PL212899B1 - Humanizowane przeciwcialo, kompozycja zawierajaca to przeciwcialo, wyrób fabryczny, przeciwcialo lub jego fragment do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy, izolowany kwas nukleinowy, wektor ekspresji, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciala lub jego fragmentu, plynny preparat i zastosowanie przeciwciala do wytwarzania leku - Google Patents

Humanizowane przeciwcialo, kompozycja zawierajaca to przeciwcialo, wyrób fabryczny, przeciwcialo lub jego fragment do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy, izolowany kwas nukleinowy, wektor ekspresji, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciala lub jego fragmentu, plynny preparat i zastosowanie przeciwciala do wytwarzania leku

Info

Publication number
PL212899B1
PL212899B1 PL377328A PL37732803A PL212899B1 PL 212899 B1 PL212899 B1 PL 212899B1 PL 377328 A PL377328 A PL 377328A PL 37732803 A PL37732803 A PL 37732803A PL 212899 B1 PL212899 B1 PL 212899B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
antibody
antigen
binding fragment
use according
disease
Prior art date
Application number
PL377328A
Other languages
English (en)
Other versions
PL377328A1 (pl
Inventor
Camellia W. Adams
Andrew C. Chan
Craig W. Crowley
Henry B. Lowman
Gerald R. Nakamura
Leonard G. Presta
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=32685285&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL212899(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of PL377328A1 publication Critical patent/PL377328A1/pl
Publication of PL212899B1 publication Critical patent/PL212899B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/16—Animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)

