PL212899B1 - Humanizowane przeciwcialo, kompozycja zawierajaca to przeciwcialo, wyrób fabryczny, przeciwcialo lub jego fragment do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy, izolowany kwas nukleinowy, wektor ekspresji, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciala lub jego fragmentu, plynny preparat i zastosowanie przeciwciala do wytwarzania leku - Google Patents

Humanizowane przeciwcialo, kompozycja zawierajaca to przeciwcialo, wyrób fabryczny, przeciwcialo lub jego fragment do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy, izolowany kwas nukleinowy, wektor ekspresji, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciala lub jego fragmentu, plynny preparat i zastosowanie przeciwciala do wytwarzania leku

Info

Publication number
PL212899B1
PL212899B1 PL377328A PL37732803A PL212899B1 PL 212899 B1 PL212899 B1 PL 212899B1 PL 377328 A PL377328 A PL 377328A PL 37732803 A PL37732803 A PL 37732803A PL 212899 B1 PL212899 B1 PL 212899B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
antibody
antigen
binding fragment
use according
disease
Prior art date
Application number
PL377328A
Other languages
English (en)
Other versions
PL377328A1 (pl
Inventor
Camellia W. Adams
Andrew C. Chan
Craig W. Crowley
Henry B. Lowman
Gerald R. Nakamura
Leonard G. Presta
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=32685285&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL212899(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of PL377328A1 publication Critical patent/PL377328A1/pl
Publication of PL212899B1 publication Critical patent/PL212899B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/16—Animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Neurology (AREA)

