CN110023338A - 用于与抗pd-l1抗体组合的抗tim-3抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及抗体，所述抗体结合人含T细胞免疫球蛋白‑和粘蛋白‑结构域蛋白‑3(Tim‑3)，并且可用于与抗人PD‑L1抗体、化疗和电离辐射组合用于治疗实体和血液肿瘤。

Description

用于与抗PD-L1抗体组合的抗TIM-3抗体
本发明处于医药领域中。具体地，本发明涉及可以与针对人PD-L1的抗体组合的针对人含T细胞免疫球蛋白-和粘蛋白-结构域蛋白-3(Tim-3)的抗体，包含此类抗人Tim-3抗体或抗人PD-L1抗体的组合物，以及使用此类抗人Tim-3抗体与抗人PD-L1抗体的组合单独或与化疗、电离辐射和其他癌症治疗剂进一步组合用于治疗实体和血液肿瘤的方法。
肿瘤细胞通过多种机制逃避免疫系统的检测和消除，其中一些机制包括操纵免疫检查点途径。免疫检查点途径用于自身耐受性维持和T细胞活化的调节中，但癌细胞可以操纵这些途径以延长肿瘤存活。PD-1/人程序性细胞死亡1配体1(PD-L1)途径是一种这种免疫检查点。人PD-1在T细胞上表达，并且已显示PD-L1或PD-L2与PD-1的结合抑制T细胞增殖和细胞因子产生。此外，已知一些肿瘤表达PD-L1和PD-L2，并且这种表达可以有助于抑制肿瘤内免疫应答。
除了PD-1/PD-L1途径以外，识别肿瘤抗原的T细胞还可以表达其他检查点受体，诸如Tim-3。具体而言，表达Tim-3的T细胞可以表现出特征在于细胞毒性功能、效应细胞因子产生和增殖受损的耗尽表型。在这方面，已经显示抗Tim-3抗体可以在一些鼠癌模型中恢复抗肿瘤免疫。此外，也已显示发展对抗PD-1治疗的适应性抗性的一些患者展现在其T细胞上的Tim-3的上调。
针对人Tim-3的抗体是已知的。WO15117002中描述了针对人Tim-3的人源化抗体。MBG453是一种抗人Tim-3抗体，目前也作为单一药剂和与抗人PD-1抗体组合在人临床试验中进行测试。然而，没有靶向Tim-3的抗体被批准用于人类中的治疗用途，并且当与抗人PD-L1抗体组合时，也没有显示任何抗人Tim-3抗体展现增强的效力。因此，仍然需要可以与抗人PD-L1抗体以及用于治疗人类癌症的其他疗法组合的抗人Tim-3抗体。
已显示Tim-3 (SEQ ID NO:1)与半乳糖凝集素-9(SEQ ID NO:15)、磷脂酰丝氨酸(C13H24NO10P)、高迁移率组Box 1(HMGB1)和癌胚抗原细胞粘附分子1(CEACAM1)(SEQ ID NO:14)相互作用。因为所有上述Tim-3配体不是Tim-3的独有配体，所以需要提供差异性阻断所述配体活性的治疗性抗Tim-3抗体，因为这些配体可独立于Tim-3调节免疫系统。这种策略可以提供替代方式以更特异性地调节Tim-3活性，允许为患者提供定制的基于免疫肿瘤学的疗法。此外，此类抗Tim-3抗体可以提供与抗人PD-L1抗体的组合疗法的选项。因此，仍然还需要提供这样的抗体，其结合人Tim-3并抑制Tim-3与一些Tim-3的配体(而不是其他配体)相互作用，并且其可以与抗人PD-L1抗体组合。
本文所述的抗人Tim-3抗体可以阻断人Tim-3 (SEQ ID NO:1)结合人半乳糖凝集素-9 (SEQ ID NO:15)和磷脂酰丝氨酸，而同时不阻断人Tim-3和人CEACAM1 (SEQ ID NO:14)的结合，并且可以与抗人PD-L1抗体组合用于治疗癌症。
尽管用于癌症免疫疗法的靶向PD-L1 (SEQ ID NO:16)的抗体已被证明对一些癌症有效，但一些癌症随着时间推移变得对PD-L1疗法不太敏感或根本不响应。在一些实施方案中，本发明提供了抗人Tim-3抗体，其可以施用于在抗人PD-L1抗体疗法下已经进展或正在进展的患者。在一些实施方案中，本发明提供了抗人Tim-3抗体，其可以与抗人PD-L1抗体组合施用于先前未接受抗人PD-L1抗体疗法的患者。
本发明包括抗人Tim-3 (SEQ ID NO:1)抗体，其包含分别由SEQ ID NO:2、3、4、5、6和7的氨基酸序列组成的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3；具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区；和/或具有SEQ IDNO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于与抗人PD-L1抗体同时、分开或依次组合。
已知的抗人PD-L1抗体的非限制性实例包括阿特珠单抗(atezolizumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)、阿维鲁单抗(avelumab)和BMS-936559。应认识到，如本文所使用的阿特珠单抗、德瓦鲁单抗、阿维鲁单抗和BMS-936559可以使用各种细胞系并使用各种制造方法制备，并且因此可表现出一些差异。阿特珠单抗是包含具有SEQ ID NO:29的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链的抗体。德瓦鲁单抗是包含具有SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链的抗体。阿维鲁单抗是包含具有SEQ ID NO:33的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链的抗体。BMS-936559是抗体，优选完全人IgG4抗体，其包含具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)和具有SEQ ID NO:35的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)。
其他抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体的非限制性实例包括抗人PD-L1抗体，其包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQID NO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ IDNO:7的氨基酸序列的LCDR3。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ IDNO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR3；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ IDNO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR3；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中抗人PD-L1抗体包含：具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、食道癌、软组织肉瘤或肝癌。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是黑色素瘤。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是肺癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是黑色素瘤。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述肺癌是非小细胞肺癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是头颈癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ IDNO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是结肠直肠癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ IDNO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是胰腺癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是胃癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是肾癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是膀胱癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是前列腺癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是乳腺癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ IDNO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是卵巢癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是食道癌。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是软组织肉瘤。治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是肝癌。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与电离辐射和/或一种或多种化疗剂同时、分开或依次组合施用。
治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链；其中抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与电离辐射和/或一种或多种化疗剂同时、分开或依次组合施用。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQID NO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ IDNO:7的氨基酸序列的LCDR3。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQID NO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ IDNO:7的氨基酸序列的LCDR3；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQID NO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ IDNO:7的氨基酸序列的LCDR3；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的至少一种：(a)具有SEQID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区；其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、食道癌、软组织肉瘤或肝癌。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是黑色素瘤。本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是肺癌。本发明的抗人Tim-3(SEQ IDNO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是黑色素瘤。本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述肺癌是非小细胞肺癌。本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ IDNO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是头颈癌。本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是结肠直肠癌。本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是胰腺癌。本发明的抗人Tim-3(SEQID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是胃癌。本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是肾癌。本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是膀胱癌。本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是前列腺癌。本发明的抗人Tim-3(SEQID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是乳腺癌。本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是卵巢癌。有效量的本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是食道癌。本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ IDNO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是软组织肉瘤。本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是肝癌。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与电离辐射和/或一种或多种化疗剂同时、分开或依次组合施用。
