어티는 5 내지 14개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자. 헤테로아릴알킬 그룹의 헤테로아릴 모이어티는 3 내지 7개의 고리 멤버 (2 내지 6개의 탄소 원자)를 갖는 모노사이클 또는 7 내지 10개의 고리 멤버 (4 내지 9개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자)를 갖는 바이사이클, 예를 들면: 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6], 또는 [6,6] 시스템일 수 있다.
"치환된 알킬", "치환된 아릴", 및 "치환된 아릴알킬"은 알킬, 아릴, 및 아릴알킬 각각을 의미하고, 여기서 하나 이상의 수소 원자 각각은 독립적으로 치환체로 치환된다. 전형적인 치환체는, 비제한적으로, 하기를 포함하고: -X, -R, -O-, -OR, -SR, -S-, -NR2, -NR3, =NR, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO2, =N2, -N3, NC(=O)R, -C(=O)R, -C(=O)NR2, -SO3 -, -SO3H, -S(=O)2R, -OS(=O)2OR, -S(=O)2NR, -S(=O)R, -OP(=O)(OR)2, -P(=O)(OR)2, -PO3, -PO3H2, -C(=O)R, -C(=O)X, -C(=S)R, -CO2R, -CO2, -C(=S)OR, -C(=O)SR, -C(=S)SR, -C(=O)NR2, -C(=S)NR2, -C(=NR)NR2, 여기서 각각의 X은 독립적으로 할로겐: F, Cl, Br, 또는 I이고; 그리고 각각의 R은 독립적으로 -H, C2-C18 알킬, C6-C20 아릴, C3-C14 헤테로사이클, 보호 그룹 또는 전구약물 모이어티이다. 알킬렌, 알케닐렌, 및 알키닐렌 그룹은 상기에서 기재된 바와 유사하게 또한 치환될 수 있다.
"헤테로아릴" 및 "헤테로사이클"은 고리계를 의미하고, 여기서 하나 이상의 고리 원자는 헤테로원자, 예를 들면 질소, 산소, 및 황이다. 헤테로사이클 라디칼은 3 내지 20개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함한다. 헤테로사이클은 3 내지 7개의 고리 멤버 (2 내지 6개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자)를 갖는 모노사이클 또는 7 내지 10개의 고리 멤버 (4 내지 9개의 탄소 원자 및 N, O, P, 및 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자)를 갖는 바이사이클, 예를 들면: 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6], 또는 [6,6] 시스템일 수 있다.
예시적인 헤테로사이클은, 예를 들면, 하기에서 기재되어 있다: Paquette, Leo A., "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W.A. Benjamin, New York, 1968), 특히 챕터 1, 3, 4, 6, 7, 및 9; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950년 제공), 특히 13, 14, 16, 19, 및 28권; 및 J. Am. Chem . Soc . (1960) 82:5566.
헤테로사이클의 예는 예로써 및 비제한적으로 하기를 포함한다: 피리딜, 디하이드로피리딜, 테트라하이드로피리딜 (피페리딜), 티아졸릴, 테트라하이드로티오페닐, 황 산화된 테트라하이드로티오페닐, 피리미디닐, 푸라닐, 티에닐, 피롤릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 테트라졸릴, 벤조푸라닐, 티아나프탈레닐, 인돌릴, 인돌레닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤즈이미다졸릴, 피페리디닐, 4-피페리도닐, 피롤리디닐, 2-피롤리도닐, 피롤리닐, 테트라하이드로푸라닐, 비스-테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 비스-테트라하이드로피라닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 데카하이드로퀴놀리닐, 옥타하이드로이소퀴놀리닐, 아조시닐, 트리아지닐, 6H-1,2,5-티아디아지닐, 2H,6H-1,5,2-디티아지닐, 티에닐, 티안트레닐, 피라닐, 이소벤조푸라닐, 크로메닐, 크산테닐, 페녹사티닐, 2H-피롤릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 피라지닐, 피리다지닐, 인돌리지닐, 이소인돌릴, 3H-인돌릴, 1H-인다졸릴, 퓨리닐, 4H-퀴놀리지닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프테리디닐, 4aH-카바졸릴, 카바졸릴, β-카볼리닐, 펜안트리디닐, 아크리디닐, 피리미디닐, 펜안트롤리닐, 펜아지닐, 페노티아지닐, 푸라자닐, 펜옥사지닐, 이소크로마닐, 크로마닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피페라지닐, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 퀴누클리디닐, 모폴리닐, 옥사졸리디닐, 벤조트리아졸릴, 벤즈이속사졸릴, 옥신돌릴, 벤즈옥사졸리닐, 및 이사티노일.
예로써 및 비제한적으로, 탄소 결합된 헤테로사이클은 피리딘의 위치 2, 3, 4, 5, 또는 6, 피리다진의 위치 3, 4, 5, 또는 6, 피리미딘의 위치 2, 4, 5, 또는 6, 피라진의 위치 2, 3, 5, 또는 6, 푸란, 테트라하이드로푸란, 티오푸란, 티오펜, 피롤 또는 테트라하이드로피롤의 위치 2, 3, 4, 또는 5, 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 위치 2, 4, 또는 5, 이속사졸, 피라졸, 또는 이소티아졸의 위치 3, 4, 또는 5, 아지리딘의 위치 2 또는 3, 아제티딘의 위치 2, 3, 또는 4, 퀴놀린의 위치 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8 또는 이소퀴놀린의 위치 1, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8에서 결합된다. 더욱더 전형적으로, 탄소 결합된 헤테로사이클은 하기를 포함한다: 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜, 5-피리딜, 6-피리딜, 3-피리다지닐, 4-피리다지닐, 5-피리다지닐, 6-피리다지닐, 2-피리미디닐, 4-피리미디닐, 5-피리미디닐, 6-피리미디닐, 2-피라지닐, 3-피라지닐, 5-피라지닐, 6-피라지닐, 2-티아졸릴, 4-티아졸릴, 또는 5-티아졸릴.
예로써 및 비제한적으로, 질소 결합된 헤테로사이클은 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 피롤리딘, 2-피롤린, 3-피롤린, 이미다졸, 이미다졸리딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2-피라졸린, 3-피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 1H-인다졸의 위치 1, 이소인돌, 또는 이소인돌린의 위치 2, 모폴린의 위치 4, 및 카바졸, 또는 β-카볼린의 위치 9에서 결합된다. 더욱더 전형적으로, 질소 결합된 헤테로사이클은 하기를 포함한다: 1-아지리딜, 1-아제테딜, 1-피롤릴, 1-이미다졸릴, 1-피라졸릴, 및 1-피페리디닐.
"C3-C8 헤테로사이클"은 방향족 또는 비-방향족 C3-C8 카보사이클을 의미하고, 여기서 고리 탄소 원자 중 1 내지 4개는 O, S 및 N으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 헤테로원자로 독립적으로 치환된다. C3-C8 헤테로사이클의 대표적인 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 벤조푸라닐, 벤조티오펜, 인돌릴, 벤조피라졸릴, 쿠마리닐, 이소퀴놀리닐, 피롤릴, 티오페닐, 푸라닐, 티아졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 퀴놀리닐, 피리미디닐, 피리디닐, 피리도닐, 피라지닐, 피리다지닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴 및 테트라졸릴. C3-C8 헤테로사이클은 비치환되거나 최대 7개의 그룹으로 치환될 수 있고, 비제한적으로, 하기를 포함하고: -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2 -NHC(O)R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN; 여기서 각각의 R'은 H, -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"C3-C8 헤테로사이클로"는 상기에서 정의된 C3-C8 헤테로사이클 그룹을 의미하고, 여기서 헤테로사이클 그룹의 수소 원자 중 하나는 결합으로 치환된다. C3-C8 헤테로사이클로는 비치환되거나 최대 6개의 그룹으로 치환될 수 있고, 비제한적으로, 하기를 포함하고: -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2 -NHC(O)R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN; 여기서 각각의 R'은 H, -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"C3-C20 헤테로사이클"은 방향족 또는 비-방향족 C3-C8 카보사이클을 의미하고, 여기서 고리 탄소 원자 중 1 내지 4개는 O, S 및 N으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 헤테로원자로 독립적으로 치환된다. C3-C20 헤테로사이클은 비치환되거나 최대 7개의 그룹으로 치환될 수 있고, 비제한적으로, 하기를 포함하고: -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2 -NHC(O)R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN; 여기서 각각의 R'은 H, -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"C3-C20 헤테로사이클로"는 상기에서 정의된 C3-C20 헤테로사이클 그룹을 의미하고, 여기서 헤테로사이클 그룹의 수소 원자 중 하나는 결합으로 치환된다.
"카보사이클"은 3 내지 7 탄소 원자를 모노사이클로서 또는 7 내지 12개의 탄소 원자를 바이사이클로서 갖는 포화된 또는 불포화된 고리를 의미한다. 모노사이클릭 카보사이클은 3 내지 6개의 고리 원자, 더욱더 전형적으로 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는다. 바이사이클릭 카보사이클은, 예를 들면 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로서 마련된 7 내지 12개의 고리 원자, 또는 바이사이클로 [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로서 마련된 9 또는 10개의 고리 원자를 갖는다. 모노사이클릭 카보사이클의 예는 하기를 포함한다: 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 1-사이클로펜트-1-에닐, 1-사이클로펜트-2-에닐, 1-사이클로펜트-3-에닐, 사이클로헥실, 1-사이클로헥스-1-에닐, 1-사이클로헥스-2-에닐, 1-사이클로헥스-3-에닐, 사이클로헵틸, 및 사이클로옥틸.
"C3-C8 카보사이클"은 3-, 4-, 5-, 6-, 7- 또는 8-원 포화된 또는 불포화된 비-방향족 카보사이클릭 고리이다. 대표적인 C3-C8 카보사이클은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: -사이클로프로필, -사이클로부틸, -사이클로펜틸, -사이클로펜타디에닐, -사이클로헥실, -사이클로헥세닐, -1,3-사이클로헥사디에닐, -1,4-사이클로헥사디에닐, -사이클로헵틸, -1,3-사이클로헵타디에닐, -1,3,5-사이클로헵타트리에닐, -사이클로옥틸, 및 -사이클로옥타디에닐. C3-C8 카보사이클 그룹은 비치환되거나 하기를 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 그룹으로 치환될 수 있다: -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2 -NHC(O)R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -할로겐, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN; 여기서 각각의 R'은 H, -C1-C8 알킬 및 아릴로부터 독립적으로 선택된다.
"C3-C8 카보사이클로"는 상기에서 정의된 C3-C8 카보사이클 그룹을 의미하고, 여기서 카보사이클 그룹' 수소 원자 중 하나는 결합으로 치환된다.
"링커"는 항체를 약물 모이어티에 공유 결합하는 원자 사슬 또는 공유 결합을 포함하는 화학적 모이어티를 나타낸다. 다양한 구현예에서, 링커에는 2가 라디칼, 예컨대 알킬디일, 아릴디일, 헤테로아릴디일, 모이어티, 예컨대: -(CR2)nO(CR2)n-, 반복 단위의 알킬옥시(예를 들면 폴리에틸렌옥시, PEG, 폴리메틸렌옥시) 및 알킬아미노(예를 들면 폴리에틸렌아미노, Jeffamine™); 및 석시네이트, 석신아미드, 디글라이콜레이트, 말로네이트, 및 카프로아미드를 포함하는 이산 에스테르 및 아미드가 포함된다. 다양한 구현예에서, 링커는 하나 이상의 아미노산 잔기, 예컨대 발린, 페닐알라닌, 라이신, 및 호모라이신을 포함할 수 있다.
용어 "키랄"은 거울상 파트너의 비-겹침 특성을 갖는 분자를 나타내는 반면, 용어 "비키랄"은 이들의 거울상 파트너 상에 겹쳐 놓을 수 있는 분자를 나타낸다.
용어 "입체이성질체"는 동일한 화학적 구성을 갖지만 공간 내 원자 또는 그룹의 배열에 대해 상이한 화합물을 나타낸다.
"부분입체이성질체"는 2 이상의 키랄 중심을 갖고 그 분자가 서로 거울상이 아닌 입체이성질체를 나타낸다. 부분입체이성질체는 상이한 물리적 특성, 예를 들면 용융점, 비점, 스펙트럼 특성, 및 반응성을 갖는다. 부분입체이성질체의 혼합물은 고해상 분석 절차, 예컨대 전기영동 및 크로마토그래피 하에 분리될 수 있다.
"거울상이성질체"는 서로 겹칠 수 없는 거울상인 화합물의 두 입체이성질체를 나타낸다.
본원에서 사용된 입체화학적 정의 및 규약은 일반적으로 [S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; 및 Eliel, E. 및 Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (1994) John Wiley & Sons, Inc., New York]을 따른다. 많은 유기 화합물은 광학 활성 형태로 존재한다, 즉 이들은 평면-편광면을 회전시키는 능력을 갖는다. 광학 활성 화합물의 설명에서, 접두어 D 및 L, 또는 R 및 S는 그 키랄 중심(들)에 대한 분자의 절대 입체배치를 표시하기 위해 사용된다. 접두어 d 및 l 또는 (+) 및 (-)는 화합물에 의한 평면-편광의 회전 기호를 표시하기 위해 이용되며, (-) 또는 1은 화합물이 좌측회전성임을 의미한다. 접두어 (+) 또는 d를 갖는 화합물은 우측회전성이다. 주어진 화학 구조에 있어서, 이들 입체이성질체는 이들이 서로 거울상인 것을 제외하고 동일하다. 특정 입체이성질체는 또한 거울상이성질체로 불릴 수 있고, 그와 같은 이성질체의 혼합물은 종종 거울상이성질체 혼합물로 불린다. 거울상이성질체의 50:50 혼합물은 라세미 혼합물 또는 라세미체로 불리며, 화학 반응 또는 공정에서 입체선택 또는 입체특이성이 없는 경우 생길 수 있다. 용어들 "라세미 혼합물" 및 "라세미체"는 광학 활성이 없는, 두 거울상이성질체 종의 등몰 혼합물을 나타낸다.
"이탈 그룹"은 또 하나의 작용기에 의해 치환될 수 있는 작용기를 나타낸다. 특정 이탈 그룹은 당해기술에서 잘 알려져 있고, 그 예에는 비제한적으로 할라이드(예를 들면, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드), 메탄설포닐(메실), p-톨루엔설포닐(토실), 트리플루오로메틸설포닐(트리플레이트), 및 트리플루오로메틸설포네이트가 포함된다.
용어 "보호 그룹"은 화합물 상의 다른 작용기와 반응하면서, 특정 작용기를 차단하거나 보호하기 위해 통상적으로 이용되는 치환체를 나타낸다. 예를 들면, "아미노-보호 그룹"은 화합물에서 아미노 작용기를 차단하거나 보호하는 아미노 그룹에 부착된 치환체이다. 적합한 아미노-보호 그룹에는 비제한적으로 아세틸, 트리플루오로아세틸, t-부톡시카보닐(BOC), 벤질옥시카보닐(CBZ) 및 9-플루오레닐메틸렌옥시카보닐(Fmoc)이 포함된다. 보호 그룹 및 그것의 사용의 일반적인 설명에 대해서는 [T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991], 또는 이후 편집본을 참고하라.
당해분야의 숙련가에게 이해되는 바와 같이, 본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급에는 그 값 또는 파라미터 자체에 대한 구현예가 포함된다(그리고 이를 설명한다). 예를 들면, "약 X"를 언급하는 설명에는 "X"의 설명이 포함된다.
본원에 기재된 측면 및 구현예에는 측면 및 구현예로 "구성된" 및/또는 "본질적으로 구성된"이 포함되는 것으로 이해된다. 본원에서 사용된 바와 같이, 단수 형태에는 다르게 지시되지 않으면 복수의 참조물이 포함된다.
II. 조성물 및 방법
이중특이적 항체를 포함하는 FcRH5에 결합하는 항체 및 그와 같은 항체를 포함하는 면역접합체가 본원에 제공된다. 항체 및 면역접합체는, 예를 들면 FcRH5-양성 암의 진단 또는 치료를 위해 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
이론에 구애받고자 하지 않고, 본 발명의 항체에 대한 정확한 항원의 선택은 적어도 3가지 중요한 고려사항들에 의해 유도되었다. 먼저, 생성 치료제의 비-표적 분자에 대한 결합 및 이에 따른 그 유효성 감소를 배제하기 위해, FcRH5c 이외의 FcRH5 동형체, 예컨대 동형체 a 및 동형체 b와의 교차 반응성이 전혀 또는 거의 없는 것이 필요하였다. 도 1에 실증된 바와 같이, FcRH5의 도메인 9는 3가지 동형체 가운데 독특한 서열의 예이다. 다음으로, FcRH5 이외의 FcRH 패밀리 멤버, 예컨대 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및 FcRH4에 대한 교차-반응성이 전혀 또는 거의 없는 것이 필요하였다. 이것은 많은 FcRH 패밀리 멤버에서 마지막 Ig-유사 도메인의 일반적으로 고도로 보존된 성질로 인해 어렵다. 그러나 FcRH5 동형체 c 특이성에 대한 병렬적 필요성으로 인해, 마지막 Ig-유사 도메인에 결합하는 항체를 추구하였다. 마지막으로, 가까운 부근에서 큰 구조를 가져오는 치료 분자, 예컨대 이중특이적 항체 형식을 이용하는 T-세포 및 종양 세포에서 항체가 사용되기 위해, 세포막에 더 가까운 종양 에피토프가 더 효과적인 것으로 공지되어 있다(예를 들면, Bluemel 등. Cancer Immunol Immunother . (2010) 59:1197-1209 참고). 때때로 동력학 분리 이론으로 기재된 바와 같이, FcRH5의 도메인 9의 세포막 근위 위치는 상기 맥락에서 바람직한 항원 표적이다. 이들 및 아래에 상세히 기재된 바와 같은 고려사항들에 부합하기 위해, 본 발명의 항체의 특정 구현예가 개발되었다.
FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합하는 단리된 항-FcRH5 항체가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 Ig-유사 도메인 9를 포함한다. 일부 구현예에서, Ig-유사 도메인 9는 Ig-유사 C2-8형으로도 불린다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 아미노산 754-835를 포함한다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 아미노산 752-834를 포함한다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 아미노산 743-850을 포함한다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 아미노산 745-851을 포함한다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 N-말단 및/또는 C-말단 경계로부터의 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 중 임의의 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 임의의 약 750, 751, 752, 753, 또는 754 내지 임의의 약 830, 831, 832, 833, 834, 835, 또는 836 중 임의의 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c 및/또는 동형체 c-특이 영역에 ≤5 nM, 또는 ≤4 nM, 또는 ≤3 nM, 또는 ≤2 nM, 또는 ≤1 nM, 및 선택적으로 ≥ 0.0001 nM, 또는 ≥ 0.001 nM, 또는 ≥ 0.01 nM의 친화도로 결합한다.
임의 항체의 일부 구현예에서, 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 갖는다: a) 전장 인간 및 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있고(즉, 전장 인간 FcRH5에 결합하며 전장 사이노 FcRH5에 결합함), b) FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 유의미하게 교차 반응하지 않으며(즉, FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4에 유의미하게 결합하지 않음), c) 내인성 FcRH5에 결합하고, d) FcRH5a와 교차 반응하지 않으며(즉, FcRH5a에 유의미하게 결합하지 않음), e) FcRH5의 또 하나의 Ig-유사 도메인과 교차 반응하지 않는다(즉, FcRH5의 또 하나의 Ig-유사 도메인에 유의미하게 결합하지 않음). 결합력을 결정하는 방법은 당해기술에 공지되어 있고 아래에 기재된다.
일부 구현예에서, 하기를 포함하는 항체가 본원에서 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:38의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:86의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:74의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:98의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:111의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:110의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:111의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:110의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 1C8.1의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 1C8.1의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서, 하기를 포함하는 항체가 본원에서 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:99의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:113의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:112의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:135의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:134의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:113의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:112의 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:135의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:134의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 1G7.2의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 1G7.2의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 1G7.2’의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 1G7.2’의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH5a와 교차반응하지 않는다.
일부 구현예에서, 하기를 포함하는 항체가 본원에서 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:88의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:115의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:114의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:115의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:114의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 2H7.3의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 2H7.3의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차 반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서, 하기를 포함하는 항체가 본원에서 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:89의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:77의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:101의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:117의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:116의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:117의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:116의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 3A4.2의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 3A4.2의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서, 하기를 포함하는 항체가 본원에서 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:90의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:78의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:102의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:119의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:118의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:119의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:118의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 3B12.1.1의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 3B12.1.1의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH5a와 교차반응하지 않는다.
일부 구현예에서 하기를 포함하는 항체가 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:91의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:79의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:103의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:121의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:120의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:121의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:120의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 3C10의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 3C10의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서 하기를 포함하는 항체가 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:68의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:92의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:80의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:123의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:122의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:123의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:122의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 3F10의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 3F10의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH5a와 교차반응하지 않는다.
일부 구현예에서 하기를 포함하는 항체가 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:69의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:93의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:81의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:105의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:125의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:124의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:125의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:124의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 3G3의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 3G3의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH5a와 교차반응하지 않는다.
일부 구현예에서 하기를 포함하는 항체가 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:94의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:106의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:127의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호: 126의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:127의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:126의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 3G7.1.5의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 3G7.1.5의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서 하기를 포함하는 항체가 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:71의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:95의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:83의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:107의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 서열식별번호:129의 아미노산 서열 및/또는 에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열 서열식별번호:128의 아미노산 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:129의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:128의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 5A10.1.3의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 5A10.1.3의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서 하기를 포함하는 항체가 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:96의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:108의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:131의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:130의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:131의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:130의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 5F1.1.5의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 5F1.1.5의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH5a와 교차반응하지 않는다.
일부 구현예에서 하기를 포함하는 항체가 제공된다: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:49의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:97의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3. 일부 구현예에서, 상기 중쇄는 하기를 포함한다: 서열식별번호:61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:109의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:133의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:132의 아미노산 서열에 대한 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성 중 적어도 약 임의의 것을 갖는 VL 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열식별번호:133의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:132의 VL 서열. 항체의 어떤 것의 일부 구현예에서, 항체는 6D2의 6개의 HVR을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 6D2의 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역 (예를 들면, Ig-유사 도메인 9)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 전장 인간의 것이고 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차반응하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 내인성 FcRH5에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 B-세포에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유의미하게 NK 세포 및/또는 단핵구에 결합하지 않는다.
본원에서 제공된 추가 측면에서, 임의의 상기 구현예에 따른 항-FcRH5 항체는 키메라성, 인간화된 또는 인간 항체를 포함하는 단클론성 항체이다. 일 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 항체 단편, 예를 들면 Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 또 하나의 구현예에서, 항체는 실질적으로 전장 항체, 예를 들면 IgG1 항체 또는 본원에서 정의된 바와 같은 다른 항체 클래스 또는 아이소타입이다.
추가 측면에서, 본 발명은 본원에 제공된 항-FcRH5 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 제공한다. 특정 구현예에서, 서열식별번호:1의 아미노산 754-835으로부터, 이내의, 또는 이와 중첩되는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합하는 항체가 제공된다.
임의의 항-FcRH5 항체의 일부 구현예에서, FcRH5 항체, 특히 FcRH5 이중특이적(예를 들면, 항-CD3/항-FcRH5 이중특이적) 항체는 단독으로 또는 조합되어, HEK 세포주 분석(그 전문이 참고로 편입된 [James and Valle, Nature 487:64-69 (2012)]에 기재된 바와 같이 TCR 유발을 위해 필요한 신호전달 성분으로 재구성된 HEK 세포)에 기반한 특징을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 단독으로 또는 조합된 특징에는 종양 세포 간기/면역 시냅스, Lck-매개된 TCR 인산화, 인산화 상태 및 편재화를 포함하는 ZAP70 활성, 편재화 및 결합을 포함하는 CD58 활성, 편재화 및 결합을 포함하는 β2Ar 활성, 편재화 및 결합을 포함하는 CAAX 활성, 편재화를 포함하는 CD45 활성, 편재화를 포함하는 pMHC 활성, 및/또는 TCR 활성 및 유발 특징이 포함될 수 있다.
추가 측면에서, 임의의 상기 구현예에 따른 항-FcRH5 항체는 단독으로 또는 조합되어 아래 (a)-(e) 및/또는 섹션 1-7에 기재된 바와 같은 임의 특징을 편입할 수 있다.
(a) FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합함
항-FcRH5 항체가 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합하는지를 결정하는 방법은 당해기술에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체의 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 대한 결합은 N- 및 C-말단 결실을 갖는 FcRH5 폴리펩타이드를 293 세포 및/또는 SVT2 세포에서 발현시키고, 끝이 잘린 폴리펩타이드에 대한 항체의 실시예 결합에 기재된 바와 같이 FACS에 의해 평가하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 293 세포에서 발현된 전장 FcRH5에 대한 결합 대비 끝이 잘린 폴리펩타이드에 대한 항체 결합의 상당한 감소(≥ 70% 감소) 또는 제거는 항체가 끝이 잘린 폴리펩타이드에 결합하지 않음을 시사한다.
일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 Ig-유사 도메인 9를 포함한다. 일부 구현예에서, Ig-유사 도메인 9는 Ig-유사 C2-8형으로도 불린다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 아미노산 754-835를 포함한다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 아미노산 752-834를 포함한다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 아미노산 743-850을 포함한다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 아미노산 745-851을 포함한다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 N-말단 및/또는 C-말단 경계로부터 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개 중 임의의 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 임의의 약 750, 751, 752, 753, 또는 754 내지 임의의 약 830, 831, 832, 833, 834, 835, 또는 836의 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, FcRH5는 인간 FcRH5이다. 일부 구현예에서, FcRH5는 인간 FcRH5 또는 사이노몰구스 원숭이 FcRH5이다.
(b) 인간 및 사이노 FcRH5에 ≤5 nM, 또는 ≤4 nM, 또는 ≤3 nM, 또는 ≤2 nM, 또는 ≤1 nM, 및 선택적으로 ≥ 0.0001 nM, 또는 ≥ 0.001 nM, 또는 ≥ 0.01 nM의 친화도로 교차 반응함(결합함)
결합 친화도를 결정하는 방법은 당해기술에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 결합 친화도는, 예를 들면 실시예에 기재된 바와 같이, BIAcore® 분석, ELISA, Facs, 및 IHC에 따라 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 인간 및/또는 사이노 FcRH5에 약 ≤5 nM, 또는 ≤4 nM, 또는 ≤3 nM, 또는 ≤2 nM, 또는 ≤1 nM 중 임의의 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 인간 및/또는 사이노 FcRH5에 약 ≤5의 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 인간 및/또는 사이노 FcRH5에 약 ≤4 nM의 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 인간 및/또는 사이노 FcRH5에 약 ≤3 nM의 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 인간 및/또는 사이노 FcRH5에 약 ≤2 nM의 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, FcRH5는 인간 FcRH5이다. 일부 구현예에서, FcRH5는 사이노몰구스 원숭이 FcRH5이다.
(c) FcRH1 , FcRH2 , FcRH3 , 및/또는 FcRH4와 교차 반응하지 않음(결합하지 않음)
결합을 결정하는 방법은 당해기술에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 결합 친화도는, 예를 들면 실시예에 기재된 바와 같이, BIAcore® 분석, Facs, ELISA, 및 IHC에 따라 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5에 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4보다 약 2, 5, 10, 20, 50, 100, 500, 또는 1000-배 중 임의를 초과하여 더 큰 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, FcRH는 인간 FcRH이다.
(d) FcRH5a와 교차 반응하지 않음(결합하지 않음).
결합을 결정하는 방법은 당해기술에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 결합 친화도는, 예를 들면 실시예에 기재된 바와 같이, BIAcore® 분석, Facs, ELISA, 및 IHC에 따라 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c에 FcRH5a보다 약 2, 5, 10, 20, 50, 100, 500, 또는 1000-배 중 임의를 초과하여 더 큰 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, FcRH는 인간 FcRH이다.
(e) FcRH5의 또 하나의 Ig-유사 도메인과 교차 반응하지 않음(결합하지 않음)
결합을 결정하는 방법은 당해기술에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 결합 친화도는, 예를 들면 실시예에 기재된 바와 같이, BIAcore® 분석, Facs, ELISA, 및 IHC에 따라 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5의 Ig-유사 도메인 9에 FcRH5의 Ig-유사 도메인 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 및/또는 8 보다 약 2, 5, 10, 20, 50, 100, 500, 또는 1000-배 중 임의를 초과하여 더 큰 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, FcRH는 인간 FcRH이다. 일부 구현예에서, Ig-유사 도메인은 Ig-유사 도메인 1(서열식별번호:1의 aa 23-100), Ig-유사 도메인 2(서열식별번호:1의 aa 105-185), Ig-유사 도메인 3(서열식별번호:1의 aa 188-271), Ig-유사 도메인 4(서열식별번호:1의 287-373), Ig-유사 도메인 5(서열식별번호:1의 aa 380-466), Ig-유사 도메인 6(서열식별번호:1의 aa 490-555), Ig-유사 도메인 7(서열식별번호:1의 aa 568-652), Ig-유사 도메인 8(서열식별번호:1의 aa 658-731)이다.
결합 분석 및 기타 분석
일 측면에서, 항-FcRH5 항체는 그 항원 결합 활성에 대해 평가된다. 예를 들면 특정 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 세포 표면 상에 발현된 FcRH5에 결합하는 그 능력에 대해 평가된다. FACS 분석이 그와 같은 평가를 위해 사용될 수 있다.