Description

Opis wynalazku
Dziedzina wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest humanizowane przeciwciało, kompozycja zawierająca to przeciwciało, wyrób fabryczny, przeciwciało lub jego fragment do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy, izolowany kwas nukleinowy, wektor ekspresji, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała lub jego fragmentu, płynny preparat i zastosowanie przeciwciała do wytwarzania leku. Lek jest do leczenia u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego oraz do leczenia choroby autoimmunologicznej.
Stan techniki
Limfocyty są jedną z kilku populacji białych krwinek; specyficznie rozpoznają i odpowiadają na obcy antygen. Trzema głównymi klasami limfocytów są limfocyty B (komórki B), limfocyty T (komórki T), komórki naturalnych zabójców (NK, ang. natural killers). Limfocyty B są komórkami odpowiedzialnymi za produkcję przeciwciał i dostarczanie odpowiedzi humoralnej. Komórki B dojrzewają w szpiku kostnym i opuszczając szpik wyrażają (ekspresja) przeciwciało wiążące antygen na swojej powierzchni komórkowej. Kiedy dziewicza komórka B napotyka po raz pierwszy antygen, dla którego jej związane z błoną przeciwciało jest specyficzne, ta komórka zaczyna się szybko dzielić a jej potomstwo różnicuje się w komórki B pamięci i komórki efektorowe nazywane komórkami plazmatycznymi. Komórki B pamięci posiadają dłuższy czas życia i kontynuują ekspresję przeciwciała związanego z błoną z tą samą specyficznością jak oryginalne komórki rodzicielskie. Komórki plazmatyczne nie wytwarzają przeciwciała związanego z błoną, ale zamiast tego wytwarzają sekrecyjną postać przeciwciała. Przeciwciała sekrecyjne są głównymi cząsteczkami efektorowymi odporności humoralnej.
Antygen CD20 (zwany także ludzkim antygenem różnicowania ograniczonym do limfocytów B, Bp35) jest hydrofobowym białkiem międzybłonowym z masą cząsteczkową około 35 kD położonym na limfocytach pre-B i dojrzałych limfocytach B (Valentine i wsp. J. Biol. Chem. 264(19):11282-11287 (1989); oraz Einfeld i wsp. EMBO J. 7(3):711-717 (1988)). Antygen ulega także ekspresji w więcej niż 90% chłoniaków nieziarniczych komórek B (NHL, ang. non-Hodgkin's lymphoma) (Anderson i wsp. Blood 63(6):1424-1433 (1984)), ale nie występuje na krwiotwórczych komórkach macierzystych lub innych zdrowych tkankach (Tedder i wsp. J. Immunol. 135(2):973-979 (1985)). Uważa się, że CD20 reguluje wczesny(e) etap(y) w procesie aktywacji w inicjacji cyklu komórkowego i różnicowaniu (Tedder i wsp., powyżej) i być może funkcjonuje jako kanał jonu wapnia (Tedder i wsp. J. Cell. Biochem. 14D: 195 (1990)).
Z powodu ekspresji CD20 w chłoniakach, ten antygen może być użytecznym celem terapeutycznym w leczeniu takich chłoniaków. W Stanach Zjednoczonych jest więcej niż 300000 osób z NHL komórek B i każdego roku diagnozuje się więcej niż 56000 nowych przypadków. Na przykład przeciwciało rituximab (RITUXAN®), które jest getycznie zaprojektowanym chimerycznym myszo/ludzkim przeciwciałem monoklonalnym skierowanym przeciwko ludzkiemu antygenowi CD20 (komercyjnie dostępnie z Genentech, Inc., Południowe San Francisco, Kalifornia, USA) jest stosowane do leczenia pacjentów z nawrotami lub opornymi mało zróżnicowanymi lub pęcherzykowatymi CD-dodatnimi chłoniakami nieziarniczymi komórek B. Rituximab jest przeciwciałem określonym jako C2B8 w Patencie USA Nr 5736137 wydanym 7 kwietnia 1998 (Anderson i wsp.) i Patencie USA Nr 5776456. Badania in vitro mechanizmu działania pokazały, że RITUXAN® wiąże ludzki dopełniacz i rozkłada linię Iimfoidalnych komórek B za pomocą zależnej od dopełniacza cytotoksyczności (CDC) (Reff i wsp. Blood 83(2): 435-445 (1994). Ponadto posiada znaczącą aktywność w oznaczeniach na komórkową cytotoksyczność zależną od przeciwciała (ADCC, ang. antibody-dependent cellular cytotoxicity). Przedkliniczne badania in vivo pokazały, że RITUXAN® usuwa komórki B z krwi obwodowej, węzłów chłonnych i szpiku kostnego małp Cynomolgus przypuszczalnie przez procesy z udziałem komórek i dopełniacza (Reff i wsp. Blood 83(2):435-445 (1994)). Inne przeciwciała anty-CD20 wskazane do leczenia NHL obejmują mysie przeciwciało Zevalin™, które jest połączone z radioizotopem, Itr-90 (IDEC Pharmaceuticals, San Diego, CA), Bexxar™, które jest innym całkowicie mysim przeciwciałem sprzężonym z I-131 (Corixa, WA).
Głównym ograniczeniem w zastosowaniu mysich przeciwciał w leczeniu człowieka jest ludzka odpowiedź przeciwko mysim przeciwciałom (HAMA, ang. human anti-mouse antibody response) (zobacz, np., Miller, R.A. i wsp. Monoclonal antibody therapeutic trials in seven patients with T-celllymphoma Blood, 62:988-995, 1983; oraz Schroff, R.W., i wsp. Human anti-murine immunoglobulin response in patients receiving monoclonal antibodytherapy Cancer Res., 45:879-885, 1985). Nawet himeryczne cząsteczki, w których domeny zmienne (V) przeciwciał otrzymanych z gryzoni są
PL 212 899 B1 poddane fuzji z ludzkimi regionami stałymi (C), są również zdolne do wywoływania znaczącej odpowiedzi immunologicznej (HACA, ludzkie przeciwciało przeciwko chimerze, ang. human anti-chimeric antibody) (Neuberger i wsp. Nature (Lond.), 314:268-270, 1985). Skutecznym podejściem do przezwyciężenia tych ograniczeń w klinicznym zastosowaniu przeciwciał monoklonalnych jest humanizacja mysiego przeciwciała lub przeciwciała z gatunków innych niż Iudzki (Jones i wsp. Nature (Lond), 321:522-525, 1986; Riechman i wsp., Nature (Lond), 332:323-327, 1988).
Zatem, korzystne jest wytworzenie terapeutycznych przeciwciał do antygenu CD20, które stwarzają minimalną lub brak antygenowości po podaniu pacjentom, szczególnie do leczenia przewlekłego. Niniejszy wynalazek zaspokaja tą i inne potrzeby. Niniejszy wynalazek dostarcza humanizowane przeciwciała anty-CD20, które przezwyciężają ograniczenia obecnych kompozycji terapeutycznych, jak również oferują dodatkowe korzyści, które będą oczywiste ze szczegółowego opisu poniżej.
Streszczenie wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest humanizowane przeciwciało, które wiąże ludzki CD20, lub jego fragment wiążący antygen, charakteryzujące się tym, że przeciwciało to zawiera region VH zawierający sekwencję VH przeciwciała hu2H7.v16 jak pokazano na Fig. 1B i region VL zawierający sekwencję przeciwciała hu2H7.v16 jak pokazano na Fig. 1A.
Zgodnie z korzystną postacią wynalazku przeciwciało to zawiera region VH, który jest przyłączony do regionu stałego łańcucha ludzkiej IgG. Bardziej korzystnie tą ludzką IgG jest IgG1 lub IgG3.
W innym korzystnym rozwiązaniu przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha ciężkiego i lekkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7, lub także korzystnie przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 8.
W kolejnym korzystnym rozwiązaniu przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest skuteczny w deplecji in vivo komórek B u naczelnych i że komórki B naczelnych pochodzą od człowieka lub małpy Cynomolgus. W bardziej korzystnych rozwiązaniach humanizowanego przeciwciała jak podano powyżej, przeciwciało to może być sprzężone ze środkiem cytotoksycznym. Takim środkiem cytotoksycznym korzystnie jest izotop radioaktywny lub toksyna.
Przedmiotem wynalazku jest kompozycja zawierająca przeciwciało lub fragment wiążący antygen według wynalazku jak zdefiniowano powyżej, oraz nośnik.
W kompozycji według wynalazku, korzystnie przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7, a nośnik stanowi farmaceutycznie akceptowalny nośnik.
Przedmiotem wynalazku jest także wyrób fabryczny zawierający pojemnik i kompozycję w nim zawartą, charakteryzujący się tym, że kompozycja ta zawiera przeciwciało lub fragment wiążący antygen jak zdefiniowano powyżej.
Wyrób fabryczny korzystnie zawiera ponadto ulotkę wskazującą, że kompozycja może być zastosowana do leczenia chłoniaka nieziarniczego lub reumatoidalnego zapalenia stawów.
Przedmiotem wynalazku jest również przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jak zdefiniowano powyżej, do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy w komórkach B in vivo, sposobie leczenia pacjentów z nowotworem CD20-dodatnim, lub w sposobie leczenia choroby autoimmunologicznej u pacjenta.
Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania w wyżej wymienionych sposobach, korzystnie charakteryzuje się tym, że nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak lub białaczka. Bardziej korzystnie, nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak nieziarniczy (NHL) lub ziarnica złośliwa z przewagą limfocytów (LPHD). Również korzystnie nowotworem jest przewlekła białaczka limfocytowa lub chłoniak z małych limfocytów.
W innym korzystnym rozwiązaniu przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego w dawce w zakresie około 275-375 mg/m2.
Również korzystnie przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania w le2 czeniu u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego w dawce w zakresie około 250 mg/m2 do około 500 mg/m2.
W następnym korzystnym rozwiązaniu przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu nowotworu CD20-dodatniego z co najmniej jednym czynnikiem chemioterapeutycznym.
PL 212 899 B1
W bardziej korzystnym rozwiązaniu nowotworem jest chłoniak nieziarniczy (NHL) a czynnikiem chemioterapeutycznym jest wybrany z grupy składającej się z doksorubicyny, cyklofosfamidu, winkrystyny oraz prednisolonu.
Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania korzystnie jest do podawania 2 w leczeniu u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego w co najmniej dwóch dawkach przy 375 mg/m2 na dawkę. Bardziej korzystnie dwie dawki podaje się w odstępie dwutygodniowym.
W następnym korzystnym wykonaniu wynalazku przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania charakteryzuje się tym, że choroba autoimmunologiczna jest wybrana z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenie stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenie stawów, tocznia rumieniowatego układowego (SLE), choroby Wegenera, choroby zapalna jelit, choroby Werlhofa (ITP), choroby Moschowitza (TTP), małopłytkowości o podłożu autoimmunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, miastenii rzekomoporaźnej, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych, natomiast chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów, przy czym pacjent może cierpieć z powodu średniego do ciężkiego reumatoidalnego zapalenia stawów i zawiodło leczenie co najmniej jednym lekiem przeciwreumatycznym modyfikującym chorobę.
Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według wynalazku jest do podawania pacjentowi do leczenia choroby autoimmunologicznej z drugim czynnikiem terapeutycznym. W bardziej korzystnym rozwiązaniu drugim czynnikiem terapeutycznym jest czynnik immunosupresyjny. Jeszcze bardziej korzystnie, czynnik immunosupresyjny stanowi metotreksat.
W kolejnym korzystnym rozwiązaniu humanizowane przeciwciało wiążące CD20 lub jego fragment wiążący antygen zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7, i przy czym przeciwciało jest do podawania w leczeniu choroby autoimmunologicznej w dawce wybranej z 2x50 mg, 2x200 mg i 2x500 mg.
Bardziej korzystnie przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez wlew dożylny.
W innym, korzystnym rozwiązaniu przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez podawanie podskórne.
Wynalazek dotyczy także izolowanego kwasu nukleinowego, który koduje przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen zdefiniowane powyżej.
Wynalazek dotyczy także wektora ekspresji kodującego przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jak zdefiniowano powyżej.
Wynalazek dotyczy również komórki gospodarza zawierającej kwas nukleinowy jak zdefiniowano powyżej.
W korzystnym rozwiązaniu komórka gospodarza według wynalazku, która wytwarza przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen, charakteryzuje się tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen wiąże ludzki CD20.
Bardziej korzystnie komórkę gospodarza według wynalazku, stanowi komórka CHO.
Przedmiotem wynalazku jest również sposób wytwarzania przeciwciała lub jego fragmentu wiążącego antygen, gdzie przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen wiąże ludzki CD20, polegający na tym, że hoduje się komórkę gospodarza jak zdefiniowano powyżej i odzyskuje się przeciwciało wytworzone przez komórkę gospodarza.
Przedmiotem wynalazku jest także płynny preparat, charakteryzujący się tym, że zawiera przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen w stężeniu 20 mg/ml, 10 mM siarczan hiscydyny o pH 5,8, 60 mg/ml sacharozy, 0,2 mg/ml polisorbanu 20, przy czym przeciwciało posiada sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7.
Przeciwciało do zastosowania według wynalazku, korzystnie zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego odpowiednio jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7. W korzystnym rozwiązaniu chorobą autoimmunologiczną jest toczeń rumieniowaty układowy (SLE) Iub toczniowe zapalenie nerek, ewentualnie chorobą autoimmunologiczną jest wrzodziejące zapalenie okrężnicy, lub chorobą autoimmunologiczną jest stwardnienie rozsiane, lub ewentualnie chorobą autoimmunologiczną jest odrzucenie przeszczepu narządu litego lub chorobą przeszczep przeciwko gospodarzowi.
Przeciwciało do zastosowania korzystnie jest do podawania przez wlew dożylny, ewentualnie także korzystnie przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez podawanie podskórne.
PL 212 899 B1
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie przeciwciała wiążącego CD20 lub jego fragmentu jak zdefiniowano powyżej do wytwarzania leku do leczenia u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego. W korzystnej postaci realizacji wynalazku CD20-dodatni nowotwór jest chłoniakiem lub białaczką komórki komórki B. Natomiast takim nowotworem CD20-dodatnim korzystnie może być chłoniak nieziarniczy (NHL) lub ziarnica złośliwa z przewagą limfocytów (LPHD). Nowotworem może być także przewlekła białaczka limfatyczna lub chłoniak z małych limfocytów (SLL).
Zgodnie z zastosowaniem według wynalazku przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu nowotworu CD20-dodatniego u pacjenta, w dawce w zakresie około 275-375 mg/m2.
Zgodnie z zastosowaniem według wynalazku przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu nowotworu CD20-dodatniego u pacjenta, w dawce w zakresie około 22
250 mg/m2 do około 500 mg/m2. Bardziej korzystnie, przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania w leczeniu nowotworu CD20-dodatniego u pacjenta, w co najmniej dwóch daw2 kach przy 375 mg/m2 na dawkę. Wspomniane dwie dawki korzystnie podaje się w odstępie dwutygodniowym.
W kolejnym korzystnym rozwiązaniu przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu nowotworu CD20-dodatniego z co najmniej jednym czynnikiem chemioterapeutycznym. Nowotworem korzystnie jest chłoniak nieziarniczy (NHL), a czynnik chemioterapeutyczny jest wybrany z grupy składającej się z doksorubicyny, cyklofosfamidu, winkrystyny oraz prednisolonu i CHOP.
Następnie przedmiotem wynalazku jest zastosowanie przeciwciała wiążącego CD20 lub jego fragmentu jak zdefiniowano powyżej do wytwarzania leku do leczenia u pacjenta choroby autoimmunologicznej.
W wynalazku tym choroba autoimmunologiczna korzystnie jest wybrana z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenie stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenie stawów, tocznia rumieniowatego układowego (SLE), choroby Wegenera, choroby zapalnej jelit, choroby Werlhofa (ITP), choroby Moschowitza (TTP), małopłytkowości o podłożu autoimmunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, miastenii rzekomopraźnej, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych.
Także korzystnie chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów. W tym przypadku pacjent może cierpieć z powodu średniego do ciężkiego reumatoidalnego zapalenia stawów i zawiodło leczenie co najmniej jednym lekiem przeciwreumatycznym modyfikującym chorobę.
W następnej korzystnej postaci wynalazku w zastosowaniu przeciwciała do wytwarzania leku do leczenia u pacjenta choroby autoimmunologicznej przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu tej choroby autoimmunologicznej z drugim czynnikiem terapeutycznym. Tym drugim czynnikiem terapeutycznym jest czynnik immunosupresyjny, w bardziej korzystnym rozwiązaniu, ten czynnik immunosupresyjny stanowi metotreksat.
W kolejnym korzystnym rozwiązaniu zastosowania, gdzie chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów przeciwciało wiążące CD20 lub jego fragment wiążący antygen zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego odpowiednio o sekwencji SEQ ID nr 21 jak pokazano na Fig. 6 i o sekwencji SEQ ID nr 22 jak pokazano na jak pokazano na Fig. 7, i przy czym przeciwciało jest do podawania w leczeniu choroby autoimmunologicznej w dawce wybranej z 2x50 mg, 2x200 mg i 2x500 mg. Przeciwciało Iub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez podawanie podskórne, którym korzystnie jest zastrzyk podskórny.
W korzystnym rozwiązaniu zastosowania według wynalazku w zakresie wytwarzania leku do leczenia pacjenta z chorobą autoimmunologiczną, korzystnie tą chorobą autoimmunologiczną jest stwardnienie rozsiane.
Jak przedstawiono to powyżej, niniejszy wynalazek dostarcza przeciwciała wiążące CD20 lub jego funkcjonalne fragmenty, i ich zastosowanie w leczeniu chorób związanych z komórkami B. Te przeciwciała są przeciwciałami monoklonalnymi. W specyficznych wykonaniach przeciwciała, które wiążą CD20 są humanizowane lub chimeryczne. Humanizowane warianty 2H7 obejmują te, które posiadają podstawienia aminokwasowe w FR oraz warianty powstałe po dojrzewaniu powinowactwa ze zmianami w przeszczepionych regionach CDR. Podstawione aminokwasy w regionach CDR lub FR nie są ograniczone do tych obecnych w przeciwciele będącym dawcą i biorcą. W innych wykonaniach przeciwciała anty-CD20 z wynalazku obejmują ponadto zmiany w resztach aminokwasowych regionu Fe, które prowadzą polepszenia funkcji efektorowej włączając wzmocnioną funkcję CDC i/lub ADCC
PL 212 899 B1 zabijającą komórki B (także określaną tutaj jako deplecja komórek B). Inne przeciwciała anty-CD20 według wynalazku obejmują te posiadające specyficzne zmiany, które polepszają stabilność. W specyficznym wykonaniu humanizowane warianty 2H7 ze zwiększoną stabilnością są takie, jak opisano w przykładzie 6 poniżej. Dostarczone są także warianty z niedoborem fukozy posiadające polepszoną funkcję ADCC in vivo. W jednym z wykonań chimeryczne przeciwciało anty-CD20 posiada mysie regiony V i ludzki region C. Jednym z takich specyficznych chimerycznych przeciwciał anty-CD20 jest Rituxan® (Rituximab®; Genentech, Inc.).
W korzystnym wykonaniu wszystkich kompozycji przeciwciał i sposobów zastosowania tego wynalazku, humanizowanym przeciwciałem wiążącym CD20 jest 2H7.v16 posiadające sekwencje aminokwasowe lekkiego i ciężkiego łańcucha odpowiednio z SEK ID NR 21 i 22, jak pokazano na Fig. 6 i Fig. 7. Przy odnoszeniu się do sekwencji polipeptydowych na Fig. 6, 7 i 8 powinno się rozumieć, że pierwsze 19 lub podobna ilość aminokwasów nie jest obecnych w dojrzałym polipeptydzie. Region V wszystkich innych wariantów opartych na wersji 16 będzie posiadał sekwencję aminokwasową z v16 z wyjątkiem pozycji podstawień aminokwasowych, które są wyszczególnione w ujawnieniu. Jeżeli nie jest wskazane inaczej, warianty 2H7 będą posiadać ten sam region L, jak ten z v16.
Wynalazek dostarcza humanizowane przeciwciało, które wiąże ludzki CD20 lub jego fragment wiążący antygen, takie, że przeciwciało jest skuteczne w deplecji in vivo komórek B z rodziny naczelnych, przeciwciał zawierające w łańcuchu H z regionu zmiennego (VH) przynajmniej sekwencję CDR3 SEK ID NR 12 z przeciwciała anty-ludzki CD20 i zasadniczo ludzkie konsensusowe reszty szkieletu (FR) ludzkiej podgrupy III łańcucha ciężkiego (VHIII). W jednym z wykonań komórki B z rodziny naczelnych pochodzą od człowieka lub małpy Cynomolgus. W jednym z wykonań przeciwciało obejmuje ponadto sekwencję CDR1 łańcucha H z SFK ID NR 10 i sekwencję CDR2 z SEK ID NR 11. W innym wykonaniu, powyższe przeciwciało zawiera sekwencję CDR3 łańcucha L z SEK ID NR 4, sekwencję CDR2 z SEK ID NR 5, sekwencję CDR3 z SEK ID NR 6 zasadniczo z konsensusowymi resztami ludzkiego szkieletu (FR) ludzkiej podgrupy I lekkiego łańcucha κ (VkI). W korzystnym wykonaniu, region FR w VL posiada resztę w pozycji 46 z przeciwciała będącego donorem; w specyficznym wykonaniu FR2 w VL posiada podstawienie aminokwasowe leuL4 6pro (Leu w ludzkiej sekwencji konsensusowej kI zmieniona na pro, która jest obecna w odpowiadającej jej pozycji w m2H7). Region VH zawiera ponadto resztę przeciwciała będącego donorem przynajmniej w pozycjach 49, 71 i 73 w szkielecie. W jednym z wykonań w VH, podstawione są następujące pozycje FR w ciężkim łańcuchu podgrupy III: AlaH49Gly w FR2; ArgH71Val i AsnH73Lys w FR3. W innych wykonaniach regiony CDR w humanizowanym przeciwciele zawierają ponadto podstawienia aminokwasowe, gdzie reszty nie są ani z przeciwciała będącego donorem, ani z przeciwciała będącego odbiorcą.
Przeciwciało z powyższych wykonań może zawierać sekwencję VH z SEK ID NR 8 z v16, jak pokazano na Fig. 1B. W dalszym wykonaniu powyższych przeciwciało ponadto zawiera sekwencję VL z SEK ID NR 2 z v16, jak pokazano na Fig. 1A.
W innych wykonaniach humanizowanym przeciwciałem jest 2H7.v31 posiadające sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha odpowiednio z SEK ID NR 2 i 23, jak pokazano na Fig. 6 i Fig. 8; 2H7.v31 posiadające sekwencję aminokwasową ciężkiego łańcucha z SEK ID NR 23, jak pokazano na Fig. 8; 2H7.v96 z podstawieniami aminokwasowymi D56A i N100A łańcuchu H i S92A w łańcuch L v16.
W osobnych wykonaniach przeciwciało z dowolnych powyższych wykonań zawiera ponadto przynajmniej jedno podstawienie aminokwasowe w regionie Fc, która ulepsza aktywność ADCC i/lub CDC w porównaniu z oryginalnym lub wyjściowym przeciwciałem, z którego się wywodzi, v.16 będące wyjściowym przeciwciałem do którego się porównuje w większości przypadków oraz Rituxan w innych przypadkach. Jedno takie przeciwciało z ulepszoną aktywnością zawiera potrójne podstawienie alaniny S298A/E333A/K334A w regionie Fc. Jednym z przeciwciał posiadających podstawienie S298A/E333A/K334A jest 2H7.v31 posiadające sekwencję aminokwasową łańcucha ciężkiego z SEK ID NR 23. Przeciwciała 2H7.v114 i 2H7.v115 wykazują przynajmniej 10-krotnie polepszoną aktywność ADCC w porównaniu z przeciwciałem Rituxan.
W innym wykonaniu przeciwciało zawiera ponadto przynajmniej jedno podstawienie aminokwasowe w regionie Fc, które zmniejsza aktywność CDC w porównaniu z wyjściowym przeciwciałem, z którego ono pochodzi, którym w większości przypadków jest v16. Jedno z takich przeciwciał z obniżoną aktywnością CDC w porównaniu z ν16 zawiera przynajmniej postawienie K322A w łańcuchu H. Porównanie aktywności ADCC i CDC noże być oznaczone jak opisano w przykładach.
PL 212 899 B1
W korzystnym wykonaniu przeciwciała z wynalazku są przeciwciałami o pełnej długości, w których region VH jest przyłączony Iudzkiego stałego regionu łańcucha ciężkiego IgG. W korzystnych wykonaniach IgG jest ludzka IgG1 lub IgG3.
W jednym z wykonań przeciwciało wiążące CD20 jest sprzężone z czynnikiem cytotoksycznym. W korzystnych wykonaniach czynnikiem cytotoksycznym jest toksyna lub izotop radioaktywny.
W jednym z wykonań przeciwciała z wynalazku do zastosowania w celach terapeutycznych lub diagnostycznych są wytwarzane w komórkach CHO.
Dostarczona jest także kompozycja zawierająca dowolne przeciwciało jednego z powyższych wykonań i nośnik. W jednym z wykonań nośnikiem jest nośnik akceptowalny farmaceutycznie. Te kompozycje mogą być dostarczone w wyrobie przemysłowym lub zestawie.
Wynalazek także dostarczył ciekłego preparatu zawierającego humanizowane przeciwciało 2H7 w stężeniu 20 mg/ml przeciwciała, 10 mM siarczanu histydyny pH 5,8, 60 mg/ml sacharozy (6%), 0,2 mg/ml polisorbatu 20 (0,02%).
Wynalazek także dostarcza wyizolowanego kwasu nukleinowego, który koduje dowolne z przeciwciał ujawnionych tutaj, włączając wektor ekspresyjny do ekspresji przeciwciała.
W innym aspekcie wynalazku są komórki gospodarza zawierające powyższe kwasy nukleinowe i komórki gospodarza, które wytwarzają przeciwciało. W korzystnym wykonaniu tych ostatnich, komórką gospodarza jest komórka CHO. Dostarczony jest sposób wytwarzania tych przeciwciał, sposób obejmujący hodowlę komórki gospodarza, która wytwarza przeciwciało i odzyskiwanie przeciwciała z hodowli komórkowej.
W jeszcze innym aspekcie wynalazek dostarcza produkt przemysłowy zawierający pojemnik i zamkniętą w nim kompozycję, w którym kompozycja zawiera przeciwciało z dowolnego z powyższych wykonań. Do zastosowania w leczeniu NHL, produkt przemysłowy ponadto zawiera ulotkę wskazującą, że kompozycja jest stosowana do leczenia chłoniaków nieziarniczych.
Dalszym aspektem wynalazku jest sposób indukowania apoptozy in vivo w komórkach B, obejmujący doprowadzanie do kontaktu komórek B z przeciwciałem dowolnym z powyższych i przez to zabijanie komórek B.
Wynalazek pozwala na leczenie chorób ujawnionych tutaj przez podawanie przeciwciała wiążącego CD20 lub jego funkcjonalnych fragmentów ssakowi takiemu, jak ludzki pacjent cierpiący na chorobę. Do leczenia choroby autoimmunologicznej lub nowotworu CD20-dodatniego, w jednym z wykonań, może służyć przeciwciało 2H7.v16 posiadające sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha odpowiednio SEK ID NR 21 i 22, jak pokazano na Fig. 6 i Fig. 7. Metoda leczenia nowotworu CD20-dodatniego obejmuje podawanie pacjentowi cierpiącemu na nowotwór terapeutycznie skutecznej ilości humanizowanego przeciwciała według wynalazku, które wiąże CD20. W korzystnych wykonaniach, nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak komórek B lub białaczka włączając chłoniaka nieziarniczego (NHL) lub ziarnicę złośliwą z przewagą limfocytów (LPHD, ang. Iymphocyte predominant Hodgkin's disease), przewlekłą białaczkę limfocytową (CLL, ang. chronic lymphocytic leukemia) lub SLL. W jednym z wykonań metody leczenia chłoniaka komórek B lub białaczki przeciwciało jest 2 podawane w dawce w zakresie około 275-375 mg/m2. W dodatkowych wykonaniach leczenie obejmuje ponadto podawanie pacjentowi przynajmniej jednego czynnika chemioterapeutycznego, który to czynnik chemioterapeutyczny dla chłoniaka nieziarniczego (NHL) jest wybrany z grupy składającej się z doksorubicyny, cyklofosfamidu, winkrystyny i prednisolonu.
Dostarczony jest także sposób leczenia choroby autoimmunologiczej obejmującej podawanie pacjentowi cierpiącemu na chorobę immunologiczną, terapeutycznie skutecznej dawki humanizowanego przeciwciała wiążącego CD20. Choroba autoimmunologicza jest wybrana z grupy składającej się reumatoidalnego zapalenia stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenia stawów, liszaja rumieniowatego układowego (SLE, ang. systemic lupus erythematosus), choroby Wegenera, choroby zapalnej jelit, choroby Werlhofa (ITP, ang. idiopathic thrombocytopenic purpura), choroby Moschowitza (TTP, ang. Thrombotic thrombocytopenic purpura), małopłytkowości o podłożu immunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, miastenii rzekomoporaźnej, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych. Kiedy chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów przeciwciało może być podane w połączeniu z drugim czynnikiem terapeutycznym, którym korzystnie jest metotreksat.
W tych metodach leczenia, przeciwciała wiążące CD20 mogą być podawane same lub w połączeniu z drugim czynnikiem terapeutycznym, takim jak drugie przeciwciało lub środek chemioterapeutyczny lub środek immunosupresyjny. Drugim przeciwciałem może być takie, które wiąże CD20 lub
PL 212 899 B1 inny antygen komórek B, lub antygen komórek NK lub T. W jednym z wykonań drugim przeciwciałem jest przeciwciało anty-CD20 wyznakowane radioaktywnie. W innych wykonaniach przeciwciało wiążące CD20 jest sprzężone ze środkiem, cytotoksycznym, włączając toksynę lub izotop radioaktywny.
W wynalazku opisuje się również metodę leczenia choroby autoimmunologicznej z grupy składającej się z zapalenia skórno-mięśniowego, ziarniniaka Wegenera, ANCA, anemii aplastycznej, autoimmunologicznej anemii hemolitycznej (AIHA, ang. Autoimmune hemolytic anemia), niedoboru czynnika VIII, hemofilii A, neutropenii autoimmunoligicznej, zespołu Castelmana, zespołu Goodpasteure'a, odrzucenia przeszczepionego organu miąższowego, choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD, ang. graft versus host disease), choroby Moschowitza (TTP) z pośrednictwem IgM, zapalenia tarczycy Hashimoto, autoimmunologicznego zapalenia wątroby, Iimfoidalnego śródmiąższowego zapalenia płuc (HIV), zarostowego zapalenia oskrzelików (nietransplantacyjnego) przeciwko NIIP, zespołu Guillain-Barre, zapalenia dużych naczyń, zapalenia tętnicy skroniowej olbrzymiokomórkowej (zapalenia Takayasu), zapalenia naczyń średniej wielkości, choroby Kawasaki, zapalenia guzkowatego tętnic, obejmującego podawanie pacjentowi cierpiącemu na chorobę skutecznej terapeutycznie dawki przeciwciała wiążącego CD20. W jednym z wykonań tego sposobu przeciwciałem wiążącym CD20 jest Rituxan®.
Wynalazek opisuje także wyizolowany kwas nukleinowy, zawierający sekwencję nukleotydową z CD20 małpy Cynomolgus (pokazaną na Fig. 19), lub zdegenerowany wariant tej sekwencji. Opisany jest także wyizolowany kwas nukleinowy zawierający sekwencję, która koduje polipeptyd o sekwencji aminokwasowej pokazanej na Fig. 20 lub o sekwencji (Fig. 20) z postawieniami konserwowanych aminokwasów. Innym wykonaniem jest wektor zawierający powyższy kwas nukleinowy, włączając wektor ekspresyjny do ekspresji w komórce gospodarza. Włączona jest również komórka gospodarza zawierająca wektor. Opisuje się także wyizolowany polipeptyd zawierający sekwencję aminokwasową (Fig. 20) z CD20 małpy Cynomoigus.
Krótki opis rysunków
Fig. 1A jest uliniowaniem sekwencji porównującym sekwencje aminokwasowe domeny zmiennej łańcucha lekkiego (VL) każdego z mysich 2H7 (SEK ID NR 1), humanizowanego wariantu 2H7.v16 (SEK ID NR 2), i ludzkiego łańcucha lekkiego kappa podgrupy I (SEK ID NR 3). Regiony CDR z VL z 2H7 i hu2H7.v16 są następujące: CDR1 (SEK ID NR 4), CDR2 (SEK ID NR 5) oraz CDR3 (SEK ID NR 6).
Fig. 1B jest przyrównaniem sekwencji, które porównuje sekwencje VH mysiego 2H7 (SEK ID NR 7), humanizowanego wariantu 2H7.v16 (SEK ID NR 8) oraz ludzkiej konsensusowej sekwencji łańcucha ciężkiego podgrupy III (SEK ID NR 9). Regiony CDR z VH z 2H7 oraz hu2H7.v16 są następujące: CDR1 (SEK ID NR 10), CDR2 (SEK ID NR 11) oraz CDR3 (SEK ID NR 12).
Na Fig. 1A i Fig. 1B regiony CDR1, CDR2 i CDR3 w każdym z łańcuchów są ujęte w nawiasy, otoczone przez regiony szkieletowe FR1-FR4, jak pokazano. 2H7 odnosi się do mysiego przeciwciała 2H7. Gwiazdki pomiędzy dwoma rzędami sekwencji wskazują pozycje, które są różne pomiędzy dwiema sekwencjami. Numerowanie reszt jest według Kabat i wsp., Sequences of Immunological Interest. Wyd. 5. Publiczna Służba Zdrowia, Narodowy Instytut Zdrowia, Bethesda, Md. (1991), ze wstawkami pokazanymi jako a, b, c, d oraz e.
Fig. 2 pokazuje sekwencję fagmidu pVX4 (SEK ID NR 13) użytego do konstrukcji plazmidów 2H7 Fab (zobacz Przykład 1) jak również sekwencje aminokwasowe łańcucha L (SEK ID NR 14) i łańcucha H (SEK ID NR 15) Fab dla humanizowanego przeciwciała anty-IFN-α z przeszczepionymi regionami CDR.
Fig. 3 pokazuje sekwencję plazmidu ekspresyjnego, który koduje chimeryczne 2H7.v6.8 Fab (SEK ID NR 16). Pokazane są sekwencje aminokwasowe łańcucha L (SEK ID NR 17) i łańcucha H (SEK ID NR 18).
Fig. 4 pokazuje sekwencję plazmidu pDR1 (SEK ID NR 19; 5391 pz) do ekspresji lekkich łańcuchów immunoglobulinowych, jak opisano w Przykładzie 1. pDR1 zawiera sekwencje kodujące nieistotne przeciwciało, lekki łańcuch humanizowanego przeciwciała anty-CD3 (Shalaby i wsp., J. Exp. Med. 175:217-225 (1992)), dla którego pokazane kodony start i stop są pogrubione i podkreślone.
Fig. 5 pokazuje sekwencję plazmidu pDR2 (SEK ID NR 20; 6135 pz) do ekspresji ciężkich łańcuchów immunoglobulinowych, jak opisano w Przykładzie 1. pDR2 zawiera sekwencje kodujące nieistotne przeciwciało, ciężki łańcuch humanizowanego przeciwciała anty-CD3 (Shalaby i wsp., powyżej), dla którego pokazane kodony start i stop są pogrubione i podkreślone.
PL 212 899 B1
Fig. 6 pokazuje sekwencję aminokwasową kompletnego łańcucha L 2H7.v16 (SEK ID NR 21). Pierwszych 19 aminokwasów przed DIQ jest sekwencją sygnału sekrecyjnego nieobecną w dojrzałym łańcuchu polipeptydowym.
Fig. 7 pokazuje sekwencję aminokwasową kompletnego łańcucha H 2H7.v16 (SEK ID NR 22). Pierwszych 19 aminokwasów przed EVQ jest sekwencją sygnału sekrecyjnego nieobecną w dojrzałym łańcuchu polipeptydowym. Przyrównanie sekwencji VH na Fig. 1B (SEK ID NR 8) z kompletną sekwencją łańcucha H, ludzkiego regionu stałego VL jest od pozycji aminokwasowej 114-471 w SEK ID NR 22.
Fig. 8 pokazuje sekwencję aminokwasową kompletnego łańcucha H 2H7.v31 (SEK ID NR 23). Pierwszych 19 aminokwasów przed EVQ jest sekwencją sygnału sekrecyjnego nieobecną w dojrzałym łańcuchu polipeptydowym. Łańcuch L jest taki sam, jak dla 2H7.v16 (zobacz Fig. 6).
Fig. 9 pokazuje względną stabilność wariantów IgG 2H7.v16 i 2H7.v73. Wyniki oznaczenia znormalizowano do wartości poprzedzających inkubację i przedstawiono jako procent pozostały po inkubacji.
Fig. 10 jest schematem podsumowującym zmiany sekwencji aminokwasowej od mysiego 2H7 do podzbioru humanizowanych wersji do v75.
Fig. 11 jest podsumowaniem średniej bezwzględnej liczebności komórek B [CD3-/CD40+] we wszystkich grupach (połączone badanie 2H7 i badanie Rituxan), jak opisano w Przykładzie 10.
Fig. 12 pokazuje wyniki reprezentatywnego oznaczenia ADCC na wariantach 2H7 z niedoborem fukozy, jak opisano w Przykładzie 11.
Fig. 13 pokazuje wyniki barwienia Aneksyną V wykreślonego jako funkcja stężenia przeciwciała. Komórki Ramos traktowano nieistotnym, przeciwciałem kontrolnym IgG1 (Herceptin©; kółka), Rituximab (kwadraty) lub rhuMAb 2H7.v16 (trójkąty) w obecności drugorzędowego przeciwciała tworzącego wiązania krzyżowe i analizowano przy użyciu FACS. Rysunki 13-15 są opisane w Przykładzie 13.
Fig. 14 pokazuje wyniki podwójnego barwienia Anneksyną V i jodkiem propidyny wykreślone jako funkcja stężenia przeciwciała. Komórki Ramos traktowano nieistotnym przeciwciałem kontrolnym IgG1 (Herceptin®; kółka), Rituximab (kwadraty) lub rhuMAb 2H7.v16 (trójkąty) w obecności drugorzędowego przeciwciała tworzącego wiązania krzyżowe i analizowano przy użyciu FACS.
Fig. 15 pokazuje zliczenia (na 10 s), żywe niewybarwione komórki są wykreślone jako funkcja stężenia przeciwciała. Komórki Ramos traktowano nieistotnym kontrolnym przeciwciałem (Herceptin®; kółka), Rituximab (kwadraty) lub rhuMAb 2H7.v16 (trójkąty) w obecności drugorzędowego przeciwciała tworzącego wiązania krzyżowe i analizowano przy użyciu FACS.
Fig. 16, 17, 18 pokazują hamowanie wzrostu nowotworu komórek Raji w myszy pozbawionej układu immunologicznego, jak opisano w Przykładzie 4. Zwierzęta traktowano co tydzień (jak wskazano przez pionowe strzałki; n=8 myszy na grupę) przez 6 tygodni roztworem PBS (kontrola) lub Rituxan® lub rhuMAb 2H7.v16 w stężeniu 5 mg /kg (Fig. 16), 0,5 mg /kg (Fig. 17), lub 0,0 5 mg/kg (Fig. 18).
Fig. 19 pokazuje nukleotydowe i aminokwasowe sekwencje CD20 z małpy Cynomolgus, jak opisano w Przykładzie 15.
Fig. 20 pokazuje sekwencję aminokwasową CD20 z małpy Cynomolgus. Reszty, które różnią się od ludzkiego CD20 są podkreślone i ludzkie reszty są wskazane bezpośrednio poniżej reszty z małpy. Przypuszczalna zewnątrz komórkowa domena małpiego CD20 jest pogrubiona.
Fig. 21 pokazuje wyniki komórek z małpy Cynomolgus z ekspresją CD20 wiążącego się do hu2H7.v16, .v31, oraz Rituxan, jak opisano w przykładzie 15. Przeciwciała oznaczano na zdolność do związania i zastąpienia mysiego 2H7 z przyłączonym FITC związanego do CD20 z Cynomolgus.
Fig. 22 pokazuje schemat zwiększania dawki w próbie klinicznej I/II fazy dla reumatoidalnego zapalenia stawów.
Fig. 23 pokazuje wektor do ekspresji 2H7.v16 w komórkach CHO.
Szczegółowy opis korzystnych wykonań
Antygen CD20 jest nieglikolizowaną międzybłonową fosfoproteiną z masą cząsteczkową w przybliżeniu 35 kD, która jest obecna na powierzchni więcej niż 90% komórek B z krwi obwodowej lub narządów Iimfoidalnych. CD20 ulega ekspresji podczas wczesnego rozwoju komórek pre-B i pozostaje do momentu zróżnicowania się w komórkę plazmatyczną; nie występuje na ludzkich komórkach macierzystych, rodzicielskich komórkach limfoidalnych lub normalnych komórkach plazmatycznych. CD20 jest obecny zarówno na normalnych komórkach B, jak również na nowotworowych komórkach B. Inne nazwy na określenie CD20 w literaturze obejmują ''antygen różnicowania ograniczony
PL 212 899 B1 do limfocytów B i Bp35. Antygen CD20 jest opisany, na przykład, w Clark i Ledbetter, Adv. Can. Res. 52:81-149 (1989) oraz Valentine i wsp. J. Biol. Chem. 264(19):11282-11287 (1989).
Określenie przeciwciało jest stosowane w najszerszym znaczeniu i specyficznie pokrywa przeciwciała monoklonalne (włączając przeciwciała monoklonalne o pełnej długości), przeciwciała wielospecyficzne (np., przeciwciała dwuspecyficzne) i fragmenty przeciwciał wystarczająco długie, aby wykazywać pożądaną biologiczną aktywność lub funkcję.
Aktywność biologiczna przeciwciał wiążących CD20 i humanizowanych przeciwciał wiążących CD20 z wynalazku będzie obejmować przynajmniej wiązanie przeciwciała do ludzkiego CD20, bardziej korzystnie wiązanie CD20 z człowieka lub innego naczelnego (włączając małpę Cynomolgus, rezusy, szympansy). Przeciwciała wiązałyby się do CD20 z wartością Kd nie większą niż około 1 x 10-8, korzystnie z wartością Kd nie większą niż około 1 x 10-9 i byłyby zdolne do zabicia lub deplecji in vivo komórek B, korzystnie przynajmniej o 20% w porównaniu do odpowiedniej negatywnej kontroli, która nie jest traktowana takim przeciwciałem. Deplecja komórek B może być wynikiem jednego z mechanizmów: ADCC, CDC, apoptozy, lub innego. W pewnych wykonaniach leczenia choroby z niniejszego wynalazku jedne specyficzne funkcje efektorowe lub mechanizmy mogą być pożądane bardziej niż inne i pewne warianty humanizowanego 2H7 mogą być korzystne do osiągnięcia tych funkcji biologicznych takich, jak ADCC.
Fragmenty przeciwciał obejmują część przeciwciała o pełnej długości, ogólnie jego region wiążący antygen lub zmienny. Przykłady fragmentów przeciwciał obejmują fragmenty Fab, Fab', F(ab')2, i Fv; dwuciała; przeciwciała liniowe; jednołańcuchowe cząsteczki przeciwciał; oraz przeciwciała wielospecyficzne utworzone z fragmentów przeciwciał.
Fv jest minimalnym fragmentem przeciwciała, który zawiera kompletne miejsce rozpoznawania i wiązania antygenu. Ten fragment składa się z dimeru jednej domeny zmiennej łańcucha ciężkiego i jednej domeny zmiennej łańcucha lekkiego w ścisłym niekowalencyjnym połączeniu. Po sfałdowaniu z tych dwóch domen wystaje sześć hiperzmiennych pętli (3 pętle z każdego z łańcuchów H i L), które dają reszty aminokwasowe do wiązania antygenu i nadają przeciwciele specyficzność wiązania antygenu. Jednakże, nawet pojedyncza domena zmienna (lub połowa Fv zawierająca tylko trzy regiony CDR specyficzne dla antygenu) posiada zdolność do rozpoznawania wiązania antygenu, chociaż z mniejszym powinowactwem niż całe miejsce wiążące.
Stosowane tutaj określenie przeciwciało monoklonalne dotyczy przeciwciała uzyskanego z populacji zasadniczo homogenicznych przeciwciał, tj. poszczególne przeciwciała znajdujące się w populacji są identyczne z wyjątkiem możliwych naturalnie występujących mutacji, które mogą być obecne w małych ilościach. Przeciwciała monoklonalne są wysoce specyficzne, będąc skierowanymi przeciwko pojedynczemu miejscu antygenu. Ponadto, w przeciwieństwie do konwencjonalnych (poliklonalnych) preparatów przeciwciał, które typowo obejmują różne przeciwciała skierowane przeciwko różnym determinantom (epitopom), każde przeciwciało monoklonalne jest skierowane przeciwko pojedynczemu determinantowi na antygenie. Określenie „monoklonalny wskazuje na charakter przeciwciała jako uzyskanego z zasadniczo homogenicznej populacji przeciwciał, i nie jest rozumiane jako wymaganie wytwarzania przeciwciała określonym sposobem. Na przykład, przeciwciała monoklonalne do zastosowania zgodnie z mniejszym wynalazkiem mogą być wytworzone według sposobu z użyciem hybrydomy po raz pierwszy opisanego przez Kohler i wsp., Nature 256:495 (1975), lub mogą być otrzymane sposobami rekombinowanego DNA (zobacz np. Patent USA Nr 4816567). Przeciwciała monoklonalne mogą być także wyizolowane z fagowych bibliotek przeciwciał przy użyciu technik opisanych, na przykład, przez Clackson i wsp., Nature 352:624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991).
Funkcjonalne fragmenty przeciwciał wiążących CD20 z wynalazku są tymi fragmentami, które zachowują wiązanie do CD20 z zasadniczo tym samym powinowactwem, jak nienaruszona cząsteczka o pełnej długości, z której pochodzą i wykazują aktywność biologiczną włączając deplecję komórek, jak zmierzono przez oznaczenia in vitro i in vivo, takie jak te opisane tutaj.
Określenie zmienny odnosi się do faktu, że sekwencje pewnych segmentów domen zmiennych różnią się znacznie pośród przeciwciał. Domena V pośredniczy w wiązaniu antygenu i definiuje specyficzność określonego przeciwciała do określonego antygenu. Jednakże, zmienność nie jest równomiernie rozłożona wzdłuż 110 aminokwasowego obszaru domen zmiennych. Przeciwnie, regiony V zawierają względnie niezmienne ciągi 15-30 aminokwasów zwane regionami szkieletowymi (FR, ang. framework region) rozdzielonymi przez krótsze regiony ekstremalnej zmienności zwanymi regionami hiperzmiennymi, każdy z nich o długości 9-12 aminokwasów. Domeny zmienne każdego z natywnych
PL 212 899 B1 ciężkich i lekkich łańcuchów zawiera cztery regiony FR, w większości posiadających konfigurację β-kartki, połączonych trzema regionami hiperzmiennymi, które tworzą pętle łączące i w pewnych przypadkach tworzące część struktury β-kartki. Regiony hiperzmienne w każdym łańcuchu są utrzymywane razem w bliskiej odległości przez regiony FR i razem z hiperzmiennymi regionami drugiego łańcucha uczestniczą w tworzeniu miejsca przeciwciała wiążącego antygen (zobacz Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Wyd 5. Publiczna Służba Zdrowia, Narodowy Instytut Zdrowia, Bethesda, MD. (1991)). Domeny stałe nie są bezpośrednio zaangażowane w wiązaniu się przeciwciała do antygenu, ale wykazują różne funkcje efektorowe, takie jak uczestniczenie przeciwciała w cytotoksyczności komórkowej zależnej od przeciwciała (ADCC).
Stosowane tutaj określenie region hiperzmienny dotyczy reszt aminokwasowych przeciwciała, które są odpowiedzialne za wiązanie antygenu. Ogólnie region hiperzmienny zawiera reszty aminokwasowe z regionów determinujących dopasowanie lub CDR (ang. complementarity determining region) (np. w okolicy około 24-34 (L1), 50-56 (L2) i 89-97 (L3) w VL, oraz w okolicy około 31-35B (H1), 50-65 (H2) i 95-102 (H3) w VH (Kabat i wsp., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Wyd 5, Publiczna Służba Zdrowia, Narodowy Instytut Zdrowia, Bethesda, MD. (1991)) i/lub te reszty z pętli hiperzmiennej (np. reszty 26-32 (L1), 50-52 (L2) i 9196 (L3) w VL oraz 26-32 (H1), 52A-55 (H2) i 96-101 (H3) w VH (Chotia i Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)).
Stosowane tutaj określenie „sekwencja konsensusowa lub konsensusowa sekwencja domeny V jest sztuczną sekwencją otrzymaną z porównania sekwencji aminokwasowych znanych sekwencji regionów zmiennych znanych ludzkich immunoglobulin. W oparciu o te porównania, przygotowano sekwencje rekombinowanych kwasów nukleinowych kodujących aminokwasy domeny V, które są konsensusem sekwencji otrzymanych z domen V z podgrupy III ludzkiego łańcucha κ i ludzkiego łańcucha H. Konsensusowa sekwencja V nie posiada żadnej znanej specyficzności wiązania lub powinowactwa charakterystycznych dla przeciwciała.
Przeciwciała (immunoglobuliny) „chimeryczne posiadają cześć ciężkiego i/lub lekkiego łańcucha identycznego z lub homologicznego do odpowiadających im sekwencji w przeciwciałach otrzymanych z określonych gatunków lub należących do określonej klasy lub podklasy przeciwciała, podczas, gdy pozostały(e) łańcuch(y) jest(są) identyczny(e) z lub homologiczny(e) do odpowiadających mu(im) sekwencji w przeciwciałach otrzymanych z innego gatunku lub należących do innej klasy lub podklasy przeciwciała, jak również fragmentów takich przeciwciał, tak długo, jak one wykazują pożądaną aktywność biologiczną (Patent USA Nr 48816567 i Morrison i wsp. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855 (1984)). Stosowane tutaj humanizowane przeciwciała są podzbiorem przeciwciał chimerycznych.
„Humanizowane postacie innych niż ludzkie (np. mysich) przeciwciał są przeciwciałami chimerycznymi, które zawierają minimalną sekwencję otrzymaną z immunoglobuliny innej niż ludzka. W głównej mierze przeciwciała humanizowane są ludzkimi immunoglobulinami (przeciwciało będące biorcą lub akceptorowe), w których reszty regionu hiperzmiennego biorcy są zastąpione przez reszty regionu hiperzmiennego z gatunków innych niż ludzki (przeciwciało będące dawcą), takich jak mysz, szczur, królik lub naczelny inny niż człowiek, posiadające pożądaną specyficzność, powinowactwo i zdolność. W pewnych przykładach reszty regionu szkieletowego (FR) z Fv ludzkiej immunoglobuliny są zastąpione przez odpowiadające im reszty nie-ludzkie. Ponadto, humanizowane przeciwciała mogą zawierać reszty, które nie występują ani w przeciwciele będącym biorcą ani w przeciwciele będącym dawcą. Te modyfikacje są wprowadzone do dalszego dopracowania wykonania przeciwciała, takiego, jak powinowactwo wiązania. Ogólnie, humanizowane przeciwciało będzie zawierać zasadniczo wszystkie z przynajmniej jednej, a typowo z dwóch domen zmiennych, w których wszystkie lub zasadniczo wszystkie pętle hiperzmienne odpowiadają tym z immunoglobuliny innej niż ludzka i wszystkie lub zasadniczo wszystkie regiony FR są tymi z sekwencji ludzkiej immunoglobuliny, chociaż regiony FR mogą zawierać jedną lub większą liczbę podstawień aminokwasowych, które polepszają powinowactwo wiązania. Liczba tych podstawień aminokwasowych w regionach FR typowo wynosi nie więcej niż 6 w łańcuchu H a w łańcuchu L nie więcej niż 3. Humanizowane przeciwciało opcjonalnie także będzie zawierać przynajmniej część immunoglobulinowego regionu stałego (Fc), typowo tego z ludzkiej immunoglobuliny. Po dalsze szczegóły zobacz Jones i wsp, Nature 321:522-525 (1986); Reichmann i wsp., Nature 332:323-329 (1988); i Presta, Curr. Op. Struct Biol. 2:593-596 (1992).
Efektorowe funkcje przeciwciała dotyczą tych aktywności biologicznych przypisanych do regionu Fc (natywnej sekwencji regionu Fc lub aminokwasowej sekwencji wariantu regionu Fc) przeciwciała i zmieniają się wraz z izotopem przeciwciała. Przykłady efektorowych funkcji przeciwciał obejmują:
PL 212 899 B1 wiązanie Clq oraz cytotoksyczność zależną od dopełniacza; wiązanie receptora Fc; cytotoksyczność zależna od przeciwciała z pośrednictwem komórek (ADCC); fagocytoza; obniżenie poziomu receptorów na powierzchni komórek (np. receptora komórek B; i aktywacja komórek B.
Cytotoksyczność zależna od przeciwciała za pośrednictwem komórek lub ADCC odnosi się do postaci cytotoksyczności, w której wydzielone Ig wiążą się do receptorów Fc (FcRs) obecnych na pewnych komórkach cytotoksycznych (np. komórkach tzw. Naturalnych Zabójcach (NK), neutrofilach i makrofagach) umożliwiając tym cytotoksycznym komórkom efektorowym specyficzne wiązanie się do komórek docelowych niosących antygen i następnie zabicie komórki docelowej przy użyciu cytotoksyn. Przeciwciała uzbrajają komórki cytotoksyczne i są absolutnie konieczne do takiego zabijania. Komórki pierwotne pośredniczące w ADCC, komórki NK, eksprymują tylko Fc/RIII, podczas gdy monocyty eksprymują FcyRI, FcyRII i FcyRIII. Ekspresja FcR na komórkach krwiotwórczych jest podsumowana w Tabeli 3 na stronie 464 w Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991). Do oznaczenia aktywności ADCC cząsteczki będącej przedmiotem zainteresowania może być wykonane oznaczenie takie, jak opisano w Patencie USA Nr 5500362 lub 5821337. Użyteczne komórki efektorowe do takich oznaczeń obejmują jednojądrzaste komórki z komórki z krwi obwodowej (PBMC, ang. peripheral blood mononuelear cells) i komórki Naturalnych Zabójców (NK). Alternatywnie, lub dodatkowo aktywność ADCC cząsteczki będącej przedmiotem zainteresowania może być oznaczona in vivo, np. w modelu zwierzęcym, takim jak ten ujawniony w Clynes i wsp. PNAS (USA) 95 :652-656 (1998).
Receptor Fc lub FcR opisuje receptor, który wiąże się do regionu Fc przeciwciała. Korzystnym FcR jest natywna sekwencja ludzkiego FcR. Ponadto, korzystnym FcR jest ten, który wiąże przeciwciało IgG (receptor gamma) i obejmuje receptory z podklas FcyRI, FcyRII i FcyRIII, włączając warianty alleliczne i formy będące wynikiem alternatywnego składania genów tych receptorów. Receptory FcyRII obejmują FcyRIIA (receptor aktywujący) i FcyRIIB (receptor hamujący), które posiadają podobne sekwencje aminokwasowe, które różnią się przede wszystkim w ich domenach cytoplazmatycznych. Aktywujący receptor FcyRIIA w domenie cytoplazmatycznej zawiera immunosupresorowy motyw aktywujący oparty o tyrozynę (ITAM). Hamujący receptor FcyRIIB w domenie cytoplazmatycznej zawiera immunoreceptorowy motyw hamujący oparty o tyrozynę (ITIM). (zobacz artykuł przeglądowy M. In Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)). Receptory FcR są opisane w Ravetch i Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel i wsp., Immunomethods 4:25-34 (1994); oraz de Haas i wsp., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995). Inne receptory FcR włączając te, które zostaną zidentyfikowane w przyszłości są objęte tutaj określeniem FcR. Określenie także obejmuje receptor ulegający ekspresji w noworodkowym FcRn, który jest odpowiedzialny za transfer matczynych IgG do płodu (Guyer i wsp., J. Immunol. 117:587 (1976) oraz Kim i wsp., J. Immunol. 24:249 (1994)). WO00/42072 (Presta) opisuje warianty przeciwciał z ulepszonym lub zmniejszonym wiązaniem do receptorów FcR. Treść tej publikacji patentowej jest specyficznie włączona tutaj jako odniesienie. Zobacz także, Shields i wsp. J. Biol. Chena. 9(2):6591-6604 (2001).
Ludzkie komórki efektorowe są leukocytami, które eksprymują jeden lub większą liczbę receptorów FcR i wykonują funkcje efektorowe. Korzystnie, komórki eksprymują przynajmniej FcyRIII i wykonują funkcje efektorowe ADCC. Przykłady ludzkich leukocytów, które pośredniczą w ADCC obejmują jednojądrzaste komórki z krwi obwodowej (PBMC), komórki naturalnych zabójców (NK), monocyty, komórki cytotoksyczne T i neutrofile; z komórkami PBMC i NK będącymi korzystnymi. Komórki efektorowe mogą być wyizolowane ze źródła naturalnego, np., z krwi.
Cytotoksyczność zależna od dopełniacza lub CDC (ang. complement dependent cytotoxicity) dotyczy Iizy komórki docelowej w obecności komplementu. Aktywacja klasycznej ścieżki komplementu jest zapoczątkowana przez związanie pierwszego składnika systemu komplementu (Clq) do przeciwciał (odpowiedniej podklasy), które są związane do rozpoznawanego przez nie antygenu. Aby oznaczyć aktywację komplementu może być zastosowane oznaczenie CDC, np. jak opisano w GazzanoSantoro i wsp., J. Inamunol. Methods 202:163 (1996).
Warianty polipeptydowe ze zmienionymi sekwencjami aminokwasowymi regionu Fc oraz zwiększona lub zmniejszona zdolność wiązania Clq są opisane w Patencie USA Nr 6194551B1 i WO99/51642. Treści tych publikacji patentowych są specyficznie włączone tutaj przez odniesienie. Zobacz także, Idusogie i wsp. J. Immunol. 164:4178-4184 (2000).
Miejsce N-glikozylacji w IgG jest w Asn297 w domenie CH2. Niniejszy wynalazek także dostarcza kompozycji wiążących CD20, humanizowanych przeciwciał posiadających region Fc, w których około 80-100% (a korzystnie około 90-99%) przeciwciał w kompozycji zawiera dojrzałą strukturę rdzenia
PL 212 899 B1 wodorowęglanowego, która jest z niedoborem fukozy, przyczepioną do regionu Fc glikoproteiny. Pokazano tutaj, że takie kompozycje wykazują zaskakujące polepszenie wiązania do FcyRIIIA(F158), które nie jest tak efektywne jak FcyRIIIA(V158) w oddziaływaniu z ludzką IgG. Zatem przewiduje się, że kompozycje zawarte tutaj są lepsze niż wcześniej opisane kompozycje przeciwciał anty-CD20, szczególnie do terapii ludzkich pacjentów posiadających ekspresję FcyRIIIA (F158). FcyRIIIA (F158) jest bardziej powszechny niż FcyRIIIA (V158) w normalnych zdrowych amerykanach podchodzenia afrykańskiego oraz osobach pochodzenia kaukaskiego. Zobacz Lehrnbecher i wsp. Blood 94:4220 (1999). Niniejsze zgłoszenie ponadto pokazuje synergistyczny wzrost w wiązaniu FcyRIII i/lub funkcji ADCC, które są wynikiem połączenia wariantów glikozylacji ujawnionych tutaj z modyfiką(acjami) sekwencji aminokwasowej w regionie Fc glikoproteiny.
Wyizolowane przeciwciało jest tym, Które zostało zidentyfikowane i oddzielone i/lub odzyskane z komponentu lub środowiska naturalnego. Składnikami zanieczyszczającymi ze środowiska naturalnego są materiały, które mogłyby oddziaływać z zastosowaniami diagnostycznymi lub terapeutycznymi przeciwciała i mogą obejmować enzymy, hormony i inne białkowe lub niebiałkowe rozpuszczone substancje. W korzystnych wykonaniach przeciwciało będzie oczyszczone (1) do większej niż 95% wagowo masy przeciwciał, jak oznaczono metodą Lowry'ego i bardziej korzystnie większej niż 99% wagowo, (2) do stopnia wystarczającego do uzyskania 15 reszt N-końcowej lub wewnętrznej sekwencji aminokwasowej przy użyciu sekwenatora z wirującym bębnem, lub (3) do homogenności przy użyciu techniki SDS-PAGE w redukujących lub nieredukujących warunkach z zastosowaniem barwnika Coomassie Blue lub korzystnie barwienia srebrem. Wyizolowane przeciwciało obejmuje przeciwciało in situ w rekombinowanych komórkach, dopóki przynajmniej jeden składnik naturalnego środowiska przeciwciała nie będzie obecny. Zwykle jednak wyizolowane przeciwciało będzie przygotowane przez przynajmniej jeden etap oczyszczania.
Wyizolowaną cząsteczką kwasu nukleinowego jest cząsteczka kwasu nukleinowego, która jest zidentyfikowana i wyodrębniona z przynajmniej jednej zanieczyszczającej cząsteczki kwasu nukleinowego, która zwykle występuje w naturalnym źródle kwasu nukleinowego kodującego przeciwciało. Wyizolowana cząsteczka kwasu nukleinowego jest w innej postaci lub ustawieniu niż ta, w której występuje w naturze. Zatem wyizolowane cząsteczki kwasu nukleinowego są różne od cząsteczki kwasu nukleinowego, która występuje w naturalnych komórkach. Jednakże wyizolowana cząsteczka kwasu nukleinowego obejmuje cząsteczkę kwasu nukleinowego obecną w komórkach, które zwykle posiadają ekspresję przeciwciała, gdzie, na przykład, cząsteczka kwasu nukleinowego jest w innym położeniu na chromosomie niż to z komórek naturalnych.
Sekwencje kontrolujące ekspresję dotyczą sekwencji DNA koniecznych do ekspresji funkcjonalnie przyłączonej sekwencji kodującej i określonych organizmie gospodarza. Sekwencje kontrolne, które są odpowiednie dla prokariotów, na przykład, obejmują promotor, opcjonalnie sekwencję operatora oraz miejsce wiązania rybosomu. Wiadomo, że komórki eukariotyczne angażują promotory, sygnały poliadenylacji oraz sekwencje wzmacniające ekspresję.
Kwas nukleinowy jest funkcjonalnie połączony, jeżeli jest umieszczony w funkcjonalnym układzie z mną sekwencją kwasu nukleinowego. Na przykład, DNA kodujący presekwencję lub lider sekrecyjny jest funkcjonalnie połączony z DNA kodującym polipeptyd, jeżeli ulega ekspresji jako prebiałko, które uczestniczy w sekrecji polipeptydu; promotor lub sekwencja wzmacniająca ekspresje jest funkcjonalnie połączony z sekwencją kodującą, jeżeli wpływa na transkrypcję tej sekwencji; lub miejsce wiążące rybosom jest funkcjonalnie połączony z sekwencją kodującą, jeżeli jest usytuowane tak, że ułatwia translację. Ogólnie, funkcjonalnie połączony oznacza, że sekwencje DNA, które są połączone są ciągłe i, w przypadku lidera sekrecyjnego, ciągłe i w ramce odczytu. Jednakże sekwencje wzmacniające ekspresję nie muszą być ciągłe. Połączenie jest wykonywane poprzez ligację w dogodnych miejscach restrykcyjnych. Jeżeli takie miejsca nie istnieją, stosowane są syntetyczne adaptory lub linkery oligonukleotydowe lub linkery według konwencjonalnej praktyki.
Sekwencje kontrolujące ekspresję dotyczą sekwencji DNA koniecznych do ekspresji funkcjonalnie przyłączonej sekwencji kodującej i określonych organizmie gospodarza. Sekwencje kontrolne, które są odpowiednie dla prokariotów, na przykład, obejmują promotor, opcjonalnie sekwencję operatora oraz miejsce wiązania rybosomu. Wiadomo, że komórki eukariotyczne angażują promotory, sygnały poliadenylacji oraz sekwencje wzmacniające ekspresję.
Kwas nukleinowy jest funkcjonalnie połączony, jeżeli jest umieszczony w funkcjonalnym układzie z inną sekwencją kwasu nukleinowego. Na przykład, DNA kodujący presekwencję lub lider sekrecyjny jest funkcjonalnie połączony z DNA kodującym polipeptyd, jeżeli ulega ekspresji jako prebiałko,
PL 212 899 B1 które uczestniczy w sekrecji polipeptydu; promotor lub sekwencja wzmacniająca ekspresję jest funkcjonalnie połączony z sekwencją kodującą, jeżeli wpływa na transkrypcję tej sekwencji; lub miejsce wiążące rybosom jest funkcjonalnie połączony z sekwencją kodującą, jeżeli jest usytuowane tak, że ułatwia translację. Ogólnie, funkcjonalnie połączony oznacza, że sekwencje DNA, które są połączone są ciągłe i, w przypadku lidera sekrecyjnego, ciągłe i w ramce odczytu. Jednakże sekwencje wzmacniające ekspresję nie muszą być ciągłe. Połączenie jest wykonywane poprzez ligację w dogodnych miejscach restrykcyjnych. Jeżeli takie miejsca nie istnieją, stosowane są syntetyczne adaptory lub linkery oligonukleotydowe lub linkery według konwencjonalnej praktyki.
Wektor obejmuje wektory dwufunkcyjne i ekspresyjne. Typowo konstrukt plazmidu będzie zawierał także miejsce startu replikacji (np., miejsce startu replikacji ColE1) oraz znacznik selekcyjny (np. oporność na ampicylinę lub tetracyklinę) w celu odpowiednio replikacji i selekcji plazmidów w bakteriach. Wektor ekspresyjny odnosi się do wektora, który zawiera konieczne sekwencje kontrolne lub elementy regulacyjne do ekspresji w komórkach bakteryjnych lub eukariotycznych przeciwciał włączając fragment przeciwciała z wynalazku. Odpowiednie wektory są ujawnione poniżej.
Komórka, która wytwarza humanizowane przeciwciało wiążące CD20 z wynalazku będzie obejmować bakteryjne lub eukariotyczne komórki gospodarza, do których wprowadzono kwas nukleinowy kodujący przeciwciała z wynalazku. Odpowiednie komórki gospodarza są ujawnione poniżej.
Używane tutaj słowo znacznik odnosi się do związku lub kompozycji możliwej do wykrycia, która jest bezpośrednio lub pośrednio połączona z przeciwciałem. Znacznik może być wykrywalny sam z siebie (np. znaczniki radioizotopowe lub znaczniki fluorescencyjne) lub, w przypadku znacznika enzymatycznego, może katalizować chemiczną przemianę związku lub kompozycji będącej substratem, który jest możliwy do wykrycia.
Chorobą autoimmunologiczną jest tutaj nienowotworowa choroba lub zaburzenie powstałe w wyniku odpowiedzi skierowanej przeciwko własnym antygenom i/lub tkankom gospodarza. Stosowane tutaj określenie deplecja komórek B odnosi się do zmniejszenia poziomów komórek B u zwierzęcia lub człowieka po leczeniu lekiem lub przeciwciałem w porównaniu z poziomem komórek B przed leczeniem. Poziomy komórek B są możliwe do zmierzenia przy użyciu dobrze znanych oznaczeń, takich jak te opisane w Przykładach Doświadczalnych. Deplecja komórek B może być całkowita lub częściowa. W jednym z wykonań deplecja komórek B eksprymujących CD20 wynosi przynajmniej 25%. Nie będąc ograniczonym do jednego mechanizmu, możliwe mechanizmy deplecji komórek B obejmują ADCC, CDC, apoptozę, modulację wyrzutu wapnia lub kombinację dwóch lub więcej z powyższych.
Stosowane tutaj określenie środek cytotoksyczny odnosi się do substancji, która hamuje lub zapobiega funkcjonowaniu komórki i/lub powoduje dysfunkcję komórek. Oczekuje się, że określenie obejmuje izotopy radioaktywne (np. I131, I125, Y90 i Re186), środki chemoterapeutyczne, i toksyny, takie jak toksyny aktywne enzymatycznie pochodzenia bakteryjnego, grzybowego, roślinnego lub zwierzęcego lub ich fragmenty.
Środkiem chemoterapeutycznym jest związek chemiczny użyteczny w leczeniu nowotworu. Przykłady środków chemoterapeutycznych obejmują środki alkalizujące lub alkilujące, takie jak tiotepa i cyklofosfamid (CYTOXAN); sulfoniany alkilu, takie jak busulfan, improsulfan i piposulfan; azyrydyny, takie jak, benzodopa, karbokwon, meturedopa i uredopa; etylenoiminy i metylamelaminy włączając altretaminę, trietylenomelaminę, trietylenofosforamid, trietylenotiofosforamid i trimetylolomelaminę; iperyty azotowe, takie jak aschlorambucyl, chlornafazyna, cholofosfamid, estramustyna, ifosfamid, mechloroetamina, mechloroetamina, chlorowodorek tlenku, melfalan, nowembichina, fenesteryna, prednimustyna, trofosfamid, iperyt uracylu; nitrozomoczniki, takie jak, karmustyna, chlorozotocyna, fotemustyna, lomustyna, nimustyna, ranimustyna; antybiotyki, takie jak aklacynomyzyny, aktynomycyna, autramycyna, azaseryna, bleomycyny, kaktiomycyna, kalicheicyna, karabicyna, karminomycyna, karzynofilina, chromomycyny, daktynymycyna, daunorubicyna, detorubicyna, 6-diazo-5-okso-L-norleucyna, doksorubicyna (Adriamycyna), epirubicyna, esorubicyna, idarubicyna, mercellomycyna, mitomycyny, kwas mykofenolowy, nogalamycyna, oliwomycyny, peplomycyna, potfiromycyna, puromycyna, kwelamycyna, rodorubicyna, streptonigryna, streptozocyna, tubercidyna, ubenimeks, zynostatyna, zorubicyna; antymetabolity, takie jak metotreksat i 5-fluorouracyl (5-FU); analogi kwasu foliowego, takie jak denopteryna, metotreksat, pteropteryna, trimetreksat; analogi puryny, takie jak fludarabina, 6-merkaptopuryna, tiamipryna, tioguanina; analogi pirymidyny, takie jak ancytabina, zacytydyna, 6-azaurydyna, karmofur, cytarabina, dideoksyurydyna, doksyflusydyna, enocytabina, fluksurydyna,
5-FU; androgeny, takie jak kalukteron, propionian dromostanolonu, epitiostanol, mepitiostan, testolakton;
PL 212 899 B1 środki przeciw hormonom wydzielanym przez nadnercza, takie jak aminoglutetymid, mitotan, trilostan; środek uzupełniający niedobór kwasu foliowego, taki jak kwas folionowy; aceglaton; glikozyd aldofosfamidu; kwas aminolewulinowy; amsakryna; bestrabucyl; bisantren; edatraksat; defofamina; demekolcyna; diazikwon; elfornityna; octan eliptynu; etoglucyd; azotan galu; hydroksymocznik; lentinan; lonidamina; mitoguazon; mitoksantron; mopidamol; nitrakryna; pentostatyna; fenamet; pirarubicyna; kwas podofilinowy; 2-etylohydrazyd; prokarbazyna; PSK®; razoksan; sizofiran; spirogerman; kwas tenuazonowy; triazikwon; 2,2',2''-trichlorotrietylamina; uretan; windesyna; dakarbazyna; mannomustyna; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacytozyna; arabinosyd (Ara-C); tiotepa; taksoidy, np. paklitaksel (TAXOL® Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ) i doksetaksel (TAXOTERE®, RhonePoulenc Rorer, Antony, Francja); chlorambucyl; gemcytabina; 6-tioguanina; merkaptopuryna; metotreksat; analogi platyny, takie jak cisplatyna i karboplatyna; platyna; etoposyd (VP-16); ifosfamid; mitomycyna C; mitoksantron; winkrystyna; winblastyna; winorelbina; nawelbina; nowantron; teniposyd; daunomycyna; aminopteryna; kseloda; ibandronat; CPT-11; inhibitor topoizomerazy RFS 2000; difluorometyloornityna (DMFO); kwas retinowy; esperamicyny; kapecytabina; oraz farmaceutycznie akceptowalne sole, kwasy lub pochodne dowolnego z powyższych. Także do tej definicji włączone są czynniki anty-hormonalne, których działanie polega na regulacji lub hamowaniu działania hormonu na nowotwory, takie jak anty-androgeny włączając, na przykład, tamoksifen, raloksifen, 4(5)-imidazole hamujące aromatazę, 4-hydroksytamiksifen, trioksifen, keoksifen, LY117C18, onapriston i toremifen (Fareston); anty-androgeny, takie jak flutamid, nilutamid, bikalutamid, leuprolid i goserelina; inne środki chemoterapeutyczne, takie jak prednisolon. Włączone są farmaceutycznie akceptowalne sole, kwasy lub sole dowolnego z powyższych.
Traktowanie lub leczenie lub złagodzenie odnosi się zarówno do terapeutycznego leczenia jak i do profilaktycznych lub prewencyjnych środków zaradczych, których przedmiotem jest zapobiegać lub spowalniać (zmniejszać) stan patologiczny lub schorzenie, na które są skierowane. Osobnik jest pomyślnie leczony na nowotwór CD20-dodatni lub chorobę immunologiczną, jeżeli po otrzymaniu terapeutycznej dawki przeciwciała wiążącego CD20 z wynalazku według sposobów z niniejszego wynalazku, wykazuje możliwe do zaobserwowania i/lub zmierzenia zmniejszenie lub brak jednej lub większej liczby oznak i objawów określonej choroby. Na przykład, dla nowotworu, zmniejszenie liczby komórek nowotworowych lub brak komórek nowotworowych; zmniejszenie rozmiaru guza nowotworowego; zahamowanie (tj. zmniejszenie do pewnego stopnia, a korzystnie zatrzymanie) tworzenia się przerzutów; zahamowanie, do pewnego stopnia, wzrostu guza nowotworowego; zwiększenie długości remisji oraz/lub usunięcie, do pewnego stopnia, jednego lub większej liczby objawów związanych ze specyficznym nowotworem; zmniejszony stan chorobowy i śmiertelność oraz polepszenie w jakości aspektów życiowych. Zmniejszenie oznak lub objawów choroby może być także odczuwane przez pacjenta. Leczenie może osiągnąć całkowitą odpowiedź, zdefiniowaną jako zanik wszystkich oznak nowotworu lub częściową odpowiedź, w której rozmiar nowotworu jest zmniejszony, korzystnie bardziej niż 50 procent, bardziej korzystnie 75%. Rozważa się także leczenie pacjenta, jeżeli pacjent wykazuje chorobę stabilną. W korzystnym wykonaniu, pacjenci z nowotworem są nadal bez objawów progresji nowotworu po jednym roku, korzystnie po 15 miesiącach. Te parametry do oszacowania udanego leczenia i polepszenia stanu chorobowego są z łatwością możliwe do zmierzenia przy użyciu rutynowych procedur znanych lekarzowi z odpowiednim doświadczeniem w tej dziedzinie.
Terapeutycznie skuteczna ilość odnosi się do ilości przeciwciała lub leku skutecznej do leczenia choroby lub schorzenia u pacjenta. W przypadku nowotworu, terapeutycznie skuteczna ilość leku może zmniejszać liczbę komórek nowotworowych; zmniejszać (zatrzymywać) naciekanie komórek nowotworowych do organów obwodowych; hamowanie (tj. spowalnianie do pewnego stopnia lub korzystnie zatrzymywanie) tworzenie przerzutów nowotworowych; hamowanie, do pewnego stopnia, wzrostu nowotworu; oraz/lub usuwać do pewnego stopnia jeden lub większą liczbę objawów związanych z nowotworem. Zobacz powyższą definicję leczenia.
Przewlekłe podawanie odnosi się do podawania środka(ów) w sposób ciągły w przeciwieństwie do sposobu gwałtownego, tak, aby utrzymać początkowy efekt (aktywność) terapeutyczny w ciągu wydłużonego okresu czasu. Przerywane podawanie jest leczeniem, które nie jest wykonywane kolejno bez przerwy, ale posiada raczej charakter cykliczny.
Kompozycje i Sposoby z Wynalazku
Wynalazek dostarcza humanizowanych przeciwciał, które wiążą ludzki CD20 i korzystnie również CD20 innych naczelnych, zawierających łańcuch H posiadający przynajmniej jeden, korzystnie dwa lub wszystkie regiony CDR łańcucha H z przeciwciała anty-ludzki CD20 pochodzącego z gatunków
PL 212 899 B1 innych niż ludzki (przeciwciało będące dawcą), oraz zasadniczo wszystkie reszty szkieletu przeciwciała o Iudzkim konsensusie jako przeciwciała będącego biorcą. Przeciwciało będące dawcą może pochodzić z różnych gatunków innych niż ludzki włączając mysz, szczura, świnkę morska, kozę, królika, konia, naczelnego, ale najczęściej będzie to mysie przeciwciało. Zasadniczo wszystkie w tym konstekscie jest rozumiane w ten sposób, że regiony FR biorcy w humanizowanym przeciwciele mogą zawierać jedną lub większą liczbę postawień aminokwasowych nieobecnych oryginalnie w ludzkiej sekwencji konsensusowej FR. Te zmiany w FR mogą obejmować reszty nie znajdowane w przeciw-ciele będącym biorcą lub dawcą.
W jednym z wykonań przeciwciałem będącym dawcą jest mysie przeciwciało 2H7, region V obejmujący sekwencje CDR i FR każdego z łańcuchów H i L, które są pokazane na Fig. 1A i 1B. W specyficznym wykonaniu reszty szkieletu ludzkiego Fab odpowiadają sekwencji konsensusowej ludzkiej podgrupie I VK i podgrupie III VH, te sekwencje konsensusowe są pokazane odpowiednio na Fig. 1A i 1B. Humanizowane przeciwciało 12H7 z wynalazku będzie posiadać przynajmniej jeden z regionów CDR z łańcucha H mysiego przeciwciała będącego dawcą. W jednym z wykonań, humanizowane przeciwciało 2H7, które wiąże ludzkie CD20 zawiera regiony CDR obydwu łańcuchów H i L z przeciwciała będącego dawcą.
W przeciwciele pełnej długości, humanizowane przeciwciało z wynalazku wiążące CD20 będzie obejmować humanizowaną domenę V przyłączoną do domeny C z ludzkiej immunoglobuliny. W korzystnym wykonaniu, region C łańcucha H jest z ludzkiej IgG, korzystnie IgG1 lub IgG3. Domena C łańcucha L jest korzystnie z ludzkiego łańcucha k.
Jeżeli nie wskazano inaczej, niniejsza wersja humanizowanego przeciwciała 2H7 będzie posiadać sekwencje domeny V i C z łańcucha L2H7.v16 (Fig. 6, SEK ID NR 21) i łańcucha H (Fig. 7., SEK ID NR 22) oprócz pozycji aminokwasowych podstawień lub zmian wskazanych w przykładach eksperymentów poniżej.
Humanizowane przeciwciała wiążące CD20 będą wiązać przynajmniej ludzkie CD20 i korzystnie wiązać CD20 innych naczelnych, takich jak małpy, włączając małpy Cynomolgus i rezusy oraz szympanse. Sekwencja CD20 z małpy Cynomolgus jest ujawniona w Przykładzie 15 i na Fig. 19.
Biologiczna aktywność przeciwciał wiążących CD20 i humanizowanych przeciwciał wiążących CD20 z wynalazku będzie obejmować przynajmniej wiązanie przeciwciała do ludzkiego CD20, bardziej korzystnie wiązanie do CD20 człowieka lub naczelnych (włączając małpę Cynomolgus, rezusa, szympansa), z wartością Kd nie większą niż 1 x 10-8, korzystnie z wartości Kd nie większą niż około 1 x 10-9 nawet bardziej korzystnie z wartością Kd nie większą niż około 1 x 10-10 i bycie zdolnym do zabicia lub deplecji komórek B in vitro i in vivo, korzystnie o przynajmniej 20% w porównaniu z poziomem podstawowym lub odpowiednią kontrolą negatywną, która nie jest traktowana takim przeciwciałem.
Pożądany poziom deplecji komórek B będzie zależał od choroby. W leczeniu nowotworu CD20-dodatniego może być pożądane maksymalne zwiększenie deplecji komórek B, które są celem przeciwciała anty-CD20 z wynalazku. Zatem, do Ieczenia nowotworu komórek B CD20-dodatnich, pożądane jest, aby deplecja komórek B była wystarczająca do zapobieżenia progresji choroby, która może być oznaczona przez lekarza z doświadczeniem w tej dziedzinie, np. przez monitorowanie wzrostu nowotworu (rozmiaru), proliferacji komórek typu nowotworowego, tworzenia przerzutów, innych oznak i objawów określonego nowotworu. Korzystnie deplecja komórek B jest wystarczająca do zapobieżenia progresji choroby przez przynajmniej 2 miesiące, bardziej korzystnie 3 miesiące, nawet bardziej korzystnie 4 miesiące, bardziej korzystnie 5 miesięcy, nawet bardziej korzystnie 6 lub więcej miesięcy, bardziej korzystnie 9 miesięcy, bardziej korzystnie jeden rok, bardziej korzystnie 2 lata, bardziej korzystnie 3 lata, nawet bardziej korzystnie 5 lub więcej lat. W najbardziej korzystnym wykonaniu deplecja komórek B jest wystarczająca do wyleczenia choroby. W korzystnych wykonaniach deplecja komórek B u pacjenta z nowotworem wynosi przynajmniej 75% a bardziej korzystnie 80%, 85%, 90%, 95%, 99% a nawet 100% podstawowego poziomu przed leczeniem.
Do leczenia ludzkiej choroby autoimmunologicznej może być pożądane modulowanie rozmiaru deplecji komórek B, w zależności od choroby i/lub ciężkości stanu określonego pacjenta, przez dostosowanie dawki przeciwciała wiążącego CD20. Zatem, deplecja komórek B może, ale nie musi być całkowita. Całkowita deplecja komórek B może być pożądana w leczeniu początkowym, ale w następnych leczeniach dawka może być dostosowana do osiągnięcia tylko częściowej deplecji. W jednym z wykonań deplecja komórek B wynosi 20%, tj. 80% lub mniej komórek B CD20-dodatnich pozostaje w porównaniu do poziomu podstawowego sprzed leczenia. W innych wykonaniach deplecja komórek B wynosi 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% lub więcej. Korzystnie, deplecja komórek B jest
PL 212 899 B1 wystarczająca do zatrzymania progresji choroby, bardziej korzystnie do złagodzenia oznak lub objawów określonej choroby podczas leczenia, a nawet bardziej korzystnie do wyleczenia choroby.
Wynalazek dostarcza także dwuspecyficznych przeciwciał wiążących CD20, w których jedno ramię przeciwciała posiada humanizowany łańcuch H i L z humanizowanego przeciwciała z wynalazku wiążącego CD20 a drugie ramię posiada region V wiążący specyficznie drugi antygen. W specyficznych wykonaniach drugim antygenem jest wybrany z grupy składającej się z CD3, CD64, CD32A, CD16, NKG2D lub inne ligandy aktywujące NK.
W porównaniu z Rituxan (rituximab), v16 wykazuje około 2 do 5 razy zwiększoną aktywność ADCC, ~3-4 razy obniżoną CDC niż Rituxan.
Wytwarzanie przeciwciał
Przeciwciała monoklonalne
Przeciwciała monoklonalne mogą być wytworzone przy użyciu sposobu z zastosowaniem hybrydomy, opisanym przez Kohler i wsp., Nature, 256:495 (1975), Iub mogą być wytworzone przy użyciu sposobów z zastosowaniem technik rekombinowanego DNA (Patent USA Nr 4816567).
W sposobie z zastosowaniem hybrydomy mysi lub inny odpowiedni gospodarz zwierzęcy, taki jak chomik, jest immunizowany, jak opisano powyżej w celu otrzymania limfocytów, które wytwarzają lub są zdolne do produkcji przeciwciał, które będą się specyficznie wiązać do białka użytego do immunizacji. Alternatywnie, limfocyty mogą być immunizowane in vitro. Po immunizacji limfocyty są izolowane i następnie poddane fuzji z linią komórkową szpiczaka przy użyciu dogodnego środka fuzyjnego, takiego jak glikol polietylenowy, w celu utworzenia komórki hybrydomy (Goding, Monoclonal Antibodies:Principles and Practice, str. 59-103 (Academic Press, 1986)).
Tak przygotowane komórki hybrydomy są wysiewane i hodowane w odpowiedniej pożywce hodowlanej, która to pożywka korzystnie zawiera jedną lub więcej substancji, które hamują wzrost lub przeżycie rodzicielskich komórek szpiczaka, które nie uległy fuzji (także określane jak parter fuzyjny). Na przykład rodzicielskie komórki szpiczaka nie posiadają enzymu fosforybozylotransferazy hipoksantynowo-guaninowej (HGPRT lub HPRT), selekcyjna pożywka hodowlana typowo będzie zawierać hipoksantynę, aminopterynę i tymidynę (pożywka HAT), które to substancje zapobiegają wzrostowi komórek nie posiadających HGPRT.
Komórki szpiczaka, jako korzystny partner fuzyjny są tymi, które wydajnie ulegają fuzji, sprzyjają stabilnemu wytwarzaniu przeciwciał na wysokim poziomie przez wyselekcjonowane komórki wytwarzające przeciwciała i są wrażliwe na pożywkę selekcyjną, która selekcjonuje przeciwko komórkom rodzicielskim, które nie uległy fuzji. Korzystne linie komórkowe szpiczaka są mysimi liniami szpiczaka, takimi jak te otrzymane z mysich nowotworów MOPC-21 i MPC-11 dostępnych z Centrum Dystrybucji Komórek w Salk Institute, San Diego, Kalifornia, USA, oraz SP-2 i pochodne, np. komórki X63-Ag8-653 dostępne z American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA. Opisano również zastosowanie linii komórkowych ludzkiego szpiczaka lub linii komórkowych ludzko-mysiego heteroszpiczaka do produkcji ludzkich przeciwciał monoklonalnych (Kozbor, J. Inzmunol., 133:3001 (1984); oraz Brodeur i wsp., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, str. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
Pożywka hodowlana, w której komórki hybrydomy są hodowane jest oznaczana na produkcję przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko antygenowi. Korzystnie specyficzność wiązania przeciwciał monoklonalnych wytworzonych przez komórki hybrydomy jest oznaczana przez immunoprecypitację lub przez oznaczenie wiązania in vitro, takie jak radioimmunooznaczenie (RIA, ang. radioimmunoassay) lub oznaczenie immunoabsorpcji enzymozależnej (ELISA).
Powinowactwo wiązania przeciwciała monoklonalnego może, na przykład, być oznaczone przez analizę Scatchard'a opisaną w Munson i wsp., Anal. Biochem., 107:220 (1980).
Jeżeli zostaną zidentyfikowane komórki hybrydomy wytwarzające przeciwciała o pożądanej specyficzności, powinowactwie i/lub aktywności, klony mogą być subklonowane przez procedury z użyciem seryjnych rozcieńczeń i hodowane z użyciem standardowych sposobów (Goaing, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, str. 59-103 (Academic Press, 1986)). Odpowiednie pożywki hodowlane stosowane do tego celu obejmują, na przykład pożywkę D-MEM lub RPMI-1640. Dodatkowo, komórki hybrydomy mogą być hodowane in vivo jako guzy puchliny brzusznej w zwierzęciu, np. przez śródotrzewnowe wstrzyknięcie komórek do myszy.
Przeciwciała monoklonalne wydzielone przez subklony są w dogodny sposób oddzielane od pożywki hodowlanej, płynu puchliny brzusznej lub surowicy przy użyciu konwencjonalnych procedur oczyszczania przeciwciał, takich jak, na przykład, chromatografia powinowactwa (np. przy użyciu białka A
PL 212 899 B1 lub złoża białko G-Sepharose) lub chromatografia jonowymienna, chromatografia na hydroksyapatycie, chromatografia żelowa, dializa, itp.
DNA kodujący przeciwciała monoklonalne jest z łatwością izolowany i sekwencjonowany przy użyciu konwencjonalnych procedur (np., przy użyciu sond oligonukleotydowych, które są zdolne do specyficznego wiązania się z genów kodujących ciężkie i lekkie łańcuchy przeciwciał mysich). Komórki hybrydomy służą jako preferowane źródło takiego DNA. Raz wyizolowany DNA może być umieszczony w wektorach ekspresyjnych, które są transfekowane do komórek gospodarza, takich jak komórki E. coli, małpie komórki COS, komórki z jajnika chomika chińskiego (CHO) lub komórki szpiczaka, które poza tym nie produkują innego białka będącego przeciwciałem, w celu uzyskania syntezy przeciwciał monoklonalnych w rekombinowanych komórkach gospodarza. Artykuły przeglądowe dotyczące rekombinowanej ekspresji w bakteriach DNA kodującego przeciwciało obejmują Skerra i wsp., Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993) oraz Ptockthun, Immunol. Revs., 130:151-188 (1992).
W dalszym wykonaniu, przeciwciała monoklonalne lub fragmenty przeciwciał mogą być wyizolowane z fagowych bibliotek przeciwciał wytworzonych przy użyciu technik opisanych w McCafferty i wsp. Nature, 348:522-554 (1990). Clackson i wsp., Nature, 352:624-628 (1991) oraz Marks i wsp., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991) opisują izolację odpowiednio mysich i ludzkich przeciwciał przy użyciu bibliotek fagowych. Kolejne publikacje opisują wytwarzanie ludzkich przeciwciał o wysokim powinowactwie (w zakresie nM) przez tasowanie łańcucha (Marks i wsp., Bio/Technology, 10:779-783 (1992)), jak również kombinatoryczną infekcję oraz rekombinację in vivo jako strategię do konstruowania bardzo dużych bibliotek fagowych (Waterhouse i wsp., Nuc. Acids. Res., 21:2265-2266 (1993)). Zatem, te techniki są wykonalnymi alternatywami do tradycyjnych technik otrzymywania przeciwciał monoklonalnych z użyciem hybrydomy do izolacji przeciwciał monoklonalnych.
DNA, który koduje przeciwciało może być zmodyfikowane do wytwarzania chimerycznych lub fuzyjnych polipeptydów będących przeciwciałami, na przykład, przez podstawienie stałej sekwencji domeny ludzkiego ciężkiego łańcucha i lekkiego łańcucha (CH i CL) do homologicznych sekwencji mysich (Patent USA Nr 4816567; oraz Morrison, i wsp., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)), lub przez fuzję immunoglobuliny kodującej sekwencję, z całością lub częścią sekwencji kodującej polipeptyd nie będącym przeciwciałem (polipetyd heterologiczny). Sekwencje polipeptydu nie będącego przeciwciałem mogą być podstawione do domen stałych przeciwciała, lub mogą być podstawione do domen zmiennych jednego z miejsc przeciwciała wiążących antygen w celu otrzymania chimerycznego przeciwciała dwuwartościowego posiadającego jedno miejsce wiążące antygen mające specyficzność do jednego antygenu a drugie miejsce wiązania antygenu mające specyficzność do innego antygenu.
Przeciwciała humanizowane
W tej dziedzinie opisano sposoby na humanizowanie przeciwciał innych niż Iudzkie. Korzystnie, humanizowane przeciwciało posiada jedną lub więcej reszt aminoxwasowych wprowadzonych do niego ze źródła, które jest inne niż ludzkie. Reszty aminokwasów innych niż ludzkie są często określane jako reszty importowane, które są typowo wzięte z importowanej domeny zmiennej. Humanizowanie może być w szczególności wykonane przy użyciu sposobu Wintera i współpracowników (Jones i wsp., Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann i wsp., Nature, 332:323-327 (1988); Vernoeyen i wsp., Science, 239:1534-1536 (1988)) opartego na podstawieniu sekwencji regionu zmiennego do odpowiadających im sekwencji ludzkiego przeciwciała. Stosownie do tego, takie humanizowane przeciwciała są przeciwciałami chimerycznymi (Patent USA Nr 4816567), w których zasadniczo mniej niż nienaruszona ludzka domena zmienna została podstawiona przez odpowiadającą jej sekwencją z gatunków innych niż ludzki. W praktyce, humanizowane przeciwciała są typowo ludzkimi przeciwciałami, w których niektóre reszty regionu hiperzmiennego i ewentualnie niektóre reszty regionu FR są podstawione resztami analogicznych miejsc w przeciwciałach gryzoni.
Wybór ludzkich domen zmiennych, zarówno lekkiego, jak i ciężkiego łańcucha, które mają być użyte to tworzenia przeciwciał humanizowanych jest bardzo ważny do zmniejszenia antygenowości oraz odpowiedzi HAMA (ludzkie przeciwciało anty-mysie), jeżeli zamierza się użycie przeciwciała do celów terapeutycznych u człowieka. Według tak zwanego sposobu najlepszego dopasowania, sekwencja regionu zmiennego przeciwciała gryzonia jest przeszukiwana przeciwko całej bibliotece znanych sekwencji ludzkich domen zmiennych. Sekwencja ludzkiej domeny V, która jest najbliższa tej z gryzonia jest identyfikowana i ludzki region szkieletowy (FR) w niej jest wybierany do przeciwciała humanizowanego (Sims i wsp., J. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia wsp., J. Mol. Biol., 196:901 (1987)). Inny sposób wykorzystuje określony region szkieletowy otrzymany z sekwencji konsensusowej
PL 212 899 B1 wszystkich ludzkich przeciwciał określonej podgrupy lekkich lub ciężkich łańcuchów. Ten sam szkielet może być użyty do kilku różnych przeciwciał humanizowanych (Carter i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); Presta i wsp., J. Immunol, 151:2623 (1993)).
Ważne jest ponadto, aby przeciwciało było humanizowane z zachowaniem dużego powinowactwa wiązania antygenu i innych korzystnych właściwości biologicznych. W celu osiągnięcia tego celu, według korzystnego sposobu, humanizowane przeciwciała są przygotowane przez proces analizy sekwencji wyjściowych i różnych konceptualistycznych produktów humanizowanych przy użyciu trójwymiarowych modeli wyjściowych oraz humanizowanych sekwencji. Trójwymiarowe modele immunoglobulin są powszechnie dostępnie i są znane specjalistom w tej dziedzinie. Dostępne są programy komputerowe, które ilustrują i wyświetlają przypuszczalne trójwymiarowe struktury konformacyjne wybranych kandydatów sekwencji immunoglobulinowych. Badanie tych obrazów pozwala na analizę przypuszczalnej roli reszt w funkcjonowaniu kandydata sekwencji immunoglobulinowej, tj. analizę reszt, które wypływają na zdolności kandydata immunoglobuliny do wiązania jego antygenu. W ten sposób mogą być wybrane reszty FR i połączone z sekwencjami biorcy i sekwencjami importowanymi tak, że osiągana jest odpowiednia cecha przeciwciała, taka jak zwiększone powinowactwo do docelowego(ych) antygenu(ów). W ogólności, reszty regionu hiperzmiennego są bezpośrednio i zasadniczo najbardziej zaangażowane we wpływie na wiązanie antygenu.
Przeciwciałem humanizowanym może być fragment przeciwciała Fab, który opcjonalnie jest połączony z jednym lub większą ilością środków cytotoksycznych w celu wytworzenia immunokoniugatu. Alternatywnie, humanizowanym przeciwciałem może być przeciwciało o pełnej długości, takie jak przeciwciało IgG o pełnej długości.
Ludzkie przeciwciała oraz technika prezentacji na fagach
Alternatywą do humanizacji jest wytworzenie ludzkich przeciwciał. Na przykład, teraz możliwe jest otrzymanie transgenicznych zwierząt (np. myszy), które są zdolne, po immunizacji do wytworzenia pełnego zestawu ludzkich przeciwciał przy braku wytwarzania endogennych immunoglobulin. Na przykład, opisane zostało, że homozygotyczna delecja genu kodującego region łączący ciężkiego łańcucha przeciwciała (JH) w mutantach chimerycznych oraz mutantach w linii płciowej powoduje całkowite zahamowanie wytwarzania endogennego przeciwciała. Transfer zestawu genów immunoglobolinowych z ludzkiej linii płciowej to takiego mutanta w linii płciowej spowoduje wytwarzanie ludzkich przeciwciał pod wpływem antygenu. Zobacz, np. Jakobovits i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 2551 (1993); Jakobovits i wsp., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggemann i wsp., Year in Immuno., 7:33 (1993) ; Patenty USA Nr 5545806,5569825, 5591669 (wszystkie dla GenPharm); 5545807; oraz WO 97/17852.
Alternatywnie, technika prezentacji na fagu (McCafferty i wsp., Nature 348:552-553 [1990]) może być użyta do wytworzenia ludzkich przeciwciał in vitro, z zestawów genu domeny zmiennej (V) immunoglobuliny otrzymanych z nieimmunizowanych dawców. Według tej techniki, geny domeny V przeciwciała są klonowane w ramce odczytu do głównego lub pomniejszego genu białka otoczki bakteriofaga nitkowatego, takiego jak M13 lub fd oraz prezentowane jako funkcjonalne fragmenty przeciwciał na powierzchni cząsteczki faga. Ponieważ cząsteczka nitkowata posiada genom faga w postaci kopii jednoniciowego DNA, selekcje oparte na właściwościach funkcjonalnych skutkują również w selekcji genu kodującego przeciwciało wykazujące te właściwości. Zatem, fag naśladuje pewne właściwości komórki B. Prezentacja na fagu może być wykonana w różnych odmianach, zebranych, np., w Johnson, Kevin S. i Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993). Do prezentacji na fagu może być użyte kilka źródeł segmentów genu V. Clackson i wsp., Nature, 352:624-628 (1991) wyizolował zróżnicowaną macierz przeciwciał anty-oksazolon z małej losowej kombinatorycznej biblioteki genów V otrzymanych ze śledzion immunizowanych myszy. Skonstruowany może być zestaw genów V z immunizowanych ludzkich dawców, a przeciwciała do zróżnicowanego szeregu antygenów (włączając auto-antygeny) mogą być wyizolowane według technik opisanych przez Marks i wsp., J. Mol. Biol. 222:581-597 lub Griffith i wsp., EMBO J. 12:725-734 (1993). Zobacz, także, Patenty USA Nr 5565332 oraz 5573905.
Jak przedyskutowano powyżej, przeciwciała ludzkie mogą być wytworzone przez komórki B aktywowane in vitro (zobacz Patenty USA 5567610 oraz 5229275).
