RS51318B - Varijante imunoglobulina i njihova upotreba - Google Patents

Varijante imunoglobulina i njihova upotreba

Info

Publication number
RS51318B
RS51318B YUP-2005/0467A YUP20050467A RS51318B RS 51318 B RS51318 B RS 51318B YU P20050467 A YUP20050467 A YU P20050467A RS 51318 B RS51318 B RS 51318B
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
antigen
binding fragment
use according
cells
Prior art date
Application number
YUP-2005/0467A
Other languages
English (en)
Inventor
Leonard G. Presta
Camellia W. Adams
Andrew C. Chan
Craig W. Crowley
Henry B. Lowman
Gerald R. Nakamura
Original Assignee
Genentech Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=32685285&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS51318(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Genentech Inc. filed Critical Genentech Inc.
Publication of RS20050467A publication Critical patent/RS20050467A/sr
Publication of RS51318B publication Critical patent/RS51318B/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/16—Animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)

Abstract

Antihumano CD20 antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, gde antitelo sadrži VH sekvencu SEQ ID NO. 8 prikazanu na slici 1B (2H7.v16) i VL sekvencu SEQ ID NO. 2 prikazanu na slici 1A (2H7.v16).Prijava sadrži još 69 patentnih zahteva.

Description

OBLAST PRONALASKA
Ovaj pronalazak odnosi se na anti-CD20 antitela i njihovu upotrebu u lečenju oboljenja povezanih sa B-ćelijama
ISTORJJAT PRONALASKA
Limfociti predstavljaju jednu od nekoliko različitih populacija belih krvnih zrnaca; oni specifično prepoznaju i odgovaraju na strani antigen. Tri glavne klase limfocita su B limfociti (B čelije), T limfociti (T ćelije) i prirodne ćelije ubice (natural killer cells-NK). B limfociti su ćelije odgovorne za proizvodnju antitela i obezbeđuju humoralni imunitet. B ćelije sazrevaju u koštanoj srži koju zatim napuštaju i na svojoj površini eksprimiraju antitelo koje se vezuje za antigen Kada naivna (naive) B ćelija naiđe prvi put na antigen, čije je antitelo vezano za njenu membranu specifično, ćelija počinje ubrzano da se deli i njeno potomstvo se diferencira u B ćelije memorije i efektorne ćelije koje se zovu "plazma ćelije". B ćelije memorije imaju duži život i nastavljaju da eksprimiraju antitela koja su vezana za membranu i koja imaju istu specifičnost kao i originalna ishodna ćelija. Plazma ćelije ne proizvode antitela vezana za membranu već umesto toga proizvode sekretovane forme antitela Sekretovana antitela su glavni efektorni molekuli humoralnog imuniteta.
CD20 antigen (takođe ima naziv i "B-lymphocyte-restricted differentiation antigen", antigen diferencijacije ograničen na B limfocit, Bp35) je hidrofobni transmembranski protein koji ima molekulsku težinu približno 35 kD i lociranje na pre-B i zrelim Blimfocitima (Valentine et al.,
./. Bio/. Chem.264 (19):1 1282-1 1287 (1989), and Einfeldet al. bM' BO./.7(3) 71 1-717 (1988)). Antigen se takođe eksprimira na više od 90% B-ćelija ne-Hočkinsonovog limfoma (NHL)
(Andersonet al. Blood 63(6): 1424-1433 (1984)), ali nije pronađen na hematopoetičnim stcm ćelijama, pro-B ćelijama, normalnim plazma ćelijama ili na daigim normalnim tkivima (Tedderet al. ,/. Immiuiol.135(2);973-979 (1985)). Smatra se da CD20 reguliše početni korak (korake) u procesima aktivacije inicijacije ćelijskog ciklusa i diferencijacije (Tedderet al., sn/ tra)i verovatno funkcioniše kao jonski kanal za kalcijum (Tedderet al../. Cei! Biochem.14D:195
(1990)).
Znajući ekspresiju CD20 u B ćelijama limfoma, ovaj antigen se uspešno koristi kao terapeutsko ciljno mesto u procesu lečenja ovakvih limfoma. Više od 300,000 ljudi u Sjedinjenim Američkim Državama ima NHL B-ćelija i više od 56,000 novih slučajeva se dijagnosticira svake godine. Na primer, rituximab (RITUXAN®) antitelo je genetički modifikovano himerno mišije/humano monoklonalno antitelo koje je usmereno na humani CD20 antigen (komercijalno dostupno od strane Genetech, Inc., South San Franciseo, California, U S ), koristi se za tretiranje pacijenata sa recidivnim ili upornim "low-grade" ili folikularnim, CD20 pozitivnim, B ćelijskim ne- Hočkinsonovim limfomom. Rituximab je antitelo za koje se koristi naziv "C2B8" u okviru US Patent No 5,736,137, izdat 7. Aprila, 1988 (Andersonet al.)i US Patent No. 5,776,456.In vitrostudije mehanizma delovanja pokazale su da se RITUXAN® vezuje za humani komplement i lizira limfoidne B ćelijske linije putem komplement-zavisne citotoksičnosti (complement-dependent cytotoxicity-CDC) (Reffet al. Blood83(2) 435-445
(1994)) Dodatno, pokazano je da poseduje značajnu aktivnost u testovima za antitelo-zavisnu ćelijsku citotoksičnost (antibody-dependent cellular cytotoxicity-ADCC).In vivoprekliničke studije su pokazale da RITUXAN® uklanja B ćelije iz perifernog krvotoka, limfnih čvorova i koštane srži cinomoglus majmuna, verovatno putem procesa komplementacije i procesa posredovanih ćelijama(Reff et al. Blood 83(2):435-455(1994)) Druga anti-CD20 antitela koja se koriste u tretiranju NHL uključuju mišja antitela Zevalin™ koji je vezan za radioizotop, Yttrium-90 (IDEC Pharmaceutical, San Diego, CA), Bexxar™ koji predstavlja kompletno mišje antitelo konjugovano sa 1-131 (Corixa, WA)
Glavno ograničenje u korišćenju mišjih antitela u humanoj terapiji je odgovor čoveka anti-mišjim antitelom (human anti-mouse antibody HAMA), (videtie. g.Miller, R. A.et al.
<u>Monoclonal antibody therapeutic trials in seven patients with T- cell lymphoma" Blood,
62:988-995, 1983; i Schroff, R W.,et al " Human anti- murine immunoglobulin response m patients receiving monoclonal anlibody therapy" Cancer Res ,45 879-885, 1985) Čak su i himerni molekuli, u kojima su varijabilni (V) domeni glodarskih antitela fuzionisani sa humanim konstantnim (C-constant) regionima, i dalje sposobni da izazovu značajan imuni odgovor (HACA, human antiehimeric antibody, humano antihimerno antitelo) (Neubergeret al.Nature, (Lond), 314:268-270, 1980). Dobar način da se prevaziđu ova ograničenja u kliničkoj primeni monoklonalnih antitela je "humanizacija" mišjeg antitela ili antitela koja nisu humanog porekla (Joneset al.Nature (Lond.), 321.522-525,1986, Reichmanet al.,Nature (Lond ), 332:323-327, 1988).
Zato je veoma korisno da se proizvedu terapeutska antitela na CD20 antigen koja stvaraju minimalnu ili nikakvu antigenost kada se daju pacijentu, pogotovu u slučaju hroničnih tretiranja. Ovaj pronalazak zadovoljava ove i druge zahteve. Ovaj pronalazak obezbeđuje anti-CD20 antitela koja prevazilaze ograničenja postojećih terapeutskih kompozicija kao i dodatne prednosti koji će postati očigledne iz detaljnog opisa koji sledi.
SADRŽAJ PRONALASKA
Ovaj pronalazak obezbeđuje CD20 vc/.ujuća antitela ili njihove funkcionalne delove, i njihovu upotrebu u tretmanima oboljenja povezanih sa B ćelijama. Ova antitela su monoklonalna tela. U specifičnim ostvarenjima, antitela koja vezuju CD20 su humana ili himerna Humanizovanc 2H7 varijante uključuju one koje poseduju ainmo kiselinske zamene u FR i varijante maturacije afiniteta sa promenama u usađenim (grafted) CDR-ovima. Zamenjene amino kiseline u CDR ili FR nisu limitirane na one koje su prisutne u donorskom ili recipijentnom antitelu U drugim ostvarenjima anti-CD20 antitela iz ovog pronalaska dalje sadrže promene u amino kiselinskim ostacima u Fc regionu koje dovode do poboljšane efektorne funkcije uključujući pojačanu CDC i/ili ADCC funkciju i ubijanje B-ćelijama (ovde se navodi i kao uklanjanje B-ćelija). Druga anti-CD20 antitela iz ovog pronalaska uključuju ona sa specifičnim promenama koje povećavaju stabilnost. U okviru specifičnog ostvarenja, humanizovane 2H7 varijante sa povećanom stabilnošću opisane su u primeru 6 koji sledi Takođe su obezbeđene varijante koje su deficitarne u fukozi i imaju poboljšanu ADCC funkcijuin vivo.U jednom ostvarenju, himerno anti-CD20 antitelo ima mišji V region i humani C-region. Jedno ovakvo specifično himerno anti-CD20 antitelo je Rituxan® (Rituximab®, Gcnetech, Ine).
U poželjnom ostvarenju od svih kompozicija antitela i metoda za njihovu upotrebu u ovom pronalasku, humanizovano CD20 vezujuće antitelo je 2H7.vl6 koje poseduje amino kiselinsku sekvencu lakog i teškog lanca predstavljenu u SEQ ID NO. 21 i 22, kao što je prikazano na slici 6 i 7. Kada se govori o polipeptidnim sekvencama sa slika 6, 7 i 8, treba naglasiti da prvih 19 ili otprilike toliko amino kiselina koje formiraju sekretornu signalnu sekvencu nisu prisutne u zrelom polipeptidu. V region kod svih varijanti baziran na verziji 16 imaće amino kiselinske sekvence od vl6 osim na položajima amino kiselinskih zamena koje su prikazane i opisane u završnom delu. Osim ako nije drugačije naglašeno, 2H7 varijante imaju isti L lanac kao i onaj kod vi6
Ovaj pronalazak obezbeđuje humanizovano antitelo koje se vezuje za humani CD20, ili njegov antigen-vezujući fragment, naznačeno time da antitelo efektivno uklanja primatne B ćelijetn vivo,antitelo obuhvata H lanac varijabilnog regiona (Vh) i makar CDR3 sekvencu od SEQ ID NO 12 od anti-humanog CD20 antitela i na kraju humani konsenzus "framevvork" (FR) ostatke humanog teškog lanca podgrupe III (VhIII). U jednom ostvarenju primatne B ćelije su humane i od Cvnomoglus majmuna U jednom ostvarenju, antitelo dalje sadrži H lanac CDR1 sekvence SEQ ID NO. 10 i CDR sekvence SEQ ID NO 11 U drugom ostvarenju, prethodno antitelo sadrži I, lanac CDR2 sekvence SEQ ID NO. 4, CDR2 sekvence SEQ ID NO 5. CDR3 sekvence SEQ ID NO. 6 sa suštinskim amino kiselinskim ostacima humaniog konsenzus "framevvork"
(FR) humanog lakogklanca podgrupe I (VkI). U poželjnom ostvarenju, FR region u Vi. ima ostatak na donorskom antitelu na poziciji 46, u specifičnom ostvarenju, FR2 u V|_ ima amino kiselinasku zamenu leu46pro (Leu u humanoj tđ konsenzus sekvenci promenjen u pro koji je prisutan na odgovarajućoj poziciji u m2H7)
Vi i region dalje obuhvata amino kiselinske ostatke donorskog antitela na najmanje aminokiselinskim pozicijama 49, 71, i 73 u frameworku. U jednom ostvarenju u Vh, sledeće FR pozicije u humanom teškom lancu podgrupe III su zamenjene: AlaH49Gly u FR2, ArgH71Val i AsnH73Lys u FR3, U drugim ostvarenjima CDR regioni u humanizovanom antitelu dalje obuhvataju amino kiselinske zamenc gde amino kiselinski ostaci nisu poreklom ni od donorskog niti od recipijentnog antitela.
Antitelo iz ostvarenja koje sledi može da sadrži Vh sekvencu od SEQ ID NO.8 od vi 6, kao što je prikazano na slici 1B. U daljem ostvarenju antitelo dalje sadrži VL sekvencu iod SEQ ID NO 2 od vi6, kao sto je prikazano na si. 1 A.
U drugim ostvarenjima humanizovano antitelo je 2117 v31 koje poseduje aminokisclmsku sekvencu lakog i teškog lanca iz SEQ ID NO. 21 i 23 kao što je prikazano na si 6 i si.8, 2M7 v3 I koji ima amino kiselinsku sekvencu teškog lanca iz SEQ ID NO 23 kao što je prikazano na si. 8, 2H7.v96 koji ima amino kiselinsku zamenu D56A i N100A u teškom lancu (H) i s92A u L lancu iz vi6.
U odvojenim ostvarenjima antitelo iz bilo kog od prethodnih ostvarenja dalje obuhvata najmanje jednu amino kiselinsku zamenu u Fc regionu koja poboljšava ADCC i/ili CDC aktivnost u odnosu na originalno ili roditeljsko antitelo od koga je izvedeno, v.16 je roditeljsko ishodno antitelo sa kojim se poredi u najvećem broju slučajeva, i Rituxan u drugim slučajevima. Jedno ovakvo antitelo sa poboljšanom aktivnošću obuhvata trostruku alaninsku zamenu S298A/E333A/K334A u Fc regionu. Jedno antitelo koje ima S298A/E333A/K334A je 2H7.v31 koje ima amino kiselinsku sekvencu teškog lanca SEQ ID NO. 23. Antitelo 2H7.vll4 i 2H7.vll5 pokazuju najmanje deset puta poboljšanu ADCC aktivnost kada se uporedi sa Rituxan-om.
U drugom ostvarenju, antitelo dalje obuhvata najmanje jednu amino kiselinsku zamenu u Fc regionu koja smanjuje CDC aktivnost u odnosu na roditeljsko ishodno antitelo od koga je izvedeno i koje je vl6 u najvećem broju slučajeva. Jedno ovakvo antitelo sa smanjenom CDC aktivnošću u odnosu na vi6 sadrži najmanje zamenu K322A u teškom (H) lancu. Poređenje ADCC i CDC može se izvesti u eseju koji je opisan u primerima.
U željenom ostvarenju, antitela iz ovog pronalaska su antitela kompletne dužine naznačeno time da je Vhregion spojen sa konstantnim regionom teškog lanca humanog IgG. U poželjnim ostvarenjima IgG je humani IgG I ili IgG3.
U jednom ostvarenju, CD20 vezujuće antitelo je konjugovano sa citotoksičnim agensom. U poželjnim ostvarenjima citotoksični agens je toksin ili radioaktivni izotop.
U jednom ostvarenju antitela iz ovog pronalaska za upotrebu u terapeutske ili dijagnostičke svrhe se proizvode u CHO ćelijama.
Takođe je obezbeđena kompozicija koja obuhvata antitelo iz bilo kog od prethodnih ostvarenja i nosač. U jednom ostvarenju, nosač je farmaceutski prihvatljiv nosač. Kompozicije mogu biti obezbeđene u obliku proizvoda ili kita.
Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje tečnu formulaciju koja sadrži humanizovano 2H7 antitelo u koncentraciji 20mg/mL antitela, lOmM histidin sulfat pH5.8, 60 mg/ml saharoze (6%), 0.2 mg/ml polisorbat 20 (0.02%).
Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje izolovanu nukleinsku kiselinu koja kodira bilo koje antitelo koje je ovde opisano, uključujući ekspresioni vektor za eksprimiranje antitela.
Još jedan aspekt ovog pronalaska su ćelije domaćini koje sadrže prethodne nukleinske kiseline, i domaćinske ćelije koje proizvode antitelo. U poželjnom ostvarenju drugo pomenutog, domaćinska ćelija je CHO ćelija. Metoda za proizvodnju ovih antitela je obezbeđena. Metoda koja obuhvata gajenje domaćinskih ćelija koje proizvode antitelo i izdvajanje antitela iz ćelijske kulture.
Još jedan aspekt ovog pronalaska je proizvod koji sadrži sud i kompoziciju koja se u njemu nalazi, gde kompozicija sadrži antitelo prema bilo kom prethodnom ostvarenju. Za upotrebu u tretiranju NHL, proizvod dalje obuhvata uputstvo koje ukazuje na to da se kompozicija koristi za tretiranje ne-Hočkinsonovog limfoma
Dalji aspekt ovog pronalaska je metoda za indukovanje apoptoze u B ćelijamain vivo,koja obuhvata dovođenje u kontakt B ćelija sa antitelom i to bilo kojim od prethodno opisanih, i na taj način ubijanje B ćelija
Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje metode za tretiranje obolenja koja su opisana ovde, putem davanja CD20 vezujućeg antitela ili njegovog funkcionalnog fragmenta do sisara kao što je pacijent (čovek) oboleo od bolesti. U svakoj metodi za tretiranje autoimunih bolesti ili CD20 pozitivnih kancera, u jednom ostvarenju, antitelo 2H7 vi6 koji ima amino kiselinsku sekvencu lakog i teškog lanca SEQ ID NO.21 i 22, kao što je prikazano na slici 6 i slici 7. Zato, jedno ostvarenje je metoda za tretiranje CD20 pozitivnog kancera, koja obuhvata davanje pacijentu koji je oboleo od kancera, terapeutski efektivne količine humanizovanog CD20 vezujućeg antitela iz ovog pronalaska. U poželjnim ostvarenjima CD20 pozitivan kancer je B ćelijski limfom ili leukemija uključujući i ne-Hočkinsonov limfom (NHL) ili limfocitnu predominantnu Hočkinsonovu bolest (lymphocyte predominant Hodkin's disease-LPHD), hroničnu limfocitičnu leukemiju (CLL) ili SLL U jednom ostavrenju metode za tretiranje B ćelijskog limfoma ili leukemije, antitelo se dostavlja pri stopi doziranja od oko 275-375mg/nr. U dodatnim ostvarenjima, metoda za tertiranje dalje obuhvata davanje do pacijenta najmanje jednog hemoterapeutskog agensa, naznačeno time da je za ne-Hočkinsonov limfom (NHL), hemoterapeutski agens selektovan iz grupe koju sačinjavaju doksorubicin, ciklofosfamid, vinkristin i prednizolon
Takođe je obezbeđena metoda za trretiranje autoimunog obolenja, koja obuhvata davanje pacijentu koji je oboleo od autoimune bolesti, terapeutski efikasne količine humanizovanog CD20 vezujućeg antitela iz bilo kog od prethodnih patentnih zahteva. Autoimuno obolenje je odabrano iz grupe koju sačinjavaju reumatoidni artritis, juvenilni reumatoidni artritis, sistemski lupus eritematozus (SLE), Wegnerova bolest, bolest zapaljenja creva, idiopatična trombocitopenična purpura)ITP), trombocitna trombocitopenična purpura (TTP), autoimuna trombocitopenija, multipna skleroza, psoriaza, IgA nefropatija, IgM polineuropatija, mijastenija gravis, vaskulitis, diabetes melitis, Rejnodov sindrom, Sjorgenov sindrom i glomerulonefritis. Kada je autoimuno obolenje reumatoidni artritis, antitelo se može dostaviti zajedno sa drugim terapeutskim agensom koji je najbolje da bude metotreksat
U ovim metodama tretiranja, CD20 vezujuća antitela mogu se dostaviti sama ili zajedno sa drugim terapeutskim agensom kao što je drugo antitelo, ili hemoterapeutski agens ili imunosupresivni agens. Drugo antitelo može da se vezuje za CD20 ili za različiti antigen B ćelije, ili NK ili antigen T ćelije. U jednom ostvarenju, drugo antitelo je radioaktivno obeleženo anti-CD20 antitelo. U drugim ostvarenjima CD20 vezujuće antitelo je u konjugaciji sa citotoksičnim agensom uključujući toksin ili radioaktivni izotop.
U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje metodu za tretiranje autoimune bolesti koja jc odabrana iz grupe koja se sastoji od dermatomiostisa, Vagnerovog granulomatozisa, ANCA, aplastične anemije, autoimune hemolitičke anemije (A1HA), deficitarnost faktora VIII, hemofilije A, autoimune neutropenije, Kastclmanovog sindroma, Goodpasture sindroma, odbacivanje transplantiranog čvrstog organa, bolest neprihvatanja grafta (GVHD), posredovano IgM, trombocitna trombocitopenična purpura (TTP), Hašimotov tireoiditis, autoimuni hepatitis, limfoidni intersticijalni pneumonitis (HIV), bronhiolitis obliterans (nc-transplant) vs. NSIP, Guillain-Barre sindrom, vaskulitis velikog krvnog suda, arteritis džiniovske ćelije (Takavasu), vaskulitis srednjeg krvnog suda, Kavasakijeva bolest, poliarteritis nodosa, koji obuhvata davanje pacijentu koji pati od bolesti, terapeutski efektivne doze CD20 vezujućeg antitela U jednom ostvarenju ove metode, CD20 vezujuće antitelo je Rituxan®.
Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje izolovanu nukleinsku kiselinu koja sadrži nukleotidnu sekvencu SEQ ID NO. 24 od Cvnomolgus majmuna CD20 (prikazano na si 19), ili degenerisanu varijantu ove sekvence. Jedno ostvarenje je izolovana nukleinska kiselina koja obuhvata sekvencu koja kodira polipeptid sa amino kiselinskom sekvencom SEQ ID NO 25 (prikazano na si.20), ili SEQ ID NO. 25 (si,20) sa konzervativnim amino kiselinskim zamenama. Drugo ostvarenje je vektor koji obuhvata prethodnu nukleinsku kiselinu, uključujući ekspresioni vektor za ekspresiju u domaćinskoj ćeliji. Takođe je obuhvaćena ćelija domaćin koja sadrži vektor Takođe je obezbeđen izolovan polipeptid koji obuhvata amino kiselinsku sekvencu (SEQ ID NO.25, sl20) od Cynomolgus majmuna CD20.
KRATAK OPIS SLIKA
SL 1A je poređenje sekvenci varijabilnih domena lakog lanca (Vi.) miša 2H7 (SEQ ID NO. 1), humanizovane 2H7. VI6 varijante (SEQ ID NO. 2), i humanog kappa lakog lanca podgrupe I (SEQ ID NO. 3). CDR-ovi VLod 2117 i hu2H7 vi6 su sledeći; CDR1 (SEQ ID NO. 4), CDR2 (SEQ ID NO. 5), i CDR3 (SEQ ID NO 6).
SL. 1B je poređenje sekvenci u kojima se porede Vh sekvence misije 2H7 (SEQ ID NO 7), humanizovane 2H7.vl6 varijante (SEQ ID NO.8), i humane konsenzus sekvence teškog lanca podgrupe III (SEQ ID NO 9) CDR-ovi V„ od 2H7 i hu2H7.vl6 su sledeći CDR1 (SEQ ID NO 10), CDR2 (SEQ ID NO 1 1), i CDR3 (SEQ ID NO 12)
SL 1A i 1B, CDR1, CDR2 i CDR3 u svakom lancu su predstavljeni zagradama, i okruženi "framevvork" regionima, FR1-FR4, kao što je prikazano. 2H7 odnosi se na misije 2H7 antitelo. Zvezdice između dva reda sekvenci ukazuju na pozicije koje se razlikuju između dve sekvence Označavanje brojevima ostataka urađeno je po Kabatet al.,Sequences of Immunological Interest. 5<th>Ed. Public Health S ervice, National Institutes of Health, Bethesda, Md (1991), sa ubačenim a. b c, d i e
Si. 2 prikazuje sekvencu fagemida pVX4 (SEQ ID NO. 13) koji je korišćen u konstruisanju 2H7 Fab plazmida (videti primer 1) kao i amino kiselinske sekvence L lanca (SEQ ID NO. 14) i H lanca (SEQ ID NO. 1 5) od Fab-a za CDR-"grafted" anti-IFN-a humanizovanog antitela.
SL 3 prikazuje sekvencu ekspresionog plazmida koji kodira himeri 2117 v6 8 Fab (SEQ ID NO. 16) Prikazane su amino kiselinske sekvence L lanca (SEQ ID NO 1 7) i H lanca (SEQ ID NO 18)
SL 4 prikazuju sekvencu plazmida pDRI (SEQ ID NO 19, 5391 bp) za ekspresiju imunoglobulinskih lakih lanaca kao stoje opisano u primeru 1. pDRI sadrži sekvence koje kodiraju irelevantno antitelo, laki lanac humanizovanog anti-CD3 antitela (Shalabyet al., . 1.
fCxp. Med175 217-225 (1992)), start i stop kodone koji su prikazani kao podvučeni i u "bold"stilu
SI 5 prikazuje sekvencu plazmida pDR2 (SEQ ID NO. 20, 6135 bp) za ekspresiju imunoglobulinskih lakih lanaca kao što je opisano u primeru 1 pDR2 sadrži sekvence koje kodiraju irelevantno antitelo, teški lanac humanizovanog anti-CD3 antitela (Shalabvet al., supra),start i stop kodone koji su prikazani kao podvučeni i u "bold" stilu
SL 6 prikazuje amino kiselinsku sekvencu 2H7.vl6 kompletnog L lanca (SEQ ID NO. 21). Prvih 19 amino kiselina pre DIQ predstavljaju sekretornu signalnu sekvencu koja nije prisutna u zrelom polipeptidnom lancu.
SL 7 prikazuje amino kiselinsku sekvencu 2H7.vl6 kompletnog H lanca (SEQ ID NO 22). Prvih 19 amino kiselina pre EVQ predstavljaju sekretornu signalnu sekvencu koja nije prisutna u zrelom polipeptidnom lancu. Poređenjem Vh sekvence sa slike 1B (SEQ ID NO. 8) sa kompletnom sekvencom H lanca, humani yl konstantni region je sa amino kiselinske pozicije 114-471 uSEQ ID NO. 22
SL 8 prikazuje amino kiselinsku sekvencu 2H7.v3I kompletnog H lanca (SEQ ID NO. 23). Prvih 19 amino kiselina pre EVQ predstavljaju sekretornu signalnu sekvencu koja nije prisutna u zrelom polipeptidnom lancu. L lanac je isti kao kod 2H7.vl6 (videti sliku 6)
SL 9 prikazuje relativnu stabilnost 2H7.vl6 i 2H7.v73 IgG varijanti koje su opisane u primeru 6. Rezultati eseja su normalizovani do vrednosti pre inkubacije i prezentovani kao procenat koji je ostao nakon inkubacije.
SL IO je grafički prikaz (flow chart) koji predstavlja sumu amino kiselinskih promena od mišijeg 2H7 do grupe humanizovanih verzija sve do v75
SL 1 1 je suma srednje vrednosti apsolutnog broja B-ćelija (CD3-/CD40+) u svim grupama (kombinacija 2H7 studije i Rituxan studije), kao stoje opisano u primeru 10
SL. 12 prikazuje rezultate reprezentativnog ADCC eseja sa 2H7 varijantom deficitarnom u fukozi kao što je opisano u primeru 11.
SL 13 prikazuje rezultate Annexin V bojenja u funkciji koncentracije antitela. Ramos ćelije su tretirane sa irelevantnim IgG kontrolnim antitelom (Herceptin®, kružići), Rituximab (kvadrati) ili rhuMab 2H7 vl6 (trouglovi) u prisustvu "crosslinking" sekundarnog antitela i analizirane su sa FACS Slike 13-15 opisane su u primeru 13
SL.14 prikazuje rezultate Annexin V i propodijum jodid dvostrukog bojenja koji su prikazani u funkciji koncentracije antitela. Ramos ćelije su tretirane sa irelevantnim IgG kontrolnim antitelom (Herceptin®, kružići), Rituximab (kvadrati) ili rhuMab 2H7vl6 (trouglovi) u prisustvu "crosslinking" sekundarnog antitela i analizirane su sa FACS
SL. 15 prikazuje broj (po 10 s) živih, ncobojenih ćelija koje su u funkciji koncentracije antitela. Ramos ćelije su tretirane sa irelevantnim IgG kontrolnim antitelom (Herceptin®, kružići), Rituximab (kvadratići) ili rhuMab 2H7.vl6 (trouglovi) u prisustvu "crosslinking" sekundarnog antitela i analizirane su sa FACS.
SL 16, 17, 18 prikazuju inhibiciju rasta Raji ćelija tumora u golom mišu, kao stoje opisano u primeru 14. Životinje su tretirane nedeljno (kao sto je naglašeno horizontalnim strelicama, (n~-8 miševa po grupi) tokom 6 nedelja sa PBS (kontrola) ili Rituxan® ili rhuMab 2H7.vl6 pri 5 mg/kg (SL. 16), 0 5 mg/kg (SL. 17), 0.05 mg/kg (SL. 18).
SL. 19 prikazuje nukleotidnu (SEQ ID NO. 24) i amino kiselinske (SEQ ID NO. 25) sekvence CD20 Cvnomolgus majmuna kao stoje opisano u primeru 15.
SL 20 prikazuje amino kiselinsku sekvencu CD20 cvnomolgus majmuna (SEQ ID NO. 25) Ostaci koji se razlikuju od humanog CD20 su podvučeni i humani ostaci (SEQ ID NO 26) obeleženi su direktno ispod majmunskih ostataka Pretpostavljeni ekstracelularni domen majmunskog CD20 je u "bold" stilu.
SL. 21 prikazuje rezultate ćelija Cvnomolgus majmuna koje eksprimiraju CD20 vezivanje za hu2H7vl6, v31 i Rituxan, kao stoje opisano u primeru 15 Za antitela urađeni su eseji za sposobnost vezivanja i "displace" FITC-konjugovanog mišijeg 2H7 vezivanja za CD20 cvnomolgus majmuna
SL 22 prikazuje šemu porasta doze za reumatoidni artritis, u fazi I/II kliničke probe
SL 23 prikazuje vektor za ekspresiju 2H7.vl6 u CHO ćelijama.
DETALJAN OPIS POŽELJNIH OSTVARENJA
"CD20" antigen je neglikozilovan, transmembranski fosfoprotein sa molekulskom težinom od otprilike 35 kD koji se može naći na površini od preko 90% B ćelija iz periferne krvi ili limfoidnih organa. CD20 se eksprimira tokom ranog razvoja pre-B ćelije i ostaje sve do diferencijacija plazma ćelija, ne nalazi se na humanim stem ćelijama, limfoidnim progenitorskim ćelijama niti na normalnim plazma ćelijama CD 20 je prisutan i na normalnim B ćelijama kao i na malignim B ćelijama Drugi nazivi za CD20 antigen u literaturi uključuju "B-limfocitni-restriktivni diferenciacioni antigen" i "Bp35". CD20 antigen je opisan na primer od starne Clark i Ledbetter, Adv. Can. Res. 52:81-149 (1989) i Valentineet al. ,/. Biul. Chem264(19): 11282-1 1287 (1989).
Izraz "antitelo" koristi se u najšierm smislu i specifični pokriva monoklonalna antitela (uključujući i monoklonalna antitela kompletne dužine), multispecifična antitela( e. g.bispecifična antitela) i fragmente antitela sve dok ispoljavaju poželjnu biološku aktivnost ili funkciju.
Biološka aktivnost CD20 vezujućeg i humanizovanog CD20 vezujućeg antitela iz ovog pronalaska uključiće makar vezivanje antitela za humani CD20, poželjnije je vezivanje za humani i drugi primatni CD20 (uključujući Cvnomolgus majmauna, rezus majmuna, šimpanzu) Antitela će vezati CD20 sa Kovrednošću ne većom od lxl0~\ poželjno je da Knvrednost nije veća od 1 x 10"J i da su sposobna da ubiju ili uklone B ćelijein vivo,poželjno makar 20% kada se uporede sa odgovarajućom negativnom kontrolom koja nije tretirana sa ovakvim antitelom Uklanjanje B ćelija može biti rezultat ADCC, CDC ili jednog ili više različitih mehanizama U nekim ostvarenjima tretiranja bolesti ovde opisanih, specifične efektorne funkcije ili mehanizmi mogu biti poželjniji od drugih i određene varijante humanizovanog 2H7 su poželjnije da bi se ostvarile te biološke funkcije kao ADCC
"Fragmeti antitela" obuhvataju deo ili antitelo kompletne dužine, uglavnom njegov antigen vezujući varijabilni region. Primeri fragmenata antitela uključuju Fab, Fab', F(ab')2 i FV fragmente, diatela (diabodies), linearna antitela, jednolančane molekule antitela, i multispecifična formirana od fragmenata antitela.
"Fv" je minimalni fragment antitela koji sadrži kompletno mesto za prepoznavanje i vezivanje antigena. Ovaj fragment se sastoji od dimera koji ima domene varijabilnog regiona jednog teškog i jednog lakog lanca koji su vezani čvrsto ne-kovalentnom vezom. Iz savijanja i pakovanja ova dva domena nastaje šest hipervarijabilnih petlji (po 3 petlje iz svakog H i L lanca) koji daju amino kiselinske ostatke koji učestvuju u vezivanju antigena i potvrđuju specifičnost vezivanja antigena za antitelo Međutim, čak i pojedinačan varijabilni domen (ili polovina Fv koja obuhvata samo tri CDR-a specifična za antigen) ima sposobnost da prepozna i veže antigen, iako sa manjim afinitetom u odnosu na celo vezujuće mesto
Izraz "monoklonalno telo" koje se ovde koristi odnosi se na antitelo dobijeno iz populacije suštinski homogenih antitela odnosno, individualna antitela koja sačinjavaju populaciju i međusobno su identična, ne računajući prirodne mutacije koje mogu biti prisutne u minimalnim količinama. Dalje nasuprot konvencionalnim (poliklonalnim) preparatima antitela koji tipično uključuju različita antitela koja su usmerena ptrotiv različitih determinanti (epitopa), svako monoklonalno antitelo je usmereno protiv jedne determinante na antigenu. Modifikator "monoklonalni" ukazuje na karakter antitela koje je dobijeno iz potpuno homogene populacije antitela, i ne treba da bude interpretirano (constured) kao što je potrebna proizvodnja antitela nekom određenom metodom. Na primer, monoklonalna antitela koja treba da se koriste u saglasnosti sa ovin pronalaskom mogu biti napravljena hibridoma metodom koja je prvi put opisao Kohlerei al.. Nature256 495 (1975), ili mogu biti napravljena metodama rekombinacije (videti,e. g.,U. S. Patent No. 4,816.567). "Monoklonalna antitela" mogu takode biti izolovana iz biblioteka antitela faga pomoću tehnika opisanih u Claksonet al, Nature352:624-628 (1991) iMarkse/ al., J. Mol. Biol.222 581-597 (1991) na primer.
"Funkcionalni fragmenti" CD20 vezujućih antitela iz ovog pronalaska su oni fragmenti koji zadržavaju vezivanje za CD20 sa potpuno istim afinitetom kao intaktni molekul kompletne dužine iz koga su izvedena i pokazuju biološku aktivnost uključujući uklanjanje B ćelije koje se meriin vitroilim vivoesejima kao što su oni opisani u ovom pronalasku.
Izraz "varijabilni" odnosi se na činjenicu da se određeni segmenti varijabilnih domena izuzetno razlikuju u sekvencama među antitelima. V domen posreduje u vezivanju antigena i definiše specifičnost određenog antitela za njegov određeni antigen. Međutim, varijabilnost nije podjednako distribuirana u okviai 110 amino kiselina koje sačinjavaju varijabilni region Umesto toga V regioni se sastoje od relativno nepromenljivih nizova koji se nazivaju "framevvork" regioni (FRi) i sačinjavaju ili 15-30 amino kiselina koje su razdvojene kratkim regionima sa ekstremnom varijabilnošću koji se zovu "hipervarijabilni regioni" koji su dugi 9-12 amino kiselina Varijabilni domeni nativnog teškog i lakog lanca sadrže, svaki ponaosob, četiri FR-a, koji zauzimaju konfiguraciju [}-pločc, koji su povezani sa tri hipervarijabilna regiona, koji formiraju petlje za povezivanje i u nekim slučajevima formiraju deo strukture P-pločc. Hipervarijabilni regioni u svakom lancu drže se zajedno u blizini jedni drugih preko FR-ova, i sa hipervarijabilnim regionima iz drugog lanca doprinose u formiranju antigen vezujućeg mesta antitela (videti Kabatet al.,Seguences of Proteins of Immunological Interest. 5<lh>Ed Public Health Service, National Institute of Health, Bethesta, MD (1991)) Konstantni domeni nisu direktno uključeni u vezivanje antitela za antigen, ali imaju različite efektorne funkcije kao što je učestvovanje antitela u ćelijskoj citotoksičnosti zavisnoj od antitela (antibodv dependant cellular cytotoxicity-ADCC).
Izraz "hipervarijabilni region" kada se koristi ovde odnosi se na amino kiselinske ostatke antitela koji su odgovorni za vezivanje antigena Hipervarijabilni region najčešće obuhvata amino kiselinske ostatke iz "regiona za određivanje komplementarnost" (complementarity determining region") ili "CDR" (e.g.oko ostataka 24-34 (LI), 50-56 (L2) i 89-97 (L3) u VL, i oko 31-35B (Hl), 50-65 (H2) i 95-102 (H3) u VH(Kabatet al.,Seguences of Proteins of Immunological Interest, 5<th>Ed. Public Health Service, National Institute of Health, Bethesta, MD (1991)) i/ili one ostatke iz "hipervarijabilne petlje"(e. g. ostaci26-32 (LI), i 91-96 (L3) u VL, i 26-32 (Hl), 52A-55 (H2) i 96-101 (H3) u VH(Clothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917
(1987))
Kao što se ovde navodi, "konsenzus sekvenca" ili konsenzus sekvenca V domena je veštačka sekvenca izvedena na osnovu poređenja amino kiselinskih sekvenci poznatih sekvenci varijabilnih regiona humanih imunoglobulina Na osnovu tog poređenja pripremljene su rekombinantne nukleokiselinske sekvence koje kodiraju amino kiseline V domena koje predstavljaju konsenzus za sekvence koje su dobijene iz humanihki humanih H lanaca podgrupe III V domena. Konsenzus V sekvenca nema nijednu poznatu funkciju antitela vezanu za specifičnost vezivanja ili afinitet
"Himerna" antitela (imunoglobulini) imaju deo teškog i/ili lakog lanca koji je identičan sa ili homolog sa odgovarajućom sekvencom u antitelima koja su dobijena iz određene vrste ili pripadaju određenoj klasi ili podklasi antitela, dok ostatak lanca je identičan sa ili homolog sa odgovarajućom sekvencom u antitelima dobijenim iz druge vrste ili pripada određenoj klasi ili podklasi antitela, kao i fragmenti ovog antitela, sve dok poseduju željenu biološku aktivnost (U S Patent No. 4, 816,567; i Morrisonet al., Proc. Natl. Acad. Sci.USA 81:6851-6855 (1984)) Humanizovano antitelo koje se ovde koristi je podklasa (subset) himernih antitela.
"Humanizovane" forme ne-humanih( e. g.mišijih) antitela su himerna antitela koja sadrže minimalnu sekvencu dobijenu iz ne-humanog imunoglobulina. Najvećim delom humanizovana antitela su humani imunoglobulini (recipijentsko ili akceptorsko antitelo) u kojima su ostaci hipervarijabilnog regiona recipijenta zamenjeni ostacima hipervarijabilnog regiona iz ne-humane vrste (donorsko antitelo) kao što je miš, pacov, zec ili nehumani primat koje ima željenu specifičnost, afinitet, i kapacitet. U nekim sučajevima, ostaci Fv "framevvork" regiona humanog imunoglobulina zamenjeni su sa odgovarajućim ne-humanim ostacima. Dalje, humanizovana antitela mogu sadržati ostatke koji se ne nalaze u recipijentnom antitelu ili donorskom antitelu. Modifikacije sc uvode da bi se dalje poboljšale performanse antitela kao što je afinitet vezivanja. Uopšteno, humanizovano antitelo sadržaće suštinski sve od, najmanje jednog, tipično dva, varijabilna domena, u kojima sve ili skoro sve hipervarijabilne petlje odgovaraju onima iz nc-humanog imunoglobulina i svi ili skoro svi FR regioni imaju humanu imunoglobulinsku sekvencu, iako FR regioni mogu da imaju jednu ili više amino kiselinske zamene koje poboljšavaju afinitet vezivanja. Broj ovih amino kiselinskih zamena u FR tipično nije veći od 6 u H lancu, i u L lancu ne više od tri. Humanizovano antitelo opcionalno takođe će sadržati najmanje deo imunoglobulinskog konstantnog regiona (Fc), tipično od humanog
imunoglobulina. Za dalje detalje videti Joneset al, Nature321:522-525 (1986); Reichmannet al, Nature332:323-329 (1988); i Presta,Curr. Op. Struct. Biol.2:593-596 (1992).
"Efektorna funkcija" antitela odnosi se na one biološke aktivnosti vezane za Fc region (nativna sekvenca Fc regiona ili varijanta amino kiselinske sekvence Fc regiona) ili za antitelo, i koje se razlikuju u zavisnosti od izotopa antitela. Primeri efektorne funkcije antitela uključuju: Clq vezivanje i citotoksičnost zavisnu od komplementa; Fc receptor vezivanje; ćelijski posredovanu zavisnu od antitela citotoksičnost (ADCC); fagocitozu; smanivanje ekspresije površinskih receptora (e.g.B ćelijskih receptora); B ćelijsku aktivaciju.
" Ćelijski-posredovana zavisna od antitela citotoksičnost" ili ADCC odnosi se na formu citotoksičnost! u kojoj se sekretovani Ig vezuje za Fc receptore (FcR) koji su prisutni na određenim citotoksičnim ćelijama( e. g.ćelije prirodne ubice (natural killer cells-NK, neutrofili, makrofazi)) i omogućavaju ove citotoksične efektorne čelije da se vežu specifično za ciljnu ćeliju koja nosi antigen i na taj način na kraju ubijaju ciljnu ćeliju sa citotoksinima. Antitela "naoružavaju" citotoksične ćelije i definitivno su neophodne za ovu vrstu ubijanja. Primarne ćelije za posredovanje u ADCC, NK ćelije eksprimiraju samo FcyRIII, dok monociti eksprimiraju FcyRI, FcyRII, i FcyRIII. Ekspresija FcR na hematopoetičnim ćelijama sumarno je prikazana na tabli 3 na strani 464 u Ravetech i Kinet,Annu, Rev. immunol 9:457-92(1991). Za procenu ADCC aktivnosti molekula od interesa, može se primenitiin vitroADCC esej, kao što je opisano u US Patent No. 5,500,362 ili 5,821,337. Korisne efektorne ćelije za ovakve eseje uključuju mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC, peripheral blood mononuclear cells) i ćelije prirodne ubice (NK, natural killer). Alternativno ili dodatno, ADCC aktivnost molekula od interesa mogu se procenitiin vivo, e. g.u životinjskom modelu kao stoje opisano u Clvneset al PNAStVSA)95:652-656 (1988).
"Fc receptor" ili "FcR" opisuje receptor koji se vezuje za Fc region antitela. Poželjni FcR je nativna sekvenca humanog FcR. Dalje, poželjan FcR je onaj koji se vezuje za IgG antitelo (gama receptor) i uključuje receptore za FcyRI, FcyRII, i FcyRIII podklase, uključujući alelske varijante i alternativno obrađene (splajsovane) forme ovih receptora. FcyRII receptori uključuju FcyRIIA ("aktivirajući receptor") i FcyRIIB ("inhibirajući receptor"), koji imaju slične amino kiselinske sekvence koje se razlikuju primarno u citoplazmatskim domenima. Aktivirajući receptor FcyRIIA sadrži imunoreceptorski baziran na tirozinu aktivacioni motiv (ITAM) u okviru svog citoplazmatskog domena. Inhibirajući receptor FcyRIIB sadrži imunoreceptorski baziran na tirozinu inhibicioni motiv (ITIM) u okviru svog citoplazmatskog domena, (videti revijski rad M. u Daeron,. 15:203-234 (1997)). FcR-ovi su obrađeni u revijskom radu Ravetech i Kinet,Annu. Rev. Immunol9:457-92 (1991); Capelet al, Immunomethods4:25-34 (1994); i Haaset al, J. Lab, Clin. Med.126:330-41 (1995). Drugi FcR-ovi uključujući i one koje tek treba u budućnosti identifikovati obuhvaćeni su u izrazu "FcR" u ovom pronalasku. Izraz takođe uključuje neonatalni receptor FcRn, koji je odgovoran za transfer maternalnog IgG u fetus(Guyer et al, J. Immunol. 117:587 (1976) i Kim et al, J. Immunol.24:249 (1994).
VVOOO/42072 (Presta) opisuje varijante antitela sa poboljšanim ili umanjenim vezivanjem za FcR-ove. Sadržaj te objave patenta je specifično ovde ugrađen i pokriven referencama. Videti takođe, Shieldset a!., J. Biol Chem9(2):6591-6604 (2001).
"Humane efektorne ćelije" su leukociti (bela krvna zrnca) koji eksprimiraju jedan ili više FcR-ova i izvršavaju efektorne funkcije. Poželjno je da ćelije eksprimiraju makar FcyRlll i izvršavaju ADCC efektomu funkciju. Primeri humanih leukocita koji posreduju ADCC uključuju
mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC, peripheral blood mononuclear cells), ćelije prirodne ubice (NK, natural killer), monocite, citotoksične T ćelije i neutrofdne; sa PBMC i NK ćelijama kao poželjnijim. Efektorne ćelije mogu biti izolovane iz nativnog izvorae. g.iz krvi.
"Citotoksičnost zavisna od komplementa" (Complement dependent cytotoxicity") ili "CDC" odnosi se na iizu ciljne ćelije u prisusustvu komplementa. Aktivacija klasičnog puta komplementa inicira se vezivanjem prvog komplementa iz sistema komplementa (Clq) za antitela (odgovarajuće podklase) koji se vezuju za srodni (cognate) antigen. Za procenu aktivacije komplementa, može se primeniti CDC esej,e. gkao što je opisano u Gazzano-Santoroet al, J. Immunol. Methods202:163 (1996).
Varijante polipeptida sa promenjenim amino kiselinskim sekvencama i povećanom i smanjenom sposobnošću vezivanja Clq, opisane su u US Patent No. 6,194,551B1 i W099/51642. Sadržaji tih objava patenta specifično su inkorporirana u ovom pronalasku sa referencama. Videti, takodjeIndusogie et al, J. Imminol.164:4178-4184 (2000).
Mesto za N-glikozilaciju u IgG je na Asn297 u okviru CH2 domena. Ovaj pronalazak takođe obezbedjuje kompozicije za CD20-vezujuće, humanizovano antitelo koje ima Fc region, naznačeno time da 80-100% (i poželjno oko 90-99%) antitela u kompoziciji obuhvata ugljovodoničnu strukturu zrele srži (ćore) kojoj nedostaje fukoza, vezana za Fc region glikoproteina. Za ovakve kompozicije ovde je demonstrirano da pokazuju poboljšanje u vezivanju za FcyRIIIA(F158), koje nije efikasno kao Fc(RlIIA(V158) u interakciji sa humanim IgG. Tako se za ovde opisane kompozicije predviđa da budu superiorne u odnosu na prethodno opisane kompozicije anti-CD20 antitela, pogotovu za terapiju humanih pacijenata koji eksprimiraju Fc(RIIIA(F158). Fc(RIIIA(F158) je češći od Fc(RIIIA(V158), u normalnim, zdravim Američkim crncima i belcima. Videti Lehrnbecheret al Blood94:4220 (1990). Ova prijava dalje demonstrira sinergističko povećanje u Fc(RIII vezivanju i/ili ADCC funkciji koje rezultira iz kombinovanja varijanti glikozilacije ovde opisane sa modifikacijama amino kiselinske sekvence u Fc regionu glikoproteina.
"Izolovano" antitelo je ono koje je identifikovano i odvojeno i/ili dobijeno iz komponente koja predstavlja njegovo normalno okruženje. Kontaminirajuće komponente iz njegovog normalnog okruženja su materijali koji bi interferirali sa dijagnostički ili terapeutskim upotrebama antitela, i mogu obuhvatiti enzime, hormone, i druge proteinske i neproteinske rastvorene komponente (solutes). U poželjnim ostvarenjima, antitelo će biti prečišćeno (1) do više od 95% po težini antitela kao što je determinisano Lowry metodom, i najpoželjnije više od 99% težinski, (2) do nivoa neophodnog za dobijanje N-terminalne sekvence makar 15 amino kiselinskih ostataka ili unutrašnje amino kiselinske sekvence pomoću "spinning cup" sekvenatora, ili (3) do homogenosti SDS-PAGE u redukujućim ili neredukujućim uslovima pomoću "Commassie blue" bojenja ili poželjnije bojenjem srebrom. Izolovano antitelo uključuje antiteloin situu okviru rekombinantne ćelije, jer makar jedna komponenta iz prirodnog okruženja antitela neće biti prisutna. Uobičajeno, međutim, izolovano antitelo biće pripremljeno makar preko jednog koraka prečišćavanja.
"Izolovani" molekul nukleinske kiseline je molekul nukleinske kiseline koji je identifikovan i razdvojen od makar jednog kontaminantnog molekula nukleinske kiseline sa kojim je u normalnim uslovima povezan u prirodni izvor molekula nukleinske kiseline antitela. Izolovani molekul nukleinske kiseline je drugačiji nego što je njegov oblik ili njegov raspored kada se on nalazi u prirodi. Zato se izolovani molekuli nukleinskih kiselina razlikuju od molekula
nukleinskih kiselina koji se nalaze u prirodi. Međutim, izolovani molekul nukleinske kiseline uključuje molekul nukleinske kiseline koji se nalazi u ćelijama koje normalno eksprimiraju antitelo gde se na primer, molekul nukleinske kiseline nalazi na različitom mestu na hromozomu nego što je to slučaj u prirodnoj ćeliji
Izraz "kontrolne sekvence" odnosi se na DNK sekvence neophodne za ekspresiju operativno povezane kodirajuće sekvence u određenom domaćinskom organizmu. Kontrolne sekvence koje odgovaraju prokariotskom organizmu na primer uključuju promotor, opcionalno operatorsku sekvencu, i mesto za vezivanje ribozoma. Poznato je da eukariotske ćelije koriste promotore, poliadenilacione signale i pojačivače ("enhancers").
Nukleinska kiselina je "operativno povezana" kada se nalazi u funkcionalnom odnosu sa drugom nukleokiselinskom sekvencom. Na primer, DNK za presekvencu ili sekretornu "lider" sekvencu je operativno povezana sa DNK za polipeptid ako se eksprimira kao preprotein koji učestvuje u sekreciji polipeptida; promotor ili "enhancer" tj pojačivač je operativno povezan sa kodirajućom sekvencom ako utiče na transkripciju sekvence, ili mesto za vezivanje ribozoma je operativno vezano za kodirajuću sekvencu ako je pozicionirano tako da olakšava translaciju Uopšteno, "operativno povezano" znači da su DNK sekvence koje su povezane u kontinuitetu i u slučaju sekretornog "lider"-a kontinuirane i u fazi čitanja. Međutim pojačivači ne moraju biti u kontinuitetu. Povezivanje se ostvaruje ligacijom preko pogodnih restrikcionih mesta. Ako takva mesta ne postoje, koriste se sintetički oligonukleotidni adapteri ili linkeri koji se konvencionalno koriste u praksi.
"Vektor" uključuje "shuttle" i ekspresione vektore. Tipično, plazmidni konstrukt će uključiti "origin" (početak) replikacije( e. g.ColEl origin replikacije) i selektivni marker( e. g.ampicilinska ili tetraciklinska rezistencija), za replikaciju i selekciju plazmida ili bakterije "Ekspresioni vektor" odnosi se na vektor koji sadrži neophodne kontrolne sekvence ili regulatorne elemente za ekspresiju antitela uključujući fragmente antitela iz ovog pronalaska, u bakterijskoj ili eukariotskoj ćeliji Pogodni vektori su predstavljeni dalje u tekstu
Ćelija koja proizvodi humanizovano CD20 vezujuće antitelo iz ovog pronalaska uključiće bakterijske i eukariotske domaćinske ćelije u koje su unesene nukleinske kiseline koje kodiraju antitela. Pogodne domaćinske ćelije su predstavljene dalje u tekstu.
Reč "oznaka" (label) kada se koristi ovde odnosi se na jedinjcnje koje se detektuje ili kompoziciju koja je konjugovana direktno ili indirektno sa antitelom Oznaka može sama po sebi biti detektabilna( e. g.radioaktivna oznaka ili fluorescentna oznaka) ili u slučaju enzimske oznake, može da katalizuje hemijsku promenu substratnog jedinjenja ili kompozicije koja se detektuje
"Autoimuno obolenje" u ovoj prijavi je ne-maligno obolenje ili poremećaj koji je usmeren direktno protiv antigena i/ili tkiva domaćina, tj sopstvenih antigena i/ili tkiva
Kao što se ovde koristi, "uklanjanje B ćelija" odnosi se na redukciju nivoa B ćelija u životinji ili čoveku nakon tretiranja sa lekom ili antitelom, kada se uporedi sa nivoom B ćelija pre tretiranja. Nivoi B ćelija sc mogu izmeriti pomoću poznatih eseja kao što su oni opisani u primerima eksperimenata. Raspadanje B ćelija može biti kompletno ili delimično. U jednom ostvarenju, raspadanje B ćelija koje eksprimiraju CD20 je najmanje 25% Mogući mehanizmi raspadanja B ćelija, iako ne treba da se samo na njih ograniči, uključuju ADCC, CDC, apoptozu, modulaciju fluksa kalcijuma ili kombinaciju jednog ili više ovih mehanizama.
Izraz "citotoksični agens" koji se ovde koristi odnosi se na substancu koja inhibira ili sprečava funkcije ćelija i/ili izaziva uništavanje ćelija Izraz je namenjen da uključi radioaktivne izotope( e. g.,1131, 1125, Y90 i Rel86, hemoterapeutske agense, i toksine kao što su enzimatski aktivni toksini poreklom iz bakterija, gljiva,biljaka ili životinja ili njihovi fragmenti.
"Hemoterapeurtski agens" je hemijsko jedinjenje koje se koristi u tretiranju raka. Primeri hemoterapeutskih agenasa uključuju alkalizirajućc (alkalyzing or alkylating) agense kao što su tiotepa i ciklofosfamid (CYTOXANr,M); alkil sulfonate kao busulfan, improsulfan i piposulfan, aziridini kao benzodopa, karbokuon, meturdopa, i uredopa; etilenimini i metilamelamini uključujući altretamin, trietilenemelamin, trietilenfosforamid, trietilentiofosforamid i trimetilolomelamin; azotni "mustrads" kao hlorambucil, hlornafazin, hlorfosfamid, estramustin, ifosfamid, mehloretamin, mehloretamin oksid hidrohloriad, melfalan, novembicin, fenesterin, prednimustin, trofosfamid, uracil "mustard, nitroerea kao karamustin, hlorozotocin, fotemustin, lomustin, nimustin, ranimustin, antibiotici kao aklakonomuzin, aktinomicin, autramicin, azaserin, bleomicini, kaktinomicin, kalihemicin, karabiin, karminomicin, karzinofilin, hromomicin, daktinomicin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-okso-L-norleucin, doksorubicin (Adriamicin), epirubicin, ezorubicin, idarubicin, marcelomicin, mitomicin, mizofenolna kiselina, nogalamicin, olivomicim, peplomicin, potfirornicin, puromicin, kuelamicin, rodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimeks, zinostatin, zorubicin; anti-metaboliti kao metotreksat i 5-fluoruraci! (5-FU), analozi folne ksileine kao denopterin, metotreksat, pteropterin, trimetreksat, analozi purina kao fludarabin, 6-merkaptopurin, tamiprin, tioguanin,; analozi pirimidina kao ancitabin, azacitidin, 6-azauridin, karmofur, citarabin, dideoksiuridin, doksifluridin, enocitabin, floksuridin, 5-FU, androgeni kao kalusteron, dromostanolon propionat, epitionastol, mepitiostan, testolakton,, anti-adrenalni kao aminoglutctimid, mitotan, trilostan; "replenisher" folne kiseline kao frolinska kiselina, aceglaton, aldofosforamid glukozid; aminolevulinska kiselina, amsakrin, bestrabucil; bizantren, edatraksit; defofamin; demekolcin; diazikuon; elfornitin; eliptinijum acetat; etoglucid, galijum nitrat, hidroksiurea, lentinan; lonidamin; mitoguazon; mitoksantron, mopidamol, nitrakrin; pentostatin, fenamet, pirarubicin, podofilična kiselina; 2-etilhidrazid, prokarbazin; PSK®, razoksan, sizofiran, spirogermanium; tenuazonična ksielina; triazikinon, 2, 2', 2"-trhlorotrietilamin, uretan, vindezin, dakarbazin; manomustin, mitobronitol, mitolaktol; pipobroman, gacitozin, arabinozid ("Ara-C"); tiotepa, taksoidie. g.paklitaksel (TAXOL®, Bristol-Mayers Squib Oncology, Princeton, NJ) i doksetaksel (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France), hlorambucil, gemcitabin, 6-tioguanin, merkaptopurin, metotreksat, analozi pletine kao cisplatina i karboplatina, platina, etopozid (VP-16), ifosfamid, mitomicin C, mitoksantron, vinkristin; vinorelbin; navclbin, novantron, tenipozid, daunomicin, aminoptcrin, xeloda, ibandronat, CPT-1 1; inhibitor topoizomeraze RFS 2000, dinuorometilornitin (DMFO), retinoična kiselina, esperamicini, kapecitabin; i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili bilo koji derivati gore napomenutih jedinjeja i elemenata. Takođe u ovoj definiciji obuhvaćeni su anti-hormonalni agensi koji deluju tako da regulišu ili inhibiraju delovanje hormona na tumore kao anti-estrogeni uključujući na primer tamoksifen, raloksifen, aromatični inhibitorni 4(5)-imidazoli, 4-hidroksitamofiksen, trioksifen, keoksifen, LY117918, onapriston, i toremifen (Farcston), anli-adrogcni kao flutamid, nilutamid, bikalutamid, leuprolid, i goserelin; drugi hemoterapeutski agensi kao prednisolon. Uključeni su farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivati bilo kojih gore navedenih jedinjenja.
"Tretiranje" ili "tretman" ili "oslobađanje" (allevation) odnosi se i na terapeutski tretman i profdaktičke ili preventivne mere, naznačeno time da objekat treba da spreči ili uspori (umanji) ciljno patološko stanje ili poremećaj. Subjekat je uspešno "tretiran" za CD20 pozitivan rak ili autoimuno obolenje, ako nakon primanja terapijske količine CD20 vezujućeg antitela iz ovog pronalaska, na osnovu metoda iz ovog pronalaska, subjekat pokazuje vidljivu i/ili merljivu redukciju ili odsustvo jednog ili više znakova i simptoma određene bolesti. Na primer, za rak, redukcija broja ćelija raka ili odsustvo ćelija raka; redukcija veličine tumora, inhibicija (/.e.usporavanje do određenog stepena i poželjno zaustavljanje) metastaza tumora; inhibicija do određenog nivoa rasta tumora; povećavanje dužine remisije, i/ili olakšanje do određenog nivoa,, jednog ili više simptoma povezanih sa specifičnim rakom, redukcija morbiditeta i mortaliteta i poboljšanje kvaliteta života. Redukciju znakova ili simptoma bolesti može sam pacijent da oseti. Tretman može dovesti do potpunog odgovora, koji se definiše kao nestanak svih znakova raka, ili delimičan odgovor, naznačeno time da je veličina tumora smanjena, poželjno je za više od 50%, još poželjnije 75%. Pacijent se takodje smatra uspešno lečenim i kada kod pacijenta dodje do stabilizacije bolesti U željenom ostvarenju, kod pacijenata obolelih od raka nema progresije u razvoju raka ni posle jedne godine , a češće ni posle 15 meseci. Ovi parametri za procenu uspešnosti tretmana i poboljšanje bolesti su merljivi rutinskim procedurama koje su poznate lekarima odgovarajuće specijalnosti
"Terapeutski efektivna količina " odnosi se na količinu antitela ili leka koja je efikasna u "tretiranju" bolesti ili poremećaja subjekta. U slučaju raka, terapeutski efektivna količina leka može da redukuje broj ćelija raka, inhibira (/.e.uspori do određenog nivoa i poželjno je da zaustavi) infiltraciju ćelija raka u periferne organe, inhibira (/.e.uspori do određenog nivoa i poželjno je da zaustavi) metastaze tumora, inhibira do određenog nivoa rast tumora, i/ili oslobodi do određenog nivoa od jednog ili više simptoma poveznaih sa rakom. Videti prethodnu definiciju "tretiranje".
"Hronično" davanje odnosi se na davanje agensa u kontinuiranom modusu kao suprotnost akutnom modusu, da bi se zadržao inicijalni terapeutski efekat (aktivnost) tokom produženog vremenskog perioda. Davanje "sa prekidima" je tretiranje koje nije izvedeno neprekidno, bez prekida, već je po prirodi ciklično.
Kompozicije i metode pronalaska
Ovaj pronalazak obezbeđuje humanizovana antitela koja vezuju CD20, i poželjno druge primatne CD20, koja obuhvataju H lanac koji ima makar jedan, poželjno dva ili sve CDR-ove H lanca ne-humane vrste anti-humanog CD20 antitela (donorsko antitelo), i suštinski sve ostatke "framework"-a humanog konsenzusa kao rccipijentno antitelo. Donorsko antitelo može biti poreklom od različitih ne-humanih vrsta uključujući miša, pacova, morsko prase, zeca, konja, primate, ali najčešće je misije antitelo. "Suštinski sve" u ovom kontekstu ima značenje da recipijentski FR regioni u humanizovanom antitelu mogu uključiti jednu ili više amino kiselinskih substitucija koje nisu prvobitno prisutne u humanoj konsenzus FR sekvenci. Ove FR promene mogu obuhvatiti ostatke koji se ne nalaze u recipijentskom ili donorskom antitelu.
U jednom ostvarenju, donorsko antitelo je misije 2117 antitelo, V region uključuje CDR i FR sekvence H i L lanca koji su prikazani na slikama 1A i 1B. Li specifičnom ostvarenju, ostaci humanog Fc "framework"-a odgovaraju konsenzus sekvenci humanog Vkpodgrupe 1 i Vhpodgrupe 111, ove konsenzus sekvence su prikazane na slikama 1A i 113. Humanizovano 2117 antitelo iz ovog pronalaska imaće najmanje jedan od CDR-ova u H lancu mišijeg donorskog antitela U jednom ostvarenju, humanizovano 2H7 antitelo koje se vezuje za humani CD20 obuhvata CDR-ove i H i L lanca donorskog antitela
U celokupnom antitelu, humanizovano CD20 vezujuće antitelo iz ovog pronalaska sadržaće humanizovani V domen spojen sa C domenom humanog imunoglobulina U poželjnijem ostvarenju, C region H lanca je iz humanog IgG, poželjno IgGl ili IgG3. C domen L lanca poželjno je da bude od humanogklanca.
Osim ako nije naznačeno drugačije, verzija humanizovanog 2H7 antitela iz ovog pronalaska imaće sekvence V i C domena od 2H7 vi6 L lanca (SL 6 SEQ ID NO 21) i H lanca (SL 7 SEQ ID NO.22) osim na pozicijama amino kiselinskih zamena ili promena koje su naglašene u primerima eksperimenata dalje u tekstu
Humanizovana CD20 vezujuća antitela će vezati makar humani CD20 i preferencijalno vezati druge primatne CD20 kao one od majmuna, uključujući cvnomolgus i rezus majmune, i šimpanze. Sekvenca CD20 od cvnomolgus majmuna prikazana je u primeru 15 i na slici 19.