Description

Opis wynalazku
Dziedzina wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest humanizowane przeciwciało, kompozycja zawierająca to przeciwciało, wyrób fabryczny, przeciwciało lub jego fragment do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy, izolowany kwas nukleinowy, wektor ekspresji, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała lub jego fragmentu, płynny preparat i zastosowanie przeciwciała do wytwarzania leku. Lek jest do leczenia u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego oraz do leczenia choroby autoimmunologicznej.
Stan techniki
Limfocyty są jedną z kilku populacji białych krwinek; specyficznie rozpoznają i odpowiadają na obcy antygen. Trzema głównymi klasami limfocytów są limfocyty B (komórki B), limfocyty T (komórki T), komórki naturalnych zabójców (NK, ang. natural killers). Limfocyty B są komórkami odpowiedzialnymi za produkcję przeciwciał i dostarczanie odpowiedzi humoralnej. Komórki B dojrzewają w szpiku kostnym i opuszczając szpik wyrażają (ekspresja) przeciwciało wiążące antygen na swojej powierzchni komórkowej. Kiedy dziewicza komórka B napotyka po raz pierwszy antygen, dla którego jej związane z błoną przeciwciało jest specyficzne, ta komórka zaczyna się szybko dzielić a jej potomstwo różnicuje się w komórki B pamięci i komórki efektorowe nazywane komórkami plazmatycznymi. Komórki B pamięci posiadają dłuższy czas życia i kontynuują ekspresję przeciwciała związanego z błoną z tą samą specyficznością jak oryginalne komórki rodzicielskie. Komórki plazmatyczne nie wytwarzają przeciwciała związanego z błoną, ale zamiast tego wytwarzają sekrecyjną postać przeciwciała. Przeciwciała sekrecyjne są głównymi cząsteczkami efektorowymi odporności humoralnej.
Antygen CD20 (zwany także ludzkim antygenem różnicowania ograniczonym do limfocytów B, Bp35) jest hydrofobowym białkiem międzybłonowym z masą cząsteczkową około 35 kD położonym na limfocytach pre-B i dojrzałych limfocytach B (Valentine i wsp. J. Biol. Chem. 264(19):11282-11287 (1989); oraz Einfeld i wsp. EMBO J. 7(3):711-717 (1988)). Antygen ulega także ekspresji w więcej niż 90% chłoniaków nieziarniczych komórek B (NHL, ang. non-Hodgkin's lymphoma) (Anderson i wsp. Blood 63(6):1424-1433 (1984)), ale nie występuje na krwiotwórczych komórkach macierzystych lub innych zdrowych tkankach (Tedder i wsp. J. Immunol. 135(2):973-979 (1985)). Uważa się, że CD20 reguluje wczesny(e) etap(y) w procesie aktywacji w inicjacji cyklu komórkowego i różnicowaniu (Tedder i wsp., powyżej) i być może funkcjonuje jako kanał jonu wapnia (Tedder i wsp. J. Cell. Biochem. 14D: 195 (1990)).
Z powodu ekspresji CD20 w chłoniakach, ten antygen może być użytecznym celem terapeutycznym w leczeniu takich chłoniaków. W Stanach Zjednoczonych jest więcej niż 300000 osób z NHL komórek B i każdego roku diagnozuje się więcej niż 56000 nowych przypadków. Na przykład przeciwciało rituximab (RITUXAN®), które jest getycznie zaprojektowanym chimerycznym myszo/ludzkim przeciwciałem monoklonalnym skierowanym przeciwko ludzkiemu antygenowi CD20 (komercyjnie dostępnie z Genentech, Inc., Południowe San Francisco, Kalifornia, USA) jest stosowane do leczenia pacjentów z nawrotami lub opornymi mało zróżnicowanymi lub pęcherzykowatymi CD-dodatnimi chłoniakami nieziarniczymi komórek B. Rituximab jest przeciwciałem określonym jako C2B8 w Patencie USA Nr 5736137 wydanym 7 kwietnia 1998 (Anderson i wsp.) i Patencie USA Nr 5776456. Badania in vitro mechanizmu działania pokazały, że RITUXAN® wiąże ludzki dopełniacz i rozkłada linię Iimfoidalnych komórek B za pomocą zależnej od dopełniacza cytotoksyczności (CDC) (Reff i wsp. Blood 83(2): 435-445 (1994). Ponadto posiada znaczącą aktywność w oznaczeniach na komórkową cytotoksyczność zależną od przeciwciała (ADCC, ang. antibody-dependent cellular cytotoxicity). Przedkliniczne badania in vivo pokazały, że RITUXAN® usuwa komórki B z krwi obwodowej, węzłów chłonnych i szpiku kostnego małp Cynomolgus przypuszczalnie przez procesy z udziałem komórek i dopełniacza (Reff i wsp. Blood 83(2):435-445 (1994)). Inne przeciwciała anty-CD20 wskazane do leczenia NHL obejmują mysie przeciwciało Zevalin™, które jest połączone z radioizotopem, Itr-90 (IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA), Bexxar™, które jest innym całkowicie mysim przeciwciałem sprzężonym z I-131 (Corixa, WA).
Głównym ograniczeniem w zastosowaniu mysich przeciwciał w leczeniu człowieka jest ludzka odpowiedź przeciwko mysim przeciwciałom (HAMA, ang. human anti-mouse antibody response) (zobacz, np., Miller, R.A. i wsp. Monoclonal antibody therapeutic trials in seven patients with T-celllymphoma Blood, 62:988-995, 1983; oraz Schroff, R.W., i wsp. Human anti-murine immunoglobulin response in patients receiving monoclonal antibodytherapy Cancer Res., 45:879-885, 1985). Nawet himeryczne cząsteczki, w których domeny zmienne (V) przeciwciał otrzymanych z gryzoni są
PL 212 899 B1 poddane fuzji z ludzkimi regionami stałymi (C), są również zdolne do wywoływania znaczącej odpowiedzi immunologicznej (HACA, ludzkie przeciwciało przeciwko chimerze, ang. human anti-chimeric antibody) (Neuberger i wsp. Nature (Lond.), 314:268-270, 1985). Skutecznym podejściem do przezwyciężenia tych ograniczeń w klinicznym zastosowaniu przeciwciał monoklonalnych jest humanizacja mysiego przeciwciała lub przeciwciała z gatunków innych niż Iudzki (Jones i wsp. Nature (Lond), 321:522-525, 1986; Riechman i wsp., Nature (Lond), 332:323-327, 1988).
Zatem, korzystne jest wytworzenie terapeutycznych przeciwciał do antygenu CD20, które stwarzają minimalną lub brak antygenowości po podaniu pacjentom, szczególnie do leczenia przewlekłego. Niniejszy wynalazek zaspokaja tą i inne potrzeby. Niniejszy wynalazek dostarcza humanizowane przeciwciała anty-CD20, które przezwyciężają ograniczenia obecnych kompozycji terapeutycznych, jak również oferują dodatkowe korzyści, które będą oczywiste ze szczegółowego opisu poniżej.
Streszczenie wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest humanizowane przeciwciało, które wiąże ludzki CD20, lub jego fragment wiążący antygen, charakteryzujące się tym, że przeciwciało to zawiera region VH zawierający sekwencję VH przeciwciała hu2H7.v16 jak pokazano na Fig. 1B i region VL zawierający sekwencję przeciwciała hu2H7.v16 jak pokazano na Fig. 1A.
Zgodnie z korzystną postacią wynalazku przeciwciało to zawiera region VH, który jest przyłączony do regionu stałego łańcucha ludzkiej IgG. Bardziej korzystnie tą ludzką IgG jest IgG1 lub IgG3.
W innym korzystnym rozwiązaniu przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha ciężkiego i lekkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7, lub także korzystnie przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 8.
W kolejnym korzystnym rozwiązaniu przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest skuteczny w deplecji in vivo komórek B u naczelnych i że komórki B naczelnych pochodzą od człowieka lub małpy Cynomolgus. W bardziej korzystnych rozwiązaniach humanizowanego przeciwciała jak podano powyżej, przeciwciało to może być sprzężone ze środkiem cytotoksycznym. Takim środkiem cytotoksycznym korzystnie jest izotop radioaktywny lub toksyna.
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja zawierająca przeciwciało lub fragment wiążący antygen według wynalazku jak zdefiniowano powyżej, oraz nośnik.
W kompozycji według wynalazku, korzystnie przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7, a nośnik stanowi farmaceutycznie akceptowalny nośnik.
Przedmiotem wynalazku jest także wyrób fabryczny zawierający pojemnik i kompozycję w nim zawartą, charakteryzujący się tym, że kompozycja ta zawiera przeciwciało lub fragment wiążący antygen jak zdefiniowano powyżej.
Wyrób fabryczny korzystnie zawiera ponadto ulotkę wskazującą, że kompozycja może być zastosowana do leczenia chłoniaka nieziarniczego lub reumatoidalnego zapalenia stawów.
Przedmiotem wynalazku jest również przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jak zdefiniowano powyżej, do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy w komórkach B in vivo, sposobie leczenia pacjentów z nowotworem CD20-dodatnim, lub w sposobie leczenia choroby autoimmunologicznej u pacjenta.
Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania w wyżej wymienionych sposobach, korzystnie charakteryzuje się tym, że nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak lub białaczka. Bardziej korzystnie, nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak nieziarniczy (NHL) lub ziarnica złośliwa z przewagą limfocytów (LPHD). Również korzystnie nowotworem jest przewlekła białaczka limfocytowa lub chłoniak z małych limfocytów.
W innym korzystnym rozwiązaniu przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego w dawce w zakresie około 275-375 mg/m2.
Również korzystnie przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania w le2 czeniu u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego w dawce w zakresie około 250 mg/m2 do około 500 mg/m2.
W następnym korzystnym rozwiązaniu przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu nowotworu CD20-dodatniego z co najmniej jednym czynnikiem chemioterapeutycznym.
PL 212 899 B1
W bardziej korzystnym rozwiązaniu nowotworem jest chłoniak nieziarniczy (NHL) a czynnikiem chemioterapeutycznym jest wybrany z grupy składającej się z doksorubicyny, cyklofosfamidu, winkrystyny oraz prednisolonu.
Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania korzystnie jest do podawania 2 w leczeniu u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego w co najmniej dwóch dawkach przy 375 mg/m2 na dawkę. Bardziej korzystnie dwie dawki podaje się w odstępie dwutygodniowym.
W następnym korzystnym wykonaniu wynalazku przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania charakteryzuje się tym, że choroba autoimmunologiczna jest wybrana z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenie stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenie stawów, tocznia rumieniowatego układowego (SLE), choroby Wegenera, choroby zapalna jelit, choroby Werlhofa (ITP), choroby Moschowitza (TTP), małopłytkowości o podłożu autoimmunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, miastenii rzekomoporaźnej, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych, natomiast chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów, przy czym pacjent może cierpieć z powodu średniego do ciężkiego reumatoidalnego zapalenia stawów i zawiodło leczenie co najmniej jednym lekiem przeciwreumatycznym modyfikującym chorobę.
Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według wynalazku jest do podawania pacjentowi do leczenia choroby autoimmunologicznej z drugim czynnikiem terapeutycznym. W bardziej korzystnym rozwiązaniu drugim czynnikiem terapeutycznym jest czynnik immunosupresyjny. Jeszcze bardziej korzystnie, czynnik immunosupresyjny stanowi metotreksat.
W kolejnym korzystnym rozwiązaniu humanizowane przeciwciało wiążące CD20 lub jego fragment wiążący antygen zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7, i przy czym przeciwciało jest do podawania w leczeniu choroby autoimmunologicznej w dawce wybranej z 2x50 mg, 2x200 mg i 2x500 mg.
Bardziej korzystnie przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez wlew dożylny.
W innym, korzystnym rozwiązaniu przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez podawanie podskórne.
Wynalazek dotyczy także izolowanego kwasu nukleinowego, który koduje przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen zdefiniowane powyżej.
Wynalazek dotyczy także wektora ekspresji kodującego przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jak zdefiniowano powyżej.
Wynalazek dotyczy również komórki gospodarza zawierającej kwas nukleinowy jak zdefiniowano powyżej.
W korzystnym rozwiązaniu komórka gospodarza według wynalazku, która wytwarza przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen, charakteryzuje się tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen wiąże ludzki CD20.
Bardziej korzystnie komórkę gospodarza według wynalazku, stanowi komórka CHO.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wytwarzania przeciwciała lub jego fragmentu wiążącego antygen, gdzie przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen wiąże ludzki CD20, polegający na tym, że hoduje się komórkę gospodarza jak zdefiniowano powyżej i odzyskuje się przeciwciało wytworzone przez komórkę gospodarza.
Przedmiotem wynalazku jest także płynny preparat, charakteryzujący się tym, że zawiera przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen w stężeniu 20 mg/ml, 10 mM siarczan hiscydyny o pH 5,8, 60 mg/ml sacharozy, 0,2 mg/ml polisorbanu 20, przy czym przeciwciało posiada sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7.
Przeciwciało do zastosowania według wynalazku, korzystnie zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego odpowiednio jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7. W korzystnym rozwiązaniu chorobą autoimmunologiczną jest toczeń rumieniowaty układowy (SLE) Iub toczniowe zapalenie nerek, ewentualnie chorobą autoimmunologiczną jest wrzodziejące zapalenie okrężnicy, lub chorobą autoimmunologiczną jest stwardnienie rozsiane, lub ewentualnie chorobą autoimmunologiczną jest odrzucenie przeszczepu narządu litego lub chorobą przeszczep przeciwko gospodarzowi.
Przeciwciało do zastosowania korzystnie jest do podawania przez wlew dożylny, ewentualnie także korzystnie przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez podawanie podskórne.
PL 212 899 B1
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie przeciwciała wiążącego CD20 lub jego fragmentu jak zdefiniowano powyżej do wytwarzania leku do leczenia u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego. W korzystnej postaci realizacji wynalazku CD20-dodatni nowotwór jest chłoniakiem lub białaczką komórki komórki B. Natomiast takim nowotworem CD20-dodatnim korzystnie może być chłoniak nieziarniczy (NHL) lub ziarnica złośliwa z przewagą limfocytów (LPHD). Nowotworem może być także przewlekła białaczka limfatyczna lub chłoniak z małych limfocytów (SLL).
Zgodnie z zastosowaniem według wynalazku przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu nowotworu CD20-dodatniego u pacjenta, w dawce w zakresie około 275-375 mg/m2.
Zgodnie z zastosowaniem według wynalazku przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu nowotworu CD20-dodatniego u pacjenta, w dawce w zakresie około 22
250 mg/m2 do około 500 mg/m2. Bardziej korzystnie, przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania w leczeniu nowotworu CD20-dodatniego u pacjenta, w co najmniej dwóch daw2 kach przy 375 mg/m2 na dawkę. Wspomniane dwie dawki korzystnie podaje się w odstępie dwutygodniowym.
W kolejnym korzystnym rozwiązaniu przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu nowotworu CD20-dodatniego z co najmniej jednym czynnikiem chemioterapeutycznym. Nowotworem korzystnie jest chłoniak nieziarniczy (NHL), a czynnik chemioterapeutyczny jest wybrany z grupy składającej się z doksorubicyny, cyklofosfamidu, winkrystyny oraz prednisolonu i CHOP.
Następnie przedmiotem wynalazku jest zastosowanie przeciwciała wiążącego CD20 lub jego fragmentu jak zdefiniowano powyżej do wytwarzania leku do leczenia u pacjenta choroby autoimmunologicznej.
W wynalazku tym choroba autoimmunologiczna korzystnie jest wybrana z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenie stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenie stawów, tocznia rumieniowatego układowego (SLE), choroby Wegenera, choroby zapalnej jelit, choroby Werlhofa (ITP), choroby Moschowitza (TTP), małopłytkowości o podłożu autoimmunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, miastenii rzekomopraźnej, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych.
Także korzystnie chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów. W tym przypadku pacjent może cierpieć z powodu średniego do ciężkiego reumatoidalnego zapalenia stawów i zawiodło leczenie co najmniej jednym lekiem przeciwreumatycznym modyfikującym chorobę.
W następnej korzystnej postaci wynalazku w zastosowaniu przeciwciała do wytwarzania leku do leczenia u pacjenta choroby autoimmunologicznej przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu tej choroby autoimmunologicznej z drugim czynnikiem terapeutycznym. Tym drugim czynnikiem terapeutycznym jest czynnik immunosupresyjny, w bardziej korzystnym rozwiązaniu, ten czynnik immunosupresyjny stanowi metotreksat.
W kolejnym korzystnym rozwiązaniu zastosowania, gdzie chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów przeciwciało wiążące CD20 lub jego fragment wiążący antygen zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego odpowiednio o sekwencji SEQ ID nr 21 jak pokazano na Fig. 6 i o sekwencji SEQ ID nr 22 jak pokazano na jak pokazano na Fig. 7, i przy czym przeciwciało jest do podawania w leczeniu choroby autoimmunologicznej w dawce wybranej z 2x50 mg, 2x200 mg i 2x500 mg. Przeciwciało Iub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez podawanie podskórne, którym korzystnie jest zastrzyk podskórny.
W korzystnym rozwiązaniu zastosowania według wynalazku w zakresie wytwarzania leku do leczenia pacjenta z chorobą autoimmunologiczną, korzystnie tą chorobą autoimmunologiczną jest stwardnienie rozsiane.
Jak przedstawiono to powyżej, niniejszy wynalazek dostarcza przeciwciała wiążące CD20 lub jego funkcjonalne fragmenty, i ich zastosowanie w leczeniu chorób związanych z komórkami B. Te przeciwciała są przeciwciałami monoklonalnymi. W specyficznych wykonaniach przeciwciała, które wiążą CD20 są humanizowane lub chimeryczne. Humanizowane warianty 2H7 obejmują te, które posiadają podstawienia aminokwasowe w FR oraz warianty powstałe po dojrzewaniu powinowactwa ze zmianami w przeszczepionych regionach CDR. Podstawione aminokwasy w regionach CDR lub FR nie są ograniczone do tych obecnych w przeciwciele będącym dawcą i biorcą. W innych wykonaniach przeciwciała anty-CD20 z wynalazku obejmują ponadto zmiany w resztach aminokwasowych regionu Fe, które prowadzą polepszenia funkcji efektorowej włączając wzmocnioną funkcję CDC i/lub ADCC
PL 212 899 B1 zabijającą komórki B (także określaną tutaj jako deplecja komórek B). Inne przeciwciała anty-CD20 według wynalazku obejmują te posiadające specyficzne zmiany, które polepszają stabilność. W specyficznym wykonaniu humanizowane warianty 2H7 ze zwiększoną stabilnością są takie, jak opisano w przykładzie 6 poniżej. Dostarczone są także warianty z niedoborem fukozy posiadające polepszoną funkcję ADCC in vivo. W jednym z wykonań chimeryczne przeciwciało anty-CD20 posiada mysie regiony V i ludzki region C. Jednym z takich specyficznych chimerycznych przeciwciał anty-CD20 jest Rituxan® (Rituximab®; Genentech, Inc.).
W korzystnym wykonaniu wszystkich kompozycji przeciwciał i sposobów zastosowania tego wynalazku, humanizowanym przeciwciałem wiążącym CD20 jest 2H7.v16 posiadające sekwencje aminokwasowe lekkiego i ciężkiego łańcucha odpowiednio z SEK ID NR 21 i 22, jak pokazano na Fig. 6 i Fig. 7. Przy odnoszeniu się do sekwencji polipeptydowych na Fig. 6, 7 i 8 powinno się rozumieć, że pierwsze 19 lub podobna ilość aminokwasów nie jest obecnych w dojrzałym polipeptydzie. Region V wszystkich innych wariantów opartych na wersji 16 będzie posiadał sekwencję aminokwasową z v16 z wyjątkiem pozycji podstawień aminokwasowych, które są wyszczególnione w ujawnieniu. Jeżeli nie jest wskazane inaczej, warianty 2H7 będą posiadać ten sam region L, jak ten z v16.
Wynalazek dostarcza humanizowane przeciwciało, które wiąże ludzki CD20 lub jego fragment wiążący antygen, takie, że przeciwciało jest skuteczne w deplecji in vivo komórek B z rodziny naczelnych, przeciwciał zawierające w łańcuchu H z regionu zmiennego (VH) przynajmniej sekwencję CDR3 SEK ID NR 12 z przeciwciała anty-ludzki CD20 i zasadniczo ludzkie konsensusowe reszty szkieletu (FR) ludzkiej podgrupy III łańcucha ciężkiego (VHIII). W jednym z wykonań komórki B z rodziny naczelnych pochodzą od człowieka lub małpy Cynomolgus. W jednym z wykonań przeciwciało obejmuje ponadto sekwencję CDR1 łańcucha H z SFK ID NR 10 i sekwencję CDR2 z SEK ID NR 11. W innym wykonaniu, powyższe przeciwciało zawiera sekwencję CDR3 łańcucha L z SEK ID NR 4, sekwencję CDR2 z SEK ID NR 5, sekwencję CDR3 z SEK ID NR 6 zasadniczo z konsensusowymi resztami ludzkiego szkieletu (FR) ludzkiej podgrupy I lekkiego łańcucha κ (VkI). W korzystnym wykonaniu, region FR w VL posiada resztę w pozycji 46 z przeciwciała będącego donorem; w specyficznym wykonaniu FR2 w VL posiada podstawienie aminokwasowe leuL4 6pro (Leu w ludzkiej sekwencji konsensusowej kI zmieniona na pro, która jest obecna w odpowiadającej jej pozycji w m2H7). Region VH zawiera ponadto resztę przeciwciała będącego donorem przynajmniej w pozycjach 49, 71 i 73 w szkielecie. W jednym z wykonań w VH, podstawione są następujące pozycje FR w ciężkim łańcuchu podgrupy III: AlaH49Gly w FR2; ArgH71Val i AsnH73Lys w FR3. W innych wykonaniach regiony CDR w humanizowanym przeciwciele zawierają ponadto podstawienia aminokwasowe, gdzie reszty nie są ani z przeciwciała będącego donorem, ani z przeciwciała będącego odbiorcą.
Przeciwciało z powyższych wykonań może zawierać sekwencję VH z SEK ID NR 8 z v16, jak pokazano na Fig. 1B. W dalszym wykonaniu powyższych przeciwciało ponadto zawiera sekwencję VL z SEK ID NR 2 z v16, jak pokazano na Fig. 1A.
W innych wykonaniach humanizowanym przeciwciałem jest 2H7.v31 posiadające sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha odpowiednio z SEK ID NR 2 i 23, jak pokazano na Fig. 6 i Fig. 8; 2H7.v31 posiadające sekwencję aminokwasową ciężkiego łańcucha z SEK ID NR 23, jak pokazano na Fig. 8; 2H7.v96 z podstawieniami aminokwasowymi D56A i N100A łańcuchu H i S92A w łańcuch L v16.
W osobnych wykonaniach przeciwciało z dowolnych powyższych wykonań zawiera ponadto przynajmniej jedno podstawienie aminokwasowe w regionie Fc, która ulepsza aktywność ADCC i/lub CDC w porównaniu z oryginalnym lub wyjściowym przeciwciałem, z którego się wywodzi, v.16 będące wyjściowym przeciwciałem do którego się porównuje w większości przypadków oraz Rituxan w innych przypadkach. Jedno takie przeciwciało z ulepszoną aktywnością zawiera potrójne podstawienie alaniny S298A/E333A/K334A w regionie Fc. Jednym z przeciwciał posiadających podstawienie S298A/E333A/K334A jest 2H7.v31 posiadające sekwencję aminokwasową łańcucha ciężkiego z SEK ID NR 23. Przeciwciała 2H7.v114 i 2H7.v115 wykazują przynajmniej 10-krotnie polepszoną aktywność ADCC w porównaniu z przeciwciałem Rituxan.
W innym wykonaniu przeciwciało zawiera ponadto przynajmniej jedno podstawienie aminokwasowe w regionie Fc, które zmniejsza aktywność CDC w porównaniu z wyjściowym przeciwciałem, z którego ono pochodzi, którym w większości przypadków jest v16. Jedno z takich przeciwciał z obniżoną aktywnością CDC w porównaniu z ν16 zawiera przynajmniej postawienie K322A w łańcuchu H. Porównanie aktywności ADCC i CDC noże być oznaczone jak opisano w przykładach.
PL 212 899 B1
W korzystnym wykonaniu przeciwciała z wynalazku są przeciwciałami o pełnej długości, w których region VH jest przyłączony Iudzkiego stałego regionu łańcucha ciężkiego IgG. W korzystnych wykonaniach IgG jest ludzka IgG1 lub IgG3.
W jednym z wykonań przeciwciało wiążące CD20 jest sprzężone z czynnikiem cytotoksycznym. W korzystnych wykonaniach czynnikiem cytotoksycznym jest toksyna lub izotop radioaktywny.
W jednym z wykonań przeciwciała z wynalazku do zastosowania w celach terapeutycznych lub diagnostycznych są wytwarzane w komórkach CHO.
Dostarczona jest także kompozycja zawierająca dowolne przeciwciało jednego z powyższych wykonań i nośnik. W jednym z wykonań nośnikiem jest nośnik akceptowalny farmaceutycznie. Te kompozycje mogą być dostarczone w wyrobie przemysłowym lub zestawie.
Wynalazek także dostarczył ciekłego preparatu zawierającego humanizowane przeciwciało 2H7 w stężeniu 20 mg/ml przeciwciała, 10 mM siarczanu histydyny pH 5,8, 60 mg/ml sacharozy (6%), 0,2 mg/ml polisorbatu 20 (0,02%).
Wynalazek także dostarcza wyizolowanego kwasu nukleinowego, który koduje dowolne z przeciwciał ujawnionych tutaj, włączając wektor ekspresyjny do ekspresji przeciwciała.
W innym aspekcie wynalazku są komórki gospodarza zawierające powyższe kwasy nukleinowe i komórki gospodarza, które wytwarzają przeciwciało. W korzystnym wykonaniu tych ostatnich, komórką gospodarza jest komórka CHO. Dostarczony jest sposób wytwarzania tych przeciwciał, sposób obejmujący hodowlę komórki gospodarza, która wytwarza przeciwciało i odzyskiwanie przeciwciała z hodowli komórkowej.
W jeszcze innym aspekcie wynalazek dostarcza produkt przemysłowy zawierający pojemnik i zamkniętą w nim kompozycję, w którym kompozycja zawiera przeciwciało z dowolnego z powyższych wykonań. Do zastosowania w leczeniu NHL, produkt przemysłowy ponadto zawiera ulotkę wskazującą, że kompozycja jest stosowana do leczenia chłoniaków nieziarniczych.
Dalszym aspektem wynalazku jest sposób indukowania apoptozy in vivo w komórkach B, obejmujący doprowadzanie do kontaktu komórek B z przeciwciałem dowolnym z powyższych i przez to zabijanie komórek B.
Wynalazek pozwala na leczenie chorób ujawnionych tutaj przez podawanie przeciwciała wiążącego CD20 lub jego funkcjonalnych fragmentów ssakowi takiemu, jak ludzki pacjent cierpiący na chorobę. Do leczenia choroby autoimmunologicznej lub nowotworu CD20-dodatniego, w jednym z wykonań, może służyć przeciwciało 2H7.v16 posiadające sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha odpowiednio SEK ID NR 21 i 22, jak pokazano na Fig. 6 i Fig. 7. Metoda leczenia nowotworu CD20-dodatniego obejmuje podawanie pacjentowi cierpiącemu na nowotwór terapeutycznie skutecznej ilości humanizowanego przeciwciała według wynalazku, które wiąże CD20. W korzystnych wykonaniach, nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak komórek B lub białaczka włączając chłoniaka nieziarniczego (NHL) lub ziarnicę złośliwą z przewagą limfocytów (LPHD, ang. Iymphocyte predominant Hodgkin's disease), przewlekłą białaczkę limfocytową (CLL, ang. chronic lymphocytic leukemia) lub SLL. W jednym z wykonań metody leczenia chłoniaka komórek B lub białaczki przeciwciało jest 2 podawane w dawce w zakresie około 275-375 mg/m2. W dodatkowych wykonaniach leczenie obejmuje ponadto podawanie pacjentowi przynajmniej jednego czynnika chemioterapeutycznego, który to czynnik chemioterapeutyczny dla chłoniaka nieziarniczego (NHL) jest wybrany z grupy składającej się z doksorubicyny, cyklofosfamidu, winkrystyny i prednisolonu.
Dostarczony jest także sposób leczenia choroby autoimmunologiczej obejmującej podawanie pacjentowi cierpiącemu na chorobę immunologiczną, terapeutycznie skutecznej dawki humanizowanego przeciwciała wiążącego CD20. Choroba autoimmunologicza jest wybrana z grupy składającej się reumatoidalnego zapalenia stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenia stawów, liszaja rumieniowatego układowego (SLE, ang. systemic lupus erythematosus), choroby Wegenera, choroby zapalnej jelit, choroby Werlhofa (ITP, ang. idiopathic thrombocytopenic purpura), choroby Moschowitza (TTP, ang. Thrombotic thrombocytopenic purpura), małopłytkowości o podłożu immunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, miastenii rzekomoporaźnej, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych. Kiedy chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów przeciwciało może być podane w połączeniu z drugim czynnikiem terapeutycznym, którym korzystnie jest metotreksat.
W tych metodach leczenia, przeciwciała wiążące CD20 mogą być podawane same lub w połączeniu z drugim czynnikiem terapeutycznym, takim jak drugie przeciwciało lub środek chemioterapeutyczny lub środek immunosupresyjny. Drugim przeciwciałem może być takie, które wiąże CD20 lub
PL 212 899 B1 inny antygen komórek B, lub antygen komórek NK lub T. W jednym z wykonań drugim przeciwciałem jest przeciwciało anty-CD20 wyznakowane radioaktywnie. W innych wykonaniach przeciwciało wiążące CD20 jest sprzężone ze środkiem, cytotoksycznym, włączając toksynę lub izotop radioaktywny.
W wynalazku opisuje się również metodę leczenia choroby autoimmunologicznej z grupy składającej się z zapalenia skórno-mięśniowego, ziarniniaka Wegenera, ANCA, anemii aplastycznej, autoimmunologicznej anemii hemolitycznej (AIHA, ang. Autoimmune hemolytic anemia), niedoboru czynnika VIII, hemofilii A, neutropenii autoimmunoligicznej, zespołu Castelmana, zespołu Goodpasteure'a, odrzucenia przeszczepionego organu miąższowego, choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD, ang. graft versus host disease), choroby Moschowitza (TTP) z pośrednictwem IgM, zapalenia tarczycy Hashimoto, autoimmunologicznego zapalenia wątroby, Iimfoidalnego śródmiąższowego zapalenia płuc (HIV), zarostowego zapalenia oskrzelików (nietransplantacyjnego) przeciwko NIIP, zespołu Guillain-Barre, zapalenia dużych naczyń, zapalenia tętnicy skroniowej olbrzymiokomórkowej (zapalenia Takayasu), zapalenia naczyń średniej wielkości, choroby Kawasaki, zapalenia guzkowatego tętnic, obejmującego podawanie pacjentowi cierpiącemu na chorobę skutecznej terapeutycznie dawki przeciwciała wiążącego CD20. W jednym z wykonań tego sposobu przeciwciałem wiążącym CD20 jest Rituxan®.
Wynalazek opisuje także wyizolowany kwas nukleinowy, zawierający sekwencję nukleotydową z CD20 małpy Cynomolgus (pokazaną na Fig. 19), lub zdegenerowany wariant tej sekwencji. Opisany jest także wyizolowany kwas nukleinowy zawierający sekwencję, która koduje polipeptyd o sekwencji aminokwasowej pokazanej na Fig. 20 lub o sekwencji (Fig. 20) z postawieniami konserwowanych aminokwasów. Innym wykonaniem jest wektor zawierający powyższy kwas nukleinowy, włączając wektor ekspresyjny do ekspresji w komórce gospodarza. Włączona jest również komórka gospodarza zawierająca wektor. Opisuje się także wyizolowany polipeptyd zawierający sekwencję aminokwasową (Fig. 20) z CD20 małpy Cynomoigus.
Krótki opis rysunków
Fig. 1A jest uliniowaniem sekwencji porównującym sekwencje aminokwasowe domeny zmiennej łańcucha lekkiego (VL) każdego z mysich 2H7 (SEK ID NR 1), humanizowanego wariantu 2H7.v16 (SEK ID NR 2), i ludzkiego łańcucha lekkiego kappa podgrupy I (SEK ID NR 3). Regiony CDR z VL z 2H7 i hu2H7.v16 są następujące: CDR1 (SEK ID NR 4), CDR2 (SEK ID NR 5) oraz CDR3 (SEK ID NR 6).
Fig. 1B jest przyrównaniem sekwencji, które porównuje sekwencje VH mysiego 2H7 (SEK ID NR 7), humanizowanego wariantu 2H7.v16 (SEK ID NR 8) oraz ludzkiej konsensusowej sekwencji łańcucha ciężkiego podgrupy III (SEK ID NR 9). Regiony CDR z VH z 2H7 oraz hu2H7.v16 są następujące: CDR1 (SEK ID NR 10), CDR2 (SEK ID NR 11) oraz CDR3 (SEK ID NR 12).
Na Fig. 1A i Fig. 1B regiony CDR1, CDR2 i CDR3 w każdym z łańcuchów są ujęte w nawiasy, otoczone przez regiony szkieletowe FR1-FR4, jak pokazano. 2H7 odnosi się do mysiego przeciwciała 2H7. Gwiazdki pomiędzy dwoma rzędami sekwencji wskazują pozycje, które są różne pomiędzy dwiema sekwencjami. Numerowanie reszt jest według Kabat i wsp., Sequences of Immunological Interest. Wyd. 5. Publiczna Służba Zdrowia, Narodowy Instytut Zdrowia, Bethesda, Md. (1991), ze wstawkami pokazanymi jako a, b, c, d oraz e.
Fig. 2 pokazuje sekwencję fagmidu pVX4 (SEK ID NR 13) użytego do konstrukcji plazmidów 2H7 Fab (zobacz Przykład 1) jak również sekwencje aminokwasowe łańcucha L (SEK ID NR 14) i łańcucha H (SEK ID NR 15) Fab dla humanizowanego przeciwciała anty-IFN-α z przeszczepionymi regionami CDR.
Fig. 3 pokazuje sekwencję plazmidu ekspresyjnego, który koduje chimeryczne 2H7.v6.8 Fab (SEK ID NR 16). Pokazane są sekwencje aminokwasowe łańcucha L (SEK ID NR 17) i łańcucha H (SEK ID NR 18).
Fig. 4 pokazuje sekwencję plazmidu pDR1 (SEK ID NR 19; 5391 pz) do ekspresji lekkich łańcuchów immunoglobulinowych, jak opisano w Przykładzie 1. pDR1 zawiera sekwencje kodujące nieistotne przeciwciało, lekki łańcuch humanizowanego przeciwciała anty-CD3 (Shalaby i wsp., J. Exp. Med. 175:217-225 (1992)), dla którego pokazane kodony start i stop są pogrubione i podkreślone.
Fig. 5 pokazuje sekwencję plazmidu pDR2 (SEK ID NR 20; 6135 pz) do ekspresji ciężkich łańcuchów immunoglobulinowych, jak opisano w Przykładzie 1. pDR2 zawiera sekwencje kodujące nieistotne przeciwciało, ciężki łańcuch humanizowanego przeciwciała anty-CD3 (Shalaby i wsp., powyżej), dla którego pokazane kodony start i stop są pogrubione i podkreślone.
PL 212 899 B1
Fig. 6 pokazuje sekwencję aminokwasową kompletnego łańcucha L 2H7.v16 (SEK ID NR 21). Pierwszych 19 aminokwasów przed DIQ jest sekwencją sygnału sekrecyjnego nieobecną w dojrzałym łańcuchu polipeptydowym.
Fig. 7 pokazuje sekwencję aminokwasową kompletnego łańcucha H 2H7.v16 (SEK ID NR 22). Pierwszych 19 aminokwasów przed EVQ jest sekwencją sygnału sekrecyjnego nieobecną w dojrzałym łańcuchu polipeptydowym. Przyrównanie sekwencji VH na Fig. 1B (SEK ID NR 8) z kompletną sekwencją łańcucha H, ludzkiego regionu stałego VL jest od pozycji aminokwasowej 114-471 w SEK ID NR 22.
Fig. 8 pokazuje sekwencję aminokwasową kompletnego łańcucha H 2H7.v31 (SEK ID NR 23). Pierwszych 19 aminokwasów przed EVQ jest sekwencją sygnału sekrecyjnego nieobecną w dojrzałym łańcuchu polipeptydowym. Łańcuch L jest taki sam, jak dla 2H7.v16 (zobacz Fig. 6).
Fig. 9 pokazuje względną stabilność wariantów IgG 2H7.v16 i 2H7.v73. Wyniki oznaczenia znormalizowano do wartości poprzedzających inkubację i przedstawiono jako procent pozostały po inkubacji.
Fig. 10 jest schematem podsumowującym zmiany sekwencji aminokwasowej od mysiego 2H7 do podzbioru humanizowanych wersji do v75.
Fig. 11 jest podsumowaniem średniej bezwzględnej liczebności komórek B [CD3-/CD40+] we wszystkich grupach (połączone badanie 2H7 i badanie Rituxan), jak opisano w Przykładzie 10.
Fig. 12 pokazuje wyniki reprezentatywnego oznaczenia ADCC na wariantach 2H7 z niedoborem fukozy, jak opisano w Przykładzie 11.
Fig. 13 pokazuje wyniki barwienia Aneksyną V wykreślonego jako funkcja stężenia przeciwciała. Komórki Ramos traktowano nieistotnym, przeciwciałem kontrolnym IgG1 (Herceptin©; kółka), Rituximab (kwadraty) lub rhuMAb 2H7.v16 (trójkąty) w obecności drugorzędowego przeciwciała tworzącego wiązania krzyżowe i analizowano przy użyciu FACS. Rysunki 13-15 są opisane w Przykładzie 13.
Fig. 14 pokazuje wyniki podwójnego barwienia Anneksyną V i jodkiem propidyny wykreślone jako funkcja stężenia przeciwciała. Komórki Ramos traktowano nieistotnym przeciwciałem kontrolnym IgG1 (Herceptin®; kółka), Rituximab (kwadraty) lub rhuMAb 2H7.v16 (trójkąty) w obecności drugorzędowego przeciwciała tworzącego wiązania krzyżowe i analizowano przy użyciu FACS.
Fig. 15 pokazuje zliczenia (na 10 s), żywe niewybarwione komórki są wykreślone jako funkcja stężenia przeciwciała. Komórki Ramos traktowano nieistotnym kontrolnym przeciwciałem (Herceptin®; kółka), Rituximab (kwadraty) lub rhuMAb 2H7.v16 (trójkąty) w obecności drugorzędowego przeciwciała tworzącego wiązania krzyżowe i analizowano przy użyciu FACS.
Fig. 16, 17, 18 pokazują hamowanie wzrostu nowotworu komórek Raji w myszy pozbawionej układu immunologicznego, jak opisano w Przykładzie 4. Zwierzęta traktowano co tydzień (jak wskazano przez pionowe strzałki; n=8 myszy na grupę) przez 6 tygodni roztworem PBS (kontrola) lub Rituxan® lub rhuMAb 2H7.v16 w stężeniu 5 mg /kg (Fig. 16), 0,5 mg /kg (Fig. 17), lub 0,0 5 mg/kg (Fig. 18).
Fig. 19 pokazuje nukleotydowe i aminokwasowe sekwencje CD20 z małpy Cynomolgus, jak opisano w Przykładzie 15.
Fig. 20 pokazuje sekwencję aminokwasową CD20 z małpy Cynomolgus. Reszty, które różnią się od ludzkiego CD20 są podkreślone i ludzkie reszty są wskazane bezpośrednio poniżej reszty z małpy. Przypuszczalna zewnątrz komórkowa domena małpiego CD20 jest pogrubiona.
Fig. 21 pokazuje wyniki komórek z małpy Cynomolgus z ekspresją CD20 wiążącego się do hu2H7.v16, .v31, oraz Rituxan, jak opisano w przykładzie 15. Przeciwciała oznaczano na zdolność do związania i zastąpienia mysiego 2H7 z przyłączonym FITC związanego do CD20 z Cynomolgus.
Fig. 22 pokazuje schemat zwiększania dawki w próbie klinicznej I/II fazy dla reumatoidalnego zapalenia stawów.
Fig. 23 pokazuje wektor do ekspresji 2H7.v16 w komórkach CHO.
Szczegółowy opis korzystnych wykonań
Antygen CD20 jest nieglikolizowaną międzybłonową fosfoproteiną z masą cząsteczkową w przybliżeniu 35 kD, która jest obecna na powierzchni więcej niż 90% komórek B z krwi obwodowej lub narządów Iimfoidalnych. CD20 ulega ekspresji podczas wczesnego rozwoju komórek pre-B i pozostaje do momentu zróżnicowania się w komórkę plazmatyczną; nie występuje na ludzkich komórkach macierzystych, rodzicielskich komórkach limfoidalnych lub normalnych komórkach plazmatycznych. CD20 jest obecny zarówno na normalnych komórkach B, jak również na nowotworowych komórkach B. Inne nazwy na określenie CD20 w literaturze obejmują ''antygen różnicowania ograniczony
PL 212 899 B1 do limfocytów B i Bp35. Antygen CD20 jest opisany, na przykład, w Clark i Ledbetter, Adv. Can. Res. 52:81-149 (1989) oraz Valentine i wsp. J. Biol. Chem. 264(19):11282-11287 (1989).
Określenie przeciwciało jest stosowane w najszerszym znaczeniu i specyficznie pokrywa przeciwciała monoklonalne (włączając przeciwciała monoklonalne o pełnej długości), przeciwciała wielospecyficzne (np., przeciwciała dwuspecyficzne) i fragmenty przeciwciał wystarczająco długie, aby wykazywać pożądaną biologiczną aktywność lub funkcję.
Aktywność biologiczna przeciwciał wiążących CD20 i humanizowanych przeciwciał wiążących CD20 z wynalazku będzie obejmować przynajmniej wiązanie przeciwciała do ludzkiego CD20, bardziej korzystnie wiązanie CD20 z człowieka lub innego naczelnego (włączając małpę Cynomolgus, rezusy, szympansy). Przeciwciała wiązałyby się do CD20 z wartością Kd nie większą niż około 1 x 10-8, korzystnie z wartością Kd nie większą niż około 1 x 10-9 i byłyby zdolne do zabicia lub deplecji in vivo komórek B, korzystnie przynajmniej o 20% w porównaniu do odpowiedniej negatywnej kontroli, która nie jest traktowana takim przeciwciałem. Deplecja komórek B może być wynikiem jednego z mechanizmów: ADCC, CDC, apoptozy, lub innego. W pewnych wykonaniach leczenia choroby z niniejszego wynalazku jedne specyficzne funkcje efektorowe lub mechanizmy mogą być pożądane bardziej niż inne i pewne warianty humanizowanego 2H7 mogą być korzystne do osiągnięcia tych funkcji biologicznych takich, jak ADCC.
Fragmenty przeciwciał obejmują część przeciwciała o pełnej długości, ogólnie jego region wiążący antygen lub zmienny. Przykłady fragmentów przeciwciał obejmują fragmenty Fab, Fab', F(ab')2, i Fv; dwuciała; przeciwciała liniowe; jednołańcuchowe cząsteczki przeciwciał; oraz przeciwciała wielospecyficzne utworzone z fragmentów przeciwciał.
Fv jest minimalnym fragmentem przeciwciała, który zawiera kompletne miejsce rozpoznawania i wiązania antygenu. Ten fragment składa się z dimeru jednej domeny zmiennej łańcucha ciężkiego i jednej domeny zmiennej łańcucha lekkiego w ścisłym niekowalencyjnym połączeniu. Po sfałdowaniu z tych dwóch domen wystaje sześć hiperzmiennych pętli (3 pętle z każdego z łańcuchów H i L), które dają reszty aminokwasowe do wiązania antygenu i nadają przeciwciele specyficzność wiązania antygenu. Jednakże, nawet pojedyncza domena zmienna (lub połowa Fv zawierająca tylko trzy regiony CDR specyficzne dla antygenu) posiada zdolność do rozpoznawania wiązania antygenu, chociaż z mniejszym powinowactwem niż całe miejsce wiążące.
Stosowane tutaj określenie przeciwciało monoklonalne dotyczy przeciwciała uzyskanego z populacji zasadniczo homogenicznych przeciwciał, tj. poszczególne przeciwciała znajdujące się w populacji są identyczne z wyjątkiem możliwych naturalnie występujących mutacji, które mogą być obecne w małych ilościach. Przeciwciała monoklonalne są wysoce specyficzne, będąc skierowanymi przeciwko pojedynczemu miejscu antygenu. Ponadto, w przeciwieństwie do konwencjonalnych (poliklonalnych) preparatów przeciwciał, które typowo obejmują różne przeciwciała skierowane przeciwko różnym determinantom (epitopom), każde przeciwciało monoklonalne jest skierowane przeciwko pojedynczemu determinantowi na antygenie. Określenie „monoklonalny wskazuje na charakter przeciwciała jako uzyskanego z zasadniczo homogenicznej populacji przeciwciał, i nie jest rozumiane jako wymaganie wytwarzania przeciwciała określonym sposobem. Na przykład, przeciwciała monoklonalne do zastosowania zgodnie z mniejszym wynalazkiem mogą być wytworzone według sposobu z użyciem hybrydomy po raz pierwszy opisanego przez Kohler i wsp., Nature 256:495 (1975), lub mogą być otrzymane sposobami rekombinowanego DNA (zobacz np. Patent USA Nr 4816567). Przeciwciała monoklonalne mogą być także wyizolowane z fagowych bibliotek przeciwciał przy użyciu technik opisanych, na przykład, przez Clackson i wsp., Nature 352:624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991).
Funkcjonalne fragmenty przeciwciał wiążących CD20 z wynalazku są tymi fragmentami, które zachowują wiązanie do CD20 z zasadniczo tym samym powinowactwem, jak nienaruszona cząsteczka o pełnej długości, z której pochodzą i wykazują aktywność biologiczną włączając deplecję komórek, jak zmierzono przez oznaczenia in vitro i in vivo, takie jak te opisane tutaj.
Określenie zmienny odnosi się do faktu, że sekwencje pewnych segmentów domen zmiennych różnią się znacznie pośród przeciwciał. Domena V pośredniczy w wiązaniu antygenu i definiuje specyficzność określonego przeciwciała do określonego antygenu. Jednakże, zmienność nie jest równomiernie rozłożona wzdłuż 110 aminokwasowego obszaru domen zmiennych. Przeciwnie, regiony V zawierają względnie niezmienne ciągi 15-30 aminokwasów zwane regionami szkieletowymi (FR, ang. framework region) rozdzielonymi przez krótsze regiony ekstremalnej zmienności zwanymi regionami hiperzmiennymi, każdy z nich o długości 9-12 aminokwasów. Domeny zmienne każdego z natywnych
PL 212 899 B1 ciężkich i lekkich łańcuchów zawiera cztery regiony FR, w większości posiadających konfigurację β-kartki, połączonych trzema regionami hiperzmiennymi, które tworzą pętle łączące i w pewnych przypadkach tworzące część struktury β-kartki. Regiony hiperzmienne w każdym łańcuchu są utrzymywane razem w bliskiej odległości przez regiony FR i razem z hiperzmiennymi regionami drugiego łańcucha uczestniczą w tworzeniu miejsca przeciwciała wiążącego antygen (zobacz Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Wyd 5. Publiczna Służba Zdrowia, Narodowy Instytut Zdrowia, Bethesda, MD. (1991)). Domeny stałe nie są bezpośrednio zaangażowane w wiązaniu się przeciwciała do antygenu, ale wykazują różne funkcje efektorowe, takie jak uczestniczenie przeciwciała w cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciała (ADCC).
Stosowane tutaj określenie region hiperzmienny dotyczy reszt aminokwasowych przeciwciała, które są odpowiedzialne za wiązanie antygenu. Ogólnie region hiperzmienny zawiera reszty aminokwasowe z regionów determinujących dopasowanie lub CDR (ang. complementarity determining region) (np. w okolicy około 24-34 (L1), 50-56 (L2) i 89-97 (L3) w VL, oraz w okolicy około 31-35B (H1), 50-65 (H2) i 95-102 (H3) w VH (Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Wyd 5, Publiczna Służba Zdrowia, Narodowy Instytut Zdrowia, Bethesda, MD. (1991)) i/lub te reszty z pętli hiperzmiennej (np. reszty 26-32 (L1), 50-52 (L2) i 9196 (L3) w VL oraz 26-32 (H1), 52A-55 (H2) i 96-101 (H3) w VH (Chotia i Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)).
Stosowane tutaj określenie „sekwencja konsensusowa lub konsensusowa sekwencja domeny V jest sztuczną sekwencją otrzymaną z porównania sekwencji aminokwasowych znanych sekwencji regionów zmiennych znanych ludzkich immunoglobulin. W oparciu o te porównania, przygotowano sekwencje rekombinowanych kwasów nukleinowych kodujących aminokwasy domeny V, które są konsensusem sekwencji otrzymanych z domen V z podgrupy III ludzkiego łańcucha κ i ludzkiego łańcucha H. Konsensusowa sekwencja V nie posiada żadnej znanej specyficzności wiązania lub powinowactwa charakterystycznych dla przeciwciała.
Przeciwciała (immunoglobuliny) „chimeryczne posiadają cześć ciężkiego i/lub lekkiego łańcucha identycznego z lub homologicznego do odpowiadających im sekwencji w przeciwciałach otrzymanych z określonych gatunków lub należących do określonej klasy lub podklasy przeciwciała, podczas, gdy pozostały(e) łańcuch(y) jest(są) identyczny(e) z lub homologiczny(e) do odpowiadających mu(im) sekwencji w przeciwciałach otrzymanych z innego gatunku lub należących do innej klasy lub podklasy przeciwciała, jak również fragmentów takich przeciwciał, tak długo, jak one wykazują pożądaną aktywność biologiczną (Patent USA Nr 48816567 i Morrison i wsp. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855 (1984)). Stosowane tutaj humanizowane przeciwciała są podzbiorem przeciwciał chimerycznych.
„Humanizowane postacie innych niż ludzkie (np. mysich) przeciwciał są przeciwciałami chimerycznymi, które zawierają minimalną sekwencję otrzymaną z immunoglobuliny innej niż ludzka. W głównej mierze przeciwciała humanizowane są ludzkimi immunoglobulinami (przeciwciało będące biorcą lub akceptorowe), w których reszty regionu hiperzmiennego biorcy są zastąpione przez reszty regionu hiperzmiennego z gatunków innych niż ludzki (przeciwciało będące dawcą), takich jak mysz, szczur, królik lub naczelny inny niż człowiek, posiadające pożądaną specyficzność, powinowactwo i zdolność. W pewnych przykładach reszty regionu szkieletowego (FR) z Fv ludzkiej immunoglobuliny są zastąpione przez odpowiadające im reszty nie-ludzkie. Ponadto, humanizowane przeciwciała mogą zawierać reszty, które nie występują ani w przeciwciele będącym biorcą ani w przeciwciele będącym dawcą. Te modyfikacje są wprowadzone do dalszego dopracowania wykonania przeciwciała, takiego, jak powinowactwo wiązania. Ogólnie, humanizowane przeciwciało będzie zawierać zasadniczo wszystkie z przynajmniej jednej, a typowo z dwóch domen zmiennych, w których wszystkie lub zasadniczo wszystkie pętle hiperzmienne odpowiadają tym z immunoglobuliny innej niż ludzka i wszystkie lub zasadniczo wszystkie regiony FR są tymi z sekwencji ludzkiej immunoglobuliny, chociaż regiony FR mogą zawierać jedną lub większą liczbę podstawień aminokwasowych, które polepszają powinowactwo wiązania. Liczba tych podstawień aminokwasowych w regionach FR typowo wynosi nie więcej niż 6 w łańcuchu H a w łańcuchu L nie więcej niż 3. Humanizowane przeciwciało opcjonalnie także będzie zawierać przynajmniej część immunoglobulinowego regionu stałego (Fc), typowo tego z ludzkiej immunoglobuliny. Po dalsze szczegóły zobacz Jones i wsp, Nature 321:522-525 (1986); Reichmann i wsp., Nature 332:323-329 (1988); i Presta, Curr. Op. Struct Biol. 2:593-596 (1992).
Efektorowe funkcje przeciwciała dotyczą tych aktywności biologicznych przypisanych do regionu Fc (natywnej sekwencji regionu Fc lub aminokwasowej sekwencji wariantu regionu Fc) przeciwciała i zmieniają się wraz z izotopem przeciwciała. Przykłady efektorowych funkcji przeciwciał obejmują:
PL 212 899 B1 wiązanie Clq oraz cytotoksyczność zależną od dopełniacza; wiązanie receptora Fc; cytotoksyczność zależna od przeciwciała z pośrednictwem komórek (ADCC); fagocytoza; obniżenie poziomu receptorów na powierzchni komórek (np. receptora komórek B; i aktywacja komórek B.
Cytotoksyczność zależna od przeciwciała za pośrednictwem komórek lub ADCC odnosi się do postaci cytotoksyczności, w której wydzielone Ig wiążą się do receptorów Fc (FcRs) obecnych na pewnych komórkach cytotoksycznych (np. komórkach tzw. Naturalnych Zabójcach (NK), neutrofilach i makrofagach) umożliwiając tym cytotoksycznym komórkom efektorowym specyficzne wiązanie się do komórek docelowych niosących antygen i następnie zabicie komórki docelowej przy użyciu cytotoksyn. Przeciwciała uzbrajają komórki cytotoksyczne i są absolutnie konieczne do takiego zabijania. Komórki pierwotne pośredniczące w ADCC, komórki NK, eksprymują tylko Fc/RIII, podczas gdy monocyty eksprymują FcyRI, FcyRII i FcyRIII. Ekspresja FcR na komórkach krwiotwórczych jest podsumowana w Tabeli 3 na stronie 464 w Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991). Do oznaczenia aktywności ADCC cząsteczki będącej przedmiotem zainteresowania może być wykonane oznaczenie takie, jak opisano w Patencie USA Nr 5500362 lub 5821337. Użyteczne komórki efektorowe do takich oznaczeń obejmują jednojądrzaste komórki z komórki z krwi obwodowej (PBMC, ang. peripheral blood mononuelear cells) i komórki Naturalnych Zabójców (NK). Alternatywnie, lub dodatkowo aktywność ADCC cząsteczki będącej przedmiotem zainteresowania może być oznaczona in vivo, np. w modelu zwierzęcym, takim jak ten ujawniony w Clynes i wsp. PNAS (USA) 95 :652-656 (1998).
Receptor Fc lub FcR opisuje receptor, który wiąże się do regionu Fc przeciwciała. Korzystnym FcR jest natywna sekwencja ludzkiego FcR. Ponadto, korzystnym FcR jest ten, który wiąże przeciwciało IgG (receptor gamma) i obejmuje receptory z podklas FcyRI, FcyRII i FcyRIII, włączając warianty alleliczne i formy będące wynikiem alternatywnego składania genów tych receptorów. Receptory FcyRII obejmują FcyRIIA (receptor aktywujący) i FcyRIIB (receptor hamujący), które posiadają podobne sekwencje aminokwasowe, które różnią się przede wszystkim w ich domenach cytoplazmatycznych. Aktywujący receptor FcyRIIA w domenie cytoplazmatycznej zawiera immunosupresorowy motyw aktywujący oparty o tyrozynę (ITAM). Hamujący receptor FcyRIIB w domenie cytoplazmatycznej zawiera immunoreceptorowy motyw hamujący oparty o tyrozynę (ITIM). (zobacz artykuł przeglądowy M. In Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)). Receptory FcR są opisane w Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel i wsp., Immunomethods 4:25-34 (1994); oraz de Haas i wsp., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995). Inne receptory FcR włączając te, które zostaną zidentyfikowane w przyszłości są objęte tutaj określeniem FcR. Określenie także obejmuje receptor ulegający ekspresji w noworodkowym FcRn, który jest odpowiedzialny za transfer matczynych IgG do płodu (Guyer i wsp., J. Immunol. 117:587 (1976) oraz Kim i wsp., J. Immunol. 24:249 (1994)). WO00/42072 (Presta) opisuje warianty przeciwciał z ulepszonym lub zmniejszonym wiązaniem do receptorów FcR. Treść tej publikacji patentowej jest specyficznie włączona tutaj jako odniesienie. Zobacz także, Shields i wsp. J. Biol. Chena. 9(2):6591-6604 (2001).
Ludzkie komórki efektorowe są leukocytami, które eksprymują jeden lub większą liczbę receptorów FcR i wykonują funkcje efektorowe. Korzystnie, komórki eksprymują przynajmniej FcyRIII i wykonują funkcje efektorowe ADCC. Przykłady ludzkich leukocytów, które pośredniczą w ADCC obejmują jednojądrzaste komórki z krwi obwodowej (PBMC), komórki naturalnych zabójców (NK), monocyty, komórki cytotoksyczne T i neutrofile; z komórkami PBMC i NK będącymi korzystnymi. Komórki efektorowe mogą być wyizolowane ze źródła naturalnego, np., z krwi.
Cytotoksyczność zależna od dopełniacza lub CDC (ang. complement dependent cytotoxicity) dotyczy Iizy komórki docelowej w obecności komplementu. Aktywacja klasycznej ścieżki komplementu jest zapoczątkowana przez związanie pierwszego składnika systemu komplementu (Clq) do przeciwciał (odpowiedniej podklasy), które są związane do rozpoznawanego przez nie antygenu. Aby oznaczyć aktywację komplementu może być zastosowane oznaczenie CDC, np. jak opisano w GazzanoSantoro i wsp., J. Inamunol. Methods 202:163 (1996).
Warianty polipeptydowe ze zmienionymi sekwencjami aminokwasowymi regionu Fc oraz zwiększona lub zmniejszona zdolność wiązania Clq są opisane w Patencie USA Nr 6194551B1 i WO99/51642. Treści tych publikacji patentowych są specyficznie włączone tutaj przez odniesienie. Zobacz także, Idusogie i wsp. J. Immunol. 164:4178-4184 (2000).
Miejsce N-glikozylacji w IgG jest w Asn297 w domenie CH2. Niniejszy wynalazek także dostarcza kompozycji wiążących CD20, humanizowanych przeciwciał posiadających region Fc, w których około 80-100% (a korzystnie około 90-99%) przeciwciał w kompozycji zawiera dojrzałą strukturę rdzenia
PL 212 899 B1 wodorowęglanowego, która jest z niedoborem fukozy, przyczepioną do regionu Fc glikoproteiny. Pokazano tutaj, że takie kompozycje wykazują zaskakujące polepszenie wiązania do FcyRIIIA(F158), które nie jest tak efektywne jak FcyRIIIA(V158) w oddziaływaniu z ludzką IgG. Zatem przewiduje się, że kompozycje zawarte tutaj są lepsze niż wcześniej opisane kompozycje przeciwciał anty-CD20, szczególnie do terapii ludzkich pacjentów posiadających ekspresję FcyRIIIA (F158). FcyRIIIA (F158) jest bardziej powszechny niż FcyRIIIA (V158) w normalnych zdrowych amerykanach podchodzenia afrykańskiego oraz osobach pochodzenia kaukaskiego. Zobacz Lehrnbecher i wsp. Blood 94:4220 (1999). Niniejsze zgłoszenie ponadto pokazuje synergistyczny wzrost w wiązaniu FcyRIII i/lub funkcji ADCC, które są wynikiem połączenia wariantów glikozylacji ujawnionych tutaj z modyfiką(acjami) sekwencji aminokwasowej w regionie Fc glikoproteiny.
Wyizolowane przeciwciało jest tym, Które zostało zidentyfikowane i oddzielone i/lub odzyskane z komponentu lub środowiska naturalnego. Składnikami zanieczyszczającymi ze środowiska naturalnego są materiały, które mogłyby oddziaływać z zastosowaniami diagnostycznymi lub terapeutycznymi przeciwciała i mogą obejmować enzymy, hormony i inne białkowe lub niebiałkowe rozpuszczone substancje. W korzystnych wykonaniach przeciwciało będzie oczyszczone (1) do większej niż 95% wagowo masy przeciwciał, jak oznaczono metodą Lowry'ego i bardziej korzystnie większej niż 99% wagowo, (2) do stopnia wystarczającego do uzyskania 15 reszt N-końcowej lub wewnętrznej sekwencji aminokwasowej przy użyciu sekwenatora z wirującym bębnem, lub (3) do homogenności przy użyciu techniki SDS-PAGE w redukujących lub nieredukujących warunkach z zastosowaniem barwnika Coomassie Blue lub korzystnie barwienia srebrem. Wyizolowane przeciwciało obejmuje przeciwciało in situ w rekombinowanych komórkach, dopóki przynajmniej jeden składnik naturalnego środowiska przeciwciała nie będzie obecny. Zwykle jednak wyizolowane przeciwciało będzie przygotowane przez przynajmniej jeden etap oczyszczania.
Wyizolowaną cząsteczką kwasu nukleinowego jest cząsteczka kwasu nukleinowego, która jest zidentyfikowana i wyodrębniona z przynajmniej jednej zanieczyszczającej cząsteczki kwasu nukleinowego, która zwykle występuje w naturalnym źródle kwasu nukleinowego kodującego przeciwciało. Wyizolowana cząsteczka kwasu nukleinowego jest w innej postaci lub ustawieniu niż ta, w której występuje w naturze. Zatem wyizolowane cząsteczki kwasu nukleinowego są różne od cząsteczki kwasu nukleinowego, która występuje w naturalnych komórkach. Jednakże wyizolowana cząsteczka kwasu nukleinowego obejmuje cząsteczkę kwasu nukleinowego obecną w komórkach, które zwykle posiadają ekspresję przeciwciała, gdzie, na przykład, cząsteczka kwasu nukleinowego jest w innym położeniu na chromosomie niż to z komórek naturalnych.
Sekwencje kontrolujące ekspresję dotyczą sekwencji DNA koniecznych do ekspresji funkcjonalnie przyłączonej sekwencji kodującej i określonych organizmie gospodarza. Sekwencje kontrolne, które są odpowiednie dla prokariotów, na przykład, obejmują promotor, opcjonalnie sekwencję operatora oraz miejsce wiązania rybosomu. Wiadomo, że komórki eukariotyczne angażują promotory, sygnały poliadenylacji oraz sekwencje wzmacniające ekspresję.
Kwas nukleinowy jest funkcjonalnie połączony, jeżeli jest umieszczony w funkcjonalnym układzie z mną sekwencją kwasu nukleinowego. Na przykład, DNA kodujący presekwencję lub lider sekrecyjny jest funkcjonalnie połączony z DNA kodującym polipeptyd, jeżeli ulega ekspresji jako prebiałko, które uczestniczy w sekrecji polipeptydu; promotor lub sekwencja wzmacniająca ekspresje jest funkcjonalnie połączony z sekwencją kodującą, jeżeli wpływa na transkrypcję tej sekwencji; lub miejsce wiążące rybosom jest funkcjonalnie połączony z sekwencją kodującą, jeżeli jest usytuowane tak, że ułatwia translację. Ogólnie, funkcjonalnie połączony oznacza, że sekwencje DNA, które są połączone są ciągłe i, w przypadku lidera sekrecyjnego, ciągłe i w ramce odczytu. Jednakże sekwencje wzmacniające ekspresję nie muszą być ciągłe. Połączenie jest wykonywane poprzez ligację w dogodnych miejscach restrykcyjnych. Jeżeli takie miejsca nie istnieją, stosowane są syntetyczne adaptory lub linkery oligonukleotydowe lub linkery według konwencjonalnej praktyki.
Sekwencje kontrolujące ekspresję dotyczą sekwencji DNA koniecznych do ekspresji funkcjonalnie przyłączonej sekwencji kodującej i określonych organizmie gospodarza. Sekwencje kontrolne, które są odpowiednie dla prokariotów, na przykład, obejmują promotor, opcjonalnie sekwencję operatora oraz miejsce wiązania rybosomu. Wiadomo, że komórki eukariotyczne angażują promotory, sygnały poliadenylacji oraz sekwencje wzmacniające ekspresję.
Kwas nukleinowy jest funkcjonalnie połączony, jeżeli jest umieszczony w funkcjonalnym układzie z inną sekwencją kwasu nukleinowego. Na przykład, DNA kodujący presekwencję lub lider sekrecyjny jest funkcjonalnie połączony z DNA kodującym polipeptyd, jeżeli ulega ekspresji jako prebiałko,
PL 212 899 B1 które uczestniczy w sekrecji polipeptydu; promotor lub sekwencja wzmacniająca ekspresję jest funkcjonalnie połączony z sekwencją kodującą, jeżeli wpływa na transkrypcję tej sekwencji; lub miejsce wiążące rybosom jest funkcjonalnie połączony z sekwencją kodującą, jeżeli jest usytuowane tak, że ułatwia translację. Ogólnie, funkcjonalnie połączony oznacza, że sekwencje DNA, które są połączone są ciągłe i, w przypadku lidera sekrecyjnego, ciągłe i w ramce odczytu. Jednakże sekwencje wzmacniające ekspresję nie muszą być ciągłe. Połączenie jest wykonywane poprzez ligację w dogodnych miejscach restrykcyjnych. Jeżeli takie miejsca nie istnieją, stosowane są syntetyczne adaptory lub linkery oligonukleotydowe lub linkery według konwencjonalnej praktyki.
Wektor obejmuje wektory dwufunkcyjne i ekspresyjne. Typowo konstrukt plazmidu będzie zawierał także miejsce startu replikacji (np., miejsce startu replikacji ColE1) oraz znacznik selekcyjny (np. oporność na ampicylinę lub tetracyklinę) w celu odpowiednio replikacji i selekcji plazmidów w bakteriach. Wektor ekspresyjny odnosi się do wektora, który zawiera konieczne sekwencje kontrolne lub elementy regulacyjne do ekspresji w komórkach bakteryjnych lub eukariotycznych przeciwciał włączając fragment przeciwciała z wynalazku. Odpowiednie wektory są ujawnione poniżej.
Komórka, która wytwarza humanizowane przeciwciało wiążące CD20 z wynalazku będzie obejmować bakteryjne lub eukariotyczne komórki gospodarza, do których wprowadzono kwas nukleinowy kodujący przeciwciała z wynalazku. Odpowiednie komórki gospodarza są ujawnione poniżej.
Używane tutaj słowo znacznik odnosi się do związku lub kompozycji możliwej do wykrycia, która jest bezpośrednio lub pośrednio połączona z przeciwciałem. Znacznik może być wykrywalny sam z siebie (np. znaczniki radioizotopowe lub znaczniki fluorescencyjne) lub, w przypadku znacznika enzymatycznego, może katalizować chemiczną przemianę związku lub kompozycji będącej substratem, który jest możliwy do wykrycia.
Chorobą autoimmunologiczną jest tutaj nienowotworowa choroba lub zaburzenie powstałe w wyniku odpowiedzi skierowanej przeciwko własnym antygenom i/lub tkankom gospodarza. Stosowane tutaj określenie deplecja komórek B odnosi się do zmniejszenia poziomów komórek B u zwierzęcia lub człowieka po leczeniu lekiem lub przeciwciałem w porównaniu z poziomem komórek B przed leczeniem. Poziomy komórek B są możliwe do zmierzenia przy użyciu dobrze znanych oznaczeń, takich jak te opisane w Przykładach Doświadczalnych. Deplecja komórek B może być całkowita lub częściowa. W jednym z wykonań deplecja komórek B eksprymujących CD20 wynosi przynajmniej 25%. Nie będąc ograniczonym do jednego mechanizmu, możliwe mechanizmy deplecji komórek B obejmują ADCC, CDC, apoptozę, modulację wyrzutu wapnia lub kombinację dwóch lub więcej z powyższych.
Stosowane tutaj określenie środek cytotoksyczny odnosi się do substancji, która hamuje lub zapobiega funkcjonowaniu komórki i/lub powoduje dysfunkcję komórek. Oczekuje się, że określenie obejmuje izotopy radioaktywne (np. I131, I125, Y90 i Re186), środki chemoterapeutyczne, i toksyny, takie jak toksyny aktywne enzymatycznie pochodzenia bakteryjnego, grzybowego, roślinnego lub zwierzęcego lub ich fragmenty.
Środkiem chemoterapeutycznym jest związek chemiczny użyteczny w leczeniu nowotworu. Przykłady środków chemoterapeutycznych obejmują środki alkalizujące lub alkilujące, takie jak tiotepa i cyklofosfamid (CYTOXAN); sulfoniany alkilu, takie jak busulfan, improsulfan i piposulfan; azyrydyny, takie jak, benzodopa, karbokwon, meturedopa i uredopa; etylenoiminy i metylamelaminy włączając altretaminę, trietylenomelaminę, trietylenofosforamid, trietylenotiofosforamid i trimetylolomelaminę; iperyty azotowe, takie jak aschlorambucyl, chlornafazyna, cholofosfamid, estramustyna, ifosfamid, mechloroetamina, mechloroetamina, chlorowodorek tlenku, melfalan, nowembichina, fenesteryna, prednimustyna, trofosfamid, iperyt uracylu; nitrozomoczniki, takie jak, karmustyna, chlorozotocyna, fotemustyna, lomustyna, nimustyna, ranimustyna; antybiotyki, takie jak aklacynomyzyny, aktynomycyna, autramycyna, azaseryna, bleomycyny, kaktiomycyna, kalicheicyna, karabicyna, karminomycyna, karzynofilina, chromomycyny, daktynymycyna, daunorubicyna, detorubicyna, 6-diazo-5-okso-L-norleucyna, doksorubicyna (Adriamycyna), epirubicyna, esorubicyna, idarubicyna, mercellomycyna, mitomycyny, kwas mykofenolowy, nogalamycyna, oliwomycyny, peplomycyna, potfiromycyna, puromycyna, kwelamycyna, rodorubicyna, streptonigryna, streptozocyna, tubercidyna, ubenimeks, zynostatyna, zorubicyna; antymetabolity, takie jak metotreksat i 5-fluorouracyl (5-FU); analogi kwasu foliowego, takie jak denopteryna, metotreksat, pteropteryna, trimetreksat; analogi puryny, takie jak fludarabina, 6-merkaptopuryna, tiamipryna, tioguanina; analogi pirymidyny, takie jak ancytabina, zacytydyna, 6-azaurydyna, karmofur, cytarabina, dideoksyurydyna, doksyflusydyna, enocytabina, fluksurydyna,
5-FU; androgeny, takie jak kalukteron, propionian dromostanolonu, epitiostanol, mepitiostan, testolakton;
PL 212 899 B1 środki przeciw hormonom wydzielanym przez nadnercza, takie jak aminoglutetymid, mitotan, trilostan; środek uzupełniający niedobór kwasu foliowego, taki jak kwas folionowy; aceglaton; glikozyd aldofosfamidu; kwas aminolewulinowy; amsakryna; bestrabucyl; bisantren; edatraksat; defofamina; demekolcyna; diazikwon; elfornityna; octan eliptynu; etoglucyd; azotan galu; hydroksymocznik; lentinan; lonidamina; mitoguazon; mitoksantron; mopidamol; nitrakryna; pentostatyna; fenamet; pirarubicyna; kwas podofilinowy; 2-etylohydrazyd; prokarbazyna; PSK®; razoksan; sizofiran; spirogerman; kwas tenuazonowy; triazikwon; 2,2',2''-trichlorotrietylamina; uretan; windesyna; dakarbazyna; mannomustyna; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacytozyna; arabinosyd (Ara-C); tiotepa; taksoidy, np. paklitaksel (TAXOL® Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ) i doksetaksel (TAXOTERE®, RhonePoulenc Rorer, Antony, Francja); chlorambucyl; gemcytabina; 6-tioguanina; merkaptopuryna; metotreksat; analogi platyny, takie jak cisplatyna i karboplatyna; platyna; etoposyd (VP-16); ifosfamid; mitomycyna C; mitoksantron; winkrystyna; winblastyna; winorelbina; nawelbina; nowantron; teniposyd; daunomycyna; aminopteryna; kseloda; ibandronat; CPT-11; inhibitor topoizomerazy RFS 2000; difluorometyloornityna (DMFO); kwas retinowy; esperamicyny; kapecytabina; oraz farmaceutycznie akceptowalne sole, kwasy lub pochodne dowolnego z powyższych. Także do tej definicji włączone są czynniki anty-hormonalne, których działanie polega na regulacji lub hamowaniu działania hormonu na nowotwory, takie jak anty-androgeny włączając, na przykład, tamoksifen, raloksifen, 4(5)-imidazole hamujące aromatazę, 4-hydroksytamiksifen, trioksifen, keoksifen, LY117C18, onapriston i toremifen (Fareston); anty-androgeny, takie jak flutamid, nilutamid, bikalutamid, leuprolid i goserelina; inne środki chemoterapeutyczne, takie jak prednisolon. Włączone są farmaceutycznie akceptowalne sole, kwasy lub sole dowolnego z powyższych.
Traktowanie lub leczenie lub złagodzenie odnosi się zarówno do terapeutycznego leczenia jak i do profilaktycznych lub prewencyjnych środków zaradczych, których przedmiotem jest zapobiegać lub spowalniać (zmniejszać) stan patologiczny lub schorzenie, na które są skierowane. Osobnik jest pomyślnie leczony na nowotwór CD20-dodatni lub chorobę immunologiczną, jeżeli po otrzymaniu terapeutycznej dawki przeciwciała wiążącego CD20 z wynalazku według sposobów z niniejszego wynalazku, wykazuje możliwe do zaobserwowania i/lub zmierzenia zmniejszenie lub brak jednej lub większej liczby oznak i objawów określonej choroby. Na przykład, dla nowotworu, zmniejszenie liczby komórek nowotworowych lub brak komórek nowotworowych; zmniejszenie rozmiaru guza nowotworowego; zahamowanie (tj. zmniejszenie do pewnego stopnia, a korzystnie zatrzymanie) tworzenia się przerzutów; zahamowanie, do pewnego stopnia, wzrostu guza nowotworowego; zwiększenie długości remisji oraz/lub usunięcie, do pewnego stopnia, jednego lub większej liczby objawów związanych ze specyficznym nowotworem; zmniejszony stan chorobowy i śmiertelność oraz polepszenie w jakości aspektów życiowych. Zmniejszenie oznak lub objawów choroby może być także odczuwane przez pacjenta. Leczenie może osiągnąć całkowitą odpowiedź, zdefiniowaną jako zanik wszystkich oznak nowotworu lub częściową odpowiedź, w której rozmiar nowotworu jest zmniejszony, korzystnie bardziej niż 50 procent, bardziej korzystnie 75%. Rozważa się także leczenie pacjenta, jeżeli pacjent wykazuje chorobę stabilną. W korzystnym wykonaniu, pacjenci z nowotworem są nadal bez objawów progresji nowotworu po jednym roku, korzystnie po 15 miesiącach. Te parametry do oszacowania udanego leczenia i polepszenia stanu chorobowego są z łatwością możliwe do zmierzenia przy użyciu rutynowych procedur znanych lekarzowi z odpowiednim doświadczeniem w tej dziedzinie.
Terapeutycznie skuteczna ilość odnosi się do ilości przeciwciała lub leku skutecznej do leczenia choroby lub schorzenia u pacjenta. W przypadku nowotworu, terapeutycznie skuteczna ilość leku może zmniejszać liczbę komórek nowotworowych; zmniejszać (zatrzymywać) naciekanie komórek nowotworowych do organów obwodowych; hamowanie (tj. spowalnianie do pewnego stopnia lub korzystnie zatrzymywanie) tworzenie przerzutów nowotworowych; hamowanie, do pewnego stopnia, wzrostu nowotworu; oraz/lub usuwać do pewnego stopnia jeden lub większą liczbę objawów związanych z nowotworem. Zobacz powyższą definicję leczenia.
Przewlekłe podawanie odnosi się do podawania środka(ów) w sposób ciągły w przeciwieństwie do sposobu gwałtownego, tak, aby utrzymać początkowy efekt (aktywność) terapeutyczny w ciągu wydłużonego okresu czasu. Przerywane podawanie jest leczeniem, które nie jest wykonywane kolejno bez przerwy, ale posiada raczej charakter cykliczny.
Kompozycje i Sposoby z Wynalazku
Wynalazek dostarcza humanizowanych przeciwciał, które wiążą ludzki CD20 i korzystnie również CD20 innych naczelnych, zawierających łańcuch H posiadający przynajmniej jeden, korzystnie dwa lub wszystkie regiony CDR łańcucha H z przeciwciała anty-ludzki CD20 pochodzącego z gatunków
PL 212 899 B1 innych niż ludzki (przeciwciało będące dawcą), oraz zasadniczo wszystkie reszty szkieletu przeciwciała o Iudzkim konsensusie jako przeciwciała będącego biorcą. Przeciwciało będące dawcą może pochodzić z różnych gatunków innych niż ludzki włączając mysz, szczura, świnkę morska, kozę, królika, konia, naczelnego, ale najczęściej będzie to mysie przeciwciało. Zasadniczo wszystkie w tym konstekscie jest rozumiane w ten sposób, że regiony FR biorcy w humanizowanym przeciwciele mogą zawierać jedną lub większą liczbę postawień aminokwasowych nieobecnych oryginalnie w ludzkiej sekwencji konsensusowej FR. Te zmiany w FR mogą obejmować reszty nie znajdowane w przeciw-ciele będącym biorcą lub dawcą.
W jednym z wykonań przeciwciałem będącym dawcą jest mysie przeciwciało 2H7, region V obejmujący sekwencje CDR i FR każdego z łańcuchów H i L, które są pokazane na Fig. 1A i 1B. W specyficznym wykonaniu reszty szkieletu ludzkiego Fab odpowiadają sekwencji konsensusowej ludzkiej podgrupie I VK i podgrupie III VH, te sekwencje konsensusowe są pokazane odpowiednio na Fig. 1A i 1B. Humanizowane przeciwciało 12H7 z wynalazku będzie posiadać przynajmniej jeden z regionów CDR z łańcucha H mysiego przeciwciała będącego dawcą. W jednym z wykonań, humanizowane przeciwciało 2H7, które wiąże ludzkie CD20 zawiera regiony CDR obydwu łańcuchów H i L z przeciwciała będącego dawcą.
W przeciwciele pełnej długości, humanizowane przeciwciało z wynalazku wiążące CD20 będzie obejmować humanizowaną domenę V przyłączoną do domeny C z ludzkiej immunoglobuliny. W korzystnym wykonaniu, region C łańcucha H jest z ludzkiej IgG, korzystnie IgG1 lub IgG3. Domena C łańcucha L jest korzystnie z ludzkiego łańcucha k.
Jeżeli nie wskazano inaczej, niniejsza wersja humanizowanego przeciwciała 2H7 będzie posiadać sekwencje domeny V i C z łańcucha L2H7.v16 (Fig. 6, SEK ID NR 21) i łańcucha H (Fig. 7., SEK ID NR 22) oprócz pozycji aminokwasowych podstawień lub zmian wskazanych w przykładach eksperymentów poniżej.
Humanizowane przeciwciała wiążące CD20 będą wiązać przynajmniej ludzkie CD20 i korzystnie wiązać CD20 innych naczelnych, takich jak małpy, włączając małpy Cynomolgus i rezusy oraz szympanse. Sekwencja CD20 z małpy Cynomolgus jest ujawniona w Przykładzie 15 i na Fig. 19.
Biologiczna aktywność przeciwciał wiążących CD20 i humanizowanych przeciwciał wiążących CD20 z wynalazku będzie obejmować przynajmniej wiązanie przeciwciała do ludzkiego CD20, bardziej korzystnie wiązanie do CD20 człowieka lub naczelnych (włączając małpę Cynomolgus, rezusa, szympansa), z wartością Kd nie większą niż 1 x 10-8, korzystnie z wartości Kd nie większą niż około 1 x 10-9 nawet bardziej korzystnie z wartością Kd nie większą niż około 1 x 10-10 i bycie zdolnym do zabicia lub deplecji komórek B in vitro i in vivo, korzystnie o przynajmniej 20% w porównaniu z poziomem podstawowym lub odpowiednią kontrolą negatywną, która nie jest traktowana takim przeciwciałem.
Pożądany poziom deplecji komórek B będzie zależał od choroby. W leczeniu nowotworu CD20-dodatniego może być pożądane maksymalne zwiększenie deplecji komórek B, które są celem przeciwciała anty-CD20 z wynalazku. Zatem, do Ieczenia nowotworu komórek B CD20-dodatnich, pożądane jest, aby deplecja komórek B była wystarczająca do zapobieżenia progresji choroby, która może być oznaczona przez lekarza z doświadczeniem w tej dziedzinie, np. przez monitorowanie wzrostu nowotworu (rozmiaru), proliferacji komórek typu nowotworowego, tworzenia przerzutów, innych oznak i objawów określonego nowotworu. Korzystnie deplecja komórek B jest wystarczająca do zapobieżenia progresji choroby przez przynajmniej 2 miesiące, bardziej korzystnie 3 miesiące, nawet bardziej korzystnie 4 miesiące, bardziej korzystnie 5 miesięcy, nawet bardziej korzystnie 6 lub więcej miesięcy, bardziej korzystnie 9 miesięcy, bardziej korzystnie jeden rok, bardziej korzystnie 2 lata, bardziej korzystnie 3 lata, nawet bardziej korzystnie 5 lub więcej lat. W najbardziej korzystnym wykonaniu deplecja komórek B jest wystarczająca do wyleczenia choroby. W korzystnych wykonaniach deplecja komórek B u pacjenta z nowotworem wynosi przynajmniej 75% a bardziej korzystnie 80%, 85%, 90%, 95%, 99% a nawet 100% podstawowego poziomu przed leczeniem.
Do leczenia ludzkiej choroby autoimmunologicznej może być pożądane modulowanie rozmiaru deplecji komórek B, w zależności od choroby i/lub ciężkości stanu określonego pacjenta, przez dostosowanie dawki przeciwciała wiążącego CD20. Zatem, deplecja komórek B może, ale nie musi być całkowita. Całkowita deplecja komórek B może być pożądana w leczeniu początkowym, ale w następnych leczeniach dawka może być dostosowana do osiągnięcia tylko częściowej deplecji. W jednym z wykonań deplecja komórek B wynosi 20%, tj. 80% lub mniej komórek B CD20-dodatnich pozostaje w porównaniu do poziomu podstawowego sprzed leczenia. W innych wykonaniach deplecja komórek B wynosi 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% lub więcej. Korzystnie, deplecja komórek B jest
PL 212 899 B1 wystarczająca do zatrzymania progresji choroby, bardziej korzystnie do złagodzenia oznak lub objawów określonej choroby podczas leczenia, a nawet bardziej korzystnie do wyleczenia choroby.
Wynalazek dostarcza także dwuspecyficznych przeciwciał wiążących CD20, w których jedno ramię przeciwciała posiada humanizowany łańcuch H i L z humanizowanego przeciwciała z wynalazku wiążącego CD20 a drugie ramię posiada region V wiążący specyficznie drugi antygen. W specyficznych wykonaniach drugim antygenem jest wybrany z grupy składającej się z CD3, CD64, CD32A, CD16, NKG2D lub inne ligandy aktywujące NK.
W porównaniu z Rituxan (rituximab), v16 wykazuje około 2 do 5 razy zwiększoną aktywność ADCC, ~3-4 razy obniżoną CDC niż Rituxan.
Wytwarzanie przeciwciał
Przeciwciała monoklonalne
Przeciwciała monoklonalne mogą być wytworzone przy użyciu sposobu z zastosowaniem hybrydomy, opisanym przez Kohler i wsp., Nature, 256:495 (1975), Iub mogą być wytworzone przy użyciu sposobów z zastosowaniem technik rekombinowanego DNA (Patent USA Nr 4816567).
W sposobie z zastosowaniem hybrydomy mysi lub inny odpowiedni gospodarz zwierzęcy, taki jak chomik, jest immunizowany, jak opisano powyżej w celu otrzymania limfocytów, które wytwarzają lub są zdolne do produkcji przeciwciał, które będą się specyficznie wiązać do białka użytego do immunizacji. Alternatywnie, limfocyty mogą być immunizowane in vitro. Po immunizacji limfocyty są izolowane i następnie poddane fuzji z linią komórkową szpiczaka przy użyciu dogodnego środka fuzyjnego, takiego jak glikol polietylenowy, w celu utworzenia komórki hybrydomy (Goding, Monoclonal Antibodies:Principles and Practice, str. 59-103 (Academic Press, 1986)).
Tak przygotowane komórki hybrydomy są wysiewane i hodowane w odpowiedniej pożywce hodowlanej, która to pożywka korzystnie zawiera jedną lub więcej substancji, które hamują wzrost lub przeżycie rodzicielskich komórek szpiczaka, które nie uległy fuzji (także określane jak parter fuzyjny). Na przykład rodzicielskie komórki szpiczaka nie posiadają enzymu fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej (HGPRT lub HPRT), selekcyjna pożywka hodowlana typowo będzie zawierać hipoksantynę, aminopterynę i tymidynę (pożywka HAT), które to substancje zapobiegają wzrostowi komórek nie posiadających HGPRT.
Komórki szpiczaka, jako korzystny partner fuzyjny są tymi, które wydajnie ulegają fuzji, sprzyjają stabilnemu wytwarzaniu przeciwciał na wysokim poziomie przez wyselekcjonowane komórki wytwarzające przeciwciała i są wrażliwe na pożywkę selekcyjną, która selekcjonuje przeciwko komórkom rodzicielskim, które nie uległy fuzji. Korzystne linie komórkowe szpiczaka są mysimi liniami szpiczaka, takimi jak te otrzymane z mysich nowotworów MOPC-21 i MPC-11 dostępnych z Centrum Dystrybucji Komórek w Salk Institute, San Diego, Kalifornia, USA, oraz SP-2 i pochodne, np. komórki X63-Ag8-653 dostępne z American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA. Opisano również zastosowanie linii komórkowych ludzkiego szpiczaka lub linii komórkowych ludzko-mysiego heteroszpiczaka do produkcji ludzkich przeciwciał monoklonalnych (Kozbor, J. Inzmunol., 133:3001 (1984); oraz Brodeur i wsp., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, str. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
Pożywka hodowlana, w której komórki hybrydomy są hodowane jest oznaczana na produkcję przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko antygenowi. Korzystnie specyficzność wiązania przeciwciał monoklonalnych wytworzonych przez komórki hybrydomy jest oznaczana przez immunoprecypitację lub przez oznaczenie wiązania in vitro, takie jak radioimmunooznaczenie (RIA, ang. radioimmunoassay) lub oznaczenie immunoabsorpcji enzymozależnej (ELISA).
Powinowactwo wiązania przeciwciała monoklonalnego może, na przykład, być oznaczone przez analizę Scatchard'a opisaną w Munson i wsp., Anal. Biochem., 107:220 (1980).
Jeżeli zostaną zidentyfikowane komórki hybrydomy wytwarzające przeciwciała o pożądanej specyficzności, powinowactwie i/lub aktywności, klony mogą być subklonowane przez procedury z użyciem seryjnych rozcieńczeń i hodowane z użyciem standardowych sposobów (Goaing, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, str. 59-103 (Academic Press, 1986)). Odpowiednie pożywki hodowlane stosowane do tego celu obejmują, na przykład pożywkę D-MEM lub RPMI-1640. Dodatkowo, komórki hybrydomy mogą być hodowane in vivo jako guzy puchliny brzusznej w zwierzęciu, np. przez śródotrzewnowe wstrzyknięcie komórek do myszy.
Przeciwciała monoklonalne wydzielone przez subklony są w dogodny sposób oddzielane od pożywki hodowlanej, płynu puchliny brzusznej lub surowicy przy użyciu konwencjonalnych procedur oczyszczania przeciwciał, takich jak, na przykład, chromatografia powinowactwa (np. przy użyciu białka A
PL 212 899 B1 lub złoża białko G-Sepharose) lub chromatografia jonowymienna, chromatografia na hydroksyapatycie, chromatografia żelowa, dializa, itp.
DNA kodujący przeciwciała monoklonalne jest z łatwością izolowany i sekwencjonowany przy użyciu konwencjonalnych procedur (np., przy użyciu sond oligonukleotydowych, które są zdolne do specyficznego wiązania się z genów kodujących ciężkie i lekkie łańcuchy przeciwciał mysich). Komórki hybrydomy służą jako preferowane źródło takiego DNA. Raz wyizolowany DNA może być umieszczony w wektorach ekspresyjnych, które są transfekowane do komórek gospodarza, takich jak komórki E. coli, małpie komórki COS, komórki z jajnika chomika chińskiego (CHO) lub komórki szpiczaka, które poza tym nie produkują innego białka będącego przeciwciałem, w celu uzyskania syntezy przeciwciał monoklonalnych w rekombinowanych komórkach gospodarza. Artykuły przeglądowe dotyczące rekombinowanej ekspresji w bakteriach DNA kodującego przeciwciało obejmują Skerra i wsp., Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993) oraz Ptockthun, Immunol. Revs., 130:151-188 (1992).
W dalszym wykonaniu, przeciwciała monoklonalne lub fragmenty przeciwciał mogą być wyizolowane z fagowych bibliotek przeciwciał wytworzonych przy użyciu technik opisanych w McCafferty i wsp. Nature, 348:522-554 (1990). Clackson i wsp., Nature, 352:624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991) opisują izolację odpowiednio mysich i ludzkich przeciwciał przy użyciu bibliotek fagowych. Kolejne publikacje opisują wytwarzanie ludzkich przeciwciał o wysokim powinowactwie (w zakresie nM) przez tasowanie łańcucha (Marks i wsp., Bio/Technology, 10:779-783 (1992)), jak również kombinatoryczną infekcję oraz rekombinację in vivo jako strategię do konstruowania bardzo dużych bibliotek fagowych (Waterhouse i wsp., Nuc. Acids. Res., 21:2265-2266 (1993)). Zatem, te techniki są wykonalnymi alternatywami do tradycyjnych technik otrzymywania przeciwciał monoklonalnych z użyciem hybrydomy do izolacji przeciwciał monoklonalnych.
DNA, który koduje przeciwciało może być zmodyfikowane do wytwarzania chimerycznych lub fuzyjnych polipeptydów będących przeciwciałami, na przykład, przez podstawienie stałej sekwencji domeny ludzkiego ciężkiego łańcucha i lekkiego łańcucha (CH i CL) do homologicznych sekwencji mysich (Patent USA Nr 4816567; oraz Morrison, i wsp., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)), lub przez fuzję immunoglobuliny kodującej sekwencję, z całością lub częścią sekwencji kodującej polipeptyd nie będącym przeciwciałem (polipetyd heterologiczny). Sekwencje polipeptydu nie będącego przeciwciałem mogą być podstawione do domen stałych przeciwciała, lub mogą być podstawione do domen zmiennych jednego z miejsc przeciwciała wiążących antygen w celu otrzymania chimerycznego przeciwciała dwuwartościowego posiadającego jedno miejsce wiążące antygen mające specyficzność do jednego antygenu a drugie miejsce wiązania antygenu mające specyficzność do innego antygenu.
Przeciwciała humanizowane
W tej dziedzinie opisano sposoby na humanizowanie przeciwciał innych niż Iudzkie. Korzystnie, humanizowane przeciwciało posiada jedną lub więcej reszt aminoxwasowych wprowadzonych do niego ze źródła, które jest inne niż ludzkie. Reszty aminokwasów innych niż ludzkie są często określane jako reszty importowane, które są typowo wzięte z importowanej domeny zmiennej. Humanizowanie może być w szczególności wykonane przy użyciu sposobu Wintera i współpracowników (Jones i wsp., Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann i wsp., Nature, 332:323-327 (1988); Vernoeyen i wsp., Science, 239:1534-1536 (1988)) opartego na podstawieniu sekwencji regionu zmiennego do odpowiadających im sekwencji ludzkiego przeciwciała. Stosownie do tego, takie humanizowane przeciwciała są przeciwciałami chimerycznymi (Patent USA Nr 4816567), w których zasadniczo mniej niż nienaruszona ludzka domena zmienna została podstawiona przez odpowiadającą jej sekwencją z gatunków innych niż ludzki. W praktyce, humanizowane przeciwciała są typowo ludzkimi przeciwciałami, w których niektóre reszty regionu hiperzmiennego i ewentualnie niektóre reszty regionu FR są podstawione resztami analogicznych miejsc w przeciwciałach gryzoni.
Wybór ludzkich domen zmiennych, zarówno lekkiego, jak i ciężkiego łańcucha, które mają być użyte to tworzenia przeciwciał humanizowanych jest bardzo ważny do zmniejszenia antygenowości oraz odpowiedzi HAMA (ludzkie przeciwciało anty-mysie), jeżeli zamierza się użycie przeciwciała do celów terapeutycznych u człowieka. Według tak zwanego sposobu najlepszego dopasowania, sekwencja regionu zmiennego przeciwciała gryzonia jest przeszukiwana przeciwko całej bibliotece znanych sekwencji ludzkich domen zmiennych. Sekwencja ludzkiej domeny V, która jest najbliższa tej z gryzonia jest identyfikowana i ludzki region szkieletowy (FR) w niej jest wybierany do przeciwciała humanizowanego (Sims i wsp., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia wsp., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)). Inny sposób wykorzystuje określony region szkieletowy otrzymany z sekwencji konsensusowej
PL 212 899 B1 wszystkich ludzkich przeciwciał określonej podgrupy lekkich lub ciężkich łańcuchów. Ten sam szkielet może być użyty do kilku różnych przeciwciał humanizowanych (Carter i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta i wsp., J. Immunol, 151:2623 (1993)).
Ważne jest ponadto, aby przeciwciało było humanizowane z zachowaniem dużego powinowactwa wiązania antygenu i innych korzystnych właściwości biologicznych. W celu osiągnięcia tego celu, według korzystnego sposobu, humanizowane przeciwciała są przygotowane przez proces analizy sekwencji wyjściowych i różnych konceptualistycznych produktów humanizowanych przy użyciu trójwymiarowych modeli wyjściowych oraz humanizowanych sekwencji. Trójwymiarowe modele immunoglobulin są powszechnie dostępnie i są znane specjalistom w tej dziedzinie. Dostępne są programy komputerowe, które ilustrują i wyświetlają przypuszczalne trójwymiarowe struktury konformacyjne wybranych kandydatów sekwencji immunoglobulinowych. Badanie tych obrazów pozwala na analizę przypuszczalnej roli reszt w funkcjonowaniu kandydata sekwencji immunoglobulinowej, tj. analizę reszt, które wypływają na zdolności kandydata immunoglobuliny do wiązania jego antygenu. W ten sposób mogą być wybrane reszty FR i połączone z sekwencjami biorcy i sekwencjami importowanymi tak, że osiągana jest odpowiednia cecha przeciwciała, taka jak zwiększone powinowactwo do docelowego(ych) antygenu(ów). W ogólności, reszty regionu hiperzmiennego są bezpośrednio i zasadniczo najbardziej zaangażowane we wpływie na wiązanie antygenu.
Przeciwciałem humanizowanym może być fragment przeciwciała Fab, który opcjonalnie jest połączony z jednym lub większą ilością środków cytotoksycznych w celu wytworzenia immunokoniugatu. Alternatywnie, humanizowanym przeciwciałem może być przeciwciało o pełnej długości, takie jak przeciwciało IgG o pełnej długości.
Ludzkie przeciwciała oraz technika prezentacji na fagach
Alternatywą do humanizacji jest wytworzenie ludzkich przeciwciał. Na przykład, teraz możliwe jest otrzymanie transgenicznych zwierząt (np. myszy), które są zdolne, po immunizacji do wytworzenia pełnego zestawu ludzkich przeciwciał przy braku wytwarzania endogennych immunoglobulin. Na przykład, opisane zostało, że homozygotyczna delecja genu kodującego region łączący ciężkiego łańcucha przeciwciała (JH) w mutantach chimerycznych oraz mutantach w linii płciowej powoduje całkowite zahamowanie wytwarzania endogennego przeciwciała. Transfer zestawu genów immunoglobolinowych z ludzkiej linii płciowej to takiego mutanta w linii płciowej spowoduje wytwarzanie ludzkich przeciwciał pod wpływem antygenu. Zobacz, np. Jakobovits i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 2551 (1993); Jakobovits i wsp., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggemann i wsp., Year in Immuno., 7:33 (1993) ; Patenty USA Nr 5545806,5569825, 5591669 (wszystkie dla GenPharm); 5545807; oraz WO 97/17852.
Alternatywnie, technika prezentacji na fagu (McCafferty i wsp., Nature 348:552-553 [1990]) może być użyta do wytworzenia ludzkich przeciwciał in vitro, z zestawów genu domeny zmiennej (V) immunoglobuliny otrzymanych z nieimmunizowanych dawców. Według tej techniki, geny domeny V przeciwciała są klonowane w ramce odczytu do głównego lub pomniejszego genu białka otoczki bakteriofaga nitkowatego, takiego jak M13 lub fd oraz prezentowane jako funkcjonalne fragmenty przeciwciał na powierzchni cząsteczki faga. Ponieważ cząsteczka nitkowata posiada genom faga w postaci kopii jednoniciowego DNA, selekcje oparte na właściwościach funkcjonalnych skutkują również w selekcji genu kodującego przeciwciało wykazujące te właściwości. Zatem, fag naśladuje pewne właściwości komórki B. Prezentacja na fagu może być wykonana w różnych odmianach, zebranych, np., w Johnson, Kevin S. i Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993). Do prezentacji na fagu może być użyte kilka źródeł segmentów genu V. Clackson i wsp., Nature, 352:624-628 (1991) wyizolował zróżnicowaną macierz przeciwciał anty-oksazolon z małej losowej kombinatorycznej biblioteki genów V otrzymanych ze śledzion immunizowanych myszy. Skonstruowany może być zestaw genów V z immunizowanych ludzkich dawców, a przeciwciała do zróżnicowanego szeregu antygenów (włączając auto-antygeny) mogą być wyizolowane według technik opisanych przez Marks i wsp., J. Mol. Biol. 222:581-597 lub Griffith i wsp., EMBO J. 12:725-734 (1993). Zobacz, także, Patenty USA Nr 5565332 oraz 5573905.
Jak przedyskutowano powyżej, przeciwciała ludzkie mogą być wytworzone przez komórki B aktywowane in vitro (zobacz Patenty USA 5567610 oraz 5229275).
