TW202210510A - 包含ｃｄ３抗原結合域之蛋白質及其用途 - Google Patents

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Abstract

本揭露提供結合分化簇3 (CD3)蛋白之抗原結合域（其包含結合CD3ε之抗原結合域）、編碼彼等之多核苷酸、載體、宿主細胞、製造及使用彼等之方法。

Description

包含CD3抗原結合域之蛋白質及其用途
本揭露提供結合分化簇3 (CD3)蛋白之抗原結合域（其包含結合CD3之抗原結合域）、編碼彼等之多核苷酸、載體、宿主細胞、製造及使用彼等之方法。
雙特異性抗體及抗體片段已經探索為招募細胞溶解性T細胞以殺滅腫瘤細胞的手段。然而，許多招募T細胞的雙特異性抗體之臨床用途已受到挑戰的限制，該等挑戰包括不利的毒性、潛在的免疫原性、及製造上的問題。因此，對於招募細胞溶解性T細胞以殺滅腫瘤細胞且包括例如降低毒性及有利製造概況之改善的雙特異性抗體，存在著相當大的需求。
人類CD3 T細胞抗原受體蛋白複合物係由下列六個不同鏈所組成：CD3γ鏈(SwissProt P09693)、CD3δ鏈(SwissProt P04234)、兩個CD3ε鏈(SwissProt P07766)、及一個與T細胞受體α及β鏈相關聯之CD3ζ鏈同二聚體(homodimer) (SwissProt P20963) (ε γ: ε δ: ζζ)。此複合物在將抗原辨識偶合至數種細胞內信號轉導路徑上扮演了重要角色。CD3複合物介導信號轉導，導致T細胞活化及增生。CD3為免疫反應所需。
重導向細胞毒性T細胞以殺滅腫瘤細胞已成為許多腫瘤適應症的重要治療機制(Labrijn, A. F., Janmaat, M. L., Reichert, J. M. & Parren, P. Bispecific antibodies: a mechanistic review of the pipeline. Nat Rev Drug Discov 18, 585-608, doi:10.1038/s41573-019-0028-1 (2019))。T細胞活化遵照二信號假說，其中第一信號係由T細胞受體(TCR)複合物與其在抗原呈現細胞(APC)上之同源肽MHC複合物的接合供應，且第二信號可為共刺激性或共抑制性(Chen, L. & Flies, D. B. Molecular mechanisms of T cell co-stimulation and co-inhibition. Nat Rev Immunol 13, 227-242, doi:10.1038/nri3405 (2013))。腫瘤通常無法呈現足以誘導基於T細胞之免疫反應的非自身抗原，而接合T細胞之BsAb (bsTCE)可在TCR-pMHC交互作用不存在下藉由誘導T細胞活化來克服此挑戰。T細胞受體信號傳導經由TCR之CD3次單元的細胞質區中之ITAM模體發生(Chen, D. S. & Mellman, I. Oncology meets immunology: the cancer-immunity cycle. Immunity 39, 1-10, doi:10.1016/j.immuni.2013.07.012 (2013))。具體而言，CD3ε次單元係以每TCR複合物兩個複本存在，且對T細胞接合而言代表具吸引力的抗原。實際上，許多靶向CD3ε之bsTCE在mAb失敗之處顯示臨床抗腫瘤療效，且顯著醫藥發展努力持續針對數種腫瘤目標進行(Labrijn, A. F. et al., 2019)。BsTCE臨床發展的三個主要挑戰係1)與經由全身性或脫腫瘤(off-tumor) T細胞活化之細胞介素釋放相關聯的快速及嚴重毒性可能性，2)具有高效力及銳利治療指數之bsTCE的實際調配及投藥挑戰，及3)再活化誘導T細胞死亡的可能性，其中腫瘤浸潤性T細胞(TIL)回應於bsTCE之過度活化而經歷細胞凋亡(Wu, Z. & Cheung, N. V. T cell engaging bispecific antibody (T-BsAb): From technology to therapeutics. Pharmacol Ther 182, 161-175, doi:10.1016/j.pharmthera.2017.08.005 (2018))。
綜合來說，這些觀察表明在所屬技術領域中對於更為有利且可用於治療癌症之新穎CD3特異性結合蛋白質有所需求。
本揭露藉由例如提供新穎的CD3ε特異性結合蛋白質來滿足此需求，其對腫瘤抗原具有高親和力且對T細胞具有弱親和力。包含本揭露之結合CD3ε之抗原結合域的蛋白質展現出高熱穩定性、減少的脫醯胺風險、及降低的免疫原性。
在某些實施例中，本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含結合至分化簇3ε (CD3ε)之抗原結合域，其中結合CD3ε之抗原結合域包含： a.         SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)的重鏈互補決定區(HCDR) 1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 24之輕鏈可變區(VL)的輕鏈互補決定區(LCDR) 1、LCDR2、及LCDR3； b.         SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 27之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3； c.         SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 28之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3； d.         SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 29之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3；或 e.         SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 30之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，經單離蛋白質包含下列之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3： a.         分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11； b.         分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17；或 c.         分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係scFv、(scFv)2、Fv、Fab、F(ab’)2、Fd、dAb、或VHH。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係Fab。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係VHH。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係scFv。
在其他實施例中，scFv自N至C端包含VH、第一連接子(L1)、及VL (VH-L1-VL)或VL、L1、及VH (VL-L1-VH)。
在某些實施例中，L1包含 a.         約5至50個胺基酸； b.         約5至40個胺基酸； c.         約10至30個胺基酸；或 d.         約10至20個胺基酸。
在某些實施例中，L1包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。
在某些實施例中，L1包含SEQ ID NO: 31、37、或64之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域包含： a.         SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； b.         SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； c.         SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； d.         SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 e.         SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 65、66、67、68、69、70、71、72、73、或74之胺基酸序列。
本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含結合CD3ε之抗原結合域，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO: 103之輕鏈可變區(VL)。在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係scFv、(scFv)2、Fv、Fab、F(ab’)2、Fd、dAb、或VHH。在其他實施例中，scFv自N至C端包含VH、第一連接子(L1)、及VL (VH-L1-VL)或VL、L1、及VH (VL-L1-VH)。在其他實施例中，L1包含：a.約5至50個胺基酸；b.約5至40個胺基酸；c.約10至30個胺基酸；或d.約10至20個胺基酸。在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。在各種實施例中，結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL；SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL；SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL；SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
在其他實施例中，經單離蛋白質係單特異性蛋白質。在其他實施例中，經單離蛋白質係多特異性蛋白質。在其他實施例中，多特異性蛋白質係雙特異性蛋白質。在其他實施例中，多特異性蛋白質係三特異性蛋白質。
在其他實施例中，蛋白質係接合至半衰期延長部份。
在其他實施例中，半衰期延長部份係免疫球蛋白(Ig)、Ig之片段、Ig恆定區、Ig恆定區之片段、Fc區、轉鐵蛋白、白蛋白、白蛋白結合域、或聚乙二醇。
在其他實施例中，經單離蛋白質進一步包含免疫球蛋白(Ig)恆定區或Ig恆定區之片段。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含Fc區。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含CH2域。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含CH3域。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含CH2域及CH3域。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含鉸鏈的至少一部分、CH2域、及CH3域。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含鉸鏈、CH2域、及CH3域。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的N端。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的C端。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係經由第二連接子(L2)接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。
在其他實施例中，多特異性蛋白質包含結合CD3ε以外的抗原之抗原結合域。
在其他實施例中，細胞抗原係腫瘤相關抗原。在其他實施例中，腫瘤相關抗原係血管舒緩素相關肽酶2 (hK2)蛋白質。在其他實施例中，腫瘤相關抗原係人類白血球抗原G (HLA-G)。在其他實施例中，腫瘤相關抗原係前列腺特異性膜抗原(PSMA)。在其他實施例中，腫瘤相關抗原係δ樣蛋白質3 (DLL3)。在其他實施例中，Ig恆定區或Ig恆定區之片段係IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4同型。
在其他實施例中，Ig恆定區或Ig恆定區之片段包含至少一個突變，該突變導致蛋白質與Fcγ受體(FcγR)之結合減少。在其他實施例中，導致蛋白質與FcγR之結合減少的至少一個突變係選自由下列所組成之群組：F234A/L235A、L234A/L235A、L234A/L235A/D265S、V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S、F234A/L235A、S228P/F234A/ L235A、N297A、V234A/G237A、K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-缺失/A327G/P331A/D365E/L358M、H268Q/V309L/A330S/P331S、S267E/L328F、L234F/L235E/D265A、L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S、S228P/F234A/L235A/G237A/P238S、及S228P/F234A/L235A/G236-缺失/G237A/P238S，其中殘基編號係根據EU索引。
在其他實施例中，Ig恆定區或Ig恆定區之片段包含至少一個突變，該突變導致蛋白質與FcγR之結合增強。
在其他實施例中，導致蛋白質與FcγR之結合增強的至少一個突變係選自由下列所組成之群組：S239D/I332E、S298A/E333A/K334A、F243L/R292P/Y300L、F243L/R292P/Y300L/P396L、F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L、及G236A/S239D/I332E，其中殘基編號係根據EU索引。
在其他實施例中，FcγR係FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、或FcγRIII、或其任何組合。
在其他實施例中，Ig恆定區或Ig恆定區之片段包含至少一個突變，該突變調節蛋白質之半衰期。
在其他實施例中，調節蛋白質之半衰期的至少一個突變係選自由下列所組成之群組：H435A、P257I/N434H、D376V/N434H、M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F、T308P/N434A、及H435R，其中殘基編號係根據EU索引。
在其他實施例中，蛋白質在Ig恆定區之CH3域中包含至少一個突變。
在其他實施例中，在Ig恆定區之CH3域中之至少一個突變係選自由下列所組成之群組：T350V、L351Y、F405A、Y407V、T366Y、T366W、T366L、F405W、K392L、T394W、T394S、Y407T、Y407A、T366S/L368A/Y407V、L351Y/F405A/Y407V、T366I/K392M/T394W、T366L/K392L/T394W、F405A/Y407V、T366L/K392M/T394W、L351Y/Y407A、T366A/K409F、L351Y/Y407A、L351Y/Y407V、T366V/K409F、T366A/K409F、T350V/L351Y/F405A/Y407V、及T350V/T366L/K392L/T394W，其中殘基編號係根據EU索引。
本揭露亦提供一種醫藥組成物，其包含含有本揭露之結合至CD3ε之抗原結合域的經單離蛋白質及醫藥上可接受之載劑。
本揭露亦提供一種編碼蛋白質之多核苷酸，該蛋白質包含本揭露之結合至CD3ε之抗原結合域。
本揭露亦提供一種載體，其包含編碼蛋白質之多核苷酸，該蛋白質包含本揭露之結合至CD3ε之抗原結合域。
本揭露亦提供一種宿主細胞，其包含載體，該載體包含編碼蛋白質之多核苷酸，該蛋白質包含本揭露之結合至CD3ε之抗原結合域。
本揭露亦提供一種生產本揭露之經單離蛋白質的方法，其包含在使蛋白質表現之條件下培養本揭露之宿主細胞、及回收由宿主細胞生產之蛋白質。
本揭露亦提供一種治療對象之癌症的方法，其包含向有需要之對象投予治療有效量的組成物以治療癌症，該組成物包含經單離之抗體，該經單離之抗體包含結合至CD3ε之抗原結合域。在其他實施例中，癌症係實體腫瘤或血液惡性疾病。在其他實施例中，實體腫瘤係前列腺癌、結腸直腸癌、胃癌、透明細胞腎癌、膀胱癌、肺癌、鱗狀細胞癌、神經膠質瘤、乳癌、腎臟癌(kidney cancer)、新生血管病症、透明細胞腎癌(CCRCC)、胰腺癌、腎癌(renal cancer)、尿路上皮癌、或往肝臟的腺癌(adenocarcinoma to the liver)。在其他實施例中，血液惡性疾病係急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性淋巴球性白血病(ALL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性骨髓性白血病(CML)、或母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(DPDCN)。在其他實施例中，抗體係與第二治療劑組合投予。
本揭露亦提供一種抗獨特型抗體(anti-idiotypic antibody)，其結合至包含本揭露之結合至CD3ε之抗原結合域的經單離蛋白質。
本揭露亦提供一種經單離蛋白質，其包含結合至CD3ε (SEQ ID NO: 1)上之表位的抗原結合域，其中該表位係包含SEQ ID NO: 100、101、及102之胺基酸序列的不連續性表位。
本揭露亦提供一種經單離蛋白質，其包含選自由SEQ ID NO: 747、748、77、78、749、750、751、752、753、及754所組成之群組的胺基酸序列。
在一個實施例中，本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 747之胺基酸序列。在一個實施例中，本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 748之胺基酸序列。在一個實施例中，本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列。在一個實施例中，本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列。在一個實施例中，本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 749之胺基酸序列。在一個實施例中，本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 750之胺基酸序列。在一個實施例中，本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 751之胺基酸序列。在一個實施例中，本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 752之胺基酸序列。在一個實施例中，本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 753之胺基酸序列。在一個實施例中，本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 754之胺基酸序列。
本揭露亦提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及86之胺基酸序列。
本揭露亦提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及88之胺基酸序列。
本揭露亦提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及90之胺基酸序列。
本揭露亦提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及92之胺基酸序列。
本揭露亦提供一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及94之胺基酸序列。
所有在本說明中引用、包括但不限於專利及專利申請文件之發表文獻在此全部併入作為參照。
吾人會理解到本說明書中所使用的用語僅用於描述特定實施例之目的，並且不意欲為限制性。除非另有定義，否則本文使用之所有技術及科學用語，均與具有本發明有關技藝之通常知識者所一般了解之意義相同。
雖然任何類似或等效於本文中所述者之方法及材料可用於測試本發明之實務中，本文中仍描述例示性材料及方法。在描述及請求本發明時，將使用下列用語。
當呈現清單時，除非另有陳述，否則應理解該清單之各個別元件及該清單之每種組合皆係分開的實施例。舉例而言，呈現為「A 、B 、或C 」的實施例清單將解讀為包括實施例「A」、「B」、「C」、「A或B」、「A或C」、「B或C」、或「A、B、或C」。
如於本說明書及隨附的申請專利範圍中所使用，除非內文另有明確規定，否則單數形式的「一 (a/an) 」及「該 (the) 」皆包括複數指稱。因此，例如對於「一細胞(a cell)」之指稱包括兩或更多個細胞之組合與類似者。
連接詞「包含 (comprising) 」、「基本上由 … 組成(consisting essentially of) 」、及「由 … 組成(consisting of) 」意欲意味著彼等在專利語言中一般公認的意義；亦即，(i)「包含(comprising)」與「包括(including)」、「含有(containing)」、或「其特徵在於(characterized by)」同義，係包括式或開放式，且不排除額外、未列舉之元件或方法步驟；(ii)「由…組成」排除請求項中未指明的任何元件、步驟、或成分；且(iii)「基本上由…組成」將請求項的範疇限制在所指明的材料或步驟「及不實質影響（所請發明的）（多個）基本及新穎特徵者」。以片語「包含」（或其均等詞）描述的實施例亦提供以「由…組成」及「基本上由…組成」所獨立描述之實施例。
「約 (about) 」意指在特定值的可接受誤差範圍內，如所屬技術領域中具有通常知識者所判定，其將部分地取決於該值是如何測量或判定的，即測量系統的限制。除非在實例或說明書中的其他地方在一特定檢定、結果或實施例的上下文中另有明確說明，「約(about)」意指根據本領域的實務在一個標準偏差內，或者至多5%的範圍，以較大者為準。
「活化 (activation) 」或「刺激 (stimulation) 」或「經活化 (activated) 」或「經刺激 (stimulated) 」係指誘導細胞之生物狀態的變化，從而導致活化標記之表現、細胞介素生產、目標細胞之增生或介導目標細胞之細胞毒性。細胞可藉由初級刺激信號活化。共刺激信號可放大初級信號之幅度並抑制初始刺激後之細胞死亡，從而導致更持久之活化狀態及因而更高之細胞毒性能力。「共刺激信號 (co-stimulatory signal) 」係指在與初級信號（諸如TCR/CD3連接）結合時會導致T細胞及/或NK細胞增生及/或關鍵分子之上調或下調的信號。
「替代支架 (alternative scaffold) 」係指一種單鏈蛋白質架構，其含有與具有高構形容許度之可變域相關聯的結構化核心。該等可變域容許變異引入而不會減損支架完整性，因而該等可變域可經工程改造且經選擇以結合至特定抗原。
「抗體依賴性細胞毒性 (antibody-dependent cellular cytotoxicity) 」、「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性 (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) 」、或「ADCC 」係指誘導細胞死亡的機制，其取決於抗體包覆的目標細胞與具有裂解活性的效應細胞（諸如自然殺手細胞(NK)、單核球、巨噬細胞、及嗜中性球）之間經由表現在效應細胞上的Fcγ受體(FcγR)的交互作用。
「抗體依賴性細胞吞噬作用 (antibody-dependent cellular phagocytosis) 」或「ADCP 」係指藉由吞噬細胞（諸如巨噬細胞或樹突細胞）內化(internalization)以消滅抗體包覆的目標細胞之機制。
「抗原 (antigen) 」係指能夠被抗原結合域或T細胞受體結合且能夠介導免疫反應之任何分子（例如，蛋白質、肽、多醣、醣蛋白、醣脂、核酸、其部分、或其組合）。例示性免疫反應包括抗體生產及免疫細胞（諸如T細胞、B細胞、或NK細胞）之活化。抗原可由基因表現、經合成、或純化自生物樣本，生物樣本諸如組織樣本、腫瘤樣本、細胞、或具有其他生物組分、生物體、蛋白質/抗原之次單元、已殺滅或去活化之全細胞或溶解物(lysate)的流體。
「抗原結合片段 (antigen binding fragment) 」或「抗原結合域 (antigen binding domain) 」係指蛋白質結合抗原之部分。抗原結合片段可係合成的、可酶促獲得的、或經基因工程改造之多肽，且包括免疫球蛋白結合抗原之部分，諸如VH、VL、VH及VL、Fab、Fab’、F(ab')2 、Fd、及Fv片段、由一個VH域或一個VL域所組成之域抗體(dAb)、鯊可變IgNAR域(shark variable IgNAR domain)、駱駝化VH域(camelized VH domain)、VHH域、由模擬抗體之CDR（諸如FR3-CDR3-FR4部分、HCDR1、HCDR2、及/或HCDR3、及LCDR1、LCDR2、及/或LCDR3）的胺基酸殘基所組成之最小識別單元、結合抗原之替代支架、及包含該等抗原結合片段之多特異性蛋白質。抗原結合片段（諸如VH及VL）可經由合成連接子連接在一起以形成各種類型的單鏈抗體設計，其中VH/VL域可進行分子內配對，或者在VH及VL域係由分開之單鏈表現的情況下可進行分子間配對，以形成單價抗原結合域，諸如單鏈Fv (scFv)或雙鏈抗體(diabody)。抗原結合片段亦可接合至可為單特異性或多特異性的其他抗體、蛋白質、抗原結合片段、或替代支架，以工程改造雙特異性及多特異性蛋白質。
「抗體 (antibody)」係以廣義的方式意指並包括免疫球蛋白分子，其包括單株抗體（包括鼠類、人類、人源化(humanized)及嵌合單株抗體）、抗原結合片段、多特異性抗體（諸如雙特異性、三特異性、四特異性等）、二聚體、四聚體或多聚體抗體、單鏈抗體、域抗體及任何其他包含具有所需特異性之抗原結合部位的免疫球蛋白分子之修飾組態。「全長抗體(full length antibody)」包含藉由雙硫鍵互連之兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)以及其多聚體（例如IgM）。各重鏈包含重鏈可變區(VH)及重鏈恆定區（包含域CH1、鉸鏈、CH2、及CH3）。每條輕鏈包含輕鏈可變區(VL)及輕鏈恆定區(CL)。VH區及VL區可進一步細分成散佈於架構區(FR)中的多個高度變異區，其被稱為互補決定區(CDR)。各VH及VL係由三個CDR及四個FR區段構成，按照下列順序從胺基至羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、及FR4。免疫球蛋白可被分為下列五大類：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，視重鏈恆定域(constant domain)胺基酸序列而定。IgA及IgG係進一步被細分為同型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。任何脊椎動物物種的抗體輕鏈可被分為兩種明確不同類型（即kappa (κ)及lambda (λ)）中之一者，其視其恆定域的胺基酸序列而定。
「雙特異性 (bispecific) 」係指特異性結合兩種不同抗原或在相同抗原內的兩個不同表位之分子（諸如蛋白質或抗體）。雙特異性分子可對於其他相關抗原具有交叉反應性，例如對於來自其他物種（諸如人類或猴）的相同抗原（同源物(homolog)）具有交叉反應性，例如食蟹獼猴(Macaca cynomolgus , cynomolgus, cyno)或黑猩猩(Pan troglodytes )，或者可結合在二或更多種不同抗原之間共有的表位。
「雙特異性抗 hK2/ 抗CD3 抗體(bispecific anti-hK2/anti-CD3 antibody) 」、「hk2/CD3 抗體(hk2/CD3 antibody) 」、「hk2xCD3 抗體(hk2xCD3 antibody) 」、「抗 hK2/ 抗CD3 蛋白質(anti-hK2/anti-CD3 protein) 」、及類似者係指結合hk2及CD3之抗體，且包含至少一個特異性結合hK2之結合域及至少一個特異性結合CD3之結合域。特異性結合hK2及CD3之結構域一般係VH /VL 對。雙特異性抗hK2×CD3抗體就其與hK2或CD3之結合而言可以是單價的。
「雙特異性抗 HLA-G/ 抗CD3 抗體(bispecific anti-HLA-G/anti-CD3 antibody) 」、「HLA-G/CD3 抗體(HLA-G/CD3 antibody) 」、「HLA-GxCD3 抗體(HLA-GxCD3 antibody) 」、「抗 HLA-G/ 抗CD3 蛋白質(anti-HLA-G/anti-CD3 protein) 」、及類似者係指結合HLA-G及CD3之抗體，且包含至少一個特異性結合HLA-G之結合域及至少一個特異性結合CD3之結合域。特異性結合HLA-G及CD3之結構域一般係VH /VL 對。雙特異性抗HLA-G×CD3抗體就其與HLA-G或CD3的結合而言可以是單價的。
「雙特異性抗 DLL3/ 抗CD3 抗體(bispecific anti-DLL3/anti-CD3 antibody) 」、「抗 DLL3 × CD3 (anti-DLL3 × CD3) 」、「DLL3/CD3 抗體(DLL3/CD3 antibody) 」、「DLL3×CD3 抗體(DLL3×CD3 antibody) 」、「抗 DLL3/ 抗CD3 蛋白質(anti-DLL3/anti-CD3 protein 」、及類似者係指結合DLL3及CD3之抗體，且包含至少一個特異性結合DLL3之結合域及至少一個特異性結合CD3之結合域。特異性結合DLL3及CD3之結構域一般係VH /VL 對。雙特異性抗DLL3×CD3抗體就其與DLL3或CD3之結合而言可以是單價的。
「癌症 (Cancer)」係指一群廣泛的各種疾病，其特徵在於身體中異常細胞的不受控制生長。未經調節之細胞分裂及生長導致侵犯鄰近組織的惡性腫瘤形成且亦可經由淋巴系統或血流轉移至身體的遠距部分。「癌症(cancer)」或「癌症組織(cancer tissue)」可包括腫瘤。
「分化簇 3ε (cluster of Differentiation 3 ε) 」或「CD3ε 」係指一種亦稱為「T細胞表面糖蛋白CD3ε鏈(T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain)」或「T3E」的已知蛋白質。CD3ε連同CD3-γ、CD3-δ、及CD3-ζ、以及T細胞受體α/β及γ/δ異二聚體一起形成T細胞受體-CD3複合物。此複合物在將抗原辨識偶合至數種細胞內信號轉導路徑上扮演了重要角色。CD3複合物介導信號轉導，導致T細胞活化及增生。CD3為免疫反應所需。全長CD3ε之胺基酸序列係示於SEQ ID NO: 1。CD3ε之胞外域(ECD)的胺基酸序列係顯示於SEQ ID NO: 2。在整份說明書中，「CD3ε特異性(CD3ε-specific)」或「特異性結合CD3ε (specifically binds CD3ε)」或「抗CD3ε抗體(anti-CD3ε antibody)」係指特異性結合至CD3ε多肽(SEQ ID NO: 1)之抗體，其包括特異性結合至CD3ε胞外域(ECD) (SEQ ID NO: 2)之抗體。 SEQ ID NO: 1（人類CD3ε） MQSGTHWRVLGLCLLSVGVWGQDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDVMSVATIVIVDICITGGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQRDLYSGLNQRRI SEQ ID NO: 2（人類CD3ε胞外域） DGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMD
「補體依賴性細胞毒性 (complement-dependent cytotoxicity) 」或「CDC 」係指誘導細胞死亡的機制，其中與目標結合之蛋白質的Fc效應域結合並活化補體成分C1q，其轉而活化補體級聯反應而導致目標細胞死亡。補體之活化亦可造成補體成分沉積在該目標細胞表面上，其藉由結合白血球上的補體受體（例如，CR3）而促進CDC。
「互補決定區 (complementarity determining region) 」(CDR)係結合抗原之抗體區。VH中有三個CDR（HCDR1、HCDR2、HCDR3），且VL中有三個CDR（LCDR1、LCDR2、LCDR3）。CDR可使用各種描繪來定義，諸如Kabat（Wu et al. (1970) J Exp Med 132: 211-50；Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991）、Chothia (Chothia et al. (1987) J Mol Biol 196: 901-17)、IMGT (Lefranc et al. (2003) Dev Comp Immunol 27: 55-77)、及AbM (Martin and Thornton J Bmol Biol 263: 800-15, 1996)。描述各種描繪與可變區編號之間的對應性（參見，例如Lefranc et al. (2003) Dev Comp Immunol 27: 55-77；Honegger and Pluckthun, J Mol Biol (2001) 309:657-70；國際免疫遺傳學(International ImMunoGeneTics, IMGT)資料庫；網路資源（例如，可取自網際網路＜URL: http://www.imgt.org＞））。可用程式（諸如UCL Business PLC之abYsis）可用於描繪CDR。本文中所使用之用語「CDR」、「HCDR1」、「HCDR2」、「HCDR3」、「LCDR1」、「LCDR2」及「LCDR3」包括由上述Kabat、Chothia、IMGT、或AbM中的任何方法定義的CDR，除非在說明書中另有明確說明。
「減少 (decrease) 」、「減低 (lower) 」、「減輕 (lessen) 」、「降低 (reduce) 」、或「減弱 (abate) 」通常係指當相較於由對照組或媒劑介導之反應時，測試分子介導減少之反應（即，下游效應）的能力。例示性反應係T細胞擴增、T細胞活化、或T細胞介導之腫瘤細胞殺滅或蛋白質與其抗原或受體之結合、增強之與Fcγ之結合、或增強之Fc效應功能，諸如增強之ADCC、CDC、及/或ADCP。減少可係所測量反應在測試分子與對照組（或媒劑）之間的統計顯著差異，或者所測量反應之減少，諸如約1.1、1.2、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30倍、或更多倍之減少，諸如500、600、700、800、900、或1000倍、或更多倍（包括其間且高於1之所有整數及小數，例如1.5、1.6、1.7、1.8等）。
「分化 (differentiation) 」係指減少細胞之潛能或增生的方法或將細胞移至發育上更受限之狀態的方法。
「δ 樣蛋白質3 (Delta-like protein 3) 」或「DLL3 」係指一種亦稱為δ樣3 (delta-like 3)、δ3、或果蠅δ同源物3的已知蛋白質。除非有指明，否則如本文中所使用，DLL3係指人類DLL3。所有DLL3異構體及變體皆涵蓋於「DLL3」中。各種異構體之胺基酸序列可取自NCBI存取號NP_058637.1（異構體1前驅物，618個胺基酸）及NP_982353.1（異構體2前驅物，587個胺基酸）。全長DLL3之胺基酸序列係示於SEQ ID NO:255。DLL3之序列包括DSL域（殘基176至215）、EGF-1域（殘基216至249）、EGF-2域（殘基274至310）、EGF-3域（殘基312至351）、EGF-4域（殘基353至389）、EGF-5域（殘基391至427）、及EGF-6域（殘基429至465）。 ＞SEQ ID NO:716 （NP_058637.1 δ樣蛋白質3異構體1前驅物[智人(Homo sapiens)]） MVSPRMSGLLSQTVILALIFLPQTRPAGVFELQIHSFGPGPGPGAPRSPCSARLPCRLFFRVCLKPGLSEEAAESPCALGAALSARGPVYTEQPGAPAPDLPLPDGLLQVPFRDAWPGTFSFIIETWREELGDQIGGPAWSLLARVAGRRRLAAGGPWARDIQRAGAWELRFSYRARCEPPAVGTACTRLCRPRSAPSRCGPGLRPCAPLEDECEAPLVCRAGCSPEHGFCEQPGECRCLEGWTGPLCTVPVSTSSCLSPRGPSSATTGCLVPGPGPCDGNPCANGGSCSETPRSFECTCPRGFYGLRCEVSGVTCADGPCFNGGLCVGGADPDSAYICHCPPGFQGSNCEKRVDRCSLQPCRNGGLCLDLGHALRCRCRAGFAGPRCEHDLDDCAGRACANGGTCVEGGGAHRCSCALGFGGRDCRERADPCAARPCAHGGRCYAHFSGLVCACAPGYMGARCEFPVHPDGASALPAAPPGLRPGDPQRYLLPPALGLLVAAGVAGAALLLVHVRRRGHSQDAGSRLLAGTPEPSVHALPDALNNLRTQEGSGDGPSSSVDWNRPEDVDPQGIYVISAPSIYAREVATPLFPPLHTGRAGQRQHLLFPYPSSILSVK
「編碼 (encode/encoding) 」係指多核苷酸（諸如基因、cDNA、或mRNA）中核苷酸之特定序列在生物程序中作為合成其他聚合物及巨分子之模板的固有性質，該等聚合物及大分子具有所定義之核苷酸序列（例如rRNA、tRNA、及mRNA）或所定義之胺基酸序列、及自其得到之生物性質。因此，若對應於基因之mRNA的轉錄及轉譯在細胞或其他生物系統中生產蛋白質，則該基因、cDNA、或RNA編碼該蛋白質。核苷酸序列與mRNA序列同一的編碼股及用作基因或cDNA轉錄之模板的非編碼股兩者皆可稱為編碼蛋白質或該基因或cDNA之其他產物。
「增強 (enhance) 」、「促進 (promote) 」 、「增加 (increase) 」、「擴增 (expand) 」、或「提升 (improve) 」通常係指當相較於由對照組或媒劑介導之反應時，測試分子介導較大之反應（即，下游效應）的能力。例示性反應係T細胞擴增、T細胞活化、或T細胞介導之腫瘤細胞殺滅或蛋白質與其抗原或受體之結合、增強之與Fcγ之結合、或增強之Fc效應功能，諸如增強之ADCC、CDC、及/或ADCP。增強可係所測量反應在測試分子與對照組（或媒劑）之間的統計顯著差異，或者所測量反應之增加，諸如約1.1、1.2、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30倍、或更多倍之增加，諸如500、600、700、800、900、或1000倍、或更多倍（包括其間且高於1之所有整數及小數，例如1.5、1.6、1.7、1.8等）。
「表位 (epitope) 」係指與抗體或其抗原結合部分特異性結合的抗原部分。表位一般由分子部分（諸如胺基酸或多醣側鏈）之化學活性（諸如極性、非極性或疏水性）表面分群(grouping)所組成，並且可具有特定三維結構特性以及特定電荷特性。表位可包含形成構形空間單元之鄰接(contiguous)及/或不鄰接(discontiguous)胺基酸。關於不鄰接表位，來自抗原線性序列之相異部分的胺基酸會透過蛋白質分子的摺疊而在3維空間中緊密靠近。抗體「表位(epitope)」取決於用於識別該表位的方法。
用語「擴增 (expansion) 」係指細胞分裂及細胞死亡之結果。
「表現 (express/expression) 」係指發生在細胞中或體外之熟知的轉錄及轉譯。因此，表現產物（例如，蛋白質）係由細胞表現或在體外表現，且可係胞內、胞外、或跨膜蛋白質。
「表現載體 (expression vector) 」係指可在生物系統或重構生物系統中用以引導多肽轉譯的載體，該多肽係由存在於該表現載體中之多核苷酸序列編碼。
「dAb 」或「dAb 片段(dAb fragment) 」係指由VH域構成之抗體片段(Ward et al., Nature 341:544 546 (1989))。
「Fab 」或「Fab 片段(Fab fragment) 」係指由VH、CH1、VL、及CL域構成之抗體片段。
「F(ab')2 」或「F(ab')2 片段(F(ab')2 fragment) 」係指含有由鉸鏈區中之雙硫鍵連接的二個Fab片段之抗體片段。
「Fd 」或「Fd 片段(Fd fragment) 」係指由VH及CH1域構成之抗體片段。
「Fv 」或「Fv 片段(Fv fragment) 」係指由來自抗體之單臂的VH及VL域構成之抗體片段。
「全長抗體 (full length antibody) 」包含藉由雙硫鍵互連之兩條重鏈(HC)及兩條輕鏈(LC)以及其多聚體（例如IgM）。各重鏈包含重鏈可變域(VH)及重鏈恆定域，重鏈恆定域包含子域CH1、鉸鏈、CH2、及CH3。各輕鏈包含輕鏈可變域(VL)及輕鏈恆定域(CL)。VH及VL可進一步細分成散佈於架構區(FR)的多個高變區，其被稱為互補決定區(CDR)。各VH及VL係由三個CDR及四個FR區段構成，按照下列順序從胺基至羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、及FR4。
「基因修飾 (genetic modification) 」係指將「外來」（即，外在或胞外）基因、DNA、或RNA序列引入宿主細胞，使得該宿主細胞將表現所引入之基因或序列以生產所欲之物質，一般是由所引入之基因或序列編碼的蛋白質或酶。所引入之基因或序列亦可稱為「選殖(cloned)」或「外來」基因或序列，可包括可操作地連接至編碼嵌合抗原受體之多核苷酸的調控或控制序列，諸如起始、終止、啟動子、信號、分泌、或細胞遺傳機制(genetic machinery)所使用之其他序列。基因或序列可包括非功能性序列或不具有已知功能的序列。接收並表現所引入之DNA或RNA的宿主細胞已經「基因工程改造(genetically engineered)」。引入宿主細胞之DNA或RNA可來自任何來源（包括與宿主細胞同屬或同種之細胞）或來自不同屬或種。
「異源 (heterologous) 」係指本質上彼此找不到相同關係的二或更多個多核苷酸或二或更多個多肽。
「異源多核苷酸 (heterologous polynucleotide) 」係指編碼二或更多種如本文所述之新抗原的非天然存在多核苷酸。
「異源多肽 (heterologous polypeptide) 」係指包含二或更多種如本文所述之新抗原多肽的非天然存在多肽。
「宿主細胞 (host cell) 」係指含有異源核酸之任何細胞。例示性異源核酸係載體（例如，表現載體）。
「人類抗體 (human antibody)」係指經最佳化以在投予至人類對象時具有最小免疫反應之抗體。人類抗體之可變區係衍生自人類免疫球蛋白序列。若人類抗體含有恆定區或恆定區的一部分，則該恆定區亦衍生自人類免疫球蛋白序列。如果該人類抗體的可變區係得自使用人類生殖系免疫球蛋白或重排(rearranged)免疫球蛋白基因的系統，則人類抗體包含「衍生自(derived from)」人源序列的重及輕鏈可變區。此類例示性系統係經展示在噬菌體上的人類免疫球蛋白基因庫、及基因轉殖非人類動物（諸如帶有人類免疫球蛋白基因座的小鼠或大鼠）。當相較於人類中表現之免疫球蛋白時，「人類抗體」一般含有胺基酸差異，此係由於用於獲得人類抗體及人類免疫球蛋白基因座之系統之間的差異、引入體細胞突變、或向架構或CDR或兩者中刻意引入取代。一般而言，「人類抗體」在胺基酸序列上與由人類生殖系免疫球蛋白或重排免疫球蛋白基因所編碼的胺基酸序列具有至少約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性。在一些情況下，「人類抗體(human antibody)」可含有自人類架構序列分析導出的共有架構序列，例如在Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86中所述，或併入經展示在噬菌體上之人類免疫球蛋白基因庫的合成HCDR3，例如在Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96及國際專利公開號WO2009/085462中所述。至少一種CDR係衍生自非人類物種的抗體不包括在「人類抗體」的定義中。
「人源化抗體 (humanized antibody) 」係指至少一個CDR係衍生自非人類物種且至少一個架構係衍生自人類免疫球蛋白序列的抗體。人源化抗體可在架構中包括取代，所以該等架構可能不是所表現人類免疫球蛋白或人類免疫球蛋白生殖系基因序列的確切複製物。
「與 … 組合(in combination with) 」意指將二或更多種治療劑一起以混合物形式投予至對象，其係並行以單劑投予或以任何順序以單劑依序投予。
「胞內信號傳導域 (intracellular signaling domain) 」或「細胞質信號傳導域 (cytoplasmic signaling domain) 」係指分子之胞內部分。其係蛋白質之功能性部分，該功能性部分藉由在細胞內傳輸信息而作用，以經由已定義之信號傳導路徑藉由產生第二傳訊者或藉由回應於此類傳訊者來作用為效應子而調控細胞活性。胞內信號傳導域產生促進含CAR細胞（例如CAR-T細胞）的免疫效應功能之信號。
「經單離 (isolated) 」係指已自產出該分子的系統（諸如重組細胞）的其他組分實質上分離及/或純化出之均質分子族群（諸如合成多核苷酸或多肽）、以及已經受至少一次純化或單離步驟的蛋白質。「經單離」係指實質上不含其他細胞材料及/或化學物之分子，且涵蓋經單離成更高純度之分子，諸如80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%純度。
「血管舒緩素相關肽酶 2 (kallikrein related peptidase 2) 」或「hK2」係指一種亦稱為血管舒緩素2、腺血管舒緩素2、或HK2的已知蛋白質。hK2係生產為前蛋白原(preproprotein)並在蛋白水解期間裂解而產生活性蛋白酶。所有hK2異構體及變體皆涵蓋於「hK2」中。各種異構體之胺基酸序列可取自GenBank存取號NP_005542.1、NP_001002231.1、及NP_001243009。全長hK2之胺基酸序列係示於SEQ ID NO: 98。序列包括信號肽（殘基1至18）及前肽區(pro-peptide region)（殘基19至24）。 SEQ ID NO: 98 MWDLVLSIALSVGCTGAVPLIQSRIVGGWECEKHSQPWQVAVYSHGWAHCGGVLVHPQWVLTAAHCLKKNSQVWLGRHNLFEPEDTGQRVPVSHSFPHPLYNMSLLKHQSLRPDEDSSHDLMLLRLSEPAKITDVVKVLGLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLRPRSLQCVSLHLLSNDMCARAYSEKVTEFMLCAGLWTGGKDTCGGDSGGPLVCNGVLQGITSWGPEPCALPEKPAVYTKVVHYRKWIKDTIAANP
「人類白血球抗原 G (human leukocyte antigen G) 」或「HLA-G 」係指一種亦稱為「HLA第I型組織相容性抗原α鏈G」或「MHC第I型抗原G」的已知蛋白質。所有HLA-G異構體及變體皆涵蓋於「HLA-G」中。各種異構體之胺基酸序列可取自Uniprot ID號P17693-1至P17693-7。SEQ ID No: 691代表稱為「HLA-G1」之例示性HLA-G異構體。 HLA-G1（信號序列：斜體），SEQ ID No: 691：MVVMAPRTLFLLLSGALTLTETWA GSHSMRYFSAAVSRPGRGEPRFIAMGYVDDTQFVRFDSDSACPRMEPRAPWVEQEGPEYWEEETRNTKAHAQTDRMNLQTLRGYYNQSEASSHTLQWMIGCDLGSDGRLLRGYEQYAYDGKDYLALNEDLRSWTAADTAAQISKRKCEAANVAEQRRAYLEGTCVEWLHRYLENGKEMLQRADPPKTHVTHHPVFDYEATLRCWALGFYPAEIILTWQRDGEDQTQDVELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPEPLMLRWKQSSLPTIPIMGIVAGLVVLAAVVTGAAVAAVLWRKKSSD
「調節 (modulate) 」係指當相較於對照或媒劑所介導之反應時，測試分子介導經增強或經減少之反應（即，下游效應）的能力增強或下降。
「單株抗體 (monoclonal antibody) 」係指自實質上均一的抗體分子群體獲得之抗體，亦即，除了可能熟知之改變之外包含該群體之個別抗體係同一的，該等改變諸如從抗體重鏈移除C端離胺酸或轉譯後修飾，諸如胺基酸異構化或脫醯胺化、甲硫胺酸氧化或天冬醯胺酸或麩醯胺酸脫醯胺化。單株抗體一般結合一種抗原表位。雙特異性單株抗體會結合兩種不同的抗原表位。單株抗體在抗體群內可具有異源醣基化。單株抗體可係單特異性或多特異性的（諸如雙特異性的）、單價、二價、或多價的。
「多特異性 (multispecific) 」係指特異性結合二或更多種不同抗原或相同抗原內二或更多個不同表位之分子，諸如抗體。多特異性分子可對於其他相關抗原具有交叉反應性，例如與來自其他物種（諸如人類或猴）的相同抗原（同源物）具有交叉反應性，例如食蟹獼猴(Macaca fascicularis , cynomolgus, cyno)或黑猩猩，或者可以結合在二或更多種不同抗原之間共有的表位。
「自然殺手細胞 (natural killer cell) 」及「NK 細胞(NK cell) 」在本文中係可互換且同義地使用。NK細胞係指具有CD16+ CD56+ 及/或CD57+ TCR- 表型之分化淋巴球。NK細胞之特徵在於其能夠結合並藉由活化特定溶細胞酶來殺滅無法表現「自體(self)」MHC/HLA抗原之細胞、能夠殺滅腫瘤細胞或其他表現NK活化受體之配體的病變細胞、及能夠釋放刺激或抑制免疫反應之蛋白質分子（稱為細胞介素）。
「操作性連接 (operatively linked) 」及類似片語當用以指涉核酸或胺基酸時，分別係指彼此處於功能性關係的核酸序列或胺基酸序列之操作性鍵聯。例如，操作性連接之啟動子、強化子元件、開讀框、5'及3' UTR、及終止子序列導致精確的核酸分子（例如RNA）之生產，且在一些情況下導致多肽之生產（即，開讀框之表現）。操作性連接之肽係指其中肽之功能域彼此以適當距離放置以賦予各域之意欲功能的肽。
用語「互補位 (paratope) 」係指涉及抗原之結合的抗體分子之區域或區，且包含與抗原交互作用之殘基。互補位可由形成構形空間單元之連續及/或不連續胺基酸構成。給定抗體之互補位可使用各種實驗及計算方法以不同之細節程度來定義及表徵。實驗方法包括氫/氘交換質譜法(HX-MS)。互補位取決於所採用之定位(mapping)方法將會有不同定義。
「醫藥組成物 (pharmaceutical composition) 」係指一起或分開投予之二或更多種活性成分的組合。
「醫藥組成物 (pharmaceutical composition) 」係指組合活性成分及醫藥上可接受載劑所產生之組成物。
「醫藥上可接受之載劑 (pharmaceutically acceptable carrier) 」或「賦形劑(excipient)」係指活性成分以外之醫藥組成物中的成分，其對對象係無毒的。例示性醫藥上可接受之載劑係緩衝劑、穩定劑、或防腐劑。
「多核苷酸 (polynucleotide) 」或「核酸 (nucleic acid) 」係指包含藉由糖-磷酸主鏈或其他等效共價化學共價連接之核苷酸鏈的合成分子。cDNA係多核苷酸的典型實例。多核苷酸可係DNA或RNA分子。
疾病或病症之「預防 (prevent/preventing/prevention/prophylaxis) 」意指預防病症在對象中發生。
「增生 (proliferation) 」係指細胞分裂之增加，對稱或不對稱細胞分裂皆是。
「啟動子 (promoter) 」係指起始轉錄所需之最小序列。啟動子亦可包括分別強化或抑制轉錄之強化子或抑制子元件。
「蛋白質 (protein) 」或「多肽 (polypeptide) 」在本文中可互換使用且係指包含一或多個各包含至少二個由肽鍵連接之胺基酸殘基的多肽之分子。蛋白質可係單體，或可係二或更多個次單元之蛋白質複合物，該等次單元係相同或不同的。少於50個胺基酸的小型多肽可稱為「肽(peptide)」。蛋白質可係異源融合蛋白、醣蛋白、或藉由轉譯後修飾所修飾之蛋白質，該等修飾諸如磷酸化、乙醯化、肉豆蔻醯化(myristoylation)、棕櫚醯化(palmitoylation)、醣基化、氧化、甲醯化、醯胺化、瓜胺酸化(citrullination)、聚麩胺酸醯化(polyglutamylation)、ADP-核糖基化、聚乙二醇化(pegylation)、或生物素化(biotinylation)。蛋白質可為抗體或可包含抗體之抗原結合片段。蛋白質可經重組表現。
「重組 (recombinant) 」係指藉由重組方式製備、表現、建立、或單離之多核苷酸、多肽、載體、病毒、及其他巨分子。
「調控元件 (regulatory element) 」係指控制核酸序列表現之某些方面的任何順式作用(cis-acting)或反式作用(trans-acting)基因元件。
「復發性 (relapsed) 」係指在先前用治療劑治療之後在一段時間的改善後，疾病或疾病之徵象及症狀的回歸。
「難治性 (refractory) 」係指對治療沒有反應的疾病。難治性疾病可在治療之前或在開始治療時對該治療具有抗性，或者難治性疾病可在治療期間變成具有抗性。
「單鏈 Fv (single chain Fv) 」或「scFv 」係指一種融合蛋白，其包含至少一個包含輕鏈可變區(VL)之抗體片段及至少一個包含重鏈可變區(VH)之抗體片段，其中VL及VH係經由多肽連接子而鄰接地連接，且能夠被表現為單鏈多肽。除非有指明，否則如本文中所使用，scFv可具有呈任一順序之VL及VH可變區，例如就多肽之N端及C端而言，scFv可包含VL-連接子-VH或可包含VH-連接子-VL。
「(scFv)2 」或「串聯 scFv (tandem scFv) 」或「bis-scFv 」片段係指一種融合蛋白，其包含兩個輕鏈可變區(VL)及兩個重鏈可變區(VH)，其中兩個VL及兩個VH係經由多肽連接子而鄰接地連接，且能夠被表現為單鏈多肽。兩個VL及兩個VH係由肽連接子融合以形成二價分子VLA -連接子-VHA -連接子-VLB -連接子-VHB 以形成兩個結合部位，能夠同時結合兩個不同抗原或表位。
「特異性結合 (specifically binds/secific binding/specifically binding) 」或「結合 (bind) 」係指蛋白質分子以比對其他抗原更大之親和力結合至抗原或抗原內之表位。一般而言，蛋白質分子係以下列平衡解離常數(KD )結合至抗原或抗原內之表位：約1×10-7 M或更小，例如約5×10-8 M或更小、約1×10-8 M或更小、約1×10-9 M或更小、約1×10-10 M或更小、約1×10-11 M或更小、或約1×10-12 M或更小，一般以小於其結合至非特異性抗原（例如BSA、酪蛋白）之KD 至少一百倍的KD 結合。在此處所述之前列腺新抗原的上下文中，「特異性結合(specific binding)」係指蛋白質分子結合至前列腺新抗原而對野生型蛋白質（該新抗原係該野生型蛋白質之變體）沒有可偵測之結合。
「對象 (subject)」包括任何人類或非人類動物。「非人類動物(nonhuman animal)」包括所有脊椎動物，例如哺乳動物及非哺乳動物，諸如非人類靈長類、綿羊、狗、貓、馬、牛、雞、兩棲動物、爬蟲動物等。用語「對象」與「患者(patient)」在本文中可互換使用。
「T 細胞(T cell) 」及「T 淋巴球(T lymphocyte) 」在本文中係可互換的且同義地使用。T細胞包括胸腺細胞、初始T淋巴球、記憶T細胞、未成熟T淋巴球、成熟T淋巴球、休止T淋巴球、或活化T淋巴球。T細胞可係輔助T (Th)細胞，例如第1型輔助T (Th1)細胞或第2型輔助T (Th2)細胞。T細胞可係輔助T細胞（HTL；CD4+ T細胞）CD4+ T細胞、細胞毒性T細胞（CTL；CD8+ T細胞）、腫瘤浸潤細胞毒性T細胞（TIL；CD8+ T細胞）、CD4+ CD8+ T細胞、或T細胞之任何其他子集。亦包括的是「NKT細胞」，其係指T細胞之特化族群，其表現半不變αβ T細胞受體(semi-invariant αβ T-cell receptor)，但亦表現出一般與NK細胞相關聯之各種分子標記，諸如NK1.1。NKT細胞包括NK1.1+ 及NK1.1- 、以及CD4+ 、CD4- 、CD8+ 、及CD8- 細胞。NKT細胞上之TCR的獨特之處在於，其會辨識類MHC I分子CD Id所呈現之醣脂質(glycolipid)抗原。NKT細胞由於其能夠產生促進發炎或免疫耐受性之細胞介素而可具有保護性或有害效應。亦包括的是「伽瑪-德他T細胞（γδ T細胞）」，其係指一種特化族群，即在表面上具有不同TCR之T細胞小亞群，且不像大多數T細胞（其中TCR係由兩條指定為α-TCR鏈及β-TCR鏈之醣蛋白鏈構成），γδ T細胞中之TCR係由γ鏈及δ鏈組成。γδ T細胞可在免疫監控及免疫調節中發揮作用，且發現其係IL-17之重要來源並誘導穩健之CD8+ 細胞毒性T細胞反應。亦包括的是「調節性T細胞(regulatory T cell)」或「Treg」，其係指抑制異常或過度免疫反應且在免疫耐受性中發揮作用之T細胞。Treg一般係轉錄因子Foxp3陽性CD4+ T細胞，且亦可包括轉錄因子Foxp3陰性調節性T細胞，其係生產IL-10之CD4+ T細胞。
「治療有效量 (therapeutically effective amount) 」或「有效量 (effective amount) 」在本文中可互換使用，且係指有效達到所欲治療結果所需之劑量及時間段的量。治療有效量可依不同因素而異，諸如對象之疾病狀態、年齡、性別、及體重、以及治療劑或治療劑的組合在對象中引發所欲反應的能力。有效治療劑或治療劑組合之例示指標包括例如病患幸福感的提高、腫瘤負荷的減少、腫瘤生長的停止或減緩、及/或癌細胞沒有轉移至身體的其他位置。
「轉導 (transduction) 」係指使用病毒載體將外來核酸引入細胞中。
疾病或病症（諸如癌症）之「治療 (treat/treating/treatment) 」係指達成下列中之一或多者：減少病症之嚴重性及/或持續時間、抑制所治療病症特有之症狀的惡化、限制或預防病症於先前已患有該病症之對象中復發、或限制或預防症狀於先前已有該病症症狀之對象中復發。
「腫瘤細胞 (tumor cell) 」或「癌細胞(cancer cell)」係指在體內(in vivo )、離體(ex vivo )、或在組織培養物中具有自發或誘導的表型改變的癌性(cancerous)、癌前(pre-cancerous)或轉化細胞。這些變化不一定涉及新遺傳物質的攝取。儘管轉化可能來自轉化病毒的感染及新基因組核酸的摻入或外源核酸的攝取，其也可以自發地發生或在暴露於致癌物後發生，從而突變內源基因。轉化/癌症的例子如下：在體外(in vitro )、體內(in vivo )、及離體(ex vivo )的形態變化、細胞永生化、異常的生長控制、病灶形成、增殖、惡性腫瘤、腫瘤特異性標記水平的調節、侵襲性、在合適的動物宿主例如裸鼠中的腫瘤生長等等。
「變體 (variant) 」、「突變體 (mutant) 」、或「經改變 (altered) 」係指因一或多個修飾（例如一或多個取代、插入、或缺失）而與參考多肽或參考多核苷酸不同的多肽或多核苷酸。
整份說明書中抗體恆定區中之胺基酸殘基編號係根據如Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)，除非另有明確說明。
Ig恆定區中之突變稱為：L351Y_F405A_Y407V係指一個免疫球蛋白恆定區中之L351Y、F405A、及Y407V突變。L351Y_F405A_Y407V/T394W係指第一Ig恆定區中之L351Y、F405A、及Y407V突變及第二Ig恆定區中之T394W突變，這些突變係存在於一個多聚體蛋白質中。
「VHH」係指單域抗體或奈米抗體，其僅由重鏈同二聚體構成。VHH單域抗體缺乏習用Fab區之輕鏈及重鏈的CH1域。
除非以其他方式說明，在本文中描述之任何數值諸如濃度或濃度範圍應理解為在所有情況下皆受到用語「約(about)」之修飾。因此，數值一般包括記載值之± 10%。例如，濃度1 mg/mL包括0.9 mg/mL至1.1 mg/mL。同樣地，濃度範圍1%至10% (w/v)包括0.9% (w/v)至11% (w/v)。如本文中所使用，明示使用之數值範圍包括所有可能的子範圍、在該範圍內之所有個別數值，包括在該等範圍內之整數及數值之分數，除非上下文以其他方式清楚指示。
整份說明書中抗體恆定區中之胺基酸殘基編號係根據如Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991)，除非另有明確說明。表1. 本文中所使用的習用一字母及三字母胺基酸代碼
胺基酸 三字母代碼 一字母代碼
丙胺酸 Ala A
精胺酸 Arg R
天冬醯胺酸 Asn N
天冬胺酸 Asp D
半胱胺酸 Cys C
麩胺酸 Glu E
麩醯胺酸 Gln Q
甘胺酸 Gly G
組胺酸 His H
異白胺酸 Ile I
離胺酸 Lys K
甲硫胺酸 Met M
苯丙胺酸 Phe F
脯胺酸 Pro P
絲胺酸 Ser S
蘇胺酸 Thr T
色胺酸 Trp W
酪胺酸 Tyr Y
纈胺酸 Val V
結合CD3ε 之抗原結合域
本揭露提供結合CD3ε之抗原結合域、包含結合CD3ε之抗原結合域之單特異性及多特異性蛋白質、編碼前述之多核苷酸、載體、宿主細胞、及製造及使用前述之方法。本文中所識別的結合CD3ε之抗原結合域就高熱穩定性、減少的脫醯胺風險、及降低的免疫原性方面展現出有利之性質。
本揭露亦提供一種經單離蛋白質，其包含結合CD3ε之抗原結合域，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO: 103之輕鏈可變區(VL)。SEQ ID NO:103代表屬(genus) VL胺基酸序列，其涵蓋展現出改善性質包括高熱穩定性、減少的脫醯胺風險、及降低的免疫原性之變體。例如，經工程改造以賦予減少的脫醯胺風險之位置係VL中之殘基N92（殘基編號使用SEQ ID NO: 24之CD3B815 VL序列，根據Kabat編號(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991)），且經工程改造以賦予降低的免疫原性之位置係殘基Y49及/或L78處之人類至小鼠回復突變（殘基編號根據Kabat，使用SEQ ID NO: 24之CD3B815 VL）。殘基N92處的經工程改造位置係在LCDR3內。即使此位置處具有突變，抗體仍保留結合抗原之能力。
本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含結合CD3ε之抗原結合域，其中結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)的重鏈互補決定區(HCDR) 1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 24之輕鏈可變區(VL)的輕鏈互補決定區(LCDR) 1、LCDR2、及LCDR3。
本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含結合CD3ε之抗原結合域，其中結合CD3ε之抗原結合域包含下列之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3： 分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11； 分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17；或 分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22。
本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含結合CD3ε之抗原結合域，其中結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含結合CD3ε之抗原結合域，其中結合CD3ε之抗原結合域包含 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
本揭露提供一種經單離蛋白質，其包含結合CD3ε之抗原結合域，其中結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 25或26之胺基酸序列。在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 85或86之胺基酸序列。在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 85或88之胺基酸序列。在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 85或90之胺基酸序列。在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 85或92之胺基酸序列。在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 85或94之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係scFv。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係(scFv)2 。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係Fv。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係Fab。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係F(ab’)2 。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係Fd。
在其他實施例中，CD3ε抗原結合域係dAb。
在其他實施例中，CD3ε抗原結合域係VHH。結合CD3ε 之scFv
本文中所識別的任何結合CD3ε之VH及VL域可經工程改造為呈VH連接子-VL或VL-連接子-VH定向之scFv格式。本文中所識別的任何VH及VL域亦可用來產生sc(Fv)2 結構，諸如VH-連接子-VL-連接子-VL-連接子-VH、VH-連接子-VL-連接子-VH-連接子-VL。VH-連接子-VH-連接子-VL-連接子-VL。VL-連接子-VH-連接子-VH-連接子-VL。VL-連接子-VH-連接子-VL-連接子-VH或VL-連接子-VL-連接子-VH-連接子-VH。
可將本文中所識別的VH及VL域併入scFv格式中，且可使用已知方法評估所得scFv對CD3ε之結合及熱穩定性。結合可使用ProteOn XPR36、Biacore 3000、或KinExA儀器設備、ELISA、或所屬技術領域中具有通常知識者已知之競爭性結合檢定來評估。結合可使用經純化scFv或含有經表現scFv之大腸桿菌上清液或經裂解細胞來評估。如果在不同條件（例如滲透性、pH）下測量，則所測得之scFv對CD3ε的親和力可能會有所變化。因此，親和力及其他結合參數（例如，KD、Kon、Koff）之測量一般係以標準化條件及標準化緩衝液進行。熱穩定性可藉由在升溫下加熱測試scFv來評估，諸如在50℃、55℃、或60℃下加熱一段時間，諸如5分鐘(min)、10 min、15 min、20 min、25 min、或30 min，並測量測試scFv與CD3ε之結合。當相較於未經加熱之scFv樣本時，scFv保持相當之與CD3ε之結合稱為熱穩定。
在重組表現系統中，連接子係肽連接子並可包括任何天然存在的胺基酸。可被包括至連接子中之例示性胺基酸係Gly、Ser、Pro、Thr、Glu、Lys、Arg、Ile、Leu、His、及The。連接子應具有適當之長度，以將VH及VL以使彼等相對於彼此形成正確構形之方式連接，使得彼等保留所欲活性，諸如與CD3ε結合。
連接子可係約5至50個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係約10至40個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係約10至35個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係約10至30個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係約10至25個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係約10至20個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係約15至20個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係約16至19個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係6個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係7個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係8個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係9個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係10個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係11個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係12個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係13個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係14個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係15個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係16個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係17個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係18個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係19個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係20個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係21個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係22個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係23個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係24個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係25個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係26個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係27個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係28個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係29個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係30個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係31個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係32個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係33個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係34個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係35個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係36個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係37個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係38個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係39個胺基酸長。在其他實施例中，連接子係40個胺基酸長。可使用之例示性連接子係富含Gly之連接子、含Gly及Ser之連接子、含Gly及Ala之連接子、含Ala及Ser之連接子、及其他可撓性連接子。
其他連接子序列可包括免疫球蛋白鉸鏈區域、衍生自任何免疫球蛋白重鏈或輕鏈同型之CL或CH1之部分。替代地，各種非蛋白質聚合物（包括聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧化烯、或聚乙二醇及聚丙二醇之共聚物）可用來作為連接子。可使用之例示性連接子係顯示於表 2 。額外連接子係描述於例如國際專利公開案第WO2019/060695號中。表2. 連接子。
連接子名稱 胺基酸序列 SEQ ID NO:
連接子1 GGSEGKSSGSGSESKSTGGS 31
連接子2 GGGSGGGS 32
連接子3 GGGSGGGSGGGS 33
連接子4 GGGSGGGSGGGSGGGS 34
連接子5 GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS 35
連接子6 GGGGSGGGGSGGGGS 36
連接子7 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS 37
連接子8 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS 38
連接子9 GSTSGSGKPGSGEGSTKG 39
連接子10 IRPRAIGGSKPRVA 40
連接子11 GKGGSGKGGSGKGGS 41
連接子12 GGKGSGGKGSGGKGS 42
連接子13 GGGKSGGGKSGGGKS 43
連接子14 GKGKSGKGKSGKGKS 44
連接子15 GGGKSGGKGSGKGGS 45
連接子16 GKPGSGKPGSGKPGS 46
連接子17 GKPGSGKPGSGKPGSGKPGS 47
連接子18 GKGKSGKGKSGKGKSGKGKS 48
連接子19 STAGDTHLGGEDFD 49
連接子20 GEGGSGEGGSGEGGS 50
連接子21 GGEGSGGEGSGGEGS 51
連接子22 GEGESGEGESGEGES 52
連接子23 GGGESGGEGSGEGGS 53
連接子24 GEGESGEGESGEGESGEGES 54
連接子25 GSTSGSGKPGSGEGSTKG 55
連接子26 PRGASKSGSASQTGSAPGS 56
連接子27 GTAAAGAGAAGGAAAGAAG 57
連接子28 GTSGSSGSGSGGSGSGGGG 58
連接子29 GKPGSGKPGSGKPGSGKPGS 59
連接子30 GSGS 60
連接子31 APAPAPAPAP 61
連接子32 APAPAPAPAPAPAPAPAPAP 62
連接子33 AEAAAKEAAAKEAAAAKEAAAAKEAAAAKAAA 63
連接子34 GTEGKSSGSGSESKST 64
在其他實施例中，scFv自N至C端包含VH、第一連接子(L1)、及VL (VH-L1-VL)。
在其他實施例中，scFv自N至C端包含VL、L1、及VH (VL-L1-VH)。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列。
在其他實施例中，scFv包含 SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)的重鏈互補決定區(HCDR) 1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 24之輕鏈可變區(VL)的輕鏈互補決定區(LCDR) 1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，scFv包含下列之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3： 分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11；或 分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17；或 分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22。
在其他實施例中，scFv包含分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，scFv包含分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，scFv包含分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 65、66、67、68、69、70、71、72、73、或74之胺基酸序列。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列。
在其他實施例中，scFv包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列。結合CD3ε 之其他抗原結合域
本文中所識別的任何結合CD3ε之VH及VL域亦可經工程改造為Fab、F(ab’)2、Fd、或Fv格式，且其等與CD3ε之結合及熱穩定性可使用本文所述之檢定評估。
在其他實施例中，Fab包含 SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)的重鏈互補決定區(HCDR) 1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 24之輕鏈可變區(VL)的輕鏈互補決定區(LCDR) 1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，Fab包含下列之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3： 分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11； 分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17；或 分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22。
在其他實施例中，Fab包含分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，Fab包含分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，Fab包含分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，Fab包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL。
在其他實施例中，Fab包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL。
在其他實施例中，Fab包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL。
在其他實施例中，Fab包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL。
在其他實施例中，Fab包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
在其他實施例中，Fab包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
在其他實施例中，F(ab’)2 包含 SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)的重鏈互補決定區(HCDR) 1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 24之輕鏈可變區(VL)的輕鏈互補決定區(LCDR) 1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，F(ab’)2 包含下列之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3： 分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11； 分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17；或 分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22。
在其他實施例中，F(ab’)2 包含分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，F(ab’)2 包含分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，F(ab’)2 包含分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，F(ab’)2 包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL。
在其他實施例中，F(ab’)2 包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL。
在其他實施例中，F(ab’)2 包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL。
在其他實施例中，F(ab’)2 包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL。
