JP2022541332A - カリクレイン関連ペプチダーゼ２抗原結合ドメインを含むタンパク質及びその使用 - Google Patents

カリクレイン関連ペプチダーゼ２抗原結合ドメインを含むタンパク質及びその使用 Download PDF

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Abstract

本発明の実施形態は、単一特異性及び二重特異性抗体を含む、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む、単離タンパク質を提供する。本発明の追加の実施形態は、ｈｋ２特異的タンパク質をコードしているポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、並びにこれらを作製及び使用する方法を提供する。

Description

（配列表）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出済みである、その全体が参照により本明細書に組み込まれている配列表を含む。上記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年６月２３日に作成され、名称はＪＢＩ６１２５ＵＳＮＰ１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズは７６４，２６５バイトである。
（発明の分野）
本発明は、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含むｈＫ２タンパク質に結合する抗原結合ドメイン、それをコードしているポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、それを作製及び使用する方法を提供する。
（背景）
前立腺癌は、診断頻度が２番目に高い癌であり、男性における癌の死因の６位であり、世界中の男性の全ての新たな癌症例の１４％（９０３，５００）及び全ての癌死亡の６％（２５８，４００）を占める。前立腺癌の診断から死亡までの過程は、疾患の程度、ホルモン状態、及び検出可能な転移の有無：限局性疾患、放射線療法又は手術後に検出可能な転移なく前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）のレベルが上昇していること、並びに非去勢病期又は去勢病期における臨床的転移に基づいて、一連の臨床段階として最善に分類される。手術、放射線照射、又はこれら両方の併用は、限局性疾患の患者にとって治癒的なものになり得るが、これらの患者のうちのかなりの割合は、ＰＳＡレベルの上昇をエビデンスとする再発性疾患を有し、これは、特に高リスク群における転移の発生、すなわち、疾患の終末期への移行につながる場合がある。
アンドロゲン枯渇療法（ＡＤＴ）が標準的治療であり、全般的に予測可能な転帰は、ＰＳＡの低下、腫瘍が増殖しない安定期、続いて、ＰＳＡの上昇、及び去勢抵抗性疾患としての再成長である。長年にわたり、ＡＤＴは、転移性前立腺癌の患者のための標準治療であった。
カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２、ＨＫ２）は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）に駆動されて前立腺組織及び前立腺癌に特異的に発現するトリプシン様酵素である。ｈＫ２は、膜貫通プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）によって活性化され、前立腺の管に分泌され、そこで、射精液中の細胞外マトリクスであるセメノゲリンを切断して精子の運動性を増強するカスケードを開始させる。ｈＫ２発現は、前立腺及び前立腺癌組織に限定されるが、最近、ステロイドホルモンによりＡＲ経路が適切に活性化された後の乳癌株及び一次患者サンプルでｈＫ２が検出可能であることが証明された（米国特許出願公開第２０１８／０３２６１０２号）。ＰＳＡと同様に、肥大又は悪性形質転換時に前立腺の高度に構造化された組織化が損なわれた場合に、触媒的に不活性なｈＫ２の血液への逆行性放出が生じる。
治療及び診断の目的のための次世代ｈＫ２結合ドメインが必要とされている。
（概要）
本開示は、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、単離タンパク質を提供する：
配列番号１３７の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１３７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６９のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号２０４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号２０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。
本開示はまた、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する単離抗原結合ドメインであって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号７５の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号７４の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離抗原結合ドメインを提供する。
本開示はまた、特定のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含むｈＫ２に結合する単離抗原結合ドメインを提供する。
本開示はまた、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する：配列番号１３７の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１３７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６９のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号２０４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号２０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。特定の実施形態では、本開示は、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１６２の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
本開示はまた、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号７５の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号７４の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
本開示はまた、特定のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を含むｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
本開示はまた、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む、単離キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
本開示はまた、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、単離キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する：配列番号１３７の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１３７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６９のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号２０４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号２０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。特定の実施形態では、本開示は、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１６２の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
本開示はまた、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号７５の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号７４の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及びリンパ球抗原（ＣＤ３など）に結合する第２の抗原結合ドメインを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である、単離多重特異性タンパク質を提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する単離抗原結合ドメインを含む、免疫コンジュゲートを提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質を含む、免疫コンジュゲートを提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離多重特異性タンパク質を含む、免疫コンジュゲートを提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離ＣＡＲを含む、免疫コンジュゲートを提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する単離抗原結合ドメインを含む、医薬組成物を提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質を含む、医薬組成物を提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離多重特異性タンパク質を含む、医薬組成物を提供する。
本開示はまた、本開示の単離多重特異性タンパク質を含む、医薬組成物を提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離ＣＡＲを含む、医薬組成物を提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する単離抗原結合ドメインをコードしている、単離ポリヌクレオチドを提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質をコードしている、単離ポリヌクレオチドを提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離多重特異性タンパク質をコードしている、単離ポリヌクレオチドを提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離ＣＡＲをコードしている、単離ポリヌクレオチドを提供する。
本開示はまた、本開示のポリヌクレオチドを含む、ベクターを提供する。
また、本発明は、本開示のポリヌクレオチド又はベクターを含む、宿主細胞を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を治療する方法であって、治療有効量の、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ－Ｔ、本開示の免疫コンジュゲート、又は本開示の医薬組成物を、当該ｈＫ２発現癌を治療するのに十分な時間にわたって、それを必要としている対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減する方法であって、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ－Ｔ、本開示の免疫コンジュゲート、又は本開示の医薬組成物を、当該ｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減するのに十分な時間にわたって当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌の定着を予防する方法であって、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ－Ｔ、本開示の免疫コンジュゲート、又は本開示の医薬組成物を、それを必要としている対象に投与して、当該対象におけるｈＫ２発現癌の定着を予防することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、ｈＫ２発現癌性状態が発生するリスクを有する対象における非癌性状態を治療する方法であって、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ－Ｔ、本開示の免疫コンジュゲート、又は本開示の医薬組成物を、それを必要としている対象に投与して、当該非癌性状態を治療することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象における前立腺癌を治療する方法であって、治療有効量の、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ－Ｔ、本開示の免疫コンジュゲート、又は本開示の医薬組成物を、当該前立腺癌を治療するのに十分な時間にわたって、それを必要としている対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象における乳癌を治療する方法であって、治療有効量の、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ－Ｔ、本開示の免疫コンジュゲート、又は本開示の医薬組成物を、当該乳癌を治療するのに十分な時間にわたって、それを必要としている対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象における前立腺癌又は乳癌を検出する方法であって、本開示の免疫コンジュゲートを当該対象に投与することと、当該免疫コンジュゲートのｈＫ２への結合を検出し、それによって、前立腺癌又は乳癌を検出することと、を含む、方法を提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ－Ｔ、本開示の免疫コンジュゲート、又は本開示の医薬組成物を含む、キットを提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインに結合する、抗イディオタイプ抗体を提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、膜貫通ドメインと、少なくとも１つの共刺激ドメインを任意選択で含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。
前述は、以下の付属の図面に示される例示的実施形態のより詳細な説明から明らかとなるであろう。ＴＭ：膜貫通。
ｍｕ１１Ｂ６（配列番号１２５）、ｈｕ１１Ｂ６（配列番号５）、ＫＬ２Ｂ３５７（配列番号１５９）、ＫＬ２Ｂ３５８（配列番号１６１）、ＫＬ２Ｂ３５９（配列番号１３９）、ＫＬ２Ｂ３６０（配列番号１５９）、ＨＣＦ３（配列番号６）、及びＨＣＧ５（配列番号４）のＶＨドメインの配列アラインメントを示す。 ｍｕ１１Ｂ６（配列番号１２４）、ｈｕ１１Ｂ６（配列番号２）、ＫＬ２Ｂ３５７（配列番号１６０）、ＫＬ２Ｂ３５８（配列番号１４０）、ＫＬ２Ｂ３５９（配列番号１４０）、ＫＬ２Ｂ３６０（配列番号１４０）、ＬＤＣ６（配列番号１）、及びＬＣＢ７（配列番号３）のＶＬドメインの配列アラインメントを示す。 ｈＫ２抗原の配列上にマッピングされた、選択されたｈＫ２抗体の結合エピトープを示す。この図では、配列番号４６７として各配列を開示する。 初代ヒトＴ細胞へのハイブリドーマ上清の結合を示す。クローンＵＣＨＴ１を陽性対照として使用し（図１Ｂ）、マウスＩｇＧ１アイソタイプ（ｍＩｇＧ１）を陰性対照として使用した。 初代ヒトＴ細胞へのハイブリドーマ上清の結合を示す。クローンＵＣＨＴ１を陽性対照として使用し（図１Ｂ）、マウスＩｇＧ１アイソタイプ（ｍＩｇＧ１）を陰性対照として使用した。 大腸菌（E.coli）で発現した抗ＣＤ３ ｓｃＦｖバリアントのＣＤ３への結合を示す。 ＣＤ３Ｂ８１５（配列番号２４９）、ＣＤ３Ｗ２４４（配列番号２５０）、ＣＤ３Ｗ２４５（配列番号２５１）、ＣＤ３Ｗ２４６（配列番号２５２）、ＣＤ３Ｗ２４７（配列番号２５３）、及びＣＤ３Ｗ２４８（配列番号２５４）のＶＬ領域のアラインメントを示す。 ヒトＣＤ３εに結合したＣＤ３Ｗ２４５（ＣＤ３ε：ＣＤ３Ｗ２４５）及びＣＤ３εに結合したＯＫＴ３（ＣＤ３ε：ＯＫＴ）の水素重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）を示す。図示されているアミノ酸配列は、ＣＤ３εのＥＣＤドメインの１０５残基のうちの残基２～９３を表し、ＣＤ３ε配列番号３４０の残基１～９１に対応する。一重下線は、ＣＤ３ε単独と比較して、抗体の存在下で重水素化レベルが１０％～３０％減少したセグメントを示し、二重下線は、重水素化レベルが＞３０％減少したセグメントを示す。 標的細胞死を定量するための、リアルタイムでｉｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定されたＫＬ２Ｂ×ＣＤ３二重特異性分子のインビトロ標的細胞傷害性を示す。 標的細胞死からのアポトーシスシグナルを測定するための、蛍光カスパーゼ３／７試薬によって測定されたＫＬ２Ｂ×ＣＤ３二重特異性分子のインビトロ標的細胞傷害性を示す。 は、異なる用量におけるＣＤ２５陽性細胞の頻度を示すことによって、ＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体によるインビトロにおけるＴ細胞の活性化及び増殖を示す。 は、増殖ゲートに入る細胞の頻度を示すことによって、ＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体によるインビトロにおけるＴ細胞の活性化及び増殖を示す。 ＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体によるインビトロにおけるＴ細胞のＩＮＦ－γ放出を示す。 ＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体によるインビトロにおけるＴ細胞のＴＮＦ－α放出を示す。 ｈＫ２結合キメラ人工受容体（ＣＡＲ）の設計図を示す。ｈＫ２結合ｓｃＦｖを、様々なＣＡＲにＶＨ－ＶＬ又はＶＬ－ＶＨ配向のいずれかでクローニングした。 Ｔ細胞表面におけるｈＫ２ ＣＡＲ発現を示す。初代ヒトＴ細胞に、ｍＲＮＡなし（モック）、又はｈＫ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ若しくは無関係の対照ＣＡＲのいずれかを発現するｍＲＮＡ１０μｇをエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションの２４時間後、２μｇ／ｍＬのビオチン化Ｌタンパク質及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥ（上図）、又は２μｇ／ｍＬのビオチン化Ｌタンパク質及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥ（下図）、又はビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥで染色した後にフローサイトメトリーによってＣＡＲ表面発現を測定した。 Ｔ細胞表面におけるｈＫ２ ＣＡＲ発現を示す。初代ヒトＴ細胞に、ｍＲＮＡなし（モック）、又はｈＫ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ若しくは無関係の対照ＣＡＲのいずれかを発現するｍＲＮＡ１０μｇをエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションの２４時間後、２μｇ／ｍＬのビオチン化Ｌタンパク質及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥ（上図）、又は２μｇ／ｍＬのビオチン化Ｌタンパク質及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥ（下図）、又はビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥで染色した後にフローサイトメトリーによってＣＡＲ表面発現を測定した。 指定のエフェクター対標的細胞（Ｅ／Ｔ）比での２０時間のフローベースアッセイにおける、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるｈＫ２陽性（ＶＣａＰ、上図）及び陰性（ＤＵ１４５、下図）腫瘍細胞の細胞傷害性を示す。一過性トランスフェクションの２４時間後、標的細胞をＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）蛍光色素で標識し、次いで、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞と共培養した。モックＴ細胞が、陰性エフェクター対照として機能した。殺傷パーセントは、ＣＡＲ－Ｔ細胞なしで培養された生存標的の数に対する共培養物中に残存する生存（生存能色素陰性）標的（ＣＴＶ陽性）細胞の絶対数の比として測定した。 リアルタイムｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞媒介細胞傷害性を示す。様々なＥ：Ｔ比でおよそ７２時間、モック、１０μｇのｍＲＮＡエレクトロポレーションされた（トランスフェクションの２４時間後）ｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ ＬＨ、又は対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と共にインキュベートしたＶＣａＰ標的細胞（５Ｅ４）の正規化された細胞指数（ＣＩ）プロット。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、ＣＩの読み出しを増加させる。Ｔ細胞を標的細胞に添加すると、ｈＫ２ ＣＡＲ及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、５：１～０．１５６：１のＥ／Ｔ比において、ｈＫ２陽性ＶＣａＰ細胞の細胞溶解及びその後のＣＩの進行性減少を媒介した。エフェクター細胞の添加後のＣＩ値の低減は、標的細胞の生存能の喪失を反映していた。Ｙ軸は、ＲＴＣＡソフトウェアによって作成され、リアルタイムで表示された正規化されたＣＩを示す。Ｘ軸は、細胞培養の時間及び処理時間（時）である。ＣＩの平均値を±標準偏差でプロットした。 リアルタイムｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞媒介細胞傷害性を示す。様々なＥ：Ｔ比でおよそ７２時間、モック、１０μｇのｍＲＮＡエレクトロポレーションされた（トランスフェクションの２４時間後）ｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ ＬＨ、又は対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と共にインキュベートしたＶＣａＰ標的細胞（５Ｅ４）の正規化された細胞指数（ＣＩ）プロット。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、ＣＩの読み出しを増加させる。Ｔ細胞を標的細胞に添加すると、ｈＫ２ ＣＡＲ及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、５：１～０．１５６：１のＥ／Ｔ比において、ｈＫ２陽性ＶＣａＰ細胞の細胞溶解及びその後のＣＩの進行性減少を媒介した。エフェクター細胞の添加後のＣＩ値の低減は、標的細胞の生存能の喪失を反映していた。Ｙ軸は、ＲＴＣＡソフトウェアによって作成され、リアルタイムで表示された正規化されたＣＩを示す。Ｘ軸は、細胞培養の時間及び処理時間（時）である。ＣＩの平均値を±標準偏差でプロットした。 リアルタイムｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞媒介細胞傷害性を示す。様々なＥ：Ｔ比でおよそ７２時間、モック、１０μｇのｍＲＮＡエレクトロポレーションされた（トランスフェクションの２４時間後）ｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ ＬＨ、又は対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と共にインキュベートしたＶＣａＰ標的細胞（５Ｅ４）の正規化された細胞指数（ＣＩ）プロット。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、ＣＩの読み出しを増加させる。Ｔ細胞を標的細胞に添加すると、ｈＫ２ ＣＡＲ及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、５：１～０．１５６：１のＥ／Ｔ比において、ｈＫ２陽性ＶＣａＰ細胞の細胞溶解及びその後のＣＩの進行性減少を媒介した。エフェクター細胞の添加後のＣＩ値の低減は、標的細胞の生存能の喪失を反映していた。Ｙ軸は、ＲＴＣＡソフトウェアによって作成され、リアルタイムで表示された正規化されたＣＩを示す。Ｘ軸は、細胞培養の時間及び処理時間（時）である。ＣＩの平均値を±標準偏差でプロットした。 ｈＫ２を発現しない標的細胞のリアルタイムｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞媒介細胞傷害性の欠如を示す。様々なＥ：Ｔ比でおよそ７２時間、モック、１０μｇのｍＲＮＡエレクトロポレーションされた（トランスフェクションの２４時間後）ｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ ＬＨ、又は対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と共にインキュベートしたＤＵ１４５標的細胞（５Ｅ３）の正規化された細胞指数（ＣＩ）プロット。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、ＣＩの読み出しを増加させる。Ｔ細胞を標的細胞に添加しても、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、添加後にＣＩが低下せず、細胞溶解活性を示さなかった。Ｙ軸は、ＲＴＣＡソフトウェアによって作成され、リアルタイムで表示された正規化されたＣＩを示す。Ｘ軸は、細胞培養の時間及び処理時間（時）である。ＣＩの平均値を±標準偏差でプロットした。 ｈＫ２を発現しない標的細胞のリアルタイムｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞媒介細胞傷害性の欠如を示す。様々なＥ：Ｔ比でおよそ７２時間、モック、１０μｇのｍＲＮＡエレクトロポレーションされた（トランスフェクションの２４時間後）ｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ ＬＨ、又は対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と共にインキュベートしたＤＵ１４５標的細胞（５Ｅ３）の正規化された細胞指数（ＣＩ）プロット。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、ＣＩの読み出しを増加させる。Ｔ細胞を標的細胞に添加しても、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、添加後にＣＩが低下せず、細胞溶解活性を示さなかった。Ｙ軸は、ＲＴＣＡソフトウェアによって作成され、リアルタイムで表示された正規化されたＣＩを示す。Ｘ軸は、細胞培養の時間及び処理時間（時）である。ＣＩの平均値を±標準偏差でプロットした。 ｈＫ２を発現しない標的細胞のリアルタイムｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞媒介細胞傷害性の欠如を示す。様々なＥ：Ｔ比でおよそ７２時間、モック、１０μｇのｍＲＮＡエレクトロポレーションされた（トランスフェクションの２４時間後）ｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ ＬＨ、又は対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と共にインキュベートしたＤＵ１４５標的細胞（５Ｅ３）の正規化された細胞指数（ＣＩ）プロット。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、ＣＩの読み出しを増加させる。Ｔ細胞を標的細胞に添加しても、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、添加後にＣＩが低下せず、細胞溶解活性を示さなかった。Ｙ軸は、ＲＴＣＡソフトウェアによって作成され、リアルタイムで表示された正規化されたＣＩを示す。Ｘ軸は、細胞培養の時間及び処理時間（時）である。ＣＩの平均値を±標準偏差でプロットした。 抗原で刺激されたｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるインターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）産生を示す。約７０時間共培養（ＶＣＡＰ＃５Ｅ４、ＤＵ１４５＃５Ｅ３）したｘＣＥＬｌｉｇｅｎｃｅベースの殺傷アッセイから上清を回収した。ｈＫ２ ＣＡＲ＿ＬＨ及び対照ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａｐ細胞との共培養中にＩＦＮ－γを分泌したが、ｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞との共培養中には分泌しなかった。デュープリケートの培養物からの平均ＩＦＮ－γ濃度±標準偏差（ｐｇ／ｍＬ）を示す。 図に示す通り様々なｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトが形質導入されたシグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーター（ＪＮＬ細胞）によって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞におけるｈＫ２ ＣＡＲコンストラクト（コンストラクト１～１０）の発現を示す。ビオチン化ｈＫ２、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによって、発現を判定した。 図に示す通り様々なｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトが形質導入されたシグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーター（ＪＮＬ細胞）によって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞におけるｈＫ２ ＣＡＲコンストラクト（コンストラクト１～１０）の発現を示す。ビオチン化ｈＫ２、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによって、発現を判定した。 図に示す通り様々なｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトが形質導入されたシグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーター（ＪＮＬ細胞）によって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞におけるｈＫ２ ＣＡＲコンストラクト（コンストラクト１～１０）の発現を示す。ビオチン化ｈＫ２、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによって、発現を判定した。 結合した際のＪＮＬ細胞におけるルシフェラーゼ発現によって検出されたＣＡＲ１～１０コンストラクトとその同種細胞抗原（標的細胞上のｈＫ２）との間の結合を示す。指定のＣＡＲコンストラクト（ＣＡＲ１～１０）が形質導入されたＪＮＬ細胞及び非形質導入ＪＮＬ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株（ＶＣａＰ又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、発光強度としてルシフェラーゼ活性を測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルを１．５倍上回った場合、コンストラクトは活性であるとみなした。 Ｔ細胞表面におけるｈＫ２ ＣＡＲ１～１０又は親１１Ｂ６＿ＨＬ及び１１Ｂ６＿ＬＨの発現を示す。初代ヒトＴ細胞に１１Ｂ６熱安定化及び親ｓｃＦｖ ＣＡＲレンチウイルスを形質導入し（感染多重度（ＭＯＩ）：３）、形質導入の１４日後に、ビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによってＣＡＲ発現を判定した。ＵＴＤ：非形質導入対照。 Ｔ細胞表面におけるｈＫ２ ＣＡＲ１～１０又は親１１Ｂ６＿ＨＬ及び１１Ｂ６＿ＬＨの発現を示す。初代ヒトＴ細胞に１１Ｂ６熱安定化及び親ｓｃＦｖ ＣＡＲレンチウイルスを形質導入し（感染多重度（ＭＯＩ）：３）、形質導入の１４日後に、ビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによってＣＡＲ発現を判定した。ＵＴＤ：非形質導入対照。 Ｔ細胞表面におけるｈＫ２ ＣＡＲ１～１０又は親１１Ｂ６＿ＨＬ及び１１Ｂ６＿ＬＨの発現を示す。初代ヒトＴ細胞に１１Ｂ６熱安定化及び親ｓｃＦｖ ＣＡＲレンチウイルスを形質導入し（感染多重度（ＭＯＩ）：３）、形質導入の１４日後に、ビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）、続いてストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによってＣＡＲ発現を判定した。ＵＴＤ：非形質導入対照。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムＩｎｃｕｃｙｔｅ殺傷アッセイにおける、ＣＡＲ１～１０又は親１１Ｂ６＿ＨＬ若しくは１１Ｂ６＿ＬＨが形質導入されたＴ細胞による、エフェクター：標的比１：１又は０．５：１におけるｈＫ２陽性ＶＣａＰ細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムＩｎｃｕｃｙｔｅ殺傷アッセイにおける、ＣＡＲ１～１０又は親１１Ｂ６＿ＨＬ若しくは１１Ｂ６＿ＬＨが形質導入されたＴ細胞による、エフェクター：標的比１：１におけるＰＣ３細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン放出を示す。１：１のＥ／Ｔ比でｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞をＶＣａＰ細胞と共に一晩（およそ２０時間）共培養したものから回収した上清を、１３－ｐｌｅｘ Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘヒト高感度Ｔ細胞キット（ＨＳＴＣＭＡＧ２８ＳＰＭＸ１３）を使用して分析した。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａＰ細胞との共培養中にサイトカインを分泌したが、非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）との共培養中の分泌は最少であった。デュープリケートの培養物からの平均サイトカイン濃度±標準偏差（ｐｇ／ｍＬ）を示す。 ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン放出を示す。１：１のＥ／Ｔ比でｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞をＶＣａＰ細胞と共に一晩（およそ２０時間）共培養したものから回収した上清を、１３－ｐｌｅｘ Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘヒト高感度Ｔ細胞キット（ＨＳＴＣＭＡＧ２８ＳＰＭＸ１３）を使用して分析した。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａＰ細胞との共培養中にサイトカインを分泌したが、非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）との共培養中の分泌は最少であった。デュープリケートの培養物からの平均サイトカイン濃度±標準偏差（ｐｇ／ｍＬ）を示す。 ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン放出を示す。１：１のＥ／Ｔ比でｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞をＶＣａＰ細胞と共に一晩（およそ２０時間）共培養したものから回収した上清を、１３－ｐｌｅｘ Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘヒト高感度Ｔ細胞キット（ＨＳＴＣＭＡＧ２８ＳＰＭＸ１３）を使用して分析した。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａＰ細胞との共培養中にサイトカインを分泌したが、非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）との共培養中の分泌は最少であった。デュープリケートの培養物からの平均サイトカイン濃度±標準偏差（ｐｇ／ｍＬ）を示す。 ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ放出を示す。１：１のＥ／Ｔ比でＶＣａＰ、ＤＵ１４５（５Ｅ４細胞）細胞と共にｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を一晩（およそ２０時間）共培養したものから上清を回収した。ｈＫ２ ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａＰ細胞との共培養中にＩＦＮ－γを分泌するが、ｈＫ２－陰性ＤＵ１４５細胞との共培養中には分泌しない。デュープリケートの培養物からの平均ＩＦＮ－γ濃度±標準偏差（ｐｇ／ｍＬ）を示す。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣＤ２５陽性ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣＤ２５陽性ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣＤ２５陽性ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣＤ２５陽性ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣＤ２５陽性ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣＤ２５陽性ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５細胞と共に５日間共培養した後、又はＣＤ３／２８ビーズで刺激した後の、ＣＤ２５陽性ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中、Ｔ細胞のみ）又はＣＡＲ１～１０が形質導入されたＣＡＲ－Ｔのフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＶＣａＰ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖したことを示す。様々なＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ＋Ｔ細胞数を示した。ＣＡＲ＋Ｔ細胞数は、３つの技術的複製物からの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいていた。 初代Ｔ細胞の表面上におけるＣＡＲ１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）、ＣＡＲ１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）、ＣＡＲ１９（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（ＨＫ２Ｂ３５９＿ＬＨの表面発現を示す。各ヒストグラム内の数字は、指定のＣＡＲを発現する細胞の百分率を示す。 初代Ｔ細胞の表面上におけるＣＡＲ１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）、ＣＡＲ１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）、ＣＡＲ１９（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（ＨＫ２Ｂ３５９＿ＬＨの表面発現を示す。各ヒストグラム内の数字は、指定のＣＡＲを発現する細胞の百分率を示す。 ＪＮＬ細胞の表面上におけるＣＡＲ１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）、ＣＡＲ１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）、ＣＡＲ１９（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨ）の表面発現を示す。 ＪＮＬ細胞の表面上におけるＣＡＲ１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）、ＣＡＲ１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）、ＣＡＲ１９（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨ）の表面発現を示す。 図中に指定されている通りの様々な標的細胞において試験ＣＡＲ－Ｔのその同種受容体への結合によって媒介されるＪＮＬ細胞におけるルシフェラーゼ発現から生じる相対光単位（ＲＬＵ）を示す。指定のＣＡＲクローンを含有するＪＮＬ細胞及び非形質導入ＮＪＬ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株（ＶＣａＰ、ＬＮＣａＰ／ｈＫ２、ＬＮＣａＰ、Ｃ４－２Ｂ、２２Ｒｖ１、又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、ルシフェラーゼ活性を発光強度（ＲＬＵ、相対光単位）として測定した。ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ：ＣＡＲ１７、ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ：ＣＡＲ１８、ＨＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ：ＣＡＲ１９、ＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨ：ＣＡＲ２０。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムＩｎｃｕｃｙｔｅ殺傷アッセイにおける、ＣＡＲ１７（図中Ｂ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中Ｂ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中Ｂ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中Ｂ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞によるｈＫ２陽性ＶＣａＰ細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムＩｎｃｕｃｙｔｅ殺傷アッセイにおける、ＣＡＲ１７（図中Ｂ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中Ｂ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中Ｂ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中Ｂ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞によるｈＫ２陽性ＶＣａＰ細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 抗原依存性細胞傷害性を評価するリアルタイムＩｎｃｕｃｙｔｅ殺傷アッセイにおける、ＣＡＲ１７（図中Ｂ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中Ｂ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中Ｂ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中Ｂ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞によるｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞の腫瘍細胞成長阻害パーセントを示す。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。 図中で指定された細胞との共培養物における、ＣＡＲ１７（図中ＫＬＫ２Ｂ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中ＫＬＫ２Ｂ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中ＫＬＫ２Ｂ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中ＫＬＫ２Ｂ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞、又は非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）によるＩＦＮ－γ産生を示す。 ＣＡＲ１７（図中Ｂ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中Ｂ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中Ｂ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中Ｂ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞、並びにＶＣａｐ細胞を共培養した結果、免疫細胞の活性化及び細胞傷害性脱顆粒を示すＣＤ１０７ａ＋ｈＫ２－ＣＡＲ－Ｔ＋細胞の増加が生じたが、ｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞との共培養は効果を有していなかった。 ＣＡＲ１７（図中Ｂ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中Ｂ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中Ｂ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中Ｂ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞、並びにＶＣａｐ細胞を共培養した結果、免疫細胞の活性化及び細胞傷害性脱顆粒を示すＣＤ１０７ａ＋ｈＫ２－ＣＡＲ－Ｔ＋細胞の増加が生じたが、ｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞との共培養は効果を有していなかった。 ＣＡＲ１７（図中Ｂ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中Ｂ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中Ｂ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中Ｂ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞、並びにＶＣａｐ細胞を共培養した結果、免疫細胞の活性化及び細胞傷害性脱顆粒を示すＣＤ１０７ａ＋ｈＫ２－ＣＡＲ－Ｔ＋細胞の増加が生じたが、ｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞との共培養は効果を有していなかった。 ＣＡＲ１７（図中Ｂ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中Ｂ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中Ｂ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中Ｂ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞、並びにＶＣａｐ細胞を共培養した結果、免疫細胞の活性化及び細胞傷害性脱顆粒を示すＣＤ１０７ａ＋ｈＫ２－ＣＡＲ－Ｔ＋細胞の増加が生じたが、ｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞との共培養は効果を有していなかった。 ＶＣＡｐ又はＤＵ１４５細胞と５日間共培養した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中Ｔ細胞のみ）、又はＣＡＲ１７（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１９（図中ＫＬＢ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中ＫＬＢ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。ＵＴＤ：非形質導入。 ＶＣＡｐ又はＤＵ１４５細胞と５日間共培養した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中Ｔ細胞のみ）、又はＣＡＲ１７（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１９（図中ＫＬＢ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中ＫＬＢ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。ＵＴＤ：非形質導入。 ＶＣＡｐ又はＤＵ１４５細胞と５日間共培養した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中Ｔ細胞のみ）、又はＣＡＲ１７（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１９（図中ＫＬＢ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中ＫＬＢ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。ＵＴＤ：非形質導入。 ＶＣＡｐ又はＤＵ１４５細胞と５日間共培養した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中Ｔ細胞のみ）、又はＣＡＲ１７（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１９（図中ＫＬＢ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中ＫＬＢ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。ＵＴＤ：非形質導入。 ＶＣＡＰ又はＤＵ１４５細胞と５日間共培養した後の、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）で標識された非形質導入Ｔ細胞（図中Ｔ細胞のみ）、又はＣＡＲ１７（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中ＫＬＢ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中ＫＬＢ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中ＫＬＢ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞の共培養物における増殖細胞の百分率を示す。ＵＴＤ：非形質導入。 ＶＣＡＰ又はＤＵ１４５細胞と５日間共培養した後の、ＣＡＲ１７（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中ＫＬＢ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中ＫＬＢ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中ＫＬＢ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＴＶ＋ＣＤ２５＋ＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣＡＰ又はＤＵ１４５細胞と５日間共培養した後の、ＣＡＲ１７（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中ＫＬＢ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中ＫＬＢ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中ＫＬＢ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＴＶ＋ＣＤ２５＋ＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣＡＰ又はＤＵ１４５細胞と５日間共培養した後の、ＣＡＲ１７（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中ＫＬＢ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中ＫＬＢ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中ＫＬＢ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＴＶ＋ＣＤ２５＋ＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣＡＰ又はＤＵ１４５細胞と５日間共培養した後の、ＣＡＲ１７（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中ＫＬＢ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中ＫＬＢ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中ＫＬＢ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＴＶ＋ＣＤ２５＋ＣＡＲ－Ｔ細胞のフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。 ＶＣａＰ若しくはＤＵ１４５（Ｔ細胞のみ）と５日間共培養した後又はＣＤ２／２８ビーズで刺激した後の、ＣＴＶを発現している非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）、又はＣＡＲ１７（図中ＫＬＢ４１３ＨＬ）、ＣＡＲ１８（図中ＫＬＢ４１３ＬＨ）、ＣＡＲ１９（図中ＫＬＢ３５９ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（図中ＫＬＢ３５９ＬＨ）が形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞の百分率を示す。 選択された抗ｈＫ２抗体及び選択された抗ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体の結合パラトープを示す。下線付き配列はＣＤＲ領域を示し、ハイライトされた配列はパラトープ領域を示す。図３８Ａは、出現順に配列番号２１９及び２２０をそれぞれ開示する。図３８Ｂは、出現順に配列番号２１３及び２２４をそれぞれ開示する。図３８Ｃは、出現順に配列番号２０３及び２１５をそれぞれ開示する。図３８Ｄは、出現順に配列番号４６８及び４６９をそれぞれ開示する。図３８Ｅは、出現順に配列番号３５４及び２２１をそれぞれ開示する。図３８Ｆは、出現順に配列番号３５６及び２２２をそれぞれ開示する。 選択された抗ｈＫ２抗体及び選択された抗ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体の結合パラトープを示す。下線付き配列はＣＤＲ領域を示し、ハイライトされた配列はパラトープ領域を示す。図３８Ａは、出現順に配列番号２１９及び２２０をそれぞれ開示する。図３８Ｂは、出現順に配列番号２１３及び２２４をそれぞれ開示する。図３８Ｃは、出現順に配列番号２０３及び２１５をそれぞれ開示する。図３８Ｄは、出現順に配列番号４６８及び４６９をそれぞれ開示する。図３８Ｅは、出現順に配列番号３５４及び２２１をそれぞれ開示する。図３８Ｆは、出現順に配列番号３５６及び２２２をそれぞれ開示する。 選択された抗ｈＫ２抗体及び選択された抗ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体の結合パラトープを示す。下線付き配列はＣＤＲ領域を示し、ハイライトされた配列はパラトープ領域を示す。図３８Ａは、出現順に配列番号２１９及び２２０をそれぞれ開示する。図３８Ｂは、出現順に配列番号２１３及び２２４をそれぞれ開示する。図３８Ｃは、出現順に配列番号２０３及び２１５をそれぞれ開示する。図３８Ｄは、出現順に配列番号４６８及び４６９をそれぞれ開示する。図３８Ｅは、出現順に配列番号３５４及び２２１をそれぞれ開示する。図３８Ｆは、出現順に配列番号３５６及び２２２をそれぞれ開示する。 選択された抗ｈＫ２抗体及び選択された抗ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体の結合パラトープを示す。下線付き配列はＣＤＲ領域を示し、ハイライトされた配列はパラトープ領域を示す。図３８Ａは、出現順に配列番号２１９及び２２０をそれぞれ開示する。図３８Ｂは、出現順に配列番号２１３及び２２４をそれぞれ開示する。図３８Ｃは、出現順に配列番号２０３及び２１５をそれぞれ開示する。図３８Ｄは、出現順に配列番号４６８及び４６９をそれぞれ開示する。図３８Ｅは、出現順に配列番号３５４及び２２１をそれぞれ開示する。図３８Ｆは、出現順に配列番号３５６及び２２２をそれぞれ開示する。 選択された抗ｈＫ２抗体及び選択された抗ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体の結合パラトープを示す。下線付き配列はＣＤＲ領域を示し、ハイライトされた配列はパラトープ領域を示す。図３８Ａは、出現順に配列番号２１９及び２２０をそれぞれ開示する。図３８Ｂは、出現順に配列番号２１３及び２２４をそれぞれ開示する。図３８Ｃは、出現順に配列番号２０３及び２１５をそれぞれ開示する。図３８Ｄは、出現順に配列番号４６８及び４６９をそれぞれ開示する。図３８Ｅは、出現順に配列番号３５４及び２２１をそれぞれ開示する。図３８Ｆは、出現順に配列番号３５６及び２２２をそれぞれ開示する。 選択された抗ｈＫ２抗体及び選択された抗ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体の結合パラトープを示す。下線付き配列はＣＤＲ領域を示し、ハイライトされた配列はパラトープ領域を示す。図３８Ａは、出現順に配列番号２１９及び２２０をそれぞれ開示する。図３８Ｂは、出現順に配列番号２１３及び２２４をそれぞれ開示する。図３８Ｃは、出現順に配列番号２０３及び２１５をそれぞれ開示する。図３８Ｄは、出現順に配列番号４６８及び４６９をそれぞれ開示する。図３８Ｅは、出現順に配列番号３５４及び２２１をそれぞれ開示する。図３８Ｆは、出現順に配列番号３５６及び２２２をそれぞれ開示する。 ＶＣａＰ異種移植マウスモデルにおけるＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体のインビボ有効性及びサイトカインプロファイルを示す。３つのＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体を３つの用量レベルで試験した：５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び０．２ｍｇ／ｋｇ。腫瘍の成長阻害を腫瘍体積測定に基づいてプロットした。 ＶＣａＰ異種移植マウスモデルにおけるＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体のインビボ有効性及びサイトカインプロファイルを示す。１回目の投与の６時間後に後眼窩出血を介して動物から１００μＬの血液サンプルを収集した。高速遠心分離によって血液サンプルから血漿を分離した。様々なＫＬＫ２二重特異性用量におけるＩＦＮ－及びＴＮＦ－α濃度を定量するためにＬｕｍｉｎｅｘアッセイを行った。 ＶＣａＰ異種移植マウスモデルにおけるＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体のインビボ有効性及びサイトカインプロファイルを示す。１回目の投与の６時間後に後眼窩出血を介して動物から１００μＬの血液サンプルを収集した。高速遠心分離によって血液サンプルから血漿を分離した。様々なＫＬＫ２二重特異性用量におけるＩＦＮ－及びＴＮＦ－α濃度を定量するためにＬｕｍｉｎｅｘアッセイを行った。