Biološka aktivnost CD20 vezujućih antitela i humanizovanih CD20 vezujućih antitela iz ovog pronalaska uključiće makar vezivanje antitela za humani CD20, još poželjnije vezivanje za humani i primatni CD20 (uključujući cvnomolgus i rezus majmune, i šimpanze), sa KD vrednošću ne većom od 1x10"<8>, poželjno je da Knvrednost nije veća od 1 x 10"9 i još poželjnije da Kq vrednost nije veća od 1x10"'° i da je sposobna da ubija ili uklanja B ćelijein vilroiliin vivo,poželjno makar 20% kada se uporede sa baznom linijom ili odgovarajućom negativnom kontrolom koja nije tretirana sa ovakvim antitelom.
Željeni nivo uklanjanja B ćelija zavisiće od obolenja. Za tretiranje CD20 pozitivnog raka može biti poželjno maksimalno uklanjanje B ćelija koje su cilj (target) za anti/CD20 antitela iz ovog pronalaska. Zato, za tretiranje CD20 pozitivne neoplazme, poželejno je da uklanjanje B ćelija bude dovoljno makar da spreči napredovanje bolesti koje se može proceniti od strane lekara specijaliste,e. g.monitoringom rasta tumora (veličine), proliferacije kancerskog tipa ćelija, metastaza, drugih znakova i simptoma određenog raka. Poželjno je da uklanjanje B ćelija bude dovoljno da spreči napredovanje bolesti najmanje 2 meseca, još poželjnije je 3 meseca, i još poželjnije 4 meseca, još poželjnije 5 meseci i najpoželjnije 6 meseci ili više. U još poželjnijim ostvarenjima, uklanjanje B ćelija je dovoljno da poveća vreme remisije makar za 6 meseci, još poželjnije 9 meseci, još poželjnije jednu godinu, još poželjnije 2 godine, još poželjnije 3 godine, i još poželjnije 5 ili više godina U najpoželjnijem ostvarenju, uklanjanje B ćelija je dovoljno da se bolest izleči U poželjnim ostvarenjima, uklanjanje B ćelija kod pacijenata obolelih od raka je makar 75%, poželjnije 80%>, 85%), 90%>, 95%> i čak 100% od bazne vrednosti pre tretiranja.
Za tretiranje autoimune bolesti, možda bude potrebno da se moduliše opseg uklanjanje B ćelija u zavisnosti od obolenja i/ili težine stanja individualnog pacijenta, tako što će se podesiti doza CD20 vezujućeg antitela. Tako, uklanjanje B ćelija može ali i ne mora biti kompletno. Ili, ukupno uklanjanje B ćelija može biti potrebno u inicijalnom tretmanu ali u narednim tretmanima doza se može podesiti da bi se dobilo samo delimično uklanjanje U jednom ostvarenju, uklanjanje B ćelija je makar 20%, i. c 80% ili manje CD20 pozitivnih B ćelija ostaje u odnosu na baznu vrednost pre tretmana. U drugim ostvarenjima uklanjanje B ćelija je 25%, 30%, 40%o, 50%, 60%o, 70% ili više. Poželjno uklanjanje B ćelija je dovoljno da zaustavi napredovanje bolesti, još poželjnije da ublaži znakove i simptome određene bolesti tokom tretmana, i još poželjnije da izleči bolest
Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje bispecifična CD20 vezujuća antitela, naznačeno time da jedna ruka antitela ima humanizovani H i L lanac od humanizovanog CD20 vezujućeg antitela iz ovog pronalaska, i druga ruka ima specifičnost vezivanja V regiona za drugi antigen. U specifičnom ostvarenju drugi antigen je odabran iz grupe koja se sastoji od CD3, CD64, CD32, CD 16, NKG2D i drugih NK aktivirajućih liganada
U poređenju sa Rituxan (rituksimab), vi6 pokazuje oko 2 do 5 puta veću ADCC potenciju, i približno 3-4 puta smanjenje CDC-a nego Rituxan.
Proizvodnja antitela
Monoklonalna antitela
Monoklonalna antitela mogu se napraviti upotrebom metode hibridoma opisanom od strane Kohleret al, Nature,256:495 (1975) ili se mogu napraviti metodama rekombinantne DNK (U S Patent No. 4,816,567).
Po hibridoma metodi, miš ili odgovarajući organizam domaćin, kao hrčak, imunizuje se kao što je gore opisano da bi se povisili limfociti koji porizvode ili su sposobni da proizvode antitela koja će se specifično vezati za protein koji je korišćen u imunizaciji Alternativno, limfociti mogu biti imunizovaniin vitroNakon imunizacije, limfociti se izoluju i zatim fuzionišu sa mieloma ćelijskom linijom pomoću prigodnog agensa za fuzionisanje, kao što je polietilen glikol, da bi se formirala hibridoma ćelija (Goding,Monoclonal Antibodies: Principles and Practtce,pp. 59-103 (Academic Press, 1986)).
Hibridoma ćelije, koje su ovako pripremljene, seju se i uzgajaju u pogodnom medijumu za gajenje kulture, medijumu koji je poželjno da sadrži jednu ili više supstanci koje inhibiraju rast ili preživljavanje nefuzionisanih, potencijalnih mieloma ćelija (takođe se zovu fuzioni partner) Na primer, ako parentalnim ćelijama mielome nedostaje enzim hipoksantin guanin fosforibozil transferaza (HGPRT ili IiPRT), selektivni medijum za kulturu za hibridome tipično će uključiti hipoksantin, aminopterin, i timidin (HAT medijum), supstance koje sprečavaju rast HPGRT deficijentnih ćelija.
Poželjni fuzioni partner mieloma ćelije su one koje efikasno fuzionišu, podržavaju stabilnu visoku produkciju antitela od strane selektovanih ćelija koje proizvode antitela, i koje su senzitivne na selektivni medijum koji selektuje nefuzionisane parentalne ćelije. Poželjne mieloma celijske linije su misije mieloma linije, kao one izvedene iz MOPC-21 i MPC-11 mišijih tumora dostupnih od Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA, i SP-2 i derivatie. g.X63-Ag8-653 ćelije dostupne od American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA. Humane mieloma i mišije-humane heteromieloma ćelijska linije takođe su opisane za proizvodnju humanih monoklonalnih antitela (Kozbor,,/. Immunol133:3001 (1984), i Brodeuret al., Monoclonal Antibodv Production Technicjiies and App/ icatios,pp. 51-63 (Marccl Dekker, Inc., New York, 1987))
Medijum za gajenje hibridoma ćelija je procenjen esejom za proizvodnju monoklonalnih antitela koja su usmerena na antigen Poželjno je da se specifičnost vezivanja monoklonalnih antitela produkovanih od strane hibridoma ćelija odredi imunoprecipitacijom ili esejomm vil. rovezivanja, kao što je radioimunoesej (RJA) ili ELISA (esej imunoabsorbcije povezane sa enzimom).
Afinitet vezivanja monoklonalnog antitela može na primer biti određen Scatchard-ovom analizom opisanom u Munsonet al., Anal. Biochem, 107:220 (1980).
Kada se identifikuju ćelije hibridoma koje proizvode antitela željene specifičnosti, afiniteta i/ili aktivnosti, klonovi se mogu subklonirati procedurama ograničenih dilucija i mogu se uzgajati standardnim metodama (Goding,Monoclonal Antibodies: Principles and Practice,pp 59-103 (Acdemic Press)). Pogodni medijumi za gajenje za ove svrhe uključuju na primer D-MEM ili RPMI-1640 medijum. Dodatno, hibridoma ćelije mogu da rastuin vivokao hidroperitoneum (ascites) tumori u životinjie. g.putem p.i injeciranja ćelija u miša.
Monoklonalna antitela koja se sekretuju od strane subklonova odvajaju se od medijuma za gajenje, hidroperitoneum (ascites) tečnosti, ili seruma konvencionalnim procedurama prečišćavanja antitela kao stoje na primer afinitativna hromatografija,( e. g.pomoću proteina A ili G sefaroze) ili jonsko izmenjivačkom hromatografijom, hidroksilapatit hromatografijom, gel elektroforezom, dijalizom itd..
DNK koja kodira monoklonalna antitela izoluje se i sekvencira pomoću konvencionalnih procedura( e. g.upotrebom oligonukleotidnih proba koje su sposobne da se specifično vežu za gene koji kodiraju lake i teške lance mišjih antitela). Hibridoma ćelije služe kao poželjan izvor ovakve DNK Kada je izolovana, DNK se može staviti u ekspresione vektore, koji se zatim transfektuju u domaćinske ćelije kaoE. colićelije, simijan COS ćelije, CHO ćelije (ćelije jajnika kineskog hrčka), ili mijeloma ćelije koje inače ne proizvode protein antitela, da bi se dobila sinteza monoklonalnih antitela u rekombinantnim domaćinskim ćelijama. Revijski radovi vezani za rekombinantnu ekspresiju u bakterijama DNK koja kodira antitelo uključuju Skerraet al., Curr. Opimon in Immunol.,5:256-262 (1993) i Pluckthun,Immunol. Revs.,130:151-188 (1992)
U sledećem ostvarenju monoklonalna tela ili fragmenti antitela mogu se izolovati iz fagnih biblioteka antitela dobijenih tehnikama opisanim u McCaffertvet al.. Nature,348:552-554
(1990) . Claksonet al.., Nature,352:624-628 (1991) i Markset al, ,/. Mol Biol.222:581-597
(1991) opisuju izolovanje murina i humanih antitela, respektivno, koristeći biblioteke faga Sledeće publikacije opisuju proizvodnju humanih antitela visokog afiniteta (nM opseg) pomoću metode "ehain shuffling" (Markset al., BioTechnology,10:779-783), kao i kombinovanu infekciju iin vivorekombinaciju kao strategiju za konstruisanje veoma velikih fagnih biblioteka (VVaterhouseet al, Nucl. Ac/ ds. Res.21:2265-2266 (1993)). Tako su ove tehnike alternativa za tradicionalne tehnike izolacije monoklonalnih antitela hibridoma.
DNK koja kodira antitelo može biti modifikovana da proizvodi himerne ili fuzione polipeptide antitela, na primer, zamenom sekvenci konstantnih domena humanog teškog lanca i lakog lanca (Cn i Ci ) homologim sekvencama iz miša (U. S. Patent No 4,816,567, i Morrisonet al., Proc. Nali Acad Sci. USA,81:6851 (1984)), ili fuzionisanjem imunoglobulinske kodirajuće sekvence kompletno ili delimično sa kodirajućom sekvencom za ne-imunoglobulinski polipeptid (heterologni polipeptid), Ne-imunoglobulmske polipeptidne sekvence mogu da zamene konstantne domene antitela, ili su zamenjene sa varijabilnim domenima jednog antigen-kombinirajućeg mesta antitela da bi se formiralo himerno bivalentno antitelo koje sadrži jedno antigen-kombinirajuće mesto koje ima specifičnost za antigen i drugo antigen-kombinirajuće mesto koje je specifično za različiti antigen
Humanizovana antitela
Metode za humanizovanje ne-humanih antitela opisana su u nauci. Poželjno humanizovano antitelo ima jedan ili više amino kiselinski ostatak unesen u njega iz ne-humanog izvora. Ovi nehumani amino kiselinski ostaci se često nazivaju "uvozni" (import) ostaci, koji su tipično uzeti iz "uvoznog" varijabilnog domena. Humanizacija se može izvesti pomoću metode Winter-a i saradnika (Joneset al., Nature,321:522-525 (1986), Reichmanet al. Nature,332:323-327
(1988)), pri čemu se sekvence hipervarijabilnih regiona zamenjuju odgovarajućim sekvencama iz humanog antitela. Navodno, ovakva "humanizovana" antitela su himerna antitela (U. S.
Patent No. 4,816,567), naznačeno time da je zamenjeno znatno manje od intaktnog humanog domena sa odgovarajućom sekvencom iz ne-humane vrste. U praksi, humanizovana antitela su tipična antitela u kojima su neki ostaci hipervarijabilnog regiona i verovatno neki FR ostaci zamenjeni ostacima iz analognih mesta iz glodarskih antitela
Izbor humanih varijabilnih regiona, i teškog i lakog, koji treba da se koriste u pravljenju humanizovanih antitela veoma je važno da bi se smanjila antigenost i HAMA odgovor (humano-anti-mišije antitelo) kada se planira teraputska primena antitela Na osnovu tzv "best-fit" metode, sekvenca varijabilnog domena glodarskog antitela je skrinovana i pregledana cela biblioteka poznatih sekvenci varijabilnih humanih domena. Sekvenca humanog V domena koja je najsličnija glodarskoj je identifikovana i humani "framevvork" region FR, koji se nalazi u okviru nje, je prihvaćen za humanizovano antitelo (Simset al., J. Immunol,151:2296 (1992), Chothiaet al., J. Mol. Biol,196:910 (1987)) Druga metoda koristi određeni "framevvork" region koji je izveden od konsenzus sekvence svih humanih antitela određene podgrupe lakih i teških lanaca. Isti "framevvork" se može koristiti za nekoliko različitih humanizovanih antitela(Čartere/«/., Proc. Nali. Acad. Sci. USA,89:4285 (1992), Prestaet al., J. Immunol.,151:2623
(1993)).
Dalje je važno da se antitela humanizuju sa zadržavanjem afiniteta vezivanja za antigen i drugih poželjnih bioloških osobina Da bi se ovo postiglo, na osnovu poželjne metode, humanizovana antitela se pripremaju u procesu analiza roditeljskih sekvenci i različitih konceptualnih humanizovanih antitela pomoću trodimenzionalnih modela roditeljskih i humanizovanih sekvenci Trodimenzionalni modeli imunoglobulina su vec svuda dostupni i poznati onima koji se bave naukom. Dostupni su i programi koji ilustruju i predviđaju trodimenzionalne konformacione strukture sekvenci imunoglobulina. Proučavanje i pregled ovih prikaza omogućava analizu mogućih uloga koje imaju ostaci u funkcionisanju kandidatne imunoglobulinske sekvence,//.analizu ostataka koji utiču na sposobnost kandidatnog imunoglobulina da veže antigen. Na ovaj način, FR ostaci sc mogu selektovati i kombinovati od recipijenta i uvoznih sekvenci tako da se dobiju željene karakteristike antitela, kao što je povećan afinitet za ciljni(e) antigen(e). Uopšteno, ostaci hipervarijabilnog regiona direktno i u značajnoj meri utiču na vezivanje antigena.
Humanizovano antitelo može biti fragment antitela, kao Fab, koje je opcionalno konjugovano sa jednim ili više citotoksičnih agenasa u cilju dobijanja imunokonjugata. Alternativno, humanizovano antitelo može biti antitelo kompletne dužine kao stoje IgG 1 antitelo kompletne dužine.
Humana anitela i metoda " izlaganjafaga " ( phage display)
Kao alternativa humanizaciji, humana antitela se mogu generisati. Na primer, danas je moguće da se proizvedu transgene životinje (na primer miševi) koji su sposobni da nakon imunizacije proizvode kompletan repertoar humanih antitela u odsustvu endogene proizvodnje imunoglobulina Na primer, opisano je da homozigotne delecije gena za povezujući region (joining region) teškog lanca (Jh) u himernim miševima i miševima mutantima u germinativnoj liniji (germ-line) rezultiraju u kompletnoj inhibiciji endogene proizvodnje antitela Transfer humane germinativne linije imunoglobulinskog genskog niza u ovakve mutantne miševe germinativne linije razultiraće proizvodnjom humanih antitela nakon unošenja antigena. Videtie. g.Jakobovitset al., Proc Nali. Acad. Sci. USA,90:2551 (1993), Jakobovitset al, Nature,362:255-258 (1993); Bruggemannet al, Vear in Immuno .,7:33 (1993), U. S. Patent Nos. 5,545,806, 5,569,825, 5,591,669 (svo od GenePharm), 5545,807, i WO 97/17852.
Alternativno, tehnologija "izlaganja faga" (phage displav) (McCaffertvet al, Nature348:552-553 (1990) može se koristiti za proizvodnju humanih antitela i fragmenata antitelain vitro,od repertoara gena za imunoglobulinski varijabilni (V) domen od neimunizovanog donora Na osnovu ove tehnike geni za V domen antitela kloniraju se "in frame" u ili glavni ili minorni gen proteina omotača fdamentoznog bakteriofaga, kao M13 ili fd, i izlažu se kao funkcionalni fragmenti na površini čestice faga. Usled toga što filamentozna čestica sadrži jednolančanu DNK kopiju genoma faga, selekcije bazirane na funkcionalnim osobinama antitela, takođe će rezultirati selekcijom gena koji kodiraju antitelo koje ima te iste osobine Zato, fag oponaša neke osobine B-ćelija. "Phage displav" se može izvesti u nekoliko različitih formata kao što je prikazano u revijskim radovimae. g.,Johnson; Kevin S and Chisvvelll, David J.,Current Opinion in Structural Biology3:564-571 (1993) Nekoliko izvora V-genskih segmenata može se iskoristiti za "phage displav". Claksonet al, Nature,352:624-628 (1991) su izolovali različiti niz (array) anti-oksidativnih antitela iz male nasumične kombinatorne biblioteke (random combinatorial library) V gena dobijenih iz slezina imunizovanih miševa. Repertoar V gena iz neimunizovanih humanih donora može se konstruisati i mogu se izolovati antitela kao niz različitih antigena (uključujući i sopstvene antigene) samo prateći tehniku opisanu od strane Markset al, J. Mol. Biol222:581-597 (1991), ili Griffithet al, EMBO ./.12:752-734 (1993). Videti takođe U. S. Patent Nos. 5,565,332, i 5,573,905.
Kao što je gore obrađeno, humana antitela mogu biti generisanain vit. roaktiviranim B ćelijama (videti U S. Patents 5.567,610 i 5,229,275.
l' ragmeniti antitela
U određenim okolnostima upotreba fragmenata antigena može biti u prednosti u odnosu na korišćenjc celih antitela. Manja veličina fragmenta omogućava brzo čišćenje, i može dovesti do poboljšanja pristupa čvrstim (solid) tumorima
Razvijene su različite tehnike za proizvodnju fragmenata antitela. Tradicionalno ovi fragmenti su dobijani preko proteolitičkog sečenja intaktnih antitela (videtie. g.Morimotoet al., Journalod Biochemical and Biophysical Melhods24:107-1 17 (1992), i Brennanet al., Science,229:81
(1985)) Međutim, ovi fragmenti mogu sada biti proizvedeni direktno od strane rekombinantne domaćinske ćelije fab, Fv i ScFv fragmenti antitela mogu se eksprimirati i sekretovati izE coli,i tako omogućiti olakšanu proizvodnju velikih količina ovih fragmenata Fragmenti antitela se mogu izolovati iz fagne biblioteke antitela koja je opisana gore u tekstu. Alternativno, Fab'-SH fragmenti mogu se direktno dobiti izE. colii hemijski povezati (coupled) da bi se formirali F(ab')2fragmenti (Catreret al., Bio/ Techology10:163-167 (1992)). Na osnovu drugog pristupa F(ab')2fragmenti se mogu izolovati direktno iz rekombinantne domaćinske ćelijske kulture. Fab i F(ab')2fragment sa povećanim poluživotom koji sadrži spašavajuće (salvage) epitopske ostatke za vezivanje za receptore kao što je opisano u U S. Patent No. 5,869,046. Druge tehnike za proizvodnju fragmenata antitela biće očigledne i poznate onima koji se bave ovom problematikom U drugim ostvarenjima antitelo, koje je odabrano, je jednolančani Fv fragment (scFv). Videti WO 93/16185; U. S. Patent No. 5,571,894; i U. S. Patent No. 5,587,458. Fv i sFv su jedine vrste sa intaktnim kombinatornim mestima kojima fale (devoid) konstantni regioni, zato su oni pogodni za redukovano nespecifično vezivanje tokom upotrebeni vivosFv fuzioni proteini mogu se konstruisati da dovedu do fuzije efektornog proteina na ili amino ili karboksilnom terminusu sFv-a. VidetiAnlibody engineering,ed Borrebaeck,supraFragment antitela može takođe da bude linearno antitelo,e. g.kao što je opisano uU. S Patent 5,641,870 na primer Ovakvi linearni fragmenti antitela mogu biti monospecifični ili bispecifični
Bispecifična antitela
Bispecifična antitela su antitela koja imaju specifičnost vezivanja za makar dva različita epitopa. Primeri bispecifičnih antitela mogu da vežu dva različita epitopa CD20 proteina. Druga ovakva antitela mogu da se kombinuju u CD20 vezujuće mesto sa vezujućim mestom za drugi protein. Alternativno, anti-CD20 ruka može se kombinovati sa rukom koja se vezuje za molekul okidač na leukocitu kao T-ćelijski receptorni molekul( e. g.CD3), ili Fc receptori za IgG (FcyR), kao FcvRJ (CD64), FcyRII (CD32) i FcyRIII (CD16), ili NKG2D ili drugi NK ćelijski aktivirajući ligand, u cilju lokalizovanja ćelijskih odbranbenih mehanizama portiv CD-20 eksprimirajućih ćelija Bispecifična antitela mogu se takođe upotrebiti za lokalizaciju citotoksičnih agenasa za ćeliju koja eksprimira CD20. Ova antitela poseduju CD-20 vezujuću ruku i ruku koja vezuje citotoksični agens{ e. g.saporin, anti-interferon-a, vinka alkaloid, ricin A lanac, metotreksat ili radioaktivni izotop hapten). Bispecifična antitela se mogu pripremati kao antitela kompletne dužine ili fragmenti antitela( e. g.F(ab')2bispecifična antitela).
Wo/96/16673 opisuje bispecifično anti-ErbB2/antiFcyRIII antitelo, a U S. Patent No. 5,837,234, otkriva bispecifično anti-ErbB2/antiFcyRI antitelo. Bispecifično anti-ErbB2/Fca antitelo prikazano je u WO98/02463. U. S. Patent No. 5,821,337 podučava o bispecifičnoni anti-ErbB2/CD3 antitelu.
Metode za proizvodnju bispecifičnih antitela poznate su u nauci. Tradicionalna proizvodnja bispecifičnih antitela kompletne dužine bazirana je na koekspresiji dva imunoglobulinska para lanaca - težak lanac i laki lanac, gde dva lanca imaju različite specifičnosti (Millsteinet al, Nature,305.537-539 (1983)). Usled nasumičnog sortiranja imunoglobulinskih lakih i teških lanaca, ove hibridome (kvadrome) proizvode mešavinu 10 različitih molekula antitela, od kojih samo jedan ima pravu bispecifična strukturu Prečišćavanje odgovarajućeg molekula koje se najčešće izvodi afinitativnom hromatografijom, veliki je poduhvat, i dobija se malo proizvoda
Slične procedure otkrivene su u WO 93/08829 i u Trauneckerel al., EMBO J,10:3655-3659
(1991) Na osnovu različitih pristupa, varijabilni domeni antitela sa željenim specifičnostima vezivanja (antitelo-antigen kombinatorno mesto) fuzionisani su sa imunoglobulinskim sekvencama konstantnog domena. Poželjno fuzija je izvedena sa konstantnim domenom Ig teškog lanca, koje obuhvata najmanje deo zgloba (hinge), Ch2 i Cn3 regiona. poželjno je i prisustvo prvog konstantnog regiona teškog lanca (ChI) koji sadrži mesto neophodno za povezivanje lakog lanca, prisutno u makar jednoj fuziji. DNK koje kodiraju imunoglobulinske fuzije teškog lanca i ako je potrebno lake lance imunoglobulina, ubačene su u odvojene ekspresione vektore i kotransfektovane u odgovarajuću domaćinsku ćeliju. Ovo obezbeđuje veću fleksibilnost u podešavanju obostranih proporcija tri polipeptidna fragmenta iz ostvarenja kada nejednaki odnosi tri polipeptidna lanca koja se koriste u konstruisanju obezbeđuju optimalni prinos željenog bispecifičnog antitela. Moguće je, međutim, ubaciti kodirajuće sekvence za dva ili tri polipeptidna lanca u jedan ekspresioni vektor kada ekspresija makar dva polipeptidna lanca u jednakim odnosima rezultira u visokom prinosu ili kada odnosi nemaju značajni efekat na prinos željene kombinacije lanaca U poželjnom ostvarenju ovog pristupa, bispecifična antitela su sastavljena od hibridnog imunoglobulinskog teškog lanca sa prvom specifičnošću vezivanja u jednoj ruci, i hibridnog imunoglobulinskog para teškog i lakog lanca (obezbeđuje drugu specifičnost vezivanja) u drugoj ruci. Pronađeno je da ova asimetrična struktura olakšava odvajanje željenog bispecifičnog jedinjenja od nepoželjnih kombinacija imunoglobulinskih lanaca, jer prisustvo imunoglobulinskog lakog lanca u samo jednoj polovini bispecifičnog molekula obezbeđuje lakše razdvajanje. Ovaj pristup je opisan u WO 94/04690. Za dalje detalje dobijanja bispecifičnih antitela videti na primer Sureshel al, hđethods in Enzymology\121:210 (1986) Na osnovu drugog pristupa opisanog u U. S. Patent No. 5,731,168, veza (interface) između para molekula antitela može da se napravi da bi se dobio maksimalan procenat heterodimera koji se dobija iz rekombinantne ćelijske kulture. Poželjna veza (interface) sadrži makar deo Cu3 domena. U ovoj metodi, jedan ili više amino kiselinskih bočnih lanaca iz veze (interface) prvog antitela zamenjeni su većim bočnim lancima(e. g.tirozin ili triptofan). Kompezatorne "šupljine" identične ili slične veličine sa velikim bočnim lancima su napravljene na vezi (interface) drugog molekula antitela zamenom velikih amino kiselinskih bočnih lanaca sa manjim( e. g.alanin ili treonin). Ovo obezbeđuje mehanizam za povećavanje prinosa heterodimera u odnosu na nepoželjni krajnji proizvod kao što su homodimeri Bispecifična antitela uključuju "cross linked" - međusobno ukrštena ili heterokonjugovana antitela. Na primer, jedno od antitela u heterokonjugatu može biti povezano sa avidinom, a drugo sa biotinom. Ovakva antitela su predložena da, na primer, ćelije imunog sistema "ciljaju" u neželjene ćelije (U. S. Patent No. 4,676,980) i za tretiranje H1V infekcije (VVO 91/00360, VVO 92/200373 i EP030S9) Heterokonjugatna antitela mogu biti proizvedena bilo kojom podesnom "cross-hnking" metodom. Pogodni "cross-linking" agensi su dobro poznati u nauci, i opisani su u U S. patent No. 4,676,980, zajedno sa brojem "cross-linking" tehnika Tehnike za generisanje bispecifičnih antitela od fragmenata antitela takodc su opisane u literaturi Na primer, bispecifična antitela mogu biti pripremljena upotrebom hemijskog povezivanja. Brennanel al., Science,229:81 (1985) su opisali proceduru koja je naznačena time da su intaktna antitela proteolitički isečena da bi se dobili F(ab')2fragmenti. Ovi fragmenti su redukovani u prisustvu ditiol kompleks agensa, natrijum arsenita, da bi se stabilizovali bliski ditioli i sprečilo intermolekularno formiranje disulfida. Generisani Fab' fragmenti se zatim dalje konvertuju u derivate tionitrobenzoata (TNB). Jedan od Fab'-TNB derivata se zatim ponovo konvertuje u Fab'-tiol putem redukcije sa merkaptoetilaminom i mesa se sa ekvimolarnom količinom drugog Fab-'TNB da bi se formiralo bispecifično antitelo. Bispecifična antitela koja su proizvedena mogu se upotrebiti kao agensi za selektivnu imobilizaciju enzima.
Nedavni napredak omogućio je direktno dobijanje Fab-'SH fragmenata izE. colikoji se mogu hemijski povezati i formirati bispecifična antitela. Shalabvet al., J. Exp. Med.175:217-225
(1992) opisuje proizvodnju potpuno humanizovanog bispecifičnog molekula antitela F(ab')2Svaki Fab' fragment je odvojeno sekretovan izE. colii podlegao je direktnom hemijskom povezivanju (coupling)in vitroda bi se formiralo bispecifično antielo. Ovako formirano bispecifično antitelo moglo je da se veže za ćelije koje "overexpress" tj. eksprimiraju u višku ErB2 receptor i normalne humane T ćelije, kao i da izazove litičku aktivnost humanih citotoksičnih limfocita na ciljne humane tumore dojke.
Opisane su takođe i različite tehnike za pravljenje i izolovanje fragmenata bispecifičnih antitela direktno iz rekombinantnih ćelijskih kultura. Na primer, bispecifična antitela su proizvedena pomoću leucinskog "zipper"-a. Kostelnvet al., J. Immunol'.,148(5): 1547-1553 (1992). Peptidi leucinskog "zipper"-a (rajsferšlus) iz Fos i Jun proteina povezani su sa delovima Fab' iz dva različita antitela genskom fuzijom Homodimerska antitela redukovana su u veznom (hinge) regionu da bi se fromirali monomeri i zatim reoksidovali da bi se dobila heterodimerska antitela. Ovaj metod takođe može da se koristi za proizvodnju homodimerskih antitela Tehnologija "diabodv" opisana od strane Hollingeret al, Proc. natl. Acad. Sci. USA,90:6444-6448 (1993) obezbedila je alternativni mehanizam za pravljenje fragmenata bispecifičnih antitela. Fragmenti obuhvataju Vhvezan Vi, pomoću linkera koji je prekratak da bi dozvolio sparivanje između dva domena istog lanca. Na osnovu toga, Vni Vldomeni jednog fragmenta prinuđeni su da se sparuju sa komplementarnim Vn i VLdomenima iz drugog fragmenta i tako formiraju dva mesta za vezivanje antigena. Objavljena je i druga strategija za pravljenje frgamenata bispecifičnih antitela upotrebom jednolančanih Fv (sFv) dimera. Videti Gruberet al., J. Immunol,152:5368 (1994).
Antitela sa više od dve valence su obrađena. Na primer, trispecifična antitela mogu da se pripreme.luiielal, J. Immunol147:60(1991)
Multivalent. ua ( viševalenlna) antitela
Multivalentno antitelo može biti unešeno (i/ili katabolisano) brže nego bivalcntno antitelo putem ćelije koja eksprimira antigen za koji se antitela vežu. Antitela iz ovog pronalaska mogu biti multivalentna antitela (koja su drugačija od IgM klase) sa tri ili više mesta za vezivanje antigena( e. g.tetravalanentna antitela), koja mogu da se odmah proizvedu rekombinantnom ekspresijom nukleinske kiseline koja kodira polipeptidne lance antitela. Multivalentno antitelo može da sadrži domen za dimerizaciju i tri ili više za vezivanje antigena. Željeni domen za dimerizaciju (ili se sastoji od) Fc regiona ili veznog (hinge) regiona. Na osnovu ovakvog scenarija, antitelo će da sadrži Fc region i tri ili više za vezivanje antigena koja su pozicionirana amino-tcrminalno u odnosu na Fc region Poželjno multivalentno antitelo ovde opisano sadrži (ili se sastoji od) tri do osam ali poželjno četiri mesta za vezivanje antigena. Multivalentno antitelo sadrži makar jedan polipeptidni lanac (poželjno dva polipeptidna lanca), naznačeno time da polipeptidni lanac(i) sadrži(e) dva ili više varijabilna domena Na primer, polipeptidni lanac(i) može(gu) da obuhvati(e) VDl-(Xl)n-VD2-(X2)n-Fc naznačeno time daje VD1 prvi varijabilni domen, VD2 drugi varijabilni domen, Fc jedan polipeptidni lanac Fc regiona, XI i X2 predstavlja amino kiselinu ili polipeptid, a n je 0 ili F Na primer, polipeptidni lanac(i) može(gu) sadržati: VH-CH1 -fleksibilni linket-VH-CHl-Fc region lanca, ili VH-CH1-VH-CH1 -Fc region lanca Multivalentno antitelo iz ovog pronalaska je poželjno da sadrži najmanje dva (i poželjno četiri) polipeptida varijabilnih domena lakog lanca Multivalentno antitelo iz ovog pronalaska može, na primer, da sadrži najmanje od oko dva do oko osam polipeptida varijabilnih domena lakog lanca. Polipeptidi varijabilnih domena lakog lanca, o kojima je ovde reč, sadrže varijabilni domen lakog lanca i opcionalno dalje sadrže Ci. domen
Druge modifikacije amino kiselinskih sekvenci
Razmotrena(e) je/su modifikacija(e) amino kiselinskih sekvenci ovde opisanih CD20 vezujućih antitela Na primer, može biti poželjno da se poboljša afinitet vezivanja i/ili druge biološke osobine antitela. Varijante amino kiselinskih sekvenci anti-CD20 antitela pripremljene su uvođenjem odgovarajućih nukleotidnih promena u nukleinskoj kiselini anti-CD20 antitela ili sintezom peptida. Ovakve modifikacije uključuju, na primer, delecije iz, i/ili insercije u i/ili substitucije ostataka u okviri amino kiselinskih sekvenci anti-CD20 antitela. Bilo koja kombinacija delecije, insercije i substitucije (zamene) napravljena je da dospe u krajnji konstrukt, pod uslovom da krajnji konstrukt poseduje željene karakteristike. Amino kiselinske promene takođe mogu da promene post-translacione procese anti-CD20 antitela, kao promena broja ili pozicije glikozilacionih mesta.
Korisna metoda za identifikaciju određenih ostataka ili regiona anti-CD20 antitela koja predstavljaju željene lokacije za mutagenezu naziva se "alanin skenirajuća mutageneza" kao što je opisno u Cunnigham i Wells uScience,244:1081-1085 (1989). Ovde je identifikovan ostatak ili grupa ciljnih ostataka( e. g.naelektrisani ostaci kao arg, asp, his, lys, i glu) i zamenjen sa neutralnim ili negativno naelektrisanim amino kiselinama (najbolje sa alaninom ili polialaninom) da bi se uticalo na interakciju amino kiselina sa CD20 antigenom. One lokacije amino kiselina koje pokazuju funkcionalnu osetljivost na zamenu se zatim profinjuju daljim uvođenjem ili drugih varijanti na mestu ili umesto mesta za substituciju. Tako, dok je mesto uvođenja varijante sekvence amino kiseline predodređeno, priroda mutacije per se ne treba da bude predodređena. Na primer, da bi se analizirala performansa mutacije na datom mestu, sprovodi se ala skeniranje ili "random" mutageneza na ciljnom kodonu i eksprimirane varijante anti-CD20 antitela se pregledaju i traži se željena aktivnost.
Insercije amino kiselinskih sekvenci uključuju amino- i/ili karboksi-terminalne fuzije opsega dužine od jednog ostatka do polipeptida koji sadrže stotinu ili više ostataka kao i insercije u intrasekvencama pojedinačnog ili višestrukih amino kselinskih ostataka Primeri terminalnih insercija uključuju anti-CD20 antitelo sa N-terminalnim metionilskim ostatkom ili antitelo fuzionisano za citotoksični polipeptid. Druge insercionc varijante molekula anti-CD20 antitela uključuju fuziju za N- ili C- terminus anti-CD20 antitela za enzim( e. g.za ADIJ.PT) ili polipeptid koji povećava serumski poluživot antitela
Drugi tip varijante je varijanta amino kiselinske zamene. Ove varijante imaju najmanje jedan amino kiselinski ostatak u molekulu anti-CD20 antitela koji je zamenjen različitim ostatkom Mesta od najvećeg interesa za supstitucionu mutagenezu uključuju hipervarijabilne rcgionc, ali se razmišlja i o FR promenama. Konzervativne supstitucije su prikazane u tabeli ispod teksta pod naslovom "željene supstitucije". Ako ovakve supstitucije rezultiraju promenom biološke aktivnosti, onda mogu biti ubačeni i proizvodi skrinovani za znatnije promene, označene kao "egzemplarne supstitucije" u tabeli, ili dalje opisane u tekstu sa osvrtom na amino kiselinske klase
Značajne modifikacije biološke aktivnosti antitela dobijaju se odabiranjem supstitucija koje se značajno razlikuju po efektu na održavanje (a) strukture polipeptidnog kostura (backbone) u predelu supstitucije, na primer, kao ploča ili struktura heliksa, (b) šarže ili hidrofobnosti molekula na ciljnom mestu, ili (c) glavnice (bulk) bočnog lanca. Prirodni amino kiselinski ostaci dele se u grupe na osnovu osobina bočnih lanaca: (1) hidrofobni. norleucin, met, ala, val, leu, ilc;
(2) neutralno hidrofilini: cys, ser, thr,
(3) kiseli: asp, glu,
(4) bazni asn, gln, his, lys, arg:
(5) ostaci koji utiču na orijentaciju lanca: gly, pro, i
(6) aromatični: trp, tyr, phc;
Nekonzervativne supstutucije će rezultirati u izmeni člana jedne od ovih klasa drugom klasom.
Takođe se može zameniti bilo koji cisteinski ostatak koji ne učestvuje u održavanju odgovarajuće konformacije anti-CD20 antitela, najčešće sa serinom, da bi se poboljšala oksidativna stabilnost molekula i sprečio aberantni "cross-linking" (ukrštanje). Promenljiva (converselv) cisteinska veza(e) može se dodati antitelu da bi se poboljšala stabilnost (pogotovu tamo gde je antitelo fragment antitela kao Fv fragment).
Posebno poželjan tip supstitucionalne varijante uključuje zamenu jednog ili više ostataka hipervarijabilnog regiona roditeljskog antitela( e. g.humanizovanog ili humanog antitela). Uopšteno, dobijena(e) varijanta(e) selektovane za dalje razvijanje imaće poboljšana biološka svojstva u odnosu na roditeljsko antitelo od koga su dobijena. Zgodan način za dobijanje ovakvih supstitucionalnih varijanti uključuje afinitativno sazrevanje pomoću "phage displav" metode. Ukratko, nekoliko mesta hipervarijabilnog regiona( e. g.6-7 mesta) se mutira da bi se dobile sve moguće amino kiselinske zamene na svakom mestu Varijante antitela ovako dobijene se izlažu, na monovalentan način iz filamentoznih čestica faga, kao fuzije sa genom III proizvodom Ml3 upakovanim u svakoj čestici Varijante izložene fazima se zatim pregledaju na biološku aktivnost( e, g.afinitet vezivanja) kao što je ovde opisano Da bi se identifikovala kandidatna mesta za modifikaciju u hipervarijabilnom regionu, može se izvesti metoda mutageneze skeniranjem alaninom da bi se identnifikovali ostaci hipervarijabilnog regiona koji u značajnoj meri doprinose vezivanju antigena. Alternativno, ili dodatno, moglo bi da bude korisno da se analizira kristalna struktura kompleksa antitela i antigena u cilju identifikovanja kontaktnih mesta između antitela i humanog CD20. Ovakvi ostaci u kontaktnim mestima i okolni ostaci su kandidati za supstitucije na osnovu tehnika koje su ovde detaljno opisane Jednom dobijene ovakve varijante, zatim podležu pregledanju, kao što je ovde opisano, i antitela sa superiornim osobinama u jednom ili više eseja mogu se selektovati za dalji razvoj.
Drugi tip amino kiselinske varijante antitela menja originalni način glikozilacije antitela Pod menjanjem se podrazumeva deletiranje jednog ili više ugljovodoničnih okruženja (moieties) koja se nalaze u antitelu, i/ili dodavanjem jednog ili više ugjovodoničnih okaiženja (moieties) koja se ne nalaze u antitelu
Glikozilacija antitela je tipično ili N-povezana ili O-povezana. N-povez.ana odnosi se na vezivanje uglovodoniČnog okruženja (moietie) za bočni lanac asparaginskog ostatka Tripeptidne sekvence asparagin-X-serin i asparagin-X-treonin, gde je X bilo koja amino kiselina osim prolina, su sekvence za raspoznavanje za enzimatsko vezivanje ugljovodoničnog okruženja za asparaginski bočni lanac. Zato, prisustvo bilo koje od ovih tripeptidnih sekvenci u polipeptidu stvara potencijalno mesto za glikozilaciju. 0-povezana glikozilacija odnosi se na vezivanje jednog od šećera N-aceilgalaktozamina, galaktoze ili ksiloze za hidroksiamino kiselinu, najčešće serin ili trconin, iako se mogu koristiti 5-hidroksiprolin ili 5-hidroksilizin
Dodavanje mesta za glikozilaciju na antitelo najzgodnije se izvodi menjanjem amino kiselinske sekvence tako da sadrži jednu ili više gore opisanih tripeptidnih sekvenci (za Na-vezana glikozilujuća mesta). Promene se mogu takođe izvesti dodavanjem, ili zamenom, jednog ili više serinskih ili treoninskih ostataka u sekvenci originalnog tela (za O- vezana glikozilujuća mesta)
Molekuli nukleinskih kiselina koji kodiraju varijante amino kiselinskih sekvenci anti-CD20 antitela pripremljeni su različitim metodama koje su poznate u nauci Ove metode uključuju, ali nisu ograničene samo na njih, izolaciju iz prirodnog izvora (u slučaju prirodnih amino kiselniskih varijanti) ili pripremu putem mutageneze posredovane oligonukleotidima (ili "site-directed" mutageneze), PCR murtageneze, i kasetne mutageneze već ranije pripremljene varijante ili nevarijante verzije anti-CD20 antitela.
Može biti poželjno da se antitelo iz ovog pronalaska izmeni u smislu efektorne funkcije, na primer, da bi se pojačala antigen-zavisna ćelijski-posredovana citotoksičnost (ADCC) i/ili citotoksičnost zavisna od komplementa (CDC) antitela. Ovo se može postići uvođenjem jedne ili više amino kiselinskih zamena u Fc regionu antitela Alternativno ili dodatno, može se uvesti cisteinski ostatak(ci) u Fc region, i tako se omogućava formiranje disulfidne veze između lanaca u okviru ovog regiona Ovako dobijeno homodimerno antitelo može imati poboljšanu unutrašnju sposobnost i/ili povećano ubijanje ćelije posredovano komplementom i antitelo-zavisnu, ćelijski-posredovanu citotoksičnost (ADCC). Videti Caronet al., J. Exp. Med176:1191-1195 (1992) i Shopes, B,J. Immunol148:2918-2922 (1992). Homodimerna antitela sa povećanom anti-tumorskom aktivnošću mogu se pripremiti pomoću heterofunkcionalnih "kross"-linkera kao što je opisaoWolf et al, Cancer Research53:2560-2565 (1993). Alternativno, antitelo se može konstruisati tako da ima duple Fc regione i tako može da ima pojačanu lizu posredovanu komplementom i ADCC sposobnost. Videti Stevensonet al., Anti Cancer Drug Design3:219-230 (1989).
Da bi se povećao serumski poluživot antitela može se uključiti spašavajući epitop antitela za vezivanje receptora (pogotovu fragmenta antitela) kao što je opisano u U. S. Patent 5,739,277, na primer Izraz "spašavajući epitop za vezivanje receptora", kao što se koristi ovde, odnosi se na epitop Fc regiona IgG molekula( e. g.IgGl, IgG2, IgG3 ili IgG4), koji je odgovoran za povećanjein vivoserumskog poluživota IgG molekula
Druge modifikacije antitela
Druge modifikacije antitela obrađene su u ovom tekstu. Na primer, antitelo može biti povezano sa jednim od mnogobrojnih neproteinskih polimera, na primer, polietilen glikolom, polipropilen glikolom, polioksalkilenima, ili kopolimerima polietilen glikola i polipropilen glikola. Antitelo može biti takođe zarobljeno u pripremljenim mikrokapsulama, na primer, tehnikom koacervacije ili interfacijalne polimcrizacije (na primer, hidroksimetilcelulozom ili želatinoznim mikrokapsulama i poli-(mctilmctacilat)-mikrokapsule), u kolodnim sistemima za dostavu leka (na primer, lipozomi, albuminske mikrosfere, mikroemulzije, nano-čestice i nanokapsule), ili u makroetnulzijama. Ovakve tehnike su objavljene i opisane u Remington's Pharmaceutical Sciences, 16<th>edition, Oslo, A, Ed., 1980).
Skrmmg antitela sa željenim osobinama
Antitela sa određenim biološkim karakteristikama mogu biti selektovana kao što je opisano u eksperimentalnim primerima.
Inhibitorni efekti na rast anti-CD20 antitela iz ovog pronalaska mogu biti procenjeni metodama koje su poznate u nauci, na primer, pomoću ćelija koje eksprimiraju CD20 ili endogeno ili nakon transfekcije sa CD20 genom. Na primer, tumorske ćelijske linije i CD20 transfektovane ćelije mogu se tretirati sa anti-CD20 monoklonalnim antitelima iz ovog pronalaska pri različitim koncentracijama tokom nekoliko dana{ napr.2-7) i obojiti sa kristal violet ili MTT ili analizirati nekim kolorimetrijskim esejima. Drugi metod merenja proliferacije bio bi poređenje unošenja 3H-timidina od strane ćelija tretiranih u prisustvu ili odsustvu anti-CD20 antitela iz ovog pronalaska. Nakon tretiranja antitelima, ćelije se sakupljaju i kvantifikuje se količina radioaktivnosti inkorporisane u DNK na scintilacionom brojaču Odgovarajuće pozitivne kontrole uključuju tretman selektovane ćelijske linije sa antitelom koje inhibira rast za koje se zna da inhibira rast te ćelijske linije.
Da bi se selektovala antitela koja izazivaju ćelijsku smrt, gubitak integriteta membrane kao mera, na primer, unošenja propodijum jodida (PI), tripan blue ili 7AAD može se relativno proceniti u odnosu na kontrolu. Esej unošenja PI može se izvesti u odsustvu komplementa i imunih efektornih ćelija. Tumorske ćelije koje eksprimiraju CD-20 se inkubiraju samo sa medijumom ili sa medijumom koji sadrži odgovarajuća monoklonalna antitela, na pr. oko 10 ug/ml Ćelije se inkubiraju tokom tri dana. Nakon svakog tretmana, ćelije se ispiraju i alikvotiraju u 12X75 tube sa kapicama od 35 mm (1 ml po tubi, 3 tube po tretiranoj grupi) da bi se uklonile ćelijske gaidvice (clumps). Tube zatim primaju PI (10 p.g/ml). Uzorci se mogu analizirati pomoću FACSCAN™ "flovv" citometrije i FACSCONVERT™ CellQuest softvera (Becton Dickinson). Ona antitela koja indukuju statistički značajne nivoe ćelijske smrti, koja su određena na osnovu PI unošenja, mogu se odabrati kao antitela koja indukuju ćelijsku smrt
Da bi se antitela pregledala i našla ona koja se vezuju za epitop na CD20 koji je vezan za antitelo od interesa, može se primeniti rutinski "cross-blocking" esej kao što je opisano uAntibodies, A Laboratory Manuat',Cold Spring Harbor Laboratorv, Ed Harlovv and David Lane (1988), Ovaj esej se može koristiti da se odredi da li se test antitelo vezuje za isto mesto ili epitop kao anti-CD20 antitelo iz ovog pronalaska. Alternativno, ili dodatno mapiranje epitopa može se izvesti metodama koje su poznate u nauci. Na primer, sekvenca antitela može se podvrgnuti mutagenezi kao što to je skeniranje alaninom, da bi se detektovali kontaktni ostaci. Na osnovu druge metode, peptidi koji odgovaraju različitim regionima CD20 mogu se iskoristiti u esejima kompeticije sa test antitelima ih test antitelom i antitelom sa okarakterisanim ili poznatim epitopom.
Vektori, domaćinske ćelije i metode rckombinacijc
Ovaj pronalazak obezbeđuje takođe izolovanu nukleinsku kiselinu koja kodira humanizovano CD20 vezujuće antitelo, vektore i domaćinske ćelije koje obuhvataju nukleinsku kiselinu, i rekombinantne tehnike za proizvodnju antitela
Za rekombinantnu proizvodnju antitela, nukleinska kiselina, koja ga kodira, izolovana je i ubačena u replikativni vektor za dalje kloniranje (amplifikaciju SNK) ili za ekspersiju DNK koja kodira monoklonalno antitelo je brzo izolovana i sekvencirana pomoću konvencionalnih procedura{ na pr.upotrebom oligonukleotidnih proba koje mogu da se specifično vežu za gene koji kodiraju teške i lake lance antitela) Mnogi vektori su dostupni. Komponente vektora najčešće uključuju, ali nisu ograničene samo na njih, jednu ili više sledećih komponenti: signalnu sekvencu, "origin" replikacije, jedan ili više marker gena, "enhancer" element, promotor i transkripcionu terminacionu sekvencu
( i) komponenla- signalna sekvenca
CD20 vezujuće antitelo iz ovog pronalaska može se proizvesti rekombinantno ne samo direktno već i kao fuzioni polipeptid sa heterolognim polipeptidom, koji je, poželjno, signalna sekvenca ili drugi polipeptid koji poseduje specifično mesto za sečenje na N-terminusu zrelog proteina ili polipeptida. Odabrana heterologna signalna sekvenca poželjno je da to bude ona koja se prepoznaje i obrađuje{ na pr.seče je signalna peptidaza) u domaćinskoj ćeliji. Za prokariotske domaćinske ćelije koje ne prepoznaju i ne procesuju nativnu CD20 vezujuću signalnu sekvencu antitela, signalna sekvenca se zamenjuje sa prokariotskom signalnom sekvencom koja se odabere na primer, iz grupe alkalna fosfataza, penicilinaza, lpp, ili stabilni na toploti enterotoksin II lideri. Za sekreciju kvasca nativna signalna sekvenca se može zameniti, na primer, sa kvaščevim fosfataznim liderom, a faktor liderom (uključujući Sacharomvces i Kluyveromyces a faktor lider), ili kiselim fosfataznim liderom,C. albicansglukomilaznim liderom, ili signalom opisanim u WO 90/13646. U sisarskim ekspresionim ćelijama, sisarske signalne sekvence kao i viralni sekretorni lideri, na primer, herpes simplex gD signal, su dostupni.
DNK za ovakve prekursorske regione je ligirana (povezana) u smeru okvira čitanja (in reading frame) za DNK koja kodira CD20 vezujuće antitelo.
( ii) " Origin " replikacije
Oba i ekspresioni i vektor za kloniranje sadrže nukleinsko kiselinsku sekvencu koja omogućava vektoru da replikuje u jednoj ili više selektovanih domaćinskih ćelija Uopšteno, u vektorima za kloniranje ova sekvenca je ona koja omogućava da se vektor replikuje nezavisno od domaćinske hromozomalne DNK, i uključuje "origin" replikacije ili autonomne replicirajuće sekvence. Ovakve sekvence su dobro poznate i otkrivene u različitim bakterijama, kvascu i virusima "Origin" replikacije iz plazmida pBR322 je pogodan za većinu Gram-negativnih bakterija, 2 ug plazmidnog "origin"-a je pogodno za kvasac, i različite viralnc "origin"-e (SV40, polioma, adenovirus, VSV ili BPV) su korisni kao vektori za kloniranje u sisarskim ćelijama. Uopšteno komponenta "origin" replikacije nije potrebna za sisarske ekspresionc vektore (SV40 "origin" se može koristiti jer sadrži rani promotor).
( ni) Kompot let tla- sclckli vni gen
Ekspresioni i vektori za kloniranje mogu da sadrže selektivni gen, koji se naziva i selektivni marker. Tipični selektivni geni kodiraju proteine koji (a) potvrđuju rezistentnost na antibiotike ili druge toksine,na pr.ampicilin, neomicin, metotreksat, ili tetraciklin, (b) komplement nedostatka autotrofije ili (c) obezbeđuju kritične nulnjente koji nisu dosptupni iz kompleksnog međijuma, na pr gen koji kodira D-alanin racemazu zaBacilli
Jedan primer selekcione šeme upotrebljava lek da bi se zaustavio rast domaćinse ćelije Ove ćelije koje se uspešno transformišu sa heterolognim genom proizvode protein koji potvrđuje rezistenciju na lek i tako se preživljava selektivni režim Primeri ovakve dominantne selekcije su upotreba leka neomicina, mikofenolne kiseline i higromicina
Drugi primer pogodnih selektivnih markera za sisarske ćelije su oni koji omogućavaju identifikaciju ćelijskih komponenti pogodnih da uzmu nukleinsku kiselinu CD20 vezujućeg antitela, kao DHFR, timidin kinaza, metalotionein-I i -II, poželjno, primatne metalotioneinske gene, adenozin deaminaza, ornitin dekarboksilaza itd.
Na primer, ćelije transformisane sa DHFR selektivnim genom se prvo identifikuju gajenjem svih transformanata u medijumu za gajenje koji sadrži metotreksat (Mtx), kompetitivni antagonist DHFR-a Odgovarajuća domaćinska ćelija, kada se upotrebljava divlji-"wild type"- DHFR, je ćelijska linija jajnika Kineskog hrčka (Chinese hampster ovary (CHO)) kojoj nedostaje DHFR aktivnost(<?. gATCC CRL-9096)
Alternativno, domaćinske ćelije (pogotovu "wild-type" domaćini koji sadrže endogeni DHFR) transformisane ili ko-transformisane sa DNK sekvencama koje kodiraju CD20 vezujuće antitelo, "wild type" DHFR protein i drugi selektivni marker kao aminoglukozid 3'-fosfotransferaza (APH) mogu se selektovati rastom ćelija u medijumu koji sadrži selektivni agens za selektivni marker kao aminoglikozidni antibiotik, na pr. kanamicin, neomicin, ili G4I8. Videti U. S. Patent No. 4,965,199
Pogodni selektivni gen za upotrebu u kvascu je trpi gen koji je prisutan u kvašćevom plazmidu YRp7 (Stinchombet a/., Nature282:39 (1979). Trpi gen obezbeđuje selektivni marker za mutantni soj kvasca kome nedostaje sposobnost da raste u triptofanu, na primer, ATCC No.44076 ili PEP4-1. JonesGenelics.85:12 (1977). Prisustvo trpi lezije u genomu domaćinske kvaščeve ćelije koja obezbeđuje okruženje za detekciju transformacije pomoću rasta u odsustvu triptofana Slično tome, sojevi kvasca kojima nedostaje Lcu2 (ATCC 20,622 ili 38, 626) se komplementuju poznatim plazmidima koji nose Leu2 gen.s
Dodatno, vektori izvedeni iz 1.6 pg cirkularnog plazmida pKDl mogu se iskoristiti za transformacijuKlyuveromyceskvasaca Alternativno, ekspresioni sistem za proizvodnju na velikoj skali rekombinantnog himozina teleta prijavljen je zaK. lactis.Van der Berg,BiO' Technology,8:135 (1990). Takođe su opisani stabilni ekspresioni vektori koji se nalaze u više kopija (multi copy) za sekreciju zrelog rekombinantnog humanog albumina od strane industijskih sojevaK/ yuveromyces.Fleerel a/., Bio/ Techno/ ogy,9:968-975
(1991).
( iv) Promotorska komponenta
Ekspresioni vektori i vektori za kloniranje najčešće sadrže promotor koji prepoznaje domaćinski organizam i koji je operativno povezan sa nuklcinskom kiselinom koja kodira CD20 vezujuće antitelo. Promotori pogodni za upotrebu u prokariotskim domaćinima uključuju phoA promotor, fj-laktamazni i laktozni promotorski sistem, promotor alkalne Ibsfataze, triptofanski (trp) promotorski sistem, i hibridni promotor kao tac promotor Međutim, mogu se koristiti i drugi bakterijski promotori Promotori za upotrebu u bakterijskim sistemima takođe će sadržati Shine-Dalgarno (S D ) sekvencu operativno povezanu sa DNK koja kodira CD20 vezujuće antitelo
Promotorske sekvence su poznate i kod eukariota. Praktično svi eukariotski geni imaju AT-bogate sekvence 25 do 30 baza uzvodno od mesta inicijacije transkripcije. Druga sekvenca 70 do 80 baza uzvodno od starta transkripcije mnogih gena ja CNCAAT region gde je N bilo koji nukleotid. Na 3' kraju većine eukariotskih gena je AATAAA sekvenca koja može biti signal za adiciju poli A repa na 3' kraj kodirajuće sekvence. Sve ove sekvence su ubačene u eukariotske ekspresione vektore
Primeri pogodnih promotorskih sekvenci za upotrebu sa kvaščevim domaćinima uključuju promotore za 3-fosfoglicerat kinazu ili druge glikolitičke enzime, kao enolazu, gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenazu, heksokinazu, piruvat dekarboksilazu, fosfofruktokinazu, glukozo-6-fosfat izomerazu, 3- fosfoglicerat mutazu, piruvat kinazu, trifosfat izomerazu, fosfoglukozo izomerazu i glukokinazu
Drugi promotori kvasca, koji su inducibilni promotori i imaju dodatnu prednost jer se transkripcija kontroliše uslovima rasta, su promotorski regioni za alkoholnu dehidrogenazu 2, izocitohrom C, kiselu fosfatazu, degradativne enzime povezane sa metabolizmom azota, metaltionein, gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaza, i enzimi odgovorni za korišćenje maltoze u galaktoze. Pogodni vektori i promotori za upotrebu u ekspresiji kvasca su dalje opisani u EP 73,657. "Enhanceri" (pojačivači) kvasca se takođe upotrebljavaju sa promotorima kvasca.
Rani i kasni promotori SV40 virusa se pogodno dobijaju kao SV40 restrikcioni fragmenti koji takođe sadrže SV40 viralni "origin" replikacije. Momentalni rani promotor (immediate early promotor) humanog citomegalovirusa se pogodno dobija kaoHindlUE restrikcioni fragment. Sistem za ekspresiju DNK u sisarskim domaćinima upotrebom goveđeg papiloma virusa kao vektora opisan je u U. S. Patent No. 4,419,446. Modifikacija ovog sistema opisana je u U S. Patent No 4,601,978. Videti Reyeeset al., Nature297:598-601 (1982) o ekspresiji humane cDNK za [3-interferon u mišijim ćelijama pod kontrolom promotora timidin kinaze iz herpes simpleks virusa Alternativno, kao promotor se može koristiti dugi terminalni ponovak iz Rausovog sarkoma virusa.
(v)komponenta-" enhaiicer" ( pojačivačkih) elemenata
Transkripcija DNK, koja kodira CD20 vezujuće antitelo iz ovog pronalaska, od strane viših eukariota često se povećava ubacivanjem pojačivačke sekvence u vektor. Mnoge sekvence pojačivača su poznate za sisarske gene (globin, elastaza, albumin, a-fetoprotcin, i insulin) Tipično, međutim, upotrebiće se pojačivač iz virusa eukariotske ćelije. Primeri uključuju SV40 pojačivač na kasnoj strani (late side) replikacionog "origin"-a (bp 100-270), citomegalovirusni "enhancer" ranog promotora, "enhancer" polioma na kasnoj strani replikacionog "origin"-a i "enhancer" adenovirusa. Videti takođe Yaniv,Nature297:17-18 (1982) o "enhancing" elementima za aktivaciju eukariotskih promotora. "Enhanccr"-i mogu biti splajsovani (obrađeni) u vektor na poziciji 5' ili 3' do kodirajuće sekvence za CD20 vezujuće antitelo, ali je poželjno da su locirani na 5' mestu od promotora
( vi) komponenta- transknpciona termi nacija
Ekspresioni vektori koji se koriste u eukariotskim domaćinskim ćelijama (kvasca, gljiva, insekata, biljaka, životinja, ljudi ili nukleisane ćelije sa jedrima iz višećelijskih organizama) takođe će sadržati sekvence neophodne za terminaciju transkripcije i za stabilizaciju RNK Ovakve sekvence najčešće su dostupne iz 5' i povremeno 3' netranslatirajućih regiona eukariotskih ili viralnih DNK ili cDNK Ovi regioni sadrže segmente koji se transkribuju kao poliadenilovani fragmenti u netranslatirajućem delu iRNK koja kodira CD20 vezujuće antitelo. Jedna korisna komponenta terminacije transkripcije je poliadenilacioni region goveđeg hormona rasta Videti W094/l 1026 i
ekspresioni vektor koji je tu opisan.
( vii) Selekcija i transformacija domaćinskih ćelija
Pogodni ćelijski domaćini za kloniranje ili ekspresiju DNK u vektore ovde opisane su prokariotske, kvaščeve, ili ćelije viših eukariota ovde opisane. Pogodni prokarioti za ovu svrhu uključuju eubakterije, kao Gram-negativne ili Gram-pozitivne organizme, na primer,EnterobacteriaceaekaoEschehchia, na pr. E. coli, Enlerobacter, Em>ima,
Klebsiel/ a, Proleus, Salmonella, na pr. Salmonella ( yphimitrium, Serratia, na pr. Serralia
marcescans,iShigellakao iBaci/ likaoBacillus sublilisiB. licheniformes { na pr. B. Iicheniformes41P opisan u DD 266, 710 objavljen 12 aprila 1989),PseudomonaskaoPseudomonas aeruginosa,iStreptomyces.Jedan poželjanE. cohdomaćin za kloniranje jeE. coli294 (ATCC 31,446), iako su pogodni i drugi sojevi kaoE. coliB,IZ. coliX1776 (ATCC 31, 537) iE. coliW3 110 (ATCC 27,325). Ovi primeri su pre za ilustraciju nego za ograničavanje samo na njih.
Antitelo pune dužine, fragmenti antitela, i fuzioni proteini antitela mogu se proizvesti u bakterijama, pogotovu kada nisu potrebni procesi glikozilacije i Fc efektorne funkcije, kao kada je terapeutsko antitelo konjugovano sa citotoksičnim agensom{ na pr.toksinom) i imunokonjugat sam po sebi pokazuje efikasnost u uništavanju ćelija tumora. Antitela pune dužine imaju duži poluživot u cirkulaciji. ProizvodnjaE. colije brža i isplatljivija Za ekspresiju fragmenata antitela i polipeptida u bakterijama, videti,na pr.U S. 5, 648,237(Čarter et al.,) U. S. 5,789,199(Joly et al)i U. S. 5,840,523(Simmons et al) kojiopisuju region za inicijaciju translacije (T1R) i signalne sekvence za optimizaciju ekspresije i sekrecije, ovi patenti su obuhvaćeni ovim pronalaskom i ugrađeni sa referencom. Nakon ekspresije antitelo se izoluje izE. colićelijske paste u solubilnoj frakciji i može se prečistiti kroz,na pr.,protein A ili B kolonu u zavisnosti od izotopa. Finalano prečišćavanje može se izvesti slično procesu za prečišćavanje antitela koja se eksprimirajuna pr., u CHO ćelijama