Fragmenty przeciwciał
W pewnych okolicznościach korzystne jest raczej używanie fragmentów przeciwciał niż całych przeciwciał. Mniejszy rozmiar fragmentów pozwala na ich szybszy zanik oraz może prowadzić do polepszonego dostępu do guzów litych.
PL 212 899 B1
Do otrzymywania fragmentów przeciwciał opracowano różne techniki. Tradycyjnie, te fragmenty były otrzymywane przez proteolityczne cięcie nienaruszonych przeciwciał (zobacz, np., Morimoto i wsp., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992); oraz Brennan i wsp., Science, 229:81 (1985)). Jednakże, te fragmenty mogą być teraz produkowane bezpośrednio przez rekombinowane komórki gospodarza. Fragmenty przeciwciał Fab, Fv oraz ScFv mogą wszystkie ulegać ekspresji i być wydzielane z E. coli, zatem pozwalać na łatwe wytwarzanie dużych ilości tych fragmentów. Fragmenty przeciwciał mogą być wyizolowane z fagowych bibliotek przeciwciał przedyskutowanych powyżej, Alternatywnie, fragmenty Fab'-SH mogą być odzyskane bezpośrednio z E. coli i być chemicznie sprzężone z fragmentami F(ab')2 (Carter i wsp., Bio/Technology 10:163-167 (1992)). Według innego podejścia fragmenty F(ab')2 mogą być wyizolowane bezpośrednio z hodowli rekombinowanych komórek gospodarza. Fragmenty Fab i F(ab')2 ze zwiększonych czasem połowicznego rozpadu in vivo, zawierające reszty epitopu wiążące się do receptora ratunkowego (ang. salvage receptor, FcR) są opisane w Patencie USA Nr 5869046. Inne techniki wytwarzania fragmentów przeciwciał będą oczywiste dla specjalisty w tej dziedzinie. W innych wykonaniach wybranym przeciwciałem jest fragment Fv pojedynczego łańcucha (scFv). Zobacz WO 93/16185; Patent USA Nr 5571894; i Patent USA Nr 5587458. Fv i sFv są jedynymi rodzajami z nienaruszonymi miejscami wiązania, które są pozbawione regionów stałych; zatem są one odpowiednie podczas podawania in vivo ze względu na zmniejszone niespecyficzne wiązanie. Białka fuzyjne sFv mogą być skonstruowane tak, aby otrzymać fuzję białka efektorowego zarówno na końcu aminowym jak i karboksylowym sFv. Zobacz Antibody Engineering, ed. Borrebaeck, powyżej. Fragment przeciwciała może być także liniowym przeciwciałem np. jak opisano w Patencie USA Nr 5641870 na przykład. Takie fragmenty liniowego przeciwciała mogą być jednospecyficzne lub dwuspecyficzne.
Przeciwciała dwuspecyficzne
Przeciwciałami dwuspecyficznymi są przeciwciała, które posiadają specyficzność, wiązania do przynajmniej dwóch różnych epitopów. Przykładowe przeciwciała dwuspecyficzne mogą wiązać dwa różne epitopy białka CD20. Inne takie przeciwciała mogą mieć kombinację miejsca wiązania CD20 z miejscem wiązania innego białka. Alternatywnie, ramię anty-CD20 może być skombinowane z ramieniem, które wiąże się do cząsteczki aktywującej na leukocycie, takiej jak cząsteczka receptora komórki T (np. CD3) lub receptora Fc dla IgG (FcyR), takiego jak FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) i FcyRIII (CD16) lub NKG2D lub innego liganda aktywującego komórkę NK tak, aby zogniskować i zlokalizować komórkowe mechanizmy obronne na komórkach z ekspresją CD20. Te przeciwciała posiadają ramię wiążące CD20 oraz ramię, które wiąże środek cytotoksyczny (np. saporynę, anty-interferon-α, alkaloid barwinka, łańcuch rycyny A, metotreksat lub hapten izotopu radioaktywnego. Przeciwciała dwuspecyficzne mogą być przygotowane jako przeciwciała o pełnej długości lub fragmenty przeciwciał (np. dwuspecyficzne przeciwciała F(ab')2)·
WO 96/16673 opisuje dwuspecyficzne przeciwciało anty-ErbB2/anty-FcyRIII a patent USA Nr 5837234 ujawnia dwuspecyficzne przeciwciało anty-ErbB2/anty-FcyRI. Dwuspecyficzne przeciwciało anty-ErbB2/anty-Fca jest pokazane w WO98/02463. Patent USA Nr 5821337 demonstruje dwuspecyficzne przeciwciało anty-ErbB2/anty-CD3.
Sposoby na otrzymywanie przeciwciał dwuspecyficznych są znane w tej dziedzinie. Tradycyjne wytwarzanie przeciwciał o pełnej długości jest oparte na koekspresji dwóch par łańcuch ciężki-łańcuch lekki immonoglobuliny, gdzie dwa łańcuchy mają różne specyficzności (Millstein i wsp., Nature, 305:537-539 (1983)). Z powodu losowego łączenia lekkich i ciężkich łańcuchów immunoglobulinowych te hybrydomy (kwadromy) wytwarzają mieszaninę potencjalnych 10 różnych cząsteczek przeciwciał, z których tylko jedna posiada właściwą strukturę dwuspecyficzną. Oczyszczanie właściwej cząsteczki, które jest zazwyczaj wykonywane przez etapy chromatografii powinowactwa, jest raczej niewygodne, a wydajności produktu są niskie. Podobne procedury są ujawnione w WO 93/08829, oraz w Traunecker i wsp., EMBO J., 10:3655-3659 (1991).
Według innego podejścia, domeny zmienne przeciwciała z pożądanymi specyficznościami wiązania (miejsca wiązania przeciwciało-antygen) są poddane fuzji z sekwencjami domen stałych przeciwciała. Korzystnie, fuzja jest z domeną stałą łańcucha ciężkiego Ig, zawierającą przynajmniej część połączenia zawiasowego, regiony CH2 i CH3. Korzystne jest posiadanie pierwszego stałego regionu łańcucha ciężkiego (CH1) zawierającego miejsce konieczne do wiązania łańcucha lekkiego obecnego przynajmniej w jednej fuzji. Cząsteczki DNA kodujące fuzje łańcucha ciężkiego immunoglobuliny oraz, jeśli pożądane, łańcucha lekkiego immunoglobuliny, są wprowadzone do odrębnych wektorów ekspresyjnych i są poddane kotransfekcji do odpowiednich komórek gospodarza. To dostarcza większej
PL 212 899 B1 elastyczności w dopasowywaniu wzajemnych proporcji trzech fragmentów polipeptydowych w wykonaniach, w których nierówne proporcje łańcuchów polipeptydowych stosowane w konstrukcji dostarczają optymalnej wydajności pożądanego przeciwciała dwuspecyficznego. Możliwe jest jednak wprowadzenie sekwencji kodujących dwa lub wszystkie trzy łańcuchy polipeptydowe do pojedynczego wektora ekspresyjnego, jeżeli ekspresja przynajmniej dwóch łańcuchów polipeptydowych w równych proporcjach skutkuje wysokimi wydajnościami Iub kiedy proporcje nie mają znaczącego wypływu na wydajność pożądanej kombinacji łańcuchów.
W korzystnym wykonaniu tego podejścia, przeciwciała dwuspecyficzne składają się z łańcucha ciężkiego hybrydowej immunoglobuliny dostarczającego pierwszej specyficzności wiązania w jednym ramieniu oraz pary łańcuch ciężki-łańcuch lekki hybrydowej immunoglobuliny (dostarczającej drugą specyficzność wiązania) i drugim ramieniu. Stwierdzono, że ta asymetryczna struktura ułatwia oddzielenie pożądanego dwuspecyficznego składnika od niechcianych kombinacji łańcuchów immunoglobulinowych, jako że obecność łańcucha lekkiego immunoglobuliny w tylko połowie dwuspecyficznej cząsteczki dostarcza łatwego sposobu oddzielania. To podejście jest ujawnione w WO 94/04690. Dla dalszych szczegółów wytwarzania przeciwciał dwuspecyficznych zobacz, na przykład, Suresh i wsp., Methods in Enzymology, 121:210 (1986).
Według innego podejścia opisanego w Patencie USA Nr 5731168, miejsce oddziaływania pomiędzy parą cząsteczek przeciwciała może być projektowane w celu zmaksymalizowania procentu heterodimerów, które są odzyskiwane z hodowli komórek rekombinowanych. Korzystne miejsce oddziaływania zawiera przynajmniej część domeny CH3. W tym sposobie jeden lub większa ilość małych łańcuchów bocznych aminokwasów z miejsca oddziaływania pierwszej cząsteczki przeciwciała jest zastąpionych większymi łańcuchami bocznymi (np. tyrozyny lub tryptofanu). Kompensujące wgłębienia identycznego lub podobnego rozmiaru są stworzone w miejscu oddziaływania drugiej cząsteczki przeciwciała przez zastąpienie dużych łańcuchów bocznych aminokwasów mniejszymi (np. alaniny lub treoniny). Dostarcza to mechanizmu zwiększającego wydajność powstawania heterodimeru nad innymi niechcianymi produktami końcowymi, takimi jak homodimery.
Przeciwciała dwuspecyficzne obejmują przeciwciała związane krzyżowo lub heterokoniugaty. Na przykład, jedno z przeciwciał w heterokoniugacie może być sprzężone z awidyną, inne z biotyną. Takie przeciwciała, na przykład, były zaproponowane do nakierowywania komórek układu immunologicznego na niechciane komórki (Pacent USA Nr 4676980) oraz do leczenia infekcji HIV (WO 91/00360, WO 92/200373 i EP 03089). Przeciwciała w postaci heterokoniugatu mogą być wytworzone przy zastosowaniu dogodnych sposobów wiązania krzyżowego. Odpowiednie środki tworzące wiązania krzyżowe są dobrze znane w tej dziedzinie i są ujawnione w Patencie USA Nr 4676980, wraz z szeregiem technik tworzenia wiązań krzyżowych.
Techniki do wytwarzania przeciwciał dwuspecyficznych z fragmentów przeciwciał także zostały opisane w literaturze. Na przykład przeciwciała dwuspecyficzne mogą być przygotowane przy użyciu wiązania chemicznego. Brennan i wsp., Science, 229:81 (1985) opisuje procedurę, w której nienaruszone przeciwciała są przecinane proteolitycznie w celu wytworzenia fragmentów F(ab')2. Te fragmenty są redukowane w obecności środka kompleksującego ditiole, arsenianu sodu, w celu stabilizowania sąsiadujących ditioli i zapobiegania tworzenia międzycząsteczkowego dwusiarczku. Otrzymane fragmenty Fab' są następnie przekształcane do pochodnych kwasu tionitrobenzoesowego (TNB). Jedna z pochodnych Fab'-TNB jest następnie przekształcana do Fab'-tiol przez redukcję merkaptoetyloaminą i jest mieszana z równomolową ilością innej pochodnej Fab'-TNB w celu utworzenia przeciwciała dwuspecyficznego. Wytworzone przeciwciała dwuspecyficzne mogą być zastosowane jako środki do selektywnej immobilizacji enzymów.
Niedawny postęp ułatwił bezpośrednie odzyskiwanie fragmentów Fab'-SH z E. coli, które mogą być chemicznie sprzężone w celu utworzenia przeciwciał dwuspecyficznych. Shalaby i wsp., J. Exp. Med., 175:217-225 (1992) opisuje wytwarzanie cząsteczki F(ab')2 całkowicie humanizowanego przeciwciała dwuspecyficznego. Każdy z fragmentów Fab' był oddzielnie wydzielany z E. coli i poddany ukierunkowanemu chemicznemu sprzęganiu in vitro w celu utworzenia przeciwciała dwuspecyficznego. Przeciwciało dwuspecyficzne tak utworzone było zdolne do wiązania się do komórek z nadekspresją receptora ErbB2 i normalnych ludzkich komórek T, jak również do włączania aktywności litycznej ludzkich limfocytów cytotoksycznych przeciwko celom w postaci ludzkiego nowotworu piersi.
Opisane zostały również różne techniki otrzymywania i izolacji fragmentów przeciwciała dwuspecyficznego bezpośrednio z hodowli komórek rekombinowanych. Na przykład przeciwciała dwuspecyficzne zostały wytworzone przy użyciu suwaków leucynowych. Kostelny i wsp., J. Immunol.,
PL 212 899 B1
148(5):1547-1553 (1992). Peptydy suwaka leucynowego z białek Fos i Jun zostały połączone do fragmentów Fab' dwóch różnych przeciwciał przez fuzję genów. Homodimery przeciwciał zostały zredukowane w regionie zawiasowym w celu utworzenia monomerów a następnie ponownie utlenione w celu utworzenia heterodimerów przeciwciał. Ten sposób może być także wykorzystany do otrzymywania homodimerów przeciwciał. Technologia dwuciał opisana przez Hollinger i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993) dostarczyła alternatywnego mechanizmu otrzymywania fragmentów przeciwciała dwuspecyficznego. Fragmenty obejmują VH przyłączone do VL przez łącznik, który jest zbyt krótki aby pozwolić na parowanie pomiędzy dwoma domenami na tym samym łańcuchu. Stosownie do tego, domeny VH i VL jednego fragmentu są zmuszone do parowania z komplementarnymi domenami VL i VH innego fragmentu, przez to tworząc dwa miejsca wiązania antygenu. Doniesiono również o innej strategii otrzymywania fragmentów przeciwciał dwuspecyficznych przez użycie jednołańcuchowych dimerów Fv (sFv). Zobacz Gruber i wsp., J. Immunol., 152:5368 (1994).
Rozważane są również przeciwciała z więcej niż dwoma wartościami. Na przykład, mogą być przygotowane przeciwciała trójspecyficzne. Tutt i wsp. J. Immunol. 147:60(1991).
Przeciwciała wielowartościowe
Przeciwciało wielowartościowe może być przyswojone i/lub katabolizowane) szybciej niż przeciwciało dwuwartościowe przez komórkę z ekspresją antygenu, do którego wiążą się przeciwciała. Przeciwciała z niniejszego wynalazku mogą być przeciwciałami wielowartościowymi (które są inne niż klasa IgM) z trzema lub większą ilością miejsc wiążących antygen (np. przeciwciała czterowartościowe), które mogą być z łatwością otrzymane przez rekombinowaną ekspresję kwasu nukleinowego kodującego łańcuchy polipeptydowe przeciwciała. Przeciwciało wielowartościowe może zawierać domenę dimeryzacji i trzy lub więcej miejsc wiązania antygenu. Korzystna domena dimeryzacji zawiera (lub składa się z) region Fc lub region zawiasowy. W tym wariancie przeciwciało będzie zawierać region Fc oraz trzy lub większą liczbę miejsc wiązania antygenu położonych na końcu aminowym w stosunku do regionu Fc. Korzystne przeciwciało wielowartościowe tutaj zawiera (lub składa się z) trzy do około ośmiu, ale korzystnie cztery, miejsc wiązania antygenu. Przeciwciało wielowartościowe zawiera przynajmniej jeden łańcuch polipeptydowy (a korzystnie dwa łańcuchy polipeptydowe), w którym łańcuch(y) polipeptydowy(e) zawierają dwie lub większą ilość domen zmiennych. Na przykład, łańcuch(y) polipeptydowy(e) mogą zawierać VD1-(X1)n-VD2(X2)n-Fc, w którym VD1 jest pierwszą domeną zmienną, VD2 jest drugą domeną zmienną, Fc jest jednym łańcuchem polipeptydowym regionu Fc, X1 i X2 reprezentują aminokwas lub polipeptyd, a n jest 0 lub 1. Na przykład łańcuch(y) polipeptydowy(e) może(gą) zawierać: VH-CH1-elastyczny łącznik-VH-CH1-region Fc łańcucha; lub VH-CH1-VH-CH1-region Fc łańcucha. Przeciwciało wielowartościowe tutaj korzystnie zawiera tutaj przynajmniej dwie (a korzystnie cztery) polipeptydy domeny zmiennej łańcucha lekkiego. Przeciwciało wielowartościowe tutaj może, na przykład, zawierać od około dwóch do około ośmiu polipeptydów domeny zmiennej łańcucha lekkiego. Polipeptydy domeny zmiennej łańcucha lekkiego rozważane tutaj mogą zawierać domenę zmienną łańcucha lekkiego oraz, opcjonalnie, zawierać ponadto domenę CL.
Inne modyfikacje sekwencji aminokwasowej
Rozważana(e) jest(są) również modyfikacja(e) sekwencji aminokwasowej opisanych tutaj przeciwciał wiążących CD20. Na przykład, pożądane może być ulepszenie powinowactwa wiązania i/lub innych biologicznych właściwości przeciwciała. Warianty sekwencji aminokwasowej przeciwciała anty-CD20 są przygotowane przez wprowadzenie odpowiednich zmian nukleotydów w kwasie nukleinowym przeciwciała anty-CD20, lub przez syntezę peptydu. Takie modyfikacje obejmują, na przykład delecje z, i/lub insercje, do i/lub podstawienia reszt w sekwencjach aminokwasowych przeciwciała anty-CD20. Dowolna kombinacja delecji, insercji i podstawień jest wykonana w celu osiągnięcia w ostatecznym konstrukcje po to, aby ostateczny konstrukt posiadał pożądane cechy. Zmiany aminokwasowe mogą także zmieniać procesy procesy posttranslacyjne przeciwciała anty-CD20, takie jak zmieniająca się liczba lub pozycja miejsc glikozylacji.
Użyteczny sposób do identyfikacji pewnych reszt lub regionów przeciwciała anty-CD20, które są korzystnymi miejscami do mutagenezy jest nazywany mutagenezą przez skanowanie alaniną jak opisano przez Cunningham i Wells w Science, 244:1081-1085 (1989). Tutaj jest zidentyfikowana reszta lub grupa docelowych reszt (np., reszt obdarzonych ładunkiem, takich jak arg, asp, his, Iys i glu) i zastąpiona przez neutralny lub ujemnie naładowany aminokwas (najbardziej korzystnie przez alaninę lub polialaninę) aby wpłynąć na oddziaływanie aminokwasów z antygenem CD20. Te miejsca aminokwasowe pokazujące funkcjonalną wrażliwość na podstawienia są następnie ulepszone przez
PL 212 899 B1 wprowadzenie dalszych lub innych wariantów w, lub do, miejscach podstawień. Zatem, dopóki miejsce do prowadzania wariancji w sekwencji aminokwasowej jest wstępnie oznaczone, dopóty charakter mutacji per se nie musi być wstępnie oznaczony. Na przykład, w celu analizy wpływu mutacji w danym miejscu, w docelowym kodonie lub regionie jest wykonywane skanowanie alaniną lub mutageneza losowa a ulegające ekspresji warianty przeciwciała anty-CD20 są przeszukiwane na pożądaną aktywność.
Insercje sekwencji aminokwasowej obejmują amino- i/lub karboksy-końcowe fuzje, których długość waha się w zakresie od jednej reszty do polipeptydów zawierających sto lub więcej reszt, jak również insercje wewnątrz sekwencji pojedynczej lub wielu reszt aminokwasowych. Przykłady końcowych insercji obejmują przeciwciało anty-CD20 z N-końcową resztą metioniny lub przeciwciało poddane fuzji z polipeptydem cytotoksycznym. Inne warianty insercyjne cząsteczki przeciwciała anty-CD20 obejmują fuzję końca N lub C przeciwciała anty-CD20 do enzymu (np. ADEPT) lub polipeptydu, który zwiększa czas połowicznego zaniku przeciwciała w surowicy.
Innym typem wariantu jest wariant posiadający podstawienie aminokwasowe. Te warianty posiadają przynajmniej jedną resztę aminokwasową w cząsteczce przeciwciała anty-CD20 zastąpioną przez inną resztę. Miejsca największego zainteresowania pod względem mutagenezy prowadzącej do podstawienia obejmują regiony hiperzmienne, ale rozważane są również zmiany FR. Postawienia konserwatywne są pokazane w Tabeli poniżej pod nagłówkiem korzystne podstawienia. Jeżeli takie podstawienia powodują zmianę aktywności biologicznej, wtedy mogą być wprowadzone bardziej znaczące zmiany, określone w przykładowych podstawieniach w Tabeli, lub jak dalej opisano poniżej w odniesieniu do klas aminokwasów a produkty przeszukane.
Tabela podstawień aminokwasowych
Wyjściowa reszta Przykładowe postawienia Korzystne postawienia
1 2 3
Ala (A) val; leu; ile val
Arg (R) Iys; gln; asn lys
Asn(N) gln; his; asp; Iys; arg gln
Asp(D) glu; asn glu
Cys(C) ser; ala ser
Gln (Q) asn; glu asn
Glu (E) asp; gln asp
Gly (G) ala ala
His (H) asn; gln; lys; arg arg
Ile (I) leu; val; met; ala; phe; norleucyna leu
Leu (L) norleucyna; ile; val; met; ala; phe ile
Lys (K) arg; gln; asn arg
Met (M) leu; phe; ile leu
Phe (F) leu; val; ile; ala; tyr tyr
Pro (P) ala ala
Ser (S) thr thr
Thr (T) ser ser
Trp (W) tyr; phe tyr
Tyr (Y) trp; phe; thr; ser phe
Val (V) ile; leu; met; phe; ala; norleucyna leu
PL 212 899 B1
Istotne modyfikacje w biologicznych właściwościach przeciwciała są uzyskane przez selekcję postawień, których efekt znacząco różni się pod względem zachowania(a) struktury szkieletu peptydowego w miejscu postawienia, na przykład jako konformacji kartki lub helisy, (b) ładunku lub hydrofobowości cząsteczki w miejscu docelowym lub (c) rozmiaru łańcucha bocznego. Naturalnie występujące reszty są podzielone na grupy w oparciu o wspólne właściwości łańcucha bocznego:
1) hydrofobowe: norleucyna, met, ala, val, leu, ile;
2) obojętne hydrofilowe: cys, ser, thr;
3) kwasowe: asp, glu;
4) zasadowe: asn, gln, his, lys, arg;
5) reszty, które wpływają na orientację łańcucha: gly, pro; oraz
6) aromatyczne: trp, tyr, phe.
Niekonserwatywne postawienia będą pozwalać na wymianę członka jednej z tych klas na członka innej klasy.
Dowolna reszta cysteiny niezaangażowana w utrzymywanie odpowiedniej konformacji przeciwciała anty-CD20 także może być podstawiona, ogólnie przez serynę, w celu polepszenia oksydacyjnej stabilności cząsteczki i zapobieżenia tworzeniu się niewłaściwych wiązań krzyżowych. Odwrotnie, wiązanie(a) cysteinowe mogą być dodane do przeciwciała w celu polepszenia jego stabilności (szczególnie tam, gdzie przeciwciało jest fragmentem przeciwciała, takim jak fragment Fv).
Szczególnie korzystny typ wariantu posiadającego podstawienie obejmuje wprowadzenie postawienia jednej lub większej liczby reszt regionu hiperzmiennego przeciwciała wyjściowego (np. przeciwciała ludzkiego lub humanizowanego). Ogólnie, powstały(e) wariant(y) selekcjonowany(e) do dalszego opracowywania będzie(ą) posiadać ulepszone właściwości biologiczne względem przeciwciała wyjściowego, z którego zostały one stworzone. Dogodny sposób tworzenia takich wariantów posiadających postawienia obejmuje udoskonalanie powinowactwa przy użyciu prezentacji na fagu. W skrócie, kilka miejsc regionu hiperzmiennego (np. 6-7 miejsc) jest poddawanych mutacji w celu wytworzenia wszystkich możliwych postawień w każdym z miejsc. Warianty przeciwciała tak otrzymane są prezentowane w sposób jednowartościowy na powierzchni cząstek faga nitkowatego jako fuzje do produktu genu III z M13 znajdującego się w każdej cząsteczce faga. Warianty prezentowane na fagu są następnie przeszukiwane pod względem ich aktywności biologicznej (np. powinowactwa wiązania), jak tutaj ujawniono. W celu zidentyfikowania miejsc regionu hiperzmiennego jako kandydatów do modyfikacji, może być wykonana mutageneza oparta na skanowaniu alaniną w celu zidentyfikowania reszt regionu hiperzmiennego mających znaczący wkład we wiązanie antygenu. Alternatywnie, lub dodatkowo, korzystna może być analiza struktury krystalograficznej kompleksu antygen-przeciwciało w celu zidentyfikowania stałych punktów pomiędzy przeciwciałem a ludzkim CD20. Takie stałe reszty i reszty sąsiadujące są kandydatami do podstawienia według tutaj opracowanych technik. Po wytworzeniu takich wariantów, zestaw wariantów jest poddany przeszukiwaniu, jak opisano tutaj, a przeciwciała z ulepszonymi właściwościami w jednym lub większej liczbie stosownych oznaczeń mogą być wybrane do dalszego opracowywania.
Inny typ wariantu aminokwasowego przeciwciała zmienia pierwotny wzór glikozylacji przeciwciała. Przez zmianę jest rozumiane usunięcie jednego lub więcej składników wodorowęglanowych obecnych w przeciwciele i/lub dodanie jednego lub większej liczby miejsc glikozylacji, które nie są obecne w przeciwciele.
Glikozylacja przeciwciał jest typowo oparta zarówno na wiązaniu N jak i wiązaniu O. Wiązanie N odnosi się do przyłączenia składnika wodorowęglanowego do łańcucha bocznego reszty asparaginy. Trójpeptydowe sekwencje asparagina-X-seryna i asparagina-X-treonina, gdzie X jest dowolnym aminokwasem z wyjątkiem proliny są miejscami rozpoznawania dla enzymatycznego przyłączania składnika wodorowęglanowego do łańcucha bocznego asparaginy. Zatem, obecność każdej z tych trójpeptydowych sekwencji w polipeptydzie tworzy potencjalne miejsce glikozylacji. O-glikozylacja odnosi się do przyłączania jednego z cukrów N-acetylogalaktozoaminy, galaktozy lub ksylozy do aminokwasu posiadającego grupę hydroksylową, najczęściej do seryny lub treoniny, chociaż 5-hydroksyprolina lub 5-hydroksylizyna także mogą być użyte.
Dodanie miejsc glikozylacji do przeciwciała jest w wygodny sposób wykonywane przez zmianę sekwencji aminokwasowej tak, że zawiera ona jedną lub większą liczbę powyżej opisanych sekwencji trójpeptydowych (dla miejsc N-glikozylacji). Zmiana może być także dokonana poprzez dodanie lub podstawienie jednej lub większej ilości reszt seryny lub treoniny do sekwencji pierwotnego przeciwciała (dla miejsc O-glikozylacji).
PL 212 899 B1
Cząsteczki kwasu nukleinowego kodujące warianty sekwencji aminokwasowej przeciwciała anty-CD20 są przygotowane różnymi sposobami znanymi w tej dziedzinie. Sposoby te obejmują, ale nie są do nich ograniczone, izolację ze źródła naturalnego (w przypadku wariantów sekwencji aminokwasowej pojawiających się w sposób naturalny) lub otrzymanie przez mutagenezę opartą o oligonukleotydy (lub ukierunkowaną), mutagenezę z użyciem reakcji PCR, mutagenezę z użyciem kasety wcześniej uzyskanych wariantów lub wersji niewariantowej przeciwciała anty-CD20.
Pożądane może być zmodyfikowanie przeciwciała z wynalazku w odniesieniu do funkcji efektorowej, np., tak, żeby wzmocnić zależną od antygenu cytotoksyczność za pośrednictwem komórek (ADCC) i/lub cytoksyczność przeciwciała zależną od komplementu (CDC). Może to być osiągnięte przez wprowadzenie jednej lub większej ilości postawień do regionu Fc przeciwciała. Alternatywnie lub dodatkowo, do regionu Fc może(gą) być wprowadzona(e) reszta(y) cysteiny, pozwalając przez to na tworzenie w tym regionie międzyłańcuchowych wiązań dwusiarczkowych. Tak uzyskane przeciwciało homodimeryczne może posiadać ulepszoną zdolność internalizacji i/lub zwiększoną skuteczność zabijania komórek za pośrednictwem dopełniacza i cytotoksyczność komórkową zależną od przeciwciała (ADCC). Zobacz Caron etal., J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992) i Snopes, B. J. Immunol. 148:2918 -2922 (1992). Przeciwciała homodimeryczne ze zwiększoną aktywnością antynowotworową mogą być także przygotowane przy użyciu heterodwufunkcyjnych środków tworzących wiązania krzyżowe, jak opisano w Wolff i wsp., Cancer Research 53:2560-2565 (1993). Alternatywnie, może być zaprojektowane przeciwciało, które posiada podwójne regiony Fc i może przez to posiadać zwiększone zdolności do Iizy za pośrednictwem komplementu oraz do ADCC. Zobacz Stevenson i wsp. Anti-Cancer Drug Design 3:219-230 (1989).
W celu wydłużenia okresu połowicznego zaniku przeciwciała z surowicy, do przeciwciała (szczególnie do fragmentu przeciwciała) może być wprowadzony epitop wiążący receptor ratunkowy, na przykład, jak opisano w Patencie USA Nr 5739277. Stosowane tutaj określenie epitop wiążący receptor ratunkowy odnosi się do epitopu regionu Fc cząsteczki IgG (np. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), który jest odpowiedzialny zwiększenie czasu połowiczne zaniku cząsteczki IgG w surowicy in vivo.
Inne modyfikacje przeciwciała
Rozważane są tutaj inne modyfikacje przeciwciał. Na przykład, przeciwciało może być sprzężone do jednego z różnych niebiałkowych polimerów, np., glikolu polyetelenowego, glikolu polipropylenowego, polioksyalkilenów lub kopolimerów glikolu polietylenowego i glikolu polipropylenowego. Przeciwciało może być także uwięzione w mikrokapsułki przygotowane, na przykład przez techniki koacerwacji lub przez polimeryzację międzyfazową (na przykład, odpowiednio mikrokapsułki z hydroksymetylocelulozy lub żelatyny oraz mikrokapsułki z poli(metylonetaoctanu)), w koloidalne systemy dostarczania leków (na przykład liposomy, mikrosfery albuminy, mikroemulsje, nanocząstki i nanokapsułki) lub w makroemulsje. Takie techniki są ujawnione w Remington's w Pharmaceutical Sciences, wydanie 16, Oslo, A., Ed., (1980).
Przeszukiwanie w kierunku przeciwciał z pożądanymi właściwościami
Przeciwciała z pewnymi cechami biologicznymi mogą być wyselekcjonowane, jak opisano w Przykładach Doświadczalnych.
Skutki w postaci zahamowania wzrostu dla przeciwciała anty-CD20 z wynalazku mogą być oznaczone przy użyciu sposobów znanych w tej dziedzinie, np., przy użyciu komórek, które posiadają ekspresję CD20 zarówno endogennie, jak i po transfekcji genem CD20. Na przykład, nowotworowe linie komórkowe i komórki transfekowane CD20 mogą być traktowane monoklonalnym przeciwciałem anty-CD20 z wynalazku w różnych stężeniach przez kilka dni (np., 2-7 dni) i barwione krystalicznym fioletem lub MTT lub analizowane przy użyciu innego oznaczenia kolorymetrycznego. Inny sposób 3 pomiaru proliferacji mógłby obejmować porównanie pobierania 3H-tymidyny przez komórki hodowane w obecności i przy braku przeciwciała anty-CD20 z wynalazku. Po traktowaniu przeciwciałem, komórki są zbierane i w liczniku scyntylacyjnym mierzona jest ilość radioaktywności włączonej do DNA. Odpowiednie kontrole pozytywne obejmują traktowanie wybranej linii komórkowej przeciwciałem hamującym wzrost, o którym wiadomo, że hamuje wzrost tej linii komórkowej.
Aby wyselekcjonować przeciwciała, które indukują śmierć komórki, może być oznaczona utrata integralności błony w porównaniu z kontrolą przez oznaczenie pobierania, np., jodku propidyny (PI), błękitu tryptofanowego lub 7AAD. Oznaczenie pobierania PI może być wykonane podczas nieobecności komplementu oraz komórek efektorowych układu immunologicznego. Komórki nowotworowe z ekspresją CD20 są inkubowane w samej pożywce lub w pożywce zawierającej odpowiednie przeciwciało monoklonalne np. w stężeniu około 10 μg/ml. Komórki są inkubowane przez okres 3 dni.
PL 212 899 B1
Po każdym okresie traktowania komórki są przemywane i porcjowane do 35 mm probówek 12 x 75 z nałożonym filtrem (1 ml na probówkę, 3 probówki na każdą badaną grupę) w celu usunięcia skupisk komórek. Do probówek jest następnie dodawany PI (10 gg/ml). Próbki mogą być analizowane przy użyciu cytometru przepływowego FACSCAN™ i oprogramowania FACSCONVERT™ CellQuest (Becton Dickinson). Te przeciwciała, które indukują statystycznie znaczące poziomy śmierci komórek oznaczane przez pobór PI mogą być wyselekcjonowane jako przeciwciała indukujące śmierć komórki.
W celu przeszukania na obecność przeciwciał, które wiążą epitop na CD20 wiązanym przez przeciwciało będące przedmiotem zainteresowania, może być wykonane rutynowe oznaczenie krzyżowego blokowania, takie jak opisano w Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed. Harlow i David Lane (1988). Oznaczenie to może być użyte do określenia, czy testowane przeciwciało wiąże to samo miejsce lub epitop, jak przeciwciało anty-CD20 z wynalazku. Alternatywnie lub dodatkowo, może być wykonane mapowanie epitopu przy użyciu sposobów znanych w tej dziedzinie. Na przykład, sekwencja przeciwciała może być poddana mutagenezie takiej, jak skanowanie alaniną, w celu zidentyfikowania reszt kontaktowych. Zmutowane przeciwciało jest wstępnie testowane na wiązanie z przeciwciałem poliklonalnym aby upewnić się, co do właściwego sfałdowania. W innym sposobie, peptydy odpowiadające różnym regionom CD20 mogą być użyte w oznaczeniach opartych o współzawodnictwo z testowanymi przeciwciałami lub z testowanym przeciwciałem i przeciwciałem ze scharakteryzowanym lub znanym epitopem.
Wektory, komórki gospodarza i sposoby rekombinacji DNA
Wynalazek także dostarcza wyizolowanego kwasu nukleinowego kodującego humanizowane przeciwciało wiążące CD20, wektorów i komórek gospodarza zawierających kwas nukleinowy i technik rekombinacji DNA do wytwarzania przeciwciała.
Do wytwarzania przeciwciała przy użyciu technik rekombinowanego DNA, kwas nukleinowy je kodujący jest wyizolowany i wprowadzony do ulegającego replikacji wektora w celu dalszego klonowania (namnażania DNA) lub ekspresji. DNA kodujący przeciwciało jest z łatwością wyizolowany i zsekwencjonowany przy użyciu konwencjonalnych procedur (np., przez użycie oligonukleotydowych sond, które są zdolne do wiązania się specyficznie do genów kodujących ciężkie i lekkie łańcuchy przeciwciała). Dostępnych jest wiele wektorów. Składniki wektora zazwyczaj obejmują, ale nie są do nich ograniczone, jeden lub większą liczbę z następujących: sekwencja sygnałowa, miejsce startu replikacji, jeden lub więcej genów znacznikowych, element wzmacniający transkrypcję, promotor oraz sekwencję germinacji transkrypcji.
i) Składnik w postaci sekwencji sygnałowej
Przeciwciało wiążące CD20 z tego wynalazku może być otrzymane przy użyciu technik rekombinowanego DNA nie tylko w sposób bezpośredni, ale także jako fuzja polipeptydu z polipeptydem heterologicznym, którym jest korzystnie sekwencja sygnałowa lub inny polipeptyd posiadający specyficzne miejsce cięcia na końcu N dojrzałego białka lub polipeptydu. Wybrana heterologiczna sekwencja sygnałowa jest korzystnie taką, która jest rozpoznawana i procesowana (tj. przecinana przez peptydazę sygnałową) przez komórkę gospodarza. U prokariotycznych komórek gospodarza, które nie rozpoznają i nie procesują natywnej sekwencji sygnałowej przeciwciała wiążącego CD20 sekwencja sygnałowa jest zastąpiona przez wybraną prokariotyczną sekwencję sygnałową, na przykład, liderami z grupy alkalicznej fosfatazy, penicylinazy, Ipp lub stabilnej w wyższej temperaturze enterotoksynie II. Do sekrecji w drożdżach natywna sekwencja sygnałowa może zostać zastąpiona, np., przez lider drożdżowej inwertazy, lider czynnika (włączając lidery α-czynnika z Saccharomyces i Kluyveromyces) lub lider kwaśnej fosfatazy, lider glukoamylazy z C. albicans lub sygnał opisany w WO 90/13646. Przy ekspresji w ssaczych komórkach dostępne są ssacze sekwencje sygnałowe, jak również wirusowe lidery sekrecyjne, na przykład, sygnał gD z opryszczki zwykłej.
DNA dla takiego regionu prekursorowego jest ligowany w ramce odczytu do DNA kodującego przeciwciało wiążącego CD20.
ii) Miejsce startu replikacji
Zarówno wektory ekspresyjne jak i służące do klonowania zawierają sekwencję kwasu nukleinowego, która umożliwia replikację wektora w jednym lub większej liczbie wybranych komórek gospodarza. Ogólnie, w wektorach służących do klonowania ta sekwencja jest tą, która umożliwia replikację wektora niezależną od chromosomalnego DNA gospodarza i obejmuje miejsca startu replikacji lub sekwencje ulegające autonomicznej replikacji. Takie sekwencje są dobrze znane dla różnych bakterii, drożdży i wirusów. Miejsce startu replikacji z plazmidu pBR322 jest odpowiednie dla większości Gram-ujemnych bakterii, miejsce startu replikacji plazmidu 2μ jest odpowiednie dla drożdży a różne
PL 212 899 B1 wirusowe miejsca startu replikacji (SV40, poliomawirus, adenowirus, VSV lub BPV) są użyteczne dla wektorów służących do klonowania w komórkach ssaczych. Ogólnie, składnik w postaci miejsca startu replikacji nie jest potrzebny w ssaczych wektorach ekspresyjnych (typowo może być użyte miejsce startu replikacji z SV40 tylko dlatego, że zawiera ono wczesny promotor).
iii) Składnik w postaci genu selekcyjnego
Wektory ekspresyjne i służące do klonowania mogą zawierać gen selekcyjny także nazywany znacznikiem selekcyjnym. Typowe geny selekcyjne kodują białka, które (a) nadają oporność na antybiotyki lub inne toksyny, np., ampicylinę, neomycynę, metrotreksat lub tetracyklinę, (b) komplementują niedobory auksotroficzne lub (c) dostarczają ważnych składników odżywczych nieobecnych w pożywkach złożonych, np. gen kodujący racemazę D-alaniny dla Bacilli.
Jeden z przykładów schematu selekcyjnego wykorzystuje związek do zatrzymania wzrostu komórki gospodarza. Te komórki, które uległy udanej transformacji genem heterologicznym wytwarzają białko nadające oporność na ten związek i zatem przeżywają warunki selekcji. Przykłady takiej dominującej selekcji wykorzystują związki w postaci neomycyny, kwasu mykofenolowego i higromycyny.
Innym przykładem odpowiednich znaczników selekcyjnych dla komórek eukariotycznych są te, które umożliwiają identyfikację komórek zdolnych do pobrania kwasu nukleinowego kodującego przeciwciało wiążące CD20, takie, jak DHFR, kinaza tymidyny, metalotioneina I i II, korzystnie geny metalotionein z rodziny naczelnych, deaminaza adenozyny, dekarboksylaza ornitynowa itp.
Na przykład, komórki transformowane genem selekcyjnym DHFR są na początku identyfikowane przez hodowlę wszystkich transformantów w pożywce hodowlanej, która zawiera metotreksat (Mtx), kompetycyjnego antagonistę DHFR. Odpowiednią komórką gospodarza do użycia DHFR dzikiego typu jest linia komórkowa z jajnika chomika chińskiego (CHO, ang. Chinese hamster ovary) nie posiadająca aktywności DHFR (np., ATCC CRL-9096).
Alternatywnie, komórki gospodarza (szczególnie gospodarzy typu dzikiego, którzy zawierają endogenny gen DHFR) transformowane lub kotransformowane sekwencjami DNA kodującymi przeciwciało wiążące CD20, białko DHFR typu dzikiego oraz inny znacznik selekcyjny, taki jak 3'-fosfotransferaza aminoglikozydu (APH) mogą być selekcjonowane poprzez wzrost komórki w pożywce zawierającej środek selekcyjny dla znacznika selekcyjnego, taki jak antybiotyk aminoglikozydowy, np. kanamycynę, neomycynę lub G418. Zobacz Patent USA Nr 4965199.
Odpowiednim genem selekcyjnym dla użycia w drożdżach jest gen trp1 obecny w drożdżowym plazmidzie YRp7 (Stinchcomb i wsp., Nature, 282:39 (1979)). Gen trp1 dostarcza znacznika selekcyjnego dla zmutowanego szczepu drożdży nie posiadających zdolności do wzrostu w obecności tryptofanu, na przykład, ATCC Nr 44076 lub PEP4-1. Jones, Genetics, 85:12 (1977). Obecność defektywnego trp1 w genomie komórki gospodarza będącego drożdżem dostarcza skutecznego środowiska do detekcji transformacji poprzez wzrost w nieobecności tryptofanu. Podobnie, szczepy drożdży nie posiadające Leu2 (ATCC 20622 lub 38626) są komplementowane przez znane plazmidy niosące gen Leu2.
Dodatkowo, wektory pochodzące z kolistego plazmidu pKD1 1,6 μm mogą być użyte do transformacji drożdży Kluyveromyces. Alternatywnie, dla K. lactis doniesiono o systemie ekspresyjnym do wytwarzania na dużą skalę rekombinowaneJ cielęcej chymozyny. Van den Berg, Bio/Technology, 8:135 (1990). Ujawnione zostały także stabilne wielokopijne wektory ekspresyjne do sekrecji dojrzałej rekombinowanej ludzkiej albuminy surowiczej przez przemysłowe szczepy Kluyveromyces. Fleer i wsp., Bio/Technology, 9:968-975 (1991).
iv) Składnik w postaci promotora
Wektory ekspresyjne i służące do klonowania zazwyczaj zawierają promotor, który jest rozpoznawany przez organizm gospodarza i jest funkcjonalnie połączony do kwasu nukleinowego kodującego przeciwciało wiążące CD20. Promotory odpowiednie do zastosowania z gospodarzami prokariotycznymi obejmują promotor phoA, systemy promotorów β-laktamazy i laktozy, promotor alkalicznej fosfatazy, system promotora tryptofanu (trp) oraz promotory hybrydowe, takie jak promotor tac. Jednakże, odpowiednie są inne znane promotory bakteryjne. Promotory do zastosowania w systemach bakteryjnych będą także zawierały sekwencję Shine-Daigarno (S.D.) funkcjonalnie połączoną z DNA kodującym przeciwciało wiążące CD20.
Sekwencje promotorowe są znane dla eukariotów. Prawie wszystkie geny eukariotyczne posiadają region bogaty w pary AT położony w przybliżeniu 25 do 30 par zasad powyżej miejsca, w którym inicjowana jest transkrypcja. Inna sekwencja obecna 70 do 80 par zasad powyżej miejsca startu transkrypcji wielu genów jest regionem CNCAAT, gdzie N może być dowolnym nukleotydem. Na końcu 3'
PL 212 899 B1 większości genów eukariotycznych jest sekwecja AATAAA, która może być sygnałem do dodania ogona poliA do końca 3' sekwencji kodującej. Wszystkie z tych sekwencji są odpowiednio wprowadzone do eukariotycznych komórek ekspresyjnych.
Przykłady odpowiednich sekwencji promotorowych do zastosowania z gospodarzami drożdżowymi obejmują promotory dla kinazy 3-fosfoglicerynianiu lub innych enzymów glikolitycznych, takich jak enolaza, dehydrogenaza aldehydu 3-fosfoglicerynowego, heksokinaza, dekarboksylaza pirogronianowa, fosfofruktokinaza, izomeraza 6-fosfoglukozy, mutaza 3-fosfoglicerynianu i gluko-kinaza.
Inne promotory drożdżowe, które są promotorami indukowalnymi posiadającymi dodatkową zaletę transkrypcji kontrolowanej przez warunki wzrostu, są regionami promotorowymi dla alkoholowej dehydrogenazy 2, izocytochromu C, kwaśnej fosfatazy, enzymów degradacyjnych związanych z metabolizmem azotu, metalotioneiny, dehydrogenazy aldehydu 3-fosfoglicerynowego i enzymów odpowiedzialnych wykorzystanie maltozy i galaktozy. Odpowiednie wektory i promotory do zastosowania w ekspresji u drożdży są dalej opisane w EP 73657. Drożdżowe sekwencje wzmacniające ekspresję są korzystnie stosowane z promotorami drożdżowymi.
Transkrypcja przeciwciała wiążącego CD20 z wektorów w ssaczych komórkach komórkach gospodarza jest kontrolowana, na przykład, przez promotory uzyskane z genomów wirusów, takich jak wirus poliomy, wirus ospy ptasiej, adenowirus (taki jak Adenowirus 2), bydlęcy wirus brodawek, wirus mięsaka ptaków, wirus cytomegalii, retrowirus, wirus zapalenia wątroby B i najbardziej korzystnie Małpi Wirus 40 (SV40), z heterologicznych promotorów ssaczych, np., promotora aktyny lub promotora immunoglobuliny, z promotorów białek szoku cieplnego, takie dostarczone promotory są kompatybilne z systemami komórki gospodarza.
Wczesne i późne promotory wirusa SV40 są dogodnie uzyskiwane jako fragment restrykcyjny SV40, który również zawiera miejsce startu replikacji wirusa SV40. Bardzo wczesny promotor ludzkiego wirusa cytomegalii jest w sposób dogodny uzyskiwany jako fragment restrykcyjny HindIIIE. System do ekspresji DNA w gospodarzach ssaczych przy użyciu bydlęcego wirusa brodawek jako wektora jest ujawniony w Patencie USA Nr 4419446. Modyfikacja tego systemu jest opisana w Patencie USA Nr 4601978. Zobacz także Reyes i wsp., Nature 297:598-601 (1982) o ekspresji cDNA ludzkiego βinterferonu w mysich komórkach pod kontrolą promotora kinazy tymidynowej z wirusa opryszczki pospolitej. Alternatywnie, jako promotor może być użyte długie terminalne powtórzenie z wirusa mięsaka Rousa.
v) składnik w postaci elementu wzmacniającego transkrycję
Transkrypcja DNA kodującego przeciwciało wiążące CD20 z niniejszego wynalazku przez wyższe eukarionty jest często zwiększana przez wprowadzanie do wektora sekwencji zwiększającej transkrypcję. Znanych jest wiele sekwencji wzmacniających transkrypcję z genów ssaczych (globiny, elastazy, albuminy, α-fetoproteiny i insuliny). Typowo, jednakże, użyte będą sekwencje wzmacniające transkrypcję z wirusów komórek eukariotycznych. Przykłady obejmują sekwencję wzmacniającą transkrypcję na późnym miejscu miejsca startu replikacji (pz 100-270), sekwencję wzmacniającą transkrypcję wczesnego promotora wirusa cytomegalii, sekwencję wzmacniającą transkrypcję z wirusa poliomy na późnym miejscu startu replikacji oraz sekwencje wzmacniające transkrypcję z adenowirusów. Zobacz także Yaniv, Nature 297:17-18 (1982) o elementach wzmacniających transkrypcję stosowanych do aktywacji promotorów eukariotycznych. Sekwencja wzmacniająca transkrypcję może być włączony do wektora w pozycji 5' lub 3' do sekwencji kodującej przeciwciało wiążące CD20, ale korzystnie jest położona na w pozycji 5' od promotora.
vi) Komponent w postaci terminatora transkrypcji
Wektory ekspresyjne stosowane w komórkach eukariotycznych gospodarzy (drożdży, grzybów, owadzich, roślinnych, zwierzęcych, ludzkich lub komórkach jądrzastych z innych organizmów wielokomórkowych) będą także zawierały sekwencje konieczne do terminacji transkrypcji i do stabilizacji mRNA. Takie sekwencje są powszechnie dostępne z końca 5' a okazjonalnie z 3' regionów nie ulegających translacji eukariotycznych lub wirusowych cząsteczek DNA lub cDNA. Regiony te zawierają elementy nukleotydowe ulegające transkrypcji jako fragmenty poliadenylowane w nieulegającej translacji części mRNA kodujące przeciwciało wiążące CD20. Jednym z użytecznych komponentów będących terminatorem transkrypcji jest region poliadenylacji bydlęcego hormonu wzrostu. Zobacz WO94/11026 i wektor ekspresyjny ujawniony tutaj.
vii) Selekcja i transformacja komórek gospodarza
Odpowiednimi komórkami gospodarza do klonowania lub ekspresji DNA w wektorach opisanych tutaj są komórki prokariotyczne, drożdżowe lub wyższych eukariontów opisane powyżej. Odpowiednie
PL 212 899 B1 prokarionty do tego celu obejmują eubakterie, takie jak organizmy Gram-ujemne lub Gram-dodatnie, na przykład, Enterobactariaceae, takie jak Escherichia, np., E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, np., Salmonella typhimurium, Serratia, np., Serratia marcescans oraz Shigella, jak również Bacilli takie jak B. subtilis i B. Iicheniformis (np., B. Iicheniformis 41P ujawniony w DD 266710 opublikowanym 12 kwietnia 1989), Pseudomonas takie jak P. aeruginosa oraz Streptomyces. Jednym z korzystnych gospodarzy E. coli do klonowania jest E. coli 294 (ATCC 31446), jednakże odpowiednie są inne szczepy, takie jak E. coli B, E. coli X1776 (ATCC 31537) i E. coli W3110 (ATCC 27325). Te przykłady są raczej obrazujące niż ograniczające.
Przeciwciała o pełnej długości, fragmenty przeciwciał białka fuzyjne przeciwciał mogą być wytwarzane w bakteriach, w szczególności, gdy glikozylacja i funkcja efektorowa Fc nie są potrzebne, jak wtedy, gdy przeciwciało terapeutyczne jest sprzężone ze środkiem cytotoksycznym (np. toksyną) i immunokoniugat sam z siebie wykazuje skuteczność w niszczeniu komórek nowotworowych. Przeciwciała o pełnej długości posiadają dłuższy czas połowicznego zaniku w krążeniu. Wytwarzanie w E. coli jest bardziej wydajne ze względu na koszty. W celu ekspresji fragmentów przeciwciał i polipeptydów w bakteriach zobacz, np., Patenty USA Nr 5648237 (Carter i wsp.), 5789199 (Joly i wsp.) oraz 5840523 (Simmons i wsp.), które opisują region inicjujący translację (TIR) oraz sekwencje sygnałowe do optymalizacji ekspresji i sekrecji, te patenty są tutaj włączone przez odniesienie. Po ekspresji przeciwciało jest izolowane z zawartości komórki E. coli w rozpuszczalnej frakcji i może być oczyszczone na, np., kolumnie z białkiem A lub G w zależności od izotypu przeciwciała. Ostateczne oczyszczanie może być wykonane podobnie do procesu oczyszczania przeciwciała ulegającego ekspresji, np., w komórkach CHO.
Oprócz prokariotów, mikroorganizmy eukariotyczne, takie jak grzyby nitkowate lub drożdże są odpowiednimi gospodarzami do klonowania i ekspresji wektorów kodujących przeciwciało wiążące CD20. Saccharomyces cerevisiae lub powszechne drożdże piekarnicze są najbardziej powszechnie stosowane spośród niższych mikroorganizmów będących eukariotycznymi gospodarzami. Jednakże szereg innych rodzajów, gatunków i szczegółów jest powszechnie dostępnych i użytecznych tutaj, takich jak Schizosaccharomyces pombe; gospodarze z rodzaju Kluyveromyces, tacy jak K. laetis, K. fragilis (ATCC 12424), K. bulgaricus (ATCC 16045), K. wickeramii (ATCC 24178), K. waltii (ATCC 56500), K. drosophilarum (ATCC 36906), K. thermotolerans i K. marxianus; yarrowia (EP 402226); Pichia pastoris (EP 183070); Candida; Trichoderna reesia (EP 244234); Neurospora crassa; Schwantiomyces, tacy jak Schwanniomyces occidentalis; grzybów niktowatych, takich jak Neurospora, Penicillium, Tolypocladium oraz gospodarze z rodzaju Aspergillus, tacy jak A. nidulans oraz A. niger.
Odpowiednie komórki gospodarza do ekspresji glikozylowanego przeciwciała wiążącego CD20 pochodzą z organizmów wielokomórkowych. Przykłady komórek bezkręgowców obejmują komórki roślinne i owadzie. Zidentyfikowano szereg szczepów bakulowirusowych i wariantów oraz odpowiednich permisyjnych owadzich komórek gospodarza z gospodarzy, takich jak Spodoptera frugiperda (frugiperda), Aedes aegypti (komar), Jedes albopictus (komar), Drosophila melanogaster (muszka owocowa) i Bombyx mori. Publicznie dostępne są różne szczepy wirusowe do transfekcji, np. warant L-1 Autographa californica NPV i szczep Bm-5 Bombyx mori NPV i takie wirusy mogą być użyte tutaj jako wirusy według niniejszego wynalazku szczególnie do transfekcji komórek Spodoptera frugiperda.
Hodowle komórek roślinnych wełny, kukurydzy, ziemniaka, soi, petunii, pomidora i tytoniu także mogą być wykorzystane jako gospodarze.
Jednakże, największe zainteresowanie budzą komórki kręgowców a rozmnażanie komórek kręgowców w hodowli (hodowli tkankowej) stało się rutynową procedurą. Przykładami użytecznych linii komórkowych ssaczych gospodarzy jest małpia linia z nerki CV1 transformowana SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); ludzka linia embrionalna z nerki (293 Iub komórki 293 subklonowane do wzrostu w hodowli zawiesinowej, Graham i wsp., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); komórki z nerki z chomiczego noworodka (BHK, ATCC CCL 10); komórki z jajnika chomika chińskiego/-DHFR (CHO, Urlaub i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); mysie komórki Sertoliego (TM4, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); mysie komórki z nerki (CV1 ATCC CCL 70); komórki z nerki z afrykańskiej małpy zielonej (VERO-76, ATCC CRL-1587); ludzkie komórki nabłonkowe raka szyjki macicy (HELA, ATCC CCL 2); komórki z nerki psa (MDCK, ATCC CCL 34); komórki wątrobowe ze szczurzego szczepu Buffalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442); ludzkie komórki płucne (W138, ATCC CCL 75) ; ludzkie komórki wątrobowe (HepG2, HB 8065); mysi nowotwór sutka (MMT 060562, ATCCCCL51); komórki TRI (Mather i wsp., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1932)); komórki MRC 5; komórki FS4; i ludzka linia hepatomy (Hep G2).
PL 212 899 B1
Komórki gospodarza są transformowane powyżej opisanymi wektorami ekspresyjnymi lub służącymi do klonowania w celu otrzymywania przeciwciała przeciwciała wiążącego CD20 i hodowania w konwencjonalnych pożywkach odżywczych zmodyfikowanych odpowiednio dla zawartych promotorów, selekcji transformantów lub namnażania genów kodujących pożądane sekwencje.
viii) Hodowla komórek gospodarza
Komórki gospodarza stosowane do wytwarzania przeciwciała wiążącego CD20 z niniejszego wynalazku mogą być hodowane w różnych pożywkach. Komercyjnie dostępne pożywki, takie jak Hals F10 (Sigma), Minimal Essential Medium ( (MEM), (Sigma), RPMI-1640 (Sigma), I Dulbecco's Modified Eagle's Medium ((DMEM), Sigma) są odpowiednie do hodowli komórek gospodarza. Ponadto, jako pożywka hodowlana dla komórek gospodarza mogą być użyte dowolne pożywki opisane w Ham i wsp., Meula. Enz. 58:44 (1979), Barnes i wsp., Anal. Blochem. 102: 255 (1980), Patenty USA Nr 4767704 ; 4657866; 4927762 ; 4560655; lub 5122469; WO90/03430; WO 87/00195; lub Patencie USA Re. 30985. Dowolna z tych pożywek może być uzupełniona, jeśli konieczne, hormonami i/lub innymi czynnikami wzrostu (takimi jak insulina, transferyna lub nabłonkowy czynnik wzrostowy), solami (takimi jak chlorek sodu, wapń, magnez, fosforan), buforami (takimi jak HEPES), nukleotydami (takimi jak adenozyna i tymina), antybiotykami (takimi jak specyfik GENTAMYCIN™), pierwiastkami śladowymi (zdefiniowanymi jako składniki nieorganiczne zazwyczaj obecne w końcowych stężeniach w zakresie mikromolarnym) oraz glukozą lub równoważnym źródłem energii. Dowolne inne konieczne uzupełnienia także mogą być dodane w odpowiednich stężeniach, które byłyby znane specjalistom w tej dziedzinie. Warunki hodowli, takie jak temperatura, pH i tym podobne, są tymi wcześniej używanymi dla komórek gospodarza wybranych do ekspresji i będą oczywiste dla specjalistów w tej dziedzinie.
ix) Oczyszczanie przeciwciała
Przy użyciu technik rekombinowanego DNA przeciwciało może być wytworzone wewnątrzkomórkowo, w przestrzeni międzybłonowej lub wydzielone bezpośrednio do pożywki. Jeżeli przeciwciało jest wytwarzane wewnątrzkomórkowo, jako pierwszy etap, przez wirowanie lub ultrafiltrację usuwane są zawieszone szczątki komórek, albo komórki gospodarza albo zlizowane fragmenty. Carter i wsp., Bio/Technology 10:163-167 (1992) opisuje procedurę izolacji przeciwciał, które są wydzielane do przestrzeni międzybłonowej E. coli. W skrócie, zawartość komórek jest rozpuszczana i obecności octanu sodu (pH 3,5), EDTA i fenylometylosulfonylofluorku (PMSF) przez ponad około 30 min. Szczątki komórek mogą być usunięte przez wirowanie. Jeżeli przeciwciało ulega wydzielaniu do pożywki, supernatanty z takich systemów ekspresji są zazwyczaj na początku zagęszczane przy użyciu komercyjnie dostępnych filtrów do zagęszczania białek, na przykład jednostki do ultrafiltracji z Amicon lub Millipore Pellicon. Do dowolnego z poprzedzających etapów może być dodany inhibitor proteaz, taki jak PMSF, w celu zahamowania proteolizy, a antybiotyk może być dodany, aby zapobiec wzrost nieoczekiwanych zanieczyszczeń.
Kompozycja przeciwciała przygotowana z komórek może być oczyszczona przy użyciu, na przykład, chromatografii na hydroksyapatycie, elektroforezy w żelu, dializy i chromatografii powinowactwa, z chromatografią powinowactwa będącą korzystną techniką oczyszczania. Odpowiedniość białka A, jako ligandu powinowactwa zależy od gatunków i izotypu dowolnej domeny Fc immunoglobuliny, która jest obecna w przeciwciele. Białko A może być użyte do oczyszczania przeciwciał, które opierają się na ludzkich łańcuchach ciężkich γ1, γ2 lub γ4 (Lindmark i wsp., J. Immunol. Metla. 62:1-13 (1983)). Białko G jest polecane dla wszystkich mysich izotypów i dla ludzkiego γ3 (Guss i wsp., EMBO J. 5:15671575 (1986)). Macierz, do której ligand powinowactwa jest przyczepiony jest najczęściej agarozą, ale inne macierze są także dostępne. Mechanicznie stabilne macierze, takie jak szkło o kontrolowanej porowatości lub poli(styrenodwuwinylo)benzen pozwalają na większe szybkości przepływu i krótsze czasy obróbki, niż te, które mogą być osiągnięte przy użyciu agarozy. Jeżeli przeciwciało zawiera domenę CH3, wtedy do oczyszczania użyteczna jest żywica ABX™ Bakerbond (J. T. Baker, Phillipsburg, NJ). Dostępne są również inne techniki do oczyszczania białek, takie jak frakcjonowanie na kolumnie jonowymiennej, wytrącanie etanolem, HPLC w odwróconych fazach, chromatografia na krzemionce, chromatografia na heparynie SEPHAROSE, chromatografia na żywicy aniono- lub kationowymiennej (takiej jak kolumna z kwasem poliasparaginowym), chromatoogniskowanie, SDS-PAGE i wytrącanie siarczanem amonu, w zależności od przeciwciała, które ma być odzyskane.
Według dowolnego(ych) etapu(ów) oczyszczania wstępnego, mieszanina zawierająca przeciwciało będące przedmiotem zainteresowania i zanieczyszczenia może być poddana chromatografii oddziaływań hydrofobowych w niskim pH przy użyciu buforu do elucji w pH pomiędzy około 2,5-4,5, korzystnie wykonanej w niskich stężeniach soli (np. od około 0-0,25 M stężenia soli).
PL 212 899 B1
Koniugaty przeciwciał
Przeciwciało może być sprzężone ze środkiem cytotoksycznym, takim jak toksyna lub izotop radioaktywny. W pewnych wykonaniach korzystną toksyną jest kalichemicyna, maitanzynoid, dolastatyna, aurystatyna E i ich analogi lub pochodne.
Preferowane leki/toksyny obejmują środki uszkadzające DNA, inhibitory polimeryzacji lub depolimeryzacji mikrotubul i antymetabolity. Korzystne klasy środków cytotoksycznych obejmują, na przykład, inhibitory enzymów, takie jak inhibitor reduktazy dihydrofolianu oraz inhibitory syntazy tymidylanu, związki interkalujące do DNA, przecinające DNA, inhibitory topoizomeraz, leki z rodziny antracykliny, leki z grupy alkaloidów barwinka, mitomycyny, bleomycyny, nukleotydy cytotoksyczne, leki z rodziny pterydyn, diyneny, podofilotoksyny i związki indukujące różnicowanie. Szczególnie użyteczni członkowie tych klas obejmują, na przykład, metotreksat, metopterynę, dichlorometotreksat, 5-fluorouracyl,
6-merkaptopurynę, arabinozyd cytozyny, melfalan, leurozynę, ieurozydeinę, aktynomycynę, daunorubicynę, doksorubicynę, N-(5,5-diacetoksypentylo)doksorubicynę, morfolino-doksorubicynę, hydrazyd 1-(2-choroetylo)-1,2-dimetanosulfonylu, N8-acetylospermidynę, aminopterynę, metopterynę, esperamycynę, mitomycynę C, mitomycynę A, aktynomycynę, bleomycynę, karminomycynę, aminopterynę, talysomycynę, podofilotoksynę i pochodne podofilotoksyny, takie jak etopozyd lub fosforan etopozydu, winblastynę, winkrystynę, windezynę, taksol, taksoter, kwas retinowy, kwas butylowy, N8-acetylospermidynę, kamptotecynę, kalichemicynę, briostatyny, cefalostatyny, ansamitocynę, aktozynę, maitanzynoidy, takie jak DM-1, maitanzyna, maitanzynol, N-desmetylo-4,5-desepoksymaitanzynol, C-19-dechloromaitanzynol, C-20-hydroksymaitanzynol, C-20-demetoksymaitanzynol, C-9-SH-maitanzynol, C-14-alkoksymetylomaitanzynol, C-14-hydroksyoroacetylooksyymetyIomaitanzynol, C-15-hydroksy/ /acetylooksymaitanzynol, C-15-metoksymaitanzynol, C-18-N-demetylomaitanzynol i 4,5-deoksymaitanzynol, aurystatyny, takie jak aurystatyna E, M, PHE i PE; dolostatyny, takie jak dolostatyna A, dolostatyna B, dolostatyna C, dolostatyna D, dolostatyna E (20-epi i 11-epi), dolostatyna G, dolostatyna H, dolostatyna I, dolostatyna 1, dolostatyna 2, dolostatyna 3, dolostatyna 4, dolostatyna 5, dolostatyna 6, dolostatyna 7, dolostatyna 8, dolostatyna 9, dolostatyna 10, deo-dolostatyna 10, dolostatyna 11, dolostatyna 12, dolostatyna 13, dolostatyna 14, dolostatyna 15, dolostatyna 16, dolostatyna 17 i dolostatyna 18; cefalostatyny, takie jak cefalostatyna 1, cefalostatyna 2, cefalostatyna 3, cefalostatyna 4, cefalostatyna 5, cefalostatyna 6, cefalostatyna 7, 25'-epi-cefalostatyna 7, 20-epi-cefalostatyna 7, cefalostatyna 8, cefalostatyna 9, cefalostatyna 10, cefalostatyna 11, cefalostatyna 12, cefalostatyna 13, cefalostatyna 14, cefalostatyna 15, cefalostatyna 16, cefalostatyna 17, cefalostatyna 18, i cefalostatyna 19.
Maitanzynoidy są inhibitorami mitotycznymi, które działają przez zahamowanie polimeryzacji tubuliny. Maitanzyna po raz pierwszy została wyizolowana z wschodnioafrykańskiego krzewu Maytenus serrata (Patent USA Nr 3896111). Następnie, odkryto, że pewne mikroby także wytwarzają maitanzynoidy, takie jak maitanzynol i estry C-3 maitanzynolu (Patent USA Nr 4151042). Syntetyczny maitanzynol i pochodne i ich analogi są ujawnione, na przykład, w Patentach USA Nr 4137230; 4248870; 4256746; 4260608; 4265814; 4294757; 4307016; 408268; 4308269; 4309428; 4313946; 4315929; 4317821; 4322348; 4331598; 4361650; 4364866; 4424219; 4450254; 4362663; oraz 4371533, których ujawnienia są odtąd wyraźnie włączone przez odniesienie.
Maitanzyna i maitanzynoidy zostały sprzężone z przeciwciałami specyficznie wiążącymi się do antygenów komórek nowotworowych. Immunokoniugaty zawierające maitanzynoidy i ich terapeutyczne zastosowanie są ujawnione, na przykład, w Patentach USA Nr 5208020, 5416064 i Europejskim Patencie EP 0425235B1, których ujawnienia są odtąd wyraźnie włączone przez odniesienie. Liu i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623 (1996) opisali immunokoniugaty zawierające maitanzynoid oznaczony DM1 połączony z monoklonalnym przeciwciałem C242 skierowanym przeciwko ludzkiemu nowotworowi okrężnicy i odbytnicy. Stwierdzono, że koniugat jest bardzo toksyczny dla hodowanych komórek nowotworowych okrężnicy i wykazywał aktywność antynowotworową in vivo w oznaczeniu mierzącym wzrost nowotworu. Chari i wsp. Cancer Research 52:127-131 (1992) opisują immunokoniugaty, w których maitanzynoid został sprzężony przez łącznik dwusiarczkowy z mysim przeciwciałem A7 wiążącym się do antygenu na nowotworowych liniach komórkowych okrężnicy lub z innym mysim monoklonalnym przeciwciałem TA.1, które wiąże się do onkogenu HER-2/neu.
Istnieje wiele grup łączących do tworzenia koniugatów przeciwciało-maitanzynoid znanych w tej dziedzinie, włączając, na przykład, te ujawnione w Patencie USA Nr 5208020 lub Patencie EP 0425235B1 oraz Charii wsp. Cancer Research 52:127-131 (1992). Grupy łączące obejmują grupy dwusiarczkowe, grupy tioeterowe, grupy labilne pod wpływem kwasu, grupy fotolabilne, grupy labilne
PL 212 899 B1 pod wpływem peptydaz lub grupy labilne pod wpływem esterazy, jak ujawniono w powyżej określonych patentach, korzystnymi będące grupy dwusiarczkowe i tioeterowe.
Koniugaty przeciwciała i maitanzynoidu mogą być wykonane przy użyciu różnych dwufunkcyjnych środków sprzęgających białka, takich jak N-sukcynoimidylo-3(2pirydyloditio)promianian (SPDP), bursztynylo-4-(N-maleimidometylo)cykloheksylo-1-karboksylan, iminotiolan (IT), dwufunkcyjne pochodne imidoestrów (takich jak dimetyloadipimidat HCl), aktywne estry (takie jak dibursztynylo-suberat, aldehydy (takie jak glutaraldehyd), związki bis-azydowe (takie jak bis(p-azydobenzoilo)heksanodiamina), pochodne bis-diazoniowe (bis-(p-diazobenzoilo)-etylenodiamina), diizocyjaniany (takie jak 2,6-diizocyjanian toluenu i dwuaktywne związki fluoru (takie jak 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen). Szczególnie korzystne środki sprzęgające dostarczające łącznika dwusiarczkowego obejmują N-sukcynimidylo-3-(2-pirydyloditio) propionian (SPDP) (Carlsson i wsp., Biochem. J. 173:723-737 [1978]) i N-sukcynimidylo-4-(2-pirydylotio)-pentanian (SPP).
Łącznik może być doczepiony do cząsteczki maitanzynoidu w różnych pozycjach, w zależności od typu łącznika. Na przykład, wiązanie estrowe może być utworzone przez reakcję z grupą hydroksylową przy użyciu konwencjonalnych technik sprzęgania. Reakcja może zajść w pozycji C-3 posiadającej grupę hydroksylową, pozycji C-14 zmodyfikowanej przez grupę hydroksymetylową, pozycji C-15 zmodyfikowanej grupą hydroksylową i pozycji C-20 posiadającej grupę hydroksylową. W korzystnym wykonaniu, wiązanie jest utworzone w pozycji C-3 maitanzynolu lub analogu maitanzynolu.
Kalichemicyna
Inny immunokoniugat będący przedmiotem zainteresowania zawiera przeciwciało wiążące CD20 sprzężone z jedną lub większą liczbą cząsteczek kalichemicyny. Antybiotyki z rodziny kalichemicyn są zdolne do wytwarzania pęknięć w dwuniciowym DNA w sub-pikomolarnych stężeniach. W celu przygotowania koniugatów z rodziny kalichemicyn zobacz Patenty USA Nr 5712374, 5714586, 5739116, 5767285, 5770701, 5770710, 5773001, 5877296 (wszystkie dla American Cyanamid Company). Strukturalne analogi kalichemicyny, które mogą być zastosowane obejmują, ale nie są ograniczone do nich, γ1', a1 I, a3', N-acetylo-γι', PSAG i θ'1 (Hinman i wsp. Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode i wsp. Cancer Research 58:2925-2928 (1998) i wyżej wspomniane Patenty USA dla American Cyanamid). Innym lekiem anty-nowotworowym, z którym przeciwciało może być sprzężone jest QFA, który jest antyfolianem. Zarówno kalichemicyna, jak i QFA posiadają wewnątrzkomórkowe miejsca działania i nie przechodzą z łatwością przez błony komórkowe. Zatem, pobranie przez komórkę tych środków poprzez internalizację za pośrednictwem przeciwciała bardzo zwiększa ich efekt cytotoksyczny.
Izotopy radioaktywne
W celu selektywnego zniszczenia nowotworu, przeciwciało może zawierać wysoce radioaktywny atom. Do wytworzenia przeciwciał anty-CD20 sprzężonych z izotopami radioaktywnymi dostępne są różne izotopy radioaktywne. Przykłady obejmują At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32,
212
Pb212 i radioaktywne izotopy Lu. Jeżeli koniugat jest użyty w celach diagnostycznych może zawierać atom radioaktywny do badań scyntygraficznych, na przykład tc99m lub I123 lub znacznik spinowy do obrazowania jądrowym rezonansem magnetycznym (NMR) (także znanym jako obrazowanie rezonansem magnetycznym, MRI), taki jak jod-123, ponownie, jod-131, ind-111, fluor-19, węgiel-13, azot-15, tlen-17, gadolin, mangan lub żelazo.
Znaczniki radioaktywne lub inne mogą być włączone do koniugatu znanymi sposobami. Na przykład peptyd może ulegać biosyntezie lub może być syntetyzowany poprzez chemiczną syntezę aminokwasową przy użyciu odpowiednich prekursorów aminokwasów, zawierających, na przykład,
186
Re188 i In111 mogą być przyłączone fluor-19 w miejscu wodoru. Znaczniki, takie jak tc99m lub I123,
Re przez resztę cysteiny w peptydzie. Itr-90 może być przyłączony przez resztę lizyny. Sposób IODOGEN (Fraker i wsp. (1978) Biochem. Biophys. Res. Cominun. 80:49-57 może być zastosowany do włączenia jodu-123. Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy (Chatal, CRC Press 1989) szczegółowo opisuje inne sposoby.
Koniugaty przeciwciała i środka cytotoksycznego mogą być wytworzone przy użyciu różnych dwufunkcyjnych środków sprzęgających białka, takich jak N-sukcynoimidylo-3-(2pirydyloditio) promianian (SPDP), bursztynylo-4-(N-maleimidometylo)cykloheksylo-1-karboksylan, iminotiolan (IT), dwufunkcyjne pochodne imidoestrów (takich jak dimetyIoadipimidat HCl), aktywne estry (takie jak dibursztynylo-suberat, aldehydy (takie jak glutaraldehyd) związki bis-azydowe (takie jak bis (p-azydobenzoilo)heksanodiamina), pochodne bis-diazoniowe (bis-(p-diazobenzoilo)-etylenodiamina), diizocyjaniany (takie jak 2,6-diizocyjanian toluenu) i dwuaktywne związki fluoru (takie jak 1,5-difluoro-2,4PL 212 899 B1
-dinitrobenzen). Na przykład, immunotoksyna w postaci rycyny może być przygotowana, jak opisano w Vitetta i wsp. Science 238:1093 (1987). Kwas izotiocyjanobenzylo-3-metylodietylenotriaminopentaoctwowy (MX-DTPA) wyznakowany węglem-14 jest przykładowym środkiem wprowadzającym do sprzęgania radioaktywnego nukleotydu do przeciwciała. Zobacz WO94/11026. Łącznik może być łącznikiem możliwym do przecięcia ułatwiającym uwolnienie środka cytotoksycznego w komórce. Na przykład, może być użyty łącznik labilny pod wpływem kwasu, łącznik wrażliwy na peptydazy, łącznik fotolabilny, łącznik dimetylowy lub łącznik zawierający dwusiarczek (Chari i wsp. Cancer Research 52:127-131 (1992); Patent USA Nr 5208020).
Terapeutyczne zastosowania przeciwciał wiążących CD20
Przeciwciała wiążące CD20 z wynalazku są użyteczne do leczenia szeregu chorób nowotworowych i nie-nowotworowych włączając choroby autoimmunologiczne i pokrewnych stanów oraz nowotworów CD20-dodatnich włączając chłoniaki i białaczki. Komórki macierzyste (przodkowie komórek B) w szpiku kostnym nie posiadają antygenu CD20, co pozwala na regenerację zdrowych komórek B po leczeniu i powrót do normalnych poziomów w ciągu kilku miesięcy.
Choroby autoimmunologiczne lub stany pokrewne chorobom immunologicznym obejmują zapalenie stawów (reumatoidalne zapalenie stawów, młodzieńcze reumatoidalne zapalenie stawów, zapalenie kości i stawów, artopatia łuszczycowa), łuszczycę, zapalenie skóry, włączając atopowe zapalenie skóry; przewlekłą autoimmunologiczną pokrzywkę, zapalenie wielomięśniowe/zapalenie skórnomięśniowe, martwicę toksyczno-rozpływną naskórkową, układową twardzinę skóry i twardzinę uogólnioną, chorobę zapalną jelit (IBD) (choroba Crohna, wrzodniejące zapalenie okrężnicy), zespół niewydolności oddechowej, zespół ostrego wyczerpania oddechowego dorosłych (ARDS), zapalenie opon, alergiczny nieżyt nosa, zapalenie mózgu, zapalenie błony naczyniowej oka, zapalenie okrężnicy, zapalenie kłębuszków nerkowych, stany alergiczne, wytrysk, astmę, stany obejmujące naciekanie komórek T i przewlekłe stany zapalne, miażdżycę tętnic, autoimmunologiczne zapalenie mięśnia sercowego, niedobór adhezji leukocytów, liszaj rumieniowaty układowy (SLE), toczeń (włączając zapalenie nerek, łysienie tarczowate nienerkowe), cukrzyce zapoczątkowane w wieku młodzieńczym, stwardnienie rozsiane, alergiczne zapalenie mózgu i rdzenia, stany immunologiczne związane z ostrą reakcją opóźnionej nadwrażliwości za pośrednictwem cytokin i limfocytów T, gruźlicę, sarkoidozę, ziarnicę, włączając ziarniniaka Wegenera, agranulocytozę, zapalenie naczyń (włączając ANCA), niedokrwistość aplastyczną, niedokrwistość Diamonda Blackfana, niedokrwistość hemolityczną na tle immunologicznym, włączając autoimmunologiczną anemię hemolityczną (AIHA), niedokrwistość złośliwą, aplazję ubogą w krwinki czerwone (PRCA), niedobór czynnika VIII, hemofilię A, autoimmunologiczną neutropenię, niedokrwistość aplastyczną, leukopenię, choroby związane z diapedezą leukocytów, choroby zapalne ośrodkowego układu nerwowego, zespoły uszkodzeń wielu organów, myasthenia gravis, choroby za pośrednictwem kompleksów antygen-przeciwciało, chorobę przeciwko kłębuszkowej błonie podstawnej, zespół przeciwciała przeciwko fosfolipidom, alergiczne zapalenie nerek, chorobę Becheta, zespół Castelmana, zespół Goodpasteure'a, zespół miasteniczny Lambert-Eatona, zespół Reynouda, zespół Sjorgena, zespół Stevens-Johnsona, odrzucenie przeszczepu organu litego (włączając wstępne leczenie wysokiego miana zestawu reaktywnych przeciwciał, odkładanie się IgA w tkankach itp.) chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi (GVHD), pęcherze podobne do pęcherzycy, pęcherzyce (wszystkie włączając pęcherzycę zwykłą i liściastą), autoimmunologiczne poliendokrynopatie, chorobę Reitersa, syndrom sztywnego człowieka, olbrzymiokomórkowe zapalenie tętnicy skroniowej, złożone zapalenie nerek o podłożu immunologicznym, chorobę nerek z udziałem IgA, polinefropatie z udziałem IgM lub zapalenie nerek za pośrednictwem IgM, chorobę Werlhofa (itp.), chorobę Moschowitza (TTP), małopłytkowość autoimmunologiczną, chorobę autoimmunologiczną jądra i jajnika, włączając immunologiczne zapalenie jąder i jajnika, pierwotną niedoczynność tarczycy; autoimmunologiczne choroby wydzielania wewnętrznego, włączając autoimmunologiczne zapalenie tarczycy, przewlekłe zapalenie tarczycy (zapalenie tarczycy Hashimoto), podostre zapalenie tarczycy, idopatyczne zapalenie tarczycy, chorobę Addinsona, chorobę Grave'a, autoimmunologiczne zespoły wielogruczołowe (lub zespoły wielogruczołowych endokrynopatii), cukrzyce typu I także określane jako cukrzyce insulino-zależne (IDDM, ang. insulindepenaent diabetes mellitus) i zespół Sheehana; autoimmunologiczne zapalenie wątroby, limfoidalne śródmiąższowe zapalenie płuc (HIV), zarostowe zapalenie oskrzelików (nietransplantacyjne) przeciwko NSIP, zespół Guillain-Barre'a, zapalenie dużych naczyń (włączając zespół bólu wielomięśniowego z wysokim OB oraz zapalenie tętnicy skroniowej olbrzymiokomórkowe (zapalenie Takayasu)), zapalenie naczyń średniej wielkości, (włączając chorobę Kawasaki i zapalenie guzkowate tętnic), zesztywniające zapalenie kręgosłupa, chorobę Bergera (neuropatię
PL 212 899 B1 z udziałem IgA), szybko postępujące zapalenie kłębuszków nerkowych, pierwotną żółciową marskość wątroby, psylozę komorową (celiaklia), krioglobulinemię, ALS, chorobę tętnicy wieńcowej.
Nowotwory CD20-dodatnie są tymi, które zawierają nieprawidłową proliferację komórek z ekspresją CD20 na powierzchni komórki. Nowotwory CD20-dodatnie z komórkami B obejmują CD20-dodatnią chorobę Hodgina włączając chorobę Hodgina z przewagą limfocytów (LPHD); chłoniaka nieziarniczego (NHL); chłoniaki grudkowate (FCC); ostrą białaczkę limfocytową (ALL); przewlekłą białaczkę limfocytową (CLL) ; białaczkę kosmatokomórkową. Chłoniak nieziarniczy obejmuje niskiego stopnia/pęcherzykowatego chłoniaka nieziarniczego (NHL), chłoniaka nieziarniczego małych limfocytów (SLL), pośredniego stopnia/pęcherzykowatego NHL, pośredniego stopnia rozproszonego NHL, wysokiego stopnia immunoblastycznego NHL, wysokiego stopnia limfoblastyczego NHL, wysokiego stopnia NHL z małymi nierozszczepionymi komórkami, masywną chorobę NHL, szpiczakowatego chłoniaka limfocytów, chłoniaka komórek kory mózgowej, chłoniaka związanego z AIDS oraz makroglubulinemię Waldenstroma. Rozważane jest także leczenie nawrotów nowotworów. LPHD jest typem choroby Hodgkina, która ma tendencję do częstych nawrotów pomimo leczenia naświetleniami lub chemioterapią i charakteryzuje się CD20-dodatnimi komórkami nowotworowymi. CLL jest jedną z czterech głównych typów białaczek. Nowotwór dojrzałych komórek B zwanych limfocytami, CLL objawia się postępującą akumulacją komórek we krwi, szpiku kostnym i tkankach limfatycznych.
W specyficznych wykonaniach humanizowane przeciwciała wiążące CD20 i ich funkcjonalne fragmenty są stosowane do leczenia chłoniaka nieziarniczego (NHL), choroby Hodgkina z przewagą limfocytów (LPHD), chłoniaka małych limfocytów (SLL), przewlekłej białaczki limfocytowej, reumatoidalnego zapalenia stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenia stawów, liszaja rumieniowatego układowego (SLE) włączając zapalenie nerek w liszaju rumieniowatym układowym, choroby Wegenera, choroby zapalnej jelit, choroby Werlhofa (ITP), choroby Moschowitza (TTP), małopłytkowości o podłożu autoimmunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, myasthania gravis, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych.
Humanizowane przeciwciała wiążące CD20 lub ich funkcjonalne fragmenty są użyteczne w leczeniu pojedynczym środkiem, np. nawrotów lub opornych na leczenie mało zróżnicowanych lub pęcherzykowych CD20-dodatnich chłoniaków NHL komórek B lub mogą być podane pacjentom w połączeniu z innymi lekami w wielolekowym trybie leczenia.
Chłoniak opieszały jest wolno postępującą nieuleczalną chorobą, w której przeciętny pacjent przeżywa pomiędzy 6 a 10 lat przechodząc szereg okresów ustępowania i nawrotów. W jednym z wykonań humanizowane przeciwciała wiążące antygen CD20 lub ich funkcjonalne fragmenty są zastosowane do leczenia opieszałego chłoniaka NHL.
Parametry pozwalające na oznaczenie skuteczności lub sukcesu leczenia nowotworu będą znane lekarzowi specjalizującemu się w danej chorobie. Ogólnie, lekarz specjalista będzie zwracał uwagę na zmniejszenie oznak i objawów określonej choroby. Parametry mogą obejmować średni czas potrzebny do postępu choroby, czas do ustąpienia objawów, stabilizację choroby.
Poniższe odniesienia opisują chłoniaki i białaczki CLL, ich rozpoznania, leczenie i standardowe procedury medyczne do mierzenia skuteczności leczenia.
Poniższe odniesienia opisują chłoniaki i białaczki CLL, ich rozpoznania, leczenie i standardowe procedury medyczne do mierzenia skuteczności leczenia. CaneIlos GP, Lister, TA, Sklar JL: The Lymphomas. W. B. Saunders Company, Philadelphia, 1998; van Besien K i Cabanillas, F: Clinical Manifestations, Staging and Treatment of Non-Hodgkin's Lymphoma, Rozdz. 70, str 1293-1333, w :Hemacology, Basic Principies and Practice, wyd. 3, red. Hoffman i wsp. (redaktorzy). Churchill Livingstone, Filadelfia, 2003; oraz Rai, K i Patel, D: Chronic Lymphocytic Leukemia, Rozdz. 72, str. 1350-1362, w: Hematology, Basic Principles and Practice, wyd. 3, red. Human i wsp. (redaktorzy). Churchill Livingstone, Philadelphia, 2000.
Parametry stosowane do oznaczenia wydajności lub sukcesu leczenia choroby autoimmunologicznej lub choroby pokrewnej chorobie autoimmunologicznej będą znane lekarzowi specjalizującemu się w odpowiedniej chorobie. Ogólnie, lekarz specjalista będzie zwracał uwagę na zmniejszenie się oznak i objawów określonej choroby. Niżej podane są w pewnym sensie przykładami.
W jednym z wykonań przeciwciała z wynalazku są użyteczne do leczenia reumatoidalnego zapalenia stawów (RA). RA charakteryzuje się zapaleniem wielu stawów, utratą chrząstki i erozją kości, która prowadzi do uszkodzenia stawów i ostatecznie do zmniejszenia funkcjonowania stawów. Dodatkowo, ponieważ RA jest chorobą układową, może dawać efekty w innych tkankach, takich jak płuca,
PL 212 899 B1 oczy i szpik kostny. Mniej niż 50 procent pacjentów, którzy cierpią na RA przez dłużej niż 10 lat może nadal pracować lub normalnie funkcjonować w życiu codziennym.
Przeciwciała mogą być użyte jako terapia pierwszej linii we wczesnym RA (tj., takim., który nie zetknął się z metotreksatem (MTX)) i jako monoterapia Iub w kombinacji, np., z MTX lub cyklofosfamidem. Przeciwciała mogą być także zastosowane w leczeniu jako terapia drugiej linii dla pacjentów z nawrotami po leczeniu DMARD i/lub MTX i jako monoterapia lub kombinacja np., z MTX. Humanizowane przeciwciała wiążące CD20 są użyteczne do zapobiegania lub kontrolowania uszkodzenia stawów, opóźniania uszkodzenia strukturalnego, zmniejszania bólu związanego z zapaleniem w RA i ogólnie zmniejszają oznaki i objawy w RA o natężeniu umiarkowanym i ciężkim. Pacjent cierpiący na RA może być leczony humanizowanym przeciwciałem przed, po lub wraz z leczeniem innymi lekami stosowanymi w leczeniu RA (zobacz terapię kombinowaną poniżej). W jednym z wykonań, pacjenci, u których wcześniej nie powiodło się leczenie lekami antyreumatoidalnymi zmieniającymi objawy choroby i/lub odpowiedź na metotreksat była nieodpowiednia są leczeni humanizowanym przeciwciałem wiążącym CD20 z wynalazku. W jednym z wykonań tego leczenia pacjenci są poddawani 17dniowemu trybowi leczenia, podczas którego otrzymują samo humanizowane przeciwciało wiążące CD20 (1 g przez wlewy dożylne w dniu 1 i 15); przeciwciało wiążące CD20 plus cyklofosfamid (750 mg przez wlew dożylny w dniu 3 i 17) lub przeciwciało wiążące CD20 plus metotreksat.
Jeden ze sposobów oceny skuteczności leczenia w RA jest oparty na kryteriach Amerykańskiego Kolegium Reumatologii (ACR, ang. American College of Rheumatology), które wśród różnych rzeczy mierzą procent polepszenia w tkliwych uciskowo i spuchniętych stawach. Pacjent cierpiący na RA może być oceniony, na przykład, na ACR 20 (20 procent polepszenia) w porównaniu z brakiem leczenia przeciwciałem (np. linia podstawowa sprzed leczenia) lub leczeniem z użyciem placebo. Inne sposoby oceny skuteczności leczenia przeciwciałem obejmują punktację przy użyciu promieniowania X, taką jak punktacja Sharpa z użyciem promieniowania X (ang. Sharp X-ray score), stosowaną do punktacji uszkodzenia strukturalnego, takiego jak erozja kości i zwężenie przestrzeni stawowej. Pacjenci mogą być także ocenieni pod względem zapobiegania lub polepszenia w utracie czynności opartego na punktacji Kwestionariusza Oceny Zdrowia (HAQ, ang. Health Assessment Questionnaire, punktacji AIMS, SF-36 w okresach czasu podczas leczenia lub po leczeniu. Kryteria ACR 20 mogą obejmować 20% polepszenie zarówno w ocenie tkliwości dotyku (uczucia bólu) stawu i oceny spuchnięcia stawu plus 20% polepszenie w przynajmniej 3 z 5 dodatkowych pomiarów:
1. ocena uczucia bólu przez pacjenta przy użyciu wzrokowej skali analogowej (VAS, ang. visual analog scale),
2. ogólna ocena pacjenta pod względem aktywności choroby (VAS),
3. ogólna ocena lekarza pod względem aktywności choroby (VAS),
4. samoocena pacjenta pod względem utraty czynności mierzona przy użyciu Kwestionariusza Oceny Zdrowia, oraz
5. czynniki fazy ostrej, CRP lub ESR.
ACR 50 i ACR 70 są zdefiniowane analogicznie. Korzystnie pacjentowi podaje się ilość przeciwciała wiążącego CD20 z wynalazku wystarczającą do osiągnięcia przynajmniej wyniku ACR 20, korzystnie przynajmniej ACR 30, bardziej korzystnie przynajmniej ACR 50, nawet bardziej korzystnie przynajmniej ACR 70, najbardziej korzystnie przynajmniej ACR 75 i wyższego.
Artropatia łuszczycowa posiada unikalne i odrębne cechy radiograficzne. Erozja stawów i zwężenie przestrzeni stawowej dla artropatii łuszczycowej może być również ocenione przy zastosowaniu punktacji Sharpa. Humanizowane przeciwciała wiążące CD20 z wynalazku mogą być zastosowane do zapobiegania uszkodzeniu stawów, jak również do zmniejszenia oznak i objawów choroby.
Jeszcze innym aspektem wynalazku jest sposób leczenia liszaja lub SLE przez podawanie pacjentowi cierpiącemu na SLE terapeutycznie skutecznej ilości humanizowanego przeciwciała z wynalazku wiążącego CD20. Punktacja SLEDAI dostarcza ilościowej oceny aktywności choroby. SLEDAI jest ważonym indeksem 24 klinicznych i laboratoryjnych parametrów, o których wiadomo, że są skorelowane z aktywnością choroby, w zakresie liczbowym 0-103. Zobacz, Bryan Gescuk & John Davis, Novel therapeutic agent for systemic lupus erythematosus w Current Opinion in Rheumatology 2002, 14:515-521. Uważa się, że nawroty choroby w nerkach i inne objawy liszaja są spowodowane obecnością przeciwciał wiążących się do dwuniciowego DNA. Pacjenci poddani leczeniu przeciwciałem mogą być monitorowani przez ten czas pod względem nawrotu choroby w nerkach, która jest zdefiniowana jako znaczący, powtarzalny wzrost surowiczej kreatyniny, poziomu białka w moczu i lub krwi w moczu. Alternatywnie lub dodatkowo, pacjenci mogą być monitorowani pod względem poziomu
PL 212 899 B1 przeciwciał antyjądrowych lub przeciwciał wiążących się z dwuniciowym DNA. Leczenie SLE obejmuje podawanie dużych dawek kortykosteroidów i/lub cyklofosfamidu (DHCC).
Artropatie kręgosłupa są grupą zaburzeń stawów obejmującą zesztywniające zapalenie kręgosłupa, artropatię łuszczycową i chorobę Crohna. Sukces w leczeniu może być określony w oparciu o narzędzia obejmujące ogólną ocenę wykonaną przez pacjenta i lekarza.
Do leczenia łuszczycy są stosowane różne sposoby leczenia; leczenie zmienia się w sposób bezpośredni do natężenia choroby. Pacjenci z bardziej łagodną postacią łuszczycy typowo otrzymują typowe leczenie, takie jak domiejscowe steroidy, antralinę, kalcipotrien, klobetazol i tazaroten, do prowadzenia choroby, podczas gdy u pacjentów z umiarkowanymi i ciężkimi objawami łuszczycy stosuje się w większym stopniu terapie układowe (metotreksat, retinoidy, cyklosporynę, PUVA i LTVB). Stosowane są również dziegcie. Terapie te są kombinacją względów bezpieczeństwa, czasochłonności trybu leczenia lub dogodnych procesów leczenia. Ponadto, niektóre z nich wymagają drogiego sprzętu i przeznaczonej do tego celu przestrzeni biurowej. Leczenie układowe może powodować poważne skutki uboczne, włączając nadciśnienie, hiperlipidemię, zahamowanie czynności szpiku, chorobę wątroby, chorobę nerek i rozstrój żołądkowy. Także, zastosowanie fototerapii może zwiększyć prawdopodobieństwo pojawienia się nowotworów skóry. Dodatkowo, do niewygody i dyskomfortu związanego z zastosowaniem terapii miejscowych, fototerapia i leczenie układowe wymaga okresowego badania pacjentów na początku i końcu terapii oraz monitorowania czasu ekspozycji z powodu skutków ubocznych tych terapii.
Skuteczność leczenia łuszczycy jest oznaczana przez monitorowanie zmian w klinicznych oznakach i objawach choroby włączając zmiany w Ogólnej Ocenie przez Lekarza (PGA, ang. Physician's Global Assessment (PGA), punktację Powierzchni Łuszczycy i Indeksu Natężenia Objawów (PASI, ang. Psoriasis Area and Severity Index), Ocenę Objawów Łuszczycy (PSA, ang. Psoriasis Symptom Assessment) w porównaniu z stanem podstawowym. Pacjent może być badany okresowo w trakcie leczenia we wzrokowej skali analogowej użytej do wskazania stopnia swędzenia doznawanego w określonych punktach czasowych.
Pacjenci mogą doznać reakcji na wlew lub objawów związanych z wlewem podczas ich pierwszego wlewu przeciwciała terapeutycznego. Natężenie tych objawów zmienia się i zazwyczaj są one odwracalne po interwencji medycznej. Objawy te obejmują, ale nie są do nich ograniczone, chorobę podobną do grypy przebiegającą z gorączką, dreszcze/zesztywnienie mięśni, mdłości, pokrzywkę, ból głowy, skurcz oskrzeli, obrzęk naczynioworuchowy. Pożądane byłoby zminimalizowanie reakcji na wlew w sposobach leczenia choroby z niniejszego wynalazku. Zatem, innym aspektem wynalazku jest ujawniony sposób leczenia chorób przez podawanie humanizowanego przeciwciała wiążącego CD20, znamiennego tym, że przeciwciało posiada zmniejszoną lub brak cytotoksyczności zależnej od dopełniacza i skutkuje zmniejszonymi objawami związanymi z wlewem w porównaniu z przeciwciałem. Rituxan®. W jednym z wykonań humanizowanym przeciwciałem wiążącym. CD20 jest 2H7.v116.
Dawka
W zależności od wskazania do leczenia i czynników wpływających na dawkowanie, które lekarz specjalista w tej dziedzinie będzie znał, przeciwciała z wynalazku będą podawane w dawce, która jest skuteczna do leczenia tego wskazania przy minimalizacji toksyczności i skutków ubocznych. Do leczenia nowotworu CD20-dodatniego lub choroby autoimmunologicznej, terapeutycznie skuteczna
2 2 dawką będzie dawka w zakresie około 250 mg/m2 do około 400 mg/m2 lub 500 mg/m2, korzystnie oko22 ło 250-375 mg/m2. W jednym z wykonań zakres dawki wynosi 275-375 mg/m2. W jednym. z wykonań leczenia CD20-dodatniego nowotworu komórek B przeciwciało jest podawane w zakresie 300-375 2 mg/m2. Do leczenia pacjentów cierpiących na chłoniaka komórek B, takiego jak chłoniak nieziarniczy, w specyficznym wykonaniu, przeciwciała anty-CD20 i humanizowane przeciwciała anty-CD20 z wyna2 lazku będą podawane ludzkiemu pacjentowi w dawce 10 mg/kg lub 375 mg/m2. Do leczenia NHL jeden z trybów dawkowania polegałby na podawaniu jednej dawki kompozycji przeciwciała w dawce 10 mg/kg w pierwszym tygodniu leczenia, po którym następowałaby dwutygodniowa przerwa, następnie podawana jest druga dawka tej samej ilości przeciwciała. Ogólnie, pacjenci cierpiący na NHL otrzymują takie leczenie raz w ciągu roku po ponownym pojawieniu się chłoniaka, takie leczenie może być powtórzone. W innym trybie dawkowania pacjenci leczeni na niskiego stopnia NHL otrzymują 2 przez cztery tygodnie wersję humanizowanego 2H7, korzystnie v16 (375 mg/m2 tygodniowo), po których występują poczynając od piątego tygodnia, trzy dodatkowe dawki przeciwciała plus standardowa chemioterapia CHOP (cyklofosfamid, doksorubicyna, winkrystyna i prednison) lub CVP (cyklofosfamid, winkrystyna, prednison), które podaje się co trzy tygodnie w trzech cyklach.
PL 212 899 B1
Do leczenia reumatoidalnego zapalenia stawów, w jednym z wykonań, zakres dawki dla prze22 ciwciała humanizowanego wynosi 125 mg/m2 (równoważnej do około 200 mg/dawkę) do 600 mg/m2, podawanych w dwóch dawkach, np., pierwsza dawka 200 mg jest podawana jednego dnia, po której następuje druga dawka 200 mg w 15 dniu. W różnych wykonaniach dawka wynosi 250 mg/dawkę, 275 mg, 300 mg, 325 mg, 350 mg, 375 mg, 400 mg, 425 mg, 450 mg, 475 mg, 500 mg, 525 mg,
550 mg, 575 mg, 600 mg.
W leczeniu choroby, przeciwciała wiążące CD20 z wynalazku mogą być podawane pacjentowi bez przerwy przez dłuższy okres lub z przerwami, jak zostało określone przez lekarza specjalistę w tej chorobie.
Pacjent, któremu podaje się lek przez dożylny wlew lub podskórnie może doznać niekorzystnych objawów, takich jak gorączka, drgawki, uczucie palenia, osłabienie, ból głowy. W celu złagodzenia lub zminimalizowania tych niekorzystnych objawów pacjent może otrzymać począt-kową(e) dawkę(i) przygotowującą(e) przeciwciała, po której(ych) jest podawana dawka terapeutyczna. Dawka(i) przygotowująca(e) będzie(ą) niższa(e) niż dawka terapeutyczna w celu przygotowania pacjenta na tolerowanie wyższych dawek.
Sposób podawania
Przeciwciała wiążące CD20 są podawane ludzkiemu pacjentowi według znanych sposobów, takich jak podawanie dożylne, np. jako jedna duża dawka lub wlew ciągły trwający pewien okres czasu, podawanie podskórne, domięśniowe, śródotrzewnowe, do płynu mórgowordzeniowego, dostastawowe, wewnątrzmaziówkowe, dooponowe lub rundy inhalacji, zazwyczaj przez podawanie dożylne lub podskórne.
W jednym z wykonań humanizowane przeciwciało 2H7 jest podawane przez wlew dożylny z 0,9% roztworem chlorku sodu jako nośnikiem wlewowym.
Terapia kombinowana
W leczeniu nowotworów komórek B opisanych powyżej, pacjent może być leczony przeciwciałami wiążącymi CD20 z niniejszego wynalazku w połączeniu z jednym lub większą ilością środków terapeutycznych, takich jak środek chemioterapeutyczny w wielolekowym trybie leczenia. Przeciwciało wiążące CD20 może być podane razem, sekwencyjnie lub zamiennie ze środkiem terapeutycznych lub po braku odpowiedzi po zastosowaniu innej terapii. Standardowa chemioterapia do leczenia chłoniaka może obejmować cyklofosfamid, cytarabinę, melfalan i mitoksantron plus melfalan. CHOP jest jednym z najbardziej powszechnych trybów chemioterapii do leczenia chłoniaka nieziarniczego. Poniższe leki są stosowane w trybie leczenia CHOP: cyklofosfamid (firmowa nazwa cytoksan, neosar); adriamycyna (doksorubicyna/hydroksyrubicyna); winkrystyna (Oncovin); i prednisolon (czasami nazywany Deitasone lub Orasone). W określonych wykonaniach, przeciwciało wiążące CD20 jest podawane pacjentowi potrzebującemu go w kombinacji z jednym lub większą liczbą poniższych środków chemioterapeutycznych, takich jak doksorubicyna, cyklofosfamid, winkrystyna i prednisolon. W specyficznym wykonaniu pacjent cierpiący na chłoniaka (takiego jak chłoniak nieziarniczy) jest leczony przeciwciałem anty-CD20 z niniejszego wynalazku w połączeniu z terapią CHOP (cyklofosfamid, doksorubicyna, winkrystyna i prednison). W innym wykonaniu, pacjent cierpiący na nowotwór może być leczony humanizowanym przeciwciałem wiążącym CD20 z wynalazku w połączeniu z chemioterapią CVP (cyklofosfamid, winkrystyna i prednison). W specyficznym wykonaniu pacjent cierpiący na chłoniaka NHL CD20-dodatniego jest leczony humanizowanym przeciwciałem 2H7.v16 w połączeniu z CVP. W specyficznym wykonaniu leczenia białaczki CLL przeciwciało wiążące CD20 jest podawane w połączeniu z chemioterapią jednym lub obydwoma środkami w postaci fludarabiny i cytoksanu.
W leczeniu chorób autoimmunologicznych lub stanów pokrewnych chorobom autoimmunologicznym opisanych powyżej, pacjent może być leczony przeciwciałami wiążącymi CD20 z niniejszego wynalazku w połączeniu z drugim środkiem terapeutycznym, takim jak środek immunosupresyjny, w taki sposób, jak wielolekowy tryb leczenia. Przeciwciało wiążące CD20 może być wraz, sekwencyjnie lub zamiennie ze środkiem lmmunosupresyjnym lub po braku odpowiedzi po leczeniu inną terapią. Środek immunosupresyjny może być podawany w tych samych lub mniejszych dawkach niż przedkładane w tej dziedzinie. Korzystna dawka dopełniająca pomocniczego środka immunosupresyjnego będzie zależeć od wielu czynników, włączając typ choroby, który jest leczony, jak również historia pacjenta.