在其他實施例中，F(ab’)2 包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
在其他實施例中，F(ab’)2 包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
在其他實施例中，Fv包含 SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)的重鏈互補決定區(HCDR) 1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 24之輕鏈可變區(VL)的輕鏈互補決定區(LCDR) 1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，Fv包含下列之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3： 分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11； 分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17；或 分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22。
在其他實施例中，Fv包含分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，Fv包含分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，Fv包含分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22之HCDR1、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
在其他實施例中，Fv包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL。
在其他實施例中，Fv包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL。
在其他實施例中，Fv包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL。
在其他實施例中，Fv包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL。
在其他實施例中，Fv包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
在其他實施例中，Fv包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
在其他實施例中，Fd包含 SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)的重鏈互補決定區(HCDR) 1、HCDR2、及HCDR3。
在其他實施例中，Fd包含分別為SEQ ID NO: 6、7、及8之HCDR1、HCDR1、及HCDR3。
在其他實施例中，Fd包含分別為SEQ ID NO: 12、13、及14之HCDR1、HCDR1、及HCDR3。
在其他實施例中，Fd包含分別為SEQ ID NO: 18、19、及20之HCDR1、HCDR1、及HCDR3。
在其他實施例中，Fd包含SEQ ID NO: 23之VH。同源抗原結合域及具有保守性取代之抗原結合域
結合CD3ε之抗原結合域的變體係在本揭露之範疇內。例如，變體可在結合CD3ε之抗原結合域中包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、或29個胺基酸取代，只要當相較於親本抗原結合域時該等變體保持或具有改善之功能性質。在其他實施例中，與本揭露之結合CD3ε之抗原結合域的序列同一性(sequence identity)可係約80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%。在其他實施例中，變異係在架構區中。在其他實施例中，變體係由保守性取代產生。
例如，結合CD3ε之抗原結合域可包含在VL中之殘基位置Y49、L78、或N92處的取代（殘基編號根據Kabat）。保守性取代可在任何指示位置進行，且在本文所述之檢定中測試所得結合CD3ε之變體抗原結合域的所欲特性。
亦提供結合CD3ε之抗原結合域，其包含與下列至少80%同一的VH及VL： SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
在其他實施例中，同一性係85%。在其他實施例中，同一性係90%。在其他實施例中，同一性係91%。在其他實施例中，同一性係91%。在其他實施例中，同一性係92%。在其他實施例中，同一性係93%。在其他實施例中，同一性係94%。在其他實施例中，同一性係94%。在其他實施例中，同一性係95%。在其他實施例中，同一性係96%。在其他實施例中，同一性係97%。在其他實施例中，同一性係98%。在其他實施例中，同一性係99%。
兩個序列間之同一性百分比係該等序列所共有之相同位置數目的函數（即同一性% =相同位置數目/總位置數目× 100），並且將需要被引入以最佳比對這兩個序列之缺口(gap)數目及各缺口長度納入考慮。
兩個胺基酸序列之間的同一性百分比可以使用已被併入ALIGN程式（版本2.0）中的E. Meyers及W. Miller的演算法(Comput Appl Biosci 4:11-17 (1988))來判定，其使用PAM120權重殘基表(weight residue table)，缺口長度罰分(gap length penalty)為12且缺口罰分(gap penalty)為4。此外，兩個胺基酸序列之間的同一性百分比可使用Needleman及Wunsch (J Mol Biol 48:444-453 (1970))演算法（其已被併入GCG軟體套件（可取自網際網路＜URL: http://www.gcg.com＞）中之GAP程式）判定，其使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣、及16、14、12、10、8、6、或4之缺口權重(gap weight)及1、2、3、4、5、或6之長度權重(length weight)。
在其他實施例中，結合CD3ε之變體抗原結合域在任何CDR區中包含一或二個保守性取代，同時保留結合CD3ε之親本抗原結合片段的所欲功能性質。
「保守修飾(conservative modification)」係指不會顯著影響或改變含有胺基酸修飾之抗體之結合特性的胺基酸修飾。保守修飾包括胺基酸取代、添加(addition)及缺失(deletion)。保守胺基酸取代為胺基酸被具有相似側鏈之胺基酸殘基置換的取代。具有相似側鏈之胺基酸殘基的家族已有明確界定，且包括具有以下者之胺基酸：酸性側鏈（如天冬胺酸、麩胺酸）、鹼性側鏈（如離胺酸、精胺酸、組胺酸）、非極性側鏈（如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸）、不帶電極性側鏈（如甘胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、半胱胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、色胺酸）、芳族側鏈（如苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸、酪胺酸）、脂族側鏈（如甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、絲胺酸、蘇胺酸）、醯胺（如天冬醯胺酸、麩醯胺酸）、β分支側鏈（如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸）、及含硫側鏈（半胱胺酸、甲硫胺酸）。此外，多肽中的任何天然殘基亦可經丙胺酸取代，如先前已針對丙胺酸掃描式突變誘發(alanine scanning mutagenesis)所描述者（MacLennan等人，(1988)Acta Physiol Scand Suppl 643:55-67；Sasaki等人，(1988)Adv Biophys 35:1-24）。本發明對於抗體的胺基酸取代可藉由例如PCR誘變的已知方法進行（美國專利第4,683,195號）。替代地，可產生變異體庫，例如使用隨機(NNK)或非隨機密碼子（例如DVK密碼子），其編碼11種胺基酸（Ala、Cys、Asp、Glu、Gly、Lys、Asn、Arg、Ser、Tyr、Trp）。所得變體可使用本文所述之檢定來測試其特性。產生結合CD3ε 之抗原結合片段的方法
可使用各種技術來產生本揭露中提供的結合CD3ε之抗原結合域。例如，Kohler及Milstein之融合瘤方法可用以識別結合CD3ε之VH/VL對。在融合瘤方法中，將小鼠或其他宿主動物（諸如倉鼠、大鼠、或雞）用人類及/或食蟹獼猴CD3ε免疫，接著使用標準方法將來自經免疫動物之脾細胞與骨髓瘤細胞融合以形成融合瘤細胞。可對從單一永生化融合瘤細胞而來的殖株，針對生產含有結合CD3ε之抗原結合域且具有所欲性質的抗體進行篩選，所欲性質諸如結合特異性、交叉反應性或缺乏交叉反應性、抗原親和力、及任何所欲功能性。
可將藉由將非人類動物免疫產生的結合CD3ε之抗原結合域人源化。例示性人源化技術（包括人類受體架構之選擇）包括CDR移植（美國專利第5,225,539號）、SDR移植（美國專利第6,818,749號）、表面重塑(resurfacing) (Padlan, (1991)Mol Immunol 28:489-499)、特異性決定殘基表面重塑(specificity determining residues resurfacing)（美國專利公開號2010/0261620）、人類架構適應（美國專利第8,748,356）、或超人源化(superhumanization)（美國專利第7,709,226號）。在此等方法中，親本抗體之CDR或CDR殘基子集被轉移至人類架構上，該人類架構可基於彼等與親本架構的整體同源性、基於CDR長度的相似性、或正則結構(canonical structure)同一性、或其組合來選擇。
可將人源化抗原結合域進一步最佳化以改善其對所欲抗原的選擇性或親和力，此係藉由諸如在國際專利申請案公開號WO1090/007861及WO1992/22653中所述之技術，藉由併入經修改架構支撐殘基以保持結合親和力（回復突變(backmutation)），或藉由在例如任何CDR引入變異以改善抗原結合域的親和力。
在其基因組中攜帶人類免疫球蛋白(Ig)基因座的基因轉殖動物（諸如小鼠、大鼠、或雞）可用於產生結合CD3ε之抗原結合片段，且係描述於例如美國專利第6,150,584號、國際專利公開號WO1999/45962、國際專利公開號WO2002/066630、WO2002/43478、WO2002/043478、及WO1990/04036。可將此動物中之內源性免疫球蛋白基因座破壞或刪除，且可使用同源或非同源重組、使用轉染色體(transchromosome)、或使用袖珍基因(minigene)將至少一個完整或部分人類免疫球蛋白基因座插入動物基因組中。可聘用諸如Regeneron (＜URL: http://www.regeneron.com＞)、Harbour Antibodies (http://www.harbourantibodies.com)、Open Monoclonal Technology, Inc. (OMT) (＜URL: http://www.omtinc.net＞)、KyMab (＜URL: http://www.kymab.com＞)、Trianni (＜URL: http://www.trianni.com＞)及Ablexis (＜URL: http://www.ablexis.com＞)等公司來使用如上所述之技術提供指向對抗所選抗原之人類抗體。
結合CD3ε之抗原結合域可選自噬菌體展示庫，其中噬菌體經工程改造以表現人類免疫球蛋白或其部分，諸如Fab、單鏈抗體(scFv)、或未配對或配對抗體可變區。結合CD3ε之抗原結合域可例如從噬菌體展示庫（表現抗體重鏈及輕鏈可變區）單離為具有噬菌體pIX外殼蛋白質的融合蛋白質，如在Shiet al., (2010)J Mol Biol 397:385-96及國際專利公開號WO09/085462中所述。該等庫可篩選出結合至人類及/或食蟹獼猴CD3ε之噬菌體，且所得之陽性殖株可經進一步表徵，將Fab自殖株溶解產物(lysate)單離出來並轉換為scFv或抗原結合片段之其他構形。
免疫性抗原(immunogenic antigen)之製備及本揭露之抗原結合域之表現及生產可使用任何合適技術執行，諸如重組蛋白質生產。免疫性抗原可用經純化的蛋白質或包括全細胞或細胞或組織抽出物的蛋白質混合物之形式來投予給動物，或者抗原可由編碼前述抗原或其之一部分的核酸於該動物體內重新地(de novo)形成。與半衰期延長部份(half-life extending moiety) 之接合
本揭露之結合CD3ε之抗原結合域可接合至半衰期延長部份。例示性半衰期延長部份係白蛋白、白蛋白變體、結合白蛋白之蛋白質及/或域、轉鐵蛋白及其片段及類似物、免疫球蛋白(Ig)或其片段（諸如Fc區）。前述半衰期延長部份之胺基酸序列係已知的。Ig或其片段包括所有同型（即IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA、及IgE）。
可接合至本揭露之結合CD3ε之抗原結合域的額外半衰期延長部份包括聚乙二醇(PEG)分子（諸如PEG5000或PEG20,000）、不同鏈長之脂肪酸及脂肪酸酯（例如月桂酸酯、肉豆蔻酸酯、硬脂酸脂、花生酸酯(arachidate)、二十二酸酯、油酸酯、花生四烯酸酯(arachidonate)、辛二酸(octanedioic acid)、十四烷二酸(tetradecanedioic acid)、十八烷二酸(octadecanedioic acid)、二十二烷二酸(docosanedioic acid)、及類似者）、聚離胺酸、辛烷、或具有所欲性質之碳水化合物（葡聚糖、纖維素、寡醣、或多醣）。此等部份可與本揭露之結合CD3ε之抗原結合域直接融合，且可藉由標準選殖及表現技術產生。替代地，可使用熟知的化學偶合方法，將該等部份附接至重組產生的本揭露之結合CD3ε之抗原結合域。
例如，聚乙二醇基(pegyl)部份可藉由下列方式接合至本揭露之結合CD3ε之抗原結合域：將半胱胺酸殘基併入本揭露之結合CD3ε之抗原結合域的C端，或者將半胱胺酸工程改造至背向CD3ε結合部位之殘基位置中，並使用熟知方法將聚乙二醇基附接至該半胱胺酸。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合片段係接合至半衰期延長部份。
在其他實施例中，半衰期延長部份係免疫球蛋白(Ig)、Ig之片段、Ig恆定區、Ig恆定區之片段、Fc區、轉鐵蛋白、白蛋白、白蛋白結合域、或聚乙二醇。在其他實施例中，半衰期延長部份係Ig恆定區。
在其他實施例中，半衰期延長部份係Ig。
在其他實施例中，半衰期延長部份係Ig之片段。
在其他實施例中，半衰期延長部份係Ig恆定區。
在其他實施例中，半衰期延長部份係Ig恆定區之片段。
在其他實施例中，半衰期延長部份係Fc區。
在其他實施例中，半衰期延長部份係白蛋白。
在其他實施例中，半衰期延長部份係白蛋白結合域。
在其他實施例中，半衰期延長部份係轉鐵蛋白。
在其他實施例中，半衰期延長部份係聚乙二醇。
接合至半衰期延長部份的結合CD3ε之抗原結合域可利用已知體內模型來評估其藥物動力學性質。與免疫球蛋白(Ig) 恆定區或Ig 恆定區之片段的接合
本揭露之結合CD3ε之抗原結合域可接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段，以賦予類抗體性質，包括Fc效應功能C1q結合、補體依賴性細胞毒性(CDC)、Fc受體結合、抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)、吞噬作用、或下調細胞表面受體（例如，B細胞受體；BCR）。Ig恆定區或Ig恆定區之片段亦作用為如本文所論述之半衰期延長部份。本揭露之結合CD3ε之抗原結合域可使用標準方法來工程改造為習知全長抗體。包含結合CD3ε之抗原結合域的全長抗體可進一步經如本文所述之工程改造。
免疫球蛋白重鏈恆定區包含子域CH1、鉸鏈、CH2、及CH3。CH1域橫跨重鏈上的殘基A118至V215，CH2域橫跨殘基A231至K340，而CH3域橫跨殘基G341至K447，殘基編號根據EU索引。在一些情況下，G341被稱為CH2域殘基。鉸鏈通常係定義為包括人類IgG1之E216且終止於P230。Ig Fc區至少包含Ig恆定區之CH2及CH3域，且因此包含至少一個Ig重鏈恆定區之約A231至K447的區。
本發明亦提供一種結合CD3ε之抗原結合域，其接合至免疫球蛋白(Ig)恆定區或Ig恆定區之片段。
在其他實施例中，Ig恆定區係重鏈恆定區。
在其他實施例中，Ig恆定區係輕鏈恆定區。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含Fc區。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含CH2域。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含CH3域。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含CH2域及CH3域。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含鉸鏈的至少一部分、CH2域、及CH3域。鉸鏈之部分係指Ig鉸鏈之一或多個胺基酸殘基。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含鉸鏈、CH2域、及CH3域。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的N端。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的C端。
在其他實施例中，結合CD3ε之抗原結合域係經由第二連接子(L2)接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列。
接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的本揭露之結合CD3ε之抗原結合域可使用數種已知檢定評估其功能性。與CD3ε之結合可使用本文所述之方法評估。由Ig恆定域或Ig恆定區之片段（諸如Fc區）賦予的經改變性質可在Fc受體結合檢定中使用受體（諸如FcγRI、FcγRII、FcγRIII、或FcRn受體）之可溶形式來檢定，或使用測量例如ADCC、CDC、或ADCP的基於細胞之檢定來檢定。
ADCC可使用體外檢定使用表現CD3ε之細胞作為目標細胞且NK細胞作為效應細胞來評估。細胞裂解可藉由從裂解細胞中釋放標示（例如放射性物質、螢光染料、或天然胞內蛋白質）來偵測。在一例示性檢定中，目標細胞係以1個目標細胞對4個效應細胞之比使用。將目標細胞用BATDA預標示，並與效應細胞及測試抗體組合。將樣本培養2小時，且藉由測量釋放至上清液中之BATDA來測量細胞裂解。將數據相對於使用0.67% Triton X-100 (Sigma Aldrich)的最大細胞毒性及在沒有任何抗體的情況下由目標細胞自發釋放的BATDA所判定之最小對照值正規化。
ADCP可藉由使用衍生自單核球的巨噬細胞作為效應細胞且任何表現CD3ε之細胞作為目標細胞來評估，該等目標細胞經工程改造以表現GFP或其他標示分子。在一例示性檢定中，效應細胞:目標細胞比可為例如4:1。可將效應細胞與目標細胞在存在或不存在本發明之抗體的情況下一起培養4小時。培養後，使用細胞剝離液(accutase)將細胞分離。巨噬細胞可用與螢光標示偶合的抗CD11b及抗CD14抗體鑑定，且吞噬作用百分比可根據在CD11+ CD14+ 巨噬細胞中的GFP螢光百分比使用標準方法判定。
細胞之CDC可藉由例如下列方式測量：將道迪(Daudi)細胞以1×105 個細胞/孔（50 µl/孔）接種於RPMI-B（補充有1% BSA的RPMI）中、將50 µL的測試蛋白質添加至孔中使最終濃度在0至100 µg/mL之間、使反應在室溫下培養15 min、將11 µL的匯集人類血清添加至孔中、及使反應在37℃下培養45 min。裂解細胞百分比(%)可使用標準方法以FACS檢定中經碘化丙啶染色的細胞%來偵測。包含本揭露之結合CD3ε 之抗原結合域的蛋白質
本揭露之結合CD3ε之抗原結合域可使用標準方法來工程改造為各種設計之單特異性或多特異性蛋白質。
本揭露亦提供一種單特異性蛋白質，其包含本揭露之結合CD3ε之抗原結合域。
在其他實施例中，單特異性蛋白質係抗體。
本揭露亦提供一種多特異性蛋白質，其包含本揭露之結合CD3ε之抗原結合域。
在其他實施例中，多特異性蛋白質係雙特異性的。
在其他實施例中，多特異性蛋白質係三特異性的。
在其他實施例中，多特異性蛋白質係四特異性的。
在其他實施例中，多特異性蛋白質針對與CD3ε之結合係單價的。
在其他實施例中，多特異性蛋白質針對與CD3ε之結合係二價的。
本揭露亦提供一種經單離多特異性蛋白質，其包含結合CD3ε之第一抗原結合域及結合腫瘤抗原之第二抗原結合域。
在其他實施例中，腫瘤抗原係hK2抗原。在其他實施例中，腫瘤抗原係HLA-G抗原。在其他實施例中，腫瘤抗原係DLL3抗原。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域及/或結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含scFv、(scFv)2 、Fv、Fab、F(ab’)2 、Fd、dAb、或VHH。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域及/或結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含Fab。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域及/或結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含F(ab’)2 。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域及/或結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含VHH。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域及/或結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含Fv。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域及/或結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含Fd。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域及/或結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含scFv。
在其他實施例中，scFv自N至C端包含VH、第一連接子(L1)、及VL (VH-L1-VL)或VL、L1、及VH (VL-L1-VH)。
在其他實施例中，L1包含約5至50個胺基酸。
在其他實施例中，L1包含約5至40個胺基酸。
在其他實施例中，L1包含約10至30個胺基酸。
在其他實施例中，L1包含約10至20個胺基酸。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 31之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 32之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 33之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 35之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 36之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 39之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 40之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 43之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 44之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 45之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 46之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 47之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 48之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 49之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 51之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 54之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 56之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 57之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 58之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 59之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 62之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 63之胺基酸序列。
在其他實施例中，L1包含SEQ ID NO: 64之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 6、12、或18之HCDR1、SEQ ID NO: 7、13、或19之HCDR2、SEQ ID NO: 8、14、或20之HCDR3、SEQ ID NO: 9、15、或21之LCDR1、SEQ ID NO: 10或16之LCDR2、及SEQ ID NO: 11、17、或22之LCDR3。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含下列之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3： 分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11； 分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17；或 分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 65、66、67、68、69、60、71、72、73、或74之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 65之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 66之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 67之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 68之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 69之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 70之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 71之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 73之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域包含SEQ ID NO: 74之胺基酸序列。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 149之HCDR1、SEQ ID NO: 150之HCDR2、SEQ ID NO: 151之HCDR3、SEQ ID NO: 171之LCDR1、SEQ ID NO: 172之LCDR2及SEQ ID NO: 173之LCDR3；或 SEQ ID NO: 126之VH及SEQ ID NO: 127之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 149之HCDR1、SEQ ID NO: 152之HCDR2、SEQ ID NO: 151之HCDR3、SEQ ID NO: 174之LCDR1、SEQ ID NO: 175之LCDR2及SEQ ID NO: 173之LCDR3；或 SEQ ID NO: 124之VH及SEQ ID NO: 125之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 149之HCDR1、SEQ ID NO: 152之HCDR2、SEQ ID NO: 151之HCDR3、SEQ ID NO: 174之LCDR1、SEQ ID NO: 175之LCDR2及SEQ ID NO: 173之LCDR3；或 SEQ ID NO: 128之VH及SEQ ID NO: 129之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 149之HCDR1、SEQ ID NO: 152之HCDR2、SEQ ID NO: 151之HCDR3、SEQ ID NO: 174之LCDR1、SEQ ID NO: 175之LCDR2及SEQ ID NO: 173之LCDR3；或 SEQ ID NO: 130之VH及SEQ ID NO: 131之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 149之HCDR1、SEQ ID NO: 152之HCDR2、SEQ ID NO: 151之HCDR3、SEQ ID NO: 171之LCDR1、SEQ ID NO: 172之LCDR2及SEQ ID NO: 173之LCDR3；或 SEQ ID NO: 132之VH及SEQ ID NO: 133之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 149之HCDR1、SEQ ID NO: 152之HCDR2、SEQ ID NO: 151之HCDR3、SEQ ID NO: 171之LCDR1、SEQ ID NO: 172之LCDR2及SEQ ID NO: 173之LCDR3；或 SEQ ID NO: 134之VH及SEQ ID NO: 135之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 149之HCDR1、SEQ ID NO: 152之HCDR2、SEQ ID NO: 151之HCDR3、SEQ ID NO: 171之LCDR1、SEQ ID NO: 172之LCDR2及SEQ ID NO: 173之LCDR3；或 SEQ ID NO: 136之VH及SEQ ID NO: 135之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 149之HCDR1、SEQ ID NO: 152之HCDR2、SEQ ID NO: 151之HCDR3、SEQ ID NO: 171之LCDR1、SEQ ID NO: 172之LCDR2及SEQ ID NO: 173之LCDR3；或 SEQ ID NO: 132之VH及SEQ ID NO: 135之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 153之HCDR1、SEQ ID NO: 154之HCDR2、SEQ ID NO: 155之HCDR3、SEQ ID NO: 176之LCDR1、SEQ ID NO: 177之LCDR2及SEQ ID NO: 178之LCDR3；或 SEQ ID NO: 137之VH及SEQ ID NO: 138之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 156之HCDR1、SEQ ID NO: 157之HCDR2、SEQ ID NO: 158之HCDR3、SEQ ID NO: 182之LCDR1、SEQ ID NO: 183之LCDR2及SEQ ID NO: 184之LCDR3；或 SEQ ID NO: 139之VH及SEQ ID NO: 140之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 159之HCDR1、SEQ ID NO: 160之HCDR2、SEQ ID NO: 161之HCDR3、SEQ ID NO: 179之LCDR1、SEQ ID NO: 180之LCDR2及SEQ ID NO: 181之LCDR3；或 SEQ ID NO: 141之VH及SEQ ID NO: 142之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 162之HCDR1、SEQ ID NO: 163之HCDR2、SEQ ID NO: 164之HCDR3、SEQ ID NO: 185之LCDR1、SEQ ID NO: 186之LCDR2及SEQ ID NO: 187之LCDR3；或 SEQ ID NO: 143之VH及SEQ ID NO: 144之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 165之HCDR1、SEQ ID NO: 166之HCDR2、SEQ ID NO: 167之HCDR3、SEQ ID NO: 191之LCDR1、SEQ ID NO: 192之LCDR2及SEQ ID NO: 193之LCDR3；或 SEQ ID NO: 145之VH及SEQ ID NO: 146之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含 SEQ ID NO: 168之HCDR1、SEQ ID NO: 169之HCDR2、SEQ ID NO: 170之HCDR3、SEQ ID NO: 191之LCDR1、SEQ ID NO: 192之LCDR2及SEQ ID NO: 188之LCDR3；或 SEQ ID NO: 147之VH及SEQ ID NO: 148之VL。
在其他實施例中，結合腫瘤抗原之第二抗原結合域包含SEQ ID NO: 143之VH及SEQ ID NO: 358之VL。
在其他實施例中，結合CD3ε之第一抗原結合域係接合至第一免疫球蛋白(Ig)恆定區或第一Ig恆定區之片段，且/或結合腫瘤抗原之第二抗原結合域係接合至第二免疫球蛋白(Ig)恆定區或第二Ig恆定區之片段。
在其他實施例中，第一Ig恆定區之片段及/或第二Ig恆定區之片段包含Fc區。
在其他實施例中，第一Ig恆定區之片段及/或第二Ig恆定區之片段包含CH2域。
在其他實施例中，第一Ig恆定區之片段及/或第二Ig恆定區之片段包含CH3域。
在其他實施例中，第一Ig恆定區之片段及/或第二Ig恆定區之片段包含CH2域及CH3域。
在其他實施例中，第一Ig恆定區之片段及/或第二Ig恆定區之片段包含鉸鏈之至少一部分、CH2域、及CH3域。
在其他實施例中，Ig恆定區之片段包含鉸鏈、CH2域、及CH3域。
在其他實施例中，多特異性蛋白質進一步包含在結合CD3ε之第一抗原結合域與第一Ig恆定區或第一Ig恆定區之片段之間、及在結合腫瘤抗原之第二抗原結合域與第二Ig恆定區或第二Ig恆定區之片段之間的第二連接子(L2)。
在其他實施例中，L2包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。
在其他實施例中，第一Ig恆定區或第一Ig恆定區之片段及第二Ig恆定區或第二Ig恆定區之片段係IgG1、IgG2、及IgG3、或IgG4同型。
在其他實施例中，第一Ig恆定區或第一Ig恆定區之片段及第二Ig恆定區或第二Ig恆定區之片段係IgG1同型。
在其他實施例中，第一Ig恆定區或第一Ig恆定區之片段及第二Ig恆定區或第二Ig恆定區之片段係IgG2同型。
在其他實施例中，第一Ig恆定區或第一Ig恆定區之片段及第二Ig恆定區或第二Ig恆定區之片段係IgG3同型。
在其他實施例中，第一Ig恆定區或第一Ig恆定區之片段及第二Ig恆定區或第二Ig恆定區之片段係IgG4同型。
第一Ig恆定區或第一Ig恆定區之片段及第二Ig恆定區或第二Ig恆定區之片段可進一步經如上所述之工程改造。
在其他實施例中，第一Ig恆定區或第一Ig恆定區之片段及第二Ig恆定區或第二Ig恆定區之片段包含導致多特異性蛋白質與FcγR之結合減少的至少一個突變。
在其他實施例中，導致多特異性蛋白質與FcγR之結合減少的至少一個突變係選自由下列所組成之群組：F234A/L235A、L234A/L235A、L234A/L235A/D265S、V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S、F234A/L235A、S228P/F234A/ L235A、N297A、V234A/G237A、K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-缺失/A327G/P331A/D365E/L358M、H268Q/V309L/A330S/P331S、S267E/L328F、L234F/L235E/D265A、L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S、S228P/F234A/L235A/G237A/P238S、及S228P/F234A/L235A/G236-缺失/G237A/P238S，其中殘基編號係根據EU索引。
在其他實施例中，第一Ig恆定區或第一Ig恆定區之片段及第二Ig恆定區或第二Ig恆定區之片段包含導致多特異性蛋白質與Fcγ受體(FcγR)之結合增強的至少一個突變。
在其他實施例中，導致多特異性蛋白質與FcγR之結合增強的至少一個突變係選自由下列所組成之群組：S239D/I332E、S298A/E333A/K334A、F243L/R292P/Y300L、F243L/R292P/Y300L/P396L、F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L、及G236A/S239D/I332E，其中殘基編號係根據EU索引。
在其他實施例中，FcγR係FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、或FcγRIII、或其任何組合。
在其他實施例中，第一Ig恆定區或第一Ig恆定區之片段及第二Ig恆定區或第二Ig恆定區之片段包含調節多特異性蛋白質之半衰期的至少一個突變。
在其他實施例中，調節多特異性蛋白質之半衰期的至少一個突變係選自由下列所組成之群組：H435A、P257I/N434H、D376V/N434H、M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F、T308P/N434A、及H435R，其中殘基編號係根據EU索引。
在其他實施例中，多特異性蛋白質包含在第一Ig恆定區的CH3域中或在第一Ig恆定區之片段的CH3域中之至少一個突變、及/或在第二Ig恆定區的CH3域中或在第二Ig恆定區之片段的CH3域中之至少一個突變。
在其他實施例中，在第一Ig恆定區的CH3域中或在第一Ig恆定區之片段的CH3域中之至少一個突變、及/或在第二Ig恆定區的CH3域中或在第二Ig恆定區之片段的CH3域中之至少一個突變係選自由下列所組成之群組：T350V、L351Y、F405A、Y407V、T366Y、T366W、T366L、F405W、K392L、T394W、T394S、Y407T、Y407A、T366S/L368A/Y407V、L351Y/F405A/Y407V、T366I/K392M/T394W、T366L/K392L/T394W、F405A/Y407V、T366L/K392M/T394W、L351Y/Y407A、L351Y/Y407V、T366A/K409F、L351Y/Y407A、T366V/K409F、T366A/K409F、T350V/L351Y/F405A/Y407V、及T350V/T366L/K392L/T394W，其中殘基編號係根據EU索引。
在其他實施例中，第一Ig恆定區或第一Ig恆定區之片段及第二Ig恆定區或第二Ig恆定區之片段包含下列突變： 在第一Ig恆定區中之L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V及在第二Ig恆定區中之L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W；或 在第一Ig恆定區中之L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W及在第二Ig恆定區中之L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V。包含結合CD3ε 之抗原結合片段的多特異性蛋白質之產生
可將本揭露之結合CD3ε之抗原結合片段工程改造為多特異性抗體，其亦涵蓋於本發明之範疇內。
可將結合CD3ε之抗原結合片段工程改造為全長多特異性抗體，其係使用Fab臂交換來產生，其中在促進體外Fab臂交換之Ig恆定區CH3域內將取代引入兩個單特異性雙價抗體中。在該等方法中，二個單特異性雙價抗體係經工程改造以在CH3域具有某些促進異二聚體穩定性之取代；該等抗體係在足以讓鉸鏈區中之半胱胺酸進行雙硫鍵異構化的還原條件下一起培養；從而藉由Fab臂交換來產生該雙特異性抗體。培養條件可最佳地被回復至非還原性(non-reducing)。可使用之例示性還原劑係2-巰基乙胺(2-MEA)、二硫蘇糖醇(dithiothreitol, DTT)、二硫赤蘚醇(dithioerythritol, DTE)、麩胱甘肽、參(2-羧乙基)膦(TCEP)、L-半胱胺酸及β-巰基乙醇，還原劑較佳係選自由下列所組成之群組：2-巰基乙胺、二硫蘇糖醇及參(2-羧乙基)膦。舉例而言，可使用在至少20℃之溫度且有至少25 mM之2-MEA存在下或於至少0.5 mM之二硫蘇糖醇存在且在5至8之pH下（例如在7.0之pH下或在7.4之pH下）培養至少90 min。
可使用之CH3突變包括諸如下列之技術：鈕扣(Knob-in-Hole)突變(Genentech)、靜電吸引突變(Chugai, Amgen, NovoNordisk, Oncomed)、鏈交換工程改造之域體(SEEDbody) (EMD Serono)、Duobody®突變(Genmab)、及其他不對稱突變（例如，Zymeworks）。
鈕扣結構突變係揭示於例如WO1996/027011中且包括在CH3區之界面上的突變，其中具有小側鏈之胺基酸（孔）被導入第一CH3區且具有大側鏈之胺基酸（鈕）被導入第二CH3區，導致在第一CH3區與第二CH3區之間的優先交互作用。形成鈕及孔之例示性CH3區突變係T366Y/F405A、T366W/F405W、F405W/Y407A、T394W/Y407T、T394S/Y407A、T366W/T394S、F405W/T394S及T366W/T366S_L368A_Y407V。
重鏈異二聚體形成可藉由使用藉由取代在第一CH3區上的帶正電殘基及在第二CH3區上的帶負電殘基之靜電交互作用來促進，如US2010/0015133、US2009/0182127、US2010/028637或US2011/0123532中所述。
可用來促進重鏈異二聚化之其他不對稱突變係L351Y_F405A_Y407V/T394W、T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V、T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V、L351Y_Y407A/T366A_K409F、L351Y_Y407A/T366V_K409F、Y407A/T366A_K409F、或T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W，如US2012/0149876或US2013/0195849 (Zymeworks)中所述。
SEEDbody突變涉及用IgA殘基取代選定IgG殘基以促進重鏈異二聚化，如US20070287170中所述。
可使用的其他例示性突變係R409D_K370E/D399K_E357K、S354C_T366W/Y349C_ T366S_L368A_Y407V、Y349C_T366W/S354C_T366S_L368A_Y407V、T366K/L351D、L351K/Y349E、L351K/Y349D、L351K/L368E、L351Y_Y407A/T366A_K409F、L351Y_Y407A/T366V_K409F、K392D/D399K、K392D/ E356K、K253E_D282K_K322D/D239K_E240K_K292D、K392D_K409D/D356K_D399K，如WO2007/147901、WO 2011/143545、WO2013157954、WO2013096291及US2018/0118849中所述。
Duobody®突變(Genmab)係揭示於例如US9150663及US2014/0303356中，且包括突變F405L/K409R、野生型/F405L_R409K、T350I_K370T_F405L/K409R、K370W/K409R、D399AFGHILMNRSTVWY/K409R、T366ADEFGHILMQVY/K409R、L368ADEGHNRSTVQ/K409AGRH、D399FHKRQ/K409AGRH、F405IKLSTVW/K409AGRH、及Y407LWQ/K409AGRH。
額外雙特異性或多特異性結構（可將結合CD3ε之抗原結合域併入其中）包括雙可變域免疫球蛋白(Dual Variable Domain Immunoglobulin, DVD)（國際專利公開號WO2009/134776；DVD為全長抗體，其包含具有結構VH1-連接子-VH2-CH之重鏈及具有結構VL1-連接子-VL2-CL之輕鏈；連接子係可選的）、包括各種二聚化域以連接兩個具有不同特異性之抗體臂的結構（諸如白胺酸拉鍊或膠原蛋白二聚化域，國際專利公開號WO2012/022811、美國專利第5,932,448號；美國專利第6,833,441號）、接合在一起之二或更多個域抗體(dAb)、雙鏈抗體、僅重鏈抗體（諸如駱駝(camelid)抗體及經工程改造之駱駝抗體）、雙靶向(DT)-Ig (GSK/Domantis)、二合一抗體(Genentech)、交聯Mab (Karmanos Cancer Center)、mAb2 (F-Star)及CovX-body (CovX/Pfizer)、類IgG雙特異性(InnClone/Eli Lilly)、Ts2Ab (MedImmune/AZ)及BsAb (Zymogenetics)、HERCULES (Biogen Idec)及TvAb (Roche)、ScFv/Fc融合(Academic Institution)、SCORPION（Emergent BioSolutions/Trubion、Zymogenetics/BMS）、雙親和性重靶向技術(Fc-DART) (MacroGenics)及雙(ScFv)2-Fab (National Research Center for Antibody Medicine--China)、雙作用或雙-Fab (Genentech)、Dock-and-Lock (DNL) (ImmunoMedics)、雙價雙特異性(Biotecnol)、及Fab-Fv (UCB-Celltech)。基於ScFv之抗體、基於雙價抗體之抗體及域抗體包括但不限於Bispecific T Cell Engager (BiTE) (Micromet)、Tandem Diabody (Tandab) (Affimed)、Dual Affinity Retargeting Technology (DART) (MacroGenics)、Single-chain Diabody (Academic)、TCR-like Antibodies (AIT, ReceptorLogics)、Human Serum Albumin ScFv Fusion (Merrimack)及COMBODY (Epigen Biotech)、雙靶向奈米抗體(Ablynx)、僅雙靶向重鏈域抗體(dual targeting heavy chain only domain antibody)。
亦可將本揭露之結合CD3ε之抗原結合域工程改造為包含三個多肽鏈之多特異性蛋白質。在此類設計中，至少一個抗原結合域係呈scFv之形式。例示性設計包括（其中「1」指示第一抗原結合域，「2」指示第二抗原結合域，且「3」指示第三抗原結合域）： 設計1：鏈A) scFv1- CH2-CH3；鏈B) VL2-CL；鏈C) VH2-CH1-鉸鏈-CH2-CH3 設計2：鏈A) scFv1-鉸鏈- CH2-CH3；鏈B) VL2-CL；鏈C) VH2-CH1-鉸鏈-CH2-CH3 設計3：鏈A) scFv1- CH1-鉸鏈- CH2-CH3；鏈B) VL2-CL；鏈C) VH2-CH1-鉸鏈-CH2-CH3 設計4：鏈A) CH2-CH3-scFv1；鏈B) VL2-CL；鏈C) VH2-CH1-鉸鏈-CH2-CH3 可將CH3工程改造併入設計1至4中，諸如突變L351Y_F405A_Y407V/T394W、T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V、T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V、L351Y_Y407A/T366A_K409F、L351Y_Y407A/T366V_K409F、Y407A/T366A_K409F、或T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W，如US2012/0149876或US2013/0195849 (Zymeworks)中所述。同型、同種異型、及Fc 工程改造
Ig恆定區或Ig恆定區之片段（諸如存在於本揭露之蛋白質中的Fc區）可係任何同種異型(allotype)或同型(isotype)。
在其他實施例中，Ig恆定區或Ig恆定區之片段係IgG1同型。
在其他實施例中，Ig恆定區或Ig恆定區之片段係IgG2同型。
在其他實施例中，Ig恆定區或Ig恆定區之片段係IgG3同型。
在其他實施例中，Ig恆定區或Ig恆定區之片段係IgG4同型。
Ig恆定區或Ig恆定區之片段可係任何同種異型。預期同種異型對於Ig恆定區之性質沒有影響，諸如結合或Fc介導之效應功能。治療性蛋白質（包含Ig恆定區或其片段）之免疫原性係與輸注反應之風險增加及治療反應之持續時間減少相關聯(Baertet al., (2003)N Engl J Med 348:602-08)。治療性蛋白質（包含Ig恆定區或其片段）在宿主中誘導免疫反應的程度可部分地由該Ig恆定區之同種異型決定(Stickleret al., (2011)Genes and Immunity 12:213-21)。Ig恆定區同種異型係與抗體恆定區序列中之特定位置處的胺基酸序列變異相關。表 3 顯示所選之IgG1、IgG2、及IgG4同種異型。表3.
同種異型 多樣性位置處的胺基酸殘基（殘基編號：EU索引）
  IgG2 IgG4 IgG1
  189 282 309 422 214 356 358 431
G2m(n) T M            
G2m(n-) P V            
G2m(n)/(n-) T V            
nG4m(a)     L R        
G1m(17)         K E M A
G1m(17,1)         K D L A
G1m(3)         R E M A
C端離胺酸(CTL)可藉由血流中的內源性循環羧肽酶而自Ig恆定區移除(Caiet al. , (2011)Biotechnol Bioeng 108:404-412)。在製造期間，藉由控制胞外Zn2+ 、EDTA或EDTA - Fe3+ 的濃度可將CTL去除控制在小於最大水平，如在美國專利公開號US20140273092中所述。蛋白質之CTL含量可使用已知方法測量。
在其他實施例中，接合至Ig恆定區的結合CD3ε之抗原結合片段具有約10%至約90%之C端離胺酸含量。在其他實施例中，C端離胺酸含量為約20%至約80%。在其他實施例中，C端離胺酸含量為約40%至約70%。在其他實施例中，C端離胺酸含量為約55%至約70%。在其他實施例中，C端離胺酸含量為約60%。
可對接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域進行Fc區突變，以調節其效應功能（諸如ADCC、ADCP、及/或ADCP）及/或藥物動力學性質。這可藉由將（多個）突變引入Fc中來達成，該（等）突變調節突變Fc與活化性FcγR（FcγRI、FcγRIIa、FcγRIII）、抑制性FcγRIIb、及/或FcRn之結合。
在其他實施例中，接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域在Ig恆定區或Ig恆定區之片段中包含至少一個突變。
在其他實施例中，至少一個突變係在Fc區中。
在其他實施例中，接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域在Fc區中包含至少一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四、或十五個突變。
在其他實施例中，接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域在Fc區中包含調節抗體與FcRn之結合的至少一個突變。
可經突變以調節半衰期（例如，與FcRn之結合）之Fc位置包括位置250、252、253、254、256、257、307、376、380、428、434、及435。可單獨或組合進行之例示性突變為突變T250Q、M252Y、I253A、S254T、T256E、P257I、T307A、D376V、E380A、M428L、H433K、N434S、N434A、N434H、N434F、H435A、及H435R。可進行以增加半衰期的例示性單個或組合突變係突變M428L/N434S、M252Y/S254T/T256E、T250Q/M428L、N434A、及T307A/E380A/N434A。可進行以減少半衰期的例示性單個或組合突變係突變H435A、P257I/N434H、D376V/N434H、M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F、T308P/N434A、及H435R。
在其他實施例中，接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域包含M252Y/S254T/T256E突變。
在其他實施例中，接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域在Fc區中包含至少一個突變，其減少蛋白質與活化性Fcγ受體(FcγR)之結合且/或降低Fc效應功能（諸如C1q結合、補體依賴性細胞毒性(CDC)、抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)或吞噬作用(ADCP)）。
可經突變以減少蛋白質與活化性FcγR之結合且因而降低效應功能之Fc位置包括位置214、233、234、235、236、237、238、265、267、268、270、295、297、309、327、328、329、330、331、及365。可單獨或組合進行之例示性突變為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4中之突變K214T、E233P、L234V、L234A、G236缺失、V234A、F234A、L235A、G237A、P238A、P238S、D265A、S267E、H268A、H268Q、Q268A、N297A、A327Q、P329A、D270A、Q295A、V309L、A327S、L328F、A330S、及P331S。導致具有降低之ADCC之蛋白質的例示性組合突變為下列突變：IgG1上之L234A/L235A、IgG1上之L234A/L235A/D265S、IgG2上之V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S、IgG4上之F234A/L235A、IgG4上之S228P/F234A/ L235A、所有Ig同型上之N297A、IgG2上之V234A/G237A、IgG1上之K214T/E233P/ L234V/L235A/G236缺失/A327G/P331A/D365E/L358M、IgG2上之H268Q/V309L/A330S/P331S、IgG1上之S267E/L328F、IgG1上之L234F/L235E/D265A、IgG1上之L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S、IgG4上之S228P/F234A/L235A/G237A/P238S、及IgG4上之S228P/F234A/L235A/G236缺失/G237A/P238S。亦可使用混成的IgG2/4 Fc域，諸如具有來自IgG2的殘基117至260及來自IgG4的殘基261至447的Fc。
導致具有降低之CDC之蛋白質的例示性突變為K322A突變。
可在IgG4中進行熟知的S228P突變以增強IgG4穩定性。
在其他實施例中，接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域包含至少一個選自由下列所組成之群組的突變：K214T、E233P、L234V、L234A、G236缺失、V234A、F234A、L235A、G237A、P238A、P238S、D265A、S267E、H268A、H268Q、Q268A、N297A、A327Q、P329A、D270A、Q295A、V309L、A327S、L328F、K322、A330S、及P331S。
在其他實施例中，接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域包含L234A/L235A/D265S突變。
在其他實施例中，接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域包含L234A/L235A突變。
在其他實施例中，接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域在Fc區中包含至少一個突變，其增強蛋白質與Fcγ受體(FcγR)之結合且/或增強Fc效應功能（諸如C1q結合、補體依賴性細胞毒性(CDC)、抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)及/或吞噬作用(ADCP)）。
可經突變以增加蛋白質與活化性FcγR之結合且/或增強Fc效應功能之Fc位置包括位置236、239、243、256、290、292、298、300、305、312、326、330、332、333、334、345、360、339、378、396、或430（殘基編號根據EU索引）。可單獨或組合進行的例示性突變係G236A、S239D、F243L、T256A、K290A、R292P、S298A、Y300L、V305L、K326A、A330K、I332E、E333A、K334A、A339T、及P396L。導致具有增加的ADCC或ADCP之蛋白質的例示性組合突變係S239D/I332E、S298A/E333A/K334A、F243L/R292P/Y300L、F243L/R292P/Y300L/P396L、F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L、及G236A/S239D/I332E。
可經突變以增強CDC之Fc位置包括位置267、268、324、326、333、345、及430。可單獨或組合進行的例示性突變係S267E、F1268F、S324T、K326A、K326W、E333A、E345K、E345Q、E345R、E345Y、E430S、E430F、及E430T。導致具有增加的CDC之蛋白質的例示性組合突變係K326A/E333A、K326W/E333A、H268F/S324T、S267E/H268F、S267E/S324T、及S267E/H268F/S324T。
本文所述之特定突變係當相較於分別為SEQ ID NO: 95、96、及97之IgG1、IgG2、及IgG4野生型胺基酸序列時之突變。 SEQ ID NO: 95，野生型IgG1 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 96；野生型IgG2 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 97；野生型IgG4 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
抗體與FcγR或FcRn之結合可在經工程改造以表現各受體之細胞上使用流動式細胞測量術來評定。在例示性結合檢定中，將每孔2×105 個細胞接種於96孔盤中，並以BSA染色緩衝劑(BD Biosciences, San Jose, USA)在4℃下阻斷30 min。在4℃下，將細胞與測試抗體於冰上培養1.5小時。用BSA染色緩衝劑洗滌兩次之後，將細胞用經R-PE標示的抗人類IgG二級抗體(Jackson Immunoresearch Laboratories)在4℃下培養45 min。將細胞以染色緩衝劑洗滌兩次，然後再懸浮於150 µL含有經1:200稀釋之DRAQ7 Live/Dead染料的染色緩衝劑(Cell Signaling Technology, Danvers, USA)中。經染色細胞之PE及DRAQ7信號係藉由Miltenyi MACSQuant流式細胞儀(Miltenyi Biotec, Auburn, USA)分別使用B2及B4通道來偵測。以DRAQ7排除對活細胞進行閘控(gated)，且判定收集之至少10,000個活事件之幾何平均螢光信號。將FlowJo軟體(Tree Star)用於分析。將數據繪製為抗體濃度之對數對平均螢光信號。執行非線性迴歸分析。醣基工程改造(glycoengineering)
接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域介導ADCC之能力可藉由工程改造Ig恆定區或Ig恆定區之片段的寡醣組分而增強。人類IgG1或IgG3係在Asn297處經N-醣基化並且大部分聚醣係呈廣為周知之雙觸角(biantennary) G0、G0F、G1、G1F、G2或G2F形式。可由未經工程改造之CHO細胞產生之含Ig恆定區的蛋白質一般具有約至少85%之聚醣岩藻醣(glycan fucose)含量。將核心岩藻糖自附接至接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域的雙觸角複合型寡醣移除，會經由改善FcγRIIIa結合而不改變抗原結合或CDC活性來增強蛋白質之ADCC。此類蛋白質可使用已報導會導致成功表現相對高量去岩藻糖基化(defucosylated)免疫球蛋白（帶有雙觸角複合型之Fc寡醣）的不同方法來達成，諸如控制培養滲透壓(Konnoet al., Cytotechnology 64(:249-65, 2012)、應用變體CHO系Lec13作為宿主細胞系(Shieldset al., J Biol Chem 277:26733-26740, 2002)、應用變體CHO系EB66作為宿主細胞系(Olivieret al., MAbs ; 2(4): 405-415, 2010; PMID:20562582)、應用大鼠融合瘤細胞系YB2/0作為宿主細胞系(Shinkawaet al., J Biol Chem 278:3466-3473, 2003)、引入特異性針對1,6-岩藻糖基轉移酶(FUT8 )基因的短小干擾RNA (Moriet al., Biotechnol Bioeng 88:901-908, 2004)、或共表現β-1,4-N -乙醯葡萄糖胺基轉移酶III (β-1,4-N -acetylglucosaminyltransferase III)與高基氏α-甘露糖苷酶II (Golgi α-mannosidase II)或基夫鹼（kifunensine，一種強效α-甘露糖苷酶I抑制劑）（Ferraraet al., J Biol Chem 281:5032-5036, 2006、Ferraraet al., Biotechnol Bioeng 93:851-861, 2006；Xhouet al., Biotechnol Bioeng 99:652-65, 2008）。
在其他實施例中，本揭露的接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域具有雙觸角聚醣結構，其岩藻糖含量係約介於1%至約15%之間，例如約15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、或1%。在其他實施例中，接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域具有聚醣結構，其岩藻糖含量係約50%、40%、45%、40%、35%、30%、25%、或20%。
「岩藻糖含量(fucose content)」意指Asn297處糖鏈內岩藻糖單醣的量。岩藻糖的相對量係含岩藻糖結構相對於所有醣類結構的百分比。這些可藉由多種方法來定性及定量，例如：1)使用經N-醣苷酶F(N-glycosidase F)處理過的樣本（如複合、雜合及寡與高甘露糖(oligo- and high-mannose)結構）的MALDI-TOF，如在國際專利公開號WO2008/077546 2中所述；2)酶促釋放Asn297聚醣、及後續的衍生化及藉由HPLC (UPLC)以螢光偵測及/或HPLC-MS (UPLC-MS)的偵測/定量；3)天然或還原mAb的完整蛋白質分析，將Asn297聚醣以Endo S或其他會在第一與第二GlcNAc單醣之間切割而留下連接至第一GlcNAc之岩藻糖的酵素處理或不經處理；4)藉由酶消化法(enzymatic digestion)（例如胰蛋白酶或內肽酶Lys-C）將mAb消化成構成分肽(constituent peptide)，且隨後藉由HPLC-MS (UPLC-MS)分離、偵測、及定量；5)藉由以PNGase F在Asn 297處進行特異性酶促去醣化(specific enzymatic deglycosylation)以將mAb寡醣自mAb蛋白分離。因此釋放之寡醣可用螢光團標示，藉由各種互補技術分離及識別，該等技術允許：藉由基質輔助雷射脫附游離(MALDI)質譜術比較實驗質量與理論質量以精細表徵聚醣結構、藉由離子交換HPLC (GlycoSep C)判定唾液酸化(sialylation)程度、藉由正相HPLC (GlycoSep N)根據親水性標準分離及定量寡醣形式、及藉由高效毛細管電泳-雷射誘導螢光(HPCE-LIF)分離及定量寡醣。
如本文中所使用，「低岩藻糖(low fucose)」或「低岩藻糖含量(low fucose content)」係指接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域具有約介於1%至15%之間的岩藻糖含量。
如本文中所使用，「正常岩藻糖(normal fucose)」或「正常岩藻糖含量(normal fucose content)」係指接合至Ig恆定區或Ig恆定區之片段的結合CD3ε之抗原結合域具有約超過50%、一般約超過80%或超過85%的岩藻糖含量。抗獨特型抗體(anti-idiotypic antibody)
抗獨特型抗體係特異性結合至本揭露之結合CD3ε之抗原結合域的抗體。
本發明亦提供一種抗獨特型抗體，其特異性結合至本揭露之結合CD3ε之抗原結合域。
本發明亦提供一種抗獨特型抗體，其特異性結合至本揭露之結合CD3ε之抗原結合域，其包含 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
抗獨特型(Id)抗體係識別抗體之抗原決定位（例如互補位(paratope)或CDR）的抗體。Id抗體可為抗原阻斷或非阻斷的。抗原阻斷Id可用於偵測樣本中之游離抗原結合域（例如，本揭露之結合CD3ε之抗原結合域）。非阻斷Id可用於偵測樣本中的總抗體（游離的、部分結合至抗原的、或完全結合至抗原的）。Id抗體可藉由以正在製備抗Id的抗體免疫動物來製備。
抗Id抗體亦可用作為免疫原(immunogen)，以在又另一種動物中誘導免疫反應，產生所謂的抗-抗Id抗體(anti-anti-Id antibody)。抗-抗Id之表位可與誘導抗Id的原始抗原結合域之表位同一。因此，藉由使用抗原結合域的獨特型決定位(idiotypic determinant)之抗體，可以識別表現具有相同特異性之抗原結合域的其他殖株。抗Id抗體可藉由任何合適的技術來變化（從而產生抗Id抗體變異體）及/或衍生化，諸如本文別處所述之技術。免疫接合物(immunoconjugate)
本揭露之結合CD3ε之抗原結合域、包含結合CD3ε之抗原結合域的蛋白質、或包含結合CD3ε之抗原結合域的多特異性蛋白質（在本文中統稱為CD3ε結合蛋白質）可接合至異源分子。
在其他實施例中，異源分子係可偵測標示或細胞毒性劑。
本發明亦提供一種結合CD3ε之抗原結合域，其接合至可偵測標示。
本發明亦提供一種包含結合CD3ε之抗原結合域的蛋白質，其接合至可偵測標示。
本發明亦提供一種包含結合CD3ε之抗原結合域的多特異性蛋白質，其接合至可偵測標示。
本發明亦提供一種結合CD3ε之抗原結合域，其接合至細胞毒性劑。
本發明亦提供一種包含結合CD3ε之抗原結合域的蛋白質，其接合至細胞毒性劑。
本發明亦提供一種包含結合CD3ε之抗原結合域的多特異性蛋白質，其接合至細胞毒性劑。
本揭露之CD3ε結合蛋白質可用於引導治療劑至腫瘤抗原表現細胞。替代地，表現CD3ε之細胞可用偶合至治療劑的本揭露之CD3ε結合蛋白質靶向，該治療劑意欲在內化後修飾細胞功能。
在其他實施例中，可偵測標示亦為細胞毒性劑。
接合至可偵測標示的本揭露之CD3ε結合蛋白質可用來評估各種樣本上的CD3ε表現。
可偵測標示包括在接合至本揭露之CD3ε結合蛋白質時使後者變為可偵測（經由光譜學、光化學、生物化學、免疫化學、或化學手段）的組成物。
例示性可偵測標示包括放射性同位素、磁珠、金屬珠、膠態粒子、螢光染料、電子緻密試劑、酶（例如，如通常用於ELISA中）、生物素、長葉毛地黃配質(digoxigenin)、半抗原、發光分子、化學發光分子、螢光染劑、螢光團、螢光淬熄劑、有色分子、放射性同位素、閃爍劑(scintillate)、卵白素、鏈黴親和素、蛋白A、蛋白G、抗體或其片段、多組胺酸、Ni2+ 、Flag標籤、myc標籤、重金屬、酶、鹼性磷酸酶、過氧化酶、螢光素酶、電子供體/受體、吖啶酯(acridinium ester)、及比色基質。
可偵測標示可自發地發射信號，諸如在可偵測標示為放射性同位素時。在其他情況下，可偵測標示由於外部場刺激而發射信號。
例示性放射性同位素可為γ發射性、鄂惹發射性(Auger-emitting)、β發射性、α發射性、或正電子發射性放射性同位素。例示性放射性同位素包括3 H、11 C、13 C、15 N、18 F、19 F、55 Co、57 Co、60 Co、61 Cu、62 Cu、64 Cu、67 Cu、68 Ga、72 As、75 Br、86 Y、89 Zr、90 Sr、94m Tc、99m Tc、115 In、123 1、124 1、125 I、131 1、211 At、212 Bi、213 Bi、223 Ra、226 Ra、225 Ac、及227 Ac。
例示性金屬原子為原子序大於20之金屬，諸如鈣原子、鈧原子、鈦原子、釩原子、鉻原子、錳原子、鐵原子、鈷原子、鎳原子、銅原子、鋅原子、鎵原子、鍺原子、砷原子、硒原子、溴原子、氪原子、銣原子、鍶原子、釔原子、鋯原子、鈮原子、鉬原子、鎝原子、釕原子、銠原子、鈀原子、銀原子、鎘原子、銦原子、錫原子、銻原子、碲原子、碘原子、氙原子、銫原子、鋇原子、鑭原子、鉿原子、鉭原子、鎢原子、錸原子、鋨原子、銥原子、鉑原子、金原子、汞原子、鉈原子、鉛原子、鉍原子、鍅原子、鐳原子、錒原子、鈰原子、鐠原子、釹原子、鉕原子、釤原子、銪原子、釓原子、鋱原子、鏑原子、鈥原子、鉺原子、銩原子、鐿原子、鎦原子、釷原子、鏷原子、鈾原子、錼原子、鈽原子、鋂原子、鋦原子、鉳原子、鉲原子、鑀原子、鐨原子、鍆原子、鍩原子、或鐒原子。
在其他實施例中，金屬原子可為原子序大於二十之鹼土金屬。
在其他實施例中，金屬原子可為鑭系元素。
在其他實施例中，金屬原子可為錒系元素。
在其他實施例中，金屬原子可為過渡金屬。
在其他實施例中，金屬原子可為貧金屬(poor metal)。
在其他實施例中，金屬原子可為金原子、鉍原子、鉭原子、及釓原子。
在其他實施例中，金屬原子可為原子序為53（即，碘）至83（即，鉍）之金屬。
在其他實施例中，金屬原子可為適用於磁共振成像之原子。
金屬原子可為呈+1、+2、或+3氧化態形式之金屬離子，諸如Ba2+ 、Bi3+ 、Cs+ 、Ca2+ 、Cr2+ 、Cr3+ 、Cr6+ 、Co2+ 、Co3+ 、Cu+ 、Cu2+ 、Cu3+ 、Ga3+ 、Gd3+ 、Au+ 、Au3+ 、Fe2+ 、Fe3+ 、F3+ 、Pb2+ 、Mn2+ 、Mn3+ 、Mn4+ 、Mn7+ 、Hg2+ 、Ni2+ 、Ni3+ 、Ag+ 、Sr2+ 、Sn2+ 、Sn4+ 、及Zn2+ 。金屬原子可包含金屬氧化物，諸如氧化鐵、氧化錳、或氧化釓。
合適染料包括任何市售可得之染料，諸如例如5(6)-羧基螢光素、IRDye 680RD順丁烯二醯亞胺或IRDye 800CW、釕聚吡啶基染料、及類似者。
合適螢光團為螢光異硫氰酸鹽(FITC)、螢光素胺基硫脲(fluorescein thiosemicarbazide)、玫瑰紅(rhodamine)、德克薩斯紅(Texas Red)、CyDye（例如，Cy3、Cy5、Cy5.5）、Alexa Fluor（例如，Alexa488、Alexa555、Alexa594；Alexa647）、近紅外(NIR)（700至900 nm）螢光染料、及羰花青(carbocyanine)及胺基苯乙烯基染料。
接合至可偵測標示的結合CD3ε之抗原結合域可用作為顯像劑。
包含接合至可偵測標示的結合CD3ε之抗原結合域的蛋白質可用作為顯像劑。
包含接合至可偵測標示的結合CD3ε之抗原結合域的多特異性蛋白質可用作為顯像劑。
在其他實施例中，細胞毒性劑為化學治療劑、藥物、生長抑制劑、毒素（例如細菌、真菌、植物、或動物來源之酶促活性毒素或其片段）、或放射性同位素（即放射接合物(radioconjugate)）。
在其他實施例中，細胞毒性劑為道諾黴素(daunomycin)、多柔比星(doxorubicin)、胺甲喋呤(methotrexate)、長春地辛(vindesine)、細菌毒素諸如白喉毒素、蓖麻毒素、格爾德黴素(geldanamycin)、類美登素(maytansinoid)、或卡奇黴素(calicheamicin)。細胞毒性劑可藉由包括微管蛋白結合、DNA結合、或拓撲異構酶抑制之機制來誘發其細胞毒性效應及細胞生長抑制效應。
在其他實施例中，細胞毒性劑為酶促活性毒素，諸如白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈（來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa )）、蓖麻毒素A鏈、雞母珠毒蛋白A鏈、莫迪素(modeccin) A鏈、α-帚曲霉素(alpha-sarcin)、油桐(Aleurites fordii )蛋白、石竹(dianthin)蛋白、美洲商陸(Phytolacca americana )蛋白（PAPI、PAPII、及PAP-S）、苦瓜(momordica charantia )抑制劑、麻瘋樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis )抑制劑、多花白樹毒蛋白(gelonin)、絲林黴素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、伊諾黴素(enomycin)、及新月毒素(tricothecene)。
在其他實施例中，細胞毒性劑為放射性核種，諸如212 Bi、131 I、131 In、90 Y、及186 Re。
在其他實施例中，細胞毒性劑為尾海兔素(dolastatin)或尾海兔素肽類似物及衍生物、阿里他汀(auristatin)或單甲基阿里他汀苯丙胺酸。例示性分子係揭示於美國專利第5,635,483號及第5,780,588號中。已顯示尾海兔素及阿里他汀干擾微管動力學、GTP水解、以及核分裂及細胞分裂（Woyke等人(2001) Antimicrob Agents and Chemother. 45(12):3580-3584），且具有抗癌及抗真菌活性。尾海兔素或阿里他汀藥物部分可透過肽藥物部分之N（胺基）端或C（羧基）端附接至本發明之抗體(WO02/088172)，或經由任何半胱胺酸工程改造至抗體中。
本揭露之CD3ε結合蛋白質可使用已知方法接合至可偵測標示。
在其他實施例中，可偵測標示係與螯合劑錯合。
在其他實施例中，可偵測標示係經由連接子接合至本揭露之CD3ε結合蛋白質。
可使用已知方法將可偵測標示或細胞毒性部份直接或間接地連接至本揭露之CD3ε結合蛋白質。合適連接子為所屬技術領域中已知的，且包括例如輔基、非酚連接子（N-琥珀醯亞胺基苯甲酸酯；十二硼酸酯之衍生物）、大環及非環狀螯合劑兩者之螯合部分，諸如1,4,7,10-四氮雜環十二烷-1,4,7,10，四乙酸(DOTA)之衍生物、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)之衍生物、S-2-(4-異硫氰基苄基)-1,4,7-三氮雜環壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)之衍生物、及1,4,8,11-四氮雜環十二烷-1,4,8,11-四乙酸(TETA)之衍生物、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫醇)丙酸酯(SPDP)、亞胺基硫烷鹽(IT)、亞胺酯之雙官能衍生物（諸如己二亞胺二甲酯鹽酸鹽(dimethyl adipimidate HCl)）、活性酯（諸如雙琥珀醯亞胺辛二酸酯）、醛（諸如戊二醛）、雙疊氮化合物（諸如雙(對疊氮苯甲醯基)己二胺）、雙重氮衍生物（諸如雙(對重氮苯甲醯基)乙二胺）、二異氰酸酯（諸如甲苯2,6-二異氰酸酯）、及雙活性氟化合物（諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯）、及其他螯合部分。合適肽連接子為熟知的。
在其他實施例中，本揭露之CD3ε結合蛋白質係經由腎清除而自血液中移除。套組
本發明亦提供一種套組，其包含結合CD3ε之抗原結合域。
本發明亦提供一種包含蛋白質之套組，該蛋白質包含結合CD3ε之抗原結合域。
本發明亦提供一種包含多特異性蛋白質之套組，該多特異性蛋白質包含結合CD3ε之抗原結合域。
套組可用於治療用途及用作為診斷套組。
套組可用於偵測樣本中CD3ε之存在。
在其他實施例中，套組包含本揭露之CD3ε結合蛋白質及用於偵測CD3ε結合蛋白質之試劑。套組可包括一或多個其他元件，包括：使用說明書；其他試劑，例如標示、治療劑、或用於將抗體與標示或治療劑或放射防護組合物螯合（或以其他方式偶合）的試劑；用於製備投予用抗體的裝置或其他材料；醫藥上可接受的載劑；及用於投予至對象的裝置或其他材料。
在其他實施例中，套組包含在容器中的結合CD3ε之抗原結合域及套組的使用說明書。
在其他實施例中，套組包含在容器中的蛋白質及套組的使用說明書，該蛋白質包含結合CD3ε之抗原結合域。
在其他實施例中，套組包含在容器中的多特異性蛋白質及套組的使用說明書，該多特異性蛋白質包含結合CD3ε之抗原結合域。
在其他實施例中，套組中結合CD3ε之抗原結合域經標示。
在其他實施例中，套組中包含結合CD3ε之抗原結合域的蛋白質經標示。
在其他實施例中，套組中包含結合CD3ε之抗原結合域的多特異性蛋白質經標示。
在其他實施例中，套組包含結合CD3ε之抗原結合域，該抗原結合域包含 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL； 在其他實施例中，套組包含結合CD3ε之抗原結合域，該抗原結合域包含SEQ ID NO: 65、66、67、68、69、70、71、72、73、或74。偵測CD3ε 之方法
本發明亦提供一種偵測樣本中之CD3ε的方法，其包含獲得該樣本、使該樣本與本揭露之結合CD3ε之抗原結合域接觸、及偵測該樣本中之結合的CD3ε。
在其他實施例中，該樣本可衍生自尿液、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、滑液、循環細胞、非為組織相關聯之細胞（即游離細胞）、組織（例如手術切除之組織、活體組織切片（包括細針穿刺））、組織標本、及類似者。
本揭露之結合CD3ε之抗原結合域可使用已知方法偵測。例示性方法包括使用螢光或化學發光標示或放射性標示直接標示抗體，或將本發明之抗體附接至易於偵測的部分，諸如生物素、酶、或表位標籤。例示性標示及部分係釕、111 In-DOTA、111 In-二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶及β-半乳糖苷酶、多組胺酸（HIS標籤）、吖啶染料、花青染料、螢光酮染料、
Figure 02_image001
Figure 02_image003
染料、啡啶染料、玫瑰紅染料、及Alexafluor®染料。
可將本揭露之結合CD3ε之抗原結合域用於多種檢定中以偵測樣本中之CD3ε。例示性檢定係西方墨點分析、放射免疫檢定、表面電漿共振、免疫沉澱法、平衡透析、免疫擴散法、電致化學發光(ECL)免疫檢定、免疫組織化學法、螢光活化細胞分選(FACS)或ELISA檢定。多核苷酸、載體、宿主細胞
本揭露亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼本揭露之CD3ε結合蛋白質之任一者。CD3ε結合蛋白質包括結合CD3ε之抗原結合域、包含結合CD3ε之抗原結合域的蛋白質、包含本揭露之結合CD3ε之抗原結合域的多特異性蛋白質。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼CD3ε結合蛋白質之任一者或其片段。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 23之VH。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 24之VL。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 27之VL。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 28之VL。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 29之VL。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 30之VL。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 65、66、67、68、69、70、71、72、73、或74之多肽。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 65之多肽。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 66之多肽。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 67之多肽。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 68之多肽。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 69之多肽。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 70之多肽。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 71之多肽。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 72之多肽。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 73之多肽。