（詳細な記述）
開示される方法は、本開示の一部を形成する、添付の図面に関連してなされる以下の詳細な説明を参照することにより、より容易に理解することができる。開示される方法は、本明細書に記載及び／又は示される特定の方法に限定されないこと、更に、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を例によって説明することのみを目的とし、請求項に記載の方法に限定することを意図しないことを理解されたい。
本明細書に引用する全ての特許、公開された特許出願及び刊行物は、参照によってあたかもその全体が本明細書に記載されているものと同様にして組み込まれる。
リストが提示される場合、特に指定しない限り、そのリストの各個々の要素及びそのリストの全ての組み合わせは別個の実施形態であることを、理解されたい。例えば、「Ａ、Ｂ、又はＣ」として提示される実施形態のリストは、実施形態「Ａ」、「Ｂ」、「Ｃ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ又はＣ」、「Ｂ又はＣ」、又は「Ａ、Ｂ、又はＣ」を含むと解釈されるべきである。
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、特にその内容が明確に指示していない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「細胞（a cell）」という言及には、２つ又は３つ以上の細胞の組み合わせ、及びこれに類するものなどが含まれる。
移行句「備える／含む（comprising）」、「から本質的になる（consisting essentially of）」、及び「からなる（consisting of）」は、特許用語において全般的に受け入れられている意味を含意することを意図しており、すなわち、（ｉ）「備える／含む（comprising）」は、「含む」、「含有する」、又は「特徴とする」と同義であり、包括的又は非制限的なものであり、その他の列挙されていない要素又は方法工程を除外するものではなく、（ｉｉ）「からなる（consisting of）」は、特許請求の範囲において特定されていない、あらゆる要素、工程、又は成分を除外し、並びに（ｉｉｉ）「から本質的になる」は、特定される材料又は工程、並びに、特許請求される発明の「基本的かつ新しい特徴（複数可）に実質的に影響しないもの」に、特許請求の範囲の範囲を制限する。句「備える／含む（comprising）」（又はその同等語）に関して記載される実施形態はまた、実施形態として、「からなる」及び「から本質的になる」に関して独立して記載されるものを提供する。
「約」は、当業者によって決定される特定の値について許容される誤差範囲内であることを意味し、これは、その値が測定又は決定される方法、すなわち測定システムの制限事項にある程度依存する。特定のアッセイ、結果、又は実施形態の文脈において実施例又は明細書のその他の箇所に別途明示的に記載のない限り、「約」は、当該技術分野の実施に従う１つの標準偏差又は５％までの範囲のいずれか大きい方の範囲内であることを意味する。
「活性化」又は「刺激」又は「活性化された」又は「刺激された」とは、活性化マーカーの発現、サイトカイン産生、又は標的細胞の増殖若しくは細胞傷害性の媒介をもたらす、細胞の生物学的状態の変化の誘導を指す。細胞は、一次刺激シグナルによって活性化され得る。共刺激シグナルは、一次シグナルの大きさを増幅し、初期刺激後の細胞死を抑制することができ、その結果、より耐久性のある活性化状態、ひいてはより高い細胞傷害能をもたらす。「共刺激シグナル」は、ＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーションなどの一次シグナルと組み合わせて、Ｔ細胞及び／若しくはＮＫ細胞の増殖並びに／又は鍵となる分子のアップレギュレーション若しくはダウンレギュレーションを引き起こすシグナルを指す。
「オルタナティブスカフォールド」は、高次構造の許容度が高い可変ドメインに会合する構造化コアを含有する一本鎖タンパク質フレームワークを指す。可変ドメインは、スカフォールドの完全性を損なうことなく導入される多様性を許容するため、可変ドメインは、特異的抗原に結合するように遺伝子操作及び選択され得る。
「抗体依存性細胞傷害」、「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」、又は「ＡＤＣＣ」は、エフェクター細胞で発現するＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）を介して、抗体でコーティングされた標的細胞の、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、単球、マクロファージ、及び好中球などの溶解活性を有するエフェクター細胞との相互作用に依存する細胞死を誘導する機序を指す。
「抗体依存性細胞貪食作用」又は「ＡＤＣＰ」は、マクロファージ又は樹状細胞などの貪食細胞による取り込みによって抗体でコーティングされた標的細胞を排除する機序を指す。
「抗原」は、免疫応答を媒介することができる抗原結合ドメイン又はＴ細胞受容体が結合することができる任意の分子（例えば、タンパク質、ペプチド、多糖類、糖タンパク質、糖脂質、核酸、これらの一部、又はこれらの組み合わせ）を指す。例示的な免疫応答としては、抗体産生、及びＴ細胞、Ｂ細胞、又はＮＫ細胞などの免疫細胞の活性化が挙げられる。抗原は、組織サンプル、腫瘍サンプル、細胞、又は他の生物学的成分、生物、タンパク質／抗原のサブユニット、殺傷若しくは不活性化された全細胞又は溶解物などの生体サンプルからの遺伝子によって発現し得る、当該サンプルから合成され得る、又は当該サンプルから精製され得る。
「抗原結合断片」又は「抗原結合ドメイン」とは、抗原に結合するタンパク質の一部を指す。抗原結合断片は、合成ポリペプチド、酵素的に入手可能なポリペプチド、又は遺伝的に操作されたポリペプチドであってよく、これには、抗原に結合する免疫グロブリンの一部、例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ及びＦｖ断片、１つのＶＨドメイン又は１つのＶＬドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）、サメ可変ＩｇＮＡＲドメイン、ラクダ化ＶＨドメイン、ＶＨＨドメイン、ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４部分などの抗体のＣＤＲを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識ユニット、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３、抗原に結合するオルタナティブスカフォールド、並びに抗原結合断片を含む多重特異性タンパク質が挙げられる。抗原結合断片（ＶＨ及びＶＬなど）は、合成リンカーを介して互いに連結して、ＶＨ及びＶＬドメインが別々の一本鎖により発現された場合にＶＨ／ＶＬドメインが分子内又は分子間で対合して一価の抗原結合ドメイン、例えば一本鎖Ｆｖ（single chain Fv、ｓｃＦｖ）又はダイアボディを形成することができる、様々な種類の一本鎖抗体設計を形成することができる。抗原結合断片はまた、二重特異性及び多重特異性タンパク質を遺伝子操作するために、単一特異性又は多重特異性であり得る他の抗体、タンパク質、抗原結合断片、又はオルタナティブスカフォールドにコンジュゲートされてもよい。
「抗体」は、広義の意味を有し、マウス、ヒト、ヒト化、及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、抗原結合断片、二重特異性、三重特異性、四重特異性などの多重特異性抗体、二量体、四量体、若しくは多量体の抗体、一本鎖抗体、ドメイン抗体、及び必要とされる特異性の抗原結合部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変された構造を含む、免疫グロブリン分子を含む。「完全長抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された、２本の重鎖（heavy chain、ＨＣ）及び２本の軽鎖（light chain、ＬＣ）、並びにこれらの多量体（例えばＩｇＭ）から構成される。各重鎖は、重鎖可変領域（heavy chain variable region、ＶＨ）、並びに重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３からなる）から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（light chain variable region、ＶＬ）及び軽鎖定常領域（constant region、ＣＬ）から構成される。ＶＨ領域及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）が散在しており相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼称される超可変領域に更に分類され得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントで構成される。免疫グロブリンは、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、５つの主要なクラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭに割り当てられ得る。ＩｇＡ及びＩｇＧは、アイソタイプのＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４として更に細分類される。いずれの脊椎動物種の抗体軽鎖も、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明確に異なるタイプ、すなわち、カッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの一方に割り当てることができる。
「二重特異性」とは、２つの異なる抗原又は同じ抗原内の２つの異なるエピトープに特異的に結合する分子（抗体など）を指す。二重特異性分子は、他の関連抗原、例えば、ヒト若しくはサル、例えば、カニクイザル（Macaca cynomolgus、ｃｙｎｏ）若しくはチンパンジー（Pan troglodytes）などの他の種由来の同じ抗原（ホモログ）に対して交差反応性を有し得るか、又は２つ以上の異なる抗原間で共有されているエピトープに結合し得る。
「二重特異性抗ｈＫ２／抗ＣＤ３抗体」、「ｈｋ２／ＣＤ３抗体」、「ｈｋ２×ＣＤ３抗体」、「抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質」などは、ｈｋ２及びＣＤ３に結合し、そして、ｈＫ２に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメイン及びＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１つの結合ドメインを含む抗体を指す。ｈＫ２及びＣＤ３に特異的に結合するドメインは、典型的にはＶＨ／ＶＬ対である。二重特異性抗ｈｋ２×ＣＤ３抗体は、ｈｋ２又はＣＤ３のいずれかへの結合に関して一価であってよい。
「癌」は、身体における異常細胞の制御されていない成長を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。制御されていない細胞分裂及び成長は、隣接組織を浸潤する悪性腫瘍の形成をもたらし、リンパ系又は血流を介して身体の遠位部分にも転移し得る。「癌」又は「癌組織」は、腫瘍を含み得る。
「キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）」は、本明細書で使用するとき、全て天然では単一のタンパク質において一緒にみられることのない組み合わせで、細胞外標的結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞表面受容体として定義される。これには、細胞外ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが天然では単一の受容体タンパク質において一緒にみられることのない受容体が含まれる。ＣＡＲは、主に、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球での使用が意図される。
「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、標的に結合したタンパク質のＦｃエフェクタードメインが補体成分Ｃ１ｑに結合して活性化し、次に、補体カスケードを活性化して標的細胞の死を引き起こす、細胞死を誘導する機序を指す。補体の活性化はまた、標的細胞表面に対する補体成分の沈着を生じさせ得、白血球への補体受容体（例えば、ＣＲ３）の結合によって、ＣＤＣを容易にする。
「相補性決定領域」（ＣＤＲ）は、抗原に結合する抗体領域である。ＶＨには３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）が存在し、ＶＬには３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）が存在する。ＣＤＲは、以下のものなどの様々な描写を用いて定義することができる：Ｋａｂａｔ（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（１９７０）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １３２：２１１－５０；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－１７），ＩＭＧＴ（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７）、及びＡｂＭ（Ｍａｒｔｉｎ ａｎｄ Ｔｈｏｒｎｔｏｎ Ｊ Ｂｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６３：８００－１５，１９９６）。様々な記述と可変領域の付番との対応が記載されている（例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７；Ｈｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ（２００１）３０９：６５７－７０；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース；ウェブリソース、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇを参照のこと）。ＵＣＬ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ ＰＬＣによるａｂＹｓｉｓなどの利用可能なプログラムを使用して、ＣＤＲを描写することができる。本明細書で使用する場合、用語「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」、及び「ＬＣＤＲ３」は、明細書で別途明示的に記載のない限り、上述したＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、又はＡｂＭの方法のいずれかにより定義されるＣＤＲを含む。
「ＣＤ３」は、多分子Ｔ細胞受容体（T cell receptor、ＴＣＲ）複合体の一部としてＴ細胞上で発現し、２本又は４本の受容体鎖：ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３ゼータ、及びＣＤ３ガンマの会合から形成されたホモ二量体又はヘテロ二量体からなる抗原を指す。ヒトＣＤ３イプシロンは、配列番号４４２のアミノ酸配列を含む。本明細書におけるタンパク質、ポリペプチド、及びタンパク質断片に対する全ての言及は、非ヒト種由来のものであると明示的に指定されない限り、それぞれのタンパク質、ポリペプチド、又はタンパク質断片のヒトバージョンを指すことを意図する。したがって、「ＣＤ３」は、非ヒト種、例えば、「マウスＣＤ３」「サルＣＤ３」などからのものとして指定されない限り、ヒトＣＤ３を意味する。
本明細書全体を通して、「ＣＤ３特異的」又は「ＣＤ３に特異的に結合する」又は「抗ＣＤ３抗体」は、ＣＤ３－イプシロン細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（配列番号４４３）に特異的に結合する抗体を含む、ＣＤ３－イプシロンポリペプチド（配列番号４４２）に特異的に結合する抗体を指す。ＣＤ３－εは、ＣＤ３－γ、－δ、及び－ζ、並びにＴ細胞受容体α／β及びγ／δヘテロダイマーと一緒に、Ｔ細胞受容体－ＣＤ３複合体を形成する。この複合体は、いくつかの細胞内シグナル伝達経路を認識する抗原結合において重要な役割を果たす。ＣＤ３複合体はシグナル伝達を媒介し、Ｔ細胞の活性化及び増殖をもたらす。ＣＤ３は、免疫応答に必要である。
配列番号４４２（ヒトＣＤ３イプシロン）
ＭＱＳＧＴＨＷＲＶＬＧＬＣＬＬＳＶＧＶＷＧＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴＴＶＩＬＴＣＰＱＹＰＧＳＥＩＬＷＱＨＮＤＫＮＩＧＧＤＥＤＤＫＮＩＧＳＤＥＤＨＬＳＬＫＥＦＳＥＬＥＱＳＧＹＹＶＣＹＰＲＧＳＫＰＥＤＡＮＦＹＬＹＬＲＡＲＶＣＥＮＣＭＥＭＤＶＭＳＶＡＴＩＶＩＶＤＩＣＩＴＧＧＬＬＬＬＶＹＹＷＳＫＮＲＫＡＫＡＫＰＶＴＲＧＡＧＡＧＧＲＱＲＧＱＮＫＥＲＰＰＰＶＰＮＰＤＹＥＰＩＲＫＧＱＲＤＬＹＳＧＬＮＱＲＲＩ
配列番号４４３（ヒトＣＤ３イプシロン細胞外ドメイン）
ＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴＴＶＩＬＴＣＰＱＹＰＧＳＥＩＬＷＱＨＮＤＫＮＩＧＧＤＥＤＤＫＮＩＧＳＤＥＤＨＬＳＬＫＥＦＳＥＬＥＱＳＧＹＹＶＣＹＰＲＧＳＫＰＥＤＡＮＦＹＬＹＬＲＡＲＶＣＥＮＣＭＥＭＤ
「減少する」、「低下する」、「減弱する」、「低減する」、又は「軽減する」とは、概して、対照又はビヒクルによって媒介される応答と比較したときに、より少ない応答を媒介する（すなわち、下流効果）試験分子の能力を指す。例示的な応答は、Ｔ細胞拡大、Ｔ細胞活性化、又はＴ細胞媒介性腫瘍細胞殺傷、又はタンパク質のその抗原若しくは受容体への結合、増強されたＦｃγへの結合、又は増強されたＡＤＣＣ、ＣＤＣ及び／若しくはＡＤＣＰなどの増強されたＦｃエフェクター機能である。減少は、試験分子と対照（又はビヒクル）との間の測定された応答の統計的に有意な差、又は約１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、若しくは３０倍以上、例えば、５００、６００、７００、８００、９００、若しくは１０００倍以上（１を上回る全ての整数及びその間の小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８等を含む）の減少等、測定された応答の減少であってよい。
「分化」は、細胞の能力若しくは増殖を減少させるか、又は細胞をより発生的に限定された状態に移行させる方法を指す。
「コードする」又は「コードしている」とは、規定の配列のヌクレオチド（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）又は規定の配列のアミノ酸のいずれかを有する、生物学的プロセスにおいて他のポリマー及び巨大分子を合成するためのテンプレートとして機能する、遺伝子、ｃＤＮＡ、又はｍＲＮＡなどのポリヌクレオチドにおけるヌクレオチドの特定の配列の固有の特性、並びにそれから生じる生物学的特性を指す。したがって、細胞又は他の生物系において、遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳がタンパク質を生成する場合、その遺伝子、ｃＤＮＡ、又はＲＮＡは、タンパク質をコードする。ヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であるコード鎖と、遺伝子又はｃＤＮＡの転写のテンプレートとして使用される非コード鎖はどちらも、その遺伝子又はｃＤＮＡのタンパク質又は他の産物をコードするとして言及され得る。
「増強する」、「促進する」、「増加させる」、「拡大する」、又は「改善する」とは、概して、対照又はビヒクルによって媒介される応答と比較したときに、より多い応答を媒介する（すなわち、下流効果）試験分子の能力を指す。例示的な応答は、Ｔ細胞拡大、Ｔ細胞活性化、又はＴ細胞媒介性腫瘍細胞殺傷、又はタンパク質のその抗原若しくは受容体への結合、増強されたＦｃγへの結合、又は増強されたＡＤＣＣ、ＣＤＣ及び／若しくはＡＤＣＰなどの増強されたＦｃエフェクター機能である。増強は、試験分子と対照（又はビヒクル）との間の測定された応答の統計的に有意な差、又は約１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、若しくは３０倍以上、例えば、５００、６００、７００、８００、９００、若しくは１０００倍以上（１を上回る全ての整数及びその間の小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８等を含む）の増加等、測定された応答の増加であってよい。
「エピトープ」とは、抗体が特異的に結合する抗原の部分を指す。エピトープは、典型的には、化学的に活性な（極性、非極性又は疎水性など）部分の表面集団、例えばアミノ酸又は多糖側鎖からなり、特定の三次元構造特性並びに特定の電荷特性を有し得る。エピトープは、高次構造的空間単位を形成する連続的な及び／又は不連続なアミノ酸で構成され得る。不連続なエピトープでは、抗原の直鎖配列の異なる部分からのアミノ酸が、タンパク質分子の折り畳みにより三次元空間でごく近接するようになる。抗体「エピトープ」は、エピトープを識別するために使用する方法論によって異なる。
「拡大」は、細胞分裂及び細胞死の結果を指す。
「発現する」及び「発現」とは、細胞内又はインビトロで生じる周知の転写及び翻訳を指す。発現産物、例えば、タンパク質は、このように、細胞によって又はインビトロで発現し、そして、細胞内、細胞外、又は膜貫通タンパク質であってよい。
「発現ベクター」とは、発現ベクター中に存在するポリヌクレオチド配列によってコードされているポリペプチドの翻訳を導くために生体系又は再構成された生体系において利用することができるベクターを指す。
「ｄＡｂ」又は「ｄＡｂ断片」は、ＶＨドメインで構成される抗体断片を指す（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４ ５４６（１９８９））。
「Ｆａｂ」又は「Ｆａｂ断片」は、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及びＣＬドメインで構成される抗体断片を指す。
「Ｆ（ａｂ’）２」又は「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、ヒンジ領域内のジスルフィド架橋によって接続された２つのＦａｂ断片を含む抗体断片を指す。
「Ｆｄ」又は「Ｆｄ断片」は、ＶＨ及びＣＨ１ドメインで構成される抗体断片を指す。
「Ｆｖ」又は「Ｆｖ断片」は、抗体の単一のアームからのＶＨドメイン及びＶＬドメインで構成される抗体断片を指す。Ｆｖ断片は、Ｆａｂ（ＣＨ１及びＣＬ）領域の定常領域を欠いている。Ｆｖ断片におけるＶＨ及びＶＬは、非共有結合性相互作用によって一緒に保持される。
二量体Ｆｃの「Ｆｃ」ポリペプチド」は、二量体Ｆｃドメインを形成する２つのポリペプチドのうちの１つを指す。例えば、二量体ＩｇＧ ＦＣのＦＣポリペプチドは、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３定常ドメイン配列を含む）。
「完全長抗体」は、ジスルフィド結合により相互接続された２本の重鎖（heavy chain、ＨＣ）及び２本の軽鎖（light chain、ＬＣ）、並びにこれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）で構成される。各重鎖は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常ドメインで構成され、重鎖定常ドメインは、サブドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）で構成される。ＶＨ及びＶＬは、フレームワーク領域（framework region、ＦＲ）に散在している相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に更に区分され得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントで構成される。
「遺伝子改変」は、宿主細胞に対して「外来」（すなわち、外因性又は細胞外）の遺伝子、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列を導入し、その結果、宿主細胞が導入された遺伝子又は配列を発現して、所望の物質、典型的には、導入された遺伝子又は配列によってコードされているタンパク質又は酵素を生成することを指す。導入された遺伝子又は配列はまた、「クローニングされた」又は「外来」遺伝子又は配列と呼ばれる場合もあり、開始、終止、プロモーター、シグナル、分泌、又は細胞の遺伝機構によって使用される他の配列などのキメラ抗原受容体をコードしているポリヌクレオチドに動作可能に連結された調節配列又は制御配列を含んでいてよい。遺伝子又は配列は、既知の機能を有さない非機能的配列を含んでいてよい。導入されたＤＮＡ又はＲＮＡを受け取って発現する宿主細胞は、「遺伝的に操作されている」。宿主細胞に導入されたＤＮＡ又はＲＮＡは、宿主細胞と同じ属若しくは種の細胞を含む任意の起源、又は異なる属若しくは種に由来し得る。
「異種」は、自然界では互いに対して同じ関係で見出されることのない２つ以上のポリヌクレオチド又は２つ以上のポリペプチドを指す。
「異種ポリヌクレオチド」は、本明細書に記載の２つ以上のネオ抗原をコードしている天然には存在しないポリヌクレオチドを指す。
「異種ポリペプチド」は、本明細書に記載の２つ以上のネオ抗原ポリペプチドを含む天然には存在しないポリペプチドを指す。
「宿主細胞」は、異種核酸を含有する任意の細胞を指す。例示的な異種核酸は、ベクター（例えば、発現ベクター）である。
「ヒト抗体」とは、ヒト対象に投与されるときに、最小の免疫応答を有するように最適化された抗体を指す。ヒト抗体の可変領域は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体が定常領域又は定常領域の一部を含む場合、当該定常領域もヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合、ヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。このような例示的な系は、ファージにディスプレイされたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばマウス又はラットを含む。「ヒト抗体」は、典型的には、ヒト抗体及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を得るために使用した系の違い、フレームワーク若しくはＣＤＲへの体細胞変異の導入若しくは置換の意図的な導入、又はこれらの両方により、ヒトで発現した免疫グロブリンと比較したときにアミノ酸の違いを含有する。典型的には、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされているアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列が少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である。場合によっては、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６及び国際公開第２００９／０８５４６２号に記載される、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来する抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。
「ヒト化抗体」は、少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来し、少なくとも１つのフレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体を指す。ヒト化抗体は、フレームワークに置換を含むことができるため、フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又はヒト免疫グロブリン生殖細胞系列遺伝子配列の厳密なコピーではない場合がある。
「と組み合わせて」は、２つ以上の治療剤を、混合物で一緒に、単剤として同時に、又は単剤として任意の順序で逐次、対象に投与することを意味する。
「細胞内シグナル伝達ドメイン」又は「細胞質シグナル伝達ドメイン」は、分子の細胞内部分を指す。これは、タンパク質の機能的部分であり、セカンドメッセンジャを生成することにより定められたシグナル伝達経路を介して細胞活動を調節するために細胞内で情報を伝達することによって作用する、又はかかるメッセンジャに応答することによりエフェクターとして機能することによって作用する。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。
「単離」は、組み換え細胞などの分子が産生される系の他の成分から離して実質的に分離及び／又は精製された分子（例えば、合成ポリヌクレオチド又はポリペプチド）の均質な集団に加えて、少なくとも１つの精製又は単離工程に供されたタンパク質を指す。「単離された」とは、他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まない分子を指し、より高い純度、例えば８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の純度まで単離された分子を包含する。
「カリクレイン関連ペプチダーゼ２」又は「ｈＫ２」は、カリクレイン－２、顆粒状カリクレイン２、又はＨＫ２とも呼ばれる既知のタンパク質を指す。ｈＫ２は、プレプロタンパク質として生成され、タンパク質分解中に切断されて活性プロテアーゼを生成する。全てのｈＫ２アイソフォーム及びバリアントが、「ｈＫ２」に包含される。様々なアイソフォームのアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００５５４２．１、ＮＰ＿００１００２２３１．１、及びＮＰ＿００１２４３００９から検索可能である。配列番号６２における完全長ヒトｈＫ２のアミノ酸配列を示す。配列は、シグナルペプチド（残基１～１８）及びプロペプチド領域（残基１９～２４）を含む。
配列番号６２
ＭＷＤＬＶＬＳＩＡＬＳＶＧＣＴＧＡＶＰＬＩＱＳＲＩＶＧＧＷＥＣＥＫＨＳＱＰＷＱＶＡＶＹＳＨＧＷＡＨＣＧＧＶＬＶＨＰＱＷＶ
ＬＴＡＡＨＣＬＫＫＮＳＱＶＷＬＧＲＨＮＬＦＥＰＥＤＴＧＱＲＶＰＶＳＨＳＦＰＨＰＬＹＮＭＳＬＬＫＨＱＳＬＲＰＤＥＤＳＳＨＤ
ＬＭＬＬＲＬＳＥＰＡＫＩＴＤＶＶＫＶＬＧＬＰＴＱＥＰＡＬＧＴＴＣＹＡＳＧＷＧＳＩＥＰＥＥＦＬＲＰＲＳＬＱＣＶＳＬＨＬＬＳ
ＮＤＭＣＡＲＡＹＳＥＫＶＴＥＦＭＬＣＡＧＬＷＴＧＧＫＤＴＣＧＧＤＳＧＧＰＬＶＣＮＧＶＬＱＧＩＴＳＷＧＰＥＰＣＡＬＰＥＫＰ
ＡＶＹＴＫＶＶＨＹＲＫＷＩＫＤＴＩＡＡＮＰ
「調節する」は、対照又はビヒクルによって媒介される応答と比較したときに、より多い又はより少ない応答を媒介する（すなわち、下流効果）試験分子の増強された又は減少した能力のいずれかを指す。
「モノクローナル抗体」は、抗体分子の実質的に均質な母集団（すなわち、母集団を構成する個別の抗体が、抗体重鎖からのＣ末端リジンの除去などの可能な周知の変更、あるいはアミノ酸異性化若しくはアミド分解、メチオニン酸化、又はアスパラギン若しくはグルタミンアミド分解などの翻訳後修飾を除いて同一である）から得られた抗体を指す。モノクローナル抗体は、典型的には、１つの抗原性エピトープに結合する。二重特異性モノクローナル抗体は、２つの異なる抗原性エピトープに結合する。モノクローナル抗体は、抗体集団内で不均一なグリコシル化を有し得る。モノクローナル抗体は、単一特異性であってよく、又は、二重特異性などの多重特異性であってよく、一価、二価、又は多価であってよい。
「多重特異性」とは、２つ以上の異なる抗原又は同じ抗原内の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する抗体などの分子を意味する。多重特異性分子は、他の関連抗原、例えば、ヒト若しくはサル、例えば、カニクイザル（Macaca fascicularis、ｃｙｎｏ）若しくはチンパンジー（Pan troglodytes）などの他の種由来の同じ抗原（ホモログ）に対して交差反応性を有し得るか、又は２つ以上の異なる抗原間で共有されているエピトープに結合し得る。
「ナチュラルキラー細胞」及び「ＮＫ細胞」は、本明細書では互換的かつ同義的に使用される。ＮＫ細胞は、ＣＤ１６＋ＣＤ５６＋及び／又はＣＤ５７＋ＴＣＲ－表現型を有する分化リンパ球を指す。ＮＫ細胞は、特定の細胞溶解性酵素の活性化によって「自己」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現できない細胞に結合し、殺傷する能力、腫瘍細胞又はＮＫ活性化受容体のリガンドを発現する他の疾患細胞を殺傷する能力、及び免疫応答を刺激又は阻害するサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力を特徴とする。
「動作可能に連結された」及び類似の語句は、核酸又はアミノ酸に関して使用される場合、それぞれ、互いに機能的な関係で配置された核酸配列又はアミノ酸配列の動作上の連結を指す。例えば、動作可能に連結されたプロモーター、エンハンサーエレメント、オープンリーディングフレーム、５’及び３’ＵＴＲ、並びにターミネーター配列は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ）の正確な産生をもたらし、場合によっては、ポリペプチドの産生（すなわち、オープンリーディングフレームの発現）をもたらす。動作可能に連結されたペプチドは、ペプチドの機能ドメインが互いに適切な距離で配置されて、各ドメインの意図された機能を付与するペプチドを指す。
用語「パラトープ」は、抗原の結合に関与し、抗原と相互作用する残基を含む抗体分子の区域又は領域を指す。パラトープは、高次構造的空間単位を形成する連続的及び／又は不連続なアミノ酸で構成され得る。所与の抗体のパラトープは、様々な実験及び計算方法を使用して、様々なレベルで詳細に定義及び特性評価することができる。実験方法は、水素／重水素交換質量分析（ＨＸ－ＭＳ）を含む。パラトープは、用いられるマッピング方法に応じて異なって定義される。
「医薬の組み合わせ」は、一緒に又は別々に投与される２つ以上の活性成分の組み合わせを指す。
「医薬組成物」は、活性成分及び医薬的に許容される担体を合わせて得られる組成物を指す。
「医薬的に許容される担体」又は「賦形剤」は、対象に対して毒性のない、活性成分以外の医薬組成物中の成分を指す。例示的な医薬的に許容される担体は、バッファ、安定剤、又は防腐剤である。
「ポリヌクレオチド」又は「核酸」とは、糖－リン酸骨格又は他の等価な共有結合性化学的作用によって共有結合しているヌクレオチド鎖を含む合成分子を指す。ｃＤＮＡが、ポリヌクレオチドの典型例である。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子であり得る。
疾患又は障害を「予防する」、「予防している」、「予防」、又は「予防処置」は、対象における障害の発生を防ぐことを意味する。
「増殖」は、細胞の対称的又は非対称的な分裂のいずれかの、細胞分裂の増加を指す。
「プロモーター」は、転写を開始させるために必要な最小配列を指す。プロモーターはまた、それぞれ転写を増強又は抑制するエンハンサー又はリプレッサーエレメントを含み得る。
「タンパク質」又は「ポリペプチド」は、本明細書では互換的に使用され、ペプチド結合によって連結された少なくとも２つのアミノ酸残基でそれぞれが構成される１つ以上のポリペプチドを含む分子を指す。タンパク質は、モノマーであってもよく、又は同一若しくは異なる２つ以上のサブユニットのタンパク質複合体であってもよい。５０個未満のアミノ酸からなる小分子ポリペプチドは、「ペプチド」と称され得る。タンパク質は、異種融合タンパク質、糖タンパク質、又はリン酸化、アセチル化、ミリストイル化、パルミトイル化、グリコシル化、酸化、ホルミル化、アミド化、シトルリン化、ポリグルタミル化、ＡＤＰ－リボシル化、ペグ化、若しくはビオチン化などの翻訳後修飾によって修飾されたタンパク質であってよい。タンパク質は、組み換え発現し得る。
「組み換え体」とは、組み換え手段によって調製、発現、作製、又は単離されたポリヌクレオチド、ポリペプチド、ベクター、ウイルス、及び他の巨大分子を指す。
「調節エレメント」は、核酸配列の発現のいくつかの態様を制御する任意のシス又はトランス作用性遺伝要素を指す。
「再発性」とは、治療薬による前治療後の改善期間後に疾患又は疾患の徴候及び症状が再開することを指す。
「難治性」とは、治療に応答しない疾患を指す。難治性疾患は、治療前又は治療開始時に治療に抵抗性であり得るか、又は難治性疾患は、治療中に抵抗性疾患となり得る。
「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」は、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む少なくとも１つの抗体断片及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含む少なくとも１つの抗体断片を含む融合タンパク質であって、ＶＬ及びＶＨが、ポリペプチドリンカーを介して連続的に連結され、一本鎖ポリペプチドとして発現することができる、融合タンパク質を指す。特に指定しない限り、本明細書で使用するとき、ｓｃＦｖは、ＶＬ及びＶＨ可変領域をいずれの順序で有していてもよく、例えば、ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端に関して、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含んでいてもよく、又はＶＨ－リンカー－ＶＬを含んでいてもよい。
「（ｓｃＦｖ）２」又は「タンデムｓｃＦｖ」又は「ビス－ｓｃＦｖ」断片は、２つの軽鎖可変領域（ＶＬ）及び２つの重鎖可変領域（ＶＨ）を含む融合タンパク質であって、２つのＶＬ及び２つのＶＨ領域が、ポリペプチドリンカーを介して連続的に連結され、一本鎖ポリペプチドとして発現することができる、融合タンパク質を指す。ペプチドリンカーによって融合された２つのＶＬ領域及び２つのＶＨ領域は、二価分子ＶＬＡ－リンカー－ＶＨＡ－リンカー－ＶＬＢ－リンカー－ＶＨＢを形成して、２つの異なる抗原又はエピトープに同時に結合することができる２つの結合部位を形成する。
「特異的に結合する」、「特異的結合」、「特異的に結合している」、又は「結合する」とは、タンパク質性分子が、抗原又は当該抗原内のエピトープに、他の抗原に対する親和性よりも高い親和性で結合することを指す。典型的には、タンパク質性分子は、約１×１０－７Ｍ以下、例えば約５×１０－８Ｍ以下、約１×１０－８Ｍ以下、約１×１０－９Ｍ以下、約１×１０－１０Ｍ以下、約１×１０－１１Ｍ以下、又は約１×１０－１２Ｍ以下の平衡解離定数（ＫＤ）で抗原又は当該抗原内のエピトープに結合し、典型的には、当該ＫＤは、非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合についてのＫＤよりも少なくとも１００倍小さい。本明細書に記載の前立腺ネオ抗原の文脈において、「特異的結合」とは、タンパク質性分子が、前立腺ネオ抗原がそのバリアントである野生型タンパク質に検出可能には結合することなく、前立腺ネオ抗原に結合することを指す。
「対象」は、任意のヒト又は非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」としては、あらゆる脊椎動物、例えば哺乳類及び非哺乳類、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などが挙げられる。用語「対象」及び「患者」は、本明細書で互換的に使用することができる。
「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」は、互換性があり、本明細書において同義的に使用される。Ｔ細胞は、胸腺細胞、ナイーブＴリンパ球、メモリＴ細胞、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、静止Ｔリンパ球、又は活性化Ｔリンパ球を含む。Ｔ細胞は、Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞、例えば、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）又はＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞であってよい。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、腫瘍浸潤細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＩＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はＴ細胞の任意の他のサブセットであってもよい。また、「ＮＫＴ細胞」も含まれ、これは、半不変αβＴ細胞受容体を発現するだけでなく、ＮＫ１．１などの通常ＮＫ細胞に関連する様々な分子マーカーも発現するＴ細胞の特殊な集団を指す。ＮＫＴ細胞としては、ＮＫ１．１＋及びＮＫ１．１－、並びにＣＤ４＋、ＣＤ４－、ＣＤ８＋、及びＣＤ８細胞が挙げられる。ＮＫＴ細胞のＴＣＲは、ＭＨＣ Ｉ様分子ＣＤ Ｉｄによって提示される糖脂質抗原を認識するという点で独特である。ＮＫＴ細胞は、炎症又は免疫寛容のいずれかを促進するサイトカインを産生する能力により、保護効果又は有害効果のいずれかを有し得る。また、「ガンマ－デルタＴ細胞（γδＴ細胞）」も含まれ、これは、その表面上に異なるＴＣＲを有するＴ細胞の小さなサブセットである特殊な集団を指し、α－及びβ－ＴＣＲ鎖と命名された２本の糖タンパク質鎖でＴＣＲが構成されるＴ細胞の大部分とは異なり、γδＴ細胞におけるＴＣＲは、γ鎖及びδ鎖で構成される。γδＴ細胞は、免疫監視及び免疫制御において役割を果たすことができ、そして、ＩＬ－１７の重要な供給源でありかつロバストなＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することが見出された。また、異常又は過剰な免疫応答を抑制し、免疫寛容における役割を果たすＴ細胞を指す「調節性Ｔ細胞」又は「Ｔｒｅｇ」も含まれる。Ｔｒｅｇは、典型的には、転写因子Ｆｏｘｐ３陽性ＣＤ４＋Ｔ細胞であり、また、ＩＬ－１０産生ＣＤ４＋Ｔ細胞である転写因子Ｆｏｘｐ３陰性調節性Ｔ細胞も含み得る。
本明細書において互換的に使用される「治療有効量」又は「有効量」は、必要な投薬量及び期間で、所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。治療的に有効な量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重などの要因、並びに個体において所望の応答を引き出す治療薬又は治療薬の組み合わせの能力によって様々であってよい。有効な治療薬又は治療薬の組み合わせの例示的な指標としては、例えば、患者の健康状態の改善、腫瘍量の低減、腫瘍の成長の停止若しくは減速、及び／又は体内の他の箇所への癌細胞の転移の不在が含まれる。
「形質導入」とは、ウイルスベクターを使用する外来核酸の細胞への導入を指す。
癌などの疾患又は障害を「治療する」、「治療している」、又は「治療」は、以下のうちの１つ以上を達成することを指す：障害の重篤度及び／若しくは期間を低減する、治療される障害に特徴的な症状の悪化を阻害する、以前障害を有していた対象における障害の再発を制限若しくは予防する、又は以前に障害について症候性であった対象における症状の再発を制限若しくは予防する。
「腫瘍細胞」又は「癌細胞」は、インビボ、エクスビボ、又は組織培養のいずれかにおいて、自然発生的な又は導入された表現型の変化を有する癌性、前癌性、又は形質転換細胞を指す。これらの変化は、必ずしも新たな遺伝物質の取り込みを伴うものではない。形質転換は、形質転換ウイルスの感染及び新たなゲノム核酸の組み込み、外因性核酸の取り込みにより発生させることもでき、自然発生的に又は発癌物質に曝露した後に発生し、それによって内因性の遺伝子が変異する場合もある。形質転換／癌は、インビトロ、インビボ、及びエクスビボにおける、形態学的変化、細胞の不死化、異常な増殖制御、病巣の形成、増殖、悪性病変、腫瘍特異的マーカーレベルの調節、浸潤性、ヌードマウスなどの好適な動物宿主における腫瘍の増殖などによって例示される。
「バリアント」、「変異体」、又は「変化」は、１つ以上の改変、例えば、１つ以上の置換、挿入、又は欠失によって参照ポリペプチド又は参照ポリヌクレオチドとは異なるポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。
本明細書全体を通して、抗体定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、本明細書に別途明示的に記載のない限り、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）に記載のＥＵインデックスに従う。
Ｉｇ定常領域における変異は、以下のように称される：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖは、１つの免疫グロブリン定常領域におけるＬ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、及びＹ４０７Ｖ変異を指す。Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗは、１つの多量体タンパク質中に存在する、第１のＩｇ定常領域におけるＬ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、及びＹ４０７Ｖ変異並びに第２のＩｇ定常領域におけるＴ３９４Ｗ変異を指す。
「ＶＨＨ」は、重鎖の抗原結合ドメインで排他的に構成される単一ドメイン抗体又はナノボディを指す。ＶＨＨ単一ドメイン抗体は、従来のＦａｂ領域の軽鎖及び重鎖のＣＨ１ドメインを欠いている。
物質の組成
ｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン
本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単一特異性及び多重特異性タンパク質（特に二重特異性タンパク質）、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、前述のものをコードしているポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞、並びに前述のものを作製及び使用する方法を提供する。本明細書で同定されたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、改善された熱安定性の観点で改善された特性を示した。本明細書に開示される多重特異性タンパク質は、Ｔ細胞媒介性細胞傷害性を媒介する、Ｔ細胞の活性化及び増殖を促進する、Ｔ細胞サイトカイン放出を増加させる、並びに／又は抗腫瘍効果の増加を示すのに特に有効であり得る。
本開示は、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１１１、１１２、１１３、１１４、又は１１５に記載のｈＫ２上のエピトープに結合する、単離タンパク質を提供する。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１１１及び１１２に記載のｈＫ２上のエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１１３、１１４、及び１１５に記載のｈＫ２上のエピトープに結合する。
本発明はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、抗体又はその抗原結合断片が、ｈＫ２の残基ＫＶＴＥＦ（配列番号１１１）又はＨＹＲＫＷ（配列番号１１２）又はＳＨＧＷＡＨ（配列番号１１３）又はＲＨＮＬＦＥＰＥＤＴＧＱＲＶＰ（配列番号１１４）又はＧＷＧＳＩＥＰＥＥ（配列番号１１５）内で結合する、単離タンパク質を提供する。特定の実施形態では、本発明はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該抗原結合ドメインが、ＫＶＴＥＦ（配列番号１１１）及びＨＹＲＫＷ（配列番号１１２）の配列を有するエピトープ内でｈＫ２に結合する、単離タンパク質を提供する。
Ｈ／Ｄ交換アッセイを使用して、抗体が結合するｈＫ２内の残基を決定することができる。Ｈ／Ｄ交換アッセイでは、組み換え的に発現させた可溶性ｈＫ２を、抗体の存在又は非存在下、重水素化水中で、所定の時間にわたってインキュベートすると、抗体によって保護されていない交換可能な水素原子で重水素の組み込みが生じ、続いて、タンパク質のプロテアーゼ消化及びＬＣ－ＭＳを使用するペプチド断片の分析を行う。Ｈ／Ｄ交換アッセイは、公知のプロトコルを使用して行うことができる。例示的なプロトコルを実施例３に記載する。いくつかの実施形態では、クエンチングバッファ（例えば、８Ｍ尿素、１Ｍ ＴＣＥＰ、ｐＨ３．０）の添加によってＨ／Ｄ交換混合物をクエンチした後、室温で平衡化された固定化ペプシン／ＦｐＸＩＩＩカラムに通す（例えば、６００μＬ／分）。次いで、消化性断片を逆相トラップカラムにロード（例えば、６００μＬ／分）し、脱塩（例えば、６００μＬで１分間）し、分離（例えば、Ｃ１８カラムで）し、質量分析によって分析する（例えば、キャピラリー温度２７５℃、分解能１５０，０００、及び質量範囲（ｍ／ｚ）３００－１，８００でＬＴＱ（商標）Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｆｕｓｉｏｎ Ｌｕｍｏｓ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて）。
本発明はまた、抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該参照抗体の抗原結合ドメインが、配列番号１１１、１１２、１１３、１１４、及び１１５からなる群から選択される配列を有するｈＫ２上のエピトープに結合し、ｈＫ２に結合する抗原結合断片が、本明細書に開示する参照抗体とｈＫ２への結合について競合する、単離タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、参照抗体は、以下を含む：
ａ．配列番号１３７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
ｂ．配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
ｃ．配列番号１６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
