JP2023532768A - Ｈｐｖ陽性癌の治療用ｒｎａ - Google Patents

Abstract

本開示は、ＨＰＶ陽性癌、特に肛門生殖器、子宮頸および陰茎の癌ならびに生殖器領域の癌および頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）などの頭頸部領域の癌を治療するための治療用ＲＮＡの分野に関する。ＨＰＶ陽性癌の治療のための組成物、使用、および方法が本明細書に開示される。本明細書に開示されるＨＰＶ陽性癌を有する患者への治療用ＲＮＡの投与は、腫瘍サイズを縮小し、進行性疾患までの時間を延長し、ならびに／または腫瘍の転移および／もしくは再発を防ぎ、最終的に生存期間を延長することができる。

Description

本開示は、ＨＰＶ陽性癌、特に肛門生殖器、子宮頸および陰茎の癌ならびに生殖器領域の癌および頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）などの頭頸部領域の癌を治療するための治療用ＲＮＡの分野に関する。

ＨＰＶ陽性癌の治療のための組成物、使用、および方法が本明細書に開示される。本明細書に開示されるＨＰＶ陽性癌を有する患者への治療用ＲＮＡの投与は、腫瘍サイズを縮小し、進行性疾患までの時間を延長し、ならびに／または腫瘍の転移および／もしくは再発を防ぎ、最終的に生存期間を延長することができる。

過去１０年間に、発癌性ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）型による感染が、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、子宮頸癌および肛門生殖器癌を含む様々な癌の原因であることが立証されている（ＩＡＲＣ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ．Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓｅｓ．ＩＡＲＣ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ ｒｉｓｋｓ ｔｏ ｈｕｍａｎｓ．９０，（２００７））。

ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣにおける最も一般的なＨＰＶサブタイプはＨＰＶ１６である。ＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣは、臨床的、組織病理学的および分子的に異なっており（Ｌａｗｒｅｎｃｅ，Ｍ．Ｓ．Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５１７，５７６－５８２（２０１５））、治療方式とは無関係に、発生率が増加しつつあり、ＨＰＶ陰性ＨＮＳＣＣよりも予後が有意に良好である（Ａｎｇ，Ｋ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６３，２４－３５（２０１０）；Ｄａｙｙａｎｉ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ Ｏｎｃｏｌ．２，（２０１０））。ＨＮＳＣＣでは、標準治療には手術、放射線療法および化学療法が含まれ、長期の身体的、機能的および心理社会的障害に関連し、患者の生活の質に強い影響を及ぼす。積極的な治療にもかかわらず、患者の約５０％がその疾患で死亡する（Ａｒｇｉｒｉｓ，Ａ．，Ｋａｒａｍｏｕｚｉｓ，Ｍ．Ｖ，Ｒａｂｅｎ，Ｄ．＆Ｆｅｒｒｉｓ，Ｒ．Ｌ．Ｓｅｍｉｎａｒ：Ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｃａｎｃｅｒ．Ｌａｎｃｅｔ（２００８）．ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０１４０－６７３６（０８）６０７２８－Ｘ；Ｒａｚｚａｇｈｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ １２４，２０３－２１１（２０１８））。治療に関連する罹患率を低減しながら生存率を改善するために、代替的な療法が必要である。

再発性または転移性ＨＮＳＣＣを有する患者の治療のためのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１軸を標的とする免疫チェックポイント遮断療法が最近承認されて以来、免疫学的アプローチを探求することへの関心が高まっている（Ｓｏｕｌｉｅｒｅｓ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ａｂｓｔｒａｃｔ ＣＴ１１５：Ｕｐｄａｔｅｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＫＥＹＮＯＴＥ－０４０ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ ｖｓ ｓｔａｎｄａｒｄ－ｏｆ－ｃａｒｅ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｏｒ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２０１８）．ｄｏｉ：１０．１１５８／１５３８－７４４５．ＡＭ２０１８－ＣＴ１１５）。悪性形質転換を促進し、癌細胞によって構成的に発現されるＨＰＶ癌タンパク質Ｅ６およびＥ７（Ｍｅｓｒｉ，Ｅ．Ａ．，Ｆｅｉｔｅｌｓｏｎ，Ｍ．Ａ．＆Ｍｕｎｇｅｒ，Ｋ．，Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｅ（２０１４）．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｈｏｍ．２０１４．０２．０１１）は、免疫療法の理想的な標的である。これは、ＨＰＶ１６癌タンパク質に対して自発的に生じるＴ細胞がＨＰＶ陽性前悪性病変のウイルスクリアランスおよび退縮に重要であるという観察結果（Ｋｅｎｔｅｒ，Ｇ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６１，１８３８－１８４７（２００９））、ならびに腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の密度がＨＰＶ陽性ＨＮＳＣＣの転帰の強力な予測因子であるという観察結果によってさらに裏付けられる（Ｗａｒｄ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １１０，４８９－５００（２０１４））。

臨床試験において、治療用ＨＰＶ１６ワクチンは、免疫化によってＥ６およびＥ７に対する全身性ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答を誘導する可能性を実証した（Ｋｅｎｔｅｒ，Ｇ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６１，１８３８－１８４７（２００９）；Ｔｒｉｍｂｌｅ，Ｃ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３８６，２０７８－２０８８（２０１５）；Ｗｅｌｔｅｒｓ，Ｍ．Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２４，６３４－６４７（２０１８））。

癌ワクチンの最終的な目標は、抗原を、最適な免疫刺激条件下でのその提示のために選択的にリンパ節における抗原提示細胞に送達することによって、強力で持続的かつ臨床的に適切な免疫応答を誘導することである（Ｍｅｌｅｒｏ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１１，５０９－２４（２０１４））。

合成ｍＲＮＡは、その有利な特性のために魅力的なワクチン形式として浮上している：ｍＲＮＡは非組込み型であり、したがって安全であると考えられている。これは、コードされた抗原をＨＬＡ非依存的に送達し、そのＴＬＲ７／８リガンド活性のために天然のアジュバントであり、その産生は時間および費用効率が高い。

ＩＡＲＣ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ．Ｈｕｍａｎ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓｅｓ．ＩＡＲＣ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ ｒｉｓｋｓ ｔｏ ｈｕｍａｎｓ．９０，（２００７） Ｌａｗｒｅｎｃｅ，Ｍ．Ｓ．Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５１７，５７６－５８２（２０１５） Ａｎｇ，Ｋ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６３，２４－３５（２０１０） Ｄａｙｙａｎｉ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｈｅａｄ Ｎｅｃｋ Ｏｎｃｏｌ．２，（２０１０） Ａｒｇｉｒｉｓ，Ａ．，Ｋａｒａｍｏｕｚｉｓ，Ｍ．Ｖ，Ｒａｂｅｎ，Ｄ．＆ Ｆｅｒｒｉｓ，Ｒ．Ｌ．Ｓｅｍｉｎａｒ：Ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｃａｎｃｅｒ．Ｌａｎｃｅｔ（２００８）．ｄｏｉ：１０．１０１６／Ｓ０１４０－６７３６（０８）６０７２８－Ｘ Ｒａｚｚａｇｈｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ １２４，２０３－２１１（２０１８） Ｓｏｕｌｉｅｒｅｓ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ａｂｓｔｒａｃｔ ＣＴ１１５：Ｕｐｄａｔｅｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＫＥＹＮＯＴＥ－０４０ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ ｖｓ ｓｔａｎｄａｒｄ－ｏｆ－ｃａｒｅ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｏｒ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２０１８）．ｄｏｉ：１０．１１５８／１５３８－７４４５．ＡＭ２０１８－ＣＴ１１５ Ｍｅｓｒｉ，Ｅ．Ａ．，Ｆｅｉｔｅｌｓｏｎ，Ｍ．Ａ．＆ Ｍｕｎｇｅｒ，Ｋ．，Ｃｅｌｌ Ｈｏｓｔ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｂｅ（２０１４）．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｈｏｍ．２０１４．０２．０１１ Ｋｅｎｔｅｒ，Ｇ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６１，１８３８－１８４７（２００９） Ｗａｒｄ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １１０，４８９－５００（２０１４） Ｔｒｉｍｂｌｅ，Ｃ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３８６，２０７８－２０８８（２０１５） Ｗｅｌｔｅｒｓ，Ｍ．Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２４，６３４－６４７（２０１８） Ｍｅｌｅｒｏ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１１，５０９－２４（２０１４）

ここで、本発明者らは、マウスモデルにおける最初の静脈内投与されたＲＮＡベースの治療用ＨＰＶ１６ワクチンであるＨＰＶ１６ Ｅ６およびＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸの特性評価を提示する。ヒト化ＨＬＡトランスジェニックＡ２ＤＲ１マウス（ヒトＨＬＡ－Ａ＊０２０１およびＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０１分子を発現する）におけるＨＰＶ１６ Ｅ６およびＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸによるワクチン接種は、ワクチンコード抗原に対する強いＴ細胞応答を誘導する。マウスにおいてＥ６癌タンパク質に由来する天然にプロセシングされ、提示されたＣＤ８^＋Ｔ細胞エピトープは存在しないので、治療実験は、本発明者らのＨＰＶ１６ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチンを治療的に評価するためにＥ７癌タンパク質に焦点を当てている。

本発明者らは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸによる強いＴ細胞免疫の誘導を示し、これは、Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞、ＣＤ４ Ｔ細胞、ＮＫ細胞および炎症誘発性（ｉＮＯＳ分泌）マクロファージのＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ媒介浸潤を介してマウスＨＰＶ１６陽性ＴＣ－１およびＣ３腫瘍の持続的寛解をもたらす。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種は、ＴＣ－１およびＣ３腫瘍拒絶を増強し、再発を防止し、さらにＰＤ－Ｌ１阻害剤などの免疫チェックポイント遮断療法と相乗作用する。

さらに、本発明者らは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸが、多くのＨＰＶ＋癌患者の標準治療である局所放射線療法（ＬＲＴ）と相乗作用することを示す。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴの併用は、いずれの単独療法後にも見られなかった、ＨＰＶ１６^＋ＴＣ－１およびＣ３腫瘍モデルの両方の優れた退縮を媒介する。

Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチンは、主にＥ７特異的腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞を誘導したが、ＬＲＴは、腫瘍細胞死をさらに増加させ、局所免疫抑制を低減し、ワクチンで刺激された細胞傷害性Ｔ細胞をより強力にした。

免疫抑制性Ｔｒｅｇの動員は、腫瘍細胞上の負のＴ細胞調節因子であるＰＤ－Ｌ１の発現と同様に、ＬＲＴを受けたか否かにかかわらず、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置腫瘍において同等であった。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスおよび併用療法処置マウスは高レベルのＰＤ－Ｌ１を示し、これは、Ｅ７特異的Ｔ細胞によるＴＭＥにおける連続的なＩＦＮγ分泌の結果である可能性が高い。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種は、Ｅ７特異的ＣＤ８ ＴＩＬ上のＰＤ－１およびＴｉｍ－３ならびにＮＫＧ２ＡＢの発現を増加させたが、ＬＲＴの併用はＮＫＧ２ＡＢ発現をさらに増加させた。本明細書に提示されるデータは、ＬＲＴに加えて、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ ＣＰＩなどのチェックポイント遮断が、ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸなどのＨＰＶベースのワクチンを含む治療の魅力的な組合せパートナーであり得ることを示唆する。

さらに、本発明者らは、シスプラチンがＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種の抗腫瘍効果を増強することを示す。したがって、ＲＮＡ－ＬＰＸワクチンおよび白金ベースの化学療法は、改善された癌治療のための相乗的な組合せパートナーとして使用することができる。

本発明は、一般に、（ｉ）ＨＰＶ Ｅ６タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片、すなわち抗原性ペプチドもしくはタンパク質を含むアミノ酸配列、すなわちワクチン抗原をコードするＲＮＡ、すなわちワクチンＲＮＡ、および（ｉｉ）ＨＰＶ Ｅ７タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片、すなわち抗原性ペプチドもしくはタンパク質を含むアミノ酸配列、すなわちワクチン抗原をコードするＲＮＡ、すなわちワクチンＲＮＡの投与を含む、対象の免疫療法治療を包含する。したがって、ワクチン抗原は、対象において、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質に対する免疫応答を誘導するためのＨＰＶ Ｅ６タンパク質またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質のエピトープを含む。ワクチン抗原をコードするＲＮＡを投与して、（適切な標的細胞によるポリヌクレオチドの発現後に）標的抗原（ＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはＨＰＶ Ｅ７タンパク質）またはそのプロセシング産物を標的とする免疫応答、例えば抗体および／または免疫エフェクタ細胞の誘導、すなわち刺激、プライミングおよび／または拡大のための抗原を提供する。一実施形態では、本開示に従って誘導される免疫応答は、Ｂ細胞媒介免疫応答、すなわち抗体媒介免疫応答である。一実施形態では、本開示に従って誘導される免疫応答は、Ｔ細胞媒介免疫応答である。一実施形態では、免疫応答は抗ＨＰＶ免疫応答である。

本明細書に記載のワクチンは、活性成分として、レシピエントの細胞に入るとそれぞれのタンパク質に翻訳され得る一本鎖ＲＮＡを含む。抗原配列をコードする野生型またはコドン最適化配列に加えて、ＲＮＡは、安定性および翻訳効率に関してＲＮＡの最大有効性のために最適化された１つ以上の構造要素を含み得る（５'キャップ、５'ＵＴＲ、３'ＵＴＲ、ポリ（Ａ）尾部）。一実施形態では、ＲＮＡはこれらの要素の全てを含む。一実施形態では、β－Ｓ－ＡＲＣＡ（Ｄ１）（ｍ_２ ^{７，２'－Ｏ}ＧｐｐＳｐＧ）を、ＲＮＡ原薬の５'末端の特異的キャッピング構造として利用し得る。５'－ＵＴＲ配列として、任意で翻訳効率を高めるために最適化された「コザック配列」を有する、ヒトα－グロビンｍＲＮＡの５'－ＵＴＲ配列を使用し得る。３'－ＵＴＲ配列として、より高い最大タンパク質レベルおよびｍＲＮＡの長期持続性を確実にするために、コード配列とポリ（Ａ）尾部との間に配置された「スプリットのアミノ末端エンハンサ」（ＡＥＳ）ｍＲＮＡ（Ｆと呼ばれる）およびミトコンドリアコード１２ＳリボソームＲＮＡ（Ｉと呼ばれる）に由来する２つの配列要素（ＦＩ要素）の組合せを使用し得る。これらは、ＲＮＡの安定性を付与し、総タンパク質発現を増強する配列のエクスビボ選択プロセスによって同定された（参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１７／０６０３１４号参照）。さらに、３０個のアデノシン残基のストレッチ、それに続く（ランダムヌクレオチドの）１０個のヌクレオチドリンカー配列および別の７０個のアデノシン残基からなる、１１０ヌクレオチド長と測定されるポリ（Ａ）尾部を使用し得る。このポリ（Ａ）尾部配列は、ＲＮＡ安定性および翻訳効率を高めるように設計された。

さらに、ｓｅｃ（分泌シグナルペプチド）および／またはＭＩＴＤ（ＭＨＣクラスＩ輸送ドメイン）は、それぞれの要素がそれぞれＮ末端タグまたはＣ末端タグとして翻訳されるように抗原コード領域に融合され得る。ヒトＭＨＣクラスＩ複合体（ＨＬＡ－Ｂ５１、ハプロタイプＡ２、Ｂ２７／Ｂ５１、Ｃｗ２／Ｃｗ３）をコードする配列に由来する融合タンパク質タグは、抗原プロセシングおよび提示を改善することが示されている。ｓｅｃは、新生ポリペプチド鎖の小胞体への移行を誘導する分泌シグナルペプチドをコードする７８ｂｐ断片に対応し得る。ＭＩＴＤは、ＭＨＣクラスＩ輸送ドメインとも呼ばれる、ＭＨＣクラスＩ分子の膜貫通および細胞質ドメインに対応し得る。融合タンパク質に一般的に使用されるような、主にアミノ酸グリシン（Ｇ）およびセリン（Ｓ）からなる短いリンカーペプチドをコードする配列は、ＧＳ／リンカーとして使用され得る。

抗原は、免疫寛容を破壊するためにヘルパーエピトープと組み合わせて投与され得る。ヘルパーエピトープは、破傷風トキソイド由来、例えば破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）の破傷風トキソイド（ＴＴ）由来のＰ２Ｐ１６アミノ酸配列であり得る。これらの配列は、プライミング中に腫瘍非特異的Ｔ細胞支援を提供することによって寛容機構を克服するのを支持し得る。破傷風トキソイド重鎖は、ＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子に無差別に結合し、破傷風ワクチン接種を受けたほぼ全ての個体においてＣＤ４＋記憶Ｔ細胞を誘導することができるエピトープを含む。さらに、ＴＴヘルパーエピトープと腫瘍関連抗原との組合せは、プライミング中にＣＤ４＋媒介Ｔ細胞支援を提供することによって、腫瘍関連抗原単独の適用と比較して免疫刺激を改善することが公知である。ＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激するリスクを低減するために、無差別に結合するヘルパーエピトープを含むことが公知の２つのペプチド配列を使用して、可能な限り多くのＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子、例えばＰ２およびＰ１６への結合を確実にし得る。

一実施形態では、ワクチン抗原は、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、ヘルパーエピトープ、好ましくは破傷風トキソイド由来のヘルパーエピトープを含む。免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、ワクチン配列、例えば抗原配列のＣ末端に直接またはリンカーによって分離されて融合され得る。任意で、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、ワクチン配列とＭＩＴＤとを連結し得る。免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、コードされたＲＮＡであり得る。一実施形態では、抗原標的化ＲＮＡを、ヘルパーエピトープをコードするＲＮＡと共に適用して、得られる免疫応答を増強する。ヘルパーエピトープをコードするこのＲＮＡは、抗原コードＲＮＡについて上述した安定性および翻訳効率に関してＲＮＡの最大有効性のために最適化された構造要素（５'キャップ、５'ＵＴＲ、３'ＵＴＲ、ポリ（Ａ）尾部）を含み得る。

ワクチンＲＮＡをリポソームと複合体化して、静脈内（ｉ．ｖ．）投与のための血清安定性ＲＮＡ－リポプレックス（ＬＰＸ）を生成し得る。異なるＲＮＡの組合せを使用する場合、ＲＮＡをリポソームと別々に複合体化して、静脈内（ｉ．ｖ．）投与のための血清安定性ＲＮＡ－リポプレックスを生成し得る。ＲＮＡ－リポプレックスは、免疫系の効率的な刺激をもたらすリンパ器官の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を標的とし得る。

ＲＮＡリポプレックス粒子は、脂質のエタノール溶液を水または適切な水相に注入することによって得られ得るリポソームを使用して調製され得る。一実施形態では、水相は酸性ｐＨを有する。一実施形態では、水相は、例えば約５ｍＭの量の酢酸を含む。リポソームは、リポソームをＲＮＡと混合することによってＲＮＡリポプレックス粒子を調製するために使用され得る。一実施形態では、リポソームおよびＲＮＡリポプレックス粒子は、少なくとも１つのカチオン性脂質および少なくとも１つのさらなる脂質を含む。一実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質は、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）を含む。一実施形態では、少なくとも１つのさらなる脂質は、１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む。一実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質は、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）を含み、少なくとも１つのさらなる脂質は、１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む。一実施形態では、リポソームおよびＲＮＡリポプレックス粒子は、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）および１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む。一実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質対少なくとも１つのさらなる脂質のモル比は、約２：１である。一実施形態では、生理学的ｐＨで、ＲＮＡリポプレックス粒子における正電荷対負電荷の電荷比は、約１．６：２～約１：２、または約１．６：２～約１．１：２である。特定の実施形態では、生理学的ｐＨでのＲＮＡリポプレックス粒子における正電荷対負電荷の電荷比は、約１．６：２．０、約１．５：２．０、約１．４：２．０、約１．３：２．０、約１．２：２．０、約１．１：２．０、または約１：２．０である。

一実施形態では、ワクチンＲＮＡは、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡと、リポプレックス粒子として共製剤化される。

一態様では、本発明は、少なくとも１つのＲＮＡを含む組成物または医薬製剤に関し、ここで、少なくとも１つのＲＮＡは、
（ｉ）ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列；および
（ｉｉ）ＨＰＶ Ｅ７タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列
をコードする。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列のそれぞれは、別個のＲＮＡによってコードされている。

一実施形態では、
（ｉ）（ｉ）のアミノ酸配列をコードするＲＮＡは、配列番号２のヌクレオチド配列、または配列番号２のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む；および／または
（ｉｉ）（ｉ）のアミノ酸配列は、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、
（ｉ）（ｉｉ）のアミノ酸配列をコードするＲＮＡは、配列番号４のヌクレオチド配列、または配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む；および／または
（ｉｉ）（ｉｉ）のアミノ酸配列は、配列番号３のアミノ酸配列、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）の少なくとも１つのアミノ酸配列は、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）の各アミノ酸配列は、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、ＭＨＣ分子、好ましくはＭＨＣクラスＩ分子の膜貫通および細胞質ドメインに対応するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、配列番号２６のアミノ酸配列、または配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列をさらに含む。

一実施形態では、分泌シグナルペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列、または配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）の少なくとも１つのアミノ酸配列は、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列を含み、および／または少なくとも１つのＲＮＡは、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡと同時投与される。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）の各アミノ酸配列は、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列を含み、および／または各ＲＮＡは、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡと同時投与される。

一実施形態では、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、ヘルパーエピトープ、好ましくは破傷風トキソイド由来のヘルパーエピトープを含む。

一実施形態では、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、配列番号２７のアミノ酸配列、または配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列の少なくとも１つは、コドン最適化されたコード配列、および／またはＧ／Ｃ含有量が野生型コード配列と比較して増加しているコード配列によってコードされ、ここで、コドン最適化および／またはＧ／Ｃ含有量の増加は、好ましくはコードされたアミノ酸配列の配列を変化させない。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列のそれぞれは、コドン最適化されたコード配列、および／またはＧ／Ｃ含有量が野生型コード配列と比較して増加しているコード配列によってコードされ、ここで、コドン最適化および／またはＧ／Ｃ含有量の増加は、好ましくはコードされたアミノ酸配列の配列を変化させない。

一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、修飾ＲＮＡ、特に安定化されたｍＲＮＡである。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一実施形態では、各ＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一実施形態では、各ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一実施形態では、修飾ヌクレオシドは、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）、および５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される。

一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、５'キャップｍ_２ ^{７，２'－Ｏ}Ｇｐｐ_ｓｐ（５'）Ｇを含む。

一実施形態では、各ＲＮＡは、５'キャップｍ_２ ^{７，２'－Ｏ}Ｇｐｐ_ｓｐ（５'）Ｇを含む。

一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号３０のヌクレオチド配列、または配列番号３０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む５'－ＵＴＲを含む。

一実施形態では、各ＲＮＡは、配列番号３０のヌクレオチド配列、または配列番号３０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む５'－ＵＴＲを含む。

一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号３１のヌクレオチド配列、または配列番号３１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む３'－ＵＴＲを含む。

一実施形態では、各ＲＮＡは、配列番号３１のヌクレオチド配列、または配列番号３１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む３'－ＵＴＲを含む。

一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡはポリＡ配列を含む。

一実施形態では、各ＲＮＡはポリＡ配列を含む。

一実施形態では、ポリＡ配列は、少なくとも１００個のヌクレオチドを含む。

一実施形態では、ポリＡ配列は、配列番号３２のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態では、（ｉ）のアミノ酸配列、すなわち、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、Ｎ－分泌シグナルペプチド－Ｅ６－免疫寛容を破壊するアミノ酸配列－抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列－Ｃを含む。

一実施形態では、（ｉｉ）のアミノ酸配列、すなわちＨＰＶ Ｅ７タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、Ｎ－分泌シグナルペプチド－Ｅ７－免疫寛容を破壊するアミノ酸配列－抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列－Ｃを含む。

一実施形態では、ＲＮＡは、液体として製剤化されるか、固体として製剤化されるか、またはそれらの組合せである。

一実施形態では、ＲＮＡは注射用に製剤化される。

一実施形態では、ＲＮＡは静脈内投与用に製剤化される。

一実施形態では、ＲＮＡは、リポプレックス粒子として製剤化されるか、または製剤化されることになっている。

一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、ＲＮＡをリポソームと混合することによって得られる。

一実施形態では、組成物または医薬製剤は、免疫チェックポイント阻害剤をさらに含む。

一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤およびＰＤ－Ｌ１阻害剤から選択される。

一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体から選択される。

一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－１抗体である。

一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ；ＭＫ－３４７５）、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ；ＢＭＳ－９３６５５８）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、セミプリマブ（ＬＩＢＴＡＹＯ、ＲＥＧＮ２８１０）、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２）、セトレリマブ（ＪＮＪ ６３７２３２８３）、トリパリマブ（ＪＳ００１）、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫ－２６６１３８０）、ＰＦ－０６８０１５９１、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、ＡＢＢＶ－１８１、ＢＩ ７５４０９１、またはＳＨＲ－１２１０である。

一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ；ＲＧ７４４６；ＭＰＤＬ３２８０Ａ；Ｒ０５５４１２６７）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９、アベルマブ（バベンチオ）、ロダポリマブ（ＬＹ３３０００５４）、ＣＸ－０７２（Ｐｒｏｃｌａｉｍ－ＣＸ－０７２）、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、またはＭＤＸ－１１０５である。

一実施形態では、組成物または医薬製剤は、白金化合物をさらに含む。

一実施形態では、白金化合物はシスプラチンを含む。

一実施形態では、組成物または医薬製剤は、免疫チェックポイント阻害剤および白金化合物を含む。

一実施形態では、組成物または医薬製剤は医薬組成物である。

一実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤をさらに含む。

一実施形態では、医薬製剤はキットである。

一実施形態では、ＲＮＡおよび任意で免疫チェックポイント阻害剤は、別々のバイアル中にある。

一実施形態では、組成物または医薬製剤は、ＨＰＶ陽性癌を治療または予防するためのＲＮＡおよび任意で免疫チェックポイント阻害剤の使用説明書をさらに含む。

一態様では、本発明は、医薬用途のための本明細書に記載の組成物または医薬製剤に関する。

一実施形態では、医薬用途は、疾患または障害の治療的または予防的処置を含む。

一実施形態では、疾患または障害の治療的または予防的処置は、ＨＰＶ陽性癌を治療または予防することを含む。

一実施形態では、本明細書に記載の組成物または医薬製剤は、ヒトへの投与用である。

一実施形態では、疾患または障害の治療的または予防的処置は、放射線療法、好ましくは局所放射線療法を投与することをさらに含む。

一実施形態では、疾患または障害の治療的または予防的処置は、さらなる療法を投与することをさらに含む。一実施形態では、さらなる療法は、腫瘍を摘出する、切除する、もしくは減量する手術、および／または化学療法を含む。一実施形態では、さらなる療法は、さらなる治療薬を投与することを含む。一実施形態では、さらなる治療薬は抗癌治療薬を含む。

一態様では、本発明は、対象におけるＨＰＶ陽性癌を治療する方法であって、少なくとも１つのＲＮＡを対象に投与することを含み、ここで、少なくとも１つのＲＮＡが、
（ｉ）ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列；および
（ｉｉ）ＨＰＶ Ｅ７タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列
をコードする、方法に関する。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列のそれぞれは、別個のＲＮＡによってコードされている。

一実施形態では、
（ｉ）（ｉ）のアミノ酸配列をコードするＲＮＡは、配列番号２のヌクレオチド配列、または配列番号２のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む；および／または
（ｉｉ）（ｉ）のアミノ酸配列は、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、
（ｉ）（ｉｉ）のアミノ酸配列をコードするＲＮＡは、配列番号４のヌクレオチド配列、または配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む；および／または
（ｉｉ）（ｉｉ）のアミノ酸配列は、配列番号３のアミノ酸配列、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）の少なくとも１つのアミノ酸配列は、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）の各アミノ酸配列は、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、ＭＨＣ分子、好ましくはＭＨＣクラスＩ分子の膜貫通および細胞質ドメインに対応するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、配列番号２６のアミノ酸配列、または配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、分泌シグナルペプチドをコードするアミノ酸配列をさらに含む。

一実施形態では、分泌シグナルペプチドは、配列番号２５のアミノ酸配列、または配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）の少なくとも１つのアミノ酸配列は、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列を含み、および／または少なくとも１つのＲＮＡは、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡと同時投与される。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）の各アミノ酸配列は、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列を含み、および／または各ＲＮＡは、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡと同時投与される。

一実施形態では、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、ヘルパーエピトープ、好ましくは破傷風トキソイド由来のヘルパーエピトープを含む。

一実施形態では、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、配列番号２７のアミノ酸配列、または配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列の少なくとも１つは、コドン最適化されたコード配列、および／またはＧ／Ｃ含有量が野生型コード配列と比較して増加しているコード配列によってコードされ、ここで、コドン最適化および／またはＧ／Ｃ含有量の増加は、好ましくはコードされたアミノ酸配列の配列を変化させない。

一実施形態では、（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列のそれぞれは、コドン最適化されたコード配列、および／またはＧ／Ｃ含有量が野生型コード配列と比較して増加しているコード配列によってコードされ、ここで、コドン最適化および／またはＧ／Ｃ含有量の増加は、好ましくはコードされたアミノ酸配列の配列を変化させない。

一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、修飾ＲＮＡ、特に安定化されたｍＲＮＡである。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一実施形態では、各ＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一実施形態では、各ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。一実施形態では、修飾ヌクレオシドは、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）、および５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される。

一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、５'キャップｍ_２ ^{７，２'－Ｏ}Ｇｐｐ_ｓｐ（５'）Ｇを含む。

一実施形態では、各ＲＮＡは、５'キャップｍ_２ ^{７，２'－Ｏ}Ｇｐｐ_ｓｐ（５'）Ｇを含む。

一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号３０のヌクレオチド配列、または配列番号３０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む５'－ＵＴＲを含む。

一実施形態では、各ＲＮＡは、配列番号３０のヌクレオチド配列、または配列番号３０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む５'－ＵＴＲを含む。

一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号３１のヌクレオチド配列、または配列番号３１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む３'－ＵＴＲを含む。

一実施形態では、各ＲＮＡは、配列番号３１のヌクレオチド配列、または配列番号３１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む３'－ＵＴＲを含む。

一実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡはポリＡ配列を含む。

一実施形態では、各ＲＮＡはポリＡ配列を含む。

一実施形態では、ポリＡ配列は、少なくとも１００個のヌクレオチドを含む。

一実施形態では、ポリＡ配列は、配列番号３２のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる。

一実施形態では、（ｉ）のアミノ酸配列、すなわち、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、Ｎ－分泌シグナルペプチド－Ｅ６－免疫寛容を破壊するアミノ酸配列－抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列－Ｃを含む。

一実施形態では、（ｉｉ）のアミノ酸配列、すなわちＨＰＶ Ｅ７タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、Ｎ－分泌シグナルペプチド－Ｅ７－免疫寛容を破壊するアミノ酸配列－抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列－Ｃを含む。

一実施形態では、ＲＮＡは注射によって投与される。

一実施形態では、ＲＮＡは静脈内投与によって投与される。

一実施形態では、ＲＮＡはリポプレックス粒子として製剤化される。

一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、ＲＮＡをリポソームと混合することによって得られる。

一実施形態では、本明細書に記載の方法は、対象に免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。

一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤およびＰＤ－Ｌ１阻害剤から選択される。

一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体から選択される。

一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－１抗体である。

一実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ；ＭＫ－３４７５）、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ；ＢＭＳ－９３６５５８）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、セミプリマブ（ＬＩＢＴＡＹＯ、ＲＥＧＮ２８１０）、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２）、セトレリマブ（ＪＮＪ ６３７２３２８３）、トリパリマブ（ＪＳ００１）、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫ－２６６１３８０）、ＰＦ－０６８０１５９１、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、ＡＢＢＶ－１８１、ＢＩ ７５４０９１、またはＳＨＲ－１２１０である。

一実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

一実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ；ＲＧ７４４６；ＭＰＤＬ３２８０Ａ；Ｒ０５５４１２６７）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９、アベルマブ（バベンチオ）、ロダポリマブ（ＬＹ３３０００５４）、ＣＸ－０７２（Ｐｒｏｃｌａｉｍ－ＣＸ－０７２）、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、またはＭＤＸ－１１０５である。

一実施形態では、対象はヒトである。

一実施形態では、本明細書に記載の方法は、放射線療法、好ましくは局所放射線療法を対象に投与することをさらに含む。

一実施形態では、本明細書に記載の方法は、放射線療法、好ましくは局所放射線療法、および免疫チェックポイント阻害剤を対象に投与することを含む。

一実施形態では、本方法は、さらなる療法を投与することをさらに含む。一実施形態では、さらなる療法は、腫瘍を摘出する、切除する、もしくは減量する手術、および／または化学療法を含む。一実施形態では、さらなる療法は、さらなる治療薬を投与することを含む。一実施形態では、さらなる治療薬は抗癌治療薬を含む。

一実施形態では、本明細書に記載の方法は、対象に白金化合物を投与することをさらに含む。

一実施形態では、白金化合物はシスプラチンを含む。

一実施形態では、本明細書に記載の方法は、免疫チェックポイント阻害剤および白金化合物を対象に投与することを含む。

一実施形態では、本明細書に記載の方法は、放射線療法、好ましくは局所放射線療法、および白金化合物を対象に投与することを含む。

一実施形態では、本明細書に記載の方法は、放射線療法、好ましくは局所放射線療法、免疫チェックポイント阻害剤および白金化合物を対象に投与することを含む。

一態様では、本明細書に記載の方法で使用するための、本明細書に記載のＲＮＡ、例えば、
（ｉ）ＨＰＶ Ｅ６タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列をコードするＲＮＡ；および
（ｉｉ）ＨＰＶ Ｅ７タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列をコードするＲＮＡ
が提供される。