本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链；其中抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与电离辐射和/或一种或多种化疗剂同时、分开或依次组合施用。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR3。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR3；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ IDNO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR3；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、食道癌、软组织肉瘤或肝癌。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是黑色素瘤。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是肺癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是黑色素瘤。抗人Tim-3(SEQ IDNO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ IDNO:16)抗体同时、分开或依次施用，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述肺癌是非小细胞肺癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是头颈癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是结肠直肠癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体和抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是胰腺癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体和抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是胃癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体和抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是肾癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体和抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是膀胱癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体和抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ IDNO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是前列腺癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体和抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是乳腺癌。抗人Tim-3(SEQID NO:1)抗体和抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是卵巢癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体和抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是食道癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体和抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是软组织肉瘤。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体和抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；且其中所述癌症是肝癌。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体和抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与电离辐射和/或一种或多种化疗剂同时、分开或依次组合施用。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体和抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体，其用于制备用于治疗癌症的药剂，任选地，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链；其中抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与电离辐射和/或一种或多种化疗剂同时、分开或依次组合施用。
用于治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包含第一药物组合物和第二药物组合物，所述第一药物组合物包含本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，且所述第二药物组合物包含抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体。用于治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包含第一药物组合物和第二药物组合物，所述第一药物组合物包含本发明的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，且所述第二药物组合物包含抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体；其中所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、食道癌、软组织肉瘤或肝癌。
用于治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包含第一药物组合物和第二药物组合物，所述第一药物组合物包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，且所述第二药物组合物包含抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链。
用于治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包含第一药物组合物和第二药物组合物，所述第一药物组合物包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，且所述第二药物组合物包含抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
用于治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包含第一药物组合物和第二药物组合物，所述第一药物组合物包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，且所述第二药物组合物包含抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
用于治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包含第一药物组合物和第二药物组合物，所述第一药物组合物包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，且所述第二药物组合物包含抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ IDNO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区。
用于治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包含第一药物组合物和第二药物组合物，所述第一药物组合物包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，且所述第二药物组合物包含抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体；其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体阻断人Tim-3与人磷脂酰丝氨酸的结合，但不阻断人Tim-3与人CEACAM1(SEQ ID:14)的结合。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体阻断人Tim-3与人磷脂酰丝氨酸的结合，但不阻断人Tim-3与人CEACAM1(SEQ ID:14)的结合；其中抗人Tim-3抗体还阻断人Tim-3与人半乳糖凝集素-9(SEQ ID:15)的结合。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体阻断人Tim-3与人磷脂酰丝氨酸的结合，但不阻断人Tim-3与人CEACAM1(SEQ ID:14)的结合；其中所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、食道癌、软组织肉瘤或肝癌。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体阻断人Tim-3与人磷脂酰丝氨酸的结合，但不阻断人Tim-3与人CEACAM1(SEQ ID:14)的结合；其中抗人Tim-3抗体还阻断人Tim-3与人半乳糖凝集素-9(SEQ ID:15)的结合；其中所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、食道癌、软组织肉瘤或肝癌。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体阻断人Tim-3与人磷脂酰丝氨酸的结合，但不阻断人Tim-3与人CEACAM1(SEQ ID:14)的结合；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体阻断人Tim-3与人磷脂酰丝氨酸的结合，但不阻断人Tim-3与人CEACAM1(SEQ ID:14)的结合；其中抗人Tim-3抗体还阻断人Tim-3与人半乳糖凝集素-9(SEQ ID:15)的结合；其中所述抗人PD-L1抗体是BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体阻断人Tim-3与人磷脂酰丝氨酸的结合，但不阻断人Tim-3与人CEACAM1(SEQ ID:14)的结合；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体阻断人Tim-3与人磷脂酰丝氨酸的结合，但不阻断人Tim-3与人CEACAM1(SEQ ID:14)的结合；其中抗人Tim-3抗体还阻断人Tim-3与人半乳糖凝集素-9(SEQ ID:15)的结合；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体接触人Tim-3(SEQ ID NO:1)上的以下中的至少一个氨基酸残基：50、55、62-65(包括端值)、72、111和113-118(包括端值)。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体接触人Tim-3(SEQ ID NO:1)上的以下中的至少一个氨基酸残基：50、55、62-65(包括端值)、72、111和113-118(包括端值)；其中抗人Tim-3抗体接触：所述残基中的至少两个；优选所述残基中的至少三个；更优选所述残基中的至少四个；更优选所述残基中的至少五个；更优选所述残基中的至少六个；更优选所述残基中的至少七个；更优选所述残基中的至少八个；更优选所述残基中的至少九个；更优选所述残基中的至少十个；更优选所述残基中的至少十一个；更优选所述残基中的至少十二个；更优选所述残基中的至少十三个；或更优选所述残基的全部。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体接触人Tim-3(SEQ ID NO:1)上的以下中的至少一个氨基酸残基：50、55、62-65(包括端值)、72、111和113-118(包括端值)；其中抗人Tim-3抗体接触：所述残基中的至少两个；优选所述残基中的至少三个；更优选所述残基中的至少四个；更优选所述残基中的至少五个；更优选所述残基中的至少六个；更优选所述残基中的至少七个；更优选所述残基中的至少八个；更优选所述残基中的至少九个；更优选所述残基中的至少十个；更优选所述残基中的至少十一个；更优选所述残基中的至少十二个；更优选所述残基中的至少十三个；或更优选所述残基的全部；其中抗人Tim-3抗体进一步接触以下中的至少一个残基：56-61 (包括端值)、107、119-120 (包括端值)和122。抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ IDNO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体接触人Tim-3(SEQ IDNO:1)上的以下中的至少一个氨基酸残基：50、55、62-65(包括端值)、72、111和113-118(包括端值)；其中抗人Tim-3抗体接触：所述残基中的至少两个；优选所述残基中的至少三个；更优选所述残基中的至少四个；更优选所述残基中的至少五个；更优选所述残基中的至少六个；更优选所述残基中的至少七个；更优选所述残基中的至少八个；更优选所述残基中的至少九个；更优选所述残基中的至少十个；更优选所述残基中的至少十一个；更优选所述残基中的至少十二个；更优选所述残基中的至少十三个；或更优选所述残基的全部；其中抗人Tim-3抗体进一步接触以下中的至少一个残基：56-61 (包括端值)、107、119-120 (包括端值)和122；其中接触的残基在抗人Tim-3抗体的六(6)埃或更少之内，如通过X-射线晶体学所确定。
包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体的第一药物组合物，其用于与包含抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体的第二药物组合物同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链。包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体的第一药物组合物，其用于与包含抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体的第二药物组合物同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体是阿特珠单抗、德瓦鲁单抗、阿维鲁单抗或BMS-936559。包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体的第一药物组合物，其用于与包含抗人PD-L1 (SEQ IDNO:16)抗体的第二药物组合物同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区。包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体的第一药物组合物，其用于与包含抗人PD-L1 (SEQ ID NO:16)抗体的第二药物组合物同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含以下中的一种或多种：(a)具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3；(b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区；和(c)具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体的第一药物组合物，其用于与包含抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体的第二药物组合物同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区。
包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体的第一药物组合物，其用于与包含抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体的第二药物组合物同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQID NO:26的氨基酸序列的轻链。
包含抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体的第一药物组合物，其用于与包含抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体的第二药物组合物同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链；其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQID NO:26的氨基酸序列的轻链，或者是阿特珠单抗、德瓦鲁单抗、阿维鲁单抗或BMS-936559。
本发明的抗体是工程改造的非天然存在的多肽复合物。本发明的DNA分子是非天然存在的DNA分子，其包含编码具有本发明的抗体中的多肽之一的氨基酸序列的多肽的多核苷酸序列。
本发明的抗体是IgG型抗体且具有经由链内和链间二硫键交联的两条"重"链和两条"轻"链。各重链由N末端HCVR和重链恒定区("HCCR")构成且具有相同的氨基酸序列。各轻链由LCVR和轻链恒定区("LCCR")构成且具有相同的氨基酸序列。当在某些生物系统中表达时，具有天然人Fc序列的抗体在Fc区中被糖基化。通常，糖基化发生在抗体的Fc区中的高度保守的N-糖基化位点处。N-聚糖通常与天冬酰胺连接。抗体同样可在其他位置处被糖基化。
任选地，本文描述的某些抗Tim-3抗体包含源自人IgG1的Fc部分。众所周知IgG1结合Fc-γ受体家族(FcγR)的蛋白以及C1q。与这些受体的相互作用可诱导抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。因此，任选地，本文描述的某些抗Tim-3抗体是缺少Fc效应子功能的完全人单克隆抗体(IgG1，Fc-无效)。为了获得Fc-无效IgG1抗体，必需在其IgG1 Fc区的CH2区内选择性诱变残基。将氨基酸取代L234A、L235E和G237A引入IgG1 Fc以减少与FcγRI、FcγRIIa和FcγRIII的结合，并且引入取代A330S和P331S以减少C1q介导的补体结合。为了减少当在人体中给药时免疫应答的潜在诱导，某些氨基酸可能需要回复突变以匹配抗体种系序列。
任选地，本文描述的某些抗人PD-L1抗体可以含有源自人IgG1的Fc部分。众所周知IgG1结合Fc-γ受体家族(FcγR)的蛋白以及C1q。与这些受体的相互作用可诱导抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。因此，任选地，本文描述的某些抗人PD-L1抗体是缺少Fc效应子功能的完全人单克隆抗体(IgG1，λ，Fc-无效)。为了获得Fc-无效IgG1抗体，必需在其IgG1 Fc区的CH2区内选择性诱变残基。将氨基酸取代L234A、L235E和G237A引入IgG1 Fc以减少与FcγRI、FcγRIIa和FcγRIII的结合，并且引入取代A330S和P331S以减少C1q介导的补体结合。为了减少当在人体中给药时免疫应答的潜在诱导，某些氨基酸可能需要回复突变以匹配抗体种系序列。因此，本文描述的某些抗人PD-L1抗体在可变重链中含有E1Q和S94R突变，并且在可变轻链中含有T76S和A80S突变。
HCVR和LCVR区可进一步细分成散布有更保守区(称为框架区("FR"))的超变区(称为互补决定区("CDR"))。每一HCVR和LCVR由三个CDR和四个FR构成，其从氨基末端至羧基末端以下列顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本文中，重链的三个CDR称为"HCDR1、HCDR2和HCDR3"且轻链的三个CDR称为"LCDR1、LCDR2和LCDR3"。CDR含有大部分与抗原形成特异性相互作用的残基。目前存在三种用于序列划定的抗体CDR指定系统。NorthCDR定义(North 等人, “A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations”,Journal of Molecular Biology, 406, 228-256 (2011))基于具有大量晶体结构的仿射传播聚类。出于本发明的目的，使用North CDR定义。
可通过使编码HCVR的DNA可操作连接至编码重链恒定区的另一DNA分子，来将编码HCVR区的分离DNA转化成全长重链基因。人以及其他哺乳动物重链恒定区基因的序列是本领域已知的。可例如通过标准PCR扩增获得涵盖这些区域的DNA片段。
可通过使编码LCVR的DNA可操作连接至编码轻链恒定区的另一DNA分子，来将编码LCVR区的分离DNA转化成全长轻链基因。人以及其他哺乳动物轻链恒定区基因的序列是本领域已知的。可通过标准PCR扩增来获得涵盖这些区域的DNA片段。轻链恒定区可以是人κ或λ恒定区。优选地，对于本发明的抗人Tim-3抗体而言，轻链恒定区为人κ恒定区。
在序列已可操作连接至表达控制序列之后，将在宿主细胞中表达本发明的多核苷酸。表达载体通常可在宿主生物体中作为附加体或作为宿主染色体DNA的整合部分复制。通常，表达载体将含有选择标记(例如四环素、新霉素和二氢叶酸还原酶)以允许检测用期望DNA序列转化的那些细胞。
本发明的抗体可容易在哺乳动物细胞(其非限制性实例包括CHO、NS0、HEK293或COS细胞)中产生。使用本领域众所周知的技术培养宿主细胞。
可通过众所周知方法将含有目标多核苷酸序列(例如，编码抗体的多肽的多核苷酸和表达控制序列)的载体转移至宿主细胞中，所述方法根据细胞宿主的类型而变化。
可以使用各种蛋白纯化方法，且此类方法是本领域已知的，并描述于例如Deutscher, Methods in Enzymology 182: 83-89 (1990)和Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 第3版, Springer, NY (1994)。
在本发明的其他实施方案中，以分离形式提供抗体或编码其的核酸。如本文所使用，术语"分离的"是指不含或基本上不含发现于细胞环境中的任何其他大分子物质的蛋白、肽或核酸。如本文所使用的"基本上不含"意指目标蛋白、肽或核酸占存在的大分子物质的大于80%(以摩尔计)、优选地大于90%和更优选地大于95%。
本发明的抗体或包含其的药物组合物可通过肠胃外途径(例如，皮下和静脉内)施用。本发明的抗体可以连同药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂以单一或多个剂量施用于患者。本发明的药物组合物可通过本领域众所周知的方法制备(例如，Remington：The Science and Practice of Pharmacy, 第22版 (2012), A. Loyd 等人, PharmaceuticalPress)并且包含如本文所公开的抗体和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
可以调整剂量方案，以提供最佳期望反应(例如治疗作用)。可以滴定治疗剂量以优化安全性和效力。用于静脉内(i.v.)或非静脉内施用、局部或全身性、或其组合的给药时间表通常范围从单次推注剂量或连续输注到每天多次施用(例如，每4-6小时)，或如由治疗医师和患者的病况所示。
术语"治疗(treating或treat或treatment)"是指减缓、中断、阻止、缓解、停止、减轻或逆转现有症状、病症、病况或疾病的进展或严重度。
"有效量"意指本发明的抗体或包含本发明的抗体的药物组合物诱发研究者、医师或其他临床医师寻求的对组织、系统、动物、哺乳动物或人的生物或医学反应或期望治疗效应的量。抗体的有效量可根据因素而变化，所述因素诸如疾病状态、个体的年龄、性别和重量以及抗体在个体内诱发期望反应的能力。有效量也是治疗有益效应胜过抗体的任何毒性或有害效应的量。
抗体产生、表达和纯化
本发明的抗体可以通过已知方法产生，所述方法包括但不限于通过使用噬菌体展示、转基因动物和/或人源化。为了生成抗人Tim-3抗体，人Tim-3蛋白可以在使用前用PNGaseF酶预处理。另外，可以使用本文描述的测定法进一步筛选如上所述衍生的抗体。
抗体A和B的重链和轻链可变区的多肽、抗体A和B的完整重链和轻链氨基酸序列以及编码其的核苷酸序列列于标题为“氨基酸和核苷酸序列”的部分中。此外，还提供了抗体A和B的轻链、重链、轻链可变区和重链可变区的SEQ ID NO。可基本上如下所述制备并纯化本发明的抗体(包括但不限于抗体A和B)。可用用于分泌抗体的表达系统使用最佳预定HC：LC载体比率或编码HC(重链)和LC(轻链)两者的单一载体系统瞬时或稳定转染适当宿主细胞(诸如HEK 293或CHO)。可使用许多常用技术中的任一者纯化其中已分泌抗体的经澄清培养基。例如，可将培养基便利地施加至已用相容缓冲液(诸如磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4))平衡的MabSelect柱(GE Healthcare)或KappaSelect柱(GE Healthcare)(用于Fab片段)。可洗涤该柱以去除非特异性结合组分。可例如通过pH梯度(诸如20mM Tris缓冲液(pH 7)至10mM柠檬酸钠缓冲液(pH 3.0)或磷酸盐缓冲盐水(pH 7.4)至100mM甘氨酸缓冲液(pH 3.0))洗脱结合抗体。可诸如通过UV吸光度或SDS-PAGE检测抗体级分，且然后可合并。取决于预期用途，进一步纯化是任选的。可使用常用技术浓缩和/或无菌过滤抗体。可通过常用技术(包括尺寸排阻、疏水性相互作用、离子交换、多态或羟基磷灰石色谱)有效去除可溶性聚集物和多聚体。抗体在这些色谱步骤之后的纯度通常大于95%。产物可立即在-70℃下冷冻或可冻干。
表 1
WINN测定法
可用WINN测定法来测试本发明的抗体的体内免疫调节活性。在WINN测定法中，将人NSCLC肿瘤细胞NCI-H292和人免疫细胞(同种异体)混合并共植入至免疫缺陷小鼠中，且然后随后用免疫调节剂给药。免疫调节剂抑制或延迟肿瘤形成或支持肿瘤内持久性的能力可以如下评估。
第0天，将2 x106个H292细胞，或2 x106个H292细胞和1 x 106个人PBMC于HBSS中的混合物(0.2ml总体积)皮下植入来自Jackson Laboratories的NSG小鼠(7周龄，雌性，8-10只小鼠的组中)的侧腹中。在第0天开始，通过i.p.注射10mg/kg的对照人IgG或1 mg/kg或10mg/kg的抗体A(每周一次，持续六周)来处理小鼠。监测动物健康和行为(包括整饰(grooming)和步态)，每周至少两次。
通过针对CD3和CD8染色并用Aperio ScanScope™分析，通过测量CD3阳性和CD8阳性T细胞的存在，可以分析来自模型的肿瘤切片的CD3阳性和CD8阳性T细胞持久性。IHC核图像分析宏(macro)检测用户选择的那些区域中的单个细胞的靶色原的核染色并定量它们的强度。从活肿瘤区域制作三到五个注释并用于调整参数，直到算法结果产生一致的细胞鉴定。然后保存宏并登录载玻片进行分析。通过Aperio软件计算作为细胞总数的百分比的%CD3阳性和CD8阳性细胞。
在基本上如该WINN测定法中所述进行的实验中，通过IHC分析，与共植入NCI-H292肿瘤和PBMC并用对照IgG处理的小鼠(6.5%)相比，共植入NCI-H292肿瘤和PBMC并以10mg/kg给药抗体A的小鼠导致人CD3阳性CD8阳性肿瘤内T细胞显著增加(30%) (P = 0.03)。
用原代人T细胞人源化的NSG小鼠中建立的人肿瘤异种移植模型
可以在NCI-HCC827人NSCLC(非小细胞肺癌)异种移植模型中测试本发明抗体的效力，以评估延迟或破坏模型中已建立肿瘤的能力。在第0天，将1x107个NCI-HCC827细胞皮下植入NSG小鼠的侧腹(7周龄，雌性，每组8只小鼠)。当肿瘤达到~400 mm3的体积(~第30-32天)时，用2.5 x106个先前扩增的人T细胞输注(i.v.)小鼠。通过从全血中分离人T细胞并使用Dynabeads® 人T-活化物CD3/CD28扩增10天来产生先前扩增的人T细胞。先前扩增的人T细胞可以冷冻保存以供以后使用。在T细胞输注后一天，通过每周i.p.注射人IgG或抗体A(总共4次剂量)以10mg/kg给药小鼠。监测动物健康和行为，包括整饰和步态，每周至少两次。
测量体重和肿瘤体积，一周两次。在细胞植入后的第4天开始，每周两次使用电子卡尺如上所述测量肿瘤体积。肿瘤体积(mm3) = π/6 * 长度 * 宽度2。抗肿瘤效力表示为T/C比率(以百分比计)且如下文所概述进行计算：如果几何平均值的ΔT > 0，则通过式100ΔT /ΔC计算%T/C。ΔT=药物治疗组在研究最后一天的平均肿瘤体积 - 药物治疗组在给药的第一天的平均肿瘤体积；ΔC=对照组在研究最后一天的平均肿瘤体积 - 对照组在给药的第一天的平均肿瘤体积。另外，如果ΔT < 0，则使用式= 100 x ∆T/T初始计算%消退。没有可测量肿瘤的动物被认为是完全反应者(CR)，且具有> 50%消退的肿瘤是部分反应者(PR)。
在基本上如上所述进行的实验中，与用人IgG处理相比，用抗体A(抗人Tim-3)处理显著抑制人源化NSG小鼠中的肿瘤生长(表2)。在第76天，用抗体A处理导致T/C = 2%。在第110天，抗体A处理产生3/8 CR。
表 2：NCI-HCC827人NSCLC异种移植模型中的肿瘤体积(mm3)
混合的淋巴细胞反应
可以通过测量T细胞活化期间细胞因子的释放来评估通过本发明的抗体阻断Tim-3信号的功能。如果通过用本发明的抗体处理促进T细胞活化，则预期某些细胞因子诸如IFN-γ的水平会增加。
通过使用人单核细胞分离试剂盒II(Miltennyi Biotec)从获得自健康供体(AllCells)的新鲜人PBMC的阴性选择来分离CD14+单核细胞。通过在62.5ng/ml hGM-CSF和20ng/ml hIL-4存在下在完全RPMI-1640培养基中培养CD14+单核细胞7天来产生人单核细胞衍生的树突细胞。使用CD4 T细胞分离试剂盒(Miltenyi)通过阴性选择从不同健康供体(AllCells)的新鲜人PBMC中纯化CD4+ T细胞。然后将两种类型的细胞在96孔板的各个孔中与每孔含1x105个CD4+ T细胞和2x104个未成熟DC的100μl完全AIM-V培养基混合。将含有100nM人IgG1或抗体A的100 μl完全AIM-V培养基一式6份加入。在37℃、5% CO2下孵育3天后，收获上清液并用ELISA试剂盒(R&D Systems)测量人IFN-γ。将未配对t - 检验用来比较各组。
在基本上如上所述进行的实验中，与添加对照人IgG1相比，添加抗体A显著增加IFN-γ的分泌(3,036 ± 367 vs. 1,644 ± 261 pg/mL的hIFN-γ；p=0.0384)。
ELISA分析：抗体A结合重组Tim-3
可以用ELISA测定法来测量本发明的抗体结合人Tim-3的能力。对于Tim-3结合测定，将96孔板(Nunc)用人Tim-3-Fc (R&D Systems)在4℃下包被过夜。用封闭缓冲液(含有3%牛血清白蛋白的PBS)将孔封闭2小时。用含有0.1% Tween-20的PBS将孔洗涤三次。然后加入抗体A或对照IgG(100 μl)，并在室温下孵育1小时。洗涤后，将板与100 μl山羊抗人IgG F(ab’)2-HRP缀合物(Jackson Immuno Research)在室温下孵育1小时。洗涤板，且然后与100 μl的3,3', 5,5'-四甲基联苯胺孵育。在微孔板阅读器上读取450 nm处的吸光度。使用GraphPadPrism 6软件计算半最大有效浓度(EC50)。
在基本上如上所述进行的实验中，抗体A以2.07 x 10-11 M的EC50结合人Tim-3。
流式细胞术分析：抗体A结合细胞表面Tim-3
可以用流式细胞术测定来测量本发明的抗体结合细胞表面人Tim-3的能力。将Tim-3DO11.10细胞，一种表达人Tim-3的DO11.10细胞系，用于该测定。
Tim-3 DO11.10细胞可如下获得。全长Tim-3基因可以从Origene Technologies,Inc.购买并使用PCR克隆至来自Clonetech Laboraties, Inc.的pLVX-IRES-Neo慢病毒载体中。将来自Clonetech Laboraties, Inc.的Lenti-X™系统用于产生高滴度的重组的、复制缺陷型病毒粒子。将病毒粒子用于立即感染靶细胞，或者等分并在-80℃冷冻直至使用。鼠T细胞杂交瘤DO11.10细胞系可以从National Jewish Health®获得。根据伴随该细胞系的方案培养和维持DO11.10细胞。在第0天，计数DO11.10细胞并离心以除去培养基。将细胞沉淀与含有人TIM-3基因或载体对照的病毒粒子混合，并在37℃下孵育24小时。当混合细胞和病毒粒子时加入聚凝胺，直至达到8μg/ml的终浓度。24小时后，再次沉淀DO11.10细胞并重悬于新鲜培养基中并在37℃下孵育3天。接下来，每3天将DO11.10细胞沉淀并重悬于含有1mg/ml Geneticin®的选择培养基中以选择稳定转导的细胞。使用从R＆D Systems获得的抗体通过流式细胞术监测Tim-3表达。在选择培养基中2至3周后，分选所得的表达Tim-3的DO11.10细胞以建立单细胞克隆。
将DO11.10和Tim-3 DO11.10细胞以每孔1.x105个细胞添加到96孔V底板(100 μl/孔)的染色缓冲液(含有3% BSA的DPBS)中。将细胞在冰上在染色缓冲液中用30 μg/mL人IgG进行Fc封闭1小时。用A488 (Molecular Probes®)标记抗体A或对照人IgG，并在染色缓冲液中制备两种抗体的12点滴定(1：3连续稀释)，且起始浓度为66.7nM。将标记的抗体加入细胞中并在黑暗中于4℃孵育1小时。通过以1200 RPM离心5分钟并倾析上清液，用PBS洗涤细胞两次。以3 μl/孔向每个孔中加入活/死细胞染料7-AAD(在PBS中1：1000)，并将细胞在冰上孵育15分钟。用PBS洗涤细胞两次，并重悬于含有0.5%BSA的100 μl DPBS中，并在Intellictye iQue上进行分析。所有染色一式三份进行。用FlowJo软件分析数据以鉴定活细胞群并使用AF488(FL1)检测通道确定每个样品的中值荧光强度。将单独的MFI(即平均荧光强度)值置于GraphPad Prism软件中以产生浓度响应曲线，从该曲线外推EC50值。
在基本上如上所述进行的实验中，抗体A以剂量依赖性方式结合Tim-3 DO11.10细胞上的细胞结合的人Tim-3，且EC50值为0.09nM。
流式细胞术分析：抗体A阻断磷脂酰丝氨酸与人Tim-3的相互作用
可以通过FACS分析测量本发明的某些抗体阻断磷脂酰丝氨酸结合Tim-3的能力。对于该受体-配体阻断测定，用12 μM喜树碱(Sigma®)在37℃下处理1x106/ml的DO11.10细胞3小时以诱导细胞凋亡。FITC-膜联蛋白V (Becton Dickinson®)用作阳性对照以检测磷脂酰丝氨酸的存在。生物素化的hTIM-3-Fc与喜树碱处理的细胞强烈结合，但不与未处理的细胞结合。用冷PBS洗涤喜树碱处理的细胞，并以1x106个细胞/ml重悬于结合缓冲液(BectonDicknson®)中。通过向细胞中添加50 μg/ml小鼠IgG和大鼠IgG并在室温下孵育30分钟来封闭Fc受体。在结合缓冲液中制备抗体A的6点滴定(1：3连续稀释)，且起始浓度为90nM，并加入至1ml细胞中，且然后将细胞在室温下孵育60分钟。然后以0.05 μg/孔向200 μl体积中的适当样品中加入hTIM-3-Fc生物素，并在室温下孵育30分钟。然后通过以1200 RPM离心5分钟用结合缓冲液洗涤细胞两次。将2.4 μl/孔的含有链霉抗生物素蛋白-FITC(Biolegend®)的溶液(在DPBS中1:10稀释)和5 μl/孔的碘化丙啶加入每个孔中并在室温下在黑暗中孵育30分钟。用结合缓冲液洗涤细胞两次，并重悬于100 μl的PBS。在IntelliCyt iQue流式细胞仪上读取样品，并用FlowJo软件分析数据。将单独的MFI(即平均荧光强度)值置于GraphPad Prism软件中以产生浓度响应曲线，从该曲线外推IC50值。
在基本上如上所述进行的实验中，抗体A以剂量依赖性方式阻断人Tim-3与磷脂酰丝氨酸的相互作用，且IC50值为0.32nM，如表3中进一步说明。
表 3
半乳糖凝集素-9阻断测定：抗体A阻断人半乳糖凝集素-9与人Tim-3的相互作用
本发明的抗体阻断人半乳糖凝集素-9结合人Tim-3的能力可以如下测量。对于该受体-配体阻断测定，将96孔链霉抗生物素蛋白包被的MSD板(Meso Scale Diagnostics)用150 μl封闭缓冲液(含有5%牛血清白蛋白的PBST)封闭2小时。用含有0.2% Tween-20的200 μlPBS将孔洗涤三次。使用EZ-Link™生物素(Thermo Scientific™)将重组人半乳糖凝集素-9(R＆D Systems)生物素化，且然后将25 μl的 0.21 μg/ml人重组半乳糖凝集素-9-生物素加入并在室温下孵育2小时。用含有0.2% Tween-20的PBS将板洗涤三次。使用磺基标签NHS-酯试剂(Meso Scale Discovery®)将人Tim-3-Fc蛋白(R&D Systems)钌化(ruthinylated)，并将小等分试样储存在-80℃直至使用。将抗体连续稀释(从13.5 μg/ml开始)，并将50 μl每种抗体与50 μl 0.05 μg/ml的稀释的hTim-3-Fc-ruth组合并在室温下孵育1小时。然后将50 μl的各组合加入板中并在室温下孵育1.5小时。用含有0.2% Tween-20的PBS将板洗涤三次。然后将150 μl的1×读取缓冲液(Meso Scale Diagnostics)加入到板的每个孔中，并在Sector Imager 2400 (Meso Scale Diagnostics)上读板。
在基本上如上所述进行的实验中，与对照多克隆抗人Tim-3抗体(R＆D Systems)(IC50值为7.8 nM)相比，抗体A阻断人Tim-3与人半乳糖凝集素-9的相互作用(IC50值为5.6nM)。然而，多克隆抗人Tim-3抗体可阻断高达100%的人Tim-3与人半乳糖凝集素-9的相互作用，而抗体A仅在该测定中实现部分阻断。
CEACAM-1阻断测定：抗体A不阻断人CEACAM1与人Tim-3的相互作用
本发明的抗体阻断人CEACAM1结合人Tim-3的能力可以如下测量。对于该受体-配体阻断测定，用100 μl/孔的1ug/ml人Tim-3-Fc在4 ℃下包被96孔Immulon 4HBX板(ThermoScientific)。用含有0.2% Tween-20的PBS洗涤板3次，并用200 μl/孔的含3% BSA的PBS在室温下封闭1小时。然后去除封闭缓冲液并且将50 μl滴定的Abs(包括多克隆抗人Tim-3，R＆D Systems，抗体A和对照人IgG)以600 nM开始加入板中并在室温下孵育1小时。然后将50 μl的20 μg/ml CEACAM1 (BIOTANG)直接加入到孔中并在室温下孵育1小时(抗体的终浓度为300nM，且CEACAM1的终浓度为10 μg/ml)。用含有0.2% Tween-20的PBS将板洗涤三次，并加入100 μl的0.2 μg/ml生物素化的人CEACAM1抗体(R＆D Systems)，且然后在室温下孵育1小时。将板用含有0.2% Tween-20的PBS洗涤三次，且然后加入100 μl的链霉抗生物素蛋白过氧化物酶(Jackson ImmunoResearch Laboratories)，且然后在室温下孵育1小时。用含有0.2% Tween-20的PBS洗涤板6次，并用100 μl/孔的1:1 TMB底物溶液A和B(KPL)在室温下显色10分钟。然后用100 μl/孔的0.1N H2SO4终止反应，并在SpectraMax®板读数器上在450nm处读板。
在基本上如上所述进行的实验中，抗体A不显著阻断CEACAM1与人Tim-3的结合，如下表4中所说明。
表 4
表位
通过用固定化(琼脂糖树脂)木瓜蛋白酶(ThermoFisher Scientific)酶促剪切抗体A，然后用标准ProA柱(GE Healthcare Life Sciences)纯化以分离游离的、可溶性Fc和未剪切的IgG来产生抗体A的Fab。收集含有Fab的流出物以进行浓缩和缓冲液交换。用标准抗FLAG树脂(Sigma-Aldrich)方案从293HEK上清液中纯化hTim-3-IgV-FLAG。hTim-3-IgV结构域代表人Tim-3 (SEQ ID:1)的氨基酸残基S22至K130。将流出物在树脂柱中重新运行多次。每次运行后，利用SDS-PAGE (NuPAGE Novex 4-12% Bis-Tris 凝胶; Invitrogen)和HPLC(TSKgel G3000 SW XL (尺寸: 7.8mm, ID 30 CM, 5 μM; TOSHO BioSCIENCE)以确定hTim-3-FLAG蛋白的质量。将最佳轮次的蛋白组合在一起以产生最终批次。
将hTim-3-IgV-FLAG(2.17 mg/mL，于pH 7.2的TBS缓冲液中)和抗体A-Fab(6.79mg/mL)以1：1的摩尔比组合，并通过尺寸排阻色谱法分离复合物，且在20mM hepes pH 7.4和150 mM氯化钠中的终浓度为6.9 mg/mL。Tim-3-抗-Tim-3复合物使用坐滴蒸汽扩散法在8℃和21℃下在5个Qiagen网格筛中进行筛选。使用Art Robbins Phoenix液体处理机器人设置液滴，其在0.3 μL蛋白顶部分配0.3 μL结晶溶液。在21℃下在20% PEG 3350和0.2 M氯化锂中获得100-200 μm共生的棱柱。收获晶体并在补充有20%乙二醇的结晶条件制成的溶液中冷冻保护，然后在液氮中快速冷冻。在Argonne National Laboratory收集数据集，在空间群P21中衍射到2.2 Å，且晶胞参数为a = 74.62 Å, b = 57.85 Å, 和c = 74.71 Å。
使用程序Phaser通过分子置换(Molecular Replacement)测定与人Tim-3复合的抗体A-Fab的结构。高分辨率和公众可获得的Fab结构和已发表的鼠Tim-3结构可用作分子置换模型。使用程序Refmac来细化结构并使用程序COOT重建模型。最终细化R因子是R工作= 20.2%，R游离 = 23.4%。不存在Ramachandran违规者，且96.4%的残基位于Ramachandran图的偏好区内。存在指示Tim-3 (SEQ ID NO:1)的Asn99处的糖基化的密度。
将Biacore T200用于测定hTim-3-IgV-FLAG与捕获的抗体A-Fab的结合动力学。在HBS-EP作为运行缓冲液时，在25℃下该复合物的1:1结合具有3.62E+05 1/Ms的kon，2.86E-03 1/s的koff，和7.92E-09 M的K D 。
在基本上如该测定中所述进行的实验中，解析抗体A-Fab/hTim-3复合物，并且表位/互补位显示于下表5。下表5列出了在hTim-3 (SEQ ID NO:1)上列出的残基的6Å之内的抗体A-Fab上的残基。抗体A-Fab的重链与hTim-3具有62个接触(截止值6 Å)，而轻链具有34个接触(截止值6Å)。
表 5
抗体A的动力学/亲和力研究
Biacore T100仪器可用于测量人Tim-3-IgV-Fc单臂抗原(SAG)结合捕获的抗体A的动力学。人Fab结合剂表面通过将人Fab结合剂(GE Healthcare)胺偶联到Biacore CM5传感器芯片表面来制备。使用HBS-EP缓冲液(GE Healthcare)作为运行缓冲液，通过芯片捕获测试抗体。将Tim-3 SAG稀释至运行缓冲液中，以30nM起始且稀释倍数为3，以得到0.04、0.12、0.37、1.11、3.33、10和30nM的浓度。将稀释的Tim-3 SAG分析物或缓冲液以30μl/min注射180秒，并监测复合物解离1200秒。以30 µl/min注射10mM甘氨酸-HCl pH2.1将结合表面再生，在每个分析物结合周期之间，对于5个较低浓度，2次注射，各30秒；对于两个较高浓度，两次注射，各60秒。使用具有质量转运的1：1 Langmuir模型拟合给定抗原/Ab相互作用的实验数据。
在基本上如上所述进行的实验中，抗体A结合人Tim-3，且动力学和亲和力常数示于表6。
表 6
抗体 K<sub>on</sub> (1/Ms) K<sub>off</sub> (1/s) K<sub>D</sub> (M) R<sub>max</sub> Chi<sup>2</sup>
抗体A 2.33E+06 9.27E-04 3.98E-10 17.09 0.319
在用PBMC人源化的NSG小鼠中建立的人肿瘤异种移植模型和抗体B
可以在NCI-H827人NSCLC异种移植模型中测试抗体B的效力，以评价延迟或破坏模型中建立的肿瘤的能力。在第0天，将1x107个H827细胞皮下植入NSG小鼠的侧腹(7周龄，雌性，每组10只小鼠)。在建立人异种移植肿瘤的情况下，在第34天向小鼠输注(i.v.) 5 x106个人PBMC。在第35天开始，向小鼠以10 mg/kg每周i.p.给予(3个总剂量)人IgG或抗体B(抗PD-L1抗体)。每周至少两次监测动物健康和行为，包括整饰和步态。每周两次测量体重和肿瘤体积。
在基本上如该测定中所述进行的实验中，与用人IgG治疗相比，用抗体B治疗显著抑制人源化NSG小鼠中的肿瘤生长(表7)。
表 7：NCI-H827人NSCLC异种移植模型中的肿瘤体积(mm3)
结合动力学和亲和力
使用表面等离振子共振(Biacore)测定抗体B对于人PD-L1的动力学和平衡解离常数(KD)。
在25℃下进行作为配体的抗体B至传感器芯片表面上的固定化。将可溶性人PD-L1-Fc融合蛋白(以及在一些情况下，食蟹猴PD-L1-Fc融合蛋白)作为分析物以范围为0.0123 nM - 9 nM的浓度注射。分析在37℃下进行。每种样品的接触时间为180秒，30μl/min。解离时间为240-1500秒。固定化表面用0.95 M NaCl / 25 mM NaOH以30μl/min再生18秒，且然后稳定5秒。使用Biacore T200评估软件(3.0版)分析结合动力学。数据针对空白流动室参考，并将数据拟合至1:1结合模型。
在基本上如该测定中所述进行的实验中，抗体B以82 pM的KD结合人PD-L1。
表 8：抗体B的通过SPR的结合
与抗体B的结合 Kon (1/Ms) Koff (1/s) K<sub>D</sub> (pM)
人PD-L1 1.40E+06 1.14E-04 82
食蟹猴PD-L1 1.51E+06 1.84E-04 122
ELISA分析：抗体B结合重组PD-L1
可以通过ELISA测量抗体B结合人PD-L1的能力。对于PD-L1结合测定，将96孔板(Nunc)用人PD-L1-Fc (R&D Systems)在4℃下包被过夜。用封闭缓冲液(含有5%脱脂奶粉的PBS)将孔封闭2小时。用含有0.1% Tween-20的PBS将孔洗涤三次。然后加入抗体B或对照IgG(100 μl)，并在室温下孵育1小时。洗涤后，将板与100 μl山羊抗人IgG F(ab’)2-HRP缀合物(Jackson Immuno Research)在室温下孵育1小时。洗涤板，且然后与100 μl的3,3', 5,5'-四甲基联苯胺孵育。在微孔板阅读器上读取450 nm处的吸光度。使用GraphPad Prism 6软件计算半最大有效浓度(EC50)。
在基本上如该测定中所述进行的实验中，抗体B以0.11 nM的EC50结合人PD-L1。在所有三个温度条件(4℃、25℃和40℃)下，抗体B在4周后保留其结合活性。
流式细胞术分析：抗体B结合细胞表面PD-L1
可以通过流式细胞术测量抗体B结合细胞表面表达的人PD-L1的能力。将MDA-MB 231细胞(PD-L1阳性人乳腺癌细胞系)以每孔1.5x105个细胞加入到96孔U形底板中的200μl染色缓冲液中，并在4℃下孵育30分钟。将板以1200 rpm离心5分钟并除去上清液。加入100μl 抗体B-生物素(从10μg/ml开始以1:4连续稀释)。评估总共6个连续稀释液。在4℃下孵育30分钟之后，将细胞用DPBS洗涤两次。加入100μl含有5μl链霉抗生物素蛋白-PE的检测缓冲液。在4℃下再孵育30分钟之后，将板离心并用DPBS洗涤两次。将细胞重悬于200μl DPBS中用于FACS分析。
在基本上如该测定中所述进行的实验中，抗体B以剂量依赖性方式以0.14 nM的EC50结合MDA-MB231细胞上的细胞表面PD-L1。
ELISA分析：抗体B阻断PD-L1与PD-1的相互作用
可以通过ELISA测量本发明的抗体阻断PD-L1与PD-1结合的能力。对于受体-配体阻断测定，将不同量的抗体B或对照IgG与固定量的生物素化的PD-L1-Fc融合蛋白(100 ng/孔)混合，并在室温下孵育1小时。将混合物转移至预包被有PD-1-Fc (1 μg/ml)的96孔板中，且然后在室温下再孵育1小时。洗涤之后，添加链霉抗生物素蛋白HRP缀合物，并读取450 nm处的吸光度。IC50代表PD-L1与PD-1结合的50%抑制所需的抗体浓度。
在基本上如该测定中所述进行的实验中，抗体B以0.95 nM的IC50阻断PD-L1与PD-1的相互作用。在所有三个温度条件(4℃、25℃和40℃)下，抗体B在4周后保留其阻断活性。
ELISA分析：抗体B阻断PD-L1与B7-1的相互作用
人PD-L1也结合B7-1。可以通过ELISA测量抗体B阻断PD-L1与B7-1结合的能力。PD-L1/B7-1阻断测定的程序类似于PD-L1/PD-1阻断测定，除了用1μg/ml B7-1-Fc (R&D Systems)包被板。使用GraphPad prism 6软件计算PD-L1与PD-1结合的50%抑制所需的抗体浓度(IC50)。
在基本上如该测定中所述进行的实验中，抗体B以2.4 nM的IC50阻断PD-L1与B7-1的相互作用。
抗体A在抗人PD-L1抗体存在的情况下增强从体外刺激的人PBMC产生干扰素-γ
可以通过测量T细胞活化期间细胞因子的释放来评估通过本发明的抗体阻断Tim-3信号的功能。如果通过用本发明的抗体处理促进T细胞活化，则预期某些细胞因子诸如IFN-γ的水平会增加。
通过使用人单核细胞分离试剂盒II(Miltennyi Biotec)从获得自健康供体(AllCells)的新鲜人PBMC的阴性选择来分离CD14+单核细胞。通过在62.5ng/ml hGM-CSF和20ng/ml 人IL-4存在下在完全RPMI-1640培养基中培养CD14+单核细胞3天来产生人单核细胞衍生的树突细胞。从不同健康供体(AllCells)分离新鲜人PBMC。然后将两种类型的细胞在96孔板的各个孔中与每孔含7.5x104个PBMC细胞和1.5x104个未成熟DC的100μl完全AIM-V培养基混合。将含有100 nM人IgG1、100 nM抗体A、4nM或1.33 nM阿特珠单抗、0.07 nM或0.22 nM Lilly PD-L1抗体抗体B或100 nM抗体A和阿特珠单抗或抗体B的组合的100 μl完全AIM-V培养基一式八份加入。在37℃、5% CO2下孵育6天后，收获上清液并用ELISA试剂盒(R&D Systems)测量人IFN-γ。将未配对t - 检验用来比较各组。
在基本上如上所述进行的实验中，与添加人IgG1相比，添加抗体A或阿特珠单抗增加IFN-γ的分泌。与以1.33 nM剂量的剂量下添加单独的阿特珠单抗相比，抗体A与阿特珠单抗的组合显著增加IFN-γ的分泌(P = 0.0014)，如下表9中所示。当在该MLR测定中与抗体B组合时，抗体A提供IFN-γ分泌的增加(表10)。
表 9：与阿特珠单抗组合的抗体A导致T细胞IFN-γ产生的增加
表 10：与抗体B组合的抗体A导致T细胞IFN-γ分泌的增加
用原代人T细胞人源化的NSG小鼠中建立的人肿瘤异种移植模型
可以在NCI-HCC827人NSCLC(非小细胞肺癌)异种移植模型中测试本发明抗体的效力，以评估延迟或破坏模型中已建立肿瘤的能力。在第0天，将1x107个NCI-HCC827细胞皮下植入NSG小鼠的侧腹(7周龄，雌性，每组8只小鼠)。当肿瘤达到~400 mm3的体积(~第30-32天)时，用2.5 x106个先前扩增的人T细胞输注(i.v.)小鼠。通过从全血中分离人T细胞并使用Dynabeads® 人T-活化物CD3/CD28扩增10天来产生先前扩增的人T细胞。先前扩增的人T细胞可以冷冻保存以供以后使用。在T细胞输注后一天，通过每周i.p.注射人IgG或抗体A(总共4次剂量)以10mg/kg给药小鼠。监测动物健康和行为，包括整饰和步态，每周至少两次。
测量体重和肿瘤体积，一周两次。在细胞植入后的第4天开始，每周两次使用电子卡尺如上所述测量肿瘤体积。肿瘤体积(mm3) = π/6 * 长度 * 宽度2。抗肿瘤效力表示为T/C比率(以百分比计)且如下文所概述进行计算：如果几何平均值的ΔT > 0，则通过式100ΔT /ΔC计算%T/C。ΔT=药物治疗组在研究最后一天的平均肿瘤体积 - 药物治疗组在给药的第一天的平均肿瘤体积；ΔC=对照组在研究最后一天的平均肿瘤体积 - 对照组在给药的第一天的平均肿瘤体积。另外，如果ΔT < 0，则使用式= 100 x ∆T/T初始计算%消退。没有可测量肿瘤的动物被认为是完全反应者(CR)，且具有> 50%消退的肿瘤是部分反应者(PR)。
在基本上如上所述进行的实验中，所有3种治疗在4每周给药后到第63天显示肿瘤生长抑制，随后在停止治疗后肿瘤再生长(表11)。抗体A以10 mg/kg的治疗以57%的T/C%延迟肿瘤生长，直至第63天 (p = 0.065)。抗体B以29%的T/C%显著抑制HCC827肿瘤的生长，直至第63天，随后肿瘤再生长。在该模型中，抗体A和抗体B的组合与单独的抗体B治疗相比不提供额外的抗肿瘤益处(p=0.84)。
表 11：NCI-HCC827人NSCLC异种移植模型中的肿瘤体积(mm3)
序列表
<110> Eli Lilly and Company
<120> 用于与抗PD-L1抗体组合的抗TIM-3抗体
<130> X21326
<150> 62/431485
<151> 2016-12-08
<160> 36
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 130
<212> PRT
<213> 人类
<400> 1
Met Phe Ser His Leu Pro Phe Asp Cys Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Thr Arg Ser Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln
20 25 30
Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu
35 40 45
Val Pro Val Cys Trp Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly
50 55 60
Asn Val Val Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser
65 70 75 80
Arg Tyr Trp Leu Asn Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr
85 90 95
Ile Glu Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly Ile Tyr Cys Cys Arg Ile
100 105 110
Gln Ile Pro Gly Ile Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val
115 120 125
Ile Lys
130
<210> 2
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 2
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Tyr Met Ser
1 5 10
<210> 3
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 3
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 4
Ala Arg Tyr Ala Arg Thr Ala Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 5
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 6
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 7
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 7
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 8
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 8
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ala Arg Thr Ala Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 9
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 9
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Gly Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 10
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 10
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ala Arg Thr Ala Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 11
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 11
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Gly Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Tyr Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 12
<211> 1341
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 12
gaggtgcagc tgttggagtc tggcggaggg ctggtgcagc cgggaggcag cctcaggctg 60
agctgcgctg cgagcgggtt tactttctcg tcgtactata tgtcgtgggt gagacaagca 120
ccaggtaaag gacttgagtg ggtgtccgct atctcaggca gcggaggatc cacctactac 180
gcggattcag tcaagggaag attcactatc tcgcgcgaca attccaagaa caccctgtac 240
ctccagatga actcgctgcg ggcagaagat acggccgtgt actactgtgc ccgctacgcc 300
cggaccgcct tcgacttgtg gggtcaggga accctggtca ctgtctcctc agctagcacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgcactga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgagggggc accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtatgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caagactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccatcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaagtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta ttccaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggcaa a 1341
<210> 13
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 13
gacatcgtga tgactcaaag cccttcaagc ctctcggcgt cagtcggtga tggcgtgacc 60
attacctgtc aagcatccca agacatctac aactacttga attggtacca gcagaagcca 120
gggaaagccc cgaagctgct gatctacgcc gcctcctcac ttcagagcgg agtgccatcc 180
cgcttttccg gatcggggag cggaacggat ttcactctga ccatctcgtc gctgcaaccg 240
gaggacttcg cgacttacta ttgccagcag gctaactcgt tcccgcccac tttcggacag 300
ggcaccaagc tcgaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 14
<211> 526
<212> PRT
<213> 人类
<400> 14
Met Gly His Leu Ser Ala Pro Leu His Arg Val Arg Val Pro Trp Gln
1 5 10 15
Gly Leu Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Thr Phe Trp Asn Pro Pro Thr
20 25 30
Thr Ala Gln Leu Thr Thr Glu Ser Met Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly
35 40 45
Lys Glu Val Leu Leu Leu Val His Asn Leu Pro Gln Gln Leu Phe Gly
50 55 60
Tyr Ser Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Gly Asn Arg Gln Ile Val
65 70 75 80
Gly Tyr Ala Ile Gly Thr Gln Gln Ala Thr Pro Gly Pro Ala Asn Ser
85 90 95
Gly Arg Glu Thr Ile Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu Ile Gln Asn Val
100 105 110
Thr Gln Asn Asp Thr Gly Phe Tyr Thr Leu Gln Val Ile Lys Ser Asp
115 120 125
Leu Val Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gln Phe His Val Tyr Pro Glu Leu
130 135 140
Pro Lys Pro Ser Ile Ser Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu Asp Lys
145 150 155 160
Asp Ala Val Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gln Asp Thr Thr Tyr
165 170 175
Leu Trp Trp Ile Asn Asn Gln Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gln
180 185 190
Leu Ser Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr Arg Asn
195 200 205
Asp Thr Gly Pro Tyr Glu Cys Glu Ile Gln Asn Pro Val Ser Ala Asn
210 215 220
Arg Ser Asp Pro Val Thr Leu Asn Val Thr Tyr Gly Pro Asp Thr Pro
225 230 235 240
Thr Ile Ser Pro Ser Asp Thr Tyr Tyr Arg Pro Gly Ala Asn Leu Ser
245 250 255
Leu Ser Cys Tyr Ala Ala Ser Asn Pro Pro Ala Gln Tyr Ser Trp Leu
260 265 270
Ile Asn Gly Thr Phe Gln Gln Ser Thr Gln Glu Leu Phe Ile Pro Asn
275 280 285
Ile Thr Val Asn Asn Ser Gly Ser Tyr Thr Cys His Ala Asn Asn Ser
290 295 300
Val Thr Gly Cys Asn Arg Thr Thr Val Lys Thr Ile Ile Val Thr Glu
305 310 315 320
Leu Ser Pro Val Val Ala Lys Pro Gln Ile Lys Ala Ser Lys Thr Thr
325 330 335
Val Thr Gly Asp Lys Asp Ser Val Asn Leu Thr Cys Ser Thr Asn Asp
340 345 350
Thr Gly Ile Ser Ile Arg Trp Phe Phe Lys Asn Gln Ser Leu Pro Ser
355 360 365
Ser Glu Arg Met Lys Leu Ser Gln Gly Asn Thr Thr Leu Ser Ile Asn
370 375 380
Pro Val Lys Arg Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Trp Cys Glu Val Phe Asn
385 390 395 400
Pro Ile Ser Lys Asn Gln Ser Asp Pro Ile Met Leu Asn Val Asn Tyr
405 410 415
Asn Ala Leu Pro Gln Glu Asn Gly Leu Ser Pro Gly Ala Ile Ala Gly
420 425 430
Ile Val Ile Gly Val Val Ala Leu Val Ala Leu Ile Ala Val Ala Leu
435 440 445
Ala Cys Phe Leu His Phe Gly Lys Thr Gly Arg Ala Ser Asp Gln Arg
450 455 460
Asp Leu Thr Glu His Lys Pro Ser Val Ser Asn His Thr Gln Asp His
465 470 475 480
Ser Asn Asp Pro Pro Asn Lys Met Asn Glu Val Thr Tyr Ser Thr Leu
485 490 495
Asn Phe Glu Ala Gln Gln Pro Thr Gln Pro Thr Ser Ala Ser Pro Ser
500 505 510
Leu Thr Ala Thr Glu Ile Ile Tyr Ser Glu Val Lys Lys Gln
515 520 525
<210> 15
<211> 323
<212> PRT
<213> 人类
<400> 15
Met Ala Phe Ser Gly Ser Gln Ala Pro Tyr Leu Ser Pro Ala Val Pro
1 5 10 15
Phe Ser Gly Thr Ile Gln Gly Gly Leu Gln Asp Gly Leu Gln Ile Thr
20 25 30
Val Asn Gly Thr Val Leu Ser Ser Ser Gly Thr Arg Phe Ala Val Asn
35 40 45
Phe Gln Thr Gly Phe Ser Gly Asn Asp Ile Ala Phe His Phe Asn Pro
50 55 60
Arg Phe Glu Asp Gly Gly Tyr Val Val Cys Asn Thr Arg Gln Asn Gly
65 70 75 80
Ser Trp Gly Pro Glu Glu Arg Lys Thr His Met Pro Phe Gln Lys Gly
85 90 95
Met Pro Phe Asp Leu Cys Phe Leu Val Gln Ser Ser Asp Phe Lys Val
100 105 110
Met Val Asn Gly Ile Leu Phe Val Gln Tyr Phe His Arg Val Pro Phe
115 120 125
His Arg Val Asp Thr Ile Ser Val Asn Gly Ser Val Gln Leu Ser Tyr
130 135 140
Ile Ser Phe Gln Pro Pro Gly Val Trp Pro Ala Asn Pro Ala Pro Ile
145 150 155 160
Thr Gln Thr Val Ile His Thr Val Gln Ser Ala Pro Gly Gln Met Phe
165 170 175
Ser Thr Pro Ala Ile Pro Pro Met Met Tyr Pro His Pro Ala Tyr Pro
180 185 190
Met Pro Phe Ile Thr Thr Ile Leu Gly Gly Leu Tyr Pro Ser Lys Ser
195 200 205
Ile Leu Leu Ser Gly Thr Val Leu Pro Ser Ala Gln Arg Phe His Ile
210 215 220
Asn Leu Cys Ser Gly Asn His Ile Ala Phe His Leu Asn Pro Arg Phe
225 230 235 240
Asp Glu Asn Ala Val Val Arg Asn Thr Gln Ile Asp Asn Ser Trp Gly
245 250 255
Ser Glu Glu Arg Ser Leu Pro Arg Lys Met Pro Phe Val Arg Gly Gln
260 265 270
Ser Phe Ser Val Trp Ile Leu Cys Glu Ala His Cys Leu Lys Val Ala
275 280 285
Val Asp Gly Gln His Leu Phe Glu Tyr Tyr His Arg Leu Arg Asn Leu
290 295 300
Pro Thr Ile Asn Arg Leu Glu Val Gly Gly Asp Ile Gln Leu Thr His
305 310 315 320
Val Gln Thr
<210> 16
<211> 290
<212> PRT
<213> 人类
<400> 16
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115 120 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val
130 135 140
Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165 170 175
Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn
180 185 190
Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr
195 200 205
Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu
210 215 220
Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His
225 230 235 240
Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr
245 250 255
Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys
260 265 270
Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu
275 280 285
Glu Thr
290
<210> 17
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 17
Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5 10
<210> 18
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 18
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 19
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 19
Ala Arg Ser Pro Asp Tyr Ser Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 20
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 20
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn
1 5 10
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 21
Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 22
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Val
1 5 10
<210> 23
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Pro Asp Tyr Ser Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 24
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 24
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Ser Val Phe Gly Gly Gly Ile Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 25
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Pro Asp Tyr Ser Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 26
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 26
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Ser Val Phe Gly Gly Gly Ile Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Ala Glu Cys Ser
210 215
<210> 27
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 27
caggtccagc tggtccagtc aggggccgag gtcaaaaagc cagggtcatc tgtcaaagtg 60
tcttgtaagg catccggggg cacattttcc agctacgcta tctcctgggt gagacaggca 120
ccagggcagg gtctggagtg gatgggcgga atcattccca tcttcgggac cgccaactac 180
gctcagaagt ttcagggaag ggtcactatt accgccgaca aaagcacatc tactgcttat 240
atggagctgt ctagtctgag gtctgaagat accgcagtgt actattgcgc ccggagtccc 300
gactatagcc cttactatta ctatggcatg gatgtctggg gccagggaac cacagtgaca 360
gtctcatccg ctagcaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 420
acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660
gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc 720
gagggggcac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 780
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840
ttcaactggt atgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900
cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca agactggctg 960
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccatcctc catcgagaaa 1020
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080
cgggaggaga tgaccaagaa ccaagtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctatt ccaagctcac cgtggacaag 1260
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320
cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggcaaa 1359
<210> 28
<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 28
cagtccgtcc tgacacagcc accctcagcc tctggcaccc ctgggcagcg agtgacaatc 60
tcttgttctg ggagttcctc aaatattggt agtaacaccg tgaattggta ccagcagctg 120
cccggcacag cacctaagct gctgatctat ggaaactcaa ataggccatc cggagtcccc 180
gaccggttct ctggtagtaa atcaggcact tccgccagcc tggctattag cgggctgcag 240
tctgaggacg aagccgatta ctattgccag tcttacgatt ccagcctgtc tggaagtgtg 300
tttggcggag ggatcaagct gaccgtcctg ggccagccta aggctgcccc ctcggtcact 360
ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata 420
agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg gcctggaagg cagatagcag ccccgtcaag 480
gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc 540
tacctgagcc tgacgcctga gcagtggaag tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg 600
catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg gcccctgcag aatgctct 648
<210> 29
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 29
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 30
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 31
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 31
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 32
<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
115 120 125
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
180 185 190
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
210 215 220
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
305 310 315 320
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 33
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 33
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 34
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 34
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 35
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 35
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 36
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 36
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120

Claims (33)

1.治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，所述抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体与有效量的抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合；其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR3。
2.权利要求1的方法，其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区。
3.权利要求2的方法，其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链。
4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述抗人PD-L1抗体是阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
5.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3。
6.权利要求5的方法，其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区。
7.权利要求6的方法，其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、食道癌、软组织肉瘤或肝癌。
9.权利要求8的方法，其中所述肺癌是非小细胞肺癌。
10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与电离辐射同时、分开或依次组合施用。
11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与一种或多种化疗剂同时、分开或依次组合施用。
12.抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体，其用于与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次组合用于治疗癌症，其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR3。
13.权利要求12所用的抗人Tim-3抗体，其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区。
14.权利要求13所用的抗人Tim-3抗体，其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链。
15.权利要求12-14中任一项所用的抗人Tim-3抗体，其中所述抗人PD-L1抗体是阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
16.权利要求12-14中任一项所用的抗人Tim-3抗体，其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ IDNO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3。
17.权利要求16所用的抗人Tim-3抗体，其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区。
18.权利要求17所用的抗人Tim-3抗体，其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
19.权利要求12-18中任一项所用的抗人Tim-3抗体，其中所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、食道癌、软组织肉瘤或肝癌。
20.权利要求19所用的抗人Tim-3抗体，其中所述肺癌是非小细胞肺癌。
21.权利要求12-20中任一项所用的抗人Tim-3抗体，其中所述抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与电离辐射同时、分开或依次组合施用。
22.权利要求12-21中任一项所用的抗人Tim-3抗体，其中所述抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与一种或多种化疗剂同时、分开或依次组合施用。
23.抗人Tim-3(SEQ ID NO:1)抗体用于制备用于治疗癌症的药剂的用途，其中所述药剂待与抗人PD-L1(SEQ ID NO:16)抗体同时、分开或依次施用；其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID:2的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQID NO:4的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:6的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的LCDR3。
24.权利要求23的用途，其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的轻链可变区。
25.权利要求24的用途，其中所述抗人Tim-3抗体包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链。
26.权利要求23-25中任一项的用途，其中所述抗人PD-L1抗体是阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗。
27.权利要求23-25中任一项的用途，其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID:17的氨基酸序列的HCDR1，具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的HCDR2，具有SEQ ID NO:19的氨基酸序列的HCDR3，具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的LCDR1，具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的LCDR2，和具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的LCDR3。
28.权利要求27的用途，其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区和具有SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链可变区。
29.权利要求28的用途，其中所述抗人PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO:25的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链。
30.权利要求23-29中任一项的用途，其中所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、食道癌、软组织肉瘤或肝癌。
31.权利要求30的用途，其中所述肺癌是非小细胞肺癌。
32.权利要求23-31中任一项的用途，其中所述抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与电离辐射同时、分开或依次组合施用。
33.权利要求23-32中任一项的用途，其中所述抗人Tim-3抗体和抗人PD-L1抗体中的至少一种与一种或多种化疗剂同时、分开或依次组合施用。
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