Środek immunosupresyjny stosowany tutaj do pomocniczej terapii odnosi się do związków, których działanie polega na supresji lub maskowaniu systemu immunologicznego pacjenta. Takie środki obejmowałyby związki, które hamują wytwarzanie cytokin, zmniejszają lub hamują wytwarzanie
PL 212 899 B1 auto-antygenów lub maskują antygeny MHC. Przykłady takich środków obejmują steroidy, takie jak glukokortykosteroidy, np., prednison, metyloprednisolon i deksametason; pirymidyny 2-amino-6-arylo-5-podstawione, (zobacz Patent USA Nr 4665077), azatioprynę, (lub cyklofosfamid, jeżeli występuje niepomyślna reakcja na azatioprynę); bromokryptynę; glutaraldehyd (który maskuje antygeny MHC, jak opisano w Patencie USA Nr 4120649); antyidiotypowe przeciwciała dla antygenów MHC i fragmentów MHC; cyklosporynę A; cytokinę lub antagonistów receptora cytokiny włączając przeciwciała przeciwko interferonowi γ, β lub α; przeciwciała przeciwko czynnikowi martwicy nowotworu a; przeciwciała przeciwko czynnikowi martwicy nowotworu β; przeciwciała przeciwko interleukinie-2; przeciwciała przeciwko receptorowi dla IL-2; przeciwciała anty-L3T4; heterologiczne przeciwciała przeciwko globulinie limfocytów; przeciwciała pan-T, korzystnie przeciwciała anty-CD3 lub anti-CD4/CD4a; rozpuszczalny peptyd zawierający domenę wiążącą LFA-3 (WO90/08187 opublikowany 7/26/90); streptokinazę; TGF-β; streptodornazę; RNA lub DNA z gospodarza; FK506; RS-61443; deoksyspergalinę; rapamycynę; receptor komórek T (Patent USA Nr 5114721); fragmenty receptora komórek T (Offner i wsp., Science 251:430-432 (1991); WO90/11294; i WO91/01133); oraz przeciwciała przeciwko receptorowi komórek T (EP 340109), takie jak T10B9.
Do leczenia reumatoidalnego zapalenia stawów pacjent może być leczony przeciwciałem CD20 z wynalazku w połączeniu z dowolnym jednym lub większą ilością następujących leków: DMARDS (anty-reumatyczne leki modyfikujące przebieg choroby, ang. disease-modifying anti-rheumatic drugs) (np., metotreksat), NSAI lub NSAID (niesterydowe leki przeciwzapalne, ang. non-steroidal anti-inflammatory drugs), HUMIRA™ (adalimumab; Abbott Laboratories), ARAVA® (Ieflunomid), REMICADE® (infliksimab; Centocor Inc., of Malvern, Pa), ENBREL (etanercept; Immunex, WA), inhibitor COX-2. Lekami DMARD powszechnie stosowanymi w RA są hydroksyklorokwina, sulfasalazyna, metotreksat, leflunimid, etanercept, infiksimab, azatiopryna, D-penicyloamina, Gold (doustny), Gold (domięśniowy), minocyklina, cyklosporyna, immunoadsorcyjne białko A ze Staphylococcus. Adalimumab jest ludzkim przeciwciałem monoklonalnym, które wiąże się do TNFa. Ingliksimab jest immunoadhezyjnym białkiem fuzyjnym złożonym z zewnątrz komórkowej, wiążącej ligand części ludzkiego receptora czynnika martwicy nowotworu (TNFR) o masie 75 kD (p75) połączonej do części Fc ludzkiej IgG1. W celu konwencjonalnego leczenia RA zobacz, np., Guidelines for the management of rheumatoidarthritis Arthritis & Rheumatism 46(2):328-346 (luty, 2002). W specyficznym wykonaniu pacjent cierpiący na RA jest leczony przeciwciałem CD20 z wynalazku w połączeniu z metotreksatem (MTX). Przykładowa dawka MTX wynosi około 7,5-25 mg/kg/wk. MTX może być podawany doustnie lub podskórnie.
Do leczenia zesztywniającego zapalenia stawów, artropatii łuszczycowej i choroby Crohna pacjent może być leczony przeciwciałem wiążącym CD20 z wynalazku w połączeniu, na przykład, z Remicade® (infliksimab; z Centocor Inc., z Malvern, Pa.), ENBREL (etanercept; Immunex, WA).
Leczenie SLE obejmuje kortykosteroidy i/lub cyklofosfamid (HDCC) podawane w dużych dawkach.
Do leczenia łuszczycy pacjentom może być podawane przeciwciało wiążące CD20 w połączeniu z leczeniem miejscowym, takim jak domiejscowe steroidy, antralina, kalcipotrien, klobetasol i tazaroten lub z metotreksatem, retinoidami, cyklosporyną, terapiami PUVA i UVB. W jednym z wykonań pacjent cierpiący na łuszczycę jest leczony przeciwciałem wiążącym CD20 sekwencyjnie lub wraz z cyklosporyną.
Preparaty farmaceutyczne
Preparaty farmaceutyczne przeciwciał wiążących CD20 stosowanych według niniejszego wynalazku są przygotowywane w celu przechowywania przez zmieszanie przeciwciała posiadającego pożądany stopień czystości z opcjonalnymi akceptowalnymi farmaceutycznie nośnikami, zaróbkami lub stabilizatorami (Remington's Pharmaceutical Sciences, wydanie 16, Osol, A. Ed. (1980)), w postaci preparatów liofilizowanych lub roztworów wodnych. Akceptowalne nośniki, zaróbki lub stabilizatory są nietoksyczne dla biorców w zastosowanych dawkach i stężeniach i obejmują bufory, takie jak fosforanowy, cytrynianowy i innych kwasów organicznych; przeciwutleniacze włączając kwas askorbinowy i metioninę; środki konserwujące (takie jak oktadecylodimetylobenzylochlorek amonu; chlorek heksametonu, chlorek benzalkonu, chlorek benżetonu; alkohol fenylowy, butylowy lub benzylowy; alkiloparabeny, takie jak metolo- Iub propyloparabeny; katechol; rezorcinol; cykloheksanol; 3-pentanol; i m-kresol; polipeptydy małocząsteczkowe (mniej niż 10 reszt); białka, takie jak albumina surowicza, żelatyna lub immunoglobuliny; polimery hydrofilowe, takie jak oliwinylopirolidon; aminokwasy, takie jak glicyna, glutamina, asparagina, histydyna, arginina lub lizyna; monosacharydy, disacharydy i inne wodorowęglany włączając glukozę, mannozę lub dekstryny; środki chelatujące, takie jak EDTA; cukry,
PL 212 899 B1 takie jak glukoza, mannitol, trehaloza lub sorbitol; przeciwjony tworzące sole, takie jak jony sodu; kompleksy metali (np. kompleksy Zn-białko); oraz/lub surfaktanty, takie jak TWEEN™, PLURONICS™ lub glikol polietylenowy (PEG).
Przykładowe preparaty przeciwciała anty-CD20 są opisane w WO98/56418, wyraźnie włączony tutaj przez odniesienie. Inny preparat jest płynnym preparatem składającym się z wielu dawek zawierającym przeciwciało anty-CD20 w stężeniu 40 mg/ml, 25 mM octan, 150 mM trehalozę, 0,9% alkoholu benzylowego, 0,02% polisorbatu 20 o pH 5,0, który posiada minimalny czas przydatności do użycia dwa lata przy przechowywaniu w 2-8°C. Inny preparat anty-CD20 będący przedmiotem zainteresowania zawiera 10 mg/ml przeciwciała w 9,0 mg/ml chlorku sodu 7,35 mg/ml dwuwodnego octanu sodu, 0,7 mg/ml polisorbatu 80 i sterylną wodę do wstrzyknięcia, pH 6.5. Jeszcze inny wodny preparat farmaceutyczny zawiera 10-30 mM octan sodu od pH około 4,8 do około 5,5, korzystnie pH 5,5, polisorbat jako surfaktant w ilości około 0,01-0,1% obj./obj., trehalozę w ilości około 2-10% w/obj. i alkohol benzylowy jako środek konserwujący (Patent USA Nr 6171586). Preparaty liofilizowane zaadoptowane do podania podskórnego są opisane w WO97/04801. Takie liofilizowane preparaty mogą być rekonstytuowane odpowiednim rozpuszczalnikiem do wysokiego stężenia białka i rekonstytuowany preparat może być podany podskórnie ssakowi, który jest tutaj leczony.
Jednym z preparatów humanizowanych wariantów 2H7 jest przeciwciało w stężeniu 12-14 mg/ml w 10 mM histydynie 6% glukozie, 0,02% polisorbacie 20, pH 5,8.
W specyficznym wykonaniu preparat wariantów 2H7 a w szczególności 2H7.v16 jest utworzony z 20 mg/ml przeciwciała w 10 mM siarczanie histydyny, 60 mg/ml glukozy, 0,2 mg/ml polisorbatu 20 i sterylnej wody do wstrzyknięcia w pH 5,8.
Preparat tutaj może także zawierać więcej niż jeden składnik aktywny konieczny do leczenia określonego wskazania, korzystnie te, z uzupełniającymi się aktywnościami, które nie oddziałują niekorzystnie pomiędzy sobą. Na przykład, może być pożądane, aby ponadto dostarczyć środek cytotoksyczny, środek chemioterapeutyczny, cytokinę lub środek immunosupresyjny (np. jeden z tych, które działają na komórki T, taki jak cyklosporyna lub przeciwciało, które wiąże komórki T, np., jedno z tych, które wiążą LFA-1). Skuteczna ilość takich innych środków zależy od ilości przeciwciała obecnego w preparacie, typu choroby albo zaburzenia lub leczenia i innych czynników przedyskutowanych powyżej. Są one stosowane ogólnie w tych samych dawkach i sposobie podawania, jak opisano tutaj lub od około 1 do 99% dawek dotychczas zastosowanych.
Przeciwciało może być także uwięzione w mikrokapsułki przygotowane, na przykład przez techniki koacerwacji lub przez polimeryzację międzyfazową (na przykład, odpowiednio mikrokapsułki z hydroksymetylocelulozy lub żelatyny oraz mikrokapsułki z poli(metylometaoctanu)), w koloidalne systemy dostarczania leków (na przykład liposomy, mikrosfery albuminy, mikroemulsje, nanocząstki i nanokapsułki) lub w makroemulsje. Takie techniki są ujawnione w Remington's Pnarmaceutical Sciences, wydanie 16, Oslo, A., red., (1980).
Mogą być przygotowane preparaty o długotrwałym uwalnianiu. Odpowiednie przykłady preparatów o długotrwałym uwalnianiu obejmują półprzepuszczalne matryce stałych polimerów hydrofobowych zawierających antagonistę, które to matryce są w postaci ukształtowanych wyrobów, np., błon lub mikrokapsułek. Przykłady matrycy o spowolnionym uwalnianiu obejmują poliestry, hydrożele (na przykład, poli(2-hydroksyetylometakrylan) lub poli(alkohol winylowy) polilaktydy (Patent USA Nr 3773 919), kopolimery kwasu L-glutaminowego i etylo-L-glutaminianu), niedegradowalny etyleno-winylo-octan, degradowalne kopolimery kwas mleczanowy-kwas glikolowy, takie jak LUPRON DEPOT™ (nadające się do wstrzyknięcia mikrosfery złożone z kopolimeru kwas mleczanowy-kwas glikolowy oraz octanu leuprolidu) oraz kwas poli-D-(-)-3-hydroksybutylowy.
Preparaty stosowane do podania in vivo muszą być sterylne. To jest z łatwością osiągane przez filtrację przez sterylne błony do filtracji.
Produkty przemysłowe i zestawy
Innym wykonaniem wynalazku jest produkt przemysłowy zawierający materiały użyteczne do leczenia chorób autoimmunologicznych i stanów pokrewnych chorobom autoimmunologicznym oraz nowotworów CD20-dodatnich, takich jak chłoniak nieziarniczy. Produkt przemysłowy zawiera pojemnik i etykietkę lub ulotkę w pojemniku lub związaną z pojemnikiem. Odpowiednie pojemniki obejmują, na przykład, butelki, fiolki, strzykawki, itp. Pojemniki mogą być utworzone z różnych materiałów, takich jak szkło lub plastik. Pojemnik zawiera kompozycję, która jest skuteczna do leczenia stanu chorobowego i może posiadać sterylne ujście (na przykład pojemnik może być workiem zawierającym roztwór dożylny lub fiolką posiadającą korek możliwy do przebicia przez podskórną igłę do iniekcji. Przynajmniej
PL 212 899 B1 jeden środek aktywny w kompozycji jest przeciwciałem wiążącym CD20 z wynalazku. Etykietka lub wkładka/ulotka wskazuje, że kompozycja jest stosowana do leczenia określonego stanu chorobowego. Etykietka lub ulotka będzie ponadto zawierać instrukcje do podawania pacjentowi kompozycji przeciwciała. Ulotka dotyczy instrukcji zwyczajowo włączonych do komercyjnych opakowań produktów terapeutycznych, które zawierają informacje o wskazaniach, stosowaniu, dawkach, podawaniu, przeciwwskazaniach i/lub ostrzeżenia dotyczące zastosowania takich terapeutycznych produktów. W jednym z wykonań, ulotka wskazuje, że kompozycja jest stosowana do leczenia chłoniaka nieziarniczego.
Dodatkowo, produkt przemysłowy może ponadto zawierać drugi pojemnik zawierający farmaceutycznie akceptowalny bufor, taki jak bakteriostatyczna woda do wstrzyknięcia (BWFI), sól fizjologiczna buforowana fosforanem, roztwór Ringera i roztwór dekstrozy. Może on ponadto zawierać inne materiały pożądane z punktu widzenia komercyjnego i użytkownika, włączając inne bufory, rozcieńczalniki, filtry, igły i strzykawki.
Dostarczone są także zestawy, które są użyteczne do różnych celów, np. do oznaczenia zabijania komórek B, jako pozytywna kontrola do oznaczeń apoptozy, do oczyszczania lub immunowytrącania CD20 z komórek. Do izolacji i oczyszczania CD20, zestaw może zawierać przeciwciało anty-CD20 sprzężone z kulkami (np., kulkami sefarozy). Mogą być zestawy, które zawierają przeciwciała do detekcji i oznaczenia ilości CD20 in vitro, np. w analizie ELISA lub Western blot. Jak w przypadku produktu przemysłowego, zestaw zawiera pojemnik z etykietką lub ulotką na pojemniku lub związaną z pojemnikiem. Pojemnik zawiera kompozycję zawierającą przynajmniej jedno przeciwciało anty-CD20 z wynalazku. Mogą być dołączone dodatkowe pojemniki, które zawierają, np., rozcieńczalniki i bufory, przeciwciała kontrolne. Etykietka lub ulotka może dostarczać opisu kompozycji, jak również instrukcji do zamierzonego zastosowania diagnostycznego in vitro.
CD20 z małpy Cynomolgus
Wynalazek dostarcza wyizolowanego kwasu nukleinowego zawierającego sekwencję nukleotydową CD20 z małpy Cynomolgus, jak pokazano na Fig. 19. W jednym z wykonań kwasem nukleinowym jest cDNA. W jednym z wykonań, kwas nukleinowy kodujący małpi CD20 jest wektorem ekspresyjnym do ekspresji w komórce gospodarza. Sekwencja nukleotydowa w wektorze ekspresyjnym jest funkcjonalnie połączona do sekwencji kontrolującej ekspresję, takiej jak promotor lub promotor i sekwencja wzmacniająca ekspresję. Sekwencja kontrolująca ekspresję może być natywną sekwencją normalnie związaną z genem CD20 w Cynomolgus lub być heterologiczna względem genu. Dostarczony jest także polipeptyd zawierający sekwencję aminokwasową [Fig. 19 i 20] CD20 z małpy Cynomolgus, jak również komórki gospodarza zawierające kwas nukleinowy kodujący CD20 z Cynomolgus. W jednym z aspektów komórki gospodarza są komórkami eukariotycznymi, np., komórkami CHO. Rozważane są również białka fuzyjne zawierające sekwencję aminokwasową CD20 z Cynomolgus lub fragmenty sekwencji.
Przykłady doświadczalne
P r z y k ł a d 1
Humanizowanie mysiego przeciwciała monoklonalnego 2H7 anty-CD20
Humanizowanie mysiego przeciwciała anty-ludzki CD20, 2H7 (także określanego tutaj jako m2H7, m od mysi) zostało wykonane w szeregu etapów ukierunkowanej mutagenezy. Opisano sekwencje regionu zmiennego mysiego przeciwciała 2H7 i chimeryczne 2H7 z mysią domeną V i ludzką domeną C, zobacz, np., Patenty USA Nr 5846818 oraz 6204023. Reszty CDR w 2H7 zostały zidentyfikowane przez porównanie sekwencji aminokwasowej mysich domen zmiennych 2H7 (ujawnionych w Patencie USA Nr 5846818) z sekwencjami znanych przeciwciał (Kabat i wsp., Sequences of proteins of immunological interest, Wyd. 5. Publiczna Służba Zdrowia, Narodowy Instytut Zdrowia, Bethesda, MD (1991)). Regiony CDR łańcucha lekkiego i ciężkiego zostały zdefiniowane na podstawie hiperzmienności sekwencji (Kabat i wsp., powyżej) i są pokazane odpowiednio na Fig. 1A i IB. Do wprowadzenia wszystkich sześciu mysich regionów CDR z 2H7 do kompletnego szkieletu ludzkiego Fab odpowiadającego sekwencji konsensusowej VKI, VHIII (podgrupa I VL kappa, podgrupa II VH) zawartego na plazmidzie pVX4 (Fig. 2) zastosowano mutagenezę ukierunkowaną z użyciem syntetycznych oligonukleotydów (Tabela 1) (Kunkel, Proc. Natl. Acad. Sci. 82:488-492 (1985)).
Fagmid pVX4 (Fig. 2 został zastosowany do mutagenezy, jak również do ekspresji cząsteczek F(ab) w E. coli. Oparty na fagmidzie pb0720, pochodnej pB0475 (Cunningham i wsp., Science 243:1330-1336 (1989)) pVX4 zawiera fragment DNA kodujący humanizowany konsensusowy łańcuch lekki κ podgrupy I (VlkI-Cl) humanizowany konsensusowy łańcuch ciężki podgrupy III (VHIII-CH1) przeciwciała anty-IFN-a (interferon a). pVX4 posiada także promotor alkalicznej fosfatazy i sekwencję
PL 212 899 B1
Shine-Dalgarno obydwie pochodzące z innego wcześniej opisanego plazmidu opartego na pUC119, pAK2 (Carter i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285 (1992)). Pomiędzy DNA kodującym lekki i ciężki łańcuch F(ab) zostało wprowadzone unikalne miejsce restrykcyjne Spe1. Pierwsze 23 aminokwasy zarówno w ciężkim i lekkim łańcuchu anty-IFN-α są sekwencją sygnału sekrecji StII (Chang i wsp., Gene 55: 189-196 (1987)).
W celu konstrukcji wersji 2H7 z zamienionymi regionami CDR (2H7.v2) wykonano mutagenezę ukierunkowaną na matrycy pVX4 zawierającej deoksyurydynę; wszystkie sześć regionów CDR anty-IFN -a zostało zmienionych na regiony CDR mysiego 2H7. Powstała cząsteczka jest określana jako wersja 2 humanizowanego 2H7 (2H7.v2) lub wersja 2H7 z zamienionymi regionami CDR; posiada ona regiony CDR z m2H7 umieszczone w konsensusowych resztach FR pokazane na Fig. 1A i 1B. Humanizowane 2H7.v2 zostało użyte do dalszego humanizowania.
Tabela 1 pokazuje sekwencję nukleotydową użytą do stworzenia każdego z regionów CDR mysiego 2H7 (m2H7) w łańcuchu H i L. Na przykład, oligonukleotyd CDR-H1 został użyty do stworzenia regionu CDR1 łańcucha H z m.2H7. CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 dotyczą odpowiednio regionów CDR1, CDR2 i CDR3 łańcucha H; podobnie, CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 dotyczą każdego z regionów CDR łańcucha L. Podstawienia w CDR-H2 wykonano w dwóch etapach przy użyciu dwóch nukleotydów, CDR-H2A i CDR-H2B.
Tabela 1. Sekwencje oligonukleotydowe użyte do konstrukcji przeniesienia regionów CDR mysiego 2H7 do ludzkiego szkieletu w pVX4. Reszty zmienione przez każdy z oligonukleotydów są podkreślone.
Podstawienie Sekwencja oligonukleotydowa
CDR-H1 C TAC ACC TTC ACC AGC TAT AAC ATG CAC TGG GTC CG
CDR-H2A G ATT AAT CCT GAC AAC GGC GAC ACG AGC TAT AAC CAG AAG TTC AAG GGC CG
CDR-H2B GAA TGG GTT GCA GCG ATC TAT CCT GGC AAC GGC GAC AC
CDR-H3 AT TAT TGT GCT CGA GTG GTC TAC TAT AGC AAC AGC TAC TGG TAC TTC GAC GTC TGG GGT CAA GGA
CDR-L1 C TGC ACA GCC AGC TCT TCT GTC AGC TAT ATG CAT TG
CDR-L2 AA CTA CTG ATT TAC GCT CCA TCG AAC CTC GCG TCT GGA GTC C
CDR-L3 TAT TAC TGT CAA CAG TGG AGC TTC AAT CCG CCC ACA TTT GGA CAG
W celu porównania humanizowanych konstruktów, skonstruowano plazmidy eksprymujące chimeryczny 2H7 Fab (zawierający mysie domeny VL i VH i ludzkie domeny CL i CH1) przy zastosowaniu mutagenezy ukierunkowanej (Kunkel, powyżej) z użyciem oligonukleotydów do wprowadzenia mysich reszt szkieletu do 2H7.v2. Sekwencja powstałego kontraktu plazmidu do ekspresji chimerycznego Fab znanego jako 2H7.v6.8 jest pokazana na Fig. 3. Każdy kodowany łańcuch Fab posiada 23-aminokwasową sekwencję sygnału sekrecyjnego StII, jak opisano dla pVX4 powyżej (Fig. 2).
W oparciu o porównanie sekwencji reszt mysiego szkieletu 2H7 z ludzkim konsensusowym szkieletem VKI, VHIII (Fig. 1A i 1B oraz wcześniej humanizowanymi przeciwciałami (Carter i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-428 9 (1992)), do konstruktu 2H7.v2 Fab wprowadzono kilka mutacji w szkielecie przy zastosowaniu mutagenezy ukierunkowanej. Mutacje te skutkują zmianą w pewnych resztach konsensusu ludzkiego szkieletu do tych obecnych w szkielecie mysiego 2H7 w miejscach, które mogłyby wpływać na konformacje CDR lub kontakty z antygenem. Wersja 3 zawierała VH(R71V, N73K), wersja 4 zawierała VH(R71V), wersja 5 zawierała VH(R71V, N73K) i VL(L46P) a wersja 6 zawierała VH(R71V, N73K) i VL(L46P, L47W).
Humanizowane i chimeryczne wersje Fab przeciwciała m2H7 ulegały ekspresji w E. coli i były oczyszczane jak następuje. Plazmidy transformowano do szczepu E. coli XL-1 Blue (Stratagene, San Diego, CA) w celu przygotowania dwu- i jednoniciowego DNA. Dla każdego wariantu, zarówno lekki, jak i ciężki łańcuch był całkowicie sekwencjonowany przy użyciu sposobu z zastosowaniem dideoksynukleotydów (Sequenase, U.S. Biochemical Corp.). Plazmidy transformowano do szczepu E. coli 16C9, pochodnej MM294, wysianego na płytki LB zawierające 5 pg/ml karbenicyliny i wybrano pojedynczą kolonię do ekspresji białka. Pojedynczą kolonię hodowano w 5 ml LB-100 pg/ml karbenicyliny przez 5-8 godz. w 37°C. 5 ml hodowli dodano do 500 ml AP5-100 mg/ml karbenicyliny i pozwolono na
PL 212 899 B1 wzrost przez 16 godz. w 4 l kolbie wystrząsarkowej z korkiem w 37°C. Pożywka AP5 składa się z 1,5 g glukozy, 11,0 Hycase SF, 0,6 g ekstraktu drożdżowego (certyfikowanego), 0,19 g bezwodnego MgSO4, 1,07 g NH4Cl, 3,73 g KCl, 1,2 g NaCl, 120 ml 1 M trietanoloaminy, pH 7,4, do 1 l wody i następnie sterylnie przefiltrowanej przez 0,1 gg filtra Sealkeen.
Komórki zbierano przez wirowanie w 1 I butelce wirówkowej (Nalgene) w 3000xg, a supernatant usunięto. Po zamrożeniu przez 1 godz. osad zawieszono w 25 ml zimnego 10 mM MES-10 mM EDTA, pH 5,0 (bufor A). W celu zahamowania proteolizy dodano 250 μΐ 0,1 M PMSF (Sigma) i w celu ułatwienia Iizy bakteryjnej ściany komórkowej dodano 3,5 ml roztworu podstawowego lizozymu z białka jaja kurzego o stężeniu 10 mg/ml (Sigma). Po lekkim wstrząsaniu w lodzie przez 1 godz. próbkę wirowano w 40000xg przez 15 min. Supernatant doprowadzono do 50 ml buforem A i naniesiono na 2 ml kolumnę DEAE zrównoważoną buforem A. Frakcje spływające z kolumny (flow-through) naniesiono na kolumnę białko G-Sepharose CL-4B (Pharmacia) (objętość złoża 0,5 ml) zrównoważoną buforem A. Kolumnę przemyto 10 ml buforu A i wyeluowano 3 ml 0,3 M glicyny, pH 3,0 do 1,25 ml 1 M Tris, pH 8,0. Następnie dokonano wymiany buforu F(ab) na PBS przy użyciu Centricon-30 (Amicon) i zagęszczono do końcowej objętości 0,5 ml. Wykonano żele SDS-PAGE wszystkich rodzajów F(ab) w celu oceny czystości, a masa każdego wariantu została zweryfikowana przy użyciu spektroskopii masowej w elektrospreju.
W oznaczeniach ELISA siły wiązania opartych na komórkach (opisanych poniżej), wiązanie cząsteczek Fab, włączając chimeryczne Fab 2H7 do CD20 było trudne do wykrycia. Zatem, wersje Fab 2H7 zostały przekształcone do przeciwciał IgG1 o pełnej długości do analiz i dalszej mutagenezy.
Plazmidy do ekspresji cząsteczek IgG o pełnej długości skonstruowano przez podklonowanie domen VL i VH chimerycznego Fab 2H7 (v6.8), jak również humanizowanych wersji Fab 2 do 6 do wcześniej opisanych wektorów pRK do ekspresji w komórce ssaczej (Gorman i wsp.; DNA Prot. Eng. Tech. 2:3-10 (1990)). W skrócie każdy konstrukt Fab strawiono przy użyciu EcoRV i BlpI w celu wycięcia fragmentu VL, który został sklonowany do miejsca EcoRV/ΒΙρΙ w plazmidzie pDRl (Fig. 4) w celu ekspresji kompletnego łańcucha lekkiego (domeny VL-CL). Dodatkowo, każdy konstrukt Fab strawiono przy użyciu PvuII i Spal w celu wycięcia fragmentu VH, który sklonowano do miejsc PvuII/ApaI w plazmidzie pDR2 (Fig. 5) w celu ekspresji kompletnego łańcucha ciężkiego (domeny VH-CH1-zawias-CH2-CH3). Dla każdego wariantu IgG, wykonano przejściowe transfekcje przez kontransfekcję plazmidu z ekspresją lekkiego łańcucha i plazmidu z ekspresją ciężkiego łańcucha do ludzkiej embrionalnej linii komórkowej nerek transformowanej adenowirosem, 293 (Graham i wsp., J. Gen. Tirol., 36:59-74, (1977)). W skrócie, komórki 293 zostały rozdzielone na dzień przed transfekcją i wysiane do pożywki zawierającej surowicę. Następnego dnia dodano dwuniciowe DNA przygotowane jako precypitat fosforanu wapnia, po którym dodano pAdVAntage™ (Promega, Madison, WI) i komórki inkubowano przez noc w 37°C. Komórki hodowano w pożywce wolnej od surowicy i zebrano po 4 dniach. Przeciwciała oczyszczono z supernatantów komórek przy użyciu kolumny białko A-Sepharose CL-4B, następnie zmieniono bufor na 10 mM bursztynian sodu, 140 mM NaCl, pH 6,0 i zagęszczono przy użyciu Centricon-10 (Amicon). Stężenia białek oznaczono przy użyciu ilościowej analizy aminokwasowej.
Aby zmierzyć względne powinowactwa wiązania do antygenu CD20 wykonano oznaczenie ELISA opartego na komórkach. Ludzkie Iimfoblastyczne komórki B WIL2-S (ATCC CRL 8885, American Type Culture Collection, Rockville, MD) hodowano w RPMI 1640 uzupełnionej 2 mM L-glutaminą, 20 mM HEPES, pH 7,2 and 10% termicznie-inaktywowanej surowicy z płodów cielęcych w inkukubatorze z 5% CO2 i 100% wilgotności. Komórki przemyto PBS zawierającym 1% FBS (bufor do oznaczeń) i wysiano w stężeniu 250-300000 komórek/studzienkę w 96-dołkowych płytkach okrągłodennych (Nunc, Roskilde, Dania). Do płytek dodano standard rozcieńczony dwukrotnym rozcieńczeniem seryjnym (15,6-1000 ng/ml chimerycznego IgG 2H7 v6.8) i próbki rozcieńczone trzykrotnym rozcieńczeniem seryjnym (2,7- 2000 ng/ml) w buforze do oznaczeń. Płytki umieszczono w lodzie i inkubowano przez 45 min. W celu usunięcia niezwiązanego przeciwciała dodano do studzienek 0,1 ml buforu do oznaczeń. Płytki zwirowano a supernatanty usunięto. Komórki przemyto dwukrotnie 0,2 ml buforu do oznaczeń. Przeciwciało związane do płytek oznaczano przez dodanie do płytek koziego anty-ludzkiego przeciwciała Fc sprzężonego z peroksydazą (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA). Po inkubacji przez 45 min. komórki przemyto, jak opisano powyżej. Do płytek dodano substratu TMB (3,3',5,5'-tetrametylobenzydyna; Kirkegaard & Perry Laboratories, Gaithersburg, MD). Krzywe miareczkowania zostały dopasowane programem dopasowującym czteroparametryczną nieliniową krzywą regresji (KaleidaGraph, oprogramowanie Synergy, Reading, PA). Oznaczono absorbancję w punkcie przegięcia krzywej miareczkowania (mid-OD) i odpowiadające jej stężenie standardu. Następnie
PL 212 899 B1 oznaczono stężenie każdego wariantu w tym punkcie mid-OD i stężenie standardu zostało podzielone przez stężenie każdego z wariantów. Stąd wartości są stosunkiem wiązania każdego z wariantów względem standardu. Odchylenia standardowe względnego powinowactwa pomiędzy eksperymentami (równoważnego stężenia) wynosiły ogólnie +/- 10%.
Jak pokazano w Tabeli 2 wiązanie dwóch wariantów z przeniesionymi regionami CDR (v.2) było ekstremalnie zmniejszone w porównaniu do chimerycznego 2H7 (v.6.8). Jednakże, wersje 3 do 6 wykazywały polepszone wiązanie. W celu określenia minimalnej liczby mutacji, które mogłyby być konieczne do przywrócenia powinowactwa wiązania, takiego jak u chimerycznego 2H7 skonstruowano dodatkowe mutacje i kombinacje mutacji przez mutagenezę ukierunkowaną otrzymując warianty 7 do 17, jak wskazano w Tabeli 3. W szczególności, obejmowało to mutacje A49G, F67A, I69L, N73K, i L78A położone w VH; i mutacje M4L, M33I i F71Y w VL. Wersje 16 i 17 wykazywały najlepsze względne powinowactwa wiązania, w obszarze dwukrotności tego dla wersji chimerycznej z brakiem znaczącej różnicy pomiędzy obydwoma (odch. std. = +/- 10%). W celu zminimalizowania liczby mutacji wersja 16 posiadająca tylko 4 mutacje reszt ludzkiego szkieletu do reszt mysiego szkieletu (Tabela 3) została zatem wybrana jako humanizowana postać do dalszej charakterystyki.
Tabela 2. Względne powinowactwo wiązania humanizowanych wariantów IgG 2H7 do CD20 w porównaniu do chimerycznego 2H7 przy użyciu ELISA opartego na komórkach. Względne wiązanie jest wyrażone jako stężenie chimerycznego 2H7 podzielone przez stężenie wariantu potrzebne do równoważnego wiązania; stąd stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo dla wariantu. Odchylenie standardowe oznaczenia względnego powinowactwa średnio wynosiło +/- 10%. Podstawienia szkieletu w domenach zmiennych podane względem wersji z przeniesionymi regionami CDR według systemu numeracji Kabata (Kabat i wsp., powyżej).
Wersja 2H7 Podstawienia łańcucha ciężkiego (Vh) Podstawienia łańcucha lekkiego (Vl) Względne wiązanie
6,8 (Chimera) (Chimera) -1-
2 (przeniesione regiony CDR) (przeniesione regiony CDR) 0,01
3 R71V, N73K (przeniesione regiony CDR) 0,21
4 R71V (przeniesione regiony CDR) 0,21
5 R71V, N73K L46P 0,50
6 R71V, N73K L46P, L47W 0,58
7 R71V L46P 0,33
8 R71V,L78A L46P 0,19
9 R71V, F67A L46P 0,07
10 R71V, F67A, I69L L46P 0,12
11 R71V, F67A, L78A L46P 0,19
12 R71V L46P, M4L 0,32
13 R71V L46P, M33I 0,31
14 R71V L46P, F71Y 0,25
15 R71V L46P, M4L, M33I 0,26
16 R71V, N73K, A49G L46P 0,65
17 R71V, N73K, A49G L46P, L47W 0,67
Tabela 3. Oligonukleotydowe sekwencje zastosowane do konstrukcji mutacji VH(A49G, R71V, N73K) i VL(L46P) w wersji 16 humanizowanego 2H7 (2H7.v16). Podkreślone kodony kodują wskazane podstawienia aminokwasowe. Dla VH(R71V, N73K) i VL(L46P), oligonukleotydy są pokazane jako nić sensowna, jako, że takie były użyte do mutagenezy na matrycy Fab, podczas gdy dla VH(A49G)
PL 212 899 B1 oligonukleotyd jest pokazany jako nić antysensowna, jako, że taki został użyty z matrycą pRK (ciężki łańcuch IgG). Sekwencja białka w wersji 16 jest pokazana na Fig. 6 i Fig. 7.
Podstawienie Sekwencja oligonukleotydu
Vh(R71V, N73K) GT TTC act ata agt gtc gac aag tcc aaa aac aca TT
Vh(A49G) gccaggatagatggcgccaacccattccaggcc
Vl(L46P) aagctccgaaaccactgatttacgct
P r z y k ł a d 2
Determinanty wiązania antygenu (paratop) z 2H7
W celu przetestowania udziału poszczególnych łańcuchów bocznych przeciwciała w wiązaniu się do CD20 wykonano podstawienia alaninowe w 2H7.v16 lub 2H7.v17 (Cunnmgham i Wells, Science 244:1081-1085 (1989). Warianty IgG poddawano ekspresji w komórkach 293 z wektorów pDR1 i pDR2, oczyszczano i poddawano oznaczeniu na względne powinowactwo wiązania, jak opisano powyżej. Kilka podstawień alaniną skutkowało znaczącym zmniejszeniem względnego powinowactwa do CD20 na komórkach WIL-2S (Tabela 4).
Tabela 4. Skutki podstawień alaniną w regionach CDR humanizowanego 2H7.v16 mierzone przy użyciu testu ELISA opartego na komórkach (komórkach WIL2-S). Względne wiązanie jest wyrażone jako stężenie wyjściowego 2H7.v16 podzielone przez stężenie wariantu wymagane do równoważnego wiązania; stąd stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo dla wariantu; stosunek > 1 wskazuje na wyższe powinowactwo dla wariantu. Odchylenie standardowe w oznaczeniu względnego powinowactwa średnio wynosiło +/- 10%. Podstawienia szkieletu w domenach zmiennych są względem 2H7.v16 według systemu numeracji Kabata (Kabat i wsp., powyżej). NBD oznacza brak wykrywalnego wiązania. Dwie liczby dla wersji 45 są z odrębnych eksperymentów.
Wersja 2H7 Położenie CDR Podstawienia łańcucha ciężkiego Podstawienia łańcucha lekkiego Względne wiązanie
1 2 3 4 5
16 - - - -1-
140 HI G26A - 0,63
141 hi Υ27Α - 0,47
34 hi T28A - 0,86
36 hi Τ30Α - 0,81
37 hi S31A - 0,97
142 hi Y32A - 0,63
143 hi N33A - NDB
144 hi M34A - 1,2
145 hi H35A - <0,25
146 H2 A50G - 0,31
147 H2 I51A - 0,65
38 H2 Y52A - 0,01
148 H2 P52aA - 0,66
39 H2 G53A - 0,89
67 H2 N54A - 1,4
40 H2 G55A - 0,79
PL 212 899 B1 ciąg dalszy Tabeli 4
1 2 3 4 5
41 H2 D56A - 2,0
89 H2 T57A - 0,61
90 H2 S58A - 0,92
91 H2 Y59A - 0,74
92 H2 N60A - 0,80
93 H2 Q61A - 0,83
94 H2 K62A - 0,44
95 H2 F63A - 0,51
83 H2 V71A - 0,96
149 H2 K64A - 0,82
150 H2 G65A - 1,2
153 H3 V95A - 0,89
42 H3 V96A - 0,98
43 H3 Y97A - 0,63
44 H3 Y98A - 0,40
45 H3 S99A - 0,84; 0,92
46 H3 N100A - 0,81
47 H3 S100aA - 0,85
48 H3 Y100bA - 0,78
49 H3 W100cA - 0,02
59 H3 Y100dA - 0,98
60 H3 F100eA - NDB
61 H3 D101A - 0,31
151 H3 V102A - 1,1
117 L1 - R24A 0,85
118 L1 - A25G 0,86
119 L1 - S26A 0,98
120 L1 - S27A 0,98
121 L1 - S28A 1,0
122 L1 - V29A 0,41
50 L1 - S30A 0,96
51 L1 - Y32A 1,0
123 L1 - M33A 1,0
124 L1 - H34A 0,21
125 L2 - A50G 0,92
PL 212 899 B1 ciąg dalszy Tabeli 4
1 2 3 4 5
126 L2 - P51A 0,88
52 L2 - S52A 0,80
53 L2 - N53A 0,76
54 L2 - L54A 0,60
127 L2 - A55G 1,1
128 L2 - S56A 1,1
129 L3 - Q39A 0,46
130 L3 - Q90A <0,22
55 L2 - W91A 0,88
56 L3 - S92A 1,1
57 L3 - F93A 0,36
58 L3 - N94A 0,61
131 L3 - P95A NDB
132 L3 - P96A 0,18
133 L3 - T97A <0,22
P r z y k ł a d 3
Dodatkowe mutacje w regionach CDR 2H7
Testowano również postawienia dodatkowych reszt i kombinacje podstawień, które zidentyfikowano jako ważne przy skanowaniu Ala. Kilka wariantów kombinatorycznych, szczególnie v.96 okazało się wiązać bardziej ściśle niż v.16.
Tabela 5. Skutki kombinacji mutacji i nie-alaninowych podstawień w regionach CDR humanizowanego 2H7.v16 zmierzone przy użyciu testu ELISA opartego na komórkach (komórki WIL2-S). Względne wiązanie do CD20 jest wyrażone jako stężenie wyjściowego 2H7.v16 podzielone przez stężenie wariantu wymagane do równoważnego wiązania; stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo dla wariantu; stosunek > 1 wskazuje na wyższe powinowactwo dla wariantu. Odchylenie standardowe oznaczenia względnego powinowactwa średnio wynosiło +/-10%. Podstawienia szkieletu w domenach zmiennych są względem 2H7.v16 według systemu numeracji Kabata (Kabat i wsp., powyżej).
Wersja 2H7 Podstawienia łańcucha ciężkiego Podstawienia łańcucha lekkiego Względne wiązanie
1 2 3 4
16 - - -1-
96 D56A, M00A S92A 3,5
97 S99T, N100G, Y100bI - 0,99
98 S99G, N100S, Y100bI - 1,6
99 N100G, Y100bI - 0,80
101 N54S, D56A - 1,7
102 N54K, D56A - 0,48
103 D56A, N100A - 2,1
104 S99T, N100G - 0,81
105 S99G, N100S - 1,1
PL 212 899 B1 ciąg dalszy Tabeli 5
1 2 3 4
106 N100G - ~1
167 S100aG, Y100bS -
136 D56A, N100A S56A, S92A 2,6
137 D56A, N100A A55G, S92A 2,1
156 D56A, N100A S26A, S56A, S92A 2,1
107 D56A, N100A, Y100bI S92A nie poddano ekspresji
182 Y27W -
183 Y27F -
184 F29Y -
185 F29W -
186 Y32F -
187 Y32W -
188 N33Q -
189 N33D -
190 Ν33Υ -
191 N33S -
208 H35S -
209 A50S -
210 A50R -
211 A50V -
212 A50L -
168 Y52W -
169 Y52F - 0,75
170 NS4D - 0,25
171 N54S - 1,2
172 56Κ - 1
173 D56R -
174 D56H - 1,5
175 D56Ε - 1,2
213 D56S -
214 D56G -
215 D56N -
216 D56Y -
176 Y59W -
177 Y59F -
PL 212 899 B1 ciąg dalszy Tabeli 5
1 2 3 4
180 K62R -
181 K62D -
178 F63W -
179 F63Y -
157 Y97W - 0,64
158 Y97F - 1,2
159 Y98W - 0,64
160 Y98F - 0,88
106 N100G -
161 W100cY - 0,05
162 W100cF - 0,27
163 F100eY - 0,59
164 F100eW - 0,71
165 D101N - 0,64
166 S99G, N100G, S100aD, Y100b usunięty - 0,99
217 V102Y - 1,0
207 - H34Y
192 - Q89E
193 - Q89N
194 - Q90E
195 - Q90N
196 - W91Y
197 - W91F
205 - S92N
206 S92G
198 - F93Y
199 - F93W
204 - F93S, N94Y
200 - P96L
201 - P96Y
202 - P96W
203 - P96R
P r z y k ł a d 4
Mutacje w miejscach podstawień humanizujących szkielet.
Podstawieniu dodatkowych reszt w pozycjach szkieletu, które zostały zmienione podczas humanizowania były także testowane w otoczeniu H7.v16. W szczególności, wykonano alternatywne
PL 212 899 B1 podstawienia szkieletu, które nie były znalezione w wyjściowym mysim 2H7 ani w ludzkim konsensusowym szkielecie w VL(P46) i VH(G49, V71 i K73).
Te podstawienia ogólnie prowadzą do niewielkiej zmiany we względnym wiązaniu (Tabela 6), wskazując, że występuje pewna elastyczność i resztach szkieletu w tych pozycjach.
Tabela 6. Względne wiązanie w podstawieniach szkieletu w oznaczeniu opartym o komórki (WIL2-S). Warianty IgG są pokazane z mutacjami w odniesieniu do otoczenia 2H7.v16. Względne wiązanie jest wyrażone jako stężenie chimery 2H7.v6.8 chimera podzielone przez stężenie wariantu konieczne do równoważnego wiązania; stąd stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo wariantu; stosunek > 1 wskazuje na wyższe powinowactwo dla wariantu. Odchylenie standardowe oznaczenia względnego powinowactwa średnio wynosiło +/-10%. Postawienia szkieletu w domenach zmiennych są względem 2H7.v16 według systemu numeracji Kabata (Kabat i wsp., powyżej). (*) Warianty, które oznaczono z 2H7.v16 jako standardem użytym do porównania; względne wartości są normalizowane do tych uzyskanych dla chimery.
Wersja 2H7 Podstawienia łańcucha ciężkiego Podstawienia łańcucha lekkiego Względne wiązanie
CO (chimera) (chimera) -1-
16 - - 0,64
78 K73R - 0,72
79 K73H - 0,49
80 K73Q - 0,58
81 V71I - 0,42
82 V71T - 0,58
83 V71A -
84 G49S - 0,32
85 G49L -
86 - P46E 0,22
87 - P46V 0,51
88 - P46T
108 G49A, V71T, K73R S92A, M32L, P46T 0,026*
109 G49A, A49G, V71T, K73R S92A, M32L, P46T 0,026*
110 K73R, D56A, N100A S92A, M32L nie poddano ekspresji
111 G49A, V71T, K73R 0,46*
112 G49A, A50G, V71T, K73R - 0,12*
(*) Warianty, które oznaczono z 2H7.v16 jako standardem użytym do porównania;
Względne wartości są normalizowane do tych uzyskanych dla chimery.
P r z y k ł a d 5
Warianty humanizowanego 2H7 ze wzmocnionymi funkcjami efektorowymi
Ponieważ 2H7 może pośredniczyć w lizie komórek komórek B przez cytotoksyczność zależną od komolementu (CDC) jak i przez komórkową cytotoksyczność zależną od przeciwciała (ADCC), usiłowaliśmy wytworzyć warianty humanizowanego 2H7.v16 z ulepszoną aktywnością CDC i ADCC. Opisano mutacje pewnych reszt wewnątrz regionów Fc innych przeciwciał (Idusogie i wsp., J. Immunol. 166:2571 -2575 (2001)) polepszających CDC przez zwiększone wiązanie do komponentu komplementu C1q. Opisano także mutacje (Shields i wsp., J. Biol. Chem. 276:6591-6604 (2001); Presta i wsp., Biochem. Soc. Trans. 30:487-490 (2002)) ulepszających ADCC przez zwiększone wiązanie IgG do aktywujących receptorów Fcy i zmniejszone wiązanie IgG do hamujących receptorów Fcy. W szczególności zidentyfikowano trzy mutacje ulepszające aktywność CDC i ADCC: S298A/E333A/K334A (także okre50
PL 212 899 B1 ślane tutaj jako potrójny mutant lub wariant Ala; numeracja w regionie Fc jest według systemu numeracji EU; Kabat i wsp., powyżej) jak opisano (Idusogie i wsp., powyżej (2001); Shields i wsp., powyżej).
W celu zwiększenia aktywności CDC i ADCC 2H7, skonstruowano potrójnego mutanta Ala 2H7 Fc. Wcześniej został wytworzony humanizowany wariant przeciwciała anty HER2 4d5 z mutacjami S298A/E333A/K334A i jest znany jako 4D5Fc110 (tj., anty-p185HER2 IgG1 (S298A/E333A/K334A); Shields i wsp., powyżej). Plazmid p4D5Fc110 kodujący przeciwciało 4D5Fc110 (Shields i wsp., powyżej) został strawiony przy użyciu ApaI i HindIII, a fragmentu Fc (zawierający mutacje S298A/E333A/ /K334A) włączono poprzez ligację do miejsc ApaI/HindIII wektora pDR2-v16 kodującego ciężki łańcuch 2H7 w celu otrzymania pDR2-v31. Sekwencja aminokwasowa wersji 31 kompletnego łańcucha H jest pokazana na Fig. 8. Łańcuch lekki jest taki sam jak ten z v16.
Pomimo, że domeny stałe regionu Fc przeciwciał IgG są relatywnie konserwowane w danych gatunkach, istnieją warianty alleliczne (opracowane przez Lefranc i Lefranc, w The human IgG subclasses: molecular analysis of structure, function, and regulation, str. 43-78, F. Shakib (red.), Pergamon Press, Oxford (1990)).
Tabela 7. Wpływ podstawień w regionie Fc na wiązanie CD20. Względne wiązanie podstawień szkieletu do CD20 zmierzono w oznaczeniu opartym o komórki (WIL2-S). Mutacje Fc (*) są wskazane przez numerację EU (Kabat, powyżej) i są podane względem wyjściowego 2H7.v16. Kombinacja trzech zmian Ala regionu Fc v.31 jest opisana jako Fc110. Warianty IgG są pokazane z mutacjami względem odniesienia w postaci 2H7.v16. Względne wiązanie jest wyrażone jako stężenie chimery 2H7.v6.8 podzielone przez stężenie wariantu wymagane do równoważnego wiązania; stąd stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo wariantu; stosunek > 1 wskazuje na wyższe powinowactwo dia wariantu. Odchylenie standardowe oznaczenia względnego powinowactwa średnio wynosiło +/- 10%.
Wersja 2H7 Podstawienia Fc* Względne wiązanie
6.8 - -1-
16 - 0,65
31 S298A, E333A, K334A 0,62
P r z y k ł a d 6
Warianty humanizowanego 2H7 ze zwiększoną stabilnością
W celu rozwoju w kierunku białek terapeutycznych, pożądane jest wybranie wariantów, które pozostają stabilne w odniesieniu do utleniania, deaminacji lub innych procesów, które mogą wpływać na ilość produktu w odpowiednim buforze użytym do stworzenia preparatu. W 2H7.v16 zidentyfikowano kilka reszt jako możliwych źródeł niestabilności: VL (M32) i VH (M34, N100). Zatem, w tych miejscach wprowadzono mutacje w celu porównania z v16.
Tabela 8. Względne wiązanie wariantów 2H7 przeznaczonych do zwiększonej stabilności i/lub funkcji efektorowej do CD20 w oznaczeniu opartym o komórki (WIL2-S). Warianty IgG są pokazane z mutacjami względem odniesienia w postaci 2H7.v16. Względne wiązanie jest wyrażone jako stężenie chimery 2H7.v6.8 podzielone przez stężenie wariantu wymagane do równoważnego wiązania; stąd stosunek < 1 wskazuje na słabsze powinowactwo wariantu; stosunek > 1 wskazuje na wyższe powinowactwo dla wariantu. Odchylenie standardowe oznaczenia względnego powinowactwa średnio wynosiło +/-10%. Podstawienia szkieletu w domenach zmiennych są względem 2H7.v16 według systemu numeracji Kabata a mutacje Fc (*) są wskazane według numeracji EU (Kabat i wsp., powyżej). (**) Warianty, które oznaczono z 2H7.v16 jako standardem użytym do porównania; względne wartości są normalizowane do tych uzyskanych dla chimery.
Dodatkowe mutacje Fc zostały połączone z mutacjami zwiększającymi stabilność lub powinowactwo w celu zmiany lub zwiększenia funkcji efektorowych opartej na wcześniej opisanych mutacjach (Idusogie i wsp. (2000); Idusogie i wsp. (2001); Shields i wsp. (2001)). Zmiany te obejmują S298, E333A, K334A jak opisano w Przykładzie 5; K322A dla zmniejszenia aktywności CDC; D265A dla zmniejszenia aktywności ADCC, K326A lub K326W dla zwiększenia aktywności CDC; i E356D/M358L dla przetestowania skutków allotypowych zmian w regionie Fc. Żadna z tych mutacji nie powodowała znaczących różnic w powinowactwie wiązania do CD20.
PL 212 899 B1
Wersja 2H7 Zmiany łańcucha ciężkiego (VH) Zmiany łańcucha lekkiego (VL) Zmiany Fc* Względne wiązanie
6.8 (chimera) (chimera) - -1-
16 - - - 0,65
62 - M32I - 0,46
63 M34I - - 0,49
64 N100A - -
65 N100A L47W - 0,74
66 S99A L47W - 0,62
67 N54A - -
68 - M32I - 0,48
69 - M32L 0,52
70 N100A - S298A, E333A, K334A 0,80
71 N100D - S298A, E333A, K334A 0,44
72 N100A M32I - 0,58
73 N100A M32L - 0,53
74 N100A M32I S298A, E333A, K334A 0,61
75 N100A M32L S298A, E333A, K334A 0,60
113 - - E356D, M358L 0,60**
114 D56A, N100A M32L, S92A S298A, E333A, K334A >1 2**
115 D56A, N100A M32L, S92A S298A, E333A, K334A, E356D, M358L 1 4**
116 D56A, N100A M32L, S92A S298A, K334A, K322A >1 2**
134 D56A, N100A M32L, S92A E356D, M358L, D265A 1,5**
135 D56A, N100A M32L, S92A E356D, M358L, D265A, K326W 0,95**
138 D56A, N100A M32L, S92A S298A, E333A, K334A, K326A >1 2**
139 D56A, N100A M32L, S92A 298A, E333A, K334A, K326A, E356N, M358L >1 >1 **
154 - - D265A 0,70**
155 - - S298A, K322A, K334A 0,70**
(**) Warianty, które oznaczono z 2H7.v16 jako standardem użytym do porównania; Względne wartości wiązania są normalizowane do tych uzyskanych dla chimery.
W celu przetestowania skutków mutacji stabilizujących na szybkość degradacji białka, z 2H7.v16 i 2H7.v73 utworzono preparaty o stężeniu 12-14 mg/ml w 10 mM histydynie, 6% sacharozie, 0,02% polisorbacie 20, pH 5,8 i inkubowano w 40°C przez 16 dni. Następnie inkubowane próbki oznaczono na zmiany w wariantach ładunku przez chromatografię jonowymienną, agregację i fragmentację przez chromatografię na sitach molekularnych względne wiązanie przez testowanie w oznaczeniu opartym na komórkach (WIL2-S).
Wyniki (Fig. 9) pokazują, że 2H7 v.73 posiada większą stabilność w porównaniu do 2H7 v.16 z uwzględnieniem strat we frakcji głównego piku w chromatografii jonowymiennej w warunkach przyspieszonego testowania stabilności. Nie zaobserwowano żadnych znaczących różnic w odniesieniu do agregacji, fragmentacji lub powinowactwa wiązania.
PL 212 899 B1
P r z y k ł a d 7
Analiza Scatcharda wiązania przeciwciała do CD20 na komórkach WIL2-S
Stałe równowagi dysocjacji (Kd) oznaczono dla wariantów 2H7 IgG wiążących się do komórek
WIL2-S przy użyciu radioaktywnie wyznakowanego 2H7 IgG. Warianty IgG wytworzono w komórkach CHO. Do porównania z humanizowanymi wariantami użyto przeciwciała Rituxan® (źródłem wszystkich eksperymentów jest Genentech, S. San Francisco, CA) i mysie 2H7 (BD PharMingen, San Diego, CA). Mysie przeciwciało 2H7 jest dostępne także z innych źródeł, np., eBioscience I Calbiochem (obydwa z San Diego, CA), Accurate Chemical & Scientific Corp., (Westbury, NY), Ancell (Bayport, MN), oraz Vinci-Biochem (Vinci, Włochy). Wszystkie rozcieńczenia wykonano w buforze do oznaczania wiązania (pożywka DMEM zawierająca 1% albuminy z surowicy cielęcej, 25 mM HEPES pH 7,2, and
123
0,01% azydek sodu). Porcje (0,025 ml) roztworu 123I- 2H7.v16 (jodowanego przy użyciu laktoperoksydazy) w stężeniu 0,8 nM rozporcjowano do studzienek o dnie w kształcie litery V w 96-studzienkowej płytce do oznaczeń i dodano seryjne rozcieńczenia (0,05 ml) zimnego przeciwciała i wymieszano. Następnie dodano komórki WIL2-S (60000 komórek w 0,025 ml). Płytkę zamknięto i inkubowano w temperaturze pokojowej przez 24 godz., następnie wirowano przez 15 min. W 3500 obr./min. Supernatant odessano, a osad komórek przemyto i zwirowano. Supernatant ponownie odessano, a osady komórek rozpuszczono w 1 N NaOH i przeniesiono do probówek do zliczenia rozpadów gamma. Dane zostały użyte do analizy Scatcharda (Munson i Rodbard, Anal. Biochem. 107: 220 -239 (1980)) przy użyciu programu Ligand (McPherson, Comput. Programs Biomed. 17: 107-114 (1983)). Wyniki pokazane w Tabeli 9 wskazują, że humanizowane warianty 2H7 posiadają podobne powinowactwo wiązania w porównaniu z mysim 2H7 i podobne powinowactwo wiązania do przeciwciała Rituxan®. Oczekuje się, że 2H7.v31 będzie posiadał bardzo podobną Kd do v.16 na podstawie wiązania pokazanego w Tabeli 7 powyżej.
Tabela 9. Równowaga powinowactwa wiązania wariantów 2H7 z analizy Scatcharda.
Wariant przeciwciała Kd (nM) n
Rituxan 0,99 + 0,49 3
2H7 (mysi) 1,23 ± 0,29 3
2H7.v16 0,84 ± 0,37 4
2H7.v73 1,22 ± 0,39 4
2H7.v75 1,09 ± 0,17 4
P r z y k ł a d 8
Oznaczenia cytotoksyczności zależnej od dopełniacza (CDC)
Warianty 2H7 oznaczano na ich zdolność do pośredniczenia w zależnej od komplementu lizie komórek WIL2-S, linii Iimfoblastycznych komórek B z ekspresją CD20, zasadniczo, jak opisano (Idusogie i wsp., J. Immunol. 164:4178-4184 (2000); Idusogie i wsp., J. ImmunoL 166:2571-2575 (2001)). Przeciwciała rozcieńczono metodą seryjnych rozcieńczeń 1:3 roztworu podstawowego o stężeniu 0,1 mg/ml. Porcję 0,05 ml każdego rozcieńczenia dodano do 96-studzienkowej płytki do hodowli tkankowej, która zawierała 0,05 ml roztworu prawidłowego ludzkiego dopełniacza (Quidel, San Diego, CA). Do tej mieszaniny dodano 50000 komórek WIL2-3 w objętości 0,05 ml. Po inkubacji przez 2 godz. w 37°C dodano 0,05 ml roztworu Alamar blue (Accumed International, Westlake, OH) i inkubację kontynuowano przez dodatkowe 18 godz. w 37°C. Następnie z płytek zdjęto wieczka i wytrząsano je przez 15 min. w temperaturze pokojowej na wytrząsarce obrotowej. Względne jednostki fluorescencji (RFU, ang. relative fluorescent units) zczytano przy użyciu filtra wzbudzenia 530 nm i filtra emisji 590 nm. EC50 obliczono poprzez dopasowanie RFU jako funkcji stężenia dla każdego przeciwciała przy użyciu oprogramowania KaleidaGraph.
Wyniki (Tabela 10) pokazują zaskakujące polepszenie CDC dla humanizowanych przeciwciał 2H7 ze względną skutecznością v.73 podobną do przeciwciała Rituxan®, 3-krotnie większą skutecznością v.75 niż Rituxan® i 3-krotnie słabszą skutecznością v.16 niż Rituxan®.
Tabela 10. Aktywność CDC przeciwciał 2H7 w porównaniu do przeciwciała Rutixan. Liczby >1 wskazują na mniej skuteczną aktywność CDC niż Rituxan®, a liczby <1 na większą skuteczność niż
PL 212 899 B1
Rituxan®. Przeciwciała otrzymano w stabilnych liniach CHO, z wyjątkiem tych wskazanych przez (*), które otrzymano przez transfekcję przejściową.
Wariant przeciwciała n EC50 (wariant)/EC50 (Rituxan)
Rituxan© 4 -1-
2H77.v16 4 3.72:4.08
2H7.v31* 4 2,21
2H7.v73 4 1,05
2H7.v75 4 0,33
2H7.v96* 4 0,956
2H7.v114* 4 0,378
2H7.v115* 4 0,475
2H7.v116* 1 >100
2H7.135* 2 0,42
P r z y k ł a d 9
Oznaczenia zależnej od przeciwciała cytotoksyczności komórkowej (ADCC)
Warianty 2H7 IgG oznaczano pod względem ich zdolności do pośredniczenia w lizie komórek WIL2-S, linii Iimfoblastycznych komórek B z ekspresją CD20, przez komórki naturalnych zabójców (komórki NK) zasadniczo, jak opisano (Shields i wsp., J. Biol. Clam. 276:6591-6604 (2001)), przy użyciu odczytu dehydrogenazy mleczanowej (LDH). Komórki NK przygotowano ze 100 ml heparynizowanej krwi rozcieńczonej 100 ml PBS (buforowany fosforanem roztwór soli fizjologicznej), uzyskanej od zdrowych dawców Iudzkich, którzy byli izotypowani na obecność FcγRIII także znanego jako CD16 (Koene i wsp., Blood 90:1109-1114 (1997)). W tym doświadczeniu komórki NK pochodziły od ludzkich dawców heterozygotycznych pod względem CD16 (F158/V158). Rozcieńczona krew naniesiona w postaci warstwy na 15 ml pożywki do rozdzielania limfocytów (ICN Biochemical, Aurora, Ohio) i wirowana przez 20 min. w 2000 obr./min. Białe krwinki w interfazie pomiędzy warstwami rozdzielono do 4 czystych probówek 50 ml, które napełniono pożywką RPMI zawierającą 15% surowicy z płodów cielęcych. Probówki wirowano przez 5 min. w 1400 obr./min., a supernatant odrzucono. Osady zawieszono w buforze MACS (0,5% BSA, 2 mM EDTA), a komórki NK oczyszczono przy użyciu kulek (Zestaw do izolacji komórek NK, 130-046- 502) według instrukcji producenta (Miltenyi Biotech,). Komórki NK rozcieńczono w buforze MACS do stężenia 2x106 komórek/ml.
Do okrągłodennych płytek do hodowli tkankowych dodano seryjne rozcieńczenia przeciwciała (0,05 ml) w pożywce do oznaczania (F12/DMEM 50:50 bez glicyny, 1 mM bufor HEPES pH 7,2, Penicylina/Streptomycyna (100 jednostek/ml; Gibco), glutamina, i 1% inaktywowana termicznie surowica 5 z płodów cielęcych). Komórki WIL2-S rozcieńczono w buforze do oznaczeń do stężenia 4 x 105/ml. Komórki WIL2-S (0,05 ml na studzienkę) zmieszano z rozcieńczonym przeciwciałem w 96-studzienkowej płytce i inkubowano przez 30 min. w temperaturze pokojowej, aby pozwolić na związanie przeciwciała do CD20 (opsonizacja).
Reakcję ADCC zapoczątkowano przez dodanie 0,1 ml komórek NK do każdej ze studzienek. W komórkach kontrolnych dodano 2% Triton X-100. Płytkę inkubowano przez 4 godz. w 37°C. Poziomy uwolnionej LDH zmierzono przy użyciu zestawu do detekcji cytotoksyczności (LDH) (Zestaw#1644793, Roche Diagnostics, Indianapolis, Indiana.) według instrukcji producenta. Do każdej studzienki dodano 0,1 ml wywoływacza LDH, po czym mieszano przez 10 sek. Płytkę następnie przykryto folią aluminiową i inkubowano w ciemności w temperaturze pokojowej przez 15 min. Następnie zczytano gęstość optyczną w 490 nm i użyto do obliczenia 1% Iizy przez podzielenie całkowitej LDH zmierzonej w komórkach kontrolnych. Lizę następnie wykreślono jako funkcję stężenia przeciwciała, a do wyznaczenia stężeń EC50 użyto dopasowania krzywej 4-parametrowej (KaleidaGraph).
Wyniki pokazały, że humanizowane przeciwciała 2H7 były aktywne w ADCC ze względną skutecznością 20-krotnie większą niż przeciwciało Rutixan® w przypadku v.31 i v.75 5-krotnie bardziej
PL 212 899 B1 skuteczne niż Rutixan® w przypadku v.16 oraz prawie 4-krotnie wyższe niż Rutixan® w przypadku v.73.
Tabela 11. Aktywność ADCC przeciwciał 2H7 na komórkach WIL2-S w porównaniu z 2H7.v16, oparta o n doświadczeń. (Wartości >1 wskazują na mniejszą skuteczność niż 2H7.v16, a wartości <1 wskazują na większą skuteczność.)
Wariant przeciwciała n EC50 (wariant) /ECą (2H7. V16)
Rutixan® 4 5,3
2H7.v16 5 1
2H7.v31 1 0,24
2H7.v73 5 1,4
2H7.v75 4 0,25
Aby porównać kombinatoryczne warianty 2H7 z przeciwciałem Rutixan® wykonano dodatkowe oznaczenia ADCC. Wyniki tych oznaczeń wskazywały, że 2H7.v114 i 2H7.v115 posiadają >10-krotnie polepszoną skuteczność ADCC w porównaniu z przeciwciałem Rutixan® (Tabela 12).
Tabela 12. Aktywność ADCC przeciwciał 2H7 na komórkach WIL2-S w porównaniu z 2H7.v16, oparta o n doświadczeń. (Wartości >1 wskazują na mniejszą skuteczność niż 2H7.v16, a wartości <1 wskazują na większą skuteczność.)
Wariant przeciwciała EC50 (wariant)/EC50 (Rutixan)
Rutixan® 2 -1-
2H7v.16 2 0,52
2H7v.96 2 0,58
2H7.v114 2 0,093
2H7.v115 2 0,083
2H7.v116 2 0,30
P r z y k ł a d 10
Skutki in vivo wariantów 2H7 w pilotażowym badaniu w małpach Cynomolgus
Warianty 2H7 otrzymane przez przejściową transfekcję komórek CHO testowano w zdrowych samcach małpach Cynomolgus (Macaca fascicularis) w celu oszacowania ich aktywności in vivo. Inne przeciwciała anty-CD20, takie jak C2B8 (Rutixan®) wykazywały zdolność do deplecji komórek B w zdrowych osobnikach z rodziny naczelnych (Reff i wsp., Blood 83:435-445 (1994)).
W jednym z badań porównywano humanizowane warianty 2H7. W równoległym badaniu na małpach Cynomolgus testowano również przeciwciało Rutixan®. W każdej z pięciu grup otrzymujących dawki: (1) nośnika, (2) 0,05 mg/kg hu2H7.v16, (3) 10 mg/kg hu2H7.v16, (4) 0,05 mg/kg hu2H7.v31, oraz (5) 10 mg/kg hu2H7.v31 użyto czterech małp. Przeciwciała podawano dożylnie w stężeniu 0, 0,2 lub 20 mg/ml, w całości składającej się z dwóch dawek, jednej 1 dnia badania i drugiej 8 dnia. Pierwszy dzień dawkowania jest oznaczony jako dzień 1 a dzień poprzedni jest oznaczony jako dzień -1; pierwszy dzień regeneracji (dla 2 zwierząt w każdej z grup) jest oznaczony jako dzień 11. Próbki krwi zebrano w dniach -19, -12, 1 (przed podaniem dawki) i w 6, 24 i 72 godz. po podaniu pierwszej dawki. Dodatkowe próbki pobrano w dniu 8 (przed podaniem dawki), 10 (przed uśmierceniem 2 zwierząt/grupę) i w dniach 36 i 67 (u zwierząt przechodzących regenerację).
Stężenia obwodowych komórek B oznaczono przy użyciu sposobu FACS, który liczył komórki CD3-/CD40+. Procent komórek B CD3-CD40+ w całkowitej liczbie limfocytów uzyskano przy zastosowaniu następującej strategii bramkowania. W celu zdefiniowania Regionu 1 (R1) populacja limfocytów została zaznaczona na wykresie rozproszenia w układzie rozproszenie przechodzące/rozproszenie boczne. Przy użyciu zliczeń w obszarze R1, instensywności fluorescencji wykreślono wykresy punkPL 212 899 B1 towe dla znaczników CD40 i CD3. Do oznaczenia odpowiednich punktów odcięcia dla sygnałów CD40-dodatnich i CD3-dodatnich użyto fluorescencyjnie wyznakowanych kontroli izotypów.
Wyniki wskazywały, że zarówno 2H7.v16 jak i 2H7.v31 były zdolne do wytwarzania całkowitej deplecji peryferyjnych komórek B w dawce 10 mg/kg i częściowej deplecji obwodowych komórek B w dawce 0,05 mg/kg (Fig. 11). Krzywa czasowa i stopień deplecji komórek B mierzonych podczas pierwszych 72 godz. były podobne dla obydwu przeciwciał. Późniejsza analiza zwierząt przechodzących regenerację wskazywała, że zwierzęta traktowane 2H7.v31 wykazywały wydłużony czas deplecji komórek B w porównaniu z tymi, którym podawano 2H7.v16. W szczególności, u zwierząt przechodzących regenerację traktowanych 10 mg/kg 2H7.v16, komórki B wykazywały znaczą regenerację w pewnym czasie pomiędzy dniem 10 a 36, w których pobierano próbki. Jednakże u zwierząt przechodzących regenerację traktowanych 10 mg/kg 2H7.v31, komórki B nie wykazywały regeneracji przed dniem 36, lecz w pewnym czasie pomiędzy dniem 36 a 67 (Fig. 11). Sugeruje to dłuższy czas trwania całkowitej deplecji przez około jeden miesiąc dla 2H7.v31 w porównaniu z 2H7.v16.
W badaniu małp niską lub wysoką dawką nie obserwowano żadnej toksyczności, a ogólna patologia była prawidłowa. W innych badaniach v16 był dobrze tolerowany aż do największych badanych 2 w tych małpach dawek (100 mg/kg x2 = 1200 mg/m2 x2) po podaniu dożylnym 2 dawek podanych w odstępie 2 tygodni.
Dane uzyskane dla małp Cynomolgus otrzymane dla 2H7.v16 względem Rutixan® sugerują, że 5-krotne obniżenie aktywności CDC nie wpływa niekorzystnie na siłę działania. Przeciwciało z silną aktywnością ADCC, ale zmniejszoną aktywnością CDC może posiadać bardzie] korzystny profil bezpieczeństwa pod względem reakcji na pierwszy wlew niż to z większą aktywnością CDC.
P r z y k ł a d 11
Warianty przeciwciał z niedoborem fukozy ze wzmocnioną funkcją efektorową.
Normalne komórki CHO oraz HEK293 dodają w dużym stopniu (97-98%) fukozę do oligosachasarydu IgG. IgG z surowicy są także wysoce fukozylowane.
Do otrzymania przeciwciał do tego badania użyto linii komórkowej CHO DP12 pozbawionej reduktazy dihydrofolianu (DHFR), która to linia jest zdolna do fukozylacji, oraz linii komórkowej Lec13, która jest niezdolna do fukozylacji białek. Linię komórkową CHO Pro-Lec13.a (Lec13) otrzymano od profesor Pameli Stanley z Kolegium Medycznego im. Alberta Ensteina na Uniwersytecie Yeshiva. Wyjściowe linie są Pro- (auksotrof prolinowy) i Gat- (auksotrof prolinowy, adenozynowy i tymidynowy). Linia komórkowa CHO-DP12 jest pochodną linii komórkowej CHO-KL (ATCC #CCL-61), która jest pozbawiona aktywności reduktazy dihydrofolianu i posiada zmniejszone zapotrzebowanie na insulinę. Linie komórkowe transfekowano cDNA z zastosowaniem sposobu z użyciem odczynnika Superfect (Qiagen, Valencia, CA). Selekcji komórek Lec13 z ekspresją transfekowanych przeciwciał dokonano przy użyciu dwuchlorowodorku puromycyny (Calbiochem, San Diego, CA) w stężeniu 10 gg/ml w pożywce hodowlanej zawierającej : pożywkę MEM Alfa z L-glutaminą, rybonukleozydami oraz deoksyrybonukleozydami (GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD), uzupełnioną o 10% inaktywowanej FBS (GIBCO), 10 mM HEPES oraz 1 X penicylina/streptomycyna (GIBCO). Komórki CHO selekcjonowano w podobny sposób w pożywce hodowlanej zawierającej Ham F12 bez GHT: DMEM z niskim stężeniem glukozy bez glicyny z NaHCO3 uzupełnionej o 5% FBS (GIBCO), 10 mM HEPES, 2 mM L-glutaminę,1 X GHT (glicyna, nipoksantyna, tymidyna) raz 1 X penicylina/streptomycyna.
Kolonie powstałe w ciągu dwóch do trzech tygodni połączono w celu namnożenia i ekspresji białka. Pule komórek rozsiano przy początkowej gęstości 3 x 106 komórek/10 cm płytkę do ekspresji małej porcji białek. Komórki przeniesiono do pożywki pozbawionej surowicy po tym, jak osiągnęły 90-95% konfluencji i po 3-5 dniach znad komórek zebrano supernatanty i testowano w teście Fc IgGi nienaruszony IgG-ELISA w celu oszacowania poziomów ekspresji białka. Komórki Lec13 i CHO rozsiano do gęstości w przybliżeniu 8 x 106 komórek/15 cm płytkę na jeden dzień przed zmianą na pożywkę do otrzymywania PS24 uzupełnioną o 10 mg/l rekombinowanej ludzkiej insuliny oraz 1 mg/l pierwiastki śladowych.
Komórki Lec13 i komórki DP12 pozostawały w pożywce do przeciwciał pozbawionej surowicy przez 3-5 dni. Supernatanty zebrano i wyklarowano przez wirowanie w probówkach stożkowych w celu usunięcia komórek i szczątków komórek. Dodano inhibitory proteaz PMSF i protininę (Sigma, St. Louis, MO) i supernatanty zagęszczono 5-krotnie na mieszanych komórkach przy użyciu filtrów MWC030 (Amicon, Beverly, MA) przed natychmiastowym oczyszczaniem przy użyciu chromatografii z białkiem G (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) ). Wszystkie białka poddano wymianie buforu na buforowany fosforanem roztwór soli fizjologicznej (PBS) przy użyciu zagęszczaczy Centri56
PL 212 899 B1 priep-30 (Amicon) i analizowano przez elektroforezę SDS-poliakrylamid. Stężenia białek oznaczono przy użyciu A280 i zweryfikowano przy użyciu analizy składu aminokwasowego.
Komórki CHO poddano transfekcji wektorami z ekspresją humanizowanego 2H7v16, 2H7v.31 i wyselekcjonowano, jak opisano. Przeciwciało 2H7.v16 zachowuje region Fc typu dzikiego, podczas, gdy v.31 (zobacz Przykład 5, Tabela 7 powyżej) posiada region Fc, w którym dokonano zmiany 3 aminokwasów (S298A, E333A, K334A), które skutkują wyższym powinowactwem do receptora FcyRIIIa (Shields i wsp. J. Biol. Chem. 276(9):6591-6604 (2001)). Po transfekcji i selekcji pojedyncze kolonie komórek wyizolowano i oznaczono pod względem poziomu ekspresji białka, a kolonie o największej ekspresji poddano selekcji metotreksatem w celu wyselekcjonowania komórek, które zwiększyły liczbę kopii plazmidu i które zatem wytwarzały przeciwciała na wyższym poziomie. Komórki hodowano, przeniesiono do pożywki pozbawionej surowicy na okres 7 dni, następnie pożywkę zebrano, naniesiono na kolumnę z białkiem A, a przeciwciało wyeluowano przy użyciu standardowych technik. Końcowe stężenie przeciwciała oznaczono przy użyciu testu ELISA, który mierzy nienaruszone przeciwciało. Wszystkie białka poddano wymianie buforu do buforowanego fosforanem roztworu soli fizjologicznej (PBS) przy użyciu zagęszczaczy Centripnep-30 (Amicon) i analizowano przez elektroforezę SDS-poIiakrylamid.
Analiza przy użyciu spektroskopii masowej metodą desorpcji/jonizacji laserowej w matrycy w analizatorze czasu przelotu (MALDI_TOF) oligosacharydów przyłączonych do asparaginy: N-oligosacharydy uwolniono z rekombinowanych glikoprotein przy użyciu procedury Papac i wsp., Glycobiology 8, 445-454 (1998). W skrócie, studzienki z 96-studzienkowej płytki do mikro-miareczkowania pokrytej PVDF (Millipore, Bedford, MA) poddano kondycjonowaniu metanolem w ilości 100 pi, który był przepuszczony przez błony PDVF przez zastosowanie próżni do powielacza próżniowego Millipore Multiscreen. Kondycjonowane błony PVDF przemyto 3 x 250 pl wody. Pomiędzy wszystkimi etapami płukania studzienki całkowicie osuszono przez zastosowanie łagodnej próżni do powielacza. Błony przemyto buforem do redukcji i karboksymetylacji (RCM) złożonym z 6M chlorowodorku guanidyny, 360 mM Trisu, 2 mM EDTA, pH 8,6. Próbki glikoprotein (50 pg) dodano do pojedynczych studzienek, ponownie przesączono przez błony PVDF przy użyciu łagodnej próżni, a studzienki przemyto 2 X 50 pl buforu RCM. Immobilizowane próbki zredukowano przez dodanie 50 pl 0,1 M roztworu ditiotreitolu (DTT) do każdej studzienki i inkubowanie płytki do mikromiareczkowania w 37°C przez 1 godz. DTT usunięto przy użyciu próżni a studzienki przemyto 4 X 250 pl wody. Reszty cysteiny poddano karboksymetylacji przez dodanie 50 pl 0,1 M roztworu kwasu jodoocotowego (IAA), który przygotowano na świeżo w 1 M NaOH i rozcieńczono do 0,1 M buforem RCM. Karboksymetylację wykonano przez inkubowanie przez 30 min. w ciemności w temperaturze otoczenia. W celu usunięcia roztworu IAA płytkę poddano działaniu próżni i studzienki przemyto 4 x 250 pl oczyszczonej wody. Błony PVDF zablokowano przez dodanie 100 pl 1% roztworu PVP360 (poliwinylopirolidyna m. cz. 360000) (Sigma) i inkubację przez 1 godz. w temperaturze otoczenia. Roztwór PVP-360 usunięto przez użycie łagodnej próżni a studzienki przemyto 4 x 250 pl wody. Do każdej studzienki dodano roztwór PNGazy F do trawienia (New England Biolabs, Beverly, MA) w ilości 25 pl roztworu o stężeniu 25 jednostek/ml w 10 mM octanie Trisu, pH 8,4 i trawienie prowadzono przez 3 godz. w 37°C. Po strawieniu, próbki przeniesiono do 500 pl probówek Eppendorfa i do każdej próbki dodano 2,5 pl 1,5 M roztworu kwasu octowego. Zakwaszone próbki inkubowano przez 3 godz. w temperaturze otoczenia w celu przekształcenia oligosacharydów z glikozyloamin do postaci hydroksylowej. Przed analizą z użyciem spektroskopii masowej MALDI-TOF uwolnione oligosacharydy odsolono przy użyciu 0,7 ml złoża w postaci zawiesiny żywicy jonowymiennej (żywica AGSOW-X8 w postaci uwodorowanej) (Bio-Rad, Hercules, CA) nałożonego do probówek do reakcji w małej objętości (US Biochemical, Cleveland, OH).
W celu analizy metodą spektroskopii masowej MALDI-TOF próbek w trybie pozytywnym odsolone oligosacharydy (porcje 0,5 pl) naniesiono na nierdzewną tarczę wraz z 0,5 pl macierzy w postaci kwasu 2,5-dihydroksybenzoesowego, który został przygotowany przez rozpuszczenie 2 mg kwasu 2,5-dihydroksybenzoesowego z 0,1 mg kwasu metoksysylicylowego w 1 mi etanol/10 mM chlorek sodu w stosunku 1:1 (obj./obj.). Mieszaninę próbka/macierz wysuszono próżniowo. W celu analizy w trybie negatywnym odsolone N-oligosacharydy (porcje 0,5 pl) naniesiono na nierdzewną tarczę wraz z 0,5 pl macierzy w postaci 2',4',6'-trihydroksyacetofenonu (THAP) przygotowanego w acetonitryl/13,3 mM bufor cytrynianu amonu w stosunku 1:3 (obj./obj.). Mieszaninę próbka/macierz wysuszono próżniowo, a następnie przed analizą pozwolono na absorbcję wilgoci atmosferycznej. Uwolnione oligosacharydy analizowano metodą MALDI-TOF na spektrometrze masowym PerSeptive BioSystems Voyager-DE. Spektrometr masowy ustawiono na 20 kV zarówno w trybie pozytywnym, jak
PL 212 899 B1 i negatywnym z konfiguracją liniową i z użyciem opóźnionej ekstrakcji. Dane zebrano przy użyciu mocy lasera 1300 i trybu sumowania danych (240 skanów) w celu poprawienia stosunku sygnału do szumu. Urządzenie skalibrowano przy użyciu mieszaniny standardowych oligosacharydów, a dane wygładzono przy użyciu 19-punktowego algorytmu Savitsky-Golay, zanim wyznaczono masy. Integrację danych spektroskopii masowej osiągnięto przy użyciu zestawu oprogramowania do analizy danych Caesar 7.0 (SciBridge Software).
Oznaczenia zależnej od przeciwciał cytotoksyczności komórek naturalnych zabójców (NK)
Oznaczenia ADCC wykonano, jak opisano w Przykładzie 9. Stosunek NK do komórek namierzanych (WIL2-S) wynosił 4 do 1, oznaczenia prowadzono przez 4 godziny, a toksyczność mierzono, jak poprzednio przy użyciu oznaczenia dehydrogenazy laktozy. Komórki namierzane poddano opsonizacji wskazanymi stężeniami przeciwciała przez 30 min. przed dodaniem komórek NK. Zastosowane przeciwciało Rituxan® pochodziło z Genentech (S. San Francisco, CA). Fig. 12 pokazuje wyniki reprezentatywnego oznaczenia ADCC.
Wyniki pokazują, że przeciwciała ze zmniejszoną fukozylacją pośredniczą w zabijaniu komórek namierzanych przez komórki NK bardziej wydajnie niż przeciwciała posiadające fukozę w pełnym składzie. Przeciwciało z zmniejszoną fukozylacją, 2H7v.31, jest najbardziej wydajne w pośredniczeniu zabijania komórek namierzanych. To przeciwciało jest skuteczne w niższych stężeniach i zdolne do pośredniczenia w zabijaniu większego procenta komórek namierzanych w wyższych stężeniach niż inne przeciwciała. Aktywność przeciwciał jest następująca: 2H7 v31 pochodzące z Lec13 > 2H7v16 pochodzące z Lec13 > 2H7 v31 pochodzące z Dp12 > 2H7 v16 pochodzące z Dp12 > lub = Rituxan. Zmiany w sekwencji białka i składzie wodorowęglanów sumują się. Porównanie wodorowęglanu występującego na negatywnym IgG z IgG otrzymanych z Lec13 i otrzymanych z CHO nie pokazało żadnych dostrzegalnych różnic w obszarze glikozylacji i stąd wyniki mogą być odniesione wyłącznie do obecności/braku obecności fukozy.
P r z y k ł a d 12
Warianty przeciwciał 2H7 z niedoborem fukozy ze zwiększoną aktywnością ADCC in vivo
Ten przykład opisuje aktywność ADCC in vivo humanizowanych wariantów 2H7 z niedoborem fukozy, włączając v.16 i v.31 otrzymane w Lec13 w porównaniu z normalnie fukozylowanymi odpowiednikami otrzymanymi w DP12, w myszy z ekspresją ludzkiego CD16 [FcRyIII] i ludzkiego CD20.
Otrzymywanie myszy huCD20Tg+ huCD16Tg+ mCD16-/-
Transgeniczne myszy z ludzkim CD20 otrzymano z ludzkiego DNA CD20 BAC (Invitrogen, Carlsbad, CA). Myszy przebadano w oparciu o analizę FACS pod względem ekspresji CD20. Myszy huCD20Tg następnie skrzyżowano z myszami huCD16TgmCD16-/- w celu otrzymania myszy huCD20Tg+huCD16Tg+mCD16-/-.
Leczenie in vivo
Dziesięć do 100 μg każdego z wariantów 2H7 lub Rituxan® podano myszom huCD20Tg+huCD16Tg+mCD16-/- przez wstrzyknięcie śródotrzewnowe. Równe porcje przeciwciał z dopasowanym izotypem będą podane podobnie do grupy zwierząt będącej negatywną kontrolą.
Otrzymywanie mysich limfocytów
Mysie limfocyty z całej krwi, śledziony, węzłów chłonnych i szpiku kostnego są otrzymywane według standardowego przepisu opisanego w Current Protocols in Iminunology, redagowanym przez John Coligan, Ada Kruisbeek David Margulies, Ethan Shevach oraz Warren Strober, 1994.
Analiza FACS
Pół miliona komórek przemyto i zawieszono w 100 μl buforu FACS, który jest buforowanym fosforanem roztworem soli fizjologicznej z 1% BSA zawierającym 5 μl przeciwciała barwiącego lub kontrolnego. Wszystkie barwiące przeciwciała, włączając kontrole izotypów, otrzymano z PharMingen, San Diego, CA. Ekspresja ludzkiego CD20 jest oznaczona przez barwienie z przeciwciałem Rituxan® wraz z drugorzędowym przeciwciałem anty-ludzka-IgG sprzężonym z FITC. Analiza FACS jest przeprowadzana przy użyciu urządzenia FACScan i oprogramowania Cell Quest (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose, CA). Wszystkie limfocyty są zdefiniowane w przechodzących i bocznych rozproszeniach światła, podczas, gdy wszystkie limfocyty B są zdefiniowane jako posiadające ekspresję B220 na powierzchni komórki.
Deplecja komórek B oraz regeneracja są oznaczane przy użyciu FACS przez analizę zliczeń obwodowych komórek B oraz analizę komórek B hCD20+ w śledzionie, węźle chłonnym o szpiku kostnym w jednodniowych odstępach czasu przez pierwszy tydzień po wstrzyknięciu, a później
PL 212 899 B1 w odstępach tygodniowych. Monitorowane są poziomy wstrzykniętego wariantu przeciwciała 2H7 w surowicy.
Wyniki tego oznaczenia in vivo potwierdzają odkrycia in vitro dotyczące zwiększonej aktywności ADCC oraz większej deplecji komórek B dla wariantów przeciwciał z niedoborem fukozy w porównaniu z odpowiednikami posiadającymi glikozylację typu dzikiego (w odniesieniu do fukozylacji).
P r z y k ł a d 13
Aktywność apoptotyczna
Pokazano, że przeciwciała anty-CD20 włączając Rituxan® indukują apoptozę in vitro, jeżeli są połączone wiązaniem krzyżowym przez przeciwciało drugorzędowe lub przez środki chemiczne (Shan i wsp., Blood 9:1644-1652 (1998); Byrd i wsp., Biood 99:1038-43 (2002); Pederson i wsp., Blood 99:1314-19 (2002)). Mysie dimery 2H7 połączone wiązaniem krzyżowym utworzonym chemicznie indukowały apoptozę komórek Daugiego (Ghetie i wsp., Proc Natl Acad Sci USA 94:7509-14 (1997)). Tworzenie wiązania krzyżowego przez przeciwciało drugorzędowe także indukowało apoptozę z udziałem mysiego przeciwciała 2H7 (Shan i wsp., 1998). Uważa się, że te aktywności są istotne fizjologicznie, ponieważ różne mechanizmy mogą prowadzić do tworzenia wiązania krzyżowego z udziałem przeciwciała anty-CD20 przyłączonego in vivo do CD20 na powierzchni komórki.
RhuMAb 2H7.v16 [humanizowane 2H7.v16; RhuMAb oznacza rekombinowane ludzkie przeciwciało monoklonalne] oraz Rituxan® porównano w oznaczenia apoptozy in vitro przy użyciu drugorzędowego przeciwciała tworzącego wiązania krzyżowe. Komórki Ramosa (CRL-1596, ATCC, Manassas, VA), linię komórkową ludzkich limfocytów z ekspresją CD20 użyto do pomiaru zdolności monoklonalnych przeciwciał anty-CD20 rhuMAb 2H7.v16 oraz Rituximab względem przeciwciała będącego negatywną kontrolą, Trastuzumab (Herceptin®, Genentech, Południowe San Francisco, CA), do indukcji apoptozy mierzonej przez barwienie Aneksyną V oraz nieprzepuszczanie barwnika w postaci jodku propidyny (Zestaw do oznaczania apoptozy Vybrant®, Molecular Probes, Seattle, WA). Komórki Ramosa hodowano w pożywce RPMI-1640 (Gibco, Rockville, MD) zawierającej 10% surowicy z płodów cielęcych (Biosource International, Camarillo, CA) oraz 2 mM L-glutaminę (Gibco). Przed oznaczeniem komórki przepłukano dwukrotnie świeżą pożywką i następnie doprowadzono do stężenia komórek 2 x 106 na ml. Komórki 150 pl dodano do 96-studzienkowych płytek do oznaczania (Becton Dickinson, Palo Alto, CA), które zawierały 150 pl wcześniej oznaczonej ilości przeciwciała kontrolnego IgG1, rhuMAb 2H7.v16 lub Rituximab wraz z kozim F(ab)'2 anty-ludzki Fc (Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Końcowe stężenia IgG wynosiły 100, 10, 1,0, 0,1, 0,01 i 0,001 nM, a stężenie koziego F(ab)'2 anty-ludzki Fc ustawiono na dwukrotnie większe od odpowiedniego stężenia próbki przeciwciała. Każde rozcieńczenie wykonano w trzech powtórzeniach. Po inkubacji przez 24 godz. w 37°C komórki przepłukano dwukrotnie przy użyciu PBS a następnie wybarwiono Anaksyną V oraz jodkiem propidyny według zaleceń producenta. Wzory barwienia komórek Ramosa analizowano przy użyciu cytometrii przepływowej z zastosowaniem cytometru przepływowego FACscan (Becton Dickinson, San Jose, CA), a dane zbierano w okresach trwających 10 sek. Dane zredukowano przy użyciu oprogramowania Cellquest Pro (Becton Dickinson). Komórki Ramosa, które były dodatnie pod względem (1) barwienia Aneksyną V, (2) podwójnym barwienia Aneksyną V i jodkiem propidyny oraz (3) liczba komórek niewybarwionych komórek żywych zostały zliczone i przedstawione na wykresie przy użyciu oprogramowania KaleidaGraph (Synergy Software, Reading, PA).
Zarówno rhuMAb 2H7.v16, jak i Rituximab indukowały apoptozę komórek Ramosa, kiedy były związane krzyżowo z anty-ludzki Fc w porównaniu z nieistotnym IgG1 będącym przeciwciałem kontrolnym (Fig. 13-15). Aktywność apoptotyczna (rhuMAb 2H7) była nieco niższa niż ta dla Rituximab. Przy stężeniach 10 nM związanego krzyżowo rhuMAb 2H7, Rituximab i kontrolnego przeciwciała IgG1 frakcje komórek wybarwionych Aneksyną V wynosiły odpowiednio 18,5, 16,5, 2,5%, frakcje podwójnie wybarwionych komórek wynosiły 29, 38 i 16%, a zliczonych liczby żywych komórek na 10 sek. wynosiły 5200, 3100 i 8600.
Te dane uzyskane in vitro pokazują, że apoptoza jest jednym z możliwych mechanizmów powodujących deplecję komórek B. Wiązanie krzyżowe in vivo przeciwciała rhuMAb 2H7 lub Rituximab związanego do CD20 na powierzchni komórki może pojawić się poprzez FcγR na powierzchniach immunologicznych komórek efektorowych
P r z y k ł a d 14
Supresja in vivo wzrostu nowotworu
Zdolność rhuMAb 2H7.v16 do hamowania ludzkich komórek B Raji, linii komórkowej chłoniaka (ATCC CCL 86) oszacowano w myszach Balb/c pozbawionych układu immunologicznego (pozbawionych
PL 212 899 B1 grasicy). Komórki Raji posiadaną ekspresję CD20 i wcześniej stwierdzono, że rosną w myszach pozbawionych układu immunologicznego, wytwarzając chorobę dającą przerzuty; wzrost nowotworu jest hamowany przez Rituxan® (Clynes i wsp., Nature Medicine 6, 443-446 (2000)). Pięćdziesiąt sześć myszy Balb/c pozbawionych układu immunologicznego będących w wieku 8-10 tygodni podzielono na 7 grup (A-G), każda z grup składająca się z 8 myszy. Dnia 0 każda z myszy otrzymała podskórne wstrzyknięcie do boku 5 x 106 komórek Raji będących komórkami chłoniaka komórek B. Poczynając od dnia 0, każda mysz otrzymała 100 μl roztworu negatywnej kontroli (PBS; buforowany tosforanem roztwór soli fizjologicznej), przeciwciała Rituxan® lub 2H7.v16. Dawka zależała od masy, dostarczanie leku było dożylne poprzez żyłę ogonową. Grupa myszy A otrzymała PBS. Grupy B-D otrzymały Rituxan® odpowiednio w ilości 5,0 mg/kg, 0,5 mg/kg i 0,05 mg/kg. Grupy myszy E-G otrzymały 2H7v.16 odpowiednio w ilości 5,0 mg/kg, 0,5 mg/kg i 0,05 mg/kg. Wstrzyknięcia powtarzano każdego tygodnia przez 6 tygodni. W tygodniowych odstępach czasu podczas leczenia każda mysz była badana na obecność namacalnych guzów w miejscu iniekcji a objętość guzów, jeżeli były obecne, mierzono i notowano. Końcowe badanie wykonano w 8 tygodniu (po dwutygodniowej przerwie w leczeniu).
Wyniki tego badania pokazały, że zarówno rhuMAb 2H7.v16, jak i Rituxan® były skuteczne w hamowaniu podskórnego wzrostu guza komórek Raji w myszy pozbawionej układu immunologicznego (Fig. 16-18). Wzrost guza obserwowano poczynając od 4 tygodni w grupie kontrolnej otrzymującej PBS. Jednakże, w grupach leczonych przeciwciałem Rituxan® lub 2H7.v16 w dawkach 5 mg/kg lub 0,5 mg/kg nie obserwowano w wzrostu żadnego guza przez 8 tygodni trwania badania. W grupach leczonych niską dawką 0,05 mg/kg guzy obserwowano u jednego zwierzęcia w grupie otrzymującej 2H7 i u jednego zwierzęcia w grupie otrzymującej Rituxan® (Fig. 18).
P r z y k ł a d 15
Klonowanie CD20 z małpy cynomolgus i wiązanie przeciwciała
Sekwencję DNA CD20 dla małpy cynomolgus (Macaca fascicularis) oznaczono przez izolację cDNA kodującego CD20 z biblioteki cDNA otrzymanego ze śledziony małpy cynomolgus. Do konstrukcji biblioteki użyto plazmidowego systemu SUPERSCRIPT™ do syntezy cDNA i klonowania do plazmidu (cat#18248-013, Invitrogen, carlsbad, cA) z niewielkimi modyfikacjami. Bibliotekę cDNA poddano ligacji do wektora pRK5E przy użyciu miejsc restrykcyjnych XhoI i NotI. mRNA wyizolowano z tkanki śledziony (Regionalne Centrum Badań nad Naczelnymi w Kaliforni, Davis, cA). Startery do namnożenia CD20 zaprojektowano w oparciu o niekodujące sekwencje ludzkiego CD20. Do sklonowania cDNA kodującego CD20 z małpy cynomolgus przy użyciu łańcuchowej reakcji polimerazy (PcR) zastosowano starter 5'-AGTTTTGAGAGcAAAATG-3' do N-końcowego regionu oraz starter 5'AAGcTATGAAcAcTAATG-3' do c-końcowego regionu. Reakcję PcR wykonano przy użyciu Polimerazy DNA Taq Platinium o wysokiej wydajności według zaleceń producenta (Gibco, Rockville, MD). Produkt PcD podklonowano do wektora pcR ®2.1-TOPO ®Vector i transformowano do E. coli XL-1 blue (Stratagene. La Jolla, cA). Plazmidowy DNA zawierający produkty PcR poddane ligacji wyizolowano z pojedynczych klonów i zsekwencjonowano.
Sekwencja aminokwasowa dla CD20 z małpy cynomolgus jest pokazana na Fig. 19. Fig. 20 pokazuje porównanie CD20 z małpy i człowieka. CD20 z małpy cynomolgus jest podobny w 97,3% do ludzkiego cD20 z 8 różnicami. Domena zewnątrzkomórkowa zawiera jedną zmianę w V157A, podczas, gdy pozostałe 7 reszt może być znalezionych w regionach cytoplazmatycznych lub międzybłonowych.
Przeciwciała skierowane przeciwko ludzkiemu CD20 oznaczono na zdolność do wiązania i zastępowania mysiego 2H7 sprzężonego z FITc związanego do komórek małpy cynomolgus z ekspresją CD20. Z dwóch małp cynomolgus pobrano dwadzieścia mililitrów krwi (Kalifornijskie Regionalne centrum Badania Naczelnych, Davis, CA) do sodowej soli heparyny i dostarczono bezpośrednio do Genentech Inc.. Tego samego dnia próbki krwi połączono i rozcieńczono w stosunku 1:1 przez dodanie 40 ml buforowanego fosforanem roztworu soli fizjologicznej (PBS). 20 ml rozcieńczonej krwi naniesiono warstwowo na 4 x 20 ml roztworu Ficoll-Paque ™Plus (Amersham Biosciences, Uppsala, Szwecja) w 50 ml probówkach stożkowych (Cat#352098, Falcon, Franklin Lakes, NJ) i wirowano przy 1300 rpm przez 30 minut w temperaturze pokojowej w wirówce Sorval 7. (Dupont, Newtown, cT). Warstwę PBMc wyizolowano i przemyto PBS. czerwone krwinki poddano lizie w 0,2% roztworze Nacl, przywrócono do izotoniczności przez dodanie takiej samej objętości 1,6% roztworu Nacl i wirowano przez 10 minut w 1000 rpm. Osad PBMc zawieszono w RPMI 1640 (Gibco, Rockville, MD) zawierającej 5% surowicy z płodów cielęcych (FBS) i przeniesiono do szalki 10 cm do hodowli tkankowej na 1 godzinę w 37°C. Nieprzylegające populacje komórek B i T usunięto przez odciągnięcie pożywki,
PL 212 899 B1 zwirowano i policzono. Odzyskano całkowitą ilość 1,4 x 107 komórek. Ponownie zawieszone PBMC rozmieszczono w dwudziestu probówek do hodowli 12 x 75 (Cat#352053, Falcon), z każdą probówką zawierającą 1 x 106 komórek w objętości 0,25 ml. Probówki podzielono na cztery zestawy po pięć probówek. Do każdego zestawu dodano pożywkę (RPMI1640, 5% FBS), miareczkowane ilości kontrolnego ludzkiego przeciwciała IgG1, przeciwciała Rituxan®, 2H7.v16 lub 2H7.v31. Końcowe stężenie każdego przeciwciała wynosiło 30, 10, 3,3 oraz 1,1 nM. Ponadto, każda probówka otrzymała 20 μl przeciwciała anty-ludzki CD20 sprzężonego z izotiocyjanianem fluoresceiny (FITC) (Cat#555622, BD Biosciences, San Diego, CA). Komórki lekko wymieszano, inkubowano przez 1 godzinę w lodzie, a następnie przemyto dwukrotnie zimnym roztworem PBS. Barwienie powierzchni komórki analizowano na urządzeniu Epic XL-MCL (Coulter, Miami, FL), policzono średnie geometryczne, przedstawiono na wykresie (KaleidaGraph™, Synergy Software,, Reading, PA) względem stężeń przeciwciała.
Dane na Fig. 21 pokazały, że 2H7 v.16 oraz 2H7 v.31 współzawodnicząc zastępowały mysie 2H7-FITC przyłączone do komórek małpy Cynomolgus. Ponadto, przeciwciało Rituxan® także zastępowało związane mysie 2H7-FITC, pokazując zatem, że zarówno 2H7, jak i Rituxan® wiążą się do pokrywających się epitopów na CD20. Dodatkowo, dane pokazują, że wartości IC50 dla przeciwciał 2H7 ν.16, 2H7 v.31 i Rituxan są podobne wahają się w granicach 4-6 nM.
P r z y k ł a d 16
Badania fazy I/II nad rhuMAb 2H7 (2H7.v16) w leczeniu reumatoidalnego zapalenia stawów w stanie od umiarkowanego do ciężkiego
Streszczenie protokołu
Randomizowane, z kontrolą placebo, rozproszone, ze ślepą próbą badania fazy I/II pod względem bezpieczeństwa zwiększających się dawek PR070769 (rhuMAb 2H7) u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów w stanie od łagodnego do ciężkiego otrzymujących towarzyszące stałe dawki metroreksatu.
Cele
Pierwotnym celem tego badania jest oszacowanie bezpieczeństwa i stopnia tolerowania zwiększających się dożylnych (IV) dawek PR070769 (rhuMAb 2H7) u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów w stopniu od łagodnego do ciężkiego.
Projektowanie badania
Jest to randomizowane, z kontrolą placebo, rozproszone, ze ślepą próbą fazy I/II, z podawaniem leku zatajonym dla badacza i pacjenta badanie bezpieczeństwa wzrastających dawek PR070769 w kombinacji z MTX u pacjentów z RA w stanie od łagodnego do ciężkiego. Badanie składa się z fazy wzrastającej dawki i drugiej fazy z rekrutacją większej liczby pacjentów. Sponsor pozostanie nie zatajony przy ustalaniu leczenia.
Zaangażowani będą pacjenci z RA w stanie od umiarkowanego do ciężkiego, u których nie powiodło się leczenie jednym do pięciu antyreumatoidalnych leków lub środków biologicznych modyfikujących przebieg choroby, którzy obecnie posiadaną niekorzystne odpowiedzi kliniczne na leczenie MTX.
Pacjenci będą musieli otrzymywać MTX w zakresie 10-25 mg tygodniowo przez przynajmniej 12 tygodni przez rozpoczęciem badania i być na stałych dawkach przez przynajmniej 4 tygodnie przed otrzymaniem ich początkowej dawki badanego leku (PR070769 lub placebo). Pacjenci mogą także otrzymywać stałe doustne dawki kortykosteroidów (do 10 mg dziennie lub odpowiednik w postaci prednisolonu) oraz stałe dawki niesterydowych leków przeciwzapalnych (NSAIDs, ang. nonsteroidal anti-inflammatory drugs). Pacjenci otrzymają dwa wlewy PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo we wskazanej dawce w Dniu 1 i 15 według następującego schematu zwiększania dawki (zobacz Fig. 22).
Zwiększanie dawki odbędzie się według określonych kryteriów (zobacz Reguły Zwiększania Dawki) i po rewizji danych dotyczących bezpieczeństwa przez wewnętrzną komisję do rewizji danych dotyczących bezpieczeństwa i oszacowania dolegliwości związanych z toksycznością 72 godziny po drugim wlewie u ostatniego leczonego pacjenta w grupie. Po fazie zwiększania dawki, 40 dodatkowych pacjentów (32 otrzymujących lek i 8 otrzymujących placebo) będzie losowo przydzielonych do następujących poziomów dawek: 2 x 50 mg, 2 x 200 mg, 2 x 500 mg oraz 2 x 1000 mg, jeżeli pokazano, że poziomy dawek były tolerowane podczas fazy zwiększania dawki. Badanie obejmie w przybliżeniu 205 pacjentów.
Liczby komórek B będą uzyskane i odnotowane (do oznaczeń związanych z badaniem, zobacz Rozdział 4.5 i Dodatek A-1) . Liczby komórek B będą oszacowane przy użyciu cytometrii przepływowej
PL 212 899 B1 w 48 tygodniu następującym po okresie oszacowania skuteczności trwającym 6 miesięcy. Deplecja komórek B nie będzie rozpatrywana jako toksyczność ograniczająca dawkę (DLC, ang. dose-limiting toxicity), ale raczej jako spodziewany wyniki farmakodynamiczny leczenia z zastosowaniem PR070769.
W nieobowiązkowej części badania od pacjentów w różnych punktach czasowych (zobacz Rozdział 3.3.3) będzie pobrana krew do analiz surowicy RNA, jak również próbki moczu. Próbki te mogą być użyte do identyfikacji znaczników biologicznych, z których można będzie przewidzieć odpowiedź na leczenie z zastosowaniem PR070769 u pacjentów z RA w stanie umiarkowanym do ciężkiego.
Wyniki pomiarów
Pierwotnym wynikiem pomiaru w tym badaniu jest bezpieczeństwo i tolerancja PR070769 u pacjentów z RA w stanie umiarkowanym do ciężkiego.
Leczenie stosowane w badaniu
Grupy pacjentów będą otrzymywać dwa wlewy dożylne leku PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo we wskazanej dawce w Dniu 1 i 15 według następującego schematu zwiększania dawki:
- 10 mg PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo: 4 pacjentów otrzymujących lek, 1 kontrola
- 50 mg PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo: 8 pacjentów otrzymujących lek, 2 kontrole
- 200 mg PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo: 8 pacjentów otrzymujących lek, 2 kontrole
- 500 mg PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo: 8 pacjentów otrzymujących lek, 2 kontrole
- 1000 mg PR070769 lub odpowiednika w postaci placebo: 8 pacjentów otrzymujących lek, 2 kontrole
Skuteczność
Skuteczność PR070769 będzie mierzona przez odpowiedzi ACR. Procent pacjentów, którzy osiągną odpowiedź ACR20, ACR50 i ACR70 będzie zsumowany względem grup leczenia i dla każdej grupy będą obliczone 95% przedziały ufności. Składniki tych odpowiedzi i ich zmiana względem poziomu podstawowego będą zsumowane względem sposobu leczenia i długości leczenia.
Wniosek
Dane przedstawione powyżej pokazują powodzenie w otrzymaniu humanizowanych przeciwciał wiążących CD20, w szczególności humanizowanych wariantów 2H7, które zachowały, a nawet wzmocniły ich właściwości biologiczne. Humanizowane przeciwciała 2H7 z wynalazku wiążą się do CD20 z powinowactwami podobnymi do mysiego dawcy i chimerycznych przeciwciał 2H7 i były skuteczne w zabijaniu komórek B u naczelnych, prowadzącemu do deplecji komórek B. Pewne warianty wykazywały zwiększoną aktywność ADCC w stosunku do chimerycznego przeciwciała anty-CD20 obecnie stosowanego w leczeniu NHL, pozwalając na stosowanie mniejszych dawek terapeutycznego przeciwciała u pacjentów. Dodatkowo, podczas, gdy dla chimerycznego przeciwciała, które posiada mysie reszty w regionie FR podawanego w dawkach koniecznych do osiągnięcia całkowitej deplecji komórek B, może być konieczne zapobieganie odpowiedzi przeciwciał przeciwko niemu, to niniejsze humanizowane przeciwciała mogą być podawane w dawkach, które powodują częściową lub całkowitą deplecję komórek B, i przez różne czasy trwania leczenia, jak jest to pożądane dla określonej choroby i pacjenta. Dodatkowo, te przeciwciała wykazywały stabilność w roztworze. Te właściwości humanizowanych przeciwciał 2H7 sprawiają, że są idealne do zastosowania jako środek immunoterapeutyczny w leczeniu nowotworów CD20-dodatnich oraz chorób immunologicznych; Nie oczekuje się, że te przeciwciała będą immunogenne lub przynajmniej będą mniej immunogenne niż całkowicie mysie lub chimeryczne przeciwciała anty-CD20 u ludzkich pacjentów.
Literatura
Odniesienia cytowane w tym zgłoszeniu, włączając patenty, opublikowane zgłoszenia i inne publikacje są niniejszym włączone przez cytowanie.
Część praktyczna niniejszego wynalazku będzie obejmować, jeżeli nie wskazano inaczej, konwencjonalne techniki biologii molekularnej i tym podobne, które są w zakresie specjalności tej dziedziny. Takie techniki są całkowicie wyjaśnione w literaturze. Zobacz, np. , Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (J. Sambrook i wsp., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989); Current Protocols in Molecular Biology (red. F. Ausubel i wsp., 1987 uaktualnione); Essential Molecular Biology (red. T. Brown, IRL Press 1991); Gene Expression Technology (red. Goeddel, Academic Press 1991); Methods for Cloning and Analysis of Eukarvotic Genes (red. A. Bothwell i wsp, Bartlett Publ. 1990); Gene Transfer and Expression (M. Kriegler, Stockton Press 1990); Recombinant DNA Methodology II (red. R. Wu i wsp, Academic Press 1995); PCR: A Practical Approach (M. MePherson i wsp. IRL Press at Oxford University Press 1991); Oligonucleotide Synthesis (red.
PL 212 899 B1
M. Gait, 1984); Cell Culture for Biochemists (red. R. Adams, Elsevier Science Publishers 1990); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (red. J. Miller i M. Calos, 1987); Mammalian Cell Biotechnology (red. M. Butler, 1991); Animal Cell Culture (red. J. Pollard i wsp., Humana Press 1990); Culture of Animal Cells, wyd 2 (red. R. Freshney i wsp. Alan R. Liss 1987); Flow Cytometry and Sorting (red. M. Melamed i wsp., Wiley-Liss 1990); seria Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Wirth M I Hauser H. (1993); Immunochemistry in Practice, wyd. 3, A Johnstone i R. Thorpe, Blackwell Science, Cambridge, Ma, 1996; Techniques in Imnunocytochemistry, (red. G. Bullock i P. Petrusz, Academic Press 1982, 1983, 1985, 1989); Handbook of Experimental Immunology, (red. D. Weir i C. Blackwell); Current Protocols in Immunology (red. J. Coligan i wsp. 1991); Immunoassay (red. E. P. Diamandis I T. K. Christopoulos, Academic Press, Inc., 1996); Goding (1986) Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (wyd. 2) Academic Press, New York; Ed Harlow i David Lane, Antibodies A laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, 1988; Antibody Engineering, wydanie 2 (red. C. Borrebaeck, Oxford University Press, 1995); oraz serie Annual Review of Immunology; serie Advances in Immunology.