本發明亦提供一種經單離之多核苷酸，其編碼SEQ ID NO: 74之多肽。
本揭露之一些實施例亦提供一種經單離或純化之核酸，其包含與編碼本揭露之CD3ε結合蛋白質的多核苷酸互補之多核苷酸，或在嚴格條件下與編碼本揭露之CD3ε結合蛋白質的多核苷酸雜交之多核苷酸。
在嚴格條件下雜交之多核苷酸可在高嚴格度條件下雜交。所謂「高嚴格度條件(high stringency condition)」意指多核苷酸與目標序列（本文中所述之任何核酸的核苷酸序列）以可偵測地比非特異性雜交更強之量特異性雜交。高嚴格度條件包括能自恰巧具有少數小區域（例如3至12個鹼基）匹配核苷酸序列之隨機序列中區別出具有精確互補序列之多核苷酸、或僅含有少數零散不匹配之多核苷酸的條件。此類小區域互補性比14至17個或更多個鹼基之全長互補體更容易解鏈(melted)，且高嚴格度雜交使其可容易地區別出來。相對高嚴格度條件會包括例如低鹽及/或高溫條件，諸如由約0.02至0.1 M NaCl或等效物在約50至70℃之溫度下所提供之條件。此類高嚴格度條件在核苷酸序列與模板或目標鏈之間容許少許的不匹配（若有的話）。一般認為，藉由添加增加量的甲醯胺可使條件變得更嚴格。
本揭露之多核苷酸序列可經可操作地連接至一或多個調控元件（諸如啟動子及增強子），以容許該核苷酸序列在所意欲宿主細胞中之表現。多核苷酸可為cDNA。啟動子可為強、弱、組織特異性、誘導性、或發育特異性啟動子。可使用的例示性啟動子係次黃嘌呤磷酸核糖基轉移酶(HPRT)、腺苷去胺酶、丙酮酸激酶、β-肌動蛋白、人類肌球蛋白、人類血紅素、人類肌肉肌酸、及其他。此外，許多病毒啟動子在真核細胞中組成性地發揮作用，並且適合搭配所述實施例使用。此等病毒啟動子包括巨細胞病毒(CMV)立即早期啟動子、SV40之早期及晚期啟動子、小鼠乳房腫瘤病毒(MMTV)啟動子、莫洛尼白血病病毒(Maloney leukemia virus)之長末端重複(LTR)、人類免疫不全病毒(HIV)、艾巴二氏病毒(EBV)、勞斯肉瘤病毒(RSV)、及其他反轉錄病毒、和單純皰疹病毒(Herpes Simplex Virus)之胸苷激酶啟動子。誘導性啟動子諸如金屬硫蛋白啟動子、四環素誘導性啟動子、多西環素誘導性啟動子、含有一或多個干擾素刺激反應元件(ISRE)（諸如蛋白激酶R、2’,5’-寡腺苷酸合成酶、Mx基因、ADAR1、及類似者）之啟動子。
本發明亦提供一種載體，其包含本發明之多核苷酸。本揭露亦提供一種表現載體，其包含本發明之多核苷酸。此類載體可係質體載體、病毒載體、用於桿狀病毒表現之載體、基於轉位子(transposon)之載體、或者任何其他適用於以任何手段將本發明之合成多核苷酸引入至一給定生物或遺傳背景中的載體。編碼本揭露之CD3ε結合蛋白質的多核苷酸可與（多個）表現載體中之控制序列可操作地連接，以確保CD3ε結合蛋白質的表現。此類調節元件可包括轉錄啟動子、編碼合適mRNA核糖體結合部位之序列、及控制轉錄及轉譯之終止的序列。表現載體亦可包括一或多種非轉錄元件，諸如複製起源、連接至待表現基因之合適啟動子及增強子、其他5'或3'側翼(flanking)非轉錄序列、5'或3'非轉譯序列（諸如必要的核糖體結合位）、多腺核苷酸化位點、剪切供體及受體位點、或轉錄終止序列。亦可併入賦予在宿主中複製之能力的複製起源。
表現載體可包含天然存在或非天然存在的核苷間鍵聯、或兩種類型的鍵聯。非天然存在或經改變之核苷酸或核苷間鍵聯不會阻礙載體之轉錄或複製。
一旦已將載體併入適當的宿主中，即將宿主維持在合適條件下以高度表現由所併入之多核苷酸編碼的本揭露之CD3ε結合蛋白質。在用來轉形脊椎動物細胞之表現載體中的轉錄及轉譯控制序列可由病毒來源提供。例示性載體可如以下文獻所述建構：Okayama及Berg, 3Mol. Cell. Biol . 280 (1983)。
本揭露之載體亦可含有一或多個內部核糖體進入位點(IRES)。將IRES序列納入融合載體中可有利於增強一些蛋白質之表現。在其他實施例中，載體系統將包括一或多個多腺核苷酸化位點（例如SV40），其可在任何前述核酸序列之上游或下游。載體組分可相鄰地連接，或者以提供用於表現基因產物之最佳間隔的方式來排列（即藉由在ORF之間引入「間隔子(spacer)」核苷酸），或者以其他方式放置。調節元件（諸如IRES模體）亦可經排列以提供用於表現之最佳間隔。
本揭露之載體可係環狀或線形的。可將其等製備為在原核或真核宿主細胞中含有複製系統功能。複製系統可衍生自例如ColE1、SV40、2 µ質體、λ、牛乳頭狀瘤病毒、及類似者。
重組表現載體可經設計以用於暫時表現、或用於穩定表現、或用於兩者。同樣，重組表現載體可經製造以用於持續性表現(constitutive expression)或誘導性表現(inducible expression)。
此外，重組表現載體可製造為包括自殺基因。如本文中所使用，用語「自殺基因(suicide gene)」係指造成表現自殺基因之細胞死亡的基因。自殺基因可係賦予表現該基因之細胞對藥劑（例如藥物）之敏感性、且當該細胞與該藥劑接觸或暴露於該藥劑時造成該細胞死亡之基因。自殺基因在所屬技術領域係已知的，並包括例如單純疱疹病毒(Herpes Simplex Virus, HSV)胸苷激酶(TK)基因、胞嘧啶去胺酶、嘌呤核苷磷酸化。載體亦可包含選擇標記，其為所屬技術領域所熟知的。選擇標記包括正向及負向選擇標記。標記基因包括殺生物劑抗性（例如對抗生素、重金屬等具有抗性）、在營養缺陷型宿主(auxotrophic host)有互補作用以提供原養型(prototrophy)、及類似者。選擇標記包括抗生素抗性基因（例如新黴素抗性基因、潮黴素抗性基因、康黴素抗性基因、四環素抗性基因、青黴素抗性基因、組胺醇抗性基因、組胺醇x抗性基因）、麩醯胺酸合成酶基因、HSV-TK、用於更昔洛威(ganciclovir)選擇之HSV-TK衍生物、或用於6-甲基嘌呤選擇之細菌嘌呤核苷磷酸化酶基因(Gadi et al., 7 Gene Ther. 1738-1743 (2000))。編碼選擇標記或選殖位點之核酸序列可在編碼所關注多肽或選殖位點之核酸序列的上游或下游。
可使用的例示性載體係細菌的：pBs、phagescript、PsiX174、pBluescript SK、pBs KS、pNH8a、pNH16a、pNH18a、pNH46a (Stratagene, La Jolla, Calif., USA)；pTrc99A、pKK223-3、pKK233-3、pDR540、及pRIT5 (Pharmacia, Uppsala, Sweden)。真核的：pWLneo、pSV2cat、pOG44、PXR1、pSG (Stratagene) pSVK3、pBPV、pMSG及pSVL (Pharmacia)、pEE6.4 (Lonza)及pEE12.4 (Lonza)。額外載體包括pUC系列(Fermentas Life Sciences, Glen Burnie, Md.)、pBluescript系列(Stratagene, LaJolla, Calif.)、pET系列(Novagen, Madison, Wis.)、pGEX系列(Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden)、及pEX系列(Clontech, Palo Alto, Calif.)。可使用噬菌體載體，諸如λ GT10、λ GT11、λ EMBL4、及λ NM1149、λ ZapII (Stratagene)。例示性植物表現載體包括pBI01、pBI01.2、pBI121、pBI101.3、及pBIN19 (Clontech)。例示性動物表現載體包括pEUK-Cl、pMAM、及pMAMneo (Clontech)。表現載體可係病毒載體，例如反轉錄病毒載體，例如γ反轉錄病毒載體。酶、及硝基還原酶。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 23之VH。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 24之VL。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 27之VL。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 28之VL。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 29之VL。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 30之VL。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 65、66、67、68、69、70、71、72、73、或74之多肽。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 65之多肽。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 66之多肽。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 67之多肽。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 68之多肽。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 69之多肽。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 70之多肽。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 71之多肽。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 72之多肽。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 73之多肽。
在其他實施例中，載體包含多核苷酸，該多核苷酸編碼SEQ ID NO: 74之多肽。
本發明亦提供一種宿主細胞，其包含本發明之一或多個載體。「宿主細胞(host cell)」係指經引入載體的細胞。應瞭解到，用語宿主細胞不只意欲指特定對象細胞，亦意欲指此細胞之後裔，並且亦意欲指從該特定對象細胞產生之穩定細胞株。由於某些修飾可能會因為突變或環境影響之任一者而發生於後繼之代中，使得後裔可能與親系細胞不同，但仍涵括於本文中所用之用語「宿主細胞」的範疇中。此類宿主細胞可為真核細胞、原核細胞、植物細胞或古菌(archeal)細胞。大腸桿菌(Escherichia coli )、桿菌（諸如枯草桿菌(Bacillus subtilis )、及其他腸桿菌(enterobacteriaceae)（諸如沙門桿菌(Salmonella)、鋸桿菌(Serratia)））、及各式假單胞菌(Pseudomonas)菌種皆為原核宿主細胞之實例。其他微生物（諸如酵母菌）對於表現亦為有用者。酵母菌(Saccharomyces)（例如釀酒酵母菌(S. cerevisiae)）及畢赤酵母菌(Pichia)皆為合適酵母菌宿主細胞之實例。例示性真核細胞可係哺乳動物、昆蟲、鳥類、或其他動物來源。哺乳動物真核細胞包括永生化細胞系(immortalized cell line)如融合瘤或骨髓瘤細胞系，諸如SP2/0 (American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, CRL-1581)、NS0 (European Collection of Cell Cultures (ECACC), Salisbury, Wiltshire, UK, ECACC No. 85110503)、FO (ATCC CRL-1646)及Ag653 (ATCC CRL-1580)鼠類細胞系。例示性人類骨髓瘤細胞系為U266 (ATTC CRL-TIB-196)。其他有用之細胞系包括衍生自中國倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary, CHO)細胞者，諸如CHO-K1SV (Lonza Biologics, Walkersville, MD)、CHO-K1 (ATCC CRL-61)或DG44。
本揭露亦提供一種生產本揭露之CD3ε結合蛋白質的方法，其包含在使CD3ε結合蛋白質表現之條件下培養本揭露之宿主細胞、及回收由宿主細胞生產之CD3ε結合蛋白質。製造蛋白質及純化其之方法為已知的。一旦（以化學或重組方式）經合成，CD3ε結合蛋白質可根據標準程序來純化，包括硫酸銨沉澱、親和管柱、管柱層析、高效液相層析(HPLC)純化、凝膠電泳、及類似者（大致上請參見Scopes, Protein Purification (Springer- Verlag, N.Y., (1982)）。主題蛋白質可為實質上純，例如至少約80%至85%純、至少約85%至90%純、至少約90%至95%純、或至少約98%至99%純、或更純，例如除主題蛋白質外不含汙染物（諸如細胞碎屑、巨分子等）。
可使用標準分子生物方法將編碼本揭露之CD3ε結合蛋白質的多核苷酸併入到載體中。宿主細胞轉形、培養、抗體表現及純化皆使用廣為人知的方法來進行。
經修飾核苷酸可用來產生本揭露之多核苷酸。例示性經修飾核苷酸係5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黃嘌呤、黃嘌呤、4-乙醯基胞嘧啶、5-(羧基羥基甲基)尿嘧啶、羧基甲基胺基甲基-2-硫尿苷、5-羧基甲基胺基甲基尿嘧啶、二氫尿嘧啶、N6 -取代腺嘌呤、7-甲基鳥嘌呤、5-甲基胺基甲基尿嘧啶、5-甲氧基胺基甲基-2-硫尿嘧碇、β-D-甘露糖基Q核苷、5″-甲氧基羧基甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲基硫-N6 -異戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧化乙酸(v)、懷丁氧苷(wybutoxosine)、偽尿嘧啶、Q核苷、β-D-半乳糖基Q核苷、肌苷(inosine)、N6 -異戊烯基腺嘌呤、1-甲基鳥嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鳥嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鳥嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧化乙酸甲基酯、3-(3-胺基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、及2,6-二胺基嘌呤。醫藥組成物/ 投予
本揭露亦提供一種醫藥組成物，其包含本揭露之CD3ε結合蛋白質及醫藥上可接受之載劑。
本揭露亦提供一種醫藥組成物，其包含本揭露之結合CD3ε之抗原結合域及醫藥上可接受之載劑。
本揭露亦提供一種醫藥組成物，其包含含有本揭露之結合CD3ε之抗原結合域的蛋白質及醫藥上可接受之載劑。
本揭露亦提供一種醫藥組成物，其包含含有本揭露之結合CD3ε之抗原結合域的多特異性蛋白質及醫藥上可接受之載劑。
本揭露亦提供一種醫藥組成物，其包含含有本揭露之結合CD3ε之抗原結合域及結合腫瘤抗原之抗原結合域的多特異性蛋白質及醫藥上可接受之載劑。
關於治療用途，可將本揭露之CD3ε結合蛋白質製備為醫藥組成物，其在醫藥上可接受的載劑中含有有效量的抗體作為活性成分。這些溶液係無菌且通常不含顆粒物質。彼等可藉由習用、習知的滅菌技術（如過濾）來滅菌。該等組成物可含有如用以接近生理條件所需之醫藥上可接受的輔助物質，諸如pH調整及緩衝劑、穩定劑、增稠劑、潤滑劑、及著色劑等。
如本文中關於醫藥組成物所使用，用語「醫藥上可接受(pharmaceutically acceptable)」意指經美國聯邦或州政府的管理機構批准，或列在美國藥典(U.S. Pharmacopeia)或其他公認的藥典中以用於動物及/或人類。治療方法及用途
本揭露亦提供本揭露之包含特異性結合CD3ε之第一抗原結合域及特異性結合第二抗原之第二抗原結合域的雙特異性或多特異性蛋白質，其係用於療法。
本揭露亦提供本揭露之包含特異性結合CD3ε之第一抗原結合域及特異性結合第二抗原之第二抗原結合域的雙特異性或多特異性蛋白質，其係用於治療細胞增生性病症。
本揭露亦提供本揭露之包含特異性結合CD3ε之第一抗原結合域及特異性結合第二抗原之第二抗原結合域的雙特異性或多特異性蛋白質，其係用於治療癌症。
本揭露亦提供本揭露之包含特異性結合CD3ε之第一抗原結合域及特異性結合第二抗原之第二抗原結合域的雙特異性或多特異性蛋白質，其係用於製造用於治療癌症之藥物。
在一個態樣中，本揭露大致上係關於治療有發展癌症之風險的對象。本發明亦包括治療化學療法及/或免疫療法導致對象之顯著免疫抑制從而增加對象發展癌症之風險的惡性疾病。
本揭露亦提供一種治療有發展癌性病況之風險的對象之非癌性病況的方法，其包含向對象投予本揭露的結合CD3ε之抗原結合域，以治療非癌性病況。
本揭露亦提供一種治療有發展癌性病況之風險的對象之非癌性病況的方法，其包含向對象投予包含本揭露的結合CD3ε之抗原結合域的蛋白質，以治療非癌性病況。
本揭露亦提供一種治療有發展癌性病況之風險的對象之非癌性病況的方法，其包含向對象投予包含本揭露的結合CD3ε之抗原結合域的多特異性蛋白質，以治療非癌性病況。
本揭露亦提供一種治療有發展癌性病況之風險的對象中之非癌性病況的方法，其包含向對象投予本揭露之免疫接合物，以治療非癌性病況。
本揭露亦提供一種治療有發展癌性病況之風險的對象之非癌性病況的方法，其包含向對象投予本揭露之醫藥組成物，以治療非癌性病況。
本揭露亦提供一種治療對象之癌症的方法，其包含向對象投予治療有效量的包含結合CD3ε之抗原結合域的多特異性蛋白質以治療癌症，其中結合CD3ε之抗原結合域包含 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
本揭露亦提供一種治療對象之癌症的方法，其包含向對象投予治療有效量的包含結合CD3ε之抗原結合域的多特異性蛋白質以治療癌症，其中結合CD3ε之抗原結合域包含SEQ ID NO: 65、66、67、68、69、70、71、72、73、或74之胺基酸序列。
本揭露之進一步態樣係一種治療有需要之對象的細胞增生性病症之方法，該方法包含向對象投予治療有效量的雙特異性或多特異性蛋白質，該雙特異性或多特異性蛋白質包含本揭露之特異性結合CD3ε之第一抗原結合域及特異性結合第二抗原之第二抗原結合域。在其他實施例中，向對象投予本揭露之包含特異性結合CD3ε之第一抗原結合域及特異性結合第二抗原之第二抗原結合域的雙特異性或多特異性蛋白質。
在任何前述用途或方法中，細胞增生性病症係癌症。在其他實施例中，癌症係選自由下列所組成之群組：食道癌、胃癌、小腸癌、大腸癌、結腸直腸癌、乳癌、非小細胞肺癌、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma, NHL)、B細胞淋巴瘤、B細胞白血病、多發性骨髓瘤、腎癌、前列腺癌、肝癌、頭頸癌、黑色素瘤、卵巢癌、間皮瘤、神經膠母細胞瘤、類生發中心B細胞(germinal-center B-cell-like, GCB) DLBCL、類活化B細胞(activated B-cell-like, ABC) DLBCL、濾泡性淋巴瘤(FL)、被套細胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma, MCL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、邊緣區型淋巴瘤(marginal zone lymphoma, MZL)、小淋巴球性白血病(SLL)、淋巴漿細胞性淋巴瘤(LL)、華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia, WM)、中樞神經系統淋巴瘤(CNSL)、Burkitt氏淋巴瘤(BL)、B細胞前淋巴球性白血病、脾臟邊緣區型淋巴瘤、毛細胞白血病、脾臟淋巴瘤/白血病（不可分類）、脾臟瀰漫性紅髓小B細胞淋巴瘤、毛細胞白血病變異體、華氏巨球蛋白血症、重鏈病、漿細胞骨髓瘤、骨孤立性漿細胞瘤、髓外漿細胞瘤、黏膜相關淋巴組織之結外邊緣區型淋巴瘤（MALT淋巴瘤）、結節邊緣區型淋巴瘤、小兒結節邊緣區型淋巴瘤、小兒濾泡性淋巴瘤、原發性皮膚濾泡中心淋巴瘤、T細胞/組織細胞豐富型大B細胞淋巴瘤、CNS之原發性DLBCL、原發性皮膚DLBCL（腿型）、老年EBV陽性DLBCL、與慢性發炎相關之DLBCL、淋巴瘤樣肉芽腫病、原發性縱膈（胸腺）大B細胞淋巴瘤。血管內大B細胞淋巴瘤、ALK陽性大B細胞淋巴瘤、漿母細胞淋巴瘤、發生於HHV8相關多中心Castleman氏病中之大B細胞淋巴瘤、原發性滲出性淋巴瘤：B細胞淋巴瘤（不可分類，其具有介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤與Burkitt氏淋巴瘤之間的中間特徵）、及B細胞淋巴瘤（不可分類，其具有介於瀰漫性大B細胞淋巴瘤、典型霍奇金氏淋巴瘤、及輕鏈類澱粉變性症之間的中間特徵）。
在其他實施例中，癌症係食道癌。在其他實施例中，癌症係腺癌，例如轉移性腺癌（例如，結腸直腸腺癌、胃腺癌、或胰腺癌）。
在另一個態樣中，本揭露之特徵在於一種套組，其包含：(a)組成物，其包含本揭露之前述雙特異性或多特異性蛋白質之任一者，該雙特異性或多特異性蛋白質包含特異性結合CD3ε之第一抗原結合域及特異性結合第二抗原之第二抗原結合域；及(b)藥品仿單(package insert)，其包含向對象投予該組成物以治療細胞增生性病症或延緩細胞增生性病症進展的說明書。
在任何前述用途或方法中，對象可係人類。組合療法
本揭露之CD3ε結合蛋白質可與至少一種額外治療劑組合投予。
在其他實施例中，一種療法之遞送在第二療法之遞送開始時仍存在，使得就投予而言存在重疊。在本文中此有時被稱為「同時(simultaneous)」或「並行遞送(concurrent delivery)」。在其他實施例中，一種療法之遞送在另一種療法之遞送開始之前結束。在任一情況之一些實施例中，療法因組合投予而更有效。舉例而言，第二療法更有效，例如用較少的第二療法見到等效效應，或第二療法減少症狀的程度大於若在不存在第一療法下投予第二療法所見到的程度，或用第一療法見到類似情況。在其他實施例中，遞送使得症狀或與病症相關之其他參數的減少大於在不存在另一療法下用一種療法遞送時所觀測到的減少。遞送可使得當遞送第二療法時，仍可偵測到所遞送之第一療法之效應。
本文中所述之CD3ε結合蛋白質及至少一種額外治療劑可以同一個組成物或以分開的組成物同時投予、或依序投予。針對依序投予，可先投予本文中所述之CD3ε結合蛋白質，其次可投予另一種藥劑，或投予順序可顛倒。實施例：
本發明提供以下非限制性實施例。 1.     一種經單離蛋白質，其包含結合至分化簇3ε (CD3ε)之抗原結合域，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含： a.     SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)的重鏈互補決定區(HCDR) 1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 24之輕鏈可變區(VL)的輕鏈互補決定區(LCDR) 1、LCDR2、及LCDR3； b.     SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 27之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3； c.     SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 28之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3； d.     SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 29之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3；或 e.     SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 30之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3。 2.     如實施例1所述之經單離蛋白質，其包含下列之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3： a.     分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11； b.     分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17；或 c.     分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22。 3.     如實施例1或2所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係scFv、(scFv)2、Fv、Fab、F(ab’)2、Fd、dAb、或VHH。 4.     如實施例3所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係該Fab。 5.     如實施例3所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係該VHH。 6.     如實施例3所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係該scFv。 7.     如實施例6所述之經單離蛋白質，其中該scFv自N至C端包含VH、第一連接子(L1)、及VL (VH-L1-VL)或該VL、該L1、及該VH (VL-L1-VH)。 8.     如實施例7所述之經單離蛋白質，其中該L1包含 a.     約5至50個胺基酸； b.     約5至40個胺基酸； c.     約10至30個胺基酸；或 d.     約10至20個胺基酸。 9.     如實施例7所述之經單離蛋白質，其中該L1包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。 10.   如實施例9所述之經單離蛋白質，其中該L1包含SEQ ID NO: 31、37、或64之胺基酸序列。 11.   如實施例1至10中任一項所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。 12.   如實施例11所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含： a.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； b.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； c.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； d.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 e.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。 13.   如實施例1至12中任一項所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含SEQ ID NO: 65、66、67、68、69、70、71、72、73、或74之胺基酸序列。 14.   一種經單離蛋白質，其包含結合CD3ε之抗原結合域，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO: 103之輕鏈可變區(VL)。 15.   如實施例14所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係scFv、(scFv)2、Fv、Fab、F(ab’)2、Fd、dAb、或VHH。 16.   如實施例15所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係該Fab。 17.   如實施例15所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係該VHH。 18.   如實施例15所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係該scFv。 19.   如實施例18所述之經單離蛋白質，其中該scFv自N至C端包含VH、第一連接子(L1)、及VL (VH-L1-VL)或該VL、該L1、及該VH (VL-L1-VH)。 20.   如實施例19所述之經單離蛋白質，其中該L1包含 a.     約5至50個胺基酸； b.     約5至40個胺基酸； c.     約10至30個胺基酸；或 d.     約10至20個胺基酸。 21.   如實施例20所述之經單離蛋白質，其中該L1包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。 22.   如實施例21所述之經單離蛋白質，其中該L1包含SEQ ID NO: 31、37、或64之胺基酸序列。 23.   如實施例14至22所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。 24.   如實施例23所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含： a.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； b.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； c.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； d.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 e.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL； 25.   如實施例1至24中任一項所述之經單離蛋白質，其中該經單離蛋白質係多特異性蛋白質。 26.   如實施例25所述之經單離蛋白質，其中該多特異性蛋白質係雙特異性蛋白質。 27.   如實施例25所述之經單離蛋白質，其中該多特異性蛋白質係三特異性蛋白質。 28.   如實施例1至27中任一項所述之經單離蛋白質，其進一步包含免疫球蛋白(Ig)恆定區或該Ig恆定區之片段。 29.   如實施例28所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含Fc區。 30.   如實施例28所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含CH2域。 31.   如實施例28所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含CH3域。 32.   如實施例28所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含該CH2域及該CH3域。 33.   如實施例28所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含鉸鏈之至少一部分、該CH2域、及該CH3域。 34.   如實施例28所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含鉸鏈、該CH2域、及該CH3域。 35.   如實施例28至34中任一項所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係接合至該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段的N端。 36.   如實施例28至34中任一項所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係接合至該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段的C端。 37.   如實施例28至36中任一項所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係經由第二連接子(L2)接合至該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段。 38.   如實施例37所述之經單離蛋白質，其中該L2包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。 39.   如實施例28至38中任一項之經單離蛋白質，其中該多特異性蛋白質包含結合CD3ε以外的抗原之抗原結合域。 40.   如實施例39所述之多特異性抗體，其中該細胞抗原係腫瘤相關抗原。 41.   如實施例39至40中任一項所述之多特異性抗體，其中該細胞抗原係選自由下列所組成之群組：血管舒緩素相關肽酶2 (hK2)、人類白血球抗原G (HLA-G)、及δ樣蛋白質3 (DLL3)。 42.   如實施例28至41中任一項所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段係IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4同型。 43.   如實施例28至42中任一項所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段包含導致該蛋白質與Fcγ受體(FcγR)之結合減少的至少一個突變。 44.   如實施例43所述之經單離蛋白質，其中導致該蛋白質與該FcγR之結合減少的該至少一個突變係選自由下列所組成之群組：F234A/L235A、L234A/L235A、L234A/L235A/D265S、V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S、F234A/L235A、S228P/F234A/ L235A、N297A、V234A/G237A、K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-缺失/A327G/P331A/D365E/L358M、H268Q/V309L/A330S/P331S、S267E/L328F、L234F/L235E/D265A、L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S、S228P/F234A/L235A/G237A/P238S、及S228P/F234A/L235A/G236-缺失/G237A/P238S，其中殘基編號係根據EU索引。 45.   如實施例28至42中任一項所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段包含導致該蛋白質與該FcγR之結合增強的至少一個突變。 46.   如實施例45所述之經單離蛋白質，其中導致該蛋白質與該FcγR之結合增強的該至少一個突變係選自由下列所組成之群組：S239D/I332E、S298A/E333A/K334A、F243L/R292P/Y300L、F243L/R292P/Y300L/P396L、F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L、及G236A/S239D/I332E，其中殘基編號係根據EU索引。 47.   如實施例43至46中任一項所述之經單離蛋白質，其中該FcγR係FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、或FcγRIII、或其任何組合。 48.   如實施例28至47中任一項所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段包含調節該蛋白質之半衰期的至少一個突變。 49.   如實施例48所述之經單離蛋白質，其中調節該蛋白質之該半衰期的至少一個突變係選自由下列所組成之群組：H435A、P257I/N434H、D376V/N434H、M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F、T308P/N434A、及H435R，其中殘基編號係根據EU索引。 50.   如實施例28至49中任一項所述之經單離蛋白質，其中該蛋白質在該Ig恆定區之CH3域中包含至少一個突變。 51.   如實施例40所述之經單離蛋白質，其中在該Ig恆定區之該CH3域中的該至少一個突變係選自由下列所組成之群組：T350V、L351Y、F405A、Y407V、T366Y、T366W、T366L、F405W、K392L、T394W、T394S、Y407T、Y407A、T366S/L368A/Y407V、L351Y/F405A/Y407V、T366I/K392M/T394W、F405A/Y407V、T366L/K392M/T394W、T366L/K392L/T394W、L351Y/Y407A、T366A/K409F、L351Y/Y407A、L351Y/Y407V、T366V/K409F、T366A/K409F、T350V/L351Y/F405A/Y407V、及T350V/T366L/K392L/T394W，其中殘基編號係根據EU索引。 52.   一種醫藥組成物，其包含如實施例1至51中任一項所述之經單離蛋白質及醫藥上可接受之載劑。 53.   一種多核苷酸，其編碼如實施例1至51中任一項所述之經單離蛋白質。 54.   一種載體，其包含如實施例53所述之多核苷酸。 55.   一種宿主細胞，其包含如實施例54所述之載體。 56.   一種生產如實施例1至51中任一項所述之經單離蛋白質的方法，其包含在使該蛋白質表現之條件下培養如實施例55所述之宿主細胞、及回收由該宿主細胞所生產之該蛋白質。 57.   一種治療對象之癌症的方法，其包含向有需要之該對象投予治療有效量的如實施例1至51中任一項所述之經單離之抗體以治療該癌症。 58.   如實施例57所述之方法，其中該癌症係實體腫瘤或血液惡性疾病。 59.   如實施例58所述之方法，其中該實體腫瘤係前列腺癌、結腸直腸癌、胃癌、透明細胞腎癌、膀胱癌、肺癌、鱗狀細胞癌、神經膠質瘤、乳癌、腎臟癌(kidney cancer)、新生血管病症、透明細胞腎癌(CCRCC)、胰腺癌、腎癌(renal cancer)、尿路上皮癌、或往肝臟的腺癌(adenocarcinoma to the liver)。 60.   如實施例58所述之方法，其中該血液惡性疾病係急性骨髓性白血病(AML)、骨髓發育不良症候群(MDS)、急性淋巴球性白血病(ALL)、瀰漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性骨髓性白血病(CML)、或母細胞性漿細胞樣樹突細胞腫瘤(DPDCN)。 61.   如實施例57至60中任一項所述之方法，其中該抗體係與第二治療劑組合投予。 62.   一種抗獨特型抗體(anti-idiotypic antibody)，其結合至如實施例1至51中任一項所述之經單離蛋白質。 63.   一種經單離蛋白質，其包含結合至CD3ε (SEQ ID NO: 1)上之表位的抗原結合域，其中該表位係包含SEQ ID NO: 100、101、及102之胺基酸序列的不連續性表位。 64.   一種經單離蛋白質，其包含選自由SEQ ID NO: 75、76、717、718、79、80、81、82、83、及84所組成之群組的胺基酸序列。 65.   一種經單離蛋白質，其包含選自由SEQ ID NO: 747、748、77、78、749、750、751、752、753、及754所組成之群組的胺基酸序列。 66.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列。 67.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列。 68.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 717之胺基酸序列。 69.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 718之胺基酸序列。 70.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列。 71.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 80之胺基酸序列。 72.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 81之胺基酸序列。 73.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列。 74.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列。 75.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 84之胺基酸序列。 76.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 747之胺基酸序列。 77.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 748之胺基酸序列。 78.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列。 79.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列。 80.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 749之胺基酸序列。 81.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 750之胺基酸序列。 82.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 751之胺基酸序列。 83.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 752之胺基酸序列。 84.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 753之胺基酸序列。 85.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 754之胺基酸序列。 86.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及86之胺基酸序列。 87.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及88之胺基酸序列。 88.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及90之胺基酸序列。 89.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及92之胺基酸序列。 90.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及94之胺基酸序列。 91.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 719及86之胺基酸序列。 92.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 719及88之胺基酸序列。 93.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 719及90之胺基酸序列。 94.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 719及92之胺基酸序列。 95.   一種經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 719及94之胺基酸序列。
提供下列實例以進一步描述一些本文所揭示之實施例。該等實例意欲說明而非限制所揭露之實施例。實例 實例1. 抗CD3 mAb 之產生及表徵
使用Ablexis®基因轉殖小鼠平台來產生抗CD3抗體。Ablexis®小鼠產生具有人類可變域的抗體，該人類可變域連接至人類CH1及CL域、嵌合人類/小鼠鉸鏈區、及小鼠Fc區。稱為Ablexis® Kappa小鼠及Lambda小鼠的兩種特定品系缺乏特異性小鼠序列，並且在WO11/123708及WO2003000737中敘述。
用TRCW5 (SEQ ID NO: 3)免疫Ablexis小鼠，包括13隻Kappa小鼠及12隻Lambda小鼠。TRCW5包含藉由26個胺基酸連接子融合至CD3ε之胞外區的CD3δ之胞外區，如Kim et al, JMB (2000) 302(4): 899-916中所報導。此多肽在其C端具有人類IgG1 Fc域，該人類IgG1 Fc域具有用於定點生物素化之C端Avi-標籤(Fairhead & Howarth, Methods Mol Biol (2015); 1266: 171-184)。 TRCW5 (SEQ ID NO: 3)： FKIPIEELEDRVFVNCNTSITWVEGTVGTLLSDITRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIYKDKESTVQVHYRMGSADDAKKDAAKKDDAKKDDAKKDGSDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVSPPSPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLT CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGLNDIFEAQKIEWHE
每週對小鼠進行免疫兩次持續7週。在第42天，藉由分散在8個部位（包括6個皮下及2個皮內注射）的投予50 µg TRCW5及50 µg CD40 mAb來追加小鼠，以達融合瘤融合。以最終追加而言，小鼠接受20 µL Jurkat細胞（4.74×107 個細胞/mL）注射，這是一種內源性表現T細胞受體複合物（包括CD3ε）的T細胞系(Schneider et al (1977) Int. J. Cancer, 19 (5): 621-6)。
自小鼠萃取淋巴結及脾臟並依世代進行融合。將淋巴結細胞計數並與FO骨髓瘤細胞(ATCC (CRL-1646))以1:1的比組合，並在抗體篩選之前在37℃下培養10天。接著，根據製造商說明，使用非特異性固定在盤上(ELISA, Thermo cat. # 34022)或藉由鏈黴親和素接合至生物素化TRCW5 (SPARCL ELISA, Lumigen)之TRCW5來檢定來自融合瘤融合細胞的上清液與TRCW5的結合。ELISA檢定係藉由以0.5 ug/mL TRCW5及0.5 ug/mL HVEM-Fc (R&D cat. # 365-HV)在4℃下隔夜包覆盤來執行。藉由添加含0.4% (w/v)牛血清白蛋白(BSA)之磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)在4℃下隔夜來阻斷盤。將盤用補充有0.02% (v/v) Tween 20之1 × PBS洗滌。在各孔中施用50 uL的融合瘤上清液並在室溫下培養1 hr。結合抗體的偵測係藉由添加經1:10,000稀釋於阻斷緩衝劑中之接合至辣根過氧化酶之山羊抗小鼠IgG Fc (Jackson cat. # 115-036-071)隨後在室溫下培養30 min來進行。添加25 uL/孔的3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)受質緩衝劑(Thermo cat. # 34022)並於黑暗中培養10 min。藉由添加25 uL/孔的4 M H2 SO4 來停止反應。使用BioTek® Epoch2微量盤讀取儀在450 nm下讀取發光。選擇比起背景具有至少高出3倍信號的命中。
兩種檢定格式導致426個命中（264個命中來自ELISA，194個來自SPARCL ELISA，70個命中在兩種檢定中皆識別）。在這426個初始命中當中，證實49個ELISA及32個SPARCL ELISA命中。再餵養(refed)對應於陽性結合劑之雜交瘤融合並使用流動式細胞測量術測試彼等結合Jurkat細胞的能力。結果表明，三種抗體（包括殖株003_F12、殖株036_E10、及殖株065_D03）顯示基於平均螢光指數（MFI，見表4）之顯著結合至內源性表現CD3之Jurkat細胞。雖然殖株003_F12及036_E10（來自人類κ小鼠）藉由ELISA證實為人類κ輕鏈陽性，但殖株065_D03（來自人類λ小鼠）為人類λ陰性。接著將這三個殖株的可變基因定序。表4. 所選殖株結合至Jurkat 細胞的平均螢光指數(MFI)
殖株ID MFI （任意單位）
003_F12 176147
036_E10 43133
065_D03 136269
無Ab 2075.61
10 nM UCHT1 89214.29
接下來，篩選這三個殖株結合初代人類及食蟹獼猴T細胞的能力。簡言之，將初代人類及食蟹獼猴泛T細胞以1 × 106 個細胞/mL重懸於流式染色緩衝劑，並將細胞以50,000個細胞/孔接種。在各孔中加入50 uL的融合瘤上清液，並將混合物在冰上培養30 min。在培養之後，添加200 uL的染色緩衝劑，並將細胞以300 × G離心5 min成團塊。添加2 ug/mL接合至Alexa-647的抗小鼠IgG於50 uL總體積染色緩衝劑中並在冰上培養30 min。添加150 uL的染色緩衝劑並將細胞以300 × G離心5 min成團塊。將細胞重懸於含有經1:1,000稀釋的Sytox綠色死亡細胞染料之30 uL的運行緩衝劑並在iQue篩選器上運行。在FCS vs SCS上閘控細胞以消除碎屑。在SCS-A vs SCS-H上閘控單態細胞(singlet)，且使用BL1通道自單態細胞群體選擇Sytox綠色呈低陰性之活細胞。CD3結合係藉由比較測試物品與陰性對照組的RL1 (Alexa-647)幾何平均數來評估。在此檢定中，殖株065_D03顯示最高細胞結合信號（圖1A至圖1B）。
因此，將殖株065_D03之可變區選殖至IgG1主鏈中，導致稱為CD3B815之抗體（序列顯示於表5）。再次篩選CD3B815與Jurkat細胞的結合且顯示與Jurkat細胞的陽性結合。表5. CD3B815 胺基酸序列。
蛋白質 胺基酸序列
CD3B815 重鏈 (SEQ ID NO: 25) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
CD3B815 輕鏈 (SEQ ID NO: 26) DILLTQSPGILSVSPGERVSFSCRARQSIGTAIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVESEDIADYYCQQSNSWPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
CD3 結合域的人源化及scFv 格式化
CD3B815之v區的輕鏈(LC)係以scFv格式人源化。簡言之，將來自CD3B815之LC植入人類IGHV3-21*04生殖系上，並識別二個位置（Y49K及L78V，根據Kabat編號系統）以進行人類至小鼠回復突變。這導致具有Y49K、L78V、或Y49K及L78V兩者之變體。來自CD3B815之LC亦含有NS模體，其呈現在位置92至93處脫醯胺之風險。因此，所產生之數個變體亦含有N92G。這些變體及相關突變係描述於表6，且VH及VL胺基酸及核酸序列係顯示於表7及表8。CDR序列係顯示於表9至表11。表6. 根據Kabat 編號系統定義之人源化scFv 變體中的突變。
scFv 識別 說明 VL 突變
CD3W234 CD3B815-HL-scFV，含有小鼠VL 無
CD3W238 CD3B815之CDR植入IGKV1D-39*01 無
CD3W241 CD3B815之CDR植入IGKV1D-39*01 L78V
CD3W242 CD3B815之CDR植入IGKV1D-39*01 Y49K
CD3W243 CD3B815之CDR植入IGKV1D-39*01 Y49K、L78V
CD3W244 CD3B815之CDR植入IGKV1D-39*01 L78V、N92G
CD3W245 CD3B815之CDR植入IGKV1D-39*01 Y49K、N92G
CD3W246 CD3B815之CDR植入IGKV1D-39*01 Y49K、L78V、N92G
CD3W247 CD3B815之CDR植入IGKV1D-39*01 N92G
CD3W248 CD3B815-HL-scFV，含有小鼠VL N92G
表7. 人源化scFv 變體之VH 及VL 胺基酸序列。
結合域名稱 VH胺基酸序列 VH SEQ ID NO: VL胺基酸序列 VL SEQ ID NO:
CD3B815 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSS 23 DILLTQSPGILSVSPGERVSFSCRARQSIGTAIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVESEDIADYYCQQSNSWPYTFGGGTKLEIK 119
CD3W244 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSS 23 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIK 27
CD3W245 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSS 23 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIK 28
CD3W246 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSS 23 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIK 24
CD3W247 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSS 23 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIK 29
CD3W248 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSS 23 DILLTQSPGILSVSPGERVSFSCRARQSIGTAIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVESEDIADYYCQQSGSWPYTFGGGTKLEIK 30
表8. 人源化scFv 變體之VH 及VL 核酸序列。
結合域名稱 VH核酸序列 VH SEQ ID NO: VL核酸序列 VL SEQ ID NO:
CD3B815 GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA 113 GATATACTTCTTACCCAGAGTCCCGGCATCCTCTCCGTTAGCCCTGGGGAGAGAGTCTCATTCTCATGCCGAGCCAGACAGTCAATTGGTACCGCAATACACTGGTATCAACAGCGGACCAATGGTTCTCCCCGACTTCTGATAAAGTACGCATCAGAATCAATTAGTGGAATACCATCAAGATTTAGTGGCTCAGGGAGTGGAACCGATTTTACTCTGACCATCAACTCAGTGGAATCTGAGGACATTGCCGACTACTACTGTCAACAAAGCAATAGTTGGCCATATACCTTCGGAGGCGGAACTAAATTGGAGATAAAA 120
CD3W244 GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA 113 GACATCCAGATGACACAGTCACCTTCTAGTTTGTCTGCTTCTGTAGGCGACCGTGTAACTATCACCTGTCGAGCCCGTCAAAGTATTGGTACTGCCATTCACTGGTACCAACAAAAACCTGGCAAAGCTCCAAAACTCTTGATCTACTATGCCTCCGAAAGCATATCAGGGGTCCCAAGCAGATTCTCAGGCAGTGGCAGTGGCACTGACTTCACTCTCACCATTTCTAGCGTGCAACCAGAGGACTTCGCCACTTATTACTGCCAACAGTCAGGGAGCTGGCCCTACACCTTCGGCCAAGGTACAAAACTGGAGATCAAA 114
CD3W245 GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA 113 GACATACAAATGACACAATCACCCTCTTCTCTTTCTGCAAGCGTTGGCGACCGTGTCACTATCACTTGTCGAGCCCGCCAGTCCATAGGTACTGCCATTCACTGGTATCAACAGAAGCCTGGCAAGGCTCCCAAACTCCTGATTAAGTATGCCAGCGAGAGCATTTCCGGCGTACCTTCAAGATTTTCCGGCTCCGGTAGTGGGACAGATTTCACTCTCACTATATCTAGCCTCCAACCAGAAGATTTCGCCACTTACTACTGTCAACAATCAGGTTCATGGCCTTACACTTTCGGCCAGGGGACAAAATTGGAGATCAAG 115
CD3W246 GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA 113 GACATCCAAATGACTCAATCACCTAGCAGCCTCTCCGCCTCCGTTGGAGATAGAGTGACAATAACTTGCCGAGCCCGGCAAAGTATCGGAACTGCTATTCACTGGTATCAACAAAAACCTGGAAAGGCACCTAAGCTCTTGATTAAATACGCTTCTGAGTCCATCTCCGGCGTGCCTTCACGATTCAGCGGCAGCGGTAGTGGTACTGACTTTACCCTCACTATTAGTTCTGTTCAGCCAGAGGACTTCGCAACTTATTACTGCCAACAGAGTGGTTCCTGGCCATACACTTTTGGCCAGGGGACTAAATTGGAAATCAAA 116
CD3W247 GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA 113 GACATCCAAATGACTCAAAGCCCCTCTAGTTTGAGTGCATCTGTAGGTGACCGGGTAACAATCACCTGCCGTGCCCGGCAAAGTATAGGTACTGCAATCCACTGGTACCAGCAAAAACCCGGCAAAGCACCAAAGCTGCTCATATACTATGCTAGTGAGAGCATTTCTGGCGTTCCTAGTCGATTTTCTGGATCAGGGAGTGGAACTGATTTTACACTGACAATCAGCAGCCTCCAACCCGAAGACTTCGCCACCTACTATTGTCAGCAGTCTGGGTCCTGGCCTTACACATTCGGTCAAGGAACTAAATTGGAGATCAAA 117
CD3W248 GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA 113 GACATTTTGCTGACACAGAGCCCTGGTATCCTCTCAGTCAGTCCAGGGGAACGCGTTTCATTTAGCTGCCGTGCTCGACAGAGCATTGGGACCGCAATCCACTGGTACCAACAAAGAACTAACGGTTCACCACGGCTTTTGATTAAGTATGCCTCCGAATCCATCAGTGGCATTCCTAGTCGTTTTTCTGGATCAGGATCAGGCACCGACTTTACTCTCACAATTAATAGTGTCGAAAGTGAGGACATTGCAGACTATTATTGTCAGCAATCCGGTTCCTGGCCCTATACTTTTGGTGGTGGTACTAAGTTGGAAATTAAA 118
表9. 使用Kabat 描繪判定之CDR 序列。
  HCDR1 (SEQ ID NO:) HCDR2 (SEQ ID NO:) HCDR3 (SEQ ID NO:) LCDR1 (SEQ ID NO:) LCDR2 (SEQ ID NO:) LCDR3 (SEQ ID NO:)
CD3 B815 RYNMN (6) SISTSSNYIYYADSVKG (7) GWGPFDY (8) RARQSIGTAIH (9) YASESIS (10) QQSNSWPYT (121)
CD3 W244 RYNMN (6) SISTSSNYIYYADSVKG (7) GWGPFDY (8) RARQSIGTAIH (9) YASESIS (10) QQSGSWPYT (11)
CD3 W245 RYNMN(6) SISTSSNYIYYADSVKG (7) GWGPFDY (8) RARQSIGTAIH (9) YASESIS (10) QQSGSWPYT (11)
CD3 W246 RYNMN (6) SISTSSNYIYYADSVKG (7) GWGPFDY (8) RARQSIGTAIH (9) YASESIS (10) QQSGSWPYT (11)
CD3 W247 RYNMN (6) SISTSSNYIYYADSVKG (7) GWGPFDY (8) RARQSIGTAIH (9) YASESIS (10) QQSGSWPYT (11)
CD3 W248 RYNMN (6) SISTSSNYIYYADSVKG (7) GWGPFDY (8) RARQSIGTAIH (9) YASESIS (10) QQSGSWPYT (11)
表10. 使用Chothia 描繪判定之CDR 序列。
  HCDR1 (SEQ ID NO:) HCDR2 (SEQ ID NO:) HCDR3 (SEQ ID NO:) LCDR1 (SEQ ID NO:) LCDR2 (SEQ ID NO:) LCDR3 (SEQ ID NO:)
CD3B815 GFTFSRY (12) STSSNY (13) GWGPFD (14) RQSIGTA (15) YAS (16) SNSWPY (122)
CD3W244 GFTFSRY (12) STSSNY (13) GWGPFD (14) RQSIGTA (15) YAS (16) SGSWPY (17)
CD3W245 GFTFSRY (12) STSSNY (13) GWGPFD (14) RQSIGTA (15) YAS (16) SGSWPY (17)
CD3W246 GFTFSRY (12) STSSNY (13) GWGPFD (14) RQSIGTA (15) YAS (16) SGSWPY (17)
CD3W247 GFTFSRY (12) STSSNY (13) GWGPFD (14) RQSIGTA (15) YAS (16) SGSWPY (17)
CD3W248 GFTFSRY (12) STSSNY (13) GWGPFD (14) RQSIGTA (15) YAS (16) SGSWPY (17)
表11. 使用IMGT 描繪判定之CDR 序列。
  HCDR1 (SEQ ID NO:) HCDR2 (SEQ ID NO:) HCDR3 (SEQ ID NO:) LCDR1 (SEQ ID NO:) LCDR2 (SEQ ID NO:) LCDR3 (SEQ ID NO:)
CD3B815 GFTFSRYN (18) ISTSSNYI (19) TRGWGPFDY (20) QSIGTA (21) YAS (16) QQSNSWPYT (123)
CD3W244 GFTFSRYN (18) ISTSSNYI (19) TRGWGPFDY (20) QSIGTA (21) YAS (16) QQSGSWPYT (22)
CD3W245 GFTFSRYN (18) ISTSSNYI (19) TRGWGPFDY (20) QSIGTA (21) YAS (16) QQSGSWPYT (22)
CD3W246 GFTFSRYN (18) ISTSSNYI (19) TRGWGPFDY (20) QSIGTA (21) YAS (16) QQSGSWPYT (22)
CD3W247 GFTFSRYN (18) ISTSSNYI (19) TRGWGPFDY (20) QSIGTA (21) YAS (16) QQSGSWPYT (22)
CD3W248 GFTFSRYN (18) ISTSSNYI (19) TRGWGPFDY (20) QSIGTA (21) YAS (16) QQSGSWPYT (22)
圖3顯示CD3B815、CD3W244、CD3W245、CD3W246、及CD3W247之VL區的比對。判定VL區之共有胺基酸序列SEQ ID NO: 103 ，且將CDR殘基加底線。SEQ ID NO: 103 DIQX1 TQSPX2 X3 LSX4 SX5 GX6 RVX7 X8 X9 CRARQSIGTAIHW YQQKX10 X11 X12 X13 PX14 LLIX15 YAS ESISGX16 PSRFSGSGSGTDFTLTIX17 SX18 QX19 EDX20 AX21 YYCQQSX22 SWPYT FGX23 GTKLEIK 其中，X1 係L或M；X2 係G或S；X3 係I或S；X4 係V或A；X5 係P或V；X6 係E或D；X7 係S或T；X8 係F或I；X9 係S或T；X10 係T或P；X11 係N或G；X12 係G或K；X13 係S或A；X14 係R或K；X15 係K或Y；X16 係I或V；X17 係N或S；X18 係V或L；X19 係S或P；X20 係I或F；X21 係D或T；X22 係N或G；或X23 係G或Q。在熱休克之後人源化抗CD3 scFv 變體與CD3 之結合
接下來將來自CD3B815之可變區使用連接子GTEGKSSGSGSESKST (SEQ ID No: 64)格式化為呈VH-VL定向之scFv（表12）以於大腸桿菌中表現，接著篩選與重組CD3 (CD3W147, SEQ ID NO: 4)之結合、與T細胞之結合、及熱穩定性。表12. scFv-HL-E.c. 胺基酸序列。
scFv 胺基酸序列
CD3W234-HL-E.c. (SEQ ID NO: 104) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDILLTQSPGILSVSPGERVSFSCRARQSIGTAIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVESEDIADYYCQQSNSWPYTFGGGTKLEIKGPGGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS
CD3W238-HL-E.c. (SEQ ID NO: 105) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNSWPYTFGQGTKLEIKGPGGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS
CD3W242-HL-E.c. (SEQ ID NO: 106) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNSWPYTFGQGTKLEIKGPGGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS
CD3W243-HL-E.c. (SEQ ID NO:107) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSNSWPYTFGQGTKLEIKGPGGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS
CD3W244-HL-E.c. (SEQ ID NO: 108) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGPGGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS
CD3W245-HL-E.c. (SEQ ID NO: 109) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGPGGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS
CD3W246-HL-E.c. (SEQ ID NO: 110) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGPGGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS
CD3W247-HL-E.c. (SEQ ID NO: 111) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGPGGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS
CD3W248-HL-E.c. (SEQ ID NO: 112) EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDILLTQSPGILSVSPGERVSFSCRARQSIGTAIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVESEDIADYYCQQSGSWPYTFGGGTKLEIKGPGGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS
CD3W147 (SEQ ID NO: 4)： QDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVGSADDAKKDAAKKDDAKKDDAKKDGSQSIKGNHLVKVYDYQEDGSVLLTCDAEAKNITWFKDGKMIGFLTEDKKKWNLGSNAKDPRGMYQCKGSQNKSKPLQVYYRMGSGSLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTFPPSQEEMTKNQVSLRCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTKPVLDSDGSFRLESRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSGGHHHHHH
判定於大腸桿菌中表現之抗CD3 scFv變體（表7）與CD3之結合。簡言之，將編碼scFv之序列選殖至pADL™-22c載體，該載體具有用於分泌之PelB前導序列(Antibody Design Labs, San Diego, CA)。大腸桿菌細胞係經質體轉形並於補充有100 µg/mL羧苄青黴素(Carbenicillin)之2xYT微生物生長培養基中在37℃下生長隔夜。將隔夜培養物用於接種5 mL表現培養物且在37℃下生長直到OD600 約2.0。蛋白質表現係藉由添加1 mM IPTG來誘導，且使培養物生長隔夜。在表現之後，將細胞以2,200 × g離心5 min成團塊，並收集上清液且直接在ELISA分析中測試。
為了進行ELISA分析，將生物素化CD3W147（同型二聚體CD3εγ-Fc，SEQ ID NO: 4）之2倍稀釋液以0.039 ug/mL至2.5 ug/mL之濃度範圍固定在盤上，隨後在室溫下培養45 min。用補充有3%奶之1 × PBS-Tween阻斷盤。將盤用1 × PBS-Tween洗滌。將大腸桿菌上清液加熱至60℃，接著冷卻至室溫以評估彼等之熱穩定性。將上清液添加至各盤並在室溫下培養45 min。結合的scFv使用每孔50 uL之經1:1,000稀釋之雞抗HA-辣根過氧化酶偵測，接著用化學發光受質(Sigma cat. # 11582950001)偵測。所有測試的衍生自CD3B815之scFv分子皆結合CD3ε（圖2）。
接著使用流動式細胞測量術測試scFv分子結合T細胞的能力。簡言之，將人類T細胞解凍並以1 × 10^6個細胞/mL重懸於流式染色緩衝劑並以50,000個細胞/孔接種。使用陽性對照（CD3W36，其包含格式化為LH-scFv之抗CD3抗體SP34）及陰性對照（B23，靶向呼吸道融合病毒之F-糖蛋白之scFv）比較結合。添加150 uL/孔之大腸桿菌上清液並在4℃下培養1 hr。在培養之後，將盤用染色緩衝劑洗滌，並用經1:100稀釋於染色緩衝劑中之接合至Alexa-647之抗His抗體在4℃下培養30 min偵測。在培養之後，將200 uL之IntelliCyt運行緩衝劑添加至混合物，並將細胞重懸於含有1:1,000 Sytox綠色死亡細胞染料之30 uL運行緩衝劑並在iQue篩選器上分析。如上所述執行閘控及分析。所有衍生自CD3B815之scFv分子皆展示與T細胞結合一致的平均螢光指數（表 13 ）。表13. 人源化scFv 分子之基於T 細胞之結合。
蛋白質 MFI (n=2)
CD3W245-HL-E.c. 178140.0
CD3W244-HL-E.c. 165631.0
CD3W246-HL-E.c. 153895.8
CD3W238-HL-E.c. 137380.4
CD3W242-HL-E.c. 126105.9
CD3W243-HL-E.c. 111347.6
CD3W241-HL-E.c. 120793.8
CD3W247-HL-E.c. 110932.3
CD3W248-HL-E.c. 60437.1
CD3W234-HL-E.c. 66790.3
B23 51.8
CD3W36 99451.6
表位識別
藉由氫氘交換質譜法(HDX-MS)判定CD3上之表位。使用抗體殖株OKT3作為HDX實驗的對照組，因為其在CD3ε上之表位係已知晶體結構(PDB ID 1SY6) (Kjer-Nielsen, L.et al.; Proc Natl Acad Sci U S A 101 , 7675-7680)。
用於HDX-MS 之交換(on-exchange) 實驗。交換反應的起始係藉由混合含有或不含1.2莫耳過量配體之10 µL之10 µM CD3W220 (SEQ ID NO: 5)（其包含與26-aa連接子區融合之CD3εγ，且該連接子區融合至血清白蛋白域上）與30 µL之H2O或氘化緩衝劑（20 mM MES，pH 6.4，150 mM NaCl於95% D2O或20 mM Tris中，pH 8.4，150 mM NaCl於95% D2O中）進行。將反應混合物在1.2℃下培養15、50、150、500、或1,500 s。添加冷卻的40 µL之8 M脲、1 M TCEP (pH 3.0)，以將交換溶液淬熄，並立即分析。 CD3W220 (CD3εγ-HSA-6xHis) (SEQ ID NO: 5)： QDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVGSADDAKKDAAKKDDAKKDDAKKDGSQSIKGNHLVKVYDYQEDGSVLLTCDAEAKNITWFKDGKMIGFLTEDKKKWNLGSNAKDPRGMYQCKGSQNKSKPLQVYYRMGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGLGGGSHHHHHHHH
用於HDX-MS數據獲取之通常程序HDX-MS樣本製備係用自動化HDx系統(LEAP Technologies, Morrisville, NC)來執行。管柱及泵係；蛋白酶，為蛋白酶第XIII型（來自齋藤麴菌(Aspergillus saitoi)第XIII型的蛋白酶）/胃蛋白酶管柱(w/w, 1:1; 2.1 × 30 mm) (NovaBioAssays Inc., Woburn, MA)；阱，為ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard前置管柱(2.1 × 5 mm) (Waters, Milford, MA)、分析性Accucore C18 (2.1 × 100 mm) (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)；及LC泵，VH-P10-A (Thermo Fisher Scientific)。裝載泵（自蛋白酶管柱至阱管柱）係設定為600 µL/min，其具有99%水、1%乙腈、0.1%甲酸。梯度泵（自阱管柱至分析管柱）係設定為100 µL/min，以20 min達8%至28%乙腈（於0.1%水性甲酸中）。
MS 數據獲取。使用LTQ™ Orbitrap Fusion Lumos質譜儀(Thermo Fisher Scientific)，進行質譜分析，其具有毛細管溫度275℃，解析度150,000，及質量範圍(m/z) 300至1,800。
HDX-MS 數據擷取。在HDX實驗之前，使用BioPharma Finder 3.0 (Thermo Fisher Scientific)來進行非氘化樣本的肽識別。為了HDX實驗，使用HDExaminer第2.5版(Sierra Analytics, Modesto, CA)，以自MS原始數據檔案擷取質心值。
HDX-MS 數據分析。將所擷取之HDX-MS數據進一步於Excel中分析。將所有交換時間點（在pH 6.4或pH 8.4下且在1.2℃下）轉換為在pH 7.4及23℃下之等效時間點（例如，在pH 6.4下在1.2℃下之15 s等效於在pH 7.4下在23℃下之0.15 s；表14）。表14. HDX 反應條件及交換時間對校正至pH 7.4 及23 ℃之交換時間。
調整至pH 7.4、23℃之時間(s) pH 6.4 1.2℃(s) pH 8.4 1.2℃(s)
0.015 ----- -----
0.05 ----- -----
0.15 15 -----
0.5 50 -----
1.5 150 -----
5 500 -----
15 1,500 15
50 ----- 50
150 ----- 150
500 ----- 500
1,500 ----- 1,500
結果 KLCB91（包含CD3W245作為抗CD3臂之雙特異性抗體（於實例3描述））與重組CD3εδ (SEQ ID NO: 5)的培養導致在抗原的特定區段不同的整體保護模式及保護程度。KLCB91及OKT3皆保護指示構形非相同表位之非連續區段（圖4）。將受保護區段定位至CD3ε之晶體結構上(PDB 1SY6)以視覺化三維結合表位。
與結合至CD3ε (Uniprot ID P07766)之OKT3的晶體結構一致，發現OKT3之表位係由涵蓋橫跨CD3ε之殘基29至37、79至84、及87至89的肽組成（SEQ ID NO: 5及圖4）。CD3W245結合至與OKT3之表位部分重疊的表位，且包括CD3ε（SEQ ID NO: 5及圖4）之胺基酸殘基29至37 (PQYPGSEIL, SEQ ID NO: 100)、55至63 (GSDEDHLSL, SEQ ID NO: 101)、及79至84 (PRGSKP, SEQ ID NO: 102)。實例2. 產生抗血管舒緩素相關肽酶2 (hK2) 抗體及scFv 抗體自親本m11B6 抗體之人源化產生
親本小鼠抗血管舒緩素相關肽酶2 (hK2)抗體m11B6已於Väisänen et al (Clinical Chemistry 50:9, 1607-1617 (2004))中描述。人源化11B6（本文中稱為hu11B6）已產生並描述於美國專利第9,345,782號及美國專利第10,100,125號中。
起始hu11B6的工程改造以產生具有改善性質諸如改善熱穩定性之額外抗HK2抗體。使用模型構建識別hu11B6架構中可潛在改變以改善hu11B6之熱穩定性的殘基位置。所識別出的位置係VH中之殘基P41、I49、M70、及A88，及VL中之S80、L82、A88、及Y91（殘基編號根據SEQ ID NO: 124 之及SEQ ID NO: 125 之hu11B6_VL之胺基酸序列）。
二元組合式scFv庫係以定向VH-連接子-VL產生，其中一個可變區代表組合式庫而第二個係親本hu11B6 VH或VL。使用GGSEGKSSGSGSESKSTGGS (SEQ ID NO: 31) 之連接子序列來接合VH/VL區。經工程改造scFv係表現於大腸桿菌，且藉由ELISA測試上清液中經生產之scFv與人類hK2之結合並與hu11B6之結合比較。合併任何展現與hu11B6可相比之結合的新穎變體，且在55℃、60℃、及65℃下培養上清液10分鐘之後進一步測試與人類hK2之結合。在55℃、60℃、及65℃下培養之後保留與hu11B6可相比之結合且改善熱穩定性的分子係基質化(matrixed)呈兩種定向（VH-連接子-VL；VL-連接子-VH）並轉換為哺乳動物scFv以進一步表徵。
此外，親本小鼠11B6的另一人源化係遵照下列概述之方案執行：Singh et al (MAbs. 2015;7(4):778-91)，具有廣泛種系變異，並仔細篩選增強熱穩定性之變體。基於序列保守性，選擇人類重鏈生殖系IGHV4-30及輕鏈生殖系IGKV3D-11用於架構適應。二元scFv庫係以包含一組選定的體細胞高突變位點及小鼠/人類生殖系變異之殘基建構。變體如上所述選殖並表現於大腸桿菌中。上清液在不同溫度下以單點ELISA篩選增強之熱穩定性。使用小鼠/人類嵌合11B6 scFv作為親本對照。將維持類似於鼠類11B6的結合活性及67℃之Tm值的殖株KL2B359轉換為scFv-Fc以用於額外剖析。藉由SPR測量的KL2B359對hK2之親和力(KD )為約0.7至1nM。HCF3-LCD6、HCG5-LCB7、KL2B357、KL2B358、及KL2B360亦得自此活動且進一步表徵官能性。使用表現人類免疫球蛋白基因座之基因轉殖小鼠(Ablexis®) 及基因轉殖大鼠(OmniRat®) 的抗體產生
OmniRat®含有嵌合人類/大鼠IgH基因座（包含22個人類VH 、所有呈天然構形的人類D及JH 區段，該等區段係連接至大鼠CH 基因座）再加上完整的人類IgL基因座（12個Vκ連接至Jκ-Cκ，且16個Vλ連接至Jλ-Cλ）。（見例如Osborn, et al. (2013) J Immunol 190(4): 1481-1490）。因此，該等大鼠展現減少表現的大鼠免疫球蛋白，且所引入之人類重鏈及輕鏈轉殖基因回應於免疫會經歷類型轉換(class switching)及體細胞突變，以產生具有完整人類可變區之高親和力嵌合人類/大鼠IgG單株抗體。OmniRat®之製備及用途、及此類大鼠所攜帶之基因組修飾係描述於WO14/093908中。
將Ablexis®小鼠（描述於實例1）及OmniRat®大鼠用可溶全長KLK2蛋白（人類血管舒緩素2 6-His蛋白）免疫。人類血管舒緩素-2 6-His 蛋白(SEQ ID NO: 355) ： VPLIEGRIVGGWECEKHSQPWQVAVYSHGWAHCGGVLVHPQWVLTAAHCLKKNSQVWLGRHNLFEPEDTGQRVPVSHSFPHPLYNMSLLKHQSLRPDEDSSHDLMLLRLSEPAKITDVVKVLGLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLRPRSLQCVSLHYSEKVTEFMLCAGLWTGGKDTCGGDSGGPLVCNGVLQGITSWGPEPCALPEKPAVYTKVVHYRKWIKDTIAANPHHHHHH