Osim prokariota, eukariotski mikrobi, kao filamentozne gljive ili kvasac, su pogodni za kloniranje ili kao ekspresioni domaćini za CD20 vezujuće antitclo-kodirajuće vektoreSacharomyces cervisiae,ili običan pekarski kvasac, se najčešće koristi među nižim eukariotskim mikroorganizmima domaćinima. Međutim, određen broj drugih rodova, vrsta, i sojeva su dostupni i korisni u ovom pronalasku, kao Shizosaccharomyces pombe. Kluyveromyces domaćinikao na pr. K. lactis,K, Fragilis (ATCC 12,424),K. hulgariais(ATCC 16, 045),K. \ vickerami(ATCC 24,178),K. waltii(ATCC 56,500),K. drosoplulanim(ATCC 36,906),K. thermotolerans,iK. marxianus, Yarrowia(EP 402,226),Pic/ iia pastoris(EP 183,070),,Candida; Triclioderma reesia(EP 244, 234),Neurospora crassa, SchwanmomyceskaoSchwanniomyces occidenialis;i filamentozne gljive kaona pr. Neurospora, Penicrflmm, Polypocladium,iAspergillusdomaćine kaoA.
mdidansiA. niger
Pogodne domaćinske ćelije za ekspresiju glikozilovanog CD20 vezujućeg antitela su dobijene iz višećelijskuh organizama Primeri ćelija beskičmenjaka uključuju ćelije biljaka ili insekata Brojni bakulovirusni sojevi i varijante i odgovarajuće permisivne insektske ćelije domaćini kaoSpodoplera frugiperda(gusenica),Aedes aegypti(komarac),Drosophila melanogaster(vinska mušica) iBambyx morisu identifikavani Različiti viralni sojevi za transfekciju su javno dostupni, na pr. L-l varijantaAulographa californicaNPV i Bm-5 sojBombyx moriNPV, i ovi virusi mogu se koristiti kao virusi u ovom pronalasku na osnovu ovog pronalaska, pogotovu za transfekcijuSpadoplera frugiperdaćelija.
Kulture biljnih ćelija pamuka, kukuruza, krompira, soje, petunije, paradajza, i duvana mogu se takođe upotrebljavati kao domaćini.
Međutim, najveći interes je za ćelije kičmenjaka, i propagacija kičmenjačkih ćelija u kulturi (kulturi tkiva) postala je rutinska procedura. Primeri ovakvih korisnih sisarskih domaćinskih ćelijskih linija su majmunske ćelijske linije bubrega CV1 transformisane sa SV40 (COS-7. ATCC CRL 1651), humana linija bubrega embriona (293 ili 293 ćelije koje su subklonirane za rast u suspenziji kulture, Grahamet a/., ,/. Gen. Virol.36:59
(1997)), ćelije bubrega bebe hrčka (BHK, ATCC CCL 10); ćelije jajnika kineskog hrčka/- DHFR (CHO Urlabet al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA77:4216 (1980)), mišije Srotovljeve (Sertoil) ćelije (TM4, Mather,Biol. Reprod.23:243-251 (1980)), ćelije bubrega majmuna (CV1 ATCC CCL 70); ćelije bubrega afričkog zelenog majmuna (VERO-76, ATCC CRL-1587), humane ćelije karcinoma cerviksa (HELA, ATCC CCL 2), ćelije bubrega psa (MDCK, ATCC CCL 34); ćelije jetre bufalo pacova (BRL 3A, ATCC CRL 1442), humane ćelije pluća (MMT 060562, ATCC CCL51), TRI ćelije (Matherel al, Annals N. Y. Acad. Sci.383:44-68 (1982)), M.RC 5 ćelije, FS4 ćelije; i humana hepatoma linija (Hep G2).
Domaćinske ćelije transformisane sa gore opisanim ekspresionim ili vektorima za kloniranje za proizvodnju CD20 vezujućeg antitela i gajene u konvencionalnim hranljivim medijumima modifikovanim za indukovanje promotora, selekciju transfromanata, ili umnožavanje gena koji kodiraju željene sekvence
( viii) Gajenje domaćinskih ćelija
Domaćinske ćelije koje se koriste za proizvodnju CD20 vezujućeg antitela iz ovog pronalaska mogu se gajiti u različitim medijumima. Komercijalno dostupni medijumi kao Ham F10 (Sigma), Minimalni esencijalni medijum (MEM) (Sigma), RPMI-1640 (Sigma) i Dulbekov modifikovani Eagle medijum (DMEM) Sigma) su pogodni za gajenje domaćinskih ćelija. Dodatno, bilo koji medijum opisan od strane Hamet al., Meth. Pnz58:44 (1979),Barncs et al,Anal Biochem. 102.255 (1980), U. S. Patent Nos 4,767,704, 4,657,866; 4,927,762; 4,560,655 ili 5,1 "22,469; VVO 90/03430, VVO 87/00195, ili U. s' Patent Re. 30,985 mogu biti upotrebljeni kao medijumi za gajenje domaćinskih ćelija. Bilo koji od ovih medijuma mogu biti obogaćeni, ako je neophodno, hormonima i/ili drugim faktorima rasta (kao insulin, transferin, ili epidermalni faktor rasta), solima (kao natrijum hlorid, kalcijum, magnesium, i fosfat), pufcrima (kao HEPES), nukleotidima (kao adenozin i timidin), antibioticima (kao GENTAMYCINcc™ lek), elementima u tragovima (definisani kao neorganska jedinjenja koja su najčešće prisutna u finalnim koncentracijama mikromolarnog opsega), i glukozom ili ekvivalentnim izvorom energije Bilo koji drugi neophodni dodatak može se takođe uključiti u odgovarajućim koncentracijama koje su poznate onima koji se bave naukom. Uslovi gajenja kao temperatura, pH, i slično, su oni primenjeni sa domaćinom odabranim za ekspresiju i biće očigledni onima koji se bave ovim delom nauke
( ix) Prečišćavanje antitela
Kada se upotrebljavaju tehnike rekombinacije , antitelo se može proizvesti intracelularno, kao prvi korak, zatim se centrifugiranjem ili ultracentrifugiranjem uklanjaju ostaci ili domaćinske ćelije ili liziranih fragmenata. Čarteret al., Bio/ Techology10:163-167 (1992) opisuju proceduru za izolaciju antitela koja se sekretuju u periplazmatski prostor kodE. coliUkratko, ćelijska pasta se otapa u prisustvu natrijum acetata (pH 3.5), EDTA, i fenilmetilsulfonilfluorida tokom oko 30 min. Celijski otpaci mogu se ukloniti centrifugiranjem Kada se antitelo sekretuje u medijum, supernatanti iz ovakvih ekspresionih sistema se najčešće koncentrišu pomoću komercijalno dostupnih filtera za koncentraciju proteina, na primer Amicon ili Millipore pelicon jedinice za ultracentrifugiranje. Proteazni inhibitor kao PMSF može se dodati u toku bilo kog od prethodnih koraka da bi se sprečila proteoliza i antibiotici se mogu uključiti da bi se sprečio rast stranih kontaminanata.
Kompozicija antitela spremljena od ćelija može se prečistiti pomoću na primer, hidroksilapatitne hromatograftje, gel elektroforeze, dijalize, i afinitativne hromatografije, pri tome je metoda afinitativne hromatografije poželjna tehnika prečišćavanja Pogodnost proteina A kao afinitativnog liganda zavisi od vrste i izotopa bilo kog imunoglobulinskog Fc domena koji je prisutan na antitelu Protein A može se upotrebiti za prečišćavanje antitela koja su bazirana na humanim yl, y2 ili y4 teškim lancima (Lindmarket al., ,/. Immunol. Meth.62:1-13 (1983)). Protein G se preporučuje za mišije izotope i za humani y3 (Gusset al., EMBOJ.5:15671575 (1986)). Matriks za koji se afinitativni ligand vezuje je najčešće agaroza, ali su dostupni i drugu matriksi. Mehanički stabilni matriksi kao kontrolisane staklene pore ili poli(stirenedivinil)benzen omogućavaju brže stope protoka i kraće vreme procesovanja nego što se može postići sa agarozom. Kada antitelo sadrži CH3 domen, Bakerbond ABX™ kuglice (J T Baker, Phillipsburg, NJ) su korisne za prečišćavanje. Druge tehnike za prečišćavanje proteina kao frakcionisanje na jono-izmenjivačkoj koloni, etanolna precipitacija, reverzno fazni HPLC, hromatografija na silici, hromatografija na heparin SEPHAROSE™ hromatografija, amonijum sulfatna precipitacija, takođe su dostupne u zavisnosti od antitela koje treba da se izdvoji.
Nakon preliminarnih(og) koraka prečišćavanja mešavina koja sadrži antitelo od interesa i kontaminanti mogu se podvrći hromatografiji hidrofobne interakcije pri niskoj pU pomoću pufera za eluciju na pll između oko 2.5-4 5. poželjno da se izvede pri niskim koncentracijama soli( e. g.od oko 0-0.251V1 soli)
Konjugati antitela
Antitelo može se konjugovati sa citotoksičnim agensom kao stoje toksin ili radioaktivni izotop. U određenim ostvarenjima, toksin je kalicheamicin, majtansinoid, dolasatin, auristatin E i analozi ili njihovi derivati su poželjni.
Poželjni lekovi/toksini uključuju agense koji oštećuju DNK, inhibitore polimerizacije mikrotubula ili depolimerizacije i antimetabolite. Poželjne klase citotoksičnih agenasa uključuju na primer, inhibitorne enzime kao inhibitore dihidrofolat reduktaze, i inhibitore timidilat sintetaze, interkalatore DNK, sekače DNK, inhibitore topoizomeraze, antraciklinsku familiju lekova, "vinca" lekove, mitomicine, bleomicine, citotoksične nukleozide, pteridinsku familiju lekova, dinene, podofdotoksine i inducere diferencijacije. Posebno korisni članovi ovih klasa uključuju, na primer, metotreksat, metopterin, dihlorometotreksat, 5-fluorouracil, 6-merkaptopurin, citozin arabinozid, melfalan, leurozin, leirozidein, aktinomicin, daunorubicin, doksorubicin, N-(5,5-diacetoksipentil)doksorubicin, morfolino-doksorubicin, l-(2-hloretil)-1,2-dimetansulfonil hidrazid, N<8->acetil spermidin, aminopterin metopterin, espermacin, mitomicin C, mitomicin A, aktinomicin, bleomicin, karminomicin, aminopterin, talizomicin, podofdotoksin, i derivate podofilotoksina kao etopozid ili etopozid fosfat, vinblastin, vinkristin, vindezin, taksol, taksoter, retinoična kiselina, butirična kiselina, N<8->acetil spermidin, kamptohecin, kalcihemicin, briostatini, cefalostatini, anzamitocin, aktozin, majtanzinoid kao DM-1, majtanzin, majtanzinol, N-dezmetil-4,5- dezepoksimajtanzinol, C-19 dehlormajtanzinol, C-20 hidroksmajtanzinol, c-20 demetoksimajtanzinol, C-9-SH majtanzinol, C-14-alkoksimstilmajtanzinol, C-14 hidroksi ili acetiloksimetilmajtanzinol, C-15-hidroksi/acetiloksimajtanzinol, C-l 5-metoksimajtanzinol, C-18-N-demetilmajtanzinol i 4,5-deoksimajtanzinol, auristane kao auristan E, M, PHE i PE, dolostatine kao dolostatin A, dolostatin B, dolostatin C, dolostatin D, dolostatin E (20-epi i 11 -epi), dolostatin G, dolostatin H, dolostatin I, dolostatin 1, dolostatin 2, dolostatin 3, dolostatin 4, dolostatin 5, dolostatin 6, dolostatin 7, dolostatin 8, dolostatin 9. dolostatin 10, dolostatin 11, dolostatin 12, dolostatin 13, dolostatin 14, dolostatin 15, dolostatin 16, dolostatin 17, dolostatin 18; cefalostatine kao cefalostatin 1, cefalostatin 2, cefalostatin 3, cefalostatin 4, cefalostatin 5, cefalostatin 6, cefalostatin 7, 25'-epi-cefalostatin 7, 20-epi-cefalostatin 7, cefalostatin 8, cefalostatin 9, cefalostatin 10, cefalostatin 11, cefalostatin 12, cefalostatin 13, cefalostatin 14, cefalostatin 15, cefalostatin 16, cefalostatin 17, cefalostatin 18, i cefalostatin 19
Majtanzinoidi su mitotočki inhibitori koji deluju tako što inhibiraju polimerizaciju tubulina. Majtanzin je prvo izolovan iz istočnoafričkog žbuna Mavtenus srrata (U. S.
Patent No 3,896,111). Kao posledica toga otkriveno je da određeni mikrobi takođe produkuju majtanzinoide, kao majtanzinol i C-3 majtanzinol stre (U. S. Patent No. 4,151,042), Sintetički majtanzinol i njegovi derivati i analozi su otkriveni, na primer u U S. Patent Nos. 4,137,230; 4,248,870; 4,256, 476; 4,260,608; 4,265,814, 4,294,757; 4,307,016, 4,308,268; 4,308, 269, 4,309,428, 4,313,946, 4,315,929; 4,3 17,821, 4,322,348; 4,331,598, 4,361,650, 4,364,866; 4,424,219, 4.450254; 4,362,663; i 4,371,533, otkrića koja su ovde inkorporirana referencama.
Majtanzin i majtanzinoidi su konjugovani za antitela koja se vezuju specifično za antigene tumorskih ćelija lmunokon]ugati koji sadrže majtanzinoid i njihove terapcutske upotrebe su otkrivene na primer u U. S. Patent nos. 5,208,020, 5,416,064 i European Patent EP 0 425 235 B 1, otkrića koja su ovde inkorporisana referencama. Uuel al, Proc. Nali. Acad. Sci USA93 8618-8623 (1996) opisali su imunokonjugate koji sadrže majtanzinod označen kao DM1 povezan sa monoklonalnim antitelom C242 usmeremm protiv humanog kolorektalnog kancera Za konjugat je pokazano da je izuzetno citotoksičan za gajene ćelije raka debelog creva, i imaju antitumorsku aktivnost uin vivoesejima rasta tumora. Chariel al., Cancer Research52 127-131 (1992) opisuju imunokonjugate u kojima majtanzoid je konjugovan via disulfidnog linkera za misije antitelo A7 koje vezuje antigen na humanim ćelijskim linijama raka debelog creva ili za druga monoklonalna antitela TA.l koje vezuje HER-2/neu onkogen.
Postoje mnogobrojne grupe za povezivanje poznate u nauci za proizvodnju konjugata antitela i majtanzinoida, uključujući na primer, one otkrivene u U. S. Patent No 5,208,020 ili EP Patent 0 425 235 BI, i Chariel al, Cancer Research52:127-131 (1992). Povezujuće grupe uključuju disulfidne grupe, tioetarske grupe, "acid labile" grupe, fotolabilne grupe, peptidaza labilne grupe, ili esteraza labilne grupe, kao stoje otkriveno u gore identifikovanim patentima, pri tome su poželjne disulfidne i tioetarske grupe.
Konjugati antitela i majtanzinoida mogu se napraviti upotrebom različitih bifunkcionalnih "coupling" proteinskih agensa ka N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio) propionat (SPDP), sukcimidil-4-(N-malemidometil) cikloheksan-l-karboksilat, iminotiolan (IT), bifunkcionalni derivati imidoestara (kao dimetil adipimidat HCL), aktivni estri (kao disukcinimidil suberat), aldehidi (kao glutaraldehid), bis-azido jedinjenja (kao bis (p-azidobenzoil) heksandiamin), derivati bis-diazonijuma (kao bis-(p-diazonijumbenzoil)-etilendiamin), diizocijanati (kao toluen 2,6-diizocijanat), i bis-aktivna fluor jedinjenja (kao l,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen. Naročito poželjni "coupling" agensi uključuju N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio) propionat (SPDP) (Carlssonel al, Biochem. J173:723-737
(1987) i N-sukcinimidil-4-(2-piridiltio)pentanoat (SPP) da bi se obezbedilo disulfidno povezivanje.
Linker može biti povezan za majtanzinoidni molekul na različitim pozicijama u zavisnosti od vrste veze. Na primer, estarska veza se može formirati reakcijom sa hidroksilnom grupom pomoću konvencionalnih "coupling" tehnika. Reakcija se može odigrati na C-3 poziciji koja ima hidroksilnu grupu, C-14 poziciji modifikovanoj sa hidroksimetilom, C-15 poziciji modifikovanoj sa hidroksil grupom, i C-20 poziciji koja ima hidroksil grupu. U poželjnom ostvarenju, veza se formira na C-3 poziciji majtanzinola ili analoga majtanzinola
Kalihetnicin ( Calicheamicin)
Još jedan imunokonjugat od interesa sadrži CD20 vezujuće antitelo konjugovano sa jednim ili više molekula kalihemina. Kaliheminska familija antibiotika je sposobna da proizvede dvolančane prekide u DNK u sub-pikomolarnim koncentracijama. Za pripremu konjugata iz familije kalihemina videti U. S patente 5,712,3374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767^285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001, 5,877,296, (svi od Amercican Cyanamid Company). Strukturni analozi kalihemicina koji se mogu upotrebiti uključuju, ali nisu ograničeni samo na njih, yi', a?', a -< ', N-acetil "v,1, PSAGi l\(Hinmanel al, Cancer research53 :3336-3342 (1993),Lode el al, Cancer Research58:2925-2928 (1998) i gore pomenute U. S. patente za American Cyanmid). Drugi anti-tumorski lek za koje se antitelo može konjugovati je Q1<7>A koje je antifolat. Oba, i kalihemacin i QI<;>A, imaju intracelularna mesta za delovanje i ne prolaze momentalno kroz plazma membranu Zato, unošenje ovih agenasa u ćeliju putem internalizacije posredovane antitelom značajno pojačava njihove citotoksične efekte
Radioaktivni izotopi
Za selektivno uništavanje tumora, antitelo može da sadrži visoko radioaktivni atom Mnogobrojni radioaktivni izotopi su dostupni za proizvodnju radiokonjugovanih anti-Pmn .-.. n • i r - ■ a.211 T131 ,125 ,,90 r, 188 o„J53 t-, - 212 n32 ni212 • CD20 antitela. Primeri uključuju At ,1 ,1 , Y , Re , Sm , Bi , P , Pb i radioaktivne izotope Lu. Kada se konjugat koristi u dijagnostičke svrhe, može da sadrži radioaktivni atom za studije scintigrafijom, na primer tc<99m>il I<123>, ili "spin label" za nuklearnu magnetnu rezonancu (NMR) (takođe poznatu kao mri, magnetic resonance imaging), kao jod-123 ponovo, jod-131, indijum-111, fluor-19, ugljenik-13, azot-15, kiseonik-17, gadolinijum, mangan ili gvožđe.
Radio- ili druga obeležja mogu biti inkorporirana u konjugat na poznati način Na primer, može se biosintetisati peptid, ili se može sintetisati hemijskom amino kiselinskom sintezom, uz pomoć pogodnih amino kiselinskih prekursora, koji uključuju na primer, fluor-19 na mestu vodonika Obeležja (labels) kao tc<99m>ili l<123>, Re<186>, Re<1>88iIn<1>" mogu se povezati preko cisteinskog ostatka u peptidu Yttrium-90 može se povezati preko lizinskog ostatka IODOGEN metod (Frakeret al.,1978) Biochem Biophvs. Res Commun. 80:49-57 može se iskoristiti za ugrađivanje joda-123. "Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphv" (Chatal, CRC, Press 1989) opisuje detaljno druge metode.
Konjugati antitela i citotoksični agensi mogu se napraviti pomoću različitih bifunkcionalnih proteinskih "coupling" agenasa kao N-sukcimidil-3-(-2piridilditio) propionat (SPDP), sukcinimidil-4-(N-maleimidometil) cikloheksan-1-karboksilat, iminotiolan (IT), bifunkcionalni derivati imidoestara (kao dimetil adtpimidat HCL), aktivni estn (kao disukcimidil suberat), aldehidi (kao gluteraldehid), bis-azido jedinjenja (kao bis (p-azidobenzoil) heksandiamin), bis-diazonijumski derivati (kao bis-(p-diazonijumbenzoil)-etilendiamin), diizocijanat (kao tolien 2,6-diizocijanat), i bis-aktivna jedinjenja fluora (kao 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen). Na primer, imunotoksin ricin može se pripremiti kao što je opisano u Vitettaet al., Science238:1098 (1987). 1-izotiocijanatobenzi-metildietilen triaminpentsirćetna kiselina (MX_DTPA), obeležena ugljenikom-24, je primer helatnog agensa za konjugaciju radionukleotida u antitelo. Videti VVO94/11026. Linker može biti "linker za sečenje" koji olakšava oslobađanje citotoksičnog leka u ćeliji. Na primer, može se koristiti linker obeležen kiselinom, linker osetljiv na peptidazu, fotolabilan linker, dimetil linker ili linker koji sadrži d i sulfid (Chariet al., Cancer Research52:127-131 (1992), U S. Patent No 5,208,020).
Tcrapeiitske upotrebe CD20 vezujućih antitela
CD20 vezujuća antitela iz ovog pronalaska su korisna za tretiranje mnogobrojnih malignih i ne-malignih obolenja uključujući autoimuna obolenja i slična stanja, i CD20 pozitivne kancere uključujući B ćelijske limfomc i leukemije. Stem ćelijama (B-ćelijski progenitori) u koštanoj srži nedostaje CD20 antigen, i zato je omogućena regeneracija zdravih B-ćelija nakon tretiranja i dovođenja na normalne nivoe u toku nekoliko meseci.
Autoimune bolesti ili stanja povezana sa autoimunošću uključuju artritis (reumatoidni artriis, juvenilni reumatoidni artritis, osteoartritis, psoriatički artritis), psorijazu, dermatitis, uključujući atopični dermatitis; hroničnu autoimunu urtikariju, polimiozitis/dermatomiozitis, toksičnu dermalnu nekrolizu, sistemsku sklerodermu i sklerozu, odgovore opovezane sa "inflaminatorv bovvel disease" (IBD), (Kronova bolest, ulcerativni kolitis), "respirator/stress" sindrom, adultni "respirator/stress" sindrom (ARDS), meningitis, alergijski rinitis, encefalitis, uveitis, kolitis, glomerulonefritis, alergijska stanja, ekcemu, astmu, stanja koja uključuju infiltraciju T ćelija i hronične inflaminatorne odgovore, aterosklerozu, autoimuni miokarditis, deficijenciju adhezije leukocita, sistemski lupus eritromatosus (SLE), lupus (uključujući nefritis, ne-renalni, diskoidni, alopecijski), juvenilni "onset" dijabetes, multipnu sklerozu, alergijski encefalomijelitis, imuni odgovori povezani sa akutnom i odloženom hipersenzitivnošću posredovani citokinima i T-limfocitima, tuberkulozu, sarkoidozu, granulomatozu uključujući VVegnerovu granulomatozu, agranulocitozu, vaskulitis (uključujući ANCA), aplastičnu anemiju, Coombs pozitivnu anemiju, Diamond Blackfan anemiju, aplaziju čistih crvenih krvnih zrnaca (pure red cell aplasia PRCA), deficijenciju faktora VIII, hemofiliju A, autoimunu neutropeniju, pancitopeniju, leukopeniju, obolenja koja uključuju leukocitnu diapedezu, CNS inflamatorni poremećaj, sindrom povrede više organa, majstenia gravis, bolest posredovana kompleksom antigen-antitelo, anti-glomerularnu "basement" membransku bolest, sindrom anti-fosfolipid antitela, alergijski neuritis, Bechet-ovu bolest, Kastelmanov sindrom, Goodpasture-ov sindrom, Lambert-Eaton Mavsetnic sindrom, Reynad-ovu bolest, Sjorgensonov sindrom, Stevens-Johnson-ov sindrom, odbacivanje transplatiranog čvrstog organa (uključujući pretretiranje za titre "high panel" reaktivna antitela, IgA deponovane u tkivu, etc.), transplant versus domaćin obolenje (graft versus host disease) (GVHD), "pemphigoid bullous", "pemphigus"
(uključujući vulgaris, foliaceus), autoimunu poliendokrinopatiju, Reiter- ovu bolest, sindrom ukočenog čoveka, arteritis gigantskih čelija, nefritis imunog kompleksa, IgA ncfropatiju, IgM posredovanu neuropatiju, idiopatsku trombocitopeničnu purpuru (ITP), trombocitnu trombocitopeničnu purpuru (TTP), autoimunu trombocitopeniju, autoimunu bolest testisa i jajnika uključujući autoimuni tireoiditis, hronični tireoiditis (Hashimoto-v tireoiditis), subakutni tireoiditis, idiopatski hipotireoidizam, Adisonovu bolest, Graveovu bolest, autoimune poliglandularne sindrome (ili sindrome poliglandularne endokrinopatije), dijabetes tipa i koji se naziva još i insulin-zavisan diabetes melitis (IDDM) i Sheehan-ov sindrom; autoimuni hepatitis, Limfoidni intersticijalni pneuponitis (HIV), bronhiolitis obliterans (ne-transplant) vs NSIP, Guillian-Barre-ov sindrom, veskulitis velikog suda (uključujućiArtritis Polimalgia Peumatika i Gigantskih ćelija (Takayas-ov sindrom)), vaskulitis srenjih sudova (uključujući Kavvasakijevu bolest i poliarteritis nodosa), "ankylosing" spondilitis, Bergerovu boelst (glutensku entropatiju), krioglobulinemiju ALS, bolest koronarne arterije.
CD20 pozitivni kanceri su oni koji obuhvataju abnormalnu proliferaciju ćelija koje eksprimiraju CD20 na površini ćelija. CD20 pozitivne neoplazme B ćelija uključuju CD20-pozitivnu Močkinsonovu bolest uključujući limfocitnu predominantnu Hočkinsonovu bolest (LPHD), ne-hočkinsonov limfom (NHL), limfome folikularnih centralnih ćelija (LCC), akutnu limfocitnu leukemiju (ALL); hroničnu limfocitnu leukemiju (CLL), leukemiju dlakavih ćelija. Ne-Hočkinsonov limfom uključuje "lo\v/grade/folikularni ne Hočkinsonov limfom (NHL), limfom malih limfocita (SLL), srednjeg stepena/folikularni NIIL, srednjeg stepena difuzni NHL, visokog stepena imunoblastični NHL, visokog nivoa limfoblastični NHL, visokog stepena malih ne sečenih ćelija NHL, "bulky" bolest NHL, plazmocitoidnu limfocitičnu limfomu, "mantle cell" limfom, AIDS-povezan limfom i Waldenstorm-ovu makroglobulinemiju. Tretiranje relapsa ovih kancera takođe su obrađeni. LPDH je tip Hočkinsonove bolesti koji često teži recidivima bez obzira na zračenje ili hemoterapiju i karakterišu ga CD-20 pozitivne maligne ćelije. CLL je jedan od četiri glavnih tipova leukemije. Kancer zrelih B-ćelija, koje se zovu limfociti, CLL se manifestuje progresivnom akumulacijom ćelija u krvi, koštanoj srži i limfnim tkivima.
U specfiČnim ostvarenjima humanizovana CD20 vezujuća antitela i njihovi funkcionalni fragmenti koriste se za tretiranje ne-Hočkinsonovog limfoma (NHL), limfocitne predominantne Hočkinsonove bolesti (LPHD), limfoma malih limfocita (SLL), hronične limfocitne leukemije, reumatidnog artritisa i juvenilnog reumatidnog artritisa, sistemskog lupusa eritematozusa (SLE), uključujući lupus nefitis, Wegner-ove bolesti, "inflaminatory bovvel disease", idiopatske trombocitopenične purpure (ITP), trombocitne trombocitopenične purpure (TTP), autoimune trombocitopenije, multipne skleroze, psorijaze, IgA nefropatije, IgM polineuropatije, majstenije gravis, vaskulitisa, diabetes melitusa, Reynaud-ovog sindroma, Sjorgens-onovog sindroma i glomerulonefritisa.
Humanizovana CD20 vezujuća antitela ili njihovi funkcionalni fragmenti su korisni u tretiranju jednim agensom,na pr..za recidivni ili refraktorni niskog stepena ili folikularni CD-20 pozitivni, B-ćelijski NHL, ili se može dostaviti pacijentima u konjunkciji sa drugim lekovima, u režimu sa više lekova.
Bezbolan (indolent) limfom je sporo rastuća, neizlečiva bolest gde prosečan pacijent preživljava između šest i 10 godina u toku kojih se smenjuju brojni periodi remisije i recidiva U jednom ostvarenju, humanizovana CD20 vezujuća antitela ili njihovi funkcionalni fragmenti koriste se za tretiranje bezbolnog NHL-a.
Parametri za procenu efikasnosti ili uspešnosti tretiranja neoplazme biće poznati lekarima koji se bave tom oblašću i odgovarajućom bolešću. Parametri mogu uključiti srednje vreme progresije bolesti, vremena remisije, stabilne bolesti.
Sledeće reference opisuju limfome i CLL, njihovo dijagnosticiranje, tretman i standardne medicinske procedure za merenje efikasnosti tretmana. Canellos GP, Lister, TA, Sklar, JLThe LymphomasW. B Saunders Company, Philadelphia, 1998; van Besien K and Cabanillas, FChnical Manifestations, Stagmg and Treatment of Non- Hodkins Lvmphoma,Chap.70, pp 1293-1338.U Hematolog)', Basic Princ/ ples and Bradice,3 rd ed. Hoffmanel al.,(editors). Churchill Livingstone, Philadelphia, 2000; and Rai, K and Patel, D:Chronic lymphocy( ic Leukemia,Chap. 72, pp 1350-1362, inHematolog)', Basic Principles and Pracitce,3<ld>ed. Hoffmanet al.(editors). Churchill Livingstone, Philadelphia, 2000.
Parametri za procenu efikasnosti ili uspešnosti tretiranja autoimune bolesti ili stanja povezanih sa autoimunom bolešću biće poznati lekarima koji se bave tom oblašću i odgovarajućom bolešću. Slede primeri
U jednom ostvarenju, antitela ovog pronalaska su korisna za tretiranje reumatoidnog artritisa RA karakteriše upala zglobova, gubitak hrskavice i erozija kostiju koja dovodi do uništavanja zglobova i na kraju do redukovane funkcionalnosti zglobova Dodatno, kako je RA sistemsko obolenje, može imati efekta i na druga tkiva kao što su pluća, oči i koštana srž Manje od 50 posto pacijenata koji su imali RA više od 10 godina mogu da nastave da rade ili funkcionišu normalno iz dana u dan
Antitela mogu da se koriste kao terapija prve linije odbrane kod pacijenata sa ranim RA (it.j metotreksat (MTX) "naive") i kao monoterapija, ili u kombinaciji sa, na pr MTX ili ciklofosfamidom, ili antitela se mogu koristiti za tretiranje kao terapija druge linije odbrane za pacijente koji su DMARD i/ili MTX refraktorni, i kao monoterapija ili u kombinaciji sa, na pr. MTX. Humanizovana CD20 vezujuća antitela korisna su za prevenciju i kontrolu oštećenja zglobova, odlaganje strukturnih oštećenja, smanjenje bolova povezanih sa upalom tokom RA, i generalno redukuju znakove i simptome umerenog do teškog RA. RA pacijenti se mogu tretirati sa humanizovanim CD20 vezujućim antitelom pre, nakon ili zajedno sa tretmanom sa drugim lekovima koji se koriste u tretiranju RA (videti dole opisanu kombinovanu terapiju). U jednom ostvarenju, pacijenti koji nisu odgovorili na lekove koji modifikuju bolest i/ili su imali neadekvatan odgovor na sam metotreksat, tertiraju se sa humanizovanim CD20 vezujućim antitelom iz ovog pronalaska. U jednom ostvarenju ovog pronalaska pacijenti su na 17-to dnevnom režimu tretmana i primaju samo humanizovano CD20 vezujuće antitelo (lg iv infuzije 1
i 15. dana); CD20 vezujuće antitelo plus ciklofosfamid (750mg iv infuzije 3 i 17, dana), ili CD20 vezujuće antitelo plus metotreksat
Jedan metod za procenu efikasnosti tretiranja kod RA bazira se na kriterijumu American College of Rheumatologv (ACR), koji između ostalog, meri procenat poboljšanja osetljivosti i otoka zglobova. RA pacijent može da se oceni kao na primer ACR 20 (20 posto poboljšanja), kada se uporedi sa tretiranjem bez antitela{ na pr.bazna vrednost pre tretiranja) ili sa placebo tretmanom. Drugi načini evaluacije efikasnosti tretmana sa antitelom uključuju ocenjivanje sa X-zračenjem kao Sharp-X-ray bodovanje koje se koristi za ocenu strukturnog oštećenja kao što je erozija kostiju i sužavanje prostora zgloba. Pacijenti mogu takođe biti evaluisani za prevenciju ili poboljšanje onesposobljenja na osnovu Health Assesment Questionnaire (HAQ) bodovanja, AIMS bodovanja, SF-36 u periodima tokom ili nakon tertiranja. ACR20 kriterijumi mogu uključiti 20% poboljšanja i u broju osetljivosti (bol) zgloba i u broju otečenosti zgloba plus 20% poboljšanja u makar tri od pet dodatnih mera:
1. procena bola pacijenta vizuelnom analognom skalom (VAS),
2 pacijentova globalna procena aktivnosti bolesti (VAS),
3 lekarska globalna procena aktivnosti bolesti (VAS),
4. pacijentova samoprocena nesposobnosti merena sa Health Assesment Questionnaire,
i
5. reaktanti akutne faze, CRP ili ESR.
ACR 50 i 70 su definisani analogno. Poželjno, pacijentu se dostavlja količina CD20 vezujućeg antitela iz ovog pronalaska koja je efektivna da se ostvari makar rezultat od ACR 20, poželjno je makar ACR 30, još poželjnije makar ACR 50 i još poželjnije ACR 70, najpoželjnije makar ACR 75 i više.
Psoriatički artritis ima jedinstvna i prepoznatljiva radiografska svojstva. Za psoiijatički artritis erozija zglobova i sužavanje prostora u zglobu može se takođe proceniti pomoću
Sharp bodovanja Humanizovana CD20 vezujuća antitela iz ovog pronalaska mogu se koristiti za sprečavanje oštećenja zglobova kao i za redukciju znakova bolesti i simptoma poremećaja
Još jedan aspekt ovog pronalaska je metoda za tretiranje Lupus ili SLE davanjem pacijentu, koji boluje od SLE, terapeutski efikasne doze humanizovanog CD20 vezujućeg antitela iz ovog pronalaska. SLEDAI bodovanje obezbeđuje numeričku kvantifikaciju aktivnosti bolesti. SLEDAI je izmeren indeks 24 klinička i laboratorijska parametra za koje se zna da koreliraju sa aktivnošću bolesti, sa numeričkim opsegom 0-103. Videti Bravan Gescuk & John Daviš," Nove/ therapeutic agent far systemic lupus erythematosus"uCurrent Opinion in Reumatology2002, 14:515-521. Za antitela za dvolančanu DNK se veruje da izazivaju bubrežne upale ("flares") i druge manifestacije lupusa. Pacijenti koji su podrgnuti tretiranju sa antitelima mogu biti monitorovani za vreme do bubrežne upale (flare), koje se definiše kao značajno, reproducibilno povećanje serumskog kreatinina, proteina urina ili krvi u urinu. Alternativno ili dodatno, pacijenti se mogu monitorovati za nivoe antinuklearnih antitela i antitela za dvolančanu DNK Tretmani za SLE uključuju visoke doze kortikosteroida i/ili ciklofosfamida (HDCC)
Spondiloartropatije su grupa poremećaja zglobova, uključujući ankilozni spondilitis, psorijatični artritis i Kronovu bolest. Uspešnost tretiranja može se odrediti pomoću priznatih globalnih mernih metoda za procenu koje se primenjuju na pacijenta i lekara
Različiti lekovi se koriste za tretiranje psorijaze, tretmani se razlikuju direktno u zavisnosti od težine obolenja Pacijenti sa blažom formom psorijaze tipično koriste lokalne tretmane, kao lokalne steroide, antralin, kalcipotrin, i tazaroten, da bi se borili sa bolešću, dok pacijenti sa umerenom i teškom psorijazom najverovatnije će upotrebiti sistemske terapije (metotreksat, retinoidi, ciklosporin, PUVA i UVB) Katrani (Tars) se takođe koriste Za ove terapije postoji kombinacija problema sigurnosti, dugotrajnosti režima ili neprijatnosti samog procesa tretiranja. Dalje, neki zahtevaju skupu opremu i određen prostor u kancelariji. Sistemski lekovi mogu prouzrokovati ozbiljne neželjene efekte, uključujući hipertenziju, hiperlipidemiju, supresiju koštane srži, oboljenje jetre, oboljenje bubrega i uznemirenost gastrointestinalnog trakta Takođe, primena fototerapije može povećati incidencu raka kože. Kao dodatak neprijatnosti koja je povezana sa topičnim terapijama, fototerapija i sistemski tretmani zahtevaju "kružne" pacijente koji su malo na terapiji, a malo bez terapije i monitoring doživotnog izlaganja usled njihovih neželjenih efekata.
Efikasnost tretmana za psorijazu se procenjuje monitorovanjem promena kliničkih znakova i simptoma bolesti uključujući promene u Phvsician's Global Assesment (PGA), i Psorias Area and Severitv Index (PASI) bodovanje, Psoriasis Svmptom Assesment (PSA), u poređenju sa baznim uslovima. Pacijent se može pregledati periodično tokom tretmana na Vizuclnoj analognoj skali koja se koristi kao indikator stepena svraba koji se oseća u određenim vremenskim tačkama.
Pacijenti mogu da dožive reakciju na infuziju ili simptome koji su povezani sa infuzijom pri prvoj infuziji terapeutskog antitela. Ovi simptomi variraju u težini i generalno su reverzibilni kada se medicinski interveniše. Ovi simptomi uključuju, ali nisu limitirani samo na njih, temperaturu kao kod gripa, ukočenost, mučninu, urlicariju, glavobolju, spazam bronhija, angioedem. Bilo bi poželjno da metode tretiranja bolesti iz ovog pronalaska minimizuju reakciju na infuziju. Zato, još jedan aspekt ovog pronalaska je metoda tretiranja bolesti koja je otkrivena i opisana, metoda za davanje humanizovanog CD20 vezujućeg antitela, naznačena time da antitelo ima redukovanu ili zavisnu od komplementa citotoksičnost i dovodi do redukcije simptoma povezanih sa infuzijom kada se uporedi sa Rituxan®. U jednom ostvarenju, humanizovano CD20 vezujuće antitelo je 2H7 vi 16.
Doziranje
U zavisnosti od indikacije koju treba tretirati i faktora relevantnih za doziranje, koji su poznati lekaru iz date oblasti, antitela iz ovog pronalaska biće davana u dozi koja je efikasna za tretiranje indikacije, a sa druge strane biće minimalizovani neželjeni efekti i toksičnost. Za tretiranje CD20 pozitivnog kancera ili autoimune bolesti, terapeutski efikasna doza biće u rangu od oko 250 mg/m<2>do oko 400 mg/m<2>ili 500 mg/ m<2>, poželjno od oko 250-375 mg/ m<2.>U jednom ostvarenju opseg doze je 275-375 mg/m<2.>Za tretiranje pacijenata koji boluju od limfoma B-ćelija, kao ne-Hočkinsonov limfom, u specifičnim ostvarenjima, anti-CD20 antitela i humanizovana anti-CD20 antitela iz ovog pronalaska biće davana humanom pacijentu u dozi 10 mg/kg ili 375 mg/m<2>. Za tretiranje NHL, jedan režim doziranja bi bio davanje jedne doze kompozicije antiitela od 10 mg/kg u toku prve nedelje tretmana, za kojom bi sledio dvonedeljni interval, zatim davanje druge doze iste količine atitela Generalno, NHL pacijent prima ovakvu terapiju jednom godišnje, ali nakon povratka limfoma ovakva terapija se može ponoviti. U drugom režimu doziranja pacijenti tretirani sa niskim-stepenom NHL primaju četiri nedelje verziju humanizovanog 2H7, poželjno vi6 (375 mg/m<2>nedeljno) a zatim sledi peta nedelja sa tri dodatna kursa antitela plus standard CHOP (ciklofosfamid, doksorubicin, vinkristin i prednizon) ili CVP (ciklofosfamid, vinkristin, prednizon) hemoterapijom koja se daje svake tri nedelje po tri ciklusa.
Za tertiranje reumatoidnog artritisa, u jednom ostvarenju, opseg doze za humanizovano telo je 125 mg/m (ekvivalent oko 200mg/dozi) u 600g/m2, daje se u dve doze, na pr. prva doza od 200 mg daje se prvog dana za kojom sledi druga doza od 200 mg 15. dana. U drugim ostvarenjima doza je 250 mg/doze, 275 mg, 300 mg, 325 mg, 350 mg, 375 mg, 400 mg, 425 mg, 450 mg, 475 mg 500 mg, 550 mg, 600 mg.
Pri tretiranju bolesti, CD20 vezujuća antitela iz ovog pronalaska mogu se davati pacijentu stalno ili u intervalima, kako odredi lekar koji se bavi datom bolešću
Pacijent kome je lek dat intravenoznom infuzijom ili subkutanozno može da doživi neželjene efekte kao povišenu temperaturu, drhtavicu, osećaj "gorenja", asteniju i glavobolju. Da bi se ublažili ili minimalizovali ovakvi neželjeni efekti, pacijent mora da primi inicijalnu uslovnu dozu(e) antitela za kojom slede terapeutske doze. Uslovnc (conditioning) doza(e) biće niže nego terapcutska doza da bi uslovile da pacijent tolerišc više doze.
Način davanja
CD20 vezujuća antitela se humanom pacijentu daju u skladu sa poznatim metodama, kao intravenozno davanje,na pr.,kao "bolus" ili kontinualna infuzija tokom odredjenog vremenskog perioda, subkutanozno, intramuskularno, intraperitoncalno, intracerebrospinalno, intra-artikularno, intrasinovijalno, intratekalno, ili inhalacionim putem, generalno intravenozno ili subkutanoznim davanjem
Kombinovana terapija
U tretiranju neoplazmi B-ćelija, koje je opisano gore u tekstu, pacijent se može tretirati sa CD20 vezujućim antitelima iz ovog pronalaska u konjunkciji sa jednim ili više agenasa kao hemoterapeutskim agensom u režimu sa više lekova. CD20 vezujuće antitelo može se davati kooperativno, sekvencijalno, ili u smeni sa hemoterapeutskim agensom, ili nakon druge terapije na koju nije bilo odgovora. Standardna hemoterapija za tretiranje limfoma može da uključi ciklofosfamide, citarabin, melfalan i mitoksantron plus melfalan CHOP je jedan od najčešće primenjivanih režima za tretiranje ne-Hočkinsonovog limfoma Slede lekovi koji se koriste u okviru CHOP režima: ciklofosfamid (komercijalna imena citoksan, neozar); adriamicin (doksorubicin/hidroksidoksorubicin), vinkristin (Onkovin); i prednizolon (ponekad se zove Delazon ili Orazon). U posebnim ostavrenjima CD20 vezujuće antitelo se daje pacijentu kome je potrebno u kombinaciji sa jednim ili više hemoterapeutskih agenasa doksorubicinom, ciklofosfamidom, vinkristinom i prednizolonom. U specifičnom ostvarenju, pacijent koji je oboleo od limfoma (kao Ne-Hočkinsonov limfom) tretira se sa anti-CD20 vezujućim antitelom iz ovog pronalaska u konjunkciji sa CHOP (ciklofosfamid, doksorubicin, vinkristin i prednizol) terapijom U drugom ostvarenju pacijent oboleo od raka može se tretirati sa humanizovanim CD20 vezujućim antitelom iz ovog pronalaska u kombinaciji sa CVP hemoterapijom (ciklofosfamid, vinkristin i prednizol). U specifičnom ostvarenju, pacijent koji je oboleo od CD-20 pozitivnog NHL tretira se sa humanizovanim 2H7.vl6 u konjunkciji sa CVP. U specifičnom izvodjenju lečenja CLL, CD20 vezujuće antitelo se daje u konjunkciji sa hemoterapijom sa jednim ili oba fludarbinom i citoksanom.
U tretiranju autoimunih obolenja ili stanja povezanih sa autoimunim obolenjima koja su gore opisana, pacijent se može tretirati sa CD20 vezujućim antitelima iz ovog pronalaska u konjunkciji sa drugim terapeutskim agensom, kao što je imunosupresivni agens, kao u režimu sa više lekova CD20 vezujuće antitelo može se davati kooperativno, sekvencijalno, ili u smeni sa hemoterapeutskim agensom, ili nakon druge terapije na koju nije bilo odgovora. Imunosupresivni agens može se davati u istoj ili manjoj dozi nego što se predlaže u nauci. Poželjni pomoćni imunosupresivni agens zavisiće od mnogo faktora, uključujući tip poremećaja koji se tretira kao i od istorijata bolesti pacijenta
"Imunosupresivni agens" koji se ovde koristi za pomoćnu terapiju odnosi se na supstance koje deluju kao supresori ili maskiraju imuni sistem pacijenta. Ovakvi agensi uključili bi supstance koje suprimiraju proizvodnju citokinina, smanjuju ekspresiju ili suprimuju sopstvenu ekspresiju antigena, ili maskiraju MHC antigene. Primeri ovakvih agenasa uključuju steroide kao glukokortikosteroide na pr., prednizon, metilprednizolon, i deksametazon; 2-amino-6-aril-5-substituisane pirimidinc (videti U. S. Pat. No. 4,665,077), azatioprin (ili ciklofosfamid, ako postoji neželjena i loša reakcija na azatioprin), anti-idiopatska antitela za MHC antigene i MHC fragmente, ciklosporin A, citokin ili antagonist za receptor za citokin uključujući anti-interferon-y,-p, ili -a antitela, anti tumor nekrozni faktor a-antitela, anti tumor nekrozni faktor -(3 antitela, anti -mterleukin-2-antitela i anti-IL-2-receptor antitela, anti-L3T4 antitela, heterologni anti-limfocitni globuli; pan-T-antitela, poželjno je anti-3CD ili anti-CD4/CD4a antitela, solubilni peptidi koji sadrže LFA vezujući domen (VVO 90/08187 objavljen 7/26/90), streptokinaza, TGF-
P, streptodornaza, RNK ili DNK iz. domaćina, FK506, RS-61443, dcoksispergualm, rapamicin, T-ćelijski receptor (U. S Pat No. 5,114,721); fragmenti receptora T ćelija (Offineret al., Science251.430-432 (1991), VVO 90/11294, i VVO 91/01 133), antitela T ćelijskih receptora (EP 340,109) kao T10B9
Za tertiranje reumatoidnog artritisa, pacijent može biti tretiran sa CD 20 antitelom iz ovog pronalaska u konjunkciji sa jednim ili više lekova koji slede: DMARDS (anti-reumatski lekovi koji modifikuju bolest){ na pr.metotreksat), NSSAI ili NSAID (ne-steroidni antizapaljivi lekovi), EfOMIRA™ (adalimumab; Abbott Laboratories), ARAVA®
(leflunomid), REMICADE® (infliksimab, Centocor Inc., Malvern, Pa), ENBREL (etanercept, Immunex, VVA), COX-2 inhibitori. DMARD® koji se ćesto koriste kod RA su hidroksiklorokin, sulfasalazin, metotreksat, leflunomid, etanercept, infliksimab, aztioprin, D-penicilamin, zlato (oralno), zlato (intramuskularno), minociklin, ciklosporin, stafilokokalna protein A imunoabsorpcija Adalimumab je humano monoklonalno antitelo koje se vezuje za TNFa Infliksimab je himerno monoklonalno antitelo koje se vezuje za TNFa. Etanercept je "imunoadhezinski" fuzioni protein koji se sastoji od vezujućeg dela ekstracelularnog liganda humanog 75kD (p75) receptora tumor nekroznog faktora (TNFR) koji je povezan sa Fc delom humanog IgG Za konvencionalni tretman RA videti na pr
" Guiedlines for thc management of rheumatoid alrhritis " ArlhrdiscvRheumat/ s/ v"
46(2) 328-346 (Februar,2002) U sepcifičnom ostvarenju, RA pacijent se tretira sa CD 20 antitelom iz ovog pronalaska u konjunkciji sa metotreksatom (MTX). Egzemplarna doza MTX je oko 7.5-25 mg/kg/nedelji. MTX se može dostaviti oralno ili subkutanozno.
Za tertiranje ankloznog spondilitisa, psoriatičnog artitisa i Kronove bolesti, pacijent može da se tretira sa CD20 vezujućim antitelom iz ovog pronalaska u konjunkciji sa na pr Remicade® (infliximab, Centocor Inc., Malvern, Pa.), ENBREL-om (etanercept; Immunex, WA).
Tretiranje SLE uključuje visoke doze kortikosteroida i/ili ciklofosfamida (HDCC).
Za tretiranje psorijaze pacijentima se može davati CD20 vezujuće antitelo u konjunkciji sa lokalnom terapijom, kao lokalnim steroidima, antralinom, kalcipotrienom, klobetazolom, i tazarotenom, ili sa metotreksatom, retinoidima, ciklosporinima, PUVA i AVB terapijama. U jednom ostvarenju, pacijent oboleo od psorijaze tretira se sa CD20 vezujućim antitelom sekvencijalno ili kooperativo sa ciklosporinom.
Farmaceutske formulacije
Terapeutske formulacije CD-20 vezujućih antitela koje se koriste prema ovom pronalasku pripremaju se za skladištenje mešanjem antitela, koje ima željen stepen čistoće, sa optimalno farmaceutski prihvatljim nosačima, ckscipijcntima ili stabilizatorima (Remington's Pharmaceutical Sciences 16 th edition, Oslo, A. Ed. (1980)), u formi liofilizovanih formulacija ili vodenih rastvora Prihvatljivi nosači, ckscipijenti ili stabilizatori su netoksični recipijcnti pri dozama i koncentracijama koje se koriste, i uključuju pufcre kao fosfatni, citratni i druge organske kiseline, antioksidansi uključuju askorbinsku kiselinu i metiomn, prezervative (kao oktadecildimctilbenz.il amonijum hlorid; heksamonijum hlorid, benzalkonijum hlond, benzetonijum hlorid, fenol, butil ili bcnz.il alkohol, alkil parabene kao metili ili propil paraben, katehol; rczorcinol, cikloheksanol; 3-pentanol, i m-krezol,) polipetide niske molekulske težine (manje od oko deset ostataka), proteine kao serum albumin, želatin, ili imunoglobuline, hidrofilne polimere kao olvinilpirolidon; amino kiseline kao glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin, ili lizin, minosaharide, disaharide, i druge ugljene hidrate uključujući glukozu, manozu, ili dekstrine, heltirajuće agense kao EDTA, šećere kao saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol, suprotne jone koji daju soli, kao natrijum, metalne komplekse( na pr.Zn-protein kompleksi); i/ili nejonske površinske aktivne agense (surfactants) kao TWEEN, PLURONICS ili polietilen glikol (PEG).
Formulacije anti-CD-20 antitela koja služe za primer su opisane u VV098/56418, ovde inkorporisani referencama. Još jedna formulacija je tečna više-dozna formulacija koja sadrži anti-CD20 antitelo pri 40 mg/mL, 25 mM acetat, 150 mM terhaloza, 0.9% benzil alkohol, 0.02% polisorbat 20 na pH 5.0 koja ima minimalni rok trajanja skladištenja na policama ("shelf life") od dve godine na 2-8°C. Još jedna anti-CD20 formulacija od interesa sadrži 10 mg/mL antitela u 9.0 mg/mL natrijum hlorida, 7,35 mg/mL natrijum citrat dihidrata, 0.7 mg/mL polisorbata 80 i sterilne vode za injeciranje, pH6.5 Još jedna vodena farmaceutska formulacija sadrži 10-30 mM natrijum acetata od oko pH 4 8 do oko Ph 5.5, poželjno je pH 5.5, polisorbat kao površinski aktivni agens u količini od oko 0.01-0.1% v/v, trehalozu u količini od oko 2-10% w/v i benzil alkohol kao prezervativ (US. 6,171,586). Liofilizovane formulacije adaptirane za subkutanozno davanje opisane su u VVO97/04081. Ovakve liofdizovane formulacije mogu biti rekonstituisane sa pogodnim rastvaračem do visokih koncentracija proteina i rekonstituisana formulacija može biti davana subkutanozno sisana koji će se ovde tretirati.
Jedna formulacija za humanizovane 2H7 varijante je antitelo od 12-14 mg/mL u 10 mM histidinu, 6% saharozi, 0.02% polisorbatu 20, pH 5 8
U specifičnom izvodjenju, 2H7 varijante i pogotovu 2H7.vl6, formulisana je na 20 mg/mL antitela u 10 mM histidin sulfatu, 60 mg/ml saharoze, 0.2 mg/ml polisorbata 20 i sterilne vode za injeciranje na pH 5.8.
Formulacija opisana ovde može takođe da sadrži više od jedne aktivne supstance neophodne za određenu indikaciju koja se tretira, poželjno za one sa komplementarnim aktivnostima koje nemaju loš efekat jedne na druge. Na primer, može biti poželjno da se dalje obezbedi citotoksični agens, hemoterapeutski agens, citokin ili imunosupresivni agens( na pr.onaj koji deluje na T ćelije kao ciklosporin ili antitelo koje se vezuje za T ćelije,na pr.ono koje se vezuje za LFA-1). Efikasna količina drugih ovakvih agenasa zavisi od količine antitela koja je prisutna u formulaciji, vrste bolesti ili poremećaja ili tretmana, i drugih faktora koji su obrađeni ovde. Oni se generalno koriste u istim dozama i načinima davanja koji su ovde opisani ili od oko 1 do 99% prethodno upotrcbljenih doza.
Aktivni sastojci mogu takođe biti obuhvaćeni u pripremljene mikrokapsule, na primer, tehnikama koacervacije i poli-(metilmetacilat) mikrokapsule, u koloidnim sistemima za davanje leka (na primer, lipozomi, albuminske mikrosfere, mikroemulzije, nano-čestice i nano kapsule) ili u makroemulzijama. Ovakve tehnike su opisane u Remington's Pharmaceutical Sciences I6th edition, Oslo, A Ed. (1980).
Mogu se pripremiti preparati sa odloženim oslobađanjem Pogodni primeri preparata sa odloženim oslobađanjem uključuju semi-permeabilne matrice čvrstih hidrofobnih polimera koji sadrže antagonist, čije matrice su u obliku uobličenih proizvoda, na pr. filmova, ili mikrokapsula Primeri matrica sa odloženim oslobađanjem uključuju poliestre, hidrogelove (na primer, poli-(2-hidroksietil-metakrilat), ili poli-(vmilalkohol)), polilaktidi (U. S Pat No 3,773,919), kopolimeri L-glutminske kiseline i etil-L-glutamata, nedegradibilni etilen-vinil acetat, degradabilni kopolimeri mlečne kiseline i glikolne kiseline kao LUPRON DEPOT™ (injektibilne mikrosfere sastavljene od kopolimera mlečne kiseline i glikolne kiseline i leuprolid acetata), i poli-D-(-)-3-hidroksibuterna kiselina.
Formulacije koje će se koristiti za///vivodavanje moraju biti sterilne. Ovo je već postignuto filtracijom kroz sterilne membrane za filtraciju
Proizvodi i kitovi
Jedno drugo ostvarenje ovog pronalaska je proizvod koji sadrži materijale korisne za tretiranje autoimunih bolesti i povezanih stanja i CD20 pozitivnih kancera kao ne-Hočkinsonov limfom. Proizvod sadrži sud i oznaku ili uputstvo na samom sudu ili uz njega . Medju pogodne kontejnere spadaju , na primer, boce, ampule, špricevi itd. Sudovi mogu biti napravljeni od različitih materijala kao što je staklo ili plastika. Sud sadrži kompoziciju koja je efikasna u tertiranju stanja i može da ima sterilan ulazni otvor (na primer sud može biti intravenozna kesa sa rastvorom ili ampula koja ima čep koji se može probušiti sa hipodermijskom iglom). Makar jedan aktivni agens u kompoziciji je CD20 vezujuće antitelo iz ovog pronalaska. Oznaka ili uputstvo u pakovanju ukazuje na to da se kompozicija koristi za tretiranje određenog stanja. Oznaka ili uputstvo u pakovanju će dalje da sadrže uputstva za davanje kompozicije antitela pacijentu. Uputstvo u pakovanju koje se obično nalazi u komercijalnim pakovanjima terapeutskih proizvoda sadrži informaciju o indikacijama, upotrebi, doziranju, dostavljanju, kontraindikacije i/ili upozorenja koja se odnose na upotrebu takvog terapeutskog proizvoda. U jednom ostvarenju, uputstvo u pakovanju ukazuje na to da se kompozicija koristi za tretiranje ne-Hočkinsonovog limfoma.
Dodatno, proizvod može takodje da ovuhvati drugi sud koji sadrži farmaceutski prihvatljiv pufer, kao bakteriostatičnu vodu za injeciranje (BVVFI), fiziološki rastvor puferisan sa fosfatom, Ringerov rastvor i rastvor dekstroze. Može dalje da uključi druge materijale koji su potrebni sa komercijalnog stanovišta i stanovišta korisnika, uključujući druge pufere, rastvarače, filtere, špriceve, i igle.
J'akođe su obezbeđeni kitovi koji se koriste za različite svrhe,na pr.,za testove ubijanja B-ćelija, kao pozitivna kontrola za testove apoptoze, za prečišćavanje i imunoprecipitaciju CD20 iz ćelija. Za izolaciju i prečišćavanje CD20, kit može da sadrži anti-CD20 antitela za detekciju i kvantifikaciju CD20/'//vitro, na pr.,u ELISA ili VVestern blot analizi Što se tiče proizvoda, kit sadrži sud i oznaku ili uputstvo u pakovanju ili je povezan sa sudom. Sud sadrži kompoziciju koja obuhvata najmanje jedno anti-CD20 antitelo iz pronalaska. Dodatni sudovi mogu biti uključeni i sadržena pr.,rastvarače i pufere, kontrolna antitela. Oznaka ili uputstvo u pakovanju mogu da obezbede opis kompozicije kao i instrukcije za///vitroili dijagnostičku upotrebu.
Cinomolgus majmun CD20
Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje izolovanu nukleinsku kiselinu koja sadrži nukleotidnu sekvencu SEQ ID NO.:24 od Cvnomegalus majmuna CD20 kao što je prikazano na slici 19. U jednom ostvarenju, nukleinska kiselina je cDNK. U jednom ostvarenju, nukleinska kiselina koja kodira majmunski CD20 je ekspresioni vektor za ekspresiju domaćinske ćelije Nukleotidna sekvenca SEQ ID NO.;24 u ekspresionom vektoru je operabilno povezana sa ekspresionom kontrolnom sekvencom kao što je promotor ili promotor i "enhancer" (pojačivač). Ekspresiona kontrolna sekvenca može biti nativna sekvenca normalno vezana za Cvnomolgus CD20 gen, ili heterologna genu Takođe je obezbeđen izolovani polipeptid koji sadrži amino kiselinsku sekvencu (SEQ ID NO 25, SL.19&20) iz Cvnomolgus majmuna CD20, kao i domaćinske ćelije koje sadrže Cvnomolgus CD20 nukleinsku kiselinu. U jednom aspektu domaćinske ćelije su eukariotske ćelije,na pr.,CHO ćelije Fuzioni proteini koji obuhvataju Cvnomolgus CD20 amino kiselinsku sekvencu ili fragmente sekvence takođe su obrađeni.
Eksprimentalni primeri
Primer I
Humanizacija 2H7 anti-CD20 mišjeg monoklonalnog antitela
Humanizacija mišjeg anti-humanog CD20 antitela, 2H7 (takođe se odnosi ovde i na m2H7, m za mišije), je izvedena putem serije koraka "site-direeted" mutageneze. Mišje sekvence varijabilnog regiona 2H7 antitela i himemi 2H7 sa mišjim V i humanim C su ranije opisane, videtina pr.,U. S. patente 5,846,818 i 6,204,023 CDR ostaci od 2H7 identifikovani su poređenjem amino kiselinske sekvence mišjih 2H7 varijabilnih domena (otkriveni u U. S. 5,846,818) sa sekvencama poznatih antitela (Kabatet al., Sec/ uences of proteins of immunological interest,Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)). CDR regioni za lake i teške lance definisani su na osnovu hipervarijabilnosti sekvence (Kabalel al., supra)i prikazani su na slici 1A i slici 1B. Pomoću sintetičkih oligonukleotida (Tabela 1), "sute direeted" mutageneza (Kunkel,Proc. Nali. Acad. Sci.82:488-492 (1985)) je iskorišćena za uvođenje svih šest mišjih 2H7 CDR regiona u kompletan humani Fab "framework" koji odgovara konsenzus sekvenci Vtđ, VhIU (Vikappa podgrupa I, Vn podgrupa III) koja se nalazi u okviru plazmida pVX4 (SI 2).
Fagemid pVX4 (SI.2) je upotrebljen za mutagenezu kao i za ekspresiju F(ab) uP. coli.Na osnovu fagemida pb0720, derivat od pB0475 (Cunninghamel al., Science243: 1330-1336
(1989)), pVX4 sadrži DNK fragment koji kodira humanizovan konsenzusK-podgrupc 1 lakog lanca (V|..kI-Cl) i humanizovan konsenzus podgrupe III teškog lanca (VnIII-Cn 1) anti-IFN-a (interferon a) antitelo. pVX4 takođe ima promotor alkalne fosfataze i Shine-Dalgamo sekvencu, obe izvedene iz drugog ranije opisanog plazmida koji se bazira na pUC19, pAK2(Čarter et al., Proc. Nali. Acad. Sci.USA 89:4285 (1992)Jedinstveno Spelrestrikciono mesto je ubačeno između DNK koja kodira F(ab) laki i teški lanac Prve 23 amino kiseline u anti-IFN-a teškom i lakom lancu su Stil sekrecione signalne sekvence (Changet al., Gene55:189-196 (1987)
Za konstruisanje zamenjene (svvap)-CDR verzije 2H7 (2H7.v2), urađena je "site directed" mutageneza na matrici pVX4 koja sadrži deoksiuridin; svih šest CDR-ova anti-IFN-a su promenjeni u mišje 2H7 CDR-ove. Dobijeni molekul nazvan je humanizovana 2H7 verzija 2 (2H7.v2, ili "CDR-zamenjena verzija" 2H7; poseduje m2H7 CDR ostatke sa konsenzusom za humane FR ostatke prikazane na slici 1A i 1B. Humanizovani 2H7.v2 je upotrebljen za dalju humanizaciju.
Tabela 1 prikazuje oligonukleotidne sekvence koje su upotrebljene za kreiranje svakog od mišjih 2H7 (m2H7) CDR-ova u H i L lancu Na primer, CDR-H1 oligonukleotid je upotrebljen za osvežavanje m2H7 H lanac CDR1. CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 odnose se na H lanac CDR1, CDR2, i CDR3, slično tome CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 odnose se na L lanac CDR1, CDR2, i CDR3. Zamene u CDR-H2 su izvršene u dva koraka sa dva oligonukleotida, CDR-H2A i CDR-H2B.
Za poređenje sa humanizovanim konstruktima, plazmid koji eksprimira himerni 2117 Fab (koji sadrži mišje Vj.. i VH domene, i humane CL i Chdomene) konstruisan je pomoću "site directed" mutageneze (Kunkel,supra)upotrebom sintetičkih oligonukleotida za ubacivanje mišjih "framework" ostataka u 2H7 v2. Sekvence dobijenog plazmidnog konstrukta za ekspresiju himernog Fab poznat kao 2H7.v6 8, prikazan je na si.3. Svaki kodiran lanac od Fab ima Stil sekrecionu signalnu sekvencu od 23 amino kiselina kao što je opisano za pVX4 (SI.2) u tekstu iznad.
Na osnovu poređenja sekvence mišjih 2H7 "framevvork" ostataka sa humanim VkI, VhIII konsenzus "framework"-om (slike 1A i 1B) i ranije humanizovanim antitelima ( Čarteret al'., Proc. Natl. Acad. Sci. USA89:4285-4289 (1992)) , nekoliko "framevvork" mutacija biće unete u 2H7.v2 Fab konstrukt pomoću "site directed" mutageneze. Ove mutacije rezultiraju pramenom određenih humanih konsenzus "feamevvork" ostatka u odnosu na one koji se nalaze u mišjem 2H7 "framework"-u, na mestima koja mogu da utiču na konformacije CDR-ova ili na kontakt sa antigenom. Verzija 3 sadržala je Vh(R71V, N73K), verzija 4 sadržala je VH(R71V), verzija 5 sadržala je V„(R71V, N73K) i V,..(L465), verzija 6 sadržala je VH(R71 V, N73K) i VL(L465, L47VV).