예시적인 경쟁 분석에서, 고정된 FcRH5는 FcRH5에 결합하는 표지된 제1 항체 및 FcRH5로의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁하는 그 능력에 대해 평가되고 있는, 표지되지 않은 제2 항체를 포함하는 용액 중에 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 FcRH5는 표지된 제1 항체를 포함하지만 표지되지 않은 제2 항체는 포함하지 않는 용액 중에 인큐베이션된다. 제1 항체의 FcRH5에 대한 결합을 허용하는 조건 하에 인큐베이션 후, 과잉의 결합되지 않은 항체가 제거되고, 고정된 FcRH5와 연관된 표지의 양이 측정된다. 고정된 FcRH5와 연관된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해 평가 샘플에서 실질적으로 감소된 경우, 이는 제2 항체가 FcRH5로의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁하고 있음을 시사한다. 특정 구현예에서, 고정된 FcRH5는 세포 표면 상에 또는 그 표면 상에 FcRH5를 발현하는 세포에서 수득된 막 제조물 중에 존재한다.
일 측면에서, 정제된 항-FcRH5 항체는 비제한적으로 N-말단 서열분석, 아미노산 분석, 비-변성 크기 배제 고압 액체 크로마토그래피(HPLC), 질량 분광분석법, 이온 교환 크로마토그래피 및 파파인 소화를 포함하는 일련의 분석에 의해 추가 분석될 수 있다. 일 구현예에서, 생체내 항체 반감기가 중요하지만 특정 효과기 기능(예컨대 보체 및 ADCC)은 불필요하거나 유해한 많은 적용을 위해 바람직한 후보가 되도록 하는, 전부가 아닌 일부 효과기 기능을 보유하는 변경된 항체가 고려된다. 특정 구현예에서, 원하는 특성만 유지되는 것을 확인하기 위해 항체의 Fc 활성이 측정된다. CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 분석이 수행될 수 있다. 예를 들면, Fc 수용체(FcR) 결합 분석은 항체에 FcγR 결합이 없지만(따라서 ADCC 활성이 없을 수 있지만), FcRn 결합 능력을 보유함을 확인하기 위해 수행될 수 있다. ADCC를 매개하기 위한 1차 세포인 NK 세포는 Fc(RIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 Fc(RI, Fc(RII 및 Fc(RIII을 발현한다. 조혈 세포 상의 FcR 발현은 [Ravetch 및 Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92(1991)]의 464페이지, 표 3에 요약된다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 분석의 예는 미국 특허 번호 5,500,362 또는 5,821,337에 기재된다. 그와 같은 분석에 유용한 효과기 세포에는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포가 포함된다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내, 예를 들면 [Clynes 등 PNAS(USA) 95:652-656(1998)]에 개시된 동물 모델에서 평가될 수 있다. 항체가 C1q에 결합할 수 없고 이에 따라 CDC 활성이 없음을 확인하기 위해 C1q 결합 분석이 또한 수행될 수 있다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들면 [Gazzano-Santoro 등, J. Immunol. Methods 202:163(1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 분석이 수행될 수 있다. FcRn 결합 및 생체내 제거/반감기 결정도 당해분야에서 공지된 방법을 이용해서 수행될 수 있다.
1. 항체 친화도
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 ≤1 μM, ≤100 nM, ≤10 nM, ≤1 nM, ≤0.1 nM, ≤0.01 nM, 또는 ≤0.001 nM의 해리 상수(Kd)를 가지며, 선택적으로 ≥ 10-13 M 이다(예를 들면 10-8 M 이하, 예를 들면 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들면 10-9 M 내지 10-13 M).
일부 구현예에서, Kd는 하기 분석에 기재된 바와 같이 관심 항체의 Fab 버전 및 그것의 항원으로 수행된 방사성 표지된 항원 결합 분석(RIA)에 의해 측정될 수 있다. 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화도는 표지되지 않은 항원의 적정 시리즈의 존재 하에 최소 농도의 (125I)-표지된 항원으로 Fab를 평형화한 뒤, 결합된 항원을 항-Fab 항체-코팅된 플레이트로 포획하여 측정될 수 있다(예를 들면, Chen 등, J. Mol . Biol . 293:865-881(1999) 참고). 분석을 위한 조건을 확립하기 위해, MICROTITER® 멀티-웰 플레이트(Thermo Scientific)를 50 mM 나트륨 카보네이트(pH 9.6) 중 5 ㎍/ml의 포획 항-Fab 항체(Cappel Labs)로 밤새 코팅한 뒤 실온(대략 23℃)에서 2 내지 5 시간 동안 PBS 중 2%(w/v) 소 혈청 알부민으로 차단할 수 있다. 비-흡착성 플레이트(Nunc #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원을 관심 Fab의 연속 희석물과 혼합한다(예를 들면, [Presta 등, Cancer Res. 57:4593-4599(1997)]에서의 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일관되게). 이어서 관심 Fab를 밤새 인큐베이션한다; 그러나, 평형에 도달됨을 확실히 하기 위해, 더 긴 기간(예를 들면 약 65 시간) 동안 인큐베이션을 계속할 수 있다. 그 후에, 혼합물을 실온에서의 인큐베이션(예를 들면 1 시간 동안)을 위해 포획 플레이트로 옮길 수 있다. 이어서 용액을 제거하고, 플레이트를 PBS 중 0.1% 폴리소르베이트 20(TWEEN-20®)으로 8회 세정할 수 있다. 플레이트가 건조되면, 150 ㎕/웰의 신틸레이팅제(MICROCINT-20™; Packard)를 첨가할 수 있고, 플레이트를 10 분 동안 TOPCOUNT™ 감마 계수기(Packard) 상에서 계수할 수 있다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각각의 Fab의 농도를 경쟁 결합 분석에서 사용하기 위해 선택할 수 있다.
또 하나의 구현예에 따르면, Kd는 ~10 반응 단위(RU)에서 고정된 항원 CM5 칩으로 25℃에서 BIACORE®-2000 또는 BIACORE®-3000(BIACORE, Inc., Piscataway, NJ)을 이용한 표면 플라즈몬 공명 분석을 이용해서 측정된다. 간단히, 카복시메틸화된 덱스트란 바이오센서 칩(CM5, BIACORE, Inc.)은 공급자의 설명서에 따라 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)-카보디이미드 하이드로클로라이드(EDC) 및 N-하이드록시석신이미드(NHS)로 활성화될 수 있다. 항원은 5 ㎕/분의 유속으로 주사하기 전에 10 mM 나트륨 아세테이트, pH 4.8로 5 ㎍/ml(~0.2 μM)로 희석하여 대략 10 반응 단위(RU)의 커플링된 단백질을 수득할 수 있다. 항원 주사 후, 1 M 에탄올아민을 주사하여 반응하지 않은 그룹을 차단할 수 있다. 동력학 측정을 위해, Fab의 2-배 연속 희석물(0.78 nM 내지 500 nM)을 대략 25 ㎕/분의 유속으로 25℃에서 0.05% 폴리소르베이트 20(TWEEN-20™) 계면활성제를 포함하는 PBS(PBST) 중에 주사할 수 있다. 결합 속도(kon) 및 해리 속도(koff)는 연합 및 해리 센서그램을 동시에 핏팅시켜 단순 1 대 1 Langmuir 결합 모델(BIACORE® 평가 소프트웨어 버전 3.2)을 이용하여 계산될 수 있다. 평형 해리 상수(Kd)는 비 koff/kon로 계산될 수 있다. 예를 들면, [Chen 등, J. Mol . Biol . 293:865-881(1999)]를 참고하라. 상기 표면 플라즈몬 공명 분석에 의해 온-율이 106 M- 1 s- 1를 초과하면, 온-율은 분광기, 예컨대 정지-유동 구비된 분광측정기(Aviv Instruments) 또는 교반된 큐벳을 포함하는 8000-시리즈 SLM-AMINCO™ 분광측정기(ThermoSpectronic)에서 측정되는 증가하는 농도의 항원의 존재 하에, PBS, pH 7.2 중 20 nM 항-항원 항체(Fab 형태)의 25℃에서의 형광 방출 세기 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술(여기 = 295 nm; 방출 = 340 nm, 16 nm 대역통과)을 이용하여 결정될 수 있다.
2. 항체 단편
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편이다. 항체 단편에는 비제한적으로 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편, 및 아래에 기재된 다른 단편이 포함된다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, [Hudson 등 Nat. Med . 9:129-134(2003)]을 참고하라. scFv 단편의 검토를 위해, 예를 들면 [Pluckthuen, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)]을 참고하라; 또한 WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5,571,894 및 5,587,458을 참고하라. 회수 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하며 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 논의를 위해서는 미국 특허 번호 5,869,046을 참고하라.
디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 두 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들면, [EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson 등, Nat. Med . 9:129-134(2003); 및 Hollinger 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90: 6444-6448(1993)]을 참고하라. 트리아바디 및 테트라바디도 [Hudson 등, Nat. Med . 9:129-134(2003)]에 기재된다.
단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다(Domantis, Inc., Waltham, MA; 예를 들면, 미국 특허 번호 6,248,516 B1 참고).
항체 단편은 비제한적으로 온전한 항체의 단백분해 소화뿐만 아니라 본원에 기재된 바와 같이 재조합 숙주 세포(예를 들면 대장균 또는 파지)에 의한 생산을 포함하는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
3. 키메라성 및 인간화된 항체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 키메라성 항체이다. 특정 키메라성 항체는, 예를 들면 [미국 특허 번호 4,816,567; 및 Morrison 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 81:6851-6855(1984)]에 기재된다. 일 예에서, 키메라성 항체는 비-인간 가변 영역(예를 들면, 마우스, 랫트, 햄스터, 토끼, 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유도된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가 예에서, 키메라성 항체는 클래스 또는 서브클래스가 모 항체의 것으로부터 변화된 "클래스 스위칭된" 항체이다. 키메라성 항체에는 이들의 항원-결합 단편이 포함된다
특정 구현예에서, 키메라성 항체는 인간화된 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 모계 비-인간 항체의 특이성 및 친화도를 보유하면서 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화된다. 일반적으로, 인간화된 항체는 HVR, 예를 들면 CDR(또는 그것의 일부)이 비-인간 항체로부터 유도되고, FR(또는 그것의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유도되는 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화된 항체는 또한 선택적으로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 구현예에서, 인간화된 항체 내의 일부 FR 잔기는, 예를 들면 항체 특이성 또는 친화도를 복원하거나 개선하기 위해, 비-인간 항체(예를 들면, HVR 잔기가 유도되는 항체)로부터의 대응 잔기로 치환된다.
인간화된 항체 및 이들의 제조 방법은, 예를 들면 [Almagro 및 Fransson, Front. Biosci . 13:1619-1633(2008)]에서 검토되며, 예를 들면 [Riechmann 등, Nature 332:323-329(1988); Queen 등, Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 86:10029-10033(1989); 미국 특허 번호 5, 821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; Kashmiri 등, Methods 36:25-34(2005)(SDR(a-CDR) 그라프팅을 설명함); Padlan, Mol . Immunol . 28:489-498(1991)("재표면화"를 설명함); Dall'Acqua 등, Methods 36:43-60(2005)("FR 셔플링"을 설명함); 및 Osbourn 등, Methods 36:61-68(2005) 및 Klimka 등, Br. J. Cancer, 83:252-260(2000)(FR 셔플링에 대한 "유도된 선택" 접근법을 설명함)]에 추가로 기재된다.
인간화를 위해 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역에는 비제한적으로 "최적-핏팅" 방법을 이용하여 선택된 프레임워크 영역(예를 들면, Sims 등 J. Immunol . 151:2296(1993) 참고); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정 하위그룹의 인간 항체의 공통 서열로부터 유도된 프레임워크 영역(예를 들면, Carter 등 Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 89:4285(1992); 및 Presta 등 J. Immunol ., 151:2623(1993) 참고); 인간 성숙(체세포적으로 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역(예를 들면, Almagro 및 Fransson, Front. Biosci . 13:1619-1633(2008) 참고); 스크리닝 FR 라이브러리로부터 유도된 프레임워크 영역(예를 들면, Baca 등, J. Biol . Chem . 272:10678-10684(1997) 및 Rosok 등, J. Biol . Chem . 271:22611-22618(1996) 참고)가 포함된다.
4. 인간 항체
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당해기술에 공지된 다양한 기술을 이용해서 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 [van Dijk 및 van de Winkel, Curr . Opin . Pharmacol . 5: 368-74(2001) 및 Lonberg, Curr . Opin . Immunol. 20:450-459(2008)]에 기재된다.
인간 항체는 항원 유발접종에 대해 반응하여 온전한 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 포함하는 온전한 항체를 생산하도록 개질된 트랜스제닉 동물에 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 그와 같은 동물은 전형적으로 인간 면역글로불린 유전자위의 전부 또는 일부를 함유하며, 이는 내인성 면역글로불린 유전자위를 대체하거나 염색체외로 존재하거나 동물의 염색체 내로 무작위로 통합된다. 그와 같은 트랜스제닉 마우스에서, 내인성 면역글로불린 유전자위는 일반적으로 불활성화되었다. 트랜스제닉 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토를 위해, [Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125(2005)]를 참고하라. 또한, 예를 들면 XENOMOUSE™ 기술을 설명하는 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584; HuMAB® 기술을 설명하는 미국 특허 번호 5,770,429; K-M MOUSE® 기술을 설명하는 미국 특허 번호 7,041,870, 및 VELOCIMOUSE® 기술을 설명하는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900을 참고하라). 그와 같은 동물에 의해 산출된 온전한 항체로부터의 인간 가변 영역은, 예를 들면 상이한 인간 불변 영역과의 조합에 의해 추가로 개질될 수 있다.
인간 항체는 또한 하이브리도마-기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 단클론성 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수 세포주가 기재된다(예를 들면, Kozbor J. Immunol ., 133: 3001 (1984); Brodeur 등, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner 등, J. Immunol., 147: 86 (1991) 참고). 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 산출된 인간 항체도 [Li 등, Proc . Natl . Acad . Sci. USA, 103:3557-3562(2006)]에 기재된다. 추가의 방법에는, 예를 들면 [미국 특허 번호 7,189,826(하이브리도마 세포주로부터 단클론성 인간 IgM 항체의 생산을 설명함) 및 Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268(2006)(인간-인간 하이브리도마를 설명함)]에 기재된 것들이 포함된다. 인간 하이브리도마 기술(Trioma 기술)은 또한 [Vollmers 및 Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers 및 Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)]에 기재된다.
인간 항체는 또한 인간-유도된 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리함으로써 산출될 수 있다. 이어서 그와 같은 가변 도메인 서열은 원하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기술이 아래에 기재된다.
5. 라이브러리-유도된 항체
본원에 제공된 항체는 원하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대해 조합 라이브러리를 스크리닝함으로써 단리될 수 있다. 예를 들면, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고, 원하는 결합 특성을 보유하는 항체에 대해 그와 같은 라이브러리를 스크리닝하기 위한 다양한 방법이 당해기술에 공지되어 있다. 그와 같은 방법은, 예를 들면 [Hoogenboom 등, Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien 등, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)]에서 검토되며, 예를 들면 [McCafferty 등, Nature 348:552-554; Clackson 등, Nature 352: 624-628 (1991); Marks 등, J. Mol. Biol . 222: 581-597 (1992); Marks 및 Bradbury, Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu 등, J. Mol . Biol . 338(2): 299-310 (2004); Lee 등, J. Mol . Biol . 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee 등, J. Immunol . Methods 284(1-2): 119-132(2004)]에서 추가 기재된다.
특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자 레퍼토리는 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)에 의해 별도로 클로닝되고 파지 라이브러리에서 무작위로 재조합되며, 이어서 [Winter 등, Ann. Rev. Immunol ., 12: 433-455(1994)]에 기재된 바와 같이 항원-결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 전형적으로 항체 단편을 단일-사슬 Fv(scFv) 단편으로 또는 Fab 단편으로 디스플레이한다. 면역화된 원천으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축할 필요성 없이 면역원에 대해 고-친화도 항체를 제공한다. 대안적으로, 미처리(naive) 레퍼토리가 클로닝되어(예를 들면, 인간으로부터) [Griffiths 등, EMBO J, 12: 725-734(1993)]에 기재된 바와 같이 임의의 면역화 없이 광범위한 비-자기 및 또한 자기 항원에 대한 항체의 단일 원천을 제공할 수 있다. 마지막으로, 미처리 라이브러리는 또한 [Hoogenboom 및 Winter, J. Mol . Biol ., 227: 381-388(1992)]에 기재된 바와 같이 줄기 세포로부터 재배열되지 않은 V-유전자 분절을 클로닝하고, 고가변 CDR3 영역을 인코딩하고 시험관내 재배열을 달성하는 랜덤 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 이용하여 합성으로 제조될 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 설명하는 특허 공보에는, 예를 들면 하기를 포함한다: 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공보 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360. 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체 또는 항체 단편은 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
6. 다중특이적 항체
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 다중특이적 항체, 예를 들면 이중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 부위에 대한 결합 특이성을 갖는 단클론성 항체이다. 특정 구현예에서, 하나의 결합 특이성은 FcRH5에 대한 것이며, 다른 것은 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 특정 구현예에서, 하나의 결합 특이성은 FcRH5에 대한 것이고 다른 것은 CD3에 대한 것이다. 예를 들면, 미국 특허 번호 5,821,337을 참고하라. 특정 구현예에서, 이중특이적 항체는 FcRH5의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 FcRH5을 발현하는 세포에 세포독성 제제를 편재화하기 위해 사용될 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로 제조될 수 있다.
일부 구현예에서, FcRH5 항체는 FcRH5 이중특이적 항체이다. 이중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 예시적인 이중특이적 항체는 본원에 기재된 바와 같이 FcRH5 단백질의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 다른 그와 같은 항체는 FcRH5 결합 부위를 또 하나의 단백질에 대한 결합 부위와 조합할 수 있다. 대안적으로, FcRH5-발현 세포에 세포성 방어 메커니즘을 집중시키고 편재화하기 위해 항-FcRH5 팔이 백혈구 상의 유발 분자, 예컨대 T-세포 수용체 분자(예를 들면 CD3), 또는 IgG에 대한 Fc 수용체(FcγR), 예컨대 FcγRI(CD64), FcγRII(CD32) 및 FcγRIII(CD16)에 결합하는 팔과 조합될 수 있다. 이중특이적 항체는 또한 FcRH5를 발현하는 세포에 세포독성 제제를 편재화하기 위해 사용될 수 있다. 이들 항체는 FcRH5-결합 팔 및 세포독성 제제(예를 들면, 사포린, 항-인터페론 α 빈카 알카로이드, 리신 A 사슬, 메토트렉세이트 또는 방사성 동위원소 합텐)에 결합하는 팔을 보유한다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편(예를 들면, F(ab')2 이중특이적 항체)으로 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
일부 구현예에서, FcRH5 이중특이적 항체는 제1 팔(여기서 제1 팔은 FcRH5에 결합함) 및 제2 팔(여기서 제2 팔은 Fc에 결합함)을 포함한다. FcRH5 이중특이적 항체의 제2 팔은 당해기술에 공지된 임의의 항-Fc 항체일 수 있다. 예를 들면, WO 96/16673은 이중특이적 항-ErbB2/항-FcγRIII 항체를 기재하며, 미국 특허 번호 5,837,234는 이중특이적 항-ErbB2/항-FcγRI 항체를 개시한다. 이중특이적 항-ErbB2/Fcα 항체를 WO98/02463에 나타낸다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
일부 구현예에서, FcRH5 이중특이적 항체는 제1 팔(여기서 제1 팔은 FcRH5에 결합함) 및 제2 팔(여기서 제2 팔은 CD3에 결합함)을 포함한다. FcRH5 이중특이적 항체의 제2 팔은 당해기술에 공지된 임의의 항-CD3 항체일 수 있다. 미국 특허 번호 5,821,337 및 6,407,213은 이중특이적 항-ErbB2/항-CD3 항체를 교시한다. CD3 항원 상의 에피토프 및 제2 에피토프에 결합하는 추가의 이중특이적 항체는 기재되어 있다. 예를 들면, 그 전문이 참고로 편입된 미국 특허 번호 5,078,998(항-CD3/종양 세포 항원); 미국 특허 번호 5,601,819(항-CD3/IL-2R; 항-CD3/CD28; 항-CD3/CD45); 미국 특허 번호 6,129,914(항-CD3/악성 B-세포 항원); 미국 특허 번호 7,112,324(항-CD3/CD19); 미국 특허 번호 6,723,538(항-CD3/CCR5); 미국 특허 번호 7,235,641(항-CD3/EpCAM); 미국 특허 번호 7,262,276(항-CD3/난소 종양 항원); 및 미국 특허 번호 5,731,168(항-CD3/CD4IgG)을 참고하라. 일부 구현예에서, 제2 팔의 항-CD3 항체는 그 전문이 참고로 편입된 WO 2005/118635, WO2007/042261, WO2008/119567, US5929212, US6750325, US6491916, US7994289, US7993641, US6706265, US5585097, US5968509, US5932448, US6129914, US7381803, US5834597, 및 US7862813 중 임의 하나에 기재된 항체이다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
다중특이적 항체의 제조 기술에는 비제한적으로 상이한 특이성을 갖는 두 면역글로불린 중쇄-경쇄 페어의 재조합 공-발현(Milstein 및 Cuello, Nature 305: 537(1983)), WO 93/08829, 및 Traunecker 등, EMBO J. 10: 3655(1991) 참고), 및 "홀-내-손잡이(knob-in-hole)" 조작(예를 들면, 미국 특허 번호 5,731,168 참고)이 포함된다. 다중-특이적 항체는 또한 항체 Fc-이종이량체 분자를 제조하기 위한 정전 스티어링 효과 조작(WO 2009/089004A1); 2개 이상 항체 또는 단편의 가교(예를 들면, 미국 특허 번호 4,676,980, 및 Brennan 등, Science, 229: 81(1985) 참고); 이중특이적 항체를 생산하기 위한 류신 지퍼의 이용(예를 들면, Kostelny 등, J. Immunol ., 148(5):1547-1553(1992) 참고); 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 "디아바디" 기술의 이용(예를 들면, Hollinger 등, Proc. Natl . Acad . Sci . USA, 90:6444-6448(1993) 참고); 및 단일-사슬 Fv(sFv) 이량체의 이용(예를 들면 Gruber 등, J. Immunol ., 152:5368(1994) 참고); 및 예를 들면 [Tutt 등 J. Immunol . 147: 60(1991)]에 기재된 바와 같은 삼중특이적 항체의 제조에 의해 제조될 수 있다.
"옥토푸스(Octopus) 항체"를 포함하는 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 포함하는 조작된 항체도 본원에 포함된다(예를 들면, US 2006/0025576A1 참고).
본원에서의 항체 또는 단편에는 또 다른 상이한 항원뿐만 아니라 FcRH5에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"가 또한 포함된다(예를 들면, US 2008/0069820 참고).
상이한 접근법에 따르면, 원하는 결합 특이성(항체-항원 조합 부위)을 갖는 항체 가변 도메인이 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 바람직하게는 융합은 적어도 일부 힌지, CH2, 및 CH3 영역을 포함하는, Ig 중쇄 불변 도메인과 수행된다. 적어도 하나의 융합에 존재하는, 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중쇄 불변 영역(CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합, 및 원한다면 면역글로불린 경쇄를 인코딩하는 DNA가 별도의 발현 벡터 내로 삽입되며, 적합한 숙주 세포 내로 공-형질감염된다. 이는 구축에 사용된 동일하지 않은 비의 3 폴리펩타이드 사슬이 최적 수율의 원하는 이중특이적 항체를 제공하는 구현예에서, 3 폴리펩타이드 단편의 상호 비율 조정에 더 큰 유연성을 제공한다. 그러나 동일한 비의 적어도 2 폴리펩타이드 사슬의 발현이 고수율을 일으키는 경우 또는 그 비가 원하는 사슬 조합의 수율에 유의미한 효과를 갖지 않는 경우, 2개 또는 전체 3개의 폴리펩타이드 사슬에 대한 코딩 서열을 단일 발현 벡터 내로 삽입하는 것이 가능하다.
일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 하나의 팔에는 제1 결합 특이성을 갖는 하이브리드 면역글로불린 중쇄, 및 다른 팔에는 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 페어(제2 결합 특이성을 제공함)로 이루어진다. 상기 비대칭 구조는 이중특이적 분자의 이분의 일에서만 존재하는 면역글로불린 경쇄가 손쉬운 분리 방식을 제공하므로, 원치 않는 면역글로불린 사슬 조합으로부터 원하는 이중특이적 화합물의 분리를 촉진하는 것으로 나타났다. 상기 접근법은 WO 94/04690에 개시된다. 이중특이적 항체의 생성을 위한 추가 세부사항에 대해서는, 예를 들면 [Suresh 등, Methods in Enzymology 121:210 (1986)]을 참고하라.
미국 특허 번호 5,731,168에 기재된 또 하나의 접근법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자 간 계면은 재조합 세포 배양에서 회수되는 이종이량체의 백분율을 최대화하도록 조작될 수 있다. 바람직한 계면은 적어도 일부 CH3 도메인을 포함한다. 상기 방법에서, 제1 항체 분자의 계면으로부터의 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄는 더 큰 측쇄(예를 들면, 티로신 또는 트립토판)로 대체된다. 큰 측쇄(들)와 동일하거나 유사한 크기의 보상 "공동"은 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 것(예를 들면, 알라닌 또는 트레오닌)으로 대체하여 제2 항체 분자의 계면 상에 생성된다. 이는 다른 원치 않는 최종 산물, 예컨대 동종이량체에 비해 이종이량체의 수율을 증가시키는 기전을 제공한다. 상기 접근법에 따라 생산된 이중특이적 항체는 본원에서 "공동-내-융기" 항체로 불린다.
이중특이적 항체에는 가교결합된 또는 "이종접합체" 항체가 포함된다. 예를 들면, 이종접합체 내 항체 중 하나는 아비딘에, 다른 하나는 바이오틴에 커플링될 수 있다. 그와 같은 항체는, 예를 들면 면역계 세포를 원치 않는 세포로 표적화하기 위해(미국 특허 번호 4,676,980), 그리고 HIV 감염의 치료를 위해(WO 91/00360, WO 92/200373, 및 EP 03089) 제안되었다. 이종접합체 항체는 임의의 편리한 가교결합 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 적합한 가교결합제는 당해기술에서 잘 알려져 있고, 수많은 가교결합 기술과 함께 미국 특허 번호 4,676,980에 개시되어 있다.
항체 단편으로부터 이중특이적 항체를 산출하기 위한 기술도 문헌에 기재되어 있다. 예를 들면, 이중특이적 항체는 화학적 연결을 이용해서 제조될 수 있다. [Brennan 등, Science 229:81(1985)]에는 온전한 항체가 단백분해로 절단되어 F(ab')2 단편을 생성하는 절차가 기재된다. 이들 단편은 근처 디티올을 안정화하고 분자간 디설파이드 형성을 방지하기 위해 디티올 착화제, 나트륨 아르세나이트의 존재 하에 환원된다. 이어서 산출된 Fab' 단편이 티오니트로벤조에이트(TNB) 유도체로 전환된다. 그 뒤, Fab'-TNB 유도체 중 하나는 머캅토에틸아민을 이용한 환원에 의해 Fab'-티올로 재전환되고 등몰 양의 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합되어 이중특이적 항체를 형성한다. 생산된 이중특이적 항체는 효소의 선택적 고정화를 위한 제제로 사용될 수 있다.
대장균으로부터의 Fab'-SH 단편은 직접적으로 회수되고 화학적으로 커플링되어 이중특이적 항체를 형성할 수 있다. [Shalaby 등, J. Exp . Med. 175: 217-225(1992)]에는 완전 인간화된 이중특이적 항체 F(ab')2 분자의 생산이 기재된다. 각각의 Fab' 단편은 대장균으로부터 별도로 분비되고 시험관내 유도된 화학적 커플링을 거쳐 이중특이적 항체를 형성하였다. 이에 따라 형성된 이중특이적 항체는 ErbB2 수용체를 과발현하는 세포 및 정상 인간 T 세포에 결합할 수 있을 뿐만 아니라 인간 유방 종양 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용해 활성을 유발할 수 있었다.
직접적으로 재조합 세포 배양으로부터 이중특이적 항체 단편을 제조하고 단리하기 위한 다양한 기술도 기재되어 있다. 예를 들면, 이중특이적 항체는 류신 지퍼를 이용해서 생산되었다[Kostelny 등, J. Immunol. 148(5):1547-1553(1992)]. Fos 및 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩타이드는 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결되었다. 항체 동종이량체는 힌지 영역에서 환원되어 모노머를 형성하고, 그 다음 재산화되어 항체 이종이량체를 형성하였다. 상기 방법은 또한 항체 동종이량체의 생산을 위해 이용될 수 있다. [Hollinger 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90:6444-6448(1993)]에 기재된 "디아바디" 기술은 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 대안적인 기전을 제공하였다. 단편은 동일한 사슬 상의 두 도메인 간 짝짓기를 허용하기에는 너무 짧은 링커에 의해 VL에 연결된 VH를 포함한다. 따라서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 또 하나의 단편의 상보적 VL 및 V 도메인과 짝짓기를 하도록 유도됨으로써 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일-사슬 Fv(sFv) 이량체를 사용하여 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 또 하나의 전략도 보고되었다. [Gruber 등, J. Immunol., 152:5368(1994)]를 참고하라.
2개 초과의 결합가를 갖는 항체가 고려된다. 예를 들면, 삼중특이적 항체가 제조될 수 있다[Tutt 등, J. Immunol. 147:60(1991)].