自Ablexis小鼠及OniRats大鼠的淋巴結萃取淋巴細胞並依世代進行融合。合併細胞並分選CD138表現。融合瘤篩選使用可溶性hK2抗原以高通量迷你MSD格式執行。識別大約＞300個樣本為hK2結合劑。＞300個抗hKLK2上清液樣本與人類KLK2蛋白質之結合係藉由單循環動力學方法藉由Biacore 8K SPR測量。此外，也測試上清液樣本與人類KLK3蛋白質之結合。同時，亦藉由流動式細胞測量術測試上清液與KLK2表現性細胞系VCap及陰性細胞系DU145之結合。選定的細胞結合劑前進至如上述之呈VH-VL及VL/VH兩種定向之scFv轉換及熱穩定性測試。KL2B413、KL2B30、KL2B53、及KL2B242係產生自Ablexis小鼠免疫活動。KL2B467及KL2B494係產生自OmniRat免疫活動。
經由上述各種免疫及人源化活動所產生之抗體係以Fab格式、mAb格式、呈VH-連接子-VL定向之scFv格式或呈VL-連接子-VH定向之scFv格式表現，且如下述進一步分析。使用上述SEQ ID NO: 31之連接子序列來接合VH/VL區。抗KLK2 抗體之結構表徵
本文提供在細胞內檢定中顯示最高性能之抗體可變域及scFv抗體片段之序列。可變域係表現為Fab格式、呈VH-連接子-VL定向之scFv格式、或呈VL-連接子-VH定向之scFv格式。可變域VH 、VL 及CDR
表15 顯示所選抗hK2抗體之VH及VL胺基酸序列。表 16 顯示所選抗hK2選擇抗體之Kabat HCDR1、HCDR2、及HCDR3。表 17 顯示所選抗hK2抗體之Kabat LCDR1、LCDR2、及LCDR3。表 18 顯示所選抗hK2抗體之AbM HCDR1、HCDR2、及HCDR3。表 19 顯示抗hK2之AbM LCDR1、LCDR2、及LCDR3。表 20 彙總所選hK2抗體之可變域序列及SEQ ID NO。表 21 顯示VH及VL區之蛋白質及DNA SEQ ID NO。表15. 所選抗hK2 抗體之VH 及VL 胺基酸序列。
mAb名稱 VH名稱 VH胺基酸序列 VH SEQ ID NO: VL名稱 VL胺基酸序列 VL SEQ ID NO:
m11B6 m11B6_VH DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGNSITSDYAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTTYSPSLKSRFSITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYFCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 126 m11B6_VL DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVEYFGTSLMHWYRQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPARFSGSGSGTDFSLNIQPVEEDDFSMYFCQQTRKVPYTFGGGTKLEIK 127
h11B6 hu11B6_VH QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 124 hu11B6_VL DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 125
HCF3-LCD6 HCF3_VH QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 128 LCD6_VL DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 129
HCG5-LCB7 HCG5_VH QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 130 LCB7_VL DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 131
KL2B357 KL2B357_VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 132 KL2B357_VL DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK 133
KL2B358 KL2B358_VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 134 KL2B358_VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK 135
KL2B359 KL2B359_VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 136 KL2B359_VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK 135
KL2B360 KL2B360_VH QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 132 KL2B360_VL EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK 135
KL2B413 KL2B413_VH evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfssywmtwvrqapgkglewvanikqdgseryyvdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycardqnydiltghygmdvwgqgttvtvss 137 KL2B413_VL eivltqspsflsasvgdrvtitcrasqgissylswyqqkpgkapklliyatstlqsgvpsrfsgsgsgteftltisslqpedfatyycqqlnsyprtfgqgtkveik 138
KL2B30 KL2B30_VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSS 139 KL2B30_VL DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIK 140
KL2B53 KL2B53_VH EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVED SAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSS 141 KL2B53_VL DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIK 142
KL2B242 KL2B242_VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSS 143 KL2B242_VL SYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVL 144
KL2B467 KL2B467_VH QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSS 145 KL2B467_VL QSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTV 146
KL2B494 KL2B494_VH QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSS 147 KL2B494_VL SSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL 148
KL2B242LC_C33S KL2B242_VH QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSS 143 KL2B242_LC_C33S_VL SYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVL 358
表16. 所選抗KLK2 抗體之Kabat HCDR1 、HCDR2 、及HCDR3 胺基酸序列。
  Kabat HCDR1 Kabat HCDR2 Kabat HCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO:
m11B6 SDYAWN 149 YISYSGSTTYSPSLKS 150 GYYYGSGF 151
hu11B6 SDYAWN 149 YISYSGSTTYNPSLKS 152 GYYYGSGF 151
HCF3-LCD6 SDYAWN 149 YISYSGSTTYNPSLKS 152 GYYYGSGF 151
HCG5-LCB7 SDYAWN 149 YISYSGSTTYNPSLKS 152 GYYYGSGF 151
KL2B357 sdyawn 149 yisysgsttynpslks 152 gyyygsgf 151
KL2B358 sdyawn 149 yisysgsttynpslks 152 gyyygsgf 151
KL2B359 sdyawn 149 yisysgsttynpslks 152 gyyygsgf 151
KL2B360 sdyawn 149 yisysgsttynpslks 152 gyyygsgf 151
KL2B413 sywmt 153 nikqdgseryyvdsvkg 154 dqnydiltghygmdv 155
KL2B30 SYYWS 156 YIYYSGSTNYNPSLKS 157 TTIFGVVTPNFYYGMDV 158
KL2B53 SYDIH 159 IISYDGSKKDYTDSVKG 160 ESGWSHYYYYGMDV 161
KL2B242 SYYWS 162 RLYVSGFTNYNPSLKS 163 DSGNYWGWFDP 164
KL2B467 YYGMH 165 FISYDGSNKYYADSVKG 166 LPYSGSYWAFDY 167
KL2B494 HYAMS 168 TIGGSGGSTYYADSVKG 169 PHIVMVTALLYDGMDV 170
表17. 所選抗hK2 抗體之Kabat LCDR1 、LCDR2 、及LCDR3 胺基酸序列。
  Kabat LCDR1 Kabat LCDR2 Kabat LCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO 序列 SEQ ID NO 序列 SEQ ID NO
m11B6 RASESVEYFGTSLMH 171 AASNVES 172 QQTRKVPYT 173
hu11B6 KASESVEYFGTSLMH 174 AASNRES 175 QQTRKVPYT 173
HCF3-LCD6 KASESVEYFGTSLMH 174 AASNRES 175 QQTRKVPYT 173
HCG5-LCB7 KASESVEYFGTSLMH 174 AASNRES 175 QQTRKVPYT 173
KL2B357 rasesveyfgtslmh 171 aasnves 172 qqtrkvpyt 173
KL2B358 rasesveyfgtslmh 171 aasnves 172 qqtrkvpyt 173
KL2B359 rasesveyfgtslmh 171 aasnves 172 qqtrkvpyt 173
KL2B360 rasesveyfgtslmh 171 aasnves 172 qqtrkvpyt 173
KL2B413 rasqgissyls 176 atstlqs 177 qqlnsyprt 178
KL2B30 RASQGISSYLA 182 AASTLQS 183 QQLNSYPLT 184
KL2B53 RASQDISNYLA 179 AASTLHS 180 QKYNSAPYT 181
KL2B242 SGDQLGENYAC 185 QDSKRPS 186 QAWDNSIVV 187
KL2B467 GGDNIGSKSVH 720 DNSDRPS 721 QVWDSSSDHPVV 193
KL2B494 GGNNIGSKSVH 191 DDSDRPS 192 QVWDSSSDHVV 188
表18. 所選抗hK2 抗體之AbM HCDR1 、HCDR2 、及HCDR3 胺基酸序列。
  AbM HCDR1 AbM HCDR2 AbM HCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO 序列 SEQ ID NO:
m11B6 GNSITSDYAWN 194 YISYSGSTT 195 GYYYGSGF 151
hu11B6 GNSITSDYAWN 194 YISYSGSTT 195 GYYYGSGF 151
HCF3-LCD6 GNSITSDYAWN 194 YISYSGSTT 195 GYYYGSGF 151
HCG5-LCB7 GNSITSDYAWN 194 YISYSGSTT 195 GYYYGSGF 151
KL2B357 gnsitsdyawn 194 yisysgstt 195 gyyygsgf 151
KL2B358 gnsitsdyawn 194 yisysgstt 195 gyyygsgf 151
KL2B359 gnsitsdyawn 194 yisysgstt 195 gyyygsgf 151
KL2B360 gnsitsdyawn 194 yisysgstt 195 gyyygsgf 151
KL2B413 gftfssywmt 189 nikqdgsery 190 dqnydiltghygmdv 155
KL2B30 GGSISSYYWS 202 YIYYSGSTN 203 TTIFGVVTPNFYYGMDV 158
KL2B53 GFTFSSYDIH 196 IISYDGSKKD 197 ESGWSHYYYYGMDV 161
KL2B242 GGSISSYYWS 198 RLYVSGFTN 199 DSGNYWGWFDP 164
KL2B467 GFTFSYY 200 FISYDGSNKY 201 LPYSGSYWAFDY 167
KL2B494 GFTFSHYAMS 204 TIGGSGGSTYY 205 PHIVMVTALLYDGMDV 206
表19. 所選抗hK2 抗體之AbM LCDR1 、LCDR2 、及LCDR3 胺基酸序列。
  AbM LCDR1 AbM LCDR2 AbM LCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO 序列 SEQ ID NO:
m11B6 RASESVEYFGTSLMH 171 AASNVES 172 QQTRKVPYT 173
hu11B6 KASESVEYFGTSLMH 174 AASNRES 175 QQTRKVPYT 173
HCF3-LCD6 KASESVEYFGTSLMH 174 AASNRES 175 QQTRKVPYT 173
HCG5-LCB7 KASESVEYFGTSLMH 174 AASNRES 175 QQTRKVPYT 173
KL2B357 rasesveyfgtslmh 171 aasnves 172 qqtrkvpyt 173
KL2B358 rasesveyfgtslmh 171 aasnves 172 qqtrkvpyt 173
KL2B359 rasesveyfgtslmh 171 aasnves 172 qqtrkvpyt 173
KL2B360 rasesveyfgtslmh 171 aasnves 172 qqtrkvpyt 173
KL2B413 rasqgissyls 176 atstlqs 177 qqlnsyprt 178
KL2B30 RASQGISSYLA 182 AASTLQS 183 QQLNSYPLT 184
KL2B53 RASQDISNYLA 179 AASTLHS 180 QKYNSAPYT 181
KL2B242 SGDQLGENYAC 185 QDSKRPS 186 QAWDNSIVV 187
KL2B467 GGDNIGSKSVH 720 DNSDRPS 192 QVWDSSSDHPVV 193
KL2B494 GGNNIGSKSVH 191 DDSDRPS 192 QVWDSSSDHVV 188
表20. 所選抗hK2 抗體之可變域的胺基酸序列
抗體 區域 胺基酸序列 SEQ ID NO:
m11B6 HCDR1 SDYAWN 149
HCDR2 YISYSGSTTYSPSLKS 150
HCDR3 GYYYGSGF 151
LCDR1 RASESVEYFGTSLMH 171
LCDR2 AASNVES 172
LCDR3 QQTRKVPYT 173
VH (m11B6_VH) DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGNSITSDYAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTTYSPSLKSRFSITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYFCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 126
VL (m11B6_VL) DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVEYFGTSLMHWYRQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPARFSGSGSGTDFSLNIQPVEEDDFSMYFCQQTRKVPYTFGGGTKLEIK 127
h11B6 HCDR1 SDYAWN 149
HCDR2 YISYSGSTTYNPSLKS 152
HCDR3 GYYYGSGF 151
LCDR1 KASESVEYFGTSLMH 174
LCDR2 AASNRES 175
LCDR3 QQTRKVPYT 173
VH (hu11B6_VH) QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 124
VL (hu11B6_VL) DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 125
HCF3-LCD6 HCDR1 SDYAWN 149
HCDR2 YISYSGSTTYNPSLKS 152
HCDR3 GYYYGSGF 151
LCDR1 KASESVEYFGTSLMH 174
LCDR2 AASNRES 175
LCDR3 QQTRKVPYT 173
VH (HCF3_VH) QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 128
VL (LCD6_VL) DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 129
HCG5-LCB7 HCDR1 SDYAWN 149
HCDR2 YISYSGSTTYNPSLKS 152
HCDR3 GYYYGSGF 151
LCDR1 KASESVEYFGTSLMH 174
LCDR2 AASNRES 175
LCDR3 QQTRKVPYT 173
VH (HCG5_VH) QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 130
VL (LCB7_VL) DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 131
KL2B357 HCDR1 SDYAWN 149
HCDR2 YISYSGSTTYNPSLKS 152
HCDR3 GYYYGSGF 151
LCDR1 RASESVEYFGTSLMH 171
LCDR2 AASNVES 172
LCDR3 QQTRKVPYT 173
VH (KL2B357_VH) QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 132
VL (KL2B_357_VL) DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK 133
KL2B358 HCDR1 SDYAWN 149
HCDR2 YISYSGSTTYNPSLKS 152
HCDR3 GYYYGSGF 151
LCDR1 RASESVEYFGTSLMH 171
LCDR2 AASNVES 172
LCDR3 QQTRKVPYT 173
VH (KL2B358_VH) QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 134
VL (KL2B_358_VL) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK 135
KL2B359 HCDR1 SDYAWN 149
HCDR2 YISYSGSTTYNPSLKS 152
HCDR3 GYYYGSGF 151
LCDR1 RASESVEYFGTSLMH 171
LCDR2 AASNVES 172
LCDR3 QQTRKVPYT 173
VH (KL2B359_VH) QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 136
VL (KL2B_359_VL) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK 135
KL2B360 HCDR1 sdyawn 149
HCDR2 yisysgsttynpslks 152
HCDR3 gyyygsgf 151
LCDR1 rasesveyfgtslmh 171
LCDR2 aasnves 172
LCDR3 qqtrkvpyt 173
VH (KL2B360_VH) QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 132
VL (KL2B_360_VL) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIK 135
KL2B413 HCDR1 SYWMT 153
HCDR2 NIKQDGSERYYVDSVKG 154
HCDR3 DQNYDILTGHYGMDV 155
LICDR1 RASQGISSYLS 176
LCDR2 ATSTLQS 177
LCDR3 QQLNSYPRT 178
VH (KL2B413_VH) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSS 137
VL (KL2B_413_VL) EIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIK 138
KL2B30 HCDR1 SYYWS 156
HCDR2 YIYYSGSTNYNPSLKS 157
HCDR3 TTIFGVVTPNFYYGMDV 158
LCDR1 RASQGISSYLA 182
LCDR2 AASTLQS 183
LCDR3 QQLNSYPLT 184
VH (KL2B30_VH) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSS 139
VL (KL2B30_VL) DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIK 140
KL2B53 HCDR1 SYDIH 159
HCDR2 IISYDGSKKDYTDSVKG 160
HCDR3 ESGWSHYYYYGMDV 161
LCDR1 RASQDISNYLA 179
LCDR2 AASTLHS 180
LCDR3 QKYNSAPYT 181
VH (KL2B53_VH) EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVED SAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSS 141
VL (KL2B53_VL) DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIK 142
KL2B242 HCDR1 SYYWS 162
HCDR2 RLYVSGFTNYNPSLKS 163
HCDR3 DSGNYWGWFDP 164
LCDR1 SGDQLGENYAC 185
LCDR2 QDSKRPS 186
LCDR3 QAWDNSIVV 187
VH (KL2B242_VH) QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSS 143
VL (KL2B242_VL) SYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVL 144
KL2B467 HCDR1 YYGMH 165
HCDR2 FISYDGSNKYYADSVKG 166
HCDR3 LPYSGSYWAFDY 167
LCDR1 GGDNIGSKSVH 191
LCDR2 DNSDRPS 721
LCDR3 QVWDSSSDHPVV 193
VH (KL2B467_VH) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSS 145
VL (KL2B467_VL) QSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTV 146
KL2B494 HCDR1 HYAMS 168
HCDR2 TIGGSGGSTYYADSVKG 169
HCDR3 PHIVMVTALLYDGMDV 170
LCDR1 GGNNIGSKSVH 191
LCDR2 DDSDRPS 192
LCDR3 QVWDSSSDHVV 188
VH (KL2B494_VH) QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSS 147
VL (KL2B494_VL) SSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL 148
表21. 所選hK2 抗體之VH 及VL 域的蛋白質及DNA 序列之SEQ ID NO 。
抗體 VH蛋白質SEQ ID NO: VL蛋白質SEQ ID NO VH cDNA SEQ ID NO: VL cDNA SEQ ID NO:
m11B6 126 127 225 237
hu11B6 124 125 226 238
HCF3-LCD6 128 129 227 239
HCG5-LCB7 130 131 228 240
KL2B357 132 133 229 241
KL2B358 134 135 230 242
KL2B359 139 135 231 242
KL2B360 132 135 229 242
KL2B413 137 138 230 243
KL2B30 139 140 231 244
KL2B53 141 142 234 245
KL2B242 143 144 361 246
KL2B467 145 146 362 247
KL2B494 147 148 235 236
SEQ ID NO:225 (m11B6 VH cDNA) GATGTGCAGCTTCAGGAGTCTGGACCCGGACTTGTTAAACCAAGTCAGTCTCTGTCCCTGACCTGTACCGTCACCGGCAACAGCATCACAAGCGATTACGCATGGAACTGGATCAGGCAGTTCCCTGGAAATCGACTCGAATGGATGGGCTACATTTCATACTCCGGTTCAACCACTTACTCTCCATCCTTGAAATCTAGGTTCAGCATCACCCGTGATACCTCAAAGAACCAATTTTTTCTGCAACTGAATAGCGTAACTCCAGAGGACACAGCCACATATTTCTGCGCCACTGGGTATTACTATGGCTCAGGTTTCTGGGGTCAGGGCACTCTCGTCACCGTCAGCAGCSEQ ID NO: 226 (hu11B6 VH cDNA) CAGGTCCAACTGCAAGAGAGCGGACCGGGCCTGGTAAAGCCATCCGACACATTGTCCCTGACGTGTGCGGTAAGTGGAAACTCTATCACTAGCGACTATGCGTGGAATTGGATAAGACAACCGCCGGGCAAGGGGCTGGAATGGATAGGATATATCAGCTATTCCGGTTCTACGACATACAATCCTTCCCTGAAAAGCAGAGTCACTATGTCACGCGACACGTCCAAGAATCAGTTCTCATTGAAATTGTCATCCGTAACGGCCGTTGACACTGCGGTTTATTATTGCGCAACCGGATATTACTACGGCTCTGGTTTTTGGGGACAGGGAACACTTGTTACTGTTAGTTCASEQ ID NO: 227 (HCF3-LCD6 VH cDNA) CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCAGGCCTGGTGAAGCCAAGCGACACCCTGAGCCTGACCTGCGCCGTGAGCGGCAACAGCATCACCAGCGACTACGCCTGGAACTGGATCCGCCAGTTCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTACATCAGCTACAGCGGCAGCACCACCTACAACCCAAGCCTGAAGAGCCGCGTCACCATCAGCCGCGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACCCCTGTGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCACCGGCTACTACTACGGCAGCGGCTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCSEQ ID NO: 228 (HCG5-LCB7 VH cDNA) CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCAGGCCTGGTGAAGCCAAGCGACACCCTGAGCCTGACCTGCGCCGTGAGCGGCAACAGCATCACCAGCGACTACGCCTGGAACTGGATCCGCCAGTTCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGATGGGCTACATCAGCTACAGCGGCAGCACCACCTACAACCCAAGCCTGAAGAGCCGCGTCACCATCAGCCGCGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACCCCTGTGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCACCGGCTACTACTACGGCAGCGGCTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCSEQ ID NO: 229 (KL2B357, KL2B360 VH cDNA) CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGACCAGGCCTGGTCAAGCCCTCTCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACCGTGTCCGGCAACTCCATCACCTCTGACTACGCCTGGAACTGGATTCGGCAGTTCCCTGGCAAGGGCCTTGAGTGGATCGGCTACATCTCCTACTCCGGTTCCACCACCTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGGTCACCATCTCCCGCGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCACCGGCTACTACTACGGCTCCGGCTTTTGGGGACAGGGCACACTGGTTACCGTGTCTAGTSEQ ID NO: 230 (KL2B358 VH cDNA) CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGACCAGGCCTGGTCAAGCCCTCTCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACCGTGTCCGGCAACTCCATCACCTCTGACTACGCCTGGAACTGGATTCGGCAGCCACCTGGCAAGGGCCTTGAGTGGATCGGCTACATCTCCTACTCCGGTTCCACCACCTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGGTCACCATCTCCCGCGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCACCGGCTACTACTACGGCTCCGGCTTTTGGGGACAGGGCACACTGGTTACCGTGTCTAGTSEQ ID NO: 231 (KL2B359 VH cDNA) CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGACCAGGCCTGGTCAAGCCCTCTCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACCGTGTCCGGCAACTCCATCACCTCTGACTACGCCTGGAACTGGATTCGGCAGTTCCCTGGCAAGCGCCTTGAGTGGATCGGCTACATCTCCTACTCCGGTTCCACCACCTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGGTCACCATCTCCCGCGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCACCGGCTACTACTACGGCTCCGGCTTTTGGGGACAGGGCACACTGGTTACCGTGTCTAGTSEQ ID NO: 232 (KL2B413 VH cDNA) GAGGTGCAACTTGTGGAGAGCGGCGGAGGTCTGGTCCAACCCGGAGGAAGTCTCCGTCTCTCCTGTGCTGCTAGTGGCTTCACTTTCAGCTCATATTGGATGACATGGGTGAGACAAGCCCCAGGAAAGGGGCTCGAGTGGGTAGCTAACATTAAACAGGACGGCTCCGAACGGTACTATGTTGATTCTGTGAAGGGACGGTTCACTATATCCAGGGATAATGCAAAAAATTCACTCTATCTTCAAATGAACTCACTCAGAGCAGAGGACACTGCCGTGTATTATTGCGCCAGGGATCAAAATTATGACATACTGACCGGTCATTATGGAATGGATGTTTGGGGCCAGGGAACAACCGTTACCGTCTCAAGTSEQ ID NO:233 (KL2B30 VH cDNA) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTATTGGAGCTGGCTCCGGCAGCCCGCCGGGTCGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTTTATATGTCAGTGGGTTCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCTTGTCACTAGACCCGTCCAGGAACCAGTTGTCCCTGAAACTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTATATTATTGTGCGGGAGATAGTGGGAACTACTGGGGTTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 234 (KL2B53 VH cDNA) GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTATGACATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATTTCATATGATGGAAGTAAAAAAGACTATACAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGGACAGCCTGAGAGTTGAGGACTCGGCTGTGTATTCCTGTGCGAGAGAAAGTGGCTGGTCCCACTACTACTATTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCASEQ ID NO: 361 (KL2B242 VH cDNA) CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTATTGGAGCTGGCTCCGGCAGCCCGCCGGGTCGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTTTATATGTCAGTGGGTTCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCTTGTCACTAGACCCGTCCAGGAACCAGTTGTCCCTGAAACTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTATATTATTGTGCGGGAGATAGTGGGAACTACTGGGGTTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 724 (KL2B467 VH cDNA) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTTACTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCATTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCCCACCTCCCTTATAGTGGGAGCTACTGGGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCAGGTCACCGTCTCTTCASEQ ID NO: 235 (KL2B494 VH cDNA) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTCATTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTGGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAACCTCATATTGTAATGGTGACTGCTCTTCTCTACGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 237 (m11B6 VL cDNA) GACATTGTGCTGACACAGAGTCCAGCATCCTTGGCAGTATCTTTGGGGCAGCGGGCAACAATTTCATGCCGTGCATCTGAAAGTGTGGAGTATTTTGGAACTTCTCTTATGCACTGGTATCGCCAGAAGCCTGGGCAGCCTCCCAAACTCCTTATATATGCCGCTTCCAACGTGGAGTCCGGAGTACCAGCACGCTTTTCCGGCTCTGGGTCCGGCACAGACTTTTCCCTCAATATCCAACCTGTTGAAGAAGACGATTTTTCCATGTATTTTTGCCAACAGACACGCAAGGTTCCATATACATTCGGCGGCGGCACTAAACTTGAGATCAAASEQ ID NO: 238 (hu11B6 VL cDNA) GACATAGTCTTGACTCAGAGCCCGGATTCCCTTGCTGTGTCTCTGGGAGAACGAGCTACGATCAACTGCAAGGCAAGTGAATCCGTAGAATACTTCGGGACATCATTGATGCATTGGTATCAACAGAAACCGGGGCAACCGCCCAAATTGCTGATATATGCGGCTAGTAATAGAGAATCAGGAGTACCGGATAGGTTTAGTGGTTCAGGATCAGGTACAGATTTCACCCTGACAATAAGTAGCTTGCAAGCCGAAGACGTAGCAGTGTATTACTGCCAACAAACCCGAAAGGTGCCATATACGTTTGGACAGGGTACAAAGTTGGAAATCAAASEQ ID NO: 239 (HCF3-LCD6 VL cDNA) GACATCGTGCTGACCCAGAGCCCAGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGCGCGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCGAGAGCGTGGAGTACTTCGGCACCAGCCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGCCACCAAAGCTGCTGATCTACGCTGCCAGCAACCGCGAGAGCGGCGTGCCAGACCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCCAGAGCGTGCAGGCCGAGGACGTCTCCGTGTACTTCTGCCAGCAGACCCGCAAGGTGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGSEQ ID NO: 240 (HCG5-LCB7 VL cDNA) GACATCGTGCTGACCCAGAGCCCAGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGCGCGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCGAGAGCGTGGAGTACTTCGGCACCAGCCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGCCACCAAAGCTGCTGATCTACGCTGCCAGCAACCGCGAGAGCGGCGTGCCAGACCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGGCCGAGGACGTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGACCCGCAAGGTGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGSEQ ID NO: 241 (KL2B357 VL cDNA) GACATCGTGCTGACCCAGTCTCCAGACTCTCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAGAGCCTCCGAGTCCGTGGAATACTTCGGCACCTCTCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCTCCAACGTGGAATCTGGCGTGCCCGATAGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCTCTCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTTCTGTCAGCAGACCCGGAAGGTGCCCTACACATTTGGCGGCGGAACAAAGGTGGAAATCAAGSEQ ID NO: 242 （ KL2B358 、 KL2B359 、 KL2B360 VL cDNA ） GAGATCGTGCTGACCCAGTCTCCTGCCACACTGTCACTGTCTCCAGGCGAGAGAGCCACCCTCTCTTGTAGAGCCTCCGAGTCCGTGGAATACTTCGGCACCTCTCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAGACTGCTGATCTACGCCGCCTCCAACGTCGAATCTGGCATCCCCGCTAGATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACCATCTCCTCCGTGGAACCCGAGGATTTCGCTGTGTACTTTTGCCAGCAGACCCGGAAGGTGCCCTACACATTTGGCGGCGGAACAAAGGTGGAAATCAAGSEQ ID NO: 243 (KL2B413 VL cDNA) GAAATCGTACTGACCCAGTCCCCTTCTTTCTTGAGTGCATCAGTTGGGGATAGAGTGACCATTACTTGTAGAGCATCTCAAGGTATTTCTTCATACTTGTCTTGGTATCAACAAAAACCTGGCAAGGCACCCAAACTCTTGATCTACGCCACCTCTACATTGCAAAGTGGGGTTCCTTCTAGGTTTTCAGGCTCCGGCTCTGGTACCGAGTTCACCCTCACTATAAGCAGTCTCCAACCTGAAGATTTCGCTACTTATTATTGTCAGCAGCTTAATTCTTATCCCCGAACCTTTGGTCAAGGAACTAAGGTCGAGATCAAASEQ ID NO: 244 (KL2B30 VL cDNA) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGGGCATTAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGCTTAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAASEQ ID NO: 245 (KL2B53 VL cDNA) GACATCGTGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGTTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCACTCTGGGGTCCCATCTCGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAAGTATAACAGTGCCCCGTACACTTTTGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAASEQ ID NO: 246 (KL2B242 VL cDNA) TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGAGAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATCAATTGGGGGAAAATTATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGTTGGTCATCTATCAAGATAGTAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTCTGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAACAGTATTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTASEQ ID NO: 247 (KL2B467 VL cDNA) CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCCGGGCAGACGGCCAGTATTACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATAATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGACCACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATCCTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTASEQ ID: 235 (KLK2B494_VH DNA) CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTCATTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTGGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAACCTCATATTGTAATGGTGACTGCTCTTCTCTACGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID: 236 (KLK2B494_VL DNA) TCTTCTGAGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA共有 VH 及 VL 序列
圖 5顯示mu11B6、hu11B6、KL2B357、KL2B358、KL2B359、KL2B360、HCF3、及HCG5之VH域的序列比對。圖 6顯示mu11B6、hu11B6、KL2B357、KL2B358、KL2B359、KL2B360、LDC6、及LCB7之VL域的序列比對。分別針對VH及VL域判定SEQ ID NO: 356及SEQ ID NO:357之共有胺基酸序列。將HCDR及LCDR殘基加底線。SEQ ID NO: 356 QVQLQESGPGLVKPSX1 TLSLTCX2 VSGNSITSDYAWN WIRQX3 PGKX4 LEWX5 GYISYSGSTT YNPSLKSRVTX6 SRDTSKNQFSLKLSSVTX7 X8 DTAVYYCATGYYYGSGF WGQGTLVTVSS 其中，X1 係D或Q；X2 係A或T；X3 係P或F；X4 係G或R；X5 係I或M；X6 係I或M；X7 係A或P；或X8 係V或A。SEQ ID NO: 357 X1 IVLTQSPX2 X3 LX4 X5 SX6 GERATX7 X8 CX9 ASESVEYFGTSLMH WYQQKPGQPPX10 LLIYAASNX11 ES GX12 PX13 RFSGSGSGTDFTLTIX14 SX15 X16 QX17 EDX18 X19 VYX20 CQQTRKVPYT FGX21 GTKX22 EIK 其中，X1 係D或E；X2 係D或A；X3 係S或T；X4 係A或S；X5 係V或L；X6 係L或P；X7 係I或L；X8 係N或S；X9 係R或K；X10 係K或R；X11 係V或R；X12 係V或I；X13 係A或D；X14 係Q或S；X15 係L或V；X16 係Q或E；X17 係P或A；X18 係F或V；X19 係A或S，X20 係Y或F；X21 係Q或G；且X22 係L或V。Fab-Fc 及scFv
將hK2特異性VH/VL區工程改造為VH-CH1-連接子CH2-CH3及VL-CL且表現為IgG2或IgG4或工程改造為呈VH-連接子-VL或VL-連接子-VH定向之scFv。用於scFv之連接子係如上述之SEQ ID NO: 31 之連接子。使用scFv產生如實例3所述之雙特異性抗體。
表22 顯示呈mAb格式之所選抗hK2抗體的HC胺基酸序列。表 23 顯示呈mAb之所選抗hK2抗體的LC胺基酸序列。表 24 彙總呈mAb格式之所選抗hK2抗體的HC及LC DNA SEQ ID NO。表 25 顯示所選呈VH-連接子-VL或VL-連接子-VH定向之scFv之胺基酸序列。表22. 所選呈mAb 格式之抗hK2 抗體之HC （VH-CH1- 連接子CH2-CH3 ）之胺基酸序列。
KLK2 重鏈 HC蛋白質SEQ ID NO: HC胺基酸序列
m11B6_HC 207 DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGNSITSDYAWNWIRQFPGNRLEWMGYISYSGSTTYSPSLKSRFSITRDTSKNQFFLQLNSVTPEDTATYFCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
h11B6_HC 208 QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
KL2B30_HC 210 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
K2B53_HC 211 EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
KL2B242_HC 212 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
KL2B467_HC 213 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
Kl2B494_HC 219 QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
表23. 所選呈mAb (Fab-Fc) 格式之抗hK2 抗體之LC (VL-CL) 之胺基酸序列。
KLK2輕鏈 LC蛋白質SEQ ID NO: LC胺基酸序列
m11B6_LC 214 DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVEYFGTSLMHWYRQKPGQPPKLLIYAASNVESGVPARFSGSGSGTDFSLNIQPVEEDDFSMYFCQQTRKVPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
h11B6_LC 215 DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
KL2B30_LC 221 DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
KL2B53_LC 222 DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
KL2B242_LC 223 SYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
KL2B467_LC 224 QSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
KL2b494_LC 220 SSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
表24. 所選hK2 抗體之HC 及LC 的cDNA 序列之SEQ ID No
抗體 HC蛋白質SEQ ID NO: LC蛋白質SEQ ID NO: HC cDNA SEQ ID NO: LC cDNA SEQ ID NO:
m11B6 207 214 248 255
hu11B6 208 215 249 256
KL2B30 210 221 250 257
KL2B53 211 222 251 258
KL2B242 212 223 252 259
KL2B467 213 224 253 260
KL2B494 219 220 254 261
SEQ ID NO: 248 (m11B6 HC cDNA) GATGTGCAGCTTCAGGAGTCTGGACCCGGACTTGTTAAACCAAGTCAGTCTCTGTCCCTGACCTGTACCGTCACCGGCAACAGCATCACAAGCGATTACGCATGGAACTGGATCAGGCAGTTCCCTGGAAATCGACTCGAATGGATGGGCTACATTTCATACTCCGGTTCAACCACTTACTCTCCATCCTTGAAATCTAGGTTCAGCATCACCCGTGATACCTCAAAGAACCAATTTTTTCTGCAACTGAATAGCGTAACTCCAGAGGACACAGCCACATATTTCTGCGCCACTGGGTATTACTATGGCTCAGGTTTCTGGGGTCAGGGCACTCTCGTCACCGTCAGCAGCGCCAAAACAACAGCACCAAGTGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGATACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCTCGAGCACCTGGCCCAGCCAGTCCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGGGCCCACAATCAAGCCCTGTCCTCCATGCAAATGCCCAGCACCTAACCTCTTGGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGATCAAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCATAGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAGATGTCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAACAGTACTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAAAGACCTCCCAGCGCCCATCGAGAGAACCATCTCAAAACCCAAAGGGTCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGAAGAAGAGATGACTAAGAAACAGGTCACTCTGACCTGCATGGTCACCGACTTCATGCCTGAAGACATTTACGTGGAGTGGACCAACAACGGGAAAACAGAGCTAAACTACAAGAACACTGAACCAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTGAGAGTGGAAAAGAAGAACTGGGTGGAAAGAAATAGCTACTCCTGTTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCACACGACTAAGAGCTTCTCCCGGACTCCGGGTAAASEQ ID NO: 249 (hu11B6 HC cDNA) 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ID NO: 254 (KL2B494 HC cDNA) 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ID NO: 255 (mu11B6 LC cDNA) GACATTGTGCTGACACAGAGTCCAGCATCCTTGGCAGTATCTTTGGGGCAGCGGGCAACAATTTCATGCCGTGCATCTGAAAGTGTGGAGTATTTTGGAACTTCTCTTATGCACTGGTATCGCCAGAAGCCTGGGCAGCCTCCCAAACTCCTTATATATGCCGCTTCCAACGTGGAGTCCGGAGTACCAGCACGCTTTTCCGGCTCTGGGTCCGGCACAGACTTTTCCCTCAATATCCAACCTGTTGAAGAAGACGATTTTTCCATGTATTTTTGCCAACAGACACGCAAGGTTCCATATACATTCGGCGGCGGCACTAAACTTGAGATCAAACGGGCTGATGCTGCACCGACTGTGTCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGTSEQ ID NO: 256 (hu11B6 LC cDNA) 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GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGGGCATTAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGCTTAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTSEQ ID NO: 258 (KL2B53 LC cDNA) 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TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGAGAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATCAATTGGGGGAAAATTATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGTTGGTCATCTATCAAGATAGTAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTCTGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAACAGTATTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCASEQ ID NO: 260 (KL2B467 LC cDNA) 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TCTTCTGAGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA表 25. 所選呈 VH- 連接子 -VL (HL) 或呈 VL- 連接子 -VH (LH) 格式之抗 hK2 scFv 抗體之可變域之胺基酸序列。
scFv名稱 頭字語 scFv之胺基酸序列 SEQ ID NO:
scFv1 HCG5_LDC6_HL QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 262
scFv2 HCG5_hu11B6_HL QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 263
scFv3 HCF3_hu11B6_HL QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 264
scFv4 HCG5_LCB7_HL QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 265
scFv5 LCD6_HCG5_LH DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 266
scFv6 hu11B6_HCF3_LH DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 267
scFv7 hu11B6_HCG5_LH DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 268
scFv8 LCB7_HCF3_LH DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 269
scFv9 LCB7_HCG5_LH DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 270
scFv10 LCD6_HCF3_LH DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 271
scFv11 hu11B6_LCB7_HL QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 272
scFv12 hu11B6_LCD6_HL QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 273
scFv13 hu11B6_HL QVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK 274
scFv14 LCD6_hu11B6_LH DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 275
scFv15 hu11B6_LH DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 276
scFv16 LCB7_hu11B6_LH DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 277
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scFv18 KL2B413_LH eivltqspsflsasvgdrvtitcrasqgissylswyqqkpgkapklliyatstlqsgvpsrfsgsgsgteftltisslqpedfatyycqqlnsyprtfgqgtkveikggsegkssgsgseskstggsevqlvesggglvqpggslrlscaasgftfssywmtwvrqapgkglewvanikqdgseryyvdsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycardqnydiltghygmdvwgqgttvtvss 279
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scFv20 KL2B359_LH eivltqspatlslspgeratlscrasesveyfgtslmhwyqqkpgqpprlliyaasnvesgiparfsgsgsgtdftltissvepedfavyfcqqtrkvpytfgggtkveikggsegkssgsgseskstggsqvqlqesgpglvkpsqtlsltctvsgnsitsdyawnwirqfpgkrlewigyisysgsttynpslksrvtisrdtsknqfslklssvtaadtavyycatgyyygsgfwgqgtlvtvss 281
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scFv26 KL2B360_LH EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKggsegkssgsgseskstggsQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS 287
scFv27 KL2B467_HL QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSSggsegkssgsgseskstggsQSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTV 288
scFv28 KL2B467_LH QSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTVggsegkssgsgseskstggsQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSS 289
scFv39 KL2B494_HL QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSS GGSEGKSSGSGSESKSTGGSSSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL 290
scFv40 KL2B494_LH SSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSS 291
scFv41 KL2B30_HL QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIK 365
scFv42 KL2B30_LH DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSS 366
scFv43 KL2B53_HL EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIK 367
scFv44 KL2B53_LH DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSS 368
scFv45 KL2B242_HL QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSSYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVL 369
scFv46 KL2B242_LH SYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSS 370
抗hK2 抗體之生物物理表徵 抗hK2 抗體之親和力及熱穩定性
所選hK2抗體針對可溶性hK2之親和力係藉由表面電漿共振(SPR)來測量。SPR係一種無標示技術，其藉由在複合物形成及解離時測量質量變化來研究二個結合伴之間的交互作用強度。抗體被捕捉在包覆抗Fc抗體之感測器晶片上，隨後注射各種濃度之可溶性hK2並指明締合及解離時間。解離後，用適當溶液再生表面以製備用於下一交互作用。藉由擬合感測曲線圖至1:1 Langmuir模型來擷取動力學資訊（締合速率及解離速率常數）。結合親和力(KD )係報導為速率常數之比率(koff /kon )。所選hK2抗體之KD 值係列於表 26 。
使用自動化Prometheus儀器，藉由微差掃描螢光測定法(NanoDSF)判定熱穩定性。NanoDSF係用於測量在磷酸鹽緩衝鹽水(pH 7.4)中濃度0.5 mg/mL之分子的Tm 。將樣本自384孔樣本盤裝載至24孔毛細管中，以進行測量。針對各樣本執行二重複運行。熱掃描以1.0℃/分鐘的速率自20℃跨至95℃。監測在發射波長330 nm及350 nm下內在色胺酸及酪胺酸之螢光，並將F350/F330 nm比率對溫度作圖以產製去折疊曲線。所測得之Tm值係列於表 26 中。表26. 所選分子之KD 及Tm
分子 KD (nM) Tm (℃)
KL2B413 (scFv-LH-Fc) 34.3 67
KL2B359 (scFv-LH-Fc) 0.7至1 67
KL2B30 (Fab) 0.460 ＞70
KL2B242 (Fab) 0.040 ＞70
KL2B53 (Fab) 0.080 ＞70
KL2B467 (Fab) 0.078 ＞70
KL2B494 (Fab) 0.053 ＞70
自Ablexis免疫活動產製之KL2B413 scFv具有藉由Nano DSF所測量之67℃之熱穩定性(Tm)且對人類hK2之結合親和力(KD )為約34 nM。將針對再人源化活動所獲得且已維持類似於鼠類11B6之結合親和力的殖株KL2B359轉化成scFv-Fc及CAR-T以進行額外剖析。KL2B359 scFv顯示67℃之Tm及約0.7至1nM之對hK2之結合親和力(KD )。KL2B30、KL2B242、KL2B53、KL2B467、及KL2B494 Fab顯示低於0.5 nM之結合親和力及高於70℃之Tm值。表位及互補位定位
藉由氫氘交換質譜法(HDX-MS)判定所選抗hK2抗體之表位及互補位。使用人類KLK2抗原進行表位及互補位定位實驗。
簡言之，將經純化的KLK2抗原在有及無抗hK2抗體下於氧化氘標示緩衝劑中培養。在不同時間點藉由添加8 M尿素、1M TCEP pH 3.0淬熄氫氘交換(HDX)混合物。使淬熄樣本在室溫下以600 µL/min通過固定胃蛋白酶/FPXIII管柱（以緩衝劑A（1%乙腈、0.1% FA於H2O中）平衡）。將肽片段用緩衝劑A以600 µL/min裝載至逆相trap管柱上並去鹽1 min（600 µL緩衝劑A）。去鹽片段係藉由C18管柱以8%至35%緩衝劑B之線性梯度（95%乙腈、5% H2O、0.0025% TFA）以100 µL/min在20 min內分離並藉由質譜法分析。使用LTQ™ Orbitrap Fusion Lumos質譜儀(Thermo Fisher Scientific)，進行質譜分析，其具有毛細管溫度275℃，解析度150,000，及質量範圍(m/z) 300至1,800。在HDX實驗之前，使用BioPharma Finder 3.0 (Thermo Fisher Scientific)來進行非氘化樣本的肽識別。為了HDX實驗，使用HDExaminer第2.5版(Sierra Analytics, Modesto, CA)，以自MS原始數據檔案擷取質心值。
hK2抗體hu11B6、KL2B494、KL2B467、KL2B30、KL2B413、及KL2B53與可溶hK2蛋白之培養會導致不同之氫交換及整體保護模式。將受保護區段定位至hK2抗原之序列上以視覺化結合表位（圖 7 ）。KL2B494、KL2B467、及KL2B30結合至下列共同序列：(i)殘基173至178 (SEQ ID NO: 209, KVTEF)（例如，KL2B494、KL2B467、及KL2B30結合SEQ ID NO: 209之殘基中至少三者，即在173至175處之KVT殘基）及(ii)殘基230至234 (SEQ ID NO: 216, HYRKW)（例如，KL2B494、KL2B467、及KL2B30結合SEQ ID NO: 216之殘基中至少三者，即在230至232處之HYR殘基）。如圖 7所示，KL2B413亦結合SEQ ID NO: 209之所有殘基及SEQ ID NO: 216之KW殘基。本發明之一實施例提供一種經單離蛋白，其包含結合hK2之抗原結合域，其中該抗原結合域在具有SEQ ID NO: 209及SEQ ID NO: 216之序列的表位內結合至hK2；例如，該抗原結合域結合至SEQ ID NO: 209之所有殘基、或至少四個殘基、或至少三個殘基，且結合至SEQ ID NO: 216之所有殘基、或至少四個殘基、或至少三個殘基。
KL2B53顯示不同之保護模式，並結合至由殘基27至32 (Seq ID NO: 217, SHGWAH)、60至75 (SEQ ID NO: 218, RHNLFEPEDTGQRVP)、及138至147 (SEQ ID NO: 292, GWGSIEPEE)所組成之序列。
根據一實施例，經單離之抗hK2/抗CD3蛋白質（例如，hu11B6、KL2B494、KL2B467、KL2B30、KL2B413、或KL2B53）包含hk2特異性抗原結合域，該域特異性結合至hK2之不連續性表位（即，表位的殘基在序列中距離遙遠），hK2包含一或多個選自由SEQ ID NO: 209、216、217、218、及292所組成之群組的胺基酸序列。
抗hK2抗體hu11B6、KL2B494、KL2B467、KL2B413、及抗hK2/CD3雙特異性抗體KLCB113及KLCB80之互補位係基於HDExaminer殘基圖中氘攝取之顯著差異識別。KL2BB494包含三個互補位區，其中二個位於KL2B494重鏈可變域中（GFTFSH (SEQ ID NO: 729)及TAVYYCAKPHIVMVTAL (SEQ ID NO: 730)），且一個互補位區位於輕鏈可變域內(YDDSDRPS GIPER (SEQ ID NO: 731))。KL2B467包含三個互補位區，其中二個位於KL2B467重鏈可變域中（FTFSY (SEQ ID NO: 732)及GSYWAFDY (SEQ ID NO: 733)），且一個互補位區在輕鏈可變域內(DNSD (SEQ ID NO: 734))。Hu11B6包含位於重鏈中之單一表位區(GNSITSDYA (SEQ ID NO: 735))。KL2B413包含位於重鏈可變域中之二個互補位區（GFTF (SEQ ID NO: 736)及ARDQNYDIL (SEQ ID NO: 737)）。雙特異性KLCB80之KL2B30包含一個位於重鏈（包含胺基酸殘基TIF及VTPNF (SEQ ID NO: 738)）中之互補位區及一個位於輕鏈(YAASTLQSG (SEQ ID NO: 739))中之互補位區。雙特異性KLCB113之KL2B53包含位於重鏈中之單一互補位區（包含胺基酸殘基ESGWSHY (SEQ ID NO: 740)）。圖 11 （圖11A 至圖11F ） 顯示這些抗hK2抗體及抗hK2/CD3雙特異性抗體之結合互補位（加底線序列指示CDR區且強調序列指示結合互補位區）。實例3. 雙特異性抗hK2 × 抗CD3 抗體之產生
實例2所產生之抗hK2抗體的VH/VL區及實例1所產生之抗CD3抗體的VH/VL區係經工程改造為雙特異性格式且表現為IgG1。工程改造CD3 scFv 以用於hK2/CD3 雙特異性分子之產生
使用SEQ ID NO: 31之連接子將CD3 VH/VL區工程改造為呈VH-連接子-VL或VL-連接子-VH定向之scFv（表27 ） 。將結合CD3之VH-連接子-VL或VL-連接子-VH scFv分子進一步工程改造為scFv-鉸鏈-CH2-CH3（亦稱為scFv-Fc）格式，其包含Fc靜默突變(L234A/L235A/D265S)及設計用來促進選擇性異二聚化之T350V/L351Y/F405A/Y407V突變（表 28 ）。SEQ ID NO: 293之多肽係用來作為恆定域鉸鏈-CH2-CH3。結合CD3之scFv-鉸鏈-CH2-CH3蛋白質係經工程改造為CH3域具有或缺乏C端離胺酸（表 28 ）。呈scFv格式及scFv-鉸鏈-CH2-CH3格式之抗CD3分子的DNA序列係顯示於表 29 。SEQ ID NO: 293 （huIgG1_G1m(17)- 鉸鏈-Fc_C220S_AAS_ZWA ） EPKSSDKTHTCPPCPAPEA AGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVS VSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVY PPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFA LV SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG表27. CD3 特異性scFv 序列。
頭字語 胺基酸序列 SEQ ID NO:
CD3W244_HL EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIK 65
CD3W244_LH DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSS 66
CD3W245_ HL EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIK 67
CD3W245_ LH DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSS 68
CD3W246_ HL EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIK 69
CD3W246_ LH DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSS 70
CD3W247_ HL EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIK 71
CD3W247_LH DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSS 72
CD3W248_HL EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDILLTQSPGILSVSPGERVSFSCRARQSIGTAIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVESEDIADYYCQQSGSWPYTFGGGTKLEIK 73
CD3W248_ LH DILLTQSPGILSVSPGERVSFSCRARQSIGTAIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVESEDIADYYCQQSGSWPYTFGGGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSS 74
表28. CD3 特異性scFv-Fc （scFv- 鉸鏈CH2-CH3 ）臂。
頭字語 胺基酸序列 （顯示C端離胺酸(K)） SEQ ID NO:（具有C端離胺酸） SEQ ID NO:（不具有C端離胺酸）
CD3W244_HL-Fc EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 75 747
CD3W244_LH-Fc DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 76 748
CD3W245_ HL-Fc EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 717 77
CD3W245_ LH-Fc DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 718 78
CD3W246_ HL-Fc EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 79 749
CD3W246_ LH-Fc DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 80 750
CD3W247_ HL-Fc EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 81 751
CD3W247_LH-Fc DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 82 752
CD3W248_HL-Fc EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDILLTQSPGILSVSPGERVSFSCRARQSIGTAIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVESEDIADYYCQQSGSWPYTFGGGTKLEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 83 753
CD3W248_ LH-Fc DILLTQSPGILSVSPGERVSFSCRARQSIGTAIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVESEDIADYYCQQSGSWPYTFGGGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 84 754
表29. 抗CD3 scFv 及scFv- 鉸鏈-CH2-CH3 (scFv-Fc) 之DNA SEQ ID NO
  scFv DNA SEQ ID NO scFv-Fc DNA SEQ ID NO
CD3W244_HL 294 304
CD3W244_LH 295 305
CD3W245_HL 296 306
CD3W245_LH 297 307
CD3W246_HL 298 308
CD3W246_LH 299 309
CD3W247_HL 300 310
CD3W247_LH 301 311
CD3W248_HL 302 312
CD3W248_LH 303 313