Ｅ６およびＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸによる免疫化は、ヒト化ＨＬＡトランスジェニックＡ２ＤＲ１マウスにおいて強いＥ６およびＥ７抗原特異的Ｔ細胞応答を誘導する Ａ２ＤＲ１マウス（ヒトＨＬＡ－Ａ＊０２０１およびＨＬＡ－ＤＲＢ１＊０１分子を発現する）（ｎ＝３／群）を３０μｇのＥ６またはＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ（ｄ０、ｄ７、ｄ１４、ｄ２１）で免疫化し、最後の免疫化の７日後（ｄ２８）に脾臓を摘出して、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔでワクチンコード抗原に対するＴ細胞反応性を評価した。（Ａ）Ｅ６ ＲＮＡ－ＬＰＸおよび（Ｂ）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種Ａ２ＤＲ１マウスのＴ細胞応答を、Ｅ６、Ｅ７または対照タンパク質（ｐｐ６５）の重複ペプチドプールに対して分析し、ＩＦＮγスポットを計数した。有意性は、一元配置ＡＮＯＶＡ、Ｔｕｋｅｙの事後検定を用いて決定した。平均±ＳＥＭ。 図２：Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化は、進行性ＨＰＶ１６陽性腫瘍の完全寛解を媒介し、保護Ｔ細胞記憶を確立する （Ａ～Ｄ）ＴＣ－１ ｌｕｃ腫瘍細胞を舌の粘膜下内層に移植した。５日後、マウスをＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ（ｎ＝１３）または無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸ（ｎ＝１２）で免疫化した。（Ａ）インビボ生物発光によって測定したＴＣ－１ ｌｕｃ腫瘍成長動態。 （Ｂ～Ｄ）マウスを腫瘍チャレンジの１３日後に犠死させ、腫瘍組織を採取した（ｎ＝３／群）。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸまたは無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸのいずれかで処置したマウスにおける（Ｂ）ＣＤ４５^＋および（Ｃ）Ｅ７_{４９－５７}多量体^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合をフローサイトメトリによって測定した。 （Ｂ～Ｄ）マウスを腫瘍チャレンジの１３日後に犠死させ、腫瘍組織を採取した（ｎ＝３／群）。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸまたは無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸのいずれかで処置したマウスにおける（Ｂ）ＣＤ４５^＋および（Ｃ）Ｅ７_{４９－５７}多量体^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合をフローサイトメトリによって測定した。 （Ｄ）血液および腫瘍におけるＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスのＥ７_{４９－５７}多量体^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞のＣＤ４９α発現。 （Ｅ、Ｆ）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸまたは無関係な（ｅＧＦＰ）ＲＮＡ－ＬＰＸで３回（ｄ４、ｄ７、ｄ１３）免疫化したマウス（ｎ＝１０／群）におけるＴＣ－１腫瘍成長（Ｅ）および生存率（Ｆ）。処置開始時に約６ｍｍ^３の平均腫瘍サイズ。 （Ｅ、Ｆ）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸまたは無関係な（ｅＧＦＰ）ＲＮＡ－ＬＰＸで３回（ｄ４、ｄ７、ｄ１３）免疫化したマウス（ｎ＝１０／群）におけるＴＣ－１腫瘍成長（Ｅ）および生存率（Ｆ）。処置開始時に約６ｍｍ^３の平均腫瘍サイズ。 （Ｇ）最初のＴＣ－１腫瘍チャレンジ後にＴＣ－１で再チャレンジしたＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウス（ｎ＝１０）の生存率。未処置マウス（ｎ＝１０）を対照群とした。 （Ｈ、Ｉ）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ（ｎ＝９）または無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸ（ｎ＝１０）で４回（ｄ１４、ｄ２１、ｄ２７、ｄ３３）免疫化したマウスにおけるＣ３腫瘍成長（Ｈ）および生存率（Ｉ）。処置開始時に約２５ｍｍ^３の平均腫瘍サイズ。 （Ｈ、Ｉ）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ（ｎ＝９）または無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸ（ｎ＝１０）で４回（ｄ１４、ｄ２１、ｄ２７、ｄ３３）免疫化したマウスにおけるＣ３腫瘍成長（Ｈ）および生存率（Ｉ）。処置開始時に約２５ｍｍ^３の平均腫瘍サイズ。 （Ｊ）Ｃ３腫瘍チャレンジ後にＴＣ－１で再チャレンジしたＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスの生存率（ｎ＝１２／群）。未処置マウス（ｎ＝１０）を対照群とした。有意性は、（Ａ）二元配置ＡＮＯＶＡ、Ｓｉｄａｋの多重比較検定、（Ｂ、Ｃ）対応のない両側スチューデントｔ検定および（Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｊ）Ｍａｎｔｅｌ－ｃｏｘログランク検定を用いて決定した。比率は、完全奏効（ＣＲ）を有するマウスの割合を示す。平均±ＳＥＭ。 （図３）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化マウスの腫瘍は、活発な免疫浸潤物、Ｅ７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞、および炎症誘発性、細胞傷害性で免疫抑制性が低い構造を有する Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸまたは無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸによる１回の免疫化の１１日後にマウス（ｎ＝５／群）から切除したＴＣ－１（Ａ、Ｂ、Ｃ～Ｅ）およびＣ３腫瘍（Ａ、Ｂ、Ｆ～Ｈ）におけるＴＩＬの分析（処置開始時にＴＣ－１：約６３ｍｍ^３およびＣ３：約６５ｍｍ^３）。フローサイトメトリによって測定したＴＣ－１およびＣ３腫瘍における、（Ａ）ＣＤ４５^＋細胞の割合および（Ｂ）Ｅ７_{４９－５７}特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞の頻度。 （Ｂ、右）ＴＣ－１腫瘍における代表的なＥ７_{４９－５７}多量体染色。 （Ｃ、Ｆ）（Ｃ）ＴＣ－１および（Ｆ）Ｃ３腫瘍における白血球サブセットの頻度。 （Ｄ、Ｇ）（Ｄ）ＴＣ－１および（Ｇ）Ｃ３腫瘍における腫瘍浸潤ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋Ｔ細胞のＫｉ６７^＋割合。 （Ｅ、Ｈ）（Ｅ）ＴＣ－１および（Ｈ）Ｃ３腫瘍のＴＡＭにおけるｉＮＯＳおよびＣＤ２０６の発現。 （Ｃ、Ｆ）（Ｃ）ＴＣ－１および（Ｆ）Ｃ３腫瘍における白血球サブセットの頻度。 （Ｄ、Ｇ）（Ｄ）ＴＣ－１および（Ｇ）Ｃ３腫瘍における腫瘍浸潤ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋Ｔ細胞のＫｉ６７^＋割合。 （Ｅ、Ｈ）（Ｅ）ＴＣ－１および（Ｈ）Ｃ３腫瘍のＴＡＭにおけるｉＮＯＳおよびＣＤ２０６の発現。 （Ｉ）ｑＲＴ－ＰＣＲによって決定した、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸまたは無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸによる２回の免疫化後に切除したＴＣ－１腫瘍（左）およびＣ３腫瘍（右）における選択した遺伝子の遺伝子発現分析。最後の免疫化の２日後に腫瘍組織を採取した。ヒートマップは、計算し、無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスに対して正規化したｌｏｇ_２倍数変化を示す。（Ａ～Ｈ）有意性は、対応のない両側スチューデントｔ検定および（Ｉ）Ｈｏｌｍ－Ｓｉｄａｋの多重比較検定を用いて決定した。平均±ＳＥＭ。ＴＩＬ：腫瘍浸潤リンパ球；ＴＡＭ：腫瘍関連マクロファージ；ｉＮＯＳ：誘導性一酸化窒素シンターゼ。 （図４）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化は、抗ＰＤ－Ｌ１抵抗性腫瘍を応答性にすることによってチェックポイント遮断と相乗作用する。 （Ａ）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸまたは無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸによる最後の免疫化の２日後にＴＣ－１担癌マウス（ｎ＝５／群）から切除したＴＣ－１腫瘍における差次的遺伝子発現分析（ｄ１３、ｄ１９）。ボルケーノプロットは、計算し、無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスに対して正規化した差次的発現遺伝子（＞２のｌｏｇ_２倍数変化、ＦＤＲ ０．０１）を示す。創薬可能な免疫チェックポイントをコードする遺伝子を強調している。 （Ｂ～Ｄ）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸまたは無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸ（ｄ１１）で免疫化し、抗ＰＤ－Ｌ１（ａＰＤ－Ｌ１）抗体またはアイソタイプ対照で３～４日間（ｄ１５、ｄ１８、ｄ２１、ｄ２５、ｄ２８）処置したＴＣ－１担癌マウス（ｎ＝１４／群）の腫瘍成長（Ｂ）および生存率（Ｃ）。ＴＣ－１腫瘍の平均サイズは、処置開始時に約１２０ｍｍ^３であった。 （Ｂ～Ｄ）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸまたは無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸ（ｄ１１）で免疫化し、抗ＰＤ－Ｌ１（ａＰＤ－Ｌ１）抗体またはアイソタイプ対照で３～４日間（ｄ１５、ｄ１８、ｄ２１、ｄ２５、ｄ２８）処置したＴＣ－１担癌マウス（ｎ＝１４／群）の腫瘍成長（Ｂ）および生存率（Ｃ）。ＴＣ－１腫瘍の平均サイズは、処置開始時に約１２０ｍｍ^３であった。 （Ｄ）末梢Ｅ７_{４９－５７}多量体陽性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合（ｄ１７、ｄ２５、ｄ３２）。有意性は、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスとＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ＋ａＰＤ－Ｌ１処置マウスとの間で、（Ｃ）Ｍａｎｔｅｌ－ｃｏｘログランク検定および（Ｄ）二元配置ＡＮＯＶＡ、Ｓｉｄａｋの多重比較検定を用いて決定した。（Ｂ）比率は、完全奏効（ＣＲ）を有するマウスの割合を示す。平均±ＳＥＭ。ＦＤＲ＝偽発見率 （図５）ＬＲＴは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種と相乗作用して、確立されたＨＰＶ１６^＋腫瘍を抑制する。 （Ａ～Ｃ）７５ｍｍ^３の平均腫瘍体積でＥ７または対照（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸを用いて免疫化し、腫瘍を１２Ｇｙ、７Ｇｙまたは１．８Ｇｙで局所照射した、皮下ＴＣ－１担癌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝６～１４／群）における抗腫瘍効果。（Ａ）個々の腫瘍成長曲線。 （図５）ＬＲＴは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種と相乗作用して、確立されたＨＰＶ１６^＋腫瘍を抑制する。 （Ａ～Ｃ）７５ｍｍ^３の平均腫瘍体積でＥ７または対照（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸを用いて免疫化し、腫瘍を１２Ｇｙ、７Ｇｙまたは１．８Ｇｙで局所照射した、皮下ＴＣ－１担癌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝６～１４／群）における抗腫瘍効果。（Ａ）個々の腫瘍成長曲線。 （Ｂ）生存率。（Ｂ、Ｄ）の有意性はＭａｎｔｅｌ－Ｃｏｘログランク検定を用いて、（Ｃ）の有意性は一元配置ＡＮＯＶＡ、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定を用いて決定した。 （Ｃ）フローサイトメトリによって決定した血液中のＥ７多量体^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞（ｎ＝４／群）。（Ｄ、Ｅ）６５ｍｍ^３の平均腫瘍体積でＥ７または対照（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸを用いて免疫化し、腫瘍を１２Ｇｙで局所照射した、皮下Ｃ３担癌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝１０～１１／群）における抗腫瘍効果。 （Ｄ）生存率。（Ｂ、Ｄ）の有意性はＭａｎｔｅｌ－Ｃｏｘログランク検定を用いて、（Ｃ）の有意性は一元配置ＡＮＯＶＡ、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定を用いて決定した。 （Ｅ）個々の腫瘍成長曲線。（Ａ、Ｅ）比率は、完全奏効（ＣＲ）を有するマウスの割合を示す。平均±ＳＥＭ。 （図６）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスの腫瘍はエフェクタ免疫細胞によって高度に浸潤されている。 １６５ｍｍ^３の平均腫瘍体積でＥ７または対照（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸをワクチン接種し、１２Ｇｙで局所照射した、皮下ＴＣ－１担癌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝６／群）から切除した皮下ＴＣ－１腫瘍、脾臓および腫瘍排出リンパ節（鼠径）のフローサイトメトリ特性評価。（Ａ）平均腫瘍成長。 （Ｂ）腫瘍浸潤ＣＤ４５^＋白血球および腫瘍細胞の割合、ならびに（Ｃ）ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）およびＮＫ細胞の割合。 （Ｂ）腫瘍浸潤ＣＤ４５^＋白血球および腫瘍細胞の割合、ならびに（Ｃ）ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）およびＮＫ細胞の割合。 （Ｄ）腫瘍、脾臓および腫瘍排出リンパ節におけるＥ７_{４９－５７}多量体陽性ＣＤ８^＋Ｔ細胞の割合。代表的な疑似カラープロットは、ＴＣ－１腫瘍におけるＥ７_{４９－５７}多量体染色を示す。 （Ｅ）Ｅ７_{４９－５７}ペプチドによるエクスビボ再刺激後のＣＤ８^＋ＴＩＬに対するＩＦＮγおよびＴＮＦαの細胞内サイトカイン染色。（Ｂ～Ｅ）の有意性は、一元配置ＡＮＯＶＡ、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定を用いて決定した。平均±ＳＥＭ。ｎｓ：有意差なし。 （図７）ＬＲＴの併用は腫瘍細胞死を増強し、局所免疫抑制を減少させ、ワクチン誘導性ＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖を促進する。 （Ａ～Ｆ）１２５ｍｍ^３の平均腫瘍体積でＥ７または対照（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸをワクチン接種し、１２Ｇｙで局所照射した、皮下ＴＣ－１担癌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝６～７／群）由来の腫瘍細胞のフローサイトメトリ特性評価。（Ａ）腫瘍組織１ｍｇ当たりのＴＣ－１腫瘍細胞数。 （Ｂ）切断型カスパーゼ３^＋ＴＣ－１腫瘍細胞の割合。 （Ｃ～Ｆ）ＴＣ－１腫瘍細胞上の（Ｃ）Ｆａｓ、（Ｄ）ＭＨＣクラスＩ（ｐａｎ Ｈ－２）、（Ｅ）ＰＤ－Ｌ１および（Ｆ）Ｑａ－１^ｂの発現。 （Ｃ～Ｆ）ＴＣ－１腫瘍細胞上の（Ｃ）Ｆａｓ、（Ｄ）ＭＨＣクラスＩ（ｐａｎ Ｈ－２）、（Ｅ）ＰＤ－Ｌ１および（Ｆ）Ｑａ－１^ｂの発現。 （Ｃ～Ｆ）ＴＣ－１腫瘍細胞上の（Ｃ）Ｆａｓ、（Ｄ）ＭＨＣクラスＩ（ｐａｎ Ｈ－２）、（Ｅ）ＰＤ－Ｌ１および（Ｆ）Ｑａ－１^ｂの発現。 （Ｃ～Ｆ）ＴＣ－１腫瘍細胞上の（Ｃ）Ｆａｓ、（Ｄ）ＭＨＣクラスＩ（ｐａｎ Ｈ－２）、（Ｅ）ＰＤ－Ｌ１および（Ｆ）Ｑａ－１^ｂの発現。 （Ｇ）１６０ｍｍ^３の平均腫瘍体積でＥ７または対照（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸを用いて免疫化し、１２Ｇｙで局所照射した、ＴＣ－１担癌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝４／群）由来のＴＣ－１腫瘍切片における低酸素腫瘍領域の免疫蛍光染色。低酸素プローブであるピモニダゾールを腫瘍切除の１時間前に注射した。ピモニダゾール^＋面積を全腫瘍面積の割合として決定した。 （Ｈ）ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）でのインビボ標識によって決定される、１６５ｍｍ^３の平均腫瘍体積でＥ７または対照（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸをワクチン接種し、１２Ｇｙで局所照射した、皮下ＴＣ－１担癌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝６／群）由来のＢｒｄＵ^＋ＣＤ４およびＣＤ８ ＴＩＬの割合。マウスに、１ｍｇのＢｒｄＵ塩基類似体を器官切除の１日前に注射した。（Ａ～Ｆ）の有意性は一元配置ＡＮＯＶＡ、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定を用いて、（Ｇ、Ｈ）の有意性は対応のない両側スチューデントｔ検定を用いて決定した。平均±ＳＥＭ。ＭＦＩ＝蛍光強度中央値。 ＬＲＴは、Ｅ７特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答をより強力かつ持続性にする。 １２０ｍｍ^３の平均腫瘍体積でＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸをワクチン接種し、１２Ｇｙで局所照射した、皮下ＴＣ－１担癌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝７／群）由来の腫瘍浸潤ＣＤ８ Ｔ細胞のフローサイトメトリ特性評価。（Ａ）平均腫瘍成長曲線。（Ｂ）ＴＣ－１腫瘍におけるＥ７特異的ＣＤ８^＋ＴＩＬの割合。（Ｃ～Ｅ）Ｅ７特異的ＣＤ８^＋ＴＩＬにおける（Ｃ）ＴＩＭ－３、（Ｄ）ＰＤ－１の発現、および（Ｅ）ＮＫＧ２ＡＢ^＋細胞の割合。（Ｆ～Ｇ）Ｅ７_{４９－５７}ペプチド負荷Ｃ５７ＢＬ／６ ＢＭＤＣを用いてエクスビボで再刺激したＭＡＣＳ選別ＣＤ８^＋ＴＩＬにおける（Ｆ）ＩＦＮγおよびＴＮＦα、ならびに（Ｇ）ＩＬ－２の細胞内サイトカイン染色。（Ｂ～Ｇ）の有意性は、対応のない両側スチューデントｔ検定によって決定した。平均±ＳＥＭ。ＭＦＩ＝蛍光強度中央値。 （図９）Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸとシスプラチン化学療法は、相乗作用してＨＰＶ１６^＋ＴＣ－１腫瘍を拒絶する。ＴＣ－１ ｌｕｃ担癌Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、１６日目に４０μｇのＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸまたは対照（ＯＶＡ）ＲＮＡ－ＬＰＸで免疫化し、２２日目および２８日目に８０μｇのシスプラチンまたはＰＢＳで腹腔内処置した（ｎ＝１０～１２匹のマウス／群）。Ａ）個々の腫瘍成長曲線。 Ｂ）対照ＲＮＡ－ＬＰＸ＋ＰＢＳ群のマウスの数が４５％に低下した４０日目までの平均腫瘍成長（マウスがｎ≧５匹である限りＬＯＣＦ）。Ｔｕｋｅｙの多重比較検定と二元配置ＡＮＯＶＡ（４０日目の結果を示す）。平均±ＳＥＭ。 Ｃ）生存率。ボンフェローニ補正なしのログランク検定。ＬＯＣＦ＝最後の観察を継続；ＯＶＡ＝ニワトリオボアルブミン；ＲＮＡ ＬＰＸ＝リボ核酸リポプレックス；ＳＥＭ＝平均の標準誤差。

配列表の説明
以下の表は、本明細書で参照される特定の配列のリストを提供する。

本開示を以下で詳細に説明するが、この開示は本明細書に記載される特定の方法、プロトコルおよび試薬に限定されず、これらは異なり得ることが理解されるべきである。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、本開示の範囲を限定することを意図するものではなく、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることも理解されるべきである。特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。

好ましくは、本明細書で使用される用語は、"Ａ ｍｕｌｔｉｌｉｎｇｕａｌ ｇｌｏｓｓａｒｙ ｏｆ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｅｒｍｓ：（ＩＵＰＡＣ Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ）"，Ｈ．Ｇ．Ｗ．Ｌｅｕｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｂ．Ｎａｇｅｌ，ａｎｄ Ｈ．Ｋｏｌｂｌ，Ｅｄｓ．，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ，ＣＨ－４０１０ Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，（１９９５）に記載されているように定義される。

本開示の実施は、特に指示されない限り、当技術分野の文献（例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ １９８９参照）で説明されている化学、生化学、細胞生物学、免疫学、および組換えＤＮＡ技術の従来の方法を用いる。

以下において、本開示の要素を説明する。これらの要素を具体的な実施形態と共に列挙するが、それらは、さらなる実施形態を創出するために任意の方法および任意の数で組み合わせ得ることが理解されるべきである。様々に説明される実施例および実施形態は、本開示を明示的に記載される実施形態のみに限定すると解釈されるべきではない。この説明は、明示的に記載される実施形態を任意の数の開示される要素と組み合わせた実施形態を開示し、包含すると理解されるべきである。さらに、記載される全ての要素の任意の並び替えおよび組合せは、文脈上特に指示されない限り、この説明によって開示されていると見なされるべきである。

「約」という用語は、およそまたはほぼを意味し、本明細書に記載の数値または範囲の文脈において、一実施形態では、列挙または特許請求される数値または範囲の±２０％、±１０％、±５％、または±３％を意味する。

本開示を説明する文脈で（特に特許請求の範囲の文脈で）使用される「１つの」および「その」という用語ならびに同様の言及は、本明細書で特に指示されない限り、または文脈上明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を包含すると解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、その範囲内に属する各々別々の値を個別に言及することの簡略方法として機能することが意図されている。本明細書で特に指示されない限り、個々の値は、本明細書で個別に列挙されているかのごとくに本明細書に組み込まれる。本明細書に記載される全ての方法は、本明細書で特に指示されない限り、または文脈上明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施することができる。本明細書で提供されるありとあらゆる例または例示的言語（例えば、「など」）の使用は、単に本開示をより良く説明することを意図しており、特許請求の範囲に限定を課すものではない。本明細書中のいかなる言語も、本開示の実施に不可欠な特許請求されていない要素を指示すると解釈されるべきではない。

特に明記されない限り、「含む」という用語は、「含む」によって導入されたリストのメンバーに加えて、さらなるメンバーが任意に存在し得ることを示すために本文書の文脈で使用される。しかしながら、「含む」という用語は、さらなるメンバーが存在しない可能性を包含することが本開示の特定の実施形態として企図され、すなわち、この実施形態の目的のためには、「含む」は「からなる」の意味を有すると理解されるべきである。

本明細書の本文全体を通していくつかの資料を引用する。本明細書で引用される各資料（全ての特許、特許出願、科学出版物、製造者の仕様書、指示書などを含む）は、上記または下記のいずれでも、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書のいかなる内容も、本開示がそのような開示に先行する権利を有さなかったことの承認と解釈されるべきではない。

定義
以下において、本開示の全ての態様に適用される定義を提供する。以下の用語は、特に指示されない限り、以下の意味を有する。未定義の用語は、それらの技術分野で広く認められている意味を有する。

本明細書で使用される「低減する」または「阻害する」などの用語は、例えば約５％以上、約１０％以上、約２０％以上、約５０％以上、または約７５％以上のレベルの全体的な減少を生じさせる能力を意味する。「阻害する」という用語または同様の語句には、完全なまたは本質的に完全な阻害、すなわち、ゼロまたは本質的にゼロへの低減が含まれる。

一実施形態における「増加する」または「増強する」などの用語は、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約１００％の増加または増強に関する。

本明細書で使用される「生理学的ｐＨ」は、約７．５のｐＨを指す。

「イオン強度」という用語は、特定の溶液中の異なる種類のイオン種の数とそれらのそれぞれの電荷との間の数学的関係を指す。したがって、イオン強度Ｉは、式

によって数学的に表され、式中、ｃは特定のイオン種のモル濃度、ｚはその電荷の絶対値である。総和Σは、溶液中の全ての異なる種類のイオン（ｉ）に適用される。

本開示によれば、一実施形態における「イオン強度」という用語は、一価イオンの存在に関する。二価イオン、特に二価カチオンの存在に関して、キレート剤の存在により、それらの濃度または有効濃度（遊離イオンの存在）は、一実施形態では、ＲＮＡの分解を防ぐのに十分に低い。一実施形態では、二価イオンの濃度または有効濃度は、ＲＮＡヌクレオチド間のホスホジエステル結合の加水分解のための触媒レベルよりも低い。一実施形態では、遊離二価イオンの濃度は２０μＭ以下である。一実施形態では、遊離二価イオンは存在しないか、または本質的に存在しない。

「凍結」という用語は、通常は熱の除去による、液体の凝固に関する。

「凍結乾燥する」または「凍結乾燥」という用語は、物質を凍結し、次いで周囲の圧力を低下させて、物質中の凍結媒体を固相から気相に直接昇華させることによる物質の凍結乾燥を指す。

「噴霧乾燥」という用語は、容器（噴霧乾燥機）内で（加熱された）気体を霧化（噴霧）される流体と混合することによって物質を噴霧乾燥することを指し、そこで形成された液滴からの溶媒が蒸発し、乾燥粉末をもたらす。

「凍結保護剤」という用語は、凍結段階中に活性成分を保護するために製剤に添加される物質に関する。

「凍結乾燥保護剤」という用語は、乾燥段階中に活性成分を保護するために製剤に添加される物質に関する。

「再構成する」という用語は、乾燥した生成物をその元の液体状態などの液体状態に戻すために、水などの溶媒を乾燥した生成物に添加することに関する。

本開示の文脈における「組換え」という用語は、「遺伝子操作を介して作製された」ことを意味する。一実施形態では、本開示の文脈における「組換え物」は、天然には存在しない。

本明細書で使用される「天然に存在する」という用語は、物体が自然界で見出され得るという事実を指す。例えば、生物（ウイルスを含む）中に存在し、自然界の供給源から単離することができ、実験室で人間によって意図的に改変されていないペプチドまたは核酸は、天然に存在する。「自然界で見出される」という用語は、「自然界に存在する」ことを意味し、公知の物体ならびに自然からまだ発見および／または単離されていないが、天然源から将来発見および／または単離される可能性がある物体を含む。

本開示の文脈において、「粒子」という用語は、分子または分子複合体によって形成される構造化された実体に関する。一実施形態では、「粒子」という用語は、マイクロサイズまたはナノサイズのコンパクトな構造体などの、マイクロサイズまたはナノサイズの構造体に関する。

本開示の文脈において、「ＲＮＡリポプレックス粒子」という用語は、脂質、特にカチオン性脂質、およびＲＮＡを含有する粒子に関する。正に帯電したリポソームと負に帯電したＲＮＡとの間の静電相互作用は、ＲＮＡリポプレックス粒子の複合体化と自発的形成をもたらす。正に帯電したリポソームは、一般に、ＤＯＴＭＡなどのカチオン性脂質、およびＤＯＰＥなどのさらなる脂質を使用して合成され得る。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子はナノ粒子である。

粒子製剤では、各ＲＮＡ種（例えばＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡおよびＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡ）を個々の粒子製剤として別々に製剤化することが可能である。その場合、個々の粒子製剤はそれぞれ１つのＲＮＡ種を含む。個々の粒子製剤は、別々の実体として、例えば別々の容器中に存在し得る。そのような製剤は、粒子形成剤と共に各ＲＮＡ種を別々に（典型的にはそれぞれＲＮＡ含有溶液の形態で）提供し、それにより粒子の形成を可能にすることによって得られる。それぞれの粒子は、粒子が形成されるときに提供される特定のＲＮＡ種のみを含む（個々の粒子製剤）。一実施形態では、医薬組成物などの組成物は、複数の個々の粒子製剤を含む。それぞれの医薬組成物は、混合粒子製剤と称される。本発明による混合粒子製剤は、上記のように、個々の粒子製剤を別々に形成し、続いて個々の粒子製剤を混合する工程によって得られる。混合する工程により、ＲＮＡ含有粒子の混合集団を含む製剤が得られる（例示のために：例えば、粒子の第１の集団は、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡを含み得、粒子の第２の製剤は、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡを含み得る）。個々の粒子集団は、個々の粒子製剤の混合集団を含む１つの容器に一緒に存在し得る。あるいは、医薬組成物の全てのＲＮＡ種（例えば、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡおよびＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡ）を組み合わせた粒子製剤として一緒に製剤化することが可能である。そのような製剤は、粒子形成剤と共に全てのＲＮＡ種の組合せ製剤（典型的には組合せ溶液）を提供し、それにより粒子の形成を可能にすることによって得られる。混合粒子製剤とは対照的に、組合せ粒子製剤は、典型的には複数のＲＮＡ種を含有する粒子を含む。組合せ粒子組成物では、異なるＲＮＡ種が、典型的には単一の粒子中に一緒に存在する。

本開示で使用される場合、「ナノ粒子」は、ＲＮＡおよび少なくとも１つのカチオン性脂質を含み、静脈内投与に適した平均直径を有する粒子を指す。

「平均直径」という用語は、いわゆるキュムラントアルゴリズムを使用したデータ分析を伴う動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定される粒子の平均流体力学的直径を指し、これは、結果として、長さの次元を有するいわゆるＺ_平均、および無次元である多分散指数（ＰＩ）を提供する（Ｋｏｐｐｅｌ，Ｄ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．５７，１９７２，ｐｐ ４８１４－４８２０，ＩＳＯ １３３２１）。ここで、粒子の「平均直径」、「直径」または「サイズ」は、このＺ_平均の値と同義で使用される。

「多分散指数」という用語は、本明細書では、粒子、例えばナノ粒子の集合体のサイズ分布の尺度として使用される。多分散指数は、いわゆるキュムラント解析による動的光散乱測定に基づいて計算される。

「エタノール注入技術」という用語は、脂質を含むエタノール溶液が針を通して水溶液に迅速に注入されるプロセスを指す。この作用は、溶液全体に脂質を分散させ、脂質構造形成、例えばリポソーム形成などの脂質小胞形成を促進する。一般に、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子は、コロイド状リポソーム分散液にＲＮＡを添加することによって得られる。エタノール注入技術を使用して、そのようなコロイド状リポソーム分散液は、一実施形態では、以下のように形成される：ＤＯＴＭＡのようなカチオン性脂質およびさらなる脂質などの脂質を含むエタノール溶液を、撹拌しながら水溶液に注入する。一実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子は押出工程なしで得られる。

「押し出す」または「押出」という用語は、固定された断面プロファイルを有する粒子の作製を指す。特に、これは粒子の小型化を指し、それによって粒子は規定された細孔を有するフィルタを通過する。

本明細書で使用される「同時投与された」または「同時投与」などの用語は、単一の製剤の一部として、または同じもしくは異なる経路によって投与される複数の製剤として、２つ以上の薬剤を同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ、ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、または本質的に同時に投与することを指す。本明細書で使用される「本質的に同時に」は、互いに約１分、５分、１０分、１５分、３０分、１時間、２時間、または６時間以内を意味する。

本開示は、それぞれ所与の核酸配列またはアミノ酸配列（参照配列）に対してある程度の同一性を有する核酸配列およびアミノ酸配列を記載する。

２つの核酸配列間の「配列同一性」は、配列間で同一であるヌクレオチドの割合を示す。２つのアミノ酸配列間の「配列同一性」は、配列間で同一であるアミノ酸の割合を示す。

「％同一」、「同一性％」という用語または同様の用語は、特に、比較される配列間の最適なアラインメントにおいて同一であるヌクレオチドまたはアミノ酸のパーセンテージを指すことが意図されている。前記パーセンテージは純粋に統計的であり、２つの配列間の差は、比較される配列の全長にわたってランダムに分布していてもよいが、必ずしもそうではない。２つの配列の比較は、通常、対応する配列の局所領域を同定するために、最適なアラインメント後に、セグメントまたは「比較ウィンドウ」に関して配列を比較することによって行われる。比較のための最適なアラインメントは、手操作によって、またはＳｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，１９８１，Ａｄｓ Ａｐｐ．Ｍａｔｈ．２，４８２による局所相同性アルゴリズムを用いて、Ｎｅｄｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３による局所相同性アルゴリズムを用いて、Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８，２４４４の類似性検索アルゴリズムを用いて、もしくは前記アルゴリズムを使用したコンピュータプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ Ｐ、ＢＬＡＳＴ ＮおよびＴＦＡＳＴＡ）を援用して実施し得る。いくつかの実施形態では、２つの配列の同一性パーセントは、米国国立バイオテクノロジー情報センター（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（ＮＣＢＩ）のウェブサイト（例えば、ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ？ＰＡＧＥ＿ＴＹＰＥ＝ＢｌａｓｔＳｅａｒｃｈ＆ＢＬＡＳＴ＿ＳＰＥＣ＝ｂｌａｓｔ２ｓｅｑ＆ＬＩＮＫ＿ＬＯＣ＝ａｌｉｇｎ２ｓｅｑ）で利用可能なＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムを使用して決定される。いくつかの実施形態では、ＮＣＢＩウェブサイトのＢＬＡＳＴＮアルゴリズムに使用されるアルゴリズムパラメータは、以下を含む：（ｉ）１０に設定された期待閾値；（ｉｉ）２８に設定されたワードサイズ；（ｉｉｉ）０に設定されたクエリ範囲内の最大一致；（ｉｖ）１、－２に設定された一致／不一致スコア；（ｖ）線形に設定されたギャップコスト；および（ｖｉ）使用されている低複雑度領域のフィルタ。いくつかの実施形態では、ＮＣＢＩウェブサイトのＢＬＡＳＴＰアルゴリズムに使用されるアルゴリズムパラメータは、以下を含む：（ｉ）１０に設定された期待閾値；（ｉｉ）３に設定されたワードサイズ；（ｉｉｉ）０に設定されたクエリ範囲内の最大一致；（ｉｖ）ＢＬＯＳＵＭ６２に設定されたマトリックス；（ｖ）存在：１１、拡張：１に設定されたギャップコスト；および（ｖｉ）条件付き組成スコアマトリックス調整。

同一性パーセントは、比較する配列が一致する同一の位置の数を決定し、この数を比較する位置の数（例えば、参照配列中の位置の数）で除して、この結果に１００を乗じることによって得られる。

いくつかの実施形態では、同一性の程度は、参照配列の全長の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または約１００％である領域について与えられる。例えば、参照核酸配列が２００ヌクレオチドからなる場合、同一性の程度は、いくつかの実施形態では連続ヌクレオチド中の少なくとも約１００、少なくとも約１２０、少なくとも約１４０、少なくとも約１６０、少なくとも約１８０、または約２００ヌクレオチドについて与えられる。いくつかの実施形態では、同一性の程度は、参照配列の全長について与えられる。

それぞれ所与の核酸配列またはアミノ酸配列に対して特定の程度の同一性を有する核酸配列またはアミノ酸配列は、前記所与の配列の少なくとも１つの機能的特性を有し得、例えば、いくつかの場合には、前記所与の配列と機能的に等価である。１つの重要な特性には、特に対象に投与した場合の免疫原性が含まれる。いくつかの実施形態では、所与の核酸配列またはアミノ酸配列に対して特定の程度の同一性を有する核酸配列またはアミノ酸配列は、所与の配列と機能的に等価である。

ＲＮＡ
本開示では、「ＲＮＡ」という用語は、リボヌクレオチド残基を含む核酸分子に関する。好ましい実施形態では、ＲＮＡは、リボヌクレオチド残基の全部または大部分を含む。本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」は、β－Ｄ－リボフラノシル基の２'位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを指す。ＲＮＡは、限定されないが、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、部分的に精製されたＲＮＡなどの単離されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え生産されたＲＮＡ、ならびに１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換および／または改変によって天然に存在するＲＮＡとは異なる修飾ＲＮＡを包含する。そのような改変は、内部ＲＮＡヌクレオチドまたはＲＮＡの末端（一方もしくは両方）への非ヌクレオチド物質の付加を指し得る。本明細書では、ＲＮＡ中のヌクレオチドは、化学合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドなどの非標準ヌクレオチドであり得ることも企図される。本開示では、これらの改変されたＲＮＡは、天然に存在するＲＮＡの類似体と見なされる。

本開示の特定の実施形態では、ＲＮＡは、ペプチドまたはタンパク質をコードするＲＮＡ転写物に関するメッセンジャＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である。当技術分野で確立されているように、ｍＲＮＡは一般に、５'非翻訳領域（５'－ＵＴＲ）、ペプチドコード領域および３'非翻訳領域（３'－ＵＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、インビトロ転写または化学合成によって生成される。一実施形態では、ｍＲＮＡは、ＤＮＡ鋳型を使用したインビトロ転写によって生成され、ＤＮＡは、デオキシリボヌクレオチドを含む核酸を指す。

一実施形態では、ＲＮＡはインビトロ転写されたＲＮＡ（ＩＶＴ－ＲＮＡ）であり、適切なＤＮＡ鋳型のインビトロ転写によって得られ得る。転写を制御するためのプロモータは、任意のＲＮＡポリメラーゼのための任意のプロモータであり得る。インビトロ転写のためのＤＮＡ鋳型は、核酸、特にｃＤＮＡをクローニングし、それをインビトロ転写のための適切なベクターに導入することによって得られ得る。ｃＤＮＡは、ＲＮＡの逆転写によって得られ得る。

一実施形態では、ＲＮＡは修飾ヌクレオシドを有し得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、少なくとも１つの（例えば全ての）ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。

本明細書で使用される「ウラシル」という用語は、ＲＮＡの核酸中に存在し得る核酸塩基の１つを表す。ウラシルの構造は：

である。

本明細書で使用される「ウリジン」という用語は、ＲＮＡ中に存在し得るヌクレオシドの１つを表す。ウリジンの構造は：

である。

ＵＴＰ（ウリジン５'－三リン酸）は、以下の構造：

を有する。

シュードＵＴＰ（シュードウリジン５'－三リン酸）は、以下の構造：

を有する。

「シュードウリジン」は、ウリジンの異性体である修飾ヌクレオシドの一例であり、ウラシルは、窒素－炭素グリコシド結合の代わりに炭素－炭素結合を介してペントース環に結合している。

別の例示的な修飾ヌクレオシドはＮ１－メチルシュードウリジン（ｍ１Ψ）であり、これは、構造：

を有する。

Ｎ１－メチルシュードＵＴＰは、以下の構造：

を有する。

別の例示的な修飾ヌクレオシドは５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）であり、これは、構造：

を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ中の１つ以上のウリジンは、修飾ヌクレオシドで置き換えられる。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは修飾ウリジンである。

いくつかの実施形態では、ウリジンを置換する修飾ウリジンは、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）、または５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）である。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡ中の１つ以上のウリジンを置換する修飾ヌクレオシドは、３－メチルウリジン（ｍ^３Ｕ）、５－メトキシウリジン（ｍｏ^５Ｕ）、５－アザウリジン、６－アザウリジン、２－チオ－５－アザウリジン、２－チオウリジン（ｓ^２Ｕ）、４－チオウリジン（ｓ^４Ｕ）、４－チオシュードウリジン、２－チオシュードウリジン、５－ヒドロキシウリジン（ｈｏ^５Ｕ）、５－アミノアリルウリジン、５－ハロウリジン（例えば５－ヨードウリジンもしくは５－ブロモウリジン）、ウリジン５－オキシ酢酸（ｃｍｏ^５Ｕ）、ウリジン５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ^５Ｕ）、５－カルボキシメチルウリジン（ｃｍ^５Ｕ）、１－カルボキシメチルシュードウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジン（ｃｈｍ^５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ^５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウリジン（ｍｃｍ^５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオウリジン（ｍｃｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオウリジン（ｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－メチルアミノメチルウリジン（ｍｎｍ^５Ｕ）、１－エチルシュードウリジン、５－メチルアミノメチル－２－チオウリジン（ｍｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノウリジン（ｍｎｍ^５ｓｅ^２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウリジン（ｎｃｍ^５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウリジン（ｃｍｎｍ^５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン（ｃｍｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、５－プロピニルウリジン、１－プロピニルシュードウリジン、５－タウリノメチルウリジン（τｍ^５Ｕ）、１－タウリノメチルシュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオシュードウリジン）、５－メチル－２－チオウリジン（ｍ^５ｓ^２Ｕ）、１－メチル－４－チオシュードウリジン（ｍ^１ｓ^４Ψ）、４－チオ－１－メチルシュードウリジン、３－メチルシュードウリジン（ｍ^３Ψ）、２－チオ－１－メチルシュードウリジン、１－メチル－１－デアザシュードウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザシュードウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６－ジヒドロウリジン、５－メチルジヒドロウリジン（ｍ^５Ｄ）、２－チオジヒドロウリジン、２－チオジヒドロシュードウリジン、２－メトキシウリジン、２－メトキシ－４－チオウリジン、４－メトキシシュードウリジン、４－メトキシ－２－チオシュードウリジン、Ｎ１－メチルシュードウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ^３Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ^３Ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ^５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオウリジン（ｉｎｍ^５ｓ^２Ｕ）、α－チオウリジン、２'－Ｏ－メチルウリジン（Ｕｍ）、５，２'－Ｏ－ジメチルウリジン（ｍ^５Ｕｍ）、２'－Ｏ－メチルシュードウリジン（Ψｍ）、２－チオ－２'－Ｏ－メチルウリジン（ｓ^２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２'－Ｏ－メチルウリジン（ｍｃｍ^５Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２'－Ｏ－メチルウリジン（ｎｃｍ^５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２'－Ｏ－メチルウリジン（ｃｍｎｍ^５Ｕｍ）、３，２'－Ｏ－ジメチルウリジン（ｍ^３Ｕｍ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２'－Ｏ－メチルウリジン（ｉｎｍ^５Ｕｍ）、１－チオウリジン、デオキシチミジン、２'－Ｆ－アラウリジン、２'－Ｆ－ウリジン、２'－ＯＨ－アラウリジン、５－（２－カルボメトキシビニル）ウリジン、５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）ウリジン、または当技術分野で公知の任意の他の修飾ウリジンのいずれか１つ以上であり得る。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、各ＲＮＡは、少なくとも１つのウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、各ＲＮＡは、各ウリジンの代わりに修飾ヌクレオシドを含む。

いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）および５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドはシュードウリジン（ψ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドはＮ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、２種類以上の修飾ヌクレオシドを含んでもよく、修飾ヌクレオシドは、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）、および５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）から独立して選択される。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、シュードウリジン（ψ）およびＮ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、シュードウリジン（ψ）および５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）および５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシドは、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）および５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）を含む。

一実施形態では、ＲＮＡは、他の修飾ヌクレオシドを含むか、またはさらなる修飾ヌクレオシド、例えば修飾シチジンを含む。例えば、一実施形態では、ＲＮＡにおいて、シチジンを５－メチルシチジンで部分的または完全に、好ましくは完全に置換する。一実施形態では、ＲＮＡは、５－メチルシチジンと、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）および５－メチルウリジン（ｍ５Ｕ）から選択される１つ以上とを含む。一実施形態では、ＲＮＡは、５－メチルシチジンおよびＮ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、各シチジンの代わりに５－メチルシチジンを含み、各ウリジンの代わりにＮ１－メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）を含む。

いくつかの実施形態では、本開示によるＲＮＡは５'キャップを含む。一実施形態では、本開示のＲＮＡは、キャップされていない５'－三リン酸を有さない。一実施形態では、ＲＮＡは５'キャップ類似体によって修飾され得る。「５'キャップ」という用語は、ｍＲＮＡ分子の５'末端に見出される構造を指し、一般に、５'－５'三リン酸結合によってｍＲＮＡに連結されたグアノシンヌクレオチドからなる。一実施形態では、このグアノシンは７位でメチル化されている。ＲＮＡに５'キャップまたは５'キャップ類似体を提供することは、５'キャップがＲＮＡ鎖に共転写的に発現されるインビトロ転写によって達成され得るか、またはキャッピング酵素を使用して転写後にＲＮＡに結合され得る。

いくつかの実施形態では、ＲＮＡのためのビルディングブロックキャップは、ｍ_２ ^{７，３'－Ｏ}Ｇｐｐｐ（ｍ_１ ^２'－Ｏ）ＡｐＧ（時にｍ_２ ^{７，３'Ｏ}Ｇ（５'）ｐｐｐ（５'）ｍ^２'－ＯＡｐＧとも呼ばれる）であり、これは、以下の構造：

を有する。

以下は、ＲＮＡおよびｍ_２ ^{７，３'Ｏ}Ｇ（５'）ｐｐｐ（５'）ｍ^２'－ＯＡｐＧを含む例示的なキャップ１ ＲＮＡである：

以下は、別の例示的なキャップ１ ＲＮＡ（キャップ類似体なし）である：

いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、一実施形態では、以下の構造：

を有するキャップ類似体アンチリバースキャップ（ＡＲＣＡキャップ（ｍ_２ ^{７，３'Ｏ}Ｇ（５'）ｐｐｐ（５'）Ｇ））を使用して、「キャップ０」構造で修飾される。

以下は、ＲＮＡおよびｍ_２ ^{７，３'Ｏ}Ｇ（５'）ｐｐｐ（５'）Ｇを含む例示的なキャップ０ ＲＮＡである：

いくつかの実施形態では、「キャップ０」構造は、構造：

を有するキャップ類似体β－Ｓ－ＡＲＣＡ（ｍ_２ ^{７，２'Ｏ}Ｇ（５'）ｐｐＳｐ（５'）Ｇ）を使用して生成される。

以下は、β－Ｓ－ＡＲＣＡ（ｍ_２ ^{７，２'Ｏ}Ｇ（５'）ｐｐＳｐ（５'）Ｇ）およびＲＮＡを含む例示的なキャップ０ ＲＮＡである：

特に好ましいキャップは、５'キャップｍ_２ ^{７，２'Ｏ}Ｇ（５'）ｐｐＳｐ（５'）Ｇを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される少なくとも１つのＲＮＡは、５'キャップｍ_２ ^{７，２'Ｏ}Ｇ（５'）ｐｐＳｐ（５'）Ｇを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される各ＲＮＡは、５'キャップｍ_２ ^{７，２'Ｏ}Ｇ（５'）ｐｐＳｐ（５'）Ｇを含む。

β－Ｓ－ＡＲＣＡの「Ｄ１」ジアステレオマーまたは「β－Ｓ－ＡＲＣＡ（Ｄ１）」は、β－Ｓ－ＡＲＣＡのＤ２ジアステレオマー（β－Ｓ－ＡＲＣＡ（Ｄ２））と比較して、ＨＰＬＣカラムで最初に溶出し、したがってより短い保持時間を示すβ－Ｓ－ＡＲＣＡのジアステレオマーである（参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１１／０１５３４７号参照）。特に好ましいキャップはβ－Ｓ－ＡＲＣＡ（Ｄ１）（ｍ_２ ^{７，２'－Ｏ}ＧｐｐＳｐＧ）である。

いくつかの実施形態では、本開示によるＲＮＡは、５'－ＵＴＲおよび／または３'－ＵＴＲを含む。「非翻訳領域」または「ＵＴＲ」という用語は、転写されるがアミノ酸配列に翻訳されないＤＮＡ分子内の領域、またはｍＲＮＡ分子などのＲＮＡ分子内の対応する領域に関する。非翻訳領域（ＵＴＲ）は、オープンリーディングフレームの５'側（上流）（５'－ＵＴＲ）および／またはオープンリーディングフレームの３'側（下流）（３'－ＵＴＲ）に存在し得る。５'－ＵＴＲは、存在する場合、タンパク質コード領域の開始コドンの上流の５'末端に位置する。５'－ＵＴＲは５'キャップ（存在する場合）の下流にあり、例えば５'キャップに直接隣接している。３'－ＵＴＲは、存在する場合、タンパク質コード領域の終止コドンの下流の３'末端に位置するが、「３'－ＵＴＲ」という用語は、好ましくはポリＡ配列を含まない。したがって、３'－ＵＴＲはポリＡ配列（存在する場合）の上流にあり、例えばポリＡ配列に直接隣接している。

特に好ましい５'－ＵＴＲは、配列番号３０のヌクレオチド配列を含む。特に好ましい３'－ＵＴＲは、配列番号３１のヌクレオチド配列を含む。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号３０のヌクレオチド配列、または配列番号３０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む５'－ＵＴＲを含む。いくつかの実施形態では、各ＲＮＡは、配列番号３０のヌクレオチド配列、または配列番号３０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む５'－ＵＴＲを含む。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡは、配列番号３１のヌクレオチド配列、または配列番号３１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む３'－ＵＴＲを含む。いくつかの実施形態では、各ＲＮＡは、配列番号３１のヌクレオチド配列、または配列番号３１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む３'－ＵＴＲを含む。

本発明で使用される場合、「ポリＡ尾部」または「ポリＡ配列」という用語は、典型的にはＲＮＡ分子の３'末端に位置するアデニル酸残基の連続的または断続的な配列を指す。ポリＡ尾部またはポリＡ配列は当業者に公知であり、本明細書に記載のＲＮＡの３'－ＵＴＲに後続し得る。連続的なポリＡ尾部は、連続するアデニル酸残基を特徴とする。自然界では、連続的なポリＡ尾部が典型的である。本明細書に開示されるＲＮＡは、転写後に鋳型非依存性ＲＮＡポリメラーゼによってＲＮＡの遊離３'末端に結合したポリＡ尾部、またはＤＮＡによってコードされ、鋳型依存性ＲＮＡポリメラーゼによって転写されたポリＡ尾部を有し得る。

約１２０個のＡヌクレオチドのポリＡ尾部は、トランスフェクトされた真核細胞中のＲＮＡのレベル、およびポリＡ尾部の上流（５'側）に存在するオープンリーディングフレームから翻訳されるタンパク質のレベルに有益な影響を及ぼすことが実証されている（Ｈｏｌｔｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｂｌｏｏｄ，ｖｏｌ．１０８，ｐｐ．４００９－４０１７）。

ポリＡ尾部は任意の長さであり得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも８０個、または少なくとも１００個、および最大５００個、最大４００個、最大３００個、最大２００個、または最大１５０個までのＡヌクレオチド、特に約１２０個のＡヌクレオチドを含むか、本質的にそれらからなるか、またはそれらからなる。この文脈において、「本質的に～からなる」は、ポリＡ尾部のほとんどのヌクレオチド、典型的にはポリＡ尾部のヌクレオチド数の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％がＡヌクレオチドであることを意味するが、残りのヌクレオチドが、Ｕヌクレオチド（ウリジル酸）、Ｇヌクレオチド（グアニル酸）、またはＣヌクレオチド（シチジル酸）などのＡヌクレオチド以外のヌクレオチドであることを許容することを意味する。この文脈において、「からなる」は、ポリＡ尾部の全てのヌクレオチド、すなわちポリＡ尾部のヌクレオチド数の１００％がＡヌクレオチドであることを意味する。「Ａヌクレオチド」または「Ａ」という用語は、アデニル酸を指す。

いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、コード鎖に相補的な鎖内に反復ｄＴヌクレオチド（デオキシチミジル酸）を含むＤＮＡ鋳型に基づいて、ＲＮＡ転写中、例えばインビトロ転写ＲＮＡの調製中に結合される。ポリＡ尾部をコードするＤＮＡ配列（コード鎖）は、ポリ（Ａ）カセットと称される。

いくつかの実施形態では、ＤＮＡのコード鎖に存在するポリ（Ａ）カセットは、本質的にｄＡヌクレオチドからなるが、４つのヌクレオチド（ｄＡ、ｄＣ、ｄＧ、およびｄＴ）のランダムな配列によって中断されている。そのようなランダムな配列は、５～５０、１０～３０、または１０～２０ヌクレオチドの長さであり得る。そのようなカセットは、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１６／００５３２４Ａ１号に開示されている。国際公開第２０１６／００５３２４Ａ１号に開示されている任意のポリ（Ａ）カセットを本発明で使用し得る。本質的にｄＡヌクレオチドからなるが、４つのヌクレオチド（ｄＡ、ｄＣ、ｄＧ、ｄＴ）が均等に分布し、例えば５～５０ヌクレオチドの長さを有するランダム配列によって中断されているポリ（Ａ）カセットは、ＤＮＡレベルでは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）においてプラスミドＤＮＡの持続的な増殖を示し、ＲＮＡレベルでは、ＲＮＡの安定性と翻訳効率を支持することに関して有益な特性と依然として関連している。結果として、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ分子に含まれるポリＡ尾部は、本質的にＡヌクレオチドからなるが、４つのヌクレオチド（Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕ）のランダムな配列によって中断されている。そのようなランダムな配列は、５～５０、１０～３０、または１０～２０ヌクレオチドの長さであり得る。