8. 항체 변이체
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들면, 항체의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열 내로 적절한 변형을 도입하여 또는 펩타이드 합성에 의해 제조될 수 있다. 그와 같은 변형에는, 예를 들면 항체의 아미노산 서열 내 잔기로부터의 결실, 및/또는 내로의 삽입 및/또는 그의 치환이 포함된다. 임의 조합의 결실, 삽입, 및 치환은 최종 구축물이 원하는 특성, 예를 들면 항원-결합을 보유하는 한, 최종 구축물에 생기도록 제조될 수 있다.
a) 치환, 삽입, 및 결실 변이체
특정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 치환 돌연변이유발을 위한 관심 부위에는 HVR 및 FR이 포함된다. 보존적 치환을 "바람직한 치환"이라는 제목 하에 표 1에 나타낸다. 보다 실질적인 변화는 "예시적인 치환"이라는 제목 하에 표 1에 그리고 아미노산 측쇄 클래스에 대해 아래에 추가 기재된 바와 같이 제공된다. 아미노산 치환은 원하는 활성, 예를 들면 유지된/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC를 위해 스크리닝된 관심 항체 및 생성물 내에 도입될 수 있다.
표 1
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아미노산은 공통 측쇄 특성에 따라 그룹화될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 사슬 방향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환은 또 하나의 클래스에 대한 이들 클래스 중 한 멤버의 교체를 수반할 것이다.
하나의 유형의 치환 변이체에는 모 항체(예를 들면 인간화된 또는 인간 항체)의 하나 이상의 초가변 영역 잔기의 치환이 관여된다. 일반적으로, 추가 연구를 위해 선택된 생성 변이체(들)는 모 항체에 비해 특정 생물학적 특성의 변형(예를 들면, 개선)(예를 들면, 증가된 친화도, 감소된 면역원성)을 가질 것이고/것이거나 모 항체의 실질적으로 유지된 특정 생물학적 특성을 가질 것이다. 예시적인 치환 변이체는 친화도 성숙된 항체이며, 이는, 예를 들면 파지 디스플레이-기반 친화도 성숙 기술, 예컨대 본 명세서에서 기재된 것을 이용하여 편리하게 산출될 수 있다. 간단히, 하나 이상의 HVR 잔기가 돌연변이되고, 변이체 항체가 파지 상에 디스플레이되고 특정 생물학적 활성(예를 들면 결합 친화도)에 대해 스크리닝된다.
변경(예를 들면, 치환)은, 예를 들면 항체 친화도를 개선하기 위해 HVR에서 수행될 수 있다. 그와 같은 변경은 HVR "핫스팟", 즉 체세포 성숙 공정 동안 높은 빈도로 돌연변이를 거치는 코돈에 의해 인코딩된 잔기(예를 들면, Chowdhury, Methods Mol . Biol . 207:179-196(2008) 참고) 및/또는 SDR(a-CDR)에서 수행될 수 있고, 생성 변이체 VH 또는 VL이 결합 친화도에 대해 평가된다. 2차 라이브러리 구축 및 재선택에 의한 친화도 성숙은, 예를 들면 [Hoogenboom 등, Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien 등, ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001))]에 기재된다. 친화도 성숙의 일부 구현예에서, 임의의 다양한 방법(예를 들면, 오류-경향성 PCR, 사슬 셔플링, 또는 올리고뉴클레오타이드-유도된 돌연변이유발)에 의해 성숙을 위해 선택된 가변 유전자 내로 다양성이 도입된다. 이어서 2차 라이브러리가 생성된다. 그 뒤 원하는 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체를 확인하기 위해 라이브러리가 스크리닝된다. 다양성을 도입하기 위한 또 하나의 방법에는 HVR-유도된 접근법이 관여되며, 여기서 몇 개의 HVR 잔기(예를 들면, 한 번에 4-6개 잔기)가 랜덤화된다. 항원 결합에 관여된 HVR 잔기는, 예를 들면 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 이용하여 구체적으로 확인될 수 있다. CDR-H3 및 CDR-L3이 특히 종종 표적화된다.
특정 구현예에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 그와 같은 변경이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 하나 이상의 HVR 내에서 일어날 수 있다. 예를 들면, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경(예를 들면, 본원에서 제공된 바와 같은 보존적 치환)이 HVR에서 수행될 수 있다. 그와 같은 변경은 HVR "핫스팟" 또는 SDR 외부에 있을 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 구현예에서, 각각의 HVR은 변경되지 않거나, 또는 1, 2 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.
돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역 확인에 유용한 방법은 [Cunningham 및 Wells (1989) Science, 244:1081-1085]에 기재된 바와 같은 소위 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"이다. 상기 방법에서, 잔기 또는 표적 잔기 그룹(예를 들면, 하전된 잔기, 예컨대 arg, asp, his, lys, 및 glu)이 확인되고 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받는지를 결정하기 위해 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(예를 들면, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체된다. 추가 치환은 치환을 개시하기 위해 기능적 민감성을 나타내는 아미노산 위치에서 도입될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 항체 및 항원 간 접촉점을 확인하기 위해 항원-항체 복합체의 결정 구조가 사용된다. 그와 같은 접촉 잔기 및 인접하는 잔기가 치환을 위한 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이체는 이들이 원하는 특성을 함유하는지를 결정하기 위해 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입에는 하나의 잔기부터 100개 이상이 잔기를 함유하는 폴리펩타이드 길이 범위의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입이 포함된다. 말단 삽입의 예에는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체가 포함된다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체에는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩타이드 또는 효소(예를 들면 ADEPT에 대한)에 대한 항체의 N- 또는 C-말단으로의 융합이 포함된다.
b) 당화 변이체
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 항체가 당화되는 정도를 증가시키거나 감소시키기 위해 변경된다. 항체에 대한 당화 부위의 부가 또는 결실은 하나 이상의 당화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다.
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 그에 부착된 탄수화물이 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 원상태 항체는 전형적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 N-연결에 의해 일반적으로 부착되는 분지형, 바이안테너리 올리고당을 포함한다. 예를 들면, [Wright 등 TIBTECH 15:26-32(1997)]을 참고하라. 올리고당에는 다양한 탄수화물, 예를 들면 만노스, N-아세틸 글루코사민(GlcNAc), 갈락토오스, 및 시알산뿐만 아니라 바이안테너리 올리고당 구조의 "줄기"에서 GlcNac에 부착된 푸코스가 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체에서 올리고당의 변형은 특정한 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성하기 위해 수행될 수 있다.
일 구현예에서, Fc 영역에 부착된(직접적으로 또는 간접적으로) 푸코스가 없는 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들면, 그와 같은 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은, 예를 들면 WO 2008/077546에 기재된 바와 같이 MALDI-TOF 질량 분광분석법에 의해 측정되는, Asn 297에 부착된 모든 당구조(예를 들면 복합, 하이브리드 및 고 만노스 구조)의 합에 대한, Asn297에서의 당 사슬 내 푸코스의 평균 양을 계산하여 결정된다. Asn297은 Fc 영역에서 위치 약 297(Fc 영역 잔기의 Eu 넘버링)에 위치하는 아스파라긴 잔기를 나타낸다; 그러나, Asn297은 또한 항체 내의 소소한 서열 변이로 인해, 위치 297의 약 ± 3 아미노산 업스트림 또는 다운스트림, 즉 위치 294 내지 300에 위치할 수 있다. 그와 같은 푸코실화 변이체는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 공보 번호 US 2003/0157108(Presta, L.); US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)을 참고하라. "탈푸코실화된" 또는 "푸코스-결핍된" 항체 변이체에 관련된 공보의 예에는 하기가 포함된다: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki 등 J. Mol . Biol . 336:1239-1249(2004); Yamane-Ohnuki 등 Biotech. Bioeng . 87: 614(2004). 탈푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예에는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포(Ripka 등 Arch. Biochem . Biophys . 249:533-545(1986); 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams 등, 특히 실시예 11), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실전달효소 유전자 FUT8 녹아웃 CHO 세포(예를 들면, Yamane-Ohnuki 등 Biotech. Bioeng . 87: 614(2004); Kanda, Y. 등, Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688(2006); 및 WO2003/085107 참고)가 포함된다.
항체 변이체에는 이등분한 올리고당이 추가로 제공된다, 예를 들면 항체의 Fc 영역에 부착된 바이안테너리 올리고당이 GlcNAc에 의해 이등분된다. 그와 같은 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 그와 같은 항체 변이체의 예는, 예를 들면 WO 2003/011878(Jean-Mairet 등); 미국 특허 번호 6,602,684(Umana 등); 및 US 2005/0123546(Umana 등)에 기재된다. Fc 영역에 부착된 올리고당에 적어도 하나의 갈락토오스 잔기를 갖는 항체 변이체도 제공된다. 그와 같은 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 그와 같은 항체 변이체는, 예를 들면 WO 1997/30087(Patel 등); WO 1998/58964(Raju, S.); 및 WO 1999/22764(Raju, S.)에 기재된다.
c) Fc 영역 변이체
특정 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 변형이 본원에 제공된 항체의 Fc 영역 내로 도입됨으로써 Fc 영역 변이체를 산출할 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에 아미노산 변형(예를 들면 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열(예를 들면, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명은 생체내 항체 반감기가 중요하지만 특정 효과기 기능(예컨대 보체 및 ADCC)이 불필요하거나 유해한 적용을 위해 바람직한 후보가 되도록 만드는 전부는 아니지만 일부 효과기 기능을 보유하는 항체 변이체를 고려한다. 시험관내 및/또는 생체내 세포독성 분석은 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들면, Fc 수용체(FcR) 결합 분석은 항체에 FcγR 결합이 없지만(따라서 ADCC 활성이 없을 수 있지만), FcRn 결합 능력을 보유함을 확인하기 위해 수행될 수 있다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 Fc(RIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 Fc(RI, Fc(RII 및 Fc(RIII을 발현한다. 조혈 세포 상의 FcR 발현은 [Ravetch 및 Kinet, Annu . Rev. Immunol . 9:457-492(1991)]의 464페이지의 표 3에 요약된다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관내 분석의 비-제한적인 예는 미국 특허 번호 5,500,362(예를 들면 Hellstrom, I. 등 Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 83:7059-7063(1986)) 및 Hellstrom, I 등, Proc . Nat'l Acad . Sci . USA 82:1499-1502(1985); 5,821,337(Bruggemann, M. 등, J. Exp. Med . 166:1351-1361(1987) 참고)에 기재된다. 대안적으로, 비-방사성 분석 방법이 이용될 수 있다(예를 들면, 유세포측정을 위한 ACTI™ 비-방사성 세포독성 분석(CellTechnology, Inc. Mountain View, CA; 및 CytoTox 96® 비-방사성 세포독성 분석(Promega, Madison, WI) 참고. 그와 같은 분석에 유용한 효과기 세포에는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포가 포함된다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내, 예를 들면 [Clynes 등 Proc . Nat'l Acad . Sci. USA 95:652-656(1998)]에 개시된 동물 모델에서 평가될 수 있다. C1q 결합 분석은 또한 항체가 C1q에 결합할 수 없고 따라서 CDC 활성이 없음을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들면, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에서의 C1q 및 C3c 결합 ELISA를 참고하라. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 분석이 수행될 수 있다(예를 들면, Gazzano-Santoro 등, J. Immunol . Methods 202:163(1996); Cragg, M.S. 등, Blood 101:1045-1052(2003); 및 Cragg, M.S. 및 M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743(2004) 참고). FcRn 결합 및 생체내 제거/반감기 결정도 당해분야에서 공지된 방법(예를 들면, Petkova, S.B. 등, Int'l . Immunol . 18(12):1759-1769(2006) 참고)을 이용하여 수행될 수 있다.
감소된 효과기 기능을 갖는 항체에는 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것들이 포함된다(미국 특허 번호 6,737,056). 그와 같은 Fc 변종에는 잔기 265 및 297의 알라닌으로의 치환을 갖는 소위 "DANA" Fc 변종을 포함하는 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환을 갖는 Fc 변종이 포함된다(미국 특허 번호 7,332,581).
FcR에 대해 개선된 또는 약화된 결합을 갖는 특정 항체 변이체가 기재되어 있다(예를 들면, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 Shields 등, J. Biol . Chem . 9(2): 6591-6604(2001) 참고).
특정 구현예에서, 항체 변이체는 ADCC를 개선하는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들면 Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334(잔기의 EU 넘버링) 위치에서 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들면 [미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 Idusogie 등 J. Immunol . 164: 4178-4184(2000)]에 기재된 바와 같이 변경된(즉, 개선되거나 약화된) C1q 결합 및/또는 보체 의존적 세포독성(CDC)을 야기하는 변경이 Fc 영역에서 수행된다.
모계 IgG의 태아로의 전달에 관여하는(Guyer 등, J. Immunol . 117:587(1976) 및 Kim 등, J. Immunol . 24:249(1994)) 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 증가된 반감기 및 개선된 결합을 갖는 항체가 US2005/0014934A1(Hinton 등)에 기재된다. 이들 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 개선하는 내부에 하나 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이체에는 하나 이상의 Fc 영역 잔기: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434에서의 치환, 예를 들면 Fc 영역 잔기 434의 치환을 갖는 것들이 포함된다(미국 특허 번호 7,371,826).
또한, Fc 영역 변이체의 다른 예에 관해서는 [Duncan & Winter, Nature 322:738-40(1988); 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351]을 참고하라.
d) 시스테인 조작된 항체 변이체
특정 구현예에서, 시스테인 조작된 항체, 예를 들면 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 "티오MAb"를 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 특정 구현예에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 생긴다. 이들 잔기를 시스테인으로 치환함으로써, 반응성 티올 그룹이 항체의 접근가능한 부위에 배치되고, 본원에서 추가 기재된 바와 같이, 항체를 다른 모이어티, 예컨대 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티에 접합하여 면역접합체를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 임의의 하나 이상의 하기 잔기가 시스테인으로 치환될 수 있다: 경쇄의 V205(Kabat 넘버링); 중쇄의 A118(EU 넘버링); 및 중쇄 Fc 영역의 S400(EU 넘버링). 시스테인 조작된 항체는, 예를 들면 미국 특허 번호 7,521,541에 기재된 바와 같이 산출될 수 있다.
e) 항체 유도체
특정 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 당해기술에 공지되어 있고 쉽게 이용가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유하도록 추가로 개질될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티에는 비제한적으로 수용성 폴리머가 포함된다. 수용성 폴리머의 비-제한적인 예에는 비제한적으로 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜 공중합체, 카복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 단독중합체, 프롤리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸레이트화 폴리올(예를 들면, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이들의 혼합물이 포함된다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데하이드는 그 수중 안정성으로 인해 제조 시 이점을 가질 수 있다. 폴리머는 임의 분자량일 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 폴리머의 수는 변할 수 있고, 1 초과의 폴리머가 부착된 경우, 이들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화를 위해 사용된 폴리머의 수 및/또는 유형은 비제한적으로, 개선될 항체의 특정 특성 또는 기능, 항체 유도체가 정의된 상태 하의 요법에서 사용될 것인지 등을 포함하는 고려사항들에 기반하여 결정될 수 있다.
또 하나의 구현예에서, 방사선에 대한 노출에 의해 선택적으로 가열될 수 있는 항체 및 비단백질성 모이어티의 접합체가 제공된다. 일 구현예에서, 비단백질성 모이어티는 탄소 나노튜브이다(Kam 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 102: 11600-11605(2005)). 방사선은 임의 파장의 것일 수 있고, 비제한적으로 보통 세포에 해를 가하지 않지만 항체-비단백질성 모이어티 근처 세포가 사멸되는 온도로 비단백질성 모이어티를 가열하는 파장이 포함된다.
B. 재조합 방법 및 조성물
항체는, 예를 들면 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 바와 같은 재조합 방법 및 조성물을 이용하여 생산될 수 있다. 일 구현예에서, 본원에 기재된 항-FcRH5 항체를 인코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 그와 같은 핵산은 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열(예를 들면, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 인코딩할 수 있다. 추가 구현예에서, 그와 같은 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들면, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 구현예에서, 그와 같은 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 하나의 그와 같은 구현예에서, 숙주 세포는 하기를 포함한다(예를 들면, 이로 형질전환되었다: (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터. 일 구현예에서, 숙주 세포는 진핵생물, 예를 들면 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 림프양 세포(예를 들면, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 일 구현예에서, 항-FcRH5 항체의 제조 방법이 제공되며, 여기서 본 방법은 상기 제공된 바와 같은 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 항체 발현에 적합한 조건 하에 배양하는 단계, 및 선택적으로 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 항체를 회수하는 단계를 포함한다.
항-FcRH5 항체의 재조합 생산을 위해, 예를 들면 상기에서 기재된 바와 같은 항체를 인코딩하는 핵산이 단리되고 숙주 세포에서의 추가 클로닝 및/또는 발현을 위한 하나 이상의 벡터 내로 삽입된다. 그와 같은 핵산은 종래의 절차를 이용하여(예를 들면, 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 이용하여) 쉽게 단리되고 시퀀싱될 수 있다.
항체-인코딩 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포에는 본원에 기재된 원핵 또는 진핵 세포가 포함된다. 예를 들면, 항체는, 특히 당화 및 Fc 효과기 기능이 필요하지 않은 경우, 박테리아에서 생산될 수 있다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩타이드의 발현을 위해, 예를 들면 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199, 및 5,840,523을 참고하라(또한 대장균에서의 항체 단편의 발현을 설명하는 Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254를 참고하라). 발현 후, 항체는 가용성 분획 중 박테리아 세포 페이스트로부터 단리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물에 부가하여, 그 당화 경로가 "인간화된" 것이어서 부분적으로 또는 완전 인간 당화 패턴을 갖는 항체의 생산을 일으키는 진균 및 효모 균주를 포함하는 진핵 미생물, 예컨대 사상균 또는 효모가 항체-인코딩 벡터를 위해 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. [Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414(2004), 및 Li 등, Nat. Biotech. 24:210-215(2006)]을 참고하라.
당화된 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터 유도된다. 무척추동물 세포의 예에는 식물 및 곤충 세포가 포함된다. 곤충 세포와, 특히 스포도프테라 프루지페르다 세포의 형질감염을 위해 사용될 수 있는 수많은 배큘로바이러스 균주가 확인되었다.
식물 세포 배양물도 숙주로 이용될 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978, 및 6,417,429(트랜스제닉 식물에서의 항체 생산을 위한 PLANTIBODIES™ 기술을 설명)를 참고하라.
척추동물 세포도 숙주로 사용될 수 있다. 예를 들면, 현탁액에서 성장하도록 적응되는 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주(COS-7); 인간 배아 신장 세포주(예를 들면, Graham 등, J. Gen Virol . 36:59(1977)에 기재된 293 또는 293 세포); 어린 햄스터 신장 세포(BHK); 마우스 세르톨리 세포(예를 들면, Mather, Biol . Reprod . 23:243-251(1980)에 기재된 TM4 세포); 원숭이 신장 세포(CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA); 개과 신장 세포(MDCK; 버팔로 랫트 간 세포(BRL 3A); 인간 폐 세포(W138); 인간 간 세포(Hep G2); 마우스 유선 종양(MMT 060562); 예를 들면, [Mather 등, Annals N.Y . Acad . Sci. 383:44-68(1982)]에 기재된 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주에는 DHFR- CHO 세포를 포함하는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포(Urlaub 등, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 77:4216(1980)); 및 골수종 세포주, 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0이 포함된다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들면, [Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)]을 참고하라.
C. 분석
본원에 제공된 항-FcRH5 항체는 당해기술에 공지된 다양한 분석에 의해 이들의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 확인되거나, 스크리닝되거나, 분석될 수 있다.
일 측면에서, 본원에 제공된 항체는, 예를 들면 공지된 방법, 예컨대 ELISA, BIACore®, FACS, 또는 웨스턴 블랏에 의해 그 항원 결합 활성에 대해 평가될 수 있다.
또 하나의 측면에서, FcRH5로의 결합에 대해 본원에 기재된 임의 항체와 경쟁하는 항체를 확인하기 위해 경쟁 분석이 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 그와 같은 경쟁 항체는 본원에 기재된 항체에 의해 결합된 것과 동일한 에피토프(예를 들면, 선형 또는 입체형태 에피토프)에 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프의 맵핑을 위한 상세한 예시적인 방법은 [Morris(1996) "Epitope Mapping Protocols", Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)]에 제공된다.
예시적인 경쟁 분석에서, 고정된 FcRH5는 FcRH5에 결합하는 표지된 제1 항체(예를 들면, 본원에 기재된 임의 항체) 및 FcRH5로의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁하는 그 능력에 대해 평가되고 있는 표지되지 않은 제2 항체를 포함하는 용액 중에 인큐베이션된다. 제2 항체는 하이브리도마 상청액 중에 존재할 수 있다. 대조군으로서, 고정된 FcRH5는 표지된 제1 항체를 포함하지만 표지되지 않은 제2 항체를 포함하지 않는 용액 중에 인큐베이션된다. FcRH5에 대한 제1 항체의 결합을 허용하는 조건 하에서 인큐베이션 후, 과잉의 결합되지 않은 항체가 제거되고, 고정된 FcRH5와 연관된 표지의 양이 측정된다. 고정된 FcRH5와 연관된 표지의 양이 대조군 샘플에 비해 평가 샘플에서 실질적으로 감소되는 경우, 이는 제2 항체가 FcRH5로의 결합에 대해 제1 항체와 경쟁하고 있음을 시사한다. [Harlow 및 Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)]을 참고하라. 일부 구현예에서, FcRH5는 FcRH5c이다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
D. 면역접합체
또한 하나 이상의 세포독성 제제, 예컨대 화학치료 제제 또는 약물, 성장 억제 제제, 독소(예를 들면, 단백질 독소, 박테리아, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소 활성 독소 또는 그것의 단편), 또는 방사성 동위원소(즉, 방사성 접합체)에 접합된 본원의 항-FcRH5 항체를 포함하는 면역접합체가 본원에서 제공된다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
면역접합체는 종양에 대한 약물 모이어티의 표적화된 전달을, 그리고 일부 구현예에서는 여기서의 세포내 축적을 허용하며, 접합되지 않은 약물의 전신 투여는 정상 세포에 허용될 수 없는 수준의 독성을 일으킬 수 있다(Polakis P.(2005) Current Opinion in Pharmacology 5:382-387).
항체-약물 접합체(ADC)는 항원-발현 종양 세포에 강력한 세포독성 약물을 표적화하여 항체 및 세포독성 약물 둘 다의 특성을 조합함으로써(Teicher, B.A. (2009) Current Cancer Drug Targets 9:982-1004) 효능을 최대화하고 표적을 벗어난 독성을 최소화하여 치료 지수를 증강시키는 표적화된 화학치료 분자이다(Carter, P.J. 및 Senter P.D.(2008) The Cancer Jour. 14(3):154-169; Chari, R.V.(2008) Acc . Chem . Res. 41:98-107.
본원에 제공된 ADC 화합물에는 항암 활성을 갖는 것들이 포함된다. 일부 구현예에서, ADC 화합물에는 약물 모이어티에 접합된, 즉 공유 결합된 항체가 포함된다. 일부 구현예에서, 항체는 링커를 통해 약물 모이어티에 공유 결합된다. 본원에 제공된 항체-약물 접합체(ADC)는 효과적인 용량의 약물을 종양 조직에 선택적으로 전달함으로써 치료 지수("치료 윈도우")를 증가시키면서 더 큰 선택성, 즉 더 낮은 유효 용량이 달성될 수 있다.
항체-약물 접합체(ADC)의 약물 모이어티(D)에는 세포독성 또는 세포증식억제 효과를 갖는 임의의 화합물, 모이어티 또는 그룹이 포함될 수 있다. 약물 모이어티는 비제한적으로 튜불린 결합, DNA 결합 또는 개재, 및 RNA 폴리머라제, 단백질 합성, 및/또는 토포이소머라제의 억제를 포함하는 기전에 의해 이들의 세포독성 및 세포증식억제 효과를 부여할 수 있다. 예시적인 약물 모이어티에는 비제한적으로, 메이탄시노이드, 돌라스타틴, 아우리스타틴, 칼리키아마이신, 피롤로벤조디아제핀(PBD), 네모루비신 및 그것의 유도체, PNU-159682, 안트라사이클린, 듀오카르마이신, 빈카 알카로이드, 탁산, 트리코테센, CC1065, 캄프토테신, 엘리나파이드, 및 입체이성질체, 등배체, 유사체, 및 세포독성 활성을 갖는 이들의 유도체가 포함된다. 그와 같은 면역접합체의 비제한적인 예는 아래에서 추가로 상세히 논의된다.
1. 예시적인 항체-약물 접합체
항체-약물 접합체(ADC) 화합물의 예시적인 구현예는 종양 세포를 표적으로 하는 항체(Ab), 약물 모이어티(D), 및 Ab를 D로 부착하는 링커 모이어티(L)를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 하나 이상의 아미노산 잔기, 예컨대 라이신 및/또는 시스테인을 통해 링커 모이어티(L)에 부착된다.
예시적인 ADC는 하기 식 I을 갖는다:
Figure pct00015
식 중, p는 1 내지 약 20이다. 일부 구현예에서, 항체에 접합될 수 있는 약물 모이어티의 수는 자유 시스테인 잔기의 수에 의해 제한된다. 일부 구현예에서, 자유 시스테인 잔기는 본원에서 기재된 방법에 의해 항체 아미노산 서열 내로 도입된다. 식 I의 예시적인 ADC에는 비제한적으로 1, 2, 3, 또는 4개의 조작된 시스테인 아미노산을 갖는 항체가 포함된다[Lyon, R. 등(2012) Methods in Enzym. 502:123-138]. 일부 구현예에서, 하나 이상의 자유 시스테인 잔기가 조작을 이용하지 않고도 이미 항체에 존재하며, 이 경우에 기존 자유 시스테인 잔기가 항체를 약물로 접합하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 하나 이상의 자유 시스테인 잔기를 산출하기 위해 항체 접합 전에 환원 조건에 노출된다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
a) 예시적인 링커
"링커"(L)는 하나 이상의 약물 모이어티(D)를 항체(Ab)에 연결하여 식 I의 항체-약물 접합체(ADC)를 형성하기 위해 사용될 수 있는 이중작용성 또는 다중작용성 모이어티이다. 일부 구현예에서, 항체-약물 접합체(ADC)는 약물에 그리고 항체에 공유 결합하기 위한 반응성 작용기를 갖는 링커를 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들면 일부 구현예에서, 항체(Ab)의 시스테인 티올은 링커 또는 약물-링커 중간체의 반응성 작용기와 결합을 형성하여 ADC를 제조할 수 있다.
일 측면에서, 링커는 항체 상에 존재하는 자유 시스테인과 반응하여 공유 결합을 형성할 수 있는 작용기를 갖는다. 그와 같은 반응성 작용기의 비제한적인 예에는 말레이미드, 할로아세트아미드, α-할로아세틸, 활성화된 에스테르, 예컨대 석신이미드 에스테르, 4-니트로페닐 에스테르, 펜타플루오로페닐 에스테르, 테트라플루오로페닐 에스테르, 무수물, 산 클로라이드, 설포닐 클로라이드, 이소시아네이트, 및 이소티오시아네이트가 포함된다. 예를 들면, [Klussman 등(2004), Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773]의 766페이지의 접합 방법, 및 본원의 실시예를 참고하라.
일부 구현예에서, 링커는 항체 상에 존재하는 친전자성 그룹과 반응할 수 있는 작용기를 갖는다. 예시적인 그와 같은 친전자성 그룹에는 비제한적으로 알데하이드 및 케톤 카보닐 그룹이 포함된다. 일부 구현예에서, 링커의 반응성 작용기의 헤테로원자는 항체 상의 친전자성 그룹과 반응하여 항체 단위에 공유 결합을 형성할 수 있다. 그와 같은 반응성 작용기의 비제한적인 예에는 비제한적으로 하이드라자이드, 옥심, 아미노, 하이드라진, 티오세미카바존, 하이드라진 카복실레이트, 및 아릴하이드라자이드가 포함된다.
링커는 하나 이상의 링커 성분을 포함할 수 있다. 예시적인 링커 성분에는 6-말레이미도카프로일("MC"), 말레이미도프로파노일("MP"), 발린-시트룰린("val-cit" 또는 "vc"), 알라닌-페닐알라닌("ala-phe"), p-아미노벤질옥시카보닐("PAB"), N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오)펜타노에이트("SPP"), 및 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1 카복실레이트("MCC")가 포함된다. 다양한 링커 성분은 당해기술에 공지되어 있고, 그 일부가 아래에 기재된다.
링커는 약물 방출을 촉진하는 "절단가능 링커"일 수 있다. 절단가능 링커의 비제한적인 예에는 산-불안정 링커(예를 들면, 하이드라존 포함), 프로테아제-민감성(예를 들면, 펩티다제-민감성) 링커, 광-불안정 링커, 또는 디설파이드-함유 링커(Chari 등, Cancer Research 52:127-131(1992); US 5208020)가 포함된다.
특정 구현예에서, 링커는 하기 식 II를 갖는다:
Figure pct00016
식 중, A는 "신장 단위"이며, a는 정수 0 내지 1이고; W는 "아미노산 단위"이고, w는 정수 0 내지 12이고; Y는 "스페이서 단위"이고, y는 0, 1, 또는 2이다. 식 II의 링커를 포함하는 ADC는 식 I(A): Ab-(Aa-Ww-Yy-D)p를 가지며, 식 중 Ab, D, 및 p는 식 I에 대해 상기 정의된 바와 같다. 그와 같은 링커의 예시적인 구현예가 명시적으로 본원에 참고로 편입된 미국 특허 번호 7,498,298에 기재된다.