Fragmenty przeciwciał
W pewnych okolicznościach korzystne jest raczej używanie fragmentów przeciwciał niż całych przeciwciał. Mniejszy rozmiar fragmentów pozwala na ich szybszy zanik oraz może prowadzić do polepszonego dostępu do guzów litych.
PL 212 899 B1
Do otrzymywania fragmentów przeciwciał opracowano różne techniki. Tradycyjnie, te fragmenty były otrzymywane przez proteolityczne cięcie nienaruszonych przeciwciał (zobacz, np., Morimoto i wsp., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992); oraz Brennan i wsp., Science, 229:81 (1985)). Jednakże, te fragmenty mogą być teraz produkowane bezpośrednio przez rekombinowane komórki gospodarza. Fragmenty przeciwciał Fab, Fv oraz ScFv mogą wszystkie ulegać ekspresji i być wydzielane z E. coli, zatem pozwalać na łatwe wytwarzanie dużych ilości tych fragmentów. Fragmenty przeciwciał mogą być wyizolowane z fagowych bibliotek przeciwciał przedyskutowanych powyżej, Alternatywnie, fragmenty Fab'-SH mogą być odzyskane bezpośrednio z E. coli i być chemicznie sprzężone z fragmentami F(ab')2 (Carter i wsp., Bio/Technology 10:163-167 (1992)). Według innego podejścia fragmenty F(ab')2 mogą być wyizolowane bezpośrednio z hodowli rekombinowanych komórek gospodarza. Fragmenty Fab i F(ab')2 ze zwiększonych czasem połowicznego rozpadu in vivo, zawierające reszty epitopu wiążące się do receptora ratunkowego (ang. salvage receptor, FcR) są opisane w Patencie USA Nr 5869046. Inne techniki wytwarzania fragmentów przeciwciał będą oczywiste dla specjalisty w tej dziedzinie. W innych wykonaniach wybranym przeciwciałem jest fragment Fv pojedynczego łańcucha (scFv). Zobacz WO 93/16185; Patent USA Nr 5571894; i Patent USA Nr 5587458. Fv i sFv są jedynymi rodzajami z nienaruszonymi miejscami wiązania, które są pozbawione regionów stałych; zatem są one odpowiednie podczas podawania in vivo ze względu na zmniejszone niespecyficzne wiązanie. Białka fuzyjne sFv mogą być skonstruowane tak, aby otrzymać fuzję białka efektorowego zarówno na końcu aminowym jak i karboksylowym sFv. Zobacz Antibody Engineering, ed. Borrebaeck, powyżej. Fragment przeciwciała może być także liniowym przeciwciałem np. jak opisano w Patencie USA Nr 5641870 na przykład. Takie fragmenty liniowego przeciwciała mogą być jednospecyficzne lub dwuspecyficzne.
Przeciwciała dwuspecyficzne
Przeciwciałami dwuspecyficznymi są przeciwciała, które posiadają specyficzność, wiązania do przynajmniej dwóch różnych epitopów. Przykładowe przeciwciała dwuspecyficzne mogą wiązać dwa różne epitopy białka CD20. Inne takie przeciwciała mogą mieć kombinację miejsca wiązania CD20 z miejscem wiązania innego białka. Alternatywnie, ramię anty-CD20 może być skombinowane z ramieniem, które wiąże się do cząsteczki aktywującej na leukocycie, takiej jak cząsteczka receptora komórki T (np. CD3) lub receptora Fc dla IgG (FcyR), takiego jak FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) i FcyRIII (CD16) lub NKG2D lub innego liganda aktywującego komórkę NK tak, aby zogniskować i zlokalizować komórkowe mechanizmy obronne na komórkach z ekspresją CD20. Te przeciwciała posiadają ramię wiążące CD20 oraz ramię, które wiąże środek cytotoksyczny (np. saporynę, anty-interferon-α, alkaloid barwinka, łańcuch rycyny A, metotreksat lub hapten izotopu radioaktywnego. Przeciwciała dwuspecyficzne mogą być przygotowane jako przeciwciała o pełnej długości lub fragmenty przeciwciał (np. dwuspecyficzne przeciwciała F(ab')2)·
WO 96/16673 opisuje dwuspecyficzne przeciwciało anty-ErbB2/anty-FcyRIII a patent USA Nr 5837234 ujawnia dwuspecyficzne przeciwciało anty-ErbB2/anty-FcyRI. Dwuspecyficzne przeciwciało anty-ErbB2/anty-Fca jest pokazane w WO98/02463. Patent USA Nr 5821337 demonstruje dwuspecyficzne przeciwciało anty-ErbB2/anty-CD3.
Sposoby na otrzymywanie przeciwciał dwuspecyficznych są znane w tej dziedzinie. Tradycyjne wytwarzanie przeciwciał o pełnej długości jest oparte na koekspresji dwóch par łańcuch ciężki-łańcuch lekki immonoglobuliny, gdzie dwa łańcuchy mają różne specyficzności (Millstein i wsp., Nature, 305:537-539 (1983)). Z powodu losowego łączenia lekkich i ciężkich łańcuchów immunoglobulinowych te hybrydomy (kwadromy) wytwarzają mieszaninę potencjalnych 10 różnych cząsteczek przeciwciał, z których tylko jedna posiada właściwą strukturę dwuspecyficzną. Oczyszczanie właściwej cząsteczki, które jest zazwyczaj wykonywane przez etapy chromatografii powinowactwa, jest raczej niewygodne, a wydajności produktu są niskie. Podobne procedury są ujawnione w WO 93/08829, oraz w Traunecker i wsp., EMBO J., 10:3655-3659 (1991).
Według innego podejścia, domeny zmienne przeciwciała z pożądanymi specyficznościami wiązania (miejsca wiązania przeciwciało-antygen) są poddane fuzji z sekwencjami domen stałych przeciwciała. Korzystnie, fuzja jest z domeną stałą łańcucha ciężkiego Ig, zawierającą przynajmniej część połączenia zawiasowego, regiony CH2 i CH3. Korzystne jest posiadanie pierwszego stałego regionu łańcucha ciężkiego (CH1) zawierającego miejsce konieczne do wiązania łańcucha lekkiego obecnego przynajmniej w jednej fuzji. Cząsteczki DNA kodujące fuzje łańcucha ciężkiego immunoglobuliny oraz, jeśli pożądane, łańcucha lekkiego immunoglobuliny, są wprowadzone do odrębnych wektorów ekspresyjnych i są poddane kotransfekcji do odpowiednich komórek gospodarza. To dostarcza większej
PL 212 899 B1 elastyczności w dopasowywaniu wzajemnych proporcji trzech fragmentów polipeptydowych w wykonaniach, w których nierówne proporcje łańcuchów polipeptydowych stosowane w konstrukcji dostarczają optymalnej wydajności pożądanego przeciwciała dwuspecyficznego. Możliwe jest jednak wprowadzenie sekwencji kodujących dwa lub wszystkie trzy łańcuchy polipeptydowe do pojedynczego wektora ekspresyjnego, jeżeli ekspresja przynajmniej dwóch łańcuchów polipeptydowych w równych proporcjach skutkuje wysokimi wydajnościami Iub kiedy proporcje nie mają znaczącego wypływu na wydajność pożądanej kombinacji łańcuchów.
W korzystnym wykonaniu tego podejścia, przeciwciała dwuspecyficzne składają się z łańcucha ciężkiego hybrydowej immunoglobuliny dostarczającego pierwszej specyficzności wiązania w jednym ramieniu oraz pary łańcuch ciężki-łańcuch lekki hybrydowej immunoglobuliny (dostarczającej drugą specyficzność wiązania) i drugim ramieniu. Stwierdzono, że ta asymetryczna struktura ułatwia oddzielenie pożądanego dwuspecyficznego składnika od niechcianych kombinacji łańcuchów immunoglobulinowych, jako że obecność łańcucha lekkiego immunoglobuliny w tylko połowie dwuspecyficznej cząsteczki dostarcza łatwego sposobu oddzielania. To podejście jest ujawnione w WO 94/04690. Dla dalszych szczegółów wytwarzania przeciwciał dwuspecyficznych zobacz, na przykład, Suresh i wsp., Methods in Enzymology, 121:210 (1986).
Według innego podejścia opisanego w Patencie USA Nr 5731168, miejsce oddziaływania pomiędzy parą cząsteczek przeciwciała może być projektowane w celu zmaksymalizowania procentu heterodimerów, które są odzyskiwane z hodowli komórek rekombinowanych. Korzystne miejsce oddziaływania zawiera przynajmniej część domeny CH3. W tym sposobie jeden lub większa ilość małych łańcuchów bocznych aminokwasów z miejsca oddziaływania pierwszej cząsteczki przeciwciała jest zastąpionych większymi łańcuchami bocznymi (np. tyrozyny lub tryptofanu). Kompensujące wgłębienia identycznego lub podobnego rozmiaru są stworzone w miejscu oddziaływania drugiej cząsteczki przeciwciała przez zastąpienie dużych łańcuchów bocznych aminokwasów mniejszymi (np. alaniny lub treoniny). Dostarcza to mechanizmu zwiększającego wydajność powstawania heterodimeru nad innymi niechcianymi produktami końcowymi, takimi jak homodimery.
Przeciwciała dwuspecyficzne obejmują przeciwciała związane krzyżowo lub heterokoniugaty. Na przykład, jedno z przeciwciał w heterokoniugacie może być sprzężone z awidyną, inne z biotyną. Takie przeciwciała, na przykład, były zaproponowane do nakierowywania komórek układu immunologicznego na niechciane komórki (Pacent USA Nr 4676980) oraz do leczenia infekcji HIV (WO 91/00360, WO 92/200373 i EP 03089). Przeciwciała w postaci heterokoniugatu mogą być wytworzone przy zastosowaniu dogodnych sposobów wiązania krzyżowego. Odpowiednie środki tworzące wiązania krzyżowe są dobrze znane w tej dziedzinie i są ujawnione w Patencie USA Nr 4676980, wraz z szeregiem technik tworzenia wiązań krzyżowych.
Techniki do wytwarzania przeciwciał dwuspecyficznych z fragmentów przeciwciał także zostały opisane w literaturze. Na przykład przeciwciała dwuspecyficzne mogą być przygotowane przy użyciu wiązania chemicznego. Brennan i wsp., Science, 229:81 (1985) opisuje procedurę, w której nienaruszone przeciwciała są przecinane proteolitycznie w celu wytworzenia fragmentów F(ab')2. Te fragmenty są redukowane w obecności środka kompleksującego ditiole, arsenianu sodu, w celu stabilizowania sąsiadujących ditioli i zapobiegania tworzenia międzycząsteczkowego dwusiarczku. Otrzymane fragmenty Fab' są następnie przekształcane do pochodnych kwasu tionitrobenzoesowego (TNB). Jedna z pochodnych Fab'-TNB jest następnie przekształcana do Fab'-tiol przez redukcję merkaptoetyloaminą i jest mieszana z równomolową ilością innej pochodnej Fab'-TNB w celu utworzenia przeciwciała dwuspecyficznego. Wytworzone przeciwciała dwuspecyficzne mogą być zastosowane jako środki do selektywnej immobilizacji enzymów.
Niedawny postęp ułatwił bezpośrednie odzyskiwanie fragmentów Fab'-SH z E. coli, które mogą być chemicznie sprzężone w celu utworzenia przeciwciał dwuspecyficznych. Shalaby i wsp., J. Exp. Med., 175:217-225 (1992) opisuje wytwarzanie cząsteczki F(ab')2 całkowicie humanizowanego przeciwciała dwuspecyficznego. Każdy z fragmentów Fab' był oddzielnie wydzielany z E. coli i poddany ukierunkowanemu chemicznemu sprzęganiu in vitro w celu utworzenia przeciwciała dwuspecyficznego. Przeciwciało dwuspecyficzne tak utworzone było zdolne do wiązania się do komórek z nadekspresją receptora ErbB2 i normalnych ludzkich komórek T, jak również do włączania aktywności litycznej ludzkich limfocytów cytotoksycznych przeciwko celom w postaci ludzkiego nowotworu piersi.
Opisane zostały również różne techniki otrzymywania i izolacji fragmentów przeciwciała dwuspecyficznego bezpośrednio z hodowli komórek rekombinowanych. Na przykład przeciwciała dwuspecyficzne zostały wytworzone przy użyciu suwaków leucynowych. Kostelny i wsp., J. Immunol.,
PL 212 899 B1
148(5):1547-1553 (1992). Peptydy suwaka leucynowego z białek Fos i Jun zostały połączone do fragmentów Fab' dwóch różnych przeciwciał przez fuzję genów. Homodimery przeciwciał zostały zredukowane w regionie zawiasowym w celu utworzenia monomerów a następnie ponownie utlenione w celu utworzenia heterodimerów przeciwciał. Ten sposób może być także wykorzystany do otrzymywania homodimerów przeciwciał. Technologia dwuciał opisana przez Hollinger i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993) dostarczyła alternatywnego mechanizmu otrzymywania fragmentów przeciwciała dwuspecyficznego. Fragmenty obejmują VH przyłączone do VL przez łącznik, który jest zbyt krótki aby pozwolić na parowanie pomiędzy dwoma domenami na tym samym łańcuchu. Stosownie do tego, domeny VH i VL jednego fragmentu są zmuszone do parowania z komplementarnymi domenami VL i VH innego fragmentu, przez to tworząc dwa miejsca wiązania antygenu. Doniesiono również o innej strategii otrzymywania fragmentów przeciwciał dwuspecyficznych przez użycie jednołańcuchowych dimerów Fv (sFv). Zobacz Gruber i wsp., J. Immunol., 152:5368 (1994).
Rozważane są również przeciwciała z więcej niż dwoma wartościami. Na przykład, mogą być przygotowane przeciwciała trójspecyficzne. Tutt i wsp. J. Immunol. 147:60(1991).
Przeciwciała wielowartościowe
Przeciwciało wielowartościowe może być przyswojone i/lub katabolizowane) szybciej niż przeciwciało dwuwartościowe przez komórkę z ekspresją antygenu, do którego wiążą się przeciwciała. Przeciwciała z niniejszego wynalazku mogą być przeciwciałami wielowartościowymi (które są inne niż klasa IgM) z trzema lub większą ilością miejsc wiążących antygen (np. przeciwciała czterowartościowe), które mogą być z łatwością otrzymane przez rekombinowaną ekspresję kwasu nukleinowego kodującego łańcuchy polipeptydowe przeciwciała. Przeciwciało wielowartościowe może zawierać domenę dimeryzacji i trzy lub więcej miejsc wiązania antygenu. Korzystna domena dimeryzacji zawiera (lub składa się z) region Fc lub region zawiasowy. W tym wariancie przeciwciało będzie zawierać region Fc oraz trzy lub większą liczbę miejsc wiązania antygenu położonych na końcu aminowym w stosunku do regionu Fc. Korzystne przeciwciało wielowartościowe tutaj zawiera (lub składa się z) trzy do około ośmiu, ale korzystnie cztery, miejsc wiązania antygenu. Przeciwciało wielowartościowe zawiera przynajmniej jeden łańcuch polipeptydowy (a korzystnie dwa łańcuchy polipeptydowe), w którym łańcuch(y) polipeptydowy(e) zawierają dwie lub większą ilość domen zmiennych. Na przykład, łańcuch(y) polipeptydowy(e) mogą zawierać VD1-(X1)n-VD2(X2)n-Fc, w którym VD1 jest pierwszą domeną zmienną, VD2 jest drugą domeną zmienną, Fc jest jednym łańcuchem polipeptydowym regionu Fc, X1 i X2 reprezentują aminokwas lub polipeptyd, a n jest 0 lub 1. Na przykład łańcuch(y) polipeptydowy(e) może(gą) zawierać: VH-CH1-elastyczny łącznik-VH-CH1-region Fc łańcucha; lub VH-CH1-VH-CH1-region Fc łańcucha. Przeciwciało wielowartościowe tutaj korzystnie zawiera tutaj przynajmniej dwie (a korzystnie cztery) polipeptydy domeny zmiennej łańcucha lekkiego. Przeciwciało wielowartościowe tutaj może, na przykład, zawierać od około dwóch do około ośmiu polipeptydów domeny zmiennej łańcucha lekkiego. Polipeptydy domeny zmiennej łańcucha lekkiego rozważane tutaj mogą zawierać domenę zmienną łańcucha lekkiego oraz, opcjonalnie, zawierać ponadto domenę CL.
Inne modyfikacje sekwencji aminokwasowej
Rozważana(e) jest(są) również modyfikacja(e) sekwencji aminokwasowej opisanych tutaj przeciwciał wiążących CD20. Na przykład, pożądane może być ulepszenie powinowactwa wiązania i/lub innych biologicznych właściwości przeciwciała. Warianty sekwencji aminokwasowej przeciwciała anty-CD20 są przygotowane przez wprowadzenie odpowiednich zmian nukleotydów w kwasie nukleinowym przeciwciała anty-CD20, lub przez syntezę peptydu. Takie modyfikacje obejmują, na przykład delecje z, i/lub insercje, do i/lub podstawienia reszt w sekwencjach aminokwasowych przeciwciała anty-CD20. Dowolna kombinacja delecji, insercji i podstawień jest wykonana w celu osiągnięcia w ostatecznym konstrukcje po to, aby ostateczny konstrukt posiadał pożądane cechy. Zmiany aminokwasowe mogą także zmieniać procesy procesy posttranslacyjne przeciwciała anty-CD20, takie jak zmieniająca się liczba lub pozycja miejsc glikozylacji.
Użyteczny sposób do identyfikacji pewnych reszt lub regionów przeciwciała anty-CD20, które są korzystnymi miejscami do mutagenezy jest nazywany mutagenezą przez skanowanie alaniną jak opisano przez Cunningham i Wells w Science, 244:1081-1085 (1989). Tutaj jest zidentyfikowana reszta lub grupa docelowych reszt (np., reszt obdarzonych ładunkiem, takich jak arg, asp, his, Iys i glu) i zastąpiona przez neutralny lub ujemnie naładowany aminokwas (najbardziej korzystnie przez alaninę lub polialaninę) aby wpłynąć na oddziaływanie aminokwasów z antygenem CD20. Te miejsca aminokwasowe pokazujące funkcjonalną wrażliwość na podstawienia są następnie ulepszone przez
PL 212 899 B1 wprowadzenie dalszych lub innych wariantów w, lub do, miejscach podstawień. Zatem, dopóki miejsce do prowadzania wariancji w sekwencji aminokwasowej jest wstępnie oznaczone, dopóty charakter mutacji per se nie musi być wstępnie oznaczony. Na przykład, w celu analizy wpływu mutacji w danym miejscu, w docelowym kodonie lub regionie jest wykonywane skanowanie alaniną lub mutageneza losowa a ulegające ekspresji warianty przeciwciała anty-CD20 są przeszukiwane na pożądaną aktywność.
Insercje sekwencji aminokwasowej obejmują amino- i/lub karboksy-końcowe fuzje, których długość waha się w zakresie od jednej reszty do polipeptydów zawierających sto lub więcej reszt, jak również insercje wewnątrz sekwencji pojedynczej lub wielu reszt aminokwasowych. Przykłady końcowych insercji obejmują przeciwciało anty-CD20 z N-końcową resztą metioniny lub przeciwciało poddane fuzji z polipeptydem cytotoksycznym. Inne warianty insercyjne cząsteczki przeciwciała anty-CD20 obejmują fuzję końca N lub C przeciwciała anty-CD20 do enzymu (np. ADEPT) lub polipeptydu, który zwiększa czas połowicznego zaniku przeciwciała w surowicy.
Innym typem wariantu jest wariant posiadający podstawienie aminokwasowe. Te warianty posiadają przynajmniej jedną resztę aminokwasową w cząsteczce przeciwciała anty-CD20 zastąpioną przez inną resztę. Miejsca największego zainteresowania pod względem mutagenezy prowadzącej do podstawienia obejmują regiony hiperzmienne, ale rozważane są również zmiany FR. Postawienia konserwatywne są pokazane w Tabeli poniżej pod nagłówkiem korzystne podstawienia. Jeżeli takie podstawienia powodują zmianę aktywności biologicznej, wtedy mogą być wprowadzone bardziej znaczące zmiany, określone w przykładowych podstawieniach w Tabeli, lub jak dalej opisano poniżej w odniesieniu do klas aminokwasów a produkty przeszukane.
Tabela podstawień aminokwasowych
Wyjściowa reszta Przykładowe postawienia Korzystne postawienia
1 2 3
Ala (A) val; leu; ile val
Arg (R) Iys; gln; asn lys
Asn(N) gln; his; asp; Iys; arg gln
Asp(D) glu; asn glu
Cys(C) ser; ala ser
Gln (Q) asn; glu asn
Glu (E) asp; gln asp
Gly (G) ala ala
His (H) asn; gln; lys; arg arg
Ile (I) leu; val; met; ala; phe; norleucyna leu
Leu (L) norleucyna; ile; val; met; ala; phe ile
Lys (K) arg; gln; asn arg
Met (M) leu; phe; ile leu
Phe (F) leu; val; ile; ala; tyr tyr
Pro (P) ala ala
Ser (S) thr thr
Thr (T) ser ser
Trp (W) tyr; phe tyr
Tyr (Y) trp; phe; thr; ser phe
Val (V) ile; leu; met; phe; ala; norleucyna leu
PL 212 899 B1
Istotne modyfikacje w biologicznych właściwościach przeciwciała są uzyskane przez selekcję postawień, których efekt znacząco różni się pod względem zachowania(a) struktury szkieletu peptydowego w miejscu postawienia, na przykład jako konformacji kartki lub helisy, (b) ładunku lub hydrofobowości cząsteczki w miejscu docelowym lub (c) rozmiaru łańcucha bocznego. Naturalnie występujące reszty są podzielone na grupy w oparciu o wspólne właściwości łańcucha bocznego:
1) hydrofobowe: norleucyna, met, ala, val, leu, ile;
2) obojętne hydrofilowe: cys, ser, thr;
3) kwasowe: asp, glu;
4) zasadowe: asn, gln, his, lys, arg;
5) reszty, które wpływają na orientację łańcucha: gly, pro; oraz
6) aromatyczne: trp, tyr, phe.
Niekonserwatywne postawienia będą pozwalać na wymianę członka jednej z tych klas na członka innej klasy.
Dowolna reszta cysteiny niezaangażowana w utrzymywanie odpowiedniej konformacji przeciwciała anty-CD20 także może być podstawiona, ogólnie przez serynę, w celu polepszenia oksydacyjnej stabilności cząsteczki i zapobieżenia tworzeniu się niewłaściwych wiązań krzyżowych. Odwrotnie, wiązanie(a) cysteinowe mogą być dodane do przeciwciała w celu polepszenia jego stabilności (szczególnie tam, gdzie przeciwciało jest fragmentem przeciwciała, takim jak fragment Fv).
Szczególnie korzystny typ wariantu posiadającego podstawienie obejmuje wprowadzenie postawienia jednej lub większej liczby reszt regionu hiperzmiennego przeciwciała wyjściowego (np. przeciwciała ludzkiego lub humanizowanego). Ogólnie, powstały(e) wariant(y) selekcjonowany(e) do dalszego opracowywania będzie(ą) posiadać ulepszone właściwości biologiczne względem przeciwciała wyjściowego, z którego zostały one stworzone. Dogodny sposób tworzenia takich wariantów posiadających postawienia obejmuje udoskonalanie powinowactwa przy użyciu prezentacji na fagu. W skrócie, kilka miejsc regionu hiperzmiennego (np. 6-7 miejsc) jest poddawanych mutacji w celu wytworzenia wszystkich możliwych postawień w każdym z miejsc. Warianty przeciwciała tak otrzymane są prezentowane w sposób jednowartościowy na powierzchni cząstek faga nitkowatego jako fuzje do produktu genu III z M13 znajdującego się w każdej cząsteczce faga. Warianty prezentowane na fagu są następnie przeszukiwane pod względem ich aktywności biologicznej (np. powinowactwa wiązania), jak tutaj ujawniono. W celu zidentyfikowania miejsc regionu hiperzmiennego jako kandydatów do modyfikacji, może być wykonana mutageneza oparta na skanowaniu alaniną w celu zidentyfikowania reszt regionu hiperzmiennego mających znaczący wkład we wiązanie antygenu. Alternatywnie, lub dodatkowo, korzystna może być analiza struktury krystalograficznej kompleksu antygen-przeciwciało w celu zidentyfikowania stałych punktów pomiędzy przeciwciałem a ludzkim CD20. Takie stałe reszty i reszty sąsiadujące są kandydatami do podstawienia według tutaj opracowanych technik. Po wytworzeniu takich wariantów, zestaw wariantów jest poddany przeszukiwaniu, jak opisano tutaj, a przeciwciała z ulepszonymi właściwościami w jednym lub większej liczbie stosownych oznaczeń mogą być wybrane do dalszego opracowywania.
Inny typ wariantu aminokwasowego przeciwciała zmienia pierwotny wzór glikozylacji przeciwciała. Przez zmianę jest rozumiane usunięcie jednego lub więcej składników wodorowęglanowych obecnych w przeciwciele i/lub dodanie jednego lub większej liczby miejsc glikozylacji, które nie są obecne w przeciwciele.
Glikozylacja przeciwciał jest typowo oparta zarówno na wiązaniu N jak i wiązaniu O. Wiązanie N odnosi się do przyłączenia składnika wodorowęglanowego do łańcucha bocznego reszty asparaginy. Trójpeptydowe sekwencje asparagina-X-seryna i asparagina-X-treonina, gdzie X jest dowolnym aminokwasem z wyjątkiem proliny są miejscami rozpoznawania dla enzymatycznego przyłączania składnika wodorowęglanowego do łańcucha bocznego asparaginy. Zatem, obecność każdej z tych trójpeptydowych sekwencji w polipeptydzie tworzy potencjalne miejsce glikozylacji. O-glikozylacja odnosi się do przyłączania jednego z cukrów N-acetylogalaktozoaminy, galaktozy lub ksylozy do aminokwasu posiadającego grupę hydroksylową, najczęściej do seryny lub treoniny, chociaż 5-hydroksyprolina lub 5-hydroksylizyna także mogą być użyte.
Dodanie miejsc glikozylacji do przeciwciała jest w wygodny sposób wykonywane przez zmianę sekwencji aminokwasowej tak, że zawiera ona jedną lub większą liczbę powyżej opisanych sekwencji trójpeptydowych (dla miejsc N-glikozylacji). Zmiana może być także dokonana poprzez dodanie lub podstawienie jednej lub większej ilości reszt seryny lub treoniny do sekwencji pierwotnego przeciwciała (dla miejsc O-glikozylacji).
PL 212 899 B1
Cząsteczki kwasu nukleinowego kodujące warianty sekwencji aminokwasowej przeciwciała anty-CD20 są przygotowane różnymi sposobami znanymi w tej dziedzinie. Sposoby te obejmują, ale nie są do nich ograniczone, izolację ze źródła naturalnego (w przypadku wariantów sekwencji aminokwasowej pojawiających się w sposób naturalny) lub otrzymanie przez mutagenezę opartą o oligonukleotydy (lub ukierunkowaną), mutagenezę z użyciem reakcji PCR, mutagenezę z użyciem kasety wcześniej uzyskanych wariantów lub wersji niewariantowej przeciwciała anty-CD20.
Pożądane może być zmodyfikowanie przeciwciała z wynalazku w odniesieniu do funkcji efektorowej, np., tak, żeby wzmocnić zależną od antygenu cytotoksyczność za pośrednictwem komórek (ADCC) i/lub cytoksyczność przeciwciała zależną od komplementu (CDC). Może to być osiągnięte przez wprowadzenie jednej lub większej ilości postawień do regionu Fc przeciwciała. Alternatywnie lub dodatkowo, do regionu Fc może(gą) być wprowadzona(e) reszta(y) cysteiny, pozwalając przez to na tworzenie w tym regionie międzyłańcuchowych wiązań dwusiarczkowych. Tak uzyskane przeciwciało homodimeryczne może posiadać ulepszoną zdolność internalizacji i/lub zwiększoną skuteczność zabijania komórek za pośrednictwem dopełniacza i cytotoksyczność komórkową zależną od przeciwciała (ADCC). Zobacz Caron etal., J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992) i Snopes, B. J. Immunol. 148:2918 -2922 (1992). Przeciwciała homodimeryczne ze zwiększoną aktywnością antynowotworową mogą być także przygotowane przy użyciu heterodwufunkcyjnych środków tworzących wiązania krzyżowe, jak opisano w Wolff i wsp., Cancer Research 53:2560-2565 (1993). Alternatywnie, może być zaprojektowane przeciwciało, które posiada podwójne regiony Fc i może przez to posiadać zwiększone zdolności do Iizy za pośrednictwem komplementu oraz do ADCC. Zobacz Stevenson i wsp. Anti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989).
W celu wydłużenia okresu połowicznego zaniku przeciwciała z surowicy, do przeciwciała (szczególnie do fragmentu przeciwciała) może być wprowadzony epitop wiążący receptor ratunkowy, na przykład, jak opisano w Patencie USA Nr 5739277. Stosowane tutaj określenie epitop wiążący receptor ratunkowy odnosi się do epitopu regionu Fc cząsteczki IgG (np. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), który jest odpowiedzialny zwiększenie czasu połowiczne zaniku cząsteczki IgG w surowicy in vivo.
Inne modyfikacje przeciwciała
Rozważane są tutaj inne modyfikacje przeciwciał. Na przykład, przeciwciało może być sprzężone do jednego z różnych niebiałkowych polimerów, np., glikolu polyetelenowego, glikolu polipropylenowego, polioksyalkilenów lub kopolimerów glikolu polietylenowego i glikolu polipropylenowego. Przeciwciało może być także uwięzione w mikrokapsułki przygotowane, na przykład przez techniki koacerwacji lub przez polimeryzację międzyfazową (na przykład, odpowiednio mikrokapsułki z hydroksymetylocelulozy lub żelatyny oraz mikrokapsułki z poli(metylonetaoctanu)), w koloidalne systemy dostarczania leków (na przykład liposomy, mikrosfery albuminy, mikroemulsje, nanocząstki i nanokapsułki) lub w makroemulsje. Takie techniki są ujawnione w Remington's w Pharmaceutical Sciences, wydanie 16, Oslo, A., Ed., (1980).
Przeszukiwanie w kierunku przeciwciał z pożądanymi właściwościami
Przeciwciała z pewnymi cechami biologicznymi mogą być wyselekcjonowane, jak opisano w Przykładach Doświadczalnych.
Skutki w postaci zahamowania wzrostu dla przeciwciała anty-CD20 z wynalazku mogą być oznaczone przy użyciu sposobów znanych w tej dziedzinie, np., przy użyciu komórek, które posiadają ekspresję CD20 zarówno endogennie, jak i po transfekcji genem CD20. Na przykład, nowotworowe linie komórkowe i komórki transfekowane CD20 mogą być traktowane monoklonalnym przeciwciałem anty-CD20 z wynalazku w różnych stężeniach przez kilka dni (np., 2-7 dni) i barwione krystalicznym fioletem lub MTT lub analizowane przy użyciu innego oznaczenia kolorymetrycznego. Inny sposób 3 pomiaru proliferacji mógłby obejmować porównanie pobierania 3H-tymidyny przez komórki hodowane w obecności i przy braku przeciwciała anty-CD20 z wynalazku. Po traktowaniu przeciwciałem, komórki są zbierane i w liczniku scyntylacyjnym mierzona jest ilość radioaktywności włączonej do DNA. Odpowiednie kontrole pozytywne obejmują traktowanie wybranej linii komórkowej przeciwciałem hamującym wzrost, o którym wiadomo, że hamuje wzrost tej linii komórkowej.
Aby wyselekcjonować przeciwciała, które indukują śmierć komórki, może być oznaczona utrata integralności błony w porównaniu z kontrolą przez oznaczenie pobierania, np., jodku propidyny (PI), błękitu tryptofanowego lub 7AAD. Oznaczenie pobierania PI może być wykonane podczas nieobecności komplementu oraz komórek efektorowych układu immunologicznego. Komórki nowotworowe z ekspresją CD20 są inkubowane w samej pożywce lub w pożywce zawierającej odpowiednie przeciwciało monoklonalne np. w stężeniu około 10 μg/ml. Komórki są inkubowane przez okres 3 dni.
PL 212 899 B1
Po każdym okresie traktowania komórki są przemywane i porcjowane do 35 mm probówek 12 x 75 z nałożonym filtrem (1 ml na probówkę, 3 probówki na każdą badaną grupę) w celu usunięcia skupisk komórek. Do probówek jest następnie dodawany PI (10 gg/ml). Próbki mogą być analizowane przy użyciu cytometru przepływowego FACSCAN™ i oprogramowania FACSCONVERT™ CellQuest (Becton Dickinson). Te przeciwciała, które indukują statystycznie znaczące poziomy śmierci komórek oznaczane przez pobór PI mogą być wyselekcjonowane jako przeciwciała indukujące śmierć komórki.
W celu przeszukania na obecność przeciwciał, które wiążą epitop na CD20 wiązanym przez przeciwciało będące przedmiotem zainteresowania, może być wykonane rutynowe oznaczenie krzyżowego blokowania, takie jak opisano w Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed. Harlow i David Lane (1988). Oznaczenie to może być użyte do określenia, czy testowane przeciwciało wiąże to samo miejsce lub epitop, jak przeciwciało anty-CD20 z wynalazku. Alternatywnie lub dodatkowo, może być wykonane mapowanie epitopu przy użyciu sposobów znanych w tej dziedzinie. Na przykład, sekwencja przeciwciała może być poddana mutagenezie takiej, jak skanowanie alaniną, w celu zidentyfikowania reszt kontaktowych. Zmutowane przeciwciało jest wstępnie testowane na wiązanie z przeciwciałem poliklonalnym aby upewnić się, co do właściwego sfałdowania. W innym sposobie, peptydy odpowiadające różnym regionom CD20 mogą być użyte w oznaczeniach opartych o współzawodnictwo z testowanymi przeciwciałami lub z testowanym przeciwciałem i przeciwciałem ze scharakteryzowanym lub znanym epitopem.
Wektory, komórki gospodarza i sposoby rekombinacji DNA
Wynalazek także dostarcza wyizolowanego kwasu nukleinowego kodującego humanizowane przeciwciało wiążące CD20, wektorów i komórek gospodarza zawierających kwas nukleinowy i technik rekombinacji DNA do wytwarzania przeciwciała.
Do wytwarzania przeciwciała przy użyciu technik rekombinowanego DNA, kwas nukleinowy je kodujący jest wyizolowany i wprowadzony do ulegającego replikacji wektora w celu dalszego klonowania (namnażania DNA) lub ekspresji. DNA kodujący przeciwciało jest z łatwością wyizolowany i zsekwencjonowany przy użyciu konwencjonalnych procedur (np., przez użycie oligonukleotydowych sond, które są zdolne do wiązania się specyficznie do genów kodujących ciężkie i lekkie łańcuchy przeciwciała). Dostępnych jest wiele wektorów. Składniki wektora zazwyczaj obejmują, ale nie są do nich ograniczone, jeden lub większą liczbę z następujących: sekwencja sygnałowa, miejsce startu replikacji, jeden lub więcej genów znacznikowych, element wzmacniający transkrypcję, promotor oraz sekwencję germinacji transkrypcji.
i) Składnik w postaci sekwencji sygnałowej
Przeciwciało wiążące CD20 z tego wynalazku może być otrzymane przy użyciu technik rekombinowanego DNA nie tylko w sposób bezpośredni, ale także jako fuzja polipeptydu z polipeptydem heterologicznym, którym jest korzystnie sekwencja sygnałowa lub inny polipeptyd posiadający specyficzne miejsce cięcia na końcu N dojrzałego białka lub polipeptydu. Wybrana heterologiczna sekwencja sygnałowa jest korzystnie taką, która jest rozpoznawana i procesowana (tj. przecinana przez peptydazę sygnałową) przez komórkę gospodarza. U prokariotycznych komórek gospodarza, które nie rozpoznają i nie procesują natywnej sekwencji sygnałowej przeciwciała wiążącego CD20 sekwencja sygnałowa jest zastąpiona przez wybraną prokariotyczną sekwencję sygnałową, na przykład, liderami z grupy alkalicznej fosfatazy, penicylinazy, Ipp lub stabilnej w wyższej temperaturze enterotoksynie II. Do sekrecji w drożdżach natywna sekwencja sygnałowa może zostać zastąpiona, np., przez lider drożdżowej inwertazy, lider czynnika (włączając lidery α-czynnika z Saccharomyces i Kluyveromyces) lub lider kwaśnej fosfatazy, lider glukoamylazy z C. albicans lub sygnał opisany w WO 90/13646. Przy ekspresji w ssaczych komórkach dostępne są ssacze sekwencje sygnałowe, jak również wirusowe lidery sekrecyjne, na przykład, sygnał gD z opryszczki zwykłej.
DNA dla takiego regionu prekursorowego jest ligowany w ramce odczytu do DNA kodującego przeciwciało wiążącego CD20.
ii) Miejsce startu replikacji
Zarówno wektory ekspresyjne jak i służące do klonowania zawierają sekwencję kwasu nukleinowego, która umożliwia replikację wektora w jednym lub większej liczbie wybranych komórek gospodarza. Ogólnie, w wektorach służących do klonowania ta sekwencja jest tą, która umożliwia replikację wektora niezależną od chromosomalnego DNA gospodarza i obejmuje miejsca startu replikacji lub sekwencje ulegające autonomicznej replikacji. Takie sekwencje są dobrze znane dla różnych bakterii, drożdży i wirusów. Miejsce startu replikacji z plazmidu pBR322 jest odpowiednie dla większości Gram-ujemnych bakterii, miejsce startu replikacji plazmidu 2μ jest odpowiednie dla drożdży a różne
PL 212 899 B1 wirusowe miejsca startu replikacji (SV40, poliomawirus, adenowirus, VSV lub BPV) są użyteczne dla wektorów służących do klonowania w komórkach ssaczych. Ogólnie, składnik w postaci miejsca startu replikacji nie jest potrzebny w ssaczych wektorach ekspresyjnych (typowo może być użyte miejsce startu replikacji z SV40 tylko dlatego, że zawiera ono wczesny promotor).
iii) Składnik w postaci genu selekcyjnego
Wektory ekspresyjne i służące do klonowania mogą zawierać gen selekcyjny także nazywany znacznikiem selekcyjnym. Typowe geny selekcyjne kodują białka, które (a) nadają oporność na antybiotyki lub inne toksyny, np., ampicylinę, neomycynę, metrotreksat lub tetracyklinę, (b) komplementują niedobory auksotroficzne lub (c) dostarczają ważnych składników odżywczych nieobecnych w pożywkach złożonych, np. gen kodujący racemazę D-alaniny dla Bacilli.
Jeden z przykładów schematu selekcyjnego wykorzystuje związek do zatrzymania wzrostu komórki gospodarza. Te komórki, które uległy udanej transformacji genem heterologicznym wytwarzają białko nadające oporność na ten związek i zatem przeżywają warunki selekcji. Przykłady takiej dominującej selekcji wykorzystują związki w postaci neomycyny, kwasu mykofenolowego i higromycyny.
Innym przykładem odpowiednich znaczników selekcyjnych dla komórek eukariotycznych są te, które umożliwiają identyfikację komórek zdolnych do pobrania kwasu nukleinowego kodującego przeciwciało wiążące CD20, takie, jak DHFR, kinaza tymidyny, metalotioneina I i II, korzystnie geny metalotionein z rodziny naczelnych, deaminaza adenozyny, dekarboksylaza ornitynowa itp.
Na przykład, komórki transformowane genem selekcyjnym DHFR są na początku identyfikowane przez hodowlę wszystkich transformantów w pożywce hodowlanej, która zawiera metotreksat (Mtx), kompetycyjnego antagonistę DHFR. Odpowiednią komórką gospodarza do użycia DHFR dzikiego typu jest linia komórkowa z jajnika chomika chińskiego (CHO, ang. Chinese hamster ovary) nie posiadająca aktywności DHFR (np., ATCC CRL-9096).
Alternatywnie, komórki gospodarza (szczególnie gospodarzy typu dzikiego, którzy zawierają endogenny gen DHFR) transformowane lub kotransformowane sekwencjami DNA kodującymi przeciwciało wiążące CD20, białko DHFR typu dzikiego oraz inny znacznik selekcyjny, taki jak 3'-fosfotransferaza aminoglikozydu (APH) mogą być selekcjonowane poprzez wzrost komórki w pożywce zawierającej środek selekcyjny dla znacznika selekcyjnego, taki jak antybiotyk aminoglikozydowy, np. kanamycynę, neomycynę lub G418. Zobacz Patent USA Nr 4965199.
Odpowiednim genem selekcyjnym dla użycia w drożdżach jest gen trp1 obecny w drożdżowym plazmidzie YRp7 (Stinchcomb i wsp., Nature, 282:39 (1979)). Gen trp1 dostarcza znacznika selekcyjnego dla zmutowanego szczepu drożdży nie posiadających zdolności do wzrostu w obecności tryptofanu, na przykład, ATCC Nr 44076 lub PEP4-1. Jones, Genetics, 85:12 (1977). Obecność defektywnego trp1 w genomie komórki gospodarza będącego drożdżem dostarcza skutecznego środowiska do detekcji transformacji poprzez wzrost w nieobecności tryptofanu. Podobnie, szczepy drożdży nie posiadające Leu2 (ATCC 20622 lub 38626) są komplementowane przez znane plazmidy niosące gen Leu2.
Dodatkowo, wektory pochodzące z kolistego plazmidu pKD1 1,6 μm mogą być użyte do transformacji drożdży Kluyveromyces. Alternatywnie, dla K. lactis doniesiono o systemie ekspresyjnym do wytwarzania na dużą skalę rekombinowaneJ cielęcej chymozyny. Van den Berg, Bio/Technology, 8:135 (1990). Ujawnione zostały także stabilne wielokopijne wektory ekspresyjne do sekrecji dojrzałej rekombinowanej ludzkiej albuminy surowiczej przez przemysłowe szczepy Kluyveromyces. Fleer i wsp., Bio/Technology, 9:968-975 (1991).
iv) Składnik w postaci promotora
Wektory ekspresyjne i służące do klonowania zazwyczaj zawierają promotor, który jest rozpoznawany przez organizm gospodarza i jest funkcjonalnie połączony do kwasu nukleinowego kodującego przeciwciało wiążące CD20. Promotory odpowiednie do zastosowania z gospodarzami prokariotycznymi obejmują promotor phoA, systemy promotorów β-laktamazy i laktozy, promotor alkalicznej fosfatazy, system promotora tryptofanu (trp) oraz promotory hybrydowe, takie jak promotor tac. Jednakże, odpowiednie są inne znane promotory bakteryjne. Promotory do zastosowania w systemach bakteryjnych będą także zawierały sekwencję Shine-Daigarno (S.D.) funkcjonalnie połączoną z DNA kodującym przeciwciało wiążące CD20.
Sekwencje promotorowe są znane dla eukariotów. Prawie wszystkie geny eukariotyczne posiadają region bogaty w pary AT położony w przybliżeniu 25 do 30 par zasad powyżej miejsca, w którym inicjowana jest transkrypcja. Inna sekwencja obecna 70 do 80 par zasad powyżej miejsca startu transkrypcji wielu genów jest regionem CNCAAT, gdzie N może być dowolnym nukleotydem. Na końcu 3'
PL 212 899 B1 większości genów eukariotycznych jest sekwecja AATAAA, która może być sygnałem do dodania ogona poliA do końca 3' sekwencji kodującej. Wszystkie z tych sekwencji są odpowiednio wprowadzone do eukariotycznych komórek ekspresyjnych.
Przykłady odpowiednich sekwencji promotorowych do zastosowania z gospodarzami drożdżowymi obejmują promotory dla kinazy 3-fosfoglicerynianiu lub innych enzymów glikolitycznych, takich jak enolaza, dehydrogenaza aldehydu 3-fosfoglicerynowego, heksokinaza, dekarboksylaza pirogronianowa, fosfofruktokinaza, izomeraza 6-fosfoglukozy, mutaza 3-fosfoglicerynianu i gluko-kinaza.
Inne promotory drożdżowe, które są promotorami indukowalnymi posiadającymi dodatkową zaletę transkrypcji kontrolowanej przez warunki wzrostu, są regionami promotorowymi dla alkoholowej dehydrogenazy 2, izocytochromu C, kwaśnej fosfatazy, enzymów degradacyjnych związanych z metabolizmem azotu, metalotioneiny, dehydrogenazy aldehydu 3-fosfoglicerynowego i enzymów odpowiedzialnych wykorzystanie maltozy i galaktozy. Odpowiednie wektory i promotory do zastosowania w ekspresji u drożdży są dalej opisane w EP 73657. Drożdżowe sekwencje wzmacniające ekspresję są korzystnie stosowane z promotorami drożdżowymi.
Transkrypcja przeciwciała wiążącego CD20 z wektorów w ssaczych komórkach komórkach gospodarza jest kontrolowana, na przykład, przez promotory uzyskane z genomów wirusów, takich jak wirus poliomy, wirus ospy ptasiej, adenowirus (taki jak Adenowirus 2), bydlęcy wirus brodawek, wirus mięsaka ptaków, wirus cytomegalii, retrowirus, wirus zapalenia wątroby B i najbardziej korzystnie Małpi Wirus 40 (SV40), z heterologicznych promotorów ssaczych, np., promotora aktyny lub promotora immunoglobuliny, z promotorów białek szoku cieplnego, takie dostarczone promotory są kompatybilne z systemami komórki gospodarza.
Wczesne i późne promotory wirusa SV40 są dogodnie uzyskiwane jako fragment restrykcyjny SV40, który również zawiera miejsce startu replikacji wirusa SV40. Bardzo wczesny promotor ludzkiego wirusa cytomegalii jest w sposób dogodny uzyskiwany jako fragment restrykcyjny HindIIIE. System do ekspresji DNA w gospodarzach ssaczych przy użyciu bydlęcego wirusa brodawek jako wektora jest ujawniony w Patencie USA Nr 4419446. Modyfikacja tego systemu jest opisana w Patencie USA Nr 4601978. Zobacz także Reyes i wsp., Nature 297:598-601 (1982) o ekspresji cDNA ludzkiego βinterferonu w mysich komórkach pod kontrolą promotora kinazy tymidynowej z wirusa opryszczki pospolitej. Alternatywnie, jako promotor może być użyte długie terminalne powtórzenie z wirusa mięsaka Rousa.
v) składnik w postaci elementu wzmacniającego transkrycję
Transkrypcja DNA kodującego przeciwciało wiążące CD20 z niniejszego wynalazku przez wyższe eukarionty jest często zwiększana przez wprowadzanie do wektora sekwencji zwiększającej transkrypcję. Znanych jest wiele sekwencji wzmacniających transkrypcję z genów ssaczych (globiny, elastazy, albuminy, α-fetoproteiny i insuliny). Typowo, jednakże, użyte będą sekwencje wzmacniające transkrypcję z wirusów komórek eukariotycznych. Przykłady obejmują sekwencję wzmacniającą transkrypcję na późnym miejscu miejsca startu replikacji (pz 100-270), sekwencję wzmacniającą transkrypcję wczesnego promotora wirusa cytomegalii, sekwencję wzmacniającą transkrypcję z wirusa poliomy na późnym miejscu startu replikacji oraz sekwencje wzmacniające transkrypcję z adenowirusów. Zobacz także Yaniv, Nature 297:17-18 (1982) o elementach wzmacniających transkrypcję stosowanych do aktywacji promotorów eukariotycznych. Sekwencja wzmacniająca transkrypcję może być włączony do wektora w pozycji 5' lub 3' do sekwencji kodującej przeciwciało wiążące CD20, ale korzystnie jest położona na w pozycji 5' od promotora.
vi) Komponent w postaci terminatora transkrypcji
Wektory ekspresyjne stosowane w komórkach eukariotycznych gospodarzy (drożdży, grzybów, owadzich, roślinnych, zwierzęcych, ludzkich lub komórkach jądrzastych z innych organizmów wielokomórkowych) będą także zawierały sekwencje konieczne do terminacji transkrypcji i do stabilizacji mRNA. Takie sekwencje są powszechnie dostępne z końca 5' a okazjonalnie z 3' regionów nie ulegających translacji eukariotycznych lub wirusowych cząsteczek DNA lub cDNA. Regiony te zawierają elementy nukleotydowe ulegające transkrypcji jako fragmenty poliadenylowane w nieulegającej translacji części mRNA kodujące przeciwciało wiążące CD20. Jednym z użytecznych komponentów będących terminatorem transkrypcji jest region poliadenylacji bydlęcego hormonu wzrostu. Zobacz WO94/11026 i wektor ekspresyjny ujawniony tutaj.
vii) Selekcja i transformacja komórek gospodarza
Odpowiednimi komórkami gospodarza do klonowania lub ekspresji DNA w wektorach opisanych tutaj są komórki prokariotyczne, drożdżowe lub wyższych eukariontów opisane powyżej. Odpowiednie
PL 212 899 B1 prokarionty do tego celu obejmują eubakterie, takie jak organizmy Gram-ujemne lub Gram-dodatnie, na przykład, Enterobactariaceae, takie jak Escherichia, np., E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, np., Salmonella typhimurium, Serratia, np., Serratia marcescans oraz Shigella, jak również Bacilli takie jak B. subtilis i B. Iicheniformis (np., B. Iicheniformis 41P ujawniony w DD 266710 opublikowanym 12 kwietnia 1989), Pseudomonas takie jak P. aeruginosa oraz Streptomyces. Jednym z korzystnych gospodarzy E. coli do klonowania jest E. coli 294 (ATCC 31446), jednakże odpowiednie są inne szczepy, takie jak E. coli B, E. coli X1776 (ATCC 31537) i E. coli W3110 (ATCC 27325). Te przykłady są raczej obrazujące niż ograniczające.
Przeciwciała o pełnej długości, fragmenty przeciwciał białka fuzyjne przeciwciał mogą być wytwarzane w bakteriach, w szczególności, gdy glikozylacja i funkcja efektorowa Fc nie są potrzebne, jak wtedy, gdy przeciwciało terapeutyczne jest sprzężone ze środkiem cytotoksycznym (np. toksyną) i immunokoniugat sam z siebie wykazuje skuteczność w niszczeniu komórek nowotworowych. Przeciwciała o pełnej długości posiadają dłuższy czas połowicznego zaniku w krążeniu. Wytwarzanie w E. coli jest bardziej wydajne ze względu na koszty. W celu ekspresji fragmentów przeciwciał i polipeptydów w bakteriach zobacz, np., Patenty USA Nr 5648237 (Carter i wsp.), 5789199 (Joly i wsp.) oraz 5840523 (Simmons i wsp.), które opisują region inicjujący translację (TIR) oraz sekwencje sygnałowe do optymalizacji ekspresji i sekrecji, te patenty są tutaj włączone przez odniesienie. Po ekspresji przeciwciało jest izolowane z zawartości komórki E. coli w rozpuszczalnej frakcji i może być oczyszczone na, np., kolumnie z białkiem A lub G w zależności od izotypu przeciwciała. Ostateczne oczyszczanie może być wykonane podobnie do procesu oczyszczania przeciwciała ulegającego ekspresji, np., w komórkach CHO.
Oprócz prokariotów, mikroorganizmy eukariotyczne, takie jak grzyby nitkowate lub drożdże są odpowiednimi gospodarzami do klonowania i ekspresji wektorów kodujących przeciwciało wiążące CD20. Saccharomyces cerevisiae lub powszechne drożdże piekarnicze są najbardziej powszechnie stosowane spośród niższych mikroorganizmów będących eukariotycznymi gospodarzami. Jednakże szereg innych rodzajów, gatunków i szczegółów jest powszechnie dostępnych i użytecznych tutaj, takich jak Schizosaccharomyces pombe; gospodarze z rodzaju Kluyveromyces, tacy jak K. laetis, K. fragilis (ATCC 12424), K. bulgaricus (ATCC 16045), K. wickeramii (ATCC 24178), K. waltii (ATCC 56500), K. drosophilarum (ATCC 36906), K. thermotolerans i K. marxianus; yarrowia (EP 402226); Pichia pastoris (EP 183070); Candida; Trichoderna reesia (EP 244234); Neurospora crassa; Schwantiomyces, tacy jak Schwanniomyces occidentalis; grzybów niktowatych, takich jak Neurospora, Penicillium, Tolypocladium oraz gospodarze z rodzaju Aspergillus, tacy jak A. nidulans oraz A. niger.
Odpowiednie komórki gospodarza do ekspresji glikozylowanego przeciwciała wiążącego CD20 pochodzą z organizmów wielokomórkowych. Przykłady komórek bezkręgowców obejmują komórki roślinne i owadzie. Zidentyfikowano szereg szczepów bakulowirusowych i wariantów oraz odpowiednich permisyjnych owadzich komórek gospodarza z gospodarzy, takich jak Spodoptera frugiperda (frugiperda), Aedes aegypti (komar), Jedes albopictus (komar), Drosophila melanogaster (muszka owocowa) i Bombyx mori. Publicznie dostępne są różne szczepy wirusowe do transfekcji, np. warant L-1 Autographa californica NPV i szczep Bm-5 Bombyx mori NPV i takie wirusy mogą być użyte tutaj jako wirusy według niniejszego wynalazku szczególnie do transfekcji komórek Spodoptera frugiperda.
Hodowle komórek roślinnych wełny, kukurydzy, ziemniaka, soi, petunii, pomidora i tytoniu także mogą być wykorzystane jako gospodarze.
Jednakże, największe zainteresowanie budzą komórki kręgowców a rozmnażanie komórek kręgowców w hodowli (hodowli tkankowej) stało się rutynową procedurą. Przykładami użytecznych linii komórkowych ssaczych gospodarzy jest małpia linia z nerki CV1 transformowana SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); ludzka linia embrionalna z nerki (293 Iub komórki 293 subklonowane do wzrostu w hodowli zawiesinowej, Graham i wsp., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); komórki z nerki z chomiczego noworodka (BHK, ATCC CCL 10); komórki z jajnika chomika chińskiego/-DHFR (CHO, Urlaub i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); mysie komórki Sertoliego (TM4, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); mysie komórki z nerki (CV1 ATCC CCL 70); komórki z nerki z afrykańskiej małpy zielonej (VERO-76, ATCC CRL-1587); ludzkie komórki nabłonkowe raka szyjki macicy (HELA, ATCC CCL 2); komórki z nerki psa (MDCK, ATCC CCL 34); komórki wątrobowe ze szczurzego szczepu Buffalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442); ludzkie komórki płucne (W138, ATCC CCL 75) ; ludzkie komórki wątrobowe (HepG2, HB 8065); mysi nowotwór sutka (MMT 060562, ATCCCCL51); komórki TRI (Mather i wsp., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1932)); komórki MRC 5; komórki FS4; i ludzka linia hepatomy (Hep G2).
PL 212 899 B1
Komórki gospodarza są transformowane powyżej opisanymi wektorami ekspresyjnymi lub służącymi do klonowania w celu otrzymywania przeciwciała przeciwciała wiążącego CD20 i hodowania w konwencjonalnych pożywkach odżywczych zmodyfikowanych odpowiednio dla zawartych promotorów, selekcji transformantów lub namnażania genów kodujących pożądane sekwencje.
viii) Hodowla komórek gospodarza
Komórki gospodarza stosowane do wytwarzania przeciwciała wiążącego CD20 z niniejszego wynalazku mogą być hodowane w różnych pożywkach. Komercyjnie dostępne pożywki, takie jak Hals F10 (Sigma), Minimal Essential Medium ( (MEM), (Sigma), RPMI-1640 (Sigma), I Dulbecco's Modified Eagle's Medium ((DMEM), Sigma) są odpowiednie do hodowli komórek gospodarza. Ponadto, jako pożywka hodowlana dla komórek gospodarza mogą być użyte dowolne pożywki opisane w Ham i wsp., Meula. Enz. 58:44 (1979), Barnes i wsp., Anal. Blochem. 102: 255 (1980), Patenty USA Nr 4767704 ; 4657866; 4927762 ; 4560655; lub 5122469; WO90/03430; WO 87/00195; lub Patencie USA Re. 30985. Dowolna z tych pożywek może być uzupełniona, jeśli konieczne, hormonami i/lub innymi czynnikami wzrostu (takimi jak insulina, transferyna lub nabłonkowy czynnik wzrostowy), solami (takimi jak chlorek sodu, wapń, magnez, fosforan), buforami (takimi jak HEPES), nukleotydami (takimi jak adenozyna i tymina), antybiotykami (takimi jak specyfik GENTAMYCIN™), pierwiastkami śladowymi (zdefiniowanymi jako składniki nieorganiczne zazwyczaj obecne w końcowych stężeniach w zakresie mikromolarnym) oraz glukozą lub równoważnym źródłem energii. Dowolne inne konieczne uzupełnienia także mogą być dodane w odpowiednich stężeniach, które byłyby znane specjalistom w tej dziedzinie. Warunki hodowli, takie jak temperatura, pH i tym podobne, są tymi wcześniej używanymi dla komórek gospodarza wybranych do ekspresji i będą oczywiste dla specjalistów w tej dziedzinie.
ix) Oczyszczanie przeciwciała
Przy użyciu technik rekombinowanego DNA przeciwciało może być wytworzone wewnątrzkomórkowo, w przestrzeni międzybłonowej lub wydzielone bezpośrednio do pożywki. Jeżeli przeciwciało jest wytwarzane wewnątrzkomórkowo, jako pierwszy etap, przez wirowanie lub ultrafiltrację usuwane są zawieszone szczątki komórek, albo komórki gospodarza albo zlizowane fragmenty. Carter i wsp., Bio/Technology 10:163-167 (1992) opisuje procedurę izolacji przeciwciał, które są wydzielane do przestrzeni międzybłonowej E. coli. W skrócie, zawartość komórek jest rozpuszczana i obecności octanu sodu (pH 3,5), EDTA i fenylometylosulfonylofluorku (PMSF) przez ponad około 30 min. Szczątki komórek mogą być usunięte przez wirowanie. Jeżeli przeciwciało ulega wydzielaniu do pożywki, supernatanty z takich systemów ekspresji są zazwyczaj na początku zagęszczane przy użyciu komercyjnie dostępnych filtrów do zagęszczania białek, na przykład jednostki do ultrafiltracji z Amicon lub Millipore Pellicon. Do dowolnego z poprzedzających etapów może być dodany inhibitor proteaz, taki jak PMSF, w celu zahamowania proteolizy, a antybiotyk może być dodany, aby zapobiec wzrost nieoczekiwanych zanieczyszczeń.
Kompozycja przeciwciała przygotowana z komórek może być oczyszczona przy użyciu, na przykład, chromatografii na hydroksyapatycie, elektroforezy w żelu, dializy i chromatografii powinowactwa, z chromatografią powinowactwa będącą korzystną techniką oczyszczania. Odpowiedniość białka A, jako ligandu powinowactwa zależy od gatunków i izotypu dowolnej domeny Fc immunoglobuliny, która jest obecna w przeciwciele. Białko A może być użyte do oczyszczania przeciwciał, które opierają się na ludzkich łańcuchach ciężkich γ1, γ2 lub γ4 (Lindmark i wsp., J. Immunol. Metla. 62:1-13 (1983)). Białko G jest polecane dla wszystkich mysich izotypów i dla ludzkiego γ3 (Guss i wsp., EMBO J. 5:15671575 (1986)). Macierz, do której ligand powinowactwa jest przyczepiony jest najczęściej agarozą, ale inne macierze są także dostępne. Mechanicznie stabilne macierze, takie jak szkło o kontrolowanej porowatości lub poli(styrenodwuwinylo)benzen pozwalają na większe szybkości przepływu i krótsze czasy obróbki, niż te, które mogą być osiągnięte przy użyciu agarozy. Jeżeli przeciwciało zawiera domenę CH3, wtedy do oczyszczania użyteczna jest żywica ABX™ Bakerbond (J. T. Baker, Phillipsburg, NJ). Dostępne są również inne techniki do oczyszczania białek, takie jak frakcjonowanie na kolumnie jonowymiennej, wytrącanie etanolem, HPLC w odwróconych fazach, chromatografia na krzemionce, chromatografia na heparynie SEPHAROSE, chromatografia na żywicy aniono- lub kationowymiennej (takiej jak kolumna z kwasem poliasparaginowym), chromatoogniskowanie, SDS-PAGE i wytrącanie siarczanem amonu, w zależności od przeciwciała, które ma być odzyskane.
Według dowolnego(ych) etapu(ów) oczyszczania wstępnego, mieszanina zawierająca przeciwciało będące przedmiotem zainteresowania i zanieczyszczenia może być poddana chromatografii oddziaływań hydrofobowych w niskim pH przy użyciu buforu do elucji w pH pomiędzy około 2,5-4,5, korzystnie wykonanej w niskich stężeniach soli (np. od około 0-0,25 M stężenia soli).
PL 212 899 B1
Koniugaty przeciwciał
Przeciwciało może być sprzężone ze środkiem cytotoksycznym, takim jak toksyna lub izotop radioaktywny. W pewnych wykonaniach korzystną toksyną jest kalichemicyna, maitanzynoid, dolastatyna, aurystatyna E i ich analogi lub pochodne.
Preferowane leki/toksyny obejmują środki uszkadzające DNA, inhibitory polimeryzacji lub depolimeryzacji mikrotubul i antymetabolity. Korzystne klasy środków cytotoksycznych obejmują, na przykład, inhibitory enzymów, takie jak inhibitor reduktazy dihydrofolianu oraz inhibitory syntazy tymidylanu, związki interkalujące do DNA, przecinające DNA, inhibitory topoizomeraz, leki z rodziny antracykliny, leki z grupy alkaloidów barwinka, mitomycyny, bleomycyny, nukleotydy cytotoksyczne, leki z rodziny pterydyn, diyneny, podofilotoksyny i związki indukujące różnicowanie. Szczególnie użyteczni członkowie tych klas obejmują, na przykład, metotreksat, metopterynę, dichlorometotreksat, 5-fluorouracyl,
6-merkaptopurynę, arabinozyd cytozyny, melfalan, leurozynę, ieurozydeinę, aktynomycynę, daunorubicynę, doksorubicynę, N-(5,5-diacetoksypentylo)doksorubicynę, morfolino-doksorubicynę, hydrazyd 1-(2-choroetylo)-1,2-dimetanosulfonylu, N8-acetylospermidynę, aminopterynę, metopterynę, esperamycynę, mitomycynę C, mitomycynę A, aktynomycynę, bleomycynę, karminomycynę, aminopterynę, talysomycynę, podofilotoksynę i pochodne podofilotoksyny, takie jak etopozyd lub fosforan etopozydu, winblastynę, winkrystynę, windezynę, taksol, taksoter, kwas retinowy, kwas butylowy, N8-acetylospermidynę, kamptotecynę, kalichemicynę, briostatyny, cefalostatyny, ansamitocynę, aktozynę, maitanzynoidy, takie jak DM-1, maitanzyna, maitanzynol, N-desmetylo-4,5-desepoksymaitanzynol, C-19-dechloromaitanzynol, C-20-hydroksymaitanzynol, C-20-demetoksymaitanzynol, C-9-SH-maitanzynol, C-14-alkoksymetylomaitanzynol, C-14-hydroksyoroacetylooksyymetyIomaitanzynol, C-15-hydroksy/ /acetylooksymaitanzynol, C-15-metoksymaitanzynol, C-18-N-demetylomaitanzynol i 4,5-deoksymaitanzynol, aurystatyny, takie jak aurystatyna E, M, PHE i PE; dolostatyny, takie jak dolostatyna A, dolostatyna B, dolostatyna C, dolostatyna D, dolostatyna E (20-epi i 11-epi), dolostatyna G, dolostatyna H, dolostatyna I, dolostatyna 1, dolostatyna 2, dolostatyna 3, dolostatyna 4, dolostatyna 5, dolostatyna 6, dolostatyna 7, dolostatyna 8, dolostatyna 9, dolostatyna 10, deo-dolostatyna 10, dolostatyna 11, dolostatyna 12, dolostatyna 13, dolostatyna 14, dolostatyna 15, dolostatyna 16, dolostatyna 17 i dolostatyna 18; cefalostatyny, takie jak cefalostatyna 1, cefalostatyna 2, cefalostatyna 3, cefalostatyna 4, cefalostatyna 5, cefalostatyna 6, cefalostatyna 7, 25'-epi-cefalostatyna 7, 20-epi-cefalostatyna 7, cefalostatyna 8, cefalostatyna 9, cefalostatyna 10, cefalostatyna 11, cefalostatyna 12, cefalostatyna 13, cefalostatyna 14, cefalostatyna 15, cefalostatyna 16, cefalostatyna 17, cefalostatyna 18, i cefalostatyna 19.
Maitanzynoidy są inhibitorami mitotycznymi, które działają przez zahamowanie polimeryzacji tubuliny. Maitanzyna po raz pierwszy została wyizolowana z wschodnioafrykańskiego krzewu Maytenus serrata (Patent USA Nr 3896111). Następnie, odkryto, że pewne mikroby także wytwarzają maitanzynoidy, takie jak maitanzynol i estry C-3 maitanzynolu (Patent USA Nr 4151042). Syntetyczny maitanzynol i pochodne i ich analogi są ujawnione, na przykład, w Patentach USA Nr 4137230; 4248870; 4256746; 4260608; 4265814; 4294757; 4307016; 408268; 4308269; 4309428; 4313946; 4315929; 4317821; 4322348; 4331598; 4361650; 4364866; 4424219; 4450254; 4362663; oraz 4371533, których ujawnienia są odtąd wyraźnie włączone przez odniesienie.
Maitanzyna i maitanzynoidy zostały sprzężone z przeciwciałami specyficznie wiążącymi się do antygenów komórek nowotworowych. Immunokoniugaty zawierające maitanzynoidy i ich terapeutyczne zastosowanie są ujawnione, na przykład, w Patentach USA Nr 5208020, 5416064 i Europejskim Patencie EP 0425235B1, których ujawnienia są odtąd wyraźnie włączone przez odniesienie. Liu i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623 (1996) opisali immunokoniugaty zawierające maitanzynoid oznaczony DM1 połączony z monoklonalnym przeciwciałem C242 skierowanym przeciwko ludzkiemu nowotworowi okrężnicy i odbytnicy. Stwierdzono, że koniugat jest bardzo toksyczny dla hodowanych komórek nowotworowych okrężnicy i wykazywał aktywność antynowotworową in vivo w oznaczeniu mierzącym wzrost nowotworu. Chari i wsp. Cancer Research 52:127-131 (1992) opisują immunokoniugaty, w których maitanzynoid został sprzężony przez łącznik dwusiarczkowy z mysim przeciwciałem A7 wiążącym się do antygenu na nowotworowych liniach komórkowych okrężnicy lub z innym mysim monoklonalnym przeciwciałem TA.1, które wiąże się do onkogenu HER-2/neu.
Istnieje wiele grup łączących do tworzenia koniugatów przeciwciało-maitanzynoid znanych w tej dziedzinie, włączając, na przykład, te ujawnione w Patencie USA Nr 5208020 lub Patencie EP 0425235B1 oraz Charii wsp. Cancer Research 52:127-131 (1992). Grupy łączące obejmują grupy dwusiarczkowe, grupy tioeterowe, grupy labilne pod wpływem kwasu, grupy fotolabilne, grupy labilne
PL 212 899 B1 pod wpływem peptydaz lub grupy labilne pod wpływem esterazy, jak ujawniono w powyżej określonych patentach, korzystnymi będące grupy dwusiarczkowe i tioeterowe.
Koniugaty przeciwciała i maitanzynoidu mogą być wykonane przy użyciu różnych dwufunkcyjnych środków sprzęgających białka, takich jak N-sukcynoimidylo-3(2pirydyloditio)promianian (SPDP), bursztynylo-4-(N-maleimidometylo)cykloheksylo-1-karboksylan, iminotiolan (IT), dwufunkcyjne pochodne imidoestrów (takich jak dimetyloadipimidat HCl), aktywne estry (takie jak dibursztynylo-suberat, aldehydy (takie jak glutaraldehyd), związki bis-azydowe (takie jak bis(p-azydobenzoilo)heksanodiamina), pochodne bis-diazoniowe (bis-(p-diazobenzoilo)-etylenodiamina), diizocyjaniany (takie jak 2,6-diizocyjanian toluenu i dwuaktywne związki fluoru (takie jak 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen). Szczególnie korzystne środki sprzęgające dostarczające łącznika dwusiarczkowego obejmują N-sukcynimidylo-3-(2-pirydyloditio) propionian (SPDP) (Carlsson i wsp., Biochem. J. 173:723-737 [1978]) i N-sukcynimidylo-4-(2-pirydylotio)-pentanian (SPP).
Łącznik może być doczepiony do cząsteczki maitanzynoidu w różnych pozycjach, w zależności od typu łącznika. Na przykład, wiązanie estrowe może być utworzone przez reakcję z grupą hydroksylową przy użyciu konwencjonalnych technik sprzęgania. Reakcja może zajść w pozycji C-3 posiadającej grupę hydroksylową, pozycji C-14 zmodyfikowanej przez grupę hydroksymetylową, pozycji C-15 zmodyfikowanej grupą hydroksylową i pozycji C-20 posiadającej grupę hydroksylową. W korzystnym wykonaniu, wiązanie jest utworzone w pozycji C-3 maitanzynolu lub analogu maitanzynolu.
Kalichemicyna
Inny immunokoniugat będący przedmiotem zainteresowania zawiera przeciwciało wiążące CD20 sprzężone z jedną lub większą liczbą cząsteczek kalichemicyny. Antybiotyki z rodziny kalichemicyn są zdolne do wytwarzania pęknięć w dwuniciowym DNA w sub-pikomolarnych stężeniach. W celu przygotowania koniugatów z rodziny kalichemicyn zobacz Patenty USA Nr 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001, 5877296 (wszystkie dla American Cyanamid Company). Strukturalne analogi kalichemicyny, które mogą być zastosowane obejmują, ale nie są ograniczone do nich, γ1', a1 I, a3', N-acetylo-γι', PSAG i θ'1 (Hinman i wsp. Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode i wsp. Cancer Research 58:2925-2928 (1998) i wyżej wspomniane Patenty USA dla American Cyanamid). Innym lekiem anty-nowotworowym, z którym przeciwciało może być sprzężone jest QFA, który jest antyfolianem. Zarówno kalichemicyna, jak i QFA posiadają wewnątrzkomórkowe miejsca działania i nie przechodzą z łatwością przez błony komórkowe. Zatem, pobranie przez komórkę tych środków poprzez internalizację za pośrednictwem przeciwciała bardzo zwiększa ich efekt cytotoksyczny.
Izotopy radioaktywne
W celu selektywnego zniszczenia nowotworu, przeciwciało może zawierać wysoce radioaktywny atom. Do wytworzenia przeciwciał anty-CD20 sprzężonych z izotopami radioaktywnymi dostępne są różne izotopy radioaktywne. Przykłady obejmują At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32,
212
Pb212 i radioaktywne izotopy Lu. Jeżeli koniugat jest użyty w celach diagnostycznych może zawierać atom radioaktywny do badań scyntygraficznych, na przykład tc99m lub I123 lub znacznik spinowy do obrazowania jądrowym rezonansem magnetycznym (NMR) (także znanym jako obrazowanie rezonansem magnetycznym, MRI), taki jak jod-123, ponownie, jod-131, ind-111, fluor-19, węgiel-13, azot-15, tlen-17, gadolin, mangan lub żelazo.
Znaczniki radioaktywne lub inne mogą być włączone do koniugatu znanymi sposobami. Na przykład peptyd może ulegać biosyntezie lub może być syntetyzowany poprzez chemiczną syntezę aminokwasową przy użyciu odpowiednich prekursorów aminokwasów, zawierających, na przykład,
186
Re188 i In111 mogą być przyłączone fluor-19 w miejscu wodoru. Znaczniki, takie jak tc99m lub I123,
Re przez resztę cysteiny w peptydzie. Itr-90 może być przyłączony przez resztę lizyny. Sposób IODOGEN (Fraker i wsp. (1978) Biochem. Biophys. Res. Cominun. 80:49-57 może być zastosowany do włączenia jodu-123. Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy (Chatal, CRC Press 1989) szczegółowo opisuje inne sposoby.
Koniugaty przeciwciała i środka cytotoksycznego mogą być wytworzone przy użyciu różnych dwufunkcyjnych środków sprzęgających białka, takich jak N-sukcynoimidylo-3-(2pirydyloditio) promianian (SPDP), bursztynylo-4-(N-maleimidometylo)cykloheksylo-1-karboksylan, iminotiolan (IT), dwufunkcyjne pochodne imidoestrów (takich jak dimetyIoadipimidat HCl), aktywne estry (takie jak dibursztynylo-suberat, aldehydy (takie jak glutaraldehyd) związki bis-azydowe (takie jak bis (p-azydobenzoilo)heksanodiamina), pochodne bis-diazoniowe (bis-(p-diazobenzoilo)-etylenodiamina), diizocyjaniany (takie jak 2,6-diizocyjanian toluenu) i dwuaktywne związki fluoru (takie jak 1,5-difluoro-2,4PL 212 899 B1
-dinitrobenzen). Na przykład, immunotoksyna w postaci rycyny może być przygotowana, jak opisano w Vitetta i wsp. Science 238:1093 (1987). Kwas izotiocyjanobenzylo-3-metylodietylenotriaminopentaoctwowy (MX-DTPA) wyznakowany węglem-14 jest przykładowym środkiem wprowadzającym do sprzęgania radioaktywnego nukleotydu do przeciwciała. Zobacz WO94/11026. Łącznik może być łącznikiem możliwym do przecięcia ułatwiającym uwolnienie środka cytotoksycznego w komórce. Na przykład, może być użyty łącznik labilny pod wpływem kwasu, łącznik wrażliwy na peptydazy, łącznik fotolabilny, łącznik dimetylowy lub łącznik zawierający dwusiarczek (Chari i wsp. Cancer Research 52:127-131 (1992); Patent USA Nr 5208020).
Terapeutyczne zastosowania przeciwciał wiążących CD20
Przeciwciała wiążące CD20 z wynalazku są użyteczne do leczenia szeregu chorób nowotworowych i nie-nowotworowych włączając choroby autoimmunologiczne i pokrewnych stanów oraz nowotworów CD20-dodatnich włączając chłoniaki i białaczki. Komórki macierzyste (przodkowie komórek B) w szpiku kostnym nie posiadają antygenu CD20, co pozwala na regenerację zdrowych komórek B po leczeniu i powrót do normalnych poziomów w ciągu kilku miesięcy.
Choroby autoimmunologiczne lub stany pokrewne chorobom immunologicznym obejmują zapalenie stawów (reumatoidalne zapalenie stawów, młodzieńcze reumatoidalne zapalenie stawów, zapalenie kości i stawów, artopatia łuszczycowa), łuszczycę, zapalenie skóry, włączając atopowe zapalenie skóry; przewlekłą autoimmunologiczną pokrzywkę, zapalenie wielomięśniowe/zapalenie skórnomięśniowe, martwicę toksyczno-rozpływną naskórkową, układową twardzinę skóry i twardzinę uogólnioną, chorobę zapalną jelit (IBD) (choroba Crohna, wrzodniejące zapalenie okrężnicy), zespół niewydolności oddechowej, zespół ostrego wyczerpania oddechowego dorosłych (ARDS), zapalenie opon, alergiczny nieżyt nosa, zapalenie mózgu, zapalenie błony naczyniowej oka, zapalenie okrężnicy, zapalenie kłębuszków nerkowych, stany alergiczne, wytrysk, astmę, stany obejmujące naciekanie komórek T i przewlekłe stany zapalne, miażdżycę tętnic, autoimmunologiczne zapalenie mięśnia sercowego, niedobór adhezji leukocytów, liszaj rumieniowaty układowy (SLE), toczeń (włączając zapalenie nerek, łysienie tarczowate nienerkowe), cukrzyce zapoczątkowane w wieku młodzieńczym, stwardnienie rozsiane, alergiczne zapalenie mózgu i rdzenia, stany immunologiczne związane z ostrą reakcją opóźnionej nadwrażliwości za pośrednictwem cytokin i limfocytów T, gruźlicę, sarkoidozę, ziarnicę, włączając ziarniniaka Wegenera, agranulocytozę, zapalenie naczyń (włączając ANCA), niedokrwistość aplastyczną, niedokrwistość Diamonda Blackfana, niedokrwistość hemolityczną na tle immunologicznym, włączając autoimmunologiczną anemię hemolityczną (AIHA), niedokrwistość złośliwą, aplazję ubogą w krwinki czerwone (PRCA), niedobór czynnika VIII, hemofilię A, autoimmunologiczną neutropenię, niedokrwistość aplastyczną, leukopenię, choroby związane z diapedezą leukocytów, choroby zapalne ośrodkowego układu nerwowego, zespoły uszkodzeń wielu organów, myasthenia gravis, choroby za pośrednictwem kompleksów antygen-przeciwciało, chorobę przeciwko kłębuszkowej błonie podstawnej, zespół przeciwciała przeciwko fosfolipidom, alergiczne zapalenie nerek, chorobę Becheta, zespół Castelmana, zespół Goodpasteure'a, zespół miasteniczny Lambert-Eatona, zespół Reynouda, zespół Sjorgena, zespół Stevens-Johnsona, odrzucenie przeszczepu organu litego (włączając wstępne leczenie wysokiego miana zestawu reaktywnych przeciwciał, odkładanie się IgA w tkankach itp.) chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD), pęcherze podobne do pęcherzycy, pęcherzyce (wszystkie włączając pęcherzycę zwykłą i liściastą), autoimmunologiczne poliendokrynopatie, chorobę Reitersa, syndrom sztywnego człowieka, olbrzymiokomórkowe zapalenie tętnicy skroniowej, złożone zapalenie nerek o podłożu immunologicznym, chorobę nerek z udziałem IgA, polinefropatie z udziałem IgM lub zapalenie nerek za pośrednictwem IgM, chorobę Werlhofa (itp.), chorobę Moschowitza (TTP), małopłytkowość autoimmunologiczną, chorobę autoimmunologiczną jądra i jajnika, włączając immunologiczne zapalenie jąder i jajnika, pierwotną niedoczynność tarczycy; autoimmunologiczne choroby wydzielania wewnętrznego, włączając autoimmunologiczne zapalenie tarczycy, przewlekłe zapalenie tarczycy (zapalenie tarczycy Hashimoto), podostre zapalenie tarczycy, idopatyczne zapalenie tarczycy, chorobę Addinsona, chorobę Grave'a, autoimmunologiczne zespoły wielogruczołowe (lub zespoły wielogruczołowych endokrynopatii), cukrzyce typu I także określane jako cukrzyce insulino-zależne (IDDM, ang. insulindepenaent diabetes mellitus) i zespół Sheehana; autoimmunologiczne zapalenie wątroby, limfoidalne śródmiąższowe zapalenie płuc (HIV), zarostowe zapalenie oskrzelików (nietransplantacyjne) przeciwko NSIP, zespół Guillain-Barre'a, zapalenie dużych naczyń (włączając zespół bólu wielomięśniowego z wysokim OB oraz zapalenie tętnicy skroniowej olbrzymiokomórkowe (zapalenie Takayasu)), zapalenie naczyń średniej wielkości, (włączając chorobę Kawasaki i zapalenie guzkowate tętnic), zesztywniające zapalenie kręgosłupa, chorobę Bergera (neuropatię
PL 212 899 B1 z udziałem IgA), szybko postępujące zapalenie kłębuszków nerkowych, pierwotną żółciową marskość wątroby, psylozę komorową (celiaklia), krioglobulinemię, ALS, chorobę tętnicy wieńcowej.
Nowotwory CD20-dodatnie są tymi, które zawierają nieprawidłową proliferację komórek z ekspresją CD20 na powierzchni komórki. Nowotwory CD20-dodatnie z komórkami B obejmują CD20-dodatnią chorobę Hodgina włączając chorobę Hodgina z przewagą limfocytów (LPHD); chłoniaka nieziarniczego (NHL); chłoniaki grudkowate (FCC); ostrą białaczkę limfocytową (ALL); przewlekłą białaczkę limfocytową (CLL) ; białaczkę kosmatokomórkową. Chłoniak nieziarniczy obejmuje niskiego stopnia/pęcherzykowatego chłoniaka nieziarniczego (NHL), chłoniaka nieziarniczego małych limfocytów (SLL), pośredniego stopnia/pęcherzykowatego NHL, pośredniego stopnia rozproszonego NHL, wysokiego stopnia immunoblastycznego NHL, wysokiego stopnia limfoblastyczego NHL, wysokiego stopnia NHL z małymi nierozszczepionymi komórkami, masywną chorobę NHL, szpiczakowatego chłoniaka limfocytów, chłoniaka komórek kory mózgowej, chłoniaka związanego z AIDS oraz makroglubulinemię Waldenstroma. Rozważane jest także leczenie nawrotów nowotworów. LPHD jest typem choroby Hodgkina, która ma tendencję do częstych nawrotów pomimo leczenia naświetleniami lub chemioterapią i charakteryzuje się CD20-dodatnimi komórkami nowotworowymi. CLL jest jedną z czterech głównych typów białaczek. Nowotwór dojrzałych komórek B zwanych limfocytami, CLL objawia się postępującą akumulacją komórek we krwi, szpiku kostnym i tkankach limfatycznych.
W specyficznych wykonaniach humanizowane przeciwciała wiążące CD20 i ich funkcjonalne fragmenty są stosowane do leczenia chłoniaka nieziarniczego (NHL), choroby Hodgkina z przewagą limfocytów (LPHD), chłoniaka małych limfocytów (SLL), przewlekłej białaczki limfocytowej, reumatoidalnego zapalenia stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenia stawów, liszaja rumieniowatego układowego (SLE) włączając zapalenie nerek w liszaju rumieniowatym układowym, choroby Wegenera, choroby zapalnej jelit, choroby Werlhofa (ITP), choroby Moschowitza (TTP), małopłytkowości o podłożu autoimmunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, myasthania gravis, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych.
Humanizowane przeciwciała wiążące CD20 lub ich funkcjonalne fragmenty są użyteczne w leczeniu pojedynczym środkiem, np. nawrotów lub opornych na leczenie mało zróżnicowanych lub pęcherzykowych CD20-dodatnich chłoniaków NHL komórek B lub mogą być podane pacjentom w połączeniu z innymi lekami w wielolekowym trybie leczenia.
Chłoniak opieszały jest wolno postępującą nieuleczalną chorobą, w której przeciętny pacjent przeżywa pomiędzy 6 a 10 lat przechodząc szereg okresów ustępowania i nawrotów. W jednym z wykonań humanizowane przeciwciała wiążące antygen CD20 lub ich funkcjonalne fragmenty są zastosowane do leczenia opieszałego chłoniaka NHL.
Parametry pozwalające na oznaczenie skuteczności lub sukcesu leczenia nowotworu będą znane lekarzowi specjalizującemu się w danej chorobie. Ogólnie, lekarz specjalista będzie zwracał uwagę na zmniejszenie oznak i objawów określonej choroby. Parametry mogą obejmować średni czas potrzebny do postępu choroby, czas do ustąpienia objawów, stabilizację choroby.
Poniższe odniesienia opisują chłoniaki i białaczki CLL, ich rozpoznania, leczenie i standardowe procedury medyczne do mierzenia skuteczności leczenia.
Poniższe odniesienia opisują chłoniaki i białaczki CLL, ich rozpoznania, leczenie i standardowe procedury medyczne do mierzenia skuteczności leczenia. CaneIlos GP, Lister, TA, Sklar JL: The Lymphomas. W. B. Saunders Company, Philadelphia, 1998; van Besien K i Cabanillas, F: Clinical Manifestations, Staging and Treatment of Non-Hodgkin's Lymphoma, Rozdz. 70, str 1293-1333, w :Hemacology, Basic Principies and Practice, wyd. 3, red. Hoffman i wsp. (redaktorzy). Churchill Livingstone, Filadelfia, 2003; oraz Rai, K i Patel, D: Chronic Lymphocytic Leukemia, Rozdz. 72, str. 1350-1362, w: Hematology, Basic Principles and Practice, wyd. 3, red. Human i wsp. (redaktorzy). Churchill Livingstone, Philadelphia, 2000.
Parametry stosowane do oznaczenia wydajności lub sukcesu leczenia choroby autoimmunologicznej lub choroby pokrewnej chorobie autoimmunologicznej będą znane lekarzowi specjalizującemu się w odpowiedniej chorobie. Ogólnie, lekarz specjalista będzie zwracał uwagę na zmniejszenie się oznak i objawów określonej choroby. Niżej podane są w pewnym sensie przykładami.
W jednym z wykonań przeciwciała z wynalazku są użyteczne do leczenia reumatoidalnego zapalenia stawów (RA). RA charakteryzuje się zapaleniem wielu stawów, utratą chrząstki i erozją kości, która prowadzi do uszkodzenia stawów i ostatecznie do zmniejszenia funkcjonowania stawów. Dodatkowo, ponieważ RA jest chorobą układową, może dawać efekty w innych tkankach, takich jak płuca,
PL 212 899 B1 oczy i szpik kostny. Mniej niż 50 procent pacjentów, którzy cierpią na RA przez dłużej niż 10 lat może nadal pracować lub normalnie funkcjonować w życiu codziennym.
Przeciwciała mogą być użyte jako terapia pierwszej linii we wczesnym RA (tj., takim., który nie zetknął się z metotreksatem (MTX)) i jako monoterapia Iub w kombinacji, np., z MTX lub cyklofosfamidem. Przeciwciała mogą być także zastosowane w leczeniu jako terapia drugiej linii dla pacjentów z nawrotami po leczeniu DMARD i/lub MTX i jako monoterapia lub kombinacja np., z MTX. Humanizowane przeciwciała wiążące CD20 są użyteczne do zapobiegania lub kontrolowania uszkodzenia stawów, opóźniania uszkodzenia strukturalnego, zmniejszania bólu związanego z zapaleniem w RA i ogólnie zmniejszają oznaki i objawy w RA o natężeniu umiarkowanym i ciężkim. Pacjent cierpiący na RA może być leczony humanizowanym przeciwciałem przed, po lub wraz z leczeniem innymi lekami stosowanymi w leczeniu RA (zobacz terapię kombinowaną poniżej). W jednym z wykonań, pacjenci, u których wcześniej nie powiodło się leczenie lekami antyreumatoidalnymi zmieniającymi objawy choroby i/lub odpowiedź na metotreksat była nieodpowiednia są leczeni humanizowanym przeciwciałem wiążącym CD20 z wynalazku. W jednym z wykonań tego leczenia pacjenci są poddawani 17dniowemu trybowi leczenia, podczas którego otrzymują samo humanizowane przeciwciało wiążące CD20 (1 g przez wlewy dożylne w dniu 1 i 15); przeciwciało wiążące CD20 plus cyklofosfamid (750 mg przez wlew dożylny w dniu 3 i 17) lub przeciwciało wiążące CD20 plus metotreksat.
Jeden ze sposobów oceny skuteczności leczenia w RA jest oparty na kryteriach Amerykańskiego Kolegium Reumatologii (ACR, ang. American College of Rheumatology), które wśród różnych rzeczy mierzą procent polepszenia w tkliwych uciskowo i spuchniętych stawach. Pacjent cierpiący na RA może być oceniony, na przykład, na ACR 20 (20 procent polepszenia) w porównaniu z brakiem leczenia przeciwciałem (np. linia podstawowa sprzed leczenia) lub leczeniem z użyciem placebo. Inne sposoby oceny skuteczności leczenia przeciwciałem obejmują punktację przy użyciu promieniowania X, taką jak punktacja Sharpa z użyciem promieniowania X (ang. Sharp X-ray score), stosowaną do punktacji uszkodzenia strukturalnego, takiego jak erozja kości i zwężenie przestrzeni stawowej. Pacjenci mogą być także ocenieni pod względem zapobiegania lub polepszenia w utracie czynności opartego na punktacji Kwestionariusza Oceny Zdrowia (HAQ, ang. Health Assessment Questionnaire, punktacji AIMS, SF-36 w okresach czasu podczas leczenia lub po leczeniu. Kryteria ACR 20 mogą obejmować 20% polepszenie zarówno w ocenie tkliwości dotyku (uczucia bólu) stawu i oceny spuchnięcia stawu plus 20% polepszenie w przynajmniej 3 z 5 dodatkowych pomiarów:
1. ocena uczucia bólu przez pacjenta przy użyciu wzrokowej skali analogowej (VAS, ang. visual analog scale),
2. ogólna ocena pacjenta pod względem aktywności choroby (VAS),
3. ogólna ocena lekarza pod względem aktywności choroby (VAS),
4. samoocena pacjenta pod względem utraty czynności mierzona przy użyciu Kwestionariusza Oceny Zdrowia, oraz
5. czynniki fazy ostrej, CRP lub ESR.
ACR 50 i ACR 70 są zdefiniowane analogicznie. Korzystnie pacjentowi podaje się ilość przeciwciała wiążącego CD20 z wynalazku wystarczającą do osiągnięcia przynajmniej wyniku ACR 20, korzystnie przynajmniej ACR 30, bardziej korzystnie przynajmniej ACR 50, nawet bardziej korzystnie przynajmniej ACR 70, najbardziej korzystnie przynajmniej ACR 75 i wyższego.
Artropatia łuszczycowa posiada unikalne i odrębne cechy radiograficzne. Erozja stawów i zwężenie przestrzeni stawowej dla artropatii łuszczycowej może być również ocenione przy zastosowaniu punktacji Sharpa. Humanizowane przeciwciała wiążące CD20 z wynalazku mogą być zastosowane do zapobiegania uszkodzeniu stawów, jak również do zmniejszenia oznak i objawów choroby.
Jeszcze innym aspektem wynalazku jest sposób leczenia liszaja lub SLE przez podawanie pacjentowi cierpiącemu na SLE terapeutycznie skutecznej ilości humanizowanego przeciwciała z wynalazku wiążącego CD20. Punktacja SLEDAI dostarcza ilościowej oceny aktywności choroby. SLEDAI jest ważonym indeksem 24 klinicznych i laboratoryjnych parametrów, o których wiadomo, że są skorelowane z aktywnością choroby, w zakresie liczbowym 0-103. Zobacz, Bryan Gescuk & John Davis, Novel therapeutic agent for systemic lupus erythematosus w Current Opinion in Rheumatology 2002, 14:515-521. Uważa się, że nawroty choroby w nerkach i inne objawy liszaja są spowodowane obecnością przeciwciał wiążących się do dwuniciowego DNA. Pacjenci poddani leczeniu przeciwciałem mogą być monitorowani przez ten czas pod względem nawrotu choroby w nerkach, która jest zdefiniowana jako znaczący, powtarzalny wzrost surowiczej kreatyniny, poziomu białka w moczu i lub krwi w moczu. Alternatywnie lub dodatkowo, pacjenci mogą być monitorowani pod względem poziomu
PL 212 899 B1 przeciwciał antyjądrowych lub przeciwciał wiążących się z dwuniciowym DNA. Leczenie SLE obejmuje podawanie dużych dawek kortykosteroidów i/lub cyklofosfamidu (DHCC).
Artropatie kręgosłupa są grupą zaburzeń stawów obejmującą zesztywniające zapalenie kręgosłupa, artropatię łuszczycową i chorobę Crohna. Sukces w leczeniu może być określony w oparciu o narzędzia obejmujące ogólną ocenę wykonaną przez pacjenta i lekarza.
Do leczenia łuszczycy są stosowane różne sposoby leczenia; leczenie zmienia się w sposób bezpośredni do natężenia choroby. Pacjenci z bardziej łagodną postacią łuszczycy typowo otrzymują typowe leczenie, takie jak domiejscowe steroidy, antralinę, kalcipotrien, klobetazol i tazaroten, do prowadzenia choroby, podczas gdy u pacjentów z umiarkowanymi i ciężkimi objawami łuszczycy stosuje się w większym stopniu terapie układowe (metotreksat, retinoidy, cyklosporynę, PUVA i LTVB). Stosowane są również dziegcie. Terapie te są kombinacją względów bezpieczeństwa, czasochłonności trybu leczenia lub dogodnych procesów leczenia. Ponadto, niektóre z nich wymagają drogiego sprzętu i przeznaczonej do tego celu przestrzeni biurowej. Leczenie układowe może powodować poważne skutki uboczne, włączając nadciśnienie, hiperlipidemię, zahamowanie czynności szpiku, chorobę wątroby, chorobę nerek i rozstrój żołądkowy. Także, zastosowanie fototerapii może zwiększyć prawdopodobieństwo pojawienia się nowotworów skóry. Dodatkowo, do niewygody i dyskomfortu związanego z zastosowaniem terapii miejscowych, fototerapia i leczenie układowe wymaga okresowego badania pacjentów na początku i końcu terapii oraz monitorowania czasu ekspozycji z powodu skutków ubocznych tych terapii.
Skuteczność leczenia łuszczycy jest oznaczana przez monitorowanie zmian w klinicznych oznakach i objawach choroby włączając zmiany w Ogólnej Ocenie przez Lekarza (PGA, ang. Physician's Global Assessment (PGA), punktację Powierzchni Łuszczycy i Indeksu Natężenia Objawów (PASI, ang. Psoriasis Area and Severity Index), Ocenę Objawów Łuszczycy (PSA, ang. Psoriasis Symptom Assessment) w porównaniu z stanem podstawowym. Pacjent może być badany okresowo w trakcie leczenia we wzrokowej skali analogowej użytej do wskazania stopnia swędzenia doznawanego w określonych punktach czasowych.
Pacjenci mogą doznać reakcji na wlew lub objawów związanych z wlewem podczas ich pierwszego wlewu przeciwciała terapeutycznego. Natężenie tych objawów zmienia się i zazwyczaj są one odwracalne po interwencji medycznej. Objawy te obejmują, ale nie są do nich ograniczone, chorobę podobną do grypy przebiegającą z gorączką, dreszcze/zesztywnienie mięśni, mdłości, pokrzywkę, ból głowy, skurcz oskrzeli, obrzęk naczynioworuchowy. Pożądane byłoby zminimalizowanie reakcji na wlew w sposobach leczenia choroby z niniejszego wynalazku. Zatem, innym aspektem wynalazku jest ujawniony sposób leczenia chorób przez podawanie humanizowanego przeciwciała wiążącego CD20, znamiennego tym, że przeciwciało posiada zmniejszoną lub brak cytotoksyczności zależnej od dopełniacza i skutkuje zmniejszonymi objawami związanymi z wlewem w porównaniu z przeciwciałem. Rituxan®. W jednym z wykonań humanizowanym przeciwciałem wiążącym. CD20 jest 2H7.v116.
Dawka
W zależności od wskazania do leczenia i czynników wpływających na dawkowanie, które lekarz specjalista w tej dziedzinie będzie znał, przeciwciała z wynalazku będą podawane w dawce, która jest skuteczna do leczenia tego wskazania przy minimalizacji toksyczności i skutków ubocznych. Do leczenia nowotworu CD20-dodatniego lub choroby autoimmunologicznej, terapeutycznie skuteczna
2 2 dawką będzie dawka w zakresie około 250 mg/m2 do około 400 mg/m2 lub 500 mg/m2, korzystnie oko22 ło 250-375 mg/m2. W jednym z wykonań zakres dawki wynosi 275-375 mg/m2. W jednym. z wykonań leczenia CD20-dodatniego nowotworu komórek B przeciwciało jest podawane w zakresie 300-375 2 mg/m2. Do leczenia pacjentów cierpiących na chłoniaka komórek B, takiego jak chłoniak nieziarniczy, w specyficznym wykonaniu, przeciwciała anty-CD20 i humanizowane przeciwciała anty-CD20 z wyna2 lazku będą podawane ludzkiemu pacjentowi w dawce 10 mg/kg lub 375 mg/m2. Do leczenia NHL jeden z trybów dawkowania polegałby na podawaniu jednej dawki kompozycji przeciwciała w dawce 10 mg/kg w pierwszym tygodniu leczenia, po którym następowałaby dwutygodniowa przerwa, następnie podawana jest druga dawka tej samej ilości przeciwciała. Ogólnie, pacjenci cierpiący na NHL otrzymują takie leczenie raz w ciągu roku po ponownym pojawieniu się chłoniaka, takie leczenie może być powtórzone. W innym trybie dawkowania pacjenci leczeni na niskiego stopnia NHL otrzymują 2 przez cztery tygodnie wersję humanizowanego 2H7, korzystnie v16 (375 mg/m2 tygodniowo), po których występują poczynając od piątego tygodnia, trzy dodatkowe dawki przeciwciała plus standardowa chemioterapia CHOP (cyklofosfamid, doksorubicyna, winkrystyna i prednison) lub CVP (cyklofosfamid, winkrystyna, prednison), które podaje się co trzy tygodnie w trzech cyklach.
PL 212 899 B1
Do leczenia reumatoidalnego zapalenia stawów, w jednym z wykonań, zakres dawki dla prze22 ciwciała humanizowanego wynosi 125 mg/m2 (równoważnej do około 200 mg/dawkę) do 600 mg/m2, podawanych w dwóch dawkach, np., pierwsza dawka 200 mg jest podawana jednego dnia, po której następuje druga dawka 200 mg w 15 dniu. W różnych wykonaniach dawka wynosi 250 mg/dawkę, 275 mg, 300 mg, 325 mg, 350 mg, 375 mg, 400 mg, 425 mg, 450 mg, 475 mg, 500 mg, 525 mg,
550 mg, 575 mg, 600 mg.
W leczeniu choroby, przeciwciała wiążące CD20 z wynalazku mogą być podawane pacjentowi bez przerwy przez dłuższy okres lub z przerwami, jak zostało określone przez lekarza specjalistę w tej chorobie.
Pacjent, któremu podaje się lek przez dożylny wlew lub podskórnie może doznać niekorzystnych objawów, takich jak gorączka, drgawki, uczucie palenia, osłabienie, ból głowy. W celu złagodzenia lub zminimalizowania tych niekorzystnych objawów pacjent może otrzymać począt-kową(e) dawkę(i) przygotowującą(e) przeciwciała, po której(ych) jest podawana dawka terapeutyczna. Dawka(i) przygotowująca(e) będzie(ą) niższa(e) niż dawka terapeutyczna w celu przygotowania pacjenta na tolerowanie wyższych dawek.
Sposób podawania
Przeciwciała wiążące CD20 są podawane ludzkiemu pacjentowi według znanych sposobów, takich jak podawanie dożylne, np. jako jedna duża dawka lub wlew ciągły trwający pewien okres czasu, podawanie podskórne, domięśniowe, śródotrzewnowe, do płynu mórgowordzeniowego, dostastawowe, wewnątrzmaziówkowe, dooponowe lub rundy inhalacji, zazwyczaj przez podawanie dożylne lub podskórne.
W jednym z wykonań humanizowane przeciwciało 2H7 jest podawane przez wlew dożylny z 0,9% roztworem chlorku sodu jako nośnikiem wlewowym.
Terapia kombinowana
W leczeniu nowotworów komórek B opisanych powyżej, pacjent może być leczony przeciwciałami wiążącymi CD20 z niniejszego wynalazku w połączeniu z jednym lub większą ilością środków terapeutycznych, takich jak środek chemioterapeutyczny w wielolekowym trybie leczenia. Przeciwciało wiążące CD20 może być podane razem, sekwencyjnie lub zamiennie ze środkiem terapeutycznych lub po braku odpowiedzi po zastosowaniu innej terapii. Standardowa chemioterapia do leczenia chłoniaka może obejmować cyklofosfamid, cytarabinę, melfalan i mitoksantron plus melfalan. CHOP jest jednym z najbardziej powszechnych trybów chemioterapii do leczenia chłoniaka nieziarniczego. Poniższe leki są stosowane w trybie leczenia CHOP: cyklofosfamid (firmowa nazwa cytoksan, neosar); adriamycyna (doksorubicyna/hydroksyrubicyna); winkrystyna (Oncovin); i prednisolon (czasami nazywany Deitasone lub Orasone). W określonych wykonaniach, przeciwciało wiążące CD20 jest podawane pacjentowi potrzebującemu go w kombinacji z jednym lub większą liczbą poniższych środków chemioterapeutycznych, takich jak doksorubicyna, cyklofosfamid, winkrystyna i prednisolon. W specyficznym wykonaniu pacjent cierpiący na chłoniaka (takiego jak chłoniak nieziarniczy) jest leczony przeciwciałem anty-CD20 z niniejszego wynalazku w połączeniu z terapią CHOP (cyklofosfamid, doksorubicyna, winkrystyna i prednison). W innym wykonaniu, pacjent cierpiący na nowotwór może być leczony humanizowanym przeciwciałem wiążącym CD20 z wynalazku w połączeniu z chemioterapią CVP (cyklofosfamid, winkrystyna i prednison). W specyficznym wykonaniu pacjent cierpiący na chłoniaka NHL CD20-dodatniego jest leczony humanizowanym przeciwciałem 2H7.v16 w połączeniu z CVP. W specyficznym wykonaniu leczenia białaczki CLL przeciwciało wiążące CD20 jest podawane w połączeniu z chemioterapią jednym lub obydwoma środkami w postaci fludarabiny i cytoksanu.
W leczeniu chorób autoimmunologicznych lub stanów pokrewnych chorobom autoimmunologicznym opisanych powyżej, pacjent może być leczony przeciwciałami wiążącymi CD20 z niniejszego wynalazku w połączeniu z drugim środkiem terapeutycznym, takim jak środek immunosupresyjny, w taki sposób, jak wielolekowy tryb leczenia. Przeciwciało wiążące CD20 może być wraz, sekwencyjnie lub zamiennie ze środkiem lmmunosupresyjnym lub po braku odpowiedzi po leczeniu inną terapią. Środek immunosupresyjny może być podawany w tych samych lub mniejszych dawkach niż przedkładane w tej dziedzinie. Korzystna dawka dopełniająca pomocniczego środka immunosupresyjnego będzie zależeć od wielu czynników, włączając typ choroby, który jest leczony, jak również historia pacjenta.