Humanizovane i himerne verzije Fab od m2II7 antitela su eksprimiraneu E. colii prečišćene na sledeći način. Plazmidi su transformisani u E. coli soj XL-B!ue (Stratagene, San Diego, CA) za pripremanje jednolančane i dvolančane DNK. Za svaku varijantu oba, i laki i teški lanac su kompletno sekvencirani pomoću dideoksinukleotidnog metoda (Sequenqse, U. S. Biochemical Corp.). Plazmidi su transformisani uE. colisoj 16C9, derivat MM294, zasejani u LB šolje koje sadrže 5 pg/ml karbenicilina, i pojedinačna kolonija je selektovana za ekspresiju proteina. Pojedinačna kolonija je uzgajana u 5 ml LB-100 u.g/ml carbenicilina tokom 5-8 h na 37°C. 5 ml kulture dodato je u 500 ml APS-100 u.g/ml karbenicilina i pušteno je da raste 16 sati u bocama za mućkanje sa pregradama od 4 I na 37°C. AP5 medijum koji se sastoji od : 1.5 g glukoze, 11.0 Hvcase SF, 0.6 g ekstrakta kvasca (sa sertifikatom), 0.19 g anhidrovanog MgS04, 1.07 g NH4C1, 3.73 g KC1, 1.2 g NaCl, 120 ml IM trietanolamina, pH 7 4, u I 1 vode i zatim se steriliše kroz 0,1 pm Sealkeen fdter.
Ćelije su sakupljene centrifugiranjem u bocu za centirfugiranje od 1 1 (Nalgene) na 3000xg i uklonjen je supernatant. Nakon zamrzavanja od 1 sata supernatant je resuspendovan u 25 ml hladnog 10 mM MES-10 mM EDTA, pH 5.0 (pufer A). 250 ul 0.1 M PMSF (Sigma) dodato je da bi se sprečila proteoliza i 3.5 ml stoka 10 mg/ml lizozima iz bclanceta jaja kokoške (Sigma) dodato je da bi se potpomogla liza bakterijskog ćelijskog zida Nakon blagog mućkanja na ledu tokom 1 sata uzorak se centrifugira na 40 000Xg tokom 15 min. Supernatant je sveden na 50 ml sa puferom A i nanešen na DEAE kolonu od 2 ml koja je ekvilibrisana sa puferom A. Silazna frakcija je zatim naneta na proteinsku G-Sepharose CL-4B (Pharmacia) kolonu (zapremina kuglice 0.5 ml) koja je ekvilibrisana sa puferomA Kolona je isprana sa 10 ml pufera A i eluirana sa 3 ml 0.3 M »ličinom, p.II 3.0, u 1 25 ml IM Iris, pH 8.0. Pufcr F(ab) je zatim zamenjen u PBS korišćenjem Centricon-300 (Amicon) i konccntrovanjem do krajnje zapremine 0.5 ml. SDS-PAGE gelovi svih F(ab) su uradjeni da se utvrdi čistoća, a molekulska težina svake varijante je određena elektrosprejnom masenom spektrometrijom
U ELISA- testovima baziranim na ćelijama (opisanim u daljem tekstu) bilo je teško ustanoviti vezivanje Fab-ova, uključujući i himerni 2H7 Fab, za CD20 Zato su 2H7 Fab verzije reformisane u IgG 1 pune dužine antitela za testove i dalje mutageneze
Plazmidi za ekspresiju IgG-ova kompletne dužine su konstruisani subkloniranjem VL i Vh domena iz himernog 2H7 (v6 8) Fab kao i humanizovane Fab verzije 2 do 6 u prethodno opisane pRK vektore za ekspresiju sisarskih ćelija (Gormanel al., DNA Prat Eng.Tech. 2:3-10 (1990). Ukratko, svaki Fab konstrukt je isečen sa EcoRV i BlpI da bi se izvadio VL fragment, koji se klonira u PvuII/Apal mesta u plazmidu pDRI (si.4) za ekspresiju kompletnog lakog lanca (Vj-Cl). Dodatno je svaki svaki Fab konstaikt isečen sa PvuII i Apal da bi se izvadio VH fragment, koji se klonira u EcorV/BlpI mesta u plamzidu pDR2 (si.5) za ekspresiju kompletnog teškog lanca (VH-CHi-zglob-CH2-CH3domeni). Za svaku IgG varijantu, izvedene su prolazne (transient) transfekcije pomoću kotransfekcije plazmida koji eksprimira lake lance plazmida koji eksprimira teške lance u humanu embrionsku bubrežnu ćelijsku liniju koja je transformisana adenovirusom 293 (Grahamel al., J. Gen Virol.,36:59-74, (1977)). Ukratko, 293 ćelije su podeljene dan pre transfekcije, i nanesene na šolju koja sadrži serum. Sledećeg dana dodata je dvolančana DNK pripremljena kao kalcijum fosfatni precipitat, za kojom sledi pAdVAntage™ DNK (Promega, MAdison, VVI), i ćelije su inkubirane preko noći na 37°C Ćelije su gajene u medijumu bez seruma i sakupljene nakon 4 dana Antitela su prečišćena iz supernatanta kulture pomoću A-Sepharose CL-4B, urađena je zamena pufera u 10 mM natrijum sukcinat, 140 mM NaCl, pH 6.0 i koncentrisan je pomoću Centricon-10 (Amicon). Koncentracije proteina su određene kvantitativnom amino kiselinskom analizom.
Da bi se odredili relativni afiniteti vezivanja za CD20 antigen, razvijen je ELISA test baziran na ćelijama. Humane B-limfoblastoidne VVIL2-S ćelije (ATCC CRL 8885, American Type Culture Collection Rockville, MD) gajene su u RPMI 1640 uz dodatak 2 mM glutamina, 20 mM HEPESa, pH 7.2 i 10 % fetalnog goveđeg seruma inaktiviranog toplotom u ovlaženom 5% CO2inkubatoru. Ćelije su isprane sa PBS-om koji sadrži 1% FBS (pufer za test) i zasejane na 250-300,000 ćelija po bunarčiću na ploče sa 96 bunarčića (Nunc, Roskilde, Denmark) Standard koji je dvostruko serijski rastvoren (15.6-1000 ng/ml 2H7 v6 8 himerni IgG) i trostruko serijski razblaženi uzorci (2 7-2000 ng/ml) u puferu za test su dodate na ploče. Ploče su stavljene u led i inkubirane 45 minuta. Da bi se uklonilo nevezano antitelo, 0 1 mL pufera za test dodato je u bunarčiće. Ploče su centnfugirane i uklonjeni su supernatanti. Ćelije su isprane još dva puta sa 0.2 mL pufera za test. Antitelo vezano za ploče je ustanovljeno dodatkom kozijih anti-humanih Fc antitela konjugovanih peroksidazom (Jackson Immuno Research, VVest Grove, PA) na ploče. Nakon 45 minuta inkubacije, ćelije su isprane kao što je ranije opisano. TMB substrat (3,3',5',5'-tetrametii benzidin, Kirkegaard & Perry Laboratoruics, Gaithersburg, MD) je dodat na ploče. Reakcija je zaustavljena dodavanjem 1 M fosforne kiseline Titracione krive su podešene sa programom "four-parameter nonlinear regression curvc-fitting" (KaleidaGraph, Synergy sofhvarc, Reading, PA). Absorbanca na srednjoj tački (midpoint) titracione krive (mid-OD) i njena odgovarajuća koncentracija standarda su određene. Zatim su određene koncentracije svake varijante na ovim mid-OD, i koncentracija standarda je podeljena sa koncentracijom svake varijante Prema tome, te vrednosti su odnos vezivanja svake varijante prema standardu. Standardne devijacije relativnih afiniteta (ekvivalentna koncentracija) generalno su iznosile -<7- 10% između eksperimenata.
Kao što je prikazano na tabeli 2, vezivanje CDR-promenjene varijante (v.2) je ekstremno redukovano, ako se uporedi sa himernim 2H7 (v.6.8). Međutim, verzije 3 do 6 pokazuju poboljšano vezivanje. Da bi se odredio minimalan broj mutacija koje mogu da budu potrebne za povraćaj afiniteta za vezivanje kao što ga ima himerni 2H7, dodatne mutacije i kombinacije mutacija su konstruisane "site-directed" mutagenezom da bi se proizvele varijante 7 do 17 kao što je prikazano na tabeli 2. Posebno one uključuju VH mutacije A49G, F67A, I69L, N73K, i L78A; i VL mutacije M4L, M33I, i F71Y. Verzije 16 i 17 pokazale su najbolje relativne afinitete vezivanja, dvostruko u odnosu na himernu verziju, bez značajnih razlika (s. d. = +/- 10%) između ova dva. Da bi se minimalizovao broj mutacija, verzija 16, koja ima samo 4 mutacije u humanom "framevvork" ostataku u odnosu na mišji "framevvork" ostatak (tabela 2) je zato izabrana kao humanizovana forma za dodatnu karakterizaciju.
Tabela2. Relativni afiniteti vezivanja humanizovanih 2H7 IgG varijanti za CD20 uporedjeni sa himernim 2H7, korišćenjem ELISA-testa baziranog na ćelijama. Relativno vezivanje se izražava kao koncentracija varijante neophodne za ekvivalentno vezivanje; tako odnos <1 ukazuje na slabiji afinitet za varijantu. Standardna devijacija određenog relativnog afiniteta u prošeku je bio +/- 10%. "Framevvork" zamene u varijabilnim domenima su relativne u odnosu na CDR-zamenjenu verziju na osnovu brojčanog sistema Kabata (Kabatet al., supra)
Tabela 3.Sekvence oligonukleotida korišćenih za konstrukciju mutacija VH(A49G, R71V, N73K) i VL(L46P) u humanizovanoj 2H7 verziji 16 (2H7.vl6). Podvučeni kodoni kodiraju amino kiselinske sibstitucije. Za VH(R71V, N73K) i VL(L46P), oligonukleotidi su prikazani kao "sense" lanac, pošto su oni upotrebljeni za mutagenezu Fab matrice, dok za VH(A49G), oligonukleotidi su prikazani kao "anti-sense" lanac, jer su korišćeni sa pRK (IgG težak lanac) matricom. Sekvenca proteina verzije 16 prikazana je na slici 6 i slici 7.
PrimerZ
Antigen-vezujuće determinante (paratop) od 2H7
Zamene alanina (Cunningham &Wells, Science, 244:1081-1085 (1989) napravljene su u 2H7.vl6 ili 2H7.vl7 u cilju testiranja doprinosa individualnih bočnih lanaca antitela u vezivanju za CD20. IgG varijante su eksprimirane u 293 ćelijama sa pDRI i pDR2 vektora, prečišćene su, i urađen je test relativnog afiniteta vezivanja kao što je gore opisano Nekoliko alaninskih zamena rezultiralo značajnim smanjenjem relativnog vezivanja za CD20 na VVIL-2S ćelijama (tabela 4).
Tabela 4 Efekti alaninskih zamena u CDR regionima humanizovanog 2H7 vl6 mereni pomoću ELISA bazirane na ćelijama (VVIL2-S ćelije) Relativno vezivanje izraženo je kao koncentracija 2H7 vl6 roditeljskih u odnosu na koncentraciju varijante neophodne za ekvivalentno vezivanje, tako odnos <1 ukazuje na slabiji afinitet za varijantu; odnos >1 ukazuje na veći afinitet za varijantu. Standardna devijacija određenog relativnog afiniteta bila je u prošeku +/- 10%. "Framevvork" zamene u varijabilnim domenima su prema brojčanom sistemu Kabata ( Kabat et al., supra) relativne u odnosu na 2FI7 vi6. NVD znači da vezivanje nije detektovano.
Primer 3
Dodatne mutacije u okviru 2H7 CDR regiona
Takodje su testirane zamene dodatnih ostataka i kombinacije zamena na CDR pozicijama koje su na osnovu Ala-skeniranja identifikovane kao bitne. Nekoliko varijanti kombinacija, posebno v.96 izgleda da se vezuju jače nego v 16.
Tabela 5.Efekti kombinacija mutacija i ne alaninskih zamena u CDR regionima humanizovanog 2H7.vl6 mereni pomoću ELISA baziranog na ćelijama (VVIL2-S ćelije). Relativno vezivanje za CD20 je izraženo kao koncentracija 2H7.vl6 roditeljskih u odnosu na koncentraciju varijante neophodne za ekvivalentno vezivanje, tako odnos <1 ukazuje na slabiji afinitet za varijantu; odnos >1 ukazuje na veći afinitet za varijantu. Standardna devijacija određenog relativnog afiniteta bila je u prošeku +/- 10%. "Framevvork" zamene u varijabilnim domenima su prema brojčanom sistemu Kabata (Kabat et al., supra) relativne u odnosu na 2H7 vi 6.
Primer 4
Mutacije na mestima zamena u okviru humanizovanog "framework"-a
Zamene dodatnih ostataka na pozicijama u okviru "framework"-a koje su promenjene tokom humanizacije takođe su testirane u 2H7.vl6 okruženju. Posebno, alternativne "framevvork" zamene, koje nisu pronađene u mišjem 2H7 roditeljskom niti u humanom konsenzus "framework"-u napravljene su na Vi,(P46) i Vn(G49, V71 i K73).
Ove zamene, koje su generalno dovodile do malih promena u relativnom vezivanju (tabela 6), ukazuju da postoji određena fleksibilnost u ostacima "framcwork"-a na ovim pozicijama,
Tabela6. Relativno vezivanje u "framevvork" zamena u testu baziranom na ćelijama (VVTL2-S ćelije), IgG varijante su prikazane sa mutacijama u odnosu na 2H7.vl6 okruženje. Relativno vezivanje je izraženo kao koncentracija 2I17,v6,8 himerc u odnosu na koncentraciju varijante neophodne za ekvivalentno vezivanje, tako odnos <1 ukazuje na slabiji afinitet za varijantu; odnos >1 ukazuje na veći afinitet za varijantu. Standardna devijacija određenog relativnog afiniteta bila je u prošeku +/- 10%. 'T'ramcvvork" zamene u varijabilnim domenima su prema brojčanom sistemu Kabata (Kabat et al, supra) relativne u odnosu na 2H7.vl6. (<*>) Za varijante su urađeni testovi sa 2H7.vl6 kao uporedni standard, relativne vrednosti su normalizovane na one kod himera
Primer 5
Humanizovane 2H7 varijante sa pojačanim efektornim funkcijama
Pošto 2H7 može da posreduje u lizi B-ćelija preko oba sistema, i citotoksičnosti zavisne od komplementa (CDC) i ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC), tražili smo da proizvedemo varijante humanizovanog 2117.vi6 sa poboljšanim CDC i ADCC aktivnostima. Mutacije određenih ostataka u okviru Fc regiona drugih antitela su opisane (Indusogieet al, ,7. Immunol166:2571-2575 (2001)) za poboljšanje CDC kroz pojačano vezivanje za Clq komponentu komplementa. Mutacije su takođe opisane (Shieldsel al.,,/. Biol. Chem276:6591-6604 (2001), Prestaet al., Bioc/ iem. Soc. Trans. 30:487-490
(2002)) za poboljšanje ADCC preko pojačanog vezivanja IgG za aktivirajuće Fcy receptore i ređukovanog IgG vezivanja za inhibitorne Fcy receptore. Posebno, tri mutacije su identifikovane za poboljšanje CDC i ADCC aktivnost S298A/E333A/K334A (takođe ovde se odnosi i na trostruki Ala mutant ili varijantu, numerisanje u okviru Fc regiona je na osnovu EU sistema numerisanja, Kabatet al, supra)kao što je opisano (Indusogieet al, supra(2001); Shieldsel al., supra)
Da bi se pojačala CDC i ADCC aktivnost 2H7, konstruisan je trostruki alaninski mutant od 2H7 Fc. Humanizovana varijanta anti-HER2 antitela 4d5 je proizvedena sa mutacijama S298A/E333A/K334A i poznata je kao 4D5FcllO (i.e., anti-p<185>HER2 I<g>Gl (S298A/E333A/K334A); Shiekdsel al, supra).Plazmid, p4D5Fcll0 koji kodira antitelo 4D5Fcl 10 (Shieldsel al,supra) je isečen sa Apal i Hind III, a Fc fragment (koji sadrži mutacije S298A/E333A/K334A) je ligiran u Apal /Hind III mesta 2H7 teškog lanca vektora pDR2-vl6, da bi se dobio pDR2-v31 Amino kiselinska sekvenca verzije 31 kompletnog H lanca je prikazana na slici 8. L lanac je isti kao kod vi 6
Iako su konstantni domeni Fc regiona IgG antitela relativno konzervirani u okviru date vrste, postoje alelske varijante (revijski rad Lefranc i Lefranc uThe human IgG subclasses:molecular analysis of structure, function, andre<g>ulation,pp.43-78, F Shakib (ed ), Pergammon Press, Oxford (1990)).
Tabela7. Efekti zamena u okviru Fc regiona na CD vezivanje. Relativno vezivanje za CD20 je izmereno u testu baziranom na ćelijama (V/IL2-S ćelije) "framevvork" zamena. Fc muatcije (<*>) su obeležene EU brojčanim sistemom (Kabatet al, supra)i relativne su u odnosu na 2H7 vl6 parentalni. Kombinacija tri Ala promena u Fc regionu od v.31 je opisana kao "FcllO". IgG varijante su prikazane sa mutacijama u odnosu na 2H7 vl6 okruženje. Relativno vezivanje je izraženo kao koncentracija 2H7.v6.8 himere u odnosu na koncentraciju varijante neophodne za ekvivalentno vezivanje, i tako odnos<<>1 ukazuje na slabiji afinitet za varijantu. Standardna devijacija u određivanju relativnog afiniteta u prošeku je bila +/- 10%.
Primer 6
Humanizovane 2H7 varijante sa povećanom stabilnošću
Za razvijanje terapeutskih proteina, poželjno je da se odaberu varijante koje ostaju stabilne uprkos oksidaciji, dezaminaciji, ili drugim procesima koji mogu da utiču na kvalitet proizvoda, u pogodnoj formulaciji pufera. U 2H7.vl6 nekoliko ostataka je identifikovano kao potencijalni izvor nestabilnosti: VL (M32) i VH (M34, NI00). Zbog toga su ubačene mutacije na ova mesta u cilju poređenja sa vi6.
Tabela 8. Relativno vezivanje 2H7 varijanti dizajniranih da povećaju stabilnost i/ili efektornu funkciju, za CD20 u testu baziranom na ćelijama (VVIL2-S ćelije) IgG varijante su prikazane sa mutacijama u odnosu na 2H7 vl6 okruženje. Relativno vezivanje je izraženo kao koncentracija 2H7.v6.8 himere u odnosu na koncentraciju varijante neophodne za ekvivalentno vezivanje, i tako odnos <1 ukazuje na slabiji afinitet za varijantu. Standardna devijacija u određivanju relativnog afiniteta u prošeku je bila +/-10%. "Framevvork" zamene u varijabilnim domenima su prema brojčanom sistemu Kabat relativneu odnosu na 2H7.vl6, a Fc mutacije (<*>) su obeležene EU brojčanim sistemom (Kabatet al., supra.(<**>) Varijante su merene sa 2H7.vl6 kao uporedni standard; relativne vrednosti su normalizovane na one kod himere.
Dodatne Fc mutacije su kombinovane sa mutacijama koje povećavaju stabilnost ili afinitet da bi se promenile ili pojačale efektorne funkcije na osnovu prethodno opisanih mutacija (Idusogieet al.(2000); Idusogieet al(2001), Shieldset al(2001)). Ove promene uključuju S298, E333, K334, kao što je opisano u primeru 5; K322A za redukovanje CDC aktivnosti, D265A za redukovanje ADCC aktivnosti, K326A ili K326VV za povećanje CDC aktivnosti, i E356D/M358L da bi se testirali efekti alotipskih promena u Fc regionu Nijedna od ovih mutacija nije izazvala značajne razlike u afinitetu CD20 vezivanja.
Da bi se testirali efekti mutacija za stabilizaciju na stopu degradacije proteina, 2H7.vl6 i 2H7 v73 su formulisani pri 12-14 mg/mL u 10 mM histidinu, 6% saharozi, 0.02% polisorbatu 20 na pH 5.8 i inkubirani su na 40°C tokom 16 dana Inkubirani uzorci su ubačeni u test za promene u naelektrisanju varijanti pomoću hromatografije izmenjivanjem jona, agregacije i fragmentacije hromatografijom ekskluzije veličine, i relativno vezivanje je provereno u testu baziranom na ćelijama (WIL2-S ćelije)
Rezultati (slika 9) pokazuju da 2H7 v73 ima veću stabilnost ako se uporedi sa 2H7 vi6, ako se vidi gubitak u frakciji glavnog pika u jonsko izmenjivačkoj hromatografiji u uslovima povećane stabilnosti. Nisu zabeležene značajne razlike u agregaciji, fragmentaciji ili afinitetu vezivanja.
Primer 7
Stahardova analiza vezivanja antitela za CD20 na VVL-2-S ćelijama
Određene su konstante disocijacije ekvilibrijuma (Kd) za vezivanje 2H7 IgG varijante za VVIL2-S ćelije upotrebom radioaktivno obeleženog 2H7 IgG. IgG varijante su proizvedene u CHO ćelijama. Rituxan® (izvor za sve eksperimente je Genentech, S. San Francisco, CA) i mišje 2H7 (BD PharMingen, San Diego, CA) su korišćeni za poređenje sa humanizovanim varijantama. Mišje 2H7 antitelo je takođe dostupno iz drugih izvora,e. g.,Bioscience, i Calbiochem (oba u San Diegu, CA), Accurate Chemical&Scientific Corp., (Westbury, NY), Ancell (Bayport, MN) i Vinci-Biochem (Vinci, Italy). Sve dilucije su urađene u puferu za vezivanje u testu (DMEM medijum sadrži 1%0 albumin seruma govečeta, 25 mM HEPES pH 7.2 i 0.01% natrijum azid) Alikvoti (0 025 mL)<1>25I-2H7.vl6 (jodiran sa laktoperoksidazom), pri koncentraciji od 0 8 nM su stavljeni u bunarčiće ploče za mikrotest sa 96 bunarčića sa V dnom, i serijska razblaženja (0.05 mL) hladnog antitela su dodata i pomešana. Zatim su dodate VVIL2-S ćelije (60, 000 ćelija u 0.025 mL). Ploča je zatvorena i inkubirana na sobnoj temperaturi tokom 24 sata, centrifugirana tokom 15 minuta na 3,500 RPM. Supernatant je zatim izvučen i ćelijski talog je ispran i centrifugiran. Supernatant je ponovo izvučen, i taloži su rastvoreni u IN NaOH i prebačeni u tube za gama brojanje. Podaci su iskorišćeni za Stahardovu analizu (Munson i Rodbard,Anal. Biochem.107.220-239 (1980)) pomoću programa Ligand (McPhcrson,C. omput. Programs Biomed17:107-114 (1983)). Rezultati prikazani utabeli 9, ukazuju na to da humanizovane 2H7 varijante imaju sličan afinitet vezivanja za CD20, kada se uporede sa mišijm 21-17, i sličan afinitet vezivanja za Rituxan®.
Očekuje se da će H7.v31 imati veoma sličnu Kdkao v.16 na bazi vezivanja prikazanog u tabeli 7 u tekstu iznad.
Primer 8
Test za citotoksičnost zavisnu od komplementa (CDC)
Urađeni su testovi sa 2H7 varijantama na njihovu sposobnost da posreduju u lizi koja zavisi od komplementa V/IL2-S ćelija, limfoblastoidne B-ćelijske linije koja eksprimira CD20, kao stoje opisano (Indusogieet al,,/. Immunol.164:4178-4184 (2000), Indusogieet al., ./. Immunol.166:2571-2572 (2001)). Antitela su serijski razblažena 1:3 od stoka rastvora.0 1 mg/mL. Alikvot od 0 05 ml svake dilucije nanesen je na ploču za kulturru tkiva sa 96 bunarčića koja sadrži 0.05 ml rastvora normalnog humanog komplementa (Quidel, San Diego, CA). U ovu mešavinu dodato je 50,000 VVIL2-S ćelija u zapremini od 0.05 ml. Nakon inkubacije tokom 2 sata na 37°C, dodato je 0.05 ml rastvora Alamar plavo (Accumed International, VVestlake, OH) i inkubacija je nastavljena dodatnih 18 sati na 37°C Poklopci su zatim uklonjeni sa ploča, i one su mućkane tokom 15 minuta na sobnoj temperaturi u orbitalnoj mućkalici. Pročitane su relativne fluorescentne jedinice (RFU) pomoću ekscitacionog filtera na 530 nm i emisionog filtera na 590 nm. EC50 je izračunat podešavanjem RFU kao funkcije koncentracije svakog antitela pomoću KaleidaGraph softvera.
Rezultati (tabela 10) pokazuju iznenađujuće poboljšanje u CDC kod humanizovanih 2H7 antitela, sa relativnim potencijalom sličnim kao RituxanO<) za v.73, trostruko većim potencijalom od Rituxan® za v.75, i trostruko slabijim potencijalom nego Rituxan® za v 16
Tabela10. CDC aktivnost 2H7 antitela u porcdciiju sa Rituxanom. Brojevi >1 ukazuju na manje potentnu CDC aktivnost nego Rituxan®, a brojevi <1 ukazuju na potentniju aktivnost nego Rituxan®. Antitela su proizvedena u stabilnoj CHO liniji, osim onih koji su obeleženi sa (<*>) što znači da su proizvedeni tranzijentno.
Primer 9
Testovi za ćelijsku citotoksičnost zavisnu od antitela (ADCC)
Urađeni su testovi sa 2H7 IgG varijantama na njihovu sposobnost da posreduju u iizi sa ćelijama prirodnim ubicama (NK, Natural Killer cells) WIL2-S ćelija, limfoblastoidne B-ćelijske linije koja eksprimira CD20 kao što je opisano (Shieldset al., J. Bio. Chem.276:6591-6604 (2001) pomoću "read out"-a laktat dehidrogenaze (LDH). NK ćelije su pripremljene iz 100 ml krvi sa heparinom, razblažene u 100 ml PBS (fosfatni puferisani fiziološki rastvor), dobijene od normalnih humanih donora za koje je urađena izotipizacija za FcvRIIIn poznat kao CD 16 (Koeneet al, Blood,90:1109-1114 (1997)). U ovom eksperimentu, NK ćelije su od humanih donora heterozigotnih za CD 16 (Fl 58/V158). Razblažena krv je nanesena u sloju preko 15 ml medijuma za razdvajanje limfocita (ICN Biochemical, Aurora, Ohio) i centrifugirano je tokom 20 minuta na 2000RPM. Bela krvna zrnca u sloju između slojeva su odbačena u 4 čiste tube od 50 ml, koje su napunjene sa RPMI medijumom koji sadrži 15% fetalni serum teleta. Tube su centrifugirane 5 minuta na 1400 RPM i bačen je supernatant. Taloži su resuspendovani u MACS puferu (0.5% BSA, 2 mM EDTA), i NK ćelije su prečišćene pomoću kuglica (NK cell Isolation Kit, 130-046-502) na osnovu uputstva proizvođača (Miltenvi Biotech). NK ćelije su diluirane u MACS puferu 2X10<6>ćelije /mL.
Serijske dilucije antitela (0.05 mL) u medijumu za test (F12/DMEM 50:50 bez glicina, 1 mM HEPES pufer pH 7.2, Penicilin/Streptomicin (100 jedinica/mL; Gibco), glutamin, i 1% inaktiviran toplotom fetalni serum govečeta) su dodati na ploču za kulturu tkiva sa 96 bunarčića sa okruglim dnom. WIL2-S ćelije su razblažene u puferu za test, do koncentracije od 4X10<5>/ml. WIL2-S ćelije (0.05 ml po bunarčiću) su pomešane sa razblaženim antitelom u ploči sa 96 bunarčića i inkubirane tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi da bi se omogućilo vezivanje antitela za CD20 (opsonizacija).
ADCC reakcija je inicirana dodavanjem 0.1 ml NK ćelija u svaki bunarčić. U kontrolnim bunarčićima dodat je Triton-X. Ploča je zatim inkubirana tokom 4 sata na 37°C. Nivoi oslobođenog LDH su izmereni pomoću kita za detekciju citotoksičnosti (LDH)
(Kit# 1644793, Roche Diagnostics, Indianapolis, Indiana.) na osnovu uputstava
proizvođača. 0.1 ml LDH razvijača dodato je u svaki bunarčić, a zatim je promešan 10 s. Ploča je pokrivena aluminijumskom folijom i inkubirana u mraku na sobnoj temperaturi 15 minuta. Optička gustina je čitana na 490 nm i upotebljena za izračunavanje % lize deljenjem sa ukupnim LDH koji je izmeren u kontrolnim bunarčićima. Liza je predstavljena kao funkcija koncentracije antitela, i "fit" 4-parametarske krive (Kaleida Graph) i upotrebljena za određivanje EC50koncentracija.
Rezultati pokazuju da su humanizovana 2H7 antitela aktivna u ADCC, sa relativnom potencijom 20 puta većom nego Rituxan® za v.31, i v.75, 5-puta potentniji nego Rituxan® za v. 16, i skoro 4 puta viši nego Rituxan® za v.73.
Dodatni ADCC testovi su izvedeni da se uporede kombinacije-varijante 2H7 sa Rituxan®-om. Rezultati ovih testova ukazuju na to da 2H7. VI14 i 2H7. VI15 imaju > 10 puta poboljšanu ADCC potentnost kada se uporede sa Rituxan® (tabela 12).
Primer IO
In vivoefekti 2H7 varijanti u pilot studiji u cinomolgus majmunima
2H7 varijante, proizvedene tranzijentnim transfekcijama CHO ćelija, su testirane u normalnim mužjacima cinomolgus( Macaca fascularis)majmunima u cilju određivanja njihovein vivoaktivnosti. Druga anti-CD20 antitela, kao C2B8 (Rituxan®) su pokazala sposobnost uklanjanja B-ćelija u normalnim primatima (Reffet al., Blood83:435-445
(1994)).
U jednoj studiji su uporedjene humanizovane 2H7 varijante U paralelnim studijama, Rituxan® je takođee testiran na cinomolgus majmunima. Za majmune je upotrebljena jedna od pet grupa doza: (1) transportno sredstvo (vehicle), (2) 0.05 mg/kg hu2H7.vl6, (3) 10 mg/kg hu2H7.v!6, (4) 0 05 mg/kg hu2H7.v31, i 10 mg/kg hu2H7.v31. Antitela su davana intravenozno u koncentraciji 0, 0.2, ili 20 mg/ml, sa ukupno 2 doze, jedna prvog dana studije a druga osmog dana. Doziranje prvog dana je označeno dan 1 a prethodni dan je označen kao -1; prvi dan oporavka (za dve životinje u svakoj grupi) je označen kao dan 11. Uzorci krvi su sakupljeni dana -19,-12, 1 (pre doziranja) i 6h, 24h i 72h nakon prve doze. Dodatni uzorci su uzeti dana 8 (pre doziranja), dana 10 (pre žrtvovanja 2 životinje/grupi), i dana 36 i 67 (za životinje u oporavku).
Koncentracije periferih B-ćelija su određene metodom FACS u kojoj se broji CD3-/CD40+ ćelije. Procenat CD3-CD40+ B ćelija od ukupnih limfocita u uzorcima majmuna je dobijen sledećom ulaznom strategijom. Populacija limfocita je obeležena na skategramu za rasejavanje napred i bočno rasejavanje (forvvard scatter/ side scatter scattergram) da bi se definisao Region 1 (Rl). Koristeći događaje iz Rl, prikazani su dijagrami tačaka intenziteta fluoresciranja za CD40 i CD3 markere. Fluorescentno obeležene izotipne kontrole korišćene su za određivanje odgovarajućih tačaka prekida (respeetive cutoff points) za CD40 i CD3 pozitivnost.
Rezultati ukazuju na to da su oba, i 2H7.vl6 i 2H7v 31, sposobni da proizvode kompletno uklanjanje B-ćelija pri dozi 10 mg/kg i parcijalno uklanjanje periferalnih B-ćelija pri dozi 0.05 mg/kg (slika 11). Vremenski kurs i obim uklanjanja B-ćelija izmeren tokom prvih 72 sata doziranja bili su slični za oba antitela Dalja analiza životinja u oporavku ukazuje na to da životinje tretirane sa 2H7.v3 1 pokazuju produženo uklanjanje B-ćelija, u poredjenju sa onima koje su tretirane sa 2H7vl6 Naime, kod životinja u oporavku tretiranih sa 10 mg/kg 2H7.vlć, B-ćelije su pokazivale značajan oporavak B-ćelija u periodu između dana 10 i dana 36. Međutim, kod životinja u oporavku tretiranih sa 10 mg/ml 2H7.v31, B-ćelije se nisu oporavile sve do dana 36 i dana 37 (si. I 1). Ovo ukazuje da sa 2H7.v3 1 kompletno uklanjanje, u poređenju sa 2H7,vl6, traje oko mesec dana duže.
U studiji sa majmunima nije zabeležena toksičnost pri niskim ili visokim dozama i kompletna patologija je normalna. U drugim studijama, vi6 je dobro tolerisan sve do najviše doze koja je evaluirana (100 mg/kgX2= 1200mg/m2 X2) , zatim je sledilo i.v. davanje 2 doze koje se daju u razmaku od 2 nedelje kod ovih majmuna.
Podaci dobijeni od Cvnomolgus majmuna sa 2H7.vl6 versus Rituxan® ukazuju na to da petoslruka redukcija u CDC aktivnosti ne utiče loše na potenciju, Antitelo sa potentnom
ADCC aktivnošću ali redukovanom CDC aktivnošću možda ima bolji sigurnosni profil u smislu prve reakcije na infuziju u odnosu na one sa većom CDC aktivnošću
PrimerU
2H7 varijante antitela dcficijentnc u fukozi sa pojačanom efektornom funkcijom
Normalne CHO i HEK293 ćelije dodaju fukozu IgG oligosaharidu u visokom procentu (97-98%) IgG iz seruma su takođe visoko ftikozilovane.
Da bi se dobila antitela za ovu studiju korišćene su DPI 2, dihidrofolat reduktaza minus (DHFR") CHO ćelijska linija koja je fukozilaciono kompetentna, i Leci3, ćelija kojoj nedostaje proteinska fukozilacija. CHO ćelijska linija Pro.LecD 6a (Lecl3) dobijena je od profesora Pamele Stanlev sa Medicinskog koledža Albert Einstein Univerziteta Yeshiva. Roditeljeske linije su Pro- (auksotrofi za prolin) i Gat- (auksotrofi za glicin, adenzoin, timidin ). CHO-DP12 ćelijska linija je derivat CHO-K1 ćelijske linije (ATCC#CCL-61), kome nedostaje dihidrofolat reduktaza, i ima smanjenu potrebu za insulinom Ćelijske linije su transfektovane sa cDNK korišćenjem Superfect metoda (Qiagen, Valencia, CA). Selekcija Lecl3 ćelija koja eksprimira transfektovana antitela je izvedena pomoću puromicin dihidrohlorida (Calbiochem, San Diego, CA) pri 10 u.g/ml u medijumu za rast koji sadrži: MEM Alpha Medium sa L-glutamin, ribonukleozidim i deoksiribonukleozide (GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD), sa dodatkom 10% inaktivisanog FBS (GIBCO), 10 mM HEPES, i IX penicilin/streptomicin (GIBCO). CHO ćelije su slično odabrane u medijumu za rast koji sadrži Ham-ov F12 bez GHT: DMEM sa niskim sadržajem glukoze, bez glicina, sa NaHC03 obogaćen sa 5% FBS(GIBCO), 10 mM HEPES, 2 mM L-glutamin, IX GHT (glicin, hipoksantin, timidin) i IX penicilin/streptomicin.
Kolonije koje su formirane u toku dve do tri nedelje sakupljene su za ekspanziju i ekspresiju proteina.
Sakupljene ćelije su inicijalno zasejane pri 3xl0<6>ćelija/10 cm na pločama za male količine ekspresije proteina Ćelije su prebačene u medijum bez seruma kada su dostigle rast od 90-95%) konfluentnosti i nakon 3-5 dana supernatanti ćelija su sakupljeni i testirani u Fc IgG i intaktnom IgG-ELISA da bi se procenili nivoi ekspresije Leci3 i CHO ćelije su zasejane na otprilike 8xl06 ćelija/15cm ploče jedan dan pre prebacivanja na PS24 medijum za proizvodnju, obogaćen sa lOmg/ml rekombinantnog humanog insulina i 1 mg/ml elemenata u tragovima.
Leci3 ćelije i DPI2 ćelije su ostale u medijumu za proizvodnju bez seruma tokom 3-5 dana. Supernatanti su sakupljeni i prečišćeni centrifugiranjem u koničnim tubama od 150 ml da bi se uklonile ćelije i drugi ostaci. Dodati su inhibitor proteaze PMSF i aprotinin (Sigma, St. Louis, MO) i supernatanti su koncentrisani petostruko na mešanim ćelijama pomoću MAVCO30 filtera (Amicon, Bcverlv, MA) pre momentalnog prečišćavanja pomoću protein G hromatografije (Amersham Pharmacia Biotcch, Piscataway, NJ). Svi proteini su puferski izmenjeni u fiziološki rastvor puferisan fosfatom (PBS) pomoću Centriprep-30 koncentratora (Amicon) i analizirani su elektroforezom na SDS pohakrilamidnom gelu. Koncentracije proteina su određene pomoću A280 i potvrđene pomoću amino kiselinske kompozicione analize.
CHO ćelije su transfektovane sa vektorima koji eksprimiraju humanizovana 2H7.vl6, 2H7v31 i selektovane su kao stoje opisano 2H7vl6 antitelo zadržava Fc region iz divljeg soja dok v 31 (videti primer 5, tabela 7 u tekstu iznad) ima Fc region, naznačen time, da su napravljene 3 amino kiselinske zamene (S298A, E333A, K334A) što rezultira većim afinitetom za FcgRIII receptor (Shieldset al.J. Biol Chem 276(9) 6591-6640
(2001)). Nakon transfekcije i selekcije izolovane su individualne kolonije ćelija i procenjene za nivoe proteinske ekspresije i najviši proizvođači su podvrgnuti selekciji sa metotreksatom da bi se odabrale ćelije koje imaju amplifikovan broj kopija plazida i koje zato proizvode više nivoe antitela. Ćelije su gajene, prebačene u medijum bez seruma tokom perioda od 7 dana, a zatim je sakupljen medijum, nanešen na protein A kolonu i antitelo je eluirano pomoću standardnih tehnika. Finalna koncentracija antitela određena je pomoću ELISA-testa koji meri intaktna antitela Svi proteini su puferski zamenjeni u fiziološki rastvor puferisan sa fosfatom (PBS) pomoću Centriprep-30 koncentratom (Amicon) i analizirani su elektroforezom na SDS poliakrilamidnom gelu.
Laserska desorpcija podpomognuta . matriksom/ jonizaciono vreme preleta (" time- of-
flight") ( MALDl- TOF) masena spektralna analiza oligosaharida povezanih sa
asparaginom.N.povezani oligosaharidi su oslobođeni iz rekombinantnih glikoproteina pomoću procedure Papacet al, Glycobiology8, 445-545 (1989). Ukratko, bunarčići u PDW obloženoj mikrotitar ploči (Millipore, Bedford, MA) pripremljeni su sa 100 u.1 metanola koji je prošao kroz PDVF membrane pomoću vakuuma u Millipore Multiscreen vakuumskom višekanalnom sistemu (manifold). Pripremljene PVDF membrane su isprane sa 3X250 ul vode. Između koraka ispiranja bunarčići su osušeni u potpunosti primenom blagog vakuuma u "mainfold"-u. Membrane su isprane sa redukcionim i karboksimetilacionim puferom (RCM) koji se sastoji od 6M guanidin hidrohlorida, 360 mM Tns, 2 mM EDTA, pH8 6 Uzorci glikoproteina (50 ug) su nanešeni na individualne bunarčiće, ponovo isušeni kroz PVDF membrane pomoću blagog vakuuma i bunarčići su isprani sa 2X50 u.1 rastvora 0.1 M ditiotreitola (DTT) u svakom bunarčiću i inkubirani su u mikrotitar ploči na 37C tokom 1 sata.. DTT je uklonjen vakuumom i bunarčići su isprani 4X sa vodom. Cisteinski ostaci su karboksimetilovani dodavanjem 50 uL 0 IM rasvora jodosirćetne kiseline (IAA) koji je sveže pripremljen u 1 M NaOH i razblažen do 0.1 M sa RCM puferom. Karboksimetilacija je izvršena inkubacijom 30 minuta u mraku na sobnoj temperaturi. Vakuum je primenjen na ploču da se ukloni IAA rastvor i bunarčići su isprani sa 4X250 ul vode. PVDF membrane su blokirane dodavanjem 100 ul 1% PVP360 (polivinilpirolidin 360,000 MW) (Sigma) rastvora i inkubirane su 1 sat na sobnoj temperaturi PVP-360 rastvor je uklonjen blagim vakuumom i bunarčići su isprani sa 4X250 ul vode. PNGazaF (Nevv England Biolabs, Beverlv, MA) digeriran rastvor, 25 ul 25U (jedinica)/ml rastvora u 10 mM Tris acetatu, pH4.8, je dodato u svaki bunarčić i digestija je puštena još 3h na 37°C. Nakon digestije, uzorci su prebačeni u Eppendorf tube 500 u' i u svaki uzorak je dodato 2.5f.il 1 5M rastvora sirćetne kiseline. Acidifikovani uzorci su inkubirani 3 sata na ambijcntalnoj temperaturi da bi se oligosaharidi preveli iz glukozilamina u hidroksilnu formu. Pre MALDI-TOF masene spektralnc analize, oslobođeni oligosaharidi su oslobođeni soli pomoću smole za katjonsku izmcnu sa 0 7 ml kuglicama (AG50W-X8 kuglice u vodoničnoj formi) (Bio-Rad, Hercules, CA), suspendovani su i upakovani u kompaktne rcakcione tube (US Biochemical, Cleveland,
OH)
Za MALD1-T0F masenu spektralnu analizu uzoraka u pozitinom obliku (mode), oligosaharidi oslobođeni soli (0 5ul alikvoti) su naneseni na nerđajuću elektrodu sa matriksom od 0.5 v 2,5 dihidrobenzoičnom kiselinom (sDHB) koja je pripremlejna rastvaranjem 2 mg 2,5 dihidrobenzoične kiseline sa 0.1 mg 5-metoksislicilne kiseline u 1 ml etanol/10 mM natrijum hlorid 1:1 (v/v). Uzorak/matriks mešavina je osušena sa vakuumom. Za analizu u negativnom obliku N-povczani oligoasharidi oslobođeni soli (0.5ul alikvoti) su nanešeni na nerdjajuću elektrodu zajedno sa 0.5ul 2', 4', 6'-trihidroksiacetofenon matriksom (THAP) pripremljenim u 1:3 (v/v) acetonitril/13 3 mM amonijum citratnom puferu. Uzorak/matriks mešavina je osušena sa vakuumom i zatim je omogućeno da upije atmosfersku vlagu pre analize. Oslobođeni oligosaharidi su analizirani sa MALDI-TOF na PerSeptive BioSvstems Voyagre-DE masenom spektrometru. Maseni spektometar je radio na 20 kV ili u pozitivnom ili negativnom modu sa linearnom konfiguracijom i upotrebljena je odložena ekstrakcija. Podaci su dobijeni pomoću laserske energije od 1300 i moda sumiranja podataka (240 skenova) da bi se poboljšali signali Instrument je kalibrisan sa mešavinom standardnih oligosaharida i podaci su sređeni pomoću Savatsky-Golay algoritma sa 19 tačaka pre nego što su određene mase Integracija podataka masenog spektra je dobijena pomoću Caesar 7 0 softver paketa za analizu podataka (SciBridge Softvvare).
Testovi za citotoksičnost zavisnu od antitela za ćelije prirodne ubice ( NK)
ADCC testovi su izvedeni kao što je opisano u primeru 9. Odnos NK prema ciljnim ćelijama (WIL-2) bio je 4 prema 1, testovi su pušteni 4 sata i izmeren je nivo citotoksičnosti pre primene testa za laktoznu dehidrogenazu. 30 minute pre dodavanja NK ćelija ciljne ćelije su opsonizovane sa koncentracijama antitela za koje su indokovane. Korišćeno Rituxan® antitelo je od Genentech (S. Francisko, CA). Slika 12 prikazuje rezultate reprezentativnog ADCC testa.
Rezultati pokazuju da nepotpuno fukozilovana (underfucosylated) antitela posreduju NK ćelijsko ubijanje ciljnih ćelija efikasnije nego antitela sa kompletnim komplementom fukoze. Nepotpuno fukozilovano antitelo, 2H7.v31 je najefikasnije u posredovanju ubijanja ciljnih ćelija. Antitelo je efikasno pri nižim koncentracijama i sposobno je da posreduje ubijanje većeg procenta ciljnih ćelija pri višim koncentracijama nego druga antitela. Aktivnost antitela je sledeća: Lecl3-izveden 2H7 v3 1> Leci3 izveden 2H7vl6>Dpl2 izveden 2H7v31>Dpl2 izveden 2H7vl6>ili = Rituxan Porteinske i ugljovodonične promene su dodatak. Poređenje ugljovodonika pronađenih u nativnom IgG iz Lec 13-proizvedenih i CHO-proizvedenih IgG ne pokazuje željene razlike u opsegu glikozilacije i zato rezultati se mogu pripisati samo prisustvu/odsustvu fukoze.
Primer 12
2IT7 varijantne antitela deficijentne n fukozi sa pojačanom ADCCin vivo
Primer opisuje ADCC aktivnost///vivokod 2H7 varijanti deficijentnih u fukozi uključujući v 16 i v.3 1 proizvedene u Lec 13 u poredenju sa normalnim fukozilovanim odgovarajućim partneroma (counterparts) proizvedenim u DPI 2, u miševima koji eksprimiraju humani CD 16 (Fcvlll) i humani CD20
Dobijanje huCD20Tg ■■ huCDKH<g>'- m( T)/ 6- - miševa
Humani CD20 transgeni miševi su dobijem iz humanih CD20 BAC DNA (Invitrogen, Carlsbad, CA). Miševi su pregledani na osnovu FACS analize ekspresije humanog CD20 HuCD20 Tg+ miševi su zatim ukršteni sa huCD16 Tg+mCD16-/- miševima da bi se dobili huCD20Tg^huCD16Tg+mCD16-/- miševi.
In vivo tretiranje
Deset do 100 ug svake 2H7 varijante ili Rituxan® je dat huCD20Tg+huCD16Tg+mCD16-/- miševima putem intraperitonealne injekcije. Ista količina antitela poklopljenih izotopom biće primenjena na sličan način na negativnu kontrolnu grupu životinja.
Priprema limfocita miša
Misiji limfociti iz peroferne krvi, slezine, limfnih čvorova i koštane srži pripremljeni su na osnovu standardnog protokola opisanog u" Current Protocols in Immunology",uređenog od strane John Coligan, Ada Krusbeek, David Margulies, Ethan Shevach i VVarren Strober, 1994".
FA CS analiza
Pola miliona ćelija je oprano i resuspendovano u lOOul FACS pufera, koji je fiziološki rastvor puferisan fosfatom sa 1% BSA, koji sadrži 5 ul antitela za bojenje ili kontrolnog antitela. Sva antitela za bojenje, uključujući kontrolne izotipove, dobijena su od PharMingen, San Diego, CA. Humana CD2o ekspresija je procenjena bojenjem sa Rituxan® zajedno sa FITC-konjugovanim anti-humanim sekundarnim antitelom. FACS analiza je izvedena upotrebom FACScan i Cell Quest (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose, CA). Svi limfociti su definisani rasejavanjem svetla napred I bočnim, dok su svi B limfociti definisani ekspresijom B220 na površini ćelije.
Za uklanjanje B ćelija i oporavak urađeni su testovi tako što je analiziran broj perifernih B ćelija i izvršena analiza hCD20- B ćelija pomoću FACS u slezini, limfnim čvorovima i koštanoj srži na dnevnoj bazi tokom prve nedelje nakon injeciranja i posle toga na nedeljnoj bazi Nivoi seruma injeciranih 2H7 varijanti antitela su posmatrani.
Rezultati ovogain vivotesta potvrđujuin vitronalaze o povećanoj ADCC aktivnosti i većem uklanjanju B ćelija 2H7 varijanti deficijentnih u fukozi u odnosu na glikozilovanc odgovarajuće parove divljeg soja (u odnosu na fukozilaciju)
Primer 13
Apoptotička aktivnost
Pokazano je da anti-CD20 antitela uključujući Rituxan® indukuju apoptozu///vitrokada se unakrsno povezu sa sekundarnim antitelom ih hemijskim putem (Shanet al., Blood9:1644-1652 (1998),Byrd el al Blood 99 1038-43(2002),Pederson et al,Blood 99:1314-19 (2002)) Kada se hemijski unakrsno povežu, misiji 2H7 dimeri indukuju apoptozu Daudi ćelija (Ghetieet al, Proc. Nali. Acad. Sci USA94:7509-14 (1997)). Unakrsno povezivanje sa sekundarnim antitelom takođe indukuje apoptozu sa mišijim 2H7 antitelom (Shanet al,1988). Veruje se da su ove aktivnosti fiziološki relevantne, jer različiti mehanizmi mogu da dovedu do unakrsnog povezivanja anti-CD20 antitela vezanih za površinu Cd20 ćelijain vivo.
RhuMab 2H7 vl6 (humanizovano 2H7.vl6, RhuMab označava rekombinantno humano monoklonalno antitelo) i Rituxan® su upoređeni u testovima za apoptozuin vitropomoću sekundarnog unakrsno povezanog antitela. Ramos ćelije (CRL-1596, ATCC, Manassas, VA), humane B ćelijske linije koje eksprimiraju CD20, su korišćene za merenje sposobnosti anti-CD20 monoklonalnih antitela rhuMab 2H7.vl6 i Rituximab-a naspram negativnog kontrolnog antitela, Trastzumab (Herceptim®, Genentech, South San Francisco, CA), da bi se indukovala apoptoza koja se meri preko Annexin V bojenja i ekskluzije propodijum jodid boje (Vybrant ® Apoptosis Assay Kit, Molecular Probes, Seattle, WA). Ramos ćelije su kultivisane u RPMI-1640 medijumu (Gibco, Rockville, MD) koji sadrži 10% fetalni serum govečeta (Biosource International, Camarillo, CA) i 2mM L-glutamin (Gibco). Pre testa ćelije su oprane dva puta u svežem medijumu i zatim su podešene na koncentraciju ćelija od 2X10<fi>po ml. Ćelije (150 ul) su dodate u bunarčiće ploče sa 96 bunarčića za test (Becton Dickinson, Palo Alto, CA) koji sadrži 150 ul unapred određene količine kontrolnog igGl, rhuMab 2H7.vl6, ili Rituximab, zajedno sa F(ab)' kozijim anti-humanim Fc (Pierce Biotechnologv, Rockford, IL). Finalne IgG koncentracije bile su 100, 10, 1.0, 0 1, i 0.001 nM, i koncentracija F(ab)'2 kozijih anti-humanih Fc antitela je podešena na duplo veću u odnosu na odgovarajuće koncentracije uzorka antitela Svako razblaženje je namešteno u triplikatu. Nakon 24 sata inkubacije na 37°C, ćelije su oprane dva puta sa PBS i zatim obojene sa Annexin V i propodijum jodidom na osnovu preporuke proizviođača. Načini bojenja Ramos ćelija su analizirani "flow" citometrijom pomoću FACscan Flovv Cytometer (Becton Dickinson, San Jose, CA), a podaci su uzimani tokom perioda od 10 sekundi Podaci su redukovani pomoću Cellquest Pro softvera (Becton dickinson): Ramos ćelije koje su bile pozitivne za (1) Annexin V bojenje, (2) Anexin V i propidijum jodid duplo bojenje, i (3) broj neobojenih živih ćelija su izbrojani i plotovani korišćenjem KaleidaGraph-softvera (Synergy Softvvare, Reading, PA).
Obe rhuMAb 2H7 vl6 i Rituximab indukovale su apoptozu Ramos ćelija, kada su unakrsno povezane sa anti-humanim Fc i u poređenju sa irelevantnim IgGl kontrolnim antitelom (Slike 13-15). Apoptotična aktivnost (rhuMAb 2H7.vl6) je bila nešto niža nego kod Rituximab. Pri 10 nM koncentarcijama unakrsno povezanih rhuMAb 2FI7,vl6, Rituximab i kontrolnog igG antitela, frakcije Anncxin V obojenih ćelija su bile 18.5, 16.5, 2,5%o, frakcije duplo obojenih ćelija bile su 29, 38 i 16%o, a brojevi živih ćelija izbrojanih na 10 s bile su 5200, 3 100, i 8600.
Oviin vitropodaci demonstriraju da je apoptoza potencijalni mehanizam za///vivouklanjanje B ćelija.In vivounakrsno povezivanje rhuMAb 2H7 ili Rituximab-a sa CD20 na ćelijskoj poivršini može da se odigra preko Fc yR na površini imunih efektornih ćelija
Primer 14
In vivosupresija rasta tumora
Sposobnost rhuMAb 2H7.vl6 da inhibira rast Raji humanih B-ćelija, ćelijske linije limfoma (ATCC CCL 86) procenjena je u Balb/c golim (atimičnim) miševima. Raji ćelije eksprimiraju CD20 i otkrivenoje da one rastu u golim miševima, proizvodeći metastatičnu bolest; rast tumora je inhibiran sa Rituxan® (Clvneset al'., Nature Medicine6, 443-446
(2000). Pedesetšest 8-10 nedelja starih Balb/c golih miševa podeljeni su u 7 grupa (A-G), svaka grupa se sastojala od 8 miševa. Nultog dana svaki miš je primio subkutanozno injekciju 5X106 Raji B-limfoma ćelija u predeo između rebra i kuka Počevši od nultog dana svaki miš je primio ih 100 uL rastvora koji je bio negativna kontrola (PBS, fiziološki rastvor puferisan fosfatom), Rituxan® ili 2H7.vl6 Doza je zavisila od težine i davanje leka je bilo intravenozno via repne vene Grupa A miševa je dobila PBS. Grupe B/D su primile Rituxan® 5.0 mg/kg, 0,5 mg/kg, i 0.05 mg/kg. Grupe E-G miševa primile su 2H7 vl6 5.0 mg/kg, 0.5 mg/kg, i 0.05 mg/kg. Injekcije su ponovljene svake nedelje tokom 6 nedelja. Tokom tretmana u nedeljnim intervalima svaki miš je pregledan na prisustvo tumora koji se mogu dodirom osetiti na mestu injeciranja i merena je i beležena zapremina tumora, ako je prisutan. Finalni pregled je napravljen 8. nedelje (nakon dvonedeljnog intervala bez tretiranja).
Rezultati ove studije pokazali su da su oba, rhuMAb 2H7 vi6 i Rituxan®, efikasni u inhibiranju rasta subkutanoznog tumora Raji ćelija u golim miševima (Slike 16-18) Rast tumora je primećen u OBS kontrolnoj grupi počev od 4. nedelje. Međutim, nije zabeležen tumor u grupama tertiranim sa Rituxan® ili 2H7.vl6 pri 5.0 mg/kg ili 0 5 mg/kg, tokom trajanja studije od 8 nedelja. U grupama tretiranim sa niskim dozama 0.05 mg/kg tumori su primećeni u jednoj životinji u 2H7 grupi i u jednoj životinji u Rituxan® grupi (si. 1 8).
Primer 15
Kloniranje CD20 Cvnomolgus majmuna i vezivanje antitela
DNK sekvenca CD20 cinomolgus majmuna( Macaca fascularis)određena je nakon izolacije cDNK koja kodira CD20 iz cDNK biblioteke iz slezine cinomolgusa SUPERSCRIPTIM plazmidni sistem za sintezu cDNA i plazmidno kloniranje
(SUPF.RSCRTPT™ Plasmid System for cDNA Synthesis and Plasmid Cloning)
(Cat#18248-013, Invitrogen, Carlsbad, CA) korišćen je sa malim modifikacijama da se napravi biblioteka. cDNK biblioteka je ligirana u pRK5E vektor pomoću restrikcionih mesta Xho I i Not I. iRNK je izolovana iz tkiva slezine (California Regional Research Primate Center, Daviš, CA). Prajmeri za umnožavanje cDNK koja kodira CD20 su dizajnirani na osnovu nekodirajućc sekvence humanog CD20. Prajmer za N terminalni region 5'-AGTTTTGAGAGCAAAATG-3'(SEQ ID NO.37) i prajmer za C-terminalni region 5'-AAGCTATGAACACTAATG-3' (SEO ID NO.38) su korišccm za kloniranje pomoću PCR-a lančane reakcije polimeraze cDNK koja kodira CD20 cinomolgus majmuna. PCR reakcija je izvedena upotrebom Platinum Taq DNA Polymerase High Fidelity na osnovu preporuke proizvođača (Gibco, Rockville, MD) PCR proizvod je subkloniran u PCR ®2.1 -TOPO® Vector (Invitrogen) i transformisan u XL-q blucE. coli
(Stratagene. La Jolla, CA) Plazmidna DNK koja sadrži ligirane PCR proizvode je izolovana iz individualnih klonova i sekvencirana je
Amino kiselinska sekvenca za CD20 cinomolgus majmuna je prikazana na slici 19 Slika 20 pokazuje poređenje cinomolgus i humanog CD20. CD20 cinomolgus majmuna je 97.3% slična humanom CD20 sa 8 razlika. Ekstracelularni domeni sadrže jednu promenu na V157A, dok se ostalih sedam ostataka mogu naći u citoplazmatskim ili transmembranskim regionima.
Za antitela uzmerena protiv humanog CD20 urađen je test sposobnosti da se vežu i premoste FITC-konjugovano misije 2H7 vezivanje za ćelije cinomolgus majmuna koje eksprimiraju CD20. Dvadeset mililitara krvi je uzeto iz 2 cinomolgus majmuna (California Regional Research Primete Center, Daviš, CA), stavljeno u natrijum heparin i poslato direktno u Genentech Inc. Istoga dana uzorci krvi su akumulirani i razblaženi 1:1 dodavanjem 40 ml fiziološkog rastvora puferisanog sa fosfatom (PBS) 20 ml razblažene krvi je naneseno na 4X20 ml Ficoll-Paque ™Plus (Amersham Biosciences, Uppsala, Svveden) u konične tube od 50 ml (Cat#352098, Falcon, Franklin Lakes, NJ) i centrifugirano na 1300 obrtaja u minuti tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi u Sorval 7 centrifugi. (Dupont, Newtown, CT) PBMC sloj je izolovan i opran sa PBS Crvena krvna zrnca su lizirana u 0.2% rastviru NaCl, oporavljena do izotoničnosti sa istom zapreminom 1,6% NaCl i centrifugirano tokom 10 min na 1000 obrtaja u minuti PBMC talog je rastvoren u RPMI 1640 (Gibco, Rockville, MD) koji sadrži 5% fetalni serum govečeta i stavljen u šolji za kulturu tkiva od 20 cm tokom 1 sata na 37°C. Ne adherentne B i T ćelijske populacije su uklonjene aspiracijom, centrifugirane i izbrojane. Ukupno je dobijeno 2,4X10<7>ćelija. Resuspendovani PBMC je podeljen u dvadeset 12X75 mm tube za gajenje (Cat#352053, Falcon), svaka tuba je sadržala 1X10<6>ćelija u zapremini od 25 ml Tube su podeljene u četiri seta po pet tuba. Svakom setu je dodat ili medijum (RPMI1640, 5%FBS), istitrirano kontrolno humano IgGl antitelo, Rituxan®, 2H7 vl6 ili 2H7.v31. Finalna koncentracija svakog antitela je bila 30, 10, 3.3 i 11 nM, Dodatno, svaka tuba je takođe primila 20 ul Fluorescein Isothiocvanate (FITC)-konugovanog anti-humanog CD20 (Cat#555622, BD Biosciences, San Diego, CA) Ćelije su blago pomešane, inkubirane 1 sat na ledu i zatim oprane dva puta sa PBS Obojene ćelijske površine su analizirane na Epic XL-MCL (Coulter, Miami, FL), izvedene geometrijske srednje vrednosti su plotovane (KaleidaGraph™, synergy Softvvare, Reding, PA) naspram koncentracije antitela.
Podaci na slici 21 pokazuju da 2H7.vl6 i 2H7.v31 kompletno izmeštaju FITC-mišije 2H7 vezivanje za ćelije cinomolgus majmuna. Dalje, Rituxan® takođe izmešta FITC-mišije 2H7 vezivanje i tako pokazuje da se oba, i 2H7 i Rituxan®, vezuju za preklapajući epitop na CD20. Dodatno, podaci pokazuju da su I.C50vrednosti 2H7.vl6 i 2H7.v3! i Rituxan-a slične i da se nalaze u opsegu 4-6 nM.
Primer 16
Faza I/II studije rhuMAb 2H7 (2H7.vI6) u umercnoin do teškom reumatoidnoiu artritisu
Sinopsis protokola
Slučajna, placebo-kontrolisana, višecentralna, šlepa (blindeed) faza I/II studije sigurnosti povećavajućih doza PRO70769 (rhuMAb 2H7) u subjektima sa umerenim do teškim reumatodidnim artriitsom koji primaju stabilne doze kontaminantnog metotreksata
Ciljevi
Primarni cilj ove studije je da se evaluira sigurnost i tolerantnost intravenoznih (IV) doza, koje se povećavaju, PRO70769 (rhuMAb 2H7) u subjektima sa umerenim do teškim reumatodidnim artriitsom (RA).
Dizajniranje studije
Ovo je slučajna, placebo-kontrolisana, višecentralna, šlepa (blindeed) faza I/II, šlepa za istraživača i subjekta, studija sigurnosti doza PRO70769 u kombinaciji sa MTX, koje se povećavaju, u subjektima sa umerenim do teškim reumatodidnim artriitsom (RA) Studija se sastoji od faze uvećavanja doze i druge faze sa uvođenjem većeg broja subjekata Sponzor će ostati neobeležen u zadatom tretmanu
Biće uključeni subjekti sa umerenim do teškim RA koji nisu dobro odgovorili na pet antireumatskih lekova koji modifikuju bolest ili na biološke preparate, koji trenutno imaju nezadovoljavajuće kliničke odgovore na tretman sa MTX.
Subjekti će primiti MTX u opsegu 10-25 mg nedeljno najmanje 12 nedelja pre ulaska u studiju i biće na stabilnoj dozi makar 4 nedelje pre primanja njihovih inicijalnih doza iz studjie leka (PRO70769 ili placebo). Subjekti će možda takodje primiti stabilne doze nesteroidnih anti-inflaminatornih lekova (NSAID) Subjekti će primiti dve IV infuzije PRO70769 ili placebo ekvivalent pri indikovanoj dozi na dan 1 i 15 na osnovu sledećeg plana za podizanje doze (videti sliku 22)
Do podizanja doze će doći na osnovu specifičnih kriterijuuma i nakon pregleda sigurnosnih podataka od strane internog komiteta za sagledavanje sigurnosti podataka (Internal Safetv Data Revievv Committee) i procene akutne toksičnosti 72 sata nakon druge infuzije u poslednjem subjektu koji je tertiran u svakoj grupi (cohort). Nakon faze podizanja doze, 40 dodatnih subjekata (32 aktivna i 8 placebo) biće nasumice izloženi svakoj od sledećih nivoa doza : 2x50 mg, 2x200 mg, 2x500 mg i 2x1000 mg, ako se utvrdi da se tokom podizanja doze određen nivo toleriše. Približno 205 subjekata biće uključeno u studiju.
Broj B-ćelija biće dobijen i zabeležen. Broj B-ćelija biće procenjen pomoću "flovv" citometrije u 48-nedeljnom periodu koji sledi nakon 6-mesečne evaluacije efikasnosti. Uklanjanje B-ćelija se neće uzimati kao toksičnost limitirana dozom (dose li miting toxicity, DLC), već pre kao očekivani farmakodinamični ishod PRO70769 tretmana.
U opcionalnoj podstudiji, dobiće se krv za analizu seruma i RNK, kao i uzorci urina od subjekata u različitim vremenskim momentima Ovi uzorci se mogu koristiti za identifikaciju biomarkera koji se mogu predvideti kao odgovor na PRO70769 tretman u subjektima sa umerenim do teškim RA
Merenja ishoda
Primarno merenje ishoda za ovu studiju je sigurnost i tolerantnost PRO70769 u subjektima sa umerenim do teškim RA.
Studija tretmana
Grupe (cohorts) subjekata primiče dve IV infuzije PRO70769 ili placebo ekvivalenta pri indikovanoj dozi na Dan 1 i 1 5 na osnovu sledećeg plana za podizanje doze:
-10 mg PRO70769 ili placebo ekvivalent: 4 subjekta aktivan lek, 1 kontrola
-50 mg PRO70769 ili placebo ekvivalent. 8 subjekta aktivan lek, 2 kontrole
-2000 mg PRO70769 ili placebo ekvivalent: 8 subjekta aktivan lek, 2 kontrole
-500 mg PRO70769 ili placebo ekvivalent: 8 subjekta aktivan lek, 2 kontrole
-1000 mg PRO70769 ili placebo ekvivalent: 8 subjekta aktivan lek, 2 kontrole Efikasnost
Efikasnost PRO70769 biće merena putem ARC odgovora. Procenat subjekata koji su dostigli ACR20, ACR50 i ACR70 odgovora biće sažet po tretiranoj grupi i 95% intervala sigurnosti (confidence interval) biće stvoreno za svaku grupu. Komponente ovih odgovora i njihove promene od bazne vrednosti biće sažete po tretmanu i poseti
Zaključak
Podaci sažeti u gornjem tekstu demonstrirali su uspeh u proizvodnji humanizovanih CD20 vezujućih antitela, posebno humanizovanih varijanti 2H7 antitela koje su zadržale i čak pojačale njihove biološke osobine. Humanizovana 2H7 antitela iz ovog pronalaska vezana za CD20 sa afinitetom sličnim mišjem donoru i himernim 2H7 antitelima bila su efikasna u ubijanju b-ćelija u primatu, dovodeći do uklanjanja B ćelija. Određene varijante pokazale su povećanu ADCC u odnosu na himerno anti-CD20 antitelo koje se trenutno koristi za tretiranje NETL, favorizujući upotrebu nižih doza terapeutskog antitela u pacijentu. Dodatno, tamo gde je neophodno da himerno antitelo ima mišije Fc ostatke da bi se dalo u dozi, koje je efikasna za kompletno uklanjanje B ćelija, da bi se obezbedio odgovor antitela protiv njega, ova humanizovana antitela mogu se davati u dozama kojima se postiže delimično ili kompletno uklanjanje B ćelija, i u različitim vremenskim periodima, kao što je poželjno za određenu bolest i pacijenta. Dodatno, ova antitela pokazala su stabilnost u rastvoru. Osobine humanizovanih 2H7 antitela čine ih idealnim za upotrebu kao imunoterapeutskih agensa u tretiranju CD20 pozitivnih kancera i autoimunih oboljenja; ne očekuje se da su ova antitela imunogena ili da će makar biti manje imunogena nego kompletno misija ili himerna anti-CD20 antitela u humanim pacijentima.