일부 구현예에서, 링커 성분은 항체를 또 하나의 링커 성분 또는 약물 모이어티로 연결하는 "신장 단위"(A)를 포함한다. 신장 단위의 비제한적인 예를 아래에 나타낸다(여기서 물결선은 항체, 약물, 또는 추가의 링커 성분에 대한 공유 결합 부위를 나타낸다):
Figure pct00017
Figure pct00018
일부 구현예에서, 링커 성분은 "아미노산 단위"(W)를 포함한다. 일부 그와 같은 구현예에서, 아미노산 단위는 프로테아제에 의한 링커의 절단을 허용함으로써 세포내 프로테아제, 예컨대 용해소체 효소에 대한 노출 시 면역접합체로부터 약물 방출을 촉진한다(Doronina 등(2003) Nat. Biotechnol . 21:778-784). 예시적인 아미노산 단위에는 비제한적으로 디펩타이드, 트리펩타이드, 테트라펩타이드, 및 펜타펩타이드가 포함된다. 예시적인 디펩타이드에는 비제한적으로 발린-시트룰린(vc 또는 val-cit), 알라닌-페닐알라닌(af 또는 ala-phe); 페닐알라닌-라이신(fk 또는 phe-lys); 페닐알라닌-호모라이신(phe-homolys); 및 N-메틸-발린-시트룰린(Me-val-cit)이 포함된다. 예시적인 트리펩타이드에는 비제한적으로, 글리신-발린-시트룰린(gly-val-cit) 및 글리신-글리신-글리신(gly-gly-gly)이 포함된다. 아미노산 단위는 천연 발생 아미노산 잔기 및/또는 소량 아미노산 및/또는 비-천연 발생 아미노산 유사체, 예컨대 시트룰린을 포함할 수 있다. 아미노산 단위는 특정 효소, 예를 들면 종양-연관된 프로테아제, 카텝신 B, C 및 D, 또는 플라스민 프로테아제에 의한 효소적 절단을 위해 설계되고 최적화될 수 있다.
전형적으로, 펩타이드-유형 링커는 2개 이상의 아미노산 및/또는 펩타이드 단편 간에 펩타이드 결합을 형성함으로써 제조될 수 있다. 그와 같은 펩타이드 결합은, 예를 들면 액상 합성 방법에 따라 제조될 수 있다(예를 들면, E. Schroeder 및 K. Luebke(1965) "The Peptides", volume 1, pp 76-136, Academic Press).
일부 구현예에서, 링커 성분은 항체를 약물 모이어티로 직접적으로 또는 신장 단위 및/또는 아미노산 단위를 통해 연결하는 "스페이서 단위"(Y)를 포함한다. 스페이서 단위는 "자가-희생성" 또는 "비-자가-희생성"일 수 있다. "비-자가-희생성" 스페이서 단위는 스페이서 단위의 일부 또는 전부가 ADC의 절단 시 약물 모이어티에 결합된 채 유지되는 것이다. 비-자가-희생성 스페이서 단위의 예에는 비제한적으로 글리신 스페이서 단위 및 글리신-글리신 스페이서 단위가 포함된다. 일부 구현예에서, 종양-세포 연관된 프로테아제에 의한 글리신-글리신 스페이서 단위를 함유하는 ADC의 효소에 의한 절단은 ADC의 나머지로부터 글리신-글리신-약물 모이어티를 방출시킨다. 일부 그와 같은 구현예에서, 글리신-글리신-약물 모이어티는 종양 세포에서 가수분해 단계를 거쳐서, 약물 모이어티로부터 글리신-글리신 스페이서 단위를 절단한다.
"자가-희생성" 스페이서 단위는 약물 모이어티의 방출을 허용한다. 특정 구현예에서, 링커의 스페이서 단위는 p-아미노벤질 단위를 포함한다. 일부 그와 같은 구현예에서, p-아미노벤질 알코올은 아미드 결합을 통해 아미노산 단위에 부착되고, 카바메이트, 메틸카바메이트, 또는 카보네이트가 벤질 알코올 및 약물 간에 제조된다(Hamann 등(2005) Expert Opin . Ther . Patents(2005) 15:1087-1103). 일부 구현예에서, 스페이서 단위는 p-아미노벤질옥시카보닐(PAB)을 포함한다. 일부 구현예에서, 자가-희생성 링커를 포함하는 ADC는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00019
식 중, Q는 -C1-C8 알킬, -O-(C1-C8 알킬), -할로겐, -니트로, 또는 -시아노이고; m은 0 내지 4 범위의 정수이고; X는 하나 이상의 추가의 스페이서 단위일 수도 있고 또는 존재하지 않을 수도 있으며; p는 1 내지 약 20 범위이다. 일부 구현예에서, p는 1 내지 10, 1 내지 7, 1 내지 5, 또는 1 내지 4 범위이다. X 스페이서 단위의 비제한적인 예에는 하기가 포함된다:
Figure pct00020
및
Figure pct00021
R1 및 R2는 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, R1 및 R2 각각은 -CH3이다.
자가-희생성 스페이서의 다른 예에는 비제한적으로 PAB 그룹과 전자적으로 유사한 방향족 화합물, 예컨대 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체(미국 특허 번호 7,375,078; Hay 등(1999) Bioorg . Med . Chem . Lett. 9:2237) 및 오르토- 또는 파라-아미노벤질아세탈이 포함된다. 일부 구현예에서, 아미드 결합 가수분해 시 고리화를 거치는 스페이서, 예컨대 치환된 및 치환되지 않은 4-아미노부티르산 아미드(Rodrigues 등(1995) Chemistry Biology 2:223), 적절하게 치환된 바이사이클로[2.2.1] 및 바이사이클로[2.2.2] 고리 시스템(Storm 등(1972) J. Amer . Chem . Soc . 94:5815) 및 2-아미노페닐프로피온산 아미드(Amsberry 등(1990) J. Org . Chem. 55:5867)가 사용될 수 있다. 글리신 잔기의 α-탄소에 대한 약물 연결은 ADC에서 유용할 수 있는 자가-희생성 스페이서의 또 하나의 예이다(Kingsbury 등(1984) J. Med. Chem. 27:1447).
일부 구현예에서, 링커 L은 분지화, 다작용성 링커 모이어티를 통해 항체에 1 초과 약물 모이어티의 공유 결합을 위한 수지상 유형 링커일 수 있다(Sun 등(2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215; Sun 등(2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768). 수지상 링커는 약물 대 항체의 몰비, 즉 ADC의 효력에 관련되는 부하를 증가시킬 수 있다. 따라서, 항체가 단 하나의 반응성 시스테인 티올 그룹을 보유하는 경우, 다수의 약물 모이어티가 수지상 링커를 통해 부착될 수 있다.
비제한적인 예시적 링커를 식 I의 ADC의 맥락에서 아래에 나타낸다:
Figure pct00022
Figure pct00023
식 중, R1 및 R2는 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, R1 및 R2 각각은 -CH3이다.
Figure pct00024
식 중, n은 0 내지 12이다. 일부 구현예에서, n은 2 내지 10이다. 일부 구현예에서, n은 4 내지 8이다.
추가의 비제한적인 ADC의 예에는 하기 구조가 포함된다:
Figure pct00025
식 중, X는 하기이며:
Figure pct00026
Figure pct00027
또는
Figure pct00028
Y는 하기이고:
Figure pct00029
또는
Figure pct00030
각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬이고; n은 1 내지 12이다.
일부 구현예에서, 링커는 용해도 및/또는 반응성을 조정하는 그룹으로 치환된다. 비제한적인 예로서, 하전된 치환체, 예컨대 설포네이트(-SO3 -) 또는 암모늄은 링커 시약의 수용성을 증가시키고, ADC를 제조하기 위해 이용된 합성 경로에 따라 링커 시약과 항체 및/또는 약물 모이어티의 커플링 반응을 촉진하거나, Ab-L(항체-링커 중간체)과 D, 또는 D-L(약물-링커 중간체)과 Ab의 커플링 반응을 촉진할 수 있다. 일부 구현예에서, 일부 링커는 항체에 커플링되고 일부 링커는 약물에 커플링된 다음 Ab-(링커부)a가 약물-(링커부)b에 커플링되어 식 I의 ADC를 형성한다.
본원에 제공된 화합물은 비제한적으로 하기 링커 시약: 비스-말레이미도-트리옥시에틸렌 글리콜(BMPEO), N-(β-말레이미도프로필옥시)-N-하이드록시 석신이미드 에스테르(BMPS), N-(ε-말레이미도카프로일옥시)석신이미드 에스테르(EMCS), N-[γ-말레이미도부티릴옥시]석신이미드 에스테르(GMBS), 1,6-헥산-비스-비닐설폰(HBVS), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복시-(6-아미도카프로에이트)(LC-SMCC), m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르(MBS), 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 하이드라자이드(MPBH), 석신이미딜 3-(브로모아세트아미도)프로피오네이트(SBAP), 석신이미딜 아이오도아세테이트(SIA), 석신이미딜(4-아이오도아세틸)아미노벤조에이트(SIAB), N-석신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP), N-석신이미딜-4-(2-피리딜티오)펜타노에이트(SPP), 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)사이클로헥산-1-카복실레이트(SMCC), 석신이미딜 4-(p-말레이미도페닐)부티레이트(SMPB), 석신이미딜 6-[(베타-말레이미도프로피온아미도)헥사노에이트](SMPH), 이미노티올란(IT), 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 및 설포-SMPB, 및 석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트(SVSB)로, 및 하기 비스-말레이미드 시약: 디티오비스말레이미도에탄(DTME), 1,4-비스말레이미도부탄(BMB), 1,4 비스말레이미딜-2,3-디하이드록시부탄(BMDB), 비스말레이미도헥산(BMH), 비스말레이미도에탄(BMOE), BM(PEG)2(아래에 나타냄), 및 BM(PEG)3(아래에 나타냄); 이미도에스테르의 이작용성 유도체(예컨대 디메틸 아디프이미데이트 HCl), 활성 에스테르(예컨대 디석신이미딜 수베레이트), 알데하이드(예컨대 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물(예컨대 비스(p-아지도벤조일)헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체(예컨대 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트(예컨대 톨루엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물(예컨대 1,5-디플루오로-2,4-디나이트로벤젠)을 포함하여 제조되는 ADC를 명시적으로 고려한다. 일부 구현예에서, 비스-말레이미드 시약은 항체 내 시스테인의 티올 그룹의 티올-함유 약물 모이어티, 링커, 또는 링커-약물 중간체로의 부착을 허용한다. 티올 그룹과 반응성인 다른 작용기에는 비제한적으로, 아이오도아세트아미드, 브로모아세트아미드, 비닐 피리딘, 디설파이드, 피리딜 디설파이드, 이소시아네이트, 및 이소티오시아네이트가 포함된다.
Figure pct00031
특정한 유용한 링커 시약은 다양한 상업적 공급원, 예컨대 Pierce Biotechnology, Inc.(Rockford, IL), Molecular Biosciences Inc.(Boulder, CO)에서 수득되거나, 당해기술; 예를 들면 [Toki 등(2002) J. Org . Chem. 67:1866-1872; Dubowchik 등(1997) Tetrahedron Letters, 38:5257-60; Walker, M.A.(1995) J. Org . Chem. 60:5352-5355; Frisch 등(1996) Bioconjugate Chem. 7:180-186; US 6214345; WO 02/088172; US 2003130189; US2003096743; WO 03/026577; WO 03/043583; 및 WO 04/032828]에 기재된 절차에 따라 합성될 수 있다.
탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 항체에 대한 방사성 뉴클레오타이드의 접합을 위한 예시적인 킬레이트제이다. 예를 들면, WO94/11026을 참고하라.
b) 약물 모이어티
(1) 메이탄신 및 메이탄시노이드
일부 구현예에서, 면역접합체는 하나 이상의 메이탄시노이드 분자에 접합된 항체를 포함한다. 메이탄시노이드는 메이탄신의 유도체이며, 튜불린 중합을 억제하여 작용하는 유사분열 억제제이다. 메이탄신은 동아프리카 관목 메이테너스 세라타에서 최초 단리되었다(미국 특허 번호 3896111). 이후에, 특정 미생물도 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄시놀 및 C-3 메이탄시놀 에스테르를 생산함이 발견되었다(미국 특허 번호 4,151,042). 합성 메이탄시노이드는, 예를 들면 미국 특허 번호 4,137,230; 4,248,870; 4,256,746; 4,260,608; 4,265,814; 4,294,757; 4,307,016; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946; 4,315,929; 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598; 4,361,650; 4,364,866; 4,424,219; 4,450,254; 4,362,663; 및 4,371,533에 개시되어 있다.
메이탄시노이드 약물 모이어티는 하기 이유로 인해, 항체-약물 접합체에서 매력적인 약물 모이어티이다: (i) 발효 또는 발효 생성물의 화학적 변형 또는 유도체화에 의해 비교적 쉽게 제조할 수 있고, (ii) 항체에 대해 비-디설파이드 링커를 통한 접합에 적합한 작용기를 이용한 유도체화가 쉽고, (iii) 혈장 중 안정하며, iv) 다양한 종양 세포주에 대해 효과적이다.
메이탄시노이드 약물 모이어티로 사용하기 적합한 특정 메이탄시노이드는 당해기술에 공지되어 있고 공지된 방법에 따라 천연 원천으로부터 단리되거나 유전 공학 기술을 이용해서 생산될 수 있다(예를 들면, Yu 등(2002) PNAS 99:7968-7973 참고). 메이탄시노이드는 또한 공지된 방법에 따라 합성으로 제조될 수 있다.
메이탄시노이드 약물 모이어티에는 비제한적으로 개질된 방향족 고리를 갖는 것들, 예컨대 C-19-데클로로(미국 특허 번호 4256746)(예를 들면, 안사마이토신 P2의 리튬 알루미늄 하이드라이드 환원에 의해 제조됨); C-20-하이드록시(또는 C-20-데메틸) +/-C-19-데클로로(미국 특허 번호 4361650 및 4307016)(예를 들면, LAH를 이용한 탈염소화 또는 스트렙토마이세스 또는 악티노마이세스를 이용한 탈메틸화에 의해 제조됨); 및 C-20-데메톡시, C-20-아실옥시(-OCOR), +/-데클로로(미국 특허 번호 4,294,757)(예를 들면, 아실 클로라이드를 이용한 아실화에 의해 제조됨) 및 방향족 고리의 다른 위치에 변형을 갖는 것들이 포함된다.
메이탄시노이드 약물 모이어티에는 또한 변형을 갖는 것들, 예컨대 C-9-SH(미국 특허 번호 4424219)(예를 들면, 메이탄시놀과 H2S 또는 P2S5의 반응에 의해 제조됨); C-14-알콕시메틸(데메톡시/CH2OR)(US 4331598); C-14-하이드록시메틸 또는 아실옥시메틸(CH2OH 또는 CH2OAc)(미국 특허 번호 4450254)(예를 들면, 노카르디아로부터 제조됨); C-15-하이드록시/아실옥시(US 4364866)(예를 들면, 스트렙토마이세스에 의한 메이탄시놀의 전환에 의해 제조됨); C-15-메톡시(미국 특허 번호 4313946 및 4315929)(예를 들면, 트레비아 누들플로라(Trewia nudlflora)로부터 단리됨); C-18-N-데메틸(미국 특허 번호 4362663 및 4322348)(예를 들면, 스트렙토마이세스에 의한 메이탄시놀의 탈메틸화에 의해 제조됨); 및 4,5-데옥시(US 4371533)(예를 들면, 메이탄시놀의 티타늄 트리클로라이드/LAH 환원에 의해 제조됨)가 포함된다.
메이탄시노이드 화합물 상의 많은 위치가 연결 위치로서 유용하다. 예를 들면, 에스테르 연결은 종래의 커플링 기술을 이용하여 하이드록실 그룹과의 반응에 의해 형성될 수 있다. 일부 구현예에서, 반응은 하이드록실 그룹을 갖는 C-3 위치, 하이드록시메틸로 변형된 C-14 위치, 하이드록실 그룹으로 변형된 C-15 위치, 및 하이드록실 그룹을 갖는 C-20 위치에서 일어날 수 있다. 일부 구현예에서, 연결은 메이탄시놀 또는 메이탄시놀 유사체의 C-3 위치에서 형성된다.
메이탄시노이드 약물 모이어티에는 하기 구조를 갖는 것들이 포함된다:
Figure pct00032
식 중, 물결선은 ADC의 링커에 대한 메이탄시노이드 약물 모이어티의 황 원자의 공유 결합을 나타낸다. 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-C6 알킬일 수 있다. 황 원자에 아미드 그룹을 부착하는 알킬렌 사슬은 메타닐, 에타닐, 또는 프로필일 수 있다, 즉 m은 1, 2, 또는 3이다(US 633410; US 5208020; Chari 등(1992) Cancer Res. 52:127-131; Liu 등(1996) Proc. Natl. Acad. Sci USA 93:8618-8623).
메이탄시노이드 약물 모이어티의 모든 입체이성질체, 즉 키랄 탄소에서 R 및 S 입체배치의 임의 조합이 본원에 제공된 ADC에 대해 고려된다(그 전문이 참고로 편입된 US 7276497; US 6913748; US 6441163; US 633410(RE39151); US 5208020; Widdison 등(2006) J. Med. Chem. 49:4392-4408). 일부 구현예에서, 메이탄시노이드 약물 모이어티는 하기 입체화학을 갖는다:
Figure pct00033
메이탄시노이드 약물 모이어티의 예시적인 구현예에는 비제한적으로 하기 구조를 갖는 DM1; DM3; 및 DM4가 포함된다:
Figure pct00034
Figure pct00035
여기서 물결선은 항체-약물 접합체의 링커(L)에 대한 약물의 황 원자의 공유 결합을 나타낸다.
다른 예시적인 메이탄시노이드 항체-약물 접합체는 하기 구조 및 약어를 갖는다(여기서 Ab는 항체이고 p는 1 내지 약 20이다. 일부 구현예에서, p는 1 내지 10이거나, p는 1 내지 7이거나, p는 1 내지 5거나, 또는 p는 1 내지 4이다):
Figure pct00036
DM1이 BMPEO 링커를 통해 항체의 티올 그룹에 연결되는 예시적인 항체-약물 접합체는 하기 구조 및 약어를 갖는다:
Figure pct00037
식 중, Ab는 항체이며; n은 0, 1, 또는 2이고; p는 1 내지 약 20이다. 일부 구현예에서, p는 1 내지 10이거나, p는 1 내지 7이거나, p는 1 내지 5이거나, 또는 p는 1 내지 4이다.
메이탄시노이드를 함유하는 면역접합체, 그 제조 방법, 및 이들의 치료적 용도는, 예를 들면 그것의 개시내용이 본원에 명시적으로 참고로 편입된 미국 특허 번호 5,208,020 및 5,416,064; US 2005/0276812 A1; 및 유럽 특허 EP 0 425 235 B1에 개시된다. 또한 [Liu 등 Proc . Natl . Acad . Sci . USA 93:8618-8623(1996); 및 Chari 등 Cancer Research 52:127-131(1992)]를 참고하라.
일부 구현예에서, 항체-메이탄시노이드 접합체는 항체 또는 메이탄시노이드 분자의 생물학적 활성을 유의미하게 약화시키지 않으면서 항체를 메이탄시노이드 분자에 화학적으로 연결하여 제조될 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 번호 5,208,020(그것의 개시내용은 본원에 명시적으로 참고로 편입됨)을 참고하라. 일부 구현예에서, 항체 분자 당 평균 3-4개 메이탄시노이드 분자가 접합된 ADC는 항체의 기능 또는 용해도에 부정적으로 영향을 미치지 않고 표적 세포의 세포독성 증강에서 효능을 나타내었다. 일부 예에서, 한 분자의 독소/항체만으로도 네이키드 항체 사용에 비해 세포독성을 증강시킬 것으로 기대된다.
항체-메이탄시노이드 접합체를 제조하기 위한 연결 그룹에는, 예를 들면 본원에 기재된 것들 및 그것의 개시내용이 본원에 명시적으로 참고로 편입된 미국 특허 번호 5208020; EP 특허 0 425 235 B1; Chari 등 Cancer Research 52:127-131(1992); US 2005/0276812 A1; 및 US 2005/016993 A1에 개시된 것들이 포함된다.
(2) 아우리스타틴 및 돌라스타틴
약물 모이어티에는 돌라스타틴, 아우리스타틴, 및 이들의 유사체 및 유도체(US 5635483; US 5780588; US 5767237; US 6124431)가 포함된다. 아우리스타틴은 해양 연체동물 화합물인 돌라스타틴-10의 유도체이다. 임의의 특정 이론에 구애받고자 하지 않고, 돌라스타틴 및 아우리스타틴은 미세소관 동력학, GTP 가수분해, 그리고 핵 및 세포 분열을 방해하며(Woyke 등(2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584) 항암(US 5663149) 및 항진균 활성(Pmettit 등(1998) Antimicrob . Agents Chemother. 42:2961-2965)을 갖는 것으로 나타났다. 돌라스타틴/아우리스타틴 약물 모이어티는 펩타이드 약물 모이어티의 N(아미노) 말단 또는 C(카복실) 말단을 통해 항체에 부착될 수 있다(WO 02/088172; Doronina 등(2003) Nature Biotechnology 21(7):778-784; Francisco 등(2003) Blood 102(4):1458-1465).
예시적인 아우리스타틴의 구현예에는 그것의 개시내용의 전문이 명시적으로 참고로 편입된 US 7498298 및 US 7659241에 개시된 N-말단 연결된 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF가 포함된다:
Figure pct00038
식 중, DE 및 DF의 물결선은 항체 또는 항체-링커 성분에 대한 공유 결합 부위를 나타내며, 독립적으로 각 위치에서:
R2는 H 및 C1-C8 알킬로부터 선택되고;
R3은 H, C1-C8 알킬, C3-C8 카보사이클, 아릴, C1-C8 알킬-아릴, C1-C8 알킬-(C3-C8 카보사이클), C3-C8 헤테로사이클 및 C1-C8 알킬-(C3-C8 헤테로사이클)로부터 선택되고;
R4는 H, C1-C8 알킬, C3-C8 카보사이클, 아릴, C1-C8 알킬-아릴, C1-C8 알킬-(C3-C8 카보사이클), C3-C8 헤테로사이클 및 C1-C8 알킬-(C3-C8 헤테로사이클)로부터 선택되고;
R5는 H 및 메틸로부터 선택되거나; 또는
R4 및 R5는 공동으로 카보사이클릭 고리를 형성하며 식 -(CRaRb)n-을 가지고, 여기서 Ra 및 Rb는 H, C1-C8 알킬 및 C3-C8 카보사이클로부터 독립적으로 선택되고 n은 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 독립적으로 선택되고;
R6은 H 및 C1-C8 알킬로부터 선택되고;
R7은 H, C1-C8 알킬, C3-C8 카보사이클, 아릴, C1-C8 알킬-아릴, C1-C8 알킬-(C3-C8 카보사이클), C3-C8 헤테로사이클 및 C1-C8 알킬-(C3-C8 헤테로사이클)로부터 선택되고;
각각의 R8은 H, OH, C1-C8 알킬, C3-C8 카보사이클 및 O-(C1-C8 알킬)로부터 독립적으로 선택되고;
R9 는 H 및 C1-C8 알킬로부터 선택되고;
R10은 아릴 또는 C3-C8 헤테로사이클로부터 선택되고;
Z는 O, S, NH, 또는 NR12이고, 여기서 R12는 C1-C8 알킬이며;
R11은 H, C1-C20 알킬, 아릴, C3-C8 헤테로사이클, -(R13O)m-R14, 또는 -(R13O)m-CH(R15)2로부터 선택되고;
m은 1-1000 범위의 정수이고;
R13는 C2-C8 알킬이고;
R14는 H 또는 C1-C8 알킬이고;
각 경우의 R15는 독립적으로 H, COOH, -(CH2)n-N(R16)2, -(CH2)n-SO3H, 또는 -(CH2)n-SO3-C1-C8 알킬이고;
각 경우의 R16은 독립적으로 H, C1-C8 알킬, 또는 -(CH2)n-COOH이고;
R18은 -C(R8)2-C(R8)2-아릴, -C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8 헤테로사이클), 및 -C(R8)2-C(R8)2-(C3-C8 카보사이클)로부터 선택되고;
n은 0 내지 6 범위의 정수이다.
일 구현예에서, R3, R4 및 R7은 독립적으로 이소프로필 또는 sec-부틸이고 R5는 -H 또는 메틸이다. 예시적인 구현예에서, R3 및 R4 각각은 이소프로필이고, R5는 -H이고, R7은 sec-부틸이다.
또 하나의 구현예에서, R2 및 R6 각각은 메틸이고, R9는 -H이다.
또 하나의 구현예에서, 각 경우의 R8은 -OCH3이다.
일부 구현예에서, R3 및 R4 각각은 이소프로필이고, R2 및 R6 각각은 메틸이고, R5는 -H이고, R7은 sec-부틸이고, 각 경우의 R8은 -OCH3이고, R9는 -H이다.
일 구현예에서, Z는 -O- 또는 -NH-이다.
일 구현예에서, R10은 아릴이다.
예시적인 구현예에서, R10은 -페닐이다.
예시적인 구현예에서, Z가 -O-인 경우, R11은 -H, 메틸 또는 t-부틸이다.
일 구현예에서, Z가 -NH인 경우, R11은 -CH(R15)2이고, 여기서 R15는 -(CH2)n-N(R16)2이고, R16은 -C1-C8 알킬 또는 -(CH2)n-COOH이다.
또 하나의 구현예에서, Z가 -NH인 경우, R11은 -CH(R15)2이고, 여기서 R15는 -(CH2)n-SO3H이다.
식 DE의 예시적인 아우리스타틴의 구현예는 MMAE이며, 여기서 물결선은 항체-약물 접합체의 링커(L)에 대한 공유 결합을 나타낸다:
Figure pct00039
식 DF의 예시적인 아우리스타틴의 구현예는 MMAF이며, 여기서 물결선은 항체-약물 접합체의 링커(L)에 대한 공유 결합을 나타낸다:
Figure pct00040
다른 예시적인 구현예에는 펜타펩타이드 아우리스타틴 약물 모이어티의 C-말단에서 페닐알라닌 카복시 변형을 갖는 모노메틸발린 화합물(WO 2007/008848) 및 펜타펩타이드 아우리스타틴 약물 모이어티의 C-말단에서 페닐알라닌 측쇄 변형을 갖는 모노메틸발린 화합물(WO 2007/008603)이 포함된다.
MMAE 또는 MMAF 및 다양한 링커 성분을 포함하는 식 I의 ADC의 비제한적인 예시적 구현예는 하기 구조 및 약어를 갖는다(여기서 "Ab"는 항체이고; p는 1 내지 약 8이고, "Val-Cit"는 발린-시트룰린 디펩타이드이고; "S"는 황 원자이다:
Figure pct00041
MMAF 및 다양한 링커 성분을 포함하는 식 I의 ADC의 비제한적인 예시적 구현예에는 Ab-MC-PAB-MMAF 및 Ab-PAB-MMAF가 추가로 포함된다. 단백분해로 절단가능하지 않은 링커에 의해 항체에 부착된 MMAF를 포함하는 면역접합체는 단백분해로 절단가능한 링커에 의해 항체에 부착된 MMAF를 포함하는 면역접합체에 필적하는 활성을 보유하는 것으로 나타났다(Doronina 등(2006) Bioconjugate Chem . 17:114-124). 일부 그와 같은 구현예에서, 약물 방출은 세포에서 항체 분해에 의해 영향받는 것으로 여겨진다.
전형적으로, 펩타이드-기반 약물 모이어티는 2개 이상 아미노산 및/또는 펩타이드 단편 간에 펩타이드 결합을 형성하여 제조될 수 있다. 그와 같은 펩타이드 결합은, 예를 들면 액상 합성 방법에 따라 제조될 수 있다(예를 들면, E. Schroeder 및 K. Luebke, "The Peptides", volume 1, pp 76-136, 1965, Academic Press 참고). 아우리스타틴/돌라스타틴 약물 모이어티는, 일부 구현예에서 하기 방법에 따라 제조될 수 있다: US 7498298; US 5635483; US 5780588; Pettit 등(1989) J. Am. Chem . Soc. 111:5463-5465; Pettit 등(1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277; Pettit, G.R. 등. Synthesis, 1996, 719-725; Pettit 등(1996) J. Chem . Soc . Perkin Trans. 1 5:859-863; 및 Doronina(2003) Nat. Biotechnol. 21(7):778-784.
일부 구현예에서, 식 DE 및 DF의 아우리스타틴/돌라스타틴 약물 모이어티, 예컨대 MMAE 및 MMAF, 그리고 약물-링커 중간체 및 이들의 유도체, 예컨대 MC-MMAF, MC-MMAE, MC-vc-PAB-MMAF, 및 MC-vc-PAB-MMAE는 [US 7498298; Doronina 등(2006) Bioconjugate Chem. 17:114-124; 및 Doronina 등(2003) Nat. Biotech. 21:778-784]에 기재된 방법을 이용하여 제조된 다음 관심 항체에 접합될 수 있다.