SEQ ID NO: 294 (CD3W244_HL) GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGSEQ ID NO: 295 (CD3W244_LH) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCSEQ ID NO: 296 (CD3W245_HL) GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGSEQ ID NO: 297 (CD3W245_LH) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCSEQ ID NO: 298 (CD3W246_HL) GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGSEQ ID NO: 299 (CD3W246_LH) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCSEQ ID NO: 300 (CD3W247_HL) GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGSEQ ID NO: 301 (CD3W247_LH) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCSEQ ID NO: 302 (CD3W248_HL) GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCTTGCTGACTCAGTCTCCAGGCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCAGTTTCTCCTGCAGGGCCAGACAGAGCATTGGCACAGCCATACACTGGTATCAGCAAAGAACAAATGGTTCTCCAAGGCTTCTCATAAAGTATGCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCTTCCAGGTTTAGCGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAACAGTGTGGAGTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAGTGGGAGCTGGCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAASEQ ID NO: 303 (CD3W248_LH) GACATCTTGCTGACTCAGTCTCCAGGCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCAGTTTCTCCTGCAGGGCCAGACAGAGCATTGGCACAGCCATACACTGGTATCAGCAAAGAACAAATGGTTCTCCAAGGCTTCTCATAAAGTATGCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCTTCCAGGTTTAGCGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAACAGTGTGGAGTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAGTGGGAGCTGGCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCASEQ ID NO: 304 (CD3W244_HL-scFv-Fc) GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAASEQ ID NO: 305 (CD3W244_LH-scFv-Fc) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAASEQ ID NO: 306 (CD3W245_HL-scFv-Fc) GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAASEQ ID NO: 307 (CD3W245_LH-scFv-Fc) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAASEQ ID NO: 308 (CD3W246_HL-scFv-Fc) GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAASEQ ID NO: 309 (CD3W246_LH-scFv-Fc) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAASEQ ID NO: 310 (CD3W247_HL-scFv-Fc) GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAASEQ ID NO: 311 (CD3W247_LH-scFv-Fc) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAASEQ ID NO: 312 (CD3W248_HL-scFv-Fc) GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCTTGCTGACTCAGTCTCCAGGCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCAGTTTCTCCTGCAGGGCCAGACAGAGCATTGGCACAGCCATACACTGGTATCAGCAAAGAACAAATGGTTCTCCAAGGCTTCTCATAAAGTATGCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCTTCCAGGTTTAGCGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAACAGTGTGGAGTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAGTGGGAGCTGGCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAASEQ ID NO: 313 (CD3W248_LH-scFv-Fc) GACATCTTGCTGACTCAGTCTCCAGGCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCAGTTTCTCCTGCAGGGCCAGACAGAGCATTGGCACAGCCATACACTGGTATCAGCAAAGAACAAATGGTTCTCCAAGGCTTCTCATAAAGTATGCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCTTCCAGGTTTAGCGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAACAGTGTGGAGTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAGTGGGAGCTGGCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA工程改造CD3 Fab 以用於hK2/CD3 雙特異性分子之產生
將CD3特異性VH及VL區分別工程改造為VH-CH1-連接子-CH2-CH3及VL-CL格式且表現為IgG1。使用SEQ ID NO: 314 之多肽（包含Fc靜默突變L234A/L235A/D265S及設計用來促進選擇性異二聚化之CH3突變T350V/L351Y/F405A/Y407V）來產生CD3特異性VH-CH1-連接子-CH2-CH3（表 30 ）。VH-CH1-連接子-CH2-CH3重鏈係經工程改造為CH3域具有或缺乏C端離胺酸。缺乏C端離胺酸之VH-CH1-連接子-CH2-CH3重鏈係顯示於SEQ ID NO: 85。SEQ ID NO: 314 (huIgG1_G1m(17)_AAS_ZWA) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 使用SEQ ID NO: 363或364之多肽來產生CD3特異性VL-CL（表 31 ）SEQ ID NO: 363 （ 人類 κ輕鏈 ） RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQ ID NO: 364 （人類 λ輕鏈） GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
抗CD3分子中作為呈VH-CH1-連接子-CH2-CH3格式之HC及呈VL-CL格式之LC的DNA序列係顯示於表 32 。表30. 雙特異性抗體之抗CD3 抗體臂VH-CH1- 連接子-CH2-CH3 的胺基酸序列。
HC蛋白質 SEQ ID NO: HC胺基酸序列
CD3W244 HC、CD3W245 HC、CD3W246 HC、CD3W247 HC、CD3W248 HC、 719 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
CD3B376 HC 349 QVQLQQSGPRLVRPSQTLSLTCAISGDSVFNNNAAWSWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWLYDYAVSVKSRITVNPDTSRNQFTLQLNSVTPEDTALYYCARGYSSSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
表31. 雙特異性抗體之抗CD3 抗體輕鏈臂(VL-CL) 的胺基酸序列
LC蛋白質 SEQ ID NO: LC胺基酸序列
CD3W244 LC 86 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
CD3W245 LC 88 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
CD3W246 LC 90 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
CD3W247 LC 92 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIYYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
CD3W248 LC 94 DILLTQSPGILSVSPGERVSFSCRARQSIGTAIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLTINSVESEDIADYYCQQSGSWPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
CD3B376 LC 350 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSNIGTYKFVSWYQQHPDKAPKVLLYEVSKRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDQADYHCVSYAGSGTLLFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
表32. 雙特異性抗體之抗CD3 臂HC （呈VH-CH1- 連接子-CH2-CH3 格式）及LC （呈VL-CL 格式）之cDNA SEQ ID NO 。
抗體 HC cDNA SEQ ID NO: LC cDNA SEQ ID NO:
CD3W244 315 316
CD3W245 315 317
CD3W246 315 318
CD3W247 315 319
CD3W248 315 320
CD3B376 351 352
SEQ ID NO: 315 （CD3W244 、CDRW245 、CD3W246 、CD3W247 、CD3W248 HC cDNA ） GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAASEQ ID NO: 316 (CD3W244 LC cDNA) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTSEQ ID NO: 317 (CD3W245 LC cDNA) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTSEQ ID NO: 318 (CD3W246 LC cDNA) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTSEQ ID NO: 319 (CD3W247 LC cDNA) GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTSEQ ID NO: 320 (CD3W248 LC cDNA) GACATCTTGCTGACTCAGTCTCCAGGCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCAGTTTCTCCTGCAGGGCCAGACAGAGCATTGGCACAGCCATACACTGGTATCAGCAAAGAACAAATGGTTCTCCAAGGCTTCTCATAAAGTATGCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCTTCCAGGTTTAGCGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAACAGTGTGGAGTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAGTGGGAGCTGGCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTSEQ ID NO: 351 (CD3B376 HC) CAGGTGCAGCTCCAACAGAGTGGTCCCAGACTCGTGAGACCCTCTCAAACACTCAGTTTGACTTGTGCCATCTCAGGCGATTCAGTTTTCAACAACAATGCAGCTTGGAGCTGGATTAGGCAGTCACCTAGTCGCGGTCTTGAATGGCTTGGGCGTACATACTATCGCTCTAAATGGTTGTATGATTACGCTGTGTCCGTGAAGAGCCGAATCACCGTAAACCCTGATACCTCCAGGAATCAGTTCACATTGCAACTGAATAGTGTGACTCCCGAGGATACTGCACTCTATTATTGTGCCCGAGGATATAGCAGTAGCTTCGACTATTGGGGACAAGGGACACTCGTTACCGTTAGTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTSEQ ID NO: 352 (CD3B376 LC) CAGTCTGCTCTGACCCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGCTCTCCCGGCCAGTCCATCACCATCAGCTGTACCGGCACCTCCTCCAACATCGGCACCTACAAGTTCGTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCCGACAAGGCCCCCAAAGTGCTGCTGTACGAGGTGTCCAAGCGGCCCTCTGGCGTGTCCTCCAGATTCTCCGGCTCCAAGTCTGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCAGCGGACTGCAGGCTGAGGACCAGGCCGACTACCACTGTGTGTCCTACGCTGGCTCTGGCACCCTGCTGTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGACCGTGCTGGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA工程改造hK2 scFv-Fc 以用於hK2/CD3 雙特異性分子之產生
使用SEQ ID NO: 31之連接子（表 2 ）將hK2 VH/VL區工程改造為呈VH-連接子-VL或VL-連接子-VH定向之scFv（如實例2所述），該scFv係經進一步工程改造為scFv-鉸鏈-CH2-CH3格式，其包含Fc靜默突變(L234A/L235A/D265S)及設計用來促進選擇性異二聚化之T350V/T366L/K392L/T394W突變且表現為IgG1（表 33 ）。SEQ ID NO: 321 之多肽係用來作為恆定域鉸鏈-CH2-CH3 (Fc)。SEQ ID NO: 321 （huIgG1_G1m(17)- 鉸鏈-Fc_C220S_AAS_ZWB ） EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG表33. 用於產生hK2/CD3 雙特異性分子之抗hK2 scFv-Fc 之胺基酸序列
蛋白質 SEQ ID NO: 胺基酸序列
KL2B359-LH-scFv-Fc 322 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B413-LH-scFv-Fc 323 EIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B467-LH-scFv-Fc 324 QSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B494-LH-scFv-Fc 325 SSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
工程改造hK2 Fab-Fc 以用於hK2/CD3 雙特異性分子之產生
將hK2特異性VH及VL區分別工程改造為VH-CH1-連接子-CH2-CH3及VL-CL格式。使用SEQ ID NO: 326 之多肽（包含Fc靜默突變L234A/L235A/D265S及設計用來促進選擇性異二聚化之CH3突變T350V/T366L/K392L/T394W）來產生CD3特異性VH-CH1-連接子-CH2-CH3。SEQ ID NO: 326 (huIgG1_G1m(17)_AAS_ZWB) ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
使用SEQ ID NO: 363或364之多肽來產生hK2特異性VL-CL。SEQ ID NO: 363 （ 人類κ 輕鏈 ） RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQ ID NO: 364 （ 人類λ 輕鏈 ） GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
表 34 顯示hK2 Fab-Fc HC之胺基酸序列。表34. 用於產生hK2/CD3 雙特異性分子之抗hK2 Fab-Fc 之胺基酸序列
蛋白質 SEQ ID NO: 胺基酸序列
KL2B30 Fab HC 327 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B242 Fab HC 328 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B53 Fab HC 329 EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B30 Fab w/K477 330 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
hK2/CD3 雙特異性分子
表現如上述經工程改造為Fab之CD3W245及CD3B376抗CD3特異性臂及經工程改造為scFv（呈HL及LH兩種定向）之KL2B359、KL2B413、KL2B467、及KL2B494之hK2 VH/VL區以產生雙特異性抗體，所得之hK2/CD3雙特異性抗體具有呈scFv-鉸鏈-CH2-CH3格式之hK2結合臂及呈重鏈：VH-CH1-連接子-CH2-CH3及輕鏈：VL-CL格式之CD3結合臂。替代地，表現如上述經工程改造為呈LH-連接子-VH定向之scFv的抗CD3抗體CD3W245之VH/VL區及經工程改造為Fab之抗hK2抗體KL2B30、KL2B242、及KL2B53之VH/VL區以產生雙特異性抗體，所得之hK2/CD3雙特異性抗體具有呈重鏈VH-CH1-連接子-CH2-CH3及輕鏈VL-CL格式之hK2結合臂及呈scFv-鉸鏈-CH2-CH3格式之CD3結合臂。用於產生抗scFv之連接子係SEQ ID NO: 31 之連接子。
如上述，T350V_L351Y_F405A_Y407V CH3突變係經工程改造至一個重鏈中，且T350V_T366L_K392L_T394W CH3突變係經工程改造至另一個重鏈中。此外，HK2及CD3結合臂兩者皆經工程改造以含有如上述之Fc效應物靜默突變L234A_L235A_D265S。
表現經工程改造之鏈，並使用標準方法純化所得之雙特異性抗體。雙特異性抗體之特徵在於彼等與hK2及CD3之結合及彼等之細胞毒性（如實例5所述）。表 35 顯示所選抗hKL2/CD3雙特異性抗體之CDR SEQ ID NO。表 36 顯示所選抗hKL2/CD3雙特異性抗體之VH、VL、及scFv SEQ ID NO。表 37 顯示所選抗hKL2/CD3雙特異性抗體之HC1、HC2、LC1、及LC2 SEQ ID NO。HC1及LC1係指hKL2結合臂之重鏈及輕鏈。替代地，HC1亦可指hKl2結合臂之scFv-鉸鏈-CH2-CH3。HC2及LC2係指CD3結合臂之重鏈及輕鏈。替代地，HC2亦可指CD3結合臂之scFv-鉸鏈-CH2-CH3。表 38 顯示HC1、LC1、HC2、及LC2之胺基酸序列。表 39 顯示HC1、LC1、HC2、及LC2之cDNA序列。表35. 雙特異性hK2/CD3 抗體之Kabat CDR SEQ ID NO
雙特異性抗體 親本（hK2臂/CD3臂） HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCDR1 LCDR2 LCDR3
KLCB91 KL2B359-LH-scFv 149 152 151 171 172 173
CD3W245 Fab 6 7 8 9 10 11
KLCB105 KL2B359-LH-scFv 149 152 151 171 172 173
CD3B376 Fab 340 341 342 343 344 345
KLCB95 KL2B413-LHscFv 153 154 155 176 177 178
CD3W245 Fab 6 7 8 9 10 11
KLCB96 KL2B413-LH-scFv 153 154 155 176 177 178
CD3B376 Fab 340 341 342 343 344 345
KLCB170 KL2B467-LH-scFv 165 166 167 191 192 193
CD3W245 Fab 6 7 8 9 10 11
KLCB80 KL2B30 Fab 156 157 158 182 183 184
CD3W245-LH-scFv 6 7 8 9 10 11
KLCB81 KL2B242 LC_C33S Fab 162 163 164 185 186 187
CD3W245-LH-scFv 6 7 8 9 10 11
KLCB113 KL2B53 Fab 159 160 161 179 180 181
CD3W245-LH-scFv 6 7 8 9 10 11
KLCB281 KL2B467-LH-scFv 165 166 167 191 192 193
CD3B376-Fab 340 341 342 343 344 345
KLCB174 KL2B494-LH-scFv 168 169 170 191 192 188
CD3B376-Fab 340 341 342 343 344 345
KLCB153 KL2B494-LH-scFv 168 169 170 191 192 188
CD3W245-Fab 6 7 8 9 10 11
KLCB245 KL2B30-Fab w/ K447 156 157 158 182 183 184
CD3W245-LH-scFv w/ K447 6 7 8 9 10 11
表36. 所選KL2/CD3 雙特異性抗體之hKL2 臂及CD3 臂之可變區的SEQ ID NO 。
雙特異性分子名稱 hK2臂 CD3臂
名稱 VH1 SEQ ID NO: VL1 SEQ ID NO: scFv SEQ ID NO 名稱 VH2 SEQ ID NO: VL2 SEQ ID NO: scFv SEQ ID NO:
KLCB91 KL2B359-LH-scFv(scFv20)   281 CD3W245 Fab 23 28  
KLCB105 KL2B359-LHscFv (scFv20) 281 CD3B376 Fab 346 347
KLCB95 KL2B413-LH-scFv (scFv18) 279 CD3W245 Fab 23 28
KLCB96 KL2B413-LH-scFv(scFv18) 279 CD3B376 Fab 346 347
KLCB170 KL2B467-LH-scFv(scFv28) 289 CD3W245 Fab 23 28
KLCB80 KL2B30 Fab 139 140   CD3W245-LH-scFv (scFv34)   348
KLCB81 KL2B242 LC_C33S Fab 143 358 CD3W245-LH-scFv (scFv34) 348
KLCB113 KL2B53 Fab 141 142 CD3W245-LH-scFv (scFv34) 348
KLCB281 KL2B467-LH-scFv (scFv28)   289 CD3B376 Fab 346 347  
KLCB174 KL2B494-LH-scFv 291 CD3B376-Fab 346 347
KLCB153 KL2B494-LH-scFv 352 CD3W245-Fab 23 28
KLCB245 KL2B30-Fab w/ K447 139 140   CD3W245-LH-scFv w/ K447   348
表37. hK2/CD3 雙特異性抗體之HC 及LC 胺基酸SEQ ID NO
雙特異性分子名稱 hK2臂 CD3臂
名稱 HC1或scFv -Fc SEQ ID NO: LC1 SEQ ID NO: 名稱 HC2或scFv - Fc SEQ ID NO: LC2 SEQ ID NO:
KLCB91 KL2B359 LH-Fc 322   CD3W245 Fab 85 88
KLCB105 KL2B359-LH-Fc 322 CD3B376 Fab 349 350
KLCB95 KL2B413-LH-Fc 323 CD3W245 Fab 85 88
KLCB96 KL2B413-LH-Fc 323 CD3B376 Fab 349 350
KLCB170 KL2B467-LH-Fc 324 CD3W245 Fab 85 88
KLCB80 KL2B30 Fab 327 221 CD3W245- LH-scFv-Fc 78  
KLCB81 KL2B242 LC_C33S Fab 328 359 CD3W245- LH-scFv-Fc 78
KLCB113 KL2B53 Fab 329 222 CD3W245- LH-scFv-Fc 78
KLCB281 KL2B467-LH-scFv (scFv28) 324   CD3B376 Fab 349 350
KLCB174 KL2B494-LH-scFv 325   CD3B376-Fab 349 350
KLCB153 KL2B494-LH-scFv 325 CD3W245-Fab 85 88
KLCB245 KL2B30-Fab w/ K447 330 221 CD3W245-LH-scFv w/ K447 331  
表38. 雙特異性HC1 及HC2 胺基酸序列
蛋白質 SEQ ID NO: 胺基酸序列
KL2B359-LH-scFv-Fc 322 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKRLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B413-LH-scFv-Fc 323 EIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B467-LH-scFv-Fc 324 QSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B30 Fab HC 327 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B242 Fab HC 328 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B242LC_C33S_Fab LC 359 SYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
KL2B53 Fab HC 329 EVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B494-LH-scfV-Fc 325 SSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
KL2B30 Fab w/K477 330 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
CD3W245 Fab HC 85 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
CD3B376 Fab 349 QVQLQQSGPRLVRPSQTLSLTCAISGDSVFNNNAAWSWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWLYDYAVSVKSRITVNPDTSRNQFTLQLNSVTPEDTALYYCARGYSSSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
CD3W245-LH-scfv-Fc 78 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
CD3W245-LH-scfv-Fc w/K447 331 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
表39. hK2/CD3 雙特異性抗體之HC 及LC DNA SEQ ID NO
雙特異性分子名稱 hK2臂 CD3臂
名稱 HC1或scFv -Fc DNA SEQ ID NO: LC1 DNA SEQ ID NO: 名稱 HC2或scFv - Fc DNA SEQ ID NO: LC2 DNA SEQ ID NO:
KLCB91 KL2B359 LH - scFv -Fc 332   CD3W245 Fab 315 88
KLCB105 KL2B359 - LH - scFv - Fc 332 CD3B376 Fab 351 352
KLCB95 KL2B413 - LH - scFv - Fc 333 CD3W245 Fab 315 317
KLCB96 KL2B413-LH-scFv-Fc 333 CD3B376 Fab 351 352
KLCB170 KL2B467-LH-scFv- Fc 334 CD3W245 Fab 315 317
KLCB80 KL2B30 Fab 335 257 CD3W245-LH-scFv- Fc 353  
KLCB81 KL2B242 LC_C33S Fab 336 360 CD3W245-LH-scFv- Fc 353
KLCB113 KL2B53 Fab 337 258 CD3W245-LH-scFv- Fc 353
KLCB281 KL2B467-LH-scFv-Fc 334   CD3B376 Fab 351 352
KLCB174 KL2B494-LH-scFv 338   CD3B376-Fab 351 352
KLCB153 KL2B494-LH-scFv 338 CD3W245-Fab 315 317
KLCB245 KL2B30-Fab w/ K447 339 257 CD3W245-LH-scFv-Fc w/ K447 354  
SEQ ID NO: 332 (KL2B359-LH-scFv-Fc) GAGATTGTTCTCACCCAATCCCCAGCTACTCTCTCTCTTTCACCCGGTGAGCGGGCAACCCTCTCCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGAGTATTTTGGCACATCCCTGATGCACTGGTATCAGCAAAAACCAGGACAACCCCCCAGACTCCTCATATATGCCGCCTCAAATGTCGAGAGTGGGATACCTGCACGGTTTTCAGGAAGCGGCAGCGGTACTGACTTCACATTGACTATATCCTCTGTAGAGCCAGAGGATTTTGCAGTCTACTTCTGCCAGCAAACTAGGAAGGTTCCATATACTTTTGGGGGCGGTACAAAAGTTGAGATAAAGGGCGGCTCCGAGGGCAAGAGCAGCGGCAGCGGCAGCGAGAGCAAGAGCACCGGCGGCAGCCAAGTACAGCTCCAGGAGTCAGGACCTGGGCTCGTCAAACCATCTCAGACATTGTCCCTGACATGCACAGTTTCCGGCAACAGTATTACTTCCGACTATGCTTGGAATTGGATCAGGCAATTCCCAGGAAAGCGGCTCGAGTGGATAGGTTATATTTCTTACTCTGGATCTACTACCTACAATCCCAGTTTGAAGTCTCGCGTGACAATTAGCCGGGACACATCAAAAAATCAATTCTCACTTAAACTTAGTTCTGTAACCGCTGCCGATACAGCCGTGTACTACTGCGCCACTGGTTATTATTATGGAAGCGGATTTTGGGGGCAAGGAACTTTGGTGACCGTCTCTTCCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTSEQ ID NO: 333 (KL2B413 -LH -scFv -Fc) GAGGTACAACTTGTCGAAAGTGGCGGTGGAGTCGTCCAGCCTGGGCGATCACTTCGCCTCTCCTGTGTAGCCTCTGGTTTCACTTTCTCATCTTACGACATACACTGGGTCCGCCAGGCACCTGGTAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCCATCATTAGTTACGATGGCTCCAAAAAAGATTACACCGATAGCGTAAAGGGCAGATTTACCATTTCCAGGGATAATTCAAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGGACAGCCTCCGCGTCGAAGACTCTGCAGTTTATAGCTGTGCCAGGGAGTCAGGCTGGTCCCATTATTACTATTATGGTATGGACGTTTGGGGCCAGGGAACCATGGTCACTGTTAGTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTSEQ ID NO: 334 (KL2B467-LH-scFv-Fc) CAGAGCGTACTTACCCAGCCTCCCAGCGTGTCTGTAGCCCCAGGACAGACAGCCAGTATTACATGCGGTGGTGACAATATAGGTTCCAAATCCGTGCATTGGTACCAGCAGAAGCCAGGGCAAGCTCCCGTGCTCGTGGTATATGATAATTCCGACCGCCCTTCCGGCATTCCCGAACGGTTTAGTGGTTCAAATTCAGGCACCACAGCAACTCTGACCATAAGCAGAGTCGAAGCTGGAGACGAAGCCGACTACTACTGTCAGGTATGGGACTCTAGTAGTGACCACCCTGTCGTCTTCGGTGGGGGAACCAAAGTGACCGTTCTGGGCGGCTCCGAGGGCAAGAGCAGCGGCAGCGGCAGCGAGAGCAAGAGCACCGGCGGCAGCCAGGTCCAGCTCGTAGAAAGTGGGGGCGGCGTAGTTCAGCCAGGCAGGAGTCTCCGGCTGAGTTGTGCAGCCAGCGGCTTTACTTTTTCCTACTATGGAATGCACTGGGTACGTCAGGCACCCGGCAAAGGTTTGGAGTGGGTCGCATTCATTTCTTATGATGGATCAAATAAGTATTATGCCGATAGTGTAAAGGGCAGATTTACAATAAGTCGAGACAACTCAAAGAACACTCTCTACCTCCAAATGAATAGTCTTCGGGCAGAGGATACTGCAGTGTACTATTGTGCTCATCTTCCTTATTCCGGTTCTTACTGGGCATTCGATTATTGGGGGCAAGGGACACAAGTTACCGTGTCTAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTSEQ ID NO: 338 (KL2B494-LH-scFv-Fc) AGCAGCGAATTGACCCAACCACCTTCCGTCAGCGTCGCACCAGGGCAAACCGCCCGCATCACATGCGGTGGGAACAATATAGGAAGCAAATCTGTCCACTGGTACCAGCAAAAACCAGGACAAGCCCCTGTTCTGGTCGTCTATGATGACAGCGACAGACCAAGTGGTATTCCCGAGAGATTCTCCGGTAGCAACTCTGGAAATACAGCTACTTTGACCATCTCCAGAGTTGAGGCTGGTGACGAGGCAGATTACTATTGCCAGGTCTGGGACAGCTCCAGCGACCACGTCGTATTCGGTGGCGGGACCAAGCTGACTGTGCTGGGCGGCTCCGAGGGCAAGAGCAGCGGCAGCGGCAGCGAGAGCAAGAGCACCGGCGGCAGCCAGGTGCAGTTGGTAGAGTCAGGAGGGGGCCTCGTTCAACCTGGTGGCAGCCTCCGTTTGTCTTGTGCTGCCAGTGGATTTACTTTCAGTCACTACGCAATGAGCTGGGTGAGACAAGCACCTGGCAAGGGCCTTGAGTGGGTCTCCACTATCGGCGGTTCAGGGGGGAGCACTTACTACGCTGACTCTGTAAAAGGTCGCTTTACTATATCTAGAGATAACTCTAAAAACACACTCTACTTGCAGATGAACAGCCTGCGAGCCGAAGATACAGCCGTGTACTACTGCGCCAAGCCTCATATTGTAATGGTCACTGCCCTCTTGTATGATGGCATGGATGTTTGGGGCCAAGGGACAATGGTGACAGTCTCAAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTSEQ ID NO: 335 (KLK2B30 Fab HC cDNA) CAGGTTCAACTTCAAGAATCCGGGCCAGGTCTGGTCAAGCCTTCAGAGACTTTGTCCCTTACTTGCACAGTGAGCGGTGGCTCTATCTCAAGTTACTACTGGTCATGGATACGGCAGCCCCCAGGAAAGGGGCTTGAGTGGATTGGGTACATTTATTACTCAGGGTCAACAAACTACAATCCCTCCCTCAAATCCCGAGTGACAATTAGTGTCGATACATCTAAAAACCAGTTTTCCCTGAAATTGAGCTCAGTCACCGCAGCTGATACTGCAGTCTATTATTGTGCTGGCACAACAATCTTCGGGGTAGTAACTCCAAACTTCTACTACGGGATGGACGTGTGGGGGCAAGGAACAACCGTAACAGTAAGTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTSEQ ID NO: 722 (KLK2B30 Fab LC cDNA) GATATTCAAATGACCCAGTCACCATCATTCCTGTCCGCCTCAGTGGGAGATCGCGTCACTATTACTTGTCGTGCTAGCCAGGGGATATCATCATATTTGGCTTGGTATCAACAAAAGCCAGGAAAGGCCCCAAAATTCCTTATATATGCAGCTAGTACACTCCAGAGTGGTGTTCCTAGCCGGTTCTCTGGCAGCGGCTCAGGGACCGAGTTCACCCTGACAATCTCCAGCTTGCAGCCCGAAGACTTTGCAACCTACTATTGCCAGCAACTGAACTCCTATCCTCTGACTTTCGGGGGAGGAACCAAGGTTGAGATTAAACGGACAGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCTGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGTSEQ ID NO: 337 (KL2B53 Fab HC cDNA) GAGGTACAACTTGTCGAAAGTGGCGGTGGAGTCGTCCAGCCTGGGCGATCACTTCGCCTCTCCTGTGTAGCCTCTGGTTTCACTTTCTCATCTTACGACATACACTGGGTCCGCCAGGCACCTGGTAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCCATCATTAGTTACGATGGCTCCAAAAAAGATTACACCGATAGCGTAAAGGGCAGATTTACCATTTCCAGGGATAATTCAAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGGACAGCCTCCGCGTCGAAGACTCTGCAGTTTATAGCTGTGCCAGGGAGTCAGGCTGGTCCCATTATTACTATTATGGTATGGACGTTTGGGGCCAGGGAACCATGGTCACTGTTAGTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTSEQ ID NO: 723 (KL2B53 Fab LC cDNA) GATATTGTAATGACTCAGTCACCCTCTTCACTGAGTGCATCAGTAGGTGATCGCGTTACCATCACTTGCCGTGCCAGTCAAGACATTTCAAATTACCTTGCATGGTACCAACAAAAGCCCGGAAAAGTGCCAAAGTTTTTGATTTATGCCGCTTCAACACTCCATTCAGGAGTGCCCTCTCGTTTCAGTGGATCTGGCAGTGGCACCGATTTTACTCTCACAATAAGCAGTCTCCAGCCTGAGGATGTAGCCACCTATTATTGCCAAAAATATAATTCAGCCCCCTATACTTTTGGACAGGGCACACGCCTTGAGATTAAACGGACAGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCTGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGTSEQ ID NO: 336 （KLK2B242 Fab HC cDNA 及KL2B242LC_C33S Fab HC ） CAAGTACAACTTCAAGAGTCTGGCCCTGGGCTTGTTAAGCCCTCAGAGACCTTGTCACTGACCTGTACCGTATCAGGCGGGTCAATTTCATCTTACTACTGGAGTTGGCTTCGTCAGCCTGCCGGATCTGGACTGGAGTGGATAGGTAGACTGTATGTTTCCGGCTTTACAAATTACAACCCATCTTTGAAAAGCCGTGTGACTCTCAGCCTCGACCCTTCTCGGAATCAACTTTCACTTAAATTGTCTTCTGTTACAGCTGCCGACACTGCAGTATATTATTGTGCAGGGGACTCAGGCAACTATTGGGGATGGTTTGATCCTTGGGGGCAGGGGACCCTGGTAACCGTGAGTTCTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTSEQ ID NO: 360 (KLK2B242LC_C33S Fab LC cDNA) AGTTATGAGCTGACTCAACCACCCAGTGTCAGCGTATCCCCAGGAGAAACTGCCTCTATAACATGCAGCGGAGACCAGTTGGGAGAAAATTACGCCTCCTGGTACCAACAGAAGCCTGGACAAAGTCCTGTCCTCGTTATTTATCAAGATTCTAAACGTCCCTCTGGGATCCCCGAACGATTCTCCGGCTCTAACTCTGGGAATACCGCTACCTTGACAATAAGTGGTACACAGGCACTTGATGAAGCTGATTATTACTGCCAGGCATGGGATAACAGCATTGTGGTTTTCGGGGGCGGCACCAAACTCACAGTTCTCGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCASEQ ID NO: 339 (KLK2B30 wK477 Fab HC cDNA) CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGCCCTGGCCTGGTCAAGCCTTCCGAGACACTGTCTCTGACCTGCACCGTGTCTGGCGGCTCCATCTCCTCCTACTACTGGTCCTGGATCAGACAGCCTCCTGGCAAAGGCCTGGAATGGATCGGCTACATCTACTACTCCGGCTCCACCAACTACAACCCCAGCCTGAAGTCCAGAGTGACCATCTCCGTGGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTATTGTGCTGGCACCACCATCTTCGGCGTGGTCACCCCTAACTTCTACTACGGCATGGACGTGTGGGGCCAAGGCACAACAGTGACAGTCTCTTCTGCCTCCACCAAGGGTCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACTTGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCTCTCTCCCTGTCTCCGGGAAAASEQ ID NO: 353 (CD3W245 -LH-scFv-Fc cDNA) GACATACAAATGACACAATCACCCTCTTCTCTTTCTGCAAGCGTTGGCGACCGTGTCACTATCACTTGTCGAGCCCGCCAGTCCATAGGTACTGCCATTCACTGGTATCAACAGAAGCCTGGCAAGGCTCCCAAACTCCTGATTAAGTATGCCAGCGAGAGCATTTCCGGCGTACCTTCAAGATTTTCCGGCTCCGGTAGTGGGACAGATTTCACTCTCACTATATCTAGCCTCCAACCAGAAGATTTCGCCACTTACTACTGTCAACAATCAGGTTCATGGCCTTACACTTTCGGCCAGGGGACAAAATTGGAGATCAAGGGCGGCTCCGAGGGCAAGAGCAGCGGCAGCGGCAGCGAGAGCAAGAGCACCGGCGGCAGCGAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTSEQ ID NO: 354 (CD3W245-LH-scFv-Fc w/ K447) GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCTCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATTACCTGCCGGGCCAGACAGTCTATCGGCACCGCTATCCACTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATTAAGTACGCCTCCGAGTCCATCTCCGGCGTGCCCTCCAGATTTTCTGGCTCTGGATCTGGCACCGACTTTACCCTGACAATCTCCAGCCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGTCAGCAGTCCGGCTCTTGGCCTTACACCTTTGGTCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTTGAATCTGGCGGAGGACTGGTTAAGCCTGGCGGCTCTCTGAGACTGTCTTGTGCTGCTTCTGGCTTCACCTTCAGCCGGTACAACATGAACTGGGTCCGACAGGCTCCTGGCAAAGGCCTGGAATGGGTGTCCTCCATCTCCACCTCCAGCAACTACATCTACTACGCCGACTCCGTGAAGGGCAGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGGACCTGCAGATGTCTGGCCTGAGAGCTGAGGACACCGCTATCTACTACTGCACCAGAGGCTGGGGACCCTTCGATTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCATCTGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACTTGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCTCTCTCCCTGTCTCCGGGAAAASEQ ID NO: 725 (CD3W245 Fab-HC-Fc) GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTSEQ ID NO: 726 (CD3W245 Fab-LC-Fc) GACATACAAATGACACAATCACCCTCTTCTCTTTCTGCAAGCGTTGGCGACCGTGTCACTATCACTTGTCGAGCCCGCCAGTCCATAGGTACTGCCATTCACTGGTATCAACAGAAGCCTGGCAAGGCTCCCAAACTCCTGATTAAGTATGCCAGCGAGAGCATTTCCGGCGTACCTTCAAGATTTTCCGGCTCCGGTAGTGGGACAGATTTCACTCTCACTATATCTAGCCTCCAACCAGAAGATTTCGCCACTTACTACTGTCAACAATCAGGTTCATGGCCTTACACTTTCGGCCAGGGGACAAAATTGGAGATCAAGCGGACAGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCTGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGTSEQ ID NO: 351 (CD3B376 Fab-HC-Fc) CAGGTGCAGCTCCAACAGAGTGGTCCCAGACTCGTGAGACCCTCTCAAACACTCAGTTTGACTTGTGCCATCTCAGGCGATTCAGTTTTCAACAACAATGCAGCTTGGAGCTGGATTAGGCAGTCACCTAGTCGCGGTCTTGAATGGCTTGGGCGTACATACTATCGCTCTAAATGGTTGTATGATTACGCTGTGTCCGTGAAGAGCCGAATCACCGTAAACCCTGATACCTCCAGGAATCAGTTCACATTGCAACTGAATAGTGTGACTCCCGAGGATACTGCACTCTATTATTGTGCCCGAGGATATAGCAGTAGCTTCGACTATTGGGGACAAGGGACACTCGTTACCGTTAGTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTSEQ ID NO: 352 (CD3B376 Fab-LC-Fc) CAGTCTGCTCTGACCCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGCTCTCCCGGCCAGTCCATCACCATCAGCTGTACCGGCACCTCCTCCAACATCGGCACCTACAAGTTCGTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCCGACAAGGCCCCCAAAGTGCTGCTGTACGAGGTGTCCAAGCGGCCCTCTGGCGTGTCCTCCAGATTCTCCGGCTCCAAGTCTGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCAGCGGACTGCAGGCTGAGGACCAGGCCGACTACCACTGTGTGTCCTACGCTGGCTCTGGCACCCTGCTGTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGACCGTGCTGGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA實例4 ：hK2xCD3 雙特異性抗體之生物物理表徵 所選hK2 × CD3 雙特異性抗體之親和力
所選hK2xCD3雙特異性抗體針對hK2或人類CD3之親和力係藉由表面電漿共振(SPR)來測量。SPR係一種無標示技術，其藉由在複合物形成及解離時測量質量變化來研究二個結合伴之間的交互作用強度。抗體被捕捉在包覆抗Fc抗體之感測器晶片上，隨後注射各種濃度之可溶性hK2（或可溶性重組CD3）並指明締合及解離時間。解離後，用適當溶液再生表面以製備用於下一交互作用。藉由擬合感測曲線圖至1:1 Langmuir模型來擷取動力學資訊（締合速率及解離速率常數）。結合親和力(KD)係報導為速率常數之比率(koff/kon)。所選hK2/CD3雙特異性抗體之KD值係列於表 40 。 表40. 所選hK2/CD3 雙特異性抗體之各別結合臂的KD 值
KLK2臂 KD (nM)
KL2B467 Fab 0.09
KL2B494 Fab 0.06
KL2B359-LH-scFv 0.63
KL2B413-LH-scFv 16.4
CD3B376 Fab 20-40
CD3W245 Fab 0.14
CD3W245 LH scFv 20-30
KL2B30 Fab 2
KL2B53 Fab 0.1
KL2B242 Fab 0.14
所選hK2 × CD3 雙特異性抗體之熱穩定性
使用自動化Prometheus儀器，藉由NanoDSF方法判定雙特異性抗體樣本之熱穩定性。將樣本自384孔樣本盤裝載至24孔毛細管中，以進行測量。針對各樣本執行二重複運行。使用Prometheus NanoDSF使用者介面(Melting Scan tab)，以設定用於運行的實驗參數。樣本的熱掃描以1.0℃/分鐘的速率自20℃跨至95℃。Dual-UV技術監測在發射波長330 nm及350 nm下內在色胺酸及酪胺酸之螢光，並將此比率(F350 nm/F330 nm)對溫度作圖以產製去折疊曲線。使用Nano DSF，以測量所有分子（濃度為0.5 mg/mL，於磷酸鹽緩衝液(pH 7.4)中）的Tm。所測得之Tm值係列於表 41 中。表41. 所選hK2 × CD3 雙特異性抗體之KLK2 或CD3 結合臂的Tm 值。
分子 藉由DSF 之TM ( ℃)
KL2B413 (scFv) 67
KL2B359 (scFv) 67
KL2B30 (Fab) ＞70
KL2B242 (Fab) ＞70
KL2B53 (Fab) ＞70
KL2B467 (Fab) ＞70
KL2B494 (Fab) ＞70
CD3B376 (Fab) 61
CD3W245 LH scFv 66
藉由AC-SINS （親和力捕捉自我交互作用奈米粒子光譜學）之自我締合潛力
使用高通量篩選檢定測量候選Ab自我交互作用之傾向。自我交互作用傾向通常意味著不良Ab溶解度及下游Ab製造的挑戰。在此檢定中，將金奈米粒子(AuNP)用山羊抗人類IgG (H+L)捕捉抗體包覆，且之後在多株山羊IgG存在下與候選Ab培養。自我締合之任何候選Ab使AuNP靠近，導致奈米粒子之電漿波長(λp )偏移，亦稱為最大吸收波長(λmax )。各候選Ab之偏移量值(Δλ max)指示其自我締合之強度。此檢定使用顯示無自我締合至高自我締合潛力之適當對照抗體。所有此檢定測試之分子顯示無自我締合至低自我締合之風險。實例5 ： 雙特異性hK2xCD3抗體之體外及體內表徵。hK2xCD3 雙特異性抗體之體外細胞毒性
所產生之雙特異性抗體的細胞毒性潛力係在Incucyte平台上使用即時延遲成像以T細胞介導之細胞毒性檢定進行體外測量。以3:1的效應物:目標比（E:T比），在來自健康供體的經單離之泛人類CD3+ T細胞存在下，於ThK2陽性細胞系VCaP細胞中測試雙特異性抗體。藉由測量來自染料之螢光信號監測細胞凋亡之細胞死亡，該染料係由目標VCaP細胞穩定表現。
正常供體泛T細胞係與KLK2+ VCaP細胞共培養。KLK2xCD3雙特異性抗體自0至100nM給藥96小時。使用3:1效應物對目標(ET)比。(A)穩定表現紅色核染料之目標細胞係藉由IncuCyte成像系統即時定量目標細胞死亡測量。整體腫瘤細胞裂解係基於VCaP細胞之即時動力學殺滅曲線之AUC作圖（圖 8A ）。綠色螢光凋亡蛋白酶3/7試劑係用於測量來自目標細胞死亡之細胞凋亡信號。總凋亡蛋白酶3/7活性係基於即時凋亡蛋白酶3/7活性曲線之AUC作圖（圖 8B ）。數據顯示，所測試之雙特異性hK2/CD3抗體隨時間增加促進存活VCaP細胞的劑量依賴性減少且因此誘導T細胞介導之VCaP腫瘤細胞死亡。雙特異性hK2xCD3抗體有效介導T細胞活化且顯示劑量依賴性KLK2+腫瘤細胞殺滅。藉由hK2xCD3 雙特異性分子之體外T 細胞活化及增生
測試hK2xCD3雙特異性抗體促進T細胞活化及增生之能力。正常供體泛T細胞係以CFSE (5uM)標示，且與KLK2 (+) VCap細胞共培養。KLK2xCD3雙特異性抗體自0至100nM給藥96小時。使用3:1效應物對目標(ET)比。在共培養96小時之後，收集細胞並用CD25、活/死染料染色。流動式細胞測量分析係在具有Flowjo軟體之Fortessa流動式細胞儀上執行。判定CTV染料稀釋及活化標記CD25之頻率。不同劑量的CD25陽性細胞的頻率係用於作出體外T活化之圖（圖 9A ） 。使用0 nM處理組來判定增生閘。進入增生閘之細胞的頻率係用於作出體外T細胞增生之圖（圖 9B ） 。數據證實藉由各種KLK2xCD3雙特異性抗體之T細胞的劑量依賴性活化及增生。藉由hK2xCD3 雙特異性分子之體外T 細胞細胞介素釋放
在體外測量抗hK2xCD3抗體對T細胞細胞介素釋放的效應。從上述體外細胞毒性實驗收集上清液樣本。進行13工細胞介素Luminex檢定以定量不同劑量的hK2xCD3雙特異性抗體下之IFN-及TNF-⍺濃度。圖 10A 及圖10B 顯示以劑量依賴性方式由KLK2xCD3雙特異性抗體所觸發之T細胞的功能性細胞介素釋放。雙特異性hK2xCD3 抗體在T 細胞人源化小鼠中已建立之皮下(SC) 人類前列腺異種移植模型的療效
在人類前列腺腫瘤VCaP s.c.小鼠異種移植模型中評估KLK2xCD3雙特異性分子的體內療效。KLK2xCD3分子的抗腫瘤療效係在已建立之SC人類前列腺VCaP異種移植中評估。使用完整的雄性NSG小鼠來提供用於植入人類腫瘤及人類T細胞的合適宿主。人類前列腺細胞系VCaP係得自美國菌種保存中心(ATCC)。在指數生長期間收集VCaP細胞，並以1×107 個細胞以0.2 mL之體積SC注射於小鼠右脇部。各動物i.p.注射20e6個人類T細胞。評估5倍增量的三個劑量水準：0.2 mg/kg、1 mg/kg、及5 mg/kg。雙特異性抗體係經由i.p.給藥一週兩次。在第一次i.p.給藥後6小時取樣眼睛血液，並使用基於Luminex之檢定測量功能性細胞介素水準。在整個研究過程中，每週收集兩次腫瘤體積和體重測量值。將Δ腫瘤生長抑制百分比(ΔTGI)定義為經處理與對照組之平均腫瘤負荷之間的差異，其計算為% ΔTGI = ([(TVc-TVc0)-(TVt-TVt0)]/(TVc-TVc0))×100；其中「TVc」係給定對照組之平均腫瘤負荷，「TVc0」係給定對照組之平均初始腫瘤負荷，「TVt」係經處理組的平均腫瘤負荷，而「TVt0」係經處理組的平均初始腫瘤負荷。%TGI係定義為([TVc-TVt]/TVc)×100。
本發明之KLK2xCD3化合物顯示劑量依賴性抗腫瘤效應，亦即在1 mg/kg下顯示邊緣腫瘤生長抑制及在5 mg/kg下顯示抗腫瘤效應。在第一次給藥後6小時的細胞介素評估顯示活性KLK2xCD3化合物高於背景的功能細胞介素釋放，其與體內療效一致。實例6. HLA-G 細胞系之產生。
缺乏所有HLA表現（包括MHC第I型蛋白質：HLA-A (Uniprot P01892)、HLA-B (Uniprot P18464)、HLA-C (Uniprot P30508)、及HLA-E (Uniprot P13747)（因此適用於基於NK細胞之殺滅）之K562慢性骨髓性白血病細胞系(ATCC, CCL-243)係使用pCDH慢病毒載體轉導，以在慢病毒顆粒(Genecopoeia)中表現HLA-G1-IRES（內部核糖體進入位點）-β-2-微球蛋白(β2M, LPP-CS-Z7412-I0035-02-200, Genecopoeia)或人類HLA-G (C42S)-IRES-β2M (LPP-CS-Z7412-I0035-01-200, Genecopoeia)，並在IMDM、10% FBS中培養。在繼代一時，用10 µg/ml嘌呤黴素(Gibco, A1113803)選擇以確保穩定HLA-G表現。當密度達到約3 x 106 個細胞/ml時（大約每3至4天），將細胞以1:10分瓶。實例7 ：HLA-G 抗體的產生。
使用OmniRat®基因轉殖人源化大鼠產生抗HLA-G抗體。OmniRat®含有嵌合人類/大鼠IgH基因座（包含22個人類VH 、所有呈天然構形的人類D及JH 區段，該等區段係連接至大鼠CH 基因座）再加上完整的人類IgL基因座（12個Vκ連接至Jκ-Cκ，且16個Vλ連接至Jλ-Cλ）。（見例如Osborn, et al. (2013) J Immunol 190(4): 1481-1490）。因此，該等大鼠展現減少表現的大鼠免疫球蛋白，且所引入之人類重鏈及輕鏈轉殖基因回應於免疫會經歷類型轉換(class switching)及體細胞突變，以產生具有完整人類可變區之高親和力嵌合人類/大鼠IgG單株抗體。OmniRat®之製備及用途、及此類大鼠所攜帶之基因組修飾係描述於WO14/093908中。
OmniRat®大鼠的免疫係使用建構體（其包含融合至β2m次單位及組蛋白H2A之重組人類HLA-G1或重組人類HLA-G5之α次單位、含有α1、α2、及α3域但缺乏跨膜區之HLA-G的可溶性異構體）、表現HLA-G1之K562細胞、或編碼具有C42S突變之HLA-G1胞外域之DNA進行（表42）。在一些情況下，組蛋白H2A肽係經融合至抗原以增強穩定性。表42顯示抗原之序列。表42. 用來產生抗體的抗原序列。 H2A肽加底線。β2M次單位以粗體強調。His、Avi-、及Gly-Ser標籤係斜體字。
活動 蛋白質AA ID 序列 SEQ ID NO:
HYB:420，融合瘤，OMT大鼠 MHGW8 (B2m-(3(G4S)-HLA-G1-G4S-Avi) MIQRTPKIQVYSRHPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGERIEKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRDM GGGGSGGGGSGGGGSGSHSMRYFSAAVSRPGRGEPRFIAMGYVDDTQFVRFDSDSASPRMEPRAPWVEQEGPEYWEEETRNTKAHAQTDRMNLQTLRGYYNQSEASSHTLQWMIGCDLGSDGRLLRGYEQYAYDGKDYLALNEDLRSWTAADTAAQISKRKCEAANVAEQRRAYLEGTCVEWLHRYLENGKEMLQRADPPKTHVTHHPVFDYEATLRCWALGFYPAEIILTWQRDGEDQTQDVELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPEPLMLRWKQSSLPTIPIGGGGSGLNDIFEAQKIEWHE 371
HYB:420，融合瘤，OMT大鼠 MHGW2 (H2A-2(G4S)-b2m-3(G4S)-HLA-G5-G4S-His-Avi) RIIPRHLQL GGGGSGGGGSIQRTPKIQVYSRHPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGERIEKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRDM GGGGSGGGGSGGGGSGSHSMRYFSAAVSRPGRGEPRFIAMGYVDDTQFVRFDSDSASPRMEPRAPWVEQEGPEYWEEETRNTKAHAQTDRMNLQTLRGYYNQSEASSHTLQWMIGCDLGSDGRLLRGYEQYAYDGKDYLALNEDLRSWTAADTAAQISKRKCEAANVAEQRRAYLEGTCVEWLHRYLENGKEMLQRADPPKTHVTHHPVFDYEATLRCWALGFYPAEIILTWQRDGEDQTQDVELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPEPLMLRWSKEGDGGIMSVRESRSLSEDLGGGGSHHHHHHGSGLNDIFEAQKIEWHE 372
HYB:420，融合瘤，OMT大鼠 FL HLA-G1 GSHSMRYFSAAVSRPGRGEPRFIAMGYVDDTQFVRFDSDSACPRMEPRAPWVEQEGPEYWEEETRNTKAHAQTDRMNLQTLRGYYNQSEASSHTLQWMIGCDLGSDGRLLRGYEQYAYDGKDYLALNEDLRSWTAADTAAQISKRKCEAANVAEQRRAYLEGTCVEWLHRYLENGKEMLQRADPPKTHVTHHPVFDYEATLRCWALGFYPAEIILTWQRDGEDQTQDVELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPEPLMLRWKQSSLPTIPIMGIVAGLVVLAAVVTGAAVAAVLWRKKSSD 373
HYB:423，融合瘤，OMT大鼠 pDR000057441(H2A-3(G4S)-b2m-3G4S-HLA-G1-C42S) DNA序列，初級轉錄本： ATGGCTTGGGTGTGGACATTGTTGTTTCTGATGGCTGCTGCTCAATCTATTCAAGCTAGGATCATTCCTAGACATCTGCAACTCGGAGGCGGAGGCAGCGGAGGAGGAGGATCTGGAGGAGGAGGATCTATTCAGAGGACACCTAAGATTCAAGTGTACTCTAGACATCCTGCTGAGAACGGCAAGAGCAACTTTCTGAACTGCTATGTGAGCGGCTTTCATCCTAGCGATATTGAAGTGGATCTGCTGAAAAACGGCGAACGTATTGAAAAAGTGGAACATAGCGATCTGAGCTTTAGCAAAGATTGGAGCTTTTATCTGCTGTATTATACCGAATTTACCCCTACCGAAAAAGATGAATATGCCTGCAGAGTGAACCATGTGACCCTGAGCCAGCCTAAGATTGTGAAATGGGATAGAGATATGGGAGGAGGAGGCTCTGGAGGAGGAGGATCTGGAGGCGGAGGCAGCGGCTCTCATAGCATGAGATATTTTAGCGCTGCAGTGAGCCGTCCTGGACGTGGAGAACCTAGGTTTATTGCTATGGGCTATGTGGATGATACCCAGTTTGTGAGGTTTGATAGCGATAGCGCCTCTCCTAGGATGGAACCTAGAGCTCCCTGGGTGGAACAGGAAGGCCCAGAATATTGGGAAGAAGAAACCAGGAACACCAAAGCACATGCTCAGACCGATCGTATGAACCTGCAGACCCTGAGAGGCTATTATAACCAGAGCGAAGCATCTAGCCATACCCTGCAGTGGATGATTGGCTGCGATCTGGGCAGCGATGGCAGACTGCTGAGAGGCTATGAACAGTATGCATATGATGGCAAAGATTATCTGGCACTGAACGAAGATCTGAGGAGCTGGACCGCTGCTGATACCGCTGCTCAGATTAGCAAGAGGAAGTGCGAAGCTGCTAACGTGGCTGAACAGAGACGCGCATATCTGGAAGGCACCTGCGTGGAATGGCTGCATAGGTATCTGGAAAACGGCAAAGAAATGCTGCAGAGAGCTGATCCTCCTAAAACCCATGTGACCCATCATCCTGTGTTTGATTATGAAGCTACCCTGAGGTGCTGGGCTCTGGGCTTCTATCCTGCTGAGATTATTCTGACCTGGCAGAGAGATGGAGAAGATCAGACTCAAGATGTCGAGTTGGTCGAGACTAGACCTGCTGGAGATGGCACCTTTCAGAAGTGGGCAGCTGTTGTCGTGCCTAGCGGAGAAGAACAGAGATATACCTGCCATGTGCAGCATGAAGGCCTGCCTGAACCTCTGATGCTGAGGTGGAAACAGAGCAGCTTGCCTACTATTCCTATTGGAGGAGGAGGATCTCACCATCATCATCATCACTGA 374
成熟蛋白質序列：QARIIPRHLQL GGGGSGGGGSGGGGSIQRTPKIQVYSRHPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGERIEKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRDM GGGGSGGGGSGGGGSGSHSMRYFSAAVSRPGRGEPRFIAMGYVDDTQFVRFDSDSASPRMEPRAPWVEQEGPEYWEEETRNTKAHAQTDRMNLQTLRGYYNQSEASSHTLQWMIGCDLGSDGRLLRGYEQYAYDGKDYLALNEDLRSWTAADTAAQISKRKCEAANVAEQRRAYLEGTCVEWLHRYLENGKEMLQRADPPKTHVTHHPVFDYEATLRCWALGFYPAEIILTWQRDGEDQTQDVELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPEPLMLRWKQSSLPTIPIGGGGSHHHHHH 375
HYB:421，融合瘤，OMT大鼠   DNA序列，初級轉錄本： ATGGCTTGGGTGTGGACATTGTTGTTTCTGATGGCTGCTGCTCAATCTATTCAAGCTAGGATCATTCCTAGACATCTGCAACTCGGAGGCGGAGGCAGCGGAGGAGGAGGATCTGGAGGAGGAGGATCTATTCAGAGGACACCTAAGATTCAAGTGTACTCTAGACATCCTGCTGAGAACGGCAAGAGCAACTTTCTGAACTGCTATGTGAGCGGCTTTCATCCTAGCGATATTGAAGTGGATCTGCTGAAAAACGGCGAACGTATTGAAAAAGTGGAACATAGCGATCTGAGCTTTAGCAAAGATTGGAGCTTTTATCTGCTGTATTATACCGAATTTACCCCTACCGAAAAAGATGAATATGCCTGCAGAGTGAACCATGTGACCCTGAGCCAGCCTAAGATTGTGAAATGGGATAGAGATATGGGAGGAGGAGGCTCTGGAGGAGGAGGATCTGGAGGCGGAGGCAGCGGCTCTCATAGCATGAGATATTTTAGCGCTGCAGTGAGCCGTCCTGGACGTGGAGAACCTAGGTTTATTGCTATGGGCTATGTGGATGATACCCAGTTTGTGAGGTTTGATAGCGATAGCGCCTCTCCTAGGATGGAACCTAGAGCTCCCTGGGTGGAACAGGAAGGCCCAGAATATTGGGAAGAAGAAACCAGGAACACCAAAGCACATGCTCAGACCGATCGTATGAACCTGCAGACCCTGAGAGGCTATTATAACCAGAGCGAAGCATCTAGCCATACCCTGCAGTGGATGATTGGCTGCGATCTGGGCAGCGATGGCAGACTGCTGAGAGGCTATGAACAGTATGCATATGATGGCAAAGATTATCTGGCACTGAACGAAGATCTGAGGAGCTGGACCGCTGCTGATACCGCTGCTCAGATTAGCAAGAGGAAGTGCGAAGCTGCTAACGTGGCTGAACAGAGACGCGCATATCTGGAAGGCACCTGCGTGGAATGGCTGCATAGGTATCTGGAAAACGGCAAAGAAATGCTGCAGAGAGCTGATCCTCCTAAAACCCATGTGACCCATCATCCTGTGTTTGATTATGAAGCTACCCTGAGGTGCTGGGCTCTGGGCTTCTATCCTGCTGAGATTATTCTGACCTGGCAGAGAGATGGAGAAGATCAGACTCAAGATGTCGAGTTGGTCGAGACTAGACCTGCTGGAGATGGCACCTTTCAGAAGTGGGCAGCTGTTGTCGTGCCTAGCGGAGAAGAACAGAGATATACCTGCCATGTGCAGCATGAAGGCCTGCCTGAACCTCTGATGCTGAGGTGGAAACAGAGCAGCTTGCCTACTATTCCTATTGGAGGAGGAGGATCTCACCATCATCATCATCACTGA 376
成熟蛋白質序列：RIIPRHLQL GGGGSGGGGSGGGGSIQRTPKIQVYSRHPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGERIEKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRDM GGGGSGGGGSGGGGSGSHSMRYFSAAVSRPGRGEPRFIAMGYVDDTQFVRFDSDSASPRMEPRAPWVEQEGPEYWEEETRNTKAHAQTDRMNLQTLRGYYNQSEASSHTLQWMIGCDLGSDGRLLRGYEQYAYDGKDYLALNEDLRSWTAADTAAQISKRKCEAANVAEQRRAYLEGTCVEWLHRYLENGKEMLQRADPPKTHVTHHPVFDYEATLRCWALGFYPAEIILTWQRDGEDQTQDVELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPEPLMLRWKQSSLPTIPIGGGGSHHHHHH 377
HYB:420，融合瘤，OMT大鼠 pDR000066413 (Mafa-AG-ECD-G4S-6XHis-GS-Avi T) GSHSMRYFYTAVSRPGRGQPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAESPRMEPRAPWVEQEGPEYWDRETQNMKTATQTYQANLRTLLRYYNQSEAGSHTFQKMYGCDLGPDGRLLRGYEQFAYDGRDYIILNEDLRSWTAADMAAQNTQRKWEAAGAAEQHRTYLEGECLEWLRRYLENGKETLQRADPPKTNVTHHPVSDYEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEEQTEDTELVETRPTGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWEPSSQSTILIGGGGSHHHHHHGSGLNDIFEAQKIEWHE 378
pDR000047703（食蟹獼猴β2-微球蛋白(b2M)） IQRTPKIQVYSRHPPENGKPNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGEKMGKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPNEKDEYACRVNHVTLSGPRTVKWDRDM 379
以HYB:420而言，OmniRat每週經免疫兩次，總共12次免疫追加，其係遵照多位點重覆免疫(RIMMS)規程，使用重組人類HLA-G1、人類HLA-G5及食蟹獼猴Mafa-AG（HLA-G1之同源物）蛋白質進行。最終細胞追加係使用衍生自K562細胞(ATCC® CCL-243™)之hHLA-G1 K562表現性細胞系執行。血清力價係經由盤上包覆免疫原之固相ELISA判定。收集引流淋巴結以用於淋巴細胞與FO骨髓瘤細胞(ATCC® CRL-1646™)之融合以產製融合瘤。
以HYB:423 而言，OmniRat係由人類HLA-G pDNA（pDR000057441（表 3 ）；C＞S變體）經由脛骨肌肉且隨後立即體內電穿孔多次來免疫。大鼠接受過度表現人類及食蟹獼猴HLA-G之細胞組合的最終追加。收集引流淋巴結並與FO骨髓瘤細胞融合以產製融合瘤。
以HYB:421 而言，OmniRat係由人類HLA-G pDNA注入各脛骨肌肉，隨後體內電穿孔來免疫。力價在第25天評估且範圍自0至800。使大鼠休息數個月，然後進一步用pDNA免疫，隨後用外源性過度表現人類HLA-G之K562細胞進行最終追加。在下游融合瘤產生中使用較低的引流淋巴結。
為了選擇用於下游篩選之抗體殖株，以其僅結合表現人類HLA-G之細胞，且不結合外源性表現HLA-A、HLA-B、及HLA-C之細胞或野生型K562細胞（其不表現細胞表面MHC第I型抗原）的能力來篩選融合瘤上清液。選擇展示＞ 20倍較高結合至K562-HLA-G及10倍較低結合至K562-HLA-A/B/C（相較於同型對照）之上清液進行v區定序及選殖。產生靜默格式-缺乏效應功能（IgG4 PAA或IgG1 AAS，其中「PAA」指示EU編號P228S、L234A、L235A且「AAS」指示L234A、L235A、D265S之突變）及活性格式-具有正常效應功能(IgG1)的單株抗體。抗體係表現於來自CHO細胞之上清液並且藉由蛋白質A親和力層析法單離。然後再篩選（如上所述）重組抗體對表現HLA-G之細胞的選擇性以及彼等結合重組HLA-G (MHGW2)的能力。從這些分析中，識別出一組48個獨特的v區，並選擇8個獨特的v區以用於進一步分析。這8個v區中的二個（衍生自MHGB688及MHGB694）係經生殖系最佳化以分別導致MHGB738及MHGB737。實例8. 抗HLA-G 抗體之結構表徵
所選抗HLA-G抗體之可變域係表現為Fab格式、呈VH-連接子-VL定向之scFv格式、或呈VL-連接子-VH定向之scFv格式。可變域VH 、VL 及CDR
表43 顯示所選抗HLA-G抗體之VH及VL胺基酸序列。表 44 顯示所選抗HLA-G抗體之Kabat HCDR1、HCDR2、及HCDR3。表 45 顯示所選抗HLA-G抗體之Kabat LCDR1、LCDR2、及LCDR3。表 46顯示所選抗HLA-G抗體之Chothia HCDR1、HCDR2、及HCDR3。表 47 顯示抗HLA-G之Chothia LCDR1、LCDR2、及LCDR3。表 48顯示所選抗HLA-G抗體之IMGT HCDR1、HCDR2、及HCDR3。表 49 顯示抗HLA-G之IMGT LCDR1、LCDR2、及LCDR3。表 50顯示所選抗HLA-G抗體之AbM HCDR1、HCDR2、及HCDR3。表 51 顯示抗HLA-G之AbM LCDR1、LCDR2、及LCDR3。表43. 所選抗HLA-G 抗體之可變區序列。
抗體 VH SEQ ID No: VL SEQ ID No:
MHGB665 MHGB732 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCAGDRRYGIVGLPFAYWGQGTLVTVSS 380 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLHSSNNKNYLTWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYYSTPPTFGQGTKVEIK 381
MHGB668 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARYGSGTLLFDYWGQGTLVTVSS 382 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSKNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTFPYTFGQGTKLEIK 383
MHGB669 QVQLQQSGPGLVRPSQTLSVTCAISGDSVSSNSASWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSEWFNDYAVSVKSRVTINPDTSKNQLSLQLNSVIPEDTAVYYCAREARIGVAGKGFDYWGQGTLVTVSS 384 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFRSNNKNYLAWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRTFGQGTKVEIK 385
MHGB672 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQTPSRGLEWLGRTYYRSEWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARVRAAVPFDYWGQGTLVTVSS 386 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPNLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAIYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIK 387
MHGB687 QLQLQESGPGLVKPSETLSLMCTVSGGSITSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGTTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAAGARDFDSWGQGSLVTVSS 388 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSSNKSYLAWYQQRPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRMYTFGQGTKLEIK 389
MHGB688 EVQLLESGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSS 390 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIK 391
MHGB689 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTTVTVSS 392 DIQMTQSPDSLAVSLGERATINCESSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTINRLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIK 393