Środek immunosupresyjny stosowany tutaj do pomocniczej terapii odnosi się do związków, których działanie polega na supresji lub maskowaniu systemu immunologicznego pacjenta. Takie środki obejmowałyby związki, które hamują wytwarzanie cytokin, zmniejszają lub hamują wytwarzanie
PL 212 899 B1 auto-antygenów lub maskują antygeny MHC. Przykłady takich środków obejmują steroidy, takie jak glukokortykosteroidy, np., prednison, metyloprednisolon i deksametason; pirymidyny 2-amino-6-arylo-5-podstawione, (zobacz Patent USA Nr 4665077), azatioprynę, (lub cyklofosfamid, jeżeli występuje niepomyślna reakcja na azatioprynę); bromokryptynę; glutaraldehyd (który maskuje antygeny MHC, jak opisano w Patencie USA Nr 4120649); antyidiotypowe przeciwciała dla antygenów MHC i fragmentów MHC; cyklosporynę A; cytokinę lub antagonistów receptora cytokiny włączając przeciwciała przeciwko interferonowi γ, β lub α; przeciwciała przeciwko czynnikowi martwicy nowotworu a; przeciwciała przeciwko czynnikowi martwicy nowotworu β; przeciwciała przeciwko interleukinie-2; przeciwciała przeciwko receptorowi dla IL-2; przeciwciała anty-L3T4; heterologiczne przeciwciała przeciwko globulinie limfocytów; przeciwciała pan-T, korzystnie przeciwciała anty-CD3 lub anti-CD4/CD4a; rozpuszczalny peptyd zawierający domenę wiążącą LFA-3 (WO90/08187 opublikowany 7/26/90); streptokinazę; TGF-β; streptodornazę; RNA lub DNA z gospodarza; FK506; RS-61443; deoksyspergalinę; rapamycynę; receptor komórek T (Patent USA Nr 5114721); fragmenty receptora komórek T (Offner i wsp., Science 251:430-432 (1991); WO90/11294; i WO91/01133); oraz przeciwciała przeciwko receptorowi komórek T (EP 340109), takie jak T10B9.
Do leczenia reumatoidalnego zapalenia stawów pacjent może być leczony przeciwciałem CD20 z wynalazku w połączeniu z dowolnym jednym lub większą ilością następujących leków: DMARDS (anty-reumatyczne leki modyfikujące przebieg choroby, ang. disease-modifying anti-rheumatic drugs) (np., metotreksat), NSAI lub NSAID (niesterydowe leki przeciwzapalne, ang. non-steroidal anti-inflammatory drugs), HUMIRA™ (adalimumab; Abbott Laboratories), ARAVA® (Ieflunomid), REMICADE® (infliksimab; Centocor Inc., of Malvern, Pa), ENBREL (etanercept; Immunex, WA), inhibitor COX-2. Lekami DMARD powszechnie stosowanymi w RA są hydroksyklorokwina, sulfasalazyna, metotreksat, leflunimid, etanercept, infiksimab, azatiopryna, D-penicyloamina, Gold (doustny), Gold (domięśniowy), minocyklina, cyklosporyna, immunoadsorcyjne białko A ze Staphylococcus. Adalimumab jest ludzkim przeciwciałem monoklonalnym, które wiąże się do TNFa. Ingliksimab jest immunoadhezyjnym białkiem fuzyjnym złożonym z zewnątrz komórkowej, wiążącej ligand części ludzkiego receptora czynnika martwicy nowotworu (TNFR) o masie 75 kD (p75) połączonej do części Fc ludzkiej IgG1. W celu konwencjonalnego leczenia RA zobacz, np., Guidelines for the management of rheumatoidarthritis Arthritis & Rheumatism 46(2):328-346 (luty, 2002). W specyficznym wykonaniu pacjent cierpiący na RA jest leczony przeciwciałem CD20 z wynalazku w połączeniu z metotreksatem (MTX). Przykładowa dawka MTX wynosi około 7,5-25 mg/kg/wk. MTX może być podawany doustnie lub podskórnie.
Do leczenia zesztywniającego zapalenia stawów, artropatii łuszczycowej i choroby Crohna pacjent może być leczony przeciwciałem wiążącym CD20 z wynalazku w połączeniu, na przykład, z Remicade® (infliksimab; z Centocor Inc., z Malvern, Pa.), ENBREL (etanercept; Immunex, WA).
Leczenie SLE obejmuje kortykosteroidy i/lub cyklofosfamid (HDCC) podawane w dużych dawkach.
Do leczenia łuszczycy pacjentom może być podawane przeciwciało wiążące CD20 w połączeniu z leczeniem miejscowym, takim jak domiejscowe steroidy, antralina, kalcipotrien, klobetasol i tazaroten lub z metotreksatem, retinoidami, cyklosporyną, terapiami PUVA i UVB. W jednym z wykonań pacjent cierpiący na łuszczycę jest leczony przeciwciałem wiążącym CD20 sekwencyjnie lub wraz z cyklosporyną.
Preparaty farmaceutyczne
Preparaty farmaceutyczne przeciwciał wiążących CD20 stosowanych według niniejszego wynalazku są przygotowywane w celu przechowywania przez zmieszanie przeciwciała posiadającego pożądany stopień czystości z opcjonalnymi akceptowalnymi farmaceutycznie nośnikami, zaróbkami lub stabilizatorami (Remington's Pharmaceutical Sciences, wydanie 16, Osol, A. Ed. (1980)), w postaci preparatów liofilizowanych lub roztworów wodnych. Akceptowalne nośniki, zaróbki lub stabilizatory są nietoksyczne dla biorców w zastosowanych dawkach i stężeniach i obejmują bufory, takie jak fosforanowy, cytrynianowy i innych kwasów organicznych; przeciwutleniacze włączając kwas askorbinowy i metioninę; środki konserwujące (takie jak oktadecylodimetylobenzylochlorek amonu; chlorek heksametonu, chlorek benzalkonu, chlorek benżetonu; alkohol fenylowy, butylowy lub benzylowy; alkiloparabeny, takie jak metolo- Iub propyloparabeny; katechol; rezorcinol; cykloheksanol; 3-pentanol; i m-kresol; polipeptydy małocząsteczkowe (mniej niż 10 reszt); białka, takie jak albumina surowicza, żelatyna lub immunoglobuliny; polimery hydrofilowe, takie jak oliwinylopirolidon; aminokwasy, takie jak glicyna, glutamina, asparagina, histydyna, arginina lub lizyna; monosacharydy, disacharydy i inne wodorowęglany włączając glukozę, mannozę lub dekstryny; środki chelatujące, takie jak EDTA; cukry,
PL 212 899 B1 takie jak glukoza, mannitol, trehaloza lub sorbitol; przeciwjony tworzące sole, takie jak jony sodu; kompleksy metali (np. kompleksy Zn-białko); oraz/lub surfaktanty, takie jak TWEEN™, PLURONICS™ lub glikol polietylenowy (PEG).
Przykładowe preparaty przeciwciała anty-CD20 są opisane w WO98/56418, wyraźnie włączony tutaj przez odniesienie. Inny preparat jest płynnym preparatem składającym się z wielu dawek zawierającym przeciwciało anty-CD20 w stężeniu 40 mg/ml, 25 mM octan, 150 mM trehalozę, 0,9% alkoholu benzylowego, 0,02% polisorbatu 20 o pH 5,0, który posiada minimalny czas przydatności do użycia dwa lata przy przechowywaniu w 2-8°C. Inny preparat anty-CD20 będący przedmiotem zainteresowania zawiera 10 mg/ml przeciwciała w 9,0 mg/ml chlorku sodu 7,35 mg/ml dwuwodnego octanu sodu, 0,7 mg/ml polisorbatu 80 i sterylną wodę do wstrzyknięcia, pH 6.5. Jeszcze inny wodny preparat farmaceutyczny zawiera 10-30 mM octan sodu od pH około 4,8 do około 5,5, korzystnie pH 5,5, polisorbat jako surfaktant w ilości około 0,01-0,1% obj./obj., trehalozę w ilości około 2-10% w/obj. i alkohol benzylowy jako środek konserwujący (Patent USA Nr 6171586). Preparaty liofilizowane zaadoptowane do podania podskórnego są opisane w WO97/04801. Takie liofilizowane preparaty mogą być rekonstytuowane odpowiednim rozpuszczalnikiem do wysokiego stężenia białka i rekonstytuowany preparat może być podany podskórnie ssakowi, który jest tutaj leczony.
Jednym z preparatów humanizowanych wariantów 2H7 jest przeciwciało w stężeniu 12-14 mg/ml w 10 mM histydynie 6% glukozie, 0,02% polisorbacie 20, pH 5,8.
W specyficznym wykonaniu preparat wariantów 2H7 a w szczególności 2H7.v16 jest utworzony z 20 mg/ml przeciwciała w 10 mM siarczanie histydyny, 60 mg/ml glukozy, 0,2 mg/ml polisorbatu 20 i sterylnej wody do wstrzyknięcia w pH 5,8.
Preparat tutaj może także zawierać więcej niż jeden składnik aktywny konieczny do leczenia określonego wskazania, korzystnie te, z uzupełniającymi się aktywnościami, które nie oddziałują niekorzystnie pomiędzy sobą. Na przykład, może być pożądane, aby ponadto dostarczyć środek cytotoksyczny, środek chemioterapeutyczny, cytokinę lub środek immunosupresyjny (np. jeden z tych, które działają na komórki T, taki jak cyklosporyna lub przeciwciało, które wiąże komórki T, np., jedno z tych, które wiążą LFA-1). Skuteczna ilość takich innych środków zależy od ilości przeciwciała obecnego w preparacie, typu choroby albo zaburzenia lub leczenia i innych czynników przedyskutowanych powyżej. Są one stosowane ogólnie w tych samych dawkach i sposobie podawania, jak opisano tutaj lub od około 1 do 99% dawek dotychczas zastosowanych.
Przeciwciało może być także uwięzione w mikrokapsułki przygotowane, na przykład przez techniki koacerwacji lub przez polimeryzację międzyfazową (na przykład, odpowiednio mikrokapsułki z hydroksymetylocelulozy lub żelatyny oraz mikrokapsułki z poli(metylometaoctanu)), w koloidalne systemy dostarczania leków (na przykład liposomy, mikrosfery albuminy, mikroemulsje, nanocząstki i nanokapsułki) lub w makroemulsje. Takie techniki są ujawnione w Remington's Pnarmaceutical Sciences, wydanie 16, Oslo, A., red., (1980).
Mogą być przygotowane preparaty o długotrwałym uwalnianiu. Odpowiednie przykłady preparatów o długotrwałym uwalnianiu obejmują półprzepuszczalne matryce stałych polimerów hydrofobowych zawierających antagonistę, które to matryce są w postaci ukształtowanych wyrobów, np., błon lub mikrokapsułek. Przykłady matrycy o spowolnionym uwalnianiu obejmują poliestry, hydrożele (na przykład, poli(2-hydroksyetylometakrylan) lub poli(alkohol winylowy) polilaktydy (Patent USA Nr 3773 919), kopolimery kwasu L-glutaminowego i etylo-L-glutaminianu), niedegradowalny etyleno-winylo-octan, degradowalne kopolimery kwas mleczanowy-kwas glikolowy, takie jak LUPRON DEPOT™ (nadające się do wstrzyknięcia mikrosfery złożone z kopolimeru kwas mleczanowy-kwas glikolowy oraz octanu leuprolidu) oraz kwas poli-D-(-)-3-hydroksybutylowy.
Preparaty stosowane do podania in vivo muszą być sterylne. To jest z łatwością osiągane przez filtrację przez sterylne błony do filtracji.
Produkty przemysłowe i zestawy
Innym wykonaniem wynalazku jest produkt przemysłowy zawierający materiały użyteczne do leczenia chorób autoimmunologicznych i stanów pokrewnych chorobom autoimmunologicznym oraz nowotworów CD20-dodatnich, takich jak chłoniak nieziarniczy. Produkt przemysłowy zawiera pojemnik i etykietkę lub ulotkę w pojemniku lub związaną z pojemnikiem. Odpowiednie pojemniki obejmują, na przykład, butelki, fiolki, strzykawki, itp. Pojemniki mogą być utworzone z różnych materiałów, takich jak szkło lub plastik. Pojemnik zawiera kompozycję, która jest skuteczna do leczenia stanu chorobowego i może posiadać sterylne ujście (na przykład pojemnik może być workiem zawierającym roztwór dożylny lub fiolką posiadającą korek możliwy do przebicia przez podskórną igłę do iniekcji. Przynajmniej
PL 212 899 B1 jeden środek aktywny w kompozycji jest przeciwciałem wiążącym CD20 z wynalazku. Etykietka lub wkładka/ulotka wskazuje, że kompozycja jest stosowana do leczenia określonego stanu chorobowego. Etykietka lub ulotka będzie ponadto zawierać instrukcje do podawania pacjentowi kompozycji przeciwciała. Ulotka dotyczy instrukcji zwyczajowo włączonych do komercyjnych opakowań produktów terapeutycznych, które zawierają informacje o wskazaniach, stosowaniu, dawkach, podawaniu, przeciwwskazaniach i/lub ostrzeżenia dotyczące zastosowania takich terapeutycznych produktów. W jednym z wykonań, ulotka wskazuje, że kompozycja jest stosowana do leczenia chłoniaka nieziarniczego.
Dodatkowo, produkt przemysłowy może ponadto zawierać drugi pojemnik zawierający farmaceutycznie akceptowalny bufor, taki jak bakteriostatyczna woda do wstrzyknięcia (BWFI), sól fizjologiczna buforowana fosforanem, roztwór Ringera i roztwór dekstrozy. Może on ponadto zawierać inne materiały pożądane z punktu widzenia komercyjnego i użytkownika, włączając inne bufory, rozcieńczalniki, filtry, igły i strzykawki.
Dostarczone są także zestawy, które są użyteczne do różnych celów, np. do oznaczenia zabijania komórek B, jako pozytywna kontrola do oznaczeń apoptozy, do oczyszczania lub immunowytrącania CD20 z komórek. Do izolacji i oczyszczania CD20, zestaw może zawierać przeciwciało anty-CD20 sprzężone z kulkami (np., kulkami sefarozy). Mogą być zestawy, które zawierają przeciwciała do detekcji i oznaczenia ilości CD20 in vitro, np. w analizie ELISA lub Western blot. Jak w przypadku produktu przemysłowego, zestaw zawiera pojemnik z etykietką lub ulotką na pojemniku lub związaną z pojemnikiem. Pojemnik zawiera kompozycję zawierającą przynajmniej jedno przeciwciało anty-CD20 z wynalazku. Mogą być dołączone dodatkowe pojemniki, które zawierają, np., rozcieńczalniki i bufory, przeciwciała kontrolne. Etykietka lub ulotka może dostarczać opisu kompozycji, jak również instrukcji do zamierzonego zastosowania diagnostycznego in vitro.
CD20 z małpy Cynomolgus
Wynalazek dostarcza wyizolowanego kwasu nukleinowego zawierającego sekwencję nukleotydową CD20 z małpy Cynomolgus, jak pokazano na Fig. 19. W jednym z wykonań kwasem nukleinowym jest cDNA. W jednym z wykonań, kwas nukleinowy kodujący małpi CD20 jest wektorem ekspresyjnym do ekspresji w komórce gospodarza. Sekwencja nukleotydowa w wektorze ekspresyjnym jest funkcjonalnie połączona do sekwencji kontrolującej ekspresję, takiej jak promotor lub promotor i sekwencja wzmacniająca ekspresję. Sekwencja kontrolująca ekspresję może być natywną sekwencją normalnie związaną z genem CD20 w Cynomolgus lub być heterologiczna względem genu. Dostarczony jest także polipeptyd zawierający sekwencję aminokwasową [Fig. 19 i 20] CD20 z małpy Cynomolgus, jak również komórki gospodarza zawierające kwas nukleinowy kodujący CD20 z Cynomolgus. W jednym z aspektów komórki gospodarza są komórkami eukariotycznymi, np., komórkami CHO. Rozważane są również białka fuzyjne zawierające sekwencję aminokwasową CD20 z Cynomolgus lub fragmenty sekwencji.
Przykłady doświadczalne
P r z y k ł a d 1
Humanizowanie mysiego przeciwciała monoklonalnego 2H7 anty-CD20
Humanizowanie mysiego przeciwciała anty-ludzki CD20, 2H7 (także określanego tutaj jako m2H7, m od mysi) zostało wykonane w szeregu etapów ukierunkowanej mutagenezy. Opisano sekwencje regionu zmiennego mysiego przeciwciała 2H7 i chimeryczne 2H7 z mysią domeną V i ludzką domeną C, zobacz, np., Patenty USA Nr 5846818 oraz 6204023. Reszty CDR w 2H7 zostały zidentyfikowane przez porównanie sekwencji aminokwasowej mysich domen zmiennych 2H7 (ujawnionych w Patencie USA Nr 5846818) z sekwencjami znanych przeciwciał (Kabat i wsp., Sequences of proteins of immunological interest, Wyd. 5. Publiczna Służba Zdrowia, Narodowy Instytut Zdrowia, Bethesda, MD (1991)). Regiony CDR łańcucha lekkiego i ciężkiego zostały zdefiniowane na podstawie hiperzmienności sekwencji (Kabat i wsp., powyżej) i są pokazane odpowiednio na Fig. 1A i IB. Do wprowadzenia wszystkich sześciu mysich regionów CDR z 2H7 do kompletnego szkieletu ludzkiego Fab odpowiadającego sekwencji konsensusowej VKI, VHIII (podgrupa I VL kappa, podgrupa II VH) zawartego na plazmidzie pVX4 (Fig. 2) zastosowano mutagenezę ukierunkowaną z użyciem syntetycznych oligonukleotydów (Tabela 1) (Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. 82:488-492 (1985)).
Fagmid pVX4 (Fig. 2 został zastosowany do mutagenezy, jak również do ekspresji cząsteczek F(ab) w E. coli. Oparty na fagmidzie pb0720, pochodnej pB0475 (Cunningham i wsp., Science 243:1330-1336 (1989)) pVX4 zawiera fragment DNA kodujący humanizowany konsensusowy łańcuch lekki κ podgrupy I (VlkI-Cl) humanizowany konsensusowy łańcuch ciężki podgrupy III (VHIII-CH1) przeciwciała anty-IFN-a (interferon a). pVX4 posiada także promotor alkalicznej fosfatazy i sekwencję
PL 212 899 B1
Shine-Dalgarno obydwie pochodzące z innego wcześniej opisanego plazmidu opartego na pUC119, pAK2 (Carter i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285 (1992)). Pomiędzy DNA kodującym lekki i ciężki łańcuch F(ab) zostało wprowadzone unikalne miejsce restrykcyjne Spe1. Pierwsze 23 aminokwasy zarówno w ciężkim i lekkim łańcuchu anty-IFN-α są sekwencją sygnału sekrecji StII (Chang i wsp., Gene 55: 189-196 (1987)).
W celu konstrukcji wersji 2H7 z zamienionymi regionami CDR (2H7.v2) wykonano mutagenezę ukierunkowaną na matrycy pVX4 zawierającej deoksyurydynę; wszystkie sześć regionów CDR anty-IFN -a zostało zmienionych na regiony CDR mysiego 2H7. Powstała cząsteczka jest określana jako wersja 2 humanizowanego 2H7 (2H7.v2) lub wersja 2H7 z zamienionymi regionami CDR; posiada ona regiony CDR z m2H7 umieszczone w konsensusowych resztach FR pokazane na Fig. 1A i 1B. Humanizowane 2H7.v2 zostało użyte do dalszego humanizowania.
Tabela 1 pokazuje sekwencję nukleotydową użytą do stworzenia każdego z regionów CDR mysiego 2H7 (m2H7) w łańcuchu H i L. Na przykład, oligonukleotyd CDR-H1 został użyty do stworzenia regionu CDR1 łańcucha H z m.2H7. CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 dotyczą odpowiednio regionów CDR1, CDR2 i CDR3 łańcucha H; podobnie, CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 dotyczą każdego z regionów CDR łańcucha L. Podstawienia w CDR-H2 wykonano w dwóch etapach przy użyciu dwóch nukleotydów, CDR-H2A i CDR-H2B.
Tabela 1. Sekwencje oligonukleotydowe użyte do konstrukcji przeniesienia regionów CDR mysiego 2H7 do ludzkiego szkieletu w pVX4. Reszty zmienione przez każdy z oligonukleotydów są podkreślone.
Podstawienie Sekwencja oligonukleotydowa
CDR-H1 C TAC ACC TTC ACC AGC TAT AAC ATG CAC TGG GTC CG
CDR-H2A G ATT AAT CCT GAC AAC GGC GAC ACG AGC TAT AAC CAG AAG TTC AAG GGC CG
CDR-H2B GAA TGG GTT GCA GCG ATC TAT CCT GGC AAC GGC GAC AC
CDR-H3 AT TAT TGT GCT CGA GTG GTC TAC TAT AGC AAC AGC TAC TGG TAC TTC GAC GTC TGG GGT CAA GGA
CDR-L1 C TGC ACA GCC AGC TCT TCT GTC AGC TAT ATG CAT TG
CDR-L2 AA CTA CTG ATT TAC GCT CCA TCG AAC CTC GCG TCT GGA GTC C
CDR-L3 TAT TAC TGT CAA CAG TGG AGC TTC AAT CCG CCC ACA TTT GGA CAG
W celu porównania humanizowanych konstruktów, skonstruowano plazmidy eksprymujące chimeryczny 2H7 Fab (zawierający mysie domeny VL i VH i ludzkie domeny CL i CH1) przy zastosowaniu mutagenezy ukierunkowanej (Kunkel, powyżej) z użyciem oligonukleotydów do wprowadzenia mysich reszt szkieletu do 2H7.v2. Sekwencja powstałego kontraktu plazmidu do ekspresji chimerycznego Fab znanego jako 2H7.v6.8 jest pokazana na Fig. 3. Każdy kodowany łańcuch Fab posiada 23-aminokwasową sekwencję sygnału sekrecyjnego StII, jak opisano dla pVX4 powyżej (Fig. 2).
W oparciu o porównanie sekwencji reszt mysiego szkieletu 2H7 z ludzkim konsensusowym szkieletem VKI, VHIII (Fig. 1A i 1B oraz wcześniej humanizowanymi przeciwciałami (Carter i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-428 9 (1992)), do konstruktu 2H7.v2 Fab wprowadzono kilka mutacji w szkielecie przy zastosowaniu mutagenezy ukierunkowanej. Mutacje te skutkują zmianą w pewnych resztach konsensusu ludzkiego szkieletu do tych obecnych w szkielecie mysiego 2H7 w miejscach, które mogłyby wpływać na konformacje CDR lub kontakty z antygenem. Wersja 3 zawierała VH(R71V, N73K), wersja 4 zawierała VH(R71V), wersja 5 zawierała VH(R71V, N73K) i VL(L46P) a wersja 6 zawierała VH(R71V, N73K) i VL(L46P, L47W).
Humanizowane i chimeryczne wersje Fab przeciwciała m2H7 ulegały ekspresji w E. coli i były oczyszczane jak następuje. Plazmidy transformowano do szczepu E. coli XL-1 Blue (Stratagene, San Diego, CA) w celu przygotowania dwu- i jednoniciowego DNA. Dla każdego wariantu, zarówno lekki, jak i ciężki łańcuch był całkowicie sekwencjonowany przy użyciu sposobu z zastosowaniem dideoksynukleotydów (Sequenase, U.S. Biochemical Corp.). Plazmidy transformowano do szczepu E. coli 16C9, pochodnej MM294, wysianego na płytki LB zawierające 5 pg/ml karbenicyliny i wybrano pojedynczą kolonię do ekspresji białka. Pojedynczą kolonię hodowano w 5 ml LB-100 pg/ml karbenicyliny przez 5-8 godz. w 37°C. 5 ml hodowli dodano do 500 ml AP5-100 mg/ml karbenicyliny i pozwolono na
PL 212 899 B1 wzrost przez 16 godz. w 4 l kolbie wystrząsarkowej z korkiem w 37°C. Pożywka AP5 składa się z 1,5 g glukozy, 11,0 Hycase SF, 0,6 g ekstraktu drożdżowego (certyfikowanego), 0,19 g bezwodnego MgSO4, 1,07 g NH4Cl, 3,73 g KCl, 1,2 g NaCl, 120 ml 1 M trietanoloaminy, pH 7,4, do 1 l wody i następnie sterylnie przefiltrowanej przez 0,1 gg filtra Sealkeen.
Komórki zbierano przez wirowanie w 1 I butelce wirówkowej (Nalgene) w 3000xg, a supernatant usunięto. Po zamrożeniu przez 1 godz. osad zawieszono w 25 ml zimnego 10 mM MES-10 mM EDTA, pH 5,0 (bufor A). W celu zahamowania proteolizy dodano 250 μΐ 0,1 M PMSF (Sigma) i w celu ułatwienia Iizy bakteryjnej ściany komórkowej dodano 3,5 ml roztworu podstawowego lizozymu z białka jaja kurzego o stężeniu 10 mg/ml (Sigma). Po lekkim wstrząsaniu w lodzie przez 1 godz. próbkę wirowano w 40000xg przez 15 min. Supernatant doprowadzono do 50 ml buforem A i naniesiono na 2 ml kolumnę DEAE zrównoważoną buforem A. Frakcje spływające z kolumny (flow-through) naniesiono na kolumnę białko G-Sepharose CL-4B (Pharmacia) (objętość złoża 0,5 ml) zrównoważoną buforem A. Kolumnę przemyto 10 ml buforu A i wyeluowano 3 ml 0,3 M glicyny, pH 3,0 do 1,25 ml 1 M Tris, pH 8,0. Następnie dokonano wymiany buforu F(ab) na PBS przy użyciu Centricon-30 (Amicon) i zagęszczono do końcowej objętości 0,5 ml. Wykonano żele SDS-PAGE wszystkich rodzajów F(ab) w celu oceny czystości, a masa każdego wariantu została zweryfikowana przy użyciu spektroskopii masowej w elektrospreju.
W oznaczeniach ELISA siły wiązania opartych na komórkach (opisanych poniżej), wiązanie cząsteczek Fab, włączając chimeryczne Fab 2H7 do CD20 było trudne do wykrycia. Zatem, wersje Fab 2H7 zostały przekształcone do przeciwciał IgG1 o pełnej długości do analiz i dalszej mutagenezy.
Plazmidy do ekspresji cząsteczek IgG o pełnej długości skonstruowano przez podklonowanie domen VL i VH chimerycznego Fab 2H7 (v6.8), jak również humanizowanych wersji Fab 2 do 6 do wcześniej opisanych wektorów pRK do ekspresji w komórce ssaczej (Gorman i wsp.; DNA Prot. Eng. Tech. 2:3-10 (1990)). W skrócie każdy konstrukt Fab strawiono przy użyciu EcoRV i BlpI w celu wycięcia fragmentu VL, który został sklonowany do miejsca EcoRV/ΒΙρΙ w plazmidzie pDRl (Fig. 4) w celu ekspresji kompletnego łańcucha lekkiego (domeny VL-CL). Dodatkowo, każdy konstrukt Fab strawiono przy użyciu PvuII i Spal w celu wycięcia fragmentu VH, który sklonowano do miejsc PvuII/ApaI w plazmidzie pDR2 (Fig. 5) w celu ekspresji kompletnego łańcucha ciężkiego (domeny VH-CH1-zawias-CH2-CH3). Dla każdego wariantu IgG, wykonano przejściowe transfekcje przez kontransfekcję plazmidu z ekspresją lekkiego łańcucha i plazmidu z ekspresją ciężkiego łańcucha do ludzkiej embrionalnej linii komórkowej nerek transformowanej adenowirosem, 293 (Graham i wsp., J. Gen. Tirol., 36:59-74, (1977)). W skrócie, komórki 293 zostały rozdzielone na dzień przed transfekcją i wysiane do pożywki zawierającej surowicę. Następnego dnia dodano dwuniciowe DNA przygotowane jako precypitat fosforanu wapnia, po którym dodano pAdVAntage™ (Promega, Madison, WI) i komórki inkubowano przez noc w 37°C. Komórki hodowano w pożywce wolnej od surowicy i zebrano po 4 dniach. Przeciwciała oczyszczono z supernatantów komórek przy użyciu kolumny białko A-Sepharose CL-4B, następnie zmieniono bufor na 10 mM bursztynian sodu, 140 mM NaCl, pH 6,0 i zagęszczono przy użyciu Centricon-10 (Amicon). Stężenia białek oznaczono przy użyciu ilościowej analizy aminokwasowej.
Aby zmierzyć względne powinowactwa wiązania do antygenu CD20 wykonano oznaczenie ELISA opartego na komórkach. Ludzkie Iimfoblastyczne komórki B WIL2-S (ATCC CRL 8885, American Type Culture Collection, Rockville, MD) hodowano w RPMI 1640 uzupełnionej 2 mM L-glutaminą, 20 mM HEPES, pH 7,2 and 10% termicznie-inaktywowanej surowicy z płodów cielęcych w inkukubatorze z 5% CO2 i 100% wilgotności. Komórki przemyto PBS zawierającym 1% FBS (bufor do oznaczeń) i wysiano w stężeniu 250-300000 komórek/studzienkę w 96-dołkowych płytkach okrągłodennych (Nunc, Roskilde, Dania). Do płytek dodano standard rozcieńczony dwukrotnym rozcieńczeniem seryjnym (15,6-1000 ng/ml chimerycznego IgG 2H7 v6.8) i próbki rozcieńczone trzykrotnym rozcieńczeniem seryjnym (2,7- 2000 ng/ml) w buforze do oznaczeń. Płytki umieszczono w lodzie i inkubowano przez 45 min. W celu usunięcia niezwiązanego przeciwciała dodano do studzienek 0,1 ml buforu do oznaczeń. Płytki zwirowano a supernatanty usunięto. Komórki przemyto dwukrotnie 0,2 ml buforu do oznaczeń. Przeciwciało związane do płytek oznaczano przez dodanie do płytek koziego anty-ludzkiego przeciwciała Fc sprzężonego z peroksydazą (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA). Po inkubacji przez 45 min. komórki przemyto, jak opisano powyżej. Do płytek dodano substratu TMB (3,3',5,5'-tetrametylobenzydyna; Kirkegaard & Perry Laboratories, Gaithersburg, MD). Krzywe miareczkowania zostały dopasowane programem dopasowującym czteroparametryczną nieliniową krzywą regresji (KaleidaGraph, oprogramowanie Synergy, Reading, PA). Oznaczono absorbancję w punkcie przegięcia krzywej miareczkowania (mid-OD) i odpowiadające jej stężenie standardu. Następnie
PL 212 899 B1 oznaczono stężenie każdego wariantu w tym punkcie mid-OD i stężenie standardu zostało podzielone przez stężenie każdego z wariantów. Stąd wartości są stosunkiem wiązania każdego z wariantów względem standardu. Odchylenia standardowe względnego powinowactwa pomiędzy eksperymentami (równoważnego stężenia) wynosiły ogólnie +/- 10%.
Jak pokazano w Tabeli 2 wiązanie dwóch wariantów z przeniesionymi regionami CDR (v.2) było ekstremalnie zmniejszone w porównaniu do chimerycznego 2H7 (v.6.8). Jednakże, wersje 3 do 6 wykazywały polepszone wiązanie. W celu określenia minimalnej liczby mutacji, które mogłyby być konieczne do przywrócenia powinowactwa wiązania, takiego jak u chimerycznego 2H7 skonstruowano dodatkowe mutacje i kombinacje mutacji przez mutagenezę ukierunkowaną otrzymując warianty 7 do 17, jak wskazano w Tabeli 3. W szczególności, obejmowało to mutacje A49G, F67A, I69L, N73K, i L78A położone w VH; i mutacje M4L, M33I i F71Y w VL. Wersje 16 i 17 wykazywały najlepsze względne powinowactwa wiązania, w obszarze dwukrotności tego dla wersji chimerycznej z brakiem znaczącej różnicy pomiędzy obydwoma (odch. std. = +/- 10%). W celu zminimalizowania liczby mutacji wersja 16 posiadająca tylko 4 mutacje reszt ludzkiego szkieletu do reszt mysiego szkieletu (Tabela 3) została zatem wybrana jako humanizowana postać do dalszej charakterystyki.
Tabela 2. Względne powinowactwo wiązania humanizowanych wariantów IgG 2H7 do CD20 w porównaniu do chimerycznego 2H7 przy użyciu ELISA opartego na komórkach. Względne wiązanie jest wyrażone jako stężenie chimerycznego 2H7 podzielone przez stężenie wariantu potrzebne do równoważnego wiązania; stąd stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo dla wariantu. Odchylenie standardowe oznaczenia względnego powinowactwa średnio wynosiło +/- 10%. Podstawienia szkieletu w domenach zmiennych podane względem wersji z przeniesionymi regionami CDR według systemu numeracji Kabata (Kabat i wsp., powyżej).
Wersja 2H7 Podstawienia łańcucha ciężkiego (Vh) Podstawienia łańcucha lekkiego (Vl) Względne wiązanie
6,8 (Chimera) (Chimera) -1-
2 (przeniesione regiony CDR) (przeniesione regiony CDR) 0,01
3 R71V, N73K (przeniesione regiony CDR) 0,21
4 R71V (przeniesione regiony CDR) 0,21
5 R71V, N73K L46P 0,50
6 R71V, N73K L46P, L47W 0,58
7 R71V L46P 0,33
8 R71V,L78A L46P 0,19
9 R71V, F67A L46P 0,07
10 R71V, F67A, I69L L46P 0,12
11 R71V, F67A, L78A L46P 0,19
12 R71V L46P, M4L 0,32
13 R71V L46P, M33I 0,31
14 R71V L46P, F71Y 0,25
15 R71V L46P, M4L, M33I 0,26
16 R71V, N73K, A49G L46P 0,65
17 R71V, N73K, A49G L46P, L47W 0,67
Tabela 3. Oligonukleotydowe sekwencje zastosowane do konstrukcji mutacji VH(A49G, R71V, N73K) i VL(L46P) w wersji 16 humanizowanego 2H7 (2H7.v16). Podkreślone kodony kodują wskazane podstawienia aminokwasowe. Dla VH(R71V, N73K) i VL(L46P), oligonukleotydy są pokazane jako nić sensowna, jako, że takie były użyte do mutagenezy na matrycy Fab, podczas gdy dla VH(A49G)
PL 212 899 B1 oligonukleotyd jest pokazany jako nić antysensowna, jako, że taki został użyty z matrycą pRK (ciężki łańcuch IgG). Sekwencja białka w wersji 16 jest pokazana na Fig. 6 i Fig. 7.
Podstawienie Sekwencja oligonukleotydu
Vh(R71V, N73K) GT TTC act ata agt gtc gac aag tcc aaa aac aca TT
Vh(A49G) gccaggatagatggcgccaacccattccaggcc
Vl(L46P) aagctccgaaaccactgatttacgct
P r z y k ł a d 2
Determinanty wiązania antygenu (paratop) z 2H7
W celu przetestowania udziału poszczególnych łańcuchów bocznych przeciwciała w wiązaniu się do CD20 wykonano podstawienia alaninowe w 2H7.v16 lub 2H7.v17 (Cunnmgham i Wells, Science 244:1081-1085 (1989). Warianty IgG poddawano ekspresji w komórkach 293 z wektorów pDR1 i pDR2, oczyszczano i poddawano oznaczeniu na względne powinowactwo wiązania, jak opisano powyżej. Kilka podstawień alaniną skutkowało znaczącym zmniejszeniem względnego powinowactwa do CD20 na komórkach WIL-2S (Tabela 4).
Tabela 4. Skutki podstawień alaniną w regionach CDR humanizowanego 2H7.v16 mierzone przy użyciu testu ELISA opartego na komórkach (komórkach WIL2-S). Względne wiązanie jest wyrażone jako stężenie wyjściowego 2H7.v16 podzielone przez stężenie wariantu wymagane do równoważnego wiązania; stąd stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo dla wariantu; stosunek > 1 wskazuje na wyższe powinowactwo dla wariantu. Odchylenie standardowe w oznaczeniu względnego powinowactwa średnio wynosiło +/- 10%. Podstawienia szkieletu w domenach zmiennych są względem 2H7.v16 według systemu numeracji Kabata (Kabat i wsp., powyżej). NBD oznacza brak wykrywalnego wiązania. Dwie liczby dla wersji 45 są z odrębnych eksperymentów.
Wersja 2H7 Położenie CDR Podstawienia łańcucha ciężkiego Podstawienia łańcucha lekkiego Względne wiązanie
1 2 3 4 5
16 - - - -1-
140 HI G26A - 0,63
141 hi Υ27Α - 0,47
34 hi T28A - 0,86
36 hi Τ30Α - 0,81
37 hi S31A - 0,97
142 hi Y32A - 0,63
143 hi N33A - NDB
144 hi M34A - 1,2
145 hi H35A - <0,25
146 H2 A50G - 0,31
147 H2 I51A - 0,65
38 H2 Y52A - 0,01
148 H2 P52aA - 0,66
39 H2 G53A - 0,89
67 H2 N54A - 1,4
40 H2 G55A - 0,79
PL 212 899 B1 ciąg dalszy Tabeli 4
1 2 3 4 5
41 H2 D56A - 2,0
89 H2 T57A - 0,61
90 H2 S58A - 0,92
91 H2 Y59A - 0,74
92 H2 N60A - 0,80
93 H2 Q61A - 0,83
94 H2 K62A - 0,44
95 H2 F63A - 0,51
83 H2 V71A - 0,96
149 H2 K64A - 0,82
150 H2 G65A - 1,2
153 H3 V95A - 0,89
42 H3 V96A - 0,98
43 H3 Y97A - 0,63
44 H3 Y98A - 0,40
45 H3 S99A - 0,84; 0,92
46 H3 N100A - 0,81
47 H3 S100aA - 0,85
48 H3 Y100bA - 0,78
49 H3 W100cA - 0,02
59 H3 Y100dA - 0,98
60 H3 F100eA - NDB
61 H3 D101A - 0,31
151 H3 V102A - 1,1
117 L1 - R24A 0,85
118 L1 - A25G 0,86
119 L1 - S26A 0,98
120 L1 - S27A 0,98
121 L1 - S28A 1,0
122 L1 - V29A 0,41
50 L1 - S30A 0,96
51 L1 - Y32A 1,0
123 L1 - M33A 1,0
124 L1 - H34A 0,21
125 L2 - A50G 0,92
PL 212 899 B1 ciąg dalszy Tabeli 4
1 2 3 4 5
126 L2 - P51A 0,88
52 L2 - S52A 0,80
53 L2 - N53A 0,76
54 L2 - L54A 0,60
127 L2 - A55G 1,1
128 L2 - S56A 1,1
129 L3 - Q39A 0,46
130 L3 - Q90A <0,22
55 L2 - W91A 0,88
56 L3 - S92A 1,1
57 L3 - F93A 0,36
58 L3 - N94A 0,61
131 L3 - P95A NDB
132 L3 - P96A 0,18
133 L3 - T97A <0,22
P r z y k ł a d 3
Dodatkowe mutacje w regionach CDR 2H7
Testowano również postawienia dodatkowych reszt i kombinacje podstawień, które zidentyfikowano jako ważne przy skanowaniu Ala. Kilka wariantów kombinatorycznych, szczególnie v.96 okazało się wiązać bardziej ściśle niż v.16.
Tabela 5. Skutki kombinacji mutacji i nie-alaninowych podstawień w regionach CDR humanizowanego 2H7.v16 zmierzone przy użyciu testu ELISA opartego na komórkach (komórki WIL2-S). Względne wiązanie do CD20 jest wyrażone jako stężenie wyjściowego 2H7.v16 podzielone przez stężenie wariantu wymagane do równoważnego wiązania; stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo dla wariantu; stosunek > 1 wskazuje na wyższe powinowactwo dla wariantu. Odchylenie standardowe oznaczenia względnego powinowactwa średnio wynosiło +/-10%. Podstawienia szkieletu w domenach zmiennych są względem 2H7.v16 według systemu numeracji Kabata (Kabat i wsp., powyżej).
Wersja 2H7 Podstawienia łańcucha ciężkiego Podstawienia łańcucha lekkiego Względne wiązanie
1 2 3 4
16 - - -1-
96 D56A, M00A S92A 3,5
97 S99T, N100G, Y100bI - 0,99
98 S99G, N100S, Y100bI - 1,6
99 N100G, Y100bI - 0,80
101 N54S, D56A - 1,7
102 N54K, D56A - 0,48
103 D56A, N100A - 2,1
104 S99T, N100G - 0,81
105 S99G, N100S - 1,1
PL 212 899 B1 ciąg dalszy Tabeli 5
1 2 3 4
106 N100G - ~1
167 S100aG, Y100bS -
136 D56A, N100A S56A, S92A 2,6
137 D56A, N100A A55G, S92A 2,1
156 D56A, N100A S26A, S56A, S92A 2,1
107 D56A, N100A, Y100bI S92A nie poddano ekspresji
182 Y27W -
183 Y27F -
184 F29Y -
185 F29W -
186 Y32F -
187 Y32W -
188 N33Q -
189 N33D -
190 Ν33Υ -
191 N33S -
208 H35S -
209 A50S -
210 A50R -
211 A50V -
212 A50L -
168 Y52W -
169 Y52F - 0,75
170 NS4D - 0,25
171 N54S - 1,2
172 56Κ - 1
173 D56R -
174 D56H - 1,5
175 D56Ε - 1,2
213 D56S -
214 D56G -
215 D56N -
216 D56Y -
176 Y59W -
177 Y59F -
PL 212 899 B1 ciąg dalszy Tabeli 5
1 2 3 4
180 K62R -
181 K62D -
178 F63W -
179 F63Y -
157 Y97W - 0,64
158 Y97F - 1,2
159 Y98W - 0,64
160 Y98F - 0,88
106 N100G -
161 W100cY - 0,05
162 W100cF - 0,27
163 F100eY - 0,59
164 F100eW - 0,71
165 D101N - 0,64
166 S99G, N100G, S100aD, Y100b usunięty - 0,99
217 V102Y - 1,0
207 - H34Y
192 - Q89E
193 - Q89N
194 - Q90E
195 - Q90N
196 - W91Y
197 - W91F
205 - S92N
206 S92G
198 - F93Y
199 - F93W
204 - F93S, N94Y
200 - P96L
201 - P96Y
202 - P96W
203 - P96R
P r z y k ł a d 4
Mutacje w miejscach podstawień humanizujących szkielet.
Podstawieniu dodatkowych reszt w pozycjach szkieletu, które zostały zmienione podczas humanizowania były także testowane w otoczeniu H7.v16. W szczególności, wykonano alternatywne
PL 212 899 B1 podstawienia szkieletu, które nie były znalezione w wyjściowym mysim 2H7 ani w ludzkim konsensusowym szkielecie w VL(P46) i VH(G49, V71 i K73).
Te podstawienia ogólnie prowadzą do niewielkiej zmiany we względnym wiązaniu (Tabela 6), wskazując, że występuje pewna elastyczność i resztach szkieletu w tych pozycjach.
Tabela 6. Względne wiązanie w podstawieniach szkieletu w oznaczeniu opartym o komórki (WIL2-S). Warianty IgG są pokazane z mutacjami w odniesieniu do otoczenia 2H7.v16. Względne wiązanie jest wyrażone jako stężenie chimery 2H7.v6.8 chimera podzielone przez stężenie wariantu konieczne do równoważnego wiązania; stąd stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo wariantu; stosunek > 1 wskazuje na wyższe powinowactwo dla wariantu. Odchylenie standardowe oznaczenia względnego powinowactwa średnio wynosiło +/-10%. Postawienia szkieletu w domenach zmiennych są względem 2H7.v16 według systemu numeracji Kabata (Kabat i wsp., powyżej). (*) Warianty, które oznaczono z 2H7.v16 jako standardem użytym do porównania; względne wartości są normalizowane do tych uzyskanych dla chimery.
Wersja 2H7 Podstawienia łańcucha ciężkiego Podstawienia łańcucha lekkiego Względne wiązanie
CO (chimera) (chimera) -1-
16 - - 0,64
78 K73R - 0,72
79 K73H - 0,49
80 K73Q - 0,58
81 V71I - 0,42
82 V71T - 0,58
83 V71A -
84 G49S - 0,32
85 G49L -
86 - P46E 0,22
87 - P46V 0,51
88 - P46T
108 G49A, V71T, K73R S92A, M32L, P46T 0,026*
109 G49A, A49G, V71T, K73R S92A, M32L, P46T 0,026*
110 K73R, D56A, N100A S92A, M32L nie poddano ekspresji
111 G49A, V71T, K73R 0,46*
112 G49A, A50G, V71T, K73R - 0,12*
(*) Warianty, które oznaczono z 2H7.v16 jako standardem użytym do porównania;
Względne wartości są normalizowane do tych uzyskanych dla chimery.
P r z y k ł a d 5
Warianty humanizowanego 2H7 ze wzmocnionymi funkcjami efektorowymi
Ponieważ 2H7 może pośredniczyć w lizie komórek komórek B przez cytotoksyczność zależną od komolementu (CDC) jak i przez komórkową cytotoksyczność zależną od przeciwciała (ADCC), usiłowaliśmy wytworzyć warianty humanizowanego 2H7.v16 z ulepszoną aktywnością CDC i ADCC. Opisano mutacje pewnych reszt wewnątrz regionów Fc innych przeciwciał (Idusogie i wsp., J. Immunol. 166:2571 -2575 (2001)) polepszających CDC przez zwiększone wiązanie do komponentu komplementu C1q. Opisano także mutacje (Shields i wsp., J. Biol. Chem. 276:6591-6604 (2001); Presta i wsp., Biochem. Soc. Trans. 30:487-490 (2002)) ulepszających ADCC przez zwiększone wiązanie IgG do aktywujących receptorów Fcy i zmniejszone wiązanie IgG do hamujących receptorów Fcy. W szczególności zidentyfikowano trzy mutacje ulepszające aktywność CDC i ADCC: S298A/E333A/K334A (także okre50
PL 212 899 B1 ślane tutaj jako potrójny mutant lub wariant Ala; numeracja w regionie Fc jest według systemu numeracji EU; Kabat i wsp., powyżej) jak opisano (Idusogie i wsp., powyżej (2001); Shields i wsp., powyżej).
W celu zwiększenia aktywności CDC i ADCC 2H7, skonstruowano potrójnego mutanta Ala 2H7 Fc. Wcześniej został wytworzony humanizowany wariant przeciwciała anty HER2 4d5 z mutacjami S298A/E333A/K334A i jest znany jako 4D5Fc110 (tj., anty-p185HER2 IgG1 (S298A/E333A/K334A); Shields i wsp., powyżej). Plazmid p4D5Fc110 kodujący przeciwciało 4D5Fc110 (Shields i wsp., powyżej) został strawiony przy użyciu ApaI i HindIII, a fragmentu Fc (zawierający mutacje S298A/E333A/ /K334A) włączono poprzez ligację do miejsc ApaI/HindIII wektora pDR2-v16 kodującego ciężki łańcuch 2H7 w celu otrzymania pDR2-v31. Sekwencja aminokwasowa wersji 31 kompletnego łańcucha H jest pokazana na Fig. 8. Łańcuch lekki jest taki sam jak ten z v16.
Pomimo, że domeny stałe regionu Fc przeciwciał IgG są relatywnie konserwowane w danych gatunkach, istnieją warianty alleliczne (opracowane przez Lefranc i Lefranc, w The human IgG subclasses: molecular analysis of structure, function, and regulation, str. 43-78, F. Shakib (red.), Pergamon Press, Oxford (1990)).
Tabela 7. Wpływ podstawień w regionie Fc na wiązanie CD20. Względne wiązanie podstawień szkieletu do CD20 zmierzono w oznaczeniu opartym o komórki (WIL2-S). Mutacje Fc (*) są wskazane przez numerację EU (Kabat, powyżej) i są podane względem wyjściowego 2H7.v16. Kombinacja trzech zmian Ala regionu Fc v.31 jest opisana jako Fc110. Warianty IgG są pokazane z mutacjami względem odniesienia w postaci 2H7.v16. Względne wiązanie jest wyrażone jako stężenie chimery 2H7.v6.8 podzielone przez stężenie wariantu wymagane do równoważnego wiązania; stąd stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo wariantu; stosunek > 1 wskazuje na wyższe powinowactwo dia wariantu. Odchylenie standardowe oznaczenia względnego powinowactwa średnio wynosiło +/- 10%.
Wersja 2H7 Podstawienia Fc* Względne wiązanie
6.8 - -1-
16 - 0,65
31 S298A, E333A, K334A 0,62
P r z y k ł a d 6
Warianty humanizowanego 2H7 ze zwiększoną stabilnością
W celu rozwoju w kierunku białek terapeutycznych, pożądane jest wybranie wariantów, które pozostają stabilne w odniesieniu do utleniania, deaminacji lub innych procesów, które mogą wpływać na ilość produktu w odpowiednim buforze użytym do stworzenia preparatu. W 2H7.v16 zidentyfikowano kilka reszt jako możliwych źródeł niestabilności: VL (M32) i VH (M34, N100). Zatem, w tych miejscach wprowadzono mutacje w celu porównania z v16.
Tabela 8. Względne wiązanie wariantów 2H7 przeznaczonych do zwiększonej stabilności i/lub funkcji efektorowej do CD20 w oznaczeniu opartym o komórki (WIL2-S). Warianty IgG są pokazane z mutacjami względem odniesienia w postaci 2H7.v16. Względne wiązanie jest wyrażone jako stężenie chimery 2H7.v6.8 podzielone przez stężenie wariantu wymagane do równoważnego wiązania; stąd stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo wariantu; stosunek > 1 wskazuje na wyższe powinowactwo dla wariantu. Odchylenie standardowe oznaczenia względnego powinowactwa średnio wynosiło +/-10%. Podstawienia szkieletu w domenach zmiennych są względem 2H7.v16 według systemu numeracji Kabata a mutacje Fc (*) są wskazane według numeracji EU (Kabat i wsp., powyżej). (**) Warianty, które oznaczono z 2H7.v16 jako standardem użytym do porównania; względne wartości są normalizowane do tych uzyskanych dla chimery.
Dodatkowe mutacje Fc zostały połączone z mutacjami zwiększającymi stabilność lub powinowactwo w celu zmiany lub zwiększenia funkcji efektorowych opartej na wcześniej opisanych mutacjach (Idusogie i wsp. (2000); Idusogie i wsp. (2001); Shields i wsp. (2001)). Zmiany te obejmują S298, E333A, K334A jak opisano w Przykładzie 5; K322A dla zmniejszenia aktywności CDC; D265A dla zmniejszenia aktywności ADCC, K326A lub K326W dla zwiększenia aktywności CDC; i E356D/M358L dla przetestowania skutków allotypowych zmian w regionie Fc. Żadna z tych mutacji nie powodowała znaczących różnic w powinowactwie wiązania do CD20.
PL 212 899 B1
Wersja 2H7 Zmiany łańcucha ciężkiego (VH) Zmiany łańcucha lekkiego (VL) Zmiany Fc* Względne wiązanie
6.8 (chimera) (chimera) - -1-
16 - - - 0,65
62 - M32I - 0,46
63 M34I - - 0,49
64 N100A - -
65 N100A L47W - 0,74
66 S99A L47W - 0,62
67 N54A - -
68 - M32I - 0,48
69 - M32L 0,52
70 N100A - S298A, E333A, K334A 0,80
71 N100D - S298A, E333A, K334A 0,44
72 N100A M32I - 0,58
73 N100A M32L - 0,53
74 N100A M32I S298A, E333A, K334A 0,61
75 N100A M32L S298A, E333A, K334A 0,60
113 - - E356D, M358L 0,60**
114 D56A, N100A M32L, S92A S298A, E333A, K334A >1 2**
115 D56A, N100A M32L, S92A S298A, E333A, K334A, E356D, M358L 1 4**
116 D56A, N100A M32L, S92A S298A, K334A, K322A >1 2**
134 D56A, N100A M32L, S92A E356D, M358L, D265A 1,5**
135 D56A, N100A M32L, S92A E356D, M358L, D265A, K326W 0,95**
138 D56A, N100A M32L, S92A S298A, E333A, K334A, K326A >1 2**
139 D56A, N100A M32L, S92A 298A, E333A, K334A, K326A, E356N, M358L >1 >1 **
154 - - D265A 0,70**
155 - - S298A, K322A, K334A 0,70**
(**) Warianty, które oznaczono z 2H7.v16 jako standardem użytym do porównania; Względne wartości wiązania są normalizowane do tych uzyskanych dla chimery.
W celu przetestowania skutków mutacji stabilizujących na szybkość degradacji białka, z 2H7.v16 i 2H7.v73 utworzono preparaty o stężeniu 12-14 mg/ml w 10 mM histydynie, 6% sacharozie, 0,02% polisorbacie 20, pH 5,8 i inkubowano w 40°C przez 16 dni. Następnie inkubowane próbki oznaczono na zmiany w wariantach ładunku przez chromatografię jonowymienną, agregację i fragmentację przez chromatografię na sitach molekularnych względne wiązanie przez testowanie w oznaczeniu opartym na komórkach (WIL2-S).
Wyniki (Fig. 9) pokazują, że 2H7 v.73 posiada większą stabilność w porównaniu do 2H7 v.16 z uwzględnieniem strat we frakcji głównego piku w chromatografii jonowymiennej w warunkach przyspieszonego testowania stabilności. Nie zaobserwowano żadnych znaczących różnic w odniesieniu do agregacji, fragmentacji lub powinowactwa wiązania.
PL 212 899 B1
P r z y k ł a d 7
Analiza Scatcharda wiązania przeciwciała do CD20 na komórkach WIL2-S
Stałe równowagi dysocjacji (Kd) oznaczono dla wariantów 2H7 IgG wiążących się do komórek
WIL2-S przy użyciu radioaktywnie wyznakowanego 2H7 IgG. Warianty IgG wytworzono w komórkach CHO. Do porównania z humanizowanymi wariantami użyto przeciwciała Rituxan® (źródłem wszystkich eksperymentów jest Genentech, S. San Francisco, CA) i mysie 2H7 (BD PharMingen, San Diego, CA). Mysie przeciwciało 2H7 jest dostępne także z innych źródeł, np., eBioscience I Calbiochem (obydwa z San Diego, CA), Accurate Chemical & Scientific Corp., (Westbury, NY), Ancell (Bayport, MN), oraz Vinci-Biochem (Vinci, Włochy). Wszystkie rozcieńczenia wykonano w buforze do oznaczania wiązania (pożywka DMEM zawierająca 1% albuminy z surowicy cielęcej, 25 mM HEPES pH 7,2, and
123
0,01% azydek sodu). Porcje (0,025 ml) roztworu 123I- 2H7.v16 (jodowanego przy użyciu laktoperoksydazy) w stężeniu 0,8 nM rozporcjowano do studzienek o dnie w kształcie litery V w 96-studzienkowej płytce do oznaczeń i dodano seryjne rozcieńczenia (0,05 ml) zimnego przeciwciała i wymieszano. Następnie dodano komórki WIL2-S (60000 komórek w 0,025 ml). Płytkę zamknięto i inkubowano w temperaturze pokojowej przez 24 godz., następnie wirowano przez 15 min. W 3500 obr./min. Supernatant odessano, a osad komórek przemyto i zwirowano. Supernatant ponownie odessano, a osady komórek rozpuszczono w 1 N NaOH i przeniesiono do probówek do zliczenia rozpadów gamma. Dane zostały użyte do analizy Scatcharda (Munson i Rodbard, Anal. Biochem. 107: 220 -239 (1980)) przy użyciu programu Ligand (McPherson, Comput. Programs Biomed. 17: 107-114 (1983)). Wyniki pokazane w Tabeli 9 wskazują, że humanizowane warianty 2H7 posiadają podobne powinowactwo wiązania w porównaniu z mysim 2H7 i podobne powinowactwo wiązania do przeciwciała Rituxan®. Oczekuje się, że 2H7.v31 będzie posiadał bardzo podobną Kd do v.16 na podstawie wiązania pokazanego w Tabeli 7 powyżej.
Tabela 9. Równowaga powinowactwa wiązania wariantów 2H7 z analizy Scatcharda.
Wariant przeciwciała Kd (nM) n
Rituxan 0,99 + 0,49 3
2H7 (mysi) 1,23 ± 0,29 3
2H7.v16 0,84 ± 0,37 4
2H7.v73 1,22 ± 0,39 4
2H7.v75 1,09 ± 0,17 4
P r z y k ł a d 8
Oznaczenia cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC)
Warianty 2H7 oznaczano na ich zdolność do pośredniczenia w zależnej od komplementu lizie komórek WIL2-S, linii Iimfoblastycznych komórek B z ekspresją CD20, zasadniczo, jak opisano (Idusogie i wsp., J. Immunol. 164:4178-4184 (2000); Idusogie i wsp., J. ImmunoL 166:2571-2575 (2001)). Przeciwciała rozcieńczono metodą seryjnych rozcieńczeń 1:3 roztworu podstawowego o stężeniu 0,1 mg/ml. Porcję 0,05 ml każdego rozcieńczenia dodano do 96-studzienkowej płytki do hodowli tkankowej, która zawierała 0,05 ml roztworu prawidłowego ludzkiego dopełniacza (Quidel, San Diego, CA). Do tej mieszaniny dodano 50000 komórek WIL2-3 w objętości 0,05 ml. Po inkubacji przez 2 godz. w 37°C dodano 0,05 ml roztworu Alamar blue (Accumed International, Westlake, OH) i inkubację kontynuowano przez dodatkowe 18 godz. w 37°C. Następnie z płytek zdjęto wieczka i wytrząsano je przez 15 min. w temperaturze pokojowej na wytrząsarce obrotowej. Względne jednostki fluorescencji (RFU, ang. relative fluorescent units) zczytano przy użyciu filtra wzbudzenia 530 nm i filtra emisji 590 nm. EC50 obliczono poprzez dopasowanie RFU jako funkcji stężenia dla każdego przeciwciała przy użyciu oprogramowania KaleidaGraph.
Wyniki (Tabela 10) pokazują zaskakujące polepszenie CDC dla humanizowanych przeciwciał 2H7 ze względną skutecznością v.73 podobną do przeciwciała Rituxan®, 3-krotnie większą skutecznością v.75 niż Rituxan® i 3-krotnie słabszą skutecznością v.16 niż Rituxan®.
Tabela 10. Aktywność CDC przeciwciał 2H7 w porównaniu do przeciwciała Rutixan. Liczby >1 wskazują na mniej skuteczną aktywność CDC niż Rituxan®, a liczby <1 na większą skuteczność niż
PL 212 899 B1
Rituxan®. Przeciwciała otrzymano w stabilnych liniach CHO, z wyjątkiem tych wskazanych przez (*), które otrzymano przez transfekcję przejściową.
Wariant przeciwciała n EC50 (wariant)/EC50 (Rituxan)
Rituxan© 4 -1-
2H77.v16 4 3.72:4.08
2H7.v31* 4 2,21
2H7.v73 4 1,05
2H7.v75 4 0,33
2H7.v96* 4 0,956
2H7.v114* 4 0,378
2H7.v115* 4 0,475
2H7.v116* 1 >100
2H7.135* 2 0,42
P r z y k ł a d 9
Oznaczenia zależnej od przeciwciała cytotoksyczności komórkowej (ADCC)
Warianty 2H7 IgG oznaczano pod względem ich zdolności do pośredniczenia w lizie komórek WIL2-S, linii Iimfoblastycznych komórek B z ekspresją CD20, przez komórki naturalnych zabójców (komórki NK) zasadniczo, jak opisano (Shields i wsp., J. Biol. Clam. 276:6591-6604 (2001)), przy użyciu odczytu dehydrogenazy mleczanowej (LDH). Komórki NK przygotowano ze 100 ml heparynizowanej krwi rozcieńczonej 100 ml PBS (buforowany fosforanem roztwór soli fizjologicznej), uzyskanej od zdrowych dawców Iudzkich, którzy byli izotypowani na obecność FcγRIII także znanego jako CD16 (Koene i wsp., Blood 90:1109-1114 (1997)). W tym doświadczeniu komórki NK pochodziły od ludzkich dawców heterozygotycznych pod względem CD16 (F158/V158). Rozcieńczona krew naniesiona w postaci warstwy na 15 ml pożywki do rozdzielania limfocytów (ICN Biochemical, Aurora, Ohio) i wirowana przez 20 min. w 2000 obr./min. Białe krwinki w interfazie pomiędzy warstwami rozdzielono do 4 czystych probówek 50 ml, które napełniono pożywką RPMI zawierającą 15% surowicy z płodów cielęcych. Probówki wirowano przez 5 min. w 1400 obr./min., a supernatant odrzucono. Osady zawieszono w buforze MACS (0,5% BSA, 2 mM EDTA), a komórki NK oczyszczono przy użyciu kulek (Zestaw do izolacji komórek NK, 130-046- 502) według instrukcji producenta (Miltenyi Biotech,). Komórki NK rozcieńczono w buforze MACS do stężenia 2x106 komórek/ml.
Do okrągłodennych płytek do hodowli tkankowych dodano seryjne rozcieńczenia przeciwciała (0,05 ml) w pożywce do oznaczania (F12/DMEM 50:50 bez glicyny, 1 mM bufor HEPES pH 7,2, Penicylina/Streptomycyna (100 jednostek/ml; Gibco), glutamina, i 1% inaktywowana termicznie surowica 5 z płodów cielęcych). Komórki WIL2-S rozcieńczono w buforze do oznaczeń do stężenia 4 x 105/ml. Komórki WIL2-S (0,05 ml na studzienkę) zmieszano z rozcieńczonym przeciwciałem w 96-studzienkowej płytce i inkubowano przez 30 min. w temperaturze pokojowej, aby pozwolić na związanie przeciwciała do CD20 (opsonizacja).
Reakcję ADCC zapoczątkowano przez dodanie 0,1 ml komórek NK do każdej ze studzienek. W komórkach kontrolnych dodano 2% Triton X-100. Płytkę inkubowano przez 4 godz. w 37°C. Poziomy uwolnionej LDH zmierzono przy użyciu zestawu do detekcji cytotoksyczności (LDH) (Zestaw#1644793, Roche Diagnostics, Indianapolis, Indiana.) według instrukcji producenta. Do każdej studzienki dodano 0,1 ml wywoływacza LDH, po czym mieszano przez 10 sek. Płytkę następnie przykryto folią aluminiową i inkubowano w ciemności w temperaturze pokojowej przez 15 min. Następnie zczytano gęstość optyczną w 490 nm i użyto do obliczenia 1% Iizy przez podzielenie całkowitej LDH zmierzonej w komórkach kontrolnych. Lizę następnie wykreślono jako funkcję stężenia przeciwciała, a do wyznaczenia stężeń EC50 użyto dopasowania krzywej 4-parametrowej (KaleidaGraph).
Wyniki pokazały, że humanizowane przeciwciała 2H7 były aktywne w ADCC ze względną skutecznością 20-krotnie większą niż przeciwciało Rutixan® w przypadku v.31 i v.75 5-krotnie bardziej
PL 212 899 B1 skuteczne niż Rutixan® w przypadku v.16 oraz prawie 4-krotnie wyższe niż Rutixan® w przypadku v.73.
Tabela 11. Aktywność ADCC przeciwciał 2H7 na komórkach WIL2-S w porównaniu z 2H7.v16, oparta o n doświadczeń. (Wartości >1 wskazują na mniejszą skuteczność niż 2H7.v16, a wartości <1 wskazują na większą skuteczność.)
Wariant przeciwciała n EC50 (wariant) /ECą (2H7. V16)
Rutixan® 4 5,3
2H7.v16 5 1
2H7.v31 1 0,24
2H7.v73 5 1,4
2H7.v75 4 0,25
Aby porównać kombinatoryczne warianty 2H7 z przeciwciałem Rutixan® wykonano dodatkowe oznaczenia ADCC. Wyniki tych oznaczeń wskazywały, że 2H7.v114 i 2H7.v115 posiadają >10-krotnie polepszoną skuteczność ADCC w porównaniu z przeciwciałem Rutixan® (Tabela 12).
Tabela 12. Aktywność ADCC przeciwciał 2H7 na komórkach WIL2-S w porównaniu z 2H7.v16, oparta o n doświadczeń. (Wartości >1 wskazują na mniejszą skuteczność niż 2H7.v16, a wartości <1 wskazują na większą skuteczność.)
Wariant przeciwciała EC50 (wariant)/EC50 (Rutixan)
Rutixan® 2 -1-
2H7v.16 2 0,52
2H7v.96 2 0,58
2H7.v114 2 0,093
2H7.v115 2 0,083
2H7.v116 2 0,30
P r z y k ł a d 10
Skutki in vivo wariantów 2H7 w pilotażowym badaniu w małpach Cynomolgus
Warianty 2H7 otrzymane przez przejściową transfekcję komórek CHO testowano w zdrowych samcach małpach Cynomolgus (Macaca fascicularis) w celu oszacowania ich aktywności in vivo. Inne przeciwciała anty-CD20, takie jak C2B8 (Rutixan®) wykazywały zdolność do deplecji komórek B w zdrowych osobnikach z rodziny naczelnych (Reff i wsp., Blood 83:435-445 (1994)).
W jednym z badań porównywano humanizowane warianty 2H7. W równoległym badaniu na małpach Cynomolgus testowano również przeciwciało Rutixan®. W każdej z pięciu grup otrzymujących dawki: (1) nośnika, (2) 0,05 mg/kg hu2H7.v16, (3) 10 mg/kg hu2H7.v16, (4) 0,05 mg/kg hu2H7.v31, oraz (5) 10 mg/kg hu2H7.v31 użyto czterech małp. Przeciwciała podawano dożylnie w stężeniu 0, 0,2 lub 20 mg/ml, w całości składającej się z dwóch dawek, jednej 1 dnia badania i drugiej 8 dnia. Pierwszy dzień dawkowania jest oznaczony jako dzień 1 a dzień poprzedni jest oznaczony jako dzień -1; pierwszy dzień regeneracji (dla 2 zwierząt w każdej z grup) jest oznaczony jako dzień 11. Próbki krwi zebrano w dniach -19, -12, 1 (przed podaniem dawki) i w 6, 24 i 72 godz. po podaniu pierwszej dawki. Dodatkowe próbki pobrano w dniu 8 (przed podaniem dawki), 10 (przed uśmierceniem 2 zwierząt/grupę) i w dniach 36 i 67 (u zwierząt przechodzących regenerację).
Stężenia obwodowych komórek B oznaczono przy użyciu sposobu FACS, który liczył komórki CD3-/CD40+. Procent komórek B CD3-CD40+ w całkowitej liczbie limfocytów uzyskano przy zastosowaniu następującej strategii bramkowania. W celu zdefiniowania Regionu 1 (R1) populacja limfocytów została zaznaczona na wykresie rozproszenia w układzie rozproszenie przechodzące/rozproszenie boczne. Przy użyciu zliczeń w obszarze R1, instensywności fluorescencji wykreślono wykresy punkPL 212 899 B1 towe dla znaczników CD40 i CD3. Do oznaczenia odpowiednich punktów odcięcia dla sygnałów CD40-dodatnich i CD3-dodatnich użyto fluorescencyjnie wyznakowanych kontroli izotypów.
Wyniki wskazywały, że zarówno 2H7.v16 jak i 2H7.v31 były zdolne do wytwarzania całkowitej deplecji peryferyjnych komórek B w dawce 10 mg/kg i częściowej deplecji obwodowych komórek B w dawce 0,05 mg/kg (Fig. 11). Krzywa czasowa i stopień deplecji komórek B mierzonych podczas pierwszych 72 godz. były podobne dla obydwu przeciwciał. Późniejsza analiza zwierząt przechodzących regenerację wskazywała, że zwierzęta traktowane 2H7.v31 wykazywały wydłużony czas deplecji komórek B w porównaniu z tymi, którym podawano 2H7.v16. W szczególności, u zwierząt przechodzących regenerację traktowanych 10 mg/kg 2H7.v16, komórki B wykazywały znaczą regenerację w pewnym czasie pomiędzy dniem 10 a 36, w których pobierano próbki. Jednakże u zwierząt przechodzących regenerację traktowanych 10 mg/kg 2H7.v31, komórki B nie wykazywały regeneracji przed dniem 36, lecz w pewnym czasie pomiędzy dniem 36 a 67 (Fig. 11). Sugeruje to dłuższy czas trwania całkowitej deplecji przez około jeden miesiąc dla 2H7.v31 w porównaniu z 2H7.v16.
W badaniu małp niską lub wysoką dawką nie obserwowano żadnej toksyczności, a ogólna patologia była prawidłowa. W innych badaniach v16 był dobrze tolerowany aż do największych badanych 2 w tych małpach dawek (100 mg/kg x2 = 1200 mg/m2 x2) po podaniu dożylnym 2 dawek podanych w odstępie 2 tygodni.
Dane uzyskane dla małp Cynomolgus otrzymane dla 2H7.v16 względem Rutixan® sugerują, że 5-krotne obniżenie aktywności CDC nie wpływa niekorzystnie na siłę działania. Przeciwciało z silną aktywnością ADCC, ale zmniejszoną aktywnością CDC może posiadać bardzie] korzystny profil bezpieczeństwa pod względem reakcji na pierwszy wlew niż to z większą aktywnością CDC.
P r z y k ł a d 11
Warianty przeciwciał z niedoborem fukozy ze wzmocnioną funkcją efektorową.
Normalne komórki CHO oraz HEK293 dodają w dużym stopniu (97-98%) fukozę do oligosachasarydu IgG. IgG z surowicy są także wysoce fukozylowane.
Do otrzymania przeciwciał do tego badania użyto linii komórkowej CHO DP12 pozbawionej reduktazy dihydrofolianu (DHFR), która to linia jest zdolna do fukozylacji, oraz linii komórkowej Lec13, która jest niezdolna do fukozylacji białek. Linię komórkową CHO Pro-Lec13.a (Lec13) otrzymano od profesor Pameli Stanley z Kolegium Medycznego im. Alberta Ensteina na Uniwersytecie Yeshiva. Wyjściowe linie są Pro- (auksotrof prolinowy) i Gat- (auksotrof prolinowy, adenozynowy i tymidynowy). Linia komórkowa CHO-DP12 jest pochodną linii komórkowej CHO-KL (ATCC #CCL-61), która jest pozbawiona aktywności reduktazy dihydrofolianu i posiada zmniejszone zapotrzebowanie na insulinę. Linie komórkowe transfekowano cDNA z zastosowaniem sposobu z użyciem odczynnika Superfect (Qiagen, Valencia, CA). Selekcji komórek Lec13 z ekspresją transfekowanych przeciwciał dokonano przy użyciu dwuchlorowodorku puromycyny (Calbiochem, San Diego, CA) w stężeniu 10 gg/ml w pożywce hodowlanej zawierającej : pożywkę MEM Alfa z L-glutaminą, rybonukleozydami oraz deoksyrybonukleozydami (GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD), uzupełnioną o 10% inaktywowanej FBS (GIBCO), 10 mM HEPES oraz 1 X penicylina/streptomycyna (GIBCO). Komórki CHO selekcjonowano w podobny sposób w pożywce hodowlanej zawierającej Ham F12 bez GHT: DMEM z niskim stężeniem glukozy bez glicyny z NaHCO3 uzupełnionej o 5% FBS (GIBCO), 10 mM HEPES, 2 mM L-glutaminę,1 X GHT (glicyna, nipoksantyna, tymidyna) raz 1 X penicylina/streptomycyna.
Kolonie powstałe w ciągu dwóch do trzech tygodni połączono w celu namnożenia i ekspresji białka. Pule komórek rozsiano przy początkowej gęstości 3 x 106 komórek/10 cm płytkę do ekspresji małej porcji białek. Komórki przeniesiono do pożywki pozbawionej surowicy po tym, jak osiągnęły 90-95% konfluencji i po 3-5 dniach znad komórek zebrano supernatanty i testowano w teście Fc IgGi nienaruszony IgG-ELISA w celu oszacowania poziomów ekspresji białka. Komórki Lec13 i CHO rozsiano do gęstości w przybliżeniu 8 x 106 komórek/15 cm płytkę na jeden dzień przed zmianą na pożywkę do otrzymywania PS24 uzupełnioną o 10 mg/l rekombinowanej ludzkiej insuliny oraz 1 mg/l pierwiastki śladowych.
Komórki Lec13 i komórki DP12 pozostawały w pożywce do przeciwciał pozbawionej surowicy przez 3-5 dni. Supernatanty zebrano i wyklarowano przez wirowanie w probówkach stożkowych w celu usunięcia komórek i szczątków komórek. Dodano inhibitory proteaz PMSF i protininę (Sigma, St. Louis, MO) i supernatanty zagęszczono 5-krotnie na mieszanych komórkach przy użyciu filtrów MWC030 (Amicon, Beverly, MA) przed natychmiastowym oczyszczaniem przy użyciu chromatografii z białkiem G (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) ). Wszystkie białka poddano wymianie buforu na buforowany fosforanem roztwór soli fizjologicznej (PBS) przy użyciu zagęszczaczy Centri56
PL 212 899 B1 priep-30 (Amicon) i analizowano przez elektroforezę SDS-poliakrylamid. Stężenia białek oznaczono przy użyciu A280 i zweryfikowano przy użyciu analizy składu aminokwasowego.
Komórki CHO poddano transfekcji wektorami z ekspresją humanizowanego 2H7v16, 2H7v.31 i wyselekcjonowano, jak opisano. Przeciwciało 2H7.v16 zachowuje region Fc typu dzikiego, podczas, gdy v.31 (zobacz Przykład 5, Tabela 7 powyżej) posiada region Fc, w którym dokonano zmiany 3 aminokwasów (S298A, E333A, K334A), które skutkują wyższym powinowactwem do receptora FcyRIIIa (Shields i wsp. J. Biol. Chem. 276(9):6591-6604 (2001)). Po transfekcji i selekcji pojedyncze kolonie komórek wyizolowano i oznaczono pod względem poziomu ekspresji białka, a kolonie o największej ekspresji poddano selekcji metotreksatem w celu wyselekcjonowania komórek, które zwiększyły liczbę kopii plazmidu i które zatem wytwarzały przeciwciała na wyższym poziomie. Komórki hodowano, przeniesiono do pożywki pozbawionej surowicy na okres 7 dni, następnie pożywkę zebrano, naniesiono na kolumnę z białkiem A, a przeciwciało wyeluowano przy użyciu standardowych technik. Końcowe stężenie przeciwciała oznaczono przy użyciu testu ELISA, który mierzy nienaruszone przeciwciało. Wszystkie białka poddano wymianie buforu do buforowanego fosforanem roztworu soli fizjologicznej (PBS) przy użyciu zagęszczaczy Centripnep-30 (Amicon) i analizowano przez elektroforezę SDS-poIiakrylamid.
Analiza przy użyciu spektroskopii masowej metodą desorpcji/jonizacji laserowej w matrycy w analizatorze czasu przelotu (MALDI_TOF) oligosacharydów przyłączonych do asparaginy: N-oligosacharydy uwolniono z rekombinowanych glikoprotein przy użyciu procedury Papac i wsp., Glycobiology 8, 445-454 (1998). W skrócie, studzienki z 96-studzienkowej płytki do mikro-miareczkowania pokrytej PVDF (Millipore, Bedford, MA) poddano kondycjonowaniu metanolem w ilości 100 pi, który był przepuszczony przez błony PDVF przez zastosowanie próżni do powielacza próżniowego Millipore Multiscreen. Kondycjonowane błony PVDF przemyto 3 x 250 pl wody. Pomiędzy wszystkimi etapami płukania studzienki całkowicie osuszono przez zastosowanie łagodnej próżni do powielacza. Błony przemyto buforem do redukcji i karboksymetylacji (RCM) złożonym z 6M chlorowodorku guanidyny, 360 mM Trisu, 2 mM EDTA, pH 8,6. Próbki glikoprotein (50 pg) dodano do pojedynczych studzienek, ponownie przesączono przez błony PVDF przy użyciu łagodnej próżni, a studzienki przemyto 2 X 50 pl buforu RCM. Immobilizowane próbki zredukowano przez dodanie 50 pl 0,1 M roztworu ditiotreitolu (DTT) do każdej studzienki i inkubowanie płytki do mikromiareczkowania w 37°C przez 1 godz. DTT usunięto przy użyciu próżni a studzienki przemyto 4 X 250 pl wody. Reszty cysteiny poddano karboksymetylacji przez dodanie 50 pl 0,1 M roztworu kwasu jodoocotowego (IAA), który przygotowano na świeżo w 1 M NaOH i rozcieńczono do 0,1 M buforem RCM. Karboksymetylację wykonano przez inkubowanie przez 30 min. w ciemności w temperaturze otoczenia. W celu usunięcia roztworu IAA płytkę poddano działaniu próżni i studzienki przemyto 4 x 250 pl oczyszczonej wody. Błony PVDF zablokowano przez dodanie 100 pl 1% roztworu PVP360 (poliwinylopirolidyna m. cz. 360000) (Sigma) i inkubację przez 1 godz. w temperaturze otoczenia. Roztwór PVP-360 usunięto przez użycie łagodnej próżni a studzienki przemyto 4 x 250 pl wody. Do każdej studzienki dodano roztwór PNGazy F do trawienia (New England Biolabs, Beverly, MA) w ilości 25 pl roztworu o stężeniu 25 jednostek/ml w 10 mM octanie Trisu, pH 8,4 i trawienie prowadzono przez 3 godz. w 37°C. Po strawieniu, próbki przeniesiono do 500 pl probówek Eppendorfa i do każdej próbki dodano 2,5 pl 1,5 M roztworu kwasu octowego. Zakwaszone próbki inkubowano przez 3 godz. w temperaturze otoczenia w celu przekształcenia oligosacharydów z glikozyloamin do postaci hydroksylowej. Przed analizą z użyciem spektroskopii masowej MALDI-TOF uwolnione oligosacharydy odsolono przy użyciu 0,7 ml złoża w postaci zawiesiny żywicy jonowymiennej (żywica AGSOW-X8 w postaci uwodorowanej) (Bio-Rad, Hercules, CA) nałożonego do probówek do reakcji w małej objętości (US Biochemical, Cleveland, OH).
W celu analizy metodą spektroskopii masowej MALDI-TOF próbek w trybie pozytywnym odsolone oligosacharydy (porcje 0,5 pl) naniesiono na nierdzewną tarczę wraz z 0,5 pl macierzy w postaci kwasu 2,5-dihydroksybenzoesowego, który został przygotowany przez rozpuszczenie 2 mg kwasu 2,5-dihydroksybenzoesowego z 0,1 mg kwasu metoksysylicylowego w 1 mi etanol/10 mM chlorek sodu w stosunku 1:1 (obj./obj.). Mieszaninę próbka/macierz wysuszono próżniowo. W celu analizy w trybie negatywnym odsolone N-oligosacharydy (porcje 0,5 pl) naniesiono na nierdzewną tarczę wraz z 0,5 pl macierzy w postaci 2',4',6'-trihydroksyacetofenonu (THAP) przygotowanego w acetonitryl/13,3 mM bufor cytrynianu amonu w stosunku 1:3 (obj./obj.). Mieszaninę próbka/macierz wysuszono próżniowo, a następnie przed analizą pozwolono na absorbcję wilgoci atmosferycznej. Uwolnione oligosacharydy analizowano metodą MALDI-TOF na spektrometrze masowym PerSeptive BioSystems Voyager-DE. Spektrometr masowy ustawiono na 20 kV zarówno w trybie pozytywnym, jak
PL 212 899 B1 i negatywnym z konfiguracją liniową i z użyciem opóźnionej ekstrakcji. Dane zebrano przy użyciu mocy lasera 1300 i trybu sumowania danych (240 skanów) w celu poprawienia stosunku sygnału do szumu. Urządzenie skalibrowano przy użyciu mieszaniny standardowych oligosacharydów, a dane wygładzono przy użyciu 19-punktowego algorytmu Savitsky-Golay, zanim wyznaczono masy. Integrację danych spektroskopii masowej osiągnięto przy użyciu zestawu oprogramowania do analizy danych Caesar 7.0 (SciBridge Software).
Oznaczenia zależnej od przeciwciał cytotoksyczności komórek naturalnych zabójców (NK)
Oznaczenia ADCC wykonano, jak opisano w Przykładzie 9. Stosunek NK do komórek namierzanych (WIL2-S) wynosił 4 do 1, oznaczenia prowadzono przez 4 godziny, a toksyczność mierzono, jak poprzednio przy użyciu oznaczenia dehydrogenazy laktozy. Komórki namierzane poddano opsonizacji wskazanymi stężeniami przeciwciała przez 30 min. przed dodaniem komórek NK. Zastosowane przeciwciało Rituxan® pochodziło z Genentech (S. San Francisco, CA). Fig. 12 pokazuje wyniki reprezentatywnego oznaczenia ADCC.
Wyniki pokazują, że przeciwciała ze zmniejszoną fukozylacją pośredniczą w zabijaniu komórek namierzanych przez komórki NK bardziej wydajnie niż przeciwciała posiadające fukozę w pełnym składzie. Przeciwciało z zmniejszoną fukozylacją, 2H7v.31, jest najbardziej wydajne w pośredniczeniu zabijania komórek namierzanych. To przeciwciało jest skuteczne w niższych stężeniach i zdolne do pośredniczenia w zabijaniu większego procenta komórek namierzanych w wyższych stężeniach niż inne przeciwciała. Aktywność przeciwciał jest następująca: 2H7 v31 pochodzące z Lec13 > 2H7v16 pochodzące z Lec13 > 2H7 v31 pochodzące z Dp12 > 2H7 v16 pochodzące z Dp12 > lub = Rituxan. Zmiany w sekwencji białka i składzie wodorowęglanów sumują się. Porównanie wodorowęglanu występującego na negatywnym IgG z IgG otrzymanych z Lec13 i otrzymanych z CHO nie pokazało żadnych dostrzegalnych różnic w obszarze glikozylacji i stąd wyniki mogą być odniesione wyłącznie do obecności/braku obecności fukozy.
P r z y k ł a d 12
Warianty przeciwciał 2H7 z niedoborem fukozy ze zwiększoną aktywnością ADCC in vivo
Ten przykład opisuje aktywność ADCC in vivo humanizowanych wariantów 2H7 z niedoborem fukozy, włączając v.16 i v.31 otrzymane w Lec13 w porównaniu z normalnie fukozylowanymi odpowiednikami otrzymanymi w DP12, w myszy z ekspresją ludzkiego CD16 [FcRyIII] i ludzkiego CD20.
Otrzymywanie myszy huCD20Tg+ huCD16Tg+ mCD16-/-
Transgeniczne myszy z ludzkim CD20 otrzymano z ludzkiego DNA CD20 BAC (Invitrogen, Carlsbad, CA). Myszy przebadano w oparciu o analizę FACS pod względem ekspresji CD20. Myszy huCD20Tg następnie skrzyżowano z myszami huCD16TgmCD16-/- w celu otrzymania myszy huCD20Tg+huCD16Tg+mCD16-/-.
Leczenie in vivo
Dziesięć do 100 μg każdego z wariantów 2H7 lub Rituxan® podano myszom huCD20Tg+huCD16Tg+mCD16-/- przez wstrzyknięcie śródotrzewnowe. Równe porcje przeciwciał z dopasowanym izotypem będą podane podobnie do grupy zwierząt będącej negatywną kontrolą.
Otrzymywanie mysich limfocytów
Mysie limfocyty z całej krwi, śledziony, węzłów chłonnych i szpiku kostnego są otrzymywane według standardowego przepisu opisanego w Current Protocols in Iminunology, redagowanym przez John Coligan, Ada Kruisbeek David Margulies, Ethan Shevach oraz Warren Strober, 1994.
Analiza FACS
Pół miliona komórek przemyto i zawieszono w 100 μl buforu FACS, który jest buforowanym fosforanem roztworem soli fizjologicznej z 1% BSA zawierającym 5 μl przeciwciała barwiącego lub kontrolnego. Wszystkie barwiące przeciwciała, włączając kontrole izotypów, otrzymano z PharMingen, San Diego, CA. Ekspresja ludzkiego CD20 jest oznaczona przez barwienie z przeciwciałem Rituxan® wraz z drugorzędowym przeciwciałem anty-ludzka-IgG sprzężonym z FITC. Analiza FACS jest przeprowadzana przy użyciu urządzenia FACScan i oprogramowania Cell Quest (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose, CA). Wszystkie limfocyty są zdefiniowane w przechodzących i bocznych rozproszeniach światła, podczas, gdy wszystkie limfocyty B są zdefiniowane jako posiadające ekspresję B220 na powierzchni komórki.
Deplecja komórek B oraz regeneracja są oznaczane przy użyciu FACS przez analizę zliczeń obwodowych komórek B oraz analizę komórek B hCD20+ w śledzionie, węźle chłonnym o szpiku kostnym w jednodniowych odstępach czasu przez pierwszy tydzień po wstrzyknięciu, a później
PL 212 899 B1 w odstępach tygodniowych. Monitorowane są poziomy wstrzykniętego wariantu przeciwciała 2H7 w surowicy.
Wyniki tego oznaczenia in vivo potwierdzają odkrycia in vitro dotyczące zwiększonej aktywności ADCC oraz większej deplecji komórek B dla wariantów przeciwciał z niedoborem fukozy w porównaniu z odpowiednikami posiadającymi glikozylację typu dzikiego (w odniesieniu do fukozylacji).
P r z y k ł a d 13
Aktywność apoptotyczna
Pokazano, że przeciwciała anty-CD20 włączając Rituxan® indukują apoptozę in vitro, jeżeli są połączone wiązaniem krzyżowym przez przeciwciało drugorzędowe lub przez środki chemiczne (Shan i wsp., Blood 9:1644-1652 (1998); Byrd i wsp., Biood 99:1038-43 (2002); Pederson i wsp., Blood 99:1314-19 (2002)). Mysie dimery 2H7 połączone wiązaniem krzyżowym utworzonym chemicznie indukowały apoptozę komórek Daugiego (Ghetie i wsp., Proc Natl Acad Sci USA 94:7509-14 (1997)). Tworzenie wiązania krzyżowego przez przeciwciało drugorzędowe także indukowało apoptozę z udziałem mysiego przeciwciała 2H7 (Shan i wsp., 1998). Uważa się, że te aktywności są istotne fizjologicznie, ponieważ różne mechanizmy mogą prowadzić do tworzenia wiązania krzyżowego z udziałem przeciwciała anty-CD20 przyłączonego in vivo do CD20 na powierzchni komórki.
RhuMAb 2H7.v16 [humanizowane 2H7.v16; RhuMAb oznacza rekombinowane ludzkie przeciwciało monoklonalne] oraz Rituxan® porównano w oznaczenia apoptozy in vitro przy użyciu drugorzędowego przeciwciała tworzącego wiązania krzyżowe. Komórki Ramosa (CRL-1596, ATCC, Manassas, VA), linię komórkową ludzkich limfocytów z ekspresją CD20 użyto do pomiaru zdolności monoklonalnych przeciwciał anty-CD20 rhuMAb 2H7.v16 oraz Rituximab względem przeciwciała będącego negatywną kontrolą, Trastuzumab (Herceptin®, Genentech, Południowe San Francisco, CA), do indukcji apoptozy mierzonej przez barwienie Aneksyną V oraz nieprzepuszczanie barwnika w postaci jodku propidyny (Zestaw do oznaczania apoptozy Vybrant®, Molecular Probes, Seattle, WA). Komórki Ramosa hodowano w pożywce RPMI-1640 (Gibco, Rockville, MD) zawierającej 10% surowicy z płodów cielęcych (Biosource International, Camarillo, CA) oraz 2 mM L-glutaminę (Gibco). Przed oznaczeniem komórki przepłukano dwukrotnie świeżą pożywką i następnie doprowadzono do stężenia komórek 2 x 106 na ml. Komórki 150 pl dodano do 96-studzienkowych płytek do oznaczania (Becton Dickinson, Palo Alto, CA), które zawierały 150 pl wcześniej oznaczonej ilości przeciwciała kontrolnego IgG1, rhuMAb 2H7.v16 lub Rituximab wraz z kozim F(ab)'2 anty-ludzki Fc (Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Końcowe stężenia IgG wynosiły 100, 10, 1,0, 0,1, 0,01 i 0,001 nM, a stężenie koziego F(ab)'2 anty-ludzki Fc ustawiono na dwukrotnie większe od odpowiedniego stężenia próbki przeciwciała. Każde rozcieńczenie wykonano w trzech powtórzeniach. Po inkubacji przez 24 godz. w 37°C komórki przepłukano dwukrotnie przy użyciu PBS a następnie wybarwiono Anaksyną V oraz jodkiem propidyny według zaleceń producenta. Wzory barwienia komórek Ramosa analizowano przy użyciu cytometrii przepływowej z zastosowaniem cytometru przepływowego FACscan (Becton Dickinson, San Jose, CA), a dane zbierano w okresach trwających 10 sek. Dane zredukowano przy użyciu oprogramowania Cellquest Pro (Becton Dickinson). Komórki Ramosa, które były dodatnie pod względem (1) barwienia Aneksyną V, (2) podwójnym barwienia Aneksyną V i jodkiem propidyny oraz (3) liczba komórek niewybarwionych komórek żywych zostały zliczone i przedstawione na wykresie przy użyciu oprogramowania KaleidaGraph (Synergy Software, Reading, PA).
Zarówno rhuMAb 2H7.v16, jak i Rituximab indukowały apoptozę komórek Ramosa, kiedy były związane krzyżowo z anty-ludzki Fc w porównaniu z nieistotnym IgG1 będącym przeciwciałem kontrolnym (Fig. 13-15). Aktywność apoptotyczna (rhuMAb 2H7) była nieco niższa niż ta dla Rituximab. Przy stężeniach 10 nM związanego krzyżowo rhuMAb 2H7, Rituximab i kontrolnego przeciwciała IgG1 frakcje komórek wybarwionych Aneksyną V wynosiły odpowiednio 18,5, 16,5, 2,5%, frakcje podwójnie wybarwionych komórek wynosiły 29, 38 i 16%, a zliczonych liczby żywych komórek na 10 sek. wynosiły 5200, 3100 i 8600.
Te dane uzyskane in vitro pokazują, że apoptoza jest jednym z możliwych mechanizmów powodujących deplecję komórek B. Wiązanie krzyżowe in vivo przeciwciała rhuMAb 2H7 lub Rituximab związanego do CD20 na powierzchni komórki może pojawić się poprzez FcγR na powierzchniach immunologicznych komórek efektorowych
P r z y k ł a d 14
Supresja in vivo wzrostu nowotworu
Zdolność rhuMAb 2H7.v16 do hamowania ludzkich komórek B Raji, linii komórkowej chłoniaka (ATCC CCL 86) oszacowano w myszach Balb/c pozbawionych układu immunologicznego (pozbawionych
PL 212 899 B1 grasicy). Komórki Raji posiadaną ekspresję CD20 i wcześniej stwierdzono, że rosną w myszach pozbawionych układu immunologicznego, wytwarzając chorobę dającą przerzuty; wzrost nowotworu jest hamowany przez Rituxan® (Clynes i wsp., Nature Medicine 6, 443-446 (2000)). Pięćdziesiąt sześć myszy Balb/c pozbawionych układu immunologicznego będących w wieku 8-10 tygodni podzielono na 7 grup (A-G), każda z grup składająca się z 8 myszy. Dnia 0 każda z myszy otrzymała podskórne wstrzyknięcie do boku 5 x 106 komórek Raji będących komórkami chłoniaka komórek B. Poczynając od dnia 0, każda mysz otrzymała 100 μl roztworu negatywnej kontroli (PBS; buforowany tosforanem roztwór soli fizjologicznej), przeciwciała Rituxan® lub 2H7.v16. Dawka zależała od masy, dostarczanie leku było dożylne poprzez żyłę ogonową. Grupa myszy A otrzymała PBS. Grupy B-D otrzymały Rituxan® odpowiednio w ilości 5,0 mg/kg, 0,5 mg/kg i 0,05 mg/kg. Grupy myszy E-G otrzymały 2H7v.16 odpowiednio w ilości 5,0 mg/kg, 0,5 mg/kg i 0,05 mg/kg. Wstrzyknięcia powtarzano każdego tygodnia przez 6 tygodni. W tygodniowych odstępach czasu podczas leczenia każda mysz była badana na obecność namacalnych guzów w miejscu iniekcji a objętość guzów, jeżeli były obecne, mierzono i notowano. Końcowe badanie wykonano w 8 tygodniu (po dwutygodniowej przerwie w leczeniu).
Wyniki tego badania pokazały, że zarówno rhuMAb 2H7.v16, jak i Rituxan® były skuteczne w hamowaniu podskórnego wzrostu guza komórek Raji w myszy pozbawionej układu immunologicznego (Fig. 16-18). Wzrost guza obserwowano poczynając od 4 tygodni w grupie kontrolnej otrzymującej PBS. Jednakże, w grupach leczonych przeciwciałem Rituxan® lub 2H7.v16 w dawkach 5 mg/kg lub 0,5 mg/kg nie obserwowano w wzrostu żadnego guza przez 8 tygodni trwania badania. W grupach leczonych niską dawką 0,05 mg/kg guzy obserwowano u jednego zwierzęcia w grupie otrzymującej 2H7 i u jednego zwierzęcia w grupie otrzymującej Rituxan® (Fig. 18).
P r z y k ł a d 15
Klonowanie CD20 z małpy cynomolgus i wiązanie przeciwciała
Sekwencję DNA CD20 dla małpy cynomolgus (Macaca fascicularis) oznaczono przez izolację cDNA kodującego CD20 z biblioteki cDNA otrzymanego ze śledziony małpy cynomolgus. Do konstrukcji biblioteki użyto plazmidowego systemu SUPERSCRIPT™ do syntezy cDNA i klonowania do plazmidu (cat#18248-013, Invitrogen, carlsbad, cA) z niewielkimi modyfikacjami. Bibliotekę cDNA poddano ligacji do wektora pRK5E przy użyciu miejsc restrykcyjnych XhoI i NotI. mRNA wyizolowano z tkanki śledziony (Regionalne Centrum Badań nad Naczelnymi w Kaliforni, Davis, cA). Startery do namnożenia CD20 zaprojektowano w oparciu o niekodujące sekwencje ludzkiego CD20. Do sklonowania cDNA kodującego CD20 z małpy cynomolgus przy użyciu łańcuchowej reakcji polimerazy (PcR) zastosowano starter 5'-AGTTTTGAGAGcAAAATG-3' do N-końcowego regionu oraz starter 5'AAGcTATGAAcAcTAATG-3' do c-końcowego regionu. Reakcję PcR wykonano przy użyciu Polimerazy DNA Taq Platinium o wysokiej wydajności według zaleceń producenta (Gibco, Rockville, MD). Produkt PcD podklonowano do wektora pcR ®2.1-TOPO ®Vector i transformowano do E. coli XL-1 blue (Stratagene. La Jolla, cA). Plazmidowy DNA zawierający produkty PcR poddane ligacji wyizolowano z pojedynczych klonów i zsekwencjonowano.
Sekwencja aminokwasowa dla CD20 z małpy cynomolgus jest pokazana na Fig. 19. Fig. 20 pokazuje porównanie CD20 z małpy i człowieka. CD20 z małpy cynomolgus jest podobny w 97,3% do ludzkiego cD20 z 8 różnicami. Domena zewnątrzkomórkowa zawiera jedną zmianę w V157A, podczas, gdy pozostałe 7 reszt może być znalezionych w regionach cytoplazmatycznych lub międzybłonowych.
Przeciwciała skierowane przeciwko ludzkiemu CD20 oznaczono na zdolność do wiązania i zastępowania mysiego 2H7 sprzężonego z FITc związanego do komórek małpy cynomolgus z ekspresją CD20. Z dwóch małp cynomolgus pobrano dwadzieścia mililitrów krwi (Kalifornijskie Regionalne centrum Badania Naczelnych, Davis, CA) do sodowej soli heparyny i dostarczono bezpośrednio do Genentech Inc.. Tego samego dnia próbki krwi połączono i rozcieńczono w stosunku 1:1 przez dodanie 40 ml buforowanego fosforanem roztworu soli fizjologicznej (PBS). 20 ml rozcieńczonej krwi naniesiono warstwowo na 4 x 20 ml roztworu Ficoll-Paque ™Plus (Amersham Biosciences, Uppsala, Szwecja) w 50 ml probówkach stożkowych (Cat#352098, Falcon, Franklin Lakes, NJ) i wirowano przy 1300 rpm przez 30 minut w temperaturze pokojowej w wirówce Sorval 7. (Dupont, Newtown, cT). Warstwę PBMc wyizolowano i przemyto PBS. czerwone krwinki poddano lizie w 0,2% roztworze Nacl, przywrócono do izotoniczności przez dodanie takiej samej objętości 1,6% roztworu Nacl i wirowano przez 10 minut w 1000 rpm. Osad PBMc zawieszono w RPMI 1640 (Gibco, Rockville, MD) zawierającej 5% surowicy z płodów cielęcych (FBS) i przeniesiono do szalki 10 cm do hodowli tkankowej na 1 godzinę w 37°C. Nieprzylegające populacje komórek B i T usunięto przez odciągnięcie pożywki,
PL 212 899 B1 zwirowano i policzono. Odzyskano całkowitą ilość 1,4 x 107 komórek. Ponownie zawieszone PBMC rozmieszczono w dwudziestu probówek do hodowli 12 x 75 (Cat#352053, Falcon), z każdą probówką zawierającą 1 x 106 komórek w objętości 0,25 ml. Probówki podzielono na cztery zestawy po pięć probówek. Do każdego zestawu dodano pożywkę (RPMI1640, 5% FBS), miareczkowane ilości kontrolnego ludzkiego przeciwciała IgG1, przeciwciała Rituxan®, 2H7.v16 lub 2H7.v31. Końcowe stężenie każdego przeciwciała wynosiło 30, 10, 3,3 oraz 1,1 nM. Ponadto, każda probówka otrzymała 20 μl przeciwciała anty-ludzki CD20 sprzężonego z izotiocyjanianem fluoresceiny (FITC) (Cat#555622, BD Biosciences, San Diego, CA). Komórki lekko wymieszano, inkubowano przez 1 godzinę w lodzie, a następnie przemyto dwukrotnie zimnym roztworem PBS. Barwienie powierzchni komórki analizowano na urządzeniu Epic XL-MCL (Coulter, Miami, FL), policzono średnie geometryczne, przedstawiono na wykresie (KaleidaGraph™, Synergy Software,, Reading, PA) względem stężeń przeciwciała.
Dane na Fig. 21 pokazały, że 2H7 v.16 oraz 2H7 v.31 współzawodnicząc zastępowały mysie 2H7-FITC przyłączone do komórek małpy Cynomolgus. Ponadto, przeciwciało Rituxan® także zastępowało związane mysie 2H7-FITC, pokazując zatem, że zarówno 2H7, jak i Rituxan® wiążą się do pokrywających się epitopów na CD20. Dodatkowo, dane pokazują, że wartości IC50 dla przeciwciał 2H7 ν.16, 2H7 v.31 i Rituxan są podobne wahają się w granicach 4-6 nM.
P r z y k ł a d 16
Badania fazy I/II nad rhuMAb 2H7 (2H7.v16) w leczeniu reumatoidalnego zapalenia stawów w stanie od umiarkowanego do ciężkiego
Streszczenie protokołu
Randomizowane, z kontrolą placebo, rozproszone, ze ślepą próbą badania fazy I/II pod względem bezpieczeństwa zwiększających się dawek PR070769 (rhuMAb 2H7) u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów w stanie od łagodnego do ciężkiego otrzymujących towarzyszące stałe dawki metroreksatu.
Cele
Pierwotnym celem tego badania jest oszacowanie bezpieczeństwa i stopnia tolerowania zwiększających się dożylnych (IV) dawek PR070769 (rhuMAb 2H7) u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów w stopniu od łagodnego do ciężkiego.
Projektowanie badania
Jest to randomizowane, z kontrolą placebo, rozproszone, ze ślepą próbą fazy I/II, z podawaniem leku zatajonym dla badacza i pacjenta badanie bezpieczeństwa wzrastających dawek PR070769 w kombinacji z MTX u pacjentów z RA w stanie od łagodnego do ciężkiego. Badanie składa się z fazy wzrastającej dawki i drugiej fazy z rekrutacją większej liczby pacjentów. Sponsor pozostanie nie zatajony przy ustalaniu leczenia.
Zaangażowani będą pacjenci z RA w stanie od umiarkowanego do ciężkiego, u których nie powiodło się leczenie jednym do pięciu antyreumatoidalnych leków lub środków biologicznych modyfikujących przebieg choroby, którzy obecnie posiadaną niekorzystne odpowiedzi kliniczne na leczenie MTX.
Pacjenci będą musieli otrzymywać MTX w zakresie 10-25 mg tygodniowo przez przynajmniej 12 tygodni przez rozpoczęciem badania i być na stałych dawkach przez przynajmniej 4 tygodnie przed otrzymaniem ich początkowej dawki badanego leku (PR070769 lub placebo). Pacjenci mogą także otrzymywać stałe doustne dawki kortykosteroidów (do 10 mg dziennie lub odpowiednik w postaci prednisolonu) oraz stałe dawki niesterydowych leków przeciwzapalnych (NSAIDs, ang. nonsteroidal anti-inflammatory drugs). Pacjenci otrzymają dwa wlewy PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo we wskazanej dawce w Dniu 1 i 15 według następującego schematu zwiększania dawki (zobacz Fig. 22).
Zwiększanie dawki odbędzie się według określonych kryteriów (zobacz Reguły Zwiększania Dawki) i po rewizji danych dotyczących bezpieczeństwa przez wewnętrzną komisję do rewizji danych dotyczących bezpieczeństwa i oszacowania dolegliwości związanych z toksycznością 72 godziny po drugim wlewie u ostatniego leczonego pacjenta w grupie. Po fazie zwiększania dawki, 40 dodatkowych pacjentów (32 otrzymujących lek i 8 otrzymujących placebo) będzie losowo przydzielonych do następujących poziomów dawek: 2 x 50 mg, 2 x 200 mg, 2 x 500 mg oraz 2 x 1000 mg, jeżeli pokazano, że poziomy dawek były tolerowane podczas fazy zwiększania dawki. Badanie obejmie w przybliżeniu 205 pacjentów.
Liczby komórek B będą uzyskane i odnotowane (do oznaczeń związanych z badaniem, zobacz Rozdział 4.5 i Dodatek A-1) . Liczby komórek B będą oszacowane przy użyciu cytometrii przepływowej
PL 212 899 B1 w 48 tygodniu następującym po okresie oszacowania skuteczności trwającym 6 miesięcy. Deplecja komórek B nie będzie rozpatrywana jako toksyczność ograniczająca dawkę (DLC, ang. dose-limiting toxicity), ale raczej jako spodziewany wyniki farmakodynamiczny leczenia z zastosowaniem PR070769.
W nieobowiązkowej części badania od pacjentów w różnych punktach czasowych (zobacz Rozdział 3.3.3) będzie pobrana krew do analiz surowicy RNA, jak również próbki moczu. Próbki te mogą być użyte do identyfikacji znaczników biologicznych, z których można będzie przewidzieć odpowiedź na leczenie z zastosowaniem PR070769 u pacjentów z RA w stanie umiarkowanym do ciężkiego.
Wyniki pomiarów
Pierwotnym wynikiem pomiaru w tym badaniu jest bezpieczeństwo i tolerancja PR070769 u pacjentów z RA w stanie umiarkowanym do ciężkiego.
Leczenie stosowane w badaniu
Grupy pacjentów będą otrzymywać dwa wlewy dożylne leku PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo we wskazanej dawce w Dniu 1 i 15 według następującego schematu zwiększania dawki:
- 10 mg PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo: 4 pacjentów otrzymujących lek, 1 kontrola
- 50 mg PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo: 8 pacjentów otrzymujących lek, 2 kontrole
- 200 mg PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo: 8 pacjentów otrzymujących lek, 2 kontrole
- 500 mg PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo: 8 pacjentów otrzymujących lek, 2 kontrole
- 1000 mg PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo: 8 pacjentów otrzymujących lek, 2 kontrole
Skuteczność
Skuteczność PR070769 będzie mierzona przez odpowiedzi ACR. Procent pacjentów, którzy osiągną odpowiedź ACR20, ACR50 i ACR70 będzie zsumowany względem grup leczenia i dla każdej grupy będą obliczone 95% przedziały ufności. Składniki tych odpowiedzi i ich zmiana względem poziomu podstawowego będą zsumowane względem sposobu leczenia i długości leczenia.
Wniosek
Dane przedstawione powyżej pokazują powodzenie w otrzymaniu humanizowanych przeciwciał wiążących CD20, w szczególności humanizowanych wariantów 2H7, które zachowały, a nawet wzmocniły ich właściwości biologiczne. Humanizowane przeciwciała 2H7 z wynalazku wiążą się do CD20 z powinowactwami podobnymi do mysiego dawcy i chimerycznych przeciwciał 2H7 i były skuteczne w zabijaniu komórek B u naczelnych, prowadzącemu do deplecji komórek B. Pewne warianty wykazywały zwiększoną aktywność ADCC w stosunku do chimerycznego przeciwciała anty-CD20 obecnie stosowanego w leczeniu NHL, pozwalając na stosowanie mniejszych dawek terapeutycznego przeciwciała u pacjentów. Dodatkowo, podczas, gdy dla chimerycznego przeciwciała, które posiada mysie reszty w regionie FR podawanego w dawkach koniecznych do osiągnięcia całkowitej deplecji komórek B, może być konieczne zapobieganie odpowiedzi przeciwciał przeciwko niemu, to niniejsze humanizowane przeciwciała mogą być podawane w dawkach, które powodują częściową lub całkowitą deplecję komórek B, i przez różne czasy trwania leczenia, jak jest to pożądane dla określonej choroby i pacjenta. Dodatkowo, te przeciwciała wykazywały stabilność w roztworze. Te właściwości humanizowanych przeciwciał 2H7 sprawiają, że są idealne do zastosowania jako środek immunoterapeutyczny w leczeniu nowotworów CD20-dodatnich oraz chorób immunologicznych; Nie oczekuje się, że te przeciwciała będą immunogenne lub przynajmniej będą mniej immunogenne niż całkowicie mysie lub chimeryczne przeciwciała anty-CD20 u ludzkich pacjentów.
Literatura
Odniesienia cytowane w tym zgłoszeniu, włączając patenty, opublikowane zgłoszenia i inne publikacje są niniejszym włączone przez cytowanie.
Część praktyczna niniejszego wynalazku będzie obejmować, jeżeli nie wskazano inaczej, konwencjonalne techniki biologii molekularnej i tym podobne, które są w zakresie specjalności tej dziedziny. Takie techniki są całkowicie wyjaśnione w literaturze. Zobacz, np. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (J. Sambrook i wsp., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989); Current Protocols in Molecular Biology (red. F. Ausubel i wsp., 1987 uaktualnione); Essential Molecular Biology (red. T. Brown, IRL Press 1991); Gene Expression Technology (red. Goeddel, Academic Press 1991); Methods for Cloning and Analysis of Eukarvotic Genes (red. A. Bothwell i wsp, Bartlett Publ. 1990); Gene Transfer and Expression (M. Kriegler, Stockton Press 1990); Recombinant DNA Methodology II (red. R. Wu i wsp, Academic Press 1995); PCR: A Practical Approach (M. MePherson i wsp. IRL Press at Oxford University Press 1991); Oligonucleotide Synthesis (red.
PL 212 899 B1
M. Gait, 1984); Cell Culture for Biochemists (red. R. Adams, Elsevier Science Publishers 1990); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (red. J. Miller i M. Calos, 1987); Mammalian Cell Biotechnology (red. M. Butler, 1991); Animal Cell Culture (red. J. Pollard i wsp., Humana Press 1990); Culture of Animal Cells, wyd 2 (red. R. Freshney i wsp. Alan R. Liss 1987); Flow Cytometry and Sorting (red. M. Melamed i wsp., Wiley-Liss 1990); seria Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Wirth M I Hauser H. (1993); Immunochemistry in Practice, wyd. 3, A Johnstone i R. Thorpe, Blackwell Science, Cambridge, Ma, 1996; Techniques in Imnunocytochemistry, (red. G. Bullock i P. Petrusz, Academic Press 1982, 1983, 1985, 1989); Handbook of Experimental Immunology, (red. D. Weir i C. Blackwell); Current Protocols in Immunology (red. J. Coligan i wsp. 1991); Immunoassay (red. E. P. Diamandis I T. K. Christopoulos, Academic Press, Inc., 1996); Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (wyd. 2) Academic Press, New York; Ed Harlow i David Lane, Antibodies A laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1988; Antibody Engineering, wydanie 2 (red. C. Borrebaeck, Oxford University Press, 1995); oraz serie Annual Review of Immunology; serie Advances in Immunology.