(3) 칼리키아마이신
일부 구현예에서, 면역접합체는 하나 이상의 칼리키아마이신 분자에 접합된 항체를 포함한다. 칼리키아마이신 패밀리의 항생제, 및 이들의 유사체는 피코몰 미만 농도에서 이중-가닥 DNA 절단을 일으킬 수 있다(Hinman 등(1993) Cancer Research 53:3336-3342; Lode 등(1998) Cancer Research 58:2925-2928). 칼리키아마이신은 세포내 작용 부위를 갖지만, 특정 예에서 원형질막을 쉽게 통과하지 못한다. 따라서, 항체-매개된 내재화를 통한 이들 제제의 세포 흡수는, 일부 구현예에서 이들의 세포독성 효과를 크게 증강시킬 수 있다. 칼리키아마이신 약물 모이어티를 포함하는 항체-약물 접합체를 제조하는 비제한적인 예시적 방법이, 예를 들면 US 5712374; US 5714586; US 5739116; 및 US 5767285에 기재된다.
(4) 피롤로벤조디아제핀
일부 구현예에서, ADC는 피롤로벤조디아제핀(PBD)을 포함한다. 일부 구현예에서, PDB 이량체는 특정 DNA 서열을 인식하고 이에 결합한다. 천연 생성물 안트라마이신인 PBD는 1965년에 최초 보고되었다(Leimgruber 등(1965) J. Am. Chem . Soc., 87:5793-5795; Leimgruber 등(1965) J. Am. Chem . Soc., 87:5791-5793). 그 이후, 트리사이클릭 PBD 스캐폴드의 이량체(US 6884799; US 7049311; US 7067511; US 7265105; US 7511032; US 7528126; US 7557099)를 포함하는 천연 발생체 및 유사체 모두의 수많은 PBD가 보고되었다(Thurston 등(1994) Chem. Rev. 1994, 433-465). 임의의 특정 이론에 구애받고자 하지 않고, 이량체 구조는 B-형태 DNA의 좁은 홈을 갖는 이소헬리시티(isohelicity)에 적절한 3차원 형상을 부여하여 결합 부위에서 꼭끼워 맞춤을 야기하는 것으로 여겨진다(Kohn, Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11(1975); Hurley 및 Needham-VanDevanter(1986) Acc . Chem . Res., 19:230-237). C2 아릴 치환체를 보유하는 이량체 PBD 화합물은 세포독성 제제로 유용한 것으로 나타났다(Hartley 등(2010) Cancer Res. 70(17):6849-6858; Antonow(2010) J. Med . Chem. 53(7):2927-2941; Howard 등(2009) Bioorganic and Med. Chem. Letters 19(22):6463-6466).
PBD 이량체는 항체에 접합되었고, 생성 ADC는 항-암 특성을 갖는 것으로 나타났다. PBD 이량체 상의 비제한적인 예시적 연결 부위에는 5-원 피롤로 고리, PBD 단위 간 결속체, 및 N10-C11 이민 그룹이 포함된다(WO 2009/016516; US 2009/304710; US 2010/047257; US 2009/036431; US 2011/0256157; WO 2011/130598).
ADC의 비제한적인 예시적 PBD 이량체 성분은 하기 식 A:
Figure pct00042
및 이들의 염 및 용매화물이며,
식 중, 물결선은 링커에 대한 공유 결합 부위를 나타내고;
점선은 C1과 C2 또는 C2와 C3 사이 이중 결합의 선택적 존재를 나타내고;
R2는 H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R 및 COR로부터 독립적으로 선택되고, 할로 또는 디할로로부터 선택적으로 추가로 선택되고, 여기서 RD는 R, CO2R, COR, CHO, CO2H, 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
R6 및 R9는 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
R7은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
Q는 O, S 및 NH로부터 독립적으로 선택되고;
R11은 H, 또는 R이고, 여기서 Q는 O, SO3M이고, 여기서 M은 금속 양이온이고;
R 및 R' 각각은 선택적으로 치환된 C1-8 알킬, C1-12 알킬, C3-8 헤테로사이클릴, C3-20 헤테로사이클, 및 C5-20 아릴 그룹으로부터 독립적으로 선택되고, 선택적으로 그룹 NRR'과 관련하여, R 및 R'은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 선택적으로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
R12, R16, R19 및 R17은 R2, R6, R9 및 R7 각각에 대해 정의된 바와 같고;
R"은 C3-12 알킬렌 그룹이고, 이 사슬은 하나 이상의 헤테로원자, 예를 들면 O, S, N(H), NMe 및/또는 선택적으로 치환되는 방향족 고리, 예를 들면 벤젠 또는 피리딘에 의해 방해될 수 있고;
X 및 X'은 O, S 및 N(H)로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, R 및 R' 각각은 선택적으로 치환된 C1-12 알킬, C3-20 헤테로사이클, 및 C5-20 아릴 그룹으로부터 독립적으로 선택되고, 선택적으로 그룹 NRR'과 관련하여, R 및 R'은 이들이 부착된 질소 원자와 함께 선택적으로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 고리를 형성한다.
일부 구현예에서, R9 및 R19는 H이다.
일부 구현예에서, R6 및 R16은 H이다.
일부 구현예에서, R7 및 R17은 둘 다 OR7A이고, 여기서 R7A는 선택적으로 치환된 C1-4 알킬이다. 일부 구현예에서, R7A는 Me이다. 일부 구현예에서, R7A는 Ch2Ph이고, 여기서 Ph는 페닐 그룹이다.
일부 구현예에서, X는 O이다.
일부 구현예에서, R11은 H이다.
일부 구현예에서, 각 모노머 단위에서 C2 및 C3 간에는 이중 결합이 존재한다.
일부 구현예에서, R2 및 R12는 H 및 R로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 독립적으로 R이다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 독립적으로 선택적으로 치환된 C5-20 아릴 또는 C5-7 아릴 또는 C8-10 아릴이다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 독립적으로 선택적으로 치환된 페닐, 티에닐, 나프틸, 피리딜, 퀴놀리닐, 또는 이소퀴놀리닐이다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 =O, =CH2, =CH-RD, 및 =C(RD)2로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, R2 및 R12는 각각 =CH2이다. 일부 구현예에서, R2 및 R12 각각은 H이다. 일부 구현예에서, R2 및 R12 각각은 =O이다. 일부 구현예에서, R2 및 R12 각각은 =CF2이다. 일부 구현예에서, R2 및/또는 R12는 독립적으로 =C(RD)2이다. 일부 구현예에서, R2 및/또는 R12는 독립적으로 =CH-RD이다.
일부 구현예에서, R2 및/또는 R12가 =CH-RD인 경우, 각 그룹은 독립적으로 아래에 나타낸 입체배치 중 하나를 가질 수 있다:
Figure pct00043
일부 구현예에서, =CH-RD는 입체배치(I)이다.
일부 구현예에서, R"은 C3 알킬렌 그룹 또는 C5 알킬렌 그룹이다.
일부 구현예에서, ADC의 예시적인 PBD 이량체 성분은 하기 식 A(I)의 구조를 갖는다:
Figure pct00044
식 중, n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, ADC의 예시적인 PBD 이량체 성분은 하기 식 A(II)의 구조를 갖는다:
Figure pct00045
식 중, n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, ADC의 예시적인 PBD 이량체 성분은 하기 식 A(III)의 구조를 갖는다:
Figure pct00046
식 중, RE 및 RE" 각각은 H 또는 RD로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 RD는 상기와 같이 정의되며;
n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, n은 0이다. 일부 구현예에서, n은 1이다. 일부 구현예에서, RE 및/또는 RE"는 H이다. 일부 구현예에서, RE 및 RE"는 H이다. 일부 구현예에서, RE 및/또는 RE"는 RD이고, 여기서 RD는 선택적으로 치환된 C1-12 알킬이다. 일부 구현예에서, RE 및/또는 RE"는 RD이고, 여기서 RD는 메틸이다.
일부 구현예에서, ADC의 예시적인 PBD 이량체 성분은 하기 식 A(IV)의 구조를 갖는다:
Figure pct00047
식 중, Ar1 및 Ar2 각각은 독립적으로 선택적으로 치환된 C5-20 아릴이고; 여기서 Ar1 및 Ar2는 동일하거나 상이할 수 있고;
n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, ADC의 예시적인 PBD 이량체 성분은 하기 식 A(V)의 구조를 갖는다:
Figure pct00048
식 중, Ar1 및 Ar2 각각은 독립적으로 선택적으로 치환된 C5-20 아릴이고; 여기서 Ar1 및 Ar2는 동일하거나 상이할 수 있고;
n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, Ar1 및 Ar2 각각은 선택적으로 치환된 페닐, 푸라닐, 티오페닐 및 피리딜로부터 독립적으로 선택된다. 일부 구현예에서, Ar1 및 Ar2 각각은 독립적으로 선택적으로 치환된 페닐이다. 일부 구현예에서, Ar1 및 Ar2 각각은 독립적으로 선택적으로 치환된 티엔-2-일 또는 티엔-3-일이다. 일부 구현예에서, Ar1 및 Ar2 각각은 독립적으로 선택적으로 치환된 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐이다. 퀴놀리닐 또는 이소퀴놀리닐 그룹은 임의의 이용가능한 고리 위치를 통해 PBD 코어에 결합될 수 있다. 예를 들면, 퀴놀리닐은 퀴놀린-2-일, 퀴놀린-3-일, 퀴놀린-4일, 퀴놀린-5-일, 퀴놀린-6-일, 퀴놀린-7-일 및 퀴놀린-8-일일 수 있다. 일부 구현예에서, 퀴놀리닐은 퀴놀린-3-일 및 퀴놀린-6-일로부터 선택된다. 이소퀴놀리닐은 이소퀴놀린-1-일, 이소퀴놀린-3-일, 이소퀴놀린-4일, 이소퀴놀린-5-일, 이소퀴놀린-6-일, 이소퀴놀린-7-일 및 이소퀴놀린-8-일일 수 있다. 일부 구현예에서, 이소퀴놀리닐은 이소퀴놀린-3-일 및 이소퀴놀린-6-일로부터 선택된다.
ADC의 추가의 비제한적인 예시적 PBD 이량체 성분은 하기 식 B:
Figure pct00049
및 이들의 염 및 용매화물이며,
식 중, 물결선은 링커에 대한 공유 결합 부위를 나타내고;
OH에 연결된 물결선은 S 또는 R 입체배치를 나타내고;
RV1 및 RV2는 H, 메틸, 에틸 및 페닐(이 페닐은, 특히 4 위치에서 플루오로로 선택적으로 치환될 수 있음) 및 C5-6 헤테로사이클릴로부터 독립적으로 선택되고; 여기서 RV1 및 RV2는 동일하거나 상이할 수 있고;
n은 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, RV1 및 RV2는 H, 페닐, 및 4-플루오로페닐로부터 독립적으로 선택된다.
일부 구현예에서, 링커는 B 고리의 N10 이민, C 고리의 C-2 엔도/엑소 위치, 또는 A 고리를 연결하는 결속체 단위를 포함하는 PBD 이량체 약물 모이어티의 다양한 부위 중 하나에 부착될 수 있다(아래 구조 C(I) 및 C(II)를 참고하라).
ADC의 비제한적인 예시적 PBD 이량체 성분에는 하기 식 C(I) 및 C(II)가 포함된다:
Figure pct00050
식 C(I) 및 C(II)를 이들의 N10-C11 이민 형태로 나타낸다. 예시적인 PBD 약물 모이어티에는 또한 아래 표에 나타낸 카비놀아민 및 보호된 카비놀아민 형태도 포함된다:
Figure pct00051
식 중,
X는 CH2(n = 1 내지 5), N, 또는 O이고;
Z 및 Z'은 OR 및 NR2로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R은 1 내지 5개의 탄소 원자를 함유하는 1차, 2차 또는 3차 알킬 사슬이고;
R1, R'1, R2 및 R'2 각각은 H, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C5-20 아릴(치환된 아릴 포함), C5-20 헤테로아릴 그룹, -NH2, -NHMe, -OH, 및 -SH로부터 독립적으로 선택되고, 일부 구현예에서, 알킬, 알케닐 및 알키닐 사슬은 최대 5개의 탄소 원자를 포함하며;
R3 및 R'3은 H, OR, NHR, 및 NR2로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 R은 1 내지 5개의 탄소 원자를 함유하는 1차, 2차 또는 3차 알킬 사슬이고;
R4 및 R'4는 H, Me, 및 OMe로부터 독립적으로 선택되고;
R5는 C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C5-20 아릴(할로, 니트로, 시아노, 알콕시, 알킬, 헤테로사이클릴로 치환된 아릴 포함) 및 C5-20 헤테로아릴 그룹으로부터 선택되고, 일부 구현예에서, 알킬, 알케닐 및 알키닐 사슬은 최대 5개의 탄소 원자를 포함하고;
R11은 H, C1-C8 알킬, 또는 보호 그룹(예컨대 아세틸, 트리플루오로아세틸, t-부톡시카보닐(BOC), 벤질옥시카보닐(CBZ), 9-플루오레닐메틸렌옥시카보닐(Fmoc), 또는 자기-희생성 단위, 예컨대 발린-시트룰린-PAB를 포함하는 모이어티)이고;
R12는 H, C1-C8 알킬, 또는 보호 그룹이고;
여기서 R1, R'1, R2, R'2, 또는 R12 중 하나의 수소 또는 A 고리 간 -OCH2CH2(X)nCH2CH2O- 스페이서의 수소는 ADC의 링커에 연결된 결합으로 대체된다.
ADC의 예시적인 PDB 이량체 부분에는 비제한적으로 하기가 포함된다(물결선은 링커의 공유 결합 부위를 나타냄):
Figure pct00052
PBD 이량체;
PBD 이량체를 포함하는 ADC의 비제한적인 예시적 구현예는 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00053
PBD 이량체-val-cit-PAB-Ab;
Figure pct00054
PBD 이량체-말레이미드-아세탈-Ab;
Figure pct00055
PBD 이량체-Phe-homoLys-PAB-Ab,
여기서 n은 0 내지 12이다. 일부 구현예에서, n은 2 내지 10이다. 일부 구현예에서, n은 4 내지 8이다. 일부 구현예에서, n은 4, 5, 6, 7, 및 8로부터 선택된다.
PBD 이량체-val-cit-PAB-Ab 및 PBD 이량체-Phe-homoLys-PAB-Ab의 링커는 프로테아제로 절단가능한 반면, PBD 이량체-말레이미드-아세탈의 링커는 산에 불안정하다.
PBD 이량체 및 PBD 이량체를 포함하는 ADC는 당해분야에서 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 예를 들면, WO 2009/016516; US 2009/304710; US 2010/047257; US 2009/036431; US 2011/0256157; WO 2011/130598을 참고하라.
(5) 안트라사이클린
일부 구현예에서, ADC는 안트라사이클린을 포함한다. 안트라사이클린은 세포독성 활성을 나타내는 항생제 화합물이다. 임의의 특정 이론에 구애받고자 하지 않고, 연구는 안트라사이클린이 하기를 포함하는 수많은 상이한 기전에 의해 세포를 사멸하도록 작동할 수 있음을 시사하였다: 1) 세포 DNA 내로 약물 분자를 개재함으로써 DNA-의존적 핵산 합성을 억제함; 2) 약물에 의해 자유 라디칼을 생산한 뒤 세포성 거대분자와 반응하여 세포에 손상을 유도함, 및/또는 3) 약물 분자와 세포막의 상호작용(예를 들면, C. Peterson 등, "Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia" in Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy; N.R. Bachur, "Free Radical Damage" id., pp.97-102 참고). 이들의 세포독성 가능성으로 인해, 안트라사이클린은 수많은 암, 예컨대 백혈병, 유방 암종, 폐 암종, 난소 선암종 및 육종의 치료에서 사용되었다(예를 들면, P.H- Wiernik, Anthracycline : Current Status And New Developments p 11 참고).
비제한적인 예시적 안트라사이클린에는 독소루비신, 에피루비신, 아이다루비신, 다우노마이신, 네모루비신, 및 이들의 유도체가 포함된다. 다우노루비신 및 독소루비신의 면역접합체 및 전구약물이 제조되고 연구되었다(Kratz 등(2006) Current Med . Chem. 13:477-523; Jeffrey 등(2006) Bioorganic & Med . Chem . Letters 16:358-362; Torgov 등(2005) Bioconj . Chem. 16:717-721; Nagy 등(2000) Proc . Natl . Acad . Sci. USA 97:829-834; Dubowchik 등(2002) Bioorg . & Med . Chem . Letters 12:1529-1532; King 등(2002) J. Med . Chem. 45:4336-4343; EP 0328147; US 6630579). 항체-약물 접합체 BR96-독소루비신은 종양-연관된 항원 루이스-Y와 특이적으로 반응하며, I상 및 II상 연구에서 평가되었다(Saleh 등(2000) J. Clin . Oncology 18:2282-2292; Ajani 등(2000) Cancer Jour. 6:78-81; Tolcher 등(1999) J. Clin. Oncology 17:478-484).
PNU-159682는 네모루비신의 강력한 대사물(또는 유도체)이다(Quintieri 등(2005) Clinical Cancer Research 11(4):1608-1617). 네모루비신은 독소루비신의 글리코사이드 아미노 상 2-메톡시모폴리노 그룹과 독소루비신의 반합성 유사체이며, 간세포 암종에 대한 II/III상 시험(Sun 등(2003) Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 22, Abs1448; Quintieri(2003) Proceedings of the American Association of Cancer Research, 44:1st Ed, Abs 4649; Pacciarini 등(2006) Jour. Clin . Oncology 24:14116)을 포함하는 임상 평가 하에 있다(Grandi 등(1990) Cancer Treat. Rev. 17:133; Ripamonti 등(1992) Brit. J. Cancer 65:703; ).
네모루비신 또는 네모루비신 유도체를 포함하는 비제한적인 예시적 ADC를 하기 식 Ia에 나타낸다:
Figure pct00056
식 중, R1은 수소 원자, 하이드록시 또는 메톡시 그룹이며 R2는 C1-C5 알콕시 그룹, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염이고;
L1 및 Z는 함께 본원에 기재된 바와 같은 링커(L)이고;
T는 본원에 기재된 바와 같은 항체(Ab)이고;
m은 1 내지 약 20이다. 일부 구현예에서, m은 1 내지 10, 1 내지 7, 1 내지 5, 또는 1 내지 4이다.
일부 구현예에서, R1 및 R2 둘 모두는 메톡시(-OMe)이다.
네모루비신 또는 네모루비신 유도체를 포함하는 추가의 비제한적인 예시적 ADC를 하기 식 Ib에 나타낸다:
Figure pct00057
식 중, R1은 수소 원자, 하이드록시 또는 메톡시 그룹이고, R2는 C1-C5 알콕시 그룹, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염이고;
L2 및 Z는 함께 본원에 기재된 바와 같은 링커(L)이고;
T는 본원에 기재된 바와 같은 항체(Ab)이고;
m은 1 내지 약 20이다. 일부 구현예에서, m은 1 내지 10, 1 내지 7, 1 내지 5, 또는 1 내지 4이다.
일부 구현예에서, R1 및 R2 둘 모두는 메톡시(-OMe)이다.
일부 구현예에서, 네모루비신-함유 ADC의 네모루비신 성분은 PNU-159682이다. 일부 그와 같은 구현예에서, ADC의 약물부는 하기 구조 중 하나를 가질 수 있다:
Figure pct00058
또는
Figure pct00059
식 중, 물결선은 링커(L)에 대한 결합을 나타낸다.
PNU-159682를 포함하는 안트라사이클린은 본원에 기재된 링커를 포함하는, 몇 개의 연결 부위 및 다양한 링커를 통해 항체에 접합될 수 있다(US 2011/0076287; WO2009/099741; US 2010/0034837; WO 2010/009124).
네모루비신 및 링커를 포함하는 예시적인 ADC에는 비제한적으로 하기가 포함된다:
Figure pct00060
PNU-159682 말레이미드 아세탈-Ab;
Figure pct00061
PNU-159682-val-cit-PAB-Ab;
Figure pct00062
PNU-159682-val-cit-PAB-스페이서-Ab;
Figure pct00063
PNU-159682-val-cit-PAB-스페이서(R1R2)-Ab,
(식 중, R1 및 R2는 H 및 C1-C6 알킬로부터 독립적으로 선택됨);
Figure pct00064
PNU-159682-말레이미드-Ab.
PNU-159682 말레이미드 아세탈-Ab 링커는 산에 불안정한 반면, PNU-159682-val-cit-PAB-Ab, PNU-159682-val-cit-PAB-스페이서-Ab, 및 PNU-159682-val-cit-PAB-스페이서(R1R2)-Ab 링커는 프로테아제로 절단가능하다.
(6) 다른 약물 모이어티
약물 모이어티에는 또한 비제한적으로, 디프테리아 A 사슬, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 사슬(슈도모나스 에어루기노사 유래), 리신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모덱신 A 사슬, 알파-사르신, 알류라이테스 포르디이 단백질, 디안틴 단백질, 파이톨라카 아메리카나 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 차란티아 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 억제제, 젤로닌, 마이토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함하는 젤다나마이신(Mandler 등(2000) J. Nat. Cancer Inst . 92(19):1573-1581; Mandler 등(2000) Bioorganic & Med . Chem . Letters 10:1025-1028; Mandler 등(2002) Bioconjugate Chem . 13:786-791); 및 효소 활성 독소 및 이들의 단편이 포함된다. 예를 들면, WO 93/21232를 참고하라.
약물 모이어티에는 또한 핵산분해 활성을 갖는 화합물(예를 들면, 리보뉴클레아제 또는 DNA 엔도뉴클레아제)이 포함된다.
특정 구현예에서, 면역접합체는 고방사성 원자를 포함할 수 있다. 다양한 방사성 동위원소가 방사성 접합된 항체의 생산을 위해 이용가능하다. 그 예에는 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소가 포함된다. 일부 구현예에서, 면역접합체가 검출을 위해 사용되는 경우, 이는 섬광계수 연구를 위한 방사성 원자, 예를 들면 Tc99 또는 I123, 또는 핵자기 공명(NMR) 영상화(자기 공명 영상, MRI로도 알려져 있음)를 위한 스핀 표지, 예컨대 지르코늄-89, 요오드-123, 요오드-131, 인듐-111, 불소-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철을 포함할 수 있다. 지르코늄-89는 다양한 금속 킬레이트제와 복합화되고, 예를 들면 PET 영상화를 위해 항체에 접합될 수 있다(WO 2011/056983).
방사성- 또는 다른 표지는 공지된 방식으로 면역접합체에 편입될 수 있다. 예를 들면, 펩타이드는, 예를 들면 하나 이상의 수소 대신 하나 이상의 불소-19 원자를 포함하는 적합한 아미노산 전구체를 이용하여 생합성되거나 화학적으로 합성될 수 있다. 일부 구현예에서, 표지, 예컨대 Tc99, I123, Re186, Re188 및 In111은 항체에서 시스테인 잔기를 통해 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, 이트륨-90은 항체의 라이신 잔기를 통해 부착될 수 있다. 일부 구현예에서, IODOGEN 방법(Fraker 등(1978) Biochem . Biophys . Res. Commun. 80: 49-57이 요오드-123을 편입하기 위해 사용될 수 있다. ["Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy"(Chatal, CRC Press 1989)]에는 특정한 다른 방법이 기재된다.
특정 구현예에서, 면역접합체는 전구약물-활성화 효소에 접합된 항체를 포함할 수 있다. 일부 그와 같은 구현예에서, 전구약물-활성화 효소는 전구약물(예를 들면, 펩티딜 화학치료제, WO 81/01145 참고)을 활성 약물, 예컨대 항-암 약물로 전환한다. 그와 같은 면역접합체는, 일부 구현예에서 항체-의존적 효소-매개된 전구약물 요법("ADEPT")에서 유용하다. 항체에 접합될 수 있는 효소에는 비제한적으로 포스페이트-함유 전구약물을 자유 약물로 전환하기 유용한 알칼리성 포스파타제; 설페이트-함유 전구약물을 자유 약물로 전환하기 유용한 아릴설파타제; 비독성 5-플루오로시토신을 항-암 약물, 5-플루오로우라실로 전환하기 유용한 시토신 데아미나제; 펩타이드-함유 전구약물을 자유 약물로 전환하기 유용한 프로테아제, 예컨대 세라티아 프로테아제, 서몰리신, 서브틸리신, 카복시펩티다제 및 카텝신(예컨대 카텝신 B 및 L); D-아미노산 치환체를 함유하는 전구약물을 전환하기 유용한 D-알라닐카복시펩티다제; 당화된 전구약물을 자유 약물로 전환하기 유용한 탄수화물-절단 효소, 예컨대 β-갈락토시다제 및 뉴라미니다제; β-락탐 유도체화된 약물을 자유 약물로 전환하기 유용한 β-락타마제; 및 이들의 아민 질소에서 각각 페녹시아세틸 또는 페닐아세틸 그룹으로 유도체화된 약물을 자유 약물로 전환하기 유용한 페니실린 아미다제, 예컨대 페니실린 V 아미다제 및 페니실린 G 아미다제가 포함된다. 일부 구현예에서, 효소는 당해기술에서 잘 알려진 재조합 DNA 기법에 의해 항체에 공유 결합될 수 있다. 예를 들면, [Neuberger 등, Nature 312:604-608(1984)]를 참고하라.
c) 약물 부하
약물 부하는 식 I의 분자에서 항체 하나 당 약물 모이어티의 평균 수 p로 나타낸다. 약물 부하는 항체 하나 당 1 내지 20개 약물 모이어티(D) 범위일 수 있다. 식 I의 ADC에는 1 내지 20개 범위의 약물 모이어티로 접합된 항체 집합이 포함된다. 접합 반응으로부터 ADC의 제조 시 항체 하나 당 약물 모이어티의 평균 수는 종래의 수단, 예컨대 질량 분광학, ELISA 분석, 및 HPLC로 특성규명될 수 있다. p에 관해 ADC의 정량적 분포도 결정될 수 있다. 일부 예에서, 균질 ADC의 분리, 정제, 및 특성규명(여기서 p는 다른 약물 부하를 갖는 ADC로부터의 특정 값임)은 역상 HPLC 또는 전기영동과 같은 수단에 의해 달성될 수 있다.
일부 항체-약물 접합체에 있어서, p는 항체 상의 부착 부위의 수에 의해 제한될 수 있다. 예를 들면, 상기 특정한 예시적 구현예에서와 같이 부착이 시스테인 티올인 경우, 항체는 단 하나의 또는 몇 개의 시스테인 티올 그룹을 가질 수도 있고, 또는 이를 통해 링커가 부착될 수 있는 단 하나의 또는 몇 개의 충분히 반응성인 티올 그룹을 가질 수도 있다. 특정 구현예에서, 더 높은 약물 부하는, 예를 들면 p > 5인 경우, 특정 항체-약물 접합체의 응집, 불용성, 독성, 또는 세포 투과도 상실을 유도할 수 있다. 특정 구현예에서, ADC에 대한 평균 약물 부하는 1 내지 약 8; 약 2 내지 약 6; 또는 약 3 내지 약 5 범위이다. 사실상, 특정 ADC에 있어서, 항체 하나 당 약물 모이어티의 최적 비는 8 미만일 수 있고, 약 2 내지 약 5일 수 있는 것으로 나타났다(US 7498298).
특정 구현예에서, 이론적 최대치 미만의 약물 모이어티가 접합 반응 동안 항체에 접합된다. 항체는, 예를 들면 아래에서 논의된 바와 같이 약물-링커 중간체 또는 링커 시약과 반응하지 않는 라이신 잔기를 함유할 수 있다. 일반적으로, 항체는 약물 모이어티에 연결될 수 있는 많은 자유 및 반응성 시스테인 티올 그룹을 함유하지 않는다; 사실상 항체에서 대부분의 시스테인 티올 잔기는 디설파이드 가교로 존재한다. 특정 구현예에서, 항체는 부분적인 또는 전체적인 환원 조건 하에 환원제, 예컨대 디티오트레이톨(DTT) 또는 트리카보닐에틸포스핀(TCEP)으로 환원되어 반응성 시스테인 티올 그룹을 생성할 수 있다. 특정 구현예에서, 항체는 변성 조건을 거쳐서 반응성 친핵 그룹, 예컨대 라이신 또는 시스테인을 드러낸다.
ADC의 부하(약물/항체 비)는 상이한 방식으로, 예를 들면 하기에 의해 조절될 수 있다: (i) 항체에 대해 몰 과잉의 약물-링커 중간체 또는 링커 시약을 제한함, (ii) 접합 반응 시간 또는 온도를 제한함, 및 (iii) 시스테인 티올 변형을 위한 부분적 또는 제한 환원 조건.
1 초과의 친핵성 그룹이 약물-링커 중간체 또는 링커 시약과 반응하는 경우, 생성 생성물은 항체에 부착된 하나 이상의 약물 모이어티 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물임이 이해된다. 항체 하나 당 약물의 평균 수는 이중 ELISA 항체 분석에 의해 혼합물로부터 계산될 수 있고, 이는 항체에 대해 특이적이고 약물에 대해 특이적이다. 개별 ADC 분자는 질량 분광학에 의해 혼합물에서 확인되고, HPLC, 예를 들면 소수성 상호작용 크로마토그래피에 의해 분리될 수 있다(예를 들면, McDonagh 등(2006) Prot. Engr. Design & Selection 19(7):299-307; Hamblett 등(2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Hamblett, K.J. 등. "Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate", Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C. 등. "Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates", Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004 참고). 특정 구현예에서, 단일 부하값을 갖는 균질 ADC가 전기영동 또는 크로마토그래피에 의해 접합 혼합물로부터 단리될 수 있다.
d) 면역접합체 특정 제조 방법
식 I의 ADC는 하기를 포함하는, 당해분야의 숙련가에게 공지된 유기 화학 반응, 조건 및 시약을 채용하는 몇 개의 경로에 의해 제조될 수 있다: (1) 항체의 친핵성 그룹과 2가 링커 시약을 반응시켜 공유 결합을 통해 Ab-L을 형성한 다음 약물 모이어티 D와 반응시킴; 및 (2) 약물 모이어티의 친핵성 그룹과 2가 링커 시약을 반응시켜 공유 결합을 통해 D-L을 형성한 다음 반응 항체의 친핵성 그룹과 반응시킴. 후자 경로를 통한 식 I의 ADC의 예시적인 제조 방법이, 명시적으로 본원에 참고로 편입된 US 7498298에 기재된다.