ｄ．配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
ｅ．配列番号１６８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６９のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
ｆ．配列番号２０４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号２０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
ｇ．配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号４４４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。
特定のこのような実施形態では、参照抗体は、配列番号１６２の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
可溶性ｈＫ２の配列番号１１１、１１２、１１３、１１４、又は１１５に結合する試験抗体の結合についての本発明の参照抗体との競合は、周知の方法を用いてインビトロでアッセイすることができる。例えば、非標識参照抗体の存在下におけるｈＫ２に対する標識抗体のｈＫ２の膜近位領域への結合は、ＥＬＩＳＡ法によって評価してもよく、又はＢｉａｃｏｒｅ分析法若しくはフローサイトメトリーを用いて競合を実証してもよい。試験抗体が参照抗体の可溶性ｈＫ２への結合を８５％以上、例えば、９０％以上、又は９５％以上阻害するとき、試験抗体はｈＫ２への結合について参照抗体と競合する。
本開示は、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、単離タンパク質を提供する：
配列番号１３７の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１３７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６９のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号２０４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号２０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。特定の実施形態では、単離タンパク質は、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離タンパク質を提供する：
それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、７１；
それぞれ配列番号６３、６５、６６、６８、７０、７１；
それぞれ配列番号７２、７３、６６、６７、６９、７１；
それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１。
それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９；
それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、１８１；
それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３；又は
それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９。
特定の実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離タンパク質を提供する。
別の実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５の配列番号のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離タンパク質を提供する。
本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１３７、１６２、１６４、１６６、１６８、又は２０４のＶＨ及び配列番号１３８、１６３、１６５、１６７、又は１６９のＶＬを含む、単離タンパク質を提供する。
本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、単離タンパク質を提供する：
配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；又は
配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ。
特定の実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む、単離タンパク質を提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む、単離タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、例えば、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、例えば、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含む。
本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１３３、１３４、３０８、３１６、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９のアミノ酸配列を含む、単離タンパク質を提供する。特定の実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号４０４のアミノ酸配列を含む、単離タンパク質を提供する。
別の実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号４０５のアミノ酸配列を含む、単離タンパク質を提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む、単離タンパク質を提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む、単離タンパク質を提供する。
本開示はまた、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号７５の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号７４の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離タンパク質を提供する。配列番号７５及び配列番号７４は、親抗体ｈｕ１１Ｂ６と比較した場合、改善された熱安定性を示すバリアントを包含する属ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を表す。改善された熱安定性を付与した遺伝子操作される位置は、ＶＨにおける残基Ｐ４１、Ｉ４９、Ｍ７０、及びＡ８８（配列番号５のｈｕ１１Ｂ６＿ＶＨに従う残基付番）並びにＶＬにおけるＳ８０、Ｌ８２、Ａ８８、及びＹ９１（配列番号２のｈｕ１１Ｂ６＿ＶＬに従う残基付番）であった。
Figure 2022541332000001
Figure 2022541332000002
本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号４、５、６、１３９、１５９、又は１６１のＶＨ及び配列番号１、２、３、１４０、又は１６０のＶＬを含み、ただし、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号５のＶＨ及び配列番号２のＶＬの両方を含むことはない、単離タンパク質を提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、単離タンパク質を提供する：
配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；又は
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ。
本開示は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１３５、１３６、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、又は３２３のアミノ酸配列を含む、単離タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、（ｓｃＦｖ）２である。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｆｖである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｆａｂである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ’）２である。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｆｄである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２抗原結合ドメインは、ｄＡｂである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２抗原結合ドメインは、ＶＨＨである。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｆａｂである。
ｈＫ２結合ｓｃＦｖ
ｈＫ２に結合する本明細書で同定されたＶＨドメイン及びＶＬドメインのいずれも、ＶＨ－リンカー－ＶＬ又はＶＬ－リンカー－ＶＨ配向のいずれのｓｃＦｖフォーマットにも遺伝子操作され得る。また、本明細書で同定されたＶＨ及びＶＬドメインのいずれも、例えば以下のｓｃ（Ｆｖ）２構造を作製するために使用され得る：ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ、ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ。ＶＨ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＬ。ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ。ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ、又はＶＬ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－リンカー－ＶＨ。
本明細書で同定されたＶＨ及びＶＬドメインは、ｓｃＦｖフォーマットに組み込むことができ、得られたｓｃＦｖのｈＫ２への結合及び熱安定性は、既知の方法を使用して評価することができる。結合は、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６、Ｂｉａｃｏｒｅ３０００、若しくはＫｉｎＥｘＡ機器、ＥＬＩＳＡ、又は当業者に公知の競合的結合アッセイを使用して評価することができる。結合は、精製されたｓｃＦｖ又は大腸菌上清又は発現したｓｃＦｖを含有する溶解細胞を使用して評価することができる。試験ｓｃＦＶのｈＫ２に対する親和性の測定値は、異なる条件（例えば、モル浸透圧濃度、ｐＨ）下で測定した場合に異なり得る。したがって、親和性及び他の結合パラメータ（例えば、ＫＤ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ）の測定は、典型的には、標準化条件及び標準化バッファを用いて行われる。熱安定性は、５０℃、５５℃、又は６０℃などの高温で、５分（ｍｉｎ）、１０分、１５分、２０分、２５分、又は３０分などの期間、試験ｓｃＦｖを加熱し、当該試験ｓｃＦｖのｈＫ２への結合を測定することによって、評価することができる。非加熱ｓｃＦｖサンプルと比較したときに、ｈＫ２と同等の結合を保持しているｓｃＦｖが、熱安定性であると称される。
組み換え発現系において、リンカーはペプチドリンカーであり、任意の天然に存在するアミノ酸を含み得る。リンカーに含まれ得る例示的なアミノ酸は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ及びＴｈｅである。リンカーは、ｈＫ２への結合などの所望の活性を保持するように、互いに対して正確な高次構造を形成するような方法でＶＨ及びＶＬを連結させるのに適切な長さを有している必要がある。
リンカーは、約５～５０個のアミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～４０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～３５個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～３０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～２５個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１０～２０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは、約１５～２０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは６個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは７個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは８個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは９個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１１個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１２個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１３個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１４個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１５個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１６個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１７個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１８個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは１９個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２１個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２２個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２３個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２４個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２５個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２６個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２７個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２８個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは２９個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３０個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３１個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３２個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３３個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３４個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３５個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３６個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３７個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３８個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは３９個のアミノ酸長である。いくつかの実施形態では、リンカーは４０個のアミノ酸長である。使用され得る例示的なリンカーは、Ｇｌｙリッチリンカー、Ｇｌｙ及びＳｅｒ含有リンカー、Ｇｌｙ及びＡｌａ含有リンカー、Ａｌａ及びＳｅｒ含有リンカー、並びに及び他の柔軟なリンカーである。
他のリンカー配列は、免疫グロブリン重鎖又は軽鎖アイソタイプに由来する免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＬ又はＣＨ１の部分を含み得る。あるいは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーを含む様々な非タンパク質性ポリマーを、リンカーとして利用してもよい。使用され得る例示的なリンカーを表１に示す。追加のリンカーは、例えば、国際公開第２０１９／０６０６９５号に記載されている。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）、及びＶＬを含む（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、Ｌ１、及びＶＨを含む（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
Figure 2022541332000003
特定の実施形態では、Ｌ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含むか又はからなる。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、以下を含む
配列番号１３７の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１６８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６９のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号２０４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号２０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は配列番号１３９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１４０のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む
それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、７１；
それぞれ配列番号６３、６５、６６、６８、７０、７１；
それぞれ配列番号７２、７３、６６、６７、６９、７１；
それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１。
それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９；
それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、１８１；
それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３；又は
それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１８２、４７０、及び２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６８、７０、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、それぞれ配列番号７２、７３、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３７のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１３８のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６４のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６５のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６６のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６７のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６８のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６９のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０４のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号２０５のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１５９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６１のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１５９のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１４０のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、例えば、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、例えば、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３３、１３４、３０８、３１６、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３３、１３４、３０８、３１６、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号７５のＶＨ及び配列番号７４のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号４、５、又は６のＶＨ及び配列番号１、２、又は３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号４、５、６、１３９、１５９、又は１６１のＶＨ及び配列番号１、２、３、１４０、又は１６０のＶＬを含み、ただし、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５のＶＨ及び配列番号２のＶＬの両方を含むことはない。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３１８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３１９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２３のアミノ酸配列を含む。
ｈＫ２に結合する他の抗原結合ドメイン
ｈＫ２に結合する本明細書で同定されたＶＨドメイン及びＶＬドメインのいずれも、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、又はＦｖフォーマットに遺伝子操作することができ、それらのｈＫ２への結合及び熱安定性は、本明細書に記載のアッセイを使用して評価することができる。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、以下を含む
配列番号１３７の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
配列番号１６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
配列番号１６８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６９のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
又は配列番号２０４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号２０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。
特定の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む
それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、７１；
それぞれ配列番号６３、６５、６６、６８、７０、７１；
それぞれ配列番号７２、７３、６６、６７、６９、７１；
それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１；
それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９；
それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、１８１；
それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３；又は
それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、Ｆａｂは、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５、又はそれぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号７５のＶＨ及び配列番号７４のＶＬを含む。
特定の実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、例えば、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、例えば、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３７のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１３８のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６４のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６５のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６６のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６７のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６８のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６９のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０４のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号２０５のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号４、５、６、１３９、１５９、又は１６１のＶＨ及び配列番号１、２、３、１４０、又は１６０のＶＬを含み、ただし、Ｆａｂは、配列番号５のＶＨ及び配列番号２のＶＬの両方を含むことはない。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＦａｂのＶＨ及びＶＬは、それぞれＦａｂ－Ｆｃ ＨＣ（ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）及びＦａｂ－Ｆｃ ＬＣ（ＶＬ－ＣＬ）フォーマットに遺伝子操作され得る。特定のこのような実施形態では、Ｆａｂ－Ｆｃ ＬＣは、配列番号３５４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｆａｂ－Ｆｃ ＨＣは、配列番号３５４と同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂ－Ｆｃ ＨＣは、Ｃ末端リジン残基（例えば、Ｋ４７７）を含む。いくつかの実施形態では、Ｆａｂ－Ｆｃ ＨＣは、Ｃ末端リジン残基を有するアミノ酸配列、及び配列番号３６１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一である配列を含む。特定の実施形態では、Ｆａｂ－Ｆｃ ＨＣは、配列番号３６１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆａｂ－Ｆｃ ＬＣは、配列番号２２１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、Ｆａｂ－Ｆｃ ＬＣは、配列番号２２１と同一であるアミノ酸配列を含む。
実施例に示されるように、多重特異性コンストラクトに組み込むためのｈＫ２に結合する特に好適な抗原結合ドメインは、配列番号３５４のアミノ酸配列を有するＦａｂ－Ｆｃ ＨＣ及び配列番号２２１のアミノ酸配列を有するＦａｂ－Ｆｃ ＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、以下を含む
配列番号１３７の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
配列番号１６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
配列番号１６８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６９のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
又は配列番号２０４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号２０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。
いくつかの実施形態ではＦ（ａｂ’）２は、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む
それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１；
それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９；
それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、１８１；
それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３；又は
それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号１７０，１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号７５のＶＨ及び配列番号７４のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号４、５、６、１３９、１５９、又は１６１のＶＨ及び配列番号１、２、３、１４０、又は１６０のＶＬを含み、ただし、Ｆａｂは、配列番号５のＶＨ及び配列番号２のＶＬの両方を含むことはない。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆ（ａｂ’）２は、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、以下を含む
配列番号１３７の重鎖可変領域（ＶＨ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８の軽鎖可変領域（ＶＬ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
配列番号１６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；
配列番号１６８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６９のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
又は配列番号２０４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号２０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む
それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１；
それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９；
それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、１８１；
それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３；又は
それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号７５のＶＨ及び配列番号７４のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号４、５、又は６のＶＨ及び配列番号１、２、又は３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号４、５、６、１３９、１５９、又は１６１のＶＨ及び配列番号１、２、３、１４０、又は１６０のＶＬを含み、ただし、Ｆａｂは、配列番号５のＶＨ及び配列番号２のＶＬの両方を含むことはない。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号２のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｖは、配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、配列番号７５のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、配列番号４のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、配列番号５のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｄは、配列番号６のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１０のＨＣ及び配列番号２２１のＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１１のＨＣ及び配列番号２２２のＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１２のＨＣ及び配列番号２２３のＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１３のＨＣ及び配列番号２２４のＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２１９のＨＣ及び配列番号２２０のＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３５４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＨＣ及び配列番号２２１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３５４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＨＣ及び配列番号２２１のＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３５４のＨＣ及び配列番号２２１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３５４と少なくとも９５％同一であるＨＣ及び配列番号２２１と少なくとも９５％同一であるＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３５４と少なくとも９９％同一であるＨＣ及び配列番号２２１と少なくとも９５％同一であるＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３５４と少なくとも９９％同一であるＨＣ及び配列番号２２１と少なくとも９９％同一であるＬＣを含む。
いくつかの実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３５４と少なくとも９５％同一であるＨＣ及び配列番号２２１と少なくとも９９％同一であるＬＣを含む。
特定の実施形態では、単離抗ｈＫ２抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３５４のＨＣ及び配列番号２２１のＬＣを含む。
相同な抗原結合ドメイン及び保存的置換を有する抗原結合ドメイン
ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインのバリアントは、本開示の範囲内である。例えば、バリアントは、親抗原結合ドメインと比較したときに改善された機能的性質を保持するか又は有する限り、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、又は２９個のアミノ酸置換を含んでいてよい。いくつかの実施形態では、配列同一性は、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインに対して約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％であってよい。いくつかの実施形態では、多様性はフレームワーク領域に存在する。いくつかの実施形態では、バリアントは保存的置換により生成される。
例えば、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、ＶＨにおける残基位置Ｄ１６、Ａ２３、Ｐ４１、Ｇ４５、Ｉ４９、Ｍ７０、及びＡ８８、及びＶ８９（配列番号５のｈｕ１１Ｂ６＿ＶＨに従う残基付番）並びにＶＬにおけるＤ１、Ｄ９、Ｓ１０、Ａ１２、Ｖ１３、Ｌ１５、Ｉ２１、Ｎ２２、Ｋ２４、Ｋ４９、Ｒ５８、Ｖ６２、Ｄ６４、Ｓ８０、Ｌ８２、Ｑ８３、Ａ８４、Ｖ８７、Ａ８８、Ｙ９１、Ｑ１０４、及びＬ１０８（配列番号２のｈｕ１１Ｂ６＿ＶＬに従う残基付番）に置換を含んでいてよい。保存的置換は、任意の指定の位置で行うことができ、得られたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインのバリアントを、本明細書に記載のアッセイで所望の特性について試験する。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質は、本明細書に開示されるｈＫ２に結合する抗原結合ドメインのＶＨ及びＶＬとそれぞれ少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及びＶＬを含む。
また、以下と少なくとも８０％同一であるＶＨ及びＶＬを含む、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインも提供される
配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；又は
配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ。
いくつかの実施形態では、同一性は、８５％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９０％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９１％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９１％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９２％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９３％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９４％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９４％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９５％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９６％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９７％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９８％である。いくつかの実施形態では、同一性は、９９％である。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１３７のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１３８のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６４のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６５のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６６のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６７のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６６のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号４４４のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６８のＶＨと少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６９のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号２０４のＶＨと少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号２０５のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８５％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９０％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９１％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９２％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９３％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９４％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９６％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９７％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９８％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８５％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９０％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９１％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９２％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９３％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９４％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９６％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９７％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９８％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。
２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮した、配列により共有される同一の位置の数の関数である（即ち、同一性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）。
２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ ４：１１－１７（１９８８））を使用し、ＰＡＭ１２０重み付け残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用して求めることができる。更に、２つのアミノ酸又は核酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ＿／／＿ｗｗｗ＿ｇｃｇ＿ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３（１９７０））を使用し、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリクス又はＰＡＭ２５０マトリクス、及びギャップ重み付け１６、１４、１２、１０、８、６、又は４、及び長さ重み付け１、２、３、４、５、又は６を使用して求めることもできる。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインのバリアントは、ｈＫ２に結合する親抗原結合断片の所望の機能的特性を保持しながら、ＣＤＲ領域のいずれかに１つ又は２つの保存的置換を含む。
「保存的修飾」とは、アミノ酸修飾を含む抗体の結合特性に大きな影響を与えることも変化させることもないアミノ酸修飾を指す。保存的修飾は、アミノ酸の置換、付加、及び欠失を含む。保存的アミノ酸置換は、あるアミノ酸が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基に置き換えられる置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、明確に定義されており、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン、トリプトファン）、芳香族側鎖（例えば、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシン）、脂肪族側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン）、アミド（例えば、アスパラギン、グルタミン）、β分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び含硫黄側鎖（システイン、メチオニン）を有するアミノ酸を含む。更に、アラニンスキャニング変異誘発について以前に説明されているように（ＭａｃＬｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｓｃａｎｄ Ｓｕｐｐｌ ６４３：５５－６７、Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ａｄｖ Ｂｉｏｐｈｙｓ ３５：１－２４）、ポリペプチド内のいずれの天然残基もアラニンで置換され得る。本発明の抗体に対するアミノ酸置換は、既知の方法、例えばＰＣＲ突然変異誘発（米国特許第４，６８３，１９５号）により行うことができる。あるいは、バリアントのライブラリは、例えば、ランダムコドン（ＮＮＫ）又は非ランダムコドン（例えば１１個のアミノ酸（Ａｌａ、Ｃｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）をコードするＤＶＫコドン）を用いて生成することもできる。得られるバリアントは、本明細書に記載のアッセイを用いて、その特徴について試験することができる。
ｈＫ２に結合する抗原結合断片を作製する方法
本開示で提供されるｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、様々な技術を使用して作製することができる。例えば、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎのハイブリドーマ法を使用して、ｈＫ２に結合するＶＨ／ＶＬ対を同定することができる。ハイブリドーマ法では、マウス又は他の宿主動物、例えば、ハムスター、ラット、若しくはニワトリを、ヒト及び／又はカニクイザルｈＫ２で免疫し、続いて、標準的な方法を用いて骨髄腫細胞で免疫した動物の脾臓細胞を融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する。１個の不死化したハイブリドーマ細胞から生じたコロニーを、結合特異性、交差反応性又はその欠如、抗原に対する親和性、及び任意の所望の機能性などの所望の特性を有するｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含有する抗体の生成についてスクリーニングしてよい。
非ヒト動物を免疫することによって生成されたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインをヒト化してもよい。ヒトアクセプタフレームワークの選別を含む例示的なヒト化技術としては、ＣＤＲグラフト化（米国特許第５，２２５，５３９号）、ＳＤＲグラフト化（米国特許第６，８１８，７４９号）、リサーフェシング（Ｐａｄｌａｎ，（１９９１）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８：４８９－４９９）、特異性決定残基のリサーフェシング（米国特許出願公開第２０１０／０２６１６２０号）、ヒトフレームワーク適応（米国特許第８，７４８，３５６号）、又は超ヒト化（米国特許第７，７０９，２２６号）が挙げられる。これらの方法では、ＣＤＲの長さの類似性若しくはカノニカル構造の同一性、又はこれらの組み合わせに基づいて、親フレームワークに対する全体的な相同性に基づき選択され得るヒトフレームワークに、親抗体のＣＤＲ又はＣＤＲ残基のサブセットを移植する。
ヒト化抗原結合ドメインは、国際公開第１０９０／００７８６１号及び同第１９９２／２２６５３号に記載されているものなどの技術により、変化させたフレームワーク支持残基を組み込んで結合親和性を保持することによって（復帰変異）、又はＣＤＲのいずれかに多様性を導入して、例えば抗原結合ドメインの親和性を改善することによって、所望の抗原に対するその選択性又は親和性を改善するように更に最適化してもよい。
自身のゲノムにヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座を保有するマウス、ラット、又はニワトリなどのトランスジェニック動物を使用して、ｈＫ２に結合する抗原結合断片を作製することができ、これらは例えば、米国特許第６，１５０，５８４号、国際公開第１９９９／４５９６２号、同第２００２／０６６６３０号、同第２００２／４３４７８号、同第２００２／０４３４７８号、及び同第１９９０／０４０３６号に記載されている。このような動物の内在的な免疫グロブリン遺伝子座を破壊又は欠失させてもよく、相同又は非相同組み換えを使用して、導入染色体（transchromosome）を使用して、又はミニ遺伝子を使用して、少なくとも１つの完全な又は部分的なヒト免疫グロブリン遺伝子座を動物のゲノムに挿入してもよい。Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ＿ｃｏｍ）、Ｈａｒｂｏｕｒ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｈａｒｂｏｕｒａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ＿ｃｏｍ）、Ｏｐｅｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（ＯＭＴ）（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｏｍｔｉｎｃ＿ｎｅｔ）、ＫｙＭａｂ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ｏｍｔｉｎｃ＿ｎｅｔ）、Ｔｒｉａｎｎｉ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ．ｔｒｉａｎｎｉ＿ｃｏｍ）、及びＡｂｌｅｘｉｓ（ｈｔｔｐ：／／＿ｗｗｗ＿ａｂｌｅｘｉｓ＿ｃｏｍ）などの企業は、上記の技術を使用して、選択抗原を標的としたヒト抗体を提供するべく取り組んでいる場合がある。いくつかの実施形態では、Ａｂｌｅｘｉｓマウス及びＯｍｎｉＲａｔラットを可溶性完全長ＫＬＫ２タンパク質（ヒトカリクレイン－２ ６－Ｈｉｓタンパク質）（配列番号４５４）で免疫した。
ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、ヒト免疫グロブリン又はその一部、例えばＦａｂ、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、又は不対若しくは対合抗体可変領域を発現するようにファージが遺伝子操作されているファージディスプレイライブラリから選択することができる。ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、例えば、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６及び国際公開第０９／０８５４６２号）に記載されているバクテリオファージｐＩＸコートタンパク質との融合タンパク質として抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を発現するファージディスプレイライブラリから単離することができる。ライブラリを、ヒト及び／又はカニクイザルｈＫ２へのファージ結合についてスクリーニングしてよく、得られた陽性クローンを更に特性評価し、クローン溶解物からＦａｂを単離し、ｓｃＦＶ又は抗原結合断片の他の構成に変換してよい。
免疫原性抗原の調製並びに本開示の抗原結合ドメインの発現及び生成は、組み換えタンパク質生成などの任意の好適な技術を用いて実施することができる。免疫原性抗原は、精製タンパク質、あるいは全細胞又は細胞若しくは組織抽出物を含むタンパク質混合物の形態で動物に投与されてもよく、あるいは、抗原は、当該抗原又はその一部分をコードしている核酸から動物の体内で新規に（de novo）形成されてもよい。
半減期延長部分へのコンジュゲーション