Claims (66)

1. Humanizowane przeciwciało, które wiąże ludzki CD20, lub jego fragment wiążący antygen, znamienne tym, że przeciwciało to zawiera region VH zawierający sekwencję VH przeciwciała hu2H7.v16 jak pokazano na Fig. 1B i region VL zawierający sekwencję VL przeciwciała hu2H7.v16 jak pokazano na Fig. 1A.
2. Przeciwciało według zastrz. 1, znamienne tym, że region VH jest przyłączony do regionu stałego łańcucha ludzkiej IgG.
3. Przeciwciało według zastrz. 2, znamienne tym, że ludzką IgG jest IgG1 lub IgG3.
4. Przeciwciało według zastrz. 1, znamienne tym, że przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha ciężkiego i lekkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7.
5. Przeciwciało według zastrz. 1, znamienne tym, że przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha jak pokazano na Fig.6 i na Fig. 8.
6. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen według zastrz. 1, znamienny tym, że przeciwciało lub fragment przeciwciała jest skuteczny w deplecji in vivo komórek B u naczelnych i że komórki B naczelnych pochodzą od człowieka lub małpy Cynomolgus.
7. Przeciwciało lub fragment wiążący antygen według zastrz. 1 do 6, znamienne tym, że jest sprzężone ze środkiem cytotoksycznym.
8. Przeciwciało lub fragment wiążący antygen według zastrz. 7, znamienne tym, że środkiem cytotoksycznym jest izotop radioaktywny lub toksyna.
9. Kompozycja zawiera przeciwciało lub fragment wiążący antygen według zastrz. 1 do 8 oraz nośnik.
10. Kompozycja według zastrz. 9, znamienna tym, że przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7, a nośnik stanowi farmaceutycznie akceptowalny nośnik.
11. Wyrób fabryczny zawierający pojemnik i kompozycję w nim zawartą, znamienny tym, że kompozycja ta zawiera przeciwciało lub fragment wiążący antygen jak zdefiniowano w zastrz. 1 do 8.
12. Wyrób fabryczny według zastrz. 11, znamienny tym, że zawiera ponadto ulotkę wskazującą, że kompozycja może być zastosowana do leczenia chłoniaka nieziarniczego lub reumatoidalnego zapalenia stawów.
13. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jak zdefiniowano w zastrz. 1 do 8, do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy w komórkach B in vivo, sposobie leczenia pacjentów z nowotworem CD20-dodatnim, lub w sposobie leczenia choroby autoimmunologicznej u pacjenta.
14. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 13, znamienny tym, że nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak lub białaczka.
15. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 14, znamienne tym, że nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak nieziarniczy (NHL) lub ziarnica złośliwa z przewagą limfocytów (LPHD).
16. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 13, znamienne tym, że nowotworem jest przewlekła białaczka limfocytowa lub chłoniak z małych limfocytów.
PL 212 899 B1
17. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 13 do 16, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu 2 u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego w dawce w zakresie około 275-375 mg/m2.
18. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 13 do 16, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania w leczeniu 22 u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego w dawce w zakresie około 250 mg/m2 do około 500 mg/m2.
19. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 13 do 18, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu nowotworu CD20-dodatniego z co najmniej jednym czynnikiem chemioterapeutycznym.
20. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 19, znamienne tym, że nowotworem jest chłoniak nieziarniczy (NHL) a czynnik chemioterapeutycznym jest wybrany z grupy składającej się z doksorubicyny, cyklofosfamidu, winkrystyny, prednisolonu i CHOP.
21. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 17, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania w leczeniu u pa2 cjenta nowotworu CD20-dodatniego w co najmniej dwóch dawkach przy 375 mg/m2 na dawkę.
22. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 21, znamienne tym, że dwie dawki podaje się w odstępie dwutygodniowym.
23. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz 13, znamienne tym, że choroba autoimmunologiczna jest wybrana z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenie stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenie stawów, tocznia rumieniowatego układowego (SLE), toczniowego zapalenia nerek, wrzodziejącego zapalenia okrężnicy, choroby Wegenera, choroby zapalnej jelit, zapalenia naczyń ANCA, odrzucenie przeszczepu narządów litych, choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi, choroby Werlhofa (ITP), choroby Moschowitza (TTP), małopłytkowości o podłożu autoimmunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, miastenii rzekomoporaźnej, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych.
24. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 23, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów.
25. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 24, znamienne tym, że pacjent cierpi z powodu średniego do ciężkiego reumatoidalnego zapalenia stawów i że zawiodło leczenie co najmniej jednym lekiem przeciwreumatycznym modyfikującym chorobę.
26. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 24, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu choroby autoimmunologicznej z drugim czynnikiem terapeutycznym.
27. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 26, znamienne tym, że drugi czynnik terapeutyczny jest czynnikiem immunosupresyjnym.
28. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 26, znamienne tym, że czynnik immunosupresyjny stanowi metotreksat.
29. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 24, znamienne tym, że przeciwciało wiążące CD20 lub jego fragment wiążący antygen zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7, i przy czym przeciwciało jest do podawania w leczeniu choroby autoimmunologicznej w dawce wybranej z 2x50 mg, 2x200 mg i 2x500 mg.
30. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 29, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez wlew dożylny.
31. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 29, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez podawanie podskórne.
32. Izolowany kwas nukleinowy, który koduje przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jak zdefiniowano w zastrz. 1 do 5.
33. Wektor ekspresji kodujący przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jak zdefiniowano w zastrz. 1 do 5.
34. Komórka gospodarza zawierająca kwas nukleinowy jak zdefiniowano w zastrz. 32.
35. Komórka gospodarza według zastrz. 34, która wytwarza przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen, znamienna tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen wiąże ludzki CD20.
PL 212 899 B1
36. Komórka gospodarza według zastrz. 35, którą stanowi komórka cHO.
37. Sposób wytwarzania przeciwciała lub jego fragmentu wiążącego antygen, gdzie przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen wiąże ludzki CD20, znamienny tym, że hoduje się komórkę gospodarza jak zdefiniowano w zastrz. 35 lub 36 i odzyskuje się przeciwciało wytworzone przez komórkę gospodarza.
38. Płynny preparat, znamienny tym, że zawiera przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen w stężeniu 20 mg/ml, 10 mM siarczan histydyny o pH 5,8, 60 mg/ml sacharozy, 0,2 mg/ml polisorbanu 20, przy czym przeciwciało posiada sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7.
39. Przeciwciało do zastosowania według zastrz. 23, znamienne tym, że przeciwciało wiążące CD20 zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego odpowiednio jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7.
40. Przeciwciało do zastosowania według zastrz. 39, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest toczeń rumieniowaty układowy (SLE) lub toczniowe zapalenie nerek.
41. Przeciwciało do zastosowania według zastrz. 39, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest wrzodziejące zapalenie okrężnicy.
42. Przeciwciało do zastosowania według zastrz. 39, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest stwardnienie rozsiane.
43. Przeciwciało do zastosowania według 39, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest odrzucenie przeszczepu narządu litego lub choroba przeszczep przeciwko gospodarzowi.
44. Przeciwciało do zastosowania według 39, znamienne tym, że przeciwciało jest do podawania przez wlew dożylny.
45. Przeciwciało do zastosowania według 39, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez podawanie podskórne.
46. Zastosowanie przeciwciała wiążącego CD20 lub jego fragmentu jak zdefiniowano w zastrz. 1-8 do wytwarzania leku do leczenia u pacjenta nowotworu cD20-dodatniego.
47. Zastosowanie według zastrz. 46, znamienne tym, że CD20-dodatni nowotwór jest chłoniakiem lub białaczką komórki komórki B.
48. Zastosowanie według zastrz. 46, znamienne tym, że nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak nieziarniczy (NHL) lub ziarnica złośliwa z przewagą limfocytów (LPHD).
49. Zastosowanie według zastrz. 47, znamienne tym, że nowotworem jest przewlekła białaczka limfatyczna lub chłoniak z małych limfocytów (SLL).
50. Zastosowanie według zastrz. 46, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu nowotworu cD20-dodatniego u pacjenta, w dawce w za2 kresie około 275-375 mg/m2.
51. Zastosowanie według zastrz. 46, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu nowotworu cD20-dodatniego u pacjenta, w dawce w za22 kresie około 250 mg/m2 do około 500 mg/m2.
52. Zastosowanie według zastrz. 50, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania w leczeniu nowotworu cD20-dodatniego u pacjenta, w co najmniej 2 dwóch dawkach przy 375 mg/m2 na dawkę.
53. Zastosowanie według zastrz. 55, znamienne tym, że dwie dawki podaje się w odstępie dwutygodniowym.
54. Zastosowanie według zastrz. 46, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu nowotworu cD20-dodatniego z co najmniej jednym czynnikiem chemioterapeutycznym.
55. Zastosowanie według zastrz. 54, znamienne tym, że nowotworem jest chłoniak nieziarniczy (NHL) a czynnik chemioterapeutyczny jest wybrany z grupy składającej się z doksorubicyny, cyklofosfamidu, winkrystyny oraz prednisolonu i cHOP.
56. Zastosowanie przeciwciała wiążącego CD20 lub jego fragmentu jak zdefiniowano w zastrz. 1 do 8 do wytwarzania leku do leczenia u pacjenta choroby autoimmunologicznej.
57. Zastosowanie według zastrz. 56, znamienne tym, że choroba autoimmunologiczna jest wybrana z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenie stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenia stawów, tocznia rumieniowatego układowego (SLE), toczniowego zapalenia nerek, wrzodziejącego zapalenia okrężnicy, choroby Wegenera, choroby zapalnej jelit, zapalenia małych naczyń ANCA, odrzucenie przeszczepu narządów litych, choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi,
PL 212 899 B1 choroby Werlhofa (ITP), choroby Moschowitza (TTP), małopłytkowości o podłożu autoimmunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, miastenii rzekomoporaźnej, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych.
58. Zastosowanie według zastrz. 57, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów.
59. Zastosowanie według zastrz. 58, znamienne tym, że pacjent cierpi z powodu średniego do ciężkiego reumatoidalnego zapalenia stawów i że zawiodło leczenie co najmniej jednym lekiem przeciwreumatycznym modyfikującym chorobę.
60. Zastosowanie według zastrz. 57, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczenia choroby autoimmunologicznej z drugim czynnikiem terapeutycznym.
61. Zastosowanie według zastrz. 60, znamienne tym, że drugim czynnikiem terapeutycznym jest czynnik immunosupresyjny.
62. Zastosowanie według zastrz. 61, znamienne tym, że czynnik immunosupresyjny stanowi metotreksat.
63. Zastosowanie według zastrz. 58, znamienne tym, że przeciwciało wiążące CD20 lub jego fragment wiążący antygen zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego odpowiednio o sekwencji SEQ ID nr 21 jak pokazano na Fig. 6 i o sekwencji SEQ ID nr 22 jak pokazano na na Fig. 7, i przy czym przeciwciało jest do podawania w leczeniu choroby autoimmunologicznej w dawce wybranej z 2x50 mg, 2x200 mg i 2x500 mg.
64. Zastosowanie według zastrz. 63, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez wlew dożylny.
65. Zastosowanie według zastrz. 63, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez zastrzyk podskórny.
66. Zastosowanie według zastrz. 57, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest stwardnienie rozsiane.
PL377328A 2002-12-16 2003-12-16 Humanizowane przeciwcialo, kompozycja zawierajaca to przeciwcialo, wyrób fabryczny, przeciwcialo lub jego fragment do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy, izolowany kwas nukleinowy, wektor ekspresji, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciala lub jego fragmentu, plynny preparat i zastosowanie przeciwciala do wytwarzania leku PL212899B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US43411502P 2002-12-16 2002-12-16
US52616303P 2003-12-01 2003-12-01