항체 상의 친핵성 그룹에는 비제한적으로 하기가 포함된다: (i) N-말단 아민 그룹, (ii) 측쇄 아민 그룹, 예를 들면 라이신, (iii) 측쇄 티올 그룹, 예를 들면 시스테인, 및 (iv) 당 하이드록실 또는 아미노 그룹(여기서 항체는 당화됨). 아민, 티올, 및 하이드록실 그룹은 친핵성이고, 하기를 포함하는 링커 모이어티 및 링커 시약 상의 친전자성 그룹과 공유 결합을 형성할 수 있다: (i) 활성 에스테르, 예컨대 NHS 에스테르, HOBt 에스테르, 할로포르메이트, 및 산 할로겐화물; (ii) 알킬 및 벤질 할라이드, 예컨대 할로아세트아미드; 및 (iii) 알데하이드, 케톤, 카복실, 및 말레이미드 그룹. 특정 항체는 환원성 사슬간 디설파이드, 즉 시스테인 가교를 갖는다. 항체가 완전히 또는 부분적으로 환원되도록 항체는 환원제, 예컨대 DTT(디티오트레이톨) 또는 트리카보닐에틸포스핀(TCEP)의 처리에 의해 링커 시약과의 접합에 반응이 될 수 있다. 이렇게 형성된 각각의 시스테인 가교는 이론적으로 2개의 반응성 티올 친핵체를 형성할 것이다. 추가의 친핵성 그룹은, 예를 들면 라이신 잔기와 2-이미노티올란(Traut 시약)의 반응으로 아민의 티올로의 전환을 일으킴으로써, 라이신 잔기의 변형을 통해 항체 내로 도입될 수 있다. 반응성 티올 그룹은 또한 1, 2, 3, 또는 4개 이상의 시스테인 잔기를 도입함으로써(예를 들면, 하나 이상의 비-원상태 시스테인 아미노산 잔기를 포함하는 변이체 항체를 제조함으로써) 항체 내로 도입될 수 있다.
본원에 제공된 항체-약물 접합체는 또한 항체 상의 친전자성 그룹, 예컨대 알데하이드 또는 케톤 카보닐 그룹과, 링커 시약 또는 약물 상의 친핵성 그룹 간 반응에 의해 생산될 수 있다. 링커 시약 상의 유용한 친핵성 그룹에는 비제한적으로 하이드라자이드, 옥심, 아미노, 하이드라진, 티오세미카바존, 하이드라진 카복실레이트, 및 아릴하이드라자이드가 포함된다. 일 구현예에서, 항체는 링커 시약 또는 약물 상의 친핵성 치환체와 반응할 수 있는 친전자성 모이어티를 도입하도록 변형된다. 또 하나의 구현예에서, 당화된 항체의 당류는, 예를 들면 퍼아이오데이트 산화 시약으로 산화되어 링커 시약 또는 약물 모이어티의 아민 그룹과 반응할 수 있는 알데하이드 또는 케톤 그룹을 형성할 수 있다. 생성 이민 쉬프 염기 그룹은 안정한 연결을 형성할 수도 있고, 또는 예를 들면 보로하이드라이드 시약에 의해 환원되어 안정한 아민 연결을 형성할 수도 있다. 일 구현예에서, 당화된 항체의 탄수화물 부분과 갈락토오스 옥시다제 또는 나트륨 메타-퍼아이오데이트의 반응은 약물(Hermanson, Bioconjugate Techniques) 상의 적절한 그룹과 반응할 수 있는 항체 내 카보닐(알데하이드 및 케톤) 그룹을 산출할 수 있다. 또 하나의 구현예에서, N-말단 세린 또는 트레오닌 잔기를 함유하는 항체는 나트륨 메타-퍼아이오데이트와 반응하여 첫 번째 아미노산 대신 알데하이드의 생산을 일으킬 수 있다(Geoghegan & Stroh,(1992) Bioconjugate Chem . 3:138-146; US 5362852). 그와 같은 알데하이드를 약물 모이어티 또는 링커 친핵체와 반응시킬 수 있다.
약물 모이어티 상의 예시적인 친핵성 그룹에는 비제한적으로 하기를 포함하는 링커 모이어티 및 링커 시약 상의 친전자성 그룹과 공유 결합을 형성하기 위해 반응할 수 있는 아민, 티올, 하이드록실, 하이드라자이드, 옥심, 하이드라진, 티오세미카바존, 하이드라진 카복실레이트, 및 아릴하이드라자이드 그룹이 포함된다: (i) 활성 에스테르, 예컨대 NHS 에스테르, HOBt 에스테르, 할로포르메이트, 및 산 할로겐화물; (ii) 알킬 및 벤질 할라이드, 예컨대 할로아세트아미드; (iii) 알데하이드, 케톤, 카복실, 및 말레이미드 그룹.
ADC를 제조하기 위해 사용될 수 있는 비제한적인 예시적 가교결합제 시약이 본원에서 "예시적인 링커"를 표제로 하는 섹션에 기재된다. 단백질성 모이어티 및 화학적 모이어티를 포함하는 두 모이어티를 연결하기 위해 그와 같은 가교결합제 시약을 사용하는 방법은 당해기술에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 항체 및 세포독성 제제를 포함하는 융합 단백질은, 예를 들면 재조합 기술 또는 펩타이드 합성에 의해 제조될 수 있다. 재조합 DNA 분자는 접합체의 원하는 특성을 파괴하지 않는 링커 펩타이드를 인코딩하는 영역에 의해 분리되거나 서로 인접한 접합체의 세포독성 부분 및 항체를 인코딩하는 영역을 포함할 수 있다.
또 하나의 구현예에서, 항체는 종양 사전-표적화에 이용하기 위해 "수용체"(예컨대 스트렙타비딘)에 접합될 수 있고, 여기서 항체-수용체 접합체는 환자에게 투여된 다음 제거제를 이용해서 순환으로부터 결합되지 않은 접합체를 제거하고, 그 다음 세포독성 제제(예를 들면, 약물 또는 방사성 뉴클레오타이드)에 접합된 "리간드"(예를 들면, 아비딘)가 투여된다.
E. 진단 및 검출을 위한 방법 및 조성물
어떤 구현예에서, 본원에서 제공된 항-FcRH5 항체 중 어떤 것은 생물학적 샘플 FcRH5 (예를 들면, FcRH5)의 존재를 검출하는데 유용하다. 용어 "검출하는"은, 본원에서 사용된 바와 같이 정량적 또는 정성적 검출을 포함한다. 어떤 구현예에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직을 포함한다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 조직은 다른 조직, 예를 들면, B-세포 및/또는 B-세포 연관된 조직에 대해 더 높은 수준으로 FcRH5를 발현시키는 정상 및/또는 암성 조직을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
일 측면에서, 생물학적 샘플에서 FcRH5의 존재를 검출하는 방법이 본원에서 제공된다. 어떤 구현예에서, 본 방법은 상기 생물학적 샘플을 항-FcRH5 항체와, 항-FcRH5 항체의 FcRH5에의 결합을 허용하는 조건 하에서 접촉시키는 단계, 및 복합체가 상기 항-FcRH5 항체와 FcRH5 사이에 형성되는 지를 검출하는 단계를 포함한다. 일 측면에서, 본 발명은 FcRH5의 증가된 발현과 연관된 장애를 진단하는 방법을 제공한다. 어떤 구현예에서, 본 방법은 시험 세포를 항-FcRH5 항체와 접촉시키는 단계; 상기 항-FcRH5 항체의 FcRH5에의 결합을 검출하여 상기 시험 세포에 의한 FcRH5의 발현 수준 (정량적으로 또는 정성적으로)을 측정하는 단계; 및 상기 시험 세포에 의한 FcRH5의 발현 수준을, 대조군 세포 (예를 들면, 그와 같은 정상 세포와 비교할만한 수준으로 FcRH5을 발현시키는 상기 시험 세포 또는 세포들과 동일한 조직 기원의 정상 세포)에 의한 FcRH5의 발현 수준과 비교하는 단계를 포함하고, 여기서 대조군 세포와 비교한 상기 시험 세포에 의한 FcRH5의 더 높은 발현 수준은 FcRH5의 증가된 발현과 연관된 장애의 존재를 나타낸다. 어떤 구현예에서, 시험 세포는 FcRH5의 증가된 발현과 연관된 장애를 갖는 것으로 의심되는 개체로부터 수득된다. 어떤 구현예에서, 장애는 세포 증식성 장애, 예컨대 암 또는 종양이다. 일부 구현예에서, FcRH5는 FcRH5c이다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
본원에서 기재된 항체를 사용하여 진단될 수 있는 예시적인 세포 증식성 장애는 B-세포 장애 및/또는 B-세포 증식성 장애를 포함하고, 이러한 장애는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 림프종, 다발성 골수종 비-호지킨 림프종 (NHL), 공격성 NHL, 재발된 공격성 NHL, 재발된 무통성 NHL, 난치성 NHL, 난치성 무통성 NHL, 만성적 림프구성 백혈병 (CLL), 작은 림프구 림프종, 백혈병, 모발 세포 백혈병 (HCL), 급성 림프구 백혈병 (ALL), 및 외투 세포 림프종.
일 구현예에서, 진단 또는 검출의 방법에서 사용하기 위한 항-FcRH5 항체가 제공된다. 추가 측면에서, 생물학적 샘플에서 FcRH5의 존재를 검출하는 방법이 제공된다. 어떤 구현예에서, 본 방법은 상기 생물학적 샘플을 본원에 기재된 바와 같은 항-FcRH5 항체와, 항-FcRH5 항체의 FcRH5에의 결합을 허용하는 조건 하에서 접촉시키는 단계, 및 복합체가 상기 생물학적 샘플에서 상기 항-FcRH5 항체와 FcRH5 사이에 형성되는 지를 검출하는 단계를 포함한다. 그와 같은 방법은 시험관내 또는 생체내 방법일 수 있다. 일 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 항-FcRH5 항체에 의한 요법에 대해 자격있는 대상체를 선택하기 위해 사용되고, 예를 들면 여기서 FcRH5는 환자의 선택을 위한 바이오마커이다. 추가 구현예에서, 생물학적 샘플은 세포 또는 조직 (예를 들면, 생검 물질)이다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
추가 구현예에서, 항-FcRH5 항체, 예를 들면, 암을 진단, 예측, 또는 스테이징하고, 요법의 적절한 과정을 결정하고, 또는 요법에 대한 암의 반응을 모니터링하기 위해 예를 들면, 생체내 영상화에 의해, 대상체에서 FcRH5-양성 암을 검출하기 위해 생체내에서 사용된다. 생체내 검출을 위해 당해기술에서 공지된 하나의 방법은 하기 예에서 기재된 바와 같이 면역-양전자 방출 단층촬영 (면역-PET): van Dongen 등, Oncologist 12:1379-1389 (2007) 및 Verel 등, J. Nucl . Med . 44:1271-1281 (2003). 그와 같은 구현예에서, 대상체에서 FcRH5-양성 암을 검출하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 표지된 항-FcRH5 항체를 FcRH5-양성 암을 가지고 있거나 가진 것으로 의심되는 대상체에게 투여하는 단계, 및 상기 대상체에서 상기 표지된 항-FcRH5 항체를 검출하는 단계를 포함하고, 여기서 상기 표지된 항-FcRH5 항체의 검출은 상기 대상체에서 FcRH5-양성 암을 나타낸다. 그와 같은 구현예의 어떤 것에서, 표지된 항-FcRH5 항체는 양전자 에미터, 예컨대 68Ga, 18F, 64Cu, 86Y, 76Br, 89Zr, 및 124I에 접합된 항-FcRH5 항체를 포함한다. 특정 구현예에서, 양전자 에미터는 89Zr이다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
추가 구현예에서, 진단 또는 검출의 방법은 기질에 고정된 제1 항-FcRH5 항체를 FcRH5의 존재에서 시험될 생물학적 샘플과 접촉시키는 단계, 상기 기질을 제2 항-FcRH5 항체에 노출시키는 단계, 및 제2 항-FcRH5가 생물학적 샘플에서 상기 제1 항-FcRH5 항체와 FcRH5 사이의 복합물에 결합되는 지를 검출하는 단계를 포함한다. 기질은 임의의 지지적 기질, 예를 들면, 유리, 금속, 세라믹, 폴리머 비드, 슬라이드, 칩, 및 다른 기질일 수 있다. 어떤 구현예에서, 생물학적 샘플은 세포, 혈액, 또는 조직 (예를 들면, 생검 물질)을 포함한다.
상기 구현예 중 어떤 것에 따나 진단 또는 검출될 수 있는 예시적인 장애는 하기를 포함한다: FcRH5-양성 암, 예컨대 FcRH5-양성 B-세포 증식성 질환, FcRH5-양성 형질 세포 신생물, 및 FcRH5-양성 다발성 골수종. 일부 구현예에서, FcRH5-양성 암은 항-FcRH5 면역조직화학 (IHC) 또는 인 시투 하이브리드화 (ISH)에 의해 검출된다. 일부 구현예에서, FcRH5-양성 암은 FcRH5 mRNA를 검출하는 역-전사효소 PCR (RT-PCR) 분석에 따라 FcRH5를 발현시키는 암이다. 일부 구현예에서, RT-PCR은 정량적 RT-PCR이다.
어떤 구현예에서, 표지된 항-FcRH5 항체가 제공된다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다. 표지는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 직접적으로 검출된 표지 또는 모이어티 (예컨대 형광성, 발색단, 전자 치밀, 화학발광, 및 방사성 표지), 뿐만 아니라 예를 들면, 효소에 의한 반응 또는 분자 상호작용을 통해 간접적으로 검출된 모이어티, 예컨대 효소 또는 리간드. 예시적인 표지는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 방사선동위원소 32P, 14C, 125I, 3H, 및 131I, 형광단 예컨대 희토류 킬레이트 또는 플루오레신 및 그것의 유도체, 로다민 및 그것의 유도체, 단실, 엄벨리페론, 루시퍼라아제, 예를 들면, 개똥벌레 루시퍼라아제 및 박테리아 루시퍼라아제 (미국 특허 번호 4,737,456), 루시페린, 2,3-디하이드로프탈라진디온, 홀스래디쉬 페록시다아제 (HRP), 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다아제, 글루코아밀라아제, 리소자임, 사카라이드 옥시다제, 예를 들면, 글루코오스 옥시다제, 갈락토오스 옥시다제, 및 글루코오스-6-포스페이트 탈수소효소, 헤테로사이클릭 옥시다제 예컨대 우리카제 및 잔틴 옥시다제 (이것은 염료 전구체를 산화시키기 위해 과산화수소를 이용하는 효소 예컨대 HRP, 락토페록시다아제, 또는 마이크로페록시다아제, 바이오틴/아비딘, 스핀 표지, 박테리오파아지 표지, 안정한 유리 라디칼, 등과 커플링됨). 또 하나의 구현예에서, 표지는 양전자 에미터이다. 양전자 에미터는 비제한적으로 68Ga, 18F, 64Cu, 86Y, 76Br, 89Zr, 및 124I를 포함한다. 특정 구현예에서, 양전자 에미터는 89Zr이다.
F. 약제학적 제형
본원에 기재된 바와 같은 항-FcRH5 항체 또는 면역접합체의 약제학적 제형은 동결건조된 제형 또는 수용액의 형태로 원하는 정도의 순도를 갖는 그와 같은 항체 또는 면역접합체를 하나 이상의 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합하여 제조된다 (Remington's Pharmaceutical Sciences 제16판, Osol, A. Ed. (1980)). 약제학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로, 이용된 투여량 및 농도로 수령체에 대해 비독성이고, 비제한적으로 하기를 포함한다: 버퍼 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 염화암모늄; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 폴리머 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 라이신; 모노사카라이드, 디사카라이드, 및 글루코오스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이트제 예컨대 EDTA; 당류 예컨대 수크로오스, 만니톨, 트레할로오스 또는 소르비톨; 염 형성 반대 이온 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들면 Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG). 본원의 예시적인 약제학적으로 허용가능한 담체는 추가로, 하기를 포함한다: 침입형 약물 분산제 예컨대 가용성 중성-활성 하이알로니다제 당단백질 (sHASEGP), 예를 들면, 인간 가용성 PH-20 하이알로니다제 당단백질, 예컨대 rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.). rHuPH20을 포함하는 어떤 예시적인 sHASEGPs 및 사용 방법은 US 특허 공보 번호 2005/0260186 및 2006/0104968에서 기재되어 있다. 일 측면에서, Shasegp는 하나 이상의 추가의 글리코사미노글리카나제 예컨대 콘드로이티나제와 조합된다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
예시적인 동결건조된 항체 또는 면역접합체 제형은 US 특허 번호 6,267,958에서 기재되어 있다. 수성 항체 또는 면역접합체 제형은 US 특허 번호 6,171,586 및 WO2006/044908에서 기재된 것들을 포함하고, 후자 제형은 히스티딘-아세테이트 버퍼를 포함한다.
본원의 제형은 또한, 치료될 특정한 적응증에 대한 필요에 따른 1 초과의 활성 성분, 바람직하게는 서로 부정적으로 영향을 주지 않는 상보적 활성을 갖는 것들을 함유할 수 있다.
활성 성분은, 콜로이드 약물 전달 시스템 (예를 들면, 리포좀, 알부민 마이크로구형체, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐) 또는 매크로에멀젼 중 예를 들면, 코아세르베이션 기술에 의해 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들면, 하이드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타실레이트) 마이크로캡슐 각각 내에 갇힐 수 있다. 그와 같은 기술은 하기에서 개시되어 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences 제16판, Osol, A. Ed. (1980).
지속 방출 제제가 제조될 수 있다. 지속 방출 제제의 적합한 예는 항체 및/또는 면역접합체를 함유하는 고형 소수성 폴리머의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 그것의 매트릭스는 형상화된 물품, 예를 들면 필름, 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
생체내 투여에 사용될 제형은 일반적으로 멸균된다. 멸균은, 예를 들면, 멸균된 여과 막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성될 수 있다.
G. 치료 방법 및 조성물
본원에서 제공된 항-FcRH5 항체 (예를 들면, FcRH5 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체 중 어떤 것은 방법, 예를 들면, 치료 방법에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
일 측면에서, 본원에서 제공된 항-FcRH5 항체 (예를 들면, FcRH5 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체는 FcRH5-양성 세포의 증식을 억제하는 방법에서 사용되고, 상기 방법은 상기 세포를 항-FcRH5 항체 (예를 들면, FcRH5 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체에, 항-FcRH5 항체 (예를 들면, FcRH5 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체의 세포의 표면 상의 FcRH5 (예를 들면, FcRH5c)으로의 결합에 대해 허용된 조건 하에서 노출시키고, 그렇게 함으로써 상기 세포의 증식을 억제하는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 본 방법은 시험관내 또는 생체내 방법이다. 추가 구현예에서, 세포는 B-세포 증식성 장애이다. 어떤 구현예에서, 세포 증식성 장애는 FcRH5 (예를 들면, FcRH5c)의 증가된 발현 및/또는 활성과 연관된다. 예를 들면, 어떤 구현예에서, B-세포 증식성 장애는 B-세포의 표면 상의 FcRH5의 증가된 발현과 연관된다. 어떤 구현예에서, B-세포 증식성 장애는 종양 또는 암이다. 일부 구현예에서, B-세포 증식성 장애는 형질 세포 신생물이다. 일부 구현예에서, 형질 세포 신생물은 다발성 골수종, 형질세포종, 및/또는 MGUS이다. 본 발명의 항체 및/또는 면역접합체에 의해 치료될 B-세포 증식성 장애의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 림프종, 다발성 골수종비-호지킨 림프종 (NHL), 공격성 NHL, 재발된 공격성 NHL, 재발된 무통성 NHL, 난치성 NHL, 난치성 무통성 NHL, 만성적 림프구성 백혈병 (CLL), 작은 림프구 림프종, 백혈병, 모발 세포 백혈병 (HCL), 급성 림프구 백혈병 (ALL), 및/또는 외투 세포 림프종.
샘플 중 다양한 바이오마커의 존재는 수많은 방법에 의해 분석될 수 잇고, 많은 기술은 당해기술에 공지되어 있고 숙련가에 의해 이해되고, 그 기술은, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 면역조직화학 ("IHC"), 웨스턴 블랏 분석, 면역침강, 분자 결합 분석, ELISA, ELIFA, 형광 활성화된 세포 분류 ("FACS"), MassARRAY, 프로테오믹스, 정량적 혈액 기반 분석 (예를 들면 혈청 ELISA로서), 생화학적 효소에 의한 활성 분석, 인 시투 하이브리드화, 서던 분석, 노던 분석, 전체의 게놈 서열분석, 정량적 실시간 PCR ("qRT-PCR")을 포함하는 폴리머라제 연쇄 반응 ("PCR") 및 다른 증폭 유형 검출 방법, 예컨대, 예를 들면, 분지형 DNA, SISBA, TMA 등, RNA-Seq, FISH, 마이크로어레이 분석, 유전자 발현 프로파일링, 및/또는 유전자 발현의 시리즈 분석 ("SAGE"), 뿐만 아니라 단백질, 유전자, 및/또는 조직 배열 분석에 의해 수행될 수 있는 광범위한 분석 중 임의의 하나. 유전자 및 유전자 생성물의 상태를 평가하기 위한 전형적인 프로토콜은, 예를 들면 하기에서 발견된다: Ausubel 등, eds., 1995, Current Protocols In Molecular Biology, Units 2 (노던 블랏팅), 4 (서던 블랏팅), 15 (면역블로팅) 및 18 (PCR 분석). 다중화된 면역분석 예컨대 Rules Based Medicine 또는 Meso Scale Discovery ("MSD")로부터 이용가능한 것들이 또한 사용될 수 있다.
시험관내 세포 증식의 억제는 Promega (Madison, WI)로부터 상업적으로 이용가능한 CellTiter-GloTM Cell Viability Assay을 사용하여 분석될 수 있다. 상기 분석은 대사작용적 활성 세포의 적응증인 존재하는 ATP의 정량화를 기반으로 하는 배양물 중 생존 세포의 수를 측정한다. 참고 Crouch 등 (1993) J. Immunol . Meth . 160:81-88, US 특허 No. 6602677. 분석은 96- 또는 384-웰 포맷으로 수행될 수 있고, 이것은 자동화된 고-처리량 스크리닝 (HTS)에 대해 잘 받아들이도록 한다. 참고 Cree 등 (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404. 상기 분석 절차는 단일 시약 (CellTiter-Glo® Reagent)을 배양 세포에 직접적으로 부가하는 것을 수반한다. 이것은 루시퍼라아제 반응에 의해 생산된 발광성 신호의 발생 및 세포 용해를 야기한다. 발광성 신호는 배양물에 존재하는 생존 세포의 수에 정비례하는, 존재하는 ATP의 양에 비례한다. 데이타는 발광분석기 또는 CCD 카메라 영상화 디바이스에 의해 기록될 수 있다. 발광 출력은 상대 광 단위 (RLU)로서 표현된다.
또 하나의 측면에서, 약제로서 사용하기 위한 항-FcRH5 항체 (예를 들면, FcRH5 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체가 제공된다. 추가 측면에서, 치료 방법에 사용하기 위한, 항-FcRH5 항체 (예를 들면, FcRH5 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체가 제공된다. 어떤 구현예에서, FcRH5 (예를 들면, FcRH5c)-양성 암을 치료하는데 사용하기 위한 항-FcRH5 항체 (예를 들면, FcRH5 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체가 제공된다. 어떤 구현예에서, FcRH5 (예를 들면, FcRH5c)-양성 암을 갖는 개체를 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 항-FcRH5 항체 (FcRH5 이중특이적 항체 포함) 및/또는 면역접합체가 제공되고, 상기 방법은 상기 개체에게 효과적인 양의 항-FcRH5 항체 및/또는 면역접합체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다. 하나의 그와 같은 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 개체에게, 예를 들면, 아래에서 기재된 바와 같은 효과적인 양의 적어도 하나의 추가의 치료제를 투여하는 것을 포함한다.
추가 측면에서, 약제이 제조 또는 제제에서의, 항-FcRH5 항체 (예를 들면, FcRH5 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체의 용도가 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 약제는 FcRH5 (예를 들면, FcRH5c)-양성 암의 치료를 위한 것이다. 추가 구현예에서, 약제는 FcRH5 (예를 들면, FcRH5c)-양성 암을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 것이고, 상기 방법은 FcRH5 (예를 들면, FcRH5c)-양성 암을 갖는 개체에게 효과적인 양의 약제를 투여하는 것을 포함한다. 하나의 그와 같은 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 개체에게, 예를 들면, 아래에서 기재된 바와 같은 효과적인 양의 적어도 하나의 추가의 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
추가 측면에서, FcRH5 (예를 들면, FcRH5c)-양성 암을 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 일 구현예에서, 본 방법은 그와 같은 FcRH5 (예를 들면, FcRH5c)-양성 암을 갖는 개체에게 효과적인 양의 항-FcRH5 항체 (예를 들면, FcRH5 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체를 투여하는 것을 포함한다. 하나의 그와 같은 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 개체에게 아래에서 기재된 바와 같은 효과적인 양의 적어도 하나의 추가의 치료제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
상기 구현예 중 어떤 것에 따른 FcRH5-양성 암은, 예를 들면, FcRH5-양성 B-세포 증식성 장애, FcRH5-양성 형질 세포 신생물, 및/또는 FcRH5-양성 다발성 골수종일 수 있다. 일부 구현예에서, FcRH5-양성 암은 항-FcRH5 면역조직화학 (IHC) 또는 인 시투 하이브리드화 (ISH)에 의해 검출된다. 일부 구현예에서, FcRH5-양성 암은 FcRH5 mRNA를 검출하는 역-전사효소 PCR (RT-PCR) 분석에 따라 FcRH5를 발현시키는 암이다. 일부 구현예에서, RT-PCR은 정량적 RT-PCR이다.
임의의 상기 구현예 중 일부 구현예에서, 개체는 인간일 수 있다.
추가 측면에서, 예를 들면 임의의 상기 치료 방법에서 사용하기 위한, 본원에 제공된 임의의 항-FcRH5 항체 및/또는 면역접합체를 포함하는 약제학적 제형이 본원에 제공된다. 일 구현예에서, 약제학적 제형은 본원에 제공된 임의의 항-FcRH5 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 또 하나의 구현예에서, 약제학적 제형은 본원에 제공된 임의의 항-FcRH5 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체 및 예를 들면, 아래에서 기재된 바와 같은 적어도 하나의 추가의 치료제를 포함한다.
본원에 제공된 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체는 요법에서 단독으로 또는 다른 제제와 병용하여 사용될 수 있다. 상기 주지된 그와 같은 병용 요법은 조합된 투여(2개 이상의 치료제가 동일한 또는 별도 제형에 포함됨), 및 별도 투여를 포함하며, 이 경우에 본원에 제공된 항체 또는 면역접합체의 투여는 추가의 치료제 및/또는 아쥬반트의 투여 전에, 동시에, 및/또는 후에 일어날 수 있다. 본원에 제공된 항체 및/또는 면역접합체는 또한 방사선 요법과 병용될 수 있다.
본원에 제공된 항체(이중특이적 항체 포함) 및/또는 면역접합체(및 임의의 추가 치료제)는 비경구, 폐내, 및 비강내 그리고 원한다면 국소 치료를 위한 병소내 투여를 포함하는 임의의 적당한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입에는 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 또는 피하 투여가 포함된다. 투여는 부분적으로 투여가 일시적인지 또는 만성적인지에 따라 임의의 적합한 경로, 예를 들면 주사, 예컨대 정맥내 또는 피하 주사에 의할 수 있다. 비제한적으로 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 볼러스 투여, 및 펄스 주입을 포함하는 다양한 투여 계획이 본원에서 고려된다.