MHGB694 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLDWVSGISGSGFSTYYVDSVKGRFTISRDNSKHTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDNLVAGTVFDYWGQGTLVTVSS 394 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSLTFGGGTKVDIK 395
MHGB737（GL最佳化B694） EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISGSGFSTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDNLVAGTVFDYWGQGTLVTVSS 396 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSLTFGGGTKVDIK 397
MHGB738（GL最佳化B688 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSS 398 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIK 399
表44. 所選抗HLA-G 選擇抗體之Kabat HCDR1 、HCDR2 、及HCDR3 。
  Kabat HCDR1 Kabat HCDR2 Kabat HCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO:
MHGB665 SNSAAWN 400 RTYYRSKWYNDYAVSVKS 401 DRRYGIVGLPFAY 402
MHGB668 NNSAAWN 403 RTYYRSKWYNDYAVSVKS 401 YGSGTLLFDY 405
MHGB669 SNSASWN 406 RTYYRSEWFNDYAVSVKS 407 EARIGVAGKGFDY 408
MHGB672 SNRAAWN 409 RTYYRSEWYNDYAVSVKS 410 VRAAVPFDY 411
MHGB687 SSSYYWG 412 NIYYSGTTYYNPSLKS 413 GARDFDS 414
MHGB688 SNRAAWN 409 RTYYRSKWYNDYAVSVKS 401 VRPGIPFDY 415
MHGB689 SNRAAWN 409 RTYYRSKWYNDYAVSVKS 401 VRPGIPFDY 415
MHGB694 SYAMH 416 GISGSGFSTYYVDSVKG 417 DNLVAGTVFDY 418
MHGB732 SNSAAWN 400 RTYYRSKWYNDYAVSVKS 401 DRRYGIVGLPFAY 402
MHGB737 SYAMH 416 GISGSGFSTYYVDSVKG 417 DNLVAGTVFDY 418
MHGB738 SNRAAWN 409 RTYYRSKWYNDYAVSVKS 401 VRPGIPFDY 415
表45. 所選抗HLA-G 抗體之Kabat LCDR1 、LCDR2 、及LCDR3 。
  Kabat LCDR1 Kabat LCDR2 Kabat LCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO:
MHGB665 KSSQSVLHSSNNKNYLT 419 WASTRES 420 HQYYSTPPT 421
MHGB668 KSSQSVLYSSKNKNYLA 422 WASTRES 420 QQYYSTFPYT 423
MHGB669 KSSQSVLFRSNNKNYLA 424 WASTRES 420 QQYYSTPRT 425
MHGB672 KSSQSVLFSSNNKNYLA 426 WASTRES 420 QQYHSTPWT 427
MHGB687 KSSQSVLYSSSNKSYLA 428 WASTRES 420 QQYYSTPRMYT 429
MHGB688 KSSQSVLFSSNKKNYLA 430 WASTRES 420 QQYNSTPWT 431
MHGB689 ESSQSVLFSSNKKNYLA 432 WASTRES 420 QQYNSTPWT 431
MHGB694 RASQSISSWLA 433 KASSLES 434 QQYNSYSLT 435
MHGB732 KSSQSVLHSSNNKNYLT 419 WASTRES 420 HQYYSTPPT 421
MHGB737 RASQSISSWLA 433 KASSLES 434 QQYNSYSLT 435
MHGB738 KSSQSVLFSSNNKNYLA 426 WASTRES 420 QQYHSTPWT 427
表46. 所選抗HLA-G 抗體之Chothia HCDR1 、HCDR2 、及HCDR3 。
  Chothia HCDR1 Chothia HCDR2 Chothia HCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO:
MHGB665 GDSVSSNSA 436 YYRSKWY 437 DRRYGIVGLPFA 438
MHGB668 GDSVSNNSA 439 YYRSKWY 437 YGSGTLLFD 440
MHGB669 GDSVSSNSA 436 YYRSEWF 441 EARIGVAGKGFD 442
MHGB672 GDSVSSNRA 443 YYRSEWY 444 VRAAVPFD 445
MHGB687 GGSITSSSY 446 YYSGT 447 GARDFD 448
MHGB688 GDSVSSNRA 443 YYRSKWY 437 VRPGIPFD 449
MHGB689 GDSVSSNRA 443 YYRSKWY 437 VRPGIPFD 449
MHGB694 GFTFSSY 450 SGSGFS 451 DNLVAGTVFD 452
MHGB732 GDSVSSNSA 436 YYRSKWY 437 DRRYGIVGLPFA 438
MHGB737 GFTFSSY 450 SGSGFS 451 DNLVAGTVFD 452
MHGB738 GDSVSSNRA 443 YYRSKWY 437 VRPGIPFD 449
表47. 抗HLA-G 抗體之Chothia LCDR1 、LCDR2 、及LCDR3 。
  Chothia LCDR1 Chothia LCDR2 Chothia LCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO:
MHGB665 SQSVLHSSNNKNY 453 WAS 454 YYSTPP 455
MHGB668 SQSVLYSSKNKNY 456 WAS 454 YYSTFPY 457
MHGB669 SQSVLFRSNNKNY 458 WAS 454 YYSTPR 459
MHGB672 SQSVLFSSNNKNY 460 WAS 454 YHSTPW 461
MHGB687 SQSVLYSSSNKSY 462 WAS 454 YYSTPRMY 728
MHGB688 SQSVLFSSNKKNY 463 WAS 454 YNSTPW 464
MHGB689 SQSVLFSSNKKNY 463 WAS 454 YNSTPW 464
MHGB694 SQSISSW 465 KAS 466 YNSYSL 467
MHGB732 SQSVLHSSNNKNY 453 WAS 454 YYSTPP 455
MHGB737 SQSISSW 465 KAS 466 YNSYSL 467
MHGB738 SQSVLFSSNNKNY 460 WAS 454 YHSTPW 461
表48. 所選抗HLA-G 抗體之IMGT HCDR1 、HCDR2 、及HCDR3 。
  IMGT HCDR1 IMGT HCDR2 IMGT HCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO:
MHGB665 GDSVSSNSAA 468 TYYRSKWYN 469 AGDRRYGIVGLPFAY 470
MHGB668 GDSVSNNSAA 471 TYYRSKWYN 469 ARYGSGTLLFDY 472
MHGB669 GDSVSSNSAS 473 TYYRSEWFN 474 AREARIGVAGKGFDY 475
MHGB672 GDSVSSNRAA 476 TYYRSEWYN 477 ARVRAAVPFDY 478
MHGB687 GGSITSSSYY 479 IYYSGTT 480 AAGARDFDS 481
MHGB688 GDSVSSNRAA 476 TYYRSKWYN 469 ARVRPGIPFDY 482
MHGB689 GDSVSSNRAA 476 TYYRSKWYN 469 ARVRPGIPFDY 482
MHGB694 GFTFSSYA 483 ISGSGFST 484 AKDNLVAGTVFDY 485
MHGB732 GDSVSSNSAA 468 TYYRSKWYN 469 AGDRRYGIVGLPFAY 470
MHGB737 GFTFSSYA 483 ISGSGFST 484 AKDNLVAGTVFDY 485
MHGB738 GDSVSSNRAA 476 TYYRSKWYN 469 ARVRPGIPFDY 482
表49. 抗HLA-G 抗體之IMGT LCDR1 、LCDR2 、及LCDR3 。
  IMGT LCDR1 IMGT LCDR2 IMGT LCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO:
MHGB665 QSVLHSSNNKNY 486 WAS 454 HQYYSTPPT 487
MHGB668 QSVLYSSKNKNY 488 WAS 454 QQYYSTFPYT 489
MHGB669 QSVLFRSNNKNY 490 WAS 454 QQYYSTPRT 491
MHGB672 QSVLFSSNNKNY 492 WAS 454 QQYHSTPWT 493
MHGB687 QSVLYSSSNKSY 494 WAS 454 QQYYSTPRMYT 495
MHGB688 QSVLFSSNKKNY 496 WAS 454 QQYNSTPWT 497
MHGB689 QSVLFSSNKKNY 496 WAS 454 QQYNSTPWT 497
MHGB694 QSISSW 498 KAS 466 QQYNSYSLT 499
MHGB732 QSVLHSSNNKNY 486 WAS 454 HQYYSTPPT 487
MHGB737 QSISSW 498 KAS 466 QQYNSYSLT 499
MHGB738 QSVLFSSNNKNY 492 WAS 454 QQYHSTPWT 493
表50. 所選抗HLA-G 抗體之AbM HCDR1 、HCDR2 、及HCDR3 。
  AbM HCDR1 AbM HCDR2 AbM HCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO:
MHGB665 GDSVSSNSAAWN 500 RTYYRSKWYND 501 DRRYGIVGLPFAY 502
MHGB668 GDSVSNNSAAWN 503 RTYYRSKWYND 501 YGSGTLLFDY 504
MHGB669 GDSVSSNSASWN 505 RTYYRSEWFND 506 EARIGVAGKGFDY 507
MHGB672 GDSVSSNRAAWN 508 RTYYRSEWYND 509 VRAAVPFDY 510
MHGB687 GGSITSSSYYWG 511 NIYYSGTTY 512 GARDFDS 513
MHGB688 GDSVSSNRAAWN 508 RTYYRSKWYND 501 VRPGIPFDY 514
MHGB689 GDSVSSNRAAWN 508 RTYYRSKWYND 501 VRPGIPFDY 514
MHGB694 GFTFSSYAMH 515 GISGSGFSTY 516 DNLVAGTVFDY 517
MHGB732 GDSVSSNSAAWN 500 RTYYRSKWYND 501 DRRYGIVGLPFAY 502
MHGB737 gftfssyamh 515 gisgsgfsty 516 dnlvagtvfdy 517
MHGB738 GDSVSSNRAAWN 508 RTYYRSKWYND 501 VRPGIPFDY 514
表51. 抗HLA-G 抗體之AbM LCDR1 、LCDR2 、及LCDR3 。
  AbM LCDR1 AbM LCDR2 AbM LCDR3
mAb名稱 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO: 序列 SEQ ID NO:
MHGB665 KSSQSVLHSSNNKNYLT 518 WASTRES 519 HQYYSTPPT 520
MHGB668 KSSQSVLYSSKNKNYLA 521 WASTRES 519 QQYYSTFPYT 522
MHGB669 KSSQSVLFRSNNKNYLA 523 WASTRES 519 QQYYSTPRT 524
MHGB672 KSSQSVLFSSNNKNYLA 525 WASTRES 519 QQYHSTPWT 526
MHGB687 KSSQSVLYSSSNKSYLA 527 WASTRES 519 QQYYSTPRMYT 528
MHGB688 KSSQSVLFSSNKKNYLA 529 WASTRES 519 QQYNSTPWT 530
MHGB689 ESSQSVLFSSNKKNYLA 531 WASTRES 519 QQYNSTPWT 530
MHGB694 RASQSISSWLA 532 KASSLES 533 QQYNSYSLT 534
MHGB732 KSSQSVLHSSNNKNYLT 518 WASTRES 519 HQYYSTPPT 520
MHGB737 rasqsisswla 532 kassles 533 qqynsyslt 534
MHGB738 KSSQSVLFSSNNKNYLA 525 WASTRES 519 QQYHSTPWT 526
生殖系最佳化
分析抗體之v區序列潛在轉譯後修飾之風險、生殖系適性、及格式化為scFv之能力。二種抗體MHGB694及MHGB688係經生殖系最佳化。MHGB694之v區含有二個生殖系突變（E46D及N77H），且此v區因此藉由這些殘基回復突變至在該些位點的生殖系序列來最佳化，以藉由VH域中D46E及H77N之突變來產生MHGB737可變區。MHGB688之v區類似地藉由VH域中E1Q、L5Q、E6Q、及S71P之突變及藉由VL中K30E、G66V之突變來最佳化。我們發現，MHGB688在位置92至93 (Kabat)處亦含有「NS」模體，其呈現脫醯胺之風險。由於MHGB672之VL除了在位置92至93處含有「HS」之外具有相同的LC-CDR，因此我們突變N92H。此改變之組合導致MHGB738。Fab-Fc 及scFv
HLA-G特異性VH/VL域係經工程改造以表現為抗體格式、或作為scFv、或作為雙特異性分子之臂（Fab-Fc或scFv-Fc）。抗體格式及Fab-Fc雙特異性臂格式包括作為VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3之重鏈及作為VL-CL之輕鏈且表現為IgG2或IgG4。scFv-Fc格式包括VH-連接子-VL-Fc或VL-連接子-VH-Fc定向。用於scFv之連接子係如上述之SEQ ID NO: 31之連接子。使用scFv-Fc及Fab-Fc產生如實例14所述之雙特異性抗體。
表52 顯示所選抗HLA-G抗體之HC胺基酸序列。表 53 顯示所選抗HLA-G抗體之LC胺基酸序列。表 54 彙總所選抗HLA-G抗體之HC及LC DNA SEQ ID NO。表 55 顯示所選呈VH-連接子-VL或VL-連接子-VH定向之scFv之胺基酸序列。表 56 顯示所選scFv-Fc之胺基酸序列。表 57 顯示呈scFv-Fc格式之所選抗HLA-G抗體的scFv及scFv-Fc DNA SEQ ID NO。表52. 所選呈mAb 格式之抗HLA-G 抗體之HC （VH-CH1- 鉸鏈-CH2-CH3 ）之胺基酸序列。
HLA-G重鏈 SEQ ID NO: 胺基酸序列
MHGB665 HC 535 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCAGDRRYGIVGLPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
MHGB668 HC 536 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARYGSGTLLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
MHGB669 HC 537 QVQLQQSGPGLVRPSQTLSVTCAISGDSVSSNSASWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSEWFNDYAVSVKSRVTINPDTSKNQLSLQLNSVIPEDTAVYYCAREARIGVAGKGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
MHGB672 HC 538 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQTPSRGLEWLGRTYYRSEWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARVRAAVPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
MHGB687 HC 539 QLQLQESGPGLVKPSETLSLMCTVSGGSITSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGTTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAAGARDFDSWGQGSLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
MHGB688 HC 540 EVQLLESGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
MHGB689 HC 541 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
MHGB694 HC 542 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLDWVSGISGSGFSTYYVDSVKGRFTISRDNSKHTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDNLVAGTVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
MHGB732 HC 543 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCAGDRRYGIVGLPFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
MHGB737 HC 544 EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISGSGFSTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDNLVAGTVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
MHGB738 HC 545 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
表53. 所選呈mAb (Fab-Fc) 格式之抗HLA-G 抗體之LC (VL-CL) 之胺基酸序列。
HLA-G輕鏈 SEQ ID NO: 胺基酸序列
MHGB665 546 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLHSSNNKNYLTWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYYSTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
MHGB668 547 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSKNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTFPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
MHGB669 548 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFRSNNKNYLAWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
MHGB672 549 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPNLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAIYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
MHGB687 550 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSSNKSYLAWYQQRPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRMYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
MHGB688 551 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
MHGB689 552 DIQMTQSPDSLAVSLGERATINCESSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTINRLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
MHGB694 553 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSLTFGGGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
MHGB732 554 divmtqspdslavslgeratinckssqsvlhssnnknyltwfqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyychqyystpptfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
MHGB737 555 DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSLTFGGGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
MHGB738 556 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
表54. 所選HLA-G 抗體之HC 及LC 的cDNA 序列之SEQ ID No
抗體 HC cDNA SEQ ID NO: LC cDNA SEQ ID NO:
MHGB665 557 558
MHGB668 559 560
MHGB669 561 562
MHGB672 563 564
MHGB687 565 566
MHGB688 567 568
MHGB689 569 570
MHGB694 571 572
MHGB732 573 574
MHGB737 575 576
MHGB738 577 578
SEQ ID NO: 557 CAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCCCTGGACTGGTGAAGCCCAGCCAGACCCTGAGCCTGACCTGCGCTATCAGCGGCGATAGCGTGAGCTCCAACAGCGCCGCCTGGAACTGGATCAGGCAGAGCCCTAGCAGGGGCCTGGAATGGCTGGGCAGGACCTACTACAGGAGCAAGTGGTACAACGACTACGCCGTGTCCGTGAAGAGCAGGATCACCATCAACCCCGACACCAGCAAGAACCAGATCAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGACCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCGGCGACAGAAGGTACGGCATCGTGGGCCTGCCTTTCGCCTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA SEQ ID NO: 558 GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTGGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGCACAGCAGCAACAACAAGAACTACCTGACCTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCTAGCACCAGAGAGTCCGGCGTGCCTGACAGGTTCAGCGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCACCAGTACTACAGCACCCCCCCTACCTTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT SEQ ID NO: 559 CAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGGCCTGGTGAAACCCAGCCAGACCCTGAGCCTGACCTGCGCCATCAGCGGCGACAGCGTGAGCAACAACAGCGCCGCCTGGAACTGGATCAGGCAGAGCCCCAGCAGAGGCCTGGAATGGCTGGGCAGGACCTACTACAGGAGCAAGTGGTACAACGACTACGCCGTGAGCGTGAAGAGCAGGATCACCATCAACCCCGACACCTCCAAGAACCAGTTCAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGACCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGTATGGCAGCGGCACCCTGCTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA 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CAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGGACTGGTGAGACCCAGCCAGACCCTGAGCGTGACCTGCGCCATCAGCGGCGACAGCGTGAGCAGCAACAGCGCCAGCTGGAACTGGATCAGGCAGAGCCCCAGCAGAGGCCTGGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGAGCGAGTGGTTCAACGACTACGCCGTGAGCGTGAAGAGCAGGGTGACCATCAACCCCGACACCAGCAAGAACCAGCTGAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGATCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGCCAGAATCGGCGTGGCCGGCAAAGGCTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA SEQ ID NO: 562 GACATCGTGATGACCCAGAGCCCTGACTCCCTGGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTTCAGGAGCAACAACAAGAACTACCTGGCCTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAGAGCGGCGTGCCCGATAGATTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCACCCCCAGAACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT SEQ ID NO: 563 CAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGAAGCCCAGCCAGACCCTGAGCCTGACATGCGCCATCAGCGGCGACAGCGTGAGCAGCAATAGGGCCGCCTGGAACTGGATCAGGCAGACCCCTAGCAGGGGCCTGGAATGGCTGGGCAGGACATACTACAGGAGCGAGTGGTACAACGACTACGCCGTGTCCGTGAAGAGCAGGATCACCATCAACCCCGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGACCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGTGAGAGCCGCCGTGCCTTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA SEQ ID NO: 564 GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTGGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTTTTCCAGCAACAACAAGAACTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCCGGCCAGCCCCCCAACCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAAAGCGGCGTGCCCGACAGGTTTAGCGGCAGCGTGAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGACGTGGCCATCTACTACTGCCAGCAGTACCACAGCACCCCCTGGACATTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT SEQ ID NO: 565 CAGCTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCTGGACTGGTGAAGCCCAGCGAGACCCTGAGCCTGATGTGCACCGTGAGCGGCGGCAGCATCACCAGCAGCAGCTACTACTGGGGATGGATCAGACAGCCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCAACATCTACTACAGCGGCACCACCTACTACAACCCCAGCCTGAAGAGCAGGGTGACCATCAGCGTGGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACAGCTGCCGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCGCCGGAGCCAGAGACTTCGACAGCTGGGGACAGGGCAGCCTGGTGACCGTGTCCAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA SEQ ID NO: 566 GACATCGTGATGACCCAGAGCCCTGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGAGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGTCCTCCCAGAGCGTGCTGTACAGCTCCAGCAACAAGAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAGGCCCGGACAGCCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAGAGCGGCGTGCCTGACAGGTTTAGCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCACCCCCAGGATGTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT SEQ ID NO: 567 GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGTCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGAGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAATTCAGACACATCCAAGAACCAGATCTCCCTGCAGTTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGTGAGACCGGGGATCCCATTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCCGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA SEQ ID NO: 568 GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATTCAGCTCCAACAAAAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCCCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATAATAGTACTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT SEQ ID NO: 569 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S EQ ID NO: 572 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGATATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT SEQ ID NO: 573 CAAGTACAACTGCAACAAAGTGGTCCTGGGCTCGTGAAGCCTTCCCAGACTCTCAGCCTCACATGCGCTATAAGTGGGGATTCTGTTTCCTCAAATTCAGCAGCCTGGAATTGGATACGACAGTCTCCATCCCGTGGCCTTGAGTGGCTTGGTAGAACTTATTACCGATCCAAGTGGTACAATGATTACGCCGTTTCAGTGAAGTCCCGCATTACTATTAATCCCGACACATCTAAGAATCAAATTTCATTGCAACTGAATAGCGTAACACCCGAAGATACAGCAGTTTATTATTGTGCAGGTGATCGACGCTACGGCATAGTGGGACTTCCTTTCGCCTATTGGGGCCAAGGGACACTGGTCACTGTGTCATCCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTGCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT SEQ ID NO: 574 GACATCGTAATGACACAGTCACCAGATTCATTGGCAGTTAGTCTGGGTGAAAGGGCAACAATCAACTGCAAGTCTTCTCAGAGTGTACTGCATAGTTCTAACAATAAGAACTACCTTACCTGGTTTCAACAGAAACCAGGTCAGCCCCCCAAGTTGCTGATTTACTGGGCAAGCACCCGCGAATCCGGCGTTCCCGATCGATTTTCAGGTTCCGGGAGTGGGACCGACTTTACCTTGACCATCTCTTCCTTGCAGGCCGAAGATGTAGCCGTCTATTACTGCCATCAGTATTACTCTACTCCCCCCACATTCGGTCAAGGTACAAAAGTTGAGATAAAACGGACAGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCTGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGT SEQ ID NO: 575 GAGGTGCAACTCCTTGAATCAGGCGGAGGACTCGTCCAACCTGGAGGGAGTCTTAGGCTTAGCTGTGCAGCCAGTGGCTTTACTTTTAGCAGCTATGCAATGCACTGGGTCAGGCAGGCTCCTGGTAAGGGGCTCGAATGGGTCAGCGGCATATCCGGGTCAGGTTTCTCTACATATTATGTCGATTCTGTAAAAGGACGATTCACCATATCCAGAGACAATTCTAAAAATACCTTGTATCTCCAGATGAACAGCCTGAGAGCAGAAGATACCGCAGTTTATTACTGTGCAAAGGATAATCTGGTTGCCGGGACAGTTTTTGATTATTGGGGGCAAGGCACCCTCGTCACAGTATCCAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTGCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT SEQ ID NO: 576 GATATTCAGATGACTCAATCACCTTCAACCCTTAGCGCCTCCGTTGGAGATCGCGTTACCATTACCTGCCGAGCCTCCCAAAGTATCAGCTCATGGTTGGCATGGTATCAACAGAAGCCTGGAAAGGCACCCAAACTTCTGATTTACAAAGCCAGCTCCTTGGAGTCAGGAGTCCCAAGCCGGTTCAGCGGATCTGGGTCAGGGACAGAATTTACCCTGACCATATCTTCCCTTCAGCCCGACGACTTCGCCACTTACTATTGTCAGCAATACAACTCCTATTCCCTGACTTTCGGCGGTGGCACAAAGGTTGACATCAAGCGGACAGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCTGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGT SEQ ID NO: 577 CAGGTGCAGCTTCAACAGAGCGGACCTGGTCTGGTTAAGCCTTCCCAAACCCTGAGCCTGACTTGTGCTATTTCCGGGGATAGTGTTAGCTCCAATAGGGCAGCATGGAACTGGATCAGACAGTCCCCAAGCCGTGGACTTGAGTGGCTTGGACGTACTTATTACAGGAGTAAATGGTACAATGATTATGCCGTTTCTGTGAAGAGCCGTATTACTATAAACCCAGATACTTCTAAAAATCAAATTTCCCTTCAGCTCAACTCAGTTACACCAGAGGATACTGCAGTCTATTATTGCGCAAGAGTTCGACCTGGCATTCCCTTCGATTATTGGGGGCAGGGGACACCCGTTACTGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTGCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT SEQ ID NO: 578 GATATTGTTATGACACAGTCCCCAGATTCATTGGCAGTAAGCCTCGGTGAACGGGCTACTATTAACTGTAAGTCTTCCCAGAGTGTATTGTTCTCTTCAAATAACAAAAACTACCTGGCATGGTATCAGCAAAAGCCTGGTCAACCCCCTAAACTTCTCATATACTGGGCATCCACTCGGGAGAGCGGTGTGCCAGACCGTTTCTCAGGGAGTGTGTCAGGTACAGATTTTACACTCACAATTTCCAGCCTCCAAGCCGAAGACGTTGCAGTATATTATTGCCAACAATATCACTCTACACCTTGGACATTTGGTCAAGGTACTAAAGTCGAAATCAAACGGACAGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCTGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGT表55. 呈VH- 連接子-VL (HL) 或呈VL- 連接子-VH (LH) 格式之抗HLA-G scFv 之胺基酸序列。
頭字語 scFv之胺基酸序列 SEQ ID NO:
MHGB665-HL QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCAGDRRYGIVGLPFAYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLHSSNNKNYLTWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYYSTPPTFGQGTKVEIK 579
MHGB665-LH DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLHSSNNKNYLTWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYYSTPPTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCAGDRRYGIVGLPFAYWGQGTLVTVSS 580
MHGB668-HL QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARYGSGTLLFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSKNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTFPYTFGQGTKLEIK 581
MHGB668-LH DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSKNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTFPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARYGSGTLLFDYWGQGTLVTVSS 582
MHGB669-HL QVQLQQSGPGLVRPSQTLSVTCAISGDSVSSNSASWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSEWFNDYAVSVKSRVTINPDTSKNQLSLQLNSVIPEDTAVYYCAREARIGVAGKGFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFRSNNKNYLAWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRTFGQGTKVEIK 583
MHGB669-LH DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFRSNNKNYLAWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVRPSQTLSVTCAISGDSVSSNSASWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSEWFNDYAVSVKSRVTINPDTSKNQLSLQLNSVIPEDTAVYYCAREARIGVAGKGFDYWGQGTLVTVSS 584
MHGB672-HL QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQTPSRGLEWLGRTYYRSEWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARVRAAVPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPNLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAIYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIK 585
MHGB672-LH DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPNLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAIYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQTPSRGLEWLGRTYYRSEWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARVRAAVPFDYWGQGTLVTVSS 586
MHGB687-HL QLQLQESGPGLVKPSETLSLMCTVSGGSITSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGTTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAAGARDFDSWGQGSLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSSNKSYLAWYQQRPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRMYTFGQGTKLEIK 587
MHGB687-LH DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSSNKSYLAWYQQRPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRMYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQLQLQESGPGLVKPSETLSLMCTVSGGSITSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGTTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAAGARDFDSWGQGSLVTVSS 588
MHGB688-HL EVQLLESGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIK 589
MHGB688-LH DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLLESGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSS 590
MHGB689-HL QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPDSLAVSLGERATINCESSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTINRLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIK 591
MHGB689-LH DIQMTQSPDSLAVSLGERATINCESSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTINRLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTTVTVSS 592
MHGB694-HL EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLDWVSGISGSGFSTYYVDSVKGRFTISRDNSKHTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDNLVAGTVFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSLTFGGGTKVDIK 593
MHGB694-LH DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSLTFGGGTKVDIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLDWVSGISGSGFSTYYVDSVKGRFTISRDNSKHTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDNLVAGTVFDYWGQGTLVTVSS 594
MHGB732-HL QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCAGDRRYGIVGLPFAYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLHSSNNKNYLTWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYYSTPPTFGQGTKVEIK 595
MHGB732-LH DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLHSSNNKNYLTWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYYSTPPTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCAGDRRYGIVGLPFAYWGQGTLVTVSS 596
MHGB737-HL EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISGSGFSTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDNLVAGTVFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSLTFGGGTKVDIK 597
MHGB737-LH DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSLTFGGGTKVDIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLEWVSGISGSGFSTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDNLVAGTVFDYWGQGTLVTVSS 598
MHGB738-HL QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIK 599
MHGB738-LH DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSS 600
表56. scFv-Fc 之胺基酸序列。
頭字語 scFv之胺基酸序列 SEQ ID NO:
MHGB665-HL-Fc QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCAGDRRYGIVGLPFAYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLHSSNNKNYLTWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYYSTPPTFGQGTKVEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 601
MHGB665-LH-Fc DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLHSSNNKNYLTWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYYSTPPTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCAGDRRYGIVGLPFAYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 602
MHGB668-HL-Fc QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARYGSGTLLFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSKNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTFPYTFGQGTKLEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 603
MHGB668-LH-Fc DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSKNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTFPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSNNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARYGSGTLLFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 604
MHGB669-HL-Fc QVQLQQSGPGLVRPSQTLSVTCAISGDSVSSNSASWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSEWFNDYAVSVKSRVTINPDTSKNQLSLQLNSVIPEDTAVYYCAREARIGVAGKGFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFRSNNKNYLAWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRTFGQGTKVEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 605
MHGB669-LH-Fc DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFRSNNKNYLAWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVRPSQTLSVTCAISGDSVSSNSASWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSEWFNDYAVSVKSRVTINPDTSKNQLSLQLNSVIPEDTAVYYCAREARIGVAGKGFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 606
MHGB672-HL-Fc QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQTPSRGLEWLGRTYYRSEWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARVRAAVPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPNLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAIYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 607
MHGB672-LH-Fc DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPNLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAIYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQTPSRGLEWLGRTYYRSEWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARVRAAVPFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 608
MHGB687-HL-Fc QLQLQESGPGLVKPSETLSLMCTVSGGSITSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGNIYYSGTTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAAGARDFDSWGQGSLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSSNKSYLAWYQQRPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPRMYTFGQGTKLEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 609
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MHGB688-HL-Fc EVQLLESGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 611
MHGB688-LH-Fc DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLLESGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 612
MHGB689-HL-Fc QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPDSLAVSLGERATINCESSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTINRLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 613
MHGB689-LH-Fc DIQMTQSPDSLAVSLGERATINCESSQSVLFSSNKKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTINRLQAEDVAVYYCQQYNSTPWTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCVISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINSDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTTVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 614
MHGB694-HL-Fc EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLDWVSGISGSGFSTYYVDSVKGRFTISRDNSKHTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDNLVAGTVFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSLTFGGGTKVDIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 615
MHGB694-LH-Fc DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYSLTFGGGTKVDIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMHWVRQAPGKGLDWVSGISGSGFSTYYVDSVKGRFTISRDNSKHTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDNLVAGTVFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 616
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MHGB738-LH-Fc DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 622
表57. 抗HLA-G scFv 及scFv-Fc 之cDNA 序列。
scFv或scFv-Fc cDNA SEQ ID NO: cDNA
MHGB665-HL 623 CAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCCCTGGACTGGTGAAGCCCAGCCAGACCCTGAGCCTGACCTGCGCTATCAGCGGCGATAGCGTGAGCTCCAACAGCGCCGCCTGGAACTGGATCAGGCAGAGCCCTAGCAGGGGCCTGGAATGGCTGGGCAGGACCTACTACAGGAGCAAGTGGTACAACGACTACGCCGTGTCCGTGAAGAGCAGGATCACCATCAACCCCGACACCAGCAAGAACCAGATCAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGACCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCGGCGACAGAAGGTACGGCATCGTGGGCCTGCCTTTCGCCTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTGGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGCACAGCAGCAACAACAAGAACTACCTGACCTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCTAGCACCAGAGAGTCCGGCGTGCCTGACAGGTTCAGCGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCACCAGTACTACAGCACCCCCCCTACCTTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
MHGB665-LH 624 GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTGGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGCACAGCAGCAACAACAAGAACTACCTGACCTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCTAGCACCAGAGAGTCCGGCGTGCCTGACAGGTTCAGCGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGACGTGGCCGTGTACTACTGCCACCAGTACTACAGCACCCCCCCTACCTTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCCCTGGACTGGTGAAGCCCAGCCAGACCCTGAGCCTGACCTGCGCTATCAGCGGCGATAGCGTGAGCTCCAACAGCGCCGCCTGGAACTGGATCAGGCAGAGCCCTAGCAGGGGCCTGGAATGGCTGGGCAGGACCTACTACAGGAGCAAGTGGTACAACGACTACGCCGTGTCCGTGAAGAGCAGGATCACCATCAACCCCGACACCAGCAAGAACCAGATCAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGACCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCGGCGACAGAAGGTACGGCATCGTGGGCCTGCCTTTCGCCTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
MHGB668-HL 625 CAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGGCCTGGTGAAACCCAGCCAGACCCTGAGCCTGACCTGCGCCATCAGCGGCGACAGCGTGAGCAACAACAGCGCCGCCTGGAACTGGATCAGGCAGAGCCCCAGCAGAGGCCTGGAATGGCTGGGCAGGACCTACTACAGGAGCAAGTGGTACAACGACTACGCCGTGAGCGTGAAGAGCAGGATCACCATCAACCCCGACACCTCCAAGAACCAGTTCAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGACCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGTATGGCAGCGGCACCCTGCTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTGGCTGTGAGCCTGGGAGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTACAGCAGCAAGAACAAGAACTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACAAGGGAAAGCGGCGTGCCCGACAGATTCAGCGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCACCTTCCCCTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
MHGB668-LH 626 GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTGGCTGTGAGCCTGGGAGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTACAGCAGCAAGAACAAGAACTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCCGGCCAGCCCCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACAAGGGAAAGCGGCGTGCCCGACAGATTCAGCGGAAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCACCTTCCCCTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGGCCTGGTGAAACCCAGCCAGACCCTGAGCCTGACCTGCGCCATCAGCGGCGACAGCGTGAGCAACAACAGCGCCGCCTGGAACTGGATCAGGCAGAGCCCCAGCAGAGGCCTGGAATGGCTGGGCAGGACCTACTACAGGAGCAAGTGGTACAACGACTACGCCGTGAGCGTGAAGAGCAGGATCACCATCAACCCCGACACCTCCAAGAACCAGTTCAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGACCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGGTATGGCAGCGGCACCCTGCTGTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCAGC
MHGB669-HL 627 CAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGGACTGGTGAGACCCAGCCAGACCCTGAGCGTGACCTGCGCCATCAGCGGCGACAGCGTGAGCAGCAACAGCGCCAGCTGGAACTGGATCAGGCAGAGCCCCAGCAGAGGCCTGGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGAGCGAGTGGTTCAACGACTACGCCGTGAGCGTGAAGAGCAGGGTGACCATCAACCCCGACACCAGCAAGAACCAGCTGAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGATCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGCCAGAATCGGCGTGGCCGGCAAAGGCTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCGTGATGACCCAGAGCCCTGACTCCCTGGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTTCAGGAGCAACAACAAGAACTACCTGGCCTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAGAGCGGCGTGCCCGATAGATTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCACCCCCAGAACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
MHGB669-LH 628 GACATCGTGATGACCCAGAGCCCTGACTCCCTGGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTTCAGGAGCAACAACAAGAACTACCTGGCCTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAGAGCGGCGTGCCCGATAGATTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCACCCCCAGAACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGGACTGGTGAGACCCAGCCAGACCCTGAGCGTGACCTGCGCCATCAGCGGCGACAGCGTGAGCAGCAACAGCGCCAGCTGGAACTGGATCAGGCAGAGCCCCAGCAGAGGCCTGGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGAGCGAGTGGTTCAACGACTACGCCGTGAGCGTGAAGAGCAGGGTGACCATCAACCCCGACACCAGCAAGAACCAGCTGAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGATCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGCCAGAATCGGCGTGGCCGGCAAAGGCTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCAGC
MHGB672-HL 629 CAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGAAGCCCAGCCAGACCCTGAGCCTGACATGCGCCATCAGCGGCGACAGCGTGAGCAGCAATAGGGCCGCCTGGAACTGGATCAGGCAGACCCCTAGCAGGGGCCTGGAATGGCTGGGCAGGACATACTACAGGAGCGAGTGGTACAACGACTACGCCGTGTCCGTGAAGAGCAGGATCACCATCAACCCCGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGACCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGTGAGAGCCGCCGTGCCTTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTGGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTTTTCCAGCAACAACAAGAACTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCCGGCCAGCCCCCCAACCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAAAGCGGCGTGCCCGACAGGTTTAGCGGCAGCGTGAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGACGTGGCCATCTACTACTGCCAGCAGTACCACAGCACCCCCTGGACATTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
MHGB672-LH 630 GACATCGTGATGACCCAGAGCCCCGATAGCCTGGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTTTTCCAGCAACAACAAGAACTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCCGGCCAGCCCCCCAACCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAAAGCGGCGTGCCCGACAGGTTTAGCGGCAGCGTGAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGACGTGGCCATCTACTACTGCCAGCAGTACCACAGCACCCCCTGGACATTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGAAGCCCAGCCAGACCCTGAGCCTGACATGCGCCATCAGCGGCGACAGCGTGAGCAGCAATAGGGCCGCCTGGAACTGGATCAGGCAGACCCCTAGCAGGGGCCTGGAATGGCTGGGCAGGACATACTACAGGAGCGAGTGGTACAACGACTACGCCGTGTCCGTGAAGAGCAGGATCACCATCAACCCCGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGACCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGTGAGAGCCGCCGTGCCTTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGAGCAGC
MHGB687-HL 631 CAGCTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCTGGACTGGTGAAGCCCAGCGAGACCCTGAGCCTGATGTGCACCGTGAGCGGCGGCAGCATCACCAGCAGCAGCTACTACTGGGGATGGATCAGACAGCCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCAACATCTACTACAGCGGCACCACCTACTACAACCCCAGCCTGAAGAGCAGGGTGACCATCAGCGTGGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACAGCTGCCGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCGCCGGAGCCAGAGACTTCGACAGCTGGGGACAGGGCAGCCTGGTGACCGTGTCCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCGTGATGACCCAGAGCCCTGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGAGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGTCCTCCCAGAGCGTGCTGTACAGCTCCAGCAACAAGAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAGGCCCGGACAGCCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAGAGCGGCGTGCCTGACAGGTTTAGCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCACCCCCAGGATGTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
MHGB687-LH 632 GACATCGTGATGACCCAGAGCCCTGATAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGAGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGTCCTCCCAGAGCGTGCTGTACAGCTCCAGCAACAAGAGCTACCTGGCCTGGTACCAGCAGAGGCCCGGACAGCCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAGAGCGGCGTGCCTGACAGGTTTAGCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCACCCCCAGGATGTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAGCTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCTGGACTGGTGAAGCCCAGCGAGACCCTGAGCCTGATGTGCACCGTGAGCGGCGGCAGCATCACCAGCAGCAGCTACTACTGGGGATGGATCAGACAGCCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCAACATCTACTACAGCGGCACCACCTACTACAACCCCAGCCTGAAGAGCAGGGTGACCATCAGCGTGGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACAGCTGCCGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCGCCGGAGCCAGAGACTTCGACAGCTGGGGACAGGGCAGCCTGGTGACCGTGTCCAGC
MHGB688-HL 633 GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGTCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGAGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAATTCAGACACATCCAAGAACCAGATCTCCCTGCAGTTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGTGAGACCGGGGATCCCATTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCCGGTCACCGTCTCCTCAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATTCAGCTCCAACAAAAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCCCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATAATAGTACTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
MHGB688-LH 634 GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATTCAGCTCCAACAAAAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCCCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATAATAGTACTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAGATCAAAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGTTGGAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGTCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGAGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAATTCAGACACATCCAAGAACCAGATCTCCCTGCAGTTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGTGAGACCGGGGATCCCATTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCCGGTCACCGTCTCCTCA
MHGB689-HL 635 CAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGTCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGAGCTGCCTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCAGTTTCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAATTCAGACACATCCAAGAACCAGATCTCCCTGCAGTTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGTGAGACCGGGGATCCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCACGGTCACCGTCTCCTCAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCGAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATTCAGCTCCAACAAAAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCCCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACCGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATAATAGTACTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
MHGB689-LH 636 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCGAGTCCAGCCAGAGTGTTTTATTCAGCTCCAACAAAAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGCCCCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGGTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACCGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATATAATAGTACTCCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAGATCAAAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAGGTACAGCTGCAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGTCATCTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGAGCTGCCTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATAATGATTATGCAGTTTCTGTGAAAAGTCGAATAACCATCAATTCAGACACATCCAAGAACCAGATCTCCCTGCAGTTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCAAGAGTGAGACCGGGGATCCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCACGGTCACCGTCTCCTCA
MHGB694-HL 637 GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCCCCAGGGAAGGGGCTGGACTGGGTCTCAGGTATTAGTGGTAGTGGCTTTAGCACATACTATGTAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGCACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATAATTTAGTGGCTGGTACCGTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGATATCAAA
MHGB694-LH 638 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGATATCAAAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCCCCAGGGAAGGGGCTGGACTGGGTCTCAGGTATTAGTGGTAGTGGCTTTAGCACATACTATGTAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGCACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATAATTTAGTGGCTGGTACCGTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
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MHGB732-LH 640 GACATCGTAATGACACAGTCACCAGATTCATTGGCAGTTAGTCTGGGTGAAAGGGCAACAATCAACTGCAAGTCTTCTCAGAGTGTACTGCATAGTTCTAACAATAAGAACTACCTTACCTGGTTTCAACAGAAACCAGGTCAGCCCCCCAAGTTGCTGATTTACTGGGCAAGCACCCGCGAATCCGGCGTTCCCGATCGATTTTCAGGTTCCGGGAGTGGGACCGACTTTACCTTGACCATCTCTTCCTTGCAGGCCGAAGATGTAGCCGTCTATTACTGCCATCAGTATTACTCTACTCCCCCCACATTCGGTCAAGGTACAAAAGTTGAGATAAAAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAAGTACAACTGCAACAAAGTGGTCCTGGGCTCGTGAAGCCTTCCCAGACTCTCAGCCTCACATGCGCTATAAGTGGGGATTCTGTTTCCTCAAATTCAGCAGCCTGGAATTGGATACGACAGTCTCCATCCCGTGGCCTTGAGTGGCTTGGTAGAACTTATTACCGATCCAAGTGGTACAATGATTACGCCGTTTCAGTGAAGTCCCGCATTACTATTAATCCCGACACATCTAAGAATCAAATTTCATTGCAACTGAATAGCGTAACACCCGAAGATACAGCAGTTTATTATTGTGCAGGTGATCGACGCTACGGCATAGTGGGACTTCCTTTCGCCTATTGGGGCCAAGGGACACTGGTCACTGTGTCATCC
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MHGB669-LH-Fc 650 GACATCGTGATGACCCAGAGCCCTGACTCCCTGGCTGTGAGCCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGAGCAGCCAGAGCGTGCTGTTCAGGAGCAACAACAAGAACTACCTGGCCTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCCAAGCTGCTGATCTACTGGGCCAGCACCAGAGAGAGCGGCGTGCCCGATAGATTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTACTGCCAGCAGTACTACAGCACCCCCAGAACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGGACTGGTGAGACCCAGCCAGACCCTGAGCGTGACCTGCGCCATCAGCGGCGACAGCGTGAGCAGCAACAGCGCCAGCTGGAACTGGATCAGGCAGAGCCCCAGCAGAGGCCTGGAGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGAGCGAGTGGTTCAACGACTACGCCGTGAGCGTGAAGAGCAGGGTGACCATCAACCCCGACACCAGCAAGAACCAGCTGAGCCTGCAGCTGAACAGCGTGATCCCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGAGAGGCCAGAATCGGCGTGGCCGGCAAAGGCTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTCCAGCgagcccaaatctagcgacaaaactcacacttgtccaccgtgcccagcacctgaagcagcagggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgagcgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacgtgctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgctgtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacctcacctggcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagtccagatggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagtctctctccctgtctccgggaaaa
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MHGB694-LH-Fc 660 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGATATCAAAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCCCCAGGGAAGGGGCTGGACTGGGTCTCAGGTATTAGTGGTAGTGGCTTTAGCACATACTATGTAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGCACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAGATAATTTAGTGGCTGGTACCGTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAgagcccaaatctagcgacaaaactcacacttgtccaccgtgcccagcacctgaagcagcagggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgagcgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacgtgctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgctgtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacctcacctggcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagtccagatggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagtctctctccctgtctccgggaaaa
MHGB732-HL-Fc 661 CAAGTACAACTGCAACAAAGTGGTCCTGGGCTCGTGAAGCCTTCCCAGACTCTCAGCCTCACATGCGCTATAAGTGGGGATTCTGTTTCCTCAAATTCAGCAGCCTGGAATTGGATACGACAGTCTCCATCCCGTGGCCTTGAGTGGCTTGGTAGAACTTATTACCGATCCAAGTGGTACAATGATTACGCCGTTTCAGTGAAGTCCCGCATTACTATTAATCCCGACACATCTAAGAATCAAATTTCATTGCAACTGAATAGCGTAACACCCGAAGATACAGCAGTTTATTATTGTGCAGGTGATCGACGCTACGGCATAGTGGGACTTCCTTTCGCCTATTGGGGCCAAGGGACACTGGTCACTGTGTCATCCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCGTAATGACACAGTCACCAGATTCATTGGCAGTTAGTCTGGGTGAAAGGGCAACAATCAACTGCAAGTCTTCTCAGAGTGTACTGCATAGTTCTAACAATAAGAACTACCTTACCTGGTTTCAACAGAAACCAGGTCAGCCCCCCAAGTTGCTGATTTACTGGGCAAGCACCCGCGAATCCGGCGTTCCCGATCGATTTTCAGGTTCCGGGAGTGGGACCGACTTTACCTTGACCATCTCTTCCTTGCAGGCCGAAGATGTAGCCGTCTATTACTGCCATCAGTATTACTCTACTCCCCCCACATTCGGTCAAGGTACAAAAGTTGAGATAAAAgagcccaaatctagcgacaaaactcacacttgtccaccgtgcccagcacctgaagcagcagggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgagcgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacgtgctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgctgtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacctcacctggcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagtccagatggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagtctctctccctgtctccgggaaaa
MHGB732-LH-Fc 662 GACATCGTAATGACACAGTCACCAGATTCATTGGCAGTTAGTCTGGGTGAAAGGGCAACAATCAACTGCAAGTCTTCTCAGAGTGTACTGCATAGTTCTAACAATAAGAACTACCTTACCTGGTTTCAACAGAAACCAGGTCAGCCCCCCAAGTTGCTGATTTACTGGGCAAGCACCCGCGAATCCGGCGTTCCCGATCGATTTTCAGGTTCCGGGAGTGGGACCGACTTTACCTTGACCATCTCTTCCTTGCAGGCCGAAGATGTAGCCGTCTATTACTGCCATCAGTATTACTCTACTCCCCCCACATTCGGTCAAGGTACAAAAGTTGAGATAAAAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAAGTACAACTGCAACAAAGTGGTCCTGGGCTCGTGAAGCCTTCCCAGACTCTCAGCCTCACATGCGCTATAAGTGGGGATTCTGTTTCCTCAAATTCAGCAGCCTGGAATTGGATACGACAGTCTCCATCCCGTGGCCTTGAGTGGCTTGGTAGAACTTATTACCGATCCAAGTGGTACAATGATTACGCCGTTTCAGTGAAGTCCCGCATTACTATTAATCCCGACACATCTAAGAATCAAATTTCATTGCAACTGAATAGCGTAACACCCGAAGATACAGCAGTTTATTATTGTGCAGGTGATCGACGCTACGGCATAGTGGGACTTCCTTTCGCCTATTGGGGCCAAGGGACACTGGTCACTGTGTCATCCgagcccaaatctagcgacaaaactcacacttgtccaccgtgcccagcacctgaagcagcagggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgagcgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacgtgctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgctgtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacctcacctggcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagtccagatggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagtctctctccctgtctccgggaaaa
MHGB737-HL-Fc 663 GAGGTGCAACTCCTTGAATCAGGCGGAGGACTCGTCCAACCTGGAGGGAGTCTTAGGCTTAGCTGTGCAGCCAGTGGCTTTACTTTTAGCAGCTATGCAATGCACTGGGTCAGGCAGGCTCCTGGTAAGGGGCTCGAATGGGTCAGCGGCATATCCGGGTCAGGTTTCTCTACATATTATGTCGATTCTGTAAAAGGACGATTCACCATATCCAGAGACAATTCTAAAAATACCTTGTATCTCCAGATGAACAGCCTGAGAGCAGAAGATACCGCAGTTTATTACTGTGCAAAGGATAATCTGGTTGCCGGGACAGTTTTTGATTATTGGGGGCAAGGCACCCTCGTCACAGTATCCAGTGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGATATTCAGATGACTCAATCACCTTCAACCCTTAGCGCCTCCGTTGGAGATCGCGTTACCATTACCTGCCGAGCCTCCCAAAGTATCAGCTCATGGTTGGCATGGTATCAACAGAAGCCTGGAAAGGCACCCAAACTTCTGATTTACAAAGCCAGCTCCTTGGAGTCAGGAGTCCCAAGCCGGTTCAGCGGATCTGGGTCAGGGACAGAATTTACCCTGACCATATCTTCCCTTCAGCCCGACGACTTCGCCACTTACTATTGTCAGCAATACAACTCCTATTCCCTGACTTTCGGCGGTGGCACAAAGGTTGACATCAAGgagcccaaatctagcgacaaaactcacacttgtccaccgtgcccagcacctgaagcagcagggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgagcgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacgtgctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgctgtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacctcacctggcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagtccagatggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagtctctctccctgtctccgggaaaa
MHGB737-LH-Fc 664 GATATTCAGATGACTCAATCACCTTCAACCCTTAGCGCCTCCGTTGGAGATCGCGTTACCATTACCTGCCGAGCCTCCCAAAGTATCAGCTCATGGTTGGCATGGTATCAACAGAAGCCTGGAAAGGCACCCAAACTTCTGATTTACAAAGCCAGCTCCTTGGAGTCAGGAGTCCCAAGCCGGTTCAGCGGATCTGGGTCAGGGACAGAATTTACCCTGACCATATCTTCCCTTCAGCCCGACGACTTCGCCACTTACTATTGTCAGCAATACAACTCCTATTCCCTGACTTTCGGCGGTGGCACAAAGGTTGACATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAACTCCTTGAATCAGGCGGAGGACTCGTCCAACCTGGAGGGAGTCTTAGGCTTAGCTGTGCAGCCAGTGGCTTTACTTTTAGCAGCTATGCAATGCACTGGGTCAGGCAGGCTCCTGGTAAGGGGCTCGAATGGGTCAGCGGCATATCCGGGTCAGGTTTCTCTACATATTATGTCGATTCTGTAAAAGGACGATTCACCATATCCAGAGACAATTCTAAAAATACCTTGTATCTCCAGATGAACAGCCTGAGAGCAGAAGATACCGCAGTTTATTACTGTGCAAAGGATAATCTGGTTGCCGGGACAGTTTTTGATTATTGGGGGCAAGGCACCCTCGTCACAGTATCCAGTgagcccaaatctagcgacaaaactcacacttgtccaccgtgcccagcacctgaagcagcagggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgagcgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacgtgctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgctgtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacctcacctggcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagtccagatggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagtctctctccctgtctccgggaaaa
MHGB738-HL-Fc 665 CAGGTGCAGCTTCAACAGAGCGGACCTGGTCTGGTTAAGCCTTCCCAAACCCTGAGCCTGACTTGTGCTATTTCCGGGGATAGTGTTAGCTCCAATAGGGCAGCATGGAACTGGATCAGACAGTCCCCAAGCCGTGGACTTGAGTGGCTTGGACGTACTTATTACAGGAGTAAATGGTACAATGATTATGCCGTTTCTGTGAAGAGCCGTATTACTATAAACCCAGATACTTCTAAAAATCAAATTTCCCTTCAGCTCAACTCAGTTACACCAGAGGATACTGCAGTCTATTATTGCGCAAGAGTTCGACCTGGCATTCCCTTCGATTATTGGGGGCAGGGGACACCCGTTACTGTGTCCTCAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGATATTGTTATGACACAGTCCCCAGATTCATTGGCAGTAAGCCTCGGTGAACGGGCTACTATTAACTGTAAGTCTTCCCAGAGTGTATTGTTCTCTTCAAATAACAAAAACTACCTGGCATGGTATCAGCAAAAGCCTGGTCAACCCCCTAAACTTCTCATATACTGGGCATCCACTCGGGAGAGCGGTGTGCCAGACCGTTTCTCAGGGAGTGTGTCAGGTACAGATTTTACACTCACAATTTCCAGCCTCCAAGCCGAAGACGTTGCAGTATATTATTGCCAACAATATCACTCTACACCTTGGACATTTGGTCAAGGTACTAAAGTCGAAATCAAAgagcccaaatctagcgacaaaactcacacttgtccaccgtgcccagcacctgaagcagcagggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgagcgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacgtgctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgctgtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacctcacctggcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagtccagatggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagtctctctccctgtctccgggaaaa
MHGB738-LH-Fc 666 GATATTGTTATGACACAGTCCCCAGATTCATTGGCAGTAAGCCTCGGTGAACGGGCTACTATTAACTGTAAGTCTTCCCAGAGTGTATTGTTCTCTTCAAATAACAAAAACTACCTGGCATGGTATCAGCAAAAGCCTGGTCAACCCCCTAAACTTCTCATATACTGGGCATCCACTCGGGAGAGCGGTGTGCCAGACCGTTTCTCAGGGAGTGTGTCAGGTACAGATTTTACACTCACAATTTCCAGCCTCCAAGCCGAAGACGTTGCAGTATATTATTGCCAACAATATCACTCTACACCTTGGACATTTGGTCAAGGTACTAAAGTCGAAATCAAAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAGGTGCAGCTTCAACAGAGCGGACCTGGTCTGGTTAAGCCTTCCCAAACCCTGAGCCTGACTTGTGCTATTTCCGGGGATAGTGTTAGCTCCAATAGGGCAGCATGGAACTGGATCAGACAGTCCCCAAGCCGTGGACTTGAGTGGCTTGGACGTACTTATTACAGGAGTAAATGGTACAATGATTATGCCGTTTCTGTGAAGAGCCGTATTACTATAAACCCAGATACTTCTAAAAATCAAATTTCCCTTCAGCTCAACTCAGTTACACCAGAGGATACTGCAGTCTATTATTGCGCAAGAGTTCGACCTGGCATTCCCTTCGATTATTGGGGGCAGGGGACACCCGTTACTGTGTCCTCAgagcccaaatctagcgacaaaactcacacttgtccaccgtgcccagcacctgaagcagcagggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgagcgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtgtccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacgtgctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgctgtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacctcacctggcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagtccagatggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagtctctctccctgtctccgggaaaa
實例9. 抗HLA-G 抗體之生物物理表徵 抗HLA-G 抗體之熱穩定性
篩選呈scFv格式之原始及生殖系最佳化v區的熱穩定性。簡言之，將v區選殖至scFv格式並於大腸桿菌中表現。藉由ELISA評估培養上清液結合重組HLA-G之能力。亦在55、60、或65℃下熱休克上清液樣本，並將熱休克樣本之結合與未加熱樣本比較。此分析提供當v區格式化為scFv時熱穩定性之估計值。基於此分析，MHGB737及MHGB738（分別為MHGB694及MHGB688之種系最佳化版本）係較佳。
圖12 及表 58 顯示格式化為scFv之v區在熱處理之後結合重組HLA-G的能力。V區在來自大腸桿菌之上清液中係表現為scFv，並藉由ELISA分析彼等結合重組HLA-G之能力。樣本在室溫下或在55、60、或65℃下熱處理10 min之後測試。B23係同型對照。表58. 分析格式化為scFv 之v 區在熱處理之後的抗原結合。
scFv 之親本抗體 室溫結合信號 所保留之結合%
55 ℃ 60 ℃ 65 ℃
MHGB665 15215600 103 122 11
MHGB668 無結合
MHGB669 無結合
MHGB672 無結合
MHGB687 無結合
MHGB688 無結合
MHGB689 3073733 2 3 4
MHGB694 3073733 85 9 4
MHGB737（GL最佳化B694） 2747333 84 80 48
MHGB738（GL最佳化B688） 5758400 14 2 1
結合特異性及親和力
測試IgG1 mAb格式中的v區特異性結合表現HLA-G但非其他MHC第I型分子之細胞的能力（表 59 ）。簡言之，將1.5 × 107 個細胞用1 × PBS洗滌2次，並重懸於7 mL之1 × PBS並培養10 min。在培養之後，添加8 mL之胎牛血清(FBS)，藉由300 × g離心5 min洗滌細胞且以1 × 106 個細胞/mL重懸於補充有10% FBS之DMEM。接著藉由300 × g離心5 min洗滌細胞且重懸於補充有山羊抗人類Fc A647 (Jackson cat. # 109-606-098)之染色緩衝劑，並在4℃下培養30 min。在培養之後，添加150 µL之染色緩衝劑且藉由300 × g離心5 min洗滌細胞。將細胞重懸於200 µL之運行緩衝劑（補充有1 mM EDTA、0.1% (v/v)普魯康酸之染色緩衝劑）且藉由300 × g離心5 min洗滌。將細胞重懸於30 mL之運行緩衝劑並藉由流動式細胞測量術來分析抗體結合。表59. 抗HLA-G 抗體之基於細胞之選擇性。幾何平均螢光信號報告結合的最大值。
抗體 HLA-G HLA-A HLA-B HLA-C
MHGB665幾何平均數 631628 9956 10436 11586
MHGB668幾何平均數 590753 4574 6323 4941
MHGB669幾何平均數 616340 8142 8312 10950
MHGB672幾何平均數 522292 158 4263 2447
MHGB687幾何平均數 527964 28765 22936 35939
MHGB688幾何平均數 481619 2860 6290 2226
MHGB689幾何平均數 536504 2541 5787 266
MHGB694幾何平均數 472613 2874 4853 3974
接下來，使用表面電漿共振(SPR)測試作為mAb之v區結合重組HLA-G之能力。SPR係一種無標示技術，其藉由在複合物形成及解離時測量質量變化來研究二個結合伴之間的交互作用強度。簡言之，將抗體固定在感測器晶片上，該抗體係與山羊抗人類Fc偶合。使可溶性HLA-G1胞外域(MHGW8)流經固定抗體，並監測締合/解離反應。藉由擬合感測曲線圖至1:1 Langmuir模型來擷取動力學資訊（締合速率及解離速率常數）。結合親和力(KD )係報導為速率常數之比率(koff /kon )。抗體親和力(Kd )之範圍自約77 pM至2.6 nM，且顯示於表 60 。表60. 可變區結合至HLA-G (MHGW8) 的基於SPR 之親和力測量。
抗體 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (M)
MHGB665 / MHGB732 5.18E+05 4.00E-05 7.71E-11
MHGB669 3.15E+05 4.53E-04 1.44E-09
MHGB672 3.25E+06 1.79E-03 5.50E-10
MHGB687 1.89E+05 1.53E-04 8.09E-10
MHGB688 6.58E+05 2.63E-04 4.00E-10
MHGB694 2.08E+06 2.40E-03 1.15E-09
MHGB737 1.996E+5 3.103E-4 2.555E-9
MHGB738 2.03E+10 2.83E+00 1.39E-10
實例10. 配體阻斷
HLA-G在某些腫瘤類型上過度表現，且因此可作為腫瘤細胞之標記。此外，HLA-G結合至配體ILT2及ILT4，該配體係表現在免疫效應細胞諸如NK細胞上4,5 。介於HLA-G與ILT2/ILT4之間的交互作用導致抑制NK細胞活性。因此，我們假設與ILT2/4競爭結合至HLA-G之抗體將防止腫瘤細胞與NK細胞之間的抑制性交互作用，且導致增加的NK介導之腫瘤細胞殺滅。為了驗證此假設，我們首先使用競爭檢定來檢定抗體是否可阻斷在HLA-G與ILT2/4之間的交互作用。在HLA-G-右旋聚體複合物與外源性表現ILT2或ILT4受體之HEK293T細胞之間的結合導致螢光信號。添加與介於HLA-G-右旋聚體與ILT-2/4細胞之間的交互作用競爭之mAb導致螢光信號降低。螢光信號抑制之倒數與mAb之配體阻斷抑制相關（表 60 ）。簡言之，重組生物素化HLA-G1 (MHGW8)結合至多鏈黴抗生物素蛋白APC-右旋聚體(Immudex cat. # DX01-APC)的最終比率為每個右旋聚體分子大約4個HLA-G1蛋白質。將右旋聚體-HLA-G複合物與外源性表現ILT-2之HEK293T細胞或外源性表現ILT-4之細胞混合並在4℃下培養30 min。將抗HLA-G抗體以各濃度添加，並在℃下與右旋聚體-HLA-G複合物培養30 min。添加細胞（25,000個細胞）並在4℃下培養30 min。在培養之後，將細胞與右旋聚體HLA-G複合物之混合物藉由離心洗滌，重懸於30 µL之運行緩衝劑(Thermo BD cat. #554657)。藉由流動式細胞測量術使用Intellicyt® iQue Screener Plus分析經重懸之混合物的螢光信號。首先在單細胞上進行閘控，接著活細胞使用Sytox™藍色死亡細胞染料(ThermoFisher)，接著在GFP上閘控表現ILT-2/4之細胞，接著在APC上閘控經結合之右旋聚體-HLA-G複合物。除了MHGB737以外的所有抗體可抑制HLA-G與ILT4之交互作用，且除了MHGB737及MHGB687以外的所有抗體可抑制與ILT2之交互作用（表 61）。這表明在此活動中發現的抗體可靶向腫瘤且緩解藉由腫瘤細胞的免疫抑制。表61. 抗體之配體阻斷性質
抗體 ILT2 EC50 (nM) ILT4 EC50 (nM)
MHGB665 1616.9 1742.7
MHGB669 1700.7 1588.5
MHGB672 2119.2 1612.8
MHGB687 NA 1864.0
MHGB688 1722.8 1420.8
MHGB694 644.5 200.1
MHGB732 1.8 2.0
MHGB737 NA NA
MHGB738 1.6 1.6
實例11. 表位定位(epitope mapping)
接著，我們探討此配體結合的抑制是否是因為與ILT2/4直接競爭在HLA-G上的相同結合部位。為了驗證此假設，我們使用基於氫氘交換的LC-MS（於實例9描述）來識別ILT-2、ILT-4、MHGB732、或MHGB738在HLA-G上的表位（圖 13 ）。MHGB732及MHGB738 Ab的結合皆強烈保護α3域中之相同肽（成熟蛋白質之胺基酸殘基191至198，序列HHPVFDYE (SEQ ID NO: 667 )），導致氘化水準＞ 30%的平均變化。在ILT2存在下此肽亦受到保護，且在ILT4存在下受到較小程度的保護。MHGB732及MHGB738抗體兩者亦顯著保護（氘化水準10%至30%之平均變化）包含成熟蛋白質之殘基249至251（序列VPS）的第二表位。表位係定位至HLA-G之晶體結構上(PDB ID 1YDP)6 ，其顯示MHGB732及MHGB738 Ab及ILT2/4的表位位於α3域之近膜區。實例12. 對於基於NK 細胞之細胞毒性的效應
接著，我們探討抑制HLA-G與ILT-2/4之交互作用是否可介導經由基於NK細胞之細胞毒性之抗腫瘤活性。為了解決此，我們將各可變區選殖至缺乏效應功能的IgG1或靜默IgG4-PAA恆定區上。接著，我們測試各抗體介導由表現Fc受體之NK細胞(NK-92)或缺乏Fc受體之NK細胞(NKL)所介導之K562-HLA-G細胞的細胞毒性之能力。簡言之，K562細胞過度表現HLA-G之細胞係經作為細胞增生染料之羧基螢光素琥珀醯亞胺基酯(CFSE)標示。根據圖 14A 至圖19B 中的稀釋，將抗體稀釋至96孔盤。將K562-HLA-G細胞添加至各抗體孔並在4℃下培養1hr。NKL細胞係以大約100,000個細胞/孔添加，且混合物在IL2及NKp46存在下（以活化NKL細胞）隔夜培養（NKL細胞）或在4℃下培養4 hr（NK-92細胞）。藉由離心洗滌細胞且重懸於含有活/死染料之緩衝劑。將混合物重懸於130 µL之染色緩衝劑且藉由流動式細胞測量術使用FACS Fortessa細胞儀分析。在NK受體不存在下可介導細胞毒性之抗體被認為是經由阻斷HLA-G與ILT-2/4之間的免疫檢查點交互作用來介導此交互作用（圖 14A 至圖19B ）。我們發現，所有可阻斷ILT2之抗體（除了MHGB687以外之所有Ab）可在24 hr檢定中增強NKL細胞介導之對抗K562-HLA-G細胞之細胞毒性（圖 14A 、圖15A 、圖16A 、圖17A 、圖18A 、圖19A ），然而只有基於IgG1之抗體可增強Fc受體介導之細胞毒性。這表明即使在Fc受體介導之效應功能不存在下，配體阻斷仍可作為重要的抗腫瘤機制。實例13. MAb 之效應功能
我們測試抗體進一步經由抗體依賴性細胞性細胞毒性(ADCC)介導腫瘤細胞殺滅以對抗內源性表現HLA-G之絨毛膜癌細胞系JEG-3 (ATCC HTB-36)的能力（圖 20 ）。將抗體添加至經BATDA染料(Perkin Elmer cat. # C136-100)標示之JEG-3細胞，該染料可單向穿透至細胞中。在細胞裂解後，染料被釋放至含有銪之溶液中，銪與染料反應以形成可測量螢光信號之螢光螯合物。將隔夜培養之PBMC以50:1之E:T比添加至JEG-3細胞（5,000個細胞/孔）且在37 C下培養混合物培養4 hr。將細胞混合物以1:10添加至銪溶液中，在室溫下培養15 min且監測在610 nm下之螢光以判定信號。100%殺滅之螢光信號使用含有經BADTA標示之目標細胞混合Triton-X 100清潔劑之孔判定。
由於抗HLA-G Ab可展示體外ADCC，因此我們探討此活性是否可被增強。數個研究顯示，具有少於10%末端岩藻糖基化Fc之抗體因為結合至Fc受體之較高親和力而展示增強的效應功能7 。因此，我們在低岩藻糖CHO宿主中產生MHGB732及MHGB738，以生產具有＜ 10%末端岩藻糖之抗體(MHGB738.CLF)（表 62 ，圖 21A 至圖21D ）。作為陰性對照組，我們產生具有無法結合Fc受體之Fc區的MHGB738版本，且此蛋白質稱為MHGB745。
測試正常岩藻糖及低岩藻糖抗體誘導基於NK細胞之ADCC以對抗JEG-3細胞（圖 21A ）或對抗RERF-LC-Ad-1細胞（人類肺腺癌細胞系，JCRB1020）（圖 21B ）的能力。低岩藻糖抗體係藉由在CHO細胞中表現編碼重鏈及輕鏈之建構體來產生，該CHO細胞天然表現低水準的岩藻糖基轉移酶，導致生產具有少於10%核心岩藻糖之抗體。效應細胞對目標細胞之比係顯示於圖表中。檢定係以與上文所述之ADCC檢定相同的方式執行。在檢定中MHGB745及同型對照皆不誘導ADCC。二個IgG1 Ab MHGB732及MHGB738皆可誘導ADCC，然而具有低岩藻糖Fc區之相同抗體展示約10倍增強之ADCC活性。此顯示ADCC增強可藉由使用低岩藻糖抗體獲得。
接下來我們測試抗體介導補體依賴性細胞毒性(CDC)的能力（圖 21C 及圖21D ）。簡言之，檢定於含有10% FBS之DMEM (JEG-3)或RPMI (RERF-LC-Ad-1)中運行。將抗體添加至目標細胞並在37℃下培養30分鐘。在培養之後，將15至20%（原液濃度）之兔補體(Cedarlane cat. # CL3441-S)及熱去活化補體分別以25 µl/孔之體積添加至孔。將混合物在37℃下培養4至12小時。藉由添加100 µl之CellTitre-Glo (Promega cat. # G9242)試劑，隨後在室溫下培養10分鐘來偵測目標細胞的裂解。使用Tecan微量板讀取儀SPARK®監測發光。兩個IgG1抗體MHGB732及MHGB738不介導CDC。由於IgG1 Ab無法介導CDC，因此我們將v區選殖至獲得K248E、T437R (RE)突變之IgG1 Fc，其顯示特異性增強CDC活性8 。這些具有與彼等之IgG1對應體相同的v區之Ab可介導CDC活性。我們探討RE Fc變體是否將影響低岩藻糖Ab的ADCC活性增強及低岩藻糖Fc是否將影響RE Fc變體的CDC活性。在低岩藻糖宿主中生產之RE Ab（具有＜ 10%岩藻糖基化Fc）MHGB752及MHGB758具有與低岩藻糖IgG1 Ab MHGB732及MHGB738相同的ADCC活性（圖 21A 及圖21B ）。類似地，在低岩藻糖宿主中生產之RE Ab與在正常岩藻糖宿主中生產之RE Ab具有相同的CDC活性（圖 21C 及圖21D ）。表62. 具有經修飾之恆定區之MHGB738 變體的說明。
蛋白質名稱 說明
MHGB732 IgG1
MHGB738 IgG1
MHGB745 L234A、L235A、D265S
MHGB752 IgG1、K248E、T437R (RE)
MHGB758 IgG1、K248E、T437R (RE)
MHGB732.CLF IgG1，低岩藻糖
MHGB738.CLF IgG1，低岩藻糖
MHGB758.CLF IgG1、K248E、T437R (RE)，低岩藻糖
MHGB758.CLF IgG1、K248E、T437R (RE)，低岩藻糖
實例14 ：雙特異性HLA-G x CD3 抗體的產生
實例7至13所產生之抗HLA-G抗體的VH/VL區及實例1之抗CD3抗體的VH/VL區係經工程改造為雙特異性格式且表現為IgG1。工程改造CD3 scFv-Fc 及CD3 Fab 以用於HLA-G × CD3 雙特異性分子之產生
CD3特異性scFv、scFv-Fc、及Fab-Fc係如實例3所述產生。此外，CD3特異性scFv、scFv-Fc、及Fab-Fc係使用來自CD3B450（已描述於US20200048349）及CD3B219（衍生自SP34-2抗體(BD Biosciences 551916)）之VH/VL區產生。使用空-scFv-Fc及B23B62-Fab-Fc作為陰性對照。 CD3B450-LH-scFv-Fc (SEQ ID NO: 684)： QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSNIGTYKFVSWYQQHPGKAPKVMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCVSYAGSGTLLFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVFNNNAAWSWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWLYDYAVSVKSRITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGYSSSFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG CD3B219-LH-scFv-Fc (SEQ ID NO: 685)： QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 空-scFv-Fc (SEQ ID NO: 686)： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGCAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGQGTKVEIKGGGSGGSGGCPPCGGSGGEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYDGIYGELDFWGCGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG B23B62-Fab-Fc臂重鏈(SEQ ID NO: 687)： QITLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVSWIRQPPGKALEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTITKDTSKNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARLYGFTYGFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG B23B62-Fab-Fc臂輕鏈(SEQ ID NO: 688)： divmtqspdslavslgeratincrasqsvdyngisymhwyqqkpgqppklliyaasnpesgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqiiedpwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec CD3B219-Fab-Fc臂重鏈(SEQ ID NO: 689)： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG CD3B219-Fab-Fc臂輕鏈(SEQ ID NO: 690)： qtvvtqepsltvspggtvtltcrsstgavttsnyanwvqqkpgqaprgliggtnkrapgtparfsgsllggkaaltlsgvqpedeaeyycalwysnlwvfgggtkltvlgqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs工程改造HLA-G Fab-Fc 以用於HLA-G/CD3 雙特異性分子之產生
將HLA-G特異性VH及VL區分別工程改造為VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3及VL-CL格式。使用SEQ ID NO: 326 之多肽（包含Fc靜默突變L234A/L235A/D265S及設計用來促進選擇性異二聚化之CH3突變T350V/T366L/K392L/T394W）來產生HLA-G特異性VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3。
使用SEQ ID NO: 363或364之多肽來產生HLA-G特異性VL-CL。
HLA-G Fab-Fc HC及LC之胺基酸序列分別顯示於表 63 及表64 。HLA-G Fab-Fc HC及LC之cDNA SEQ ID No列示於表 65 。表63 顯示抗HLA-G Fab-Fc 重鏈(HC) 之胺基酸序列。
Fab-Fc重鏈 SEQ ID NO: 胺基酸序列
MHGB732-Fab-Fc HC 668 qvqlqqsgpglvkpsqtlsltcaisgdsvssnsaawnwirqspsrglewlgrtyyrskwyndyavsvksritinpdtsknqislqlnsvtpedtavyycagdrrygivglpfaywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvsvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvyvlppsreemtknqvsllclvkgfypsdiavewesngqpennyltwppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg
MHGB738-Fab-Fc HC 669 qvqlqqsgpglvkpsqtlsltcaisgdsvssnraawnwirqspsrglewlgrtyyrskwyndyavsvksritinpdtsknqislqlnsvtpedtavyycarvrpgipfdywgqgtpvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvsvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvyvlppsreemtknqvsllclvkgfypsdiavewesngqpennyltwppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg
MHGB712-Fab-Fc HC 670 QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNRAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCARVRPGIPFDYWGQGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
表64 顯示抗HLA-G Fab-Fc 輕鏈(LC) 之胺基酸序列。
Fab-Fc輕鏈 SEQ ID NO: 胺基酸序列
MHGB732-Fab-Fc LC 671 divmtqspdslavslgeratinckssqsvlhssnnknyltwfqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyychqyystpptfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
MHGB738-Fab-Fc LC 672 divmtqspdslavslgeratinckssqsvlfssnnknylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsvsgtdftltisslqaedvavyycqqyhstpwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
MHGB712-Fab-Fc LC 673 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSVSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYHSTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
表65 顯示抗HLA-G Fab-Fc 輕鏈(LC) 及重鏈(HC) 之cDNA 序列。
Fab-Fc SEQ ID NO: cDNA序列
MHGB732-Fab-Fc HC 674 caagtacaactgcaacaaagtggtcctgggctcgtgaagccttcccagactctcagcctcacatgcgctataagtggggattctgtttcctcaaattcagcagcctggaattggatacgacagtctccatcccgtggccttgagtggcttggtagaacttattaccgatccaagtggtacaatgattacgccgtttcagtgaagtcccgcattactattaatcccgacacatctaagaatcaaatttcattgcaactgaatagcgtaacacccgaagatacagcagtttattattgtgcaggtgatcgacgctacggcatagtgggacttcctttcgcctattggggccaagggacactggtcactgtgtcatccgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgtccaccgtgcccagcacctgaagcagcagggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgagcgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacgtgctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgctgtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacctcacctggcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagtctagatggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt
MHGB732-Fab-Fc LC 675 gacatcgtaatgacacagtcaccagattcattggcagttagtctgggtgaaagggcaacaatcaactgcaagtcttctcagagtgtactgcatagttctaacaataagaactaccttacctggtttcaacagaaaccaggtcagccccccaagttgctgatttactgggcaagcacccgcgaatccggcgttcccgatcgattttcaggttccgggagtgggaccgactttaccttgaccatctcttccttgcaggccgaagatgtagccgtctattactgccatcagtattactctactccccccacattcggtcaaggtacaaaagttgagataaaacggacagtggccgctccttccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcacagcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctaccctcgggaagccaaggtgcagtggaaggtggacaatgccctgcagtccggcaactcccaagagtctgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctacagcctgtcctccacactgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccatcagggcctgtctagccctgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
MHGB738-Fab-Fc HC 676 caggtgcagcttcaacagagcggacctggtctggttaagccttcccaaaccctgagcctgacttgtgctatttccggggatagtgttagctccaatagggcagcatggaactggatcagacagtccccaagccgtggacttgagtggcttggacgtacttattacaggagtaaatggtacaatgattatgccgtttctgtgaagagccgtattactataaacccagatacttctaaaaatcaaatttcccttcagctcaactcagttacaccagaggatactgcagtctattattgcgcaagagttcgacctggcattcccttcgattattgggggcaggggacacccgttactgtgtcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgtccaccgtgcccagcacctgaagcagcagggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgagcgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacgtgctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgctgtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacctcacctggcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagtctagatggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt
MHGB738-Fab-Fc LC 677 gatattgttatgacacagtccccagattcattggcagtaagcctcggtgaacgggctactattaactgtaagtcttcccagagtgtattgttctcttcaaataacaaaaactacctggcatggtatcagcaaaagcctggtcaaccccctaaacttctcatatactgggcatccactcgggagagcggtgtgccagaccgtttctcagggagtgtgtcaggtacagattttacactcacaatttccagcctccaagccgaagacgttgcagtatattattgccaacaatatcactctacaccttggacatttggtcaaggtactaaagtcgaaatcaaacggacagtggccgctccttccgtgttcatcttcccaccttccgacgagcagctgaagtccggcacagcttctgtcgtgtgcctgctgaacaacttctaccctcgggaagccaaggtgcagtggaaggtggacaatgccctgcagtccggcaactcccaagagtctgtgaccgagcaggactccaaggacagcacctacagcctgtcctccacactgaccctgtccaaggccgactacgagaagcacaaggtgtacgcctgcgaagtgacccatcagggcctgtctagccctgtgaccaagtctttcaaccggggcgagtgt
MHGB712-Fab-Fc HC 678 CAGGTGCAGCTTCAACAGAGCGGACCTGGTCTGGTTAAGCCTTCCCAAACCCTGAGCCTGACTTGTGCTATTTCCGGGGATAGTGTTAGCTCCAATAGGGCAGCATGGAACTGGATCAGACAGTCCCCAAGCCGTGGACTTGAGTGGCTTGGACGTACTTATTACAGGAGTAAATGGTACAATGATTATGCCGTTTCTGTGAAGAGCCGTATTACTATAAACCCAGATACTTCTAAAAATCAAATTTCCCTTCAGCTCAACTCAGTTACACCAGAGGATACTGCAGTCTATTATTGCGCAAGAGTTCGACCTGGCATTCCCTTCGATTATTGGGGGCAGGGGACACCCGTTACTGTGTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
MHGB712-Fab-Fc LC 679 GATATTGTTATGACACAGTCCCCAGATTCATTGGCAGTAAGCCTCGGTGAACGGGCTACTATTAACTGTAAGTCTTCCCAGAGTGTATTGTTCTCTTCAAATAACAAAAACTACCTGGCATGGTATCAGCAAAAGCCTGGTCAACCCCCTAAACTTCTCATATACTGGGCATCCACTCGGGAGAGCGGTGTGCCAGACCGTTTCTCAGGGAGTGTGTCAGGTACAGATTTTACACTCACAATTTCCAGCCTCCAAGCCGAAGACGTTGCAGTATATTATTGCCAACAATATCACTCTACACCTTGGACATTTGGTCAAGGTACTAAAGTCGAAATCAAACGGACAGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCTGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGT
工程改造HLA-G scFv-Fc 以用於HLA-G/CD3 雙特異性分子之產生
使用SEQ ID NO: 31之連接子（表 2 ）將HLA-G VH/VL區工程改造為呈VH-連接子-VL或VL-連接子-VH定向之scFv（如實例2所述），該scFv係經進一步工程改造為scFv-鉸鏈-CH2-CH3格式，其包含Fc靜默突變(L234A/L235A/D265S)及設計用來促進選擇性異二聚化之T350V/T366L/K392L/T394W突變且表現為IgG1。SEQ ID NO: 321 之多肽係用來作為恆定域鉸鏈-CH2-CH3。
呈scFv-鉸鏈-CH2-CH3格式(scFv-Fc)之抗HLA-G分子的胺基酸序列顯示於表 66 。呈scFv-鉸鏈-CH2-CH3格式(scFv-Fc)之抗HLA-G分子的cDNA序列列示於表 67 。表66. 抗HLA-G scFv-Fc 雙特異性臂之胺基酸序列。
scFv-Fc SEQ ID NO: 胺基酸序列
MHGB732- LH-scFv-Fc 680 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLHSSNNKNYLTWFQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYYSTPPTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSNSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRITINPDTSKNQISLQLNSVTPEDTAVYYCAGDRRYGIVGLPFAYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
MHGB737- LH-scFv-Fc 681 diqmtqspstlsasvgdrvtitcrasqsisswlawyqqkpgkapklliykasslesgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycqqynsysltfgggtkvdikggsegkssgsgseskstggsevqllesggglvqpggslrlscaasgftfssyamhwvrqapgkglewvsgisgsgfstyyvdsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakdnlvagtvfdywgqgtlvtvssepkssdkthtcppcpapeaaggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvsvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvyvlppsreemtknqvsllclvkgfypsdiavewesngqpennyltwppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg
表67 抗HLA-G scFv-Fc 雙特異性臂之cDNA 序列。
scFv-Fc SEQ ID NO: cDNA序列
MHGB732- scFv-LH-Fc 682 GACATCGTGATGACCCAGTCTCCAGACAGCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGAGCTACCATCAACTGCAAGTCCAGCCAGTCCGTGCTGCACTCCTCCAACAACAAGAACTACCTGACCTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAAGCTGCTGATCTACTGGGCCTCCACCCGCGAGTCTGGTGTGCCCGATAGATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTTACCCTGACAATCAGCTCCCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTACTGCCACCAGTACTACAGCACCCCTCCTACCTTTGGCCAGGGCACCAAGGTGGAAATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCTGGACTGGTCAAGCCCTCTCAGACCCTGTCTCTGACCTGTGCCATCTCCGGCGACTCCGTGTCCTCTAATTCTGCCGCCTGGAACTGGATCCGGCAGTCTCCTAGTAGAGGCCTGGAATGGCTGGGCAGAACCTACTACCGGTCCAAGTGGTACAACGACTACGCCGTGTCCGTGAAGTCCCGGATCACCATCAATCCCGACACCTCCAAGAACCAGATCTCCCTGCAGCTCAACAGCGTGACCCCTGAGGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCGGCGATCGGAGATATGGCATCGTGGGCCTGCCTTTTGCTTACTGGGGACAGGGCACACTGGTCACCGTTTCTTCTGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACTTGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCTCTCTCCCTGTCTCCGGGA
MHGB737- LH-scFv-Fc 683 gatattcagatgacccaatcccccagtacccttagtgctagtgtgggagaccgagtgaccattacctgcagagcatcccaatccataagctcctggctcgcctggtatcagcaaaagccaggcaaggcacctaagctgcttatttacaaagcatcctcattggagtccggcgtaccctcacgtttctctggctcaggctccgggacagagtttacattgaccatctctagccttcagccagatgactttgctacatactattgtcaacaatataacagctactctctgaccttcgggggtgggaccaaagtggatattaaaggcggctccgagggcaagagcagcggcagcggcagcgagagcaagagcaccggcggcagcgaagtccaacttcttgagagtggtggtggcctcgtccagccaggaggttctctccggctctcatgtgctgcaagtggctttactttcagctcttacgccatgcactgggtgcgacaggctcccgggaagggtcttgagtgggtgtctggtataagtggttcaggcttttcaacctactatgtcgattccgtcaagggccggtttacaatttcaagggacaattctaagaatacactgtatctccaaatgaatagtctcagagccgaagataccgccgtttactactgcgccaaagataatcttgtggctgggactgtcttcgactattggggtcagggtacattggtaaccgtaagtagtgagcccaaatctagcgacaaaactcacacatgtccaccgtgcccagcacctgaagcagcagggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtgagcgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacgtgctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgctgtgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacctcacctggcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagtctagatggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt
HLA-G × CD3 雙特異性分子
表現如上述經工程改造為Fab-Fc之抗CD3抗體CD3B376、CD3B450、CD3B219、及CD3W246之VH/VL區及經工程改造為scFv-Fc（呈HL及LH兩種定向）之抗HLA-G抗體MHGB738、MHGB732、及MHGB737之VH/VL區以產生雙特異性抗體，所得之HLA-G/CD3雙特異性抗體具有呈scFv-鉸鏈-CH2-CH3格式之HLA-G結合臂及呈重鏈：VH-CH1-連接子-CH2-CH3及輕鏈：VL-CL格式之CD3結合臂（表 68 ）。使用B23B62-Fab-Fc臂作為CD3特異性臂之同型對照。
替代地，表現如上述經工程改造為呈HL及/或LH定向之scFv-Fc的抗CD3抗體CD3W246、CD3B450、及CD3B219之VH/VL區（見表 68 ）及經工程改造為Fab之抗HLA-G抗體MHGB738、MHGB732、及MHGB737之VH/VL區以產生雙特異性抗體，所得之HLA-G/CD3雙特異性抗體具有呈重鏈VH-CH1-連接子-CH2-CH3及輕鏈VL-CL格式之HLA-G結合臂及呈scFv-鉸鏈-CH2-CH3格式之CD3結合臂。用於產生抗scFv之連接子係SEQ ID NO: 31 之連接子（表 68 ）。
如上述，T350V_L351Y_F405A_Y407V CH3突變係經工程改造至一個重鏈中，且T350V_T366L_K392L_T394W CH3突變係經工程改造至另一個重鏈中。此外，HK2及CD3結合臂兩者皆經工程改造以含有如上述之Fc效應物靜默突變L234A_L235A_D265S。
表現經工程改造之鏈，並使用標準方法純化所得之雙特異性建構體。雙特異性分子之特徵在於彼等結合至HLA-G及CD3、彼等之體外細胞毒性、免疫檢查點反應、及實例 15 至17 中所述之體內療效。表68. HLA-G × CD3 雙特異性分子。
雙特異性分子名稱 CD3 臂 CD3 臂 SEQ ID NO: HLA-G 臂 HLA-G 臂 SEQ ID NO:
HC3B239 空-scFv-Fc 686 MHGB738-Fab-Fc HC: 669 LC: 672
HC3B238 CD3W246-HL-scFv-Fc 79 MHGB738-Fab-Fc HC: 669 LC: 672
HC3B237 CD3W246-LH-scFv-Fc 80 MHGB738-Fab-Fc HC: 669 LC: 672
HC3B236 CD3B450-LH-scFv-Fc 684 MHGB738-Fab-Fc HC: 669 LC: 672
HC3B235 CD3B219-LH-scFv-Fc 685 MHGB738-Fab-Fc HC: 669 LC: 672
HC3B234 空-scFv-Fc 686 MHGB732-Fab-Fc HC: 668 LC: 671
HC3B233 CD3W246-HL-scFv-Fc 79 MHGB732-Fab-Fc HC: 668 LC: 671
HC3B232 CD3W246-LH-scFv-Fc 80 MHGB732-Fab-Fc HC: 668 LC: 671
HC3B231 CD3B450-LH-scFv-Fc 684 MHGB732-Fab-Fc HC: 668 LC: 671
HC3B230 CD3B219-LH-scFv-Fc 685 MHGB732-Fab-Fc HC: 668 LC: 671
HC3B128 B23B62-Fab-Fc HC: 687 LC: 688 MHGB732-LH-scFv 680
HC3B125 CD3B376-Fab-Fc HC: 349 LC: 350 MHGB732-LH-scFv-Fc 680
HC3B258 CD3B376-Fab-Fc HC: 349 LC: 350 MHGB732-LH-scFv-Fc 680
HC3B124 CD3B219-Fab-Fc HC: 689 LC: 690 MHGB732-scFv-Fc 680
HC3B123 CD3W246-Fab-Fc HC: 85 LC: 90 MHGB732-LH-scFv-Fc 680
HC3B225 B23B62-Fab HC: 687 LC: 688 MHGB737-scFv-Fc 681
HC3B216 CD3B376-Fab-Fc HC: 349 LC: 350 MHGB737-scFv-Fc 681
HC3B214 CD3W246-Fab-Fc HC: 85 LC: 90 MHGB737-scFv-Fc 681
實例15. BsAb 格式化及體外測試
T細胞重導向對抗腫瘤細胞已在臨床上顯示顯著成效，且我們探討靶向HLA-G及T細胞受體複合物之CD3次單位的雙特異性抗體(BsAb)是否將顯示對抗表現HLA-G之腫瘤細胞之細胞毒性。將前導v區以一系列結合CD3之重導向臂格式化為BsAb（表 69 ）。簡言之，將目標細胞(NCI-H2009-b2m)以每孔50,000個細胞與始於10 nM且每孔連續半對數濃度之抗體培養。將經純化之初代T細胞以3:1之比添加且混合物在37℃下培養72 hr。製備染色溶液，添加每10^6個細胞1uL活/死近IR染料(Dead Cell Stain, L34976, Invitrogen)及每10^6個細胞5uL亮紫色抗CD25 (Biolegend cat. # 302630)於BD FACS染色緩衝劑。在藉由流動式細胞測量術之添加分析之前，使用Accutase將細胞混合物解離。在FSC-A vs SSC-A及CFSE (BL-1) vs SSC-A上閘控細胞，且藉由總腫瘤目標細胞群體之CFSE (BL-1) vs近IR活/死(RL2-H)閘控來識別非存活腫瘤細胞。使用ForeCyt (Sartorius)進階度量分析數據以計算腫瘤細胞毒性。當HLA-G結合v區與CD3結合臂成對時，所有BsAb展示增強T細胞介導之細胞毒性的能力，其EC50值與HLA-G靶向臂及CD3靶向臂兩者之結合親和力相關（表 69 ）。表69. BsAb 設計及細胞毒性
BsAb 名稱 CD3 臂 HLA-G 臂 細胞毒性，EC50 (M)
HC3B239 空-scFv-Fc MHGB738-Fab-Fc NA
HC3B238 CD3W246-HL-scFv-Fc MHGB738-Fab-Fc 1.72542E-11
HC3B237 CD3W246-LH-scFv-Fc MHGB738-Fab-Fc 1.32773E-10
HC3B236 CD3B450-LH-scFv-Fc MHGB738-Fab-Fc 4.53748E-09
HC3B235 CD3B219-LH-scFv-Fc MHGB738-Fab-Fc 8.37E-11
HC3B234 空-scFv-Fc MHGB732-Fab-Fc N/A
HC3B233 CD3W246-HL-scFv-Fc MHGB732-Fab-Fc N/A
HC3B232 CD3W246-LH-scFv-Fc MHGB732-Fab-Fc 6.77438E-12
HC3B231 CD3B450-LH-scFv-Fc MHGB732-Fab-Fc 1.26465E-10
HC3B230 CD3B219-LH-scFv-Fc MHGB732-Fab-Fc 9.91577E-12
HC3B128 B23B62-Fab MHGB732-LH-scFv 無數據
HC3B125 CD3B376-Fab-Fc MHGB732-LH-scFv-Fc 5.65197E-11
HC3B258 CD3B376-Fab-Fc MHGB732-LH-scFv-Fc 結合與HC3B125相同
HC3B124 CD3B219-Fab-Fc MHGB732-scFv-Fc 3.849E-12
HC3B123 CD3W246-Fab-Fc MHGB732-LH-scFv-Fc 3.24183E-12
HC3B225 B23B62-Fab MHGB737-scFv-Fc 無數據
HC3B216 CD3B376-Fab-Fc MHGB737-scFv-Fc 1.8984E-09
HC3B214 CD3W246-Fab-Fc MHGB737-scFv-Fc 1.37611E-10
進一步測試BsAb介導T細胞活化及基於T細胞之對抗額外細胞系：Hup-T3及RERF-LC-Ad-1之細胞毒性的能力（圖 22A 至圖22D ）。圖 22A 至圖22D 顯示由HC3B125所介導之對抗表現HLA-G之腫瘤細胞的細胞毒性。
二個BsAb HC3B125及HC3B258的差異僅在於在重鏈表現C端離胺酸K447之密碼子的存在(HC3B258)或不存在(HC3B125)。由於抗體之重鏈的C端離胺酸通常經蛋白分解處理，因此二個Ab展示相同質譜（表 70 ）。此外，它們展示相同生物物理性質，諸如熱穩定性及對T細胞及K562-HLA-G細胞兩者之結合親和力。此外，HC3B258展示與HC3B125類似之細胞毒性性質（圖 23 ）。表70. 比較HC3B125 與HC3B258 的生物物理性質。
分子 Exp.質量(Da) Kd (pM) T起始 Tm1 Tm2 Tagg T細胞結合（EC50，M） K562-HLA-G細胞結合（EC50，M）
HC3B258 128,772.4 13 ± 1.2 55.0℃ 63.0℃ 81.1℃ 63.9℃ 6.0E-08 1.1E-08
HC3B125 128,772.5 11 ± 0.5 55.3℃ 63.6℃ 81.3℃ 65.3℃ 6.0E-08 1.2E-08
實例16. 免疫檢查點反應之觀察
我們觀察到，抗HLA-G mAb的細胞毒性機制特徵在於效應功能（例如，ADCC）且CD3 x HLA-G BsAb可誘導殺滅表現HLA-G之所有細胞類型。腫瘤通常經由上調某些可抑制免疫細胞之免疫檢查點調節劑諸如PD-L1或CTLA-4來逃脫免疫監控9 。因此我們探討經由CD3 x HLA-G BsAb之T細胞介導細胞毒性靶向癌細胞是否可克服免疫檢查點調節劑在腫瘤細胞上的表現。我們測量表現HLA-G之腫瘤細胞是否表現免疫檢查點配體（表 71 ）。簡言之，細胞係如實例11所述培養，接著用靶向表 71 所示之受體的商業抗體染色。使用流動式細胞測量術測量螢光，以判定各受體之相對表現水準。有趣的是，我們觀察到RERF-LC-Ad1細胞以顯著高於其他目標細胞的量表現PD-L1，且CD3 x HLA-G BsAb仍可介導基於T細胞之細胞毒性對抗RERF-LC-Ad1細胞（圖 22A 至圖22D ）。我們觀察到，我們的靶向腫瘤細胞上之HLA-G的α3域之Ab的基於T細胞之細胞毒性可克服免疫檢查點配體在腫瘤細胞上的表現。表71. 表現HLA-G 之腫瘤細胞上的免疫檢查點抗原表現全面分析
配體名稱/細胞系名稱 相對於陰性對照組之信號倍數
RERF-LCAd1 JEG-3 HUP-T3 BICR6 HCC1806  
PD-L1(CD274, B7-H1) 43 7 9      
PD-L2(CD273, B7-DC) 2 1 2      
連接蛋白-1 (CD111, PVRL1) 2 1 1      
脊髓灰白質炎病毒受體(CD155) 18 1 23      
HVEM (CD270, TNFRSF14) 3 1 1      
B7H3(CD276) 21 9 1      
半乳糖凝集素-9 1 2 3      
B7-1 (CD80, CD28L) 1 1 1      
MICA/B 6   2   11  
ULBP1 1   1   1  
ULBP2/5/6 2   2   10  
ULBP3 3   2   6  
ULBP4 2   1   1  
NKG2D-Fc 1   1   1  
NKp46-Fc 1   1   1  
NKp44-Fc 1   1   1  
NKp30-Fc 1   1   1  
CD46 1 5 9 12    
CD55 141 73 21 15    
CD59 78 15 291 120    
體外基於T細胞之細胞毒性 是 否 是 是    
體外ADCC背景 確認 確認 確認 確認 確認  
體外CDC 否 部分 未測試 未測試 未測試  
實例17. 體內療效
雖然患者的HLA-G表現與不良預後之間的相關性已在大部分癌症類型中建立，但HLA-G於體內腫瘤逃脫之直接角色至今尚未顯示。由於並無HLA-G之鼠同源物（ILT-2亦無），因此研究HLA-G之角色需要異種移植模型及人源化小鼠。
在一系列小鼠研究中測試Ab及BsAb介導體內抗腫瘤療效的能力。所示研究（圖 24A 至圖24B ，表72 ）係由療效實驗組成，其中將胰腫瘤模型PAXF 1657 (Charles River Discovery Research Services Germany GmbH)皮下植入來自Jackson Laboratory之人源化雌性hNSG-SGM3小鼠(NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl Tg(CMV-IL3, CSF2, KITLG)。經植入來自三個不同供體（#2595、#2597、及#5867）之衍生自人類臍帶血之CD34⁺造血幹細胞(HSC)的小鼠已由動物經銷商檢查在植入後10至11週具有足夠的HSC植入程度（＞25%人類CD45+ 細胞）。在抵達後18天植入PAXF 1657腫瘤且隨機分組前2天再次檢查植入程度。實驗包含八組10或11隻小鼠，各小鼠帶有一個PAXF 1657腫瘤。在隨機分組當天及接著每週二次，藉由數位卡尺(S_Cal EVO Bluetooth, Switzerland)二維測量判定絕對腫瘤體積(ATV)。腫瘤體積係根據下式計算：腫瘤體積= (l × w2) × 0.5，其中l =腫瘤的最大直徑且w =寬度（垂直直徑）（以mm計）。當腫瘤體積46.7 mm3 至117.7 mm3 時，將小鼠分布於八組，目標為可相比的組平均及中位數腫瘤體積，同時確保盡可能將三個供體HSC人源化之小鼠的群組平均分布。各抗體係以二或三個劑量水準評估，且在第0、3、7、10、14、17、21、24天投予（靜脈內，2x/週）。所有組的抗腫瘤療效使用媒劑對照組作為參考評估。腫瘤生長抑制(TGI)在治療期結束時藉由比較測試組的腫瘤體積變化相對於對照組的變化來判定，且表現為以百分比計的Δ TGI值（文字中表示為TGI）。根據下式使用絕對腫瘤體積計算TGI：Δ TGIₓ [%] = (1 −平均(Tₓ -T₀) /平均(Cₓ - C₀)) × 100，其中T₀及C₀係治療開始時（即，隨機分組當天）測試組及對照組的絕對腫瘤體積，且Tₓ及Cₓ係治療期結束時對應之絕對腫瘤體積。此在此研究中為第25天。在第27天終止實驗。HC3B125顯著抑制腫瘤模型PAXF 1657於hNSG-SGM3小鼠中之生長。相較於媒劑對照組，所評估之所有三個劑量水準的腫瘤生長抑制有統計顯著性（Kruskal-Wallis檢定合併Dunn’s事後檢定，表50）。在0.002 mg HC3B125組中6/11隻動物、0.006 mg組中8/11隻動物、及0.02 mg組中9/11的腫瘤完全緩解。在實驗結束時，0.002 mg/0.006 mg/0.02 mg HC3B125組中分別有6/7/6隻無腫瘤存活。
在測試的劑量水準下，腫瘤生長並未受到HC3B128抑制。儘管在較高劑量的HC3B128相較於對照組觀察到組平均腫瘤體積小量減少，但差異不具有統計顯著性（表71）。表72. 胰PDX 模型療效統計
分組ID 治療¹ 劑量水準[mg/ 天] 排程[ 天數] 途徑 Δ TGI [%] （天數）2 緩解3 Td [ 天數] Tq [ 天數]