いくつかの実施形態では、Ａヌクレオチド以外のヌクレオチドは、その３'末端でポリＡ尾部に隣接しておらず、すなわち、ポリＡ尾部はその３'末端でＡ以外のヌクレオチドによってマスクされていないか、または後続されていない。

いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は配列番号３２の配列を含む。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲＮＡはポリＡ尾部を含む。いくつかの実施形態では、各ＲＮＡはポリＡ尾部を含む。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも８０個または少なくとも１００個、および最大５００個、最大４００個、最大３００個、最大２００個、または最大１５０個までのヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも８０個、または少なくとも１００個、および最大５００個、最大４００個、最大３００個、最大２００個、または最大１５０個までのヌクレオチドから本質的になり得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも８０個、または少なくとも１００個、および最大５００個、最大４００個、最大３００個、最大２００個、または最大１５０個までのヌクレオチドからなり得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、配列番号３２に示されるポリＡ尾部を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は少なくとも１００個のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は約１５０個のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は約１２０個のヌクレオチドを含む。

本開示の文脈において、「転写」という用語は、ＤＮＡ配列中の遺伝暗号がＲＮＡに転写されるプロセスに関する。その後、ＲＮＡはペプチドまたはタンパク質に翻訳され得る。

ＲＮＡに関して、「発現」または「翻訳」という用語は、ｍＲＮＡの鎖が、ペプチドまたはタンパク質を作製するようにアミノ酸の配列のアセンブリを指示する、細胞のリボソームにおけるプロセスに関する。

一実施形態では、例えばＲＮＡリポプレックス粒子として製剤化された、本明細書に記載のＲＮＡの投与後、ＲＮＡの少なくとも一部が標的細胞に送達される。一実施形態では、ＲＮＡの少なくとも一部が標的細胞のサイトゾルに送達される。一実施形態では、ＲＮＡは、標的細胞によって翻訳されて、それがコードするペプチドまたはタンパク質を産生する。一実施形態では、標的細胞は脾臓細胞である。一実施形態では、標的細胞は、脾臓におけるプロフェッショナル抗原提示細胞などの抗原提示細胞である。一実施形態では、標的細胞は樹状細胞またはマクロファージである。本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子は、そのような標的細胞にＲＮＡを送達するために使用され得る。したがって、本開示はまた、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子を対象に投与することを含む、対象の標的細胞にＲＮＡを送達するための方法に関する。一実施形態では、ＲＮＡは、標的細胞のサイトゾルに送達される。一実施形態では、ＲＮＡは、標的細胞によって翻訳されて、ＲＮＡによってコードされたペプチドまたはタンパク質を産生する。

本開示によれば、「ＲＮＡがコードする」という用語は、ＲＮＡが、標的組織の細胞内などの適切な環境に存在する場合、翻訳プロセス中にそれがコードするペプチドまたはタンパク質を産生するようにアミノ酸のアセンブリを指示することができることを意味する。一実施形態では、ＲＮＡは、ペプチドまたはタンパク質の翻訳を可能にする細胞翻訳機構と相互作用することができる。細胞は、コードされたペプチドもしくはタンパク質を細胞内で（例えば、細胞質内および／もしくは核内で）産生し得るか、コードされたペプチドもしくはタンパク質を分泌し得るか、またはそれを表面上で産生し得る。

本開示によれば、「ペプチド」という用語は、オリゴペプチドおよびポリペプチドを含み、ペプチド結合によって互いに連結された約２個以上、約３個以上、約４個以上、約６個以上、約８個以上、約１０個以上、約１３個以上、約１６個以上、約２０個以上、および最大約５０個、約１００個または約１５０個までの連続するアミノ酸を含む物質を指す。「タンパク質」という用語は、大きなペプチド、特に少なくとも約１５１個のアミノ酸を有するペプチドを指すが、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書では通常同義語として使用される。

「抗原」という用語は、免疫応答を生じさせることができるエピトープを含む作用物質に関する。「抗原」という用語は、特にタンパク質およびペプチドを含む。一実施形態では、抗原は、樹状細胞またはマクロファージのような抗原提示細胞などの免疫系の細胞によって提示される。抗原またはＴ細胞エピトープなどのそのプロセシング産物は、一実施形態では、Ｔ細胞もしくはＢ細胞受容体によって、または抗体などの免疫グロブリン分子によって結合される。したがって、抗原またはそのプロセシング産物は、抗体またはＴリンパ球（Ｔ細胞）と特異的に反応し得る。一実施形態では、抗原は、腫瘍抗原、特にＨＰＶ Ｅ６またはＨＰＶ Ｅ７などの疾患関連抗原であり、エピトープはそのような抗原に由来する。

「疾患関連抗原」という用語は、疾患に関連する任意の抗原を指すためにその最も広い意味で使用される。疾患関連抗原は、宿主の免疫系を刺激して疾患に対する細胞性抗原特異的免疫応答および／または体液性抗体応答を生じさせるエピトープを含む分子である。したがって、疾患関連抗原またはそのエピトープは、治療目的に使用され得る。疾患関連抗原は、癌、典型的には腫瘍に関連し得る。

「腫瘍抗原」という用語は、癌細胞の成分を指す。特に、これは、細胞内でまたは腫瘍細胞上の表面抗原として産生される抗原を指す。

「エピトープ」という用語は、免疫系によって認識される抗原などの分子の一部または断片を指す。例えば、エピトープは、Ｔ細胞、Ｂ細胞または抗体によって認識され得る。抗原のエピトープは、抗原の連続部分または不連続部分を含み得、約５～約１００アミノ酸の長さであり得る。一実施形態では、エピトープは、約１０～約２５アミノ酸の長さである。「エピトープ」という用語は、Ｔ細胞エピトープを含む。

「Ｔ細胞エピトープ」という用語は、ＭＨＣ分子に関連して提示された場合にＴ細胞によって認識されるタンパク質の一部または断片を指す。「主要組織適合遺伝子複合体」という用語および「ＭＨＣ」という略語は、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩ分子を含み、全ての脊椎動物に存在する遺伝子の複合体に関する。ＭＨＣタンパク質または分子は、免疫反応におけるリンパ球と抗原提示細胞または疾患細胞との間のシグナル伝達に重要であり、ＭＨＣタンパク質または分子は、ペプチドエピトープに結合し、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体による認識のためにそれらを提示する。ＭＨＣによってコードされるタンパク質は、細胞の表面に発現され、自己抗原（細胞自体からのペプチド断片）および非自己抗原（例えば、侵入微生物の断片）の両方をＴ細胞に表示する。クラスＩ ＭＨＣ／ペプチド複合体の場合、結合ペプチドは、典型的には約８～約１０アミノ酸長であるが、より長いまたはより短いペプチドも有効であり得る。クラスＩＩ ＭＨＣ／ペプチド複合体の場合、結合ペプチドは、典型的には約１０～約２５アミノ酸長であり、特に約１３～約１８アミノ酸長であるが、より長いおよびより短いペプチドも有効であり得る。

本開示の特定の実施形態では、ＲＮＡは少なくとも１つのエピトープをコードする。特定の実施形態では、エピトープは、本明細書に記載される腫瘍抗原に由来する。

ヒトパピローマウイルス関連悪性腫瘍
ヒトパピローマウイルス感染（ＨＰＶ感染）は、パピローマウイルス科（ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ ｆａｍｉｌｙ）由来のＤＮＡウイルスであるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）によって引き起こされる感染である。ＨＰＶは、最も頻繁に性感染するウイルス感染症である。ＨＰＶ感染は、生殖器および頭頸部領域における様々な癌の原因物質として確立されている。全ての子宮頸癌はＨＰＶ陽性であり、肛門癌の８８％、膣癌の７８％、より少ない程度で外陰癌および陰茎癌がＨＰＶ陽性である。頭頸部領域のうちで、ＨＰＶに起因する癌は中咽頭癌の３０．８％を占めるが、口腔および喉頭は、はるかに少ない程度に影響を受ける。ＨＰＶ陰性中咽頭扁平上皮癌（ＯＰＳＣＣ）の発生率は、１９８８年から２００４年までに５０％減少したが、ＨＰＶ陽性中咽頭癌は２倍超増加した。１００を超える異なるＨＰＶ型が存在し、これらは悪性形質転換を媒介するそれらの能力に応じて「低」または「高」リスクに分類され得る。高リスクＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８は最も頻度の高い発癌性ＨＰＶ型であり、ＨＰＶ１６は、全てのＨＰＶ陽性頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）の９０％および全ての子宮頸癌の６６％を占める。

高リスクＨＰＶウイルスは、それらの形質転換能力がそれらの癌遺伝子Ｅ６およびＥ７に起因する非エンベロープ二本鎖ＤＮＡウイルスである。ＨＰＶは、粘膜および皮膚扁平上皮に感染し、上皮内感染サイクルを有する。ＨＰＶは、６つの初期（Ｅ１、Ｅ２、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６およびＥ７）タンパク質ならびに２つの後期（Ｌ１およびＬ２）タンパク質を発現する。Ｅ１およびＥ２はウイルス複製の開始に必要であるが、Ｅ２は転写抑制因子としてＥ６およびＥ７の発現も調節する。ローリングサークルゲノム組み込みの間に、Ｅ２遺伝子が破壊され、Ｅ６およびＥ７のより高い発現がもたらされる。Ｌ１およびＬ２は、ウイルス集合および、Ｅ４の助けを借りて、ウイルス粒子の放出に重要なウイルスキャプシドタンパク質である。ウイルス感染の急性期後、ＨＰＶ遺伝子産物は、粘膜および皮膚扁平上皮の細胞内に留まり得、Ｅ６およびＥ７が持続的に発現して悪性形質転換を促進し得る。ＨＰＶタンパク質Ｅ６およびＥ７は、細胞周期を脱調節し、アポトーシスを阻害し、したがって癌の進行を促進することができる。Ｅ６は、細胞周期の進行およびアポトーシスを支配する腫瘍抑制タンパク質ｐ５３の機能を無効にする能力を有する。Ｅ７の発癌能は、Ｇ１からＳへの相転移に関与する網膜芽細胞腫ポケットタンパク質（ｐＲｂ）などのいくつかの細胞因子を調節する能力によって決定される。Ｅ７は、ｐＲｂファミリーメンバーをプロテオソーム分解に標的化し、ＤＮＡ修復障害、細胞周期チェックポイント障害およびゲノム完全性の喪失をもたらす。

ＨＰＶ駆動癌は、重要な発癌ドライバーであるウイルス癌遺伝子Ｅ６およびＥ７の持続的発現を特徴とする。

ＨＮＳＣＣは、生活の質の低下および有意な罹患率に関連して、攻撃的で治療が困難な癌型である。複数のワクチン形式が臨床試験に入っているが、ＨＰＶ陽性子宮頸癌またはＨＮＳＣＣ癌患者における治療的使用のために承認されたＨＰＶワクチンはまだない。

本開示によれば、「ＨＰＶ陽性癌」という用語は、ＨＰＶ感染によって引き起こされる、ならびに／またはＨＰＶもしくは特定の成分、特にＨＰＶ Ｅ６および／もしくはＨＰＶ Ｅ７が検出可能である癌を含む。そのような癌の例には、肛門生殖器癌、子宮頸癌および陰茎癌、ならびに生殖器領域または頭頸部領域の癌などの頭頸部領域の癌が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態では、ＨＰＶ陽性癌は頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物または医薬製剤は、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡ、およびＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡを含む。同様に、本明細書に記載の方法は、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡおよびＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡの投与を含む。

ＨＰＶ Ｅ６およびＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原ならびにそれらをコードするＲＮＡの分子構造および機能
ＨＰＶは、宿主ゲノムへの組み込みを通して腫瘍形成プロセスを誘導することができる。さらに、遺伝子Ｅ６およびＥ７などのＨＰＶウイルスによって担持される「初期遺伝子」の一部は、腫瘍成長および悪性形質転換を促進する癌遺伝子として作用する。高リスクＨＰＶ型の２つの主要な癌タンパク質は、Ｅ６およびＥ７である。「Ｅ」という名称は、これらの２つのタンパク質がＨＰＶ生活環の初期に発現されることを示す。Ｅ６／Ｅ７タンパク質は、２つの腫瘍抑制タンパク質、ｐ５３（Ｅ６によって不活性化）およびｐＲｂ（Ｅ７によって不活性化）を不活性化する。

本明細書に記載のＨＰＶ Ｅ６タンパク質またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質は、任意のＨＰＶ、特にＨＰＶ１６、１８、３１、３３、４５または５８などの任意の高リスクＨＰＶ型に由来し得る。一実施形態では、本明細書に記載のＨＰＶ Ｅ６タンパク質またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質は、異なるＨＰＶ型に由来する。一実施形態では、本明細書に記載のＨＰＶ Ｅ６タンパク質またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質は、同じＨＰＶ型に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ型はＨＰＶ１６である。一実施形態では、ＨＰＶ型はＨＰＶ１８である。一実施形態では、ＨＰＶ型はＨＰＶ３１である。一実施形態では、ＨＰＶ型はＨＰＶ３３である。一実施形態では、ＨＰＶ型はＨＰＶ４５である。一実施形態では、ＨＰＶ型はＨＰＶ５８である。

一実施形態では、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列は、「本明細書中のＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原」とも称され、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質のアミノ酸配列、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質の免疫原性変異体のアミノ酸配列、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質の免疫原性断片のアミノ酸配列、またはＨＰＶ Ｅ６タンパク質の免疫原性変異体の免疫原性断片のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ７タンパク質、その免疫原性変異体、またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列は、「本明細書中のＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原」とも称され、ＨＰＶ Ｅ７タンパク質のアミノ酸配列、ＨＰＶ Ｅ７タンパク質の免疫原性変異体のアミノ酸配列、ＨＰＶ Ｅ７タンパク質の免疫原性断片のアミノ酸配列、またはＨＰＶ Ｅ７タンパク質の免疫原性変異体の免疫原性断片のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質はＨＰＶ１６に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列、配列番号１のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列、配列番号２のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号２のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列の断片、または配列番号２のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列、配列番号１のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質はＨＰＶ１８に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号５のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列、配列番号５のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号５のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号５のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号５のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号６のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列、配列番号６のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号６のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列の断片、または配列番号６のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列、配列番号５のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号５のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号５のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号６のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質はＨＰＶ３１に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号９のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列、配列番号９のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号９のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号９のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号９のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１０のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列、配列番号１０のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号１０のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列の断片、または配列番号１０のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列、配列番号９のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号９のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号９のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１０のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質はＨＰＶ３３に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１３のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列、配列番号１３のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１３のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１３のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１３のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１４のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列、配列番号１４のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号１４のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列の断片、または配列番号１４のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列、配列番号１３のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１３のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１３のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１４のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質はＨＰＶ４５に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１７のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列、配列番号１７のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１７のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１７のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１７のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１８のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列、配列番号１８のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号１８のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列の断片、または配列番号１８のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列、配列番号１７のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１７のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１７のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１８のヌクレオチド１６１～６３４のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸３７～１９４のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６タンパク質はＨＰＶ５８に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号２１のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列、配列番号２１のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号２１のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号２１のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号２１のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２２のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列、配列番号２２のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号２２のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列の断片、または配列番号２２のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列、配列番号２１のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号２１のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号２１のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２２のヌクレオチド１６１～６０７のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸３７～１８５のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７タンパク質はＨＰＶ１６に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列、配列番号３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号４のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列、配列番号４のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号４のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列の断片、または配列番号４のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列、配列番号３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号４のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７タンパク質はＨＰＶ１８に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号７のアミノ酸３７～１４１のアミノ酸配列、配列番号７のアミノ酸３７～１４１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号７のアミノ酸３７～１４１のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号７のアミノ酸３７～１４１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号７のアミノ酸３７～１４１のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号８のヌクレオチド１６１～４７５のヌクレオチド配列、配列番号８のヌクレオチド１６１～４７５のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド１６１～４７５のヌクレオチド配列の断片、または配列番号８のヌクレオチド１６１～４７５のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸３７～１４１のアミノ酸配列、配列番号７のアミノ酸３７～１４１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号７のアミノ酸３７～１４１のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号７のアミノ酸３７～１４１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号８のヌクレオチド１６１～４７５のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸３７～１４１のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７タンパク質はＨＰＶ３１に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１１のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列、配列番号１１のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１１のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１１のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１１のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１２のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列、配列番号１２のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号１２のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列の断片、または配列番号１２のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列、配列番号１１のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１１のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１１のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１２のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７タンパク質はＨＰＶ３３に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１５のアミノ酸３７～１３３のアミノ酸配列、配列番号１５のアミノ酸３７～１３３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１５のアミノ酸３７～１３３のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１５のアミノ酸３７～１３３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１５のアミノ酸３７～１３３のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１６のヌクレオチド１６１～４５１のヌクレオチド配列、配列番号１６のヌクレオチド１６１～４５１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号１６のヌクレオチド１６１～４５１のヌクレオチド配列の断片、または配列番号１６のヌクレオチド１６１～４５１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸３７～１３３のアミノ酸配列、配列番号１５のアミノ酸３７～１３３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１５のアミノ酸３７～１３３のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１５のアミノ酸３７～１３３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１６のヌクレオチド１６１～４５１のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸３７～１３３のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７タンパク質はＨＰＶ４５に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１９のアミノ酸３７～１４２のアミノ酸配列、配列番号１９のアミノ酸３７～１４２のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１９のアミノ酸３７～１４２のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１９のアミノ酸３７～１４２のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１９のアミノ酸３７～１４２のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２０のヌクレオチド１６１～４７８のヌクレオチド配列、配列番号２０のヌクレオチド１６１～４７８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号２０のヌクレオチド１６１～４７８のヌクレオチド配列の断片、または配列番号２０のヌクレオチド１６１～４７８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１９のアミノ酸３７～１４２のアミノ酸配列、配列番号１９のアミノ酸３７～１４２のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１９のアミノ酸３７～１４２のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１９のアミノ酸３７～１４２のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２０のヌクレオチド１６１～４７８のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１９のアミノ酸３７～１４２のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７タンパク質はＨＰＶ５８に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号２３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号２３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号２３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号２３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２４のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列、配列番号２４のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号２４のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列の断片、または配列番号２４のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号２３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号２３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２４のヌクレオチド１６１～４５４のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸３７～１３４のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

特定の実施形態によれば、シグナルペプチドは、ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７タンパク質、その変異体、またはその断片、すなわち抗原性ペプチドもしくはタンパク質に、直接またはリンカー、例えば配列番号２８に従うアミノ酸配列を有するリンカーを介して融合される。したがって、一実施形態では、シグナルペプチドは、上記ワクチン抗原に含まれるＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７タンパク質またはその免疫原性断片（抗原性ペプチドもしくはタンパク質）に由来する上記アミノ酸配列に融合される。

そのようなシグナルペプチドは、典型的には約１５～３０アミノ酸の長さを示し、好ましくは抗原性ペプチドまたはタンパク質のＮ末端に位置する配列であるが、それに限定されない。本明細書で定義されるシグナルペプチドは、好ましくは、ＲＮＡによってコードされる抗原性ペプチドまたはタンパク質を定義された細胞区画、好ましくは細胞表面、小胞体（ＥＲ）またはエンドソーム－リソソーム区画に輸送することを可能にする。一実施形態では、本明細書で定義されるシグナルペプチド配列は、ヒトＭＨＣクラスＩ複合体（ＨＬＡ－Ｂ５１、ハプロタイプＡ２、Ｂ２７／Ｂ５１、Ｃｗ２／Ｃｗ３）をコードする配列に由来するシグナルペプチド配列を含むが、それに限定されず、好ましくは、新生ポリペプチド鎖の小胞体への移行を誘導する分泌シグナルペプチドをコードする７８ｂｐ断片に対応し、特に配列番号２５のアミノ酸配列またはその機能的変異体を含む配列を含む。

一実施形態では、シグナル配列は、配列番号２５のアミノ酸配列、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号２５のアミノ酸配列の機能的断片、または配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、シグナル配列は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。

そのようなシグナルペプチドは、好ましくは、コードされた抗原性ペプチドまたはタンパク質の分泌を促進するために使用される。より好ましくは、本明細書で定義されるシグナルペプチドは、本明細書で定義されるコードされた抗原性ペプチドまたはタンパク質に融合される。

したがって、特に好ましい実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡは、抗原性ペプチドまたはタンパク質およびシグナルペプチドをコードする少なくとも１つのコード領域を含み、前記シグナルペプチドは、好ましくは抗原性ペプチドまたはタンパク質、より好ましくは本明細書に記載の抗原性ペプチドまたはタンパク質のＮ末端に融合されている。

特定の実施形態によれば、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、直接またはリンカーを介して、ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７タンパク質、その変異体、またはその断片、すなわち抗原性ペプチドもしくはタンパク質に融合される。したがって、一実施形態では、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、上記ワクチン抗原に含まれるＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７またはその免疫原性断片（抗原性ペプチドもしくはタンパク質）に由来する上記アミノ酸配列に融合される。

抗原プロセシングおよび／または提示を増強するそのようなアミノ酸配列は、好ましくは抗原性ペプチドまたはタンパク質のＣ末端に（および任意で免疫寛容を破壊するアミノ酸配列のＣ末端に）位置するが、それに限定されない。本明細書で定義される抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、好ましくは抗原プロセシングおよび提示を改善する。一実施形態では、本明細書で定義される抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、ヒトＭＨＣクラスＩ複合体（ＨＬＡ－Ｂ５１、ハプロタイプＡ２、Ｂ２７／Ｂ５１、Ｃｗ２／Ｃｗ３）に由来する配列、特に配列番号２６のアミノ酸配列またはその機能的変異体を含む配列を含むが、それに限定されない。

一実施形態では、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、配列番号２６のアミノ酸配列、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号２６のアミノ酸配列の機能的断片、または配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。

抗原プロセシングおよび／または提示を増強するそのようなアミノ酸配列は、好ましくは、コードされた抗原性ペプチドまたはタンパク質の抗原プロセシングおよび／または提示を促進するために使用される。より好ましくは、本明細書で定義される抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列は、本明細書で定義されるコードされた抗原性ペプチドまたはタンパク質に融合される。

したがって、特に好ましい実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡは、抗原性ペプチドまたはタンパク質をコードする少なくとも１つのコード領域ならびに抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列を含み、抗原プロセシングおよび／または提示を増強する前記アミノ酸配列は、好ましくは抗原性ペプチドまたはタンパク質、より好ましくは本明細書に記載の抗原性ペプチドまたはタンパク質のＣ末端に融合されている。

破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）の破傷風トキソイドに由来するアミノ酸配列は、プライミング中にＴ細胞支援を提供することによって自己抗原に対する免疫応答を効率的に開始するために、自己寛容機構を克服するために使用され得る。

破傷風トキソイド重鎖は、ＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子に無差別に結合し、破傷風ワクチン接種を受けたほぼ全ての個体でＣＤ４^＋記憶Ｔ細胞を誘導することができるエピトープを含むことが公知である。さらに、破傷風トキソイド（ＴＴ）ヘルパーエピトープと腫瘍関連抗原との組合せは、プライミング中にＣＤ４^＋媒介Ｔ細胞支援を提供することによって、腫瘍関連抗原単独の適用と比較して免疫刺激を改善することが公知である。腫瘍抗原特異的Ｔ細胞応答の意図された誘導と競合し得る破傷風配列でＣＤ８^＋Ｔ細胞を刺激するリスクを低下させるために、破傷風トキソイドの断片Ｃ全体ではＣＤ８^＋Ｔ細胞エピトープを含有することが公知であるので、断片Ｃ全体は使用しない。可能な限り多くのＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子への結合を確実にするために、無差別に結合するヘルパーエピトープを含有する２つのペプチド配列を代替的に選択した。エクスビボ試験のデータに基づいて、周知のエピトープｐ２（ＱＹＩＫＡＮＳＫＦＩＧＩＴＥＬ；ＴＴ_{８３０－８４４}）およびｐ１６（ＭＴＮＳＶＤＤＡＬＩＮＳＴＫＩＹＳＹＦＰＳＶＩＳＫＶＮＱＧＡＱＧ；ＴＴ_{５７８－６０９}）を選択した。ｐ２エピトープは、抗黒色腫活性をブーストするために臨床試験におけるペプチドワクチン接種に既に使用されていた。

現在の非臨床データ（未公開）は、腫瘍抗原および無差別に結合する破傷風トキソイド配列の両方をコードするＲＮＡワクチンが、腫瘍抗原に対するＣＤ８^＋Ｔ細胞応答の増強および寛容破壊の改善をもたらすことを示した。腫瘍抗原特異的配列とインフレームで融合した配列を含むワクチンを接種した患者からの免疫モニタリングデータは、選択された破傷風配列がほぼ全ての患者において破傷風特異的Ｔ細胞応答を誘導することができることを明らかにする。

特定の実施形態によれば、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７タンパク質、その変異体、またはその断片、すなわち抗原性ペプチドもしくはタンパク質に、直接またはリンカー、例えば配列番号２８に従うアミノ酸配列を有するリンカーを介して融合される。したがって、一実施形態では、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、上記ワクチン抗原に含まれるＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７タンパク質またはその免疫原性断片（抗原性ペプチドもしくはタンパク質）に由来する上記アミノ酸配列に融合される。

免疫寛容を破壊するそのようなアミノ酸配列は、好ましくは抗原性ペプチドまたはタンパク質のＣ末端に（ならびに任意で抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列のＮ末端に、ここで、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列と抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列とは、直接またはリンカー、例えば配列番号２９に従うアミノ酸配列を有するリンカーを介して融合されていてもよい）位置するが、それに限定されない。本明細書で定義される免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、好ましくはＴ細胞応答を改善する。一実施形態では、本明細書で定義される免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、破傷風トキソイド由来のヘルパー配列ｐ２およびｐ１６（Ｐ２Ｐ１６）に由来する配列、特に配列番号２７のアミノ酸配列またはその機能的変異体を含む配列を含むが、それに限定されない。

一実施形態では、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、配列番号２７のアミノ酸配列、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号２７のアミノ酸配列の機能的断片、または配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。

破傷風トキソイドヘルパーエピトープと融合した抗原ＲＮＡを使用する代わりに、腫瘍抗原ＲＮＡを、ワクチン接種中にＴＴヘルパーエピトープをコードする別個のＲＮＡと同時投与し得る。ここで、ＴＴヘルパーエピトープをコードするＲＮＡは、調製前に各抗原コードＲＮＡに付加される。このようにして、両方の化合物を所与のＡＰＣに送達するために、抗原およびヘルパーエピトープコードＲＮＡの両方を含む混合リポプレックスナノ粒子が形成される。

したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、破傷風トキソイド由来のヘルパー配列ｐ２およびｐ１６（Ｐ２Ｐ１６）をコードするＲＮＡを含み得る。同様に、本明細書に記載の方法は、破傷風トキソイド由来のヘルパー配列ｐ２およびｐ１６（Ｐ２Ｐ１６）をコードするＲＮＡの投与を含み得る。

したがって、さらなる態様は、
（ｉ）ワクチン抗原をコードするＲＮＡ、および
（ｉｉ）免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡ
を含むリポプレックス粒子などの粒子を含む医薬組成物などの組成物に関する。

そのような組成物は、ワクチン抗原に対する、したがって疾患関連抗原に対する免疫応答を誘導する方法において有用である。

さらなる態様は、免疫応答を誘導する方法であって、
（ｉ）ワクチン抗原をコードするＲＮＡ、および
（ｉｉ）免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡ
を含むリポプレックス粒子などの粒子を投与することを含む方法に関する。

一実施形態では、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列は、ヘルパーエピトープ、好ましくは破傷風トキソイド由来のヘルパーエピトープを含む。

一実施形態では、ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、約４：１～約１６：１、約６：１～約１４：１、約８：１～約１２：１、または約１０：１の比で免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡと共に、リポプレックス粒子などの粒子として共製剤化される。

以下において、ＨＰＶ Ｅ６またはＥ７ワクチンＲＮＡの実施形態を説明し、その要素を説明するときに使用される特定の用語は以下の意味を有する：
ｈＡｇ－コザック：翻訳効率を高めるための最適化された「コザック配列」を有するヒトα－グロビンｍＲＮＡの５'－ＵＴＲ配列。
ｓｅｃ／ＭＩＴＤ：抗原プロセシングおよび提示を改善することが示されている、ヒトＭＨＣクラスＩ複合体（ＨＬＡ－Ｂ５１、ハプロタイプＡ２、Ｂ２７／Ｂ５１、Ｃｗ２／Ｃｗ３）をコードする配列に由来する融合タンパク質タグ。ｓｅｃは、新生ポリペプチド鎖の小胞体への移行を誘導する分泌シグナルペプチドをコードする７８ｂｐ断片に対応する。ＭＩＴＤは、ＭＨＣクラスＩ輸送ドメインとも呼ばれる、ＭＨＣクラスＩ分子の膜貫通および細胞質ドメインに対応する。
Ｅ６／Ｅ７：ＨＰＶのそれぞれの抗原をコードする配列。
グリシン－セリンリンカー（ＧＳ）：融合タンパク質に一般的に使用される、主にアミノ酸グリシン（Ｇ）およびセリン（Ｓ）からなる短いリンカーペプチドをコードする配列。
Ｐ２Ｐ１６：免疫寛容を破壊するための破傷風トキソイド由来ヘルパーエピトープをコードする配列。
ＦＩ要素：３'－ＵＴＲは、「スプリットのアミノ末端エンハンサ」（ＡＥＳ）ｍＲＮＡ（Ｆと呼ばれる）およびミトコンドリアにコードされた１２ＳリボソームＲＮＡ（Ｉと呼ばれる）に由来する２つの配列要素の組合せである。これらは、ＲＮＡの安定性を付与し、総タンパク質発現を増強する配列のエクスビボ選択プロセスによって同定された。
Ａ３０Ｌ７０：３０個のアデノシン残基のストレッチ、それに続く１０個のヌクレオチドのリンカー配列、および樹状細胞におけるＲＮＡの安定性と翻訳効率を高めるように設計された別の７０個のアデノシン残基からなる、１１０ヌクレオチド長と測定されるポリ（Ａ）尾部。

一実施形態では、本明細書に記載のワクチンＲＮＡは、構造：
β－Ｓ－ＡＲＣＡ（Ｄ１）－ｈＡｇ－コザック－ｓｅｃ－ＧＳ（１）－Ｅ６／Ｅ７－ＧＳ（２）－Ｐ２Ｐ１６－ＧＳ（３）－ＭＩＴＤ－ＦＩ－Ａ３０Ｌ７０
を有する。

一実施形態では、本明細書に記載のワクチン抗原は、構造：
ｓｅｃ－ＧＳ（１）－Ｅ６／Ｅ７－ＧＳ（２）－Ｐ２Ｐ１６－ＧＳ（３）－ＭＩＴＤ
を有する。

一実施形態では、ｈＡｇ－コザックは、配列番号３０のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、ｓｅｃは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、Ｅ６／Ｅ７は、本明細書に記載のワクチン抗原のＥ６またはＥ７配列を含む。一実施形態では、Ｐ２Ｐ１６は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＭＩＴＤは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＧＳ（１）は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＧＳ（２）は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＧＳ（３）は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＦＩは、配列番号３１のヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、Ａ３０Ｌ７０は、配列番号３２のヌクレオチド配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１のアミノ酸配列、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２のヌクレオチド配列、配列番号２のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号２のヌクレオチド配列の断片、または配列番号２のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号３のアミノ酸配列、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号３のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号３のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号４のヌクレオチド配列、配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号４のヌクレオチド配列の断片、または配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号３のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ１６ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号４のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ１８ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号５のアミノ酸配列、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号５のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ１８ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ１８ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号６のヌクレオチド配列、配列番号６のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号６のヌクレオチド配列の断片、または配列番号６のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号５のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ１８ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号６のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ１８ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号７のアミノ酸配列、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号７のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ１８ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ１８ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号８のヌクレオチド配列、配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号８のヌクレオチド配列の断片、または配列番号８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号７のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ１８ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号８のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ３１ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号９のアミノ酸配列、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号９のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ３１ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号９のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ３１ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１０のヌクレオチド配列、配列番号１０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号１０のヌクレオチド配列の断片、または配列番号１０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号９のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ３１ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１０のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ３１ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１１のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ３１ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ３１ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１２のヌクレオチド配列、配列番号１２のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号１２のヌクレオチド配列の断片、または配列番号１２のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１１のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ３１ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１２のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ３３ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１３のアミノ酸配列、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１３のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ３３ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ３３ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１４のヌクレオチド配列、配列番号１４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号１４のヌクレオチド配列の断片、または配列番号１４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１３のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ３３ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１４のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ３３ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１５のアミノ酸配列、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１５のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ３３ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ３３ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１６のヌクレオチド配列、配列番号１６のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号１６のヌクレオチド配列の断片、または配列番号１６のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１５のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ３３ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１６のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ４５ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１７のアミノ酸配列、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１７のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ４５ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ４５ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１８のヌクレオチド配列、配列番号１８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号１８のヌクレオチド配列の断片、または配列番号１８のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１７のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ４５ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号１８のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ４５ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１９のアミノ酸配列、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１９のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ４５ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ４５ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２０のヌクレオチド配列、配列番号２０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号２０のヌクレオチド配列の断片、または配列番号２０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号１９のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ４５ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２０のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ５８ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号２１のアミノ酸配列、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号２１のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ５８ Ｅ６ワクチン抗原は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ５８ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２２のヌクレオチド配列、配列番号２２のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、もしくは配列番号２２のヌクレオチド配列の断片、または配列番号２２のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号２１のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ５８ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２２のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

一実施形態では、ＨＰＶ５８ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号２３のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号２３のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一実施形態では、ＨＰＶ５８ Ｅ７ワクチン抗原は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。

一実施形態では、ＨＰＶ５８ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２４のヌクレオチド配列、配列番号２４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列、または配列番号２４のヌクレオチド配列の断片、または配列番号２４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列、または配列番号２３のアミノ酸配列の免疫原性断片、または配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。一実施形態では、ＨＰＶ５８ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡは、（ｉ）配列番号２４のヌクレオチド配列を含み、および／または（ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列をコードする。

ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡによってコードされる抗原性ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７タンパク質またはペプチドは、任意のＨＰＶ、特にＨＰＶ１６、１８、３１、３３、４５または５８などの任意の高リスクＨＰＶ型に由来し得る。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡによってコードされる抗原性ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７タンパク質またはペプチドは、異なるＨＰＶ型に由来する。一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡによってコードされる抗原性ＨＰＶ Ｅ６／Ｅ７タンパク質またはペプチドは、同じＨＰＶ型に由来する。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡの組合せは、ＨＰＶ１６ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡとＨＰＶ１６ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡとの組合せである。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡの組合せは、ＨＰＶ１８ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡとＨＰＶ１８ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡとの組合せである。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡの組合せは、ＨＰＶ３１ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡとＨＰＶ３１ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡとの組合せである。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡの組合せは、ＨＰＶ３３ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡとＨＰＶ３３ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡとの組合せである。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡの組合せは、ＨＰＶ４５ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡとＨＰＶ４５ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡとの組合せである。

一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡの組合せは、ＨＰＶ５８ Ｅ６ワクチン抗原をコードするＲＮＡとＨＰＶ５８ Ｅ７ワクチン抗原をコードするＲＮＡとの組合せである。

本明細書における「変異体」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾によって親アミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を意味する。親アミノ酸配列は、天然もしくは野生型（ＷＴ）アミノ酸配列であり得るか、または野生型アミノ酸配列の改変形態であり得る。好ましくは、変異体アミノ酸配列は、親アミノ酸配列と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾、例えば、親と比較して１～約２０のアミノ酸修飾、好ましくは１～約１０または１～約５のアミノ酸修飾を有する。

本明細書における「野生型」または「ＷＴ」または「天然」とは、対立遺伝子変異を含む、自然界で見出されるアミノ酸配列を意味する。野生型アミノ酸配列、ペプチドまたはタンパク質は、意図的に改変されていないアミノ酸配列を有する。

本開示の目的のために、アミノ酸配列（ペプチド、タンパク質またはポリペプチド）の「変異体」は、アミノ酸挿入変異体、アミノ酸付加変異体、アミノ酸欠失変異体および／またはアミノ酸置換変異体を含む。「変異体」という用語は、全ての突然変異体、スプライス変異体、翻訳後修飾変異体、立体配座変異体、アイソフォーム変異体、対立遺伝子変異体、種変異体、および種ホモログ、特に天然に存在するものを含む。

アミノ酸挿入変異体は、特定のアミノ酸配列中に１個または２個以上のアミノ酸の挿入を含む。挿入を有するアミノ酸配列変異体の場合、１個以上のアミノ酸残基がアミノ酸配列の特定の部位に挿入されるが、得られた産物の適切なスクリーニングを伴うランダムな挿入も可能である。アミノ酸付加変異体は、１個以上のアミノ酸、例えば１、２、３、５、１０、２０、３０、５０個、またはそれ以上のアミノ酸のアミノ末端および／またはカルボキシ末端融合物を含む。アミノ酸欠失変異体は、配列からの１個以上のアミノ酸の除去、例えば１、２、３、５、１０、２０、３０、５０個、またはそれ以上のアミノ酸の除去を特徴とする。欠失は、タンパク質の任意の位置にあってよい。タンパク質のＮ末端および／またはＣ末端に欠失を含むアミノ酸欠失変異体は、Ｎ末端および／またはＣ末端切断変異体とも呼ばれる。アミノ酸置換変異体は、配列内の少なくとも１個の残基が除去され、別の残基がその位置に挿入されていることを特徴とする。相同なタンパク質もしくはペプチド間で保存されていないアミノ酸配列内の位置にある修飾、および／またはアミノ酸を類似の性質を有する他のアミノ酸で置換することが好ましい。好ましくは、ペプチドおよびタンパク質変異体におけるアミノ酸変化は、保存的アミノ酸変化、すなわち、同様に荷電したアミノ酸または非荷電アミノ酸の置換である。保存的アミノ酸変化は、その側鎖が関連するアミノ酸のファミリーの１つの置換を含む。天然に存在するアミノ酸は、一般に４つのファミリー：酸性（アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性（リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および非荷電極性（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン）アミノ酸に分けられる。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、時に芳香族アミノ酸として一緒に分類されることがある。一実施形態では、保存的アミノ酸置換は、以下の群内の置換を含む：
グリシン、アラニン；
バリン、イソロイシン、ロイシン；
アスパラギン酸、グルタミン酸；
アスパラギン、グルタミン；
セリン、トレオニン；
リジン、アルギニン；および
フェニルアラニン、チロシン。

好ましくは、所与のアミノ酸配列と前記所与のアミノ酸配列の変異体であるアミノ酸配列との間の類似性、好ましくは同一性の程度は、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％である。類似性または同一性の程度は、好ましくは、参照アミノ酸配列の全長の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％であるアミノ酸領域について与えられる。例えば、参照アミノ酸配列が２００個のアミノ酸からなる場合、類似性または同一性の程度は、好ましくは少なくとも約１００個、少なくとも約１２０個、少なくとも約１４０個、少なくとも約１６０個、少なくとも約１８０個、または約２００個のアミノ酸、好ましくは連続するアミノ酸について与えられる。好ましい実施形態では、類似性または同一性の程度は、参照アミノ酸配列の全長について与えられる。

「配列類似性」は、同一であるか、または保存的アミノ酸置換を表すアミノ酸の割合を示す。２つのアミノ酸配列間の「配列同一性」は、配列間で同一であるアミノ酸の割合を示す。

指定されたアミノ酸配列（ペプチド、タンパク質またはポリペプチド）に「由来する」アミノ酸配列（ペプチド、タンパク質またはポリペプチド）は、最初のアミノ酸配列の起源を指す。好ましくは、特定のアミノ酸配列に由来するアミノ酸配列は、その特定の配列またはその断片と同一、本質的に同一または相同であるアミノ酸配列を有する。特定のアミノ酸配列に由来するアミノ酸配列は、その特定の配列の変異体またはその断片であり得る。

本明細書に記載のペプチド抗原およびタンパク質抗原（Ｅ６タンパク質およびＥ７タンパク質）は、抗原、すなわちワクチン抗原をコードするＲＮＡの投与によって対象に提供された場合、好ましくは対象においてＴ細胞の刺激、プライミングおよび／または拡大をもたらす。前記刺激された、プライミングされたおよび／または拡大されたＴ細胞は、好ましくは標的抗原、特に疾患細胞、組織および／または器官によって発現される標的抗原、すなわち疾患関連抗原に対して向けられる。したがって、ワクチン抗原は、疾患関連抗原、またはその断片もしくは変異体を含み得る。一実施形態では、そのような断片または変異体は、疾患関連抗原と免疫学的に等価である。本開示の文脈において、「抗原の断片」または「抗原の変異体」という用語は、Ｔ細胞の刺激、プライミングおよび／または拡大をもたらす作用物質を意味し、刺激、プライミングおよび／または拡大されたＴ細胞は、特に疾患細胞、組織および／または器官の表面に発現された場合に、疾患関連抗原を標的とする。したがって、本開示に従って投与されるワクチン抗原は、疾患関連抗原に対応し得るかもしくはそれを含み得る、疾患関連抗原の断片に対応し得るかもしくはそれを含み得る、または疾患関連抗原もしくはその断片に相同な抗原に対応し得るかもしくはそれを含み得る。本開示に従って投与されるワクチン抗原が、疾患関連抗原の断片または疾患関連抗原の断片に相同なアミノ酸配列を含む場合、前記断片またはアミノ酸配列は、疾患関連抗原のエピトープ、または疾患関連抗原のエピトープに相同な配列を含み得、ここで、Ｔ細胞は前記エピトープに結合する。したがって、本開示によれば、抗原は、疾患関連抗原の免疫原性断片、または疾患関連抗原の免疫原性断片に相同なアミノ酸配列を含み得る。本開示による「抗原の免疫原性断片」は、好ましくは、Ｔ細胞を刺激、プライミングおよび／または拡大することができる抗原の断片に関する。ワクチン抗原（疾患関連抗原に類似）は、Ｔ細胞による結合のための関連エピトープを提供することが好ましい。ワクチン抗原（疾患関連抗原に類似）は、Ｔ細胞による結合のための関連エピトープを提供するために、抗原提示細胞などの細胞の表面に発現されることも好ましい。本発明によるワクチン抗原は、組換え抗原であり得る。

「免疫学的に等価」という用語は、免疫学的に等価なアミノ酸配列などの免疫学的に等価な分子が、同じもしくは本質的に同じ免疫学的特性を示し、および／または、例えば免疫学的効果の種類に関して、同じもしくは本質的に同じ免疫学的効果を及ぼすことを意味する。本開示の文脈において、「免疫学的に等価」という用語は、好ましくは、抗原または抗原変異体の免疫学的効果または特性に関して使用される。例えば、アミノ酸配列が、参照アミノ酸配列に結合するＴ細胞または参照アミノ酸配列を発現する細胞に曝露されたときに、参照アミノ酸配列と反応する特異性を有する免疫反応、特にＴ細胞の刺激、プライミングおよび／または拡大を誘導する場合、前記アミノ酸配列は参照アミノ酸配列と免疫学的に等価である。したがって、抗原と免疫学的に等価である分子は、Ｔ細胞の刺激、プライミングおよび／または拡大に関して、Ｔ細胞が標的とする抗原と同じもしくは本質的に同じ特性を示し、および／または同じもしくは本質的に同じ効果を及ぼす。

本明細書で使用される「活性化」または「刺激」は、検出可能な細胞増殖を誘導するのに十分に刺激されたＴ細胞の状態を指す。活性化はまた、誘導されたサイトカイン産生、および検出可能なエフェクタ機能に関連し得る。「活性化Ｔ細胞」という用語は、とりわけ、細胞分裂を行っているＴ細胞を指す。

「プライミング」という用語は、Ｔ細胞がその特異的抗原と最初に接触し、エフェクタＴ細胞への分化を引き起こすプロセスを指す。

「クローン拡大」または「拡大」という用語は、特定の実体が増加するプロセスを指す。本開示の文脈において、この用語は、好ましくは、リンパ球が抗原によって刺激され、増殖し、前記抗原を認識する特異的リンパ球が増幅される免疫学的応答に関連して使用される。好ましくは、クローン拡大はリンパ球の分化をもたらす。

リポプレックス粒子
本開示の特定の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡは、ＲＮＡリポプレックス粒子中に存在し得る。本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子およびＲＮＡリポプレックス粒子を含む組成物は、非経口投与後、特に静脈内投与後の標的組織へのＲＮＡの送達に有用である。ＲＮＡリポプレックス粒子は、脂質のエタノール溶液を水または適切な水相に注入することによって得られ得るリポソームを使用して調製され得る。一実施形態では、水相は酸性ｐＨを有する。一実施形態では、水相は、例えば約５ｍＭの量の酢酸を含む。一実施形態では、リポソームおよびＲＮＡリポプレックス粒子は、少なくとも１つのカチオン性脂質および少なくとも１つのさらなる脂質を含む。一実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質は、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）および／または１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）を含む。一実施形態では、少なくとも１つのさらなる脂質は、１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、コレステロール（Ｃｈｏｌ）および／または１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）を含む。一実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質は、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）を含み、少なくとも１つのさらなる脂質は、１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む。一実施形態では、リポソームおよびＲＮＡリポプレックス粒子は、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）および１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含む。リポソームは、リポソームをＲＮＡと混合することによってＲＮＡリポプレックス粒子を調製するために使用され得る。

脾臓を標的とするＲＮＡリポプレックス粒子は、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１３／１４３６８３号に記載されている。正味の負電荷を有するＲＮＡリポプレックス粒子は、脾臓組織または脾臓細胞、例えば抗原提示細胞、特に樹状細胞を選択的に標的とするために使用し得ることが認められている。したがって、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与後、脾臓におけるＲＮＡ蓄積および／またはＲＮＡ発現が起こる。したがって、本開示のＲＮＡリポプレックス粒子は、脾臓においてＲＮＡを発現させるために使用され得る。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与後、肺および／または肝臓におけるＲＮＡ蓄積および／またはＲＮＡ発現は、起こらないかまたは本質的に起こらない。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与後、脾臓内のプロフェッショナル抗原提示細胞などの抗原提示細胞におけるＲＮＡ蓄積および／またはＲＮＡ発現が起こる。したがって、本開示のＲＮＡリポプレックス粒子は、そのような抗原提示細胞においてＲＮＡを発現させるために使用され得る。一実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞および／またはマクロファージである。

ＲＮＡリポプレックス粒径
本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子は、一実施形態では、約２００ｎｍ～約１０００ｎｍ、約２００ｎｍ～約８００ｎｍ、約２５０～約７００ｎｍ、約４００～約６００ｎｍ、約３００ｎｍ～約５００ｎｍ、または約３５０ｎｍ～約４００ｎｍの範囲の平均直径を有する。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、約２５０ｎｍ～約７００ｎｍの範囲の平均直径を有する。別の実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、約３００ｎｍ～約５００ｎｍの範囲の平均直径を有する。例示的な実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、約４００ｎｍの平均直径を有する。

一実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子は、約０．５未満、約０．４未満、または約０．３未満の多分散指数を示す。例として、ＲＮＡリポプレックス粒子は、約０．１～約０．３の範囲の多分散指数を示し得る。

脂質
一実施形態では、本明細書に記載の脂質溶液、リポソームおよびＲＮＡリポプレックス粒子は、カチオン性脂質を含む。本明細書で使用される場合、「カチオン性脂質」は、正味の正電荷を有する脂質を指す。カチオン性脂質は、静電相互作用によって負に帯電したＲＮＡを脂質マトリックスに結合する。一般に、カチオン性脂質は、ステロール、アシル鎖またはジアシル鎖などの親油性部分を有し、脂質の頭部基は、典型的には正電荷を担持する。カチオン性脂質の例には、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）、ジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）；１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）；１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＤＡＰ）；１，２－ジアシルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン；１，２－ジアルキルオキシ－３－ジメチルアンモニウムプロパン；ジオクタデシルジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）、２，３－ジ（テトラデコキシ）プロピル－（２－ヒドロキシエチル）－ジメチルアザニウム（ＤＭＲＩＥ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（ＤＭＥＰＣ）、ｌ，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、１，２－ジオレイルオキシプロピル－３－ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、および２，３－ジオレオイルオキシ－Ｎ－［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－ｌ－プロパナミウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）が含まれるが、これらに限定されない。ＤＯＴＭＡ、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＤＡＣ、およびＤＯＳＰＡが好ましい。特定の実施形態では、カチオン性脂質は、ＤＯＴＭＡおよび／またはＤＯＴＡＰである。

ＲＮＡリポプレックス粒子の全体的な正電荷対負電荷比および物理的安定性を調整するために、さらなる脂質を組み込んでもよい。特定の実施形態では、さらなる脂質は中性脂質である。本明細書で使用される場合、「中性脂質」は、ゼロの正味電荷を有する脂質を指す。中性脂質の例には、１，２－ジ－（９Ｚ－オクタデセノイル）－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、セファリン、コレステロール、およびセレブロシドが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、さらなる脂質は、ＤＯＰＥ、コレステロールおよび／またはＤＯＰＣである。

特定の実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、カチオン性脂質とさらなる脂質の両方を含む。例示的な実施形態では、カチオン性脂質はＤＯＴＭＡであり、さらなる脂質はＤＯＰＥである。理論に拘束されることを望むものではないが、少なくとも１つのさらなる脂質の量と比較した少なくとも１つのカチオン性脂質の量は、電荷、粒径、安定性、組織選択性、およびＲＮＡの生物活性などの重要なＲＮＡリポプレックス粒子特性に影響を及ぼし得る。したがって、いくつかの実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質対少なくとも１つのさらなる脂質のモル比は、約１０：０～約１：９、約４：１～約１：２、または約３：１～約１：１である。特定の実施形態では、モル比は、約３：１、約２．７５：１、約２．５：１、約２．２５：１、約２：１、約１．７５：１、約１．５：１、約１．２５：１、または約１：１であり得る。例示的な実施形態では、少なくとも１つのカチオン性脂質対少なくとも１つのさらなる脂質のモル比は、約２：１である。

電荷比
本開示のＲＮＡリポプレックス粒子の電荷は、少なくとも１つのカチオン性脂質中に存在する電荷とＲＮＡ中に存在する電荷との合計である。電荷比は、少なくとも１つのカチオン性脂質中に存在する正電荷対ＲＮＡ中に存在する負電荷の比である。少なくとも１つのカチオン性脂質中に存在する正電荷対ＲＮＡ中に存在する負電荷の電荷比は、以下の式によって計算される：電荷比＝［（カチオン性脂質濃度（ｍｏｌ））＊（カチオン性脂質中の正電荷の総数）］／［（ＲＮＡ濃度（ｍｏｌ））＊（ＲＮＡ中の負電荷の総数）］。ＲＮＡの濃度および少なくとも１つのカチオン性脂質の量は、当業者によって日常的な方法を使用して決定され得る。

一実施形態では、生理学的ｐＨで、ＲＮＡリポプレックス粒子における正電荷対負電荷の電荷比は、約１．６：２～約１：２、または約１．６：２～約１．１：２である。特定の実施形態では、生理学的ｐＨでのＲＮＡリポプレックス粒子における正電荷対負電荷の電荷比は、約１．６：２．０、約１．５：２．０、約１．４：２．０、約１．３：２．０、約１．２：２．０、約１．１：２．０、または約１：２．０である。

そのような電荷比を有するＲＮＡリポプレックス粒子は、脾臓組織または脾臓細胞、例えば抗原提示細胞、特に樹状細胞を選択的に標的とするために使用し得ることが認められている。したがって、一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与後、脾臓におけるＲＮＡ蓄積および／またはＲＮＡ発現が起こる。したがって、本開示のＲＮＡリポプレックス粒子は、脾臓においてＲＮＡを発現させるために使用され得る。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与後、肺および／または肝臓におけるＲＮＡ蓄積および／またはＲＮＡ発現は、起こらないかまたは本質的に起こらない。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与後、脾臓内のプロフェッショナル抗原提示細胞などの抗原提示細胞におけるＲＮＡ蓄積および／またはＲＮＡ発現が起こる。したがって、本開示のＲＮＡリポプレックス粒子は、そのような抗原提示細胞においてＲＮＡを発現させるために使用され得る。一実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞および／またはマクロファージである。

放射線療法
放射線療法（ＲＴ）は、使用される２番目に一般的な治療レジメンであり、癌患者の約５０％に行われる。放射線を悪性組織に局所的に送達するために、高エネルギー光子（Ｘ線およびγ線）、粒子照射（例えば陽子、炭素イオン）または放射性核種（セシウム１３７、イリジウム１９２、ヨウ素１２５）を使用する、様々な種類のＲＴ治療が存在する。局所ＲＴ（ＬＲＴ）は、１２０年以上にわたる技術的改善および放射線量の精緻化の歴史に向き合っている。

電離放射線とは、物質をイオン化するのに十分なエネルギーを有し、電磁放射線（Ｘ線およびγ線）と粒子放射線（αおよびβ粒子、陽子、重イオン）とに分けることができる放射線を指す。電離放射線の天然源は、放射性崩壊時に、α（Ｈｅ^２＋）、β（ｅ^－またはｅ^＋）およびγ線（高エネルギー光子）の固有のスペクトルを放出する放射性同位体である。イオン化事象の数および組織浸透深さは、一次運動エネルギー、および帯電している場合はクーロンエネルギーの関数である。放射線量は、物質の単位質量当たりの吸収放射線量（１Ｊ放射線／ｋｇ物質）についての国際単位系（ＳＩ）単位としてグレイ（Ｇｙ）で測定される。

電離放射線が生体物質を横断するとき、電離放射線は、細胞、組織および全体としての生物に対する直接的かつ深刻な影響を伴って、化学結合を破壊し、分子をイオン化することができる。全ての細胞構造は、直接的または間接的に（放射線誘発活性酸素種（ＲＯＳ）による間接イオン化）放射線によって害され得るが、ＤＮＡ損傷は、最終的かつ最も深刻な結果と見なされる。電離放射線は、塩基損傷、一本鎖切断（ＳＳＢ）および二本鎖切断（ＤＳＢ）などの様々な種類のＤＮＡ損傷を引き起こし得る。ＤＮＡ損傷の種類および密度は、放射線の種類（例えば電磁気または微粒子）および線量の関数である。しかしながら、正確な細胞運命は、開始されたＤＮＡ損傷応答（ＤＤＲ）の関数としての細胞型、細胞周期期、修復能力および細胞死能力などの細胞固有因子に依存する。第１に、細胞が修復能力を有し、損傷が最小限である場合、細胞はその損傷を修復し得る。塩基損傷およびＳＳＢは、塩基除去修復（ＢＥＲ）またはヌクレオチド除去修復（ＮＥＲ）を介して修復されるが、より重度のＤＳＢは、非相同末端結合（ＮＨＥＪ、全細胞周期期）または相同組換え（ＨＲ、ＳおよびＧ２期のみ）を介して修復される。第２に、細胞はＤＮＡ損傷を修復しようとし得るが、成功せず、その損傷形態で再生する。未修復のＤＳＢは、有糸分裂崩壊による細胞死をもたらし得るが、誤って修復されたＤＳＢは、染色体転座およびゲノム不安定性を生じさせ、二次癌を引き起こし得る。第３に、細胞は損傷を認識し、プログラム細胞死（アポトーシス）を受ける。

ほとんどの癌細胞は、異常なＤＮＡ修復経路および損なわれた細胞周期制御を示すので、それらは、それらの健康な対応物とは異なって電離放射線に応答し得る。

細胞死滅の線形二次（ＬＱ）モデルは、放射線生物学および物理学における重要な数学的ツールの１つであり、送達される線量と細胞生存率との間の単純な関係を提供する。異なる放射線量をインビトロで適用し、クローン原性生存アッセイで測定される前駆細胞の生存コロニーを産生する能力によって細胞の生存率を決定する。クローン原性生存アッセイは、放射線に応答した細胞生存率を測定するための認められているゴールドスタンダードであり、

によって定義され、Ｓは生存細胞率であり、Ｄは総線量であり、αおよびβは細胞の放射線感受性の尺度である。生存率は、放射線量に対して対数スケールでプロットされる。生存曲線は、低線量では線形勾配（α）および高線量では曲線勾配（β）に従う。この曲線の初期および後期の屈曲は細胞固有の特性であり、α／β比として表される。α／β比が高い細胞は、異なる線量にわたって比較的一定の細胞死速度を経験するが、α／β比が低い細胞は顕著な曲率を示し、高線量放射線に応答して細胞死が増加する。ほとんどの健康な細胞などのゆっくり増殖する細胞または組織は、一般に非常に良好に修復し、低いα／β比を有する（後期応答組織）。腫瘍細胞などの急速に増殖する細胞または組織は、一般に修復不良であり、高いα／β比を有する（急性応答組織）。特に低線量（＜２～２．５Ｇｙ）では、正常細胞は、より遅い増殖および無傷のＤＮＡ修復のために腫瘍細胞よりも生存上の利点を有する。低線量での腫瘍細胞のより高い放射線感受性は、今日の標準的な臨床診療で依然として使用されている分割放射線療法の基礎を形成する。

しかしながら、電離放射線効果を予測するためのＬＱモデルには重大な制限がある：（ｉ）これは、インビボ放射線効果を予測するために使用されるインビトロモデルであり、（ｉｉ）クローン原性生存率を測定するが、誘導される細胞死の種類、例えば有糸分裂崩壊、アポトーシス、壊死、ネクロトーシス、オートファジーまたは複製老化についての情報は提供されておらず、（ｉｉｉ）免疫系の反応を説明しておらず、および（ｉｖ）分割当たりのより高い線量（＞１０Ｇｙ）では正確ではない。

腫瘍の放射線治療処置には、２種類の放射線装置、すなわち電磁装置および粒子装置が利用される。種類（電磁または粒子）および一次エネルギーに依存して、放射線ビームは組織への異なる線量沈着プロファイルを有する。

光子は組織に深く浸透することができず、一次エネルギーに応じて、最初の５～１０ｃｍの水中にエネルギーを沈着するが、陽子ビームのような粒子ビームは、組織により深く浸透することができる。Ｘ線は比較的安価であり、微粒子照射ほど有害ではなく、したがってより安全であると考えられるため、従来の放射線療法で最も一般的に使用されている。

Ｘ線の治療的使用は、技術開発の長い歴史に向き合っており、今日でも初期の放射線装置の多くが依然として使用されている。１９３０年代の慣用電圧Ｘ線管（２００～５００キロボルト（ｋＶ））の開発により、初めてＸ線ビームによる腫瘍の外部治療が可能になった。自然のＸ線またはγ線放出放射性核種とは対照的に、Ｘ線管は、電気入力からＸ線を生成する真空管である。電子はカソードから放出され、真空を通ってアノードに向かって加速される。管電圧（５０ｋＶ～５００ｋＶ）に応じて、電子は異なる速度に加速され、異なるエネルギーのＸ線が生成される。電子がアノード材料に衝突すると、電子ビームに垂直にＸ範囲の制動放射が生成される。自然放出放射性核種とは対照的に、放射線は、Ｘ線管がオンになっている限り生成されるのみである。得られるＸ線エネルギーは、管電圧およびアノード材料の関数である。組織浸透深さが低いため、慣用電圧Ｘ線は臨床診療では断念されているが、前臨床研究では依然として頻繁に適用されている。

今日、治療目的で高エネルギーＸ線を生成するために医療用線形加速器（ＬＩＮＡＣ）を利用した大容量Ｘ線（１～２５ＭｅＶ）が使用されている。ビームのサイズ、形状および角度は、健康な組織を避けながら腫瘍を覆うように制御される。従来の３ＤコンフォーマルＲＴ（３Ｄ－ＣＲＴ）および強度変調ＲＴ（ＩＭＲＴ）は、外部ビームＲＴ（ＥＢＲＴ）の異なる形態である。従来のＲＴでは、放射線量は、複数の重なり合うビームにおいて異なる角度から送達される。最高線量は腫瘍内のビーム交差部で送達され、線量は交点からの距離と共に減少する。３Ｄ－ＣＲＴでは、腫瘍３Ｄ画像（コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）または陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ））を使用して、腫瘍の形状により適合し、リスクのある臓器の輪郭をより正確に描画する放射線ビームを設計する。ＩＭＲＴは、ビームが異なる強度の数百のビームレットに分割され、高コンフォーマル線量分布および高精度の腫瘍標的化を可能にする、先進的な形態の３Ｄ－ＣＲＴである。

電磁照射とは対照的に、陽子または炭素ビームを使用して、１９７０年代に治療的使用のために粒子照射が導入された。粒子照射は、その良好な浸透可能性およびその範囲の末端における高いエネルギー沈着（ブラッグピーク）を特徴とする。これは、軌道に沿った線量沈着が制限された極めて急峻な線量勾配を可能にする。しかしながら、放射線装置は非常にコストがかかり、高線量沈着は二次癌の高いリスクを伴う。

放射線送達および放射線装置が基本的であったときに、基礎となる生物学の認識のためではなく、技術的な制限およびオフターゲット効果を低減するという要求のために、総放射線量は複数のより小さい放射線量に分割された。今日、臨床ＬＲＴプロトコルは依然として分割ＬＲＴに基づいており、６～８週間にわたって毎日１．８～２Ｇｙ（月曜日から金曜日まで）を適用し、６０～８０Ｇｙの総線量を累積する。

放射線送達の技術的進歩により、放射線量を高い精度、減少したマージンおよび高い線量コンフォメーションで送達することができる。これは、リスクの低い単回照射でより高い放射線量を送達することを可能にし、体幹部定位ＲＴ（ＳＢＲＴ）と称される。さらに、特に分割当たりの高線量を適用した場合に、ＬＲＴの免疫調節効果が知られるようになった。好ましい免疫学的効果のために、変化が進行中であり、高線量ＬＲＴを単独でまたは他の免疫調節剤と組み合わせて適用することが増えつつある。

免疫チェックポイント阻害剤
本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント」は、免疫系の調節因子、特に、抗原のＴ細胞受容体認識の大きさおよび質を調節する共刺激シグナルおよび阻害シグナルを指す。特定の実施形態では、免疫チェックポイントは阻害シグナルである。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２との間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＣＤ２８結合を置き換えるためのＣＴＬＡ－４とＣＤ８０またはＣＤ８６との間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＬＡＧ－３とＭＨＣクラスＩＩ分子との間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＴＩＭ－３とガレクチン９、ＰｔｄＳｅｒ、ＨＭＧＢ１およびＣＥＡＣＡＭ１などのそのリガンドの１つ以上との間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、１つまたはいくつかのＫＩＲとそれらのリガンドとの間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＴＩＧＩＴとそのリガンドであるＰＶＲ、ＰＶＲＬ２およびＰＶＲＬ３の１つ以上との間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡとＨＬＡ－Ｅとの間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＶＩＳＴＡとその結合パートナー（１つ以上）との間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、１つ以上のＳｉｇｌｅｃとそれらのリガンドとの間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＧＡＲＰとそのリガンドの１つ以上との間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＰＶＲＩＧとＰＶＲＬ２との間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＣＳＦ１ＲとＣＳＦ１との間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＢＴＬＡとＨＶＥＭとの間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＣＤ３９およびＣＤ７３によって産生される、アデノシン作動性経路の一部、例えばＡ２ＡＲおよび／またはＡ２ＢＲとアデノシンとの間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、Ｂ７－Ｈ３とその受容体および／またはＢ７－Ｈ４とその受容体との間の相互作用である。特定の実施形態では、阻害シグナルは、ＩＤＯ、ＣＤ２０、ＮＯＸまたはＴＤＯによって媒介される。

「プログラム死１（ＰＤ－１）」受容体は、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫抑制受容体を指す。ＰＤ－１は、インビボで以前に活性化されたＴ細胞上に主に発現され、２つのリガンド、ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１またはＣＤ２７４としても公知）およびＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣまたはＣＤ２７３としても公知）に結合する。本明細書で使用される「ＰＤ－１」という用語は、ヒトＰＤ－１（ｈＰＤ－１）、ｈＰＤ－１の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＰＤ－１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。「プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）」は、ＰＤ－１に結合するとＴ細胞の活性化およびサイトカイン分泌を下方制御する、ＰＤ－１の２つの細胞表面糖タンパク質リガンドの１つ（もう１つはＰＤ－Ｌ２）である。本明細書で使用される「ＰＤ－Ｌ１」という用語は、ヒトＰＤ－Ｌ１（ｈＰＤ－Ｌ１）、ｈＰＤ－Ｌ１の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＰＤ－Ｌ１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＰＤ－Ｌ２」という用語は、ヒトＰＤ－Ｌ２（ｈＰＤ－Ｌ２）、ｈＰＤ－Ｌ２の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＰＤ－Ｌ２と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。ＰＤ－１のリガンド（ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２）は、樹状細胞またはマクロファージなどの抗原提示細胞、および他の免疫細胞の表面に発現される。ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２への結合は、Ｔ細胞活性化の下方制御をもたらす。ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２を発現する癌細胞は、抗癌免疫応答の抑制をもたらすＰＤ－１を発現するＴ細胞をスイッチオフにすることができる。ＰＤ－１とそのリガンドとの間の相互作用は、腫瘍浸潤リンパ球の減少、Ｔ細胞受容体媒介増殖の減少、および癌性細胞による免疫回避をもたらす。免疫抑制は、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との局所的相互作用を阻害することによって逆転させることができ、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ２との相互作用も同様に遮断される場合、その効果は相加的である。

「細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ－４）」（ＣＤ１５２としても公知）は、Ｔ細胞表面分子であり、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。このタンパク質は、ＣＤ８０（Ｂ７－１）およびＣＤ８６（Ｂ７－２）に結合することによって免疫系を下方制御する。本明細書で使用される「ＣＴＬＡ－４」という用語は、ヒトＣＴＬＡ－４（ｈＣＴＬＡ－４）、ｈＣＴＬＡ－４の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＣＴＬＡ－４と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。ＣＴＬＡ－４は、ＣＤ８０およびＣＤ８６に対してはるかに高い結合親和性を有する刺激性チェックポイントタンパク質ＣＤ２８のホモログである。ＣＴＬＡ４は活性化Ｔ細胞の表面に発現され、そのリガンドはプロフェッショナル抗原提示細胞の表面に発現される。ＣＴＬＡ－４のそのリガンドへの結合は、ＣＤ２８の共刺激シグナルを妨げ、阻害シグナルを生成する。したがって、ＣＴＬＡ－４はＴ細胞活性化を下方制御する。

「ＩｇドメインおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体」（ＴＩＧＩＴ、ＷＵＣＡＭまたはＶｓｔｍ３としても公知）は、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上の免疫受容体であり、ＤＣ、マクロファージなどのＰＶＲ（ＣＤ１５５）ならびにＰＶＲＬ２（ＣＤ１１２；ネクチン－２）およびＰＶＲＬ３（ＣＤ１１３；ネクチン－３）に結合し、Ｔ細胞媒介免疫を調節する。本明細書で使用される「ＴＩＧＩＴ」という用語は、ヒトＴＩＧＩＴ（ｈＴＩＧＩＴ）、ｈＴＩＧＩＴの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＴＩＧＩＴと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＰＶＲ」という用語は、ヒトＰＶＲ（ｈＰＶＲ）、ｈＰＶＲの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＰＶＲと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＰＶＲＬ２」という用語は、ヒトＰＶＲＬ２（ｈＰＶＲＬ２）、ｈＰＶＲＬ２の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＰＶＲＬ２と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＰＶＲＬ３」という用語は、ヒトＰＶＲＬ３（ｈＰＶＲＬ３）、ｈＰＶＲＬ３の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＰＶＲＬ３と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。

「Ｂ７ファミリー」は、受容体が未定義の阻害性リガンドを指す。Ｂ７ファミリーはＢ７－Ｈ３およびＢ７－Ｈ４を包含し、どちらも腫瘍細胞および腫瘍浸潤細胞で上方制御される。本明細書で使用される「Ｂ７－Ｈ３」および「Ｂ７－Ｈ４」という用語は、ヒトＢ７－Ｈ３（ｈＢ７－Ｈ３）およびヒトＢ７－Ｈ４（ｈＢ７－Ｈ４）、その変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにそれぞれＢ７－Ｈ３およびＢ７－Ｈ４と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。

「ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ」（ＢＴＬＡ、ＣＤ２７２としても公知）は、Ｔｈ１細胞で発現されるがＴｈ２細胞では発現されないＴＮＦＲファミリーメンバーである。ＢＴＬＡ発現は、Ｔ細胞の活性化中に誘導され、特にＣＤ８＋Ｔ細胞の表面上に発現される。本明細書で使用される「ＢＴＬＡ」という用語は、ヒトＢＴＬＡ（ｈＢＴＬＡ）、ｈＢＴＬＡの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＢＴＬＡと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。ＢＴＬＡ発現は、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞のエフェクタ細胞表現型への分化中に徐々に下方制御される。腫瘍特異的ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞は高レベルのＢＴＬＡを発現する。ＢＴＬＡは「ヘルペスウイルス侵入メディエータ」（ＨＶＥＭ、ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０としても公知）に結合し、Ｔ細胞阻害に関与する。本明細書で使用される「ＨＶＥＭ」という用語は、ヒトＨＶＥＭ（ｈＨＶＥＭ）、ｈＨＶＥＭの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＨＶＥＭと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。ＢＴＬＡ－ＨＶＥＭ複合体は、Ｔ細胞免疫応答を負に調節する。

「キラー細胞免疫グロブリン様受容体」（ＫＩＲ）は、健康な細胞と疾患細胞の区別に関与するＮＫ Ｔ細胞およびＮＫ細胞上のＭＨＣクラスＩ分子の受容体である。ＫＩＲは、正常な免疫細胞活性化を抑制するヒト白血球抗原（ＨＬＡ）Ａ、ＢおよびＣに結合する。本明細書で使用される「ＫＩＲ」という用語は、ヒトＫＩＲ（ｈＫＩＲ）、ｈＫＩＲの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＫＩＲと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＨＬＡ」という用語は、ＨＬＡの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにＨＬＡと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用されるＫＩＲは、特に、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、および／またはＫＩＲ２ＤＬ３を指す。

「リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）」は（ＣＤ２２３としても公知）、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合することによるリンパ球活性の阻害に関連する阻害性受容体である。この受容体は、Ｔｒｅｇ細胞の機能を増強し、ＣＤ８＋エフェクタＴ細胞の機能を阻害し、免疫応答抑制をもたらす。ＬＡＧ－３は、活性化Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞およびＤＣ上に発現される。本明細書で使用される「ＬＡＧ－３」という用語は、ヒトＬＡＧ－３（ｈＬＡＧ－３）、ｈＬＡＧ－３の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。

「Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ－３）」（ＨＡＶｃｒ－２としても公知）は、Ｔｈ１細胞応答の阻害によるリンパ球活性の阻害に関与する阻害性受容体である。そのリガンドは、様々な種類の癌において上方制御されるガレクチン９（ＧＡＬ９）である。他のＴＩＭ－３リガンドには、ホスファチジルセリン（ＰｔｄＳｅｒ）、高移動度群タンパク質１（ＨＭＧＢ１）および癌胎児性抗原関連細胞接着分子１（ＣＥＡＣＡＭ１）が含まれる。本明細書で使用される「ＴＩＭ－３」という用語は、ヒトＴＩＭ３（ｈＴＩＭ－３）、ｈＴＩＭ－３の変異体、アイソフォームおよび種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＧＡＬ９」という用語は、ヒトＧＡＬ９（ｈＧＡＬ９）、ｈＧＡＬ９の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＰｄｔＳｅｒ」という用語は、少なくとも１つの共通エピトープを有する変異体および類似体を含む。本明細書で使用される「ＨＭＧＢ１」という用語は、ヒトＨＭＧＢ１（ｈＨＭＧＢ１）、ｈＨＭＧＢ１の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＣＥＡＣＡＭ１」という用語は、ヒトＣＥＡＣＡＭ１（ｈＣＥＡＣＡＭ１）、ｈＣＥＡＣＡＭ１の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。

「ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ」は、主にナチュラルキラー細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の表面上に発現される阻害性受容体である。本明細書で使用される「ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ」という用語は、ヒトＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ（ｈＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ）、ｈＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ受容体は、ＣＤ９４およびＮＫＧ２Ａを含むヘテロ二量体である。これは、おそらくＨＬＡ－Ｅなどのリガンドに結合することによって、ＮＫ細胞活性化およびＣＤ８＋Ｔ細胞機能を抑制する。ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａは、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）およびＴ細胞（α／βおよびγ／δ）のサイトカイン放出および細胞傷害性応答を制限する。ＮＫＧ２Ａは腫瘍浸潤細胞で頻繁に発現され、ＨＬＡ－Ｅはいくつかの癌で過剰発現される。

「インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ」（ＩＤＯ）は、免疫阻害特性を有するトリプトファン異化酵素である。本明細書で使用される「ＩＤＯ」という用語は、ヒトＩＤＯ（ｈＩＤＯ）、ｈＩＤＯの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。ＩＤＯは、キヌレニンへの変換を触媒するトリプトファン分解における律速酵素である。したがって、ＩＤＯは必須アミノ酸の枯渇に関与している。ＴおよびＮＫ細胞の抑制、Ｔｒｅｇおよび骨髄由来サプレッサ細胞の生成および活性化、ならびに腫瘍血管新生の促進に関与することが公知である。ＩＤＯは多くの癌において過剰発現され、局所炎症によって誘導された場合、腫瘍細胞の免疫系回避を促進し、慢性腫瘍進行を促進することが示された。

本明細書で使用される「アデノシン作動性経路」または「アデノシンシグナル伝達経路」では、ＡＴＰがエクトヌクレオチダーゼＣＤ３９およびＣＤ７３によってアデノシンに変換され、阻害性アデノシン受容体である「アデノシンＡ２Ａ受容体」（Ａ２ＡＲ、ＡＤＯＲＡ２Ａとしても公知）および「アデノシンＡ２Ｂ受容体」（Ａ２ＢＲ、ＡＤＯＲＡ２Ｂとしても公知）の１つ以上によるアデノシン結合を介した阻害シグナル伝達をもたらす。アデノシンは、免疫抑制特性を有するヌクレオシドであり、腫瘍微小環境に高濃度で存在し、免疫細胞浸潤、細胞傷害性およびサイトカイン産生を制限する。したがって、アデノシンシグナル伝達は、宿主免疫系クリアランスを回避するための癌細胞の戦略である。Ａ２ＡＲおよびＡ２ＢＲを介したアデノシンシグナル伝達は、腫瘍微小環境に典型的に存在する高アデノシン濃度によって活性化される、癌治療における重要なチェックポイントである。ＣＤ３９、ＣＤ７３、Ａ２ＡＲおよびＡ２ＢＲは、Ｔ細胞、インバリアントナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、血小板、肥満細胞および好酸球を含むほとんどの免疫細胞によって発現される。Ａ２ＡＲおよびＡ２ＢＲを介したアデノシンシグナル伝達は、Ｔ細胞受容体が媒介する免疫細胞の活性化を妨げ、Ｔｒｅｇの数の増加ならびにＤＣおよびエフェクタＴ細胞の活性化の減少をもたらす。本明細書で使用される「ＣＤ３９」という用語は、ヒトＣＤ３９（ｈＣＤ３９）、ｈＣＤ３９の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＣＤ７３」という用語は、ヒトＣＤ７３（ｈＣＤ７３）、ｈＣＤ７３の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「Ａ２ＡＲ」という用語は、ヒトＡ２ＡＲ（ｈＡ２ＡＲ）、ｈＡ２ＡＲの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「Ａ２ＢＲ」という用語は、ヒトＡ２ＢＲ（ｈＡ２ＢＲ）、ｈＡ２ＢＲの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。

「Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサ」（ＶＩＳＴＡ、Ｃ１０ｏｒｆ５４としても公知）は、ＰＤ－Ｌ１と相同性を有するが、造血区画に限定された固有の発現パターンを示す。本明細書で使用される「ＶＩＳＴＡ」という用語は、ヒトＶＩＳＴＡ（ｈＶＩＳＴＡ）、ｈＶＩＳＴＡの変異体、アイソフォームおよび種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。ＶＩＳＴＡは、Ｔ細胞抑制を誘導し、腫瘍内の白血球によって発現される。

「シアル酸結合免疫グロブリン型レクチン」（Ｓｉｇｌｅｃ）ファミリーメンバーは、シアル酸を認識し、「自己」と「非自己」の区別に関与する。本明細書で使用される「Ｓｉｇｌｅｃ」という用語は、ヒトＳｉｇｌｅｃ（ｈＳｉｇｌｅｃ）、ｈＳｉｇｌｅｃの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに１つ以上のｈＳｉｇｌｅｃｓと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。ヒトゲノムは１４個のＳｉｇｌｅｃを含み、限定されないが、Ｓｉｇｌｅｃ－２、Ｓｉｇｌｅｃ－３、Ｓｉｇｌｅｃ－７およびＳｉｇｌｅｃ－９を含むそのうちのいくつかは、免疫抑制に関与している。Ｓｉｇｌｅｃ受容体は、シアル酸を含むグリカンに結合するが、シアル酸残基の結合位置化学および空間分布の認識が異なる。このファミリーのメンバーはまた、異なる発現パターンを有する。広範囲の悪性腫瘍は、１つ以上のＳｉｇｌｅｃを過剰発現する。

「ＣＤ２０」は、Ｂ細胞およびＴ細胞の表面上に発現される抗原である。ＣＤ２０の高発現は、Ｂ細胞リンパ腫、毛様細胞白血病、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、および黒色腫癌幹細胞などの癌において見出され得る。本明細書で使用される「ＣＤ２０」という用語は、ヒトＣＤ２０（ｈＣＤ２０）、ｈＣＤ２０の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。

「糖タンパク質Ａ反復優勢」（ＧＡＲＰ）は、免疫寛容および腫瘍が患者の免疫系から逃れる能力において役割を果たす。本明細書で使用される「ＧＡＲＰ」という用語は、ヒトＧＡＲＰ（ｈＧＡＲＰ）、ｈＧＡＲＰの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。ＧＡＲＰは、末梢血中のＴｒｅｇ細胞および腫瘍部位の腫瘍浸潤Ｔ細胞を含むリンパ球上に発現される。これは、おそらく、潜在性「トランスフォーミング増殖因子β」（ＴＧＦ－β）に結合する。ＴｒｅｇにおけるＧＡＲＰシグナル伝達の破壊は、寛容の減少をもたらし、Ｔｒｅｇの腸への移動および細胞傷害性Ｔ細胞の増殖の増加を阻害する。

「ＣＤ４７」は、リガンド「シグナル調節タンパク質アルファ」（ＳＩＲＰα）に結合する膜貫通タンパク質である。本明細書で使用される「ＣＤ４７」という用語は、ヒトＣＤ４７（ｈＣＤ４７）、ｈＣＤ４７の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＣＤ４７と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＳＩＲＰα」という用語は、ヒトＳＩＲＰα（ｈＳＩＲＰα）、ｈＳＩＲＰαの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＳＩＲＰαと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。ＣＤ４７シグナル伝達は、アポトーシス、増殖、接着および遊走を含む様々な細胞プロセスに関与する。ＣＤ４７は多くの癌において過剰発現され、マクロファージに対する「ｄｏｎ'ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルとして機能する。阻害性抗ＣＤ４７または抗ＳＩＲＰα抗体を介したＣＤ４７シグナル伝達の遮断は、癌細胞のマクロファージ食作用を可能にし、癌特異的Ｔリンパ球の活性化を促進する。

「ポリオウイルス受容体関連免疫グロブリンドメイン含有」（ＰＶＲＩＧ、ＣＤ１１２Ｒとしても公知）は、「ポリオウイルス受容体関連２」（ＰＶＲＬ２）に結合する。ＰＶＲＩＧおよびＰＶＲＬ２は、いくつかの癌において過剰発現される。ＰＶＲＩＧ発現はまた、ＴＩＧＩＴおよびＰＤ－１発現を誘導し、ＰＶＲＬ２およびＰＶＲ（ＴＩＧＩＴリガンド）は、いくつかの癌において同時過剰発現される。ＰＶＲＩＧシグナル伝達経路の遮断は、Ｔ細胞機能およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答の増加、したがって免疫抑制の減少およびインターフェロン応答の上昇をもたらす。本明細書で使用される「ＰＶＲＩＧ」という用語は、ヒトＰＶＲＩＧ（ｈＰＶＲＩＧ）、ｈＰＶＲＩＧの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＰＶＲＩＧと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＰＶＲＬ２」は、上記で定義されたｈＰＶＲＬ２を含む。

「コロニー刺激因子１」経路は、本開示に従って標的とすることができる別のチェックポイントである。ＣＳＦ１Ｒは、ＣＳＦ１に結合する骨髄増殖因子受容体である。ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達の遮断は、マクロファージ応答を機能的に再プログラム化し、それによって抗原提示および抗腫瘍Ｔ細胞応答を増強することができる。本明細書で使用される「ＣＳＦ１Ｒ」という用語は、ヒトＣＳＦ１Ｒ（ｈＣＳＦ１Ｒ）、ｈＣＳＦ１Ｒの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＣＳＦ１Ｒと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。本明細書で使用される「ＣＳＦ１」という用語は、ヒトＣＳＦ１（ｈＣＳＦ１）、ｈＣＳＦ１の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＣＳＦ１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。

「ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸ＮＡＤＰＨオキシダーゼ」は、免疫抑制活性酸素種（ＲＯＳ）を生成する骨髄細胞の酵素のＮＯＸファミリーの酵素を指す。５つのＮＯＸ酵素（ＮＯＸ１～ＮＯＸ５）が癌の発症および免疫抑制に関与することが認められている。ＲＯＳレベルの上昇は、ほとんど全ての癌で検出されており、腫瘍の発生および進行の多くの局面を促進する。ＮＯＸ産生ＲＯＳは、ＮＫおよびＴ細胞の機能を弱め、骨髄細胞におけるＮＯＸの阻害は、隣接するＮＫ細胞およびＴ細胞の抗腫瘍機能を改善する。本明細書で使用される「ＮＯＸ」という用語は、ヒトＮＯＸ（ｈＮＯＸ）、ｈＮＯＸの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＮＯＸと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。

本開示に従って標的とすることができる別の免疫チェックポイントは、「トリプトファン－２，３－ジオキシゲナーゼ」（ＴＤＯ）によって媒介されるシグナルである。ＴＤＯは、トリプトファン分解におけるＩＤＯの代替経路であり、免疫抑制に関与する。腫瘍細胞はＩＤＯの代わりにＴＤＯを介してトリプトファンを異化し得るので、ＴＤＯはチェックポイント遮断のためのさらなる標的であり得る。実際に、いくつかの癌細胞株は、ＴＤＯを上方制御することが見出されており、ＴＤＯはＩＤＯ阻害を補完し得る。本明細書で使用される「ＴＤＯ」という用語は、ヒトＴＤＯ（ｈＴＤＯ）、ｈＴＤＯの変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびにｈＴＤＯと少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。

免疫チェックポイントの多くは、上記のような特異的受容体とリガンドの対の間の相互作用によって調節される。したがって、免疫チェックポイントタンパク質は免疫チェックポイントシグナル伝達を媒介する。例えば、チェックポイントタンパク質は、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖および／またはＴ細胞機能を直接的または間接的に調節する。癌細胞は、免疫系による攻撃から自身を保護するために、しばしばこれらのチェックポイント経路を利用する。したがって、本開示に従って調節されるチェックポイントタンパク質の機能は、典型的には、Ｔ細胞活性化、Ｔ細胞増殖および／またはＴ細胞機能の調節である。したがって、免疫チェックポイントタンパク質は、自己寛容ならびに生理学的免疫応答の持続時間および大きさを調節し、維持する。免疫チェックポイントタンパク質の多くは、Ｂ７：ＣＤ２８ファミリーまたは腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーに属し、特異的リガンドに結合することによって、細胞質ドメインに動員されるシグナル伝達分子を活性化する（Ｓｕｚｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊａｐ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃ，４６：１９１－２０３）。

本明細書で使用される場合、「免疫チェックポイント調節剤」または「チェックポイントモジュレータ」という用語は、１つ以上のチェックポイントタンパク質の機能を調節する分子または化合物を指す。免疫チェックポイント調節剤は、典型的には、自己寛容ならびに／または免疫応答の大きさおよび／もしくは持続時間を調節することができる。好ましくは、本開示に従って使用される免疫チェックポイント調節剤は、１つ以上のヒトチェックポイントタンパク質の機能を調節し、したがって「ヒトチェックポイント調節剤」である。好ましい実施形態では、本明細書で使用されるヒトチェックポイント調節剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。

本明細書中で使用される場合、「免疫チェックポイント阻害剤」または「チェックポイント阻害剤」は、１つ以上のチェックポイントタンパク質の発現を全体的もしくは部分的に低減するか、阻害するか、妨げるかもしくは負に調節するか、または１つ以上のチェックポイントタンパク質の発現を完全にもしくは部分的に低減するか、阻害するか、妨げるかもしくは負に調節する分子を指す。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ以上のチェックポイントタンパク質に結合する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、チェックポイントタンパク質を調節する１つ以上の分子に結合する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、例えばＤＮＡまたはＲＮＡレベルで、１つ以上のチェックポイントタンパク質の前駆体に結合する。本開示によるチェックポイント阻害剤として機能する任意の薬剤を使用することができる。

本明細書で使用される「部分的に」という用語は、レベル、例えばチェックポイントタンパク質の阻害レベルの少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％を意味する。

特定の実施形態では、本明細書に開示される方法での使用に適した免疫チェックポイント阻害剤は、阻害シグナルのアンタゴニスト、例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、またはＴＩＭ－３を標的とする抗体である。これらのリガンドおよび受容体は、Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｄ．，Ｎａｔｕｒｅ．１２：２５２－２６４，２０１２に総説されている。本開示に従って標的化され得るさらなる免疫チェックポイントタンパク質が本明細書に記載されている。

特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイントに関連する阻害シグナルを防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイントに関連する阻害シグナル伝達を妨害する抗体またはその断片である。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、阻害シグナル伝達を妨害する小分子である。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、阻害シグナル伝達を妨害するペプチドベースの阻害剤である。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、阻害シグナル伝達を妨害する阻害性核酸分子である。

特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、チェックポイント遮断タンパク質間の相互作用を防止する抗体、その断片、または抗体模倣物、例えば、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２との間の相互作用を防止する抗体またはその断片である。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４とＣＤ８０またはＣＤ８６との間の相互作用を防止する抗体、その断片、または抗体模倣物である。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ－３とそのリガンド、またはＴＩＭ－３とそのリガンドとの間の相互作用を防止する抗体、その断片、または抗体模倣物である。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ３９および／もしくはＣＤ７３を介した阻害シグナル伝達ならびに／またはＡ２ＡＲおよび／もしくはＡ２ＢＲとアデノシンとの相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｂ７－Ｈ３とその受容体との相互作用および／またはＢ７－Ｈ４とその受容体との相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡとそのリガンドＨＶＥＭとの相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ以上のＫＩＲとそれらのそれぞれのリガンドとの相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ－３とそのリガンドの１つ以上との相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ－３とそのリガンドであるガレクチン－９、ＰｔｄＳｅｒ、ＨＭＧＢ１およびＣＥＡＣＡＭ１の１つ以上との相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴとそのリガンドであるＰＶＲ、ＰＶＲＬ２およびＰＶＲＬ３の１つ以上との相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２ＡとＨＬＡ－Ｅとの相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡとその結合パートナーの１つ以上との相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つ以上のＳｉｇｌｅｃおよびそれらのそれぞれのリガンドの相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ２０シグナル伝達を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＧＡＲＰとそのリガンドの１つ以上との相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＶＲＩＧとＰＶＲＬ２との相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＳＦ１ＲとＣＳＦ１との相互作用を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＮＯＸシグナル伝達を防止する。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＩＤＯおよび／またはＴＤＯシグナル伝達を防止する。

本明細書に記載の阻害性免疫チェックポイントシグナル伝達の阻害または遮断は、癌細胞に対する免疫抑制およびＴ細胞免疫の確立または増強の防止または逆転をもたらす。一実施形態では、本明細書に記載の免疫チェックポイントシグナル伝達の阻害は、免疫系の機能不全を低減または阻害する。一実施形態では、本明細書に記載の免疫チェックポイントシグナル伝達の阻害は、機能不全の免疫細胞の機能不全の程度をより少なくする。一実施形態では、本明細書に記載の免疫チェックポイントシグナル伝達の阻害は、機能不全のＴ細胞の機能不全の程度をより少なくする。

本明細書で使用される「機能不全」という用語は、抗原刺激に対する免疫応答性が低下した状態を指す。この用語は、抗原認識が起こり得る枯渇および／またはアネルギーの両方の共通要素を含むが、それに続く免疫応答は、感染または腫瘍成長を制御するのには無効である。機能不全には、機能不全の免疫細胞のために抗原認識が遅延している状態も含まれる。

本明細書で使用される「機能不全」という用語は、抗原刺激に対する免疫応答性が低下した状態にある免疫細胞を指す。機能不全には、抗原認識に対する不応答性、および抗原認識を下流のＴ細胞エフェクタ機能、例えば増殖、サイトカイン産生（例えばＩＬ－２）および／または標的細胞死滅に変換する能力の障害が含まれる。

本明細書で使用される「アネルギー」という用語は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介して送達される不完全または不十分なシグナルから生じる、抗原刺激に対する不応答性の状態を指す。Ｔ細胞アネルギーはまた、共刺激の非存在下での抗原による刺激時にも生じることがあり、その結果細胞は、共刺激の状況でさえも、抗原によるその後の活性化に対して抵抗性になる。不応答性状態は、ＩＬ－２の存在によってしばしば覆され得る。アネルギーＴ細胞は、クローン拡大を受けず、かつ／またはエフェクタ機能を獲得しない。

本明細書で使用される「枯渇」という用語は、免疫細胞枯渇、例えば多くの慢性感染症および癌の間に起こる持続的なＴＣＲシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全の状態としてのＴ細胞枯渇を指す。これは、不完全または不十分なシグナル伝達によってではなく、持続的なシグナル伝達によって生じるという点でアネルギーとは区別される。枯渇は、不十分なエフェクタ機能、阻害性受容体の持続的発現、および機能性エフェクタまたは記憶Ｔ細胞とは異なる転写状態によって定義される。枯渇は、疾患（例えば感染症および腫瘍）の最適な制御を妨げる。枯渇は、外因性負調節経路（例えば免疫調節性サイトカイン）ならびに細胞内因性負調節経路（本明細書に記載されるような阻害性免疫チェックポイント経路）の両方に起因し得る。

「Ｔ細胞機能を増強する」とは、Ｔ細胞が持続的もしくは増幅された生物学的機能を有するように、または枯渇したもしくは不活性なＴ細胞を再生もしくは再活性化するように、Ｔ細胞を誘導する、導くもしくは刺激することを意味する。Ｔ細胞機能を増強する例には、介入前のレベルと比較して、ＣＤ８＋Ｔ細胞からのγ－インターフェロンの分泌増加、増殖増加、抗原応答性の増加（例えば腫瘍クリアランス）が含まれる。一実施形態では、増強のレベルは、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、２００％またはそれ以上である。この増強を測定する方法は当業者に公知である。

免疫チェックポイント阻害剤は、阻害性核酸分子であり得る。本明細書で使用される「阻害性核酸」または「阻害性核酸分子」という用語は、１つ以上のチェックポイントタンパク質を全体的または部分的に低減する、阻害する、妨げるまたは負に調節する核酸分子、例えばＤＮＡまたはＲＮＡを指す。阻害性核酸分子には、限定されないが、オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ分子、およびアプタマー（例えばＤＮＡアプタマーまたはＲＮＡアプタマー）が含まれる。

本明細書で使用される「オリゴヌクレオチド」という用語は、タンパク質発現、特に本明細書に記載のチェックポイントタンパク質などのチェックポイントタンパク質の発現を減少させることができる核酸分子を指す。オリゴヌクレオチドは、典型的には２～５０ヌクレオチドを含む短いＤＮＡまたはＲＮＡ分子である。オリゴヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖であり得る。チェックポイント阻害剤オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、所与の配列、特にチェックポイントタンパク質の核酸配列（またはその断片）の配列に相補的な一本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡ分子である。アンチセンスＲＮＡは、典型的には、ｍＲＮＡ、例えばチェックポイントタンパク質をコードするｍＲＮＡに結合することによって、前記ｍＲＮＡのタンパク質翻訳を防止するために使用される。アンチセンスＤＮＡは、典型的には、特定の相補的（コードまたは非コード）ＲＮＡを標的とするために使用される。結合が起こる場合、そのようなＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドは酵素ＲＮａｓｅ Ｈによって分解され得る。さらに、モルホリノアンチセンスオリゴヌクレオチドは、脊椎動物における遺伝子ノックダウンに使用され得る。例えば、Ｋｒｙｃｚｅｋ ｅｔ ａｌ．，２００６（Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２０３：８７１－８１）は、マクロファージにおけるＢ７－Ｈ４発現を特異的にブロックするＢ７－Ｈ４特異的モルホリノを設計し、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）特異的Ｔ細胞を有するマウスにおいてＴ細胞増殖の増加および腫瘍体積の減少をもたらした。

「ｓｉＲＮＡ」または「低分子干渉ＲＮＡ」または「低分子阻害性ＲＮＡ」という用語は、本明細書では互換的に使用され、相補的なヌクレオチド配列を有する特定の遺伝子、例えばチェックポイントタンパク質をコードする遺伝子の発現を妨げる、典型的な長さが２０～２５塩基対の二本鎖ＲＮＡ分子を指す。一実施形態では、ｓｉＲＮＡはｍＲＮＡを妨げ、したがって翻訳、例えば免疫チェックポイントタンパク質の翻訳を遮断する。外因性ｓｉＲＮＡのトランスフェクションは、遺伝子ノックダウンのために使用され得るが、その効果は、特に急速に分裂する細胞では、一過性のみであり得る。安定なトランスフェクションは、例えばＲＮＡ修飾によって、または発現ベクターを使用することによって達成され得る。ｓｉＲＮＡによる細胞の安定なトランスフェクションに有用な修飾およびベクターは、当技術分野で公知である。ｓｉＲＮＡ配列はまた、２本の鎖の間に短いループを導入して「低分子ヘアピンＲＮＡ」または「ｓｈＲＮＡ」を生じるように修飾され得る。ｓｈＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒによって機能的ｓｉＲＮＡにプロセシングされ得る。ｓｈＲＮＡは、比較的低い分解速度および代謝回転速度を有する。したがって、免疫チェックポイント阻害剤はｓｈＲＮＡであり得る。

本明細書で使用される「アプタマー」という用語は、ポリペプチドなどの標的分子に結合することができる、典型的には２５～７０ヌクレオチドの長さのＤＮＡまたはＲＮＡなどの一本鎖核酸分子を指す。一実施形態では、アプタマーは、本明細書に記載の免疫チェックポイントタンパク質などの免疫チェックポイントタンパク質に結合する。例えば、本開示によるアプタマーは、免疫チェックポイントタンパク質もしくはポリペプチド、または免疫チェックポイントタンパク質もしくはポリペプチドの発現を調節するシグナル伝達経路中の分子に特異的に結合することができる。アプタマーの生成および治療的使用は当技術分野で周知である（例えば米国特許第５，４７５，０９６号参照）。

「低分子阻害剤」または「低分子」という用語は、本明細書では互換的に使用され、上記のように１つ以上のチェックポイントタンパク質を全体的または部分的に低減する、阻害する、妨げる、または負に調節する、通常は最大１０００ダルトンの低分子量有機化合物を指す。そのような低分子阻害剤は、通常、有機化学によって合成されるが、植物、真菌、および微生物などの天然源からも単離され得る。低分子量は、低分子阻害剤が細胞膜を横切って急速に拡散することを可能にする。例えば、当技術分野で公知の様々なＡ２ＡＲアンタゴニストは、５００ダルトン未満の分子量を有する有機化合物である。

免疫チェックポイント阻害剤は、必要な特異性の抗原結合断片を有する抗体部分を含む抗体、その抗原結合断片、抗体模倣物または融合タンパク質であり得る。抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載される通りである。免疫チェックポイント阻害剤である抗体またはその抗原結合断片には、特に、免疫チェックポイントタンパク質、例えば免疫チェックポイント受容体または免疫チェックポイント受容体リガンドに結合する抗体またはその抗原結合断片が含まれる。抗体または抗原結合断片はまた、本明細書に記載されるように、さらなる部分にコンジュゲートされ得る。特に、抗体またはその抗原結合断片は、キメラ化抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。好ましくは、免疫チェックポイント阻害剤抗体またはその抗原結合断片は、免疫チェックポイント受容体または免疫チェックポイント受容体リガンドのアンタゴニストである。

好ましい実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤である抗体は、単離された抗体である。

本開示による免疫チェックポイント阻害剤またはその抗原結合断片である抗体はまた、任意の公知の免疫チェックポイント阻害剤抗体と抗原結合について交差競合する抗体であり得る。特定の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤抗体は、本明細書に記載の免疫チェックポイント阻害剤抗体の１つ以上と交差競合する。抗原への結合について交差競合する抗体の能力は、これらの抗体が、抗原の同じエピトープ領域に結合し得るか、または別のエピトープに結合する場合、その特定のエピトープ領域への公知の免疫チェックポイント阻害剤抗体の結合を立体的に妨げ得ることを示す。これらの交差競合抗体は、同じエピトープに結合することによって、またはリガンドの結合を立体的に妨げることによって、そのリガンドへの免疫チェックポイントの結合を遮断すると予想されるので、それらが交差競合しているものと非常に類似した機能的特性を有し得る。交差競合抗体は、表面プラズモン共鳴分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリなどの標準的な結合アッセイにおいて公知の抗体の１つ以上と交差競合するそれらの能力に基づいて容易に同定することができる（例えば国際公開第２０１３／１７３２２３号参照）。

特定の実施形態では、所与の抗原への結合について１つ以上の公知の抗体と交差競合するか、または所与の抗原の同じエピトープ領域に結合する抗体またはその抗原結合断片は、モノクローナル抗体である。ヒト患者への投与のために、これらの交差競合抗体は、キメラ抗体、またはヒト化もしくはヒト抗体であり得る。そのようなキメラ、ヒト化またはヒトモノクローナル抗体は、当技術分野で周知の方法によって調製および単離することができる。

チェックポイント阻害剤はまた、分子（またはその変異体）自体の可溶性形態、例えば可溶性ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ１融合物の形態であり得る。

本開示の文脈では、複数のチェックポイント阻害剤を使用することができ、複数のチェックポイント阻害剤は、異なるチェックポイント経路または同じチェックポイント経路を標的とする。好ましくは、複数のチェックポイント阻害剤は、異なるチェックポイント阻害剤である。好ましくは、複数の異なるチェックポイント阻害剤が使用される場合、特に少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の異なるチェックポイント阻害剤が使用され、好ましくは２、３、４または５個の異なるチェックポイント阻害剤が使用され、より好ましくは２、３または４個の異なるチェックポイント阻害剤が使用され、さらにより好ましくは２または３個の異なるチェックポイント阻害剤が使用され、最も好ましくは２個の異なるチェックポイント阻害剤が使用される。異なるチェックポイント阻害剤の組合せの好ましい例には、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＣＴＬＡ－４シグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＴＩＧＩＴシグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＢ７－Ｈ３および／またはＢ７－Ｈ４シグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＢＴＬＡシグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＫＩＲシグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＬＡＧ－３シグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＴＩＭ－３シグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＩＤＯシグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とアデノシンシグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＶＩＳＴＡシグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＳｉｇｌｅｃシグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＣＤ２０シグナル伝達阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＧＡＲＰシグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤およびＣＤ４７シグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＰＶＲＩＧシグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＣＳＦ１Ｒシグナル伝達の阻害剤、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＮＯＸシグナル伝達の阻害剤、およびＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤とＴＤＯシグナル伝達の阻害剤の組合せが含まれる。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子（免疫チェックポイント遮断剤）は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２シグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＰＤ－１シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＰＤ－１シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤である。特定の実施形態では、ＰＤ－１シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤またはＰＤ－Ｌ２阻害剤などのＰＤ－１リガンド阻害剤である。好ましい実施形態では、ＰＤ－１シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１受容体とそのリガンドであるＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２の１つ以上との間の相互作用を妨害する抗体またはその抗原結合部分である。ＰＤ－１に結合し、ＰＤ－１とそのリガンドの１つ以上との間の相互作用を妨害する抗体は、当技術分野で公知である。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＰＤ－１に特異的に結合する。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ－１とのその相互作用を阻害し、それによって免疫活性を増加させる。特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合部分は、ＰＤ－Ｌ２に特異的に結合し、ＰＤ－１とのその相互作用を阻害し、それによって免疫活性を増加させる。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＣＴＬＡ－４シグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＣＴＬＡ－４シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＣＴＬＡ－４シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４阻害剤である。特定の実施形態では、ＣＴＬＡ－４シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４リガンド阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＴＩＧＩＴシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＴＩＧＩＴシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＴＩＧＩＴシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴ阻害剤である。特定の実施形態では、ＴＩＧＩＴシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴリガンド阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、Ｂ７ファミリーシグナル伝達経路の成分である。特定の実施形態では、Ｂ７ファミリーメンバーは、Ｂ７－Ｈ３およびＢ７－Ｈ４である。本開示の特定の実施形態は、Ｂ７－Ｈ３および／またはＢ７－４のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。したがって、本開示の特定の実施形態は、Ｂ７－Ｈ３またはＢ７－Ｈ４を標的とする抗体またはその抗原結合部分を対象に投与することを提供する。Ｂ７ファミリーは定義された受容体を有さないが、これらのリガンドは腫瘍細胞または腫瘍浸潤細胞で上方制御される。前臨床マウスモデルは、これらのリガンドの遮断が抗腫瘍免疫を増強し得ることを示している。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＢＴＬＡシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＢＴＬＡシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＢＴＬＡシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡ阻害剤である。特定の実施形態では、ＢＴＬＡシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＨＶＥＭ阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、１つ以上のＫＩＲシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、１つ以上のＫＩＲシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、１つ以上のＫＩＲシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＫＩＲ阻害剤である。特定の実施形態では、１つ以上のＫＩＲシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＫＩＲリガンド阻害剤である。例えば、本開示によるＫＩＲ阻害剤は、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２、および／またはＫＩＲ２ＤＬ３に結合する抗ＫＩＲ抗体であり得る。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＬＡＧ－３シグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＬＡＧ－３シグナル伝達のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＬＡＧ－３シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ－３阻害剤である。特定の実施形態では、ＬＡＧ－３シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ－３リガンド阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＴＩＭ－３シグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＴＩＭ－３シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＴＩＭ－３シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ－３阻害剤である。特定の実施形態では、ＴＩＭ－３シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ－３リガンド阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ阻害剤である。特定の実施形態では、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａリガンド阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＩＤＯシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＩＤＯシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤、例えばＩＤＯ阻害剤を対象に投与することを提供する。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、アデノシンシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、アデノシンシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、アデノシンシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＣＤ３９阻害剤である。特定の実施形態では、アデノシンシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＣＤ７３阻害剤である。特定の実施形態では、アデノシンシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、Ａ２ＡＲ阻害剤である。特定の実施形態では、アデノシンシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、Ａ２ＢＲ阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＶＩＳＴＡシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＶＩＳＴＡシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＶＩＳＴＡシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡ阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、Ｓｉｇｌｅｃシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、１つ以上のＳｉｇｌｅｃシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、１つ以上のＳｉｇｌｅｃシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、Ｓｉｇｌｅｃ阻害剤である。特定の実施形態では、１つ以上のＳｉｇｌｅｃシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、Ｓｉｇｌｅｃリガンド阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＣＤ２０シグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＣＤ２０シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＣＤ２０シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＣＤ２０阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＧＡＲＰシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＧＡＲＰシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＧＡＲＰシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＧＡＲＰ阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＣＤ４７シグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＣＤ４７シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＣＤ４７シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＣＤ４７阻害剤である。特定の実施形態では、ＣＤ４７シグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＳＩＲＰα阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＰＶＲＩＧシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＰＶＲＩＧシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＰＶＲＩＧシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＰＶＲＩＧ阻害剤である。特定の実施形態では、ＰＶＲＩＧシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＰＶＲＩＧリガンド阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤を対象に投与することを提供する。特定の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤である。特定の実施形態では、ＣＳＦ１Ｒシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤は、ＣＳＦ１阻害剤である。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＮＯＸシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＮＯＸシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤、例えばＮＯＸ阻害剤を対象に投与することを提供する。

特定の実施形態では、阻害性免疫調節因子は、ＴＤＯシグナル伝達経路の成分である。したがって、本開示の特定の実施形態は、ＴＤＯシグナル伝達経路のチェックポイント阻害剤、例えばＴＤＯ阻害剤を対象に投与することを提供する。

例示的なＰＤ－１阻害剤には、限定されないが、抗ＰＤ－１抗体、例えばＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ；米国特許第８，７３５，５５３号、国際公開第２０１５／３５６０６号および米国特許出願公開第２０１５／００７９１０９号参照）、セミプリマブ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ；国際公開第２０１５／１１２８００号参照）およびラムブロリズマブ（例えば、国際公開第２００８／１５６７１２号にｈＰＤ１０９Ａならびにそのヒト化誘導体ｈ４０９Ａ１、ｈ４０９Ａ１６およびｈ４０９Ａ１７として開示されている）、ＡＢ１３７１３２（Ａｂｃａｍ）、ＥＨ１２．２Ｈ７およびＲＭＰ１－１４（＃ＢＥ０１４６；Ｂｉｏｘｃｅｌｌ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｖｔ．ＬＴＤ．）、ＭＩＨ４（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ，ＢＭＳ－９３６５５８；Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；国際公開第２００６／１２１１６８号参照）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ；ＭＫ－３４７５；Ｍｅｒｃｋ；国際公開第２００８／１５６７１２号参照）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１；ＣｕｒｅＴｅｃｈ；Ｈａｒｄｙ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５４（２２）：５７９３－６および国際公開第２００９／１０１６１１号参照）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；国際公開第２０１５／１１２９００号参照）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；国際公開第２０１２／１４５４９３号参照）、ＴＳＲ－０４２（国際公開第２０１４／１７９６６４号参照）、ＲＥＧＮ－２８１０（Ｈ４Ｈ７７９８Ｎ；米国特許出願公開第２０１５／０２０３５７９号参照）、ＪＳ００１（ＴＡＩＺＨＯＵ ＪＵＮＳＨＩ ＰＨＡＲＭＡ；Ｓｉ－Ｙａｎｇ Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．７０：１３６）、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫ－２６６１３８０；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ，１７（７）：１１５１および国際公開第２０１０／０２７８２７号および国際公開第２０１１／０６６３４２号参照）、ＰＦ－０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ；国際公開第２０１５／３５６０６号および米国特許出願公開第２０１５／００７９１０９号参照）、ＢＩ ７５４０９１、ＳＨＲ－１２１０（国際公開第２０１５／０８５８４７号参照）、ならびに国際公開第２００６／１２１１６８号に記載されている抗体１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、４Ａ１１、７Ｄ３および５Ｆ４；ＩＮＣＳＨＲ１２１０（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；ＳＨＲ－１２１０としても公知；国際公開第２０１５／０８５８４７号参照），ＴＳＲ－０４２（Ｔｅｓａｒｏ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ；ＡＮＢ０１１としても公知；国際公開第２０１４／１７９６６４号参照），ＧＬＳ－０１０（Ｗｕｘｉ／Ｈａｒｂｉｎ Ｇｌｏｒｉａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ；ＷＢＰ３０５５としても公知；Ｓｉ－Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．７０：１３６参照）、ＳＴＩ－１１１０（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；国際公開第２０１４／１９４３０２号参照）、ＡＧＥＮ２０３４（Ａｇｅｎｕｓ；国際公開第２０１７／０４０７９０号参照）、ＭＧＡ０１２（Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ；国際公開第２０１７／１９８４６号参照）、ＩＢＩ３０８（Ｉｎｎｏｖｅｎｔ；国際公開第２０１７／０２４４６５号、国際公開第２０１７／０２５０１６号、国際公開第２０１７／１３２８２５号および国際公開第２０１７／１３３５４０号参照）、例えば米国特許第７，４８８，８０２号、米国特許第８，００８，４４９号、米国特許第８，１６８，７５７号、国際公開第０３／０４２４０２号、国際公開第２０１０／０８９４１１号（抗ＰＤ－Ｌ１抗体をさらに開示する）、国際公開第２０１０／０３６９５９号、国際公開第２０１１／１５９８７７号（ＴＩＭ－３に対する抗体をさらに開示する）、国際公開第２０１１／０８２４００号、国際公開第２０１１／１６１６９９号、国際公開第２００９／０１４７０８号、国際公開第０３／０９９１９６号、国際公開第２００９／１１４３３５号、国際公開第２０１２／１４５４９３号（ＰＤ－Ｌ１に対する抗体をさらに開示する）、国際公開第２０１５／０３５６０６号、国際公開第２０１４／０５５６４８号（抗ＫＩＲ抗体をさらに開示する）、米国特許出願公開第２０１８／０１８５４８２号（抗ＰＤ－Ｌ１抗体および抗ＴＩＧＩＴ抗体をさらに開示する）、米国特許第８，００８，４４９号、米国特許第８，７７９，１０５号、米国特許第６，８０８，７１０号、米国特許第８，１６８，７５７号、米国特許出願公開第２０１６／０２７２７０８号および米国特許第８，３５４，５０９号に記載されている抗ＰＤ－１抗体、例えばＳｈａａｂａｎｉ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐ Ｔｈｅｒ Ｐａｔ．，２８（９）：６６５－６７８およびＳａｓｉｋｕｍａｒ ａｎｄ Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａ，２０１８，ＢｉｏＤｒｕｇｓ，３２（５）：４８１－４９７に開示されているＰＤ－１シグナル伝達経路に対する低分子アンタゴニスト、例えば国際公開第２０１９／０００１４６号および国際公開第２０１８／１０３５０１号に開示されているＰＤ－１に対するｓｉＲＮＡ、国際公開第２０１８／２２２７１１号に開示されている可溶性ＰＤ－１タンパク質、ならびに例えば国際公開第２０１８／０２２８３１号に記載されている可溶性形態のＰＤ－１を含む腫瘍溶解性ウイルスが含まれる。

特定の実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ；ＢＭＳ－９３６５５８）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ；ＭＫ－３４７５）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、ＰＤＲ００１、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＴＳＲ－０４２、ＲＥＧＮ２８１０、ＪＳ００１、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫ－２６６１３８０）、ＰＦ－０６８０１５９１、ＢＧＢ－Ａ３１７、ＢＩ ７５４０９１、またはＳＨＲ－１２１０である。

例示的なＰＤ－１リガンド阻害剤はＰＤ－Ｌ１阻害剤およびＰＤ－Ｌ２阻害剤であり、限定されないが、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；国際公開第２０１１／０６６３８９号参照）、ＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（米国特許出願公開第２０１４／０３４１９１７号参照）、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（国際公開第２０１０／０７７６３４号の配列番号２０および米国特許第８，２１７，１４９号参照）、ＭＩＨ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；欧州特許第３２３０３１９号参照）、ＭＤＸ－１１０５（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；国際公開第２０１３０１９９０６号および米国特許第８，２１７，１４９号参照）、ＳＴＩ－１０１４（Ｓｏｒｒｅｎｔｏ；国際公開第２０１３／１８１６３４号参照）、ＣＫ－３０１（チェックポイント治療薬）、ＫＮ０３５（３Ｄ Ｍｅｄ／Ａｌｐｈａｍａｂ；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｃｏｖ．３：１７００４参照）、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ；ＲＧ７４４６；ＭＰＤＬ３２８０Ａ；Ｒ０５５４１２６７；米国特許第９，７２４，４１３号参照）、ＢＭＳ－９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；米国特許第７，９４３，７４３号、国際公開第２０１３／１７３２２３号参照）、アベルマブ（バベンチオ；米国特許出願公開第２０１４／０３４１９１７号参照）、ＬＹ３３０００５４（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ Ｃｏ．）、ＣＸ－０７２（Ｐｒｏｃｌａｉｍ－ＣＸ－０７２；ＣｙｔｏｍＸとも呼ばれる；国際公開第２０１６／１４９２０１号参照）、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５（国際公開第２０１７０２０８０１号および国際公開第２０１７０２０８０２号参照）、ＭＤＸ－１１０５（米国特許出願公開第２０１５／０３２０８５９号参照）などの抗ＰＤ－Ｌ１抗体、３Ｇ１０、１２Ａ４（ＢＭＳ－９３６５５９とも称される）、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７および１３Ｇ４を含む米国特許第７，９４３，７４３号に開示されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体、国際公開第２０１０／０７７６３４号、米国特許第８，２１７，１４９号、国際公開第２０１０／０３６９５９号、国際公開第２０１０／０７７６３４号、国際公開第２０１１／０６６３４２号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許第７，９４３，７４３号、国際公開第２０１０／０８９４１１号、米国特許第７，６３５，７５７号、米国特許第８，２１７，１４９号、米国特許第２００９／０３１７３６８号、国際公開第２０１１／０６６３８９号、国際公開第２０１７／０３４９１６号、国際公開第２０１７／０２０２９１号、国際公開第２０１７／０２０８５８号、国際公開第２０１７／０２０８０１号、国際公開第２０１６／１１１６４５号、国際公開第２０１６／１９７３６７号、国際公開第２０１６／０６１１４２号、国際公開第２０１６／１４９２０１号、国際公開第２０１６／０００６１９号、国際公開第２０１６／１６０７９２号、国際公開第２０１６／０２２６３０号、国際公開第２０１６／００７２３５号、国際公開第２０１５／１７９６５４号、国際公開第２０１５／１７３２６７号、国際公開第２０１５／１８１３４２号、国際公開第２０１５／１０９１２４号、国際公開第２０１８／２２２７１１号、国際公開第２０１５／１１２８０５号、国際公開第２０１５／０６１６６８号、国際公開第２０１４／１５９５６２号、国際公開第２０１４／１６５０８２号、国際公開第２０１４／１０００７９号に記載されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体が含まれる。

例示的なＣＴＬＡ－４阻害剤には、限定されないが、モノクローナル抗体であるイピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ；Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）およびトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ／Ｍｅｄｌｍｍｕｎｅ）、トレビリズマブ、ＡＧＥＮ－１８８４（Ａｇｅｎｕｓ）およびＡＴＯＲ－１０１５、国際公開第２００１／０１４４２４号、米国特許第２００５／０２０１９９４号、欧州特許第１２１２４２２号、米国特許第５，８１１，０９７号、米国特許第５，８５５，８８７号、米国特許第６，０５１，２２７号、米国特許第６，６８２，７３６号、米国特許第６，９８４，７２０号、国際公開第０１／１４４２４号、国際公開第００／３７５０４号、米国特許第２００２／００３９５８１号、米国特許第２００２／０８６０１４号、国際公開第９８／４２７５２号、米国特許第６，２０７，１５６号、米国特許第５，９７７，３１８号、米国特許第７，１０９，００３号および米国特許第７，１３２，２８１号に開示されている抗ＣＴＬＡ４抗体、ＣＴＬＡ－４ ＥＣＤに融合したＩｇＧ１のＦｅ領域を含むドミナントネガティブタンパク質アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ；欧州特許第２８５５５３３号参照）、ならびにアバタセプトと比較してＣＴＬＡ－４ ＥＣＤ内に２つのアミノ酸置換を有する第２世代のより高親和性のＣＴＬＡ－４－Ｉｇ変異体であるベラタセプト（Ｎｕｌｏｊｉｘ；国際公開第２０１４／２０７７４８号参照）、可溶性ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、例えばＲＧ２０７７およびＣＴＬＡ４－ＩｇＧ４ｍ（米国特許第６，７５０，３３４号参照）、抗ＣＴＬＡ－４アプタマー、ならびに例えば米国特許出願公開第２０１５／２０３８４８号に開示されているＣＴＬＡ－４に対するｓｉＲＮＡが含まれる。例示的なＣＴＬＡ－４リガンド阻害剤は、Ｐｉｌｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５（Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍ．Ｐａｒｎｈａｍ（ｅｄ．），ｄｏｉ：１０．１００７／９７８－３－０３４８－０６２０－６＿２０）に記載されている。

ＴＩＧＩＴシグナル伝達経路の例示的なチェックポイント阻害剤には、限定されないが、ＢＭＳ－９８６２０７、ＣＯＭ９０２（ＣＧＥＮ－１５１３７；Ｃｏｍｐｕｇｅｎ）、ＡＢ１５４（Ａｒｃｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）もしくはエチギリマブ（ＯＭＰ－３１３Ｍ３２；ＯｎｃｏＭｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）などの抗ＴＩＧＩＴ抗体、または国際公開第２０１７／０５９０９５号に開示されている抗体、特に「ＭＡＢ１０」、米国特許出願公開第２０１８／０１８５４８２号、国際公開第２０１５／００９８５６号および米国特許出願公開第２０１９／００７７８６４号に開示されている抗体が含まれる。

Ｂ７－Ｈ３の例示的なチェックポイント阻害剤には、限定されないが、Ｆｃ最適化モノクローナル抗体エノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１；Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ；米国特許出願公開第２０１２／０２９４７９６号参照）ならびに抗Ｂ７－Ｈ３抗体ＭＧＤ００９（Ｍａｃｒｏｇｅｎｉｃｓ）およびピジリズマブ（米国特許第７，３３２，５８２号参照）が挙げられる。

例示的なＢ７－Ｈ４阻害剤には、限定されないが、Ｄａｎｇａｊ ｅｔ ａｌ．，２０１３（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ７３：４８２０－９）およびＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４（Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ，１３４：１８１－１８９）、国際公開第２０１３／０２５７７９号（例えば配列番号３および４によってコードされる２Ｄ１、配列番号３７および３９によってコードされる２Ｈ９、ならびに配列番号４１および４３によってコードされる２Ｅ１１）および国際公開第２０１３／０６７４９２号（例えば配列番号１～８から選択されるアミノ酸配列を有する抗体）に記載されている抗体、例えばＫｒｙｃｚｅｋ ｅｔ ａｌ．，２００６（Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２０３：８７１－８１）に記載されているモルホリノアンチセンスオリゴヌクレオチド、または米国特許出願公開第２０１２／０１７７６４５号に開示されているようなＢ７－Ｈ４の可溶性組換え形態が含まれる。

例示的なＢＴＬＡ阻害剤には、限定されないが、Ｃｒａｗｆｏｒｄ ａｎｄ Ｗｈｅｒｒｙ，２００９（Ｊ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ ８６：５－８）、国際公開第２０１１／０１４４３８号（例えば４Ｃ７、または配列番号８および１５ならびに／もしくは配列番号１１および１８に従う重鎖および軽鎖を含む抗体）、国際公開第２０１４／１８３８８５号（例えばＣＮＣＭ Ｉ－４７５２の番号で寄託された抗体）および米国特許出願公開第２０１８／１５５４２８号に記載されている抗ＢＴＬＡ抗体が含まれる。

ＫＩＲシグナル伝達のチェックポイント阻害剤には、限定されないが、モノクローナル抗体リリルマブ（１－７Ｆ９；ＩＰＨ２１０２；米国特許第８，７０９，４１１号参照）、ＩＰＨ４１０２（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ；Ｍａｒｉｅ－Ｃａｒｄｉｎｅ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｃａｎｃｅｒ ７４（２１）：６０６０－７０参照）、例えば、米国特許出願公開第２０１８／２０８６５２号、米国特許出願公開第２０１８／１１７１４７号、米国特許出願公開第２０１５／３４４５７６号、国際公開第２００５／００３１６８号、国際公開第２００５／００９４６５号、国際公開第２００６／０７２６２５号、国際公開第２００６／０７２６２６号、国際公開第２００７／０４２５７３号、国際公開第２００８／０８４１０６号（例えば、配列番号２および３に従う重鎖および軽鎖を含む抗体）、国際公開第２０１０／０６５９３９号、国際公開第２０１２／０７１４１１号、国際公開第２０１２／１６０４４８号および国際公開第２０１４／０５５６４８号に開示されている抗ＫＩＲ抗体が含まれる。

ＬＡＧ－３阻害剤には、限定されないが、抗ＬＡＧ－３抗体ＢＭＳ－９８６０１６（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；国際公開第２０１４／００８２１８号および国際公開第２０１５／１１６５３９号参照）、２５Ｆ７（米国特許出願公開第２０１１／０１５０８９２参照）、ＩＭＰ７３１（国際公開第２００８／１３２６０１号参照）、Ｈ５Ｌ７ＢＷ（国際公開第２０１４１４０１８０号参照）、ＭＫ－４２８０（２８Ｇ－１０；Ｍｅｒｃｋ；国際公開第２０１６／０２８６７２号参照）、ＲＥＧＮ３７６７（Ｒｅｇｎｅｒｏｎ／Ｓａｎｏｆｉ）、ＢＡＰ０５０（国際公開第２０１７／０１９８９４号参照）、ＩＭＰ－７０１（ＬＡＧ－５２５；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｓｙｍ０２２（Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ）、ＴＳＲ－０３３（Ｔｅｓａｒｏ）、ＭＧＤ０１３（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓによって開発されたＬＡＧ－３およびＰＤ－１を標的とする二重特異性ＤＡＲＴ抗体）、ＢＩ７５４１１１（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＦＳ１１８（Ｆ－ｓｔａｒによって開発されたＬＡＧ－３およびＰＤ－１を標的とする二重特異性抗体）、ＧＳＫ２８３１７８１（ＧＳＫ）、ならびに国際公開第２００９／０４４２７３号、国際公開第２００８／１３２６０１号、国際公開第２０１５／０４２２４６号、欧州特許第２３２０９４０号、米国特許出願公開第２０１９／１６９２９４号、米国特許出願公開第２０１９／１６９２９２号、国際公開第２０１６／０２８６７２号、国際公開第２０１６／１２６８５８号、国際公開第２０１６／２００７８２号、国際公開第２０１５／２００１１９号、国際公開第２０１７／２２０５６９号、国際公開第２０１７／０８７５８９号、国際公開第２０１７／２１９９９５号、国際公開第２０１７／０１９８４６号、国際公開第２０１７／１０６１２９号、国際公開第２０１７／０６２８８８号、国際公開第２０１８／０７１５００号、国際公開第２０１７／０８７９０１号、米国特許出願公開第２０１７／０２６０２７１号、国際公開第２０１７／１９８７４１号、国際公開第２０１７／２２０５５５号、国際公開第２０１７／０１５５６０号、国際公開第２０１７／０２５４９８号、国際公開第２０１７／１４９１４３号、国際公開第２０１８／０６９５００号、国際公開第２０１８／０８３０８７号、国際公開第２０１８／０３４２２７号、国際公開第２０１４／１４０１８０号に開示されている抗体、ＬＡＧ－３アンタゴニストタンパク質ＡＶＡ－０１７（Ａｖａｃｔａ）、可溶性ＬＡＧ－３融合タンパク質ＩＭＰ３２１（エフチラギモドアルファ；Ｉｍｍｕｔｅｐ；欧州特許第２２０５２５７号およびＢｒｉｇｎｏｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７９：４２０２－４２１１）、ならびに国際公開第２０１８／２２２７１１号に開示されている可溶性ＬＡＧ－３タンパク質が含まれる。

ＴＩＭ－３阻害剤には、限定されないが、Ｆ３８－２Ｅ２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、コボリマブ（ＴＳＲ－０２２；Ｔｅｓａｒｏ）、ＬＹ３３２１３６７（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＭＢＧ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）などのＴＩＭ－３を標的とする抗体、ならびに例えば、国際公開第２０１３／００６４９０号、国際公開第２０１８／０８５４６９号（例えば、配列番号３および４に従う核酸配列によってコードされる重鎖および軽鎖配列を含む抗体）、国際公開第２０１８／１０６５８８号、国際公開第２０１８／１０６５２９号（例えば、配列番号８～１１に従う重鎖および軽鎖配列を含む抗体）に開示されている抗体が含まれる。

ＴＩＭ－３リガンド阻害剤には、限定されないが、抗ＣＥＡＣＡＭ１抗体ＣＭ１０（ｃＣＡＭ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；国際公開第２０１３／０５４３３１号参照）などのＣＥＡＣＡＭ１阻害剤、国際公開第２０１５／０７５７２５号（例えば、ＣＭ－２４、２６Ｈ７、５Ｆ４、ＴＥＣ－１１、１２－１４０－４、４／３／１７、ＣＯＬ－４、Ｆ３６－５４、３４Ｂ１、ＹＧ－Ｃ２８Ｆ２、Ｄ１４ＨＤ１１、Ｍ８．７．７、Ｄ１１－ＡＤ１１、ＨＥＡ８１、Ｂ ｌ．ｌ、ＣＬＢ－ｇｒａｎ－１０、Ｆ３４－１８７、Ｔ８４．１、Ｂ６．２、Ｂ １．１３、ＹＧ－Ｃ９４Ｇ７、１２－１４０－５、ｓｃＦｖ ＤＩＡＴＨＩＳ１、ＴＥＴ－２；ｃＣＡＭ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）に開示されている抗体、Ｗａｔｔ ｅｔ ａｌ．，２００１（Ｂｌｏｏｄ，９８：１４６９－１４７９）および国際公開第２０１０／１２５５７号に記載されている抗体、ならびにバビツキシマブ（Ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ）などのＰｔｄＳｅｒ阻害剤が含まれる。

ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ阻害剤には、限定されないが、モナリズマブ（ＩＰＨ２２０１；Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ）、ならびに米国特許第９，４２２，３６８号（例えばヒト化Ｚ１９９；欧州特許第２６２８７５３号参照）、欧州特許第３１９３９２９号および国際公開第２０１６／０３２３３４号（例えばヒト化Ｚ２７０；欧州特許第２６２８７５３号参照）に開示されている抗体およびそれらの生成のための方法が含まれる。

ＩＤＯ阻害剤には、限定されないが、エキシグアミンＡ、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０；ＩｎＣｙｔｅ；米国特許第９，６２４，１８５号参照）、インドキシモド（Ｎｅｗｌｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ；ＣＡＳ番号：１１０１１７－８３－４）、ＮＬＧ９１９（Ｎｅｗｌｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；ＣＡＳ番号：１４０２８３６－５８－１）、ＧＤＣ－０９１９（Ｎｅｗｌｉｎｋ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；ＣＡＳ番号：１４０２８３６－５８－１）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／ＢＭＳ；ＣＡＳ番号：２２２１０３４－２９－１）、ＫＨＫ２４５５（Ｃｈｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｐａｔ．２８（４）：３１７－３３０）、ＰＦ－０６８４０００３（国際公開第２０１６／１８１３４８号参照）、ナボキシモド（ＲＧ６０７８、ＧＤＣ－０９１９、ＮＬＧ９１９；ＣＡＳ番号：１４０２８３７－７８－８）、リンロドスタット（ＢＭＳ－９８６２０５；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｕｉｂｂ；ＣＡＳ番号：１９２３８３３－６０－６）、小分子、例えば１－メチル－トリプトファン、ピロリジン－２，５－ジオン誘導体（国際公開第２０１５／１７３７６４号参照）およびＳｈｅｒｉｄａｎ，２０１５，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ３３：３２１－３２２によって開示されているＩＤＯ阻害剤が含まれる。

ＣＤ３９阻害剤には、限定されないが、Ａ００１４８５（Ａｒｃｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＰＳＢ ０６９（ＣＡＳ番号：７８５１０－３１－３）および抗ＣＤ３９モノクローナル抗体ＩＰＨ５２０１（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ；Ｐｅｒｒｏｔ ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ８：２４１１－２４２５．Ｅ９参照）が含まれる。

ＣＤ７３阻害剤には、限定されないが、ＣＰＩ－００６（Ｃｏｒｖｕｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＭＥＤＩ９４４７（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ；国際公開第２０１６０７５０９９号参照）、ＩＰＨ５３０１（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ；Ｐｅｒｒｏｔ ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ８：２４１１－２４２５．Ｅ９参照）などの抗ＣＤ７３抗体、国際公開第２０１８／１１０５５５号に記載されている抗ＣＤ７３抗体、低分子阻害剤ＰＢＳ １２３７９（Ｔｏｃｒｉｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；ＣＡＳ番号：１８０２２２６－７８－３）、Ａ０００８３０、Ａ００１１９０およびＡ００１４２１（Ａｒｃｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｂｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ７８（１３ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）：３６９１－３６９１，ｄｏｉ：１０．１１５８／１５３８－７４４５．ＡＭ２０１８－３６９１参照）、ＣＢ－７０８（Ｃａｌｉｔｈｅｒａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ならびにＡｌｌａｒｄ ｅｔ ａｌ．，２０１８（Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．，２７６（１）：１２１－１４４）に記載されているプリン細胞傷害性ヌクレオシド類似体に基づくジホスホネートが含まれる。

Ａ２ＡＲ阻害剤には、限定されないが、イストラデフィリン（ＫＷ－６００２；ＣＡＳ番号：１５５２７０－９９－８）、ＰＢＦ－５０９（Ｐａｌｏｂｉｏｐｈａｒｍａ）、シフォラデナント（ＣＰＩ－４４４：Ｃｏｒｖｕｓ Ｐｈａｒｍａ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；ＣＡＳ番号：１２０２４０２－４０－１）、ＳＴ１５３５（［２ブチル－９－メチル－８－（２Ｈ－１，２，３－トリアゾール２－イル）－９Ｈ－プリン－６－キシラミン］；ＣＡＳ番号：４９６９５５－４２－１）、ＳＴ４２０６（Ｓｔａｓｉ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｅｕｒｏｐ Ｊ Ｐｈａｒｍ ７６１：３５３－３６１；ＣＡＳ番号：１２４６０１８－３６－９）、トザデナント（ＳＹＮ１１５；ＣＡＳ番号：８７００７０－５５－６）、Ｖ８１４４４（国際公開第２００２／０５５０８２号参照）、プレラデナント（ＳＣＨ４２０８１４；Ｍｅｒｃｋ；ＣＡＳ番号：３７７７２７－８７－２）、ビパデナント（ＢＩＩＢ０１４；ＣＡＳ番号：４４２９０８－１０－３）、ＳＴ１５３５（ＣＡＳ番号：４９６９５５－４２－１）、ＳＣＨ４１２３４８（ＣＡＳ番号：３７７７２７－２６－９）、ＳＣＨ４４２４１６（Ａｘｏｎ ２２８３；Ａｘｏｎ Ｍｅｄｃｈｅｍ；ＣＡＳ番号：３１６１７３－５７－６）、ＺＭ２４１３８５（４－（２－（７－アミノ－２－（２－フリル）－（１，２，４）トリアゾロ（２，３－ａ）－（１，３，５）トリアジン－５－イル－アミノ）エチル）フェノール；ＣＡＳ番号：１３９１８０－３０－６）、ＡＺＤ４６３５（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＡＢ９２８（二重Ａ２ＡＲ／Ａ２ＢＲ低分子阻害剤；Ａｒｃｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＳＣＨ５８２６１（Ｐｏｐｏｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ ２２：５２２－５２９参照；ＣＡＳ番号：１６００９８－９６－４）などの低分子阻害剤が含まれる。

Ａ２ＢＲ阻害剤には、限定されないが、ＡＢ９２８（二重Ａ２ＡＲ／Ａ２ＢＲ低分子阻害剤；Ａｒｃｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＭＲＳ １７０６（ＣＡＳ番号：２６４６２２－５３－９）、ＧＳ６２０１（ＣＡＳ番号：７５２２２２－８３－６）およびＰＢＳ１１１５（ＣＡＳ番号：１５２５２９－７９－８）が含まれる。

ＶＩＳＴＡ阻害剤には、限定されないが、ＪＮＪ－６１６１０５８８（オンバチリマブ；Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）などの抗ＶＩＳＴＡ抗体ならびに低分子阻害剤ＣＡ－１７０（抗ＰＤ－Ｌ１／Ｌ２および抗ＶＩＳＴＡ低分子；ＣＡＳ番号：１６７３５３４－７６－３）が含まれる。

Ｓｉｇｌｅｃ阻害剤には、限定されないが、米国特許出願公開第２０１９／０２３７８６号および国際公開第２０１８／０２７２０３号に開示されている抗Ｓｉｇｌｅ－７抗体、（例えば、配列番号１に従う可変重鎖領域および配列番号１５に従う可変軽鎖領域を含む抗体）、抗Ｓｉｇｌｅｃ－２抗体イノツズマブオゾガマイシン（Ｂｅｓｐｏｎｓａ；米国特許第８，１５３，７６８号および米国特許第９，６４２，９１８号参照）、抗Ｓｉｇｌｅｃ－３抗体ゲムツズマブオゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ；米国特許第９，３５９，４４２号参照）、または米国特許出願公開第２０１９／０６２４２７号、米国特許出願公開第２０１９／０２３７８６号、国際公開第２０１９／０１１８５５号、国際公開第２０１９／０１１８５２号（例えば、配列番号１７１～１７６、もしくは３および４、もしくは５および６、もしくは７および８、もしくは９および１０、もしくは１１および１２、もしくは１３および１４、もしくは１５および１６、もしくは１７および１８、もしくは１９および２０、もしくは２１および２２、もしくは２３および２４、もしくは２５および２６に従うＣＤＲを含む抗体）、米国特許出願公開第２０１７／３０６０１４号および欧州特許第３１４６９７９号に開示されている抗Ｓｉｇｌｅｃ－９抗体が含まれる。

ＣＤ２０阻害剤には、限定されないが、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ；ＩＤＥＣ－１０２；ＩＤＥＣ－Ｃ２Ｂ８；米国特許第５，８４３，４３９号参照）、ＡＢＰ ７９８（リツキシマブバイオシミラー）、オファツムマブ（２Ｆ２；国際公開第２００４／０３５６０７号参照）、オビヌツズマブ、オクレリズマブ（２ｈ７；国際公開第２００４／０５６３１２号参照）、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ）、トシツモマブ、ウブリツキシマブ（ＬＦＢ－Ｒ６０３；ＬＦＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）などの抗ＣＤ２０抗体、および米国特許出願公開第２０１８／００３６３０６号に開示されている抗体（例えば、配列番号１～３および４～６、または７および８、または９および１０に従う軽鎖および重鎖を含む抗体）が含まれる。

ＧＡＲＰ阻害剤には、限定されないが、ＡＲＧＸ－１１５（ａｒＧＥＮ－Ｘ）などの抗ＧＡＲＰ抗体、ならびに米国特許出願公開第２０１９／１２７４８３号、米国特許出願公開第２０１９／０１６８１１号、米国特許出願公開第２０１８／３２７５１１号、米国特許出願公開第２０１６／２５１４３８号、欧州特許第３２５３７９６号に開示されている抗体およびそれら生成のための方法が含まれる。

ＣＤ４７阻害剤には、限定されないが、例えばＨｕＦ９－Ｇ４（Ｓｔａｎｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／Ｆｏｒｔｙ Ｓｅｖｅｎ）、ＣＣ－９０００２／ＩＮＢＲＸ－１０３（Ｃｅｌｇｅｎｅ／Ｉｎｈｉｂｒｘ）、ＳＲＦ２３１（Ｓｕｒｆａｃｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）、ＩＢＩ１８８（Ｉｎｎｏｖｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）、ＡＯ－１７６（Ａｒｃｈ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）などの抗ＣＤ４７抗体、ＴＧ－１８０１（ＮＩ－１７０１；ＣＤ４７およびＣＤ１９を標的とする二重特異性モノクローナル抗体；Ｎｏｖｉｍｍｕｎｅ／ＴＧ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）およびＮＩ－１８０１（ＣＤ４７およびメソテリンを標的とする二重特異性モノクローナル抗体；Ｎｏｖｉｍｍｕｎｅ）を含むＣＤ４７を標的とする二重特異性抗体、ならびにＡＬＸ１４８（ＡＬＸ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ；Ｋａｕｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１９，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０２０１８３２）などのＣＤ４７融合タンパク質が含まれる。

ＳＩＲＰα阻害剤には、限定されないが、ＯＳＥ－１７２（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ／ＯＳＥ）、ＦＳＩ－１８９（Ｆｏｒｔｙ Ｓｅｖｅｎ）などの抗ＳＩＲＰα抗体、ＴＴＩ－６２１およびＴＴＩ－６６２（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；国際公開第２０１４／０９４１２２号参照）などの抗ＳＩＲＰα融合タンパク質が含まれる。

ＰＶＲＩＧ阻害剤には、限定されないが、ＣＯＭ７０１（ＣＧＥＮ－１５０２９）などの抗ＰＶＲＩＧ抗体、ならびに例えば国際公開第２０１８／０３３７９８号に開示されている抗体およびそれらの製造方法（例えば、ＣＨＡ．７．５１８．１Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．７．５３８．１．２．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＰＡ．９．０８６Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＰＡ．９．０８３Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．７．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ＣＨＡ．９．５４７．１３．Ｈ４（Ｓ２４１Ｐ）、ならびに配列番号５に従う可変重鎖ドメインと国際公開第２０１８／０３３７９８号の配列番号１０に従う可変軽鎖ドメインとを含む抗体、または配列番号９に従う重鎖と配列番号１４に従う軽鎖とを含む抗体；国際公開第２０１８／０３３７９８号は、抗ＴＩＧＩＴ抗体ならびに抗ＴＩＧＩＴ抗体と抗ＰＶＲＩＧ抗体との併用療法をさらに開示する）、国際公開第２０１６１３４３３３号、国際公開第２０１８０１７８６４号（例えば、配列番号１１と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列番号５～７に従う重鎖および／もしくは配列番号１２と少なくとも９０％の配列同一性を有する配列番号８～１０に従う軽鎖を含む抗体、または配列番号１３および／もしくは１４もしくは配列番号２４および／もしくは２９によってコードされる抗体、または国際公開第２０１８／０１７８６４号に開示されている別の抗体）に開示されている抗体およびそれらの製造方法、ならびに国際公開第２０１６／１３４３３５号に開示されている抗ＰＶＲＩＧ抗体および融合ペプチドが含まれる。

ＣＳＦ１Ｒ阻害剤には、限定されないが、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体カビラリズマブ（ＦＰＡ００８；ＦｉｖｅＰｒｉｍｅ；国際公開第２０１１／１４０２４９号、国際公開第２０１３／１６９２６４号および国際公開第２０１４／０３６３５７号参照）、ＩＭＣ－ＣＳ４（ＥｉｉＬｉｌｌｙ）、エマクツズマブ（Ｒ０５５０９５５４；Ｒｏｃｈｅ）、ＲＧ７１５５（国際公開第２０１１／７００２４号、国際公開第２０１１／１０７５５３号、国際公開第２０１１／１３１４０７号、国際公開第２０１３／８７６９９号、国際公開第２０１３／１１９７１６号、国際公開第２０１３／１３２０４４号）、ならびに低分子阻害剤ＢＬＺ９４５（ＣＡＳ番号：９５３７６９－４６－５）およびペキシダルチニブ（ＰＬＸ３３９７；Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ；ＣＡＳ番号：１０２９０４４－１６－３）が含まれる。

ＣＳＦ１阻害剤には、限定されないが、欧州特許第１２２３９８０号およびＷｅｉｒ ｅｔ ａｌ．，１９９６（Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒａｌ Ｒｅｓ １１：１４７４－１４８１）、国際公開第２０１４／１３２０７２号に開示されている抗ＣＳＦ１抗体、ならびに国際公開第２００１／０３０３８１号に開示されているアンチセンスＤＮＡおよびＲＮＡが含まれる。

例示的なＮＯＸ阻害剤には、限定されないが、低分子ＭＬ１７１（Ｇｉａｎｎｉ ｅｔ ａｌ．，２０１０，ＡＣＳ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ５（１０）：９８１－９３、ＮＯＳ３１（Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｂｉｏｌ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ．４１（３）：４１９－４２６）などのＮＯＸ１阻害剤、低分子セプレン（ヒスタミン二塩酸塩；ＣＡＳ番号：５６－９２－８）、ＢＪ－１３０１（Ｇａｕｔａｍ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ １６（１０）：２１４４－２１５６；ＣＡＳ番号：１２８７２３４－４８－３）およびＬｕ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １４３：２５－３８によって記載されている阻害剤などのＮＯＸ２阻害剤、低分子阻害剤ＶＡＳ２８７０（Ａｌｔｅｎｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ６９（１４）：２３２７－２３４３）、ジフェニレンヨードニウム（ＣＡＳ番号：２４４－５４－２）およびＧＫＴ１３７８３１（ＣＡＳ番号：１２１８９４２－３７－０；Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８，１９（１０）：５７８－５８５参照）などのＮＯＸ４阻害剤が含まれる。

ＴＤＯ阻害剤には、限定されないが、４－（インドール－３－イル）－ピラゾール誘導体（米国特許第９，１２６，９８４号および米国特許出願公開第２０１６／０２６３０８７号参照）、３－インドール置換誘導体（国際公開第２０１５／１４０７１７号、国際公開第２０１７／０２５８６８号、国際公開第２０１６／１４７１４４号参照）、３－（インドール－３－イル）－ピリジン誘導体（米国特許出願公開第２０１５／０２２５３６７号および国際公開第２０１５／１２１８１２号参照）、国際公開第２０１５／１５００９７号、国際公開第２０１５／０８２４９９号、国際公開第２０１６／０２６７７２号、国際公開第２０１６／０７１２８３号、国際公開第２０１６／０７１２９３号、国際公開第２０１７／００７７００号に開示されている低分子二重ＩＤＯ／ＴＤＯ阻害剤などの二重ＩＤＯ／ＴＤＯアンタゴニスト、ならびに低分子阻害剤ＣＢ５４８（Ｋｉｍ，Ｃ，ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ａｎｎａｌｓ Ｏｎｃｏｌ ２９（ｓｕｐｐｌ＿８）：ｖｉｉｉ４００－ｖｉｉｉ４４１）が含まれる。

本開示によれば、免疫チェックポイント阻害剤は、阻害性チェックポイントタンパク質の阻害剤であるが、好ましくは刺激性チェックポイントタンパク質の阻害剤ではない。本明細書に記載されるように、多数のＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＩＤＯ、Ａ２ＡＲ、Ａ２ＢＲ、ＶＩＳＴＡ、Ｓｉｇｌｅｃ、ＣＤ２０、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＧＡＲＰ、ＣＤ４７、ＰＶＲＩＧ、ＣＳＦ１Ｒ、ＮＯＸおよびＴＤＯの阻害剤ならびにそれぞれのリガンドの阻害剤が公知であり、それらのいくつかは既に臨床試験中であるか、さらには承認されている。これらの公知の免疫チェックポイント阻害剤に基づいて、代替免疫チェックポイント阻害剤が開発され得る。特に、好ましい免疫チェックポイントタンパク質の公知の阻害剤をそのまま使用してもよく、またはその類似体を使用してもよく、特にキメラ化、ヒト化またはヒト形態の抗体および本明細書に記載される抗体のいずれかと交差競合する抗体を使用してもよい。

標的化が、例えばＴ細胞増殖の増加、Ｔ細胞活性化の増強、および／またはサイトカイン産生の増加（例えばＩＦＮ－γ、ＩＬ２）に反映されるような抗腫瘍免疫応答などの免疫応答の刺激をもたらすことを条件として、他の免疫チェックポイント標的もまた、アンタゴニストまたは抗体によって標的化され得ることが当業者に理解されるであろう。

チェックポイント阻害剤は、当技術分野で公知の任意の方法および任意の経路によって投与され得る。投与の方法および経路は、使用されるチェックポイント阻害剤の種類に依存する。

チェックポイント阻害剤は、本明細書に記載の任意の適切な医薬組成物の形態で投与され得る。

チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイント阻害剤、例えば阻害性核酸分子または抗体もしくはその断片をコードする核酸、例えばＤＮＡまたはＲＮＡ分子の形態で投与され得る。例えば、抗体は、本明細書に記載されるように、発現ベクターにコードされて送達され得る。核酸分子は、それ自体で、例えばプラスミドもしくはｍＲＮＡ分子の形態で送達され得るか、または送達ビヒクル、例えばリポソーム、リポプレックスもしくは核酸脂質粒子と複合体化され得る。チェックポイント阻害剤はまた、チェックポイント阻害剤をコードする発現カセットを含む腫瘍溶解性ウイルスを介して投与され得る。チェックポイント阻害剤はまた、例えば細胞ベースの療法の形態で、チェックポイント阻害剤を発現することができる内因性または同種異系細胞の投与によって投与され得る。

「細胞ベースの療法」という用語は、疾患または障害（例えば癌疾患）を治療する目的で、免疫チェックポイント阻害剤を発現する細胞（例えばＴリンパ球、樹状細胞、または幹細胞）を対象に移植することを指す。一実施形態では、細胞ベースの療法は、遺伝子操作された細胞を含む。一実施形態では、遺伝子操作された細胞は、本明細書に記載されるような免疫チェックポイント阻害剤を発現する。一実施形態では、遺伝子操作された細胞は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、アンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡ、アプタマー、抗体もしくはその断片、または可溶性免疫チェックポイントタンパク質もしくは融合物などの阻害性核酸分子である免疫チェックポイント阻害剤を発現する。遺伝子操作された細胞はまた、Ｔ細胞機能を増強するさらなる作用物質を発現し得る。そのような作用物質は当技術分野で公知である。免疫チェックポイントシグナル伝達の阻害において使用するための細胞ベースの療法は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１８／２２２７１１号に開示されている。

本明細書で使用される「腫瘍溶解性ウイルス」という用語は、インビトロまたはインビボのいずれかで、正常細胞には全く影響を及ぼさないかまたは最小限の影響しか及ぼさずに、癌性または過剰増殖性細胞において選択的に複製し、その成長を遅らせるかまたはその死を誘導することができるウイルスを指す。免疫チェックポイント阻害剤の送達のための腫瘍溶解性ウイルスは、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、アンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡ、アプタマー、抗体もしくはその断片、または可溶性免疫チェックポイントタンパク質もしくは融合物などの阻害性核酸分子である免疫チェックポイント阻害剤をコードし得る発現カセットを含む。腫瘍溶解性ウイルスは、好ましくは複製能を有し、発現カセットはウイルスプロモータ、例えば合成初期／後期ポックスウイルスプロモータの制御下にある。例示的な腫瘍溶解性ウイルスには、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ラブドウイルス（例えばセネカバレーウイルス；ＳＶＶ－００１などのピコルナウイルス）、コクサッキーウイルス、パルボウイルス、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ；ＯｎｃｏＶＥＸ ＧＭＣＳＦ）、レトロウイルス（例えばインフルエンザウイルス）、麻疹ウイルス、レオウイルス、シンドビスウイルス、国際公開第２０１７／２０９０５３号に例示的に記載されているワクシニアウイルス（Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ、Ｗｙｅｔｈ株を含む）、およびアデノウイルス（例えばＤｅｌｔａ－２４、Ｄｅｌｔａ－２４－ＲＧＤ、ＩＣＯＶＩＲ－５、ＩＣＯＶＩＲ－７、Ｏｎｙｘ－０１５、ＣｏｌｏＡｄ１、Ｈ１０１、ＡＤ５／３－Ｄ２４－ＧＭＣＳＦ）が含まれるる。可溶性形態の免疫チェックポイント阻害剤を含む組換え腫瘍溶解性ウイルスの作製およびそれらの使用方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１８／０２２８３１号に開示されている。腫瘍溶解性ウイルスは、弱毒化ウイルスとして使用することができる。

本明細書に記載されるように、一実施形態では、ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡおよびＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡは、チェックポイント阻害剤と一緒に対象、例えば患者に投与される、すなわち同時投与される。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤およびＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡは、単一組成物として対象に投与される。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤およびＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡは、同時に（別々の組成物として同時に）対象に投与される。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤およびＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡは、対象に別々に投与される。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡの前に対象に投与される。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡの後に対象に投与される。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤およびＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡは、同日に対象に投与される。特定の実施形態では、チェックポイント阻害剤およびＨＰＶ Ｅ６ワクチンＲＮＡ／ＨＰＶ Ｅ７ワクチンＲＮＡは、異なる日に対象に投与される。

白金化合物
本明細書で使用される場合、「白金化合物」という用語は、白金錯体などのその構造中に白金を含有する化合物を指す。いくつかの実施形態では、この用語は、白金ベースの化学療法で使用されるような化合物を指す。いくつかの実施形態では、この用語は、シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンなどの化合物を含む。いくつかの実施形態では、白金化合物はシスプラチンである。

「シスプラチン」または「シスプラチナム」という用語は、以下の式：

の化合物シス－ジアンミンジクロロ白金（ＩＩ）（ＣＤＤＰ）を指す。

「カルボプラチン」という用語は、以下の式：

の化合物シス－ジアンミン（１，１－シクロブタンジカルボキシラト）白金（ＩＩ）を指す。

「オキサリプラチン」という用語は、以下の式：

のジアミノシクロヘキサン担体配位子に錯化した白金化合物である化合物を指す。

特に、「オキサリプラチン」という用語は、化合物［（１Ｒ，２Ｒ）－シクロヘキサン－１，２－ジアミン］（エタンジオアト－Ｏ，Ｏ'）白金（ＩＩ）を指す。注射用のオキサリプラチンも、Ｅｌｏｘａｔｉｎｅの商品名で市販されている。

Ａ．塩およびイオン強度
本開示によれば、本明細書に記載の組成物は、塩化ナトリウムなどの塩を含み得る。理論に拘束されることを望むものではないが、塩化ナトリウムは、少なくとも１つのカチオン性脂質と混合する前にＲＮＡを前処理するためのイオン性浸透圧剤として機能する。特定の実施形態は、本開示における塩化ナトリウムに代わる有機塩または無機塩を企図する。代替の塩には、限定されないが、塩化カリウム、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、酢酸カリウム、重炭酸カリウム、硫酸カリウム、酢酸カリウム、リン酸二ナトリウム、リン酸一ナトリウム、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化リチウム、塩化マグネシウム、リン酸マグネシウム、塩化カルシウム、およびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のナトリウム塩が含まれる。

一般に、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子を含む組成物は、好ましくは０ｍＭ～約５００ｍＭ、約５ｍＭ～約４００ｍＭ、または約１０ｍＭ～約３００ｍＭの範囲の濃度の塩化ナトリウムを含む。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子を含む組成物は、そのような塩化ナトリウム濃度に対応するイオン強度を含む。

Ｂ．安定剤
本明細書に記載の組成物は、凍結、凍結乾燥、噴霧乾燥、または凍結、凍結乾燥もしくは噴霧乾燥組成物の貯蔵などの貯蔵中の製品品質の実質的な損失、特にＲＮＡ活性の実質的な損失を回避するための安定剤を含み得る。

一実施形態では、安定剤は炭水化物である。本明細書で使用される「炭水化物」という用語は、単糖、二糖、三糖、オリゴ糖、および多糖を指し、それらを包含する。

本開示の実施形態では、安定剤は、マンノース、グルコース、スクロースまたはトレハロースである。

本開示によれば、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子組成物は、組成物の安定性、特にＲＮＡリポプレックス粒子の安定性およびＲＮＡの安定性に適した安定剤濃度を有する。

Ｃ．ｐＨおよび緩衝剤
本開示によれば、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子組成物は、ＲＮＡリポプレックス粒子の安定性、特にＲＮＡの安定性に適したｐＨを有する。一実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子組成物は、約５．５～約７．５のｐＨを有する。

本開示によれば、緩衝剤を含む組成物が提供される。理論に拘束されることを望むものではないが、緩衝剤の使用は、組成物の製造、貯蔵および使用の間、組成物のｐＨを維持する。本開示の特定の実施形態では、緩衝剤は、重炭酸ナトリウム、リン酸一ナトリウム、リン酸二ナトリウム、リン酸一カリウム、リン酸二カリウム、［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、２－（ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ）酢酸（ビシン）、２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－１，３－ジオール（トリス）、Ｎ－（２－ヒドロキシ－１，１－ビス（ヒドロキシメチル）エチル）グリシン（トリシン）、３－［［１，３－ジヒドロキシ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－２－イル］アミノ］－２－ヒドロキシプロパン－１－スルホン酸（ＴＡＰＳＯ）、２－［４－（２－ヒドロキシエチル）ピペラジン－１－イル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２－［［１，３－ジヒドロキシ－２－（ヒドロキシメチル）プロパン－２－イル］アミノ］エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、１，４－ピペラジンジエタンスルホン酸（ＰＩＰＥＳ）、ジメチルアルシン酸、２－モルホリン－４－イルエタンスルホン酸（ＭＥＳ）、３－モルホリノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）であり得る。他の適切な緩衝剤は、塩中の酢酸、塩中のクエン酸、塩中のホウ酸および塩中のリン酸であり得る。

一実施形態では、緩衝剤はＨＥＰＥＳである。

一実施形態では、緩衝剤は、約２．５ｍＭ～約１５ｍＭの濃度を有する。

Ｄ．キレート剤
本開示の特定の実施形態は、キレート剤の使用を企図する。キレート剤とは、金属イオンと少なくとも２つの配位共有結合を形成し、それによって安定な水溶性錯体を生成することができる化合物を指す。理論に拘束されることを望むものではないが、キレート剤は、さもなければ本開示において加速されたＲＮＡ分解を誘導し得る、遊離二価イオンの濃度を低下させる。適切なキレート剤の例には、限定されないが、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ＥＤＴＡの塩、デスフェリオキサミンＢ、デフェロキサミン、ジチオカルブナトリウム、ペニシラミン、ペンテト酸カルシウム、ペンテト酸のナトリウム塩、スクシマー、トリエンチン、ニトリロ三酢酸、トランス－ジアミノシクロヘキサン四酢酸（ＤＣＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ビス（アミノエチル）グリコールエーテル－Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'－四酢酸、イミノ二酢酸、クエン酸、酒石酸、フマル酸、またはそれらの塩が含まれる。特定の実施形態では、キレート剤は、ＥＤＴＡまたはＥＤＴＡの塩である。例示的な実施形態では、キレート剤は、ＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物である。

いくつかの実施形態では、ＥＤＴＡは、約０．０５ｍＭ～約５ｍＭの濃度である。

Ｅ．本開示の組成物の物理的状態
実施形態では、本開示の組成物は液体または固体である。固体の非限定的な例には、凍結形態または凍結乾燥形態が含まれる。好ましい実施形態では、組成物は液体である。

本開示の医薬組成物
例えばＲＮＡリポプレックス粒子として製剤化された、本明細書に記載の作用物質、例えば本明細書に記載のＲＮＡは、治療的または予防的処置のための医薬組成物または薬剤として、またはそれらを調製するために有用である。

本開示の組成物は、任意の適切な医薬組成物の形態で投与され得る。

「医薬組成物」という用語は、治療上有効な薬剤を、好ましくは薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤と共に含む製剤に関する。前記医薬組成物は、前記医薬組成物を対象に投与することによって疾患または障害を治療する、予防する、またはその重症度を軽減するのに有用である。医薬組成物は、当技術分野では医薬製剤としても公知である。本開示の文脈において、医薬組成物は、例えばＲＮＡリポプレックス粒子として製剤化された、本明細書に記載のＲＮＡを含む。

本開示の医薬組成物は、好ましくは１つ以上のアジュバントを含むか、または１つ以上のアジュバントと共に投与され得る。「アジュバント」という用語は、免疫応答を延長、増強または加速する化合物に関する。アジュバントは、油エマルジョン（例えばフロイントアジュバント）、無機化合物（ミョウバンなど）、細菌産物（百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）毒素など）、または免疫刺激複合体などの不均一な群の化合物を含む。アジュバントの例には、限定されないが、ＬＰＳ、ＧＰ９６、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、成長因子、およびサイトカイン、例えばモノカイン、リンホカイン、インターロイキン、ケモカインが含まれる。ケモカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＮＦａ、ＩＮＦ－γ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＬＴ－ａであり得る。さらなる公知のアジュバントは、水酸化アルミニウム、フロイントアジュバント、またはＭｏｎｔａｎｉｄｅ（登録商標）ＩＳＡ５１などの油である。本開示で使用するための他の適切なアジュバントには、Ｐａｍ３Ｃｙｓなどのリポペプチドが含まれる。

本開示による医薬組成物は、一般に、「薬学的有効量」および「薬学的に許容される製剤」で適用される。

「薬学的に許容される」という用語は、医薬組成物の活性成分の作用と相互作用しない物質の非毒性を指す。

「薬学的有効量」という用語は、単独でまたはさらなる用量と共に所望の反応または所望の効果を達成する量を指す。特定の疾患の治療の場合、所望の反応は、好ましくは疾患の経過の阻害に関する。これは、疾患の進行を遅らせること、特に疾患の進行を中断するまたは逆転させることを含む。疾患の治療における所望の反応はまた、前記疾患または前記状態の発症の遅延または発症の予防であり得る。本明細書に記載の組成物の有効量は、治療される状態、疾患の重症度、年齢、生理学的状態、サイズおよび体重を含む患者の個々のパラメータ、治療の期間、付随する治療の種類（存在する場合）、特定の投与経路ならびに同様の因子に依存する。したがって、本明細書に記載の組成物の投与される用量は、そのような様々なパラメータに依存し得る。患者の反応が初期用量では不十分である場合、より高い用量（または異なる、より限局された投与経路によって達成される効果的により高い用量）を使用し得る。

いくつかの実施形態では、有効量は、腫瘍／病変を縮小させるのに十分な量を含む。いくつかの実施形態では、有効量は、腫瘍の成長速度を低下させる（例えば、腫瘍の成長を抑制する）のに十分な量である。いくつかの実施形態では、有効量は、腫瘍の発生を遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態では、有効量は、腫瘍の再発を予防するまたは遅延させるのに十分な量である。いくつかの実施形態では、有効量は、腫瘍の成長および／またはサイズおよび／または転移が減少、遅延、改善および／または予防されるように、腫瘍に対する対象の免疫応答を増加させるのに十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与することができる。いくつかの実施形態では、有効量（例えば、ｍＲＮＡを含む組成物の）の投与は、（ｉ）癌細胞の数を減少させ得る；（ｉｉ）腫瘍サイズを縮小し得る；（ｉｉｉ）末梢器官への癌細胞浸潤を阻害し、遅延させ、ある程度減速させ、停止させ得る；（ｉｖ）転移を阻害し得る（例えば、ある程度減速させ得るおよび／またはブロックもしくは防止し得る）；（ｖ）腫瘍成長を阻害し得る；（ｖｉ）腫瘍の発生および／または再発を予防または遅延させ得る；ならびに／または（ｖｉｉ）癌に関連する症状の１つ以上をある程度軽減し得る。

本開示の医薬組成物は、塩、緩衝剤、防腐剤、および任意で他の治療薬を含有し得る。一実施形態では、本開示の医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、および／または賦形剤を含有する。

本開示の医薬組成物で使用するための適切な防腐剤には、限定されないが、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、パラベンおよびチメロサールが含まれる。

本明細書で使用される「賦形剤」という用語は、本開示の医薬組成物中に存在し得るが、活性成分ではない物質を指す。賦形剤の例には、限定されないが、担体、結合剤、希釈剤、潤滑剤、増粘剤、界面活性剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、緩衝剤、香味剤、または着色剤が含まれる。

「希釈剤」という用語は、希釈するおよび／または希薄にする薬剤に関する。さらに、「希釈剤」という用語は、流体、液体、または固体の懸濁液および／または混合媒体のいずれか１つ以上を含む。適切な希釈剤の例には、エタノール、グリセロール、および水が含まれる。

「担体」という用語は、医薬組成物の投与を容易にする、増強するまたは可能にするために活性成分が組み合わされる、天然、合成、有機、無機であり得る成分を指す。本明細書で使用される担体は、対象への投与に適した１つ以上の適合性の固体もしくは液体充填剤、希釈剤または封入物質であり得る。適切な担体には、限定されないが、滅菌水、リンゲル液、乳酸リンゲル液、滅菌塩化ナトリウム溶液、等張食塩水、ポリアルキレングリコール、水素化ナフタレンおよび、特に、生体適合性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマーまたはポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーが含まれる。一実施形態では、本開示の医薬組成物は等張食塩水を含む。

治療的使用のための薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤は、製薬分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（Ａ．Ｒ Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｄｉｔ．１９８５）に記載されている。

医薬担体、賦形剤または希釈剤は、意図される投与経路および標準的な製薬慣行に関して選択することができる。

本開示の医薬組成物の投与経路
一実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、静脈内、動脈内、皮下、皮内、結節内または筋肉内に投与され得る。特定の実施形態では、医薬組成物は、局所投与または全身投与用に製剤化される。全身投与には、消化管を介した吸収を含む経腸投与、または非経口投与が含まれ得る。本明細書で使用される場合、「非経口投与」は、静脈内注射などによる、消化管を介する以外の任意の方法での投与を指す。好ましい実施形態では、医薬組成物は全身投与用に製剤化される。別の好ましい実施形態では、全身投与は静脈内投与によるものである。

本開示の医薬組成物の使用
例えばＲＮＡリポプレックス粒子として製剤化された、本明細書に記載の作用物質、例えば本明細書に記載のＲＮＡは、ＨＰＶ陽性癌の治療的または予防的処置に使用され得る。

「疾患」という用語は、個体の身体に影響を及ぼす異常な状態を指す。疾患はしばしば、特定の症状および徴候に関連する医学的状態として解釈される。疾患は、感染症などの外部源に由来する因子によって引き起こされ得るか、または自己免疫疾患などの内部機能不全によって引き起こされ得る。ヒトでは、「疾患」はしばしば、罹患した個体に疼痛、機能不全、苦痛、社会的問題、もしくは死亡を引き起こす、または個体と接触するものに対して同様の問題を引き起こす状態を指すためにより広く使用される。このより広い意味では、疾患は時に、損傷、無力、障害、症候群、感染、孤立した症状、逸脱した挙動、ならびに構造および機能の非定型の変化を含むが、他の状況および他の目的では、これらは区別可能なカテゴリと見なされ得る。多くの疾患を患い、それらと共に生活することは、人生観および人格を変える可能性があるため、疾患は通常、身体的だけでなく感情的にも個体に影響を及ぼす。

本文脈において、「治療」、「治療する」または「治療的介入」という用語は、疾患または障害などの状態と闘うことを目的とした、対象の管理およびケアに関する。この用語は、症状もしくは合併症を緩和するため、疾患、障害もしくは状態の進行を遅らせるため、症状および合併症を緩和もしくは軽減するため、ならびに／または疾患、障害もしくは状態を治癒もしくは排除するため、ならびに状態を予防するための治療上有効な化合物の投与などの、対象が罹患している所与の状態に対するあらゆる範囲の治療を含むことを意図しており、予防は、疾患、状態または障害と闘うことを目的とした個体の管理およびケアとして理解されるべきであり、症状または合併症の発症を防止するための活性化合物の投与を含む。

「治療的処置」という用語は、個体の健康状態を改善する、および／または寿命を延長する（増加させる）任意の治療に関する。前記治療は、個体における疾患を排除し、個体における疾患の発症を停止もしくは遅延させ、個体における疾患の発症を阻害もしくは遅延させ、個体における症状の頻度もしくは重症度を低下させ、および／または現在疾患を有しているかもしくは以前に有していたことがある個体における再発を減少させ得る。

「予防的処置」または「防止的処置」という用語は、個体において疾患が発生するのを防ぐことを意図した任意の治療に関する。「予防的処置」または「防止的処置」という用語は、本明細書では互換的に使用される。

「個体」および「対象」という用語は、本明細書では互換的に使用される。これらは、疾患または障害（例えば癌）に罹患し得るかまたは罹患しやすいが、疾患または障害を有していても有していなくてもよいヒトまたは別の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、または霊長動物）を指す。多くの実施形態では、個体はヒトである。特に明記されない限り、「個体」および「対象」という用語は特定の年齢を示すものではなく、したがって成人、高齢者、小児、および新生児を包含する。本開示の実施形態では、「個体」または「対象」は「患者」である。

「患者」という用語は、治療のための個体または対象、特に罹患した個体または対象を意味する。

本開示の一実施形態では、目的は、１つ以上のＨＰＶ抗原、特にＨＰＶ Ｅ６および／またはＨＰＶ Ｅ７を発現する癌細胞に対する免疫応答を提供すること、ならびに１つ以上のＨＰＶ抗原を発現する細胞が関与する癌疾患を治療することである。一実施形態では、癌がＨＰＶ陽性癌である。一実施形態では、癌は、肛門生殖器癌、子宮頸癌もしくは陰茎癌、または生殖器領域もしくは頭頸部領域の癌などの頭頸部領域の癌である。一実施形態では、癌は頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）である。

ＲＮＡを含む医薬組成物を対象に投与して、治療的または部分的もしくは完全に保護的であり得る、対象のＲＮＡによってコードされる１つ以上の抗原または１つ以上のエピトープに対する免疫応答を誘発し得る。当業者は、免疫療法およびワクチン接種の原理の１つが、治療される疾患に関して免疫学的に関連する抗原またはエピトープで対象を免疫することによって疾患に対する免疫保護反応が生じるという事実に基づくことを理解するであろう。したがって、本明細書に記載の医薬組成物は、免疫応答を誘導または増強するために適用可能である。したがって、本明細書に記載の医薬組成物は、抗原またはエピトープが関与する疾患、特にＨＰＶ陽性癌の予防的および／または治療的処置において有用である。

本明細書で使用される場合、「免疫応答」は、抗原または抗原を発現する細胞に対する統合された身体応答を指し、細胞性免疫応答および／または体液性免疫応答を指す。細胞性免疫応答には、限定されないが、抗原を発現し、クラスＩまたはクラスＩＩ ＭＨＣ分子による抗原の提示を特徴とする細胞に向けられる細胞応答が含まれる。細胞応答はＴリンパ球に関連し、Ｔリンパ球は、免疫応答を制御することによって中心的な役割を果たすヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞とも称される）、または感染細胞もしくは癌細胞におけるアポトーシスを誘導するキラー細胞（細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、もしくはＣＴＬとも称される）として分類され得る。一実施形態では、本開示の医薬組成物を投与することは、１つ以上の腫瘍抗原を発現する癌細胞に対する抗腫瘍ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答の刺激を含む。特定の実施形態では、腫瘍抗原は、クラスＩ ＭＨＣ分子と共に提示される。

本開示は、保護的、防御的、予防的、および／または治療的であり得る免疫応答を企図する。本明細書で使用される場合、「免疫応答を誘導する（または誘導すること）」は、誘導前に特定の抗原に対する免疫応答が存在しなかったことを示し得るか、または誘導前に特定の抗原に対する基礎レベルの免疫応答があり、これが誘導後に増強されたことを示し得る。したがって、「免疫応答を誘導する（または誘導すること）」には、「免疫応答を増強する（または増強すること）」が含まれる。

「免疫療法」という用語は、免疫応答を誘導または増強することによる疾患または状態の治療に関する。「免疫療法」という用語は、抗原免疫または抗原ワクチン接種を含む。

「免疫」または「ワクチン接種」という用語は、例えば治療上または予防上の理由により、免疫応答を誘導する目的で個体に抗原を投与するプロセスを表す。

一実施形態では、本開示は、脾臓組織を標的とする本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子が投与される実施形態を想定する。ＲＮＡは、例えば本明細書に記載される抗原またはエピトープを含むペプチドまたはタンパク質をコードする。ＲＮＡは、樹状細胞などの脾臓内の抗原提示細胞によって取り込まれて、ペプチドまたはタンパク質を発現する。抗原提示細胞による任意のプロセシングおよび提示の後に、抗原またはエピトープに対する免疫応答が生成され、抗原またはエピトープが関与する疾患の予防的および／または治療的処置をもたらし得る。一実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子によって誘導される免疫応答は、樹状細胞および／またはマクロファージなどの抗原提示細胞による、エピトープなどの抗原またはその断片の提示、ならびにこの提示による細胞傷害性Ｔ細胞の活性化を含む。例えば、ＲＮＡによってコードされるペプチドもしくはタンパク質またはそのプロセシング産物は、抗原提示細胞上に発現される主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）タンパク質によって提示され得る。次いで、ＭＨＣペプチド複合体は、Ｔ細胞またはＢ細胞などの免疫細胞によって認識され、それらの活性化をもたらすことができる。

したがって、一実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子中のＲＮＡは、投与後、脾臓に送達され、および／または脾臓で発現される。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、脾臓の抗原提示細胞を活性化するために脾臓に送達される。したがって、一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子の投与後、抗原提示細胞におけるＲＮＡ送達および／またはＲＮＡ発現が起こる。抗原提示細胞は、プロフェッショナル抗原提示細胞または非プロフェッショナル抗原提示細胞であり得る。プロフェッショナル抗原提示細胞は、樹状細胞および／またはマクロファージ、さらにより好ましくは脾臓樹状細胞および／または脾臓マクロファージであり得る。

したがって、本開示は、免疫応答、好ましくはＨＰＶ陽性癌に対する免疫応答を誘導または増強するための、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子またはＲＮＡリポプレックス粒子を含む医薬組成物に関する。

一実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子またはＲＮＡリポプレックス粒子を含む医薬組成物を全身投与すると、脾臓におけるＲＮＡリポプレックス粒子またはＲＮＡの標的化および／または蓄積がもたらされ、肺および／または肝臓では標的化および／または蓄積は起こらない。一実施形態では、ＲＮＡリポプレックス粒子は、脾臓でＲＮＡを放出し、および／または脾臓の細胞に入る。一実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡリポプレックス粒子またはＲＮＡリポプレックス粒子を含む医薬組成物を全身投与すると、脾臓の抗原提示細胞にＲＮＡが送達される。特定の実施形態では、脾臓における抗原提示細胞は、樹状細胞またはマクロファージである。

「マクロファージ」という用語は、単球の分化によって産生される食細胞のサブグループを指す。炎症、免疫サイトカインまたは微生物産物によって活性化されるマクロファージは、マクロファージ内に外来病原体を非特異的に飲み込み、病原体の分解をもたらす加水分解および酸化攻撃によって死滅させる。分解されたタンパク質由来のペプチドは、それらがＴ細胞によって認識され得るマクロファージ細胞表面に表示され、Ｂ細胞表面の抗体と直接相互作用して、Ｔ細胞およびＢ細胞の活性化ならびに免疫応答のさらなる刺激をもたらすことができる。マクロファージは抗原提示細胞のクラスに属する。一実施形態では、マクロファージは脾臓マクロファージである。

「樹状細胞」（ＤＣ）という用語は、抗原提示細胞のクラスに属する食細胞の別のサブタイプを指す。一実施形態では、樹状細胞は造血骨髄前駆細胞に由来する。これらの前駆細胞は、最初に未成熟な樹状細胞に変化する。これらの未成熟細胞は、高い食作用活性と低いＴ細胞活性化能とを特徴とする。未成熟な樹状細胞は、ウイルスおよび細菌などの病原体について周囲環境を絶えずサンプリングする。それらは、提示可能な抗原と接触すると、活性化されて成熟樹状細胞になり、脾臓またはリンパ節に移動し始める。未成熟樹状細胞は病原体を貪食し、それらのタンパク質を小さな断片に分解し、成熟すると、ＭＨＣ分子を使用してそれらの細胞表面にそれらの断片を提示する。同時に、それらは、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＣＤ４０などのＴ細胞活性化における共受容体として機能する細胞表面受容体を上方制御し、Ｔ細胞を活性化するそれらの能力を大幅に増強する。それらはまた、樹状細胞が血流を通って脾臓に、またはリンパ系を通ってリンパ節に移動するように誘導する走化性受容体であるＣＣＲ７を上方制御する。ここで、それらは抗原提示細胞として機能し、非抗原特異的共刺激シグナルと共に抗原を提示することによってヘルパーＴ細胞およびキラーＴ細胞ならびにＢ細胞を活性化する。したがって、樹状細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞に関連する免疫応答を能動的に誘導することができる。一実施形態では、樹状細胞は脾臓樹状細胞である。

「抗原提示細胞」（ＡＰＣ）という用語は、その細胞表面上に（またはその細胞表面で）少なくとも１つの抗原または抗原断片を表示、獲得、および／または提示することができる様々な細胞の１つである。抗原提示細胞は、プロフェッショナル抗原提示細胞と非プロフェッショナル抗原提示細胞とに区別することができる。

「プロフェッショナル抗原提示細胞」という用語は、ナイーブＴ細胞との相互作用に必要な主要組織適合遺伝子複合体クラスＩＩ（ＭＨＣクラスＩＩ）分子を構成的に発現する抗原提示細胞に関する。Ｔ細胞が抗原提示細胞の膜上のＭＨＣクラスＩＩ分子複合体と相互作用する場合、抗原提示細胞は、Ｔ細胞の活性化を誘導する共刺激分子を産生する。プロフェッショナル抗原提示細胞は、樹状細胞およびマクロファージを含む。

「非プロフェッショナル抗原提示細胞」という用語は、ＭＨＣクラスＩＩ分子を構成的に発現しないが、インターフェロンγなどの特定のサイトカインによる刺激を受けると発現する抗原提示細胞に関する。例示的な非プロフェッショナル抗原提示細胞には、線維芽細胞、胸腺上皮細胞、甲状腺上皮細胞、グリア細胞、膵臓ベータ細胞または血管内皮細胞が含まれる。

「抗原プロセシング」は、抗原の、前記抗原の断片であるプロセシング産物への分解（例えばタンパク質のペプチドへの分解）、および抗原提示細胞などの細胞による特異的Ｔ細胞への提示のためのＭＨＣ分子とこれらの断片の１つ以上との会合（例えば結合による）を指す。

「抗原が関与する疾患」または「エピトープが関与する疾患」という用語は、抗原またはエピトープが関係する任意の疾患、例えば、抗原またはエピトープの存在を特徴とする疾患を指す。抗原またはエピトープが関与する疾患は、癌疾患または単に癌であり得る。上述したように、抗原は、腫瘍関連抗原などの疾患関連抗原であり得、エピトープはそのような抗原に由来し得る。

「癌疾患」または「癌」という用語は、典型的には無秩序な細胞増殖を特徴とする個体の生理学的状態を指すかまたは表す。癌の例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病が含まれるが、これらに限定されない。より具体的には、そのような癌の例には、骨癌、血液癌肺癌、肝臓癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部癌、皮膚または眼内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、結腸癌、乳癌、前立腺癌、子宮癌、性器および生殖器の癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、膀胱癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、神経外胚葉癌、脊髄軸腫瘍、神経膠腫、髄膜腫、および下垂体腺腫が含まれる。本明細書に記載の組成物および方法によって処置することができる癌の１つの特定の形態は、ＨＰＶ陽性癌である。本開示による「癌」という用語は、癌転移も含む。

癌治療における併用戦略は、結果として生じる相乗効果のために望ましい場合があり、これは単独療法アプローチの影響よりもかなり強力であり得る。一実施形態では、医薬組成物は免疫療法剤と共に投与される。本明細書で使用される場合、「免疫療法剤」は、特異的免疫応答および／または免疫エフェクタ機能（１つ以上）の活性化に関与し得る任意の薬剤に関する。本開示は、免疫療法剤としての抗体の使用を企図する。理論に拘束されることを望むものではないが、抗体は、アポトーシスを誘導する、シグナル伝達経路の成分を遮断する、または腫瘍細胞の増殖を阻害することを含む様々な機構を介して癌細胞に対する治療効果を達成することができる。特定の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して細胞死を誘導し得るか、または補体タンパク質に結合して、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）として知られる直接的な細胞毒性をもたらし得る。本開示と組み合わせて使用し得る抗癌抗体および潜在的な抗体標的（括弧内）の非限定的な例には、以下が含まれる：アバゴボマブ（ＣＡ－１２５）、アブシキシマブ（ＣＤ４１）、アデカツムマブ（ＥｐＣＡＭ）、アフツズマブ（ＣＤ２０）、アラシズマブペゴル（ＶＥＧＦＲ２）、アルツモマブペンテテート（ＣＥＡ）、アマツキシマブ（ＭＯＲＡｂ－００９）、アナツモマブマフェナトクス（ＴＡＧ－７２）、アポリズマブ（ＨＬＡ－ＤＲ）、アルシツモマブ（ＣＥＡ）、アテゾリズマブ（ＰＤ－Ｌ１）、バビツキシマブ（ホスファチジルセリン）、ベクツモマブ（ＣＤ２２）、ベリムマブ（ＢＡＦＦ）、ベバシズマブ（ＶＥＧＦ－Ａ）、ビバツズマブメルタンシン（ＣＤ４４ ｖ６）、ブリナツモマブ（ＣＤ１９）、ブレンツキシマブベドチン（ＣＤ３０ ＴＮＦＲＳＦ８）、カンツズマブメルタンシン（ムチンＣａｎＡｇ）、カンツズマブラブタンシン（ＭＵＣ１）、カプロマブペンデチド（前立腺癌細胞）、カルルマブ（ＣＮＴ０８８８）、カツマキソマブ（ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３）、セツキシマブ（ＥＧＦＲ）、シタツズマブボガトクス（ＥｐＣＡＭ）、シクスツムマブ（ＩＧＦ－１受容体）、クローディキシマブ（クローディン）、クリバツズマブテトラキセタン（ＭＵＣ１）、コナツムマブ（ＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ダセツズマブ（ＣＤ４０）、ダロツズマブ（インスリン様増殖因子Ｉ受容体）、デノスマブ（ＲＡＮＫＬ）、デツモマブ（Ｂリンパ腫細胞）、ドロジツマブ（ＤＲ５）、エクロメキシマブ（ＧＤ３ガングリオシド）、エドレコロマブ（ＥｐＣＡＭ）、エロツズマブ（ＳＬＡＭＦ７）、エナバツズマブ（ＰＤＬ１９２）、エンシツキシマブ（ＮＰＣ－１Ｃ）、エプラツズマブ（ＣＤ２２）、エルツマキソマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＣＤ３）、エタラシズマブ（インテグリンανβ３）、ファルレツズマブ（葉酸受容体１）、ＦＢＴＡ０５（ＣＤ２０）、フィクラツズマブ（ＳＣＨ ９００１０５）、フィギツムマブ（ＩＧＦ－１受容体）、フランボツマブ（糖タンパク質７５）、フレソリムマブ（ＴＧＦ－β）、ガリキシマブ（ＣＤ８０）、ガニツマブ（ＩＧＦ－Ｉ）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＣＤ３３）、ゲボキズマブ（ＩＬ－Ιβ）、ギレンツキシマブ（炭酸脱水酵素９（ＣＡ－ＩＸ））、グレムバツムマブベドチン（ＧＰＮＭＢ）、イブリツモマブチウキセタン（ＣＤ２０）、イクルクマブ（ＶＥＧＦＲ－１）、イゴボマ（ＣＡ－１２５）、インダツキシマブラブタンシン（ＳＤＣ１）、インテツムマブ（ＣＤ５１）、イノツズマブオゾガマイシン（ＣＤ２２）、イピリムマブ（ＣＤ１５２）、イラツムマブ（ＣＤ３０）、ラベツズマブ（ＣＥＡ）、レクサツムマブ（ＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、リビビルマブ（Ｂ型肝炎表面抗原）、リンツズマブ（ＣＤ３３）、ロルボツズマブメルタンシン（ＣＤ５６）、ルカツムマブ（ＣＤ４０）、ルミリキシマブ（ＣＤ２３）、マパツムマブ（ＴＲＡＩＬ－Ｒ１）、マツズマブ（ＥＧＦＲ）、メポリズマブ（ＩＬ－５）、ミラツズマブ（ＣＤ７４）、ミツモマブ（ＧＤ３ガングリオシド）、モガムリズマブ（ＣＣＲ４）、モキセツモマブパスドトクス（ＣＤ２２）、ナコロマブタフェナトクス（Ｃ２４２抗原）、ナプツモマブエスタフェナトクス（５Ｔ４）、ナマツマブ（ＲＯＮ）、ネシツムマブ（ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（ＥＧＦＲ）、ニボルマブ（ＩｇＧ４）、オファツムマブ（ＣＤ２０）、オララツマブ（ＰＤＧＦ－Ｒ ａ）、オナルツズマブ（ヒト散乱因子受容体キナーゼ）、オポルツズマブモナトクス（ＥｐＣＡＭ）、オレゴボマブ（ＣＡ－１２５）、オキセルマブ（ＯＸ－４０）、パニツムマブ（ＥＧＦＲ）、パトリツマブ（ＨＥＲ３）、ペムツモマ（ＭＵＣ１）、ペルツズマ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ピンツモマブ（腺癌抗原）、プリツムマブ（ビメンチン）、ラコツモマブ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸）、ラドレツマブ（フィブロネクチンエクストラドメインＢ）、ラフィビルマブ（狂犬病ウイルス糖タンパク質）、ラムシルマブ（ＶＥＧＦＲ２）、リロツムマブ（ＨＧＦ）、リツキシマブ（ＣＤ２０）、ロバツムマブ（ＩＧＦ－１受容体）、サマリズマブ（ＣＤ２００）、シブロツズマブ（ＦＡＰ）、シルツキシマブ（ＩＬ－６）、タバルマブ（ＢＡＦＦ）、タカツズマブテトラキセタン（α－フェトプロテイン）、タプリツモマブパプトクス（ＣＤ１９）、テナツモマブ（テネイシンＣ）、テプロツムマブ（ＣＤ２２１）、チシリムマブ（ＣＴＬＡ－４）、ティガツズマブ（ＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ＴＮＸ－６５０（ＩＬ－１３）、トシツモマブ（ＣＤ２０）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ＴＲＢＳ０７（ＧＤ２）、トレメリムマブ（ＣＴＬＡ－４）、ツコツズマブセルモロイキン（ＥｐＣＡＭ）、ウブリツキシマブ（ＭＳ４Ａ１）、ウレルマブ（４－１ＢＢ）、ボロキシマブ（インテグリンα５β１）、ボツムマブ（腫瘍抗原ＣＴＡＡ １６．８８）、ザルツムマブ（ＥＧＦＲ）、およびザノリムマブ（ＣＤ４）。

一実施形態では、免疫療法剤は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストである。ＰＤ－１軸結合アンタゴニストには、ＰＤ－１結合アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストおよびＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストが含まれるが、これらに限定されない。「ＰＤ－１」の別名には、ＣＤ２７９およびＳＬＥＢ２が含まれる。「ＰＤ－Ｌ１」の別名には、Ｂ７－Ｈ１、Ｂ７－４、ＣＤ２７４、およびＢ７－Ｈが含まれる。「ＰＤ－Ｌ２」の別名には、Ｂ７－ＤＣ、Ｂｔｄｃ、およびＣＤ２７３が含まれる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１がそのリガンド結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。特定の態様では、ＰＤ－１リガンド結合パートナーは、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２である。別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１がその結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合パートナーは、ＰＤ－１および／またはＢ７－１である。別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２がその結合パートナーに結合するのを阻害する分子である。特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ２結合パートナーはＰＤ－１である。ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）である。抗ＰＤ－１抗体の例には、限定されないが、ＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ、ＯＰＤＩＶＯ）、Ｍｅｒｃｋ ３４７５（ＭＫ－３４７５、ペムブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－１０８、およびＢＧＢ－Ａ３１７が含まれる。

一実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、定常領域に融合したＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の細胞外部分またはＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシンである。一実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、国際公開第２０１０／０２７８２７号および国際公開第２０１１／０６６３４２号に記載されている融合可溶性受容体である、ＡＭＰ－２２４（Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られ、ＰＤ－Ｌ２－Ｆｃである）である。

一実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、限定されないが、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（アテゾリズマブ）、ＭＥＤＩ４７３６（デュルバルマブ）、ＭＤＸ－１１０５、およびＭＳＢ００１０７１８Ｃ（アベルマブ）を含む、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

一実施形態では、免疫療法剤はＰＤ－１結合アンタゴニストである。別の実施形態では、ＰＤ－１結合アンタゴニストは抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。例示的な実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はアテゾリズマブである。

本明細書で参照される文書および試験の引用は、前述のいずれかが関連する先行技術であることの承認を意図するものではない。これらの文書の内容に関する全ての記述は、出願人が入手可能な情報に基づいており、これらの文書の内容の正確さに関するいかなる承認も構成しない。

以下の説明は、当業者が様々な実施形態を作成および使用することを可能にするために提示される。具体的な装置、技術、および用途の説明は、例としてのみ提供される。本明細書に記載される例に対する様々な変更は、当業者には容易に明らかであり、本明細書で定義される一般的な原理は、様々な実施形態の精神および範囲から逸脱することなく他の例および用途に適用され得る。したがって、様々な実施形態は、本明細書に記載され、示される例に限定されることを意図するものではなく、特許請求の範囲と一致する範囲を与えられるべきである。

実施例１～４の材料および方法
マウス
ヒト化ＨＬＡトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６ Ａ２ＤＲ１胚をＣＮＲＳ Ｏｒｌｅａｎｓから入手し、自家繁殖させた。野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＣｈａｒｌｅｓ ＲｉｖｅｒおよびＥｎｖｉｇｏから購入した。全ての実験を通して、週齢が一致する（６～１２週）雌動物を使用した。手順および実験群の大きさは、動物福祉のために規制当局によって承認された。全てのマウスを、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＭａｉｎｚおよびＢｉｏＮＴｅｃｈ ＡＧにおいて動物研究に関する連邦および州の方針に従って飼育した。

腫瘍細胞株
Ｔ．－Ｃ．Ｗｕ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）からのルシフェラーゼをトランスフェクトした変異体ＴＣ－１ ｌｕｃと共に、不死化およびＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７によるレトロウイルス形質導入によって（Ｌｉｎ，Ｋ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６，２１－２６（１９９６））初代肺細胞に由来するＣ５７ＢＬ／６ ＴＣ－１腫瘍細胞株を得た。完全なＨＰＶ１６ゲノムを有するＣ５７ＢＬ／６マウス胚細胞の不死化およびトランスフェクションによって作製されたＣ５７ＢＬ／６ Ｃ３腫瘍細胞株（Ｆｅｌｔｋａｍｐ，Ｍ．Ｃ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３，２２４２－２２４９（１９９３））は、Ｓ．Ｈ．ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｕｒｇ（Ｌｅｉｄｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から好意で贈られたものであった。細胞の再認証ならびにマスターセルバンクおよびワーキングセルバンクの作製は、受領直後に行った。３継代から９継代までの細胞を腫瘍実験に使用した。

ＲＮＡ構築物およびインビトロ転写
抗原コードＲＮＡのインビトロ転写のためのプラスミド鋳型は、安定性およびタンパク質翻訳のために薬理学的に最適化された５'および３'ＵＴＲならびにポリ（Ａ）尾部を特徴とするｐＳＴ１－Ａ１２０およびｐＳＴ１－ＭＩＴＤベクター（Ｈｏｌｔｋａｍｐ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０８，４００９－４０１７（２００６））に基づいた。ｐＳＴ１－ＭＩＴＤは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩおよびＩＩエピトープの提示を改善するために小胞体ならびにＭＨＣクラスＩ膜貫通および細胞質ドメインにルーティングするためのシグナル配列を特徴とする。ｐＳＴ１－ｅＧＦＰ－Ａ１２０（ｅＧＦＰ）、ｐＳＴ１－ＯＶＡ－ＭＩＴＤ（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）およびｐＳＴ１－Ｅ７－ＭＩＴＤベクターは以前に記載されている（Ｈｏｌｔｋａｍｐ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０８，４００９－４０１７（２００６）；Ｋｒｅｉｔｅｒ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８０，３０９－３１８（２００７）；Ｋｒａｎｚ，Ｌ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５３４，３９６－４０１（２０１６）；Ｋｕｈｎ，Ａ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７，９６１－７１（２０１０））。ｐＳＴ１－ＯＶＡ－ＭＩＴＤは、Ｈ－２Ｋｂ拘束性免疫優性エピトープＯＶＡ_{２５７－２６４}をコードする。ｐＳＴ１－Ｅ７－ＭＩＴＤはＨＰＶ１６全長Ｅ７タンパク質をコードし、ｐＳＴ１－Ｅ６－ＭＩＴＤはＨＰＶ１６全長Ｅ６タンパク質をコードする。ｍＲＮＡのインビトロ転写のための鋳型を、標的配列をｐＳＴ１－ＭＩＴＤベクターにクローニングすることによって作製した。インビトロ転写およびβ－Ｓ－アンチリバースキャップアナログ（ＡＲＣＡ）（Ｋｕｈｎ，Ａ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７，９６１－７１（２０１０））によるキャッピングを、以前に記載されているように実施した（Ｈｏｌｔｋａｍｐ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０８，４００９－４０１７（２００６））。

リポソーム、ＲＮＡ－ＬＰＸ製剤、および免疫
カチオン性脂質ＤＯＴＭＡおよびヘルパー脂質ＤＯＰＥからなるカチオン性正味電荷を有するリポソームを使用して、ＲＮＡ－ＬＰＸの形成のためにＲＮＡを複合体化した。リポソーム製造およびＬＰＸ形成は、以前に記載されているように実施した（Ｋｒａｎｚ，Ｌ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５３４，３９６－４０１（２０１６））。簡単に述べると、ＲＮＡを１ｍｇ／ｍＬ^－１のＲＮＡ濃度でＨＥＰＥＳ緩衝溶液中に保存した。ＲＮＡをＨ_２Ｏおよび１．５Ｍ ＮａＣｌ溶液で希釈し、続いて１５０ｍＭの最終ＮａＣｌ濃度で（＋）：（－）１．３：２の電荷比に達するように適切な量のリポソーム分散液を添加することによってＲＮＡ－ＬＰＸを調製した。示された電荷比で、ＲＮＡ－ＬＰＸ製剤（Ｅ７、ｅＧＦＰおよびＯＶＡ_{２５７－２６４} ＲＮＡ－ＬＰＸ）は、２００～２５０ｎｍの粒径、約０．２５の多分散指数および－２０～３０ｍＶのゼータ電位（ｍＶ）を有していた（実施例２～４）。特に言及されない限り、マウスを４０μｇのＲＮＡ－ＬＰＸで免疫した。対照マウスには、無関係なタンパク質（ｅＧＦＰもしくはＯＶＡ_{２５７－２６４}）またはＮａＣｌをコードするＲＮＡ－ＬＰＸを投与した。ワクチン接種スキームにおける矢印は免疫化を示す。

腫瘍モデルおよび治療
治療的腫瘍実験のために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１×１０^５個のＴＣ－１腫瘍細胞または５×１０^５個のＣ３腫瘍細胞を皮下注射した。腫瘍サイズを、式（ａ^２×ｂ）／２（ａ、幅；ｂ、長さ）を使用して腫瘍体積を計算するために、３～４日ごとにノギスを用いて非盲検で測定した。同所性腫瘍実験のために、５×１０^４個のＴＣ－１ ｌｕｃ腫瘍細胞を舌の粘膜下組織に接種した。いくつかの実験では、２００μｇのＰＤ－Ｌ１抗体（１０Ｆ．９Ｇ２、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）またはＩｇＧ２ｂアイソタイプ対照（ＬＦ－２、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を、３～４日ごとに腹腔内投与した。所定のエンドポイントに達したとき、動物を安楽死させた。

生物発光イメージング
同所性ＴＣ－１ ｌｕｃ腫瘍成長を、Ｘｅｎｏｇｅｎ ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｉｍａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）を使用したインビボ生物発光イメージングによって評価した。Ｌ－ルシフェリン水溶液（１．３ｍｇ／マウス；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を腹腔内注射した。ルシフェリン投与の５分後に、生存動物から放出された光子を定量化した。関心領域（ＲＯＩ）を、ＩＶＩＳ Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ４．０ソフトウェアを使用して平均放射輝度（光子／秒^－１／ｃｍ^－２／ｓｒ^－１）として定量化した。

組織の調製
単一細胞懸濁液の生成のために、腫瘍を切除し、小片に切断し、続いてＰＢＳ中５μｇ／ｍＬコラゲナーゼ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、５００単位ヒアルロニダーゼ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）および５０μｇ／ｍＬ ＤＮＡｓｅ Ｉ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を含有する消化緩衝液中３７℃で１５分間インキュベートした。腫瘍試料を、ＰＢＳですすぎながらシリンジのプランジャ端部を使用して７０μｍセルストレーナ（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）に通した。細胞を４６０ｇで６分間遠心分離し、新鮮なＰＢＳに再懸濁した。赤血球を低張電解質液で５分間溶解した。同様に、脾臓をＰＢＳですすぎながら７０μｍセルストレーナに通し、赤血球を低張電解質液で溶解した。眼窩洞から末梢血（５０μｌ）を採取して、ＦＡＣＳ染色用のＰＢＭＣを得た。

ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔ
抗原遭遇時のＴ細胞ＩＦＮγ放出を検出するために、酵素結合イムノスポットアッセイ（ＥＬＩＳｐｏｔ）を実施した。簡単に述べると、Ａ２ＤＲ１マウス由来の脾臓を単離し、単一細胞懸濁物を生成し、Ｅ６、Ｅ７または対照タンパク質（ヒトヘルペスウイルス５型（ＨＨＶ５）タンパク質ｐｐ６５）の２μｇ／ｍＬの重複ペプチドプールを含有する培地を用いて３７℃で一晩、５×１０^５個の脾細胞を再刺激した。全ての試料を三連で試験した。Ｅ６、Ｅ７およびｐｐ６５の重複ペプチドプールは、完全なタンパク質配列（１１アミノ酸（ａａ）の重複を有する１５量体）に及んでおり、ＪＰＴ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手した。

フローサイトメトリ
フローサイトメトリ染色を、全血、腫瘍および脾臓単一細胞懸濁液に対して行った。細胞外染色のためのモノクローナル抗体には、ＣＤ４５、ＣＤ８αＣＤ４、ＣＤ４４、ＣＤ８６、ＰＤ－１、ＮＫ１．１、ＣＤ１１ｂ、ＰＤ－Ｌ１、Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ＣＤ３、Ｆ４／８０、Ｇｒ－１、（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ２５および（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）が含まれた。細胞内染色には、ＩＦＮγ、Ｋｉ－６７（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＴＮＦα、Ｆｏｘｐ３（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、グランザイムＢ、ｉＮＯＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）およびＣＤ２０６（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）に対する抗体を使用した。フローサイトメトリ染色を以下のように実施した：生細胞を製造者の指示に従って生死判定用色素（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色した。Ｅ７特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞を、暗所において４℃で１０分間、Ｅ７_{４９－５７} Ｈ２－Ｄｂ拘束性デキストラマー（Ｉｍｍｕｄｅｘ）で染色した。細胞外標的を暗所において４℃で３０分間染色した。５％ＦＣＳおよび５ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＰＢＳを洗浄および染色緩衝液として使用した。ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびグランザイムＢの染色のために、試料をＣｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で固定し、透過処理し、ｉＮＯＳ、ＣＤ２０６、Ｋｉ６７およびＦｏｘｐ３染色のために、Ｆｏｘｐ３ Ｆｉｘａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を製造者の指示に従って使用して試料を固定し、透過処理した。全血を、ＢＤ ＦＡＣＳ溶解液（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用した赤血球溶解の前にＭＨＣ－デキストラマーで染色した。免疫細胞集団を生細胞およびシングレットでプレゲートすることによって定義し、以下のように決定した：ＮＫ細胞（ＣＤ４５^＋ＣＤ３^－ＮＫ１．１^＋）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ４５^＋ＣＤ８^＋）、Ｅ７_{４９－５７}特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞（ＣＤ４５^＋ＣＤ８^＋Ｅ７_{４９－５７}多量体^＋）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞（ＣＤ４５^＋ＣＤ４^＋）、Ｔｒｅｇ（ＣＤ４５^＋ＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋）、腫瘍関連マクロファージ（ＣＤ４５^＋ＣＤ１１ｂ^＋Ｆ４／８０^＋）。フローサイトメトリデータをＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩまたはＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａフローサイトメータ（両方ともＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＵＳＡ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏ ７．６．５またはＦｌｏｗＪｏ １０．４ソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）で分析した。

Ｆｌｕｉｄｉｇｍ ｑＰＣＲ発現分析
Ｔｉｓｓｕｅ Ｌｙｓｅｒ ＩＩ（Ｑｕｉａｇｅｎ）を用いて、凍結保存腫瘍から全ＲＮＡを抽出した。ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙミニスピンカラムを使用したＱＩＡｃｕｂｅでの最初のＲＮＡクリーンアップ後に古典的なフェノール／クロロホルム抽出によって単離した。ＴＡＫＡＲＡ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）ＲＴ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）を用いてＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。ｃＤＮＡを、ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓ（ＰＮ １００－２５９４ Ａ２）を用いるＦｌｕｉｄｉｇｍ（登録商標）Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ２８－Ｆａｓｔ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓに従って、Ｆｌｕｉｄｉｇｍ ＢｉｏＭａｒｋ ＨＤシステムに供した。６－カルボキシフルオレセインシグナルの検出、線形ベースライン補正、および自動Ｃｔ閾値法を、Ｃｔ値決定のために使用した。データ解析には、自社開発したＲソフトウェアパッケージ「ｑｐｃｒＰＡＮＥＬ」を用いた。生Ｃｔ値を読み込み、検出されなかったＣｔを全てのＣｔの０．９７５分位に設定した。ΔΔＣｔ値を記載されているように計算した（Ｐｆａｆｆｌ，Ｍ．Ｗ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２９，４５ｅ－４５（２００１））。ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）を参照遺伝子として使用して、ｉを遺伝子とし、ｊを試料インデックスとして各データ点のΔＣｔを計算した（ΔＣｔ_ｉ，ｊ＝Ｃｔ_ｉ，ｊ－Ｃｔ_{ＨＰＲＴ，ｊ}）。ΔＣｔ_ｉ，ｊを、ＨＰＲＴにおける対照試料の平均に対する各遺伝子についての対照試料の平均（χ）のΔＣｔ値で較正した（ΔＣｔ_{ｉ，ｃａｌｉｂ}＝χＣｔ_{ｉ，ｃｏｎｔｒｏｌ}－χＣｔ_{ＨＰＲＴ，ｃｏｎｔｒｏｌ}）。プライマー効率は等しいと仮定し、ΔΔＣｔ＝２－（－ΔＣｔ_ｉ，ｊ－ΔＣｔ_{ｉ，ｃａｌｉｂ}）として定義した。ΔΔＣｔ値のｌｏｇ_２倍数変化の差をプロットしてヒートマップを作成した（ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭ ７）。

次世代シーケンシング（ＮＧＳ）および遺伝子発現分析
凍結保存ＴＣ－１腫瘍（液体Ｎ_２）を、ＲＮＡ抽出のためにＴｉｓｓｕｅ Ｌｙｓｅｒ ＩＩ（Ｑｕｉａｇｅｎ）で乾式ホモジナイズした。ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙミニスピンカラムを使用したＱＩＡｃｕｂｅでのクリーンアップ工程後に古典的なフェノール／クロロホルム抽出によって単離した。ＴＡＫＡＲＡ ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（商標）ＲＴ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ）を用いてＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。ＮＧＳの手順は、Ｃａｓｔｌｅらによって詳細に記載された（Ｃａｓｔｌｅ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ １５，１９０（２０１４））。ＲＮＡ－ｓｅｑリードを、ＳＴＡＲアルゴリズム（バージョン２．４．２）（Ｄｏｂｉｎ Ａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２９（１），１５－２１（２０１３））を適用してマウスゲノムにマッピングした。転写物を定量化するために、Ｐｙｔｈｏｎパッケージ「ＨＴＳｅｑ ｗｉｔｈ ＵＣＳＣ」（Ｊｕｌｙ ２００７／ＮＣＢＩ３７）アノテーション（Ａｎｄｅｒｓ Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ３１（２），１６６－１６９（２０１５）；Ｈｓｕ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２２（９），１０３６－１０４６（２００６））を使用し、リードカウントを、マッピングされたリード１００万個当たりのキロベース当たりのリード数（ＲＰＫＭ）に対して正規化した（Ｍｏｒｔａｚａｖｉ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ ５（７），６２１－６２８（２００８））。正規化および差次的発現（ＤＥ）分析は、Ｒソフトウェアパッケージ「ＤＥＳｅｑ２」（Ｌｏｖｅ，Ｍ．Ｉ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ １５，５５０（２０１４））を用いて行った。差次的に発現された遺伝子を検出するために、０．０１の偽発見率（ＦＤＲ）および２のｌｏｇ_２倍数変化を選択した。

統計分析
個々の処置および対応する対照群の平均を、適切な場合は補正されたｐ値（Ｈｏｌｍ－Ｓｉｄａｋアプローチ）を使用して、対応のない両側スチューデントｔ検定によって比較した。時間と処置の両方を比較する場合は二元配置ＡＮＯＶＡを行い、有意（ｐ＜０．０５）である場合は、ボンフェローニの事後検定を用いて多重比較を行った。生存利益をログランク検定（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）で決定した。＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１。特に言及されない限り、結果は平均±ＳＥＭとして示す。全ての統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭ ７を用いて行った。

（実施例１）
Ｅ６およびＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸによる免疫化は、ヒト化ＨＬＡトランスジェニックＡ２ＤＲ１マウスにおいて強いＥ６およびＥ７抗原特異的Ｔ細胞応答を誘導する
ＨＰＶ１６ Ｅ６およびＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸの免疫原性を評価するために、ヒト化ＨＬＡトランスジェニックＡ２ＤＲ１マウスを使用した（Ｐａｊｏｔ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４（１１），３０６０－３０６９（２００４））。これらのマウスは、マウスＭＨＣクラスＩおよびＩＩ分子を欠いており、β２ｍおよびＩＡ β^ｂに二重のノックアウトを有するが、ヒトＨＬＡ－Ａ２．１およびＨＬＡ－ＤＲＲで安定にトランスフェクトされたヒトＭＨＣクラスＩおよびＩＩ分子を発現する。Ａ２ＤＲ１マウスにＥ６またはＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸを毎週ワクチン接種し、４回目の免疫化の７日後に脾臓Ｔ細胞を単離して、ＩＦＮγ ＥＬＩＳｐｏｔ（図１Ａ、Ｂ）においてワクチンコード抗原に対するＴ細胞反応性を評価した。Ｅ６ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種マウスは、ＨＰＶ１６ Ｅ６に対して強力かつ選択的なＴ細胞応答を示し（図１Ａ）、一方、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種マウス由来のＴ細胞は、ＨＰＶ１６ Ｅ７を選択的に認識する（図１Ｂ）。

まとめると、これらのデータは、ＨＰＶ１６ Ｅ６およびＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸの両方が、ヒト化ＨＬＡトランスジェニックＡ２ＤＲ１マウスにおいてワクチンコード抗原に対して内因性Ｔ細胞を効率的にプライミングし、拡大させることを示している。

（実施例２）
Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化は、進行性ＨＰＶ１６陽性腫瘍の完全寛解を媒介し、保護Ｔ細胞記憶を確立する
次に、本発明者らは、２つのＨＰＶ１６抗原陽性同系マウス腫瘍モデル－ＴＣ－１およびＣ３－においてＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ誘導Ｔ細胞の抗腫瘍効果を評価し、そのうちＴＣ－１はＣ３よりも高いＥ７発現レベルを有する（データは示していない）。

ＨＰＶ陽性悪性腫瘍は、典型的には、粘膜の口腔または生殖器領域の感染部位で生じる。これはＴ細胞輸送に特有の課題をもたらすので（Ｆ．，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２０１３）；Ｎｉｚａｒｄ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．８，１５２２１（２０１７））、本発明者らは最初に、同所性腫瘍状況でＨＰＶ１６ Ｅ７ワクチンを調べた。ＴＣ－１ ｌｕｃ腫瘍を舌の基部の粘膜下に移植した。単回のＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化の数日後、劇的な腫瘍退縮が全てのマウスで観察された（図２Ａ）。免疫化の９日後、ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスの同所性腫瘍病変は、白血球が高度に浸潤していることが認められた（図２Ｂ）。浸潤しているＣＤ８^＋Ｔ細胞の４２％までがＨＰＶ１６ Ｅ７_{４９－５７}特異的であった（図２Ｃ）。同所性腫瘍におけるＨＰＶ１６ Ｅ７_{４９－５７}特異的Ｔ細胞の大部分は、ホーミング関連インテグリンＣＤ４９αについて陽性であったが、血液中を循環する全ての抗原特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞はＣＤ４９α陰性であり（図２Ｄ）、粘膜部位に位置する腫瘍へのプライミングされたＴ細胞の効果的な輸送をさらに裏付けた。

次に、腫瘍細胞をマウスの側腹部に皮下（ｓ．ｃ．）移植し、マウスにＨＰＶ１６ Ｅ７または無関係な（ｉｒｒ．）抗原のいずれかをコードするＲＮＡ－ＬＰＸを繰り返し静脈内投与した。全ての対照処置マウスは進行性の腫瘍成長を経験し、腫瘍チャレンジ後３０～４０日以内に犠死させなければならなかった（図２Ｅ、Ｆおよび２Ｈ、Ｉ）。ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化は、全てのＴＣ－１担癌マウス（図２Ｅ、Ｆ）および９匹のＣ３担癌マウス中６匹（図２Ｈ、Ｉ）における腫瘍の迅速かつ完全な拒絶に関連していた。残りの３匹のＣ３担癌マウスは、最初は腫瘍縮小で応答したが、最終的には腫瘍成長が進行した（図２Ｈ、Ｉ）。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化に対する完全な抗腫瘍応答を有する全てのマウスは、観察期間全体にわたって腫瘍がないままであった（図Ｅ、Ｆ）。ＴＣ－１細胞で再チャレンジしたマウスは腫瘍がないままであり、ＨＰＶ１６ Ｅ７抗原に対する機能的記憶Ｔ細胞応答の優勢を示した（図２ＧおよびＪ）。

まとめると、これらのデータは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸが、腫瘍に浸潤し、粘膜ならびに皮下のＨＰＶ１６^＋ＴＣ－１およびＣ３腫瘍において抗腫瘍活性を遂行するＴ細胞を効率的にプライミングすることを示す。

（実施例３）
Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化マウスの腫瘍は、活発な免疫浸潤物、Ｅ７特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞ならびに炎症誘発性、細胞傷害性および低い免疫抑制性の構造を有する
ＴＣ－１およびＣ３担癌マウスの両方からの腫瘍浸潤細胞集団を、単回のＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化または無関係な（ＯＶＡ_{２５７－２６４}）ＲＮＡ－ＬＰＸによる対照処置の１１日後にフローサイトメトリによって分析した。両方の腫瘍モデルにおいて、免疫化は、初期白血球浸潤（図３Ａ）およびＥ７特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞の強力な拡大（図３Ｂ）に関連していた。対照処置マウスではなく免疫化したＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸの腫瘍浸潤ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、Ｅ７_{４９－５７}ペプチドを用いてエクスビボで刺激した場合、高レベルのＩＦＮγおよびグランザイムＢ（ＧｚｍＢ）を発現した（データは示していない）。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種マウスのＴＣ－１腫瘍は、より高い頻度の腫瘍浸潤ＣＤ８^＋およびＣＤ４^＋Ｔ細胞を有し（図３Ｃ）、これらはまた、Ｋｉ－６７染色によって測定されるように高度に増殖性であった（図３Ｄ）。Ｃ３腫瘍では、この所見はＣＤ８^＋Ｔ細胞集団について確認されたが、ＣＤ４^＋Ｔ細胞の頻度および増殖能はＥ７ワクチンによって影響されなかった（図３ＦおよびＧ）。両方の腫瘍モデルにおいて、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸは、ＮＫ細胞および腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の有意な増加に関連していた（図３ＣおよびＦ）。ＴＡＭは、炎症誘発性ｉＮＯＳ分泌Ｍ１様表現型の方にわずかに偏っていたが、抑制性ＣＤ２０６^＋Ｍ２様マクロファージの頻度は、対照ワクチン接種マウスと比較して低かった（図３ＥおよびＨ）。免疫化は、いずれのモデルにおいてもＴｒｅｇに影響を及ぼさなかった（図３ＣおよびＦ）。

免疫化マウスのバルク腫瘍試料の遺伝子発現分析により、細胞レベルでフローサイトメトリによって行った観察を確認し、さらに拡張した（図３Ｉ）。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化は、Ｔ細胞転写因子ＥＯＭＥＳおよびＴＢＸ２１（Ｔ－ｂｅｔ）、Ｔ細胞共刺激分子ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＩＣＯＳ、ならびにＣＣＬ５、ＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１２などのケモカインを、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（Ｈｉｃｋｍａｎ，Ｈ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４２，５２４－５３７（２０１５））およびＮＫ細胞（Ｗｅｎｄｅｌ，Ｍ．，Ｇａｌａｎｉ，Ｉ．Ｅ．，Ｓｕｒｉ－Ｐａｙｅｒ，Ｅ．＆Ｃｅｒｗｅｎｋａ，Ａ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６８，８４３７－８４４５（２００８））上に発現されることが公知のそれらの共受容体ＣＸＣＲ３と共に含む、ＣＤ８^＋Ｔ細胞の機能、誘引およびＴｈ１発生（Ｈｅｒｔｗｅｃｋ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１５，２７５６－２７７０（２０１６））についてのマーカの上方制御に関連していた。ＩＬ－１、ＩＬ－６、インターフェロンおよびＣＣＬ２などの炎症誘発性分子は、ＰＤ－１およびｉＮＯＳと同様に増加した。全てではないがほとんどのこれらのマーカは、両方の腫瘍モデルにおいて上方制御された。さらに、ワクチン接種マウスのＴＣ－１腫瘍は、ＣＤ８６、ＣＤ４０などのＤＣ活性化マーカ、Ｆ４／８０、ＣＣＬ５およびＧＭ－ＣＳＦなどの単球／マクロファージ動員のマーカ、ならびに免疫チェックポイント分子ＰＤ－Ｌ１およびＣＴＬＡ－４のより高い発現を示したが、Ｃ３腫瘍はこれらを示さなかった。

要約すると、ＨＰＶ１６ Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸによるワクチン接種は、炎症誘発性、細胞傷害性および低い免疫抑制性の構造への偏りと顕著に関連しており、これはＣ３腫瘍と比較してＴＣ－１でより著明であった。

（実施例４）
Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化は、抗ＰＤ－Ｌ１抵抗性腫瘍を応答性にすることによってチェックポイント遮断と相乗作用する
Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種は、腫瘍内Ｔ細胞応答を強く増加させ、全体的な炎症誘発性遺伝子発現変化を媒介した。強い炎症応答は、免疫学的バランスを保つために強い阻害応答によってしばしば逆調節される。したがって、本発明者らは、遺伝子発現分析によってＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置ＴＣ－１腫瘍における公知の阻害性受容体の発現を分析した（図４Ａ）。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種は、２４６３個の遺伝子の差次的発現（ＤＥ）を誘導し（ｌｏｇ_２倍数＞１、ＦＤＲ ０．０１）、多くの周知の阻害性Ｔ細胞受容体、例えばＬａｇ３、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、Ｐｄｃｄ１（ＰＤ－１）、Ｔｉｇｉｔ、Ｈａｖｃｒ２（Ｔｉｍ－３）または代謝物、例えばＩｄｏ１が強く上方制御された。

Ｃ３およびＴＣ－１腫瘍は、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１免疫チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）単独療法に抵抗性であることが公知である（Ｂａｄｏｕａｌ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２０１３）．ｄｏｉ：１０．１１５８／０００８－５４７２．ＣＡＮ－１２－２６０６；Ｒｉｃｅ，Ａ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．（２０１５）．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｇｔ．２０１５．４０；Ｗｅｉｒ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ（２０１６）．ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ４０４２５－０１６－０１６９－２）。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種は、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１の上方制御を含む腫瘍微小環境における一連の免疫学的に好ましい変化に関連するようであり（図３Ｉ、４Ａ）、これは、ＨＰＶ抗原発現ＴＣ－１腫瘍で観察されるＩＦＮγ誘導と相関する（図３Ｉ）。より強い炎症を起こし、排除されず、あまり抑制されていない局所環境と組み合わせたＰＤ－Ｌ１発現の増加は、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１遮断に対して抵抗性の腫瘍を感受性の腫瘍に変換することができると仮定して、本発明者らは、マウスにおいてワクチンと抗ＰＤ－Ｌ１（ａＰＤ－Ｌ１）との併用処置を試験した。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ単独療法の有効性にもかかわらず治療域を可能にするために、腫瘍を十分に進行した段階（腫瘍平均サイズ１２０ｍｍ^３）まで成長させ、ワクチンの単回用量のみを投与し、続いて３～４日ごとにａＰＤ－Ｌ１処置を行った。

ＴＣ－１モデルでは、ａＰＤ－Ｌ１単独で処置したマウスの大部分を２５日以内に犠死させなければならなかったが、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ単独療法では有意な生存利益が観察された（図４ＢおよびＣ）。ａＰＤ－Ｌ１の併用は、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ媒介抗腫瘍応答をさらに改善し、全体的生存を有意に増強した。初期の腫瘍増殖動態は、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン群とａＰＤ－Ｌ１併用療法群との間でほぼ同等であったので、ワクチンへのａＰＤ－Ｌ１の追加は腫瘍増殖をさらに防止した。さらに、抗ＰＤ－Ｌ１処置は、処置マウスの血液におけるＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ後のＥ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答の拡大を有意に増強した（図４Ｄ）。所見は、ＨＰＶ１６陽性癌患者が、腫瘍拒絶および腫瘍特異的Ｔ細胞応答を集合的に駆動するＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ａＰＤ－Ｌ１の提案された組合せから大きな利益を得ることができることを示唆する。