Claims (70)

1. Antihumano CD20 antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, gde antitelo sadrži VHsekvencu SEQ ID NO. 8 prikazanu na slici 1B (2H7.vl6) i VLsekvencu SEQ ID NO.
2 prikazanu na slici 1A (2H7.vl6).
2. Antitelo prema zahtevu 1, gde je VHregion spojen sa konstantnim regionom humanog IgG lanca.
3. Antitelo prema zahtevu 2, gde je humani IgG, IgGl ili IgG3.
4. Antitelo prema zahtevu 1, gde antitelo sadrži odgovarajuće amino kiselinske sekvence lakog i teškog lanca, SEQ ID NO. 21 prikazanu na slici 6 i 22 prikazanu na slici 7.
5. Antitelo prema patentnom zahtevu 1, gde antitelo sadrži odgovarajuće amino kiselinske sekvence lakog i teškog lanca, SEQ ID NO. 21 prikazanu na slici 6 i 23 prikazanu na slici 8.
6. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema zahtevu 1, gde su antitelo ili fragment antitela efikasani u uklanjanju B ćelija primatain vivo,a B ćelije primata su humane ili iz cinomolgus majmuna.
7. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od prethodnih zahteva, što je konjugovan za citotoksični agens.
8. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema zahtevu 7, što je citotoksični agens radioaktivni izotop ili toksin.
9. Antihumano CD20 antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen proizvedeni postupkom ekspresije nukleinske kiseline koja kodira antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1-5 u domaćinskoj ćeliji i regeneracija antitela ili fragmenta koji vezuje antigen proizvedenog od kulture domaćinskih ćelija.
10. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema zahtevu 9, što je domaćinska ćelija CHO ćelija.
11. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema zahtevu 9 ili zahtevu 10, gde nukleinska kiselina kodira antitelo koje sadrži odgovarajuće amino kiselinske sekvence lakog i teškog lanca, SEQ ID NO. 21 prikazanu na slici 6 i 22 prikazanu na slici 7.
12. Kompozicija koja sadrži antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od prethodnih zahteva i nosač.
13. Kompozicija prema zahtevu 12, gde antitelo sadrži odgovarajuću amino kiselinsku sevencu lakog i teškog lanca, SEQ ID NO. 21 prikazanu na slici 6 i 22 prikazanu na slici 7, a nosač je farmaceutski prihvaljiv nosač.
14. Proizvod koji obuhvata sud i kompoziciju koja se u njemu nalazi, gde kompozicija sadrži antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1-11.
15. Proizvod prema zahtevu 14, što sadrži još uputstvo koje ukazuje na to da se kompozicija može upotrebiti za tertiranje ne-Hočkinsonovog limfoma ili reumatoidnog artritisa.
16. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1 do 11 za upotrebu u postupku izazivanja apoptoze u B ćelijamain vivo,u postupku tretiranja CD20 pozitivnog kancera kod pacijenata ili u postupku tretiranja autoimunih bolesti kod pacijenta.
17. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 16, gde je CD20 pozitivan kancer limfom B ćelija ili leukemija.
18. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 17, gde je CD20 pozitivan kancer ne-Hočkinsov limfom (NHL) ili limfocitna predominantna Hočkinsonova bolest (LPHD).
19. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 16, gde je kancer hronična limfocitna leukemija (CLL) ili limfom malih limfocita (SLL).
20. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema bilo kom od zahteva 16 do 19, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za davanje pacijentu pri tretiranju CD20 pozitivnog kancera u doznom opsegu od oko 275-375 mg/m<2>.
21. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema bilo kom od zahteva 16 do 19, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za davanje pacijentu pri tretiranju CD20 pozitivnog kancera u doznom opsegu od oko 250 mg/m<2>do oko 500 mg/m<2>
22. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema bilo kom od zahteva 16 do 21, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za davanje pacijentu pri tretiranju CD20 pozitivnog kancera sa bar jednim hemoterapeutskim agensom.
23. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 22, gde je kancer ne-Hočkinov limfom (NHL), a hemoterapeutski agens izabran iz grupe koju čine doksorubicin, ciklofosfamid, vinkristin, prednizolon i CHOP.
24. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 20, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za davanje pacijentu pri tretiranju CD20 pozitvnog kancera u bar dve doze od 375 mg/m2 po dozi.
25. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 24, gde su dve doze odvojene dve nedelje.
26. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 16, gde je autoimuna bolest odabrana iz grupe koja se sastoji od reumatidnog artritisa, juvenilnog reumatoidnog artritisa, sistemskog lupusa eritematozisa (SLE), lupusnog nefritisa, ulcerativnog kolitisa, Wegnerove bolesti, zapaljenskog oboljenja creva (inflamminatorv bowel disease), idiopatske trombocitopenične purpure (ITP), trombocitne trombocitopenične purpure (TTP), autoimune trombocitopenije, multiple skleroze, psorijaze, IgA nefropatije, IgM polineuropatije, mijastenije gravis, vaskulitisa, ANCA vaskulitisa, odbacivanja transplantovanog čvrstog organa, 'graft versus host' bolesti, diabetes melitusa, Rejnodovog sindroma, Sjorgenovog sindroma i glomerulonefritisa.
27. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 26, gde je autoimuna bolest multiple skleroza.
28. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 26, gde je autoimuna bolest reumatoidni artritis.
29. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 28, gde pacijent pati od umerenog do teškog reumatidnog artritisa i što mu nije uspeo tretman sa makar jednim antireumatskim lekom koji modifikuje bolest.
30. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 28, gde su antitelo i fragment koji vezuje antigen za davanje pacijentu pri tretiranju autoimune bolesti sa drugim terapeutskim sredstvom.
31. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 30, gde je drugi terapeutski agens imunosupresorski agens.
32. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 31, gde je imunosupresorski agens metotreksat.
33. Antitelo ili fragment koji veže antigen za upotrebu prema zahtevu 28, gde antitelo koje vezuje CD20 ili fragment koji veže antigen sadrže odgovarajuće amino kiselinske sekvence lakog i teškog lanca, SEQ ID NO. 21 prikazanu na slici 6 i 22 prikazanu na slici 7 i gde je antitelo za davanje pri tretiranju autoimunih bolesti u dozama izabranim od 2X50 mg, 2X200 mg i 2X500 mg.
34. Antitelo ili fragment koji vezuje antigen za upotrebu prema zahtevu 33, gde su antitelo ili fragment koji veže antigen za davanje intravenskom infuzijom.
35. Antitelo za upotrebu prema zahtevu 33, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za davanje subkutanoznim putem.
36. Izolovana nukleinska kiselina koja kodira antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1-5.
37. Ekspresioni vektor koji kodira antitelo ili fragment koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1-5.
38. Domaćinska ćelija koja sadrži nukleinsku kiselinu prema zahtevu 36.
39. Domaćinska ćelija prema zahtevu 38 koja proizvodi antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen, gde se antitelo ili fragment koji vezuje antigen vezuju za humani CD20.
40. Domaćinska ćelija prema zahtevu 39 , što je CHO ćelija.
41. Postupak za dobijanje antitela ili njegovog fragment koji vezuje antigen, gde se antitelo ili fragment koji vezuje antigen vezuju za humani CD20, koji obuhvata kultivisanje domaćinske ćelije prema zahtevu 39 ili zahtevu 40 i regeneraciju antitela iz kulture ćelija.
42. Tečna formulacija koja sadrži 20 mg/ml antitela ili njegovog fragmenta koji vezuje antigen, lOmM histidin sulfata na pH 5.8, 60 mg/ml saharoze i 0.2 mg/ml polisorbata 20, gde antitelo ima odgovarajuće aminokiselinske sekvence lakog i teškog lanca, SEQ ID NO. 21 prikazanu na slici 6 i 22 prikazanu na slici 7.
43. Antitelo za upotrebu prema zahtevu 27, gde antitelo koje se vezuje za CD20 se sadrži odgovarajuće amino kiselinske sekvence lakog i teškog lanca, SEQ ID NO: 21 prikazanu na slici 6 i 22 prikazanu na slici 7.
44. Antitelo za upotrebu prema zahtevu 43, što je autoimuna bolest sistemski lupus eritematozis (SLE) ili lupusni nefritis.
45. Antitelo za upotrebu prema zahtevu 43, gde je autoimuna bolest ulcerozni kolitis.
46. Antitelo za upotrebu prema zahtevu 43, gde je autoimuna bolest ANCA vaskulitis.
47. Antitelo za upotrebu prema zahtevu 43, gde je autoimuna bolest odbacivanje transplantovanog čvrstog organa ili 'graft versus host' bolest.
48. Antitelo za upotrebu prema zahtevu 43, gde je antitelo za davanje intravenskom infuzijom.
49. Antitelo za upotrebu prema zahtevu 43, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za davanje subkutanoznim putem.
50. Upotreba antitela koje veže CD20 ili fragmenta prema bilo kom od zahteva 1 do 11 u proizvodnji leka za Iečenje CD20 pozitivnog kancera kod pacijenta.
51. Upotreba premazahtevu 50, gde je CD20 pozitivan kancer B ćelijski limfom ili leukemija.
52. Upotrena prema zahtevu 50, gde je CD20 pozitivan kancer ne-Hočkinsov limfom (NHL) ili limfocitna predominantna Hočkinsonova bolest (LPHD).
53. Upotreba prema zahtevu 51, gde je kancer hronična lmfocitna leukemija ili limfom malih limfocita.
54. Upotreba prema zahtevu 50, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za davanje pacijentu pri tretiranju CD20 pozitivnog kancera u doznom opsegu od oko 275-375 mg/m'.
55. Upotreba prema zahtevu 50, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za davanje pacijentu pri tretiranju CD20 pozitivnog kancera u doznom opsegu od oko 250 mg/m<2>do oko 500 mg/m<2>.
56. Upotreba prema zahtevu 54, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za davanje pacijentu pri tretiranju CD20 pozitivnog kancera u bar dve doze od 375 mg/m<2>po dozi.
57. Upotreba prema zahtevu 56, gde su dve doze odvojene dve nedelje.
58. Upotreba prema zahtevu 50, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za davanje pacijentu pri tretiranju CD20 pozitivnog kancera sa bar jednim hemoterapeutskim agensom.
59. Upotreba prema zahtevu 58, gde je kancer ne-Hočkinov limfom (NHL), a hemoterapeutski agens je izabran iz grupe koju čine doksorubicin, ciklofosfamid, vinkristin, prednizolon i CHOP.
60. Upotreba antitela koje vezuje CD20 ili fragmenta koji vezuje antigen prema bilo kom od zahteva 1 do 11 u proizvodnji leka za tretiranje autoimune bolesti kod pacijenta.
61. Upotreba prema zahtevu 60, gde je autoimuna bolest izabrana iz grupe koja se sastoji od reumatidnog artritisa, juvenilnog reumatoidnog artritisa, sistemskog Iupusa eritematozisa (SLE), lupusnog nefritisa, ulcerativnog kolitisa, VVegnerove bolesti, zapaljenskog oboljenja creva (inflamminatorv bowel disease), idiopatske trombocitopenične purpure (ITP), trombocitne trombocitopenične purpure (TTP), autoimune trombocitopenije, multiple skleroze, psorijaze, IgA nefropatije, IgM polineuropatije, mijastenije gravis, vaskulitisa, ANCA vaskulitisa, odbacivanja transplantovanog čvrstog organa, 'graft versus host' bolesti, diabetes melitusa, Rejnodovog sindroma, Sjorgenovog sindroma i glomerulonefritisa.
62. Upotreba prema zahtevu 61, gde je autoimuna bolest multiple skleroza.
63. Upotreba prema zahtevu 61, gde je autoimuna bolest reumatoidni artritis.
64. Upotreba prema zahtevu 63, gde pacijent pati od umerenog do teškog reumatidnog artritisa i što mu nije uspeo tretman sa makar jednim antireumatskim lekom koji modifikuje bolest,
65. Upotreba prema zahtevu 63, gde su antitelo ili fragment koji vezuje antigen za davanje pacijentu pri tretiranju autoimune bolesti sa drugim terapeutskim agensom.
66. Upotreba prema zahtevu 65, gde je drugi terapeutski agens imunosupresivno sredstvo.
67. Upotreba prema zahtevu 66, gde je imunosupresivni agens metotreksat.
68. Upotreba prema zahtevima 63, gde se antitelo koje veže CD20 ili fragment koji vezuje antigen sadrži odgovarajuće amino kiselinske sekvence lakog i teškog lanca, SEQ ID NO.
21 prikazanu na slici 6 i 22 prikazanu na slici 7, i gde je antitelo za davanje pri tretiranju autoimune bolesti u dozi odabranoj od 2x50 mg, 2x200mg i 2x500mg.
69. Upotreba prema zahtevu 68, gde se antitelo ili fragment koji vezuje antigen daju intravenskom infuzijom.
70. Upotreba prema zahtevu 68, gde se antitelo ili fragment koji vezuje antigen daju subkutanoznom injekcijom.
YUP-2005/0467A 2002-12-16 2003-12-16 Varijante imunoglobulina i njihova upotreba RS51318B (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US43411502P 2002-12-16 2002-12-16
US52616303P 2003-12-01 2003-12-01
PCT/US2003/040426 WO2004056312A2 (en) 2002-12-16 2003-12-16 Immunoglobulin variants and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RS20050467A RS20050467A (sr) 2007-08-03
RS51318B true RS51318B (sr) 2010-12-31