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL377328A1 PL377328A1 (pl) 2006-01-23
PL212899B1 true PL212899B1 (pl) 2012-12-31

Family

ID=32685285

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL377328A PL212899B1 (pl) 2002-12-16 2003-12-16 Humanizowane przeciwcialo, kompozycja zawierajaca to przeciwcialo, wyrób fabryczny, przeciwcialo lub jego fragment do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy, izolowany kwas nukleinowy, wektor ekspresji, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciala lub jego fragmentu, plynny preparat i zastosowanie przeciwciala do wytwarzania leku

Country Status (35)

Country Link
US (7) US7799900B2 (pl)
EP (5) EP1944320A1 (pl)
JP (3) JP4351674B2 (pl)
KR (2) KR20070055625A (pl)
CN (1) CN103833854B (pl)
AR (3) AR042485A1 (pl)
AT (1) ATE470675T1 (pl)
AU (1) AU2003301079C1 (pl)
BE (1) BE2018C021I2 (pl)
BR (2) BRPI0316779B1 (pl)
CA (1) CA2507898C (pl)
CL (1) CL2008003323A1 (pl)
CR (2) CR7875A (pl)
CY (2) CY1110759T1 (pl)
DE (1) DE60332957D1 (pl)
DK (2) DK2289936T3 (pl)
ES (2) ES2633311T3 (pl)
FR (1) FR18C1023I2 (pl)
HK (1) HK1248731A1 (pl)
HR (1) HRP20050649B1 (pl)
HU (3) HU227217B1 (pl)
IL (2) IL168754A (pl)
MA (1) MA27704A1 (pl)
MX (1) MXPA05006511A (pl)
NO (1) NO338402B1 (pl)
NZ (1) NZ566907A (pl)
PL (1) PL212899B1 (pl)
PT (1) PT1572744E (pl)
RS (2) RS20100366A (pl)
RU (1) RU2326127C2 (pl)
SG (1) SG2013036975A (pl)
SI (2) SI2289936T1 (pl)
TW (2) TW201000132A (pl)
UA (1) UA89350C2 (pl)
WO (1) WO2004056312A2 (pl)