PR CR TFS
腫瘤模型PAXF 1657 -Exp. S317h
1 對照媒劑 0.1 ml/劑量 0、3、7、10、14、17、21、24 i.v. n/a 0 0 0 7.2 12.6
2 HC3B128.004 0.02 0、3、7、10、14、17、21、24 i.v. 8.4 (25) 0 0 0 8.9 13.5
3 HC3B128.004 0.2 0、3、7、10、14、17、21、24 i.v. 16.2 (25) 0 0 0 9.7 15.3
4 HC3B125 0.002 0、3、7、10、14、17、21、24 i.v. 98.5 (25) 2 6 6 n.r. n.r.
5 HC3B125 0.006 0、3、7、10、14、17、21、24 i.v. 104.4 (25) 3 8 7 n.r. n.r.
6 HC3B125 0.02 0、3、7、10、14、17、21、24 i.v. 97.9 (25) 1 9 6 n.r. n.r.
n/a =不適用；n.r.=未達到（即，組中位數RTV總是＜ 200%/400%） 用於抗體之媒劑：PBS2 各組Δ TGI值係在最終2QW治療投予之後的第一測量日（第25天）根據「腫瘤生長抑制」一節中給出之公式計算；關於額外TGI、T/C、及腫瘤緩解值，見附錄1。3 部分(PR)及完全緩解(CR)係根據「腫瘤緩解」一節。TFS：無腫瘤存活；Td，腫瘤二倍時間；tq，腫瘤四倍時間。
HC3B125治療亦可導致HuP-T3細胞系衍生性異種移植(CDX)模型中的腫瘤生長抑制（圖 25 ，表73 ）。研究係由療效實驗組成，其中將胰腫瘤模型HuP-T3 (Sigma-Aldrich)皮下植入（10e6個細胞/小鼠於50% Cultrex (R&D Systems)）經T細胞人源化之NSG (Jackson Laboratories)小鼠。實驗包含六組10隻小鼠，各小鼠帶有一個HuP-T3腫瘤。在第7天，當腫瘤體積75 mm3 至150 mm3 時，將小鼠隨機分組至六組，目標為具有可相比的組平均及中位數腫瘤體積。小鼠在隨機分組之後在隨機分組當天經腹膜內植入T細胞（20e6個細胞/小鼠，0.2 mL/動物；ALLCELLS 6093 T細胞供體）。HC3B125抗體係以五個劑量水準評估。所有組的抗腫瘤療效使用空xCD3治療組作為參考評估。治療在T細胞植入後1天開始，且在第8、11、14、17、21、24、28、31、35、38、42、48天執行（腹膜內，2x/週）。腫瘤生長抑制在治療期結束時藉由比較測試組的組平均腫瘤體積變化相對於空xCD3治療對照組的該變化來判定，且表現為以百分比計的Δ TGI值（文字中表示為TGI）。使用腫瘤植入後第42天作為TGI計算的最後一天。在第46天終止實驗。HC3B125顯著抑制腫瘤模型HuPT3於hNSG小鼠中之生長。相較於空xCD3治療對照組，所評估之所有五個劑量水準的腫瘤生長抑制有統計顯著性（表 73 ）。表73. HuP-T3 模型療效統計
組 建構體 劑量/ 動物 % ΔTGI （第42 天） CR 的數量（第42 天）
1 CD3x 空 -
2 HC3B125 0.05 mg/kg 112% ***p＜0.0001
3 HC3B125 0.1 mg/kg 118% ***p＜0.0001 1/9隻CR
4 HC3B125 0.3 mg/kg 130% ***p＜0.0001 1/10隻CR
5 HC3B125 1 mg/kg 129% ***p＜0.0001
6 HC3B125 5 mg/kg 118% ***p＜0.0001 3/10隻CR
參考文獻 1      Lee, N.et al. The membrane-bound and soluble forms of HLA-G bind identical sets of endogenous peptides but differ with respect to TAP association.Immunity 3 , 591-600, doi:10.1016/1074-7613(95)90130-2 (1995). 2      Juch, H.et al. A novel sandwich ELISA for alpha1 domain based detection of soluble HLA-G heavy chains.J Immunol Methods 307 , 96-106, doi:10.1016/j.jim.2005.09.016 (2005). 3      Morales, P. J., Pace, J. L., Platt, J. S., Langat, D. K. & Hunt, J. S. Synthesis of beta(2)-microglobulin-free, disulphide-linked HLA-G5 homodimers in human placental villous cytotrophoblast cells.Immunology 122 , 179-188, doi:10.1111/j.1365-2567.2007.02623.x (2007). 4      Carosella, E. D., Favier, B., Rouas-Freiss, N., Moreau, P. & Lemaoult, J. Beyond the increasing complexity of the immunomodulatory HLA-G molecule.Blood 111 , 4862-4870, doi:10.1182/blood-2007-12-127662 (2008). 5      Carosella, E. D., Rouas-Freiss, N., Tronik-Le Roux, D., Moreau, P. & LeMaoult, J. HLA-G: An Immune Checkpoint Molecule.Adv Immunol 127 , 33-144, doi:10.1016/bs.ai.2015.04.001 (2015). 6      Clements, C. S.et al. Crystal structure of HLA-G: a nonclassical MHC class I molecule expressed at the fetal-maternal interface.Proc Natl Acad Sci U S A 102 , 3360-3365, doi:10.1073/pnas.0409676102 (2005). 7      Shields, R. L.et al. Lack of fucose on human IgG1 N-linked oligosaccharide improves binding to human Fcgamma RIII and antibody-dependent cellular toxicity.J Biol Chem 277 , 26733-26740, doi:10.1074/jbc.M202069200 (2002). 8      Zhang, D.et al. Functional optimization of agonistic antibodies to OX40 receptor with novel Fc mutations to promote antibody multimerization.MAbs 9 , 1129-1142, doi:10.1080/19420862.2017.1358838 (2017). 9      Wilky, B. A. Immune checkpoint inhibitors: The linchpins of modern immunotherapy.Immunol Rev 290 , 6-23, doi:10.1111/imr.12766 (2019).實例18. 雙特異性DLL3 ×CD3 的產生
使用基因轉殖小鼠(Ablexis®)產生之抗δ樣配體3 (DLL3)抗體的VH/VL區及實例1之抗CD3抗體的VH/VL區係經工程改造為雙特異性格式且表現為IgG1。此外，使用US20200048349所述之CD3特異性抗體CD3B376及CD3B450之VH/VL區。
將經設計之重鏈分子合成為gblock (IDT; Coralville, IA)，其在5’及3’端含有用於使用InFusion方法(ClonTech)之毋須接合選殖的15 bp重疊。將所有輕鏈建構體插入含有用於符合讀框接合至人類κ恆定域之BswiI及HindIII限制位點的pLonza載體。編碼鼠IgH信號肽以允許有效分泌mAb至培養上清液。將所有gblock重構於無菌水並在50⁰C下培養10分鐘，如製造商規程所示。將pLonza載體(Lonza; Basel, Switzerland)使用EcoRI及HindIII線性化，隨後進行凝膠萃取及清潔。使用2:1質量比之欲插入之線性化載體，隨後在50⁰C下熱脈衝15分鐘。將InFusion反應轉化成至Stellar勝任細胞(ClonTech)且所得殖株經調整以進行微量製備。所有建構體的序列經驗證，並使用無內毒素maxi製備套組擴大規模(Qiagen; Hilden, Germany)。工程改造CD3 及DLL3 scFv 以用於雙特異性DLL3 x CD3 之產生
使用SEQ ID NO:31之連接子將CD3 VH/VL區工程改造為呈VH-連接子-VL或VL-連接子-VH定向之scFv（表2）。將結合CD3之VH-連接子-VL或VL-連接子-VH scFv分子進一步工程改造為scFv-鉸鏈-CH2-CH3格式，其包含Fc靜默突變(L234A/L235A/D265S)及允許DLL3及CD3重鏈異二聚化之二聚化突變。
使用如上述產生CD3 scFv之相同連接子SEQ ID NO:31將DLL3 VH/VL區工程改造為呈VL-連接子-VH定向之scFv（表2）。將結合DLL3之VL-連接子-VH scFv分子進一步工程改造為包含Fc靜默突變(L234A/L235A/D265S)之scFv-鉸鏈-CH2-CH3格式。設計用來促進Fc域選擇性異二聚化之突變亦工程改造於Fc域中。工程改造CD3 及DLL3 Fab 以用於DLL3/CD3 雙特異性分子之產生
亦將CD3及DLL3特異性VH及VL區分別工程改造為VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3及VL-CL格式且表現為IgG1。將Fc靜默突變L234A/L235A/D265S導入Fc區。設計用來促進Fc域選擇性異二聚化之突變亦工程改造於Fc域中。雙特異性DLL3 x CD3 抗體的表現
雙特異性抗體的表現係遵照製造商建議，在ExpiCHO-S™細胞中藉由暫時轉染經純化之質體DNA進行。簡言之，將ExpiCHO-S™細胞懸浮維持於設定37℃、8% CO2 及125 RPM之迴轉震盪培養箱中之ExpiCHO™表現培養基(ThermoFisher Scientific, Cat # A29100)中。將細胞繼代並在轉染前稀釋至每ml 6.0 × 106 個細胞，維持99.0%或更佳之細胞存活性。使用ExpiFectamine™ CHO轉染套組(ThermoFisher Scientific, Cat # A29131)進行暫時轉染。以每ml之待轉染的經稀釋細胞而言，使用0.5微克之編碼各雙特異性抗體之DNA（以HC1:LC1:HC2 = 1:2:2之比）及0.5微克之pAdVAntage DNA (Promega, Cat# E1711)並稀釋於OptiPRO™ SFM複合培養基中。以每公升的細胞而言，將2.56 mL之ExpiFectamine™ CHO試劑稀釋於8 mL之OptiPRO™中。將稀釋的DNA及轉染試劑合併一分鐘，允許DNA/脂質錯合物形成，接著添加至細胞。在整夜培養後，依照製造商標準規程，將ExpiCHO™ feed及ExpiFectamine™ CHO增強劑添加至細胞。使細胞在37℃下迴轉震盪(125 rpm)培養七天，之後收集培養液。來自暫時轉染ExpiCHO-S™細胞之培養上清液係藉由離心(30 min, 3000rcf)澄清，隨後過濾（0.2 µm PES膜，Corning；Corning, NY）。雙特異性DLL3 x CD3 的純化
使用AKTA Avant 150層析系統，將過濾的細胞培養上清液裝載至預平衡(1xDPBS, pH 7.2)的HiTrap MabSelect SuRe蛋白質A管柱(GE Healthcare)上。在裝載後，將管柱用5倍管柱體積之1xDPBS, pH 7.2洗滌。將蛋白質用8倍管柱體積之0.1 M乙酸鈉(Na) pH 3.5洗提。將蛋白質流份藉由添加2.5 M Tris HCl, pH 7.2至15% (v/v)最終體積來完全中和並經針筒過濾(0.2 µm)。將經中和之蛋白質溶液裝載至2× 5 mL預填充之CaptureSelect™ IgG-CH1 Affinity Matrix (Thermo Fisher Scientific)上。將管柱用10倍管柱體積之1xDPBS, pH7.2洗滌。將蛋白質用10倍管柱體積之0.1 M乙酸鈉(Na) pH 3.5洗提。將蛋白質流份藉由添加2.5 M Tris HCl, pH 7.2至15% (v/v)最終體積來完全中和。將主要尖峰流份彙集、用總共3次透析變化透析至1xDPBS, pH 7.2並過濾(0.2 µm)。
表74 至表77 顯示所選DLL3/CD3雙特異性抗體之序列資訊。表74. DLL3/CD3 雙特異性抗體之HC 及LC 胺基酸SEQ ID NO
雙特異性分子名稱 DLL3臂 CD3臂
名稱 HC1或scFv -Fc SEQ ID NO: LC1 SEQ ID NO: 名稱 HC2或scFv - Fc SEQ ID NO: LC2 SEQ ID NO:
DL3B582 DL3B279-Fab-Fc 692 693 CD3W245-LH-scFv-Fc 78  
DL3B583 DL3B279-Fab-Fc 692 693 CD3W245-HL-scFv-Fc 77  
DL3B585 DL3B279-LH-scFv-Fc 694   CD3B376-Fab-Fc 349 350
DL3B587 DL3B279-LH-scFv-Fc 694   CD3W245-Fab-Fc 85 88
D3C3B80 DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFv-Fc (ZW) 695   CD3B376-K477-Fab-Fc 696 350
D3C3BB3 DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFv-Fc (KIH) 697   CD3B376-Fab-Fc 349 350
表75 ：所選雙特異性抗體之胺基酸序列
蛋白質 SEQ ID NO: 胺基酸序列
DL3B279-Fab HC1（VH-CH1-鉸鏈-CH2-CH3） 692 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGNTFTNYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKLQGRMTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQGPFIGDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
DL3B279-Fab LC1 (VL-CL) 693 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFAQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
DL3B279-LH-scFv 694 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFAQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGNTFTNYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKLQGRMTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQGPFIGDAFDIWGQGTMVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS
DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFv-Fc (ZW) 695 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGQTFTNYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKLQGRMTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQGPFIGDAFDIWGQGTTVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
CD3W245-LH-scFv-Fc 78 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
CD3W245-HL-scFv-Fc 77 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
CD3W245-Fab-Fc HC2 85 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYNMNWVRQAPGKGLEWVSSISTSSNYIYYADSVKGRFTFSRDNAKNSLDLQMSGLRAEDTAIYYCTRGWGPFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
CD3W245-Fab-Fc LC2 88 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRARQSIGTAIHWYQQKPGKAPKLLIKYASESISGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSGSWPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
CD3B376-Fab-Fc HC2 349 QVQLQQSGPRLVRPSQTLSLTCAISGDSVFNNNAAWSWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWLYDYAVSVKSRITVNPDTSRNQFTLQLNSVTPEDTALYYCARGYSSSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
CD3B376-Fab-Fc LC2 350 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSNIGTYKFVSWYQQHPDKAPKVLLYEVSKRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDQADYHCVSYAGSGTLLFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
CD3B376-Fab-Fc K477 HC2 696 QVQLQQSGPRLVRPSQTLSLTCAISGDSVFNNNAAWSWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWLYDYAVSVKSRITVNPDTSRNQFTLQLNSVTPEDTALYYCARGYSSSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
CD3B376-Fab-K477 LC2 350 QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSNIGTYKFVSWYQQHPDKAPKVLLYEVSKRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDQADYHCVSYAGSGTLLFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFv-Fc (KIH) 697 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNYLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSYPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGQTFTNYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKLQGRMTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQGPFIGDAFDIWGQGTTVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
CD3B376-Fab-Fc HC2 727 QVQLQQSGPRLVRPSQTLSLTCAISGDSVFNNNAAWSWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWLYDYAVSVKSRITVNPDTSRNQFTLQLNSVTPEDTALYYCARGYSSSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
表76. 雙特異性DLL3/CD3 抗體之Kabat CDR SEQ ID NO
雙特異性抗體 親本（DLL3臂/CD3臂） HCDR1 (SEQ ID No) HCDR2 (SEQ ID No) HCDR3 (SEQ ID No) LCDR1 (SEQ ID No) LCDR2 (SEQ ID No) LCDR3 (SEQ ID No)
DL3B582 DL3B279-Fab NYYIH (699) IINPSGGSTSYAQKLQG (700) QGPFIGDAFDI (701) RASQGISNYLA (702) AASSLQS (703) QQYNSYPYT (704)
CD3W245 LH-scFv RYNMN (6) SISTSSNYIYYADSVKG (7) GWGPFDY (8) RARQSIGTAIH (9) YASESIS (10) QQSGSWPYT (11)
DL3B583 DL3B279 Fab NYYIH (699) IINPSGGSTSYAQKLQG (700) QGPFIGDAFDI (701) RASQGISNYLA (702) AASSLQS (703) QQYNSYPYT (704)
CD3W245-HL-scFv RYNMN (6) SISTSSNYIYYADSVKG (7) GWGPFDY (8) RARQSIGTAIH (9) YASESIS (10) QQSGSWPYT (11)
DL3B585 DL3B279-LH-scFv NYYIH (699) IINPSGGSTSYAQKLQG (700) QGPFIGDAFDI (701) RASQGISNYLA (702) AASSLQS (703) QQYNSYPYT (704)
CD3B376-Fab NNNAAWS 340 RTYYRSKWLYDYAYSYKS 341 GYSSSFDY 342 TGTSSNIGTYKFVS 343 EVSKRPS 344 VSYAGSGTLL 345
DL3B587 DL3B279-scFv NYYIH (699) IINPSGGSTSYAQKLQG (700) QGPFIGDAFDI (701) RASQGISNYLA (702) AASSLQS (703) QQYNSYPYT (704)
CD3W245-Fab RYNMN (6) SISTSSNYIYYADSVKG (7) GWGPFDY (8) RARQSIGTAIH (9) YASESIS (10) QQSGSWPYT (11)
D3C3B80 DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFv (ZWB) NYYIH (699) IINPSGGSTSYAQKLQG (700) QGPFIGDAFDI (701) RASQGISNYLA (702) AASSLQS (703) QQYNSYPYT (704)
CD3B376-K477-Fab NNNAAWS 340 RTYYRSKWLYDYAYSYKS 341 GYSSSFDY 342 TGTSSNIGTYKFVS 343 EVSKRPS 344 VSYAGSGTLL 345
D3C3BB3 DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFv (KIH) NYYIH (699) IINPSGGSTSYAQKLQG (700) QGPFIGDAFDI (701) RASQGISNYLA (702) AASSLQS (703) QQYNSYPYT (704)
CD3B376-Fab (KIH) NNNAAWS 340 RTYYRSKWLYDYAYSYKS 341 GYSSSFDY 342 TGTSSNIGTYKFVS 343 EVSKRPS 344 VSYAGSGTLL 345
表77. DLL3/CD3 雙特異性抗體之HC 及LC DNA SEQ ID NO
雙特異性分子名稱 DLL3臂 CD3臂
名稱 HC1或scFv -Fc SEQ ID NO: LC1 SEQ ID NO: 名稱 HC2或scFv - Fc SEQ ID NO: LC2 SEQ ID NO:
DL3B582 DL3B279-Fab-Fc 705 706 CD3W245-LH-scFv-Fc 710  
DL3B583 DL3B279-Fab-Fc 705 706 CD3W245-HL-scFv-Fc 711  
DL3B585 DL3B279-LH-scFv-Fc 707   CD3B376-Fab-Fc 351 352
DL3B587 DL3B279-LH-scFv-Fc 707   CD3W245-Fab-Fc 712 713
D3C3B80 DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFv (ZWB) 708   CD3B376-K477-Fab-Fc 351 352
D3C3BB3 DL3B279-scFv-Fc (KIH) 709   CD3B376-Fab-Fc (KIH) 714 715
＞SEQ ID NO:705 （DL3B582 及DL3B583 中之DL3B279-Fab-Fc HC1 cDNA ） 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ID NO:713 (CD3W245 Fab-Fc LC2 cDNA) GACATACAAATGACACAATCACCCTCTTCTCTTTCTGCAAGCGTTGGCGACCGTGTCACTATCACTTGTCGAGCCCGCCAGTCCATAGGTACTGCCATTCACTGGTATCAACAGAAGCCTGGCAAGGCTCCCAAACTCCTGATTAAGTATGCCAGCGAGAGCATTTCCGGCGTACCTTCAAGATTTTCCGGCTCCGGTAGTGGGACAGATTTCACTCTCACTATATCTAGCCTCCAACCAGAAGATTTCGCCACTTACTACTGTCAACAATCAGGTTCATGGCCTTACACTTTCGGCCAGGGGACAAAATTGGAGATCAAGCGGACAGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCTGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGT＞SEQ ID NO:714 (CD3B376 Fab-Fc HC2 KIH cDNA) CAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCTAGACTCGTGCGGCCTTCCCAGACCCTGTCTCTGACCTGTGCCATCTCCGGCGACTCCGTGTTCAACAACAACGCCGCCTGGTCCTGGATCCGGCAGTCTCCATCTCGCGGTCTGGAGTGGCTCGGTCGCACCTACTACCGCTCTAAATGGCTGTACGACTACGCCGTGTCCGTGAAGTCCCGGATCACCGTGAACCCTGACACCTCCCGGAACCAGTTCACCCTGCAGCTGAACTCCGTGACCCCTGAGGACACCGCCCTGTACTACTGCGCCAGAGGCTACTCCTCCTCCTTCGACTATTGGGGCCAAGGCACCCTCGTGACCGTGTCCTCTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCCGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCGAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGTCCTGCGCCGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGGTTCACGCAGAAGTCTCTCTCCCTGTCTCCGGGAAAA＞SEQ ID NO:715 (CD3B376 Fab-Fc LC KIH cDNA) CAGTCTGCTCTGACCCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGCTCTCCCGGCCAGTCCATCACCATCAGCTGTACCGGCACCTCCTCCAACATCGGCACCTACAAGTTCGTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCCGACAAGGCCCCCAAAGTGCTGCTGTACGAGGTGTCCAAGCGGCCCTCTGGCGTGTCCTCCAGATTCTCCGGCTCCAAGTCTGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCAGCGGACTGCAGGCTGAGGACCAGGCCGACTACCACTGTGTGTCCTACGCTGGCTCTGGCACCCTGCTGTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGACCGTGCTGGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA實例19. 雙特異性DLL3 × CD3 抗體之表徵 DLL3 表位對於雙特異性DLL3 × CD3 介導之細胞毒性之效應
為了判定DLL3表位對於雙特異性DLL3 × CD3介導之殺滅DLL3 +目標細胞的效應，T細胞重導向係使用人類泛T細胞作為效應物及SHP-77細胞作為目標以3:1比執行72小時。將相等體積(100ul)之自20nM之½對數稀釋的2X測試樣本（最終始於10nM）添加至50,000個經CSFE標示之SHP-77細胞混合150,000個泛T細胞於最終體積200ul RPMI、10% FBS中在37℃下達72hr。在72小時之後，將盤用PBS洗滌1x，與近IR L/D染料及經BV421標示之抗CD25抗體於染色緩衝劑中培養20分鐘。將細胞用染色緩衝劑洗滌二次、重懸於25 ul Accutase達10分鐘，接著添加25 ul之QSol緩衝劑。在IQue plus上讀取盤且在CSFE陽性群體（腫瘤細胞）及CSFE陰性細胞（T細胞）上閘控細胞且兩個群體後續在活/死染色上閘控。進一步在CD25染色上閘控活T細胞。所計算之輸出係腫瘤殺滅%、CD25 T細胞活化%、及T細胞存活性。使用寶石紅染色對照（空白100%死亡）及僅T細胞/僅SHP-77從殘渣及接著個別細胞群體閘控含有核之細胞。使用4參數曲線擬合在GeneData Screenr中分析數據。下表顯示與各種CD3臂成對之各DLL3結合劑在72小時結束時所觀察到之SHP-77細胞最大裂解百分比。結果指示，腫瘤殺滅%取決於DLL3上之結合表位，其與膜越遠，細胞裂解越少（表 78 至表80 ）。腫瘤殺滅%隨著DLL3結合表位變得更靠近膜而改善。當DLL3結合劑與3個不同CD3成對時，此趨勢相對一致。
發明人意外發現，出現當DLL3內之結合域朝向一級序列之C端移動或靠近腫瘤膜時，各域之最大殺滅隨之增加的有趣趨勢。特別是，最大殺滅效率從EGF2改善至EGF6，且當測試抗體結合EGF-6域或靠近C端時達到最高百分比。表78 ：SHP-77 在與人類泛T 細胞及雙特異性抗DLL3 × CD3W245 抗體以3:1 ET 比（CD3: 目標細胞）共培養之後第3 天的裂解% 。
名稱 樣本說明 DLL3臂 表位 最大殺滅%
CD3B1706 CD3W245-Fab-RF；DL3B279-scFv DL3B279-scFv EGF6 89.7
CD3B1506 CD3W245-Fab-RF；DL3B463-scFv DL3B463-scFv EGF3/EGF4 94.5
CD3B1346 CD3W245-Fab-RF；DL3B419-scFv DL3B419-scFv EGF2/EGF3 85.2
CD3B1586 CD3W245-Fab-RF；DL3B470-scFv DL3B470-scFv DSL 55.5
表79 ：SHP-77 在與人類泛T 細胞及雙特異性抗DLL3 × CD3B376 抗體以3:1 ET 比（CD3: 目標細胞）共培養之後第3 天的裂解% 。
名稱 樣本說明 DLL3臂 表位 最大殺滅%
CD3B1738 CD3B376-Fab-RF；DL3B279-scFv DL3B279-scFv EGF6 74.3
CD3B1538 CD3B376-Fab-RF；DL3B463-scFv DL3B463-scFv EGF3/EGF4 25.9
CD3B1378 CD3B376-Fab-RF；DL3B419-scFv DL3B419-scFv EGF2/EGF3 49.1
CD3B1618 CD3B376-Fab-RF；DL3B470-scFv DL3B470-scFv DSL 3.4
表80 ：SHP-77 在與人類泛T 細胞及雙特異性抗DLL3 × CD3B219 抗體以3:1 ET 比（CD3: 目標細胞）共培養之後第3 天的裂解% 。
名稱 樣本說明 DLL3臂 表位 最大殺滅%
CD3B1737 CD3B219-Fab-RF；DL3B279-scFv DL3B279-scFv EGF6 86.4
CD3B1377 CD3B219-Fab-RF；DL3B419-scFv DL3B419-scFv EGF2/EGF3 73.1
CD3B1617 CD3B219-Fab-RF；DL3B470-scFv DL3B470-scFv DSL 21.9
雙特異性抗DLL3 × CD3 抗體對DLL3 之結合親和力
使用Biacore T200儀器，藉由表面電漿共振(SPR)判定抗DLL3xCD3抗體對重組人類DLL3之結合親和力。抗體被捕捉在經山羊抗Fc抗體修飾之C1晶片上，且用濃度橫跨90 nM至1.1 nM之DLL3抗原之3倍連續稀釋液滴定。使用100 µL/min之流速，監測締合2分鐘及解離5或60分鐘。原始結合數據係藉由減去來自空白之分析物結合信號參照，且使用1:1 Langmuir結合模型使用Biacore Insight評估軟體分析，以獲得用於計算結合親和力之動力學。抗DLL3xCD3抗體對重組人類DLL3之結合親和力係彙總於表 81 。表81 ：藉由Biacore (SPR) 方法獲得之抗DLL3xCD3 雙特異性抗體與人類DLL3 之交互作用的親和力(KD) 。使用抗人類Fc 抗體捕捉抗體，並將抗原注入溶液中。
名稱 說明 kD (pM)
DL3B582 CD3W245-LH-scFv；DL3B279-Fab 16
DL3B583 CD3W245-HL-scFv；DL3B279-Fab 16
DL3B585 CD3B376-Fab；DL3B279-LH-scFv 24
DL3B587 CD3W245-Fab；DL3B279-LH-scFv 31
雙特異性抗DLL3 x CD3 抗體之熱穩定性
使用自動化Prometheus儀器，藉由NanoDSF方法判定雙特異性抗DLL3xCD3抗體之熱穩定性（構形穩定性）。將樣本自384孔樣本盤裝載至24孔毛細管中，以進行測量。執行二重複運行。熱掃描以1.0℃/分鐘的速率自20℃跨至95℃。數據經處理以獲得整合數據及330 nm、350 nm、比率330/350、及散射數據的第一衍生分析，自此獲得熱轉變、去折疊開始、Tm 、及Tagg 。
結果顯示，這些雙特異性抗DLL3 x CD3抗體具有高於59℃之第一轉變(Tm1 )。結果亦顯示大部分蛋白質（除了DL3B585以外）具有低聚集潛力，且Tagg 超過70℃並高於Tm1 5度或更多（表 82 ） 。表82 ：使用NanoDSF 儀器獲得之雙特異性抗DLL3 x CD3 抗體之熱穩定性數據。
名稱 說明 Tagg Tm1
DL3B582 CD3W245-LH-scFv；DL3B279-Fab 74.7℃ 63.3℃
DL3B583 CD3W245-HL-scFv；DL3B279-Fab 75.4℃ 63.1℃
DL3B585 CD3B376-Fab；DL3B279-LH-scFv 62.7℃ 60.8℃
DL3B587 CD3W245-Fab；DL3B279-LH-scFv 74.6℃ 62.4℃
雙特異性抗DLL3 x CD3 抗體在DLL3+ 腫瘤細胞上之結合
我們判定雙特異性抗DLL3 x CD3抗體與DLL3+ 人類腫瘤細胞系（HCC1833及SHP-77）之細胞結合概況。將附著的SCLC HCC1833細胞用DPBS洗滌，並添加0.25%胰蛋白酶以允許細胞剝離。添加培養基以中和胰蛋白酶，並將細胞轉移至15 mL錐形管。將懸浮SCLC SHP77細胞轉移至15 mL錐形管，並離心1200 rpm達3分鐘。將培養基吸出，並將細胞用DPBS再洗滌一次。細胞使用Vi-細胞XR細胞存活性分析儀計數並以100K/孔接種於100uL DPBS。將盤離心1200 rpm達3分鐘，並用DPBS洗滌2x。細胞用紫色活/死染料(Thermo-Fisher)染色，並在RT下於黑暗中培養25min。將細胞離心並用FACS染色緩衝劑(BD Pharmingen)洗滌2x。
將測試抗體以FACS染色緩衝劑稀釋至最終起始濃度100nM，並自起始濃度製備3倍連續稀釋達總共10個稀釋點。將連續稀釋的測試抗體（100uL/孔）添加至細胞，並在37o 下培養30min。將細胞用FACS染色緩衝劑洗滌2x，並添加接合AlexaFluor 647之驢抗人類二級抗體(Jackson Immunoresearch)且允許與細胞在4o 下培養30 min。接著將細胞用FACS染色緩衝劑洗滌2x，並重懸於100uL FACS緩衝劑。細胞在BD Celesta上使用FACS Diva軟體運行，並使用FlowJo軟體分析。如圖 26A 及圖26B 所示，DLL3-Fab臂（DL3B582及DL3B583）與DLL3-scFv臂（DL3B585及DL3B587）之間的結合概況係中度不同。雙特異性抗DLL3 x CD3 抗體在泛T 細胞上之結合
亦評估雙特異性抗DLL3 x CD3抗體與正常人類T細胞之細胞結合概況。將人類泛T細胞(Biological Specialty Corporation, Colmar, PA)解凍並轉移至含有DPBS（Dulbecco氏磷酸鹽鹽水緩衝劑）之15 mL錐形管。將細胞離心1300 rpm達5分鐘。將DPBS吸出，並將細胞重懸於DPBS中。細胞使用Vi-細胞XR細胞存活性分析儀計數並以100K/孔接種於100uL DPBS。將盤離心1200 rpm達3分鐘，並用DPBS洗滌2x。細胞用紫色活/死染料(Thermo-Fisher)染色，並在RT下於黑暗中培養25min。將細胞離心並用FACS染色緩衝劑(BD Pharmingen)洗滌2x。將測試抗體以FACS染色緩衝劑稀釋至最終起始濃度100nM，並自起始濃度製備3倍連續稀釋達總共10個稀釋點。將連續稀釋的測試抗體（100uL/孔）添加至細胞，並在37o 下培養30min。將細胞用FACS染色緩衝劑洗滌2x，並添加接合AlexaFluor 647之驢抗人類二級抗體(Jackson Immunoresearch)且允許與細胞在4o 下培養30 min。將細胞用FACS染色緩衝劑洗滌2x，並重懸於100uL FACS緩衝劑。細胞在BD Celesta上使用FACS Diva軟體運行，並使用FlowJo軟體分析。如圖 27 所示，各種CD3臂的細胞結合概況不同。雙特異性DLL3 x CD3 介導對抗泛T 細胞中之DLL3+ 目標細胞系之細胞毒性
我們評估雙特異性抗DLL3 x CD3抗體在DLL3+ 及DLL3- 細胞系中之T細胞介導之殺滅潛力。產生穩定表現紅色核染料之DLL3+ SHP77及DLL3- HEK293以用於基於IncuCyte之細胞毒性檢定。將健康供體T細胞(Biological Specialty Corporation, Colmar, PA)之冷凍小瓶於37℃水浴中解凍，轉移至15 mL錐形管，並用5 mL無酚紅RPMI/ 10% HI FBS培養基洗滌一次。使用Viacell XR細胞存活性分析儀計數細胞，並將T細胞與目標細胞合併達5:1之最終效應物T細胞對目標細胞(E: T)比。將細胞混合物（100uL/孔）合併於50 mL錐形管並添加至透明96孔平底盤。接著將測試抗體以無酚紅RPMI/10% HI FBS培養基稀釋至最終起始濃度60nM，並自起始濃度製備3倍連續稀釋達總共11個稀釋點。將連續稀釋的測試抗體（100uL/孔）添加至合併細胞。將盤放入IncuCyte® Zoom或IncuCyte S3® (Essen)在37℃、5% CO2 下達120小時。目標細胞系穩定表現紅色核染料，其係用於追蹤目標細胞裂解之動力學。細胞生長抑制百分比(%) =（初始活目標細胞數目-目前活目標細胞數目）/初始活細胞數目* 100%。如圖 28A 及圖28B 所示，T細胞細胞毒性檢定結果顯示所有雙特異性抗DLL3 x CD3抗體在5天內皆能夠達成＞95%腫瘤裂解。雙特異性DLL3 x CD3 抗體介導泛T 細胞中之細胞介素誘導
我們評估雙特異性抗DLL3 xCD3抗體在DLL3+ 人類腫瘤細胞系中的細胞介素釋放概況。上清液使用Human Proinflammatory Panel I組織培養套組(Meso Scale Discovery)分析並在濕冰上解凍，以1,500 rpm在4℃下離心5分鐘，接著放在冰上。MULT-SPOT檢定盤按照製造商規程預洗滌。標準曲線係藉由連續稀釋所提供的校正品於MSD稀釋劑1中製備。將標準品及測試抗體樣本（25uL/孔）添加至預洗滌盤。在SECTOR Imager 6000上讀取檢定盤。如圖 29 所示，細胞介素概況實驗之結果顯示IFN-γ生產與雙特異性抗DLL3 xCD3抗體之CD3親和力相關。雙特異性DLL3 x CD3 介導對抗PBMC 中之DLL3+ 目標細胞系之細胞毒性
為了測試具有不同抗原表現水準之雙特異性對抗DLL3+ 目標細胞之療效，在細胞毒性測定中測試DLL3高表現（SHP-77及HCC1833）及DLL3低表現細胞系(G361)。SHP-77及HCC1833分別係肺部上皮及肺腺癌細胞系。G361細胞係衍生自惡性皮膚黑色素瘤。在細胞毒性檢定中使用穩定表現核限制NucLight Red (NLR)蛋白質之DLL3+ SHP-77細胞系。在檢定當天，收集SHP-77-NLR細胞至50 ml falcon管，並以1300 rpm離心5 min。接著將細胞團塊重懸於經修飾之RPMI 1640培養基+ 10% FBS（完全培養基）且細胞計數使用血球計使用台盼藍活死亡標記估計。接著將SHP-77-NLR細胞以10,000個細胞/孔/90 µl之完全培養基接種至經膠原蛋白包覆之96孔盤。藉由輕柔攪動使細胞均勻分布並允許在5% CO2 培養箱中靜置1小時。在HCC1833及G361目標細胞系之情況下，在PBMC添加之前一天將3000個細胞/孔/90 µl完全培養基接種在96孔平底組織培養盤中。
將來自健康供體(Clinigene)之冷凍PBMC小瓶在37℃水浴中快速解凍，轉移至15 mL錐形管，並用10 mL完全培養基洗滌一次。將細胞用抗人類CD3抗體染色並藉由流動式細胞測量儀分析以判定PBMC內之CD3%。來自各供體之PBMC使用血球計使用台盼藍活死亡標記計數，且將欲得到所需效應物對目標(ET)比（CD3:目標細胞）之所需數量的PBMC添加至經接種於於90 µl完全培養基中之目標細胞。接著將測試抗體製備為於完全培養基中之10X原液，並製備3倍連續稀釋。將連續稀釋的測試抗體以20 µl/孔添加至PBMC-腫瘤共培養，以使抗體之最終濃度變成1X。使用無抗體(NBS)之孔作為基準細胞毒性對照。將盤放入IncuCyte S3® (Essen BioScience)在37℃、5% CO2 下達5天。紅色信號的增加對應於目標細胞增生，且信號的降低對應於目標細胞死亡。結果彙總於表 83 。裂解%係計算為= {100 - (特定時間點含抗體之紅色信號強度/該時間點NBS孔之紅色信號強度) * 100}。表83 ：SHP-77 、HCC1833 、及G361 細胞在與全PBMC 及所示濃度之雙特異性抗DLL3 x CD3 抗體使用1:1 ET 比（CD3: 目標細胞）共培養之後第5 天的裂解% 。NA 指示未測試。
分子 細胞毒性（第6 天裂解% ，1:1 ET 比）
SHP-77 G361 HCC1833
名稱 說明 30nM 30nM 30nM
DL3B582 CD3W245-LH-scFv DL3B279-Fab 87.3 98.9 93.7
DL3B583 CD3W245-HL-scFv DL3B279-Fab 99.8 98.9 88.4
DL3B585 CD3B376-Fab DL3B279-LH-scFv 58.1 NA NA
DL3B587 CD3W245-Fab DL3B279-LH-ScFv 83.3 NA NA
觀察到雙特異性DLL3 x CD3抗體在不同來源之細胞系及抗原密度的強效腫瘤細胞裂解。為了比較高親和力CD3雙特異性(DL3B583)與低親和力CD3雙特異性(DL3B585)之療效，以各種ET比測試對抗DLL3高表現SHP-77細胞之細胞毒性。來自3個供體之全PBMC係與DLL3+ SHP-77-NLR細胞以所示ET比(CD3: SHP-77)在雙特異性DLL3 x CD3抗體存在下培養。含有PBMC及目標細胞但無抗體之孔係用來作為基礎細胞毒性對照。將盤在IncuCyte S3® (Essen BioScience)中在37℃、5% CO2培養箱中掃描至多120小時。裂解%係計算為= {100 - (特定時間點含抗體之紅色信號強度/該時間點NBS孔之紅色信號強度) * 100}。該圖表上的各點代表3個供體的平均。如圖 30A 至圖30C 所示，具有高親和力CD3 (DL3B583)及低親和力CD3 (DL3B585)臂兩者之雙特異性DLL3 x CD3抗體顯示對抗SHP-77細胞之強健細胞毒性。在10:1 ET比下，在90nM及30nM抗體濃度下之目標細胞裂解在高及低親和力CD3抗體之間類似。在全PBMC 細胞毒性檢定中CD3+ T 細胞回應於雙特異性DLL3 x CD3 抗體之增生
為了測試雙特異性DLL3 x CD3抗體與CD8+ T細胞之結合是否可誘導CD8+ T細胞之增生及擴增，執行CD8+ T細胞增生之時間進程分析。DLL3+ SHP-77細胞係用於檢定。在檢定當天，收集SHP-77細胞至50 ml falcon管，並以1300 rpm離心5 min。接著將細胞團塊重懸於1 ml經修飾之RPMI 1640培養基+ 10% FBS（完全培養基）且細胞計數使用血球計使用台盼藍活死亡標記估計。接著將SHP77細胞以10,000個細胞/孔/90 µl之完全培養基接種於U底96孔盤。
將來自健康供體(Clinigene)之冷凍PBMC小瓶在37℃水浴中快速解凍，轉移至15 mL錐形管，並用10 mL完全培養基洗滌一次。將細胞用抗人類CD3抗體染色並藉由流動式細胞測量儀分析以判定PBMC內之CD3%。PBMC用Cell Trace紫色染料(C34571, Thermo Fisher Scientific)染色。來自各供體之PBMC使用血球計使用台盼藍活死亡標記計數，且將欲得到效應物對目標(ET)比10:1（CD3:目標細胞）之所需數量的PBMC添加至經接種於於90 µl完全培養基中之目標細胞。
接著將測試抗體製備為於完全培養基中之10X原液，並自起始濃度製備3倍連續稀釋達總共3個稀釋點。將連續稀釋的測試抗體以20 µl/孔添加至PBMC-腫瘤共培養，以使抗體之最終濃度變成1X。使用無抗體(NBS)之孔作為基準細胞毒性對照。將盤在5% CO2 培養箱中培養達所示時間期間。在培養期結束時，將細胞懸浮液轉移至v底盤，並以1500 rpm離心5 min。將團塊重懸於100 µl之DPBS中。採集10 µl之細胞懸浮液，使用台盼藍與血球計判定各抗體濃度下之總細胞數。使剩餘的細胞懸浮液經受LIVE/DEAD™可固定近IR死亡細胞染色套組(L10119)並培養20 min。使用FACS緩衝劑將存活性染色去活化並以1500 rpm離心5 min。將細胞用BD Fc阻斷劑(564220, BD Pharmingen)染色10 min，隨後用CD3及CD8抗體染色並在流動式細胞測量儀上獲得。執行CD8 T細胞上的閘控以估計細胞毒性CD8 T細胞群體在CD3 T細胞內之擴增。如圖 31 所示，雙特異性DLL3 x CD3抗體與T細胞之結合強效介導細胞毒性CD8 T細胞之擴增。在全PBMC 檢定中藉由雙特異性DLL3 x CD3 抗體之CD8 T 細胞之活化概況
為了探討細胞毒性CD8 T細胞群體回應於DLL3 x CD3雙特異性分子之結合的活化狀態，執行CD25、CD69、及CD71標記之動力學分析。DLL3+ SHP-77細胞係用於檢定。收集SHP-77細胞至50 ml falcon管，並以1300 rpm離心5 min。接著將細胞團塊重懸於1 ml經修飾之RPMI 1640培養基+ 10% FBS（完全培養基）且細胞計數使用血球計使用台盼藍活死亡標記估計。接著將SHP-77細胞以10,000個細胞/孔/90 µl之完全培養基接種於U底96孔盤。
將來自健康供體(Clinigene)之冷凍PBMC小瓶在37℃水浴中快速解凍，轉移至15 mL錐形管，並用10 mL完全培養基洗滌一次。將細胞用抗人類CD3抗體染色並藉由流動式細胞測量儀分析以判定PBMC內之CD3%。來自各供體之PBMC使用血球計使用台盼藍活死亡標記計數，且將欲得到效應物對目標(ET)比10:1（CD3:目標細胞）之所需數量的PBMC添加至經接種於於90 µl完全培養基中之目標細胞。
將測試抗體製備為於完全培養基中之10X原液，並自起始濃度製備3倍連續稀釋達總共3個稀釋點。將連續稀釋的測試抗體以20 µl/孔添加至PBMC-腫瘤共培養，以使抗體之最終濃度變成1X。使用無抗體(NBS)之孔作為基準細胞毒性對照。將盤在5% CO2培養箱中培養達所示時間期間。在培養期結束時，將細胞懸浮液轉移至v底盤，並以1500 rpm離心5 min。將團塊重懸於100 µl之DPBS中。採集10 µl之細胞懸浮液，使用台盼藍與血球計判定各抗體濃度下之總細胞數。
使剩餘的細胞懸浮液經受LIVE/DEAD™可固定近IR死亡細胞染色套組(L10119)並培養20 min。使用FACS緩衝劑將存活性染色去活化並以1500 rpm離心5 min。將細胞用BD Fc阻斷劑(564220, BD Pharmingen)染色10 min，隨後用CD3、CD8、CD25、CD69、及CD71抗體染色並在流動式細胞測量儀上獲得。如圖 32A 至圖32C 所示，見到雙特異性DLL3 x CD3抗體對細胞毒性CD8 T細胞之強效活化，如CD8 T細胞表面上CD25、CD69、及CD71表現之上調所示。雙特異性DLL3 x CD3 抗體介導全PBMC 檢定中之細胞介素誘導
T細胞重導向雙特異性抗體可造成毒性，因為誘導細胞介素釋放症候群。這些細胞介素可由T細胞本身或骨髓樣細胞生產，且導致更多細胞介素生產之回饋環路。為了瞭解藉由添加DLL3 x CD3雙特異性分子所釋放之細胞介素諸如IL-6、TNF-a、IL-10、GMCSF、及其他T細胞細胞介素，測試細胞毒性檢定之培養上清液中這些細胞介素之水準。DLL3+ SHP-77細胞係用於檢定。收集SHP-77細胞至50 ml falcon管，並以1300 rpm離心5 min。接著將細胞團塊重懸於1 ml經修飾之RPMI 1640培養基+ 10% FBS（完全培養基）且細胞計數使用血球計使用台盼藍活死亡標記估計。接著將SHP-77細胞以10,000個細胞/孔/90 µl之完全培養基接種於U底96孔盤。
將來自健康供體(Clinigene)之冷凍PBMC小瓶在37℃水浴中快速解凍，轉移至15 mL錐形管，並用10 mL完全培養基洗滌一次。將細胞用抗人類CD3抗體染色並藉由流動式細胞測量儀分析以判定PBMC內之CD3%。來自各供體之PBMC使用血球計使用台盼藍活死亡標記計數，且將欲得到效應物對目標(ET)比10:1（CD3:目標細胞）之所需數量的PBMC添加至經接種於於90 µl完全培養基中之目標細胞。
將測試抗體製備為於完全培養基中之10X原液，並以20 µl/孔添加至PBMC-腫瘤共培養，以使抗體之最終濃度變成1X。使用無抗體(NBS)之孔作為基準細胞毒性對照。將盤在5% CO2培養箱中培養達所示時間期間。在培養期結束時，將細胞懸浮液轉移至v底盤並以1500 rpm離心5 min。收集上清液並儲存在-20℃下以使用MILLIPLEX MAP人類CD8+ T細胞磁珠組(HCD8MAG-15K, Millipore)執行Luminex。使用具有eXPONENT軟體之MAGPIX分析盤。結果彙總於表 84 。表84 ：在全PBMC 細胞毒性檢定中雙特異性DLL3 x CD3 抗體介導之細胞介素釋放： 在30 nM濃度之CD3XDLL3抗體DL3B582及DL3B583及在90 nM之DL3B585存在下，將來自3個供體之全PBMC與DLL3+ SHP-77細胞以10:1 ET比(CD3: SHP-77)培養。在所示時間點收集上清液，並使用Luminex分析細胞介素釋放。該圖表上的各點係3個供體的平均。
細胞介素(ng/ml) 雙特異性DLL3 x CD3 抗體
DL3B582 DL3B583 DL3B585
TNFα 2.7 2.0 1.1
GMCSF 0.8 1.0 0.5
IL-10 13.5 20.7 1.9
IL-13 0.5 0.4 0.5
Gzm B 9.7 9.6 1.0
IL-2 1.0 0.8 0.0
IL-4 0.2 0.2 0.0
IL-5 0.1 0.1 0.1
IL-6 4.2 4.8 0.9
觀察到具有較低親和力CD3 (DL3B585)之雙特異性DLL3 x CD3抗體相較於具有較高親和力CD3臂者（DL3B582及DL3B583）的細胞介素釋放水準低，特別是IL-10、IL-6、IL-2、及IL-4，然而這些雙特異性DLL3 x CD3的細胞毒性效力係可相比的。實例20. 具有最佳化抗DLL3 抗體序列之雙特異性抗DLL3 x CD3 抗體之表徵 雙特異性抗DLL3 變體x CD3 抗體對DLL3 之結合親和力
為了確保如實例1所述之DL3B279變體之HCDR1區（或靠近HCDR1區，取決於所使用的描繪）中之N至Q突變不導致與DLL3結合之變化，使用Biacore T200儀器，藉由表面電漿共振(SPR)判定DL3B279變體與重組人類DLL3之結合親和性並與親本DL3B279比較。抗體被捕捉在經山羊抗Fc抗體修飾之C1晶片上，且用濃度橫跨90 nM至1.1 nM之人類及食蟹獼猴DLL3抗原之3倍連續稀釋液滴定。使用50 µL/min之流速，監測締合3分鐘及解離60分鐘。原始結合數據係藉由減去來自空白之分析物結合信號參照，且使用1:1 Langmuir結合模型使用Biacore Insight評估軟體分析，以獲得用於計算結合親和力之動力學。結果（表85）顯示含有DL3B279變體(DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFV)之DLL3 x CD3雙特異性分子(C3C3B80)的結合親和力與含有原始DL3B279-LH-scFV分子(DL3B585: 24 pM)之原始DLL3xCD3雙特異性分子(DL3B585)係可相比的。表85 ：藉由Biacore (SPR) 方法獲得之雙特異性抗DLL3 x CD3 抗體與人類DLL3 之交互作用的親和力(KD) 。使用抗人類Fc 抗體捕捉抗DLL3 抗體，並將抗原注入溶液中。
名稱 說明 kD (pM)
DL3B585 HC1: CD3B376-Fab；HC2: DL3B279-LH-scFv 24
D3C3B80 HC1 : CD3B376-Fab x HC2 : DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFV 33
雙特異性抗DLL3 變體x CD3 抗體之DSF 構形穩定性
使用自動化Prometheus儀器，藉由NanoDSF方法判定含有DL3B279變體之新穎DL3B279序列的雙特異性抗DLL3 CD3抗體(D3C3B80)之熱穩定性（構形穩定性）。將樣本自384孔樣本盤裝載至24孔毛細管中，以進行測量。執行二重複運行。熱掃描以1.0℃/分鐘的速率自20℃跨至95℃。數據經處理以獲得整合數據及330 nm、350 nm、比率330/350、及散射數據的第一衍生分析，自此獲得熱轉變、去折疊開始、Tm 1、及Tagg 。結果（表86）顯示具有DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFV變體之雙特異性DLL3 x CD3抗體(D3C3B80)的熱穩定性與具有原始DL3B279-LH-scFv序列之原始雙特異性分子（DL3B585：Tagg = 62.7，Tm 1 = 60.8，顯示於表86）係可相比的。表86 ：使用nanoDSF 儀器獲得之抗DLL3 抗體之熱穩定性數據。
名稱 說明 Tagg Tm1
DL3B585 HC1: CD3B376-Fab；HC2: DL3B279-LH-scFv 62.7℃ 60.8℃
D3C3B80 HC1: CD3B376-Fab x HC2: DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFV 62.4℃ 60.9℃
雙特異性抗DLL3 變體x CD3 抗體在T 細胞上之結合
將人類泛T細胞(Biological Specialty Corporation, Colmar, PA)解凍並轉移至含有DPBS之15 mL錐形管。將細胞離心1300 rpm達5分鐘。將DPBS吸出，並將細胞重懸於DPBS中。細胞使用Vi-細胞XR細胞存活性分析儀計數並以100K/孔接種於100uL DPBS。將盤離心1200 rpm達3分鐘，並用DPBS洗滌2x。細胞用紫色活/死染料(Thermo-Fisher)染色，並在RT下於黑暗中培養25min。將細胞離心並用FACS染色緩衝劑(BD Pharmingen)洗滌2x。將測試抗體以FACS染色緩衝劑稀釋至最終起始濃度100nM，並自起始濃度製備3倍連續稀釋達總共10個稀釋點。將連續稀釋的測試抗體（100uL/孔）添加至細胞，並在37o 下培養30min。將細胞用FACS染色緩衝劑洗滌2x，並添加接合AlexaFluor 647之驢抗人類二級抗體(Jackson Immunoresearch)且允許與細胞在4o 下培養30 min。將細胞用FACS染色緩衝劑洗滌2x，並重懸於100uL FACS緩衝劑。細胞在BD Celesta上使用FACS Diva軟體運行，並使用FlowJo軟體分析。如圖 33A 所示，具有DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFV變體之雙特異性DLL3 x CD3抗體(D3C3B80)與具有原始DL3B279-LH-scFv序列之原始雙特異性分子(DL3B585)具有在T細胞上可相比的結合。藉由IncuCyte 之雙特異性抗DLL3 變體x CD3 介導對抗泛T 細胞中之DLL3+ 目標細胞系之細胞毒性
產生穩定表現紅色核染料之DLL3+ SHP77以用於基於IncuCyte之細胞毒性檢定。將健康供體T細胞(Biological Specialty Corporation, Colmar, PA)之冷凍小瓶於37℃水浴中解凍，轉移至15 mL錐形管，並用5 mL無酚紅RPMI/ 10% HI FBS培養基洗滌一次。使用Viacell XR細胞存活性分析儀計數細胞，並將T細胞與目標細胞合併達5:1之最終效應物T細胞對目標細胞(E: T)比。將細胞混合物合併於50 mL錐形管。將細胞混合物（100uL/孔）添加至透明96孔平底盤。接下來，將測試抗體以無酚紅RPMI/ 10% HI FBS培養基稀釋至最終起始濃度60nM，並自起始濃度製備3倍連續稀釋達總共11個稀釋點。將連續稀釋的測試抗體（100uL/孔）添加至合併細胞。將盤放入IncuCyte® Zoom或IncuCyte S3® (Essen)在37℃、5% CO2下達120小時。目標細胞系穩定表現紅色核染料，其係用於追蹤目標細胞裂解之動力學。細胞生長抑制百分比等於初始活目標細胞數目與目前活目標細胞數目之間的差異除以初始活細胞數目。如圖 33B 所示，具有DL3B279-VL-A99G-VH-N27Q_M105T-LH-scFV變體之雙特異性DLL3 x CD3抗體(D3C3B80)與具有原始DL3B279-LH-scFv序列之原始雙特異性分子(DL3B585)具有可相比的細胞生長抑制。
本發明實例顯示本文所揭示之單離多特異性蛋白質尤其有效於介導T細胞介導之細胞毒性、促進T細胞活化及增生、增加T細胞細胞介素釋放、及/或展示增加之抗腫瘤效力。這些活性反映靶向目標細胞上之DLL3及T細胞上之CD3之抗原結合域的組合。所屬技術領域中具有通常知識者會瞭解到，此類活性將自組裝結合域成雙特異性抗體而預期，不論雙特異性抗體所憑藉之組裝機制為何。
無
當結合附圖閱讀時可進一步理解發明內容以及下文之實施方式。為了說明所揭露之抗體及方法，在圖式中顯示出該等抗體及方法的例示性實施例；然而，抗體及方法並不限於所揭露之具體實施例。在圖式中：〔 圖1A 〕 及 〔 圖1B 〕 顯示融合瘤上清液與初代人類T細胞之結合。使用殖株UCHT1作為陽性對照組（圖 1B）；使用小鼠IgG1同型(mIgG1)作為陰性對照組。〔 圖2 〕 顯示抗CD3 scFv變體（表現於大腸桿菌）與CD3之結合。〔 圖3 〕 顯示CD3B815 (SEQ ID NO: 119)、CD3W244 (SEQ ID NO: 27)、CD3W245 (SEQ ID NO: 28)、CD3W246 (SEQ ID NO: 24)、CD3W247 (SEQ ID NO: 29)、及CD3W248 (SEQ ID NO: 30)之VL區的比對。〔 圖4 〕 顯示使用氫氘交換質譜法(HDX-MS)測量CD3W245結合至人類CD3ε之複合物(CD3ε:CD3W245)、或OKT3結合至人類CD3ε之複合物(CD3ε:OKT3)所判定之氫氘交換率（所顯示之SEQ ID No: 99係SEQ ID No: 5之片段）。單底線指示在抗體存在下氘化水準相較於單獨CD3ε降低10%至30%之區段，且雙底線指示氘化水準降低＞30%之區段。〔 圖5 〕 顯示mu11B6、hu11B6、KL2B357、KL2B358、KL2B359、KL2B360、HCF3、及HCG5之VH域的序列比對。圖5以出現順序分別揭示SEQ ID NO 126、124、132、134、136、132、128、及130。〔 圖6 〕 顯示mu11B6、hu11B6、KL2B357、KL2B358、KL2B359、KL2B360、LDC6、及LCB7之VL域的序列比對。圖6以出現順序分別揭示SEQ ID NO 127、125、133、135、135、135、129、及131。〔 圖7 〕 顯示所選hK2抗體之結合表位（定位至hK2抗原之序列上）。圖7以出現順序分別揭示SEQ ID NO: 745、741、741、741、741、及741。〔 圖8A 〕 顯示藉由incuCyte成像系統即時測量之KL2B×CD3雙特異性分子的體外目標細胞毒性，其係用於定量目標細胞死亡。〔 圖8B 〕 顯示藉由螢光凋亡蛋白酶3/7試劑測量之KL2B×CD3雙特異性分子的體外目標細胞毒性，以測量來自目標細胞死亡之細胞凋亡信號。〔 圖9A 〕 藉由顯示在不同劑量下之CD25陽性細胞的頻率，顯示藉由KLK2×CD3雙特異性抗體之體外T細胞活化及增生。〔 圖9B 〕 藉由顯示進入增生閘之細胞頻率，顯示藉由KLK2×CD3雙特異性抗體之體外T細胞活化及增生。〔 圖10A 〕 顯示藉由KLK2×CD3雙特異性抗體之體外T細胞INF-γ釋放。〔 圖10B 〕 顯示藉由KLK2×CD3雙特異性抗體之體外T細胞TNF-α釋放。〔 圖11 〕 （圖 11A 至圖11F ）顯示所選抗hK2抗體及所選抗hK2/CD3雙特異性抗體之結合互補位(paratope)。加底線的序列指示CDR區，而強調顯示的序列指示互補位區。圖11A依出現順序分別揭示SEQ ID NO 219至220。圖11B依出現順序分別揭示SEQ ID NO 213及224。圖11C依出現順序分別揭示SEQ ID NO 208及215。圖11D依出現順序分別揭示SEQ ID NO 742及743。圖11E依出現順序分別揭示SEQ ID NO 327及221。圖11F依出現順序分別揭示SEQ ID NO 329及222。〔 圖12 〕 顯示格式化為scFv之v區在熱處理之後結合重組HLA-G的能力。〔 圖13 〕 顯示使用基於氫氘交換的LC-MS之所選抗體在HLA-G (SEQ ID NO: 691)上的表位定位。所顯示的序列係SEQ ID NO: 691之片段，其中胺基酸殘基編號始於成熟HLA-G的第一個殘基（顯示殘基183至274）。圖13依出現順序分別揭示SEQ ID NO 746、746、744、及744。〔 圖14A 〕 至 〔 圖14B 〕 顯示藉由衍生自MHGB665之可變區所工程改造之IgG1 (MHGB665)或IgG4 (MHGB523)增強NK細胞介導之K562-HLA-G細胞的細胞毒性。圖 14A 顯示NKL細胞介導之細胞毒性；圖 14B 顯示NK-92細胞介導之細胞毒性。〔 圖15A 〕 至 〔 圖15B 〕 顯示藉由衍生自MHGB669之可變區所工程改造之IgG1 (MHGB669)或IgG4 (MHGB526)增強NK細胞介導之K562-HLA-G細胞的細胞毒性。圖 15A 顯示NKL細胞介導之細胞毒性；圖 15B 顯示NK-92細胞介導之細胞毒性。〔 圖16A 〕 至 〔 圖16B 〕 顯示藉由衍生自MHGB688之可變區所工程改造之IgG1 (MHGB688)或IgG4 (MHGB596)增強NK細胞介導之K562-HLA-G細胞的細胞毒性。圖 16A 顯示NKL細胞介導之細胞毒性；圖 16B 顯示NK-92細胞介導之細胞毒性。〔 圖17A 〕 至 〔 圖17B 〕 顯示藉由衍生自MHGB694之可變區所工程改造之IgG1 (MHGB694)或IgG4 (MHGB616)增強NK細胞介導之K562-HLA-G細胞的細胞毒性。圖 17A 顯示NKL細胞介導之細胞毒性；圖 17B 顯示NK-92細胞介導之細胞毒性。〔 圖18A 〕 至 〔 圖18B 〕 顯示藉由衍生自MHGB687之可變區所工程改造之IgG1 (MHGB687)或IgG4 (MHGB585)增強NK細胞介導之K562-HLA-G細胞的細胞毒性。圖 18A 顯示NKL細胞介導之細胞毒性；圖 18B 顯示NK-92細胞介導之細胞毒性。〔 圖19A 〕 至 〔 圖19B 〕 顯示藉由衍生自MHGB672之可變區所工程改造之IgG1 (MHGB672)或IgG4 (MHGB508)增強NK細胞介導之K562-HLA-G細胞的細胞毒性。圖 19A 顯示NKL細胞介導之細胞毒性；圖 19B 顯示NK-92細胞介導之細胞毒性。〔 圖20 〕 顯示由所選抗體MHGB665（「B665」）、MHGB669（「B669」）、MHGB672（「B672」）、MHGB682（「B682」）、MHGB687（「B687」）、及MHGB688（「B688」）所介導之對抗JEG-3細胞的ADCC活性。〔 圖21A 〕 至 〔 圖21B 〕 顯示所選抗體之ADCC活性。〔 圖21C 〕 至 〔 圖21D 〕 顯示所選抗體之CDC活性。〔 圖22A 〕 至 〔 圖22B 〕 顯示HC3B125對抗表現HLA-G之腫瘤細胞HUP-T3之細胞毒性及T細胞活化%。〔 圖22C 〕 至 〔 圖22D 〕 顯示HC3B125對抗表現HLA-G之腫瘤細胞RERF-LC-Ad-1之細胞毒性及T細胞活化%。〔 圖23 〕 顯示HC3B258及HC3B125對抗RERF-LC-Ad-1細胞之細胞毒性；效應物（T細胞）:目標(RERF-LC-Ad1)比係如所示之1:3、1:1、或3:1。〔 圖24A 〕 至 〔 圖24B 〕 顯示已建立之胰PDX於經對照（HLA-G ×空）或HCB125治療之CD34+ 細胞人源化NSG-SGM3小鼠第27天的組平均腫瘤體積(17A)及個別腫瘤體積。〔 圖25 〕 顯示已建立之Hup-T3異種移植物於經對照（CD3 ×空）或HCB125治療之T細胞人源化NSG小鼠的組平均腫瘤體積。 〔圖 26A〕及〔圖 26B〕顯示雙特異性抗DLL3 × CD3抗體對DLL3+ 腫瘤細胞系的細胞結合。圖 26A顯示雙特異性抗DLL3 × CD3抗體對DLL3+ 腫瘤細胞系SHP77細胞的細胞結合。圖 26B顯示雙特異性抗DLL3 × CD3抗體對DLL3+ 腫瘤細胞系HCC1833細胞的細胞結合。 〔圖 27〕顯示使用FACS之雙特異性抗DLL3 × CD3抗體在人類泛T細胞上之結合。 〔圖 28A〕及〔圖 28B〕顯示藉由incuCyte成像系統即時測量之雙特異性抗DLL3 × CD3抗體的體外目標細胞毒性，其係用於定量目標細胞死亡。圖 28A顯示藉由incuCyte成像系統即時測量之抗DLL3 × CD3雙特異性分子的體外目標細胞毒性，其係用於定量目標細胞死亡。將單離泛T細胞與DLL3+ SHP77細胞在雙特異性抗DLL3 × CD3抗體存在下共培養120小時。圖 28B顯示藉由incuCyte成像系統即時測量之抗DLL3 × CD3雙特異性分子的體外目標細胞毒性，其係用於定量目標細胞死亡。將單離泛T細胞與DLL3- HEK293細胞在雙特異性抗DLL3 × CD3抗體存在下共培養120小時。 〔圖 29〕顯示藉由雙特異性抗DLL3 × CD3抗體之體外T細胞IFN-γ釋放。IFN-γ濃度係自所示時間點收集之上清液測量。 〔圖 30A〕至〔圖 30C〕顯示由雙特異性抗DLL3 × CD3抗體所介導之對抗PBMC中之DLL3+ 目標細胞系之細胞毒性。圖 30A顯示以10:1的E:T比，由雙特異性抗DLL3 × CD3抗體所介導之對抗PBMC中之DLL3+ 目標細胞系之細胞毒性。圖 30B顯示以5:1的E:T比，由雙特異性抗DLL3 × CD3抗體所介導之對抗PBMC中之DLL3+ 目標細胞系之細胞毒性。圖 30C顯示以1:1的E:T比，由雙特異性抗DLL3 × CD3抗體所介導之對抗PBMC中之DLL3+ 目標細胞系之細胞毒性。 〔圖 31〕顯示在全PBMC細胞毒性檢定中CD3+ T細胞回應於雙特異性抗DLL3 × CD3抗體之增生。 〔圖 32A〕至〔圖 32C〕顯示T細胞回應於雙特異性抗DLL3 × CD3抗體之活化。圖 32A顯示T細胞回應於雙特異性抗DLL3 × CD3抗體之活化（CD25+ 細胞%）。圖 32B顯示T細胞回應於雙特異性抗DLL3 × CD3抗體之活化（CD69+ 細胞%）。圖 32C顯示T細胞回應於雙特異性抗DLL3 × CD3抗體之活化（CD71+ 細胞%）。 〔圖 33A〕至〔圖 33B〕顯示最佳化雙特異性抗DLL3 × CD3抗體之表徵。圖 33A顯示具有及不具有最佳化抗DLL3序列之抗DLL3 × CD3雙特異性抗體在基於IncuCyte之細胞毒性檢定中評估的腫瘤裂解。圖 33B顯示將單離泛T細胞與DLL3+ SHP77細胞在雙特異性DLL3/T細胞重導向抗體存在下共培養120小時。
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Claims (68)

  1. 一種經單離蛋白質，其包含結合至分化簇3ε (CD3ε)之抗原結合域，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含： a.  SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)的重鏈互補決定區(HCDR) 1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 24之輕鏈可變區(VL)的輕鏈互補決定區(LCDR) 1、LCDR2、及LCDR3； b.     SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 27之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3； c.     SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 28之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3； d.     SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 29之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3；或 e.     SEQ ID NO: 23之VH的HCDR1、HCDR2、及HCDR3及SEQ ID NO: 30之VL的LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
  2. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含下列之HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3： a.     分別為SEQ ID NO: 6、7、8、9、10、及11； b.     分別為SEQ ID NO: 12、13、14、15、16、及17；或 c.     分別為SEQ ID NO: 18、19、20、21、16、及22。
  3. 如請求項1或2所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係scFv、(scFv)2、Fv、Fab、F(ab’)2、Fd、dAb、或VHH。
  4. 如請求項3所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係該Fab。
  5. 如請求項3所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係該scFv。
  6. 如請求項5所述之經單離蛋白質，其中該scFv自N至C端包含VH、第一連接子(L1)、及VL (VH-L1-VL)或該VL、該L1、及該VH (VL-L1-VH)。
  7. 如請求項6所述之經單離蛋白質，其中該L1包含 a.     約5至50個胺基酸； b.     約5至40個胺基酸； c.     約10至30個胺基酸；或 d.     約10至20個胺基酸。
  8. 如請求項6所述之經單離蛋白質，其中該L1包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。
  9. 如請求項8所述之經單離蛋白質，其中該L1包含SEQ ID NO: 31、37、或64之胺基酸序列。
  10. 如請求項1至9中任一項所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
  11. 如請求項10所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含： a.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； b.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； c.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； d.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 e.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
  12. 如請求項1至11中任一項所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含SEQ ID NO: 65、66、67、68、69、70、71、72、73、或74之胺基酸序列。
  13. 一種經單離蛋白質，其包含結合CD3ε之抗原結合域，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之重鏈可變區(VH)及SEQ ID NO: 103之輕鏈可變區(VL)。
  14. 如請求項13所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係scFv、(scFv)2、Fv、Fab、F(ab’)2、Fd、dAb、或VHH。
  15. 如請求項14所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係該Fab。
  16. 如請求項14所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係該scFv。
  17. 如請求項16所述之經單離蛋白質，其中該scFv自N至C端包含VH、第一連接子(L1)、及VL (VH-L1-VL)或該VL、該L1、及該VH (VL-L1-VH)。
  18. 如請求項17所述之經單離蛋白質，其中該L1包含 a.     約5至50個胺基酸； b.     約5至40個胺基酸； c.     約10至30個胺基酸；或 d.     約10至20個胺基酸。
  19. 如請求項18所述之經單離蛋白質，其中該L1包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。
  20. 如請求項19所述之經單離蛋白質，其中該L1包含SEQ ID NO: 31、37、或64之胺基酸序列。
  21. 如請求項13至20所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24、27、28、29、或30之VL。
  22. 如請求項21所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域包含： a.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 24之VL； b.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 27之VL； c.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 28之VL； d.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 29之VL；或 e.     SEQ ID NO: 23之VH及SEQ ID NO: 30之VL。
  23. 如請求項1至22中任一項所述之經單離蛋白質，其中該經單離蛋白質係多特異性蛋白質。
  24. 如請求項23所述之經單離蛋白質，其中該多特異性蛋白質係雙特異性蛋白質。
  25. 如請求項23所述之經單離蛋白質，其中該多特異性蛋白質係三特異性蛋白質。
  26. 如請求項1至25中任一項所述之經單離蛋白質，其進一步包含免疫球蛋白(Ig)恆定區或該Ig恆定區之片段。
  27. 如請求項26所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含Fc區。
  28. 如請求項26所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含CH2域。
  29. 如請求項26所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含CH3域。
  30. 如請求項26所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含CH2域及CH3域。
  31. 如請求項26所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含鉸鏈之至少一部分、CH2域、及CH3域。
  32. 如請求項26所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區之該片段包含鉸鏈、CH2域、及CH3域。
  33. 如請求項26至32中任一項所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係接合至該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段的N端。
  34. 如請求項26至32中任一項所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係接合至該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段的C端。
  35. 如請求項26至32中任一項所述之經單離蛋白質，其中結合CD3ε之該抗原結合域係經由第二連接子(L2)接合至該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段。
  36. 如請求項35所述之經單離蛋白質，其中該L2包含SEQ ID NO: 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、或64之胺基酸序列。
  37. 如請求項23至36中任一項之經單離蛋白質，其中該多特異性蛋白質包含結合CD3ε以外的抗原之抗原結合域。
  38. 如請求項37所述之多特異性抗體，其中該細胞抗原係腫瘤相關抗原。
  39. 如請求項26至38中任一項所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段係IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4同型。
  40. 如請求項26至39中任一項所述之經單離蛋白質，其中該Ig恆定區或該Ig恆定區之該片段包含導致該蛋白質與Fcγ受體(FcγR)之結合減少的至少一個突變。
  41. 如請求項40所述之經單離蛋白質，其中導致該蛋白質與該FcγR之結合減少的該至少一個突變係選自由下列所組成之群組：F234A/L235A、L234A/L235A、L234A/L235A/D265S、V234A/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S、F234A/L235A、S228P/F234A/ L235A、N297A、V234A/G237A、K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-缺失/A327G/P331A/D365E/L358M、H268Q/V309L/A330S/P331S、S267E/L328F、L234F/L235E/D265A、L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S、S228P/F234A/L235A/G237A/P238S、及S228P/F234A/L235A/G236-缺失/G237A/P238S，其中殘基編號係根據EU索引。
  42. 如請求項40至41中任一項所述之經單離蛋白質，其中該FcγR係FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIB、或FcγRIII、或其任何組合。
  43. 如請求項26至42中任一項所述之經單離蛋白質，其中該蛋白質在該Ig恆定區之CH3域中包含至少一個突變。
  44. 如請求項38所述之經單離蛋白質，其中在該Ig恆定區之該CH3域中的該至少一個突變係選自由下列所組成之群組：T350V、L351Y、F405A、Y407V、T366Y、T366W、T366L、F405W、T394W、K392L、T394S、Y407T、Y407A、T366S/L368A/Y407V、L351Y/F405A/Y407V、T366I/K392M/T394W、F405A/Y407V、T366L/K392M/T394W、T366L/K392L/T394W、L351Y/Y407A、L351Y/Y407V、T366A/K409F、T366V/K409F、T366A/K409F、T350V/L351Y/F405A/Y407V、及T350V/T366L/K392L/T394W，其中殘基編號係根據EU索引。
  45. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至44中任一項所述之經單離蛋白質及醫藥上可接受之載劑。
  46. 一種多核苷酸，其編碼如請求項1至44中任一項所述之經單離蛋白質。
  47. 一種載體，其包含如請求項46所述之多核苷酸。
  48. 一種宿主細胞，其包含如請求項47所述之載體。
  49. 一種生產如請求項1至44中任一項所述之經單離蛋白質的方法，其包含在使該蛋白質表現之條件下培養如請求項48所述之宿主細胞、及回收由該宿主細胞所生產之該蛋白質。
  50. 一種治療對象之癌症的方法，其包含向有需要之該對象投予治療有效量的如請求項1至44中任一項所述之經單離之抗體以治療該癌症。
  51. 一種抗獨特型抗體(anti-idiotypic antibody)，其結合至如請求項1至50中任一項所述之經單離蛋白質。
  52. 一種經單離蛋白質，其包含結合至CD3ε (SEQ ID NO: 1)上之表位的抗原結合域，其中該表位係包含SEQ ID NO: 100、101、及102之胺基酸序列的不連續性表位。
  53. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含選自由SEQ ID NO: 747、748、77、78、749、750、751、752、753、及754所組成之群組的胺基酸序列。
  54. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 747之胺基酸序列。
  55. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 748之胺基酸序列。
  56. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列。
  57. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 78之胺基酸序列。
  58. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 749之胺基酸序列。
  59. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 750之胺基酸序列。
  60. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 751之胺基酸序列。
  61. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 752之胺基酸序列。
  62. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 753之胺基酸序列。
  63. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 754之胺基酸序列。
  64. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及86之胺基酸序列。
  65. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及88之胺基酸序列。
  66. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及90之胺基酸序列。
  67. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及92之胺基酸序列。
  68. 如請求項1所述之經單離蛋白質，其包含SEQ ID NO: 85及94之胺基酸序列。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024089551A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Janssen Biotech, Inc. Msln and cd3 binding agents and methods of use thereof

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
DK0590058T3 (da) 1991-06-14 2004-03-29 Genentech Inc Humaniseret heregulin-antistof
US5932448A (en) 1991-11-29 1999-08-03 Protein Design Labs., Inc. Bispecific antibody heterodimers
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6818749B1 (en) 1998-10-31 2004-11-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Variants of humanized anti carcinoma monoclonal antibody cc49
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
AU3942202A (en) 2000-11-30 2002-06-11 Medarex Inc Transgenic transchromosomal rodents for making human antibodies
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
GB0115256D0 (en) 2001-06-21 2001-08-15 Babraham Inst Mouse light chain locus
MXPA05000511A (es) 2001-07-12 2005-09-30 Jefferson Foote Anticuepros super humanizados.
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
JP5620626B2 (ja) 2005-03-31 2014-11-05 中外製薬株式会社 会合制御によるポリペプチド製造方法
DE102005028778A1 (de) 2005-06-22 2006-12-28 SUNJÜT Deutschland GmbH Mehrlagige Folie mit einer Barriere- und einer antistatischen Lage
AR060070A1 (es) 2006-03-24 2008-05-21 Merck Patent Gmbh Dominios proteicos heterodimericos obtenidos por ingenieria
WO2007147901A1 (en) 2006-06-22 2007-12-27 Novo Nordisk A/S Production of bispecific antibodies
RU2451682C2 (ru) 2006-12-18 2012-05-27 Ариджен Фармасьютикалз, Инк. ПРЕПАРАТ ПРОТИВ Helicobacter pylori, ИНГИБИРУЮЩИЙ СЕКРЕЦИЮ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА
US8748356B2 (en) 2007-10-19 2014-06-10 Janssen Biotech, Inc. Methods for use in human-adapting monoclonal antibodies
AU2008343589A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Design and generation of human de novo pIX phage display libraries via fusion to pIX or pVII, vectors, antibodies and methods
SG190572A1 (en) 2008-04-29 2013-06-28 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2010045340A1 (en) 2008-10-14 2010-04-22 Centocor Ortho Biotech Inc. Methods of humanizing and affinity-maturing antibodies
ES2708124T3 (es) 2009-04-27 2019-04-08 Oncomed Pharm Inc Procedimiento para preparar moléculas heteromultiméricas
KR20210010942A (ko) 2010-03-31 2021-01-28 아블렉시스, 엘엘씨 키메라 항체의 제조를 위한 비-인간 동물의 유전적 조작
WO2011131746A2 (en) 2010-04-20 2011-10-27 Genmab A/S Heterodimeric antibody fc-containing proteins and methods for production thereof
US9527926B2 (en) 2010-05-14 2016-12-27 Rinat Neuroscience Corp. Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
EP2420253A1 (en) 2010-08-20 2012-02-22 Leadartis, S.L. Engineering multifunctional and multivalent molecules with collagen XV trimerization domain
EP2635607B1 (en) 2010-11-05 2019-09-04 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
SI2771364T1 (sl) 2011-10-27 2019-10-30 Genmab As Produkcija heterodimernih proteinov
CA2853669C (en) 2011-10-28 2019-03-12 Fredax Ab Therapeutic agents and uses thereof
JP6326371B2 (ja) 2011-11-04 2018-05-16 ザイムワークス，インコーポレイテッド Ｆｃドメインにおける変異を有する安定なヘテロ二量体抗体デザイン
CA2859667C (en) 2011-12-20 2022-05-24 Medimmune, Llc Modified polypeptides for bispecific antibody scaffolds
CN114163530A (zh) 2012-04-20 2022-03-11 美勒斯公司 用于产生免疫球蛋白样分子的方法和手段
PT2931030T (pt) 2012-12-14 2020-08-03 Open Monoclonal Tech Inc Polinucleótidos que codificam anticorpos de roedores com idiótipos humanos e animais que os compreendem
AU2014237635B2 (en) 2013-03-15 2020-03-12 Janssen Biologics B.V. Manufacturing methods to control C-terminal lysine, galactose and sialic acid content in recombinant proteins
PL3071595T3 (pl) 2013-11-19 2019-09-30 Fredax Ab Humanizowane przeciwciało przeciw kalikreinie-2
AU2015266077A1 (en) * 2014-05-28 2016-09-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to human and cynomolgus CD3 epsilon
AU2016210068B2 (en) * 2015-01-23 2021-10-28 Sanofi Anti-CD3 antibodies, anti-CD123 antibodies and bispecific antibodies specifically binding to CD3 and/or CD123
EP3331913A1 (en) * 2015-08-07 2018-06-13 Novartis AG Treatment of cancer using chimeric cd3 receptor proteins
PL3519437T3 (pl) 2016-09-30 2022-01-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Przeciwciała dwuswoiste przeciwko p95HER2
EP3668898B1 (en) * 2017-08-14 2023-07-05 MorphoSys AG Humanized antibodies for cd3
TWI820041B (zh) * 2017-09-21 2023-11-01 中國大陸商上海藥明生物技術有限公司 新型抗CD3ε抗體
AU2018338192B2 (en) 2017-09-22 2022-03-03 Kite Pharma, Inc. Chimeric polypeptides and uses thereof
SG11202006042SA (en) * 2017-12-27 2020-07-29 Teneobio Inc Cd3-delta/epsilon heterodimer specific antibodies
WO2019175658A1 (en) * 2018-03-14 2019-09-19 Novimmune Sa Anti-cd3 epsilon antibodies and methods of use thereof
EA202092847A1 (ru) 2018-05-24 2021-04-20 Янссен Байотек, Инк. Антитела к cd3 и их применение
UY38803A (es) * 2019-07-26 2021-01-29 Janssen Biotech Inc Proteínas que comprenden dominios de unión al antígeno de la peptidasa 2 relacionada con la calicreína y usos de las mismas

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