Claims (66)

1. Humanizowane przeciwciało, które wiąże ludzki CD20, lub jego fragment wiążący antygen, znamienne tym, że przeciwciało to zawiera region VH zawierający sekwencję VH przeciwciała hu2H7.v16 jak pokazano na Fig. 1B i region VL zawierający sekwencję VL przeciwciała hu2H7.v16 jak pokazano na Fig. 1A.
2. Przeciwciało według zastrz. 1, znamienne tym, że region VH jest przyłączony do regionu stałego łańcucha ludzkiej IgG.
3. Przeciwciało według zastrz. 2, znamienne tym, że ludzką IgG jest IgG1 lub IgG3.
4. Przeciwciało według zastrz. 1, znamienne tym, że przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha ciężkiego i lekkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7.
5. Przeciwciało według zastrz. 1, znamienne tym, że przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha jak pokazano na Fig.6 i na Fig. 8.
6. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen według zastrz. 1, znamienny tym, że przeciwciało lub fragment przeciwciała jest skuteczny w deplecji in vivo komórek B u naczelnych i że komórki B naczelnych pochodzą od człowieka lub małpy Cynomolgus.
7. Przeciwciało lub fragment wiążący antygen według zastrz. 1 do 6, znamienne tym, że jest sprzężone ze środkiem cytotoksycznym.
8. Przeciwciało lub fragment wiążący antygen według zastrz. 7, znamienne tym, że środkiem cytotoksycznym jest izotop radioaktywny lub toksyna.
9. Kompozycja zawiera przeciwciało lub fragment wiążący antygen według zastrz. 1 do 8 oraz nośnik.
10. Kompozycja według zastrz. 9, znamienna tym, że przeciwciało zawiera sekwencję aminokwasową lekkiego i ciężkiego łańcucha jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7, a nośnik stanowi farmaceutycznie akceptowalny nośnik.
11. Wyrób fabryczny zawierający pojemnik i kompozycję w nim zawartą, znamienny tym, że kompozycja ta zawiera przeciwciało lub fragment wiążący antygen jak zdefiniowano w zastrz. 1 do 8.
12. Wyrób fabryczny według zastrz. 11, znamienny tym, że zawiera ponadto ulotkę wskazującą, że kompozycja może być zastosowana do leczenia chłoniaka nieziarniczego lub reumatoidalnego zapalenia stawów.
13. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jak zdefiniowano w zastrz. 1 do 8, do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy w komórkach B in vivo, sposobie leczenia pacjentów z nowotworem CD20-dodatnim, lub w sposobie leczenia choroby autoimmunologicznej u pacjenta.
14. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 13, znamienny tym, że nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak lub białaczka.
15. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 14, znamienne tym, że nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak nieziarniczy (NHL) lub ziarnica złośliwa z przewagą limfocytów (LPHD).
16. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 13, znamienne tym, że nowotworem jest przewlekła białaczka limfocytowa lub chłoniak z małych limfocytów.
PL 212 899 B1
17. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 13 do 16, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu 2 u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego w dawce w zakresie około 275-375 mg/m2.
18. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 13 do 16, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania w leczeniu 22 u pacjenta nowotworu CD20-dodatniego w dawce w zakresie około 250 mg/m2 do około 500 mg/m2.
19. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 13 do 18, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu nowotworu CD20-dodatniego z co najmniej jednym czynnikiem chemioterapeutycznym.
20. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 19, znamienne tym, że nowotworem jest chłoniak nieziarniczy (NHL) a czynnik chemioterapeutycznym jest wybrany z grupy składającej się z doksorubicyny, cyklofosfamidu, winkrystyny, prednisolonu i CHOP.
21. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 17, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania w leczeniu u pa2 cjenta nowotworu CD20-dodatniego w co najmniej dwóch dawkach przy 375 mg/m2 na dawkę.
22. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 21, znamienne tym, że dwie dawki podaje się w odstępie dwutygodniowym.
23. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz 13, znamienne tym, że choroba autoimmunologiczna jest wybrana z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenie stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenie stawów, tocznia rumieniowatego układowego (SLE), toczniowego zapalenia nerek, wrzodziejącego zapalenia okrężnicy, choroby Wegenera, choroby zapalnej jelit, zapalenia naczyń ANCA, odrzucenie przeszczepu narządów litych, choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi, choroby Werlhofa (ITP), choroby Moschowitza (TTP), małopłytkowości o podłożu autoimmunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, miastenii rzekomoporaźnej, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych.
24. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 23, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów.
25. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 24, znamienne tym, że pacjent cierpi z powodu średniego do ciężkiego reumatoidalnego zapalenia stawów i że zawiodło leczenie co najmniej jednym lekiem przeciwreumatycznym modyfikującym chorobę.
26. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 24, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu choroby autoimmunologicznej z drugim czynnikiem terapeutycznym.
27. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 26, znamienne tym, że drugi czynnik terapeutyczny jest czynnikiem immunosupresyjnym.
28. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 26, znamienne tym, że czynnik immunosupresyjny stanowi metotreksat.
29. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 24, znamienne tym, że przeciwciało wiążące CD20 lub jego fragment wiążący antygen zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7, i przy czym przeciwciało jest do podawania w leczeniu choroby autoimmunologicznej w dawce wybranej z 2x50 mg, 2x200 mg i 2x500 mg.
30. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 29, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez wlew dożylny.
31. Przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen do zastosowania według zastrz. 29, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez podawanie podskórne.
32. Izolowany kwas nukleinowy, który koduje przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jak zdefiniowano w zastrz. 1 do 5.
33. Wektor ekspresji kodujący przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jak zdefiniowano w zastrz. 1 do 5.
34. Komórka gospodarza zawierająca kwas nukleinowy jak zdefiniowano w zastrz. 32.
35. Komórka gospodarza według zastrz. 34, która wytwarza przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen, znamienna tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen wiąże ludzki CD20.
PL 212 899 B1
36. Komórka gospodarza według zastrz. 35, którą stanowi komórka cHO.
37. Sposób wytwarzania przeciwciała lub jego fragmentu wiążącego antygen, gdzie przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen wiąże ludzki CD20, znamienny tym, że hoduje się komórkę gospodarza jak zdefiniowano w zastrz. 35 lub 36 i odzyskuje się przeciwciało wytworzone przez komórkę gospodarza.
38. Płynny preparat, znamienny tym, że zawiera przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen w stężeniu 20 mg/ml, 10 mM siarczan histydyny o pH 5,8, 60 mg/ml sacharozy, 0,2 mg/ml polisorbanu 20, przy czym przeciwciało posiada sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7.
39. Przeciwciało do zastosowania według zastrz. 23, znamienne tym, że przeciwciało wiążące CD20 zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego odpowiednio jak pokazano na Fig. 6 i na Fig. 7.
40. Przeciwciało do zastosowania według zastrz. 39, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest toczeń rumieniowaty układowy (SLE) lub toczniowe zapalenie nerek.
41. Przeciwciało do zastosowania według zastrz. 39, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest wrzodziejące zapalenie okrężnicy.
42. Przeciwciało do zastosowania według zastrz. 39, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest stwardnienie rozsiane.
43. Przeciwciało do zastosowania według 39, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest odrzucenie przeszczepu narządu litego lub choroba przeszczep przeciwko gospodarzowi.
44. Przeciwciało do zastosowania według 39, znamienne tym, że przeciwciało jest do podawania przez wlew dożylny.
45. Przeciwciało do zastosowania według 39, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez podawanie podskórne.
46. Zastosowanie przeciwciała wiążącego CD20 lub jego fragmentu jak zdefiniowano w zastrz. 1-8 do wytwarzania leku do leczenia u pacjenta nowotworu cD20-dodatniego.
47. Zastosowanie według zastrz. 46, znamienne tym, że CD20-dodatni nowotwór jest chłoniakiem lub białaczką komórki komórki B.
48. Zastosowanie według zastrz. 46, znamienne tym, że nowotworem CD20-dodatnim jest chłoniak nieziarniczy (NHL) lub ziarnica złośliwa z przewagą limfocytów (LPHD).
49. Zastosowanie według zastrz. 47, znamienne tym, że nowotworem jest przewlekła białaczka limfatyczna lub chłoniak z małych limfocytów (SLL).
50. Zastosowanie według zastrz. 46, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu nowotworu cD20-dodatniego u pacjenta, w dawce w za2 kresie około 275-375 mg/m2.
51. Zastosowanie według zastrz. 46, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przy leczeniu nowotworu cD20-dodatniego u pacjenta, w dawce w za22 kresie około 250 mg/m2 do około 500 mg/m2.
52. Zastosowanie według zastrz. 50, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania w leczeniu nowotworu cD20-dodatniego u pacjenta, w co najmniej 2 dwóch dawkach przy 375 mg/m2 na dawkę.
53. Zastosowanie według zastrz. 55, znamienne tym, że dwie dawki podaje się w odstępie dwutygodniowym.
54. Zastosowanie według zastrz. 46, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczeniu nowotworu cD20-dodatniego z co najmniej jednym czynnikiem chemioterapeutycznym.
55. Zastosowanie według zastrz. 54, znamienne tym, że nowotworem jest chłoniak nieziarniczy (NHL) a czynnik chemioterapeutyczny jest wybrany z grupy składającej się z doksorubicyny, cyklofosfamidu, winkrystyny oraz prednisolonu i cHOP.
56. Zastosowanie przeciwciała wiążącego CD20 lub jego fragmentu jak zdefiniowano w zastrz. 1 do 8 do wytwarzania leku do leczenia u pacjenta choroby autoimmunologicznej.
57. Zastosowanie według zastrz. 56, znamienne tym, że choroba autoimmunologiczna jest wybrana z grupy składającej się z reumatoidalnego zapalenie stawów, młodzieńczego reumatoidalnego zapalenia stawów, tocznia rumieniowatego układowego (SLE), toczniowego zapalenia nerek, wrzodziejącego zapalenia okrężnicy, choroby Wegenera, choroby zapalnej jelit, zapalenia małych naczyń ANCA, odrzucenie przeszczepu narządów litych, choroby przeszczep przeciwko gospodarzowi,
PL 212 899 B1 choroby Werlhofa (ITP), choroby Moschowitza (TTP), małopłytkowości o podłożu autoimmunologicznym, stwardnienia rozsianego, łuszczycy, neuropatii IgA, polineuropatii IgM, miastenii rzekomoporaźnej, zapalenia naczyń, cukrzycy, zespołu Reynaud'a, zespołu Sjorgen'a i zapalenia kłębuszków nerwowych.
58. Zastosowanie według zastrz. 57, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest reumatoidalne zapalenie stawów.
59. Zastosowanie według zastrz. 58, znamienne tym, że pacjent cierpi z powodu średniego do ciężkiego reumatoidalnego zapalenia stawów i że zawiodło leczenie co najmniej jednym lekiem przeciwreumatycznym modyfikującym chorobę.
60. Zastosowanie według zastrz. 57, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania pacjentowi w leczenia choroby autoimmunologicznej z drugim czynnikiem terapeutycznym.
61. Zastosowanie według zastrz. 60, znamienne tym, że drugim czynnikiem terapeutycznym jest czynnik immunosupresyjny.
62. Zastosowanie według zastrz. 61, znamienne tym, że czynnik immunosupresyjny stanowi metotreksat.
63. Zastosowanie według zastrz. 58, znamienne tym, że przeciwciało wiążące CD20 lub jego fragment wiążący antygen zawiera sekwencję aminokwasową łańcucha lekkiego i ciężkiego odpowiednio o sekwencji SEQ ID nr 21 jak pokazano na Fig. 6 i o sekwencji SEQ ID nr 22 jak pokazano na na Fig. 7, i przy czym przeciwciało jest do podawania w leczeniu choroby autoimmunologicznej w dawce wybranej z 2x50 mg, 2x200 mg i 2x500 mg.
64. Zastosowanie według zastrz. 63, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez wlew dożylny.
65. Zastosowanie według zastrz. 63, znamienne tym, że przeciwciało lub jego fragment wiążący antygen jest do podawania przez zastrzyk podskórny.
66. Zastosowanie według zastrz. 57, znamienne tym, że chorobą autoimmunologiczną jest stwardnienie rozsiane.
PL377328A 2002-12-16 2003-12-16 Humanizowane przeciwcialo, kompozycja zawierajaca to przeciwcialo, wyrób fabryczny, przeciwcialo lub jego fragment do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy, izolowany kwas nukleinowy, wektor ekspresji, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciala lub jego fragmentu, plynny preparat i zastosowanie przeciwciala do wytwarzania leku PL212899B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US43411502P 2002-12-16 2002-12-16
US52616303P 2003-12-01 2003-12-01

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL377328A1 PL377328A1 (pl) 2006-01-23
PL212899B1 true PL212899B1 (pl) 2012-12-31

Family

ID=32685285

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL377328A PL212899B1 (pl) 2002-12-16 2003-12-16 Humanizowane przeciwcialo, kompozycja zawierajaca to przeciwcialo, wyrób fabryczny, przeciwcialo lub jego fragment do zastosowania w sposobie indukowania apoptozy, izolowany kwas nukleinowy, wektor ekspresji, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciala lub jego fragmentu, plynny preparat i zastosowanie przeciwciala do wytwarzania leku

Country Status (35)

Country Link
US (7) US7799900B2 (pl)
EP (5) EP3263596A1 (pl)
JP (3) JP4351674B2 (pl)
KR (2) KR20070055625A (pl)
CN (1) CN103833854B (pl)
AR (3) AR042485A1 (pl)
AT (1) ATE470675T1 (pl)
AU (1) AU2003301079C1 (pl)
BE (1) BE2018C021I2 (pl)
BR (2) BRPI0316779B1 (pl)
CA (1) CA2507898C (pl)
CL (1) CL2008003323A1 (pl)
CR (2) CR7875A (pl)
CY (2) CY1110759T1 (pl)
DE (1) DE60332957D1 (pl)
DK (2) DK2289936T3 (pl)
ES (2) ES2347241T3 (pl)
FR (1) FR18C1023I2 (pl)
HK (1) HK1248731A1 (pl)
HR (1) HRP20050649B1 (pl)
HU (3) HU227217B1 (pl)
IL (2) IL168754A (pl)
MA (1) MA27704A1 (pl)
MX (1) MXPA05006511A (pl)
NO (1) NO338402B1 (pl)
NZ (1) NZ566907A (pl)
PL (1) PL212899B1 (pl)
PT (1) PT1572744E (pl)
RS (2) RS51318B (pl)
RU (1) RU2326127C2 (pl)
SG (1) SG2013036975A (pl)
SI (2) SI2289936T1 (pl)
TW (2) TW201000132A (pl)
UA (1) UA89350C2 (pl)
WO (1) WO2004056312A2 (pl)

Families Citing this family (1108)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69303494T2 (de) 1992-11-13 1997-01-16 Idec Pharma Corp Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörper gegen menschlichen b lymphozyt beschränkter differenzierung antigen für die behandlung von b-zell-lymphoma
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
KR101063278B1 (ko) 1998-08-11 2011-09-07 바이오겐 아이덱 인크. Ｂ-세포 림프종을 치료하기 위한 항-ｃｄ２０ 항체를 포함하는 약제
AU761516B2 (en) * 1998-11-09 2003-06-05 Biogen Inc. Chimeric anti-CD20 antibody treatment of patients receiving BMT or PBSC transplants
EP1131093A4 (en) 1998-11-09 2002-05-02 Idec Pharma Corp TREATMENT OF HEMATOLOGICAL VILTIES ASSOCIATED WITH CIRCULATING TUMOR CELLS USING CHIMERIC ANTI-CD20 ANTIBODIES
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
KR20020027311A (ko) * 1999-05-07 2002-04-13 제넨테크, 인크. Ｂ 세포 표면 마커에 결합하는 길항물질을 이용한자가면역 질환의 치료
CN1373672A (zh) * 1999-07-12 2002-10-09 杰南技术公司 应用结合cd20的拮抗剂阻断对外来抗原的免疫应答
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
JP2004508420A (ja) * 2000-09-18 2004-03-18 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション Ｂ細胞枯渇抗体／免疫調節性抗体の組合せを用いて自己免疫疾患を治療するための併用療法
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
ATE430580T1 (de) * 2001-10-25 2009-05-15 Genentech Inc Glycoprotein-zusammensetzungen
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
US8093357B2 (en) 2002-03-01 2012-01-10 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
JP2006512891A (ja) * 2002-04-18 2006-04-20 ジェネンコー・インターナショナル・インク 糸状菌における機能性抗体の生産
CN103833854B (zh) 2002-12-16 2017-12-12 健泰科生物技术公司 免疫球蛋白变体及其用途
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
EP1613350B1 (en) * 2003-04-09 2009-03-18 Genentech, Inc. Therapy of autoimmune disease in a patient with an inadequate response to a tnf-alpha inhibitor
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
PT1631313E (pt) * 2003-06-05 2015-07-02 Genentech Inc Terapêutica de combinação para distúrbios de células b
US9714282B2 (en) 2003-09-26 2017-07-25 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US8399618B2 (en) 2004-10-21 2013-03-19 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions, and substitutions
US8883147B2 (en) 2004-10-21 2014-11-11 Xencor, Inc. Immunoglobulins insertions, deletions, and substitutions
BRPI0416262B1 (pt) 2003-11-05 2022-04-12 Roche Glycart Ag Anticorpo anti-cd20 humano tipo ii humanizado, seu método de produção, seus usos, bem como polinucleotídeo isolado, vetor de expressão e composição farmacêutica
WO2005063815A2 (en) * 2003-11-12 2005-07-14 Biogen Idec Ma Inc. Fcϝ receptor-binding polypeptide variants and methods related thereto
WO2005092925A2 (en) 2004-03-24 2005-10-06 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the fc region
DOP2005000108A (es) * 2004-06-04 2007-06-15 Genentech Inc Method for treating lupus
TW201422238A (zh) * 2004-06-04 2014-06-16 Genentech Inc Ｃｄ２０抗體於治療多發性硬化症之用途及用於該用途之物品
WO2006004663A2 (en) * 2004-06-25 2006-01-12 Medimmune, Inc. Increasing the production of recombinant antibodies in mammalian cells by site-directed mutagenesis
WO2006085967A2 (en) * 2004-07-09 2006-08-17 Xencor, Inc. OPTIMIZED ANTI-CD20 MONOCONAL ANTIBODIES HAVING Fc VARIANTS
US20150010550A1 (en) 2004-07-15 2015-01-08 Xencor, Inc. OPTIMIZED Fc VARIANTS
WO2006012508A2 (en) * 2004-07-22 2006-02-02 Genentech, Inc. Method of treating sjögren's syndrome
CN101001873B (zh) 2004-08-04 2013-03-13 曼璀克生物科技有限责任公司 Fc区变体
US20060067930A1 (en) * 2004-08-19 2006-03-30 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
CA2580271A1 (en) 2004-10-05 2006-04-20 Genentech, Inc. Method for treating vasculitis
AR052774A1 (es) * 2004-10-08 2007-04-04 Wyeth Corp Inmunoterapia para trastornos autoinmunes
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
EP2325206B1 (en) 2004-11-12 2014-03-19 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to fcrn
US8546543B2 (en) 2004-11-12 2013-10-01 Xencor, Inc. Fc variants that extend antibody half-life
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
FR2879204B1 (fr) * 2004-12-15 2007-02-16 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps cytotoxique dirige contre les proliferations hematopoietiques lymphoides de type b.
EP3026063A1 (en) 2004-12-28 2016-06-01 Innate Pharma S.A. Monoclonal antibodies against nkg2a
JP2008526998A (ja) * 2005-01-13 2008-07-24 ジェネンテック・インコーポレーテッド 治療方法
DOP2006000029A (es) * 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
TW200714289A (en) * 2005-02-28 2007-04-16 Genentech Inc Treatment of bone disorders
AR053579A1 (es) * 2005-04-15 2007-05-09 Genentech Inc Tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal (eii)
CA2605697A1 (en) * 2005-04-26 2006-11-02 Bioren, Inc. Method of producing human igg antibodies with enhanced effector functions
US7601335B2 (en) 2005-05-20 2009-10-13 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
BRPI0611220A2 (pt) * 2005-06-02 2010-08-24 Astrazeneca Ab anticorpos direcionados para cd20 e usos dos mesmos
SI1912675T1 (sl) 2005-07-25 2014-07-31 Emergent Product Development Seattle, Llc zmanjšanje števila celic B z uporabo molekul, ki se specifično vežejo na CD37 in CD20
EP1924286A4 (en) * 2005-08-12 2010-01-13 Garvan Inst Med Res PROPHYLACTIC AND / OR THERAPEUTIC METHOD FOR THE TREATMENT OF AUTOIMMUNE DISEASES
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
DK1931709T3 (en) 2005-10-03 2017-03-13 Xencor Inc FC VARIETIES WITH OPTIMIZED FC RECEPTOR BINDING PROPERTIES
CA2625998C (en) 2005-10-06 2015-12-01 Xencor, Inc. Optimized anti-cd30 antibodies
DK1940881T3 (en) 2005-10-11 2017-02-20 Amgen Res Munich Gmbh COMPOSITIONS WITH ARTICLE CROSS-SPECIFIC ANTIBODIES AND APPLICATIONS THEREOF
MY149159A (en) * 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
AU2006318539B2 (en) 2005-11-23 2012-09-13 Genentech, Inc. Methods and compositions related to B cell assays
CN105859886A (zh) 2005-12-02 2016-08-17 健泰科生物技术公司 牵涉与il-22和il-22r结合的抗体的组合物和方法
RU2450020C2 (ru) 2006-01-05 2012-05-10 Дженентек, Инк. АНТИТЕЛА ПРОТИВ EphB4 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
ZA200806187B (en) 2006-01-20 2009-10-28 Genentech Inc Anti-EphrinB2 antibodies and methods using same
JPWO2007102200A1 (ja) * 2006-03-07 2009-07-23 国立大学法人大阪大学 抗ｃｄ２０モノクローナル抗体
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
HRP20140172T1 (hr) 2006-05-30 2014-03-28 Genentech, Inc. Protutijela i imunokonjugati kao i njihove uporabe
CA2654000A1 (en) 2006-06-06 2008-05-22 Genentech, Inc. Anti-dll4 antibodies and methods using same
FR2902799B1 (fr) 2006-06-27 2012-10-26 Millipore Corp Procede et unite de preparation d'un echantillon pour l'analyse microbiologique d'un liquide
MX2008015830A (es) 2006-06-30 2009-01-09 Novo Nordisk As Anticuerpos anti-nkg2a y usos de los mismos.
CA2656620C (en) 2006-07-04 2018-03-13 Genmab A/S Cd20 binding molecules for the treatment of copd
EP1878747A1 (en) 2006-07-11 2008-01-16 greenovation Biotech GmbH Glyco-engineered antibodies
WO2008008482A2 (en) * 2006-07-13 2008-01-17 Genentech, Inc. Altered br3-binding polypeptides
US9683026B2 (en) 2006-07-19 2017-06-20 The Trustees Of The University Of Pennslyvania WSX-1/P28 as a target for anti-inflammatory responses
RS53263B (sr) 2006-08-14 2014-08-29 Xencor Inc. Optimizovana antitela usmerena na cd19
WO2008034076A2 (en) * 2006-09-15 2008-03-20 The Johns Hopkins University Cyclophosphamide in combination with immune therapeutics
EP2064240A2 (en) 2006-09-18 2009-06-03 Xencor, Inc. Optimized antibodies that target hm1.24
PE20080980A1 (es) 2006-10-12 2008-09-02 Genentech Inc Anticuerpos anti-linfotoxina alfa
CA2667019C (en) 2006-10-27 2016-03-29 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
PT2662091T (pt) * 2006-12-01 2018-12-03 Novartis Ag Anticorpos anti-p-selectina e métodos para os utilizar no tratamento de doenças inflamatórias
US8362217B2 (en) 2006-12-21 2013-01-29 Emd Millipore Corporation Purification of proteins
US8569464B2 (en) 2006-12-21 2013-10-29 Emd Millipore Corporation Purification of proteins
WO2008079302A2 (en) 2006-12-21 2008-07-03 Millipore Corporation Purification of proteins
KR101431856B1 (ko) 2007-01-22 2014-08-27 제넨테크, 인크. 항체의 고분자전해질 침전 및 정제
PE20081760A1 (es) 2007-02-09 2009-01-01 Genentech Inc Anticuerpos anti-robo4 y sus usos
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
PE20090321A1 (es) 2007-06-04 2009-04-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch1 nrr, metodo de preparacion y composicion farmaceutica
PL2158315T3 (pl) * 2007-06-25 2016-10-31 Sposoby modyfikowania przeciwciał i zmodyfikowane przeciwciała o ulepszonych właściwościach funkcjonalnych
US8323647B2 (en) * 2007-09-13 2012-12-04 Delenex Therapeutics Ag Humanized antibodies against the β-amyloid peptide
GB0718684D0 (en) * 2007-09-24 2007-10-31 Roche Products Ltd Treatment method
KR102339457B1 (ko) 2007-09-26 2021-12-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항체 정상영역 개변체
US20090098118A1 (en) 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
EP2211903A4 (en) * 2007-10-17 2011-07-06 Nuvelo Inc CLL-1 ANTIBODY
PE20091434A1 (es) 2007-10-30 2009-10-17 Genentech Inc Purificacion de anticuerpos por cromatografia de intercambio cationico
CN104888193A (zh) 2007-11-07 2015-09-09 健泰科生物技术公司 用于治疗微生物病症的组合物和方法
TWI468417B (zh) 2007-11-30 2015-01-11 Genentech Inc 抗－ｖｅｇｆ抗體
KR101616758B1 (ko) 2007-12-26 2016-04-29 젠코어 인코포레이티드 ＦｃＲｎ에 대한 변경된 결합성을 갖는 Ｆｃ 변이체
BRPI0908508A2 (pt) 2008-01-24 2016-03-22 Novo Nordisk As anticorpo monoclonal nkg2a anti-humano humanizado
US12492253B1 (en) 2008-02-25 2025-12-09 Xencor, Inc. Anti-human C5 antibodies
TWI532498B (zh) 2008-03-17 2016-05-11 巴克斯特保健公司 供免疫球蛋白及玻尿酸酶之皮下投藥之用的組合及方法
MX2010009647A (es) * 2008-03-25 2010-09-28 Roche Glycart Ag Uso de un anticuerpo anti-cd20 de tipo ii con citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo aumentada en combinacion con ciclofosfamida, vincristina y doxorubicina para el tratamiento de linfoma no hodgkiniano.
SG189772A1 (en) 2008-04-11 2013-05-31 Trubion Pharmaceuticals Inc Cd37 immunotherapeutic and combination with bifunctional chemotherapeutic thereof
JP5646457B2 (ja) * 2008-04-29 2014-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
NZ589434A (en) * 2008-06-03 2012-11-30 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
JP5723769B2 (ja) * 2008-06-03 2015-05-27 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
WO2009151514A1 (en) 2008-06-11 2009-12-17 Millipore Corporation Stirred tank bioreactor
MX2010014574A (es) * 2008-07-08 2011-04-27 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable dual para prostaglandina e2 y usos de las mismas.
JP5986745B2 (ja) 2008-07-15 2016-09-06 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ Ｐｔｆｅ様のアルミニウム・コート・ガラススライド上のグリカンアレイおよび関連する方法
DK2848625T3 (da) 2008-08-14 2019-10-07 Genentech Inc Fremgangsmåder til fjernelse af en kontaminant under anvendelse af ion bytningsmembrankromatografi med forskydning af naturligt forekommende proteiner
WO2010030670A2 (en) 2008-09-10 2010-03-18 Genentech, Inc. Compositions and methods for the prevention of oxidative degradation of proteins
TW201014605A (en) 2008-09-16 2010-04-16 Genentech Inc Methods for treating progressive multiple sclerosis
SG10201605250SA (en) 2008-10-14 2016-08-30 Genentech Inc Immunoglobulin variants and uses thereof
PE20120204A1 (es) * 2008-11-17 2012-03-03 Genentech Inc Metodo y formulacion para reducir la agregacion de una macromolecula bajo condiciones fisiologicas
EA022752B1 (ru) 2008-12-09 2016-02-29 Галозим, Инк. Длинные растворимые полипептиды рн20 и их использование
CN105037535A (zh) 2008-12-16 2015-11-11 Emd密理博公司 搅拌槽反应器及方法
KR20110101212A (ko) 2008-12-17 2011-09-15 제넨테크, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 조합 요법
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
US20120009182A1 (en) 2008-12-23 2012-01-12 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants with altered binding to protein a
CN102439163A (zh) * 2009-02-16 2012-05-02 拜奥雷克斯治疗公司 人源化抗cd20抗体及使用方法
SG173812A1 (en) 2009-02-27 2011-09-29 Genentech Inc Methods and compositions for protein labelling
MA33198B1 (fr) 2009-03-20 2012-04-02 Genentech Inc Anticorps anti-her di-spécifiques
PE20120553A1 (es) 2009-03-25 2012-05-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-fgfr3
MA33210B1 (fr) 2009-03-25 2012-04-02 Genentech Inc Nouveaux anticorps anti-a5b1 et leurs utilisations
US20100247484A1 (en) 2009-03-31 2010-09-30 Heinrich Barchet Combination therapy of an afucosylated antibody and one or more of the cytokines gm csf, m csf and/or il3
DK2417156T3 (en) 2009-04-07 2015-03-02 Roche Glycart Ag Trivalent, bispecific antibodies
CA2761310C (en) * 2009-05-07 2017-02-28 Charles S. Craik Antibodies and methods of use thereof
US20120121578A1 (en) * 2009-05-13 2012-05-17 Gliknik Inc. Methods of using immunoglobulin aggregates
US8815242B2 (en) * 2009-05-27 2014-08-26 Synageva Biopharma Corp. Avian derived antibodies
WO2010146059A2 (en) 2009-06-16 2010-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
AR077595A1 (es) 2009-07-27 2011-09-07 Genentech Inc Tratamientos de combinacion
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
AU2010278844A1 (en) 2009-07-31 2012-02-09 Genentech, Inc. Inhibition of tumor metastasis using Bv8- or G-CSF-antagonists
TWI409079B (zh) 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
KR20120054069A (ko) 2009-08-14 2012-05-29 로슈 글리카트 아게 플루다라빈 및/또는 미토잔트론과 어푸코실화된 ｃｄ20 항체의 복합 요법
SG178602A1 (en) * 2009-09-01 2012-04-27 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US9321823B2 (en) 2009-09-02 2016-04-26 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
US9493578B2 (en) 2009-09-02 2016-11-15 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
MX2012002766A (es) 2009-09-03 2012-04-02 Genentech Inc Metodos para el tratamiento, diagnosis y monitoreo de artritis reumatoide.
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
CN102482701B (zh) * 2009-09-16 2015-05-13 免疫医疗公司 I类抗-cea抗体及其使用
EP2477603B1 (en) 2009-09-17 2016-03-30 Baxalta Incorporated Stable co-formulation of hyaluronidase and immunoglobulin, and methods of use thereof
BR112012008833A2 (pt) * 2009-10-15 2015-09-08 Abbott Lab imunoglobulinas de dominio variavel duplo e usos das mesmas
KR20120105447A (ko) 2009-10-22 2012-09-25 제넨테크, 인크. 항-헵신 항체 및 그의 사용 방법
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
CA2780221A1 (en) 2009-11-04 2011-05-12 Fabrus Llc Methods for affinity maturation-based antibody optimization
MX2012005168A (es) 2009-11-05 2012-06-08 Genentech Inc Metodos y composicion para secrecion de polipeptidos heterologos.
MX343228B (es) * 2009-11-30 2016-10-26 Biotest Ag Anticuerpos anti-il-10humanizados para el tratamiento de lupus sistémico eritematoso.
JP2013512674A (ja) 2009-12-02 2013-04-18 アクセルロン ファーマ， インコーポレイテッド Ｆｃ融合タンパク質の血清半減期を増加させるための組成物および方法
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US8486397B2 (en) 2009-12-11 2013-07-16 Genentech, Inc. Anti-VEGF-C antibodies and methods using same
US8771685B2 (en) 2009-12-23 2014-07-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-BV8 antibodies and uses thereof
WO2011091078A2 (en) 2010-01-19 2011-07-28 Xencor, Inc. Antibody fc variants with enhanced complement activity
WO2011100403A1 (en) 2010-02-10 2011-08-18 Immunogen, Inc Cd20 antibodies and uses thereof
JP5981853B2 (ja) 2010-02-18 2016-08-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド ニューレグリンアンタゴニスト及び癌の治療におけるそれらの使用
WO2011101328A2 (en) 2010-02-18 2011-08-25 Roche Glycart Ag Treatment with a humanized igg class anti egfr antibody and an antibody against insulin like growth factor 1 receptor
CA2792125C (en) 2010-03-22 2019-02-12 Genentech, Inc. Compositions and methods useful for stabilizing protein-containing formulations
KR101899835B1 (ko) 2010-03-24 2018-09-19 제넨테크, 인크. 항-ｌｒｐ６ 항체
EP3372617B1 (en) 2010-04-02 2024-07-24 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
WO2011130332A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
JP6042801B2 (ja) 2010-04-27 2016-12-14 ロシュ グリクアート アーゲー ｍＴＯＲインヒビターとのアフコシル化ＣＤ２０抗体の併用療法
WO2011139718A1 (en) 2010-05-03 2011-11-10 Genentech, Inc. Compositions and methods useful for reducing the viscosity of protein-containing formulations
KR101915647B1 (ko) 2010-05-10 2018-11-06 아카데미아 시니카 항-인플루엔자 활성을 가진 자나미비르 포스포네이트 동족체 및 인플루엔자 바이러스의 오셀타미비르 감수성을 확인하는 방법
PL2571532T3 (pl) 2010-05-14 2017-10-31 Abbvie Inc Białka wiążące IL-1
KR101551295B1 (ko) 2010-05-17 2015-09-08 이엠디 밀리포어 코포레이션 생체분자 정제용 자극 반응성 중합체
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
CN103119442A (zh) 2010-06-03 2013-05-22 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗体和免疫偶联物的免疫peg成像及其用途
KR101885388B1 (ko) 2010-06-18 2018-08-03 제넨테크, 인크. 항-Ａｘｌ 항체 및 사용 방법
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
MY184736A (en) 2010-06-24 2021-04-20 Genentech Inc Compositions and methods containing alkylglycosides for stabilizing protein-containing formulations
CA2803792A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Genentech, Inc. Anti-neuropilin antibodies and methods of use
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
EP3029066B1 (en) 2010-07-29 2019-02-20 Xencor, Inc. Antibodies with modified isoelectric points
SG188190A1 (en) 2010-08-03 2013-04-30 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2013106216A (ru) 2010-08-03 2014-09-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биомаркеры хронической лимфоцитарной лейкемии
RU2013106217A (ru) 2010-08-05 2014-09-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Гибридный белок из антитела против мнс и противовирусного цитокина
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
ES2655616T3 (es) 2010-08-13 2018-02-20 Roche Glycart Ag Anticuerpos anti-FAP y procedimientos de uso
RU2584597C2 (ru) 2010-08-13 2016-05-20 Рош Гликарт Аг Антитела против а2 тенасцина с и способы их применения
TW201208703A (en) 2010-08-17 2012-03-01 Roche Glycart Ag Combination therapy of an afucosylated CD20 antibody with an anti-VEGF antibody
CA2805054A1 (en) 2010-08-25 2012-03-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against il-18r1 and uses thereof
JP2013539364A (ja) 2010-08-26 2013-10-24 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリンおよびその使用
AU2011295919A1 (en) 2010-08-31 2013-03-07 Genentech, Inc. Biomarkers and methods of treatment
CA2821992A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
DK2625197T3 (en) 2010-10-05 2016-10-03 Genentech Inc Smoothened MUTANT AND METHODS OF USING THE SAME
KR20220070586A (ko) 2010-11-08 2022-05-31 제넨테크, 인크. 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체
US8772457B2 (en) 2010-11-10 2014-07-08 Genentech, Inc. BACE1 antibodies
MX2013006739A (es) 2010-12-16 2013-07-17 Roche Glycart Ag Terapia combinada de anticuerpo cd20 afucosilado con inhibidor de mdm2.
WO2012083132A2 (en) 2010-12-16 2012-06-21 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to th2 inhibition
NZ610976A (en) 2010-12-20 2015-07-31 Genentech Inc Anti-mesothelin antibodies and immunoconjugates
SG191219A1 (en) 2010-12-22 2013-07-31 Genentech Inc Anti-pcsk9 antibodies and methods of use
WO2012092539A2 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibodies to dll4 and uses thereof
EP2482074A1 (en) * 2011-01-27 2012-08-01 Medizinische Hochschule Hannover Methods and means for diagnosing vasculitis
US10689447B2 (en) 2011-02-04 2020-06-23 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
EP2672999A2 (en) 2011-02-10 2013-12-18 Roche Glycart AG Improved immunotherapy
CN103403025B (zh) 2011-02-28 2016-10-12 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 单价抗原结合蛋白
CA2827859A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 Genentech, Inc. Biological markers and methods for predicting response to b-cell antagonists
BR112013019975A2 (pt) 2011-02-28 2017-08-01 Hoffmann La Roche proteínas de ligação de antígeno, composição farmacêutica, uso de uma proteína de ligação de antígeno, método para o tratamento de um paciente e método para a preparação de uma proteína de ligação de antígeno, ácido nucleico, vetor e célula hospedeira"
US20120222851A1 (en) * 2011-03-04 2012-09-06 GM Global Technology Operations LLC Hvac system damper
HUE041335T2 (hu) 2011-03-29 2019-05-28 Roche Glycart Ag Antitest FC-variánsok
DE12722942T1 (de) 2011-03-31 2021-09-30 Modernatx, Inc. Freisetzung und formulierung von manipulierten nukleinsäuren
MX342240B (es) 2011-04-07 2016-09-21 Genentech Inc Anticuerpos anti-fgfr4 y metodos de uso.
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
EA201892619A1 (ru) 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2
US8679767B2 (en) 2011-05-12 2014-03-25 Genentech, Inc. Multiple reaction monitoring LC-MS/MS method to detect therapeutic antibodies in animal samples using framework signature peptides
LT2710035T (lt) 2011-05-16 2017-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Fgfr1 agonistai ir jų naudojimo būdai
SG195072A1 (en) 2011-05-21 2013-12-30 Macrogenics Inc Cd3-binding molecules capable of binding to human and non-human cd3
WO2012171996A1 (en) 2011-06-15 2012-12-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-human epo receptor antibodies and methods of use
CN103635487B (zh) 2011-06-17 2016-10-12 诺沃—诺迪斯克有限公司 选择性消除侵蚀性细胞
BR112013029746B1 (pt) 2011-06-22 2021-02-02 F. Hoffmann-La Roche Ag método para a produção recombinante de um complexo, complexo, formulação farmacêutica e uso do complexo
US20130004484A1 (en) 2011-06-30 2013-01-03 Genentech, Inc. Anti-c-met antibody formulations
RU2014109985A (ru) 2011-08-17 2015-09-27 Дженентек, Инк. Ингибирование ангиогенеза в рефрактерных опухолях
US20140363438A1 (en) 2011-08-17 2014-12-11 Genentech, Inc. Neuregulin antibodies and uses thereof
CN103890006A (zh) 2011-08-23 2014-06-25 罗切格利卡特公司 抗mcsp抗体
PL2748202T3 (pl) 2011-08-23 2018-12-31 Roche Glycart Ag Dwuswoiste cząsteczki wiążące antygen
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
MX2014003094A (es) 2011-09-15 2014-04-25 Genentech Inc Metodos para promover diferenciacion.
KR20140064971A (ko) 2011-09-19 2014-05-28 제넨테크, 인크. c-met 길항제 및 B-raf 길항제를 포함하는 조합 치료
HRP20220250T1 (hr) 2011-10-03 2022-04-29 Modernatx, Inc. Modificirani nukleozidi, nukleotidi i nukleinske kiseline, te njihove uporabe
US9663573B2 (en) 2011-10-05 2017-05-30 Genentech, Inc. Methods of treating liver conditions using Notch2 antagonists
LT2766393T (lt) 2011-10-14 2018-10-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Antikūnai prieš htra1 ir jų naudojimo būdai
EP2766000A2 (en) 2011-10-15 2014-08-20 F.Hoffmann-La Roche Ag Scd1 antagonists for treating cancer
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
SG10201604104PA (en) 2011-10-25 2016-07-28 Prothena Therapeutics Ltd Antibody formulations and methods
EP2776051A4 (en) 2011-10-28 2015-06-17 Hoffmann La Roche THERAPEUTIC COMBINATIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF MELANOMA
KR102057742B1 (ko) 2011-11-17 2019-12-19 군드람 정 의학적 용도를 위한 이중특이성 항체
BR112014012005A2 (pt) 2011-11-21 2017-12-19 Genentech Inc composições, métodos, formulação farmacêutica e artigo
US20130302274A1 (en) 2011-11-25 2013-11-14 Roche Glycart Ag Combination therapy
WO2013083497A1 (en) 2011-12-06 2013-06-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
RU2685867C2 (ru) 2011-12-15 2019-04-23 Алтернатив Инновейтив Текнолоджиз Ллц Гибридные белки и белковые конъюгаты на основе белка теплового шока-70 (БТШ70) и способы их применения (варианты)
SI2791160T1 (sl) 2011-12-16 2022-07-29 Modernatx, Inc. Sestave modificirane MRNA
BR112014012667A2 (pt) 2011-12-22 2018-10-09 F Hoffmann-La Roche Ag vetor de expressão, usos de vetor de expressão, método de transfecção de células eucarióticas, uso de método, uso de célula, métodos de produção de anticorpos e método de transfecção
HK1200849A1 (en) 2011-12-22 2015-08-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Full length antibody display system for eukaryotic cells and its use
RU2639519C2 (ru) 2011-12-22 2017-12-21 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Комбинации элементов экспрессионного вектора, новые способы получения клеток-продуцентов и их применение для рекомбинантного получения полипептидов
HRP20181846T1 (hr) 2011-12-22 2018-12-28 Genentech, Inc. Kromatografija membranom za ionsku izmjenu
WO2013096791A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Genentech, Inc. Process for making high concentration protein formulations
LT3130347T (lt) 2011-12-30 2019-10-25 Halozyme Inc Ph20 polipeptido variantai, kompozicijos ir jų panaudojimas
WO2013101771A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Genentech, Inc. Compositions and method for treating autoimmune diseases
US9120870B2 (en) 2011-12-30 2015-09-01 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-13 and IL-17
US10774132B2 (en) 2012-01-09 2020-09-15 The Scripps Research Instittue Ultralong complementarity determining regions and uses thereof
US20150011431A1 (en) 2012-01-09 2015-01-08 The Scripps Research Institute Humanized antibodies
IN2014DN05885A (pl) 2012-01-18 2015-06-05 Hoffmann La Roche
CA2862424A1 (en) 2012-01-18 2013-07-25 Genentech, Inc. Methods of using fgf19 modulators
HK1203561A1 (en) * 2012-01-19 2015-10-30 医用蛋白国际有限责任公司 Stabilization of the anti-cd20 antibody rituximab
BR112014018471A2 (pt) 2012-01-31 2017-07-04 Genentech Inc anticorpos anti-ige m1' e métodos para o seu uso
WO2013120056A1 (en) 2012-02-11 2013-08-15 Genentech, Inc. R-spondin translocations and methods using the same
BR112014018005B1 (pt) 2012-02-15 2021-06-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Uso de um complexo não covalente imobilizado
MX2014011500A (es) 2012-03-27 2014-12-05 Genentech Inc Diagnosticos y tratamientos relacionados a inhibidores her3.
KR102096678B1 (ko) 2012-03-27 2020-04-02 제넨테크, 인크. 재조합 단백질을 위한 개선된 수확 작업
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
AU2013243952A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
WO2013151762A1 (en) 2012-04-05 2013-10-10 Ac Immune S.A. Humanized tau antibody
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
US9056910B2 (en) 2012-05-01 2015-06-16 Genentech, Inc. Anti-PMEL17 antibodies and immunoconjugates
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
WO2013177470A1 (en) 2012-05-23 2013-11-28 Genentech, Inc. Selection method for therapeutic agents
EP2861624A1 (en) 2012-06-15 2015-04-22 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pcsk9 antibodies, formulations, dosing, and methods of use
MX357043B (es) 2012-07-04 2018-06-25 Rhizen Pharmaceuticals Sa Inhibidores selectivos de pi3k delta.
AU2013285422B2 (en) 2012-07-04 2017-04-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked antigen-antibody conjugates
CN104394886B (zh) 2012-07-04 2017-05-24 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 抗茶碱抗体及使用方法
KR20150030755A (ko) 2012-07-04 2015-03-20 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-바이오틴 항체 및 사용 방법
ES2743401T3 (es) 2012-07-05 2020-02-19 Hoffmann La Roche Sistema de expresión y secreción
KR20150030698A (ko) 2012-07-09 2015-03-20 제넨테크, 인크. 항-cd79b 항체를 포함하는 면역접합체
SG11201500087VA (en) 2012-07-09 2015-02-27 Genentech Inc Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
AU2013288930A1 (en) 2012-07-09 2014-12-04 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-CD79b antibodies
AR091701A1 (es) 2012-07-09 2015-02-25 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd22 e inmunoconjugados
WO2014011955A2 (en) 2012-07-12 2014-01-16 Abbvie, Inc. Il-1 binding proteins
MX361337B (es) 2012-07-13 2018-12-04 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos anti-factor de crecimiento endotelial vascular humano (vegf) / anti-angiopoyetina-2 humana (ang-2) y su uso en el tratamiento de enfermedades vasculares oculares.
CA2876096A1 (en) 2012-08-02 2014-02-06 Petra Rueger Method for producing soluble fcr as fc-fusion with inert immunoglobulin fc-region and uses thereof
PL3434695T3 (pl) 2012-08-07 2021-05-17 Roche Glycart Ag Ulepszona immunoterapia
JP6302909B2 (ja) 2012-08-18 2018-03-28 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ シアリダーゼの同定および画像化のための細胞透過性プローブ
AU2013305827A1 (en) 2012-08-21 2015-03-05 Academia Sinica Benzocyclooctyne compounds and uses thereof
WO2014052713A2 (en) 2012-09-27 2014-04-03 Massachusetts Institute Of Technology Her2-and vegf-a-binding proteins with enhanced stability
MY171664A (en) 2012-11-01 2019-10-22 Abbvie Inc Anti-dll4/vegf dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP3756686A1 (en) 2012-11-02 2020-12-30 TG Therapeutics Inc. Combination of anti-cd20 antibody and pi3 kinase selective inhibitor
AU2013337264B2 (en) 2012-11-05 2018-03-08 Foundation Medicine, Inc. Novel fusion molecules and uses thereof
WO2014071358A2 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Foundation Medicine, Inc. Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof
MX2015005757A (es) 2012-11-08 2015-11-18 Hoffmann La Roche Proteinas ligantes de antigeno her3 de union a la horquilla beta de her3.
MA38176A1 (fr) 2012-11-13 2017-06-30 Genentech Inc Nouvel anticorps anti-hemagglutinine, utile pour le traitement, l'inhibition ou la prévention de l’infection virale a grippe a
JP6475631B2 (ja) 2012-11-19 2019-02-27 バリオファルム・アクチェンゲゼルシャフト Ｃｄ２０およびｃｄ９５に結合する組換え二重特異性抗体
SMT202200337T1 (it) 2012-11-26 2022-09-14 Modernatx Inc Rna modificato al livello del terminale
CN104994885B (zh) 2012-12-19 2017-09-29 基因泰克公司 用于放射性卤素蛋白质标记的方法和组合物
RU2015129640A (ru) 2012-12-21 2017-01-26 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Связанные дисульфидом мультивалентные многофункциональные белки, содержащие молекулы гкгс класса 1
EP3939614A1 (en) 2013-01-18 2022-01-19 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
US9255155B2 (en) 2013-01-31 2016-02-09 The Regents Of The University Of California Antibodies specific for urokinase-type plasminogen activator and methods of treating cancer
HK1211235A1 (en) 2013-02-22 2016-05-20 霍夫曼-拉罗奇有限公司 Methods of treating cancer and preventing drug resistance
US20140242083A1 (en) 2013-02-26 2014-08-28 Roche Glycart Ag Anti-mcsp antibodies
KR20150123250A (ko) 2013-03-06 2015-11-03 제넨테크, 인크. 암 약물 내성의 치료 및 예방 방법
CA2902432A1 (en) 2013-03-12 2014-10-09 Molecular Templates, Inc. Cytotoxic proteins comprising cell-targeting binding regions and shiga toxin a subunit regions for selective killing of specific cell types
WO2014160490A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Genetech, Inc. Antibody formulations
EP2968540A2 (en) 2013-03-14 2016-01-20 Genentech, Inc. Combinations of a mek inhibitor compound with an her3/egfr inhibitor compound and methods of use
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
WO2014159835A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
RU2015139054A (ru) 2013-03-14 2017-04-19 Дженентек, Инк. Способы лечения рака и профилактики лекарственной резистентности рака
RU2661111C2 (ru) 2013-03-15 2018-07-11 Ац Иммуне С.А. Антитела к тау и способы применения
BR112015021993A8 (pt) 2013-03-15 2019-12-03 Genentech Inc polipeptídeo, métodos para sua produção, métodos para cultivo de uma célula, composição farmacêutica, kit, e meio de cultura celular
EP2968537A1 (en) 2013-03-15 2016-01-20 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
HK1211963A1 (en) 2013-03-15 2016-06-03 豪夫迈．罗氏有限公司 Compositions and methods for diagnosis and treatment of hepatic cancers
AR095517A1 (es) 2013-03-15 2015-10-21 Genentech Inc ANTICUERPOS CONTRA EL RECEPTOR QUIMIOATRAYENTE EXPRESADO EN CÉLULAS T HELPER 2 (ANTI-CRTh2) Y MÉTODOS DE USO
CA2903587C (en) 2013-03-15 2021-09-28 Genentech, Inc. Il-22 polypeptides and il-22 fc fusion proteins and methods of use
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
KR20220053691A (ko) 2013-03-15 2022-04-29 제넨테크, 인크. Pd-1 및 pd-l1 관련 상태를 치료하기 위한 바이오마커 및 방법
AU2014227732A1 (en) 2013-03-15 2015-09-17 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against IL-1 beta and IL-17
UA118028C2 (uk) 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
TW201920285A (zh) 2013-04-29 2019-06-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 遏止FcRn結合之抗IGF-1R抗體及其治療血管性眼疾之用途
US20160068613A1 (en) 2013-04-29 2016-03-10 Hoffmann-La Roche Inc. Fc-receptor binding modified asymmetric antibodies and methods of use
KR20210094669A (ko) 2013-04-29 2021-07-29 에프. 호프만-라 로슈 아게 인간 fcrn-결합 변형된 항체 및 사용 방법
PH12021550015A1 (en) 2013-05-20 2022-05-11 Genentech Inc Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
BR112015029838A2 (pt) 2013-05-31 2017-09-26 Genentech Inc anticorpos, composições, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira isolada, método de produção de anticorpos, composto, conjugado de anticorpo e antibiótico, processo de elaboração do composto, intermediário entre ligante e antibiótico, método de tratamento de infecções bacterianas e método de matar staphylococcus aureus
KR20160015286A (ko) 2013-05-31 2016-02-12 제넨테크, 인크. 항-세포벽 테이코산 항체 및 접합체
EP3013365B1 (en) 2013-06-26 2019-06-05 Academia Sinica Rm2 antigens and use thereof
WO2014210564A1 (en) 2013-06-27 2014-12-31 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
TW201534726A (zh) 2013-07-03 2015-09-16 Halozyme Inc 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途
US20160168231A1 (en) 2013-07-18 2016-06-16 Fabrus, Inc. Antibodies with ultralong complementarity determining regions
CN111518199A (zh) 2013-07-18 2020-08-11 图鲁斯生物科学有限责任公司 具有超长互补决定区的人源化抗体
RS58719B1 (sr) 2013-08-01 2019-06-28 Five Prime Therapeutics Inc Nefukozilisana anti-fgfr2iiib antitela
US10093978B2 (en) 2013-08-12 2018-10-09 Genentech, Inc. Compositions for detecting complement factor H (CFH) and complement factor I (CFI) polymorphisms
CN105682666B (zh) 2013-09-06 2021-06-01 中央研究院 使用醣脂激活人类iNKT细胞
AR097685A1 (es) 2013-09-17 2016-04-06 Genentech Inc Métodos de uso de anticuerpos anti-lgr5
CN103524621B (zh) * 2013-09-27 2015-04-01 北京济福霖生物技术有限公司 一种抗人cd20嵌合单克隆抗体
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
US10323076B2 (en) 2013-10-03 2019-06-18 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
JP6422956B2 (ja) 2013-10-11 2018-11-14 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 多重特異性ドメイン交換共通可変軽鎖抗体
RU2016117978A (ru) 2013-10-11 2017-11-17 Дженентек, Инк. Ингибиторы nsp4 и способы их применения
CN105813654B (zh) 2013-10-11 2019-05-31 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) Tem8抗体及其用途
BR112016008477A2 (pt) 2013-10-18 2017-10-03 Genentech Inc Corpos, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica e usos do anticorpo
CA2924873A1 (en) 2013-10-23 2015-04-30 Genentech, Inc. Methods of diagnosing and treating eosinophilic disorders
CN104623637A (zh) 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
PT3071597T (pt) 2013-11-21 2020-10-08 Hoffmann La Roche Anticorpos anti-alfa-sinucleína e métodos de utilização
LT3079719T (lt) 2013-12-09 2019-12-10 Allakos Inc Antikūnai prieš siglec-8 ir jų panaudojimo būdai
AU2014362238A1 (en) 2013-12-13 2016-06-09 Genentech, Inc. Anti-CD33 antibodies and immunoconjugates
WO2015095410A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and an anti-cd20 antibody
CN112390883A (zh) 2013-12-17 2021-02-23 基因泰克公司 抗cd3抗体及使用方法
AU2014364606A1 (en) 2013-12-17 2016-07-07 Genentech, Inc. Combination therapy comprising OX40 binding agonists and PD-1 axis binding antagonists
MY189089A (en) 2013-12-17 2022-01-25 Genentech Inc Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
ES2778498T3 (es) 2013-12-20 2020-08-10 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-tau(pS422) humanizados y procedimientos de uso
TWI670283B (zh) 2013-12-23 2019-09-01 美商建南德克公司 抗體及使用方法
CN105873616B (zh) 2014-01-03 2020-06-05 豪夫迈·罗氏有限公司 共价连接的多肽毒素-抗体缀合物
KR102278979B1 (ko) 2014-01-03 2021-07-19 에프. 호프만-라 로슈 아게 공유적으로 연결된 헬리카-항-헬리카 항체 접합체 및 그의 용도
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
ES2895752T3 (es) 2014-01-03 2022-02-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos anti-hapteno/anti-receptor de la barrera hematoencefálica, complejos de los mismos y su uso como lanzaderas a través de la barrera hematoencefálica
ES2864160T3 (es) 2014-01-06 2021-10-13 Hoffmann La Roche Módulos lanzadera de la barrera hematoencefálica monovalentes
JP6786392B2 (ja) 2014-01-15 2020-11-18 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ＦｃＲｎ結合特性が改変され、プロテインＡ結合特性が保持されているＦｃ領域変異体
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
JP2017507118A (ja) 2014-01-16 2017-03-16 アカデミア シニカＡｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ がんの処置および検出のための組成物および方法
EP3096797A1 (en) 2014-01-24 2016-11-30 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of using anti-steap1 antibodies and immunoconjugates
CN112851769A (zh) 2014-01-27 2021-05-28 分子模板公司 用于哺乳动物中的去免疫化志贺毒素a亚基效应子多肽
WO2015120075A2 (en) 2014-02-04 2015-08-13 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
KR20240094017A (ko) 2014-02-08 2024-06-24 제넨테크, 인크. 알츠하이머 질환을 치료하는 방법
MX388168B (es) 2014-02-08 2025-03-19 Genentech Inc Un anticuerpo anti-amiloide beta (a?) monoclonal humanizado para usarse en el tratamiento de enfermedad de alzheimer.
US9518121B2 (en) 2014-02-12 2016-12-13 Genentech, Inc. Anti-Jagged1 antibodies and methods of use
WO2015127405A2 (en) 2014-02-21 2015-08-27 Genentech, Inc. Anti-il-13/il-17 bispecific antibodies and uses thereof
TWI558399B (zh) 2014-02-26 2016-11-21 美國禮來大藥廠 癌症之組合療法
US10183996B2 (en) 2014-02-28 2019-01-22 Allakos Inc. Methods and compositions for treating Siglec-8 associated diseases
TW201622744A (zh) 2014-03-04 2016-07-01 美國禮來大藥廠 癌症之組合療法
US11142584B2 (en) 2014-03-11 2021-10-12 Molecular Templates, Inc. CD20-binding proteins comprising Shiga toxin A subunit effector regions for inducing cellular internalization and methods using same
MX2016011637A (es) 2014-03-14 2017-04-13 Genentech Inc Metodos y composiciones para secrecion de polipeptidos heterologos.
RU2688349C2 (ru) 2014-03-21 2019-05-21 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг In vitro прогнозирование времени полужизни антител in vivo
US20170107294A1 (en) 2014-03-21 2017-04-20 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
EP3122900A1 (en) 2014-03-24 2017-02-01 F. Hoffmann-La Roche AG Cancer treatment with c-met antagonists and correlation of the latter with hgf expression
CN106415244B (zh) 2014-03-27 2020-04-24 中央研究院 反应性标记化合物及其用途
MX2016012779A (es) 2014-03-31 2017-04-27 Genentech Inc Terapia de combinacion con agentes antiangiogénesis y agonistas de unión a ox40.
AU2015241037B2 (en) 2014-03-31 2020-10-15 Genentech, Inc. Anti-OX40 antibodies and methods of use
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
BR112016027222A2 (pt) 2014-05-22 2018-01-30 Genentech Inc anticorpos isolados, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, métodos de tratamento de um indivíduo com um câncer, de inibição da proliferação de uma célula, de detecção de gpc3 humano e de detecção de um câncer
KR20170005016A (ko) 2014-05-23 2017-01-11 제넨테크, 인크. MiT 바이오마커 및 그의 사용 방법
SI3149000T1 (sl) 2014-05-27 2021-09-30 Rhizen Pharmaceuticals S.A. Kristalinična tosilatna sol selektivnega inhibitorja PI3K delta za uporabo v farmacevtskih oblikah
TWI717319B (zh) 2014-05-27 2021-02-01 中央研究院 得自類桿菌屬之岩藻糖苷酶及其用途
US20150344585A1 (en) 2014-05-27 2015-12-03 Academia Sinica Anti-cd20 glycoantibodies and uses thereof
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
TWI679020B (zh) 2014-05-27 2019-12-11 中央研究院 抗ｈｅｒ２醣抗體及其用途
TWI732738B (zh) 2014-05-28 2021-07-11 中央研究院 抗TNF-α醣抗體及其用途
KR20170010785A (ko) 2014-06-11 2017-02-01 제넨테크, 인크. 항-lgr5 항체 및 이의 용도
CN113831416A (zh) 2014-06-11 2021-12-24 分子模板公司 耐受蛋白酶切割的志贺毒素a亚基效应子多肽和包含其的细胞靶向分子
JP2017517552A (ja) 2014-06-13 2017-06-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗癌剤耐性の治療及び防止方法
AR100978A1 (es) 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
KR20170026362A (ko) 2014-06-26 2017-03-08 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-ｂｒｄｕ 항체 및 사용 방법
CN106488775A (zh) 2014-07-11 2017-03-08 基因泰克公司 Notch途径抑制
RU2715038C2 (ru) 2014-07-11 2020-02-21 Дженентек, Инк. Антитела анти-pd-l1 и способы их диагностического применения
WO2016019969A1 (en) 2014-08-08 2016-02-11 Ludwig-Maximilians-Universität München Subcutaneously administered bispecific antibodies for use in the treatment of cancer
TWI751102B (zh) 2014-08-28 2022-01-01 美商奇諾治療有限公司 對ｃｄ１９具專一性之抗體及嵌合抗原受體
ES3034398T3 (en) 2014-08-28 2025-08-18 Bioatla Inc Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells
WO2016037123A2 (en) 2014-09-05 2016-03-10 Opexa Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating b cell mediated autoimmune disorders
TWI745275B (zh) 2014-09-08 2021-11-11 中央研究院 使用醣脂激活人類ｉＮＫＴ細胞
CR20170095A (es) 2014-09-12 2017-07-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-cll-1 e inmunoconjugados referencias recíprocas con solicitudes relacionadas
WO2016040724A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
PE20170935A1 (es) 2014-09-12 2017-07-13 Genentech Inc Anticuerpos anti-her2 e inmunoconjugados
MX2017003123A (es) 2014-09-12 2017-05-12 Genentech Inc Anticuerpos y conjugados modificados geneticamente con cisteina.
US20160137727A1 (en) 2014-09-15 2016-05-19 Genentech, Inc. Antibody formulations
KR20170055521A (ko) 2014-09-17 2017-05-19 제넨테크, 인크. 항-her2 항체를 포함하는 면역콘주게이트
EP3262071B8 (en) 2014-09-23 2022-05-18 F. Hoffmann-La Roche AG Method of using anti-cd79b immunoconjugates
CN107074938A (zh) 2014-10-16 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 抗‑α‑突触核蛋白抗体和使用方法
EP3223865A4 (en) 2014-10-31 2018-10-03 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind b7-h4
RU2017119231A (ru) 2014-11-03 2018-12-06 Дженентек, Инк. Способы и биомаркеры для прогнозирования эффективности и оценки лечения агонистом ох40
SG11201703448QA (en) 2014-11-03 2017-05-30 Genentech Inc Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof
BR112017009152A2 (pt) 2014-11-05 2018-03-06 Genentech Inc métodos de produção de proteínas de duas cadeias em bactérias
AU2015342964B2 (en) 2014-11-05 2021-06-24 Genentech, Inc. Methods of producing two chain proteins in bacteria
CA2961439A1 (en) 2014-11-05 2016-05-12 Genentech, Inc. Anti-fgfr2/3 antibodies and methods using same
BR112017006591A2 (pt) 2014-11-06 2018-01-16 Hoffmann La Roche polipeptídeo heterodimérico, formulação farmacêutica e uso de um polipeptídeo heterodimérico
WO2016073157A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Genentech, Inc. Anti-ang2 antibodies and methods of use thereof
WO2016073282A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ox40 binding agonists and tigit inhibitors
PT3215528T (pt) 2014-11-06 2019-10-11 Hoffmann La Roche Variantes da região fc com ligação modificada ao fcrn e métodos de utilização
CA2960297A1 (en) 2014-11-10 2016-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
JP2018500882A (ja) 2014-11-10 2018-01-18 ジェネンテック， インコーポレイテッド 腎症の動物モデルおよびそれを治療するための薬剤
WO2016077789A1 (en) 2014-11-14 2016-05-19 The Usa, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
SG10201807625PA (en) 2014-11-17 2018-10-30 Genentech Inc Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
JP6993228B2 (ja) 2014-11-19 2022-03-03 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トランスフェリン受容体／抗ｂａｃｅ１多重特異性抗体および使用方法
JP6859259B2 (ja) 2014-11-19 2021-04-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＢＡＣＥｌに対する抗体及び神経疾患免疫療法のためのその使用
CN107001473B (zh) 2014-11-19 2021-07-09 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-运铁蛋白受体抗体及使用方法
ES2926673T3 (es) 2014-11-20 2022-10-27 Hoffmann La Roche Politerapia de moléculas de unión a antígeno biespecíficas activadoras de linfocitos T y antagonistas de la unión al eje de PD-1
BR112017011478A2 (pt) 2014-12-03 2018-02-27 Genentech, Inc. composto de conjugado anticorpo-antibiótico, conjugado anticorpo-antibiótico, composição farmacêutica, métodos de tratamento de uma infecção bacteriana e para exterminar staph aureus, processo para a preparação do composto, kit e intermediário antibiótico-ligante
CN107206102A (zh) 2014-12-03 2017-09-26 豪夫迈·罗氏有限公司 抗金黄色葡萄球菌抗体利福霉素缀合物及其用途
PL3227332T3 (pl) 2014-12-03 2020-06-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Wielospecyficzne przeciwciała
SG11201704449VA (en) 2014-12-05 2017-06-29 Genentech Inc ANTI-CD79b ANTIBODIES AND METHODS OF USE
CA2966365A1 (en) 2014-12-10 2016-06-16 Genentech, Inc. Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
PT3233912T (pt) 2014-12-19 2021-08-09 Regenesance B V Antocorpos que se ligam a c6 humano e utilizações destes
TWI617580B (zh) 2014-12-19 2018-03-11 中外製藥股份有限公司 抗ｃ５抗體及使用方法
MY181199A (en) 2014-12-19 2020-12-21 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use
US20160200815A1 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
AR103442A1 (es) 2015-01-16 2017-05-10 Juno Therapeutics Inc Anticuerpos y receptores de antígenos quiméricos específicos de ror1
WO2016117346A1 (en) 2015-01-22 2016-07-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A combination of two or more anti-c5 antibodies and methods of use
CA2972072A1 (en) 2015-01-24 2016-07-28 Academia Sinica Novel glycan conjugates and methods of use thereof
AU2016212158B2 (en) * 2015-01-26 2021-06-03 Allogene Therapeutics, Inc. mAb-driven chimeric antigen receptor systems for sorting/depleting engineered immune cells
EP3253784B1 (en) 2015-02-04 2020-05-06 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
KR20170110601A (ko) 2015-02-05 2017-10-11 몰레큘러 템플레이츠, 인코퍼레이션. 시가 독소 a 서브유닛 작동체 영역을 포함하는 다가 cd20 결합 분자 및 이들의 강화된 조성물
CN107108729A (zh) 2015-02-05 2017-08-29 中外制药株式会社 包含离子浓度依赖性的抗原结合结构域的抗体，fc区变体，il‑8‑结合抗体，及其应用
EP3261665A1 (en) 2015-02-24 2018-01-03 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Middle east respiratory syndrome coronavirus immunogens, antibodies, and their use
JP2018511797A (ja) 2015-03-16 2018-04-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＩＬ−１３の検出方法及び定量方法並びにＴｈ２関連疾患の診断及び治療における使用
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
HRP20200583T1 (hr) 2015-03-20 2020-07-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Protutijela koja neutraliziraju gp120 i njihova upotreba
RS59878B1 (sr) 2015-03-23 2020-03-31 Bayer Pharma AG Anti-ceacam6 antitela i njihova primena
HUE049938T2 (hu) 2015-03-23 2020-11-30 Jounce Therapeutics Inc Icos elleni antitestek
EP3274368A1 (en) 2015-03-25 2018-01-31 THE UNITED STATES OF AMERICA, represented by the S Bispecific multivalent fusion proteins
HK1249048A1 (zh) 2015-04-03 2018-10-26 Eureka Therapeutics, Inc. 靶向afp肽/mhc复合体的构建体及其用途
EP3280736A1 (en) 2015-04-07 2018-02-14 F. Hoffmann-La Roche AG Antigen binding complex having agonistic activity and methods of use
PT3283508T (pt) 2015-04-17 2021-06-21 Alpine Immune Sciences Inc Proteínas imuno modulatórias com afinidades afináveis
CN115932273A (zh) 2015-04-24 2023-04-07 豪夫迈·罗氏有限公司 鉴定包含结合多肽的细菌的方法
EP3778640A1 (en) 2015-05-01 2021-02-17 Genentech, Inc. Masked anti-cd3 antibodies and methods of use
WO2016179194A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Jounce Therapeutics, Inc. Lilra3 and method of using the same
EP4450524A3 (en) 2015-05-11 2025-05-14 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions and methods of treating lupus nephritis
MX2017014381A (es) 2015-05-12 2018-03-02 Genentech Inc Metodos terapeuticos y diagnosticos para cancer.
KR20190080992A (ko) 2015-05-21 2019-07-08 하푼 테라퓨틱스, 인크. 삼중특이성 결합 단백질 및 사용 방법
CN107771182A (zh) 2015-05-29 2018-03-06 豪夫迈·罗氏有限公司 人源化抗埃博拉病毒糖蛋白抗体和使用方法
JP7144935B2 (ja) 2015-05-29 2022-09-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 癌のための治療方法及び診断方法
AU2016271142A1 (en) 2015-05-29 2017-11-23 Genentech, Inc. PD-L1 promoter methylation in cancer
MX2017015493A (es) 2015-05-30 2018-02-09 Molecular Templates Inc Andamiajes de la subunidad a de la toxina shiga desinmunizados y moleculas con direccion a las celulas que los comprenden.
JP2018516933A (ja) 2015-06-02 2018-06-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｉｌ−３４抗体を使用して神経学的疾患を治療するための組成物及び方法
WO2016196975A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
PL3303386T3 (pl) 2015-06-05 2025-03-03 Genentech, Inc. Przeciwciała anty-tau i sposoby zastosowania
KR20180025888A (ko) 2015-06-08 2018-03-09 제넨테크, 인크. 항-ox40 항체 및 pd-1 축 결합 길항제를 사용하여 암을 치료하는 방법
EP3303399A1 (en) 2015-06-08 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies
EP3307780A1 (en) 2015-06-15 2018-04-18 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
WO2016204966A1 (en) 2015-06-16 2016-12-22 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
CN107847568B (zh) 2015-06-16 2022-12-20 豪夫迈·罗氏有限公司 抗cll-1抗体和使用方法
EP3310814B1 (en) 2015-06-16 2023-08-02 F. Hoffmann-La Roche AG Humanized and affinity matured antibodies to fcrh5 and methods of use
CN116327953A (zh) 2015-06-17 2023-06-27 豪夫迈·罗氏有限公司 使用pd-1轴结合拮抗剂和紫杉烷治疗局部晚期或转移性乳腺癌的方法
KR20180012859A (ko) 2015-06-17 2018-02-06 제넨테크, 인크. 항-her2 항체 및 이용 방법
WO2016205567A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Allakos Inc. Methods and compositions for treating fibrotic diseases
EP3744732B1 (en) 2015-06-24 2025-09-10 F. Hoffmann-La Roche AG Humanized anti-tau(ps422) antibodies and methods of use
CN107531788B (zh) 2015-06-24 2022-06-21 豪夫迈·罗氏有限公司 对her2和血脑屏障受体特异性的三特异性抗体及使用方法
EP3108897A1 (en) 2015-06-24 2016-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies against human csf-1r for use in inducing lymphocytosis in lymphomas or leukemias
IL302486A (en) 2015-06-24 2023-06-01 Hoffmann La Roche Antibodies against the transnephrine receptor with adapted affinity
EP3313885A1 (en) 2015-06-29 2018-05-02 H. Hoffnabb-La Roche Ag Type ii anti-cd20 antibody for use in organ transplantation
ES2898065T3 (es) 2015-06-29 2022-03-03 Ventana Med Syst Inc Materiales y procedimientos para realizar ensayos histoquímicos para proepirregulina y anfirregulina humanas
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
IL319047A (en) 2015-08-28 2025-04-01 Amunix Operating Inc Chimeric polypeptide composition and methods for its preparation and use
CN108026180B (zh) 2015-08-28 2022-06-07 豪夫迈·罗氏有限公司 抗羟腐胺赖氨酸抗体及其用途
PH12018500386B1 (en) 2015-09-18 2024-01-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Il-8-binding antibodies and uses thereof
EP3353206A1 (en) 2015-09-22 2018-08-01 Spring Bioscience Corporation Anti-ox40 antibodies and diagnostic uses thereof
CN116987187A (zh) 2015-09-23 2023-11-03 豪夫迈·罗氏有限公司 抗-vegf抗体的优化的变体
CA2999917A1 (en) 2015-09-24 2017-03-30 Abvitro Llc Hiv antibody compositions and methods of use
MY186016A (en) 2015-09-25 2021-06-14 Genentech Inc Anti-tigit antibodies and methods of use
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
RU2746409C1 (ru) 2015-10-02 2021-04-13 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела к pd1 и способы их применения
CN114057885A (zh) 2015-10-02 2022-02-18 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗人cd20/人转铁蛋白受体抗体及使用方法
CN114773481B (zh) 2015-10-02 2025-04-29 豪夫迈·罗氏有限公司 对pd1和tim3特异性的双特异性抗体
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
MA43017A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Anticorps bispécifiques spécifiques d'un récepteur de co-stimulation du tnf
HK1257072A1 (zh) 2015-10-06 2019-10-11 豪夫迈‧罗氏有限公司 治疗多发性硬化的方法
RU2018116402A (ru) 2015-10-07 2019-11-07 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биспецифические антитела, четырехвалентные в отношении костимуляторного tnf-рецептора
US10392441B2 (en) 2015-10-07 2019-08-27 United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services IL-7R-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
MA45326A (fr) 2015-10-20 2018-08-29 Genentech Inc Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation
CA2998208A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Jounce Therapeutics, Inc. Gene signatures for determining icos expression
US10604577B2 (en) 2015-10-22 2020-03-31 Allakos Inc. Methods and compositions for treating systemic mastocytosis
IL295756A (en) 2015-10-29 2022-10-01 Hoffmann La Roche Anti-variant fc-region antibodies and methods of use
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
US10407510B2 (en) 2015-10-30 2019-09-10 Genentech, Inc. Anti-factor D antibodies and conjugates
ES2870141T3 (es) 2015-10-30 2021-10-26 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-HtrA1 y procedimientos de uso de los mismos
CA3003878A1 (en) 2015-11-03 2017-05-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 gp41 and their use
EP3371217B1 (en) 2015-11-08 2025-06-11 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of screening for multispecific antibodies
CN108368174B (zh) 2015-11-23 2023-04-14 戊瑞治疗有限公司 用于癌症治疗的单独fgfr2抑制剂或与免疫刺激剂的组合
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
KR102850929B1 (ko) 2015-12-09 2025-08-27 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-약물 항체의 형성을 감소시키기 위한 ii형 항-cd20 항체
WO2017104783A1 (en) 2015-12-18 2017-06-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use
IL259256B2 (en) 2015-12-18 2023-02-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-c5 antibodies and methods of use
BR112018010945A2 (pt) 2015-12-30 2018-12-04 Genentech Inc formulações com degradação de polissorbato reduzida
KR20180097615A (ko) 2016-01-08 2018-08-31 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd-1 축 결합 길항물질 및 항-cea/항-cd3 이중특이성 항체를 사용하는 cea-양성 암의 치료 방법
CN114019170A (zh) 2016-01-20 2022-02-08 基因泰克公司 用于阿尔茨海默氏病的高剂量治疗
EP3411396A1 (en) 2016-02-04 2018-12-12 Curis, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
KR102500659B1 (ko) 2016-02-29 2023-02-16 제넨테크, 인크. 암에 대한 치료 및 진단 방법
CN108699155B (zh) 2016-03-01 2023-03-21 豪夫迈·罗氏有限公司 具有改变的细胞死亡诱导的奥滨尤妥珠单抗变体
TW201808978A (zh) 2016-03-08 2018-03-16 中央研究院 N-聚醣及其陣列之模組化合成方法
WO2017159699A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-gpc3 antibodies
US20170315132A1 (en) 2016-03-25 2017-11-02 Genentech, Inc. Multiplexed total antibody and antibody-conjugated drug quantification assay
SG11201808562SA (en) 2016-03-29 2018-10-30 Geltor Inc Expression of proteins in gram-negative bacteria wherein the ratio of periplasmic volume to cytoplasmic volume is between 0.5:1 and 10:1
KR101796277B1 (ko) 2016-04-12 2017-11-13 앱클론(주) 안정성이 개선된 ｈｅｒ２에 특이적으로 결합하는 항체
WO2017180864A1 (en) 2016-04-14 2017-10-19 Genentech, Inc. Anti-rspo3 antibodies and methods of use
SG11201808994YA (en) 2016-04-15 2018-11-29 Bioatla Llc Anti-axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof
KR20190003958A (ko) 2016-04-15 2019-01-10 제넨테크, 인크. 암의 치료 및 모니터링 방법
JP2019515670A (ja) 2016-04-15 2019-06-13 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんをモニタリングし治療するための方法
IL310729A (en) 2016-04-15 2024-04-01 Alpine Immune Sciences Inc Cd80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
ES2930351T3 (es) 2016-04-15 2022-12-09 Evive Biotechnology Shanghai Ltd Un dímero de IL-22 para su uso en el tratamiento de enterocolitis necrosante
WO2017181148A2 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Alpine Immune Sciences, Inc. Icos ligand variant immunomodulatory proteins and uses thereof
SG11201809620UA (en) 2016-05-02 2018-11-29 Hoffmann La Roche The contorsbody - a single chain target binder
WO2017192589A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to influenza ha and their use and identification
JP7089483B2 (ja) 2016-05-11 2022-06-22 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 修飾された抗テネイシン抗体及び使用方法
ES2930255T3 (es) 2016-05-13 2022-12-09 Bioatla Inc Anticuerpos anti-Ror2, fragmentos de anticuerpos, sus inmunoconjugados y usos de los mismos
ES2858151T3 (es) 2016-05-20 2021-09-29 Hoffmann La Roche Conjugados de PROTAC-anticuerpo y procedimientos de uso
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
US20170370906A1 (en) 2016-05-27 2017-12-28 Genentech, Inc. Bioanalytical analysis of site-specific antibody drug conjugates
MX2018014577A (es) 2016-05-27 2019-05-20 Tg Therapeutics Inc Combinacion de anticuerpo anti-cd20, inhibidor selectivo de quinasa p13-delta, e inhibidor de btk para tratar trastornos proliferativos de celulas b.
CN110603266A (zh) 2016-06-02 2019-12-20 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗癌症的ii型抗cd20抗体和抗cd20/cd3双特异性抗体
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
EP3464280B1 (en) 2016-06-06 2021-10-06 F. Hoffmann-La Roche AG Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use
EA201990017A1 (ru) 2016-06-17 2019-07-31 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Антитела к миостатину и способы их применения
CN109563160B (zh) 2016-06-24 2023-02-28 豪夫迈·罗氏有限公司 抗聚泛素多特异性抗体
EP3478717B1 (en) 2016-07-04 2022-01-05 F. Hoffmann-La Roche AG Novel antibody format
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
US11834490B2 (en) 2016-07-28 2023-12-05 Alpine Immune Sciences, Inc. CD112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11471488B2 (en) 2016-07-28 2022-10-18 Alpine Immune Sciences, Inc. CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
EP3491013A1 (en) 2016-07-28 2019-06-05 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US20190269666A1 (en) 2016-07-29 2019-09-05 Eli Lilly And Company Combination therapy with merestinib and anti-pd-l1 or anti-pd-1 inhibitors for use in the treatment of cancer
US20240018268A1 (en) 2016-07-29 2024-01-18 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies against anti-cd19 antibodies
MX2018015721A (es) 2016-07-29 2019-05-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos biespecificos que exhiben actividad de funcion de cofactor fviii alternativa mejorada.
EP3494139B1 (en) 2016-08-05 2022-01-12 F. Hoffmann-La Roche AG Multivalent and multiepitopic anitibodies having agonistic activity and methods of use
JP6527643B2 (ja) 2016-08-05 2019-06-05 中外製薬株式会社 Ｉｌ−８関連疾患の治療用又は予防用組成物
JP7250674B2 (ja) 2016-08-08 2023-04-03 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんの治療及び診断方法
WO2018031662A1 (en) 2016-08-11 2018-02-15 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepine prodrugs and antibody conjugates thereof
EP3500594A4 (en) 2016-08-22 2020-03-11 Cho Pharma Inc. ANTIBODIES, BINDING FRAGMENTS AND METHOD FOR USE
EP3507305A1 (en) 2016-09-02 2019-07-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating b cell disorders
US11168148B2 (en) 2016-09-07 2021-11-09 The Regents Of The University Of California Antibodies to oxidation-specific epitopes
EP3509634A1 (en) 2016-09-09 2019-07-17 TG Therapeutics Inc. Combination of an anti-cd20 antibody, pi3 kinase-delta inhibitor, and anti-pd-1 or anti-pd-l1 antibody for treating hematological cancers
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
CN116731197A (zh) 2016-09-19 2023-09-12 豪夫迈·罗氏有限公司 基于补体因子的亲和层析
RU2752785C2 (ru) 2016-09-23 2021-08-04 Дженентек, Инк. Применение антагонистов il-13 для лечения атопического дерматита
AU2017338827B2 (en) 2016-10-03 2023-08-31 Juno Therapeutics, Inc. HPV-specific binding molecules
CN110139674B (zh) 2016-10-05 2023-05-16 豪夫迈·罗氏有限公司 制备抗体药物缀合物的方法
JP7579056B2 (ja) 2016-10-06 2024-11-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんのための治療方法及び診断方法
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
WO2018081648A2 (en) 2016-10-29 2018-05-03 Genentech, Inc. Anti-mic antibidies and methods of use
BR112019008494A2 (pt) 2016-11-02 2019-07-09 Jounce Therapeutics Inc anticorpos para pd-1 e usos dos mesmos
KR20210117359A (ko) * 2016-11-07 2021-09-28 더 위스타 인스티튜트 오브 아나토미 앤드 바이올로지 라임병에 사용하기 위한 dna 항체 작제물
KR20190074300A (ko) 2016-11-15 2019-06-27 제넨테크, 인크. 항-cd20/항-cd3 이중특이적 항체에 의한 치료를 위한 투약
WO2018093669A1 (en) 2016-11-16 2018-05-24 Eli Lilly And Company Combination therapy for cancer with exon 14 skipping mutation(s) or exon 14 skipping phenotype
TW201829463A (zh) 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
WO2018091724A1 (en) 2016-11-21 2018-05-24 Cureab Gmbh Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
KR102557126B1 (ko) 2016-12-07 2023-07-18 몰레큘러 템플레이츠, 인코퍼레이션. 부위 특이적 접합을 위한 시가 독소 a 서브유닛 작동체 폴리펩타이드, 시가 독소 작동체 스캐폴드, 및 세포-표적화 분자
CA3045294A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of use
TWI787219B (zh) 2016-12-07 2022-12-21 美商建南德克公司 抗-ｔａｕ抗體及使用方法
JP2020511408A (ja) 2016-12-12 2020-04-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｐｄ−ｌ１抗体及び抗アンドロゲン薬を使用してがんを治療する方法
IL267406B2 (en) 2016-12-20 2025-05-01 Hoffmann La Roche Combination therapy of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and 4-1bb (cd137) agonists
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
CR20190309A (es) 2017-01-03 2019-08-21 Hoffmann La Roche Moleculas de unión de3 antígeno biespecíficas que comprenden el clon 20h4.9 anti-4-1bb
US20180230218A1 (en) 2017-01-04 2018-08-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
EP3568468A4 (en) 2017-01-12 2020-12-30 Eureka Therapeutics, Inc. RECOMBINATION PRODUCTS TARGETING PEPTIDE HISTONE H3 / MHC COMPLEXES AND THEIR USES
ES2971981T3 (es) 2017-01-25 2024-06-10 Molecular Templates Inc Moléculas de reconocimiento de células que comprenden efectores de la subunidad A de la toxina Shiga desinmunizados y epítopos de células T CD8+
IL268327B2 (en) 2017-01-31 2025-09-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Pharmaceutical preparation for use in the treatment and prevention of C5-related diseases and methods for the treatment and prevention of C5-related diseases
US11021535B2 (en) 2017-02-10 2021-06-01 The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
UA126574C2 (uk) 2017-02-10 2022-11-02 Дженентек, Інк. Антитіло проти триптази, його композиція та застосування
EP3589754B1 (en) 2017-03-01 2023-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for cancer
IL268781B2 (en) 2017-03-16 2025-09-01 Alpine Immune Sciences Inc Cd80 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
WO2018170021A1 (en) 2017-03-16 2018-09-20 Alpine Immune Sciences, Inc. Pd-l1 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11732022B2 (en) 2017-03-16 2023-08-22 Alpine Immune Sciences, Inc. PD-L2 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
TWI839327B (zh) 2017-03-22 2024-04-21 美商建南德克公司 用於治療眼部病症之最佳化之抗體組合物
PE20200152A1 (es) 2017-03-27 2020-01-17 Hoffmann La Roche Receptores de union a antigeno mejorados
WO2018183175A1 (en) 2017-03-28 2018-10-04 Genentech, Inc. Methods of treating neurodegenerative diseases
WO2018178076A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
WO2018178055A1 (en) 2017-03-29 2018-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecule for a costimulatory tnf receptor
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
ES2955852T3 (es) 2017-04-03 2023-12-07 Hoffmann La Roche Anticuerpos de unión a STEAP-1
PE20200006A1 (es) 2017-04-04 2020-01-06 Hoffmann La Roche Nuevas moleculas de union antigeno biespecificas capaces de unirse especificamente cd40 y a fap
FI3606955T3 (fi) 2017-04-05 2025-01-08 Hoffmann La Roche Pd1:een ja lag3:een spesifisesti sitoutuvia bispesifisiä vasta-aineita
BR112019018779A2 (pt) 2017-04-05 2020-05-05 Hoffmann La Roche anticorpos isolados, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método para tratar um indivíduo tendo câncer e para produzir um anticorpo, formulação farmacêutica e uso do anticorpo
MX2019012192A (es) 2017-04-14 2020-01-21 Genentech Inc Métodos de diagnóstico y terapéuticos para el cáncer.
CR20190480A (es) 2017-04-21 2019-11-20 Genentech Inc Uso de antagonistas de klk5 para el tratamiento de una enfermedad
IL270138B2 (en) 2017-04-26 2025-08-01 Eureka Therapeutics Inc Structures that specifically recognize glypican 3 and their uses
KR102769634B1 (ko) 2017-04-27 2025-02-19 테사로, 인코포레이티드 림프구 활성화 유전자-3 (lag-3)에 대한 항체 작용제 및 그의 용도
US11203638B2 (en) 2017-05-05 2021-12-21 Allakos Inc. Methods and compositions for treating perennial allergic conjunctivitis and keratoconjunctivitis
SG10202107880XA (en) 2017-05-12 2021-09-29 Harpoon Therapeutics Inc Mesothelin binding proteins
US11091555B2 (en) 2017-05-16 2021-08-17 Five Prime Therapeutics, Inc. Method of treating gastric cancer with anti-FGFR2-IIIb antibodies and modified FOLFOX6 chemotherapy
WO2018237097A1 (en) 2017-06-20 2018-12-27 Amgen Inc. METHOD OF TREATING OR REDUCING METABOLIC DISORDERS USING GASTRIC INHIBITING PEPTIDE RECEPTOR BINDING PROTEINS (GIPR) IN ASSOCIATION WITH GLP-1 AGONISTS
AU2018304458B2 (en) 2017-07-21 2021-12-09 Foundation Medicine, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
AU2018308364C1 (en) 2017-07-26 2023-02-16 Forty Seven, LLC Anti-SIRP-alpha antibodies and related methods
JP2020528061A (ja) 2017-07-26 2020-09-17 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ＢＥＴ阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体を用いた併用療法
WO2019036855A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Adagene Inc. Anti-cd137 molecules and use thereof
WO2019059411A1 (en) 2017-09-20 2019-03-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha DOSAGE FOR POLYTHERAPY USING PD-1 AXIS BINDING ANTAGONISTS AND GPC3 TARGETING AGENT
US11180541B2 (en) 2017-09-28 2021-11-23 Geltor, Inc. Recombinant collagen and elastin molecules and uses thereof
EP3690050A4 (en) 2017-09-29 2021-06-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha MULTISPECIFIC ANTIGENBINDING MOLECULE WITH BLOOD CLOG FACTOR VIII (FVIII) COFACTOR FUNCTION SUBSTITUATING ACTIVITY AND PHARMACEUTICAL FORMULATION WITH THIS MOLECULE AS THE ACTIVE SUBSTANCE
US11952408B2 (en) 2017-10-03 2024-04-09 Juno Therapeutics, Inc. HPV-specific binding molecules
CA3198255A1 (en) 2017-10-10 2019-04-18 Alpine Immune Sciences, Inc. Ctla-4 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11912754B2 (en) 2017-10-12 2024-02-27 Immunowake Inc. VEGFR-antibody light chain fusion protein
PL3694529T3 (pl) 2017-10-13 2024-12-16 Harpoon Therapeutics, Inc. Trójswoiste białka i sposoby zastosowania
IL315737A (en) 2017-10-13 2024-11-01 Harpoon Therapeutics Inc B-cell maturation antigen-binding proteins
AU2018353533A1 (en) 2017-10-17 2020-05-28 Rhizen Pharmaceuticals Sa CRAC channel modulators for treating esophageal cancer
EA202090974A1 (ru) 2017-10-18 2020-08-05 Элпайн Иммьюн Сайенсиз, Инк. Вариантные иммуномодулирующие белки лиганда icos и сопутствующие композиции и способы
EP3697441B1 (en) 2017-10-20 2023-06-07 F. Hoffmann-La Roche AG Method for generating multispecific antibodies from monospecific antibodies
WO2019082124A1 (en) 2017-10-26 2019-05-02 Rhizen Pharmaceuticals Sa COMPOSITION AND METHOD FOR THE TREATMENT OF LARGE B-CELL DIFFUSED LYMPHOMA
BR112020008219A2 (pt) 2017-10-30 2020-10-27 Rhizen Pharmaceuticals Sa moduladores de canal de cálcio ativado por liberação de cálcio para tratar cânceres hematológicos e sólidos
BR112020007736A2 (pt) 2017-10-30 2020-10-20 F. Hoffmann-La Roche Ag composição e método de tratamento
WO2019089969A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen
JP7544597B2 (ja) 2017-11-06 2024-09-03 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんの診断及び療法
EP3710589A4 (en) 2017-11-14 2021-11-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha ANTI-C1S ANTIBODIES AND METHOD OF USING
TWI830711B (zh) 2017-12-01 2024-02-01 美商輝瑞大藥廠 抗cxcr5抗體及組合物及其用途
CN111770776A (zh) 2017-12-06 2020-10-13 瑞真药业公司 治疗外周t细胞淋巴瘤和皮肤t细胞淋巴瘤的组合物和方法
TW201934578A (zh) 2017-12-14 2019-09-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 治療方法
JP2021506260A (ja) 2017-12-15 2021-02-22 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 抗ｃｃｔ５結合分子およびその使用方法
MA51302A (fr) 2017-12-21 2021-03-31 Hoffmann La Roche Anticorps se liant à hla-a2/wt1
US20190211098A1 (en) 2017-12-22 2019-07-11 Genentech, Inc. Use of pilra binding agents for treatment of a disease
CA3087166A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to lilrb2
KR102845020B1 (ko) 2017-12-28 2025-08-12 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Pd-l1에 대한 항체 및 변이체
JP7369127B2 (ja) 2017-12-28 2023-10-25 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｔｉｇｉｔに対する単一ドメイン抗体及びその変異体
WO2019129677A1 (en) 2017-12-29 2019-07-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-vegf antibodies and methods of use
EP3724223A1 (en) 2018-01-02 2020-10-21 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
WO2019136179A1 (en) 2018-01-03 2019-07-11 Alpine Immune Sciences, Inc. Multi-domain immunomodulatory proteins and methods of use thereof
BR112020013679A2 (pt) 2018-01-04 2020-12-01 Iconic Therapeutics, Inc. anticorpos de fator antitecidual, conjugados anticorpo-fármaco e métodos relacionados
CN111886247A (zh) 2018-01-05 2020-11-03 Ac免疫有限公司 错折叠tdp-43结合分子
WO2019139987A1 (en) 2018-01-09 2019-07-18 Elstar Therapeutics, Inc. Calreticulin binding constructs and engineered t cells for the treatment of diseases
KR102839330B1 (ko) 2018-01-15 2025-07-30 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Pd-1에 대한 단일-도메인 항체 및 이의 변이체
US20200339686A1 (en) 2018-01-16 2020-10-29 Lakepharma, Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
ES2932861T3 (es) 2018-01-26 2023-01-27 Hoffmann La Roche Composiciones de IL-22 Fc y procedimientos de uso
MA51676A (fr) 2018-01-26 2021-05-05 Hoffmann La Roche Protéines de fusion il-22 fc et procédés d'utilisation
AU2019214183B2 (en) 2018-02-01 2022-04-07 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Fully human anti-B cell maturation antigen (BCMA) single chain variable fragment, and application thereof
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
CA3089287A1 (en) 2018-02-08 2019-08-15 Genentech, Inc. Bispecific antigen-binding molecules and methods of use
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
JP7418337B2 (ja) 2018-02-09 2024-01-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド マスト細胞媒介性炎症性疾患の治療法及び診断法
JP7350756B2 (ja) 2018-02-14 2023-09-26 アバ セラピューティクス アーゲー 抗ヒトｐｄ－ｌ２抗体
JP2021514354A (ja) 2018-02-21 2021-06-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＩＬ−２２Ｆｃ融合タンパク質による治療のための投与
WO2019165122A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
AU2019225249A1 (en) 2018-02-26 2020-09-17 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-PD-L1 antagonist antibodies
WO2019175071A1 (en) 2018-03-13 2019-09-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic combination of 4-1 bb agonists with anti-cd20 antibodies
WO2019178362A1 (en) 2018-03-14 2019-09-19 Elstar Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
EP3765522A4 (en) 2018-03-14 2022-05-18 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. ANTI-CLAUDIN 18.2 ANTIBODIES
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
IL277375B2 (en) 2018-03-15 2025-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-dengue virus antibodies having cross-reactivity to zika virus and methods of use
KR20200135510A (ko) 2018-03-29 2020-12-02 제넨테크, 인크. 포유류 세포들에서 젖분비자극 활성의 조절
US11958903B2 (en) 2018-03-30 2024-04-16 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies against LAG-3 and uses thereof
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
MX2020010460A (es) 2018-04-05 2021-01-29 Juno Therapeutics Inc Receptores de células t, y células diseñadas que expresan los mismos.
CN110612117B (zh) 2018-04-17 2024-04-12 分子模板公司 包含去免疫化的志贺毒素a亚基支架的her2靶向分子
AR114789A1 (es) 2018-04-18 2020-10-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos
AR115052A1 (es) 2018-04-18 2020-11-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos
CN110464842B (zh) 2018-05-11 2022-10-14 信达生物制药(苏州)有限公司 包含抗pcsk9抗体的制剂及其用途
JP7460609B2 (ja) 2018-05-14 2024-04-02 ウェアウルフ セラピューティクス， インコーポレイテッド 活性化可能なインターロイキン－２ポリペプチド及びその使用方法
EP3794022A1 (en) 2018-05-14 2021-03-24 Werewolf Therapeutics, Inc. Activatable cytokine polypeptides and methods of use thereof
US11987629B2 (en) 2018-06-01 2024-05-21 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and uses thereof for treating disease or condition
WO2019227490A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and methods for imaging
EP3805400A4 (en) 2018-06-04 2022-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule showing changed half-life in cytoplasm
TW202519270A (zh) 2018-06-07 2025-05-16 美商思進公司 喜樹鹼結合物
WO2019241758A1 (en) 2018-06-15 2019-12-19 Alpine Immune Sciences, Inc. Pd-1 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
WO2019245991A1 (en) 2018-06-18 2019-12-26 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs targeting prostate-specific membrane antigen (psma) and uses thereof
SG11202012446UA (en) 2018-06-23 2021-01-28 Genentech Inc Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor
AU2019297451A1 (en) 2018-07-03 2021-01-28 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
WO2020007817A1 (en) 2018-07-04 2020-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Novel bispecific agonistic 4-1bb antigen binding molecules
MX2021000349A (es) 2018-07-09 2021-05-14 Takeda Pharmaceuticals Co Administracion de un inhibidor de la enzima activadora de sumo y anticuerpos anti-cd20.
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
EP3823611A1 (en) 2018-07-18 2021-05-26 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, an antimetabolite, and a platinum agent
MX2021000745A (es) 2018-07-20 2021-03-26 Surface Oncology Inc Composiciones anti-cd112r y metodos.
MX2021000516A (es) 2018-08-01 2021-04-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Composicion farmaceutica para usarse en el tratamiento o prevencion de una enfermedad relacionada con c5 y metodo para tratar o prevenir una enfermedad relacionada con c5.
CA3106829A1 (en) 2018-08-03 2020-02-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule containing two antigen-binding domains that are linked to each other
US12172106B2 (en) 2018-08-09 2024-12-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing binding affinity of an antibody variant to the neonatal Fc receptor
SG10202106830VA (en) 2018-08-10 2021-08-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-cd137 antigen-binding molecule and utilization thereof
TW202021618A (zh) 2018-08-17 2020-06-16 美商２３與我有限公司 抗ｉｌ１ｒａｐ抗體及其使用方法
WO2020037258A1 (en) 2018-08-17 2020-02-20 Ab Studio Inc. Catabodies and methods of use thereof
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
CA3110750A1 (en) 2018-09-10 2020-03-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies against cd33 and constructs thereof
KR20210063330A (ko) 2018-09-19 2021-06-01 제넨테크, 인크. 방광암에 대한 치료 및 진단 방법
WO2020061376A2 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods and uses of variant cd80 fusion proteins and related constructs
AU2019342133B8 (en) 2018-09-21 2025-08-07 Genentech, Inc. Diagnostic methods for triple-negative breast cancer
US12195544B2 (en) 2018-09-21 2025-01-14 Harpoon Therapeutics, Inc. EGFR binding proteins and methods of use
CN113286817B (zh) 2018-09-25 2025-01-28 哈普恩治疗公司 Dll3结合蛋白及使用方法
EP3856764A4 (en) 2018-09-27 2022-11-02 Xilio Development, Inc. MASKED CYTOKINE POLYPEPTIDES
EP3861025A1 (en) 2018-10-01 2021-08-11 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antigen binding molecules with trivalent binding to cd40
US11242396B2 (en) 2018-10-01 2022-02-08 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific antigen binding molecules comprising anti-FAP clone 212
KR20210074286A (ko) 2018-10-05 2021-06-21 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 항-fgfr2 항체 제형
US20210388101A1 (en) 2018-10-15 2021-12-16 Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University Productivity-enhanced antibody and method for producing same
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
KR20210079311A (ko) 2018-10-18 2021-06-29 제넨테크, 인크. 육종성 신장암에 대한 진단과 치료 방법
RU2724469C2 (ru) 2018-10-31 2020-06-23 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Моноклональное антитело, которое специфически связывается с cd20
CA3117856A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Bayer Aktiengesellschaft Reversal agents for neutralizing the therapeutic activity of anti-fxia antibodies
AU2019375413A1 (en) 2018-11-05 2021-05-27 Genentech, Inc. Methods of producing two chain proteins in prokaryotic host cells
US12168696B2 (en) 2018-11-16 2024-12-17 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies to mucin-16 (MUC16), encoding polynucleotides and methods of treating MUC16-positive cancer
EP3902835A4 (en) 2018-11-27 2022-08-17 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. ANTIBODIES SPECIFICALLY RECOGNIZING GRANULOCYTE-MACROPHAGE COLONY-STIMULATING FACTOR RECEPTOR ALPHA AND USES THEREOF
JP7517999B2 (ja) 2018-11-27 2024-07-17 イノベント バイオロジックス （スウツォウ） カンパニー，リミテッド 抗ＩＬ－２３ｐ１９抗体およびその使用
CA3120868A1 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd86 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
JP7671248B2 (ja) 2018-12-05 2025-05-01 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんの免疫療法のための診断方法及び診断用組成物
KR20210100668A (ko) 2018-12-06 2021-08-17 제넨테크, 인크. 항-CD79b 면역접합체, 알킬화제 및 항-CD20 항체를 포함하는 미만성 큰 B-세포 림프종의 조합 요법
EP3894427A1 (en) 2018-12-10 2021-10-20 Genentech, Inc. Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins
TW202035442A (zh) 2018-12-20 2020-10-01 美商建南德克公司 經修飾之抗體Fc及其使用方法
AR117327A1 (es) 2018-12-20 2021-07-28 23Andme Inc Anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
WO2020132214A2 (en) 2018-12-20 2020-06-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof
JP7560459B2 (ja) 2018-12-21 2024-10-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド アポトーシスに耐性のある細胞株を使用してポリペプチドを生成する方法
CN113195531B (zh) 2018-12-21 2025-03-04 豪夫迈·罗氏有限公司 与VEGF和IL-1β结合的抗体及其使用方法
MX2021007307A (es) 2018-12-21 2021-07-07 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3.
AU2019405782A1 (en) 2018-12-21 2021-06-17 23Andme, Inc. Anti-IL-36 antibodies and methods of use thereof
CA3123050A1 (en) 2018-12-26 2020-07-02 City Of Hope Activatable masked anti-ctla4 binding proteins
JP7650802B2 (ja) 2018-12-30 2025-03-25 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 抗ウサギｃｄ１９抗体および使用方法
JP2022518399A (ja) 2019-01-14 2022-03-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｄ－１軸結合アンタゴニスト及びｒｎａワクチンを用いてがんを処置する方法
EP3911675A1 (en) 2019-01-17 2021-11-24 Bayer Aktiengesellschaft Methods to determine whether a subject is suitable of being treated with an agonist of soluble guanylyl cyclase (sgc)
BR112021014276A2 (pt) 2019-01-22 2021-09-28 Genentech, Inc. Anticorpos iga isolados, moléculas de fusão igg-iga isoladas, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, para tratar um indivíduo, para aumentar a expressão de dímeros, trímeros ou tetrâmeros, para aumentar a produção de polímeros, para aumentar a produção de dímeros, para aumentar a produção de um polímero, para diminuir a produção de polímeros, para aumentar a expressão transitória de um anticorpo, para expressar dímeros de moléculas de fusão, para expressar dímeros, trímeros ou tetrâmeros, para purificar um anticorpo, para purificar um estado oligomérico de um anticorpo, composição farmacêutica e uso do anticorpo
KR102794884B1 (ko) 2019-01-23 2025-04-15 제넨테크, 인크. 진핵 숙주 세포에서 다합체 단백질을 생산하는 방법
CN113795511B (zh) 2019-01-23 2024-07-23 大有华夏生物医药集团有限公司 抗pd-l1双抗体及其用途
EP3915581A4 (en) 2019-01-24 2023-03-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha NOVEL CANCER ANTIGENS AND ANTIBODIES OF THESE ANTIGENS
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
CA3123303A1 (en) 2019-01-29 2020-08-06 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1 (ror1)
AU2020224681A1 (en) 2019-02-21 2021-09-16 Marengo Therapeutics, Inc. Antibody molecules that bind to NKp30 and uses thereof
GB2599228B (en) 2019-02-21 2024-02-07 Marengo Therapeutics Inc Multifunctional molecules that bind to T cell related cancer cells and uses thereof
CN113710706A (zh) 2019-02-27 2021-11-26 豪夫迈·罗氏有限公司 用于抗tigit抗体和抗cd20抗体或抗cd38抗体治疗的给药
US12428477B2 (en) 2019-02-27 2025-09-30 Angiex, Inc. Antibody-drug conjugates comprising anti-TM4SF1 antibodies and methods of using the same
MX2021010565A (es) 2019-03-08 2021-10-13 Genentech Inc Metodos para detectar y cuantificar proteinas asociadas a la membrana en vesiculas extracelulares.
AU2020236015B9 (en) 2019-03-14 2024-11-28 Genentech, Inc. Treatment of cancer with HER2XCD3 bispecific antibodies in combination with anti-HER2 MAB
WO2020205716A1 (en) 2019-04-01 2020-10-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for stabilizing protein-containing formulations
SG11202111349QA (en) 2019-04-12 2021-11-29 Geltor Inc Recombinant elastin and production thereof
AU2020257238A1 (en) 2019-04-17 2021-12-02 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods and uses of variant ICOS Ligand (ICOSL) fusion proteins
US20220298231A1 (en) 2019-04-18 2022-09-22 Ac Immune Sa Novel Molecules for Therapy and Diagnosis
WO2020213724A1 (ja) 2019-04-19 2020-10-22 中外製薬株式会社 抗体改変部位認識キメラ受容体
TW202043291A (zh) 2019-04-19 2020-12-01 美商建南德克公司 抗mertk抗體及使用方法
US12269872B2 (en) 2019-05-03 2025-04-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to Plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
WO2020226986A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody
JP7754723B2 (ja) 2019-05-14 2025-10-15 ウェアウルフ セラピューティクス， インコーポレイテッド 分離部分及びその使用方法
EP3968993A1 (en) 2019-05-14 2022-03-23 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat follicular lymphoma
US20230085439A1 (en) 2019-05-21 2023-03-16 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use
PH12021552938A1 (en) 2019-05-23 2022-07-25 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
JP7082245B2 (ja) 2019-06-10 2022-06-07 中外製薬株式会社 サイトカイン阻害剤と組み合わせて使用するための抗ｔ細胞抗原結合分子
KR20220031054A (ko) 2019-07-02 2022-03-11 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 Egfrviii에 결합하는 단일클론 항체 및 이의 용도
WO2021004446A1 (en) 2019-07-09 2021-01-14 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing pseudomonas pcrv and uses thereof
US20220267452A1 (en) 2019-07-12 2022-08-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-mutation type fgfr3 antibody and use therefor
AR119382A1 (es) 2019-07-12 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos de pre-direccionamiento y métodos de uso
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
BR112022001460A2 (pt) 2019-07-31 2022-03-22 Hoffmann La Roche Moléculas de ligação ao antígeno biespecíficas, um ou mais polinucleotídeos isolados, célula hospedeira, método para produzir uma molécula de ligação ao antígeno biespecífica e para tratar uma doença em um indivíduo, composição farmacêutica, uso da molécula de ligação ao antígeno biespecífica e invenção
WO2021019036A1 (en) 2019-07-31 2021-02-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosage and administration regimen for the treatment or prevention of c5-related diseases by the use of the anti-c5 antibody crovalimab
CN114466660A (zh) 2019-07-31 2022-05-10 豪夫迈·罗氏有限公司 通过使用抗c5抗体可伐利单抗来治疗或预防c5相关疾病的剂量和施用方案
CN114174338A (zh) 2019-07-31 2022-03-11 豪夫迈·罗氏有限公司 与gprc5d结合的抗体
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
EP4007773A1 (en) 2019-08-06 2022-06-08 Aprinoia Therapeutics Limited Antibodies that bind to pathological tau species and uses thereof
KR20220062304A (ko) 2019-09-12 2022-05-16 제넨테크, 인크. 루푸스 신장염을 치료하는 조성물과 방법
WO2021047599A1 (en) * 2019-09-13 2021-03-18 Beijing Xuanyi Pharmasciences Co., Ltd. Humanized anti-claudin 18.2 (cldn18.2) antibodies
AR119997A1 (es) 2019-09-18 2022-01-26 Genentech Inc Anticuerpos anti-klk7, anticuerpos anti-klk5, anticuerpos multiespecíficos anti-klk5 / klk7 y métodos de uso
CA3147179A1 (en) 2019-09-20 2021-03-25 Joseph Haw-Ling Lin Dosing for anti-tryptase antibodies
MX2022003610A (es) 2019-09-27 2022-04-20 Genentech Inc Administracion de dosis para tratamiento con anticuerpos antagonistas anti-tigit y anti-pd-l1.
EP4034160A1 (en) 2019-09-27 2022-08-03 Janssen Biotech, Inc. Anti-ceacam antibodies and uses thereof
EP4025250A4 (en) * 2019-10-12 2024-01-17 Bio-Thera Solutions, Ltd. FORMULATION OF ANTI-CD20 ANTIBODIES AND USE OF ANTI-CD20 ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF CD20-POSITIVE DISEASES
CR20220166A (es) 2019-10-18 2022-06-15 Genentech Inc Métodos para usar inmunoconjugados anti-cd79b para tratar linfoma difuso de linfocitos b grandes
AU2020370110A1 (en) 2019-10-21 2022-05-26 Rhizen Pharmaceuticals Ag Compositions comprising a DHODH inhibitor for the treatment of acute myeloid leukemia
KR20220092580A (ko) 2019-11-06 2022-07-01 제넨테크, 인크. 혈액암의 치료를 위한 진단과 치료 방법
TWI895295B (zh) 2019-11-12 2025-09-01 美商方得生醫療公司 偵測編碼新生抗原之融合基因之方法
BR112022009110A2 (pt) 2019-11-14 2022-07-26 Werewolf Therapeutics Inc Polipeptídeos de citocina ativáveis e métodos de uso destes
KR20220110539A (ko) 2019-12-04 2022-08-08 에이씨 이뮨 에스에이 치료 및 진단용 신규 분자
CN115335399A (zh) 2019-12-06 2022-11-11 朱诺治疗学股份有限公司 针对gprc5d靶结合结构域的抗独特型抗体以及相关组合物和方法
US20230028050A1 (en) 2019-12-06 2023-01-26 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to bcma-targeted binding domains and related compositions and methods
AR120741A1 (es) 2019-12-13 2022-03-16 Genentech Inc Anticuerpos anti-ly6g6d y métodos de uso
EP4076666A1 (en) 2019-12-18 2022-10-26 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies binding to hla-a2/mage-a4
CN113045655A (zh) 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
UA128549C2 (uk) 2019-12-27 2024-08-07 Чугаі Сейяку Кабусікі Кайся Антитіло до ctla-4 та його застосування
JP2023509708A (ja) 2020-01-03 2023-03-09 マレンゴ・セラピューティクス，インコーポレーテッド 抗ｔｃｒ抗体分子およびその使用
EP4087607A1 (en) 2020-01-06 2022-11-16 Vaccinex, Inc. Anti-ccr8 antibodies and uses thereof
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
CA3165319A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Vincent K. Tuohy Anti-mullerian hormone receptor 2 antibodies and methods of use
WO2021155149A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Genentech, Inc. Methods of inducing neoepitope-specific t cells with a pd-1 axis binding antagonist and an rna vaccine
TWI895351B (zh) 2020-02-12 2025-09-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
TWI832035B (zh) 2020-02-14 2024-02-11 美商基利科學股份有限公司 結合ccr8之抗體及融合蛋白及其用途
EP4093762A1 (en) 2020-02-20 2022-11-30 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Epstein-barr virus monoclonal antibodies and uses thereof
KR20220145859A (ko) 2020-02-28 2022-10-31 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항cd137 작제물, 다중 특이적 항체 및 그 용도
JP7715722B2 (ja) 2020-02-28 2025-07-30 上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司 抗ｃｄ１３７コンストラクト及びその使用
AU2021232158A1 (en) 2020-03-06 2022-09-29 Ona Therapeutics, S.L. Anti-CD36 antibodies and their use to treat cancer
PH12022552371A1 (en) 2020-03-13 2023-12-18 Genentech Inc Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
WO2021188749A1 (en) 2020-03-19 2021-09-23 Genentech, Inc. Isoform-selective anti-tgf-beta antibodies and methods of use
KR20220157445A (ko) 2020-03-24 2022-11-29 제넨테크, 인크. Tie2-결합제 및 사용방법
CA3169908A1 (en) 2020-03-26 2021-09-30 Genentech, Inc. Modified mammalian cells having reduced host cell proteins
EP4126940A1 (en) 2020-03-30 2023-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody that binds to vegf and pdgf-b and methods of use
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
EP4127724A1 (en) 2020-04-03 2023-02-08 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
US20230265204A1 (en) 2020-04-24 2023-08-24 Hoffmann-La Roche Inc. Enzyme and pathway modulation with sulfhydryl compounds and their derivatives
BR112022021441A2 (pt) 2020-04-24 2022-12-13 Genentech Inc Métodos para tratar linfoma folicular e linfoma difuso de grandes células b e kits
KR20230004520A (ko) 2020-04-27 2023-01-06 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 지단백(ａ)에 대한 이소형-비의존성 항체
EP4143345A1 (en) 2020-04-28 2023-03-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy
EP4146283A1 (en) 2020-05-03 2023-03-15 Levena (Suzhou) Biopharma Co., Ltd. Antibody-drug conjugates (adcs) comprising an anti-trop-2 antibody, compositions comprising such adcs, as well as methods of making and using the same
PE20230494A1 (es) 2020-05-08 2023-03-23 Alpine Immune Sciences Inc Proteinas inmunomoduladoras inhibidoras de april y baff y metodos de uso de las mismas
EP4559477A3 (en) 2020-05-13 2025-08-13 Adagene AG Compositions and methods for treating cancer
EP4157881A4 (en) 2020-05-27 2024-10-09 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. ANTIBODIES THAT SPECIFICALLY RECOGNIZE NERVE GROWTH FACTOR AND THEIR USES
CN116323665A (zh) 2020-05-29 2023-06-23 23和我公司 抗cd200r1抗体及其使用方法
WO2021247769A1 (en) 2020-06-02 2021-12-09 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-cd93 constructs and uses thereof
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
IL298302A (en) 2020-06-08 2023-01-01 Hoffmann La Roche Anti-hbv antibodies and methods of use
EP4165415A1 (en) 2020-06-12 2023-04-19 Genentech, Inc. Methods and compositions for cancer immunotherapy
WO2021257503A1 (en) 2020-06-16 2021-12-23 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating triple-negative breast cancer
BR112022025801A2 (pt) 2020-06-18 2023-10-03 Hoffmann La Roche Métodos para tratar um paciente e para tratar um paciente com escc avançado, kit, anticorpo, uso de um anticorpo e uso de um antagonista de ligação
PE20231080A1 (es) 2020-06-19 2023-07-17 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y cd19
WO2021255142A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2021255143A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and folr1
WO2021255146A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cea
US20230235056A1 (en) 2020-06-19 2023-07-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-t cell antigen-binding molecule for use in combination with angiogenesis inhibitor
US20230235040A1 (en) 2020-06-22 2023-07-27 Almirall, S.A. Anti-il-36 antibodies and methods of use thereof
EP4169948A4 (en) 2020-06-22 2024-07-10 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. ANTI-CD73 ANTIBODIES AND USE THEREOF
IL299161A (en) 2020-06-24 2023-02-01 Genentech Inc Cell lines resistant to apoptosis
KR20230035576A (ko) 2020-07-07 2023-03-14 비온테크 에스이 Hpv 양성 암 치료용 rna
IL298921A (en) 2020-07-10 2023-02-01 Hoffmann La Roche Antibodies which bind to cancer cells and target radionuclides to said cells
MX2023000617A (es) 2020-07-17 2023-02-13 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch2 y metodos de uso.
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
AU2021315665A1 (en) 2020-07-29 2023-03-16 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-CD93 constructs and uses thereof
WO2022031749A1 (en) 2020-08-03 2022-02-10 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for lymphoma
WO2022029660A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to ror1-targeted binding domains and related compositions and methods
MX2023001441A (es) 2020-08-07 2023-03-06 Genentech Inc Proteinas de fusion del ligando para flt3 y metodos de uso.
CN111759732B (zh) * 2020-08-12 2024-12-06 河南省人民医院 一种用于外周血造血干细胞冻存的多通道连接管路及方法
WO2022036129A1 (en) 2020-08-14 2022-02-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods for treating multiple sclerosis with ocrelizumab
WO2022034228A1 (en) 2020-08-14 2022-02-17 Ac Immune Sa Humanized anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
WO2022043517A2 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Cureab Gmbh Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
WO2022047316A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Sana Biotechnology, Inc. Modified anti-viral binding agents
TW202227625A (zh) 2020-08-28 2022-07-16 美商建南德克公司 宿主細胞蛋白質之ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９多重剔除
MX2023002496A (es) 2020-09-04 2023-03-09 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une al factor de crecimiento endotelial vascular a (vegf-a) y a la angiopoyetina 2 (ang2) y metodos de uso.
IL301269A (en) 2020-09-14 2023-05-01 Ichnos Sciences S A Antibodies that bind to IL1RAP and their uses
US20240010750A1 (en) 2020-09-15 2024-01-11 Bayer Aktiengesellschaft Novel anti-a2ap antibodies and uses thereof
JP7641667B2 (ja) 2020-09-28 2025-03-07 アンジティア バイオメディスンズ リミテッド 抗スクレロスチン構築体及びその使用
US11795228B2 (en) 2020-09-30 2023-10-24 Dren Bio, Inc. Anti-CD94 antibodies and methods of use thereof
WO2022076462A1 (en) 2020-10-05 2022-04-14 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
JP2023545057A (ja) 2020-10-07 2023-10-26 ドレン バイオ， インコーポレイテッド 抗デクチン－１抗体及びその使用方法
US20250320283A1 (en) 2020-10-16 2025-10-16 Ac Immune Sa Antibodies Binding to Alpha-Synuclein for Therapy and Diagnosis
IL300024A (en) 2020-10-20 2023-03-01 Hoffmann La Roche Combination therapy of PD-1 axis binding antagonists and LRRK2 inhibitors
WO2022086957A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Genentech, Inc. Peg-conjugated anti-mertk antibodies and methods of use
CA3192306A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Burkhard Ludewig Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to gremlin-1 and uses thereof
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
IL302217A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-CD20/anti-CD3 antibodies and anti-CD79B drug antibody conjugates
JP7716473B2 (ja) 2020-11-04 2025-07-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体の皮下投薬
IL302396A (en) 2020-11-04 2023-06-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-CD20/anti-CD3 antibodies
US20220143026A1 (en) 2020-11-12 2022-05-12 Tg Therapeutics, Inc. Triple combination to treat b-cell malignancies
CA3196844A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Raphael Rozenfeld Tumor-specific cleavable linkers
IL303294A (en) 2020-12-07 2023-07-01 UCB Biopharma SRL Antibodies against interleukin-22
AU2021395729A1 (en) 2020-12-07 2023-07-13 UCB Biopharma SRL Multi-specific antibodies and antibody combinations
TW202237638A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
TW202237639A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 鳥苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
WO2022132904A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2
IL303656A (en) 2020-12-17 2023-08-01 Hoffmann La Roche Anti-hla-g antibodies and use thereof
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022140797A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Immunowake Inc. Immunocytokines and uses thereof
WO2022135467A1 (zh) 2020-12-23 2022-06-30 信达生物制药(苏州)有限公司 抗b7-h3抗体及其用途
AU2022206061A1 (en) 2021-01-06 2023-07-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy employing a pd1-lag3 bispecific antibody and a cd20 t cell bispecific antibody
CN116829593A (zh) 2021-01-12 2023-09-29 豪夫迈·罗氏有限公司 与癌细胞结合并将放射性核素靶向所述细胞的分裂抗体
EP4277668A1 (en) 2021-01-13 2023-11-22 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy
WO2022162201A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
WO2022162203A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
JP2024509695A (ja) 2021-02-03 2024-03-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド 多重特異性結合タンパク質分解プラットフォームおよび使用方法
CA3209479A1 (en) 2021-02-03 2022-08-11 Mozart Therapeutics, Inc. Binding agents and methods of using the same
JP2024506315A (ja) 2021-02-09 2024-02-13 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ アズ リプリゼンテッド バイ ザ セクレタリー、デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ コロナウイルスのスパイクタンパク質を標的とする抗体
WO2022173689A1 (en) 2021-02-09 2022-08-18 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Human monoclonal antibodies against pneumococcal antigens
KR20230146032A (ko) 2021-02-15 2023-10-18 다케다 야쿠힌 고교 가부시키가이샤 Tgf-b 신호전달을 조절하기 위한 세포 치료 조성물 및 방법
AU2022225064A1 (en) 2021-02-26 2023-08-10 Bayer Aktiengesellschaft Inhibitors of il-11 or il-11ra for use in the treatment of abnormal uterine bleeding
WO2022187270A1 (en) 2021-03-01 2022-09-09 Xilio Development, Inc. Combination of ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
WO2022187272A1 (en) 2021-03-01 2022-09-09 Xilio Development, Inc. Combination of masked ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
CA3210069A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Tong Zhu Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody
EP4301472A1 (en) 2021-03-05 2024-01-10 Dynamicure Biotechnology LLC Anti-vista constructs and uses thereof
US20240392004A1 (en) 2021-03-10 2024-11-28 Immunowake Inc. Immunomodulatory molecules and uses thereof
WO2022192647A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Genentech, Inc. Anti-klk7 antibodies, anti-klk5 antibodies, multispecific anti-klk5/klk7 antibodies, and methods of use
KR20230156373A (ko) 2021-03-15 2023-11-14 제넨테크, 인크. 루푸스 신염의 치료 조성물 및 치료 방법
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
JP2024511424A (ja) 2021-03-25 2024-03-13 ダイナミキュア バイオテクノロジー エルエルシー 抗ｉｇｆｂｐ７構築物およびその使用
EP4314047A1 (en) 2021-03-30 2024-02-07 Bayer Aktiengesellschaft Anti-sema3a antibodies and uses thereof
AU2022253902A1 (en) 2021-04-10 2023-11-02 Genmab A/S Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
AR125344A1 (es) 2021-04-15 2023-07-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-c1s
WO2022225880A1 (en) 2021-04-19 2022-10-27 Genentech, Inc. Modified mammalian cells
WO2022223651A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Prevention or mitigation of nk cell engaging agent-related adverse effects
TW202308699A (zh) 2021-04-23 2023-03-01 美商普方生物製藥美國公司 Ｃｄ７０結合劑、其結合物及其使用方法
EP4329800A1 (en) 2021-04-30 2024-03-06 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody
TW202243689A (zh) 2021-04-30 2022-11-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３雙特異性抗體及抗ｃｄ７８ｂ抗體藥物結合物的組合治療之給藥
CA3218933A1 (en) 2021-05-03 2022-11-10 UCB Biopharma SRL Antibodies
IL308336A (en) 2021-05-07 2024-01-01 Alpine Immune Sciences Inc Methods of dosing and treatment with TACI-FC modulatory fusion protein
JP2024518410A (ja) 2021-05-07 2024-05-01 ビエラ バイオ インコーポレイテッド 重症筋無力症を治療するための抗ｃｄ１９抗体の使用
AU2022273063A1 (en) 2021-05-12 2023-11-23 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
AU2022273541A1 (en) 2021-05-14 2023-11-30 Genentech, Inc. Methods for treatment of cd20-positive proliferative disorder with mosunetuzumab and polatuzumab vedotin
EP4337317A1 (en) 2021-05-14 2024-03-20 Genentech, Inc. Agonists of trem2
KR20240010020A (ko) * 2021-05-18 2024-01-23 크리스티안-알브레히츠-우니버지태트 추 킬 공동-자극 다중 특이성 항체
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
WO2022246259A1 (en) 2021-05-21 2022-11-24 Genentech, Inc. Modified cells for the production of a recombinant product of interest
EP4155321A1 (en) 2021-06-04 2023-03-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ddr2 antibodies and uses thereof
IL308015A (en) 2021-06-09 2023-12-01 Hoffmann La Roche Combination of a particular braf inhibitor (paradox breaker) and a pd-1 axis binding antagonist for use in the treatment of cancer
CN114990128A (zh) * 2021-06-16 2022-09-02 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 Cd20基因人源化非人动物的构建方法及应用
EP4355785A1 (en) 2021-06-17 2024-04-24 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-cd3 constructs and uses thereof
US20240279321A1 (en) 2021-06-18 2024-08-22 Therini Bio, Inc. ANTIBODIES WHICH BIND HUMAN FIBRIN OR FIBRINOGEN yC DOMAIN AND METHODS OF USE
TWI864408B (zh) 2021-06-25 2024-12-01 日商中外製藥股份有限公司 抗ctla-4抗體的用途
JP7472405B2 (ja) 2021-06-25 2024-04-22 中外製薬株式会社 抗ｃｔｌａ－４抗体
KR20240028452A (ko) 2021-07-02 2024-03-05 제넨테크, 인크. 암을 치료하기 위한 방법 및 조성물
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
US20250011448A1 (en) 2021-07-08 2025-01-09 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing tnfr2 and uses thereof
JP2024530402A (ja) 2021-07-12 2024-08-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体－リパーゼ結合を減少させるための構造
AU2022312698A1 (en) 2021-07-13 2024-01-25 BioNTech SE Multispecific binding agents against cd40 and cd137 in combination therapy for cancer
TW202309097A (zh) 2021-07-14 2023-03-01 美商建南德克公司 抗ｃ－ｃ模體趨化因子受體８（ｃｃｒ８）抗體及其使用方法
US20240343817A1 (en) 2021-07-14 2024-10-17 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibody that specifically recognizes cd40 and application thereof
JP2024526880A (ja) 2021-07-22 2024-07-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド 脳標的化組成物及びその使用方法
KR20240036570A (ko) 2021-07-22 2024-03-20 에프. 호프만-라 로슈 아게 이종이량체 Fc 도메인 항체
AU2022317820A1 (en) 2021-07-28 2023-12-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating cancer
EP4377344A1 (en) 2021-07-30 2024-06-05 Ona Therapeutics S.L. Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer
WO2023011338A1 (zh) 2021-08-02 2023-02-09 信达生物制药(苏州)有限公司 抗CD79b×CD3双特异性抗体及其用途
US20250215103A1 (en) 2021-08-03 2025-07-03 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific antibodies and methods of use
US20240336697A1 (en) 2021-08-07 2024-10-10 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
WO2023019239A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
JP2024534067A (ja) 2021-08-19 2024-09-18 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 多価抗バリアントｆｃ領域抗体および使用方法
GB202111905D0 (en) 2021-08-19 2021-10-06 UCB Biopharma SRL Antibodies
MX2024002281A (es) 2021-08-23 2024-05-20 Immunitas Therapeutics Inc Anticuerpos anti-cd161 y usos de los mismos.
MX2024002295A (es) 2021-08-27 2024-03-07 Genentech Inc Metodos para tratar las patologias de tau.
JP2024534853A (ja) 2021-08-30 2024-09-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ポリビキチン多重特異性抗体
CA3232223A1 (en) 2021-09-17 2023-03-23 Ying Fu Synthetic humanized llama nanobody library and use thereof to identify sars-cov-2 neutralizing antibodies
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
WO2023056069A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Angiex, Inc. Degrader-antibody conjugates and methods of using same
MX2024004117A (es) 2021-10-08 2024-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Metodo para preparar formulacion de jeringa precargada.
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
WO2023076876A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Mozart Therapeutics, Inc. Modulation of immune responses to viral vectors
CA3236417A1 (en) 2021-11-05 2023-05-11 American Diagnostics & Therapy, Llc (Adxrx) Monoclonal antibodies against carcinoembryonic antigens, and their uses
EP4430072A1 (en) 2021-11-10 2024-09-18 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
AU2022389969A1 (en) 2021-11-16 2024-05-02 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating systemic lupus erythematosus (sle) with mosunetuzumab
JP2024544997A (ja) 2021-11-16 2024-12-05 エイシー イミューン ソシエテ アノニム 治療および診断のための新規分子
EP4437006A1 (en) 2021-11-26 2024-10-02 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy of anti-tyrp1/anti-cd3 bispecific antibodies and tyrp1-specific antibodies
EP4445911A4 (en) 2021-12-06 2025-10-22 Beijing Solobio Genetechnology Co Ltd BISPECIFIC ANTIBODY THAT BINDS SPECIFICALLY TO KLEBSIELLA PNEUMONIAE O1 AND O2 ANTIGENS AND COMPOSITION
AR127887A1 (es) 2021-12-10 2024-03-06 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y plap
WO2023114829A1 (en) 2021-12-15 2023-06-22 Genentech, Inc. Stabilized il-18 polypeptides and uses thereof
JP2025501522A (ja) 2021-12-17 2025-01-22 シャンハイ・ヘンリウス・バイオテック・インコーポレイテッド 抗ｏｘ４０抗体及び使用方法
CA3240585A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Wenfeng Xu Anti-ox40 antibodies, multispecific antibodies and methods of use
CR20240246A (es) 2021-12-20 2024-07-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos agonistas anti-ltbr y anticuerpos biespecificos que los comprenden
UY40097A (es) 2022-01-07 2023-07-14 Johnson & Johnson Entpr Innovation Inc Materiales y métodos de proteínas de unión a il-1b
TW202340251A (zh) 2022-01-19 2023-10-16 美商建南德克公司 抗ｎｏｔｃｈ２抗體及結合物及其使用方法
US20250115675A1 (en) * 2022-02-08 2025-04-10 Amgen Inc. Codon-optimized nucleic acids encoding ocrelizumab
CN118984836A (zh) 2022-02-10 2024-11-19 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 广泛靶向冠状病毒的人单克隆抗体
IL315043A (en) 2022-02-16 2024-10-01 Ac Immune Sa Humanized anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
WO2023159182A1 (en) 2022-02-18 2023-08-24 Rakuten Medical, Inc. Anti-programmed death-ligand 1 (pd-l1) antibody molecules, encoding polynucleotides, and methods of use
EP4490173A1 (en) 2022-03-07 2025-01-15 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins of variant cd80 polypeptides, cell therapies thereof and related methods and uses
CA3245693A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Vivasor, Inc. ANTIBODY-DRUG CONJUGATIONS AND THEIR USES
CA3254549A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Evolveimmune Therapeutics, Inc. BISPECIFIC ANTIBODY FUSION MOLECULES AND THEIR METHODS OF USE
MX2024011468A (es) 2022-03-23 2024-09-25 Hoffmann La Roche Tratamiento conjunto de un anticuerpo biespecifico anti-cd20/anti-cd3 y quimioterapia.
JP2025514610A (ja) 2022-03-25 2025-05-09 シャンハイ・ヘンリウス・バイオテック・インコーポレイテッド 抗ｍｓｌｎ抗体及び使用方法
EP4499227A1 (en) 2022-03-26 2025-02-05 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Bispecific antibodies to hiv-1 env and their use
EP4499228A1 (en) 2022-03-28 2025-02-05 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
WO2023186756A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Interferon gamma variants and antigen binding molecules comprising these
AU2022450448A1 (en) 2022-04-01 2024-10-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
CN119156401A (zh) 2022-04-08 2024-12-17 Ac免疫有限公司 抗tdp-43结合分子
AU2023253705A1 (en) 2022-04-13 2024-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical compositions of therapeutic proteins and methods of use
EP4508081A1 (en) 2022-04-13 2025-02-19 F. Hoffmann-La Roche AG Pharmaceutical compositions of anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and methods of use
CA3243581A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Kantonsspital St. Gallen ANTIBODIES OR ANTIGEN-BINDING FRAGMENTS THAT BIND PANSPECIFICALLY TO GREMLIN-1 AND GREMLIN-2 AND RELATED USES
KR20250006932A (ko) 2022-05-03 2025-01-13 제넨테크, 인크. 항-Ly6E 항체, 면역접합체 및 이들의 용도
CN119487065A (zh) 2022-05-09 2025-02-18 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别gdf15的抗体及其应用
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
AR129268A1 (es) 2022-05-11 2024-08-07 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a e il6 y métodos de uso
WO2023235699A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to lilrb4 and uses thereof
US11814439B1 (en) 2022-06-01 2023-11-14 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
US11807689B1 (en) 2022-06-01 2023-11-07 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
US11884740B1 (en) 2022-06-01 2024-01-30 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
US11965032B1 (en) 2022-06-01 2024-04-23 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
AU2023284422A1 (en) 2022-06-07 2024-12-19 Genentech, Inc. Method for determining the efficacy of a lung cancer treatment comprising an anti-pd-l1 antagonist and an anti-tigit antagonist antibody
US20250382354A1 (en) 2022-06-08 2025-12-18 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
EP4536290A1 (en) 2022-06-08 2025-04-16 Angiex, Inc. Anti-tm4sf1 antibody-drug conjugates comprising cleavable linkers and methods of using same
AU2023305619A1 (en) 2022-07-13 2025-01-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
EP4558226A1 (en) 2022-07-19 2025-05-28 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing b- and t-lymphocyte attenuator (btla) and uses thereof
EP4558524A1 (en) 2022-07-19 2025-05-28 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
CR20250056A (es) 2022-07-22 2025-03-19 Genentech Inc Moléculas de unión al antígeno anti-steap1 y sus usos.
EP4565329A1 (en) 2022-08-01 2025-06-11 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase
WO2024030956A2 (en) 2022-08-03 2024-02-08 Mozart Therapeutics, Inc. Cd39-specific binding agents and methods of using the same
CN120077064A (zh) 2022-08-05 2025-05-30 詹森生物科技公司 用于治疗脑肿瘤的转铁蛋白受体结合蛋白
JP2025525969A (ja) 2022-08-05 2025-08-07 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 脳腫瘍を治療するためのｃｄ９８結合構築物
IL318702A (en) 2022-08-19 2025-03-01 Evive Biotechnology Shanghai Ltd Compositions containing G-CSF and their uses
WO2024044550A1 (en) 2022-08-22 2024-02-29 Abdera Therapeutics Inc. Dll3 binding molecules and uses thereof
CN120435310A (zh) 2022-08-26 2025-08-05 朱诺治疗学股份有限公司 对δ样配体3（DLL3）具有特异性的抗体和嵌合抗原受体
CN120153254A (zh) 2022-09-01 2025-06-13 基因泰克公司 膀胱癌的治疗和诊断方法
WO2024054822A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth
JP2025531788A (ja) 2022-09-07 2025-09-25 ダイナミキュア バイオテクノロジー エルエルシー 抗ｖｉｓｔａコンストラクト及びその使用
WO2024064826A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
WO2024067344A1 (zh) 2022-09-27 2024-04-04 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别light的抗体及其应用
JP2025535041A (ja) 2022-10-04 2025-10-22 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド 自己抗体介在疾患の治療における使用のための変異ｔａｃｉ－ｆｃ融合タンパク質
IL319943A (en) 2022-10-07 2025-05-01 Genentech Inc Methods for treating cancer with anti-C motif chemokine receptor 8 (CCR8) antibodies
AU2023365967A1 (en) 2022-10-20 2025-06-05 Beijing Solobio Genetechnology Co., Ltd. Antibody combination specifically binding to trail or fasl, and bispecific antibody
EP4609201A1 (en) 2022-10-25 2025-09-03 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma
WO2024094741A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with anti-cd19/anti-cd28 bispecific antibody
CN120051301A (zh) 2022-11-04 2025-05-27 吉利德科学公司 使用抗ccr8抗体、化学疗法和免疫疗法组合的抗癌疗法
IL320029A (en) 2022-11-08 2025-06-01 Genentech Inc Compositions and methods for treating childhood idiopathic nephrotic syndrome
KR20250091217A (ko) 2022-11-09 2025-06-20 씨아이에스 바이오파마 아게 항-l1-cam 항체 및 진단 및 치료 응용분야를 위한 이의 용도
WO2024100170A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a*02/foxp3
CN120417937A (zh) 2022-11-17 2025-08-01 赛诺菲 Ceacam5抗体-药物缀合物及其使用方法
TW202436348A (zh) 2022-11-25 2024-09-16 日商中外製藥股份有限公司 蛋白質的製造方法
CN119998314A (zh) 2022-12-08 2025-05-13 长春百克生物科技股份公司 特异性结合rsv的抗体
CN120418289A (zh) 2022-12-14 2025-08-01 安斯泰来制药欧洲有限公司 结合cldn18.2和cd3的双特异性结合剂与免疫检查点抑制剂的联合疗法
EP4638491A1 (en) 2022-12-19 2025-10-29 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Monoclonal antibodies for treating sars-cov-2 infection
WO2024145398A1 (en) 2022-12-27 2024-07-04 Yale University Antibody drug conjugates
PE20252286A1 (es) 2023-01-18 2025-09-18 Genentech Inc Anticuerpos multiespecificos y usos de estos
EP4655007A1 (en) 2023-01-23 2025-12-03 Yale University Antibody oligonucleotide conjugates
CN120569410A (zh) 2023-01-25 2025-08-29 豪夫迈·罗氏有限公司 与csf1r和cd3结合的抗体
WO2024163494A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating non-small cell lung cancer and triple-negative breast cancer
WO2024163009A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating urothelial bladder cancer
WO2024173607A2 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Combination of bispecific antibodies and chimeric antigen receptor t cells for treatment
AR131869A1 (es) 2023-02-17 2025-05-07 Ablynx Nv POLIPÉPTIDOS QUE SE UNEN AL RECEPTOR DE Fc NEONATAL
WO2024184494A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
CN120858109A (zh) 2023-03-10 2025-10-28 基因泰克公司 与蛋白酶的融合物及其用途
CN120835901A (zh) 2023-03-13 2025-10-24 豪夫迈·罗氏有限公司 采用pd1-lag3双特异性抗体和hla-g t细胞双特异性抗体的组合疗法
WO2024197302A1 (en) 2023-03-23 2024-09-26 Yale University Compositions and methods for delivering antibody oligonucleotide conjugates for exon skipping
CN120936626A (zh) 2023-03-31 2025-11-11 基因泰克公司 抗αvβ8整合素抗体及使用方法
WO2024211234A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024211235A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024211236A2 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
AU2024251934A1 (en) 2023-04-12 2025-10-30 Shanghai Kangabio Co., Limited Multifunctional molecules comprising masked interleukin 12 and methods of use
WO2024220546A2 (en) 2023-04-17 2024-10-24 Peak Bio, Inc. Antibodies and antibody-drug conjugates and methods of use and synthetic processes and intermediates
WO2024219442A1 (ja) 2023-04-19 2024-10-24 第一三共株式会社 抗体－薬物コンジュゲートと他の薬剤との組み合わせ
WO2024233341A1 (en) 2023-05-05 2024-11-14 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
AU2024269754A1 (en) 2023-05-08 2025-10-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Targeted interferon alpha fusion proteins and methods of use
AU2024268933A1 (en) 2023-05-10 2025-11-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods and compositions for treating cancer
WO2024238537A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Pd-1 -regulated il-2 immunocytokine and uses thereof
AU2024275646A1 (en) 2023-05-24 2025-11-13 Mozart Therapeutics, Inc. Cd8-specific binding proteins and methods of using the same
WO2024243355A1 (en) 2023-05-24 2024-11-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies that target the rh5 complex of blood-stage plasmodium falciparum
WO2024246356A1 (en) 2023-06-01 2024-12-05 Pierre Fabre Medicament Silenced antibody-based anti-met constructs for the treatment of tumors and metastasis
WO2024254455A1 (en) 2023-06-08 2024-12-12 Genentech, Inc. Macrophage signatures for diagnostic and therapeutic methods for lymphoma
WO2024263845A1 (en) 2023-06-22 2024-12-26 Genentech, Inc. Treatment of multiple myeloma
TW202502809A (zh) 2023-06-22 2025-01-16 美商建南德克公司 抗體及其用途
WO2024263195A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
WO2024263904A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
WO2025002410A1 (en) 2023-06-30 2025-01-02 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd G-csf dimer for use in the treatment or prevention of chemotherapy or radiotherapy induced neutropenia
WO2025014896A1 (en) 2023-07-07 2025-01-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Humanized 40h3 antibody
WO2025015081A1 (en) 2023-07-11 2025-01-16 Genentech, Inc. Compositions and methods for treating multiple sclerosis
WO2025024233A1 (en) 2023-07-21 2025-01-30 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bispecific antibodies that broadly target coronaviruses
WO2025021838A1 (en) 2023-07-26 2025-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2025027052A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Sixpeaks Bio Ag Antibody conjugates and fusion proteins
WO2025034806A1 (en) 2023-08-08 2025-02-13 Wisconsin Alumni Research Foundation Single-domain antibodies and variants thereof against fibroblast activation protein
WO2025032071A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
WO2025032069A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
WO2025032070A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-a-beta protein antibodies, methods and uses thereof
WO2025038492A1 (en) 2023-08-11 2025-02-20 Abalytics Oncology, Inc. Anti-ctla-4 antibodies and related binding molecules and methods and uses thereof
WO2025049905A1 (en) 2023-09-01 2025-03-06 Gennao Bio, Inc. Dnase co-expression in host cells
WO2025045250A1 (en) 2023-09-03 2025-03-06 Kira Pharmaceuticals (Us) Llc Anti-human factor d antibody constructs and uses thereof
WO2025054500A2 (en) 2023-09-08 2025-03-13 Mlab Biosciences, Inc. Bifunctional proteins and uses thereof
WO2025059037A1 (en) 2023-09-11 2025-03-20 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules targeting b7-h4 and cd3 and methods of use thereof
WO2025064539A1 (en) 2023-09-19 2025-03-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Herv-e antibodies and methods of their use
WO2025064890A1 (en) 2023-09-20 2025-03-27 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules targeting cd180 and cd3 and methods of use thereof
WO2025064885A1 (en) 2023-09-20 2025-03-27 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Multispecific antibodies that bind cd3 and cd2 and methods of use thereof
AR133909A1 (es) 2023-09-25 2025-11-12 Hoffmann La Roche ANTICUERPO QUE SE UNE A C3bBb
AR133955A1 (es) 2023-09-26 2025-11-19 Profoundbio Us Co Agentes de unión a ptk7, conjugados de éstos y métodos de uso de los mismos
TW202517674A (zh) 2023-10-19 2025-05-01 德商拜耳廠股份有限公司 抗gpc3抗體及其放射性結合物
WO2025099120A1 (en) 2023-11-09 2025-05-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies with conditional activity
WO2025106427A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing and protective monoclonal antibodies against respiratory syncytial virus (rsv)
WO2025106474A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for treating cancer with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2025111402A1 (en) 2023-11-21 2025-05-30 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Anti-amyloid beta antibodies and related compositions and methods thereof
TW202535955A (zh) 2023-11-27 2025-09-16 丹麥商珍美寶股份有限公司 用於ｐｔｋ７檢測之抗體及方法
WO2025117516A1 (en) 2023-11-30 2025-06-05 Genzyme Corporation Methods for treating cd20-related disorders
WO2025117384A1 (en) 2023-12-01 2025-06-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Broadly neutralizing influenza hemagglutinin stem-directed antibodies
WO2025120866A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
WO2025120867A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and anti-vegfr2 antibodies
WO2025121445A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
WO2025125118A1 (en) 2023-12-11 2025-06-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Protease activatable fc domain binding molecules
WO2025125386A1 (en) 2023-12-14 2025-06-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that bind to folr1 and methods of use
WO2025137410A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 Apogee Therapeutics, Inc. Pharmaceutical compositions of anti-il-13 antibodies with and without c-terminal lysine
US20250230251A1 (en) 2023-12-20 2025-07-17 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies targeting il-18 receptor beta (il-18rb) and related methods
WO2025132503A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to ceacam5
WO2025137523A2 (en) 2023-12-20 2025-06-26 Apogee Therapeutics, Inc. Pharmaceutical formulations of antibodies that bind interleukin 13
WO2025137284A2 (en) 2023-12-21 2025-06-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Broadly neutralizing antibodies against sars-cov-2 and sars-cov variants
WO2025133290A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Temper Bio Protein for immune regulation
WO2025133042A2 (en) 2023-12-22 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Activatable fusion proteins and methods of use
US20250296992A1 (en) 2024-01-10 2025-09-25 Genmab A/S Slitrk6 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2025149633A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Laigo Bio B.V. Bispecific antigen binding proteins
WO2025179281A1 (en) 2024-02-23 2025-08-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Treatment of cardiovascular disease with antxr1 antibodies
WO2025184416A1 (en) 2024-02-27 2025-09-04 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Single-domain antibodies and bispecific antibodies against hiv-1 and their use
WO2025184421A1 (en) 2024-02-28 2025-09-04 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors and antibodies specific for delta-like ligand 3 (dll3) and related methods
US20250381289A1 (en) 2024-02-29 2025-12-18 Genmab A/S Egfr and c-met bispecific binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2025181189A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2025186332A1 (en) 2024-03-05 2025-09-12 Ac Immune Sa Vectorized anti-tdp-43 antibodies
WO2025199352A2 (en) 2024-03-20 2025-09-25 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies specific for solute carrier family 34 member 2 (slc34a2)
WO2025196639A1 (en) 2024-03-21 2025-09-25 Seagen Inc. Cd25 antibodies, antibody-drug conjugates, and uses thereof
WO2025215060A1 (en) 2024-04-11 2025-10-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that specifically bind modified oligonucleotides
US20250333530A1 (en) 2024-04-12 2025-10-30 Hoffmann-La Roche Inc. Combination treatment of glofitamab and chemotherapy
WO2025222129A2 (en) 2024-04-19 2025-10-23 Mozart Therapeutics, Inc. Engineered cytokines and targeted cytokine delivery
WO2025226603A1 (en) 2024-04-22 2025-10-30 Surface Oncology, LLC Methods for treating cancer using anti-ccr8 antibodies
WO2025226808A1 (en) 2024-04-24 2025-10-30 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
WO2025233266A1 (en) 2024-05-07 2025-11-13 Innate Pharma Use of cd39 blocking agents in combination with anti-cd20 x cd3 t cell engagers
WO2025233264A1 (en) 2024-05-07 2025-11-13 Innate Pharma Use of cd73 blocking agents in combination with anti-cd20 x cd3 t cell engagers
WO2025238187A1 (en) 2024-05-15 2025-11-20 Cis Biopharma Ag Immunoconjugates targeting l1-cam
WO2025240670A2 (en) 2024-05-15 2025-11-20 Abalytics Oncology, Inc. Anti-pd-1 antibodies and related binding molecules and methods and uses thereof
WO2025238135A2 (en) 2024-05-17 2025-11-20 UCB Biopharma SRL Antibody with binding specificity for il-11
WO2025238133A1 (en) 2024-05-17 2025-11-20 UCB Biopharma SRL Multispecific antibody with binding specificity for il-11 and il-17
WO2025242909A1 (en) 2024-05-24 2025-11-27 Paul Scherrer Institut CD30-targeting antibody-radioligand conjugates and their therapeutic use
WO2025250969A1 (en) 2024-05-31 2025-12-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Anti-cd74 antibodies, conjugates and uses thereof
WO2025255353A1 (en) 2024-06-06 2025-12-11 Apogee Therapeutics, Inc. Dosage and administration of an anti-ox40l antibody