Families Citing this family (1121)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0752248B1 (en) 1992-11-13 2000-09-27 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
CN1320044A (zh) 1998-08-11 2001-10-31 Idec药物公司 包括施用抗－cd20抗体的b－细胞淋巴瘤联合疗法
KR20010099788A (ko) * 1998-11-09 2001-11-09 케네쓰 제이. 울코트 Ｂｍｔ 또는 ｐｂｓｃ 이식을 받은 환자의 키메라항-ｃｄ２０ 항체 치료법
EP1131093A4 (en) 1998-11-09 2002-05-02 Idec Pharma Corp TREATMENT OF HEMATOLOGICAL VILTIES ASSOCIATED WITH CIRCULATING TUMOR CELLS USING CHIMERIC ANTI-CD20 ANTIBODIES
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1176981B1 (en) 1999-05-07 2005-11-30 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
JP2003528805A (ja) * 1999-07-12 2003-09-30 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ｃｄ２０に結合するアンタゴニストを用いた異種抗原に対する免疫応答のブロッキング
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
US20020058029A1 (en) * 2000-09-18 2002-05-16 Nabil Hanna Combination therapy for treatment of autoimmune diseases using B cell depleting/immunoregulatory antibody combination
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
CA2463879C (en) * 2001-10-25 2012-12-04 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US7662925B2 (en) 2002-03-01 2010-02-16 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040018573A1 (en) * 2002-04-18 2004-01-29 Power Scott D Production of functional antibodies in filamentous fungi
RS20100366A (sr) 2002-12-16 2011-04-30 Genentech, Inc. Varijante imunoglobulina i njihova upotreba
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
KR101092171B1 (ko) * 2003-04-09 2011-12-13 제넨테크, 인크. Ｔｎｆ-알파 저해제에 대해 부적절한 반응을 하는환자에서의 자가면역 질환의 치료법
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
AU2004256042A1 (en) * 2003-06-05 2005-01-20 Genentech, Inc. BlyS antagonists and uses thereof
US8399618B2 (en) 2004-10-21 2013-03-19 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions, and substitutions
US8883147B2 (en) 2004-10-21 2014-11-11 Xencor, Inc. Immunoglobulins insertions, deletions, and substitutions
US9714282B2 (en) 2003-09-26 2017-07-25 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
HUE042914T2 (hu) 2003-11-05 2019-07-29 Roche Glycart Ag CD20 antitestek fokozott fc receptorkötõ affinitással és effektorfunkcióval
WO2005063815A2 (en) * 2003-11-12 2005-07-14 Biogen Idec Ma Inc. Fcϝ receptor-binding polypeptide variants and methods related thereto
EP2053062A1 (en) 2004-03-24 2009-04-29 Xencor, Inc. Immunoglobin variants outside the Fc region
BRPI0510915A (pt) * 2004-06-04 2007-11-13 Genentech Inc método para o tratamento da esclerose múltipla e artigo manufaturado
RU2396980C2 (ru) * 2004-06-04 2010-08-20 Дженентек, Инк. Способ лечения волчанки
AU2005259992A1 (en) * 2004-06-25 2006-01-12 Medimmune, Llc Increasing the production of recombinant antibodies in mammalian cells by site-directed mutagenesis
WO2006085967A2 (en) * 2004-07-09 2006-08-17 Xencor, Inc. OPTIMIZED ANTI-CD20 MONOCONAL ANTIBODIES HAVING Fc VARIANTS
US20150010550A1 (en) 2004-07-15 2015-01-08 Xencor, Inc. OPTIMIZED Fc VARIANTS
US20060062787A1 (en) * 2004-07-22 2006-03-23 Genentech, Inc. Method for treating Sjogren's syndrome
PL2213683T3 (pl) 2004-08-04 2013-10-31 Mentrik Biotech Llc WARIANTY REGIONÓW Fc
US20060067930A1 (en) * 2004-08-19 2006-03-30 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
CN101087807A (zh) 2004-10-05 2007-12-12 健泰科生物技术公司 治疗血管炎的方法
GT200500283A (es) * 2004-10-08 2006-05-08 Inmunoterapia de desordenes autoinmunes
JO3000B1 (ar) * 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
DK1817340T3 (da) 2004-11-12 2012-08-13 Xencor Inc Fc-varianter med ændret binding til fcrn
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US8546543B2 (en) 2004-11-12 2013-10-01 Xencor, Inc. Fc variants that extend antibody half-life
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
FR2879204B1 (fr) 2004-12-15 2007-02-16 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps cytotoxique dirige contre les proliferations hematopoietiques lymphoides de type b.
US8993319B2 (en) 2004-12-28 2015-03-31 Innate Pharma S.A. Monoclonal antibodies against NKG2A
DOP2006000013A (es) * 2005-01-13 2006-07-15 Genentech Inc Dosis de anticuerpos en el tratamiento de enfermedades asociadas a las celulas b
DOP2006000029A (es) * 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
TW200714289A (en) * 2005-02-28 2007-04-16 Genentech Inc Treatment of bone disorders
AR053579A1 (es) * 2005-04-15 2007-05-09 Genentech Inc Tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal (eii)
US20090215639A1 (en) * 2005-04-26 2009-08-27 Bioren, Inc. Method of Producing Human IgG Antibodies with Enhanced Effector Functions
AU2006251647A1 (en) 2005-05-20 2006-11-30 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
JP2008541758A (ja) * 2005-06-02 2008-11-27 アストラゼネカ エービー Ｃｄ２０に対する抗体およびその使用
UA97469C2 (uk) 2005-07-25 2012-02-27 Емерджент Продакт Дівелопмент Сіетл, Елелсі Гуманізована специфічна до cd37 зв'язувальна молекула імуноглобуліну
US20090226440A1 (en) * 2005-08-12 2009-09-10 Shane Grey Prophylactic and/or Therapeutic Method for Treatment of Autoimmune Disease
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
CA2624189A1 (en) 2005-10-03 2007-04-12 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
AU2006302254B2 (en) 2005-10-06 2011-05-26 Xencor, Inc. Optimized anti-CD30 antibodies
ES2856451T3 (es) 2005-10-11 2021-09-27 Amgen Res Munich Gmbh Composiciones que comprenden anticuerpos específicos para diferentes especies, y usos de las mismas
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
WO2007062090A2 (en) 2005-11-23 2007-05-31 Genentech, Inc. Methods and compositions related to b cell assays
EP2623516B1 (en) 2005-12-02 2015-07-15 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of diseases and disorders associated with cytokine signaling involving antibodies that bind to il-22 and il-22r
EP1973950B1 (en) 2006-01-05 2014-09-17 Genentech, Inc. Anti-ephb4 antibodies and methods using the same
AR059096A1 (es) 2006-01-20 2008-03-12 Genentech Inc Anticuerpos anti- efrina -b2 y metodos que usan estos
JPWO2007102200A1 (ja) * 2006-03-07 2009-07-23 国立大学法人大阪大学 抗ｃｄ２０モノクローナル抗体
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
BRPI0711249A2 (pt) 2006-05-30 2012-03-13 Genentech, Inc. Anticorpos, polinucleotídeos, vetores, células hospedeira, métodos para fabricar um anticorpo, para detectar a presença de cd2 em uma amostra biológica, para tratar uma disfunção proliferativa de células b, para inibir proliferaçõa de células b, para tratar câncer, para fabricar um composto conjugado anti-corpo-droga. imunoconjugados,composições farmacêuticas, formulações farmacêuticas, conjugado anticorpo-droga, compostos conjugados anti-corpo-droga, teste para detectar células b e artigo de fabricação
KR20090027227A (ko) 2006-06-06 2009-03-16 제넨테크, 인크. 항-ｄｌｌ4 항체 및 이의 사용 방법
FR2902799B1 (fr) 2006-06-27 2012-10-26 Millipore Corp Procede et unite de preparation d'un echantillon pour l'analyse microbiologique d'un liquide
DK2038306T3 (en) 2006-06-30 2015-03-09 Novo Nordisk As ANTI-NKG2A ANTIBODIES AND APPLICATIONS THEREOF
JP5605895B2 (ja) 2006-07-04 2014-10-15 ゲンマブ エー／エス Ｃｏｐｄを処置するためのｃｄ２０結合分子
EP1878747A1 (en) 2006-07-11 2008-01-16 greenovation Biotech GmbH Glyco-engineered antibodies
US20100166741A1 (en) * 2006-07-13 2010-07-01 Genentech , Inc. Altered br-3 binding polypeptides
JP2009543579A (ja) 2006-07-19 2009-12-10 ザ・トラスティーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ペンシルバニア 抗炎症反応のための標的としてのＷＳＸ−１／ｐ２８
ME01786B (me) 2006-08-14 2014-09-20 Xencor Inc Optimizovana antitela usmerena na cd19
WO2008034076A2 (en) * 2006-09-15 2008-03-20 The Johns Hopkins University Cyclophosphamide in combination with immune therapeutics
AU2007299843B2 (en) 2006-09-18 2012-03-08 Xencor, Inc Optimized antibodies that target HM1.24
TWI414531B (zh) 2006-10-12 2013-11-11 Genentech Inc 淋巴毒素α之抗體
ES2636089T3 (es) 2006-10-27 2017-10-05 Genentech, Inc. Anticuerpos e inmunoconjugados y usos para los mismos
HUE041957T2 (hu) * 2006-12-01 2019-06-28 Novartis Ag Anti-P-szelektin antitestek és eljárások azok alkalmazására gyulladásos betegségek kezelésére
US8362217B2 (en) 2006-12-21 2013-01-29 Emd Millipore Corporation Purification of proteins
WO2008079280A1 (en) 2006-12-21 2008-07-03 Millipore Corporation Purification of proteins
US8569464B2 (en) 2006-12-21 2013-10-29 Emd Millipore Corporation Purification of proteins
ES2426158T3 (es) 2007-01-22 2013-10-21 Genentech, Inc. Precipitación con polielectrolito y purificación de anticuerpos
WO2008100805A2 (en) 2007-02-09 2008-08-21 Genentech, Inc. Anti-robo4 antibodies and uses therefor
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
PE20090321A1 (es) 2007-06-04 2009-04-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch1 nrr, metodo de preparacion y composicion farmaceutica
PL2158315T3 (pl) * 2007-06-25 2016-10-31 Sposoby modyfikowania przeciwciał i zmodyfikowane przeciwciała o ulepszonych właściwościach funkcjonalnych
US8323647B2 (en) 2007-09-13 2012-12-04 Delenex Therapeutics Ag Humanized antibodies against the β-amyloid peptide
GB0718684D0 (en) * 2007-09-24 2007-10-31 Roche Products Ltd Treatment method
KR102467302B1 (ko) 2007-09-26 2022-11-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항체 정상영역 개변체
US20090098118A1 (en) 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
WO2009051974A1 (en) * 2007-10-17 2009-04-23 Nuvelo, Inc. Antibodes to cll-1
PL2840090T3 (pl) 2007-10-30 2018-07-31 Genentech, Inc. Oczyszczanie przeciwciał za pomocą chromatografii kationowymiennej
AU2008323770B2 (en) 2007-11-07 2014-08-07 Genentech, Inc. Compositions and methods for treatment of microbial disorders
AR069501A1 (es) 2007-11-30 2010-01-27 Genentech Inc Anticuerpos anti- vegf (factor de crecimiento endotelial vascular)
EP2235059B1 (en) 2007-12-26 2015-02-18 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to fcrn
BRPI0908508A2 (pt) 2008-01-24 2016-03-22 Novo Nordisk As anticorpo monoclonal nkg2a anti-humano humanizado
US12492253B1 (en) 2008-02-25 2025-12-09 Xencor, Inc. Anti-human C5 antibodies
TWI489994B (zh) 2008-03-17 2015-07-01 Baxter Healthcare Sa 供免疫球蛋白及玻尿酸酶之皮下投藥之用的組合及方法
CL2009000713A1 (es) * 2008-03-25 2010-04-09 Hoffmann La Roche Composicion farmaceutica que comprende un anticuerpo anti-cd20 de tipo ii con citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ccda) aumentada y uno o mas agentes quimioterapeuticos; y su uso para tratar un cancer que expresa cd20.
NZ621443A (en) 2008-04-11 2015-09-25 Emergent Product Dev Seattle Cd37 immunotherapeutic and combination with bifunctional chemotherapeutic thereof
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
AU2009241589B2 (en) * 2008-04-29 2013-10-10 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP3002299A1 (en) * 2008-06-03 2016-04-06 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US9109026B2 (en) * 2008-06-03 2015-08-18 Abbvie, Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2009151514A1 (en) 2008-06-11 2009-12-17 Millipore Corporation Stirred tank bioreactor
TW201012475A (en) * 2008-07-08 2010-04-01 Abbott Lab Prostaglandin E2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2010009271A2 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Academia Sinica Glycan arrays on ptfe-like aluminum coated glass slides and related methods
PT3604324T (pt) 2008-08-14 2024-05-10 Genentech Inc Métodos para remover um contaminante com a utilização de cromatografia de membrana de permuta iónica de deslocação de proteína indígena
EP2334323A2 (en) 2008-09-10 2011-06-22 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions and methods for the prevention of oxidative degradation of proteins
TW201438738A (zh) 2008-09-16 2014-10-16 建南德克公司 治療進展型多發性硬化症之方法
US20100098730A1 (en) 2008-10-14 2010-04-22 Lowman Henry B Immunoglobulin variants and uses thereof
CN102281902B (zh) * 2008-11-17 2013-11-13 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于减少大分子在生理条件下聚集的方法和制剂
US8927249B2 (en) 2008-12-09 2015-01-06 Halozyme, Inc. Extended soluble PH20 polypeptides and uses thereof
EP2370561B1 (en) 2008-12-16 2019-08-07 EMD Millipore Corporation Stirred tank reactor and method
WO2010080528A1 (en) 2008-12-17 2010-07-15 Genentech, Inc. Hepatitis c virus combination therapy
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
KR101812811B1 (ko) 2008-12-23 2017-12-27 제넨테크, 인크. 단백질 ａ에 대해 변경된 결합을 갖는 이뮤노글로불린 변이체
MX2011008611A (es) * 2009-02-16 2011-10-21 Biolex Therapeutics Inc Anticuerpos anti-cd20 humanizados y metodos de uso.
WO2010099273A1 (en) 2009-02-27 2010-09-02 Genentech, Inc. Methods and compositions for protein labelling
AR075896A1 (es) 2009-03-20 2011-05-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-her (factor de crecimiento epidermico)
MY173526A (en) 2009-03-25 2020-01-31 Genentech Inc Novel anti-?5?1 antibodies and uses thereof
HRP20150965T1 (hr) 2009-03-25 2015-11-06 Genentech, Inc. Anti-fgr3 protutijela i metode koje ih koriste
US20100247484A1 (en) 2009-03-31 2010-09-30 Heinrich Barchet Combination therapy of an afucosylated antibody and one or more of the cytokines gm csf, m csf and/or il3
EP2417156B1 (en) 2009-04-07 2015-02-11 Roche Glycart AG Trivalent, bispecific antibodies
US9309325B2 (en) 2009-05-07 2016-04-12 The Regents Of The University Of California Antibodies and methods of use thereof
US20120121578A1 (en) * 2009-05-13 2012-05-17 Gliknik Inc. Methods of using immunoglobulin aggregates
WO2010138184A2 (en) * 2009-05-27 2010-12-02 Synageva Biopharma Corp. Avian derived antibodies
US20100316639A1 (en) 2009-06-16 2010-12-16 Genentech, Inc. Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
TW201106972A (en) 2009-07-27 2011-03-01 Genentech Inc Combination treatments
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
JP2013500993A (ja) 2009-07-31 2013-01-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｂｖ８アンタゴニスト又はｇ−ｃｓｆアンタゴニストを用いた腫瘍転移の阻害
KR20120054069A (ko) 2009-08-14 2012-05-29 로슈 글리카트 아게 플루다라빈 및/또는 미토잔트론과 어푸코실화된 ｃｄ20 항체의 복합 요법
TWI409079B (zh) 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
AU2010289527C1 (en) * 2009-09-01 2014-10-30 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
CA2772715C (en) 2009-09-02 2019-03-26 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
EP3211094A3 (en) 2009-09-03 2017-11-01 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for treating, diagnosing, and monitoring rheumatoid arthritis
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
IN2012DN01663A (pl) 2009-09-16 2015-06-05 Immunomedics Inc
DK2477603T3 (en) 2009-09-17 2016-06-13 Baxalta Inc STABLE CO-DEVELOPMENT OF hyaluronidase and Immunoglobulin, AND METHODS OF USE THEREOF
BR112012008833A2 (pt) * 2009-10-15 2015-09-08 Abbott Lab imunoglobulinas de dominio variavel duplo e usos das mesmas
MX2012004647A (es) 2009-10-22 2012-06-19 Genentech Inc Anticuerpos antihepsina y metodos para su uso.
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
CA2780221A1 (en) 2009-11-04 2011-05-12 Fabrus Llc Methods for affinity maturation-based antibody optimization
CA2780143A1 (en) 2009-11-05 2011-05-12 Genentech, Inc. Methods and composition for secretion of heterologous polypeptides
NZ600899A (en) 2009-11-30 2014-09-26 Biotest Ag Humanized anti-il-10 antibodies for the treatment of systemic lupus erythematosus (sle)
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
IN2012DN05169A (pl) 2009-12-02 2015-10-23 Acceleron Pharma Inc
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
WO2011071577A1 (en) 2009-12-11 2011-06-16 Genentech, Inc. Anti-vegf-c antibodies and methods using same
AU2010336485B2 (en) 2009-12-23 2015-03-26 Genentech, Inc. Anti-Bv8 antibodies and uses thereof
WO2011091078A2 (en) 2010-01-19 2011-07-28 Xencor, Inc. Antibody fc variants with enhanced complement activity
MX341687B (es) 2010-02-10 2016-08-30 Immunogen Inc "anticuerpos cd20 y su utilización".
US20110200595A1 (en) 2010-02-18 2011-08-18 Roche Glycart TREATMENT WITH A HUMANIZED IgG CLASS ANTI EGFR ANTIBODY AND AN ANTIBODY AGAINST INSULIN LIKE GROWTH FACTOR 1 RECEPTOR
CA2784211C (en) 2010-02-18 2019-12-24 Genentech, Inc. Neuregulin antagonists and use thereof in treating cancer
JP5937059B2 (ja) 2010-03-22 2016-06-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド タンパク質含有製剤の安定化に有用な組成物及び方法
BR112012022044A2 (pt) 2010-03-24 2020-08-25 Genentech Inc ''anticorpo,imunoconjugado,formulação farmacêutica,uso do anticorpo,método de tratamento,anticorpo biespecifico isolado e célula hospedeira''.
EP3372617B1 (en) 2010-04-02 2024-07-24 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
US10338069B2 (en) 2010-04-12 2019-07-02 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
CN102844049B (zh) 2010-04-27 2016-06-01 罗切格利卡特公司 无岩藻糖基化CD20抗体与mTOR抑制剂的联合疗法
MX2012012743A (es) 2010-05-03 2012-11-23 Genentech Inc Composiciones y metodos utiles para reducir la viscosidad de formulaciones que contienen proteina.
CN104777301B (zh) 2010-05-10 2018-04-20 中央研究院 具有抗流感活性的扎那米韦膦酸酯同类物及流感病毒的奥司他韦易感性的测定
KR101539684B1 (ko) 2010-05-14 2015-07-27 애브비 인코포레이티드 Ｉｌ－１ 결합 단백질
KR101551295B1 (ko) 2010-05-17 2015-09-08 이엠디 밀리포어 코포레이션 생체분자 정제용 자극 반응성 중합체
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
SG185430A1 (en) 2010-06-03 2012-12-28 Genentech Inc Immuno-pet imaging of antibodies and immunoconjugates and uses therefor
CA2794731C (en) 2010-06-18 2019-03-19 Genentech, Inc. Anti-axl antibodies and methods of use
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
MY184736A (en) 2010-06-24 2021-04-20 Genentech Inc Compositions and methods containing alkylglycosides for stabilizing protein-containing formulations
CN103097418A (zh) 2010-07-09 2013-05-08 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗神经毡蛋白抗体及使用方法
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
DK3029066T3 (da) 2010-07-29 2019-05-20 Xencor Inc Antistoffer med modificerede isoelektriske punkter
NZ607480A (en) 2010-08-03 2014-10-31 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2012018771A1 (en) 2010-08-03 2012-02-09 Genentech, Inc. Chronic lymphocytic leukemia (cll) biomarkers
BR112013002532A2 (pt) 2010-08-05 2016-05-31 Hoffmann La Roche proteína de fusão de citocina anti-viral do anticorpo anti-mhc
CA2807552A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
NZ703653A (en) 2010-08-13 2016-09-30 Roche Glycart Ag Anti-fap antibodies and methods of use
MX2013001336A (es) 2010-08-13 2013-03-08 Roche Glycart Ag Anticuerpos ani-tenascina c a2 y metodos de utilizacion.
TW201208703A (en) 2010-08-17 2012-03-01 Roche Glycart Ag Combination therapy of an afucosylated CD20 antibody with an anti-VEGF antibody
TW201215405A (en) 2010-08-25 2012-04-16 Hoffmann La Roche Antibodies against IL-18R1 and uses thereof
PH12013500337A1 (en) 2010-08-26 2017-08-23 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2013114360A (ru) 2010-08-31 2014-10-10 Дженентек, Инк. Биомаркеры и способы лечения
MX2013003681A (es) 2010-10-01 2013-11-20 Moderna Therapeutics Inc Ácidos nucleicos manipulados y métodos de uso de los mismos.
AU2011312205B2 (en) 2010-10-05 2015-08-13 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
KR20220070586A (ko) 2010-11-08 2022-05-31 제넨테크, 인크. 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체
CA2815840A1 (en) 2010-11-10 2012-05-18 Genentech, Inc. Methods and compositions for neural disease immunotherapy
TWI708944B (zh) 2010-12-16 2020-11-01 美商建南德克公司 關於th2抑制作用之診斷及治療
RU2013131444A (ru) 2010-12-16 2015-01-27 Рош Гликарт Аг Сочетанная терапия афукозилированным антителом к cd20 и ингибитором mdm2
AU2011349443B2 (en) 2010-12-20 2015-12-24 Genentech, Inc. Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates
PH12013501339A1 (en) 2010-12-22 2013-08-28 Genentech Inc Anti-pcsk9 antibodies and methods of use
WO2012092539A2 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibodies to dll4 and uses thereof
EP2482074A1 (en) * 2011-01-27 2012-08-01 Medizinische Hochschule Hannover Methods and means for diagnosing vasculitis
US10689447B2 (en) 2011-02-04 2020-06-23 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
AU2012215572A1 (en) 2011-02-10 2013-05-02 Roche Glycart Ag Improved immunotherapy
JP6271254B2 (ja) 2011-02-28 2018-01-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｂ細胞アンタゴニストに対する生物学的マーカー及び応答を予測するための方法
MX341921B (es) 2011-02-28 2016-09-07 Hoffmann La Roche Proteinas de union a antigeno.
RU2013141078A (ru) 2011-02-28 2015-04-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Одновалентные антигенсвязывающие белки
US20120222851A1 (en) * 2011-03-04 2012-09-06 GM Global Technology Operations LLC Hvac system damper
TR201815420T4 (tr) 2011-03-29 2018-11-21 Roche Glycart Ag Antikor fc varyantları.
DE12722942T1 (de) 2011-03-31 2021-09-30 Modernatx, Inc. Freisetzung und formulierung von manipulierten nukleinsäuren
BR112013024717A2 (pt) 2011-04-07 2017-08-08 Genentech Inc anticorpo isolado, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, imunoconjugado, formulação farmacêutica, método de tratar um indivíduo que tem câncer e método de inibir proliferação celular em um indivíduo
EA201892619A1 (ru) 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
KR101992502B1 (ko) 2011-05-12 2019-06-24 제넨테크, 인크. 프레임워크 시그너처 펩티드를 사용하여 동물 샘플에서 치료 항체를 검출하기 위한 다중 반응 모니터링 lc-ms/ms 방법
PH12013502294A1 (en) 2011-05-16 2014-01-27 Genentech Inc Fgfr1 agonists and methods of use
MY173899A (en) 2011-05-21 2020-02-26 Macrogenics Inc Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3
EP2721067B1 (en) 2011-06-15 2019-07-31 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-human epo receptor antibodies and methods of use
CN103635487B (zh) 2011-06-17 2016-10-12 诺沃—诺迪斯克有限公司 选择性消除侵蚀性细胞
AR086982A1 (es) 2011-06-22 2014-02-05 Hoffmann La Roche Eliminacion de celulas diana por parte de celulas t citotoxicas especificas de virus utilizando complejos que comprenden mhc de clase i
US20130004484A1 (en) 2011-06-30 2013-01-03 Genentech, Inc. Anti-c-met antibody formulations
CN103890007A (zh) 2011-08-17 2014-06-25 霍夫曼-拉罗奇有限公司 神经调节蛋白抗体及其用途
KR20140068877A (ko) 2011-08-17 2014-06-09 제넨테크, 인크. 불응성 종양에서의 혈관신생의 억제
MX2014002053A (es) 2011-08-23 2014-04-25 Roche Glycart Ag Anticuerpos anti -mcsp y metodos de uso.
KR101721301B1 (ko) 2011-08-23 2017-03-29 로슈 글리카트 아게 이중특이적 항원 결합 분자
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
BR112014005720A2 (pt) 2011-09-15 2017-12-12 Genentech Inc método de seleção e/ou identificação de um antagonista de usp1, antagonista de uaf1 e/ou um antagonista de id que promove uma alteração no destino celular do dito método
AR087918A1 (es) 2011-09-19 2014-04-23 Genentech Inc Tratamientos combinados que comprenden antagonistas de c-met y antagonistas de b-raf
SI3682905T1 (sl) 2011-10-03 2022-04-29 Modernatx, Inc. Modificirani nukleozidi, nukleotidi in nukleinske kisline ter njihove uporabe
BR112014008212A2 (pt) 2011-10-05 2017-06-13 Genentech Inc método para tratar uma condição hepática, método de indução por diferenciação hepática e método de redução de proliferação anormal do ducto biliar
KR102102862B1 (ko) 2011-10-14 2020-04-22 제넨테크, 인크. 항-HtrA1 항체 및 사용 방법
US9358250B2 (en) 2011-10-15 2016-06-07 Genentech, Inc. Methods of using SCD1 antagonists
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
WO2013059740A1 (en) 2011-10-21 2013-04-25 Foundation Medicine, Inc. Novel alk and ntrk1 fusion molecules and uses thereof
EP4088736A1 (en) 2011-10-25 2022-11-16 Prothena Biosciences Limited Humanized anti-amyloid antibody formulations and methods
AU2012328980A1 (en) 2011-10-28 2014-04-24 Genentech, Inc. Therapeutic combinations and methods of treating melanoma
KR102057742B1 (ko) 2011-11-17 2019-12-19 군드람 정 의학적 용도를 위한 이중특이성 항체
CN104066748A (zh) 2011-11-21 2014-09-24 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗c-met抗体的纯化
US20130302274A1 (en) 2011-11-25 2013-11-14 Roche Glycart Ag Combination therapy
EP2788024A1 (en) 2011-12-06 2014-10-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
WO2013101509A2 (en) 2011-12-15 2013-07-04 Alternative Innovative Technologies Llc Hsp70 fusion protein conjugates and uses thereof
US20130156849A1 (en) 2011-12-16 2013-06-20 modeRNA Therapeutics Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
MX355624B (es) 2011-12-22 2018-04-25 Hoffmann La Roche Combinaciones de elementos de vector de expresion, metodos novedosos de generacion de celulas de produccion y su uso para la produccion recombinante de polipeptidos.
RU2648999C2 (ru) 2011-12-22 2018-03-29 Дженентек, Инк. Способы повышения эффективности этапов очистки белка, находящихся ниже по потоку, с использованием мембранной ионообменной хроматографии
SG10201805622QA (en) 2011-12-22 2018-08-30 Hoffmann La Roche Expression Vector Organization, Novel Production Cell Generation Methods And Their Use For The Recombinant Production Of Polypeptides
SG11201403445YA (en) 2011-12-22 2014-07-30 Hoffmann La Roche Full length antibody display system for eukaryotic cells and its use
AR089434A1 (es) 2011-12-23 2014-08-20 Genentech Inc Procedimiento para preparar formulaciones con alta concentracion de proteinas
CA2861610A1 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against il-13 and/or il-17
WO2013101771A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Genentech, Inc. Compositions and method for treating autoimmune diseases
CA2861919C (en) 2011-12-30 2019-04-02 Halozyme, Inc. Ph20 polypeptide variants, formulations and uses thereof
US10774132B2 (en) 2012-01-09 2020-09-15 The Scripps Research Instittue Ultralong complementarity determining regions and uses thereof
CN104411717A (zh) 2012-01-09 2015-03-11 斯克利普斯研究所 具有超长cdr3s的人源化抗体
KR20140119114A (ko) 2012-01-18 2014-10-08 제넨테크, 인크. Fgf19 조절제의 사용 방법
EP2804629A1 (en) 2012-01-18 2014-11-26 Genentech, Inc. Anti-lrp5 antibodies and methods of use
JP2015506687A (ja) * 2012-01-19 2015-03-05 セラピューティック プロテインズ インターナショナル， エルエルシー 抗−ｃｄ２０抗体リツキシマブの安定化
TW201334789A (zh) 2012-01-31 2013-09-01 Genentech Inc 抗ｉｇｅ抗體及其使用方法
MX366804B (es) 2012-02-11 2019-07-25 Genentech Inc Translocaciones de la r-espondina y sus metodos de uso.
EP2814587B1 (en) 2012-02-15 2018-05-02 F.Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor based affinity chromatography
CA2866753C (en) 2012-03-27 2020-09-22 Genentech, Inc. Improved harvest operations for recombinant proteins
JP2015514710A (ja) 2012-03-27 2015-05-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｈｅｒ３阻害剤に関する診断及び治療
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
HK1206601A1 (en) 2012-04-02 2016-01-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of biologics and proteins associated with human disease
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
AU2013243861A1 (en) 2012-04-05 2014-10-23 Ac Immune S.A. Humanized Tau antibody
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
KR20150006000A (ko) 2012-05-01 2015-01-15 제넨테크, 인크. 항-pmel17 항체 및 면역접합체
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
MX2014014086A (es) 2012-05-23 2015-01-26 Genentech Inc Metodo de seleccion para agentes terapeuticos.
KR20150023711A (ko) 2012-06-15 2015-03-05 제넨테크, 인크. 항-pcsk9 항체, 제제, 투여, 및 사용 방법
CA2872192A1 (en) 2012-07-04 2014-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-biotin antibodies and methods of use
DK3260455T3 (da) 2012-07-04 2019-06-11 Rhizen Pharmaceuticals S A Selektive pi3k delta-hæmmere
RU2684595C2 (ru) 2012-07-04 2019-04-09 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Ковалентно связанные конъюгаты антиген-антитело
EP3138578B1 (en) 2012-07-04 2022-01-12 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-theophylline antibodies and methods of use
CN110042114B (zh) 2012-07-05 2024-09-10 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 表达和分泌系统
TW201408697A (zh) 2012-07-09 2014-03-01 Genentech Inc 抗ｃｄ７９ｂ抗體及免疫結合物
IN2014DN10510A (pl) 2012-07-09 2015-08-21 Genentech Inc
CN104428007B (zh) 2012-07-09 2018-03-16 基因泰克公司 包含抗cd22抗体的免疫缀合物
US20140030280A1 (en) 2012-07-09 2014-01-30 Genentech, Inc. Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates
TW201402608A (zh) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie Inc Ｉｌ－１結合蛋白質
DK3495387T3 (da) 2012-07-13 2021-11-08 Roche Glycart Ag Bispecifikke anti-VEGF-/anti-ANG-2-antistoffer og deres anvendelse ved behandling af okulære vaskulære sygdomme
CN104508132B (zh) 2012-08-02 2017-09-15 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于产生作为与惰性免疫球蛋白Fc区Fc融合的可溶FcR的方法及其用途
EP3434695B1 (en) 2012-08-07 2020-12-02 Roche Glycart AG Improved immunotherapy
US9914956B2 (en) 2012-08-18 2018-03-13 Academia Sinica Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases
JP6211084B2 (ja) 2012-08-21 2017-10-11 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ ベンゾシクロオクチン化合物およびその使用
US9777067B2 (en) 2012-09-27 2017-10-03 Massachusetts Institute Of Technology HER2- and VEGF-A-binding proteins with enhanced stability
TW201811825A (zh) 2012-11-01 2018-04-01 美商艾伯維有限公司 抗-ｖｅｇｆ／ｄｌｌ４雙重可變區域免疫球蛋白及其用途
RS60844B1 (sr) 2012-11-02 2020-10-30 Tg Therapeutics Inc Kombinacija anti-cd20 antitela i selektivnog inhibitora pi3 kinaze
HK1214830A1 (zh) 2012-11-05 2016-08-05 Foundation Medicine, Inc. 新型ntrk1融合分子及其应用
EP4223770A3 (en) 2012-11-05 2023-10-18 Foundation Medicine, Inc. Novel fusion molecules and uses thereof
CA2884431A1 (en) 2012-11-08 2014-05-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Her3 antigen binding proteins binding to the beta-hairpin of her3
CA2890669A1 (en) 2012-11-13 2014-05-22 Genetech, Inc. Anti-hemagglutinin antibodies and methods of use
WO2014076292A1 (en) 2012-11-19 2014-05-22 Baliopharm Ag Recombinant bispecific antibody binding to cd20 and cd95
SI2922554T1 (sl) 2012-11-26 2022-06-30 Modernatx, Inc. Terminalno modificirana RNA
CN104994885B (zh) 2012-12-19 2017-09-29 基因泰克公司 用于放射性卤素蛋白质标记的方法和组合物
KR20150097688A (ko) 2012-12-21 2015-08-26 에프. 호프만-라 로슈 아게 디술피드-연결 다가 ｍｈｃ 클래스 ｉ 포함 다관능 단백질
AU2014207342C1 (en) 2013-01-18 2019-04-04 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
US9255155B2 (en) 2013-01-31 2016-02-09 The Regents Of The University Of California Antibodies specific for urokinase-type plasminogen activator and methods of treating cancer
JP2016509045A (ja) 2013-02-22 2016-03-24 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんを治療し、薬剤耐性を防止する方法
WO2014131715A1 (en) 2013-02-26 2014-09-04 Roche Glycart Ag Anti-mcsp antibodies
JP2016510751A (ja) 2013-03-06 2016-04-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗がん剤耐性を治療及び予防する方法
HRP20200553T1 (hr) * 2013-03-12 2020-07-10 Molecular Templates, Inc. Citotoksični proteini koji sadrže vezne regije koje ciljaju na stanice i regije podjedinice a shiga toksina za selektivno ubijanje specifičnih tipova stanica
CN105209069B (zh) 2013-03-13 2019-08-23 豪夫迈·罗氏有限公司 抗体配制剂
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
CN105189552B (zh) 2013-03-14 2019-08-02 基因泰克公司 抗b7-h4抗体和免疫缀合物
EP2968540A2 (en) 2013-03-14 2016-01-20 Genentech, Inc. Combinations of a mek inhibitor compound with an her3/egfr inhibitor compound and methods of use
EP2968565A2 (en) 2013-03-14 2016-01-20 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
JP6568514B2 (ja) 2013-03-15 2019-08-28 エーシー イミューン エス．エー． 抗タウ抗体及び使用方法
CN105339001A (zh) 2013-03-15 2016-02-17 基因泰克公司 治疗癌症和预防癌症耐药性的方法
CN105143252A (zh) 2013-03-15 2015-12-09 豪夫迈·罗氏有限公司 IL-22多肽和IL-22Fc融合蛋白及其使用方法
US10017732B2 (en) * 2013-03-15 2018-07-10 Genentech, Inc. Cell culture compositions with antioxidants and methods for polypeptide production
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
JP2016517441A (ja) 2013-03-15 2016-06-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＣＲＴｈ２抗体及び使用方法
CA2904448A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Tariq Ghayur Dual specific binding proteins directed against il-1.beta. and/or il-17
WO2014151006A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Genentech, Inc. Biomarkers and methods of treating pd-1 and pd-l1 related conditions
HK1211963A1 (en) 2013-03-15 2016-06-03 豪夫迈．罗氏有限公司 Compositions and methods for diagnosis and treatment of hepatic cancers
UA118028C2 (uk) 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
WO2014177461A1 (en) 2013-04-29 2014-11-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Fcrn-binding abolished anti-igf-1r antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases
JP6618893B2 (ja) 2013-04-29 2019-12-11 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｆｃ受容体結合が変更された非対称抗体および使用方法
PE20151807A1 (es) 2013-04-29 2015-12-02 Hoffmann La Roche Anticuerpos modificados de union a fcrn humano y metodo de utilizacion
HRP20240107T1 (hr) 2013-05-20 2024-04-12 F. Hoffmann - La Roche Ag Protutijela na transferinski receptor i postupci uporabe
CA2910029A1 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Genentech, Inc. Anti-wall teichoic antibodies and conjugates
CN105358574B (zh) 2013-05-31 2020-10-16 基因泰克公司 抗壁磷壁酸抗体和缀合物
EP3013365B1 (en) 2013-06-26 2019-06-05 Academia Sinica Rm2 antigens and use thereof
EP3013347B1 (en) 2013-06-27 2019-12-11 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
TW201534726A (zh) 2013-07-03 2015-09-16 Halozyme Inc 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途
EP3022224A2 (en) 2013-07-18 2016-05-25 Fabrus, Inc. Antibodies with ultralong complementarity determining regions
AU2014290361B2 (en) 2013-07-18 2019-04-18 Taurus Biosciences, Llc Humanized antibodies with ultralong complementarity determining regions
ES2719103T3 (es) 2013-08-01 2019-07-08 Five Prime Therapeutics Inc Anticuerpos anti-FGFR2IIIB afucosilados
JP6463359B2 (ja) 2013-08-12 2019-01-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 補体関連病態を治療するための組成物及び方法
CA2923579C (en) 2013-09-06 2023-09-05 Academia Sinica Human inkt cell activation using glycolipids with altered glycosyl groups
JP2016537399A (ja) 2013-09-17 2016-12-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｌｇｒ５抗体を使用する方法
CN103524621B (zh) * 2013-09-27 2015-04-01 北京济福霖生物技术有限公司 一种抗人cd20嵌合单克隆抗体
EP3052106A4 (en) 2013-09-30 2017-07-19 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
SG11201602503TA (en) 2013-10-03 2016-04-28 Moderna Therapeutics Inc Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
CN105814078A (zh) 2013-10-11 2016-07-27 豪夫迈·罗氏有限公司 Nsp4抑制剂及其使用方法
RU2016115866A (ru) 2013-10-11 2017-11-16 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифические антитела с обменянными доменами и одинаковыми вариабельными доменами легкой цепи
AU2014331667B2 (en) 2013-10-11 2019-08-22 Biomed Valley Discoveries, Inc. TEM8 antibodies and their use
MX2016004802A (es) 2013-10-18 2016-07-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-r-espondina (anti-rspo) y metodos de uso.
AR098155A1 (es) 2013-10-23 2016-05-04 Genentech Inc Métodos para diagnosticar y tratar trastornos eosinofílicos
CN104623637A (zh) 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
RU2718990C1 (ru) 2013-11-21 2020-04-15 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела к альфа-синуклеину и способы применения
AU2014363944B2 (en) 2013-12-09 2020-03-26 Allakos Inc. Anti-Siglec-8 antibodies and methods of use thereof
PE20160712A1 (es) 2013-12-13 2016-07-26 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados anti-cd33
CN112353943A (zh) 2013-12-17 2021-02-12 豪夫迈·罗氏有限公司 用pd-1轴结合拮抗剂和紫杉烷治疗癌症的方法
HRP20240939T1 (hr) 2013-12-17 2024-10-25 Genentech, Inc. Anti-cd3 protutijela i metode uporabe
JP2017501167A (ja) 2013-12-17 2017-01-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｏｘ４０結合アゴニスト及びｐｄ−１軸結合アンタゴニストを含む併用療法
WO2015095410A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and an anti-cd20 antibody
CA2932958A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Humanized anti-tau(ps422) antibodies and methods of use
TWI728373B (zh) 2013-12-23 2021-05-21 美商建南德克公司 抗體及使用方法
CA2930154A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked helicar-anti-helicar antibody conjugates and uses thereof
WO2015101586A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
EP3089759B1 (en) 2014-01-03 2018-12-05 F. Hoffmann-La Roche AG Covalently linked polypeptide toxin-antibody conjugates
JP6557664B2 (ja) 2014-01-06 2019-08-07 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 一価の血液脳関門シャトルモジュール
CA2931986A1 (en) 2014-01-15 2015-07-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-region variants with modified fcrn- and maintained protein a-binding properties
AU2015206370A1 (en) 2014-01-16 2016-07-07 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
JP2017505305A (ja) 2014-01-24 2017-02-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｓｔｅａｐ１抗体及びイムノコンジュゲートを使用する方法
IL285403B2 (en) 2014-01-27 2023-10-01 Molecular Templates Inc Polypeptides that remove an epitope for MHC group I
EP3102197B1 (en) 2014-02-04 2018-08-29 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
KR20160111039A (ko) 2014-02-08 2016-09-23 제넨테크, 인크. 알츠하이머 질환을 치료하는 방법
ES2873248T3 (es) 2014-02-08 2021-11-03 Hoffmann La Roche Métodos para tratar la enfermedad de Alzheimer
TR201810635T4 (tr) 2014-02-12 2018-08-27 Hoffmann La Roche Anti-jagged1 antikorları ve kullanım yöntemleri.
KR20160124165A (ko) 2014-02-21 2016-10-26 제넨테크, 인크. 항-il-13/il-17 이중특이적 항체 및 그의 용도
TWI558399B (zh) 2014-02-26 2016-11-21 美國禮來大藥廠 癌症之組合療法
DK3110446T3 (da) 2014-02-28 2022-02-28 Allakos Inc Fremgangsmåder og sammensætninger til behandling af Siglec-8-associerede sygdomme
TW201622744A (zh) 2014-03-04 2016-07-01 美國禮來大藥廠 癌症之組合療法
US11142584B2 (en) 2014-03-11 2021-10-12 Molecular Templates, Inc. CD20-binding proteins comprising Shiga toxin A subunit effector regions for inducing cellular internalization and methods using same
EP3116999B1 (en) 2014-03-14 2021-09-15 F. Hoffmann-La Roche AG Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US20170107294A1 (en) 2014-03-21 2017-04-20 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
EP3119490B1 (en) 2014-03-21 2021-09-08 F. Hoffmann-La Roche AG In vitro prediction of in vivo half-life of antibodies
CA2943329A1 (en) 2014-03-24 2015-10-01 Genentech, Inc. Cancer treatment with c-met antagonists and correlation of the latter with hgf expression
JP6562942B2 (ja) 2014-03-27 2019-08-28 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ 反応性標識化合物およびその使用
CN106103486B (zh) 2014-03-31 2020-04-21 豪夫迈·罗氏有限公司 抗ox40抗体和使用方法
CA2943834A1 (en) 2014-03-31 2015-10-08 Genentech, Inc. Combination therapy comprising anti-angiogenesis agents and ox40 binding agonists
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
KR20170003582A (ko) 2014-05-22 2017-01-09 제넨테크, 인크. 항-gpc3 항체 및 면역접합체
JP2017524371A (ja) 2014-05-23 2017-08-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｍｉｔバイオマーカーとその使用方法
KR20220151036A (ko) 2014-05-27 2022-11-11 아카데미아 시니카 항-ｃｄ20 글리코항체 및 이의 용도
US10005847B2 (en) 2014-05-27 2018-06-26 Academia Sinica Anti-HER2 glycoantibodies and uses thereof
EP3149000B1 (en) 2014-05-27 2021-06-30 Rhizen Pharmaceuticals S.A. Crystalline tosylate salt of a pi3k delta selective inhibitor for use in pharmaceutical formulations
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
DK3149045T3 (da) 2014-05-27 2023-03-06 Academia Sinica Sammensætninger og fremgangsmåder vedrørende universelle glycoformer til forbedret antistofeffekt
AU2015267044A1 (en) 2014-05-28 2016-12-15 Academia Sinica Anti-TNF-alpha glycoantibodies and uses thereof
KR102496206B1 (ko) 2014-06-11 2023-02-06 몰레큘러 템플레이츠, 인코퍼레이션. 프로테아제-절단 저항성의 시가 독소 a 서브유닛 작동체 폴리펩티드 및 이를 포함하는 세포-표적화 분자
CA2949982A1 (en) 2014-06-11 2015-12-17 Genentech, Inc. Anti-lgr5 antibodies and uses thereof
CN107073121A (zh) 2014-06-13 2017-08-18 基因泰克公司 治疗及预防癌症药物抗性的方法
AR100978A1 (es) 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
EP3164419B1 (en) 2014-06-26 2024-07-24 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-brdu antibodies and methods of use
RU2715038C2 (ru) 2014-07-11 2020-02-21 Дженентек, Инк. Антитела анти-pd-l1 и способы их диагностического применения
WO2016007775A1 (en) 2014-07-11 2016-01-14 Genentech, Inc. Notch pathway inhibition
WO2016019969A1 (en) 2014-08-08 2016-02-11 Ludwig-Maximilians-Universität München Subcutaneously administered bispecific antibodies for use in the treatment of cancer
DK4074735T3 (da) 2014-08-28 2025-07-14 Bioatla Inc Betinget aktive kimæriske antigenreceptorer til modificerede t-celler
TWI805109B (zh) 2014-08-28 2023-06-11 美商奇諾治療有限公司 對cd19具專一性之抗體及嵌合抗原受體
WO2016037123A2 (en) 2014-09-05 2016-03-10 Opexa Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating b cell mediated autoimmune disorders
WO2016040369A2 (en) 2014-09-08 2016-03-17 Academia Sinica HUMAN iNKT CELL ACTIVATION USING GLYCOLIPIDS
CN107108724A (zh) 2014-09-12 2017-08-29 豪夫迈·罗氏有限公司 半胱氨酸改造抗体和缀合物
SG11201701627PA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
CN113698485A (zh) 2014-09-12 2021-11-26 基因泰克公司 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物
MX2017003126A (es) 2014-09-12 2017-08-28 Genentech Inc Anticuerpos anti-her2 e inmunoconjugados.
WO2016044334A1 (en) 2014-09-15 2016-03-24 Genentech, Inc. Antibody formulations
RU2727663C2 (ru) 2014-09-17 2020-07-22 Дженентек, Инк. Иммуноконъюгаты, содержащие антитела против her2 и пирролбензодиазепины
RS60349B8 (sr) 2014-09-23 2022-10-31 Hoffmann La Roche Postupak upotrebe anti-cd79b imunokonjugata
JP2017536102A (ja) 2014-10-16 2017-12-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗アルファ−シヌクレイン抗体及び使用方法
EP3223865A4 (en) 2014-10-31 2018-10-03 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind b7-h4
RU2017119231A (ru) 2014-11-03 2018-12-06 Дженентек, Инк. Способы и биомаркеры для прогнозирования эффективности и оценки лечения агонистом ох40
KR20170086540A (ko) 2014-11-03 2017-07-26 제넨테크, 인크. T 세포 면역 하위세트를 검출하기 위한 검정 및 그의 사용 방법
ES2819256T3 (es) 2014-11-05 2021-04-15 Genentech Inc Métodos para producir proteínas bicatenarias en bacterias
MX2017003478A (es) 2014-11-05 2018-02-01 Genentech Inc Anticuerpos anti-fgfr2/3 y metodos para su uso.
EP3215526A1 (en) 2014-11-05 2017-09-13 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of producing two chain proteins in bacteria
WO2016073157A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Genentech, Inc. Anti-ang2 antibodies and methods of use thereof
RU2017119428A (ru) 2014-11-06 2018-12-06 Дженентек, Инк. Комбинированная терапия, включающая применение агонистов, связывающихся с ох40, и ингибиторов tigit
BR112017006591A2 (pt) 2014-11-06 2018-01-16 Hoffmann La Roche polipeptídeo heterodimérico, formulação farmacêutica e uso de um polipeptídeo heterodimérico
PL3215528T3 (pl) 2014-11-06 2020-01-31 F.Hoffmann-La Roche Ag Warianty regionu Fc ze zmodyfikowanym wiązaniem FcRn i sposoby stosowania
US10093730B2 (en) 2014-11-10 2018-10-09 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
WO2016077369A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Genentech, Inc. Animal model for nephropathy and agents for treating the same
EP3875481B1 (en) 2014-11-14 2025-01-22 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
KR20170096112A (ko) 2014-11-17 2017-08-23 제넨테크, 인크. Ox40 결합 효능제 및 pd-1 축 결합 길항제를 포함하는 조합 요법
WO2016081643A1 (en) 2014-11-19 2016-05-26 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
CN107108745B (zh) 2014-11-19 2021-01-12 基因泰克公司 抗bace1的抗体和其用于神经疾病免疫疗法的用途
JP6993228B2 (ja) 2014-11-19 2022-03-03 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トランスフェリン受容体／抗ｂａｃｅ１多重特異性抗体および使用方法
CN107206072B (zh) 2014-11-20 2022-01-21 豪夫迈·罗氏有限公司 T细胞活化性双特异性抗原结合分子CD3 ABD叶酸受体1(FolR1)和PD-1轴结合拮抗剂的组合疗法
WO2016090040A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Anti-staphylococcus aureus antibody rifamycin conjugates and uses thereof
WO2016090038A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Anti-staphylococcus aureus antibody rifamycin conjugates and uses thereof
JP6721590B2 (ja) 2014-12-03 2020-07-15 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 多重特異性抗体
PL3227336T3 (pl) 2014-12-05 2019-11-29 Hoffmann La Roche Przeciwciała anty-CD79b i sposoby stosowania
KR20170085595A (ko) 2014-12-10 2017-07-24 제넨테크, 인크. 혈뇌 장벽 수용체 항체 및 사용 방법
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
EP4600372A3 (en) 2014-12-19 2025-11-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use
DK3233912T3 (da) 2014-12-19 2021-08-02 Regenesance B V Antistoffer, der binder human c6, og anvendelser deraf
BR112017011235A2 (pt) 2014-12-19 2018-02-06 Chugai Pharmaceutical Co Ltd anticorpos anti-c5 e métodos de uso
US20160200815A1 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
CA2973964A1 (en) 2015-01-16 2016-07-21 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for ror1
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
WO2016117346A1 (en) 2015-01-22 2016-07-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A combination of two or more anti-c5 antibodies and methods of use
TWI736523B (zh) 2015-01-24 2021-08-21 中央研究院 新穎聚醣結合物及其使用方法
AU2016212158B2 (en) * 2015-01-26 2021-06-03 Allogene Therapeutics, Inc. mAb-driven chimeric antigen receptor systems for sorting/depleting engineered immune cells
HK1244512A1 (zh) 2015-02-04 2018-08-10 健泰科生物技术公司 突变型smoothened及其使用方法
MX2017010072A (es) 2015-02-05 2017-11-09 Molecular Templates Inc Moleculas multivalentes que se enlazan a cd20, las cuales comprenden regiones efectoras de la subunidad a de la toxina shiga, y composiciones enriquecidas de las mismas.
CN114773469B (zh) 2015-02-05 2025-12-19 中外制药株式会社 包含离子浓度依赖性的抗原结合结构域的抗体，fc区变体，il-8-结合抗体及其应用
US10301377B2 (en) 2015-02-24 2019-05-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Middle east respiratory syndrome coronavirus immunogens, antibodies, and their use
WO2016149276A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 Genentech, Inc. Methods of detecting and quantifying il-13 and uses in diagnosing and treating th2-associated diseases
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
EP3683233A1 (en) 2015-03-20 2020-07-22 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to gp120 and their use
PL3274370T3 (pl) 2015-03-23 2020-05-18 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Przeciwciała anty-ceacam6 i ich zastosowania
CN114907481A (zh) 2015-03-23 2022-08-16 震动疗法股份有限公司 Icos的抗体
US10472412B2 (en) 2015-03-25 2019-11-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bispecific multivalent fusion proteins
CA2979732A1 (en) 2015-04-03 2016-10-06 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting afp peptide/mhc complexes and uses thereof
CA2981183A1 (en) 2015-04-07 2016-10-13 Greg Lazar Antigen binding complex having agonistic activity and methods of use
JP2018512856A (ja) 2015-04-17 2018-05-24 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド 調整可能な親和性を有する免疫調節タンパク質
HRP20211159T1 (hr) 2015-04-24 2021-10-29 F. Hoffmann - La Roche Ag Postupci identifikacije bakterija koje sadrže vezujuće polipeptide
JP2018520642A (ja) 2015-05-01 2018-08-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド マスク抗ｃｄ３抗体及びその使用方法
WO2016179194A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Jounce Therapeutics, Inc. Lilra3 and method of using the same
HK1248577A1 (zh) 2015-05-11 2018-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag 治疗狼疮性肾炎的组合物和方法
IL295002A (en) 2015-05-12 2022-09-01 Genentech Inc Therapeutic and diagnostic methods for cancer containing a pd–l1 binding antagonist
AU2016263808B2 (en) 2015-05-21 2019-01-03 Harpoon Therapeutics, Inc. Trispecific binding proteins and methods of use
HK1248773A1 (zh) 2015-05-29 2018-10-19 豪夫迈‧罗氏有限公司 用於癌症的治疗和诊断方法
EP3763827A1 (en) 2015-05-29 2021-01-13 F. Hoffmann-La Roche AG Pd-l1 promoter methylation in cancer
HK1250723A1 (zh) 2015-05-29 2019-01-11 F. Hoffmann-La Roche Ag 人源化抗埃博拉病毒糖蛋白抗体和使用方法
HRP20200640T1 (hr) 2015-05-30 2020-07-10 Molecular Templates, Inc. De-imunizirane, okosnice podjedinice shiga toksina a i molekule koje ciljaju stanice koje ih sadrže
EP3302552A1 (en) 2015-06-02 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Compositions and methods for using anti-il-34 antibodies to treat neurological diseases
WO2016196975A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
CR20180013A (es) 2015-06-05 2018-12-06 Ac Immune Sa Anticuerpos anti-tau y métodos de uso.
MX2017014740A (es) 2015-06-08 2018-08-15 Genentech Inc Métodos de tratamiento del cáncer con anticuerpos anti-ox40.
EP3303397A1 (en) 2015-06-08 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies and pd-1 axis binding antagonists
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
HK1255483A1 (zh) 2015-06-15 2019-08-16 基因泰克公司 抗体和免疫结合物
US10501545B2 (en) 2015-06-16 2019-12-10 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and methods of use
EP3310811B1 (en) 2015-06-16 2021-06-16 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
JP6871874B2 (ja) 2015-06-16 2021-05-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＦｃＲＨ５に対するヒト化親和性成熟抗体及び使用方法
HK1251493A1 (zh) 2015-06-17 2019-02-01 豪夫迈‧罗氏有限公司 使用pd-1轴结合拮抗剂和紫杉烷治疗局部晚期或转移性乳腺癌的方法
US10774145B2 (en) 2015-06-17 2020-09-15 Allakos Inc. Methods and compositions for treating fibrotic diseases
EP3310812B1 (en) 2015-06-17 2025-07-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-her2 antibodies and methods of use
EP3108897A1 (en) 2015-06-24 2016-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies against human csf-1r for use in inducing lymphocytosis in lymphomas or leukemias
CN120665195A (zh) 2015-06-24 2025-09-19 豪夫迈·罗氏有限公司 具有定制亲和力的抗转铁蛋白受体抗体
EP3744732B1 (en) 2015-06-24 2025-09-10 F. Hoffmann-La Roche AG Humanized anti-tau(ps422) antibodies and methods of use
CN107531788B (zh) 2015-06-24 2022-06-21 豪夫迈·罗氏有限公司 对her2和血脑屏障受体特异性的三特异性抗体及使用方法
CN108473573A (zh) 2015-06-29 2018-08-31 豪夫迈·罗氏有限公司 Ii型抗cd20抗体用于器官移植中
ES2878316T3 (es) 2015-06-29 2021-11-18 Ventana Med Syst Inc Materiales y procedimientos para realizar ensayos histoquímicos de pro-epirregulina y anfirregulina humanas
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
IL319047A (en) 2015-08-28 2025-04-01 Amunix Operating Inc Chimeric polypeptide composition and methods for its preparation and use
EP3932953A1 (en) 2015-08-28 2022-01-05 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-hypusine antibodies and uses thereof
CA2993423C (en) 2015-09-18 2024-03-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Il-8-binding antibodies and uses thereof
EP3353206A1 (en) 2015-09-22 2018-08-01 Spring Bioscience Corporation Anti-ox40 antibodies and diagnostic uses thereof
RU2763916C2 (ru) 2015-09-23 2022-01-11 Дженентек, Инк. Оптимизированные варианты анти-vegf антител
JP6955487B2 (ja) 2015-09-24 2021-10-27 アブビトロ， エルエルシー Ｈｉｖ抗体組成物および使用方法
HRP20241752T1 (hr) 2015-09-25 2025-02-28 F. Hoffmann - La Roche Ag Anti-tigit protutijela i metode uporabe
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
ES2886569T3 (es) 2015-10-02 2021-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos específicos para PD1 y TIM3
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
AU2016333512B2 (en) 2015-10-02 2022-11-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific anti-human CD20/human transferrin receptor antibodies and methods of use
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
PE20181092A1 (es) 2015-10-02 2018-07-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-pd1 y metodos de uso
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
MX2018003820A (es) 2015-10-02 2018-12-10 F Hoffmann ­La Roche Ag Anticuerpos biespecificos especificos para un receptor de tnf coestimulador.
KR20180075537A (ko) 2015-10-06 2018-07-04 제넨테크, 인크. 다발성 경화증을 치료하기 위한 방법
WO2017062748A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Il-7r-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
RU2018116402A (ru) 2015-10-07 2019-11-07 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биспецифические антитела, четырехвалентные в отношении костимуляторного tnf-рецептора
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
MA45326A (fr) 2015-10-20 2018-08-29 Genentech Inc Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation
US10604577B2 (en) 2015-10-22 2020-03-31 Allakos Inc. Methods and compositions for treating systemic mastocytosis
EP3365372A1 (en) 2015-10-22 2018-08-29 Jounce Therapeutics, Inc. Gene signatures for determining icos expression
EP3368568B1 (en) 2015-10-29 2022-04-06 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-variant fc-region antibodies and methods of use
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
EP3368074A2 (en) 2015-10-30 2018-09-05 Hoffmann-La Roche AG Anti-factor d antibodies and conjugates
WO2017075212A1 (en) 2015-10-30 2017-05-04 Genentech, Inc. Anti-htra1 antibodies and methods of use thereof
CN115010805B (zh) 2015-11-03 2025-01-28 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) Hiv-1 gp41中和抗体及其用途
JP6998869B2 (ja) 2015-11-08 2022-02-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多重特異性抗体のスクリーニング方法
AU2016359609B2 (en) 2015-11-23 2023-12-07 Five Prime Therapeutics, Inc. FGFR2 inhibitors alone or in combination with immune stimulating agents in cancer treatment
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
IL313608A (en) 2015-12-09 2024-08-01 Hoffmann La Roche Antibody against CD20 type II to reduce the formation of antibodies against drugs
CR20180364A (es) 2015-12-18 2018-08-22 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos anti-c5 y métodos de uso
TWI868415B (zh) 2015-12-18 2025-01-01 日商中外製藥股份有限公司 抗肌抑素抗體、含變異fc區之多肽及使用方法
ES3038408T3 (en) 2015-12-30 2025-10-13 Hoffmann La Roche Formulations with reduced degradation of polysorbate
EP3400246B1 (en) 2016-01-08 2020-10-21 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cea-positive cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-cea/anti-cd3 bispecific antibodies
CA3011739A1 (en) 2016-01-20 2017-07-27 Genentech, Inc. High dose treatments for alzheimer's disease
JP2019509721A (ja) 2016-02-04 2019-04-11 キュリス，インコーポレイテッド 突然変異体スムースンド及びその使用方法
JP6821693B2 (ja) 2016-02-29 2021-01-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんのための治療方法及び診断方法
EP3423490A1 (en) 2016-03-01 2019-01-09 H. Hoffnabb-La Roche Ag Obinutuzumab and rituximab variants having reduced adcp
AU2017231749A1 (en) 2016-03-08 2018-09-20 Academia Sinica Methods for modular synthesis of N-glycans and arrays thereof
EP4112641A1 (en) 2016-03-15 2023-01-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-gpc3 antibodies
CN108700598A (zh) 2016-03-25 2018-10-23 豪夫迈·罗氏有限公司 多路总抗体和抗体缀合的药物量化测定法
JP2019510517A (ja) 2016-03-29 2019-04-18 ジェルター， インコーポレイテッド 細胞質内体積に対するペリプラズム体積の比率が０．５：１および１０：１の間にあるグラム陰性細菌におけるタンパク質の発現
KR101796277B1 (ko) 2016-04-12 2017-11-13 앱클론(주) 안정성이 개선된 ｈｅｒ２에 특이적으로 결합하는 항체
US20170319688A1 (en) 2016-04-14 2017-11-09 Genentech, Inc. Anti-rspo3 antibodies and methods of use
WO2017181079A2 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Genentech, Inc. Methods for monitoring and treating cancer
CN109154613A (zh) 2016-04-15 2019-01-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于监测和治疗癌症的方法
KR102824067B1 (ko) 2016-04-15 2025-06-23 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 Icos 리간드 변이체 면역조절 단백질 및 그의 용도
JP7527758B2 (ja) 2016-04-15 2024-08-05 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド Ｃｄ８０バリアント免疫調節タンパク質およびその使用
CN109563164A (zh) 2016-04-15 2019-04-02 生物蛋白有限公司 抗axl抗体、抗体片段和它们的免疫缀合物以及其用途
CN109328069B (zh) 2016-04-15 2023-09-01 亿一生物医药开发(上海)有限公司 Il-22在治疗坏死性小肠结肠炎中的用途
MX2018013342A (es) 2016-05-02 2019-05-09 Hoffmann La Roche Polipeptido de fusion multicircular "contorsbody" - ligante de diana de cadena sencilla.
WO2017192589A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to influenza ha and their use and identification
JP7089483B2 (ja) 2016-05-11 2022-06-22 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 修飾された抗テネイシン抗体及び使用方法
MX394735B (es) 2016-05-13 2025-03-24 Bioatla Llc Anticuerpos anti-ror2, fragmentos de anticuerpos, sus inmunoconjugados y usos de los mismos.
ES2858151T3 (es) 2016-05-20 2021-09-29 Hoffmann La Roche Conjugados de PROTAC-anticuerpo y procedimientos de uso
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
US10966977B2 (en) 2016-05-27 2021-04-06 Tg Therapeutics, Inc. Combination of anti-CD20 antibody, P13 kinase-delta selective inhibitor, and BTK inhibitor to treat b-cell proliferative disorders
JP7022080B2 (ja) 2016-05-27 2022-02-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 部位特異的抗体－薬物複合体の特徴付けのための生化学分析的方法
CN110603266A (zh) 2016-06-02 2019-12-20 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗癌症的ii型抗cd20抗体和抗cd20/cd3双特异性抗体
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
CN109476648B (zh) 2016-06-06 2022-09-13 豪夫迈·罗氏有限公司 司维司群抗体-药物缀合物和使用方法
EP3472200B1 (en) 2016-06-17 2026-01-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies and methods of use
CN109563160B (zh) 2016-06-24 2023-02-28 豪夫迈·罗氏有限公司 抗聚泛素多特异性抗体
EP3478717B1 (en) 2016-07-04 2022-01-05 F. Hoffmann-La Roche AG Novel antibody format
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
US11834490B2 (en) 2016-07-28 2023-12-05 Alpine Immune Sciences, Inc. CD112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11471488B2 (en) 2016-07-28 2022-10-18 Alpine Immune Sciences, Inc. CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
WO2018022946A1 (en) 2016-07-28 2018-02-01 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
JP2019525934A (ja) 2016-07-29 2019-09-12 イーライ リリー アンド カンパニー 癌の治療に使用するためのメレスチニブおよび抗ｐｄ−ｌ１または抗ｐｄ−１阻害剤を用いた組み合わせ治療
BR112019001179A2 (pt) 2016-07-29 2019-04-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha anticorpo biespecífico que exibe atividade alternativa aumentada de função de cofator fviii
KR20230107408A (ko) 2016-07-29 2023-07-14 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 항-cd19 항체에 대한 항-이디오타입 항체
CN109963871A (zh) 2016-08-05 2019-07-02 豪夫迈·罗氏有限公司 具有激动活性的多价及多表位抗体以及使用方法
KR102102734B1 (ko) 2016-08-05 2020-04-22 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Il-8 관련 질환의 치료용 또는 예방용 조성물
WO2018029124A1 (en) 2016-08-08 2018-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2018031662A1 (en) 2016-08-11 2018-02-15 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepine prodrugs and antibody conjugates thereof
CN109963868B (zh) 2016-08-22 2023-11-14 醣基生医股份有限公司 抗体、结合片段及使用方法
WO2018045379A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating b cell disorders
US11168148B2 (en) 2016-09-07 2021-11-09 The Regents Of The University Of California Antibodies to oxidation-specific epitopes
CN110191720A (zh) 2016-09-09 2019-08-30 Tg治疗有限公司 用于治疗血液学癌症的抗-CD20抗体、PI 3激酶-δ抑制剂以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体的组合
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
EP3515932B1 (en) 2016-09-19 2023-11-22 F. Hoffmann-La Roche AG Complement factor based affinity chromatography
RS64550B1 (sr) 2016-09-23 2023-09-29 Hoffmann La Roche Upotreba il-13 antagonista za lečenje atopičnog dermatitisa
EP3519433A1 (en) 2016-10-03 2019-08-07 Juno Therapeutics, Inc. Hpv-specific binding molecules
CN110139674B (zh) 2016-10-05 2023-05-16 豪夫迈·罗氏有限公司 制备抗体药物缀合物的方法
CA3038712A1 (en) 2016-10-06 2018-04-12 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
EP3532091A2 (en) 2016-10-29 2019-09-04 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-mic antibidies and methods of use
MX2019004834A (es) 2016-11-02 2019-06-20 Jounce Therapeutics Inc Anticuerpos de pd-1 y usos de estos.
JP2020500033A (ja) * 2016-11-07 2020-01-09 ザ ウィスター インスティテュート オブ アナトミー アンド バイオロジー ライム病に対する使用のためのｄｎａ抗体構築物
CN109923128A (zh) 2016-11-15 2019-06-21 基因泰克公司 用于用抗cd20/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药
JP6709340B2 (ja) 2016-11-16 2020-06-10 イーライ リリー アンド カンパニー エクソン１４スキッピング変異（複数可）またはエクソン１４スキッピング表現型を有するがんの併用療法
TW201829463A (zh) 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
JP7313684B2 (ja) 2016-11-21 2023-07-25 キュレアブ ゲーエムベーハー 抗ｇｐ７３抗体及びイムノコンジュゲート
TWI789371B (zh) 2016-12-07 2023-01-11 美商建南德克公司 抗-ｔａｕ抗體及使用方法
IL266911B2 (en) 2016-12-07 2024-10-01 Genentech Inc Anti-tau antibodies and uses thereof in treating tauopathy, retaining or increasing cognitive memory capacity or slowing memory loss
CA3043333A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Molecular Templates, Inc. Shiga toxin a subunit effector polypeptides, shiga toxin effector scaffolds, and cell-targeting molecules for site-specific conjugation
JP2020511408A (ja) 2016-12-12 2020-04-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｐｄ−ｌ１抗体及び抗アンドロゲン薬を使用してがんを治療する方法
EP3559034B1 (en) 2016-12-20 2020-12-02 H. Hoffnabb-La Roche Ag Combination therapy of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and 4-1bb (cd137) agonists
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
MX2019007795A (es) 2017-01-03 2019-08-16 Hoffmann La Roche Moleculas de union a antigeno biespecificas que comprenden el clon 20h4.9 anti-4-1bb.
US20180230218A1 (en) 2017-01-04 2018-08-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
US11274157B2 (en) 2017-01-12 2022-03-15 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting histone H3 peptide/MHC complexes and uses thereof
WO2018140427A1 (en) 2017-01-25 2018-08-02 Molecular Templates, Inc. Cell-targeting molecules comprising de-immunized, shiga toxin a subunit effectors and cd8+ t-cell epitopes
US20190367599A1 (en) 2017-01-31 2019-12-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Pharmaceutical composition for use in the treatment or prevention of a c5-related disease and a method for treating or preventing a c5-related disease
WO2018148660A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
EP3580240A1 (en) 2017-02-10 2019-12-18 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-tryptase antibodies, compositions thereof, and uses thereof
EP3589754B1 (en) 2017-03-01 2023-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for cancer
CA3053804C (en) 2017-03-16 2025-09-23 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory Proteins of PD-L1 Variants and Associated Uses
US11732022B2 (en) 2017-03-16 2023-08-22 Alpine Immune Sciences, Inc. PD-L2 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
MX2019010887A (es) 2017-03-16 2019-10-15 Alpine Immune Sciences Inc Proteinas inmunomoduladoras de cb80 variante y usos de estas.
MX2019011141A (es) 2017-03-22 2019-11-05 Genentech Inc Composiciones de anticuerpo optimizadas para el tratamiento de trastornos oculares.
BR112019020168A2 (pt) 2017-03-27 2020-06-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Receptores de ligação ao antígeno, células t transduzidas, polinucleotídeo isolado, vetor, kits, métodos para tratar uma doença e para induzir a lise de uma célula alvo e uso do receptor de ligação ao antígeno
CN110494446A (zh) 2017-03-28 2019-11-22 基因泰克公司 治疗神经退行性疾病的方法
WO2018178055A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
CN110382542B (zh) 2017-03-29 2023-06-09 豪夫迈·罗氏有限公司 针对共刺激性tnf受体的双特异性抗原结合分子
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
AU2018247767B2 (en) 2017-04-03 2025-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to STEAP-1
CA3053358A1 (en) 2017-04-04 2018-10-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel bispecific antigen binding molecules capable of specific binding to cd40 and to fap
PE20210256A1 (es) 2017-04-05 2021-02-10 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-lag3
TWI690538B (zh) 2017-04-05 2020-04-11 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 特異性結合至pd1至lag3的雙特異性抗體
WO2018191660A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
TW201841656A (zh) 2017-04-21 2018-12-01 美商建南德克公司 Ｋｌｋ５拮抗劑用於治療疾病之用途
CA3059820A1 (en) 2017-04-26 2018-11-01 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs specifically recognizing glypican 3 and uses thereof
EP3615572A1 (en) 2017-04-27 2020-03-04 Tesaro Inc. Antibody agents directed against lymphocyte activation gene-3 (lag-3) and uses thereof
EP3618868A4 (en) 2017-05-05 2021-02-24 Allakos Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING ALLERGIC EYE DISEASES
CN110891974B (zh) 2017-05-12 2021-08-06 哈普恩治疗公司 间皮素结合蛋白质
SG10202112636SA (en) 2017-05-16 2021-12-30 Five Prime Therapeutics Inc Anti-fgfr2 antibodies in combination with chemotherapy agents in cancer treatment
EP3642239A1 (en) 2017-06-20 2020-04-29 Amgen Inc. Method of treating or ameliorating metabolic disorders using binding proteins for gastric inhibitory peptide receptor (gipr) in combination with glp-1 agonists
TWI823859B (zh) 2017-07-21 2023-12-01 美商建南德克公司 癌症之治療及診斷方法
CN110869391A (zh) 2017-07-26 2020-03-06 豪夫迈·罗氏有限公司 用BET抑制剂,Bcl-2抑制剂和抗CD20抗体的组合疗法
SG11202000658PA (en) 2017-07-26 2020-02-27 Forty Seven Inc Anti-sirp-alpha antibodies and related methods
CN111511762B (zh) 2017-08-21 2025-05-06 天演药业公司 抗cd137分子及其用途
EP3684413A1 (en) 2017-09-20 2020-07-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Dosage regimen for combination therapy using pd-1 axis binding antagonists and gpc3 targeting agent
US11180541B2 (en) 2017-09-28 2021-11-23 Geltor, Inc. Recombinant collagen and elastin molecules and uses thereof
UA128389C2 (uk) 2017-09-29 2024-07-03 Чугаі Сейяку Кабусікі Кайся Мультиспецифічна антигензв'язувальна молекула, яка має активність заміщувати кофакторну функцію фактора коагуляції крові viii (fviii), та фармацевтичний склад, який містить згадану молекулу як активний інгредієнт
EP3692063A1 (en) 2017-10-03 2020-08-12 Juno Therapeutics, Inc. Hpv-specific binding molecules
KR20250020681A (ko) 2017-10-10 2025-02-11 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 Ctla-4 변이체 면역조절 단백질 및 이의 용도
CA3185107A1 (en) 2017-10-12 2019-04-18 Immunowake Inc. Vegfr-antibody light chain fusion protein
CR20200196A (es) 2017-10-13 2020-06-05 Harpoon Therapeutics Inc Proteínas trispecìficas y mètodos de uso
IL315737A (en) 2017-10-13 2024-11-01 Harpoon Therapeutics Inc B-cell maturation antigen-binding proteins
EP3697417A1 (en) 2017-10-17 2020-08-26 Rhizen Pharmaceuticals S.A. Crac channel modulators for treating esophageal cancer
TWI899046B (zh) 2017-10-18 2025-10-01 美商艾爾潘免疫科學有限公司 變異型icos 配位體免疫調節蛋白及相關組合物及方法
MX2020003497A (es) 2017-10-20 2020-07-22 Hoffmann La Roche Metodo para generar anticuerpos multiespecificos a partir de anticuerpos monoespecificos.
WO2019082124A1 (en) 2017-10-26 2019-05-02 Rhizen Pharmaceuticals Sa COMPOSITION AND METHOD FOR THE TREATMENT OF LARGE B-CELL DIFFUSED LYMPHOMA
US20200281918A1 (en) 2017-10-30 2020-09-10 Rhizen Pharmaceuticals Sa Calcium release-activated calcium channel modulators for treating hematological and solid cancers
AU2018358883B2 (en) 2017-10-30 2025-09-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for in vivo generation of multispecific antibodies from monospecific antibodies
CA3080904A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen
PL3707510T3 (pl) 2017-11-06 2024-09-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Sposoby diagnostyczne i terapeutyczne w chorobach nowotworowych
JP7731196B2 (ja) 2017-11-14 2025-08-29 中外製薬株式会社 抗Ｃ１ｓ抗体および使用方法
BR112020010753A2 (pt) * 2017-12-01 2020-11-24 The Regents Of The University Of California anticorpos anti-cxcr5 e composições e usos dos mesmos
US20200289520A1 (en) 2017-12-06 2020-09-17 Rhizen Pharmaceuticals Sa Composition and method for treating peripheral t-cell lymphoma and cutaneous t-cell lymphoma
CA3079039A1 (en) 2017-12-14 2019-06-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of a cea cd3 bispecific antibody and a pd-1 axis binding antagonist in a dosage regime to treat cancer
JP2021506260A (ja) 2017-12-15 2021-02-22 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 抗ｃｃｔ５結合分子およびその使用方法
AR114001A1 (es) 2017-12-21 2020-07-08 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a hla- a2 / wt1
EP3728318A2 (en) 2017-12-22 2020-10-28 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies for lilrb2
EP3728321A1 (en) 2017-12-22 2020-10-28 F. Hoffmann-La Roche AG Use of pilra binding agents for treatment of a disease
SG11202004158QA (en) 2017-12-28 2020-06-29 Nanjing Legend Biotech Co Ltd Single-domain antibodies and variants thereof against tigit
CN111542543B (zh) 2017-12-28 2023-12-22 南京传奇生物科技有限公司 针对pd-l1的抗体及其变体
EP3731865A1 (en) 2017-12-29 2020-11-04 F. Hoffmann-La Roche AG Method for improving vegf-receptor blocking selectivity of an anti-vegf antibody
US11976109B2 (en) 2018-01-02 2024-05-07 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
SG11202006148UA (en) 2018-01-03 2020-07-29 Alpine Immune Sciences Inc Multi-domain immunomodulatory proteins and methods of use thereof
US20220153871A1 (en) 2018-01-04 2022-05-19 Iconic Therapeutics, Inc. Anti-Tissue Factor Antibodies, Antibody-Drug Conjugates, and Related Methods
AU2019205090A1 (en) 2018-01-05 2020-08-06 Ac Immune Sa Misfolded TDP-43 binding molecules
US12247060B2 (en) 2018-01-09 2025-03-11 Marengo Therapeutics, Inc. Calreticulin binding constructs and engineered T cells for the treatment of diseases
CA3084518A1 (en) 2018-01-15 2019-07-18 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against pd-1
CA3088649A1 (en) 2018-01-16 2019-07-25 Lakepharma, Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
EP3743437A1 (en) 2018-01-26 2020-12-02 F. Hoffmann-La Roche AG Il-22 fc fusion proteins and methods of use
SI3743088T1 (sl) 2018-01-26 2023-01-31 F. Hoffmann - La Roche Ag Farmacevtski sestavki IL-22 Fc in načini njihove uporabe
CA3081125C (en) 2018-02-01 2025-09-16 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. All-Human Single-Chain Variable Fragment Anti-Antigen for B Lymphocyte Maturation (BCMA), and Associated Application
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
EP3749361A1 (en) 2018-02-08 2020-12-16 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antigen-binding molecules and methods of use
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
BR112020016172A2 (pt) 2018-02-09 2020-12-15 Genentech, Inc. Métodos de tratamento, métodos para determinar, métodos para selecionar uma terapia, métodos para avaliar uma resposta e monitorar a resposta, kits para identificar um paciente, agentes selecionados, agentes para uso, uso de um agente selecionado e uso de um antagonista
CN111757894B (zh) 2018-02-14 2025-02-25 Abba疗法股份公司 抗人类pd-l2抗体
CN111757751A (zh) 2018-02-21 2020-10-09 豪夫迈·罗氏有限公司 用于使用IL-22 Fc融合蛋白的治疗的剂量方案
CA3091437A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
CA3092108A1 (en) 2018-02-26 2019-08-29 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
CA3092002A1 (en) 2018-03-13 2019-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic combination of 4-1 bb agonists with anti-cd20 antibodies
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
EP3765522A4 (en) 2018-03-14 2022-05-18 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. ANTI-CLAUDIN 18.2 ANTIBODIES
US12152073B2 (en) 2018-03-14 2024-11-26 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
US11891432B2 (en) 2018-03-15 2024-02-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-dengue virus antibodies having cross-reactivity to Zika virus and methods of use
SG11202009542PA (en) 2018-03-29 2020-10-29 Genentech Inc Modulating lactogenic activity in mammalian cells
KR102876940B1 (ko) 2018-03-30 2025-10-24 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Lag-3에 대한 단일-도메인 항체 및 이의 용도
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
KR102764123B1 (ko) 2018-04-05 2025-02-05 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Τ 세포 수용체 및 이를 발현하는 조작된 세포
CA3097178A1 (en) 2018-04-17 2019-10-24 Molecular Templates, Inc. Her2-targeting molecules comprising de-immunized, shiga toxin a subunit scaffolds
AR114789A1 (es) 2018-04-18 2020-10-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos
AR115052A1 (es) 2018-04-18 2020-11-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos
CN110464842B (zh) 2018-05-11 2022-10-14 信达生物制药(苏州)有限公司 包含抗pcsk9抗体的制剂及其用途
BR112020023118A2 (pt) 2018-05-14 2021-04-13 Werewolf Therapeutics, Inc. Polipeptídeos de interleucina 12 ativáveis e métodos de uso destes
AU2019271148B9 (en) 2018-05-14 2025-05-29 Werewolf Therapeutics, Inc. Activatable interleukin-2 polypeptides and methods of use thereof
US11987629B2 (en) 2018-06-01 2024-05-21 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and uses thereof for treating disease or condition
WO2019227490A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and methods for imaging
JP7372237B2 (ja) 2018-06-04 2023-10-31 中外製薬株式会社 細胞質内での半減期が変化した抗原結合分子
TWI851577B (zh) 2018-06-07 2024-08-11 美商思進公司 喜樹鹼結合物
WO2019241758A1 (en) 2018-06-15 2019-12-19 Alpine Immune Sciences, Inc. Pd-1 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
CA3103936A1 (en) 2018-06-18 2019-12-26 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting prostate-specific membrane antigen (psma) and uses thereof
MY205645A (en) 2018-06-23 2024-11-02 Genentech Inc Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor
AU2019297451A1 (en) 2018-07-03 2021-01-28 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
TW202035447A (zh) 2018-07-04 2020-10-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 新穎雙特異性促效性4-1bb抗原結合分子
BR112021000169A2 (pt) 2018-07-09 2021-04-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Ministração de inibidor de enzima ativadora de sumo e anticorpos anti-cd20
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
AU2019305637A1 (en) 2018-07-18 2021-03-11 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a PD-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent
SG11202100373VA (en) 2018-07-20 2021-02-25 Surface Oncology Inc Anti-cd112r compositions and methods
SMT202400271T1 (it) 2018-08-01 2024-07-09 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Composizione farmaceutica per l’uso nel trattamento o nella prevenzione di una patologia correlata a c5
CN113286824A (zh) 2018-08-03 2021-08-20 中外制药株式会社 包含两个彼此连接的抗原结合结构域的抗原结合分子
EP3608674A1 (en) 2018-08-09 2020-02-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing binding affinity of an antibody variant to the neonatal fc receptor
CN112839960B (zh) 2018-08-10 2024-09-06 中外制药株式会社 抗cd137抗原结合分子及其应用
TW202021618A (zh) 2018-08-17 2020-06-16 美商２３與我有限公司 抗ｉｌ１ｒａｐ抗體及其使用方法
US12259395B2 (en) 2018-08-17 2025-03-25 Ab Studio Inc. Catabodies and methods of use thereof
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
WO2020052542A1 (en) 2018-09-10 2020-03-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies against cll1 and constructs thereof
AU2019342099A1 (en) 2018-09-19 2021-04-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
EP3853247A2 (en) 2018-09-19 2021-07-28 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods and uses of variant cd80 fusion proteins and related constructs
US12195544B2 (en) 2018-09-21 2025-01-14 Harpoon Therapeutics, Inc. EGFR binding proteins and methods of use
JP7475336B2 (ja) 2018-09-21 2024-04-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド トリプルネガティブ乳癌のための診断方法
WO2020069028A1 (en) 2018-09-25 2020-04-02 Harpoon Therapeutics, Inc. Dll3 binding proteins and methods of use
EP3856764A4 (en) 2018-09-27 2022-11-02 Xilio Development, Inc. MASKED CYTOKINE POLYPEPTIDES
MX2021003548A (es) 2018-10-01 2021-05-27 Hoffmann La Roche Moleculas de union a antigeno biespecificas que comprenden el clon 212 anti-fap.
EP3861025A1 (en) 2018-10-01 2021-08-11 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antigen binding molecules with trivalent binding to cd40
CR20210217A (es) 2018-10-05 2021-06-18 Five Prime Therapeutics Inc Formulaciones de anticuerpos anti-fgfr2
KR102262012B1 (ko) 2018-10-15 2021-06-09 연세대학교 산학협력단 생산성이 향상된 항체 및 이의 제조방법
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
KR20210079311A (ko) 2018-10-18 2021-06-29 제넨테크, 인크. 육종성 신장암에 대한 진단과 치료 방법
MA54052A (fr) 2018-10-29 2022-02-09 Hoffmann La Roche Formulation d'anticorps
RU2724469C2 (ru) 2018-10-31 2020-06-23 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Моноклональное антитело, которое специфически связывается с cd20
EP3873944A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Bayer Aktiengesellschaft Reversal agents for neutralizing the therapeutic activity of anti-fxia antibodies
SG11202104104VA (en) 2018-11-05 2021-05-28 Genentech Inc Methods of producing two chain proteins in prokaryotic host cells
MX2021005751A (es) 2018-11-16 2021-10-01 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anticuerpos contra mucina 16 y métodos de uso de los mismos.
CA3120729A1 (en) 2018-11-27 2020-06-04 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing granulocyte-macrophage colony stimulating factor receptor alpha and uses thereof
CA3101670C (en) 2018-11-27 2024-02-06 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-il-23p19 antibody and use thereof
KR20210135987A (ko) 2018-11-30 2021-11-16 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 Cd86 변이체 면역조절 단백질 및 그의 용도
JP7671248B2 (ja) 2018-12-05 2025-05-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんの免疫療法のための診断方法及び診断用組成物
KR20210100668A (ko) 2018-12-06 2021-08-17 제넨테크, 인크. 항-CD79b 면역접합체, 알킬화제 및 항-CD20 항체를 포함하는 미만성 큰 B-세포 림프종의 조합 요법
WO2020123275A1 (en) 2018-12-10 2020-06-18 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
US20220089694A1 (en) 2018-12-20 2022-03-24 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof
AR117327A1 (es) 2018-12-20 2021-07-28 23Andme Inc Anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
TW202035442A (zh) 2018-12-20 2020-10-01 美商建南德克公司 經修飾之抗體Fc及其使用方法
JP2022514950A (ja) 2018-12-21 2022-02-16 ２３アンドミー・インコーポレイテッド 抗ｉｌ－３６抗体およびその使用方法
MX2021007307A (es) 2018-12-21 2021-07-07 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3.
KR102910209B1 (ko) 2018-12-21 2026-01-09 제넨테크, 인크. 세포사멸에 내성인 세포주를 사용한 폴리펩티드 생산 방법
CN113195531B (zh) 2018-12-21 2025-03-04 豪夫迈·罗氏有限公司 与VEGF和IL-1β结合的抗体及其使用方法
CN113490687A (zh) 2018-12-26 2021-10-08 西利欧发展公司 抗ctla4抗体和其使用方法
WO2020141145A1 (en) 2018-12-30 2020-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-rabbit cd19 antibodies and methods of use
MX2021008434A (es) 2019-01-14 2021-09-23 Genentech Inc Metodos para tratar el cancer con un antagonista de union al eje de pd-1 y una vacuna de arn.
CN113330030A (zh) 2019-01-17 2021-08-31 拜耳公司 确定受试者是否适于用可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的激动剂治疗的方法
CN113329763A (zh) 2019-01-22 2021-08-31 豪夫迈·罗氏有限公司 免疫球蛋白a抗体以及制备和使用方法
CA3124515A1 (en) 2019-01-23 2020-07-30 Genentech, Inc. Methods of producing multimeric proteins in eukaryotic host cells
US12263234B2 (en) 2019-01-23 2025-04-01 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Anti-PD-L1 diabodies and the use thereof
JPWO2020153467A1 (ja) 2019-01-24 2021-12-02 中外製薬株式会社 新規がん抗原及びそれらの抗原に対する抗体
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
PE20212198A1 (es) 2019-01-29 2021-11-16 Juno Therapeutics Inc Anticuerpos y receptores quimericos de antigenos especificos para receptor 1 huerfano tipo receptor tirosina-cinasa (ror1)
AU2020224681A1 (en) 2019-02-21 2021-09-16 Marengo Therapeutics, Inc. Antibody molecules that bind to NKp30 and uses thereof
SG11202109061YA (en) 2019-02-21 2021-09-29 Marengo Therapeutics Inc Multifunctional molecules that bind to t cell related cancer cells and uses thereof
KR20210133237A (ko) 2019-02-27 2021-11-05 제넨테크, 인크. 항-tigit 및 항-cd20 또는 항-cd38 항체로 치료를 위한 투약
CN113874051A (zh) 2019-02-27 2021-12-31 安吉克公司 包含抗tm4sf1抗体的抗体-药物缀合物及其使用方法
KR102866290B1 (ko) 2019-03-08 2025-10-01 제넨테크, 인크. 세포외 소포 상에서 막 관련 단백질을 검출하고 정량하기 위한 방법
JP7730761B2 (ja) 2019-03-14 2025-08-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＨＥＲ２ ＭＡＢと組み合わせたＨＥＲ２ｘＣＤ３二重特異性抗体によるがんの処置
TWI856084B (zh) 2019-04-01 2024-09-21 美商建南德克公司 用於穩定含有蛋白質之配方之組合物及方法
JP7777451B2 (ja) 2019-04-12 2025-11-28 ジェルター， インコーポレイテッド 組換えエラスチンおよびその産生
KR20220035032A (ko) 2019-04-17 2022-03-21 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 변이체 icos 리간드(icosl) 융합 단백질의 방법 및 용도
MX2021012608A (es) 2019-04-18 2021-11-12 Ac Immune Sa Nuevas moleculas para terapia y diagnostico.
TW202043291A (zh) 2019-04-19 2020-12-01 美商建南德克公司 抗mertk抗體及使用方法
AU2020257748A1 (en) 2019-04-19 2021-11-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chimeric receptor recognizing modification site of antibody
TWI879768B (zh) 2019-05-03 2025-04-11 美商建南德克公司 用抗pd-l1抗體治療癌症之方法
EP3962523A2 (en) 2019-05-03 2022-03-09 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
AU2020275415B2 (en) 2019-05-14 2026-01-15 Genentech, Inc. Methods of using anti-CD79B immunoconjugates to treat follicular lymphoma
WO2020232305A1 (en) 2019-05-14 2020-11-19 Werewolf Therapeutics, Inc. Separation moieties and methods and use thereof
US20230085439A1 (en) 2019-05-21 2023-03-16 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use
KR20220012270A (ko) 2019-05-23 2022-02-03 에이씨 이뮨 에스.에이. 항-tdp-43 결합 분자 및 이의 용도
US20220348658A1 (en) 2019-06-10 2022-11-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-t cell antigen-binding molecule to be used in combination with cytokine inhibitor
EP3994173A1 (en) 2019-07-02 2022-05-11 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Monoclonal antibodies that bind egfrviii and their use
CA3145139A1 (en) 2019-07-09 2021-01-14 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing pseudomonas pcrv and uses thereof
JPWO2021010326A1 (pl) 2019-07-12 2021-01-21
AR119382A1 (es) 2019-07-12 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos de pre-direccionamiento y métodos de uso
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
WO2021019036A1 (en) 2019-07-31 2021-02-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosage and administration regimen for the treatment or prevention of c5-related diseases by the use of the anti-c5 antibody crovalimab
WO2021018925A1 (en) 2019-07-31 2021-02-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to gprc5d
CR20220019A (es) 2019-07-31 2022-02-11 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se fijan a gprc5d
CN114466660A (zh) 2019-07-31 2022-05-10 豪夫迈·罗氏有限公司 通过使用抗c5抗体可伐利单抗来治疗或预防c5相关疾病的剂量和施用方案
CN114641490B (zh) 2019-08-06 2023-06-06 新旭生技股份有限公司 结合至病理性tau种类的抗体及其用途
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
EP4438057A3 (en) 2019-09-12 2025-01-01 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions and methods of treating lupus nephritis
WO2021047599A1 (en) * 2019-09-13 2021-03-18 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. Humanized anti-claudin 18.2 (cldn18.2) antibodies
EP4031579A2 (en) 2019-09-18 2022-07-27 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
MX2022003266A (es) 2019-09-20 2022-04-11 Genentech Inc Dosis para anticuerpos anti-triptasa.
AU2020351734A1 (en) 2019-09-27 2022-04-14 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-TIGIT and anti-PD-L1 antagonist antibodies
EP4034160A1 (en) 2019-09-27 2022-08-03 Janssen Biotech, Inc. Anti-ceacam antibodies and uses thereof
JP2023507053A (ja) * 2019-10-12 2023-02-21 バイオ－セラ ソリューションズ リミテッド 抗ｃｄ２０抗体製剤及びｃｄ２０陽性疾患の治療のための抗ｃｄ２０抗体の使用
CA3153880A1 (en) 2019-10-18 2020-06-09 Juana Elva HERNANDEZ MONTALVO Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
CA3155215A1 (en) 2019-10-21 2021-04-29 Srikant Viswanadha Compositions comprising a dhodh inhibitor for the treatment of acute myeloid leukemia
JP2022553803A (ja) 2019-11-06 2022-12-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド 血液がんの処置のための診断方法及び治療方法
WO2021096888A1 (en) 2019-11-12 2021-05-20 Foundation Medicine, Inc. Methods of detecting a fusion gene encoding a neoantigen
EP4058471A1 (en) 2019-11-14 2022-09-21 Werewolf Therapeutics, Inc. Activatable cytokine polypeptides and methods of use thereof
WO2021110995A1 (en) 2019-12-04 2021-06-10 Ac Immune Sa Novel molecules for therapy and diagnosis
WO2021113780A1 (en) 2019-12-06 2021-06-10 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to gprc5d-targeted binding domains and related compositions and methods
WO2021113776A1 (en) 2019-12-06 2021-06-10 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to bcma-targeted binding domains and related compositions and methods
KR20220113790A (ko) 2019-12-13 2022-08-16 제넨테크, 인크. 항-ly6g6d 항체 및 사용 방법
WO2021122875A1 (en) 2019-12-18 2021-06-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a2/mage-a4
KR20240035914A (ko) 2019-12-27 2024-03-18 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항ctla-4 항체 및 그의 사용
CN113045655A (zh) 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
EP4084823A4 (en) 2020-01-03 2024-05-15 Marengo Therapeutics, Inc. ANTI-TCR ANTIBODY MOLECULES AND THEIR USES
US11859000B2 (en) 2020-01-06 2024-01-02 Vaccinex Inc. Anti-CCR8 antibodies and uses thereof
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
EP4097143A1 (en) 2020-01-31 2022-12-07 The Cleveland Clinic Foundation Anti-müllerian hormone receptor 2 antibodies and methods of use
CN116650628A (zh) 2020-01-31 2023-08-29 基因泰克公司 用pd-1轴结合拮抗剂和rna疫苗诱导新表位特异性t细胞的方法
TWI895351B (zh) 2020-02-12 2025-09-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
AU2021219668B2 (en) 2020-02-14 2025-06-12 Gilead Sciences, Inc. Antibodies and fusion proteins that bind to CCR8 and uses thereof
EP4106794A4 (en) 2020-02-19 2024-03-20 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd METHOD FOR TREATING TRANSPLANT AND HOST DISEASE
EP4093762A1 (en) 2020-02-20 2022-11-30 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Epstein-barr virus monoclonal antibodies and uses thereof
WO2021170071A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-cd137 constructs, multispecific antibody and uses thereof
BR112022016491A2 (pt) 2020-02-28 2022-10-11 Shanghai Henlius Biotech Inc Construto anti-cd137 e usos do mesmo
KR20220151195A (ko) 2020-03-06 2022-11-14 오엔에이 테라퓨틱스 에스.엘. 항-cd36 항체 및 암을 치료하기 위한 이의 용도
JP7767298B2 (ja) 2020-03-13 2025-11-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗インターロイキン－３３抗体及びその使用
KR102811560B1 (ko) 2020-03-19 2025-05-22 제넨테크, 인크. 동종형 선택적 항-tgf-베타 항체 및 이용 방법
MX2022011752A (es) 2020-03-24 2022-10-18 Genentech Inc Agentes de fijacion a tie2 y metodos de uso.
EP4127153A2 (en) 2020-03-26 2023-02-08 Genentech, Inc. Modified mammalian cells having reduced host cell proteins
EP4126940A1 (en) 2020-03-30 2023-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody that binds to vegf and pdgf-b and methods of use
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
CN115698717A (zh) 2020-04-03 2023-02-03 基因泰克公司 癌症的治疗和诊断方法
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
JP2023522417A (ja) 2020-04-24 2023-05-30 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー スルフヒドリル化合物およびその誘導体を用いた酵素および経路調節
BR112022021441A2 (pt) 2020-04-24 2022-12-13 Genentech Inc Métodos para tratar linfoma folicular e linfoma difuso de grandes células b e kits
CA3172880A1 (en) 2020-04-27 2021-11-04 Sotirios Tsimikas Isoform-independent antibodies to lipoprotein(a)
WO2021222167A1 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Genentech, Inc. Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy
IL297830A (en) 2020-05-03 2023-01-01 Levena Suzhou Biopharma Co Ltd Antibody-drug conjugates (adcs) comprising an anti-trop-2 antibody, compositions comprising such adcs, as well as methods of making and using the same
CA3178882A1 (en) 2020-05-08 2021-11-11 Alpine Immune Sciences, Inc. April and baff inhibitory immunomodulatory proteins and methods of use thereof
JP2023525085A (ja) 2020-05-13 2023-06-14 アダジーン アーゲー がんを治療するための組成物および方法
US20230220057A1 (en) 2020-05-27 2023-07-13 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing nerve growth factor and uses thereof
JP2023528375A (ja) 2020-05-29 2023-07-04 ２３アンドミー・インコーポレイテッド 抗ｃｄ２００ｒ１抗体及びその使用方法
US20230235075A1 (en) 2020-06-02 2023-07-27 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-cd93 constructs and uses thereof
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
JP2023527918A (ja) 2020-06-08 2023-06-30 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｈｂｖ抗体及び使用方法
WO2021252977A1 (en) 2020-06-12 2021-12-16 Genentech, Inc. Methods and compositions for cancer immunotherapy
MX2022015877A (es) 2020-06-16 2023-01-24 Genentech Inc Metodos y composiciones para tratar cancer de mama triple negativo.
MX2022015881A (es) 2020-06-18 2023-01-24 Genentech Inc Tratamiento con anticuerpos anti-tigit y antagonistas de union al eje de pd-1.
CN115768478A (zh) 2020-06-19 2023-03-07 中外制药株式会社 用于和血管新生抑制剂组合使用的抗t细胞抗原结合分子
WO2021255146A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cea
KR20230025673A (ko) 2020-06-19 2023-02-22 에프. 호프만-라 로슈 아게 CD3 및 FolR1에 결합하는 항체
KR20230025665A (ko) 2020-06-19 2023-02-22 에프. 호프만-라 로슈 아게 Cd3에 결합하는 항체
EP4168447A1 (en) 2020-06-19 2023-04-26 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies binding to cd3 and cd19
AU2021297856A1 (en) 2020-06-22 2023-02-02 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-CD73 antibody and use thereof
US20230235040A1 (en) 2020-06-22 2023-07-27 Almirall, S.A. Anti-il-36 antibodies and methods of use thereof
JP2023533217A (ja) 2020-06-24 2023-08-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド アポトーシス耐性細胞株
JP2023532768A (ja) 2020-07-07 2023-07-31 バイオエヌテック エスエー Ｈｐｖ陽性癌の治療用ｒｎａ
MX2023000339A (es) 2020-07-10 2023-02-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a celulas cancerosas y dirigen radionucleotidos a dichas celulas.
CN116406377A (zh) 2020-07-17 2023-07-07 基因泰克公司 抗notch2抗体及其使用方法
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
EP4188550A1 (en) 2020-07-29 2023-06-07 Dynamicure Biotechnology LLC Anti-cd93 constructs and uses thereof
EP4189121A1 (en) 2020-08-03 2023-06-07 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for lymphoma
WO2022029660A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to ror1-targeted binding domains and related compositions and methods
MX2023001440A (es) 2020-08-07 2023-03-06 Genentech Inc Proteinas de fusion del ligando para flt3 y metodos de uso.
CN111759732B (zh) * 2020-08-12 2024-12-06 河南省人民医院 一种用于外周血造血干细胞冻存的多通道连接管路及方法
WO2022036129A1 (en) 2020-08-14 2022-02-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods for treating multiple sclerosis with ocrelizumab
JP2023537761A (ja) 2020-08-14 2023-09-05 エイシー イミューン ソシエテ アノニム ヒト化抗ｔｄｐ－４３結合分子およびその使用
EP4204448A2 (en) 2020-08-27 2023-07-05 cureab GmbH Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
US20230303665A1 (en) 2020-08-28 2023-09-28 Sana Biotechnology, Inc. Modified anti-viral binding agents
JP2023539201A (ja) 2020-08-28 2023-09-13 ジェネンテック， インコーポレイテッド 宿主細胞タンパク質のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９マルチプレックスノックアウト
EP4208201A1 (en) 2020-09-04 2023-07-12 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody that binds to vegf-a and ang2 and methods of use
PE20231575A1 (es) 2020-09-14 2023-10-04 Ichnos Sciences SA Anticuerpos que se unen a il1rap y usos de estos
JP7454106B2 (ja) 2020-09-15 2024-03-21 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト 新規な抗ａ２ａｐ抗体およびその使用
EP4217389A4 (en) 2020-09-28 2025-03-19 Angitia Incorporated Limited ANTI-SCLEROSTIN CONSTRUCTS AND USES THEREOF
EP4221752A4 (en) 2020-09-30 2024-12-04 Dren Bio, Inc. ANTI-CD94 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
TWI836278B (zh) 2020-10-05 2024-03-21 美商建南德克公司 用抗fcrh5/抗cd3雙特異性抗體進行治療之給藥
WO2022077006A1 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Dren Bio, Inc. Anti-dectin-1 antibodies and methods of use thereof
EP4229082A1 (en) 2020-10-16 2023-08-23 AC Immune SA Antibodies binding to alpha-synuclein for therapy and diagnosis
CA3192306A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Burkhard Ludewig Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to gremlin-1 and uses thereof
CN116685325A (zh) 2020-10-20 2023-09-01 豪夫迈·罗氏有限公司 Pd-1轴结合拮抗剂和lrrk2抑制剂的组合疗法
TW202233671A (zh) 2020-10-20 2022-09-01 美商建南德克公司 Ｐｅｇ結合抗ｍｅｒｔｋ抗體及其使用方法
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
CA3196076A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Chi-Chung Li Subcutaneous dosing of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
IL302217A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-CD20/anti-CD3 antibodies and anti-CD79B drug antibody conjugates
EP4240492A2 (en) 2020-11-04 2023-09-13 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
US20220143026A1 (en) 2020-11-12 2022-05-12 Tg Therapeutics, Inc. Triple combination to treat b-cell malignancies
KR20230113581A (ko) 2020-11-25 2023-07-31 실리오 디벨럽먼트, 인크. 종양 특이적 절단성 링커
AU2021391054A1 (en) 2020-12-02 2023-06-22 Shanghai Henlius Biotech, Inc. ANTI-GARP/TGFβ ANTIBODIES AND METHODS OF USE
JP2023551981A (ja) 2020-12-07 2023-12-13 ユーシービー バイオファルマ エスアールエル 多重特異性抗体及び抗体の組み合わせ
JP2023551983A (ja) 2020-12-07 2023-12-13 ユーシービー バイオファルマ エスアールエル インターロイキン－２２に対する抗体
TW202237638A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
TW202237639A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 鳥苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
WO2022132904A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2
CR20230263A (es) 2020-12-17 2023-08-21 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de estos
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
WO2022140797A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Immunowake Inc. Immunocytokines and uses thereof
CA3203257A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Li Li Anti-b7-h3 antibody and uses thereof
AU2022206061A1 (en) 2021-01-06 2023-07-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and a cd20 t cell bispecific antibody
JP2024504931A (ja) 2021-01-12 2024-02-02 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がん細胞に結合し、放射性核種を前記細胞に標的化するスプリット抗体
US20240173442A1 (en) 2021-01-13 2024-05-30 Hoffmann-La Roche Inc. Combination therapy
EP4284422A1 (en) 2021-01-28 2023-12-06 Vaccinvent GmbH Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
WO2022162203A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
MX2023009100A (es) 2021-02-03 2023-09-25 Mozart Therapeutics Inc Agentes aglutinantes y métodos para usar los mismos.
EP4288458A1 (en) 2021-02-03 2023-12-13 Genentech, Inc. Multispecific binding protein degrader platform and methods of use
CA3210753A1 (en) 2021-02-09 2022-08-18 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Human monoclonal antibodies against pneumococcal antigens
US20240117011A1 (en) 2021-02-09 2024-04-11 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibodies targeting the spike protein of coronaviruses
MX2023009497A (es) 2021-02-15 2023-08-23 Takeda Pharmaceuticals Co Composiciones y metodos de terapia celular para modular la se?alizacion del factor de crecimiento transformador-beta (tgf-beta).
US20240124572A1 (en) 2021-02-26 2024-04-18 Bayer Aktiengesellschaft INHIBITORS OF IL-11 OR IL-11Ra FOR USE IN THE TREATMENT OF ABNORMAL UTERINE BLEEDING
US20220340662A1 (en) 2021-03-01 2022-10-27 Xilio Development, Inc. Combination of masked ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
EP4301467A1 (en) 2021-03-01 2024-01-10 Xilio Development, Inc. Combination of ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
EP4301418A1 (en) 2021-03-03 2024-01-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody
WO2022187863A1 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
US20240392004A1 (en) 2021-03-10 2024-11-28 Immunowake Inc. Immunomodulatory molecules and uses thereof
JP2024512377A (ja) 2021-03-12 2024-03-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｋｌｋ７抗体、抗ｋｌｋ５抗体、多重特異性抗ｋｌｋ５／ｋｌｋ７抗体、及び使用方法
WO2022198192A1 (en) 2021-03-15 2022-09-22 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
CN117616041A (zh) 2021-03-25 2024-02-27 当康生物技术有限责任公司 抗-igfbp7构建体及其用途
KR20230162800A (ko) 2021-03-30 2023-11-28 바이엘 악티엔게젤샤프트 항-sema3a 항체 및 그의 용도
CA3215049A1 (en) 2021-04-10 2022-10-13 Baiteng ZHAO Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
AR125344A1 (es) 2021-04-15 2023-07-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-c1s
EP4326855A1 (en) 2021-04-19 2024-02-28 Genentech, Inc. Modified mammalian cells
EP4326768A1 (en) 2021-04-23 2024-02-28 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
WO2022223651A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Prevention or mitigation of nk cell engaging agent-related adverse effects
CN117321078A (zh) 2021-04-30 2023-12-29 豪夫迈·罗氏有限公司 针对用抗cd20/抗cd3双特异性抗体和抗cd79b抗体药物缀合物进行组合治疗的给药
AU2021443863A1 (en) 2021-04-30 2023-10-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody
AR125732A1 (es) 2021-05-03 2023-08-09 UCB Biopharma SRL Anticuerpos anti-trem1
EP4333869A1 (en) 2021-05-07 2024-03-13 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods of dosing and treatment with a taci-fc fusion immunomodulatory protein
JP2024518410A (ja) 2021-05-07 2024-05-01 ビエラ バイオ インコーポレイテッド 重症筋無力症を治療するための抗ｃｄ１９抗体の使用
KR20240007184A (ko) 2021-05-12 2024-01-16 제넨테크, 인크. 미만성 거대 b세포 림프종을 치료하기 위해 항-cd79b 면역접합체를 사용하는 방법
JP2024518545A (ja) 2021-05-14 2024-05-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｔｒｅｍ２のアゴニスト
AU2022273541A1 (en) 2021-05-14 2023-11-30 Genentech, Inc. Methods for treatment of cd20-positive proliferative disorder with mosunetuzumab and polatuzumab vedotin
EP4341289A1 (en) * 2021-05-18 2024-03-27 Christian-Albrechts-Universität zu Kiel Co-stimulatory multispecific antibodies
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
WO2022246259A1 (en) 2021-05-21 2022-11-24 Genentech, Inc. Modified cells for the production of a recombinant product of interest
TW202306994A (zh) 2021-06-04 2023-02-16 日商中外製藥股份有限公司 抗ddr2抗體及其用途
EP4351582B1 (en) 2021-06-09 2025-10-08 F. Hoffmann-La Roche AG Combination of a particular braf inhibitor (paradox breaker) and a pd-1 axis binding antagonist for use in the treatment of cancer
WO2022262808A1 (en) * 2021-06-16 2022-12-22 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Genetically modified non-human animal with human or chimeric cd20 genes
WO2022266660A1 (en) 2021-06-17 2022-12-22 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
AU2022294106A1 (en) 2021-06-18 2024-01-25 Therini Bio, Inc. ANTIBODIES WHICH BIND HUMAN FIBRIN OR FIBRINOGEN γC DOMAIN AND METHODS OF USE
MX2023014453A (es) 2021-06-25 2024-01-31 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Uso de anticuerpos anti-antigeno 4 del linfocito t citotoxico (anti-ctla-4).
CA3221833A1 (en) 2021-06-25 2022-12-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ctla-4 antibody
EP4363449A2 (en) 2021-07-02 2024-05-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating cancer
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
US20250011448A1 (en) 2021-07-08 2025-01-09 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing tnfr2 and uses thereof
JP2024530402A (ja) 2021-07-12 2024-08-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体－リパーゼ結合を減少させるための構造
JP2024525758A (ja) 2021-07-13 2024-07-12 ビオンテック・ソシエタス・エウロパエア がんのための併用療法におけるｃｄ４０およびｃｄ１３７に対する多重特異性結合剤
EP4370553A1 (en) 2021-07-14 2024-05-22 Genentech, Inc. Anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use
KR20240058075A (ko) 2021-07-14 2024-05-03 스테이드슨 (베이징) 바이오팔마슈티칼스 캄퍼니 리미티드 Cd40을 특이적으로 식별하는 항체 및 이의 응용
JP2024526880A (ja) 2021-07-22 2024-07-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド 脳標的化組成物及びその使用方法
WO2023001884A1 (en) 2021-07-22 2023-01-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterodimeric fc domain antibodies
JP2024529451A (ja) 2021-07-28 2024-08-06 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんを治療するための方法及び組成物
KR20240042476A (ko) 2021-07-30 2024-04-02 오엔에이 테라퓨틱스 에스.엘. 항-cd36 항체 및 암을 치료하기 위한 이의 용도
WO2023011338A1 (zh) 2021-08-02 2023-02-09 信达生物制药(苏州)有限公司 抗CD79b×CD3双特异性抗体及其用途
JP2024528217A (ja) 2021-08-03 2024-07-26 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 二重特異性抗体および使用方法
US20240336697A1 (en) 2021-08-07 2024-10-10 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
JP2024534004A (ja) 2021-08-13 2024-09-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トリプターゼ抗体のための投与量
GB202111905D0 (en) 2021-08-19 2021-10-06 UCB Biopharma SRL Antibodies
WO2023021055A1 (en) 2021-08-19 2023-02-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Multivalent anti-variant fc-region antibodies and methods of use
CN118284623A (zh) 2021-08-23 2024-07-02 伊莫尼塔斯治疗公司 抗cd161抗体及其用途
IL310382A (en) 2021-08-27 2024-03-01 Genentech Inc Methods for treating tau pathologies
WO2023034750A1 (en) 2021-08-30 2023-03-09 Genentech, Inc. Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
KR20240058167A (ko) 2021-09-17 2024-05-03 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 Sars-cov-2 중화 항체 동정을 위한 합성 인간화 라마 나노바디 라이브러리 및 이의 용도
WO2023056069A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Angiex, Inc. Degrader-antibody conjugates and methods of using same
WO2023056403A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Genentech, Inc. Methods for treatment of hematologic cancers using anti-tigit antibodies, anti-cd38 antibodies, and pd-1 axis binding antagonists
AR127269A1 (es) 2021-10-08 2024-01-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulación de anticuerpo anti-hla-dq2.5
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
WO2023076876A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Mozart Therapeutics, Inc. Modulation of immune responses to viral vectors
EP4426748A4 (en) 2021-11-05 2025-11-26 Mab Biotec Inc Monoclonal antibodies against carcinomebryonal antigens and their uses
EP4430072A1 (en) 2021-11-10 2024-09-18 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
TW202337494A (zh) 2021-11-16 2023-10-01 美商建南德克公司 用莫蘇妥珠單抗治療全身性紅斑狼瘡（ｓｌｅ）之方法及組成物
CA3235206A1 (en) 2021-11-16 2023-05-25 Davide BASCO Novel molecules for therapy and diagnosis
EP4437006A1 (en) 2021-11-26 2024-10-02 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of anti-tyrp1/anti-cd3 bispecific antibodies and tyrp1-specific antibodies
EP4445911A4 (en) 2021-12-06 2025-10-22 Beijing Solobio Genetechnology Co Ltd BISPECIFIC ANTIBODY THAT BINDS SPECIFICALLY TO KLEBSIELLA PNEUMONIAE O1 AND O2 ANTIGENS AND COMPOSITION
AR127887A1 (es) 2021-12-10 2024-03-06 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y plap
CA3237618A1 (en) 2021-12-15 2023-06-22 Genentech, Inc. Stabilized il-18 polypeptides and uses thereof
EP4448578A4 (en) 2021-12-17 2026-02-18 Shanghai Henlius Biotech Inc ANTI-OX40 ANTIBODIES, MULTI-SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE
WO2023109901A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-ox40 antibodies and methods of use
CR20240246A (es) 2021-12-20 2024-07-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos agonistas anti-ltbr y anticuerpos biespecificos que los comprenden
UY40097A (es) 2022-01-07 2023-07-14 Johnson & Johnson Entpr Innovation Inc Materiales y métodos de proteínas de unión a il-1b
WO2023141445A1 (en) 2022-01-19 2023-07-27 Genentech, Inc. Anti-notch2 antibodies and conjugates and methods of use
CA3249820A1 (en) * 2022-02-08 2023-08-17 Amgen Inc. OCRELIZUMAB CODON-OPTIMIZED NUCLEIC ACIDS
EP4476251A1 (en) 2022-02-10 2024-12-18 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Human monoclonal antibodies that broadly target coronaviruses
IL315043A (en) 2022-02-16 2024-10-01 Ac Immune Sa Humanized anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
EP4479431A1 (en) 2022-02-18 2024-12-25 Rakuten Medical, Inc. Anti-programmed death-ligand 1 (pd-l1) antibody molecules, encoding polynucleotides, and methods of use
US20250243260A1 (en) 2022-03-07 2025-07-31 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins of variant cd80 polypeptides, cell therapies and related methods and uses
CA3245693A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Vivasor, Inc. ANTIBODY-DRUG CONJUGATIONS AND THEIR USES
CN119562970A (zh) 2022-03-18 2025-03-04 进化免疫治疗公司 双特异性抗体融合分子及其使用方法
CA3251878A1 (en) 2022-03-23 2023-09-28 Genentech, Inc. COMBINED TREATMENT COMBINING AN ANTI-CD20/ANTI-CD3 BISPECIFIC ANTIBODY AND CHEMOTHERAPY
JP2025514610A (ja) 2022-03-25 2025-05-09 シャンハイ・ヘンリウス・バイオテック・インコーポレイテッド 抗ｍｓｌｎ抗体及び使用方法
US20250197482A1 (en) 2022-03-26 2025-06-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Bispecific antibodies to hiv-1 env and their use
EP4499228A1 (en) 2022-03-28 2025-02-05 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
JP2025511000A (ja) 2022-03-28 2025-04-15 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト インターフェロンガンマバリアントおよびこれを含む抗原結合分子
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4504775A1 (en) 2022-04-08 2025-02-12 AC Immune SA Anti-tdp-43 binding molecules
JP2025512342A (ja) 2022-04-13 2025-04-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド 治療用タンパク質の医薬組成物および使用方法
EP4508081A1 (en) 2022-04-13 2025-02-19 F. Hoffmann-La Roche AG Pharmaceutical compositions of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and methods of use
EP4511395A1 (en) 2022-04-20 2025-02-26 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments pan-specifically binding to gremlin-1 and gremlin-2 and uses thereof
CN119137157A (zh) 2022-05-03 2024-12-13 基因泰克公司 抗Ly6E抗体、免疫缀合物及其用途
EP4524158A4 (en) 2022-05-09 2025-12-17 Staidson Beijing Biopharmaceuticals Co Ltd Antibody that specifically recognizes gdf15 and use thereof
AR129268A1 (es) 2022-05-11 2024-08-07 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a e il6 y métodos de uso
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023235699A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to lilrb4 and uses thereof
US11965032B1 (en) 2022-06-01 2024-04-23 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
US11814439B1 (en) 2022-06-01 2023-11-14 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
US11807689B1 (en) 2022-06-01 2023-11-07 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
US11884740B1 (en) 2022-06-01 2024-01-30 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
CN119856056A (zh) 2022-06-07 2025-04-18 基因泰克公司 用于确定包括抗pd-l1拮抗剂和抗tight拮抗剂抗体的肺癌治疗的疗效的方法
WO2023239803A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Angiex, Inc. Anti-tm4sf1 antibody-drug conjugates comprising cleavable linkers and methods of using same
WO2023237706A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
CA3261147A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Genentech, Inc. DOSAGE FOR TREATMENT WITH BISOPECIFIC ANTI-FCRH5/ANTI-CD3 ANTIBODIES
US20260035464A1 (en) 2022-07-19 2026-02-05 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing b- and t-lymphocyte attenuator (btla) and uses thereof
CN119604530A (zh) 2022-07-19 2025-03-11 基因泰克公司 用抗fcrh5/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药
EP4558528A1 (en) 2022-07-22 2025-05-28 Genentech, Inc. Anti-steap1 antigen-binding molecules and uses thereof
WO2024030829A1 (en) 2022-08-01 2024-02-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase
WO2024030956A2 (en) 2022-08-03 2024-02-08 Mozart Therapeutics, Inc. Cd39-specific binding agents and methods of using the same
CA3263779A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Janssen Biotech, Inc. CD98 LINKAGE CONSTRUCTIONS FOR THE TREATMENT OF BRAIN TUMORS
CN120077064A (zh) 2022-08-05 2025-05-30 詹森生物科技公司 用于治疗脑肿瘤的转铁蛋白受体结合蛋白
IL318702A (en) 2022-08-19 2025-03-01 Evive Biotechnology Shanghai Ltd Compositions containing G-CSF and their uses
TW202423979A (zh) 2022-08-22 2024-06-16 美商雅博得樂醫療公司 Dll3結合分子及其用途
CN120435310A (zh) 2022-08-26 2025-08-05 朱诺治疗学股份有限公司 对δ样配体3（DLL3）具有特异性的抗体和嵌合抗原受体
CN120153254A (zh) 2022-09-01 2025-06-13 基因泰克公司 膀胱癌的治疗和诊断方法
WO2024054822A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth
CN120077071A (zh) 2022-09-07 2025-05-30 当康生物技术有限责任公司 抗vista构建体及其用途
WO2024064826A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
WO2024067344A1 (zh) 2022-09-27 2024-04-04 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别light的抗体及其应用
CN120344256A (zh) 2022-10-04 2025-07-18 高山免疫科学股份有限公司 突变的taci-fc融合蛋白用于在治疗自身抗体介导的疾病中的用途
IL319943A (en) 2022-10-07 2025-05-01 Genentech Inc Methods for treating cancer with anti-C motif chemokine receptor 8 (CCR8) antibodies
EP4606886A1 (en) 2022-10-20 2025-08-27 Beijing SoloBio Genetechnology Company Ltd. Antibody combination specifically binding to trail or fasl, and bispecific antibody
TW202426505A (zh) 2022-10-25 2024-07-01 美商建南德克公司 癌症之治療及診斷方法
WO2024094741A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with anti-cd19/anti-cd28 bispecific antibody
AU2023373363A1 (en) 2022-11-04 2025-05-08 Gilead Sciences, Inc. Anticancer therapies using anti-ccr8 antibody, chemo and immunotherapy combinations
AU2023375342A1 (en) 2022-11-08 2025-04-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome
IL320220A (en) 2022-11-09 2025-06-01 Cis Biopharma Ag Antibodies against L1-CAM and their uses for diagnostic and therapeutic applications
WO2024100170A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a*02/foxp3
KR20250106304A (ko) 2022-11-17 2025-07-09 사노피 Ceacam5 항체-약물 접합체 및 이의 사용 방법
IL320881A (en) 2022-11-25 2025-07-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for producing protein
WO2024120516A1 (zh) 2022-12-08 2024-06-13 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 特异性结合rsv的抗体
WO2024126457A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Astellas Pharma Europe Bv Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and immune checkpoint inhibitors
WO2024137381A1 (en) 2022-12-19 2024-06-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies for treating sars-cov-2 infection
WO2024145398A1 (en) 2022-12-27 2024-07-04 Yale University Antibody drug conjugates
TW202432607A (zh) 2023-01-18 2024-08-16 美商建南德克公司 多特異性抗體及其用途
EP4655007A1 (en) 2023-01-23 2025-12-03 Yale University Antibody oligonucleotide conjugates
WO2024156672A1 (en) 2023-01-25 2024-08-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to csf1r and cd3
WO2024163009A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating urothelial bladder cancer
WO2024163494A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating non-small cell lung cancer and triple-negative breast cancer
EP4665392A2 (en) 2023-02-14 2025-12-24 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Combination of bispecific antibodies and chimeric antigen receptor t cells for treatment
AU2024221136A1 (en) 2023-02-17 2025-10-02 Ablynx N.V. Polypeptides binding to the neonatal fc receptor
EP4676596A1 (en) 2023-03-08 2026-01-14 AC Immune SA Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
WO2024191785A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Genentech, Inc. Fusions with proteases and uses thereof
WO2024188965A1 (en) 2023-03-13 2024-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and an hla-g t cell bispecific antibody
WO2024197302A1 (en) 2023-03-23 2024-09-26 Yale University Compositions and methods for delivering antibody oligonucleotide conjugates for exon skipping
TW202446789A (zh) 2023-03-31 2024-12-01 美商建南德克公司 抗αｖβ８整合素抗體及使用方法
EP4687997A2 (en) 2023-04-05 2026-02-11 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
EP4687995A1 (en) 2023-04-05 2026-02-11 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
EP4687996A1 (en) 2023-04-05 2026-02-11 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024212827A1 (en) 2023-04-12 2024-10-17 Shanghai Kangabio Co., Limited Multifunctional molecules comprising masked interleukin 12 and methods of use
CN121263210A (zh) 2023-04-17 2026-01-02 沛科生物公司 抗体和抗体-药物偶联物以及使用方法和合成工艺及中间体
CN121335716A (zh) 2023-04-19 2026-01-13 第一三共株式会社 抗体-药物缀合物和其他药物的组合
AU2024270495A1 (en) 2023-05-05 2025-10-09 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
AU2024269754A1 (en) 2023-05-08 2025-10-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Targeted interferon alpha fusion proteins and methods of use
KR20260008790A (ko) 2023-05-10 2026-01-16 제넨테크, 인크. 암 치료 방법 및 조성물
TW202509065A (zh) 2023-05-16 2025-03-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 經ｐｄ－１調節之ｉｌ－２免疫結合物及其用途
WO2024243355A1 (en) 2023-05-24 2024-11-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies that target the rh5 complex of blood-stage plasmodium falciparum
AU2024275646A1 (en) 2023-05-24 2025-11-13 Mozart Therapeutics, Inc. Cd8-specific binding proteins and methods of using the same
TW202448953A (zh) 2023-06-01 2024-12-16 法商皮爾法伯製藥公司 用於腫瘤及轉移之治療的基於沉默抗體的抗met建構物
CN121285742A (zh) 2023-06-08 2026-01-06 基因泰克公司 用于淋巴瘤的诊断和治疗方法的巨噬细胞特征
WO2024251199A1 (zh) 2023-06-09 2024-12-12 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性结合masp3的抗体以及特异性结合masp3和masp2的多特异性抗体
WO2024255794A1 (zh) 2023-06-16 2024-12-19 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别因子XIIa的抗体及其应用
WO2024263761A1 (en) 2023-06-22 2024-12-26 Genentech, Inc. Antibodies and uses thereof
CN121443309A (zh) 2023-06-22 2026-01-30 基因泰克公司 多发性骨髓瘤的治疗
WO2024263195A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
WO2024263904A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
AU2024309736A1 (en) 2023-06-30 2026-01-15 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd G-csf dimer for use in the treatment or prevention of chemotherapy or radiotherapy induced neutropenia
AU2024296940A1 (en) 2023-07-07 2026-01-29 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Humanized 40h3 antibody
TW202517294A (zh) 2023-07-11 2025-05-01 美商建南德克公司 用於治療多發性硬化症之組成物及方法
AU2024300009A1 (en) 2023-07-21 2026-01-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bispecific antibodies that broadly target coronaviruses
AU2024300993A1 (en) 2023-07-26 2026-01-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2025027052A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Sixpeaks Bio Ag Antibody conjugates and fusion proteins
WO2025034806A1 (en) 2023-08-08 2025-02-13 Wisconsin Alumni Research Foundation Single-domain antibodies and variants thereof against fibroblast activation protein
WO2025032070A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-a-beta protein antibodies, methods and uses thereof
WO2025032069A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
WO2025032071A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
WO2025038492A1 (en) 2023-08-11 2025-02-20 Abalytics Oncology, Inc. Anti-ctla-4 antibodies and related binding molecules and methods and uses thereof
WO2025049905A1 (en) 2023-09-01 2025-03-06 Gennao Bio, Inc. Dnase co-expression in host cells
WO2025045250A1 (en) 2023-09-03 2025-03-06 Kira Pharmaceuticals (Us) Llc Anti-human factor d antibody constructs and uses thereof
WO2025054500A2 (en) 2023-09-08 2025-03-13 Mlab Biosciences, Inc. Bifunctional proteins and uses thereof
WO2025059037A1 (en) 2023-09-11 2025-03-20 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules targeting b7-h4 and cd3 and methods of use thereof
WO2025064539A1 (en) 2023-09-19 2025-03-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Herv-e antibodies and methods of their use
WO2025064885A1 (en) 2023-09-20 2025-03-27 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Multispecific antibodies that bind cd3 and cd2 and methods of use thereof
WO2025064890A1 (en) 2023-09-20 2025-03-27 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules targeting cd180 and cd3 and methods of use thereof
AR133909A1 (es) 2023-09-25 2025-11-12 Hoffmann La Roche ANTICUERPO QUE SE UNE A C3bBb
TW202535954A (zh) 2023-09-26 2025-09-16 丹麥商珍美寶股份有限公司 Ｐｔｋ７結合劑、其共軛物及使用彼等之方法
TW202517674A (zh) 2023-10-19 2025-05-01 德商拜耳廠股份有限公司 抗gpc3抗體及其放射性結合物
WO2025099120A1 (en) 2023-11-09 2025-05-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies with conditional activity
WO2025106474A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for treating cancer with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2025106427A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing and protective monoclonal antibodies against respiratory syncytial virus (rsv)
WO2025111402A1 (en) 2023-11-21 2025-05-30 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Anti-amyloid beta antibodies and related compositions and methods thereof
TW202535955A (zh) 2023-11-27 2025-09-16 丹麥商珍美寶股份有限公司 用於ｐｔｋ７檢測之抗體及方法
WO2025117516A1 (en) 2023-11-30 2025-06-05 Genzyme Corporation Methods for treating cd20-related disorders
WO2025117384A1 (en) 2023-12-01 2025-06-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Broadly neutralizing influenza hemagglutinin stem-directed antibodies
WO2025120867A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and anti-vegfr2 antibodies
WO2025120866A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
TW202541837A (zh) 2023-12-08 2025-11-01 日商安斯泰來製藥公司 含有結合至cldn18.2和cd3之雙特異性結合劑和穩定或增加cldn18.2表現之藥劑之組合療法
WO2025125118A1 (en) 2023-12-11 2025-06-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Protease activatable fc domain binding molecules
WO2025125386A1 (en) 2023-12-14 2025-06-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that bind to folr1 and methods of use
WO2025137410A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 Apogee Therapeutics, Inc. Pharmaceutical compositions of anti-il-13 antibodies with and without c-terminal lysine
TW202535949A (zh) 2023-12-20 2025-09-16 美商必治妥美雅史谷比公司 靶向IL-18受體β(IL-18RB)之抗體及相關方法
WO2025132503A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to ceacam5
WO2025137523A2 (en) 2023-12-20 2025-06-26 Apogee Therapeutics, Inc. Pharmaceutical formulations of antibodies that bind interleukin 13
WO2025133290A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Temper Bio Protein for immune regulation
WO2025137284A2 (en) 2023-12-21 2025-06-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Broadly neutralizing antibodies against sars-cov-2 and sars-cov variants
WO2025133042A2 (en) 2023-12-22 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Activatable fusion proteins and methods of use
WO2025149661A1 (en) 2024-01-10 2025-07-17 Genmab A/S Slitrk6 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2025149633A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Laigo Bio B.V. Bispecific antigen binding proteins
WO2025179281A1 (en) 2024-02-23 2025-08-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Treatment of cardiovascular disease with antxr1 antibodies
WO2025184416A1 (en) 2024-02-27 2025-09-04 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Single-domain antibodies and bispecific antibodies against hiv-1 and their use
WO2025184421A1 (en) 2024-02-28 2025-09-04 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors and antibodies specific for delta-like ligand 3 (dll3) and related methods
WO2025181219A1 (en) 2024-02-29 2025-09-04 Genmab A/S Egfr and c-met bispecific binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2025181189A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2025186332A1 (en) 2024-03-05 2025-09-12 Ac Immune Sa Vectorized anti-tdp-43 antibodies
WO2025199352A2 (en) 2024-03-20 2025-09-25 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies specific for solute carrier family 34 member 2 (slc34a2)
US20250295801A1 (en) 2024-03-21 2025-09-25 Seagen Inc. Cd25 antibodies, antibody drug conjugates, and uses thereof
WO2025215060A1 (en) 2024-04-11 2025-10-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that specifically bind modified oligonucleotides
WO2025215124A2 (en) 2024-04-12 2025-10-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination treatment of glofitamab and chemotherapy
WO2025222129A2 (en) 2024-04-19 2025-10-23 Mozart Therapeutics, Inc. Engineered cytokines and targeted cytokine delivery
WO2025226603A1 (en) 2024-04-22 2025-10-30 Surface Oncology, LLC Methods for treating cancer using anti-ccr8 antibodies
WO2025226808A1 (en) 2024-04-24 2025-10-30 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
WO2025233266A1 (en) 2024-05-07 2025-11-13 Innate Pharma Use of cd39 blocking agents in combination with anti-cd20 x cd3 t cell engagers
WO2025233264A1 (en) 2024-05-07 2025-11-13 Innate Pharma Use of cd73 blocking agents in combination with anti-cd20 x cd3 t cell engagers
WO2025240670A2 (en) 2024-05-15 2025-11-20 Abalytics Oncology, Inc. Anti-pd-1 antibodies and related binding molecules and methods and uses thereof
WO2025238187A1 (en) 2024-05-15 2025-11-20 Cis Biopharma Ag Immunoconjugates targeting l1-cam
WO2025238135A2 (en) 2024-05-17 2025-11-20 UCB Biopharma SRL Antibody with binding specificity for il-11
WO2025238133A1 (en) 2024-05-17 2025-11-20 UCB Biopharma SRL Multispecific antibody with binding specificity for il-11 and il-17
WO2025242909A1 (en) 2024-05-24 2025-11-27 Paul Scherrer Institut CD30-targeting antibody-radioligand conjugates and their therapeutic use
WO2025250969A1 (en) 2024-05-31 2025-12-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Anti-cd74 antibodies, conjugates and uses thereof
WO2025255353A1 (en) 2024-06-06 2025-12-11 Apogee Therapeutics, Inc. Dosage and administration of an anti-ox40l antibody
WO2025262564A1 (en) 2024-06-17 2025-12-26 Pfizer Inc. Use of anti-cxcr5 antibodies
WO2025264972A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 Apogee Therapeutics, Inc. Antibodies that bind il-4r alpha and antibodies that bind
WO2025264960A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 Apogee Therapeutics, Inc. Antibodies that bind il-13 and antibodies that bind ox40l
WO2026013218A1 (en) 2024-07-10 2026-01-15 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 vectors, binding molecules and uses thereof
EP4684803A1 (en) 2024-07-25 2026-01-28 CeMM - Forschungszentrum für Molekulare Medizin GmbH Antibody conjugated chemical inducers of degradation of rbm39 and therapeutic uses thereof
WO2026030464A1 (en) 2024-07-30 2026-02-05 Genentech, Inc. Dosage regimen for reducing cytokine release syndrome (crs) with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies in multiple myeloma therapy
WO2026030473A1 (en) 2024-07-31 2026-02-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services West nile virus neutralizing monoclonal antibodies

