JP2016537965A - Ｎｓｐ４阻害剤及び使用方法 - Google Patents

Ｎｓｐ４阻害剤及び使用方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、ＮＳＰ４阻害剤（抗ＮＳＰ４抗体など）及びそれを使用する方法を提供する。【選択図】図１１Ａ−Ｃ

Description

関連出願とのクロスリファレンス
本出願は、２０１３年１０月１１日に出願された米国仮出願第６１／８９０１４７号、２０１３年１０月１８日に出願された第６１／８９３０５９号、及び２０１４年９月１９日に出願された第６２／０５３０５２号の優先権の利益を主張し、これらはそれぞれ、その全内容が本明細書に参照により援用される。
配列表のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出
以下のＡＳＣＩＩテキストファイルでの提出の全内容は、本明細書に参照により援用されている：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１４６３９２０２２７４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録された日付：２０１４年１０月８日、サイズ：６３ＫＢ）。
本発明は、ＮＳＰ４阻害剤及びそれを使用する方法に関する。
好中球セリンプロテアーゼは、侵入病原体から防御するために重要である自然免疫系のエフェクター分子のファミリーである。このトリプシンフォールドプロテアーゼファミリーのメンバーである、好中球エラスターゼ（ＮＥ）、カテプシンＧ（ＣＧ）、及びプロテイナーゼ３（ＰＲ３）は、侵入微生物の好中球媒介性排除（Reevesら、Nature、2002、416:291-297；Weinrauchら、Nature、2002、417:91-94；Belaaouajら、Nat Med、1998、4:615-618）及び炎症（Phamら、Nat Rev Immunol、2006、6:541-550）において重要な役割を果たすだけでなく、様々な疾患の発生においても関与し得る（Magroneら、Curr Pharm Des.、2012、18(12):1609-19及び Phamら、Int J Biochem Cell Biol.、2008、40(6-7):1317-1333）。最初、ヒトｃＤＮＡライブラリーの酵母シグナルトラップスクリーニング及びコンピュータによるマイニングによって発見された（Clarkら、Genome Res.、2003、13:2265-2270）、セリンプロテアーゼＰＲＳＳ５７は、最近、第４のＮＳＰメンバーとして同定され、その後、好中球セリンプロテアーゼ４（ＮＳＰ４）と呼ばれた（Pereraら、Proc Natl Acad Sci USA、2012、109:6229-6234；Pereraら、J Immunol.、2013）。注目すべきことには、ＮＳＰ４は、硬骨魚からヒトまで高度に保存されており、他のＮＳＰの出現より先行し、ＮＳＰ４が、好中球生態において基本的な役割を果たす可能性が高いことを示している（Pereraら、Proc Natl Acad Sci USA、2012、109:6229-6234；Pereraら、Expert Rev Clin Immunol、2012、8:501-503）。
ＮＥ、ＣＧ、及びＰＲ３の相対的に広い基質特異性は、それらの活性部位構造の詳細な知識に基づいてよく理解されている（Naviaら、Proc Natl Acad Sci USA、1989、86:7-11；Hofら、EMBO J、1996、15:5481-5491；Fujinagaら、J Mol Biol、1996、261:267-278）。しかしながら、ＮＳＰ４は、トリプシンのように、アルギニン残基の後の基質を切断するが（Pereraら、Proc Natl Acad Sci USA、2012、109:6229-6234；Pereraら、J Immunol.、2013）、逆説的に、小さい脂肪族アミノ酸を好む非常に異なるエラスターゼ様活性部位を予測する一次配列を有し、外見的には、長いＰ１−アルギニン側鎖とは適合しないという謎を提示する。ＮＳＰ４の長い進化的系列及びその特有の活性部位により、ＮＳＰ４が好中球機能にとって重要なプロテアーゼであり、かつ好中球媒介性疾患又は障害に寄与し得ることが考えられる。しかしながら、好中球セリンプロテアーゼファミリーの他のメンバーと比較して、関節炎などの好中球媒介性疾患におけるＮＳＰ４の役割は知られていない。例えば、マウスコラーゲン抗体誘導性関節炎モデルにおいて完全防御を付与するのにＮＥとＣＧの複合欠損が必要とされた（Adkisonら、J Clin Invest、2002、109:363-371）。ＮＥ及びＣＧはまた、それぞれ、ＩＬ−３３をプロセシングして活性化する能力があり（Lefrancaisら、Proc Natl Acad Sci USA、2012、109:1673-1678）、そのＩＬ−３３は、炎症性関節炎を促進する炎症促進性サイトカインである（Xuら、Proc Natl Acad Sci USA、2008、105:10913-10918）。同様に、炎症性関節炎を軽減する抗炎症性サイトカインであるプログラニュリン（Tangら、Science、2011、332:478-484）の不活性化を防ぐのにＮＥとＰＲ３の複合消失が必要とされた（Kessenbrockら、J Clin Invest、2008、118:2438-2447）。
予測されるエラスターゼ様活性部位とＮＳＰ４により示される実際のトリプシン様活性部位との間の逆説を解決することは、特異的なＮＳＰ４阻害剤の開発を促進することができる酵素活性部位の構造的特徴を提供する可能性がある。これらのＮＳＰ４阻害剤は、基礎病理がＮＳＰ４の活性に完全に、又は部分的に起因する好中球媒介性疾患又は障害の治療のニーズを満たし得る。
特許出願、特許刊行物、科学論文、及び国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）寄託番号を含む本明細書に引用された全ての参考文献は、あたかもそれぞれ個々の参考文献が具体的かつ個々に示されて、参照により援用されているように、その全体が本明細書に参照により援用されている。
本発明は、広くには、好中球セリンプロテアーゼ４（ＮＳＰ４）阻害剤及びそれを使用する方法を提供する。
一態様において、有効量のＮＳＰ４阻害剤を個体に投与することを含む、個体において顆粒球により媒介される疾患又は障害を治療又は予防するための方法が本明細書において提供される。一部の実施態様において、疾患又は障害は、好酸球媒介性、好塩基球媒介性、又は好中球媒介性疾患又は障害である。本明細書に記載された方法の一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤により治療することができる疾患又は障害は、血管性疾患、炎症性疾患、又は自己免疫疾患である。本明細書に記載された方法の一部の実施態様において、疾患又は障害は、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、脳虚血、急性肺傷害、アナフィラキシー、全身性アナフィラキシー、アレルギー性肺炎症、喘息（例えば、アレルギー性喘息、ウイルス誘発性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、特発性肺線維症、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性血管炎、水疱形成性皮膚疾患（例えば、水疱性類天疱瘡）、炎症性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、じん麻疹、好酸球性蜂巣炎）、がん（例えば、肺がん）、腎臓疾患（例えば、糸球体腎炎）、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、敗血症性ショック、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病）からなる群から選択される。本明細書に記載された方法の一部の実施態様において、個体は、疾患若しくは障害を有し、又は疾患若しくは障害と診断されている。本明細書に記載された方法の一部の実施態様において、個体は、疾患又は障害を発症するリスクがある。一部の実施態様において、個体はヒトである。
一態様において、有効量のＮＳＰ４阻害剤を個体に投与することを含む、個体において好中球媒介性疾患又は障害を治療又は予防するための方法が本明細書において提供される。一部の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、血管性疾患及び炎症性疾患からなる群から選択される。さらなる実施態様において、血管性疾患は、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、及び脳虚血からなる群から選択される。別のさらなる実施態様において、炎症性疾患は、急性肺傷害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、変形性関節症、関節リウマチ、及び敗血症性ショックからなる群から選択される。本明細書における実施態様の何れかにおいて、個体はヒトであり得る。
別の態様において、本明細書に記載された方法の何れかに使用することができるＮＳＰ４阻害剤が本明細書において提供される。一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、抗体、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、及びペプチド阻害剤からなる群から選択される。さらなる実施態様において、プロテアーゼ阻害剤は、セリンプロテアーゼ阻害剤である。別のさらなる実施態様において、プロテアーゼ阻害剤は、α１−アンチトリプシン、ヘパリン活性化アンチトロンビン、Ｃ１インヒビター、又はα２−アンチプラスミンである。
本明細書における実施態様の何れかにおいて、ＮＳＰ４阻害剤は、ＮＳＰ４と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体であり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、ＮＳＰ４阻害剤は、成熟型のＮＳＰ４と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体であり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、ＮＳＰ４阻害剤は、成熟型のＮＳＰ４と特異的に結合するが、前駆型のＮＳＰ４と結合しない抗ＮＳＰ４抗体であり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、ＮＳＰ４阻害剤は、ヒトＮＳＰ４と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体であり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、ＮＳＰ４阻害剤は、マウスＮＳＰ４と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体であり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、ＮＳＰ４阻害剤は、ヒトＮＳＰ４とマウスＮＳＰ４の両方と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体であり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、抗ＮＳＰ４抗体は、モノクローナル抗体であり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、抗ＮＳＰ４抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片であり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、抗ＮＳＰ４抗体は、ヒト化抗体又はキメラ抗体であり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、抗ＮＳＰ４抗体は、（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｉｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、（ｉｖ）配列番号１、４、又は７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｖ）配列番号２、５、又は８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｖｉ）配列番号３、６、又は９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個のＨＶＲを含み得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、抗ＮＳＰ４抗体は、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び配列番号１３、１４、又は１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み得る。
本明細書における一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所に、経口で、経皮で、腹腔内に、眼窩内に、植え込みにより、吸入により、髄腔内に、脳室内に、又は鼻腔内に投与することができる。本明細書における実施態様の何れかにおいて、ＮＳＰ４阻害剤は、ＮＳＰ４阻害剤及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物に製剤化することができる。
さらに別の態様において、ＮＳＰ４阻害剤、及び個体において顆粒球により媒介される疾患又は障害を治療又は予防するためのＮＳＰ４阻害剤の使用に関する説明書を含む添付文書を含む製品が本明細書において提供される。一部の実施態様において、疾患又は障害は、好酸球媒介性、好塩基球媒介性、又は好中球媒介性疾患又は障害である。一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤により治療することができる疾患又は障害は、血管性疾患、炎症性疾患、又は自己免疫疾患である。一部の実施態様において、疾患又は障害は、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、脳虚血、急性肺傷害、アナフィラキシー、全身性アナフィラキシー、アレルギー性肺炎症、喘息（例えば、アレルギー性喘息、ウイルス誘発性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、特発性肺線維症、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性血管炎、水疱形成性皮膚疾患（例えば、水疱性類天疱瘡）、炎症性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、じん麻疹、好酸球性蜂巣炎）、がん（例えば、肺がん）、腎臓疾患（例えば、糸球体腎炎）、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、敗血症性ショック、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病）からなる群から選択される。一部の実施態様において、個体は、疾患若しくは障害を有し、又は疾患若しくは障害と診断されている。一部の実施態様において、個体は、疾患又は障害を発症するリスクがある。一部の実施態様において、個体はヒトである。
さらに別の態様において、ＮＳＰ４阻害剤、及び個体において好中球媒介性疾患又は障害を治療又は予防するためのＮＳＰ４阻害剤の使用に関する説明書を含む添付文書を含む製品が本明細書において提供される。一部の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、血管性疾患及び炎症性疾患からなる群から選択される。さらなる実施態様において、血管性疾患は、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、及び脳虚血からなる群から選択される。別のさらなる実施態様において、炎症性疾患は、急性肺傷害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、変形性関節症、関節リウマチ、及び敗血症性ショックからなる群から選択される。本明細書における実施態様の何れかにおいて、個体はヒトであり得る。
別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｔ（配列番号９５）（ここで、Ｘ１はＹ又はＡであり、Ｘ２はＴ、Ｇ、又はＤであり、Ｘ３はＴ又はＦであり、Ｘ４はＰ又はＬである）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。さらに別の態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｔ（配列番号９５）（ここで、Ｘ１はＹ又はＡであり、Ｘ２はＴ、Ｇ、又はＤであり、Ｘ３はＴ又はＦであり、Ｘ４はＰ又はＬである）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１２及び９２−９４からなる群から選択される配列を含む。
ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７８の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体３５．ＷＴの少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む可変ドメインを含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体３５．ＷＴの重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＧＦＰＬＴ（配列番号９２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＧＦＰＬＴ（配列番号９２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７８の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０２の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体３５．１４の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体３５．１４の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＤＦＰＬＴ（配列番号９３）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＤＦＰＬＴ（配列番号９３）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７８の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０３の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体３５．５０の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体３５．５０の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＡＧＦＰＬＴ（配列番号９４）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＡＧＦＰＬＴ（配列番号９４）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７８の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０４の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体３５．６２の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体３５．６２の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｔ（配列番号９５）（ここで、Ｘ１はＹ又はＡであり、Ｘ２はＴ、Ｇ、又はＤであり、Ｘ３はＴ又はＦであり、Ｘ４はＰ又はＬである）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＧＦＰＬＴ（配列番号９２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＤＦＰＬＴ（配列番号９３）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＡＧＦＰＬＴ（配列番号９４）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＫＲＨＬＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＡＹＳＡＰＰＴ（配列番号９６）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。一部の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＫＲＨＬＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＡＹＳＡＰＰＴ（配列番号９６）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号１０５の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体３５．７７の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体３５．７７の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＫＲＨＬＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＡＹＳＡＰＰＴ（配列番号９６）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列又はＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９１）（ここで、Ｘ１はＫ又はＲであり、Ｘ２はＳ、Ｇ、又はＶであり、Ｘ３はＬ又はＦである）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＰＴ（配列番号１０１）（ここで、Ｘ１はＳ、Ａ、Ｎ、又はＴであり、Ｘ２はＹ、Ｎ、又はＦであり、Ｘ３はＴ、Ｓ、又はＮであり、Ｘ４はＴ、Ａ、又はＳである）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖がＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列若しくはＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＸ１Ｘ２Ｘ３ＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９１）（ここで、Ｘ１はＫ又はＲであり、Ｘ２はＳ、Ｇ、又はＶであり、Ｘ３はＬ又はＦである）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＰＴ（配列番号１０１）（ここで、Ｘ１はＳ、Ａ、Ｎ、又はＴであり、Ｘ２はＹ、Ｎ、又はＦであり、Ｘ３はＴ、Ｓ、又はＮであり、Ｘ４はＴ、Ａ、又はＳである）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６７、８９、及び９０からなる群から選択される配列を含む。ある特定の実施態様において、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１２及び９７−１００からなる群から選択される配列を含む。ある特定の実施態様において、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６７、８９、及び９０からなる群から選択される配列を含み、かつＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号１２及び９７−１００からなる群から選択される配列を含む。
ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号８３の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体５１.ＷＴの少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体５１．ＷＴの重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号１０７の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０８の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体５１．３０の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体５１．３０の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＡＮＳＴＰＰＴ（配列番号９８）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む可変ドメインを含む。ある特定の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＡＮＳＴＰＰＴ（配列番号９８）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号８３の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０９の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体５１．５０の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む可変ドメインを含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体５１．５０の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＧＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＧＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号１１０の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０８の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体５１．５１の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体５１．５１の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＶＦＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＮＦＳＳＰＰＴ（配列番号９９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＶＦＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＮＦＳＳＰＰＴ（配列番号９９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号１１１の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１１２の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体５１．５９の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体５１．５９の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号８３の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０８の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体５１．７２の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体５１．７２の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＧＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＴＹＮＡＰＰＴ（配列番号１００）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＧＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＴＹＮＡＰＰＴ（配列番号１００）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号１１０の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１１３の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表５−７に示されているような）抗体５１．８２の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（例えば、表７に示されているような）抗体５１．８２の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列又はＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９１）（ここで、Ｘ１はＫ又はＲであり、Ｘ２はＳ、Ｇ、又はＶであり、Ｘ３はＬ又はＦである）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＰＴ（配列番号１０１）（ここで、Ｘ１はＳ、Ａ、Ｎ、又はＴであり、Ｘ２はＹ、Ｎ、又はＦであり、Ｘ３はＴ、Ｓ、又はＮであり、Ｘ４はＴ、Ａ、又はＳである）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＡＮＳＴＰＰＴ（配列番号９８）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＧＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＶＦＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＮＦＳＳＰＰＴ（配列番号９９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＧＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＴＹＮＡＰＰＴ（配列番号１００）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＷＩＳ（配列番号２０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＴＩＳＰＹＮＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＶＬＲＰＫＶＹＡＳＶＭＤＹ（配列番号２２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＴＩＳＰＹＮＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＶＬＲＰＫＶＹＡＳＶＭＤＹ（配列番号２２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＷＩＳ（配列番号２０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＴＩＳＰＹＮＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＶＬＲＰＫＶＹＡＳＶＭＤＹ（配列番号２２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号６８の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体１−１の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体１−１の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＹＳＩＨ（配列番号２３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＧＩＳＰＴＮＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＬＶＦＹＲＧＶＭＤＹ（配列番号２５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＧＩＳＰＴＮＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＬＶＦＹＲＧＶＭＤＹ（配列番号２５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＹＳＩＨ（配列番号２３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＧＩＳＰＴＮＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＬＶＦＹＲＧＶＭＤＹ（配列番号２５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体１−２の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体１−２の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＤＮＷＩＳ（配列番号２６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＹＩＹＰＡＳＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＳＤＳＰＨＡＹＷＹＡＭＤＹ（配列番号２８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＹＩＹＰＡＳＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＳＤＳＰＨＡＹＷＹＡＭＤＹ（配列番号２８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＷＩＳ（配列番号２６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＹＩＹＰＡＳＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＳＤＳＰＨＡＹＷＹＡＭＤＹ（配列番号２８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７０の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体１−３の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体１−３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＴＮＮＳＩＳ（配列番号２９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＡＩＳＰＮＮＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＮＡＷＨＹＳＷＶＧＶＭＤＹ（配列番号３１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＡＩＳＰＮＮＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＮＡＷＨＹＳＷＶＧＶＭＤＹ（配列番号３１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＮＮＳＩＳ（配列番号２９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＡＩＳＰＮＮＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＮＡＷＨＹＳＷＶＧＶＭＤＹ（配列番号３１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体１−５の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体１−５の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＴＤＹＳＩＨ（配列番号３２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＥＩＹＰＹＳＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＤＧＤＧＷＦＤＷＡＭＤＹ（配列番号３４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＥＩＹＰＹＳＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＤＧＤＧＷＦＤＷＡＭＤＹ（配列番号３４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＤＹＳＩＨ（配列番号３２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＥＩＹＰＹＳＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＤＧＤＧＷＦＤＷＡＭＤＹ（配列番号３４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７２の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体２−１の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体２−１の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＳＴＡＩＳ（配列番号３５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＥＩＹＰＳＤＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＶＫＷＡＶＳＳＬＧＶＭＤＹ（配列番号３７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＥＩＹＰＳＤＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＶＫＷＡＶＳＳＬＧＶＭＤＹ（配列番号３７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＳＴＡＩＳ（配列番号３５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＥＩＹＰＳＤＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＶＫＷＡＶＳＳＬＧＶＭＤＹ（配列番号３７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体２−２の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体２−２の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＴＤＳＤＩＳ（配列番号３８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＷＩＳＰＳＤＧＡＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＨＥＡＳＤＤＤＹＡＩＤＹ（配列番号４０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＷＩＳＰＳＤＧＡＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＨＥＡＳＤＤＤＹＡＩＤＹ（配列番号４０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＤＳＤＩＳ（配列番号３８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＳＤＧＡＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＥＡＳＤＤＤＹＡＩＤＹ（配列番号４０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７４の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体２−３の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体２−３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＤＹＷＩＳ（配列番号４１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＧＩＳＰＮＮＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＥＤＤＤＥＲＤＹＡＭＤＹ（配列番号４３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＧＩＳＰＮＮＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＥＤＤＤＥＲＤＹＡＭＤＹ（配列番号４３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＹＷＩＳ（配列番号４１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＧＩＳＰＮＮＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＥＤＤＤＥＲＤＹＡＭＤＹ（配列番号４３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体２−４の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体２−４の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＴＧＹＧＩＳ（配列番号４４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＷＩＹＰＡＳＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＨＲＡＦＤＷＹＰＹＹＩＧＳＳＶＭＤＹ（配列番号４６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＷＩＹＰＡＳＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＨＲＡＦＤＷＹＰＹＹＩＧＳＳＶＭＤＹ（配列番号４６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＧＹＧＩＳ（配列番号４４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＷＩＹＰＡＳＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＨＲＡＦＤＷＹＰＹＹＩＧＳＳＶＭＤＹ（配列番号４６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７６の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体２−５の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体２−５の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＤＹＳＩＳ（配列番号４７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＥＩＮＰＡＧＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＧＤＦＰＦＷＳＤＡＹＹＶＭＤＹ（配列番号４９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＥＩＮＰＡＧＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＧＤＦＰＦＷＳＤＡＹＹＶＭＤＹ（配列番号４９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＹＳＩＳ（配列番号４７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＥＩＮＰＡＧＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＧＤＦＰＦＷＳＤＡＹＹＶＭＤＹ（配列番号４９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７７の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体３−２の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体３−２の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７８の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。抗体は、抗体３−５の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体３−５の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＤＩＳ（配列番号５３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＥＩＹＰＳＮＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＳＶＲＰＳＷＷＡＭＤＹ（配列番号５５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＥＩＹＰＳＮＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＳＶＲＰＳＷＷＡＭＤＹ（配列番号５５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＤＩＳ（配列番号５３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＥＩＹＰＳＮＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＳＶＲＰＳＷＷＡＭＤＹ（配列番号５５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号７９の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体４−２の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体４−２の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＳＹＤＩＳ（配列番号５６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＴＩＳＰＹＤＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＹＩＲＲＹＳＶＨＹＧＭＤＹ（配列番号５８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＴＩＳＰＹＤＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＹＩＲＲＹＳＶＨＹＧＭＤＹ（配列番号５８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＳＹＤＩＳ（配列番号５６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＴＩＳＰＹＤＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＹＩＲＲＹＳＶＨＹＧＭＤＹ（配列番号５８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号８０の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体４−３の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体４−３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＴＳＴＳＩＨ（配列番号５９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＥＩＴＰＨＧＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＧＲＴＫＷＧＷＬＹＧＭＤＹ（配列番号６１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＥＩＴＰＨＧＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＧＲＴＫＷＧＷＬＹＧＭＤＹ（配列番号６１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＳＴＳＩＨ（配列番号５９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＥＩＴＰＨＧＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＧＲＴＫＷＧＷＬＹＧＭＤＹ（配列番号６１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号８１の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体４−４の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体４−４の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＴＮＮＳＩＨ（配列番号６２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＥＩＡＰＤＤＧＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＧＶＩＲＹＡＹＬＹＡＭＤＹ（配列番号６４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＥＩＡＰＤＤＧＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＧＶＩＲＹＡＹＬＹＡＭＤＹ（配列番号６４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＮＮＳＩＨ（配列番号６２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＥＩＡＰＤＤＧＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＧＶＩＲＹＡＹＬＹＡＭＤＹ（配列番号６４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号８２の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体４−５の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体４−５の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号８３の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体５−１の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体５−１の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＮＴＹＩＳ（配列番号１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＧＦＩＹＰＡＮＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＲＹＲＬＳＦＤＹ（配列番号３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＧＦＩＹＰＡＮＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＲＹＲＬＳＦＤＹ（配列番号３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＮＴＹＩＳ（配列番号１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＦＩＹＰＡＮＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＲＹＲＬＳＦＤＹ（配列番号３）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号８４の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体５−２の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体５−２の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＳＧＮＤＩＳ（配列番号４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＧＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＲＶＳＦＹＳＲＨＡＧＭＤＹ（配列番号６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＧＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＲＶＳＦＹＳＲＨＡＧＭＤＹ（配列番号６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＮＤＩＳ（配列番号４）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＧＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＲＶＳＦＹＳＲＨＡＧＭＤＹ（配列番号６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号８５の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体５−３の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体５−３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
さらに別の態様において、（ａ）ＧＦＴＦＴＳＹＡＩＳ（配列番号７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＡＧＩＳＰＳＮＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＡＧＲＷＴＨＳＤＩＤＹ（配列番号９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３からなる群から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＧＩＳＰＳＮＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＡＧＲＷＴＨＳＤＩＤＹ（配列番号９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＳＹＡＩＳ（配列番号７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＧＩＳＰＳＮＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＡＧＲＷＴＨＳＤＩＤＹ（配列番号９）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、配列番号８６の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体５−４の少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の超可変領域（ＨＶＲ）配列（例えば、表３及び４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。ある特定の実施態様において、抗体は、抗体５−４の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列（例えば、表４に示されているようなもの、並びに配列番号１９、１１、及び１２）を含む。
上記の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗体は、配列番号１１４の配列を含む重鎖定常領域を含む。上記の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗体は、配列番号１１５の配列を含む軽鎖定常領域を含む。
さらに別の態様において、ＮＳＰ４活性部位に特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。別の態様において、ＮＳＰ４の触媒活性を阻害する抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。別の態様において、ＮＳＰ４活性部位に特異的に結合し、かつＮＳＰ４の触媒活性を阻害する抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
さらに別の態様において、ＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。別の態様において、ＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。別の態様において、ＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合し、かつＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
上記の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗体はモノクローナル抗体である。前述の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である。前述の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４の定常領域を含む。前述の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗体は成熟型のＮＳＰ４と特異的に結合する。前述の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗体は成熟型のＮＳＰ４と特異的に結合するが、前駆型のＮＳＰ４と結合しない。前述の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗体はヒトＮＳＰ４と特異的に結合する。前述の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗体はマウスＮＳＰ４と特異的に結合する。前述の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗体はヒトＮＳＰ４とマウスＮＳＰ４の両方と特異的に結合する。
別の態様において、本明細書に記載された抗体の何れかをコードする単離された核酸が本明細書において提供される。別の態様において、本明細書に記載された核酸を含むベクターが本明細書において提供される。別の態様において、本明細書に記載された核酸を含む宿主細胞が本明細書において提供される。別の態様において、本明細書に記載された宿主細胞を抗体の産生に適した条件下で培養することを含む、本明細書に記載された抗体を産生するための方法が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、本明細書に記載された抗体を産生するための方法が、本明細書に記載された宿主細胞により産生される本明細書に記載された抗体を回収することをさらに含む。別の態様において、本明細書に記載された抗体を産生するための方法により産生される抗体が本明細書において提供される。別の態様において、本明細書に記載された抗体の何れか、及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物が本明細書において提供される。
さらに別の態様において、有効量の、本明細書に記載された抗体の何れかを個体に投与することを含む、個体において顆粒球により媒介される疾患又は障害を治療又は予防するための方法が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、抗体は、ＮＳＰ４活性部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４の触媒活性を阻害する。ある特定の実施態様において、抗体は、ＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する。ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４活性部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４の触媒活性を阻害する抗体、並びにＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する抗体の有効量が、個体に投与される。前述の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、疾患又は障害は、好中球媒介性、好酸球媒介性、又は好塩基球媒介性疾患又は障害である。ある特定の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、血管性疾患及び炎症性疾患から選択される。ある特定の実施態様において、血管性疾患は、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、及び脳虚血から選択される。ある特定の実施態様において、炎症性疾患は、急性肺傷害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、変形性関節症、関節リウマチ、及び敗血症性ショックから選択される。ある特定の実施態様において、疾患又は障害は、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性血管炎、脳虚血、急性肺傷害、アナフィラキシー、全身性アナフィラキシー、アレルギー性肺炎症、特発性肺線維症、喘息、アレルギー性喘息、ウイルス誘発性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、水疱形成性皮膚疾患、水疱性類天疱瘡、炎症性皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、じん麻疹、好酸球性蜂巣炎、がん、肺がん、腎臓疾患、糸球体腎炎、敗血症性ショック、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、及びクローン病から選択される。前述の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、個体はヒトである。前述の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗体は、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所に、経口で、経皮で、腹腔内に、眼窩内に、植え込みにより、吸入により、髄腔内に、脳室内に、又は鼻腔内に投与される。前述の実施態様の何れかと組み合わせることができるある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、その抗体及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物に製剤化される。
さらに別の態様において、本明細書に記載された抗体の何れかを含む製品が本明細書において提供される。ある特定の実施態様において、製品は、個体において顆粒球により媒介される疾患又は障害を治療又は予防するための抗体の使用に関する説明書を含む添付文書をさらに含む。一部の実施態様において、疾患又は障害は、好酸球媒介性、好塩基球媒介性、又は好中球媒介性疾患又は障害である。一部の実施態様において、本明細書に記載された抗体により治療することができる疾患又は障害は、血管性疾患、炎症性疾患、又は自己免疫疾患である。一部の実施態様において、疾患又は障害は、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、脳虚血、急性肺傷害、アナフィラキシー、全身性アナフィラキシー、アレルギー性肺炎症、喘息（例えば、アレルギー性喘息、ウイルス誘発性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、特発性肺線維症、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性血管炎、水疱形成性皮膚疾患（例えば、水疱性類天疱瘡）、炎症性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、じん麻疹、好酸球性蜂巣炎）、がん（例えば、肺がん）、腎臓疾患（例えば、糸球体腎炎）、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、敗血症性ショック、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病）からなる群から選択される。一部の実施態様において、個体は、疾患若しくは障害を有し、又は疾患若しくは障害と診断されている。一部の実施態様において、個体は、疾患又は障害を発症するリスクがある。一部の実施態様において、個体はヒトである。
本明細書に記載された様々な実施態様の性質の１つ、一部、又は全部を組み合わせて、本発明の他の実施態様を形成し得ることは、理解されるべきである。これらを始めとする本発明の態様は、当業者に明らかになるだろう。これらを始めとする本発明の態様は、以下に続く詳細な説明によりさらに記載される。
ＮＳＰ４オルソログの活性領域の配列アラインメントの図である。残基は、キモトリプシノーゲン番号付けシステムを使用して、上部に番号を付している。ジスルフィド結合を、下部に線で示す。保存残基は、ＣｌｕｓｔａｌＸスキームを使用して色を付ける。１９０位、１９２位、及び２１６位のＮＳＰ４一次基質特異性決定基を標識し、枠で囲う。Ｐ１−アルギニン側鎖を配位する１８０−ループ（１９０ＦＣＳ１９２）及び２２０−ループ（２１４ＳＦＳＧｘｘＣ２２０）セグメントの長さもまた、ＮＳＰ４オルソログにおいて保存されており、上部の黒色バーで示す。２つ以上のＮＳＰ４パラログが、タスマニアデビル、カエル（アフリカツメガエル（Ｘ．ｌａｅｖｉｓ）及びネッタイツメガエル（Ｘ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ））、及びシーラカンスに見出され、いくつかのパラログは１９２位に置換を有するが、すべての種が、すべての必須Ｈ結合アクセプターを有する少なくとも１つのパラログを有する。爬虫類及び鳥類種は、本物の好中球の代わりに偽好酸球を有し、それらのＮＳＰ４オルソログは、Ｆ１９０Ｖ置換を有する。鳥類ＮＳＰ４オルソログは、Ｓ１９２Ａ置換のために減少した活性を有すると予測され、Ｃ２０１Ｆ置換により孤立した不対Ｃ１３６を有する。ＮＳＰ４オルソログ配列は、国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）及びＥＮＳＥＭＢＬデータベースから編集され、ＣｌｕｓｔａｌＷ（Larkinら、Bioinformatics, 2007, 23:2947-2948）を使用してアラインした。次に、予備的アラインメントを手作業でキュレーションし、ＳｅａＶｉｅｗ（Gouyら、Mol Biol Evol, 2010, 27:221-224）及びＵｎｉｐｒｏ ＵＧＥＮＥ（Okonechnikovら、Bioinformatics, 2012, 28:1166-1167）を使用して解析した。 ＮＳＰ４が、トリプシン様アルギニン特異性を有するエラスターゼ様活性部位を有することを示す図である。Ａ）ＮＳＰ４ Ｓ１ポケットの概略図。Ｂ）トリプシン、キモトリプシン、及び好中球エラスターゼＳ１ポケット並びにそれらと好ましいＰ１残基との相互作用の概略図。トリプシン様プロテアーゼは、深いＳ１ポケットを有し、Ｓ１ポケットの底部で基質Ｐ１−アルギニンと保存されたＤ１８９との間の塩橋相互作用を形成する（点線）。キモトリプシン様プロテアーゼは、かさ高いＰ１残基を収容する大きな疎水性ポケットを有する。エラスターゼ様プロテアーゼは、２１６位及び１９０位の残基により形成され、小さな脂肪族Ｐ１残基を収容する、浅いＳ１ポケットを有する。 ＮＳＰ４が、トリプシン様アルギニン特異性を有するエラスターゼ様活性部位を有することを示す図である。Ｃ）昆虫（バキュロウイルス発現ベクター系；ＢＥＶＳ）又は哺乳動物細胞（チャイニーズハムスター卵巣；ＣＨＯ）から作製された、組換え野生型（ＷＴ）又は不活性（Ｓ１９５Ａ）ＮＳＰ４で処置された異なるＰ１残基とともに蛍光発生ペプチド基質パネルを使用した、ＮＳＰ４ Ｐ１基質特異性のプロファイリング。Ｐ１−Ａｒｇペプチド：ＷＴ（ＢＥＶＳ）ｋｃａｔ／ＫＭ＝１．１×１０４±２．１×１０３ Ｍ−１ｓ−１及びＷＴ（ＣＨＯ）ｋｃａｔ／ＫＭ＝７．５×１０３±１．１×１０３ Ｍ−１ｓ−１。Ｄ）ＮＳＰ４ Ｓ１ポケット変異体による蛍光発生ペプチドの切断。活性は、毎秒形成されるナノモル産物として測定される（ｎＭ／ｓ）。結果は、少なくとも３つの独立した実験からの平均±標準偏差である。 ＮＳＰ４が、閉塞されたＳ１ポケット及びＰ１−アルギニンとの非カノニカルな相互作用を特徴とすることを示す図である。Ａ）ＮＳＰ４結晶構造の重層：ＮＳＰ４−アポフォーム１、ＮＳＰ４−アポフォーム２、ＮＳＰ４：ＦＦＲ−ｃｍｋ、及びＮＳＰ４：ＶＬＫ−ｃｍｋ。アスタリスクは、触媒三残基を示す。 ＮＳＰ４が、閉塞されたＳ１ポケット及びＰ１−アルギニンとの非カノニカルな相互作用を特徴とすることを示す図である。Ｂ）左上、カノニカルなトリプシン様プロテアーゼ、第ＶＩＩａ因子、ＰＤＢ １ＤＡＮに結合したＦＦＲ−ｃｍｋ（スティック）。右上、ＮＳＰ４に結合したＦＦＲ−ｃｍｋ（スティック）。左下、トリプシン様プロテアーゼ（リボン）に結合した１０個の異なるＰ１−アルギニンリガンド（スティック）の重層を有するカノニカルなＳ１ポケットの側面図。図示されている構造は、１ＤＡＮ、１ＳＨＨ、１ＯＲＦ、１ＡＵＴ、１ＰＦＸ、２ＦＩＲ、１ＬＭＷ、１ＢＵＩ、２Ｂ８０、１ＢＤＡである。右下、ＮＳＰ４に結合したＦＦＲ−ｃｍｋ（スティック）の側面図。 ＮＳＰ４が、イオン性相互作用を介してヘパリンと結合する塩基性パッチを有することを示す図である。Ａ）−５から５ｋＴ／ｅで輪郭を付けたポアソン−ボルツマン静電気計算により陰影を付けたＮＳＰ４の表面表現。Ｓ１は、閉塞されたＳ１ポケットを示す。 ＮＳＰ４が、イオン性相互作用を介してヘパリンと結合する塩基性パッチを有することを示す図である。Ｂ）異なるイオン条件での蛍光偏光（左）及び０．１５Ｍ ＮａＣｌ条件での未変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動（右）により決定される、フルオレセインをコンジュゲートされたヘパリンと結合するＮＳＰ４。 ＮＳＰ４活性部位における代表的な電子密度を示す図である。１．５σで輪郭を付けた、ＮＳＰ４活性部位のσＡ重み付けされた２ｍＦｏ−ＤＦｃ電子密度マップ。図示するのは、２２０−ループ残基２１４ＳＦＳＧＬＷＣ２２０、１８０−ループ残基１９０ＦＣＳ１９２、並びに触媒残基Ｈ５７及びＳ１９５である。Ｓ１ポケットを閉塞させるＳ２１６及びＦ１９０残基が、スティックとして示される。結合したＦＦＲ−ｃｍｋ及びＶＬＫ−ｃｍｋは、スティックとして示される。 「アップ」コンフォメーションのＰ１−アルギニンが、Ｈ結合ネットワークにより安定化されることを示す図である。Ａ）ＮＳＰ４及び第ＶＩＩａ因子（ＰＤＢ １ＤＡＮ）におけるＰ１−アルギニンの構造的重層。Ｂ）ＮＳＰ４におけるＰ１−アルギニン残基（Ｐ１−Ａｒｇ）の周囲のＨ結合ネットワーク。 「アップ」コンフォメーションのＰ１−アルギニンが、Ｈ結合ネットワークにより安定化されることを示す図である。Ｃ）ＮＳＰ４水素結合変異体による蛍光発生ペプチドの切断。Ｄ）ＮＳＰ４又は第Ｘａ因子（ＦＸａ）による、Ｐ１−アルギニン及びＰ１−メチルアルギニンを有する蛍光発生ペプチドの切断。 ＮＳＰ４がＰ１−リジンよりもＰ１−アルギニンを優先させることの構造的基礎を示す図である。ＮＳＰ４：ＦＦＲ−ｃｍｋ構造におけるＰ１−アルギニンは、Ｈ結合アクセプターＳ２１６及びＳ１９２側鎖及びＧ２１７骨格カルボニル酸素により配位される、Ｈ結合のネットワークにより安定化される。対照的に、ＮＳＰ４：ＶＬＫ−ｃｍｋ構造におけるＰ１−リジンは、ＮＳＰ４上のＨ結合アクセプターを完全には補完しない。 液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）による、修飾されたＰ１−アルギニン蛍光発生ペプチド基質のＮＳＰ４又はＦＸａ切断の確認を示す図である。ＮＳＰ４（５０ｎＭ）又は第Ｘａ因子（ＦＸａ、２００ｎＭ）によるＰ１−アルギニン（Ｐ１−Ａｒｇ、左パネル）又はＰ１−メチルアルギニン（Ｐ１−Ａｒｇ（Ｍｅ）、右パネル）蛍光発生ペプチド基質の切断が、ＬＣ−ＭＳを使用して確認された。ピークは、全イオン電流で測定され、逆相ＨＰＬＣを通して分離された完全長又は加水分解ペプチド断片の何れかを表す。ペプチド断片の同一性及びそれらの推定質量を示す。Ｐ１−Ａｒｇ（Ｍｅ）は、ＦＸａ切断に対して抵抗性であり、ＦＸａについてＰ１−Ａｒｇ（Ｍｅ）において観察されたピークは、ＮＳＰ４について観察された１ＩＲ｛Ａｒｇ（Ｍｅ）｝３↓４ＳＳＹＳＦＫＫ１０ではなく、１ＩＲ２↓３｛Ａｒｇ（Ｍｅ）｝ＳＳＹＳＦＫＫ１０で生じる、シフトしたＰ１切断現象を表す。 ＮＳＰ４−／−マウスの特徴づけを示す図である。Ａ）以前に記述された、相同組換えによりＮＳＰ４−／−マウスを生成するための標的戦略（Tangら、Nat Biotechnol, 2010, 28:749-755）。Ｂ）ＮＳＰ４−／−マウスにおけるＮＳＰ４除去が、３つの異なるＮＳＰ４プライマー（ＰＲＳＳ５７＿１、ＰＲＳＳ５７＿２、ＰＲＳＳ５７＿３）を使用して、全骨髄細胞からＲＴ−ｑＰＣＲにより確認された。隣接するプロテアーゼ遺伝子、好中球エラスターゼ（Ｅｌａｎｅ）、グランザイムＭ（Ｇｚｍｍ）、プロテイナーゼ３（Ｐｒｔｎ３）、及び補体因子Ｄ（Ｃｆｄ）の発現もまた、解析された。すべての遺伝子発現量が、哺乳動物１８Ｓ ｒＲＮＡ（ｄＣｔ）に対するその相対存在量により定量された。 ＮＳＰ４−／−マウスの特徴づけを示す図である。Ｃ）生存全骨髄細胞、並びにソートされたＢ細胞（Ｂ２２０＋）、骨髄性細胞（Ｂ２２０−／ＣＤ１１ｂ＋）、単球（Ｂ２２０−／ＣＤ１１ｂ＋／Ｌｙ６Ｃｈｉ）及び好中球（Ｂ２２０−／ＣＤ１１ｂ＋／Ｌｙ６Ｇｈｉ）細胞の計数。 ＮＳＰ４が、Ｋ／ＢｘＮ血清誘導血管漏出に必要とされることを示す図である。蛍光プローブＡｎｇｉｏＳｅｎｓｅ ６８０を、尾静脈を介して静脈内注射し（−５ｍｉｎ）、５分間平衡化し、続いて、Ｋ／ＢｘＮ関節炎血清を静脈内注射した（０ｍｉｎ）。Ａ）野生型及びＮＳＰ４−／−マウスからの前肢の代表的な近赤外蛍光画像。血管漏出が、野生型マウス前肢において５ｍｉｎ以降に観察できた（矢印）。Ｂ）標識された通り、１群当たりｎ＝５マウスの野生型マウス又はＮＳＰ４−／−マウスの、平均蛍光強度における倍率変化の個体定量。 ＮＳＰ４が、Ｋ／ＢｘＮ血清誘導血管関節炎に必要とされることを示す図である。Ａ）野生型（丸）及びＮＳＰ４−／−（四角）マウスにおける、全身Ｋ／ＢｘＮ血清注射後のマウスの肢の臨床スコア。データは、１群当たりｎ＝４マウスで、平均±ＳＥＭとして表す。Ｂ）実験終点におけるマウスの肢の組織学的病変スコア。１群当たりｎ＝４マウスの各マウスの全四肢を半切片（ｈｅｍｉｓｅｃｔｉｏｎｓ）として検査し、炎症、線維増殖、軟骨損傷及び骨再形成を０（病変なし）から５（重症病変）のスケール上でスコア化した。野生型マウスは、軽度から中程度の病変を有していた（３．４、３．０、２．１、２．２の平均組織学的病変スコア）一方で、ＮＳＰ４−／−マウスは、基本的に保護されていた（０．７０、０．８０、０．００、０．７８の平均組織学的病変スコア）。４つすべての組織学的病変スコアカテゴリーに基づく群間比較は、ｐ＜０．０００１の統計的有意性に達した。Ｃ）ヘマトキシリン及びエオシンで染色した野生型（左）及びＮＳＰ４−／−（右）マウス前肢の代表的な組織学的切片。上：野生型マウスは、広範な関節周囲炎症細胞浸潤を伴う相当量の軟組織腫脹（矢印）及び線維増殖を有していた。中：野生型の肢の病変は、関節内滲出液（アスタリスク）、骨膜性骨溶解（矢頭印）、及び炎症細胞浸潤（二重矢印）を含んでいた。下：野生型マウスは、密な関節周囲炎症細胞浸潤を有していた。ＮＳＰ４−／−マウスは、組織腫脹を示さず（上）、正常な関節構造を維持し（中）、細胞浸潤が最小限だった（下）。 ファージディスプレイによるコンフォメーション特異的ＮＳＰ４抗体の生成のために使用される、ＮＳＰ４の前駆型（チモーゲン）及びＮＳＰ４の成熟型（活性）の図である。ｈＺは、ヒトＮＳＰ４の前駆型を示し、ｍＺは、マウスＮＳＰ４の前駆型を示し、ｈＡは、ヒトＮＳＰ４の成熟型を示し、ｍＡは、マウスＮＳＰ４の成熟型を示す。 抗体５−２、５−３、及び５−４の重鎖可変領域のＣＤＲ配列の図である。図に示す配列は、配列表において以下の通り同定される：ファージクローン５−２のＣＤＲＨ１、配列番号１；ファージクローン５−２のＣＤＲＨ２、配列番号２；ファージクローン５−２のＣＤＲＨ３、配列番号３；ファージクローン５−３のＣＤＲＨ１、配列番号４；ファージクローン５−３のＣＤＲＨ２、配列番号５；ファージクローン５−３のＣＤＲＨ３、配列番号６；ファージクローン５−４のＣＤＲＨ１、配列番号７；ファージクローン５−４のＣＤＲＨ２、配列番号８；及びファージクローン５−４のＣＤＲＨ３、配列番号９。 バイオレイヤー干渉法実験におけるマウスＮＳＰ４の成熟型に対する抗体Ａ）５−２、Ｂ）５−３、及びＣ）５−４の特異的結合を示す一連のグラフを示す図である。ｈＺは、ヒトＮＳＰ４の前駆型を示し、ｍＺは、マウスＮＳＰ４の前駆型を示し、ｈＡは、ヒトＮＳＰ４の成熟型を示し、ｍＡは、マウスＮＳＰ４の成熟型を示す。 蛍光発生基質アッセイにおいて、抗体５−２、５−３、及び５−４が、マウスＮＳＰ４のプロテアーゼ活性を特異的にブロックしたことを示すグラフである図である。ｈＮＳＰは、成熟ヒトＮＳＰ４を示す。ｍＮＳＰ４は、成熟マウスＮＳＰ４を示す。 ４匹の野生型及び４匹のＮＳＰ４欠損マウス（ＮＳＰ４ ＰＲＳＳ５７ ＫＯ）から単離された、４つの異なるソートされた骨髄細胞画分のｍＲＮＡ測定値を示す一連のグラフを示す図である。野生型マウスにおける転写物レベルを丸で示し、ＮＳＰ４欠損マウスにおける転写物レベルを四角で示す。３つの異なるエクソン接合部にまたがる３つの異なるＮＳＰ４／Ｐｒｓｓ５７プライマー／プローブセットを使用した：Ａ）は、エクソン１−２にまたがり、Ｂ）は、エクソン２−３にまたがり、Ｃ）は、エクソン３−４にまたがる。 ４つの異なるマウス骨髄細胞系列細胞型（好中球、好酸球、肥満細胞、及びマクロファージ）におけるＮＳＰ４タンパク質の存在を検出するために実施された一連のウェスタンブロットである図である。等量のタンパク質溶解物（１０μｇ/レーン）をロードし、ウサギ抗マウスＮＳＰ４ポリクローナル抗体を使用してＮＳＰ４を検出した。マウス骨髄由来好中球、好酸球、肥満細胞、及びマクロファージを、３つの野生型（ＷＴ）及び３つのＮＳＰ４（Ｐｒｓｓ５７）欠損（ＫＯ）マウス骨髄から単離した。 ＮＳＰ４が、好中球動員に必要なことを示す図である。Ａ）全身Ｋ／ＢｘＮ血清注射後、示した時点でのマウスの肢のミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性のルミノールベース生物発光画像。図示する通り、野生型（ＷＴ）又はＮＳＰ４欠損（ＫＯ）マウスを試験し、１ｃｍ２当たりの光子の毎分計数（ｃｐｍ）として定量した。Ｂ）野生型（ＷＴ）及びＮＳＰ４欠損（ＫＯ）マウスから単離された全マウス骨髄由来好中球溶解物を使用した、ＭＰＯ及びコントロールタンパク質ベータアクチンのウェスタンブロット。各レーンは、１遺伝子型当たり３匹のマウスからのプールされた溶解物を表した。Ｃ）野生型（ＷＴ）又はＮＳＰ４欠損（ＮＳＰ４ＫＯ）マウス（ｎ＝３）における、Ｋ／ＢｘＮ血清注射後のマウスの肢のルミノールベース生体発光の代表的なグラフ。 ファージＩＣ５０アッセイによるＮＳＰ４抗体クローン親和性の推定値を示す図である。２ｕｇ／ｍｌのＮＳＰ４で被覆されたウェル内への配置及びそれに続く０．０２％Ｔｗｅｅｎ−２０を添加されたリン酸緩衝生理食塩水でのウェルの洗浄前に、可溶型ＮＳＰ４タンパク質とプレインキュベートされた、ファージクローンの検出。ｈＺ、ヒトチモーゲンＮＳＰ４；ｍＺ、マウスチモーゲンＮＳＰ４；ｈＡ、ヒト活性ＮＳＰ４；ｍＡ、マウス活性ＮＳＰ４。より高い親和性のクローンが、可溶型ＮＳＰ４と、より低い可溶型ＮＳＰ４濃度で結合し、したがって、左側にシフトしたカーブを有する。 バイオレイヤー干渉法によるＮＳＰ４抗体クローン親和性の決定を示す図である。精製ＮＳＰ４タンパク質の異なる変異体に結合する、精製ＮＳＰ４特異抗体１−１（Ａ）及び１−２（Ｂ）（両方がヒトＩｇＧ１フォーマット）のバイオレイヤー干渉法測定値。ｈＺ、ヒトチモーゲンＮＳＰ４；ｍＺ、マウスチモーゲンＮＳＰ４；ｈＡ、ヒト活性ＮＳＰ４；ｍＡ、マウス活性ＮＳＰ４；すべて標識された通り。 バイオレイヤー干渉法によるＮＳＰ４抗体クローン親和性の決定を示す図である。精製ＮＳＰ４タンパク質の異なる変異体に結合する、精製ＮＳＰ４特異抗体１−３（Ａ）及び１−５（Ｂ）（両方がヒトＩｇＧ１フォーマット）のバイオレイヤー干渉法測定値。ｈＺ、ヒトチモーゲンＮＳＰ４；ｍＺ、マウスチモーゲンＮＳＰ４；ｈＡ、ヒト活性ＮＳＰ４；ｍＡ、マウス活性ＮＳＰ４；すべて標識された通り。 バイオレイヤー干渉法によるＮＳＰ４抗体クローン親和性の決定を示す図である。精製ＮＳＰ４タンパク質の異なる変異体に結合する、精製ＮＳＰ４特異抗体２−１（Ａ）、２−２（Ｂ）、２−３（Ｃ）、及び２−４（Ｄ）（すべてがヒトＩｇＧ１フォーマット）のバイオレイヤー干渉法測定値。ｈＺ、ヒトチモーゲンＮＳＰ４；ｍＺ、マウスチモーゲンＮＳＰ４；ｈＡ、ヒト活性ＮＳＰ４；ｍＡ、マウス活性ＮＳＰ４；すべて標識された通り。 バイオレイヤー干渉法によるＮＳＰ４抗体クローン親和性の決定を示す図である。精製ＮＳＰ４タンパク質の異なる変異体に結合する、精製ＮＳＰ４特異抗体２−５（ヒトＩｇＧ１フォーマット）のバイオレイヤー干渉法測定値。ｈＺ、ヒトチモーゲンＮＳＰ４；ｍＺ、マウスチモーゲンＮＳＰ４；ｈＡ、ヒト活性ＮＳＰ４；ｍＡ、マウス活性ＮＳＰ４；すべて標識された通り。 バイオレイヤー干渉法によるＮＳＰ４抗体クローン親和性の決定を示す図である。精製ＮＳＰ４タンパク質の異なる変異体に結合する、精製ＮＳＰ４特異抗体３−２（Ａ）及び３−５（Ｂ）（両方がヒトＩｇＧ１フォーマット）のバイオレイヤー干渉法測定値。ｈＺ、ヒトチモーゲンＮＳＰ４；ｍＺ、マウスチモーゲンＮＳＰ４；ｈＡ、ヒト活性ＮＳＰ４；ｍＡ、マウス活性ＮＳＰ４；すべて標識された通り。 バイオレイヤー干渉法によるＮＳＰ４抗体クローン親和性の決定を示す図である。精製ＮＳＰ４タンパク質の異なる変異体に結合する、精製ＮＳＰ４特異抗体４−２（Ａ）、４−３（Ｂ）、及び４−４（Ｃ）（すべてがヒトＩｇＧ１フォーマット）のバイオレイヤー干渉法測定値。ｈＺ、ヒトチモーゲンＮＳＰ４；ｍＺ、マウスチモーゲンＮＳＰ４；ｈＡ、ヒト活性ＮＳＰ４；ｍＡ、マウス活性ＮＳＰ４；すべて標識された通り。 バイオレイヤー干渉法によるＮＳＰ４抗体クローン親和性の決定を示す図である。精製ＮＳＰ４タンパク質の異なる変異体に結合する、精製ＮＳＰ４特異抗体５−１（Ａ）、５−２（Ｂ）、５−３（Ｃ）、及び５−４（Ｄ）（すべてがヒトＩｇＧ１フォーマット）のバイオレイヤー干渉法測定値。ｈＺ、ヒトチモーゲンＮＳＰ４；ｍＺ、マウスチモーゲンＮＳＰ４；ｈＡ、ヒト活性ＮＳＰ４；ｍＡ、マウス活性ＮＳＰ４；すべて標識された通り。 活性ＮＳＰ４を使用した蛍光発生活性アッセイによりチモーゲンＮＳＰ４に対してパニングされた抗体のスクリーニングを示す図である。バッファーのみ（「Ｎｏ Ａｂ」）又は様々な精製抗ＮＳＰ４抗体の何れかとプレインキュベートされた、精製ヒト活性ＮＳＰ４（灰色バー）、マウス活性ＮＳＰ４（白色バー）、又はバッファーのみ（酵素なし；黒色バー）の蛍光発生ペプチド切断アッセイ。 活性ＮＳＰ４を使用した蛍光発生活性アッセイによるＮＳＰ４ブロッキング抗体に関するスクリーニングを示す図である。バッファーのみ（「Ｎｏ Ａｂ」）又は様々な精製ＮＳＰ４特異抗体の何れかとプレインキュベートされた、精製ヒト活性ＮＳＰ４（灰色バー）、マウス活性ＮＳＰ４（白色バー）、又はバッファーのみ（酵素なし；黒色バー）の蛍光発生ペプチド切断アッセイ。アスタリスクは、ＮＳＰ４酵素活性を阻害する抗体を示す。 ＮＳＰ４抗体特徴づけの要約である図である。提供されるのは、精製ＮＳＰ４特異抗体のインビトロ特徴づけの要約であり、以下により決定された（左から右）：バイオレイヤー干渉法による精製ＮＳＰ４変異体に対する親和性、バイオレイヤー干渉法により決定された特異性分類、及び蛍光発生酵素活性アッセイによるブロッキング抗体スクリーニング。 Ｆａｂ ５−１を伴う、ＮＳＰ４抗体のエピトープマッピングを示す図である。Ｆａｂ ５−１の存在下で精製マウスＮＳＰ４に結合する精製ＮＳＰ４特異抗体のバイオレイヤー干渉法測定値による、マウス特異的ＮＳＰ４抗体のエピトープマッピング。 ヘパリンを伴う、ＮＳＰ４抗体のエピトープマッピングを示す図である。ヘパリン硫酸の存在下で精製マウスＮＳＰ４に結合する精製ＮＳＰ４特異抗体のバイオレイヤー干渉法測定値による、マウス特異的ＮＳＰ４抗体のエピトープマッピング。 汎ＮＳＰ４ Ａｂ３５抗体クローンの親和性成熟を示す図である。可溶型ｍＮＳＰ４（上）又は可溶型ｈＮＳＰ４（下）競合物質を使用したファージＩＣ５０アッセイにより決定された、Ａｂ ３−５（「３５．ＷＴ」）に対する抗体の親和性改善。 コンフォメーション特異的ＮＳＰ４ Ａｂ５１抗体クローンの親和性成熟を示す図である。可溶型ｍＮＳＰ４競合物質を使用したファージＩＣ５０アッセイにより決定された、Ａｂ ５−１（「５１．ＷＴ」）に対する抗体の親和性改善。
Ｉ．定義
本明細書で使用される場合、用語「好中球セリンプロテアーゼ４」又は「ＮＳＰ４」は、別途指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト、アカゲザル、チンパンジーのＮＳＰ４）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの任意の哺乳動物由来の任意の天然ＮＳＰ４を指す。その用語は、前駆型又はチモーゲン型のＮＳＰ４などの「完全長」のプロセシングされていないＮＳＰ４、加えて、成熟型又は活性型のＮＳＰ４などのタンパク質切断から生じるＮＳＰ４の任意の型を包含する。その用語はまた、ＮＳＰ４の天然に存在する変異体、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子変異体を包含する。例示的なヒトＮＳＰ４のアミノ酸配列は、配列番号１７に示されている。別の例示的なヒトＮＳＰ４のアミノ酸配列は配列番号１８に示されている。
ヒトＮＳＰ４配列
ＭＧＬＧＬＲＧＷＧＲＰＬＬＴＶＡＴＡＬＭＬＰＶＫＰＰＡＧＳＷＧＡＱＩＩＧＧＨＥＶＴＰＨＳＲＰＹＭＡＳＶＲＦＧＧＱＨＨＣＧＧＦＬＬＲＡＲＷＶＶＳＡＡＨＣＦＳＨＲＤＬＲＴＧＬＶＶＬＧＡＨＶＬＳＴＡＥＰＴＱＱＶＦＧＩＤＡＬＴＴＨＰＤＹＨＰＭＴＨＡＮＤＩＣＬＬＲＬＮＧＳＡＶＬＧＰＡＶＧＬＬＲＬＰＧＲＲＡＲＰＰＴＡＧＴＲＣＲＶＡＧＷＧＦＶＳＤＦＥＥＬＰＰＧＬＭＥＡＫＶＲＶＬＤＰＤＶＣＮＳＳＷＫＧＨＬＴＬＴＭＬＣＴＲＳＧＤＳＨＲＲＧＦＣＳＡＤＳＧＧＰＬＶＣＲＮＲＡＨＧＬＶＳＦＳＧＬＷＣＧＤＰＫＴＰＤＶＹＴＱＶＳＡＦＶＡＷＩＷＤＶＶＲＲＳＳＰＱＰＧＰＬＰＧＴＴＲＰＰＧＥＡＡ（配列番号１７）
ヒトＮＳＰ４配列
ＭＧＬＧＬＲＧＷＧＲＰＬＬＴＶＡＴＡＬＭＬＰＶＫＰＰＡＧＳＷＧＡＱＩＩＧＧＨＥＶＴＰＨＳＲＰＹＭＡＳＶＲＦＧＧＱＨＨＣＧＧＦＬＬＲＡＲＷＶＶＳＡＡＨＣＦＳＨＲＤＬＲＴＧＬＶＶＬＧＡＨＶＬＳＴＡＥＰＴＱＱＶＦＧＩＤＡＬＴＴＨＰＤＹＨＰＭＴＨＡＮＤＩＣＬＬＲＬＮＧＳＡＶＬＧＰＡＶＧＬＬＲＰＰＧＲＲＡＲＰＰＴＡＧＴＲＣＲＶＡＧＷＧＦＶＳＤＦＥＥＬＰＰＧＬＭＥＡＫＶＲＶＬＤＰＤＶＣＮＳＳＷＫＧＨＬＴＬＴＭＬＣＴＲＳＧＤＳＨＲＲＧＦＣＳＡＤＳＧＧＰＬＶＣＲＮＲＡＨＧＬＶＳＦＳＧＬＷＣＧＤＰＫＴＰＤＶＹＴＱＶＳＡＦＶＡＷＩＷＤＶＶＲＲＳＳＰＱＰＧＰＬＰＧＴＴＲＰＰＧＥＡＡ（配列番号１８）
本明細書で使用される場合、用語「好中球セリンプロテアーゼ４阻害剤」又は「ＮＳＰ４阻害剤」は、インビトロ、ｉｎ ｓｉｔｕ、及び／又はインビボで、（ヒトＮＳＰ４などの哺乳動物の）ＮＳＰ４生物活性をブロックし、阻害し、低下させ（有意に低下させることを含む）、又はそれに干渉する分子を指す。用語「阻害剤」は、生物学的作用の何の特定の機構も含意するものではなく、直接的であろうと間接的であろうと、及びＮＳＰ４と相互作用しようと、その基質と相互作用しようと、又は別の機構を通して相互作用しようとに関わらず、ＮＳＰ４との全ての可能な薬理的、生理的、及び生化学的相互作用、並びに様々な、異なる、及び化学的に多岐にわたる組成物により達成することができるその結果を明確に含み、かつ包含する。例示的なＮＳＰ４阻害剤には、ＮＳＰ４、又はＮＳＰ４の前駆型及び成熟型の一方若しくは両方と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体、ＮＳＰ４をコードする核酸に方向づけられたアンチセンス分子、ＮＳＰ４をコードする核酸に方向づけられた低分子干渉ＲＮＡ（「ｓｉＲＮＡ」）、ＮＳＰ４阻害性化合物、ＮＳＰ４、又はＮＳＰ４の前駆型及び成熟型の一方若しくは両方、並びにＮＳＰ４構造的アナログと結合するＲＮＡ又はＤＮＡアプタマーが挙げられるが、それらに限定されない。一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗体）は、ＮＳＰ４と結合し（それと生理学的に相互作用し）、ＮＳＰ４基質と結合し、及び／又はＮＳＰ４合成、産生、若しくは放出を阻害する（低下させる）。他の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、ＮＳＰ４と結合し、ＮＳＰ４のその基質との結合を阻止する。なお他の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、ＮＳＰ４の発現（すなわち、転写又は翻訳）、又はタンパク質分解処理を低下させ、又は排除する。ＮＳＰ４阻害剤の型の例は本明細書に提供されている。
本明細書で使用される場合、用語「ＲＮＡ干渉」又は「ＲＮＡｉ」は一般的に、二本鎖ＲＮＡ分子又は低分子ヘアピンＲＮＡ分子が、その二本鎖又は低分子ヘアピンＲＮＡ分子が実質的な、又は完全な相同性を共有する核酸配列の発現を低下させ、又は阻害する過程を指す。用語「低分子干渉ＲＮＡ」又は「ｓｉＲＮＡ」又は「ＲＮＡｉ剤」は、ＲＮＡ干渉を誘発するＲＮＡ配列を指す。Ｋｒｅｕｔｚｅｒら、国際公開第００／４４８９５号；Ｚｅｒｎｉｃｋａ−Ｇｏｅｔｚら、国際公開第０１／３６６４６号；Ｆｉｒｅ、国際公開第９９／３２６１９号；Ｍｅｌｌｏ及びＦｉｒｅ、国際公開第０１／２９０５８号を参照。本明細書で使用される場合、ｓｉＲＮＡ分子には、化学修飾されたヌクレオチド及び非ヌクレオチドを包含するＲＮＡ分子が挙げられる。用語「ｄｄＲＮＡｉ剤」は、外因性ベクターから転写されるＤＮＡ指向性ＲＮＡｉ剤を指す。用語「低分子ヘアピンＲＮＡ」又は「ｓｈＲＮＡ」は、二重鎖領域及びループ領域を有するＲＮＡ構造を指す。ある特定の実施態様において、ｄｄＲＮＡｉ剤は、最初はｓｈＲＮＡとして発現する。
本明細書で使用される場合、用語「アプタマー」は、例えば、一般的な代謝性補助因子（例えば、コエンザイムＡ、Ｓ−アデノシルメチオニンなど）、タンパク質（例えば、補体タンパク質Ｃ５、抗体など）、又は核酸分子内の保存された構造要素（例えば、転写因子の結合に重要な構造など）などの、所望の分子標的と密接かつ特異的に結合する能力がある異種性オリゴヌクレオチドを指す。アプタマーは典型的には、約１０ヌクレオチド長から約１００ヌクレオチド長まで、約１０ヌクレオチド長から約７５ヌクレオチド長まで、約１０ヌクレオチド長から約５０ヌクレオチド長まで、約１０ヌクレオチド長から約３５ヌクレオチド長まで、及び約１０ヌクレオチド長から約２５ヌクレオチド長までの範囲であるＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオチド配列を含む。合成ＤＮＡ又はＲＮＡオリゴヌクレオチドは、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）から入手できる３９００ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（商標）を使用することなどによる標準的な固体相ホスホラミダイト方法及び装置を使用して作製することができる。アプタマーは、ＤＮＡ及びＲＮＡに見出される一般的に存在するヌクレオチド（例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、及びＴ／Ｕ）の誘導体又はアナログを組み込むことが多く、それらは、ヌクレアーゼに対する抵抗性、結合力を増加させるための、又はそれらの薬物動態学的性質を別なふうに変えるための、バックボーン改変又は結合改変（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）又はホスホチオエート結合）を含む。例示的な改変は、米国特許第６４５５３０８号；第４４６９８６３号；第５５３６８２１号；第５５４１３０６号；第５６３７６８３号；第５６３７６８４号；第５７００９２２号；第５７１７０８３号；第５７１９２６２号；第５７３９３０８号；第５７７３６０１号；第５８８６１６５号；第５９２９２２６号；第５９７７２９６号；第６１４０４８２号；並びに国際公開第００／５６７４６号及び第０１／１４３９８号に示されている。そのようなアナログ又は誘導体を含むオリゴヌクレオチドを合成するための方法は、例えば、上記で引用された特許刊行物、及び米国特許第６４５５３０８号；第５６１４６２２号；第５７３９３１４号；第５９５５５９９；第５９６２６７４号；第６１１７９９２号、及び国際公開第００／７５３７２号に開示されている。
「ブロッキング」抗体は、それが結合する抗原の生物活性を阻害し、又は低下させるものである。一部の実施態様において、ブロッキング抗体は、抗原の生物活性を実質的に、又は完全に阻害する。一部の実施態様において、抗原はＮＳＰ４である。
用語「抗ＮＳＰ４抗体」及び「ＮＳＰ４と結合する抗体」は、その抗体が、ＮＳＰ４を標的にすることにおいて診断剤及び／又は治療剤として有用であるように、ＮＳＰ４と十分な親和性で結合する能力がある抗体を指す。一実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体の、関連していない非ＮＳＰ４タンパク質との結合の程度が、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により測定される場合、抗体のＮＳＰ４との結合の約１０％未満である。ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４と結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍまで、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍまで）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、異なる種由来のＮＳＰ４の間で保存されているＮＳＰ４のエピトープと結合する。
本明細書における用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、様々な抗体構造を包含し、それには、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び所望の抗原結合活性を示す限りには、抗体断片が挙げられるが、それらに限定されない。
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、それらに限定されない。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて参照抗体のその抗原との結合を５０％以上ブロックする抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいてその抗体のその抗原との結合を５０％以上ブロックする。例示的な競合アッセイは本明細書に提供されている。
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の源又は種に由来し、一方、重鎖及び／又は軽鎖の残りが異なる源又は種に由来している抗体を指す。
抗体の「クラス」は、その重鎖が有する定常ドメイン又は定常領域の型を指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２へさらに分けられ得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプによって異なる、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例え、Ｂ細胞受容体）の下方制御；並びにＢ細胞活性化が挙げられる。
本明細書における目的のための、「アクセプターヒトフレームワーク」は、下記で定義されているような、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク由来の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来した」アクセプターヒトフレームワークは、それらの同じアミノ酸配列を含んでもよいし、又はアミノ酸配列変化を含有してもよい。一部の実施態様において、アミノ酸変化の数は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、又は２個以下である。一部の実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列において同一である。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合的相互作用の総計の強さを指す。別途指示がない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合ペア（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、当該技術分野で知られた一般的な方法により測定することができ、その方法には、本明細書に記載されたものが挙げられる。結合親和性を測定するための特定の実例的及び例示的実施態様は、以下に記載されている。
「親和性成熟」抗体は、そのような変化を有しない親抗体と比較して、１つ又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）において１つ又は複数の変化を有する抗体を指し、そのような変化は、抗体の抗原に対する親和性において向上を生じる。
本明細書における用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。その用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、重鎖のＣｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０からカルボキシル末端まで及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもしなくてもよい。本明細書で他に指定がない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１に記載されているように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムによる。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（又はＶＬ）において以下の配列で現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、天然抗体構造と実質的に類似した構造を有し、又は本明細書で定義されているようなＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように、本明細書で交換可能に使用される。
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」は、交換可能に使用され、外因性核酸が導入されている細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含み、それらは、初代形質転換細胞、及び継代の数を問わず、それらに由来した子孫を含む。子孫は、親細胞と核酸内容において完全に同一であるとは限らず、突然変異を含有してもよい。最初に形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されているのと同じ機能又は生物活性を有する突然変異体子孫は、本明細書において含まれる。
「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞により産生された抗体、又はヒト抗体レパートリー若しくは他のヒト抗体コード化配列を利用する非ヒト供給源に由来した抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒトの抗原結合性残基を含むヒト化抗体を除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般的に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１）、１−３巻にあるようなサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループは、Ｋａｂａｔら、前記にあるようなサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループは、Ｋａｂａｔら、前記にあるようなサブグループＩＩＩである。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施態様において、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全部又は実質的に全部が非ヒト抗体のＨＶＲに対応し、ＦＲの全部又は実質的に全部がヒト抗体のＦＲに対応する、少なくとも１つ、典型的には、２つの可変ドメインの実質的に全部を含む。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト抗体に由来した抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化型」は、ヒト化を受けている抗体を指す。
本明細書で使用される場合、用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列において超過変性であり、及び／又は構造的に限定されるループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの領域のそれぞれを指す。一般的に、天然の４鎖抗体は６つのＨＶＲ；ＶＨにおける３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶＬにおける３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。ＨＶＲは一般的に、超可変ループ由来の、及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、最も高い配列可変性をもち、及び／又は抗原認識に関与する。本明細書で使用される場合、ＨＶＲ領域は、２４−３６位（Ｌ１について）、４６−５６位（Ｌ２について）、８９−９７位（Ｌ３について）、２６−３５Ｂ位（Ｈ１について）、４７−６５位（Ｈ２について）、及び９３−１０２位（Ｈ３について）内に位置する任意の数の残基を含む。したがって、ＨＶＲは、以下のように以前に記載された位置における残基を含む：
Ａ）２４−３４（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）、及び９６−１０１（Ｈ３）（Chothia及びLesk、J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）；
Ｂ）Ｌ１の２４−３４、Ｌ２の５０−５６、Ｌ３の８９−９７、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−６５、及びＨ３の９５−１０２（Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest、第5版 Public Health Service、National Institutes of Health、Bethesda、MD (1991)）
Ｃ）３０−３６（Ｌ１）、４６−５５（Ｌ２）、８９−９６（Ｌ３）、３０−３５（Ｈ１）、４７−５８（Ｈ２）、９３−１００ａ−ｊ（Ｈ３）（MacCallumら、J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)）
ＶＨにおけるＣＤＲ１を例外として、ＣＤＲは、一般的に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原に接触する残基である、「特異性決定残基」又は「ＳＤＲ」を含む。ＳＤＲは、短縮型ＣＤＲ又はａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含有される。例示的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基３１−３４、Ｌ２の５０−５５、Ｌ３の８９−９６、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−５８、及びＨ３の９５−１０２に存在する。（Almagro及びFransson、Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)参照）。別途指示がない限り、ＨＶＲ残基及び可変ドメインにおける他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書においてＫａｂａｔら、前記に従って番号付けされている。
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原との結合に関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は一般的に、各ドメインが４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む、類似した構造を有する。（例えば、Kindtら、Kuby Immunology、第６版、W.H. Freeman and Co.、p 91 (2007)を参照。）単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、その抗原に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを使用して、それぞれ、補完的なＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングすることにより単離され得る。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照。
「個体」又は「対象」は哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられるが、それらに限定されない。ある特定の実施態様において、個体又は対象はヒトである。
「単離された」抗体は、その天然の環境の成分から分離されているものである。一部の実施態様において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）、又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定される場合、９５％又は９９％より高い純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法の概説について、例えば、Ｆｌａｔｍａｎら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９−８７（２００７）参照。
「単離された」核酸は、その天然の環境の成分から分離されている核酸分子を指す。単離された核酸には、その核酸分子を通常、含有する細胞に含有される核酸分子であるが、その核酸分子が、染色体外に、又はその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する、核酸分子が挙げられる。
「抗ＮＳＰ４抗体をコードする単離された核酸」は、抗体重鎖及び軽鎖をコードする１つ又は複数の核酸分子（又はその断片）を指し、それには、単一のベクター又は別々のベクターにおけるそのような核酸分子、及び宿主細胞において１つ又は複数の位置に存在するそのような核酸分子が挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、例えば、天然に存在する突然変異を含有し、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能な変異体抗体（そのような変異体は一般的に、微量で存在する）を除いて、その集団を構成する個々の抗体が同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して方向づけられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して方向づけられている。このように、修飾句「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、いかなる特定の方法による抗体の産生も必要とはしないと解釈されるべきである。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、様々な技術により作製され得、その技術には、ハイブリドーマ方法、組換えＤＮＡ方法、ファージディスプレイ方法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は部分を含有するトランスジェニック動物を利用する方法が挙げられるが、それらに限定されず、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
「ネイキッド抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、薬学的製剤中に存在し得る。
「天然抗体」は、様々な構造を有する、天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖で構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端へ、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端へ、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの型の１つに割り当てられ得る。
用語「添付文書」は、治療用産物の市販用パッケージに通例、含まれる説明書を指すように使用され、その説明書は、そのような治療用産物の使用に関する適応症、用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌、及び／又は警告についての情報を含む。
参照ポリペプチド配列に対しての「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、最大のパーセント配列同一性を達成するために、必要ならば、配列をアラインメントし、ギャップを導入した後の、かつ配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセンアミノ酸配列同一性を決定することを目的とするアラインメントは、当該技術分野における技能の範囲内である様々な方法において、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較することになっている配列の完全長にわたって最高アラインメントを達成するのに必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアライメントするための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して導かれている。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成されており、ソースコードは、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、２０５５９におけるユーザー文書に届けられており、それは、著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能であり、又はソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステム上で使用するためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変わらない。
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較に用いられる状況において、所定のアミノ酸配列Ａの所定のアミノ酸配列Ｂに対する％アミノ酸配列同一性（あるいは、所定のアミノ酸配列Ｂに対してある特定の％アミノ酸配列同一性を有し、又は含む所定のアミノ酸配列Ａと表現することができる）は、以下のように計算される：分数Ｘ／Ｙの１００倍、ここで、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により、Ａ及びＢのそのプログラムのアラインメントにおいて完全な一致としてスコア化されるアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性に等しくないだろうことは理解されているだろう。明確に他に記述がない限り、本明細書で使用される全ての％アミノ酸配列同一性の値は、直前の段落で記載されているように、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られている。
用語「薬学的製剤」は、それに含有される活性成分の生物活性が有効であることを可能にするような形をとり、かつその製剤が投与されるだろう対象に容認しがたいほど毒性である追加の成分を含有しない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」は、対象に無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、バッファー、賦形剤、安定剤、又は保存剤が挙げられるが、それらに限定されない。
本明細書で使用される場合、用語「治療」は、臨床病理の経過において、処置されることになっている個体又は細胞の自然の経過を変化させるように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果には、疾患進行の速度の減少、病態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の向上が挙げられる。例えば、障害に関連した１つ又は複数の症状が軽減され、又は除去される場合には、個体は成功裏に「治療されている」。例えば、炎症性疾患に関連した１つ又は複数の症状が軽減され、又は除去される場合には、個体は成功裏に「治療されており」、その場合には、疾患に起因する症状の減少、疾患を患っている者の生活の質の向上、疾患を治療するのに必要とされる他の薬物療法の用量の減少、疾患の進行の遅延、及び／又は個体の生存期間の延長が挙げられるが、それらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「と併用して」は、１つの治療モダリティーの別の治療モダリティーに加えての投与を指す。それとして、「と併用して」は、個体への他の治療モダリティーの投与前、投与中、又は投与後の１つの治療モダリティーの投与を指す。
本明細書で使用される場合、用語「予防（prevention）」は、個体において、障害の発生又は再発に関して予防（prophylaxis）を与えることを含む。個体は、障害の素因があり得、障害を被りやすくあり得、又は障害を発生するリスクがあり得るが、その障害とはまだ診断されていない。一部の実施態様において、本明細書に記載されたＮＳＰ４阻害剤は、障害の発生を遅らせるために使用される。一部の実施態様において、本明細書に記載されたＮＳＰ４阻害剤は、炎症及び／又は血管漏出を予防する。
本明細書で使用される場合、障害を発生する「リスクがある」個体は、検出可能な疾患又は疾患の症状を有しても有しなくてもよく、本明細書に記載された治療方法の前に、検出可能な疾患又は疾患の症状を示していても示していなくてもよい。「リスクがある」とは、個体が、当該技術分野で知られているような、障害の発生と相関する測定可能なパラメータである、１つ又は複数のリスク因子を有することを意味する。これらのリスク因子の１つ又は複数を有する個体は、これらのリスク因子の１つ又は複数をもたない個体より、障害を発生する可能性が高い。
「有効量」は、必要な投与回数及び期間において、治療的又は予防的結果を含む所望の、又は指示された効果を達成するのに少なくとも有効な量を指す。有効量は、１回又は複数回の投与において供給することができる。
「治療的有効量」は、特定の障害の測定可能な改善をもたらすのに少なくとも必要とされる最小濃度である。本明細書における治療的有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する抗体の能力などの因子によって異なり得る。治療的有効量はまた、治療的に有益な効果が抗体のいかなる毒性又は有害性効果も上回る量でもある。「予防的有効量」は、必要な投与回数及び期間において、所望の予防的結果を達成するのに有効な量を指す。必ずではないが、通常、予防的用量は、疾患の前に、又は疾患のより早期に対象において使用されるため、予防的有効量は、治療的有効量より少なくあり得る。
本明細書で使用される場合、用語「ベクター」は、連結されている別の核酸を増殖する能力がある核酸分子を指す。その用語は、自己複製する核酸構造としてのベクター、及びそれが導入されている宿主細胞のゲノムへ組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、動作可能に連結されている核酸の発現を指揮する能力がある。そのようなベクターは、本明細書では、「発現ベクター」と呼ばれる。
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に結合した分泌性Ｉｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が、抗原所有標的細胞と特異的に結合し、その後、標的細胞を細胞毒で殺害することを可能にする、細胞傷害性の型を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「武装させ」、この機構による標的細胞の殺害に必要とされる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞である、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２（１９９１）のｐ４６４の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５５００３６２号又は第５８２１３３７号に記載されたものなどのインビトロＡＤＣＣアッセイが実施され得る。そのようなアッセイについての有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替として、又は追加として、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されたものなどの動物モデルにおいて、評価され得る。
「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、補体の存在下における標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、同種抗原に結合している（適切なサブクラスの）抗体への補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）の結合により開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）に記載されているような、ＣＤＣアッセイが実施され得る。
本明細書で使用される場合、用語「約」は、当業者に容易に知られたそれぞれの値についての通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値又はパラメータへの言及は、その値又はパラメータ、それ自体に向けられる実施態様を含む（及び記載する）。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」、及び「その（the）」は、文脈が明らかに他に規定しない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「１つの（an）」抗体への言及は、１個から、モル量などの多数個の抗体までの言及であり、当業者に知られたその等価物などを含む。
本明細書に記載された本発明の態様及び実施態様は、態様及び実施態様「を含むこと（comprising）」、「からなること（consisting of）」、及び「から本質的になること（consisting essentially of）」を含むことは理解されている。
ＩＩ．組成物及び方法
Ａ．ＮＳＰ４阻害剤
ＮＳＰ４の酵素活性をインビトロで、ｉｎ ｓｉｔｕで、及び／又はインビボでブロックし、阻害し、低下させ、又は干渉するＮＳＰ４阻害剤が本明細書において提供される。ＮＳＰ４阻害剤は、以下の特性の１つ又は複数を有する分子である：（１）ＮＳＰ４酵素活性を阻害し、又は低下させる；（２）ＮＳＰ４のその基質との結合を阻害し、又は低下させる能力；（３）ＮＳＰ４のクリアランスを増加させる（例えば、放出されたＮＳＰ４の細胞外レベルを減少させる）能力；（４）好中球、好塩基球、及び／又は好酸球からのＮＳＰ４放出を阻害し、又は低下させる能力；（５）好中球、好塩基球、及び／又は好酸球において（例えば、ｍＲＮＡレベルで、及び／又はタンパク質レベルで）ＮＳＰ４発現を低下させる能力；（６）ＮＳＰ４の前駆型及び／又は成熟型と相互作用し、それらと結合し、又はそれらを認識する能力；（７）プロテアーゼ阻害剤（例えば、α１−アンチトリプシン）によるＮＳＰ４の不活性化を増強する能力；（８）ＮＳＰ４と特異的に相互作用又は結合し、好中球エラスターゼ（ＮＥ）、カテプシンＧ（ＣＧ）、又はプロテイナーゼ３（ＰＲ３）活性とは相互作用又は結合しない能力；（９）本明細書に記載又は企図された好中球媒介性疾患又は障害の任意の態様を治療、改善、又は予防する能力；並びに（１０）本明細書に記載又は企図された顆粒球により媒介される疾患又は障害の任意の態様を治療、改善、又は予防する能力。
ＮＳＰ４の産生を阻害する例示的なＮＳＰ４阻害剤には、非限定的に、ＮＳＰ４合成及び／若しくは放出を特異的に阻害する化合物、ＮＳＰ４に方向づけられたアンチセンス分子、又はＮＳＰ４をコードする核酸に方向づけられた低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子などの薬剤が挙げられる。ＮＳＰ４プロテアーゼ活性を阻害する追加の例示的なＮＳＰ４阻害剤には、非限定的に、ＮＳＰ４（例えば、前駆体ＮＳＰ４及び／又は成熟ＮＳＰ４）と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体、プロテアーゼ阻害剤（例えば、セリンプロテアーゼ阻害剤）、小分子阻害剤及び／若しくはペプチド阻害剤などのＮＳＰ４触媒活性を特異的に阻害する化合物、ＮＳＰ４のその基質との結合を特異的に阻害する化合物、ＮＳＰ４構造的アナログ、又はＮＳＰ４に結合するＲＮＡ若しくはＤＮＡアプタマーなどの薬剤が挙げられる。一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、アロステリック阻害剤である。一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、オルソステリック阻害剤である。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、ＮＳＰ４の触媒活性を低下させるプロテアーゼ阻害剤である。ある特定の実施態様において、本明細書で企図されるプロテアーゼ阻害剤は、活性ＮＳＰ４タンパク質濃度を低下させることによりＮＳＰ４プロテアーゼ活性のレベルを低下させる。一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、プロテアーゼ活性を阻害する能力がある一群のタンパク質として当該技術分野でよく知られた、セルピンと呼ばれる、セリンプロテアーゼ阻害剤である。例えば、セルピンタンパク質には、α１−アンチトリプシン、Ｃ１インヒビター、ヘパリン活性化アンチトロンビン、及びα２−アンチプラスミンが挙げられるが、それらに限定されない。セルピン阻害剤を作製又は精製するための方法は、当該技術分野でよく知られており、それには、組換えタンパク質発現又は免疫親和性精製が挙げられるが、それらに限定されない。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、小分子阻害剤（例えば、ペプチド阻害剤）であり、それには、小さいペプチド又はペプチド様分子、可溶性ペプチド、及び合成非ペプチド有機又は無機化合物が挙げられるが、それらに限定されない。小分子阻害剤は、約１００−約２０，０００ダルトン（Ｄａ）、約５００−約１５，０００Ｄａ、約１０００−約１０，０００Ｄａの何れかの分子量を有し得る。例えば、本明細書で企図される小分子阻害剤には、アマスタチン塩酸塩水和物、アンチパイン二塩酸塩、アプロチニン、エラスタチナール、エピアマスタチン塩酸塩，ヒスタチン５、ロイペプチンヘミ硫酸塩、ロイペプチントリフルオロ酢酸塩、ロイペプチン塩酸塩，ペプスタチン、又はフッ化フェニルメタンスルホニルが挙げられるが、それらに限定されない。一部の実施態様において、小分子阻害剤は、非限定的に、大環状アシルスルホンアミド、又はＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼを阻害することが知られている小分子阻害剤などの大環状阻害剤である。小分子が触媒活性に対して生じる阻害効果を生成し、試験するための方法は当該技術分野でよく知られており、そのような方法は、小分子阻害剤のＮＳＰ４活性への効果を評価するために使用することができる。例えば、ＮＳＰ４阻害剤候補のライブラリーを、バッファー中、蛍光発生ペプチド基質の存在下で各阻害剤候補を活性ＮＳＰ４とインキュベートすることにより、ＮＳＰ４プロテアーゼ活性を減少させることについてスクリーニングすることができる。ＮＳＰ４切断により、前記蛍光発生ペプチド基質は蛍光を発し、各阻害剤候補の存在下でのＮＳＰ４活性は、当該技術分野でよく知られた技術により測定することができる。本明細書に記載されたアッセイに使用することができる例示的な蛍光発生ペプチド基質には、アミノ酸配列１ＩＲ｛Ａｒｇ（Ｍｅ）｝ＳＳＹＳＦＫＫ１０又は１ＩＲ｛Ａｒｇ｝ＳＳＹＳＦＫＫ１０を有する蛍光発生ペプチド基質が挙げられるが、それらに限定されない。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、ＮＳＰ４に結合し、又はそれと物理的に相互作用する抗ＮＳＰ４抗体である。抗体は、標的抗原（例えば、ＮＳＰ４）に対してナノモル又はさらにピコモルの親和性を有し得る。ある特定の実施態様において、抗体のＫｄは、約０．０５−約１００ｎＭである。例えば、抗体のＫｄは、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、又は約５０ｐＭの何れかから約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、又は約４０ｐＭの何れかまでである。ＮＳＰ４と特異的に相互作用及び／又は結合する抗体の調製及び選択のための方法は本明細書に記載されている。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、ＮＳＰ４をコードする核酸を標的にすることにより、機能性ＮＳＰ４の発現をブロックし、又は減少させる能力がある少なくとも１つのアンチセンス分子を含む。ＮＳＰ４の核酸配列は当該技術分野で知られている。例えば、ヒトＮＳＰ４は、ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿２１４７１０に示されているような核酸配列を有し得、マウスＮＳＰ４は、ＮＣＢＩ寄託番号ＮＭ＿００１０４２７１０に示されているような核酸配列を有し得る。アンチセンスオリゴヌクレオチド分子の調製のための方法は知られており、そのような方法は、他のポリヌクレオチドと交差反応することなく、ＮＳＰ４ ｍＲＮＡの１つ又は複数と特異的に結合するアンチセンスオリゴヌクレオチドを調製するために使用することができる。標的にする例示的な部位には、開始コドン、５’制御領域、コード配列（例えば、任意の保存的コンセンサス領域）、及び３’非翻訳領域が挙げられるが、それらに限定されない。ある特定の実施態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、約１０−約１００ヌクレオチド長、約１５−約５０ヌクレオチド長、約１８−約２５ヌクレオチド長、又はそれ以上である。ある特定の実施態様において、オリゴヌクレオチドは、例えば、当業者に知られた、ホスホロチオエート結合及び２’−Ｏ−糖修飾などの、ヌクレアーゼ抵抗性を増加させるための化学修飾をさらに含む。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、ＮＳＰ４をコードする核酸を標的にすることにより、機能性ＮＳＰ４の発現をブロックし、又は減少させる能力がある少なくとも１つのｓｉＲＮＡ分子を含む。ｓｉＲＮＡ分子の調製のための方法は当該技術分野でよく知られており、そのような方法は、他のポリヌクレオチドと交差反応することなく、ＮＳＰ４ ｍＲＮＡを特異的に標的にするｓｉＲＮＡ分子を調製するために使用することができる。ｓｉＲＮＡ分子は、典型的な固体相オリゴヌクレオチド合成などによる方法により作製され得、ｓｉＲＮＡ剤の半減期及び／若しくは有効性を増加させるために、並びに／又はより頑強な送達製剤を可能にするために、化学修飾を組み入れることが多い。あるいは、ｓｉＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡの細胞内転写のための発現カセットをコードするベクターを使用して送達される。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、ＮＳＰ４と結合し、又はそれと物理的に相互作用して、ＮＳＰ４とその基質との相互作用をブロックするＲＮＡ又はＤＮＡアプタマーである。ある特定の実施態様において、アプタマーは、成熟型のＮＳＰ４と結合する少なくとも１つのＲＮＡ又はＤＮＡアプタマーを含む。ある特定の実施態様において、アプタマーは、前駆型のＮＳＰ４と結合する少なくとも１つのＲＮＡ又はＤＮＡアプタマーを含む。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、少なくとも１つのＮＳＰ４構造的アナログを含む。ＮＳＰ４構造的アナログという用語は、ＮＳＰ４（例えば、前駆型及び／又は成熟型のＮＳＰ４）の構造の部分と類似した３次元構造を有し、かつインビトロ又はインビボで生理的条件下においてＮＳＰ４基質と結合する化合物であって、その結合がＮＳＰ４生物活性を少なくとも部分的に阻害する、化合物を指す。適切なＮＳＰ４構造的アナログは、ＮＳＰ４のその基質との結合の分子モデル化を通して設計及び合成することができる。ＮＳＰ４構造的アナログは、親和性及び生物学的効果の向上を得るように、同じ又は異なる構造の任意の望ましい組合せでのモノマー、ダイマー、又はより高次のマルチマーであり得る。一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、図１に示されているようなＮＳＰ４のアミノ酸配列と結合し、又はそれと相互作用する。
アッセイ
ＮＳＰ４阻害剤は、例えば、放射標識阻害剤アッセイ、光学的アッセイ、タンパク質結合アッセイ、生化学的スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、質量シフト測定アッセイ、蛍光アッセイ、及び／又は蛍光発生ペプチド切断アッセイなどの当該技術分野でよく知られた方法を使用して、同定され、及び／又は特徴を明らかにされ得る。
結合アッセイ及び他のアッセイ
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、ＮＳＰ４に対するＮＳＰ４阻害剤候補の相互作用及び／又は結合親和性の存在を検出するための、当該技術分野でよく知られた技術により、同定することができる。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４と相互作用するＮＳＰ４阻害剤は、放射標識阻害剤アッセイを使用して同定することができる。例えば、既知量の放射標識阻害剤候補を、既知量の固定化ＮＳＰ４及びバッファーとインキュベートし得る。その後、固定化ＮＳＰ４をバッファーで洗浄し、固定化ＮＳＰ４は、例えば、ガンマカウンターなどの当該技術分野で知られた技術を使用して、放射標識ＮＳＰ４阻害剤候補の残っている存在について測定し得る。放射標識物質の存在を示す測定値は、放射標識阻害剤候補がＮＳＰ４と相互作用及び／又は結合する能力があることを示し得る。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４と相互作用するＮＳＰ４阻害剤は、光学的技術を使用して同定され得る。ＮＳＰ４の阻害剤を検出するための例示的な光学的技術は、例えば、ＮＳＰ４を比色共鳴グラフティング表面へ付着させ、それにより、光がとるにちがいない光路における変化により反射光の波長をシフトさせ、その後、阻害剤候補がＮＳＰ４と相互作用することを許された場合の反射光の波長における追加の変化を測定することを含み得る。例えば、阻害剤がＮＳＰ４とインキュベートされた場合の反射光の測定された波長に変化がないことは、その阻害剤候補がＮＳＰ４と相互作用することができないことを示し得る。阻害剤候補がＮＳＰ４とインキュベートされた場合の反射光の測定された波長における変化は、その阻害剤候補がＮＳＰ４と結合及び／又は相互作用する能力があることを示し得る。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４と相互作用するＮＳＰ４阻害剤は、タンパク質結合アッセイを使用して同定され得る。ＮＳＰ４阻害剤を検出するための例示的なタンパク質結合アッセイには、例えば、阻害剤候補の存在下におけるＮＳＰ４の免疫共沈降が挙げられ得る。例えば、ＮＳＰ４を、バッファー中、阻害剤候補とインキュベートし得、その後、当該技術分野で知られた洗浄手順中、例えば、抗ＮＳＰ４抗体などのＮＳＰ４を捕捉するのに特異的な固定化分子が使用され、阻害剤候補の存在下でＮＳＰ４を捕捉し、おそらく相互作用している阻害剤候補と共のＮＳＰ４と結合し得る。その後、おそらく相互作用している阻害剤候補と共のＮＳＰ４は、遊離させることができ、阻害剤候補の存在は、例えば、質量分析法及び／又はウェスタンブロットなどの技術により、阻害剤候補特性に基づいて検出され得る。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４と相互作用するＮＳＰ４阻害剤は、当該技術分野でよく知られた生化学的アッセイ及び／又はイムノアッセイを使用して、同定され得る。例示的な技術には、例えば、ＮＳＰ４濃度及び／又はタンパク質半減期における変化を、例えば、ウェスタンブロットなどの技術を使用して定量的に測定するアッセイが挙げられる。例えば、阻害剤候補は、ＮＳＰ４を含有する試料とインキュベートされ得、その後、ＮＳＰ４タンパク質の量が、経時変化研究中、複数のポイントで測定され得る。コントロール処理と比較した、タンパク質の量及び／又はタンパク質半減期における変化は、ＮＳＰ４阻害剤候補が、ＮＳＰ４半減期及び／又は活性を変化させる能力があり得ることを示し得る。
ある特定の実施態様において、質量シフト測定アッセイが、ＮＳＰ４と相互作用するＮＳＰ４阻害剤を同定するために使用され得る。例示的な質量シフト測定アッセイは、例えば、阻害剤候補がＮＳＰ４と相互作用している時のＮＳＰ４質量における変化を、非限定的に質量分析計などの機器を使用することによって測定することにより、強く、及び／又は共有結合的に結合したＮＳＰ４阻害剤の存在を検出することを含み得る。例えば、質量シフトアッセイは、阻害剤候補相互作用の性質に依存して、タンパク質全体及び／又はペプチドに基づいた分析に関して実施され得る。前記阻害剤候補のＮＳＰ４への付加と相関する質量シフトの検出は、その阻害剤候補がＮＳＰ４を阻害する能力があり得ることを示し得る。追加として、例示的な質量シフト測定アッセイは、例えば、表面プラズモン共鳴などの技術を使用して、阻害剤候補がＮＳＰ４と相互作用している時のそれぞれの阻害剤候補質量と相関するＮＳＰ４への質量の付加を検出することを含み得る。例えば、光の屈折率における変化が測定され得、センサー表面に付着したＮＳＰ４の質量における変化と相関し得る。
ある特定の実施態様において、化学的架橋アッセイが、ＮＳＰ４と相互作用するＮＳＰ４阻害剤を同定するために使用され得る。例えば、阻害剤候補は、ＮＳＰ４と相互作用する阻害剤候補を前記ＮＳＰ４分子と共有結合させる能力がある分子架橋剤と共に、ＮＳＰ４とインビボ又はインビトロでインキュベートされ得る。その後、非限定的に、質量分析及び／又はウェスタンブロットなどの技術を使用して、ＮＳＰ４を阻害する能力があり得る阻害剤候補を同定し得る。例えば、阻害剤候補と共有結合的に架橋したＮＳＰ４の検出は、その阻害剤候補がＮＳＰ４を阻害する能力があり得ることを示し得る。
ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４と相互作用するＮＳＰ４阻害剤は、蛍光阻害剤アッセイを使用して同定され得る。例えば、既知量の蛍光性阻害剤候補を、既知量の固定化ＮＳＰ４及びバッファーとインキュベートし得る。その後、固定化ＮＳＰ４をバッファーで洗浄し、固定化ＮＳＰ４は、非限定的に蛍光検出などの当該技術分野で知られた技術を使用して、蛍光性ＮＳＰ４阻害剤候補の残っている存在について測定され得る。蛍光物質の存在を示す測定値は、蛍光性阻害剤候補がＮＳＰ４と相互作用及び／又は結合する能力があることを示し得る。
活性アッセイ
当該技術分野で知られた、及び本明細書に記載された（例えば、実施例３）アッセイは、ＮＳＰ４阻害剤の生物活性を同定し、かつ試験するために使用することができる。一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤を、ＮＳＰ４活性をブロックする能力について試験するためのアッセイが提供される。生物活性についての例示的な試験は、例えば、ＮＳＰ４（例えば、ヒトＮＳＰ４）をＮＳＰ４阻害剤との混合物として供給し、その混合物を、１つ又は複数の内部消光した蛍光発生ペプチド基質とインキュベートし、蛍光強度を、例えば、分光光度計などの機器で測定することを含み得る。ＮＳＰ４阻害剤の存在下での蛍光の増加は、そのＮＳＰ４阻害剤がＮＳＰ４活性をブロックすることができないことを示し、一方、ＮＳＰ４阻害剤の存在下での蛍光の増加がないことは、そのＮＳＰ４阻害剤がＮＳＰ４活性をブロックすることを示す。本明細書に記載されたアッセイに使用することができる例示的な蛍光発生ペプチド基質には、アミノ酸配列１ＩＲ｛Ａｒｇ（Ｍｅ）｝ＳＳＹＳＦＫＫ１０又は１ＩＲ｛Ａｒｇ｝ＳＳＹＳＦＫＫ１０を有する蛍光発生ペプチド基質が挙げられるが、それらに限定されない。
一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、これらのアッセイの何れかにおいて、ＮＳＰ４活性の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、及び１００％の何れか、ブロックし得る。
抗ＮＳＰ４抗体
一態様において、本発明は、ＮＳＰ４と結合する単離された抗体を提供する。ある特定の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、以下の特性の１つ又は複数を有する：（１）ＮＳＰ４（例えば、ヒトＮＳＰ４）と結合し、ＮＳＰ４プロテアーゼ活性を阻害し、又は低下させる；（２）ＮＳＰ４のそのペプチド基質との結合をブロックする；（３）マウス及び／又はヒトのＮＳＰ４と結合する；（４）不活性型及び／又は成熟型のＮＳＰ４と結合する；（５）ＮＳＰ４とプロテアーゼ阻害剤（例えば、α１−アンチトリプシン）とで形成された複合体と結合する；（６）ＮＳＰ４のプロテアーゼ阻害剤（例えば、α１−アンチトリプシン）による不活性化を増強する；並びに（７）ＮＳＰ４と特異的に反応し、好中球エラスターゼ（ＮＥ）ともカテプシンＧ（ＣＧ）ともプロテイナーゼ３（ＰＲ３）とも反応しない。
別の態様において、本発明は、以下のサブクラスの１つに分類することができる単離された抗ＮＳＰ４抗体を提供する：１）成熟型及び前駆型のマウスＮＳＰ４と結合するが、成熟型及び前駆型のヒトＮＳＰ４と結合しない；２）成熟型及び前駆型のヒトＮＳＰ４と結合するが、成熟型及び前駆型のマウスＮＳＰ４と結合しない；３）成熟型のマウスＮＳＰ４と結合するが、前駆型のマウスＮＳＰ４と結合しない；４）成熟型のヒトＮＳＰ４と結合するが、前駆型のヒトＮＳＰ４と結合しない；５）成熟型のマウスＮＳＰ４及び成熟型のヒトＮＳＰ４と結合するが、前駆型のマウスＮＳＰ４及び前駆型のヒトＮＳＰ４と結合しない；並びに６）成熟型と前駆型のマウスＮＳＰ４及び成熟型と前駆型のヒトＮＳＰ４と結合する。
ＮＳＰ４が活性部位及びヘパリン結合部位を含むという所見が本明細書に記載されている（例えば、図４Ａ参照）。これらの部位の１つと特異的に結合する抗体が本明細書にさらに記載されている（例えば、図３０−３１参照）。別の態様において、本発明は、以下のサブクラスの１つに分類することができる単離された抗ＮＳＰ４抗体を提供する：（１）ＮＳＰ４活性部位、又はＮＳＰ４活性部位の近くに特異的に結合する；（２）ＮＳＰ４の触媒活性を阻害する；（３）ＮＳＰ４活性部位、又はＮＳＰ４活性部位の近くに特異的に結合し、かつＮＳＰ４の触媒活性を阻害する；（４）ＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合する；（５）ＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する；及び（６）ＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合し、かつＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する。
一態様において、本発明は、（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（ｉｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；（ｉｖ）配列番号１、４、又は７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｖ）配列番号２、５、又は８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｖ）配列番号３、６、又は９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個のＨＶＲを含む単離された抗ＮＳＰ４抗体を提供する。
一実施態様において、単離された抗ＮＳＰ４抗体は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域を含み、ここで
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１配列がＧＦＴＦＳＮＴＹＩＳ（配列番号１）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２配列がＧＦＩＹＰＡＮＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３配列がＲＲＹＲＬＳＦＤＹ（配列番号３）である。
一実施態様において、単離された抗ＮＳＰ４抗体は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域を含み、ここで
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１配列がＧＦＴＦＳＧＮＤＩＳ（配列番号４）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２配列がＡＧＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３配列がＲＲＶＳＦＹＳＲＨＡＧＭＤＹ（配列番号６）である。
一実施態様において、単離された抗ＮＳＰ４抗体は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域を含み、ここで
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１配列がＧＦＴＦＴＳＹＡＩＳ（配列番号７）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２配列がＡＧＩＳＰＳＮＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３配列がＲＡＧＲＷＴＨＳＤＩＤＹ（配列番号９）である。
一部の実施態様において、本明細書において提供される重鎖ポリペプチドを、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む可変領域軽鎖とさらに組み合わせ、ここで
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１配列がＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１０）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２配列がＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３配列がＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）である。
別の実施態様において、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む単離された抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片であって、
（ａ）重鎖がＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、
（ｉ）ＨＶＲ−Ｈ１配列がＧＦＴＦＳＮＴＹＩＳ（配列番号１）であり、
（ｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ２配列がＧＦＩＹＰＡＮＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり、
（ｉｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ３配列がＲＲＹＲＬＳＦＤＹ（配列番号３）であり、並びに／又は
（ｂ）軽鎖がＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含み、
（ｉ）ＨＶＲ−Ｌ１配列がＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１０）であり、
（ｉｉ）ＨＶＲ−Ｌ２配列はＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）であり、
（ｉｉｉ）ＨＶＲ−Ｌ３配列はＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）である、
抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片が提供される。
別の実施態様において、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む単離された抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片であって、
（ｃ）重鎖がＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、
（ｉ）ＨＶＲ−Ｈ１配列がＧＦＴＦＳＧＮＤＩＳ（配列番号４）であり、
（ｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ２配列がＡＧＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）であり、
（ｉｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ３配列がＲＲＶＳＦＹＳＲＨＡＧＭＤＹ（配列番号６）であり、並びに／又は
（ｄ）軽鎖がＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含み、
（ｉ）ＨＶＲ−Ｌ１配列がＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１０）であり、
（ｉｉ）ＨＶＲ−Ｌ２配列はＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）であり、
（ｉｉｉ）ＨＶＲ−Ｌ３配列はＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）である、
抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片が提供される。
別の実施態様において、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む単離された抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片であって、
（ｅ）重鎖がＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、
（ｉ）ＨＶＲ−Ｈ１配列がＧＦＴＦＴＳＹＡＩＳ（配列番号７）であり、
（ｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ２配列がＡＧＩＳＰＳＮＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）であり、
（ｉｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ３配列がＲＡＧＲＷＴＨＳＤＩＤＹ（配列番号９）であり、並びに／又は
（ｆ）軽鎖がＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含み、
（ｉ）ＨＶＲ−Ｌ１配列がＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１０）であり、
（ｉｉ）ＨＶＲ−Ｌ２配列はＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）であり、
（ｉｉｉ）ＨＶＲ−Ｌ３配列はＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）である、
抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片が提供される。
なおさらなる特定の態様において、抗体は、ヒト又はマウス定常領域をさらに含む。なおさらなる態様において、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択される。なおさらなる特定の態様において、ヒト定常領域はＩｇＧ１である。なおさらなる態様において、マウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、及びＩｇＧ３からなる群から選択される。なおさらなる態様において、マウス定常領域はＩｇＧ２Ａである。なおさらなる特定の態様において、抗体は、低下した、又は最小のエフェクター機能を有する。
さらに別の実施態様において、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む単離された抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＮＴＹＩＳ（配列番号１）、ＧＦＩＹＰＡＮＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）、及びＲＲＹＲＬＳＦＤＹ（配列番号３）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列をさらに含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１０）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列をさらに含む、
抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片が提供される。
さらに別の実施態様において、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む単離された抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＮＤＩＳ（配列番号４）、ＡＧＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）、及びＲＲＶＳＦＹＳＲＨＡＧＭＤＹ（配列番号６）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列をさらに含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１０）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列をさらに含む、
抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片が提供される。
さらに別の実施態様において、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む単離された抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＳＹＡＩＳ（配列番号７）、ＡＧＩＳＰＳＮＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）、及びＲＡＧＲＷＴＨＳＤＩＤＹ（配列番号９）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列をさらに含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１０）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列をさらに含む、
抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片が提供される。
なおさらなる実施態様において、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む単離された抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片であって、
（ａ）重鎖配列が、重鎖配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＴＹＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＹＰＡＮＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＲＹＲＬＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）と少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び／又は
（ｂ）軽鎖配列が、軽鎖配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１６）と少なくとも８５％の配列同一性を有する、
抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片が提供される。
なお別の実施態様において、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む単離された抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片であって、
（ａ）重鎖配列が、重鎖配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＮＤＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＲＶＳＦＹＳＲＨＡＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）と少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び／又は
（ｂ）軽鎖配列が、軽鎖配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１６）と少なくとも８５％の配列同一性を有する、
抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片が提供される。
なお別の実施態様において、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む単離された抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片であって、
（ａ）重鎖配列が、重鎖配列：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧＩＳＰＳＮＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＡＧＲＷＴＨＳＤＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）と少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び／又は
（ｂ）軽鎖配列が、軽鎖配列：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１６）と少なくとも８５％の配列同一性を有する、
抗ＮＳＰ４抗体又は抗原結合断片が提供される。
上記の実施態様の何れかにおいて、抗ＮＳＰ４抗体は、単離された抗体である。上記の実施態様の何れかにおいて、抗ＮＳＰ４抗体はヒト化されている。一実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、上記の実施態様の何れかと同様のＨＶＲ、及び図１３に示されたＨＶＲ（Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ、又はＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ配列を含むＨＶＲを含めて）を含み、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
ある特定の実施態様において、本明細書に記載された抗ＮＳＰ４抗体は、Ｋａｂａｔにより定義されているようなＨＶＲを含み、例えば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む抗ＮＳＰ４抗体であり、それらのＣＤＲのそれぞれが、本明細書にさらに記載されているように、Ｋａｂａｔにより定義される。ある特定の実施態様において、本明細書に記載された抗ＮＳＰ４抗体は、Ｃｈｏｔｈｉａにより定義されているようなＨＶＲを含み、例えば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む抗ＮＳＰ４抗体であり、それらのＣＤＲのそれぞれが、本明細書にさらに記載されているように、Ｃｈｏｔｈｉａにより定義される。ある特定の実施態様において、本明細書に記載された抗ＮＳＰ４抗体は、Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ配列により定義されているようなＨＶＲを含み、例えば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む抗ＮＳＰ４抗体であり、それらのＣＤＲのそれぞれが、本明細書にさらに記載されているように、Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ配列により定義される。
別の態様において、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＮＳＰ４抗体が提供される。ある特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＮＳＰ４抗体は、ＮＳＰ４と結合する能力を保持する。ある特定の実施態様において、配列番号１６において、合計１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、又は１０個のアミノ酸が置換され、挿入され、及び／又は欠失している。ある特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）起こる。任意選択的に、抗ＮＳＰ４抗体は、配列番号１６のＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。
別の態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、配列番号１３−１５からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＮＳＰ４抗体は、ＮＳＰ４と結合する能力を保持する。ある特定の実施態様において、配列番号１３−１５の何れかにおいて、合計１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、又は１０個のアミノ酸が置換され、挿入され、及び／又は欠失している。ある特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）起こる。任意選択的に、抗ＮＳＰ４抗体は、配列番号１３−１５の何れかにおけるＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾を含む）を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）、及びＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｔ（配列番号９５）（ここで、Ｘ１はＹ又はＡであり、Ｘ２は、Ｔ、Ｇ、又はＤであり、Ｘ３はＴ又はＦであり、Ｘ４はＰ又はＬである）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、前の段落の抗ＮＳＰ４抗体は、配列番号１２及び９２−９４から選択される配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）、及び（配列番号５２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７８と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）、及びＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＳＹＧＦＰＬＴ（配列番号９２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７８と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０２と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）、及びＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、ＱＱＳＹＤＦＰＬＴ（配列番号９３）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７８と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０３と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）、及び（配列番号５２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、ＱＱＳＡＧＦＰＬＴ（配列番号９４）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７８の配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０４の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）、ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）、及びＱＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｔ（配列番号９５）（ここで、Ｘ１はＹ又はＡであり、Ｘ２はＴ、Ｇ、又はＤであり、Ｘ３はＴ又はＦであり、Ｘ４はＰ又はＬである）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）、ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。一部の実施態様において、抗体は、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）、ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）、及びＱＱＳＹＧＦＰＬＴ（配列番号９２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。一部の実施態様において、抗体は、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）、ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）、及びＱＱＳＹＤＦＰＬＴ（配列番号９３）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。一部の実施態様において、抗体は、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）、ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）、及びＱＱＳＡＧＦＰＬＴ（配列番号９４）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、及びＫＲＨＬＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＡＹＳＡＰＰＴ（配列番号９６）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号１０５と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、ＫＲＨＬＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８７）、及びＱＱＡＹＳＡＰＰＴ（配列番号９６）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）若しくはＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）、及びＸ１Ｘ２Ｘ３ＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９１）（ここで、Ｘ１はＫ又はＲであり、Ｘ２はＳ、Ｇ、又はＶであり、Ｘ３はＬ又はＦである）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＰＴ（配列番号１０１）（ここで、Ｘ１はＳ、Ａ、Ｎ、又はＴであり、Ｘ２はＹ、Ｎ、又はＦであり、Ｘ３はＴ、Ｓ、又はＮであり、Ｘ４はＴ、Ａ、又はＳである）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、前の段落の抗ＮＳＰ４抗体は、配列番号６７、８９、及び９０から選択される配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖を含む。一部の実施態様において、前の段落の抗ＮＳＰ４抗体は、配列番号１２、及び９７−１００から選択される配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む。
一部の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号８３と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）、ＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）、及びＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号１０７と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０８と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、及びＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＡＮＳＴＰＰＴ（配列番号９８）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号８３と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０９と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、及びＲＧＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８９）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号１１０と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０８と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、及びＲＶＦＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９０）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＮＦＳＳＰＰＴ（配列番号９９）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号１１１と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１１２と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、及びＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号８３と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１０８と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、ＲＧＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８９）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）、及びＱＱＴＹＮＡＰＰＴ（配列番号１００）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号１１０と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１１３と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）又はＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９１）（ここで、Ｘ１はＫ又はＲであり、Ｘ２はＳ、Ｇ、又はＶであり、Ｘ３はＬ又はＦである）、及びＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＰＴ（配列番号１０１）（ここで、Ｘ１はＳ、Ａ、Ｎ、又はＴであり、Ｘ２はＹ、Ｎ、又はＦであり、Ｘ３はＴ、Ｓ、又はＮであり、Ｘ４はＴ、Ａ、又はＳである）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。一部の実施態様において、抗体は、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）、及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。一部の実施態様において、抗体は、ＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）、ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）、及びＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。一部の実施態様において、抗体は、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）、及びＱＱＡＮＳＴＰＰＴ（配列番号９８）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。一部の実施態様において、抗体は、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、ＲＧＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８９）、及びＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。一部の実施態様において、抗体は、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、ＲＶＦＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９０）、及びＱＱＮＦＳＳＰＰＴ（配列番号９９）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。一部の実施態様において、抗体は、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、ＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）、及びＱＱＳＹＴＡＰＰＴ（配列番号９７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。一部の実施態様において、抗体は、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、ＲＧＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８９）、及びＱＱＴＹＮＡＰＰＴ（配列番号１００）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＷＩＳ（配列番号２０）、ＧＴＩＳＰＹＮＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２１）、及びＲＶＬＲＰＫＶＹＡＳＶＭＤＹ（配列番号２２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号６８と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＹＳＩＨ（配列番号２３）、ＡＧＩＳＰＴＮＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４）、及びＲＬＶＦＹＲＧＶＭＤＹ（配列番号２５）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号６９と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＷＩＳ（配列番号２６）、ＧＹＩＹＰＡＳＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２７）、及びＳＤＳＰＨＡＹＷＹＡＭＤＹ（配列番号２８）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７０と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＮＮＳＩＳ（配列番号２９）、ＧＡＩＳＰＮＮＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３０）、及びＲＮＡＷＨＹＳＷＶＧＶＭＤＹ（配列番号３１）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７１と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＤＹＳＩＨ（配列番号３２）、ＡＥＩＹＰＹＳＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３３）、及びＲＤＧＤＧＷＦＤＷＡＭＤＹ（配列番号３４）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７２と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＳＴＡＩＳ（配列番号３５）、ＧＥＩＹＰＳＤＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３６）、及びＲＶＫＷＡＶＳＳＬＧＶＭＤＹ（配列番号３７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７３と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＤＳＤＩＳ（配列番号３８）、ＡＷＩＳＰＳＤＧＡＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号３９）、及びＨＥＡＳＤＤＤＹＡＩＤＹ（配列番号４０）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７４と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＹＷＩＳ（配列番号４１）、ＡＧＩＳＰＮＮＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４２）、及びＲＥＤＤＤＥＲＤＹＡＭＤＹ（配列番号４３）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７５と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＧＹＧＩＳ（配列番号４４）、ＧＷＩＹＰＡＳＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４５）、及びＲＨＲＡＦＤＷＹＰＹＹＩＧＳＳＶＭＤＹ（配列番号４６）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＹＳＩＳ（配列番号４７）、ＧＥＩＮＰＡＧＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４８）、及びＲＧＤＦＰＦＷＳＤＡＹＹＶＭＤＹ（配列番号４９）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７７と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）、及びＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７８と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＤＩＳ（配列番号５３）、ＧＥＩＹＰＳＮＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５４）、及びＲＳＶＲＰＳＷＷＡＭＤＹ（配列番号５５）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号７９と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＳＹＤＩＳ（配列番号５６）、ＧＴＩＳＰＹＤＧＹＴＤＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５７）、及びＲＹＩＲＲＹＳＶＨＹＧＭＤＹ（配列番号５８）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号８０と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＳＴＳＩＨ（配列番号５９）、ＡＥＩＴＰＨＧＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６０）、及びＲＧＲＴＫＷＧＷＬＹＧＭＤＹ（配列番号６１）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号８１と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＮＮＳＩＨ（配列番号６２）、ＡＥＩＡＰＤＤＧＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６３）、及びＲＧＶＩＲＹＡＹＬＹＡＭＤＹ（配列番号６４）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号８２と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）、及びＫＳＬＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号６７）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号８３と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＮＴＹＩＳ（配列番号１）、ＧＦＩＹＰＡＮＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）、及びＲＲＹＲＬＳＦＤＹ（配列番号３）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号８４と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＮＤＩＳ（配列番号４）、ＡＧＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）、及びＲＲＶＳＦＹＳＲＨＡＧＭＤＹ（配列番号６）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号８５と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施態様において、重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
（ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＴＳＹＡＩＳ（配列番号７）、ＡＧＩＳＰＳＮＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）、及びＲＡＧＲＷＴＨＳＤＩＤＹ（配列番号９）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含み、並びに／又は
（ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）及びＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）それぞれと少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
抗ＮＳＰ４抗体が本明細書において提供される。
一部の実施態様において、抗体は、配列番号８６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域、及び／又は配列番号１６と少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
上記の実施態様の何れかと組み合わせることができる一部の実施態様において、配列同一性は、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性であり得る。
上記の実施態様の一部において、抗ＮＳＰ４抗体は、単離された抗体である。上記の実施態様の一部において、抗ＮＳＰ４抗体はヒト化されている。一実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、上記の実施態様の何れかにおいてのようなＨＶＲ、及び本明細書に記載された抗体のＨＶＲ（それには、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ、又はＣｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ配列を含むＨＶＲが挙げられる）を含む。
ある特定の実施態様において、本明細書に記載された抗ＮＳＰ４抗体は、Ｋａｂａｔにより定義されているようなＨＶＲを含み、例えば、抗ＮＳＰ４抗体が、ＣＤＲのそれぞれが、本明細書にさらに記載されているように、Ｋａｂａｔにより定義される、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、本明細書に記載された抗ＮＳＰ４抗体は、Ｃｈｏｔｈｉａにより定義されているようなＨＶＲを含み、例えば、抗ＮＳＰ４抗体が、ＣＤＲのそれぞれが、本明細書にさらに記載されているように、Ｃｈｏｔｈｉａにより定義される、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む。ある特定の実施態様において、本明細書に記載された抗ＮＳＰ４抗体は、Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ配列により定義されているようなＨＶＲを含み、例えば、抗ＮＳＰ４抗体が、ＣＤＲのそれぞれが、本明細書にさらに記載されているように、Ｃｏｎｔａｃｔ ＣＤＲ配列により定義される、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３を含む。
別の態様において、配列番号１６、１０２、１０３、１０４、１０６、１０８、１０９、１１２、又は１１３から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗ＮＳＰ４抗体が提供される。ある特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＮＳＰ４抗体は、ＮＳＰ４と結合する能力を保持する。ある特定の実施態様において、配列番号１６、１０２、１０３、１０４、１０６、１０８、１０９、１１２、又は１１３の何れかにおいて、合計１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、又は１０個のアミノ酸が置換され、挿入され、及び／又は欠失している。ある特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）起こる。任意選択的に、抗ＮＳＰ４抗体は、配列番号１６、１０２、１０３、１０４、１０６、１０８、１０９、１１２、又は１１３の何れかのＶＬ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。任意選択的に、軽鎖は、配列番号１１５の配列を有する定常領域を含有する。
別の態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、配列番号１３−１５、６８−８６、１０５、１０７、１１０、及び１１１から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＮＳＰ４抗体は、ＮＳＰ４と結合する能力を保持する。ある特定の実施態様において、配列番号１３−１５、６８−８６、１０５、１０７、１１０、及び１１１の何れかにおいて、合計１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、又は１０個のアミノ酸が置換され、挿入され、及び／又は欠失している。ある特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲで）起こる。任意選択的に、抗ＮＳＰ４抗体は、配列番号１３−１５、６８−８６、１０５、１０７、１１０、及び１１１の何れかにおけるＶＨ配列（それらの配列の翻訳後修飾を含む）を含む。任意選択的に、重鎖は、配列番号１１４の配列を有する定常領域を含有する。
本発明のさらなる態様において、上記の実施態様の何れかによる抗ＮＳＰ４抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施態様において、抗体は、完全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体又は本明細書で定義されているような他の抗体クラス若しくはアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）である。
ＮＳＰ４のアミノ酸配列は当該技術分野で知られている。例えば、ヒトＮＳＰ４は、ＮＣＢＩ寄託番号ＮＰ＿９９９８７５．１に示されているようなアミノ酸配列を有し得、非ヒト霊長類ＮＳＰ４は、ＮＣＢＩ寄託番号ＸＰ＿００１１４６５９６．１（チンパンジーＮＳＰ４）、ＸＰ＿００２８２８４０３．１（オランウータンＮＳＰ４）、ＥＨＨ２９３９８．１（アカゲザルＮＳＰ４）、ＸＰ＿００３９１４５９５．１（ヒヒＮＳＰ４）、ＸＰ＿００２７６１５６５．１（マーモセットＮＳＰ４）、又はＸＰ＿００３７８８８７８．１（ガラゴＮＳＰ４）に示されているようなアミノ酸配列を有し得、非霊長類哺乳動物は、ＮＣＢＩ寄託番号ＮＰ＿００１０３６１７５．１（マウスＮＳＰ４）、Ｑ６ＩＥ５９．２（ラットＮＳＰ４）、ＸＰ＿００４７１７０６１．１（ハリネズミＮＳＰ４）、ＸＰ＿００１３７５７８４．７（オポッサムＮＳＰ４）、ＸＰ＿５４２２１７．３（イヌＮＳＰ４）、ＸＰ＿５９３３７７．３（ウシＮＳＰ４）、又はＸＰ＿００４００９５１６．１（ヒツジＮＳＰ４）に示されているようなアミノ酸配列を有し得る。一部の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体はヒトＮＳＰ４と結合する。一部の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体はマウスＮＳＰ４と結合する。一部の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、ヒトＮＳＰ４とマウスＮＳＰ４の両方と結合する。一部の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、図１に示されているようなＮＳＰ４のアミノ酸配列と結合する。
さらなる態様において、上記の実施態様の何れかによる抗ＮＳＰ４抗体は、下記のセクションに記載されているような、特徴の何れかを単独で、又は組み合わせて、組み込み得る：
抗体親和性
ある特定の実施態様において、本明細書において提供される抗体は、≦１μＭ、≦１５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍまで、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍまで）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
一実施態様において、Ｋｄは、以下のアッセイにより記載されているように、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を使用して実施される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。Ｆａｂの抗原に対する溶液結合親和性は、滴定系列の非標識抗原の存在下で、Ｆａｂを最小濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原と平衡にし、その後、結合した抗原を抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートで捕捉することにより測定される（例えば、Chenら、J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)参照）。アッセイについての条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで室温（およそ２３℃）、２−５時間、ブロッキングする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）において、１００ｐＭ又は２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、（例えば、Prestaら、Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)における抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致した）目的のＦａｂの段階希釈溶液と混合する。その後、目的のＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションは、平衡に達していることを確実にするために、より長い時間（例えば、約６５時間）、継続し得る。その後、混合物を、室温での（例えば、１時間の）インキュベーションのために捕捉プレートへ移す。その後、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回、洗浄する。プレートが乾燥した時、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計数する。競合的結合アッセイに使用するのに、最大結合の２０％以下を示す各Ｆａｂの濃度を選択する。
別の実施態様により、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を〜１０反応単位（ＲＵ）における固定化抗原ＣＭ５チップ、２５℃で使用する、表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。簡単に述べれば、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）をＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で、供給業者の指示書に従って活性化する。抗原を、５μｌ／分の流速での注入の前に、およそ１０反応単位（ＲＵ）の共役タンパク質に達するように１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）へ希釈する。抗原の注入後、未反応の基をブロックするために１Ｍエタノールアミンを注入する。反応速度論的測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈溶液（０．７８ｎＭ−５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳ中、２５℃、およそ２５μｌ／分の流速で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウェア バージョン３．２）を使用して、会合と解離のセンサーグラムを同時にフィッティングすることにより計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される。例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）参照。会合速度が、上記の表面プラズモン共鳴アッセイにより１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合には、会合速度は、ストップフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを付けた８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計において測定される場合、漸増濃度の抗原の存在下でＰＢＳ、ｐＨ７．２中２０ｎＭ抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）の２５℃での蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を使用することにより決定することができる。
抗体断片
ある特定の実施態様において、本明細書において提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、並びに下記の他の断片が挙げられるが、それらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説として、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）参照。ｓｃＦｖ断片の概説として、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、ｐ２６９−３１５（１９９４）を参照；国際公開第９３／１６１８５号、並びに米国特許第５５７１８９４号及び第５５８７４５８号も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボでの半減期が増加しているＦａｂ及び（Ｆａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。
ダイアボディは、二価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４０９７、国際公開第１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８（１９９３）参照。トリアボディ及びテトラボディもまた、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部、又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。ある特定の実施態様において、単一ドメイン抗体はヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、例えば、米国特許第６２４８５１６ Ｂ１参照）。
抗体断片は、様々な技術により作製することができ、その技術には、本明細書に記載されているような、インタクトな抗体のタンパク質分解性消化、及び組換え宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はファージ）による産生が挙げられるが、それらに限定されない。
キメラ抗体及びヒト化抗体
ある特定の実施態様において、本明細書において提供される抗体はキメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４）に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例において、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のそれから変化している「クラススイッチされた」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合性断片を含む。
ある特定の実施態様において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるようにヒト化されている。一般的に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来しており、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来している、１つ又は複数の可変ドメインを含む。任意選択的に、ヒト化抗体はまた、ヒト定常領域の少なくとも一部を含む。一部の実施態様において、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を回復し、又は向上させるために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来している抗体）由来の対応する残基と置換されている。
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説され、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１、及び第７０８７４０９、（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記載する）Ｋａｓｈｍｉｒｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４（２００５）、（「リサーフェイシング」を記載する）Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）、（「ＦＲシャッフリング」を記載する）Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（２００５）、並びに（ＦＲシャッフリングへの「誘導選択」手法を記載する）Ｏｓｂｏｕｒｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８３：２５２−２６０（２０００）にさらに記載されている。
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、以下が挙げられるが、それらに限定されない：「ベストフィット」方法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Simsら、J.Immunol. 151:2296 (1993)）、軽鎖又は重鎖の可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Carterら、Proc.Natl. Acad. Sci. USA、89:4285 (1992)、及びPrestaら、J. Immunol.、151:2623 (1993)参照）、ヒト成熟（体細胞性に突然変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Almagro及びFransson、Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)参照）、並びにＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Bacaら、J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)、及びRosokら、J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)参照）。
ヒト抗体
ある特定の実施態様において、本明細書において提供される抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で知られた様々な技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ及びｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）、並びにＬｏｎｂｅｒｇ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
ヒト抗体は、抗原への曝露に応答してインタクトなヒト抗体、又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されているトランスジェニック動物に免疫原を投与することにより調製され得る。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わり、又は染色体外に存在し、若しくは動物の染色体へランダムに組み込まれている、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含有する。そのようなトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説として、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）テクノロジーを記載する米国特許第６０７５１８１号及び第６１５０５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）テクノロジーを記載する米国特許第５７７０４２９号、Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）テクノロジーを記載する米国特許第７０４１８７０号、並びにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）テクノロジーを記載する米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号もまた参照されたい。そのような動物により産生されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、さらに改変され得る。
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマに基づいた方法により作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株は記載されている。（例えば、Kozbor J. Immunol.、133: 3001 (1984)；Brodeurら、Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications、p51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及びBoernerら、J. Immunol.、147: 86 (1991)参照。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマテクノロジーにより産生されるヒト抗体もまた、Ｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。追加の方法には、例えば、（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）米国特許第７１８９８２６号、及び（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）Ｎｉ、Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ、２６（４）：２６５−２６８（２００６）に記載されたものが挙げられる。ヒトハイブリドーマテクノロジー（トリオーマテクノロジー）もまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２０（３）：９２７−９３７（２００５）、並びにＶｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
ヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することにより作製され得る。その後、そのような可変ドメイン配列は、望ましいヒト定常ドメインと組み合わせることができる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術は、下に記載されている。
ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性（１つ又は複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより単離され得る。例えば、実施例３に記載された方法など、ファージディスプレイライブラリーを作製し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で知られている。追加の方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００１）に概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ及びＢｒａｄｂｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
ある特定のファージディスプレイ方法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングし、ファージライブラリーにおいてランダムに再び組み合わせ、その後、Ｗｉｎｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されているように、抗原結合性ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片か、又はＦａｂ断片かの何れかとして、抗体断片をディスプレイする。免疫された供給源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、ナイーブレパートリーは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ Ｊ、１２：７２５−７３４（１９９３）により記載されているように、いかなる免疫化もなしに、（例えば、ヒトから）クローニングされて、幅広い範囲の非自己及びまた自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリーはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１−３８８（１９９２）により記載されているように、幹細胞由来の再編成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、超過変性ＣＤＲ３領域をコードし、かつインビトロで再編成を達成することにより、合成的に作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許刊行物には、例えば、米国特許第５７５０３７３号、並びに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、第２００５／０１１９４５５号、第２００５／０２６６０００号、第２００７／０１１７１２６号、第２００７／０１６０５９８号、第２００７／０２３７７６４号、第２００７／０２９２９３６号、及び第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書において、ヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。
多重特異性抗体
ある特定の実施態様において、本明細書において提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施態様において、結合特異性の１つは、ＮＳＰ４に対してであり、その他は、任意の他の抗原に対してである。ある特定の実施態様において、二重特異性抗体は、ＮＳＰ４の２つの異なるエピトープと結合し得る。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
多重特異性抗体を作製するための技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖のペアの組換え共発現（Milstein及びCuello、Nature 305：537 (1983)参照）、及び「ノブインホール（knob-in-hole）」エンジニアリング（例えば、米国特許第５７３１１６８号参照）が挙げられるが、それらに限定されない。多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃヘテロダイマー分子を作製するために静電気ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば、米国特許第４６７６９８０号、及びBrennanら、Science、229：81 (1985)参照）、二重特異性抗体を作製するのにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelnyら、J. Immunol.、 148(5):1547-1553 (1992)参照）、二重特異性抗体断片を作製するために「ダイアボディ」テクノロジーを使用すること（例えば、Hollingerら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、90:6444-6448 (1993)参照）、及び単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用すること（例えば、Gruberら、J. Immunol.、152:5368 (1994)参照）、及び、例えば、Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているように、三重特異性抗体を調製することにより、作製され得る。
「オクトパス（Octopus）抗体」を含む３つ以上の機能性抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１参照）。
本明細書における抗体又は断片にはまた、ＮＳＰ４及び別の異なる抗原と結合する抗原結合部位を含む「二重作用性ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」も挙げられる（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０参照）。
抗体変異体
ある特定の実施態様において、本明細書において提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的性質を向上させることが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列へ適切な改変を導入することにより、又はペプチド合成により調製され得る。そのような改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの欠失、及び／又はそのアミノ酸配列への挿入、及び／又はそのアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。最終構築物が所望の特性、例えば、抗原結合性を有するとの条件で、最終構築物に達するように欠失、挿入、及び置換の任意の組合せを行うことができる。
置換、挿入、及び欠失の変異体
ある特定の実施態様において、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換の突然変異誘発の目的となる部位には、ＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。保存的置換は、表１において「保存的置換」という見出しにより示されている。より実質的な変化は、表１において「例示的な置換」という見出しにより提供され、アミノ酸側鎖クラスに関して下でさらに記載されている。アミノ酸置換は、目的の抗体へ導入され得、その産物は、所望の活性、例えば、抗原結合性の保持／向上、免疫原性の減少、又はＡＤＣＣ若しくはＣＤＣの向上についてスクリーニングされ得る。
アミノ酸は、共通の側鎖性質により分類され得る：
ａ．疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ．中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ．酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ．塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ．鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
ｆ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを意味する。
１つの型の置換変異体は、親抗体の１つ又は複数の超可変領域残基を置換することを含む（例えば、ヒト化又はヒト抗体）。一般的に、さらなる研究のために選択される、生じた変異体は、親抗体と比較してある特定の生物学的性質において改変（例えば、向上）（例えば、親和性の増加、免疫原性の低下）を有し、及び／又は親抗体のある特定の生物学的性質を実質的に保持している。例示的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、それは、簡便には、例えば、本明細書に記載された技術などのファージディスプレイに基づいた親和性成熟技術を使用して、作製され得る。簡単に述べれば、１つ又は複数のＨＶＲ残基が、変異され、変異体抗体がファージ上にディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
変更（例えば、置換）は、例えば、抗体親和性を向上させるために、ＨＶＲにおいて行われ得る。そのような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で突然変異を起こすコドンによりコードされる残基（例えば、Chowdhury、Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)参照）、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において行われ得、生じた変異体ＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築し、それから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（O’Brienら編、Human Press、Totowa、NJ、(2001)）に記載されている。親和性成熟の一部の実施態様において、様々な方法（例えば、変異性ＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指定突然変異）の何れかにより、成熟について選択された可変遺伝子へ多様性が導入される。その後、二次ライブラリーが作製される。その後、そのライブラリーは、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を同定するようにスクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４−６個の残基）がランダム化されるＨＶＲ指向性手法を含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発又はモデル化を使用して、特定的に同定され得る。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が標的にされる場合が多い。
ある特定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、そのような変更が、抗原に結合する抗体の能力の実質的な低下を生じない限り、１つ又は複数のＨＶＲ内に起きてもよい。例えば、結合親和性の実質的な低下を生じない保存的変更（例えば、本明細書に提供されているような保存的置換）がＨＶＲにおいてなされ得る。そのような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であり得る。上記で提供された変異体ＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施態様において、各ＨＶＲの何れかが変更されず、又は１つ以下、２つ以下、又は３つ以下のアミノ酸置換を含有する。
Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１−１０８５により記載されているような、突然変異誘発の標的にされ得る抗体の残基又は領域の同定のための有用な方法は、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法において、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）の残基又は群が同定され、中性又は負荷電のアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）に取って代えられ、抗体の抗原との相互作用が影響されるかどうかを決定する。最初の置換に対して機能的感受性を示すアミノ酸位置にさらなる置換が導入され得る。代替として、又は追加として、抗体と抗原の間の接触点を同定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基及び隣接残基は、置換のための候補として標的にされ、又は除去され得る。変異体は、それらが所望の性質を含有するかどうかを決定するようにスクリーニングされ得る。
アミノ酸配列挿入には、長さが１個の残基から１００個又はそれ以上の残基を含有するポリペプチドまでの範囲であるアミノ末端及び／又はカルボキシル末端の融合、加えて、単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体には、抗体のＮ末端若しくはＣ末端の、酵素への（例えば、ＡＤＥＰＴについて）、又は抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合が挙げられる。
グリコシル化変異体
ある特定の実施態様において、本明細書において提供される抗体は、抗体がグリコシル化されている程度を増加又は減少させるように変化している。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、簡便には、１つ又は複数のグリコシル化部位が生成又は除去されるようにアミノ酸配列を変化させることにより達成され得る。
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに付着した糖（炭水化物）が変更されてもよい。哺乳動物細胞により産生された天然の抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ結合により一般的に付着している分枝型の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら、ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６−３２（１９９７）参照。オリゴ糖は、様々な糖（炭水化物）、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、加えて、二分岐オリゴ糖構造の「幹」におけるＧｌｃＮＡｃに付着したフコースを含み得る。一部の実施態様において、本発明の抗体のオリゴ糖の改変は、ある特定の向上した性質を有する抗体変異体を生成するために行われ得る。
一実施態様において、ＡＤＣＣ機能を向上させ得る、Ｆｃ領域に付着した糖（炭水化物）構造におけるフコースの減少又は欠損を有するＦｃ領域を含む抗体変異体が提供される。具体的には、野生型ＣＨＯ細胞において産生された同じ抗体上のフコースの量と比較して、フコースが減少している抗体が、本明細書で企図される。すなわち、それらは、そうではなく天然のＣＨＯ細胞（例えば、天然ＦＵＴ８遺伝子を含有するＣＨＯ細胞などの天然グリコシル化パターンを生じるＣＨＯ細胞）により産生されたならば有したであろうものより少ない量のフコースを有することを特徴とする。ある特定の実施態様において、抗体は、その抗体上におけるＮ結合グリカンの約５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、又は５％未満がフコースを含むものである。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、１％から８０％まで、１％から６５％まで、５％から６５％まで、又は２０％から４０％までであり得る。ある特定の実施態様において、抗体は、その抗体上のＮ結合グリカンの何れもフコースを含まないものであり、すなわち、抗体は、全くフコースを含まず、又はフコースをもたず、又はアフコシル化されている。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析により測定される場合、Ａｓｎ２９７に付着した全ての糖構造体（例えば、複合型、ハイブリッド型、及び高マンノース型の構造）の和に対するＡｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することにより決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指す；しかしながら、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における微量な配列差異により、２９７位の約±３アミノ酸上流又は下流に、すなわち、２９４位から３００位の間に、位置し得る。そのようなフコシル化変異体は、ＡＤＣＣ機能を向上させる可能性がある。例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；第ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関する刊行物の例には、ＵＳ２００３／０１５７１０８；国際公開第２０００／６１７３９号；国際公開第２００１／２９２４６号；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；国際公開第２００３／０８５１１９号；国際公開第２００３／０８４５７０号；国際公開第２００５／０３５５８６号；国際公開第２００５／０３５７７８号；国際公開第２００５／０５３７４２号；国際公開第２００２／０３１１４０号；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生する能力がある細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ripkaら、Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８ Ａ１、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、及び国際公開第２００４／０５６３１２ Ａ１、Ａｄａｍｓら、特に実施例１１）、及びアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Yamane-Ohnukiら、Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；Kanda, Y.ら、Biotechnol. Bioeng.、94(4):680-688 (2006)；及び国際公開第２００３／０８５１０７号参照）が挙げられる。
二分されたオリゴ糖を有する抗体変異体がさらに提供され、例えば、抗体のＦｃ領域に付着した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている。そのような抗体変異体は、フコシル化が減少し得、及び／又はＡＤＣＣ機能が向上し得る。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）；ＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）、及びＦｅｒｒａｒａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、９３（５）：８５１−８６１（２００６）に記載されている。Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖に少なくとも１個のガラクトース残基を有する抗体変異体もまた提供される。そのような抗体変異体は、ＣＤＣ機能が向上している可能性がある。そのような抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）、国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
ある特定の実施態様において、本明細書に記載されたＦｃ領域を含む抗体変異体は、ＦｃγＲＩＩＩと結合する能力がある。ある特定の実施態様において、本明細書に記載されたＦｃ領域を含む抗体変異体は、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣ活性を有し、又はヒトエフェクター細胞の存在下で、ヒト野生型ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む他の点では同じ抗体と比較してＡＤＣＣ活性が増加している。
Ｆｃ領域変異体
ある特定の実施態様において、１つ又は複数のアミノ酸改変は、本明細書において提供される抗体のＦｃ領域へ導入され、それにより、Ｆｃ領域変異体を生じ得る。Ｆｃ領域変異体は、１つ又は複数のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
ある特定の実施態様において、本発明は、全部ではないが、一部のエフェクター機能を有する抗体変異体を企図し、そのことにより、その抗体変異体が、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）が不要であり、又は有害である適用の望ましい候補となる。ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低下／欠乏を確認するために、インビトロ及び／又はインビボの細胞傷害性アッセイを行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（それゆえに、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを保証するために行うことができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞である、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページの表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的例は、米国特許第５５００３６２号（例えば、Hellstrom, I.ら、Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)参照）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９−１５０２（１９８５）；米国特許第５８２１３３７号（Bruggemann, M.ら、J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法が用いられ得る（例えば、ＡＣＴＩ（商標）フローサイトメトリーについての非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）参照）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替として、又は追加として、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されたものなどの動物モデルにおいて、インビボで評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイもまた、抗体が、Ｃ１ｑに結合できず、それゆえにＣＤＣ活性を欠くことを確認するために行われ得る。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが実施されてもよい（例えば、Gazzano-Santoroら、J. Immunol. Methods 202:163 (1996)；Cragg, M.S.ら、Blood 101:1045-1052 (2003)；並びにCragg, M.S.及びM.J. Glennie、Blood 103:2738-2743 (2004)参照）。ＦｃＲｎ結合及びインビボのクリアランス／半減期決定もまた、当該技術分野で知られた方法を使用して実施することができる（例えば、Petkova, S.B.ら、Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)参照）。
エフェクター機能が低下した抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９の１つ又は複数の置換を有するものが挙げられる（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ突然変異体には、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、及び３２７位の２つ以上における置換を有するＦｃ突然変異体が挙げられる（米国特許第７３３２５８１号）。
ＦｃＲへの結合が向上又は減少したある特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShieldsら、J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)参照。）
ある特定の実施態様において、抗体変異体は、ＡＤＣＣを向上させる１つ又は複数のアミノ酸置換を有するＦｃ領域、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／又は３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換を含む。例示的な実施態様において、Ｆｃ領域に以下のアミノ酸置換を含む抗ＮＳＰ４抗体：Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ、及びＫ３３４Ａ。
一部の実施態様において、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されているように、結果として、Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変化（すなわち、向上か又は減少の何れか）が生じる変更がＦｃ領域になされる。
半減期が増加し、かつ新生児のＦｃ受容体（ＦｃＲｎ）（母体ＩｇＧの胎児への移動に関与する（Guyerら、J. Immunol. 117:587 (1976)及びKimら、J. Immunol. 24:249 (1994)））との結合が向上した抗体は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎとの結合を向上させる、Ｆｃ領域内に１つ又は複数の置換を有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ変異体には、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、又は４３４の１つ又は複数における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７３７１８２６号）を有するものが挙げられる。
Ｆｃ領域変異体の他の例に関して、Ｄｕｎｃａｎ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号もまた参照されたい。
システイン操作抗体変異体
ある特定の実施態様において、システイン操作抗体、例えば、抗体の１つ又は複数の残基がシステイン残基と置換されている「チオＭＡｂ」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施態様において、置換される残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。それらの残基をシステインと置換することにより、抗体のアクセス可能な部位に反応性チオール基が位置し、薬物部分又はリンカー−薬物部分などの他の部分へ抗体をコンジュゲートするために使用されて、イムノコンジュゲートを生成し得る。ある特定の実施態様において、以下の残基の何れか１つ又は複数がシステインと置換され得る：軽鎖のＶ２０５（カバット番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載されているように作製され得る。
抗体誘導体
ある特定の実施態様において、本明細書において提供される抗体は、当該技術分野で知られており、かつ容易に利用できる追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに改変され得る。抗体の誘導体化に適した部分には、水溶性ポリマーが挙げられるが、それに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（ホモポリマーかランダム共重合体かの何れか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、酸化プロリプロピレン／酸化エチレン共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物が挙げられるが、それらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中での安定性により製造するのに有利であり得る。そのポリマーは、任意の分子量であってもよく、分枝型でも非分枝型でもよい。抗体に付着したポリマーの数は様々であり得、１つより多いポリマーが付着している場合には、それらは同じ又は異なる分子であり得る。一般的に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は型は、非限定的に、向上させられるべき抗体の特定の性質又は機能、抗体誘導体が、限定された条件下で治療に使用されるかどうかなどを含む考慮すべき事柄に基づいて決定することができる。
別の実施態様において、抗体と、放射線への曝露により選択的に加熱され得る非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。一実施態様において、非タンパク質性部分は、炭素ナノチューブである（Kamら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)）。放射線は、任意の波長であってもよく、それには、普通の細胞を害さないが、抗体−非タンパク質性部分の近位にある細胞が殺害される温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長が挙げられるが、それらに限定されない。
組換え方法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されているような、組換え方法及び組成物を使用して産生され得る。一実施態様において、本明細書に記載される抗ＮＳＰ４抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又はＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。さらなる実施態様において、そのような核酸を含む１つ又は複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施態様において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのそのような実施態様において、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下で形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。一実施態様において、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様において、上記で提供されているような抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を抗体の発現に適した条件下で培養し、任意選択的に、宿主細胞（又は宿主細胞培地）から抗体を回収することを含む、抗ＮＳＰ４抗体を作製する方法が提供される。そのような方法により産生される抗ＮＳＰ４抗体がさらに本明細書において提供される。
抗ＮＳＰ４抗体の組換え産生について、例えば、上記のような、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞におけるさらなるクローニング及び／又は発現のために１つ又は複数のベクターへ挿入される。そのような核酸は、通常の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合する能力があるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離及びシーケンシングされ得る。
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現のための適切な宿主細胞には、本明細書に記載された原核細胞又は真核細胞が挙げられる。例えば、抗体は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合、細菌において産生され得る。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現について、例えば、米国特許第５６４８２３７号、第５７８９１９９号、及び第５８４０５２３号を参照。（大腸菌における抗体断片の発現を記載するCharlton、Methods in Molecular Biology、248巻 (B.K.C. Lo編、Humana Press、Totowa、NJ、2003)、p 245-254もまた参照。）発現後、抗体は、細菌細胞ペーストから可溶性画分中に単離され得、さらに精製することができる。
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核微生物が、抗体コード化ベクターについての適切なクローニング又は発現宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、その結果として、部分的又は完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生を生じる、真菌株及び酵母株が挙げられる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照。
グリコシル化抗体の発現のための適切な宿主細胞はまた、多細胞生物体（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と共に、特にヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのために、使用され得る多数のバキュロウイルス株が同定されている。
植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号、及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）テクノロジーを記載する）を参照。
脊椎動物細胞もまた宿主として使用され得る。例えば、浮遊状態で成長するのに適応している哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胎児由来腎臓株（例えば、Grahamら、J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載されているような２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Mather、Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されているようなＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファロー系ラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されているようなＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ− ＣＨＯ細胞（Urlaubら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；並びに、Ｙ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に適したある特定の哺乳動物宿主細胞株の概説として、例えば、Ｙａｚａｋｉ及びＷｕ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ． Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ）、ｐ２５５−２６８（２００３）を参照。
アッセイ
本明細書において提供される抗ＮＳＰ４抗体は、当該技術分野で知られた様々なアッセイにより、それらの物理的／化学的性質及び／又は生物活性について同定され、スクリーニングされ、又は特徴づけられ得る。
結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様において、本発明の抗体は、その抗原結合活性について、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどの既知の方法により、試験される。
別の態様において、ＮＳＰ４との結合について、１−１、１−２、１−３、１−５、２−１、２−２、２−３、２−４、２−５、３−２、３−５、４−２、４−３、４−４、４−５、５−１、５−２、５−３、５−４、３５．ＷＴ、３５．１４、３５．５０、３５．６２、３５．７７、５１．ＷＴ、５１．３０、５１．５０、５１．５１、５１．５９、５１．７２、及び５１．８２から選択される１つ又は複数の抗体と競合する抗体を同定するために競合アッセイが使用され得る。ある特定の実施態様において、そのような競合抗体は、１−１、１−２、１−３、１−５、２−１、２−２、２−３、２−４、２−５、３−２、３−５、４−２、４−３、４−４、４−５、５−１、５−２、５−３、５−４、３５．ＷＴ、３５．１４、３５．５０、３５．６２、３５．７７、５１．ＷＴ、５１．３０、５１．５０、５１．５１、５１．５９、５１．７２、及び５１．８２から選択される１つ又は複数の抗体により結合される同じエピトープ（例えば、直鎖状又はコンフォメ−ションエピトープ）と結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６６巻（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ）に提供されている。
例示的な競合アッセイにおいて、固定化ＮＳＰ４が、ＮＳＰ４（例えば、ヒトＮＳＰ４又はマウスＮＳＰ４）と結合する第１の標識抗体、及びＮＳＰ４との結合について第１の抗体と競合する能力について試験されることになっている第２の非標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在していてもよい。コントロールとして、固定化ＮＳＰ４は、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。第１の抗体のＮＳＰ４との結合に許容的な条件下でのインキュベーション後、過剰な結合していない抗体が除去され、固定化ＮＳＰ４と会合した標識の量が測定される。固定化ＮＳＰ４と会合した標識の量が、コントロール試料と比較して、試験試料において実質的に低下しているならば、それは、第２の抗体が、ＮＳＰ４との結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ １４章（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）を参照。
別の態様において、抗ＮＳＰ４抗体のＮＳＰ４に対する親和性を決定するためにバイオレイヤー干渉法が使用され得る。例示的なアッセイにおいて、例えば、Ｏｃｔｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）などの装置を使用して、抗ＮＳＰ４抗体が、抗ヒトＦｃセンサー上に固定化され、漸増濃度のＮＳＰ４とインキュベートされて、親和性測定値を得る。
別の態様において、ＮＳＰ４とプロテアーゼ阻害剤（例えば、α１−アンチトリプシン）の複合体と結合する抗体を同定するために、ＥＬＩＳＡが使用され得る。例示的なアッセイにおいて、組換えＮＳＰ４が、セリンプロテアーゼ阻害剤などのプロテアーゼ阻害剤と混合されて、複合体形成を可能にする。ＮＳＰ４複合体は、組換えＮＳＰ４上に存在するＨｉｓ−タグを介してニッケル（Ｎｉ）プレートにおいてコーティングされ、捕捉ＥＬＩＳＡが、以前に記載されているように（Kuhlら、2010、J. Immunol.、185、387-399参照）、抗ＮＳＰ４抗体を使用して実施される。アイソタイプ抗体コントロールと比較しての、抗ＮＳＰ４抗体のＮＳＰ４複合体との結合により、その抗体が、ＮＳＰ４とプロテアーゼ阻害剤の複合体と結合すると同定される。例えば、Ｈｉｎｋｏｆｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２０１３、２８８：２６６３５−２６６４８を参照されたい。
本明細書中の実施態様の何れにおいても、アッセイに使用されるＮＳＰ４は、ＮＳＰ４の成熟型又は前駆型であり得る。
活性アッセイ
当該技術分野で知られたアッセイ、及び本明細書（例えば、実施例３）に記載されたアッセイは、抗ＮＳＰ４抗体の生物活性を同定及び試験するために使用することができる。一部の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体を、ＮＳＰ４活性をブロックすることについて試験するためのアッセイが提供される。生物活性についての例示的な試験は、例えば、ＮＳＰ４（例えば、ヒトＮＳＰ４）を、抗ＮＳＰ４抗体との混合物として供給し、その混合物を、１つ又は複数の内部消光した蛍光発生ペプチド基質とインキュベートし、例えば、分光光度計などの装置で蛍光強度を測定することを含む。抗ＮＳＰ４抗体の存在下での蛍光の増加は、抗ＮＳＰ４抗体がＮＳＰ４活性をブロックできないことを示し、一方、抗ＮＳＰ４抗体の存在下で蛍光の増加がないことは、抗ＮＳＰ４抗体がＮＳＰ４活性をブロックすることを示す。本明細書に記載されたアッセイに使用することができる例示的な蛍光発生ペプチド基質には、アミノ酸配列１ＩＲ｛Ａｒｇ（Ｍｅ）｝ＳＳＹＳＦＫＫ１０又は１ＩＲ｛Ａｒｇ｝ＳＳＹＳＦＫＫ１０を有する蛍光発生ペプチド基質が挙げられるが、それに限定されない。
一部の実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、これらのアッセイの何れかにおいて、ＮＳＰ４活性の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、及び１００％、ブロックし得る。
抗ＮＳＰ４抗体を、ＮＳＰ４活性をブロックすることについて試験するためのアッセイもまた提供される。ＮＳＰ４活性を評価するための例示的な方法は、基質上に顆粒球を供給し、顆粒球を抗ＮＳＰ４抗体などのＮＳＰ４阻害剤とインキュベートし、続いて、走化性因子（補体Ｃ５ａ又はインターロイキン−８など）で刺激し、アイソタイプコントロールと比較した、抗ＮＳＰ４抗体の存在下での顆粒球の走化性又は運動性の変化を測定することを含み得、走化性又は運動性の低下は、抗ＮＳＰ４抗体がＮＳＰ４活性をブロックしていることを示す。
別の例示的なアッセイにおいて、好中球媒介性疾患についてのインビボ動物モデルを使用することができる。例えば、好中球依存性Ｋ／ＢｘＮ血清移行関節炎モデルは、静脈内のＫ／ＢｘＮ血清の投与前、投与と同時に、又は投与後、抗ＮＳＰ４抗体を投与することにより使用することができる。処理されたマウスの足における血管漏出、紅斑、及び浮腫を、実施例２に記載されているように、インビボ近赤外蛍光画像化を使用してモニターすることができ、血管漏出、紅斑、又は浮腫の何れか１つの低下が、抗ＮＳＰ４抗体がＮＳＰ４活性をブロックすることを示す。
診断及び検出のための方法及び組成物
ある特定の実施態様において、本明細書において提供される抗ＮＳＰ４抗体の何れも、生物学的試料においてＮＳＰ４タンパク質の存在を検出するのに有用である。本明細書で使用される場合、用語「検出すること」は、定量的又は定性的検出を包含する。ある特定の実施態様において、生物学的試料は、好中球などの細胞又は組織を含む。
一実施態様において、診断又は検出の方法に使用される抗ＮＳＰ４抗体が提供される。さらなる態様において、生物学的試料においてＮＳＰ４の存在を検出する方法が提供される。ある特定の実施態様において、方法は、本明細書に記載されているような抗ＮＳＰ４抗体と生物学的試料を、抗ＮＳＰ４抗体のＮＳＰ４との結合に許容的な条件下で接触させ、抗ＮＳＰ４抗体とＮＳＰ４の間に複合体が形成されるかどうかを検出することを含む。そのような方法は、インビトロ方法でもインビボ方法でもよい。一実施態様において、抗ＮＳＰ４抗体は、抗ＮＳＰ４抗体での治療に好適な対象を選択するために、例えば、ＮＳＰ４が患者の選択のためのバイオマーカーである場合、使用される。
本発明の抗体を使用して診断され得る例示的な障害には、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、脳虚血、急性肺傷害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、変形性関節症、関節リウマチ（例えば、若年性関節リウマチ）、敗血症性ショック、慢性気管支炎、肺気腫、α−１アンチトリプシン欠損症、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性血管炎、水疱形成性皮膚疾患、がん（例えば、肺がん）、天然プロテアーゼ阻害剤（例えば、セリンプロテアーゼ阻害剤）の欠乏により引き起こされる疾患、並びに本明細書に記載及び企図された任意の他の顆粒球媒介性疾患又は障害（例えば、好中球媒介性疾患又は障害）が挙げられる。
ある特定の実施態様において、標識された抗ＮＳＰ４抗体が提供される。標識には、直接的に検出される標識又は部分（蛍光性、発色団、高電子密度、化学発光、及び放射性の標識など）、加えて、間接的に、例えば、酵素反応又は分子相互作用を通して、検出される、酵素又はリガンドなどの部分が挙げられるが、それらに限定されない。例示的な標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体などのフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン類、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖類オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はミクロペルオキシダーゼなどの色素前駆体を酸化するのに過酸化水素を用いる酵素と共役した、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなどの複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定なフリーラジカルなどが挙げられるが、それらに限定されない。
Ｂ．薬学的組成物及び製剤
本明細書に記載されたＮＳＰ４阻害剤及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物及び製剤もまた提供される。一部の実施態様において、ＮＳＰ４阻害剤は、本明細書に記載された抗体であり得る。
本明細書に記載されているような薬学的組成物及び製剤は、所望の純度を有するＮＳＰ４阻害剤（抗体又はポリペプチドなど）を１つ又は複数の任意選択の薬学的に許容される担体と混合することにより（Remington’s Pharmaceutical Sciences 第16版、Osol, A.編(1980)）、凍結乾燥製剤又は水溶液の形に調製することができる。薬学的に許容される担体は、一般的に、用いられる投薬量及び濃度においてレシピエントに対して無毒であり、それには、以下が挙げられるが、それらに限定されない：リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などのバッファー；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸及びメチオニン；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロライド；ベンザルコニウムクロライド；ベンゼトニウムクロライド；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及び他の糖（炭水化物）、例えば、グルコース、マンノース、若しくはデキストリン；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩生成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの界面活性剤。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体にはさらに、可溶型中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶型ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの間質内薬物分散剤が挙げられる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６及び第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ又は複数の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせる。
例示的な凍結乾燥した抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性抗体製剤には、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されたものが挙げられ、後者の製剤は、ヒスチジン−酢酸バッファーを含む。
本明細書における組成物及び製剤はまた、治療されることになっている特定の適応症の必要に応じて、１つより多い活性成分を含有してもよく、その成分は、好ましくは、お互いに悪影響を及ぼさない補完的な活性を有するものである。そのような活性成分は、適切には、意図された目的にとって効果的である量で組み合わされて存在する。
活性成分は、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）又はマクロエマルジョンにおいて、例えば、コアセルベーション技術により、又は界面重合により調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル、及びポリ−（メタクリル酸メチル）マイクロカプセル内に封入され得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０）に開示されている。
徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性調製物の適切な例には、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、そのマトリックスは、造形品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形をとる。
インビボ投与に使用される製剤は、一般的に、無菌状態である。無菌は、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過により、容易に達成され得る。
Ｃ．治療方法
本明細書において提供されるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）の何れも治療方法に使用され得る。
一態様において、医薬として使用されるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）が提供される。さらなる態様において、顆粒球により媒介される疾患又は障害を治療又は予防するのに使用されるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）が提供される。ある特定の実施態様において、治療又は予防の方法に使用されるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）が提供される。ある特定の実施態様において、本発明は、有効量のＮＳＰ４阻害剤を個体に投与することを含む、顆粒球により媒介される疾患又は障害を有する個体を治療又は予防する方法に使用されるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）を提供する。１つのそのような実施態様において、方法は、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。一部の実施態様において、顆粒球により媒介される疾患又は障害は、血管性疾患及び炎症性疾患からなる群から選択される。上記の実施態様の何れかによる「個体」は、好ましくはヒトである。本明細書における実施態様の何れかにおいて、顆粒球により媒介される疾患又は障害は、本明細書に記載された疾患であり得る。
ある特定の実施態様において、本発明は、有効量の抗ＮＳＰ４抗体を個体に投与することを含む、顆粒球により媒介される疾患又は障害を有する個体を治療又は予防する方法に使用される抗ＮＳＰ４抗体を提供する。ある特定の実施態様において、抗体は、ＮＳＰ４活性部位に特異的に結合する。ある特定の実施態様において、抗体は、ＮＳＰ４の触媒活性を阻害する。ある特定の実施態様において、抗体は、ＮＳＰ４活性部位に特異的に結合し、かつＮＳＰ４の触媒活性を阻害する。ある特定の実施態様において、抗体は、ＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合する。ある特定の実施態様において、抗体は、ＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する。ある特定の実施態様において、抗体は、ＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合し、かつＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する。ある特定の実施態様において、ＮＳＰ４活性部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４の触媒活性を阻害する抗体、並びにＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する抗体の有効量が、個体に投与される。
さらなる態様において、本発明は、医薬の製造又は調製におけるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）の使用を提供する。一実施態様において、医薬は、顆粒球により媒介される疾患又は障害の治療又は予防用である。さらなる実施態様において、医薬は、顆粒球により媒介される疾患又は障害を治療又は予防する方法であって、その疾患又は障害を有する個体に有効量の医薬を投与することを含む方法に使用される。１つのそのような実施態様において、方法は、有効量の、少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。一部の実施態様において、顆粒球により媒介される疾患又は障害は、血管性疾患及び炎症性疾患からなる群から選択される。上記の実施態様の何れかによる「個体」はヒトであり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、顆粒球により媒介される疾患又は障害は、本明細書に記載された疾患であり得る。
さらなる態様において、本発明は、顆粒球により媒介される疾患又は障害を治療又は予防するための方法を提供する。一実施態様において、方法は、有効量のＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）を、そのような疾患又は障害を有する個体に投与することを含む。１つのそのような実施態様において、方法は、有効量の、少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。一部の実施態様において、顆粒球により媒介される疾患又は障害は、血管性疾患及び炎症性疾患からなる群から選択される。上記の実施態様の何れかによる「個体」はヒトであり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、顆粒球により媒介される疾患又は障害は、本明細書に記載された疾患であり得る。
一態様において、医薬として使用されるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）が提供される。さらなる態様において、好中球媒介性疾患又は障害を治療するのに使用されるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）が提供される。ある特定の実施態様において、治療の方法に使用されるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）が提供される。ある特定の実施態様において、本発明は、有効量のＮＳＰ４阻害剤を個体に投与することを含む、好中球媒介性疾患又は障害を有する個体を治療する方法に使用されるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）を提供する。１つのそのような実施態様において、方法は、有効量の、少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。一部の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、血管性疾患及び炎症性疾患からなる群から選択される。上記の実施態様の何れかによる「個体」は、好ましくはヒトである。本明細書における実施態様の何れかにおいて、好中球媒介性疾患又は障害は、本明細書に記載された疾患であり得る。
さらなる態様において、本発明は、医薬の製造又は調製におけるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）の使用を提供する。一実施態様において、医薬は、好中球媒介性疾患又は障害の治療用である。さらなる実施態様において、医薬は、好中球媒介性疾患又は障害を治療する方法であって、その疾患又は障害を有する個体に有効量の医薬を投与することを含む方法に使用される。１つのそのような実施態様において、方法は、有効量の、少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。一部の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、血管性疾患及び炎症性疾患からなる群から選択される。上記の実施態様の何れかによる「個体」はヒトであり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、好中球媒介性疾患又は障害は、本明細書に記載された疾患であり得る。
さらなる態様において、本発明は、好中球媒介性疾患又は障害を治療するための方法を提供する。一実施態様において、方法は、有効量のＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）を、そのような疾患又は障害を有する個体に投与することを含む。１つのそのような実施態様において、方法は、有効量の、少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。一部の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、血管性疾患及び炎症性疾患からなる群から選択される。上記の実施態様の何れかによる「個体」はヒトであり得る。本明細書における実施態様の何れかにおいて、好中球媒介性疾患又は障害は、本明細書に記載された疾患であり得る。
多形核白血球（ＰＭＮ）としても知られている好中球は、急性炎症、及び侵入病原体（例えば、細菌）の食作用に関与する自然免疫系の細胞である。好中球の抗菌活性は、部分的には、好中球エラスターゼ、カテプシンＧ、及びプロテイナーゼ３などの好中球セリンプロテアーゼにより媒介され、それらのプロテアーゼは、貧食された微生物を破壊するように細胞内で作用し、又は好中球により放出されて、感染部位において病原体増殖を封じ込め、かつ低下させるように細胞外で作用することができる。好中球により放出される好中球セリンプロテアーゼは、自然免疫系において有益な役割を果たすことができるが、これらのプロテアーゼはまた、例えば、異所性組織損傷及び炎症を引き起こすことにより、好中球媒介性疾患又は障害の形成に寄与する場合がある。非限定的に、敗血症性ショック、急性呼吸窮迫症候群、虚血後再灌流、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、関節リウマチ、及びがんなどのいくつかの疾患の病態に寄与する役割を果たすことが、研究により好中球に関連づけられている。例えば、Ａｄａｍｓら、Ｊ Ｔｒａｕｍａ−Ｉｎｊｕｒｙ Ｉｎｆｅｃｔ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ．、２００１、５１：４５２−４５６；Ｌｉｎｄｓｅｙら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、２００１、１０３：２１８１−２１８７；Ｗｒｉｇｈｔら、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、２０１０、４９（９）：１６１８−１６３１；Ｍａｇｒｏｎｅら、Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ．、２０１２、１８（１２）：１６０９−１９；及びＶａｇｕｌｉｅｎｅら、ＢＭＣ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．、２０１３、６：１４−３６を参照されたい。
好中球媒介性疾患又は障害には、炎症（例えば、急性炎症及び／又は慢性炎症）、血管透過性の増加、組織損傷、及び／又は好中球が役割を果たすことが知られている他の炎症過程によって特徴づけられる疾患が挙げられる。一部の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、及び脳虚血からなる群から選択される血管性疾患である。一部の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、急性肺傷害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、変形性関節症、関節リウマチ（例えば、若年性関節リウマチ）、及び敗血症性ショックからなる群から選択される炎症性疾患である。一部の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、肺気腫、α−１アンチトリプシン欠損症、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、及びＡＲＤＳからなる群から選択される肺疾患である。一部の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、非限定的に、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性血管炎、及び水疱形成性皮膚疾患などの自己免疫疾患である。一部の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、非限定的に、肺がん、乳がん、結腸がん、リンパ腫、膵臓がん、及び脳がんなどのがんである。一部の実施態様において、がんは、転移性がんである。一部の実施態様において、好中球媒介性疾患又は障害は、非限定的に、α１−アンチトリプシン、アンチトロンビン、Ｃ１インヒビター、分泌型白血球プロテアーゼ阻害剤、単球−好中球エラスターゼ阻害剤、及びα１−アンチキモトリプシンなどの天然の（すなわち、宿主の）プロテアーゼ阻害剤（例えば、セリンプロテアーゼ阻害剤）の欠乏により引き起こされる疾患である。
顆粒球には、好中球、好酸球、及び好塩基球が挙げられる。一部の実施態様において、本明細書に記載された方法又は医薬は、顆粒球により媒介される疾患又は障害を治療又は予防するのに有用である。例えば、治療又は予防することができる疾患又は障害には、血管性疾患、炎症性疾患、及び自己免疫疾患が挙げられる。一部の実施態様において、疾患又は障害は、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、脳虚血、急性肺傷害、アナフィラキシー、全身性アナフィラキシー、アレルギー性肺炎症、喘息（例えば、アレルギー性喘息、ウイルス誘発性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、特発性肺線維症、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性血管炎、水疱形成性皮膚疾患（例えば、水疱性類天疱瘡）、炎症性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、じん麻疹、好酸球性蜂巣炎）、がん（例えば、肺がん）、腎臓疾患（例えば、糸球体腎炎）、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、敗血症性ショック、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病）からなる群から選択される。
さらなる態様において、本発明は、例えば、上記の治療方法の何れかに使用される、本明細書において提供されるＮＳＰ４阻害剤の何れかを含む薬学的組成物又は製剤を提供する。一実施態様において、薬学的組成物又は製剤は、本明細書において提供されるＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）の何れか、及び薬学的に許容される担体を含む。別の実施態様において、薬学的組成物又は製剤は、本明細書において提供されるＮＳＰ４阻害剤の何れか、及び少なくとも１つの追加の、例えば下記のような、治療剤を含む。
本明細書に記載されたＮＳＰ４阻害剤は、治療において、単独で、又は他の薬剤と組み合わせて、使用することができる。例えば、本明細書に記載されたＮＳＰ４阻害剤は、少なくとも１つの追加の治療剤と共投与されてもよい。そのような併用療法は、組み合わせた投与（２つ以上の治療剤が同じ、又は別々の製剤中に含まれる）、及び別々の投与（その場合、本発明の抗体の投与は、追加の治療剤及び／又はアジュバントの投与前、投与と同時、及び／又は投与後に起こり得る）を包含する。
本明細書に記載されたＮＳＰ４阻害剤（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内の投与、並びに、局所治療が望まれる場合には、病巣内の投与を含む、任意の適切な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が挙げられる。投薬は、１つには投与が短期間か長期間かに依存して、任意の適切な経路により、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。非限定的に、単回、又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含む様々な投薬スケジュールが本明細書において企図される。
本明細書に記載されたＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗体）は、医学行動規範と一致した様式で、製剤化され、投薬され、及び投与される。この関連において考慮されるべき因子には、治療されることになっている特定の障害、治療されることになっている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジューリング、及び医療施術者に知られた他の因子が挙げられる。ＮＳＰ４阻害剤は、必要というわけではないが、任意選択的に、問題の障害を予防又は治療するために現在使用されている１つ又は複数の薬剤と共に製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在するＮＳＰ４阻害剤の量、障害又は治療の型、及び上記で論じられた他の因子に依存する。これらは、一般的に、本明細書に記載されたものと同じ投薬量及び投与経路で、又は本明細書に記載された投薬量の約１％から９９％までで、又は適切であると経験的に／臨床的に決定されている任意の投薬量及び任意の経路により、使用される。
疾患の予防又は治療について、（単独で、又は１つ若しくは複数の他の追加治療剤と組み合わせて使用される場合の）ＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）の適切な投薬量は、治療されることになっている疾患の型、ＮＳＰ４阻害剤の型、疾患の重症度及び経過、ＮＳＰ４阻害剤が投与されるのは予防のためか、治療のためか、以前の治療、患者の病歴及び治療に対する応答、並びに主治医の裁量に依存する。ＮＳＰ４阻害剤は、適切には、単回、又は一連の治療にわたって患者に投与される。
例えば、疾患の型及び重症度に依存して、約１μｇ／ｋｇ−１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ−１０ｍｇ／ｋｇ）のＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）が、例えば、１回若しくは複数回の別々の投与によるか、又は連続的注入によるかに関わらず、患者への投与の初回の候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日量は、上で述べられた因子に依存して、約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇまで、又はそれ以上の範囲であり得る。数日間又はそれ以上にわたる連続投与について、状態に依存して、治療は、一般的に、病徴の所望の抑制が起こるまで持続される。ＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇまでの範囲である。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はそれらの任意の組合せ）の１つ又は複数の用量が患者に投与され得る。そのような用量は、間欠的に、例えば、毎週又は３週間ごと（例えば、患者が、約２回から約２０回まで、又は例えば約６回の用量の抗体を受けるように）、投与され得る。初回の、より高い負荷用量、続いて、１回又は複数回の、より低い用量が投与され得る。しかしながら、他の投与計画が有用である場合がある。この治療の進行は、通常の技術及びアッセイにより容易にモニターされる。
ＩＩＩ．製品及びキット
本発明の別の態様において、上記の障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な１つ又は複数のＮＳＰ４阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体）を含む製品又はキットが提供される。製品又はキットは、容器、及び容器上に、又はそれに付随したラベル又は添付文書をさらに含み得る。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、単独で存在する組成物、又は状態を治療、予防、及び／若しくは診断するのに有効な別の組成物と組み合わされる組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は静脈内溶液バッグ、又は皮下注射針により穿刺可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本明細書に記載されたＮＳＰ４阻害剤である。ラベル又は添付文書は、その組成物が、選ばれた状態を治療するために使用されることを示している。一部の実施態様において、選ばれた状態は、顆粒球により媒介される疾患又は障害である。一部の実施態様において、治療され得る疾患又は障害は、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、脳虚血、急性肺傷害、アナフィラキシー、全身性アナフィラキシー、アレルギー性肺炎症、喘息（例えば、アレルギー性喘息、ウイルス誘発性喘息）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、特発性肺線維症、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性血管炎、水疱形成性皮膚疾患（例えば、水疱性類天疱瘡）、炎症性皮膚疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、じん麻疹、好酸球性蜂巣炎）、がん（例えば、肺がん）、腎臓疾患（例えば、糸球体腎炎）、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、敗血症性ショック、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病）からなる群から選択される。一部の実施態様において、選ばれた状態は、非限定的に、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、脳虚血、急性肺傷害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、変形性関節症、関節リウマチ（例えば、若年性関節リウマチ）、敗血症性ショック、慢性気管支炎、肺気腫、α−１アンチトリプシン欠損症、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性血管炎、水疱形成性皮膚疾患、がん（例えば、肺がん）、天然プロテアーゼ阻害剤（例えば、セリンプロテアーゼ阻害剤）の欠乏により引き起こされる疾患などの好中球媒介性疾患若しくは障害、又は本明細書に記載及び企図された任意の他の好中球媒介性疾患若しくは障害である。さらに、製品又はキットは、（ａ）本明細書に記載されたＮＳＰ４阻害剤を含む組成物が含有されている第１の容器、及び（ｂ）第２の治療剤を含む組成物が含有されている第２の容器を含み得る。本発明のこの実施態様における製品又はキットは、その組成物が特定の状態を治療するために使用することができることを示す添付文書をさらに含み得る。代替として、又は追加として、製品又はキットは、静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液などの薬学的に許容されるバッファーを含む第２（又は第３）の容器をさらに含んでもよい。それは、他のバッファー、希釈液、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業及びユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