実施例５～９の材料および方法
マウス
雌Ｃ５７ＢＬ／６野生型マウスをＥｎｖｉｇｏから購入し、全ての実験を通して週齢が一致する（８～１０週）動物を使用した。マウスは、ＢｉｏＮＴｅｃｈ ＡＧにおいて動物研究に関する連邦および州の方針に従って飼育し、手順および実験群の大きさは動物福祉のために規制当局によって承認された。

腫瘍細胞株
マウスＴＣ－１腫瘍細胞は、ＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７を用いた不死化およびレトロウイルス形質導入による初代Ｃ５７ＢＬ／６肺細胞に由来し（Ｌｉｎ，Ｋ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ５６，２１－２６（１９９６））、Ｔ．Ｃ．Ｗｕ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）からのルシフェラーゼをトランスフェクトした変異体ＴＣ－１ ｌｕｃと共に得た。マウスＣ３腫瘍細胞株は、完全なＨＰＶ１６ゲノムを有するＣ５７ＢＬ／６胚細胞の不死化およびトランスフェクションによって以前に作製され（Ｆｅｌｔｋａｍｐ，Ｍ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２３，２２４２－２２４９（１９９３））、Ｓ．Ｈ．ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｕｒｇ（Ｌｅｉｄｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ）から好意で贈られたものであった。細胞の再認証ならびにマスターセルバンクおよびワーキングセルバンクの作製は、受領直後に行った。５継代から９継代までの細胞をインビボ腫瘍実験に使用した。腫瘍細胞の照射のために、定電圧Ｘ線源ＸＲＡＤ３２０（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｘ－Ｒａｙ Ｉｎｃ．）を使用した。

ＲＮＡ構築物およびインビトロ転写
抗原コードＲＮＡのインビトロ転写のためのプラスミド鋳型は、安定性およびタンパク質翻訳のために薬理学的に最適化された５'および３'ＵＴＲならびにポリ（Ａ）尾部を特徴とするｐＳＴ１－Ａ１２０およびｐＳＴ１－ＭＩＴＤベクターに標的配列をクローニングすることによって作製した（Ｈｏｌｔｋａｍｐ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０８，４００９－４０１７（２００６）；Ｋｒｅｉｔｅｒ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．：１９５０）１８０，３０９－３１８（２００８））。ｐＳＴ１－ＭＩＴＤは、ＭＨＣクラスＩおよびＩＩエピトープの提示を改善するために小胞体ならびにＭＨＣクラスＩ膜貫通および細胞質ドメインにルーティングするためのシグナル配列を特徴とする（Ｋｒｅｉｔｅｒ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．：１９５０）１８０，３０９－３１８（２００８））。以下の抗原をコードするベクターを使用した：Ｅ７（全長ＨＰＶ１６ Ｅ７をコードする）（Ｇｒｕｎｗｉｔｚ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８，ｅ１６２９２５９（２０１９））およびニワトリオボアルブミン（ＯＶＡ、Ｈ－２Ｋ^ｂ拘束性免疫優性エピトープＯＶＡ_{２５７－２６４}をコードする）（Ｋｒａｎｚ，Ｌ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５３４，３９６－４０１（２０１６））。全ての実験を通して、ＯＶＡ ＲＮＡを対照ＲＮＡとして使用した。抗原をコードするベクターをインビトロ転写し（ＩＶＴ）、以前に記載されているように（Ｋｕｈｎ，Ａ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ １７，９６１－９７１（２０１０））β－Ｓ－アンチリバースキャップアナログ（ＡＲＣＡ）でキャップした。

ＲＮＡ－ＬＰＸの調製
ＲＮＡ－リポプレックス（ＲＮＡ－ＬＰＸ）は、以前に記載されているように（Ｋｒａｎｚ，Ｌ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５３４，３９６－４０１（２０１６））、負に荷電したＩＶＴ ＲＮＡをカチオン性脂質ＤＯＴＭＡおよびヘルパー脂質ＤＯＰＥからなるカチオン性リポソームと複合体化することによって生成した。ＨＥＰＥＳ緩衝ＲＮＡ（１ｍｇ／ｍｌ^－１）をＨ_２Ｏおよび１．５Ｍ ＮａＣｌで希釈し、１５０ｍＭの最終ＮａＣｌ濃度で１．３：２の（＋）：（－）電荷比に達するようにリポソームを添加した。ＲＮＡ－ＬＰＸ製剤は、２００～２５０ｎｍの粒径、約０．２５の多分散指数および－２０～３０ｍＶのゼータ電位（ｍＶ）を有していた。

腫瘍モデルおよび治療
治療的腫瘍実験のために、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１×１０^５個のＴＣ－１またはＴＣ－１ ｌｕｃ腫瘍細胞および５×１０^５個のＣ３腫瘍細胞を右側腹部に皮下注射した。腫瘍成長を、３～４日ごとにノギスを用いて非盲検で測定し、腫瘍体積を（ａ^２×ｂ）／２（ａ、幅；ｂ、長さ）によって計算した。マウスを４０μｇのＥ７または対照（ＯＶＡ）ＲＮＡ－ＬＰＸで静脈内免疫化した。ワクチン接種スキームにおける矢印は免疫化を示す。マウスを、ＲＮＡ－ＬＰＸ免疫化の前にそれらの腫瘍サイズに従って無作為化した。定電圧Ｘ線源ＸＲＡＤ３２０（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｘ－Ｒａｙ Ｉｎｃ．）を腫瘍照射に使用し、０．４７Ｇｙ／分の線量率で、異なる線量で腫瘍を局所的に照射した。生物学的有効線量は、式

を使用して計算し、ｎは分割回数であり、ｄは分割当たりの線量であり、

は腫瘍固有の放射線感受性である（Ｇｏｕｇｈ，Ｍ．Ｊ．，Ｃｒｉｔｔｅｎｄｅｎ，Ｍ．Ｒ．＆Ｙｏｕｎｇ，Ｋ．Ｈ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ７，８４７－８４９（２０１５））。腫瘍照射をケタミン／キシラジン麻酔下で実施した。正常組織は、穴（直径１．５ｃｍ）を残す特注の鉛シールドを使用して遮蔽し、腫瘍組織のみの露出を可能にした。インビボでのＢｒｄＵ標識のために、ＢｒｄＵ塩基類似体を器官切除の２４時間前に１ｍｇ／マウスで腹腔内注射した（ＢｒｄＵ Ｆｌｏｗ Ｋｉｔ，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。低酸素プローブピモニダゾール（Ｈｙｐｏｘｙｐｒｏｂｅ Ｉｎｃ．）を器官切除の１時間前に１．２ｍｇ／マウスで静脈内注射した。腫瘍体積が１５００ｍｍ^３を超えた場合、または健康障害の徴候を示した場合、動物を安楽死させた。

いくつかの実験では、マウスに、ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種後２回、８０μｇのシスプラチン化学療法またはＰＢＳを腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。

組織の調製
腫瘍の単一細胞懸濁液を生成するために、マウス腫瘍解離キットおよびｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（商標）解離器（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して腫瘍を切断し、消化した。リンパ節の単一細胞懸濁液を生成するために、リンパ節を鉗子で圧迫し、１ｍｇ／ｍＬ^－１コラゲナーゼ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）および１０μｇ／ｍＬ^－１ ＤＮＡｓｅＩ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）と共にインキュベートした。腫瘍およびリンパ節の単一細胞懸濁液ならびに脾臓全体を、ＰＢＳですすぎながらシリンジのプランジャ端部を使用して７０μｍセルストレーナ（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）に通した。細胞を４６０ｇで６分間遠心分離し、赤血球を低張電解質液で５分間溶解した。ＣＤ８ ＴＩＬの単離のために、マウスＣＤ８（ＴＩＬ）ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を製造者の指示に従って使用して、標的細胞を磁気的に濃縮した。

フローサイトメトリ
フローサイトメトリ染色を、腫瘍、腫瘍排出リンパ節および脾臓単一細胞懸濁液ならびにＣＤ８ Ｔ細胞濃縮腫瘍単一細胞懸濁液に対して実施した。細胞外染色のためのモノクローナル抗体には、抗マウスＣＤ４５、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ４４、ＮＫ１．１、ＰＤ－Ｌ１、切断型カスパーゼ３、Ｑａ－１ｂ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ＰＤ－１、ＮＫＧ２ＡＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｔｉｍ－３、Ｆａｓ、Ｈ－２（パンＭＨＣクラスＩ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）およびＣＤ２５（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）が含まれた。細胞内染色のために、ＩＦＮγ、ＩＬ－２（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）およびＴＮＦα、Ｆｏｘｐ３（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）に対する抗体を使用した。フローサイトメトリ染色を以下のように実施した：生細胞を製造者の指示に従って生死判定用色素（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色した。Ｅ７特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞を、暗所において４℃で１０分間、Ｅ７_{４９－５７} Ｈ２－Ｄｂ拘束性デキストラマー（Ｉｍｍｕｄｅｘ）で染色した。細胞外標的を暗所において４℃で３０分間染色した。５％ＦＣＳおよび５ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＰＢＳを洗浄および染色緩衝液として使用した。ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＩＬ－２の染色のために、試料をＣｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で固定し、透過処理し、Ｆｏｘｐ３染色のために、Ｆｏｘｐ３ Ｆｉｘａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を製造者の指示に従って使用して試料を固定し、透過処理した。細胞内サイトカイン染色を以前に記載されているように実施し（Ｄｉｋｅｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃｌｉｆｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）１４９９，２２３－２３６（２０１７））、１０μｇ／ｍＬのブレフェルジンＡ（Ｓｉｇｍａ）の存在下に３７℃で５時間、ＣＤ８^＋Ｔ細胞を２μｇ／ｍＬのＥ７_{４９－５７}（ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ，Ｊｅｒｉｎｉ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）ペプチド負荷Ｃ５７ＢＬ／６ ＢＭＤＣで刺激した。インビボでのＢｒｄＵ標識および染色を、ＢＤインビボＢｒｄＵフローサイトメトリキットを製造者の指示に従って使用して実施した。免疫細胞集団を生細胞およびシングレットでプレゲートすることによって定義し、以下のように決定した：ＮＫ細胞（ＣＤ４５^＋ＮＫ１．１^＋）、ＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ４５^＋ＣＤ８^＋）、Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ４５^＋ＣＤ８^＋Ｅ７_{４９－５７}多量体^＋）、ＣＤ４ Ｔ細胞（ＣＤ４５^＋ＣＤ４^＋）、Ｔｒｅｇ（ＣＤ４５^＋ＣＤ４^＋Ｆｏｘｐ３^＋ＣＤ２５^＋）、腫瘍細胞（ＣＤ４５^－ＣＤ４４^＋）。フローサイトメトリデータをＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩまたはＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏ １０．４（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用して分析した。

免疫蛍光顕微鏡法
凍結保存腫瘍の８μｍ切片を４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中で１０分間固定し、０．１％トリトンを含有するトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）緩衝液中で透過処理し、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、５％マウス血清、５％ラット血清および０．０２％Ｎｏｎｉｄｅｎｔを添加したＤＰＢＳ中で１時間、暗所において室温でブロックした。ピモニダゾール－チオール付加物に対する蛍光標識抗体（Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｂｅ（商標）Ｒｅｄ５８４、Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｂｅ Ｉｎｃ．）を用いて４℃で一晩切片を染色し、続いてＨｏｅｃｈｓｔ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で核染色した。落射蛍光顕微鏡（Ａｘｉｏ Ｓｃａｎ．Ｚ１，Ｚｅｉｓｓ，Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して免疫蛍光画像を取得した。

統計分析およびデータ提示
単一処置群および対照群の平均を、対応のない両側スチューデントｔ検定によって比較した。３つ以上の実験群を比較する場合、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を行い、有意であると決定された場合（ｐ＜０．０５）、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定を行った。生存利益を、ログランク検定（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）を使用して決定した。＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１、＊＊＊ｐ≦０．００１。特に言及されない限り、結果は平均±ＳＥＭとして示す。全ての統計分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭ ８を用いて行った。

実施例９については、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭ ９を用いて統計分析を行った。腫瘍増殖分析のために、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を行い、有意であると決定された場合（ｐ＜０．０５）、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定を行った。

（実施例５）
ＬＲＴは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種と相乗作用して、確立されたＨＰＶ１６^＋腫瘍を抑制する
ＬＲＴとＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン形式との組合せを調べるために、マウスＨＰＶ１６ Ｅ６／Ｅ７^＋腫瘍モデルＴＣ－１において異なる線量の局所放射線療法（ＬＲＴ）（１．８Ｇｙ、７Ｇｙまたは１２Ｇｙ）を評価した。単回および後期投与のＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種は、腫瘍拒絶（図５Ａ２）およびＴＣ－１担癌マウスの生存（図５Ｂ）を有意に促進したが、ＴＣ－１腫瘍の大部分は再発した。対照的に、ＬＲＴ処置は腫瘍成長に対してわずかな効果があったが（図５Ａ１、Ｂ）、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチンと組み合わせた場合、試験した放射線量とは無関係に優れた治療効果を示した（図５Ａ２、Ｂ）。興味深いことに、この腫瘍モデルでは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸを高線量の１２ＧｙのＬＲＴと組み合わせた場合に最良の治療効果が達成され、マウスの１００％が腫瘍接種後１００日まで腫瘍を有していなかった（図５Ｂ）。並行して、Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の拡大をＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸの１７日後に血液中でモニターし、マウスに放射線照射したか否かにかかわらず等しいと判定し、細胞傷害性ＬＲＴと組み合わせた場合でもＲＮＡ－ＬＰＸ誘導性抗原特異的免疫応答の効率的なプライミングを示した（図５Ｃ）。次に、本発明者らは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴの同じ治療有効性が、生物学的に有効な用量を維持しながら、異なるＬＲＴレジメンで達成できるかどうかを検討した。１２ＧｙのＬＲＴを３×６Ｇｙに分割した場合（データは示していない）、同等の抗腫瘍効果および生存利益が観察され、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸとの相乗作用に達するためにＬＲＴ線量分割ではなく総線量の関連性を示した。

次いで、第２のＨＰＶ１６^＋マウス腫瘍モデルＣ３におけるＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴ併用の抗腫瘍有効性を試験した。ＴＣ－１と同様に、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸはＣ３担癌マウスの生存を有意に増強したが、１２ＧｙのＬＲＴもまた、Ｃ３腫瘍成長に対してわずかな効果しか有していなかった（図５Ｄ、Ｅ）。全てのＬＲＴ処置Ｃ３担癌マウスを腫瘍チャレンジ後７５日目までに犠死させなければならなかったが、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴの併用は、Ｃ３担癌マウスの有意な生存利益をもたらし（図５Ｄ）、完全奏効率を６０％に高めた（図５Ｅ）。ＨＰＶ１６^＋ＴＣ－１担癌マウスに関しては、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴの併用は、ＨＰＶ１６^＋Ｃ３腫瘍の優れた腫瘍拒絶を媒介し、他の全ての処置群を上回っていた。

（実施例６）
Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスの腫瘍はエフェクタ免疫細胞によって高度に浸潤される
Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴ併用後の優れた腫瘍拒絶の根底にある細胞効果を特徴付けるために、フローサイトメトリによってＴＣ－１腫瘍免疫浸潤物を分析した（図６）。対照群に関して単一療法の腫瘍成長曲線が分岐し始めた時点である、単回Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種の１２日後および１２ＧｙのＬＲＴの５日後に、ＴＣ－１腫瘍を切除したが、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴ療法下のマウスは、依然としてＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種マウスと同様の腫瘍サイズを示した（図６Ａ）。フローサイトメトリデータは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種がＣＤ４５^＋白血球の浸潤をベースライン（対照ＲＮＡ－ＬＰＸ）の１０％から７０％に増加させ、腫瘍細胞含有量を９０％から２０％に減少させることを示した（図６Ｂ）。ＬＲＴはまた、ＣＤ４５^＋白血球浸潤を媒介し、腫瘍細胞含有量の減少をもたらしたが、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチンよりも低い程度であった。さらに、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種マウスは、腫瘍ならびに処置マウスの脾臓およびリンパ節においてより高い割合の腫瘍内ＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ細胞（図６Ｃ）およびＥ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を示したが（図６Ｄ）、ＬＲＴ単独はこれらの標的集団をわずかに調節しただけであった。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴ処置マウスの免疫浸潤物は、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種マウスの免疫浸潤物と大部分重複していた（図６Ｂ、Ｃ、Ｄ）。腫瘍浸潤ＣＤ８ Ｔ細胞（ＣＤ８ ＴＩＬ）をＥ７ペプチド負荷ＢＭＤＣでインビトロ再刺激すると、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種マウス由来のＣＤ８ ＴＩＬは、ＴＣ－１腫瘍に放射線照射したか否かにかかわらず、最高レベルのＩＦＮγおよびＴＮＦαエフェクタサイトカインを分泌した（図６Ｅ）。

分析のこの初期時点で、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴ処置マウスで観察された免疫細胞浸潤に主に寄与するようであったが、ＬＲＴの併用は、観察された免疫学的効果を増大させなかった。

(実施例７)
ＬＲＴの併用は腫瘍細胞死を増強し、局所免疫抑制を減少させ、ワクチン誘導性ＣＤ８^＋Ｔ細胞増殖を促進する
浸潤性免疫細胞サブセットを特徴付けることに加えて、ＴＣ－１腫瘍細胞含有量およびそれらの表現型に対するＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴ併用の効果を検討した。細胞傷害性療法として、ＬＲＴは、ＴＣ－１腫瘍細胞数を３倍強力に減少させ（図７Ａ）、切断型カスパーゼ３（ＣＣ３^＋、図７Ｂ）および細胞死受容体Ｆａｓ（図７Ｃ）の発現を特徴とするアポトーシス腫瘍細胞の割合を増加させた。腫瘍細胞上の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ（図７Ｄ）、Ｔ細胞阻害性受容体ＰＤ－Ｌ１（図７Ｅ）、ならびにＴおよびＮＫ細胞阻害性自然免疫受容体Ｑａ－１^ｂ（図７Ｆ）の発現は、ＬＲＴによってわずかに調節されただけであった。一方、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種は、総腫瘍細胞含有量を変化させず（図７Ａ）、ＣＣ３^＋腫瘍細胞の割合（図７Ｂ）、および腫瘍細胞上のＦａｓの発現（図７Ｃ）をわずかしか増加させなかったが、腫瘍細胞上のＭＨＣクラスＩ（図７Ｄ）、ＰＤ－Ｌ１（図７Ｅ）およびより少ない程度でＱａ－１^ｂ（図７Ｆ）の発現を強く調節した。Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴ処置マウス由来のＴＣ－１腫瘍細胞は、腫瘍含有量（図７Ａ）およびＣＣ３^＋腫瘍細胞の割合（図７Ｂ）を除いて、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスの全ての特徴を共有していた。腫瘍細胞含有量は、ＬＲＴ単独療法後と同じように有意かつ強く減少し、アポトーシスを受けている腫瘍細胞より大きな割合と対合した（ＣＣ３^＋、図７ＡおよびＢ）。

抗原特異的Ｔ細胞応答中の放射線照射の影響をさらに特徴付けるために、事前に照射したＴＣ－１腫瘍細胞をＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種マウスの脾臓から単離したＣＤ８ Ｔ細胞と共培養するインビトロアッセイを実施し、腫瘍細胞ＭＨＣクラスＩ、ＰＤ－Ｌ１発現、切断型カスパーゼ３^＋腫瘍細胞の割合、ならびにＥ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞によるサイトカイン分泌を特徴付けた（データは示していない）。異なる線量のＬＲＴ（６Ｇｙおよび１２Ｇｙ）は、抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞による腫瘍細胞の認識および死滅についての重要なパラメータである、腫瘍細胞上のＭＨＣクラスＩおよびＰＤ－Ｌ１発現をわずかに上方制御した（データは示していない）。極めて対照的に、Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞との共培養は、放射線前処理とは無関係に、ＭＨＣクラスＩおよびＰＤ－Ｌ１発現を高度に上昇させ（データは示していない）、これは、インビボでも観察されたように、腫瘍細胞を感知するＩＦＮγのフィードバック機構であり得る（図７Ｄ、Ｅ）。ＭＨＣクラスＩおよびＰＤ－Ｌ１の同様の細胞外発現にもかかわらず、Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞による腫瘍細胞死滅（ＣＣ３^＋細胞）は、適用される放射線量と共に増加した（データは示していない）。さらに、Ｅ７特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞は、放射線照射腫瘍細胞と共培養した場合、より多くのＩＦＮγを分泌し、Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞による放射線照射ＴＣ－１腫瘍細胞のより良好な認識を主張する（線量≧４Ｇｙ、データは示していない）。これらのインビトロデータは、放射線が腫瘍細胞を抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞媒介死滅に対してより感受性にするという証拠を裏付ける。

腫瘍細胞表現型に加えて、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ誘導性ＣＤ８ Ｔ細胞が、免疫抑制に関与し、急速に成長する腫瘍における異常かつ非生理的学的な脈管構造に関連する一般的に記載されている因子である腫瘍低酸素（Ｌｉ，Ｙ．，Ｐａｔｅｌ，Ｓ．Ｐ．，Ｒｏｓｚｉｋ，Ｊ．＆Ｑｉｎ，Ｙ．，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９，１５９１（２０１８））などの変化した局所腫瘍微小環境を感知するかどうかを調べたいと考えた。そこで、器官切除の前に、低酸素プローブピモニダゾール（Ｖａｒｉａ，Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ ｏｎｃｏｌｏｇｙ ７１，２７０－２７７（１９９８））を、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸまたはＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴで処置したＴＣ－１担癌マウスに静脈内注射し、低酸素腫瘍領域を組織学によって分析した。併用したＬＲＴは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスにおいてＴＣ－１腫瘍低酸素を有意かつ強力に減少させ（図７Ｇ）、興味深いことに、ＣＤ４ ＴＩＬではなくＣＤ８ ＴＩＬにおける塩基類似体ブロムデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）のより高い取り込みによって示されるように、この処置群におけるＣＤ８ ＴＩＬの最も高い増殖率と関連していた（図７Ｈ）。

本発明者らの観察に基づいて、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種は、低免疫浸潤および低温のＴＣ－１腫瘍を免疫学的に高温にした（図６Ｂ、Ｃ、Ｄ）が、併用したＬＲＴは腫瘍細胞含有量を減少させ、さらに腫瘍内低酸素を減少させ（図７Ａ、Ｇ）、これはＣＤ８の増殖能を促進するようであり（図７Ｈ）、後期腫瘍拒絶を可能にした。

（実施例８）
ＬＲＴはＥ７特異的ＣＤ８^＋Ｔ細胞応答をより強力かつ持続性にする
以前、本発明者らは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種によって生成されたＥ７特異的ＣＤ８ ＴＩＬが、腫瘍が放射線照射されたか否かにかかわらず、ＩＦＮγおよびＴＮＦαエフェクタサイトカインの同じ分泌レベルを示すことを観察し（図６Ｅ、この初期時点で、抗腫瘍効果は類似していた（図６Ａ）。

併用したＬＲＴが後の時点で腫瘍拒絶を増強したので、本発明者らは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置マウスおよびＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴ処置マウスの腫瘍成長曲線が、ＬＲＴの９日後に生じたように分岐したときに、Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の機能的パラメータを特徴付けることにした（図８Ａ）。フローサイトメトリデータは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸおよびＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴ処置ＴＣ－１担癌マウスが、同じ頻度のＥ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（図８Ｂ）ならびに阻害受容体Ｔｉｍ－３（図８Ｃ）およびＰＤ－１（図８Ｄ）の同様の発現を示したが、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ／ＬＲＴ処置マウスから単離されたＣＤ８ ＴＩＬにおいてＴ細胞阻害性受容体ＮＫＧ２ＡＢのより高い発現が検出可能であった（図８Ｅ）ことを示した。重要なことに、併用療法で処置されたマウス由来のＥ７特異的ＣＤ８ ＴＩＬは、抗原再刺激時に、より多くのＩＦＮγおよびＴＮＦαエフェクタサイトカイン（図８Ｆ）ならびにＩＬ－２（図８Ｇ）を有意に分泌し、腫瘍拒絶中のそれらのより高い生物学的効果と相関するワクチン誘導性Ｅ７特異的ＣＤ８ Ｔ細胞のより高いエフェクタ機能および活性化状態を示した。このより高い生物学的効果は、腫瘍内容物の減少（データは示していない）およびより高いレベルのアポトーシス腫瘍細胞（ＣＣ３^＋、データは示していない）と対合したが、ＭＨＣクラスＩ、ＰＤ－Ｌ１およびＦａｓ発現などの腫瘍細胞認識の他の免疫学的パラメータは変化しないままであった（データは示していない）。

全体として、データは、ＬＲＴがＴＭＥ内の腫瘍細胞含有量および免疫抑制因子を減少させ、したがって、ＨＰＶ１６^＋腫瘍の拒絶を増強するためにワクチン誘導性Ｅ７特異的ＣＤ８ ＴＩＬ応答をより強力かつ持続性にしたことを示す。

（実施例９）
Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸおよびシスプラチン化学療法は、相乗作用してＨＰＶ１６^＋ＴＣ－１腫瘍を拒絶する
化学療法はＨＮＳＣＣ癌患者における標準治療の一部であるので（ＰＭＩＤ：２４２７３４１６）、ＨＰＶ^＋ＨＮＳＣＣ患者のための潜在的な将来の治療レジメンとして、ＨＰＶ１６^＋ＴＣ－１担癌Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいてシスプラチン化学療法－ＨＮＳＣＣ患者において最も一般的に使用される化学療法－と新規Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチンとの組合せを評価した。ＴＣ－１担癌マウスを１６日目にＥ７ ＲＮＡ－ＬＰＸで処置し、２２および２８日目にシスプラチン化学療法の２回の投与を行った（図９）。対照マウスを、ＴＣ－１腫瘍によって発現されないＯＶＡをコードする対照ＲＮＡ－ＬＰＸ、またはシスプラチンと組み合わせた対照ＲＮＡ－ＬＰＸで処置した。全ての対照ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種マウスを４３日目までに犠死させなければならなかったが、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸ処置は完全奏効率を高め（図９Ａ）、腫瘍成長を有意に遅らせ（図９Ｂ）、生存利益を誘導した（図９Ｃ）。シスプラチン化学療法は、対照ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種マウスにおいて腫瘍成長をわずかに改善しただけであった（図９Ａ、Ｂ）が、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチンの治療効果を強力かつ有意に増強し、１２匹のマウスのうち１０匹は腫瘍を有していなかった（図９Ａ）。さらに、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸとシスプラチン化学療法の併用は、腫瘍成長を有意に減少させ（図９Ｂ）、単独療法処置群のいずれにおいても観察されなかった強い生存利益を媒介した（図９Ｃ）。まとめると、シスプラチンは、Ｅ７ ＲＮＡ－ＬＰＸワクチン接種の抗腫瘍効果を増強する。したがって、ＲＮＡ－ＬＰＸワクチンおよび白金ベースの化学療法は、改善された癌治療のための相乗的な組合せパートナーとして機能することができる。

Claims (89)

1. 少なくとも１つのＲＮＡを含む組成物または医薬製剤であって、前記少なくとも１つのＲＮＡが、
   （ｉ）ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６タンパク質、その免疫原性変異体、または前記ＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列；および
   （ｉｉ）ＨＰＶ Ｅ７タンパク質、その免疫原性変異体、または前記ＨＰＶ Ｅ７タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列
   をコードする、組成物または医薬製剤。
2. 前記（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列のそれぞれが、別個のＲＮＡによってコードされている、請求項１に記載の組成物または医薬製剤。
3. （ｉ）前記（ｉ）のアミノ酸配列をコードする前記ＲＮＡが、配列番号２のヌクレオチド配列、または配列番号２のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む；および／または
   （ｉｉ）前記（ｉ）のアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
   請求項１または２に記載の組成物または医薬製剤。
4. （ｉ）前記（ｉｉ）のアミノ酸配列をコードする前記ＲＮＡが、配列番号４のヌクレオチド配列、または配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む；および／または
   （ｉｉ）前記（ｉｉ）のアミノ酸配列が、配列番号３のアミノ酸配列、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
   請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
5. （ｉ）または（ｉｉ）の少なくとも１つのアミノ酸配列が、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
6. （ｉ）または（ｉｉ）の各アミノ酸配列が、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
7. 抗原プロセシングおよび／または提示を増強する前記アミノ酸配列が、ＭＨＣ分子、好ましくはＭＨＣクラスＩ分子の膜貫通および細胞質ドメインに対応するアミノ酸配列を含む、請求項５または６に記載の組成物または医薬製剤。
8. 抗原プロセシングおよび／または提示を増強する前記アミノ酸配列が、配列番号２６のアミノ酸配列、または配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５～７のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
9. （ｉ）または（ｉｉ）の少なくとも１つのアミノ酸配列が、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列を含み、および／または少なくとも１つのＲＮＡが、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡと同時投与される、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
10. （ｉ）または（ｉｉ）の各アミノ酸配列が、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列を含み、および／または各ＲＮＡが、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡと同時投与される、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
11. 免疫寛容を破壊する前記アミノ酸配列が、ヘルパーエピトープ、好ましくは破傷風トキソイド由来のヘルパーエピトープを含む、請求項９または１０に記載の組成物または医薬製剤。
12. 免疫寛容を破壊する前記アミノ酸配列が、配列番号２７のアミノ酸配列、または配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９～１１のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
13. 前記（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列の少なくとも１つが、コドン最適化されたコード配列、および／またはＧ／Ｃ含有量が野生型コード配列と比較して増加しているコード配列によってコードされ、前記コドン最適化および／または前記Ｇ／Ｃ含有量の増加が、好ましくは前記コードされたアミノ酸配列の配列を変化させない、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
14. 前記（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列のそれぞれが、コドン最適化されたコード配列、および／またはＧ／Ｃ含有量が野生型コード配列と比較して増加しているコード配列によってコードされ、前記コドン最適化および／または前記Ｇ／Ｃ含有量の増加が、好ましくは前記コードされたアミノ酸配列の配列を変化させない、請求項１～１３のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
15. 少なくとも１つのＲＮＡが５'キャップｍ_２ ^{７，２'－Ｏ}Ｇｐｐ_ｓｐ（５'）Ｇを含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
16. 各ＲＮＡが５'キャップｍ_２ ^{７，２'－Ｏ}Ｇｐｐ_ｓｐ（５'）Ｇを含む、請求項１～１５いずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
17. 少なくとも１つのＲＮＡが、配列番号３０のヌクレオチド配列、または配列番号３０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む５'ＵＴＲを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
18. 各ＲＮＡが、配列番号３０のヌクレオチド配列、または配列番号３０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む５'ＵＴＲを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
19. 少なくとも１つのＲＮＡが、配列番号３１のヌクレオチド配列、または配列番号３１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む３'ＵＴＲを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
20. 各ＲＮＡが、配列番号３１のヌクレオチド配列、または配列番号３１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む３'ＵＴＲを含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
21. 少なくとも１つのＲＮＡがポリＡ配列を含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
22. 各ＲＮＡがポリＡ配列を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
23. 前記ポリＡ配列が少なくとも１００個のヌクレオチドを含む、請求項２１または２２に記載の組成物または医薬製剤。
24. 前記ポリＡ配列が、配列番号３２のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる、請求項２１～２３のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
25. 前記ＲＮＡが、液体として製剤化されているか、固体として製剤化されているか、またはそれらの組合せである、請求項１～２４のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
26. 前記ＲＮＡが注射用に製剤化されている、請求項１～２５のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
27. 前記ＲＮＡが静脈内投与用に製剤化されている、請求項１～２６のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
28. 前記ＲＮＡがリポプレックス粒子として製剤化されているかまたは製剤化されることになっている、請求項１～２７のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
29. 前記ＲＮＡリポプレックス粒子が、前記ＲＮＡをリポソームと混合することによって得られる、請求項２８に記載の組成物または医薬製剤。
30. 免疫チェックポイント阻害剤をさらに含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
31. 前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１阻害剤およびＰＤ－Ｌ１阻害剤から選択される、請求項３０に記載の組成物または医薬製剤。
32. 前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体から選択される、請求項３０または３１に記載の組成物または医薬製剤。
33. 前記免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－１抗体である、請求項３０～３２のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
34. 前記抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ；ＭＫ－３４７５）、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ；ＢＭＳ－９３６５５８）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、セミプリマブ（ＬＩＢＴＡＹＯ、ＲＥＧＮ２８１０）、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２）、セトレリマブ（ＪＮＪ ６３７２３２８３）、トリパリマブ（ＪＳ００１）、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫ－２６６１３８０）、ＰＦ－０６８０１５９１、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、ＡＢＢＶ－１８１、ＢＩ ７５４０９１、またはＳＨＲ－１２１０である、請求項３３に記載の組成物または医薬製剤。
35. 前記免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項３０～３４のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
36. 前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ；ＲＧ７４４６；ＭＰＤＬ３２８０Ａ；Ｒ０５５４１２６７）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９、アベルマブ（バベンチオ）、ロダポリマブ（ＬＹ３３０００５４）、ＣＸ－０７２（Ｐｒｏｃｌａｉｍ－ＣＸ－０７２）、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、またはＭＤＸ－１１０５である、請求項３５に記載の組成物または医薬製剤。
37. 白金化合物をさらに含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
38. 前記白金化合物がシスプラチンを含む、請求項３７に記載の組成物または医薬製剤。
39. 免疫チェックポイント阻害剤および白金化合物を含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
40. 医薬組成物である、請求項１～３９のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
41. 前記医薬組成物が、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤および／または賦形剤をさらに含む、請求項４０に記載の組成物または医薬製剤。
42. 前記医薬製剤がキットである、請求項１～３９のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
43. 前記ＲＮＡおよび任意で前記免疫チェックポイント阻害剤が別々のバイアル中にある、請求項４２に記載の組成物または医薬製剤。
44. ＨＰＶ陽性癌を治療または予防するための前記ＲＮＡならびに任意で前記免疫チェックポイント阻害剤および／または前記白金化合物の使用説明書をさらに含む、請求項４２または４３に記載の組成物または医薬製剤。
45. 医薬用途のための、請求項１～４４のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
46. 前記医薬用途が、疾患または障害の治療的または予防的処置を含む、請求項４５に記載の組成物または医薬製剤。
47. 疾患または障害の前記治療的または予防的処置が、ＨＰＶ陽性癌を治療または予防することを含む、請求項４６に記載の組成物または医薬製剤。
48. ヒトへの投与用である、請求項１～４７のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
49. 疾患または障害の前記治療的または予防的処置が、放射線療法、好ましくは局所放射線療法を投与することをさらに含む、請求項４６～４８のいずれか一項に記載の組成物または医薬製剤。
50. 対象におけるＨＰＶ陽性癌を治療する方法であって、少なくとも１つのＲＮＡを前記対象に投与することを含み、ここで、前記少なくとも１つのＲＮＡが、
    （ｉ）ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｅ６タンパク質、その免疫原性変異体、または前記ＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列；および
    （ｉｉ）ＨＰＶ Ｅ７タンパク質、その免疫原性変異体、または前記ＨＰＶ Ｅ６タンパク質もしくはその免疫原性変異体の免疫原性断片を含むアミノ酸配列
    をコードする、方法。
51. 前記（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列のそれぞれが、別個のＲＮＡによってコードされている、請求項５０に記載の方法。
52. （ｉ）前記（ｉ）のアミノ酸配列をコードする前記ＲＮＡが、配列番号２のヌクレオチド配列、または配列番号２のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む；および／または
    （ｉｉ）前記（ｉ）のアミノ酸配列が、配列番号１のアミノ酸配列、または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
    請求項５０または５１に記載の方法。
53. （ｉ）前記（ｉｉ）のアミノ酸配列をコードする前記ＲＮＡが、配列番号４のヌクレオチド配列、または配列番号４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む；および／または
    （ｉｉ）前記（ｉｉ）のアミノ酸配列が、配列番号３のアミノ酸配列、または配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
    請求項５０～５２のいずれか一項に記載の方法。
54. （ｉ）または（ｉｉ）の少なくとも１つのアミノ酸配列が、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列を含む、請求項５０～５３のいずれか一項に記載の方法。
55. （ｉ）または（ｉｉ）の各アミノ酸配列が、抗原プロセシングおよび／または提示を増強するアミノ酸配列を含む、請求項５０～５４のいずれか一項に記載の方法。
56. 抗原プロセシングおよび／または提示を増強する前記アミノ酸配列が、ＭＨＣ分子、好ましくはＭＨＣクラスＩ分子の膜貫通および細胞質ドメインに対応するアミノ酸配列を含む、請求項５４または５５に記載の方法。
57. 抗原プロセシングおよび／または提示を増強する前記アミノ酸配列が、配列番号２６のアミノ酸配列、または配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５４～５６のいずれか一項に記載の方法。
58. （ｉ）または（ｉｉ）の少なくとも１つのアミノ酸配列が、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列を含み、および／または少なくとも１つのＲＮＡが、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡと同時投与される、請求項５０～５７のいずれか一項に記載の方法。
59. （ｉ）または（ｉｉ）の各アミノ酸配列が、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列を含み、および／または各ＲＮＡが、免疫寛容を破壊するアミノ酸配列をコードするＲＮＡと同時投与される、請求項５０～５８のいずれか一項に記載の方法。
60. 免疫寛容を破壊する前記アミノ酸配列が、ヘルパーエピトープ、好ましくは破傷風トキソイド由来のヘルパーエピトープを含む、請求項５８または５９に記載の方法。
61. 免疫寛容を破壊する前記アミノ酸配列が、配列番号２７のアミノ酸配列、または配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５８～６０のいずれか一項に記載の方法。
62. 前記（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列の少なくとも１つが、コドン最適化されたコード配列、および／またはＧ／Ｃ含有量が野生型コード配列と比較して増加しているコード配列によってコードされ、前記コドン最適化および／または前記Ｇ／Ｃ含有量の増加が、好ましくは前記コードされたアミノ酸配列の配列を変化させない、請求項５０～６１のいずれか一項に記載の方法。
63. 前記（ｉ）または（ｉｉ）のアミノ酸配列のそれぞれが、コドン最適化されたコード配列、および／またはＧ／Ｃ含有量が野生型コード配列と比較して増加しているコード配列によってコードされ、前記コドン最適化および／または前記Ｇ／Ｃ含有量の増加が、好ましくは前記コードされたアミノ酸配列の配列を変化させない、請求項５０～６２のいずれか一項に記載の方法。
64. 少なくとも１つのＲＮＡが５'キャップｍ_２ ^{７，２'－Ｏ}Ｇｐｐ_ｓｐ（５'）Ｇを含む、請求項５０～６３のいずれか一項に記載の方法。
65. 各ＲＮＡが５'キャップｍ_２ ^{７，２'－Ｏ}Ｇｐｐ_ｓｐ（５'）Ｇを含む、請求項５０～６４のいずれか一項に記載の方法。
66. 少なくとも１つのＲＮＡが、配列番号３０のヌクレオチド配列、または配列番号３０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む５'ＵＴＲを含む、請求項５０～６５のいずれか一項に記載の方法。
67. 各ＲＮＡが、配列番号３０のヌクレオチド配列、または配列番号３０のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む５'ＵＴＲを含む、請求項５０～６６のいずれか一項に記載の方法。
68. 少なくとも１つのＲＮＡが、配列番号３１のヌクレオチド配列、または配列番号３１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む３'ＵＴＲを含む、請求項５０～６７のいずれか一項に記載の方法。
69. 各ＲＮＡが、配列番号３１のヌクレオチド配列、または配列番号３１のヌクレオチド配列と少なくとも９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む３'ＵＴＲを含む、請求項５０～６８のいずれか一項に記載の方法。
70. 少なくとも１つのＲＮＡがポリＡ配列を含む、請求項５０～６９のいずれか一項に記載の方法。
71. 各ＲＮＡがポリＡ配列を含む、請求項５０～７０のいずれか一項に記載の方法。
72. 前記ポリＡ配列が少なくとも１００個のヌクレオチドを含む、請求項７０または７１に記載の方法。
73. 前記ポリＡ配列が、配列番号３２のヌクレオチド配列を含むかまたはそれからなる、請求項７０～７２のいずれか一項に記載の方法。
74. 前記ＲＮＡが注射によって投与される、請求項５０～７３のいずれか一項に記載の方法。
75. 前記ＲＮＡが静脈内投与によって投与される、請求項５０～７４のいずれか一項に記載の方法。
76. 前記ＲＮＡがリポプレックス粒子として製剤化される、請求項５０～７５のいずれか一項に記載の方法。
77. 前記ＲＮＡリポプレックス粒子が、前記ＲＮＡをリポソームと混合することによって得られる、請求項７６のいずれか一項に記載の方法。
78. 前記対象に免疫チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、請求項５０～７７のいずれか一項に記載の方法。
79. 前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ－１阻害剤およびＰＤ－Ｌ１阻害剤から選択される、請求項７８に記載の方法。
80. 前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体および抗ＰＤ－Ｌ１抗体から選択される、請求項７８または７９に記載の方法。
81. 前記免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－１抗体である、請求項７８～８０のいずれか一項に記載の方法。
82. 前記抗ＰＤ－１抗体が、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ；ＭＫ－３４７５）、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ；ＢＭＳ－９３６５５８）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１）、セミプリマブ（ＬＩＢＴＡＹＯ、ＲＥＧＮ２８１０）、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２）、セトレリマブ（ＪＮＪ ６３７２３２８３）、トリパリマブ（ＪＳ００１）、ＡＭＰ－２２４（ＧＳＫ－２６６１３８０）、ＰＦ－０６８０１５９１、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、ＡＢＢＶ－１８１、ＢＩ ７５４０９１、またはＳＨＲ－１２１０である、請求項８１に記載の方法。
83. 前記免疫チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項７８～８２のいずれか一項に記載の方法。
84. 前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ；ＲＧ７４４６；ＭＰＤＬ３２８０Ａ；Ｒ０５５４１２６７）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９、アベルマブ（バベンチオ）、ロダポリマブ（ＬＹ３３０００５４）、ＣＸ－０７２（Ｐｒｏｃｌａｉｍ－ＣＸ－０７２）、ＦＡＺ０５３、ＫＮ０３５、またはＭＤＸ－１１０５である、請求項８３に記載の方法。
85. 前記対象に白金化合物を投与することをさらに含む、請求項５０～８４のいずれか一項に記載の方法。
86. 前記白金化合物がシスプラチンを含む、請求項８５に記載の方法。
87. 前記対象に免疫チェックポイント阻害剤および白金化合物を投与することを含む、請求項５０～８６のいずれか一項に記載の方法。
88. 前記対象がヒトである、請求項５０～８７のいずれか一項に記載の方法。
89. 前記対象に放射線療法、好ましくは局所放射線療法を投与することをさらに含む、請求項５０～８８のいずれか一項に記載の方法。

Images