本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、半減期延長部分にコンジュゲートさせてもよい。例示的な半減期延長部分は、アルブミン、アルブミンバリアント、アルブミン結合タンパク質及び／又はドメイン、トランスフェリン並びにその断片及び類似体、免疫グロブリン（Ｉｇ）又はその断片、例えばＦｃ領域である。前述の半減期延長部分のアミノ酸配列は公知である。Ｉｇ又はその断片は、全てのアイソタイプ、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む。
本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインにコンジュゲートされ得る追加の半減期延長部分としては、所望の特性のための、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子、例えば、ＰＥＧ５０００又はＰＥＧ２０，０００、異なる鎖長の脂肪酸及び脂肪酸エステル、例えば、ラウリン酸エステル、ミリスチン酸エステル、ステアリン酸エステル、アラキジン酸エステル、ベヘン酸エステル、オレイン酸エステル、アラキドン酸エステル、オクタン二酸、テトラデカン二酸、オクタデカン二酸、ドコサン二酸など、ポリリジン、オクタン、炭水化物（デキストラン、セルロース、オリゴ糖又は多糖類）が挙げられる。これら部分は、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインと直接融合させてよく、標準的なクローニング及び発現技術によって作製してよい。あるいは、周知の化学的カップリング方法を用いて、組み換えで生成された本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインにその部分を結合させてもよい。
例えば、システイン残基を本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインのＣ末端に組み込むか、又は遺伝子操作してシステインをｈＫ２結合部位から離れる方向に面する残基位置にし、周知の方法を用いてペギル基をシステインに結合させることによって、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインにペギル部分をコンジュゲートさせることができる。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合断片は、半減期延長部分にコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、Ｉｇの断片、Ｉｇ定常領域、Ｉｇ定常領域の断片、Ｆｃ領域、トランスフェリン、アルブミン、アルブミン結合ドメイン、又はポリエチレングリコールである。いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｉｇ定常領域である。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｉｇである。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｉｇの断片である。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｉｇ定常領域である。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｉｇ定常領域の断片である。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、Ｆｃ領域である。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、アルブミンである。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、アルブミン結合ドメインである。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、トランスフェリンである。
いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、ポリエチレングリコールである。
半減期延長部分にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、公知のインビボモデルを利用してその薬物動態特性について評価することができる。
免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又はＩｇ定常領域の断片へのコンジュゲーション
本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートして、Ｆｃエフェクター機能Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貪食作用、又は細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）のダウンレギュレーションを含む、抗体様特性を付与することができる。Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片はまた、本明細書で論じられるように、半減期延長部分としても機能する。本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、標準的な方法を使用して遺伝子操作して従来の完全長抗体にすることができる。ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む完全長抗体は、本明細書に記載の通り、更に遺伝子操作されてもよい。
免疫グロブリン重鎖定常領域は、サブドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３で構成される。ＥＵインデックスに従う残基付番で、重鎖においてＣＨ１ドメインは残基Ａ１１８～Ｖ２１５に及び、ＣＨ２ドメイン残基はＡ２３１～Ｋ３４０に及び、ＣＨ３ドメイン残基Ｇ３４１～Ｋ４４７に及ぶ。いくつかの例では、Ｇ３４１は、ＣＨ２ドメイン残基と称される。ヒンジは、概して、Ｅ２１６を含み、ヒトＩｇＧ１のＰ２３０で終結すると定義される。Ｉｇ Ｆｃ領域は、Ｉｇ定常領域の少なくともＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含み、したがって、Ｉｇ重鎖定常領域の少なくともおよそＡ２３１からＫ４４７までの領域を含む。
本発明はまた、免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを提供する。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域は、重鎖定常領域である。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域は、軽鎖定常領域である。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、Ｆｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む。ヒンジの一部は、Ｉｇヒンジの１つ以上のアミノ酸残基を指す。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＮ末端にコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のＣ末端にコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、第２のリンカー（Ｌ２）を介してＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号７、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、又は１０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号９７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートした本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、いくつかの既知のアッセイを使用してその機能性について評価することができる。ｈＫ２への結合は、本明細書に記載の方法を使用して評価することができる。Ｉｇ定常ドメイン又はＩｇ定常領域の断片、例えばＦｃ領域によって付与される変化した特性は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、若しくはＦｃＲｎ受容体などの受容体の可溶性形態を使用するＦｃ受容体結合アッセイにおいて、又は例えばＡＤＣＣ、ＣＤＣ、若しくはＡＤＣＰを測定する細胞ベースのアッセイを使用して、アッセイすることができる。
ＡＤＣＣは、ｈＫ２発現細胞を標的細胞として、そしてＮＫ細胞をエフェクター細胞として使用するインビトロアッセイを用いて評価することができる。細胞溶解は、溶解した細胞からの標識（例えば、放射性基質、蛍光染料、又は天然の細胞内タンパク質）の放出によって検出することができる。例示的なアッセイでは、標的細胞を、標的細胞１に対してエフェクター細胞４の比で使用する。標的細胞はＢＡＴＤＡで予め標識し、エフェクター細胞及び試験抗体と組み合わせる。サンプルを２時間インキュベートし、上清に放出したＢＡＴＤＡを測定することにより、細胞溶解を測定した。０．６７％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）による最大の細胞傷害に対してデータを正規化し、また任意の抗体の非存在下における標的細胞からのＢＡＴＤＡの自然放出によって最小対照を求める。
ＡＤＣＰは、単球由来マクロファージをエフェクター細胞として、そして、ＧＦＰ又は他の標識分子を発現するように遺伝子操作された任意のｈＫ２発現細胞を標的細胞として使用することによって評価することができる。例示的なアッセイでは、エフェクター：標的細胞比は、例えば４：１とすることができる。エフェクター細胞は、本発明の抗体を添加し又は添加せずに、標的細胞と共に４時間インキュベートしてよい。インキュベーション後、細胞は、アクターゼを用いて剥離できる。マクロファージは、蛍光標識に結合した抗ＣＤ１１ｂ抗体及び抗ＣＤ１４抗体により識別され得、貪食作用パーセントは、標準的な方法を用いて、ＣＤ１１＋及びＣＤ１４＋マクロファージにおけるＧＦＰ蛍光の割合（％）に基づいて決定され得る。
細胞のＣＤＣは、例えば、ダウディ細胞をＲＰＭＩ－Ｂ（１％のＢＳＡを補給したＲＰＭＩ）に１×１０５細胞／ウェル（５０μＬ／ウェル）でプレーティングし、５０μＬの試験タンパク質を０～１００μｇ／ｍＬの最終濃度でウェルに添加し、反応物を室温で１５分間インキュベートし、１１μＬのプールしたヒト血清をウェルに添加し、反応物を３７℃で４５分間インキュベートすることによって測定することができる。溶解した細胞の百分率（％）は、標準法を使用して、ＦＡＣＳアッセイにおけるヨウ化プロピジウム染色細胞の％として検出され得る。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、ＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ１重鎖定常領域の断片にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１１０と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ１重鎖定常領域の断片（例えば、ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を含む）にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１重鎖定常領域は、Ｆｃサイレンシング変異（Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ）及び選択的ヘテロ二量体化を促進するように設計されたＴ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ変異を含む。いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号１１０のアミノ酸配列を有するＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ１重鎖定常領域の断片にコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号３７８のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＩｇＧ１重鎖定常領域（例えば、ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）にコンジュゲートされる。特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号３７８のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１重鎖定常領域又はＩｇＧ１重鎖定常領域の断片にコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号３０９と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含むＩｇＧ１軽鎖定常領域にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号４４７と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＩｇＧ１軽鎖定常領域にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号３０９又は４４７と同一であるアミノ酸配列を含むＩｇＧ１軽鎖定常領域にコンジュゲートされる。特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含むＩｇＧ１軽鎖定常領域にコンジュゲートされる。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、配列番号３７８のアミノ酸配列を含むＩｇＧ１重鎖定常領域にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン及び配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含むＩｇＧ１軽鎖定常領域にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン、及び配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片を含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン、及び配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片を含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメイン、及び配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片を含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含み、当該単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメインと、配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片とを更に含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメインであって、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含み、当該単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメインであって、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片とを更に含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメインであって、配列番号３３１のアミノ酸配列を含む、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメイン、及び配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片を含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含み、当該単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメインであって、配列番号３３１のアミノ酸配列を含む、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片とを更に含む。
本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質
本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、標準的な方法を使用して様々な設計の単一特異性又は多重特異性タンパク質に遺伝子操作され得る。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する単離抗原結合ドメインを含む単一特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単一特異性タンパク質は、抗体である。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、多重特異性タンパク質は、二重特異性である。
いくつかの実施形態では、多重特異性タンパク質は、三重特異性である。
いくつかの実施形態では、多重特異性タンパク質は、四重特異性である。
いくつかの実施形態では、多重特異性タンパク質は、ｈＫ２への結合について一価である。
いくつかの実施形態では、多重特異性タンパク質は、ｈＫ２への結合について二価である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及びリンパ球抗原（ＣＤ３など）に結合する第２の抗原結合ドメインを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、Ｔ細胞抗原である。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞抗原は、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗原である。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＮＫ細胞抗原である。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、又はＮＫＧ２Ｃである。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３ε．である。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
いくつかの実施形態では、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、二重特異性である。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ、又はＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ’）２を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ’）２を含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ’）２を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆｖを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、Ｆｖを含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆｖを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆｄを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、Ｆｄを含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆｄを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含む。
特定の実施形態では、多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインがＦａｂを含み、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメインがｓｃＦｖを含む二重特異性である。
いくつかの実施形態では、結合する第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含む。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ’を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、Ｆａｂ’を含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆｖを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、ｄＡｂを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｄＡｂを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、Ｆｄを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、Ｆｖを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、Ｆｄを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）、及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）、又はＶＬ、Ｌ１、及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、約５～５０個のアミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、約５～４０個のアミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、約１０～３０個のアミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、約１０～２０個のアミノ酸を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号７、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、又は１０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１００のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ１は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、Ｌ１は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号６３、７２、１４１、１４７、１７０、１７６、１８８、１９４、１９６、１９８、２００、２０６、又は２１６のＨＣＤＲ１、配列番号６４、６５、７３、１４２、１４８、１７１、１７７、１８８、１８９、１９５、１９７、１９９、２０１、２０７、又は２１７のＨＣＤＲ２、配列番号６６、１４３、１７２、１７８、１８４、１９０、２０８、又は２１８のＨＣＤＲ３、配列番号６７、６８、１４４、１７３、１７９、１８２、１８５、又は１９１のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、１４５、１７４、１８０、１８６、１９２、又は４７０のＬＣＤＲ２、及び配列番号７１、１４６、１７５、１８１、１８７、１９３、又は２０９のＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む
それぞれ配列番号６３、６５、６６、６８、７０、及び７１；
それぞれ配列番号６３、６４、６６、６７、６９、及び７１；
それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１；
それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１；
それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、及び２０９；
それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号７２、７３、６６、６８、７０、及び７１；
それぞれ配列番号７２、７３、６６、６７、６９、及び７１；
それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１９０、及び１８１；
それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３；又は
それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５、又はそれぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、任意選択で、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、又はＮＫＧ２Ｃ、例えばＣＤ３であるリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメイン。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、任意選択で、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、又はＮＫＧ２Ｃ、例えばＣＤ３であるリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメイン。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号７５のＶＨ及び配列番号７４のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号７５のＶＨ及び配列番号７４のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、例えば、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、例えば、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含み、任意選択で、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、又はＮＫＧ２Ｃ、例えばＣＤ３であるリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメイン。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、任意選択で、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、又はＮＫＧ２Ｃ、例えばＣＤ３であるリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメイン。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含み、任意選択で、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、又はＮＫＧ２Ｃ、例えばＣＤ３であるリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメイン。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、任意選択で、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、又はＮＫＧ２Ｃ、例えばＣＤ３であるリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメイン。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４、５、６、１３９、１５９、又は１６１のＶＨ及び配列番号１、２、３、１４０、又は１６０のＶＬを含み、ただし、Ｆａｂは、配列番号５のＶＨ及び配列番号２のＶＬの両方を含むことはない。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４、５、又は６のＶＨ及び配列番号１、２、又は３のＶＬを含み、ただし、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号５のＶＨ及び配列番号２のＶＬの両方を含むことはない。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、以下を含む：
配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；又は
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインはは、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１３３、１３４、１３５、１３６、３０８、３１６、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３１６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３１８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３１９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３２０のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３２１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３２２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３２３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３２４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号３２５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０４のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０５のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０４又は４０５のアミノ酸配列を含む。本開示はまた、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインであって、配列番号２４８の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号１５７の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、リンパ球抗原に結合する抗原結合ドメインを提供する。配列番号２４８及び配列番号１５７は、親抗体ＣＤ３Ｂ８１５抗体の属ＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を表す。
ＶＬコンセンサス配列（配列番号１５７）
ＤＩＱＸ１ＴＱＳＰＸ２Ｘ３ＬＳＸ４ＳＸ５ＧＸ６ＲＶＸ７Ｘ８Ｘ９ＣＲＡＲＱＳＩＧＴＡＩＨＷＹＱＱＫＸ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３ＰＸ１４ＬＬＩＸ１５ＹＡＳＥＳＩＳＧＸ１６ＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＸ１７ＳＸ１８ＱＸ１９ＥＤＸ２０ＡＸ２１ＹＹＣＱＱＳＸ２２ＳＷＰＹＴＦＧＸ２３ＧＴＫＬＥＩＫ
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、以下を含む
配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６０のＬＣＤＲ３；又は
配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、以下を含む
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５０のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５２のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５３のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５４のＶＬ。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨと少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号２５１のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、例えば、配列番号２４８のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、例えば、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％同一であるＶＬを含む。
特定の実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、以下を含む
配列番号１１６のＨＣＤＲ１、配列番号１１７のＨＣＤＲ２、配列番号１１８のＨＣＤＲ３、配列番号１１９のＬＣＤＲ１、配列番号１２０のＬＣＤＲ２、及び配列番号１２１のＬＣＤＲ３；又は
配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬ。
特定の実施形態では、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む。
特定の実施形態ではｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２７５、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１のドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；又は
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２７５、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１のドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号４４４のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；又は
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号４４４のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる、及び／又はリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、第２の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域の断片は、Ｆｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域の断片は、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片との間、及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片との間に、第２のリンカー（Ｌ２）を更に含む。
いくつかの実施形態では、Ｌ２は、配列番号７、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、又は１０８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片、及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ２アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ３アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ４アイソタイプである。
特定の実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、本明細書に記載の通り更に遺伝子操作されてもよい。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片、及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、多重特異性タンパク質のＦｃγＲへの結合を低減する少なくとも１つの変異を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性タンパク質のＦｃγＲへの結合を低減する少なくとも１つの変異は、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番はＥＵインデックスに従う。特定の実施形態では、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片は、以下の変異：Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片、及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、多重特異性タンパク質のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）への結合を増強する少なくとも１つの変異を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性タンパク質のＦｃγＲへの結合を増強する少なくとも１つの変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番はＥＵインデックスに従う。
いくつかの実施形態では、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、若しくはＦｃγＲＩＩＩ、又はこれらの任意の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片、及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、多重特異性タンパク質の半減期を調節する少なくとも１つの変異を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性タンパク質の半減期を調節する少なくとも１つの変異は、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ、及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番はＥＵインデックスに従う。
いくつかの実施形態では、多重特異性タンパク質は、第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの変異を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの変異及び／又は第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの変異は、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番はＥＵインデックスに従う。特定の実施形態では、第１のＩｇ定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片は、以下の変異を含む：Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ及び／又は第２のＩｇ定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片は、以下の変異を含む：Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、以下の変異を含む：
第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ；又は
第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３５Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、以下の変異を含む：
第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ；又は
第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ及び第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片は、配列番号３７８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片は、配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片は、配列番号３０９と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片は、配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、配列番号１０９と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片は、配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、第１のＩｇ重鎖定常領域は、配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含み、第１のＩｇ軽鎖定常領域は、配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含み、第２のＩｇ定常領域は、配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン、及び配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片を含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン、及び配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片を含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメイン、及び配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片を含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含み、当該単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメインと、配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片とを更に含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメインであって、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含み、当該単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメインであって、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片とを更に含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメインであって、配列番号３３１のアミノ酸配列を含む、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメイン、及び配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片を含む。
特定の実施形態では、本明細書に開示される単離タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインであって、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む、ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと、（ｉ）配列番号３７８と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ重鎖定常領域又は第１のＩｇ重鎖定常領域の断片と、（ｉｉ）配列番号３０９と同一であるアミノ酸配列を含む第１のＩｇ軽鎖定常領域又は第１のＩｇ軽鎖定常領域の断片とを含み、当該単離タンパク質は、リンパ球抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する第２の抗原結合ドメインであって、配列番号３３１のアミノ酸配列を含む、リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと、配列番号１０９と同一であるアミノ酸配列を含む第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片とを更に含む。
ｈＫ２に結合する抗原結合断片を含む多重特異性タンパク質の作製
本開示のｈＫ２に結合する抗原結合断片は、多重特異性抗体に遺伝子操作してもよく、このような抗体も本発明の範囲内に包含される。
ｈＫ２に結合する抗原結合断片は、Ｆａｂアーム交換を使用して作製され、インビトロでＦａｂアーム交換を促進するＩｇ定常領域ＣＨ３ドメイン内の２つの単一特異性二価抗体に置換が導入されている完全長多重特異性抗体に遺伝子操作してもよい。この方法では、ヘテロ二量体の安定性を促進する特定の置換をＣＨ３ドメインに有するように、２つの単一特異性二価抗体を遺伝子操作する。これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合を異性化させるために十分な還元条件下において共にインキュベーションされ、それにより、Ｆａｂアーム交換により二重特異性抗体が生成される。インキュベート条件は、最適には、非還元条件に戻され得る。使用され得る代表的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン、及びβ－メルカプトエタノールであり、好ましくは、２－メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度で、少なくとも２５ｍＭの２－ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５～８、例えばｐＨ７．０又はｐＨ７．４で、少なくとも９０分間のインキュベートを用いることができる。
使用され得るＣＨ３変異としては、ノブインホール変異（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、静電的マッチ変異（Ｃｈｕｇａｉ、Ａｍｇｅｎ、ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ、Ｏｎｃｏｍｅｄ）、鎖交換遺伝子操作ドメインボディ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｄｕｏｂｏｄｙ（登録商標）変異（Ｇｅｎｍａｂ）、及び他の非対称変異（例えば、Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）などの技術が挙げられる。
ノブインホール変異は、例えば、国際公開第１９９６／０２７０１１号に開示されており、小さい側鎖（ホール）を有するアミノ酸が第１のＣＨ３領域に導入され、大きな側鎖（ノブ）を有するアミノ酸が第２のＣＨ３領域に導入され、第１のＣＨ３領域と第２のＣＨ３領域との間に優先的な相互作用をもたらす、ＣＨ３領域の界面上の変異が含まれる。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３領域変異は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである。
重鎖ヘテロ二量体形成は、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、同第２００９／０１８２１２７号、同第２０１０／０２８６３７号、又は同第２０１１／０１２３５３２号に記載のように、第１のＣＨ３領域上の正に荷電した残基及び第２のＣＨ３領域上の負に荷電した残基を置換することにより、静電相互作用を使用することによって促進され得る。
重鎖ヘテロ二量体化を促進するために使用することができる他の非対称変異は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は同第２０１３／０１９５８４９号（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）に記載のＬ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗである。
ＳＥＥＤボディ変異は、米国特許出願公開第２００７／０２８７１７０号に記載のように、選択されたＩｇＧ残基をＩｇＡ残基と置換して、重鎖ヘテロ二量体化を促進することを伴う。
使用され得る他の例示的な変異は、国際公開第２００７／１４７９０１号、国際公開第２０１１／１４３５４５号、国際公開第２０１３／１５７９５４号、国際公開第２０１３／０９６２９１号、及び米国特許出願公開第２０１８／０１１８８４９号に記載のＲ４０９Ｄ＿Ｋ３７０Ｅ／Ｄ３９９Ｋ＿Ｅ３５７Ｋ、Ｓ３５４Ｃ＿Ｔ３６６Ｗ／Ｙ３４９Ｃ＿Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｙ３４９Ｃ＿Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃ＿Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｋ／Ｌ３５１Ｄ、Ｌ３５１Ｋ／Ｙ３４９Ｅ、Ｌ３５１Ｋ／Ｙ３４９Ｄ、Ｌ３５１Ｋ／Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｋ３９２Ｄ／Ｄ３９９Ｋ、Ｋ３９２Ｄ／Ｅ３５６Ｋ、Ｋ２５３Ｅ＿Ｄ２８２Ｋ＿Ｋ３２２Ｄ／Ｄ２３９Ｋ＿Ｅ２４０Ｋ＿Ｋ２９２Ｄ、Ｋ３９２Ｄ＿Ｋ４０９Ｄ／Ｄ３５６Ｋ＿Ｄ３９９Ｋである。
Ｄｕｏｂｏｄｙ（登録商標）変異（Ｇｅｎｍａｂ）は、例えば、米国特許第９１５０６６３号及び米国特許出願公開第２０１４／０３０３３５６号に開示されており、Ｆ４０５Ｌ／Ｋ４０９Ｒ、野生型／Ｆ４０５Ｌ＿Ｒ４０９Ｋ、Ｔ３５０Ｉ＿Ｋ３７０Ｔ＿Ｆ４０５Ｌ／Ｋ４０９Ｒ、Ｋ３７０Ｗ／Ｋ４０９Ｒ、Ｄ３９９ＡＦＧＨＩＬＭＮＲＳＴＶＷＹ／Ｋ４０９Ｒ、Ｔ３６６ＡＤＥＦＧＨＩＬＭＱＶＹ／Ｋ４０９Ｒ、Ｌ３６８ＡＤＥＧＨＮＲＳＴＶＱ／Ｋ４０９ＡＧＲＨ、Ｄ３９９ＦＨＫＲＱ／Ｋ４０９ＡＧＲＨ、Ｆ４０５ＩＫＬＳＴＶＷ／Ｋ４０９ＡＧＲＨ、及びＹ４０７ＬＷＱ／Ｋ４０９ＡＧＲＨの変異が含まれる。
ｈＫ２に結合する抗原結合断片を組み込むことができる更なる二重特異性又は多重特異性構造としては、二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ）（国際公開第２００９／１３４７７６号；ＤＶＤは、ＶＨ１－リンカー－ＶＨ２－ＣＨ構造を有する重鎖と、ＶＬ１－リンカー－ＶＬ２－ＣＬ構造を有する軽鎖とを含む完全長抗体であり、リンカーは任意選択である）、ロイシンジッパー又はコラーゲン二量化ドメインなどの、異なる特異性を有する２つの抗体アームを結合するための様々な二量化ドメインを含む構造（国際公開第２０１２／０２２８１１号、米国特許第５，９３２，４４８号、米国特許第６，８３３，４４１号）、一緒にコンジュゲートされた２つ又は３つ以上のドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ、ラクダ科抗体及び操作されたラクダ科抗体などの重鎖のみ抗体、二重標的（ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、２ｉｎ１抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、架橋Ｍａｂ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸボディ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）、ＩｇＧ様二重特異性（ＩｎｎＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、及びＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）、ＳｃＦｖ／Ｆｃ融合体（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ、Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、二重親和性再標的技術（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及び二重（ＳｃＦｖ）２－Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ－－Ｃｈｉｎａ）、二重活性又はＢｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、二価二重特異性（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が含まれる。ＳｃＦｖ抗体、ダイアボディに基づく抗体、及びドメイン抗体には、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、タンデムダイアボディ（Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、二重親和性再標的技術（ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、一本鎖ダイアボディ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ様抗体（ＡＩＴ、ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、ヒト血清アルブミンＳｃＦｖ融合体（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的ナノボディ（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的重鎖のみのドメイン抗体が含まれるが、これらに限定されない。
本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインはまた、３本のポリペプチド鎖を含む多重特異性タンパク質に遺伝子操作してもよい。このような設計では、少なくとも１つの抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖの形態である。例示的な設計としては、以下が挙げられる（「１」は、第１の抗原結合ドメインを示し、「２」は、第２の抗原結合ドメインを示し、「３」は、第３の抗原結合ドメインを示す：
設計１：鎖Ａ）ｓｃＦｖ１－ＣＨ２－ＣＨ３；鎖Ｂ）ＶＬ２－ＣＬ；鎖Ｃ）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３
設計２：鎖Ａ）ｓｃＦｖ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３；鎖Ｂ）ＶＬ２－ＣＬ；鎖Ｃ）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３
設計３：鎖Ａ）ｓｃＦｖ１－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３；鎖Ｂ）ＶＬ２－ＣＬ；鎖Ｃ）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３
設計４：鎖Ａ）ＣＨ２－ＣＨ３－ｓｃＦｖ１；鎖Ｂ）ＶＬ２－ＣＬ；鎖Ｃ）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３
米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は同第２０１３／０１９５８４９号（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）に記載のように、変異Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４ＷなどのＣＨ３の遺伝子操作を設計１～４に組み込んでもよい。
特定の実施形態では、設計は、以下である、鎖Ａ）ｓｃＦｖ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３；鎖Ｂ）ＶＬ２－ＣＬ；鎖Ｃ）ＶＨ２－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（ＣＤ３など）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号６３、７２、１４１、１４７、１７０、１７６、１８８、１９４、１９６、１９８、２００、２０６、又は２１６のＨＣＤＲ１、配列番号６４、６５、７３、１４２、１４８、１７１、１７７、１８８、１８９、１９５、１９７、１９９、２０１、２０７、又は２１７のＨＣＤＲ２、配列番号６６、１４３、１７２、１７８、１８４、１９０、２０８、又は２１８のＨＣＤＲ３、配列番号６７、６８、１４４、１７３、１７９、１８２、１８５、又は１９１のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、１４５、１７４、１８０、１８６、１９２、又は４７０のＬＣＤＲ２、及び配列番号７１、１４６、１７５、１８１、１８７、１９３、又は２０９のＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む：
それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１；
それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、及び２０９；
それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１９０、及び１８１；
それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３；又は
それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３である。特定の実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５又はそれぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、以下を含む：
配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；又は
配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３である。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号７５のＶＨ及び配列番号７４のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３である。いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
特定の実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
特定の実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
特定の実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
特定の実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４、５、６、１３７、１３９、１５９、又は１６１のＶＨ及び配列番号１、２、３、１４０、又は１６０のＶＬを含み、ただし、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、配列番号５のＶＨ及び配列番号２のＶＬの両方を含むことはない。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３である。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、以下を含む：
配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；又は
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３である。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１３３、１３４、１３５、１３６、３０８、３１６、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原は、ＣＤ３である。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０４又は４０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原（例えばＣＤ３）に結合する第２の結合ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインは、配列番号４０４又は４０５のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２５５又は１１６のＨＣＤＲ１、配列番号２５６又は１１７のＨＣＤＲ２、配列番号２５７又は１１８のＨＣＤＲ３、又は配列番号２５８又は１１９のＬＣＤＲ１、配列番号２５９又は１２０のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６０、２６１、又は１２１のＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５７のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、以下を含む：
配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６０のＬＣＤＲ３；又は
配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、以下を含む：
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５０のＶＬ；
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬ；
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５２のＶＬ；
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５３のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５４のＶＬ。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨと少なくとも８０％（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＨ及び配列番号２５１のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＶＬを含む。
特定の実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、以下を含む：
配列番号１１６のＨＣＤＲ１、配列番号１１７のＨＣＤＲ２、配列番号１１８のＨＣＤＲ３、配列番号１１９のＬＣＤＲ１、配列番号１２０のＬＣＤＲ２、及び配列番号１２１のＬＣＤＲ３；又は
配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬ。
特定の実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインは、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、又は配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、リンパ球抗原に結合する、単離多重特異性タンパク質の第２の結合ドメインは、配列番号３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、又は３３７のアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、リンパ球抗原に結合する、単離多重特異性タンパク質の第２の結合ドメインは、配列番号３３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２７５、２５８、２５９、及び２６０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５１のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５１のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３４のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５２のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３４のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５２のＨＣ１、配列番号２５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３２５のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５３のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５４のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号４４４のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５５のＨＣ１、配列番号４４５のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５６のＨＣ１、配列番号２２２のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３２５のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５３のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３１６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５７のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３１６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５７のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３６１のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６２のＨＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２７５、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１のドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；又は
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２７５、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１のドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３リンパ球抗原に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３４のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３４のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３２５のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号４４４のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３２５のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３１６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３１６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む；又は
当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３４のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３４のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３２５のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号４４４のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３２５のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３１６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３１６のｓｃＦＶを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下を含む、単離タンパク質を提供する：
配列番号３５１のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２；
配列番号３５１のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２；
配列番号３５２のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２；
配列番号３５２のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２；
配列番号３５３のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２；
配列番号３５４のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２；
配列番号３５５のＨＣ１、配列番号２２３のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２；
配列番号３５６のＨＣ１、配列番号２２２のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２；
配列番号３５３のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２；
配列番号３５７のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２；
配列番号３５７のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２；又は
配列番号３６１のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６２のＨＣ２。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５１のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む、単離タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５１のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５２のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５２のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５３のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５４のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５５のＨＣ１、配列番号２２３のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５６のＨＣ１、配列番号２２２のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５３のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５７のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５７のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３６１のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６２のＨＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質である。
特定の実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該ＣＤ３に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５４のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、Ｆｃドメイン（すなわち、ＨＣ１及びＨＣ２ドメイン）の両方のＣ末端にリジン（例えば、Ｋ４７７）を含む。追加のリジンは、コンストラクトの発現を増強し得る。したがって、特定の実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、配列番号３６１のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６２のＨＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、以下である、単離多重特異性タンパク質を提供する：
当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該ＣＤ３に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
当該ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；並びに／又は
当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３６１のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６２のＨＣ２を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％同一であるＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも８０％同一であるｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８５％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８５％同一であるＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも８５％同一であるｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９０％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９０％同一であるＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも９０％同一であるｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも９５％同一であるｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも９９％同一であるｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも９５％同一であるｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも９９％同一であるｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも９５％同一であるｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも９９％同一であるｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９５％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９５％同一であるＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも９９％同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも９９％同一であるＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、当該ＣＤ３に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５４のＨＣ１と少なくとも８０％同一であるＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１と少なくとも８０％同一であるＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２と少なくとも８０％同一であるＨＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５４のＨＣ１と少なくとも８５％同一であるＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１と少なくとも８５％同一であるＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２と少なくとも８５％同一であるＨＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５４のＨＣ１と少なくとも９０％同一であるＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１と少なくとも９０％同一であるＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２と少なくとも９０％同一であるＨＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５４のＨＣ１と少なくとも９５％同一であるＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１と少なくとも９５％同一であるＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２と少なくとも９５％同一であるＨＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含む単離多重特異性タンパク質であって、配列番号３５４のＨＣ１と少なくとも９９％同一であるＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１と少なくとも９９％同一であるＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２と少なくとも９９％同一であるＨＣ２を含む、単離多重特異性タンパク質を提供する。
いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、Ｆｃドメイン（すなわち、ＨＣ１及びＨＣ２ドメイン）の両方のＣ末端にリジン（例えば、Ｋ４７７）を含む。したがって、いくつかの実施形態では、単離多重特異性タンパク質は、Ｃ末端リジンを含み、かつ配列番号３６１のＨＣ１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＨＣ１と、Ｃ末端リジンを含み、かつ配列番号３６２のＨＣ２と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％）同一であるＨＣ２とを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１１１及び配列番号１１２の配列を有するエピトープ内の３つ以上の残基でｈＫ２に結合する、単離多重特異性タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ＣＤ３に結合する抗原結合ドメインが、配列番号３４１、配列番号４４８、及び配列番号４４９の配列を有するエピトープ内の３つ以上の残基でＣＤ３に結合する、単離多重特異性タンパク質を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１１１及び配列番号１１２の配列を有するエピトープ内でｈＫ２に結合し、当該ＣＤ３に結合する抗原結合ドメインが、配列番号３４１、配列番号４４８、及び配列番号４４９の配列を有するエピトープ内でＣＤ３に結合する、単離多重特異性タンパク質を提供する。
アイソタイプ、アロタイプ、及びＦｃ遺伝子操作
本開示のタンパク質中に存在するＩｇ定常領域又はＦｃ領域などのＩｇ定常領域の断片は、任意のアロタイプ又はアイソタイプのものであってよい。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ１アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ２アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ３アイソタイプである。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、ＩｇＧ４アイソタイプである。
Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片は、任意のアロタイプのものであってよい。アロタイプは、結合又はＦｃ媒介性エフェクター機能などのＩｇ定常領域の特性に影響を与えないと予想される。Ｉｇ定常領域のその断片を含む治療用タンパク質の免疫原性は、輸注反応のリスク増大及び治療応答の期間短縮に関連している（Ｂａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４８：６０２－０８）。Ｉｇ定常領域のその断片を含む治療用タンパク質が宿主において免疫応答を誘導する程度は、Ｉｇ定常領域のアロタイプによって部分的に決定され得る（Ｓｔｉｃｋｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １２：２１３－２１）。Ｉｇ定常領域のアロタイプは、抗体の定常領域配列における特定の位置のアミノ酸配列の多様性に関連する。表２は、選択ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４アロタイプを示す。
Figure 2022541332000004
特定の実施形態では、Ｉｇ定常領域のアロタイプは、ｈｕＩｇＧ１＿Ｇ１ｍ（１７）である。
Ｃ末端リジン（C-terminal lysine、ＣＴＬ）は、血流中の内因性循環カルボキシペプチダーゼによってＩｇ定常領域から除去され得る（Ｃａｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ １０８：４０４－４１２）。製造中、米国特許出願公開第２０１４０２７３０９２号に記載のとおり、細胞外Ｚｎ２＋、ＥＤＴＡ、又はＥＤＴＡ－Ｆｅ３＋の濃度を制御することによって、ＣＴＬの除去を最高レベル未満に制御することができる。タンパク質のＣＴＬ含有量は、既知の方法を使用して測定することができる。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合断片は、約１０％～約９０％のＣ末端リジン含有量を有する。いくつかの実施形態では、Ｃ末端リジン含有量は約２０％～約８０％である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端リジン含有量は約４０％～約７０％である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端リジン含有量は約５５％～約７０％である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端リジン含有量は約６０％である。
Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインに対してＦｃ領域変異を行って、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及び／若しくはＡＤＣＰなどのエフェクター機能、並びに／又は薬物動態特性を調節することができる。このことは、変異をＦｃに導入して、変異Ｆｃの、活性化ＦｃγＲｓ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩ）、阻害性ＦｃγＲＩＩｂ、及び／又はＦｃＲｎへの結合を制御することにより達成可能である。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片に少なくとも１つの変異を含む。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの変異は、Ｆｃ領域にある。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｆｃ領域に少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個の変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、抗体のＦｃＲｎへの結合を調節するＦｃ領域における少なくとも１つの変異を含む。
半減期（例えば、ＦｃＲｎへの結合）を調節するために変異させることが可能なＦｃの位置としては、位置２５０、２５２、２５３、２５４、２５６、２５７、３０７、３７６、３８０、４２８、４３４、及び４３５が挙げられる。単独で、又は組み合わせで行われることができる例示的な変異は、変異Ｔ２５０Ｑ、Ｍ２５２Ｙ、Ｉ２５３Ａ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｐ２５７Ｉ、Ｔ３０７Ａ、Ｄ３７６Ｖ、Ｅ３８０Ａ、Ｍ４２８Ｌ、Ｈ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ｓ、Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、Ｈ４３５Ａ、及びＨ４３５Ｒである。半減期を延長するために行うことができる例示的な単独又は組み合わせの変異は、変異Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ、Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ａ、及びＴ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａである。半減期を短縮するために行うことができる例示的な単独又は組み合わせの変異は、変異Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ、及びＨ４３５Ｒである。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、タンパク質の活性化Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）への結合を低減する、及び／又はＣ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、若しくは貪食作用（ＡＤＣＰ）などのＦｃエフェクター機能を低下させる、Ｆｃ領域における少なくとも１つの変異を含む。
タンパク質の活性化ＦｃγＲへの結合を低下させ、続いて、エフェクター機能を低下させるために変異させることが可能なＦｃ位置としては、位置２１４、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２６５、２６７、２６８、２７０、２９５、２９７、３０９、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、及び３６５が挙げられる。単独で、又は組み合わせで加えることができる例示的な変異は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４における、変異Ｋ２１４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｇ２３６の欠失、Ｖ２３４Ａ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｑ２６８Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３２７Ｓ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓである。ＡＤＣＣが低下したタンパク質をもたらす例示的な組み合わせの変異は、ＩｇＧ１におけるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ１におけるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、ＩｇＧ２におけるＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ４におけるＦ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、ＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、全てのＩｇアイソタイプにおけるＮ２９７Ａ、ＩｇＧ２におけるＶ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、ＩｇＧ１におけるＫ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、ＩｇＧ２におけるＨ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ１におけるＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、ＩｇＧ１におけるＬ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、ＩｇＧ１におけるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、ＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、及び、ＩｇＧ４におけるＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓの変異である。ＩｇＧ２由来の残基１１７～２６０及びＩｇＧ４由来の残基２６１～４４７を有するＦｃなどのハイブリッドＩｇＧ２／４ Ｆｃドメインを使用してもよい。
ＣＤＣが低下したタンパク質をもたらす例示的な変異は、Ｋ３２２Ａ変異である。
ＩｇＧ４抗体において周知のＳ２２８Ｐ変異を加えて、ＩｇＧ４の安定性を増強することができる。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｋ２１４Ｔ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ａ、Ｇ２３６の欠失、Ｖ２３４Ａ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｑ２６８Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ａ３２７Ｑ、Ｐ３２９Ａ、Ｄ２７０Ａ、Ｑ２９５Ａ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３２７Ｓ、Ｌ３２８Ｆ、Ｋ３２２、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓからなる群から選択される、少なくとも１つの変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ変異を含む。特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを、Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ変異を含むＩｇＧ１定常領域又はＩｇＧ１定常領域の断片にコンジュゲートさせる。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインはＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、タンパク質のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）への結合を増強する、並びに／又はＣ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び／若しくは貪食作用（ＡＤＣＰ）などのＦｃエフェクター機能を増強する、Ｆｃ領域における少なくとも１つの変異を含む。
タンパク質の活性化ＦｃγＲへの結合を増加させる及び／又はＦｃエフェクター機能を増強するために変異させることが可能なＦｃ位置としては、位置２３６、２３９、２４３、２５６，２９０，２９２、２９８、３００、３０５、３１２、３２６、３３０、３３２、３３３、３３４、３４５、３６０、３３９、３７８、３９６、又は４３０（ＥＵインデックスに従った残基付番）が挙げられる。単独で又は組み合わせて行うことが可能な例示的な変異は、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｌ、Ｔ２５６Ａ、Ｋ２９０Ａ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｌ、Ｋ３２６Ａ、Ａ３３０Ｋ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ａ３３９Ｔ、及びＰ３９６Ｌ変異である。ＡＤＣＣ又はＡＤＣＰが増加したタンパク質をもたらす例示的な組み合わせの変異は、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅである。
ＣＤＣを増強するために変異させることが可能なＦｃ位置としては、位置２６７、２６８、３２４、３２６、３３３、３４５、及び４３０が挙げられる。単独で又は組み合わせて行うことが可能な例示的な変異は、Ｓ２６７Ｅ、Ｆ１２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、Ｋ３２６Ａ、Ｋ３２６Ｗ、Ｅ３３３Ａ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、及びＥ４３０Ｔである。ＣＤＣが増加したタンパク質をもたらす例示的な組み合わせの変異は、Ｋ３２６Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｋ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ａ、Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ、Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ、Ｓ２６７Ｅ／Ｓ３２４Ｔ、及びＳ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔである。
本明細書に記載の特定の変異は、それぞれ配列番号１３０、１３１、及び１３２のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４野生型アミノ酸配列と比較した場合の変異である。
配列番号１３０、野生型ＩｇＧ１
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ
ＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮ
ＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥ
ＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷ
ＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１３１；野生型ＩｇＧ２
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦ
ＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲ
ＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮ
ＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＳＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮ
ＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１３２；野生型ＩｇＧ４
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ
ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶ
ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹ
ＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫ
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ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
抗体の、ＦｃγＲ又はＦｃＲｎへの結合は、フローサイトメトリーを用いて、各受容体を発現するように遺伝子操作された細胞にて評価することができる。例示の結合アッセイでは、９６ウェルプレート中１ウェル当たり２×１０５個の細胞を播種し、ＢＳＡ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＵＳＡ）中、４℃で３０分間ブロックした。細胞を、氷上で、４℃で１．５時間、試験抗体と共にインキュベートする。ＢＳＡ染色緩衝液で２回洗浄した後、細胞を、Ｒ－ＰＥ標識抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と共に４℃で４５分間、インキュベートする。細胞を、染色緩衝液で２回洗浄し、その後、１：２００希釈したＤＲＡＱ７生／死細胞染色試薬（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＵＳＡ）を含有する１５０μＬのＳｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ中に再懸濁する。染色された細胞のＰＥ及びＤＲＡＱ７シグナルを、それぞれＢ２及びＢ４チャンネルを使用して、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣＳＱｕａｎｔフローサイトメーター（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ，ＵＳＡ）によって検出する。生細胞をＤＲＡＱ７除外でゲーティングし、収集された少なくとも１０，０００生細胞イベントについて、幾何平均蛍光シグナルを求める。解析にはＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）を使用する。平均蛍光シグナルに対する抗体濃度の対数としてデータをプロットする。非線形回帰分析を実行する。
糖鎖遺伝子操作
Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインのＡＤＣＣを媒介する能力は、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片のオリゴ糖成分を遺伝子操作することによって増強することができる。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、Ａｓｎ２９７においてＮ－グリコシル化される。ここで、グリカンの大部分は、公知の二分岐Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ２、又はＧ２Ｆの形態である。遺伝子操作されていないＣＨＯ細胞によって生成され得るＩｇ定常領域含有タンパク質は、典型的には、少なくとも約８５％のグリカンフコース含有量を有する。Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインに結合した二分岐複合体型オリゴ糖からコアフコースを除去すると、抗原結合もＣＤＣ活性も変化させることなく、改善されたＦｃγＲＩＩＩａ結合を介してタンパク質のＡＤＣＣが増強される。このようなタンパク質は、培養物の浸透圧の制御（Ｋｏｎｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６４（：２４９－６５，２０１２）、宿主細胞株としてのバリアントＣＨＯ株Ｌｅｃ１３の適用（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７：２６７３３－２６７４０，２００２）、宿主細胞株としてのバリアントＣＨＯ株ＥＢ６６の適用（Ｏｌｉｖｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ；２（４）：４０５－４１５，２０１０；ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、宿主細胞系としてのラットハイブリドーマ細胞株ＹＢ２／０の適用（Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：３４６６－３４７３，２００３）、１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対して特異的な低分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ８８：９０１－９０８，２００４）、又はβ－１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ及びゴルジα－マンノシダーゼＩＩ若しくは強力なアルファ－マンノシダーゼＩ阻害剤であるキフネンシンの共発現（Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ２８１：５０３２－５０３６，２００６、Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ９３：８５１－８６１，２００６；Ｘｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ９９：６５２－６５，２００８）などの、二分岐複合型のＦｃオリゴ糖を有する比較的高度に脱フコシル化された免疫グロブリンの発現を成功させることが報告されている様々な方法を使用して得られ得る。
いくつかの実施形態では、本開示のＩｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、約１％～約１５％、例えば、約１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％のフコース含有量を有する二分岐グリカン構造を有する。いくつかの実施形態では、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、約５０％、４０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、又は２０％のフコース含有量を有するグリカン構造を有する。
「フコース含有量」とは、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコース単糖類の量を意味する。フコースの相対量は、フコース含有構造の全糖構造に対する百分率である。これらの糖構造は、複数の方法、例えば、１）国際公開第２００８／０７７５４６２号に記載されるような、Ｎ－グリコシダーゼＦ処理試料（例えば、複合体、ハイブリッド、及びオリゴ－並びに高マンノース構造）のＭＡＬＤＩ－ＴＯＦの使用、２）Ａｓｎ２９７グリカンの酵素放出、その後の誘導体化、並びに蛍光検出を備えたＨＰＬＣ（ＵＰＬＣ）及び／又はＨＰＬＣ－ＭＳ（ＵＰＬＣ－ＭＳ）による検出／定量化、３）第１のＧｌｃＮＡｃ単糖類と第２のＧｌｃＮＡｃ単糖類との間を切断し、フコースを第１のＧｌｃＮＡｃに付加されたままにさせる、Ｅｎｄｏ Ｓ又は他の酵素によるＡｓｎ２９７グリカンの処理を伴うか又はこの処理なしでの、天然又は還元ｍＡｂのインタクトプロテイン分析、４）酵素消化（例えば、トリプシン又はエンドペプチダーゼＬｙｓ－Ｃ）によるｍＡｂの構成ペプチドへの消化、その後のＨＰＬＣ－ＭＳ（ＵＰＬＣ－ＭＳ）による分離、検出及び定量、５）Ａｓｎ２９７にＰＮＧａｓｅ Ｆを有する特異的な酵素脱グリコシル化により、ｍＡｂタンパク質からｍＡｂオリゴ糖を分離すること、により特性決定及び定量化可能である。このように放出されるオリゴ糖は、フルオロフォアで標識され、分離され、グリカン構造の細かな特性評価を可能にする様々な補足的技術、即ち、実測された質量の理論上の質量との比較によるマトリクス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）質量分析、イオン交換ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐ Ｃ）によるシアル化の程度の決定、順相ＨＰＬＣ（ＧｌｙｃｏＳｅｐ Ｎ）による親水性基準に準拠するオリゴ糖型の分離及び定量、並びに高性能キャピラリー電気泳動－レーザー誘起蛍光（ＨＰＣＥ－ＬＩＦ）によるオリゴ糖の分離及び定量によって特定することが可能である。
「低フコース」又は「低フコース含有量」は、本明細書で使用するとき、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、約１％～１５％のフコース含有量を有することを指す。
「正常フコース」又は「正常フコース含有量」は、本明細書で使用するとき、Ｉｇ定常領域又はＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、約５０％超、典型的には８０％超又は８５％超のフコース含有量を有することを指す。
抗イディオタイプ抗体
抗イディオタイプ抗体は、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する抗体である。
本発明はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する抗イディオタイプ抗体を提供する。
本発明はまた、以下を含むｈＫ２に結合する抗原結合ドメインに特異的に結合する抗イディオタイプ抗体を提供する
配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；
配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ。
配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；又は
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ。
抗イディオタイプ（idiotypic、Ｉｄ）抗体は、抗体の抗原決定基（例えば、パラトープ又はＣＤＲ）を認識する抗体である。Ｉｄ抗体は、抗原をブロッキングするものであっても、しないものであってもよい。抗原ブロッキングＩｄは、サンプル中の遊離抗原結合ドメイン（例えば、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン）を検出するために使用され得る。ブロッキングしないＩｄを使用して、サンプル中の全抗体（遊離しているもの、抗原に一部結合しているもの、又は抗原に完全に結合しているもの）を検出することができる。Ｉｄ抗体は、抗Ｉｄが調製されている抗体で動物を免疫することによって調製することができる。
また、更に別の動物で免疫応答を誘導する免疫原として抗Ｉｄ抗体を使用して、いわゆる抗－抗Ｉｄ抗体を生成することもできる。抗－抗Ｉｄは、抗Ｉｄを誘導した元の抗原結合ドメインとエピトープが同一であり得る。したがって、抗原結合ドメインのイディオタイプ決定基に対する抗体を使用することによって、同一の特異性の抗原結合ドメインを発現する他のクローンを同定することが可能である。抗Ｉｄ抗体は、本明細書の他の箇所に記載のものなどの任意の好適な技術によって変動（それにより、抗Ｉｄ抗体バリアントを産生する）、及び／又は誘導することができる。
免疫コンジュゲート（Immunoconjugates）
本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質、又はｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質（本明細書ではｈＫ２結合タンパク質と総称される）を、異種分子にコンジュゲートさせてもよい。ｈＫ２結合タンパク質はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も含む。
いくつかの実施形態では、異種分子は、検出可能な標識又は細胞傷害性剤である。
本発明はまた、検出可能な標識にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する、抗原結合断片を提供する。
本発明はまた、検出可能な標識にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合断片を含む、タンパク質を提供する。
本発明はまた、検出可能な標識にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合断片を含む、多重特異性タンパク質を提供する。
本発明はまた、検出可能な標識にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合断片を含む、ＣＡＲを提供する。
本発明はまた、細胞傷害性剤にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する、抗原結合断片を提供する。
本発明はまた、細胞傷害性剤にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合断片を含む、タンパク質を提供する。
本発明はまた、細胞傷害性剤にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合断片を含む、多重特異性タンパク質を提供する。
本発明はまた、細胞傷害性剤にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合断片を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示のｈＫ２結合タンパク質は、前立腺癌細胞又は乳癌細胞などのｈＫ２発現細胞に治療薬を導くために使用することができる。あるいは、内部移行してから細胞機能を改変することを意図する治療薬にカップリングさせた本開示のｈＫ２結合タンパク質を用いて、ｈＫ２発現細胞を標的とすることもできる。
いくつかの実施形態では、検出可能な標識は細胞傷害性剤でもある。
検出可能な標識にコンジュゲートした本開示のｈＫ２結合タンパク質は、様々なサンプルにおけるｈＫ２の発現を評価するために使用することができる。
検出可能な標識は、本開示のｈＫ２結合タンパク質にコンジュゲートさせたとき、分光的、光化学的、生化学的、免疫化学的、又は化学的手段を介して後者を検出可能なものにする組成物を含む。
例示的な検出可能な標識としては、放射性同位体、磁気ビーズ、金属ビーズ、コロイド粒子、蛍光染料、電子密度試薬、酵素（例えば、一般的にＥＬＩＳＡにおいて使用される）、ビオチン、ジゴキシゲニン、ハプテン、発光分子、化学発光分子、蛍光色素、フルオロフォア、蛍光消光剤、有色分子、放射性同位体、シンシレート（scintillates）、アビジン、ストレプトアビジン、プロテインＡ、プロテインＧ、抗体又はその断片、ポリヒスチジン、Ｎｉ２＋、Ｆｌａｇタグ、ｍｙｃタグ、重金属、酵素、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、電子供与体／受容体、アクリジニウムエステル、及び比色基質が挙げられる。
検出可能な標識は、検出可能な標識が放射性同位体であるときなど、自発的にシグナルを発し得る。他の場合、検出可能な標識は、外部場によって刺激された結果として、シグナルを発する。
例示的な放射性同位体は、γ放出、オージェ放出、β放出、アルファ放出、又はポジトロン放出性の放射性同位体であり得る。例示的な放射性同位体としては、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、１９Ｆ、５５Ｃｏ、５７Ｃｏ、６０Ｃｏ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、７５Ｂｒ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９０Ｓｒ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、１１５Ｉｎ、１２３１、１２４１、１２５Ｉ、１３１１、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、２２６Ｒａ、２２５Ａｃ、及び２２７Ａｃが挙げられる。
例示的な金属原子は、２０超の原子番号を有する金属、例えば、カルシウム原子、スカンジウム原子、チタン原子、バナジウム原子、クロム原子、マンガン原子、鉄原子、コバルト原子、ニッケル原子、銅原子、亜鉛原子、ガリウム原子、ゲルマニウム原子、ヒ素原子、セレン原子、臭素原子、クリプトン原子、ルビジウム原子、ストロンチウム原子、イットリウム原子、ジルコニウム原子、ニオブ原子、モリブデン原子、テクネチウム原子、ルテニウム原子、ロジウム原子、パラジウム原子、銀原子、カドミウム原子、インジウム原子、スズ原子、アンチモン原子、テルル原子、ヨウ素原子、キセノン原子、セシウム原子、バリウム原子、ランタン原子、ハフニウム原子、タンタル原子、タングステン原子、レニウム原子、オスミウム原子、イリジウム原子、白金原子、金原子、水銀原子、タリウム原子、鉛原子、ビスマス原子、フランシウム原子、ラジウム原子、アクチニウム原子、セリウム原子、プラセオジム原子、ネオジム原子、プロメチウム原子、サマリウム原子、ユウロピウム原子、ガドリニウム原子、テルビウム原子、ジスプロシウム原子、ホルミウム原子、エルビウム原子、ツリウム原子、イッテルビウム原子、ルテチウム原子、トリウム原子、プロトアクチニウム原子、ウラン原子、ネプツニウム原子、プルトニウム原子、アメリシウム原子、キュリウム原子、バーケリウム原子、カリホルニウム原子、アインスタイニウム原子、フェルミウム原子、メンデレビウム原子、ノーベリウム原子、又はローレンシウム原子である。
いくつかの実施形態では、金属原子は、２０超の原子番号を有するアルカリ土類金属であり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、ランタニドであり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、アクチニドであり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、遷移金属であり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、卑金属であり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、金原子、ビスマス原子、タンタル原子、及びガドリニウム原子であり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、５３（即ち、ヨウ素）～８３（即ち、ビスマス）の原子番号を有する金属であり得る。
いくつかの実施形態では、金属原子は、磁気共鳴造影法に好適な原子であり得る。
金属原子は、＋１、＋２、又は＋３の酸化状態の形態の金属イオン、例えば、Ｂａ２＋、Ｂｉ３＋、Ｃｓ＋、Ｃａ２＋、Ｃｒ２＋、Ｃｒ３＋、Ｃｒ６＋、Ｃｏ２＋、Ｃｏ３＋、Ｃｕ＋、Ｃｕ２＋、Ｃｕ３＋、Ｇａ３＋、Ｇｄ３＋、Ａｕ＋、Ａｕ３＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｆ３＋、Ｐｂ２＋、Ｍｎ２＋、Ｍｎ３＋、Ｍｎ４＋、Ｍｎ７＋、Ｈｇ２＋、Ｎｉ２＋、Ｎｉ３＋、Ａｇ＋、Ｓｒ２＋、Ｓｎ２＋、Ｓｎ４＋、及びＺｎ２＋であり得る。金属原子は、金属酸化物、例えば、酸化鉄、酸化マンガン、又は酸化ガドリニウムを含み得る。
好適な色素としては、例えば、５（６）－カルボキシフルオレセイン、ＩＲＤｙｅ ６８０ＲＤマレイミド、又はＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ、ルテニウムポリピリジル色素などの任意の市販の色素が挙げられる。
好適なフルオロフォアは、フルオレセインイソチオシアネート（fluorescein isothiocyante、ＦＩＴＣ）、フルオレセインチオセミカルバジド、ローダミン、テキサスレッド、ＣｙＤｙｅ（例えば、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒｓ（例えば、Ａｌｅｘａ４８８、Ａｌｅｘａ５５５、Ａｌｅｘａ５９４、Ａｌｅｘａ６４７）、近赤外（near infrared、ＮＩＲ）（７００～９００ｎｍ）蛍光染料、並びにカルボシアニン及びアミノスチリル染料である。
検出可能な標識にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、造影剤として使用することができる。
検出可能な標識にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質は、造影剤として使用することができる。
検出可能な標識にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質は、造影剤として使用することができる。
検出可能な標識にコンジュゲートしたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、造影剤として使用することができる。
いくつかの実施形態では、細胞傷害性剤は、化学療法剤、薬物、増殖阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、若しくは動物由来の酵素活性を有する毒素、又はその断片）、又は放射性同位体（即ち、放射性コンジュゲート）である。
いくつかの実施形態では、細胞傷害性剤は、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、ビンデシン、ジフテリア毒素などの細菌毒素、リシン、ゲルダナマイシン、マイタンシノイド、又はカリケアマイシンである。細胞傷害性剤は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合、又はトポイソメラーゼ阻害を含む機構によってその細胞傷害性又は細胞増殖抑制作用を引き起こし得る。
いくつかの実施形態では、細胞傷害性剤は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α－サルシン、アレウリテス・フォルディ（Aleurites fordii）タンパク質、ジアンチンタンパク質、フィトラカ・アメリカナ（Phytolaca americana）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、モモルディカ・カランティア（momordica charantia）阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（sapaonaria officinalis）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンなどの酵素活性を有する毒素である。
いくつかの実施形態では、細胞傷害性剤は、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ、及び１８６Ｒｅなどの放射性核種である。
いくつかの実施形態では、細胞傷害性剤は、ドラスタチン又はドラスタチンのペプチド類似体及び誘導体、アウリスタチン又はモノメチルアウリスタチンフェニルアラニンである。例示的な分子は、米国特許第５，６３５，４８３号及び同第５，７８０，５８８号に開示されている。ドラスタチン及びアウリスタチンは、微小管動態、ＧＴＰの加水分解、並びに核及び細胞の分裂に干渉し（Ｗｏｙｋｅ ｅｔ ａｌ（２００１）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４５（１２）：３５８０～３５８４）、抗癌及び抗真菌活性を有することが示されている。ドラスタチン及びアウリスタチン薬剤部位は、ペプチド薬剤部位のＮ（アミノ）末端若しくはＣ（カルボキシル）末端を介して（国際公開第０２／０８８１７２号）、又は抗体内に遺伝子操作された任意のシステインを介して、本発明の抗体に結合することができる。
本開示のｈＫ２結合タンパク質は、既知の方法を使用して検出可能な標識にコンジュゲートさせることができる。
いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、キレート剤と複合体を形成している。
いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、リンカーを介して本開示のｈＫ２結合タンパク質にコンジュゲートされる。
検出可能な標識又は細胞傷害性部分は、既知の方法を用いて、本開示のｈＫ２結合タンパク質に直接又は間接的にコンジュゲートさせることができる。好適なリンカーは、当該技術分野において既知であり、例えば、補欠分子族、非フェノールリンカー（Ｎ－スクシミジル－ベンゾエートの誘導体、ドデカボレート）、大環状及び非環式の両キレート剤のキレート部分、例えば、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０，四酢酸（ＤＯＴＡ）の誘導体、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）の誘導体、Ｓ－２－（４－イソチオシアナトベンジル）－１，４，７－トリアザシクロノナン－１，４，７－三酢酸（ＮＯＴＡ）の誘導体、及び１，４，８，１１－テトラアザシクロドデカン－１，４，８，１１－四酢酸（ＴＥＴＡ）の誘導体、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス－ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６－ジイソシアネート）、及びビス－活性フッ素化合物（例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン）、並びに他のキレート部分が挙げられる。好適なペプチドリンカーは周知である。
いくつかの実施形態では、本開示のｈＫ２結合タンパク質は、腎クリアランスを介して血液から除去される。
キット
本発明はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むキットを提供する。
本発明はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質を含むキットを提供する。
本発明はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を含むキットを提供する。
本発明はまた、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを含むキットを提供する。
キットは、治療的使用のために、及び診断キットとして使用することができる。
キットを使用して、サンプル中のｈＫ２の存在を検出することができる。
いくつかの実施形態では、キットは、本開示のｈＫ２結合タンパク質と、ｈＫ２結合タンパク質を検出するための試薬とを含む。キットは、使用説明書；他の試薬、例えば、標識、治療薬、又はキレート化若しくは別の方法のカップリングに有用な剤、標識若しくは治療薬に対する抗体、又は放射線防護組成物；投与するために当該抗体を調製するためのデバイス又は他の材料；医薬的に許容される担体、及び対象に投与するためのデバイス又は他の材料を含む、１つ以上の他の構成要素を含み得る。
いくつかの実施形態では、キットは、容器内のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインと、キットの使用説明書とを含む。
いくつかの実施形態では、キットは、容器内のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質と、キットの使用説明書とを含む。
いくつかの実施形態では、キットは、容器内のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質と、キットの使用説明書とを含む。
いくつかの実施形態では、キットにおけるｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、標識される。
いくつかの実施形態では、キットにおけるｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質は、標識される。
いくつかの実施形態では、キットにおけるｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質は、標識される。
いくつかの実施形態では、キットは、以下を含むｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む
配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；
配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ。
配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；又は
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ。
特定の実施形態では、キットは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含む、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、キットは、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１３３、１３４、１３５、１３６、３０８、３１６、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９を含む、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む。
ｈＫ２を検出する方法
本発明はまた、サンプル中のｈＫ２を検出する方法であって、サンプルを入手することと、当該サンプルを本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインと接触させることと、当該サンプル中の結合したｈＫ２を検出することと、を含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、サンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、血中循環細胞、滑液、血中循環細胞、組織と会合していない細胞（即ち、遊離細胞）、組織（即ち、微細な針吸引を含む、手術により切除された組織、生検）、組織学的調製物などに由来することができる。
本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、既知の方法を使用して検出することができる。例示的な方法としては、蛍光若しくは化学発光標識、又は放射線標識を使用して抗体を直接標識すること、又は本発明の抗体に、ビオチン、酵素、又はエピトープタグなどの容易に検出可能な部分を結合させることが挙げられる。例示的な標識及び部分は、ルテニウム、１１１Ｉｎ－ＤＯＴＡ、１１１Ｉｎ－ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びベータガラクトシダーゼ、ポリ－ヒスチジン（ＨＩＳタグ）、アクリジン染料、シアニン染料、フルオロン染料、オキサジン染料、フェナントリジン染料、ローダミン染料、及びＡｌｅｘａｆｌｕｏｒ（登録商標）染料である。
本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインは、サンプル中のｈＫ２を検出するための様々なアッセイで使用してよい。例示的なアッセイは、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、免疫沈降、平衡透析、免疫拡散、電気化学発光（ＥＣＬ）イムノアッセイ、免疫組織化学的検査、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、又はＥＬＩＳＡアッセイである。
本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本明細書で同定されたｈＫ２に結合する抗原結合ドメインのいずれかを、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）に遺伝子操作して、ｈＫ２に結合するＣＡＲを提供することができる。本開示は、ｈＫ２を標的とするＣＡＲ、このようなＣＡＲを含む細胞、及び本明細書に記載のＣＡＲを使用して前立腺癌などのｈＫ２産生癌を治療する方法を提供する。
本発明のＣＡＲは、ｈＫ２に対する抗原特異性を有する。「抗原特異性を有する」及び「抗原特異的応答を誘発する」という句は、本明細書で使用するとき、ＣＡＲが抗原に特異的に結合し、免疫学的に認識することができ、その結果、ＣＡＲのｈＫ２抗原への結合により免疫応答が誘発されることを意味する。抗原特異性及び標的細胞を認識する能力についてＣＡＲを試験する方法は、当技術分野で知られている。
本開示は、所望のキメラ抗原受容体を安定して発現するように遺伝的に改変されたＴ細胞の使用に関する。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインに連結された抗体（ｓｃＦｖなど）の抗原結合ドメインを含有する人工的に構築された異種タンパク質又はポリペプチドである。ＣＡＲの特徴としては、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用して、非ＭＨＣ制限的に選択された標的に向けてＴ細胞の特異性及び反応性をリダイレクトする能力を挙げることができる。非ＭＨＣ制限抗原認識により、ＣＡＲを発現するＴ細胞は、抗原プロセシングとは無関係に抗原を認識することができるため、腫瘍逃避の主要なメカニズムを迂回する。更に、Ｔ細胞において発現される場合、ＣＡＲは、内因性Ｔ細胞受容体（T cell receptor、ＴＣＲ）アルファ及びベータ鎖と有利には二量体化しない。
本明細書に記載のＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、本明細書に記載の刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン（本明細書では細胞質シグナル伝達ドメインとも称される）とを少なくとも含む組み換えポリペプチドコンストラクトを提供する。ＣＡＲを発現するＴ細胞は、本明細書では、ＣＡＲ Ｔ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞、又はＣＡＲ修飾Ｔ細胞と称され、これらの用語は、本明細書において互換的に使用される。細胞は、その表面上に抗体結合ドメインを安定して発現するように遺伝的に改変することができ、ＭＨＣ非依存性の新規抗原特異性を付与する。
場合によっては、Ｔ細胞は、抗体の抗原認識ドメインがＣＤ３－ゼータ鎖又はＦｃγＲＩタンパク質の細胞内ドメインと組み合わされて単一のキメラタンパク質になるＣＡＲを安定して発現するように、遺伝的に改変される。一実施形態では、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体に関連するゼータ鎖である。
「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、分子の細胞内部分を指す。これは、タンパク質の機能的部分であり、セカンドメッセンジャを生成することにより定められたシグナル伝達経路を介して細胞活動を調節するために細胞内で情報を伝達することによって作用する、又はかかるメッセンジャに応答することによりエフェクターとして機能することによって作用する。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞）の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えばＣＡＲ－Ｔ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性及びヘルパー活性（サイトカインの分泌を含む）が挙げられる。
一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。例示的な一次細胞内シグナル伝達ドメインとしては、一次刺激又は抗原依存性シミュレーションに関与する分子に由来するものが挙げられる。一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含む。例示的な共刺激細胞内シグナル伝達ドメインとしては、共刺激シグナル又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものが挙げられる。例えば、ＣＡＲ－Ｔの場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体の細胞質配列を含み、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共受容体又は共刺激分子からの細胞質配列を含む。
一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られているシグナル伝達モチーフを含む。一次細胞質シグナル伝達配列を含む例示的なＩＴＡＭとしては、ＣＤ３－ゼータ、ＦｃＲγ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、ＤＡＰ１０、及びＤＡＰ１２に由来するものが挙げられる。
用語「ゼータ」又は代替的に「ゼータ鎖」、「ＣＤ３－ゼータ」、又は「ＴＣＲ－ゼータ」は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＡＧ３６６６４．１として提供されるタンパク質、又は非ヒト種、例えば、ネズミ、ウサギ、霊長類、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価な残基として定義され、「ゼータ刺激ドメイン」又は代替的に「ＣＤ３－ゼータ刺激ドメイン」又は「ＴＣＲ－ゼータ刺激ドメイン」は、Ｔ細胞活性化に必要な初期シグナルを機能的に伝達するのに十分なゼータ鎖の細胞質ドメインからのアミノ酸残基として定義される。一態様では、ゼータの細胞質ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＡＧ３６６６４．１の残基５２～１６４、又はその機能的オルソログである、非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などに由来する等価な残基を含む。一態様では、「ゼータ刺激ドメイン」又は「ＣＤ３－ゼータ刺激ドメイン」は、配列番号２８として提供される配列、又は配列番号２８と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列である。
配列番号２８ ＣＤ３－ゼータ刺激ドメイン
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
用語「共刺激分子」とは、共刺激リガンドと特異的に結合し、それによって、Ｔ細胞による共刺激応答（例えば、限定するものではないが、増殖）を媒介するＴ細胞上の同種結合パートナーを指す。共刺激分子は、効率的な免疫応答に必要な抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子としては、ＭＨＣクラス１分子、ＢＴＬＡ、及びＴｏｌｌ配位子受容体、並びにＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、及び４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）が挙げられるが、これらに限定されない。
共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリー：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、及び活性化ＮＫ細胞受容体で表すことができる。例示的なこのような分子としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。
細胞内シグナル伝達ドメインは、それが由来する分子の細胞内部分全体、又は天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、又はそれらの機能的フラグメントを含み得る。
用語「４－１ＢＢ」又は代替的に「ＣＤ１３７」とは、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ６２４７８．２として提供されるアミノ酸配列、又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価な残基を有するＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーを指し、「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＡＡ６２４７８．２のアミノ酸残基２１４～２５５、又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、及び類人猿などからの等価な残基として定義される。一態様では、「４－１ＢＢ共刺激ドメイン」又は「ＣＤ１３７共刺激ドメイン」は、配列番号２７（ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ；配列番号２７）、又は非ヒト種、例えば、マウス、げっ歯類、サル、類人猿などからの等価な残基、又は配列番号２７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列として提供される配列である。
一実施形態では、ＣＡＲにおける他のドメインのうちの１つに天然に会合する膜貫通ドメインが使用される。別の実施形態では、膜貫通ドメインを、アミノ酸置換によって選択又は修飾し、同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのかかるドメインの結合を回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えることができる。一実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８αヒンジドメインを含む。
いくつかの実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、本明細書で定義される少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインを更に含む。一実施形態では、共刺激分子は、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、ＣＤ３－ゼータ、及び／又はＣＤ２８から選択される。ＣＤ２８は、Ｔ細胞共刺激において重要なＴ細胞マーカーである。ＣＤ２７は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーであり、共刺激免疫チェックポイント分子として機能する。４－１ＢＢは、Ｔ細胞に強力な共刺激シグナルを伝達し、分化を促進し、Ｔリンパ球の長期生存を増強する。ＣＤ３－ゼータは、ＴＣＲと会合してシグナルを生成し、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（immunoreceptor tyrosine-based activation motifs、ＩＴＡＭ）を含有する。別の実施形態では、共刺激分子は、ＭｙＤ８８又はＣＤ４０である。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８αを含む細胞内ヒンジドメインと、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ３－ゼータを含む細胞内Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインと、を含む。別の実施形態では、ＣＡＲは、細胞内ヒンジドメインと、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、及びＣＤ３－ゼータを含む細胞内Ｔ細胞受容体シグナル伝達ドメインとを含み、当該ヒンジドメインは、ＣＤ８、ＣＤ４、又はＣＤ２８の細胞外領域の全て又は一部、抗体定常領域の全て又は一部、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体、ＩｇＧヒンジ、ＩｇＭヒンジ、ＩｇＡヒンジ、ＩｇＤヒンジ、ＩｇＥヒンジ、又はＩｇヒンジの全て又は一部を含む。ＩｇＧヒンジは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、又はこれらのキメラ由来であってよい。
本明細書に記載のＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインと、膜貫通ドメインと、例えば以下に定義する刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞質シグナル伝達ドメイン」とも称される）とを少なくとも含む組み換えポリペプチドコンストラクトを提供する。
一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むキメラ融合タンパク質を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むキメラ融合タンパク質を含む。一実施形態では、ＣＡＲは、細胞外抗原認識ドメインと、膜貫通ドメインと、１つ以上の共刺激分子に由来する少なくとも２つの機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含むキメラ融合タンパク質を含む。
本開示のＣＡＲは、ＣＤ２８及び／若しくは４－１ＢＢシグナル伝達ドメインのみを含むように、又は本発明のＣＡＲの状況において有用な任意の他の所望の細胞質ドメインと組み合わされるように設計してよい。一実施形態では、ＣＡＲの細胞質ドメインは、ＣＤ３－ゼータのシグナル伝達ドメインを更に含み得る。例えば、ＣＡＲの細胞質ドメインとしては、ＣＤ３－ゼータ、４－１ＢＢ、及びＣＤ２８シグナル伝達モジュール、並びにこれらの組み合わせが挙げられ得るが、これらに限定されない。したがって、本発明は、ＣＡＲ Ｔ細胞、及び養子療法のためのそれらの使用方法を提供する。
本開示は更に、ＣＡＲのバリアント、例えば、機能的バリアントを提供する。用語「機能的バリアント」とは、本明細書で使用するとき、親ＣＡＲとかなりの又は著しい配列同一性又は類似性を有するＣＡＲを指し、当該機能的バリアントは、それがバリアントであるＣＡＲの生物活性を保持している。機能的バリアントは、例えば、親ＣＡＲと同様の程度、同程度、又はより高い程度、標的細胞を認識する能力を保持しているＣＡＲのバリアントを包含する。親ＣＡＲに関して、機能的バリアントは、例えば、親ＣＡＲとアミノ酸配列が少なくとも約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又はそれ以上同一であり得る。
機能的バリアントは、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親ＣＡＲのアミノ酸配列を含む。一実施形態では、機能的バリアントは、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親ＣＡＲのアミノ酸配列を含む。この場合、非保存的アミノ酸置換は、機能的バリアントの生物活性を妨害又は阻害することができない。非保存的アミノ酸置換により、機能的バリアントの生物活性が親ＣＡＲと比較して増加するように、機能的バリアントの生物活性を増強させることができる。
保存的アミノ酸置換は、当該技術分野において公知であり、本明細書に記載されている。
本開示のＣＡＲは、指定のアミノ酸配列又は本明細書に記載の配列から本質的になり得、その結果、他の構成成分、例えば、他のアミノ酸が、機能的バリアントの生物活性を実質的に変化させることはない。
本開示のＣＡＲ（機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、任意の長さであり得る、すなわち、任意の数のアミノ酸を含み得、ただし、ＣＡＲ（又はその機能的部分若しくは機能的バリアント）は、その生物活性、例えば、抗原に特異的に結合する能力、宿主内の疾患細胞（例えば、癌細胞）を検出する能力、又は宿主内の疾患を治療若しくは予防する能力などを保持している。例えば、ＣＡＲは、約５０～約５０００個のアミノ酸長、例えば、約５０、約７０、約７５、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約２２５、約２５０、約２７５、約３００、約３２５、約３５０、約３７５、約４００、約４２５、約４５０、約４７５、約５００、約５２５、約５５０、約５７５、約６００、約６２５、約６５０、約６７５、約７００、約７２５、約７５０、約７７５、約８００、約８２５、約８５０、約８７５、約９００、約９２５、約９５０、約９７５、約１０００個、又はそれ以上のアミノ酸長であり得る。
本開示のＣＡＲ（本発明の機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、１つ以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含んでいてもよい。かかる合成アミノ酸は、当該技術分野において既知であり、例としては、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－及びトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリンβ－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リジン、６－ヒドロキシリジン、オルニチン、α－アミノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、及びα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンが挙げられる。
本開示のＣＡＲ（機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、翻訳後修飾を受けることができる。これらは、グリコシル化、エステル化、Ｎ－アシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、例えば、ジスルフィド架橋を介して環化することができ、又は酸付加塩に変換することができる。いくつかの実施形態では、これらは、二量体化若しくはポリマー化、又はコンジュゲートされている。
本開示のＣＡＲ（機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、当該技術分野において既知の方法によって得ることができる。ポリペプチド及びタンパク質をデノボ合成する好適な方法は、参考文献、例えばＣｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｍｏｃ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ，２０００；Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ａｎａｌｙｓｉｓ，ｅｄ．Ｒｅｉｄ，Ｒ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２０００；ａｎｄ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ，ｅｄ．Ｗｅｓｔｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ，２００１に記載されている。また、ＣＡＲは、標準的な組み換え方法を使用し、本明細書に記載の核酸を使用して、組み換えにより産生され得る。更に、ＣＡＲ（その機能的部分及び機能的バリアントを含む）の一部は、植物、細菌、昆虫、哺乳動物などの供給源から単離及び／又は精製することができる。単離及び精製の方法は、当該技術分野において既知である。あるいは、本開示のＣＡＲ（その機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、商業的に合成することができる。この点において、ＣＡＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、合成、組み換え、単離、及び／又は精製することができる。
本開示はまた、本開示のＣＡＲのエピトープに結合する抗体又はその抗原結合断片を提供する。抗体又はその抗原結合断片は、ＣＡＲの機能的部分に対して任意のレベルの親和性又は結合活性を有し得る。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、ある範囲の親和性（ＫＤ）でｈＫ２に結合し得る。一実施形態では、当業者により実施される表面プラズモン共鳴又はＫｉｎｅｘａ法によって求めたとき、約１０－７Ｍ以下のＫＤで、例えば、限定するものではないが、１～９．９（又は１、２、３、４、５、６、７、８、若しくは９などの、その中の任意の若しくは値）×１０－８Ｍ、１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ、１０－１２Ｍ、１０－１３Ｍ、１０－１４Ｍ、１０－１５Ｍ、又はその中の任意の範囲若しくは値のＫＤで、抗体はｈＫ２に結合する。１つの例示的な親和性は、１×１０－８Ｍ以下である。別の例示的な親和性は、１×１０－９Ｍ以下である。
本開示のＣＡＲの任意の機能的部分に結合する能力について抗体を試験する方法は、当該技術分野において既知であり、任意の抗体－抗原結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）、ウエスタンブロット、酵素結合免疫吸着アッセイ（enzyme-linked immunosorbent assay、ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、及び競合阻害アッセイなどが挙げられる。
抗体又はその抗体フラグメントを含むＣＡＲの一部は、様々な形態で存在してもよく、その場合、抗原結合ドメインは、例えば、単一ドメイン抗体フラグメント（ｓｄＡｂ）、ｓｃＦｖ及びヒトキメラ抗体又はヒト化抗体などの連続するポリペプチド鎖の一部として発現される（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９９９、Ｉｎ：Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９８９、Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｈｏｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６）。一態様では、本開示のＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体断片を含む。一態様では、本開示のＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体断片を含む。
本開示はまた、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２に結合する。
本開示はまた、以下を含むＣＡＲを提供する
ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
膜貫通ドメインと、
少なくとも１つの共刺激ドメインを任意選択で含む細胞内シグナル伝達ドメイン。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８ａヒンジ領域を更に含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８ａ－ＴＭ）ポリペプチドと、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）成分を含む共刺激ドメイン及びＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）成分を含む一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインと、を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、以下を含む
配列番号２５と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ８ａヒンジ領域、
配列番号２６と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む膜貫通ドメイン、並びに／又は
配列番号２７と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン、及び配列番号２８と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン。
本開示はまた、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＡＲを提供し、当該細胞外抗原結合ドメインは、ｈＫ２に結合し、以下を含む
配列番号１３８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１３８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１６５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１６７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１６９のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１６８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号２０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号２０４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号４４４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１６０のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１４０のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１６１のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１４０のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１４０のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１５９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号５のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号１のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；
配列番号２のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；又は
配列番号３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３。
特定の実施形態では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該細胞外抗原結合ドメインがｈＫ２に結合し、配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
別の実施形態では、本開示は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該細胞外抗原結合ドメインがｈＫ２に結合し、配列番号１３８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３；又は配列番号１４０のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａに従って定義される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＩＭＧＴに従って定義される。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＡｂＭに従って定義される。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６３、７２、１４１、１４７、１７０、１７６、１８８、１９４、１９６、１９８、２００、２０６、又は２１６のＨＣＤＲ１、配列番号６４、６５、７３、１４２、１４８、１７１、１７７、１８３、１８９、１９５、１９７、１９９、２０１、２０７、又は２１７のＨＣＤＲ２、配列番号６６、１４３、１７２、１７８、１８４、１９０、２０８、又は２１８のＨＣＤＲ３、配列番号６７、６８、１４４、１７３、１７９、１８２、１８５、又は１９１のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、１４５、１７４、１８０、１８６、１９２、又は４７０のＬＣＤＲ２、及び配列番号７１、１４６、１７５、１８１、１８７、１９３、又は２０９のＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６３、７２、１４１、１４７、１７０、１７６、１８８、１９４、１９６、１９８、２００、２０６、若しくは２１６のＨＣＤＲ１、又はその保存的置換を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６４、６５、７３、１４２、１４８、１７１、１７７、１８３、１８９、１９５、１９７、１９９、２０１、２０７、若しくは２１７のＨＣＤＲ２、又はその保存的置換を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６６、１４３、１７２、１７８、１８４、１９０、２０８、若しくは２１８のＨＣＤＲ３、又はその保存的置換を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６７、６８、１４４、１７３、１７９、１８５、若しくは１９１のＬＣＤＲ１、又はその保存的置換を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号６９、７０、１４５、１７４、１８０、１８６、１９２、若しくは４７０のＬＣＤＲ２、又はその保存的置換を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号７１、１４６、１７５、１８１、１８７、１９３、若しくは２０９のＬＣＤＲ３、又はその保存的置換を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、及び２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号７２、７３、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６４、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６８、７０、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号７２、７３、６６、６８、７０、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、ＣＡＲを提供する。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１、２、３、１３８、１４０、１６０、１６３、１６５、１６７、１６９、又は２０５のＶＬを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４、５、６、１３７、１３９、１５９、１６１、１６２、１６４、１６６、１６８、又は２０４のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１、２、３、１３８、１４０、１６０、１６３、１６５、１６７、１６９、２０５、又は４４４のＶＬ、及び配列番号４、５、６、１３７、１３９、１５９、１６１、１６２、１６４、１６６、１６８、又は２０４のＶＨを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、以下を含む
配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；又は
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１３８のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１３７のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６３のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１６２のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６３のＶＬと、配列番号１６２のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６３のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１６２のＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６５のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１６４のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６７のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１６６のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６８のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１６９のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２０４のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号２０５のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１６０のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１５９のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４０のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１６１のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４０のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１３９のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４０のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１５９のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号４のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号５のポリペプチドと少なくとも５０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号６のポリペプチドと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号４のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号５のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号６のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号４のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号５のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３のポリペプチドと８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号６のポリペプチドと少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨとを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１３８又は配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＶＬと、配列番号１３７及び配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨとを含む細胞外抗原結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦＶを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＶＬとＶＨとの間にリンカーポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、リンカーポリぺプチドは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、リンカーポリぺプチドは、配列番号７と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインはは、配列番号２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、１４９、１５０、１５１、１５２、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３。４２４、又は４２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号２９のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３０のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３３のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４２のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４３のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４４のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１４９のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号１５２のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１０のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１１のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１２のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１３のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１４のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１５のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１７のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１８のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１９のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４２０のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４２１のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４２２のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４２３のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４２４のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４２５のアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１６又は配列番号４１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
特定の実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１６又は配列番号４１７のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦＶである。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４９、配列番号１５０、番号１５１、又は配列番号１５２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦＶを含む、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１４９、配列番号１５０、番号１５１、又は配列番号１５２のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含むｓｃＦＶを含む、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２０のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号２３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３１８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３１９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２０のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０７のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３２５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３０８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号３１６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０４のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号４０４又は配列番号４０５のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、又は配列番号１３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３４のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号１３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、ｓｃＦＶは、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、又は配列番号１３６のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインは、シグナルポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、シグナル配列は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、１４９、１５０、１５１、１５２、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４，又は４２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号３５のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３５のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号３９のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号４０のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４１のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４２のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４３のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインが、配列番号４４のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
一実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、配列番号４４のアミノ酸配列と、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー（例えば、ＣＤ２８又は誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）など）成分、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド成分を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７成分は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１３７成分は、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３ｚ成分は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ｚ成分は、配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
配列番号４５
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８Ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。（ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ；配列番号２６）。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドは、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のα、β、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４の膜貫通領域を少なくとも含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ζ、η、又はＦｃεＲ１γ及び－β、ＭＢ１（Ｉｇα）、Ｂ２９又はＣＤ３－γ、ζ、若しくはηの膜貫通ドメインを少なくとも含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、合成であり、例えば、ロイシン及びバリン、フェニルアラニンのトリプレット、又はトリプトファンなどの主に疎水性の残基を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインをｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメインに連結するヒンジ領域を更に含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ８ａヒンジ領域である。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号２５のアミノ酸配列（ＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ；配列番号２５）を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８ａ－ヒンジ領域は、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２６）を含むか、又はＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２６）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２７）を含むか、又はＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号１２７）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号１２８）を含むか、又はＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰ（ＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰ）３（配列番号１２８）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒンジ領域は、配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号１２９）を含むか、又はＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号１２９）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本開示はまた、配列番号４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、１５３、１５４、１５５、１５６、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、又は４４１のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４６のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４７のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４７のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４８のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４９のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５２のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号６０のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号６１のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号１５３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号１５４のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号１５４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号１５５のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号１５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号１５６のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号１５６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４２６のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４２６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４２７のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４２７のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４２８のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４２８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４２９のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４２９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３０のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３０のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３１のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３２のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３３のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３４のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３５のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３６のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３７のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３７のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３８のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３９のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４４０のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４４０のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４４１のアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４４１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
本開示はまた、配列番号４３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む、ＣＡＲを提供する。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４３２又は配列番号４３３のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、又は配列番号１５６のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１５４のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１５５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１５６のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％）同一であるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、又は配列番号１５６のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態では、本開示は、ｈＫ２に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含み、当該細胞外抗原結合ドメインが、配列番号１１１及び配列番号１１２の配列を有するエピトープ内の３つ以上の残基でｈＫ２に結合するＣＡＲを提供する。
ＣＡＲコンストラクト及びＣＡＲを発現する免疫応答性細胞
本開示はまた、本明細書に記載のＣＡＲをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
別途記載のない限り、「アミノ酸配列をコードしているポリヌクレオチド」は、互いの縮重バージョンであり、同じアミノ酸配列をコードしているポリヌクレオチド配列を全て含む。タンパク質又はＲＮＡをコードしているポリヌクレオチドという句はまた、そのタンパク質をコードしているポリヌクレオチドが、いくつかのバリアントにおいて、発現したタンパク質にスプライシングされるイントロンを含有し得る程度にイントロンを含み得る。
本開示はまた、本開示のＣＡＲをコードしている核酸分子を含む発現ベクターを提供する。
「発現ベクター」という用語は、発現させるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組み換えポリヌクレオチドを含む、ベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用エレメントを含み、発現のための他のエレメントは、宿主細胞によって、又はインビトロ発現系において供給され得る。発現ベクターとしては、組み換えポリヌクレオチドを組み込んだコスミド、プラスミド（例えば、裸の、又はリポソームに含有されるもの）、及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）を含む、当該技術分野において既知の全てのベクターが挙げられる。
本開示はまた、本開示のＣＡＲを含む、単離免疫応答性細胞を提供する。いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、ＣＡＲで形質導入され、例えば、ＣＡＲは、免疫応答性細胞の表面上に構成的に発現される。ある特定の実施形態では、単離免疫応答性細胞は、少なくとも１つの共刺激リガンドで更に形質導入され、免疫応答性細胞が少なくとも１つの共刺激リガンドを発現するようにする。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激リガンドは、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４８、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦＲＳＦ１４、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、単離免疫応答性細胞は、少なくとも１つのサイトカインで更に形質導入され、免疫応答性細胞が少なくとも１つのサイトカインを分泌するようにする。ある特定の実施形態では、少なくともサイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－２１、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞（Treg）、ヒト胚性幹細胞、リンパ球前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、及びそれからリンパ球細胞が分化し得る多能性幹細胞からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。
本明細書の目的のために、Ｔ細胞は、培養Ｔ細胞（例えば、初代Ｔ細胞）、又は培養Ｔ細胞株（例えば、Ｊｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１など）からのＴ細胞、又は哺乳動物から得られたＴ細胞など、任意のＴ細胞であり得る。哺乳動物から得られる場合、Ｔ細胞は、多数の供給源（骨髄、血液、リンパ節、胸腺、又は他の組織若しくは体液を含むが、これらに限定されない）から得ることができる。Ｔ細胞はまた、濃縮又は精製され得る。Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞であり得る。Ｔ細胞は、ヒトから単離されたＴ細胞であり得る。Ｔ細胞は、任意の種類のＴ細胞であり得、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋二重陽性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞（例えば、Ｔｈ１及びＴｈ２細胞）、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、末梢血白血球（ＰＢＬ）、腫瘍浸潤細胞、メモリＴ細胞、ナイーブＴ細胞などを含むがこれらに限定されない、任意の発達段階のものであり得る。Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋Ｔ細胞であってよい。
いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、ＮＫ細胞である。
いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、ＣＴＬである。
いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、Ｔｒｅｇである。
いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、ヒト胚性幹細胞である。
いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、リンパ球前駆細胞である。
いくつかの実施形態では、単離免疫応答性細胞は、多能性幹細胞である。
一実施形態では、本開示のＣＡＲ Ｔ細胞は、所望のＣＡＲ、例えば、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン、ＣＤ８αヒンジ、及び膜貫通ドメイン、並びにヒト４－１ＢＢ及びＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを含むレンチウイルスベクターを細胞に導入することによって生成され得る。本開示のＣＡＲ Ｔ細胞は、インビボで複製することができ、その結果、持続的な腫瘍制御につながり得る長期持続性が得られる。
本発明の実施形態は、本明細書に記載の組み換え発現ベクターのいずれかを含む、宿主細胞を更に提供する。本明細書で使用するとき、「宿主細胞」という用語は、組み換え発現ベクターを含有し得る任意のタイプの細胞を指す。宿主細胞は、真核細胞、例えば、植物、動物、若しくは藻類、真菌であり得るか、又は、原核細胞、例えば、細菌若しくは原生動物であり得る。宿主細胞は、培養細胞又は初代細胞であり得る、すなわち、生物、例えば、ヒトから直接単離され得る。宿主細胞は、接着細胞又は浮遊細胞、すなわち、懸濁物中で増殖する細胞であり得る。好適な宿主細胞は、当該技術分野において既知であり、例えば、ＤＨ５α大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルＶＥＲＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞などが挙げられる。組み換え発現ベクターを増幅又は複製する目的で、宿主細胞は、原核細胞、例えば、ＤＨ５α細胞であり得る。組み換えＣＡＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を産生する目的で、宿主細胞は、哺乳動物細胞であり得る。宿主細胞はヒト細胞であり得る。宿主細胞は、任意の細胞タイプのものであり得、任意の組織タイプに由来し得、任意の発達段階のものであり得るが、宿主細胞は末梢血リンパ球（peripheral blood lymphocyte、ＰＢＬ）であり得る。宿主細胞はＴ細胞であり得る。
本明細書に記載の少なくとも１つの宿主細胞を含む細胞集団も提供される。細胞集団は、少なくとも１つの他の細胞、例えば、組み換え発現ベクターのいずれも含まない宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）、又はＴ細胞以外の細胞（例えば、Ｂ細胞、マクロファージ、赤血球、好中球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋細胞、脳細胞など）に加えて、記載される組み換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を含む不均質な集団であり得る。代替的に、細胞集団は、実質的に均質な集団であり得、この場合、その集団は、組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を主に含む（例えば、本質的にそれらからなる）。集団はまた、細胞のクローン集団であり得、この場合、集団の全ての細胞が組み換え発現ベクターを含む単一の宿主細胞のクローンであり、そのため、集団の全ての細胞は組み換え発現ベクターを含む。一実施形態では、細胞集団は、本明細書に記載の組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。
ポリヌクレオチド、宿主細胞、及びベクター
本発明はまた、本開示のｈＫ２結合タンパク質のいずれかをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。ｈＫ２結合タンパク質は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメイン、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質、及び本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。
本発明はまた、ｈＫ２結合タンパク質又はその断片のいずれかをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１３７のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１６２のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１６４のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１６６のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１６８のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号２０４のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１５９のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１６１のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１３９のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号４、５、又は６のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号７５のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１３８のＶＬをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１６３のＶＬをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１６５のＶＬをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１６７のＶＬをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１６９のＶＬをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号２０５のＶＬをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１４０のＶＬをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１６０のＶＬをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号７４のＶＬをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号１、２、又は３のＶＬをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、以下をコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する
配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；
配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；又は
配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ。
特定の実施形態では、本発明は、配列番号１６２のＶＨをコードしている単離ポリヌクレオチド及び／又は配列番号１６３のＶＬをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１３３、１３４、１３５、１３６、３０８、３１６、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９のポリペプチドをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、１４９、１５０、１５１、１５２、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２．４２３、４２４、又は４２５のポリペプチドをコードしている単離ポリヌクレオチドを提供する。
いくつかの実施形態では、本開示のｈＫ２結合タンパク質をコードしている単離ポリヌクレオチド配列は、配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６３、２７１、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、３０３、３０４、３０５、３０６、３１２、３１６、３１７、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、４４６、４５０、又は４５１のポリヌクレオチドと少なくとも８５％同一である。
いくつかの実施形態では、本開示のｈＫ２結合タンパク質をコードしている単離ポリヌクレオチド配列は、配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６３、２７１、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、３０３、３０４、３０５、３０６、３１２、３１６、３１７、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、４４６、４５０、又は４５１のポリヌクレオチドと少なくとも９０％同一である。
いくつかの実施形態では、本開示のｈＫ２結合タンパク質をコードしている単離ポリヌクレオチド配列は、配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６３、２７１、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、３０３、３０４、３０５、３０６、３１２、３１６、３１７、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、４４６、４５０、又は４５１のポリヌクレオチドと少なくとも９５％同一である。
いくつかの実施形態では、本開示のｈＫ２結合タンパク質をコードしている単離ポリヌクレオチド配列は、配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６３、２７１、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、３０３、３０４、３０５、３０６、３１２、３１６、３１７、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、４４６、４５０、又は４５１のポリヌクレオチドと少なくとも９８％同一である。
いくつかの実施形態では、本開示のｈＫ２結合タンパク質をコードしている単離ポリヌクレオチド配列は、配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６３、２７１、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、３０３、３０４、３０５、３０６、３１２、３１６、３１７、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、４４６、４５０、又は４５１のポリヌクレオチドと少なくとも９９％同一である。
本発明はまた、配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６３、２６７、２７１、２６７、２７４、２８２、２９２、２９３、２９４、２９５、３０３、３０４、３０５、３０６，３１２、３１６、３６３、３６４、３６５、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、又は３７４の単離ポリヌクレオチドを提供する。
本発明はまた、配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６３、２７１、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、３０３、３０４、３０５、３０６、３１２、３１６、３１７、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、４４６、４５０、又は４５１の単離ポリヌクレオチドを提供する。特定の実施形態では、本開示は、配列番号３５４のポリヌクレオチド配列をコードしている単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、配列番号２２１のポリヌクレオチド配列をコードしている単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、配列番号３６０のポリヌクレオチド配列をコードしている単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、配列番号３５４、２２１、及び３６０のポリヌクレオチド配列をコードしている単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、例えば、配列番号３６７のポリヌクレオチドと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％、又は１００％）同一である単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、例えば、配列番号３０３のポリヌクレオチドと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％、又は１００％）同一である単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、例えば、配列番号３７３のポリヌクレオチドと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％、又は１００％）同一である単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、配列番号３６１のポリヌクレオチド配列をコードしている単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、配列番号２２１のポリヌクレオチド配列をコードしている単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、配列番号３６２のポリヌクレオチド配列をコードしている単離ポリヌクレオチド配列を提供する。特定の実施形態では、本開示は、配列番号３６１、２２１、及び３６２のポリヌクレオチド配列をコードしている単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、例えば、配列番号３７０のポリヌクレオチドと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％、又は１００％）同一である単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、例えば、配列番号３０３のポリヌクレオチドと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％、又は１００％）同一である単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
特定の実施形態では、本開示は、例えば、配列番号３７４のポリヌクレオチドと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％、又は１００％）同一である単離ポリヌクレオチド配列を提供する。
本開示のいくつかの実施形態はまた、本開示のｈＫ２結合タンパク質をコードしているポリヌクレオチド又は本開示のｈＫ２結合タンパク質をコードしているポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドを含む、単離又は精製核酸を提供する。
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドは、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得る。「高ストリンジェンシー条件」は、ポリヌクレオチドが、非特異的なハイブリダイゼーションよりも強い検出可能な量で標的配列（本明細書に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列）に特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェンシー条件としては、正確に相補的な配列を有するポリヌクレオチド、又は散らばったミスマッチをほんのわずか含むポリヌクレオチドを、ヌクレオチド配列とマッチしたいくつかの小領域（例えば、３～１２塩基）を有することとなったランダム配列から識別する条件が挙げられる。かかる相補的な小領域は、１４～１７又はそれ以上の塩基の完全長相補体よりも容易に融解され、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションにより、それらが容易に識別可能となる。比較的高いストリンジェンシー条件としては、例えば、低塩及び／又は高温条件（例えば、約５０～７０℃の温度の約０．０２～０．１ＭのＮａＣｌ又は同等のものによって提供される）が挙げられる。かかる高ストリンジェンシー条件は、ヌクレオチド配列とテンプレート鎖又は標的鎖との間のミスマッチがあったとしてもほとんど許容されず、本明細書に記載のＣＡＲのいずれかの発現を検出するために特に好適である。条件は、漸増量のホルムアミドの添加によって、よりストリンジェントになり得ることが、概ね理解される。
本開示のポリヌクレオチド配列は、意図とする宿主細胞においてヌクレオチド配列を発現させる１つ以上の制御エレメント（例えばプロモーター又はエンハンサー）に動作可能に連結し得る。ポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡであってもよい。プロモーターは、強い、弱い、組織特異的、誘導性、又は発生段階特異的なプロモーターであってよい。使用することができる例示的なプロモーターは、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータ－アクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋肉クレアチンなどである。加えて、多くのウイルスプロモータが、真核細胞中で恒常的に機能し、記載された実施形態での使用に適している。このようなウイルスプロモータとしては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ＳＶ４０の初期及び後期プロモーター、マウス乳腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、モロニー白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、及び他のレトロウイルスの長い末端反復配列（ＬＴＲ）、並びに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターが挙げられる。メタロチオネインプロモーター、テトラサイクリン誘導性プロモーター、ドキシサイクリン誘導性プロモーター、タンパク質キナーゼＲ２’，５’－オリゴアデニル酸合成酵素、Ｍｘ遺伝子、ＡＤＡＲ１などの１つ以上のインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）を含有するプロモーターなどの誘導性プロモーターを使用してもよい。
本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含む、ベクターを提供する。本開示はまた、本発明のポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。このようなベクターは、プラスミドベクター、ウイルスベクター、バキュロウイルス発現用ベクター、トランスポゾンベースのベクター、又は任意の手段によって所与の生物又は遺伝的バックグラウンドに本発明の合成ポリヌクレオチドを導入するのに好適な任意の他のベクターであってよい。本開示のｈＫ２結合タンパク質をコードしているポリヌクレオチドは、ｈＫ２結合タンパク質の発現を確実にする発現ベクター中の制御配列に動作可能に連結され得る。このような調節エレメントには、転写プロモータ、好適なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、並びに転写及び翻訳の終了を制御する配列を挙げることができる。発現ベクターはまた、１つ以上の非転写エレメント、例えば、複製起点、発現する遺伝子に連結された好適なプロモーター及びエンハンサー、他の５’又は３’隣接非転写配列、５’又は３’非翻訳配列（例えば、必須リボソーム結合部位）、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位、又は転写終結配列を含んでいてもよい。宿主において複製する能力を付与する複製起点もまた組み込まれてもよい。
発現ベクターは、天然に存在する若しくは天然に存在しないヌクレオチド間結合、又は両方の種類の結合を含み得る。天然に存在しない又は改変されたヌクレオチド又はヌクレオチド間結合は、ベクターの転写又は複製を阻害しない。
ベクターを適切な宿主に組み込んではら、組み込まれたポリヌクレオチドによってコードされている本開示のｈＫ２結合タンパク質を高レベルで発現させるのに好適な条件下で宿主を維持する。脊椎動物細胞を形質転換するのに使用される発現ベクター中の転写及び翻訳制御配列は、ウイルス資源により提供することができる。例示的なベクターは、Ｏｋａｙａｍａ ａｎｄ Ｂｅｒｇ，３ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３）に記載されたように構築されてもよい。Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３）。
本開示のベクターはまた、１つ以上の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含有していてもよい。ＩＲＥＳ配列の融合ベクター内への包含は、一部のタンパク質の発現を増強させるのに有益であり得る。いくつかの実施形態では、ベクター系は、１つ以上のポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０）を含み、その部位は、前述の核酸配列のうちいずれかの上流又は下流にあってもよい。ベクターの成分は、近接して連結されてもよいか、又は遺伝子産物を発現させるのに最適な間隔を提供するように（即ち、ＯＲＦ間に「スペーサー」ヌクレオチドを導入することにより）配置されてもよいか、又は別の方法で位置付けられてもよい。調節エレメント、例えば、ＩＲＥＳモチーフはまた、発現に最適な間隔を提供するように配置されてもよい。
本開示のベクターは、環状であっても線形であってもよい。これらは、原核生物又は真核生物の宿主細胞において機能的な複製系を含有するように調製され得る。複製系は、例えば、ＣｏｌＥ１、ＳＶ４０、２μプラスミド、λ、ウシパピローマウイルスなどに由来していてよい。
組み換え発現ベクターは、一過性の発現のため、安定な発現のため、又はその両方のために設計され得る。また、組み換え発現ベクターは、構成的発現又は誘導性発現のために作製され得る。
更に、組み換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製され得る。本明細書で使用するとき、「自殺遺伝子」という用語は、自殺遺伝子を発現する細胞を死に至らしめる遺伝子を指す。自殺遺伝子は、遺伝子を発現する細胞に対し薬剤（例えば、薬物）に対する感受性を付与し、細胞が薬剤と接触したとき又は薬剤に曝露されたときに細胞を死に至らしめる遺伝子であり得る。自殺遺伝子は、当該技術分野において既知であり、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、及びニトロレダクターゼが挙げられる。
ベクターはまた、当技術分野において周知の選択マーカーを含んでいてもよい。選択マーカーは、陽性及び陰性選択マーカーを含む。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質、重金属などに対する耐性）、栄養要求性宿主における原栄養を提供するための補完などを含む。例示的なマーカー遺伝子としては、抗生物質耐性遺伝子（例えば、ネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、ペニシリン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、ヒスチジノールｘ耐性遺伝子）、グルタミン合成酵素遺伝子、ガンシクロビル選択用のＨＳＶ－ＴＫ、ＨＳＶ－ＴＫ誘導体、又は６－メチルプリン選択用の細菌プリンヌクレオシドホスホリラーゼ遺伝子が挙げられる（Ｇａｄｉ ｅｔ ａｌ．，７ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７３８－１７４３（２０００））。選択マーカーをコードする核酸配列又はクローニング部位は、対象となるポリペプチドをコードする核酸配列又はクローニング部位の上流又は下流にあってもよい。
使用され得る例示的なベクターは、細菌：ｐＢｓ、ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔ、ＰｓｉＸ１７４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ、ｐＢｓ ＫＳ、ｐＮＨ８ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８ａ、ｐＮＨ４６ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡ）；ｐＴｒｃ９９Ａ、ｐＫＫ２２３－３、ｐＫＫ２３３－３、ｐＤＲ５４０、及びｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）。真核生物：ｐＷＬｎｅｏ、ｐＳＶ２ｃａｔ、ｐＯＧ４４、ＰＸＲ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）ｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ及びｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｐＥＥ６．４（Ｌｏｎｚａ）並びにｐＥＥ１２．４（Ｌｏｎｚａ）である。追加のベクターは、ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｌｅｎ Ｂｕｒｎｉｅ，Ｍｄ．）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、及びｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）を含む。λＧＴ１０、λＧＴ１１、λＥＭＢＬ４、及びλＮＭ１１４９、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）などのバクテリオファージベクターを使用することができる。例示的な植物発現ベクターとしては、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ０１．２、ｐＢＩ１２１、ｐＢＩ１０１．３、及びｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。例示的な動物発現ベクターとしては、ｐＥＵＫ－Ｃｌ、ｐＭＡＭ、及びｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。発現ベクターは、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター、例えば、ガンマレトロウイルスベクターであってよい。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１３７のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１６２のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１６４のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１６６のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１６８のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０４のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１５９のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１６１のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１３９のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号４、５、又は６のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号７５のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１３８のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１６３のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１６５のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１６７のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１６９のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２０５のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１４０のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１６０のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号７４のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１、２、又は３のＶＨをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、以下をコードしているポリヌクレオチドを含む
配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；
配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；又は
配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１３３、１３４、１３５、１３６、３０８、３１６、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９のポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、１４９、１５０、１５１、１５２、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３。４２４、又は４２５のポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含む。
特定の実施形態では、ベクターは、配列番号３５４のポリペプチド配列をコードしているポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ベクターは、配列番号２２１のポリペプチド配列をコードしているポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ベクターは、配列番号３６０のポリペプチド配列をコードしているポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本開示は、配列番号３５４、２２１、及び３６０のベクター、ポリペプチド配列を提供する。