Family Cites Families (105)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2002128A (en) * 1934-02-19 1935-05-21 Ray A Reidenbaugh Display rack
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
US5618920A (en) * 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US5576195A (en) 1985-11-01 1996-11-19 Xoma Corporation Vectors with pectate lyase signal sequence
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
US6893625B1 (en) * 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) * 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
HUT53672A (en) 1988-02-25 1990-11-28 Gen Hospital Corp Quick immunoselective cloning process
US5506126A (en) * 1988-02-25 1996-04-09 The General Hospital Corporation Rapid immunoselection cloning method
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
US4861579A (en) 1988-03-17 1989-08-29 American Cyanamid Company Suppression of B-lymphocytes in mammals by administration of anti-B-lymphocyte antibodies
FI891226L (fi) 1988-04-28 1989-10-29 Univ Leland Stanford Junior Reseptordeterminanter i anti-t-celler foer behandling av autoimmunsjukdom.
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
JP3472297B2 (ja) 1989-03-21 2003-12-02 ザ イミューン レスポンス コーポレイション 特定のｔ細胞集団の病原性応答により生じる疾患に対するワクチン接種および方法
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
ATE161850T1 (de) 1989-07-19 1998-01-15 Connetics Corp T-zell-rezeptor-peptide als heilmittel für autoimmune und bösartige krankheiten
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
EP0940468A1 (en) * 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
EP0604580A1 (en) 1991-09-19 1994-07-06 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab') 2? ANTIBODIES
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
US5736137A (en) * 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
DE69303494T2 (de) * 1992-11-13 1997-01-16 Idec Pharma Corp Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörper gegen menschlichen b lymphozyt beschränkter differenzierung antigen für die behandlung von b-zell-lymphoma
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
US5417972A (en) 1993-08-02 1995-05-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of killing B-cells in a complement independent and an ADCC independent manner using antibodies which specifically bind CDIM
US5595721A (en) * 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US20010056066A1 (en) * 1996-07-26 2001-12-27 Smithkline Beecham Corporation Method of treating immune cell mediated systemic diseases
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
JP3919235B2 (ja) 1997-06-13 2007-05-23 ジェネンテク，インコーポレイテッド 抗体製剤
US6171586B1 (en) * 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
JP2002506353A (ja) 1997-06-24 2002-02-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド ガラクトシル化糖タンパク質の方法及び組成物
US6368596B1 (en) * 1997-07-08 2002-04-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for homoconjugates of antibodies which induce growth arrest or apoptosis of tumor cells
WO1999022764A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6528624B1 (en) * 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6194551B1 (en) * 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
PT1068241E (pt) 1998-04-02 2007-11-19 Genentech Inc Variantes de anticorpos e respectivos fragmentos
US6242195B1 (en) * 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
KR101063278B1 (ko) * 1998-08-11 2011-09-07 바이오겐 아이덱 인크. Ｂ-세포 림프종을 치료하기 위한 항-ｃｄ２０ 항체를 포함하는 약제
US6224866B1 (en) * 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
AU761516B2 (en) 1998-11-09 2003-06-05 Biogen Inc. Chimeric anti-CD20 antibody treatment of patients receiving BMT or PBSC transplants
EP1131093A4 (en) 1998-11-09 2002-05-02 Idec Pharma Corp TREATMENT OF HEMATOLOGICAL VILTIES ASSOCIATED WITH CIRCULATING TUMOR CELLS USING CHIMERIC ANTI-CD20 ANTIBODIES
US6737056B1 (en) * 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
KR101077001B1 (ko) 1999-01-15 2011-10-26 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US6897044B1 (en) 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
US6383276B1 (en) * 1999-03-12 2002-05-07 Fuji Photo Film Co., Ltd. Azomethine compound and oily magenta ink
KR20020027311A (ko) 1999-05-07 2002-04-13 제넨테크, 인크. Ｂ 세포 표면 마커에 결합하는 길항물질을 이용한자가면역 질환의 치료
EP1194167B1 (en) 1999-06-09 2009-08-19 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target b-cells
ITMI991299A1 (it) * 1999-06-11 2000-12-11 Consiglio Nazionale Ricerche Uso di anticorpi contro antigeni di superficie per il trattamento della malattia trapianto contro ospite
DE19930748C2 (de) * 1999-07-02 2001-05-17 Infineon Technologies Ag Verfahren zur Herstellung von EEPROM- und DRAM-Grabenspeicherzellbereichen auf einem Chip
CN1373672A (zh) 1999-07-12 2002-10-09 杰南技术公司 应用结合cd20的拮抗剂阻断对外来抗原的免疫应答
CN100389825C (zh) 1999-08-11 2008-05-28 拜奥根Idec公司 用抗cd20抗体治疗累及骨髓的非霍奇金淋巴瘤患者
US6451284B1 (en) 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
AU6929100A (en) * 1999-08-23 2001-03-19 Biocrystal Limited Methods and compositions for immunotherapy of b cell involvement in promotion ofa disease condition comprising multiple sclerosis
EP1229935A1 (en) 1999-11-08 2002-08-14 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of b cell malignancies using anti-cd40l antibodies in combination with anti-cd20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
US20020006404A1 (en) * 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
CA2404390A1 (en) 2000-03-24 2001-10-04 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma using a combination of an antibody to cd20 and interleukin-2
US20030185796A1 (en) * 2000-03-24 2003-10-02 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
KR20020091170A (ko) * 2000-03-31 2002-12-05 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션 Ｂ 세포 림프종의 치료를 위한 항-사이토카인 항체 또는길항제 및 항-ｃｄ２０의 조합된 사용
MXPA02010011A (es) * 2000-04-11 2003-04-25 Genentech Inc Anticuerpos multivalentes y usos para los mismos.
BR0110364A (pt) * 2000-04-25 2003-12-30 Idec Pharma Corp Administração intratecal de rituximab para tratamento de linfomas do sistema nervoso central
JP2004512262A (ja) 2000-06-20 2004-04-22 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション 非放射性抗ｃｄ２０抗体／放射標識抗ｃｄ２２抗体の組合せ
CA2410371C (en) * 2000-06-22 2015-11-17 University Of Iowa Research Foundation Methods for enhancing antibody-induced cell lysis and treating cancer
AU6461201A (en) 2000-07-12 2002-01-21 Idec Pharma Corp Treatment of b cell malignancies using combination of b cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
JP2004508420A (ja) * 2000-09-18 2004-03-18 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション Ｂ細胞枯渇抗体／免疫調節性抗体の組合せを用いて自己免疫疾患を治療するための併用療法
US20020128448A1 (en) * 2000-10-20 2002-09-12 Idec Pharmaceuticals Corporation Variant IgG3 Rituxan and therapeutic use thereof
JP4731793B2 (ja) * 2000-12-28 2011-07-27 アルセア テクノロジーズ インコーポレイテッド 抗体全体またはそのフラグメントの結晶、ならびにこの結晶を作製および使用するための方法
US7319139B2 (en) 2001-01-29 2008-01-15 Biogen Idec, Inc. TAG-72 specific CH2 domain deleted antibodies
PL372140A1 (pl) 2001-01-29 2005-07-11 Idec Pharmaceuticals Corporation Modyfikowane przeciwciała i sposoby zastosowania
US20030103971A1 (en) 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
ES2364816T3 (es) * 2001-04-02 2011-09-14 Genentech, Inc. Terapia de combinación.
JP2005500018A (ja) 2001-04-02 2005-01-06 アイデック ファーマスーティカルズ コーポレイション ＧｎＴＩＩＩと同時発現する組換え抗体
WO2003061694A1 (en) 2001-05-10 2003-07-31 Seattle Genetics, Inc. Immunosuppression of the humoral immune response by anti-cd20 antibodies
AU2002315168A1 (en) 2001-06-14 2003-01-02 Intermune, Inc. Combination therapy of gamma-interferon and b cell specific antibodies
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
US7718387B2 (en) * 2001-09-20 2010-05-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Measuring circulating therapeutic antibody, antigen and antigen/antibody complexes using ELISA assays
ATE430580T1 (de) * 2001-10-25 2009-05-15 Genentech Inc Glycoprotein-zusammensetzungen
US7127096B2 (en) * 2001-11-20 2006-10-24 Accuimage Diagnostics Corp. Method and software for improving coronary calcium scoring consistency
WO2003049694A2 (en) 2001-12-07 2003-06-19 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
US20040093621A1 (en) * 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
EP2295468B1 (en) * 2002-02-14 2015-07-08 Immunomedics, Inc. Anti-CD20 antibodies and fusion proteins thereof and methods of use
US20040002587A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20030180292A1 (en) * 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
US20030219818A1 (en) * 2002-05-10 2003-11-27 Bohen Sean P. Methods and compositions for determining neoplastic disease responsiveness to antibody therapy
WO2004032828A2 (en) 2002-07-31 2004-04-22 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
KR100932340B1 (ko) 2002-10-17 2009-12-16 젠맵 에이/에스 Ｃｄ20에 대한 인간 모노클로날 항체
CN103833854B (zh) * 2002-12-16 2017-12-12 健泰科生物技术公司 免疫球蛋白变体及其用途
EP1613350B1 (en) * 2003-04-09 2009-03-18 Genentech, Inc. Therapy of autoimmune disease in a patient with an inadequate response to a tnf-alpha inhibitor
AR044388A1 (es) * 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
TW201422238A (zh) 2004-06-04 2014-06-16 Genentech Inc Ｃｄ２０抗體於治療多發性硬化症之用途及用於該用途之物品
US7601335B2 (en) * 2005-05-20 2009-10-13 Genentech, Inc. Pretreatment of a biological sample from an autoimmune disease subject
US8144978B2 (en) * 2007-08-01 2012-03-27 Tandent Vision Science, Inc. System and method for identifying complex tokens in an image
KR101041914B1 (ko) * 2008-06-26 2011-06-15 부산대학교 산학협력단 셀레늄에 의해 탈분화된 세포, 이의 제조방법 및 이의 용도
TW201014605A (en) * 2008-09-16 2010-04-16 Genentech Inc Methods for treating progressive multiple sclerosis

Also Published As

Publication number Publication date
DE60332957D1 (de) 2010-07-22
KR20070055625A (ko) 2007-05-30
AU2003301079C1 (en) 2018-03-08
RS51318B (sr) 2010-12-31
SG2013036975A (en) 2016-07-28
MXPA05006511A (es) 2006-02-17
WO2004056312A3 (en) 2005-05-26
BRPI0316779B8 (pt) 2023-02-28
NO20053435L (no) 2005-08-31
CA2507898C (en) 2014-02-18
US20170158773A1 (en) 2017-06-08
EP2289936A1 (en) 2011-03-02
CR11367A (es) 2010-07-23
CN103833854A (zh) 2014-06-04
TW201000132A (en) 2010-01-01
BRPI0316779B1 (pt) 2020-04-28
US20140154242A1 (en) 2014-06-05
AU2003301079B2 (en) 2011-06-23
FR18C1023I1 (pl) 2018-07-13
PL377328A1 (pl) 2006-01-23
KR20050086913A (ko) 2005-08-30
US20090155257A1 (en) 2009-06-18
HRP20050649A2 (en) 2005-12-31
MA27704A1 (fr) 2006-01-02
AU2003301079A1 (en) 2004-07-14
WO2004056312A2 (en) 2004-07-08
US8562992B2 (en) 2013-10-22
IL168754A (en) 2011-09-27
AR072523A2 (es) 2010-09-01
JP2009159950A (ja) 2009-07-23
RU2326127C2 (ru) 2008-06-10
TWI335821B (en) 2011-01-11
NO338402B1 (no) 2016-08-15
ES2347241T3 (es) 2010-10-27
RS20050467A (sr) 2007-08-03
BR0316779A (pt) 2005-11-01
EP2289936B1 (en) 2017-05-31
EP3263596A1 (en) 2018-01-03
US7799900B2 (en) 2010-09-21
RU2005122448A (ru) 2006-03-20
EP1944320A1 (en) 2008-07-16
TW200501982A (en) 2005-01-16
US20220002430A1 (en) 2022-01-06
CL2008003323A1 (es) 2009-03-06
HU227217B1 (en) 2010-11-29
NZ566907A (en) 2009-10-30
EP1572744B1 (en) 2010-06-09
EP1572744A2 (en) 2005-09-14
ES2633311T3 (es) 2017-09-20
HUE035898T2 (en) 2018-05-28
CR7875A (es) 2008-11-07
SI2289936T1 (sl) 2017-10-30
DK2289936T3 (en) 2017-07-31
IL214083A0 (en) 2011-08-31
BE2018C021I2 (pl) 2023-03-07
HUS1800030I1 (hu) 2018-07-30
KR100910433B1 (ko) 2009-08-04
CA2507898A1 (en) 2004-07-08
JP2012044997A (ja) 2012-03-08
ATE470675T1 (de) 2010-06-15
EP2301966A1 (en) 2011-03-30
CN103833854B (zh) 2017-12-12
EP1572744A4 (en) 2006-07-12
CY2018009I1 (el) 2018-06-27
JP2006517399A (ja) 2006-07-27
CY1110759T1 (el) 2015-06-10
HK1248731A1 (en) 2018-10-19
SI1572744T1 (sl) 2010-09-30
RS20100366A (sr) 2011-04-30
HRP20050649B1 (hr) 2016-06-17
PT1572744E (pt) 2010-09-07
AR093046A2 (es) 2015-05-13
US20060024300A1 (en) 2006-02-02
JP5885457B2 (ja) 2016-03-15
UA89350C2 (uk) 2010-01-25
US20190071511A1 (en) 2019-03-07
US20060034835A1 (en) 2006-02-16
DK1572744T3 (da) 2010-09-20
HUP0500954A2 (en) 2007-09-28
JP4351674B2 (ja) 2009-10-28
FR18C1023I2 (fr) 2019-05-17
HK1074208A1 (en) 2005-11-04
AR042485A1 (es) 2005-06-22
CY2018009I2 (el) 2018-06-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220002430A1 (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
CN100460421C (zh) 免疫球蛋白变体及其用途
AU2017202590A1 (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1154871A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1156047A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1120058A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1074208B (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1154871B (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1129406B (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1129406A (zh) 免疫球蛋白變體及其用途
HK1129405A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1129407A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
RECP Rectifications of patent specification