Family

ID=32685285

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
YUP-2005/0467A RS51318B (sr) 2002-12-16 2003-12-16 Varijante imunoglobulina i njihova upotreba
RSP-2010/0366A RS20100366A (sr) 2002-12-16 2003-12-16 Varijante imunoglobulina i njihova upotreba

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RSP-2010/0366A RS20100366A (sr) 2002-12-16 2003-12-16 Varijante imunoglobulina i njihova upotreba

Country Status (35)

Country Link
US (7) US7799900B2 (sr)
EP (5) EP1944320A1 (sr)
JP (3) JP4351674B2 (sr)
KR (2) KR20070055625A (sr)
CN (1) CN103833854B (sr)
AR (3) AR042485A1 (sr)
AT (1) ATE470675T1 (sr)
AU (1) AU2003301079C1 (sr)
BE (1) BE2018C021I2 (sr)
BR (2) BRPI0316779B1 (sr)
CA (1) CA2507898C (sr)
CL (1) CL2008003323A1 (sr)
CR (2) CR7875A (sr)
CY (2) CY1110759T1 (sr)
DE (1) DE60332957D1 (sr)
DK (2) DK1572744T3 (sr)
ES (2) ES2347241T3 (sr)
FR (1) FR18C1023I2 (sr)
HK (1) HK1248731A1 (sr)
HR (1) HRP20050649B1 (sr)
HU (3) HUE035898T2 (sr)
IL (2) IL168754A (sr)
MA (1) MA27704A1 (sr)
MX (1) MXPA05006511A (sr)
NO (1) NO338402B1 (sr)
NZ (1) NZ566907A (sr)
PL (1) PL212899B1 (sr)
PT (1) PT1572744E (sr)
RS (2) RS51318B (sr)
RU (1) RU2326127C2 (sr)
SG (1) SG2013036975A (sr)
SI (2) SI1572744T1 (sr)
TW (2) TW201000132A (sr)
UA (1) UA89350C2 (sr)
WO (1) WO2004056312A2 (sr)

Families Citing this family (1107)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT752248E (pt) 1992-11-13 2001-01-31 Idec Pharma Corp Aplicacao terapeutica de anticorpos quimericos e marcados radioactivamente contra antigenios de diferenciacao restrita de linfocitos b humanos para o tratamento do linfoma de celulas b
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
DE69939939D1 (de) 1998-08-11 2009-01-02 Idec Pharma Corp Kombinationstherapien gegen b-zell-lymphome beinhaltend die verabreichung von anti-cd20-antikörpern
TR200101302T2 (tr) * 1998-11-09 2001-10-22 Idec Pharmaceuticals Corporation BMT yada PBSC transplantı alan hastalarda in vitro ya da in vivo temizleyici madde olarak kimerik anti-CD20 antikorunun kullanımı.
ES2351149T3 (es) 1998-11-09 2011-02-01 Biogen Idec Inc. Anticuerpo quimérico dirigido contra cd20, el rituxan, para uso en el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica.
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
IL146005A0 (en) 1999-05-07 2002-07-25 Genentech Inc Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
KR20020027490A (ko) * 1999-07-12 2002-04-13 제넨테크, 인크. Ｃｄ20에 결합하는 길항제를 사용한 외래 항원에 대한면역 반응 차단 방법
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
KR20040023565A (ko) * 2000-09-18 2004-03-18 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션 Ｂ 세포 고갈/면역조절 항체 조합을 이용한 자가면역질환의 치료를 위한 조합 요법
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
NZ532526A (en) * 2001-10-25 2007-01-26 Genentech Inc Compositions comprising a glycoprotein having a Fc region
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US7662925B2 (en) 2002-03-01 2010-02-16 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
EP1495055B1 (en) * 2002-04-18 2013-08-14 Genencor International, Inc. Production of functional antibodies in filamentous fungi
AR042485A1 (es) * 2002-12-16 2005-06-22 Genentech Inc Anticuerpo humanizado que se une al cd20 humano
US8084582B2 (en) 2003-03-03 2011-12-27 Xencor, Inc. Optimized anti-CD20 monoclonal antibodies having Fc variants
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
MXPA05010778A (es) * 2003-04-09 2005-12-12 Genentech Inc Terapia para enfermedad autoinmune en un paciente con una respuesta inadecuada a un inhibidor tnf-alfa.
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
NZ543712A (en) * 2003-06-05 2008-06-30 Genentech Inc Combination therapy for B cell disorders
US9714282B2 (en) 2003-09-26 2017-07-25 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US8399618B2 (en) 2004-10-21 2013-03-19 Xencor, Inc. Immunoglobulin insertions, deletions, and substitutions
US8883147B2 (en) 2004-10-21 2014-11-11 Xencor, Inc. Immunoglobulins insertions, deletions, and substitutions
TR201809892T4 (tr) 2003-11-05 2018-07-23 Roche Glycart Ag Fc reseptörüne bağlanma afinitesi ve artırılmış efektör fonksiyonu bulunan antijen bağlayan moleküller.
WO2005063815A2 (en) * 2003-11-12 2005-07-14 Biogen Idec Ma Inc. Fcϝ receptor-binding polypeptide variants and methods related thereto
EP2053062A1 (en) 2004-03-24 2009-04-29 Xencor, Inc. Immunoglobin variants outside the Fc region
AR049292A1 (es) * 2004-06-04 2006-07-12 Genentech Inc Metodo para tratar lupus con un anticuerpo cd20
AU2005249566B2 (en) 2004-06-04 2010-11-11 Genentech, Inc. Method for treating multiple sclerosis
US20060019342A1 (en) * 2004-06-25 2006-01-26 Medimmune, Inc. Increasing the production of recombinant antibodies in mammalian cells by site-directed mutagenesis
WO2006085967A2 (en) * 2004-07-09 2006-08-17 Xencor, Inc. OPTIMIZED ANTI-CD20 MONOCONAL ANTIBODIES HAVING Fc VARIANTS
US20150010550A1 (en) 2004-07-15 2015-01-08 Xencor, Inc. OPTIMIZED Fc VARIANTS
EP1781378A2 (en) * 2004-07-22 2007-05-09 Genentech, Inc. Method of treating sjögren's syndrome
DK2213683T3 (da) 2004-08-04 2013-09-02 Mentrik Biotech Llc VARIANT-Fc-REGIONER
KR20070057839A (ko) * 2004-08-19 2007-06-07 제넨테크, 인크. 변경된 이펙터 기능을 갖는 폴리펩티드 변이체
ZA200702335B (en) * 2004-10-05 2009-05-27 Genentech Inc Method for treating vasculitis
TW200630106A (en) * 2004-10-08 2006-09-01 Wyeth Corp Immunotherapy of autoimmune disorders
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US8546543B2 (en) 2004-11-12 2013-10-01 Xencor, Inc. Fc variants that extend antibody half-life
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
CN102746404B (zh) 2004-11-12 2016-01-20 赞科股份有限公司 对FcRn的结合被改变的Fc变体
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
FR2879204B1 (fr) 2004-12-15 2007-02-16 Lab Francais Du Fractionnement Anticorps cytotoxique dirige contre les proliferations hematopoietiques lymphoides de type b.
MX2007007935A (es) 2004-12-28 2007-12-06 Innate Pharma Sa Anticuerpos monoclonales contra nkg2a.
US20060188495A1 (en) * 2005-01-13 2006-08-24 Genentech, Inc. Treatment method
DOP2006000029A (es) * 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
TW200714289A (en) * 2005-02-28 2007-04-16 Genentech Inc Treatment of bone disorders
AR053579A1 (es) * 2005-04-15 2007-05-09 Genentech Inc Tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal (eii)
EP1877441A2 (en) * 2005-04-26 2008-01-16 Bioren, Inc. Method of producing human igg antibodies with enhanced effector functions
CN101223448B (zh) 2005-05-20 2012-01-18 健泰科生物技术公司 来自自身免疫病受试者的生物学样品的预处理
ZA200710496B (en) * 2005-06-02 2009-04-29 Astrazeneca Ab Antibodies directed to CD20 and used thereof
PT1912675E (pt) 2005-07-25 2014-05-09 Emergent Product Dev Seattle Moléculas de ligaçao especificas para cd37 e especificas para cd20
AU2006281978A1 (en) * 2005-08-12 2007-02-22 Garvan Institute Of Medical Research Phrophylactic and/or therapeutic method for treatment of autoimmune disease
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP1931709B1 (en) 2005-10-03 2016-12-07 Xencor, Inc. Fc variants with optimized fc receptor binding properties
JP4860703B2 (ja) 2005-10-06 2012-01-25 ゼンコー・インコーポレイテッド 最適化された抗ｃｄ３０抗体
EP3770174A1 (en) 2005-10-11 2021-01-27 Amgen Research (Munich) GmbH Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
ES2618543T3 (es) 2005-11-23 2017-06-21 Genentech, Inc. Métodos y composiciones relacionados con ensayos de linfocitos B
EP1954719A2 (en) 2005-12-02 2008-08-13 Genentech Inc. Compositions and methods for the treatment of diseases and disorders associated with cytokine signaling involving antibodies that bind to il-22 and il-22r
JP5164856B2 (ja) 2006-01-05 2013-03-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｅｐｈｂ４抗体およびその使用方法
SI1976884T1 (sl) 2006-01-20 2013-04-30 Genetech, Inc. Anti-efrinB2 protitelesa in postopki uporabe le teh
WO2007102200A1 (ja) * 2006-03-07 2007-09-13 Osaka University 抗ｃｄ２０モノクローナル抗体
AR059851A1 (es) 2006-03-16 2008-04-30 Genentech Inc Anticuerpos de la egfl7 y metodos de uso
US8524865B2 (en) 2006-05-30 2013-09-03 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
CL2007001623A1 (es) 2006-06-06 2008-01-18 Genentech Inc Anticuerpo anti-dll4; polinucleotido que lo codifica; vector y celula huesped que comprenden dicho polinucleotido; metodo para elaborar el anticuerpo e inmunojugado; metodo de deteccion de dll4 y metodo diagnostico de un trastorno asociado a dll4; composicion que comprende al anticuerpo.
FR2902799B1 (fr) 2006-06-27 2012-10-26 Millipore Corp Procede et unite de preparation d'un echantillon pour l'analyse microbiologique d'un liquide
MX2008015830A (es) 2006-06-30 2009-01-09 Novo Nordisk As Anticuerpos anti-nkg2a y usos de los mismos.
US20130004480A1 (en) 2006-07-04 2013-01-03 Paul Parren CD20 Binding Molecules for the Treatment of Copd
EP1878747A1 (en) 2006-07-11 2008-01-16 greenovation Biotech GmbH Glyco-engineered antibodies
WO2008008482A2 (en) * 2006-07-13 2008-01-17 Genentech, Inc. Altered br3-binding polypeptides
AU2007275654A1 (en) 2006-07-19 2008-01-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania WSX-1/p28 as a target for anti-inflammatory responses
HRP20140331T1 (hr) 2006-08-14 2014-05-09 Xencor, Inc. Optimizirana antitijela usmjerena na cd19
WO2008034076A2 (en) * 2006-09-15 2008-03-20 The Johns Hopkins University Cyclophosphamide in combination with immune therapeutics
JP5562031B2 (ja) 2006-09-18 2014-07-30 ゼンコー・インコーポレイテッド Ｈｍ１．２４を標的とする最適化抗体
UA94484C2 (uk) 2006-10-12 2011-05-10 Дженентек, Інк. Антитіла до лімфотоксину-альфа
MX2009003938A (es) 2006-10-27 2009-04-24 Genentech Inc Anticuerpos e inmunoconjugados y sus usos.
SI2662091T1 (sl) * 2006-12-01 2019-01-31 Novartis Ag Protitelesa proti P-selektinu in postopki za njihovo uporabo za zdravljenje vnetnih bolezni
US8569464B2 (en) 2006-12-21 2013-10-29 Emd Millipore Corporation Purification of proteins
US8362217B2 (en) 2006-12-21 2013-01-29 Emd Millipore Corporation Purification of proteins
WO2008079302A2 (en) 2006-12-21 2008-07-03 Millipore Corporation Purification of proteins
BRPI0806367A2 (pt) 2007-01-22 2011-09-06 Genentech Inc métodos de purificação de anticorpos
MX2009008430A (es) 2007-02-09 2009-10-28 Genentech Inc Anticuerpos anti-robo4 y sus usos.
US7960139B2 (en) 2007-03-23 2011-06-14 Academia Sinica Alkynyl sugar analogs for the labeling and visualization of glycoconjugates in cells
PE20090321A1 (es) 2007-06-04 2009-04-20 Genentech Inc Anticuerpos anti-notch1 nrr, metodo de preparacion y composicion farmaceutica
WO2009000099A2 (en) * 2007-06-25 2008-12-31 Esbatech Ag Methods of modifying antibodies, and modified antibodies with improved functional properties
WO2009033309A1 (en) 2007-09-13 2009-03-19 Esbatech Ag HUMANIZED ANTIBODIES AGAINST THE ß-AMYLOYD PEPTIDE
GB0718684D0 (en) * 2007-09-24 2007-10-31 Roche Products Ltd Treatment method
RU2526512C2 (ru) 2007-09-26 2014-08-20 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Модифицированная константная область антитела
US20090098118A1 (en) 2007-10-15 2009-04-16 Thomas Friess Combination therapy of a type ii anti-cd20 antibody with an anti-bcl-2 active agent
US8536310B2 (en) 2007-10-17 2013-09-17 Arca Biopharma, Inc. Antibodies to CLL-1
US20090148435A1 (en) 2007-10-30 2009-06-11 Genentech, Inc. Antibody purification by cation exchange chromatography
WO2009062102A2 (en) 2007-11-07 2009-05-14 Genentech, Inc. Compositions and methods for treatment of microbial disorders
TWI580694B (zh) 2007-11-30 2017-05-01 建南德克公司 抗-ｖｅｇｆ抗體
HRP20150279T1 (hr) 2007-12-26 2015-05-08 Xencor, Inc. Fc inaäśice s promijenjenim vezanjem na fcrn
JP5774312B2 (ja) 2008-01-24 2015-09-09 ノボ・ノルデイスク・エー／エス ヒト化抗ヒトｎｋｇ２ａモノクローナル抗体
US12492253B1 (en) 2008-02-25 2025-12-09 Xencor, Inc. Anti-human C5 antibodies
TWI532498B (zh) 2008-03-17 2016-05-11 巴克斯特保健公司 供免疫球蛋白及玻尿酸酶之皮下投藥之用的組合及方法
HUE028828T2 (en) * 2008-03-25 2017-01-30 Roche Glycart Ag Use of type II anti-CD20 antibody with increased antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADDC) in combination with cyclophosphamide, vincristine, and doxorubicin for the treatment of non-hodgkin's lymphomas
RS51975B (sr) 2008-04-11 2012-02-29 Emergent Product Development Seattle Llc. Cd37 imunoterapeutski proizvod i njegova kombinacija sa bifunkcionalnim hemoterapeutskim sredstvom
US20100260668A1 (en) * 2008-04-29 2010-10-14 Abbott Laboratories Dual Variable Domain Immunoglobulins and Uses Thereof
EP2899209A1 (en) * 2008-04-29 2015-07-29 Abbvie Inc. Dual Variable Domain Immunoglobulins and uses thereof
BRPI0913406A2 (pt) * 2008-06-03 2018-01-09 Abbott Lab imunoglobulinas de domínio variável duplo e usos das mesmas
EP2297208A4 (en) * 2008-06-03 2012-07-11 Abbott Lab DUAL VARIABLE DOMAIN IMMUNOGLOBULINS AND ITS USES
US8999702B2 (en) 2008-06-11 2015-04-07 Emd Millipore Corporation Stirred tank bioreactor
US8822645B2 (en) * 2008-07-08 2014-09-02 Abbvie Inc. Prostaglandin E2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP2318832B1 (en) 2008-07-15 2013-10-09 Academia Sinica Glycan arrays on ptfe-like aluminum coated glass slides and related methods
DK2848625T3 (da) 2008-08-14 2019-10-07 Genentech Inc Fremgangsmåder til fjernelse af en kontaminant under anvendelse af ion bytningsmembrankromatografi med forskydning af naturligt forekommende proteiner
CN103599541A (zh) 2008-09-10 2014-02-26 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于防止蛋白质氧化降解的组合物和方法
TW201438738A (zh) 2008-09-16 2014-10-16 Genentech Inc 治療進展型多發性硬化症之方法
EP3524620A1 (en) * 2008-10-14 2019-08-14 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants and uses thereof
KR20140133588A (ko) * 2008-11-17 2014-11-19 제넨테크, 인크. 생리적 조건하에 거대분자의 응집을 감소시키는 방법 및 제제
CN102307993B (zh) 2008-12-09 2014-06-25 哈洛齐梅公司 延长的可溶性ph20多肽及其用途
SG171446A1 (en) 2008-12-16 2011-07-28 Millipore Corp Stirred tank reactor and method
AU2009335788A1 (en) 2008-12-17 2011-07-07 Genentech, Inc. Hepatitis C virus combination therapy
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
KR20170143025A (ko) 2008-12-23 2017-12-28 제넨테크, 인크. 단백질 ａ에 대해 변경된 결합을 갖는 이뮤노글로불린 변이체
JP2012517806A (ja) * 2009-02-16 2012-08-09 バイオレックス・セラピューティクス インコーポレイテッド ヒト化抗ｃｄ２０抗体および使用方法
WO2010099273A1 (en) 2009-02-27 2010-09-02 Genentech, Inc. Methods and compositions for protein labelling
AR075896A1 (es) 2009-03-20 2011-05-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-her (factor de crecimiento epidermico)
SG174904A1 (en) 2009-03-25 2011-11-28 Genentech Inc Anti-fgfr3 antibodies and methods using same
NZ594343A (en) 2009-03-25 2013-10-25 Genentech Inc Novel anti-alpha5beta1 antibodies and uses thereof
US20100247484A1 (en) 2009-03-31 2010-09-30 Heinrich Barchet Combination therapy of an afucosylated antibody and one or more of the cytokines gm csf, m csf and/or il3
SI2417156T1 (sl) 2009-04-07 2015-06-30 Roche Glycart Ag Trivalentna, bispecifiäśna protitelesa
US9309325B2 (en) 2009-05-07 2016-04-12 The Regents Of The University Of California Antibodies and methods of use thereof
AU2010248938B2 (en) * 2009-05-13 2014-12-11 Gliknik Inc. Methods of using immunoglobulin aggregates
EP2435476A4 (en) * 2009-05-27 2013-04-17 Synageva Biopharma Corp ANTIBODIES OBTAINED FROM BIRDS
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
WO2010146059A2 (en) 2009-06-16 2010-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for igf-1r inhibitor therapy
AR077595A1 (es) 2009-07-27 2011-09-07 Genentech Inc Tratamientos de combinacion
TW201109438A (en) * 2009-07-29 2011-03-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
SG178177A1 (en) 2009-07-31 2012-03-29 Genentech Inc Inhibition of tumor metastasis using bv8- or g-csf-antagonists
TWI409079B (zh) 2009-08-14 2013-09-21 Roche Glycart Ag 非典型岩藻醣化ｃｄ２０抗體與苯達莫斯汀（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）之組合療法
WO2011018225A1 (en) 2009-08-14 2011-02-17 Roche Glycart Ag Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with fludarabine and/or mitoxantrone
RU2012112550A (ru) * 2009-09-01 2013-10-10 Эбботт Лэборетриз Иммуноглобулины с двумя вариабельными доменами и их применение
US9321823B2 (en) 2009-09-02 2016-04-26 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
WO2011028952A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Xencor, Inc. Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens
MX2012002766A (es) 2009-09-03 2012-04-02 Genentech Inc Metodos para el tratamiento, diagnosis y monitoreo de artritis reumatoide.
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
EP2478110B1 (en) 2009-09-16 2016-01-06 Immunomedics, Inc. Class i anti-cea antibodies and uses thereof
CA2774053C (en) 2009-09-17 2015-04-28 Baxter Healthcare, S.A. Stable co-formulation of hyaluronidase and immunoglobulin, and methods of use thereof
US8716450B2 (en) * 2009-10-15 2014-05-06 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
AU2010310585A1 (en) 2009-10-22 2012-05-03 Genentech, Inc. Anti-hepsin antibodies and methods using same
WO2011056494A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor-like kinase-1 antagonist and vegfr3 antagonist combinations
WO2011056497A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Activin receptor type iib compositions and methods of use
WO2011056502A1 (en) 2009-10-26 2011-05-12 Genentech, Inc. Bone morphogenetic protein receptor type ii compositions and methods of use
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2011056997A1 (en) 2009-11-04 2011-05-12 Fabrus Llc Methods for affinity maturation-based antibody optimization
CA2780143A1 (en) 2009-11-05 2011-05-12 Genentech, Inc. Methods and composition for secretion of heterologous polypeptides
RU2587622C2 (ru) 2009-11-30 2016-06-20 Биотест Аг Гуманизированные антитела против il-10 для лечения системной красной волчанки (sle)
CA2782320A1 (en) 2009-12-02 2011-06-09 Acceleron Pharma Inc. Compositions and methods for increasing serum half-life of fc fusion proteins
US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
WO2011071577A1 (en) 2009-12-11 2011-06-16 Genentech, Inc. Anti-vegf-c antibodies and methods using same
RU2559542C2 (ru) 2009-12-23 2015-08-10 Дженентек, Инк. Антитела против bv8 и их применение
WO2011091078A2 (en) 2010-01-19 2011-07-28 Xencor, Inc. Antibody fc variants with enhanced complement activity
EP2533810B1 (en) 2010-02-10 2016-10-12 ImmunoGen, Inc. Cd20 antibodies and uses thereof
SG183333A1 (en) 2010-02-18 2012-09-27 Genentech Inc Neuregulin antagonists and use thereof in treating cancer
US20110200595A1 (en) 2010-02-18 2011-08-18 Roche Glycart TREATMENT WITH A HUMANIZED IgG CLASS ANTI EGFR ANTIBODY AND AN ANTIBODY AGAINST INSULIN LIKE GROWTH FACTOR 1 RECEPTOR
RU2584232C2 (ru) 2010-03-22 2016-05-20 Дженентек, Инк. Композиции и способы, используемые для стабилизации белоксодержащих готовых форм
JP6093692B2 (ja) 2010-03-24 2017-03-08 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｌｒｐ６抗体
EP3372617B1 (en) 2010-04-02 2024-07-24 Amunix Pharmaceuticals, Inc. Binding fusion proteins, binding fusion protein-drug conjugates, xten-drug conjugates and methods of making and using same
WO2011130332A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
CN102844049B (zh) 2010-04-27 2016-06-01 罗切格利卡特公司 无岩藻糖基化CD20抗体与mTOR抑制剂的联合疗法
RU2012151500A (ru) 2010-05-03 2014-06-10 Дженентек, Инк. Композиции и способы, пригодные для снижения вязкости белковосодержащих составов
DK2568976T3 (en) 2010-05-10 2016-01-11 Academia Sinica Zanamivir-phosphonate congener with the anti-influenza activity, and determining the sensitivity oseltamivir in influenza viruses
US8841417B2 (en) 2010-05-14 2014-09-23 Abbvie Inc. IL-1 binding proteins
CN107312062B (zh) 2010-05-17 2021-03-16 Emd密理博公司 用于纯化生物分子的刺激响应性聚合物
WO2011147834A1 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Roche Glycart Ag Antibodies against cd19 and uses thereof
AU2011261362B2 (en) 2010-06-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Immuno-pet imaging of antibodies and immunoconjugates and uses therefor
JP5940061B2 (ja) 2010-06-18 2016-06-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ａｘｌ抗体及び使用方法
WO2011161119A1 (en) 2010-06-22 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against insulin-like growth factor i receptor and uses thereof
WO2011161189A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-hepsin antibodies and methods of use
PL3586826T3 (pl) 2010-06-24 2021-10-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Kompozycje i sposoby stabilizowania preparatów zawierających białka
RU2571226C2 (ru) 2010-07-09 2015-12-20 Дженентек, Инк. Антитела против нейропилина и способы их применения
WO2012010582A1 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Roche Glycart Ag Anti-cxcr5 antibodies and methods of use
CN103052649B (zh) 2010-07-29 2015-12-16 Xencor公司 具有修改的等电点的抗体
TW201206473A (en) 2010-08-03 2012-02-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2013106216A (ru) 2010-08-03 2014-09-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Биомаркеры хронической лимфоцитарной лейкемии
WO2012017003A1 (en) 2010-08-05 2012-02-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-mhc antibody anti-viral cytokine fusion protein
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
HUE036077T2 (hu) 2010-08-13 2018-06-28 Roche Glycart Ag Anti-FAP ellenanyagok és alkalmazásukra szolgáló eljárások
CA2806640A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Roche Glycart Ag Anti-tenascin-c a2 antibodies and methods of use
AR082693A1 (es) 2010-08-17 2012-12-26 Roche Glycart Ag Terapia de combinacion de un anticuerpo anti-cd20 afucosilado con un anticuerpo anti-vegf
RU2013110874A (ru) 2010-08-25 2014-09-27 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела против il-18r1 и их применения
PE20140229A1 (es) 2010-08-26 2014-03-27 Abbvie Inc Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
JP2013537966A (ja) 2010-08-31 2013-10-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド バイオマーカー及び治療の方法
RS63430B1 (sr) 2010-10-01 2022-08-31 Modernatx Inc Ribonukleinske kiseline koje sadrže n1-metil-pseudouracile i njihove primene
US8481680B2 (en) 2010-10-05 2013-07-09 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
RU2013126477A (ru) 2010-11-08 2014-12-20 Дженентек, Инк. Вводимые подкожно антитела против рецептора il-6
WO2012064836A1 (en) 2010-11-10 2012-05-18 Genentech, Inc. Methods and compositions for neural disease immunotherapy
CA2819436A1 (en) 2010-12-16 2012-06-21 Roche Glycart Ag Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with a mdm2 inhibitor
EP3447491A3 (en) 2010-12-16 2019-06-05 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnosis and treatments relating to th2 inhibition
TWI477513B (zh) 2010-12-20 2015-03-21 建南德克公司 抗間皮素（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）抗體及免疫接合物
CA2820953A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Genentech, Inc. Anti-pcsk9 antibodies and methods of use
WO2012092539A2 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Takeda Pharmaceutical Company Limited Antibodies to dll4 and uses thereof
EP2482074A1 (en) * 2011-01-27 2012-08-01 Medizinische Hochschule Hannover Methods and means for diagnosing vasculitis
US10689447B2 (en) 2011-02-04 2020-06-23 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
JP2014511147A (ja) 2011-02-10 2014-05-12 ロシュ グリクアート アーゲー 改善された免疫療法
BR112013020338A2 (pt) 2011-02-28 2016-10-18 Hoffmann La Roche proteína de ligação de antígeno monovalente, composição farmacêutica, uso da proteína de ligação de antígeno monovalente, método para o tratamento de um paciente com necessidade de terapia, método para a preparação de uma proteína de ligação de antígeno monovalente, ácido nucleico, vetor e célula hospedeira
WO2012116926A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Antigen binding proteins
WO2012118750A2 (en) 2011-02-28 2012-09-07 Genentech, Inc. Biological markers and methods for predicting response to b-cell antagonists
US20120222851A1 (en) * 2011-03-04 2012-09-06 GM Global Technology Operations LLC Hvac system damper
SI2691417T2 (sl) 2011-03-29 2025-05-30 Roche Glycart Ag FC variante protitelesa
EP2691101A2 (en) 2011-03-31 2014-02-05 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
CN103596983B (zh) 2011-04-07 2016-10-26 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗fgfr4抗体及使用方法
EA201892619A1 (ru) 2011-04-29 2019-04-30 Роше Гликарт Аг Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
MX2013013054A (es) 2011-05-12 2014-02-20 Genentech Inc Metodo de monitoreo de lc-ms/ms de reaccion multiple para detectar anticuerpos terapeuticos en muestras de animales utilizando peptidos de firma de estructura.
ES2628385T3 (es) 2011-05-16 2017-08-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistas de FGFR1 y procedimientos de uso
BR112013029893A2 (pt) 2011-05-21 2017-05-30 Macrogenics Inc molécula de ligação a cd3, anticorpo de ligação a cd3, diacorpo de ligação a cd3 e composição farmacêutica
RU2013158627A (ru) 2011-06-15 2015-07-20 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела к рецептору человеческого эритропоэтина и способы их применения
WO2012172102A1 (en) 2011-06-17 2012-12-20 Novo Nordisk A/S Selective elimination of erosive cells
AU2012274127B2 (en) 2011-06-22 2017-06-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Removal of target cells by circulating virus-specific cytotoxic T-cells using MHC class I comprising complexes
AR086823A1 (es) 2011-06-30 2014-01-22 Genentech Inc Formulaciones de anticuerpo anti-c-met, metodos
CA2842375A1 (en) 2011-08-17 2013-02-21 Erica Jackson Neuregulin antibodies and uses thereof
CN103890008A (zh) 2011-08-17 2014-06-25 霍夫曼-拉罗奇有限公司 在顽固性肿瘤中抑制血管发生
KR20140048292A (ko) 2011-08-23 2014-04-23 로슈 글리카트 아게 항-mcsp 항체
RU2650775C2 (ru) 2011-08-23 2018-04-17 Рош Гликарт Аг Биспецифические антигенсвязывающие молекулы
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CN103930781A (zh) 2011-09-15 2014-07-16 霍夫曼-拉罗奇有限公司 促进分化的方法
KR20140064971A (ko) 2011-09-19 2014-05-28 제넨테크, 인크. c-met 길항제 및 B-raf 길항제를 포함하는 조합 치료
DK3682905T3 (da) 2011-10-03 2022-02-28 Modernatx Inc Modificerede nukleosider, nukleotider og nukleinsyrer og anvendelser deraf
US20130089562A1 (en) 2011-10-05 2013-04-11 Genenthech, Inc. Methods of treating liver conditions using notch2 antagonists
CA2850032C (en) 2011-10-14 2022-06-07 Genentech, Inc. Anti-htra1 antibodies and methods of use
BR112014008590A2 (pt) 2011-10-15 2017-10-24 Genentech Inc métodos de uso de antagonistas de scd1
WO2013059531A1 (en) 2011-10-20 2013-04-25 Genentech, Inc. Anti-gcgr antibodies and uses thereof
HK1198689A1 (en) 2011-10-25 2015-05-29 Prothena Biosciences Limited Antibody formulations and methods
JP6251682B2 (ja) 2011-10-28 2017-12-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド メラノーマ治療の治療の組み合わせ及び方法
KR102057742B1 (ko) * 2011-11-17 2019-12-19 군드람 정 의학적 용도를 위한 이중특이성 항체
CN104066748A (zh) 2011-11-21 2014-09-24 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗c-met抗体的纯化
US20130302274A1 (en) 2011-11-25 2013-11-14 Roche Glycart Ag Combination therapy
WO2013083497A1 (en) 2011-12-06 2013-06-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
WO2013101509A2 (en) 2011-12-15 2013-07-04 Alternative Innovative Technologies Llc Hsp70 fusion protein conjugates and uses thereof
DE12858350T1 (de) 2011-12-16 2021-10-07 Modernatx, Inc. Modifizierte mrna zusammensetzungen
HRP20181846T1 (hr) 2011-12-22 2018-12-28 Genentech, Inc. Kromatografija membranom za ionsku izmjenu
RU2756106C2 (ru) 2011-12-22 2021-09-28 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Строение экспрессионного вектора, новые способы получения клеток-продуцентов и их применение для рекомбинантного получения полипептидов
US20160208284A1 (en) 2011-12-22 2016-07-21 Hoffmann-La Roche Inc. Expression vector element combinations, novel production cell generation methods and their use for the recombinant production of polypeptides
BR112014013035A2 (pt) 2011-12-22 2018-10-09 Hoffmann La Roche métodos de seleção de células, conjuntos de expressão bicistrônica, células eucarióticas, vetores lentivirais, uso de vetor lentiviral, bibliotecas de ventores lentivirais e de células eucarióticas, métodos de seleção de células, fluxos de trabalho e uso de célula
WO2013096791A1 (en) 2011-12-23 2013-06-27 Genentech, Inc. Process for making high concentration protein formulations
TW201333035A (zh) 2011-12-30 2013-08-16 Abbvie Inc 針對ｉｌ－１３及／或ｉｌ－１７之雙特異性結合蛋白
CN104244968B (zh) 2011-12-30 2017-07-25 哈洛齐梅公司 Ph20多肽变体、配制物及其应用
WO2013101771A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Genentech, Inc. Compositions and method for treating autoimmune diseases
JP6684490B2 (ja) 2012-01-09 2020-04-22 ザ・スクリップス・リサーチ・インスティテュート 超長相補性決定領域及びその使用
CA2862979A1 (en) 2012-01-09 2013-07-18 The Scripps Research Institute Humanized antibodies with ultralong cdr3s
MX2014008699A (es) 2012-01-18 2014-11-21 Genentech Inc Metodos para utilizar moduladores de fgf19.
PE20141561A1 (es) 2012-01-18 2014-11-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-lrp5 y metodos de uso
EP2804952A4 (en) * 2012-01-19 2015-09-09 Therapeutic Proteins Int Llc STABILIZATION OF ANTI-CD20 ANTIBODY RITUXIMAB
TW201334789A (zh) 2012-01-31 2013-09-01 Genentech Inc 抗ｉｇｅ抗體及其使用方法
WO2013120056A1 (en) 2012-02-11 2013-08-15 Genentech, Inc. R-spondin translocations and methods using the same
WO2013120929A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Fc-receptor based affinity chromatography
CA2865082A1 (en) 2012-03-27 2013-10-03 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to her3 inhibitors
CA2866753C (en) 2012-03-27 2020-09-22 Genentech, Inc. Improved harvest operations for recombinant proteins
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
HK1206601A1 (en) 2012-04-02 2016-01-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of biologics and proteins associated with human disease
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
KR102132041B1 (ko) 2012-04-05 2020-07-09 에이씨 이뮨 에스.에이. 인간화된 타우 항체
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
RU2014148162A (ru) 2012-05-01 2016-06-20 Дженентек, Инк. Анти-pmel17 антитела и их иммуноконъюгаты
WO2013170191A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Genentech, Inc. Methods of using antagonists of nad biosynthesis from nicotinamide
KR101843614B1 (ko) 2012-05-23 2018-03-29 제넨테크, 인크. 치료제의 선택 방법
US9266961B2 (en) 2012-06-15 2016-02-23 Genentech, Inc. Anti-PCSK9 antibodies, formulations, dosing, and methods of use
HRP20171610T1 (hr) 2012-07-04 2018-03-23 Rhizen Pharmaceuticals S.A. Selektivni inhibitori pi3k delta
BR112014030844A2 (pt) 2012-07-04 2019-10-15 Hoffmann La Roche anticorpo anti-biotina humanizado, formulação farmacêutica e uso do anticorpo
CA2871112C (en) 2012-07-04 2020-05-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked antigen-antibody conjugates
ES2600154T3 (es) 2012-07-04 2017-02-07 F. Hoffmann-La Roche Ag Anticuerpos antiteofilina y métodos de uso
EP3578660A1 (en) 2012-07-05 2019-12-11 F. Hoffmann-La Roche AG Expression and secretion system
BR112015000439A2 (pt) 2012-07-09 2017-12-19 Genentech Inc imunoconjugado , formulação farmacêutica e métodos de tratamento de um indivíduo e de inibição da proliferação
HK1209043A1 (en) 2012-07-09 2016-03-24 基因泰克公司 Immunoconjugates comprising anti-cd22 antibodies
US20140030280A1 (en) 2012-07-09 2014-01-30 Genentech, Inc. Anti-cd79b antibodies and immunoconjugates
EP2869847B1 (en) 2012-07-09 2017-12-06 Genentech, Inc. Immunoconjugates comprising anti-cd79b antibodies
UY34905A (es) 2012-07-12 2014-01-31 Abbvie Inc Proteínas de unión a il-1
PE20150361A1 (es) 2012-07-13 2015-03-14 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos anti-vegf/anti-ang-2 y su utilizacion en el tratamiento de enfermedades vasculares oculares
KR20150038511A (ko) 2012-08-02 2015-04-08 에프. 호프만-라 로슈 아게 불활성 면역글로불린 Ｆｃ-영역을 갖는 Ｆｃ-융합체로서의 가용성 ＦｃＲ 의 생산 방법 및 그의 용도
CA2872195A1 (en) 2012-08-07 2014-02-13 Roche Glycart Ag Composition comprising two antibodies engineered to have reduced and increased effector function
EP2885311B1 (en) 2012-08-18 2020-01-01 Academia Sinica Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases
US9547009B2 (en) 2012-08-21 2017-01-17 Academia Sinica Benzocyclooctyne compounds and uses thereof
US9777067B2 (en) 2012-09-27 2017-10-03 Massachusetts Institute Of Technology HER2- and VEGF-A-binding proteins with enhanced stability
UY35110A (es) 2012-11-01 2014-05-30 Abbvie Inc Inmunoglobulinas de dominio variable dual anti-vegf/dll4 y usos de las mismas
EP3756686A1 (en) 2012-11-02 2020-12-30 TG Therapeutics Inc. Combination of anti-cd20 antibody and pi3 kinase selective inhibitor
AU2013337264B2 (en) 2012-11-05 2018-03-08 Foundation Medicine, Inc. Novel fusion molecules and uses thereof
EP2914621B1 (en) 2012-11-05 2023-06-07 Foundation Medicine, Inc. Novel ntrk1 fusion molecules and uses thereof
AR093378A1 (es) 2012-11-08 2015-06-03 Hoffmann La Roche PROTEINAS LIGANTES DE ANTIGENO HER3 DE UNION A LA HORQUILLA b DE HER3
BR112015010817A8 (pt) 2012-11-13 2018-01-23 Genentech Inc anticorpos anti-hemaglutinina isolado, método de tratamento, inibição ou prevenção de infecções, composição, composição farmacêutica, ácido nucleico isolado, célula hospedeira, método de produção de anticorpos e uso do anticorpo anti-hemaglutinina
ES2649991T3 (es) 2012-11-19 2018-01-16 Baliopharm Ag Anticuerpo biespecífico recombinante que se une a CD20 y CD95
HRP20220607T1 (hr) 2012-11-26 2022-06-24 Modernatx, Inc. Terminalno modificirana rna
WO2014100095A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Genentech, Inc. Methods and compositions for radiohalogen protein labeling
WO2014096015A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Disulfide-linked multivalent mhc class i comprising multi-function proteins
AU2014207342C1 (en) 2013-01-18 2019-04-04 Foundation Medicine, Inc. Methods of treating cholangiocarcinoma
WO2014116749A1 (en) 2013-01-23 2014-07-31 Genentech, Inc. Anti-hcv antibodies and methods of using thereof
WO2014120555A1 (en) 2013-01-31 2014-08-07 The Regents Of The University Of California Antibodies specific for urokinase-type plasminogen activator and methods of use thereof
WO2014128235A1 (en) 2013-02-22 2014-08-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of treating cancer and preventing drug resistance
CN104936987A (zh) 2013-02-26 2015-09-23 罗切格利卡特公司 抗mcsp抗体
HK1213180A1 (zh) 2013-03-06 2016-06-30 豪夫迈‧罗氏有限公司 治疗和预防癌症药物抗性的方法
KR101990341B1 (ko) * 2013-03-12 2019-06-19 몰레큘러 템플레이츠, 인코퍼레이션. 세포 내재화를 유도하기 위한 ｃｄ20-결합 면역독소 및 이의 사용 방법
NZ711567A (en) 2013-03-13 2020-04-24 Genentech Inc Antibody formulations
JP2016515132A (ja) 2013-03-14 2016-05-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｍｅｋ阻害剤化合物のｈｅｒ３／ｅｇｆｒ阻害剤化合物との組み合わせ及び使用方法
AU2014244424A1 (en) 2013-03-14 2015-08-27 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
HK1220916A1 (zh) 2013-03-14 2017-05-19 基因泰克公司 治疗癌症和预防癌症药物抗性的方法
RS57393B1 (sr) 2013-03-15 2018-09-28 Hoffmann La Roche Il-22 polipeptiidi i il-22 fuzioni proteini i metode za njihovu upotrebu
MX2015012326A (es) 2013-03-15 2016-03-08 Genentech Inc Anticuerpos anti-crth2 y su uso.
RU2015143437A (ru) 2013-03-15 2017-04-27 Дженентек, Инк. Способы лечения рака и предотвращения устойчивости к лекарственным препаратам для лечения рака
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
MX2015011444A (es) 2013-03-15 2015-12-16 Genentech Inc Composiciones y metodos para el diagnostico y tratamiento del cancer hepatico.
EP2970452A2 (en) 2013-03-15 2016-01-20 AC Immune S.A. Anti-tau antibodies and methods of use
CA2904448A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Tariq Ghayur Dual specific binding proteins directed against il-1.beta. and/or il-17
KR20210037745A (ko) 2013-03-15 2021-04-06 제넨테크, 인크. 항산화제를 함유하는 세포 배양 조성물 및 폴리펩티드 생산 방법
KR20150131269A (ko) 2013-03-15 2015-11-24 제넨테크, 인크. Pd-1 및 pd-l1 관련 상태를 치료하기 위한 바이오마커 및 방법
UA118028C2 (uk) 2013-04-03 2018-11-12 Рош Глікарт Аг Біспецифічне антитіло, специфічне щодо fap і dr5, антитіло, специфічне щодо dr5, і спосіб їх застосування
JP2016528167A (ja) 2013-04-29 2016-09-15 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ヒトＦｃＲｎ結合改変抗体及び使用方法
SG11201508910WA (en) 2013-04-29 2015-11-27 Hoffmann La Roche Fcrn-binding abolished anti-igf-1r antibodies and their use in the treatment of vascular eye diseases
CN105164157B (zh) 2013-04-29 2024-05-28 豪夫迈·罗氏有限公司 Fc-受体结合的修饰的非对称抗体及使用方法
IL242088B2 (en) 2013-05-20 2023-12-01 Genentech Inc Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
BR112015029754A2 (pt) 2013-05-31 2017-09-26 Genentech Inc anticorpos anti-teicoico da parede e conjugados
BR112015029838A2 (pt) 2013-05-31 2017-09-26 Genentech Inc anticorpos, composições, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira isolada, método de produção de anticorpos, composto, conjugado de anticorpo e antibiótico, processo de elaboração do composto, intermediário entre ligante e antibiótico, método de tratamento de infecções bacterianas e método de matar staphylococcus aureus
US10086054B2 (en) 2013-06-26 2018-10-02 Academia Sinica RM2 antigens and use thereof
US9981030B2 (en) 2013-06-27 2018-05-29 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
TW201534726A (zh) 2013-07-03 2015-09-16 Halozyme Inc 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途
CN105814074B (zh) 2013-07-18 2020-04-21 图鲁斯生物科学有限责任公司 具有超长互补决定区的人源化抗体
WO2015017146A2 (en) 2013-07-18 2015-02-05 Fabrus, Inc. Antibodies with ultralong complementarity determining regions
ME03476B (me) 2013-08-01 2020-01-20 Five Prime Therapeutics Inc Nefukozilisana anti-fgfr2iiib antitijela
MX2016001854A (es) 2013-08-12 2016-09-06 Genentech Inc Composiciones y metodo para tratar condiciones asociadas con el complemento.
WO2015035337A1 (en) 2013-09-06 2015-03-12 Academia Sinica HUMAN iNKT CELL ACTIVATION USING GLYCOLIPIDS WITH ALTERED GLYCOSYL GROUPS
KR20160055252A (ko) 2013-09-17 2016-05-17 제넨테크, 인크. 항-lgr5 항체의 사용 방법
CN103524621B (zh) * 2013-09-27 2015-04-01 北京济福霖生物技术有限公司 一种抗人cd20嵌合单克隆抗体
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
WO2015051214A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
ES2960807T3 (es) 2013-10-11 2024-03-06 Us Health Anticuerpos contra TEM8 y su uso
KR20160044060A (ko) 2013-10-11 2016-04-22 에프. 호프만-라 로슈 아게 다중특이적 도메인 교환된 통상의 가변 경쇄 항체
BR112016007635A2 (pt) 2013-10-11 2017-09-12 Genentech Inc inibidores de nsp4 e métodos de uso
WO2015058132A2 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Genentech, Inc. Anti-rspo antibodies and methods of use
BR112016008694A2 (pt) 2013-10-23 2017-10-03 Genentech Inc Métodos de previsão da reação de pacientes com asma, de previsão da capacidade de reação de pacientes com asma, de identificação de pacientes com asma, de tratamento de pacientes portadores de asma e de tratamento de asma, uso de um kit e kit
CN104623637A (zh) 2013-11-07 2015-05-20 健能隆医药技术（上海）有限公司 Il-22二聚体在制备静脉注射药物中的应用
SI3071597T1 (sl) 2013-11-21 2020-11-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti alfa-sinukleinska protitelesa in postopki uporabe
HRP20192052T1 (hr) 2013-12-09 2020-02-07 Allakos Inc. Protutijela anti-siglec-8 te njihovi postupci i uporabe
EP3461845B1 (en) 2013-12-13 2020-09-16 Genentech, Inc. Anti-cd33 antibodies and immunoconjugates
PE20210107A1 (es) 2013-12-17 2021-01-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd3 y metodos de uso
BR112016013963A2 (pt) 2013-12-17 2017-10-10 Genentech Inc terapia de combinação compreendendo agonistas de ligação de ox40 e antagonistas de ligação do eixo de pd-1
FI3083686T4 (fi) 2013-12-17 2023-05-09 Menetelmiä syöpien hoitamiseksi käyttäen pd-1-akselia sitovia antagonisteja ja taksaaneja
CA2933881A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and an anti-cd20 antibody
MX2016007208A (es) 2013-12-20 2016-07-21 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-tau(ps422) humanizados y metodos de uso.
TWI728373B (zh) 2013-12-23 2021-05-21 美商建南德克公司 抗體及使用方法
BR112016014945A2 (pt) 2014-01-03 2018-01-23 F. Hoffmann-La Roche Ag conjugado, formulação farmacêutica e uso
WO2015103549A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
EP3089758B1 (en) 2014-01-03 2021-01-27 F.Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked helicar-anti-helicar antibody conjugates and uses thereof
EP3089996B1 (en) 2014-01-03 2021-07-28 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles
BR112016015589A2 (pt) 2014-01-06 2017-10-31 Hoffmann La Roche módulos de trânsito monovalentes para a barreira hematoencefálica
EP3835318B1 (en) 2014-01-15 2025-10-29 F. Hoffmann-La Roche AG Fc-region variants with modified fcrn- and maintained protein a-binding properties
US9982041B2 (en) 2014-01-16 2018-05-29 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
AU2015209154A1 (en) 2014-01-24 2017-02-16 Genentech, Inc. Methods of using anti-STEAP1 antibodies and immunoconjugates
JP6655017B2 (ja) 2014-01-27 2020-02-26 モレキュラー テンプレーツ, インク.Molecular Templates, Inc. Ｍｈｃクラスｉエピトープ送達ポリペプチド
DK3102197T3 (en) 2014-02-04 2018-11-19 Genentech Inc Smoothened mutant and methods for its use
KR102476641B1 (ko) 2014-02-08 2022-12-09 제넨테크, 인크. 알츠하이머병의 치료 방법
EP3718563A1 (en) 2014-02-08 2020-10-07 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of treating alzheimer's disease
CA2936565C (en) 2014-02-12 2020-08-11 Genentech, Inc. Anti-jagged1 antibodies and methods of use
MX2016010729A (es) 2014-02-21 2016-10-26 Genentech Inc Anticuerpos biespecificos anti-il-13 / il-17 y sus usos.
TWI558399B (zh) 2014-02-26 2016-11-21 美國禮來大藥廠 癌症之組合療法
WO2015131155A1 (en) 2014-02-28 2015-09-03 Allakos Inc. Methods and compositions for treating siglec-8 associated diseases
TW201622744A (zh) 2014-03-04 2016-07-01 美國禮來大藥廠 癌症之組合療法
US11142584B2 (en) 2014-03-11 2021-10-12 Molecular Templates, Inc. CD20-binding proteins comprising Shiga toxin A subunit effector regions for inducing cellular internalization and methods using same
WO2015139046A1 (en) 2014-03-14 2015-09-17 Genentech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US20170107294A1 (en) 2014-03-21 2017-04-20 Nordlandssykehuset Hf Anti-cd14 antibodies and uses thereof
BR112016023417A2 (pt) 2014-03-21 2019-04-16 F. Hoffmann-La Roche Ag predição in vitro de meia-vida in vivo
CN107002119A (zh) 2014-03-24 2017-08-01 豪夫迈·罗氏有限公司 使用c‑met拮抗剂的癌症治疗及前者与hgf表达的关联
EP3129767B1 (en) 2014-03-27 2021-09-01 Academia Sinica Reactive labelling compounds and uses thereof
JP6588461B2 (ja) 2014-03-31 2019-10-09 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗血管新生剤及びｏｘ４０結合アゴニストを含む併用療法
PE20161571A1 (es) 2014-03-31 2017-02-07 Genentech Inc Anticuerpos anti-ox40 y metodos de uso
WO2015164615A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 University Of Oslo Anti-gluten antibodies and uses thereof
EP3145952A2 (en) 2014-05-22 2017-03-29 Genentech, Inc. Anti-gpc3 antibodies and immunoconjugates
KR20170005016A (ko) 2014-05-23 2017-01-11 제넨테크, 인크. MiT 바이오마커 및 그의 사용 방법
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
CA2950440A1 (en) 2014-05-27 2015-12-03 Academia Sinica Anti-her2 glycoantibodies and uses thereof
CN106573971A (zh) 2014-05-27 2017-04-19 中央研究院 抗cd20醣抗体及其用途
HUE054916T2 (hu) 2014-05-27 2021-10-28 Rhizen Pharmaceuticals S A PI3K delta szelektív gátló kristályos toszilát-sója gyógyszerkészítményekben történõ alkalmazásra
AU2015267051B2 (en) 2014-05-27 2022-03-17 Academia Sinica Fucosidase from bacteroides and methods using the same
CN106714829A (zh) 2014-05-28 2017-05-24 中央研究院 抗TNF‑α醣抗体及其用途
MX2016016233A (es) 2014-06-11 2017-03-31 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 y sus usos.
EP3137488B1 (en) 2014-06-11 2019-01-02 Molecular Templates, Inc. Protease-cleavage resistant, shiga toxin a subunit effector polypeptides and cell-targeting molecules comprising the same
JP2017517552A (ja) 2014-06-13 2017-06-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗癌剤耐性の治療及び防止方法
AR100978A1 (es) 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
CA2947504A1 (en) 2014-06-26 2015-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-brdu antibodies and methods of use
BR112017000497B1 (pt) 2014-07-11 2023-12-26 Ventana Medical Systems, Inc Anticorpo isolado, célula hospedeira procariótica, imunoconjugado e método de detecção da presença ou do nível de expressão de pd-l1
BR112017000130A2 (pt) 2014-07-11 2018-01-09 Genentech Inc método para atenuar a toxicidade associada à inibição da via de notch e método de tratamento do câncer
WO2016019969A1 (en) 2014-08-08 2016-02-11 Ludwig-Maximilians-Universität München Subcutaneously administered bispecific antibodies for use in the treatment of cancer
TWI805109B (zh) 2014-08-28 2023-06-11 美商奇諾治療有限公司 對cd19具專一性之抗體及嵌合抗原受體
RU2764074C2 (ru) 2014-08-28 2022-01-13 Байоатла, Ллк Условно активные химерные антигенные рецепторы для модифицированных т-клеток
WO2016037123A2 (en) 2014-09-05 2016-03-10 Opexa Therapeutics, Inc. Compositions and methods for treating b cell mediated autoimmune disorders
US9879042B2 (en) 2014-09-08 2018-01-30 Academia Sinica Human iNKT cell activation using glycolipids
EP3388449A3 (en) 2014-09-12 2018-10-24 F. Hoffmann-La Roche AG Cysteine engineered antibodies and conjugates
KR102508173B1 (ko) 2014-09-12 2023-03-10 제넨테크, 인크. 항-her2 항체 및 면역콘주게이트
US9751946B2 (en) 2014-09-12 2017-09-05 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and immunoconjugates
EP3191518B1 (en) 2014-09-12 2020-01-15 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
EP3193932B1 (en) 2014-09-15 2023-04-26 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody formulations
HK1243629A1 (zh) 2014-09-17 2018-07-20 基因泰克公司 包含抗her2抗体和吡咯并苯并二氮杂䓬的免疫缀合物
EP3689910A3 (en) 2014-09-23 2020-12-02 F. Hoffmann-La Roche AG Method of using anti-cd79b immunoconjugates
CN107074938A (zh) 2014-10-16 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 抗‑α‑突触核蛋白抗体和使用方法
WO2016070001A1 (en) 2014-10-31 2016-05-06 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind b7-h4
SG11201703521UA (en) 2014-11-03 2017-05-30 Genentech Inc Methods and biomarkers for predicting efficacy and evaluation of an ox40 agonist treatment
CA2966523A1 (en) 2014-11-03 2016-05-12 Genentech, Inc. Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof
KR20170080675A (ko) 2014-11-05 2017-07-10 제넨테크, 인크. 항-fgfr2/3 항체 및 이의 이용 방법
CN108064308B (zh) 2014-11-05 2023-06-09 豪夫迈·罗氏有限公司 细菌中产生双链蛋白的方法
RU2739500C2 (ru) 2014-11-05 2020-12-25 Дженентек, Инк. Способы получения двуцепочечных белков в бактериях
WO2016073157A1 (en) 2014-11-06 2016-05-12 Genentech, Inc. Anti-ang2 antibodies and methods of use thereof
HUE045466T2 (hu) 2014-11-06 2019-12-30 Hoffmann La Roche Fc-régió-variánsok módosított FcRn-kötéssel és alkalmazási eljárások
KR20170076697A (ko) 2014-11-06 2017-07-04 에프. 호프만-라 로슈 아게 개질된 FCRN-결합 특성 및 단백질 A-결합 특성을 가진 Fc-영역 변이체
KR20170072343A (ko) 2014-11-06 2017-06-26 제넨테크, 인크. Ox40 결합 효능제 및 tigit 억제제를 포함하는 병용 요법
MX2017006094A (es) 2014-11-10 2017-07-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-interleucina-33 y sus usos.
EP3552488A1 (en) 2014-11-10 2019-10-16 F. Hoffmann-La Roche AG Animal model for nephropathy and agents for treating the same
EP3875481B1 (en) 2014-11-14 2025-01-22 The U.S.A. as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
EP3221360A1 (en) 2014-11-17 2017-09-27 F. Hoffmann-La Roche AG Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
CN107108745B (zh) 2014-11-19 2021-01-12 基因泰克公司 抗bace1的抗体和其用于神经疾病免疫疗法的用途
JP6993228B2 (ja) 2014-11-19 2022-03-03 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗トランスフェリン受容体／抗ｂａｃｅ１多重特異性抗体および使用方法
US10508151B2 (en) 2014-11-19 2019-12-17 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
DK4141032T3 (da) 2014-11-20 2024-08-05 Hoffmann La Roche Kombinationsbehandling med T-celleaktiverende bispecifikke antigenbindende molekyler og PD-1-aksebindende antagonister
WO2016087416A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
CN107206102A (zh) 2014-12-03 2017-09-26 豪夫迈·罗氏有限公司 抗金黄色葡萄球菌抗体利福霉素缀合物及其用途
EP3226908A1 (en) 2014-12-03 2017-10-11 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-staphylococcus aureus antibody rifamycin conjugates and uses thereof
SG11201704449VA (en) 2014-12-05 2017-06-29 Genentech Inc ANTI-CD79b ANTIBODIES AND METHODS OF USE
EP3230317A2 (en) 2014-12-10 2017-10-18 F. Hoffmann-La Roche AG Blood brain barrier receptor antibodies and methods of use
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
AR103162A1 (es) 2014-12-19 2017-04-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpos anti-c5 y métodos para su uso
IL278014B2 (en) 2014-12-19 2023-10-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variable FC regions and methods of use
EP3233912B1 (en) 2014-12-19 2021-05-19 Regenesance B.V. Antibodies that bind human c6 and uses thereof
US20160200815A1 (en) 2015-01-05 2016-07-14 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies that inhibit tim-3:lilrb2 interactions and uses thereof
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
MX2017009254A (es) 2015-01-16 2017-10-12 Juno Therapeutics Inc Anticuerpos y receptores de antigeno quimerico especificos para ror1.
JP2018511557A (ja) 2015-01-22 2018-04-26 中外製薬株式会社 ２種以上の抗ｃ５抗体の組み合わせおよび使用方法
AU2015378564A1 (en) 2015-01-24 2017-07-13 Academia Sinica Novel glycan conjugates and methods of use thereof
KR102329836B1 (ko) * 2015-01-26 2021-11-19 셀렉티스 암 면역치료를 위한 항-CLL1 특이적 단일-체인 키메라 항원 수용체들(scCARS)
CA2975875A1 (en) 2015-02-04 2016-08-11 Genentech, Inc. Mutant smoothened and methods of using the same
WO2016126950A1 (en) 2015-02-05 2016-08-11 Molecular Templates, Inc. Multivalent cd20-binding molecules comprising shiga toxin a subunit effector regions and enriched compositions thereof
SG10201907215QA (en) 2015-02-05 2019-09-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antibodies Comprising An Ion Concentration Dependent Antigen-Binding Domain, Fc Region Variants, Il-8-Binding Antibodies, And Uses Therof
WO2016138160A1 (en) 2015-02-24 2016-09-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Middle east respiratory syndrome coronavirus immunogens, antibodies, and their use
CA2977285A1 (en) 2015-03-16 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods of detecting and quantifying il-13 and uses in diagnosing and treating th2-associated diseases
WO2016146833A1 (en) 2015-03-19 2016-09-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Biomarkers for nad(+)-diphthamide adp ribosyltransferase resistance
PT3271389T (pt) 2015-03-20 2020-05-13 Us Health Anticorpos neutralizantes dirigidos contra a gp120 e sua utilização
AU2016235362B2 (en) 2015-03-23 2021-12-16 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to ICOS
EP3628688A1 (en) 2015-03-23 2020-04-01 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Anti-ceacam6 antibodies and uses thereof
US10472412B2 (en) 2015-03-25 2019-11-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bispecific multivalent fusion proteins
RU2021124437A (ru) 2015-04-03 2021-09-29 Еурека Терапьютикс, Инк. Конструкции, направленные на комплексы пептида afp/mhc, и виды их использования
KR20180002653A (ko) 2015-04-07 2018-01-08 제넨테크, 인크. 효능작용 활성을 갖는 항원 결합 복합체 및 사용 방법
PT3283508T (pt) 2015-04-17 2021-06-21 Alpine Immune Sciences Inc Proteínas imuno modulatórias com afinidades afináveis
CN115932273A (zh) 2015-04-24 2023-04-07 豪夫迈·罗氏有限公司 鉴定包含结合多肽的细菌的方法
CN107709363A (zh) 2015-05-01 2018-02-16 基因泰克公司 掩蔽抗cd3抗体和使用方法
WO2016179194A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Jounce Therapeutics, Inc. Lilra3 and method of using the same
EP4238994A3 (en) 2015-05-11 2024-02-07 F. Hoffmann-La Roche AG Compositions and methods of treating lupus nephritis
RS61152B2 (sr) 2015-05-12 2024-06-28 Hoffmann La Roche Terapeutski i dijagnostički postupci za lečenje raka
CN107849148B (zh) 2015-05-21 2023-09-19 哈普恩治疗公司 三特异性结合蛋白质及使用方法
HK1248773A1 (zh) 2015-05-29 2018-10-19 豪夫迈‧罗氏有限公司 用於癌症的治疗和诊断方法
AU2016271142A1 (en) 2015-05-29 2017-11-23 Genentech, Inc. PD-L1 promoter methylation in cancer
WO2016196343A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Genentech, Inc. Humanized anti-ebola virus glycoprotein antibodies and methods of use
LT3303373T (lt) 2015-05-30 2020-07-10 Molecular Templates, Inc. Deimunizuoto shiga toksino a subvieneto karkasai ir juos apimančios ląstelės taikinio molekulės
JP2018516933A (ja) 2015-06-02 2018-06-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｉｌ−３４抗体を使用して神経学的疾患を治療するための組成物及び方法
WO2016196975A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The United States Of America, As Represented By The Secretary Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
EP4465050A3 (en) 2015-06-05 2025-06-11 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of use
JP2018521019A (ja) 2015-06-08 2018-08-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｏｘ４０抗体を使用して癌を治療する方法
JP2018518483A (ja) 2015-06-08 2018-07-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｏｘ４０抗体及びｐｄ−１軸結合アンタゴニストを使用して癌を治療する方法
JP2018524295A (ja) 2015-06-15 2018-08-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体及び免疫複合体
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
CN107849132B (zh) 2015-06-16 2022-03-08 豪夫迈·罗氏有限公司 人源化的和亲和力成熟的针对FcRH5的抗体和使用方法
EP3916018A1 (en) 2015-06-16 2021-12-01 Genentech, Inc. Anti-cd3 antibodies and methods of use
EP3310378B1 (en) 2015-06-16 2024-01-24 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-cll-1 antibodies and methods of use
JP2018524312A (ja) 2015-06-17 2018-08-30 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｈｅｒ２抗体及び使用方法
WO2016205567A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Allakos Inc. Methods and compositions for treating fibrotic diseases
IL256080B2 (en) 2015-06-17 2025-06-01 Genentech Inc Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
CN113929779B (zh) 2015-06-24 2025-02-25 豪夫迈·罗氏有限公司 人源化的抗-Tau(pS422)抗体和使用方法
EP3313890A1 (en) 2015-06-24 2018-05-02 H. Hoffnabb-La Roche Ag Trispecific antibodies specific for her2 and a blood brain barrier receptor and methods of use
UA123053C2 (uk) 2015-06-24 2021-02-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Антитіло до рецептора трансферину зі спеціально підібраною афінністю
EP3108897A1 (en) 2015-06-24 2016-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Antibodies against human csf-1r for use in inducing lymphocytosis in lymphomas or leukemias
EP3514174B1 (en) 2015-06-29 2021-03-31 Ventana Medical Systems, Inc. Materials and methods for performing histochemical assays for human pro-epiregulin and amphiregulin
CA2989936A1 (en) 2015-06-29 2017-01-05 Genentech, Inc. Type ii anti-cd20 antibody for use in organ transplantation
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
IL319047A (en) 2015-08-28 2025-04-01 Amunix Operating Inc Chimeric polypeptide composition and methods for its preparation and use
EP3932953A1 (en) 2015-08-28 2022-01-05 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-hypusine antibodies and uses thereof
MY203894A (en) 2015-09-18 2024-07-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Il-8-binding antibodies and uses thereof
JP6904947B2 (ja) 2015-09-22 2021-07-21 スプリング バイオサイエンス コーポレーション 抗ｏｘ４０抗体及びその診断用途
KR102725051B1 (ko) 2015-09-23 2024-11-04 제넨테크, 인크. 항-vegf 항체의 최적화된 변이체들
CN108289954B (zh) 2015-09-24 2022-05-31 阿布维特罗有限责任公司 Hiv抗体组合物和使用方法
KR20230125094A (ko) 2015-09-25 2023-08-28 제넨테크, 인크. 항-tigit 항체 및 이의 이용 방법
AR106188A1 (es) 2015-10-01 2017-12-20 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización
MA43345A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
MA43018B1 (fr) 2015-10-02 2021-11-30 Hoffmann La Roche Anticorps anti-pd1 et procédés d'utilisation
KR20180053674A (ko) 2015-10-02 2018-05-23 에프. 호프만-라 로슈 아게 공자극 tnf 수용체에 특이적인 이중특이성 항체
EP3150636A1 (en) 2015-10-02 2017-04-05 F. Hoffmann-La Roche AG Tetravalent multispecific antibodies
MA43023A (fr) 2015-10-02 2018-08-08 Hoffmann La Roche Anticorps de récepteur de la transferrine humaine/anti-humaine cd20 bispécifique et leurs procédés d'utilisation
RS62258B1 (sr) 2015-10-02 2021-09-30 Hoffmann La Roche Bispecifična antitela specifična za pd1 i tim3
HUE069935T2 (hu) 2015-10-06 2025-04-28 Hoffmann La Roche Módszer szklerózis multiplex kezelésére
WO2017062748A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Il-7r-alpha specific antibodies for treating acute lymphoblastic leukemia
EP3359568B1 (en) 2015-10-07 2022-03-09 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antibodies with tetravalency for a costimulatory tnf receptor
MA43354A (fr) 2015-10-16 2018-08-22 Genentech Inc Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré
MA45326A (fr) 2015-10-20 2018-08-29 Genentech Inc Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation
US10604577B2 (en) 2015-10-22 2020-03-31 Allakos Inc. Methods and compositions for treating systemic mastocytosis
KR20180066236A (ko) 2015-10-22 2018-06-18 조운스 테라퓨틱스, 인크. Icos 발현을 계측하기 위한 유전자 특질
JP6949016B2 (ja) 2015-10-29 2021-10-13 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 抗バリアントＦｃ領域抗体および使用法
EP3184547A1 (en) 2015-10-29 2017-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-tpbg antibodies and methods of use
WO2017075173A2 (en) 2015-10-30 2017-05-04 Genentech, Inc. Anti-factor d antibodies and conjugates
RU2750285C2 (ru) 2015-10-30 2021-06-25 Дженентек, Инк. АНТИТЕЛА ПРОТИВ НtrА1 И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
WO2017079479A1 (en) 2015-11-03 2017-05-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Neutralizing antibodies to hiv-1 gp41 and their use
CN108602884B (zh) 2015-11-08 2024-06-25 豪夫迈·罗氏有限公司 筛选多特异性抗体的方法
KR20250034528A (ko) 2015-11-23 2025-03-11 파이브 프라임 테라퓨틱스, 인크. 암 치료에서의 단독의, 또는 면역 자극제와 병용한, fgfr2 억제제
EP3178848A1 (en) 2015-12-09 2017-06-14 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody for reducing formation of anti-drug antibodies
KR102850929B1 (ko) 2015-12-09 2025-08-27 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-약물 항체의 형성을 감소시키기 위한 ii형 항-cd20 항체
CA3002422C (en) 2015-12-18 2024-04-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use
IL259256B2 (en) 2015-12-18 2023-02-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-c5 antibodies and methods of use
AU2016380988B2 (en) 2015-12-30 2022-07-21 Genentech, Inc. Formulations with reduced degradation of polysorbate
ES2837428T3 (es) 2016-01-08 2021-06-30 Hoffmann La Roche Procedimientos de tratamiento de cánceres positivos para CEA usando antagonistas de unión al eje PD-1 y anticuerpos biespecíficos anti-CEA/anti-CD3
CN114019170A (zh) 2016-01-20 2022-02-08 基因泰克公司 用于阿尔茨海默氏病的高剂量治疗
JP2019509721A (ja) 2016-02-04 2019-04-11 キュリス，インコーポレイテッド 突然変異体スムースンド及びその使用方法
KR102500659B1 (ko) 2016-02-29 2023-02-16 제넨테크, 인크. 암에 대한 치료 및 진단 방법
EP3423491A1 (en) 2016-03-01 2019-01-09 H. Hoffnabb-La Roche Ag Obinutuzumab variants having altered cell death induction
KR20180114210A (ko) 2016-03-08 2018-10-17 아카데미아 시니카 N-글리칸의 모듈 합성 방법 및 그의 어레이
EP3430054B1 (en) 2016-03-15 2021-12-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of treating cancers using pd-1 axis binding antagonists and anti-gpc3 antibodies
CN108700598A (zh) 2016-03-25 2018-10-23 豪夫迈·罗氏有限公司 多路总抗体和抗体缀合的药物量化测定法
WO2017172994A1 (en) 2016-03-29 2017-10-05 Geltor, Inc. Expression of proteins in gram-negative bacteria wherein the ratio of periplasmic volume to cytoplasmic volume is between 0.5:1 and 10:1
KR101796277B1 (ko) * 2016-04-12 2017-11-13 앱클론(주) 안정성이 개선된 ｈｅｒ２에 특이적으로 결합하는 항체
US20170319688A1 (en) 2016-04-14 2017-11-09 Genentech, Inc. Anti-rspo3 antibodies and methods of use
AU2017250358B2 (en) 2016-04-15 2023-06-01 Alpine Immune Sciences, Inc. ICOS ligand variant immunomodulatory proteins and uses thereof
EP3442562B1 (en) 2016-04-15 2022-09-21 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd An il-22 dimer for use in treating necrotizing enterocolitis
IL262366B2 (en) 2016-04-15 2024-07-01 Alpine Immune Sciences Inc Immunomodulatory proteins and CD80 variants and their uses
JP7503887B2 (ja) 2016-04-15 2024-06-21 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんを監視及び治療するための方法
CN109563164A (zh) 2016-04-15 2019-04-02 生物蛋白有限公司 抗axl抗体、抗体片段和它们的免疫缀合物以及其用途
CA3020718A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Genentech, Inc. Methods for monitoring and treating cancer
CR20180509A (es) 2016-05-02 2019-02-15 Hoffmann La Roche Contorsbody - un ligante de diana monocatenario
WO2017192589A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to influenza ha and their use and identification
JP7089483B2 (ja) 2016-05-11 2022-06-22 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 修飾された抗テネイシン抗体及び使用方法
TWI844509B (zh) 2016-05-13 2024-06-11 美商拜奧亞特拉公司 抗-ror2抗體、抗體片段、其免疫結合物及其用途
CN109152843A (zh) 2016-05-20 2019-01-04 豪夫迈·罗氏有限公司 Protac抗体缀合物及其使用方法
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
CN109640964A (zh) 2016-05-27 2019-04-16 Tg治疗有限公司 用于治疗B细胞增殖性紊乱的抗-CD20抗体、P13激酶-δ选择性抑制剂和BTK抑制剂的组合
CN109313200B (zh) 2016-05-27 2022-10-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于表征位点特异性抗体-药物缀合物的生物分析性方法
AU2018276419A1 (en) 2016-06-02 2019-10-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Type II anti-CD20 antibody and anti-CD20/CD3 bispecific antibody for treatment of cancer
EP3252078A1 (en) 2016-06-02 2017-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Type ii anti-cd20 antibody and anti-cd20/cd3 bispecific antibody for treatment of cancer
US10639378B2 (en) 2016-06-06 2020-05-05 Genentech, Inc. Silvestrol antibody-drug conjugates and methods of use
KR102376582B1 (ko) 2016-06-17 2022-03-18 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항-마이오스타틴 항체 및 사용 방법
WO2017223405A1 (en) 2016-06-24 2017-12-28 Genentech, Inc. Anti-polyubiquitin multispecific antibodies
JP6983824B2 (ja) 2016-07-04 2021-12-17 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft 新規抗体フォーマット
WO2018014260A1 (en) 2016-07-20 2018-01-25 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Multispecific antigen binding proteins and methods of use thereof
WO2018022945A1 (en) 2016-07-28 2018-02-01 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd112 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
US11471488B2 (en) 2016-07-28 2022-10-18 Alpine Immune Sciences, Inc. CD155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
EP3491013A1 (en) 2016-07-28 2019-06-05 Alpine Immune Sciences, Inc. Cd155 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
EP3490676A1 (en) 2016-07-29 2019-06-05 Eli Lilly and Company Combination therapy with merestinib and anti-pd-l1 or anti-pd-1 inhibitors for use in the treatment of cancer
CN109415444B (zh) 2016-07-29 2024-03-01 中外制药株式会社 显示增加的备选fviii辅因子功能活性的双特异性抗体
KR20230107408A (ko) 2016-07-29 2023-07-14 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 항-cd19 항체에 대한 항-이디오타입 항체
CN109689099B (zh) 2016-08-05 2023-02-28 中外制药株式会社 用于预防或治疗il-8相关疾病的组合物
JP2019530434A (ja) 2016-08-05 2019-10-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド アゴニスト活性を有する多価及び多重エピトープ抗体ならびに使用方法
JP7250674B2 (ja) 2016-08-08 2023-04-03 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんの治療及び診断方法
CN109689111B (zh) 2016-08-11 2024-04-05 基因泰克公司 吡咯并苯并二氮杂䓬前药及其抗体缀合物
US10538592B2 (en) 2016-08-22 2020-01-21 Cho Pharma, Inc. Antibodies, binding fragments, and methods of use
WO2018045379A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Composition and methods of treating b cell disorders
EP3510046A4 (en) 2016-09-07 2020-05-06 The Regents of the University of California ANTIBODIES AGAINST OXIDATION-SPECIFIC EPITOPES
KR20190068521A (ko) 2016-09-09 2019-06-18 티지 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 혈액암을 치료하기 위한 항-cd20 항체, pi3 키나아제-델타 억제제, 및 항-pd-1 또는 항-pd-l1 항체의 조합
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
CN116731197A (zh) 2016-09-19 2023-09-12 豪夫迈·罗氏有限公司 基于补体因子的亲和层析
HRP20231015T1 (hr) 2016-09-23 2023-12-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Upotreba antagonista il-13 u liječenju atopičnog dermatitisa
KR20190062505A (ko) 2016-10-03 2019-06-05 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Hpv-특이적 결합 분자
EP3522933B1 (en) 2016-10-05 2021-12-15 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for preparing antibody drug conjugates
MX2019003934A (es) 2016-10-06 2019-07-10 Genentech Inc Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer.
WO2018068201A1 (en) 2016-10-11 2018-04-19 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies and variants thereof against ctla-4
JP2019535250A (ja) 2016-10-29 2019-12-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｍｉｃ抗体及び使用方法
CN110392694B (zh) 2016-11-02 2023-08-04 震动疗法股份有限公司 针对pd-1的抗体及其用途
KR20210117359A (ko) * 2016-11-07 2021-09-28 더 위스타 인스티튜트 오브 아나토미 앤드 바이올로지 라임병에 사용하기 위한 dna 항체 작제물
CN109923128A (zh) 2016-11-15 2019-06-21 基因泰克公司 用于用抗cd20/抗cd3双特异性抗体进行治疗的给药
ES2866348T3 (es) 2016-11-16 2021-10-19 Lilly Co Eli Terapia de combinación para el cáncer con mutación o mutaciones de omisión del exón 14 o fenotipo de omisión del exón 14
TW201829463A (zh) 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
JOP20190100A1 (ar) 2016-11-19 2019-05-01 Potenza Therapeutics Inc بروتينات ربط مولد ضد مضاد لـ gitr وطرق استخدامها
WO2018091724A1 (en) 2016-11-21 2018-05-24 Cureab Gmbh Anti-gp73 antibodies and immunoconjugates
CN110248959B (zh) 2016-12-07 2023-06-30 基因泰克公司 抗tau抗体和使用方法
IL302130A (en) 2016-12-07 2023-06-01 Molecular Templates Inc Shiga toxin a subunit effector polypeptides, shiga toxin effector scaffolds, and cell-targeting molecules for site-specific conjugation
EP3551220B1 (en) 2016-12-07 2025-01-29 Genentech, Inc. Anti-tau antibodies and methods of use
EP3551663A1 (en) 2016-12-12 2019-10-16 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-pd-l1 antibodies and antiandrogens
JP7247091B2 (ja) 2016-12-20 2023-03-28 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３二重特異性抗体と４－１ｂｂ（ｃｄ１３７）アゴニストの併用療法
JOP20190134A1 (ar) 2016-12-23 2019-06-02 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لنيوروبيلين وطرق استخدامها
EP3565843A1 (en) 2017-01-03 2019-11-13 H. Hoffnabb-La Roche Ag Bispecific antigen binding molecules comprising anti-4-1bb clone 20h4.9
TW201825515A (zh) 2017-01-04 2018-07-16 美商伊繆諾金公司 Ｍｅｔ抗體以及其免疫結合物及用途
TW201831517A (zh) 2017-01-12 2018-09-01 美商優瑞科生物技術公司 靶向組織蛋白h3肽/mhc複合體之構築體及其用途
KR102590672B1 (ko) 2017-01-25 2023-10-18 몰레큘러 템플레이츠, 인코퍼레이션. 탈면역된 시가 독소 a 서브유닛 이펙터 및 cd8+ t-세포 에피토프를 포함하는 세포-표적화 분자
WO2018143266A1 (en) 2017-01-31 2018-08-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A pharmaceutical composition for use in the treatment or prevention of a c5-related disease and a method for treating or preventing a c5-related disease
EP3580235B1 (en) 2017-02-10 2024-05-01 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
TWI778018B (zh) 2017-02-10 2022-09-21 美商建南德克公司 抗類胰蛋白酶抗體、其組合物及其用途
ES2953595T3 (es) 2017-03-01 2023-11-14 Hoffmann La Roche Procedimientos diagnósticos y terapéuticos para el cáncer
US11732022B2 (en) 2017-03-16 2023-08-22 Alpine Immune Sciences, Inc. PD-L2 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
KR20250083578A (ko) 2017-03-16 2025-06-10 알파인 이뮨 사이언시즈, 인코포레이티드 Cd80 변이체 면역조절 단백질 및 그의 용도
HUE064136T2 (hu) 2017-03-16 2024-02-28 Alpine Immune Sciences Inc PD-L1 variáns immunmódosító fehérjék és alkalmazásuk
AR111249A1 (es) 2017-03-22 2019-06-19 Genentech Inc Composiciones de anticuerpo optimizadas para el tratamiento de trastornos oculares
PE20200152A1 (es) 2017-03-27 2020-01-17 Hoffmann La Roche Receptores de union a antigeno mejorados
KR20190133162A (ko) 2017-03-28 2019-12-02 제넨테크, 인크. 신경퇴행성 질병의 치료 방법
JP7205995B2 (ja) 2017-03-29 2023-01-17 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 共刺激性ｔｎｆ受容体に対する二重特異性抗原結合分子
JP7196094B2 (ja) 2017-03-29 2022-12-26 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 共刺激ｔｎｆ受容体のための二重特異性抗原結合分子
JOP20190203A1 (ar) 2017-03-30 2019-09-03 Potenza Therapeutics Inc بروتينات رابطة لمولد ضد مضادة لـ tigit وطرق استخدامها
AU2018247767B2 (en) 2017-04-03 2025-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to STEAP-1
EP3606956B1 (en) 2017-04-04 2024-07-31 F. Hoffmann-La Roche AG Novel bispecific antigen binding molecules capable of specific binding to cd40 and to fap
US11285207B2 (en) 2017-04-05 2022-03-29 Hoffmann-La Roche Inc. Bispecific antibodies specifically binding to PD1 and LAG3
TWI707871B (zh) 2017-04-05 2020-10-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗lag3抗體
JP2020516253A (ja) 2017-04-14 2020-06-11 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんのための診断及び治療方法
JP7248588B2 (ja) 2017-04-21 2023-03-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 疾患の治療のためのｋｌｋ５アンタゴニストの使用
AU2018258049B2 (en) 2017-04-26 2025-03-27 Eureka Therapeutics, Inc. Constructs specifically recognizing glypican 3 and uses thereof
KR102769634B1 (ko) 2017-04-27 2025-02-19 테사로, 인코포레이티드 림프구 활성화 유전자-3 (lag-3)에 대한 항체 작용제 및 그의 용도
EA201992626A1 (ru) 2017-05-05 2020-04-24 Аллакос Инк. Способы и композиции для лечения аллергических заболеваний глаз
CN113896792B (zh) 2017-05-12 2025-08-22 哈普恩治疗公司 间皮素结合蛋白质
PT3624837T (pt) 2017-05-16 2025-10-01 Five Prime Therapeutics Inc Anticorpos anti-fgfr2 em combinação com agentes quimioterapêuticos no tratamento do cancro
EA201992502A1 (ru) 2017-06-20 2020-04-22 Эмджен Инк. Способ лечения или уменьшения интенсивности метаболических нарушений с применением белков, связывающих рецептор гастроингибиторного пептида (gipr), в комбинации с агонистами glp-1
IL271888B2 (en) 2017-07-21 2024-09-01 Genentech Inc Therapeutic and diagnostic methods for cancer
CN110869391A (zh) 2017-07-26 2020-03-06 豪夫迈·罗氏有限公司 用BET抑制剂,Bcl-2抑制剂和抗CD20抗体的组合疗法
CN111448210B (zh) 2017-07-26 2024-05-14 四十七公司 抗SIRP-α抗体及相关方法
WO2019036855A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Adagene Inc. Anti-cd137 molecules and use thereof
US20200216542A1 (en) 2017-09-20 2020-07-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Dosage regimen for combination therapy using pd-1 axis binding antagonists and gpc3 targeting agent
US11180541B2 (en) 2017-09-28 2021-11-23 Geltor, Inc. Recombinant collagen and elastin molecules and uses thereof
CA3071236A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Multispecific antigen-binding molecule having blood coagulation factor viii (fviii) cofactor function-substituting activity, and pharmaceutical formulation containing said molecule as active ingredient
EP3692063A1 (en) 2017-10-03 2020-08-12 Juno Therapeutics, Inc. Hpv-specific binding molecules
CA3077509A1 (en) 2017-10-10 2019-04-18 Alpine Immune Sciences, Inc. Ctla-4 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
CN111372950B (zh) 2017-10-12 2024-11-05 免疫苏醒公司 Vegfr-抗体轻链融合蛋白
KR102425983B1 (ko) 2017-10-13 2022-07-29 하푼 테라퓨틱스, 인크. 삼중특이적 단백질 및 사용 방법
IL315737A (en) 2017-10-13 2024-11-01 Harpoon Therapeutics Inc B-cell maturation antigen-binding proteins
BR112020007586A2 (pt) 2017-10-17 2020-09-24 Rhizen Pharmaceuticals Sa moduladores de canal de crac para tratar câncer esofágico
IL320945A (en) 2017-10-18 2025-07-01 Alpine Immune Sciences Inc Immunomodulatory proteins, ligands for ICOs, and compositions and methods related thereto
EP3697441B1 (en) 2017-10-20 2023-06-07 F. Hoffmann-La Roche AG Method for generating multispecific antibodies from monospecific antibodies
WO2019082124A1 (en) 2017-10-26 2019-05-02 Rhizen Pharmaceuticals Sa COMPOSITION AND METHOD FOR THE TREATMENT OF LARGE B-CELL DIFFUSED LYMPHOMA
CA3078676A1 (en) 2017-10-30 2019-05-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for in vivo generation of multispecific antibodies from monospecific antibodies
KR20200079256A (ko) 2017-10-30 2020-07-02 리젠 파마슈티컬스 소시에떼 아노님 혈액암 및 고형암을 치료하기 위한 칼슘 방출-활성화된 칼슘 채널 조절제
KR20200074997A (ko) 2017-11-01 2020-06-25 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 B-세포 성숙 항원에 특이적인 항체 및 키메릭 항원 수용체
CA3077664A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
EP4640703A2 (en) 2017-11-14 2025-10-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-c1s antibodies and methods of use
JP7391839B2 (ja) 2017-12-01 2023-12-05 ファイザー・インク 抗ｃｘｃｒ５抗体、その組成物及びその使用
JP2021505571A (ja) 2017-12-06 2021-02-18 ルヒゼン ファーマスティカルズ エスエー 末梢ｔ細胞リンパ腫および皮膚ｔ細胞リンパ腫を治療するための組成物および方法
EP3723799A1 (en) 2017-12-14 2020-10-21 H. Hoffnabb-La Roche Ag Use of a cea cd3 bispecific antibody and a pd-1 axis binding antagonist in a dosage regime to treat cancer
CN112204048A (zh) 2017-12-15 2021-01-08 朱诺治疗学股份有限公司 抗cct5结合分子及其使用方法
WO2019122052A2 (en) 2017-12-21 2019-06-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a2/wt1
CN111699196A (zh) 2017-12-22 2020-09-22 震动疗法公司 针对lilrb2的抗体
WO2019126472A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Genentech, Inc. Use of pilra binding agents for treatment of a disease
JP7383617B2 (ja) 2017-12-28 2023-11-20 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｐｄ－ｌ１に対する抗体及びそのバリアント
JP7369127B2 (ja) 2017-12-28 2023-10-25 ナンジン レジェンド バイオテック カンパニー，リミテッド Ｔｉｇｉｔに対する単一ドメイン抗体及びその変異体
EP3731865A1 (en) 2017-12-29 2020-11-04 F. Hoffmann-La Roche AG Method for improving vegf-receptor blocking selectivity of an anti-vegf antibody
WO2019136029A1 (en) 2018-01-02 2019-07-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
AU2019205273B2 (en) 2018-01-03 2024-04-04 Alpine Immune Sciences, Inc. Multi-domain immunomodulatory proteins and methods of use thereof
KR20200118029A (ko) 2018-01-04 2020-10-14 아이코닉 테라퓨틱스, 인코포레이티드 항-조직 인자 항체, 항체-약물 결합체, 및 관련 방법
CA3086879A1 (en) 2018-01-05 2019-07-11 Ac Immune Sa Misfolded tdp-43 binding molecules
WO2019139987A1 (en) 2018-01-09 2019-07-18 Elstar Therapeutics, Inc. Calreticulin binding constructs and engineered t cells for the treatment of diseases
KR20250114571A (ko) 2018-01-15 2025-07-29 난징 레전드 바이오테크 씨오., 엘티디. Pd-1에 대한 단일-도메인 항체 및 이의 변이체
WO2019143636A1 (en) 2018-01-16 2019-07-25 Lakepharma, Inc. Bispecific antibody that binds cd3 and another target
AR114565A1 (es) 2018-01-26 2020-09-23 Genentech Inc Proteínas de fusión fc il-22 y métodos de uso
CA3088763A1 (en) 2018-01-26 2019-08-01 Genentech, Inc. Compositions and methods of use
CA3081125C (en) 2018-02-01 2025-09-16 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. All-Human Single-Chain Variable Fragment Anti-Antigen for B Lymphocyte Maturation (BCMA), and Associated Application
WO2019148445A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Adagene Inc. Precision/context-dependent activatable antibodies, and methods of making and using the same
CN118772288A (zh) 2018-02-08 2024-10-15 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗原结合分子和使用方法
TWI829667B (zh) 2018-02-09 2024-01-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 結合gprc5d之抗體
WO2019157358A1 (en) 2018-02-09 2019-08-15 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for mast cell-mediated inflammatory diseases
CA3091646A1 (en) 2018-02-14 2019-08-22 Abba Therapeutics Ag Anti-human pd-l2 antibodies
RU2020128111A (ru) 2018-02-21 2022-03-21 Дженентек, Инк. ВЕДЕНИЕ БЕЛКОВ СЛИЯНИЯ IL-22 Fc ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ
WO2019165122A1 (en) 2018-02-21 2019-08-29 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
CA3092108A1 (en) 2018-02-26 2019-08-29 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
MX2020009468A (es) 2018-03-13 2020-10-22 Hoffmann La Roche Terapias de combinacion de agonistas de 4-1bb con anticuerpos anti-cd20.
US12152073B2 (en) 2018-03-14 2024-11-26 Marengo Therapeutics, Inc. Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof
US20200040103A1 (en) 2018-03-14 2020-02-06 Genentech, Inc. Anti-klk5 antibodies and methods of use
TW202003562A (zh) 2018-03-14 2020-01-16 中國大陸商北京軒義醫藥科技有限公司 抗密連蛋白18.2(cldn18.2)抗體
TWI887899B (zh) 2018-03-15 2025-06-21 日商中外製藥股份有限公司 對茲卡病毒具有交叉反應性的抗登革病毒抗體之用途
JP2021519073A (ja) 2018-03-29 2021-08-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 哺乳動物細胞におけるラクトジェニック活性の制御
US11958903B2 (en) 2018-03-30 2024-04-16 Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. Single-domain antibodies against LAG-3 and uses thereof
TW202011029A (zh) 2018-04-04 2020-03-16 美商建南德克公司 偵測及定量fgf21之方法
KR102764123B1 (ko) 2018-04-05 2025-02-05 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Τ 세포 수용체 및 이를 발현하는 조작된 세포
CN110612117B (zh) 2018-04-17 2024-04-12 分子模板公司 包含去免疫化的志贺毒素a亚基支架的her2靶向分子
AR114789A1 (es) 2018-04-18 2020-10-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de los mismos
AR115052A1 (es) 2018-04-18 2020-11-25 Hoffmann La Roche Anticuerpos multiespecíficos y utilización de los mismos
CN110464842B (zh) 2018-05-11 2022-10-14 信达生物制药(苏州)有限公司 包含抗pcsk9抗体的制剂及其用途
JP7460609B2 (ja) 2018-05-14 2024-04-02 ウェアウルフ セラピューティクス， インコーポレイテッド 活性化可能なインターロイキン－２ポリペプチド及びその使用方法
SG11202011308VA (en) 2018-05-14 2020-12-30 Werewolf Therapeutics Inc Activatable cytokine polypeptides and methods of use thereof
WO2019228514A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and uses thereof for treating disease or condition
WO2019227490A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and methods for imaging
EP3805400A4 (en) 2018-06-04 2022-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule showing changed half-life in cytoplasm
TWI851577B (zh) 2018-06-07 2024-08-11 美商思進公司 喜樹鹼結合物
US12065476B2 (en) 2018-06-15 2024-08-20 Alpine Immune Sciences, Inc. PD-1 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
SG11202012342WA (en) 2018-06-18 2021-01-28 Eureka Therapeutics Inc Constructs targeting prostate-specific membrane antigen (psma) and uses thereof
AU2019288728A1 (en) 2018-06-23 2021-01-14 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor
CN112955465A (zh) 2018-07-03 2021-06-11 马伦戈治疗公司 抗tcr抗体分子及其用途
CN112424228B (zh) 2018-07-04 2024-08-09 豪夫迈·罗氏有限公司 新型双特异性激动性4-1bb抗原结合分子
EP3820475A4 (en) 2018-07-09 2022-04-13 Takeda Pharmaceutical Company Limited Administration of sumo-activating enzyme inhibitor and anti-cd20 antibodies
WO2020014306A1 (en) 2018-07-10 2020-01-16 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
TW202011991A (zh) 2018-07-18 2020-04-01 美商建南德克公司 用pd-1軸結合拮抗劑、抗代謝劑及鉑劑治療肺癌之方法
MX2021000745A (es) 2018-07-20 2021-03-26 Surface Oncology Inc Composiciones anti-cd112r y metodos.
CA3107618A1 (en) 2018-08-01 2020-02-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A pharmaceutical composition for use in the treatment or prevention of a c5-related disease and a method for treating or preventing a c5-related disease
CN113286824A (zh) 2018-08-03 2021-08-20 中外制药株式会社 包含两个彼此连接的抗原结合结构域的抗原结合分子
US12172106B2 (en) 2018-08-09 2024-12-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for assessing binding affinity of an antibody variant to the neonatal Fc receptor
MX2021001431A (es) 2018-08-10 2021-05-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molecula de union al antigeno anti grupo de diferenciacion 137 (cd137) y su uso.
TW202021618A (zh) 2018-08-17 2020-06-16 美商２３與我有限公司 抗ｉｌ１ｒａｐ抗體及其使用方法
CN112584863B (zh) 2018-08-17 2025-10-28 Ab工作室有限公司 催化抗体和其使用方法
GB201814281D0 (en) 2018-09-03 2018-10-17 Femtogenix Ltd Cytotoxic agents
CN112673022B (zh) 2018-09-10 2024-07-09 南京传奇生物科技有限公司 针对cd33的单结构域抗体及其构建体
JP2022501361A (ja) 2018-09-19 2022-01-06 アルパイン イミューン サイエンシズ インコーポレイテッド バリアントｃｄ８０融合タンパク質および関連構築物の方法および使用
CN112955747A (zh) 2018-09-19 2021-06-11 豪夫迈·罗氏有限公司 膀胱癌的治疗和诊断方法
ES2955032T3 (es) 2018-09-21 2023-11-28 Hoffmann La Roche Métodos de diagnóstico para el cáncer de mama triple negativo
US12195544B2 (en) 2018-09-21 2025-01-14 Harpoon Therapeutics, Inc. EGFR binding proteins and methods of use
IL281683B2 (en) 2018-09-25 2023-04-01 Harpoon Therapeutics Inc dll3 binding proteins and methods of use
US20220002370A1 (en) 2018-09-27 2022-01-06 Xilio Development, Inc. Masked cytokine polypeptides
EP3861025A1 (en) 2018-10-01 2021-08-11 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antigen binding molecules with trivalent binding to cd40
EP3861026A1 (en) 2018-10-01 2021-08-11 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific antigen binding molecules comprising anti-fap clone 212
US20220010020A1 (en) 2018-10-05 2022-01-13 Five Prime Therapeutics, Inc. Anti-FGFR2 Antibody Formulations
EP3868784A4 (en) 2018-10-15 2022-07-27 Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University ANTIBODIES WITH INCREASED PRODUCTIVITY AND METHODS FOR THEIR PRODUCTION
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
AU2019361983A1 (en) 2018-10-18 2021-05-20 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for sarcomatoid kidney cancer
RU2724469C2 (ru) 2018-10-31 2020-06-23 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Моноклональное антитело, которое специфически связывается с cd20
US20210395390A1 (en) 2018-10-31 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft Reversal agents for neutralizing the therapeutic activity of anti-fxia antibodies
WO2020096959A1 (en) 2018-11-05 2020-05-14 Genentech, Inc. Methods of producing two chain proteins in prokaryotic host cells
EP4640698A2 (en) 2018-11-16 2025-10-29 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies to mucin-16 and methods of use thereof
US12098195B2 (en) 2018-11-27 2024-09-24 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-IL-23p19 antibody and use thereof in treating diseases
CA3120729A1 (en) 2018-11-27 2020-06-04 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing granulocyte-macrophage colony stimulating factor receptor alpha and uses thereof
AU2019389151B2 (en) 2018-11-30 2025-07-24 Alpine Immune Sciences, Inc. CD86 variant immunomodulatory proteins and uses thereof
EP4198057A1 (en) 2018-12-05 2023-06-21 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic methods and compositions for cancer immunotherapy
WO2020117257A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Genentech, Inc. Combination therapy of diffuse large b-cell lymphoma comprising an anti-cd79b immunoconjugates, an alkylating agent and an anti-cd20 antibody
JP2022513198A (ja) 2018-12-10 2022-02-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｆｃ含有タンパク質への部位特異的コンジュゲーションのための光架橋性ペプチド
WO2020132230A2 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Genentech, Inc. Modified antibody fcs and methods of use
AR117327A1 (es) 2018-12-20 2021-07-28 23Andme Inc Anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
WO2020132214A2 (en) 2018-12-20 2020-06-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Ebola virus glycoprotein-specific monoclonal antibodies and uses thereof
CN119708247A (zh) 2018-12-21 2025-03-28 豪夫迈·罗氏有限公司 与VEGF和IL-1β结合的抗体及其使用方法
JP7560459B2 (ja) 2018-12-21 2024-10-02 ジェネンテック， インコーポレイテッド アポトーシスに耐性のある細胞株を使用してポリペプチドを生成する方法
SG11202106100VA (en) 2018-12-21 2021-07-29 23Andme Inc Anti-il-36 antibodies and methods of use thereof
PE20211603A1 (es) 2018-12-21 2021-08-18 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3
KR20210142594A (ko) 2018-12-26 2021-11-25 시티 오브 호프 활성화 가능한 차폐된 항-ctla4 결합 단백질
CN113272327A (zh) 2018-12-30 2021-08-17 豪夫迈·罗氏有限公司 抗兔cd19抗体及其使用方法
JP2022518399A (ja) 2019-01-14 2022-03-15 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｐｄ－１軸結合アンタゴニスト及びｒｎａワクチンを用いてがんを処置する方法
EP3911675A1 (en) 2019-01-17 2021-11-24 Bayer Aktiengesellschaft Methods to determine whether a subject is suitable of being treated with an agonist of soluble guanylyl cyclase (sgc)
CN119490582A (zh) 2019-01-22 2025-02-21 豪夫迈·罗氏有限公司 免疫球蛋白a抗体以及制备和使用方法
CN113795511B (zh) 2019-01-23 2024-07-23 大有华夏生物医药集团有限公司 抗pd-l1双抗体及其用途
CN120248098A (zh) 2019-01-23 2025-07-04 豪夫迈·罗氏有限公司 在真核宿主细胞中产生多聚体蛋白质的方法
WO2020153467A1 (ja) 2019-01-24 2020-07-30 中外製薬株式会社 新規がん抗原及びそれらの抗原に対する抗体
GB201901197D0 (en) 2019-01-29 2019-03-20 Femtogenix Ltd G-A Crosslinking cytotoxic agents
WO2020160050A1 (en) 2019-01-29 2020-08-06 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for receptor tyrosine kinase like orphan receptor 1 (ror1)
CN119661722A (zh) 2019-02-21 2025-03-21 马伦戈治疗公司 结合t细胞相关癌细胞的多功能分子及其用途
CN119039441A (zh) 2019-02-21 2024-11-29 马伦戈治疗公司 与nkp30结合的抗体分子及其用途
JP2022521773A (ja) 2019-02-27 2022-04-12 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｔｉｇｉｔ抗体と抗ｃｄ２０抗体又は抗ｃｄ３８抗体とによる処置のための投薬
JP2022522007A (ja) 2019-02-27 2022-04-13 アンジーエックス・インコーポレーテッド 抗ｔｍ４ｓｆ１抗体を含む抗体薬物コンジュゲートおよびそれを使用する方法
EP3935385A1 (en) 2019-03-08 2022-01-12 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for detecting and quantifying membrane-associated proteins on extracellular vesicles
CR20210467A (es) 2019-03-14 2021-10-07 Genentech Inc Tratamiento de cáncer con anticuerpos biespecíficos contra her2xcd3 en combinación con mab anti-her2
WO2020205716A1 (en) 2019-04-01 2020-10-08 Genentech, Inc. Compositions and methods for stabilizing protein-containing formulations
WO2020210440A1 (en) 2019-04-12 2020-10-15 Geltor, Inc. Recombinant elastin and production thereof
WO2020214867A1 (en) 2019-04-17 2020-10-22 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods and uses of variant icos ligand (icosl) fusion proteins
KR20210154179A (ko) 2019-04-18 2021-12-20 에이씨 이뮨 에스.에이. 치료 및 진단용 신규한 분자
AU2020257748A1 (en) 2019-04-19 2021-11-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chimeric receptor recognizing modification site of antibody
BR112021020867A2 (pt) 2019-04-19 2022-01-04 Genentech Inc Anticorpos, ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, usos do anticorpo, método de tratamento de um indivíduo com câncer e método para reduzir a depuração
KR20220004744A (ko) 2019-05-03 2022-01-11 제넨테크, 인크. 항-pd-l1 항체를 이용하여 암을 치료하는 방법
EP3962523A2 (en) 2019-05-03 2022-03-09 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
EP3968993A1 (en) 2019-05-14 2022-03-23 F. Hoffmann-La Roche AG Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat follicular lymphoma
EP3969035A4 (en) 2019-05-14 2023-06-21 Werewolf Therapeutics, Inc. SEPARATION UNITS AND METHODS AND THEIR USE
US20230085439A1 (en) 2019-05-21 2023-03-16 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Antibodies that bind human metapneumovirus fusion protein and their use
MX2021014274A (es) 2019-05-23 2022-01-06 Ac Immune Sa Moleculas de union anti-tdp-43 y usos de las mismas.
EP3981429A4 (en) 2019-06-10 2023-07-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-t cell antigen-binding molecule to be used in combination with cytokine inhibitor
JP2022539589A (ja) 2019-07-02 2022-09-12 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ アズ リプリゼンテッド バイ ザ セクレタリー、デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ ＥＧＦＲｖＩＩＩと結合するモノクローナル抗体およびその使用
AU2020311511B2 (en) 2019-07-09 2024-08-29 Beijing Solobio Genetechnology Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing Pseudomonas PcrV and uses thereof
AR119382A1 (es) 2019-07-12 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos de pre-direccionamiento y métodos de uso
EP3998083A4 (en) 2019-07-12 2023-08-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-mutation type fgfr3 antibody and use therefor
AR119393A1 (es) 2019-07-15 2021-12-15 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a nkg2d
KR20240033090A (ko) 2019-07-31 2024-03-12 에프. 호프만-라 로슈 아게 항-c5 항체 크로발리맙의 사용에 의한 c5-관련 질병의 치료 또는 예방을 위한 투여량 및 투여 섭생
AU2020319677A1 (en) 2019-07-31 2022-01-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Dosage and administration regimen for the treatment or prevention of C5-related diseases by the use of the anti-C5 antibody Crovalimab
JP2022543551A (ja) 2019-07-31 2022-10-13 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｇｐｒｃ５ｄに結合する抗体
PE20220394A1 (es) 2019-07-31 2022-03-18 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se fijan a gprc5d
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
TWI832183B (zh) 2019-08-06 2024-02-11 香港商新旭生技股份有限公司 結合至病理性tau種類之抗體及其用途
MX2022002963A (es) 2019-09-12 2022-04-06 Genentech Inc Composiciones y metodos para tratar nefritis lupica.
TW202124442A (zh) * 2019-09-13 2021-07-01 大陸商北京軒義醫藥科技有限公司 人源化抗ｃｌｄｎ１８．２抗體、編碼其的核酸分子、其產生方法、包含其的組合物、試劑盒及其用途
AU2020349509A1 (en) 2019-09-18 2022-03-31 Genentech, Inc. Anti-KLK7 antibodies, anti-KLK5 antibodies, multispecific anti-KLK5/KLK7 antibodies, and methods of use
US20220348687A1 (en) 2019-09-20 2022-11-03 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
CR20220127A (es) 2019-09-27 2022-05-27 Genentech Inc Administración de dosis para tratamiento con anticuerpos antagonistas anti-tigit y anti-pd-l1
EP4034160A1 (en) 2019-09-27 2022-08-03 Janssen Biotech, Inc. Anti-ceacam antibodies and uses thereof
EP4025250A4 (en) * 2019-10-12 2024-01-17 Bio-Thera Solutions, Ltd. FORMULATION OF ANTI-CD20 ANTIBODIES AND USE OF ANTI-CD20 ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF CD20-POSITIVE DISEASES
CA3153880A1 (en) 2019-10-18 2020-06-09 Juana Elva HERNANDEZ MONTALVO Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
JP2023501912A (ja) 2019-10-21 2023-01-20 ライゼン ファーマシューティカルズ アーゲー 急性骨髄性白血病の治療のためのｄｈｏｄｈ阻害剤を含む組成物
US20220389103A1 (en) 2019-11-06 2022-12-08 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for treatment of hematologic cancers
EP4058593A4 (en) 2019-11-12 2023-11-15 Foundation Medicine, Inc. METHOD FOR DETECTING A FUSION GENE CODING A NEOANTIGEN
MX2022005666A (es) 2019-11-14 2022-10-07 Werewolf Therapeutics Inc Polipeptidos de citocina activables y metodos de uso de los mismos.
AU2020394842A1 (en) 2019-12-04 2022-06-30 Ac Immune Sa Novel molecules for therapy and diagnosis
JP2023504740A (ja) 2019-12-06 2023-02-06 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド Ｂｃｍａ標的結合ドメインに対する抗イディオタイプ抗体ならびに関連する組成物および方法
US20230192869A1 (en) 2019-12-06 2023-06-22 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to gprc5d-targeted binding domains and related compositions and methods
KR20220113790A (ko) 2019-12-13 2022-08-16 제넨테크, 인크. 항-ly6g6d 항체 및 사용 방법
MX2022007635A (es) 2019-12-18 2022-07-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a hla-a2/mage-a4.
CN113045655A (zh) 2019-12-27 2021-06-29 高诚生物医药(香港)有限公司 抗ox40抗体及其用途
IL294226B2 (en) 2019-12-27 2025-05-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-CTLA-4 antibodies and their use
GB2609554B (en) 2020-01-03 2025-08-20 Marengo Therapeutics Inc Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
CN114929278A (zh) 2020-01-06 2022-08-19 瓦西尼斯公司 抗ccr8抗体及其用途
CN110818795B (zh) 2020-01-10 2020-04-24 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗tigit抗体和使用方法
WO2022050954A1 (en) 2020-09-04 2022-03-10 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
CA3165319A1 (en) 2020-01-31 2021-08-05 Vincent K. Tuohy Anti-mullerian hormone receptor 2 antibodies and methods of use
BR112022015077A2 (pt) 2020-01-31 2022-10-04 Genentech Inc Métodos para induzir células t cd8+ específicas de neoepítopos em um indivíduo com um tumor e para induzir o tráfico de células t cd8+, vacinas de rna, vacina de rna para uso e antagonistas de ligação
TWI895351B (zh) 2020-02-12 2025-09-01 日商中外製藥股份有限公司 用於癌症之治療的抗cd137抗原結合分子
MX2022009947A (es) 2020-02-14 2022-11-07 Jounce Therapeutics Inc Anticuerpos y proteinas de fusion que se unen a ccr8 y usos de estos.
US20230348568A1 (en) 2020-02-20 2023-11-02 The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Epstein-barr virus monoclonal antibodies and uses thereof
CN115066440A (zh) 2020-02-28 2022-09-16 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 抗cd137构建体及其用途
KR20220145859A (ko) 2020-02-28 2022-10-31 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항cd137 작제물, 다중 특이적 항체 및 그 용도
EP4114445A1 (en) 2020-03-06 2023-01-11 Ona Therapeutics S.L. Anti-cd36 antibodies and their use to treat cancer
EP4118114A1 (en) 2020-03-13 2023-01-18 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
US11919948B2 (en) 2020-03-19 2024-03-05 Genentech, Inc. Isoform-selective anti-TGFβ antibodies and methods of use
PE20230414A1 (es) 2020-03-24 2023-03-07 Genentech Inc Agentes de fijacion a tie2 y metodos de uso
CA3169908A1 (en) 2020-03-26 2021-09-30 Genentech, Inc. Modified mammalian cells having reduced host cell proteins
EP4126940A1 (en) 2020-03-30 2023-02-08 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody that binds to vegf and pdgf-b and methods of use
AR121706A1 (es) 2020-04-01 2022-06-29 Hoffmann La Roche Moléculas de unión a antígeno biespecíficas dirigidas a ox40 y fap
WO2021202959A1 (en) 2020-04-03 2021-10-07 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for cancer
WO2021207662A1 (en) 2020-04-10 2021-10-14 Genentech, Inc. Use of il-22fc for the treatment or prevention of pneumonia, acute respiratory distress syndrome, or cytokine release syndrome
CR20220531A (es) 2020-04-24 2022-11-28 Hoffmann La Roche Modulacion de enzimas y vías con compuestos de sulfhidrilo y sus derivados
IL297541A (en) 2020-04-24 2022-12-01 Genentech Inc Methods for using anti-cd79b immunoconjugates
CA3172880A1 (en) 2020-04-27 2021-11-04 Sotirios Tsimikas Isoform-independent antibodies to lipoprotein(a)
EP4143345A1 (en) 2020-04-28 2023-03-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy
IL297830A (en) 2020-05-03 2023-01-01 Levena Suzhou Biopharma Co Ltd Antibody-drug conjugates (adcs) comprising an anti-trop-2 antibody, compositions comprising such adcs, as well as methods of making and using the same
PE20230494A1 (es) 2020-05-08 2023-03-23 Alpine Immune Sciences Inc Proteinas inmunomoduladoras inhibidoras de april y baff y metodos de uso de las mismas
JP2023525085A (ja) 2020-05-13 2023-06-14 アダジーン アーゲー がんを治療するための組成物および方法
WO2021238886A1 (en) 2020-05-27 2021-12-02 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing nerve growth factor and uses thereof
US11787861B2 (en) 2020-05-29 2023-10-17 23Andme, Inc. Anti-CD200R1 antibodies and methods of use thereof
CN116529260A (zh) 2020-06-02 2023-08-01 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
TW202210515A (zh) 2020-06-02 2022-03-16 美商當康生物科技有限公司 抗ｃｄ３９之構築體及其用途
BR112022024996A2 (pt) 2020-06-08 2022-12-27 Hoffmann La Roche Anticorpos, ácido nucleico, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, composição farmacêutica, agente terapêutico, uso do anticorpo e método para tratar um indivíduo com hepatite b
JP2023529206A (ja) 2020-06-12 2023-07-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド がん免疫療法のための方法及び組成物
CA3181820A1 (en) 2020-06-16 2021-12-23 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating triple-negative breast cancer
WO2021257124A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Genentech, Inc. Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
US20230235056A1 (en) 2020-06-19 2023-07-27 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-t cell antigen-binding molecule for use in combination with angiogenesis inhibitor
PE20230616A1 (es) 2020-06-19 2023-04-14 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y folr1
PE20230835A1 (es) 2020-06-19 2023-05-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3
WO2021255146A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3 and cea
BR112022025856A2 (pt) 2020-06-19 2023-01-10 Hoffmann La Roche Anticorpo que se liga a cd3 e cd19, polinucleotídeo isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo que se liga a cd3 e cd19, composição farmacêutica, uso do anticorpo, método para tratar uma doença em um indivíduo e invenção
EP4169948A4 (en) 2020-06-22 2024-07-10 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. ANTI-CD73 ANTIBODIES AND USE THEREOF
JP2023531222A (ja) 2020-06-22 2023-07-21 アルミラル・ソシエダッド・アノニマ 抗ｉｌ－３６抗体およびその使用方法
MX2022016453A (es) 2020-06-24 2023-02-01 Genentech Inc Lineas celulares resistentes a la apoptosis.
CA3182579A1 (en) 2020-07-07 2022-01-13 Ugur Sahin Therapeutic rna for hpv-positive cancer
IL298921A (en) 2020-07-10 2023-02-01 Hoffmann La Roche Antibodies which bind to cancer cells and target radionuclides to said cells
IL299799A (en) 2020-07-17 2023-03-01 Genentech Inc Anti-NOTCH2 antibodies and methods of use
GB2597532A (en) 2020-07-28 2022-02-02 Femtogenix Ltd Cytotoxic compounds
CN116783215A (zh) 2020-07-29 2023-09-19 当康生物技术有限责任公司 抗cd93构建体及其用途
WO2022031749A1 (en) 2020-08-03 2022-02-10 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for lymphoma
WO2022029660A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to ror1-targeted binding domains and related compositions and methods
WO2022031876A1 (en) 2020-08-07 2022-02-10 Genentech, Inc. Flt3 ligand fusion proteins and methods of use
CN111759732B (zh) * 2020-08-12 2024-12-06 河南省人民医院 一种用于外周血造血干细胞冻存的多通道连接管路及方法
AU2021324842A1 (en) 2020-08-14 2023-03-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods for treating multiple sclerosis with ocrelizumab
EP4196162A1 (en) 2020-08-14 2023-06-21 AC Immune SA Humanized anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
WO2022043517A2 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Cureab Gmbh Anti-golph2 antibodies for macrophage and dendritic cell differentiation
JP2023539201A (ja) 2020-08-28 2023-09-13 ジェネンテック， インコーポレイテッド 宿主細胞タンパク質のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９マルチプレックスノックアウト
WO2022047316A1 (en) 2020-08-28 2022-03-03 Sana Biotechnology, Inc. Modified anti-viral binding agents
JP7158626B1 (ja) 2020-09-04 2022-10-21 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｖｅｇｆ－ａ及びａｎｇ２に結合する抗体及び使用方法
EP4211165A1 (en) 2020-09-14 2023-07-19 Ichnos Sciences SA Antibodies that bind to il1rap and uses thereof
CN116249719A (zh) 2020-09-15 2023-06-09 拜耳公司 新的抗a2ap抗体及其用途
AU2021348613A1 (en) 2020-09-28 2023-06-08 Angitia Incorporated Limited Anti-sclerostin constructs and uses thereof
KR20230104611A (ko) 2020-09-30 2023-07-10 드렌 바이오, 인크. 항-cd94 항체 및 이의 사용 방법
JP2023544407A (ja) 2020-10-05 2023-10-23 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ＦｃＲＨ５／抗ＣＤ３二重特異性抗体による処置のための投与
EP4225373A4 (en) 2020-10-07 2025-01-08 Dren Bio, Inc. ANTI-DECTIN-1 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
EP4229082A1 (en) 2020-10-16 2023-08-23 AC Immune SA Antibodies binding to alpha-synuclein for therapy and diagnosis
JP2023545566A (ja) 2020-10-20 2023-10-30 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｐｄ－１軸結合アンタゴニストとｌｒｒｋ２阻害剤との併用療法
AR123855A1 (es) 2020-10-20 2023-01-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-mertk conjugados con peg y métodos de uso
WO2022084400A1 (en) 2020-10-20 2022-04-28 Kantonsspital St. Gallen Antibodies or antigen-binding fragments specifically binding to gremlin-1 and uses thereof
WO2022093981A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ptpn22 inhibitors and pd-l1 binding antagonists
MX2023005130A (es) 2020-11-04 2023-05-25 Genentech Inc Dosis subcutanea de anticuerpos biespecificos anti-cd20/anti-cd3.
US20220153842A1 (en) 2020-11-04 2022-05-19 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies and anti-cd79b antibody drug conjugates
WO2022098638A2 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibodies
US20220143026A1 (en) 2020-11-12 2022-05-12 Tg Therapeutics, Inc. Triple combination to treat b-cell malignancies
TW202235431A (zh) 2020-11-25 2022-09-16 美商艾希利歐發展股份有限公司 腫瘤特異性可裂解連接子
PE20231953A1 (es) 2020-12-07 2023-12-06 UCB Biopharma SRL Anticuerpos multiespecificos y combinaciones de anticuerpos
WO2022122652A1 (en) 2020-12-07 2022-06-16 UCB Biopharma SRL Antibodies against interleukin-22
TW202237638A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 烏苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
TW202237639A (zh) 2020-12-09 2022-10-01 日商武田藥品工業股份有限公司 鳥苷酸環化酶ｃ（ｇｃｃ）抗原結合劑之組成物及其使用方法
WO2022132904A1 (en) 2020-12-17 2022-06-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies targeting sars-cov-2
CR20230263A (es) 2020-12-17 2023-08-21 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-hla-g y uso de estos
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022140797A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Immunowake Inc. Immunocytokines and uses thereof
WO2022135467A1 (zh) 2020-12-23 2022-06-30 信达生物制药(苏州)有限公司 抗b7-h3抗体及其用途
JP2024503826A (ja) 2021-01-06 2024-01-29 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｐｄ１－ｌａｇ３二重特異性抗体及びｃｄ２０ ｔ細胞二重特異性抗体を用いる併用療法
MX2023008084A (es) 2021-01-12 2023-07-13 Hoffmann La Roche Anticuerpos split que se unen a celulas cancerosas y dirigen radionuclidos a dichas celulas.
WO2022152701A1 (en) 2021-01-13 2022-07-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy
CN117120084A (zh) 2021-01-28 2023-11-24 维肯芬特有限责任公司 用于调节b细胞介导的免疫应答的方法和手段
WO2022162203A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Vaccinvent Gmbh Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
AU2022212599A1 (en) 2021-01-28 2023-08-17 Universität Ulm Method and means for modulating b-cell mediated immune responses
WO2022169825A1 (en) 2021-02-03 2022-08-11 Mozart Therapeutics, Inc. Binding agents and methods of using the same
WO2022169872A1 (en) 2021-02-03 2022-08-11 Genentech, Inc. Multispecific binding protein degrader platform and methods of use
AU2022221297A1 (en) 2021-02-09 2023-08-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Antibodies targeting the spike protein of coronaviruses
CA3210753A1 (en) 2021-02-09 2022-08-18 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Human monoclonal antibodies against pneumococcal antigens
US20240226295A9 (en) 2021-02-15 2024-07-11 Takeda Pharmaceutical Company Limited Cell therapy compositions and methods for modulating tgf-b signaling
WO2022180172A1 (en) 2021-02-26 2022-09-01 Bayer Aktiengesellschaft Inhibitors of il-11 or il-11ra for use in the treatment of abnormal uterine bleeding
CA3209364A1 (en) 2021-03-01 2022-09-09 Jennifer O'neil Combination of masked ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
EP4301467A1 (en) 2021-03-01 2024-01-10 Xilio Development, Inc. Combination of ctla4 and pd1/pdl1 antibodies for treating cancer
EP4301418A1 (en) 2021-03-03 2024-01-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates comprising an anti-bcma antibody
CN117715933A (zh) 2021-03-05 2024-03-15 当康生物技术有限责任公司 抗vista的构建体及其用途
WO2022192898A2 (en) 2021-03-10 2022-09-15 Immunowake Inc. Immunomodulatory molecules and uses thereof
CN117062839A (zh) 2021-03-12 2023-11-14 基因泰克公司 抗klk7抗体、抗klk5抗体、多特异性抗klk5/klk7抗体和使用方法
TW202300521A (zh) 2021-03-15 2023-01-01 美商建南德克公司 治療狼瘡性腎炎的組成物及方法
WO2022197877A1 (en) 2021-03-19 2022-09-22 Genentech, Inc. Methods and compositions for time delayed bio-orthogonal release of cytotoxic agents
JP2024511424A (ja) 2021-03-25 2024-03-13 ダイナミキュア バイオテクノロジー エルエルシー 抗ｉｇｆｂｐ７構築物およびその使用
IL307233A (en) 2021-03-30 2023-11-01 Bayer Ag Anti-SEMA3A antibodies and uses thereof
AU2022253902A1 (en) 2021-04-10 2023-11-02 Genmab A/S Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
AR125344A1 (es) 2021-04-15 2023-07-05 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-c1s
TW202305122A (zh) 2021-04-19 2023-02-01 美商建南德克公司 經修飾之哺乳動物細胞
TW202308699A (zh) 2021-04-23 2023-03-01 美商普方生物製藥美國公司 Ｃｄ７０結合劑、其結合物及其使用方法
WO2022223651A1 (en) 2021-04-23 2022-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Prevention or mitigation of nk cell engaging agent-related adverse effects
TW202244059A (zh) 2021-04-30 2022-11-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３雙特異性抗體進行治療之給藥
EP4330282A1 (en) 2021-04-30 2024-03-06 F. Hoffmann-La Roche AG Dosing for combination treatment with anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and anti-cd79b antibody drug conjugate
CA3218933A1 (en) 2021-05-03 2022-11-10 UCB Biopharma SRL Antibodies
JP2024518410A (ja) 2021-05-07 2024-05-01 ビエラ バイオ インコーポレイテッド 重症筋無力症を治療するための抗ｃｄ１９抗体の使用
CA3216795A1 (en) 2021-05-07 2022-11-10 Alpine Immune Sciences, Inc. Methods of dosing and treatment with a taci-fc fusion immunomodulatory protein
CA3218170A1 (en) 2021-05-12 2022-11-17 Jamie Harue HIRATA Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
TW202306993A (zh) 2021-05-14 2023-02-16 美商建南德克公司 Ｔｒｅｍ２之促效劑
KR20240007171A (ko) 2021-05-14 2024-01-16 제넨테크, 인크. 모수네투주맙 및 폴라투주맙 베도틴을 이용한 cd20 양성 증식성 장애의 치료 방법
US20240239902A1 (en) * 2021-05-18 2024-07-18 Christian-Albrechts-Universität Zu Kiel Co-stimulatory multispecific antibodies
WO2022243261A1 (en) 2021-05-19 2022-11-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Agonistic cd40 antigen binding molecules targeting cea
EP4341385A1 (en) 2021-05-21 2024-03-27 Genentech, Inc. Modified cells for the production of a recombinant product of interest
TW202306994A (zh) 2021-06-04 2023-02-16 日商中外製藥股份有限公司 抗ddr2抗體及其用途
CA3216220A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination of a particular braf inhibitor (paradox breaker) and a pd-1 axis binding antagonist for use in the treatment of cancer
WO2022262808A1 (en) * 2021-06-16 2022-12-22 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Genetically modified non-human animal with human or chimeric cd20 genes
US12227574B2 (en) 2021-06-17 2025-02-18 Amberstone Biosciences, Inc. Anti-CD3 constructs and uses thereof
AU2022294106A1 (en) 2021-06-18 2024-01-25 Therini Bio, Inc. ANTIBODIES WHICH BIND HUMAN FIBRIN OR FIBRINOGEN γC DOMAIN AND METHODS OF USE
CA3220353A1 (en) 2021-06-25 2022-12-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Use of anti-ctla-4 antibody
CR20240026A (es) 2021-06-25 2024-03-14 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-ctla-4
KR20240028452A (ko) 2021-07-02 2024-03-05 제넨테크, 인크. 암을 치료하기 위한 방법 및 조성물
TW202320857A (zh) 2021-07-06 2023-06-01 美商普方生物製藥美國公司 連接子、藥物連接子及其結合物及其使用方法
US20250011448A1 (en) 2021-07-08 2025-01-09 Staidson Biopharma Inc. Antibodies specifically recognizing tnfr2 and uses thereof
TW202306985A (zh) 2021-07-12 2023-02-16 美商建南德克公司 降低抗體－脂酶結合之結構
JP2024525758A (ja) 2021-07-13 2024-07-12 ビオンテック・ソシエタス・エウロパエア がんのための併用療法におけるｃｄ４０およびｃｄ１３７に対する多重特異性結合剤
JP2024525769A (ja) 2021-07-14 2024-07-12 舒泰神（北京）生物製薬股フン有限公司 Ｃｄ４０を特異的に認識する抗体およびその使用
CA3224853A1 (en) 2021-07-14 2023-01-19 Gautham GAMPA Anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use
JP2024526880A (ja) 2021-07-22 2024-07-19 ジェネンテック， インコーポレイテッド 脳標的化組成物及びその使用方法
AU2022315528A1 (en) 2021-07-22 2023-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Heterodimeric fc domain antibodies
MX2024001214A (es) 2021-07-28 2024-02-12 Hoffmann La Roche Metodos y composiciones para tratar cancer.
JP2024529502A (ja) 2021-07-30 2024-08-06 オーエヌエー セラピューティクス エセ．エレ． 抗ｃｄ３６抗体及び癌を治療するためのそれらの使用
EP4382538A4 (en) 2021-08-02 2025-10-22 Innovent Biologics Suzhou Co Ltd BISPECIFIC ANTI-CD79BXCD3 ANTIBODY AND ITS USE
CN117794953A (zh) 2021-08-03 2024-03-29 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗体及使用方法
US20240336697A1 (en) 2021-08-07 2024-10-10 Genentech, Inc. Methods of using anti-cd79b immunoconjugates to treat diffuse large b-cell lymphoma
WO2023019239A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Genentech, Inc. Dosing for anti-tryptase antibodies
JP2024534067A (ja) 2021-08-19 2024-09-18 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 多価抗バリアントｆｃ領域抗体および使用方法
GB202111905D0 (en) 2021-08-19 2021-10-06 UCB Biopharma SRL Antibodies
WO2023028501A1 (en) 2021-08-23 2023-03-02 Immunitas Therapeutics, Inc. Anti-cd161 antibodies and uses thereof
IL310382A (en) 2021-08-27 2024-03-01 Genentech Inc Methods for treating tau pathologies
TW202325727A (zh) 2021-08-30 2023-07-01 美商建南德克公司 抗聚泛素多特異性抗體
WO2023044272A1 (en) 2021-09-17 2023-03-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Synthetic humanized llama nanobody library and use thereof to identify sars-cov-2 neutralizing antibodies
TW202321308A (zh) 2021-09-30 2023-06-01 美商建南德克公司 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體、抗ｃｄ３８抗體及ｐｄ—１軸結合拮抗劑治療血液癌症的方法
WO2023056069A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Angiex, Inc. Degrader-antibody conjugates and methods of using same
KR20240082388A (ko) 2021-10-08 2024-06-10 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 프리필드 시린지 제제의 조제 방법
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
WO2023076876A1 (en) 2021-10-26 2023-05-04 Mozart Therapeutics, Inc. Modulation of immune responses to viral vectors
AU2022379952A1 (en) 2021-11-05 2024-05-16 Mab Biotec, Inc. Monoclonal antibodies against carcinoembryonic antigens, and their uses
EP4430072A1 (en) 2021-11-10 2024-09-18 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
MX2024005680A (es) 2021-11-16 2024-05-30 Genentech Inc Metodos y composiciones para tratar lupus eritematoso sistemico (sle) con mosunetuzumab.
TW202334202A (zh) 2021-11-16 2023-09-01 瑞士商Ａｃ免疫有限公司 用於治療和診斷的新分子
JP2024543257A (ja) 2021-11-26 2024-11-20 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 抗ｔｙｒｐ１／抗ｃｄ３二重特異性抗体およびｔｙｒｐ１特異性抗体の併用療法
EP4445911A4 (en) 2021-12-06 2025-10-22 Beijing Solobio Genetechnology Co Ltd BISPECIFIC ANTIBODY THAT BINDS SPECIFICALLY TO KLEBSIELLA PNEUMONIAE O1 AND O2 ANTIGENS AND COMPOSITION
AR127887A1 (es) 2021-12-10 2024-03-06 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen a cd3 y plap
CA3237618A1 (en) 2021-12-15 2023-06-22 Genentech, Inc. Stabilized il-18 polypeptides and uses thereof
KR20240116755A (ko) 2021-12-17 2024-07-30 상하이 헨리우스 바이오테크, 인크. 항-ox40 항체, 다중 특이적 항체 및 이의 사용 방법
WO2023109901A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Shanghai Henlius Biotech, Inc. Anti-ox40 antibodies and methods of use
CR20240246A (es) 2021-12-20 2024-07-19 Hoffmann La Roche Anticuerpos agonistas anti-ltbr y anticuerpos biespecificos que los comprenden
UY40097A (es) 2022-01-07 2023-07-14 Johnson & Johnson Entpr Innovation Inc Materiales y métodos de proteínas de unión a il-1b
TW202340251A (zh) 2022-01-19 2023-10-16 美商建南德克公司 抗ｎｏｔｃｈ２抗體及結合物及其使用方法
AU2023217695A1 (en) * 2022-02-08 2024-08-15 Amgen Inc. Codon-optimized nucleic acids encoding ocrelizumab
JP2025506172A (ja) 2022-02-10 2025-03-07 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ コロナウイルスを広く標的とするヒトモノクローナル抗体
EP4479426A1 (en) 2022-02-16 2024-12-25 AC Immune SA Humanized anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
JP2025508739A (ja) 2022-02-18 2025-04-10 ラクテン・メディカル，インコーポレイテッド 抗プログラム細胞死リガンド１（ｐｄ－ｌ１）抗体分子、それをコードするポリヌクレオチド、および使用方法
EP4490173A1 (en) 2022-03-07 2025-01-15 Alpine Immune Sciences, Inc. Immunomodulatory proteins of variant cd80 polypeptides, cell therapies thereof and related methods and uses
WO2023173026A1 (en) 2022-03-10 2023-09-14 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
CN119562970A (zh) 2022-03-18 2025-03-04 进化免疫治疗公司 双特异性抗体融合分子及其使用方法
EP4496631A1 (en) 2022-03-23 2025-01-29 F. Hoffmann-La Roche AG Combination treatment of an anti-cd20/anti-cd3 bispecific antibody and chemotherapy
WO2023179740A1 (en) 2022-03-25 2023-09-28 Shanghai Henlius Biotech , Inc. Anti-msln antibodies and methods of use
EP4499227A1 (en) 2022-03-26 2025-02-05 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Bispecific antibodies to hiv-1 env and their use
CN119095880A (zh) 2022-03-28 2024-12-06 豪夫迈·罗氏有限公司 干扰素γ变体以及包含这些变体的抗原结合分子
US20250197483A1 (en) 2022-03-28 2025-06-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Neutralizing antibodies to hiv-1 env and their use
WO2023191816A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
JP2025513799A (ja) 2022-04-08 2025-04-30 エイシー イミューン ソシエテ アノニム 抗ｔｄｐ－４３結合分子
TW202404637A (zh) 2022-04-13 2024-02-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗ｃｄ２０／抗ｃｄ３雙特異性抗體之醫藥組成物及使用方法
EP4508087A1 (en) 2022-04-13 2025-02-19 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of therapeutic proteins and methods of use
CA3243581A1 (en) 2022-04-20 2023-10-26 Kantonsspital St. Gallen ANTIBODIES OR ANTIGEN-BINDING FRAGMENTS THAT BIND PANSPECIFICALLY TO GREMLIN-1 AND GREMLIN-2 AND RELATED USES
PE20242350A1 (es) 2022-05-03 2024-12-16 Genentech Inc Anticuerpos anti-ly6e, inmunoconjugados y usos de estos
WO2023217068A1 (zh) 2022-05-09 2023-11-16 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别gdf15的抗体及其应用
AR129268A1 (es) 2022-05-11 2024-08-07 Hoffmann La Roche Anticuerpo que se une a vegf-a e il6 y métodos de uso
CA3251472A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. DOSAGE FOR TREATMENT WITH ANTI-FCRH5/ANTI-CD3 BISPECIFIC ANTIBODIES
WO2023235699A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies to lilrb4 and uses thereof
US11884740B1 (en) 2022-06-01 2024-01-30 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
US11807689B1 (en) 2022-06-01 2023-11-07 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
US11965032B1 (en) 2022-06-01 2024-04-23 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
US11814439B1 (en) 2022-06-01 2023-11-14 Tg Therapeutics, Inc. Anti-CD20 antibody compositions
KR20250022049A (ko) 2022-06-07 2025-02-14 제넨테크, 인크. 항-pd-l1 길항제 및 항-tigit 길항제 항체를 포함하는, 폐암 치료의 효율을 결정하는 방법
US20250382354A1 (en) 2022-06-08 2025-12-18 Institute For Research In Biomedicine (Irb) Cross-specific antibodies, uses and methods for discovery thereof
WO2023239803A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Angiex, Inc. Anti-tm4sf1 antibody-drug conjugates comprising cleavable linkers and methods of using same
CN119585308A (zh) 2022-07-13 2025-03-07 基因泰克公司 针对用抗fcrh5/抗cd3双特异性抗体进行的治疗的给药
EP4558524A1 (en) 2022-07-19 2025-05-28 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
TW202417503A (zh) 2022-07-19 2024-05-01 美商舒泰神（加州）生物科技有限公司 特異性識別ｂ和ｔ淋巴細胞衰減器（ｂｔｌａ）的抗體及其應用
CR20250056A (es) 2022-07-22 2025-03-19 Genentech Inc Moléculas de unión al antígeno anti-steap1 y sus usos.
EP4565329A1 (en) 2022-08-01 2025-06-11 The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Monoclonal antibodies that bind to the underside of influenza viral neuraminidase
WO2024030956A2 (en) 2022-08-03 2024-02-08 Mozart Therapeutics, Inc. Cd39-specific binding agents and methods of using the same
EP4565331A1 (en) 2022-08-05 2025-06-11 Janssen Biotech, Inc. Cd98 binding constructs for treating brain tumors
EP4565330A1 (en) 2022-08-05 2025-06-11 Janssen Biotech, Inc. Transferrin receptor binding proteins for treating brain tumors
CN119698274A (zh) 2022-08-19 2025-03-25 亿一生物医药开发(上海)有限公司 包含g-csf的制剂及其用途
CA3265385A1 (en) 2022-08-22 2024-02-29 Abdera Therapeutics Inc. DLL3 BINDING MOLECULES AND THEIR USES
AU2023329484A1 (en) 2022-08-26 2025-02-20 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for delta-like ligand 3 (dll3)
CN120153254A (zh) 2022-09-01 2025-06-13 基因泰克公司 膀胱癌的治疗和诊断方法
WO2024054929A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 Dynamicure Biotechnology Llc Anti-vista constructs and uses thereof
WO2024054822A1 (en) 2022-09-07 2024-03-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Engineered sars-cov-2 antibodies with increased neutralization breadth
WO2024064826A1 (en) 2022-09-22 2024-03-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to plasmodium falciparum circumsporozoite protein and their use
CN119998321A (zh) 2022-09-27 2025-05-13 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别light的抗体及其应用
AU2023356958A1 (en) 2022-10-04 2025-04-03 Alpine Immune Sciences, Inc. Mutated taci-fc fusion proteins for use in the treatment of autoantibody-mediated diseases
EP4598959A1 (en) 2022-10-07 2025-08-13 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with anti-c-c motif chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies
JP2025535386A (ja) 2022-10-20 2025-10-24 北京三▲諾▼佳邑生物技▲術▼有限▲責▼任公司 ＴＲＡＩＬまたはＦａｓＬに特異的に結合する抗体の組み合わせおよび二重特異性抗体
WO2024091991A1 (en) 2022-10-25 2024-05-02 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for multiple myeloma
WO2024094741A1 (en) 2022-11-03 2024-05-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy with anti-cd19/anti-cd28 bispecific antibody
JP2025537137A (ja) 2022-11-04 2025-11-14 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 抗ｃｃｒ８抗体、化学療法及び免疫療法の組み合わせを使用する抗がん療法
AU2023375342A1 (en) 2022-11-08 2025-04-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Compositions and methods of treating childhood onset idiopathic nephrotic syndrome
WO2024100200A1 (en) 2022-11-09 2024-05-16 Cis Pharma Ag Anti-l1-cam antibodies and their uses for diagnostic and therapeutic applications
WO2024100170A1 (en) 2022-11-11 2024-05-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to hla-a*02/foxp3
KR20250106304A (ko) 2022-11-17 2025-07-09 사노피 Ceacam5 항체-약물 접합체 및 이의 사용 방법
CN120265651A (zh) 2022-11-25 2025-07-04 中外制药株式会社 用于生产蛋白质的方法
CN119998314A (zh) 2022-12-08 2025-05-13 长春百克生物科技股份公司 特异性结合rsv的抗体
WO2024126457A1 (en) 2022-12-14 2024-06-20 Astellas Pharma Europe Bv Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and immune checkpoint inhibitors
WO2024137381A1 (en) 2022-12-19 2024-06-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Monoclonal antibodies for treating sars-cov-2 infection
EP4642488A1 (en) 2022-12-27 2025-11-05 Yale University Antibody drug conjugates
AR131638A1 (es) 2023-01-18 2025-04-16 Genentech Inc Anticuerpos multiespecíficos y usos de estos
EP4655007A1 (en) 2023-01-23 2025-12-03 Yale University Antibody oligonucleotide conjugates
WO2024156672A1 (en) 2023-01-25 2024-08-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to csf1r and cd3
WO2024163494A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Methods and compositions for treating non-small cell lung cancer and triple-negative breast cancer
WO2024163009A1 (en) 2023-01-31 2024-08-08 Genentech, Inc. Methods and compositions for treating urothelial bladder cancer
WO2024173607A2 (en) 2023-02-14 2024-08-22 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Combination of bispecific antibodies and chimeric antigen receptor t cells for treatment
CN120712282A (zh) 2023-02-17 2025-09-26 阿布林克斯有限公司 结合新生儿fc受体的多肽
WO2024184494A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 Ac Immune Sa Anti-tdp-43 binding molecules and uses thereof
CN120858109A (zh) 2023-03-10 2025-10-28 基因泰克公司 与蛋白酶的融合物及其用途
CN120835901A (zh) 2023-03-13 2025-10-24 豪夫迈·罗氏有限公司 采用pd1-lag3双特异性抗体和hla-g t细胞双特异性抗体的组合疗法
WO2024197302A1 (en) 2023-03-23 2024-09-26 Yale University Compositions and methods for delivering antibody oligonucleotide conjugates for exon skipping
AU2024248331A1 (en) 2023-03-31 2025-10-09 Genentech, Inc. Anti-alpha v beta 8 integrin antibodies and methods of use
WO2024211234A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024211235A1 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024211236A2 (en) 2023-04-05 2024-10-10 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
WO2024212827A1 (en) 2023-04-12 2024-10-17 Shanghai Kangabio Co., Limited Multifunctional molecules comprising masked interleukin 12 and methods of use
WO2024220546A2 (en) 2023-04-17 2024-10-24 Peak Bio, Inc. Antibodies and antibody-drug conjugates and methods of use and synthetic processes and intermediates
AU2024270495A1 (en) 2023-05-05 2025-10-09 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
AR132623A1 (es) 2023-05-08 2025-07-16 Hoffmann La Roche PROTEÍNAS DE FUSIÓN DE INTERFERÓN a DIRIGIDAS Y MÉTODOS DE USO
AU2024268933A1 (en) 2023-05-10 2025-11-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods and compositions for treating cancer
AR132687A1 (es) 2023-05-16 2025-07-23 Hoffmann La Roche Inmunoconjugados de il-2 regulados por pd-1 y sus usos
WO2024243423A1 (en) 2023-05-24 2024-11-28 Mozart Therapeutics, Inc. Cd8-specific binding proteins and methods of using the same
WO2024243355A1 (en) 2023-05-24 2024-11-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human monoclonal antibodies that target the rh5 complex of blood-stage plasmodium falciparum
WO2024246356A1 (en) 2023-06-01 2024-12-05 Pierre Fabre Medicament Silenced antibody-based anti-met constructs for the treatment of tumors and metastasis
WO2024254455A1 (en) 2023-06-08 2024-12-12 Genentech, Inc. Macrophage signatures for diagnostic and therapeutic methods for lymphoma
WO2024263761A1 (en) 2023-06-22 2024-12-26 Genentech, Inc. Antibodies and uses thereof
WO2024263845A1 (en) 2023-06-22 2024-12-26 Genentech, Inc. Treatment of multiple myeloma
WO2024263195A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
WO2024263904A1 (en) 2023-06-23 2024-12-26 Genentech, Inc. Methods for treatment of liver cancer
WO2025002410A1 (en) 2023-06-30 2025-01-02 Evive Biotechnology (Shanghai) Ltd G-csf dimer for use in the treatment or prevention of chemotherapy or radiotherapy induced neutropenia
WO2025014896A1 (en) 2023-07-07 2025-01-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Humanized 40h3 antibody
TW202517294A (zh) 2023-07-11 2025-05-01 美商建南德克公司 用於治療多發性硬化症之組成物及方法
WO2025024233A1 (en) 2023-07-21 2025-01-30 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bispecific antibodies that broadly target coronaviruses
WO2025021838A1 (en) 2023-07-26 2025-01-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2025027052A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Sixpeaks Bio Ag Antibody conjugates and fusion proteins
WO2025034806A1 (en) 2023-08-08 2025-02-13 Wisconsin Alumni Research Foundation Single-domain antibodies and variants thereof against fibroblast activation protein
WO2025032070A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-a-beta protein antibodies, methods and uses thereof
WO2025032071A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
WO2025032069A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 F. Hoffmann-La Roche Ag Mono and multispecific anti-trem2 antibodies, methods and uses thereof
WO2025038492A1 (en) 2023-08-11 2025-02-20 Abalytics Oncology, Inc. Anti-ctla-4 antibodies and related binding molecules and methods and uses thereof
WO2025049905A1 (en) 2023-09-01 2025-03-06 Gennao Bio, Inc. Dnase co-expression in host cells
WO2025045251A2 (en) 2023-09-03 2025-03-06 Kira Pharmaceuticals (Us) Llc Multispecific constructs comprising anti-factor d moiety
WO2025054500A2 (en) 2023-09-08 2025-03-13 Mlab Biosciences, Inc. Bifunctional proteins and uses thereof
WO2025059037A1 (en) 2023-09-11 2025-03-20 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules targeting b7-h4 and cd3 and methods of use thereof
WO2025064539A1 (en) 2023-09-19 2025-03-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Herv-e antibodies and methods of their use
WO2025064890A1 (en) 2023-09-20 2025-03-27 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Bispecific antibody fusion molecules targeting cd180 and cd3 and methods of use thereof
WO2025064885A1 (en) 2023-09-20 2025-03-27 Evolveimmune Therapeutics, Inc. Multispecific antibodies that bind cd3 and cd2 and methods of use thereof
AR133909A1 (es) 2023-09-25 2025-11-12 Hoffmann La Roche ANTICUERPO QUE SE UNE A C3bBb
AR133955A1 (es) 2023-09-26 2025-11-19 Profoundbio Us Co Agentes de unión a ptk7, conjugados de éstos y métodos de uso de los mismos
TW202517674A (zh) 2023-10-19 2025-05-01 德商拜耳廠股份有限公司 抗gpc3抗體及其放射性結合物
WO2025099120A1 (en) 2023-11-09 2025-05-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies with conditional activity
WO2025106474A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for treating cancer with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2025106427A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing and protective monoclonal antibodies against respiratory syncytial virus (rsv)
WO2025111402A1 (en) 2023-11-21 2025-05-30 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Anti-amyloid beta antibodies and related compositions and methods thereof
TW202535955A (zh) 2023-11-27 2025-09-16 丹麥商珍美寶股份有限公司 用於ｐｔｋ７檢測之抗體及方法
US20250179207A1 (en) 2023-11-30 2025-06-05 Genzyme Corporation Methods for treating digitally-identified cd20-related disorders
WO2025117384A1 (en) 2023-12-01 2025-06-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Broadly neutralizing influenza hemagglutinin stem-directed antibodies
WO2025120866A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
WO2025120867A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and anti-vegfr2 antibodies
WO2025121445A1 (en) 2023-12-08 2025-06-12 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving bispecific binding agents binding to cldn18.2 and cd3 and agents stabilizing or increasing expression of cldn18.2
WO2025125118A1 (en) 2023-12-11 2025-06-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Protease activatable fc domain binding molecules
WO2025125386A1 (en) 2023-12-14 2025-06-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that bind to folr1 and methods of use
WO2025137523A2 (en) 2023-12-20 2025-06-26 Apogee Therapeutics, Inc. Pharmaceutical formulations of antibodies that bind interleukin 13
TW202535935A (zh) 2023-12-20 2025-09-16 美商艾普吉醫療股份有限公司 結合介白素13之抗體之醫藥組合物
US20250230251A1 (en) 2023-12-20 2025-07-17 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies targeting il-18 receptor beta (il-18rb) and related methods
WO2025132503A1 (en) 2023-12-20 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to ceacam5
WO2025133290A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Temper Bio Protein for immune regulation
WO2025137284A2 (en) 2023-12-21 2025-06-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Broadly neutralizing antibodies against sars-cov-2 and sars-cov variants
WO2025133042A2 (en) 2023-12-22 2025-06-26 F. Hoffmann-La Roche Ag Activatable fusion proteins and methods of use
US20250296992A1 (en) 2024-01-10 2025-09-25 Genmab A/S Slitrk6 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2025149633A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Laigo Bio B.V. Bispecific antigen binding proteins
WO2025179281A1 (en) 2024-02-23 2025-08-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Treatment of cardiovascular disease with antxr1 antibodies
WO2025184416A1 (en) 2024-02-27 2025-09-04 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Single-domain antibodies and bispecific antibodies against hiv-1 and their use
WO2025184421A1 (en) 2024-02-28 2025-09-04 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors and antibodies specific for delta-like ligand 3 (dll3) and related methods
WO2025181219A1 (en) 2024-02-29 2025-09-04 Genmab A/S Egfr and c-met bispecific binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2025181189A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies binding to cd3
WO2025186332A1 (en) 2024-03-05 2025-09-12 Ac Immune Sa Vectorized anti-tdp-43 antibodies
WO2025199352A2 (en) 2024-03-20 2025-09-25 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies specific for solute carrier family 34 member 2 (slc34a2)
US20250295801A1 (en) 2024-03-21 2025-09-25 Seagen Inc. Cd25 antibodies, antibody drug conjugates, and uses thereof
WO2025215060A1 (en) 2024-04-11 2025-10-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies that specifically bind modified oligonucleotides
WO2025215124A2 (en) 2024-04-12 2025-10-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination treatment of glofitamab and chemotherapy
WO2025222129A2 (en) 2024-04-19 2025-10-23 Mozart Therapeutics, Inc. Engineered cytokines and targeted cytokine delivery
WO2025226603A1 (en) 2024-04-22 2025-10-30 Surface Oncology, LLC Methods for treating cancer using anti-ccr8 antibodies
WO2025226808A1 (en) 2024-04-24 2025-10-30 Genentech, Inc. Compositions and methods of treating lupus nephritis
WO2025233264A1 (en) 2024-05-07 2025-11-13 Innate Pharma Use of cd73 blocking agents in combination with anti-cd20 x cd3 t cell engagers
WO2025233266A1 (en) 2024-05-07 2025-11-13 Innate Pharma Use of cd39 blocking agents in combination with anti-cd20 x cd3 t cell engagers
WO2025238187A1 (en) 2024-05-15 2025-11-20 Cis Biopharma Ag Immunoconjugates targeting l1-cam
WO2025240670A2 (en) 2024-05-15 2025-11-20 Abalytics Oncology, Inc. Anti-pd-1 antibodies and related binding molecules and methods and uses thereof
WO2025238135A2 (en) 2024-05-17 2025-11-20 UCB Biopharma SRL Antibody with binding specificity for il-11
WO2025238133A1 (en) 2024-05-17 2025-11-20 UCB Biopharma SRL Multispecific antibody with binding specificity for il-11 and il-17
WO2025242909A1 (en) 2024-05-24 2025-11-27 Paul Scherrer Institut CD30-targeting antibody-radioligand conjugates and their therapeutic use
WO2025250969A1 (en) 2024-05-31 2025-12-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Anti-cd74 antibodies, conjugates and uses thereof
WO2025255353A1 (en) 2024-06-06 2025-12-11 Apogee Therapeutics, Inc. Dosage and administration of an anti-ox40l antibody

Family Cites Families (105)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2002128A (en) * 1934-02-19 1935-05-21 Ray A Reidenbaugh Display rack
IL47062A (en) 1975-04-10 1979-07-25 Yeda Res & Dev Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde
US4665077A (en) 1979-03-19 1987-05-12 The Upjohn Company Method for treating rejection of organ or skin grafts with 6-aryl pyrimidine compounds
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US5576195A (en) 1985-11-01 1996-11-19 Xoma Corporation Vectors with pectate lyase signal sequence
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
US6893625B1 (en) 1986-10-27 2005-05-17 Royalty Pharma Finance Trust Chimeric antibody with specificity to human B cell surface antigen
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5506126A (en) 1988-02-25 1996-04-09 The General Hospital Corporation Rapid immunoselection cloning method
HUT53672A (en) 1988-02-25 1990-11-28 Gen Hospital Corp Quick immunoselective cloning process
IL85746A (en) 1988-03-15 1994-05-30 Yeda Res & Dev Preparations comprising t-lymphocyte cells treated with 8-methoxypsoralen or cell membranes separated therefrom for preventing or treating autoimmune diseases
US4861579A (en) 1988-03-17 1989-08-29 American Cyanamid Company Suppression of B-lymphocytes in mammals by administration of anti-B-lymphocyte antibodies
FI891226A7 (fi) 1988-04-28 1989-10-29 The Board Of Trustees Of The Leland Anti-T-solun reseptorideterminantit autoimmuunisairauden hoitoon
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
WO1990008187A1 (en) 1989-01-19 1990-07-26 Dana Farber Cancer Institute Soluble two domain cd2 protein
DE69006018T3 (de) 1989-03-21 2004-01-15 Immune Response Corp Inc Impfung und methoden gegen krankheiten, die von pathologischen reaktionen der spezifischen t-zellen abstammen.
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
DE69031919T3 (de) 1989-07-19 2005-01-27 Connetics Corp., Palo Alto T-zell-rezeptor-peptide als heilmittel für autoimmune und bösartige krankheiten
US5859205A (en) * 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
CA2103059C (en) * 1991-06-14 2005-03-22 Paul J. Carter Method for making humanized antibodies
JP3951062B2 (ja) 1991-09-19 2007-08-01 ジェネンテック・インコーポレーテッド 少なくとも遊離のチオールとして存在するシステインを有する抗体フラグメントの大腸菌での発現、２官能性Ｆ（ａｂ’）２抗体の産生のための使用
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
US7744877B2 (en) 1992-11-13 2010-06-29 Biogen Idec Inc. Expression and use of anti-CD20 Antibodies
PT752248E (pt) 1992-11-13 2001-01-31 Idec Pharma Corp Aplicacao terapeutica de anticorpos quimericos e marcados radioactivamente contra antigenios de diferenciacao restrita de linfocitos b humanos para o tratamento do linfoma de celulas b
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
US5417972A (en) 1993-08-02 1995-05-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of killing B-cells in a complement independent and an ADCC independent manner using antibodies which specifically bind CDIM
US5595721A (en) 1993-09-16 1997-01-21 Coulter Pharmaceutical, Inc. Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US20010056066A1 (en) 1996-07-26 2001-12-27 Smithkline Beecham Corporation Method of treating immune cell mediated systemic diseases
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
EP0999853B1 (en) 1997-06-13 2003-01-02 Genentech, Inc. Stabilized antibody formulation
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
JP2002506353A (ja) 1997-06-24 2002-02-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド ガラクトシル化糖タンパク質の方法及び組成物
AU8296098A (en) 1997-07-08 1999-02-08 Board Of Regents, The University Of Texas System Compositions and methods for homoconjugates of antibodies which induce growth arrest or apoptosis of tumor cells
WO1999022764A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DK1068241T3 (da) 1998-04-02 2008-02-04 Genentech Inc Antistofvarianter og fragmenter deraf
DE69939939D1 (de) 1998-08-11 2009-01-02 Idec Pharma Corp Kombinationstherapien gegen b-zell-lymphome beinhaltend die verabreichung von anti-cd20-antikörpern
US6224866B1 (en) 1998-10-07 2001-05-01 Biocrystal Ltd. Immunotherapy of B cell involvement in progression of solid, nonlymphoid tumors
TR200101302T2 (tr) 1998-11-09 2001-10-22 Idec Pharmaceuticals Corporation BMT yada PBSC transplantı alan hastalarda in vitro ya da in vivo temizleyici madde olarak kimerik anti-CD20 antikorunun kullanımı.
ES2351149T3 (es) 1998-11-09 2011-02-01 Biogen Idec Inc. Anticuerpo quimérico dirigido contra cd20, el rituxan, para uso en el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica.
ES2694002T3 (es) 1999-01-15 2018-12-17 Genentech, Inc. Polipéptido que comprende una región Fc de IgG1 humana variante
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6897044B1 (en) 1999-01-28 2005-05-24 Biogen Idec, Inc. Production of tetravalent antibodies
EP1035172A3 (en) 1999-03-12 2002-11-27 Fuji Photo Film Co., Ltd. Azomethine compound and oily magenta ink
IL146005A0 (en) 1999-05-07 2002-07-25 Genentech Inc Treatment of autoimmune diseases with antagonists which bind to b cell surface markers
KR20020020730A (ko) 1999-06-09 2002-03-15 오트리브 데이비스 더블유 Ｂ-세포를 표적하는 항체를 이용한 자가면역질환의 면역치료
ITMI991299A1 (it) * 1999-06-11 2000-12-11 Consiglio Nazionale Ricerche Uso di anticorpi contro antigeni di superficie per il trattamento della malattia trapianto contro ospite
DE19930748C2 (de) 1999-07-02 2001-05-17 Infineon Technologies Ag Verfahren zur Herstellung von EEPROM- und DRAM-Grabenspeicherzellbereichen auf einem Chip
KR20020027490A (ko) 1999-07-12 2002-04-13 제넨테크, 인크. Ｃｄ20에 결합하는 길항제를 사용한 외래 항원에 대한면역 반응 차단 방법
JP2003513012A (ja) 1999-08-11 2003-04-08 アイデック ファーマスーティカルズ コーポレイション 抗ｃｄ２０抗体による骨髄病変を伴う非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療
US8557244B1 (en) 1999-08-11 2013-10-15 Biogen Idec Inc. Treatment of aggressive non-Hodgkins lymphoma with anti-CD20 antibody
US6451284B1 (en) 1999-08-11 2002-09-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Clinical parameters for determining hematologic toxicity prior to radioimmunotheraphy
AU6929100A (en) * 1999-08-23 2001-03-19 Biocrystal Limited Methods and compositions for immunotherapy of b cell involvement in promotion ofa disease condition comprising multiple sclerosis
US20020006404A1 (en) 1999-11-08 2002-01-17 Idec Pharmaceuticals Corporation Treatment of cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
KR20020072277A (ko) 1999-11-08 2002-09-14 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션 항-ｃｄ20 항체 및/또는 화학요법 및 방사선요법과결합하여 항-ｃｄ40ｌ 항체를 이용한 ｂ세포 악성종양의치료방법
US20030185796A1 (en) 2000-03-24 2003-10-02 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
WO2001072333A1 (en) 2000-03-24 2001-10-04 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma using a combination_of an antibody to cd20 and interleuking-2
CN1981868A (zh) 2000-03-31 2007-06-20 拜奥根Idec公司 抗细胞因子抗体或拮抗剂与抗－cd20在b细胞淋巴瘤治疗中的联合应用
PT2857516T (pt) 2000-04-11 2017-08-28 Genentech Inc Anticorpos multivalentes e utilizações dos mesmos
CA2405632A1 (en) 2000-04-25 2001-11-01 Idec Pharmaceutical Corporation Intrathecal administration of rituximab for treatment of central nervous system lymphomas
JP2004512262A (ja) 2000-06-20 2004-04-22 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション 非放射性抗ｃｄ２０抗体／放射標識抗ｃｄ２２抗体の組合せ
DE60139689D1 (de) 2000-06-22 2009-10-08 Univ Iowa Res Found Kombination von CpG und Antikörpern gegen CD19,CD20,CD22 oder CD40 zur Prävention oder Behandlung von Krebs.
CA2415100A1 (en) 2000-07-12 2002-01-17 Idec Pharmaceutical Corporation Treatment of b cell malignancies using combination of b cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications
KR20040023565A (ko) * 2000-09-18 2004-03-18 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션 Ｂ 세포 고갈/면역조절 항체 조합을 이용한 자가면역질환의 치료를 위한 조합 요법
WO2002034790A1 (en) 2000-10-20 2002-05-02 Idec Pharmaceuticals Corporation Variant igg3 rituxan r and therapeutic use thereof
EP2325205A3 (en) 2000-12-28 2011-10-12 Altus Pharmaceuticals Inc. Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them
WO2002096948A2 (en) 2001-01-29 2002-12-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Engineered tetravalent antibodies and methods of use
KR20030091978A (ko) 2001-01-29 2003-12-03 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션 변형된 항체 및 사용 방법
US20030103971A1 (en) 2001-11-09 2003-06-05 Kandasamy Hariharan Immunoregulatory antibodies and uses thereof
AU2002307037B2 (en) 2001-04-02 2008-08-07 Biogen Idec Inc. Recombinant antibodies coexpressed with GnTIII
EP2359849A1 (en) 2001-04-02 2011-08-24 Genentech, Inc. Combination therapy
WO2003061694A1 (en) 2001-05-10 2003-07-31 Seattle Genetics, Inc. Immunosuppression of the humoral immune response by anti-cd20 antibodies
EP1404366A4 (en) 2001-06-14 2006-06-07 Intermune Inc COMBINED THERAPY USING INTERFERON GAMMA AND SPECIFIC B-CELL ANTIBODIES
US7321026B2 (en) 2001-06-27 2008-01-22 Skytech Technology Limited Framework-patched immunoglobulins
DE60233744D1 (de) 2001-09-20 2009-10-29 Univ Texas Bestimmung der zirkulierenden therapeutischen antikörper, antigene sowie antigen-antikörper-komplexe mit elisa-tests
NZ532526A (en) 2001-10-25 2007-01-26 Genentech Inc Compositions comprising a glycoprotein having a Fc region
US7127096B2 (en) * 2001-11-20 2006-10-24 Accuimage Diagnostics Corp. Method and software for improving coronary calcium scoring consistency
CA2469045A1 (en) 2001-12-07 2003-06-19 Chiron Corporation Methods of therapy for non-hodgkin's lymphoma
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
KR101033196B1 (ko) 2002-02-14 2011-05-09 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 항-ｃｄ20 항체 및 그 융합 단백질 및 이들의 이용방법
US20040002587A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20030180292A1 (en) 2002-03-14 2003-09-25 Idec Pharmaceuticals Treatment of B cell malignancies using anti-CD40L antibodies in combination with anti-CD20 antibodies and/or chemotherapeutics and radiotherapy
US20030219818A1 (en) 2002-05-10 2003-11-27 Bohen Sean P. Methods and compositions for determining neoplastic disease responsiveness to antibody therapy
US20050180972A1 (en) 2002-07-31 2005-08-18 Wahl Alan F. Anti-CD20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
PT1558648E (pt) 2002-10-17 2012-04-23 Genmab As Anticorpos monoclonais humanos contra cd20
AR042485A1 (es) 2002-12-16 2005-06-22 Genentech Inc Anticuerpo humanizado que se une al cd20 humano
MXPA05010778A (es) * 2003-04-09 2005-12-12 Genentech Inc Terapia para enfermedad autoinmune en un paciente con una respuesta inadecuada a un inhibidor tnf-alfa.
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
AU2005249566B2 (en) 2004-06-04 2010-11-11 Genentech, Inc. Method for treating multiple sclerosis
CN101223448B (zh) * 2005-05-20 2012-01-18 健泰科生物技术公司 来自自身免疫病受试者的生物学样品的预处理
US8144978B2 (en) 2007-08-01 2012-03-27 Tandent Vision Science, Inc. System and method for identifying complex tokens in an image
KR101041914B1 (ko) * 2008-06-26 2011-06-15 부산대학교 산학협력단 셀레늄에 의해 탈분화된 세포, 이의 제조방법 및 이의 용도
TW201438738A (zh) * 2008-09-16 2014-10-16 Genentech Inc 治療進展型多發性硬化症之方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20170158773A1 (en) 2017-06-08
KR20070055625A (ko) 2007-05-30
MXPA05006511A (es) 2006-02-17
HK1074208A1 (en) 2005-11-04
RS20050467A (sr) 2007-08-03
AR042485A1 (es) 2005-06-22
US20220002430A1 (en) 2022-01-06
FR18C1023I2 (fr) 2019-05-17
BRPI0316779B1 (pt) 2020-04-28
ATE470675T1 (de) 2010-06-15
US20140154242A1 (en) 2014-06-05
FR18C1023I1 (sr) 2018-07-13
RU2005122448A (ru) 2006-03-20
NO338402B1 (no) 2016-08-15
KR100910433B1 (ko) 2009-08-04
DK1572744T3 (da) 2010-09-20
IL168754A (en) 2011-09-27
US7799900B2 (en) 2010-09-21
JP4351674B2 (ja) 2009-10-28
EP2289936B1 (en) 2017-05-31
TWI335821B (en) 2011-01-11
DK2289936T3 (en) 2017-07-31
TW201000132A (en) 2010-01-01
CA2507898A1 (en) 2004-07-08
KR20050086913A (ko) 2005-08-30
US20060024300A1 (en) 2006-02-02
HUE035898T2 (en) 2018-05-28
JP2012044997A (ja) 2012-03-08
JP2006517399A (ja) 2006-07-27
AR072523A2 (es) 2010-09-01
CY2018009I2 (el) 2018-06-27
HUP0500954A2 (en) 2007-09-28
HUS1800030I1 (hu) 2018-07-30
CR11367A (es) 2010-07-23
BR0316779A (pt) 2005-11-01
CY1110759T1 (el) 2015-06-10
HRP20050649B1 (hr) 2016-06-17
HRP20050649A2 (en) 2005-12-31
US20190071511A1 (en) 2019-03-07
CR7875A (es) 2008-11-07
ES2347241T3 (es) 2010-10-27
EP1572744A2 (en) 2005-09-14
HU227217B1 (en) 2010-11-29
PL212899B1 (pl) 2012-12-31
NZ566907A (en) 2009-10-30
US8562992B2 (en) 2013-10-22
CY2018009I1 (el) 2018-06-27
SI1572744T1 (sl) 2010-09-30
NO20053435L (no) 2005-08-31
WO2004056312A2 (en) 2004-07-08
UA89350C2 (uk) 2010-01-25
BRPI0316779B8 (pt) 2023-02-28
JP5885457B2 (ja) 2016-03-15
SG2013036975A (en) 2016-07-28
AR093046A2 (es) 2015-05-13
PT1572744E (pt) 2010-09-07
IL214083A0 (en) 2011-08-31
AU2003301079C1 (en) 2018-03-08
EP2301966A1 (en) 2011-03-30
HK1248731A1 (en) 2018-10-19
CL2008003323A1 (es) 2009-03-06
RU2326127C2 (ru) 2008-06-10
US20060034835A1 (en) 2006-02-16
AU2003301079A1 (en) 2004-07-14
US20090155257A1 (en) 2009-06-18
CN103833854A (zh) 2014-06-04
EP3263596A1 (en) 2018-01-03
MA27704A1 (fr) 2006-01-02
WO2004056312A3 (en) 2005-05-26
TW200501982A (en) 2005-01-16
EP2289936A1 (en) 2011-03-02
DE60332957D1 (de) 2010-07-22
EP1572744B1 (en) 2010-06-09
BE2018C021I2 (sr) 2023-03-07
AU2003301079B2 (en) 2011-06-23
PL377328A1 (pl) 2006-01-23
CA2507898C (en) 2014-02-18
JP2009159950A (ja) 2009-07-23
EP1944320A1 (en) 2008-07-16
SI2289936T1 (sl) 2017-10-30
RS20100366A (sr) 2011-04-30
CN103833854B (zh) 2017-12-12
EP1572744A4 (en) 2006-07-12
ES2633311T3 (es) 2017-09-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220002430A1 (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
NO20150245L (no) Immunoglobulinvarianter og anvendelser derav
AU2011226858B2 (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1156047A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1120058A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1074208B (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1154871A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1129406B (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1129406A (zh) 免疫球蛋白變體及其用途
HK1154871B (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1129405A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof
HK1129407A (en) Immunoglobulin variants and uses thereof