KR20220040483A - 칼리크레인 관련 펩티다제 2 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 및 이의 용도 - Google Patents
칼리크레인 관련 펩티다제 2 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 및 이의 용도 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명의 실시형태는 단일특이적 항체 및 이중특이적 항체를 포함하는 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공한다. 본 발명의 추가 실시형태는 hk2-특이적 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 및 이들을 제조 및 사용하는 방법을 제공한다.
Description
서열 목록
본 출원에는 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록이 포함되어 있으며 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함된다. 2020년 6월 23일에 생성된 상기 ASCII 사본의 이름은 JBI6125USNP1_SL.txt이고 크기는 764,265바이트이다.
기술분야
본 발명은 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 hK2 단백질에 결합하는 항원 결합 도메인, 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포, 이의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
전립선암은 남성에서 두 번째로 가장 빈번하게 진단되는 암으로 여섯 번째로 높은 암 사망 원인이며, 전세계적으로 남성에서 총 신규 암 환자의 14%(903,500명) 및 총 암 사망자의 6%(258,400명)를 차지한다. 전립선암의 진단부터 사망까지의 과정은 하기의 질환 정도, 호르몬 상태, 및 검출가능한 전이의 유무에 기초한 일련의 임상 병기로서 최적으로 분류된다: 국소성 질환, 검출가능한 전이를 수반하지 않는 방사선 요법 또는 수술 후 전립선-특이적 항원(prostate-specific antigen, PSA)의 수준 상승, 및 비-거세 또는 거세 단계에서의 임상적 전이. 수술, 방사선, 또는 이 둘의 조합이 국소성 질환을 갖는 환자들에 대해 치유 효과를 발휘할 수 있지만, PSA의 상승 수준에 의해 입증되는 바와 같이 이들 환자의 상당한 비율에서 질병이 재발하며, 이는 특히 고위험 그룹에서의 전이의 발생 - 질환의 치명적인 단계로의 이행 - 을 초래할 수 있다.
안드로겐 박탈 요법(ADT)은 일반적으로 하기의 예측가능한 결과를 갖는 표준 치료법이다: PSA의 감소, 종양이 증식하지 않는 안정기에 이어 PSA 상승 및 거세-저항성 질환으로서의 재성장. 역사적으로, ADT는 전이성 전립선암을 갖는 환자에 대한 표준 치료였다.
칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2, HK2)는 전립선 조직 및 전립선암에 특이적인 안드로겐 수용체(AR) 유도된 발현을 갖는 트립신 유사 효소이다. hK2는 막관통 프로테아제, 세린 2(TMPRSS2)에 의해 활성화되고 전립선 관으로 분비되어 사정액 내의 세포외 기질인 세메노겔린을 절단하는 캐스케이드를 개시하여 정자 운동성을 향상시킨다. hK2 발현은 전립선 및 전립선암 조직으로 제한되지만, 최근 hK2가 스테로이드 호르몬에 의한 AR 경로의 적절한 활성화 후에 유방암주 및 1차 환자 샘플에서 검출가능하다는 것이 입증되었다(미국 특허출원공개 2018/0326102호). PSA와 유사하게, 혈액으로의 촉매적으로 불활성인 hK2의 역행 방출은 전립선의 고도로 구조화된 조직이 비대 또는 악성 변형에 의해 손상될 때 발생한다.
치료 및 진단 목적을 위한 차세대 hK2 결합 도메인이 필요하다.
본 개시내용은 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 137의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 137의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 164의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 165의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 167의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 168의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 169의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 204의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 205의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3.
본 개시내용은 또한 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 단리된 항원 결합 도메인을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 75의 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 74의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
본 개시내용은 또한 특정 VH 및 VL 아미노산 서열을 포함하는 hK2에 결합하는 단리된 항원 결합 도메인을 제공한다.
본 개시내용은 또한 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 137의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 137의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 164의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 165의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 167의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 168의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 169의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 204의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 205의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3. 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 162의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2 및 LCDR3.
본 개시내용은 또한 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 75의 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 74의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
본 개시내용은 또한 특정 VH 및 VL 아미노산 서열을 포함하는 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공한다.
본 개시내용은 또한 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공한다.
본 개시내용은 또한 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 137의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 137의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 164의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 165의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 167의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 168의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 169의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 204의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 205의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3. 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 162의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2 및 LCDR3.
본 개시내용은 또한 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 75의 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 74의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 단리된 항 hK2/항 CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 단리된 항원 결합 도메인을 포함하는 면역접합체를 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 포함하는 면역접합체를 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 포함하는 면역접합체를 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 CAR을 포함하는 면역접합체를 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 단리된 항원 결합 도메인을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 단리된 다중특이적 단백질을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 CAR을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 단리된 항원 결합 도메인을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 CAR을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
본 개시내용은 또한 치료적 유효량의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR-T, 본 개시내용의 면역접합체 또는 본 개시내용의 약학 조성물을 hK2 발현 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR-T, 본 개시내용의 면역접합체 또는 본 개시내용의 약학 조성물을 hK2 발현 세포의 양을 감소시키기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR-T, 본 개시내용의 면역접합체 또는 본 개시내용의 약학 조성물을 대상체에서 hK2 발현 암의 확립을 방지하기 위해 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암의 확립을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR-T, 본 개시내용의 면역접합체 또는 본 개시내용의 약학 조성물을 비암성 병태를 치료하기 위해 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 hK2 발현 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 치료적 유효량의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR-T, 본 개시내용의 면역접합체 또는 본 개시내용의 약학 조성물을 전립선암을 치료하기에 충분한 시간 동안 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 전립선암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 치료적 유효량의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR-T, 본 개시내용의 면역접합체 또는 본 개시내용의 약학 조성물을 유방암을 치료하기에 충분한 시간 동안 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 유방암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 면역접합체를 대상체에게 투여하고, hK2에 대한 면역접합체의 결합을 검출함으로써 전립선암 또는 유방암을 검출하는 것을 포함하는 대상체에서 전립선암 또는 유방암을 검출하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR-T, 본 개시내용의 면역접합체 또는 본 개시내용의 약학 조성물을 포함하는 키트를 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인에 결합하는 항-이디오타입(anti-idiotypic) 항체를 제공한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인; 막관통 도메인; 및 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 선택적으로 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 제공한다.
전술한 내용은 첨부 도면에 예시된 바와 같은 예시적인 실시형태에 대한 하기의 보다 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. TM: 막관통.
도 1은 mu11B6(SEQ ID NO: 125), hu11B6(SEQ ID NO: 5), KL2B357(SEQ ID NO: 159), KL2B358(SEQ ID NO: 161), KL2B359(SEQ ID NO: 139), KL2B360(SEQ ID NO: 159), HCF3(SEQ ID NO: 6) 및 HCG5(SEQ ID NO: 4)의 VH 도메인의 서열 정렬을 도시한다.
도 2는 mu11B6(SEQ ID NO: 124), hu11B6(SEQ ID NO: 2), KL2B357(SEQ ID NO: 160), KL2B358(SEQ ID NO: 140), KL2B359(SEQ ID NO: 140), KL2B360(SEQ ID NO: 140), LDC6(SEQ ID NO: 1) 및 LCB7(SEQ ID NO: 3)의 VL 도메인의 서열 정렬을 도시한다.
도 3은 hK2 항원의 서열에 맵핑된 선택된 hK2 항체의 결합 에피토프를 도시한다. 도면은 SEQ ID NO: 467로서 각 서열을 개시한다.
도 4a 및 도 4b는 1차 인간 T 세포에 대한 하이브리도마 상청액의 결합을 도시한다. 클론 UCHT1은 양성 대조군으로 사용되었다(도 1b); 마우스 IgG1 동형(isotype)(mIgG1)을 음성 대조군으로 사용하였다.
도 5는 대장균에서 발현되는 항-CD3 scFv 변이체의 CD3에 대한 결합을 도시한다.
도 6은 CD3B815(SEQ ID NO: 249), CD3W244(SEQ ID NO: 250), CD3W245(SEQ ID NO: 251), CD3W246(SEQ ID NO: 252), CD3W247(SEQ ID NO: 253), 및 CD3W248(SEQ ID NO: 254)의 VL 영역의 정렬을 도시한다.
도 7은 인간 CD3ε에 결합된 CD3W245(CD3ε:CD3W245) 및 CD3ε에 결합된 OKT3(CD3ε:OKT)의 수소-중수소 교환 질량분석(HDX-MS)을 도시한다. 도시된 아미노산 서열은 CD3ε의 ECD 도메인의 105개 잔기 중 잔기 2-93을 나타내고 CD3ε SEQ ID NO: 340의 잔기 1-91에 상응한다. CD3ε 단독과 비교하여 단일 밑줄은 중수소화 수준이 10% 내지 30% 감소한 세그먼트를 나타내고 이중 밑줄은 항체의 존재 하에 중수소화 수준이 >30% 감소한 세그먼트를 나타낸다.
도 8a는 표적 세포 사멸을 정량화하기 위해 실시간으로 incuCyte 이미징 시스템에 의해 측정된 KL2BxCD3 이중특이적 분자의 시험관내 표적 세포독성을 도시한다.
도 8b는 표적 세포 사멸로부터의 아포토시스 신호를 측정하기 위해 형광 카스파제 3/7 시약에 의해 측정된 KL2BxCD3 이중특이적 분자의 시험관내 표적 세포독성을 도시한다.
도 9a는 상이한 용량에서 CD25 양성 세포의 빈도를 보여줌으로써 KLK2xCD3 이중특이적 항체에 의한 시험관내 T 세포 활성화 및 증식을 도시한다.
도 9b는 세포가 증식 게이트로 들어가는 빈도를 보여줌으로써 KLK2xCD3 이중특이적 항체에 의한 시험관내 T 세포 활성화 및 증식을 도시한다.
도 10a는 KLK2xCD3 이중특이적 항체에 의한 시험관내 T 세포 INF-γ 방출을 도시한다.
도 10b는 KLK2xCD3 이중특이적 항체에 의한 시험관내 T 세포 TNF-α 방출을 도시한다.
도 11은 hK2 결합 키메라 인공 수용체(CAR)의 디자인의 도식을 도시한다. hK2 결합 scFv는 다양한 CAR에서 VH-VL 또는 VL-VH 방향으로 클로닝되었다.
도 12a 및 도 12b는 T 세포 표면 상의 hK2 CAR 발현을 도시한다. 1차 인간 T 세포는 mRNA 없이(MOCK) 또는 hK2 scFv CAR 또는 관련 없는 대조군 CAR을 발현하는 10 ㎍의 mRNA와 함께 전기천공되었다. 전기천공 24시간 후 CAR 표면 발현은 2 ㎍/ml의 비오틴화된 L-단백질 및 스트렙타비딘-접합된 PE(위쪽 패널) 또는 2 ㎍/ml 비오틴화된 L-단백질 및 스트렙타비딘-접합된 PE(아래쪽 패널) 또는 비오틴화된 hK2(1 ㎍/ml) 및 스트렙타비딘-접합된 PE로 염색한 후 유세포 분석에 의해 측정되었다.
도 13은 표시된 이펙터-대-표적 세포(E/T) 비에서 20시간 유동 기반 분석에서 hK2 CAR-T 세포에 의한 hK2 양성(VCaP, 위쪽 패널) 및 음성(DU145, 아래쪽 패널) 종양 세포의 세포독성을 도시한다. 일시적 형질감염 24시간 후, 표적 세포를 세포 추적 바이올렛(CTV: Cell Trace Violet) 형광 염료로 표지한 후 hK2 CAR-T 세포와 공동 배양하였다. Mock T 세포는 음성 이펙터 대조군으로 사용되었다. 사멸 백분율은 CAR-T 세포 없이 배양된 살아있는 표적의 수에 대한 공동 배양물에 남아 있는 살아있는(생존 염료 음성) 표적(CTV 양성) 세포의 절대 수의 비로 측정되었다.
도 14는 실시간 hK2 CAR-T 세포 매개 세포독성을 나타낸다. Mock, 10 ㎍ mRNA 전기천공된(형질감염 24시간 후) hK2 11B6 CAR LH 또는 대조군 CAR-T 세포와 대략 72시간 동안 상이한 E:T 비로 배양된 VCaP 표적 세포(5E4)에 대한 정규화된 세포 지수(CI) 플롯. 단독으로 시딩했을 때 표적 세포가 플레이트에 부착되고 증식하여 CI 판독값이 증가한다. T 세포가 표적 세포에 첨가되었을 때, hK2 CAR 및 대조군 CAR-T 세포는 5:1 내지 0.156:1의 E/T 비에서 hK2 양성 VCap 세포 세포용해 및 후속적인 CI의 점진적인 감소를 매개하였다. 이펙터 세포의 첨가 후 CI 값의 감소는 표적 세포의 생존력 상실을 반영하였다. Y축은 RTCA 소프트웨어에 의해 생성되고 실시간으로 표시되는 정규화된 CI를 보여준다. X축은 세포 배양 시간 및 처리 시간(시간)이다. CI의 평균 값은 ± 표준 편차로 플롯되었다.
도 15는 hK2를 발현하지 않는 표적 세포의 실시간 hK2 CAR-T 세포 매개 세포독성의 결여를 보여준다. Mock, 10 ㎍ mRNA 전기천공된(형질감염 24시간 후) hK2 11B6 CAR LH 또는 대조군 CAR-T 세포와 대략 72시간 동안 상이한 E:T 비로 배양된 DU145 표적 세포(5E3)에 대한 정규화된 세포 지수(CI) 플롯. 단독으로 시딩했을 때 표적 세포가 플레이트에 부착되고 증식하여 CI 판독값이 증가한다. T 세포가 표적 세포에 첨가되었을 때, hK2 CAR-T 및 대조군 CAR-T 세포는 첨가 후 CI를 감소시키지 않았으며 이는 세포용해 활성을 나타내지 않았다. Y축은 RTCA 소프트웨어에 의해 생성되고 실시간으로 표시되는 정규화된 CI를 보여준다. X축은 세포 배양 시간 및 처리 시간(시간)이다. CI의 평균 값은 ± 표준 편차로 플롯되었다.
도 16은 항원 자극 hK2 CAR-T 세포에 의한 인터페론-γ(IFN-γ) 생성을 도시한다. 상청액을 xCELLigence 기반 사멸 분석에서 대략 70시간 공동 배양(VCap#5E4, DU145#5E3)에서 수집하였다. hK2 CAR_LH 및 대조군 CAR 변형된 T 세포는 hK2 발현 VCaP 세포와의 공동 배양 동안 IFN-γ를 분비했지만 hK2 음성 DU145 세포와의 공동 배양 동안에는 그렇지 않았다. 2회 배양으로부터의 평균 IFN-γ 농도 ± 표준 편차(pg/ml)가 도시되어 있다.
도 17은 도면에 도시된 바와 같은 다양한 hK2 CAR 작제물로 형질도입된 신호전달-반응성 NFAT 프로모터(JNL 세포)에 의해 유도되는 루시페라제 유전자를 함유하는 Jurkat 세포 상의 hK2 CAR 작제물(작제물 1-10)의 발현을 도시한다. 발현은 비오틴화된 hK2에 이어 스트렙타비딘-접합된 PE에 의해 결정되었다.
도 18은 결합 시 JNL 세포에서 루시페라제 발현에 의해 검출된 CAR1-10 작제물 및 이의 동족 세포 항원(표적 세포 상의 hK2) 사이의 결합을 도시한다. 표시된 CAR 작제물로 형질도입된 JNL 세포(CAR1-10) 및 형질도입되지 않은 JNL 세포(UTD)를 표적 세포주(VCaP 또는 DU145 세포)와 공동 배양하고 루시페라제 활성을 발광 강도로 측정하였다. 작제물은 발광 강도가 항원 발현 세포의 존재 하에 UTD 세포 수준의 1.5배를 초과할 때 활성인 것으로 간주하였다.
도 19는 T 세포 표면 상의 hK2 CAR1-10 또는 부모 11B6_HL 및 11B6_LH 발현을 도시한다. 1차 인간 T 세포는 열적으로 안정화된 11B6 및 부모 scFv CAR 렌티바이러스로 형질도입되었고(감염 다중도(MOI): 3) CAR 발현은 형질도입 14일 후 비오틴화된 hK2(1 ㎍/ml)에 이어 스트렙타비딘-접합된 PE에 의해 결정되었다. UTD: 형질도입되지 않은 대조군.
도 20은 항원 의존적 세포독성을 평가하는 실시간 IncuCyte 사멸 분석에서 CAR1-10 또는 부모 11B6_HL 또는 11B6_LH로 형질도입된 T 세포에 의한 1:1 또는 0.5:1의 이펙터:표적 비에서 hK2 양성 VCaP 세포의 종양 세포 성장 억제 백분율을 도시한다. 종양 세포 성장 억제(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%).
도 21은 항원 의존적 세포독성을 평가하는 실시간 IncuCyte 사멸 분석에서 CAR1-10 또는 부모 11B6_HL 또는 11B6_LH로 형질도입된 T 세포에 의한 1:1의 이펙터:표적 비에서 PC3 세포의 종양 세포 성장 억제 백분율을 도시한다. 종양 세포 성장 억제(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%).
도 22는 hK2 CAR-T 세포에 의한 사이토카인 방출을 도시한다. 1:1의 E/T 비로 hK2 CAR-T 세포와 VCaP 세포의 밤새(대략 20시간) 공동 배양하여 수집된 상청액은 13-플렉스 Milliplex 인간 고감도 T 세포 키트(HSTCMAG28SPMX13)를 사용하여 분석되었다. hK2 CAR-T 세포는 hK2를 발현하는 VCaP 세포와 공동 배양하는 동안 사이토카인을 분비했지만, 형질도입되지 않은 T 세포(UTD)와의 공동 배양 동안에는 최소한으로 분비했다. 2회 배양으로부터의 평균 사이토카인 농도 ± 표준 편차(pg/ml)가 도시되어 있다.
도 23은 hK2 CAR-T 세포에 의한 IFN-γ 방출을 도시한다. 상청액은 1:1의 E/T 비로 hK2 CAR-T 세포와 VCap, DU145(5E4 세포) 세포를 밤새(대략 20시간) 공동 배양하여 수집되었다. hK2 CAR 변형된 T 세포는 hK2 발현 VCaP 세포와의 공동 배양 동안 IFN-γ를 분비하지만, hK2 음성 DU145 세포와의 공동 배양 동안에는 그렇지 않았다. 2회 배양으로부터의 평균 IFN-γ 농도 ± 표준 편차(pg/ml)가 도시되어 있다. CD3/28 비드 자극 T 세포 및 T 세포 단독을 각각 양성 및 음성 대조군으로 사용하였다.
도 24a 및 도 24b는 VCaP 또는 DU145 세포와 5일 공동 배양 후 또는 CD3/28 비드로 자극한 후 세포 추적 바이올렛(CTV) 표지된 형질도입되지 않은 T 세포(도면에서 T 세포 단독) 또는 CAR1-10-형질도입된 CAR-T의 유세포 분석 히스토그램을 도시한다.
도 25a 및 도 25b는 VCaP 또는 DU145 세포와 5일 공동 배양 후 또는 CD3/28 비드로 자극한 후 CD25 양성 세포 추적 바이올렛(CTV) 표지된 형질도입되지 않은 T 세포(도면에서 T 세포 단독) 또는 CAR1-10-형질도입된 CAR-T의 유세포 분석 히스토그램을 도시한다.
도 26은 hK2 CAR-T 세포가 VCaP 세포와의 공동 배양 5일 후 CD3/28 비드 양성 대조군보다 더 강력하게 증식했음을 도시한다. 상이한 CAR 작제물 조작된 T 세포는 상이한 증식 활성을 가졌고 상이한 CAR+ T 세포 수를 나타냈다. CAR+ T 세포 수는 3개의 기술 복제물로부터의 평균 절대 세포 수 +/- SEM을 기반으로 하였다.
도 27은 1차 T 세포의 표면에서의 CAR17(KL2B413_HL), CAR18(KL2B413_LH), CAR19(KL2B359_HL) 및 CAR20(HK2B359_LH)의 표면 발현을 도시한다. 각 히스토그램 내부의 숫자는 표시된 CAR을 발현하는 세포의 백분율을 나타낸다.
도 28은 JNL 세포에서의 CAR17(KL2B413_HL), CAR18(KL2B413_LH), CAR19(KL2B359_HL) 및 CAR20(KL2B359_LH)의 표면 발현을 도시한다.
도 29는 도면에 나타낸 바와 같이 다양한 표적 세포 상의 이의 동족 수용체에 대한 시험 CAR-T의 결합에 의해 매개되는 JNL 세포에서의 루시페라제 발현으로 인한 상대 광 단위(RLU)를 도시한다. 표시된 CAR 클론 및 형질도입되지 않은 JNL 세포(UTD)를 함유하는 JNL 세포를 표적 세포주(VCaP, LNCaP/hK2, LNCaP, C4-2B, 22Rv1 또는 DU145 세포)와 공동 배양하고 루시페라제 활성을 발광 강도(RLU, 상대 광 단위)로 측정하였다. KL2B413_HL: CAR17, KL2B413_LH: CAR18, HL2B359_HL: CAR19, KL2B359_LH: CAR20.
도 30은 항원 의존적 세포독성을 평가하는 실시간 IncuCyte 사멸 분석에서 CAR17(도면에서 B413HL), CAR18(도면에서 B413LH), CAR19(도면에서 B359HL) 및 CAR20(도면에서 B359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포에 의한 hK2 양성 VCaP 세포의 종양 세포 성장 억제 백분율을 나타낸다. 종양 세포 성장 억제(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%).
도 31은 항원 의존적 세포독성을 평가하는 실시간 IncuCyte 사멸 분석에서 CAR17(도면에서 B413HL), CAR18(도면에서 B413LH), CAR19(도면에서 B359HL) 및 CAR20(도면에서 B359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포에 의한 hK2 음성 DU145 세포의 종양 세포 성장 억제 백분율을 나타낸다. 종양 세포 성장 억제(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%).
도 32는 도면에 표시된 세포와의 공동 배양에서 CAR17(도면에서 KLK2B413HL), CAR18(도면에서 KLK2B413LH), CAR19(도면에서 KLK2B359HL) 및 CAR20(도면에서 KLK2B359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포 또는 형질도입되지 않은 T 세포(UTD)에 의한 IFN-γ 생성을 도시한다.
도 33a 및 도 33b는 CAR17(도면에서 B413HL), CAR18(도면에서 B413LH), CAR19(도면에서 B359HL) 및 CAR20(B359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포 및 VCap 세포의 공동 배양이 CD107a+hK2-CAR-T+ 세포의 증가를 야기한다는 것을 도시하며, 이는 면역 세포 활성화 및 세포독성 탈과립화를 나타내는 반면, hK2 음성 DU145 세포와의 공동 배양은 효과가 없었다.
도 34a 및 도 34b는 VCap 또는 DU145 세포와의 5일 공동 배양 후 세포 추적 바이올렛(CTV) 표지된 형질도입되지 않은 T 세포(도면에서 T 세포 단독) 또는 CAR17(도면에서 KLB413HL), CAR18(도면에서 KLB413LH), CAR19(도면에서 KLB359HL) 및 CAR20(도면에서 KLB359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포의 유세포 분석 히스토그램을 도시한다. UTD: 형질도입되지 않음.
도 35는 VCAP 또는 DU145 세포와의 5일 공동 배양 후 세포 추적 바이올렛(CTV) 표지된 형질도입되지 않은 T 세포(도면에서 T 세포 단독) 또는 CAR17(도면에서 KLB413HL), CAR18(도면에서 KLB413LH), CAR19(도면에서 KLB359HL) 및 CAR20(도면에서 KLB359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포의 공동 배양에서 증식 세포의 백분율을 도시한다. UTD: 형질도입되지 않음.
도 36a 및 도 36b는 VCaP 또는 DU145 세포와의 5일 공동 배양 후 CAR17(도면에서 KLB413HL), CAR18(도면에서 KLB413LH), CAR19(도면에서 KLB359HL) 및 CAR20(도면에서 KLB359LH)으로 형질도입된 CTV+CD25+ CAR-T 세포의 유세포 분석 히스토그램을 도시한다.
도 37은 VCaP 또는 DU145 세포와의 5일 공동 배양 후 단독으로(T 세포 단독) 또는 CD2/28 비드 자극 후 CAR17(도면에서 KLB413HL), CAR18(도면에서 KLB413LH), CAR19(도면에서 KLB359HL) 및 CAR20(도면에서 KLB359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포 또는 형질도입되지 않은 T 세포(UTD)를 발현하는 CTV의 백분율을 도시한다.
도 38a 내지 도 38f는 선택된 항-hK2 항체 및 선택된 항-hK2/CD3 이중특이적 항체의 결합 파라토프를 도시한다. 밑줄 친 서열은 CDR 영역을 나타내고 강조 표시된 서열은 파라토프 영역을 나타낸다. 도 38a는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 219 및 220를 개시한다. 도 38b는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 213 및 224를 개시한다. 도 38c는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 203 및 215를 개시한다. 도 38d는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 468 및 469를 개시한다. 도 38e는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 354 및 221를 개시한다. 도 38f는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 356 및 222를 개시한다.
도 39a는 VCaP 이종이식 마우스 모델에서 KLK2xCD3 이중특이적 항체의 생체내 효능 및 사이토카인 프로파일을 도시한다. 3개의 KLK2xCD3 이중특이적 항체를 3가지 용량 수준에서 시험하였다: 5 mg/㎏, 1 mg/㎏ 및 0.2 mg/㎏. 종양 성장 억제는 종양 부피 측정을 기반으로 하여 플롯되었다.
도 39b는 VCaP 이종이식 마우스 모델에서 KLK2xCD3 이중특이적 항체의 생체내 효능 및 사이토카인 프로파일을 도시한다. 100 μl 혈액 샘플은 첫 번째 투여 6시간 후에 안와후 출혈을 통해 동물로부터 수집되었다. 혈장은 고속 원심분리에 의해 혈액 샘플로부터 분리되었다. Luminex 분석을 수행하여 상이한 KLK2 이중특이적 용량에서 IFN-γ 및 TNF-α 농도를 정량화하였다.
도 1은 mu11B6(SEQ ID NO: 125), hu11B6(SEQ ID NO: 5), KL2B357(SEQ ID NO: 159), KL2B358(SEQ ID NO: 161), KL2B359(SEQ ID NO: 139), KL2B360(SEQ ID NO: 159), HCF3(SEQ ID NO: 6) 및 HCG5(SEQ ID NO: 4)의 VH 도메인의 서열 정렬을 도시한다.
도 2는 mu11B6(SEQ ID NO: 124), hu11B6(SEQ ID NO: 2), KL2B357(SEQ ID NO: 160), KL2B358(SEQ ID NO: 140), KL2B359(SEQ ID NO: 140), KL2B360(SEQ ID NO: 140), LDC6(SEQ ID NO: 1) 및 LCB7(SEQ ID NO: 3)의 VL 도메인의 서열 정렬을 도시한다.
도 3은 hK2 항원의 서열에 맵핑된 선택된 hK2 항체의 결합 에피토프를 도시한다. 도면은 SEQ ID NO: 467로서 각 서열을 개시한다.
도 4a 및 도 4b는 1차 인간 T 세포에 대한 하이브리도마 상청액의 결합을 도시한다. 클론 UCHT1은 양성 대조군으로 사용되었다(도 1b); 마우스 IgG1 동형(isotype)(mIgG1)을 음성 대조군으로 사용하였다.
도 5는 대장균에서 발현되는 항-CD3 scFv 변이체의 CD3에 대한 결합을 도시한다.
도 6은 CD3B815(SEQ ID NO: 249), CD3W244(SEQ ID NO: 250), CD3W245(SEQ ID NO: 251), CD3W246(SEQ ID NO: 252), CD3W247(SEQ ID NO: 253), 및 CD3W248(SEQ ID NO: 254)의 VL 영역의 정렬을 도시한다.
도 7은 인간 CD3ε에 결합된 CD3W245(CD3ε:CD3W245) 및 CD3ε에 결합된 OKT3(CD3ε:OKT)의 수소-중수소 교환 질량분석(HDX-MS)을 도시한다. 도시된 아미노산 서열은 CD3ε의 ECD 도메인의 105개 잔기 중 잔기 2-93을 나타내고 CD3ε SEQ ID NO: 340의 잔기 1-91에 상응한다. CD3ε 단독과 비교하여 단일 밑줄은 중수소화 수준이 10% 내지 30% 감소한 세그먼트를 나타내고 이중 밑줄은 항체의 존재 하에 중수소화 수준이 >30% 감소한 세그먼트를 나타낸다.
도 8a는 표적 세포 사멸을 정량화하기 위해 실시간으로 incuCyte 이미징 시스템에 의해 측정된 KL2BxCD3 이중특이적 분자의 시험관내 표적 세포독성을 도시한다.
도 8b는 표적 세포 사멸로부터의 아포토시스 신호를 측정하기 위해 형광 카스파제 3/7 시약에 의해 측정된 KL2BxCD3 이중특이적 분자의 시험관내 표적 세포독성을 도시한다.
도 9a는 상이한 용량에서 CD25 양성 세포의 빈도를 보여줌으로써 KLK2xCD3 이중특이적 항체에 의한 시험관내 T 세포 활성화 및 증식을 도시한다.
도 9b는 세포가 증식 게이트로 들어가는 빈도를 보여줌으로써 KLK2xCD3 이중특이적 항체에 의한 시험관내 T 세포 활성화 및 증식을 도시한다.
도 10a는 KLK2xCD3 이중특이적 항체에 의한 시험관내 T 세포 INF-γ 방출을 도시한다.
도 10b는 KLK2xCD3 이중특이적 항체에 의한 시험관내 T 세포 TNF-α 방출을 도시한다.
도 11은 hK2 결합 키메라 인공 수용체(CAR)의 디자인의 도식을 도시한다. hK2 결합 scFv는 다양한 CAR에서 VH-VL 또는 VL-VH 방향으로 클로닝되었다.
도 12a 및 도 12b는 T 세포 표면 상의 hK2 CAR 발현을 도시한다. 1차 인간 T 세포는 mRNA 없이(MOCK) 또는 hK2 scFv CAR 또는 관련 없는 대조군 CAR을 발현하는 10 ㎍의 mRNA와 함께 전기천공되었다. 전기천공 24시간 후 CAR 표면 발현은 2 ㎍/ml의 비오틴화된 L-단백질 및 스트렙타비딘-접합된 PE(위쪽 패널) 또는 2 ㎍/ml 비오틴화된 L-단백질 및 스트렙타비딘-접합된 PE(아래쪽 패널) 또는 비오틴화된 hK2(1 ㎍/ml) 및 스트렙타비딘-접합된 PE로 염색한 후 유세포 분석에 의해 측정되었다.
도 13은 표시된 이펙터-대-표적 세포(E/T) 비에서 20시간 유동 기반 분석에서 hK2 CAR-T 세포에 의한 hK2 양성(VCaP, 위쪽 패널) 및 음성(DU145, 아래쪽 패널) 종양 세포의 세포독성을 도시한다. 일시적 형질감염 24시간 후, 표적 세포를 세포 추적 바이올렛(CTV: Cell Trace Violet) 형광 염료로 표지한 후 hK2 CAR-T 세포와 공동 배양하였다. Mock T 세포는 음성 이펙터 대조군으로 사용되었다. 사멸 백분율은 CAR-T 세포 없이 배양된 살아있는 표적의 수에 대한 공동 배양물에 남아 있는 살아있는(생존 염료 음성) 표적(CTV 양성) 세포의 절대 수의 비로 측정되었다.
도 14는 실시간 hK2 CAR-T 세포 매개 세포독성을 나타낸다. Mock, 10 ㎍ mRNA 전기천공된(형질감염 24시간 후) hK2 11B6 CAR LH 또는 대조군 CAR-T 세포와 대략 72시간 동안 상이한 E:T 비로 배양된 VCaP 표적 세포(5E4)에 대한 정규화된 세포 지수(CI) 플롯. 단독으로 시딩했을 때 표적 세포가 플레이트에 부착되고 증식하여 CI 판독값이 증가한다. T 세포가 표적 세포에 첨가되었을 때, hK2 CAR 및 대조군 CAR-T 세포는 5:1 내지 0.156:1의 E/T 비에서 hK2 양성 VCap 세포 세포용해 및 후속적인 CI의 점진적인 감소를 매개하였다. 이펙터 세포의 첨가 후 CI 값의 감소는 표적 세포의 생존력 상실을 반영하였다. Y축은 RTCA 소프트웨어에 의해 생성되고 실시간으로 표시되는 정규화된 CI를 보여준다. X축은 세포 배양 시간 및 처리 시간(시간)이다. CI의 평균 값은 ± 표준 편차로 플롯되었다.
도 15는 hK2를 발현하지 않는 표적 세포의 실시간 hK2 CAR-T 세포 매개 세포독성의 결여를 보여준다. Mock, 10 ㎍ mRNA 전기천공된(형질감염 24시간 후) hK2 11B6 CAR LH 또는 대조군 CAR-T 세포와 대략 72시간 동안 상이한 E:T 비로 배양된 DU145 표적 세포(5E3)에 대한 정규화된 세포 지수(CI) 플롯. 단독으로 시딩했을 때 표적 세포가 플레이트에 부착되고 증식하여 CI 판독값이 증가한다. T 세포가 표적 세포에 첨가되었을 때, hK2 CAR-T 및 대조군 CAR-T 세포는 첨가 후 CI를 감소시키지 않았으며 이는 세포용해 활성을 나타내지 않았다. Y축은 RTCA 소프트웨어에 의해 생성되고 실시간으로 표시되는 정규화된 CI를 보여준다. X축은 세포 배양 시간 및 처리 시간(시간)이다. CI의 평균 값은 ± 표준 편차로 플롯되었다.
도 16은 항원 자극 hK2 CAR-T 세포에 의한 인터페론-γ(IFN-γ) 생성을 도시한다. 상청액을 xCELLigence 기반 사멸 분석에서 대략 70시간 공동 배양(VCap#5E4, DU145#5E3)에서 수집하였다. hK2 CAR_LH 및 대조군 CAR 변형된 T 세포는 hK2 발현 VCaP 세포와의 공동 배양 동안 IFN-γ를 분비했지만 hK2 음성 DU145 세포와의 공동 배양 동안에는 그렇지 않았다. 2회 배양으로부터의 평균 IFN-γ 농도 ± 표준 편차(pg/ml)가 도시되어 있다.
도 17은 도면에 도시된 바와 같은 다양한 hK2 CAR 작제물로 형질도입된 신호전달-반응성 NFAT 프로모터(JNL 세포)에 의해 유도되는 루시페라제 유전자를 함유하는 Jurkat 세포 상의 hK2 CAR 작제물(작제물 1-10)의 발현을 도시한다. 발현은 비오틴화된 hK2에 이어 스트렙타비딘-접합된 PE에 의해 결정되었다.
도 18은 결합 시 JNL 세포에서 루시페라제 발현에 의해 검출된 CAR1-10 작제물 및 이의 동족 세포 항원(표적 세포 상의 hK2) 사이의 결합을 도시한다. 표시된 CAR 작제물로 형질도입된 JNL 세포(CAR1-10) 및 형질도입되지 않은 JNL 세포(UTD)를 표적 세포주(VCaP 또는 DU145 세포)와 공동 배양하고 루시페라제 활성을 발광 강도로 측정하였다. 작제물은 발광 강도가 항원 발현 세포의 존재 하에 UTD 세포 수준의 1.5배를 초과할 때 활성인 것으로 간주하였다.
도 19는 T 세포 표면 상의 hK2 CAR1-10 또는 부모 11B6_HL 및 11B6_LH 발현을 도시한다. 1차 인간 T 세포는 열적으로 안정화된 11B6 및 부모 scFv CAR 렌티바이러스로 형질도입되었고(감염 다중도(MOI): 3) CAR 발현은 형질도입 14일 후 비오틴화된 hK2(1 ㎍/ml)에 이어 스트렙타비딘-접합된 PE에 의해 결정되었다. UTD: 형질도입되지 않은 대조군.
도 20은 항원 의존적 세포독성을 평가하는 실시간 IncuCyte 사멸 분석에서 CAR1-10 또는 부모 11B6_HL 또는 11B6_LH로 형질도입된 T 세포에 의한 1:1 또는 0.5:1의 이펙터:표적 비에서 hK2 양성 VCaP 세포의 종양 세포 성장 억제 백분율을 도시한다. 종양 세포 성장 억제(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%).
도 21은 항원 의존적 세포독성을 평가하는 실시간 IncuCyte 사멸 분석에서 CAR1-10 또는 부모 11B6_HL 또는 11B6_LH로 형질도입된 T 세포에 의한 1:1의 이펙터:표적 비에서 PC3 세포의 종양 세포 성장 억제 백분율을 도시한다. 종양 세포 성장 억제(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%).
도 22는 hK2 CAR-T 세포에 의한 사이토카인 방출을 도시한다. 1:1의 E/T 비로 hK2 CAR-T 세포와 VCaP 세포의 밤새(대략 20시간) 공동 배양하여 수집된 상청액은 13-플렉스 Milliplex 인간 고감도 T 세포 키트(HSTCMAG28SPMX13)를 사용하여 분석되었다. hK2 CAR-T 세포는 hK2를 발현하는 VCaP 세포와 공동 배양하는 동안 사이토카인을 분비했지만, 형질도입되지 않은 T 세포(UTD)와의 공동 배양 동안에는 최소한으로 분비했다. 2회 배양으로부터의 평균 사이토카인 농도 ± 표준 편차(pg/ml)가 도시되어 있다.
도 23은 hK2 CAR-T 세포에 의한 IFN-γ 방출을 도시한다. 상청액은 1:1의 E/T 비로 hK2 CAR-T 세포와 VCap, DU145(5E4 세포) 세포를 밤새(대략 20시간) 공동 배양하여 수집되었다. hK2 CAR 변형된 T 세포는 hK2 발현 VCaP 세포와의 공동 배양 동안 IFN-γ를 분비하지만, hK2 음성 DU145 세포와의 공동 배양 동안에는 그렇지 않았다. 2회 배양으로부터의 평균 IFN-γ 농도 ± 표준 편차(pg/ml)가 도시되어 있다. CD3/28 비드 자극 T 세포 및 T 세포 단독을 각각 양성 및 음성 대조군으로 사용하였다.
도 24a 및 도 24b는 VCaP 또는 DU145 세포와 5일 공동 배양 후 또는 CD3/28 비드로 자극한 후 세포 추적 바이올렛(CTV) 표지된 형질도입되지 않은 T 세포(도면에서 T 세포 단독) 또는 CAR1-10-형질도입된 CAR-T의 유세포 분석 히스토그램을 도시한다.
도 25a 및 도 25b는 VCaP 또는 DU145 세포와 5일 공동 배양 후 또는 CD3/28 비드로 자극한 후 CD25 양성 세포 추적 바이올렛(CTV) 표지된 형질도입되지 않은 T 세포(도면에서 T 세포 단독) 또는 CAR1-10-형질도입된 CAR-T의 유세포 분석 히스토그램을 도시한다.
도 26은 hK2 CAR-T 세포가 VCaP 세포와의 공동 배양 5일 후 CD3/28 비드 양성 대조군보다 더 강력하게 증식했음을 도시한다. 상이한 CAR 작제물 조작된 T 세포는 상이한 증식 활성을 가졌고 상이한 CAR+ T 세포 수를 나타냈다. CAR+ T 세포 수는 3개의 기술 복제물로부터의 평균 절대 세포 수 +/- SEM을 기반으로 하였다.
도 27은 1차 T 세포의 표면에서의 CAR17(KL2B413_HL), CAR18(KL2B413_LH), CAR19(KL2B359_HL) 및 CAR20(HK2B359_LH)의 표면 발현을 도시한다. 각 히스토그램 내부의 숫자는 표시된 CAR을 발현하는 세포의 백분율을 나타낸다.
도 28은 JNL 세포에서의 CAR17(KL2B413_HL), CAR18(KL2B413_LH), CAR19(KL2B359_HL) 및 CAR20(KL2B359_LH)의 표면 발현을 도시한다.
도 29는 도면에 나타낸 바와 같이 다양한 표적 세포 상의 이의 동족 수용체에 대한 시험 CAR-T의 결합에 의해 매개되는 JNL 세포에서의 루시페라제 발현으로 인한 상대 광 단위(RLU)를 도시한다. 표시된 CAR 클론 및 형질도입되지 않은 JNL 세포(UTD)를 함유하는 JNL 세포를 표적 세포주(VCaP, LNCaP/hK2, LNCaP, C4-2B, 22Rv1 또는 DU145 세포)와 공동 배양하고 루시페라제 활성을 발광 강도(RLU, 상대 광 단위)로 측정하였다. KL2B413_HL: CAR17, KL2B413_LH: CAR18, HL2B359_HL: CAR19, KL2B359_LH: CAR20.
도 30은 항원 의존적 세포독성을 평가하는 실시간 IncuCyte 사멸 분석에서 CAR17(도면에서 B413HL), CAR18(도면에서 B413LH), CAR19(도면에서 B359HL) 및 CAR20(도면에서 B359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포에 의한 hK2 양성 VCaP 세포의 종양 세포 성장 억제 백분율을 나타낸다. 종양 세포 성장 억제(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%).
도 31은 항원 의존적 세포독성을 평가하는 실시간 IncuCyte 사멸 분석에서 CAR17(도면에서 B413HL), CAR18(도면에서 B413LH), CAR19(도면에서 B359HL) 및 CAR20(도면에서 B359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포에 의한 hK2 음성 DU145 세포의 종양 세포 성장 억제 백분율을 나타낸다. 종양 세포 성장 억제(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%).
도 32는 도면에 표시된 세포와의 공동 배양에서 CAR17(도면에서 KLK2B413HL), CAR18(도면에서 KLK2B413LH), CAR19(도면에서 KLK2B359HL) 및 CAR20(도면에서 KLK2B359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포 또는 형질도입되지 않은 T 세포(UTD)에 의한 IFN-γ 생성을 도시한다.
도 33a 및 도 33b는 CAR17(도면에서 B413HL), CAR18(도면에서 B413LH), CAR19(도면에서 B359HL) 및 CAR20(B359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포 및 VCap 세포의 공동 배양이 CD107a+hK2-CAR-T+ 세포의 증가를 야기한다는 것을 도시하며, 이는 면역 세포 활성화 및 세포독성 탈과립화를 나타내는 반면, hK2 음성 DU145 세포와의 공동 배양은 효과가 없었다.
도 34a 및 도 34b는 VCap 또는 DU145 세포와의 5일 공동 배양 후 세포 추적 바이올렛(CTV) 표지된 형질도입되지 않은 T 세포(도면에서 T 세포 단독) 또는 CAR17(도면에서 KLB413HL), CAR18(도면에서 KLB413LH), CAR19(도면에서 KLB359HL) 및 CAR20(도면에서 KLB359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포의 유세포 분석 히스토그램을 도시한다. UTD: 형질도입되지 않음.
도 35는 VCAP 또는 DU145 세포와의 5일 공동 배양 후 세포 추적 바이올렛(CTV) 표지된 형질도입되지 않은 T 세포(도면에서 T 세포 단독) 또는 CAR17(도면에서 KLB413HL), CAR18(도면에서 KLB413LH), CAR19(도면에서 KLB359HL) 및 CAR20(도면에서 KLB359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포의 공동 배양에서 증식 세포의 백분율을 도시한다. UTD: 형질도입되지 않음.
도 36a 및 도 36b는 VCaP 또는 DU145 세포와의 5일 공동 배양 후 CAR17(도면에서 KLB413HL), CAR18(도면에서 KLB413LH), CAR19(도면에서 KLB359HL) 및 CAR20(도면에서 KLB359LH)으로 형질도입된 CTV+CD25+ CAR-T 세포의 유세포 분석 히스토그램을 도시한다.
도 37은 VCaP 또는 DU145 세포와의 5일 공동 배양 후 단독으로(T 세포 단독) 또는 CD2/28 비드 자극 후 CAR17(도면에서 KLB413HL), CAR18(도면에서 KLB413LH), CAR19(도면에서 KLB359HL) 및 CAR20(도면에서 KLB359LH)로 형질도입된 CAR-T 세포 또는 형질도입되지 않은 T 세포(UTD)를 발현하는 CTV의 백분율을 도시한다.
도 38a 내지 도 38f는 선택된 항-hK2 항체 및 선택된 항-hK2/CD3 이중특이적 항체의 결합 파라토프를 도시한다. 밑줄 친 서열은 CDR 영역을 나타내고 강조 표시된 서열은 파라토프 영역을 나타낸다. 도 38a는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 219 및 220를 개시한다. 도 38b는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 213 및 224를 개시한다. 도 38c는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 203 및 215를 개시한다. 도 38d는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 468 및 469를 개시한다. 도 38e는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 354 및 221를 개시한다. 도 38f는 보이는 순서대로 각각 SEQ ID NO 356 및 222를 개시한다.
도 39a는 VCaP 이종이식 마우스 모델에서 KLK2xCD3 이중특이적 항체의 생체내 효능 및 사이토카인 프로파일을 도시한다. 3개의 KLK2xCD3 이중특이적 항체를 3가지 용량 수준에서 시험하였다: 5 mg/㎏, 1 mg/㎏ 및 0.2 mg/㎏. 종양 성장 억제는 종양 부피 측정을 기반으로 하여 플롯되었다.
도 39b는 VCaP 이종이식 마우스 모델에서 KLK2xCD3 이중특이적 항체의 생체내 효능 및 사이토카인 프로파일을 도시한다. 100 μl 혈액 샘플은 첫 번째 투여 6시간 후에 안와후 출혈을 통해 동물로부터 수집되었다. 혈장은 고속 원심분리에 의해 혈액 샘플로부터 분리되었다. Luminex 분석을 수행하여 상이한 KLK2 이중특이적 용량에서 IFN-γ 및 TNF-α 농도를 정량화하였다.
개시된 방법은 본 개시내용의 일부를 형성하는 첨부 도면과 관련하여 취해지는 하기 상세한 설명을 참조하여 더욱 용이하게 이해될 수 있다. 개시된 방법은 본원에 기재되고/기재되거나 보여준 구체적인 방법으로 제한되지 않으며, 본원에 사용된 용어는 특정 실시형태를 단지 예로서 기술하기 위한 것이고 청구된 방법을 제한하려는 의도가 아님을 이해하여야 한다.
본원에 인용된 모든 특허, 공개된 특허 출원 및 간행물은 마치 본원에 완전히 기재되어 있는 것처럼 참고로 포함된다.
달리 언급되지 않는 한, 목록이 제시되는 경우, 그러한 목록의 각각의 개별 요소, 및 그러한 목록의 모든 조합은 별개의 실시형태임이 이해되어야 한다. 예를 들어, "A, B 또는 C"로 표현된 실시형태의 목록은 실시형태 "A", "B", "C", "A 또는 B", "A 또는 C", "B 또는 C" 또는 "A, B 또는 C"를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수형("a", "an" 및 "the")은 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "세포(a cell)"에 대한 언급은 2개 이상의 세포의 조합 등을 포함한다.
이행 용어 "포함하는", "~로 본질적으로 이루어진", 및 "~로 이루어진"은 특허 용어에서 그들의 일반적으로 허용되는 의미를 함축하는 것으로 의도되며; 즉, (i) "비롯한", "함유하는", 또는 "특징으로 하는"과 동의어인 "포함하는"은 포괄적 또는 개방형(open-ended)이고 추가의 언급되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않으며; (ii) "~로 이루어진"은 청구범위에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계, 또는 성분을 배제하고; (iii) "~로 본질적으로 이루어진"은 명시된 재료 또는 단계, 및 청구된 발명의 "기본적이고 신규한 특성(들)에 실질적으로 영향을 주지 않는 것들"로 청구범위의 범주를 제한한다. 어구 "포함하는"(또는 이의 등가적 표현)의 관점에서 기재된 실시형태는 또한 "~로 이루어진" 및 "~로 본질적으로 이루어진"의 관점에서 독립적으로 기재된 것들을 실시형태로서 제공한다.
"약"은 당업자에 의해 결정된 바와 같은 특정 값이 허용되는 오차 범위 내에 있음을 의미하며, 이는 어떻게 그 값이 측정 또는 결정되는지, 즉 측정 시스템의 제한사항에 부분적으로 좌우될 것이다. 특정 분석, 결과 또는 실시형태와 관련하여 실시예에서 또는 명세서에서의 어딘가 다른 곳에서 달리 명시적으로 언급되지 않는 한, "약"은 당업계의 관행에 따른 1 표준 편차, 또는 최대 5%의 범위 어느 쪽이든 더 큰 값 이내에 있음을 의미한다.
"활성화" 또는 "자극" 또는 "활성화된" 또는 "자극된"은 활성화 마커의 발현, 사이토카인 생성, 증식 또는 표적 세포의 세포독성 매개를 야기하는 세포의 생물학적 상태 변화의 유도를 지칭한다. 세포는 1차 자극 신호에 의해 활성화될 수 있다. 공동 자극 신호는 1차 신호의 크기를 증폭하고 초기 자극 후 세포 사멸을 억제하여 더 내구성 있는 활성화 상태를 야기하며 따라서 더 높은 세포독성 용량으로 이어질 수 있다. "공동 자극 신호"는 TCR/CD3 결찰과 같은 1차 신호와 조합하여 T 세포 및/또는 NK 세포 증식 및/또는 주요 분자의 상향조절 또는 하향조절을 유도하는 신호를 지칭한다.
"대안적인 스캐폴드"는 높은 입체형태 공차(conformational tolerance)의 가변 도메인과 관련된 구조화된 코어를 함유하는 단일 사슬 단백질 프레임워크를 지칭한다. 가변 도메인은 스캐폴드 완전성(integrity)을 손상시키지 않고서 도입되는 변이에 견디므로, 가변 도메인은 특이적 항원에 결합하도록 조작 및 선택될 수 있다.
"항체-의존성 세포성 세포독성", "항체-의존성 세포-매개 세포독성" 또는 "ADCC"는, 이펙터 세포 상에서 발현되는 Fc 감마 수용체(FcγR)를 통한, 항체-코팅된 표적 세포와 용해 활성을 갖는 이펙터 세포, 예컨대 자연 살해 세포(NK), 단핵구, 대식세포 및 호중구의 상호작용에 의존하는 세포 사멸을 유도하는 메커니즘을 지칭한다.
"항체-의존성 세포 식세포작용" 또는 "ADCP"는 식세포, 예컨대 대식세포 또는 수지상 세포에 의한 내재화에 의한 항체-코팅된 표적 세포의 제거의 기전을 지칭한다.
"항원"은 면역 반응을 매개할 수 있는 항원 결합 도메인 또는 T 세포 수용체에 의해 결합될 수 있는 임의의 분자(예를 들어, 단백질, 펩티드, 다당류, 당단백질, 당지질, 핵산, 이들의 부분, 또는 이들의 조합)를 지칭한다. 예시적인 면역 반응은 항체 생성 및 T 세포, B 세포 또는 NK 세포와 같은 면역 세포의 활성화를 포함한다. 항원은 다른 생물학적 성분, 유기체, 단백질/항원의 서브유닛, 사멸되거나 비활성화된 전체 세포 또는 용해물이 있는 조직 샘플, 종양 샘플, 세포 또는 유체와 같은 생물학적 샘플로부터 유전자에 의해 발현되거나 합성되거나 정제될 수 있다.
"항원 결합 단편" 또는 "항원 결합 도메인"은 항원에 결합하는 단백질의 일부를 지칭한다. 항원 결합 단편은 합성, 효소적으로 수득가능하거나, 유전적으로 조작된 폴리펩티드일 수 있으며, 항원에 결합하는 면역글로불린의 일부, 예컨대 VH, VL, VH 및 VL, Fab, Fab', F(ab')2, Fd 및 Fv 단편, 1개의 VH 도메인 또는 1개의 VL 도메인으로 이루어진 도메인 항체(dAb), 상어 가변 IgNAR 도메인, 낙타화(camelized) VH 도메인, VHH 도메인, 항체의 CDR을 모방하는 아미노산 잔기로 이루어진 최소 인식 단위, 예컨대 FR3-CDR3-FR4 부분, HCDR1, HCDR2 및/또는 HCDR3 및 LCDR1, LCDR2 및/또는 LCDR3, 항원에 결합하는 대안적인 스캐폴드, 및 항원 결합 단편을 포함하는 다중특이적 단백질을 포함한다. 항원 결합 단편(예컨대 VH 및 VL)은 합성 링커를 통해 함께 연결되어 다양한 유형의 단일 항체 디자인을 형성할 수 있으며, 여기서 1가 항원 결합 부위, 예컨대 단일 사슬 Fv(scFv) 또는 다이아바디(diabody)를 형성하기 위해, VH/VL 도메인은 분자내에, 또는 VH 및 VL 도메인이 별도의 단일 사슬에 의해 발현되는 경우에는 분자간에 쌍을 이룰 수 있다. 항원 결합 단편은 또한 이중특이적 및 다중특이적 단백질을 조작하기 위해 단일특이적 또는 다중특이적일 수 있는 다른 항체, 단백질, 항원 결합 단편 또는 대안적인 스캐폴드에 접합될 수 있다.
"항체"는 광의의 의미를 가지며, 뮤린, 인간, 인간화 및 키메라 단일클론 항체를 포함한 단일클론 항체, 항원-결합 단편, 다중특이적 항체(예컨대, 이중특이적, 삼중특이적, 사중특이적), 이량체성, 사량체성, 또는 다량체성 항체, 단일 사슬 항체, 도메인 항체를 포함하는 면역글로불린 분자, 및 필요한 특이성의 항원 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 구성을 포함한다. "전장 항체"는 다이설파이드 결합에 의해 상호연결된 2개의 중쇄(HC) 및 2개의 경쇄(LC)뿐만 아니라 이의 다량체(예를 들어, IgM)로 구성된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH) 및 중쇄 불변 영역(도메인 CH1, 힌지, CH2 및 CH3으로 구성됨)으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL) 및 경쇄 불변 영역(CL)으로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이 산재된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성의 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR 세그먼트로 구성되며, 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 하기 순서대로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. 면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라, 5개의 주요 클래스, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM으로 정해질 수 있다. IgA 및 IgG는 동형 IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 추가로 하위-분류된다. 임의의 척추동물 종의 항체 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 명확하게 별개인 2개의 유형, 즉 카파(κ) 및 람다(λ) 중 하나로 정해질 수 있다.
"이중특이적"은 2개의 별개의 항원 또는 동일한 항원 내의 2개의 별개의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분자(예컨대, 항체)를 지칭한다. 이중특이적 분자는 다른 관련 항원들에 대한, 예를 들어 다른 종(상동체), 예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 사이노몰거스(Macaca cynomolgus)(사이노몰거스, 사이노), 또는 판 트로글로디테스(Pan troglodytes)로부터의 동일한 항원에 대한 교차-반응성을 가질 수 있거나, 2개 이상의 별개의 항원 사이에 공유되는 에피토프에 결합할 수 있다.
"이중특이적 항-hK2/항-CD3 항체", "hk2/CD3 항체", "hk2xCD3 항체", "항-hK2/항-CD3 단백질" 등은 hk2 및 CD3에 결합하고 hK2에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 결합 도메인 및 CD3에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 결합 도메인을 포함하는 항체를 지칭한다. hK2 및 CD3에 특이적으로 결합하는 도메인은 전형적으로 VH/VL 쌍이다. 이중특이적 항-hk2×CD3 항체는 hk2 또는 CD3에 대한 그의 결합의 관점에서 1가일 수 있다.
"암"은 체내 비정상 세포의 비제어된 성장을 특징으로 하는 다양한 질환의 광범위한 군을 지칭한다. 조절되지 않은 세포 분열 및 성장은 이웃하는 조직을 침범하고, 또한 림프계 또는 혈류를 통해 신체의 먼 부분으로 전이될 수 있는 악성 종양의 형성을 야기한다. "암" 또는 "암 조직"은 종양을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 "키메라 항원 수용체"(CAR)는 단일 단백질에서 자연적으로 함께 발견되지 않는 조합으로 세포외 표적 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 모두 포함하는 세포 표면 수용체로 정의된다. 이는 세포외 도메인과 세포내 신호전달 도메인이 단일 수용체 단백질에서 자연적으로 함께 발견되지 않는 수용체를 포함한다. CAR은 주로 T 세포 및 자연 살해(NK) 세포와 같은 림프구와 함께 사용하기 위한 것이다.
"보체-의존성 세포독성" 또는 "CDC"는, 표적-결합된 단백질의 Fc 이펙터 도메인이 보체 성분 C1q에 결합하여 이를 활성화하고, 이는 다시 보체 캐스케이드를 활성화하여 표적 세포 사멸을 초래하는 세포 사멸 유도 기전을 지칭한다. 보체의 활성화는 또한 표적 세포 표면 상에의 보체 성분의 침착을 가져올 수 있는데, 이는 백혈구 상의 보체 수용체(예를 들어, CR3)에 결합함으로써 CDC를 용이하게 한다.
"상보성 결정 영역(CDR)"은 항원에 결합하는 항체 영역이다. VH에 3개의 CDR(HCDR1, HCDR2, HCDR3)이 존재하고, VL에 3개의 CDR(LCDR1, LCDR2, LCDR3)이 존재한다. CDR은 카바트(문헌[Wu et al. (1970) J Exp Med 132: 211-50]; 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991]), 초티아(문헌[Chothia et al. (1987) J Mol Biol 196: 901-17]), IMGT(문헌[Lefranc et al. (2003) Dev Comp Immunol 27: 55-77]) 및 AbM(문헌[Martin and Thornton J Bmol Biol 263: 800-15, 1996])과 같은 다양한 기술을 사용하여 정의될 수 있다. 다양한 기술과 가변 영역 넘버링 간의 대응 관계가 설명된다(예를 들어, 문헌[Lefranc et al. (2003) Dev Comp Immunol 27: 55-77]; 문헌[Honegger and Pluckthun, J Mol Biol (2001) 309:657-70]; International ImMunoGeneTics(IMGT) 데이터베이스; 웹 리소스, http://www_imgt_org 참조). UCL Business PLC의 abYsis와 같은 이용가능한 프로그램을 사용하여 CDR을 상세하게 설명할 수 있다. 본원에 사용되는 용어 "CDR", "HCDR1", "HCDR2", "HCDR3", "LCDR1", "LCDR2" 및 "LCDR3"는 본 명세서에 달리 명시적으로 기재되어 있지 않는 한, 상기에 기재된 방법들인 카바트, 초티아, IMGT 또는 AbM 중 임의의 것에 의해 정의된 CDR을 포함한다.
"CD3"은, 다분자 T 세포 수용체(TCR) 복합체의 일부로서 T 세포 상에서 발현되고, 하기의 2개 또는 4개의 수용체 사슬의 회합으로부터 형성된 동종이량체 또는 이종이량체로 이루어진 항원을 지칭한다: CD3 엡실론, CD3 델타, CD3 제타 및 CD3 감마. 인간 CD3 엡실론은 SEQ ID NO: 442의 아미노산 서열을 포함한다. 본원에서 단백질, 폴리펩티드, 및 단백질 단편에 대한 모든 언급은 비인간 종으로부터의 것으로 명시적으로 특정되지 않는 한, 각각의 단백질, 폴리펩티드, 또는 단백질 단편의 인간 버전을 지칭하고자 의도된다. 따라서, "CD3"은 비인간 종, 예컨대, "마우스 CD3" 또는 "원숭이 CD3" 등으로부터의 것으로서 특정되지 않는 한, 인간 CD3을 의미한다.
명세서 전체에 걸쳐, "CD3-특이적" 또는 "CD3에 특이적으로 결합함", 또는 "항-CD3 항체"는 CD3-엡실론 세포외 도메인(ECD)(SEQ ID NO: 443)에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 CD3-엡실론 폴리펩티드(SEQ ID NO: 442)에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. CD3-엡실론은 CD3-감마,-델타, 및-제타, 및 T-세포 수용체 알파/베타 및 감마/델타 이종이량체와 함께 T-세포 수용체-CD3 복합체를 형성한다. 이러한 복합체는 항원 인식을 몇몇 세포내 신호-전달 경로에 커플링하는 데 있어서 중요한 역할을 한다. CD3 복합체는 신호 전달을 매개하여, T 세포 활성화 및 증식을 가져온다. CD3은 면역 반응에 필요하다.
SEQ ID NO: 442 (인간 CD3 엡실론)
MQSGTHWRVLGLCLLSVGVWGQDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDVMSVATIVIVDICITGGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQRDLYSGLNQRRI
SEQ ID NO: 443 (인간 CD3 엡실론 세포외 도메인)
DGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMD
"감소시키다", "감소하다", "약화하다", "줄이다" 또는 "약화시키다"는 일반적으로 대조군 또는 비히클에 의해 매개된 반응과 비교할 때 감소된 반응(즉, 다운스트림 효과)을 매개하는 시험 분자의 능력을 지칭한다. 예시적인 반응은 T 세포 확장, T 세포 활성화 또는 T 세포 매개된 종양 세포 사멸 또는 단백질의 그 항원 또는 수용체에 대한 결합, Fcγ에 대한 향상된 결합 또는 향상된 Fc 이펙터 기능, 예컨대 향상된 ADCC, CDC 및/또는 ADCP이다. 감소는 시험 분자와 대조군(또는 비히클) 사이의 측정된 반응에서 통계적으로 유의한 차이, 또는 측정된 반응의 감소, 예컨대 약 1.1, 1.2, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 또는 30배 또는 그 이상, 예컨대 500, 600, 700, 800, 900 또는 1000배 또는 그 이상(1 사이 및 그 이상의 모든 정수 및 소수점 포함, 예를 들어, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8 등)의 감소일 수 있다.
"분화"는 세포의 효능 또는 증식을 감소시키거나 세포를 보다 발달적으로 제한된 상태로 이동시키는 방법을 지칭한다.
"코딩" 또는 "코딩하는"은 뉴클레오티드(예를 들어, rRNA, tRNA 및 mRNA)의 정의된 서열 또는 아미노산의 정의된 서열 중 어느 하나를 갖는, 생물학적 과정에서 다른 중합체 및 거대분자의 합성을 위한 주형으로서의 역할을 하는 폴리뉴클레오티드, 예컨대 유전자, cDNA, 또는 mRNA 내의 뉴클레오티드들의 특이적 서열의 고유 특성 및 그로부터 발생되는 생물학적 특성을 지칭한다. 따라서, 유전자, cDNA 또는 RNA는 그러한 유전자에 상응하는 mRNA의 전사 및 번역이 세포 또는 다른 생물학적 시스템에서 단백질을 생성한다면 단백질을 코딩한다. 유전자 또는 cDNA의 전사를 위한 주형으로서 사용되는, mRNA 서열과 동일한 뉴클레오티드 서열을 갖는 코딩 가닥, 및 비-코딩 가닥 둘 모두는 이러한 유전자 또는 cDNA의 단백질 또는 다른 생성물을 코딩하는 것으로 지칭될 수 있다.
"향상하다", "촉진하다", "증가하다", "확장하다" 또는 "개선하다"는 일반적으로 대조군 또는 비히클에 의해 매개된 반응과 비교할 때 더 큰 반응(즉, 다운스트림 효과)을 매개하는 시험 분자의 능력을 지칭한다. 예시적인 반응은 T 세포 확장, T 세포 활성화 또는 T 세포 매개된 종양 세포 사멸 또는 단백질의 그 항원 또는 수용체에 대한 결합, Fcγ에 대한 향상된 결합 또는 향상된 Fc 이펙터 기능, 예컨대 향상된 ADCC, CDC 및/또는 ADCP이다. 향상은 시험 분자와 대조군(또는 비히클) 사이의 측정된 반응에서 통계적으로 유의한 차이, 또는 측정된 반응의 증가, 예컨대 약 1.1, 1.2, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 또는 30배 또는 그 이상, 예컨대 500, 600, 700, 800, 900 또는 1000배 또는 그 이상(1 사이 및 그 이상의 모든 정수 및 소수점 포함, 예를 들어, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8 등)의 증가일 수 있다.
"에피토프"는 항체가 특이적으로 결합하는 항원의 부분을 지칭한다. 에피토프는 전형적으로 아미노산 또는 다당류 측쇄와 같은 모이어티의 화학적으로 활성(예컨대, 극성, 비극성 또는 소수성)인 표면 그룹화로 이루어지며, 특이적인 3차원 구조적 특징뿐만 아니라 특이적인 전하 특징을 가질 수 있다. 에피토프는 입체구조 공간 단위(conformational spatial unit)를 형성하는 연속 및/또는 불연속 아미노산으로 구성될 수 있다. 불연속 에피토프의 경우, 항원의 선형 서열의 상이한 부분으로부터의 아미노산이 단백질 분자의 접힘을 통해 3차원 공간에서 아주 근접하게 된다. 항체 "에피토프"는 에피토프를 확인하기 위해 사용되는 방법에 따라 다르다.
"확장"은 세포 분열 및 세포 사멸의 결과를 지칭한다.
"발현하다" 및 "발현"은 세포 또는 시험관내에서 발생하는 잘 알려진 전사 및 번역을 지칭한다. 따라서, 발현 생성물, 예를 들어 단백질은 세포에 의해 또는 시험관내에서 발현되고 세포내, 세포외 또는 막관통 단백질일 수 있다.
"발현 벡터"는 발현 벡터에 존재하는 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 폴리펩티드의 번역을 유도하기 위해 생물계 또는 재구성된 생물계에서 이용될 수 있는 벡터를 지칭한다.
"dAb" 또는 "dAb 단편"은 VH 도메인으로 구성된 항체 단편을 지칭한다(문헌[Ward et al., Nature 341:544 546 (1989)]).
"Fab" 또는 "Fab 단편"은 VH, CH1, VL 및 CL 도메인으로 구성된 항체 단편을 지칭한다.
"F(ab') 2 " 또는 "F(ab') 2 단편"은 힌지 영역에서 다이설파이드 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 함유하는 항체 단편을 지칭한다.
"Fd" 또는 "Fd 단편"은 VH 및 CH1 도메인으로 구성된 항체 단편을 지칭한다.
"Fv" 또는 "Fv 단편"은 항체의 단일 아암으로부터의 VH 및 VL 도메인으로 구성된 항체 단편을 지칭한다. Fv 단편에는 Fab(CH1 및 CL) 영역의 불변 영역이 없다. Fv 단편의 VH 및 VL은 비공유 상호작용에 의해 함께 고정된다.
이량체 Fc의 "Fc 폴리펩티드"는 이량체 Fc 도메인을 형성하는 2개의 폴리펩티드 중 하나를 지칭한다. 예를 들어, 이량체 IgG FC의 Fc 폴리펩티드는 IgG CH2 및 IgG CH3 불변 도메인 서열을 포함한다.
"전장 항체"는 다이설파이드 결합에 의해 상호 연결된 2개의 중쇄(HC) 및 2개의 경쇄(LC)뿐만 아니라 이의 다량체(예를 들어, IgM)로 구성된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 중쇄 불변 도메인으로 구성되며, 중쇄 불변 도메인은 서브도메인 CH1, 힌지, CH2 및 CH3로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 도메인(VL) 및 경쇄 불변 도메인(CL)으로 구성된다. VH 및 VL은 프레임워크 영역(FR)이 산재된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR 세그먼트로 구성되며, 아미노 말단에서 카르복시 말단으로 하기 순서대로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4.
"유전적 변형"은 "외부"(즉, 외부 또는 세포외) 유전자, DNA 또는 RNA 서열을 숙주 세포에 도입하여 숙주 세포가 원하는 물질, 일반적으로 도입된 유전자 또는 서열에 의해 코딩되는 단백질 또는 효소를 생성하기 위해 도입된 유전자 또는 서열을 발현하도록 하는 것을 지칭한다. 도입된 유전자 또는 서열은 또한 "클로닝된" 또는 "외부" 유전자 또는 서열로 지칭될 수 있으며, 개시, 정지, 프로모터, 신호, 분비 또는 세포의 유전 기구에 의해 사용되는 기타 서열과 같은 키메라 항원 수용체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 조절 또는 제어 서열을 포함할 수 있다. 유전자 또는 서열은 비기능적 서열 또는 공지된 기능이 없는 서열을 포함할 수 있다. 도입된 DNA 또는 RNA를 수용하고 발현하는 숙주 세포는 "유전적으로 조작"되었다. 숙주 세포에 도입된 DNA 또는 RNA는 숙주 세포와 동일한 속 또는 종 또는 상이한 속 또는 종의 세포를 포함하는 임의의 공급원으로부터 유래할 수 있다.
"이종"은 자연계에서 서로 동일한 관계에서 발견되지 않는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 2개 이상의 폴리펩티드를 지칭한다.
"이종 폴리뉴클레오티드"는 본원에 기재된 바와 같은 2개 이상의 신생항원을 코딩하는 비자연적으로 발생하는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.
"이종 폴리펩티드"는 본원에 기재된 바와 같은 2개 이상의 신생항원 폴리펩티드를 포함하는 비자연적으로 발생하는 폴리펩티드를 지칭한다.
"숙주 세포"는 이종 핵산을 함유하는 임의의 세포를 지칭한다. 예시적인 이종 핵산은 벡터(예를 들어, 발현 벡터)이다.
"인간 항체"는 인간 대상체에게 투여될 때 최소 면역 반응을 갖도록 최적화된 항체를 지칭한다. 인간 항체의 가변 영역은 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 인간 항체가 불변 영역 또는 불변 영역의 일부를 함유하는 경우, 불변 영역은 또한 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 인간 항체는, 인간 항체의 가변 영역이 인간 생식세포계열(germline) 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자를 사용하는 시스템으로부터 수득되는 경우, 인간 기원의 서열"로부터 유래되는" 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 그러한 예시적인 시스템은, 파지 상에 디스플레이된 인간 면역글로불린 유전자 라이브러리, 및 인간 면역글로불린 유전자위를 담지하는 유전자도입 비인간 동물, 예컨대 마우스 또는 래트를 포함한다. "인간 항체"는 전형적으로, 인간 항체 및 인간 면역글로불린 유전자위를 수득하는 데 사용되는 시스템 간의 차이, 체세포 돌연변이의 도입 또는 프레임워크 또는 CDR 내로의 치환의 의도적인 도입, 또는 둘 모두로 인해 인간에서 발현된 면역글로불린과 비교하여 아미노산 차이를 함유한다. 전형적으로, "인간 항체"는 인간 생식세포계열 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자에 의해 코딩된 아미노산 서열과 아미노산 서열이 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하다. 일부 경우에, "인간 항체"는, 예를 들어 문헌[Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86]에 기재된 바와 같이 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래되는 공통 프레임워크 서열을 함유하거나, 또는, 예를 들어 문헌[Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96] 및 국제공개 WO2009/085462호에 기재된 바와 같이 파지 상에 디스플레이된 인간 면역글로불린 유전자 라이브러리 내로 혼입된 합성 HCDR3을 함유할 수 있다. 적어도 하나의 CDR이 비인간 종으로부터 유래되는 항체는 "인간 항체"의 정의에 포함되지 않는다.