Family Cites Families (105)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2002128A (en) * 1934-02-19 1935-05-21 Ray A Reidenbaugh Display rack
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
US5618920A (en) * 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US5576195A (en) * 1985-11-01 1996-11-19 Xoma Corporation Vectors with pectate lyase signal sequence
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
US6893625B1 (en) * 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) * 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5506126A (en) * 1988-02-25 1996-04-09 The General Hospital Corporation Rapid immunoselection cloning method
HUT53672A (en) 1988-02-25 1990-11-28 Gen Hospital Corp Quick immunoselective cloning process
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
US4861579A (en) * 1988-03-17 1989-08-29 American Cyanamid Company Suppression of B-lymphocytes in mammals by administration of anti-B-lymphocyte antibodies
FI891226L (fi) 1988-04-28 1989-10-29 Univ Leland Stanford Junior Reseptordeterminanter i anti-t-celler foer behandling av autoimmunsjukdom.
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
DE69006018T3 (de) 1989-03-21 2004-01-15 Immune Response Corp Inc Impfung und methoden gegen krankheiten, die von pathologischen reaktionen der spezifischen t-zellen abstammen.
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
IL95125A (en) 1989-07-19 1995-07-31 Vandenbark Arthur Allen T cell peptides receive a method for their selection and preparation, and pharmaceutical preparations containing them
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
DE69233254T2 (de) * 1991-06-14 2004-09-16 Genentech, Inc., South San Francisco Humanisierter Heregulin Antikörper
JP3951062B2 (ja) 1991-09-19 2007-08-01 ジェネンテック・インコーポレーテッド 少なくとも遊離のチオールとして存在するシステインを有する抗体フラグメントの大腸菌での発現、２官能性Ｆ（ａｂ’）２抗体の産生のための使用
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
EP0752248B1 (en) * 1992-11-13 2000-09-27 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US5736137A (en) * 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US5417972A (en) 1993-08-02 1995-05-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of killing B-cells in a complement independent and an ADCC independent manner using antibodies which specifically bind CDIM
US5595721A (en) * 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US20010056066A1 (en) * 1996-07-26 2001-12-27 Smithkline Beecham Corporation Method of treating immune cell mediated systemic diseases
US6306393B1 (en) * 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
ES2190087T3 (es) 1997-06-13 2003-07-16 Genentech Inc Formulacion estabilizada de un anticuerpo.
US6171586B1 (en) * 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
JP2002506353A (ja) 1997-06-24 2002-02-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド ガラクトシル化糖タンパク質の方法及び組成物
WO1999002567A2 (en) * 1997-07-08 1999-01-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for producing homoconjugates of antibodies which induce growth arrest or apoptosis of tumor cells
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6194551B1 (en) * 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6242195B1 (en) * 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
DK1068241T3 (da) 1998-04-02 2008-02-04 Genentech Inc Antistofvarianter og fragmenter deraf
US6528624B1 (en) * 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
CN1320044A (zh) * 1998-08-11 2001-10-31 Idec药物公司 包括施用抗－cd20抗体的b－细胞淋巴瘤联合疗法
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
EP1131093A4 (en) 1998-11-09 2002-05-02 Idec Pharma Corp TREATMENT OF HEMATOLOGICAL VILTIES ASSOCIATED WITH CIRCULATING TUMOR CELLS USING CHIMERIC ANTI-CD20 ANTIBODIES
KR20010099788A (ko) 1998-11-09 2001-11-09 케네쓰 제이. 울코트 Ｂｍｔ 또는 ｐｂｓｃ 이식을 받은 환자의 키메라항-ｃｄ２０ 항체 치료법
US6737056B1 (en) * 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
MX353234B (es) 1999-01-15 2018-01-08 Genentech Inc Variantes de polipeptidos con función efectora alterada.
US6897044B1 (en) 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
US6383276B1 (en) * 1999-03-12 2002-05-07 Fuji Photo Film Co., Ltd. Azomethine compound and oily magenta ink
EP1176981B1 (en) 1999-05-07 2005-11-30 Genentech, Inc. Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
DE05075555T1 (de) 1999-06-09 2007-02-08 Immunomedics, Inc. Immuntherapie von Autoimmunerkrankungen durch die Verwendung von B-Zell-spezifischen Antikörpern
ITMI991299A1 (it) * 1999-06-11 2000-12-11 Consiglio Nazionale Ricerche Uso di anticorpi contro antigeni di superficie per il trattamento della malattia trapianto contro ospite
DE19930748C2 (de) * 1999-07-02 2001-05-17 Infineon Technologies Ag Verfahren zur Herstellung von EEPROM- und DRAM-Grabenspeicherzellbereichen auf einem Chip
JP2003528805A (ja) 1999-07-12 2003-09-30 ジェネンテック・インコーポレーテッド Ｃｄ２０に結合するアンタゴニストを用いた異種抗原に対する免疫応答のブロッキング
AU784971B2 (en) 1999-08-11 2006-08-10 Biogen Inc. Treatment of patients having non-Hodgkins lymphoma with bone marrow involvement with anti-CD20 antibodies
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
US6451284B1 (en) 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
AU6929100A (en) * 1999-08-23 2001-03-19 Biocrystal Limited Methods and compositions for immunotherapy of b cell involvement in promotion ofa disease condition comprising multiple sclerosis
US20020006404A1 (en) * 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
MXPA02004599A (es) * 1999-11-08 2002-10-23 Idec Pharma Corp Tratamiento de tumores malignos de celula b utilizando anticuerpos anti-cd40l en combinacion con anticuerpos anti-cd20 y/o agentes quimioterapeuticos y radioterapia.
US20020009427A1 (en) * 2000-03-24 2002-01-24 Wolin Maurice J. Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
US20030185796A1 (en) * 2000-03-24 2003-10-02 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
MXPA02009626A (es) 2000-03-31 2003-05-14 Idec Pharma Corp Uso combinado de anticuerpos anti-citocina o antagonistas y anti-cd20 para el tratamiento de linfoma de celulas b.
PL357939A1 (pl) * 2000-04-11 2004-08-09 Genentech, Inc. Wielowartościowe przeciwciała i sposób ich zastosowania
EP1286692A4 (en) 2000-04-25 2004-11-17 Idec Pharma Corp INTRATHECAL ADMINISTRATION OF RITUXIMAB FOR THE TREATMENT OF LYMPHOMAS OF THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM
EP1299128A2 (en) 2000-06-20 2003-04-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Cold anti-cd20 antibody/radiolabeled anti-cd22 antibody combination
SI1296714T1 (sl) * 2000-06-22 2010-01-29 S For Entpr University Of Iowa Kombinacija CpG-ja in protiteles, usmerjenih proti CD19, CD20, CD22 ali CD40 za zdravljenje ali preprečevanje raka
JP2004502742A (ja) 2000-07-12 2004-01-29 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション Ｂ細胞を消滅させる抗体及び免疫調節抗体を併用するｂ細胞悪性疾患の治療関連出願
US20020058029A1 (en) * 2000-09-18 2002-05-16 Nabil Hanna Combination therapy for treatment of autoimmune diseases using B cell depleting/immunoregulatory antibody combination
US20020128448A1 (en) * 2000-10-20 2002-09-12 Idec Pharmaceuticals Corporation Variant IgG3 Rituxan and therapeutic use thereof
WO2002072636A2 (en) * 2000-12-28 2002-09-19 Altus Biologics Inc. Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them
AU2002327164A1 (en) 2001-01-29 2002-12-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Engineered tetravalent antibodies and methods of use
CN1494553A (zh) 2001-01-29 2004-05-05 IDECҩ�﹫˾ 改变的抗体及其使用方法
US20030103971A1 (en) 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
AU2002307037B2 (en) 2001-04-02 2008-08-07 Biogen Idec Inc. Recombinant antibodies coexpressed with GnTIII
JP4679035B2 (ja) * 2001-04-02 2011-04-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 併用療法
WO2003061694A1 (en) 2001-05-10 2003-07-31 Seattle Genetics, Inc. Immunosuppression of the humoral immune response by anti-cd20 antibodies
AU2002315168A1 (en) 2001-06-14 2003-01-02 Intermune, Inc. Combination therapy of gamma-interferon and b cell specific antibodies
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
EP2131198B1 (en) * 2001-09-20 2013-03-27 Board of Regents, The University of Texas System Measuring circulating therapeutic antibody, antigen and antigen/antibody complexes using ELISA assays
CA2463879C (en) * 2001-10-25 2012-12-04 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US7127096B2 (en) * 2001-11-20 2006-10-24 Accuimage Diagnostics Corp. Method and software for improving coronary calcium scoring consistency
WO2003049694A2 (en) 2001-12-07 2003-06-19 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
US20040093621A1 (en) * 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
WO2003068821A2 (en) * 2002-02-14 2003-08-21 Immunomedics, Inc. Anti-cd20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
US20040002587A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20030180292A1 (en) * 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
US20030219818A1 (en) * 2002-05-10 2003-11-27 Bohen Sean P. Methods and compositions for determining neoplastic disease responsiveness to antibody therapy
AU2003294210A1 (en) 2002-07-31 2004-05-04 Seattle Genetics, Inc Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
ES2524694T3 (es) 2002-10-17 2014-12-11 Genmab A/S Anticuerpos monoclonales humanos contra CD20
RS20100366A (sr) 2002-12-16 2011-04-30 Genentech, Inc. Varijante imunoglobulina i njihova upotreba
KR101092171B1 (ko) * 2003-04-09 2011-12-13 제넨테크, 인크. Ｔｎｆ-알파 저해제에 대해 부적절한 반응을 하는환자에서의 자가면역 질환의 치료법
AR044388A1 (es) * 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
BRPI0510915A (pt) 2004-06-04 2007-11-13 Genentech Inc método para o tratamento da esclerose múltipla e artigo manufaturado
AU2006251647A1 (en) * 2005-05-20 2006-11-30 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
US8144978B2 (en) * 2007-08-01 2012-03-27 Tandent Vision Science, Inc. System and method for identifying complex tokens in an image
KR101041914B1 (ko) * 2008-06-26 2011-06-15 부산대학교 산학협력단 셀레늄에 의해 탈분화된 세포, 이의 제조방법 및 이의 용도
TW201438738A (zh) * 2008-09-16 2014-10-16 建南德克公司 治療進展型多發性硬化症之方法

Also Published As

Publication number Publication date
ES2633311T3 (es) 2017-09-20
CN103833854B (zh) 2017-12-12
FR18C1023I1 (pl) 2018-07-13
AR072523A2 (es) 2010-09-01
KR20070055625A (ko) 2007-05-30
KR20050086913A (ko) 2005-08-30
CL2008003323A1 (es) 2009-03-06
HUP0500954A2 (en) 2007-09-28
US20060024300A1 (en) 2006-02-02
WO2004056312A3 (en) 2005-05-26
HUS1800030I1 (hu) 2018-07-30
CR11367A (es) 2010-07-23
NZ566907A (en) 2009-10-30
BRPI0316779B1 (pt) 2020-04-28
HK1074208A1 (en) 2005-11-04
PL377328A1 (pl) 2006-01-23
SI2289936T1 (sl) 2017-10-30
AU2003301079B2 (en) 2011-06-23
HUE035898T2 (en) 2018-05-28
DK2289936T3 (en) 2017-07-31
US7799900B2 (en) 2010-09-21
US20140154242A1 (en) 2014-06-05
CY2018009I2 (el) 2018-06-27
HRP20050649A2 (en) 2005-12-31
EP1572744B1 (en) 2010-06-09
CA2507898A1 (en) 2004-07-08
RU2326127C2 (ru) 2008-06-10
US20090155257A1 (en) 2009-06-18
RS20050467A (sr) 2007-08-03
JP2009159950A (ja) 2009-07-23
JP4351674B2 (ja) 2009-10-28
UA89350C2 (uk) 2010-01-25
EP3263596A1 (en) 2018-01-03
FR18C1023I2 (fr) 2019-05-17
TW200501982A (en) 2005-01-16
TW201000132A (en) 2010-01-01
ATE470675T1 (de) 2010-06-15
NO20053435L (no) 2005-08-31
SI1572744T1 (sl) 2010-09-30
WO2004056312A2 (en) 2004-07-08
IL168754A (en) 2011-09-27
AU2003301079C1 (en) 2018-03-08
CY1110759T1 (el) 2015-06-10
US20220002430A1 (en) 2022-01-06
CN103833854A (zh) 2014-06-04
US20170158773A1 (en) 2017-06-08
NO338402B1 (no) 2016-08-15
EP2289936A1 (en) 2011-03-02
MXPA05006511A (es) 2006-02-17
RS20100366A (sr) 2011-04-30
BE2018C021I2 (pl) 2023-03-07
EP1572744A2 (en) 2005-09-14
HRP20050649B1 (hr) 2016-06-17
DE60332957D1 (de) 2010-07-22
EP1944320A1 (en) 2008-07-16
RS51318B (sr) 2010-12-31
SG2013036975A (en) 2016-07-28
EP2289936B1 (en) 2017-05-31
JP5885457B2 (ja) 2016-03-15
US20190071511A1 (en) 2019-03-07
US8562992B2 (en) 2013-10-22
BR0316779A (pt) 2005-11-01
BRPI0316779B8 (pt) 2023-02-28
TWI335821B (en) 2011-01-11
AR042485A1 (es) 2005-06-22
CR7875A (es) 2008-11-07
PT1572744E (pt) 2010-09-07
ES2347241T3 (es) 2010-10-27
AR093046A2 (es) 2015-05-13
HU227217B1 (en) 2010-11-29
CY2018009I1 (el) 2018-06-27
RU2005122448A (ru) 2006-03-20
KR100910433B1 (ko) 2009-08-04
AU2003301079A1 (en) 2004-07-14
CA2507898C (en) 2014-02-18
JP2012044997A (ja) 2012-03-08
IL214083A0 (en) 2011-08-31
JP2006517399A (ja) 2006-07-27
US20060034835A1 (en) 2006-02-16
DK1572744T3 (da) 2010-09-20
MA27704A1 (fr) 2006-01-02
EP1572744A4 (en) 2006-07-12
EP2301966A1 (en) 2011-03-30
HK1248731A1 (en) 2018-10-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220002430A1 (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
CN100460421C (zh) 免疫球蛋白变体及其用途
HK1154871A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1156047A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1120058A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1074208B (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1154871B (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1129406B (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1129406A (zh) 免疫球蛋白變體及其用途
HK1129405A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1129407A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification