JP2023516724A

JP2023516724A - 抗ｃｄ３６抗体及び癌を治療するためのそれらの使用

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Publication number: JP2023516724A
Application number: JP2022553013A
Authority: JP
Inventors: ベニータサルバドールアスナール; ヴァレリーヴァンホーレン; フリアスサンチェスメルセデ; アーミセンベアトリスモランチョ; バガンサルバドールグァルディオラ; ジェフリーヘイル; イアンウィルキンソン
Original assignee: オーエヌエーセラピューティクスエセ．エレ．
Priority date: 2020-03-06
Filing date: 2021-03-05
Publication date: 2023-04-20
Also published as: MX2022011050A; KR20220151195A; CA3174442A1; BR112022016720A2; CN115768465A; US20230235073A1; IL295979A; EP4114445A1; WO2021176424A1; AU2021232158A1

Abstract

特許請求の範囲に記載の発明は、脂肪酸受容体であるＣＤ３６を標的とすることによる癌の治療に関する。特許請求の範囲に記載の発明は、ＣＤ３６を標的とすることによる癌転移の治療にも関する。本発明は、ＣＤ３６活性の遮断剤又は阻害剤として抗ＣＤ３６抗体を使用することを含む。

Description

本開示は、癌、特に癌転移の治療、及び上記疾患の制御に関する。より具体的には、本開示は、癌の治療のための抗ＣＤ３６抗体の使用に関する。本開示はまた、原発性癌、癌転移、又はその両方の治療のための抗ＣＤ３６抗体の使用に関する。治療は、全長抗体及びそのフラグメントの両方の使用に関する。

ＣＤ３６（ＨＧＮＣ：１６６３、ＥｎｔｒｅｚＧｅｎｅ：９４８、Ｅｎｓｅｍｂｌ：ＥＮＳＧ０００００１３５２１８、ＯＭＩＭ：１７３５１０、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ：Ｐ１６６７１）は、複数の別名を与えられていることから示されるとおり、複数の異なる機能を持つことが知られている受容体タンパク質である。この受容体タンパク質は、そうした機能の中でも特に、表面分類抗原３６、トロンボスポンジン受容体、コラーゲンＩ型受容体、白血球分化抗原ＣＤ３６、血小板糖タンパク質４、又は脂肪酸トランスロカーゼとして知られている。ＣＤ３６遺伝子のＥｎｔｒｅｚＧｅｎｅ及びＵｎｉＰｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔＳｕｍｍａｒｉｅｓは、ＧｅｎｅＣａｒｄｓ（http://www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=CD36）に要約されるとおり、このタンパク質を、血小板及び各種細胞株においてトロンボスポンジンの受容体として働く血小板表面の４番目に主要な糖タンパク質であると記載している。トロンボスポンジンは、様々な接着プロセスに関与する広く分布するタンパク質であることから、このタンパク質は、細胞接着分子として重要な役割を果たす可能性がある。ＣＤ３６は、コラーゲン及びトロンボスポンジンに結合することで、後者の血管新生阻害効果に介在し、アニオン性リン脂質及び酸化型ＬＤＬに結合する。ＣＤ３６は、プラスモジウム・ファルシパルム（Plasmodium falciparum）が寄生した赤血球の細胞接着に直接介在し、長鎖脂肪酸と結合する。ＣＤ３６は、単球／マクロファージにおいて炎症を促進するＴＬＲ４－ＴＬＲ６ヘテロ二量体の共受容体である。ＣＤ３６がｏｘＬＤＬ又はアミロイドベータ４２等のリガンドに結合すると、ＣＤ３６はＴＬＲ４とＴＬＲ６とのヘテロ二量体の形成を急速に誘導する。ＴＬＲ４－ＴＬＲ６ヘテロ二量体は内在化され、ＮＦ－カッパＢ依存性のＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、及びＣＣＬ９サイトカインの産生（ＭＹＤ８８シグナル伝達経路経由）、ＣＣＬ５サイトカインの産生（ＴＩＣＡＭ１シグナル伝達経路経由）、及びＩＬ１ｂの分泌につながる炎症応答を誘発する。ＣＤ３６はまた、細胞外環境から脂質を取り込み、それらのベータ酸化を引き起こして、ＡＴＰの形でエネルギーを得るシグナル伝達カスケードの最頂部に位置する（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３）。

ＣＤ３６は、以前から癌に関連するとされてきたものの、治療及び作用機序に関するその意義は不明であった。特許文献１は、アッセイを開示しており、そのアッセイでは、ＣＤ３６が腎細胞癌で上方制御される遺伝子の１種であることが示されている。他の癌種についてのアッセイは提示されていないものの、この出願において、ＣＤ３６は、或る種の癌について診断及び／又は治療、更には予防の有用な標的であると提示されており、腫瘍治療の予後の予測因子とも見なされている。ＳＣＣは、ＣＤ３６抗体、又はアンチセンスＲＮＡ等のアンタゴニストを用いた治療が有用となり得る可能性がある癌種の１種として言及されているが、ＳＣＣにおけるＣＤ３６発現の変化、又は、特に、ＣＤ３６抗体若しくは他のアンタゴニストの原発性腫瘍若しくは転移を予防又は治療する有効性について、どのような証拠も提示されていない。特許文献１にて示されたアッセイに従って、動物の自然発生腫瘍が、腎細胞癌で過剰発現するタンパク質に特異的に結合する抗体の有効性の試験に提案されており、これが高度に侵襲性及び悪性の腫瘍であることを考慮して、ネコ口腔ＳＣＣが適切なモデルとして提案されている。しかしながら、またしても、そのような提案は、上記アプローチの実際の有用性の例を提示せずになされており、そのうえ、腎細胞癌で過剰発現する遺伝子のいずれかがネコ口腔ＳＣＣにおいても過剰発現するという証拠は何も示されておらず、特に、ネコ口腔ＳＣＣにおけるＣＤ３６の発現レベルにおける変化（上昇又は低下）に関するどのようなデータも、そのような癌種における転移の開始、発達、又は伝播におけるＣＤ３６の関与の可能性に関するどのような証拠も示されていない。そのうえ、ネコ口腔ＳＣＣは、低い転移発生率を示すと注釈されているが、これは、この腫瘍を担持するネコの生存期間が短いことによる可能性があるとも言及されている。

転移に関しては、ＣＤ３６の阻害（その活性を中和する抗体又はｓｈＲＮＡの両方による）が、転移の開始及び進行に関して劇的な影響を及ぼし、転移の浸透率及び試験した全ての細胞株及び患者由来の腫瘍の増殖を減少させることが以前に示されている。特許文献２（引用することにより本明細書の一部をなす）を参照されたい。

国際公開第０３／０３２８１３号米国特許出願公開第２０１９－０１０６５０３号

Coburn et al., 2000 Ibrahimi et al., 1999 Pepino et al., 2014

この出願の開示は、抗ＣＤ３６抗体、及び癌の治療のためのかかる抗体の使用に関する。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、癌転移を治療するために使用される。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、原発性腫瘍及び癌転移の両方を治療するために使用される。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、配列番号５及び配列番号７からの（すなわち、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体からの）１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含む単離抗体である。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、配列番号５及び配列番号７からの１つ以上のＣＤＲ配列を含むキメラ抗体である。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、配列番号５及び配列番号７からの１つ以上のＣＤＲ配列を含むヒト化抗体である。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体におけるＶＨのアミノ酸配列（配列番号１１）と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するＶＨを含む。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体におけるＶＬのアミノ酸配列（配列番号１３）と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の同一性を有するＶＬを含む。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、配列番号５として列挙される重鎖及び配列番号７として列挙される軽鎖を含むＯＮＡ－０－ｖ１である。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、配列番号２１に列挙される重鎖及び配列番号２３に列挙される軽鎖（すなわち、１Ｇ０４抗体からの重鎖及び軽鎖）を含む、キメラＯＮＡ－０－ｖ１ＩｇＧ１ＬＡＬＡ抗体である。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、配列番号６４に列挙される重鎖及び配列番号２３に列挙される軽鎖（すなわち、１Ｇ０６抗体からの重鎖及び軽鎖）を含む、キメラＯＮＡ－０－ｖ１ＩｇＧ１抗体である。

幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖ＣＤＲ１領域が配列番号２７を含み、重鎖ＣＤＲ２領域が配列番号２８を含み、重鎖ＣＤＲ３領域が配列番号２９を含み、軽鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３０を含み、軽鎖ＣＤＲ２領域が配列番号３１を含み、軽鎖ＣＤＲ３領域が配列番号３２を含む。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３７を含み、重鎖ＣＤＲ２領域が配列番号３８を含み、重鎖ＣＤＲ３領域が配列番号２９を含み、軽鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３０を含み、軽鎖ＣＤＲ２領域が配列番号３１を含み、軽鎖ＣＤＲ３領域が配列番号３２を含む。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３９を含み、重鎖ＣＤＲ２領域が配列番号４０を含み、重鎖ＣＤＲ３領域が配列番号４１を含み、軽鎖ＣＤＲ１領域が配列番号４２を含み、軽鎖ＣＤＲ２領域が配列番号４３を含み、軽鎖ＣＤＲ３領域が配列番号３２を含む。

幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体はヒト化抗体であり、重鎖ＣＤＲ領域が（ａ）配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号２９、（ｂ）配列番号４４、配列番号４６、及び配列番号２９、又は（ｃ）配列番号４５、配列番号４７、及び配列番号２９を含む。これらの幾つかの実施の形態において、軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２を含む。これらの幾つかの実施の形態において、軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号４８、配列番号３１、及び配列番号３２を含む。これらの幾つかの実施の形態において、軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号４８、配列番号４９、及び配列番号３２を含む。これらの幾つかの実施の形態において、軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号３０、配列番号５０、及び配列番号３２を含む。これらの幾つかの実施の形態において、重鎖可変領域が、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、又は配列番号５４を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、又は配列番号５８を含む。

幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、（ａ）配列番号５１を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域、（ｂ）配列番号５２を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域、（ｃ）配列番号５３を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域、又は（ｄ）配列番号５４を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域とを含むヒト化抗体である。

或る特定の実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、配列番号５における重鎖及び配列番号７における軽鎖を含む抗体と同じヒトＣＤ３６のエピトープに結合する、単離抗体、キメラ抗体、又はヒト化抗体である。或る特定の実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、配列番号５における重鎖及び配列番号７における軽鎖を含む抗体と、ヒトＣＤ３６への結合について競合する、単離抗体、キメラ抗体、又はヒト化抗体である。

幾つかの実施の形態において、抗体は、ＣＤ３６に特異的に結合しない抗体を実質的に含まない。幾つかの実施の形態において、抗体は、配列番号９に存在する軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖を実質的に含まない。

或る特定の実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体はヒトＣＤ３６に結合する。幾つかの実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、１０ｎＭを超える親和性でヒトＣＤ３６に結合する。

或る特定の実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、重鎖定常領域を更に含む。幾つかの実施の形態において、抗体は、ＩｇＡ又はＩｇＧの重鎖定常領域を含む。幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４の重鎖定常領域からなる群より選択される。幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、アミノ酸位置Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３６、Ｎ２９７、Ｐ３３１及びＰ３２９に１つ以上の変異を含有する定常領域を含む。幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、アミノ酸位置２３４及び２３５におけるロイシンからアラニンへの変化からなるＬＡＬＡ変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。

幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、アミノ酸位置Ｌ２３４、Ｌ２３５、及び／又はＧ２３６に変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｇ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｇ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｖ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｑ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ；Ｇ２３６Ｒ及びＬ３２８Ｒ；Ｌ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ；Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ；Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ｅ；Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、及びＰ３９６Ｌ；Ｄ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ；Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＫ３２２Ａ；Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ；Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｑ、及びＫ３２２Ｑ；Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ；Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６Δ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ；Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３５Ｓ及びＧ２３６Ｒ；Ｇ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ及びＬ２３５Ｓ；Ｌ２３５Ｇ及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ及びΔ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ及びＬ２３５Ｓ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、Ｇ２３６Ｒ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ；並びにＬ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、Ｇ２３６Ｒ、Ｔ２５０Ｑ、及びＭ４２８Ｌからなる群より選択される変異のセットを含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ｇ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｖ、及びＧ２３６Ｒの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｑ、及びＧ２３６Ｒの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態において、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。

或る特定の実施の形態において、抗ＣＤ３６抗体は、軽鎖定常領域を更に含む。幾つかの実施の形態において、軽鎖定常領域は、ヒト免疫グロブリンカッパ（κ）及びラムダ（λ）軽鎖定常領域からなる群より選択される。幾つかの実施の形態において、抗体は重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含み、重鎖定常領域はヒトＩｇＧ１重鎖定常領域であり、軽鎖定常領域はヒトκ軽鎖定常領域である。

或る特定の実施の形態において、抗体は、抗原結合フラグメントである。幾つかの実施の形態において、抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）_２、又はｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。

或る特定の実施の形態は、本明細書に記載の抗ＣＤ３６抗体と薬学的に許容され得る賦形剤とを含む医薬組成物である。幾つかの実施の形態において、医薬組成物中の抗体の少なくとも９５％が脱フコシル化されている。幾つかの実施の形態において、医薬組成物は、１つ以上の他の治療薬を更に含む。幾つかの実施の形態において、医薬組成物は、ＰＤ－１阻害剤を更に含む。適切なＰＤ－１阻害剤としては、抗ＰＤ－１抗体であるペムブロリズマブ、ピジリズマブ、又はニボルマブが挙げられる。幾つかの実施の形態において、医薬組成物は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるアテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、又はＢＭＳ－９３６５５９等のＰＤ－Ｌ１阻害剤を更に含む。幾つかの実施の形態において、医薬組成物は、抗ＣＴＬＡ－４抗体であるイピリムマブ等のＣＴＬＡ－４阻害剤を更に含む。幾つかの実施の形態において、医薬組成物は、シスプラチン等の化学療法剤を更に含む。

或る特定の実施の形態は、本明細書に記載の抗ＣＤ３６抗体及び抗ＣＤ３６抗体を含有する医薬組成物を投与する方法である。幾つかの実施の形態は、治療有効量の本明細書に開示される抗体、又は治療有効量の本明細書に開示される医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、患者において癌を治療する方法に関する。幾つかの実施の形態において、癌は、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫である。幾つかの実施の形態は、治療有効量の本明細書に開示される抗体又は治療有効量の本明細書に開示される医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、患者において１つ以上の転移性腫瘍を治療する方法である。幾つかの実施の形態において、転移性腫瘍は、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫から発生している。幾つかの実施の形態において、転移性腫瘍は、頸部リンパ節、肝臓、肺、脾臓、腎臓、又は腹膜壁にある。幾つかの実施の形態において、治療は、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍のサイズを縮小させる。幾つかの実施の形態において、治療は、頸部リンパ節、肝臓、肺、脾臓、腎臓、又は腹膜壁における転移性腫瘍のサイズを縮小させる。幾つかの実施の形態において、治療は、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍の形成又は発生を予防又は阻害する。幾つかの実施の形態において、治療は、頸部リンパ節、肝臓、肺、脾臓、腎臓、又は腹膜壁における転移性腫瘍の形成又は発生を予防又は阻害する。幾つかの実施の形態において、治療は転移性腫瘍の数を減少させる。幾つかの実施の形態において、患者はヒト患者である。幾つかの実施の形態において、治療は、原発性腫瘍及び転移性腫瘍の両方を治療するのに有効である。

或る特定の実施の形態において、上記方法は、全長抗体、単鎖抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂフラグメント、又はＦ（ａｂ’）_２フラグメントである抗ＣＤ３６抗体を投与することを含む。幾つかの実施の形態において、上記方法は、全長抗体である抗ＣＤ３６抗体を投与することを含む。幾つかの実施の形態において、上記方法は、配列番号２１における重鎖及び配列番号２３における軽鎖を含む抗ＣＤ３６抗体を投与することを含む。幾つかの実施の形態において、上記方法は、配列番号６４における重鎖及び配列番号２３における軽鎖を含む抗ＣＤ３６抗体を投与することを含む。

或る特定の実施の形態において、上記方法は、抗ＣＤ３６抗体に加えて第二療法を適用することを含む。幾つかの実施の形態において、適用される第二療法は免疫療法である。幾つかの実施の形態において、適用される免疫療法は、抗ＰＤ－１抗体であるペムブロリズマブ、ピジリズマブ、又はニボルマブ等のＰＤ－１阻害剤である。幾つかの実施の形態において、適用される免疫療法は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体であるアテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、又はＢＭＳ－９３６５５９等のＰＤ－Ｌ１阻害剤である。幾つかの実施の形態において、適用される免疫療法は、抗ＣＴＬＡ－４抗体であるイピリムマブ等のＣＴＬＡ－４阻害剤である。幾つかの実施の形態において、第二療法は化学療法剤である。幾つかの実施の形態において、投与される化学療法剤はシスプラチンである。

或る特定の実施の形態において、対象において転移が減少又は阻害される。幾つかの実施の形態において、頸部リンパ節、肝臓、肺、脾臓、腎臓、又は腹膜壁への転移が、対象において減少又は阻害される。上記方法が抗ＣＤ３６抗体に加えて第二療法を適用することを含む幾つかの実施の形態において、２つの療法が連続して適用される。上記方法が抗ＣＤ３６抗体に加えて第二療法を適用することを含む幾つかの実施の形態において、２つの療法が同時に適用される。

或る特定の実施の形態は、本明細書に開示される抗体をコードする単離ポリヌクレオチドである。幾つかの実施の形態において、単離ポリヌクレオチドは、配列番号５における重鎖及び配列番号７における軽鎖をコードする。幾つかの実施の形態において、単離ポリヌクレオチドは配列番号６を含む。幾つかの実施の形態において、単離ポリヌクレオチドは配列番号８を含む。幾つかの実施の形態において、単離ポリヌクレオチドは、配列番号２１における重鎖及び配列番号２３における軽鎖をコードする。幾つかの実施の形態において、単離ポリヌクレオチドは、配列番号６４における重鎖及び配列番号２３における軽鎖をコードする。幾つかの実施の形態において、単離ポリヌクレオチドは配列番号２２を含む。幾つかの実施の形態において、単離ポリヌクレオチドは配列番号２４を含む。

或る特定の実施の形態は、本明細書に開示される単離ポリヌクレオチドを含むベクターである。或る特定の他の実施の形態は、本明細書に開示される単離ポリヌクレオチド又はベクターを含む細胞である。幾つかの実施の形態において、細胞は、大腸菌（E.coli）、シュードモナス（Pseudomonas）、バチルス（Bacillus）、ストレプトマイセス（Streptomyces）、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及び組織培養物中のヒト細胞からなる群より選択される。幾つかの実施の形態において、前記細胞が機能的なα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）遺伝子を欠いている。

或る特定の実施の形態は、本明細書に開示される抗体を作製する方法である。幾つかの実施の形態において、抗体を作製する方法は、本明細書に開示される単離ポリヌクレオチド又はベクターを含む細胞を使用して抗体を発現させることを含む。幾つかの実施の形態において、抗体を作製する方法は、抗体の発現に適した条件下で、本明細書に開示される単離ポリヌクレオチド又はベクターを含む細胞を培養し、そこで発現された抗体を単離することを含む。

図１Ａは、シスプラチンを含むもの又は含まないものの両方で、Ｄｅｔｒｏｉｔ－５６２細胞を用いた口腔癌転移マウスモデルにおける市販の抗ＣＤ３６抗体の効果に関する研究の実験概要を示す概略図である。図１Ｂは、その研究で試験した研究群、特に各群に与えられた療法薬及び用量を詳述する。図２Ａ～図２Ｃは、口腔癌転移のＤｅｔｒｏｉｔ－５６２マウスモデルにおける原発性腫瘍に対する抗ＣＤ３６抗体及び／又はシスプラチンの効果に関する結果を提供する。図２Ａは、抗ＣＤ３６抗体及び／又はシスプラチンによる一連の治療中の原発性腫瘍のＩＶＩＳイメージングの定量化を示す。図２Ｂは、同所性注射マウスの舌からのＨ＆Ｅ染色原発性腫瘍の代表的な画像を示す。また、図２Ｃは、治療レジメンの終了時の原発性腫瘍の表面積を示す。これらの図は、試験した抗ＣＤ３６Ａｂが、口腔癌において原発性腫瘍の増殖を抑制する上で、シスプラチンと少なくとも相加的な抗腫瘍活性を示したことを説明する。口腔癌転移のＤｅｔｒｏｉｔ－５６２マウスモデルにおける抗ＣＤ３６抗体及び／又はシスプラチンによる一連の治療の終了時の肺転移の代表的なＨ＆Ｅ染色画像を含む図である。この図は、シスプラチン（右上）、抗ＣＤ３６抗体（左下）、又はシスプラチンと抗ＣＤ３６抗体（右下）で処置されたマウスが、対照で処置されたマウス（左上）よりも転移が少なく、小さいことを説明する。図４Ａ及び図４Ｂは、口腔癌転移のＤｅｔｒｏｉｔ－５６２マウスモデルにおける肺転移の数及びサイズの定量化をそれぞれ含む。これらの図は、抗ＣＤ３６抗体単独で処置したマウスは、対照マウスよりも転移が小さく、少なかったことを説明する。シスプラチン単独で処置されたマウスは、転移性腫瘍のサイズをシスプラチンが減少させたにもかかわらず、対照マウスと同様の数の転移を有した。抗ＣＤ３６抗体とシスプラチンの両方で処置すると、抗ＣＤ３６抗体単独で処置した場合と同様の数の転移を有するマウスが得られた。しかしながら、抗ＣＤ３６抗体とシスプラチンの両方による処置は、抗ＣＤ３６抗体又はシスプラチンいずれか単独よりも転移性腫瘍サイズの大幅な縮小をもたらした。ＯＮＡ－０－ｖ１抗体、ＯＮＡ－０－ｖ２抗体、１Ｇ０４抗体（すなわち、ＬＡＬＡＦｃ変化を伴うＯＮＡ－０－ｖ１抗体のキメラＩｇＧ１バージョン）、及びキメラＯＮＡ－０－ｖ２ＩｇＧＬＡＬＡ抗体の構造を示す概略図である。この概略図では、緑色の部分は、ＯＮＡ－０－ｖ１とＯＮＡ－０－ｖ２の両方に存在するマウスＩｇＡ定常領域配列を表す。灰色の部分は、キメラ抗体で使用されるヒトＩｇＧ１配列を表し、灰色の領域内の赤い点は、ＩｇＧ１配列内のアミノ酸位置２３４及び２４５でのロイシンからアラニンへの変異（すなわち、「ＬＡＬＡ」変化）である。黄色の部分はＯＮＡ－０－ｖ１可変領域を表す。また青色の部分はＯＮＡ－０－ｖ１の軽鎖可変領域とは異なるＯＮＡ－０－ｖ２の軽鎖可変領域を表す。各レーンに２．５μｇの抗体をロードした、還元型又は非還元型のＯＮＡ－０抗体を含有するタンパク質ゲルを示す図である。ＯＮＡ－０－ｖ１、ＯＮＡ－０－ｖ２、１Ｇ０４、及びキメラＯＮＡ－０－ｖ２ＩｇＧＬＡＬＡ抗体について個別のゲルが示される。マイクロウェルプレートにコーティングされたヒトＣＤ３６及びマウスＣＤ３６タンパク質に結合する１Ｇ０４及びキメラＯＮＡ－０－ｖ２ＩｇＧＬＡＬＡ抗体の能力を試験するＥＬＩＳＡアッセイからのデータを示す図である。これらのデータは、キメラＯＮＡ－０－ｖ２ＩｇＧ１ＬＡＬＡ抗体ではなく、１Ｇ０４がヒト及びマウスのＣＤ３６に特異的に結合したことを示す。ＯＮＡ－０－ｖ１抗体及び市販の抗ＣＤ３６抗体が、マイクロウェルプレートにコーティングされたヒトＣＤ３６及びマウスＣＤ３６タンパク質に結合する能力を試験するＥＬＩＳＡアッセイからのデータを示す図である。これらのデータは、２つの抗体が同様にヒト及びマウスのＣＤ３６に特異的に結合したことを示す。図９Ａ及び図９Ｂは、市販の抗ＣＤ３６抗体と比較した、ＯＮＡ－０－ｖ１、１Ｇ０４、及びキメラＯＮＡ－０－ｖ２ＩｇＧＬＡＬＡ抗体がヒトＣＤ３６を過剰発現する細胞に結合する能力のＦＡＣＳ分析からのデータを示す。これらのデータは、ＯＮＡ－０－ｖ１、１Ｇ０４、及び市販の抗ＣＤ３６抗体がヒトＣＤ３６に特異的に結合したが、キメラＯＮＡ－０－ｖ２ＩｇＧ１ＬＡＬＡ抗体は結合しなかったことを示す。市販の抗ＣＤ３６抗体と比較した、ＯＮＡ－０－ｖ１、ＯＮＡ－０－ｖ２、１Ｇ０４、及びキメラＯＮＡ－０－ｖ２ＩｇＧＬＡＬＡ抗体がヒトＣＤ３６を過剰発現する細胞に結合する能力のＦＡＣＳ分析からのデータを示す。これらのデータは、キメラ抗体形態への切り替えが、これらを１００ｎＭ濃度で試験した場合、ＯＮＯ－０抗体の結合を変化させなかったことを示す。図１１Ａは、シスプラチンを含むもの又は含まないものの両方で、ＦａＤｕ細胞を用いた口腔癌転移マウスモデルにおけるＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体の効果に関する研究の実験概要を示す概略図である。図１１Ｂは、その研究で試験した研究群、特に各群に与えられた療法薬及び用量を詳述する。図１２Ａ及び図１２Ｂは、ＦａＤｕ細胞を用いた口腔癌転移マウスモデルにおけるＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体の効果に関する研究からの原発性腫瘍のＩＶＩＳイメージング（図１２Ａ）及びＨ＆Ｅ染色（図１２Ｂ）の結果を示す。両方のアッセイで、シスプラチンは腫瘍の増殖を阻害したが、投与された用量のＯＮＡ－０－ｖ１による治療は、このモデルのアイソタイプ対照抗体による処置と比較して、原発性腫瘍に対して統計的に有意な効果をもたらさなかった。図１３Ａ及び図１３Ｂは、ＦａＤｕ細胞を用いた口腔癌転移マウスモデルにおけるＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体の効果に関する研究からの転移のＩＶＩＳイメージングの結果を示す。これらの結果は、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置が転移の増殖を阻害できたことを示す。ＦａＤｕ細胞を用いた口腔癌転移マウスモデルにおけるＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体の効果に関する研究からのリンパ節転移のＩＶＩＳイメージングの結果を示す図である。ＯＮＡ－０－ｖ１抗体による処置は、ＩｇＡアイソタイプ対照と比較して転移性腫瘍の増殖を５０％超抑制し、シスプラチンにＯＮＡ－０－ｖ１を追加すると、転移性腫瘍の増殖を抑制するシスプラチンの能力が強化された。ＦａＤｕ細胞を用いた口腔癌転移マウスモデルにおけるＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体の効果に関する研究からのリンパ節転移のＩＶＩＳイメージングの結果を示す図である。ＯＮＡ－０－ｖ１抗体による処置は、ＩｇＡアイソタイプ対照と比較して転移性腫瘍の増殖を５０％超抑制し、シスプラチンにＯＮＡ－０－ｖ１を追加すると、転移性腫瘍の増殖を抑制するシスプラチンの能力が強化された。ＦａＤｕ細胞を用いた口腔癌転移マウスモデルにおけるＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体の効果に関する研究からのリンパ節転移のＩＶＩＳイメージングの結果を示す図である。シスプラチン又はＯＮＡ－０－ｖ１のいずれかによる処置はリンパ節への転移を減少させ、ＯＮＡ－０－ｖ１の浸透阻害はシスプラチンの阻害と相乗的であった。図１７Ａ及び図１７Ｂは、ＯＮＡ－０－ｖ１及び／又はシスプラチンによる一連の処置の間の体重と血小板数の測定値を含む。これらのデータは、シスプラチンとは異なり、ＯＮＡ－０－ｖ１治療単独では、アイソタイプ対照で処置したマウスと比較して、マウスの体重及び血小板数に影響を与えなかったことを示す。図１８Ａは、ＯＶＣＡＲ－３細胞を用いた卵巣癌マウスモデルにおけるＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体の効果に関する研究の実験概要を示す概略図である。図１８Ｂは、このモデルで試験されたマウスから切除された原発性腫瘍の画像であり、ビヒクル注射マウスからの腫瘍が上の列にあり、ＯＮＡ－０－ｖ１を注射されたマウスからの腫瘍が下の列にある。図１８Ｃは、これらの原発性腫瘍の重量の定量化を提示し、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置が原発性腫瘍の重量の相対的な減少をもたらしたことを示す（^＊＊は対応のないｔ検定ｐ＝０．０３３を示す）。図１８Ｄ及び図１８Ｅは、ＯＶＣＡＲ－３原発性腫瘍のパーセント壊死及び線維症／コラーゲンの組織学的分析の結果をそれぞれ示す（^＊は対応のないｔ検定ｐ＝０．０２８７を示す）。図１８Ｄ及び図１８Ｅは、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置が、分析された腫瘍において生じた壊死及び線維症の増加をもたらすことを示す。図１９Ａ及び図１９Ｂは、ＯＶＣＡＲ－３細胞を用いた卵巣癌マウスモデルで形成された転移の代表的な画像を示す。図１９Ａは腹膜壁における例示的な転移を示し、図１９Ｂは例示的な肝臓転移を示す。各画像は、スケール用のセンチメートルでマークされた定規、及び転移を指す白い矢印を含む。図２０Ａ、図２０Ｂ及び図２０Ｃは、対照処置マウス及びＯＮＡ－０－ｖ１で処置されたマウスにおける卵巣癌のＯＶＣＡＲ－３マウスモデルにおける転移の数及びサイズの定量化を示す。図２０Ａは、対照（「ビヒクル」）マウス（全てのビヒクルマウスからの合計；ｎ＝９）及びＯＮＡ－０－ｖ１で処置されたマウス（全ての処置マウスからの合計；ｎ＝８）において任意の臓器で観察された巨視的転移の総数を示し、ＯＮＡ－０－ｖ１によるその処置は、転移の数を５０％超減少させた。図２０Ｂ及び図２０Ｃは、それぞれ腹膜壁及び肝臓における転移サイズの巨視的定量化を示す。まとめると、図２０Ａ、図２０Ｂ、及び図２０Ｃは、ＯＮＡ－０－ｖ１で処置すると、卵巣癌のＯＶＣＡＲ－３マウスモデルにおいて転移のサイズ及び数が減少することを示す。図２１Ａは、ＨＣＴ－１１６細胞を用いた結腸癌のマウスモデルにおけるＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体の効果に関する研究の実験概要を示す概略図である。ＨＣＴ－１１６細胞内からのルシフェラーゼ発光は、一連の処置の間にｉｎｖｉｖｏで定量化され（図２１Ｂに示される；^＊はマンホイットニー検定ｐ＝０．０２８８を示す）、実験終了後にｅｘｖｉｖｏで定量化された（図２１Ｃに示される）。これらのデータは、ＯＮＡ－０－Ｖ１による処置がこの結腸癌モデルの原発性腫瘍のサイズを縮小したことを示す。図２２Ａ、図２２Ｂ、図２２Ｃ、及び図２２Ｄは、臓器のｅｘｖｉｖｏ発光分析によって測定された、結腸癌のＨＣＴ－１１６マウスモデルにおける様々な臓器への転移の浸透率に対するＯＮＡ－０－ｖ１処置の効果を示す。図２２Ａ及び図２２Ｂは、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置が、転移のないものとして測定された臓器が増えるにつれて、転移を含むことが観察された肝臓及び肺のパーセンテージが減少することを示す（^＊＊＊はｐ＜０．０００１を示す；^＊＊はｐ＝０．００３２を示す（両側のフィッシャーの正確確率検定））。図２３Ａ、図２３Ｂ、図２３Ｃ、及び図２３Ｄは、ルシフェラーゼ発光のｅｘｖｉｖｏ分析によって測定された、結腸癌のマウスモデルにおける特定の臓器（すなわち、転移）におけるＨＣＴ－１１６細胞の数に対するＯＮＡ－０－ｖ１処置の効果を示す。これらのデータは、ＯＮＡ－０－ｖ１で処置すると、肝臓（図２３Ａ）、肺（図２３Ｂ）、脾臓（図２３Ｃ）、及び腎臓（図２３Ｄ）の発光が減少したことを示す。結腸癌のＨＣＴ－１１６マウスモデルにおけるマウスの体重に対するＯＮＡ－０－ｖ１処置の効果を示す図である。時間の経過と共に、ＯＮＡ－０－ｖ１で処理されたマウスは、より良好に体重を維持することができた。図２５Ａ、図２５Ｂ、図２５Ｃ、図２５Ｄ、図２５Ｅ、図２５Ｆ、及び図２５Ｇは、対照処置マウスと比較した、卵巣癌ＯＶＣＡＲ－３マウスモデルにおけるＯＮＡ－０－ｖ１及び１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体の効果を試験した結果を示す。図２５Ａは、この研究の実験概要を示す概略図である。図２５Ｂは、経時的な処置されたマウスの体重の変化を示す。図２５Ｃ～図２５Ｇは、ＯＮＡ－０－ｖ１及び１Ｇ０４の両方が、処置されたマウスにおいて転移の数及びサイズの両方を減少させることを示す。図２６Ａ、図２６Ｂ、図２６Ｃ、図２６Ｄ、図２６Ｅ、図２６Ｆ、及び図２６Ｇは、ルシフェラーゼ発光のｅｘｖｉｖｏ分析によって測定された、結腸癌マウスモデルにおける特定の臓器（すなわち、転移）におけるＨＣＴ－１１６細胞の数に対する１Ｇ０４処置の効果を示す。図２６Ａは、この研究の実験概要を示す概略図である。図２６Ｂは、経時的な処置マウスの体重の変化を示す。図２６Ｃは、１Ｇ０４が処置されたマウスにおける全体的な癌細胞量を減少させることを示し、図２６Ｄ～図２６Ｇは、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置が、肝臓（図２６Ｄ）、肺（図２６Ｅ）、脾臓（図２６Ｆ）及び腎臓（図２６Ｇ）における発光の減少をもたらしたことを示す。図２７Ａ及び図２７Ｂは、アイソタイプ対照抗体及び１Ｇ０４を用いた発光ベースの脂肪酸取り込みアッセイからのデータを示す。経時的な脂肪酸取り込みの動態（図２７Ａ）及び所与の時間における脂肪酸取り込みの阻害（図２７Ｂ）が示される。図２８Ａ及び図２８Ｂは、マイクロウェルプレートにコーティングされたマウスＣＤ３６（図２８Ａ）及びヒトＣＤ３６（図２８Ｂ）タンパク質に結合する１Ｇ０４及び１Ｇ０６抗ＣＤ３６抗体の能力を試験するＥＬＩＳＡアッセイからのデータを示す。これらのデータは、２つの抗体が同様にヒト及びマウスのＣＤ３６に特異的に結合したことを示す。ＦＡＣＳ分析により測定した、ヒトＣＤ３６を過剰発現する細胞への１Ｇ０４及び１Ｇ０６抗ＣＤ３６抗体の結合を示す図である。これらのデータは、２つの抗体が同様にヒトのＣＤ３６に特異的に結合したことを示す。図３０Ａ、図３０Ｂ、図３０Ｃ、図３０Ｄ、及び図３０Ｅは、ビヒクル処置マウスと比較した、転移性肺癌のＡ５４９モデルにおける１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体の試験結果を示す。図３０Ａは、この研究の実験概要を示す概略図である。図３０Ｂは、その研究で試験した研究群、特に各群に与えられた療法薬及び用量を詳述する。図３０Ｃは、１Ｇ０４が、発光によって測定した場合、処置されたマウスにおける全体的な癌細胞量を減少させることを示す。図３０Ｄ及び図３０Ｅは、肺重量及びｅｘｖｉｖｏでの肺発光がそれぞれ、１Ｇ０４による処置後に減少されることを示す。図３１Ａ、図３１Ｂ、図３１Ｃ、図３１Ｄ、及び図３１Ｅは、ＭＣ３８同系結腸癌モデルにおける１Ｇ０４処置の効果を示す。図３１Ａは、この研究の実験概要を示す概略図である。図３１Ｂは、その研究で試験した研究群、特に各群に与えられた療法薬及び用量を詳述する。図３１Ｃは、１Ｇ０４が、発光によって測定した場合、処置されたマウスにおける全体的な癌細胞量を減少させることを示す。図３１Ｄは、肝臓の発光が１Ｇ０４処置後に減少されることを示しており、肝臓における転移レベルの低下を示す。同様に、図３１Ｅは、肺の発光が１Ｇ０４処置後に減少されることを示しており、肺における転移レベルの低下を示す。図３２Ａ、図３２Ｂ、及び図３２Ｃは、１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体で４Ｔ１乳癌腫瘍を担持するマウスを処置した効果を示す。図３２Ａは、この研究の実験概要を示す概略図である。図３２Ｂは、その研究で試験した研究群、特に各群に与えられた療法及び用量を詳述する。図３２Ｃは、１Ｇ０４処置後、ビヒクル処置と比較して肺における発光が減少されることを示しており、肺における転移レベルの低下を示す。

本開示は、抗ＣＤ３６抗体、抗ＣＤ３６抗体をコードするヌクレオチド、抗ＣＤ３６抗体を含む医薬組成物、及び抗ＣＤ３６抗体を使用して、癌、特に癌転移を治療する（例えば、低減及び／又は阻害する）方法に関する。開示された抗ＣＤ３６抗体は、ＩｇＡ抗体及びＩｇＧ抗体の両方を含み、それらは両方とも、癌を治療する開示された方法において有効である。開示された抗ＣＤ３６抗体は、原発性腫瘍、転移癌、又は原発性腫瘍と転移癌の両方の治療に有効である。

一般的な用語及び表現の定義
本開示をより容易に理解できるようにするため、或る特定の用語を最初に定義する。本願で使用される場合、本書に別段の定めがある場合を除き、以下の各用語は、以下に定める意味を有するものとする。追加の定義は、本願全体で規定される。

「抗体」という用語は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、又は前述の組合せ等の標的を認識して特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、組換え抗体、二重特異性抗体、全長抗体又はそのフラグメントを含む融合タンパク質、かかる抗体のフラグメント、及び所望の生物学的活性を示す限り、任意の他の改変免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと称されるそれらの重鎖定常ドメインの同一性に基づいて、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、又はそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）の免疫グロブリンの５つの主要なクラスのいずれかであり得る。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なるよく知られたサブユニット構造と三次元配置とを持つ。抗体は、裸であってもよく、又は毒素、放射性同位体等の他の分子にコンジュゲートされ得る。

「抗体フラグメント」という用語は、無傷の抗体の一部を指す。「抗原結合フラグメント」、「抗原結合ドメイン」、又は「抗原結合領域」は、抗原に結合する無傷の抗体の一部を指す。抗原結合フラグメントは、無傷の抗体の抗原決定領域（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含むことができる。抗体の抗原結合フラグメントの例としては、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、及びＦｖフラグメント、直鎖状抗体、及び単鎖抗体が挙げられる。抗体の抗原結合フラグメントは、齧歯類（例えば、マウス、ラット、又はハムスター）及びヒト等の任意の動物種に由来することができ、又は人工的に生成することができる。

「抗ＣＤ３６抗体」、「ＣＤ３６抗体」及び「ＣＤ３６に結合する抗体」という用語は、抗体がＣＤ３６の標的化における診断薬及び／又は治療薬として有用であるように十分な親和性でＣＤ３６に結合することができる抗体を指す。無関係の非ＣＤ３６タンパク質への抗ＣＤ３６抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、ＣＤ３６への抗体の結合の約１０％未満であり得る。

「抗ＰＤ－１抗体」、「ＰＤ－１抗体」及び「ＰＤ－１に結合する抗体」という用語は、抗体がＰＤ－１の標的化における診断薬及び／又は治療薬として有用であるように十分な親和性でＰＤ－１に結合することができる抗体を指す。無関係の非ＰＤ－１タンパク質への抗ＰＤ－１抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、ＰＤ－１への抗体の結合の約１０％未満であり得る。

「単離抗体」とは、単一種の抗体を含む抗体集団を指す。例えば、特定の単離抗ＣＤ３６抗体は、単一のＣＤ３６エピトープに結合する単一の重鎖アミノ酸配列及び単一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体集団からなる。しかしながら、ＣＤ３６に特異的に結合する単離抗体は、異なる種からのＣＤ３６分子等の他の抗原に対して交差反応性を持つ可能性がある。また、抗体の集団は、少量の他の抗体種によって汚染されている場合でも、「単離抗体」である場合がある。特に、単離抗体は、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満の他の抗体種を含むか、又は他の抗体種を含有しない場合がある。

「モノクローナル抗体」とは、単一の抗原決定基又はエピトープの高度に特異的な認識及び結合に関与する均質な抗体又は抗原結合フラグメント集団を指す。これは、典型的には、異なる抗原決定基に対して向けられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル」抗体という用語は、無傷及び全長のモノクローナル抗体、並びに抗体フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ等）、単鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、及び抗原認識部位を含む任意の他の改変免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル」抗体は、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及びトランスジェニック動物を含むがこれらに限定されない幾つもの方法で作製されたかかる抗体及びその抗原結合フラグメントを指す。

本明細書で使用される場合、「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、同じ意味で使用され、当該技術分野で一般的である。可変領域は、典型的には、抗体の一部、一般に、軽鎖又は重鎖の一部、典型的には、成熟重鎖のアミノ末端約１１０～１２０アミノ酸又は１１０～１２５アミノ酸及び成熟軽鎖の約９０～１１５アミノ酸を指し、これらは抗体間で配列が大きく異なり、特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性に使用される。配列の可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中しているが、可変ドメイン内のより高度に保存された領域はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。特定の機序又は理論に拘束されることを望むものではないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲが抗体と抗原との相互作用及び特異性を主に担っていると考えられている。或る特定の実施形態において、可変領域はヒト可変領域である。或る特定の実施形態において、可変領域は、齧歯類又はマウスのＣＤＲ、及びヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態において、可変領域は霊長類（例えば、非ヒト霊長類）の可変領域である。或る特定の実施形態において、可変領域は、齧歯類又はマウスのＣＤＲ、及び霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。

「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために同じ意味で使用される。

「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために同じ意味で使用される。

「Ｋａｂａｔナンバリング」の用語及び類似の用語は、当該技術分野において認められ、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域、又はその抗原結フラグメント中のアミノ酸残基をナンバリングするシステムを指す。或る特定の態様では、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って、ＣＤＲを特定することができる（例えば、Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391、及びKabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242を参照されたい）。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、３５（Ｋａｂａｔナンバリングスキームでは３５Ａ及び３５Ｂと呼ばれる）に続いて任意に１つ又は２つの追加のアミノ酸を含み得るアミノ酸３１位～３５位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０位～６５位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸９５位～１０２位（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用すると、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸２４位～３４位（ＣＤＲ１）、アミノ酸５０位～５６位（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸８９位～９７位（ＣＤＲ３）に存在する。具体的な実施形態において、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って決定された。

代わりに、Ｃｈｏｔｈｉａは構造ループの位置を指す（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。Ｋａｂａｔナンバリング規則を使用してナンバリングされた場合のＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ－Ｈ１ループの終わりは、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４との間で異なる（これは、ＫａｂａｔナンバリングスキームがＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を配置するためである；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終了する；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了する；３５Ａと３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。

ＡｂＭ超可変領域は、ＫａｂａｔＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協点を表し、ＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用される。具体的な実施形態において、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキーム又はＡｂＭナンバリングスキームに従って決定されている。

幾つかの態様では、ＣＤＲ領域のＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングシステムに従って決定することができる（例えば、Guidicelli et al., Nucl. Acids Res. 34:D781-D784 (2006)、Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55-77 (2003)を参照されたい）。このナンバリングスキームは、抗体のラムダ鎖及びカッパ軽鎖、重鎖、及びＴ細胞受容体鎖全体でナンバリングを統一している。

本明細書で使用される「定常領域」及び「定常ドメイン」という用語は区別なく用いられ、当該技術分野でこれらは共通の意味を有する。定常領域は抗体部分、例えば、抗原に対する抗体の結合に直接関係しないが、Ｆｃ受容体との相互作用等の様々なエフェクター機能を呈し得る、軽鎖及び／又は重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する。或る特定の態様では、抗体又は抗原結合フラグメントは、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に十分な定常領域又はその一部を含む。

本明細書で使用される「重鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の異なる種類、ＩｇＧのサブクラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）及びＩｇＡのサブクラス（例えば、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）を含む、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭのクラスの抗体をそれぞれ生じさせる、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指す場合がある。重鎖アミノ酸配列は、当該技術分野でよく知られている。具体的な実施形態において、重鎖はヒト重鎖である。

本明細書で使用される「軽鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意の異なる種類、例えばカッパ（κ）又はラムダ（λ）を指す場合がある。軽鎖アミノ酸配列は当該技術分野においてよく知られている。具体的な実施形態において、軽鎖はヒト軽鎖である。

「キメラ抗体」という用語は、アミノ酸配列が２つ以上の種に由来する全長抗体又はその抗原結合フラグメントを指す。典型的には、軽鎖と重鎖の両方の可変領域が、所望の特異性、親和性、定常領域が別の（通常はヒトの）由来の配列と相同である一方で、その種で免疫応答を誘発することを回避する能力を有する哺乳動物の１つの種（例えば、マウス、ラット、ウサギ等）に由来する抗体の可変領域に対応する。

「ヒト化抗体」とは、非ヒトＣＤＲ由来のアミノ酸残基、並びにヒトフレームワーク領域及び定常領域由来のアミノ酸残基を含む、キメラ抗体又はその抗原結合フラグメントを指す。或る特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、ＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。典型的には、ヒト化抗体は、ＣＤＲからの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲの残基に置き換えられたヒト免疫グロブリンである（Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)、Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988)、Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)）。したがって、ヒト化抗体は「ＣＤＲ移植」抗体とも称される。ヒト化抗体を生成するために使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号、Roguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 91(3):969-973 (1994)、及びRoguska et al., Protein Eng. 9(10):895-904 (1996)に記載されている。

「ヒト抗体」とは、ＦＲとＣＤＲの両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する全長抗体又はそのフラグメントを指す。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域もヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する。本開示のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含むことができる（例えば、ｉｎｖｉｔｒｏでのランダム変異導入法若しくは部位特異的変異導入によって、又はｉｎｖｉｖｏでの体細胞変異によって導入された変異）。しかしながら、本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、マウス等の別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むことを意図していない。「ヒト抗体」及び「完全ヒト抗体」という用語は同義語として使用される。

「脱フコシル化」抗体若しくはその抗原結合フラグメント、又は「フコースを欠く」抗体又は若しくは抗原結合フラグメントは、抗体集団の少なくとも５０％で、定常領域のグリコシル化において任意のフコース残基を欠くＩｇＧ１若しくはＩｇＧ３アイソタイプ抗体、又はその抗原結合フラグメントを指す。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３のグリコシル化は、最大２つのＧａｌ残基で終結するコアフコシル化バイアンテナリー複合体オリゴ糖グリコシル化として、Ａｓｎ２９７で発生する。幾つかの実施形態において、脱フコシル化抗体は、Ａｓｎ２９７でフコースを欠いている。これらの構造は、末端のＧａｌ残基の量に応じて、Ｇ０、Ｇ１（ａ１，６又はａ１，３）、又はＧ２グリカン残基として指定される。例えば、Raju, T. S., BioProcess Int. 1:44-53 (2003)を参照されたい。抗体ＦｃのＣＨＯ型グリコシル化は、例えば、Routier, F. FL, Glycoconjugate J. 14:201-207 (1997)に記載されている。

フコースを測定する方法としては、当該技術分野で知られている任意の方法が挙げられる。本明細書の目的で、フコースは、国際公開第２０１５／０１７６００号（その全体が引用することにより本明細書の一部をなす）の実施例１に記載の方法によって検出することができる。簡単に言えば、グリカン分析は、抗体からグリカンを放出し（例えば、酵素的放出によって）、グリカンをアントラニル酸（２－ＡＡ）で標識し、標識グリカンを精製することによって行うことができる。蛍光検出を備えた順相ＨＰＬＣを使用してグリカンを分離し、抗体中の各グリカンの相対量を測定する。グリカンは、質量分析によって、フコースを欠いているか、又はフコースを含むと明確に同定され得る。幾つかの実施形態において、フコースは、複数の脱フコシル化抗体を含む組成物中で検出できない。幾つかの実施形態において、脱フコシル化抗体は、本明細書の実施例１２に提供されるアッセイによって測定され得る、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。幾つかの実施形態において、脱フコシル化抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡに対する増強した親和性を有する。幾つかの実施形態において、脱フコシル化抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｖ１５８）に対する増強した親和性を有する。幾つかの実施形態において、脱フコシル化抗体は、ＦｃガンマＲＩＩＩＡ（Ｆ１５８）に対する増強した親和性を有する。ＦｃガンマＲＩＩＩＡ又はその対立遺伝子に対する親和性は、本明細書の実施例１０に提供されるアッセイによって測定することができる。

「結合親和性」は、一般的には、分子（例えば抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合的な相互作用の合計の強さを指す。別段の指示がない限り、本明細書で使用される「結合親和性」は、結合ペアのメンバー（例えば抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般的には、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表され得る。親和性は、限定されるものではないが、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）及び平衡会合定数（Ｋ_Ａ）を含む、当該技術分野で知られている多くの方法で測定され得る及び／又は表され得る。Ｋ_Ｄはｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎの商から計算されるが、Ｋ_Ａはｋ_ｏｎ／ｋ_ｏｆｆの商から計算される。ｋ_ｏｎは、例えば抗原に対する抗体の会合速度定数を指し、ｋ_ｏｆｆは、例えば抗原からの抗体の解離を指す。ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）又はＫｉｎＥｘＡ等の当業者に知られている技術によって決定され得る。

本明細書で使用される「エピトープ」は、当該技術分野における用語であり、抗体が特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えばポリペプチドの隣接するアミノ酸（直鎖の又は隣接するエピトープ）であってもよく、又はエピトープは、例えば、ポリペプチド（複数の場合もある）の２以上の隣接しない領域に共に由来するもの（配座、非直鎖、不連続、又は隣接しないエピトープ）であってもよい。或る特定の実施形態において、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析と結合された水素／重水素交換（例えば液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイに基づくオリゴペプチド走査アッセイ、及び／又は変異誘発マッピング（例えば部位特異的変異誘発マッピング）によって特定され得る。Ｘ線結晶学研究のため、結晶化は、当該技術分野の既知の方法（例えば、Giege R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350、McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23、Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274、McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303）のいずれかを使用して遂行され得る。抗原に結合した抗体の結晶は、良く知られているＸ線回折技術を使用して研究され得て、Ｘ－ＰＬＯＲ（Yale University, 1992、Molecular Simulations, Inc.によって配布；例えば、Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.,を参照されたい；米国特許出願公開第２００４／００１４１９４号）、及びＢＵＳＴＥＲ（Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60、Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW、Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323）等のコンピューターソフトウェアを使用してリファインされ得る。変異誘発マッピング研究は、当業者に知られている任意の方法を使用して遂行され得る。例えば、アラニンスキャニング変異誘発技術を含む、変異誘発技術の説明について、Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394、及びCunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085を参照されたい。

参照ＣＤ３６抗体と「同じエピトープに結合する」ＣＤ３６抗体は、参照ＣＤ３６抗体と同じＣＤ３６アミノ酸残基に結合する抗体を指す。参照ＣＤ３６抗体と同じエピトープに結合するＣＤ３６抗体の能力は、水素／重水素交換アッセイ（Coales et al. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2009; 23:639-647を参照されたい）、アラニンスキャン、架橋結合質量分析（ＸＬ－ＭＳ）、ペプチドスキャン、又は変異誘発と組み合わせたＦＡＣＳ分析によって決定され得る。

本明細書で使用される場合、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、及び「特異的に認識する」という用語は、抗体の文脈における類似の用語である。これらの用語は、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、及び結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間の何らかの相補性を伴うことを示す。したがって、ヒトＣＤ３６（配列番号１）に「特異的に結合する」抗体は他の種由来のＣＤ３６（例えば、非ヒト霊長類、マウス、及び／又はラットＣＤ３６）及び／又は他のヒト対立遺伝子から産生されたＣＤ３６タンパク質にも結合する可能性があるが、関連のない、非ＣＤ３６タンパク質への結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるように、抗体のＣＤ３６への結合の約１０％未満である。

具体的な実施形態において、ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットのＣＤ３６に結合する抗体が本明細書に提供される。

抗体は、参照抗体のエピトープへの結合を或る程度遮断する程度まで、そのエピトープ又は重複するエピトープに優先的に結合する場合、参照抗体の所与のエピトープへの結合を「競合的に阻害する」と言われる。競合阻害は、当該技術分野で知られている任意の方法、例えば、競合ＥＬＩＳＡアッセイ又は競合ＦＡＣＳによって決定することができる。抗体は、所与のエピトープへの参照抗体の結合を少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、又は少なくとも５０％競合的に阻害すると言うことができる。

本明細書で使用される場合、物質を「実質的に含まない」という特徴は、その物質がほぼ完全に又は完全に欠如していることを指す。例えば、特定の抗体種を実質的に含まない医薬組成物は、問題の医薬組成物においてその抗体種がほぼ完全に又は完全に欠如している。この文脈において、実質的に含まないとは、医薬組成物中に問題の抗体種である抗体を５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満有するか、又は全く有さないことを指すことができる。さらに、夾雑物を「実質的に含まない」とは、他の細胞物質及び／又は化学物質をほとんど含まない（例えば、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、１％未満、又は他の細胞物質及び／又は化学物質がない）ように精製されることを指すことができる。

「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書では同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖状又は分枝状であることができ、修飾アミノ酸を含むことができ、非アミノ酸によって中断することができる。この用語はまた、自然に又は介入（例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は標識化成分とのコンジュゲーション等の任意の他の操作若しくは修飾）によって改変されたアミノ酸ポリマーを包含する。また、定義内には、例えば、アミノ酸の１つ以上の類縁体（例えば、非天然アミノ酸等を含む）及び当該技術分野で知られている他の改変を含むポリペプチドも含まれる。本発明のポリペプチドは抗体に基づいているため、或る特定の実施形態において、ポリペプチドは単鎖又は関連鎖として存在し得ることが理解される。

「パーセント同一性」は、２つの配列（例えば、アミノ酸配列又は核酸配列）間の同一性の程度を指す。パーセント同一性は、２つの配列を整列させ、ギャップを導入して配列間の同一性を最大化することによって決定できる。アラインメントは、当該技術分野で知られているプログラムを使用して生成することができる。本明細書の目的のため、ヌクレオチド配列のアラインメントは、デフォルトのパラメータに設定されたｂｌａｓｔｎプログラムで実施することができ、アミノ酸配列のアラインメントは、デフォルトのパラメータに設定されたｂｌａｓｔｐプログラムで実行できる（worldwide web、ncbi.nlm.nih.govのNational Center for Biotechnology Information（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。

本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、任意のタイプの細胞、例えば、初代細胞、培養物中の細胞、又は細胞株由来の細胞であり得る。具体的な実施形態において、「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェクトされた細胞、及びかかる細胞の子孫又は潜在的な子孫を指す。かかる細胞の子孫は、例えば、その後の世代又は宿主細胞ゲノムへの核酸分子の統合で起こり得る変異又は環境の影響により、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一ではない場合がある。

「医薬組成物」及び「医薬製剤」という用語は、有効成分の生物学的活性が治療上有効であるようにするような形態であり、組成物又は製剤が投与される対象にとって容認できないほど毒性のある追加の成分を含まない製剤を指す。組成物又は製剤は無菌であり得る。

「投与する」、「投与すること」、「投与」等の用語は、本明細書で使用される場合、薬物、例えば抗ＣＤ３６抗体の所望の生物学的作用部位への送達を可能にするために使用され得る方法を指す。本明細書に記載の薬剤及び方法で使用できる投与技術は、例えば、Goodman and Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, current edition, Pergamon; and Remington’s, Pharmaceutical Sciences, current edition, Mack Publishing Co., Easton, Pa.に見られる。投与は、当業者に既知である様々な方法及び送達系のいずれかを用いて、対象に、治療薬を含む組成物を物理的に導入することを指す。本明細書中において開示される製剤に好適な投与経路として、例えば、注射又は点滴による、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄、又は他の非経口投与経路が挙げられる。「非経口投与」という語句は、本明細書中において使用される場合、経腸投与及び外用投与以外の、通常は注射による投与様式を意味し、そのような投与として、特に制限なく、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、リンパ内、病巣内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、及び胸骨内の、注射及び点滴、並びにｉｎｖｉｖｏ電気穿孔法が挙げられる。幾つかの実施形態において、製剤は、非経口以外の経路を介して、好ましくは経口で投与される。他の非経口以外の経路として、外用、上皮、又は粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、膣、直腸、舌下、又は外用での経路が挙げられる。投与はまた、例えば、１回、複数回、及び／又は１つ以上の長期間にわたり行うことも可能である。

１つ以上の追加の治療薬と「組み合わせた」投与は、同時に（simultaneous）（同じ時に（concurrent））又は任意の順序での連続投与を含む。

併用療法は、「相乗作用」、すなわち活性剤を一緒に使用した場合に得られる効果が、活性剤を別々に使用した結果得られる効果の合計よりも大きくなり得る。相乗効果は、活性剤が、（１）組み合わせた単位用量製剤で共製剤化され、同時に投与又は送達されるか、（２）別々の製剤として連続的に、交互に、又は並行して送達されるか、又は（３）幾つかの他のレジメンによる場合に達成され得る。交互療法で送達される場合、相乗効果は、活性剤が連続して投与又は送達される場合に、例えば別々の注射器での異なる注射によって達成され得る。「相乗的組合せ」は、組合せの個々の活性剤の効果の合計よりも大きな効果をもたらす。

併用療法は、「相加的」効果、すなわち、活性剤を一緒に使用したときに得られる効果が、活性剤を別々に使用した結果得られる効果の合計に等しい場合に達成される効果をもたらすことができる。

本明細書で使用される「対象」及び「患者」という用語は、同じ意味で使用される。対象は動物であり得る。幾つかの実施形態において、対象は、非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サル又は他の霊長類等）等の哺乳動物である。幾つかの実施形態において、対象はカニクイザルである。幾つかの実施形態において、対象はヒトである。

「治療有効量」という用語は、所望の治療又は予防結果を達成するのに有効な薬物、例えば抗ＣＤ３６抗体の量を指す。場合によっては、所望の結果は、対象の疾患又は障害を治療することである。癌の場合、治療上有効な量の薬物によって癌細胞の数を減らす；腫瘍のサイズ又は量を軽減する；末梢器官への癌細胞の浸潤を阻害する（すなわち、或る程度遅らせ、或る特定の実施形態において停止させる）；腫瘍転移を阻害する（すなわち、或る程度遅らせ、或る特定の実施形態において停止させる）；腫瘍の増殖を或る程度阻害する；癌に関連する１つ以上の症状を或る程度和らげる；及び／又は好ましい反応、例えば無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）若しくは全生存期間（ＯＳ）の増加、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）若しくは場合によっては疾患の安定（ＳＤ）、疾患の進行（ＰＤ）の減少、進行までの時間（ＴＴＰ）の短縮、又はそれらの任意の組合せをもたらすことができる。薬物が増殖を防止し、及び／又は既存の癌細胞を殺すことができる範囲で、細胞増殖抑制性及び／又は細胞傷害性であり得る。

「治療する、治療すること」又は「治療」又は「治療するため」又は「緩和する、緩和すること」又は「緩和するため」等の用語は、診断された病的状態又は障害を治癒する、遅らせる、症状を軽減する、及び／又は進行を止める治療手段を指す。したがって、治療が必要な人としては、既に障害があると診断されているか、その疑いがある人が挙げられる。或る特定の実施形態において、対象は、患者が以下の１つ以上を示す場合、本発明の方法による癌の「治療」が成功したとみなされる：癌細胞の数の減少又は完全な欠如；腫瘍サイズの縮小；例えば、軟部組織及び骨への癌の広がりを含む、末梢器官への癌細胞浸潤の阻害又は不在；腫瘍転移の抑制又は不在；腫瘍増殖の阻害又は不在；特定の癌に関連する１以上の症状を和らげること；罹患率及び死亡率の減少；生活の質の向上；腫瘍の腫瘍形成性、腫瘍形成頻度、又は腫瘍形成能力の低下；腫瘍内の癌幹細胞の数又は頻度の減少；腫瘍原性細胞の非腫瘍原性状態への分化；無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）若しくは全生存期間（ＯＳ）の増加、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定した疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行までの時間（ＴＴＰ）の短縮、又はそれらの任意の組合せ。転移性癌の状況では、治療とは、新たな転移性腫瘍の発生を防ぐこと、転移性腫瘍のサイズを縮小すること、又は既存の転移性腫瘍を排除することも指す。

「癌」とは、体内の異常な細胞が制御されずに増殖することを特徴とする様々な疾患の広い群を指す。「癌」又は「癌組織」は、腫瘍を含み得る。制御されていない細胞分裂及び増殖により、悪性腫瘍が形成され、隣接する組織に侵入し、リンパ系又は血流を介して体の離れた部分に転移することもある。転移後、遠位の腫瘍は転移前の腫瘍に「由来する」と言える。かかる遠位腫瘍は、「転移性腫瘍」又は「転移」とも呼ばれる。

特に定義されない限り、本明細書中において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press、The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press、及び the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Pressは、当業者にとって、本開示で使用される用語の多くについての総合辞書となる。

単位、接頭辞、及び記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）に認められた形で表される。数字範囲は、その範囲を定める数字を含める。本明細書中において提供される見出しは、本開示の様々な態様を制限するものではなく、これら態様は、本明細書を全体として参照することにより理解することができる。したがって、これから直後に定義される用語は、本明細書全体を参照することで、より深く定義される。

本開示及び特許請求の範囲で使用される場合、数量を特定しない単数形（the singular forms "a," "an," and "the"）は、文脈が明確に指示しない限り、複数形を含む。

実施形態が「含む（comprising）」という言葉で本明細書に記載されている場合は常に、「からなる」及び／又は「から本質的になる」に関して記載される類似の実施形態も提供されることを理解される。本開示において、「含む（comprises）」、「含む、含んでいる（comprising）」、「含む、含んでいる、含有する、含有している（containing）」及び「有する、有している（having）」等は、米国特許法でそれらに帰せられる意味を有することができ、「含む、挙げる（includes）」、「含む、挙げる（including）」等を意味することができ、同様に「から本質的になる（consisting essentially of）」又は「本質的になる（consists essentially）」は、米国特許法に帰せられる意味を有し、その用語は無制限であり、列挙されたものの基本的又は新規な特徴が列挙されたものよりも多くの存在によって変更されない限り、列挙されたものよりも多くの存在が許容されるが、従来技術の実施形態は除外される。

本明細書で使用される場合、「又は」という用語は、具体的に述べられていないか、又は文脈から明らかでない限り、包括的であると理解される。本明細書において「Ａ及び／又はＢ」等の語句で使用される「及び／又は」という用語は、「Ａ及びＢ」の両方、「Ａ又はＢ」、「Ａ」及び「Ｂ」を含むことを意図している。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」等の語句で使用される「及び／又は」という用語は、Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；及びＣ（単独）の実施形態のそれぞれを包含することを意図している。

「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる（comprising essentially of）」という用語は、当業者によって特定される特定の値又は組成に対する許容可能な誤差範囲内にある値若しくは組成を指し、その値又は組成がどのように測定され又は特定されるのか、すなわち測定システムの制限に一部依存する。例えば、「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる」は、当該技術分野における１回の実施当たりの１以内又は１より大きい標準偏差を意味し得る。代替的には、「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる」は、最大２０％の範囲を意味し得る。さらに、特に生物学的なシステム又はプロセスに関して、上記用語は、或る値の最大１０倍（up to an order of magnitude）又は最大５倍を意味する場合がある。特定の値又は組成が本出願及び特許請求の範囲に提供される場合、別段の指示がない限り、「約」又は「を本質的に含む、を本質的に含んでいる」の意味は、その特定の値又は組成に対する許容可能な誤差範囲に含まれるとされるべきである。

本明細書で提供される任意の組成物又は方法は、本明細書で提供される他の組成物及び方法のいずれかの１つ以上と組み合わせることができる。

抗ＣＤ３６抗体
具体的な態様では、全長抗体（例えば、キメラ、ヒト化、又はヒト抗体等のモノクローナル抗体）及びＣＤ３６（例えば、ヒトＣＤ３６）に特異的に結合するその抗原結合フラグメントが本明細書に提供される。ヒト、カニクイザル、アカゲザル、マウス、及びラットのＣＤ３６のアミノ酸配列は当該技術分野で知られており、以下に示す通り、配列番号１～配列番号４によって表されるように本明細書に提供する。

ヒトＣＤ３６（配列番号１；ＵＮＩＰＲＯＴＰ１６６７１）：
MGCDRNCGLIAGAVIGAVLAVFGGILMPVGDLLIQKTIKKQVVLEEGTIAFKNWVKTGTEVYRQFWIFDVQNPQEVMMNSSNIQVKQRGPYTYRVRFLAKENVTQDAEDNTVSFLQPNGAIFEPSLSVGTEADNFTVLNLAVAAASHIYQNQFVQMILNSLINKSKSSMFQVRTLRELLWGYRDPFLSLVPYPVTTTVGLFYPYNNTADGVYKVFNGKDNISKVAIIDTYKGKRNLSYWESHCDMINGTDAASFPPFVEKSQVLQFFSSDICRSIYAVFESDVNLKGIPVYRFVLPSKAFASPVENPDNYCFCTEKIISKNCTSYGVLDISKCKEGRPVYISLPHFLYASPDVSEPIDGLNPNEEEHRTYLDIEPITGFTLQFAKRLQVNLLVKPSEKIQVLKNLKRNYIVPILWLNETGTIGDEKANMFRSQVTGKINLLGLIEMILLSVGVVMFVAFMISYCACRSKTIK

カニクイザル／アカゲザルＣＤ３６（配列番号２；それぞれ、ＵＮＩＰＲＯＴＱ４Ｒ６Ｂ４及びＱ６Ｊ５１２）：
MGCDRNCGLITGAVIGAVLAVFGGILMPVGDMLIQKTIKKEVVLEEGTIAFKNWVKTGTEIYRQFWIFDVQNPQEVMMNSSNIQVKQRGPYTYRVRFLAKENITQDPKDNTVSFLQPNGAIFEPSLSVGTEADNFTVLNLAVAAASHIYPNPFVQVVLNSLINKSKSSMFQVRTLRELLWGYTDPFLSLVPYPVSTRVGMFYPYNNTADGVYKVFNGKDSISKVAIIDTYKGKRNLSYWESYCDMINGTDAASFPPFVEKSQVLQFFSSDICRSIYAVFESDVNLKGIPVYRFVLPSKAFASPVQNPDNHCFCTEKIISKNCTSYGVLDISKCKEGKPVYISLPHFLYASPDVSETIDGLNPNEEEHRTYLDIEPITGFTLQFAKRLQVNLLVKPSNKIQVLKRLKRNYIVPILWLNETGTIGDEKAKMFRSQVTGKINLLGLIEMILLSVGVVMFVAFMISYCACRSKTIK

マウスＣＤ３６（配列番号３；ＵＮＩＰＲＯＴＱ０８８５７）：
MGCDRNCGLIAGAVIGAVLAVFGGILMPVGDMLIEKTIKREVVLEEGTTAFKNWVKTGTTVYRQFWIFDVQNPDDVAKNSSKIKVKQRGPYTYRVRYLAKENITQDPEDHTVSFVQPNGAIFEPSLSVGTEDDNFTVLNLAVAAAPHIYQNSFVQVVLNSLIKKSKSSMFQTRSLKELLWGYKDPFLSLVPYPISTTVGVFYPYNDTVDGVYKVFNGKDNISKVAIIESYKGKRNLSYWPSYCDMINGTDAASFPPFVEKSRTLRFFSSDICRSIYAVFGSEIDLKGIPVYRFVLPANAFASPLQNPDNHCFCTEKVISNNCTSYGVLDIGKCKEGKPVYISLPHFLHASPDVSEPIEGLHPNEDEHRTYLDVEPITGFTLQFAKRLQVNILVKPARKIEALKNLKRPYIVPILWLNETGTIGDEKAEMFKTQVTGKIKLLGMVEMALLGIGVVMFVAFMISYCACKSKNGK

ラットＣＤ３６（配列番号４；ＵＮＩＰＲＯＴＱ０７９６９）：
MGCDRNCGLITGAVIGAVLAVFGGILMPVGDLLIEKTIKREVVLEEGTIAFKNWVKTGTTVYRQFWIFDVQNPEEVAKNSSKIKVKQRGPYTYRVRYLAKENITQDPKDSTVSFVQPNGAIFEPSLSVGTENDNFTVLNLAVAAAPHIYTNSFVQGVLNSLIKKSKSSMFQTRSLKELLWGYKDPFLSLVPYPISTTVGVFYPYNNTVDGVYKVFNGKDNISKVAIIDTYKGKRNLSYWESYCDMINGTDAASFPPFVEKSQTLRFFSSDICRSIYAVFESEVNLKGIPVYRFVLPANAFASPLQNPDNHCFCTEKVISNNCTSYGVLDIGKCKEGKPVYISLPHFLHASPDVSEPIEGLNPNEDEHRTYLDVEPITGFTLQFAKRLQVNILVKPARKIEALKNLKRPYIVPILWLNETGTIGDEKAEMFRNQVTGKIKLLGLVEMVLLGVGVVMFVAFMISYCACRSKNGK

或る特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＣＤ３６に結合する。或る特定の実施形態において、抗体は、ヒト及びカニクイザルＣＤ３６に結合する。或る特定の実施形態において、抗体は、ヒト及びマウスのＣＤ３６に結合する。或る特定の実施形態において、抗体は、ヒト、マウス、及びラットのＣＤ３６に結合する。或る特定の実施形態において、抗体は、ヒト、カニクイザル、マウス、及びラットのＣＤ３６に結合する。

本発明の抗ＣＤ３６抗体は、全長抗体、単鎖抗体、及びｓｃＦｖ、Ｆａｂ又はＦ（ａｂ’）_２フラグメントを含む。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ－３６阻害剤は全長抗体である。幾つかの実施形態において、ＣＤ３６阻害剤はヒト化抗体である。幾つかの実施形態において、ＣＤ３６阻害剤はヒト抗体である。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ３６抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１又はＯＮＡ－０－ｖ２である。ＯＮＡ－０－ｖ１のアミノ酸配列は、配列番号５（重鎖）及び配列番号７（軽鎖）として提供される。ＯＮＡ－０－ｖ２のアミノ酸配列は、配列番号５（重鎖）及び配列番号９（軽鎖）として提供される。ＯＮＡ－０－ｖ１及びＯＮＡ－０－ｖ２抗体は、同じ定常領域及び同じ重鎖可変領域を共有するが、異なる軽鎖可変領域を含むという点で異なる。ＯＮＡ－０－ｖ１及びＯＮＡ－０－ｖ２の概略図を図５に示す。

本発明の実施形態はまた、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）_２、又はｓｃＦｖ－Ｆｃを含む、ＯＮＡ－０－ｖ１又はＯＮＡ－０－ｖ２に由来する抗体フラグメントを含む。抗体フラグメントは、当業者に知られている任意の技術によって生成することができる。或る特定の実施形態において、抗体フラグメントは、ｉｎｖｉｖｏで抗体の半減期を延長する部分を更に含む。この部分は、「半減期延長部分」とも呼ばれる。ｉｎｖｉｖｏで抗体フラグメントの半減期を延長するための当業者に知られている任意の部分を使用することができる。例えば、半減期延長部分は、Ｆｃ領域、ポリマー、アルブミン、又はアルブミン結合タンパク質若しくは化合物を含み得る。ポリマーは、天然又は合成の任意に置換された直鎖又は分枝鎖ポリアルキレン、ポリアルケニレン、ポリオキシルアルキレン、多糖、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、メトキシポリエチレングリコール、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン、又はそれらの誘導体を含むことができる。置換基は、１つ以上のヒドロキシ基、メチル基、又はメトキシ基を含むことができる。或る特定の実施形態において、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖを、半減期延長部分の付着のために１つ以上のＣ末端アミノ酸を付加することによって修飾することができる。或る特定の実施形態において、半減期延長部分は、ポリエチレングリコール又はヒト血清アルブミンである。或る特定の実施形態において、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖは、Ｆｃ領域に融合される。

或る特定の実施形態において、抗体は、ＣＤ３６に結合し、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ、又はＩＭＧＴ抗体のナンバリングスキームによって識別されるように、１つ以上のＯＮＡ－０－ｖ１のＣＤＲを含む。幾つかの実施形態において、その抗体は、配列番号２７～配列番号３２の６つのＣＤＲのうちの１つ以上を含むヒト化抗体である。幾つかの実施形態において、その抗体は、配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号２９～配列番号３２の６つのＣＤＲのうちの１つ以上を含むヒト化抗体である。幾つかの実施形態において、その抗体は、配列番号３９～配列番号４３及び配列番号３２の６つのＣＤＲのうちの１つ以上を含むヒト化抗体である。幾つかの実施形態において、重鎖配列は、ＣＤＲ領域ＧＹＴＦＴＤＹ（重鎖ＣＤＲ１；配列番号２７）、ＹＰＧＳＧＮ（重鎖ＣＤＲ２；配列番号２８）、及びＧＩＧＧＧＦＧＭＤＹ（重鎖ＣＤＲ３；配列番号２９）を含む。幾つかの実施形態において、重鎖配列は、ＣＤＲ領域ＤＹＹＩＮ（重鎖ＣＤＲ１；配列番号３７）、ＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＮＥＫＦＫＧ（重鎖ＣＤＲ２；配列番号３８）、及びＧＩＧＧＧＦＧＭＤＹ（重鎖ＣＤＲ３；配列番号２９）を含む。幾つかの実施形態において、重鎖配列は、ＣＤＲ領域ＧＹＴＦＴＤＹＹ（重鎖ＣＤＲ１；配列番号３９）、ＩＹＰＧＳＧＮＴ（重鎖ＣＤＲ２；配列番号４０）、及びＡＲＧＩＧＧＧＦＧＭＤＹ（重鎖ＣＤＲ３；配列番号４１）を含む。幾つかの実施形態において、軽鎖可変領域は、ＣＤＲ領域ＫＡＳＱＳＶＳＤＤＶＡ（軽鎖ＣＤＲ１；配列番号３０）、ＹＡＳＮＲＹＴ（軽鎖ＣＤＲ２；配列番号３１）、及びＱＱＤＹＳＳＰＬＴ（軽鎖ＣＤＲ３；配列番号３２）を含む。幾つかの実施形態において、軽鎖可変領域は、ＣＤＲ領域ＱＳＶＳＤＤ（軽鎖ＣＤＲ１；配列番号４２）、ＹＡＳ（軽鎖ＣＤＲ２；配列番号４３）、及びＱＱＤＹＳＳＰＬＴ（軽鎖ＣＤＲ３；配列番号３２）を含む。

或る特定の実施形態において、抗体は、ＣＤ３６に結合し、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ、又はＩＭＧＴ抗体のナンバリングスキームによって識別されるように、１つ以上のＯＮＡ－０－ｖ１のＣＤＲのバリアントを含む。幾つかの実施形態において、抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１重鎖ＣＤＲ１領域のバリアントとしてＤＹＹＭＨ（配列番号４４）又はＤＹＹＭＮ（配列番号４５）を含む。幾つかの実施形態において、抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１重鎖ＣＤＲ２領域のバリアントとしてＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＮＥＫＦＱＧ（配列番号４６）又はＲＩＹＰＧＳＧＮＴＹＹＮＥＫＦＴＧ（配列番号４７）を含む。幾つかの実施形態において、抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１軽鎖ＣＤＲ１領域のバリアントとしてＱＡＳＱＳＶＳＤＤＶＡ（配列番号４８）を含む。幾つかの実施形態において、抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１軽鎖ＣＤＲ２領域のバリアントとしてＹＡＳＮＬＹＴ（配列番号４９）又はＹＡＳＮＲＹＳ（配列番号５０）を含む。

幾つかの実施形態において、その抗体は、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ、又はＩＭＧＴ抗体のナンバリングスキームによって識別される、１つ以上のＯＮＡ－０－ｖ１のＣＤＲ又はＯＮＡ－０－ｖ１のＣＤＲのバリアントを含むヒト化抗体である。１つ以上のＯＮＡ－０－ｖ１のＣＤＲ又はＯＮＡ－０－ｖ１のＣＤＲのバリアント（Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される）を含む抗体の例示的な実施形態を、以下の表２に提供する。

幾つかの実施形態において、その抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体のヒト化バリアントを含むヒト化抗体である。幾つかの実施形態において、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体のヒト化バリアントは、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、又は配列番号５４を含むヒト化重鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態において、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体のヒト化バリアントは、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、又は配列番号５８を含むヒト化軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態において、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体のヒト化バリアントは配列番号５１を含むヒト化重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、又は配列番号５８を含むヒト化軽鎖可変領域とを含む。幾つかの実施形態において、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体のヒト化バリアントは配列番号５２を含むヒト化重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、又は配列番号５８を含むヒト化軽鎖可変領域とを含む。幾つかの実施形態において、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体のヒト化バリアントは配列番号５３を含むヒト化重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、又は配列番号５８を含むヒト化軽鎖可変領域とを含む。幾つかの実施形態において、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体のヒト化バリアントは配列番号５４を含むヒト化重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、又は配列番号５８を含むヒト化軽鎖可変領域とを含む。

或る特定の実施形態において、抗体は、ＣＤ３６に結合し、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ、又はＩＭＧＴ抗体のナンバリングスキームによって識別されるように、ＯＮＡ－０－ｖ２の６つのＣＤＲのうちの１つ以上を含む。幾つかの実施形態において、抗体は、配列番号２７～配列番号２９及び配列番号３３～配列番号３５に列挙される６つのＣＤＲのうちの１つ以上を含むヒト化抗体である。幾つかの実施形態において、重鎖配列は、ＣＤＲ領域ＧＹＴＦＴＤＹ（重鎖ＣＤＲ１；配列番号２７）、ＹＰＧＳＧＮ（重鎖ＣＤＲ２；配列番号２８）、及びＧＩＧＧＧＦＧＭＤＹ（重鎖ＣＤＲ３；配列番号２９）を含む。幾つかの実施形態において、軽鎖可変領域は、ＣＤＲ領域ＫＡＳＥＮＶＶＴＹＶＳ（軽鎖ＣＤＲ１；配列番号３３）、ＧＡＳＮＲＹＴ（軽鎖ＣＤＲ２；配列番号３４）、及びＧＱＧＹＳＹＰＹＴ（軽鎖ＣＤＲ３；配列番号３５）を含む。幾つかの実施形態において、抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ２の６つのＣＤＲのうちの１つ以上を含むヒト化抗体である。

或る特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ヒトＣＤ３６に結合し、配列番号１１として提供されるＯＮＡ－０－ｖ１ＶＨ配列を含む。或る特定の実施形態において、抗体はヒトＣＤ３６に結合し、配列番号１３として提供されるＯＮＡ－０－ｖ１ＶＬ配列を含む。或る特定の実施形態において、抗体はヒトＣＤ３６に結合し、配列番号２０として提供されるＶＬを含む。幾つかの実施形態において、抗体は、配列番号１１として提供されるＶＨ配列と配列番号１３として提供されるＶＬとを含むキメラ抗体である。幾つかの実施形態において、抗体は、１Ｇ０４抗体等の配列番号２１として提供される重鎖配列と配列番号２３として提供される軽鎖とを含むキメラ抗体である。幾つかの実施形態において、抗体は、１Ｇ０６抗体等の配列番号６４として提供される重鎖配列と配列番号２３として提供される軽鎖とを含むキメラ抗体である。

或る特定の実施形態において、抗ＣＤ３６抗体は二重特異性抗体である。「二重特異性」という用語は、問題の抗体が少なくとも２つの異なるエピトープ又は抗原に特異的に結合できることを意味する。典型的には、二重特異性抗体は、それぞれが異なるエピトープ又は抗原に特異的な２つの抗原結合部位を含む。したがって、幾つかの実施形態において、二重特異性抗ＣＤ３６抗体は、第２のエピトープ又は抗原にも結合する。幾つかの実施形態において、二重特異性抗体は、ＣＤ３６に特異的に結合するとともに、Ｔ細胞受容体抗原に特異的に結合する。幾つかの実施形態において、二重特異性抗体はＣＤ３６に特異的に結合するとともに、ＣＤ３に特異的に結合する。幾つかの実施形態において、二重特異性抗ＣＤ３６抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体からの１つ以上のＣＤＲを含む。本発明の実施形態は、かかる二重特異性抗体を使用してＴ細胞を腫瘍に動員する方法を含む。これらの方法の幾つかの実施形態において、動員されたＴ細胞は、主要組織適合性複合体を介した抗原提示を迂回しながら、腫瘍細胞を溶解する。二重特異性抗体を調製及び使用するための例示的な方法は、国際公開第２０１６／１４１２８７号（引用することによりその全体が本明細書の一部をなす）に見出すことができる。

ＯＮＡ－０－ｖ１抗体、ＯＮＡ－０－ｖ２抗体、及び他の実施形態に関連するアミノ酸配列は、以下の表３に提供される。

特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ＣＤ３６に結合し、ＯＮＡ－０－ｖ１の６つのＣＤＲ（すなわち、配列番号２７～配列番号３２）を含み、ＯＮＡ－０－ｖ１のＶＨ配列（配列番号１１）と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＨと、ＯＮＡ－０－ｖ１のＶＬ配列（配列番号１３）と少なくとも８０％同一の配列を含むＶＬとを含む。これらの実施形態の幾つかでは、抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１のＶＨ配列（配列番号１１）と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の同一性を備えるＶＨを含む。これらの態様の幾つかでは、抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１のＶＬ配列（配列番号１３）と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の同一性を備えるＶＬを含む。

或る特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体は、ＣＤ３６に結合し、ＯＮＡ－０－ｖ１の６つのＣＤＲ（すなわち、配列番号２７～配列番号３２）を含み、ＯＮＡ－０－ｖ１の重鎖配列（配列番号５）と少なくとも８０％同一の配列を含む重鎖と、ＯＮＡ－０－ｖ１の軽鎖配列（配列番号７）と少なくとも８０％同一の配列を含む軽鎖とを含む。これらの実施形態の幾つかでは、抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１の重鎖配列（配列番号５）と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の同一性を備える重鎖を含む。これらの態様の幾つかでは、抗体は、ＯＮＡ－０－ｖ１の軽鎖配列（配列番号７）と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の同一性を備える軽鎖を含む。

別の態様では、本明細書に記載の抗体（例えば、ＯＮＡ－０－ｖ１）と同じＣＤ３６のエピトープ（例えば、ヒトＣＤ３６のエピトープ）に結合する抗体が本明細書に提供される。

競合結合アッセイを使用して、２つの抗体が重複するエピトープに結合するかどうかを判断することができる。競合的結合は、試験中の免疫グロブリンがＣＤ３６等の共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイで判断することができる。多数のタイプの競合結合アッセイ、例えば、競合ＦＡＣＳ；固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Stahli C et al., (1983) Methods Enzymol 9:242-253を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Kirkland TN et al., (1986) J Immunol 137:3614-9を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Harlow E & Lane D, (1988) Antibodies:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Pressを参照されたい）；Ｉ－１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（Morel GA et al., (1988) Mol Immunol 25(1):7-15を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Cheung RC et al., (1990) Virology 176:546-52）；及び直接標識ＲＩＡ（Moldenhauer G et al., (1990) Scand J Immunol 32:77-82）が知られている。典型的には、かかるアッセイは、固体表面又はこれらのいずれかを担持する細胞に結合した精製抗原（例えば、ヒトＣＤ３６等のＣＤ３６）、非標識試験免疫グロブリン及び標識参照免疫グロブリンの使用を伴う。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面又は細胞に結合した標識の量を決定することによって測定することができる。通常、試験免疫グロブリンは過剰に存在する。通常、競合する抗体が過剰に存在する場合、参照抗体の共通抗原への特異的結合を少なくとも５０％～５５％、５５％～６０％、６０％～６５％、６５％～７０％、７０％～７５％又はそれ以上阻害する。競合結合アッセイは、標識抗原又は標識抗体のいずれかを使用して、多数の異なる形式で構成され得る。このアッセイの一般的なバージョンでは、抗原は９６ウェルプレートに固定化される。次いで、標識された抗体の抗原への結合を遮断する非標識抗体の能力を、放射性標識又は酵素標識を使用して測定する。更なる詳細については、例えば、Wagener C et al., (1983) J Immunol 130:2308-2315；Wagener C et al., (1984) J Immunol Methods 68:269-274；Kuroki M et al., (1990) Cancer Res 50:4872-4879；Kuroki M et al., (1992) Immunol Invest 21:523-538；Kuroki M et al., (1992) Hybridoma 11:391-407 and Antibodies:A Laboratory Manual, Ed Harlow E & Lane D editors supra, pp. 386-389を参照されたい。

一実施形態において、競合アッセイは、例えば、Abdiche YN et al., (2009) Analytical Biochem 386:172-180によって記載される「インタンデムアプローチ」によって、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標））を使用して実施され、これにより、ＣＤ３６抗原をチップ表面、例えばＣＭ５センサーチップに固定化し、次いで抗ＣＤ３６抗体をチップ上に流す。抗体が本明細書に記載の抗ＣＤ３６抗体と競合するかどうかを判断するために、抗ＣＤ３６抗体を最初にチップ表面に流して飽和させ、次いで潜在的な競合抗体を加える。次いで、競合する抗体の結合を判断し、非競合対照と比較して定量化することができる。

一実施形態において、ＦｏｒｔｅｂｉｏＯｃｔｅｔ競合結合は、ＣＤ３６抗体が別のＣＤ３６抗体のＣＤ３６への結合を競合的に阻害することを判断するために使用される。

別の態様では、当業者に知られているか、又は本明細書に記載されているアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合アッセイ、又はサスペンションアレイ、又は表面プラズモン共鳴アッセイ）を使用して決定される場合、本明細書に記載の抗体（例えば、ＯＮＡ－０－ｖ１）がＣＤ３６（例えば、ヒトＣＤ３６）に結合することを競合的に（例えば、用量依存的に）阻害する抗体が本明細書に提供される。

抗ＣＤ３６抗体がＣＤ３６の活性を調節し、それを拮抗又は遮断することが好ましい。ＣＤ３６の活性を遮断又は阻害する抗体は、全長の抗体であり得る。抗体の類似体又はフラグメント、例えば、単鎖抗体、単鎖可変ドメインフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント（これは、抗体分子のペプシン消化により得ることができる）、又はＦａｂフラグメント（これは、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより得ることができる）を使用することも可能である。対象がヒトである場合、ヒト化抗体が使用可能である。

ＣＤ３６には幾つかの既知の機能があるため、トロンボスポンジン、コラーゲン及び脂肪酸との相互作用を含むＣＤ３６の全ての既知の機能を阻害するように、又はＣＤ３６の特定の機能のみを阻害するように（例えば、脂肪酸及び酸化ＬＤＬの取り込みのみを遮断するように）抗体を選択することができる。したがって、幾つかの実施形態において、抗ＣＤ３６抗体は、脂肪酸及び／又は酸化ＬＤＬのＣＤ３６媒介取り込みを遮断する。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ３６抗体は、脂肪酸及び／又はｏｘＬＤＬのＣＤ３６媒介取込みを遮断する一方で、ＣＤ３６のＴＳＰ－１への結合にほとんど又は全く影響を及ぼさない。また幾つかの実施形態において、抗ＣＤ３６抗体は、ＴＳＰ－１に対するリガンドとしてのＣＤ３６の役割にほとんど又は全く影響を及ぼさずに、脂肪酸及び／又はｏｘＬＤＬのＣＤ３６媒介取込みを遮断する。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ３６抗体は、脂肪酸及び／又は酸化ＬＤＬのＣＤ３６媒介取り込みを、未処置対照と比較して少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、又は少なくとも約３０％遮断する。幾つかの実施形態において、抗ＣＤ３６抗体は、脂肪酸及び／又は酸化ＬＤＬのＣＤ３６媒介取り込みを少なくとも約１７％遮断する。

治療される対象がヒトである場合、任意の既知の抗ＣＤ３６抗体を使用することも可能であれば、ヒトへの投与用に抗体を調製することも可能である。マウス等の非ヒト免疫系で生成させた抗体の場合（本出願のアッセイで使用されるもののように）、有害な反応を回避する目的で、それらをヒトに投与可能なものにするためヒト化が必要となる可能性がある。ヒト化抗体とは、最初は、非ヒト種で生成したものであり、そのタンパク質配列が、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を維持するようにして、ヒトで天然に産生される抗体バリアントとの類似性を高めるように修飾されている、抗体、通常はモノクローナル抗体である。ヒト化の後でさえ、ヒト化抗体のアミノ酸配列は、ヒトで天然に生じる抗体とは部分的に異なる。抗体ヒト化のプロセスは、例えば、Almagro and Fransson (2008)による総説のとおり、複数が当業者に知られており、そのようなプロセスとして以下が挙げられる：マウス－ヒト（マウスＦａｂを切断しヒトＦｃに継ぎ合わせた）キメラの産生を通じたヒト化、このキメラは、Ｆａｂ部分のアミノ酸配列の選択的改変により、更にヒト化することができる；ヒト抗体の対応するセグメントを置き換えることによる、「ドナー」（非ヒト抗体）の１つ以上のＣＤＲセグメントの挿入、これは、組換えＤＮＡ技法を用いて哺乳類細胞培養物において発現することができる構築物を作製することにより実行可能であり、又は、通常は、末梢血から単離されたヒトＲＮＡに由来し、微生物若しくはウイルスにより提示される（ファージディスプレイでそうであるように）又は無細胞抽出物由来でさえある（リボソームディスプレイでそうであるように）抗体遺伝子ライブラリーを作製することにより非ヒト哺乳類の使用さえも回避して、適切な中間産物（通常は、抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂ又はｓｃＦｖ等）を選択し、例えば、再び組換えＤＮＡ技法により完全抗体を得ることにより、実行可能である。複数の特許文献、例えば、Genentechに付与されている米国特許第６０５４２９７号等が、ヒト化方法に焦点を合わせている。米国特許第５２２５５３９号、及び米国特許第４８１６３９７号もまた有用な参照であり、これらはその全体が引用することにより本明細書の一部をなす。

モノクローナル抗体を得る方法は、当業者に既知である。一般に、ＣＤ３６受容体に対する抗体は、既知の方法に従って生じさせることが可能であり、そのような方法として、例えば、古典的な実験室マニュアルである''Antibodies: A Laboratory Manual, Second edition'', edited by E.A. Greenfield in 2014で言及されるもの等、ＣＤ３６全タンパク質又はそのフラグメント若しくはエピトープを、治療効果の探究対象である哺乳類とは異なる宿主動物に投与することによるものがある。モノクローナル抗体は、特に、連続培養細胞株による抗体分子の産生をもたらす任意の技法により、調製及び単離が可能であり、そのような技法として、例えば、Kohler and Milstein (1975)により最初に記載されたハイブリドーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（Cote et al., 1983）、又はＥＢＶ－ハイブリドーマ技法（Cole et al., 1985）がある。クローン細胞株、並びにそれによって発現されるモノクローナル抗体及びその抗原結合フラグメントを調製するための他の方法は、当該技術分野でよく知られている（例えば、前出のShort Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et alの１１章を参照されたい）。あるいは、上記で述べたとおり、Ｆａｂ及び／又はｓｃＦｖ発現ライブラリーを構築して、ＣＤ３６受容体に対する所望の特異性を有するフラグメントの迅速な同定を可能にすることができる。本明細書に記載の抗体又はフラグメントを作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例としては、Brinkman U et al., (1995) J Immunol Methods 182:41-50、Ames RS et al., (1995) J Immunol Methods 184:177-186、Kettleborough CA et al., (1994) Eur J Immunol 24:952-958、Persic L et al., (1997) Gene 187:9-18、Burton DR & Barbas CF (1994) Advan Immunol 57:191-280、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４、国際公開第９０／０２８０９号、国際公開第９１／１０７３７号、国際公開第９２／０１０４７号、国際公開第９２／１８６１９号、国際公開第９３／１１２３６号、国際公開第９５／１５９８２号、国際公開第９５／２０４０１号及び国際公開第９７／１３８４４号、並びに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号及び同第５，９６９，１０８号に記載されるものが挙げられる。

特定の特異性を持つ抗体の設計に関して、所望であれば、抗体を生成する前に、標的となる又は変異される抗体の特定ドメイン又は領域を免疫原として選択する目的で、注釈付きＮＣＢＩ参照配列（ＮＣ＿０００００７．１４、ホモ・サピエンス（Homo sapiens）アノテーションリリース：１０７、これは２０１５年９月２９日に出された最新のリリースである）又はＵｎｉＰｒｏｔＫＢＰ１６６７１を利用することが有利である。

治療効果を達成するため、ＣＤ３６の活性の遮断薬である抗ＣＤ３６抗体は、好ましくは治療上有効量で、投与されることになる。何が有効用量と見なされることになるかの正確な判断は、患者ごとの要因に基づく可能性があり、要因としては、患者の体格、年齢、癌の段階、及び遮断薬の性質（例えば、発現構築物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、抗体、又はそのフラグメントである等）が挙げられる。したがって、投与量は、当業者が、本開示及び当該技術分野の知見から、容易に確定することができる。対象に、複数用量を特定の治療期間にわたり投与することも可能であり、例えば、毎日、毎週、毎月、２ヶ月ごと、３ヶ月ごと、又は６ヶ月ごと等がある。毎日複数回投与することにより、治療効果のある血漿中濃度を達成することもできる。或る特定の投薬スケジュールでは、対象は、最初の時点で初期用量を投与され、この初期用量は、１回以上のその後の用量又は維持用量よりも多い。数日以上の反復投与の場合は、状態にもよるが、一般に、所望の効果が現れるまで治療を継続する。この治療の進行状況は、従来の技術とアッセイによって簡単に監視される。

疾患の種類及び重症度に応じて、抗ＣＤ３６抗体約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）が患者への投与の初期候補投与量となり得る。投与量は、例えば、１回以上の別個の投与によって、又は持続注入によって投与され得る。一日の投与量は、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。抗ＣＤ３６抗体の１つの例示的な投与量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲となり得る。他の例では、用量はまた、１回の投与当たり約１μｇ／ｋｇ体重、約５μｇ／ｋｇ体重、約１０μｇ／ｋｇ体重、約５０μｇ／ｋｇ体重、約１００μｇ／ｋｇ体重、約２００μｇ／ｋｇ体重、約３５０μｇ／ｋｇ体重、約５００μｇ／ｋｇ体重、約１ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約２００ｍｇ／ｋｇ体重、約３５０ｍｇ／ｋｇ体重、約５００ｍｇ／ｋｇ体重から、約１０００ｍｇ／ｋｇ体重以上、及びそこから導き出される任意の範囲を含み得る。本明細書に列挙された数から導出可能な範囲の例では、上記の数値に基づいて、約５ｍｇ／ｋｇ体重～約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約５μｇ／ｋｇ体重～約５００ｍｇ／ｋｇ体重等の範囲が投与され得る。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はそれらの任意の組合せ）うちの１つ以上の用量を患者に投与することができる。

全身投与の場合、治療有効用量は、細胞培養アッセイ等のｉｎｖｉｔｒｏアッセイから最初に推定することができる。次いで、細胞培養で決定されるＩＣ_５０を含む循環濃度範囲を達成するために、動物モデルで用量を処方することができる。かかる情報は、ヒトでの有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。初期投与量は、当該技術分野でよく知られている手法を使用して、例えば動物モデルのｉｎｖｉｖｏデータから推定することもできる。当業者は、動物データに基づいてヒトへの投与を容易に最適化することができる。投与量及び投与間隔は、治療効果を維持するのに十分な抗ＣＤ３６抗体の血漿レベルを提供するために個別に調整され得る。血漿中のレベルは、例えば、ＨＰＬＣによって測定することができる。

抗ＣＤ３６抗体は、検出可能な標識又は物質に融合又はコンジュゲート（例えば、共有結合又は非共有結合）することができる。検出可能な標識又は物質の例としては、グルコースオキシダーゼ等の酵素標識；ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）等の放射性同位元素；ルミノール等の発光ラベル；並びにフルオレセイン及びローダミン及びビオチン等の蛍光標識が挙げられる。かかる標識抗体は、ＣＤ３６（例えば、ヒトＣＤ３６）タンパク質を検出するために使用することができる。

フコース含有量が減少した抗体は、例えばＦｃγＲＩＩＩＡ等のＦｃ受容体に対する増加した親和性を有することが報告されている。したがって、或る特定の実施形態において、本明細書に記載の抗体は、フコース含有量が減少しているか、又はフコースを欠いている（すなわち、「脱フコシル化されている」）。かかる抗体は、当業者に知られている手法を使用して産生することができる。例えば、かかる抗体は、フコシル化する能力が欠損している、又は欠如している細胞で発現することができる。具体的な例では、α１，６－フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子をノックアウトした細胞株を使用して、フコース含有量が減少した抗体を産生することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（商標）システム（Lonza）は、フコース含有量が減少した抗体を産生するために使用することができるようなシステムの例である。あるいは、フコース含有量が減少した、又はフコース含有量のない抗体は、例えば、以下によって産生することができる：（ｉ）フコシル化を防止又は低減する条件下で細胞を培養する；（ｉｉ）フコースの翻訳後除去（例えば、フコシダーゼ酵素による）；（ｉｉｉ）所望の炭水化物の翻訳後付加、例えば非グリコシル化糖タンパク質の組換え発現後；又は（ｉｖ）フコシル化されていない抗体を選択するための糖タンパク質の精製。フコース含有量のない、又はフコース含量が減少したその抗体を産生する方法については、例えば、Longmore GD & Schachter H (1982) Carbohydr Res 100:365-92及びImai-Nishiya H et al., (2007) BMC Biotechnol. 7:84を参照されたい。

幾つかの実施形態において、ＣＤ３６抗体は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化ＣＤ３６抗体と比較して、ｉｎｖｉｔｒｏで増強されたＡＤＣＣ活性を有する。幾つかの実施形態において、脱フコシル化ＣＤ３６抗体は、フコシル化ＣＤ３６抗体による特異的溶解よりも、少なくとも１０パーセンテージポイント、少なくとも１５パーセンテージポイント、少なくとも２０パーセンテージポイント、少なくとも２５パーセンテージポイント、少なくとも３０パーセンテージポイント、少なくとも３５パーセンテージポイント、少なくとも４０パーセンテージポイント、少なくとも４５パーセンテージポイント、少なくとも５０パーセンテージポイント、少なくとも６０パーセンテージポイント、少なくとも６５パーセンテージポイント、少なくとも７０パーセンテージポイント、又は少なくとも７５パーセンテージポイント高い特異的溶解を引き起こす。

或る特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入されることによって、Ｆｃ領域バリアントが生成され得る。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。幾つかの実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への、特にＦｃγ受容体への結合を減少させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及び／又はＰ３２９Ｇ（ナンバリングはＫａｂａｔＥＵインデックスに従う）を有するヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。幾つかの実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ｇ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒを有するヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。幾つかの実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒを有するヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。幾つかの実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｖ、及びＧ２３６Ｒを有するヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。幾つかの実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｑ、及びＧ２３６Ｒを有するヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。幾つかの実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒを有するヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。幾つかの実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａを有するヒトＩｇＧ１サブクラスのものである。

Ｆｃドメインは、本発明の抗体に、標的組織における良好な蓄積及び好ましい組織血液分布比に寄与する長い血清半減期を含む、好ましい薬物動態特性を付与する。しかしながら同時に、好ましい抗原担持細胞ではなく、Ｆｃ受容体を発現する細胞に対する本発明の抗体の望ましくないターゲティングにつながる可能性がある。したがって、特定の実施形態において、本発明の抗体のＦｃドメインは、天然のＩｇＧＦｃドメイン、特にＩｇＧ１Ｆｃドメイン又はＩｇＧ４Ｆｃドメインと比較して、Ｆｃ受容体に対する結合親和性の低下及び／又はエフェクター機能の低下を示す。より具体的には、ＦｃドメインはＩｇＧ１Ｆｃドメインである。

特定の態様では、Ｆｃドメインは、操作されていないＦｃドメインと比較して、Ｆｃ受容体に対する低下した結合親和性、及び／又は低下したエフェクター機能を有するように操作される。かかる一実施形態において、Ｆｃドメインは、天然のＩｇＧ１Ｆｃドメインと比較して、Ｆｃ受容体に対して５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満の結合親和性を示し、及び／又は天然ＩｇＧ１Ｆｃドメインと比較して、５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、最も好ましくは５％未満のエフェクター機能を示す。一実施形態において、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体に実質的に結合せず、及び／又はエフェクター機能を誘導しない。特定の実施形態において、Ｆｃ受容体はＦｃγ受容体である。一実施形態において、Ｆｃ受容体はヒトＦｃ受容体である。一実施形態において、Ｆｃ受容体は活性化Ｆｃ受容体である。具体的な実施形態において、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体、より具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ又はＦｃγＲＩＩａ、最も具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩａである。一実施形態において、Ｆｃ受容体は抑制性Ｆｃ受容体である。具体的な実施形態において、Ｆｃ受容体は、抑制性ヒトＦｃγ受容体、より具体的にはヒトＦｃγＲＩＩＩＢである。一実施形態において、エフェクター機能は、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びサイトカイン分泌の１つ以上である。特定の実施形態において、エフェクター機能はＡＤＣＣである。一実施形態において、Ｆｃドメインは、天然のＩｇＧ１Ｆｃドメインと比較して、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対して実質的に同様の結合親和性を示す。Ｆｃドメインが、ＦｃＲｎに対する天然ＩｇＧ１Ｆｃドメインの約７０％を超える、特に約８０％を超える、より詳しくは約９０％を超える結合親和性を示す場合、ＦｃＲｎへの実質的に同様の結合が達成される。幾つかの実施形態において、補体成分への結合親和性、具体的にはＣ１ｑへの結合親和性も低下する。一態様では、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合親和性は低下しない。

或る特定の実施形態において、本発明の抗体のＦｃドメインは、操作されていないＦｃドメインと比較して、低下したエフェクター機能を有するように操作される。低下したエフェクター機能としては、限定されるものではないが、以下の１つ以上が含まれ得る：補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の減少、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の減少、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）の減少、サイトカイン分泌の減少、抗原提示細胞による免疫複合体を介した抗原の取り込みの減少、ＮＫ細胞への結合の減少、マクロファージへの結合の減少、単球への結合の減少、多形核細胞への結合の減少、アポトーシスを誘導する直接シグナル伝達の減少、樹状細胞の成熟の減少、又はＴ細胞プライミングの減少。

エフェクター機能が低下した抗体としては、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうち１つ以上が置換された抗体が挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ変異体としては、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７の２つ以上に置換を有するＦｃ変異体が挙げられ、これは、残基２６５及び２９７がアラニンに置換されたいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。ＦｃＲへの結合が改善又は減少した或る特定の抗体バリアントが記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields, R. L. et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604）。

本発明の一態様では、Ｆｃドメインは、位置Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３６、Ｎ２９７、Ｐ３３１及びＰ３２９のうちの１つ以上にアミノ酸置換を含む。幾つかの態様では、Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）を含む。かかる一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインである。一態様では、Ｆｃドメインは、位置Ｐ３２９にアミノ酸置換を含む。より具体的な態様では、アミノ酸置換は、Ｐ３２９Ａ又はＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇである。一実施形態において、Ｆｃドメインは、位置Ｐ３２９のアミノ酸置換、及びＥ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ又はＰ３３１Ｓからなる群より選択される更なるアミノ酸置換を含む。より特定の実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９ＧＬＡＬＡ」）を含む。ＰＣＴ特許出願の国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載されているように、アミノ酸置換の「Ｐ３２９ＧＬＡＬＡ」の組合せは、ヒトＩｇＧ１ＦｃドメインのＦｃγ受容体結合をほぼ完全に無効にする。この文献はまた、かかる変異型Ｆｃドメインを調製する方法、及びＦｃ受容体結合又はエフェクター機能等のその特性を決定する方法も記載している。かかる抗体は、変異Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ又は変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇを伴うＩｇＧ１である（ナンバリングは、KabatらのＥＵインデックス（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991）に従う）。

本発明の幾つかの態様では、重鎖定常領域は、アミノ酸位置Ｌ２３４、Ｌ２３５、及び／又はＧ２３６に変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。抗ＣＤ３６抗体との使用に特に有益であり得る変異のセットは、重鎖定常領域が、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｇ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｇ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｖ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｑ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ；Ｇ２３６Ｒ及びＬ３２８Ｒ；Ｌ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ；Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ；Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ｅ；Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、及びＰ３９６Ｌ；Ｄ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ；Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＫ３２２Ａ；Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及びＰ３３１Ｓ；Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｑ、及びＫ３２２Ｑ；Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ；Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６Δ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓ；Ｌ２３５Ａ及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３５Ｓ及びＧ２３６Ｒ；Ｇ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ及びＬ２３５Ｓ；Ｌ２３５Ｇ及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ及びΔ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ及びＬ２３５Ｓ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、Ｇ２３６Ｒ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ；並びにＬ２３４Ｑ、Ｌ２３５Ｓ、Ｇ２３６Ｒ、Ｔ２５０Ｑ、及びＭ４２８Ｌからなる群より選択される変異のセットを含むＩｇＧ定常領域を含む実施形態を含む。幾つかの実施の形態では、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ｇ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態では、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態では、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｖ、及びＧ２３６Ｒの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態では、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｑ、及びＧ２３６Ｒの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態では、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態では、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。幾つかの実施の形態では、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇの変異を含有するＩｇＧ定常領域を含む。

一態様では、本発明の抗体は、（全ての位置はKabatのＥＵインデックスに従う）（ｉ）任意に変異Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａを有するヒトＩｇＧ１サブクラスのホモ二量体Ｆｃ領域、又は（ｉｉ）任意に変異Ｐ３２９Ｇ、Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅを有するヒトＩｇＧ４サブクラスのホモ二量体Ｆｃ領域、又は（ｉｉｉ）任意に変異Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａを有する、若しくは任意に変異Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３３Ａ、及びＹ４３６Ａを有する、ヒトＩｇＧ１サブクラスのホモ二量体Ｆｃ領域、又は（ｉｖ）一方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｗを含み、他方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む、若しくは一方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃを含み、他方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＳ３５４Ｃを含む、若しくは一方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃを含み、他方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを含む、ヘテロ二量体Ｆｃ領域、又は（ｖ）両方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｐ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａを含み、一方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｗを含み、他方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む、若しくは一方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃを含み、他方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＳ３５４Ｃを含む、若しくは一方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃを含み、他方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを含む、ヒトＩｇＧ１サブクラスのヘテロ二量体Ｆｃ領域。

一態様では、ＦｃドメインはＩｇＧ４Ｆｃドメインである。より具体的な実施形態において、Ｆｃドメインは、位置Ｓ２２８（Ｋａｂａｔナンバリング）にアミノ酸置換、特にアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むＩｇＧ４Ｆｃドメインである。より具体的な実施形態において、Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３５Ｅ及びＳ２２８Ｐ及びＰ３２９Ｇを含むＩｇＧ４Ｆｃドメインである。このアミノ酸置換は、ＩｇＧ４抗体のｉｎｖｉｖｏでのＦａｂアーム交換を減少させる（Stubenrauch et al., Drug Metabolism and Disposition 38, 84-91 (2010)を参照されたい）。したがって、一態様では、（全ての位置がKabatのＥＵインデックスに従う）両方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｐ３２９Ｇ、Ｓ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅを含み、一方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｗを含み、他方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む、若しくは一方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｗ及びＹ３４９Ｃを含み、他方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＳ３５４Ｃを含む、若しくは一方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｗ及びＳ３５４Ｃを含み、他方のＦｃ領域ポリペプチドが変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＹ３４９Ｃを含む、ヒトＩｇＧ４サブクラスのヘテロ二量体Ｆｃ領域を含む抗体が提供される。

半減期が増加し、母体のＩｇＧの胎児への移行を担う（Guyer, R. L. et al., J. Immunol. 117 (1976) 587-593、及びKim, J. K. et al., J. Immunol. 24 (1994) 2429-2434）新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ以上の置換を含むＦｃ領域を含む。かかるＦｃバリアントとしては、１つ以上のＦｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４に置換があるもの、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換があるものが挙げられる（米国特許第７，３７１，８２６号）。Duncan, A. R. and Winter, G., Nature 322 (1988) 738-740、米国特許第５，６４８，２６０号、同第５，６２４，８２１号、及びＦｃ領域バリアントの他の例に関する国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。

Ｆｃ受容体への結合は、例えばＥＬＩＳＡによって、又はＢＩＡｃｏｒｅ機器（GE Healthcare）等の標準的な機器を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって容易に決定することができ、Ｆｃ受容体は組換え発現等によって得ることができる。適切なかかる結合アッセイは、本明細書に記載される。あるいは、ＦｃγＩＩＩａ受容体を発現するヒトＮＫ細胞等、特定のＦｃ受容体を発現することが知られている細胞株を使用して、Ｆｃドメイン又はＦｃドメインを含む細胞活性化抗体のＦｃ受容体に対する結合親和性を評価することができる。Ｆｃドメイン、又はＦｃドメインを含む本発明の抗体のエフェクター機能は、当該技術分野で知られている方法によって測定することができる。ＡＤＣＣを測定するための適切なアッセイは、本明細書に記載されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評定するためのｉｎｖｉｔｒｏアッセイの他の例は、米国特許第５，５００，３６２号、Hellstrom et al. Proc Natl Acad Sci USA 83, 7059-7063 (1986)、及びHellstrom et al., Proc Natl Acad Sci USA 82, 1499-1502 (1985)、米国特許第５，８２１，３３７号、Bruggemann et al., J Exp Med 166, 1351-1361 (1987)に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を採用してもよい（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞毒性アッセイ（カリフォルニア州マウンテンビューのCellTechnology, Inc．）；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（商標）非放射性細胞毒性アッセイ（ウィスコンシン州マディソンのPromega）を参照されたい）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、又はさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎｖｉｖｏで、例えば、Clynes et al., Proc Natl Acad Sci USA 95, 652-656 (1998)に開示されるような動物モデルにおいて評定され得る。

抗ＣＤ３６抗体をコードするヌクレオチド
或る特定の態様では、ＣＤ３６（例えば、ヒトＣＤ３６）抗原に免疫特異的に結合する、本明細書に記載の抗体又はそのドメイン（例えば、可変軽鎖領域及び／又は可変重鎖領域）をコードするヌクレオチド配列含むポリヌクレオチド、及びベクター、例えば、宿主細胞（例えば、大腸菌（E. coli）及び哺乳動物細胞）における組換え発現のためのかかるポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書に提供される。

特定の態様では、ＣＤ３６ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ３６）に免疫特異的に結合し、本明細書に記載のアミノ酸配列を含む抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３６ポリペプチドへの結合についてかかる抗体と競合する（例えば、用量依存的に）、又はかかる抗体のエピトープと同じエピトープに結合する抗体が本明細書に提供される。

或る特定の態様では、本明細書に記載の抗体の軽鎖又は重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗体のＶＨ又はＣＤＲを含む重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むことができる。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗体のＶＬ又はＣＤＲを含む軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むことができる。

特定の実施形態において、例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３を包含する３つのＶＨ鎖ＣＤＲを含む抗ＣＤ３６抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。具体的な実施形態において、例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を包含する３つのＶＬ鎖ＣＤＲを含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。具体的な実施形態において、例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、及びＶＨＣＤＲ３を包含する３つのＶＨ鎖ＣＤＲと、例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか１つのＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、及びＶＬＣＤＲ３を包含する３つのＶＬ鎖ＣＤＲとを含む、抗ＣＤ３６抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。

特定の実施形態において、抗ＣＤ３６抗体、又は本明細書に記載のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含むそのフラグメント（例えば、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含有する）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。具体的な実施形態において、抗ＣＤ３６抗体、又は本明細書に記載のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含むそのフラグメント（例えば、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を含有する）をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。

例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列との置換、及びｍＲＮＡ不安定要素の除去によって最適化された、本明細書に記載の抗ＣＤ３６抗体又はそのドメインをコードするポリヌクレオチドも本明細書に提供される。例えば、米国特許第５，９６５，７２６号、同第６，１７４，６６６号、同第６，２９１，６６４号、同第６，４１４，１３２号、及び同第６，７９４，４９８号に記載される最適化方法を適宜適応させることにより、コドン変化を導入することによって（例えば、遺伝暗号の縮重による同じアミノ酸をコードするコドン変化）及び／又はｍＲＮＡの阻害領域を除去することによって組換え発現のために抗ＣＤ３６抗体又はそのドメイン（例えば、重鎖、軽鎖、ＶＨドメイン、又はＶＬドメイン）をコードする最適化された核酸を生成する方法を行うことができる。

幾つかの実施形態において、本願に記載の抗体又は抗体フラグメントのいずれかをコードするポリヌクレオチドが本明細書に提供される。ＯＮＡ－０－ｖ１抗体、ＯＮＡ－０－ｖ２抗体、及び他の実施形態をコードする例示的なヌクレオチド配列を、以下の表４に提供する。

本明細書に記載の抗体又はそのドメインをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野でよく知られている方法（例えば、ＰＣＲ及び他の分子クローニング法）を使用して、適切な供給源（例えば、ハイブリドーマ）に由来する核酸から生成することができる。例えば、既知の配列の３’末端及び５’末端にハイブリダイズする合成プライマーを用いたＰＣＲ増幅は、目的の抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを用いて行うことができる。かかるＰＣＲ増幅法を使用して、抗体の軽鎖及び／又は重鎖をコードする配列を含む核酸を得ることができる。かかるＰＣＲ増幅法を使用して、抗体の可変軽鎖領域及び／又は可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得ることができる。増幅された核酸は、宿主細胞での発現のため、及び例えばキメラ抗体及びヒト化抗体を生成するための更なるクローニングのために、ベクターにクローニングすることができる。

本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、例えば、ＲＮＡの形態又はＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡとしては、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡが挙げられ、ＤＮＡは二本鎖又は一本鎖であり得る。一本鎖の場合、ＤＮＡはコード鎖又は非コード（アンチセンス）鎖であり得る。或る特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、１つ以上の内因性イントロンを欠くｃＤＮＡ又はＤＮＡである。或る特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは天然に存在しないポリヌクレオチドである。或る特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは組み換えによって産生される。或る特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは単離される。或る特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは実質的に純粋である。或る特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは天然成分から精製される。

抗体産生
ＣＤ３６（例えば、ヒトＣＤ３６）に免疫特異的に結合する抗体は、全長抗体又はその抗原結合フラグメントの合成のための当該技術分野で知られている任意の方法によって、例えば、化学合成又は組換え発現の手法によって産生され得る。本明細書に記載の方法は、別段の指示がない限り、分子生物学、微生物学、遺伝子分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び修飾、核酸ハイブリダイゼーション、並びに当該技術分野の技術範囲内の関連分野における従来の手法を採用する。これらの手法は、例えば、本明細書で引用した参考文献に記載されており、文献で十分に説明されている。例えば、Sambrook J et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY、Ausubel FM et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates)、Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press、Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press、Birren B et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Pressを参照されたい。

或る特定の態様では、本明細書に記載の細胞又は宿主細胞を培養することを含む、ＣＤ３６（例えば、ヒトＣＤ３６）に免疫特異的に結合する抗体を作製する方法が本明細書に提供される。或る特定の態様では、本明細書に記載の細胞又は宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含む細胞又は宿主細胞）を使用して抗体を発現させる（例えば、組換え発現させる）ことを含む、ＣＤ３６（例えば、ヒトＣＤ３６）に免疫特異的に結合する抗体を作製する方法が本明細書に提供される。特定の実施形態において、細胞は単離された細胞である。特定の実施形態において、外因性ポリヌクレオチドが細胞に導入されている。特定の実施形態において、この方法は、細胞又は宿主細胞から得られた抗体を精製する工程を更に含む。

医薬組成物
生理学的に許容され得る担体、賦形剤又は安定剤（Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA）中に所望の純度を有する本明細書に記載の抗ＣＤ３６抗体を含む組成物が本明細書に提供される。許容され得る担体、賦形剤、又は安定剤は、採用される投与量及び濃度でレシピエントに対して無毒である。

様々な実施形態において、抗ＣＤ３６抗体を含む組成物は、薬学的に許容され得る担体を含む製剤で提供される（例えば、Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003)、Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004)、Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000)を参照されたい）。

本明細書に記載の医薬組成物は、ＣＤ３６活性を遮断するのに有用であり得る。本明細書に記載の医薬組成物は、癌等の病態を治療するのに有用であり得る。本明細書に記載の方法に従って治療することができる癌の例としては、限定されるものではないが、固形癌及びその転移が挙げられる。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫の治療に有用となり得る。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫から発生した転移の治療に有用となり得る。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の医薬組成物は、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫の原発性腫瘍及びそれから発生した転移の治療に有用となり得る。

本明細書に記載の医薬組成物は、一実施形態において、医薬品として使用するためのものである。本明細書に記載の医薬組成物は、一実施形態において、例えば患者（例えば、ヒト患者）から得られた試料中のＣＤ３６の存在を検出するための診断として使用するためのものである。

ｉｎｖｉｖｏ投与に使用される組成物は無菌であり得る。これは、例えば滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成される。

幾つかの実施形態において、医薬組成物は、単離抗体を含む。幾つかの実施形態において、医薬組成物は、他の抗体を実質的に含まない。幾つかの実施形態において、医薬組成物は、ＯＮＡ－０－ｖ２抗体を実質的に含まない。

幾つかの実施形態において、本明細書に記載の抗ＣＤ３６抗体と薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物が提供される。幾つかの実施形態において、本明細書に記載の脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体と薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物が提供される。

具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも８０％が脱フコシル化されている。グリカン部分のフコース含量が減少したＦｃ領域を有する抗体は、例えばＦｃγＲＩＩＩＡ等のＦｃ受容体に対する親和性が増加するため、完全にフコシル化された抗体と比較してより高いＡＤＣＣ活性を示し得る（Niwa R et al., Clinical Cancer Research 11(6):2327-36 (2005)）。幾つかの実施形態において、ＣＤ３６抗体は、同じアミノ酸配列を有するフコシル化ＣＤ３６抗体と比較して、ｉｎｖｉｔｒｏで増強されたＡＤＣＣ活性を有する。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも５０％が脱フコシル化されている。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも６０％が脱フコシル化されている。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも７０％が脱フコシル化されている。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも８０％が脱フコシル化されている。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも８５％が脱フコシル化されている。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９０％が脱フコシル化されている。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９５％が脱フコシル化されている。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９６％が脱フコシル化されている。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９７％が脱フコシル化されている。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９８％が脱フコシル化されている。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、例えば、組成物中の抗体の少なくとも９９％が脱フコシル化されている。具体的な実施形態において、かかる医薬組成物は、脱フコシル化抗ＣＤ３６抗体を含み、フコースが組成物中で検出されない。

本開示の方法
幾つかの実施形態において、本発明は、抗ＣＤ３６抗体と第二療法との組合せを使用して哺乳動物の癌を治療する方法を提供する。幾つかの実施形態において、癌は、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、及びリンパ腫からなる群より選択される。実施形態において、癌は口腔扁平上皮癌である。幾つかの実施形態において、癌は卵巣癌である。他の実施形態において、癌は黒色腫である。更なる実施形態において、癌は、本明細書に開示される任意の癌である。幾つかの実施形態において、癌は転移性癌である。幾つかの実施形態において、癌は、原発性腫瘍及び転移性癌の両方である。幾つかの実施形態において、哺乳動物はヒトである。

幾つかの実施形態において、抗ＣＤ３６抗体は、全長抗体、単鎖抗体、又はｓｃＦｖ、Ｆａｂ、若しくはＦ（ａｂ’）_２フラグメントである。１つの実施形態において、ＣＤ３６阻害剤は、抗体である。或る実施形態において、ＣＤ３６阻害剤は、ヒト化抗体である。或る特定の実施形態において、ＣＤ３６阻害剤は、本明細書に開示される抗体である。或る特定の実施形態において、ＣＤ３６阻害剤は、抗体ＪＣ６３．１等の市販の抗ＣＤ３６抗体である。一実施形態において、ＣＤ３６阻害剤は、ｓｈＲＮＡ若しくはｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はアンチセンスＲＮＡ若しくはアンチセンスＤＮＡである。

幾つかの実施形態において、第二療法は、免疫療法である。１つの実施形態において、免疫療法は、ＰＤ－１阻害剤である。或る実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体である。１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブ（キイトルーダ；ＭＫ－３４７５）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、又はニボルマブ（オプジーボ；ＢＭＳ－９３６５５８）である。或る実施形態において、免疫療法は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤である。１つの実施形態において、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。或る実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（テセントリク又はＲＧ７４４６）、デュルバルマブ（イミフィンジ又はＭＥＤＩ４７３６）、アベルマブ（バベンチオ）、又はＢＭＳ－９３６５５９である。１つの実施形態において、免疫療法は、ＣＴＬＡ－４阻害剤である。或る実施形態において、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体である。１つの実施形態において、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ又はその抗原結合フラグメントである。

１つの実施形態において、第二療法は、化学療法薬である。或る実施形態において、化学療法薬は、シスプラチンである。或る特定の実施形態において、化学療法薬は、表５に列挙する抗癌剤又は抗癌剤の組合せのうちの１種を含む。

幾つかの実施形態において、本発明は、ＣＤ３６阻害剤と抗ＰＤ－１抗体との組合せを用いて、哺乳類において癌を治療する方法を提供する。幾つかの実施形態において、癌は、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、及びリンパ腫からなる群より選択される。幾つかの実施形態において、癌は、口腔扁平上皮癌である。幾つかの実施形態において、癌は、卵巣癌である。他の実施形態において、癌は、黒色腫である。更なる実施形態において、癌は、本明細書中において開示される癌のいずれか他のものである。１つの実施形態において、癌は、転移性癌である。幾つかの実施形態において、癌は、原発性腫瘍及び転移性癌の両方である。実施形態において、ＣＤ３６阻害剤は、抗体、単鎖抗体、又はｓｃＦｖ、Ｆａｂ、若しくはＦ（ａｂ’）_２フラグメントである。１つの実施形態において、ＣＤ３６阻害剤は、抗体である。１つの実施形態において、ＣＤ３６阻害剤は、ヒト化抗体である。或る特定の実施形態において、ＣＤ３６阻害剤は、本明細書に開示される抗体である。或る特定の実施形態において、ＣＤ３６阻害剤は、抗体ＪＣ６３．１等の市販の抗ＣＤ３６抗体である。１つの実施形態において、ＣＤ３６阻害剤は、ｓｈＲＮＡ若しくはｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はアンチセンスＲＮＡ若しくはアンチセンスＤＮＡである。１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブ（キイトルーダ；ＭＫ－３４７５）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、又はニボルマブ（オプジーボ；ＢＭＳ－９３６５５８）である。

本発明の方法を用いて治療される可能性のある癌及び／又は悪性腫瘍の例として、肝臓癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、骨癌、膵癌、皮膚癌、口腔癌、頭頸部癌、乳癌、肺癌、小細胞肺癌、ＮＳＣＬＣ、皮膚若しくは眼内悪性黒色腫、メルケル細胞癌（ＭＣＣ）、皮膚扁平上皮癌（ｃＳＣＣ）、腎癌、子宮癌、卵巣癌、結腸直腸癌、結腸癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸部癌、膣癌、外陰部癌、頭頸部扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児固形腫瘍、リンパ性リンパ腫、膀胱癌、尿路上皮癌、腎臓又は尿管癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平細胞癌、アスベストにより誘発されたものをはじめとする環境誘発性癌、血液悪性腫瘍（これには、例えば、多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫／原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性リンパ腫、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、菌状息肉症、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、及び前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫が含まれる）、及び上記癌の任意の組合せが挙げられる。本発明は、転移性癌の治療にも適用可能である。実施形態において、癌は、口腔扁平上皮癌である。幾つかの実施形態において、癌は、卵巣癌である。他の実施形態において、癌は、黒色腫である。

実施形態において、抗体は、例えば腹腔内等で全身に投与することができ、適切な懸濁液、例えば水、又は生理食塩水等のその他の適切な液体中の水性懸濁液の形態であり得る。

抗体を投与する場合、投与量は、宿主の体重当たり約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、より一般的には０．０１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、投与量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重若しくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、又は１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な治療レジメンは、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、１ヶ月に１回、３ヶ月に１回、又は３ヶ月～６ヶ月に１回の投与を伴う。或る特定の実施形態において、抗体は、一定用量又は固定用量で投与される。実施形態において、抗体は、当該技術分野で抗体について説明されている任意の投与量で投与される。

抗ＰＤ－１抗体及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体
本明細書で使用される場合、「プログラムされた死１」、「プログラム細胞死１」、「タンパク質ＰＤ－１」、「ＰＤ－１」、「ＰＤ１」、「ＰＤＣＤ１」、「ｈＰＤ－１」及び「ｈＰＤ－１」は同じ意味で使用され、ヒトＰＤ－１のバリアント、アイソフォーム、種相同体、及びＰＤ－１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類縁体を含む。完全なＰＤ－１配列は、GenBankアクセッション番号Ｕ６４８６３に見ることができる。

プログラム細胞死（ＰＤ－１）は、Ｔ細胞の活性化及び寛容の調節において重要な役割を果たす細胞表面シグナル伝達受容体である（Keir M.E., et al., Annu. Rev. Immunol. 2008; 26:677-704）。ＰＤ－１はＩ型膜貫通タンパク質であり、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、及びＣＤ２８と共に、Ｔ細胞共刺激受容体のＣＤ２８ファミリーを構成する。ＰＤ－１は主に、活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、及び骨髄細胞で発現される（Dong H., et al., Nat. Med. 1999; 5:1365-1369、Agata et al.,（同上）、Okazaki et al. (2002) Curr. Opin. Immunol. 14:391779-82、Bennett et al. (2003) J Immunol 170:711-8）。ＰＤ－１は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞でも発現される（Terme M., et al., Cancer Res. 2011; 71:5393-5399）。ＰＤ－１とそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２との結合により、近位細胞内免疫受容体チロシン阻害ドメインのチロシン残基がリン酸化され、続いてホスファターゼＳＨＰ－２が動員され、最終的にＴ細胞活性化の下方制御が起こる。ＰＤ－１の重要な役割の１つは、感染に対する炎症反応時に末梢組織のＴ細胞の活性を制限し、自己免疫の発達を制限することである（Pardoll D.M., Nat. Rev. Cancer 2012; 12:252-264）。この負の調節的役割の証拠は、ＰＤ－１欠損マウスが心筋症と共に関節炎及び腎炎を含む狼瘡様自己免疫疾患を発症するという知見に由来する（Nishimura H., et al., Immunity, 1999; 11:141-151、及びNishimura H., et al., Science, 2001; 291:319-322）。腫瘍環境では、その結果、腫瘍微小環境内で免疫抵抗が発達する。ＰＤ－１は腫瘍浸潤リンパ球で高度に発現され、そのリガンドは多くの異なる腫瘍の細胞表面で上方制御される（Dong H., et al., Nat. Med. 2002; 8:793-800）。複数のマウス癌モデルが、ＰＤ－１へのリガンドの結合が免疫回避をもたらすことを実証している。さらに、この相互作用の遮断は、抗腫瘍活性をもたらす（Topalian S.L., et al. NEJM 2012; 366(26):2443-2454、Hamid O., et al., NEJM 2013; 369:134-144）。さらに、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の阻害は、前臨床モデルで強力な抗腫瘍活性を媒介することが示されている（米国特許第８，００８，４４９号及び同第７，９４３，７４３号）。

このＰＤ－１ファミリーの初期メンバーであるＣＤ２８及びＩＣＯＳは、モノクローナル抗体の添加に続くＴ細胞増殖の増大に対する機能的効果により発見された（Hutloff et al. Nature (1999); 397:263-266、Hansen et al. Immunogenics (1980); 10:247-260）。ＰＤ－１は、アポトーシス細胞における示差的発現のスクリーニングを通じて発見された（Ishida et al. EMBO J (1992); 11:3887-95）。このファミリーの他のメンバーであるＣＴＬＡ－４及びＢＴＬＡは、それぞれ、細胞傷害性Ｔリンパ球及びＴＨ１細胞における示差的発現のスクリーニングを通じて発見された。ＣＤ２８、ＩＣＯＳ、及びＣＴＬＡ－４は全て、対形成していないシステイン残基を有し、これがホモ二量体化を可能にする。対照的に、ＰＤ－１は、他のＣＤ２８ファミリーメンバーの特徴である対形成していないシステイン残基を欠いており、単量体として存在することが示唆されている。

ＰＤ－１遺伝子は、Ｉｇ遺伝子スーパーファミリーの一部である５５ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である（Agata et al. (1996) Int Immunol 8:765-72）。ＰＤ－１は、膜近位免疫受容体チロシン抑制性モチーフ（ＩＴＩＭ）及び膜遠位チロシン依存性スイッチモチーフ（ＩＴＳＭ：tyrosine-based switch motif）を有する（Thomas, M. L. (1995) J Exp Med 181:1953-6、Vivier, E and Daeron, M (1997) Immunol Today 18:286-91）。ＣＴＬＡ－４と構造的に類似しているものの、ＰＤ－１には、Ｂ７－１及びＢ７－２結合に極めて重要であるＭＹＰＰＰＹモチーフ（配列番号３６）が欠けている。ＰＤ－１のリガンドは２種同定されており、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２であるが、これらは、ＰＤ－１との結合に際して、Ｔ細胞活性化を下方制御することが示されている（Freeman et al. (2000) J Exp Med 192:1027-34、Latchman et al. (2001) Nat Immunol 2:261-8、Carter et al. (2002) Eur J Immunol 32:634-43）。ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２は両方とも、ＰＤ－１と結合するＢ７ホモログであるが、他のＣＤ２８ファミリーメンバーとは結合しない。ＰＤ－Ｌ１は、様々なヒト癌に豊富に存在する（Dong et al. (2002) Nat. Med. 8:787-9）。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との間の相互作用は、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体介在型増殖の減少、及び癌性細胞による免疫回避をもたらす（Dong et al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7、Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314、Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100）。ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との局所相互作用を阻害することにより免疫抑制を反転させることができ、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２との相互作用も同様に遮断した場合、効果は相加的である（Iwai et al. (2002) Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 99:12293-7、Brown et al. (2003) J. Immunol. 170:1257-66）。

ＰＤ－１がＣＤ２８ファミリーの抑制性メンバーであることと一致して、ＰＤ－１欠損動物は、様々な自己免疫表現型を発生させ、そのような表現型として、自己免疫心筋症並びに関節炎及び腎炎を伴うループス様症候群が挙げられる（Nishimura et al. (1999) Immunity 11:141-51、Nishimura et al. (2001) Science 291:319-22）。さらに、ＰＤ－１は、自己免疫性脳脊髄炎、全身性エリテマトーデス、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、Ｉ型糖尿病、及び関節リウマチにおいて役割を果たしていることが見つかっている（Salama et al. (2003) J Exp Med 198:71-78、Prokunina and Alarcon-Riquelme (2004) Hum Mol Genet 13:R143、Nielsen et al. (2004) Lupus 13:510）。マウスＢ細胞腫瘍株において、ＰＤ－１のＩＴＳＭは、ＢＣＲ介在型Ｃａ^２＋流及び下流エフェクター分子のチロシンリン酸化を遮断するのに必須であることが示された（Okazaki et al. (2001) PNAS 98:13866-71）。

「プログラム死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）」は、ＰＤ－１の２つの細胞表面糖タンパク質リガンドのうちの１つ（もう１つはＰＤ－Ｌ２）であり、これは、ＰＤ－１との結合に際して、Ｔ細胞活性化及びサイトカイン分泌を下方制御する。「ＰＤ－Ｌ１」という用語には、本明細書中において使用される場合、ヒトＰＤ－Ｌ１（ｈＰＤ－Ｌ１）、ｈＰＤ－Ｌ１のバリアント、アイソフォーム、及び種ホモログ、及びｈＰＤ－Ｌ１と共通するエピトープを少なくとも１つ有するアナログが含まれる。完全ｈＰＤ－Ｌ１配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号第Ｑ９ＮＺＱ７号で見つけることができる。

本発明の幾つかの実施形態は、抗ＰＤ－１抗体、又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体と抗ＣＤ３６抗体との組合せを含む。ＰＤ－１は、活性化Ｔ細胞及びＢ細胞により発現する重要な免疫チェックポイント受容体であり、免疫抑制に介在する。ＰＤ－１は、受容体のＣＤ２８ファミリーのメンバーであり、このファミリーには、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、ＰＤ－１、及びＢＴＬＡが含まれる。ＰＤ－１の細胞表面糖タンパク質リガンドは２種が同定されていて、プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）及びプログラム死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）であるが、これらは、抗原提示細胞及び多くのヒト癌で発現し、これらは、ＰＤ－１との結合に際して、Ｔ細胞活性化及びサイトカイン分泌を下方制御することが示されている。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用の阻害は、前臨床モデルにおいて、強力な抗腫瘍活性に介在している。

高い親和性でＰＤ－１と特異的に結合するヒトモノクローナル抗体（ＨｕＭＡｂ）が、米国特許第８，００８，４４９号及び同第８，７７９，１０５号に開示されている。他の抗ＰＤ－１ｍＡｂは、例えば、米国特許第６，８０８，７１０号、同第７，４８８，８０２号、同第８，１６８，７５７号、及び同第８，３５４，５０９号、並びにＰＣＴ公開番号である国際公開第２０１２／１４５４９３号及び国際公開第２０１６／１６８７１６号に開示されている。米国特許第８，００８，４４９号に開示される抗ＰＤ－１ＨｕＭＡｂはそれぞれが、以下の特徴のうち１つ以上を示すことが実証されている：（ａ）Ｂｉａｃｏｒｅバイオセンサーシステムを用いて表面プラズモン共鳴法により特定した場合に、１×１０^－７Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＰＤ－１に結合する；（ｂ）ヒトＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、又はＩＣＯＳとは実質的に結合しない；（ｃ）混合リンパ球培養反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖を増加させる；（ｄ）ＭＬＲアッセイにおいてインターフェロン－γ産生を増加させる；（ｅ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２分泌を増加させる；（ｆ）ヒトＰＤ－１及びカニクイザルＰＤ－１に結合する；（ｇ）ＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２がＰＤ－１に結合するのを阻害する；（ｈ）抗原特異的記憶反応を刺激する；（ｉ）Ａｂ反応を刺激する；並びに（ｊ）ｉｎｖｉｖｏで腫瘍細胞増殖を阻害する。本発明に有用な抗ＰＤ－１抗体には、ヒトＰＤ－１に特異的に結合し、前述の特徴のうち少なくとも１つ、好ましくは少なくとも５つを示すｍＡｂが含まれる。

本発明での使用に適切な抗ヒトＰＤ－１抗体（又はそれらに由来するＶＨ及び／又はＶＬドメイン）は、当該技術分野で既知である方法を用いて生成可能である。あるいは、当該技術分野で認められた抗ＰＤ－１抗体が使用可能である。例えば、モノクローナル抗体の５Ｃ４（本明細書中においてニボルマブ又はＢＭＳ－９３６５５８と称する）、１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、４Ａ１１、７Ｄ３、及び５Ｆ４が使用可能である。これらモノクローナル抗体は、国際公開第２００６／１２１１６８号に記載されており、その文献の教示は引用することにより本明細書の一部をなす。他の既知ＰＤ－１抗体として、国際公開第２００８／１５６７１２号に記載のランブロリズマブ（ＭＫ－３４７５）、及び国際公開第２０１２／１４５４９３号に記載のＡＭＰ－５１４が挙げられる。更なる既知抗ＰＤ－１抗体及び他のＰＤ－１阻害剤として、国際公開第２００９／０１４７０８号、国際公開第０３／０９９１９６号、国際公開第２００９／１１４３３５号、及び国際公開第２０１１／１６１６９９号に記載のものが挙げられる。別の既知抗ＰＤ－１抗体として、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）がある。ＰＤ－１との結合に関してこれらの抗体又は阻害剤のいずれかと競合する抗体も、使用可能である。

１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。ニボルマブ（別名「オプジーボ（商標）」；ＢＭＳ－９３６５５８；以前は５Ｃ４、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、又はＯＮＯ－４５３８と称する）は、ＰＤ－１リガンド（ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２）との相互作用を選択的に阻止し、それにより抗腫瘍性Ｔ細胞機能の下方制御を遮断する、完全ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ＰＤ－１免疫チェックポイント阻害剤抗体である（米国特許第８，００８，４４９号、Wang et al., 2014 Cancer Immunol Res. 2(9):846-56）。別の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体又はそのフラグメントは、ニボルマブと交差競合する。他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体又はそのフラグメントは、ニボルマブと同じエピトープに結合する。或る特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブと同じＣＤＲを有する。

別の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブである。ペムブロリズマブは、ヒト細胞表面受容体ＰＤ－１（プログラム死１又はプログラム細胞死１）に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）抗体である。ペムブロリズマブは、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号及び同第８，９００，５８７号に記載されている。

別の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブと交差競合する。幾つかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブと同じエピトープに結合する。或る特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブと同じＣＤＲを有する。別の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブである。ペムブロリズマブ（別名「キイトルーダ（商標）」、ランブロリズマブ、及びＭＫ－３４７５）は、ヒト細胞表面受容体ＰＤ－１（プログラム死１又はプログラム細胞死１）に対するヒト化モノクローナルＩｇＧ４抗体である。ペムブロリズマブは、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号及び同第８，９００，５８７号に記載されている。同じく、http://www.cancer.gov/drugdictionary?cdrid=695789（最終アクセス：２０１７年５月２５日）も参照。ペムブロリズマブは、ＦＤＡにより、再発又は難治性黒色腫の治療に承認されている。

他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＭＥＤＩ０６０８と交差競合する。更に他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＭＥＤＩ０６０８と同じエピトープに結合する。或る特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＭＥＤＩ０６０８と同じＣＤＲを有する。他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＭＥＤＩ０６０８（以前のＡＭＰ－５１４）であり、これは、モノクローナル抗体である。ＭＥＤＩ０６０８は、例えば、米国特許第８，６０９，０８９号又はhttp://www.cancer.gov/drugdictionary?cdrid=756047（最終アクセス：２０１７年５月２５日）に記載されている。

他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＢＧＢ－Ａ３１７と交差競合する。幾つかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＢＧＢ－Ａ３１７と同じエピトープに結合する。或る特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＢＧＢ－Ａ３１７と同じＣＤＲを有する。或る特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＢＧＢ－Ａ３１７であり、これは、ヒト化モノクローナル抗体である。ＢＧＢ－Ａ３１７は、米国特許出願公開第２０１５／００７９１０９号に記載されている。

本開示の組成物に有用な抗ＰＤ－１抗体として、ヒトＰＤ－１に特異的に結合し、ヒトＰＤ－１との結合に関してニボルマブと交差競合する単離抗体も挙げられる（例えば、米国特許第８，００８，４４９号及び同第８，７７９，１０５号、国際公開第２０１３／１７３２２３号を参照）。抗原との結合に関して交差競合する抗体の能力は、上記抗体が、その抗原の同一エピトープ領域に結合し、その特定エピトープ領域に対する他の交差競合する抗体の結合を立体的に妨害することを示す。こうした交差競合する抗体は、ＰＤ－１の同一エピトープ領域に対するそれらの結合のおかげで、ニボルマブのものと類似した機能特性を有することが予想される。交差競合する抗体は、標準ＰＤ－１結合アッセイ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、又はフローサイトメトリー等で、ニボルマブと交差競合する能力に基づいて、容易に同定することが可能である（例えば、国際公開第２０１３／１７３２２３号を参照）。

或る特定の実施形態において、ヒトＰＤ－１との結合に関してニボルマブと交差競合する、すなわちニボルマブと同じヒトＰＤ－１のエピトープ領域に結合する抗体は、ｍＡｂである。ヒト対象に投与する場合、こうした交差競合する抗体は、キメラ抗体、又はヒト化若しくはヒト抗体が可能である。そのようなキメラ、ヒト化、又はヒトｍＡｂは、当該技術分野で既知である方法により、調製及び単離が可能である。

本開示の発明の組成物に有用な抗ＰＤ－１抗体には、上記抗体の抗原結合部分も含まれる。抗体の抗原結合機能が全長抗体のフラグメントにより発揮可能であることは、十分に実証されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合フラグメントの例として、以下が挙げられる：（ｉ）Ｆａｂフラグメント、すなわちＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメイン、及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、すなわちヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；並びに（ｉｖ）抗体の単一腕のＶＬドメイン及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント。

本開示の発明の組成物に使用するのに適切な抗ＰＤ－１抗体は、高い特異性及び親和性でＰＤ－１に結合し、ＰＤ－Ｌ１及び／又はＰＤ－Ｌ２の結合を遮断し、ＰＤ－１シグナル伝達経路の免疫抑制効果を阻害する、抗体である。本明細書中において開示される組成物又は方法のいずれにおいても、抗ＰＤ－１「抗体」は、ＰＤ－１受容体に結合し、リガンド結合阻害及び免疫系の上方制御について全抗体のものと類似した機能特性を示す、抗原結合部分又はフラグメントを含む。或る特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ヒトＰＤ－１との結合に関してニボルマブと交差競合する。他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、キメラ、ヒト化、若しくはヒトモノクローナル抗体、又はその一部分である。或る特定の実施形態において、抗体は、ヒト化抗体である。他の実施形態において、抗体は、ヒト抗体である。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプの抗体が、使用可能である。

或る特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４アイソタイプのものである重鎖定常領域を含む。或る特定の他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体のＩｇＧ４重鎖定常領域の配列は、ヒンジ領域のセリン残基がプロリン残基に置き換わったＳ２２８Ｐ変異を有し、これは、通常、ＩｇＧ１アイソタイプ抗体の該当する位置で見られる。この変異は、ニボルマブに存在するものであるが、野生型ＩｇＧ４抗体に付随するＦｃ受容体の活性化に関して低い親和性を維持したまま、内在ＩｇＧ４抗体とのＦａｂ腕交換（Fab arm exchange）を阻止する（Wang et al., 2014）。更に他の実施形態において、抗体は、ヒトカッパ又はラムダ定常領域である軽鎖定常領域を含む。他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ｍＡｂ又はその抗原結合部分である。抗ＰＤ－１抗体の投与を含む本明細書中において記載される治療法のいずれかについての或る特定の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブである。他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブである。他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、米国特許第８，００８，４４９号に記載されるヒト抗体１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、４Ａ１１、７Ｄ３、及び５Ｆ４から選択される。更に他の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＭＥＤＩ０６０８（以前のＡＭＰ－５１４）、ＡＭＰ－２２４、又はピジリズマブ（ＣＴ－０１１）である。他の既知ＰＤ－１抗体として、例えば、国際公開第２００８／１５６７１２号に記載されるランブロリズマブ（ＭＫ－３４７５）、及び例えば、国際公開第２０１２／１４５４９３号に記載されるＡＭＰ－５１４が挙げられる。更なる既知抗ＰＤ－１抗体及び他のＰＤ－１阻害剤として、例えば、国際公開第２００９／０１４７０８号、国際公開第０３／０９９１９６号、国際公開第２００９／１１４３３５号、及び国際公開第２０１１／１６１６９９号に記載されるものが挙げられる。１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＲＥＧＮ２８１０である。１つの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤＲ００１である。別の既知抗ＰＤ－１抗体は、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）である。上記参照のそれぞれが、引用することにより本明細書の一部をなす。ＰＤ－１との結合に関してこれら抗体又は阻害剤のいずれかと競合する抗体もまた、使用可能である。

他の抗ＰＤ－１モノクローナル抗体は、例えば、米国特許第６，８０８，７１０号、同第７，４８８，８０２号、同第８，１６８，７５７号、及び同第８，３５４，５０９号、米国特許出願公開第２０１６／０２７２７０８号、並びにＰＣＴ公開番号である国際公開第２０１２／１４５４９３号、国際公開第２００８／１５６７１２号、国際公開第２０１５／１１２９００号、国際公開第２０１２／１４５４９３号、国際公開第２０１５／１１２８００号、国際公開第２０１４／２０６１０７号、国際公開第２０１５／３５６０６号、国際公開第２０１５／０８５８４７号、国際公開第２０１４／１７９６６４号、国際公開第２０１７／０２０２９１号、国際公開第２０１７／０２０８５８号、国際公開第２０１６／１９７３６７号、国際公開第２０１７／０２４５１５号、国際公開第２０１７／０２５０５１号、国際公開第２０１７／１２３５５７号、国際公開第２０１６／１０６１５９号、国際公開第２０１４／１９４３０２号、国際公開第２０１７／０４０７９０号、国際公開第２０１７／１３３５４０号、国際公開第２０１７／１３２８２７号、国際公開第２０１７／０２４４６５号、国際公開第２０１７／０２５０１６号、国際公開第２０１７／１０６０６１号、国際公開第２０１７／１９８４６号、国際公開第２０１７／０２４４６５号、国際公開第２０１７／０２５０１６号、国際公開第２０１７／１３２８２５号、及び国際公開第２０１７／１３３５４０号に記載されており、これらはそれぞれ、引用することにより本明細書の一部をなす。

幾つかの実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、以下からなる群より選択される：ニボルマブ（別名オプジーボ（商標）、５Ｃ４、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、及びＯＮＯ－４５３８）、ペムブロリズマブ（Merck；別名キイトルーダ（商標）、ランブロリズマブ、及びＭＫ－３４７５；国際公開第２００８／１５６７１２号を参照）、ＰＤＲ００１（Novartis；国際公開第２０１５／１１２９００号を参照）、ＭＥＤＩ－０６８０（AstraZeneca；別名ＡＭＰ－５１４；国際公開第２０１２／１４５４９３号を参照）、セミプリマブ（Regeneron；別名ＲＥＧＮ－２８１０；国際公開第２０１５／１１２８００号を参照）、ＪＳ００１（TAIZHOU JUNSHI PHARMA；Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)を参照）、ＢＧＢ－Ａ３１７（Beigene；国際公開第２０１５／３５６０６号及び米国特許出願公開第２０１５／００７９１０９号を参照）、ＩＮＣＳＨＲ１２１０（Jiangsu Hengrui Medicine；別名ＳＨＲ－１２１０；国際公開第２０１５／０８５８４７号、Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)を参照）、ＴＳＲ－０４２（Tesaro Biopharmaceutical；別名ＡＮＢ０１１；国際公開第２０１４／１７９６６４号を参照）、ＧＬＳ－０１０（Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals；別名ＷＢＰ３０５５；Si-Yang Liu et al., J. Hematol. Oncol. 10:136 (2017)を参照）、ＡＭ－０００１（Armo）、ＳＴＩ－１１１０（Sorrento Therapeutics；国際公開第２０１４／１９４３０２号を参照）、ＡＧＥＮ２０３４（Agenus；国際公開第２０１７／０４０７９０号を参照）、ＭＧＡ０１２（Macrogenics、国際公開第２０１７／１９８４６号を参照）、並びにＩＢＩ３０８（Innovent；国際公開第２０１７／０２４４６５号、国際公開第２０１７／０２５０１６号、国際公開第２０１７／１３２８２５号、及び国際公開第２０１７／１３３５４０号を参照）。上記参照はそれぞれが、引用することにより本明細書の一部をなす。

実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、二重特異性抗体である。実施形態において、第二療法は、ＰＤ－１阻害剤である。実施形態において、ＰＤ－１阻害剤は、小分子である。

抗ＰＤ－１抗体及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、同じシグナル伝達経路を標的とし、臨床試験において、様々な癌で同様なレベルの有効性を示してきているため、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書中において開示される治療法又は組成物のいずれかにおいて、抗ＰＤ－１抗体と置き換えることが可能である。

本発明で使用するのに適した抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体（又はそれらに由来するＶＨドメイン及び／又はＶＬドメイン）は、当該技術分野で既知である方法を用いて生成可能である。あるいは、当該技術分野で認められた抗ＰＤ－Ｌ１抗体が使用可能である。例えば、米国特許第７，９４３，７４３号に開示されるヒト抗ＰＤ－Ｌ１抗体が使用可能であり、その文献の内容は引用することにより本明細書の一部をなす。そのような抗ＰＤ－Ｌ１抗体として、３Ｇ１０、１２Ａ４（ＢＭＳ－９３６５５９とも称する）、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７、及び１３Ｇ４が挙げられる。使用可能な他の当該技術分野で認められた抗ＰＤ－Ｌ１抗体として、例えば、米国特許第７，６３５，７５７号及び同第８，２１７，１４９号、米国特許出願公開第２００９／０３１７３６８号、並びにＰＣＴ公開番号である国際公開第２０１１／０６６３８９号及び国際公開第２０１２／１４５４９３号に記載されるものが挙げられ、これらはそれぞれ、引用することにより本明細書の一部をなす。抗ＰＤ－Ｌ１抗体の他の例として、アテゾリズマブ（テセントリク；ＲＧ７４４６）、又はデュルバルマブ（イミフィンジ；ＭＥＤＩ４７３６）が挙げられる。ＰＤ－Ｌ１との結合に関してこれら当該技術分野で認められた抗体又は阻害剤のいずれかと競合する抗体も、使用可能である。

本開示の方法で有用な抗ＰＤ－Ｌ１抗体の例として、米国特許第９，５８０，５０７号に開示される抗体が挙げられ、その文献は引用することにより本明細書の一部をなす。米国特許第９，５８０，５０７号に開示される抗ＰＤ－Ｌ１ヒトモノクローナル抗体は、以下の特徴のうち１つ以上を示すことが実証されている：（ａ）Ｂｉａｃｏｒｅバイオセンサーシステムを用いて表面プラズモン共鳴法により特定した場合に、１×１０^－７Ｍ以下のＫ_ＤでヒトＰＤ－Ｌ１と結合する；（ｂ）混合リンパ球培養反応（ＭＬＲ）アッセイにおいてＴ細胞増殖を増加させる；（ｃ）ＭＬＲアッセイにおいてインターフェロン－γ産生を増加させる；（ｄ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ－２分泌を増加させる；（ｅ）抗体反応を刺激する；並びに（ｆ）Ｔ細胞エフェクター細胞及び／又は樹状細胞に対する制御性Ｔ細胞の効果を反転させる。本発明に使用可能な抗ＰＤ－Ｌ１抗体には、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、前述の特徴のうち少なくとも１つ、幾つかの実施形態において、少なくとも５つを示すモノクローナル抗体が含まれる。

或る特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９（以前の１２Ａ４又はＭＤＸ－１１０５）である（例えば、米国特許第７，９４３，７４３号、国際公開第２０１３／１７３２２３号を参照）。他の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（別名ＲＧ７４４６及びアテゾリズマブ）（例えば、Herbst et al. 2013 J Clin Oncol 31(suppl):3000、米国特許第８，２１７，１４９号を参照）、ＭＥＤＩ４７３６（Khleif, 2013, In: Proceedings from the European Cancer Congress 2013; September 27-October 1, 2013; Amsterdam, The Netherlands. Abstract 802）、又はＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブとも呼ばれる；米国特許出願公開第２０１４／０３４１９１７号を参照）である。或る特定の実施形態において、ヒトＰＤ－Ｌ１との結合に関して上記参照ＰＤ－Ｌ１抗体と交差競合する、すなわち上記参照ＰＤ－Ｌ１抗体と同じヒトＰＤ－Ｌ１のエピトープ領域に結合する抗体は、ｍＡｂである。ヒト対象に投与する場合、こうした交差競合する抗体は、キメラ抗体が可能である、又はヒト化若しくはヒト抗体が可能である。そのようなキメラ、ヒト化、又はヒトｍＡｂは、当該技術分野で既知である方法により、調製及び単離が可能である。或る特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、以下からなる群より選択される：ＢＭＳ－９３６５５９（別名１２Ａ４、ＭＤＸ－１１０５；例えば、米国特許第７，９４３，７４３号及び国際公開第２０１３／１７３２２３号を参照）、アテゾリズマブ（Roche；別名テセントリク（商標）；ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＲＧ７４４６；米国特許第８，２１７，１４９号を参照；同じくHerbst et al. (2013) J Clin Oncol 31(suppl):3000を参照）、デュルバルマブ（AstraZeneca；別名イミフィンジ（商標）、ＭＥＤＩ－４７３６；例えば、国際公開第２０１１／０６６３８９号を参照）、アベルマブ（Pfizer；別名バベンチオ（商標）、ＭＳＢ－００１０７１８Ｃ；例えば、国際公開第２０１３／０７９１７４号を参照）、ＳＴＩ－１０１４（Sorrento；例えば、国際公開第２０１３／１８１６３４号を参照）、ＣＸ－０７２（Cytomx；例えば、国際公開第２０１６／１４９２０１号を参照）、ＫＮ０３５（3D Med/Alphamab；Zhang et al., Cell Discov. 7:3 (March 2017)を参照）、ＬＹ３３０００５４（Eli Lilly Co.；例えば、国際公開第２０１７／０３４９１６号を参照）、並びにＣＫ－３０１（Checkpoint Therapeutics；Gorelik et al., AACR:Abstract 4606 (Apr 2016)を参照）。上記参照は、引用することにより本明細書の一部をなす。

或る特定の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（テセントリク（商標））である。アテゾリズマブは、完全ヒト化ＩｇＧ１モノクローナル抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

或る特定の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ（イミフィンジ（商標））である。デュルバルマブは、ヒトＩｇＧ１カッパモノクローナル抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

或る特定の実施形態において、ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブ（バベンチオ（商標））である。アベルマブは、ヒトＩｇＧ１ラムダモノクローナル抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

他の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体は、２８－８、２８－１、２８－１２、２９－８、５Ｈ１、及びそれらの任意の組合せからなる群より選択される。

本開示の方法に使用可能な抗ＰＤ－Ｌ１抗体には、ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ヒトＰＤ－Ｌ１との結合に関して、本明細書中において開示されるいずれかの抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、及び／又はアベルマブと交差競合する、単離抗体も含まれる。幾つかの実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、本明細書中において記載される抗ＰＤ－Ｌ１抗体のいずれか、例えば、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、及び／又はアベルマブと同じエピトープに結合する。抗原との結合に関して交差競合する抗体の能力は、上記抗体が、その抗原の同一エピトープ領域に結合し、その特定エピトープ領域に対する他の交差競合する抗体の結合を立体的に妨害することを示す。こうした交差競合する抗体は、ＰＤ－Ｌ１の同一エピトープ領域に対するそれらの結合のおかげで、参照抗体、例えば、アテゾリズマブ及び／又はアベルマブのものと類似した機能特性を有することが予想される。交差競合する抗体は、標準ＰＤ－Ｌ１結合アッセイ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、又はフローサイトメトリー等で、アテゾリズマブ及び／又はアベルマブと交差競合する能力に基づいて、容易に同定することが可能である（例えば、国際公開第２０１３／１７３２２３号を参照）。

或る特定の実施形態において、ヒトＰＤ－Ｌ１との結合に関してアテゾリズマブ、デュルバルマブ、及び／又はアベルマブと交差競合する、すなわちアテゾリズマブ、デュルバルマブ、及び／又はアベルマブと同じヒトＰＤ－Ｌ１抗体のエピトープに結合する抗体は、モノクローナル抗体である。ヒト対象に投与する場合、こうした交差競合する抗体は、キメラ抗体、改変抗体、又はヒト化若しくはヒト抗体である。そのようなキメラ、改変、ヒト化、又はヒトモノクローナル抗体は、当該技術分野で既知である方法により、調製及び単離が可能である。

本開示の発明の方法に使用可能な抗ＰＤ－Ｌ１抗体には、上記抗体の抗原結合部分も含まれる。抗体の抗原結合機能が全長抗体のフラグメントにより発揮可能であることは、十分に実証されている。

本開示の方法又は組成物で使用するのに適切な抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、高い特異性及び親和性でＰＤ－Ｌ１に結合し、ＰＤ－１の結合を遮断し、ＰＤ－１シグナル伝達経路の免疫抑制効果を阻害する、抗体である。本明細書中において開示される組成物又は方法のいずれにおいても、抗ＰＤ－Ｌ１「抗体」は、ＰＤ－Ｌ１に結合し、受容体結合阻害及び免疫系の上方制御について全抗体のものと類似した機能特性を示す、抗原結合部分又はフラグメントを含む。或る特定の実施形態において、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ヒトＰＤ－Ｌ１との結合に関して、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、及び／又はアベルマブと交差競合する。

抗ＣＴＬＡ－４抗体
或る特定の実施形態において、実施形態は、抗ＣＴＬＡ－４抗体の使用を包含する。１つの実施形態において、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、ＣＴＬＡ－４に結合し、ＣＴＬＡ－４を阻害する。実施形態よっては、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ（ヤーボイ）、トレメリムマブ（チシリムマブ；ＣＰ－６７５２０６）、ＡＧＥＮ－１８８４、又はＡＴＯＲ－１０１５である。

更なる実施形態
軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合する単離抗体であって、重鎖ＣＤＲ３領域が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ３領域である、単離抗体。
１．軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合するキメラ抗体であって、重鎖ＣＤＲ３領域が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ３領域である、キメラ抗体。
２．軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合するヒト化抗体であって、重鎖ＣＤＲ３領域が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ３領域である、ヒト化抗体。
３．軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合する単離抗体であって、
軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号７に存在する軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域であり、
重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域である、単離抗体。
４．軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合するキメラ抗体であって、
軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号７に存在する軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域であり、
重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域である、キメラ抗体。
５．軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合するヒト化抗体であって、
軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号７に存在する軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域であり、
重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域である、ヒト化抗体。
６．重鎖ＣＤＲ１領域が配列番号２７を含み、重鎖ＣＤＲ２領域が配列番号２８を含み、重鎖ＣＤＲ３領域が配列番号２９を含み、軽鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３０を含み、軽鎖ＣＤＲ２領域が配列番号３１を含み、軽鎖ＣＤＲ３領域が配列番号３２を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の抗体。
７．重鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３７を含み、重鎖ＣＤＲ２領域が配列番号３８を含み、重鎖ＣＤＲ３領域が配列番号２９を含み、軽鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３０を含み、軽鎖ＣＤＲ２領域が配列番号３１を含み、軽鎖ＣＤＲ３領域が配列番号３２を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の抗体。
８．重鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３９を含み、重鎖ＣＤＲ２領域が配列番号４０を含み、重鎖ＣＤＲ３領域が配列番号４１を含み、軽鎖ＣＤＲ１領域が配列番号４２を含み、軽鎖ＣＤＲ２領域が配列番号４３を含み、軽鎖ＣＤＲ３領域が配列番号３２を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の抗体。
９．重鎖ＣＤＲ領域が、
（ａ）配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号２９、
（ｂ）配列番号４４、配列番号４６、及び配列番号２９、又は、
（ｃ）配列番号４５、配列番号４７、及び配列番号２９、
を含む、実施形態３に記載のヒト化抗体。
１０．軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２を含む、実施形態３又は実施形態１０に記載のヒト化抗体。
１１．軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号４８、配列番号３１、及び配列番号３２を含む、実施形態３又は実施形態１０に記載のヒト化抗体。
１２．軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号４８、配列番号４９、及び配列番号３２を含む、実施形態３又は実施形態１０に記載のヒト化抗体。
１３．軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号３０、配列番号５０、及び配列番号３２を含む、実施形態３又は実施形態１０に記載のヒト化抗体。
１４．重鎖可変領域が、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、又は配列番号５４を含み、軽鎖可変領域が、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、又は配列番号５８を含む、実施形態３及び１０～１４のいずれか１つに記載のヒト化抗体。
１５．ヒト化抗体が、
（ａ）配列番号５１を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号５２を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域と、
（ｃ）配列番号５３を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域と、又は、
（ｄ）配列番号５４を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域と、
を含む、実施形態１５に記載のヒト化抗体。
１６．配列番号７における軽鎖及び配列番号５における重鎖を含む抗体と同じヒトＣＤ３６のエピトープに結合する単離抗体。
１７．ヒトＣＤ３６への結合について、配列番号７における軽鎖及び配列番号５における重鎖を含む抗体と競合する単離抗体。
１８．抗体がＣＤ３６に特異的に結合しない抗体を実質的に含まない、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の抗体。
１９．抗体が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号９に存在する軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖を実質的に含まない、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の抗体。
２０．抗体がヒトＣＤ３６に結合する、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の抗体。
２１．抗体が、１対１モデルに当てはめたＳＰＲデータを用いて測定される場合、１０ｎＭ未満のＫ_ＤでヒトＣＤ３６に結合する、実施形態１～２１のいずれか１つに記載の抗体。
２２．抗体が、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するＶＨを含む、実施形態１、２、４、５、７～９、又は１９～２２のいずれか１つに記載の抗体。
２３．抗体が配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、実施形態２３に記載の抗体。
２４．抗体が、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するＶＬを含む、実施形態１、２、４、５、７～９、又は１９～２２のいずれか１つに記載の抗体。
２５．抗体が配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、実施形態２５に記載の抗体。
２６．重鎖定常領域を更に含む、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の抗体。
２７．重鎖定常領域が、ヒト免疫グロブリンＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４の重鎖定常領域からなる群より選択される、実施形態２７に記載の抗体。
２８．ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、実施形態２８に記載の抗体。
２９．重鎖定常領域が、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）を含有するＩｇＧ定常領域を含む、実施形態２９に記載の抗体。
３０．重鎖定常領域が、Ｌ２３４Ｇ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｖ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｑ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びにＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇからなる群より選択されるアミノ酸置換のセットを含有するＩｇＧ定常領域を含む、実施形態２９に記載の抗体。
３１．ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、実施形態２８に記載の抗体。
３２．重鎖定常領域が、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含有するＩｇＧ定常領域を含む、実施形態３１に記載の抗体。
３３．抗体が軽鎖定常領域を更に含む、実施形態１～３３のいずれか１つに記載の抗体。
３４．軽鎖定常領域が、ヒト免疫グロブリンκ及びλ軽鎖定常領域からなる群より選択される、実施形態３４に記載の抗体。
３５．抗体が重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を更に含み、重鎖定常領域がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域であり、軽鎖定常領域がヒトκ軽鎖定常領域である、実施形態１～３５のいずれか１つに記載の抗体。
３６．抗体が配列番号２３における軽鎖及び配列番号２１における重鎖を含む、実施形態１～２、４～５、又は１７～３６のいずれか１つに記載の抗体。
３７．抗体が配列番号２３における軽鎖及び配列番号６４における重鎖を含む、実施形態１～２、４～５、又は１７～３６のいずれか１つに記載の抗体。
３８．抗原結合フラグメントである、実施形態１～３６のいずれか１つに記載の抗体。
３９．抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）_２、又はｓｃＦｖ－Ｆｃを含む、実施形態３９に記載の抗原結合フラグメント。
４０．実施形態１～４０のいずれか１つに記載の抗体と薬学的に許容され得る賦形剤とを含む医薬組成物。
４１．組成物中の抗体の少なくとも９５％が脱フコシル化されている、実施形態４１に記載の医薬組成物。
４２．ＰＤ－１阻害剤を更に含む、実施形態４１又は実施形態４２に記載の医薬組成物。
４３．ＰＤ－１阻害剤が抗ＰＤ－１抗体である、実施形態４３に記載の医薬組成物。
４４．抗ＰＤ－１抗体がペムブロリズマブ、ピジリズマブ、又はニボルマブである、実施形態４４に記載の医薬組成物。
４５．ＰＤ－Ｌ１阻害剤を更に含む、実施形態４１～４５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
４６．ＰＤ－Ｌ１阻害剤が抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、実施形態４６に記載の医薬組成物。
４７．抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、又はＢＭＳ－９３６５５９である、実施形態４７に記載の医薬組成物。
４８．ＣＴＬＡ－４阻害剤を更に含む、実施形態４１～４８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
４９．ＣＴＬＡ－４阻害剤が抗ＣＴＬＡ－４抗体である、実施形態４９に記載の医薬組成物。
５０．抗ＣＴＬＡ－４抗体がイピリムマブである、実施形態５０に記載の医薬組成物。
５１．組成物が化学療法剤を更に含む、実施形態４１～５１のいずれか１つに記載の医薬組成物。
５２．化学療法剤がシスプラチンである、実施形態５２に記載の医薬組成物。
５３．抗体が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号９に存在する軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖を実質的に含まない、実施形態４１～５３のいずれか１つに記載の医薬組成物。
５４．患者において癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の実施形態１～４０のいずれか１つに記載の抗体、又は治療有効量の実施形態４１～５４のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
５５．癌が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫である、実施形態５５に記載の方法。
５６．患者において１つ以上の転移性腫瘍を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の実施形態１～４０のいずれか１つに記載の抗体、又は治療有効量の実施形態４１～５４のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
５７．転移性腫瘍が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫から発生したものである、実施形態５７に記載の方法。
５８．治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍のサイズを縮小させる、実施形態５８に記載の方法。
５９．治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍の形成又は発生を阻害する、実施形態５７～５９のいずれか１つに記載の方法。
６０．抗ＣＤ３６抗体が、脂肪酸及び／又はｏｘＬＤＬのＣＤ３６媒介取り込みを遮断する一方で、ＣＤ３６のＴＳＰ－１への結合にはほとんど又は全く影響を及ぼさない、実施形態５５～６０のいずれか１つに記載の方法。
６１．患者がヒト患者である、実施形態５５～６１のいずれか１つに記載の方法。
６２．抗ＣＤ３６抗体が、全長抗体、単鎖抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂフラグメント、又はＦ（ａｂ’）_２フラグメントである、実施形態５５～６２のいずれか１つに記載の方法。
６３．抗ＣＤ３６抗体が全長抗体である、実施形態５５～６３のいずれか１つに記載の方法。
６４．抗ＣＤ３６抗体が、配列番号２３における軽鎖及び配列番号２１における重鎖を含む、実施形態６４に記載の方法。
６５．抗ＣＤ３６抗体が、配列番号２３における軽鎖及び配列番号６４における重鎖を含む、実施形態６４に記載の方法。
６６．方法が第二療法を適用することを更に含む、実施形態５５～６６のいずれか１つに記載の方法。
６７．第二療法が免疫療法である、実施形態６７に記載の方法。
６８．免疫療法がＰＤ－１阻害剤である、実施形態６８に記載の方法。
６９．ＰＤ－１阻害剤が抗ＰＤ－１抗体である、実施形態６９に記載の方法。
７０．抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、又はニボルマブである、実施形態７０に記載の方法。
７１．免疫療法がＰＤ－Ｌ１阻害剤である、実施形態６８に記載の方法。
７２．ＰＤ－Ｌ１阻害剤が抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、実施形態７２に記載の方法。
７３．抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、又はＢＭＳ－９３６５５９である、実施形態７３に記載の方法。
７４．免疫療法がＣＴＬＡ－４阻害剤である、実施形態６８に記載の方法。
７５．ＣＴＬＡ－４阻害剤が抗ＣＴＬＡ－４抗体である、実施形態７５に記載の方法。
７６．抗ＣＴＬＡ－４抗体がイピリムマブである、実施形態７６に記載の方法。
７７．第二療法が化学療法剤である、実施形態６７に記載の方法。
７８．化学療法剤がシスプラチンである、実施形態７８に記載の方法。
７９．対象において転移が減少又は阻害される、実施形態５５～７９のいずれか１つに記載の方法。
８０．２つの療法が逐次適用される、実施形態６７～８０のいずれか１つに記載の方法。
８１．２つの療法が同時適用される、実施形態６７～８０のいずれか１つに記載の方法。
８２．ＣＤ３６を発現する癌を有する対象を治療する方法において使用される、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の抗体であって、治療有効量の本発明による抗ＣＤ３６抗体を対象に投与することを含む、抗体。
８３．癌が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫である、実施形態８３に記載の使用のための抗体。
８４．癌が転移性癌である、実施形態８３又は実施形態８４に記載の使用のための抗体。
８５．治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色により測定した場合、転移性腫瘍のサイズを縮小させる、実施形態８３～８５のいずれか１つに記載の使用のための抗体。
８６．治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍の形成又は発生を阻害する、実施形態８３～８６のいずれか１つに記載の使用のための抗体。
８７．抗ＣＤ３６抗体が、脂肪酸及び／又はｏｘＬＤＬのＣＤ３６媒介取込みを遮断する一方で、ＣＤ３６のＴＳＰ－１への結合にほとんど又は全く影響を及ぼさない、実施形態８３～８７のいずれか１つに記載の使用のための抗体。
８８．使用が第二療法と組み合わされる、実施形態８３～８８のいずれか１つに記載の使用のための抗体。
８９．第二療法が免疫療法である、実施形態８９に記載の使用のための抗体。
９０．免疫療法が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＬ－Ｌ１抗体、又は抗ＣＴＬＡ－４抗体である、実施形態９０に記載の使用のための抗体。
９１．第二療法が化学療法剤である、実施形態８９に記載の使用のための抗体。
９２．化学療法剤がシスプラチンである、実施形態９２に記載の使用のための抗体。
９３．ＣＤ３６を発現する癌を有する対象を治療するための医薬品の製造における、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の抗体の使用。
９４．癌が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫である、実施形態９４に記載の抗体の使用。
９５．癌が転移性癌である、実施形態９４又は実施形態９５に記載の抗体の使用。
９６．治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色により測定した場合、転移性腫瘍のサイズを縮小させる、実施形態９４～９６のいずれか１つに記載の抗体の使用。
９７．治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍の形成又は発生を阻害する、実施形態９４～９７のいずれか１つに記載の抗体の使用。
９８．抗ＣＤ３６抗体が、脂肪酸及び／又はｏｘＬＤＬのＣＤ３６媒介取込みを遮断する一方で、ＣＤ３６のＴＳＰ－１への結合にほとんど又は全く影響を及ぼさない、実施形態９４～９８のいずれか１つに記載の抗体の使用。
９９．使用が第二療法と組み合わされる、実施形態９４～９９のいずれか１つに記載の抗体の使用。
１００．第二療法が免疫療法である、実施形態１００に記載の抗体の使用。
１０１．免疫療法が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＬ－Ｌ１抗体、又は抗ＣＴＬＡ－４抗体である、実施形態１０１に記載の抗体の使用。
１０２．第二療法が化学療法剤である、実施形態１００に記載の抗体の使用。
１０３．化学療法剤がシスプラチンである、実施形態１０３に記載の抗体の使用。
１０４．実施形態１～４０のいずれか１つに記載の抗体をコードする単離ポリヌクレオチド。
１０５．配列番号７における軽鎖及び配列番号５における重鎖をコードする、実施形態１０５に記載の単離ポリヌクレオチド。
１０６．配列番号８を含む、実施形態１０５又は１０６に記載の単離ポリヌクレオチド。
１０７．配列番号６を含む、実施形態１０５～１０７のいずれか１つに記載の単離ポリヌクレオチド。
１０８．配列番号２４を含む、実施形態１０５又は１０６に記載の単離ポリヌクレオチド。
１０９．配列番号２２を含む、実施形態１０５～１０７のいずれか１つに記載の単離ポリヌクレオチド。
１１０．実施形態１０５～１１０のいずれか１つに記載の単離ポリヌクレオチドを含むベクター。
１１１．実施形態１０５～１１０のいずれか１つに記載の単離ポリヌクレオチド又は実施形態１１１に記載のベクターを含む細胞。
１１２．大腸菌、シュードモナス、バチルス、ストレプトマイセス、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及び組織培養物中のヒト細胞からなる群より選択される、実施形態１１２に記載の細胞。
１１３．細胞が機能的なα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）遺伝子を欠いている、実施形態１１２又は１１３に記載の細胞。
１１４．ＣＤ３６に特異的に結合することができる抗体を作製する方法であって、実施形態１１２～１１４のいずれか１つに記載の細胞において抗体を発現させることを含む、方法。
１１５．ＣＤ３６に特異的に結合することができる抗体を作製する方法であって、実施形態１１２～１１５のいずれか１つに記載の細胞を培養し、そこで発現された抗体を単離することを含む、方法。
１１６．医薬組成物の製造のための、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の抗体の使用。
１１７．医薬組成物の製造のための、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の抗体、及び薬学的に許容され得る賦形剤又は担体の使用。
１１８．転移性腫瘍が、肝臓、肺、脾臓、腎臓、頸部リンパ節、又は腹膜壁の１つ以上に存在する、実施形態５７～８２のいずれか１つに記載の方法。
１１９．転移性癌が、肝臓、肺、脾臓、腎臓、頸部リンパ節、又は腹膜壁の１つ以上における転移性腫瘍を含む、実施形態８３～９３のいずれか１つに記載の使用のための抗体。
１２０．転移性癌が、肝臓、肺、脾臓、腎臓、頸部リンパ節、又は腹膜壁の１つ以上における転移性腫瘍を含む、実施形態９４～１０４のいずれか１つに記載の抗体の使用。
１２１．患者において原発性腫瘍と転移性腫瘍の両方を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の実施形態１～４０のいずれか１つに記載の抗体、又は治療有効量の実施形態４１～５４のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
１２２．癌が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫である、実施形態１２２に記載の方法。
１２３．転移性腫瘍が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫から発生したものである、実施形態１２２又は１２３に記載の方法。
１２４．治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色により測定した場合、転移性腫瘍のサイズを縮小させる、実施形態１２２～１２４のいずれか１つに記載の方法。
１２５．治療が原発性腫瘍のサイズを縮小させる、実施形態１２２～１２５のいずれか１つに記載の方法。
１２６．治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍の形成又は発生を阻害する、実施形態１２２～１２６のいずれか１つに記載の方法。
１２７．抗ＣＤ３６抗体が、脂肪酸及び／又はｏｘＬＤＬのＣＤ３６媒介取り込みを遮断する一方で、ＣＤ３６のＴＳＰ－１への結合にはほとんど又は全く影響を及ぼさない、実施形態１２２～１２７のいずれか１つに記載の方法。
１２８．患者がヒト患者である、実施形態１２２～１２８のいずれか１つに記載の方法。
１２９．抗ＣＤ３６抗体が、全長抗体、単鎖抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂフラグメント、又はＦ（ａｂ’）_２フラグメントである、実施形態１２２～１２９のいずれか１つに記載の方法。
１３０．抗ＣＤ３６抗体が全長抗体である、実施形態１２２～１３０のいずれか１つに記載の方法。
１３１．抗ＣＤ３６抗体が、配列番号２３における軽鎖及び配列番号２１における重鎖を含む、実施形態１３１に記載の方法。
１３２．抗ＣＤ３６抗体が、配列番号２３における軽鎖及び配列番号６４における重鎖を含む、実施形態１３１に記載の方法。
１３３．方法が第二療法を適用することを更に含む、実施形態１２２～１３３のいずれか１つに記載の方法。
１３４．第二療法が免疫療法である、実施形態１３４に記載の方法。
１３５．免疫療法がＰＤ－１阻害剤である、実施形態１３５に記載の方法。
１３６．ＰＤ－１阻害剤が抗ＰＤ－１抗体である、実施形態１３６に記載の方法。
１３７．抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、又はニボルマブである、実施形態１３７に記載の方法。
１３８．免疫療法がＰＤ－Ｌ１阻害剤である、実施形態１３５に記載の方法。
１３９．ＰＤ－Ｌ１阻害剤が抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、実施形態１３９に記載の方法。
１４０．抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、又はＢＭＳ－９３６５５９である、実施形態１４０に記載の方法。
１４１．免疫療法がＣＴＬＡ－４阻害剤である、実施形態１３５に記載の方法。
１４２．ＣＴＬＡ－４阻害剤が抗ＣＴＬＡ－４抗体である、実施形態１４２に記載の方法。
１４３．抗ＣＴＬＡ－４抗体がイピリムマブである、実施形態１４３に記載の方法。
１４４．第二療法が化学療法剤である、実施形態１３４に記載の方法。
１４５．化学療法剤がシスプラチンである、実施形態１４５に記載の方法。
１４６．対象において転移が減少又は阻害される、実施形態１２２～１４６のいずれか１つに記載の方法。
１４７．２つの療法が逐次適用される、実施形態１３４～１４７のいずれか１つに記載の方法。
１４８．２つの療法が同時適用される、実施形態１３４～１４７のいずれか１つに記載の方法。

実施例１：動物研究
別段の指示がない限り、以下の実施例に開示される動物研究は、以下の材料及び方法論を使用して行われた。

ＮＯＤｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）（ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃ^ｓｃｉｄＩＩ２ｒｇ^{ｔｍ１Ｗｊｌ}／ＳｚＪ）マウスをCharles Riverから購入し、社内で交配した。全てのマウスは、１２時間明／１２時間暗サイクルのレジメン及びＳＰＦ条件下で飼育され、全ての手順は、カタルーニャ政府のＣＥＥＡ（動物実験倫理委員会）によって評価及び承認された。ＳＣＣ舌内注射を、以前に記載されたように実施した（Oskarsson et al., 2014、Nieman et al., 2011）。簡単に言えば、１ｋｇ当たり５０ｍｇのケタミンと１ｋｇ当たり０．５ｍｇのメデトミジンとの混合物を腹腔内注射してマウスを麻酔し、３０μｌのＰＢＳに再懸濁したＳＣＣ細胞をＢＤ極細６ｍｍ針で各マウスの舌に注射した。注射直後（Ｔ０）及びその後週１回、ＸｅｎｏｇｅｎＩＶＩＳＩｍａｇｉｎｇＳｙｓｔｅｍ－１００（Caliper Life Sciences）を用いてマウスをルシフェラーゼ生物発光シグナルについて監視した。簡単に言えば、動物に、後眼窩注射により、１×ＰＢＳで５ｍｇ／ｍｌに希釈した５０μｌのＤ－ルシフェリン（Promega）を注射した。イメージング中に動物を確実に麻酔するために、イソフルランガスの連続投与を提供した。データを、ＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅソフトウェアバージョン４．４（Caliper Life Sciences）で定量化した。定量化を、非飽和ピクセルで計算した。カラースケールの最小値と最大値を写真に示す。

ｉｎｖｉｖｏでマウスを中和抗ＣＤ３６抗体で処置するために、５μｇ、１０μｇ又は２０μｇの中和モノクローナル抗ＣＤ３６抗体ＪＣ６３．１（CAYMAN、ＣＡＹ－１０００９８９３－５００）；５μｇ、１０μｇ、若しくは２０μｇの中和モノクローナル抗ＣＤ３６ＯＮＡ－０－ｖ１（ＩｇＡ又はＩｇＧアイソタイプのいずれか）；又は５μｇ、１０μｇ、若しくは２０μｇの対応する対照ＩｇＡ（マウスＩｇＡ、カッパ［Ｓ１０７］、Abcam、ａｂ３７３２２）若しくはＩｇＧ抗体を含有する１００μｌの生理学的血清をマウスに腹腔内注射した。これらの用量は、それぞれ０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、及び１ｍｇ／ｋｇに相当する。全ての抗体はアジドを含まず、保存剤化合物は添加されていない。

各実験では、実験群が承認されたＣＥＥＡプロトコルに従って人道的終点に達すると（同所性注射の４～６週間後、マウスが口腔病変の増殖により体重を減らし始めたらすぐに）、マウスを同時に屠殺し、その後の細胞分析を行った。

マウスの全血液試料を下大静脈から収集し、次いで標準的な手順に従って実験毒性学及び生態毒性学ユニット（ＰＣＢ）で処理した。

動物組織を収集し、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を用いて室温（ＲＴ）で一晩固定し、ＯＣＴに包埋して－８０℃で凍結するか、又は脱水してパラフィンに包埋した。標準的な手順に従って、組織病理学施設で毒物学的研究を行った。

組織学的分析。分析のため、８μｍの凍結又は脱パラフィン化抗原賦活化切片（沸騰０．０１Ｍクエン酸、ｐＨ６．０において１０分間）を０．２５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００／ＰＢＳで２５分間透過処理し、０．２５％ゼラチン／ＰＢＳで９０分間ブロックした。ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を、標準的なプロトコルに従って行った。ＮｉｋｏｎＥ６００＋ＯｌｙｍｐｕｓＤＰ７２、ＬｅｉｃａＳＰＥ、及びＬｅｉｃａＴＣＳＳＰ５共焦点顕微鏡を使用して画像を取得した。各症例について代表的な写真を選択した。

全ての実験について、パイロット研究の結果に基づいて適切なサンプルサイズを決定した。サンプルサイズを決定するために使用した統計的方法はない。実験手順の間に適切な実験条件を満たした全ての動物を分析に含めた。パイロット研究の結果に基づいて、８週齢～１２週齢の同種の雄性及び雌性の群と、それらの対照同腹子を実験研究に使用した。原発性腫瘍又は頸部リンパ節転移の発光強度に基づいて、注射後７日目に動物を無作為化した。データは一般的に、平均値±標準誤差として示される。Ｐｒｉｓｍ６ソフトウェア（GraphPad）を使用し、両側ｔ検定、Ｍａｎｎ－ＷｈｉｔｎｅｙＵ検定、Ｆｉｓｈｅｒ正確検定、又は超幾何検定を用いて、統計的有意性を分析した。有意性をＰ≦０．０５とした。

実施例２：シスプラチンを含む又は含まない抗ＣＤ３６抗体を使用した癌の処置
シスプラチンを含む又は含まない抗ＣＤ３６抗体の効果の研究をＮＳＧマウス（免疫不全）で行った。これらの研究の実験概要を図１Ａに提供する。研究は雄性マウスのみを含んだが、雌性マウスを用いても同様の傾向（データは報告されていない）が観察された。全てのマウスに市販のＤｅｔｒｏｉｔ５６２（ＡＴＣＣ）癌細胞を接種し、ルシフェラーゼ及び緑色蛍光タンパク質（Ｌｕｃ－ＧＦＰ）を発現するレトロウイルスベクターで形質導入した。Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２細胞は、咽頭癌の転移部位に由来（すなわち、口腔癌に由来）する。接種前に、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２細胞を加湿したインキュベーターにおいて３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、５μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン及び１０％ＦＢＳ（GIBCO）を補充したＥＭＥＭ（LONZA）中で増殖させた。

各マウスについて、５００００個のＤｅｔｒｏｉｔ５６２細胞を同所性注射により接種した。以前の試験は、未処置のＮＳＧマウスでは、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２細胞を接種したマウスの１００％が大きな原発性腫瘍を形成し、接種したマウスの８１％が接種後１週間以内にリンパ節転移を発症することが観察されたことを明らかにした。

接種されたマウスの処置を、癌細胞を接種してから９日後に開始した。接種されたマウスは、４つの異なる処置群に分けた。図１Ｂに見られるように、処置群は次のとおりであった：
群１：ＩｇＡアイソタイプ対照（１日目～２３日目ではｎ＝９、２９日目はｎ＝６）、
群２：ＩｇＡアイソタイプ対照＋シスプラチン（ｎ＝５）、
群３：市販の抗ＣＤ３６抗体（ＪＣ６３．１）（１日目～２３日目ではｎ＝６、２９日目はｎ＝４）、
群４：市販の抗ＣＤ３６抗体（ＪＣ６３．１）＋シスプラチン（ｎ＝５）。

抗体処置を、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により毎日１ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。シスプラチンを、２ｍｇ／ｋｇの用量で週２回投与した（群２及び群４）。シスプラチンを受けなかったマウス（群１及び群３）は、代わりに同量のＰＢＳ注射を受けた。処置の過程で、ｉｎｖｉｖｏイメージングシステム（ＩＶＩＳ）を使用してマウスを週１回観察した。さらに、適切な投与量を更新するために、週に２回マウスの体重を測定した。マウスを、体重が倫理的に承認されたガイドライン下に落ちたとき、又は処置期間の終わりのいずれかに屠殺した。屠殺後、免疫組織化学分析を実施するために臓器及び組織を収集した。

図２Ａ～図２Ｃに見られるように、抗ＣＤ３６Ａｂ処置は、口腔癌において原発性腫瘍の増殖を抑制する上で、シスプラチンと少なくとも相加的な抗腫瘍活性を示す。図２Ａは、抗ＣＤ３６抗体とシスプラチンの両方で処置されたマウスが、対照マウスに対する処置マウスにおけるルシフェラーゼ誘導発光の相対強度によって測定した場合に、対照抗体（ＩｇＡ）とシスプラチンで処置されたマウスよりも腫瘍の増殖をより良好に抑制できたことを示す。図２Ｂは、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２細胞の同所性同種注射後に舌に発生した原発性腫瘍の代表的な画像を示す。図２Ｃは、抗ＣＤ３６抗体又は対照抗体（ＩｇＡ）とシスプラチンの両方で処置されたマウスには腫瘍表面積が減少した原発性腫瘍があったことを示す。

図３は、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２癌細胞を接種し、上記のように処置したマウスに存在する肺転移の代表的な画像を示す。これらの画像は、シスプラチン（右上）、市販の抗ＣＤ３６抗体（ＪＣ６３．１、左下）、又はシスプラチン及びＪＣ６３．１（右下）で処置したマウスが、対照処置マウス（左上）よりも転移が少なく、小さいことを示す。さらに、肺転移の数（図４Ａ）及びサイズ（図４Ｂ）の定量化は、ＪＣ６３．１単独で処置されたマウスは、対照処置マウスよりも転移が小さく、少ないことを示す。シスプラチン単独で処置されたマウスは、転移腫瘍のサイズをシスプラチンが減少させたにもかかわらず、対照細胞と同様の数の転移を有した。ＪＣ６３．１とシスプラチンの両方で処置すると、ＪＣ６３．１単独で処置した場合と同数の転移を有するマウスを生じた。しかしながら、ＪＣ６３．１とシスプラチンの両方による処置は、ＪＣ６３．１又はシスプラチン単独よりも転移性腫瘍サイズの大幅な縮小をもたらした。

実施例３：キメラ抗体の構築
標準的な分子生物学技術を使用して、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体及びＯＮＡ－０－ｖ２抗体に基づいて新たなキメラ抗体を作製した。簡単に言えば、ＯＮＡ－０－ｖ１の抗体可変ドメイン及びＯＮＡ－０－ｖ２の抗体可変ドメインは、ヒト細胞での発現用に最適化されたコドンであり、５’末端及び３’末端にＮｈｅＩ及びＡｖａＩの制限部位を持つように設計された。可変ドメインを合成し、次いでそれぞれのヒトＩｇＧ１－ＬＡＬＡ重鎖、マウスＩｇＡ重鎖、又はヒトカッパ軽鎖の定常ドメイン配列を含有する発現ベクターにクローニングした。配列の検証後、ＰｌａｓｍｉｄＰｌｕｓ精製キット（Qiagen）を使用して、トランスフェクションに十分な量のプラスミドを調製した。

キメラＯＮＡ－０－ｖ１ＩｇＧ１ＬＡＬＡ抗体は、配列番号２１における重鎖及び配列番号２３における軽鎖を含み、１Ｇ０４と名付けた。類似のキメラＯＮＡ－０－ｖ２ＩｇＧ１ＬＡＬＡ抗体は、配列番号２１における重鎖及び配列番号２５における軽鎖を含む。１Ｇ０４をコードする例示的なポリヌクレオチドは、配列番号２２（重鎖をコードする）及び配列番号２４（軽鎖をコードする）として提供される。キメラＯＮＡ－０－ｖ２ＩｇＧ１ＬＡＬＡ抗体をコードする例示的なポリヌクレオチドは、配列番号２２（重鎖をコードする）及び配列番号２６（軽鎖をコードする）である。

図５は、ＯＮＡ－０－ｖ１、ＯＮＡ－０－ｖ２、１Ｇ０４、及びキメラＯＮＡ－０－ｖ２ＩｇＧ１ＬＡＬＡ抗体の配列及び構造の概略図を示す。この模式図は、軽鎖可変領域（青色で表示）がＯＮＡ－０－ｖ１とＯＮＡ－０－ｖ２との唯一の相違点であることを示す。また、この模式図は、ＯＮＡ－０抗体のキメラバージョンが、マウスＩｇＡＦｃテイルの代わりにＬＡＬＡ変異を持つヒトＩｇＧ１Ｆｃテイル（赤色で表示）を含有することを更に示す。

実施例４：抗ＣＤ３６抗体の特性評価
ＨＥＫ２９３（ヒト胎児腎臓２９３）哺乳動物細胞を、一過性トランスフェクションに最適な段階まで継代した。細胞を重鎖及び軽鎖発現ベクターで一過性にトランスフェクトし、更に６日間培養した。

４０００ｒｐｍでの遠心分離によって培養培地を回収し、０．２２μｍフィルターで濾過した。ＩｇＧ抗体の場合、精製の最初の工程を、クエン酸ｐＨ３．０バッファーを使用して溶出するプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーで行った。マウスＩｇＡ抗体の場合、精製の最初の工程は、０．１ＭＴｒｉｓ、０．１ＭＮａＣｌ、０．５ＭグルコピラノシドｐＨ７．６バッファーを使用して溶出するＣｏｎＡセファロースアフィニティクロマトグラフィーであった。次いで、ＰＤ１０脱塩カラム（GE Healthcare）を使用して、精製抗体をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）にバッファー交換した。抗体濃度をＵＶ分光法によって測定し、必要に応じて抗体を濃縮した。抗体の純度を、４％～１２％Ｂｉｓ－ＴｒｉｓＮｕＰＡＧＥゲル及びＮｕＰＡＧＥＭＥＳバッファー（Thermo）を含むＸ－ｃｅｌｌＳｕｒｅＬｏｃｋシステムを使用して、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動）によって決定した。必要な試料は、ＮｕＰＡＧＥ試料還元剤を使用して還元していた。精製されたＯＮＡ－０－ｖ１、ＯＮＡ－０－ｖ２、１Ｇ０４、及びキメラＯＮＡ－０－ｖ２（ＩｇＧ１－ＬＡＬＡ）を示す染色タンパク質ゲルを図６に示す。

ＥＬＩＳＡアッセイを実施するために、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートをヒトＣＤ３６（Sino Biological、参照１０７５２－Ｈ０８Ｈ）又はマウスＣＤ３６（Sino Biological、参照５０４２２－Ｍ０８Ｈ）の組換えタンパク質により０．２５ｍｇ／ｍｌの濃度で一晩コーティングした。ＰＢＳで２回洗浄した後、プレートを、ＰＢＳ中の４％スキムミルクを用いて３７℃で１時間ブロックした。ブロッキング溶液を捨て、プレートを２００μｌ／ウェルのＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎ２０（０．５％）で５回洗浄した。一次抗体を省略するか（対照ブロッキング溶液処理）、又は０．０１ｎＭ～０．５μＭの範囲の幾つかの希釈でブロッキング溶液に混合した。一次抗体溶液をウェルに加え、４℃で一晩インキュベートした。２００μｌ／ウェルのＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎ２０（０．５％）で５回洗浄した後、プレートをブロッキング溶液で１：２０００に希釈したヤギ抗マウスＨＲＰ複合化抗体（Abcam、参照ａｂ９７２３５）と共に室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートを２００μｌ／ウェルのＰＢＳ－Ｔｗｅｅｎ２０（０．５％）で５回洗浄し、１００μｌ／ウェルのＴＭＢでインキュベートし、１０分、３０分、又は６０分後に波長６３０ｎｍにて分光光度計で検出した。

図７のＥＬＩＳＡアッセイに示すように、ＯＮＡ－０－ｖ１は、ヒトＣＤ３６（上部パネル、マゼンタの円）とマウスのＣＤ３６（下部パネル、マゼンタの円）の両方に特異的に結合することができた。このＥＬＩＳＡアッセイデータに基づいて、ＯＮＡ－０－ｖ１は、ヒトＣＤ３６ではおよそ０．０４ｎＭ、マウスＣＤ３６では０．１ｎＭのＫ_Ｄを有すると推定された。対照的に、図７は、同じＥＬＩＳＡアッセイでＯＮＡ－０－ｖ２がヒトＣＤ３６（上部パネル；灰色の四角）又はマウスＣＤ３６（下部パネル；灰色の四角）のいずれとも相互作用しなかったことも示す。

図８のＥＬＩＳＡアッセイに示すように、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体と市販の抗ＣＤ３６抗体（ＪＣ６３．１）は、ヒトＣＤ３６（上部パネル）とマウスＣＤ３６（下部パネル）の両方に対して同様の親和性及び結合特性を示した。

図２８Ａ及び図２８ＢのＥＬＩＳＡアッセイに示されるように、１Ｇ０４抗体及び１Ｇ０６抗体は、ヒトＣＤ３６及びマウスＣＤ３６の両方に対して同様の親和性及び結合特性を示した。

ＦＡＣＳ分析のため、細胞をトリプシン処理し、１５ｍＬチューブに集め、洗浄バッファー（ＰＢＳ中２％ＦＢＳ）で希釈した。次いで、細胞を４℃で５分間、１５００ｒｐｍで遠心分離し、上清を捨て、細胞を新鮮な洗浄バッファーに再懸濁した。抗ＣＤ３６抗体は省略（対照洗浄バッファー処理）するか、又は洗浄バッファーで段階的に希釈し（最大１００ｎＭの希釈範囲）、細胞に添加した。インキュベーションを氷上で１時間行った。次いで、細胞を４℃で５分間、１５００ｒｐｍで遠心分離し、上清を捨て、細胞を新鮮な洗浄バッファーに再懸濁した。最後に、洗浄緩衝液で１：１００に希釈された細胞をヤギ抗マウスＩｇＡ（ＢＶ４２１ラット抗マウスＩｇＡ、Becton Dickinson、参照７４３２９３）と共に細胞をインキュベートし、洗浄してＦＡＣＳで分析した。

図９Ａ及び図９ＢのＦＡＣＳアッセイに示されるように、ＯＮＡ－０－ｖ１及び１Ｇ０４の両方が、ヒトＣＤ３６を過剰発現する細胞に特異的に結合した（図９Ａ）。市販の抗ＣＤ３６抗体（ＪＣ６３．１）も同様に、ヒトＣＤ３６を過剰発現する細胞に結合した。しかしながら、ＥＬＩＳＡアッセイで観察されたものと同様に、キメラＯＮＡ－０－ｖ２ＩｇＧ１ＬＡＬＡ抗体は、ＦＡＣＳアッセイでヒトＣＤ３６を過剰発現する細胞と相互作用することは観察されなかった（図９Ｂ）。

図１０のＦＡＣＳアッセイに示すように、ＯＮＡ－０－ｖ１及び１Ｇ０４は、抗体を１００ｎＭ濃度で使用した場合、ヒトＣＤ３６を過剰発現する細胞に同等に結合した。

図２９のＦＡＣＳアッセイに示されるように、１Ｇ０４抗体及び１Ｇ０６抗体は、ヒトＣＤ３６を過剰発現する細胞に同等に結合した。

ＯＮＡ－０－ｖ１、１Ｇ０４、及び市販の抗ＣＤ３６抗体（ＪＣ６３．１）のヒトＣＤ３６に対する親和性も、ＢｉａｃｏｒｅＴ２００を使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した。１Ｇ０４を、１００ＲＵ～１５０ＲＵの捕捉範囲及び３．３ｎＭ～３３３ｎＭの抗原滴定範囲で、プロテインＡ捕捉表面を使用して分析した。マウス抗体ＯＮＡ－０－Ｖ１及び市販の抗ＣＤ３６抗体を、１６０ＲＵ～１８０ＲＵの捕捉範囲及び３．３ｎＭ～３３３ｎＭの抗原滴定範囲で、抗マウスＩｇＡ捕捉表面を使用して分析した。単一の分析サイクルごとに、５つの抗原濃度の滴定を捕捉された抗体に注入し、次いで複合体の解離を測定した。抗体が捕捉されなかった参照表面（それぞれｆｃ１及びｆｃ３）からのデータが、抗体結合捕捉表面（ｆｃ２及びｆｃ４）から差し引かれる二重参照法を採用した。抗原滴定サイクルごとにバッファーのブランク注入を行い、次いで分析物注入サイクルから差し引いて、抗体捕捉表面密度の小さな変化を補正した。全ての分析を２５℃で実施し、サンプルラックは実験中６℃に保持した。各実験を、報告された少なくとも２つの独立したアッセイから生成された平均結合定数で少なくとも３回実行した。全ての分析を、４０μＬ／分のＰＢＳ－Ｔランニングバッファーにおいて実施した。

ＳＰＲ分析では、市販の抗ＣＤ３６抗体とＯＮＡ－０－Ｖ１は類似のＫ_Ｄ値を示したが、１Ｇ０４は最も強い結合を示した。ＳＰＲの結果を以下の表６、表７、及び表８に示す。

ＣＤ３６によって駆動される脂肪酸の取り込みを変更する抗ＣＤ３６抗体の能力を測定するため、市販のＳＣＣ－２５細胞（ＡＴＣＣ）を、ＣＤ３６を発現するレトロウイルスベクター及びルシフェラーゼを発現するレンチウイルスベクターによる安定した形質導入によって改変した。舌の扁平上皮癌に由来するこれらの細胞を、５μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン、０．０２５ｍｇ／ｍｌウシ下垂体抽出物、及び０．２μｇ／ｍｌｈＥＧＦを補充したケラチノサイト無血清培地（ＫＳＦＭ）中で増殖させた。脂肪酸の取り込みを、基質として市販の生物発光標識長鎖脂肪酸類縁体（SwissLumix）を使用して評価した。アッセイを実施するために、細胞を９６ウェルプレートに播種し、翌日から１００μＭのパルミチン酸で４８時間刺激した。パルミチン酸刺激の前に、アイソタイプ対照抗体又は１Ｇ０４を１０μｇ／ｍｌで添加し、次の日にリフレッシュした。取り込み動態を定量化するために、ＰＢＳ１×で洗浄した後に基質をプレートに加え、ＳｙｎｅｒｇｙＨ１Ｍプレートリーダーを使用して経時的に読み取りを行った。この分析は、図２７Ａに示されるように、１Ｇ０４による処置が経時的に脂肪酸取り込みを遮断したことを示した。基質添加２５６秒後の脂肪酸取り込みの比較は、１Ｇ０４が、対照細胞に対して脂肪酸取り込みのおよそ１７％を阻害したことを示した（図２７Ｂ；^＊＊＊＝０．００１０のｐ値）。

実施例５：シスプラチンを含む又は含まないＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体を使用した癌の処置
シスプラチンを含む又は含まない両方の、ＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体の効果の組合せに関する研究を、ＮＳＧマウス（免疫不全）で行った。これらの研究の実験概要を図１１Ａに示す。研究は、雄性と雌性の両方のマウスを含んだ。全てのマウスに市販のＦａＤｕ（ＡＴＣＣ）癌細胞を接種し、ルシフェラーゼ及び緑色蛍光タンパク質（Ｌｕｃ－ＧＦＰ）を発現するレトロウイルスベクターで形質導入した。ＦａＤｕ細胞は、扁平上皮癌に由来（すなわち、口腔癌に由来）した。接種前に、ＦａＤｕ細胞を加湿したインキュベーターにおいて３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、５μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン及び１０％ＦＢＳ（GIBCO）を補充したＥＭＥＭ（LONZA）中で増殖させた。

各マウスについて、１０００００個のＦａＤｕ細胞を同所性注射により接種した。以前の試験は、未処置のＮＳＧマウスでは、ＦａＤｕ細胞を接種したマウスの１００％が大きな原発性腫瘍を形成し、接種したマウスの９１％が接種後１週間以内にリンパ節転移を発症することが観察されたことを明らかにした。

接種されたマウスの処置を、癌細胞を接種してから９日後に開始した。接種されたマウスは、４つの異なる処置群に分けた。図１１Ｂに見られるように、処置群は次のとおりであった：
群１：ＩｇＡアイソタイプ対照（ｎ＝７）、
群２：ＩｇＡアイソタイプ対照＋シスプラチン（ｎ＝８）、
群３：抗ＣＤ３６抗体ＯＮＡ－０－ｖ１（ｎ＝８）、
群４：抗ＣＤ３６抗体ＯＮＡ－０－ｖ１＋シスプラチン（ｎ＝８）。

抗体処置を、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により毎日１ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。シスプラチンを、２ｍｇ／ｋｇの用量で週２回投与した（群２及び群４）。シスプラチンを受けなかったマウス（群１及び群３）は、代わりに同量のＰＢＳ注射を受けた。処置の過程で、ｉｎｖｉｖｏイメージングシステム（ＩＶＩＳ）を使用してマウスを週１回観察した。さらに、適切な投与量を更新するために、週に２回マウスの体重を測定した。処置期間の終わりに、マウスを屠殺し、免疫組織化学分析を実施するために臓器及び組織を収集した。

図１２Ａ及び図１２Ｂに見られるように、抗ＣＤ３６抗体であるＯＮＡ－０－ｖ１をシスプラチンと組み合わせて処置すると、原発性腫瘍のＩＶＩＳイメージング及びＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、シスプラチン単独で処置するのと同様の効果があった。このモデルにおける１ｍｇ／ｋｇ用量のＯＮＡ－０－ｖ１単独による処置は、アイソタイプ対照抗体による処置と比較して、原発性腫瘍に対して統計的に有意な影響はなかった。対照的に、図１３Ａ及び図１３Ｂは、ＩＶＩＳイメージングにおける相対強度によって測定される場合、ＯＮＡ－０－ｖ１単独による処置がリンパ節転移の増殖を阻害できたことを示す。さらに、シスプラチンと組み合わせたＯＮＡ－０－ｖ１による処置は、ＩＶＩＳイメージングの相対強度によって測定される場合、リンパ節転移の増殖のほぼ完全な阻害をもたらした。

ＯＮＡ－０－ｖ１抗体による処置は、リンパ節転移の増殖を阻害した。図１４は、ＦａＤｕ細胞の同所性注射後７日目、処置開始直前の接種ＮＳＧマウスの代表的なＩＶＩＳ画像を示す。そのマウスにおけるリンパ節転移は丸で囲まれた領域で示され、ルシフェラーゼシグナル伝達の強度をヒートマップで示す。図１４は、７日目に全ての群のマウスに存在するリンパ節転移の定量化も示す。その初期強度は、全ての群で同じであった。処置の終点で更にＩＶＩＳ画像化を実施し、図１５（左パネル）に示すように、ＯＮＡ－０－ｖ１抗体による処置は、ＩｇＡアイソタイプ対照と比較して、処置の終点と開始点との間のＩＶＩＳ画像強度の比率によって測定する場合、５０％を超えて転移性腫瘍増殖を阻害した。さらに、同じく図１５（右パネル）に示されるように、シスプラチンに対するＯＮＡ－０－ｖ１の添加は、転移性腫瘍増殖を阻害するシスプラチンの能力を増強した。ＯＮＡ－０－ｖ１とシスプラチンとの組合せにより、リンパ節転移における腫瘍増殖のほぼ完全な阻害がもたらされた。

ＯＮＡ－０－ｖ１抗体による処置は、図１６に示すように、リンパ節への転移の浸透も阻害した。全ての対照マウスは、リンパ節転移を示した。シスプラチン又はＯＮＡ－０－ｖ１のいずれかによる処置により、各処置群の８匹の試験マウスのうちの１匹でリンパ節への転移が予防された。さらに、シスプラチンとＯＮＡ－０－ｖ１との組合せが８匹の試験マウスのうち５匹で転移を予防したため、ＯＮＡ－０－ｖ１の浸透阻害はシスプラチンの阻害と相乗的であった。

ＯＮＡ－０－ｖ１抗体による処置は、処置の過程でＮＳＧマウスに十分に許容された。図１７Ａ及び図１７Ｂに示されるように、ＯＮＡ－０－ｖ１処置単独では、アイソタイプ対照処置マウスと比較して、マウスの体重又は血小板数に何の効果もなかった。ＯＮＡ－０－ｖ１処置はまた、シスプラチンを介した体重減少又はシスプラチンを介した血小板数の減少を有意に増強しなかった。

実施例６：ＹＵＭＭ１．７細胞由来黒色腫担癌Ｃ５７Ｂｌ６／Ｊマウスにおける、ＰＤ１阻害と併用した抗ＣＤ３６抗体の抗腫瘍効果
ＹＵＭＭ１．７細胞２５００００個を、ＰＢＳに浮遊させ、８週齢～１２週齢Ｃ５７Ｂｌ６／Ｊマウスの側腹部に皮下注射する。腫瘍が平均体積５０ｍｍ^３～１００ｍｍ^３に到達した時点で、マウスを無作為にグループ分けし、処置を開始する。

実験群は、表９に示すとおりである。

全ての抗体は、濃度１０ｍｇ／ｋｇで、３回／１週間、ＩＰ注射する。マウスは、体重及び腫瘍体積について１週間に３回、挙動及び生存について毎日、監視する。腫瘍が、最大体積１．５００ｍｍ^３に達した時点で、マウスを安楽死させ、組織を収集する。原発性腫瘍の重量を測り、ノギスで再測定する。肺及び肝臓を、Ｈ＆Ｅ染色及び転移性病変の盲検分析用にパラフィン包埋する。この研究の結果は、黒色腫のＹＵＭＭ１．７マウスモデルにおいて、抗ＣＤ３６抗体（例えば、１Ｇ０４）及び抗ＰＤ－１抗体が癌の処置において相加効果又は相乗効果を有することを示すと予想される。

実施例７：ＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体を用いた卵巣癌の処置
卵巣癌に対するＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体の効果の研究を、ＮＳＧマウス（免疫不全）で実施した。これらの研究の実験概要を図１８Ａに示す。研究は雌性マウスのみを含んだ。全てのマウスに、市販のＯＶＣＡＲ－３（ＡＴＣＣ）癌細胞を接種した。ＯＶＣＡＲ－３細胞は、卵巣のヒト進行性腺癌に由来（すなわち、卵巣癌に由来）した。接種前に、ＯＶＣＡＲ－３細胞を３７℃、５％ＣＯ_２の加湿したインキュベーターで培養し、５μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン、０．０１ｍｇ／ｍｌウシインスリン及び２０％ＦＢＳ（GIBCO）を補充したＲＰＭＩ－１６４０中で増殖させた。

各マウスについて、ＯＶＣＡＲ－３異種移植片を同所移植した。図１８Ｂに示すように、ＯＶＣＡＲ－３細胞を移植したＮＳＧマウスは大きな原発性腫瘍を形成する。ＯＶＣＡＲ－３を移植したマウスも、腹膜壁と肝臓の両方に転移を発症する。接種されたマウスからの例示的な転移を、図１９Ａ及び図１９Ｂに示す。

移植されたマウスの処置を、ＯＶＣＡＲ－３腫瘍片による移植の２３日後に開始した。接種されたマウスを、ビヒクル注射対照（ｎ＝９）又はＯＮＡ－０－ｖ１処置（ｎ＝９）の２つの処置群の１つに分けた。抗体処置は、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により３ｍｇ／ｋｇの用量で毎日投与され、対照マウスは同じスケジュールで等量のビヒクルを受けた。処置期間の終わりにマウスを屠殺した。屠殺後、免疫組織化学分析を実施するために臓器及び組織を収集した。

図１８Ｂ及び図１８Ｃに見られるように、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置は、卵巣癌のＯＶＣＡＲ－３マウスモデルにおいてより小さな腫瘍をもたらす。図１８Ｃにおけるこの効果の定量化は、ＯＶＣＡＲ－３による処置が腫瘍重量を平均１．８４４ｇから平均１．０５８に減少させ、４３％減少したことを示す。これらのデータは、ＯＮＡ－０－ｖ１が処置期間中に腫瘍増殖を阻害し、及び／又は腫瘍細胞の破壊を促進したことを示す。

ビヒクル処置マウス及びＯＮＡ－０－ｖ１処置マウスにおける原発性腫瘍の組織学的分析も実施した。最初に、腫瘍を分析して、病理学者の目視検査及び定量化によって壊死率を決定した。この分析の結果を図１８Ｄに示し、これは、ＯＮＡ－０－ｖ１がおよそ２４．４％からおよそ４０．７１％に増加したことを示す（^＊＝０．０２８７のｐ値）。この増加は、処置された腫瘍がより高い細胞死を示すことを示す。処置マウス及びＯＮＡ－０－ｖ１処置マウスの原発性腫瘍も分析し、シリウスレッド染色によってコラーゲン領域と線維領域との割合を決定した。この分析の結果を図１８Ｅに示し、これは、ＯＮＡ－０－ｖ１がＳＲ陽性領域を１６．９％から２２．５％に増加させたことを示す（^＊＝０．０４５７のｐ値）。この増加は、壊死の増加と共に、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置が線維症を増加させたことを示し、処置された腫瘍が小さいだけでなく、より少ない腫瘍細胞で構成されていることを示す。

図２０Ａ、図２０Ｂ、及び図２０Ｃは、ＯＮＡ－０－ｖ１処置マウスにおける転移性腫瘍を定量化した結果を示す。図２０Ａは、ＯＮＡ－０－ｖ１処置したマウスでは、ビヒクル処置マウスと比較して、転移の総数が５０％超減少したことを示す。臓器の目視検査によって、転移の総数を決定した。図２０Ｂ及び図２０Ｃは、それぞれ腹膜壁及び肝臓における転移のサイズの巨視的分析の結果を示す。転移のサイズを、目視検査によって測定した。ビヒクル処置群では、動物の４８％に大きな転移（５ｍｍ超）、４１％に小さな転移（１ｍｍ～２ｍｍ）があり、１１％は腹膜壁に転移がなかった。ＯＮＡ－０－ｖ１処置動物では、大きな転移は検出されず、動物の３８％が小さな転移を示し、６３％は転移を示さなかった。肝臓では、転移のないマウスのパーセンテージが、ビヒクル群の２２％から処置群の５０％に増加した。肝転移のある動物の中で、大きいものの数は１６％から６％に、小さいものは６２％から４４％に減少した。ＯＮＡ－０－ｖ１で処置すると、腹膜壁転移のサイズが移行して大きな転移が完全に消失し、より多くのマウスで腹膜転移が全くなくなった（図２０Ｂ）。同様に、ＯＮＡ－０－ｖ１で処置すると、肝転移のサイズが移行し、大きな転移が少なくなり、より多くのマウスで肝転移が全くなくなった（図２０Ｃ）。まとめると、図２０Ａ、図２０Ｂ、及び図２０Ｃは、ＯＮＡ－０－ｖ１が卵巣癌からの転移の形成及び増殖を減少させるのに有効であることを示す。

実施例８：ＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体を用いた結腸癌の処置
結腸癌に対するＯＮＡ－０－ｖ１抗ＣＤ３６抗体の効果の研究を、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（免疫不全）で実施した。これらの研究の実験概要を図２１Ａに示す。研究は雌性マウスのみを含んだ。全てのマウスに市販のＨＣＴ－１１６（ＡＴＣＣ）癌細胞を接種し、ルシフェラーゼを発現するレトロウイルスベクターで形質導入した。ＨＣＴ－１１６細胞は、ヒト結腸直腸癌に由来（すなわち、結腸癌に由来）した。接種前に、ＨＣＴ－１１６細胞を加湿したインキュベーターにおいて３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、５μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン及び１０％ＦＢＳ（GIBCO）を補充したＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地中で増殖させた。

各マウスについて、２×１０^６個のＨＣＴ－１１６細胞を同所性注射により接種した。接種後及び１週間後に各マウスを撮像し、処置開始前にｅｘｖｉｖｏ発光により肝転移を確認した。ＨＣＴ－１１６細胞を接種してから１４日後に処置を開始した。接種されたマウスを、ビヒクル注射対照（ｎ＝１０）又はＯＮＡ－０－ｖ１処置（ｎ＝１０）の２つの処置群の１つに分けた。抗体処置は、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により３ｍｇ／ｋｇの用量で毎日投与され、対照マウスは同じスケジュールで等量のビヒクルを受けた。処置開始後７日目、１４日目、及び２１日目に、全てのマウスをＩＶＩＳで撮像した。処置期間の終わり（２５日目）にマウスを屠殺した。屠殺後、剖検、ｅｘｖｉｖｏＩＶＩＳ、及び組織病理学を実施するために、臓器及び組織を収集した。

図２１Ｂ及び図２１Ｃは、ＨＣＴ－１１６接種部位に形成された原発性腫瘍のＩＶＩＳイメージングを示す。図２１Ｂは、経時的なｉｎｖｉｖｏ総腫瘍生物発光の変化を示し、２１日目までに、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置がビヒクル処置対照と比較して腫瘍の増殖を減少させたことを示す（^＊＝０．０２８８のｐ値）。図２１Ｃは、マウスの屠殺後にｅｘｖｉｖｏイメージングによって測定された、２５日目の腫瘍の生物発光を示す。ＯＮＡ－０－ｖ１処置は、ビヒクル処置対照（平均放射輝度２．１５×１０^１０）と比較して、腫瘍の増殖を減少させた（平均放射輝度１．５１×１０^１０）ことが再び観察された。

図２２Ａ、図２２Ｂ、図２２Ｃ、及び図２２Ｄは、ＯＮＡ－０－ｖ１及びビヒクル処置マウスにおける転移性腫瘍を定量化した結果を示す。肝臓、肺、脾臓、及び腎臓における転移性腫瘍の浸透度を、ｅｘｖｉｖｏ発光によって定量化し、発光を示さなかった臓器を転移のないものとして特徴付けた。図２２Ａは、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置が、肝臓に腫瘍を有するマウスのパーセンテージを９０％から６０％に減少させたことを示す（^＊＝０．０００１未満のｐ値）。同様に、図２２Ｂは、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置が、肺に腫瘍を有するマウスのパーセンテージを８０％から６０％に減少させたことを示す（^＊＝０．００３２のｐ値）。

肝臓、肺、脾臓、及び腎臓における転移性腫瘍の発光も定量化し、図２３Ａ、図２３Ｂ、図２３Ｃ、及び図２３Ｄはその定量化の結果を示す。マウスから検査対象臓器を摘出した後、ＩＶＩＳで検査した。図２３Ｂ及び図２３Ｄは、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置が、処置マウスからのｅｘｖｉｖｏの肺（１．２３×１０^７に対して１．２４×１０^６）（図２３Ｂ）及び腎臓（４．２６×１０^６に対して１．０８×１０^６）（図２３Ｄ）における発光のほぼ完全な除去をもたらしたことを示し、それらの臓器における転移の完全又はほぼ完全な排除を反映する。同様に、図２３Ａ及び図２３Ｃは、ＯＮＡ－０－ｖ１による処置が、処置されたマウスからのｅｘｖｉｖｏの肝臓（１．４１×１０^８に対して９．０２×１０^７）及び脾臓（３．７７×１０^８に対して１．７９×１０^８）における発光の減少をもたらしたことを示し、肺の転移のサイズ及び／又は数の減少を反映する。これらのデータは、ＯＮＡ－０－ｖ１が結腸癌の転移の広がり及び増殖の強力な阻害剤であることを示す。

ＨＣＴ－１１６を接種したマウスの体重も、実験の過程で追跡した。図２４は、１８日目以降、ＯＮＡ－０－ｖ１で処置されたマウスが平均して対照マウスよりも高い体重を有していたことを示す。例えば、１８日目に、対照マウスの体重は開始時の体重の８４．３％であったが、ＯＮＡ－０－ｖ１で処置したマウスの体重は開始時の体重の９１．１％であった。これは、ＯＮＡ－０－ｖ１マウスがより健康であり、より良好に結腸癌腫瘍と闘うことができることを反映する。

実施例９：ＯＮＡ－０－ｖ１及び１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体を用いた卵巣癌の処置
卵巣癌に対するＯＮＡ－０－ｖ１及び１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体の効果の研究を、ＮＳＧマウス（免疫不全）で実施した。これらの研究の実験概要を図２５Ａに示す。研究は雌性マウスのみを含んだ。全てのマウスに、市販のＯＶＣＡＲ－３（ＡＴＣＣ）癌細胞を接種した。ＯＶＣＡＲ－３細胞は、卵巣のヒト進行性腺癌に由来（すなわち、卵巣癌に由来）した。各マウスについて、ＯＶＣＡＲ－３異種移植片を同所移植した。接種前に、ＯＶＣＡＲ－３細胞を３７℃、５％ＣＯ_２の加湿したインキュベーターで培養し、５μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン、０．０１ｍｇ／ｍｌウシインスリン及び２０％ＦＢＳ（GIBCO）を補充したＲＰＭＩ－１６４０中で増殖させた。

移植されたマウスの処置を、ＯＶＣＡＲ－３腫瘍片による移植の７日後に開始した。接種されたマウスを、ビヒクル注射対照（ｎ＝９）、ＯＮＡ－０－ｖ１処置（ｎ＝９）、又は１Ｇ０４処置（ｎ＝９）の３つの処置群の１つに分けた。ＯＮＡ－０－ｖ１抗体処置を、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により３ｍｇ／ｋｇの用量で毎日投与した。１Ｇ０４抗体処置を、ｉ．ｐ．注射でＴＩＷ（週３回）１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。対照マウスは、毎日等量のビヒクルを受けた。図２５Ｂに見られるように、３つの処置群全てのマウスの体重は、処置期間を通じて同じままであった。処置期間の終わりにマウスを屠殺した。屠殺後、剖検及び組織病理学分析を実施するために臓器及び組織を収集した。

図２５Ｃ～図２５Ｇは、処置されたマウスにおける転移性腫瘍を定量化した結果を示す。図２５Ｃは、各処置条件についての転移の総数を示す。臓器の目視検査によって、転移の総数を決定した。この分析により、ＯＮＡ－０－ｖ１処置マウスでは、ビヒクル処置マウスと比較して、転移数がおよそ４５％減少したことが明らかになった（ビヒクルでは５２個の転移がカウントされ、処置群では２９個の転移がカウントされた）。転移の総数も、ビヒクル処置マウスと比較して、１Ｇ０４処置マウスでおよそ３５％減少した（ビヒクルで５２個の転移がカウントされ、処置群で３４個の転移がカウントされた）。

図２５Ｄ及び図２５Ｅは、それぞれ腹膜壁及び肝臓における転移のサイズの巨視的分析の結果を示す。転移のサイズを、目視検査によって測定した。ＯＮＡ－０－ｖ１又は１Ｇ０４のいずれかで処置すると、観察される転移のサイズが減少し、大きい（５ｍｍ超）及び中（１ｍｍ～２ｍｍ）サイズの観察される転移が少なくなった。ビヒクル処置動物は、２６％のマウスが腹膜壁に５ｍｍ超の転移を有し、３９％が２ｍｍ～５ｍｍの転移を有し、１３％が１ｍｍ～２ｍｍの転移を有することを示した。ＯＮＡ－０－ｖ１処置動物は、１９％のマウスが腹膜壁に５ｍｍ超の転移を有し、１９％が２ｍｍ～５ｍｍの転移を有し、１９％が１ｍｍ～２ｍｍの転移を有することを示した。１Ｇ０４処置動物は、７％のマウスが腹膜壁に５ｍｍ超の転移を有し、１１％が２ｍｍ～５ｍｍの転移を有し、４９％が１ｍｍ～２ｍｍの転移を有することを示した。さらに、処置マウスの肝臓も同様のパターンを示した。ビヒクル処置動物は、５％のマウスが肝臓に２ｍｍ～５ｍｍの転移を有し、２５％が１ｍｍ～２ｍｍの転移を有し、２５％が１ｍｍ未満の転移を有することを示した。ＯＮＡ－０－ｖ１処置動物は、６％のマウスが肝臓に２ｍｍ～５ｍｍの転移を有し、１７％が１ｍｍ～２ｍｍの転移を有することを示し、１ｍｍ未満の転移を有するものはなかった。１Ｇ０４処置で２ｍｍ～５ｍｍの転移はなく、１１％に１ｍｍ～２ｍｍの転移があり、１ｍｍ未満の転移はなかった。さらに、ＯＮＡ－０－ｖ１又は１Ｇ０４のいずれかによる処置は、腹膜壁及び肝臓に転移のない動物のパーセンテージを増加させた。ビヒクル処置マウスの２２％、ＯＮＡ－０－ｖ１処置マウスの４４％、及び１Ｇ０４処置マウスの３３％で、腹膜壁に転移はなかった。ビヒクル処置マウスの４４％、ＯＮＡ－０－ｖ１処置マウスの７８％、及び１Ｇ０４処置マウスの８９％で、肝臓に転移はなかった。

図２５Ｆは、肺における転移の浸透度の顕微鏡分析の結果を示す。腹膜壁及び肝臓と同様に、ＯＮＡ－０－ｖ１又は１Ｇ０４のいずれかによる処置は、肺に転移のない動物のパーセンテージを増加させた（ビヒクル群で３３％から、それぞれＯＮＡ－０－ｖ１群で４４％及び１Ｇ０４群で６６％）。さらに、図２５Ｇで定量化されるように、ＯＮＡ－０－ｖ１又は１Ｇ０４のいずれかによる処置は、マウス１匹当たりの肺における転移数を減少させた（平均転移数は、ビヒクル処置群で３．６、ＯＮＡ－０－ｖ１群で１．６、及び１Ｇ０４群で１．２）。

まとめると、図２５Ｃ～図２５Ｇは、ＯＮＡ－０－ｖ１（マウスＩｇＡ抗体）及び１Ｇ０４（キメラＩｇＧ１抗体）の両方が、卵巣癌からの転移の形成及び増殖を減少させるのに有効であることを示す。

実施例１０：１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体を用いた結腸癌の処置
結腸癌に対する１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体の効果の研究を、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（免疫不全）で実施した。これらの研究の実験概要を図２６Ａに示す。研究は雌性マウスのみを含んだ。全てのマウスに市販のＨＣＴ－１１６（ＡＴＣＣ）癌細胞を接種し、ルシフェラーゼを発現するレトロウイルスベクターで形質導入した。ＨＣＴ－１１６細胞は、ヒト結腸直腸癌に由来（すなわち、結腸癌に由来）した。接種前に、ＨＣＴ－１１６細胞を加湿したインキュベーターにおいて３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、５μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン及び１０％ＦＢＳ（GIBCO）を補充したＭｃＣｏｙ’ｓ５Ａ培地中で増殖させた。

各マウスについて、２×１０^６個のＨＣＴ－１１６細胞を同所性注射により接種した。接種後及び１週間後に各マウスを撮像し、処置開始前にｅｘｖｉｖｏ発光により肝転移を確認した。ＨＣＴ－１１６細胞を接種してから１２日後に処置を開始した。接種されたマウスを、ビヒクル注射対照（ｎ＝１０）又は１Ｇ０４処置（ｎ＝１０）の２つの処置群の１つに分けた。抗体処置は、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により１０ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に３回投与され、対照マウスは同じスケジュールで等量のビヒクルを受けた。処置開始の１日前と処置開始後７日目、１４日目、及び２１日目に、全てのマウスをＩＶＩＳで撮像した。処置期間の終わり（２５日目）にマウスを屠殺した。屠殺後、剖検、ｅｘｖｉｖｏＩＶＩＳ、及び組織病理学を実施するために、臓器及び組織を収集した。

図２６Ｂに見られるように、１Ｇ０４で処置されたマウスは、処置の間、体重をより良好に維持することができた。図２６Ｃは、マウスにおけるルシフェラーゼ含有腫瘍細胞の増殖の読み出しである、経時的な動物全体の生物発光イメージングの結果を示す。生物発光イメージングは、１Ｇ０４が動物全体の発光を減少させ、したがって注入されたＨＣＴ－１１６腫瘍細胞のｉｎｖｉｖｏでの増殖を遅らせることを示した。

図２６Ｄ、図２６Ｅ、図２６Ｆ、及び図２６Ｇは、１Ｇ０４及びビヒクル処置マウスにおける転移性腫瘍を定量化した結果を示す。マウスから検査対象臓器を摘出した後、肝臓（図２６Ｄ）、肺（図２６Ｅ）、脾臓（図２６Ｆ）、及び腎臓（図２６Ｇ）の転移性腫瘍の発光を、ＩＶＩＳを使用するｅｘｖｉｖｏ発光によって定量化した。各臓器において、１Ｇ０４処置は発光を減少させ、転移のサイズ及び／又は数の減少を反映する。ビヒクル処置マウスの肝臓、肺、脾臓、及び腎臓について観察された平均発光値は、それぞれ、１．６９×１０^８、５．３８×１０^６、２．６６×１０^８、及び４．１１×１０^７であった。１Ｇ０４処置マウスの肝臓、肺、脾臓及び腎臓について観察された平均発光値は、それぞれ１．０７×１０^８、１．６８×１０^６、１．８３×１０^７、及び１．４６×１０^７であった。これらのデータは、１Ｇ０４が結腸癌の転移の拡散及び増殖の強力な阻害剤であることを示す。

まとめると、図２６Ｄ～図２６Ｇは、１Ｇ０４が結腸癌からの転移の形成及び増殖を減少させるのに有効であることを示す。

実施例１１：１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体を用いた肺癌の処置
肺癌に対する１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体の効果の研究を、ＮＳＧマウス（免疫不全）で実施した。これらの研究の実験概要を図３０Ａに示す。研究は雌性マウスのみを含んだ。全てのマウスに市販のＡ５４９－ｌｕｃ２（ＡＴＣＣ）癌細胞を接種し、これはルシフェラーゼを発現するレンチウイルスベクターによる安定した形質導入によって生成されたＡ５４９細胞の改変バージョンである。Ａ５４９細胞を、肺癌腫に由来（すなわち、肺癌に由来）する細胞であるため、肺癌のマウスモデルの一部として使用した。接種前に、Ａ５４９細胞を加湿したインキュベーターにおいて３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、５μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン及び１０％ＦＢＳ（GIBCO）を補充したＦ－１２Ｋ培地中で増殖させた。

各マウスについて、１×１０^６個のＡ５４９細胞を尾静脈注射により静脈内接種した。接種後及び１週間後に各マウスを撮像し、処置開始前に発光により肺転移を確認した。Ａ５４９細胞を接種してから８日後に処置を開始した。図３０Ｂに詳述するように、接種したマウスをビヒクル注射対照（ｎ＝１１）又は１Ｇ０４処置（ｎ＝１１）の２つの処置群の１つに分けた。抗体処置は、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により１０ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に３回投与され、対照マウスは同じスケジュールで等量のビヒクルを受けた。処置開始の１日前と、処置開始後１週間に１回、全てのマウスをＩＶＩＳで撮像した。処置期間の終わり（６１日目）にマウスを屠殺した。屠殺後、剖検及びｅｘｖｉｖｏＩＶＩＳを実施するために臓器及び組織を収集した。

図３０Ｃは、動物全体の生物発光を経時的に画像化した結果を示し、１Ｇ０４処置マウスでは蛍光の減少が観察される。これは、１Ｇ０４処置がｉｎｖｉｖｏで注射されたＡ５４９腫瘍細胞の増殖を減少させたことを示す（^＊＊＝ｐ＝０．０００２のｐ値）。終点で、１Ｇ０４抗体処置マウスの肺は、対照ビヒクル処置マウスの肺より小さく（図３０Ｄ）、発生した腫瘍の増殖が少なかったことを示す。観察された平均肺重量は、ビヒクル処置マウスで０．９０ｇ、１Ｇ０４処置マウスで０．７２ｇであった（２０％減少）。図３０Ｅに示されるように、１Ｇ０４で処置された動物はまた、終点で肺においてより少ない発光を示した（２．１１×１０^８に対して１．３９×１０^８）。これらの結果は、１Ｇ０４が肺癌の転移増殖を阻害することを示す。

実施例１２：１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体を用いた結腸癌の処置
肺癌に対する１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体の効果の研究を、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（免疫適格性）で実施した。これらの研究の実験概要を図３１Ａに示す。研究は雌性マウスのみを含んだ。全てのマウスに、ルシフェラーゼを発現するベクターで形質導入した市販のＭＣ－３８癌細胞を接種した。ＭＣ－３８細胞は、マウス結腸腺癌に由来する（すなわち、結腸癌に由来する）細胞である。接種前に、ＭＣ－３８細胞を加湿したインキュベーターにおいて３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、５μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン及び１０％ＦＢＳ（GIBCO）を補充したＤＭＥＭ培地中で増殖させた。

各マウスについて、１×１０^６個のＭＣ－３８細胞を脾臓内に接種した。各マウスを４日後に撮像し、接種後５日目に処置を開始する前に肝転移をｅｘｖｉｖｏ発光によって確認した。図３１Ｂに詳述されているように、接種されたマウスを、ビヒクル注射対照（ｎ＝１３）又は１Ｇ０４処置（ｎ＝１０）の２つの処置群の１つに分けた。抗体処置は、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により１０ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に３回投与され、対照マウスは同じスケジュールで等量のビヒクルを受けた。処置開始の１日前と、処置開始後１週間に２回、全てのマウスをＩＶＩＳで撮像した。処置期間の終わり（６０日目）にマウスを屠殺した。屠殺後、剖検及びｅｘｖｉｖｏＩＶＩＳを実施するために臓器及び組織を収集した。

研究の間、動物全体の生物発光イメージングは、１Ｇ０４処置が発光を減少させ、腫瘍増殖の減少を示すことを示した（^＊＝０．００３のｐ値、図３１Ｃ）。発光のｅｘｖｉｖｏ分析は、１Ｇ０４で処置されたマウスが、肝臓（１．４１×１０^９に対して６．６７×１０^４）及び肺（７．２３×１０^６に対して６．７８×１０^４）の両方においてより低い発光を示すことを示した（それぞれ図３１Ｄ及び図３１Ｅ）。結論として、１Ｇ０４は結腸癌の転移サイズを縮小させる有効性を示した。

実施例１３：１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体を用いた乳癌の処置
乳癌に対する１Ｇ０４抗ＣＤ３６抗体の効果の研究をＢＡＬＢ／ｃマウス（免疫適格性）で実施した。これらの研究の実験概要を図３２Ａに示す。研究は雌性マウスのみを含んだ。全てのマウスに、ルシフェラーゼを発現するベクターで形質導入した市販の４Ｔ１癌細胞（ＡＴＣＣ）を接種した。４Ｔ１細胞は、マウス乳腺組織に由来（すなわち乳癌に由来）した。接種前に、４Ｔ１細胞を加湿したインキュベーターで３７℃、５％ＣＯ_２で培養し、５μｇ／ｍｌペニシリン／ストレプトマイシン、２ｍＭＬ－グルタミン、及び１０％ＦＢＳ（GIBCO）を補充したＲＰＭＩ培地中で増殖させた。

各マウスについて、４×１０^４個の４Ｔ１細胞を乳房脂肪体に同所接種した。４Ｔ１細胞を接種してから５日後に処置を開始した。マウスを、ビヒクル注射対照（ｎ＝１０）又は１Ｇ０４処置（ｎ＝１０）の２つの処置群のうちの１つに分けた。抗体処置は、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により１０ｍｇ／ｋｇの用量で１週間に３回投与され、対照マウスは同じスケジュールで等量のビヒクルを受けた（図３２Ｂ）。処置期間の終わり（２２日目）にマウスを屠殺した。屠殺後、剖検及びｅｘｖｉｖｏＩＶＩＳを実施するために臓器及び組織を収集した。

１Ｇ０４処置マウスでは、ビヒクル処置マウスと比較して肺の発光が減少し（２．４９×１０^５に対して５．９６×１０^４、図３２Ｃ）、抗ＣＤ３６処置が転移のサイズ及び／又は遠隔臓器への転移拡散を減少させることを示している。

Claims

軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合する単離抗体であって、前記重鎖ＣＤＲ３領域が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ３領域である、単離抗体。
軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合するキメラ抗体であって、前記重鎖ＣＤＲ３領域が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ３領域である、キメラ抗体。
軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合するヒト化抗体であって、前記重鎖ＣＤＲ３領域が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ３領域である、ヒト化抗体。
軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合する単離抗体であって、
前記軽鎖ＣＤＲ１領域、前記軽鎖ＣＤＲ２領域、及び前記軽鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号７に存在する軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域であり、
前記重鎖ＣＤＲ１領域、前記重鎖ＣＤＲ２領域、及び前記重鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域である、単離抗体。
軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合するキメラ抗体であって、
前記軽鎖ＣＤＲ１領域、前記軽鎖ＣＤＲ２領域、及び前記軽鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号７に存在する軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域であり、
前記重鎖ＣＤＲ１領域、前記重鎖ＣＤＲ２領域、及び前記重鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域である、キメラ抗体。
軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、軽鎖ＣＤＲ３領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域を含む、ＣＤ３６に結合するヒト化抗体であって、
前記軽鎖ＣＤＲ１領域、前記軽鎖ＣＤＲ２領域、及び前記軽鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号７に存在する軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域であり、
前記重鎖ＣＤＲ１領域、前記重鎖ＣＤＲ２領域、及び前記重鎖ＣＤＲ３領域は、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号５に存在する重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、及び重鎖ＣＤＲ３領域である、ヒト化抗体。
前記重鎖ＣＤＲ１領域が配列番号２７を含み、前記重鎖ＣＤＲ２領域が配列番号２８を含み、前記重鎖ＣＤＲ３領域が配列番号２９を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３０を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２領域が配列番号３１を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３領域が配列番号３２を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
前記重鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３７を含み、前記重鎖ＣＤＲ２領域が配列番号３８を含み、前記重鎖ＣＤＲ３領域が配列番号２９を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３０を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２領域が配列番号３１を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３領域が配列番号３２を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
前記重鎖ＣＤＲ１領域が配列番号３９を含み、前記重鎖ＣＤＲ２領域が配列番号４０を含み、前記重鎖ＣＤＲ３領域が配列番号４１を含み、前記軽鎖ＣＤＲ１領域が配列番号４２を含み、前記軽鎖ＣＤＲ２領域が配列番号４３を含み、前記軽鎖ＣＤＲ３領域が配列番号３２を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体。
前記重鎖ＣＤＲ領域が、
（ａ）配列番号３７、配列番号３８、及び配列番号２９、
（ｂ）配列番号４４、配列番号４６、及び配列番号２９、又は、
（ｃ）配列番号４５、配列番号４７、及び配列番号２９、
を含む、請求項３記載のヒト化抗体。
前記軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号３０、配列番号３１、及び配列番号３２を含む、請求項３又は１０に記載のヒト化抗体。
前記軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号４８、配列番号３１、及び配列番号３２を含む、請求項３又は１０に記載のヒト化抗体。
前記軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号４８、配列番号４９、及び配列番号３２を含む、請求項３又は１０に記載のヒト化抗体。
前記軽鎖ＣＤＲ領域が配列番号３０、配列番号５０、及び配列番号３２を含む、請求項３又は１０に記載のヒト化抗体。
前記重鎖可変領域が、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、又は配列番号５４を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、又は配列番号５８を含む、請求項３及び１０～１４のいずれか一項に記載のヒト化抗体。
前記ヒト化抗体が、
（ａ）配列番号５１を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号５２を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域と、
（ｃ）配列番号５３を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域と、又は、
（ｄ）配列番号５４を含む重鎖可変領域と、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７若しくは配列番号５８を含む軽鎖可変領域と、
を含む、請求項１５に記載のヒト化抗体。
配列番号７における軽鎖及び配列番号５における重鎖を含む抗体と同じヒトＣＤ３６のエピトープに結合する単離抗体。
ヒトＣＤ３６への結合について、配列番号７における軽鎖及び配列番号５における重鎖を含む抗体と競合する単離抗体。
前記抗体がＣＤ３６に特異的に結合しない抗体を実質的に含まない、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗体。
前記抗体が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号９に存在する軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖を実質的に含まない、請求項１～１９のいずれか一項に記載の抗体。
前記抗体がヒトＣＤ３６に結合する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗体。
前記抗体が、１対１モデルに当てはめたＳＰＲデータを用いて測定される場合、１０ｎＭ未満のＫ_ＤでヒトＣＤ３６に結合する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の抗体。
前記抗体が、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するＶＨを含む、請求項１、２、４、５、７～９、又は１９～２２のいずれか一項に記載の抗体。
前記抗体が配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２３に記載の抗体。
前記抗体が、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の同一性を有するＶＬを含む、請求項１、２、４、５、７～９、又は１９～２２のいずれか一項に記載の抗体。
前記抗体が配列番号１３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項２５に記載の抗体。
重鎖定常領域を更に含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
前記重鎖定常領域が、ヒト免疫グロブリンＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４の重鎖定常領域からなる群より選択される、請求項２７に記載の抗体。
ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項２８に記載の抗体。
前記重鎖定常領域が、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（「ＬＡＬＡ」）を含有するＩｇＧ定常領域を含む、請求項２９に記載の抗体。
前記重鎖定常領域が、Ｌ２３４Ｇ、Ｌ２３５Ｓ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｓ、Ｌ２３５Ｖ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｑ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ｔ、Ｌ２３５Ｔ、及びＧ２３６Ｒ；Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ；並びにＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇからなる群より選択されるアミノ酸置換のセットを含有するＩｇＧ定常領域を含む、請求項２９に記載の抗体。
ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、請求項２８に記載の抗体。
前記重鎖定常領域が、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含有するＩｇＧ定常領域を含む、請求項３１に記載の抗体。
前記抗体が軽鎖定常領域を更に含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の抗体。
前記軽鎖定常領域が、ヒト免疫グロブリンκ及びλ軽鎖定常領域からなる群より選択される、請求項３４に記載の抗体。
前記抗体が重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を更に含み、前記重鎖定常領域がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域であり、前記軽鎖定常領域がヒトκ軽鎖定常領域である、請求項１～３５のいずれか一項に記載の抗体。
前記抗体が配列番号２３における軽鎖及び配列番号２１における重鎖を含む、請求項１～２、４～５、又は１７～３６のいずれか一項に記載の抗体。
前記抗体が配列番号２３における軽鎖及び配列番号６４における重鎖を含む、請求項１～２、４～５、又は１７～３６のいずれか一項に記載の抗体。
抗原結合フラグメントである、請求項１～３６のいずれか一項に記載の抗体。
前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、イントラボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_３、テトラボディ、トリアボディ、ダイアボディ、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）_２、又はｓｃＦｖ－Ｆｃを含む、請求項３９に記載の抗原結合フラグメント。
請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗体と薬学的に許容され得る賦形剤とを含む医薬組成物。
前記組成物中の抗体の少なくとも９５％が脱フコシル化されている、請求項４１に記載の医薬組成物。
ＰＤ－１阻害剤を更に含む、請求項４１又は請求項４２に記載の医薬組成物。
前記ＰＤ－１阻害剤が抗ＰＤ－１抗体である、請求項４３に記載の医薬組成物。
前記抗ＰＤ－１抗体がペムブロリズマブ、ピジリズマブ、又はニボルマブである、請求項４４に記載の医薬組成物。
ＰＤ－Ｌ１阻害剤を更に含む、請求項４１～４５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ＰＤ－Ｌ１阻害剤が抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項４６に記載の医薬組成物。
前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、又はＢＭＳ－９３６５５９である、請求項４７に記載の医薬組成物。
ＣＴＬＡ－４阻害剤を更に含む、請求項４１～４８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記ＣＴＬＡ－４阻害剤が抗ＣＴＬＡ－４抗体である、請求項４９に記載の医薬組成物。
前記抗ＣＴＬＡ－４抗体がイピリムマブである、請求項５０に記載の医薬組成物。
前記組成物が化学療法剤を更に含む、請求項４１～５１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記化学療法剤がシスプラチンである、請求項５２に記載の医薬組成物。
前記抗体が、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って識別される配列番号９に存在する軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、及び軽鎖ＣＤＲ３領域を含む軽鎖を実質的に含まない、請求項４１～５３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
患者において癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗体、又は治療有効量の請求項４１～５４のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
前記癌が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫からなる群である、請求項５５に記載の方法。
患者において１つ以上の転移性腫瘍を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗体、又は治療有効量の請求項４１～５４のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
前記転移性腫瘍が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫から発生したものである、請求項５７に記載の方法。
前記治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍のサイズを縮小させる、請求項５８に記載の方法。
前記治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍の形成又は発生を阻害する、請求項５７～５９のいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＣＤ３６抗体が、脂肪酸及び／又はｏｘＬＤＬのＣＤ３６媒介取り込みを遮断する一方で、ＣＤ３６のＴＳＰ－１への結合にはほとんど又は全く影響を及ぼさない、請求項５５～６０のいずれか一項に記載の方法。
前記患者がヒト患者である、請求項５５～６１のいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＣＤ３６抗体が、全長抗体、単鎖抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂフラグメント、又はＦ（ａｂ’）_２フラグメントである、請求項５５～６２のいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＣＤ３６抗体が全長抗体である、請求項５５～６３のいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＣＤ３６抗体が、配列番号２３における軽鎖及び配列番号２１における重鎖を含む、請求項６４に記載の方法。
前記抗ＣＤ３６抗体が、配列番号２３における軽鎖及び配列番号６４における重鎖を含む、請求項６４に記載の方法。
前記方法が第二療法を適用することを更に含む、請求項５５～６６のいずれか一項に記載の方法。
前記第二療法が免疫療法である、請求項６７に記載の方法。
前記免疫療法がＰＤ－１阻害剤である、請求項６８に記載の方法。
前記ＰＤ－１阻害剤が抗ＰＤ－１抗体である、請求項６９に記載の方法。
前記抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、又はニボルマブである、請求項７０に記載の方法。
前記免疫療法がＰＤ－Ｌ１阻害剤である、請求項６８に記載の方法。
前記ＰＤ－Ｌ１阻害剤が抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項７２に記載の方法。
前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、又はＢＭＳ－９３６５５９である、請求項７３に記載の方法。
前記免疫療法がＣＴＬＡ－４阻害剤である、請求項６８に記載の方法。
前記ＣＴＬＡ－４阻害剤が抗ＣＴＬＡ－４抗体である、請求項７５に記載の方法。
前記抗ＣＴＬＡ－４抗体がイピリムマブである、請求項７６に記載の方法。
前記第二療法が化学療法剤である、請求項６７に記載の方法。
前記化学療法剤がシスプラチンである、請求項７８に記載の方法。
前記対象において転移が減少又は阻害される、請求項５５～７９のいずれか一項に記載の方法。
前記２つの療法が逐次適用される、請求項６７～８０のいずれか一項に記載の方法。
前記２つの療法が同時適用される、請求項６７～８０のいずれか一項に記載の方法。
ＣＤ３６を発現する癌を有する対象を治療する方法に用いられる、請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗体であって、治療有効量の本発明による抗ＣＤ３６抗体を前記対象に投与することを含む、抗体。
前記癌が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫である、請求項８３に記載の抗体。
前記癌が転移性癌である、請求項８３又は８４に記載の抗体。
前記治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色により測定した場合、転移性腫瘍のサイズを縮小させる、請求項８３～８５のいずれか一項に記載の抗体。
前記治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍の形成又は発生を阻害する、請求項８３～８６のいずれか一項に記載の抗体。
前記抗ＣＤ３６抗体が、脂肪酸及び／又はｏｘＬＤＬのＣＤ３６媒介取込みを遮断する一方で、ＣＤ３６のＴＳＰ－１への結合にほとんど又は全く影響を及ぼさない、請求項８３～８７のいずれか一項に記載の抗体。
前記方法において前記治療が第二療法と組み合わされる、請求項８３～８８のいずれか一項に記載の抗体。
前記第二療法が免疫療法である、請求項８９に記載の抗体。
前記免疫療法が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＬ－Ｌ１抗体、又は抗ＣＴＬＡ－４抗体である、請求項９０に記載の抗体。
前記第二療法が化学療法剤である、請求項８９に記載の抗体。
前記化学療法剤がシスプラチンである、請求項９２に記載の抗体。
ＣＤ３６を発現する癌を有する対象を治療するための医薬品の製造における、請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗体の使用。
前記癌が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫である、請求項９４に記載の抗体の使用。
前記癌が転移性癌である、請求項９４又は９５に記載の抗体の使用。
前記治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色により測定した場合、転移性腫瘍のサイズを縮小させる、請求項９４～９６のいずれか一項に記載の抗体の使用。
前記治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍の形成又は発生を阻害する、請求項９４～９７のいずれか一項に記載の抗体の使用。
前記抗ＣＤ３６抗体が、脂肪酸及び／又はｏｘＬＤＬのＣＤ３６媒介取込みを遮断する一方で、ＣＤ３６のＴＳＰ－１への結合にほとんど又は全く影響を及ぼさない、請求項９４～９８のいずれか一項に記載の抗体の使用。
前記使用が第二療法と組み合わされる、請求項９４～９９のいずれか一項に記載の抗体の使用。
前記第二療法が免疫療法である、請求項１００に記載の抗体の使用。
前記免疫療法が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＬ－Ｌ１抗体、又は抗ＣＴＬＡ－４抗体である、請求項１０１に記載の抗体の使用。
前記第二療法が化学療法剤である、請求項１００に記載の抗体の使用。
前記化学療法剤がシスプラチンである、請求項１０３に記載の抗体の使用。
請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗体をコードする単離ポリヌクレオチド。
配列番号７における軽鎖及び配列番号５における重鎖をコードする、請求項１０５に記載の単離ポリヌクレオチド。
配列番号８を含む、請求項１０５又は１０６に記載の単離ポリヌクレオチド。
配列番号６を含む、請求項１０５～１０７のいずれか一項に記載の単離ポリヌクレオチド。
配列番号２４を含む、請求項１０５又は１０６に記載の単離ポリヌクレオチド。
配列番号２２を含む、請求項１０５～１０７のいずれか一項に記載の単離ポリヌクレオチド。
請求項１０５～１１０のいずれか一項に記載の単離ポリヌクレオチドを含むベクター。
請求項１０５～１１０のいずれか一項に記載の単離ポリヌクレオチド又は請求項１１１に記載のベクターを含む細胞。
大腸菌、シュードモナス、バチルス、ストレプトマイセス、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ－Ｃ６、ＨＥＫ－２９３Ｔ、ＮＩＨ－３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ－Ｗ、Ｌ－Ｍ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及び組織培養物中のヒト細胞からなる群より選択される、請求項１１２に記載の細胞。
前記細胞が機能的なα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）を欠いている、請求項１１２又は１１３に記載の細胞。
ＣＤ３６に特異的に結合することができる抗体を作製する方法であって、請求項１１２～１１４のいずれか一項に記載の細胞において前記抗体を発現させることを含む、方法。
ＣＤ３６に特異的に結合することができる抗体を作製する方法であって、請求項１１２～１１５のいずれか一項に記載の細胞を培養し、そこで発現された前記抗体を単離することを含む、方法。
医薬組成物の製造のための、請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗体の使用。
医薬組成物の製造のための、請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗体、及び薬学的に許容され得る賦形剤又は担体の使用。
前記転移性腫瘍が、肝臓、肺、脾臓、腎臓、頸部リンパ節、又は腹膜壁の１つ以上に存在する、請求項５７～８２のいずれか一項に記載の方法。
前記転移性癌が、肝臓、肺、脾臓、腎臓、頸部リンパ節、又は腹膜壁の１つ以上における転移性腫瘍を含む、請求項８３～９３のいずれか一項に記載の抗体。
前記転移性癌が、肝臓、肺、脾臓、腎臓、頸部リンパ節、又は腹膜壁の１つ以上における転移性腫瘍を含む、請求項９４～１０４のいずれか一項に記載の抗体の使用。
患者において原発性腫瘍と転移性腫瘍の両方を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１～４０のいずれか一項に記載の抗体、又は治療有効量の請求項４１～５４のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
前記癌が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫である、請求項１２２に記載の方法。
前記転移性腫瘍が、口腔扁平上皮癌、頭頸部癌、食道癌、胃癌、卵巣癌、子宮頸癌、肺癌、乳癌、結腸癌、腎癌、前立腺癌、肉腫、黒色腫、白血病、又はリンパ腫から発生したものである、請求項１２２又は１２３に記載の方法。
前記治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色により測定した場合、転移性腫瘍のサイズを縮小させる、請求項１２２～１２４のいずれか一項に記載の方法。
前記治療が原発性腫瘍のサイズを縮小させる、請求項１２２～１２５のいずれか一項に記載の方法。
前記治療が、ＩＶＩＳイメージング又はＨ＆Ｅ染色によって測定される場合、転移性腫瘍の形成又は発生を阻害する、請求項１２２～１２６のいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＣＤ３６抗体が、脂肪酸及び／又はｏｘＬＤＬのＣＤ３６媒介取り込みを遮断する一方で、ＣＤ３６のＴＳＰ－１への結合にはほとんど又は全く影響を及ぼさない、請求項１２２～１２７のいずれか一項に記載の方法。
前記患者がヒト患者である、請求項１２２～１２８のいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＣＤ３６抗体が、全長抗体、単鎖抗体、ｓｃＦｖ、Ｆａｂフラグメント、又はＦ（ａｂ’）_２フラグメントである、請求項１２２～１２９のいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＣＤ３６抗体が全長抗体である、請求項１２２～１３０のいずれか一項に記載の方法。
前記抗ＣＤ３６抗体が、配列番号２３における軽鎖及び配列番号２１における重鎖を含む、請求項１３１に記載の方法。
前記抗ＣＤ３６抗体が、配列番号２３における軽鎖及び配列番号６４における重鎖を含む、請求項１３１に記載の方法。
前記方法が第二療法を適用することを更に含む、請求項１２２～１３３のいずれか一項に記載の方法。
前記第二療法が免疫療法である、請求項１３４に記載の方法。
前記免疫療法がＰＤ－１阻害剤である、請求項１３５に記載の方法。
前記ＰＤ－１阻害剤が抗ＰＤ－１抗体である、請求項１３６に記載の方法。
前記抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、又はニボルマブである、請求項１３７に記載の方法。
前記免疫療法がＰＤ－Ｌ１阻害剤である、請求項１３５に記載の方法。
前記ＰＤ－Ｌ１阻害剤が抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項１３９に記載の方法。
前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、又はＢＭＳ－９３６５５９である、請求項１４０に記載の方法。
前記免疫療法がＣＴＬＡ－４阻害剤である、請求項１３５に記載の方法。
前記ＣＴＬＡ－４阻害剤が抗ＣＴＬＡ－４抗体である、請求項１４２に記載の方法。
前記抗ＣＴＬＡ－４抗体がイピリムマブである、請求項１４３に記載の方法。
前記第二療法が化学療法剤である、請求項１３４に記載の方法。
前記化学療法剤がシスプラチンである、請求項１４５に記載の方法。
前記対象において転移が減少又は阻害される、請求項１２２～１４６のいずれか一項に記載の方法。
前記２つの療法が逐次適用される、請求項１３４～１４７のいずれか一項に記載の方法。
前記２つの療法が同時適用される、請求項１３４～１４７のいずれか一項に記載の方法。