본원에 제공된 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체는 우수한 의료 실시와 일치하는 방식으로 제형화되고, 용량제공되고, 투여될 것이다. 상기 맥락에서의 고려 요인에는 치료받는 특정 장애, 치료받는 특정 포유동물, 개별 환자의 임상 상태, 장애의 원인, 제제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정, 및 의학 실시자에게 공지된 다른 요인이 포함된다. 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체는 반드시 그래야하는 것은 아니지만 선택적으로 문제 장애를 예방하거나 치료하기 위해 현재 사용되는 하나 이상의 제제와 제형화된다. 그와 같은 다른 제제의 효과적인 양은 제형에 존재하는 항체 또는 면역접합체의 양, 장애 또는 치료 유형, 및 상기 논의된 다른 요인에 의존한다. 이들은 일반적으로 본원에 기재된 바와 동일한 투여량 및 투여 경로로 또는 본원에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%로, 또는 실험적으로/임상적으로 적절한 것으로 결정되는 임의의 투여량 및 임의의 경로에 의해 사용된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 본원에 제공된 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체의 적절한 투여량은(단독으로 또는 하나 이상의 다른 추가의 치료제와 병용하여 사용될 때) 치료받는 질환의 유형, 항체 또는 면역접합체의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전의 요법, 환자의 임상 이력 및 항체 또는 면역접합체에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 의존할 것이다. 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 적당하게 투여된다. 질환의 유형 및 중증도에 따라, 약 1 ㎍/kg 내지 15 mg/kg(예를 들면 0.1 mg/kg-10 mg/kg)의 항체 또는 면역접합체는, 예를 들면 하나 이상의 별도 투여에 의하건 또는 계속되는 주입에 의하건, 환자에 대한 투여를 위한 초기 후보 투여량일 수 있다. 하나의 전형적인 1일 투여량은 상기 언급된 요인에 따라 약 1 ㎍/kg 내지 100 mg/kg 이상 범위일 수 있다. 며칠 이상에 걸친 반복된 투여에 있어서, 상태에 따라 치료는 일반적으로 원하는 질환 증상의 억제가 일어날 때까지 지속될 것이다. 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및/또는 면역접합체의 하나의 예시적인 투여량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg 범위일 것이다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg(또는 이들의 임의 조합) 중 하나 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 그와 같은 용량은 간헐적으로, 예를 들면 매주 또는 3 주 마다(예를 들면 환자가 약 2 내지 약 20, 또는 예를 들면 약 6 용량의 항체를 수여받도록) 투여될 수 있다. 초기 더 높은 부하 용량에 이어 하나 이상의 더 낮은 용량이 투여될 수 있다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 상기 요법의 진행은 종래의 기술 및 분석에 의해 쉽게 모니터링된다.
임의의 상기 제형 또는 치료 방법은 본원에 제공된 면역접합체 및 항-FcRH5 항체 둘 다를 이용해서 수행될 수 있음이 이해된다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
H. 제조 물품
본원에 제공된 또 하나의 측면에서, 상기 기재된 장애의 치료, 예방 및/또는 진단을 위해 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 제공된다. 제조 물품은 용기 및 용기 상의 또는 이와 연관된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기에는, 예를 들면 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백 등이 포함된다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 용기는 그것만으로 또는 장애를 치료, 예방 및/또는 진단하기 효과적인 또 하나의 조성물과 조합되는 조성물을 보유하며, 멸균된 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들면 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 스토퍼를 갖는 바이알 또는 정맥내 용액 백일 수 있다). 조성물 내의 적어도 하나의 활성제는 본원에 제공된 항체 또는 면역접합체이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 선택 상태의 치료를 위해 사용됨을 나타낸다. 게다가, 제조 물품은 (a) 내부에 함유된 조성물을 포함하는 제1 용기(여기서 조성물은 본원에 제공된 FcRH5 항체(예를 들면, 이중특이적 항체) 및/또는 FcRH5 면역접합체를 포함함); 및 (b) 내부에 함유된 조성물을 포함하는 제2 용기(여기서 조성물은 추가 세포독성 또는 다른 치료제를 포함함)를 포함할 수 있다. 본원에 제공된 상기 구현예에서의 제조 물품은 조성물이 특정 상태를 치료하기 위해 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제조 물품은 약제학적으로-허용가능한 버퍼, 예컨대 정균 주사용수(BWFI), 포스페이트-완충된 염수, 링거액 또는 덱스트로오스 용액을 포함하는 제2(또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 여기에는 다른 버퍼, 희석제, 필터, 니들, 및 주사기를 포함하는, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질이 추가로 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-FcRH5 항체는 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 9에 결합한다.
III. 실시예
하기는 본 발명의 방법 또는 조성물의 예이다. 다양한 다른 구현예가 상기 제공된 일반적인 설명에 따라 실시될 수 있음이 이해된다.
물질 및 방법
면역원(E11-플래그)
표준 프로토콜을 이용하여 인간 FcRH5c(서열식별번호:1)의 아미노산 745-850을 포유동물 발현 벡터 pRK5.NT.플래그 내로 클로닝하고 CHO 세포에서 일시적으로 발현시켰다. N-말단 플래그-발현 태그를 갖는 재조합 단백질을 S200 Superdex 칼럼 상의 항-플래그 및 크기 배제 크로마토그래피를 이용하여 정제하였다.
마우스 항- FcRH5 E11 항체의 개발 및 특성규명
Balb/c 마우스(Charles River, Hollister, CA)를 발바닥 주사를 통해 MPL+TDM(Ribi) 아쥬반트와 혼합된 2 ㎍ 인간 FcRH5 E11 ECD 단백질(서열식별번호:1의 아미노산 잔기 743-850)(Genentech, South San Francisco, CA)로 면역화하였다. 마우스에 9 용량을 수여한 다음, 융합 3 일 전에 발바닥 및 IV 경로를 통해 단독 PBS 중 융합 전 추가접종을 수행하였다.
이들 마우스의 오금 림프절 및 림프구를 수확하였고, 그 혈청은 모두 ELISA에 의해 면역화 단백질에 대해 강한 결합 역가를 나타내었고, 인간 FcRH5 E11 ECD로 형질감염된 SVT2 세포에 강한 FACS 반응성을 나타내었고, 전기융합(Harvard Apparatus, Holliston, MA)을 통해 X63-Ag8.653 마우스 골수종 세포(미국 종균 협회, Rockville, MD)와 융합시켰다. 융합된 세포를 배지 C(StemCell Technologies, Vancouver, BC, Canada)에서 밤새 37℃, 7% CO2에서 인큐베이션한 뒤 0.01 mg/ml FITC 표지된 항-마우스 IgG(Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA)를 함유하는 반-고체 배지 D(StemCell Technologies)에 재현탁하고 Omniwell 트레이(Thermo Fisher Scientific, Rochester, NY) 내로 접종하였다. 접종 9 일 후, 형광 콜로니를 선택하고 Clonepix FL(Genetix, New Milton, Hampshire, UK)을 이용해서 배지 E(StemCell Technologie)를 함유하는 96-웰 플레이트 내로 옮겼다. 채집 7 일 후, 상청액을 항-마우스 IgG(MP Biomedicals, Santa Ana, CA)에 대한 ELISA에 의해 스크리닝하였다.
ELISA에 의해 마우스 IgG 발현을 나타내는 하이브리도마를 전장 인간 FcRH5, 사이노 FcRH5, 및 인간 FcRH5 E11 ECD를 과발현하는 SVT2 세포에 대한 FACS에 의해 증식시키고 스크리닝하였다. 강한 FACS 양성 클론을 FACSAria(BD, Franklin Lakes, NJ)를 이용한 단일-세포 분류에 의해 서브클로닝하였다. 1 또는 2 라운드 서브클로닝 후 최고 ELISA 및 관심 FACS 결합을 나타내는 최종 클론을 생물반응기(Integra Biosciences, Chur, Switzerland)에서 대규모 생산을 위해 증식시켰다. 이어서 상청액을 이전에 기재된 바와 같이(Hongo 등 2000) 단백질 A 친화도 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
비스Fab의 생산
비스Fab를 힌지 시스테인 잔기에서 항-CD3(UCHT1.v9) Mab의 Fab'에 대한 항-FcRH5 Mab의 Fab'의 가교결합에 의해 산출하였다. 하이브리도마 Ab로부터 Fab' 2 단편을 산출하기 위해, 상이한 소화 조건을 사용하였다: mIgG1 아이소타입 Ab를 37℃에서 1-2 h 동안 pH 3.5에서 1:50(w/w) 펩신으로 소화시키고; 마우스 IgG2a Ab를 37℃에서 2-4 h 동안 pH 8에서 1 1:500(w/w) 비의 라이신 C 엔도펩티다제로 소화시키고; 마우스 IgG2b Ab를 37℃에서 밤새 1:100(w/w) 비로 라이신 C로 소화시켰다. 모든 경우, F(ab')2 단편을 SP 칼럼을 이용한 포획에 의해 반응 혼합물로부터 단리하고, 10 칼럼 용적의 선형 구배(0-100%) 1M 염화나트륨으로 용출하였다. 상기 언급된 소화 조건 하에, mIgG1 및 mIgG2b는 힌지에 3개의 시스테인 잔기를 함유하는 F(ab')2 단편을 생산한 반면, mIgG2a로부터의 F(ab')2는 힌지에 2개의 시스테인 잔기를 나타내었다. 단일 반응성 Cys를 갖는 Fab'를 생성하기 위해, 2개의 상이한 방법을 사용하였다. 홀수(3) 갯수의 힌지 시스테인을 함유하는 단편(mIgG1 및 mIgG2b)에 있어, 단리된 F(ab')2를 실온에서 2-6 h 동안 25 mM 나트륨 아세테이트, pH 5, 150 mM 염화나트륨, 2 mM EDTA, 2 mM TCEP 중에 환원시켰다. 환원 단계가 완료된 후, 샘플을 0.2 mg/ml로 희석하고, Tris pH 8을 첨가하여 pH를 7.5로 높이고, 5 mM 데하이드로아스코르브산(DHAA)을 첨가하여 시스테인의 재산화를 유도하였다. 실온에서 밤새 인큐베이션 후, 환원된 티올의 존재를 과잉의 NEM을 이용한 탐침검사 및 질량 분광분석법에 의한 MW 이동의 분석에 의해 평가하였다. 분자 당 단 하나의 반응성 시스테인의 존재를 확인한 후, Fab'를 겔 여과에 의해 정제하여 소량의 동종이량체를 제거하였다.
mIgG2a로부터 유도되고 힌지에 2개의 시스테인 잔기를 함유하는 F(ab')2 단편에 있어서, 단일 반응성 시스테인을 [Scheer 등(출판 중)]에 기재된 바와 같이 N-에틸 말레이미드(NEM)로 부분 차단하여 생산하였다. 간단히, 항체를 pH 4.5에서 나트륨 아세테이트 버퍼 중 처리에 의해 펩신(1% w/w)으로 소화시켰다. 1 시간 동안 소화 후, F(ab')2를 SP-HP 양이온 교환 수지 상 포획에 의해 소화 혼합물로부터 단리하고 10 CV 염 구배의 0-1 M NaCl로 정제하였다. 그 뒤, F(ab')2를 25 mm MES, pH 5.8, 2 mM EDTA, 및 300 mM NaCl을 함유하는 버퍼 중 1 mM TCEP로 환원시키고, 5 mM 데하이드로아스코르브산(DHAA)의 첨가에 의해 Fab를 산화하여 중쇄 및 경쇄 간 디설파이드 결합을 재형성하였다.
전에 기재된 바와 같이(Scheer 등; 출판 중) 펩신 소화, 부분 NEM 차단 및 비스말레이미드에 대한 접합에 의해 비스Fab(UCHT1.v9)의 효과기 팔을 산출하였다. 이어서 간단히, 힌지에서 2개의 티올(cys 잔기)을 1 당량의 N-에틸말레이미드(NEM)와 반응시켰다(Sigma Aldrich). 단일 반응성 시스테인을 함유하는 상이한 항-FCRH5 Fab를 밤새 실온에서 비스말레이미드 가교결합제에 접합된 항-CD3 Fab'와 인큐베이션하였다. ~100kDa의 가교결합된 Fab를 겔 여과에 의해 미반응된 종으로부터 분리한 다음 SDS-PAGE, 질량 분광분석법 및 분석적 크기 배제 크로마토그래피로 특성규명하였다.
TDB 발현 및 정제
TDB를 하기 2개의 상이한 접근법에 의해 생산하였다: 두 항체 팔을 각각 발현하는 박테리아의 공동-배양 또는 각각의 팔을 별도로 발현시킨 다음 이들을 시험관내 어닐링함. 전략은 참고로 편입된 [Christoph Spiess 등 2012] 및 2011년 5월 31일에 출원된 PCT/US10/58958에 기재되었다. 간략하게 공동 배양 전략을 위해, 항-CD3을 발현하는 대장균(홀) 및 항종양 표적을 발현하는 대장균(손잡이)을 유사한 양의 각각의 헤미머를 생산하도록 예정된 비로 진탕기 플라스크에서 함께 성장시켰다. 이어서 공동-배양된 박테리아 액체배지를 수확하고, 세포를 미세유체화기에서 파열시키고, 항체를 단백질 A 친화도에 의해 정제하였다. 미세유체화 및 단백질 A 포획 동안, 2개의 팔이 어닐링되고 힌지의 사슬 간 디설파이드 가교를 형성하는 것이 관측되었다(Christoph Spiess 등 2012). 대안적으로, 항체 헤미머를 고-세포 밀도 발효에 의해 별도 성장시키고, 단백질 A 크로마토그래피에 의해 독립적으로 단리하였다. 이어서 정제된 헤미머를 1:1 몰비로 조합하고, 4 시간 동안 2 mM DTT의 존재 하에 50 mM Tris, pH 8.5 중 인큐베이션하여 힌지 영역에서의 어닐링 및 디설파이드 환원을 허용하였다. 24-48 시간 동안 DTT를 포함하지 않는 동일한 버퍼에 대한 투석으로 사슬-간 디설파이드 결합을 형성하였다. 두 생산 전략 모두를 위해, 이중특이적 항체를 [Christoph Spiess 등 2012]에 기재된 바와 같은 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC)에 의해 오염물질로부터 정제하였다. 생성 물질을 Endosafe protable etest 시스템을 이용해서 내독소 수준에 대해 분석하고, 필요 시 단백질을 0.1% 트리톤 X-114로 세척하여 내독소 함량을 감소시켰다.
TDB 특성규명
이중특이적 항체의 분자량을 전에 기재된 바와 같이(Jackman 등 2010) 질량 분광분석법(LC-ESI/TCF)에 의해 분석하였다. 항체를 또한 Agilent 1:100 HPLC 시스템을 이용해서 Zenix SEC-300 칼럼(Sepax Technologies USA)에서 분석적 크기 배제 크로마토그래피로 분석하였다. 잔류 항체 단편의 존재를 2100 Bioanalyzer 및 Protein 230 칩을 이용해서 전기영동에 의해 정량화하였다.
혈구 분획화
PBMC를 림프구 분리 매질(MP biomedicals, Solon, OH)을 이용해서 건강한 지원자의 혈액으로부터 분리하였다. CD8+ 세포를 음성 선택에 의해 Miltenyi(#130-094-156)로부터 인간 CD8+ 단리 키트를 이용하여 PBMC로부터 추출하였다.
시험관내 세포독성 분석(T 세포 사멸)
시험관내 세포독성 분석을 위해, 1x104 표적 세포를 96 웰 플레이트 상에 접종하고 밤새 인큐베이션하였다. 3x104 CD8+ T-세포에 TDB 또는 비스Fab를 첨가하거나 첨가하지 않고, +37℃에서 48 시간 동안 인큐베이션하였다. 성장 배지로 2회 세척하여 T 세포를 제거하였다. 세포 생존력을 CellTiter-Glo® 발광성 세포 생존력 분석(Promega, Madison, WI)을 이용하여 측정하였다.
대안적으로, 시험관내 세포독성을 유세포측정으로 모니터링하였다. 표적 세포를 제조자의 프로토콜(Invitrogen, #C34554)에 따라 카복시플루오레신 석신이미딜 에스테르(CFSE)로 표지하였다. CFSE-표지된 표적 세포 및 인간 PBMC로부터 정제된 CD8+ T 세포를 3:1 E:T 비로 혼합하고, TDB 또는 비스Fab와 48 시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 말기에, 세포를 트립신으로 들어올려서 플레이트에서 수집하였다. 세포를 동등 용적의 PBS + 2% FBS + 1 mM EDTA + 프로피듐 요오드(PI)에서 재현탁하였다. 유세포측정 분석을 자동화 포맷으로 FACSCalibur 상에서 수행하였다. 살아있는 표적 세포의 수를 CFSE+/PI 음성 세포 상의 관문화에 의해 카운트하였다. 세포독성 백분율을 하기와 같이 계산하였다: 세포독성%(TDB 비함유, 살아있는 표적 세포 수 - TDB 함유, 살아있는 표적 세포 수)/(TDB 비함유, 살아있는 표적 세포 수) x 100.
T 세포 활성화 분석
표적 세포 및 정제된 CD8+ T 세포를 TDB의 존재 또는 부재 하에 혼합하고 T 세포 활성화를 유세포측정으로 분석하였다. 인큐베이션 말기에, 세포를 CD8-FITC(BD Biosciences, 555634) 및 CD69-PE(BD Biosciences, 555531)로 염색하였다.
서브클론 상청액 , 단클론성 항체, 비스Fab 및 TDB의 결합
내인성으로 FcRH5를 발현하는 암 세포 또는 FcRH5 형질감염된 암 세포에 대한 결합을 평가하기 위해, 세포를 EDTA/PBS를 이용해서 들어올렸다. 1x105 세포를 100 ul 중 현탁시키고 일차 항체(1 용적의 비-IgG 정량화된 서브클론 상청액, 4 ug/ml IgG 정량화된 서브클론 상청액 또는 2 ug/ul 정제된 단클론성 항체)와 h 인큐베이션하였다. 세포를 FACS 버퍼(PBS 1% BSA 2mM EDTA)로 2회 세정하고 PE로 표지된 염소 항-마우스 2차의 1:1000 희석물 또는 염소 항-마우스 APC의 1:100 희석물과 인큐베이션하였다. 세포를 FACS 버퍼로 2회 세정하고 유세포측정 분석을 FACSCalibur 상에 수행하였다. 명시된 경우, 항체의 직접적인 크세논-표지를 제조자의 프로토콜(Invitrogen)에 따라 수행하였다. NK 또는 B 세포에 대한 결합을 분석하기 위해, 1 백만 인간 PBMC를 60 분 동안 4 ug/ml IgG 정량화된 서브클론 상청액과 인큐베이션하고, 세정하고, APC로 표지된 염소 항-마우스 2차 1:100 희석물과 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 다시 2 회 세정하고, 항-CD56(PE; BD Biosciences #555516) 및 항-CD19(PE; BD Biosciences #340364)를 이용해서 염색한 뒤 유세포측정 및 인간 CD56+ 및 CD19+ 세포에 대한 결합 분석을 수행하였다.
결과
처음에는 막 근위 Ig-도메인에 대한 동형체 특이적 항체를 생산하기 위해, 마우스를 재조합 배큘로바이러스 생산된 E11 단백질(인간 FcRH5c의 서열식별번호:1의 아미노산 745-848 및 C-말단 His-발현 태그)로 면역화하였다. 상기 면역화 전략은 FcRH5에 대한 유의미한 면역 반응을 일으키지 못했고 단클론성 항-FcRH5 항체를 생산하는데 실패하였다. 두 번째 면역화 전략은 인간 FcRH5의 막 근위 Ig-도메인, 막통과 도메인 및 세포내 도메인을 인코딩하는 FcRH5c(서열식별번호:1)의 아미노산 745-977를 인코딩하는 플라스미드를 이용한 DNA-면역화였다. 상기 면역화 전략은 FcRH5에 대한 유의미한 면역 반응을 일으키지 못했고 단클론성 항-FcRH5 항체를 생산하는데 실패하였다. 세 번째 면역화 전략은 사이노 FcRH5에 상동성이고 인간 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및 FcRH4에 비-상동성인 FcRH5의 막 근위 Ig-도메인에 상응하는 펩타이드를 이용하였다. 상기 면역화 전략은 FcRH5에 대한 유의미한 면역 반응을 일으키지 못했고 단클론성 항-FcRH5 항체를 생산하는데 실패하였다.
네 번째 면역화 전략을 위해, 인간 FcRH5의 막 근위 Ig-도메인(서열식별번호:1의 아미노산 잔기 745-850)과 N-말단 플래그 발현 태그로 구성된 E11 단백질을 CHO 세포에서 생산하였다. 상기 재조합 단백질을 사용하여 마우스를 면역화하였다. 마우스 항-FcRH5 E11 항체의 면역화, 개발 및 특성규명을 상기 상세히 기재된 바와 같이 수행하였다.
6 용량의 재조합 E11(서열식별번호:1의 아미노산 잔기 745-850) 후, 혈청을 FACS를 이용해서 FcRH5 결합 항체에 대해 분석하였다. 인간 전장 FcRH5, 사이노 전장 FcRH5, 또는 인간 E11 도메인 막통과 도메인 및 세포질 도메인을 발현하는 SVT2 세포에 대해 유의미한 반응성이 검출되었으나 벡터로 형질감염된 SVT2 세포에서는 검출되지 않아, FcRH5 반응성 항체가 모든 5 마리의 면역화된 마우스의 혈청 중에 존재함을 시사하였다.
9 용량 후, 면역화된 마우스로부터의 림프구를 X63-Ag8.653 마우스 골수종 세포와 전기융합하였다. 323 IgG 양성 하이브리도마 서브클론을 추가 스크리닝을 위해 선택하였다. 클론을 ELISA에 의해 재조합 E11 단백질(서열식별번호:1의 아미노산 잔기 745-850)에 대한 결합(도시되지 않음) 및 FACS에 의해 인간 전장 FcRH5, 사이노 전장 FcRH5 또는 인간 E11 도메인 막통과 도메인 및 FcRH5의 세포질 도메인을 발현하는 SVT2 세포에 대한 결합에 대해 평가하였다. 인간 FcRH5를 발현하는 세포 및 사이노 FcRH5를 발현하는 세포에 결합된 총 26개 클론이 확인되어, 교차종 반응성을 시사하였다(표 2). 서브클론 상청액을 A) 인간 FcRH5로 형질감염된 다발성 골수종 세포, B) 내인성으로 인간 FcRH5를 발현하는 세포(건강한 공여체로부터의 말초 인간 CD19+ B-세포, MOLP-2 골수 세포), C) 인간 FcRH1, FcRH2, FcRH3 또는 FcRH4를 발현하도록 형질감염된 SVT2 세포, D) 인간 FcRH5의 끝이 잘린 버전을 발현하는 293 세포(E11을 포함하는 4 Ig-도메인 비함유; 서열식별번호:1의 아미노산 464-850) 및 E) NK-세포에 대한 결합에 대해 추가로 특성규명하였다. 또한, 가용성 FcRH5a에 대한 상청액의 결합을 ELISA로 분석하였다. 이들 분석에 기반하여, 단클론성 항체를 정제를 위해 선택하였다.
표 2.
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Figure pct00066
도 2는 5개의 정제된 E11 항체, 비-동형체 선택적 항-FcRH5 항체 10A8(FcRH5c의 Ig-유사 도메인 4-5에 결합함) 및 인간 FcRH5(도 2a) 또는 사이노 FcRH5(도 2b)를 발현하는 SVT2 세포에 대한 N-말단 gD-태그에 특이적인 대조군 항체의 결합 용량 범위를 나타낸다. 상기 분석에서의 항체를 제조자의 프로토콜(Invitrogen #z25051, z25151, z25251)에 따라 APC-형광단으로 직접적으로 표지하였다. 인간 FcRH5 형질감염된 EJM(도 3a) 및 OPM2(도 3b) 다발성 골수종 세포주에 대한 대표적인 E11 항체 5A10의 결합은 이전에 기재된 비-동형체 선택적 FcRH5 항체 10A8 및 7D11(둘 다 FcRH5c의 Ig-유사 도메인 4-5에 결합함)과 유사하거나 더 나은 것으로 나타났다(Elkins 등, 2012; Polson 등, 2006). MOLP-2 세포는 내인성으로 낮은 수준의 FcRH5를 발현하는 아주 적은 공지된 다발성 골수종 세포주 중 하나이다. 5A10, 5F1, 3G7 및 6D2 서브클론 상청액은 7D11과 유사한 세기로 MOLP-2 세포를 염색하였다(도 3c-f).
2개의 별도 평가를 막 근위 Ig-도메인 9(E11)의 존재 하의 결합 의존성을 해결하기 위해 설계하였다. 먼저 E11 면역화로 유도된 항체에 대해 예상 결합 부위를 포함하는 Ig-도메인 6-9(서열식별번호:1의 아미노산 464-850)가 없는 끝이 잘린 인간 FcRH5c 변종을 산출하였다. N-말단 gD-태그를 포함하는 상기 구축물을 293 세포에서 발현하고, 2.5 ug/ml 서브클론 상청액에 이어 PE 표지된 염소 항-마우스 2차 항체(1:1000 희석물)를 가하였다. 평가된 서브클론 어느 것도 끝이 잘린 인간 FcRH5c를 발현하는 293 세포에 결합하지 않았다(도 4a). 대조적으로, 야생형 인간 FcRH5c를 발현하는 293 세포에 대한 결합이 검출되었다. gD 또는 비-동형체 선택적 항체 클론(10A8)의 결합은 돌연변이에 의해 변경되지 않았다. 상기 결과는 E11 항체의 결합 부위가 Ig-도메인 6-9에 포함되었음을 나타낸다.
가용성 FcRH5a 동형체에 대한 결합을 평가하여 동형체 선택성을 추가 실증하였다. 이를 위해, 293 세포를 형질감염시켜 C-말단 HIS-발현 태그를 포함하는 가용성 동형체를 발현하였다. FcRH5a 단백질의 발현을 항-HIS 항체를 이용하여 웨스턴 블랏 분석으로 확인하였다. FcRH5a로부터의 조건화된 배지에서 65 kD 밴드가 검출되었지만 벡터로 형질감염된 세포에서는 검출되지 않았다(도시되지 않음). ELISA를 위해, 플레이트를 항-HIS 포획 항체로 코팅하고, HIS-태그화된 가용성 FcRH5a 동형체를 포함하는 1:10 희석된 조건화된 배지로 1 시간 동안 인큐베이션하였다. E11 단클론성 항체를 1 - 0.001 ug/ml 농도로 검출을 위해 사용하고, 1 시간 동안 인큐베이션한 다음 염소 항-마우스 HRP 항체 및 마지막으로 TMB-기질과 인큐베이션하였다. 클론 2H7 및 5A10은 가용성 FcRH5a에 상당한 반응성을 나타내지만, 다른 평가된 단클론성 항체는 임의의 검출가능한 결합을 나타내지 않는다(도 5a). 상기 결과는 Ig-도메인 9(E11)가 항체 1G7, 3A4, 3B12, 3G7 및 5F1의 결합을 위해 필요하며, 이에 따라 이들 항체가 전장 FcRH5 동형체(FcRH5c)에 대해 선택적임을 확인시켜 준다.
FcRH5를 B-세포에서 내인성으로 발현시켰다(Hatzivassiliou 등, 2001; Polson 등, 2006). B-세포에 대한 서브클론 상청액의 결합을 평가하기 위해, PBMC를 건강한 공여체의 혈액으로부터 추출하였다. 1 백만 인간 PBMC를 60 분 동안 4 ug/ml 서브클론 상청액과 인큐베이션하고, 세정하고, APC로 표지된 염소 항-마우스 2차의 1:100 희석물로 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 다시 2회 세정하고, PE-표지된 항-CD19(BD Biosciences #340364)로 염색한 뒤 유세포측정 및 CD19+ 세포에 대한 결합 분석을 수행하였다. 대부분의 상청액은 대조군(항-gD, 일차 항체 없음)에 비해 CD19+ 세포에서 APC 신호의 유의미한 이동을 유도하여(도 5b) B 세포로의 결합을 시사하였다.
Fc 수용체 동족체(FcRH) 패밀리 분자는 서로에 대해 고도의 상동성을 갖는다(Miller 등, 2002). 상동성은 특히 E11 항체의 표적인 막 근위 도메인 간에 높다(Miller 등, 2002). 패밀리 멤버에 대한 교차 반응성을 조사하기 위해, FcRH1, FcRH2, FcRH3 및 FcRH4(모두 N-말단 gD-발현 태그 포함)를 SVT2 세포에서 발현시키고, 세포를 서브클론 상청액 및 염소 항-마우스-PE 2차 항체로 염색하였다. 형질감염된 FcRH의 발현을 모든 세포주에서 항-gD 항체로부터의 신호로 확인하였다. 상청액 중 어느 것도 gD 항체를 이용한 염색에 비해 FcRH2 발현 세포에 유의미하게 결합하지 않았다(도 6b). 1B8, 1H11, 3C10, 4G8 및 6D2는 FcRH1에 낮은 수준의 결합을 나타내었고(도 6a) 1F4는 FcRH4에 결합하였다(도 6d). 전반적으로, FcRH3-발현 SVT2 세포로부터의 신호는 gD 대조군 항체를 포함하여 낮았으며, 낮은 발현 수준을 시사하였다. FcRH3-발현 SVT2 세포에 대한 낮은 수준의 결합이 1F4 및 4H8 상청액에 대해 검출되었다(도 6c).
FcRH3-발현 SVT2 세포에서의 전반적 신호가 낮으므로, 건강한 공여체로부터의 PBMC를 이용하여 추가 평가를 수행하였다. PBMC를 상기에서 기재된 바와 같이 염색하였으나, NK 세포에 대해 조사된 세포 집단을 관문화하기 위해 CD19 대신 CD56(BD Biosciences #555516)을 사용하였다. NK-세포는 내인성으로 FcRH3(Polson 등, 2006)을 발현하였고, 예상대로 이전에 기재된 단클론성 항-FcRH3 항체에 의해 염색되었다(Polson 등, 2006). FcRH1 발현은 CD56+ 세포에서도 검출되었지만, E11 서브클론 상청액은 어느 것도 NK 세포를 유의미하게 염색하지 않아(도 7) 내인성으로 발현된 FcRH3에 대한 교차 반응성의 부재를 나타내었다.