前述の発明は、理解の明瞭さを目的として、実例及び例によりかなり詳しく記載されているが、その記載及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。上記で提供された一般的な説明を考慮すれば、様々な他の実施態様が実行され得ることは理解されている。
実施例１： 好中球セリンプロテアーゼ４（ＮＳＰ４）による基質認識の特徴づけ。
トリプシンフォールドプロテアーゼとして特徴を明らかにされる好中球セリンプロテアーゼのファミリーの一員であるＮＳＰ４は、好中球アズール顆粒に貯蔵される（Pereraら、J Immunol., 2013）が、すべてのＮＳＰのなかで存在量が最少であり（Pereraら、Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109:6229-6234）、その機能は未知のままである。ＮＳＰ４は、硬骨魚からヒトに至るまで、高度に保存されており（図１）、他のＮＳＰの進化的出現に先立つ（Pereraら、Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109:6229-6234; Pereraら、Expert Rev Clin Immunol, 2012, 8:501-503）。したがって、ＮＳＰ４はおそらく、好中球生物学において基本的な役割を果たしている。好中球エラスターゼ（ＮＥ）、カテプシンＧ（ＣＧ）、及びプロテイナーゼ３（ＰＲ３）の比較的広範な基質特異性は、それらの活性部位構造の知識に基づいてよく理解されている（Naviaら、Proc Natl Acad Sci USA, 1989, 86:7-11; Hofら、EMBO J, 1996, 15:5481-5491; Fujinagaら、J Mol Biol, 1996, 261:267-278）一方で、ＮＳＰ４は、それがアルギニン残基の後で基質を切断する点において課題をもたらす（Pereraら、Proc Natl Acad Sci USA, 2012, 109:6229-6234; Pereraら、J Immunol., 2013）が、その一次配列からは、異なるエラスターゼ様活性部位が予測される（図２Ａ）。トリプシンフォールドプロテアーゼのなかでも、トリプシン、キモトリプシン、及びエラスターゼの活性部位が、Ｐ１位置の基質特異性の３つの主要なクラスを定義するのに役立つ（Hedstromら、Chem Rev, 2002, 102:4501-4524）（図２Ｂ）。トリプシン様プロテアーゼ、例えば凝固因子及び補体因子は、高度に保存されたＤ１８９（キモトリプシノーゲン番号付け）との塩橋相互作用により安定化された長いアルギニン側鎖を収容する、深いＳ１ポケットを有する。対照的に、エラスターゼ様プロテアーゼは、それらの浅いＳ１ポケットのために、大きなアルギニン側鎖を収容できない。
見かけ上のエラスターゼ様Ｓ１ポケット（図２Ａ及びＢ）で、どのようにＮＳＰ４がそのアルギニン特異性を達成できるのかを研究するため、非定型Ｓ１ポケットの特徴を明らかにした。
方法
組換えタンパク質発現及び精製
構造的特徴づけのためのヒト野生型ＮＳＰ４を産生するため、Ｉｌｅ３４（キモトリプシノーゲン番号付けにおけるＩｌｅ１６）からＡｌａ２８３までのヒトＮＳＰ４をコードするＤＮＡを、Ｎ末端Ｈｉｓ６−タグ及びエンテロペプチダーゼ切断部位と融合し、ｐＡｃＧＰ６７ベクター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）内にクローニングした。得られたバキュロウイルストランスファーベクターを、ＤＮＡシークエンシングにより確認し、Ｓｆ９昆虫細胞内にＢａｃｕｌｏＧｏｌｄ線状化ＤＮＡ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）とともにコトランスフェクトし、高力価ウイルスストックを生成するために３倍に増幅した。タンパク質産生については、細胞を、振盪フラスコ又はウェーブバッグ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）内で、２７℃で、ＥＳＦ９２１培地（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ）とともに、感染後７２時間培養し、遠心分離により除去した。得られた上清に、５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５中の１ｍＭ ＮｉＣｌ２、５ｍＭ ＣａＣｌ２を添加した。上清中のタンパク質を、重力流によりＮｉ−ＮＴＡカラム（Ｑｉａｇｅｎ）上で捕捉し、２００ｍｌ洗浄バッファー（５０ｍＭトリス ｐＨ７．５、３００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭイミダゾール）で洗浄し、溶出バッファー（５０ｍＭトリス ｐＨ７．５、３００ｍＭ ＮａＣｌ、３００ｍＭイミダゾール）で溶出した。タンパク質を濃縮し、２０ｍＭトリス ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌで平衡化したサイズ排除カラム（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ＨｉＬｏａｄ １６／６０、ＧＥ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でさらに精製した。
生化学的特徴づけのためのＮＳＰ４突然変異体を産生するため、Ｉｌｅ３４からＡｌａ２８３までのヒトＮＳＰ４断片をコードするＤＮＡを、Ｎ末端ＦＬＡＧタグ及びＣ末端Ｈｉｓ６タグとともに、哺乳動物細胞発現に好適な修飾されたｐＲＫ５ベクターにクローニングした。ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ突然変異誘発キット（Ａｇｉｌｅｎｔ）を、以下の所望の単一及び二重点突然変異体を組み込んだ誘導体発現コンストラクトを生成するために使用した（キモトリプシン番号付けで）：Ｆ１９０Ａ、Ｓ１９２Ａ、Ｓ１９５Ａ、Ｓ２１６Ｇ、Ｆ１９０Ａ：Ｓ２１６Ｇ、及びＳ１９２Ａ：Ｓ２１６Ｇ。コンストラクトは、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内で、一過性発現により発現させ、インキュベーション後に上清を遠心分離により回収した。上清中のタンパク質を、重力流により抗ＦＬＡＧ親和性樹脂上で捕捉し、２００ｍｌリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、溶出バッファー（５０ｍＭクエン酸ナトリウム ｐＨ３．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ）で溶出し、１Ｍトリス ｐＨ８を使用してすぐにｐＨ７に中和した。
生化学アッセイ
昆虫細胞由来及びＣＨＯ細胞由来ＮＳＰ４の両方を、１５ＥＵ／ｍｌのタンパク質にエンテロペプチダーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して活性化させ、２０℃で一晩インキュベートした。切断反応の完了を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及び液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）によりモニタリングした。エンテロペプチダーゼを除去し、ＮＳＰ４を均一に精製するため、ＭｏｎｏＳカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で、２０ｍＭトリス ｐＨ７．５、０．０５Ｍから１．０Ｍ ＮａＣｌまでの勾配溶出を使用して、イオン交換での二次精製を実施した。
結晶化及び構造決定
アポ−ＮＳＰ４及びＦＦＲ：ＮＳＰ４結晶について、Ｅｎｄｏ Ｆ３を１：１００のＥｎｄｏ Ｆ３：ＮＳＰ４質量比で使用して、１００ｍＭクエン酸ナトリウム ｐＨ５．５、３００ｍＭ ＮａＣｌ中で、３７℃で３時間、その後４℃で一晩、昆虫細胞由来ＮＳＰ４を部分的に脱グリコシル化した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＬＣ−ＭＳを使用して、脱グリコシル化反応を検証した。ＶＬＫ：ＮＳＰ４結晶について、昆虫細胞由来ＮＳＰ４を、完全にグリコシル化した。ＦＦＲ：ＮＳＰ４及びＶＬＫ：ＮＳＰ４複合体を作るため、ＮＳＰ４をそれぞれ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ａｒｇ−ｃｍｋ（Ｂａｃｈｅｍ）又はＤ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｌｙｓ−ｃｍｋ（Ｂａｃｈｅｍ）と、２０倍モル過剰で、２０℃で一晩混合した。得られたＦＦＲ：ＮＳＰ４及びＶＬＫ：ＮＳＰ４共有結合性複合体を、ＬＣ−ＭＳを使用して検証した。アポ−ＮＳＰ４、ＦＦＲ：ＮＳＰ４、及びＶＬＫ：ＮＳＰ４をすべて、２０ｍＭトリス ｐＨ７．５、１５０ｍＭ ＮａＣｌを使用して平衡化されたＳｕｐｅｒｄｅｘ Ｓ２００ ＨｉＬｏａｄ １６／６０サイズ排除クロマトグラフィーカラムを使用して脱塩した。タンパク質をおよそ１０ｍｇ／ｍｌまで濃縮し、結晶化試験のために沈殿剤／バッファー溶液（母液）と１：１で混合した。
すべての結晶は、１９℃でシッティングドロップ蒸気拡散法により得られ、結晶は２日から７日の間に現れた。ＦＦＲ：ＮＳＰ４は、２０％ＰＥＧ ＭＭＥ ２０００、０．１Ｍトリス ｐＨ８．５、０．２ＭトリメチルアミンＮ−オキシド中で結晶化させた。アポ−ＮＳＰ４（フォーム１）は、１５−１７％ＰＥＧ−１０，０００、０．１Ｍ酢酸ナトリウム ｐＨ４．４、０．１Ｍ酢酸アンモニウム中で結晶化させた。アポ−ＮＳＰ４（フォーム２）は、２２−２５％ＰＥＧ−３３５０、０．１Ｍビス−トリス ｐＨ５．５、０．２ＭＮａＣｌ中で結晶化させた。ＶＬＫ：ＮＳＰ４は、２０％ＰＥＧ−３３５０、０．２Ｍ酢酸カリウム中で、追加のバッファーなしで結晶化させた。結晶を、２０％グリセロールを添加した母液中で凍結保護し、液体窒素中で急速冷凍した。
シンクロトロン光源を使用して、データ収集実験を実施した。具体的には、アポ（フォーム１及び２）並びにＶＬＫ−ｃｍｋデータセットは、ＡＬＳビームライン５．０．１で、０．９７７４Åの波長及び９５Ｋの温度で収集した（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ）。ＦＦＲ−ｃｍｋデータセットは、ＳＳＲＬビームライン７−１で、１．１２７１Åの波長及び１００Ｋの温度で収集した（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｓｙｎｃｈｒｏｔｏｎ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ）。ＨＫＬ２０００を使用して、データにインデックスを付け、統合した（Otwinowskiら、Methods in Enzymology, 1997, 276:307-326）。ＮＳＰ４の初期構造は、初期位相を得るためにＭｒＢＵＭＰ（Keeganら、Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 2007, 63:447-457）を使用して解析され、ＰＨＥＮＩＸパッケージ（Adamsら、Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 2010, 66:213-221）を使用して焼きなまし法により創出されたマップへと再構築された。ラマチャンドランプロットの好ましい領域内の残基の９７．０％（アポフォーム１）、９５．４％（アポフォーム２）、９６．５％（ＦＦＲ−ｃｍｋ）、及び９５．４％（ＶＬＫ−ｃｍｋ）並びに許容される領域内の残りの残基について、ＰＨＥＮＩＸを使用して、構造を精密化した。データ収集及び精密化統計を表２に要約する。すべての構造図は、ＰｙＭｏｌ（Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ、ＬＬＣ）を使用して生成した。
蛍光発生ペプチド切断アッセイ
Ｎ末端の７−メトキシクマリン−４−アセテート（Ｍｃａ）及びｍｉｎｉ−ＰＥＧ１（８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸）並びにＣ末端近傍の最後から２番目のリジン側鎖に結合されたジニトロフェノール（Ｄｎｐ）を有する内部消光される蛍光発生ペプチドを、Ｆｍｏｃ固相ペプチド合成（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）を使用して合成した。ペプチドを、３７℃の５０ｍＭトリス ｐＨ８．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ２中の５０ｎＭ ＮＳＰ４又は１００ｎＭ第Ｘａ因子（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に添加した。３２８ｎｍの励起及び３９３ｎｍの発光でＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ）を使用して、酵素反応速度測定を実施した。反応速度データを、Ｐｒｉｓｍ５（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用し、標準的なミカエリス−メンテン反応速度論モデルを使用してフィッティングし、蛍光測定値からの触媒反応速度（ＲＦＵ／ｓ）を１秒当たりに形成されたナノモル産物（ｎＭ／ｓ）に変換するために標準曲線を生成した。５０ｍＭトリス ｐＨ８．０、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ２中の５０ｎＭ ＮＳＰ４又は２００ｎＭ第Ｘａ因子と３７℃で１時間インキュベートした蛍光発生ペプチドを使用してペプチド切断の部位を確認するために、ＬＣ−ＭＳを使用した。飛行時間型質量分析計（Ａｇｉｌｅｎｔ）上での解析前に、５〜６０％アセトニトリル：水逆相勾配上でペプチド断片を分離した。
ヘパリン結合アッセイ
蛍光偏光を使用してヘパリン結合を評価し、フルオレセインコンジュゲートヘパリン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を精製組換えＮＳＰ４と混合した。蛍光偏光アッセイを３回の独立測定で実施し、４８５±３０ｎｍ励起フィルター及び５３５±４０ｎｍ発光フィルターを備えるＶｉｃｔｏｒ ３（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）上で読んだ。電気泳動移動度シフトアッセイを介して反応を評価するため、等体積の５０％グリセロールをＮＳＰ４：ヘパリン混合物に添加し、これを次に、ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離し、Ｔｙｐｈｏｏｎ撮像装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、青色（４８８ｎｍ）レーザー及び５２６±２０ｎｍ発光フィルターで蛍光シグナルを検出した。
ＮＳＰ４−／−マウスの特徴づけ
以前に記述された通りＮＳＰ４−／−マウスを生成し（Tangら、Nat Biotechnol, 2010, 28:749-755）、Ｃ５７／ＢＬ６に１０世代を超えて戻し交配した。ＮＳＰ４−／−マウスにおけるＮＳＰ４除去の確認及び近傍のプロテアーゼ遺伝子発現の決定を、ＲＴ−ＰＣＲを使用して実施した。ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＮＳＰ４−／−マウス又は野生型同腹仔の全骨髄細胞からのＲＮＡを単離し、ｉＳｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用して、対応するｃＤＮＡを合成した。これらはすべて、製造業者の説明書に従って実施した。Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから入手した、以下の括弧内のカタログ番号を有するＴａｑＭａｎプライマー／プローブセットを伴う、ＴａｑＭａｎ ２Ｘ ＰＣＲマスターミックス（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、ｃＤＮＡ試料からｑＰＣＲを実施した：Ｐｒｓｓ５７＿１（ＡＢＩ Ｍｍ０１１４４７９４＿ｍ１、エクソン１−２にまたがる）、Ｐｒｓｓ５７＿２（ＡＢＩ Ｍｍ０１１４４７９５＿ｍ１、エクソン２−３にまたがる）、Ｐｒｓｓ５７＿３（ＡＢＩ Ｍｍ０１１４４７９６＿ｍ１、エクソン３−４にまたがる）、Ｃｆｄ（ＡＢＩ Ｍｍ０１１４３９３５＿ｇ１、エクソン４−５にまたがる）、Ｅｌａｎｅ（ＡＢＩ Ｍｍ０１１６８９２８＿ｇ１、エクソン１−２にまたがる）、Ｇｚｍｍ（ＡＢＩ Ｍｍ００４９３１５０＿ｍ１、エクソン２−３にまたがる）、Ｐｒｔｎ３（ＡＢＩ Ｍｍ００４７８３２３＿ｍ１、エクソン１−２にまたがる）、１８ｓ ｒＲＮＡ（ＡＢＩ ４３３３７６０Ｆ）。
免疫細胞集団を定量するため、標準的なフローサイトメトリープロトコール及び以下の抗体クローンを使用して、ＮＳＰ４−／−マウス又は野生型同腹仔の大腿骨髄からの細胞を同定した：抗ＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０）；抗ＣＤ１１ｃ（Ｎ４１８）；抗Ｂ２２０（ＲＡ３−６Ｂ２）；抗Ｌｙ６Ｃ（ＨＫ１．４）、抗Ｌｙ６Ｇ（１Ａ８）。すべての抗体をｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから得た。Ｓｙｔｏｘ Ｂｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して生存率を評価した。ＦＡＣＳＡｒｉａセルソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、染色細胞をソートした。以下の集団をソートし、計数した：Ｂ細胞、Ｂ２２０＋；全骨髄性細胞、Ｂ２２０−／ＣＤ１１ｂ＋；単球、Ｂ２２０−／ＣＤ１１ｂ＋／Ｌｙ６Ｃｈｉ、及び好中球、Ｂ２２０−／ＣＤ１１ｂ＋／Ｌｙ６Ｇｈｉ。
Ｋ／ＢｘＮ血清移入マウスモデル
Ｋ／ＢｘＮ血清誘導血管透過性をインビボで、マウスの肢全体の非侵襲的近赤外蛍光画像化（ＮＩＲＦ）によりモニタリングした。マウスを２％イソフルラン（Ｂｕｔｌｅｒ Ｓｃｈｅｉｎ、流量１Ｌ／ｍｉｎ）により麻酔し、尾静脈カテーテルを埋め込み、サージカルテープにより固定された肢で、Ｋｏｄａｋ Ｉｎ−Ｖｉｖｏ ＦＸ Ｐｒｏ ４００動物全身ＮＩＲＦ画像化システム（Ｃａｒｅｓｔｒｅａｍ Ｈｅａｌｔｈ）の画像化表面ガラス上に固定化した。尾静脈カテーテルを通じて１００μｌの血液プールプローブＡｎｇｉｏＳｅｎｓｅ ６８０（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）をマウスに注入し、７５μｌ Ｋ／ＢｘＮ血清の尾静脈カテーテル注入の前に１分間隔で５分間画像化（６５０ｎｍ励起／７００ｎｍ発光、２１．４ｍｍ ＦＯＶ、１０秒曝露、２×ビニング）してベースライン蛍光を確立し、さらに２５分間画像化した。このモデルにおいて使用されたＫ／ＢｘＮ血清は、重症関節炎を示すＫＲＮｘＮＯＤ Ｆ１マウスに由来する。肢の内部での初期画像化時点からの平均蛍光強度及び蛍光強度における倍率変化を、ＭａｔＬａｂ（ＭａｔｈＷｏｒｋｓ）におけるカスタムルーチンを使用して定量した。
関節炎を、血管透過性解析後の８日間毎日評価した。臨床スコアは、１動物当たり０から１６の範囲であり、０（正常な関節の外観）から４（最大の紅斑及び浮腫）の個々の肢のスコアを組み合わせることにより割り当てられる。紅斑及び浮腫について以下の関節を解析した：足根若しくは手根関節、中足若しくは中手関節、中足指若しくは中手指関節、又は指節骨。
マウスの関節炎の肢の組織学的検査
肢を中性緩衝ホルマリン中に固定し、脱灰し、常套的に処理して、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した矢状半切片とした。１動物当たり４つすべての肢を検査した。組織学的病変を、以下の特徴について０（正常）から５（重症）の任意尺度上でスコア化した：炎症細胞の浸潤、パンヌス形成を含む線維増殖、軟骨損傷、及び骨再形成。
結果
ＮＳＰ４ Ｓ１結合ポケットの反応速度の特徴づけ
Ｐ１−アルギニン残基を認識するＮＳＰ４の能力を、特にアルギニン結合を阻害するようであるＮＳＰ４ Ｓ１結合ポケットにおけるＦ１９０及びＳ２１６残基に照らして研究した（図２Ａ）。Ｓ１ポケットの開口部に向かい合って位置するＮＳＰ４残基Ｆ１９０及びＳ２１６は、Ｓ１ポケットへのアクセスを可能にする移動可能なゲートとして作用する可能性がある。もしそうであるなら、Ｐ１−アルギニン側鎖は、Ｄ１８９（ＮＳＰ４におけるＧ１８９）の代理としてのＤ２２６により安定化され得る（図２Ａ）（１３、１４）。この仮説を試験するため、部分的に開いた（Ｆ１９０Ａ若しくはＳ２１６Ｇ）又は完全に開いた（Ｆ１９０Ａ：Ｓ２１６Ｇ）「ゲート」の何れかを有するＮＳＰ４変異体を設計した。この仮説が正しければ、これらのすべてが酵素活性を増加させるはずである。ＮＳＰ４活性に対する効果を測定するため、アルギニンの後でＰ１残基１ＩＲＲ３↓４ＳＳＹＳＦＫＫ１０としてＮＳＰ４により特異的に切断される蛍光発生ペプチドを合成した（図２Ｃ）。結果は、単一突然変異体（Ｆ１９０Ａ又はＳ２１６Ｇ）及び二重突然変異体Ｆ１９０Ａ：Ｓ２１６Ｇが、野生型と比較しておよそ１０倍及び４倍減少した活性（ｋｃａｔ／ＫＭ）を有することを示した（図２Ｄ）。これらの結果は、移動可能なゲートの仮説を支持せず、むしろ、Ｆ１９０及びＳ２１６の両方が、触媒を可能にするよう基質を配置するうえで決定的に重要であることを示唆した。
ＮＳＰ４の結晶構造
Ｐ１−アルギニン認識メカニズムの構造的基礎を解明するため、共有結合基質模倣体Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ａｒｇクロロメチルケトン（ＦＦＲ−ｃｍｋ）を用いて１．４０Åの分解能でＮＳＰ４のＸ線結晶構造を決定した。加えて、アポフォームであるＮＳＰ４の２つの非同型構造を、２．５５Å及び２．７０Åの分解能で（表２）決定した。すべての構造が、トリプシンフォールドセリンプロテアーゼに特徴的な二重βバレル及び触媒三残基構成を示した（図３Ａ）。ＮＳＰ４はまた、ＮＳＰ４をプロテオグリカンに局在化させるよう機能し得る伸長した塩基性表面パッチを有していた（図４Ａ）。この見解と一致して、蛍光偏光及び電気泳動移動度シフトアッセイにおいて、ＮＳＰ４は強力なヘパリン結合を示した（図４Ｂ）。ＮＳＰ４構造の重層はまた、Ｓ２／Ｓ４基質相互作用部位を形成する９９−ループ（図３Ａ）が不安定であり、他のセリンプロテアーゼについて実証されている通り（Ganesanら、Structure, 2009, 17:1614-1624; Debelaら、J Mol Biol, 2007, 373:1017-1031）、ＮＳＰ４アロステリック制御に関わる可能性があることを示した。
ＮＳＰ４アルギニン特異性の構造的基礎
活性部位の構造の詳細は、基質Ｐ１−アルギニンを認識し、同時にＮＳＰ４の難問を説明する、前例のないメカニズムを明らかにした。これらの構造は、カノニカルなＳ１ポケットが存在しないことを示す。なぜならそれは、Ｆ１９０及びＳ２１６により完全に閉塞されるからである（図３Ｂ及び図５）。Ｆ１９０及びＳ２１６側鎖は、高度に秩序立っており、「ゲート」メカニズムの非存在と一致した。代わりに、残基Ｆ１９０及びＳ２１６は、向け直されたアルギニン側鎖を収容する閉塞されたＳ１ポケットの上に浅い溝の床を形成した（図３Ｂ）。ＮＳＰ４におけるカノニカルな「下降」位置から新しい「上昇」位置へのアルギニン側鎖の移動は、Ｃβ−Ｃγ結合（Ｃｈｉ２角度）の１６０°回転により達成された（図６Ａ）。他方、触媒三残基、オキシアニオンホール、及びＦＦＲペプチドの古典的Ｃαトレースは、プロテアーゼ２１４−２１６残基と基質Ｐ１−Ｐ３残基との間の逆平行主鎖相互作用を含めて、すべて保存された。Ｐ１−アルギニンの「上昇」コンフォメーションはＦ１９０により支持され、Ｐ１−アルギニン側鎖の脂肪族部分と好ましく相互作用する疎水性プラットフォームを提供した。加えて、Ｐ１−アルギニンに対する特異性は、３つのＨ結合アクセプター、すなわちＳ２１６及びＳ１９２側鎖並びにＧ２１７骨格カルボニル酸素により配位される、グアニジウム基を伴うＨ結合のネットワークにより付与された（図６Ｂ）。したがって、ＮＳＰ４は、典型的なトリプシン様Ｓ１ポケットの内部の優勢なＰ１−アルギニン安定化静電的相互作用を、閉塞されたＳ１ポケットの上部に位置する新しいＨ結合ネットワークに置き換えた。触媒反応に関するこのＨ結合ネットワークの重要性を、２つのＨ結合アクセプターＳ１９２及びＳ２１６に変異導入することにより検査した。単一のＨ結合アクセプター突然変異体は、１０倍減少した活性を示し、一方で両方のＨ結合アクセプターの除去（Ｓ１９２Ａ：Ｓ２１６Ｇ）は、２０倍の減少をもたらした（図６Ｃ）。
Ｐ１−リジン（Ｐ１−Ｌｙｓ）基質に対するＮＳＰ４の活性が弱いにもかかわらず、共有結合基質リジン模倣体Ｄ−Ｖａｌ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｌｙｓ（ＶＬＫ）−ｃｍｋとのＮＳＰ４の複合体を調製し、３．０８Åの分解能で結晶構造を得ることが可能だった。それは、Ｐ１−リジン側鎖がＰ１−アルギニンと同様のコンフォメーションをとったことを示した（図７）。しかしながら、より長いＰ１−アルギニン側鎖と異なり、より短いＰ１−リジン側鎖は、Ｐ１−アルギニンのようにＨ結合を完全に補完することはできず、そのことによりＰ１−リジン残基の後での切断がきわめて弱いことを説明した（図２Ｃ）。
ＮＳＰ４は修飾アルギニンを有する基質を処理した
固有のＮＳＰ４活性部位を確証する直交的アプローチにおいて、ペプチド基質に対するＮＳＰ４の活性を検査した。天然に存在するアルギニン誘導体であるメチルアルギニンは、トリプシン様プロテアーゼによる切断に対し耐性がある。なぜなら、メチルアルギニン側鎖を、狭いＳ１ポケットの内部に空間的に収容できないからである（Baldwinら、Science, 1971, 171:579-581; Asamiら、Bioorg Med Chem Lett, 2012, 22:6328-6332）。この構造的限界は、ＮＳＰ４には当てはまらなかった。Ｐ１−アルギニングアニジウム基はＮＳＰ４上で溶媒に曝露されているので、ＮＳＰ４がアルギニングアニジウム基に修飾、例えば余分なメチル基を受け入れ得ることが推測された。ペプチド性基質での酵素的アッセイは、ＮＳＰ４が実際、メチルアルギニンの後で切断できる一方で、カノニカルなＳ１ポケットを有するトリプシン様プロテアーゼである第Ｘａ因子は、非修飾のＰ１−Ａｒｇ基質しか切断できないことを実証した（図６Ｄ及び図８）。
実施例２： ＮＳＰ４欠損マウスを使用した、ＮＳＰ４の生物学的役割の決定
ＮＳＰ４のインビボ機能の探究に向けた第１段階として、好中球依存性Ｋ／ＢｘＮ血清移入関節炎モデルを使用して、炎症におけるＮＳＰ４の潜在的役割を研究した（Monachら、Curr Protoc Immunol, 2008, Chapter 15:Unit 15.22）。ＮＳＰは、以前から炎症性関節炎に関与することが示唆されていたが、実験的関節炎モデルにおいて十分な保護を達成するにはＮＥ及びＣＧの両方の複合欠損を必要とし、ＮＳＰ間での機能的冗長性が示唆される。しかしながら、ＮＳＰ４の固有のアルギニン特異性及びその進化的地位を鑑みると、ＮＳＰ４が好中球媒介性炎症プロセスにおいて必須の機能を有する可能性があることが推測された。炎症におけるＮＳＰ４の役割を研究するため、ＮＳＰ４欠損マウスを以前に記述された通り生成し（Tangら、Nat Biotechnol, 2010, 28:749-755）（図９Ａ）、Ｃ５７ＢＬ／６系統に戻し交配した。ＮＳＰ４−／−マウスにおけるＮＳＰ４除去の成功を、３つの異なるＮＳＰ４エクソン境界にまたがる異なるＰＣＲプライマー／プローブセットを使用して、ＲＴ−ｑＰＣＲにより確証した（図９Ｂ）。同様にして、ＮＳＰ４−／−マウスを、このプロテアーゼリッチな遺伝子座においてＮＳＰ４と隣接するプロテアーゼ遺伝子の発現についても解析した。ＮＳＰメンバーであるＮＥ及びＰＲ３を含む隣接するプロテアーゼ遺伝子のいずれも、影響を受けなかった（図９Ｂ）。ＮＳＰ４欠損マウスは、生存及び繁殖可能であり、包括的表現型スクリーニングにおいて顕著な異常を示さず（Henrichら、Nat Struct Biol, 2003, 10:520-526）、正常な骨髄細胞、Ｂ細胞、単球、骨髄性細胞、及び好中球数を有していた（図９Ｃ）。
Ｋ／ＢｘＮモデルの主要な特徴の一つは、静脈内Ｋ／ＢｘＮ血清投与後のマウスの肢における限局性血管性浮腫の急速な発症である（Binstadtら、Nat Immunol, 2006, 7:284-292）。血管漏出をモニタリングするため、ＮＳＰ４欠損及び野生型マウスの両方に、Ｋ／ＢｘＮ血清注射の５分前に、近赤外蛍光血管プローブを投与し、次に、インビボ近赤外蛍光画像化により、その後の血管透過性変化を視覚化及び定量した（図１０Ａ及び図１０Ｂ）。Ｋ／ＢｘＮ血清の静脈内投与後、野生型マウスは、予想された通り、肢において再現性のある重症度及び速度で血管プローブの急速な血管外漏出を示した。著しく対照的に、ＮＳＰ４−／−マウスの蛍光レベルは、研究中を通じてベースラインに留まり（図１０Ａ及び図１０Ｂ）、ＮＳＰ４が、この免疫複合体誘発性血管透過性反応の媒介において不可欠な役割を果たすことを示唆した。
野生型マウスにおいてＫ／ＢｘＮ血清移入後の血管漏出の初期誘導に続き、紅斑及び浮腫が発症した一方で、ＮＳＰ４−／−マウスは、８日の誘導後期間中、有意に保護されたままだった（図１１Ａ）。実験終点での肢の組織学的検査は、野生型コントロール群において軽度から中程度の多発性関節炎を示した一方で、ＮＳＰ４−／−マウスは、基本的に病変を有しなかった（図１１Ｂ及び図１１Ｃ）。野生型マウスにおいて、観察された多発性関節炎は、Ｋ／ＢｘＮモデルと一致し、炎症細胞、主に好中球の浸潤により特徴づけられ、軽度の線維増殖、軟骨損傷及び骨再形成を伴った（図１１Ｃ）。対照的に、ＮＳＰ４−／−マウスは、最少の病理学的病変を有し（図１１Ｃ、右中央）、実質的に炎症細胞浸潤を有しなかった（図１１Ｃ、右下）。まとめると、この好中球媒介性疾患モデルにおいて、ＮＳＰ４が不可欠の炎症促進性の役割を果たすことを、これらの結果は示した。
実施例３： コンフォメーション特異的及び種特異的ＮＳＰ４抗体の生成
一群の抗体を生成し、ＮＳＰ４に対する特異性について特徴を明らかにした。Ｋａｂａｔシステムを使用して残基を番号付けした（Kabatら、Sequences of proteins of immunological interest, 5th Ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)）。
方法
組換えヒト及びマウスＮＳＰ４の生成
組換えヒトＮＳＰ４及びマウスＮＳＰ４を、ライブラリーソーティングのための抗原として生成した。タンパク質のＮ末端に切断可能なエピトープタグを設計して、時期尚早の活性化を防止し、そのことにより異種発現系における細胞傷害性を減少させ、タンパク質発現を増加させることにより、ＮＳＰ４を不活性のチモーゲンとして作製した。全部で４つのＮＳＰ４抗原を生成した：ヒトチモーゲン（ｈＺ）、ヒト活性（ｈＡ）、マウスチモーゲン（ｍＺ）、及びマウス活性（ｍＡ）。ｈＺ ＮＳＰ４を昆虫細胞内に発現させ、固定化金属アフィニティークロマトグラフィーを使用してＮ末端６Ｈｉｓ−タグにより精製した。ｍＺ ＮＳＰ４をＣＨＯ細胞内に発現させ、抗ＦＬＡＧアフィニティークロマトグラフィーを使用してＮ末端ＦＬＡＧタグにより精製した。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００サイズ排除クロマトグラフィー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）及びＭｏｎｏＳ陽イオン交換クロマトグラフィー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ｈＺ及びｍＺ ＮＳＰ４の両方をさらに精製した。精製チモーゲン形態（ｈＺ及びｍＺ）をＥＫｍａｘエンテロペプチダーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で処理し、Ｎ末端エピトープタグを除去することにより、触媒的に活性の形態のこれらＮＳＰ４（ｈＡ及びｍＡ）を生成し、続いて別のＭｏｎｏＳ陽イオン交換クロマトグラフィー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で均一に精製した。アミノ酸配列Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓの後のリジンのＣ末端側に切断が生じた。ファージライブラリーソーティング並びにコンフォメーション特異的及び種特異的抗ＮＳＰ４抗体のスクリーニングのために、これらの４つのＮＳＰ４抗原（ｈＺ、ｈＡ、ｍＺ、及びｍＡ）を平行して使用した（図１２）。
ライブラリー構築のためのファージミドベクター
鋳型として、修飾されたｈ４Ｄ５をコードするファージミド、ｐＶ０３５０−４上で、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）におけるオリゴヌクレオチド指定突然変異を使用して、ファージディスプレイ合成抗体ライブラリーを生成し、Ｌｉｂ−３として記述された（Leeら、2004. J Mol Biol 340:1073-1093を参照のこと）。ナイーブライブラリーでの初期選択のため、ｈＺ−、ｈＡ−、ｍＺ、及びｍＡ−ＮＳＰ４が、それぞれ別々にＭａｘｉｓｏｒｐイムノプレート（Ｎｕｎｃ）上に固定化され、ファージライブラリーを、高塩条件下、１％ＢＳＡ又はカゼイン（第１及び第３ラウンドでＢＳＡ、第２及び第４ラウンドでカゼイン）、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０、並びに正電荷ＮＳＰ４タンパク質と負電荷ファージ粒子との間の非特異的相互作用を減少させるための追加の０．５Ｍ ＮａＣｌを添加したリン酸緩衝生理食塩水中で、４ラウンドの結合選択によりサイクルさせた（Lee ら、J Mol Biol, 2004, 340:1073-1093を参照のこと）。第３及び第４ラウンドから選択されたランダムクローンを取り出し、ファージ酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、特異的バインダーを同定するためにアッセイした。ＮＳＰ４に結合した選択されたクローンのＶＨ領域を、シークエンシングのためにポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により増幅した。
競合ファージＥＬＩＳＡ
ファージクローンを、カルベニシリン及びＫＯ７ヘルパーファージを添加した３０ｍｌ ２ＹＴ培地中で、一晩、３０℃で成長させることにより単一のコロニーから繁殖させ、精製し、記述された通りアッセイした（Leeら、J Mol Biol, 2004, 340:1073-1093を参照のこと）。亜飽和濃度のファージをまず、漸増濃度の標的ＮＳＰ４抗原（ｈＺ、ｈＡ、ｍＺ、又はｍＡの何れか）と１から２時間インキュベートし、次に、非結合ファージを捕捉するために同じＮＳＰ４抗原で被覆されたウェルに移した。結合したファージの量を、抗Ｍ１３抗体−ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で測定し、基質テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用しておよそ５分間発色させ、１．０Ｍ Ｈ３ＰＯ４で消光させ、以前に記述された通り分光光度計で、４５０ｎｍ波長で読んだ（Leeら、J Mol Biol, 2004, 340:1073-1093を参照のこと）。固定化されている抗原に対するファージ結合の５０％を阻害する可溶型坑原の濃度として、阻害濃度（ＩＣ５０）値を計算した。
抗ＮＳＰ４抗体産生及び親和性測定
特徴づけのためのＩｇＧタンパク質を生成するため、選択されたファージクローンの可変ドメインを、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における一過性ＩｇＧ発現のためのヒト軽鎖又は重鎖（ヒトＩｇＧ１）定常ドメインとともにｐＲＫ５ベースのプラスミド内にクローニングし、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製した。
バイオレイヤー干渉法測定（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を、４つすべてのＮＳＰ４抗原（ｈＺ−、ｈＡ−、ｍＺ−、及びｍＡ−ＮＳＰ４）に対する抗ＮＳＰ４抗体の親和性を決定するために使用した。５μｇ／ｍｌの各抗ＮＳＰ４候補を、抗ヒトＦｃセンサー上に固定化し、親和性測定値を得るために漸増濃度の各ＮＳＰ４抗原とインキュベートした。次に、これらの抗体候補を以下のカテゴリーのうちの１つに振り分けた：１）コンフォメーション及び種特異的：ｈＺ、ｈＡ、又はｍＡの何れかに結合する（ｍＺ特異的バインダーは同定されなかった）；２）コンフォメーション特異的：ＮＳＰ４の活性（ｈＡ／ｍＡ）又はチモーゲン（ｈＺ／ｍＺ）形態に結合する；３）種特異的：ＮＳＰ４のヒト（ｈＺ／ｈＡ）又はマウス（ｍＺ／ｍＡ）形態に結合する；及び４）汎ＮＳＰ４：ＮＳＰ４の４つすべての形態（ｈＺ／ｈＡ／ｍＺ／ｍＡ）に結合する。
ＮＳＰ４ブロッキング抗体のスクリーニング
ＮＳＰ４を有する一群の内部消光される蛍光発生ペプチド基質をスクリーニングすることにより、ＮＳＰ４蛍光発生活性アッセイを考案した（Eigenbrotら、Structure, 2012, 20:1040-1050を参照のこと）。５０ｎＭのＮＳＰ４を、５０ｍＭトリス ｐＨ８．０、２００ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．２５％ｗ／ｗ ＣＨＡＰＳ中の２．５μＭの各蛍光消光ペプチド基質とインキュベートし、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５分光光度計（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ）を使用して３２８ｎｍの励起及び３９３ｎｍの発光で蛍光強度を決定した。ＮＳＰ４により最も効率的に切断されたペプチド基質は、Ｍｃａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ［Ｄｎｐ］−Ｌｙｓだったのであり、Ｍｃａは７−メトキシクマリン−４−アセテートであり、Ｄｎｐはジニトロフェノールである。ＮＳＰ４とのインキュベーションは、特異的切断をもたらし、以下の２つの異なる断片をもたらした：Ｍｃａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ及びＳｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ［Ｄｎｐ］−Ｌｙｓ。
ブロッキング抗ＮＳＰ４抗体候補を同定するために、１０ｎＭの組換えヒト又はマウスＮＳＰ４を、５００ｎＭの各抗体候補と３０分間、３７℃でインキュベートした。次に、このＮＳＰ４：抗体混合物を、６．７μＭの蛍光発生ペプチド基質と混合し、５分間３７℃でインキュベートし、次に、上述のパラメータを使用してＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５分光光度計上で読んだ。
結果
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）ライブラリーパニング中にＮＳＰ４に強く結合する３つの抗体候補を単離し、さらなる特徴づけのためのＩｇＧ１抗体を生成するために使用した（図１３）。抗体候補５−２、５−３、及び５−４は、活性マウス（ｍＡ）ＮＳＰ４抗原に対する高度の結合特異性を示した（それぞれ図１４Ａ、図１４Ｂ、及び図１４Ｃ）。抗体候補５−２、５−３、及び５−４の評価は、マウスＮＳＰ４のペプチド切断活性をブロックするそれらの能力を示した（図１５）。さらに、これらの抗体は、ヒトＮＳＰ４のペプチド切断活性をブロックせず、５−２、５−３、及び５−４がマウスＮＳＰ４に種特異的であることを示した（図１５）。
ヒトＮＳＰ４に対する抗体は、本明細書に記載の方法を使用して生成できる。
抗体配列
抗体５−２’のための重鎖ＣＤＲ１
ＧＦＴＦＳＮＴＹＩＳ（配列番号１）
抗体５−２’のための重鎖ＣＤＲ２
ＧＦＩＹＰＡＮＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）
抗体５−２’のための重鎖ＣＤＲ３
ＲＲＹＲＬＳＦＤＹ（配列番号３）
抗体５−３’のための重鎖ＣＤＲ１
ＧＦＴＦＳＧＮＤＩＳ（配列番号４）
抗体５−３’のための重鎖ＣＤＲ２
ＡＧＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５）
抗体５−３’のための重鎖ＣＤＲ３
ＲＲＶＳＦＹＳＲＨＡＧＭＤＹ（配列番号６）
抗体５−４’のための重鎖ＣＤＲ１
ＧＦＴＦＴＳＹＡＩＳ（配列番号７）
抗体５−４’のための重鎖ＣＤＲ２
ＡＧＩＳＰＳＮＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８）
抗体５−４’のための重鎖ＣＤＲ３
ＲＡＧＲＷＴＨＳＤＩＤＹ（配列番号９）
抗体５−２’、５−３’、及び５−４’のための軽鎖ＣＤＲ１
ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１０）
抗体５−２’、５−３’、及び５−４’のための軽鎖ＣＤＲ２
ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）
抗体５−２’、５−３’、及び５−４’のための軽鎖ＣＤＲ３
ＱＱＳＹＴＴＰＰＴ（配列番号１２）
抗体５−２’のための重鎖可変領域
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＴＹＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＦＩＹＰＡＮＧＡＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＲＹＲＬＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１３）
抗体５−３’のための重鎖可変領域
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＮＤＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＲＶＳＦＹＳＲＨＡＧＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１４）
抗体５−４’のための重鎖可変領域
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＴＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧＩＳＰＳＮＧＹＴＮＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＲＡＧＲＷＴＨＳＤＩＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）
抗体５−２’、５−３’、及び５−４’のための軽鎖可変領域
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＴＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１６）
実施例４： ＮＳＰ４ ｍＲＮＡ及びタンパク質発現量の特徴づけ
ＮＳＰ４についてｍＲＮＡ及びタンパク質発現量の両方を、様々なマウス細胞型において測定し、ＮＳＰ４の存在について細胞型をプロファイリングした。
方法
ＮＳＰ４ ｍＲＮＡレベルのＲＴ−ｑＰＣＲ測定。マウス大腿骨髄からの免疫細胞集団におけるＮＳＰ４のｍＲＮＡ発現量を定量するため、ＲＴ−ｑＰＣＲ解析を実施した。標準的なフローサイトメトリープロトコール及び以下の抗体クローンを使用して、マウス大腿骨髄からの免疫細胞集団を同定した：抗ＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０）；抗ＣＤ１１ｃ（Ｎ４１８）；抗Ｂ２２０（ＲＡ３−６Ｂ２）；（ＢＭ８）；抗Ｌｙ６Ｃ（ＨＫ１．４）；抗Ｌｙ６Ｇ（１Ａ８）；抗Ｓｉｇｌｅｃ Ｆ（Ｅ５０−２４４０）。すべての抗体をｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから得た。Ｓｙｔｏｘ Ｂｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して生存率を評価した。ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＡｒｉａセルソーターを使用して、染色細胞をソートした。ダウンストリーム解析のために以下の集団をソートした：Ｂ細胞、Ｂ２２０＋ＣＤ１１ｂ−；単球、Ｌｙ６Ｃ＋ＣＤ１１ｂ＋；好中球、Ｌｙ６Ｇ＋ＣＤ１１ｂ＋；好酸球、Ｓｉｇｌｅｃ Ｆ＋ＣＤ１１ｂ＋。ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、全ＲＮＡ含有量を各細胞型から単離し、ｉＳｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用して、対応するｃＤＮＡを合成した。これらはすべて、製造業者の説明書に従って実施した。ＴａｑＭａｎ ２Ｘ ＰＣＲマスターミックス（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を以下の３つのＮＳＰ４／Ｐｒｓｓ５７プライマー／プローブセット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）とともに使用して、ｃＤＮＡ試料からｑＰＣＲ測定を実施した：Ｐｒｓｓ５７＿１（ＡＢＩ Ｍｍ０１１４４７９４＿ｍ１）、Ｐｒｓｓ５７＿２（ＡＢＩ Ｍｍ０１１４４７９５＿ｍ１）、及びＰｒｓｓ５７＿３（ＡＢＩ Ｍｍ０１１４４７９６＿ｍ１）。遺伝子発現量は、マウス１８Ｓ ｒＲＮＡコントロールと比較して２＾（−ｄＣｔ）として表す。
ＮＳＰ４タンパク質のウェスタンブロット検出。マウス大腿骨髄からの免疫細胞集団におけるＮＳＰ４タンパク質の存在を測定するため、ウサギ抗マウスＮＳＰ４ポリクローナル抗体を使用してウェスタンブロット解析を実施した。製造業者の説明書に従って実施されるマウス好中球ネガティブ選択キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、骨髄由来好中球を全骨髄細胞から単離した。Dyerら、2008. J Immunol 181(6):4004-4009に記載の通り、骨髄由来好酸球を骨髄細胞から単離及び培養した。Lukacsら、1996, Blood 87(6):2262-2268に記載の通り、骨髄由来肥満細胞を骨髄細胞から単離及び培養した。Zhangら、2008. Curr Protoc Immunol, Unit 14.1に記載の通り、骨髄由来マクロファージを骨髄細胞から単離した。ＳＤＳ−Ｌａｅｍｍｌｉ試料バッファー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用して細胞可溶化物を生成し、ＢＣＡタンパク質アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して濃度を決定した。