"인간화 항체"는, 하나 이상의 CDR이 비인간 종으로부터 유래되고, 적어도 하나의 프레임워크가 인간 면역글로불린 서열로부터 유래되는 항체를 지칭한다. 인간화 항체는 프레임워크 내에 치환을 포함할 수 있으므로, 프레임워크는 발현된 인간 면역글로불린 또는 인간 면역글로불린 생식세포계열 유전자 서열의 정확한 사본이 아닐 수 있다.
"와 조합으로"는 둘 이상의 치료제가 대상체에게 혼합물 상태로 함께 투여되거나, 단제(single agent)로서 동시에 투여되거나, 단제로서 임의의 순서로 순차적으로 투여됨을 의미한다.
"세포내 신호전달 도메인" 또는 "세포질 신호전달 도메인"은 분자의 세포내 부분을 지칭한다. 그것은 세포 내의 정보를 전달하여, 2차 메신저를 발생시킴으로써 또는 그러한 메신저에 반응하여 이펙터로서 기능함으로써 규정된 신호전달 경로를 통해 세포 활성을 조절함에 의해 작용하는 단백질의 기능성 부분이다. 세포내 신호전달 도메인은 CAR 함유 세포, 예를 들어 CAR-T 세포의 면역 이펙터 기능을 촉진하는 신호를 발생시킨다.
"단리된"은 분자가 생성되는 시스템, 예컨대 재조합 세포의 다른 성분으로부터 실질적으로 분리되고/분리되거나 정제된 분자(예컨대, 합성 폴리뉴클레오티드 또는 합성 폴리펩티드)의 상동 집단뿐만 아니라, 적어도 하나의 정제 또는 단리 단계를 거친 단백질을 지칭한다. "단리된"은 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없는 분자를 지칭하며, 더 높은 순도로, 예컨대 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 순도로 단리된 분자를 포함한다.
"칼리크레인 관련 펩티다제 2" 또는 "hK2"는 칼리크레인-2, 그랜드 칼리크레인 2 또는 HK2라고도 하는 공지된 단백질을 지칭한다. hK2는 프리프로단백질(preproprotein)로 생성되고 단백질 분해 동안 절단되어 활성 프로테아제를 생성한다. 모든 hK2 이소형 및 변이체는 "hK2"에 포함된다. 다양한 이소형의 아미노산 서열은 GenBank 수탁 번호 NP_005542.1, NP_001002231.1 및 NP_001243009에서 검색할 수 있다. 전장 hK2의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 62에 제시되어 있다. 서열은 신호 펩티드(잔기 1-18) 및 프로-펩티드 영역(잔기 19-24)을 포함한다.
SEQ ID NO: 62
MWDLVLSIALSVGCTGAVPLIQSRIVGGWECEKHSQPWQVAVYSHGWAHCGGVLVHPQWV
LTAAHCLKKNSQVWLGRHNLFEPEDTGQRVPVSHSFPHPLYNMSLLKHQSLRPDEDSSHD
LMLLRLSEPAKITDVVKVLGLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLRPRSLQCVSLHLLS
NDMCARAYSEKVTEFMLCAGLWTGGKDTCGGDSGGPLVCNGVLQGITSWGPEPCALPEKP
AVYTKVVHYRKWIKDTIAANP
"조절"은 대조군 또는 비히클에 의해 매개되는 반응과 비교할 때 향상되거나 감소된 반응(즉, 다운스트림 효과)을 매개하는 시험 분자의 능력이 향상되거나 감소됨을 지칭한다.
"단일클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체 분자 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하는데, 즉, 집단을 구성하는 개별 항체는 항체 중쇄로부터 C-말단 라이신의 제거와 같은 가능성 있는 잘 알려진 변경, 또는 아미노산 이성질화 또는 탈아미드화, 메티오닌 산화 또는 아스파라긴 또는 글루타민 탈아미드화와 같은 번역 후 변형을 제외하고는 동일하다. 단일클론 항체는 전형적으로 1개의 항원 에피토프에 결합한다. 이중특이적 단일클론 항체는 2개의 별개의 항원 에피토프에 결합한다. 단일클론 항체는 항체 집단 내에 불균질한 글리코실화를 가질 수 있다. 단일클론 항체는 단일특이적 또는 다중특이적, 예컨대 이중특이적 1가, 2가 또는 다가일 수 있다.
"다중특이적"은 2개 이상의 별개의 항원 또는 동일한 항원 내의 2개 이상의 별개의 에피토프와 특이적으로 결합하는 항체와 같은 분자를 지칭한다. 다중특이적 분자는 다른 관련 항원에 대한, 예를 들어 다른 종, 예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 파시쿨라리스(사이노몰구스, 사이노) 또는 판 트로글로디테스로부터의 동일한 항원(상동체)에 대한 교차-반응성을 가질 수 있거나, 2개 이상의 별개의 항원 사이에 공유되는 에피토프에 결합할 수 있다.
"자연 살해 세포" 및 "NK 세포"는 본원에서 상호교환적으로 그리고 동의어로 사용된다. NK 세포는 CD16+ CD56+ 및/또는 CD57+ TCR- 표현형을 갖는 분화된 림프구를 지칭한다. NK 세포는 특정 세포용해 효소의 활성화에 의해 "자가" MHC/HLA 항원을 발현하지 못하는 세포에 결합하여 이를 사멸시키는 이의 능력, NK 활성화 수용체에 대한 리간드를 발현하는 종양 세포 또는 다른 이상 세포(diseased cell)를 사멸시키는 능력 및 면역반응을 자극하거나 억제하는 사이토카인이라고 불리는 단백질 분자를 방출하는 능력을 특징으로 한다.
핵산 또는 아미노산과 관련하여 사용될 때 "작동가능하게 연결된" 및 유사한 어구는 서로 기능적 관계에 있는 핵산 서열 또는 아미노산 서열의 작동적 연결을 각각 지칭한다. 예를 들어, 작동가능하게 연결된 프로모터, 인핸서 요소, 오픈 리딩 프레임, 5' 및 3' UTR, 및 종결자 서열은 핵산 분자(예를 들어, RNA)의 정확한 생성을 야기하고 일부 경우에는 폴리펩티드의 생성을 야기한다(즉, 오픈 리딩 프레임의 발현). 작동가능하게 연결된 펩티드는 펩티드의 기능적 도메인이 각 도메인의 의도된 기능을 부여하기 위해 서로 적절한 거리를 두고 배치된 펩티드를 지칭한다.
용어 "파라토프"는 항원의 결합에 관여하고 항원과 상호작용하는 잔기를 포함하는 항체 분자의 부분 또는 영역을 지칭한다. 파라토프는 구조적 공간 단위를 형성하는 연속 및/또는 불연속 아미노산으로 구성될 수 있다. 소정의 항체에 대한 파라토프는 다양한 실험 및 계산 방법을 사용하여 상이한 세부 수준에서 정의되고 특성화될 수 있다. 실험 방법에는 수소/중수소 교환 질량 분석법(HX-MS)이 포함된다. 파라토프는 사용된 맵핑 방법에 따라 다르게 정의될 것이다.
"약학 조합물"은 함께 또는 개별적으로 투여되는 둘 이상의 활성 성분의 조합물을 지칭한다.
"약학 조성물"은 활성 성분 및 약학적으로 허용되는 담체를 조합하여 수득되는 조성물을 지칭한다.
"약학적으로 허용되는 담체" 또는 "부형제"는 활성 성분 이외의, 대상체에게 비독성인 약학 조성물 내의 성분을 지칭한다. 예시적인 약학적으로 허용되는 담체는 완충제, 안정화제 또는 보존제이다.
"폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 당-포스페이트 골격 또는 다른 동등한 공유결합적 화학 특성에 의해 공유결합된 뉴클레오티드의 사슬을 포함하는 합성 분자를 지칭한다. cDNA는 폴리뉴클레오티드의 전형적인 예이다. 폴리뉴클레오티드는 DNA 또는 RNA 분자일 수 있다.
질환 또는 장애와 관련하여 "예방하다", "예방하는", "예방", 또는 "예방법"은 장애가 대상체에서 발생하는 것을 예방하는 것을 의미한다.
"증식"은 대칭 또는 비대칭 세포 분열인 세포 분열의 증가를 지칭한다.
"프로모터"는 전사를 개시하는 데 필요한 최소 서열을 지칭한다. 프로모터는 또한 전사를 향상시키거나 억제하는 인핸서 또는 리프레서 요소 각각을 포함할 수 있다.
"단백질" 또는 "폴리펩티드"는 본원에서 상호교환적으로 사용되고 펩티드 결합에 의해 연결된 적어도 2개의 아미노산 잔기로 각각 구성된 하나 이상의 폴리펩티드를 포함하는 분자를 지칭한다. 단백질은 단량체일 수 있거나 2개 이상의 서브유닛의 단백질 복합체일 수 있으며, 서브유닛은 동일하거나 구별된다. 50개 미만의 아미노산의 작은 폴리펩티드는 "펩티드"로 지칭될 수 있다. 단백질은 이종 융합 단백질, 당단백질 또는 번역 후 변형, 예컨대 인산화, 아세틸화, 미리스토일화, 팔미토일화, 글리코실화, 산화, 포르밀화, 아미드화, 시트룰린화, 폴리글루타밀화, ADP-리보실화, 페길화 또는 비오틴화에 의해 변형된 단백질일 수 있다. 단백질은 재조합적으로 발현될 수 있다.
"재조합"은 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드, 벡터, 바이러스 및 기타 거대분자를 지칭한다.
"조절 요소"는 핵산 서열의 발현의 일부 측면을 제어하는 임의의 시스- 또는 트랜스 작용 유전 요소를 지칭한다.
"재발성(relapsed)"은 치료제에 의한 이전 치료 후의 개선 기간 후에 질환 또는 질환의 징후 및 증상의 복귀를 지칭한다.
"불응성(refractory)"은 치료에 반응하지 않는 질환을 지칭한다. 불응성 질환은 치료 전 또는 치료 시작 시점에서 치료에 대해 저항성일 수 있거나, 또는 불응성 질환은 치료 동안 저항성이 될 수 있다.
"단일 사슬 Fv" 또는 "scFv"는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 하나 이상의 항체 단편 및 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 하나 이상의 항체 단편을 포함하는 융합 단백질을 지칭하고, VL 및 VH는 폴리펩티드 링커를 통해 연속적으로 연결되고, 단일 사슬 폴리펩티드로서 발현될 수 있다. 명시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 바와 같이, scFv는 예를 들어 폴리펩티드의 N-말단 및 C-말단에 대하여, 어느 순서로든 VL 및 VH 가변 영역을 가질 수 있으며, scFv는 VL-링커-VH를 포함할 수 있거나 VH-링커-VL을 포함할 수 있다.
"(scFv) 2 " 또는 "탠덤 scFv" 또는 "비스-scFv" 단편은 2개의 경쇄 가변 영역(VL) 및 2개의 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 융합 단백질을 지칭하고, 2개의 VL 및 2개의 VH 영역은 폴리펩티드 링커를 통해 연속적으로 연결되고, 단일 사슬 폴리펩티드로서 발현될 수 있다. 펩티드 링커에 의해 융합된 2개의 VL 및 2개의 VH 영역은 2가 분자 VLA-링커-VHA-링커-VLB-링커-VHB를 형성하여 2개의 상이한 항원 또는 에피토프에 동시에 결합할 수 있는 2개의 결합 부위를 형성한다.
"특이적으로 결합하다", "특이적 결합", "특이적으로 결합하는" 또는 "결합하다"는 항원 또는 항원 내의 에피토프에 대해 다른 항원에 대한 친화성보다 더 큰 친화성으로 결합하는 단백질성 분자를 지칭한다. 전형적으로, 단백질성 분자는 약 1×10-7 M 이하, 예를 들어 약 5×10-8 M 이하, 약 1×10-8 M 이하, 약 1×10-9 M 이하, 약 1×10-10 M 이하, 약 1×10-11 M 이하 또는 약 1×10-12 M 이하의 평형 해리 상수(KD)로 항원 또는 항원 내의 에피토프에 결합하며, 이때 전형적으로 KD는 비특이적 항원(예를 들어, BSA, 카세인)에 결합하기 위한 이의 KD보다 적어도 100배 더 적다. 본원에 기재된 전립선 신생항원과 관련하여, "특이적 결합"은 야생형 단백질에 대한 검출가능한 결합 없이 전립선 신생항원에 대한 단백질성 분자의 결합을 지칭하며, 신생항원은 그 변이체이다.
"대상체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유동물 및 비포유동물, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다. 용어 "대상체" 또는 "환자"는 본원에서 상호교환적으로 사용될 수 있다.
"T 세포" 및 "T 림프구"는 상호 교환가능하며, 본원에서 동의어로 사용된다. T 세포는 흉선세포, 나이브 T 림프구, 기억 T 세포, 미성숙 T 림프구, 성숙 T 림프구, 휴지지 T 림프구 또는 활성화 T 림프구를 포함한다. T 세포는 T 헬퍼(Th) 세포, 예를 들어 T 헬퍼 1(Th1) 또는 T 헬퍼 2(Th2) 세포일 수 있다. T 세포는 헬퍼 T 세포(HTL; CD4+ T 세포), CD4+ T 세포, 세포독성 T 세포(CTL; CD8+ T 세포), 종양 침윤 세포독성 T 세포(TIL; CD8+ T 세포), CD4+CD8+ T 세포, 또는 T 세포의 다른 하위 집합일 수 있다. 반불변(semi-invariant) αβ T 세포 수용체를 발현하지만, NK1.1과 같은 NK 세포와 전형적으로 관련된 다양한 분자 마커도 발현하는 특수화된 T 세포 집단을 지칭하는 "NKT 세포"도 포함된다. NKT 세포에는 CD4+, CD4-, CD8+ 및 CD8- 세포뿐만 아니라, NK1.1+ 및 NK1.1-도 포함된다. NKT 세포 상의 TCR은, 그것이 MHC I-유사 분자 CD Id에 의해 제시되는 당지질 항원을 인식한다는 점에서 독특하다. NKT 세포는 염증 또는 면역 관용을 촉진하는 사이토카인을 생성하는 그의 능력에 기인하여 보호 효과 또는 해로운 효과를 가질 수 있다. 또한, "감마-델타 T 세포(γδ T 세포)"가 포함되며, 이는 표면에 별개의 TCR을 갖는 T 세포의 작은 서브세트에 대한 특수화된 집단을 말하며, TCR이 α- 및 β-TCR 사슬로 지정된 2개의 당단백질 사슬로 구성되는 대부분의 T 세포와는 달리, γδ T 세포의 TCR은 γ 사슬 및 δ 사슬로 구성된다. γδ T 세포는 면역 감시 및 면역 조절에서 역할을 할 수 있으며 IL-17의 중요한 공급원으로 밝혀졌으며 강력한 CD8+ 세포독성 T 세포 반응을 유도하는 것으로 밝혀졌다. "조절성 T 세포" 또는 "Treg"가 또한 포함되는데, 이는 비정상적이거나 과도한 면역 반응을 억제하고 면역 관용에서 역할을 하는 T 세포를 지칭한다. Treg는 전형적으로 전사 인자 Foxp3 양성 CD4+T 세포이며, 또한 IL-10 생성 CD4+T 세포인 전사 인자 Foxp3 음성 조절성 T 세포를 포함할 수 있다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 "치료적 유효량" 또는 "유효량"은 필요한 투여량에서 그리고 필요한 시간 동안 원하는 치료 결과를 달성하기에 효과적인 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중, 그리고 치료제 또는 치료제들의 조합물이 개체에서 원하는 반응을 유도하는 능력과 같은 인자들에 따라 변동될 수 있다. 효과적인 치료제 또는 치료제들의 조합의 예시적인 지표는, 예를 들어, 환자의 개선된 웰빙(well-being), 종양 부하(tumor burden)의 감소, 정지되거나 지연된 종양의 성장, 및/또는 체내의 다른 위치로의 암 세포의 전이의 부재를 포함한다.
"형질도입"은 바이러스 벡터를 사용하여 세포에 외부 핵산을 도입하는 것을 지칭힌다.
암과 같은 질환 또는 장애와 관련하여 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 하기 중 하나 이상을 달성하는 것을 지칭한다: 장애의 중증도 및/또는 지속기간을 감소시킴, 치료되는 장애에 특징적인 증상의 악화를 억제함, 이전에 장애를 가졌던 대상체에서 그러한 장애의 재발을 제한하거나 예방함, 또는 장애에 대해 이전에 증상을 나타낸 대상체에서 증상의 재발을 제한하거나 예방함.
"종양 세포" 또는 "암 세포"는 생체내, 생체외, 또는 조직 배양에서의 암성, 전암성, 또는 형질전환 세포를 지칭하며, 이는 자발적이거나 유도된 표현형 변화를 갖는다. 이러한 변화가 반드시 새로운 유전 물질의 흡수를 수반하지는 않는다. 형질전환이 형질전환 바이러스에 의한 감염 및 새로운 게놈 핵산의 혼입, 또는 외인성 핵산의 흡수로부터 일어날 수 있기는 하지만, 이는 또한 자발적으로 또는 발암물질에 대한 노출 후에 일어날 수 있으며, 그럼으로써 내인성 유전자를 돌연변이화할 수 있다. 형질전환/암은 시험관내에서, 생체내에서, 그리고 생체외에서 누드 마우스 등과 같은 적합한 동물 숙주에서의 형태학적 변화, 세포의 불멸화, 비정상 성장 제어, 병소 형성, 증식, 악성종양, 종양 특이적 마커 수준의 조절, 침습성, 종양 성장에 의해 예시된다.
"변이체", "돌연변이체" 또는 "변경된"은 하나 이상의 변형, 예를 들어 하나 이상의 치환, 삽입 또는 결실에 의해 참조 폴리펩티드 또는 참조 폴리뉴클레오티드와 상이한 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.
달리 명백하게 언급되지 않는 한, 본 명세서 전체에 걸쳐 항체 불변 영역 내의 아미노산 잔기의 넘버링은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다.
Ig 불변 영역에서의 돌연변이는 다음과 같이 지칭된다: L351Y_F405A_Y407V는 하나의 면역글로불린 불변 영역에서의 L351Y, F405A 및 Y407V 돌연변이를 지칭한다. L351Y_F405A_Y407V/T394W는 하나의 다량체 단백질에 존재하는 제1 Ig 불변 영역에서의 L351Y, F405A 및 Y407V 돌연변이 및 제2 Ig 불변 영역에서의 T394W 돌연변이를 지칭한다.
"VHH"는 중쇄의 항원 결합 도메인으로만 구성된 단일 도메인 항체 또는 나노바디를 지칭한다. VHH 단일 도메인 항체는 통상적인 Fab 영역의 중쇄의 CH1 도메인 및 경쇄가 결여되어 있다.
물질의 조성물
hK2에 결합하는 항원 결합 도메인
본 개시내용은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단일특이적 및 다중특이적 단백질(특히 이중특이적 단백질), hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR), 전술한 것을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 벡터, 숙주 세포 및 전술한 것의 제조 및 사용 방법을 제공한다. 본원에서 확인된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 개선된 열안정성 측면에서 개선된 특성을 입증하였다. 본원에 개시된 다중특이적 단백질은 T 세포 매개된 세포독성을 매개하고, T 세포 활성화 및 증식을 촉진하고, T 세포 사이토카인 방출을 증가시키고/증가시키거나 증가된 항-종양 효능을 나타내는 데 특히 효과적일 수 있다.
본 개시내용은 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 111, 112, 113, 114 또는 115에 제시된 hK2 상의 에피토프에 결합한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 111 및 112에 제시된 hK2 상의 에피토프에 결합한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 113, 114 및 115에 제시된 hK2 상의 에피토프에 결합한다.
본 발명은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 hK2의 잔기 KVTEF(SEQ ID NO: 111) 또는 HYRKW(SEQ ID NO: 112) 또는 SHGWAH(SEQ ID NO: 113) 또는 RHNLFEPEDTGQRVP(SEQ ID NO: 114) 또는 GWGSIEPEE(SEQ ID NO: 115) 내에서 결합한다. 특정 실시형태에서, 본 발명은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, 상기 항원 결합 도메인은 KVTEF(SEQ ID NO: 111) 및 HYRKW(SEQ ID NO: 112)의 서열을 갖는 에피토프 내에서 hK2에 결합한다.
H/D 교환 분석을 사용하여 항체가 결합하는 hK2 내의 잔기를 결정할 수 있다. H/D 교환 분석에서는, 재조합적으로 발현된 가용성 hK2를 항체의 존재 또는 부재 하에 사전결정된 시간 동안 중수 중에 배양하여, 항체에 의해 보호되지 않는 교환성 수소 원자에서의 중수소 혼입을 유발한 후, 단백질의 프로테아제 분해 및 LC-MS를 사용하는 펩티드 단편의 분석이 이어진다. H/D 교환 분석은 공지된 프로토콜을 사용하여 수행할 수 있다. 예시적인 프로토콜은 실시예 3에 기재되어 있다. 일부 실시형태에서, H/D 교환 혼합물은 실온에서(예를 들어, 600 μL/분) 평형화된 고정화된 펩신/FPXIII 컬럼을 통과하기 전에 켄칭 완충제(예를 들어, 8 M 요소, 1 M TCEP, pH 3.0)의 첨가에 의해 켄칭된다. 그런 다음 펩신 단편을 역상 트랩 컬럼(예를 들어, 600 μL/분)에 로딩하고 탈염(예를 들어, 600 μL에서 1분 동안)하고 분리하고(예를 들어, C18 컬럼 상에서) 질량 분석법(예를 들어, LTQ™ Orbitrap Fusion Lumos 질량 분석계(Thermo Fisher Scientific) 사용, 모세관 온도 275℃, 분해능 150,000 및 질량 범위(m/z) 300 내지 1,800)으로 분석하였다.
본 발명은 또한 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, 상기 참조 항체의 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 111, 112, 113, 114 및 115로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 갖는 hK2 상의 에피토프에 결합하고, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 hK2에 대한 결합에 대해 본원에 개시된 참조 항체와 경쟁한다. 일부 실시형태에서, 참조 항체는 하기를 포함한다:
a.
SEQ ID NO: 137의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
b.
SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
c.
SEQ ID NO: 164의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 165의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
d.
SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 167의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
e.
SEQ ID NO: 168의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 169의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
f.
SEQ ID NO: 204의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 205의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
g.
SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 444의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3.
특정 이러한 실시형태에서, 참조 항체는 SEQ ID NO: 162의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
가용성 hK2의 SEQ ID NO: 111, 112, 113, 114 또는 115에 결합하는 시험 항체와 본 발명의 참조 항체의 결합에 대한 경쟁은 잘 알려진 방법을 사용하여 시험관내에서 분석될 수 있다. 예를 들어, 표지되지 않은 참조 항체의 존재 하에 hK2의 hK2 막 근위 영역에 대한 표지된 항체의 결합은 ELISA에 의해 평가될 수 있거나, Bioacore 분석 또는 유세포 분석을 사용하여 경쟁을 입증할 수 있다. 시험 항체는 시험 항체가 가용성 hK2에 대한 참조 항체의 결합을 85% 이상, 예를 들어 90% 이상, 또는 95% 이상 억제할 때 참조 항체와 hk2에 대한 결합에 대해 경쟁한다.
본 개시내용은 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다: SEQ ID NO: 137의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 137의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 164의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 165의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 167의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 168의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 169의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 204의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 205의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3. 특정 실시형태에서, 단리된 단백질은 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다:
각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69, 71;
각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 68, 70, 71;
각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 67, 69, 71;
각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181;
각각 SEQ ID NO: 170,183, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193;
각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209;
각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180, 181;
각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193; 또는
각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
또 다른 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 137, 162, 164, 166, 168 또는 204의 VH 및 SEQ ID NO: 138, 163, 165, 167 또는 169의 VL을 포함한다.
본 개시내용은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL; 또는
SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 95% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 95% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 95% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 99% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 99% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 99% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 99% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 95% 동일한 VL을 포함한다.
본 개시내용은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 133, 134, 308, 316, 324,325, 404, 405, 406, 407, 408, 또는 409의 아미노산 서열을 포함한다.특정 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 404의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 405의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 404의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 405의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 75의 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 74의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. SEQ ID NO: 75 및 SEQ ID NO: 74는 부모 항체 hu11B6과 비교할 때 개선된 열안정성을 나타내는 변이체를 포함하는 속 VH 및 VL 아미노산 서열을 나타낸다. 개선된 열안정성을 부여하도록 조작된 위치는 VH의 잔기 P41, I49, M70 및 A88(SEQ ID NO: 5의 hu11B6_VH에 따른 잔기 넘버링) 및 VL의 S80, L82, A88 및 Y91(SEQ ID NO: 2의 hu11B6_VL에 따른 잔기 넘버링)이었다.
SEQ ID NO: 75 (VH 공통 서열)
QVQLQESGPGLVKPSX1TLSLTCX2VSGNSITSDYAWNWIRQX3PGKX4LEWX5GYISYSGSTT
YNPSLKSRVTX6SRDTSKNQFSLKLSSVTX7X8DTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 74 (VL 공통 서열)
X1IVLTQSPX2X3LX4X5SX6GERATX7X8CX 9 ASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPX10LLIYAASNX 11
ESGX12PX13RFSGSGSGTDFTLTIX14SX15X16QX17EDX18X19VYX20CQQTRKVPYTFGX21GTKX22EIK
본 개시내용은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 139, 159 또는 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 140 또는 160의 VL을 포함하며, 단, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함하지 않는다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL; 또는
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 135, 136, 318, 319, 320, 321, 322 또는 323의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 (scFv)2이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 F(ab')2이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fd이다.
일부 실시형태에서, hK2 항원 결합 도메인은 dAb이다.
일부 실시형태에서, hK2 항원 결합 도메인은 VHH이다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fab이다.
hK2 결합 scFv
hK2에 결합하는 본원에서 확인된 임의의 VH 및 VL 도메인은 VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH 방향으로 scFv 형식으로 조작될 수 있다. 본원에서 확인된 임의의 VH 및 VL 도메인은 또한 sc(Fv)2 구조, 예컨대 VH-링커-VL-링커-VL-링커-VH, VH-링커-VL-링커-VH-링커-VL. VH-링커-VH-링커-VL-링커-VL. VL-링커-VH-링커-VH-링커-VL. VL-링커-VH-링커-VL-링커-VH 또는 VL-링커-VL-링커-VH-링커-VH를 생성하는 데 사용될 수 있다.
본원에서 확인된 VH 및 VL 도메인은 scFv 형식으로 혼입될 수 있고 생성된 scFv의 hK2에 대한 결합 및 열안정성은 공지된 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 결합은 ProteOn XPR36, BIAcore 3000 또는 KinExA 기기, ELISA 또는 당업자에게 알려진 경쟁적 결합 분석을 사용하여 평가될 수 있다. 결합은 정제된 scFv 또는 대장균 상청액 또는 발현된 scFv를 함유하는 용해된 세포를 사용하여 평가될 수 있다. hK2에 대한 시험 scFv의 측정된 친화도는 상이한 조건(예를 들어, 삼투압 농도, pH)에서 측정되는 경우 달라질 수 있다. 따라서, 친화도 및 기타 결합 파라미터(예를 들어, KD, Kon, Koff)의 측정은 전형적으로 표준화된 조건 및 표준화된 완충액으로 이루어진다. 열안정성은 시험 scFv를 50℃, 55℃ 또는 60℃와 같은 승온에서 5분, 10분, 15분, 20분, 25분 또는 30분과 같은 일정 시간 동안 가열하고 hK2에 대한 시험 scFv의 결합을 측정하여 평가될 수 있다. 가열되지 않은 scFv 샘플과 비교할 때 hK2에 대한 비슷한 결합을 유지하는 scFv를 열안정한 것으로 지칭한다.
재조합 발현 시스템에서, 링커는 펩티드 링커이고, 임의의 자연 발생 아미노산을 포함할 수 있다. 링커 내로 포함될 수 있는 예시적인 아미노산은 Gly, Ser Pro, Thr, Glu, Lys, Arg, Ile, Leu, His 및 The이다. 링커는 VH와 VL을, 이들이 서로에 대해 올바른 입체구조를 형성하여 hK2에 대한 결합과 같은 원하는 활성을 유지하도록 하는 방식으로 연결하기에 충분한 길이를 가져야 한다.
링커는 약 5 내지 50개의 아미노산 길이일 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 약 10 내지 40개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 약 10 내지 35개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 약 10 내지 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 약 10 내지 25개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 약 10 내지 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 약 15 내지 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 6개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 7개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 8개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 9개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 10개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 11개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 12개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 13개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 14개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 15개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 16개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 17개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 18개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 19개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 21개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 22개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 23개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 24개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 25개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 26개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 27개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 28개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 29개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 31개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 32개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 33개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 34개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 35개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 36개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 37개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 38개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 39개의 아미노산 길이이다. 일부 실시형태에서, 링커는 40개의 아미노산 길이이다. 사용될 수 있는 예시적인 링커는 Gly 풍부 링커, Gly 및 Ser 함유 링커, Gly 및 Ala 함유 링커, Ala 및 Ser 함유 링커, 및 기타 가요성 링커이다.
다른 링커 서열은 임의의 면역글로불린 중쇄 또는 경쇄 동형으로부터 유래되는 면역글로불린 힌지 영역, CL 또는 CH1의 부분을 포함할 수 있다. 대안적으로, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시알킬렌, 또는 폴리에틸렌 글리콜과 폴리프로필렌 글리콜의 공중합체를 포함하는 다양한 비단백질성 중합체가 링커로서 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 링커가 표 1에 제시되어 있다. 추가의 링커는 예를 들어 국제공개 WO2019/060695호에 기재되어 있다.
일부 실시형태에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1) 및 VL(VH-L1-VL)을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VL, L1 및 VH(VL-L1-VH)를 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 76의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 78의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 79의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 80의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 81의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 82의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 83의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 91의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 94의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 95의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함한다.
[표 1]
일부 특정 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
일부 실시형태에서, scFv는 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 137의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 164의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 165의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 167의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 168의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 169의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 204의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 205의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는 SEQ ID NO: 139의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 140의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3.
일부 실시형태에서, scFv는 하기의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다:
각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69, 71;
각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 68, 70, 71;
각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 67, 69, 71;
각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181;
각각 SEQ ID NO: 170,183, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193;
각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209;
각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180, 181;
각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193; 또는
각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180, 181의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 68, 70 및 71의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 137의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 164의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 166의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 168의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 204의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 159의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 161의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 139의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 159의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 95% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 95% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 99% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 95% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 99% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 99% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 95% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 99% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 133, 134, 308, 316, 324,325, 404, 405, 406, 407, 408 또는 409의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 133, 134, 308, 316, 324,325, 404, 405, 406, 407, 408 또는 409의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 404의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 405의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 75의 VH 및 SEQ ID NO: 74의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 4, 5 또는 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2 또는 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 139, 159 또는 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 140 또는 160의 VL을 포함하며, 단, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 318의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 319의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 320의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 321의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 322의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 323의 아미노산 서열을 포함한다.
hK2에 결합하는 다른 항원 결합 도메인
hK2에 결합하는 본원에서 확인된 임의의 VH 및 VL 도메인은 또한 Fab, F(ab')2, Fd 또는 Fv 형식으로 조작될 수 있고, hK2에 대한 이들의 결합 및 열안정성은 본원에 기재된 분석을 사용하여 평가될 수 있다.
일부 실시형태에서, Fab는 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 137의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
SEQ ID NO: 164의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 165의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 167의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
SEQ ID NO: 168의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 169의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 204의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 205의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3.
특정 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 하기의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다:
각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69, 71;
각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 68, 70, 71;
각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 67, 69, 71;
각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181;
각각 SEQ ID NO: 170,183, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193;
각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209;
각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180, 181;
각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193; 또는
각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 170,183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180, 181의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
특정 실시형태에서, Fab은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175, 또는 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 75의 VH 및 SEQ ID NO: 74의 VL을 포함한다.
특정 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 95% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 95% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 99% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 95% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 99% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 99% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 99% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 95% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 137의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 164의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 166의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 168의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 204의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 139, 159 또는 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 140 또는 160의 VL을 포함하며, 단, Fab는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 Fab의 VH 및 VL은 각각 Fab-Fc HC(VH-CH1-힌지-CH2-CH3) 및 Fab-Fc LC(VL-CL) 형식으로 조작될 수 있다. 특정 이러한 실시형태에서, Fab-Fc HC는 SEQ ID NO: 354와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, Fab-Fc HC는 SEQ ID NO: 354와 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab-Fc HC는 C-말단 라이신 잔기(예를 들어, K477)를 포함한다. 일부 실시형태에서, Fab-Fc HC는 SEQ ID NO: 361과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 서열 및 C-말단 라이신 잔기를 갖는 아미노산을 포함한다. 특정 실시형태에서, Fab-Fc HC는 SEQ ID NO: 361의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fab-Fc LC는 SEQ ID NO: 221과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, Fab-Fc LC는 SEQ ID NO: 221과 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
실시예에서 볼 수 있는 바와 같이, 다중특이적 작제물 내로 혼입하기 위해 hK2에 결합하는 특히 적합한 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 354의 아미노산 서열을 갖는 Fab-Fc HC 및 SEQ ID NO: 221의 아미노산 서열을 갖는 Fab-Fc LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 137의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
SEQ ID NO: 164의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 165의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 167의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
SEQ ID NO: 168의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 169의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 204의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 205의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 하기의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다:
각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181;
각각 SEQ ID NO: 170,183, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193;
각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209;
각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180, 181;
각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193; 또는
각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180, 181의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 75의 VH 및 SEQ ID NO: 74의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 139, 159 또는 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 140 또는 160의 VL을 포함하며, 단, Fab는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, F(ab')2는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 137의 중쇄 가변 영역(VH)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 경쇄 가변 영역(VL)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
SEQ ID NO: 164의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 165의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 167의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3;
SEQ ID NO: 168의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 169의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 204의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 205의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3.
일부 실시형태에서, Fv는 하기의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다:
각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181;
각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193;
각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209;
각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180, 181;
각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193; 또는
각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180, 181의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 75의 VH 및 SEQ ID NO: 74의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 4, 5 또는 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2 또는 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 139, 159 또는 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 140 또는 160의 VL을 포함하며, 단, Fab는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fv는 SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, Fd는 SEQ ID NO: 75의 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, Fd는 SEQ ID NO: 4의 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, Fd는 SEQ ID NO: 5의 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, Fd는 SEQ ID NO: 6의 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 210의 HC 및 SEQ ID NO: 221의 LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 211의 HC 및 SEQ ID NO: 222의 LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 212의 HC 및 SEQ ID NO: 223의 LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 213의 HC 및 SEQ ID NO: 224의 LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 219의 HC 및 SEQ ID NO: 220의 LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 354와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 HC 및 SEQ ID NO: 221과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 354와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 HC 및 SEQ ID NO: 221의 LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 354의 HC 및 SEQ ID NO: 221과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 354와 적어도 95% 동일한 HC 및 SEQ ID NO: 221과 적어도 95% 동일한 LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 354와 적어도 99% 동일한 HC 및 SEQ ID NO: 221과 적어도 95% 동일한 LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 354와 적어도 99% 동일한 HC 및 SEQ ID NO: 221과 적어도 99% 동일한 LC를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 354와 적어도 95% 동일한 HC 및 SEQ ID NO: 221과 적어도 99% 동일한 LC를 포함한다.
특정 실시형태에서, 단리된 항-hK2 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 354의 HC 및 SEQ ID NO: 221의 LC를 포함한다.
보존적 치환을 갖는 상동 항원 결합 도메인 및 항원 결합 도메인
hK2에 결합하는 항원 결합 도메인의 변이체는 본 개시내용의 범위 내에 있다. 예를 들어, 변이체는 부모 항원 결합 도메인과 비교할 때 개선된 기능적 특성을 유지하거나 갖는 한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 또는 29개의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 서열 동일성은 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인에 대해 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%일 수 있다. 일부 실시형태에서, 프레임워크 영역에 변이가 발생한다. 일부 실시형태에서, 변이체는 보존적 치환에 의해 생성된다.
예를 들어, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 VH의 잔기 위치 D16, A23, P41, G45, I49, M70 및 A88 및 V89(SEQ ID NO: 5의 hu11B6_VH에 따른 잔기 넘버링) 및 VL의 D1, D9, S10, A12, V13, L15, I21, N22, K24, K49, R58, V62, D64, S80, L82, Q83, A84, V87, A88, Y91, Q104 및 L108(SEQ ID NO: 2의 hu11B6_VL에 따른 잔기 넘버링)에 치환을 포함할 수 있다. 보존적 치환은 임의의 표시된 위치에서 이루어질 수 있고 생성된 hK2에 결합하는 변이체 항원 결합 도메인은 본원에 기재된 분석에서 원하는 특성에 대해 시험된다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질은 본원에 개시된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인의 VH 및 VL과 각각 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 VL을 포함한다.
또한, 하기와 적어도 80% 동일한 VH 및 VL을 포함하는 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 제공된다:
SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL; 또는
SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL.
일부 실시형태에서, 동일성은 85%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 90%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 91%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 91%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 92%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 93%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 94%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 94%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 95%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 96%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 97%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 98%이다. 일부 실시형태에서, 동일성은 99%이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 137의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 164의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 166의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 166의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 444의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 168의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 204의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 85% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 90% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 91% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 92% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 93% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 94% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 95% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 96% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 97% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 98% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 99% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 85% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 90% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 91% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 92% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 93% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 94% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 95% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 96% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 97% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 98% 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 99% 동일한 VL을 포함한다.
2개의 서열 간의 % 동일성은 서열들에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수(즉, % 동일성 = 동일한 위치의 수/위치의 총수 × 100)이며, 이때 2개의 서열의 최적의 정렬을 위해 도입되어야 할 필요가 있는 갭(gap)의 수, 및 각각의 갭의 길이를 고려한다.
두 아미노산 서열 사이의 % 동일성은, PAM120 가중치 잔기(weight residue) 표, 12의 갭 길이 페널티 및 4의 갭 페널티를 사용하여, ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된 이. 메이어스(E. Meyers) 및 더블유. 밀러(W. Miller)의 알고리즘(문헌[Comput. Appl . Biosci., 4:11-17 (1988)])을 사용하여 결정될 수 있다. 또한, 두 아미노산 또는 핵산 서열 사이의 % 동일성은, 블로섬(Blossum) 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5 또는 6의 길이 가중치(length weight)를 사용하여, (http://_www_gcg_com에서 입수가능한) GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램에 통합된 니들만(Needleman) 및 분쉬(Wunsch)의 알고리즘(문헌[J. Mol . Biol 48:444-453 (1970)])을 사용하여 결정될 수 있다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 변이체 항원 결합 도메인은 hK2에 결합하는 부모 항원 결합 단편의 원하는 기능적 특성을 유지하면서 임의의 CDR 영역에 1개 또는 2개의 보존적 치환을 포함한다.
"보존적 변형"은 아미노산 변형을 함유하는 항체의 결합 특성에 유의한 영향을 주지 않거나 그를 변경시키지 않는 아미노산 변형을 지칭한다. 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산이 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것들이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기들의 패밀리는 잘 규정되어 있고, 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 비하전된 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신, 트립토판), 방향족 측쇄(예를 들어, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘, 티로신), 지방족 측쇄(예를 들어, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 세린, 트레오닌), 아미드(예를 들어, 아스파라긴, 글루타민), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 아이소류신) 및 황-함유 측쇄 (시스테인, 메티오닌)를 갖는 아미노산을 포함한다. 뿐만 아니라, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발에 대해 이전에 기재된 바와 같이, 폴리펩티드의 임의의 천연 잔기도 알라닌으로 치환될 수 있다(문헌[MacLennan et al., (1988) Acta Physiol Scand Suppl 643:55-67]; 문헌[Sasaki et al., (1988) Adv Biophys 35:1-24]). 본 발명의 항체에 대한 아미노산 치환은 알려진 방법, 예를 들어 PCR 돌연변이생성(미국 특허 제4,683,195호)에 의해 행해질 수 있다. 대안적으로, 변이체의 라이브러리를 생성할 수 있는데, 예를 들어 무작위(NNK) 또는 비무작위 코돈, 예를 들어 DVK 코돈(이는 11개의 아미노산(Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Asn, Arg, Ser, Tyr, Trp)을 코딩함)을 사용하여 생성할 수 있다. 생성되는 변이체는 본원 기재된 분석을 사용하여 그들의 특성에 대해 시험될 수 있다.
hK2에 결합하는 항원 결합 단편을 생성하는 방법
본 개시내용에서 제공되는 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 다양한 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, Kohler 및 Milstein의 하이브리도마 방법을 사용하여 hK2에 결합하는 VH/VL 쌍을 확인할 수 있다. 하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 숙주 동물, 예컨대 햄스터, 래트 또는 닭을 인간 및/또는 사이노 hK2로 면역화한 후, 면역화된 동물로부터의 비장 세포를 표준 방법을 사용하여 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성한다. 단일 불멸화 하이브리도마 세포로부터 발생하는 콜로니는 결합 특이성, 교차 반응성 또는 그의 결여, 항원에 대한 친화성, 및 임의의 원하는 기능과 같은 원하는 특성으로 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 함유하는 항체의 생성에 대해 스크리닝될 수 있다.
비인간 동물을 면역화함으로써 생성된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 인간화될 수 있다. 인간 수용체 프레임워크의 선택을 포함하는 예시적인 인간화 기술은 CDR 그래프팅(미국 특허 제5,225,539호), SDR 그래프팅(미국 특허 제6,818,749호), 재표면화(Resurfacing)(문헌[Padlan, (1991) Mol Immunol 28:489-499]), 특이성 결정 잔기 재표면화(미국 특허출원공개 2010/0261620호), 인간 프레임워크 적응화(미국 특허 제8,748,356호) 또는 초인간화(superhumanization)(미국 특허 제7,709, 226호)를 포함한다. 이러한 방법에서는, 부모 항체의 CDR 또는 CDR 잔기의 서브세트를 인간 프레임워크에 전달하며, 이는 부모 프레임워크에 대한 이들의 전체 상동성에 기초하여, CDR 길이의 유사성, 정준(canonical) 구조 동일성 또는 이들의 조합에 기초하여 선택될 수 있다.
인간화 항원 결합 도메인은 국제공개 WO1090/007861호 및 국제공개 WO1992/22653호에 기재된 것들과 같은 기법들에 의해, 변경된 프레임워크 지지 잔기를 혼입시켜 결합 친화도를 보존함으로써(복귀 돌연변이(backmutation)), 또는 CDR들 중 임의의 것에서 변이를 도입하여, 예를 들어 항원 결합 도메인의 친화성을 개선함으로써 원하는 항원에 대한 그의 선택성 또는 친화성을 개선하도록 추가로 최적화될 수 있다.
인간 면역글로불린(Ig) 유전자위를 게놈 내에 갖는 마우스, 래트 또는 닭과 같은 형질전환 동물을 사용하여 hK2에 결합하는 항원 결합 단편을 생성할 수 있으며, 이는 예를 들어 미국 특허 제6,150,584호, 국제공개 WO1999/45962호, 국제공개 WO2002/066630호, 국제공개 WO2002/43478호, 국제공개 WO2002/043478호 및 국제공개 WO1990/04036호에 기재되어 있다. 이러한 동물의 내인성 면역글로불린 유전자위는 파괴되거나 결실될 수 있고, 상동적 또는 비상동적 재조합을 사용하거나, 도입염색체(transchromosome)를 사용하거나, 미니유전자(minigene)를 사용하여, 하나 이상의 완전하거나 부분적인 인간 면역글로불린 유전자위를 동물의 게놈에 삽입할 수 있다.Regeneron(http://_www_regeneron_com), Harbour Antibodies(http://_www_harbourantibodies_com), Open Monoclonal Technology, Inc.(OMT)(http://_www_omtinc_net), KyMab(http://_www_kymab_com), Trianni(http://_www.trianni_com) 및 Ablexis(http://_www_ablexis_com)와 같은 회사는 위에서 설명한 기술을 사용하여 선택된 항원에 대한 인간 항체를 제공하기 위해 계약될 수 있다. 일부 실시형태에서, Alexis 마우스 및 OmniRats 래트는 가용성 전장 KLK2 단백질(인간 칼리크레인-2 6-His 단백질)(SEQ ID NO: 454)로 면역화되었다.
hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택될 수 있으며, 여기서 파지는 인간 면역글로불린 또는 그의 일부, 예컨대 Fab, 단일 사슬 항체(scFv), 또는 쌍을 이루지 않거나 쌍을 이루는 항체 가변 영역을 발현하도록 조작된다. hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 문헌[Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96] 및 국제공개 WO09/085462호에 기재된 바와 같이, 예를 들어 박테리오파지 pIX 외피 단백질과의 융합 단백질로서 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 발현시키는 파지 디스플레이 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 라이브러리는 인간 및/또는 사이노 hK2에 대한 파지 결합에 대해 스크리닝될 수 있고, 수득된 양성 클론은 추가로 특징화될 수 있고, Fab는 클론 용해물로부터 단리되고, 항원 결합 단편의 scFv 또는 다른 구성으로 전환될 수 있다.
본 개시내용의 면역원성 항원의 제조 및 항원 결합 도메인의 발현 및 생성은 재조합 단백질 생성과 같은 임의의 적합한 기술을 사용하여 수행될 수 있다. 면역원성 항원을 정제된 단백질, 또는 전세포, 세포 또는 조직 추출물을 포함하는 단백질 혼합물의 형태로 동물에게 투여할 수 있거나, 항원은 상기 항원 또는 이의 부분을 코딩하는 핵산으로부터 동물의 체내에 새로(de novo) 형성될 수 있다.
반감기 연장 모이어티에 대한 접합
본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 반감기 연장 모이어티에 접합될 수 있다. 예시적인 반감기 연장 모이어티는 알부민, 알부민 변이체, 알부민-결합 단백질 및/또는 도메인, 트랜스페린 및 이의 단편 및 유사체, 면역글로불린(Ig) 또는 이의 단편, 예컨대 Fc 영역이다. 전술한 반감기 연장 모이어티의 아미노산 서열은 공지되어 있다. Ig 또는 이의 단편은 모든 동형, 즉, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA 및 IgE를 포함한다.
원하는 특성을 위해 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인에 접합될 수 있는 추가의 반감기 연장 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 분자, 예컨대 PEG5000 또는 PEG20,000, 상이한 사슬 길이의 지방산 및 지방산 에스테르, 예를 들어 라우레이트, 미리스테이트, 스테아레이트, 아라키데이트, 베헤네이트, 올레에이트, 아라키도네이트, 옥탄디오산, 테트라데칸디오산, 옥타데칸디오산, 도코산디오산 등, 폴리라이신, 옥탄, 탄수화물(덱스트란, 셀룰로오스, 올리고당 또는 다당류)을 포함한다. 이들 모이어티는 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인과의 직접적인 융합일 수 있고 표준 클로닝 및 발현 기술에 의해 생성될 수 있다. 대안적으로, 잘 알려진 화학적 커플링 방법을 사용하여 모이어티를 본 개시내용의 hK2에 결합하는 재조합적으로 생성된 항원 결합 도메인에 부착할 수 있다.
페길 모이어티는 예를 들어 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인의 C-말단에 시스테인 잔기를 혼입함으로써 또는 시스테인을 hK2 결합 부위에서 멀어지는 잔기 위치로 조작하고 잘 알려진 방법을 사용하여 페길 기를 시스테인에 부착함으로써 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인에 접합될 수 있다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 단편은 반감기 연장 모이어티에 접합된다.
일부 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 면역글로불린(Ig), Ig의 단편, Ig 불변 영역, Ig 불변 영역의 단편, Fc 영역, 트랜스페린, 알부민, 알부민 결합 도메인 또는 폴리에틸렌 글리콜이다. 일부 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 Ig 불변 영역이다.
일부 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 Ig이다.
일부 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 Ig의 단편이다.
일부 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 Ig 불변 영역이다.
일부 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 Ig 불변 영역의 단편이다.
일부 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 Fc 영역이다.
일부 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 알부민이다.
일부 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 알부민 결합 도메인이다.
일부 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 트랜스페린이다.
일부 실시형태에서, 반감기 연장 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜이다.
반감기 연장 모이어티에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 공지된 생체내 모델을 사용하여 그의 약동학적 특성에 대해 평가될 수 있다.
면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 대한 접합
본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fc 이펙터 기능 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), Fc 수용체 결합, 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC), 식세포작용 또는 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절을 포함하는 항체-유사 특성을 부여하기 위해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합될 수 있다. Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 또한 본원에서 논의된 바와 같이 반감기 연장 모이어티로서 기능한다. 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 표준 방법을 사용하여 통상적인 전장 항체로 조작될 수 있다. hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 전장 항체는 본원에 기재된 바와 같이 추가로 조작될 수 있다.
면역글로불린 중쇄 불변 영역은 서브도메인 CH1, 힌지, CH2 및 CH3으로 구성된다. CH1 도메인은 EU 인덱스에 따라 잔기 넘버링된 중쇄 상의 잔기 A118-V215, CH2 도메인 잔기 A231-K340 및 CH3 도메인 잔기 G341-K447에 걸쳐 있다. 일부 경우에, G341은 CH2 도메인 잔기로 지칭된다. 힌지는 일반적으로 E216을 포함하고 인간 IgG1의 P230에서 끝나는 것으로 정의된다. Ig Fc 영역은 Ig 불변 영역의 적어도 CH2 및 CH3 도메인을 포함하고, 따라서 Ig 중쇄 불변 영역의 약 A231 내지 K447 영역을 적어도 포함한다.
본 발명은 또한 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공한다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역은 중쇄 불변 영역이다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역은 경쇄 불변 영역이다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역의 단편은 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역의 단편은 CH3 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역의 단편은 적어도 일부의 힌지, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함한다. 상기 힌지의 일부는 Ig 힌지의 하나 이상의 아미노산 잔기를 지칭한다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 N-말단에 접합된다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 C-말단에 접합된다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 제2 링커(L2)를 통해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 7, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107 또는 108의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 76의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 78의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 79의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 80의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 81의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 82의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 83의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 91의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 94의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 95의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함한다.
Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 몇몇 공지된 분석을 사용하여 이들의 기능에 대해 평가될 수 있다. hK2에 대한 결합은 본원에 기재된 방법을 사용하여 평가될 수 있다. Ig 불변 도메인 또는 Ig 불변 영역의 단편, 예컨대 Fc 영역에 의해 부여된 변경된 특성은 예를 들어 ADCC, CDC 또는 ADCP를 측정하는 세포 기반 분석을 사용하여 또는 FcγRI, FcγRII, FcγRIII 또는 FcRn 수용체와 같은 수용체의 가용성 형태를 사용하여 Fc 수용체 결합 분석에서 분석될 수 있다.
ADCC는 표적 세포로서 hK2 발현 세포 및 이펙터 세포로서 NK 세포를 사용하는 시험관내 분석을 사용하여 평가될 수 있다. 세포용해는 용해된 세포로부터 표지(예를 들어, 방사성 기질, 형광 염료 또는 자연 세포내 단백질)의 방출에 의해 검출될 수 있다. 예시적인 분석에서, 표적 세포는 1개의 표적 세포 대 4개의 이펙터 세포의 비로 사용된다. 표적 세포는 BATDA로 미리 표지되고, 이펙터 세포 및 시험 항체와 조합된다. 샘플을 2시간 동안 배양하고, 상청액 내로 방출된 BATDA를 측정함으로써 세포 용해를 측정한다. 0.67% Triton X-100(Sigma Aldrich)에 의한 최대 세포독성, 및 임의의 항체의 부재 하에서의 표적 세포로부터의 BATDA의 자발적인 방출에 의해 결정된 최소 대조군에 대해 데이터를 정규화한다.
ADCP는 이펙터 세포로서 단핵구 유래 대식세포를 사용하고 GFP 또는 다른 표지된 분자를 발현하도록 조작된 표적 세포로서 임의의 hK2 발현 세포를 사용하여 평가될 수 있다. 예시적인 분석에서, 이펙터:표적 세포 비는 예를 들어 4:1일 수 있다. 이펙터 세포는 본 발명의 항체와 함께 또는 항체 없이 4시간 동안 표적 세포와 배양될 수 있다. 배양 후, 세포는 아큐타제를 사용하여 탈착될 수 있다. 대식세포는 형광 표지에 커플링된 항-CD11b 및 항-CD14 항체로 확인될 수 있으며, 식세포작용 백분율은 표준 방법을 사용하여 CD11+CD14+ 대식세포에서 % GFP 형광을 기반으로 결정될 수 있다.
세포의 CDC는 예를 들어 RPMI-B(1% BSA가 보충된 RPMI) 중에서 1×105 세포/웰(50 μL/웰)로 다우디(Daudi) 세포를 플레이팅하고, 0 내지 100 ㎍/mL의 최종 농도로 웰에 50 μL의 시험 단백질을 첨가하고, 실온에서 15분 동안 반응물을 배양하고, 11 μL의 풀링된(pooled) 인간 혈청을 웰에 첨가하고, 37℃에서 45분 동안 반응물을 배양함으로써 측정될 수 있다. 용해된 세포의 백분율(%)은 표준 방법을 사용하여 FACS 분석에서 % 프로피듐 아이오다이드 염색된 세포로서 검출될 수 있다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 IgG1 중쇄 불변 영역의 단편에 접합된다. 일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 110과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 IgG1 중쇄 불변 영역의 단편(예를 들어, 힌지-CH2-CH3 포함)에 접합된다. 일부 실시형태에서, IgG1 중쇄 불변 영역은 선택적 이종이량체화를 촉진하도록 설계된 T350V_T366L_K392L_T394W 돌연변이 및 Fc 침묵 돌연변이(L234A_L235A_D265S)를 포함한다. 일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 갖는 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 IgG1 중쇄 불변 영역의 단편에 접합된다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 중쇄 불변 영역(예를 들어, CH1-힌지-CH2-CH3)에 접합된다. 특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 중쇄 불변 영역 또는 IgG1 중쇄 불변 영역의 단편에 접합된다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 309와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 경쇄 불변 영역에 접합된다. 일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 447과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 경쇄 불변 영역에 접합된다. 일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 309 또는 447과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 경쇄 불변 영역에 접합된다. 특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 경쇄 불변 영역에 접합된다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 중쇄 불변 영역에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인 및 SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 IgG1 경쇄 불변 영역에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함하고, 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 추가로 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3, 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함하고, 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 추가로 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3, 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL, 및 SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL, 및 SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL, 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 아미노산 서열, 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL, 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함하고, 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 추가로 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 아미노산 서열, 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 포함한다.
본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질
본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 표준 방법을 사용하여 다양한 디자인의 단일특이적 또는 다중특이적 단백질로 조작될 수 있다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단일특이적 단백질을 제공한다.
일부 실시형태에서, 단일특이적 단백질은 항체이다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질을 제공한다.
일부 실시형태에서, 다중특이적 단백질은 이중특이적이다.
일부 실시형태에서, 다중특이적 단백질은 삼중특이적이다.
일부 실시형태에서, 다중특이적 단백질은 사중특이적이다.
일부 실시형태에서, 다중특이적 단백질은 hK2에 대한 결합에 대해 1가이다.
일부 실시형태에서, 다중특이적 단백질은 hK2에 대한 결합에 대해 2가이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공한다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원은 T 세포 항원이다.
일부 실시형태에서, T 세포 항원은 CD8+ T 세포 항원이다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원은 NK 세포 항원이다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원은 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 또는 NKG2C이다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원은 CD3ε이다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
일부 실시형태에서, 항-hK2/항-CD3 단백질은 이중특이적이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb 또는 VHH를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab를 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 Fab를 포함한다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 F(ab')2를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 F(ab')2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 F(ab')2를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 VHH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 Fv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fd를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 Fd를 포함한다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fd를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
특정 실시형태에서, 다중특이적 단백질은 이중특이적이고, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 Fab를 포함하고 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab를 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 Fab를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fab'를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 Fab'를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 dAb를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 dAb를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 Fd를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 VHH를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 VHH를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 Fv를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 scFv를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 Fd를 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1) 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1 및 VH(VL-L1-VH)를 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 약 5 내지 50개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 약 5 내지 40개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 약 10 내지 30개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 약 10 내지 20개의 아미노산을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 7, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107 또는 108의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 76의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 78의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 79의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 80의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 81의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 82의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 83의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 84의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 85의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 88의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 91의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 94의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 95의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 특정 실시형태에서, L1은 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 63, 72, 141, 147, 170, 176, 188, 194, 196, 198, 200, 206 또는 216의 HCDR1, SEQ ID NO: 64, 65, 73, 142, 148, 171, 177, 188, 189, 195, 197, 199, 201, 207 또는 217의 HCDR2, SEQ ID NO: 66, 143, 172, 178, 184, 190, 208 또는 218의 HCDR3, SEQ ID NO: 67, 68, 144, 173, 179, 182, 185 또는 191의 LCDR1, SEQ ID NO: 69, 70, 145, 174, 180, 186, 192 또는 470의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 71, 146, 175, 181, 187, 193 또는 209의 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 하기의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다:
각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 68, 70 및 71;
각각 SEQ ID NO: 63, 64, 66, 67, 69 및 71;
각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71;
각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181;
각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193;
각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 및 209;
각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 68, 70 및 71;
각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 67, 69 및 71;
각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 190 및 181;
각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193; 또는
각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175 또는 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 선택적으로 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 또는 NKG2C, 예컨대 CD3인 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 선택적으로 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 또는 NKG2C, 예컨대 CD3인 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 75의 VH 및 SEQ ID NO: 74의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 75의 VH 및 SEQ ID NO: 74의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL, 및 선택적으로 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 또는 NKG2C, 예컨대 CD3인 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL, 및 선택적으로 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 또는 NKG2C, 예컨대 CD3인 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL, 및 선택적으로 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 또는 NKG2C, 예컨대 CD3인 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL, 및 선택적으로 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 또는 NKG2C, 예컨대 CD3인 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 139, 159 또는 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 140 또는 160의 VL을 포함하며, 단, Fab는 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 4, 5 또는 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2 또는 3의 VL을 포함하며, 단, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL; 또는
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 133, 134, 135, 136, 308, 316, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 404, 405, 406, 407, 408 또는 409의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 308의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 316의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 318의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 319의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 320의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 321의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 322의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 323의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 324의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 325의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 404의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 405의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 406의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 407의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 408의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 409의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 404의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 405의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 404 또는 405의 아미노산 서열을 포함한다.본 개시내용은 또한 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 제공하며, 림프구 항원에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 157의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. SEQ ID NO: 248 및 SEQ ID NO: 157은 부모 항체 CD3B815 항체의 속 VH 및 VL 아미노산 서열을 나타낸다.
VL 공통 (SEQ ID NO: 157)
DIQX1TQSPX2X3LSX4SX5GX6RVX7X8X9CRARQSIGTAIHWYQQKX10X11X12X13PX14LLIX15YASESISGX16PSRFSGSGSGTDFTLTIX17SX18QX19EDX20AX21YYCQQSX22SWPYTFGX23GTKLEIK
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 260의 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 249의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 250의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 252의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 253의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 254의 VL.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
특정 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 116의 HCDR1, SEQ ID NO: 117의 HCDR2, SEQ ID NO: 118의 HCDR3, SEQ ID NO: 119의 LCDR1, SEQ ID NO: 120의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 121의 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL.
특정 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3을 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3을 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3을 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3을 포함한다.
특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 275, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고; 또는
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 275, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO:140의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO:140의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO:138의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO:138의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO:169의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO:163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 444의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고; 또는
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO:140의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO:139의 VH 및 SEQ ID NO:140의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO:138의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO:137의 VH 및 SEQ ID NO:138의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO:169의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO:163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO:444의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO:165의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO:168의 VH 및 SEQ ID NO:169의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO:204의 VH 및 SEQ ID NO:205의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO:205의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO:163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 제1 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편에 접합되고/접합되거나 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 제2 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편에 접합된다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역의 단편 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 Fc 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역의 단편 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역의 단편 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 CH3 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역의 단편 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역의 단편 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 적어도 일부의 힌지, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역의 단편은 힌지, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 다중특이적 단백질은 hK2 및 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편에 결합하는 제1 항원 결합 도메인과 림프구 항원 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 사이에 제2 링커(L2)를 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, L2는 SEQ ID NO: 7, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107 또는 108의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1, IgG2 및 IgG3 또는 IgG4 동형이다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1 동형이다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG2 동형이다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG3 동형이다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG4 동형이다.
특정 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1 동형이다.
제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 본원에 기재된 바와 같이 추가로 조작될 수 있다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 감소된 결합을 야기하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
일부 실시형태에서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 감소된 결합을 야기하는 적어도 하나의 돌연변이는 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따른다. 특정 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및/또는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 하기 돌연변이를 포함한다: L234A_L235A_D265S.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 다중특이적 단백질의 향상된 결합을 야기하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
일부 실시형태에서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 향상된 결합을 야기하는 적어도 하나의 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시형태에서, FcγR은 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의 조합이다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
일부 실시형태에서, 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 하나 이상의 돌연변이는 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시형태에서, 다중특이적 단백질은 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인에 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인에서의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인에서의 적어도 하나의 돌연변이는 T350V, L351Y, F405A,Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따른다. 특정 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편은 하기 돌연변이 T350V_T366L_K392L_T394W를 포함하고/포함하거나 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 하기 돌연변이 T350V_L351Y_F405A_Y407V를 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 하기 돌연변이를 포함한다:
제1 Ig 불변 영역에 L234A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 및 제2 Ig 불변 영역에 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W; 또는
제1 Ig 불변 영역에 L235A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 및 제2 Ig 불변 영역에 L235A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 하기 돌연변이를 포함한다:
제1 Ig 불변 영역에 L234A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 및 제2 Ig 불변 영역에 L234A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W; 또는
제1 Ig 불변 영역에 L234A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 및 제2 Ig 불변 영역에 L234A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편은 SEQ ID NO: 378과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편은 SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편은 SEQ ID NO: 309와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편은 SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 SEQ ID NO: 109와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편은 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 제1 Ig 중쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 제1 Ig 경쇄 불변 영역은 SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하고 제2 Ig 불변 영역은 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함하고, 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 추가로 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3, 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3, 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함하고, 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 추가로 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3, 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL, 및 SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL, 및 SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL, 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 아미노산 서열, 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 단리된 단백질은 hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL, 및 (i) SEQ ID NO: 378과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 중쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 중쇄 불변 영역의 단편; 및 (ii) SEQ ID NO: 309와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제1 Ig 경쇄 불변 영역 또는 제1 Ig 경쇄 불변 영역의 단편을 포함하고, 단리된 단백질은 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 추가로 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 아미노산 서열, 및 SEQ ID NO: 109와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편을 포함한다.
hK2에 결합하는 항원 결합 단편을 포함하는 다중특이적 단백질의 생성
본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 단편은 또한 본 발명의 범위 내에 포함되는 다중특이적 항체로 조작될 수 있다.
hK2에 결합하는 항원 결합 단편은 Fab 아암 교환을 사용하여 생성되는 전장 다중특이적 항체로 조작될 수 있으며, 여기서 치환은 시험관내에서 Fab 아암 교환을 촉진하는 Ig 불변 영역 CH3 도메인 내의 2개의 단일특이적 2가 항체에 도입된다. 상기 방법에서, 2개의 단일특이적 2가 항체는 이종이량체 안정성을 촉진하는 CH3 도메인에서의 특정 치환을 갖도록 조작되며; 항체는 힌지 영역의 시스테인이 다이설파이드 결합 이성질화를 거치기에 충분한 환원 조건 하에서 함께 배양되고; 그럼으로써 Fab 아암 교환에 의해 이중특이적 항체를 생성한다. 배양 조건은 비환원성 상태로 최적으로 회복될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 환원제는 2-메르캅토에틸아민(2-MEA), 다이티오트레이톨(DTT), 다이티오에리트리톨(DTE), 글루타티온, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), L-시스테인 및 베타-메르캅토에탄올이며, 바람직하게는 환원제는 2-메르캅토에틸아민, 다이티오트레이톨 및 트리스(2-카르복시에틸)포스핀으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예를 들어, pH 5 내지 8에서, 예를 들어 pH 7.0에서 또는 pH 7.4에서 적어도 25 mM 2-MEA의 존재 하에서 또는 적어도 0.5 mM 다이티오트레이톨의 존재 하에서 20℃ 이상의 온도에서 90분 이상 동안의 배양이 사용될 수 있다.
사용될 수 있는 CH3 돌연변이는 노브-인-홀(Knob-in-Hole) 돌연변이(Genentech), 정전기적으로 매칭된 돌연변이(Chugai, Amgen, NovoNordisk, Oncomed), 스트랜드 교환 조작된 도메인 바디(SEED바디)(EMD Serono), Duobody® 돌연변이(Genmab) 및 다른 비대칭 돌연변이(예를 들어, Zymeworks)와 같은 기술을 포함한다.
노브-인-홀 돌연변이는 예를 들어 국제공개 WO1996/027011호에 개시되어 있으며, CH3 영역의 계면 상의 돌연변이를 포함하는데, 여기서 작은 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 제1 CH3 영역 내로 도입되고 큰 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 제2 CH3 영역 내로 도입되어, 제1 CH3 영역과 제2 CH3 영역 사이의 우선적인 상호작용을 가져온다. 노브와 홀을 형성하는 예시적인 CH3 영역 돌연변이는 T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S_L368A_Y407V이다.
중쇄 이종이량체 형성은 미국 특허출원공개 2010/0015133호, 미국 특허출원공개 2009/0182127호, 미국 특허출원공개 2010/028637호 또는 미국 특허출원공개 2011/0123532호에 기재된 바와 같이 제1 CH3 영역 상에 양으로 하전된 잔기를 그리고 제2 CH3 영역 상에 음으로 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 사용함으로써 촉진될 수 있다.
중쇄 이종이량체화를 촉진하기 위해 사용될 수 있는 다른 비대칭 돌연변이는 미국 특허출원공개 2012/0149876호 또는 미국 특허출원공개 2013/0195849호에 기재된 바와 같은 L351Y_F405A_Y407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V_K409F, Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W(Zymeworks)이다.
SEED바디 돌연변이는 미국 특허출원공개 20070287170호에 기재된 바와 같이, 선택된 IgG 잔기를 IgA 잔기로 치환하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것을 수반한다.
사용될 수 있는 다른 예시적인 돌연변이는 국제공개 WO2007/147901호, 국제공개 WO 2011/143545호, 국제공개 WO2013157954호, 국제공개 WO2013096291호 및 미국 특허출원공개 2018/0118849호에 기재된 바와 같은 R409D_K370E/D399K_E357K, S354C_T366W/Y349C_ T366S_L368A_Y407V, Y349C_T366W/S354C_T366S_L368A_Y407V, T366K/L351D, L351K/Y349E, L351K/Y349D, L351K/L368E, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V_K409F, K392D/D399K, K392D/E356K, K253E_D282K_K322D/D239K_E240K_K292D, K392D_K409D/D356K_D399K이다.
Duobody® 돌연변이(Genmab)는 예를 들어 미국 특허 제9150663호 및 미국 특허출원공개 2014/0303356호에 개시되어 있으며, 돌연변이 F405L/K409R, 야생형/F405L_R409K, T350I_K370T_F405L/K409R, K370W/K409R, D399AFGHILMNRSTVWY/K409R, T366ADEFGHILMQVY/K409R, L368ADEGHNRSTVQ/K409AGRH, D399FHKRQ/K409AGRH, F405IKLSTVW/K409AGRH 및 Y407LWQ/K409AGRH를 포함한다.
hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 혼입될 수 있는 추가의 이중특이적 또는 다중특이적 구조는 이중 가변 도메인 면역글로불린(DVD)(국제공개 WO2009/134776호; DVD는 VH1-링커-VH2-CH 구조를 갖는 중쇄 및 VL1-링커-VL2-CL 구조를 갖는 경쇄를 포함하는 전장 항체(링커는 선택적임)), 류신 지퍼 또는 콜라겐 이량체화 도메인과 같은, 상이한 특이성을 갖는 2개의 항체 아암을 연결하는 다양한 이량체화 도메인을 포함하는 구조(국제공개 WO2012/022811호, 미국 특허 제5,932,448호; 미국 특허 제6,833,441호), 함께 접합된 2개 이상의 도메인 항체(dAb), 다이아바디, 중쇄 단독 항체, 예컨대 낙타과 항체 및 조작된 낙타과 항체, 이중 표적화(DT)-Ig(GSK/Domantis), 투-인-원 항체(Two-in-one Antibody)(Genentech), 가교결합된 Mab(Karmanos Cancer Center), mAb2(F-Star) 및 CovX-body(CovX/Pfizer), IgG 유사 이중특이적(InnClone/Eli Lilly), Ts2Ab(MedImmune/AZ) 및 BsAb(Zymogenetics), HERCULES(Biogen Idec) 및 TvAb(Roche), ScFv/Fc 융합체(Academic Institution), SCORPION(Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS), 이중 친화성 재표적화 기술(Dual Affinity Retargeting Technology)(Fc-DART)(MacroGenics) 및 이중(Dual)(ScFv)2-Fab(National Research Center for Antibody Medicine--China), 이중 작용(Dual-Action) 또는 Bis-Fab(Genentech), 독-앤드-록(Dock-and-Lock)(DNL)(ImmunoMedics), 2가 이중특이적(Biotecnol) 및 Fab-Fv(UCB-Celltech)를 포함한다. ScFv-, 다이아바디-기반 및 도메인 항체는 이중특이적 T 세포 인게이저(BiTE)(Micromet), 탠덤 다이아바디(Tandab)(Affimed), 이중 친화성 재표적화 기술(DART)(MacroGenics), 단일쇄 다이아바디(Academic), TCR-유사 항체(AIT, ReceptorLogics), 인간 혈청 알부민 ScFv 융합체(Merrimack) 및 COMBODY(Epigen Biotech), 이중 표적화 나노바디(Ablynx), 이중 표적화 중쇄 단독 도메인 항체를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 또한 3개의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 다중특이적 단백질로 조작될 수 있다. 이러한 디자인에서, 적어도 하나의 항원 결합 도메인은 scFv의 형태이다. 예시적인 디자인은 다음을 포함한다(여기서 "1"은 제1 항원 결합 도메인을 나타내고, "2"는 제2 항원 결합 도메인을 나타내고 "3"은 제3 항원 결합 도메인을 나타낸다):
디자인 1: 사슬 A) scFv1- CH2-CH3; 사슬 B) VL2-CL; 사슬 C) VH2-CH1-힌지-CH2-CH3
디자인 2: 사슬 A) scFv1- 힌지- CH2-CH3; 사슬 B) VL2-CL; 사슬 C) VH2-CH1-힌지-CH2-CH3
디자인 3: 사슬 A) scFv1- CH1-힌지- CH2-CH3; 사슬 B) VL2-CL; 사슬 C) VH2-CH1-힌지-CH2-CH3
디자인 4: 사슬 A) CH2-CH3-scFv1; 사슬 B) VL2-CL; 사슬 C) VH2-CH1-힌지-CH2-CH3
CH3 조작은 디자인 1-4, 예컨대 돌연변이 L351Y_F405A_Y407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V_K409F, Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W(미국 특허출원공개 US2012/0149876호 또는 미국 특허출원공개 US2013/0195849호(Zymeworks)에 기재되어 있는 바와 같음)에 혼입될 수 있다.
특정 실시형태에서, 디자인은 하기와 같다: 사슬 A) scFv-힌지-CH2-CH3; 사슬 B) VL2-CL; 사슬 C) VH2-CH1-힌지-CH2-CH3.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예컨대 CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 63, 72, 141, 147, 170, 176, 188, 194, 196, 198, 200, 206 또는 216의 HCDR1, SEQ ID NO: 64, 65, 73, 142, 148, 171, 177, 188, 189, 195, 197, 199, 201, 207 또는 217의 HCDR2, SEQ ID NO: 66, 143, 172, 178, 184, 190, 208 또는 218의 HCDR3, SEQ ID NO: 67, 68, 144, 173, 179, 182, 185 또는 191의 LCDR1, SEQ ID NO: 69, 70, 145, 174, 180, 186, 192 또는 470의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 71, 146, 175, 181, 187, 193 또는 209의 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서 림프구 항원은 CD3이다.일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예컨대 CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 하기의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다:
각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181;
각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193;
각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 및 209;
각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146;
각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175;
각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 190 및 181;
각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187;
각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193; 또는
각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209.
일부 실시형태에서 림프구 항원은 CD3이다.특정 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175 또는 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예컨대 CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL; 또는
SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL.
일부 실시형태에서 림프구 항원은 CD3이다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예컨대 CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 75의 VH 및 SEQ ID NO: 74의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서 림프구 항원은 CD3이다.일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
특정 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
특정 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
특정 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
특정 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예컨대 CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 137, 139, 159 또는 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 140 또는 160의 VL을 포함하며, 단, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함하지 않는다.
일부 실시형태에서 림프구 항원은 CD3이다.
특정 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예컨대 CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL; 또는
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL.
일부 실시형태에서 림프구 항원은 CD3이다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예컨대 CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 133, 134, 135, 136, 308, 316, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 404, 405, 406, 407, 408 또는 409의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서 림프구 항원은 CD3이다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 404 또는 405의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원(예를 들어, CD3)에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 404 또는 405의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 255 또는 116의 HCDR1, SEQ ID NO: 256 또는 117의 HCDR2, SEQ ID NO: 257 또는 118의 HCDR3, SEQ ID NO: 258 또는 119의 LCDR1, SEQ ID NO: 259 또는 120의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 260, 261 또는 121의 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 157의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 260의 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 249의 VL;
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 250의 VL;
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL;
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 252의 VL;
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 253의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 254의 VL.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.
특정 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 116의 HCDR1, SEQ ID NO: 117의 HCDR2, SEQ ID NO: 118의 HCDR3, SEQ ID NO: 119의 LCDR1, SEQ ID NO: 120의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 121의 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL.
특정 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 hK2에 결합하는 제1 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인을 포함하며, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 단리된 다중특이적 단백질의 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336 또는 337의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 림프구 항원에 결합하는 단리된 다중특이적 단백질의 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 275, 258, 259 및 260의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 136의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 351의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 136의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 351의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 260의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 134의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 352의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 134의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 352의 HC1, SEQ ID NO: 259의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 260의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 325의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 353의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 260의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 354의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 260의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 444의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 355의 HC1, SEQ ID NO: 445의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 260의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 356의 HC1, SEQ ID NO: 222의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 325의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 353의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 316의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 357의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 260의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 316의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 151의 VL을 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 357의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 260의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 361의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 362의 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 275, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고; 또는
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 275, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 136의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 136의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 134의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 134의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 325의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 444의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 325의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 316의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 316의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 151의 VL을 포함하고; 또는
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 136의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 136의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 134의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 134의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 325의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO:162의 VH 및 SEQ ID NO:163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO:166의 VH 및 SEQ ID NO:444의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO:164의 VH 및 SEQ ID NO:165의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 325의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 316의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 316의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 151의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO:162의 VH 및 SEQ ID NO:163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 단백질은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 351의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2;
SEQ ID NO: 351의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2;
SEQ ID NO: 352의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2;
SEQ ID NO: 352의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2;
SEQ ID NO: 353의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2;
SEQ ID NO: 354의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2;
SEQ ID NO: 355의 HC1, SEQ ID NO: 223의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2;
SEQ ID NO: 356의 HC1, SEQ ID NO: 222의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2;
SEQ ID NO: 353의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2;
SEQ ID NO: 357의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2;
SEQ ID NO: 357의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2; 또는
SEQ ID NO: 361의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 362의 HC2.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 단백질은 SEQ ID NO: 351의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 351의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 352의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 352의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 353의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 354의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 355의 HC1, SEQ ID NO: 223의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 356의 HC1, SEQ ID NO: 222의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 353의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 357의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 357의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 361의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 362의 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 항-hK2/항-CD3 단백질이다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 354의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 Fc 도메인(즉, HC1 및 HC2 도메인) 둘 모두의 C-말단에 라이신(예를 들어, K477)을 포함한다. 추가의 라이신은 작제물의 발현을 향상시킬 수 있다. 따라서, 특정 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 361의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 362의 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며,
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고;
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함하고/포함하거나;
단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 361의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 362의 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80% 동일한 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 80% 동일한 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 85% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 85% 동일한 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 85% 동일한 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 90% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 90% 동일한 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 90% 동일한 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 95% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 95% 동일한 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 95% 동일한 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 99% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 99% 동일한 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 99% 동일한 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 95% 동일한 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 95% 동일한 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 99% 동일한 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 99% 동일한 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 95% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 95% 동일한 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 99% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 99% 동일한 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 95% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 95% 동일한 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 99% 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 99% 동일한 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO:162의 VH 및 SEQ ID NO:163의 VL을 포함하고, CD3에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 354의 HC1과 적어도 80% 동일한 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1과 적어도 80% 동일한 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2와 적어도 80% 동일한 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 354의 HC1과 적어도 85% 동일한 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1과 적어도 85% 동일한 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2와 적어도 85% 동일한 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 354의 HC1과 적어도 90% 동일한 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1과 적어도 90% 동일한 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2와 적어도 90% 동일한 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 354의 HC1과 적어도 95% 동일한 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1과 적어도 95% 동일한 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2와 적어도 95% 동일한 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 354의 HC1과 적어도 99% 동일한 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1과 적어도 99% 동일한 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2와 적어도 99% 동일한 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 Fc 도메인(즉, HC1 및 HC2 도메인) 둘 모두의 C-말단에 라이신(예를 들어, K477)을 포함한다. 따라서, 일부 실시형태에서, 단리된 다중특이적 단백질은 C-말단 라이신을 포함하고 SEQ ID NO: 361의 HC1과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 HC1 및 C-말단 라이신을 포함하고 SEQ ID NO: 362의 HC2와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99%) 동일한 HC2를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 111 및 SEQ ID NO: 112의 서열을 갖는 에피토프 내에서 3개 이상의 잔기에서 hK2에 결합한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, CD3에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 341, SEQ ID NO: 448 및 SEQ ID NO: 449의 서열을 갖는 에피토프 내에서 3개 이상의 잔기에서 CD3에 결합한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 다중특이적 단백질을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 111 및 SEQ ID NO: 112의 서열을 갖는 에피토프 내에서 hK2에 결합하고, CD3에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 341, SEQ ID NO: 448 및 SEQ ID NO: 449의 서열을 갖는 에피토프 내에서 CD3에 결합한다.
동형, 동종이인자형(allotype) 및 Fc 조작
본 개시내용의 단백질에 존재하는 Fc 영역과 같은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 임의의 동종이인자형 또는 동형일 수 있다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG1 동형이다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG2 동형이다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG3 동형이다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 IgG4 동형이다.
Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편은 임의의 동종이인자형일 수 있다. 동종이인자형은 결합 또는 Fc 매개 이펙터 기능과 같은 Ig 불변 영역의 특성에 영향을 미치지 않을 것으로 예상된다. Ig 불변 영역 또는 이의 단편을 포함하는 치료 단백질의 면역원성은 주입 반응의 위험 증가 및 치료 반응의 지속 기간 감소와 관련이 있다(문헌[Baert et al., (2003) N Engl J Med 348:602-08]). Ig 불변 영역 또는 이의 단편을 포함하는 치료 단백질이 숙주에서 면역 반응을 유도하는 정도는 Ig 불변 영역의 동종이인자형에 의해 부분적으로 결정될 수 있다(문헌[Stickler et al., (2011) Genes and Immunity 12:213-21]). Ig 불변 영역 동종이인자형은 항체의 불변 영역 서열의 특정 위치에서 아미노산 서열 변이와 관련이 있다. 표 2는 선택된 IgG1, IgG2, 및 IgG4 동종이인자형을 나타낸다.
[표 2]
특정 실시형태에서, Ig 불변 영역 동종이인자형은 huIgG1_G1m(17)이다.
C-말단 라이신(CTL)을 혈류 내의 내인성 순환 카르복시펩티다제에 의해 Ig 불변 영역으로부터 제거할 수 있다(문헌[Cai et al., (2011) Biotechnol Bioeng 108:404-412]). 미국 특허출원공개 20140273092호에 기재된 바와 같이, 세포외 Zn2+, EDTA 또는 EDTA - Fe3+의 농도를 제어하여 제조 시에 CTL 제거를 최대 수준 미만으로 제어할 수 있다. 단백질의 CTL 함량을 알려진 방법을 사용하여 측정할 수 있다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 단편은 약 10% 내지 약 90%의 C-말단 라이신 함량을 갖는다. 일부 실시형태에서, C-말단 라이신 함량은 약 20% 내지 약 80%이다. 일부 실시형태에서, C-말단 라이신 함량은 약 40% 내지 약 70%이다. 일부 실시형태에서, C-말단 라이신 함량은 약 55% 내지 약 70%이다. 일부 실시형태에서, C-말단 라이신 함량은 약 60%이다.
Fc 영역 돌연변이는 ADCC, ADCP 및/또는 ADCP와 같은 이펙터 기능 및/또는 약동학적 특성을 조절하기 위해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인에 대하여 수행될 수 있다. 이것은 활성화 FcγRs(FcγRI, FcγRIIa, FcγRIII), 억제성 FcγRIIb 및/또는 FcRn에 대한 돌연변이된 Fc의 결합을 조절하는 Fc에 돌연변이(들)를 도입함으로써 달성될 수 있다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
일부 실시형태에서, 적어도 하나의 돌연변이는 Fc 영역에 있다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fc 영역에 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 돌연변이를 포함한다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 FcRn에 대한 항체의 결합을 조절하는 Fc 영역에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
반감기를 조절하기 위해 돌연변이될 수 있는 Fc 위치(예를 들어, FcRn에 대한 결합)는 위치 250, 252, 253, 254, 256, 257, 307, 376, 380, 428, 434 및 435를 포함한다. 단독으로 또는 조합으로 수행될 수 있는 예시적인 돌연변이는 돌연변이 T250Q, M252Y, I253A, S254T, T256E, P257I, T307A, D376V, E380A, M428L, H433K, N434S, N434A, N434H, N434F, H435A 및 H435R이다. 반감기를 증가시키기 위해 수행될 수 있는 예시적인 단독 또는 조합 돌연변이는 돌연변이 M428L/N434S, M252Y/S254T/T256E, T250Q/M428L, N434A 및 T307A/E380A/N434A이다. 반감기를 감소시키기 위해 수행될 수 있는 예시적인 단독 또는 조합 돌연변이는 돌연변이 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A 및 H435R이다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 M252Y/S254T/T256E 돌연변이를 포함한다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 활성화 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 결합을 감소시키고/감소시키거나 Fc 이펙터 기능, 예컨대 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC) 또는 식세포작용(ADCP)을 감소시키는 Fc 영역에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
돌연변이되어 활성화 FcγR에 대한 단백질의 결합을 감소시키고 이어서 이펙터 기능을 감소시킬 수 있는 Fc 위치는 위치 214, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 265, 267, 268, 270, 295, 297, 309, 327, 328, 329, 330, 331 및 365를 포함한다. 단독으로 또는 조합으로 수행될 수 있는 예시적인 돌연변이는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4에서의 돌연변이 K214T, E233P, L234V, L234A, G236 결실, V234A, F234A, L235A, G237A, P238A, P238S, D265A, S267E, H268A, H268Q, Q268A, N297A, A327Q, P329A, D270A, Q295A, V309L, A327S, L328F, A330S 및 P331S이다. ADCC가 감소된 단백질을 유도하는 예시적인 조합 돌연변이는 IgG1 상의 돌연변이 L234A/L235A, IgG1 상의 돌연변이 L234A/L235A/D265S, IgG2 상의 돌연변이 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, IgG4 상의 돌연변이 F234A/L235A, IgG4 상의 돌연변이 S228P/F234A/L235A, 모든 Ig 동형 상의 돌연변이 N297A, IgG2 상의 돌연변이 V234A/G237A, IgG1 상의 돌연변이 K214T/E233P/L234V/L235A/G236 결실/A327G/P331A/D365E/L358M, IgG2 상의 돌연변이 H268Q/V309L/A330S/P331S, IgG1 상의 돌연변이 S267E/L328F, IgG1 상의 돌연변이 L234F/L235E/D265A, IgG1 상의 돌연변이 L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, IgG4 상의 돌연변이 S228P/F234A/L235A/G237A/P238S 및 IgG4 상의 돌연변이 S228P/F234A/L235A/G236 결실/G237A/P238S이다. IgG2의 잔기 117-260 및 IgG4의 잔기 261-447을 갖는 Fc와 같은 하이브리드 IgG2/4 Fc 도메인이 또한 사용될 수 있다.
CDC가 감소된 단백질을 생성하는 예시적인 돌연변이는 K322A 돌연변이이다.
잘 알려진 S228P 돌연변이가 IgG4 안정성을 향상시키도록 IgG4에서 수행될 수 있다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 K214T, E233P, L234V, L234A, G236 결실, V234A, F234A, L235A, G237A, P238A, P238S, D265A, S267E, H268A, H268Q, Q268A, N297A, A327Q, P329A, D270A, Q295A, V309L, A327S, L328F, K322, A330S 및 P331S로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 L234A/L235A/D265S 돌연변이를 포함한다. 특정 실시형태에서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 L234A_L235A_D265S 돌연변이를 포함하는 IgG1 불변 영역 또는 IgG1 불변 영역의 단편에 접합된다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 L234A/L235A 돌연변이를 포함한다.
일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 결합을 향상시키고/향상시키거나 Fc 이펙터 기능, 예컨대 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC) 또는 식세포작용(ADCP)을 향상시키는 Fc 영역에 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다.
돌연변이되어 단백질의 활성화 FcγR에 대한 결합을 향상시키고/향상시키거나 Fc 이펙터 기능을 향상시킬 수 있는 Fc 위치는 위치 236, 239, 243, 256,290,292, 298, 300, 305, 312, 326, 330, 332, 333, 334, 345, 360, 339, 378, 396 또는 430(EU 인덱스에 따른 잔기 넘버링)을 포함한다. 단독으로 또는 조합으로 수행될 수 있는 예시적인 돌연변이는 G236A, S239D, F243L, T256A, K290A, R292P, S298A, Y300L, V305L, K326A, A330K, I332E, E333A, K334A, A339T, 및 P396L이다. 증가된 ADCC 또는 ADCP를 갖는 단백질을 생성하는 예시적인 조합 돌연변이는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L 및 G236A/S239D/I332E이다.
돌연변이되어 CDC를 향상시킬 수 있는 Fc 위치는 위치 267, 268, 324, 326, 333, 345 및 430을 포함한다. 단독으로 또는 조합으로 수행될 수 있는 예시적인 돌연변이는 S267E, F1268F, S324T, K326A, K326W, E333A, E345K, E345Q, E345R, E345Y, E430S, E430F 및 E430T이다. 증가된 CDC를 갖는 단백질을 생성하는 예시적인 조합 돌연변이는 K326A/E333A, K326W/E333A, H268F/S324T, S267E/H268F, S267E/S324T 및 S267E/H268F/S324T이다.
본원에 기재된 특정 돌연변이는 각각 SEQ ID NO: 130, 131 및 132인 IgG1, IgG2 및 IgG4 야생형 아미노산 서열과 비교할 때 돌연변이이다.
SEQ ID NO: 130, 야생형 IgG1
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGG
PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN
STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDE
LTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW
QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 131; 야생형 IgG2
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVF
LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFR
VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN
QVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN
VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 132; 야생형 IgG4
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS
GLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSV
FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTY
RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTK
NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEG
NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
FcγR 또는 FcRn에 대한 항체의 결합은 유세포 측정을 사용하여 각각의 수용체를 발현하도록 조작된 세포에서 평가될 수 있다. 예시적인 결합 분석에서, 웰당 2×105개의 세포를 96웰 플레이트에 시딩하고, BSA 염색 완충액(미국 산호세 소재의 BD Biosciences) 중에서 4℃에서 30분 동안 차단시킨다. 세포를 얼음 상에서 시험 항체와 4℃에서 1.5시간 동안 배양한다. BSA 염색 완충액으로 2회 세척한 후, 세포를 R-PE 표지된 항-인간 IgG 2차 항체(Jackson Immunoresearch Laboratories)와 4℃에서 45분 동안 배양한다. 세포를 염색 완충액 중에서 2회 세척한 후, 1:200 희석된 DRAQ7 라이브/데드(live/dead) 염색제(미국 덴버스 소재의 Cell Signaling Technology)를 함유하는 150 μL의 염색 완충액 중에 재현탁한다. 각각, B2 및 B4 채널을 사용하여 Miltenyi MACSQuant 유세포 분석기(미국 어번 소재의 Miltenyi Biotec)에 의해 염색된 세포의 PE 및 DRAQ7 신호를 검출한다. 살아있는 세포를 DRAQ7 배제에 대해 게이팅하고 수집된 적어도 10,000개의 살아 있는 이벤트에 대해 기하 평균 형광 신호를 결정한다. FlowJo 소프트웨어(Tree Star)를 분석에 사용한다. 데이터는 항체 농도 vs. 평균 형광 신호의 로그로서 플롯된다. 비선형 회귀 분석을 수행한다.
글리코조작
ADCC를 매개하는 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인의 능력은 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역 올리고당 성분의 단편을 조작함으로써 향상될 수 있다. 인간 IgG1 또는 IgG3은 잘 알려진 바이안테나리(biantennary) G0, G0F, G1, G1F, G2 또는 G2F 형태의 글리칸의 대부분에 의해 Asn297에서 N-글리코실화된다. Ig 불변 영역 함유 단백질은 일반적으로 약 적어도 85%의 글리칸 푸코스 함량을 갖는 조작되지 않은 CHO 세포에 의해 생성될 수 있다. Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인에 부착된 바이안테나리 복합형 올리고당으로부터 코어 푸코스의 제거는 항원 결합 또는 CDC 활성을 변경하지 않고 개선된 FcγRIIIa 결합을 통해 단백질의 ADCC를 향상시킨다. 이러한 단백질은 배양 삼투압 조절(문헌[Konno et al., Cytotechnology 64(:249-65, 2012]), 숙주 세포주로서 변이체 CHO주 Lec13의 적용(문헌[Shields et al., J Biol Chem 277:26733-26740, 2002]), 숙주 세포주로서 변이체 CHO주 EB66의 적용(문헌[Olivier et al., MAbs;2(4): 405-415, 2010]; PMID:20562582), 숙주 세포주로서 래트 하이브리도마 세포주 YB2/0의 적용(문헌[Shinkawa et al., J Biol Chem 278:3466-3473, 2003]), 1,6-푸코실트랜스퍼라제(FUT8) 유전자에 특이적으로 작은 간섭 RNA 도입(문헌[Mori et al., Biotechnol Bioeng 88:901-908, 2004]), 또는 β-1,4-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III 및 골지 α-만노시다제 II 또는 강력한 알파-만노시다제 I 억제제, 키푸넨신의 동시 발현(문헌[Ferrara et al., J Biol Chem 281:5032-5036, 2006, Ferrara et al., Biotechnol Bioeng 93:851-861, 2006]; 문헌[Xhou et al., Biotechnol Bioeng 99:652-65, 2008])과 같은 바이안테너리 복합체 유형의 Fc 올리고당을 함유하는 상대적으로 높은 탈푸코실화된 면역글로불린의 성공적인 발현을 유도하는 것으로 보고된 상이한 방법을 사용하여 달성될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 약 1% 내지 약 15%, 예를 들어 약 15%, 14%, 13%, 12%, 11% 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1%의 푸코스 함량을 갖는 바이안테너리 글리칸 구조를 갖는다. 일부 실시형태에서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 약 50%, 40%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25% 또는 20%의 푸코스 함량을 갖는 글리칸 구조를 갖는다.
"푸코스 함량"은 Asn297에서의 당 사슬 내의 푸코스 단당류의 양을 의미한다. 푸코스의 상대량은 모든 당구조(glycostructure)에 대한 푸코스 함유 구조의 백분율이다. 이들은 예를 들어 하기와 같은 다수의 방법에 의해 특성화 및 정량화될 수 있다: 1) 국제공개 WO2008/077546 2호에 기재된 바와 같이 N-글리코시다제 F 처리된 샘플(예를 들어, 복합, 혼성 및 올리고- 및 고-만노스 구조)의 MALDI-TOF를 사용하는 방법; 2) Asn297 글리칸의 효소적 방출을 행하고, 후속으로, 유도체화하고, 형광 검출을 사용하는 HPLC(UPLC) 및/또는 HPLC-MS(UPLC-MS)에 의해 검출/정량화에 의한 방법; 3) 엔도(Endo) S, 또는 제1 GlcNAc 단당과 제2 GlcNAc 단당 사이를 절단하여 푸코스가 제1 GlcNAc에 부착된 상태로 남겨 두는 다른 효소로 Asn297 글리칸을 처리하거나 처리하지 않고서, 천연 또는 환원된 mAb의 온전한 단백질을 분석하는 방법; 4) 효소 소화(예를 들어, 트립신 또는 엔도펩티다제 Lys-C)에 의해 mAb를 구성성분 펩티드로 분해하고, 이어서 HPLC-MS(UPLC-MS)에 의해 분리, 검출, 및 정량화하는 방법; 5) Asn297에서의 PNGase F에 의한 특이적 효소적 탈글리코실화에 의해 mAb 단백질로부터 mAb 올리고당을 분리하는 방법. 방출된 올리고당은 형광단으로 표지되고, 실험 질량과 이론 질량의 비교에 의한 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화(MALDI: matrix-assisted laser desorption ionization) 질량 분석법에 의한 글리칸 구조의 미세 특성화, 이온 교환 HPLC(GlycoSep C)에 의한 시알릴화도(degree of sialylation)의 결정, 순상 HPLC(GlycoSep N)에 의한 친수성 기준에 따른 올리고당 형태의 분리 및 정량화, 및 고성능 모세관 전기영동-레이저 유도 형광(HPCE-LIF: high performance capillary electrophoresis-laser induced fluorescence)에 의한 올리고당의 분리 및 정량화를 가능하게 하는 다양한 보완적 기술에 의해 분리 및 확인될 수 있다.
본원에 사용된 "낮은 푸코스" 또는 "낮은 푸코스 함량"은 약 1% 내지 15%의 푸코스 함량으로 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 지칭한다.
본원에 사용된 "정상 푸코스" 또는 "정상 푸코스 함량"은 약 50% 초과, 일반적으로 약 80% 초과 또는 85% 초과의 푸코스 함량으로 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 지칭한다.
항-이디오타입 항체
항-이디오타입 항체는 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항체이다.
본 발명은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 하기를 포함하는 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다:
SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL;
SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL.
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL; 또는
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL.
항-이디오타입(Id) 항체는 항체의 항원 결정기(예를 들어, 파라토프 또는 CDR)를 인식하는 항체이다. Id 항체는 항원-차단성 또는 비차단성일 수 있다. 항원-차단성 Id는 샘플에서 유리 항원 결합 도메인(예를 들어, 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인)을 검출하기 위해 사용될 수 있다. 비차단성 Id는 샘플 내의 총 항체(유리 항체, 항원에 부분 결합된 항체, 또는 항원에 완전 결합된 항체)를 검출하는 데 사용될 수 있다. Id 항체는 항-Id가 준비되어 있는 항체로 동물을 면역화함으로써 제조될 수 있다.
항-Id 항체는 또한 면역원으로서 사용되어 또 다른 동물에서 면역 반응을 유도하여, 이른바 항-항-Id 항체를 생성할 수 있다. 항-항-Id는 항-Id를 유도한 원래의 항원 결합 도메인과 에피토프적으로 동일할 수 있다. 따라서, 항원 결합 도메인의 이디오타입 결정기에 대한 항체를 사용함으로써, 동일한 특이성의 항원 결합 도메인을 발현하는 다른 클론을 확인하는 것이 가능하다. 항-Id 항체는 본원의 어딘가 다른 곳에 기재된 것과 같은 임의의 적합한 기법에 의해 유도체화되고/유도체화되거나 변이될(그럼으로써, 항-Id 항체 변이체를 생성할) 수 있다.
면역접합체
본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 또는 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질(본원에서 총괄적으로 hK2 결합 단백질로 지칭됨)은 이종 분자에 접합될 수 있다. hK2 결합 단백질은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한다.
일부 실시형태에서, 이종 분자는 검출가능한 표지 또는 세포독성제이다.
본 발명은 또한 검출가능한 표지에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공한다.
본 발명은 또한 검출가능한 표지에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질을 제공한다.
본 발명은 또한 검출가능한 표지에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질을 제공한다.
본 발명은 또한 검출가능한 표지에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 발명은 또한 세포독성제에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공한다.
본 발명은 또한 세포독성제에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질을 제공한다.
본 발명은 또한 세포독성제에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질을 제공한다.
본 발명은 또한 세포독성제에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용의 hK2 결합 단백질은 치료제를 hK2 발현 세포, 예컨대 전립선 또는 유방암 세포에 지시하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, hK2 발현 세포는 일단 내재화되면 세포 기능을 변형시키도록 의도된 치료제에 커플링된 본 개시내용의 hK2 결합 단백질로 표적화될 수 있다.
일부 실시형태에서, 검출가능한 표지는 또한 세포독성제이다.
검출가능한 표지에 접합된 본 개시내용의 hK2 결합 단백질은 다양한 샘플에서 hK2의 발현을 평가하기 위해 사용될 수 있다.
검출가능한 표지는 본 개시내용의 hK2 결합 단백질에 접합될 때 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적 또는 화학적 수단을 통해 후자를 검출가능하게 만드는 조성물을 포함한다.
예시적인 검출가능 표지에는 방사성 동위원소, 자성 비드, 금속 비드, 콜로이드 입자, 형광 염료, 고 전자밀도 시약(electron-dense reagent), 효소(예를 들어, ELISA에서 통상적으로 사용되는 것), 비오틴, 디곡시게닌, 합텐, 발광 분자, 화학발광 분자, 형광색소, 형광단, 형광 켄칭제(fluorescent quenching agent), 착색된 분자, 방사성 동위원소, 신틸레이트(scintillate), 아비딘, 스트렙타비딘, 단백질 A, 단백질 G, 항체 또는 이의 단편, 폴리히스티딘, Ni2+, Flag 태그, myc 태그, 중금속, 효소, 알칼리 포스파타제, 퍼옥시다제, 루시페라제, 전자 공여체/수용체, 아크리디늄 에스테르 및 발색 기질이 포함된다.
검출가능 표지는, 예컨대, 검출가능 표지가 방사성 동위원소인 경우, 신호를 자발적으로 방출할 수 있다. 다른 경우에는, 검출가능한 표지는 외부장(external field)에 의해 자극된 결과로서 신호를 방출한다.
예시적인 방사성 동위원소는 γ-방출, 오거(Auger)-방출, β-방출, 알파-방출 또는 양전자-방출 방사성 동위원소일 수 있다. 예시적인 방사성 동위원소는 3H, 11C, 13C, 15N, 18F, 19F, 55Co, 57Co, 60Co, 61Cu, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 68Ga, 72As, 75Br, 86Y, 89Zr, 90Sr, 94mTc, 99mTc, 115In, 123I, 124I, 125I, 131I, 211At, 212Bi, 213Bi, 223Ra, 226Ra, 225Ac 및 227Ac를 포함한다.
예시적인 금속 원자는 원자번호가 20보다 큰 금속, 예컨대 칼슘 원자, 스칸듐 원자, 티타늄 원자, 바나듐 원자, 크롬 원자, 망간 원자, 철 원자, 코발트 원자, 니켈 원자, 구리 원자, 아연 원자, 갈륨 원자, 게르마늄 원자, 비소 원자, 셀레늄 원자, 브롬 원자, 크립톤 원자, 루비듐 원자, 스트론튬 원자, 이트륨 원자, 지르코늄 원자, 니오븀 원자, 몰리브덴 원자, 테크네튬 원자, 루테늄 원자, 로듐 원자, 팔라듐 원자, 은 원자, 카드뮴 원자, 인듐 원자, 주석 원자, 안티몬 원자, 텔루륨 원자, 요오드 원자, 제논 원자, 세슘 원자, 바륨 원자, 란타늄 원자, 하프늄 원자, 탄탈룸 원자, 텅스텐 원자, 레늄 원자, 오스뮴 원자, 이리듐 원자, 백금 원자, 금 원자, 수은 원자, 탈륨 원자, 납 원자, 비스무트 원자, 프란슘 원자, 라듐 원자, 악티늄 원자, 세륨 원자, 프라세오디뮴 원자, 네오디뮴 원자, 프로메튬 원자, 사마륨 원자, 유로퓸 원자, 가돌리늄 원자, 테르븀 원자, 디스프로슘 원자, 홀뮴 원자, 에르븀 원자, 툴륨 원자, 이터븀 원자, 루테튬 원자, 토륨 원자, 프로트악티늄 원자, 우라늄 원자, 넵투늄 원자, 플루토늄 원자, 아메리슘 원자, 퀴륨 원자, 버클륨 원자, 캘리포늄 원자, 아인슈타이늄 원자, 페르뮴 원자, 멘델레븀 원자, 노벨륨 원자 또는 로렌슘 원자이다.
일부 실시형태에서, 금속 원자는 원자번호가 20보다 큰 알칼리 토금속일 수 있다.
일부 실시형태에서, 금속 원자는 란탄족 원소일 수 있다.
일부 실시형태에서, 금속 원자는 악티늄족 원소일 수 있다.
일부 실시형태에서, 금속 원자는 전이 금속일 수 있다.
일부 실시형태에서, 금속 원자는 전이후 금속(poor metal)일 수 있다.
일부 실시형태에서, 금속 원자는 금 원자, 비스무트 원자, 탄탈룸 원자 및 가돌리늄 원자일 수 있다.
일부 실시형태에서, 금속 원자는 원자번호가 53(즉, 요오드) 내지 83(즉, 비스무트)인 금속일 수 있다.
일부 실시형태에서, 금속 원자는 자기 공명 영상에 적합한 원자일 수 있다.
금속 원자는 +1, +2 또는 +3 산화 상태의 형태의 금속 이온, 예컨대 Ba2+, Bi3+, Cs+, Ca2+, Cr2+, Cr3+, Cr6+, Co2+, Co3+, Cu+, Cu2+, Cu3+, Ga3+, Gd3+, Au+, Au3+, Fe2+, Fe3+, F3+, Pb2+, Mn2+, Mn3+, Mn4+, Mn7+, Hg2+, Ni2+, Ni3+, Ag+, Sr2+, Sn2+, Sn4+ 및 Zn2+일 수 있다. 금속 원자는 금속 산화물, 예컨대 산화철, 산화망간 또는 산화가돌리늄을 포함할 수 있다.
적절한 염료는, 예를 들어 5(6)-카르복시플루오레세인, IRDye 680RD 말레이미드 또는 IRDye 800CW, 루테늄 폴리피리딜 염료 등과 같은 임의의 시판 염료를 포함한다.
적합한 형광단은 플루오레세인 이소티오시아네이트(FITC), 플루오레세인 티오세미카르바지드, 로다민, 텍사스 레드, CyDyes(예를 들어, Cy3, Cy5, Cy5.5), Alexa Fluors(예를 들어, Alexa488, Alexa555, Alexa594; Alexa647), 근적외선(NIR)(700-900 nm) 형광 염료, 및 카르보시아닌 및 아미노스티릴 염료이다.
검출가능한 표지에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 조영제(imaging agent)로 사용될 수 있다.
검출가능한 표지에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질은 조영제로 사용될 수 있다.
검출가능한 표지에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질은 조영제로 사용될 수 있다.
검출가능한 표지에 접합된 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR은 조영제로 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 세포독성제는 화학요법제, 약물, 성장 억제제, 독소(예를 들어, 세균, 진균, 식물 또는 동물 유래의 효소적으로 활성인 독소 또는 이의 단편) 또는 방사성 동위원소(즉, 방사성 접합체(radioconjugate))이다.
일부 실시형태에서, 세포독성제는 다우노마이신, 독소루비신, 메토트렉세이트, 빈데신, 세균 독소, 예컨대 디프테리아 독소, 라이신, 겔다나마이신, 메이탄시노이드 또는 칼리키아미신(calicheamicin)이다. 세포독성제는 튜불린 결합, DNA 결합 또는 토포아이소머라제 억제를 포함하는 메커니즘에 의해 이들의 세포독성 및 세포증식억제(cytostatic) 효과를 끌어낼 수 있다.
일부 실시형태에서, 세포독성제는 효소적으로 활성인 독소, 예컨대 디프테리아 A 사슬, 디프테리아 독소의 비결합성 활성 단편, 외독소 A 사슬(슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래), 라이신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모데신 A 사슬, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(Momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오프피시날리스(Sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센이다.
일부 실시형태에서, 세포독성제는 방사성 핵종, 예컨대 212Bi, 131I, 131In, 90Y 및 186Re이다.
일부 실시형태에서, 세포독성제는 돌라스타틴 또는 돌로스타틴 펩티드 유사체 및 유도체, 오리스타틴 또는 모노메틸 오리스타틴 페닐알라닌이다. 예시적인 분자가 미국 특허 제5,635,483호 및 미국 특허 제5,780,588호에 개시되어 있다. 돌라스타틴 및 오리스타틴은 미세소관 동역학, GTP 가수분해, 및 핵 및 세포 분열을 방해하고(문헌[Woyke et al (2001) Antimicrob Agents and Chemother. 45(12):3580-3584]), 항암 및 항진균 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 돌라스타틴 또는 오리스타틴 약물 모이어티는 펩티드 약물 모이어티의 N(아미노) 말단 또는 C(카르복실) 말단을 통해(국제공개 WO02/088172호), 또는 항체 내로 조작된 임의의 시스테인을 통해 본 발명의 항체에 부착될 수 있다.
본 개시내용의 hK2 결합 단백질은 공지된 방법을 사용하여 검출가능한 표지에 접합될 수 있다.
일부 실시형태에서, 검출가능한 표지는 킬레이트제와 복합체를 형성한다.
일부 실시형태에서, 검출가능한 표지는 링커를 통해 본 개시내용의 hK2 결합 단백질에 접합된다.
검출가능한 표지 또는 세포독성 모이어티는 공지된 방법을 사용하여 본 개시내용의 hK2 결합 단백질에 직접적으로 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 적합한 링커는 본 기술 분야에 알려져 있으며, 예를 들어, 보결분자족(prosthetic group), 비페놀계 링커(N-석신이미딜-벤조에이트의 유도체; 도데카보레이트), 마크로사이클릭 및 비환형 킬레이트제 둘 모두의 킬레이트 모이어티, 예컨대 1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산(DOTA)의 유도체, 다이에틸렌트라이아민펜타아세트산(DTPA)의 유도체, S-2-(4-아이소티오시아네이토벤질)-1,4,7-트라이아자사이클로노난-1,4,7-트라이아세트산(NOTA)의 유도체 및 1,4,8,11-테트라아자사이클로도데칸-1,4,8,11-테트라아세트산(TETA)의 유도체, N-석신이미딜-3-(2-피리딜다이티올) 프로피오네이트(SPDP), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 2작용성 유도체(예컨대 다이메틸 아디피미데이트 HCl), 활성 에스테르(예컨대 다이석신이미딜 수베레이트), 알데하이드(예컨대 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물(예컨대 비스(p-아지도벤조일)헥산다이아민), 비스-다이아조늄 유도체(예컨대 비스-(p-다이아조늄벤조일)-에틸렌다이아민), 다이아이소시아네이트(예컨대 톨루엔 2,6-다이아이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물(예컨대 1,5-다이플루오로-2,4-다이니트로벤젠) 및 다른 킬레이트 모이어티가 포함한다. 적합한 펩티드 링커가 잘 알려져 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 hK2 결합 단백질은 신장 청소를 통해 혈액으로부터 제거된다.
키트
본 발명은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질을 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질을 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 포함하는 키트를 제공한다.
키트는 치료 용도 및 진단 키트로 사용될 수 있다.
키트는 샘플에서 hK2의 존재를 검출하는 데 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 키트는 본 개시내용의 hK2 결합 단백질 및 hK2 결합 단백질을 검출하기 위한 시약을 포함한다. 키트는 하기를 포함하는 하나 이상의 다른 요소를 포함할 수 있다: 사용 설명서; 다른 시약, 예를 들어 표지, 치료제, 또는 킬레이트화 또는 다른 커플링에 유용한 작용제, 표지 또는 치료제에 대한 항체, 또는 방사선 보호 조성물; 투여용 항체를 제조하기 위한 장치 또는 다른 재료; 약학적으로 허용되는 담체; 및 대상체에게 투여하기 위한 장치 또는 다른 재료.
일부 실시형태에서, 키트는 용기 내의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인 및 키트 사용 설명서를 포함한다.
일부 실시형태에서, 키트는 용기 내의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 및 키트의 사용 설명서를 포함한다.
일부 실시형태에서, 키트는 용기 내의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질 및 키트의 사용 설명서를 포함한다.
일부 실시형태에서, 키트 내의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 표지된다.
일부 실시형태에서, 키트 내의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질은 표지된다.
일부 실시형태에서, 키트 내의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질은 표지된다.
일부 실시형태에서, 키트는 하기를 포함하는 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다:
SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL;
SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL.
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL; 또는
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL.
특정 실시형태에서, 키트는 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하는 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 키트는 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 133, 134, 135, 136, 308, 316, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 404, 405, 406, 407, 408 또는 409을 포함하는 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
hK2 검출 방법
본 발명은 또한 샘플을 수득하고, 샘플을 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인과 접촉시키고, 샘플에서 결합된 hK2를 검출하는 것을 포함하는, 샘플에서 hK2를 검출하는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수, 순환 세포, 활액, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 조직, 생검(미세 바늘 흡인 포함)), 조직학적 준비 등으로부터 유래될 수 있다.
본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 공지된 방법을 사용하여 검출될 수 있다. 예시적인 방법은 형광 또는 화학발광 표지, 또는 방사성 표지를 사용한 항체의 직접 표지화, 또는 용이하게 검출가능한 모이어티, 예컨대 비오틴, 효소 또는 에피토프 태그의 본 발명의 항체에 대한 부착을 포함한다. 예시적인 표지 및 모이어티는 루테늄, 111In-DOTA, 111In-디에틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA), 홀스래디쉬 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 및 베타-갈락토시다제, 폴리-히스티딘(HIS 태그), 아크리딘 염료, 시아닌 염료, 플로오론 염료, 옥사진 염료, 페난트리딘 염료, 로다민 염료 및 Alexafluor® 염료이다.
본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 샘플에서 hK2를 검출하기 위한 다양한 분석에서 사용될 수 있다. 예시적인 분석은 웨스턴 블롯 분석, 방사면역분석, 표면 플라즈몬 공명, 면역침전, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역분석, 면역조직화학, 형광-활성화 세포 분류(FACS) 또는 ELISA 분석이다.
본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)
본원에서 확인된 hK2에 결합하는 임의의 항원 결합 도메인은 키메라 항원 수용체(CAR)로 조작되어 hK2에 결합하는 CAR을 제공할 수 있다. 본 개시내용은 hK2를 표적으로 하는 CAR, 이러한 CAR을 포함하는 세포, 및 본원에 기재된 CAR을 사용하여 hK2 생성 암, 예컨대 전립선암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 CAR은 hK2에 대한 항원 특이성을 갖는다. 본원에 사용되는 바와 같이, 어구 "항원 특이성을 갖는다" 및 "항원-특이적 반응을 이끌어낸다"는 CAR이 항원에 특이적으로 결합하여 항원을 면역학적으로 인식할 수 있으며, 이에 따라 hK2 항원에 대한 CAR의 결합이 면역 반응을 이끌어내는 것을 의미한다. 항원 특이성에 대한 그리고 표적 세포를 인식하는 능력에 대한 CAR의 시험 방법은 당업계에 알려져 있다.
본 개시내용은 원하는 키메라 항원 수용체를 안정적으로 발현하도록 유전적으로 조작된 T 세포의 용도에 관한 것이다. 키메라 항원 수용체(CAR)는 T 세포 신호전달 도메인에 연결된 항체(예컨대 scFv)의 항원 결합 도메인을 함유하는 인공적으로 구성된 이종 단백질 또는 폴리펩티드이다. CAR의 특성은, 비-MHC-제한된 방식으로, 선택된 표적에 대한 T-세포 특이성 및 반응성을 재유도하여, 단일클론 항체의 항원-결합 특성을 이용하는 그의 능력을 포함한다. 비-MHC-제한된 항원 인식은 CAR을 발현하는 T 세포에게 항원 처리와 독립적으로 항원을 인식하며, 이로써 종양 회피의 주요 기전을 우회하는 능력을 제공한다. 더욱이, T-세포 내에서 발현되는 경우, CAR은 유리하게도 내인성 T 세포 수용체(TCR) 알파 및 베타 사슬과 이량체화되지 않는다.
본원에 기재된 CAR은, 적어도 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 본원에 기재된 바와 같은 자극성 분자로부터 유래되는 기능성 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인(본원에서 "세포질 신호전달 도메인"으로도 지칭됨)을 포함하는 재조합 폴리펩티드 작제물을 제공한다. CAR을 발현하는 T 세포는 본원에서 CAR T 세포, CAR-T 세포 또는 CAR 변형된 T 세포로 지칭되며, 이들 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 이러한 세포는 그의 표면 상에 항체 결합 도메인을 안정하게 발현하도록 유전적으로 변형되어, MHC 독립적인 신규한 항원 특이성을 부여할 수 있다.
일부 경우에, T 세포는 항체의 항원 인식 도메인을 CD3-제타 사슬 또는 FcγRI 단백질의 세포내 도메인과 조합하여 단일 키메라 단백질을 형성하는 CAR을 안정하게 발현하도록 유전적으로 변형된다. 일 실시형태에서, 자극성 분자는 T 세포 수용체 복합체와 회합된 제타 사슬이다.
"세포내 신호전달 도메인"은 분자의 세포내 부분을 지칭한다. 그것은 세포 내의 정보를 전달하여, 2차 메신저를 발생시킴으로써 또는 그러한 메신저에 반응하여 이펙터로서 기능함으로써 규정된 신호전달 경로를 통해 세포 활성을 조절함에 의해 작용하는 단백질의 기능성 부분이다. 세포내 신호전달 도메인은 CAR 함유 세포, 예를 들어 CAR-T 세포의 면역 이펙터 기능을 촉진하는 신호를 발생시킨다. 예를 들어 CAR-T 세포에서의 면역 이펙터 기능의 예에는 세포용해 활성 및 헬퍼 활성이 포함되며, 이에는 사이토카인의 분비가 포함된다.
일 실시형태에서, 세포내 신호전달 도메인은 1차 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 예시적인 1차 세포내 신호전달 도메인은 1차 자극 또는 항원 의존성 시뮬레이션을 담당하는 분자로부터 유래되는 것들을 포함한다. 일 실시형태에서, 세포내 신호전달 도메인은 공동 자극 세포내 도메인을 포함한다. 예시적인 공동 자극 세포내 신호전달 도메인은 공동 자극 신호 또는 항원 비의존성 자극을 담당하는 분자로부터 유래되는 것들을 포함한다. 예를 들어, CAR-T의 경우에, 1차 세포내 신호전달 도메인은 T 세포 수용체의 세포질 서열을 포함하고, 공동 자극성 세포내 신호전달 도메인은 공동 수용체 또는 공동 자극성 분자로부터의 세포질 서열을 포함한다.
1차 세포내 신호전달 도메인은 면역수용체 티로신계 활성화 모티프 또는 ITAM으로 알려진 신호전달 모티프를 포함한다. 예시적인 1차 세포질 신호전달 서열을 함유하는 ITAM은 CD3-제타, FcRγ, FcR 베타, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD5, CD22, CD79a, CD79b, CD66d, DAP10 및 DAP12로부터 유래되는 것들을 포함한다.
용어 "제타" 또는 대안적으로 "제타 사슬", "CD3-제타" 또는 "TCR-제타"는 GenBank 수탁 번호 BAG36664.1로 제공되는 단백질, 또는 비인간 종, 예를 들어 뮤린, 토끼, 영장류, 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등으로부터의 동등한 잔기로 정의되고, "제타 자극성 도메인" 또는 대안적으로 "CD3-제타 자극성 도메인" 또는 "TCR-제타 자극성 도메인"은 T 세포 활성화에 필요한 초기 신호를 기능적으로 전달하기에 충분한 제타 사슬의 세포질 도메인으로부터의 아미노산 잔기로 정의된다. 일 양태에서, 제타의 세포질 도메인은 GenBank 수탁 번호 BAG36664.1의 잔기 52 내지 164, 또는 이의 기능적 오르토로그(ortholog)인, 비인간 종, 예를 들어 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등으로부터의 동등한 잔기를 포함한다. 일 양태에서, "제타 자극 도메인" 또는 "CD3-제타 자극 도메인"은 SEQ ID NO: 28로서 제공되는 서열, 또는 SEQ ID NO: 28과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열이다.
SEQ ID NO: 28 CD3-제타 자극 도메인
RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
용어 "공동 자극성 분자"는 공동 자극성 리간드와 특이적으로 결합함으로써, 증식과 같은 그러나 이로 한정되지 않는 T 세포에 의한 공동 자극성 반응을 매개하는 T 세포 상의 동종 결합 파트너를 지칭한다. 공동 자극성 분자는 효율적인 면역 반응을 위해 요구되는, 항원 수용체 또는 그의 리간드 이외의 세포 표면 분자이다. 공동 자극성 분자는 MHC 클래스 1 분자, BTLA 및 Toll 리간드 수용체, 뿐만 아니라 OX40, CD2, CD27, CD28, CDS, ICAM-1, LFA-1(CD11a/CD18) 및 4-1BB(CD137)를 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
공동 자극성 세포내 신호전달 도메인은 공동 자극성 분자의 세포내 부분일 수 있다. 공동 자극성 분자는 하기 단백질 패밀리로 나타낼 수 있다: TNF 수용체 단백질, 면역글로불린-유사 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 신호전달 림프구성 활성화 분자(SLAM 단백질), 및 NK 세포 활성화 수용체. 예시적인 이러한 분자는 CD27, CD28, 4-1BB(CD137), OX40, GITR, CD30, MyD88, CD40, ICOS, BAFFR, HVEM, 림프구 기능 관련 항원-1(LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, 및 CD83과 특이적으로 결합하는 리간드 등을 포함한다.
세포내 신호전달 도메인은 유래가 되는 분자의, 전체 세포내 부분, 또는 전체 천연 세포내 신호전달 도메인, 또는 이들의 기능성 단편을 포함할 수 있다.
용어 "4-1BB" 또는 대안적으로 "CD137"는 GenBank 수탁 번호 AAA62478.2로서 제공되는 아미노산 서열, 또는 비인간 종, 예를 들어 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등으로부터의 동등한 잔기를 갖는 TNFR 슈퍼패밀리의 구성원을 지칭하며; "4-1BB 공동 자극성 도메인"은 GenBank 수탁 번호 AAA62478.2의 아미노산 잔기 214 내지 255, 또는 비인간 종, 예를 들어 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등으로부터의 동등한 잔기로 정의된다. 일 양태에서, "4-1BB 공동 자극 도메인" 또는 "CD137 공동 자극 도메인"은 SEQ ID NO: 27(KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL; SEQ ID NO: 27) 또는 비인간 종, 예를 들어, 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등의 등가 잔기 또는 SEQ ID NO: 27과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 서열로서 제공된 서열이다.
일 실시형태에서, CAR 내의 다른 도메인들 중 하나와 자연적으로 회합된 막관통 도메인이 사용된다. 다른 실시형태에서, 막관통 도메인은 수용체 복합체의 다른 구성원들과의 상호작용을 최소화하기 위하여 동일한 또는 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 그러한 도메인의 결합을 피하도록 아미노산 치환에 의해 변형되거나 선택될 수 있다. 일 실시형태에서, 막관통 도메인은 CD8α 힌지 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포질 신호전달 도메인은 본원에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 공동 자극 분자로부터 유래되는 하나 이상의 기능성 신호전달 도메인을 추가로 포함한다. 일 실시형태에서, 공동 자극 분자는 4-1BB(즉, CD137), CD27, CD3-제타 및/또는 CD28로부터 선택된다. CD28은 T 세포 공동 자극에서 중요한 T 세포 마커이다. CD27은 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리의 구성원이며, 공동 자극 면역 관문 분자로서 작용한다. 4-1BB는 강력한 공동 자극 신호를 T 세포에 전달하여, T 림프구의 분화를 촉진하고 장기간 생존을 향상시킨다. CD3-제타는 TCR과 회합하여 신호를 생성하고, 면역수용체 티로신계 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 또 다른 실시형태에서, 공동 자극 분자는 MyD88 또는 CD40이다.
일 실시형태에서, CAR은 CD8을 포함하는 세포내 힌지 도메인 및 CD28, 4-1BB 및 CD3-제타를 포함하는 세포내 T 세포 수용체 신호전달 도메인을 포함한다. 또 다른 실시형태에서, CAR은 세포내 힌지 도메인 및 CD28, 4-1BB, 및 CD3-제타를 포함하는 세포내 T 세포 수용체 신호전달 도메인을 포함하며, 힌지 도메인은 CD8, CD4 또는 CD28의 세포외 영역의 전부 또는 일부; 항체 불변 영역의 전부 또는 일부; FcγRIIIA 수용체, IgG 힌지, IgM 힌지, IgA 힌지, IgD 힌지, IgE 힌지, 또는 Ig 힌지의 전부 또는 일부를 포함한다. IgG 힌지는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM1, IgM2, IgA1, IgA2, IgD, IgE, 또는 이들의 키메라로부터 유래될 수 있다.
본원에 기재된 CAR은, 적어도 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인, 및 예를 들어 하기에 정의된 바와 같은 자극성 분자로부터 유래되는 기능성 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인(본원에서 "세포질 신호전달 도메인"으로도 지칭됨)을 포함하는 재조합 폴리펩티드 작제물을 제공한다.
일 실시형태에서, CAR은 세포외 항원 인식 도메인, 막관통 도메인, 및 자극성 분자로부터 유래되는 기능성 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 융합 단백질을 포함한다. 일 실시형태에서, CAR은 세포외 항원 인식 도메인, 막관통 도메인, 및 공동 자극 분자로부터 유래되는 기능성 신호전달 도메인 및 자극성 분자로부터 유래되는 기능성 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 융합 단백질을 포함한다. 일 실시형태에서, CAR은 세포외 항원 인식 도메인, 막관통 도메인, 및 하나 이상의 공동 자극 분자(들)로부터 유래되는 적어도 2개의 기능성 신호전달 도메인 및 자극성 분자로부터 유래되는 기능성 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 융합 단백질을 포함한다.
본 개시내용의 CAR은 CD28 및/또는 4-1BB 신호전달 도메인을 단독으로 포함하거나 본 발명의 CAR과 관련하여 유용한 임의의 다른 원하는 세포질 도메인(들)과 조합되도록 설계될 수 있다. 일 실시형태에서, CAR의 세포질 도메인은 CD3-제타의 신호전달 도메인을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, CAR의 세포질 도메인은 CD3-제타, 4-1BB 및 CD28 신호전달 모듈 및 이들의 조합을 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다. 따라서, 본 발명은 CAR T 세포, 및 입양 요법을 위한 그의 사용 방법을 제공한다.
본 개시내용은 CAR의 변이체, 예를 들어 기능적 변이체를 추가로 제공한다. 본원에 사용되는 바와 같은 용어 "기능성 변이체"는 부모 CAR과 실질적이거나 유의한 서열 동일성 또는 유사성을 갖는 CAR을 지칭하며, 이러한 기능성 변이체는 그러한 변이체의 유래가 되는 CAR의 생물학적 활성을 유지한다. 기능적 변이체는 예를 들어 부모 CAR과 유사한 정도로, 동일한 정도로, 또는 더 높은 정도로 표적 세포를 인식하는 능력을 유지하는 CAR의 변이체를 포함한다. 부모 CAR과 관련하여, 기능성 변이체는 예를 들어 아미노산 서열에 있어서 부모 CAR과 적어도 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99% 또는 그 이상 동일할 수 있다.
기능성 변이체는 예를 들어 적어도 하나의 보존적 아미노산 치환을 갖는 부모 CAR의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 기능성 변이체는 적어도 하나의 비보존적 아미노산 치환을 갖는 부모 CAR의 아미노산 서열을 포함한다. 이 경우에, 비보존적 아미노산 치환은 기능성 변이체의 생물학적 활성을 방해하지 않거나 억제하지 않을 수 있다. 비보존적 아미노산 치환은 기능성 변이체의 생물학적 활성이 부모 CAR에 비하여 증가되도록 기능성 변이체의 생물학적 활성을 향상시킬 수 있다.
보존적 아미노산 치환은 당업계에 공지되어 있고 본원에 기재되어 있다.
본 개시내용의 CAR은 본원에 기재된 명시된 아미노산 서열 또는 서열들로 본질적으로 이루어질 수 있으며, 이에 따라 다른 성분, 예를 들어 다른 아미노산은 기능성 변이체의 생물학적 활성을 실질적으로 변화시키지 않는다.
본 개시내용의 CAR(기능적 부분 및 기능적 변이체 포함)은 임의의 길이일 수 있으며, 즉, CAR(또는 이의 기능적 부분 또는 기능적 변이체)이 생물학적 활성, 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 능력, 숙주에서 질환에 걸린 세포(예를 들어, 암 세포)를 검출하는 능력, 또는 숙주에서 질환을 치료 또는 예방하는 능력 등을 유지한다면 임의의 수의 아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들어, CAR은 약 50 내지 약 5000개의 아미노산 길이, 예컨대 약 50, 약 70, 약 75, 약 100, 약 125, 약 150, 약 175, 약 200, 약 225, 약 250, 약 275, 약 300, 약 325, 약 350, 약 375, 약 400, 약 425, 약 450, 약 475, 약 500, 약 525, 약 550, 약 575, 약 600, 약 625, 약 650, 약 675, 약 700, 약 725, 약 750, 약 775, 약 800, 약 825, 약 850, 약 875, 약 900, 약 925, 약 950, 약 975, 약 1000개 또는 그 이상의 아미노산 길이일 수 있다.
본 개시내용의 CAR(본 발명의 기능성 부분 및 기능성 변이체를 포함함)은 하나 이상의 자연 발생 아미노산 대신에 합성 아미노산을 포함할 수 있다. 이러한 합성 아미노산은 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어 아미노사이클로헥산 카르복실산, 노르류신, α-아미노 n-데칸산, 호모세린, S-아세틸아미노메틸-시스테인, 트랜스-3- 및 트랜스-4-하이드록시프롤린, 4-아미노페닐알라닌, 4-니트로페닐알라닌, α-(2-아미노-2-노르보르난)-카르복실산, α,γ-다이아미노부티르산, α,β-다이아미노프로피온산, 호모페닐알라닌, 4-클로로페닐알라닌, 4-카르복시페닐알라닌, β-페닐세린 β-하이드록시페닐알라닌, 페닐글리신, α-나프틸알라닌, 사이클로헥실알라닌, 사이클로헥실글리신, N'-벤질-N'-메틸-라이신, N',N'-다이벤질-라이신, 6-하이드록시라이신, 오르니틴, α-아미노사이클로펜탄 카르복실산, α-아미노사이클로헥산 카르복실산, α-아미노사이클로헵탄 카르복실산, 인돌린-2-카르복실산, 1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린-3-카르복실산, 아미노말론산, 아미노말론산 모노아미드, 및 α-tert-부틸글리신을 포함한다.
본 개시내용의 CAR(기능성 부분 및 기능성 변이체를 포함함)은 번역 후 변형될 수 있다. 이들은 글리코실화, 에스테르화, N-아실화, 아미드화, 카르복실화, 포스포릴화, 에스테르화, 환화(예를 들어, 다이설파이드 브릿지를 통해)되거나, 또는 산 부가 염으로 전환될 수 있다. 일부 실시형태에서, 이들은 이량체화되거나 중합되거나, 또는 접합된다.
본 개시내용의 CAR(이의 기능성 부분 및 기능성 변이체 포함)은 당업계에 알려진 방법에 의해 수득될 수 있다. 폴리펩티드 및 단백질을 새롭게 합성하는 적합한 방법은 문헌[Chan et al., Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2000]; 문헌[Peptide and Protein Drug Analysis, ed. Reid, R., Marcel Dekker, Inc.,2000]; 및 문헌[Epitope Mapping, ed. Westwood et al., Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2001]와 같은 참고문헌에 기재되어 있다. 또한, CAR은 표준 재조합 방법을 사용하여 본원에 기재된 핵산을 사용하여 재조합적으로 생성될 수 있다. 또한, CAR(이의 기능성 부분 및 기능성 변이체 포함) 중 일부는 식물, 세균, 곤충, 포유동물 등과 같은 공급원으로부터 단리 및/또는 정제될 수 있다. 단리 및 정제 방법은 당업계에 알려져 있다. 대안적으로, 본 개시내용의 CAR(이의 기능성 부분 및 기능성 변이체 포함)은 상업적으로 합성될 수 있다. 이러한 점에 있어서, CAR, 폴리펩티드, 및 단백질은 합성, 재조합, 단리, 및/또는 정제될 수 있다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 CAR의 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CAR의 기능성 부분에 대해 임의의 수준의 친화도 또는 결합력을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 광범위한 친화도(KD)로 hK2에 결합될 수 있다. 일 실시형태에서, 항체는 당업자에 의해 실시되는 바와 같이 표면 플라즈몬 공명 또는 키넥사(Kinexa) 방법에 의해 측정 시 약 10-7 M 이하, 예컨대 비제한적으로, 1 내지 9.9(또는 그 안의 임의의 범위 또는 값, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9)×10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 10-12 M, 10-13 M, 10-14 M, 10-15 M 또는 그 안의 임의의 범위 또는 값의 KD로 hK2에 결합한다. 하나의 예시적인 친화도는 1×10-8 M 이하이다. 또 다른 예시적인 친화도는 1×10-9 M 이하이다.
본 개시내용의 CAR의 임의의 기능성 부분에 결합하는 능력에 대하여 항체를 시험하는 방법은 당업계에 알려져 있으며, 임의의 항체-항원 결합 분석, 예컨대 방사면역분석(RIA), 웨스턴 블롯, 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA), 면역침전, 및 경쟁적 억제 분석을 포함한다.
항체 또는 이의 항체 단편을 포함하는 CAR의 일부는 항원 결합 도메인이 인접한 폴리펩티드 사슬의 일부로서 발현되는 다양한 형태로 존재할 수 있으며, 이에는, 예를 들어 단일 도메인 항체 단편(sdAb), scFv 및 인간 키메라 또는 인간화 항체가 포함된다(문헌[Harlow et al., 1999, In: Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y.]; 문헌[Harlow et al., 1989, In: Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, N.Y.]; 문헌[Houston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883]; 문헌[Bird et al., 1988, Science 242:423-426]). 일 양태에서, 본 개시내용의 CAR의 항원 결합 도메인은 항체 단편을 포함한다. 일 실시형태에서, 본 개시내용의 CAR은 scFv를 포함하는 항체 단편을 포함한다.
본 개시내용은 또한 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, 세포외 항원 결합 도메인은 hK2에 결합한다.
본 개시내용은 또한 하기를 포함하는 CAR을 제공한다:
hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인;
막관통 도메인; 및
적어도 하나의 공동 자극 도메인을 선택적으로 포함하는 세포내 신호전달 도메인.
일부 실시형태에서, CAR은 CD8a-힌지 영역을 추가로 포함한다.
일부 실시형태에서, CAR은 CD8a 막관통 영역 (CD8a-TM) 폴리펩티드 및 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분을 포함하는 공동 자극 도메인 및 T 세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, CAR은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 25와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CD8a-힌지 영역;
SEQ ID NO: 26과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인; 및/또는
SEQ ID NO: 27과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 공동 자극 도메인, 및 SEQ ID NO: 28과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 1차 신호전달 도메인을 포함하는 세포내 신호전달 도메인.
본 개시내용은 또한 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, 세포외 항원 결합 도메인은 hK2에 결합하고 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 138의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 137의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 161의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 138의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 137의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 165의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 164의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 167의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 169의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 168의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 205의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 204의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 444의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 160의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 159의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 140의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 161의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 140의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 139의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 140의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 159의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 1의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 4의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 2의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 4의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 3의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 4의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 1의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 5의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 2의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 5의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 3의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 5의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 1의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 6의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3;
SEQ ID NO: 2의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 6의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3; 또는
SEQ ID NO: 3의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 6의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, 세포외 항원 결합 도메인은 hK2에 결합하고 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, 세포외 항원 결합 도메인은 hK2에 결합하고 SEQ ID NO: 138의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 137의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3; 또는 SEQ ID NO: 140의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 139의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, CDR은 카바트에 따라 정의된다.
일부 실시형태에서, CDR은 초티아에 따라 정의된다.
일부 실시형태에서, CDR은 IMGT에 따라 정의된다.
일부 실시형태에서, CDR은 AbM에 따라 정의된다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 63, 72, 141, 147, 170, 176, 188, 194, 196, 198, 200, 206 또는 216의 HCDR1, SEQ ID NO: 64, 65, 73, 142, 148, 171, 177, 183, 189, 195, 197, 199, 201, 207 또는 217의 HCDR2, SEQ ID NO: 66, 143, 172, 178, 184, 190, 208 또는 218의 HCDR3, SEQ ID NO: 67, 68, 144, 173, 179, 182, 185 또는 191의 LCDR1, SEQ ID NO: 69, 70, 145, 174, 180, 186, 192 또는 470의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 71, 146, 175, 181, 187, 193 또는 209의 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 63, 72, 141, 147, 170, 176, 188, 194, 196, 198, 200, 206 또는 216의 HCDR1, 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 64, 65, 73, 142, 148, 171, 177, 183, 189, 195, 197, 199, 201, 207, 또는 217의 HCDR2, 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 66, 143, 172, 178, 184, 190, 208 또는 218의 HCDR3, 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 67, 68, 144, 173, 179, 185 또는 191의 LCDR1, 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 69, 70, 145, 174, 180, 186, 192 또는 470의 LCDR2, 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 71, 146, 175, 181, 187, 193 또는 209의 LCDR3, 또는 이의 보존적 치환을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192, 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 64, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 68, 70 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 68, 70 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 138, 140, 160, 163, 165, 167, 169 또는 205의 VL을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 137, 139, 159, 161, 162, 164, 166, 168, 또는 204의 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 138, 140, 160, 163, 165, 167, 169, 205 또는 444의 VL 및 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 137, 139, 159, 161, 162, 164, 166, 168 또는 204의 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL; 또는
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 138의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 137의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 163의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 162의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 163의 VL 및 SEQ ID NO: 162의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 163의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 162의 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 165의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 164의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 167의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 166의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 168의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 169의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 204의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 205의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 160의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 159의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 140의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 161의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 140의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 139의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 140의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 159의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 1의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 4의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 1의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 5의 폴리펩티드와 적어도 50%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 1의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 6의 폴리펩티드와 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 2의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 4의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 2의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 5의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 2의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 6의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 3의 폴리펩티드와 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 4의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 3의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 5의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 3의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 6의 폴리펩티드와 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다.
특정 실시형태에서, CAR은 SEQ ID NO: 138 또는 SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 137 또는 SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 scFv를 포함한다. 일부 실시형태에서, scFv는 VL과 VH 사이에 링커 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 링커 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 링커 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 7과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 149, 150, 151, 152, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422. 423, 424 또는 425로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 150의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 152의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 410의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 411의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 412의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 413의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 414의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 415의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 416의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 417의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 418의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 419의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 420의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 421의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 422의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 423의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 424의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 425의 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 416 또는 SEQ ID NO: 417의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
특정 실시형태에서 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 416 또는 SEQ ID NO: 417의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 실시형태에서, CAR은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151 또는 SEQ ID NO: 152와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 scFv를 포함하는 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함한다.
특정 실시형태에서, CAR은 아미노산 서열 SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151 또는 SEQ ID NO: 152와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 scFv를 포함하는 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 8의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 9의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 318의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 319의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 320의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 321의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 322의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 323의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 404의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 405의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 322의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 323의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 404의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 405의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 406의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 407의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 408의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 409의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 324의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 325의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 308의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 316의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 404의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 405의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 404 또는 SEQ ID NO: 405의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135 또는 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, scFv는 SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135 또는 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 신호 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 신호 서열은 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 149, 150, 151, 152, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422. 423, 424 또는 425로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 43의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시형태에서, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 44의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분, T 세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분, 분화의 클러스터(CD27) 성분, 분화 슈퍼패밀리 구성원의 클러스터(예를 들어, CD28 또는 유도성 T 세포 공동 자극제(ICOS)) 성분, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드 성분을 포함한다.
일부 실시형태에서, CD137 성분은 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CD137 성분은 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, CD3z 성분은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, CD3z 성분은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 세포내 신호전달 도메인은 SEQ ID NO: 45의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 세포내 신호전달 도메인은 SEQ ID NO: 45의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
SEQ ID NO: 45
KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
일부 실시형태에서, 막관통 도메인은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, CD8a-TM 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함한다. (IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC; SEQ ID NO: 26).
일부 실시형태에서, CD8a-TM 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 막관통 도메인은 T-세포 수용체, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD40, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154의 α, β 또는 ζ 사슬의 막관통 영역(들)을 적어도 포함한다. 일부 실시형태에서, 막관통 도메인은 ζ, η 또는 FcεR1γ 및 -β, MB1(Igα.), B29 또는 CD3-γ, ζ, 또는 η의 막관통 도메인을 적어도 포함한다. 일부 실시형태에서, 막관통 도메인은 합성 막관통 도메인으로서, 예를 들어 소수성 잔기, 예컨대 류신 및 발린, 페닐알라닌의 트리플렛, 또는 트립토판을 주로 포함하는 막관통 도메인이다.
일부 실시형태에서, CAR은 막관통 도메인을 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인에 연결하는 힌지 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 CD8a-힌지 영역이다. 일부 실시형태에서, CD8a-힌지 영역은 SEQ ID NO: 25(TSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD; SEQ ID NO: 25)의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, CD8a-힌지 영역은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열과 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 아미노산 서열 EPKSCDKTHTCPPCP(SEQ ID NO: 126)를 포함하거나, EPKSCDKTHTCPPCP(SEQ ID NO: 126)와 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열 ERKCCVECPPCP(SEQ ID NO: 127)를 포함하거나, ERKCCVECPPCP(SEQ ID NO: 127)와 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열 ELKTPLGDTTHTCPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)3(SEQ ID NO: 128)를 포함하거나 ELKTPLGDTTHTCPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)3(SEQ ID NO: 128)와 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 힌지 영역은 서열 ESKYGPPCPSCP(SEQ ID NO: 129)를 포함하거나, ESKYGPPCPSCP(SEQ ID NO: 129)와 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 153, 154, 155, 156, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 435, 436, 437, 438, 439, 440 또는 441의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 48의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 48의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 49의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 50의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 51의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 52의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 52의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 53의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 53의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 54의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 54의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 55의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 58의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 58의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 59의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 59의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 60의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 60의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 61의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 61의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 155의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 155의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 426의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 426의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 427의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 427의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 428의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 428의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 429의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 429의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 430의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 430의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 431의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 431의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 432의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 432의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 433의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 433의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 434의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 434의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 435의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 435의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 436의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 436의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 437의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 437의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 438의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 438의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 439의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 439의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 440의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 440의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 441의 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 441의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 432의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
본 개시내용은 또한 SEQ ID NO: 433의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 CAR을 제공한다.
일부 실시형태에서, CAR은 SEQ ID NO: 432 또는 SEQ ID NO: 433의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, CAR은 SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155 또는 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, CAR은 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, CAR은 SEQ ID NO: 155의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, CAR은 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, CAR은 SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155 또는 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 hK2에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 제공하며, 세포외 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 111 및 SEQ ID NO: 112의 서열을 갖는 에피토프 내에서 3개 이상의 잔기에서 hK2에 결합한다.
CAR을 발현하는 CAR 작제물 및 면역반응성 세포
본 개시내용은 또한 본원에 기재된 CAR을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
달리 명시되지 않는 한, "아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드"는 서로의 축퇴된 버전이고 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 모든 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 어구 단백질 또는 RNA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 또한 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 일부 변이체에서 발현된 단백질에 스플라이싱되는 인트론(들)을 함유할 수 있는 정도로 인트론을 포함할 수 있다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 CAR을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
용어 "발현 벡터"는 발현될 뉴클레오티드 서열에 작동가능하게 연결된 발현 제어 서열을 포함하는 재조합 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 지칭한다. 발현 벡터는 발현을 위한 충분한 시스-작용 요소를 포함하고; 발현을 위한 다른 요소는 숙주 세포에 의해 또는 시험관내 발현 시스템에 공급될 수 있다. 발현 벡터는 재조합 폴리뉴클레오티드를 혼입시킨, 코스미드, 플라스미드(예를 들어, 네이키드(naked) 또는 리포좀 내에 수용된 것) 및 바이러스(예를 들어, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 및 아데노 관련 바이러스)를 포함하여, 당업계에 알려진 모든 것들을 포함한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 CAR을 포함하는 단리된 면역반응성 세포를 제공한다. 일부 실시형태에서, 단리된 면역반응성 세포는 CAR에 의해 형질도입되며, 예를 들어 CAR이 면역반응성 세포의 표면 상에서 구성적으로 발현된다. 특정 실시형태에서, 단리된 면역반응성 세포는 적어도 하나의 공동 자극 리간드에 의해 추가로 형질도입되며, 이에 따라 면역반응성 세포는 적어도 하나의 공동 자극 리간드를 발현하게 된다. 특정 실시형태에서, 적어도 하나의 공동 자극성 리간드는 4-1BBL, CD48, CD70, CD80, CD86, OX40L, TNFRSF14, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, 단리된 면역반응성 세포는 적어도 하나의 사이토카인에 의해 추가로 형질도입되며, 이에 따라 면역반응성 세포는 적어도 하나의 사이토카인을 분비하게 된다. 특정 실시형태에서, 적어도 하나의 사이토카인은 IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17, IL-21, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시형태에서, 단리된 면역반응성 세포는 T 림프구(T 세포), 자연 살해(NK) 세포, 세포독성 T 림프구(CTL), 조절 T 세포(Treg), 인간 배아 줄기 세포, 림프성 선조 세포, T 세포-전구 세포, 및 림프성 세포가 분화될 수 있는 만능성 줄기 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 단리된 면역반응성 세포는 T 세포이다.
본원의 목적상, T 세포는 임의의 T 세포일 수 있으며, 예컨대, 배양된 T 세포, 예를 들어 1차 T 세포, 또는 배양된 T 세포주, 예를 들어 Jurkat, SupT1 등으로부터의 T 세포, 또는 포유동물로부터 수득된 T 세포일 수 있다. 포유동물로부터 수득되는 경우, T 세포는 골수, 혈액, 림프절, 흉선, 또는 다른 조직 또는 체액을 포함하지만 이에 한정되지 않는 다수의 공급원으로부터 수득될 수 있다. T 세포는 또한 농축되거나 정제될 수 있다. T 세포는 인간 T 세포일 수 있다. T 세포는 인간으로부터 단리된 T 세포일 수 있다. T 세포는 임의의 유형의 T 세포일 수 있으며, CD4+/CD8+ 이중 양성 T 세포, CD8+ T 세포(예를 들어, 세포독성 T 세포), CD4+ 헬퍼 T 세포, 예를 들어 Th1 및 Th2 세포, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 말초 혈액 백혈구(PBL), 종양 침윤 세포, 기억 T 세포, 나이브 T 세포 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는 임의의 발달 단계의 것일 수 있다. T 세포는 CD8+ T 세포 또는 CD4+ T 세포일 수 있다.
일부 실시형태에서, 단리된 면역반응성 세포는 NK 세포이다.
일부 실시형태에서, 단리된 면역반응성 세포는 CTL이다.
일부 실시형태에서, 단리된 면역반응성 세포는 Treg이다.
일부 실시형태에서, 단리된 면역반응성 세포는 인간 배아 줄기 세포이다.
일부 실시형태에서, 단리된 면역반응성 세포는 림프성 선조 세포이다.
일부 실시형태에서, 단리된 면역반응성 세포는 만능 줄기 세포이다.
일 실시형태에서, 본 개시내용의 CAR T 세포는 원하는 CAR, 예를 들어 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인, CD8α 힌지 및 막관통 도메인, 및 인간 4-1BB 및 CD3-제타 신호전달 도메인을 포함하는 CAR을 포함하는 렌티바이러스 벡터를 세포 내로 도입시킴으로써 생성될 수 있다. 본 개시내용의 CAR T 세포는 생체내에서 복제하여 장기간 지속성을 가져올 수 있으며, 이는 지속적인 종양 제어로 이어질 수 있다.
본 발명의 실시형태는 본원에 기재된 재조합 발현 벡터들 중 임의의 것을 포함하는 숙주 세포를 추가로 제공한다. 본원에서 사용되는 용어 "숙주 세포"는 재조합 발현 벡터를 수용할 수 있는 임의의 유형의 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들어 식물, 동물, 또는 조류, 진균일 수 있거나, 원핵 세포, 예를 들어 세균 또는 원생동물일 수 있다. 숙주 세포는 배양된 세포이거나 또는 1차 세포, 즉, 유기체, 예를 들어 인간으로부터 직접 단리된 세포일 수 있다. 숙주 세포는 부착성 세포이거나 또는 현탁된 세포, 즉 현탁액에서 성장하는 세포일 수 있다. 적합한 숙주 세포는 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어 DH5α 대장균 세포, 중국 햄스터 난소 세포, 원숭이 VERO 세포, COS 세포, HEK293 세포 등을 포함한다. 재조합 발현 벡터를 증폭 또는 복제할 목적상, 숙주 세포는 원핵 세포, 예를 들어 DH5α 세포일 수 있다. 재조합 CAR, 폴리펩티드, 또는 단백질을 생성할 목적상, 숙주 세포는 포유동물 세포일 수 있다. 숙주 세포는 인간 세포일 수 있다. 숙주 세포는 임의의 세포 유형의 것일 수 있고, 임의의 유형의 조직으로부터 기원될 수 있고, 임의의 발달 단계의 것일 수 있지만, 숙주 세포는 말초 혈액 림프구(PBL)일 수 있다. 숙주 세포는 T 세포일 수 있다.
또한, 본원에 기재된 적어도 하나의 숙주 세포를 포함하는 세포 집단이 제공된다. 세포 집단은, 적어도 하나의 다른 세포, 예를 들어 숙주 세포(예를 들어, T 세포)에 더하여, 기재된 재조합 발현 벡터들 중 임의의 것을 포함하는 숙주 세포를 포함하는 이종 집단일 수 있으며, 이때 적어도 하나의 다른 세포는 재조합 발현 벡터들 중 어떠한 것도 포함하지 않거나, T 세포 이외의 세포, 예를 들어 B 세포, 대식세포, 적혈구, 호중구, 간세포, 내피 세포, 상피 세포, 근육 세포, 뇌세포 등을 포함하지 않는다. 대안적으로, 세포의 집단은 실질적으로 균질한 집단일 수 있으며, 집단은 주로 재조합 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포(예를 들어, 본질적으로 이루어짐)를 포함한다. 집단은 또한 세포의 클론 집단일 수 있으며, 집단의 모든 세포는 재조합 발현 벡터를 포함하는 단일 숙주 세포의 클론이며, 이에 따라 집단의 모든 세포는 재조합 발현 벡터를 포함하게 된다. 일 실시형태에서, 세포의 집단은 본원에 기재된 바와 같은 재조합 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포함하는 클론 집단이다.
폴리뉴클레오티드, 숙주 세포 및 벡터
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 임의의 hK2 결합 단백질을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다. hK2 결합 단백질은 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질 및 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한다.
본 발명은 또한 임의의 hK2 결합 단백질 또는 이의 단편을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 137의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 162의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 164의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 166의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 168의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 204의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 159의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 161의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 139의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 4, 5 또는 6의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 75의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 138의 VL을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 163의 VL을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 165의 VL을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 167의 VL을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 169의 VL을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 205의 VL을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 140의 VL을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 160의 VL을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 74의 VL을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 1, 2 또는 3의 VL을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 하기를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다:
SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL;
SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL; 또는
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL.
특정 실시형태에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 162의 VH를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 및/또는 SEQ ID NO: 163의 VL을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 133, 134, 135, 136, 308, 316, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 404, 405, 406, 407, 408 또는 409의 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 149, 150, 151, 152, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422. 423, 424 또는 425의 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 hK2 결합 단백질을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 263, 271, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 303, 304, 305, 306, 312, 316, 317, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 446, 450 또는 451의 폴리뉴클레오티드와 적어도 85% 동일하다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 hK2 결합 단백질을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 263, 271, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 303, 304, 305, 306, 312, 316, 317, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 446, 450 또는 451의 폴리뉴클레오티드와 적어도 90% 동일하다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 hK2 결합 단백질을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 263, 271, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 303, 304, 305, 306, 312, 316, 317, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 446, 450 또는 451의 폴리뉴클레오티드와 적어도 95% 동일하다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 hK2 결합 단백질을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 263, 271, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 303, 304, 305, 306, 312, 316, 317, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 446, 450 또는 451의 폴리뉴클레오티드와 적어도 98% 동일하다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 hK2 결합 단백질을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열은 SEQ ID NO: 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 263, 271, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 303, 304, 305, 306, 312, 316, 317, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 446, 450 또는 451의 폴리뉴클레오티드와 적어도 99% 동일하다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 263, 267, 271, 267, 274, 282, 292, 293, 294, 295, 303, 304, 305, 306,312, 316, 363, 364, 365, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 또는 374의 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 SEQ ID NO: 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 263, 271, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 303, 304, 305, 306, 312, 316, 317, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 446, 450 또는 451의 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 354의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 221의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 360의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 354, 221 및 360의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 367의 폴리뉴클레오티드와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 또는 100%) 동일한 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 303의 폴리뉴클레오티드와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 또는 100%) 동일한 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 373의 폴리뉴클레오티드와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 또는 100%) 동일한 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 361의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 221의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 362의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 361, 221 및 362의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 370의 폴리뉴클레오티드와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 또는 100%) 동일한 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 303의 폴리뉴클레오티드와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 또는 100%) 동일한 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 374의 폴리뉴클레오티드와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 적어도 99% 또는 100%) 동일한 단리된 폴리뉴클레오티드 서열을 제공한다.
본 개시내용의 일부 실시형태는 또한 본 개시내용의 hK2 결합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 엄격한 조건 하에 본 개시내용의 hK2 결합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드에 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리되거나 정제된 핵산을 제공한다.
엄격한 조건 하에서 혼성화되는 폴리뉴클레오티드는 높은 엄격성 조건 하에서 혼성화될 수 있다. "높은 엄격성 조건"이란, 폴리뉴클레오티드가 비특이적 혼성화보다 검출가능하게 더 강한 양으로 표적 서열(본원에 기재된 핵산들 중 임의의 것의 뉴클레오티드 서열)에 특이적으로 혼성화됨을 의미한다. 높은 엄격성 조건은 정확한 상보성 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 구별하게 될 조건, 또는 몇몇 작은 영역(예를 들어, 3 내지 12개의 염기)이 뉴클레오티드 서열과 우연히 매칭된 랜덤 서열로부터 단지 몇몇 산포된 불일치를 함유하는 조건을 포함한다. 그러한 작은 상보성 영역은 14 내지 17개 또는 그 이상의 염기의 전장 보체(full-length complement)보다 더 용이하게 융해되고, 높은 엄격성 혼성화는 이들을 용이하게 구별가능하게 한다. 비교적 높은 엄격성 조건은, 예를 들어 약 50 내지 70℃의 온도에서 약 0.02 내지 0.1 M NaCl 또는 등가물에 의해 제공되는 것과 같은 저염 및/또는 고온 조건을 포함할 것이다. 그러한 높은 엄격성 조건은 뉴클레오티드 서열과 주형 또는 표적 가닥 사이에 불일치가 만약 있다 하더라도 거의 허용하지 않으며, 본원에 기재된 CAR들 중 임의의 것의 발현을 검출하기에 특히 적합하다. 일반적으로, 증가하는 양의 포름아미드의 첨가에 의해 조건이 더 엄격하게 될 수 있음이 이해된다.
본 개시내용의 폴리뉴클레오티드 서열은 의도된 숙주 세포에서 뉴클레오티드 서열의 발현을 가능하게 하는 하나 이상의 조절 요소, 예컨대 프로모터 또는 인핸서에 작동가능하게 연결될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 cDNA일 수 있다. 프로모터는 강하고, 약하고, 조직 특이적, 유도성 또는 발달 특이적 프로모터일 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 프로모터는 하이포크산틴 포스포리보실 트랜스퍼라제(HPRT), 아데노신 데아미나제, 피루베이트 키나제, 베타-액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 등이다. 또한, 많은 바이러스 프로모터가 진핵 세포에서 구성적으로 기능하고, 기재된 실시형태와 함께 사용하기에 적합하다. 그러한 바이러스 프로모터는 거대세포바이러스(CMV) 극초기 프로모터, SV40의 초기 및 후기 프로모터, 마우스 유선 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, 말로니(Maloney) 백혈병 바이러스의 긴 말단 반복부(LTR), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr Virus, EBV), 라우스 육종 바이러스(Rous Sarcoma Virus, RSV), 및 다른 레트로바이러스, 및 단순 헤르페스 바이러스의 티미딘 키나제 프로모터를 포함한다. 유도성 프로모터, 예컨대 메탈로티오네인 프로모터, 테트라사이클린-유도성 프로모터, 독시사이클린-유도성 프로모터, 하나 이상의 인터페론-자극 반응 요소(ISRE), 예컨대 단백질 키나제 R 2',5'-올리고아데닐레이트 합성효소, Mx 유전자, ADAR1을 포함하는 프로모터 등이 사용될 수도 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다. 본 개시내용은 또한 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 그러한 벡터는 플라스미드 벡터, 바이러스 벡터, 배큘로바이러스 발현용 벡터, 트랜스포존 기반 벡터, 또는 임의의 수단에 의한 소정의 유기체 또는 유전적 백그라운드 내로 본 발명의 합성 폴리뉴클레오티드를 도입시키기에 적합한 임의의 다른 벡터일 수 있다. 본 개시내용의 hK2 결합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 hK2 결합 단백질의 발현을 보장하는 발현 벡터(들)의 제어 서열에 작동가능하게 연결될 수 있다. 이러한 조절 요소는 전사 프로모터, 적합한 mRNA 리보솜 결합 부위를 코딩하는 서열, 및 전사 및 번역의 종결을 제어하는 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터는 또한 하나 이상의 비전사 요소, 예컨대 복제 기점, 발현시키고자 하는 유전자에 연결된 적합한 프로모터 및 인핸서, 다른 5' 또는 3' 플랭킹(flanking) 비전사 서열, 5' 또는 3' 비번역 서열(예컨대, 필요한 리보솜 결합 부위), 폴리아데닐화 부위, 스플라이스 도너 및 억셉터 부위, 또는 전사 종결 서열을 포함할 수 있다. 숙주에서 복제하는 능력을 부여하는 복제 기점이 또한 포함될 수 있다.
발현 벡터는 자연 발생 또는 비자연 발생 뉴클레오티드간 결합, 또는 두 결합 유형 모두를 포함할 수 있다. 비자연 발생 또는 변경된 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드간 결합은 벡터의 전사 또는 복제를 방해하지 않는다.
일단 벡터가 적절한 숙주 내로 혼입되었으면, 숙주는 혼입된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 본 개시내용의 hK2 결합 단백질의 고수준 발현에 적합한 조건 하에서 유지된다. 척추동물 세포를 형질전환시키는 데 사용되는 발현 벡터에서의 전사 및 번역 제어 서열은 바이러스 공급원에 의해 제공될 수 있다. 예시적인 벡터가 문헌[Okayama and Berg, 3 Mol . Cell. Biol. 280 (1983)]에 의해 기재된 바와 같이 작제될 수 있다.
본 개시내용의 벡터는 또한 하나 이상의 내부 리보솜 진입 부위(들)(IRES)를 함유할 수 있다. 융합 벡터 내로의 IRES 서열의 포함은 일부 단백질의 발현을 향상시키는 데 유익할 수 있다. 일부 실시형태에서, 벡터 시스템은 하나 이상의 폴리아데닐화 부위(예를 들어, SV40)를 포함할 것이며, 이는 상기 언급된 핵산 서열들 중 임의의 것의 상류 또는 하류에 있을 수 있다. 벡터 성분들은(즉, ORF들 사이에의 "스페이서" 뉴클레오티드의 도입에 의해) 유전자 산물을 발현시키기 위한 최적의 간격을 제공하는 방식으로 인접하게 연결 또는 배열될 수 있거나, 또는 다른 방식으로 위치될 수 있다. 조절 요소, 예컨대 IRES 모티프는 또한 발현을 위한 최적의 간격을 제공하도록 배열될 수 있다.
본 개시내용의 벡터는 원형 또는 선형일 수 있다. 이들은 원핵생물 또는 진핵생물 숙주 세포에서 기능하는 복제계를 포함하도록 제조될 수 있다. 복제계는 예를 들어, ColE1, SV40, 2μ 플라스미드, λ, 소 유두종 바이러스 등으로부터 유래될 수 있다.
재조합 발현 벡터는 일시적 발현을 위해, 안정한 발현을 위해, 또는 둘 모두를 위해 설계될 수 있다. 또한, 재조합 발현 벡터는 구성적 발현을 위해 또는 유도성 발현을 위해 제조될 수 있다.
또한, 재조합 발현 벡터는 자살 유전자를 포함하도록 제조될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "자살 유전자"는 자살 유전자를 발현하는 세포가 죽게 하는 유전자를 지칭한다. 자살 유전자는, 유전자가 발현되는 세포 상에서 작용제, 예를 들어 약물에 대한 감수성을 부여하고, 세포가 작용제와 접촉되거나 그에 노출될 때 세포가 죽게 하는 유전자일 수 있다. 자살 유전자는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 단순 헤르페스 바이러스(HSV), 티미딘 키나제(TK) 유전자, 시토신 데아미나제, 푸린 뉴클레오시드 포스포릴라제 및 니트로환원효소를 포함한다.
벡터는 또한 당업계에 잘 알려진 선택 마커를 포함할 수 있다. 선택 마커는 양성 및 음성 선택 마커를 포함한다. 마커 유전자는 살생제 저항성, 예를 들어 항생제, 중금속 등에 대한 저항성, 영양요구성 숙주에서 원생영양을 제공하기 위한 상보성 등을 포함한다. 예시적인 마커 유전자는 항생물질 내성 유전자(예를 들어, 네오마이신 내성 유전자, 하이그로마이신 내성 유전자, 카나마이신 내성 유전자, 테트라사이클린 내성 유전자, 페니실린 내성 유전자, 히스티디놀 내성 유전자, 히스티디놀 x 내성 유전자), 글루타민 합성효소 유전자, HSV-TK, 간시클로비르 선택을 위한 HSV-TK 유도체 또는 6-메틸푸린 선택을 위한 세균성 푸린 뉴클레오시드 포스포릴라제 유전자를 포함한다(문헌[Gadi et al., 7 Gene Ther. 1738-1743 (2000)]). 선택 마커 또는 클로닝 부위를 코딩하는 핵산 서열은 관심 폴리펩티드 또는 클로닝 부위를 코딩하는 핵산 서열의 상류 또는 하류에 있을 수 있다.
사용할 수 있는 예시적인 벡터는 세균 벡터: pBs, 파지스크립트(phagescript), PsiX174, p블루스크립트(pBluescript) SK, pBs KS, pNH8a, pNH16a, pNH18a, pNH46a(미국 캘리포니아주 라호이아 소재의 Stratagene); pTrc99A, pKK223-3, pKK233-3, pDR540 및 pRIT5(스웨덴 웁살라 소재의 Pharmacia). 진핵세포 벡터: pWLneo, pSV2cat, pOG44, PXR1, pSG(Stratagene) pSVK3, pBPV, pMSG 및 pSVL(Pharmacia), pEE6.4(Lonza) 및 pEE12.4(Lonza)이다. 추가의 벡터는 pUC 시리즈(미국 메릴랜드주 글렌 버니 소재의 Fermentas Life Sciences), pBluescript 시리즈(미국 캘리포니아주 라졸라 소재의 Stratagene), pET 시리즈(미국 위스콘신주 매디슨 소재의 Novagen), pGEX 시리즈(스웨덴 웁살라 소재의 Pharmacia Biotech), 및 pEX 시리즈(미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재의 Clontech)를 포함한다. 박테리오파지 벡터, 예컨대 λGT10, λGT11, λEMBL4, 및 λNM1149, λZapII(Stratagene)가 사용될 수 있다. 예시적인 식물 발현 벡터는 pBI01, pBI01.2, pBI121, pBI101.3, 및 pBIN19(Clontech)를 포함한다. 예시적인 동물 발현 벡터는 pEUK-Cl, pMAM, 및 pMAMneo(Clontech)를 포함한다. 발현 벡터는 바이러스 벡터, 예를 들어 레트로바이러스 벡터, 예를 들어 감마 레트로바이러스 벡터일 수 있다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 137의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 162의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 164의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 166의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 168의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 204의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 159의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 161의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 139의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 4, 5 또는 6의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 75의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 138의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 163의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 165의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 167의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 169의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 205의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 140의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 160의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 74의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 1, 2 또는 3의 VH를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 하기를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다:
SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL;
SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL; 또는
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 133, 134, 135, 136, 308, 316, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 404, 405, 406, 407, 408 또는 409의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 149, 150, 151, 152, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422. 423, 424 또는 425의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 354의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 221의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 360의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 SEQ ID NO: 354, 221 및 360의 폴리펩티드 서열 벡터를 제공한다.
특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 367의 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 303의 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 373의 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 367, 303 및 373의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 361의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 221의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 362의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 370의 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 303의 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정 실시형태에서, 벡터는 SEQ ID NO: 374의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
본 발명은 또한 본 발명의 하나 이상의 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. "숙주 세포"는 벡터가 도입된 세포를 지칭한다. 용어 숙주 세포는 특정 대상 세포뿐만 아니라 그러한 세포의 자손, 그리고 또한 특정 대상 세포로부터 생성된 안정한 세포주를 지칭하고자 함이 이해된다. 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 후세대에서 소정의 변형이 일어날 수 있기 때문에, 그러한 후손은 부모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 여전히 본원에 사용되는 용어 "숙주 세포"의 범위 내에 포함된다. 그러한 숙주 세포는 진핵 세포, 원핵 세포, 식물 세포 또는 고세균(archeal) 세포일 수 있다. 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 간균강(bacilli), 예컨대 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 및 다른 장내세균과(enterobacteriaceae), 예컨대 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia), 및 다양한 슈도모나스(Pseudomonas) 종이 원핵 숙주 세포의 예이다. 다른 미생물, 예컨대 효모가 또한 발현에 유용하다. 사카로미세스(Saccharomyces)(예를 들어, S. 세레비시아이(S. cerevisiae)) 및 피키아(Pichia)가 적절한 효모 숙주 세포의 예이다. 예시적인 진핵 세포는 포유동물, 곤충, 조류 또는 다른 동물 기원의 것일 수 있다. 포유류 진핵 세포는 불멸화 세포주, 예컨대 하이브리도마 또는 골수종 세포주, 예컨대 SP2/0(미국 버지니아주 머내서스 소재의 ATCC(American Type Culture Collection), CRL-1581), NS0(영국 윌트셔주 솔즈베리 소재의 ECACC(European Collection of Cell Cultures), ECACC No. 85110503), FO(ATCC CRL-1646) 및 Ag653(ATCC CRL-1580) 뮤린 세포주를 포함한다. 예시적인 인간 골수종 세포주는 U266(ATTC CRL-TIB-196)이다. 다른 유용한 세포주는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 예를 들어 CHO-K1SV(미국 메릴랜드주 워커스빌 소재의 Lonza Biologics), CHO-K1(ATCC CRL-61) 또는 DG44로부터 유래된 것을 포함한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2 결합 단백질의 생성 방법으로서, 본 개시내용의 숙주 세포를 hK2 결합 단백질이 발현되는 조건에서 배양하고, 숙주 세포에 의해 생성된 hK2 결합 단백질을 회수하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 단백질 제조 방법 및 그의 정제 방법이 알려져 있다. 일단(화학적으로 또는 재조합적으로) 합성되면, hK2 결합 단백질은 황산암모늄 침전, 친화성 컬럼, 컬럼 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 정제, 겔 전기영동 등을 포함한 표준 절차에 따라 정제될 수 있다(전반적으로 문헌[Scopes, Protein Purification (Springer- Verlag, N.Y., (1982))] 참조). 대상 단백질은 실질적으로 순수할 수 있으며, 예를 들어 적어도 약 80% 내지 85% 순수하거나, 적어도 약 85% 내지 90% 순수하거나, 적어도 약 90% 내지 95% 순수하거나, 또는 적어도 약 98% 내지 99%, 또는 그 이상으로 순수할 수 있는데, 예를 들어 대상 단백질 이외의 세포 잔해, 거대분자 등과 같은 오염물이 없다.
본 개시내용의 hK2 결합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 표준 분자 생물학 방법을 사용하여 벡터 내로 혼입될 수 있다. 숙주 세포 형질전환, 배양, 항체 발현 및 정제는 잘 알려진 방법을 사용하여 행해진다.
변형된 뉴클레오티드를 사용하여 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드를 생성할 수 있다. 예시적인 변형된 뉴클레오티드는 5-플루오로우라실, 5-브로모우라실, 5-클로로우라실, 5-요오도우라실, 하이포크산틴, 크산틴, 4-아세틸시토신, 5-(카르복시하이드록시메틸) 우라실, 카르복시메틸아미노메틸-2-티오우리딘, 5-카르복시메틸아미노메틸우라실, 다이하이드로우라실, N6-치환된 아데닌, 7-메틸구아닌, 5-메틸아미노메틸우라실, 5-메톡시아미노메틸-2-티오우라실, 베타-D-만노실퀘오신, 5″-메톡시카르복시메틸우라실, 5-메톡시우라실, 2-메틸티오-N6-아이소펜테닐아데닌, 우라실-5-옥시아세트산(v), 위부톡소신, 슈도우라실, 퀘오신, 베타-D-갈락토실퀘오신, 이노신, N6-아이소펜테닐아데닌, 1-메틸구아닌, 1-메틸이노신, 2,2-다이메틸구아닌, 2-메틸아데닌, 2-메틸구아닌, 3-메틸시토신, 5-메틸시토신, 2-티오시토신, 5-메틸-2-티오우라실, 2-티오우라실, 4-티오우라실, 5-메틸우라실, 우라실-5-옥시아세트산 메틸에스테르, 3-(3-아미노-3-N-2-카르복시프로필) 우라실, 및 2,6-다이아미노퓨린이다.
약학 조성물/투여
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2 결합 단백질 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
치료적 용도를 위하여, 본 개시내용의 hK2 결합 단백질은 약학적으로 허용되는 담체 중에 활성 성분으로서 항체의 유효량을 함유하는 약학 조성물로서 제조될 수 있다. "담체"는 본 발명의 항체와 함께 투여되는 희석제, 애쥬번트(adjuvant), 부형제, 또는 비히클을 지칭한다. 그러한 비히클은 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것들, 예컨대 낙화생유, 대두유, 광유, 참기름 등을 포함하는, 물 및 오일과 같은 액체일 수 있다. 예를 들어, 0.4% 염수 및 0.3% 글리신이 사용될 수 있다. 이들 용액은 무균성이고 일반적으로 미립자 물질이 없다. 이들은 통상적인 잘 알려진 멸균 기법(예를 들어, 여과)에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 안정화제, 증점제, 윤활제 및 착색제 등과 같은 생리학적 조건을 근사화하는 데 필요한 약학적으로 허용되는 보조 물질을 함유할 수 있다. 이러한 약학 제형에서 본 발명의 항체의 농도는 약 0.5 중량% 미만부터, 통상 적어도 약 1 중량%까지, 많게는 15 또는 20 중량%까지 변동될 수 있으며, 선택된 투여 방식에 따라, 필요 용량, 유체 부피, 점도 등에 기초하여 주로 선택될 수 있다. 다른 인간 단백질, 예를 들어 인간 혈청 알부민을 포함하는 적합한 비히클 및 제형이, 예를 들어 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Troy, D.B. ed., Lipincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA 2006, Part 5, Pharmaceutical Manufacturing pp 691-1092, 특히 pp. 958-989 참조]에 기재되어 있다.
본 개시내용의 hK2 결합 단백질의 투여 방식은 비경구 투여, 예를 들어 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내 또는 피하, 경점막(구강, 비강내, 질내, 직장) 또는 당업자에 의해 이해되는 다른 수단과 같은 임의의 적합한 경로일 수 있으며, 이는 당업계에 잘 알려진 바와 같다.
본 개시내용의 실시형태에서, CAR-발현 세포는 조성물, 예를 들어 CAR-발현 세포 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 적합한 약학 조성물(들)로 제공될 수 있다. 일 양태에서, 본 개시내용은 약학 조성물을 제공하며, 상기 약학 조성물은 기재된 CAR들 중 하나 이상을 발현하는 림프구의 유효량 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함한다. 본 개시내용의 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 또는 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제와 조합하여, 본원에 기재된 바와 같은 CAR-발현 세포, 예를 들어 복수의 CAR-발현 세포를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 활성 성분 이외의, 대상체에게 비독성인 약학 조성물 내의 성분일 수 있다.
약학적으로 허용되는 담체는 완충제, 부형제, 안정제, 또는 방부제를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체의 예에는 생리학적으로 상용성인 용매, 분산 매질, 코팅, 항세균제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등, 예컨대 염, 완충제, 산화방지제, 당류, 수성 또는 비수성 담체, 방부제, 습윤제, 계면활성제 또는 유화제, 또는 이들의 조합이 있다. 약학 조성물 중 약학적으로 허용되는 담체(들)의 양은 담체(들)의 활성 및 제형의 원하는 특성, 예컨대 안정성 및/또는 최소 산화를 기반으로 실험적으로 결정될 수 있다.약학 조성물과 관련하여 본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용되는"은 동물 및/또는 인간에서 사용하기 위해 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 열거됨을 의미한다.
치료 방법 및 용도
본 개시내용은 또한 hK2 발현 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 hK2 발현 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 hK2 발현 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 hK2 발현 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 hK2 발현 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 면역접합체의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 hK2 발현 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 약학 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 림프구 주입을 사용하여 암에 걸리거나 암에 걸릴 위험이 있는 대상체의 치료를 위해 CAR을 발현하는 유전적으로 변형된 T 세포를 투여하는 방법을 제공한다.
적어도 하나의 실시형태에서, 자가 림프구 주입이 치료에 사용된다. 자가 PBMC는 치료를 필요로 하는 대상체로부터 수집되고 T 세포는 본원에 기재되고 당업계에 공지된 방법을 사용하여 활성화 및 확장된 다음 대상체에 다시 주입된다.
일 양태에서, 본 개시내용은 일반적으로 암이 발병할 위험이 있는 대상체의 치료에 관한 것이다. 본 발명은 또한 화학요법 및/또는 면역요법이 대상체에서 유의한 면역억제를 야기하여 대상체에서 암이 발병할 위험을 증가시키는 악성종양 또는 자가면역 질환을 치료하는 것을 포함한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 대상체에게 투여하여 비암성 병태를 치료하는 것을 포함하는 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질을 대상체에게 투여하여 비암성 병태를 치료하는 것을 포함하는 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질을 대상체에게 투여하여 비암성 병태를 치료하는 것을 포함하는 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 면역접합체를 대상체에게 투여하여 비암성 병태를 치료하는 것을 포함하는 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 약학 조성물을 대상체에게 투여하여 비암성 병태를 치료하는 것을 포함하는 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 CAR을 대상체에게 투여하여 비암성 병태를 치료하는 것을 포함하는 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, 암 병태가 발병할 위험이 있는 대상체는 전립선 비대증을 갖는다.
일부 실시형태에서, 암 병태가 발병할 위험이 있는 대상체는 양성 전립선 비대증(BPH)을 갖는다.
일부 실시형태에서, 암성 병태가 발병할 위험이 있는 대상체는 진단된 전립선암의 부재 하에 높은 PSA 수준을 갖는다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인의 치료적 유효량을 hK2 발현 암을 예방하기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질의 치료적 유효량을 hK2 발현 암을 예방하기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 hK2 발현 암을 예방하기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR의 치료적 유효량을 hK2 발현 암을 예방하기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 면역접합체의 치료적 유효량을 hK2 발현 암을 예방하기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 약학 조성물의 치료적 유효량을 hK2 발현 암을 예방하기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 암을 예방하는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질을 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질을 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 시간 동안 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 CAR을 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 면역접합체를 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 개시내용은 또한 본 개시내용의 약학 조성물을 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, hK2 발현 암은 전립선암이다.
일부 실시형태에서, hK2 발현 암은 전립선 유래 암이다.
일부 실시형태에서, hK2 발현 암은 뼈로 전이되었다.
일부 실시형태에서, hK2 발현 암은 유방암이다.
일부 실시형태에서, hK2 발현 암은 안드로겐 수용체(AR) 발현 유방암이다.
일부 실시형태에서, 전립선암은 재발성, 불응성, 악성 또는 거세 저항성 전립선암, 또는 이들의 임의의 조합이다.
일부 실시형태에서, 유방암은 재발성, 불응성 또는 악성 유방암, 또는 이들의 임의의 조합이다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 전립선암을 치료하기에 충분한 시간 동안 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 전립선암을 치료하는 방법을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL;
SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL; 또는
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 전립선암을 치료하기에 충분한 시간 동안 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 전립선암을 치료하는 방법을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 133, 134, 135, 136, 308, 316, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 404, 405, 406, 407, 408 또는 409의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 유방암을 치료하기에 충분한 시간 동안 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 유방암을 치료하는 방법을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL;
SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL;
SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL; 또는
SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL.
본 개시내용은 또한 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 유방암을 치료하기에 충분한 시간 동안 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 유방암을 치료하는 방법을 제공하며, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 133, 134, 135, 136, 308, 316, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 404, 405, 406, 407, 408 또는 409의 아미노산 서열을 포함한다.
본 개시내용은 또한 림프구 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 전립선암을 치료하기에 충분한 시간 동안 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 전립선암을 치료하는 방법을 제공하며, 림프구 항원에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 116의 HCDR1, SEQ ID NO: 117의 HCDR2, SEQ ID NO: 118의 HCDR3, SEQ ID NO: 119의 LCDR1, SEQ ID NO: 120의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 121의 LCDR3;
SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 260의 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3.
본 개시내용은 또한 림프구 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 전립선암을 치료하기에 충분한 시간 동안 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 전립선암을 치료하는 방법을 제공하며, 림프구 항원에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 249의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 250의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 252의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 253의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 254의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 157의 VL.
본 개시내용은 또한 림프구 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 유방암을 치료하기에 충분한 시간 동안 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 유방암을 치료하는 방법을 제공하며, 림프구 항원에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 116의 HCDR1, SEQ ID NO: 117의 HCDR2, SEQ ID NO: 118의 HCDR3, SEQ ID NO: 119의 LCDR1, SEQ ID NO: 120의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 121의 LCDR3;
SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 260의 LCDR3; 또는
SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3.
본 개시내용은 또한 림프구 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질의 치료적 유효량을 유방암을 치료하기에 충분한 시간 동안 대상체에 투여하는 것을 포함하는 대상체에서 유방암을 치료하는 방법을 제공하며, 림프구 항원에 결합하는 항원 결합 도메인은 하기를 포함한다:
SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 249의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 250의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 252의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 253의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 254의 VL; 또는
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 157의 VL.
일 양태에서, 본 개시내용은 암의 예방 방법을 제공하며, 상기 방법은 기재된 CAR들 중 하나 이상을 발현하는 림프구의 양을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 기재된 CAR들 중 하나 이상을 발현하는 림프구의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써, 림프구가 대상체에서 암 세포의 사멸을 유도하게 하거나 조절하게 하는 것을 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 암을 갖는 대상체에서 종양 부하를 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 기재된 CAR들 중 하나 이상을 발현하는 림프구의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써, 림프구가 대상체에서 암 세포의 사멸을 유도하게 하는 것을 포함한다. 다른 양태에서, 본 개시내용은 암을 갖는 대상체의 생존을 증가시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 기재된 CAR들 중 하나 이상을 발현하는 림프구의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써, 상기 대상체의 생존을 연장시키는 것을 포함한다. 일반적으로, CAR(들)을 발현하는 림프구는 대상체에서 암 세포의 사멸을 유도하고, 대상체에서 종양/암 세포의 감소 또는 근절을 가져온다. 표적화될 수 있는 전이성 병변을 포함하는 암의 비제한적인 목록은 전립선암 및 유방암, 및 이들의 조합을 포함한다. 일 실시형태에서, 대상체에서 치료되는 암은 전립선암 및 유방암이다.
일 양태에서, 본원에 기재된 방법은 예를 들어 진단된 전립선암이 없는 상태에서 전립선 비대 및 높은 PSA 수준과 같은 암 병태로 발병할 위험이 있는 비암성 병태의 치료에 적용 가능하다.
일 양태에서, 암을 갖는 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 hK2 항원에 결합하는 세포외 항원-결합 도메인을 갖는 CAR을 발현하는 림프구의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써, 림프구가 대상체에서 암 세포의 사멸을 유도하게 하는 것을 포함한다. 일부 실시형태에서, CAR들 중 적어도 하나는 SEQ ID NO: 46-61로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
일 양태에서, 암 세포의 표적화된 사멸의 방법이 개시되며, 상기 방법은 상기 암 세포를 기재된 CAR들 중 하나 이상을 발현하는 림프구와 접촉시킴으로써, 림프구가 암 세포의 사멸을 유도하게 하는 것을 포함한다. 표적화될 수 있는 전이성 암 세포를 포함하는 암 세포의 비제한적인 목록은 전립선암 및 이들의 조합을 포함한다. 일 실시형태에서, 암 세포는 전립선암 세포이다.
치료적 유효량이 지시될 때, 투여되는 본 개시내용의 CAR 또는 CAR-T의 정확한 양은 대상체의 연령, 체중, 종양 크기, 감염 또는 전이의 정도, 및 병태의 개체 차이를 고려하여 의사에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로, 본원에 기재된 T 세포를 포함하는 약학 조성물은 약 104 내지 약 1010개의 세포/㎏ 체중, 일부 경우에는 약 105 내지 약 106개의 세포/㎏ 체중의 투여량으로 투여될 수 있는 것으로 언급될 수 있으며, 이때 상기 투여량은 그러한 범위 내의 모든 정수 값을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 T 세포를 포함하는 약학 조성물은 약 106 세포/㎏ 체중의 투여량으로 투여될 수 있다. T 세포 조성물은 또한 이들 투여량으로 다회 투여될 수 있다. 세포는 면역요법에서 일반적으로 알려진 주입 기법을 사용하여 투여될 수 있다(예를 들어, 문헌[Rosenberg et al., New Eng . J. of Med . 319:1676, 1988] 참조).
본 발명의 CAR-T와 관련하여 유용한 전달 시스템은 시한 방출(time-released), 지연 방출, 및 지속 방출 전달 시스템을 포함할 수 있으며, 이에 따라 T 세포 조성물의 전달은 치료하고자 하는 부위의 감작화 전에 그리고 이를 결과하기에 충분한 시간을 두고서 일어난다. 조성물은 다른 치료제 또는 요법과 함께 사용될 수 있다. 그러한 시스템은 조성물의 반복 투여를 피할 수 있으며, 그럼으로써 대상체 및 의사에 대한 편의성을 증가시킬 수 있고, 본 발명의 특정의 조성물 실시형태에 특히 적합할 수 있다.
많은 유형의 방출 전달 시스템이 입수가능하며 당업자에게 알려져 있다. 이들은 폴리(락타이드-글리콜라이드), 코폴리옥살레이트, 폴리에스테르아미드, 폴리오르토에스테르, 폴리카프로락톤, 폴리하이드록시부티르산, 및 폴리무수물과 같은 중합체 기반 시스템을 포함한다. 약물을 함유하는 전술한 중합체의 마이크로캡슐은, 예를 들어, 미국 특허 제5,075,109호에 기재되어 있다. 전달 시스템은 또한 스테롤, 예컨대 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르, 및 지방산 또는 중성 지방, 예컨대 모노-, 다이-, 및 트라이-글리세라이드를 포함하는 지질인 비-중합체 시스템; 실라스틱 시스템(sylastic system); 펩티드 기반 시스템; 하이드로겔 방출 시스템; 왁스 코팅; 종래의 결합제 및 부형제를 사용하는 압축 정제; 부분적으로 융합된 임플란트 등을 포함한다. 구체적인 예는 하기를 포함하지만 이에 한정되지 않는다: (a) 활성 조성물이 미국 특허 제4,452,775호; 제4,667,014호; 제4,748,034호; 및 제5,239,660호에 기재된 바와 같은 매트릭스 내에 형태로 함유되어 있는 침식 시스템 및 (b) 활성 성분이 미국 특허 제3,854,480호 및 미국 특허 제3,832,253호에 기재된 바와 같은 중합체로부터 제어된 속도로 침투하는 확산 시스템. 또한, 펌프-기반 하드웨어 전달 시스템이 사용될 수 있으며, 이들 중 일부는 삽입을 위해 조정된다.
특정 양태에서, 활성화된 T 세포를 대상체에게 투여하고, 이어서 후속으로 혈액을 재채혈하고(또는 성분채집술이 수행되고), 본 개시내용에 따라 T 세포를 활성화시키고, 이들 활성화되고 확장된 T 세포를 대상체에게 재주입하는 것이 바람직할 수 있다. 이 과정은 매 수주마다 다회 수행될 수 있다. 특정 양태에서, T 세포는 10 cc 내지 400 cc의 채혈물로부터 활성화될 수 있다. 특정 양태에서, T 세포는 20 cc, 30 cc, 40 cc, 50 cc, 60 cc, 70 cc, 80 cc, 90 cc, 또는 100 cc의 채혈물로부터 활성화된다.
CAR-T 세포 및 조성물의 투여는 임의의 방식으로, 예를 들어 비경구 투여 또는 비경구 이외의 투여에 의해 수행될 수 있으며, 이에는 에어로졸 흡입, 주사, 주입, 섭취, 수혈, 삽입 또는 이식에 의한 투여가 포함된다. 예를 들어, 본원에 기재된 CAR-T 세포 및 조성물은 환자에게 동맥 경유(trans-arterially), 피내, 피하, 종양내, 수내, 결절내, 근육내, 정맥내(i.v.) 주사에 의해, 또는 복막내 투여될 수 있다. 일 양태에서, 본 개시내용의 조성물은 i.v. 주사에 의해 투여된다. 일 양태에서, 본 발명의 조성물은 대상체에게 피내 또는 피하 주사에 의해 투여된다. T 세포의 조성물은, 예를 들어, 종양, 림프절, 조직, 기관, 또는 감염 부위 내로 직접 주사될 수 있다.
투여는 자가 또는 비자가일 수 있다. 예를 들어, 인간 칼리크레인-2(예를 들어, hK2)-특이적 CAR을 발현하는 면역반응성 세포가 하나의 대상체로부터 수득되고, 동일한 대상체 또는 상이한 양립가능한 대상체에게 투여될 수 있다. 본 개시내용의 말초 혈액 유래 T 세포, 또는 확장된 T 세포(예를 들어, 생체내, 생체외 또는 시험관내 유래)는, 예를 들어 정맥내 주사, 국부 주사, 전신 주사, 카테터 투여, 또는 비경구 투여를 통해 투여될 수 있다.
특정 실시형태에서, 대상체는 백혈구성분채집술(leukapheresis)을 거칠 수 있는데, 여기서는 백혈구를 생체외에서 수집하거나, 풍부화하거나, 또는 고갈시켜 관심 세포, 예를 들어 T 세포를 선택 및/또는 단리한다. 이들 T 세포 단리물은 당업계에 알려진 방법에 의해 확장되고, 본 개시내용의 하나 이상의 CAR 작제물이 도입되어 CAR-T 세포를 생성할 수 있도록 처리될 수 있다. 후속으로, 이를 필요로 하는 대상체는 고용량 화학요법 후에 말초 혈액 줄기 세포 이식을 이용한 표준 치료를 받을 수 있다. 특정 양태에서, 이식 후에 또는 이식과 동시에, 대상체는 확장된 CAR-T 세포의 주입을 제공받는다. 일 양태에서, 확장된 세포는 수술 전 또는 수술 후에 투여된다.
악성종양을 갖는 환자에게 투여되는 투여량은 치료되는 질환을 경감시키거나 적어도 부분적으로 정지시키기에 충분하다("치료적 유효량"). 대상체에게 투여되는 상기 치료제의 투여량은 치료되는 병태의 정확한 성질 및 치료제의 수용자에 따라 변동될 것이다. 인간 투여를 위한 투여량의 규모는 당업계에서 대체로 허용되는 실무에 따라 수행될 수 있다.
본 발명의 CAR T 세포는 생체내 T 세포 확장을 거칠 수 있고, 혈액 및 골수 중에서 연장된 시간 동안 고수준으로 지속되는 hK2-특이적 기억 세포를 확립할 수 있다. 일부 경우에, 대상체 내로 주입된 본 발명의 CAR T 세포는 진행성 화학요법-저항성 암을 갖는 대상체의 생체내에서 암 세포, 예를 들어 전립선암 세포를 제거할 수 있다.
일 실시형태에서, 본 개시내용의 CAR은, 예를 들어 시험관내 전사를 사용하여 T 세포 내로 도입되고, 대상체(예를 들어, 인간)는 본 개시내용의 CAR-T 세포의 초기 투여, 및 CAR-T 세포의 1회 이상의 후속 투여를 제공받으며, 여기서 1회 이상의 후속 투여는 이전 투여 후 15일, 예를 들어 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 또는 2일 미만에 투여된다. 일 실시형태에서, CAR-T 세포의 주당 1회 초과의 투여가 대상체(예를 들어, 인간)에게 투여되며, 예를 들어 CAR-T 세포의 주당 2, 3, 또는 4회 투여가 투여된다. 일 실시형태에서, 대상체는 CAR-T 세포의 주당 1회 초과의 투여(예를 들어, 주당 2, 3 또는 4회 투여)(본원에서 주기로도 지칭됨)를 받은 후, 1주간 CAR-T 세포 투여가 없으며, 이어서 CAR-T 세포의 1회 이상의 추가의 투여(예를 들어, CAR-T 세포의 주당 1회 초과의 투여)가 대상체에게 투여된다. 다른 실시형태에서, 대상체는 1회 초과의 주기의 CAR-T 세포를 제공받고, 매 주기 사이의 시간은 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 또는 3일 미만이다. 일 실시형태에서, CAR-T 세포는 주당 3회 투여를 위해 격일로 투여된다. 일 실시형태에서, CAR-T 세포는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8주 또는 그 이상의 주 동안 투여된다.
일 실시형태에서, 투여는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 5주, 6주, 7주, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월 또는 그 이상 후에 반복될 수 있다. 만성 투여인 바와 같이, 반복된 치료 과정이 또한 가능하다. 반복 투여는 동일한 용량으로 또는 상이한 용량으로 행해질 수 있다.
CAR-T 세포는 본 발명의 방법에서 유지 요법(maintenance therapy)에 의해, 예를 들어 6개월 또는 그 이상의 기간 동안 주 1회 투여될 수 있다.
일 실시형태에서, CAR-T 세포는 렌티바이러스 바이러스 벡터, 예컨대 렌티바이러스를 사용하여 생성된다. 그러한 바이러스 벡터를 사용하여 생성된 CAR-T 세포는 일반적으로 안정한 CAR 발현을 가질 것이다.
일 실시형태에서, CAR-T 세포는 형질도입 후 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15일 동안 CAR 벡터를 일시적으로 발현한다. CAR의 일시적 발현은 RNA CAR 벡터 전달에 의해 영향을 받을 수 있다. 일 실시형태에서, CAR RNA는 전기천공에 의해 T 세포 내로 형질도입된다.
환자가 일시적 CAR 요법의 과정 동안 항-CAR 항체 반응을 발생시킬 위험이 높은 경우(예컨대, RNA 형질도입에 의해 생성된 것들), CAR-T 주입 중단은 10일 초과 내지 14일 동안 지속되어서는 안 된다.
조합 요법
본 개시내용의 hK2 결합 단백질은 적어도 하나의 추가 치료제와 조합으로 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 적어도 하나의 추가 치료제는 수술, 화학요법, 안드로겐 박탈 요법 또는 방사선, 또는 이들의 임의의 조합이다.
일부 실시형태에서, 하나의 치료의 전달은 제2의 전달이 시작될 때 여전히 일어나고 있으며, 이로써 투여의 관점에서 중첩이 있다. 이는 때때로 본원에서 "동시" 또는 "병행적 전달"로 지칭된다. 다른 실시형태에서, 하나의 치료의 전달은 다른 하나의 치료의 전달이 시작되기 전에 종료된다. 어느 경우든 일부 실시형태에서, 치료는 조합된 투여 때문에 더 효과적이다. 예를 들어, 제2 치료는 더 효과적인데, 예를 들어 더 적은 제2 치료에 대해 동등한 효과가 관찰되거나, 제2 치료는 제1 치료의 부재 하에 제2 치료가 투여되었을 경우에 관찰되는 것보다 더 큰 정도로 증상을 감소시키거나, 또는 유사한 상황이 제1 치료에 대해서도 관찰된다. 일부 실시형태에서, 전달은 증상의 감소 또는 장애와 관련된 다른 파라미터의 감소가, 하나의 치료가 다른 하나의 치료의 부재 하에 전달되는 경우에 관찰되는 것보다 더 크도록 행해진다. 2개의 치료의 효과는 부분적으로 상가적이거나, 전체적으로 상가적이거나, 또는 상가적인 것보다 더 클 수 있다. 전달은, 전달되는 제1 치료의 효과가, 제2 치료가 전달될 때 여전히 검출가능하도록 행해질 수 있다.
일 실시형태에서, 인자와 같은 다른 치료제는 인터류킨, 뿐만 아니라 콜로니 자극 인자, 예컨대 G-, M- 및 GM-CSF 및 인터페론을 포함하지만 이에 한정되지 않는 CAR-T 세포와 같은 hK2 결합 단백질 이전, 이후, 또는 이와 동일한 시간에(동시에) 투여될 수 있다.
본원에 기재된 CAR-발현 세포와 같은 hK2 결합 단백질 및 적어도 하나의 추가 치료제는 동시에, 동일하거나 별개의 조성물로, 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 순차적 투여의 경우, 본원에 기재된 CAR-발현 세포와 같은 hK2 결합 단백질이 먼저 투여될 수 있고, 추가 제제가 두 번째로 투여될 수 있거나, 투여 순서가 역전될 수 있다.
추가 실시형태에서, 본원에 기재된 CAR-발현 세포와 같은 hK2 결합 단백질은 수술, 방사선, 화학요법, 면역억제제, 항체 또는 기타 면역제거제(immunoablative agent)와 조합으로 치료 요법에서 사용될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 본원에 기재된 CAR-발현 세포와 같은 hK2 결합 단백질은 항-안드로겐 치료와 조합으로 사용될 수 있다. 일 실시형태에서, 대상체에는 CAR-발현 세포의 활성을 향상시키는 작용제가 투여될 수 있다. 예를 들어, 일 실시형태에서, 제제는 억제 분자를 억제하는 제제일 수 있다.
이중특이적 실시형태
본 발명의 이중특이적 hk2/CD3 항체의 실시형태가 하기에 제공된다.
KLCB91
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 275, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 136의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 351의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
KLCB105
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 136의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 351의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
KLCB95
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 134의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 352의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
KLCB96
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 134의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 352의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
KLCB170
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 325의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 353의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
KLCB80
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 354의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함한다.
KLCB81
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 444의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 355의 HC1, SEQ ID NO: 223의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함한다.
KLCB113
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 356의 HC1, SEQ ID NO: 222의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함한다.
KLCB281
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 325의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 353의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
KLCB174
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 316의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 357의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함한다.
KLCB153
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 316의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 151의 VL을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 357의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함한다.
KLCB245
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하며, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 한 실시형태에 따르면, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함한다. 한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질은 SEQ ID NO: 361의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 362의 HC2를 포함한다.
하기 실시예는 본원에 개시된 실시형태들 중 일부를 추가로 설명하기 위해 제공된다. 실시예는 개시된 실시형태를 예시하고자 하는 것으로서, 이를 한정하고자 하는 것은 아니다.
번호가 매겨진 실시형태
본 개시내용은 또한 다음의 번호가 매겨진 실시형태를 제공한다:
1.
칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질로서, 상기 항원 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 단리된 단백질.
2.
실시형태 1에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VH를 포함하는, 단리된 단백질.
3.
실시형태 2에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 162의 VH를 포함하는, 단리된 단백질.
4.
실시형태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VL을 포함하는, 단리된 단백질.
5.
실시형태 4에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하는, 단리된 단백질.
6.
실시형태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 Fab인, 단리된 단백질.
7.
실시형태 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 단백질이 반감기 연장 모이어티에 접합되고, 반감기 연장 모이어티는 면역글로불린(Ig), Ig의 단편, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편인, 단리된 단백질.
8.
실시형태 7에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편이 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 감소된 결합을 야기하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하며, 선택적으로 FcγR에 대한 단백질의 감소된 결합을 야기하는 돌연변이는 L234A_L235A_D265S인, 단리된 단백질.
9.
실시형태 7 또는 8에 있어서, 단백질이 Ig 불변 영역의 CH3 도메인에 적어도 하나의 돌연변이를 포함하며, 선택적으로 Ig 불변 영역의 CH3 도메인에서의 돌연변이는 T350V_T366L_K392L_T394W인, 단리된 단백질.
10.
실시형태 7 내지 9 중 어느 하나에 있어서, IgG 중쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
11.
실시형태 9에 있어서, IgG 중쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
12.
실시형태 7 내지 11 중 어느 하나에 있어서, IgG 경쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 309의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
13.
실시형태 12에 있어서, IgG 경쇄 불변 영역이 SEQ ID NO: 309의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
14.
실시형태 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질이 SEQ ID NO: 354와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 HC를 포함하는, 단리된 단백질.
15.
실시형태 14에 있어서, 단리된 단백질이 SEQ ID NO: 354의 HC를 포함하는, 단리된 단백질.
16.
실시형태 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질이 SEQ ID NO: 221과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 LC를 포함하는, 단리된 단백질.
17.
실시형태 16에 있어서, 단리된 단백질이 SEQ ID NO: 221의 LC를 포함하는, 단리된 단백질.
18.
실시형태 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 단리된 단백질이 다중특이적 단백질인, 단리된 단백질.
19.
실시형태 18에 있어서, 다중특이적 단백질이 이중특이적 단백질인, 단리된 단백질.
20.
실시형태 18 또는 19에 있어서, 림프구 상의 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는, 다중특이적 단백질.
21.
실시형태 20에 있어서, 림프구가 T 세포인, 다중특이적 단백질.
22.
실시형태 21에 있어서, T 세포가 CD8+ T 세포인, 다중특이적 단백질.
23.
실시형태 22에 있어서, 림프구가 자연 살해(NK) 세포인, 다중특이적 단백질.
24.
실시형태 20 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 림프구 상의 항원이 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 또는 NKG2C인, 다중특이적 단백질.
25.
실시형태 24에 있어서, 림프구 상의 항원이 CD3ε인, 다중특이적 단백질.
26.
실시형태 25에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 다중특이적 단백질:
a.
SEQ ID NO: 116의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), SEQ ID NO: 117의 HCDR2, SEQ ID NO: 118의 HCDR3, SEQ ID NO: 119의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SEQ ID NO: 120의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 121의 LCDR3; 또는
b.
SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL.
27.
실시형태 25에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 157의 VL을 포함하는, 다중특이적 단백질.
28.
실시형태 25에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 다중특이적 단백질:
a.
SEQ ID NO: 255의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 260의 LCDR3; 또는
b.
SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3; 또는
c.
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 249의 VL; 또는
d.
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 250의 VL; 또는
e.
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL; 또는
f.
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 252의 VL; 또는
g.
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 253의 VL; 또는
h.
SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 254의 VL.
29.
실시형태 25에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3을 포함하는, 다중특이적 단백질.
30.
실시형태 29에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 248의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VH를 포함하는, 다중특이적 단백질.
31.
실시형태 30에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 248의 VH를 포함하는, 다중특이적 단백질.
32.
실시형태 29 내지 31 중 어느 하나에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 251의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VL을 포함하는, 다중특이적 단백질.
33.
실시형태 32에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함하는, 다중특이적 단백질.
34.
실시형태 25 내지 33 중 어느 하나에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 scFv인, 다중특이적 단백질.
35.
실시형태 34에 있어서, scFv가 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한, 다중특이적 단백질.
36.
실시형태 35에 있어서, scFv가 SEQ ID NO: 331의 scFv인, 다중특이적 단백질.
37.
실시형태 25 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 림프구 상의 항원에 결합하는 항원 결합 도메인이 반감기 연장 모이어티에 접합되고, 반감기 연장 모이어티는 면역글로불린(Ig), Ig의 단편, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편인, 다중특이적 단백질.
38.
실시형태 37에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편이 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 감소된 결합을 야기하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하며, 선택적으로 FcγR에 대한 단백질의 감소된 결합을 야기하는 돌연변이는 L234A_L235A_D265S인, 다중특이적 단백질.
39.
실시형태 37 또는 38에 있어서, 단백질이 Ig 불변 영역의 CH3 도메인에 적어도 하나의 돌연변이를 포함하며, 선택적으로 Ig 불변 영역의 CH3 도메인에서의 돌연변이는 T350V_L351Y_F405A_Y407V인, 다중특이적 단백질.
40.
실시형태 37 내지 39 중 어느 하나에 있어서, IgG 불변 영역이 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 다중특이적 단백질.
41.
실시형태 40에 있어서, IgG 불변 영역이 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하는, 다중특이적 단백질.
42.
실시형태 25 내지 41 중 어느 하나에 있어서, 단백질이 SEQ ID NO: 360의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 다중특이적 단백질.
43.
실시형태 42에 있어서, 단백질이 SEQ ID NO: 360의 아미노산 서열을 포함하는, 다중특이적 단백질.
44.
실시형태 25 내지 43 중 어느 하나에 있어서, 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 341, 448 및 449의 서열을 갖는 에피토프 내에서 CD3에 결합하는, 다중특이적 단백질.
45.
hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
46.
실시형태 45에 있어서, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인이 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VH를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
47.
실시형태 46에 있어서, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인이 SEQ ID NO: 162의 VH를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
48.
실시형태 45 내지 47 중 어느 하나에 있어서, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인이 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VL을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
49.
실시형태 48에 있어서, hK2에 결합하는 제1 결합 도메인이 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
50.
실시형태 45 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인이 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 scFv를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
51.
실시형태 50에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인이 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
52.
실시형태 45 내지 51 중 어느 하나에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 SEQ ID NO: 354의 HC1과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 HC1을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
53.
실시형태 52에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 SEQ ID NO: 354의 HC1을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
54.
실시형태 45 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 SEQ ID NO: 221의 LC1과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 LC1을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
55.
실시형태 54에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 SEQ ID NO: 221의 LC1을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
56.
실시형태 45 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 SEQ ID NO: 360의 HC2와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 HC2를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
57.
실시형태 56에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
58.
실시형태 52 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 HC1 및 HC2의 C-말단에 라이신(예를 들어, K477)을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
59.
실시형태 58에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 SEQ ID NO: 361의 HC1과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 HC1을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
60.
실시형태 59에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 SEQ ID NO: 361의 HC1을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
61.
실시형태 58 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 SEQ ID NO: 362의 HC2와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 HC2를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
62.
실시형태 61에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 SEQ ID NO: 362의 HC2를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
실시예
실시예 1. 항-hK2 항체 및 scFv의 생성
부모 m11B6 항체의 인간화로부터의 항체 생성.
부모 마우스 항-HK2 항체, m11B6은 문헌[
et al (Clinical Chemistry 50:9, 1607-1617 (2004))]에 기재되어 있다. 인간화 11B6(본원에서 hu11B6으로 지칭됨)이 생성되고 미국 특허 제9,345,782호 및 미국 특허 제10,100,125호에 기재되어 있다.
개선된 열안정성과 같은 개선된 특성을 갖는 추가의 항-HK2 항체를 생성하기 위한 hu11B6의 조작이 개시되었다. 잔기 위치는 모델링을 사용하여 hu11B6의 열안정성을 개선하기 위해 잠재적으로 변경될 수 있는 hu11B6 프레임워크에서 확인되었다. 확인된 위치는 VH에서 잔기 P41, I49, M70 및 A88이고 VL에서 S80, L82, A88 및 Y91이었다(SEQ ID NO: 5의 hu11B6_VH 및 SEQ ID NO: 2의 hu11B6_VL의 아미노산 서열에 따른 잔기 넘버링).
이원 조합 scFv 라이브러리는 가변 영역 중 하나가 조합 라이브러리를 나타내고 두 번째 영역이 부모 hu11B6 VH 또는 VL인 방향 VH-링커-VL로 생성되었다. GGSEGKSSGSGSESKSTGGS(SEQ ID NO: 7)의 링커 서열을 사용하여 VH/VL 영역을 접합시켰다. 조작된 scFv는 대장균에서 발현되었고 상청액에서 생성된 scFv는 ELISA에 의해 인간 hK2에 대한 결합에 대해 시험되었고 hu11B6의 결합과 비교되었다. hu11B6에 대하여 비슷한 결합을 나타내는 임의의 새로운 변이체를 통합하고 10분 동안 55℃, 60℃ 및 65℃에서 상청액을 배양한 후 인간 hK2에 대한 결합에 대해 추가로 시험하였다. 55℃, 60℃ 및 65℃에서 배양한 후 hu11B6에 대한 비슷한 결합이 유지되고 열안정성이 개선된 분자는 두 방향(VH-링커-VL; VL-링커-VH)으로 매트릭스화되었고 추가 특성화를 위해 포유동물 scFv로 전환되었다. 매트릭스화 scFv는 또한 CAR 작제물에 혼입되었고 실시예 11에 추가로 기재된 바와 같이 추가로 특성화되었다.
또한, 부모 마우스 11B6의 또 다른 인간화는 문헌[Singh et al(MAbs. 2015;7(4):778-91)]에 의해 개략적으로 설명한 접근 방식에 따라 광범위한 생식계열 변이 및 향상된 열 안정성을 위한 변이체의 신중한 스크리닝으로 수행되었다. 서열 보존에 기초하여, 인간 중쇄 생식계열 IGHV4-30 및 경쇄 생식계열 IGKV3D-11이 프레임워크 개작을 위해 선택되었다. 이원 scFv 라이브러리는 체세포 과돌연변이 부위의 선택 세트 및 마우스/인간 생식계열 변이를 포함하는 잔기로 구성되었다. 변이체는 위에서 기재한 바와 같이 대장균에서 클로닝되고 발현되었다. 향상된 열 안정성을 위해 단일 지점 ELISA에서 상청액을 각기 다른 온도에서 스크리닝하였다. 마우스/인간 키메라 11B6 scFv를 부모 대조군으로 사용하였다. 뮤린 11B6과 유사한 결합 활성을 유지하고 Tm 값이 67℃인 클론 KL2B359는 추가 프로파일링을 위해 scFv-Fc 및 CAR-T로 전환되었다. SPR에 의해 hK2에 대한 KL2B359의 측정된 친화도(KD)는 약 0.7 내지 1 nM이었다. HCF3-LCD6, HCG5-LCB7, KL2B357, KL2B358 및 KL2B360도 이 캠페인의 결과이며 기능에 대해 추가로 특성화되었다.
인간 면역글로불린 유전자위를 발현하는 형질전환 마우스(Ablexis®) 및 형질전환 래트(OmniRat®)를 사용한 항체 생성.
OmniRat®는 키메라 인간/래트 IgH 유전자위(22개의 인간 VH를 포함하며, 이들은 모두 래트 CH 유전자위에 연결된 천연 구성의 인간 D 및 JH 세그먼트임)를 완전 인간 IgL 유전자위(Jκ-Cκ에 연결된 12개의 Vκ 및 Jλ-Cλ에 연결된 16개의 Vλ)와 함께 함유한다. (예를 들어,문헌[Osborn, et al. (2013) J Immunol 190(4): 1481-1490] 참조). 따라서, 래트는 래트 면역글로불린의 감소된 발현을 나타내고, 면역화에 반응하여, 도입된 인간 중쇄 및 경쇄 도입유전자는 클래스 전환 및 체세포 돌연변이를 거쳐 완전한 인간 가변 영역을 갖는 고친화도 키메라 인간/래트 IgG 단일클론 항체를 생성한다. OmniRat®의 제조 및 사용, 및 이러한 래트에 의해 수행되는 게놈 변형은 국제공개 WO14/093908호에 기재되어 있다.
Alexis® 마우스는 인간 CH1 및 CL 도메인, 키메라 인간/마우스 힌지 영역 및 마우스 Fc 영역에 연결된 인간 가변 도메인을 갖는 항체를 생성한다. Alexis 카파 마우스 및 람다 마우스 균주는 중쇄 중 어느 것이 아래에 기술된 바와 같이 인간인지 또는 마우스인지에 따라 구별된다. 카파 마우스에 의해 생성된 항체에는 마우스 VH, DH 및 JH 엑손 및 마우스 Vκ, Jκ 및 Cκ 엑손으로부터 유래된 서열이 없다. 내인성 마우스 Igλ는 카파 마우스에서 활성화된다. 인간 Igκ 사슬은 나이브 레퍼토리의 대략 90 내지 95%를 구성하고 마우스 Igλ 사슬은 이 균주의 나이브 레퍼토리의 대략 5 내지 10%를 구성한다. 람다 마우스에 의해 생성된 항체에는 마우스 VH, DH 및 JH 엑손 및 마우스 Vλ, Jλ 및 Cλ 엑손으로부터 유래된 서열이 없다. 내인성 마우스 Igκ는 람다 마우스에서 활성화된다. 인간 Igλ 사슬은 나이브 레퍼토리의 대략 40%를 구성하고 마우스 Igκ 사슬은 나이브 레퍼토리의 대략 60%를 구성한다. Alexis®의 제조 및 사용, 및 이러한 마우스에 의해 수행되는 게놈 변형은 국제공개 WO11/123708호에 기재되어 있다.
Alexis 마우스 및 OmniRats 래트는 가용성 전장 KLK2 단백질(인간 칼리크레인-2 6-His 단백질)로 면역화되었다.
인간 칼리크레인-2 6-His 단백질
VPLIEGRIVGGWECEKHSQPWQVAVYSHGWAHCGGVLVHPQWVLTAAHCLKKNSQVWLGRHNLFEPEDTGQRVPVSHSFPHPLYNMSLLKHQSLRPDEDSSHDLMLLRLSEPAKITDVVKVLGLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLRPRSLQCVSLHYSEKVTEFMLCAGLWTGGKDTCGGDSGGPLVCNGVLQGITSWGPEPCALPEKPAVYTKVVHYRKWIKDTIAANPHHHHHH (SEQ ID NO: 454)
Ablexis 마우스 및 OniRats 래트로부터의 림프구를 림프절에서 추출하고 코호트에서 융합을 수행하였다. CD138 발현을 위해 세포를 합치고 분류하였다. 하이브리도마 스크리닝은 가용성 hK2 항원을 사용하여 고효율 소형 MSD 형식으로 수행되었다. 대략 300개 초과의 샘플이 hK2 결합제로 확인되었다. 인간 KLK2 단백질에 대한 300개 초과의 항-hKLK2 상청액 샘플의 결합은 Biacore 8K SPR에 의한 단일 주기 동역학 방법에 의해 측정되었다. 추가적으로 상청액 샘플은 또한 인간 KLK3 단백질에 대한 결합에 대해 시험되었다. 동시에, 상청액은 또한 유세포 분석에 의해 KLK2 발현 세포주 VCap 및 음성 세포주 DU145에 대한 결합에 대해 시험되었다. 선택된 세포 결합제는 위에서 설명한 VH-VL 및 VL/VH 방향 모두 및 열 안정성 시험에서 scFv 전환으로 이동되었다. KL2B413, KL2B30, KL2B53 및 KL2B242는 Alexis 마우스 면역화 캠페인의 결과였다. KL2B467 및 KL2B494는 OmniRat 면역화 캠페인의 결과였다.
위에서 설명한 다양한 면역화 및 인간화 캠페인을 통해 생성된 항체는 fab 형식, mAb 형식, VH-링커-VL 방향의 scFv 형식 또는 VL-링커-VH 방향의 scFv 형식으로 발현되었으며 아래에서 설명된 대로 추가 분석되었다. VH/VL 영역을 접합하기 위해 상기 기재된 SEQ ID NO: 7의 링커 서열을 사용하였다.
실시예 2. 항 KLK2 항체의 구조적 특성화
세포내 분석에서 가장 높은 성능을 보였던 항체 가변 도메인 및 scFv 항체 단편의 서열이 본원에 제공된다. 가변 도메인은 Fab 형식, VH-링커-VL 방향의 scFv 형식 또는 VL-링커-VH 방향의 scFv 형식으로 발현되었다.
가변 도메인 VH, VL 및 CDR
표 3은 선택된 항-hK2 항체의 VH 및 VL 아미노산 서열을 나타낸다. 표 4는 선택된 항-hK2 선택된 항체의 카바트 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 나타낸다. 표 5는 선택된 항-hK2 항체의 카바트 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 나타낸다. 표 6은 선택된 항-hK2 항체의 AbM HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 나타낸다. 표 7은 항-hK2의 AbM LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 나타낸다. 표 8은 선택된 hK2 항체의 가변 도메인 서열 및 SEQ ID NO를 요약한다. 표 9는 VH 및 VL 영역에 대한 단백질 및 DNA SEQ ID NO를 나타낸다.
[표 3]
[표 4]
[표 5]
[표 6]
[표 7]
[표 8]
[표 9]
SEQ ID NO:225 (m11B6 VH cDNA)
GATGTGCAGCTTCAGGAGTCTGGACCCGGACTTGTTAAACCAAGTCAGTCTCTGTCCCTGACCTGTACCGTCACCGGCAACAGCATCACAAGCGATTACGCATGGAACTGGATCAGGCAGTTCCCTGGAAATCGACTCGAATGGATGGGCTACATTTCATACTCCGGTTCAACCACTTACTCTCCATCCTTGAAATCTAGGTTCAGCATCACCCGTGATACCTCAAAGAACCAATTTTTTCTGCAACTGAATAGCGTAACTCCAGAGGACACAGCCACATATTTCTGCGCCACTGGGTATTACTATGGCTCAGGTTTCTGGGGTCAGGGCACTCTCGTCACCGTCAGCAGC
SEQ ID NO: 226 (hu11B6 VH cDNA)
CAGGTCCAACTGCAAGAGAGCGGACCGGGCCTGGTAAAGCCATCCGACACATTGTCCCTGACGTGTGCGGTAAGTGGAAACTCTATCACTAGCGACTATGCGTGGAATTGGATAAGACAACCGCCGGGCAAGGGGCTGGAATGGATAGGATATATCAGCTATTCCGGTTCTACGACATACAATCCTTCCCTGAAAAGCAGAGTCACTATGTCACGCGACACGTCCAAGAATCAGTTCTCATTGAAATTGTCATCCGTAACGGCCGTTGACACTGCGGTTTATTATTGCGCAACCGGATATTACTACGGCTCTGGTTTTTGGGGACAGGGAACACTTGTTACTGTTAGTTCA
SEQ ID:NO 227 (HCF3-LCD6 VH cDNA)
CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCAGGCCTGGTGAAGCCAAGCGACACCCTGAGCCTGACCTGCGCCGTGAGCGGCAACAGCATCACCAGCGACTACGCCTGGAACTGGATCCGCCAGTTCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTACATCAGCTACAGCGGCAGCACCACCTACAACCCAAGCCTGAAGAGCCGCGTCACCATCAGCCGCGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACCCCTGTGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCACCGGCTACTACTACGGCAGCGGCTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 228 (HCG5-LCB7 VH cDNA)
CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGCGGCCCAGGCCTGGTGAAGCCAAGCGACACCCTGAGCCTGACCTGCGCCGTGAGCGGCAACAGCATCACCAGCGACTACGCCTGGAACTGGATCCGCCAGTTCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGATGGGCTACATCAGCTACAGCGGCAGCACCACCTACAACCCAAGCCTGAAGAGCCGCGTCACCATCAGCCGCGACACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACCCCTGTGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCACCGGCTACTACTACGGCAGCGGCTTCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 229 (KL2B357, KL2B360 VH cDNA)
CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGACCAGGCCTGGTCAAGCCCTCTCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACCGTGTCCGGCAACTCCATCACCTCTGACTACGCCTGGAACTGGATTCGGCAGTTCCCTGGCAAGGGCCTTGAGTGGATCGGCTACATCTCCTACTCCGGTTCCACCACCTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGGTCACCATCTCCCGCGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCACCGGCTACTACTACGGCTCCGGCTTTTGGGGACAGGGCACACTGGTTACCGTGTCTAGT
SEQ ID NO: 230 (KL2B358 VH cDNA)
CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGACCAGGCCTGGTCAAGCCCTCTCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACCGTGTCCGGCAACTCCATCACCTCTGACTACGCCTGGAACTGGATTCGGCAGCCACCTGGCAAGGGCCTTGAGTGGATCGGCTACATCTCCTACTCCGGTTCCACCACCTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGGTCACCATCTCCCGCGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCACCGGCTACTACTACGGCTCCGGCTTTTGGGGACAGGGCACACTGGTTACCGTGTCTAGT
SEQ ID NO: 231 (KL2B359 VH cDNA)
CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGACCAGGCCTGGTCAAGCCCTCTCAGACCCTGTCTCTGACCTGTACCGTGTCCGGCAACTCCATCACCTCTGACTACGCCTGGAACTGGATTCGGCAGTTCCCTGGCAAGCGCCTTGAGTGGATCGGCTACATCTCCTACTCCGGTTCCACCACCTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGGTCACCATCTCCCGCGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCACCGGCTACTACTACGGCTCCGGCTTTTGGGGACAGGGCACACTGGTTACCGTGTCTAGT
SEQ ID NO: 232 (KL2B413 VH cDNA)
GAGGTGCAACTTGTGGAGAGCGGCGGAGGTCTGGTCCAACCCGGAGGAAGTCTCCGTCTCTCCTGTGCTGCTAGTGGCTTCACTTTCAGCTCATATTGGATGACATGGGTGAGACAAGCCCCAGGAAAGGGGCTCGAGTGGGTAGCTAACATTAAACAGGACGGCTCCGAACGGTACTATGTTGATTCTGTGAAGGGACGGTTCACTATATCCAGGGATAATGCAAAAAATTCACTCTATCTTCAAATGAACTCACTCAGAGCAGAGGACACTGCCGTGTATTATTGCGCCAGGGATCAAAATTATGACATACTGACCGGTCATTATGGAATGGATGTTTGGGGCCAGGGAACAACCGTTACCGTCTCAAGT
SEQ ID NO:233 (KL2B30 VH cDNA)
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGATATATCTATTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGGGGACTACGATTTTTGGAGTGGTTACCCCCAACTTCTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 234 (KL2B53 VH cDNA)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTATGACATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATTTCATATGATGGAAGTAAAAAAGACTATACAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGGACAGCCTGAGAGTTGAGGACTCGGCTGTGTATTCCTGTGCGAGAGAAAGTGGCTGGTCCCACTACTACTATTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
SEQ ID NO: 235 (KL2B242 VH cDNA)
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTATTGGAGCTGGCTCCGGCAGCCCGCCGGGTCGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTTTATATGTCAGTGGGTTCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCTTGTCACTAGACCCGTCCAGGAACCAGTTGTCCCTGAAACTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTATATTATTGTGCGGGAGATAGTGGGAACTACTGGGGTTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 236 (KL2B467 VH cDNA)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTTACTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCATTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCCCACCTCCCTTATAGTGGGAGCTACTGGGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCAGGTCACCGTCTCTTCA
SEQ ID NO: 263 (KL2B494 VH cDNA)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTCATTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTGGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAACCTCATATTGTAATGGTGACTGCTCTTCTCTACGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 237 (m11B6 VL cDNA)
GACATTGTGCTGACACAGAGTCCAGCATCCTTGGCAGTATCTTTGGGGCAGCGGGCAACAATTTCATGCCGTGCATCTGAAAGTGTGGAGTATTTTGGAACTTCTCTTATGCACTGGTATCGCCAGAAGCCTGGGCAGCCTCCCAAACTCCTTATATATGCCGCTTCCAACGTGGAGTCCGGAGTACCAGCACGCTTTTCCGGCTCTGGGTCCGGCACAGACTTTTCCCTCAATATCCAACCTGTTGAAGAAGACGATTTTTCCATGTATTTTTGCCAACAGACACGCAAGGTTCCATATACATTCGGCGGCGGCACTAAACTTGAGATCAAA
SEQ ID NO: 238 (hu11B6 VL cDNA)
GACATAGTCTTGACTCAGAGCCCGGATTCCCTTGCTGTGTCTCTGGGAGAACGAGCTACGATCAACTGCAAGGCAAGTGAATCCGTAGAATACTTCGGGACATCATTGATGCATTGGTATCAACAGAAACCGGGGCAACCGCCCAAATTGCTGATATATGCGGCTAGTAATAGAGAATCAGGAGTACCGGATAGGTTTAGTGGTTCAGGATCAGGTACAGATTTCACCCTGACAATAAGTAGCTTGCAAGCCGAAGACGTAGCAGTGTATTACTGCCAACAAACCCGAAAGGTGCCATATACGTTTGGACAGGGTACAAAGTTGGAAATCAAA
SEQ ID NO: 239 (HCF3-LCD6 VL cDNA)
GACATCGTGCTGACCCAGAGCCCAGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGCGCGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCGAGAGCGTGGAGTACTTCGGCACCAGCCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGCCACCAAAGCTGCTGATCTACGCTGCCAGCAACCGCGAGAGCGGCGTGCCAGACCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCCAGAGCGTGCAGGCCGAGGACGTCTCCGTGTACTTCTGCCAGCAGACCCGCAAGGTGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
SEQ ID NO: 240 (HCG5-LCB7 VL cDNA)
GACATCGTGCTGACCCAGAGCCCAGACAGCCTGGCCGTGAGCCTGGGCGAGCGCGCCACCATCAACTGCAAGGCCAGCGAGAGCGTGGAGTACTTCGGCACCAGCCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGCCACCAAAGCTGCTGATCTACGCTGCCAGCAACCGCGAGAGCGGCGTGCCAGACCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGGCCGAGGACGTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGACCCGCAAGGTGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
SEQ ID NO: 241 (KL2B357 VL cDNA)
GACATCGTGCTGACCCAGTCTCCAGACTCTCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAGAGCCTCCGAGTCCGTGGAATACTTCGGCACCTCTCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAAGCTGCTGATCTACGCCGCCTCCAACGTGGAATCTGGCGTGCCCGATAGATTTTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCTCTCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTTCTGTCAGCAGACCCGGAAGGTGCCCTACACATTTGGCGGCGGAACAAAGGTGGAAATCAAG
SEQ ID NO: 242 (KL2B358, KL2B359, KL2B360 VL cDNA)
GAGATCGTGCTGACCCAGTCTCCTGCCACACTGTCACTGTCTCCAGGCGAGAGAGCCACCCTCTCTTGTAGAGCCTCCGAGTCCGTGGAATACTTCGGCACCTCTCTGATGCACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCTAGACTGCTGATCTACGCCGCCTCCAACGTCGAATCTGGCATCCCCGCTAGATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACAGACTTTACCCTGACCATCTCCTCCGTGGAACCCGAGGATTTCGCTGTGTACTTTTGCCAGCAGACCCGGAAGGTGCCCTACACATTTGGCGGCGGAACAAAGGTGGAAATCAAG
SEQ ID NO: 243 (KL2B413 VL cDNA)
GAAATCGTACTGACCCAGTCCCCTTCTTTCTTGAGTGCATCAGTTGGGGATAGAGTGACCATTACTTGTAGAGCATCTCAAGGTATTTCTTCATACTTGTCTTGGTATCAACAAAAACCTGGCAAGGCACCCAAACTCTTGATCTACGCCACCTCTACATTGCAAAGTGGGGTTCCTTCTAGGTTTTCAGGCTCCGGCTCTGGTACCGAGTTCACCCTCACTATAAGCAGTCTCCAACCTGAAGATTTCGCTACTTATTATTGTCAGCAGCTTAATTCTTATCCCCGAACCTTTGGTCAAGGAACTAAGGTCGAGATCAAA
SEQ ID NO: 244 (KL2B30 VL cDNA)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGGGCATTAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGCTTAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
SEQ ID NO: 245 (KL2B53 VL cDNA)
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGTTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCACTCTGGGGTCCCATCTCGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAAGTATAACAGTGCCCCGTACACTTTTGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAA
SEQ ID NO: 246 (KL2B242 VL cDNA)
TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGAGAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATCAATTGGGGGAAAATTATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGTTGGTCATCTATCAAGATAGTAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTCTGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAACAGTATTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
SEQ ID NO: 247 (KL2B467 VL cDNA)
CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCCGGGCAGACGGCCAGTATTACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATAATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGACCACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATCCTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTA
SEQ ID: 271 (KLK2B494_VL DNA)
TCTTCTGAGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
공통 VH 및 VL 서열
도 1은 mu11B6, hu11B6, KL2B357, KL2B358, KL2B359, KL2B360, HCF3 및 HCG5의 VH 도메인의 서열 정렬을 나타낸다. 도 2는 mu11B6, hu11B6, KL2B357, KL2B358, KL2B359, KL2B360, LDC6 및 LCB7의 VL 도메인의 서열 정렬을 나타낸다. SEQ ID NO:75 및 SEQ ID NO:74의 공통 아미노산 서열은 각각 VH 및 VL 도메인에 대해 결정되었다. HCDR 및 LCDR 잔기는 밑줄이 그어져 있다.
SEQ ID NO: 75
QVQLQESGPGLVKPSX1TLSLTCX2VSGNSITSDYAWNWIRQX3PGKX4LEWX5GYISYSGSTT
YNPSLKSRVTX6SRDTSKNQFSLKLSSVTX7X8DTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
여기서, X1은 D 또는 Q이고; X2는 A 또는 T이고; X3는 P 또는 F이고; X4는 G 또는 R이고; X5은 I 또는 M이고; X6은 I 또는 M이고; X7은 A 또는 P이고; 또는 X8은 V 또는 A이다.
SEQ ID NO: 74
X1IVLTQSPX2X3LX4X5SX6GERATX7X8CX 9 ASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPX10LLIYAASNX 11
ESGX12PX13RFSGSGSGTDFTLTIX14SX15X16QX17EDX18X19VYX20CQQTRKVPYTFGX21GTKX22EIK
여기서, X1은 D 또는 E이고; X2는 D 또는 A이고; X3은 S 또는 T이고; X4는 A 또는 S이고; X5는 V 또는 L이고; X6은 L 또는 P이고; X7은 I 또는 L이고; X8은 N 또는 S이고; X9는 R 또는 K이고; X10은 K 또는 R이고; X11은 V 또는 R이고; X12는 V 또는 I이고; X13은 A 또는 D이고; X14는 Q 또는 S이고; X15는 L 또는 V이고; X16은 Q 또는 E이고; X17은 P 또는 A이고; X18은 F 또는 V이고; X19는 A 또는 S이고; X20은 Y 또는 F이고; X21은 Q 또는 G이고; 및 X22는 L 또는 V이다.
Fab-Fc 및 scFv
hK2 특이적 VH/VL 영역은 VH-CH1-힌지 CH2-CH3 및 VL-CL로 조작되었고 IgG2 또는 IgG4로 발현되었거나 VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH 방향으로 scFv로 조작되었다. scFv에 사용된 링커는 전술한 SEQ ID NO: 7의 링커였다. scFv를 사용하여 실시예 7에 기재된 바와 같이 이중특이적 항체를 생성하거나 실시예 11에 기재된 바와 같이 CAR을 생성하였다.
표 10은 mAb 형식의 선택된 항-hK2 항체의 HC 아미노산 서열을 나타낸다. 표 11은 mAb의 선택된 항-hK2 항체의 LC 아미노산 서열을 나타낸다. 표 12는 mAb 형식의 선택된 항-hK2 항체의 HC 및 LC DNA SEQ ID NO를 요약한다. 표 13은 VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH 방향의 선택된 scFv의 아미노산 서열을 나타낸다.
[표 10]
[표 11]
[표 12]
SEQ ID NO: 284 (m11B6 HC cDNA)
GATGTGCAGCTTCAGGAGTCTGGACCCGGACTTGTTAAACCAAGTCAGTCTCTGTCCCTGACCTGTACCGTCACCGGCAACAGCATCACAAGCGATTACGCATGGAACTGGATCAGGCAGTTCCCTGGAAATCGACTCGAATGGATGGGCTACATTTCATACTCCGGTTCAACCACTTACTCTCCATCCTTGAAATCTAGGTTCAGCATCACCCGTGATACCTCAAAGAACCAATTTTTTCTGCAACTGAATAGCGTAACTCCAGAGGACACAGCCACATATTTCTGCGCCACTGGGTATTACTATGGCTCAGGTTTCTGGGGTCAGGGCACTCTCGTCACCGTCAGCAGCGCCAAAACAACAGCACCAAGTGTCTATCCACTGGCCCCTGTGTGTGGAGATACAACTGGCTCCTCGGTGACTCTAGGATGCCTGGTCAAGGGTTATTTCCCTGAGCCAGTGACCTTGACCTGGAACTCTGGATCCCTGTCCAGTGGTGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTGCAGTCTGACCTCTACACCCTCAGCAGCTCAGTGACTGTAACCTCGAGCACCTGGCCCAGCCAGTCCATCACCTGCAATGTGGCCCACCCGGCAAGCAGCACCAAGGTGGACAAGAAAATTGAGCCCAGAGGGCCCACAATCAAGCCCTGTCCTCCATGCAAATGCCCAGCACCTAACCTCTTGGGTGGACCATCCGTCTTCATCTTCCCTCCAAAGATCAAGGATGTACTCATGATCTCCCTGAGCCCCATAGTCACATGTGTGGTGGTGGATGTGAGCGAGGATGACCCAGATGTCCAGATCAGCTGGTTTGTGAACAACGTGGAAGTACACACAGCTCAGACACAAACCCATAGAGAGGATTACAACAGTACTCTCCGGGTGGTCAGTGCCCTCCCCATCCAGCACCAGGACTGGATGAGTGGCAAGGAGTTCAAATGCAAGGTCAACAACAAAGACCTCCCAGCGCCCATCGAGAGAACCATCTCAAAACCCAAAGGGTCAGTAAGAGCTCCACAGGTATATGTCTTGCCTCCACCAGAAGAAGAGATGACTAAGAAACAGGTCACTCTGACCTGCATGGTCACCGACTTCATGCCTGAAGACATTTACGTGGAGTGGACCAACAACGGGAAAACAGAGCTAAACTACAAGAACACTGAACCAGTCCTGGACTCTGATGGTTCTTACTTCATGTACAGCAAGCTGAGAGTGGAAAAGAAGAACTGGGTGGAAAGAAATAGCTACTCCTGTTCAGTGGTCCACGAGGGTCTGCACAATCACCACACGACTAAGAGCTTCTCCCGGACTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 285 (hu11B6 HC cDNA)
CAGGTCCAACTGCAAGAGAGCGGACCGGGCCTGGTAAAGCCATCCGACACATTGTCCCTGACGTGTGCGGTAAGTGGAAACTCTATCACTAGCGACTATGCGTGGAATTGGATAAGACAACCGCCGGGCAAGGGGCTGGAATGGATAGGATATATCAGCTATTCCGGTTCTACGACATACAATCCTTCCCTGAAAAGCAGAGTCACTATGTCACGCGACACGTCCAAGAATCAGTTCTCATTGAAATTGTCATCCGTAACGGCCGTTGACACTGCGGTTTATTATTGCGCAACCGGATATTACTACGGCTCTGGTTTTTGGGGACAGGGAACACTTGTTACTGTTAGTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 292 (KL2B30 HC cDNA)
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGATATATCTATTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGGGGACTACGATTTTTGGAGTGGTTACCCCCAACTTCTACTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAAACCTACACTTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCATGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
SEQ ID NO: 293 (KL2B53 HC cDNA)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTATGACATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAATTATTTCATATGATGGAAGTAAAAAAGACTATACAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGGACAGCCTGAGAGTTGAGGACTCGGCTGTGTATTCCTGTGCGAGAGAAAGTGGCTGGTCCCACTACTACTATTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAAACCTACACTTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCATGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
SEQ ID NO: 294 (KL2B242 HC cDNA)
CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTATTGGAGCTGGCTCCGGCAGCCCGCCGGGTCGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTTTATATGTCAGTGGGTTCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCTTGTCACTAGACCCGTCCAGGAACCAGTTGTCCCTGAAACTGAGTTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTATATTATTGTGCGGGAGATAGTGGGAACTACTGGGGTTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACGAAAACCTACACTTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCACCATGCCCAGCACCTGAGGCCGCCGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTAACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
SEQ ID NO: 295 (KL2B467 HC cDNA)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTTACTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCATTTATATCATATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCCCACCTCCCTTATAGTGGGAGCTACTGGGCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCAGGTCACCGTCTCTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCCGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 274 (KL2B494 HC cDNA)
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGTCATTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTGGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAACCTCATATTGTAATGGTGACTGCTCTTCTCTACGACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCCGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 296 (mu11B6 LC cDNA)
GACATTGTGCTGACACAGAGTCCAGCATCCTTGGCAGTATCTTTGGGGCAGCGGGCAACAATTTCATGCCGTGCATCTGAAAGTGTGGAGTATTTTGGAACTTCTCTTATGCACTGGTATCGCCAGAAGCCTGGGCAGCCTCCCAAACTCCTTATATATGCCGCTTCCAACGTGGAGTCCGGAGTACCAGCACGCTTTTCCGGCTCTGGGTCCGGCACAGACTTTTCCCTCAATATCCAACCTGTTGAAGAAGACGATTTTTCCATGTATTTTTGCCAACAGACACGCAAGGTTCCATATACATTCGGCGGCGGCACTAAACTTGAGATCAAACGGGCTGATGCTGCACCGACTGTGTCCATCTTCCCACCATCCAGTGAGCAGTTAACATCTGGAGGTGCCTCAGTCGTGTGCTTCTTGAACAACTTCTACCCCAAAGACATCAATGTCAAGTGGAAGATTGATGGCAGTGAACGACAAAATGGCGTCCTGAACAGTTGGACTGATCAGGACAGCAAAGACAGCACCTACAGCATGAGCAGCACCCTCACGTTGACCAAGGACGAGTATGAACGACATAACAGCTATACCTGTGAGGCCACTCACAAGACATCAACTTCACCCATTGTCAAGAGCTTCAACAGGAATGAGTGT
SEQ ID NO: 297 (hu11B6 LC cDNA)
GACATAGTCTTGACTCAGAGCCCGGATTCCCTTGCTGTGTCTCTGGGAGAACGAGCTACGATCAACTGCAAGGCAAGTGAATCCGTAGAATACTTCGGGACATCATTGATGCATTGGTATCAACAGAAACCGGGGCAACCGCCCAAATTGCTGATATATGCGGCTAGTAATAGAGAATCAGGAGTACCGGATAGGTTTAGTGGTTCAGGATCAGGTACAGATTTCACCCTGACAATAAGTAGCTTGCAAGCCGAAGACGTAGCAGTGTATTACTGCCAACAAACCCGAAAGGTGCCATATACGTTTGGACAGGGTACAAAGTTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO: 450 (KL2B30 LC cDNA)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCAGTCAGGGCATTAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCAACAGCTTAATAGTTACCCTCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO: 451 (KL2B53 LC cDNA)
GACATCGTGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGTCAGGACATTAGCAATTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGTTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCACTCTGGGGTCCCATCTCGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCAAAAGTATAACAGTGCCCCGTACACTTTTGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO: 305 (KL2B242 LC cDNA)
TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGAGAGACAGCCAGCATCACCTGCTCTGGAGATCAATTGGGGGAAAATTATGCTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTGTGTTGGTCATCTATCAAGATAGTAAGCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTCTGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGGCGTGGGACAACAGTATTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
SEQ ID NO: 306 (KL2B467 LC cDNA)
CAGTCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCCGGGCAGACGGCCAGTATTACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATAATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGACCACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATCCTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
SEQ ID NO: 282 (KL2B494 LC cDNA)
TCTTCTGAGCTGACTCAGCCACCCTCGGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACGGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACATTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGTCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTGATCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
[표 13]
실시예 3. 항-hK2 항체의 생물물리학적 특성화
항-hK2 항체의 친화도 및 열 안정성.
가용성 hK2에 대해 선택된 hK2 항체의 친화도를 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 측정하였다. SPR은 복합체 형성 및 해리 시 질량 변화를 측정하여 두 결합 파트너 간의 상호 작용 강도를 연구하는 라벨-프리 기술이다. 항체는 항-Fc 항체로 코팅된 센서 칩에 포획된 후 다양한 농도 및 특정 결합 및 해리 시간에서 가용성 hK2를 주입하였다. 해리 후, 표면은 다음 상호작용을 준비하기 위해 적절한 용액으로 재생되었다. 센서그램을 1:1 Langmuir 모델에 피팅하여 동역학 정보(온-속도 및 오프-속도 상수)를 추출하였다. 결합 친화도(KD)는 속도 상수의 비(Koff/Kon)로 보고된다. 선택된 hK2 항체의 KD 값은 표 14에 나열되어 있다.
열 안정성은 자동화된 Prometheus 기기를 사용하여 시차 주사 형광 측정법(NanoDSF)에 의해 결정되었다. NanoDSF를 사용하여 pH 7.4인 인산염 완충 식염수에서 0.5 mg/mL 농도의 분자 Tm을 측정하였다. 384웰 샘플 플레이트로부터 24웰 모세관으로 샘플을 로딩하여 측정을 수행하였다. 각각의 샘플에 대해 2회 실행을 수행하였다. 열 스캔은 1.0℃/분의 속도로 20℃ 내지 95℃ 범위이다. 330 nm 및 350 nm의 방출 파장에서 고유한 트립토판 및 티로신 형광을 모니터링하였고, F350/F330 nm 비를 온도에 대해 플롯하여 언폴딩 곡선을 생성하였다. 측정된 Tm 값은 표 14에 나열되어 있다.
[표 14]
Ablexis 면역화 캠페인으로부터 생성된 KL2B413 scFv는 Nano DSF에 의해 측정 시 열 안정성(Tm)이 67℃이고 인간 hK2에 대한 결합 친화도(KD)가 약 34 nM이었다. 재인간화 캠페인을 위해 수득되고 뮤린 11B6과 유사한 결합 친화도를 유지한 클론 KL2B359는 추가 프로파일링을 위해 scFv-Fc 및 CAR-T로 전환되었다. KL2B359 scFv는 67℃의 Tm 및 약 0.7 내지 1 nM의 hK2에 대한 결합 친화도(KD)를 나타낸다. KL2B30, KL2B242, KL2B53, KL2B467 및 KL2B494 Fab는 0.5 nM 미만의 결합 친화도 및 70℃ 초과의 Tm 값을 나타냈다.
에피토프 맵핑
선택된 항-hK2 항체 및 항-hK2/CD3 이중특이적 항체의 에피토프 및 파라토프는 수소-중수소 교환 질량 분석법(HDX-MS)에 의해 결정되었다. 인간 KLK2 항원은 에피토프 및 파라토프 맵핑 실험에 사용되었다.
간단히 말해서, 정제된 KLK2 항원은 중수소 산화물 표지 완충액에서 항-hK2 항체 또는 항-hK2/CD3 이중특이적 항체와 함께 및 이것 없이 배양되었다. 수소-중수소 교환(HDX) 혼합물은 8 M 우레아, 1 M TCEP, pH 3.0을 첨가하여 각기 다른 시점에서 켄칭되었다. 켄칭된 샘플을 실온에서 완충액 A(1% 아세토니트릴, H2O 중 0.1% FA)로 평형화된 600 μL/분으로 고정된 펩신/FPXIII 컬럼에 통과시켰다. 펩신 단편을 완충액 A를 사용하여 600 μL/분으로 역상 트랩 컬럼에 로딩하고 1분 동안 탈염했다(600 μL 완충액 A). 탈염된 단편을 20분에 걸쳐 100 μL/분에서 8%에서 35% 완충액 B(95% 아세토니트릴, 5% H2O, 0.0025% TFA)의 선형 구배를 사용하여 C18 컬럼으로 분리하고 질량 분석기로 분석하였다. 질량 분석은 LTQ™ Orbitrap Fusion Lumos 질량 분석기(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 모세관 온도 275℃, 분해능 150,000, 질량 범위(m/z) 300 내지 1,800을 사용하여 수행되었다. BioPharma Finder 3.0(Thermo Fisher Scientific)은 HDX 실험 전에 중수소화되지 않은 샘플의 펩티드 확인에 사용되었다. HDExaminer 버전 2.5(Sierra Analytics, Modesto, CA)는 HDX 실험을 위해 MS 원시 데이터 파일에서 중심 값을 추출하는 데 사용되었다.
가용성 hK2 단백질과 hK2 항체, hu11B6, KL2B494, KL2B467, KL2B30, KL2B413 및 KL2B53의 배양은 상이한 패턴의 수소 교환 및 전체 보호를 야기하였다. 보호된 세그먼트는 hK2 항원의 서열에 맵핑되어 결합 에피토프를 시각화하였다(도 3). KL2B494, KL2B467 및 KL2B30은 하기의 공통 서열에 결합된다: (i) 잔기 174-178(SEQ ID NO: 111, KVTEF)(예를 들어, KL2B494, KL2B467 및 KL2B30은 적어도 3개의 SEQ ID NO: 111의 잔기, 즉 174-176에서의 KVT 잔기에 결합됨) 및 (ii) 잔기 230-234(SEQ ID NO: 112, HYRKW)(예를 들어, KL2B494, KL2B467 및 KL2B30은 적어도 3개의 SEQ ID NO: 112의 잔기, 즉 230-232에서의 HYR 잔기에 결합됨). KL2B413은 또한 도 3에 나타낸 바와 같이 SEQ ID NO: 111의 모든 잔기 및 SEQ ID NO: 112의 KW 잔기에 결합하였다. 본 발명의 한 실시형태는 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질을 제공하며, 상기 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 111 및 SEQ ID NO: 112의 서열을 갖는 에피토프 내에서 hK2에 결합하며; 예를 들어, 상기 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 111의 모든 잔기, 또는 적어도 4개의 잔기, 또는 적어도 3개의 잔기에 결합하고, SEQ ID NO: 112의 모든 잔기, 또는 적어도 4개의 잔기, 또는 적어도 3개의 잔기에 결합한다.
KL2B53은 상이한 보호 패턴을 나타냈고 잔기 27-32(Seq ID NO: 113, SHGWAH), 60-75(SEQ ID NO: 114, RHNLFEPEDTGQRVP) 및 138-147(SEQ ID NO: 115, GWGSIEPEE)로 이루어진 서열에 결합되었다.
한 실시형태에 따르면, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질(예를 들어, hu11B6, KL2B494, KL2B467, KL2B30, KL2B413 또는 KL2B53)은 SEQ ID NO: 111, 112, 113, 114 및 115로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 hK2의 불연속 에피토프(즉, 잔기가 서열에서 멀리 떨어진 에피토프)에 특이적으로 결합하는 hk2-특이적 항원 결합 도메인을 포함한다.
항-hK2 항체 hu11B6, KL2B494, KL2B467, KL2B413 및 항-hK2/CD3 이중특이적 항체 KLCB113 및 KLCB80의 파라토프는 HDExaminer 잔기 플롯으로부터의 중수소 흡수의 유의한 차이에 기초하여 확인되었다. KL2BB494는 3개의 파라토프 영역을 포함하며 그 중 2개는 KL2B494 중쇄 가변 도메인(GFTFSH(SEQ ID NO: 455) 및 TAVYYCAKPHIVMVTAL(SEQ ID NO: 456))에 위치하고 단일 파라토프 영역은 경쇄 가변 도메인(YDDSDRPSGIPER(SEQ ID NO: 457)) 내에 위치한다. KL2B467은 3개의 파라토프 영역을 포함하며 그 중 2개는 KL2B467 중쇄 가변 도메인(FTFSY(SEQ ID NO: 458) 및 GSYWAFDY(SEQ ID NO: 459))에 위치하고 단일 파라토프 영역은 경쇄 가변 도메인(DNSD(SEQ ID NO: 460)) 내에 위치한다. Hu11B6은 중쇄(GNSITSDYA(SEQ ID NO: 461))에 위치한 단일 에피토프 영역을 포함한다. KL2B413은 중쇄 가변 도메인(GFTF(SEQ ID NO: 462) 및 ARDQNYDIL(SEQ ID NO: 463))에 위치한 2개의 파라토프 영역을 포함한다. 이중특이적 KLCB80의 KL2B30은 중쇄에 위치한 파라토프 영역(아미노산 잔기 TIF 및 VTPNF(SEQ ID NO: 464) 포함) 및 경쇄에 위치한 파라토프 영역(YAASTLQSG(SEQ ID NO: 465))을 포함한다. 이중특이적 KLCB113의 KL2B53은 중쇄에 위치한 단일 파라토프 영역을 포함한다(아미노산 잔기 ESGWSHY(SEQ ID NO: 466) 포함). 도 38a 내지 도 38f는 이들 항-hK2 항체 및 항-hK2/CD3 이중특이적 항체의 결합 파라토프를 나타낸다(밑줄 친 서열은 CDR 영역을 나타내고 강조 표시된 서열은 파라토프 영역을 나타낸다).
실시예 4: 항-CD3 항체의 생성
면역화
항-CD3 항체 CD3B376의 생성은 미국 특허 제20200048349호에 기재되어 있다.
항-CD3 항체는 Alexis 형질전환 마우스 플랫폼을 사용하여 생성되었다. 13마리의 카파 마우스 및 12마리의 람다 마우스를 포함하는 Alexis 마우스는 TRCW5(SEQ ID NO:338)로 면역화되었다. TRCW5는 문헌[Kim et al, JMB (2000) 302(4): 899-916]에 보고된 바와 같이 CD3ε의 세포외 영역에 26개 아미노산 링커에 의해 융합된 CD3δ의 세포외 영역으로 구성된다. 이 폴리펩티드는 C-말단에 부위 특이적 비오틴화에 사용되는 C-말단 Avi-태그가 있는 인간 IgG1 Fc 도메인을 가졌다(문헌[Fairhead & Howarth, Methods Mol Biol (2015); 1266: 171-184]).
TRCW5 (SEQ ID NO: 338):
FKIPIEELEDRVFVNCNTSITWVEGTVGTLLSDITRLDLGKRILDPRGIYRCNGTDIYKDKESTVQVHYRMGSADDAKKDAAKKDDAKKDDAKKDGSDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVSPPSPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGLNDIFEAQKIEWHE
마우스를 7주 동안 매주 2회 면역화시켰다. 42일차에, 마우스는 6회의 피하 주사 및 2회의 피내 주사를 포함하여 8개 부위에 걸쳐 50 ㎍ TRCW5 및 50 ㎍ CD40 mAb를 투여하여 하이브리도마 융합을 위해 부스팅되었다. 최종 부스트를 위해, 마우스에 CD3ε(문헌[Schneider et al (1977) Int. J. Cancer, 19 (5): 621-6])을 4.74×107 세포/mL로 포함하는 T 세포 수용체 복합체를 내인적으로 발현하는 T 세포주인 Jurkat 세포를 20 μL 주입했다.
림프절과 비장을 마우스에서 추출하고 코호트에서 융합을 수행했다. 림프절 세포를 계수하고 FO 골수종 세포(ATCC(CRL-1646))와 1:1 비로 조합하고 항체 스크리닝 전에 37℃에서 10일 동안 배양했다. 이어서 하이브리도마 융합 세포의 상청액을 ELISA에 의해 TRCW5에 대한 결합에 대해 플레이트 상에 비특이적으로 고정된 TRCW5(ELISA, Thermo cat. # 34022) 또는 비오틴화된-TRCW5에 대한 스트렙타비딘 접합(SPARCL ELISA, Lumigen)에 의해 제조업체의 지침에 따라 분석했다. ELISA 분석은 플레이트를 0.5 ug/mL TRCW5 및 0.5 ug/mL HVEM-Fc(R&D cat. # 365-HV)로 4℃에서 밤새 코팅하여 수행했다. 인산염 완충 식염수(PBS) 중 0.4%(w/v) 소 혈청 알부민(BSA)을 4℃에서 밤새 첨가하여 플레이트를 차단하였다. 플레이트를 0.02%(v/v) Tween 20이 보충된 1X PBS로 세척했다. 각 웰에 하이브리도마 상청액 50 uL를 적용하고 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 결합된 항체는 차단 완충액에 1:10,000으로 희석된 홀스래디쉬 퍼옥시다제(Jackson cat. # 115-036-071)에 접합된 염소 항-마우스 IgG Fc를 첨가한 후 실온에서 30분 동안 배양하여 검출되었다. 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB) 기질 완충액(Thermo cat. # 34022)을 25 uL/웰로 첨가하고 암실에서 10분 동안 배양하였다. 25 uL/웰의 4 M H2SO4를 첨가하여 반응을 중단시켰다. BioTek® Epoch2 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 450 nm에서 발광을 판독하였다. 신호가 배경보다 3배 이상 높은 히트를 선택하였다.
두 가지 분석 형식은 426개의 히트를 생성했다(ELISA에서 264개, SPARCL ELISA에서 194개, 두 분석에서 70개의 히트가 확인됨). 이들 426개의 초기 히트 중, 49개의 ELISA 및 32개의 SPARCL ELISA 히트가 확인되었다. 양성 결합제에 상응하는 하이리보마 융합물을 공급하고 유세포 분석을 사용하여 Jurkat 세포에 결합하는 능력을 시험하였다. 결과는 클론 003_F12, 클론 036_E10 및 클론 065_D03을 포함한 3개의 항체가 평균 형광 지수(MFI, 표 4 참조)를 기반으로 내인적으로 CD3을 발현하는 Jurkat 세포에 대한 유의한 결합을 보여주었다는 것을 시사하였다. 클론 003_F12 및 036_E10(인간 카파 마우스)은 ELISA에 의해 인간 카파 경쇄에 대해 양성인 것으로 확인된 반면, 클론 065_D03(인간 람다 마우스)은 인간 람다에 대해 음성이었다. 그런 다음 이 세 클론의 가변 유전자를 시퀀싱하였다.
[표 15]
다음으로, 이들 3개의 클론은 1차 인간 및 사이노 T 세포에 결합하는 능력에 대해 스크리닝되었다. 간단히 말해서, 1차 인간 및 사이노 팬 T 세포를 유동 염색 완충액에 1 X 106 세포/mL로 재현탁하고 세포를 50,000 세포/웰로 플레이팅하였다. 각 웰에 50 uL의 하이브리도마 상청액을 첨가하고 혼합물을 얼음 위에서 30분 동안 배양하였다. 배양 후, 200 μL의 염색 완충액을 첨가하고 세포를 300 X G에서 5분 동안 원심분리하여 펠렛화하였다. Alexa-647에 접합된 항-마우스 IgG를 50 μL 총 부피의 염색 완충액에 2 ㎍/mL로 첨가하고 얼음에서 30분 동안 배양하였다. 150 μL의 염색 완충액을 첨가하고 세포를 300 X G에서 5분 동안 원심분리하여 펠렛화하였다. 세포를 1:1,000으로 희석된 사이톡스 그린 데드 세포 염색이 포함된 30 μL의 실행 완충액에 재현탁하고 iQue Screener에서 실행하였다. 세포는 파편을 제거하기 위해 FCS 대 SCS에 게이트되었다. 단일항은 SCS-A 대 SCS-H에 게이팅되었으며 단일항 집단에서 살아있는 세포는 사이톡스 그린으로 낮은 음성에 대해 BL1 채널을 사용하여 선택되었다. CD3 결합은 RL1(Alexa-647) 기하 평균에 의해 음성 대조군과 시험 항목을 비교하여 평가되었다. 이 분석에서, 클론 065_D03은 가장 높은 세포 결합 신호를 나타냈다(도 4a 및 도 4b).
그런 다음 클론 065_D03의 가변 영역을 IgG1 백본으로 클로닝하여 CD3B815라는 항체를 생성했다(서열은 표 16에 표시됨). CD3B815는 Jurkat 세포에 대한 결합에 대해 다시 스크리닝되었고 Jurkat 세포에 대해 양성 결합을 나타냈다.
[표 16]
CD3 결합 도메인의 인간화 및 scFv 형식화
CD3B815의 v-영역의 경쇄(LC)는 scFv 형식으로 인간화되었다. 요약하면, CD3B815로부터의 LC를 인간 IGKV1-39*01-IGKJ2*01 생식계열에 그래프트하고 인간에서 마우스로의 역 돌연변이에 대해 2개의 위치(Y49K 및 L78V)가 확인되었다. 이로 인해 Y49K, L78V, 또는 Y49K와 L78V 둘 모두를 갖는 변이체가 생성되었다. CD3B815로부터의 LC는 또한 위치 92-93에서 탈아미드화의 위험을 나타내는 NS 모티프를 함유하였다. 따라서, 생성된 여러 변이체에도 N92G가 함유되었다. 이러한 변이체 및 관련 돌연변이는 표 17에 설명되어 있다.
[표 17]
표 18은 선택된 항-CD3 항체의 VH 및 VL 아미노산 서열을 나타낸다. 표 19는 선택된 항-CD3 항체의 VH 및 VL DNA 서열을 나타낸다. 표 20은 카바트 기술에서 선택된 항-CD3 항체의 카바트 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열을 나타낸다. 표 21은 카바트 기술에서 선택된 항-CD3 항체의 카바트 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 나타낸다. 표 22는 선택된 CD3 항체의 CDR, VH 및 VL 서열을 요약한다. 도 6은 CD3B815, CD3W244, CD3W245, CD3W246 및 CD3W247의 VL 영역의 정렬을 나타낸다.
[표 18]
[표 19]
[표 20]
[표 21]
[표 22]
공통 서열
도 6은 CD3B815, CD3W244, CD3W245, CD3W246 및 CD3W247의 VL 영역의 정렬을 나타낸다. HCDR 및 LCDR 잔기는 밑줄이 그어져 있다. SEQ ID NO: 157의 공통 아미노산 서열은 VL 영역에 대해 결정되었다.
SEQ ID NO: 157
DIQX1TQSPX2X3LSX4SX5GX6RVX7X8X9 CRARQSIGTAIHWYQQKX10X11X12X13PX14LLIX15 YASESISGX16PSRFSGSGSGTDFTLTIX17SX18QX19EDX20AX21YYCQQSX 22 SWPYTFGX23GTKLEIK
여기서, X1은 L 또는 M이고; X2는 G 또는 S이고; X3은 I 또는 S이고; X4는 V 또는 A이고; X5는 P 또는 V이고; X6은 E 또는 D이고; X7은 S 또는 T이고; X8은 F 또는 I이고; X9는 S 또는 T이고; X10은 T 또는 P이고; X11은 N 또는 G이고; X12는 G또는 K이고; X13은 S 또는 A이고; X14는 R 또는 K이고; X15는 K 또는 Y이고; X16은 I 또는 V이고; X17은 N 또는 S이고; X18은 V 또는 L이고; X19는 S 또는 P이고; X20은 I 또는 F이고; X21은 D 또는 T이고; X22는 N 또는 G이고; 또는 X23은 G 또는 Q이다.
열 충격 후 CD3에 대한 인간화 항-CD3 scFv 변이체의 결합.
항-CD3 분자의 가변 영역은 대장균에서의 발현을 위해 링커 GTEGKSSGSGSESKST(SEQ ID NO: 108)를 사용하여 VH-링커-VL 방향으로 scFv로 형식화된 다음, 재조합 CD3(동종이량체 CD3εγ-Fc, CD3W147, SEQ ID NO: 339)에 대한 결합, T 세포에 대한 결합, 및 열안정성에 대해 스크리닝되었다.
CD3W147 (SEQ ID NO: 339):
QDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVGSADDAKKDAAKKDDAKKDDAKKDGSQSIKGNHLVKVYDYQEDGSVLLTCDAEAKNITWFKDGKMIGFLTEDKKKWNLGSNAKDPRGMYQCKGSQNKSKPLQVYYRMGSGSLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTFPPSQEEMTKNQVSLRCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTKPVLDSDGSFRLESRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSGGHHHHHH
간략하게, scFv-코딩 서열은 분비를 위한 PelB 리더(leader) 서열을 갖는 pADL™-22c 벡터 내로 클로닝되었다. 대장균 세포를 플라스미드로 형질전환하고 100 ㎍/mL 카르베니실린이 보충된 2xYT 미생물 성장 배지에서 37℃에서 밤새 성장시켰다. 1 mM IPTG를 첨가하여 단백질 발현을 유도하고 배양물을 밤새 성장시켰다. 발현 후, 세포를 5분 동안 2,200 X g에서 원심분리하여 펠렛화하고 상청액을 수집하고 ELISA에 의해 비오틴화된 CD3W147에 대한 결합에 대해 직접 시험하였다.
대장균에서 발현된 scFv-HL 단백질의 서열은 표 24에 제시되어 있다.
[표 24]
CD3에 대한 항-CD3 scFv 변이체의 결합은 ELISA에 의해 결정되었다. 비오틴화된 CD3W147(SEQ ID NO: 339)을 0.039 ㎍/mL 내지 2.5 ㎍/mL 범위의 농도로 플레이트에 2배 희석액으로 고정시킨 후 실온에서 45분 동안 배양하였다. 결합된 scFv는 닭 항-HA-홀스래디쉬 퍼옥시다제를 사용하여 검출된 다음 화학발광 기질로 검출되었다. CD3B815로부터 유래된 모든 시험된 scFv 분자는 CD3ε에 결합되었다(도 5).
그런 다음 scFv 분자는 유세포 분석을 사용하여 T 세포에 결합하는 능력에 대해 시험되었다. 간단히 말해서, 인간 T 세포를 해동하고 1 X 10^6 세포/mL로 유동 염색 완충액에 재현탁하고 50,000 세포/웰로 플레이팅하였다. 양성 대조군, scFv-LH로 형식화된 항-CD3 항체 SP34로 구성된 CD3W36, 및 음성 대조군, B23, 호흡기 세포융합 바이러스의 F-당단백질을 표적으로 하는 scFv을 비교에 사용하였다. 대장균 상청액을 150 μL/웰로 첨가하고 4℃에서 1시간 동안 배양하였다. 배양 후, 플레이트를 염색 완충액으로 세척하고 염색 완충액에서 Alexa-647에 접합된 항-His 항체로 검출하였다. 배양 후, IntelliCyt 실행 완충액 200 μL를 혼합물에 첨가하고, 세포를 1:1,000 사이톡스 그린 데드 세포 염색이 함유된 30 μL 실행 완충액에 재현탁하고 iQue Screener에서 분석하였다. 게이팅 및 분석은 위와 같이 수행되었다. CD3B815로부터 유래된 모든 scFv 분자는 T 세포 결합과 일치하는 평균 형광 지수를 나타냈다(표 25).
[표 25]
에피토프 확인
CD3 상의 에피토프는 수소-중수소 교환 질량 분석법(HDX-MS)에 의해 결정되었다. CD3ε 상의 에피토프가 결정 구조(PDB ID 1SY6)에 대해 알려져 있기 때문에(문헌[Kjer-Nielsen, L. et al.; Proc Natl Acad Sci U S A 101, 7675-7680]) 항체 클론 OKT3을 HDX 실험의 대조군으로 사용하였다.
HDX-MS에 대한 교환 시 실험. 교환 시 반응은 10 μL의 10 μM CD3W220(SEQ ID NO: 340)을 혼합하여 개시되었으며, 이는 1.2 몰 과량의 리간드와 30 μL의 H2O 또는 중수소화 완충액(20 mM MES, pH 6.4, 95% D2O 중 150 mM NaCl 또는 20 mM Tris, pH 8.4, 95% D2O 중 150 mM NaCl)과 함께 또는 없이 혈청 알부민 도메인에 융합된 26-aa 링커 영역과 융합된 CD3εγ로 구성되었다. 반응 혼합물을 1.2℃에서 15, 50, 150, 500 또는 1,500초 동안 배양하였다. 교환된 용액을 냉각된 40 μL의 8 M 요소, 1 M TCEP, pH 3.0을 첨가하여 켄칭하고 즉시 분석하였다.
CD3W220 (CD3εγ-HSA-6xHis) (SEQ ID NO: 340):
QDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVGSADDAKKDAAKKDDAKKDDAKKDGSQSIKGNHLVKVYDYQEDGSVLLTCDAEAKNITWFKDGKMIGFLTEDKKKWNLGSNAKDPRGMYQCKGSQNKSKPLQVYYRMGGGSDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQSPFEDHVKLVNEVTEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLVRPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELRDEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADDRADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVFLGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFEQLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEKTPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHKPKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGLGGGSHHHHHHHH
HDX-MS 데이터 수집을 위한 일반 절차. HDX-MS 샘플 준비는 자동화된 HDx 시스템(LEAP Technologies, Morrisville, NC)으로 수행되었다. 컬럼 및 펌프는 프로테아제, 프로테아제 유형 XIII(아스페르길루스 사이토이(Aspergillus saitoi)로부터의 프로테아제, 유형 XIII) /펩신 컬럼(w/w, 1:1; 2.1 × 30 mm)(NovaBioAssays Inc., Woburn, MA); 트랩, ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard 예비 컬럼(2.1 × 5 mm)(Waters, Milford, MA), 분석, Accucore C18(2.1 × 100 mm)(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA); 및 LC 펌프, VH-P10-A(Thermo Fisher Scientific)였다. 로딩 펌프(프로테아제 컬럼에서 트랩 컬럼까지)는 99% 물, 1% 아세토니트릴, 0.1% 포름산으로 600 μL/분으로 설정되었다. 구배 펌프(트랩 컬럼에서 분석 컬럼까지)는 100 μL/분으로 20분 동안 0.1% 수성 포름산에서 8%에서 28% 아세토니트릴로 설정되었다.
MS 데이터 수집. 질량 분석은 LTQ™ Orbitrap Fusion Lumos 질량 분석기(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 모세관 온도 275℃, 분해능 150,000, 질량 범위(m/z) 300 내지 1,800을 사용하여 수행되었다.
HDX-MS 데이터 추출. BioPharma Finder 3.0(Thermo Fisher Scientific)은 HDX 실험 전에 중수소화되지 않은 샘플의 펩티드 확인에 사용되었다. HDExaminer 버전 2.5(Sierra Analytics, Modesto, CA)는 HDX 실험을 위해 MS 원시 데이터 파일에서 중심 값을 추출하는 데 사용되었다.
HDX-MS 데이터 분석. 추출된 HDX-MS 데이터는 엑셀에서 추가로 분석되었다. 모든 교환 시점(1.2℃에서 pH 6.4 또는 pH 8.4에서)은 pH 7.4 및 23℃에서 동등한 시점으로 전환되었다(예를 들어, 1.2℃에서 pH 6.4에서 15초는 23℃에서 pH 7.4에서 0.15초와 동일함; 표 23).
[표 23]
결과. 실시예 5에 기재된 항-CD3 아암으로서 CD3W245를 포함하는 이중특이적 항체인 KLCB91과 재조합 CD3ε(SEQ ID NO: 340)의 배양은 항원의 특정 세그먼트에서 상이한 패턴의 전체 보호 및 보호 정도를 야기하였다. KLCB91 및 OKT3은 둘 다 형태가 동일하지 않은 에피토프를 나타내는 비연속적인 세그먼트를 보호하였다(도 7). 보호된 세그먼트는 CD3ε(PDB 1SY6)의 결정 구조에 맵핑되어 결합 에피토프를 3차원으로 시각화하였다.
CD3ε에 결합된 OKT3의 결정 구조와 일치하여(Uniprot ID P07766), OKT3의 에피토프는 CD3ε의 스패닝 잔기 29-37, 79-84 및 87-89를 덮는 펩티드로 이루어진 것으로 밝혀졌다(SEQ ID NO: 340 및 도 7). CD3W245는 OKT3의 에피토프와 부분적으로 겹치는 에피토프에 결합하고 CD3ε SEQ ID NO: 340의 아미노산 잔기 29-37(PQYPGSEIL, SEQ ID NO 341), 55-63(GSDEDHLSL, SEQ ID NO:448), 및 79-84(PRGSKP, SEQ ID NO: 449)를 포함했다(도 7).
실시예 5: 이중특이적 hK2xCD3 항체의 생성
실시예 1 내지 3에서 생성된 항-hK2 항체의 VH/VL 영역과 실시예 4의 항-CD3 항체의 VH/VL 영역을 이중특이적 형식으로 조작하고 IgG1로 발현시켰다.
hK2/CD3 이중특이적 생성을 위한 CD3 scFv의 조작
CD3 VH/VL 영역은 SEQ ID NO: 7의 링커를 사용하여 VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH 방향으로 scFv로 조작되었다(표 1). scFv 형식의 항-CD3 분자의 아미노산 서열은 표 26에 제시되어 있다. VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH scFv 분자 결합 CD3은 선택적 이종이량체화를 촉진하도록 설계된 T350V/L351Y/F405A/Y407V 돌연변이 및 Fc 침묵 돌연변이(L234A/L235A/D265S)를 포함하는 scFv-힌지-CH2-CH3 형식으로 추가 조작되었다. SEQ ID NO: 109의 폴리펩티드를 불변 도메인 힌지-CH2-CH3으로 사용하였다. scFv-힌지-CH2-CH3 형식(scFv-Fc)의 항-CD3 분자의 아미노산 서열은 표 27에 제시되어 있다. scFv 형식 및 scFv-힌지-CH2-CH3 형식(scFv-Fc)의 항-CD3 분자의 DNA SEQ ID NO가 표 28에 제시되어 있다.
SEQ ID NO: 109 (huIgG1_G1m(17)-힌지-Fc_C220S_AAS_ZWA) EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
[표 26]
[표 27]
[표 28]
SEQ ID NO: 384 (CD3W244_HL scFv)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
SEQ ID NO: 385 (CD3W244_LH scFv)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 386 (CD3W245_HL scFv)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
SEQ ID NO: 387 (CD3W245_LH scFv)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 388 (CD3W246_HL scFv)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
SEQ ID NO: 389 (CD3W246_LH scFv)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 390 (CD3W247_HL scFv)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
SEQ ID NO: 391 (CD3W247_LH scFv)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
SEQ ID NO: 392 (CD3W248_HL scFv)
GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCTTGCTGACTCAGTCTCCAGGCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCAGTTTCTCCTGCAGGGCCAGACAGAGCATTGGCACAGCCATACACTGGTATCAGCAAAGAACAAATGGTTCTCCAAGGCTTCTCATAAAGTATGCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCTTCCAGGTTTAGCGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAACAGTGTGGAGTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAGTGGGAGCTGGCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
SEQ ID NO: 393 (CD3W248_LH scFv)
GACATCTTGCTGACTCAGTCTCCAGGCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCAGTTTCTCCTGCAGGGCCAGACAGAGCATTGGCACAGCCATACACTGGTATCAGCAAAGAACAAATGGTTCTCCAAGGCTTCTCATAAAGTATGCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCTTCCAGGTTTAGCGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAACAGTGTGGAGTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAGTGGGAGCTGGCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO: 394 (CD3W244_HL-scFv-Fc)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 395 (CD3W244_LH-scFv-Fc)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 396 (CD3W245_HL-scFv-Fc)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 397 (CD3W245_LH-scFv-Fc)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 398 (CD3W246_HL-scFv-Fc)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 399 (CD3W246_LH-scFv-Fc)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 400 (CD3W247_HL-scFv-Fc)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 401 (CD3W247_LH-scFv-Fc)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 402 (CD3W248_HL-scFv-Fc)
GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGACATCTTGCTGACTCAGTCTCCAGGCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCAGTTTCTCCTGCAGGGCCAGACAGAGCATTGGCACAGCCATACACTGGTATCAGCAAAGAACAAATGGTTCTCCAAGGCTTCTCATAAAGTATGCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCTTCCAGGTTTAGCGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAACAGTGTGGAGTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAGTGGGAGCTGGCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 403 (CD3W248_LH-scFv-Fc)
GACATCTTGCTGACTCAGTCTCCAGGCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCAGTTTCTCCTGCAGGGCCAGACAGAGCATTGGCACAGCCATACACTGGTATCAGCAAAGAACAAATGGTTCTCCAAGGCTTCTCATAAAGTATGCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCTTCCAGGTTTAGCGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAACAGTGTGGAGTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAGTGGGAGCTGGCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAAGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
hK2/CD3 이중특이적 생성을 위한 CD3 Fab의 조작
CD3 특이적 VH 및 VL 영역은 각각 VH-CH1-힌지-CH2-CH3 및 VL-CL 형식으로 조작되었고 IgG1로 발현되었다. 선택적 이종이량체화를 촉진하도록 설계된 CH3 돌연변이 T350V/L351Y/F405A/Y407V 및 Fc 침묵 돌연변이 L234A/L235A/D265S를 포함하는 SEQ ID NO: 158의 폴리펩티드를 사용하여 CD3 특이적 VH-CH1-힌지-CH2-CH3를 생성하였다(표 29).
SEQ ID NO: 158 (huIgG1_G1m(17)_AAS_ZWA)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVYPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 309 또는 447의 폴리펩티드를 사용하여 CD3 특이적 VL-CL을 생성하였다(표 30).
SEQ ID NO: 309 (인간 카파 경쇄)
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 447 (인간 람다 경쇄)
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
VH-CH1-힌지-CH2-CH3 및 VL-CL 형식의 항-CD3 분자의 DNA 서열의 SEQ ID NO가 표 31에 제시되어 있다.
[표 29]
[표 30]
[표 31]
SEQ ID NO: 471 (CD3W244, CDRW245, CD3W246, CD3W247, CD3W248 HC cDNA)
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGTGGCGGTCTGGTGAAGCCAGGTGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGTTTCACCTTCAGCCGCTACAACATGAACTGGGTGCGCCAAGCCCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGAGCAGCATCAGCACCAGCAGCAACTACATCTACTACGCCGACAGCGTGAAGGGCCGCTTCACCTTCAGCCGCGACAACGCCAAGAACAGCCTGGACCTGCAGATGAGCGGTCTGCGCGCCGAGGACACCGCCATCTACTACTGCACCCGCGGTTGGGGCCCATTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
SEQ ID NO: 311 (CD3W244 LC cDNA)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO: 452 (CD3W245 LC cDNA)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO: 313 (CD3W246 LC cDNA)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCAAGTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCGTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO: 314 (CD3W247 LC cDNA)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCAAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTCGGCGACCGCGTGACCATCACCTGTCGTGCCCGCCAGAGCATCGGCACCGCCATCCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATCTACTACGCCAGCGAGAGCATCAGCGGTGTGCCAAGCCGCTTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCAGCAGCCTGCAGCCAGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGAGCGGCAGCTGGCCATACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
SEQ ID NO: 315 (CD3W248 LC cDNA)
GACATCTTGCTGACTCAGTCTCCAGGCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCAGTTTCTCCTGCAGGGCCAGACAGAGCATTGGCACAGCCATACACTGGTATCAGCAAAGAACAAATGGTTCTCCAAGGCTTCTCATAAAGTATGCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCTTCCAGGTTTAGCGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAACAGTGTGGAGTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAGTGGGAGCTGGCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
hK2/CD3 이중특이적 생성을 위한 hK2 scFv-Fc의 조작
실시예 2에 기재된 바와 같이 SEQ ID NO: 7(표 1)의 링커를 사용하여 VH-링커-VL 또는 VL-링커-VH 방향으로 scFv로 조작된 hK2 VH/VL 영역은 선택적 이종이량체화를 촉진하기 위해 설계된 T350V/T366L/K392L/T394W 돌연변이 및 Fc 침묵 돌연변이(L234A/L235A/D265S)를 포함하는 scFv-힌지-CH2-CH3 형식으로 추가 조작되었고 IgG1로 발현되었다. SEQ ID NO: 110의 폴리펩티드를 불변 도메인 힌지-CH2-CH3으로 사용하였다.
SEQ ID NO: 110 (huIgG1_G1m(17)-힌지-Fc_C220S_AAS_ZWB)
EPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
scFv-힌지-CH2-CH3 형식(scFv-Fc)의 항-hK2 분자의 아미노산 서열은 표 32에 제시되어 있다.
[표 32]
hK2/CD3 이중특이적 생성을 위한 hK2 Fab-Fc의 조작
hK2 특이적 VH 및 VL 영역은 각각 VH-CH1-힌지-CH2-CH3 및 VL-CL 형식으로 조작되었다. 선택적 이종이량체화를 촉진하도록 설계된 CH3 돌연변이 T350V/T366L/K392L/T394W 및 Fc 침묵 돌연변이 L234A/L235A/D265S를 포함하는 SEQ ID NO: 378의 폴리펩티드가 KLK2 특이적 VH-CH1-힌지-CH2-CH3를 생성하기 위해 사용되었다.
SEQ ID NO: 378 (huIgG1_G1m(17)_AAS_ZWB)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYVLPPSREEMTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 309 또는 447의 폴리펩티드를 사용하여 hK2 특이적 VL-CL을 생성하였다.
SEQ ID NO: 309 (인간 카파 경쇄)
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 447 (인간 람다 경쇄)
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
hK2 Fab-Fc HC의 아미노산 서열이 표 33에 제시되어 있다.
[표 33]
hK2/CD3 이중특이적
Fab로 조작된 CD3B376 및 CD3W245 및 상기 기재한 바와 같이 양방향으로 scFv로 조작된 KL2B359, KL2B413, KL2B467 및 KL2B494의 hK2 VH/VL 영역은 이중특이적 항체를 생성하기 위해 발현되어, scFv-힌지-CH2-CH3 형식의 hK2 결합 아암 및 중쇄: VH-CH1-힌지-CH2-CH3 및 경쇄: VL-CL CD3 형식의 CD3 결합 아암을 갖는 hK2/CD3 이중특이적 항체를 생성한다. 대안적으로, LH-링커-VH 방향으로 scFv로 조작된 항-CD3 항체 CD3W245의 VH/VL 영역 및 상기 기재된 바와 같이 Fab로 조작된 항-hK2 항체 KL2B30, KL2B242 및 KL2B53의 VH/VL 영역은 이중특이적 항체를 생성하기 위해 발현되어, 중쇄 VH-CH1-힌지-CH2-CH3 및 경쇄 VL-CL 형식의 hK2 결합 아암 및 scFv-힌지-CH2-CH3 형식의 CD3 결합 아암을 갖는 hK2/CD3 이중특이적 항체를 생성한다. 항-scFv를 생성하기 위해 사용된 링커는 SEQ ID NO: 7의 링커이다.
T350V_L351Y_F405A_Y407V CH3 돌연변이는 하나의 중쇄로 조작되었고 T350V_T366L_K392L_T394W CH3 돌연변이는 위에서 설명한 바와 같이 다른 중쇄로 조작되었다. 또한, HK2 및 CD3 결합 아암 둘 모두는 전술한 바와 같이 Fc 이펙터 침묵 돌연변이 L234A_L235A_D265S를 함유하도록 조작되었다.
인간 람다-3 생식계열에 속하는 KL2B242 경쇄에는 짝을 이루지 않은 유리 Cys를 제거하고 잠재적인 제조 가능성 문제를 방지하기 위해 Ser(C33S)으로 돌연변이된 유리 Cys 잔기 하나가 함유되어 있다.
조작된 사슬이 발현되었고, 생성된 이중특이적 항체는 표준 방법을 사용하여 정제되었다. 이중특이적 항체는 실시예 8 및 9에 기재된 바와 같이 hK2 및 CD3에 대한 결합, 및 시험관내 및 생체내 세포독성에 대해 특성화되었다. 표 34는 선택된 항 hKL2/CD3 이중특이적 항체의 CDR SEQ ID NO를 나타낸다. 표 35는 선택된 항 hKL2/CD3 이중특이적 항체의 VH, VL 및 scFv SEQ ID NO를 나타낸다. 표 36은 선택된 항 hKL2/CD3 이중특이적 항체의 HC1, HC2, LC1 및 LC2 SEQ ID NO를 나타낸다. HC1 및 LC1은 hKL2 결합 아암의 중쇄 및 경쇄를 지칭한다. 대안적으로, HC1은 또한 hKL2 결합 아암의 scFv-힌지-CH2-CH3을 지칭할 수 있다. HC2 및 LC2는 CD3 결합 아암의 중쇄 및 경쇄를 지칭한다. 대안적으로, HC2는 또한 CD3 결합 아암의 scFv-힌지-CH2-CH3을 지칭할 수 있다. 표 37 HC1, LC1, HC2 및 LC2의 아미노산 서열. 표 37 HC1, LC1, HC2 및 LC2의 cDNA 서열.
[표 34]
[표 35]
[표 36]
[표 37]
[표 38]
SEQ ID NO: 363 (KL2B359-LH-scFv-Fc)
GAGATTGTTCTCACCCAATCCCCAGCTACTCTCTCTCTTTCACCCGGTGAGCGGGCAACCCTCTCCTGTAGAGCCAGCGAGAGCGTGGAGTATTTTGGCACATCCCTGATGCACTGGTATCAGCAAAAACCAGGACAACCCCCCAGACTCCTCATATATGCCGCCTCAAATGTCGAGAGTGGGATACCTGCACGGTTTTCAGGAAGCGGCAGCGGTACTGACTTCACATTGACTATATCCTCTGTAGAGCCAGAGGATTTTGCAGTCTACTTCTGCCAGCAAACTAGGAAGGTTCCATATACTTTTGGGGGCGGTACAAAAGTTGAGATAAAGGGCGGCTCCGAGGGCAAGAGCAGCGGCAGCGGCAGCGAGAGCAAGAGCACCGGCGGCAGCCAAGTACAGCTCCAGGAGTCAGGACCTGGGCTCGTCAAACCATCTCAGACATTGTCCCTGACATGCACAGTTTCCGGCAACAGTATTACTTCCGACTATGCTTGGAATTGGATCAGGCAATTCCCAGGAAAGCGGCTCGAGTGGATAGGTTATATTTCTTACTCTGGATCTACTACCTACAATCCCAGTTTGAAGTCTCGCGTGACAATTAGCCGGGACACATCAAAAAATCAATTCTCACTTAAACTTAGTTCTGTAACCGCTGCCGATACAGCCGTGTACTACTGCGCCACTGGTTATTATTATGGAAGCGGATTTTGGGGGCAAGGAACTTTGGTGACCGTCTCTTCCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
SEQ ID NO: 364 (KL2B413 - LH - scFv - Fc)
GAGGTACAACTTGTCGAAAGTGGCGGTGGAGTCGTCCAGCCTGGGCGATCACTTCGCCTCTCCTGTGTAGCCTCTGGTTTCACTTTCTCATCTTACGACATACACTGGGTCCGCCAGGCACCTGGTAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCCATCATTAGTTACGATGGCTCCAAAAAAGATTACACCGATAGCGTAAAGGGCAGATTTACCATTTCCAGGGATAATTCAAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGGACAGCCTCCGCGTCGAAGACTCTGCAGTTTATAGCTGTGCCAGGGAGTCAGGCTGGTCCCATTATTACTATTATGGTATGGACGTTTGGGGCCAGGGAACCATGGTCACTGTTAGTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
SEQ ID NO: 365 (KL2B467-LH-scFv-Fc)
CAGAGCGTACTTACCCAGCCTCCCAGCGTGTCTGTAGCCCCAGGACAGACAGCCAGTATTACATGCGGTGGTGACAATATAGGTTCCAAATCCGTGCATTGGTACCAGCAGAAGCCAGGGCAAGCTCCCGTGCTCGTGGTATATGATAATTCCGACCGCCCTTCCGGCATTCCCGAACGGTTTAGTGGTTCAAATTCAGGCACCACAGCAACTCTGACCATAAGCAGAGTCGAAGCTGGAGACGAAGCCGACTACTACTGTCAGGTATGGGACTCTAGTAGTGACCACCCTGTCGTCTTCGGTGGGGGAACCAAAGTGACCGTTCTGGGCGGCTCCGAGGGCAAGAGCAGCGGCAGCGGCAGCGAGAGCAAGAGCACCGGCGGCAGCCAGGTCCAGCTCGTAGAAAGTGGGGGCGGCGTAGTTCAGCCAGGCAGGAGTCTCCGGCTGAGTTGTGCAGCCAGCGGCTTTACTTTTTCCTACTATGGAATGCACTGGGTACGTCAGGCACCCGGCAAAGGTTTGGAGTGGGTCGCATTCATTTCTTATGATGGATCAAATAAGTATTATGCCGATAGTGTAAAGGGCAGATTTACAATAAGTCGAGACAACTCAAAGAACACTCTCTACCTCCAAATGAATAGTCTTCGGGCAGAGGATACTGCAGTGTACTATTGTGCTCATCTTCCTTATTCCGGTTCTTACTGGGCATTCGATTATTGGGGGCAAGGGACACAAGTTACCGTGTCTAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
SEQ ID NO: 366 (KL2B494-LH-scFv-Fc)
AGCAGCGAATTGACCCAACCACCTTCCGTCAGCGTCGCACCAGGGCAAACCGCCCGCATCACATGCGGTGGGAACAATATAGGAAGCAAATCTGTCCACTGGTACCAGCAAAAACCAGGACAAGCCCCTGTTCTGGTCGTCTATGATGACAGCGACAGACCAAGTGGTATTCCCGAGAGATTCTCCGGTAGCAACTCTGGAAATACAGCTACTTTGACCATCTCCAGAGTTGAGGCTGGTGACGAGGCAGATTACTATTGCCAGGTCTGGGACAGCTCCAGCGACCACGTCGTATTCGGTGGCGGGACCAAGCTGACTGTGCTGGGCGGCTCCGAGGGCAAGAGCAGCGGCAGCGGCAGCGAGAGCAAGAGCACCGGCGGCAGCCAGGTGCAGTTGGTAGAGTCAGGAGGGGGCCTCGTTCAACCTGGTGGCAGCCTCCGTTTGTCTTGTGCTGCCAGTGGATTTACTTTCAGTCACTACGCAATGAGCTGGGTGAGACAAGCACCTGGCAAGGGCCTTGAGTGGGTCTCCACTATCGGCGGTTCAGGGGGGAGCACTTACTACGCTGACTCTGTAAAAGGTCGCTTTACTATATCTAGAGATAACTCTAAAAACACACTCTACTTGCAGATGAACAGCCTGCGAGCCGAAGATACAGCCGTGTACTACTGCGCCAAGCCTCATATTGTAATGGTCACTGCCCTCTTGTATGATGGCATGGATGTTTGGGGCCAAGGGACAATGGTGACAGTCTCAAGCGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
SEQ ID NO: 367 (KLK2B30 Fab HC cDNA)
CAGGTTCAACTTCAAGAATCCGGGCCAGGTCTGGTCAAGCCTTCAGAGACTTTGTCCCTTACTTGCACAGTGAGCGGTGGCTCTATCTCAAGTTACTACTGGTCATGGATACGGCAGCCCCCAGGAAAGGGGCTTGAGTGGATTGGGTACATTTATTACTCAGGGTCAACAAACTACAATCCCTCCCTCAAATCCCGAGTGACAATTAGTGTCGATACATCTAAAAACCAGTTTTCCCTGAAATTGAGCTCAGTCACCGCAGCTGATACTGCAGTCTATTATTGTGCTGGCACAACAATCTTCGGGGTAGTAACTCCAAACTTCTACTACGGGATGGACGTGTGGGGGCAAGGAACAACCGTAACAGTAAGTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
SEQ ID NO: 303 (KLK2B30 Fab LC cDNA)
GATATTCAAATGACCCAGTCACCATCATTCCTGTCCGCCTCAGTGGGAGATCGCGTCACTATTACTTGTCGTGCTAGCCAGGGGATATCATCATATTTGGCTTGGTATCAACAAAAGCCAGGAAAGGCCCCAAAATTCCTTATATATGCAGCTAGTACACTCCAGAGTGGTGTTCCTAGCCGGTTCTCTGGCAGCGGCTCAGGGACCGAGTTCACCCTGACAATCTCCAGCTTGCAGCCCGAAGACTTTGCAACCTACTATTGCCAGCAACTGAACTCCTATCCTCTGACTTTCGGGGGAGGAACCAAGGTTGAGATTAAACGGACAGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCTGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGT
SEQ ID NO: 368 (KL2B53 Fab HC cDNA)
GAGGTACAACTTGTCGAAAGTGGCGGTGGAGTCGTCCAGCCTGGGCGATCACTTCGCCTCTCCTGTGTAGCCTCTGGTTTCACTTTCTCATCTTACGACATACACTGGGTCCGCCAGGCACCTGGTAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCCATCATTAGTTACGATGGCTCCAAAAAAGATTACACCGATAGCGTAAAGGGCAGATTTACCATTTCCAGGGATAATTCAAAGAACACCCTGTATCTGCAAATGGACAGCCTCCGCGTCGAAGACTCTGCAGTTTATAGCTGTGCCAGGGAGTCAGGCTGGTCCCATTATTACTATTATGGTATGGACGTTTGGGGCCAGGGAACCATGGTCACTGTTAGTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
SEQ ID NO: 304 (KL2B53 Fab LC cDNA)
GATATTGTAATGACTCAGTCACCCTCTTCACTGAGTGCATCAGTAGGTGATCGCGTTACCATCACTTGCCGTGCCAGTCAAGACATTTCAAATTACCTTGCATGGTACCAACAAAAGCCCGGAAAAGTGCCAAAGTTTTTGATTTATGCCGCTTCAACACTCCATTCAGGAGTGCCCTCTCGTTTCAGTGGATCTGGCAGTGGCACCGATTTTACTCTCACAATAAGCAGTCTCCAGCCTGAGGATGTAGCCACCTATTATTGCCAAAAATATAATTCAGCCCCCTATACTTTTGGACAGGGCACACGCCTTGAGATTAAACGGACAGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCTGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGT
SEQ ID NO: 369 (KLK2B242 Fab HC cDNA 및 KL2B242LC_C33S Fab HC)
CAAGTACAACTTCAAGAGTCTGGCCCTGGGCTTGTTAAGCCCTCAGAGACCTTGTCACTGACCTGTACCGTATCAGGCGGGTCAATTTCATCTTACTACTGGAGTTGGCTTCGTCAGCCTGCCGGATCTGGACTGGAGTGGATAGGTAGACTGTATGTTTCCGGCTTTACAAATTACAACCCATCTTTGAAAAGCCGTGTGACTCTCAGCCTCGACCCTTCTCGGAATCAACTTTCACTTAAATTGTCTTCTGTTACAGCTGCCGACACTGCAGTATATTATTGTGCAGGGGACTCAGGCAACTATTGGGGATGGTTTGATCCTTGGGGGCAGGGGACCCTGGTAACCGTGAGTTCTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
SEQ ID NO: 446 (KLK2B242LC_C33S Fab LC cDNA)
AGTTATGAGCTGACTCAACCACCCAGTGTCAGCGTATCCCCAGGAGAAACTGCCTCTATAACATGCAGCGGAGACCAGTTGGGAGAAAATTACGCCTCCTGGTACCAACAGAAGCCTGGACAAAGTCCTGTCCTCGTTATTTATCAAGATTCTAAACGTCCCTCTGGGATCCCCGAACGATTCTCCGGCTCTAACTCTGGGAATACCGCTACCTTGACAATAAGTGGTACACAGGCACTTGATGAAGCTGATTATTACTGCCAGGCATGGGATAACAGCATTGTGGTTTTCGGGGGCGGCACCAAACTCACAGTTCTCGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
SEQ ID NO: 370 (KLK2B30 wK477 Fab HC cDNA)
CAGGTTCAGCTGCAAGAGTCTGGCCCTGGCCTGGTCAAGCCTTCCGAGACACTGTCTCTGACCTGCACCGTGTCTGGCGGCTCCATCTCCTCCTACTACTGGTCCTGGATCAGACAGCCTCCTGGCAAAGGCCTGGAATGGATCGGCTACATCTACTACTCCGGCTCCACCAACTACAACCCCAGCCTGAAGTCCAGAGTGACCATCTCCGTGGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGTCCTCCGTGACCGCTGCTGATACCGCCGTGTACTATTGTGCTGGCACCACCATCTTCGGCGTGGTCACCCCTAACTTCTACTACGGCATGGACGTGTGGGGCCAAGGCACAACAGTGACAGTCTCTTCTGCCTCCACCAAGGGTCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACTTGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGCTGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACCTCACCTGGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCTCTCTCCCTGTCTCCGGGAAAA
SEQ ID NO: 373 (CD3W245 - LH-scFv-Fc cDNA)
GACATACAAATGACACAATCACCCTCTTCTCTTTCTGCAAGCGTTGGCGACCGTGTCACTATCACTTGTCGAGCCCGCCAGTCCATAGGTACTGCCATTCACTGGTATCAACAGAAGCCTGGCAAGGCTCCCAAACTCCTGATTAAGTATGCCAGCGAGAGCATTTCCGGCGTACCTTCAAGATTTTCCGGCTCCGGTAGTGGGACAGATTTCACTCTCACTATATCTAGCCTCCAACCAGAAGATTTCGCCACTTACTACTGTCAACAATCAGGTTCATGGCCTTACACTTTCGGCCAGGGGACAAAATTGGAGATCAAGGGCGGCTCCGAGGGCAAGAGCAGCGGCAGCGGCAGCGAGAGCAAGAGCACCGGCGGCAGCGAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
SEQ ID NO: 374 (CD3W245-LH-scFv-Fc w/ K447)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCTCTGTCCGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATTACCTGCCGGGCCAGACAGTCTATCGGCACCGCTATCCACTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGATTAAGTACGCCTCCGAGTCCATCTCCGGCGTGCCCTCCAGATTTTCTGGCTCTGGATCTGGCACCGACTTTACCCTGACAATCTCCAGCCTGCAGCCTGAGGACTTCGCCACCTACTACTGTCAGCAGTCCGGCTCTTGGCCTTACACCTTTGGTCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTGCAGCTGGTTGAATCTGGCGGAGGACTGGTTAAGCCTGGCGGCTCTCTGAGACTGTCTTGTGCTGCTTCTGGCTTCACCTTCAGCCGGTACAACATGAACTGGGTCCGACAGGCTCCTGGCAAAGGCCTGGAATGGGTGTCCTCCATCTCCACCTCCAGCAACTACATCTACTACGCCGACTCCGTGAAGGGCAGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGGACCTGCAGATGTCTGGCCTGAGAGCTGAGGACACCGCTATCTACTACTGCACCAGAGGCTGGGGACCCTTCGATTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCATCTGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACTTGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCTCTCTCCCTGTCTCCGGGAAAA
SEQ ID NO: 371 (CD3W245 Fab-HC-Fc)
GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGATATAACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTACTAGTAGTAATTACATATACTACGCAGACTCAGTGAAGGGCCGATTCACCTTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGGATCTGCAAATGAGCGGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTATTTATTACTGTACGAGAGGCTGGGGGCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
SEQ ID NO: 312 (CD3W245 Fab-LC-Fc)
GACATACAAATGACACAATCACCCTCTTCTCTTTCTGCAAGCGTTGGCGACCGTGTCACTATCACTTGTCGAGCCCGCCAGTCCATAGGTACTGCCATTCACTGGTATCAACAGAAGCCTGGCAAGGCTCCCAAACTCCTGATTAAGTATGCCAGCGAGAGCATTTCCGGCGTACCTTCAAGATTTTCCGGCTCCGGTAGTGGGACAGATTTCACTCTCACTATATCTAGCCTCCAACCAGAAGATTTCGCCACTTACTACTGTCAACAATCAGGTTCATGGCCTTACACTTTCGGCCAGGGGACAAAATTGGAGATCAAGCGGACAGTGGCCGCTCCTTCCGTGTTCATCTTCCCACCTTCCGACGAGCAGCTGAAGTCCGGCACAGCTTCTGTCGTGTGCCTGCTGAACAACTTCTACCCTCGGGAAGCCAAGGTGCAGTGGAAGGTGGACAATGCCCTGCAGTCCGGCAACTCCCAAGAGTCTGTGACCGAGCAGGACTCCAAGGACAGCACCTACAGCCTGTCCTCCACACTGACCCTGTCCAAGGCCGACTACGAGAAGCACAAGGTGTACGCCTGCGAAGTGACCCATCAGGGCCTGTCTAGCCCTGTGACCAAGTCTTTCAACCGGGGCGAGTGT
SEQ ID NO: 372 (CD3B376 Fab-HC-Fc)
CAGGTGCAGCTCCAACAGAGTGGTCCCAGACTCGTGAGACCCTCTCAAACACTCAGTTTGACTTGTGCCATCTCAGGCGATTCAGTTTTCAACAACAATGCAGCTTGGAGCTGGATTAGGCAGTCACCTAGTCGCGGTCTTGAATGGCTTGGGCGTACATACTATCGCTCTAAATGGTTGTATGATTACGCTGTGTCCGTGAAGAGCCGAATCACCGTAAACCCTGATACCTCCAGGAATCAGTTCACATTGCAACTGAATAGTGTGACTCCCGAGGATACTGCACTCTATTATTGTGCCCGAGGATATAGCAGTAGCTTCGACTATTGGGGACAAGGGACACTCGTTACCGTTAGTTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGTCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCAGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACGTGTACCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCGCCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCTAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
SEQ ID NO: 317 (CD3B376 Fab-LC-Fc)
CAGTCTGCTCTGACCCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGCTCTCCCGGCCAGTCCATCACCATCAGCTGTACCGGCACCTCCTCCAACATCGGCACCTACAAGTTCGTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCCGACAAGGCCCCCAAAGTGCTGCTGTACGAGGTGTCCAAGCGGCCCTCTGGCGTGTCCTCCAGATTCTCCGGCTCCAAGTCTGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCAGCGGACTGCAGGCTGAGGACCAGGCCGACTACCACTGTGTGTCCTACGCTGGCTCTGGCACCCTGCTGTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGACCGTGCTGGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
실시예 6: hK2xCD3 이중특이적 항체의 생물물리학적 특성화
선택된 hK2 x CD3 이중특이적 항체의 친화도
hK2 또는 인간 CD3에 대해 선택된 hK2xCD3 이중특이적 항체의 친화도를 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 측정하였다. SPR은 복합체 형성 및 해리 시 질량 변화를 측정하여 두 결합 파트너 간의 상호 작용 강도를 연구하는 라벨-프리 기술이다. 항체는 항-Fc 항체로 코팅된 센서 칩에 포획된 후 다양한 농도 및 특정 결합 및 해리 시간에서 가용성 hK2 또는 가용성 재조합 인간 CD3을 주입하였다. 해리 후, 표면은 다음 상호작용을 준비하기 위해 적절한 용액으로 재생되었다. 센서그램을 1:1 Langmuir 모델에 피팅하여 동역학 정보(온-속도 및 오프-속도 상수)를 추출하였다. 결합 친화도(KD)는 속도 상수의 비(koff/kon)로 보고된다. 선택된 hK2/CD3 이중특이적 항체의 KD 값은 표 39에 나열되어 있다.
[표 39]
선택된 hK2 x CD3 이중특이적 항체의 열 안정성
이중특이적 항체 샘플의 열 안정성은 자동화 Prometheus 기기를 사용하여 NanoDSF 방법에 의해 결정되었다. 384웰 샘플 플레이트로부터 24웰 모세관으로 샘플을 로딩하여 측정을 수행하였다. 각각의 샘플에 대해 2회 실행을 수행하였다. Prometheus NanoDSF 사용자 인터페이스(용융 스캔 탭)를 사용하여 실행에 대한 실험 파라미터를 설정하였다. 샘플에 대한 열 스캔은 1.0℃/분의 속도로 20℃ 내지 95℃ 범위이다. Dual-UV 기술은 330 nm 및 350 nm의 방출 파장에서 고유한 트립토판 및 티로신 형광을 모니터링하고 이 비(F350 nm/F330 nm)를 온도에 대해 플롯하여 언폴딩(unfolding) 곡선을 생성한다. Nano DSF는 pH 7.4인 인산염 완충 식염수에서 0.5 mg/mL 농도의 모든 분자의 Tm을 측정하는 데 사용된다. 측정된 Tm 값은 표 40에 나열되어 있다.
[표 40]
AC-SINS(선호도 포획-자가 상호작용 나노입자 분광법)에 의한 자가-결합 가능성
높은 처리량 스크리닝 분석을 사용하여 Ab 후보의 자가-상호작용 경향을 측정하였다. 자가-상호 작용에 대한 경향은 일반적으로 Ab 용해도가 낮고 다운스트림 Ab 제조에 어려움이 있다. 이 분석에서, 금 나노입자(AuNP)는 염소 항-인간 IgG(H+L) 포획 항체로 코팅되고 나중에 폴리클론 염소 IgG의 존재 하에 후보 Ab와 배양된다. 자가-결합하는 임의의 후보 Ab는 AuNP를 근접하게 가져와 나노입자의 플라즈몬 파장(λp)을 이동시키며, 이를 최대 흡광도에서의 파장(λmax)이라고도 한다. 각 후보 Ab에 대한 이동의 크기(Δλmax)는 자체-결합의 강도를 나타낸다. 이 분석에서는 자가-결합 가능성을 나타내지 않거나 높은 자가-결합 가능성을 나타내는 적절한 대조 항체가 사용된다. 이 분석에서 시험된 모든 분자는 자가-결합에 대한 위험이 낮거나 없음을 보여주었다.
실시예 7: 이중특이적 hK2xCD3 항체의 시험관내 및 생체내 특성화
hK2xCD3 이중특이적 항체의 시험관내 세포독성
생성된 이중특이적 항체의 세포독성 가능성은 Incucyte 플랫폼에서 실시간 경과 이미징을 사용하여 T 세포 매개 세포독성 분석에 의해 시험관내 측정되었다.이중특이적 항체는 3:1의 이펙터:표적 비(E:T 비)에서 건강한 공여자로부터 단리된 팬 인간 CD3+ T 세포의 존재 하에 hK2 양성 세포주 VCaP 세포에서 시험되었다. 아포토시스에 의한 세포 사멸은 표적 VCaP 세포에 의해 안정적으로 발현되는 염료로부터의 형광 신호를 측정함으로써 모니터링되었다.
정상 공여자 팬 T 세포를 KLK2+ VCaP 세포와 공동 배양하였다. KLK2xCD3 이중특이적 항체는 96시간 동안 0 내지 100 nM로 투여되었다. 3:1 이펙터 대 표적(ET) 비가 사용되었다. 도 8a는 표적 세포 사멸을 정량화하기 위해 실시간으로 incuCyte 이미징 시스템에 의해 측정된 KL2BxCD3 이중특이적 분자의 시험관내 표적 세포독성을 도시한다. 표적 세포는 표적 세포 사멸을 정량화하기 위해 실시간으로 IncuCyte 이미징 시스템에 의해 측정된 적색 핵 염료를 안정적으로 발현하고 있었다. 전체 종양 세포 용해는 VCaP 세포의 실시간 동역학적 사멸 곡선의 AUC에 기초하여 그래프화되었다(도 8a). 도 8b는 표적 세포 사멸로부터의 아포토시스 신호를 측정하기 위해 형광 카스파제 3/7 시약에 의해 측정된 KL2BxCD3 이중특이적 분자의 시험관내 표적 세포독성을 도시한다. 녹색 형광 카스파제 3/7 시약을 사용하여 표적 세포 사멸로부터의 아포토시스 신호를 측정하였다. 총 카스파제 3/7 활성은 실시간 카스파제 3/7 활성 곡선의 AUC에 기초하여 그래프화되었다(도 8b). 데이터는 이중특이적 hK2/CD3 항체가 시간이 지남에 따라 생존 가능한 VCaP 세포의 용량 의존적 감소를 촉진하고 따라서 VCaP 종양 세포의 T 세포 매개 사멸을 유도한다는 것을 보여준다. 따라서, 이중특이적 hK2xCD3 항체는 T 세포 활성화를 매개하는 데 효과적이며 용량 의존적 KLK2+ 종양 세포 사멸을 보여준다.
hK2xCD3 이중특이적 분자에 의한 시험관내 T 세포 활성화 및 증식
hK2xCD3 이중특이적 항체는 T 세포 활성화 및 증식을 촉진하는 능력에 대해 시험되었다. 정상적인 공여자 팬 T 세포는 CFSE(5 uM)로 표지되었고 KLK2(+) VCap 세포와 공동 배양되었다. KLK2xCD3 이중특이적 항체는 96시간 동안 0 내지 100 nM로 투여되었다. 3:1 이펙터 대 표적(ET) 비가 사용되었다. 96시간의 공동 배양 후, 세포를 수확하고 CD25, 라이브/데드 염료로 염색하였다. Flowjo 소프트웨어를 사용하여 Fortessa 유세포 분석기에서 유세포 분석을 수행하였다. CTV 염료 희석 및 활성화 마커 CD25의 빈도를 결정하였다. 상이한 용량의 CD25 양성 세포의 빈도를 사용하여 시험관내 T 활성화를 그래프화하였다(도 9a). 증식 게이트는 0 nM 처리군을 사용하여 결정되었다. 증식 게이트로 들어가는 세포의 빈도를 사용하여 시험관내 T 세포 증식을 그래프화하였다(도 9b). 데이터는 다양한 KLK2xCD3 이중특이적 항체에 의한 T 세포의 용량 의존적 활성화 및 증식을 확인한다.
hK2xCD3 이중특이적 분자에 의한 시험관내 T 세포 사이토카인 방출.
T 세포 사이토카인 방출에 대한 항-hK2xCD3 항체의 효과를 시험관내 측정하였다. 위에서 설명한 시험관내 세포독성 실험으로부터 상청액 샘플을 수집하였다. 13-플렉스 사이토카인 Luminex 분석을 수행하여 hK2xCD3 이중특이적 항체의 상이한 용량에서 IFN-γ 및 TNF-α 농도를 정량화하였다. 도 10a 및 도 10b는 용량 의존적 방식으로 KLK2xCD3 이중특이적 항체에 의해 촉발된 활성화된 T 세포에 의한 기능적 사이토카인 방출을 도시한다.
T 세포 인간화 마우스에서 확립된 피하(SC) 인간 전립선 이종이식 모델에서의 이중특이적 hK2xCD3 항체의 효능
이 연구의 목적은 인간 전립선 종양 VCaP s.c. 마우스 이종이식 모델에서 KLK2xCD3 이중특이적 생체내 효능을 평가하는 것이다. KLK2xCD3 이중특이적 항체의 생체내 효능을 인간 전립선 종양 VCaP s.c. 마우스 이종이식 모델에서 평가하였다. KLK2xCD3 분자의 항종양 효능은 확립된 SC 인간 전립선 VCaP 이종이식편에서 평가되었다. 온전한 수컷 NSG 마우스를 사용하여 인간 종양 및 인간 T 세포를 이식하기에 적합한 숙주를 제공하였다. 인간 전립선 세포주 VCaP는 ATCC(American Type Culture Collection)에서 입수하였다. VCaP 세포는 지수 성장 동안 수확되었고 마우스 오른쪽 옆구리에 0.2 mL의 부피로 1×107 세포 SC가 주입되었다. 20e6 인간 T 세포를 각 동물에 대해 복강내 주사하였다. 3가지 용량 수준을 5배 증량으로 평가하였다: 0.2 mg/㎏, 1 mg/㎏ 및 5 mg/㎏(도 39a). 이중특이적 항체는 복강내를 통해 일주일에 2회 투여되었다. 첫 번째 복강내 투여 후 6시간에 눈 혈액을 샘플링하고 Luminex 기반 분석을 사용하여 기능적 사이토카인 수준을 측정하였다(도 39b). 종양 부피 및 체중 측정값은 모든 연구 전반에 걸쳐 매주 2회 수집되었다. 델타 종양 성장 억제(ΔTGI) 백분율은 % ΔTGI = ([(TVc-TVc0)-(TVt-TVt0)]/(TVc-TVc0))×100으로 계산된, 처리군과 대조군의 평균 종양 부하 사이의 차이로 정의되었다; 상기 식에서, 'TVc'는 소정의 대조군의 평균 종양 부하이고, 'TVc0'은 소정의 대조군의 평균 초기 종양 부하이고, 'TVt'는 처리군의 평균 종양 부하이고, 'TVt0'은 처리군의 평균 초기 종양 부하이다. %TGI는 ([TVc-TVt]/TVc)×100으로 정의되었다.
본 발명의 적어도 하나의 KLK2xCD3 화합물은 용량 의존적 항-종양 효과를 나타냈고, 즉 1 mg/㎏에서, KLCB80은 한계 종양 성장 억제를 나타냈고 5 mg/㎏에서 강력한 항-종양 효과를 나타냈다. 첫 번째 투여 후 6시간에 사이토카인 평가는 활성 KLCB80의 배경 이상의 기능적 사이토카인 방출을 보여주었으며, 이는 생체내 효능과 일치한다.
실시예 8: 11B6을 포함하는 CAR의 생성 및 특성화.
hK2 11B6 scFv CAR의 작제 및 발현
hK2-표적화 항체 11B6으로부터 유래된 scFv를 포함하는 hK2 CAR 작제물(CAR13: HL_HC인간화_LC인간화_20AA 및 CAR15: LH_LC인간화_HC인간화_20AA)을 도 11에 예시된 바와 같이 작제하였다. 다이나비즈 인간 T-Expander CD3/CD28 자극 T 세포를 전기천공한 다음 OPTI-MEM(Invitrogen)으로 3회 세척하고 50×106/ml의 최종 농도로 OPTI-MEM에 재현탁하였다. 이어서, 0.1 ml의 세포(5E6)를 RNA를 코딩하는 10 ㎍의 IVT CAR과 혼합하고 전기천공하였다. 전기천공 후, T 세포를 6웰 플레이트로 옮기고 즉시 37℃ 배양기에 다시 넣었다. 1차 인간 T 세포는 mRNA 없이(MOCK) 또는 hK2 scFv CAR 또는 관련 없는 대조군 CAR을 발현하는 10 ㎍의 mRNA와 함께 전기천공되었다. 전기천공 24시간 후 CAR 표면 발현을 2 ㎍/ml 비오틴화된 L-단백질 및 스트렙타비딘-접합된 PE(도 12 위쪽 패널) 또는 비오틴화된 hK2(1 ㎍/ml) 및 스트렙타비딘-접합된 PE(도 12 아래쪽 패널)로 염색한 후 유세포 분석에 의해 측정하였다.
전기천공 24시간 후, T 세포를 계수하였다. 각각에 대해 1E5 T 세포를 수집하였다. 세포를 마이크로타이터 플레이트용 FACS 완충액 200 μL/웰을 사용하여 FACS 완충액으로 2회 세척하고 상청액을 버렸다. 모든 웰을 단백질 L(Genscript, Cat. No. M000971:500; 2 ug/ml)을 함유한 100 μl 염색 완충액으로 염색하고, 빛을 차단하면서 4℃에서 적어도 30분 동안 배양하였다. FACS 완충액이 있는 마이크로타이터 플레이트에 대해 150 μL/웰을 사용하여 FACS 완충액을 2회 첨가하여 세포를 세척하였다. 400× g에서 원심분리를 실온에서 4분 동안 수행하였다. 이어서 상청액을 버렸다.모든 웰을 100 μl 스트렙타비딘-R-피코에리트린(SA-PE; 1:250) 및 라이브/데드 고정 가능 근적외선 데드 세포 염색 염료(1:1000)로 염색하고 빛을 차단하면서 4℃에서 적어도 30분 동안 배양하였다. 이어서 세포는 유세포 분석을 위해 준비되었다.
도 12, 위쪽 패널에 도시된 바와 같이, 단백질 L 염색은 KLK2 HL 및 LH CAR 둘 다(각각 41.4% 및 66.3%)에서 관찰된 반면, mRNA 전기천공이 없는 T 세포인 대조군 T 세포에서는 배경 염색(약 5.5%)만 관찰되었다.도 12, 아래쪽 패널에 도시된 바와 같이, 1차 인간 T 세포에 대한 CAR 발현은 또한 J&J 내부 비오틴 표지된 재조합 KLK2 단백질(비오틴-Hk2 단백질, Lot:20180810, CBIS ID:KL2W12.CB.003, 2.4 mg/ml, 1 mM 벤자미딘)에 이어 SA-PE을 통해 검출될 수 있다. 도시된 바와 같이, T 세포는 유세포 분석에 의해 측정 시 KLK2 LH CAR(82.7%)을 효율적으로 발현하였으며, 반면 mRNA 전기천공 또는 개시되지 않은 대조군 CAR(비-KLK2 특이적)이 없는 T 세포인 대조군 T 세포에서는 배경 염색(약 1.73% 또는 1.19%)만 관찰되었다. 결과는 대표적인 공여자 T 세포에 대해 표시되며 여러 공여자(적어도 n = 3)에서 재현 가능하였다.
표 41은 CAR13 및 15의 SEQ ID 번호를 보여준다.
hK2 11B6 CAR-T 세포에 의한 종양 세포 사멸
유세포 분석기를 사용한 세포 추적 바이올렛(CTV, Thermo Fisher Scientific) 기반 세포독성 분석에 대한 공동 배양은 11B6 CAR-T 세포의 세포독성을 연구하기 위해 수행되었다.
T 세포는 다음과 같이 제조되었다.EP 24시간 후에, T 세포를 계수하고 가장 농축된/원하는 E:T에 필요한 농도에서 재현탁하였다. T 세포를 100 μl/웰의 분석으로 첨가하였다(2×106 세포/ml; 100 μl를 10:1 E:T 비로 플레이팅, 즉 2E4 표적 세포당 2E5 T 세포).완전한 T 세포 배지(Optimizer w/CTS, 5% 인간 혈청, 1% GlutaMax)를 사용하여 0.3125:1로 만든 2배 연속 희석으로 10:1 E:T 농도의 스톡을 만들었다. T 세포를 96웰 둥근 바닥 조직 배양 처리된 플레이트를 사용하여 삼중으로 플레이팅하였다(100 ul/웰).
CTV 표지된 표적 세포는 다음과 같이 제조되었다. 20 μL DMSO를 CTV 염색 용액의 바이알에 첨가하였다. 이 스톡 용액을 5 μM 염색 용액을 위해 20 mL의 PBS(37℃로 가온)로 희석하였다. 10E6 종양 세포를 수집하고 PBS로 2회 세척하고 4E6/ml(2.5 ml)에 재현탁하였다. 동일한 부피(2.5 ml)의 CTV 염색 용액을 첨가하였다. 세포를 37℃ 배양기에서 20분 동안 배양하였다. 결합되지 않은 염료를 흡수하기 위해 40 ml PRMI+20% FBS를 세포에 첨가하였다. 세포를 5분 동안 배양하였다. 세포를 400 × g에서 5분 동안 원심분리하였다. 세포 펠렛을 미리 가온시킨 RPMI+10% FBS 배지에 재현탁하였다. 한편, T 세포는 위에서 설명한 원하는 E/T 비로 시딩되었다. 종양 세포주 Vcap(KLK2+) 및 DU145(KLK2-)를 재계수한 다음, 세포를 2E5/ml 및 100 ul에 이중으로 재현탁하였다. 세포는 평평한 바닥 96웰 플레이트에서 표지된 종양 세포주와 공동 배양되었다.
유세포 분석기를 사용하여 다음과 같이 세포 독성 분석을 수행하였다. 20시간의 공동 배양 후, 모든 세포를 U-바닥 96웰 플레이트로 옮기고 세척하였다. 20시간의 공동 배양 후 평평한 바닥 96웰 플레이트에서 모든 세포를 수집하고 U-바닥 96웰 플레이트로 옮기고 세척하였다. 0.25% 트립신 30 μl를 모든 웰에 첨가하고 37℃ 배양기에서 5분 동안 배양하였다. 5분 후, 모든 종양 세포를 U-바닥 96웰 플레이트에 수집하였다. 세포를 원심분리하고 400 × g에서 5분 동안 2회 세척하였다. 그런 다음 세포 펠렛을 희석된(1:1000) LIVE/DEAD™ 고정 가능 근적외선 염색 염료(100 μl)에 재현탁하였다. 세포를 4℃에서 30분 동안 배양하고 400 × g에서 5분 동안 세포를 원심분리하여 FACS 완충액으로 2회 세척하였다. 세척 후, 모든 세포를 100 μl의 BD Cytofix™ 고정 완충액(50 ul FACS 완충액 + 50 ul 고정 완충액)을 사용하여 10분 동안 고정하였다. 세포를 원심분리하고 400 × g에서 5분 동안 1회 세척하였다. 세포 펠렛을 FACS 완충액에 재현탁하였다. 배양 기간의 종료 후 염색된 샘플을 다색 유세포 분석으로 분석하였다.
세포독성 활성의 백분율은 다음 방정식을 사용하여 계산되었다:
% 비(specific)사멸 = % 근적외선+CTV+(죽은) 세포 - % 자발적인 근적외선 +CTV+ / (100% - % 자발적인 근적외선 +CTV+ (죽은) 세포) × 100%.
일시적 형질감염 24시간 후, 표적 세포(hK2 양성 Vcap 및 hK2 음성 DU145 세포)를 세포 추적 바이올렛(CTV) 형광 염료로 표지한 다음 hK2 CAR-T 세포와 공동 배양하였다. Mock T 세포는 음성 이펙터 대조군으로 사용되었다. 세포는 도 13에 도시된 바와 같이 0.3125:1 내지 10:1 범위의 이펙터-대-표적 세포(E/T) 비로 20시간 동안 공동 배양되었다. 사멸 백분율은 CAR-T 세포 없이 배양된 살아있는 표적 세포의 수에 대한 공동 배양물에 남아 있는 살아 있는(생존 염료 음성) 표적(CTV 양성) 세포의 절대 수의 비로 측정되었다. 도시된 바와 같이, hK2 CAR LH T 세포는 10:1 내지 0.3125:1의 E/T 비에서 hK2(+) 인간 전립선암 세포주 VCap 세포(도 13, 위쪽 패널)를 특이적이고 효율적으로 용해했지만 K2(-) DU145 세포(도 13, 아래쪽 패널)는 용해하지 않았으며, 반면 Mock 또는 hK2 HL CAR인 T 세포에서는 배경 세포독성만 관찰되었다.
hK2 CAR-T 세포는 또한 표적 세포의 면역 세포 매개 세포용해에 대한 효능 분석으로서 실시간 세포 분석 시스템으로 xCELLigence를 사용하여 실시간 세포 독성에 대해 시험되었다.
96웰 E-플레이트(ACEA Biosciences)의 각 웰에 50 μL의 표적 암세포 배양 배지를 첨가하고 배경 임피던스를 측정하여 세포 지수로 표시하였다. 그런 다음, 부착 표적 세포 VCap 및 DU145를 해리하고 E-플레이트의 5E4(VCap), 5E3(DU145) 세포/웰의 밀도로 100 μL의 부피로 시딩하고 전극 표면에 수동적으로 부착되도록 하였다. 시딩 후, E-플레이트를 층류 후드 내부의 주위 온도에서 30분 동안 유지한 다음 세포 배양 배양기 내부의 RTCA MP 기기로 옮겼다. 데이터 기록은 실험의 전체 기간(96시간) 동안 15분 간격으로 즉시 시작되었다.
처리가 적용되었을 때(암 세포 시딩 24시간 후), 데이터 수집이 일시 중지되었고, 각 웰에서 50 μL의 배지를 제거하였으며, 이펙터 CAR-T 세포를 50 μL의 부피로 상이한 이펙터 대 표적(E:T) 비로 첨가하였다. hK2 CAR-T 및 개시되지 않은 대조군 CAR(비-hK2 특이적) T 세포를 재현탁하였다. 그런 다음 96웰 플레이트에서 2배 희석을 2회 수행하였다(5:1 내지 0.156:1 E/T 비). 표적 + Mock 이펙터 대조군(RNA 전기천공 T 세포 없음)도 표적 세포에 추가되었다.
표적 세포 VCap(5E4) 및 DU145(5E3)는 Mock, 10 ㎍ mRNA 전기천공(형질감염 24시간 후) hK2 11B6 CAR LH 또는 대조군 CAR-T 세포와 함께 대략 72시간 동안 상이한 E/T 비로 배양되었다. VCap 및 DU145에 대한 정규화된 세포 지수(CI) 플롯이 각각 도 14 및 도 15 에 도시되어 있다. 단독으로 시딩했을 때 표적 세포가 플레이트에 부착되고 증식하여 CI 판독값이 증가한다. T 세포가 표적 세포에 첨가되었을 때, hK2 CAR 및 대조군 CAR-T 세포는 5:1 내지 0.156:1의 E/T 비에서 hK2(+) VCap 세포 세포용해 및 후속적인 CI의 점진적인 감소를 매개하였다.
hK2 11B6 CAR-T 세포에 의한 사이토카인 생성
세포독성 T 세포에 의해 생성된 IFN-γ는 종양의 면역 감시를 가능하게 하며, 이는 증식을 직접적으로 억제하고 생체내 및 시험관내에서 일부 악성 종양의 아포토시스를 유도할 수 있다. 실시예 3에 기재된 바와 같이, hK2 CAR-T 세포가 hK2(+) 종양 세포를 인식하고 활성화할 수 있는지 여부를 결정하기 위해, xCELLigence 기반 사멸 분석으로부터 상청액을 수집하였다.약 70시간의 공동 배양 후, 상청액을 수집하고 ELISA 키트(인간 IFN-γ ELISA MAX™ Deluxe, BioLegend, Cat#:430106)와 함께 제공된 지침에 따라 ELISA에 의해 분석하였다.
항원-자극된 CAR-T 세포의 IFN-γ 생성은 도 16에 도시되어 있다. hK2 CAR LH 및 대조군 CAR-T 세포는 E:T 비 의존적 방식으로 hK2 발현 VCap 세포와의 공동 배양 동안 IFN-γ를 분비했지만, hK2-음성 DU145 세포와의 공동 배양 동안에는 그렇지 않았다. 개시되지 않은 대조군 CAR은 hK2보다 훨씬 더 높은 항원 발현 수준으로 인해 훨씬 더 많은 양의 IFN-γ를 분비하였다. 2회 배양으로부터의 평균 IFN-γ 농도 ± SD(pg/ml)가 기록되었다.
실시예 9: 추가 scFv CAR 작제물의 생성 및 특성화
실시예 1에 기재된 바와 같이, scFv로 클로닝된 11B6의 엑토도메인은 승온(55℃)에서 결합을 유지하지 않았고, 따라서 부모 11B6으로부터 새로운 인간화 항체를 생성하기 위한 추가 캠페인이 개시되었다.
항체 11B6으로부터 유래된 열적으로 안정화된 scFv를 함유하는 hK2 CAR이 생성되었다(CAR1-CAR12, CAR14, CAR16). 열적으로 안정화된 scFv를 함유하는 CAR 작제물의 설명 및 SEQ ID NO가 표 13에 제공되어 있다. 설명의 이름(HCG5, LCD6, HCF3, LCB7)은 실시예 1에서 확인된 VH 또는 VL 사슬을 다시 지칭하며, 20AA는 scFv에서 VH/VL 쌍들 사이의 20개 아미노산 길이의 링커를 지칭한다. CAR에서 scFv는 VH-L-VL 또는 VL-L-VH 방향으로 클로닝되었다.
생성된 scFv는 또한 CAR 작제물(CAR17-CAR36)에 혼입되고 추가로 특성화되었다. 표 41은 생성된 CAR 작제물 및 이들의 SEQ ID NO를 보여준다. 사용된 신호 서열은 MAWVWTLLFLMAAAQSIQA(SEQ ID NO: 24)이다.
[표 41]
CAR의 scFv 아미노산 서열은 실시예 2의 표 13에 제시되어 있다.
CAR 전장 ECD 도메인 및 전장 아미노산 서열은 아래에 나열되어 있다.
SEQ ID NO: 29 - 세포외 항원 결합 도메인 1 (HL_HCG5_LCD6_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 30 - 세포외 항원 결합 도메인 2 (HL_HCG5_LC인간화_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 31 - 세포외 항원 결합 도메인 3 (HL_HCF3_LCB7_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 32 - 세포외 항원 결합 도메인 4 (HL_HCG5_LCB7_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 33 - 세포외 항원 결합 도메인 5 (LH_LCD6_HCG5_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 34 - 세포외 항원 결합 도메인 6 (LH_LC인간화_HCF3_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 35 - 세포외 항원 결합 도메인 7 (LH_LC인간화_HCG5_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 36 - 세포외 항원 결합 도메인 8 (LH_LCB7_HCF3_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 37 - 세포외 항원 결합 도메인 9 (LH_LCB7_HCG5_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWMGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 38 - 세포외 항원 결합 도메인 10 (LH_LCD6_HCF3_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTPVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 39 - 세포외 항원 결합 도메인 11 (HL_HC인간화_LCB7_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 40 - 세포외 항원 결합 도메인 12 (HL_HC인간화_LCD6_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 41 - 세포외 항원 결합 도메인 13 (HL_HC인간화_LC인간화_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO: 42 - 세포외 항원 결합 도메인 14 (LH_LCD6_HC인간화_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTIQSVQAEDVSVYFCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 43 - 세포외 항원 결합 도메인 15 (LH_LC인간화_HC인간화_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 44 - 세포외 항원 결합 도메인 16 (LH_LCB7_HC인간화_20AA)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPKLLIYAASNRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSVQAEDVAVYYCQQTRKVPYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSDTLSLTCAVSGNSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTMSRDTSKNQFSLKLSSVTAVDTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 149 (KL2B413_HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO: 150 (KL2B413_LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAEIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 151 (KL2B359_HL)
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SEQ ID NO: 152 (KL2B359_LH)
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SEQ ID NO: 410 (KL2B357_HL)
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SEQ ID NO: 411 (KL2B357_LH)
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SEQ ID NO: 412 (KL2B358_HL)
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SEQ ID NO: 413 (KL2B358_LH)
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SEQ ID NO: 414 (KL2B360_HL)
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SEQ ID NO: 415 (KL2B360_LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASESVEYFGTSLMHWYQQKPGQPPRLLIYAASNVESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSVEPEDFAVYFCQQTRKVPYTFGGGTKVEIKggsegkssgsgseskstggsQVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGNSITSDYAWNWIRQFPGKGLEWIGYISYSGSTTYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATGYYYGSGFWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 416 (KL2B30_HL)
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SEQ ID NO: 417 (KL2B30_LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO: 418 (KL2B53_HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSDIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIK
SEQ ID NO: 419 (KL2B53_LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQADIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO: 420 (KL2B242_HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSSYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO: 421 (KL2B242_LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQASYELTQPPSVSVSPGETASITCSGDQLGENYACWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQALDEADYYCQAWDNSIVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWLRQPAGSGLEWIGRLYVSGFTNYNPSLKSRVTLSLDPSRNQLSLKLSSVTAADTAVYYCAGDSGNYWGWFDPWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 422 (KL2B467_HL)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSSggsegkssgsgseskstggsQSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTV
SEQ ID NO: 423 (KL2B467_LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQAQSVLTQPPSVSVAPGQTASITCGGDNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDNSDRPSGIPERFSGSNSGTTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHPVVFGGGTKVTVggsegkssgsgseskstggsMAWVWTLLFLMAAAQSIQAQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSYYGMHWVRQAPGKGLEWVAFISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAHLPYSGSYWAFDYWGQGTQVTVSS
SEQ ID NO: 424 (KL2B494_HL)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSSSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL
SEQ ID NO: 425 (KL2B494_LH)
MAWVWTLLFLMAAAQSIQASSELTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSHYAMSWVRQAPGKGLEWVSTIGGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKPHIVMVTALLYDGMDVWGQGTMVTVSS
SEQ ID NO: 46 - CAR 1 (HL_HCG5_LCD6_20AA; pDR000083431)
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SEQ ID NO: 47 - CAR 2 (HL_HCG5_LC인간화_20AA; pDR000083432)
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SEQ ID NO: 48 - CAR 3 (HL_HCF3_LCB7_20AA; pDR000083436)
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SEQ ID NO: 49 - CAR 4 (HL_HCG5_LCB7_20AA; pDR000083437)
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SEQ ID NO: 50 - CAR 5 (LH_LCD6_HCG5_20AA; pDR000083438)
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SEQ ID NO: 51 - CAR 6 (LH_LC인간화_HCF3_20AA; pDR000083440)
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SEQ ID NO: 52 - CAR 7 (LH_LC인간화_HCG5_20AA; pDR000083441)
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SEQ ID NO: 53 - CAR 8 (LH_LCB7_HCF3_20AA; pDR000083443)
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SEQ ID NO: 54 - CAR 9 (LH_LCB7_HCG5_20AA; pDR000083444)
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SEQ ID NO: 55 - CAR 10 (LH_LCD6_HCF3_20AA; pDR000083446)
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SEQ ID NO: 56 - CAR 11 (HL_HC인간화_LCB7_20AA; pDR000083433)
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SEQ ID NO: 57 - CAR 12 (HL_HC인간화_LCD6_20AA; pDR000083434)
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SEQ ID NO: 58 - CAR 13 (HL_HC인간화_LC인간화_20AA; pDR000083435)
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SEQ ID NO: 59 - CAR 14 (LH_LCD6_HC인간화_20AA; pDR000083439)
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SEQ ID NO: 60 - CAR 15 (LH_LC인간화_HC인간화_20AA; pDR000083442)
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SEQ ID NO: 61 - CAR 16 (LH_LCB7_HC인간화_20AA; pDR000083445)
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>SEQ ID NO: 153 - CAR17 (KL2B413_HL; PBD000091628)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSSGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIKTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
>SEQ ID NO: 154 - CAR18 (KL2B413_LH; PBD000091623)
EIVLTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLSWYQQKPGKAPKLLIYATSTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPRTFGQGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMTWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSERYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQNYDILTGHYGMDVWGQGTTVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
>SEQ ID NO: 155 - CAR19 (KL2B359_HL; PBD000091576)
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>SEQ ID NO: 156 - CAR20 (KL2B359_LH; PBD000091577)
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SEQ ID NO: 426 (CAR21)
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SEQ ID NO: 427 (CAR22)
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SEQ ID NO: 428 (CAR23)
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SEQ ID NO: 429 (CAR24)
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SEQ ID NO: 430 (CAR25)
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SEQ ID NO: 431 (CAR26)
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SEQ ID NO: 432 (CAR27)
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SEQ ID NO: 433 (CAR28)
DIQMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQGISSYLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCQQLNSYPLTFGGGTKVEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAGTTIFGVVTPNFYYGMDVWGQGTTVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
SEQ ID NO: 434 (CAR29)
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SEQ ID NO: 435 (CAR30)
DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLAWYQQKPGKVPKFLIYAASTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQKYNSAPYTFGQGTRLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCVASGFTFSSYDIHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSKKDYTDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMDSLRVEDSAVYSCARESGWSHYYYYGMDVWGQGTMVTVSSTSTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
SEQ ID NO: 436 (CAR31)
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SEQ ID NO: 437 (CAR32)
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SEQ ID NO: 438 (CAR33)
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SEQ ID NO: 439 (CAR34)
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SEQ ID NO: 440 (CAR35)
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SEQ ID NO: 441 (CAR36)
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상이한 scFv 기반 CAR을 확인하기 위해, Jurkat-Lucia™ NFAT 세포(JNL)를 통해 항원 의존적 활성화를 평가하였다. 활성화된 T 세포의 핵 인자(NFAT)는 면역 세포의 조절자로 처음 확인된 전사 인자의 패밀리이다. T 세포 활성화는 칼슘 유입을 유도하여 NFAT의 N-말단에서 세린이 풍부한 핵 국소화 신호를 탈인산화하는 칼시뉴린을 활성화하여 NFAT의 핵 수입을 유도한다. 이론에 얽매이지 않고, scFv 클러스터링으로 인한 강장제 신호전달은 JNL 리포터 세포주에서 NFAT 프로모터에 의해 유도되는 반딧불이 루시페라제에 의해 후속적으로 검출될 수 있다.
렌티바이러스 형질도입은 다음과 같이 수행되었다. JNL 세포를 수확하고 1E6/ml로 재현탁하였다. 500 μl의 JNL 세포와 렌티바이러스 바이러스를 3의 MOI로 첨가하고, 상하로 피펫팅하여 혼합하였다. 혼합물을 37℃ 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 500 μl JNL 배지를 각 웰에 첨가하고 37℃ 배양기에서 배양을 계속하였다. 4일차에 세포를 T25 플라스크로 옮겼다. 5 내지 6일차에 형질도입 검증을 수행하였다. 사용된 특정 CAR에 대한 적절한 검출 시약(예를 들어, CAR을 검출하기 위한 비오틴-hK2 단백질)을 통해 CAR 발현을 조사하기 위해 150 μl의 세포를 수확하였다. JNL 세포는 동결되거나 분석에 사용하기에 충분한 세포가 수득될 때까지 5×105/ml로 유지되었다.
열적으로 안정화된 scFv CAR을 JNL 리포터 분석에서 항원 의존적 활성에 대해 평가하였다. 신호-반응성 NFAT 프로모터에 의해 유도되는 루시페라제 유전자를 함유하는 Jurkat 세포는 다양한 hK2 CAR 작제물로 형질도입되었다. 분석은 다음과 같이 수행되었다. 표적 세포주와의 공동 배양은 2:1의 이펙터 대 표적 비로 수행되었다. JNL 세포를 회전시켜 배지에서 임의의 분비된 루시페라제를 제거했다; 그런 다음 JNL 세포를 4×105/ml로 새로운 배지에 재현탁하였다. 세포를 수확하였다. 그 다음, 항원-양성 및 항원-음성 표적 세포주를 모두 2E5/ml로 제조하였다. 100 μl JNL을 100 μl 표적 세포에 첨가하였다. JNL 단독 대조군의 경우, 표적 세포 대신 100 μl 배지를 첨가하였다. 양성 대조군의 경우, JNL 세포 단독 또는 CAR JNL 세포를 1× 세포 자극 칵테일에 첨가하고 37℃ 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 150 μl의 상청액을 96웰 플레이트에 수확하고 원심분리하여 세포를 제거하였다. 100 μl의 상청액을 플레이트에서 단단한 바닥 블랙 플레이트로 옮겼다. 그런 다음, QUANTI-luc 루시아 검출 시약 100 μl를 첨가하였다. Envision 멀티플레이트 판독기로 판독하기 전에 혼합물을 실온에서 5분 동안 배양하였다.
JNL 세포 상의 CAR 발현(CAR 1-10)은 비오틴화된 hK2에 이어 스트렙타비딘-접합된 PE에 의해 결정되었으며, 그 결과는 도 17에 도시되어 있다. 형질도입된 JNL 세포에서의 CAR 발현은 상이한 클론 및 부모 11B6 CAR 전반에 걸쳐 검출가능한 발현을 나타내는 세포의 60 내지 75%로 선택된 모든 클론 모두에 대해 확인되었다. 표시된 CAR 클론 및 형질도입되지 않은 JNL 세포(UTD)를 포함하는 JNL 세포를 표적 세포주(VCap 또는 DU145 세포)와 공동 배양하고 루시페라제 활성을 발광 강도로 측정하였다. 클론은 발광 강도가 항원 발현 세포의 존재 하에 UTD 세포 수준의 1.5배를 초과할 때 활성인 것으로 간주하였다.
CAR 작제물과 그의 동족 세포 항원(표적 세포 상의 hK2) 사이의 결합은 JNL 세포에서 루시페라제 발현을 유도한다(도 18). 표시된 CAR 클론 및 JNL 세포(형질도입되지 않음, 이하 "UTD")를 함유하는 JNL 세포를 표적 세포주(VCap 또는 DU145 세포)와 공동 배양하고 루시페라제 활성을 발광 강도로 측정하였다. 클론은 발광 강도가 항원 발현 세포의 존재 하에 UTD 세포 수준의 1.5배를 초과할 때 활성인 것으로 간주하였다. 모든 10개 클론과 부모 11B6 CAR HL 및 LH에 대해 항원 의존적 활성화가 발견되지 않았다.
실시예 10: T 세포 상의 추가 scFv CAR의 발현
열적으로 안정화된 11B6 CAR T 세포의 기능을 평가하기 위해, 렌티바이러스 형질도입을 사용하여 열적으로 안정화된 11B6 및 부모 scFv 형질도입된 CAR-T 세포를 생성하였다. 1차 인간 T 세포는 감염 다중도(MOI)가 3인 부모 scFv CAR 렌티바이러스 및 열적으로 안정화된 11B6으로 형질도입되었다. CAR 발현은 형질도입 후 14일에 비오틴화된 hK2(1 ㎍/ml)에 이어 스트렙타비딘-접합된 PE에 의해 결정되었다.
실험 프로토콜은 다음과 같았다.
렌티바이러스 패키징이 수행되었다. 14E6 Lenti-X™ 293T 세포를 150 ㎟ 둥근 바닥 Corning™ BioCoat™ Collagen I 코팅된 배양 디쉬당 시딩하고, DMEM+10% FBS 배지를 사용하여 37℃에서 밤새 배양하였다.
80-85%의 이상적인 컨플루언시(confluency)에서 Lenti-X™ 293T 세포를 사용하여 다음을 준비하였다. 배양 배지를 21 ml 293T 성장 배지로 교체하였다. 리포펙타민 2000을 실온에서 희석하고 OptiMEM을 평형화하였다. 희석된 리포펙타민 2000을 혼합된 플라스미드에 적가하고 잘 혼합하였다. 혼합물을 실온에서 25분 동안 배양하였다. 플레이트를 부드럽게 휘저어 혼합하면서 형질감염 혼합물을 Lenti-X 293T 세포에 적가하였다. 혼합물을 37℃ 배양기에서 배양하였다. 렌티바이러스를 형질감염 24시간 및 48시간 후에 수확하였다. 상기 시약은 표 42에 요약되어 있다.
[표 42]
렌티바이러스 농축은 다음과 같이 수행되었다. 0.45 μm 셀룰로오스 아세테이트 필터를 통해 여과하기 전에 과도한 293T 세포가 떠다니는 경우 렌티바이러스 함유 상청액을 수확하고 500 × g에서 10분 동안 원심분리하였다. 상청액을 1/3 부피의 Lenti-X 농축기(Clontech, Cat. # 631232)와 조합한 멸균 용기로 옮기고 부드럽게 뒤집어서 혼합하였다. 혼합물을 4℃에서 밤새 배양하였다. 샘플을 4℃에서 45분 동안 1,500 × g에서 원심분리하였으며 원심분리 후 흰색 펠렛을 볼 수 있었다. 상청액은 펠렛을 방해하지 않고 조심스럽게 제거되었다. 잔류 상청액은 1,500 × g에서 간단한 원심분리 후 피펫으로 제거되었다. 저온 T 세포 성장을 사용하여 펠렛을 원래 부피의 1/10로 부드럽게 재현탁하였다. 바이러스는 200 μl로 분취되었고 즉시 -80℃에서 보관되었다.
바이러스 적정은 다음과 같이 수행되었다. 로그 단계 SupT1은 완전한 RPMI에서 성장되었다. 100 μl 20,000 SupT1 세포/ml를 평평한 96웰 플레이트에 웰당 시딩하였다. 그런 다음 96웰 둥근 바닥 플레이트에서 바이러스 적정을 수행하였다. 100 μl 배지를 플레이트의 모든 웰에 첨가하였다. 바이러스 분취액을 -80℃ 냉동고에서 손으로 해동하였다. 분취량을 위아래로 피펫팅하여 잘 혼합하고 첫 번째 웰에 50 μl 바이러스를 첨가한 다음 완전히 혼합하였다. 50 μl 바이러스를 다음 웰에 피펫팅하여 연속 1:3 희석을 수행하였다. 그 다음, 50 μl 배지를 1차 Ab 단독, 2차 Ab 단독 및 형질도입되지 않은 대조군에 첨가하였다. 각각의 50 μl를 다중 채널 피펫을 사용하여 적정 플레이트에서 분석 플레이트의 100 μl SupT1 세포로 옮기고 37℃에서 밤새 배양하였다. 100 μl의 미리 가온시킨 배지를 각 샘플에 첨가하고 2일 더 배양하였다. 형질도입 효율은 유세포 분석에 의해 결정되었다. 샘플을 둥근 바닥 96웰 플레이트로 옮기고 1400 RPM에서 3분 동안 회전시켰다. 상청액을 빠르게 버리고 후드에서 블로팅하여 과도한 배지를 제거하였다. 세척을 150 μl FACS 완충액으로 반복하였다. 그런 다음 CAR 작제물에 적합한 염색 프로토콜을 수행하였다. 유세포 분석 전에 샘플을 150 μl FACS 완충액에 재현탁하였다.
바이러스 역가 계산: 역가 = (% CAR 양성/100) × 2 × 104 × 20 × 희석 인자
다중 복사 통합을 제외하기 위해, 20%에 가장 가까운 형질도입을 갖는 역가가 사용된다.
T 세포 활성화, 형질도입 및 확장은 다음과 같이 수행되었다. 나이브 T 세포의 바이알을 수조에서 해동하고 9 ml의 미리 가온시킨 T 세포 배지(TCM CTS OpTmizer T 세포 확장 SFM+5% 인간 혈청 +IL-2 100IU/ml)를 함유하는 15 ml 원뿔형 튜브에 적가하였다. 크라이오바이알을 1 ml의 배지로 세척하여 최대 수를 회수하고 실온에서 8분 동안 300 × g에서 회전시켰다. 펠렛을 새로운 10 ml TCM에 재현탁하고, 계수하고, 밀리너(milliner)당 1E6 세포로 재현탁하였다. 5E5 세포를 24웰 플레이트에 웰당 첨가하였다. 1.5×106 CD3/CD28 비드를 웰당 500 μl 부피로 첨가하여 총 부피가 웰당 1 ml가 되도록 하였다. 활성화 24시간 후, 바이러스를 실온에서 해동시켰다. 바이러스를 3의 감염 다중도(MOI)로 첨가하고, 부드럽게 휘저어 혼합하고, 배양기의 플레이트로 되돌렸다. (렌티바이러스 기능적 역가는 SupT1 역가 분석으로 사전 결정되었다.) 하나의 웰은 바이러스가 첨가되지 않은 형질도입되지 않음(UTD)에 대해 남겨두었다.
형질도입 24시간 후, 1 ml의 TCM을 각 웰에 첨가하였다. 이 시점부터 페니실린-스트렙토마이신을 첨가했다(2일차). 3 내지 5일차에, 4 ml의 TCM을 각 2 ml의 세포에 첨가하고 T25 조직 배양 처리 플라스크로 옮겼다. 플라스크를 배양기에 수평으로 배치했다(3일차). T 세포 배양을 위해 동일한 부피의 TCM을 첨가했다(4일차). 5 내지 14일차에, 세포를 격일로 확인하고 생존력, 크기 및 총 세포 수를 기록하였다. 세포 밀도는 mL당 백만 세포로 조정되었다. 이상적인 수확 시간은 공여자에 따라 다르며 세포 크기와 확장 배율에 따라 결정된다. 100 내지 200배 확장된 MOXI 유동 세포 계수기를 기반으로 세포 크기가 8 μm 미만인 경우 일반적으로 세포가 동결되었다.
렌티바이러스 형질도입 효율은 수확일에 다음과 같이 확인되었다. 배양물은 잘 혼합되었다. 100 μl의 T 세포를 100 μl FACS 완충액이 있는 96웰 플레이트의 상응하는 웰에 수확하고, 혼합하고, 실온에서 3분 동안 1300 RPM으로 회전시켰다. 세포를 200 μl FACS 완충액에 재현탁하고 4℃에서 원심분리를 반복하였다.
형질도입 14일 후, 세포를 100 μl의 비오틴 표지된 hK2(FACS 완충액에 희석된 1 ㎍/ml)에 재현탁하고 30분 동안 얼음에서 배양하였다. 100 μl의 FACS 완충액을 첨가하고, 4℃에서 회전 세척하였다. 또 다른 200 μl FACS 완충액을 첨가한 후 회전 세척을 반복하였다. 2차 항체 SA-PE(1:250), 라이브 데드 고정 가능 염색(1:500), αCD3, αCD4 및 αCD8 항체를 함유하는 마스터 용액 100 μl에 의한 염색을 얼음 위에서 30분 동안 수행하였다. 100 μl FACS 완충액을 첨가하고 4℃에서 회전 세척하고 버리고 4℃에서 회전 세척하기 전에 200 μl FACS 완충액에 재현탁하였다. 샘플을 유세포 분석으로 분석하기 전에 100 μl FACS 완충액에 재현탁하였다.
세포 수확 및 동결은 다음과 같이 수행되었다. 최종 세포 수가 결정되었다. 배양물을 수확하고 실온에서 10분 동안 300 × g에서 원심분리하였다. 배양물을 50 ml 원뿔형 튜브에 맞도록 더 작은 부피의 배지에 재현탁하였다. 튜브를 4℃에서 10분 동안 자석에 넣어 "비드를 제거"하였다. 비드/자석을 방해하는 것을 최소화하기 위해 세포를 튜브에서 부드럽게 옮기고 정확한 부피를 기록하였다. 계수를 반복하였다. 원심분리를 300 × g에서 10분 동안 수행하고 상청액은 버렸다. 세포를 냉각 용기에서 CS-10 CryoStor® 세포 동결보존 배지에서 동결시켰다. 용기를 액체 질소에 영구적으로 보관하기 전에 24 내지 48시간 동안 -80℃로 즉시 옮겼다. 그 결과를 도 27에 도시하였고, 형질도입된 T 세포의 표면에서 hK2 CAR 발현이 확인되었다. 10개의 열적으로 안정화된 클론 및 분석된 부모 11B6 HL 및 LH 각각에 의해 검출된 hK2 CAR + T 세포의 백분율(% 양성)의 요약이 도면에 제공되어 있다. CAR17(KL2B413_HL), CAR18(KL2B413_LH), CAR19(KL2B359_HL) 및 CAR20(HK2B359_LH)의 표면 발현의 결과가 도 27에 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, 상이한 클론은 17.9% 내지 42.7% 범위의 상이한 CAR 발현 수준을 갖는다. CAR 양성 CD3+ T 세포의 백분율은 CAR17의 경우 56.0%, CAR18의 경우 51.2%, CAR19의 경우 45.1%, 및 CAR20의 경우 59.9%, 그리고 형질도입되지 않은 세포(도면에서 UTD)의 경우 0.065%였다. 모든 CAR T 세포는 후속 기능 분석을 위해 동일한 CAR+ T 세포로 정규화되었다.
실시예 11: CAR-T 세포가 종양 세포 사멸을 매개한다
scFv CAR-T 세포는 항원 의존성 세포독성에 대해 실시간 IncuCyte 종양 사멸 분석에서 평가되었다. 열적으로 안정화된 hK2 CAR-T 세포 및 부모 11B6 CAR-T 세포를 VCaP 세포(도 20) 또는 PC3 세포(도 21)와 1:1 또는 0.5:1의 이펙터:표적 비(이는 CAR 발현 데이터를 기반으로 계산되었음)에서 88시간 동안 공동 배양하였다. CAR17, CAR18, CAR19 및 CAR20으로 형질도입된 CAR-T 세포를 1:1 또는 0.5:1의 이펙터 대 표적(ET) 비(이는 T 세포에 대한 CAR 발현을 기반으로 계산되었음)로 96시간 동안 hK2 양성 VCaP 세포 및 hK2 음성 DU145 세포와 공동 배양하였다. CAR17, CAR18, CAR19 및 CAR20으로 형질도입된 CAR-T 세포의 시간 경과에 따른 종양 세포 성장 억제 백분율은 VCap 세포에 대해서 도 30 및 DU145 세포에 대해서 도 31에 도시되어 있다. 표적 세포는 실시간 방식으로 IncuCyte 이미징 시스템에 의해 측정된 적색 핵 염료를 안정적으로 발현하고 있었다. 종양 세포 성장 억제(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%). 시험된 CAR-T 세포는 대략 100% TGI를 달성한 반면 형질도입되지 않은 대조군은 TGI를 나타내지 않았다. hK2 음성 DU145 세포에서 시험된 CAR-T 세포에서는 TGI가 관찰되지 않았다.
실시예 12: 열적으로 안정화된 scFv CAR-T 세포에 의한 사이토카인 생성
상청액은 1:1의 E/T 비로 VCaP 세포와 hK2 CAR-T 세포의 밤새(대략 20시간) 공동 배양하여 수집되었고 13-플렉스 Milliplex 인간 고감도 T 세포 키트(HSTCMAG28SPMX13)를 사용하여 분석되었다. hK2 CAR 변형된 T 세포는 hK2-발현 VCap 세포와 공동 배양하는 동안 사이토카인을 분비하였지만, 형질도입되지 않은 T 세포(UTD)에 대해서는 최소였다. hK2 CAR-T 세포에 의한 사이토카인 방출 결과가 도 22에 도시되어 있다.
상청액은 1:1의 E/T 비로 VCap, DU145(5E4 세포) 세포와 hK2 CAR-T 세포를 밤새(대략 20시간) 공동 배양하여 수집되었다. hK2 CAR-T 세포는 hK2 발현 VCap 세포와의 공동 배양 동안 IFN-γ를 분비했지만, hK2 음성 DU145 세포와의 공동 배양 동안에는 분비하지 않았다. CD3/28 비드 자극 T 세포 및 T 세포 단독을 각각 양성 및 음성 대조군으로 사용하였다. hK2 CAR-T 세포에 의한 IFN-γ 방출이 도 23에 도시되어 있다. 2회 배양으로부터의 평균 IFN-γ 농도 ± SD(pg/ml)가 도시되어 있다. 다른 열적으로 안정화된 CAR-T 세포는 hK2(+) VCap 세포와 공동 배양할 때 각기 다른 양의 IFN-γ를 생성하였다.
실시예 13: hK2 CAR-T 세포의 증식
hK2 CAR-T 세포를 증식 분석에서 평가하였다. T 세포 증식은 생체내 면역 기능의 중요한 시험관내 파라미터이다. 열적으로 안정화된 11B6 CAR-T 세포의 기능을 추가로 평가하기 위해, 열적으로 안정화된 11B6 및 부모 scFv CAR-T 세포를 CTV로 표지하여 T 세포 증식을 평가하였다.
hK2 CAR-T 및 형질도입되지 않은(UTD) T 세포를 CellTrace Violet(CTV, 5 μM)으로 표지하고 hK2(+) VCap 및 hK2(-) DU145 세포와 공동 배양하였다. 공동 배양 5일 후, 세포를 수확하고 CD3, CD25, 근적외선 라이브/데드 염료 및 hK2 CAR로 염색하였다. Flowjo 소프트웨어를 사용하여 Fortessa 유세포 분석기에서 유세포 분석을 수행하였다. 림프구는 살아있는 CD3에 의해 확인되었고, CTV 염료 희석 및 활성화 마커 CD25가 있는 CAR-T 세포의 빈도가 결정되었다. 도시된 바와 같이, hK2 CAR+ T 세포에 게이팅함으로써 hK2(-) DU145 세포가 아닌 hK2(+) Vcap 세포는 T 세포 증식(도 33) 및 활성화 마커 CD25의 상향 조절(도 34)을 조작한 모든 CAR 작제물을 촉진하였다. CD3/28 비드 자극 T 세포 및 T 세포 단독을 각각 양성 및 음성 대조군으로 사용하였다. 임의의 자극이 없는 T 세포 단독은 증식하지 않았고 CD3/28 비드 자극된 T 세포는 동등한 증식 패턴을 나타냈다. 도 35에 도시된 바와 같이, hK2 CAR-T 세포는 VCap 세포와의 공동 배양 5일 후 CD3/28 비드 양성 대조군보다 더 강력하게 증식하였다. 상이한 CAR 작제물 조작된 T 세포는 상이한 증식 활성을 갖고 상이한 CAR-T 세포 수를 나타냈다. CAR-T 세포 수는 3개의 기술 복제물로부터의 평균 절대 세포 수 +/- SEM을 기반으로 한다.
프로토콜은 다음과 같았다. 종양 세포 Vcap 및 DU145를 수집하고 PBS로 2회 세척하고 37℃ 배양기에서 1.5시간 동안 100 ug/ml 미토마이신 C(MMC)가 함유된 PBS에 10E6/ml로 재현탁하여 종양 세포 증식을 차단하였다. 20 μL의 DMSO를 CTV 염색 용액의 바이알에 첨가하였다. 5 μl의 용액을 5 mL(1:1000) PBS(37℃로 가온)에 희석하여 5 μM 염색 용액을 제공하였다. 2E6 T 세포를 계수하고, 수집하고, PBS로 2회 세척하고, 4E6/ml(0.5 ml)로 재현탁하였다. 동일한 부피(0.5 ml)의 CTV 염색 용액을 첨가하였다. 세포를 37℃에서 20분 동안 배양하였다. 그런 다음, 임의의 결합되지 않은 염료를 흡수하기 위해 4 ml PRMI+20% FBS를 세포에 첨가하였다. 세포를 5분 동안 배양하고 400 × g에서 5분 동안 원심분리하였다. 세포 펠렛을 미리 가온시킨 RPMI+10% FBS 배지에 재현탁하였다. T 세포를 계수하고, 1E5 세포(100 ul)를 96웰 평평한 바닥 플레이트에 시딩하였다.
그 동안, MMC 처리된 종양 세포 hK2(+) VCap 및 HK2(-) DU145를 수집하고 1.5시간 후에 계수한 다음 1E6/ml로 재현탁하였다. 세포의 1E5(100 μl)를 96웰 플레이트에서 T 세포와 공동 배양하였다. T 세포 단독 및 3:1 CD3/28 비드 대 세포 비를 첨가한 T 세포를 각각 음성 및 양성 대조군으로 사용하였다.
5일의 공동 배양 후, 모든 세포를 각 웰로부터 수집하였다. 세포를 원심분리하고 5분 동안 400 × g에서 2회 세척한 다음, 96웰 U 바닥 플레이트에서 hK2CAR, CD3, CD8 및 CD25, 라이브/데드(근적외선)로 염색하였다. 세척 후, 모든 세포를 100 μl BD Cytofix™ 고정 완충액(50 ul FACS 완충액 + 50 ul 고정 완충액)을 사용하여 10분 동안 고정하였다. 배양 기간의 종료 후 염색된 샘플을 다색 유세포 분석으로 분석하였다.
데이터 분석은 다음과 같이 수행하였다. CTV 히스토그램을 준비하였다. CTV 희석되지 않은 게이트는 단독으로 배양된 T 세포의 맨 오른쪽 피크(CTV 브라이트)를 포함하도록 설정되었고, CTV 희석된 게이트는 집단의 나머지를 캡처하도록 설정되었다. 이는 모든 샘플에 적용되었다.
실시예 14. CAR17, CAR18, CAR19 또는 CAR20으로 형질도입된 CAR-T 세포의 특성화.
CAR-T 세포의 활성화는 항원 의존적이다
생성된 CAR-T 세포를 실시예 5에 기재된 바와 같이 항원-의존적 활성에 대해 JNL 리포터 분석에서 평가하였다. 간단히 말해서, 신호 반응성 NFAT 프로모터에 의해 유도되는 루시페라제 유전자를 함유하는 Jurkat 세포(JNL 세포라고 함)는 CAR17(KL2B413_HL), CAR18(KL2B413_LH), CAR19(KL2B359_HL) 또는 CAR20(KL2B359_LH) 작제물로 형질도입되었다. 각 CAR의 발현은 비오틴화된 hK2에 이어 스트렙타비딘-접합된 PE에 의해 결정되었다. 형질도입된 JNL 세포에서 CAR 발현은 도 28에 도시된 바와 같이 KL2B359 기반 CAR을 발현하는 세포의 46 내지 50% 및 KL2B413 기반 CAR을 발현하는 세포의 73.7 내지 96%로 선택된 클론에 대해 확인되었다. 각 CAR을 발현하는 JNL 세포의 백분율은 다음과 같았다: CAR17 (KL2B413_HL): 73.7%. CAR18(KL2B413_LH): 93.6%, CAR19(KL2B359_HL): 46%, CAR20(KL2B359_LH): 50.8%.
hK2 CAR 작제물과 그 동족 세포 항원(표적 세포 상의 hK2) 사이의 결합은 JNL 세포에서 루시페라제 발현을 유도한다. 이를 위해, 시험 CAR 작제물로 형질도입된 JNL 세포 또는 형질도입되지 않은 JNL 세포(UTD)를 표적 세포주(VCap, LNCap/hK2(hK2를 재조합적으로 발현하는 LNCaP 세포), LNCaP, C4-2B, 22Rv1 또는 DU145 세포)와 공동 배양하였고 루시페라제 활성을 발광 강도로 측정하였다. 작제물은 발광 강도가 항원 발현 세포의 존재 하에 UTD 세포 수준의 1.5배를 초과할 때 활성인 것으로 간주하였다. 시험된 CAR 작제물에 대해 항원 의존적 활성화가 발견되지 않았다. 도 29는 도면에 나타낸 바와 같이 시험 표적 세포에 CAR-T 세포의 결합으로 인한 RLU(상대 광 단위)를 도시한다.
CAR-T 세포는 항원 의존적 방식으로 종양 세포 사멸을 매개한다
CAR17, CAR18, CAR19 및 CAR20으로 형질도입된 CAR-T 세포를 1:1 또는 0.5:1의 이펙터 대 표적(ET) 비(이는 T 세포에 대한 CAR 발현을 기반으로 계산되었음)로 96시간 동안 hK2 양성 VCaP 세포 및 hK2 음성 DU145 세포와 공동 배양했다(실시예 11). 표적 세포는 실시간 방식으로 IncuCyte 이미징 시스템에 의해 측정된 적색 핵 염료를 안정적으로 발현하고 있었다. 시간 경과에 따른 종양 세포 성장 억제 백분율(%)은 VCap 세포에 대해서 도 30 및 DU145 세포에 대해서 도 31에 도시되어 있다. 종양 세포 성장 억제(TGI)(%) = (초기 생존 표적 세포 수-현재 생존 표적 세포 수)/초기 생존 세포 수*100 (%). 시험된 CAR-T 세포는 대략 100% TGI를 달성한 반면 형질도입되지 않은 대조군은 TGI를 나타내지 않았다. hK2 음성 DU145 세포에서 시험된 CAR-T 세포에서는 TGI가 관찰되지 않았다.
CAR-T 세포는 항원 자극 시 사이토카인을 생성한다
세포독성 T 세포에 의해 생성된 IFN-γ는 종양의 면역 감시를 발휘하는 데 중요하며, 이는 증식을 직접적으로 억제하고 생체내 및 시험관내에서 일부 악성 종양의 아포토시스를 유도할 수 있다. hK2 CAR-변형된 인간 T 세포가 hK2 양성 종양 세포를 인식하고 활성화될 수 있는지 여부를 결정하기 위해, 지시된 CAR 클론으로 형질도입된 1차 T 세포 및 형질도입되지 않은 T 세포(UTD) 대조군을 표적 세포주(LNCaP/hK2, LNCaP, C4-2B, 22Rv1 또는 DU145 세포)와 공동 배양하고 IFN-γ 농도 측정을 위해 상청액을 수집하였다. 도 32에 도시된 바와 같이, hK2 CAR로 형질도입된 CAR-T 세포는 hK2(LNCap/hK2) 세포를 재조합적으로 발현하는 LNCaP 세포와의 공동 배양 동안 및 또한 매우 낮은 hK2 발현 C4-2B 및 LNCap 세포와의 공동 배양 동안 IFN-γ를 분비했지만 hK2 음성 DU145 세포와의 공동 배양 동안에는 분비하지 않았다. 2회 배양으로부터의 평균 IFN-γ 농도 ± SD(pg/ml)가 도면에 도시되어 있다.
CAR-T 세포는 항원 의존적 방식으로 활성화되고 탈과립화 마커를 상향 조절한다
종양 세포는 표적 종양 세포를 죽이는 용해 과립의 면역 분비를 통해 주로 CD8+ T 림프구 및 자연 살해(NK) 세포와 같은 세포독성 림프구에 의해 인식되고 살해될 수 있다. 이 과정은 면역 이펙터 세포의 세포질 막과 과립 막의 융합을 수반하여 CD107a와 같은 용해성 과립을 둘러싼 지질 이중층에 일반적으로 존재하는 리소좀 관련 단백질의 표면 노출을 야기한다. 따라서, CD107a의 막 발현은 면역 세포 활성화 및 세포독성 탈과립화의 마커를 구성한다.
탈과립화 분석은 다음과 같이 수행되었다. 표적 세포(5×104)는 96웰 플레이트에 웰당 0.1 ml의 동일한 수의 이펙터 세포와 공동 배양되었다. 대조군 웰은 T 세포만 함유하였다. 1 μl/샘플의 모넨신(BD Biosciences) 이외에 항-CD107a(웰당 5 μl)를 첨가하고 37℃에서 4시간 동안 배양하였다. 세포를 PBS로 2회 세척하고, hK2 CAR, CD3 및 CD8의 발현에 대해 염색하고 유세포 분석기 BD Fortessa에서 분석했다.
탈과립화 분석 결과는 도 33에 도시되어 있다. CD107A+ hK2 CAR-T 세포의 증가는 hK2 양성 Vcap 세포와의 공동 배양에서 분명했지만, hK2 음성 DU145와의 공동 배양은 효과가 없었다. 종양 세포 자극이 없는 CAR-T 세포 단독에서 그리고 UTD 대조군에서만 배경 염색(<2%)이 관찰되었다. 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA)는 이오노마이신(eBioscience™ Cell Stimulation Cocktail; 500X)과 조합으로, 양성 대조군으로 사용된 이 4시간 세포 배양 모델에서 CD107a 세포 표면 발현의 일관된 유도제였다. 결과는 대표적인 공여자 T 세포에 대해 표시되며 여러 공여자에서 재현 가능하였다.
CAR-T 세포는 항원 의존적 방식으로 증식한다
CAR-T 세포는 실시예 9에 기재된 T 세포 증식 분석 프로토콜을 사용하여 그의 증식에 대해 평가되었다. hK2 CAR-T 및 형질도입되지 않은(UTD) T 세포를 CellTrace Violet(CTV; 5μM)로 표지하고 hK2 양성 VCap 및 hK2 음성 DU145 세포와 공동 배양하였다. 공동 배양 5일 후, 세포를 수확하고 CD3, CD25, 근적외선 라이브/데드 염료 및 hK2 CAR로 염색하였다. Flowjo 소프트웨어를 사용하여 Fortessa 유세포 분석기에서 유세포 분석을 수행하였다. 림프구는 살아있는 CD3에 의해 확인되었고, CTV 염료 희석 및 활성화 마커 CD25가 있는 CAR-T 세포의 빈도가 결정되었다. CD3+ T 세포에 대한 게이팅에 의해, hK2 음성 DU145 세포가 아닌 hK2 양성 Vcap 세포는 각각의 시험된 CAR-T 세포주의 증식(도 34 및 도 35에 도시된 바와 같음) 및 활성화 마커 CD25의 상향 조절(도 36 및 도 37에 도시된 바와 같음)을 촉진했다. 임의의 자극 없는 T 세포 단독은만 증식하지 않았고 CD3/28 비드 자극된 T 세포는 동등한 증식 패턴을 나타냈다. hK2 CAR+ T 세포는 VCap 세포와의 공동 배양 5일 후 CD3/28 비드 양성 대조군보다 더 강력하게 증식하였다. 상이한 시험된 CAR-T 세포는 상이한 증식 활성을 가졌고 상이한 CAR-T 세포 수를 나타냈다. 증식하는 T 세포 및 CD25 발현 T 세포의 백분율은 복제물로부터의 평균 절대 세포 수 +/- SEM을 기반으로 하였다.
실시예 15: ADC의 생성 및 특성화
hK2에 결합하는 항체 또는 항원 결합 도메인은 In-111, Zr-89 또는 Lu-177 Ac-225와 같은 다양한 방사성 금속으로 표지되고 생체내 종양 생체 분포 또는 종양 효능은 수컷 NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ(NSG, 미국 메인주 바 하버 소재의 The Jackson Laboratory) 또는 Balb-c 또는 SHO 누드 마우스에서 LNCaP, VCaP 또는 C4-2B를 포함하는 확립된 피하(SC) 인간 전립선 모델에서 평가된다. hK2 또는 동형 대조군 항체에 결합하는 다양한 용량의 항체 또는 항원 결합 도메인은 상이한 양의 방사능(10-1000 nCi)으로 표지되고 종양 흡수 또는 효능이 측정된다.
SEQUENCE LISTING
<110> JANSSEN BIOTECH, INC.
<120> PROTEINS COMPRISING KALLIKREIN RELATED PEPTIDASE 2 ANTIGEN
BINDING DOMAINS AND THEIR USES
<130> JBI6125USNP1
<140>
<141>
<150> 63/030,445
<151> 2020-05-27
<150> 62/910,650
<151> 2019-10-04
<150> 62/878,964
<151> 2019-07-26
<160> 471
<170> PatentIn version 3.5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
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Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gln
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Ser Val Gln Ala Glu Asp Val Ser Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 2
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
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Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Val Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
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Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
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Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Pro Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Val Thr Val Ser Ser
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<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 5
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
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Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
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Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
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Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Pro Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 7
Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser
1 5 10 15
Thr Gly Gly Ser
20
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 8
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
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Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
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130 135 140
Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp
165 170 175
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
180 185 190
Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gln Ser Val Gln Ala Glu Asp Val
210 215 220
Ser Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly
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Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 9
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65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Pro Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
115 120 125
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130 135 140
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Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp
165 170 175
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
180 185 190
Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
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Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
115 120 125
Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp
165 170 175
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
180 185 190
Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Val
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245
<210> 12
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 12
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
Ser Val Gln Ala Glu Asp Val Ser Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
Pro Ser Asp Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile
145 150 155 160
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
180 185 190
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
195 200 205
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Pro Val Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 13
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 13
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg
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Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
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Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
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225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 14
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 14
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg
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Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
Pro Ser Asp Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile
145 150 155 160
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly
165 170 175
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Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
195 200 205
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Pro Val Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 15
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 15
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
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Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Val Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg
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Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
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Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
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Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
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Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Pro Val Asp Thr Ala Val
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Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 16
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 16
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
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Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
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Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
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Pro Ser Asp Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile
145 150 155 160
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly
165 170 175
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180 185 190
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
195 200 205
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Pro Val Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 17
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 17
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gln
65 70 75 80
Ser Val Gln Ala Glu Asp Val Ser Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
Pro Ser Asp Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile
145 150 155 160
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
180 185 190
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
195 200 205
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Pro Val Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 18
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 18
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
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Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
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Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
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Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp
165 170 175
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
180 185 190
Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Val
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245
<210> 19
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 19
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
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Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
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Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser
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Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
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Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
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Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gln Ser Val Gln Ala Glu Asp Val
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Ser Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly
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Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245
<210> 20
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 20
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
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Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
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Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
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Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245
<210> 21
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 21
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
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Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
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Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
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165 170 175
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Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 22
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 22
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
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Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 23
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 23
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
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Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
Pro Ser Asp Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile
145 150 155 160
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165 170 175
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
180 185 190
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195 200 205
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 24
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 24
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala
<210> 25
<211> 45
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 25
Thr Ser Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1 5 10 15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
20 25 30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
35 40 45
<210> 26
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 26
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
20
<210> 27
<211> 42
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 27
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 28
<211> 112
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 28
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
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85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 29
<211> 267
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 29
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
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35 40 45
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Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Pro Val Asp Thr Ala Val
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Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
115 120 125
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 53
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 58
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Pro Ala Pro Arg Pro
245 250 255
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
260 265 270
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
275 280 285
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
290 295 300
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly
305 310 315 320
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
325 330 335
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
340 345 350
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp
355 360 365
Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn
370 375 380
Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg
385 390 395 400
Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly
405 410 415
Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu
420 425 430
Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu
435 440 445
Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His
450 455 460
Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 61
<211> 471
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 61
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Val Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
Pro Ser Asp Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile
145 150 155 160
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
180 185 190
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
195 200 205
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Pro Ala Pro Arg Pro
245 250 255
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
260 265 270
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
275 280 285
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
290 295 300
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly
305 310 315 320
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
325 330 335
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
340 345 350
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp
355 360 365
Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn
370 375 380
Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg
385 390 395 400
Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly
405 410 415
Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu
420 425 430
Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu
435 440 445
Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His
450 455 460
Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 62
<211> 261
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 62
Met Trp Asp Leu Val Leu Ser Ile Ala Leu Ser Val Gly Cys Thr Gly
1 5 10 15
Ala Val Pro Leu Ile Gln Ser Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu
20 25 30
Lys His Ser Gln Pro Trp Gln Val Ala Val Tyr Ser His Gly Trp Ala
35 40 45
His Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala
50 55 60
His Cys Leu Lys Lys Asn Ser Gln Val Trp Leu Gly Arg His Asn Leu
65 70 75 80
Phe Glu Pro Glu Asp Thr Gly Gln Arg Val Pro Val Ser His Ser Phe
85 90 95
Pro His Pro Leu Tyr Asn Met Ser Leu Leu Lys His Gln Ser Leu Arg
100 105 110
Pro Asp Glu Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu
115 120 125
Pro Ala Lys Ile Thr Asp Val Val Lys Val Leu Gly Leu Pro Thr Gln
130 135 140
Glu Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile
145 150 155 160
Glu Pro Glu Glu Phe Leu Arg Pro Arg Ser Leu Gln Cys Val Ser Leu
165 170 175
His Leu Leu Ser Asn Asp Met Cys Ala Arg Ala Tyr Ser Glu Lys Val
180 185 190
Thr Glu Phe Met Leu Cys Ala Gly Leu Trp Thr Gly Gly Lys Asp Thr
195 200 205
Cys Gly Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asn Gly Val Leu Gln
210 215 220
Gly Ile Thr Ser Trp Gly Pro Glu Pro Cys Ala Leu Pro Glu Lys Pro
225 230 235 240
Ala Val Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr
245 250 255
Ile Ala Ala Asn Pro
260
<210> 63
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 63
Ser Asp Tyr Ala Trp Asn
1 5
<210> 64
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 64
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Ser Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 65
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 65
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 66
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 66
Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe
1 5
<210> 67
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 67
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His
1 5 10 15
<210> 68
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 68
Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His
1 5 10 15
<210> 69
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 69
Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser
1 5
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 70
Ala Ala Ser Asn Arg Glu Ser
1 5
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 71
Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 72
Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn
1 5 10
<210> 73
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 73
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr
1 5
<210> 74
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> D or E
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> D or A
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> S or T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> A or S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> V or L
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> L or P
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> I or L
<220>
<221> MOD_RES
<222> (22)..(22)
<223> N or S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> R or K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (49)..(49)
<223> K or R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (58)..(58)
<223> V or R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (62)..(62)
<223> V or I
<220>
<221> MOD_RES
<222> (64)..(64)
<223> A or D
<220>
<221> MOD_RES
<222> (80)..(80)
<223> Q or S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (82)..(82)
<223> L or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (83)..(83)
<223> Q or E
<220>
<221> MOD_RES
<222> (85)..(85)
<223> P or A
<220>
<221> MOD_RES
<222> (88)..(88)
<223> F or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (89)..(89)
<223> A or S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (92)..(92)
<223> Y or F
<220>
<221> MOD_RES
<222> (105)..(105)
<223> Q or G
<220>
<221> MOD_RES
<222> (109)..(109)
<223> L or V
<400> 74
Xaa Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Ser Xaa Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Xaa Xaa Cys Xaa Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Xaa Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Xaa Glu Ser Gly Xaa Pro Xaa
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Xaa
65 70 75 80
Ser Xaa Xaa Gln Xaa Glu Asp Xaa Xaa Val Tyr Xaa Cys Gln Gln Thr
85 90 95
Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Xaa Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 75
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (16)..(16)
<223> D or Q
<220>
<221> MOD_RES
<222> (23)..(23)
<223> A or T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (41)..(41)
<223> P or F
<220>
<221> MOD_RES
<222> (45)..(45)
<223> G or R
<220>
<221> MOD_RES
<222> (49)..(49)
<223> I or M
<220>
<221> MOD_RES
<222> (70)..(70)
<223> I or M
<220>
<221> MOD_RES
<222> (88)..(88)
<223> A or P
<220>
<221> MOD_RES
<222> (89)..(89)
<223> V or A
<400> 75
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Xaa
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Xaa Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Xaa Pro Gly Lys Xaa Leu Glu Trp
35 40 45
Xaa Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Xaa Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Xaa Xaa Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 76
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 76
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 77
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 77
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 78
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 78
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 79
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 79
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 80
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 80
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 81
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 81
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 82
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 82
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 83
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 83
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 84
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 84
Ile Arg Pro Arg Ala Ile Gly Gly Ser Lys Pro Arg Val Ala
1 5 10
<210> 85
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 85
Gly Lys Gly Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 86
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 86
Gly Gly Lys Gly Ser Gly Gly Lys Gly Ser Gly Gly Lys Gly Ser
1 5 10 15
<210> 87
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 87
Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Gly Lys Ser
1 5 10 15
<210> 88
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 88
Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser
1 5 10 15
<210> 89
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 89
Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Lys Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 90
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 90
Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
<210> 91
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 91
Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly
1 5 10 15
Lys Pro Gly Ser
20
<210> 92
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 92
Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly
1 5 10 15
Lys Gly Lys Ser
20
<210> 93
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 93
Ser Thr Ala Gly Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp
1 5 10
<210> 94
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 94
Gly Glu Gly Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 95
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 95
Gly Gly Glu Gly Ser Gly Gly Glu Gly Ser Gly Gly Glu Gly Ser
1 5 10 15
<210> 96
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 96
Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser
1 5 10 15
<210> 97
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 97
Gly Gly Gly Glu Ser Gly Gly Glu Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 98
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 98
Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly
1 5 10 15
Glu Gly Glu Ser
20
<210> 99
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 99
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 100
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 100
Pro Arg Gly Ala Ser Lys Ser Gly Ser Ala Ser Gln Thr Gly Ser Ala
1 5 10 15
Pro Gly Ser
<210> 101
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 101
Gly Thr Ala Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Gly Gly Ala Ala Ala Gly
1 5 10 15
Ala Ala Gly
<210> 102
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 102
Gly Thr Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly
<210> 103
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 103
Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly
1 5 10 15
Lys Pro Gly Ser
20
<210> 104
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 104
Gly Ser Gly Ser
1
<210> 105
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 105
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10
<210> 106
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 106
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10 15
Ala Pro Ala Pro
20
<210> 107
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 107
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Ala
1 5 10 15
Lys Glu Ala Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala
20 25 30
<210> 108
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 108
Gly Thr Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
1 5 10 15
<210> 109
<211> 231
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 109
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ala Leu Val
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
225 230
<210> 110
<211> 231
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 110
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Leu Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
225 230
<210> 111
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 111
Lys Val Thr Glu Phe
1 5
<210> 112
<211> 5
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 112
His Tyr Arg Lys Trp
1 5
<210> 113
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 113
Ser His Gly Trp Ala His
1 5
<210> 114
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 114
Arg His Asn Leu Phe Glu Pro Glu Asp Thr Gly Gln Arg Val Pro
1 5 10 15
<210> 115
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 115
Gly Trp Gly Ser Ile Glu Pro Glu Glu
1 5
<210> 116
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 116
Asn Asn Asn Ala Ala Trp Ser
1 5
<210> 117
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 117
Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Leu Tyr Asp Tyr Ala Val Ser Val
1 5 10 15
Lys Ser
<210> 118
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 118
Gly Tyr Ser Ser Ser Phe Asp Tyr
1 5
<210> 119
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 119
Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr Lys Phe Val Ser
1 5 10
<210> 120
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 120
Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 121
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 121
Val Ser Tyr Ala Gly Ser Gly Thr Leu Leu
1 5 10
<210> 122
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 122
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Arg Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Phe Asn Asn
20 25 30
Asn Ala Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Leu Tyr Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Val Asn Pro Asp Thr Ser Arg Asn
65 70 75 80
Gln Phe Thr Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Leu
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 123
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 123
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr
20 25 30
Lys Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Asp Lys Ala Pro Lys Val
35 40 45
Leu Leu Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Gln Ala Asp Tyr His Cys Val Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Gly Thr Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 124
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 124
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Arg Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile Gln
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Phe Ser Met Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 125
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 125
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Ser Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Phe Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 126
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 126
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 127
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 127
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 128
<211> 62
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 128
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys
1 5 10 15
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
20 25 30
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
35 40 45
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 129
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 129
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 130
<211> 330
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Description of Unknown:
wild-type IgG1 sequence
<400> 130
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 131
<211> 326
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Description of Unknown:
wild-type IgG2 sequence
<400> 131
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 132
<211> 327
<212> PRT
<213> Unknown
<220>
<223> Description of Unknown:
wild-type IgG4 sequence
<400> 132
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 133
<211> 251
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 133
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Asn Tyr Asp Ile Leu Thr Gly His Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser
130 135 140
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
145 150 155 160
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
165 170 175
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
180 185 190
Tyr Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
210 215 220
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg
225 230 235 240
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245 250
<210> 134
<211> 251
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 134
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp
145 150 155 160
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
165 170 175
Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Arg Asp Gln Asn Tyr Asp Ile Leu Thr Gly His Tyr Gly Met Asp Val
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 135
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 135
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
115 120 125
Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp
165 170 175
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
180 185 190
Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe
210 215 220
Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 136
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 136
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile
145 150 155 160
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Arg
165 170 175
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
180 185 190
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
195 200 205
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 137
<211> 124
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 137
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Asn Tyr Asp Ile Leu Thr Gly His Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 138
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 138
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 139
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 140
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 141
Ser Tyr Trp Met Thr
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 142
Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 143
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 143
Asp Gln Asn Tyr Asp Ile Leu Thr Gly His Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 144
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 144
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 145
Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 146
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 146
Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 147
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 147
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met Thr
1 5 10
<210> 148
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 148
Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr
1 5 10
<210> 149
<211> 270
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 149
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
85 90 95
Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gln Asn Tyr Asp Ile Leu Thr Gly His Tyr
115 120 125
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly
130 135 140
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
145 150 155 160
Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala
165 170 175
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile
180 185 190
Ser Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
195 200 205
Leu Leu Ile Tyr Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg
210 215 220
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
225 230 235 240
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser
245 250 255
Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
260 265 270
<210> 150
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 150
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala
20 25 30
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile
35 40 45
Ser Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
50 55 60
Leu Leu Ile Tyr Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg
65 70 75 80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
85 90 95
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser
100 105 110
Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly
130 135 140
Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
145 150 155 160
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
165 170 175
Ser Tyr Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
180 185 190
Trp Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp
195 200 205
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser
210 215 220
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys Ala Arg Asp Gln Asn Tyr Asp Ile Leu Thr Gly His Tyr Gly
245 250 255
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
260 265 270
<210> 151
<211> 267
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 151
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile
35 40 45
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Arg
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
65 70 75 80
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
85 90 95
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
115 120 125
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser
130 135 140
Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu
145 150 155 160
Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr
165 170 175
Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu
180 185 190
Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile
195 200 205
Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro
225 230 235 240
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr
245 250 255
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
260 265
<210> 152
<211> 267
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 152
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu
20 25 30
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val
35 40 45
Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
50 55 60
Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly
65 70 75 80
Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln
100 105 110
Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
115 120 125
Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser
130 135 140
Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly
145 150 155 160
Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly
165 170 175
Asn Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro
180 185 190
Gly Lys Arg Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr
195 200 205
Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr
210 215 220
Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp
225 230 235 240
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 153
<211> 474
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 153
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Asn Tyr Asp Ile Leu Thr Gly His Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser
130 135 140
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
145 150 155 160
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
165 170 175
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
180 185 190
Tyr Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
210 215 220
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg
225 230 235 240
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Ser Thr Pro Ala
245 250 255
Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser
260 265 270
Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr
275 280 285
Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala
290 295 300
Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
305 310 315 320
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
325 330 335
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
340 345 350
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg
355 360 365
Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
370 375 380
Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg
385 390 395 400
Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro
405 410 415
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
420 425 430
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His
435 440 445
Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp
450 455 460
Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 154
<211> 474
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 154
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp
145 150 155 160
Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
165 170 175
Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
210 215 220
Arg Asp Gln Asn Tyr Asp Ile Leu Thr Gly His Tyr Gly Met Asp Val
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Pro Ala
245 250 255
Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser
260 265 270
Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr
275 280 285
Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala
290 295 300
Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
305 310 315 320
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
325 330 335
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
340 345 350
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg
355 360 365
Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
370 375 380
Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg
385 390 395 400
Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro
405 410 415
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
420 425 430
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His
435 440 445
Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp
450 455 460
Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 155
<211> 471
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 155
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
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Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Arg Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
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Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
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Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp
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Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
180 185 190
Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe
210 215 220
Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Ser Thr Pro Ala Pro Arg Pro
245 250 255
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
260 265 270
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
275 280 285
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
290 295 300
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly
305 310 315 320
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
325 330 335
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
340 345 350
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp
355 360 365
Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn
370 375 380
Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg
385 390 395 400
Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly
405 410 415
Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu
420 425 430
Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu
435 440 445
Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His
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Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 156
<211> 471
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 156
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
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Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
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100 105 110
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
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275 280 285
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
290 295 300
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly
305 310 315 320
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
325 330 335
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
340 345 350
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp
355 360 365
Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn
370 375 380
Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg
385 390 395 400
Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly
405 410 415
Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu
420 425 430
Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu
435 440 445
Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His
450 455 460
Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 157
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> L or M
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> G or S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> I or S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (13)..(13)
<223> V or A
<220>
<221> MOD_RES
<222> (15)..(15)
<223> P or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (17)..(17)
<223> E or D
<220>
<221> MOD_RES
<222> (20)..(20)
<223> S or T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (21)..(21)
<223> F or I
<220>
<221> MOD_RES
<222> (22)..(22)
<223> S or T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (40)..(40)
<223> T or P
<220>
<221> MOD_RES
<222> (41)..(41)
<223> N or G
<220>
<221> MOD_RES
<222> (42)..(42)
<223> G or K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (43)..(43)
<223> S or A
<220>
<221> MOD_RES
<222> (45)..(45)
<223> R or K
<220>
<221> MOD_RES
<222> (49)..(49)
<223> K or Y
<220>
<221> MOD_RES
<222> (58)..(58)
<223> I or V
<220>
<221> MOD_RES
<222> (76)..(76)
<223> N or S
<220>
<221> MOD_RES
<222> (78)..(78)
<223> V or L
<220>
<221> MOD_RES
<222> (80)..(80)
<223> S or P
<220>
<221> MOD_RES
<222> (83)..(83)
<223> I or F
<220>
<221> MOD_RES
<222> (85)..(85)
<223> D or T
<220>
<221> MOD_RES
<222> (92)..(92)
<223> N or G
<220>
<221> MOD_RES
<222> (100)..(100)
<223> G or Q
<400> 157
Asp Ile Gln Xaa Thr Gln Ser Pro Xaa Xaa Leu Ser Xaa Ser Xaa Gly
1 5 10 15
Xaa Arg Val Xaa Xaa Xaa Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Leu Leu Ile
35 40 45
Xaa Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Xaa Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Xaa Ser Xaa Gln Xaa
65 70 75 80
Glu Asp Xaa Ala Xaa Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Xaa Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 158
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 158
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Ala
275 280 285
Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 159
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 159
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 160
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 160
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 161
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 161
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 162
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 162
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Gly Thr Thr Ile Phe Gly Val Val Thr Pro Asn Phe Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 163
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 163
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 164
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 164
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asp Tyr Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Val Glu Asp Ser Ala Val Tyr Ser Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Gly Trp Ser His Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 165
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 165
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 166
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 166
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Ala Gly Ser Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Leu Tyr Val Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Leu Ser Leu Asp Pro Ser Arg Asn Gln Leu Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Gly Asp Ser Gly Asn Tyr Trp Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 167
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 167
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Gln Leu Gly Glu Asn Tyr Ala
20 25 30
Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Asn Ser Ile Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 168
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 168
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala His Leu Pro Tyr Ser Gly Ser Tyr Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 169
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 169
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asn Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val
100 105
<210> 170
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 170
Ser Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 171
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 171
Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 172
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 172
Thr Thr Ile Phe Gly Val Val Thr Pro Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp
1 5 10 15
Val
<210> 173
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 173
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 174
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 174
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 175
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 175
Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 176
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 176
Ser Tyr Asp Ile His
1 5
<210> 177
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 177
Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asp Tyr Thr Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 178
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 178
Glu Ser Gly Trp Ser His Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 179
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 179
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 180
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 180
Ala Ala Ser Thr Leu His Ser
1 5
<210> 181
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 181
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 182
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 182
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His
1 5 10
<210> 183
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 183
Arg Leu Tyr Val Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 184
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 184
Asp Ser Gly Asn Tyr Trp Gly Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 185
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 185
Ser Gly Asp Gln Leu Gly Glu Asn Tyr Ala Cys
1 5 10
<210> 186
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 186
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 187
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 187
Gln Ala Trp Asp Asn Ser Ile Val Val
1 5
<210> 188
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 188
Tyr Tyr Gly Met His
1 5
<210> 189
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 189
Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 190
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 190
Leu Pro Tyr Ser Gly Ser Tyr Trp Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 191
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 191
Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His
1 5 10
<210> 192
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 192
Asp Asn Ser Asp Arg Pro Ser
1 5
<210> 193
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 193
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Pro Val Val
1 5 10
<210> 194
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 194
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser
1 5 10
<210> 195
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 195
Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn
1 5
<210> 196
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 196
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp Ile His
1 5 10
<210> 197
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 197
Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asp
1 5 10
<210> 198
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 198
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser
1 5 10
<210> 199
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 199
Arg Leu Tyr Val Ser Gly Phe Thr Asn
1 5
<210> 200
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 200
Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 201
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 201
Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr
1 5 10
<210> 202
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 202
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Ser Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Phe Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp
180 185 190
Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser
245 250 255
Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp
260 265 270
Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln
275 280 285
Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser
290 295 300
Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro
340 345 350
Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met
355 360 365
Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn
370 375 380
Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn
405 410 415
Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu
420 425 430
His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 203
<211> 447
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 203
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Asp
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 204
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 204
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Pro His Ile Val Met Val Thr Ala Leu Leu Tyr Asp Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 205
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 205
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 206
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 206
His Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 207
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 207
Thr Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 208
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 208
Pro His Ile Val Met Val Thr Ala Leu Leu Tyr Asp Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 209
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 209
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Val
1 5 10
<210> 210
<211> 452
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 210
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Gly Thr Thr Ile Phe Gly Val Val Thr Pro Asn Phe Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Gly Lys
450
<210> 211
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 211
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asp Tyr Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Val Glu Asp Ser Ala Val Tyr Ser Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Gly Trp Ser His Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val
195 200 205
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys
210 215 220
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 212
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 212
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Ala Gly Ser Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Leu Tyr Val Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Leu Ser Leu Asp Pro Ser Arg Asn Gln Leu Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Gly Asp Ser Gly Asn Tyr Trp Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 213
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 213
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala His Leu Pro Tyr Ser Gly Ser Tyr Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 214
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 214
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Arg Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Asn Ile Gln
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Phe Ser Met Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
115 120 125
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln
145 150 155 160
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
180 185 190
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
195 200 205
Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 215
<211> 218
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 215
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 216
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 216
Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 217
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 217
Thr Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr
1 5 10
<210> 218
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 218
Pro His Ile Val Met Val Thr Ala Leu Leu Tyr Asp Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 219
<211> 455
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 219
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Pro His Ile Val Met Val Thr Ala Leu Leu Tyr Asp Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 220
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 220
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 221
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 221
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 222
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 222
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 223
<211> 212
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 223
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Gln Leu Gly Glu Asn Tyr Ala
20 25 30
Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Asn Ser Ile Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn
115 120 125
Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val
130 135 140
Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu
145 150 155 160
Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser
165 170 175
Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser
180 185 190
Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro
195 200 205
Thr Glu Cys Ser
210
<210> 224
<211> 215
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 224
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asn Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro
130 135 140
Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala
145 150 155 160
Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala
165 170 175
Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg
180 185 190
Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr
195 200 205
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 225
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 225
gatgtgcagc ttcaggagtc tggacccgga cttgttaaac caagtcagtc tctgtccctg 60
acctgtaccg tcaccggcaa cagcatcaca agcgattacg catggaactg gatcaggcag 120
ttccctggaa atcgactcga atggatgggc tacatttcat actccggttc aaccacttac 180
tctccatcct tgaaatctag gttcagcatc acccgtgata cctcaaagaa ccaatttttt 240
ctgcaactga atagcgtaac tccagaggac acagccacat atttctgcgc cactgggtat 300
tactatggct caggtttctg gggtcagggc actctcgtca ccgtcagcag c 351
<210> 226
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 226
caggtccaac tgcaagagag cggaccgggc ctggtaaagc catccgacac attgtccctg 60
acgtgtgcgg taagtggaaa ctctatcact agcgactatg cgtggaattg gataagacaa 120
ccgccgggca aggggctgga atggatagga tatatcagct attccggttc tacgacatac 180
aatccttccc tgaaaagcag agtcactatg tcacgcgaca cgtccaagaa tcagttctca 240
ttgaaattgt catccgtaac ggccgttgac actgcggttt attattgcgc aaccggatat 300
tactacggct ctggtttttg gggacaggga acacttgtta ctgttagttc a 351
<210> 227
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 227
caggtgcagc tgcaggagag cggcccaggc ctggtgaagc caagcgacac cctgagcctg 60
acctgcgccg tgagcggcaa cagcatcacc agcgactacg cctggaactg gatccgccag 120
ttcccaggca agggcctgga gtggatcggc tacatcagct acagcggcag caccacctac 180
aacccaagcc tgaagagccg cgtcaccatc agccgcgaca ccagcaagaa ccagttcagc 240
ctgaagctga gcagcgtgac ccctgtggac accgccgtgt actactgcgc caccggctac 300
tactacggca gcggcttctg gggccagggc accctggtga ccgtgagcag c 351
<210> 228
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 228
caggtgcagc tgcaggagag cggcccaggc ctggtgaagc caagcgacac cctgagcctg 60
acctgcgccg tgagcggcaa cagcatcacc agcgactacg cctggaactg gatccgccag 120
ttcccaggca agggcctgga gtggatgggc tacatcagct acagcggcag caccacctac 180
aacccaagcc tgaagagccg cgtcaccatc agccgcgaca ccagcaagaa ccagttcagc 240
ctgaagctga gcagcgtgac ccctgtggac accgccgtgt actactgcgc caccggctac 300
tactacggca gcggcttctg gggccagggc accctggtga ccgtgagcag c 351
<210> 229
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 229
caggttcagc tgcaagagtc tggaccaggc ctggtcaagc cctctcagac cctgtctctg 60
acctgtaccg tgtccggcaa ctccatcacc tctgactacg cctggaactg gattcggcag 120
ttccctggca agggccttga gtggatcggc tacatctcct actccggttc caccacctac 180
aaccccagcc tgaagtcccg ggtcaccatc tcccgcgaca cctccaagaa ccagttctcc 240
ctgaagctgt cctccgtgac cgctgctgat accgccgtgt actactgtgc caccggctac 300
tactacggct ccggcttttg gggacagggc acactggtta ccgtgtctag t 351
<210> 230
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 230
caggttcagc tgcaagagtc tggaccaggc ctggtcaagc cctctcagac cctgtctctg 60
acctgtaccg tgtccggcaa ctccatcacc tctgactacg cctggaactg gattcggcag 120
ccacctggca agggccttga gtggatcggc tacatctcct actccggttc caccacctac 180
aaccccagcc tgaagtcccg ggtcaccatc tcccgcgaca cctccaagaa ccagttctcc 240
ctgaagctgt cctccgtgac cgctgctgat accgccgtgt actactgtgc caccggctac 300
tactacggct ccggcttttg gggacagggc acactggtta ccgtgtctag t 351
<210> 231
<211> 351
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 231
caggttcagc tgcaagagtc tggaccaggc ctggtcaagc cctctcagac cctgtctctg 60
acctgtaccg tgtccggcaa ctccatcacc tctgactacg cctggaactg gattcggcag 120
ttccctggca agcgccttga gtggatcggc tacatctcct actccggttc caccacctac 180
aaccccagcc tgaagtcccg ggtcaccatc tcccgcgaca cctccaagaa ccagttctcc 240
ctgaagctgt cctccgtgac cgctgctgat accgccgtgt actactgtgc caccggctac 300
tactacggct ccggcttttg gggacagggc acactggtta ccgtgtctag t 351
<210> 232
<211> 372
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 232
gaggtgcaac ttgtggagag cggcggaggt ctggtccaac ccggaggaag tctccgtctc 60
tcctgtgctg ctagtggctt cactttcagc tcatattgga tgacatgggt gagacaagcc 120
ccaggaaagg ggctcgagtg ggtagctaac attaaacagg acggctccga acggtactat 180
gttgattctg tgaagggacg gttcactata tccagggata atgcaaaaaa ttcactctat 240
cttcaaatga actcactcag agcagaggac actgccgtgt attattgcgc cagggatcaa 300
aattatgaca tactgaccgg tcattatgga atggatgttt ggggccaggg aacaaccgtt 360
accgtctcaa gt 372
<210> 233
<211> 375
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 233
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggagtg gattggatat atctattaca gtgggagcac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcggg gactacgatt 300
tttggagtgg ttacccccaa cttctactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 234
<211> 369
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 234
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgtag cctctggatt caccttcagt agttatgaca tacactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcaatt atttcatatg atggaagtaa aaaagactat 180
acagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatgg acagcctgag agttgaggac tcggctgtgt attcctgtgc gagagaaagt 300
ggctggtccc actactacta ttacggtatg gacgtctggg gccaagggac aatggtcacc 360
gtctcttca 369
<210> 235
<211> 357
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 235
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactatt ggagctggct ccggcagccc 120
gccgggtcgg gactggagtg gattgggcgt ttatatgtca gtgggttcac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccttgtca ctagacccgt ccaggaacca gttgtccctg 240
aaactgagtt ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtatatt attgtgcggg agatagtggg 300
aactactggg gttggttcga cccctggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 236
<211> 363
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 236
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt tactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcattt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc ccacctccct 300
tatagtggga gctactgggc ctttgactac tggggccagg gaacccaggt caccgtctct 360
tca 363
<210> 237
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 237
gacattgtgc tgacacagag tccagcatcc ttggcagtat ctttggggca gcgggcaaca 60
atttcatgcc gtgcatctga aagtgtggag tattttggaa cttctcttat gcactggtat 120
cgccagaagc ctgggcagcc tcccaaactc cttatatatg ccgcttccaa cgtggagtcc 180
ggagtaccag cacgcttttc cggctctggg tccggcacag acttttccct caatatccaa 240
cctgttgaag aagacgattt ttccatgtat ttttgccaac agacacgcaa ggttccatat 300
acattcggcg gcggcactaa acttgagatc aaa 333
<210> 238
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 238
gacatagtct tgactcagag cccggattcc cttgctgtgt ctctgggaga acgagctacg 60
atcaactgca aggcaagtga atccgtagaa tacttcggga catcattgat gcattggtat 120
caacagaaac cggggcaacc gcccaaattg ctgatatatg cggctagtaa tagagaatca 180
ggagtaccgg ataggtttag tggttcagga tcaggtacag atttcaccct gacaataagt 240
agcttgcaag ccgaagacgt agcagtgtat tactgccaac aaacccgaaa ggtgccatat 300
acgtttggac agggtacaaa gttggaaatc aaa 333
<210> 239
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 239
gacatcgtgc tgacccagag cccagacagc ctggccgtga gcctgggcga gcgcgccacc 60
atcaactgca aggccagcga gagcgtggag tacttcggca ccagcctgat gcactggtac 120
cagcagaagc caggccagcc accaaagctg ctgatctacg ctgccagcaa ccgcgagagc 180
ggcgtgccag accgcttcag cggcagcggc agcggcaccg acttcaccct gaccatccag 240
agcgtgcagg ccgaggacgt ctccgtgtac ttctgccagc agacccgcaa ggtgccatac 300
accttcggcc agggcaccaa gctggagatc aag 333
<210> 240
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 240
gacatcgtgc tgacccagag cccagacagc ctggccgtga gcctgggcga gcgcgccacc 60
atcaactgca aggccagcga gagcgtggag tacttcggca ccagcctgat gcactggtac 120
cagcagaagc caggccagcc accaaagctg ctgatctacg ctgccagcaa ccgcgagagc 180
ggcgtgccag accgcttcag cggcagcggc agcggcaccg acttcaccct gaccatcagc 240
agcgtgcagg ccgaggacgt cgccgtgtac tactgccagc agacccgcaa ggtgccatac 300
accttcggcc agggcaccaa gctggagatc aag 333
<210> 241
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 241
gacatcgtgc tgacccagtc tccagactct ctggctgtgt ctctgggcga gagagccacc 60
atcaactgca gagcctccga gtccgtggaa tacttcggca cctctctgat gcactggtac 120
cagcagaagc ccggccagcc tcctaagctg ctgatctacg ccgcctccaa cgtggaatct 180
ggcgtgcccg atagattttc cggctctggc tctggcaccg actttaccct gaccatcagc 240
tctctgcagg ccgaggatgt ggccgtgtac ttctgtcagc agacccggaa ggtgccctac 300
acatttggcg gcggaacaaa ggtggaaatc aag 333
<210> 242
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 242
gagatcgtgc tgacccagtc tcctgccaca ctgtcactgt ctccaggcga gagagccacc 60
ctctcttgta gagcctccga gtccgtggaa tacttcggca cctctctgat gcactggtac 120
cagcagaagc ccggccagcc tcctagactg ctgatctacg ccgcctccaa cgtcgaatct 180
ggcatccccg ctagattctc cggctctggc tctggcacag actttaccct gaccatctcc 240
tccgtggaac ccgaggattt cgctgtgtac ttttgccagc agacccggaa ggtgccctac 300
acatttggcg gcggaacaaa ggtggaaatc aag 333
<210> 243
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 243
gaaatcgtac tgacccagtc cccttctttc ttgagtgcat cagttgggga tagagtgacc 60
attacttgta gagcatctca aggtatttct tcatacttgt cttggtatca acaaaaacct 120
ggcaaggcac ccaaactctt gatctacgcc acctctacat tgcaaagtgg ggttccttct 180
aggttttcag gctccggctc tggtaccgag ttcaccctca ctataagcag tctccaacct 240
gaagatttcg ctacttatta ttgtcagcag cttaattctt atccccgaac ctttggtcaa 300
ggaactaagg tcgagatcaa a 321
<210> 244
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 244
gacatccaga tgacccagtc tccttccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120
gggaaagccc ctaagttcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag cttaatagtt accctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 245
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 245
gacatcgtga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcgagtca ggacattagc aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagttc ctaagttcct gatctatgct gcatccactt tgcactctgg ggtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tataacagtg ccccgtacac ttttggccaa 300
gggacacgac tggagattaa a 321
<210> 246
<211> 318
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 246
tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggagagac agccagcatc 60
acctgctctg gagatcaatt gggggaaaat tatgcttgct ggtatcagca gaagccaggc 120
cagtcccctg tgttggtcat ctatcaagat agtaagcggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctctg 240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacaacagta ttgtggtatt cggcggaggg 300
accaagctga ccgtccta 318
<210> 247
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 247
cagtctgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc ccgggcagac ggccagtatt 60
acctgtgggg gagacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120
caggcccctg tgctggtcgt ctatgataat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaccacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatcc tgtggtattc 300
ggcggaggga ccaaggtcac cgtccta 327
<210> 248
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 248
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 249
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 249
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 250
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 250
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 251
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 251
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 252
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 252
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 253
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 253
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 254
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 254
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 255
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 255
Arg Tyr Asn Met Asn
1 5
<210> 256
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 256
Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 257
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 257
Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr
1 5
<210> 258
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 258
Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala Ile His
1 5 10
<210> 259
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 259
Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
1 5
<210> 260
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 260
Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 261
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 261
Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr Thr
1 5
<210> 262
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 262
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 263
<211> 375
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 263
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt cattatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaact attggtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaacctcat 300
attgtaatgg tgactgctct tctctacgac ggtatggacg tctggggcca agggacaatg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 264
<211> 446
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 264
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 265
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 265
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 266
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 266
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 267
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 267
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 268
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 268
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 269
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 269
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 270
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 270
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 271
<211> 324
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 271
tcttctgagc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60
acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120
caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgt ggtattcggc 300
ggagggacca agctgaccgt ccta 324
<210> 272
<211> 216
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 272
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr
20 25 30
Lys Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Asp Lys Ala Pro Lys Val
35 40 45
Leu Leu Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Gln Ala Asp Tyr His Cys Val Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Gly Thr Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 273
<211> 348
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 273
gaggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agatataaca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtacta gtagtaatta catatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccttc tccagagaca acgccaagaa ctcactggat 240
ctgcaaatga gcggcctgag agccgaggac acggctattt attactgtac gagaggctgg 300
gggccttttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca 348
<210> 274
<211> 1365
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 274
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt cattatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaact attggtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaacctcat 300
attgtaatgg tgactgctct tctctacgac ggtatggacg tctggggcca agggacaatg 360
gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc accctcctcc 420
aagagcacct ctgggggcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480
ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540
gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600
ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660
aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacacat gcccaccgtg cccagcacct 720
gaagccgccg ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780
atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtgagcg tgagccacga agaccctgag 840
gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900
gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 960
tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1020
gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc 1080
ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1140
tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1200
accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1260
gacaagagca gatggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1320
cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaa 1365
<210> 275
<211> 360
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 275
caggtgcagc tgcagcagtc tggccctaga ctcgtgcggc cttcccagac cctgtctctg 60
acctgtgcca tctccggcga ctccgtgttc aacaacaacg ccgcctggtc ctggatccgg 120
cagagccctt ctagaggcct ggaatggctg ggccggacct actaccggtc caagtggctg 180
tacgactacg ccgtgtccgt gaagtcccgg atcaccgtga accctgacac ctcccggaac 240
cagttcaccc tgcagctgaa ctccgtgacc cctgaggaca ccgccctgta ctactgcgcc 300
agaggctact cctcctcctt cgactattgg ggccagggca ccctcgtgac cgtgtcctct 360
<210> 276
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 276
gatatacttc ttacccagag tcccggcatc ctctccgtta gccctgggga gagagtctca 60
ttctcatgcc gagccagaca gtcaattggt accgcaatac actggtatca acagcggacc 120
aatggttctc cccgacttct gataaagtac gcatcagaat caattagtgg aataccatca 180
agatttagtg gctcagggag tggaaccgat tttactctga ccatcaactc agtggaatct 240
gaggacattg ccgactacta ctgtcaacaa agcaatagtt ggccatatac cttcggaggc 300
ggaactaaat tggagataaa a 321
<210> 277
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 277
gacatccaga tgacacagtc accttctagt ttgtctgctt ctgtaggcga ccgtgtaact 60
atcacctgtc gagcccgtca aagtattggt actgccattc actggtacca acaaaaacct 120
ggcaaagctc caaaactctt gatctactat gcctccgaaa gcatatcagg ggtcccaagc 180
agattctcag gcagtggcag tggcactgac ttcactctca ccatttctag cgtgcaacca 240
gaggacttcg ccacttatta ctgccaacag tcagggagct ggccctacac cttcggccaa 300
ggtacaaaac tggagatcaa a 321
<210> 278
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 278
gacatacaaa tgacacaatc accctcttct ctttctgcaa gcgttggcga ccgtgtcact 60
atcacttgtc gagcccgcca gtccataggt actgccattc actggtatca acagaagcct 120
ggcaaggctc ccaaactcct gattaagtat gccagcgaga gcatttccgg cgtaccttca 180
agattttccg gctccggtag tgggacagat ttcactctca ctatatctag cctccaacca 240
gaagatttcg ccacttacta ctgtcaacaa tcaggttcat ggccttacac tttcggccag 300
gggacaaaat tggagatcaa g 321
<210> 279
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 279
gacatccaaa tgactcaatc acctagcagc ctctccgcct ccgttggaga tagagtgaca 60
ataacttgcc gagcccggca aagtatcgga actgctattc actggtatca acaaaaacct 120
ggaaaggcac ctaagctctt gattaaatac gcttctgagt ccatctccgg cgtgccttca 180
cgattcagcg gcagcggtag tggtactgac tttaccctca ctattagttc tgttcagcca 240
gaggacttcg caacttatta ctgccaacag agtggttcct ggccatacac ttttggccag 300
gggactaaat tggaaatcaa a 321
<210> 280
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 280
gacatccaaa tgactcaaag cccctctagt ttgagtgcat ctgtaggtga ccgggtaaca 60
atcacctgcc gtgcccggca aagtataggt actgcaatcc actggtacca gcaaaaaccc 120
ggcaaagcac caaagctgct catatactat gctagtgaga gcatttctgg cgttcctagt 180
cgattttctg gatcagggag tggaactgat tttacactga caatcagcag cctccaaccc 240
gaagacttcg ccacctacta ttgtcagcag tctgggtcct ggccttacac attcggtcaa 300
ggaactaaat tggagatcaa a 321
<210> 281
<211> 321
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 281
gacattttgc tgacacagag ccctggtatc ctctcagtca gtccagggga acgcgtttca 60
tttagctgcc gtgctcgaca gagcattggg accgcaatcc actggtacca acaaagaact 120
aacggttcac cacggctttt gattaagtat gcctccgaat ccatcagtgg cattcctagt 180
cgtttttctg gatcaggatc aggcaccgac tttactctca caattaatag tgtcgaaagt 240
gaggacattg cagactatta ttgtcagcaa tccggttcct ggccctatac ttttggtggt 300
ggtactaagt tggaaattaa a 321
<210> 282
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 282
tcttctgagc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60
acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120
caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatgt ggtattcggc 300
ggagggacca agctgaccgt cctaggtcag cccaaggctg cacccagtgt cactctgttc 360
ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 420
ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggccgata gcagccccgt caaggcggga 480
gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 540
agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600
gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642
<210> 283
<211> 329
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 283
agtctgctct gacccagcct gcctccgtgt ctggctctcc cggccagtcc atcaccatca 60
gctgtaccgg cacctcctcc aacatcggca cctacaagtt cgtgtcctgg tatcagcagc 120
accccgacaa ggcccccaaa gtgctgctgt acgaggtgtc caagcggccc tctggcgtgt 180
cctccagatt ctccggctcc aagtctggca acaccgcctc cctgaccatc agcggactgc 240
aggctgagga ccaggccgac taccactgtg tgtcctacgc tggctctggc accctgctgt 300
ttggcggagg caccaagctg accgtgctg 329
<210> 284
<211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 284
gatgtgcagc ttcaggagtc tggacccgga cttgttaaac caagtcagtc tctgtccctg 60
acctgtaccg tcaccggcaa cagcatcaca agcgattacg catggaactg gatcaggcag 120
ttccctggaa atcgactcga atggatgggc tacatttcat actccggttc aaccacttac 180
tctccatcct tgaaatctag gttcagcatc acccgtgata cctcaaagaa ccaatttttt 240
ctgcaactga atagcgtaac tccagaggac acagccacat atttctgcgc cactgggtat 300
tactatggct caggtttctg gggtcagggc actctcgtca ccgtcagcag cgccaaaaca 360
acagcaccaa gtgtctatcc actggcccct gtgtgtggag atacaactgg ctcctcggtg 420
actctaggat gcctggtcaa gggttatttc cctgagccag tgaccttgac ctggaactct 480
ggatccctgt ccagtggtgt gcacaccttc ccagctgtcc tgcagtctga cctctacacc 540
ctcagcagct cagtgactgt aacctcgagc acctggccca gccagtccat cacctgcaat 600
gtggcccacc cggcaagcag caccaaggtg gacaagaaaa ttgagcccag agggcccaca 660
atcaagccct gtcctccatg caaatgccca gcacctaacc tcttgggtgg accatccgtc 720
ttcatcttcc ctccaaagat caaggatgta ctcatgatct ccctgagccc catagtcaca 780
tgtgtggtgg tggatgtgag cgaggatgac ccagatgtcc agatcagctg gtttgtgaac 840
aacgtggaag tacacacagc tcagacacaa acccatagag aggattacaa cagtactctc 900
cgggtggtca gtgccctccc catccagcac caggactgga tgagtggcaa ggagttcaaa 960
tgcaaggtca acaacaaaga cctcccagcg cccatcgaga gaaccatctc aaaacccaaa 1020
gggtcagtaa gagctccaca ggtatatgtc ttgcctccac cagaagaaga gatgactaag 1080
aaacaggtca ctctgacctg catggtcacc gacttcatgc ctgaagacat ttacgtggag 1140
tggaccaaca acgggaaaac agagctaaac tacaagaaca ctgaaccagt cctggactct 1200
gatggttctt acttcatgta cagcaagctg agagtggaaa agaagaactg ggtggaaaga 1260
aatagctact cctgttcagt ggtccacgag ggtctgcaca atcaccacac gactaagagc 1320
ttctcccgga ctccgggtaa a 1341
<210> 285
<211> 1341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 285
caggtccaac tgcaagagag cggaccgggc ctggtaaagc catccgacac attgtccctg 60
acgtgtgcgg taagtggaaa ctctatcact agcgactatg cgtggaattg gataagacaa 120
ccgccgggca aggggctgga atggatagga tatatcagct attccggttc tacgacatac 180
aatccttccc tgaaaagcag agtcactatg tcacgcgaca cgtccaagaa tcagttctca 240
ttgaaattgt catccgtaac ggccgttgac actgcggttt attattgcgc aaccggatat 300
tactacggct ctggtttttg gggacaggga acacttgtta ctgttagttc agcctccacc 360
aagggcccat cggtcttccc cctggcaccc tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg 420
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480
ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc ccggctgtcc tacagtcctc aggactctac 540
tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcagcttgg gcacccagac ctacatctgc 600
aacgtgaatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga aagttgagcc caaatcttgt 660
gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc 720
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 780
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 900
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 1020
gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1140
tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1200
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcagatg gcagcagggg 1260
aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320
ctctccctgt ctccgggtaa a 1341
<210> 286
<400> 286
000
<210> 287
<400> 287
000
<210> 288
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000
<210> 289
<400> 289
000
<210> 290
<400> 290
000
<210> 291
<400> 291
000
<210> 292
<211> 1356
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 292
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggagtg gattggatat atctattaca gtgggagcac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcggg gactacgatt 300
tttggagtgg ttacccccaa cttctactac ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cctcagcttc caccaagggc ccatccgtct tccccctggc gccctgctcc 420
aggagcacct ccgagagcac agccgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480
ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 540
gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600
ttgggcacga aaacctacac ttgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660
aagagagttg agtccaaata tggtccccca tgcccaccat gcccagcacc tgaggccgcc 720
gggggaccat cagtcttcct gttcccccca aaacccaagg acactctcat gatctcccgg 780
acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc 840
aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 900
ttcaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac 960
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc 1020
atctccaaag ccaaagggca gccccgagag ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag 1080
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc 1140
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1200
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc 1260
agatggcagg aggggaatgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1320
tacacacaga agagcctctc cctgtctctg ggtaaa 1356
<210> 293
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 293
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgtag cctctggatt caccttcagt agttatgaca tacactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcaatt atttcatatg atggaagtaa aaaagactat 180
acagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatgg acagcctgag agttgaggac tcggctgtgt attcctgtgc gagagaaagt 300
ggctggtccc actactacta ttacggtatg gacgtctggg gccaagggac aatggtcacc 360
gtctcttcag cttccaccaa gggcccatcc gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc 420
acctccgaga gcacagccgc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600
acgaaaacct acacttgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga 660
gttgagtcca aatatggtcc cccatgccca ccatgcccag cacctgaggc cgccggggga 720
ccatcagtct tcctgttccc cccaaaaccc aaggacactc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc caggaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 840
tacgtggatg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagttcaac 900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccgtcct ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccaaag ggcagccccg agagccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccaggaggag 1080
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaggctaa ccgtggacaa gagcagatgg 1260
caggagggga atgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacaca 1320
cagaagagcc tctccctgtc tctgggtaaa 1350
<210> 294
<211> 1338
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 294
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactatt ggagctggct ccggcagccc 120
gccgggtcgg gactggagtg gattgggcgt ttatatgtca gtgggttcac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccttgtca ctagacccgt ccaggaacca gttgtccctg 240
aaactgagtt ctgtgaccgc cgcggacacg gccgtatatt attgtgcggg agatagtggg 300
aactactggg gttggttcga cccctggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcagct 360
tccaccaagg gcccatccgt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 420
acagccgccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac gaaaacctac 600
acttgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagagagt tgagtccaaa 660
tatggtcccc catgcccacc atgcccagca cctgaggccg ccgggggacc atcagtcttc 720
ctgttccccc caaaacccaa ggacactctc atgatctccc ggacccctga ggtcacgtgc 780
gtggtggtgg acgtgagcca ggaagacccc gaggtccagt tcaactggta cgtggatggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agttcaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaaggcct cccgtcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag agccacaggt gtacaccctg cccccatccc aggaggagat gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttct tcctctacag caggctaacc gtggacaaga gcagatggca ggaggggaat 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacaca gaagagcctc 1320
tccctgtctc tgggtaaa 1338
<210> 295
<211> 1353
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 295
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt tactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcattt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc ccacctccct 300
tatagtggga gctactgggc ctttgactac tggggccagg gaacccaggt caccgtctct 360
tcagcctcca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcac cctcctccaa gagcacctct 420
gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480
tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc 540
tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcagctt gggcacccag 600
acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gaaagttgag 660
cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc cagcacctga agccgccggg 720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc 780
cctgaggtca catgcgtggt ggtgagcgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac 900
aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc 1020
tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag 1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc 1200
gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcaga 1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac 1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa 1353
<210> 296
<211> 654
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 296
gacattgtgc tgacacagag tccagcatcc ttggcagtat ctttggggca gcgggcaaca 60
atttcatgcc gtgcatctga aagtgtggag tattttggaa cttctcttat gcactggtat 120
cgccagaagc ctgggcagcc tcccaaactc cttatatatg ccgcttccaa cgtggagtcc 180
ggagtaccag cacgcttttc cggctctggg tccggcacag acttttccct caatatccaa 240
cctgttgaag aagacgattt ttccatgtat ttttgccaac agacacgcaa ggttccatat 300
acattcggcg gcggcactaa acttgagatc aaacgggctg atgctgcacc gactgtgtcc 360
atcttcccac catccagtga gcagttaaca tctggaggtg cctcagtcgt gtgcttcttg 420
aacaacttct accccaaaga catcaatgtc aagtggaaga ttgatggcag tgaacgacaa 480
aatggcgtcc tgaacagttg gactgatcag gacagcaaag acagcaccta cagcatgagc 540
agcaccctca cgttgaccaa ggacgagtat gaacgacata acagctatac ctgtgaggcc 600
actcacaaga catcaacttc acccattgtc aagagcttca acaggaatga gtgt 654
<210> 297
<211> 654
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 297
gacatagtct tgactcagag cccggattcc cttgctgtgt ctctgggaga acgagctacg 60
atcaactgca aggcaagtga atccgtagaa tacttcggga catcattgat gcattggtat 120
caacagaaac cggggcaacc gcccaaattg ctgatatatg cggctagtaa tagagaatca 180
ggagtaccgg ataggtttag tggttcagga tcaggtacag atttcaccct gacaataagt 240
agcttgcaag ccgaagacgt agcagtgtat tactgccaac aaacccgaaa ggtgccatat 300
acgtttggac agggtacaaa gttggaaatc aaacgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654
<210> 298
<400> 298
000
<210> 299
<400> 299
000
<210> 300
<400> 300
000
<210> 301
<400> 301
000
<210> 302
<400> 302
000
<210> 303
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 303
gatattcaaa tgacccagtc accatcattc ctgtccgcct cagtgggaga tcgcgtcact 60
attacttgtc gtgctagcca ggggatatca tcatatttgg cttggtatca acaaaagcca 120
ggaaaggccc caaaattcct tatatatgca gctagtacac tccagagtgg tgttcctagc 180
cggttctctg gcagcggctc agggaccgag ttcaccctga caatctccag cttgcagccc 240
gaagactttg caacctacta ttgccagcaa ctgaactcct atcctctgac tttcggggga 300
ggaaccaagg ttgagattaa acggacagtg gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctaca gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagcc ctgtgaccaa gtctttcaac cggggcgagt gt 642
<210> 304
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 304
gatattgtaa tgactcagtc accctcttca ctgagtgcat cagtaggtga tcgcgttacc 60
atcacttgcc gtgccagtca agacatttca aattaccttg catggtacca acaaaagccc 120
ggaaaagtgc caaagttttt gatttatgcc gcttcaacac tccattcagg agtgccctct 180
cgtttcagtg gatctggcag tggcaccgat tttactctca caataagcag tctccagcct 240
gaggatgtag ccacctatta ttgccaaaaa tataattcag ccccctatac ttttggacag 300
ggcacacgcc ttgagattaa acggacagtg gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctaca gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagcc ctgtgaccaa gtctttcaac cggggcgagt gt 642
<210> 305
<211> 636
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 305
tcctatgagc tgactcagcc accctcagtg tccgtgtccc caggagagac agccagcatc 60
acctgctctg gagatcaatt gggggaaaat tatgcttgct ggtatcagca gaagccaggc 120
cagtcccctg tgttggtcat ctatcaagat agtaagcggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacagcc actctgacca tcagcgggac ccaggctctg 240
gatgaggctg actattactg tcaggcgtgg gacaacagta ttgtggtatt cggcggaggg 300
accaagctga ccgtcctagg tcagcccaag gctgcaccca gtgtcactct gttcccgccc 360
tcctctgagg agcttcaagc caacaaggcc acactggtgt gtctcataag tgacttctac 420
ccgggagccg tgacagtggc ctggaaggcc gatagcagcc ccgtcaaggc gggagtggag 480
accaccacac cctccaaaca aagcaacaac aagtacgcgg ccagcagcta tctgagcctg 540
acgcctgagc agtggaagtc ccacagaagc tacagctgcc aggtcacgca tgaagggagc 600
accgtggaga agacagtggc ccctacagaa tgttca 636
<210> 306
<211> 645
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 306
cagtctgtgc tgactcagcc accctcggtg tcagtggccc ccgggcagac ggccagtatt 60
acctgtgggg gagacaacat tggaagtaaa agtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120
caggcccctg tgctggtcgt ctatgataat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaccacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gatagtagta gtgatcatcc tgtggtattc 300
ggcggaggga ccaaggtcac cgtcctaggt cagcccaagg ctgcacccag tgtcactctg 360
ttcccgccct cctctgagga gcttcaagcc aacaaggcca cactggtgtg tctcataagt 420
gacttctacc cgggagccgt gacagtggcc tggaaggccg atagcagccc cgtcaaggcg 480
ggagtggaga ccaccacacc ctccaaacaa agcaacaaca agtacgcggc cagcagctat 540
ctgagcctga cgcctgagca gtggaagtcc cacagaagct acagctgcca ggtcacgcat 600
gaagggagca ccgtggagaa gacagtggcc cctacagaat gttca 645
<210> 307
<400> 307
000
<210> 308
<211> 253
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 308
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Pro His Ile Val Met Val Thr Ala Leu Leu Tyr Asp Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly
130 135 140
Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly
145 150 155 160
Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser
165 170 175
Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val
180 185 190
Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala
210 215 220
Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp
225 230 235 240
His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245 250
<210> 309
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 309
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 310
<400> 310
000
<210> 311
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 311
gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgtc gtgcccgcca gagcatcggc accgccatcc actggtacca gcagaagcca 120
ggcaaggccc caaagctgct gatctactac gccagcgaga gcatcagcgg tgtgccaagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cgtgcagcca 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcggcagct ggccatacac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 312
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 312
gacatacaaa tgacacaatc accctcttct ctttctgcaa gcgttggcga ccgtgtcact 60
atcacttgtc gagcccgcca gtccataggt actgccattc actggtatca acagaagcct 120
ggcaaggctc ccaaactcct gattaagtat gccagcgaga gcatttccgg cgtaccttca 180
agattttccg gctccggtag tgggacagat ttcactctca ctatatctag cctccaacca 240
gaagatttcg ccacttacta ctgtcaacaa tcaggttcat ggccttacac tttcggccag 300
gggacaaaat tggagatcaa gcggacagtg gccgctcctt ccgtgttcat cttcccacct 360
tccgacgagc agctgaagtc cggcacagct tctgtcgtgt gcctgctgaa caacttctac 420
cctcgggaag ccaaggtgca gtggaaggtg gacaatgccc tgcagtccgg caactcccaa 480
gagtctgtga ccgagcagga ctccaaggac agcacctaca gcctgtcctc cacactgacc 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaagtgac ccatcagggc 600
ctgtctagcc ctgtgaccaa gtctttcaac cggggcgagt gt 642
<210> 313
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 313
gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgtc gtgcccgcca gagcatcggc accgccatcc actggtacca gcagaagcca 120
ggcaaggccc caaagctgct gatcaagtac gccagcgaga gcatcagcgg tgtgccaagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cgtgcagcca 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcggcagct ggccatacac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 314
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 314
gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgtc gtgcccgcca gagcatcggc accgccatcc actggtacca gcagaagcca 120
ggcaaggccc caaagctgct gatctactac gccagcgaga gcatcagcgg tgtgccaagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcggcagct ggccatacac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 315
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 315
gacatcttgc tgactcagtc tccaggcatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60
ttctcctgca gggccagaca gagcattggc acagccatac actggtatca gcaaagaaca 120
aatggttctc caaggcttct cataaagtat gcttctgagt ctatctctgg gatcccttcc 180
aggtttagcg gcagtggatc agggacagat tttactctta ccatcaacag tgtggagtct 240
gaagatattg cagattatta ctgtcaacaa agtgggagct ggccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 316
<211> 253
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 316
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Glu
100 105 110
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser
115 120 125
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
130 135 140
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
145 150 155 160
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
165 170 175
Ser Thr Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
180 185 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
195 200 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Lys Pro His Ile Val Met Val Thr Ala Leu Leu Tyr Asp Gly Met
225 230 235 240
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 317
<211> 648
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 317
cagtctgctc tgacccagcc tgcctccgtg tctggctctc ccggccagtc catcaccatc 60
agctgtaccg gcacctcctc caacatcggc acctacaagt tcgtgtcctg gtatcagcag 120
caccccgaca aggcccccaa agtgctgctg tacgaggtgt ccaagcggcc ctctggcgtg 180
tcctccagat tctccggctc caagtctggc aacaccgcct ccctgaccat cagcggactg 240
caggctgagg accaggccga ctaccactgt gtgtcctacg ctggctctgg caccctgctg 300
tttggcggag gcaccaagct gaccgtgctg ggtcagccca aggctgcacc cagtgtcact 360
ctgttcccgc cctcctctga ggagcttcaa gccaacaagg ccacactggt gtgtctcata 420
agtgacttct acccgggagc cgtgacagtg gcctggaagg ccgatagcag ccccgtcaag 480
gcgggagtgg agaccaccac accctccaaa caaagcaaca acaagtacgc ggccagcagc 540
tatctgagcc tgacgcctga gcagtggaag tcccacagaa gctacagctg ccaggtcacg 600
catgaaggga gcaccgtgga gaagacagtg gcccctacag aatgttca 648
<210> 318
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 318
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
115 120 125
Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp
165 170 175
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
180 185 190
Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val
210 215 220
Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 319
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 319
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile
145 150 155 160
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
180 185 190
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
195 200 205
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 320
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 320
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
115 120 125
Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp
165 170 175
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
180 185 190
Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe
210 215 220
Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 321
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 321
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile
145 150 155 160
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
180 185 190
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
195 200 205
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 322
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 322
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
115 120 125
Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp
165 170 175
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
180 185 190
Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe
210 215 220
Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
<210> 323
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 323
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile
145 150 155 160
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
180 185 190
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
195 200 205
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 324
<211> 249
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 324
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala His Leu Pro Tyr Ser Gly Ser Tyr Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser
115 120 125
Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Ser Val
130 135 140
Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Ser
145 150 155 160
Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Asn Ser
180 185 190
Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly
195 200 205
Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala
210 215 220
Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Pro Val Val
225 230 235 240
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val
245
<210> 325
<211> 249
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 325
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asn Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Gly Gly Ser Glu
100 105 110
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser
115 120 125
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
130 135 140
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr
145 150 155 160
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
165 170 175
Ala Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
180 185 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
195 200 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala His Leu Pro Tyr Ser Gly Ser Tyr Trp Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 326
<211> 475
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 326
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
115 120 125
Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
245 250 255
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
260 265 270
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
275 280 285
Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
290 295 300
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
305 310 315 320
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
325 330 335
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
340 345 350
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
355 360 365
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu
370 375 380
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
385 390 395 400
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
405 410 415
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
420 425 430
Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
435 440 445
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
450 455 460
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 327
<211> 475
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 327
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Asn
145 150 155 160
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp Leu
195 200 205
Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
225 230 235 240
Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
245 250 255
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
260 265 270
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
275 280 285
Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
290 295 300
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
305 310 315 320
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
325 330 335
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
340 345 350
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
355 360 365
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu
370 375 380
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
385 390 395 400
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
405 410 415
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
420 425 430
Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
435 440 445
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
450 455 460
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 328
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 328
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
115 120 125
Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 329
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 329
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Asn
145 150 155 160
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp Leu
195 200 205
Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
225 230 235 240
Val Ser Ser
<210> 330
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 330
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
115 120 125
Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 331
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 331
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Asn
145 150 155 160
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp Leu
195 200 205
Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
225 230 235 240
Val Ser Ser
<210> 332
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 332
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
115 120 125
Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 333
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 333
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Asn
145 150 155 160
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp Leu
195 200 205
Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
225 230 235 240
Val Ser Ser
<210> 334
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 334
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
115 120 125
Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 335
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 335
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Asn
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Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp Leu
195 200 205
Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
225 230 235 240
Val Ser Ser
<210> 336
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 336
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
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Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro
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Gly Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg
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Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr
165 170 175
Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser
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Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Ser Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 337
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 337
Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Gly Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Asn
145 150 155 160
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp Leu
195 200 205
Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
225 230 235 240
Val Ser Ser
<210> 338
<211> 432
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 338
Phe Lys Ile Pro Ile Glu Glu Leu Glu Asp Arg Val Phe Val Asn Cys
1 5 10 15
Asn Thr Ser Ile Thr Trp Val Glu Gly Thr Val Gly Thr Leu Leu Ser
20 25 30
Asp Ile Thr Arg Leu Asp Leu Gly Lys Arg Ile Leu Asp Pro Arg Gly
35 40 45
Ile Tyr Arg Cys Asn Gly Thr Asp Ile Tyr Lys Asp Lys Glu Ser Thr
50 55 60
Val Gln Val His Tyr Arg Met Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp
65 70 75 80
Ala Ala Lys Lys Asp Asp Ala Lys Lys Asp Asp Ala Lys Lys Asp Gly
85 90 95
Ser Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys
100 105 110
Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Pro Gln Tyr Pro
115 120 125
Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys Asn Ile Gly Gly Asp
130 135 140
Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp His Leu Ser Leu Lys
145 150 155 160
Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg
165 170 175
Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu Tyr Leu Arg Ala Arg
180 185 190
Val Ser Pro Pro Ser Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
195 200 205
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
210 215 220
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
225 230 235 240
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
245 250 255
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
260 265 270
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
275 280 285
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
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Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
305 310 315 320
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
325 330 335
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
340 345 350
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
355 360 365
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
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Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
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His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly
405 410 415
Gly Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu
420 425 430
<210> 339
<211> 426
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 339
Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys
1 5 10 15
Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Pro Gln Tyr Pro
20 25 30
Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys Asn Ile Gly Gly Asp
35 40 45
Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp His Leu Ser Leu Lys
50 55 60
Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg
65 70 75 80
Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu Tyr Leu Arg Ala Arg
85 90 95
Val Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Asp
100 105 110
Ala Lys Lys Asp Asp Ala Lys Lys Asp Gly Ser Gln Ser Ile Lys Gly
115 120 125
Asn His Leu Val Lys Val Tyr Asp Tyr Gln Glu Asp Gly Ser Val Leu
130 135 140
Leu Thr Cys Asp Ala Glu Ala Lys Asn Ile Thr Trp Phe Lys Asp Gly
145 150 155 160
Lys Met Ile Gly Phe Leu Thr Glu Asp Lys Lys Lys Trp Asn Leu Gly
165 170 175
Ser Asn Ala Lys Asp Pro Arg Gly Met Tyr Gln Cys Lys Gly Ser Gln
180 185 190
Asn Lys Ser Lys Pro Leu Gln Val Tyr Tyr Arg Met Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
210 215 220
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
225 230 235 240
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
245 250 255
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
260 265 270
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
275 280 285
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
290 295 300
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
305 310 315 320
Gln Val Tyr Thr Phe Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
325 330 335
Val Ser Leu Arg Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
340 345 350
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
355 360 365
Lys Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Glu Ser Arg Leu
370 375 380
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
385 390 395 400
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
405 410 415
Leu Ser Gly Gly His His His His His His
420 425
<210> 340
<211> 805
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 340
Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys
1 5 10 15
Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Pro Gln Tyr Pro
20 25 30
Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys Asn Ile Gly Gly Asp
35 40 45
Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp His Leu Ser Leu Lys
50 55 60
Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg
65 70 75 80
Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu Tyr Leu Arg Ala Arg
85 90 95
Val Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Asp
100 105 110
Ala Lys Lys Asp Asp Ala Lys Lys Asp Gly Ser Gln Ser Ile Lys Gly
115 120 125
Asn His Leu Val Lys Val Tyr Asp Tyr Gln Glu Asp Gly Ser Val Leu
130 135 140
Leu Thr Cys Asp Ala Glu Ala Lys Asn Ile Thr Trp Phe Lys Asp Gly
145 150 155 160
Lys Met Ile Gly Phe Leu Thr Glu Asp Lys Lys Lys Trp Asn Leu Gly
165 170 175
Ser Asn Ala Lys Asp Pro Arg Gly Met Tyr Gln Cys Lys Gly Ser Gln
180 185 190
Asn Lys Ser Lys Pro Leu Gln Val Tyr Tyr Arg Met Gly Gly Gly Ser
195 200 205
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
210 215 220
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
225 230 235 240
Gln Ser Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
245 250 255
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
260 265 270
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
275 280 285
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
290 295 300
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
305 310 315 320
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
325 330 335
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
340 345 350
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
355 360 365
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
370 375 380
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
385 390 395 400
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
405 410 415
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420 425 430
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
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450 455 460
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Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
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Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
530 535 540
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545 550 555 560
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580 585 590
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725 730 735
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
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1 5
<210> 342
<211> 262
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 342
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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260
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
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260
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 346
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 347
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 348
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 349
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 350
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 351
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 352
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195 200 205
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His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
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Pro Gly
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<211> 481
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 353
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Thr Ala Ser Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asn Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
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Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
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Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gly Ser
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Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr
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Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
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Gly
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 354
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Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
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Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
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Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
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Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
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Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
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Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
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Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 355
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
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Tyr Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Ala Gly Ser Gly Leu Glu Trp Ile
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Ser Arg Val Thr Leu Ser Leu Asp Pro Ser Arg Asn Gln Leu Ser Leu
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Gly Asp Ser Gly Asn Tyr Trp Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
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Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 356
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
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Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
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Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
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Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
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435 440 445
Leu Ser Pro Gly
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 357
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
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Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
195 200 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Lys Pro His Ile Val Met Val Thr Ala Leu Leu Tyr Asp Gly Met
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Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys
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305 310 315 320
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
325 330 335
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
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Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
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Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
405 410 415
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Leu Thr Trp
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Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
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Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
450 455 460
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
465 470 475 480
Leu Ser Pro Gly
<210> 358
<211> 445
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 358
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
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Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Thr Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
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Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro
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Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
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<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 359
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Arg Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
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Gly
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<211> 474
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 360
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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<220>
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<400> 361
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1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Gly Thr Thr Ile Phe Gly Val Val Thr Pro Asn Phe Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Leu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Leu
385 390 395 400
Thr Trp Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 362
<211> 475
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 362
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu
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130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Asn
145 150 155 160
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp Leu
195 200 205
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225 230 235 240
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245 250 255
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275 280 285
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290 295 300
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325 330 335
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
340 345 350
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355 360 365
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu
370 375 380
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
385 390 395 400
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
405 410 415
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
420 425 430
Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
435 440 445
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
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<210> 363
<211> 1437
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 363
gagattgttc tcacccaatc cccagctact ctctctcttt cacccggtga gcgggcaacc 60
ctctcctgta gagccagcga gagcgtggag tattttggca catccctgat gcactggtat 120
cagcaaaaac caggacaacc ccccagactc ctcatatatg ccgcctcaaa tgtcgagagt 180
gggatacctg cacggttttc aggaagcggc agcggtactg acttcacatt gactatatcc 240
tctgtagagc cagaggattt tgcagtctac ttctgccagc aaactaggaa ggttccatat 300
acttttgggg gcggtacaaa agttgagata aagggcggct ccgagggcaa gagcagcggc 360
agcggcagcg agagcaagag caccggcggc agccaagtac agctccagga gtcaggacct 420
gggctcgtca aaccatctca gacattgtcc ctgacatgca cagtttccgg caacagtatt 480
acttccgact atgcttggaa ttggatcagg caattcccag gaaagcggct cgagtggata 540
ggttatattt cttactctgg atctactacc tacaatccca gtttgaagtc tcgcgtgaca 600
attagccggg acacatcaaa aaatcaattc tcacttaaac ttagttctgt aaccgctgcc 660
gatacagccg tgtactactg cgccactggt tattattatg gaagcggatt ttgggggcaa 720
ggaactttgg tgaccgtctc ttccgagccc aaatctagcg acaaaactca cacatgtcca 780
ccgtgcccag cacctgaagc agcaggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 840
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt gagcgtgagc 900
cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 960
aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 1020
gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 1080
ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 1140
gtgtacgtgc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgctgtgc 1200
ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 1260
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agcaagctca ccgtggacaa gtctagatgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1380
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<210> 364
<211> 1356
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 364
gaggtacaac ttgtcgaaag tggcggtgga gtcgtccagc ctgggcgatc acttcgcctc 60
tcctgtgtag cctctggttt cactttctca tcttacgaca tacactgggt ccgccaggca 120
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cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggt 1356
<210> 365
<211> 1443
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 365
cagagcgtac ttacccagcc tcccagcgtg tctgtagccc caggacagac agccagtatt 60
acatgcggtg gtgacaatat aggttccaaa tccgtgcatt ggtaccagca gaagccaggg 120
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tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg 1440
ggt 1443
<210> 366
<211> 1452
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 366
agcagcgaat tgacccaacc accttccgtc agcgtcgcac cagggcaaac cgcccgcatc 60
acatgcggtg ggaacaatat aggaagcaaa tctgtccact ggtaccagca aaaaccagga 120
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gacgaggcag attactattg ccaggtctgg gacagctcca gcgaccacgt cgtattcggt 300
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caacctggtg gcagcctccg tttgtcttgt gctgccagtg gatttacttt cagtcactac 480
gcaatgagct gggtgagaca agcacctggc aagggccttg agtgggtctc cactatcggc 540
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gtgtactact gcgccaagcc tcatattgta atggtcactg ccctcttgta tgatggcatg 720
gatgtttggg gccaagggac aatggtgaca gtctcaagcg agcccaaatc tagcgacaaa 780
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tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagtcta gatggcagca ggggaacgtc 1380
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ctgtctccgg gt 1452
<210> 367
<211> 1362
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 367
caggttcaac ttcaagaatc cgggccaggt ctggtcaagc cttcagagac tttgtccctt 60
acttgcacag tgagcggtgg ctctatctca agttactact ggtcatggat acggcagccc 120
ccaggaaagg ggcttgagtg gattgggtac atttattact cagggtcaac aaactacaat 180
ccctccctca aatcccgagt gacaattagt gtcgatacat ctaaaaacca gttttccctg 240
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gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600
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gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900
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cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gt 1362
<210> 368
<211> 1356
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 368
gaggtacaac ttgtcgaaag tggcggtgga gtcgtccagc ctgggcgatc acttcgcctc 60
tcctgtgtag cctctggttt cactttctca tcttacgaca tacactgggt ccgccaggca 120
cctggtaagg ggctggagtg ggttgccatc attagttacg atggctccaa aaaagattac 180
accgatagcg taaagggcag atttaccatt tccagggata attcaaagaa caccctgtat 240
ctgcaaatgg acagcctccg cgtcgaagac tctgcagttt atagctgtgc cagggagtca 300
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acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540
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<210> 369
<211> 1344
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 369
caagtacaac ttcaagagtc tggccctggg cttgttaagc cctcagagac cttgtcactg 60
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aaattgtctt ctgttacagc tgccgacact gcagtatatt attgtgcagg ggactcaggc 300
aactattggg gatggtttga tccttggggg caggggaccc tggtaaccgt gagttctgcc 360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc 420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480
aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga 540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca gcttgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaagt tgagcccaaa 660
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tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780
gtcacatgcg tggtggtgag cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc 900
acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 960
tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020
gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacgtgctgc ccccatcccg ggaggagatg 1080
accaagaacc aggtcagcct gctgtgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactacc tcacctggcc tcccgtgctg 1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagtc tagatggcag 1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320
aagagcctct ccctgtctcc gggt 1344
<210> 370
<211> 1365
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 370
caggttcagc tgcaagagtc tggccctggc ctggtcaagc cttccgagac actgtctctg 60
acctgcaccg tgtctggcgg ctccatctcc tcctactact ggtcctggat cagacagcct 120
cctggcaaag gcctggaatg gatcggctac atctactact ccggctccac caactacaac 180
cccagcctga agtccagagt gaccatctcc gtggacacct ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgtcct ccgtgaccgc tgctgatacc gccgtgtact attgtgctgg caccaccatc 300
ttcggcgtgg tcacccctaa cttctactac ggcatggacg tgtggggcca aggcacaaca 360
gtgacagtct cttctgcctc caccaagggt ccatcggtct tccccctggc accctcctcc 420
aagagcacct ctgggggcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 480
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gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 600
ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 660
aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa actcacactt gtccaccgtg cccagcacct 720
gaagcagcag ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 780
atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtgagcg tgagccacga agaccctgag 840
gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 900
gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 960
tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtgtccaaca aagccctccc agcccccatc 1020
gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta cgtgctgccc 1080
ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctgc tgtgcctggt caaaggcttc 1140
tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacctc 1200
acctggcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg 1260
gacaagtcca gatggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1320
cacaaccact acacgcagaa gtctctctcc ctgtctccgg gaaaa 1365
<210> 371
<211> 1335
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 371
gaggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agatataaca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtacta gtagtaatta catatactac 180
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<210> 372
<211> 1347
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 372
caggtgcagc tccaacagag tggtcccaga ctcgtgagac cctctcaaac actcagtttg 60
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 373
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<210> 374
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 374
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 375
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
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Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
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Thr Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
115 120 125
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130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
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Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
245 250 255
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
260 265 270
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
275 280 285
Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
290 295 300
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
305 310 315 320
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
325 330 335
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
340 345 350
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
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Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu
370 375 380
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
385 390 395 400
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
405 410 415
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
420 425 430
Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
435 440 445
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
450 455 460
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 376
<211> 475
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 376
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
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<210> 377
<211> 475
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 377
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 379
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<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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gagatcaag 729
<210> 391
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcggcagct ggccatacac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gggcggatct gagggaaagt ccagcggctc cggcagcgaa 360
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gtgagcagc 729
<210> 392
<211> 729
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 392
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ctgcaaatga gcggcctgag agccgaggac acggctattt attactgtac gagaggctgg 300
gggccttttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctcagg cggatctgag 360
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gccagacaga gcattggcac agccatacac tggtatcagc aaagaacaaa tggttctcca 540
aggcttctca taaagtatgc ttctgagtct atctctggga tcccttccag gtttagcggc 600
agtggatcag ggacagattt tactcttacc atcaacagtg tggagtctga agatattgca 660
gattattact gtcaacaaag tgggagctgg ccgtacacgt tcggaggggg gaccaagctg 720
gaaataaaa 729
<210> 393
<211> 729
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 393
gacatcttgc tgactcagtc tccaggcatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60
ttctcctgca gggccagaca gagcattggc acagccatac actggtatca gcaaagaaca 120
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gtctcctca 729
<210> 394
<211> 1425
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 394
gaggtgcagc tggtggagag cggtggcggt ctggtgaagc caggtggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggttt caccttcagc cgctacaaca tgaactgggt gcgccaagcc 120
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<210> 395
<211> 1425
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 395
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 396
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<213> Artificial Sequence
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<400> 398
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<210> 399
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
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<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
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<220>
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atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtgagcg tgagccacga agaccctgag 900
gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 960
gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 1020
tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1080
gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta cgtgtacccc 1140
ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1200
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<210> 402
<211> 1425
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 402
gaggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
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actcagtctc caggcatcct gtctgtgagt ccaggagaaa gagtcagttt ctcctgcagg 480
gccagacaga gcattggcac agccatacac tggtatcagc aaagaacaaa tggttctcca 540
aggcttctca taaagtatgc ttctgagtct atctctggga tcccttccag gtttagcggc 600
agtggatcag ggacagattt tactcttacc atcaacagtg tggagtctga agatattgca 660
gattattact gtcaacaaag tgggagctgg ccgtacacgt tcggaggggg gaccaagctg 720
gaaataaaag agcccaaatc tagcgacaaa actcacacat gtccaccgtg cccagcacct 780
gaagcagcag ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 840
atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtgagcg tgagccacga agaccctgag 900
gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 960
gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 1020
tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1080
gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta cgtgtacccc 1140
ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1200
tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1260
accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcgccc tcgtgagcaa gctcaccgtg 1320
gacaagtcta gatggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1380
cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaa 1425
<210> 403
<211> 1425
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 403
gacatcttgc tgactcagtc tccaggcatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60
ttctcctgca gggccagaca gagcattggc acagccatac actggtatca gcaaagaaca 120
aatggttctc caaggcttct cataaagtat gcttctgagt ctatctctgg gatcccttcc 180
aggtttagcg gcagtggatc agggacagat tttactctta ccatcaacag tgtggagtct 240
gaagatattg cagattatta ctgtcaacaa agtgggagct ggccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa aggcggatct gagggaaagt ccagcggctc cggcagcgaa 360
agcaagtcca ccggcggaag cgaggtgcaa ctggtggagt ctgggggagg cctggtcaag 420
cctggggggt ccctgagact ctcctgtgca gcctctggat tcaccttcag tagatataac 480
atgaactggg tccgccaggc tccagggaag gggctggagt gggtctcatc cattagtact 540
agtagtaatt acatatacta cgcagactca gtgaagggcc gattcacctt ctccagagac 600
aacgccaaga actcactgga tctgcaaatg agcggcctga gagccgagga cacggctatt 660
tattactgta cgagaggctg ggggcctttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 720
gtctcctcag agcccaaatc tagcgacaaa actcacacat gtccaccgtg cccagcacct 780
gaagcagcag ggggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg 840
atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtgagcg tgagccacga agaccctgag 900
gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg 960
gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac 1020
tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agcccccatc 1080
gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta cgtgtacccc 1140
ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc 1200
tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag 1260
accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcgccc tcgtgagcaa gctcaccgtg 1320
gacaagtcta gatggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg 1380
cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaa 1425
<210> 404
<211> 252
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 404
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Gly Thr Thr Ile Phe Gly Val Val Thr Pro Asn Phe Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly
130 135 140
Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val
145 150 155 160
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser
165 170 175
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu
180 185 190
Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
210 215 220
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro
225 230 235 240
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245 250
<210> 405
<211> 252
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 405
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln
115 120 125
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr
130 135 140
Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr
145 150 155 160
Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
165 170 175
Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
180 185 190
Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys
195 200 205
Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly
210 215 220
Thr Thr Ile Phe Gly Val Val Thr Pro Asn Phe Tyr Tyr Gly Met Asp
225 230 235 240
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 406
<211> 250
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 406
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asp Tyr Thr Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Val Glu Asp Ser Ala Val Tyr Ser Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Gly Trp Ser His Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly
115 120 125
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp
130 135 140
Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp
145 150 155 160
Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu
165 170 175
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Phe Leu Ile Tyr
180 185 190
Ala Ala Ser Thr Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
210 215 220
Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr
225 230 235 240
Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
245 250
<210> 407
<211> 250
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 407
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Phe Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asp
145 150 155 160
Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
165 170 175
Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asp Tyr Thr Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
195 200 205
Gln Met Asp Ser Leu Arg Val Glu Asp Ser Ala Val Tyr Ser Cys Ala
210 215 220
Arg Glu Ser Gly Trp Ser His Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 408
<211> 245
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 408
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Ala Gly Ser Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Leu Tyr Val Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Leu Ser Leu Asp Pro Ser Arg Asn Gln Leu Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Gly Asp Ser Gly Asn Tyr Trp Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly
115 120 125
Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Leu Thr
130 135 140
Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Glu Thr Ala Ser Ile Thr
145 150 155 160
Cys Ser Gly Asp Gln Leu Gly Glu Asn Tyr Ala Cys Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Ser Lys Arg
180 185 190
Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr
195 200 205
Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu Asp Glu Ala Asp Tyr
210 215 220
Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Asn Ser Ile Val Val Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 409
<211> 245
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 409
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Gln Leu Gly Glu Asn Tyr Ala
20 25 30
Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Asn Ser Ile Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser Glu Gly Lys
100 105 110
Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu Thr Leu
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr Trp
145 150 155 160
Ser Trp Leu Arg Gln Pro Ala Gly Ser Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg
165 170 175
Leu Tyr Val Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg
180 185 190
Val Thr Leu Ser Leu Asp Pro Ser Arg Asn Gln Leu Ser Leu Lys Leu
195 200 205
Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Gly Asp
210 215 220
Ser Gly Asn Tyr Trp Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 410
<211> 267
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 410
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile
35 40 45
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
65 70 75 80
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
85 90 95
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
115 120 125
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser
130 135 140
Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu
145 150 155 160
Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr
165 170 175
Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu
180 185 190
Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
195 200 205
Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
225 230 235 240
Glu Asp Val Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr
245 250 255
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
260 265
<210> 411
<211> 267
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 411
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val
20 25 30
Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val
35 40 45
Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
50 55 60
Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly
65 70 75 80
Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Phe Cys Gln
100 105 110
Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
115 120 125
Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser
130 135 140
Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly
145 150 155 160
Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly
165 170 175
Asn Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro
180 185 190
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr
195 200 205
Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr
210 215 220
Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp
225 230 235 240
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 412
<211> 267
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 412
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile
35 40 45
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
65 70 75 80
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
85 90 95
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
115 120 125
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser
130 135 140
Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu
145 150 155 160
Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr
165 170 175
Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu
180 185 190
Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile
195 200 205
Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro
225 230 235 240
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr
245 250 255
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
260 265
<210> 413
<211> 267
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 413
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu
20 25 30
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val
35 40 45
Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
50 55 60
Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly
65 70 75 80
Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln
100 105 110
Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
115 120 125
Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser
130 135 140
Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly
145 150 155 160
Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly
165 170 175
Asn Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro
180 185 190
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr
195 200 205
Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr
210 215 220
Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp
225 230 235 240
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 414
<211> 267
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 414
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile
35 40 45
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
65 70 75 80
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
85 90 95
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
115 120 125
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser
130 135 140
Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu
145 150 155 160
Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr
165 170 175
Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu
180 185 190
Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile
195 200 205
Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro
225 230 235 240
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr
245 250 255
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
260 265
<210> 415
<211> 267
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 415
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu
20 25 30
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val
35 40 45
Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
50 55 60
Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly
65 70 75 80
Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Ser Ser Val Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Gln
100 105 110
Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu
115 120 125
Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser
130 135 140
Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly
145 150 155 160
Leu Val Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly
165 170 175
Asn Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro
180 185 190
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr
195 200 205
Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr
210 215 220
Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp
225 230 235 240
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 416
<211> 271
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 416
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile
35 40 45
Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro
65 70 75 80
Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln
85 90 95
Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Gly Thr Thr Ile Phe Gly Val Val Thr Pro Asn Phe Tyr
115 120 125
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser
145 150 155 160
Thr Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser
165 170 175
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly
180 185 190
Ile Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
195 200 205
Lys Phe Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
210 215 220
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser
225 230 235 240
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn
245 250 255
Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
260 265 270
<210> 417
<211> 271
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 417
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala
20 25 30
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile
35 40 45
Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
50 55 60
Phe Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg
65 70 75 80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
85 90 95
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser
100 105 110
Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly
130 135 140
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro
145 150 155 160
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser
165 170 175
Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
180 185 190
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
195 200 205
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
210 215 220
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
225 230 235 240
Cys Ala Gly Thr Thr Ile Phe Gly Val Val Thr Pro Asn Phe Tyr Tyr
245 250 255
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
260 265 270
<210> 418
<211> 269
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 418
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Asp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asp Tyr Thr
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Val Glu Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Ser Cys Ala Arg Glu Ser Gly Trp Ser His Tyr Tyr Tyr Tyr Gly
115 120 125
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
130 135 140
Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly
145 150 155 160
Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
165 170 175
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser
180 185 190
Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Phe
195 200 205
Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
210 215 220
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
225 230 235 240
Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala
245 250 255
Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
260 265
<210> 419
<211> 269
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 419
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
20 25 30
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile
35 40 45
Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys
50 55 60
Phe Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg
65 70 75 80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
85 90 95
Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser
100 105 110
Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly
130 135 140
Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro
145 150 155 160
Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
165 170 175
Ser Tyr Asp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
180 185 190
Trp Val Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asp Tyr Thr Asp
195 200 205
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
210 215 220
Leu Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Val Glu Asp Ser Ala Val Tyr
225 230 235 240
Ser Cys Ala Arg Glu Ser Gly Trp Ser His Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
245 250 255
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 420
<211> 264
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 420
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile
35 40 45
Ser Ser Tyr Tyr Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Ala Gly Ser Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Arg Leu Tyr Val Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro
65 70 75 80
Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Leu Ser Leu Asp Pro Ser Arg Asn Gln
85 90 95
Leu Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Gly Asp Ser Gly Asn Tyr Trp Gly Trp Phe Asp Pro Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys
130 135 140
Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Ser Tyr
145 150 155 160
Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Glu Thr Ala
165 170 175
Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Gln Leu Gly Glu Asn Tyr Ala Cys Trp
180 185 190
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp
195 200 205
Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser
210 215 220
Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu Asp Glu
225 230 235 240
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Asn Ser Ile Val Val Phe Gly
245 250 255
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
260
<210> 421
<211> 264
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 421
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser
20 25 30
Pro Gly Glu Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Gln Leu Gly Glu
35 40 45
Asn Tyr Ala Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu
50 55 60
Val Ile Tyr Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe
65 70 75 80
Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr
85 90 95
Gln Ala Leu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Asn Ser
100 105 110
Ile Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly
130 135 140
Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
145 150 155 160
Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser
165 170 175
Tyr Tyr Trp Ser Trp Leu Arg Gln Pro Ala Gly Ser Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Ile Gly Arg Leu Tyr Val Ser Gly Phe Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
195 200 205
Lys Ser Arg Val Thr Leu Ser Leu Asp Pro Ser Arg Asn Gln Leu Ser
210 215 220
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Ala Gly Asp Ser Gly Asn Tyr Trp Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln
245 250 255
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260
<210> 422
<211> 268
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 422
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Tyr Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala His Leu Pro Tyr Ser Gly Ser Tyr Trp Ala Phe Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu
130 135 140
Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser
145 150 155 160
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
165 170 175
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
180 185 190
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
195 200 205
Asp Asn Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
210 215 220
Asn Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
225 230 235 240
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
245 250 255
Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val
260 265
<210> 423
<211> 287
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 423
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala
20 25 30
Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser
35 40 45
Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu
50 55 60
Val Val Tyr Asp Asn Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe
65 70 75 80
Ser Gly Ser Asn Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val
85 90 95
Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser
100 105 110
Ser Asp His Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Gly
115 120 125
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Gly Gly Ser Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala
145 150 155 160
Ala Gln Ser Ile Gln Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
165 170 175
Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
180 185 190
Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
195 200 205
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
210 215 220
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
225 230 235 240
Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
245 250 255
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala His Leu Pro Tyr Ser Gly Ser Tyr Trp
260 265 270
Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
275 280 285
<210> 424
<211> 253
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 424
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Pro His Ile Val Met Val Thr Ala Leu Leu Tyr Asp Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly
130 135 140
Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly
145 150 155 160
Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser
165 170 175
Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val
180 185 190
Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala
210 215 220
Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp
225 230 235 240
His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245 250
<210> 425
<211> 272
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 425
Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser
1 5 10 15
Ile Gln Ala Ser Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala
20 25 30
Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser
35 40 45
Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu
50 55 60
Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe
65 70 75 80
Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val
85 90 95
Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser
100 105 110
Ser Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
115 120 125
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
145 150 155 160
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
165 170 175
Ser His Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
180 185 190
Glu Trp Val Ser Thr Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala
195 200 205
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
210 215 220
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
225 230 235 240
Tyr Tyr Cys Ala Lys Pro His Ile Val Met Val Thr Ala Leu Leu Tyr
245 250 255
Asp Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
260 265 270
<210> 426
<211> 471
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 426
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly
115 120 125
Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe Gly Thr Ser Leu Met His Trp
165 170 175
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala
180 185 190
Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val
210 215 220
Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Thr Ser Thr Pro Ala Pro Arg Pro
245 250 255
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
260 265 270
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
275 280 285
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
290 295 300
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly
305 310 315 320
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
325 330 335
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
340 345 350
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp
355 360 365
Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn
370 375 380
Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg
385 390 395 400
Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly
405 410 415
Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu
420 425 430
Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu
435 440 445
Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His
450 455 460
Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 427
<211> 471
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 427
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Glu Tyr Phe
20 25 30
Gly Thr Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Val Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Arg
85 90 95
Lys Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
130 135 140
Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asn Ser Ile
145 150 155 160
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn
180 185 190
Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
195 200 205
Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Phe Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Pro Ala Pro Arg Pro
245 250 255
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
260 265 270
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
275 280 285
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
290 295 300
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly
305 310 315 320
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
325 330 335
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
340 345 350
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340 345 350
Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
355 360 365
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
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Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
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Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
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Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
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Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
435 440 445
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
450 455 460
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 436
<211> 468
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 436
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Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala
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450 455 460
Leu Pro Pro Arg
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<211> 468
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 437
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Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
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Leu Pro Pro Arg
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 438
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 439
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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro
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Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 440
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro
325 330 335
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<210> 441
<211> 476
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 441
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
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245 250 255
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Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
275 280 285
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
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Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu
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Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro
325 330 335
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<210> 442
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<400> 442
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<210> 443
<211> 104
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 443
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<210> 444
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 444
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 445
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Glu
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195 200 205
Thr Glu Cys Ser
210
<210> 446
<211> 636
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 446
agttatgagc tgactcaacc acccagtgtc agcgtatccc caggagaaac tgcctctata 60
acatgcagcg gagaccagtt gggagaaaat tacgcctcct ggtaccaaca gaagcctgga 120
caaagtcctg tcctcgttat ttatcaagat tctaaacgtc cctctgggat ccccgaacga 180
ttctccggct ctaactctgg gaataccgct accttgacaa taagtggtac acaggcactt 240
gatgaagctg attattactg ccaggcatgg gataacagca ttgtggtttt cgggggcggc 300
accaaactca cagttctcgg tcagcccaag gctgcaccca gtgtcactct gttcccgccc 360
tcctctgagg agcttcaagc caacaaggcc acactggtgt gtctcataag tgacttctac 420
ccgggagccg tgacagtggc ctggaaggcc gatagcagcc ccgtcaaggc gggagtggag 480
accaccacac cctccaaaca aagcaacaac aagtacgcgg ccagcagcta tctgagcctg 540
acgcctgagc agtggaagtc ccacagaagc tacagctgcc aggtcacgca tgaagggagc 600
accgtggaga agacagtggc ccctacagaa tgttca 636
<210> 447
<211> 106
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 447
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 448
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 448
Gly Ser Asp Glu Asp His Leu Ser Leu
1 5
<210> 449
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 449
Pro Arg Gly Ser Lys Pro
1 5
<210> 450
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 450
gacatccaga tgacccagtc tccttccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120
gggaaagccc ctaagttcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag cttaatagtt accctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggaaatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 451
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 451
gacatcgtga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcgagtca ggacattagc aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagttc ctaagttcct gatctatgct gcatccactt tgcactctgg ggtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tataacagtg ccccgtacac ttttggccaa 300
gggacacgac tggagattaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 452
<211> 642
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 452
gacatccaga tgacccagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgtc gtgcccgcca gagcatcggc accgccatcc actggtacca gcagaagcca 120
ggcaaggccc caaagctgct gatcaagtac gccagcgaga gcatcagcgg tgtgccaagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcca 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agcggcagct ggccatacac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 453
<211> 475
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 453
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Arg Gln Ser Ile Gly Thr Ala
20 25 30
Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Gly Ser Trp Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly
100 105 110
Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly Ser
130 135 140
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Asn
145 150 155 160
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
165 170 175
Ser Ile Ser Thr Ser Ser Asn Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
180 185 190
Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Asp Leu
195 200 205
Gln Met Ser Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr
210 215 220
Arg Gly Trp Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
225 230 235 240
Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
245 250 255
Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
260 265 270
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
275 280 285
Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
290 295 300
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
305 310 315 320
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
325 330 335
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
340 345 350
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
355 360 365
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Tyr Pro Pro Ser Arg Glu
370 375 380
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
385 390 395 400
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
405 410 415
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
420 425 430
Ala Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
435 440 445
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
450 455 460
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 454
<211> 240
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 454
Val Pro Leu Ile Glu Gly Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu Lys
1 5 10 15
His Ser Gln Pro Trp Gln Val Ala Val Tyr Ser His Gly Trp Ala His
20 25 30
Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His
35 40 45
Cys Leu Lys Lys Asn Ser Gln Val Trp Leu Gly Arg His Asn Leu Phe
50 55 60
Glu Pro Glu Asp Thr Gly Gln Arg Val Pro Val Ser His Ser Phe Pro
65 70 75 80
His Pro Leu Tyr Asn Met Ser Leu Leu Lys His Gln Ser Leu Arg Pro
85 90 95
Asp Glu Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu Pro
100 105 110
Ala Lys Ile Thr Asp Val Val Lys Val Leu Gly Leu Pro Thr Gln Glu
115 120 125
Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile Glu
130 135 140
Pro Glu Glu Phe Leu Arg Pro Arg Ser Leu Gln Cys Val Ser Leu His
145 150 155 160
Tyr Ser Glu Lys Val Thr Glu Phe Met Leu Cys Ala Gly Leu Trp Thr
165 170 175
Gly Gly Lys Asp Thr Cys Gly Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys
180 185 190
Asn Gly Val Leu Gln Gly Ile Thr Ser Trp Gly Pro Glu Pro Cys Ala
195 200 205
Leu Pro Glu Lys Pro Ala Val Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys
210 215 220
Trp Ile Lys Asp Thr Ile Ala Ala Asn Pro His His His His His His
225 230 235 240
<210> 455
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 455
Gly Phe Thr Phe Ser His
1 5
<210> 456
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 456
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Pro His Ile Val Met Val Thr Ala
1 5 10 15
Leu
<210> 457
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 457
Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg
1 5 10
<210> 458
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 458
Phe Thr Phe Ser Tyr
1 5
<210> 459
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 459
Gly Ser Tyr Trp Ala Phe Asp Tyr
1 5
<210> 460
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 460
Asp Asn Ser Asp
1
<210> 461
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 461
Gly Asn Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala
1 5
<210> 462
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 462
Gly Phe Thr Phe
1
<210> 463
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 463
Ala Arg Asp Gln Asn Tyr Asp Ile Leu
1 5
<210> 464
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 464
Val Thr Pro Asn Phe
1 5
<210> 465
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 465
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly
1 5
<210> 466
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 466
Glu Ser Gly Trp Ser His Tyr
1 5
<210> 467
<211> 244
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 467
Val Pro Leu Ile Glu Gly Arg Ile Val Gly Gly Trp Glu Cys Glu Lys
1 5 10 15
His Ser Gln Pro Trp Gln Val Ala Val Tyr Ser His Gly Trp Ala His
20 25 30
Cys Gly Gly Val Leu Val His Pro Gln Trp Val Leu Thr Ala Ala His
35 40 45
Cys Leu Lys Lys Asn Ser Gln Val Trp Leu Gly Arg His Asn Leu Phe
50 55 60
Glu Pro Glu Asp Thr Gly Gln Arg Val Pro Val Ser His Ser Phe Pro
65 70 75 80
His Pro Leu Tyr Asn Met Ser Leu Leu Lys His Gln Ser Leu Arg Pro
85 90 95
Asp Glu Asp Ser Ser His Asp Leu Met Leu Leu Arg Leu Ser Glu Pro
100 105 110
Ala Lys Ile Thr Asp Val Val Lys Val Leu Gly Leu Pro Thr Gln Glu
115 120 125
Pro Ala Leu Gly Thr Thr Cys Tyr Ala Ser Gly Trp Gly Ser Ile Glu
130 135 140
Pro Glu Glu Phe Leu Arg Pro Arg Ser Leu Gln Cys Val Ser Leu His
145 150 155 160
Leu Leu Ser Asn Asp Met Cys Ala Arg Ala Tyr Ser Glu Lys Val Thr
165 170 175
Glu Phe Met Leu Cys Ala Gly Leu Trp Thr Gly Gly Lys Asp Thr Cys
180 185 190
Gly Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Val Cys Asn Gly Val Leu Gln Gly
195 200 205
Ile Thr Ser Trp Gly Pro Glu Pro Cys Ala Leu Pro Glu Lys Pro Ala
210 215 220
Val Tyr Thr Lys Val Val His Tyr Arg Lys Trp Ile Lys Asp Thr Ile
225 230 235 240
Ala Ala Asn Pro
<210> 468
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 468
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Phe Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Asn Tyr Asp Ile Leu Thr Gly His Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Gly Lys
450
<210> 469
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide
<400> 469
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Thr Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Asn Ser Tyr Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 470
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 470
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser
1 5
<210> 471
<211> 1338
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide
<400> 471
gaggtgcagc tggtggagag cggtggcggt ctggtgaagc caggtggcag cctgcgcctg 60
agctgtgccg ccagcggttt caccttcagc cgctacaaca tgaactgggt gcgccaagcc 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgagcagc atcagcacca gcagcaacta catctactac 180
gccgacagcg tgaagggccg cttcaccttc agccgcgaca acgccaagaa cagcctggac 240
ctgcagatga gcggtctgcg cgccgaggac accgccatct actactgcac ccgcggttgg 300
ggcccattcg actactgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgagcagcgc ctccaccaag 360
ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc tccaagagca cctctggggg cacagcggcc 420
ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480
gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540
ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc agcttgggca cccagaccta catctgcaac 600
gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac 660
aaaactcaca catgtccacc gtgcccagca cctgaagcag cagggggacc gtcagtcttc 720
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 780
gtggtggtga gcgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 840
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 900
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 960
aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1020
cagccccgag aaccacaggt gtacgtgtac cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1080
caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1140
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1200
ggctccttcg ccctcgtgag caagctcacc gtggacaagt ctagatggca gcaggggaac 1260
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1320
tccctgtctc cgggtaaa 1338
Claims (250)
- 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질로서, 상기 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 111, 112, 113, 114 및 115로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 갖는 hK2 상의 에피토프에 결합하는, 단리된 단백질.
- 제1항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 KVTEF(SEQ ID NO: 111) 및 HYRKW(SEQ ID NO: 112)의 서열을 갖는 에피토프 내에서 hK2에 결합하는, 단리된 단백질.
- 제1항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 hK2에 대한 결합에 대해 참조 항체와 경쟁하고, 참조 항체는 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. SEQ ID NO: 137의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 138의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
b. SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
c. SEQ ID NO: 164의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 165의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
d. SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 167의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
e. SEQ ID NO: 168의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 169의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
f. SEQ ID NO: 204의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 205의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 또는
g. SEQ ID NO: 166의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 444의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3. - 제3항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 hK2에 대한 결합에 대해 참조 항체와 경쟁하고, 참조 항체는 SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 하기의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단백질:
a. 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146;
b. 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175;
c. 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181;
d. 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187;
e. 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193;
f. 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 및 209;
g. 각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146;
h. 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175;
i. 각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180 및 181;
j. 각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187;
k. 각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193; 또는
l. 각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209. - 제5항에 있어서, 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb 또는 VHH인, 단리된 단백질.
- 제7항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 Fab인, 단리된 단백질.
- 제7항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 VHH인, 단리된 단백질.
- 제7항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 scFv인, 단리된 단백질.
- 제10항에 있어서, scFv가 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1) 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제11항에 있어서, L1이 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. 약 5 내지 50개의 아미노산;
b. 약 5 내지 40개의 아미노산;
c. 약 10 내지 30개의 아미노산; 또는
d. 약 10 내지 20개의 아미노산. - 제12항에 있어서, L1이 SEQ ID NO: 7, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107 또는 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제13항에 있어서, L1이 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 137, 162, 164, 166, 168 또는 204의 VH 및 SEQ ID NO: 138, 163, 165, 167, 169 또는 205의 VL을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제15항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL; 또는
b. SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL; 또는
c. SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL; 또는
d. SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL; 또는
e. SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL; 또는
f. SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL; 또는
g. SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 444의 VL. - 제15항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VL을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 133, 134, 308, 316, 324, 325, 404, 405, 406, 407, 408 및 409로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 404 또는 405의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
- 칼리크레인 관련 펩티다제 2(hK2)에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질로서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 75의 중쇄 가변 영역(VH) 및 SEQ ID NO: 74의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 단리된 단백질.
- 제20항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 139, 159 또는 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 140 또는 160의 VL을 포함하며, 단, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL 둘 다를 포함하지 않는, 단리된 단백질.
- 제21항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
b. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
c. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
d. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
e. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
f. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
g. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
h. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
i. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
j. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
k. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
l. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
m. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
n. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
o. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
p. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
q. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
r. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
s. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
t. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
u. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
v. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
w. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
x. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
y. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
z. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
aa. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
bb. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL; 또는
cc. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL. - 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 하기의 HCDR1, HCDR1, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 단백질:
a. 각각 SEQ ID NO: 63, 64, 66, 67, 69 및 71;
b. 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 68, 70 및 71;
c. 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71;
d. 각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 67, 69 및 71; 또는
e. 각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 68, 70 및 71; 또는
f. 각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 67, 69 및 71. - 제21항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb 또는 VHH인, 단리된 단백질.
- 제24항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 Fab인, 단리된 단백질.
- 제24항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 VHH인, 단리된 단백질.
- 제24항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 scFv인, 단리된 단백질.
- 제27항에 있어서, scFv가 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1) 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제28항에 있어서, L1이 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. 약 5 내지 50개의 아미노산;
b. 약 5 내지 40개의 아미노산;
c. 약 10 내지 30개의 아미노산;
d. 또는 약 10 내지 20개의 아미노산. - 제29항에 있어서, L1이 SEQ ID NO: 7, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107 또는 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제21항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 135, 136, 318, 319, 320, 321, 322 또는 323의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 단백질이 단일특이적 단백질인, 단리된 단백질.
- 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 단백질이 다중특이적 단백질인, 단리된 단백질.
- 제33항에 있어서, 다중특이적 단백질이 이중특이적 단백질인, 단리된 단백질.
- 제33항에 있어서, 다중특이적 단백질이 삼중특이적 단백질인, 단리된 단백질.
- 제34항 또는 제35항에 있어서, 림프구 상의 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질.
- 제36항에 있어서, 림프구가 T 세포인, 다중특이적 단백질.
- 제37항에 있어서, T 세포가 CD8+ T 세포인, 다중특이적 단백질.
- 제38항에 있어서, 림프구가 자연 살해(NK) 세포인, 다중특이적 단백질.
- 제36항에 있어서, 림프구 상의 항원이 CD3, CD3 엡실론 (CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 또는 NKG2C인, 다중특이적 단백질.
- 제40항에 있어서, 림프구 상의 항원이 CD3ε인, 다중특이적 단백질.
- 제41항에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 다중특이적 단백질:
a. SEQ ID NO: 116의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), SEQ ID NO: 117의 HCDR2, SEQ ID NO: 118의 HCDR3, SEQ ID NO: 119의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SEQ ID NO: 120의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 121의 LCDR3; 또는
b. SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL. - 제41항에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 157의 VL을 포함하는, 다중특이적 단백질.
- 제43항에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 다중특이적 단백질:
a. SEQ ID NO: 255의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 260의 LCDR3; 또는
b. SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3; 또는
c. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 249의 VL; 또는
d. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 250의 VL; 또는
e. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL; 또는
f. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 252의 VL; 또는
g. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 253의 VL; 또는
h. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 254의 VL. - 제43항에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3을 포함하는, 다중특이적 단백질.
- 제43항 또는 제45항에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 248의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VL을 포함하는, 다중특이적 단백질.
- 제41항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 결합 도메인이 하기의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 다중특이적 단백질:
a. 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146;
b. 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175;
c. 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181;
d. 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187;
e. 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193;
f. 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 및 209;
g. 각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146;
h. 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175;
i. 각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 190 및 181;
j. 각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187;
k. 각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193;
l. 각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209;
m. 각각 SEQ ID NO: 63, 64, 66, 67, 69 및 71;
n. 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 68, 70 및 71;
o. 각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 67, 69 및 71;
p. 각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 68, 70 및 71;
q. SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
r. SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
s. SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
t. SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
u. SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL;
v. SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL;
w. SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 444의 VL;
x. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
y. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
z. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
aa. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL; 또는
bb. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL. - 제47항에 있어서, hK2에 결합하는 결합 도메인이, 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 다중특이적 단백질.
- 제41항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, CD3에 결합하는 결합 도메인이 하기를 포함하는, 다중특이적 단백질:
a. SEQ ID NO: 116의 HCDR1, SEQ ID NO: 117의 HCDR2, SEQ ID NO: 118의 HCDR3, SEQ ID NO: 119의 LCDR1, SEQ ID NO: 120의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 121의 LCDR3; 또는
b. SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 260의 LCDR3; 또는
c. SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3; 또는
d. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 249의 VL; 또는
e. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 250의 VL; 또는
f. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL; 또는
g. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 252의 VL; 또는
h. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 253의 VL; 또는
i. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 254의 VL; 또는
j. SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL. - 제1항 내지 제49 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질이 반감기 연장 모이어티에 접합된, 단리된 단백질.
- 제50항에 있어서, 반감기 연장 모이어티가 면역글로불린(Ig), Ig의 단편, Ig 불변 영역, Ig 불변 영역의 단편, Fc 영역, 트랜스페린, 알부민, 알부민 결합 도메인 또는 폴리에틸렌 글리콜인, 단리된 단백질.
- 제51항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 Fc 영역을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제52항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 CH2 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제52항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제52항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제55항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 힌지, CH2 도메인 및 CH3 도메인의 적어도 일부를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제56항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 힌지, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제50항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 N-말단에 접합된, 단리된 단백질.
- 제50항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편의 C-말단에 접합된, 단리된 단백질.
- 제50항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 제2 링커(L2)를 통해 Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편에 접합된, 단리된 단백질.
- 제60항에 있어서, L2가 SEQ ID NO: 7, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107 또는 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제51항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편이 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 동형인, 단리된 단백질.
- 제62항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편이 IgG1인, 단리된 단백질.
- 제51항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편이 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 단백질의 감소된 결합을 초래하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제64항에 있어서, FcγR에 대한 단백질의 감소된 결합을 초래하는 적어도 하나의 돌연변이가 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 단리된 단백질.
- 제65항에 있어서, FcγR에 대한 단백질의 감소된 결합을 초래하는 돌연변이가 L234A_L235A_D265S인, 단리된 단백질.
- 제51항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편이 FcγR에 대한 단백질의 향상된 결합을 초래하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제67항에 있어서, FcγR에 대한 단백질의 향상된 결합을 초래하는 적어도 하나의 돌연변이가 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 단리된 단백질.
- 제64항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, FcγR이 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합인, 단리된 단백질.
- 제51항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, Ig 불변 영역 또는 Ig 불변 영역의 단편이 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제70항에 있어서, 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이가 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 단리된 단백질.
- 제51항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 Ig 불변 영역의 CH3 도메인에 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 단백질.
- 제72항에 있어서, Ig 불변 영역의 CH3 도메인에서의 적어도 하나의 돌연변이가 T350V, L351Y, F405A, Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 단리된 단백질.
- 제73항에 있어서, Ig 불변 영역의 CH3 도메인에서의 돌연변이가 T350V_T366L_K392L_T394W 또는 T350V_L351Y_F405A_Y407V인, 단리된 단백질.
- 제73항 또는 제74항에 있어서, IgG 불변 영역이 SEQ ID: 109, 110, 158 또는 378을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제75항에 있어서, IgG 불변 영역이 SEQ ID NO: 109 또는 378을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제1항 내지 제18항 또는 제50항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. SEQ ID NO: 210의 중쇄(HC) 및 SEQ ID NO: 221의 경쇄(LC);
b. SEQ ID NO: 211의 HC 및 SEQ ID NO: 222의 LC;
c. SEQ ID NO: 212의 HC 및 SEQ ID NO: 223의 LC;
d. SEQ ID NO: 213의 HC 및 SEQ ID NO: 224의 LC; 또는
e. SEQ ID NO: 219의 HC 및 SEQ ID NO: 220의 LC. - 제1항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 354와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 HC 및 SEQ ID NO: 221과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 LC를 포함하는, 단리된 단백질.
- hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질로서, 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 및/또는
b. SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL; 및/또는
c. SEQ ID NO: 210의 HC 및 SEQ ID NO: 221의 LC. - hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질로서, 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 및/또는
b. SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL; 및/또는
c. SEQ ID NO: 354의 HC 및 SEQ ID NO: 221의 LC. - hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질로서, 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 및/또는
b. SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL; 및/또는
c. SEQ ID NO: 211의 HC 및 SEQ ID NO: 222의 LC. - hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질로서, 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 및/또는
b. SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL; 및/또는
c. SEQ ID NO: 212의 HC 및 SEQ ID NO: 223의 LC. - hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질로서, 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 및/또는
b. SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL; 및/또는
c. SEQ ID NO: 213의 HC 및 SEQ ID NO: 224의 LC. - hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 단리된 단백질로서, 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 및 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3; 및/또는
b. SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL; 및/또는
c. SEQ ID NO: 219의 HC 및 SEQ ID NO: 220의 LC. - 제79항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 키메라 항원 수용체(CAR)인, 단리된 단백질.
- 제79항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 단백질이 CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 다중특이적 단백질인, 단리된 단백질.
- 제86항에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 다중특이적 단백질:
a. SEQ ID NO: 116의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), SEQ ID NO: 117의 HCDR2, SEQ ID NO: 118의 HCDR3, SEQ ID NO: 119의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SEQ ID NO: 120의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 121의 LCDR3; 또는
b. SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL. - 제86항 또는 제87항에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 157의 VL을 포함하는, 다중특이적 단백질.
- 제86항 또는 제87항에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 다중특이적 단백질:
a. SEQ ID NO: 255의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 260의 LCDR3; 또는
b. SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3; 또는
c. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 249의 VL; 또는
d. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 250의 VL; 또는
e. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL; 또는
f. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 252의 VL; 또는
g. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 253의 VL; 또는
h. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 254의 VL. - 제86항에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3을 포함하는, 다중특이적 단백질.
- 제86항 또는 제90항에 있어서, CD3ε에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 248의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VL을 포함하는, 다중특이적 단백질.
- 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질이 키메라 항원 수용체(CAR)인, 단리된 단백질.
- 제92항에 있어서, CAR이 하기를 포함하는, 단리된 단백질:
a. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인;
b. 막관통 도메인; 및
c. 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 선택적으로 포함하는 세포내 신호전달 도메인. - 제92항 또는 제93항에 있어서, CAR이 CD8a-힌지 영역을 추가로 포함하는, 단리된 단백질.
- 제92항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 하기와 같은, 단리된 단백질:
a. CD8a-힌지 영역은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함함;
b. 막관통 도메인은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함함; 및/또는
c. 세포내 신호전달 도메인은 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 공동 자극 도메인 및 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 1차 신호전달 도메인을 포함함. - hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제96항에 있어서, 림프구 항원이 T 세포 항원인, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제97항에 있어서, T 세포 항원이 CD8+ T 세포 항원인, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제98항에 있어서, 림프구 항원이 NK 세포 항원인, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제96항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 림프구 항원이 CD3, CD3 엡실론(CD3ε), CD8, KI2L4, NKG2E, NKG2D, NKG2F, BTNL3, CD186, BTNL8, PD-1, CD195, 또는 NKG2C인, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제100항에 있어서, 림프구 항원이 CD3ε인, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제96항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 scFv, (scFv)2, Fv, Fab, F(ab')2, Fd, dAb 또는 VHH를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제102항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 Fab를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제102항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 VHH를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제102항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및/또는 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 scFv를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제102항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 Fab를 포함하고 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 scFv를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제105항 또는 제106항에 있어서, scFv가 N-말단에서 C-말단으로 VH, 제1 링커(L1) 및 VL(VH-L1-VL) 또는 VL, L1 및 VH(VL-L1-VH)를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제107항에 있어서, L1이 하기를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. 약 5 내지 50개의 아미노산;
b. 약 5 내지 40개의 아미노산;
c. 약 10 내지 30개의 아미노산; 또는
d. 약 10 내지 20개의 아미노산. - 제108항에 있어서, L1이 SEQ ID NO: 7, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107 또는 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제109항에 있어서, L1이 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제96항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 111, 112, 113, 114 또는 115에 의해 제시된 hK2 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제111항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 111 및 112에 의해 제시된 hK2 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제111항 또는 제112항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 111, 112, 113, 114 및 115로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 hK2의 불연속 에피토프에 특이적으로 결합하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제96항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, CD3ε에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 341, 448 또는 449에 의해 제시된 CD3ε 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제114항에 있어서, CD3ε에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 341, 448 및 449로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하는 CD3ε 상의 불연속 에피토프에 특이적으로 결합하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제115항에 있어서, CD3ε에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 341, 448 및 449에 의해 제시된 CD3 상의 에피토프에 특이적으로 결합하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제96항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 63, 72, 141, 147, 170, 176, 188, 194, 196, 198, 200, 206 또는 216의 HCDR1, SEQ ID NO: 64, 65, 73, 142, 148, 171, 177, 189, 195, 197, 199, 201, 207 또는 217의 HCDR2, SEQ ID NO: 66, 143, 172, 178, 184, 190, 208 또는 218의 HCDR3, SEQ ID NO: 67, 68, 144, 173, 179, 182, 185 또는 191의 LCDR1, SEQ ID NO: 69, 70, 145, 174, 180, 186, 192 또는 470의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 71, 146, 175, 181, 187, 193 또는 209의 LCDR3을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제117항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 하기의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146;
b. 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175;
c. 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181;
d. 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187;
e. 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193;
f. 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 및 209;
g. 각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146;
h. 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175;
i. 각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 190 및 181;
j. 각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187;
k. 각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193; 또는
l. 각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 181, 470 및 209. - 제118항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이, 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제118항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
b. SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
c. SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
d. SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
e. SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL;
f. SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL; 또는
g. SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 444의 VL. - 제117항 내지 제119항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VL을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제96항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 75의 VH 및 SEQ ID NO: 74의 VL을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제122항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 137, 139, 159 또는 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 140 또는 160의 VL을 포함하며, 단, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인은 SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL을 포함하지 않는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제123항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
b. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
c. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
d. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
e. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
f. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
g. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
h. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
i. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
j. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
k. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
l. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
m. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
n. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
o. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
p. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
q. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
r. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
s. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
t. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
u. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
v. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
w. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
x. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
y. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
z. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
aa. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
bb. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL; 또는
cc. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL. - 제124항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 133, 134, 135, 136, 308, 316, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 404, 405, 406, 407, 408 또는 409의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제124항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 404 또는 405의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 단백질.
- 제96항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 255 또는 116의 HCDR1, SEQ ID NO: 256 또는 117의 HCDR2, SEQ ID NO: 257 또는 118의 HCDR3, SEQ ID NO: 258 또는 119의 LCDR1, SEQ ID NO: 259 또는 120의 LCDR2, 및 SEQ ID NO: 260, 261 또는 121의 LCDR3을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제126항에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제126항 또는 제127항에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 157의 VL을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제128항 또는 제129항에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 260의 LCDR3;
b. SEQ ID NO: 255의 HCDR1, SEQ ID NO: 256의 HCDR2, SEQ ID NO: 257의 HCDR3, SEQ ID NO: 258의 LCDR1, SEQ ID NO: 259의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 261의 LCDR3;
c. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 249의 VL;
d. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 250의 VL;
e. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL;
f. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 252의 VL;
g. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 253의 VL; 또는
h. SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 254의 VL. - 제129항에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 248의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VL을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제96항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. SEQ ID NO: 116의 HCDR1, SEQ ID NO: 117의 HCDR2, SEQ ID NO: 118의 HCDR3, SEQ ID NO: 119의 LCDR1, SEQ ID NO: 120의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 121의 LCDR3; 또는
b. SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL. - 제132항에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336 또는 337의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제96항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 331의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제96항 내지 제134항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 제1 항원 결합 도메인은 제1 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편에 접합되고/접합되거나 림프구 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인은 제2 면역글로불린(Ig) 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편에 접합되는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제135항에 있어서, hK2 및 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편에 결합하는 제1 항원 결합 도메인과 림프구 항원 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 사이에 제2 링커(L2)를 추가로 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제136항에 있어서, L2가 SEQ ID NO: 7, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107 또는 108의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제137항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 Fc 영역을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제138항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 CH2 도메인을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제139항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제140항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제141항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 적어도 일부의 힌지, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제142항에 있어서, Ig 불변 영역의 단편이 힌지, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제138항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편이 IgG1, IgG2 및 IgG3 또는 IgG4 동형인, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제144항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편이 IgG1인, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제145항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편이 FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 감소된 결합을 초래하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제146항에 있어서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 감소된 결합을 초래하는 적어도 하나의 돌연변이가 F234A/L235A, L234A/L235A, L234A/L235A/D265S, V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, F234A/L235A, S228P/F234A/L235A, N297A, V234A/G237A, K214T/E233P/L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, H268Q/V309L/A330S/P331S, S267E/L328F, L234F/L235E/D265A, L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, S228P/F234A/L235A/G237A/P238S 및 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제147항에 있어서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 감소된 결합을 초래하는 돌연변이가 L234A_L235A_D265S인, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제144항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편이 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 다중특이적 단백질의 향상된 결합을 초래하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제149항에 있어서, FcγR에 대한 다중특이적 단백질의 향상된 결합을 초래하는 적어도 하나의 돌연변이가 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L 및 G236A/S239D/I332E로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제146항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, FcγR이 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB 또는 FcγRIII, 또는 이들의 임의의 조합인, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제144항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편이 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 다중특이적 단백질.
- 제152항에 있어서, 다중특이적 단백질의 반감기를 조절하는 적어도 하나의 돌연변이가 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A 및 H435R로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제152항 또는 제153항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인에 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인에 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제154항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인에서의 적어도 하나의 돌연변이 및/또는 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인에서의 적어도 하나의 돌연변이가 T350V, L351Y, F405A,Y407V, T366Y, T366W, F405W, T394W, T394S, Y407T, Y407A, T366S/L368A/Y407V, L351Y/F405A/Y407V, T366I/K392M/T394W, F405A/Y407V, T366L/K392M/T394W, L351Y/Y407A, T366A/K409F, L351Y/Y407A, T366V/K409F, T366A/K409F, T350V/L351Y/F405A/Y407V 및 T350V/T366L/K392L/T394W로 이루어진 군으로부터 선택되고, 잔기 넘버링은 EU 인덱스에 따르는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제155항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인에서의 돌연변이 및 제2 Ig 불변 영역의 CH3 도메인 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편의 CH3 도메인에서의 돌연변이가 각각 T350V_T366L_K392L_T394W 또는 T350V_L351Y_F405A_Y407V인, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제135항 내지 제156항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역 또는 제1 Ig 불변 영역의 단편 및 제2 Ig 불변 영역 또는 제2 Ig 불변 영역의 단편이 하기 돌연변이를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. 제1 Ig 불변 영역에 L234A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V 및 제2 Ig 불변 영역에 L234A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W; 또는
b. 제1 Ig 불변 영역에 L234A_L235A_D265S_T350V_T366L_K392L_T394W 및 제2 Ig 불변 영역에 L234A_L235A_D265S_T350V_L351Y_F405A_Y407V. - 제157항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역이 SEQ ID NO: 110 또는 SEQ ID NO: 378을 갖는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제157항 또는 158항에 있어서, 제2 Ig 불변 영역이 SEQ ID NO: 109 및 SEQ ID NO: 158을 갖는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제135항 내지 제157항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 Ig 불변 영역은 SEQ ID NO: 378과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 제2 Ig 불변 영역은 SEQ ID NO: 109와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 제160항에 있어서, 단리된 단백질이 SEQ ID NO: 309와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 275, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 136의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 351의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함함. - 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 136의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 351의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함함. - 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 134의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 352의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함함. - 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 134의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 352의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함함. - 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 325의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 251의 VL을 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 353의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함함. - 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 354의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함함. - 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 scFv를 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 354의 HC1과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 HC2를 포함함. - 제167항 또는 제168항에 있어서, 단리된 다중특이적 단백질이 HC1 및 HC2의 C-말단에 라이신(예를 들어, K477)을 포함하고, 단리된 다중특이적 단백질이 SEQ ID NO: 361의 HC1과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 HC1 및 SEQ ID NO: 362의 HC2와 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 HC2를 포함하는, 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질.
- 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 444의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 355의 HC1, SEQ ID NO: 445의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함함. - 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 356의 HC1, SEQ ID NO: 222의 LC1 및 SEQ ID NO: 360의 HC2를 포함함. - 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 325의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 353의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함함. - 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 120 및 121의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 316의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 122의 VH 및 SEQ ID NO: 123의 VL을 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 357의 HC1, SEQ ID NO: 359의 HC2 및 SEQ ID NO: 272의 LC2를 포함함. - 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470, 209의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 316의 scFv를 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 248의 VH 및 SEQ ID NO: 151의 VL을 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 357의 HC1, SEQ ID NO: 358의 HC2 및 SEQ ID NO: 267의 LC2를 포함함. - 하기와 같은, hK2에 결합하는 제1 도메인 및 CD3에 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 항-hK2/항-CD3 단백질:
a. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 도메인은 각각 SEQ ID NO: 255, 256, 257, 258, 259 및 261의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함함;
b. hK2에 결합하는 제1 결합 도메인은 SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL을 포함하고, 림프구 항원에 결합하는 제2 결합 도메인은 SEQ ID NO: 331의 scFv를 포함함; 및/또는
c. 단리된 다중특이적 단백질은 SEQ ID NO: 361의 HC1, SEQ ID NO: 221의 LC1 및 SEQ ID NO: 362의 HC2를 포함함. - 치료제 또는 조영제(imaging agent)에 접합된 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질을 포함하는 면역접합체.
- 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.
- 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
- 하기와 같은 폴리뉴클레오티드:
a. 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질을 코딩함; 및/또는
b. SEQ ID NO: 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 263, 271, 274, 282, 292, 293, 294, 295, 303, 304, 305, 306, 312, 317, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 450 또는 451의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함함. - 하기와 같은 폴리뉴클레오티드:
a. 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 단리된 단백질을 코딩함; 및/또는
b. SEQ ID NO: 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 263, 271, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 303, 304, 305, 306, 312, 316, 317, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 446, 450 또는 451의 폴리뉴클레오티드 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 폴리뉴클레오티드 서열을 포함함. - 제179항 또는 제180항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제181항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질을 생성하는 방법으로서, 제182항의 숙주 세포를 상기 단백질이 발현되는 조건에서 배양하고, 숙주 세포에 의해 생성된 단백질을 회수하는 것을 포함하는 방법.
- 치료제 또는 조영제에 접합된 제96항 내지 제175항 중 어느 한 항의 단리된 이중특이적 단백질을 포함하는 면역접합체.
- 제96항 내지 제175항 중 어느 한 항의 단리된 이중특이적 단백질 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학 조성물.
- 하기와 같은 폴리뉴클레오티드:
a. 제96항 내지 제175항 중 어느 한 항의 이중특이적 단백질을 코딩함; 및/또는
b. SEQ ID NO: 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 263, 271, 274, 282, 292, 293, 294, 295, 303, 304, 305, 306,312, 316, 317, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 450 또는 451의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함함. - 하기와 같은 폴리뉴클레오티드:
a. 제96항 내지 제175항 중 어느 한 항의 단리된 단백질과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 단리된 단백질을 코딩함; 및/또는
b. SEQ ID NO: 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 263, 271, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 303, 304, 305, 306, 312, 316, 317, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 446, 450 또는 451의 폴리뉴클레오티드 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 폴리뉴클레오티드 서열을 포함함. - 제186항 또는 제187항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제188항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제96항 내지 제175항 중 어느 한 항의 단리된 이중특이적 단백질을 생성하는 방법으로서, 제189항의 숙주 세포를 다중특이적 단백질이 발현되는 조건에서 배양하고, 숙주 세포에 의해 생성된 다중특이적 단백질을 회수하는 것을 포함하는 방법.
- 대상체에서 hK2 발현 암을 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질, 제96항 내지 제175항 중 어느 한 항의 단리된 이중특이적 단백질, 제176항 또는 제184항의 면역접합체, 또는 제177항 또는 제185항의 약학 조성물을 hK2 발현 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 대상체에 투여하는 것을 포함하는 방법.
- 대상체에서 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키는 방법으로서, 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질, 제96항 내지 제175항 중 어느 한 항의 단리된 이중특이적 단백질, 제176항 또는 제184항의 면역접합체, 또는 제177항 또는 제185항의 약학 조성물을 hK2 발현 종양 세포의 양을 감소시키기에 충분한 시간 동안 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
- 대상체에서 hK2 발현 암의 확립을 예방하는 방법으로서, 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질, 제95항 내지 제175항 중 어느 한 항의 단리된 이중특이적 단백질, 제176항 또는 제184항의 면역접합체, 또는 제177항 또는 제185항의 약학 조성물을 대상체에서 hK2 발현 암의 확립을 예방하기 위해 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
- hK2 발현 암이 발병할 위험이 있는 대상체에서 비암성 병태를 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질, 제96항 내지 제175항 중 어느 한 항의 단리된 다중특이적 단백질, 제176항 또는 제184항의 면역접합체, 또는 제177항 또는 제185항의 약학 조성물을 비암성 병태를 치료하기 위해 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
- 제191항 내지 제194항 중 어느 한 항에 있어서, hK2 발현 암이 전립선암 또는 유방암인, 방법.
- 제195항에 있어서, 전립선암이 재발성, 불응성, 악성 또는 거세 저항성 전립선암, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
- 제195항에 있어서, 유방암이 안드로겐 수용체(AR) 양성 유방암, 재발성, 불응성 또는 악성 유방암, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
- 제195항에 있어서, 비암성 병태가 전립선 비대, 양성 전립선 비대증(BPH) 또는 진단된 전립선암이 없는 상태에서 전립선 특이적 항원(PSA) 수준이 높은 병태인, 방법.
- 제191항 내지 제198항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 단백질 또는 단리된 다중특이적 단백질이 제2 치료제와 조합으로 투여되는, 방법.
- 제199항에 있어서, 제2 치료제가 수술, 화학요법, 안드로겐 박탈 요법 또는 방사선, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
- 대상체에서 전립선암 또는 유방암의 존재를 검출하는 방법으로서, 제176항 또는 제184항의 면역접합체를 전립선암 또는 유방암을 갖는 것으로 의심되는 대상체에게 투여하고 면역접합체가 결합된 생물학적 구조를 시각화함으로써 전립선암 또는 유방암의 존재를 검출하는 것을 포함하는, 방법.
- 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질, 제96항 내지 제175항 중 어느 한 항의 단리된 이중특이적 단백질, 제176항 또는 제184항의 면역접합체, 또는 제177항 또는 제185항의 약학 조성물을 포함하는 키트.
- 제1항 내지 제95항 중 어느 한 항의 단리된 단백질에 결합하는 항-이디오타입(anti-idiotypic) 항체.
- 하기를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR):
a. hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인;
b. 막관통 도메인; 및
c. 적어도 하나의 공동 자극 도메인을 선택적으로 포함하는 세포내 신호전달 도메인. - 제204항에 있어서, CD8a-힌지 영역을 추가로 포함하는 CAR.
- 제204항 또는 제205항에 있어서, 하기와 같은 CAR:
a. 막관통 도메인은 CD8a 막관통 영역(CD8a-TM) 폴리펩티드를 포함함; 및
b. 세포내 신호전달 도메인은 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분을 포함하는 공동 자극 도메인 및 T세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분을 포함하는 1차 신호전달 도메인을 포함함. - 제204항 또는 제206항에 있어서, 하기와 같은 CAR:
a. CD8a-힌지 영역은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함함;
b. 막관통 도메인은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함함; 및/또는
c. 세포내 신호전달 도메인은 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 공동 자극 도메인, 및 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는 1차 신호전달 도메인을 포함함. - 제204항 내지 제207항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 63, 72, 141, 147, 170, 176, 188, 194, 196, 198, 200, 206 또는 216의 HCDR1, SEQ ID NO: 64, 65, 73, 142, 148, 171, 177, 183, 189, 195, 197, 199, 201, 207 또는 217의 HCDR2, SEQ ID NO: 66, 143, 172, 178, 184, 190, 208 또는 218의 HCDR3, SEQ ID NO: 67, 68, 144, 173, 179, 182, 185 또는 191의 LCDR1, SEQ ID NO: 69, 70, 145, 174, 180, 186, 192 또는 470의 LCDR2 및 SEQ ID NO: 71, 146, 175, 181, 187, 193 또는 209의 LCDR3을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제208항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 하기의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는, CAR:
a. 각각 SEQ ID NO: 63, 64, 66, 67, 69 및 71;
b. 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 67, 69 및 71;
c. 각각 SEQ ID NO: 63, 65, 66, 68, 70 및 71;
d. 각각 SEQ ID NO: 141, 142, 143, 144, 145 및 146;
e. 각각 SEQ ID NO: 170, 171, 172, 173, 174 및 175;
f. 각각 SEQ ID NO: 176, 177, 178, 179, 180 및 181;
g. 각각 SEQ ID NO: 170, 183, 184, 185, 186 및 187;
h. 각각 SEQ ID NO: 188, 189, 190, 191, 192 및 193;
i. 각각 SEQ ID NO: 206, 207, 208, 182, 470 또는 209;
j. 각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 67, 69 및 71;
k. 각각 SEQ ID NO: 72, 73, 66, 68, 70 및 71;
l. 각각 SEQ ID NO: 147, 148, 143, 144, 145 및 146;
m. 각각 SEQ ID NO: 194, 195, 172, 173, 174 및 175;
n. 각각 SEQ ID NO: 196, 197, 178, 179, 180 및 181;
o. 각각 SEQ ID NO: 198, 199, 184, 185, 186 및 187;
p. 각각 SEQ ID NO: 200, 201, 190, 191, 192 및 193; 또는
q. 각각 SEQ ID NO: 216, 217, 218, 182, 470 및 209. - 제204항 내지 제209항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 163의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 162의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제209항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 138의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 137의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3; 또는 SEQ ID NO: 140의 VL의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 및 SEQ ID NO: 139의 VH의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제211항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, CAR:
a. SEQ ID NO: 137의 VH 및 SEQ ID NO: 138의 VL;
b. SEQ ID NO: 162의 VH 및 SEQ ID NO: 163의 VL;
c. SEQ ID NO: 164의 VH 및 SEQ ID NO: 165의 VL;
d. SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 167의 VL;
e. SEQ ID NO: 168의 VH 및 SEQ ID NO: 169의 VL;
f. SEQ ID NO: 204의 VH 및 SEQ ID NO: 205의 VL; 또는
g. SEQ ID NO: 166의 VH 및 SEQ ID NO: 444의 VL. - 제204항 내지 제212항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 75의 VH 및 SEQ ID NO: 74의 VL을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제211항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 138 또는 SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 및 SEQ ID NO: 137 또는 SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는, CAR.
- 제213항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 SEQ ID NO: 1, 2, 3, 140 또는 160의 VL 및/또는 SEQ ID NO: 4, 5, 6, 139, 159 또는 161의 VH를 포함하는, CAR.
- 제215항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 하기를 포함하는, CAR:
a. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
b. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
c. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
d. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
e. SEQ ID NO: 4의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
f. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
g. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
h. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
i. SEQ ID NO: 5의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
j. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
k. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
l. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
m. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
n. SEQ ID NO: 6의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
o. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
p. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
q. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
r. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
s. SEQ ID NO: 139의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
t. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
u. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
v. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
w. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL;
x. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL;
y. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 1의 VL;
z. SEQ ID NO: 159의 VH 및 SEQ ID NO: 2의 VL;
aa. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 3의 VL;
bb. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 140의 VL; 또는
cc. SEQ ID NO: 161의 VH 및 SEQ ID NO: 160의 VL. - 제204항 내지 제216항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인이 scFv인, CAR.
- 제217항에 있어서, scFv가 VL과 VH 사이에 제1 링커(L1)를 포함하는, CAR.
- 제218항에 있어서, L1이 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제219항에 있어서, scFv가 SEQ ID NO: 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 133, 134, 135, 136, 308, 316, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 404, 405, 406, 407, 408 또는 409의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제219항에 있어서, scFv가 SEQ ID NO: 404 또는 SEQ ID NO: 405의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제219항에 있어서, scFv가 SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 135 또는 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제217항 내지 제222항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인이 신호 폴리펩티드를 추가로 포함하는, CAR.
- 제223항에 있어서, 신호 폴리펩티드가 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제224항 중 어느 한 항에 있어서, 세포내 신호전달 도메인이 TNF 수용체 슈퍼패밀리 구성원 9(CD137) 성분, T 세포 표면 당단백질 CD3 제타 사슬(CD3z) 성분, 분화의 클러스터(CD27) 성분, 분화 슈퍼패밀리 구성원 성분의 클러스터, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드 성분을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제225항 중 어느 한 항에 있어서, CD137 성분이 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제226항 중 어느 한 항에 있어서, CD3z 성분이 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제227항 중 어느 한 항에 있어서, 세포내 신호전달 도메인이 SEQ ID NO: 45의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제228항 중 어느 한 항에 있어서, CD8a-TM 폴리펩티드가 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제229항 중 어느 한 항에 있어서, CD8a-힌지 영역이 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제223항 내지 제230항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인이 SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 149, 150, 151, 152, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422. 423, 424 또는 425의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제223항 내지 제230항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인이 SEQ ID NO: 416 또는 SEQ ID NO: 417의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제223항 내지 제230항 중 어느 한 항에 있어서, hK2에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 세포외 도메인이 SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 151 또는 SEQ ID NO: 152의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제233항 중 어느 한 항에 있어서, CAR이 SEQ ID NO: 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 153, 154, 155, 156, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 435, 436, 437, 438, 439, 440 또는 441의 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제233항 중 어느 한 항에 있어서, CAR이 SEQ ID NO: 432 또는 SEQ ID NO: 433의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제233항 중 어느 한 항에 있어서, CAR이 SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 155 또는 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는, CAR.
- 제204항 내지 제236항 중 어느 한 항의 CAR을 발현하는 단리된 림프구.
- 제237항에 있어서, 림프구가 T 림프구인, 단리된 림프구.
- 제238항에 있어서, 림프구가 자연 살해(NK) 세포인, 단리된 림프구.
- 제204항 내지 제236항 중 어느 한 항의 CAR을 코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
- 제240항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
- 제240항의 폴리뉴클레오티드 또는 제241항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제237항 내지 제239항 중 어느 한 항의 림프구 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
- hK2 발현 암이 있는 대상체를 치료하는 방법으로서, 치료적 유효량의 제237항 내지 제239항 중 어느 한 항의 림프구를 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써, 림프구가 대상체에서 hK2 발현 암의 사멸을 매개하는 것을 포함하는 방법.
- 제244항에 있어서, hK2 발현 암이 전립선암 또는 유방암인, 방법.
- 제245항에 있어서, hK2 발현 암은 전립선암인, 방법.
- 암 세포의 표적화된 사멸 방법으로서, 암 세포를 제244항 내지 제246항 중 어느 한 항의 림프구와 접촉시킴으로써, 림프구가 암세포의 표적화된 사멸을 유도하는 것을 포함하는 방법.
- 제247항에 있어서, 암세포가 전립선암 세포 또는 유방암 세포인, 방법.
- 제248항에 있어서, 암세포가 전립선암 세포인, 방법.
- 대상체에서 암의 존재를 검출하는 방법으로서, 하기를 포함하는 방법:
a. 대상체로부터 수득된 세포 샘플을 제204항 내지 제236항 중 어느 한 항의 CAR과 접촉시켜 CAR-세포 복합체를 형성하는 것, 및
b. CAR-세포 복합체를 검출하는 것, 여기서 CAR-세포 복합체의 검출은 대상체에서 암의 존재를 나타냄.
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