패밀리 멤버의 교차 반응성을 SVT2 세포에서 상기 기재된 것과 동일한 프로토콜을 이용하여 그러나 신선 시약을 이용하여 재평가하고, 및 FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및 FcRH4로 SVT2 세포를 재형질감염시켰다. 상기에서 기재된 바와 같은 정제된 항체의 재평가는 첫 번째 시리즈의 실험과 유의미하게 상이한 결과를 일으켰다. 이들 업데이트된 결과를 표 4에 요약한다. 다른 FcRH 패밀리 멤버와 교차 반응성을 거의 또는 전혀 나타내지 않기보다, 한 항체(1G7)를 제외한 전부는 FcRH5 및 적어도 하나 이상의 다른 패밀리 멤버 모두에 유의미한 결합을 나타내었다. 이론에 구애받고자 하지 않고, 상기 양의 항체 교차-반응성은 다양한 FcRH 패밀리 멤버에서 마지막 Ig-유사 도메인의 서열 유사성에 따라, 예상되는 것이다.
CD8+ T 세포는 가장 강력한 면역 효과기 세포에 속하는 것이다. T 세포의 활성은 T 세포 및 종양 항원에 동시에 결합하는 이중특이적 항체(또는 항체 단편)를 이용하여 종양 세포를 사멸시키기 위해 모집될 수 있다. 이중 결합은 T 세포의 다클론성 활성화 및 종양 항원 발현 세포의 특이적 사멸로 이어질 수 있다(Liu 등, 1985; Shalaby 등, 1992). 몇 개의 종양 표적 및 몇 개의 이중특이적 항체 플랫폼은 상기 접근법을 위해 일반적인 유연성 및 전임상 실행가능성을 실증하였다. 중요하게는, 유망한 임상 활성이 CD19 표적화, T 세포 활성화 이중특이적 scFv 항체 단편 블리나투모맙(MT103; MicroMet)으로 실증되었다. 60 ug/m2/1일만큼 낮은 용량을 이용한 치료는 재발된 비-호지킨 림프종 및 급성 림프아세포성 백혈병의 치료를 위한 임상평가에서 연장된 반응을 유도하였다(Bargou 등, 2008; Dreier 등, 2002).
이중특이적 비스Fab 분자를 생성하여 T 세포를 활성화하고 이중특이적 항체 포맷으로 사멸을 매개하는 FcRH5 항체의 능력을 조사하였다. 요약하면, 이들 이중특이적 분자를 항체의 단백분해 절단에 이어, 환원, 재-산화 반응 및 비스-말레아미드를 이용한 Fab-단편의 접합에 의해 산출한다(Scheer 등, 2012b 및 상기에서 기재된 바와 같이). 항-CD3 항체 클론 UCHT1은 T 세포 수용체에 편입되는 인간 CD3에 결합한다. UCHT1.v9는 이전에 효율적인 T 세포 결합 팔로 나타났으므로(Junttila 등, 2012 및 상기에서 기재된 바와 같음; Zhu 등, 1995) FcRH5 비스Fab에 사용되었다. E11 면역화로부터 9개의 항-FcRH5 항체 클론(1G7, 2H7, 3G7, 5A10, 5F1, 6D2, 3B12, 3C10, 3F10)을 표적 팔을 위해 선택하였고, UCHT1.v9와 접합하여 CD3-FcRH5 이중특이적 비스Fab 분자를 생성하였다.
비스Fab 분자에 부가하여, 전장 이중특이적 항체(T 세포 의존적 이중특이적 항체; TDB)를 또한 항체 헤미머의 이종이량체화를 유도하는 한 쌍의 상보적 조작된 Fc 영역에 의존하는 홀-내-손잡이 기술(Merchant 등, 1998)을 이용하여 생산하였다. 비스Fab의 경우, UCHT1.v9(Zhu 등, 1995)를 항-CD3(홀)으로 사용하였다. 표적 팔(손잡이)을 위해, FcRH5 E11-면역화, 비-동형체 선택적 항-FcRH5 클론(10A8)(Elkins 등, 2012) 또는 항-HER2 클론 4D5(트라스투주맙)(Carter 등, 1992)로부터의 항체 클론을 사용하였다. TDB의 개발 및 정제는 상세히 기재되어 있다(Junttila 등, 2012; Scheer 등, 2012a 및 상기에서 기재된 바와 같음).
48 시간 동안 표적을 CD8+ T 세포(효과기 세포)와 인큐베이션하고 Cell Titer Glo 분석 또는 FACS 사멸 분석(상기 기재된 분석)을 이용하여 사멸 활성을 측정함으로써 FcRH5 형질감염된 293 표적 세포의 사멸을 매개하는 이중특이적 분자의 능력을 조사하였다. 항-FcRH5 E11 표적 팔을 편입한 모든 9개 비스Fab은 표적 세포 사멸을 매개하는데 있어 효율적이었다(도 8a-b). 사멸 활성은 1-10 ng/ml 농도만큼 낮은 농도에서 검출되었고 10-100 ng/ml 농도에서 포화되었다. 최대 사멸 활성은 대부분의 클론에 있어서 80%를 초과하였다. 사멸 활성은 HER2-TDB와 유사하였다(도 8a-b). 인간 HER2는 낮은 수준으로 293 세포에서 발현된다(데이타는 도시되지 않음). 그에 반해서, 사멸 활성은 표적의 대략 20%만 사멸시킬 수 있는 비-동형체 선택적 FcRH5-TDB(10A8)를 훨씬 능가하였다(도 8a-b). 표적 팔로 2H7, 3G7 및 5A10 FcRH5-E11 클론을 편입하는 전장 TDB 포맷을 이용하여 유사하게 강력한 활성이 검출되었다(도 8c-d). TDB 및 비스Fab 버전의 2H7 및 3G7 간에는 유의미한 차이가 검출되지 않아서, Fc가 사멸 활성의 활성화나 억제를 위해 필요하지 않음을 시사하였다. 표적 팔로 2H7 및 3G7을 편입하는 전장 TDB 및 FcRH5 비스Fab도 내인성으로 낮은 수준의 FcRH5를 발현하는 MOLP2 세포의 사멸을 효율적으로 매개할 수 있었다(도 9a). T 세포 활성화에 세포막 상에 CD69를 발현하는 CD8+ 세포의 비를 측정하는 반응이 뒤따랐다. T 세포 활성화는 사멸 활성에 대응하였고, 두 비스Fab 및 TDB 모두에 대해 유사하였다(도 9b). 결과 요약을 표 3에 나타낸다.
표 3
Figure pct00067
표 4
Figure pct00068
참조문헌
Figure pct00069
Figure pct00070
정상 조직 및 B-만성 림프구 백혈병 중 인간 FcRH/IRTA 수용체의 발현 패턴.
Figure pct00071
Figure pct00072
전술된 발명은 이해의 명확성을 위해 예시 및 실시예로 일부 상세히 기재되었으나, 기재 및 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본원에 언급된 모든 특허 및 과학적 문헌의 개시내용은 명시적으로 그 전문이 참고로 편입된다.가변 경쇄 도메인
Figure pct00073
가변 중쇄 도메인
Figure pct00074
Kabat CDR L1 (HVR-L1)
Figure pct00075
Kabat CDR L2 (HVR-L2)
Figure pct00076
Kabat CDR L3 (HVR-L3)
Figure pct00077
Kabat CDR H1 (HVR-H1)
Figure pct00078
CDR H1 (HVR-H1)
Figure pct00079
Kabat CDR H2 (HVR-H2)
Figure pct00080
CDR H2 (HVR-H2)
Figure pct00081
Kabat CDR H3 (HVR-H3)
Figure pct00082
CDR H3 (HVR-H3)
Figure pct00083
Figure pct00084
<110> GENENTECH, INC. <120> ANTI-FCRH5 ANTIBODIES <130> GNE-0413 WO <150> 61/838,534 <151> 2013-06-24 <160> 136 <170> KopatentIn 3.0 <210> 1 <211> 977 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Leu Leu Trp Val Ile Leu Leu Val Leu Ala Pro Val Ser Gly Gln 1 5 10 15 Phe Ala Arg Thr Pro Arg Pro Ile Ile Phe Leu Gln Pro Pro Trp Thr 20 25 30 Thr Val Phe Gln Gly Glu Arg Val Thr Leu Thr Cys Lys Gly Phe Arg 35 40 45 Phe Tyr Ser Pro Gln Lys Thr Lys Trp Tyr His Arg Tyr Leu Gly Lys 50 55 60 Glu Ile Leu Arg Glu Thr Pro Asp Asn Ile Leu Glu Val Gln Glu Ser 65 70 75 80 Gly Glu Tyr Arg Cys Gln Ala Gln Gly Ser Pro Leu Ser Ser Pro Val 85 90 95 His Leu Asp Phe Ser Ser Ala Ser Leu Ile Leu Gln Ala Pro Leu Ser 100 105 110 Val Phe Glu Gly Asp Ser Val Val Leu Arg Cys Arg Ala Lys Ala Glu 115 120 125 Val Thr Leu Asn Asn Thr Ile Tyr Lys Asn Asp Asn Val Leu Ala Phe 130 135 140 Leu Asn Lys Arg Thr Asp Phe His Ile Pro His Ala Cys Leu Lys Asp 145 150 155 160 Asn Gly Ala Tyr Arg Cys Thr Gly Tyr Lys Glu Ser Cys Cys Pro 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Synthetic peptide" <400> 30 Gln His Phe Trp Gly Ile Pro Trp Thr 1 5 <210> 31 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 31 Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr 1 5 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 32 Gln His Phe Trp Gly Ile Pro Trp Thr 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 33 Gln His Phe Trp Gly Ile Pro Trp Thr 1 5 <210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 34 Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Gln Tyr Thr 1 5 10 <210> 35 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 35 Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Gln Tyr Thr 1 5 10 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> 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Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 59 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Lys 1 5 10 <210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 60 Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr Leu Ile Glu 1 5 10 <210> 61 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 61 Gly Phe Ser Phe Thr Ala Tyr Phe Met Asn 1 5 10 <210> 62 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 62 Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 63 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 63 Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met Ser 1 5 10 15 <210> 64 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 64 Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Glu Thr Phe Tyr Ser Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 65 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 65 Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Glu Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Leu Lys 1 5 10 15 Gly <210> 66 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 66 Gly Ile Asn Pro Asn Asn Asp Ala Val Ser Tyr Asn Gln Arg Phe Arg 1 5 10 15 Gly <210> 67 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 67 Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Asp <210> 68 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 68 Gly Ile Asn Pro Asn Asn Asp Ala Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Arg 1 5 10 15 Gly <210> 69 <211> 17 <212> PRT <213> 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of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 78 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Asp Ala Val Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 1 5 10 15 Arg Gly <210> 79 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 79 Gly Asn Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 1 5 10 15 Lys Asp <210> 80 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 80 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Asp Ala Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 1 5 10 15 Arg Gly <210> 81 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 81 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Asp Ala Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 1 5 10 15 Arg Gly <210> 82 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 82 Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe 1 5 10 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Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 93 Leu Gly Arg Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 94 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 94 Gly Leu Tyr Phe Phe His Tyr 1 5 <210> 95 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 95 Gly Leu Tyr Arg Phe Asp Tyr 1 5 <210> 96 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 96 Thr Arg Asn Tyr Gly Tyr Val Ile Asp Tyr 1 5 10 <210> 97 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 97 Gly Leu Tyr Tyr Leu Asn Tyr 1 5 <210> 98 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 98 Ala Arg Gly Leu Tyr Trp Phe Pro Tyr 1 5 <210> 99 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial 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Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 104 Ala Lys Leu Gly Arg Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 105 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 105 Ala Lys Leu Gly Arg Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 106 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 106 Ala Arg Gly Leu Tyr Phe Phe His Tyr 1 5 <210> 107 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 107 Ala Arg Gly Leu Tyr Arg Phe Asp Tyr 1 5 <210> 108 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 108 Ala Arg Thr Arg Asn Tyr Gly Tyr Val Ile Asp Tyr 1 5 10 <210> 109 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 109 Gly Arg Gly Leu Tyr 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Ser Arg Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Glu Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Leu Tyr Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro <210> 112 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 112 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Ile Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Ile 20 25 30 Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Ser Pro Tyr 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/note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 117 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Ser Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Glu Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Leu 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Val Phe 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Leu Tyr Phe Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro <210> 118 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 118 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Leu Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Gly Ala Ala Asn Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Ile Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Ile Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 <210> 119 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 119 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Arg Ile 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Asp Ala Val Ser Tyr Asn Gln Arg Phe 50 55 60 Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Leu Gly Arg Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro 130 <210> 120 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 120 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala 115 <210> 121 <211> 134 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 121 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val 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Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Ile Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 <210> 123 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 123 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Arg Ile 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Asp Ala Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Leu Gly Arg Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro 130 <210> 124 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 124 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Leu Lys Gln Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Val 35 40 45 Tyr Gly Ala Ala Asn Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Ile Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Gly Ile Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 <210> 125 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 125 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30 Thr Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Arg Ile 35 40 45 Gly Gly Ile Asn Pro Asn Asn Asp Ala Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Leu Gly Arg Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro 130 <210> 126 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 126 Asp Ile Val Leu Ile Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gly Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Arg Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Thr 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Gln 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala <210> 127 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 127 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Lys Trp Val Arg Gln Asn His Gly Lys Arg Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Phe Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Leu Tyr Phe Phe His Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro <210> 128 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 128 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Asn Leu Ser Val Ile Pro Gly 1 5 10 15 Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Arg Asn Asn 20 25 30 Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gln Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Phe Ala Ser Gln Ser Met Ser Gly Thr Pro Ser Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Thr Val Glu Thr 65 70 75 80 Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Asn Trp Pro Gln 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala <210> 129 <211> 130 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 129 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Trp Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Lys Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Glu Thr Phe Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Thr Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Leu Tyr Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro 130 <210> 130 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 130 Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Ser Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Thr Val Thr Thr Ser 20 25 30 Asn Phe Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Asp His Leu Phe Thr Gly 35 40 45 Leu Ile Gly Gly Thr Ser Asn Arg Ala Pro Gly Val Pro Ala Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala 65 70 75 80 Gln Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys Val Leu Trp Cys Ser Asn 85 90 95 Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro 100 105 110 Lys Ala Ala 115 <210> 131 <211> 132 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 131 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Asp Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Leu Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Arg Asn Tyr Gly Tyr Val Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro 130 <210> 132 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 132 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Phe Trp Pro Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Ser Ser Leu Pro His 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 <210> 133 <211> 129 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 133 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Ala Tyr 20 25 30 Phe Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Arg Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Glu Thr Phe Phe Asn Gln Asn Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala His 65 70 75 80 Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Gly Arg Gly Leu Tyr Tyr Leu Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro <210> 134 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 134 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Ile Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Ile 20 25 30 Val Val Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Ser Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 135 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 135 Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Arg Phe 20 25 30 Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Arg Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe 65 70 75 80 Lys Leu Asn Ser Leu Lys Val Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ser 85 90 95 Asn His Tyr Tyr Gly Ser Ser Asp Tyr Ala Leu Asp Asn Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Ile Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 136 <211> 233 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 136 Val Ala Val Pro Val Ser Arg Pro Val Leu Thr Leu Arg Ala Pro Gly 1 5 10 15 Thr His Ala Ala Val Gly Asp Leu Leu Glu Leu His Cys Glu Ala Leu 20 25 30 Arg Gly Ser Pro Leu Ile Leu Tyr Arg Phe Phe His Glu Asp Val Thr 35 40 45 Leu Gly Asn Arg Ser Ser Pro Ser Gly Gly Ala Ser Leu Asn Leu Ser 50 55 60 Leu Thr Ala Glu His Ser Gly Asn Tyr Ser Cys Glu Ala Asp Asn Gly 65 70 75 80 Leu Gly Ala Gln Arg Ser Glu Thr Val Thr Leu Tyr Ile Thr Gly Leu 85 90 95 Thr Ala Asn Arg Ser Gly Pro Phe Ala Thr Gly Val Ala Gly Gly Leu 100 105 110 Leu Ser Ile Ala Gly Leu Ala Ala Gly Ala Leu Leu Leu Tyr Cys Trp 115 120 125 Leu Ser Arg Lys Ala Gly Arg Lys Pro Ala Ser Asp Pro Ala Arg Ser 130 135 140 Pro Ser Asp Ser Asp Ser Gln Glu Pro Thr Tyr His Asn Val Pro Ala 145 150 155 160 Trp Glu Glu Leu Gln Pro Val Tyr Thr Asn Ala Asn Pro Arg Gly Glu 165 170 175 Asn Val Val Tyr Ser Glu Val Arg Ile Ile Gln Glu Lys Lys Lys His 180 185 190 Ala Val Ala Ser Asp Pro Arg His Leu Arg Asn Lys Gly Ser Pro Ile 195 200 205 Ile Tyr Ser Glu Val Lys Val Ala Ser Thr Pro Val Ser Gly Ser Leu 210 215 220 Phe Leu Ala Ser Ser Ala Pro His Arg 225 230

Claims (74)

  1. FcRH5c의 세포외 도메인의 동형체 c-특이 영역에 결합하는 단리된 항-FcRH5 항체.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 동형체 c-특이 영역은 Ig-유사 도메인 9를 포함하는, 항체.
  3. 청구항 1 내지 2 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동형체 c-특이 영역은 서열식별번호:1의 아미노산 743-850을 포함하는, 항체.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:38의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:62의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:86의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:14의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:26의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  5. 청구항 4에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:50의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:74의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:98의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  6. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:39의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:63의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:87의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:15의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:27의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  7. 청구항 6에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:51의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:75의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:99의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  8. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:40의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:64의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:88의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:28의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  9. 청구항 8에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:52의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:76의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  10. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:41의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:65의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:89의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:5의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:17의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:29의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:53의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:77의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:101의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  12. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:42의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:66의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:90의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:6의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:18의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:30의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:54의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:78의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:102의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  14. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:43의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:67의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:91의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:7의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  15. 청구항 14에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:55의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:79의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:103의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  16. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:44의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:68의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:92의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:20의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  17. 청구항 16에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:56의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:80의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  18. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:45의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:69의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:93의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:21의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:33의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  19. 청구항 18에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:57의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:81의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:105의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  20. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:46의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:70의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:94의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:34의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  21. 청구항 20에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:58의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:82의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:106의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  22. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:47의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:71의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:95의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:23의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:35의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  23. 청구항 22에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:59의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:83의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:107의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  24. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:48의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:72의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:96의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:24의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:36의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  25. 청구항 24에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:60의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:84의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:108의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  26. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체: a) 하기를 포함하는 중쇄: 서열식별번호:49의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:73의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:97의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; 및/또는 b) 하기를 포함하는 경쇄: 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열식별번호:25의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열식별번호:37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3.
  27. 청구항 26에 있어서, 상기 중쇄는 하기를 포함하는, 항체: 서열식별번호:61의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열식별번호:85의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열식별번호:109의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3.
  28. 청구항 1 내지 27 중 어느 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체:
    a) 서열식별번호:111의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:110의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열;
    b) 서열식별번호:113의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:112의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열;
    c) 서열식별번호:115의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:114의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열;
    d) 서열식별번호:117의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:116의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열;
    e) 서열식별번호:119의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:118의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열;
    f) 서열식별번호:121의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:120의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열;
    g) 서열식별번호:123의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:122의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열;
    h) 서열식별번호:125의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:124의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열;
    i) 서열식별번호:127의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호: 126의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열;
    j) 서열식별번호:129의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:128의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열;
    k) 서열식별번호:131의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:130의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열;
    l) 서열식별번호:133의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:132의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열; 또는
    m) 서열식별번호:135의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VH 서열 및/또는 서열식별번호:134의 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 VL 서열.
  29. 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기를 포함하는, 항체:
    a) 서열식별번호:111의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:110의 VL 서열;
    b) 서열식별번호:113의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:112의 VL 서열;
    c) 서열식별번호:115의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:114의 VL 서열;
    d) 서열식별번호:117의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:116의 VL 서열;
    e) 서열식별번호:119의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:118의 VL 서열;
    f) 서열식별번호:121의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:120의 VL 서열;
    g) 서열식별번호:123의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:122의 VL 서열;
    h) 서열식별번호:125의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:124의 VL 서열;
    i) 서열식별번호:127의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:126의 VL 서열;
    j) 서열식별번호:129의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:128의 VL 서열;
    k) 서열식별번호:131의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:130의 VL 서열;
    l) 서열식별번호:133의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:132의 VL 서열; 또는
    m) 서열식별번호:135의 VH 서열 및/또는 서열식별번호:134의 VL 서열.
  30. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단클론성 항체인, 항체.
  31. 청구항 1 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간, 인간화된, 또는 키메라성 항체인, 항체.
  32. 청구항 1 내지 31 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 FcRH5에 결합하는 항체 단편인, 항체.
  33. 청구항 1 내지 32 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1, IgG2a 또는 IgG2b 항체인, 항체.
  34. 청구항 1 내지 33 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 갖는, 방법: a) 전장 인간 및 사이노 FcRH5와 교차반응성이 있고, b) FcRH1, FcRH2, FcRH3, 및/또는 FcRH4와 교차 반응하지 않고, c) 내인성 FcRH5에 결합하고, d) FcRH5a와 교차 반응하지 않고, 그리고 e) FcRH5의 또 하나의 Ig-유사 도메인과 교차 반응하지 않음.
  35. 청구항 1 내지 34 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 이중특이적 항체인, 항체.
  36. 청구항 35에 있어서, 이중특이적 항체는 FcRH5 및 CD3에 결합하는, 항체.
  37. 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항의 항체를 인코딩하는, 단리된 핵산.
  38. 청구항 37의 핵산을 포함하는 숙주세포.
  39. 청구항 38의 숙주세포를 배양하여 항체를 생산하는 것을 포함하는, 항체의 생산 방법.
  40. 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항의 항체 및 세포독성 약물을 포함하는 면역접합체.
  41. 청구항 41에 있어서, 식 Ab-(L-D)p을 가지며, 여기서:
    (a) Ab은 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항의 항체이고;
    (b) L은 링커이고;
    (c) D는 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 칼리키아마이신, 피롤로벤조디아제핀, 및 네모루비신 유도체로부터 선택된 약물이고; 그리고
    (d) p는 1 내지 8의 범위인, 면역접합체.
  42. 청구항 41에 있어서, D는 아우리스타틴인, 면역접합체.
  43. 청구항 42에 있어서, D는 식 DE를 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00085

    여기서 R2 및 R6 각각은 메틸이고, R3 및 R4 각각은 이소프로필이고, R5는 H이고, R7는 sec-부틸이고, 각각의 R8은 CH3, O-CH3, OH, 및 H 로부터 독립적으로 선택되고; R9는 H이고; 그리고 R18는 -C(R8)2-C(R8)2-아릴이다.
  44. 청구항 41에 있어서, 상기 약물은 MMAE인, 면역접합체.
  45. 청구항 41에 있어서, D는 식 A의 피롤로벤조디아제핀인, 면역접합체:
    Figure pct00086

    여기서 상기 점선은 C1과 C2 또는 C2와 C3 사이의 이중 결합의 임의의 존재를 나타내고;
    R2은 H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-RD, =C(RD)2, O-SO2-R, CO2R 및 COR 로부터 독립적으로 선택되고, 그리고 할로 또는 디할로로부터 임의로 추가로 선택되고, 여기서 RD은 R, CO2R, COR, CHO, CO2H, 및 할로 로부터 독립적으로 선택되고;
    R6 및 R9은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로 로부터 독립적으로 선택되고;
    R7은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', NO2, Me3Sn 및 할로 로부터 독립적으로 선택되고;
    Q는 O, S 및 NH로부터 독립적으로 선택되고;
    R11은 H, 또는 R이거나, 여기서 Q는 O, SO3M이고, 여기서 M은 금속 양이온이고;
    R 및 R' 각각은 임의로 치환된 C1-8 알킬, C3-8　헤테로사이클릴 및 C5-20 아릴 그룹으로부터 독립적으로 선택되고, 및 임의로 그룹 NRR’과 관련하여, R 및 R'는, 이들이 부착된 질소 원자와 함께, 임의로 치환된 4-, 5-, 6- 또는 7-원 헤테로사이클릭 고리를 형성하고;
    R12, R16, R19 및 R17는 R2, R6, R9 및 R7 각각에 대해 정의된 바와 같고;
    R은 C3-12 알킬렌 그룹이고, 그 사슬은 임의로 치환된 하나 이상의 헤테로원자 및/또는 방향족 고리에 의해 방해될 수 있고; 그리고
    X 및 X'은 O, S 및 N(H)로부터 독립적으로 선택된다.
  46. 청구항 45에 있어서, D는 아래의 구조를 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00087

    여기서 n은 0 또는 1이다.
  47. 청구항 45에 있어서, D는 아래로부터 선택된 구조를 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00088

    Figure pct00089
    및
    Figure pct00090

    여기서 RE 및 RE" 각각은 H 또는 RD 로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 RD은 R, CO2R, COR, CHO, CO2H, 및 할로 로부터 독립적으로 선택되고;
    여기서 Ar1 및 Ar2 각각은 독립적으로 임의로 치환된 C5-20 아릴이고; 그리고
    여기서 n은 0 또는 1이다.
  48. 청구항 41에 있어서, D는 식 B의 피롤로벤조디아제핀인, 면역접합체:
    Figure pct00091

    여기서 상기 수평 물결선은 링커에 대한 공유 부착 부위를 나타내고;
    RV1 및 RV2은 H, 메틸, 에틸, 페닐, 플루오로-치환된 페닐, 및 C5-6 헤테로사이클릴 로부터 독립적으로 선택되고; 그리고
    n은 0 또는 1이다.
  49. 청구항 41에 있어서, D는 네모루비신 유도체인, 면역접합체.
  50. 청구항 49에 있어서, D는 아래로부터 선택된 구조를 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00092
    및
    Figure pct00093
  51. 청구항 41 내지 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커는 프로테아제에 의해 절단가능한, 면역접합체.
  52. 청구항 51에 있어서, 상기 링커는 val-cit 디펩타이드 또는 Phe-homoLys 디펩타이드를 포함하는, 면역접합체.
  53. 청구항 41 내지 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커는 산-불안정한 것인, 면역접합체.
  54. 청구항 53에 있어서, 상기 링커는 하이드라존을 포함하는, 면역접합체.
  55. 청구항 53에 있어서, 아래의 식을 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00094

    여기서 S는 황 원자이다.
  56. 청구항 46에 있어서, 하기로부터 선택된 식을 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00095
    및
    Figure pct00096
  57. 청구항 50에 있어서, 하기로부터 선택된 식을 갖는, 면역접합체:
    Figure pct00097

    Figure pct00098
    ;
    Figure pct00099
    및
    Figure pct00100
  58. 청구항 41 내지 57 중 어느 한 항에 있어서, p는 2 내지 5의 범위인, 면역접합체.
  59. 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항의 항체 및/또는 청구항 41 내지 58 중 어느 한 항의 면역접합체 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약제학적 제형.
  60. 청구항 59에 있어서, 추가의 치료제를 포함하는, 약제학적 제형.
  61. FcRH5-양성 암이 있는 개인을 치료하는 방법으로서, 상기 개체에게 효과적인 양의 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항의 항체 및/또는 청구항 41 내지 59 중 어느 한 항의 면역접합체를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  62. 청구항 61에 있어서, 상기 FcRH5-양성 암은 B-세포 증식성 장애인, 방법.
  63. 청구항 61 내지 62 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 치료제를 개인에게 투여하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  64. FcRH5-양성 세포의 증식을 억제하는 방법으로서, 상기 세포를 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항의 항체 및/또는 청구항 41 내지 59 중 어느 한 항의 면역접합체에 세포의 표면 상에서 상기 항체 및/또는 면역접합체의 FcRH5에의 결합을 위해 허용된 조건 하에서 노출시키고, 그렇게 함으로써 상기 세포의 증식을 억제하는 것을 포함하는 방법.
  65. 청구항 64에 있어서, 상기 세포는 B-세포인, 방법.
  66. 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, 라벨에 접합된 것인, 항체.
  67. 청구항 66에 있어서, 상기 표지는 양전자 에미터인, 항체.
  68. 청구항 67에 있어서, 상기 양전자 에미터는 89Zr인, 항체.
  69. 생물학적 샘플에서 인간 FcRH5를 검출하는 방법으로서, 생물학적 샘플은 청구항 1 내지 36 또는 66 내지 68 중 어느 한 항의 항-FcRH5 항체와, 상기 항-FcRH5 항체의 천연 발생 인간 FcRH5에의 결합을 위해 허용된 조건 하에서 접촉시키는 단계, 및 복합체가 생물학적 샘플에서 상기 항-FcRH5 항체와 천연 발생 인간 FcRH5 사이에서 형성되는 지를 검출하는 단계를 포함하는 방법.
  70. 청구항 69에 있어서, 상기 항-FcRH5 항체는 청구항 9 또는 청구항 15에서와 같은 항체인, 방법.
  71. 청구항 69 내지 70 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 샘플은 혈액 샘플인, 방법.
  72. FcRH5-양성 암을 검출하는 방법으로서, (i) 표지된 항-FcRH5 항체를 FcRH5-양성 암을 가지고 있거나 가진 것으로 의심되는 대상체에게 투여하는 단계로서, 상기 표지된 항-FcRH5 항체는 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항의 항-FcRH5 항체를 포함하는 단계, 및 (ii) 상기 대상체에서 상기 표지된 항-FcRH5 항체를 검출하는 단계로서, 상기 표지된 항-FcRH5 항체의 검출은 상기 대상체에서 FcRH5-양성 암을 나타내는 단계를 포함하는, 방법.
  73. 청구항 72에 있어서, 상기 표지된 항-FcRH5 항체는 양전자 에미터에 접합된 항-FcRH5 항체를 포함하는, 방법.
  74. 청구항 72 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, 상기 양전자 에미터는 89Zr인, 방법.




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