結果
ＮＳＰ４ ｍＲＮＡレベルのＲＴ−ｑＰＣＲ測定。マウス大腿骨髄から単離した免疫細胞集団におけるＮＳＰ４のｍＲＮＡ発現量を測定するため、ＲＴ−ｑＰＣＲ解析を実施した。３つの異なるエクソン接合部にまたがる３つの異なるＮＳＰ４／Ｐｒｓｓ５７プライマー／プローブセットを使用したＲＴ−ｑＰＣＲ測定値は、Ｂ細胞、好中球、好酸球、及び単球におけるＮＳＰ４ ｍＲＮＡ発現量を実証する（図１６）。図１６Ａ−Ｃに示す通り、ＮＳＰ４ ｍＲＮＡは、好酸球において非常に高度に発現し、測定値は、単球におけるＮＳＰ４ ｍＲＮＡ発現の存在を示した。ＮＳＰ４転写物は、完全に分化した好中球において非常に低量であった。なぜなら、ＮＳＰ遺伝子の転写は、主に前骨髄球段階中に生じ、完全に分化した好中球において停止するからである。Theilgaard-Monchら、Blood 105:1785-1796, 2005を参照のこと。
ＮＳＰ４タンパク質のウェスタンブロット検出。マウス大腿骨髄から単離及び培養された好中球、好酸球、肥満細胞及びマクロファージにおけるＮＳＰ４のタンパク質発現レベルを測定するため、ウサギ抗マウスＮＳＰ４ポリクローナル抗体を使用して、ウェスタンブロット解析を実施した（図１７）。図示する通り、野生型マウスから単離された好中球及び好酸球においてＮＳＰ４タンパク質（約３０ｋＤ）が検出されたが、野生型マウスからの肥満細胞又はマクロファージにおいては、ＮＳＰ４は検出されなかった。ＮＳＰ４欠損マウスからの細胞においては、ＮＳＰ４は検出されなかった。
実施例５： 好中球動員はＮＳＰ４を必要とする
ＮＳＰ４−／−マウスにおける好中球関節浸潤の欠如を確認するために、野生型及びＮＳＰ４−／−マウスにおいてルミノールベース生物発光画像化により好中球動員をモニタリングした。
方法
マウスの肢における好中球ミエロペルオキシダーゼ活性のルミノール生物発光画像化。マウスの肢の非侵襲的生物発光画像化（ＢＬＩ）を通じて、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性をインビボでモニタリングした。マウスを２％イソフルラン（Ｂｕｔｌｅｒ Ｓｃｈｅｉｎ、流量１Ｌ／ｍｉｎ）により麻酔し、尾静脈カテーテルを埋め込み、Ｐｈｏｔｏｎ Ｉｍａｇｅｒ（Ｂｉｏｓｐａｃｅ Ｌａｂ、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）内の加熱ステージ上に配置した。尾静脈カテーテルを通じてマウスに、７５μｌ Ｋ／ＢｘＮ血清及び１５０μｌ ＭＰＯ感応性ルミノール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）のカクテルを注入した。カクテルの注入後、５分、６時間、及び２４時間の間隔で、各マウスについて８分にわたって発光を記録した。マウスのグレースケール明視野画像上に重ねた生物発光疑似カラー画像が示され、最も強いシグナルは赤色、最も弱いシグナルは青色であった。ルミノールシグナルの定量解析のため、４つすべての肢の上に楕円の目的領域（ＲＯＩ）を生物発光画像上で描いた。ＲＯＩの面積は一定に保たれ、Ｍ３ Ｖｉｓｉｏｎソフトウェア（Ｂｉｏｓｐａｃｅ Ｌａｂ）を使用して、結果を１ｃｍ２当たりの光子の毎分計数として表した。
ＮＳＰ４欠損マウスにおけるミエロペルオキシダーゼの発現を確証するため、マウス好中球単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、大腿骨髄からの好中球を単離し、２Ｘ Ｌａｅｍｍｌｉバッファー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用して全細胞可溶化物を作製した。抗ミエロペルオキシダーゼマウスモノクローナル抗体（クローン３９２１０５；Ｒ＆Ｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及び抗ベータアクチンマウスモノクローナル抗体（クローン８Ｈ１０Ｄ１０；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）をそれぞれ使用して、ミエロペルオキシダーゼ及びアクチンを検出した。
結果
マウスの肢における好中球を画像化するため、好中球ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性のルミノールベース生物発光画像化を実施した（図１８Ａ）。ＮＳＰ４欠損好中球は正常量のＭＰＯを発現し（図１８Ｂ）、したがって、好中球動員をモニタリングするための代理マーカーとして、ルミノール生物発光量を使用できる。Grossら、2009, Nat. Med. 15::455-461を参照のこと。ＮＳＰ４−／−マウスは、Ｋ／ＢｘＮ血清移入の２４時間後に、有意に減少した好中球ミエロペルオキシダーゼ活性を示したのであり（図１８Ｃ）、インビボでの好中球遊出及び関節浸潤の媒介におけるＮＳＰ４の決定的に重要な役割を示唆する。これらの光学的画像化結果は、上述の組織学的検査において観察された好中球浸潤の欠如と一致するのであり、したがって、ＮＳＰ４−／−マウスにおける好中球関節浸潤の欠如を確認する。
実施例６： 抗体３−５及び５−１の親和性改善
抗体クローン３−５及び５−１を、より高い親和性でＮＳＰ４と結合するようそれらの抗体軽鎖配列を最適化することにより、親和性成熟させた。
方法
ＶＨライブラリーに由来する、クローン３−５及び５−１の親和性改善のためのライブラリー構築。抗体クローンＡｂ ３−５（Ａｂ３５と省略）及びＡｂ ５−１（Ａｂ５１と省略）を、さらなる親和性改善のために選択した。すべてのＣＤＲ−Ｌ３位置で終止コドン（ＴＡＡ）に接し、Ｍ１３バクテリオファージの表面上に一価Ｆａｂを提示する、ファージミドｐＷ０７０３（ファージミドｐＶ０３５０−２ｂに由来（Leeら、J. Mol. Biol 340, 1073-1093 (2004)））は、親和性成熟のためのＶＨライブラリーから目的のクローンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ）をグラフトするためのライブラリー鋳型として役立った。ハード及びソフトランダム化戦略の両方を、親和性成熟のために使用した。ハードランダム化のため、天然ヒト抗体を模倣するよう設計されたアミノ酸を使用して、３つの軽鎖ＣＤＲの選択された位置を有する１つの軽鎖ライブラリーをランダム化し、設計されたＤＮＡ縮重は Lee等（J. Mol. Biol 340, 1073-1093 (2004)）に記載の通りだった。ソフトランダム化のため、ＣＤＲ−Ｌ３の位置９１−９６、ＣＤＲ−Ｈ１の位置３０−３３、３５、ＣＤＲ−Ｈ２の位置５０、５２、５３−５４、５６、及び５８、ＣＤＲ−Ｈ３の位置９５-１００、１００Ａ、及び１００Ｃの残基を標的とし、ＣＤＲループの３つの異なる組合せ、Ｈ１／Ｌ３、Ｈ２／Ｌ３、及びＨ３／Ｌ３を、ランダム化のために選択した。選択された位置でおよそ５０％の突然変異率を導入するソフトランダム化条件を達成するため、野生型ヌクレオチドを好む塩基の７０−１０−１０−１０混合物で突然変異誘発性ＤＮＡを合成した（Gallopら、Journal of Medicinal Chemistry 37:1233-1251 (1994)）。
親和性改善をもたらすファージソーティング戦略。親和性改善選択のため、ファージライブラリーを１ラウンドのプレートソーティングにかけ、その後、ストリンジェンシーを漸増しながら溶液ソーティングの３回の追加ラウンドにかけた。第１ラウンドのために、プレートソーティング戦略が使用され、１％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０中の３ＯＤ／ｍｌのファージインプットを、５μｇ／ｍｌのマウスＮＳＰ４と、１％ＢＳＡ及び０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有する１００μｌ／ウェルのバッファーで、１．５時間室温で穏やかに振盪しながらインキュベートした。ＰＢＳ−０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０でウェルを１０回洗浄した。結合したファージを、１５０μｌ／ウェルの５０ｍＭ ＨＣｌ、５００ｍＭ ＫＣｌで３０分間溶出し、続いて、５０μｌ／ウェルの１Ｍトリス ｐＨ８により中和し、滴定し、次のラウンドのために繁殖させた。第２から第４ラウンドのため、選択ストリンジェンシーを漸増しながら溶液ソーティング戦略を使用した。具体的には、ビオチン化マウスＮＳＰ４を、２０ｎＭ（第２ラウンド）、５ｎＭ（第３ラウンド）、及び５００ｎＭ非標識化ｍＮＳＰ４競合物質を伴って０．５ｎＭ（第４ラウンド）で使用し、改善した会合速度及び分離速度バインダーについて選択した。バックグラウンド結合を決定するため、ファージを含有するコントロールウェルを、ニュートラアビジン被覆プレート上で捕捉した。ニュートラアビジン被覆プレート上で捕捉された結合したファージを、１５０μｌ／ウェルの５０ｍＭ ＨＣｌ、５００ｍＭ ＫＣｌで３０分間溶出し、続いて、５０μｌ／ウェルの１Ｍトリス ｐＨ８により中和し、滴定し、次のラウンドのために繁殖させた。
エピトープマッピング。組換えマウスＮＳＰ４を、バッファーのみ、ＮＳＰ４抗体５−１（Ｆａｂフォーマット）、又は１０μｇ／ｍｌヘパリン硫酸（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）と、１５分間室温で、リン酸緩衝生理食塩水中でプレインキュベートした。次に、５０ｎＭのこのマウスＮＳＰ４混合物を、１Ｘ Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）中４０μｇ／ｍｌで固定化されているＮＳＰ４抗体で被覆された光学センサーとインキュベートした。結合を、Ｏｃｔｅｔバイオレイヤー干渉法（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して測定した。
結果
ファージＩＣ５０実験において、複数の抗体クローンを試験し、ＮＳＰ４に対するそれらの結合親和性を推定した。簡潔に述べると、２μｇ／ｍｌのＮＳＰ４（ｈＺ、ｈＡ、ｍＺ、又はｍＡ変異体）を、ウェル上で一晩、４℃で、０．５％ＢＳＡを添加したＰＢＳ中で被覆した。それぞれ個々のファージクローン（０．０１ＯＤ／ｍｌで）を精製し、漸増濃度の可溶型ＮＳＰ４タンパク質と２時間室温でインキュベートし、その後、固定化されているＮＳＰ４タンパク質で被覆されたウェル中に１５分間室温で置いた。次に、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を添加したＰＢＳでウェルを１０回洗浄し、ＨＲＰとコンジュゲートされた抗Ｍ１３ファージ抗体（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）を使用して発色させた。図１９に示す通り、より高い親和性のファージクローンは、より低い親和性のファージクローンよりも、より低い抗原濃度で可溶型坑原と結合したままである可能性が高く、１５分のインキュベーション時間中、ウェル上に被覆された固定化されている抗原とのより少ない結合をもたらすと考えられる。したがって、高親和性ファージクローンであるより高い可能性を有する可溶型ファージ：抗原複合体は、連続洗浄工程を通じて除去され、溶液抗原の任意の所定濃度で、より低いＡ４５０シグナルをもたらすと考えられる。結果として、より高い親和性のファージクローンは、より低い親和性のファージクローンと比較して、より低いファージＩＣ５０値を有し、同時に結合曲線において左方向へシフトすると考えられる。これらのクローンのＨＶＲ配列は、下の表３及び表４に記載する。表３及び表４の抗体のそれぞれが同じ軽鎖を使用し、配列番号１６に対応する軽鎖可変領域並びに配列番号１９、１１、及び１２にそれぞれ対応するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含んでいた。
図１９は、ファージＩＣ５０実験の結果を示し、これらは、可溶型ｈＺ−、ｈＡ−、ｍＺ−、又はｍＡ−ＮＳＰ４を競合物質として（標識された通り）使用した。これらの実験において、より高い親和性のクローンが、可溶型ＮＳＰ４と、より低い可溶型ＮＳＰ４濃度で結合し、したがって、左側にシフトしたカーブを有する。これらの結果に基づいて、さらなる特徴づけのために個々の抗体を精製し、発現させた。これらの結果を、下の表に要約する。
異なるＮＳＰ４タンパク質（すなわち、標識された通り、ｈＺ、ｈＡ、ｍＺ、及びｍＡ）に対する親和性（ｋＤ）を推定するためにバイオレイヤー干渉法測定を使用して、さらにこれらの抗体の特徴を明らかにした。図２０Ａ及び図２０Ｂはそれぞれ、抗体１−１及び１−２についての結果を示す。図２１Ａ及び図２１Ｂはそれぞれ、抗体１−３及び１−５についての結果を示す。図２２Ａ−Ｄはそれぞれ、抗体２−１、２−２、２−３及び２−４についての結果を示す。図２３は、抗体２−５についての結果を示す。図２４Ａ及び図２４Ｂはそれぞれ、抗体３−２及び３−５についての結果を示す。図２５Ａ−Ｃはそれぞれ、抗体４−２、４−３及び４−４についての結果を示す。図２６Ａ−Ｄはそれぞれ、抗体５−１、５−２、５−３及び５−４についての結果を示す。これらの結合データは、高度にコンフォメーション特異的及び種特異的な抗体（例えば、ｈＺ−ＮＳＰ４、ｈＡ−ＮＳＰ４、又はｍＡ−ＮＳＰ４のうちの１つに特異的、例えば抗体１−２、４−３、及び５−３）から、コンフォメーション特異的だが種特異的でない抗体（例えば、チモーゲン−ＮＳＰ４又は活性−ＮＳＰ４に特異的、例えば抗体２−２、２−５、及び５−１）、種特異的だがコンフォメーション特異的でない抗体（例えば、ヒト−ＮＳＰ４又はマウス−ＮＳＰ４に特異的、例えば抗体３−２、４−２、及び４−４）、最後に、汎ＮＳＰ４バインダーである抗体（例えば、チモーゲン及び活性コンフォメーション状態のヒト及びマウスＮＳＰ４に結合する、例えば抗体２−１、２−３、２−４及び３−５）に至る範囲の、異なるＮＳＰ４結合特性を有する一群の抗体を示唆する。
ＮＳＰ４酵素活性をブロックする能力について、抗体をさらに試験した。ヒト及びマウスＮＳＰ４をブロックする能力を試験した。図２７は、チモーゲンＮＳＰ４に対する抗体の効果を示す。図２８は、活性ＮＳＰ４に対する抗体の効果を示す。図２８に示す通り、抗体４−３及び４−４がヒトＮＳＰ４活性をブロックした一方で、５系列の抗体のそれぞれが、マウスＮＳＰ４活性をブロックした。抗体のインビトロ特性を図２９に要約する。
理論に束縛されることを望まないが、５系列の抗体は、ＮＳＰ４酵素活性をブロックするそれらの能力及びＮＳＰ４の活性型に対してそれらは優先的に結合するが、チモーゲン型に対してはそうではないことにより、プロテアーゼ活性化プロセス中に顕著なコンフォメーション変化を経る領域である、酵素活性部位から近位にあるＮＳＰ４に結合したと仮定された。対照的に、３系列の抗体は、ＮＳＰ４酵素活性をブロックする能力がそれらにないこと及びそれらのコンフォメーション非感応性により、酵素活性部位から遠位にあるＮＳＰ４に結合したと仮定された。抗体エピトープに関するこの仮説は、図３０及び図３１に示した一連の実験において確認された。
図３０に示す通り、Ｆａｂ ５−１は、マウスＮＳＰ４に対するＡｂ５−１、５−２、及び５−４の結合に干渉するが、Ａｂ３−２又は３−５の結合には干渉しない。同様にして、図３１に示す通り、ヘパリンは、ＮＳＰ４に対するＡｂ５−１、５−２、及び５−４の結合に対する効果をほとんど有しないが、Ａｂ３−２及び３−５の結合を有意に減少させることができた。これらの結果は、Ａｂ５−１、５−２、５−４が、酵素活性部位の近傍で結合し、対照的に、Ａｂ３−２及び３−５が、酵素活性部位から離れたヘパリン結合部位の近傍で結合することを示唆する。
さらなる親和性改善（上述の通り実施）のために、抗体クローン３−５（以下Ａｂ３５と呼ぶ）及び５−１（以下Ａｂ５１と呼ぶ）を選択した。ヒト及びマウスＮＳＰ４の両方並びにチモーゲン及び活性コンフォメーションの両方に結合するその能力により、Ａｂ３５を選択した。５系列抗体のなかでも最高力価でマウスＮＳＰ４酵素活性を阻害するその能力のために、Ａｂ５１を選択した。
表５及び表６は、３５．ＸＸと標識された抗体３−５（下の表で３５．ＷＴと呼ばれる）の親和性成熟変異体、及び５１．ＸＸと標識された抗体５−１（下の表で５１．ＷＴと呼ばれる）の親和性成熟変異体を挙げている。重鎖ＨＶＲ配列は表５に挙げ、軽鎖ＨＶＲ配列は表６に挙げている。
表７は、３５．ＸＸと標識された抗体３−５（下の表で３５．ＷＴと呼ばれる）の親和性成熟変異体、及び５１．ＸＸと標識された抗体５−１（下の表で５１．ＷＴと呼ばれる）の親和性成熟変異体について、重鎖及び軽鎖可変領域配列を挙げている。定常領域配列は下の表に示す。
ＨＣ定常領域配列（配列番号１１４）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＡＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＡＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ
ＬＣ定常領域配列（配列番号１１５）
ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
親和性成熟抗体クローンの改善を、一連のファージＩＣ５０実験において推定した。図３２は、ヒト及びマウスＮＳＰ４に対する、Ａｂ３５由来親和性成熟抗体クローンの親和性を示す。図３３は、ヒトＮＳＰ４に対する、Ａｂ５１由来親和性成熟抗体クローンの親和性を示す。示す通り、Ａｂ３５クローンの親和性は、Ａｂ５１クローンほどは改善しなかった。理論に束縛されることを望まないが、これが、Ａｂ３５がより高い親和性で開始した事実によるということはあり得る。対照的に、Ａｂ５１の親和性は有意に改善した（５００ｘ超）。
表９は、ファージ競合結合アッセイにおけるＩＣ５０値により決定された、親和性成熟抗体クローンの改善を要約する。
Ａｂ３５及びＡｂ５１はそれぞれ、ＮＳＰ４に結合するための抗体軽鎖上のＣＤＲ配列を探究及び最適化することにより、それらの親クローンに対して２．７倍及び５０４．６倍まで親和性が改善した。親和性成熟Ａｂ３５及びＡｂ５１クローンの両方が、ＮＳＰ４に対する目標ピコモル親和性に達し、異なるエピトープでＮＳＰ４に結合した。理論に束縛されることを望まないが、Ａｂ３５由来クローンは、ヘパリン結合部位でＮＳＰ４に結合し、Ａｂ５１由来クローンは、ＮＳＰ４にその酵素活性部位の近位で結合すると考えられる。
実施例７： インビボでのＮＳＰ４触媒活性
ＮＳＰ４の酵素活性が、Ｋ／ＢｘＮ血清移入マウスモデルにおいて観察される疾患表現型と関連づけられることを確認するため、野生型ＮＳＰ４を有するマウス、ＮＳＰ４ノックアウトマウス及び触媒不活性ＮＳＰ４ノックインマウス（例えば、ＮＳＰ４タンパク質配列においてＳ２２４Ａ突然変異を有するマウス）において、Ｋ／ＢｘＮモデルを比較する。これら３つのマウス系統のそれぞれにおいて、ＮＩＲＦ、ルミノール生物発光画像化及び組織学的検査を使用して、血清誘導血管透過性をインビボでモニタリングする。触媒不活性ＮＳＰ４タンパク質を発現するマウスが、ＮＳＰ４ノックアウトマウスと類似したＫ／ＢｘＮモデルにおける保護を示す場合、この結果は、ＮＳＰ４の触媒活性が、疾患表現型と関連づけられ、ＮＳＰ４触媒活性の阻害剤（例えば、抗ＮＳＰ４抗体、例えば抗体５１．ＷＴ、５１．３０、５１．５０、５１．５１、５１．５９、５１．７２、５１．８２）が、ＮＳＰ４活性と関連づけられる様々な血管及び炎症障害の治療剤として有用であると考えられることを示し得る。
実施例８： マウスモデルにおけるＮＳＰ４活性の阻害
ＮＳＰ４活性の抗体阻害が、野生型ＮＳＰ４Ｋ／ＢｘＮモデルにおいて観察される疾患表現型を保護することを確認するため、マウスＫ／ＢｘＮモデルにおいて抗ＮＳＰ４抗体を試験する。抗ＮＳＰ４抗体の存在下又は非存在下の何れかで、Ｋ／ＢｘＮマウスに上述の通り抗原投与した。ヘパリン結合部位に結合する（例えば、３５系列抗体３５．ＷＴ、３５．１４、３５．５０、３５．６２及び／若しくは３５．７７）か、又はＮＳＰ４の酵素活性を阻害する（５１系列抗体５１．ＷＴ、５１．３０、５１．５０、５１．５１、５１．５９、５１．７２、及び／若しくは５１．８２）かの何れかであるＮＳＰ４抗体を、Ｋ／ＢｘＮモデルにおいて試験する。コントロール抗体（例えば、ＮＳＰ４と結合しない抗体）と結果を比較する。抗ＮＳＰ４抗体で治療されたマウスが、ＮＳＰ４ノックアウトマウスと類似したＫ／ＢｘＮモデルにおける保護を示す場合、この結果は、抗ＮＳＰ４抗体を使用したＮＳＰ４の阻害が、ＮＳＰ４活性と関連づけられる様々な血管及び炎症障害の治療剤として有用であると考えられることを示し得る。
以上の本発明が、理解の明瞭さのため、図示及び例としてある程度詳細に記述されたとはいえ、これらの記載及び例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書において引用されたすべての特許及び科学文献の開示は、その全体が参照により援用される。

Claims (77)

  1. 重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
    （ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＤＮＤＩＳ（配列番号５０）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は
    （ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｔ（配列番号９５）（ここで、Ｘ１はＹ又はＡであり、Ｘ２はＴ、Ｇ、又はＤであり、Ｘ３はＴ又はＦであり、Ｘ４はＰ又はＬである）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、
    抗ＮＳＰ４抗体。
  2. ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１２及び９２−９４からなる群から選択される配列を含む、請求項１に記載の抗体。
  3. 配列番号７８の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗体。
  4. 配列番号７８の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０２の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗体。
  5. 配列番号７８の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０３の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗体。
  6. 配列番号７８の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０４の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗体。
  7. （ａ）ＧＳＩＳＰＤＮＧＤＴＮＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号５１）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＲＤＤＶＰＡＶＦＴＳＡＭＤＹ（配列番号５２）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｔ（配列番号９５）（ここで、Ｘ１はＹ又はＡであり、Ｘ２はＴ、Ｇ、又はＤであり、Ｘ３はＴ又はＦであり、Ｘ４はＰ又はＬである）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＮＳＰ４抗体。
  8. 重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
    （ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＫＲＨＬＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は
    （ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＡＹＳＡＰＰＴ（配列番号９６）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、
    抗ＮＳＰ４抗体。
  9. 配列番号１０５の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０６の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項８に記載の抗体。
  10. （ａ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）ＫＲＨＬＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号８７）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＡＹＳＡＰＰＴ（配列番号９６）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＮＳＰ４抗体。
  11. 重鎖及び軽鎖を含む抗ＮＳＰ４抗体であって、
    （ａ）重鎖が、ＧＦＴＦＳＧＳＧＩＨ（配列番号６５）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列若しくはＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及びＸ１Ｘ２Ｘ３ＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９１）（ここで、Ｘ１はＫ又はＲであり、Ｘ２はＳ、Ｇ、又はＶであり、Ｘ３はＬ又はＦである）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、並びに／又は
    （ｂ）軽鎖が、ＲＡＳＱＤＶＳ（配列番号１９）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１１）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＰＴ（配列番号１０１）（ここで、Ｘ１はＳ、Ａ、Ｎ、又はＴであり、Ｘ２はＹ、Ｎ、又はＦであり、Ｘ３はＴ、Ｓ、又はＮであり、Ｘ４はＴ、Ａ、又はＳである）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、
    抗ＮＳＰ４抗体。
  12. ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号６７、８９、及び９０からなる群から選択される配列を含む、請求項１１に記載の抗体。
  13. ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号１２及び９７−１００からなる群から選択される配列を含む、請求項１１又は１２に記載の抗体。
  14. （ａ）配列番号６５の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６６の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号６７の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１９の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１２の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
    （ｂ）配列番号６５の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８８の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号６７の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１９の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号９７の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
    （ｃ）配列番号６５の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６６の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号６７の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１９の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号９８の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
    （ｄ）配列番号６５の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６６の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８９の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１９の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号９７の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
    （ｅ）配列番号６５の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６６の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９０の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１９の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号９９の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、
    （ｆ）配列番号６５の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６６の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号６７の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１９の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号９７の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は
    （ｇ）配列番号６５の配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６６の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８９の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１９の配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１１の配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１００の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む、請求項１１に記載の抗体。
  15. 配列番号８３の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１６の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の抗体。
  16. 配列番号１０７の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０８の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の抗体。
  17. 配列番号８３の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０９の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の抗体。
  18. 配列番号１１０の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０８の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の抗体。
  19. 配列番号１１１の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１１２の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の抗体。
  20. 配列番号８３の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１０８の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の抗体。
  21. 配列番号１１０の配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１１３の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１１に記載の抗体。
  22. （ａ）ＡＷＩＳＰＴＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号６６）の配列又はＡＷＩＰＴＡＧＧＮＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号８８）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｂ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＦＨＮＶＡＦＤＹ（配列番号９１）（ここで、Ｘ１はＫ又はＲであり、Ｘ２はＳ、Ｇ、又はＶであり、Ｘ３はＬ又はＦである）の配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び（ｃ）ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＰＴ（配列番号１０１）（ここで、Ｘ１はＳ、Ａ、Ｎ、又はＴであり、Ｘ２はＹ、Ｎ、又はＦであり、Ｘ３はＴ、Ｓ、又はＮであり、Ｘ４はＴ、Ａ、又はＳである）の配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＮＳＰ４抗体。
  23. ＮＳＰ４活性部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４の触媒活性を阻害する抗ＮＳＰ４抗体。
  24. ＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する抗ＮＳＰ４抗体。
  25. モノクローナル抗体である、請求項１から２４の何れか一項に記載の抗体。
  26. Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である、請求項１から２４の何れか一項に記載の抗体。
  27. ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４の定常領域を含む、請求項１から２６の何れか一項に記載の抗体。
  28. 成熟型のＮＳＰ４と特異的に結合する、請求項１から２７の何れか一項に記載の抗体。
  29. 成熟型のＮＳＰ４と特異的に結合するが、前駆型のＮＳＰ４と結合しない、請求項１から２７の何れか一項に記載の抗体。
  30. ヒトＮＳＰ４と特異的に結合する、請求項１から２９の何れか一項に記載の抗体。
  31. マウスＮＳＰ４と特異的に結合する、請求項１から２９の何れか一項に記載の抗体。
  32. ヒトＮＳＰ４とマウスＮＳＰ４の両方と特異的に結合する、請求項１から２９の何れか一項に記載の抗体。
  33. 請求項１から３２の何れか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸。
  34. 請求項３３に記載の核酸を含むベクター。
  35. 請求項３３に記載の核酸を含む宿主細胞。
  36. 請求項３５に記載の宿主細胞を、抗体の産生に適した条件下で培養することを含む、抗体を産生するための方法。
  37. 宿主細胞により産生された抗体を回収することをさらに含む、請求項３６に記載の方法。
  38. 請求項３６又は請求項３７に記載の方法により産生される抗ＮＳＰ４抗体。
  39. 請求項１から３２及び３８の何れか一項に記載の抗ＮＳＰ４抗体並びに薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
  40. 請求項１から３２及び３８の何れか一項に記載の抗体の有効量を個体に投与することを含む、個体において顆粒球により媒介される疾患又は障害を治療又は予防するための方法。
  41. 抗体が、ＮＳＰ４活性部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４の触媒活性を阻害する、請求項４０に記載の方法。
  42. 抗体が、ＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する、請求項４０に記載の方法。
  43. ＮＳＰ４活性部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４の触媒活性を阻害する抗体、並びにＮＳＰ４ヘパリン結合部位に特異的に結合し、及び／又はＮＳＰ４との結合についてヘパリンと競合する抗体の有効量が個体に投与される、請求項４０に記載の方法。
  44. 疾患又は障害が、好中球媒介性、好酸球媒介性、又は好塩基球媒介性疾患又は障害である、請求項４０から４３の何れか一項に記載の方法。
  45. 好中球媒介性疾患又は障害が血管性疾患及び炎症性疾患からなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
  46. 血管性疾患が、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、及び脳虚血からなる群から選択される、請求項４５に記載の方法。
  47. 炎症性疾患が、急性肺傷害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、変形性関節症、関節リウマチ、及び敗血症性ショックからなる群から選択される、請求項４５に記載の方法。
  48. 疾患又は障害が、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性血管炎、脳虚血、急性肺傷害、アナフィラキシー、全身性アナフィラキシー、アレルギー性肺炎症、特発性肺線維症、喘息、アレルギー性喘息、ウイルス誘発性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、水疱形成性皮膚疾患、水疱性類天疱瘡、炎症性皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、じん麻疹、好酸球性蜂巣炎、がん、肺がん、腎臓疾患、糸球体腎炎、敗血症性ショック、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、及びクローン病からなる群から選択される、請求項４０から４３の何れか一項に記載の方法。
  49. 個体がヒトである、請求項４０から４８の何れか一項に記載の方法。
  50. 抗体が、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所に、経口で、経皮で、腹腔内に、眼窩内に、植え込みにより、吸入により、髄腔内に、脳室内に、又は鼻腔内に投与される、請求項４０から４９の何れか一項に記載の方法。
  51. 抗ＮＳＰ４抗体が、抗体及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物に製剤化される、請求項４０から５０の何れか一項に記載の方法。
  52. 有効量のＮＳＰ４阻害剤を個体に投与することを含む、個体において顆粒球により媒介される疾患又は障害を治療又は予防するための方法。
  53. 疾患又は障害が、好中球媒介性、好酸球媒介性、又は好塩基球媒介性疾患又は障害である、請求項５２に記載の方法。
  54. 好中球媒介性疾患又は障害が血管性疾患及び炎症性疾患からなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
  55. 血管性疾患が、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、及び脳虚血からなる群から選択される、請求項５４に記載の方法。
  56. 炎症性疾患が、急性肺傷害、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、変形性関節症、関節リウマチ、及び敗血症性ショックからなる群から選択される、請求項５４に記載の方法。
  57. 疾患又は障害が、脳卒中、糖尿病性網膜症、浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、遺伝性血管浮腫、特発性血管浮腫、血管系の漏出、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性血管炎、脳虚血、急性肺傷害、アナフィラキシー、全身性アナフィラキシー、アレルギー性肺炎症、特発性肺線維症、喘息、アレルギー性喘息、ウイルス誘発性喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、変形性関節症、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、水疱形成性皮膚疾患、水疱性類天疱瘡、炎症性皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、じん麻疹、好酸球性蜂巣炎、がん、肺がん、腎臓疾患、糸球体腎炎、敗血症性ショック、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、及びクローン病からなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。
  58. 個体がヒトである、請求項５２から５７の何れか一項に記載の方法。
  59. ＮＳＰ４阻害剤が、抗体、アンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、小分子阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、及びペプチド阻害剤からなる群から選択される、請求項５２から５８の何れか一項に記載の方法。
  60. プロテアーゼ阻害剤がセリンプロテアーゼ阻害剤である、請求項５９に記載の方法。
  61. プロテアーゼ阻害剤が、α１−アンチトリプシン、ヘパリン活性化アンチトロンビン、Ｃ１インヒビター、又はα２−アンチプラスミンである、請求項５９に記載の方法。
  62. ＮＳＰ４阻害剤が、ＮＳＰ４と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体である、請求項５２から５９の何れか一項に記載の方法。
  63. ＮＳＰ４阻害剤が、成熟型のＮＳＰ４と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体である、請求項５２から５９の何れか一項に記載の方法。
  64. ＮＳＰ４阻害剤が、成熟型のＮＳＰ４と特異的に結合するが、前駆型のＮＳＰ４と結合しない抗ＮＳＰ４抗体である、請求項５２から５９の何れか一項に記載の方法。
  65. ＮＳＰ４阻害剤が、ヒトＮＳＰ４と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体である、請求項５２から５９の何れか一項に記載の方法。
  66. ＮＳＰ４阻害剤が、マウスＮＳＰ４と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体である、請求項５２から５９の何れか一項に記載の方法。
  67. ＮＳＰ４阻害剤が、ヒトＮＳＰ４とマウスＮＳＰ４の両方と特異的に結合する抗ＮＳＰ４抗体である、請求項５２から５９の何れか一項に記載の方法。
  68. 抗ＮＳＰ４抗体がモノクローナル抗体である、請求項６２から６７の何れか一項に記載の方法。
  69. 抗ＮＳＰ４抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である、請求項６２から６７の何れか一項に記載の方法。
  70. 抗ＮＳＰ４抗体がヒト化抗体又はキメラ抗体である、請求項６２から６７の何れか一項に記載の方法。
  71. 抗ＮＳＰ４抗体が、（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｉｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、（ｉｖ）配列番号１、４、又は７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｖ）配列番号２、５、又は８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｖｉ）配列番号３、６、又は９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、又は６個のＨＶＲを含む、請求項６２に記載の方法。
  72. 抗ＮＳＰ４抗体が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、及び配列番号１３、１４、又は１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項７１に記載の方法。
  73. 抗ＮＳＰ４抗体又はＮＳＰ４阻害剤が、静脈内に、筋肉内に、皮下に、局所に、経口で、経皮で、腹腔内に、眼窩内に、植え込みにより、吸入により、髄腔内に、脳室内に、又は鼻腔内に投与される、請求項５２から７２の何れか一項に記載の方法。
  74. 抗ＮＳＰ４抗体又はＮＳＰ４阻害剤が、（ａ）抗ＮＳＰ４抗体又はＮＳＰ４阻害剤及び（ｂ）薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物に製剤化される、請求項５２から７３の何れか一項に記載の方法。
  75. 請求項１から３２及び３８の何れか一項に記載の抗体を含む製品。
  76. 個体において顆粒球により媒介される疾患又は障害を治療又は予防するための抗体の使用に関する説明書を含む添付文書をさらに含む、請求項７５に記載の製品。
  77. 疾患又は障害が、好酸球媒介性、好塩基球媒介性、又は好中球媒介性疾患又は障害である、請求項７６に記載の製品。
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