特定の実施形態では、ベクターは、配列番号３６７のポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ベクターは、配列番号３０３のポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ベクターは、配列番号３７３のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号３６７、３０３、及び３７３のポリヌクレオチド配列を含む。
特定の実施形態では、ベクターは、配列番号３６１のポリペプチド配列をコードしているポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ベクターは、配列番号２２１のポリペプチド配列をコードしているポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ベクターは、配列番号３６２のポリペプチド配列をコードしているポリヌクレオチドを含む。
特定の実施形態では、ベクターは、配列番号３７０のポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ベクターは、配列番号３０３のポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、ベクターは、配列番号３７４のポリヌクレオチドを含む。
また、本発明は、本発明の１つ以上のベクターを含む、宿主細胞を提供する。「宿主細胞」は、ベクターが導入された細胞を指す。宿主細胞という用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の後代、また特定の対象細胞から生成された安定な細胞株も指すことを意図すると理解される。変異又は環境による影響のいずれかにより、後続世代においてある特定の改変が生じることがあるため、そのような後代は親細胞と同一ではないことがあるが、本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲内には依然として含まれる。そのような宿主細胞は、真核細胞、原核細胞、植物細胞、又は古細菌細胞であってもよい。原核宿主細胞の例は、大腸菌（Escherichia coli）、バチルス・スブチリス（Bacillus subtilis）などの桿菌、並びにサルモネラ属（Salmonella）、セラチア属（Serratia）、及び様々なシュードモナス属（Pseudomonas）の種などの他の腸内細菌科のものである。酵母などの他の微生物も発現に有用である。好適な酵母宿主細胞の例は、サッカロミセス（Saccharomyces）（例えば、Ｓ．セレビジアエ（S.cerevisiae））及びピキア（Pichia）である。例示的な真核細胞は、哺乳動物、昆虫、鳥類、又は他の動物由来のものであってもよい。哺乳類真核細胞としては、不死化細胞株（例えばハイブリドーマ）又は骨髄腫細胞株（例えばＳＰ２／０（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＣＲＬ－１５８１）、ＮＳ０（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ，ＵＫ、ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．８５１１０５０３）、ＦＯ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１６４６）及びＡｇ６５３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８０）マウス細胞株）が挙げられる。例示的なヒト骨髄腫細胞株は、Ｕ２６６（ＡＴＴＣ ＣＲＬ－ＴＩＢ－１９６）である。他の有用な細胞株としては、ＣＨＯ－Ｋ１ＳＶ（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ））、ＣＨＯ－Ｋ１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－６１）、又はＤＧ４４などの、チャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞に由来するものが挙げられる。
本開示はまた、ｈＫ２結合タンパク質が発現する条件下で本開示の宿主細胞を培養することと、宿主細胞によって生成されたｈＫ２結合タンパク質を回収することと、を含む、本開示のｈＫ２結合タンパク質の生成方法も提供する。タンパク質を作製し、それを精製する方法は既知である。（化学的に又は組み換えによって）合成されてから、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティカラム、カラムクロマトグラフィ、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）精製、ゲル電気泳動などを含む標準的な手順に従ってｈＫ２結合タンパク質を精製することができる（全般的には、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．，（１９８２）を参照）。対象タンパク質は、実質的に純粋、例えば、純度が少なくとも約８０％～８５％、純度が少なくとも約８５％～９０％、純度が少なくとも約９０％～９５％、又は純度が少なくとも約９８％～９９％、若しくはそれ以上であってよく、例えば、細胞残屑、対象タンパク質以外の巨大分子などの夾雑物を含んでいなくてよい。
本開示のｈＫ２結合タンパク質をコードしているポリヌクレオチドを、標準的な分子生物学的方法を用いてベクターに組み込むことができる。宿主細胞の形質転換、培養、抗体発現、及び精製は、周知の方法を使用して行われる。
修飾ヌクレオチドを使用して、本開示のポリヌクレオチドを生成することができる。例示的な修飾ヌクレオチドは、５－フルオロウラシル、５－ブロモウラシル、５－クロロウラシル、５－ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４－アセチルシトシン、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、Ｎ６－置換アデニン、７－メチルグアニン、５－メチルアミノメチルウラシル、５－メトキシアミノメチル－２－チオウラシル、ベータ－Ｄ－マンノシルキューオシン、５″－メトキシカルボキシメチルウラシル、５－メトキシウラシル、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデニン、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、ウィブトキソシン（wybutoxosine）、シュードウラシル、キューオシン、ベータ－Ｄ－ガラクトシルキューオシン、イノシン、Ｎ６－イソペンテニルアデニン、１－メチルグアニン、１－メチルイノシン、２，２－ジメチルグアニン、２－メチルアデニン、２－メチルグアニン、３－メチルシトシン、５－メチルシトシン、２－チオシトシン、５－メチル－２－チオウラシル、２－チオウラシル、４－チオウラシル、５－メチルウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、３－（３－アミノ－３－Ｎ－２－カルボキシプロピル）ウラシル、及び２，６－ジアミノプリンである。
医薬組成物／投与
本発明はまた、本開示のｈＫ２結合タンパク質と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物を提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインと、医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質と、医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質と、医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
本開示はまた、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲと、医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
治療用途では、本開示のｈＫ２結合タンパク質は、医薬的に許容される担体中に活性成分として有効量の抗体を含有する医薬組成物として調製することができる。「担体」は、本発明の抗体が共に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。このようなビヒクルは、水、及び石油、動物、植物、又は合成物由来のものを含む油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの液体であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを用いてよい。これらの溶液は滅菌され、概して粒子状物質を含まない。これらは、従来周知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる。組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされる医薬的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調節剤及び緩衝剤、安定剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤などを含み得る。そのような医薬製剤中の本発明の抗体の濃度は、約０．５重量％未満から通常少なくとも約１重量％まで、最大で１５又は２０重量％まで変動し得、また、選択される投与方法に従って、必要とされる用量、流体体積、粘度などに主に基づいて選択され得る。好適なビヒクル及び製剤（他のヒトタンパク質、例えばヒト血清アルブミンを含む）は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔＥｄｉｔｉｏｎ，Ｔｒｏｙ，Ｄ．Ｂ．ｅｄ．，Ｌｉｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ ２００６，Ｐａｒｔ ５，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｐｐ６９１－１０９２に記載され、特にｐｐ．９５８－９８９を参照されたい。
本開示のｈＫ２結合タンパク質の投与方式は、当該技術分野において既知である通り、非経口投与、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、若しくは皮下、経粘膜（経口、鼻腔内、膣内、直腸）投与、又は当業者に理解される他の手段などの任意の好適な経路であってよい。
本開示の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、組成物、例えば、ＣＡＲ発現細胞及び医薬的に許容される担体を含む好適な医薬組成物で提供され得る。一態様では、本開示は、記載される１つ以上のＣＡＲを発現する有効量のリンパ球及び医薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本開示の医薬組成物は、ＣＡＲ発現細胞、例えば、本明細書に記載されるような複数のＣＡＲ発現細胞を、１つ以上の医薬的又は生理学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤と組み合わせて含み得る。医薬的に許容される担体は、有効成分以外の、対象に対して無毒性である医薬組成物中の成分であり得る。
医薬的に許容される担体としては、バッファ、賦形剤、安定剤、又は防腐剤を挙げることができる。医薬的に許容される担体の例は、生理学的に適合性の溶剤、分散媒体、コーティング剤、抗菌及び抗真菌剤、等張及び吸収遅延剤などであり、例えば、塩、緩衝液、抗酸化剤、糖類、水性若しくは非水性担体、防腐剤、湿潤剤、界面活性剤、若しくは乳化剤、又はこれらの組み合わせである。医薬組成物中の医薬的に許容される担体の量は、担体の活性並びに安定性及び／又は最小酸化などの製剤の所望の特徴に基づいて実験的に決定することができる。用語「医薬的に許容される」とは、医薬組成物に関して本明細書で使用するとき、連邦政府若しくは州政府の規制機関によって承認されているか、あるいは米国薬局方又は動物及び／若しくは又はヒトにおける使用について他の全般的に認識されている薬局方に列挙されていることを意味する。
治療及び使用方法
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を治療する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを、当該ｈＫ２発現癌を治療するのに十分な時間にわたって、それを必要としている対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を治療する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質を、当該ｈＫ２発現癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を治療する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を、当該ｈＫ２発現癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を治療する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを、当該ｈＫ２発現癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を治療する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む免疫コンジュゲートを、当該ｈＫ２発現癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を治療する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む医薬組成物を、当該ｈＫ２発現癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、リンパ球注入を使用して、癌を有するか又は癌を有するリスクのある対象を治療するために、ＣＡＲを発現する遺伝的に改変されたＴ細胞を投与する方法を提供する。
少なくとも１つの実施形態では、自己リンパ球注入が治療に使用される。自己ＰＢＭＣは、治療を必要とする対象から収集され、本明細書に記載され当該技術分野において既知の方法を使用して、Ｔ細胞を活性化及び増殖して、次いで対象に注入して戻される。
一態様では、本開示は、概して、癌を発症するリスクのある対象の治療に関する。本発明はまた、化学療法及び／又は免疫療法により対象において著しく免疫が抑制され、それによって対象の癌を発症するリスクを増加させる、悪性腫瘍又は自己免疫疾患を治療することを含む。
本開示はまた、癌性状態を発症するリスクを有する対象における非癌性状態を治療する方法であって、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを当該対象に投与して当該非癌性状態を治療することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、癌性状態を発症するリスクを有する対象における非癌性状態を治療する方法であって、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質を当該対象に投与して当該非癌性状態を治療することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、癌性状態を発症するリスクを有する対象における非癌性状態を治療する方法であって、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を当該対象に投与して当該非癌性状態を治療することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、癌性状態を発症するリスクを有する対象における非癌性状態を治療する方法であって、本開示の免疫コンジュゲートを当該対象に投与して当該非癌性状態を治療することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、癌性状態を発症するリスクを有する対象における非癌性状態を治療する方法であって、本開示の医薬組成物を当該対象に投与して当該非癌性状態を治療することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、癌性状態を発症するリスクを有する対象における非癌性状態を治療する方法であって、本開示のＣＡＲを当該対象に投与して当該非癌性状態を治療することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、癌性状態を発症するリスクを有する対象は、前立腺肥大を有する。
いくつかの実施形態では、癌性状態を発症するリスクを有する対象は、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）を有する。
いくつかの実施形態では、癌性状態を発症するリスクを有する対象は、診断された前立腺癌の非存在下で高ＰＳＡレベルを有する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を予防する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを、当該ｈＫ２発現癌を予防するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を予防する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質を、当該ｈＫ２発現癌を予防するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を予防する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を、当該ｈＫ２発現癌を予防するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を予防する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを、当該ｈＫ２発現癌を予防するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を予防する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む免疫コンジュゲートを、当該ｈＫ２発現癌を予防するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現癌を予防する方法であって、治療有効量の本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む医薬組成物を、当該ｈＫ２発現癌を予防するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減する方法であって、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを、当該ｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減する方法であって、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むタンパク質を、当該ｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減する方法であって、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を、当該ｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減する方法であって、本開示のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲを、当該ｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減する方法であって、本開示の免疫コンジュゲートを、当該ｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象におけるｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減する方法であって、本開示の医薬組成物を、当該ｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２発現癌は、前立腺癌である。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２発現癌は、前立腺由来癌である。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２発現癌は、骨に転移している。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２発現癌は、乳癌である。
いくつかの実施形態では、ｈＫ２発現癌は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）発現乳癌である。
いくつかの実施形態では、前立腺癌は、再発性、難治性、悪性、若しくは去勢抵抗性の前立腺癌、又はこれらの任意の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、乳癌は、再発性、難治性、若しくは悪性の乳癌、又はこれらの任意の組み合わせである。
本開示はまた、対象における前立腺癌を治療する方法であって、治療有効量のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を、前立腺癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含み、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが以下を含む、方法を提供する
配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；
配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；又は
配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ。
本開示はまた、対象における前立腺癌を治療する方法であって、治療有効量のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を、前立腺癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含み、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１３３、１３４、１３５、１３６、３０８、３１６、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象における乳癌を治療する方法であって、治療有効量のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を、乳癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含み、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが以下を含む、方法を提供する
配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；
配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ；
配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；又は
配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ。
本開示はまた、対象における乳癌を治療する方法であって、治療有効量のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を、乳癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含み、当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１３３、１３４、１３５、１３６、３０８、３１６、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９のアミノ酸配列を含む、方法を提供する。
本開示はまた、対象における前立腺癌を治療する方法であって、治療有効量のリンパ球抗原に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を、前立腺癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含み、当該リンパ球抗原に結合する抗原結合ドメインが以下を含む、方法を提供する：
配列番号１１６のＨＣＤＲ１、配列番号１１７のＨＣＤＲ２、配列番号１１８のＨＣＤＲ３、配列番号１１９のＬＣＤＲ１、配列番号１２０のＬＣＤＲ２、及び配列番号１２１のＬＣＤＲ３；
配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６０のＬＣＤＲ３；又は
配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３。
本開示はまた、対象における前立腺癌を治療する方法であって、治療有効量のリンパ球抗原に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を、前立腺癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含み、当該リンパ球抗原に結合する抗原結合ドメインが以下を含む、方法を提供する：
配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５０のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５２のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５３のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５４のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５７のＶＬ。
本開示はまた、対象における乳癌を治療する方法であって、治療有効量のリンパ球抗原に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を、乳癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含み、当該リンパ球抗原に結合する抗原結合ドメインが以下を含む、方法を提供する：
配列番号１１６のＨＣＤＲ１、配列番号１１７のＨＣＤＲ２、配列番号１１８のＨＣＤＲ３、配列番号１１９のＬＣＤＲ１、配列番号１２０のＬＣＤＲ２、及び配列番号１２１のＬＣＤＲ３；
配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６０のＬＣＤＲ３；又は
配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３。
本開示はまた、対象における乳癌を治療する方法であって、治療有効量のリンパ球抗原に結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質を、乳癌を治療するのに十分な時間にわたって、当該対象に投与することを含み、当該リンパ球抗原に結合する抗原結合ドメインが以下を含む、方法を提供する：
配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５０のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５２のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５３のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５４のＶＬ；又は
配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５７のＶＬ。
一態様では、本開示は、癌を予防する方法を提供し、本方法は、記載される１つ以上のＣＡＲを発現するリンパ球の量を、それを必要とする対象に投与することを含む。
一態様では、本開示は、癌を有する対象を治療する方法を提供し、本方法は、記載される１つ以上のＣＡＲを発現する治療有効量のリンパ球を、それを必要とする対象に投与することを含み、それにより、リンパ球は対象における癌細胞の死滅を誘導又は調節する。
別の態様では、本開示は、癌を有する対象における腫瘍量を低減する方法を提供し、本方法は、記載される１つ以上のＣＡＲを発現する治療有効量のリンパ球を、それを必要とする対象に投与することを含み、それにより、リンパ球は対象における癌細胞の死滅を誘導する。別の態様では、本開示は、癌を有する対象の生存期間を増加させる方法を提供し、本方法は、記載される１つ以上のＣＡＲを発現する治療有効量のリンパ球を、それを必要とする対象に投与することを含み、それにより、対象の生存期間が長くなる。概ね、ＣＡＲを発現するリンパ球により、対象における癌細胞の死滅が誘導され、対象における腫瘍／癌細胞の低減又は根絶がもたらされる。標的とすることができる転移性病変を含む癌の非限定的なリストは、前立腺癌及び乳癌、並びにこれらの組み合わせを含む。一実施形態では、対象において治療される癌は、前立腺癌及び乳癌である。
一態様では、本明細書に記載の方法は、例えば、前立腺肥大、及び診断された前立腺癌の非存在下での高ＰＳＡレベルなどの、癌性状態に発達するリスクのある非癌性状態の治療に適用可能である。
一態様では、癌を有する対象を治療する方法であって、治療有効量のｈＫ２抗原に結合する細胞外抗原結合ドメインを有するＣＡＲを発現するリンパ球を、それを必要としている対象に投与し、それによって、当該リンパ球が当該対象における癌細胞の死滅を誘導することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲのうちの少なくとも１つは、配列番号４６～６１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
一態様では、癌細胞の標的化死滅の方法が開示される。当該方法は、癌細胞を、記載される１つ以上のＣＡＲを発現するリンパ球と接触させることを含み、それにより、リンパ球は癌細胞の死滅を誘導する。標的とすることができる転移性癌細胞を含む癌細胞の非限定的なリストは、前立腺癌及びその組み合わせを含む。一実施形態では、癌細胞は、前立腺癌細胞である。
治療有効量が指定されている場合、投与される本開示のＣＡＲ又はＣＡＲ－Ｔの正確な量は、対象の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度、及び状態における個々の差異を考慮して、医師が判断することができる。概して、本明細書に記載のＴ細胞を含む医薬組成物は、約１０４～約１０１０細胞／ｋｇ（体重）、場合によっては約１０５～約１０６細胞／ｋｇ（体重）の投与量（これらの範囲内の全ての整数値を含む）で投与してよいと述べることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴ細胞を含む医薬組成物は、約１０６細胞／ｋｇ（体重）の投与量で投与され得る。Ｔ細胞組成物はまた、これらの投与量で複数回投与され得る。細胞は、免疫療法において通常に知られている注入技術を使用することによって投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８）。
本発明のＣＡＲ－Ｔの状況において有用な送達システムは、Ｔ細胞組成物の送達が、治療される部位の感作の前に、そして、感作を引き起こすために十分な時間で行われるように、徐放性、遅延放出、及び持続性放出送達システムを含み得る。組成物は、他の療法薬又は療法と併用することができる。かかるシステムは、組成物の反復投与を回避することにより、対象及び医師に対する利便性を高めることができ、本発明における特定の組成物の実施形態に対して特に好適であり得る。
多くの種類の放出送達系が利用可能であり、当業者に既知である。これらには、ポリ（ラクチド－グリコリド）、コポリオキサレート、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、及びポリ無水物などのポリマー基本成分系が含まれる。前述の薬物含有ポリマーのマイクロカプセルは、例えば、米国特許第５，０７５，１０９号に記載されている。送達系としてはまた、コレステロール、コレステロールエステルなどのステロール、並びに脂肪酸又はモノ－ジ－及びトリ－グリセリドなどの中性脂肪を含む脂質である非ポリマー系、シラスティック系、ペプチド基本成分系、ヒドロゲル放出系、ワックスコーティング、従来のバインダー及び賦形剤を使用した圧縮錠剤、部分的に融合したインプラントなども挙げられる。具体例としては、（ａ）米国特許第４，４５２，７７５号、同第４，６６７，０１４号、同第４，７４８，０３４号、及び同第５，２３９，６６０号に記載されているものなど、活性組成物がマトリックス内の形態で含有される浸食系、並びに（ｂ）米国特許第３，８５４，４８０号及び同第３，８３２，２５３号に記載されているものなどの活性成分が制御された速度でポリマーから浸透する拡散系が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、ポンプベースのハードウェア送達システムが使用され得、そのうちのいくつかは埋め込み用に適合されている。
特定の態様では、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、その後、血液を再採取し（又はアフェレーシスを実施し）、本開示によるＴ細胞を活性化し、これらの活性化及び増殖したＴ細胞を対象に再注入することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週間ごとに複数回実行することができる。特定の態様では、Ｔ細胞は、１０ｃｃ～４００ｃｃの採血から活性化され得る。特定の態様では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、又は１００ｃｃの採血から活性化される。
ＣＡＲ－Ｔ細胞及び組成物の投与は、任意の方法、例えば、非経口投与又は非経腸投与（エアロゾル吸入、注射、注入、経口摂取、輸血、埋め込み、又は移植を含む）によって実施することができる。例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ－Ｔ細胞及び組成物は、経動脈、皮内、皮下、腫瘍内、髄内、節内、筋肉内経路で、静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって、又は腹腔内経路で患者に投与され得る。一態様では、本開示の組成物は、ｉ．ｖ．注射によって投与される。一態様では、本開示の組成物は、皮内注射又は皮下注射によって対象に投与される。Ｔ細胞の組成物は、例えば、腫瘍、リンパ節、組織、器官、又は感染部位に直接注射することができる。
投与は、自己投与又は非自己投与であり得る。例えば、ヒトカリクレイン－２（例えば、ｈＫ２）特異的ＣＡＲを発現する免疫応答性細胞は、１人の対象から得ることができ、同じ対象又は異なる適合性対象に投与することができる。本開示の末梢血由来Ｔ細胞、又は拡大Ｔ細胞（例えば、インビボ、エクスビボ、又はインビトロ由来）は、例えば、静脈内注射、局所注射、全身注射、カテーテル投与、又は非経口投与を介して投与することができる。
特定の実施形態では、対象は白血球搬出法を受けることができ、その場合、対象となる細胞、例えば、Ｔ細胞を選択及び／又は単離するために、白血球をエクスビボで収集、濃縮、又は枯渇させる。これらの単離されたＴ細胞は、当該技術分野において既知の方法によって増殖させることができ、本開示の１つ以上のＣＡＲコンストラクトが導入され得るように処理され、それによってＣＡＲ－Ｔ細胞を作製することができる。それを必要とする対象は、その後、高用量化学療法による標準的な治療と、それに続く末梢血幹細胞移植を受ける場合がある。特定の態様では、移植後又は移植と同時に、対象は、増殖したＣＡＲ－Ｔ細胞の注入を受ける。一態様では、増殖した細胞は、手術の前又は後に投与される。
悪性腫瘍を有する患者に投与される投与量は、治療される疾患を緩和するか、又は少なくとも部分的に阻止するために十分な量である（「治療有効量」）。対象に投与される上記治療の投与量は、治療される状態の正確な性質及び治療のレシピエントによって変化する。ヒト投与のための投与量の増減は、当該技術分野において概ね受け入れられている慣行に従って実行することができる。
本発明のＣＡＲ Ｔ細胞は、インビボにおけるＴ細胞拡大を受けることができ、血中及び骨髄中で長期間にわたって高レベルで持続するｈＫ２特異的記憶細胞を得ることができる。いくつかの例では、対象に注入された本発明のＣＡＲ Ｔ細胞は、進行した化学療法抵抗性癌を有する対象において、インビボで癌細胞、例えば、前立腺癌細胞を排除することができる。
一実施形態では、例えばインビトロ転写を使用して本開示のＣＡＲをＴ細胞に導入し、対象（例えば、ヒト）に、本開示のＣＡＲ－Ｔ細胞を初回投与し、ＣＡＲ－Ｔ細胞を１回以上後続投与し、当該１回以上の後続投与は、前回の投与の１５日未満後、例えば、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、又は２日後に投与される。一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞を対象（例えば、ヒト）に１週間に２回以上投与する、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞を１週間に２、３、又は４回投与する。一実施形態では、対象に、ＣＡＲ－Ｔ細胞を１週間に２回以上投与し（例えば、１週間に２、３又は４回投与）（本明細書ではサイクルとも称される）、その後、ＣＡＲ－Ｔ細胞投与がない週が続き、続いて、ＣＡＲ－Ｔ細胞を１回以上追加投与する（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞を１週間に２回以上投与）。別の実施形態では、対象に、ＣＡＲ－Ｔ細胞を２サイクル以上で投与し、各サイクル間の時間は、１０、９、８、７、６、５、４、又は３日未満である。一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、１週間に３回の投与のために、１日おきに投与される。一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、少なくとも２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、又はそれ以上の週にわたって投与される。
一実施形態では、投与は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、５週間、６週間、７週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、又はそれ以上後に繰り返され得る。また、治療過程を繰り返すことも、長期にわたる投与として可能である。繰り返し投与は、同一用量であっても異なる用量であってもよい。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、例えば、１週間に１回、６ヶ月又はそれ以上の期間などの維持療法によって、本発明の方法で投与することができる。
一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、レンチウイルスなどのレンチウイルスウイルスベクターを使用して生成される。かかるウイルスベクターで生成されたＣＡＲ－Ｔ細胞は、安定したＣＡＲ発現を概して有する。
一実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、形質導入後４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５日間、ＣＡＲベクターを一過性に発現する。ＣＡＲの一過性発現は、ＲＮＡ ＣＡＲベクターの送達によって行われ得る。一実施形態では、ＣＡＲ ＲＮＡは、エレクトロポレーションによってＴ細胞に形質導入される。
一過性のＣＡＲ療法（ＲＮＡ形質導入によって生成されるものなど）の過程で患者が抗ＣＡＲ抗体応答を生成するリスクが高い場合、ＣＡＲ Ｔ注入の中断は、１０～１４日を超えて続けないことが必要である。
併用療法
本開示のｈＫ２結合タンパク質は、少なくとも１つの追加の療法と併用投与してもよい。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の療法は、手術、化学療法、アンドロゲン枯渇療法、若しくは放射線、又はこれらの任意の組み合わせである。
いくつかの実施形態では、１つの治療の送達は、第２の送達が開始されるときにも依然として起こるため、投与に関して重複がある。これは、本明細書において「同時」又は「同時送達」と称されることがある。他の実施形態では、１つの治療の送達は、もう１つの治療の送達が開始される前に終了する。いずれの場合もいくつかの実施形態では、併用投与することにより、治療がより効果的になる。例えば、第２の治療はより効果的であり、例えば、同等の効果が、第２の治療を少なくして見られ、又は第２の治療が、第１の治療なく第２の治療が施される場合に見られるよりも、症状を大幅に軽減し、又は第１の治療と同様の状況が見られる。いくつかの実施形態では、送達は、障害に関連する症状又は他のパラメータの軽減が、他の治療なしで送達される１つの治療で観察される軽減よりも大きくなるようなものである。２つの治療の効果は、部分的に相加的であるか、全体的に相加的であるか、又は相加的を超えるものであり得る。送達は、送達された第１の治療の効果が、第２の送達時に依然として検出可能であるようなものであり得る。
一実施形態では、インターロイキン、並びにＧ－、Ｍ－及びＧＭ－ＣＳＦなどのコロニー刺激因子、並びにインターフェロンを含むがこれらに限定されない、因子などの他の治療薬は、ＣＡＲ－Ｔ細胞などのｈＫ２結合タンパク質の前、後、又は同時に（一斉に）投与してよい。
本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞などのｈＫ２結合タンパク質及び少なくとも１つの追加の治療剤は、同時に、同じ若しくは別個の組成物で、又は逐次投与してよい。逐次投与の場合、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞などのｈＫ２結合タンパク質を最初に投与し、２番目に追加の剤を投与してもよく、又は投与の順序を逆にしてもよい。
更なる実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞などのｈＫ２結合タンパク質は、治療レジメンにおいて手術、放射線、化学療法、免疫抑制剤、抗体、又は他の免疫破壊剤と組み合わせて使用してよい。別の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ発現細胞などのｈＫ２結合タンパク質は、抗アンドロゲン治療と組み合わせて使用してもよい。一実施形態では、対象に、ＣＡＲ発現細胞の活性を増強する薬剤を投与することができる。例えば、一実施形態では、薬剤は、阻害分子を阻害する薬剤であり得る。
二重特異性実施形態
本発明の二重特異性ｈｋ２／ＣＤ３抗体の実施形態を以下に提供する。
ＫＬＣＢ９１
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号２５５、２５６、２７５、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号１３６のｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３５１のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
ＫＬＣＢ１０５
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号１３６のｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３５１のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
ＫＬＣＢ９５
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号１３４のｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３５２のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
ＫＬＣＢ９６
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号１３４のｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３５２のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
ＫＬＣＢ１７０
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号３２５のｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３５３のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
ＫＬＣＢ８０
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１のドメインは、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３５４のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む。
ＫＬＣＢ８１
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号４４４のＶＬを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３５５のＨＣ１、配列番号２２３のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む。
ＫＬＣＢ１１３
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３５６のＨＣ１、配列番号２２２のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む。
ＫＬＣＢ２８１
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号３２５のｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３５３のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
ＫＬＣＢ１７４
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号３１６のｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３５７のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
ＫＬＣＢ１５３
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号３１６のｓｃＦＶを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３５７のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
ＫＬＣＢ２４５
実施形態によれば、単離抗ｈｋ２／抗ＣＤ３タンパク質は、ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインは、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。実施形態によれば、ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインは、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインは、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む。実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質は、配列番号３６１のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６２のＨＣ２を含む。
本明細書にて開示した実施形態のいくつかを更に説明するために、以下の実施例を提供する。これらの実施例は、例示を目的とするものであって、本開示の実施形態を限定するものではない。
番号付き実施形態
本開示はまた、以下の番号付きの実施形態を提供する。
１．カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離タンパク質。
２．当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨを含む、実施形態１に記載の単離タンパク質。
３．当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨを含む、実施形態２に記載の単離タンパク質。
４．当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬを含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の単離タンパク質。
５．当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１６３のＶＬを含む、実施形態４に記載の単離タンパク質。
６．当該ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、Ｆａｂである、実施形態１～５のいずれか１つに記載の単離タンパク質。
７．半減期延長部分にコンジュゲートされ、当該半減期延長部分が、免疫グロブリン（Ｉｇ）、Ｉｇの断片、Ｉｇ定常領域、又はＩｇ定常領域の断片である、実施形態１～６のいずれか１つに記載の単離タンパク質。
８．当該Ｉｇ定常領域又は当該Ｉｇ定常領域の断片が、当該タンパク質のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）への結合を低減する少なくとも１つの変異を含み、任意選択で、当該タンパク質のＦｃγＲへの結合を低減する変異が、Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓである、実施形態７に記載の単離タンパク質。
９．当該Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインに少なくとも１つの変異を含み、任意選択で、当該Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける変異が、Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗである、実施形態７又は８に記載の単離タンパク質。
１０．当該Ｉｇ重鎖定常領域が、配列番号３７８のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態７～９のいずれか１つに記載の単離タンパク質。
１１．当該Ｉｇ重鎖定常領域が、配列番号３７８のアミノ酸配列を含む、実施形態９に記載の単離タンパク質。
１２．当該Ｉｇ軽鎖定常領域が、配列番号３０９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態７～１１のいずれか１つに記載の単離タンパク質。
１３．当該Ｉｇ軽鎖定常領域が、配列番号３０９のアミノ酸配列を含む、実施形態１２に記載の単離タンパク質。
１４．配列番号３５４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣを含む、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の単離タンパク質。
１５．配列番号３５４のＨＣを含む、実施形態１４に記載の単離タンパク質。
１６．配列番号２２１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＬＣを含む、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の単離タンパク質。
１７．配列番号２２１のＬＣを含む、実施形態１６に記載の単離タンパク質。
１８．多重特異性タンパク質である、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の単離タンパク質。
１９．当該多重特異性タンパク質が、二重特異性タンパク質である、実施形態１８に記載の単離タンパク質。
２０．リンパ球上の抗原に結合する抗原結合ドメインを含む、実施形態１８又は１９に記載の多重特異性タンパク質。
２１．当該リンパ球が、Ｔ細胞である、実施形態２０に記載の多重特異性タンパク質。
２２．当該Ｔ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施形態２１に記載の多重特異性タンパク質。
２３．当該リンパ球が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、実施形態２２に記載の多重特異性タンパク質。
２４．当該リンパ球上の抗原が、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、又はＮＫＧ２Ｃである、実施形態２０～２３のいずれか１つに記載の多重特異性タンパク質。
２５．当該リンパ球上の抗原が、ＣＤ３εである、実施形態２４に記載の多重特異性タンパク質。
２６．当該ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、実施形態２５に記載の多重特異性タンパク質：
ａ．配列番号１１６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１１７のＨＣＤＲ２、配列番号１１８のＨＣＤＲ３、配列番号１１９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１２０のＬＣＤＲ２、及び配列番号１２１のＬＣＤＲ３；又は
ｂ．配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬ。
２７．当該ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５７のＶＬを含む、実施形態２５に記載の多重特異性タンパク質。
２８．当該ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、実施形態２５に記載の多重特異性タンパク質：
ａ．配列番号２５５の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６０のＬＣＤＲ３；又は
ｂ．配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３；又は
ｃ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
ｄ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５０のＶＬ；又は
ｅ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬ；又は
ｆ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５２のＶＬ；又は
ｇ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５３のＶＬ；又は
ｈ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５４のＶＬ。
２９．当該ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む、実施形態２５のいずれか１つに記載の多重特異性タンパク質。
３０．当該ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨを含む、実施形態２９に記載の多重特異性タンパク質。
３１．当該ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨを含む、実施形態３０に記載の多重特異性タンパク質。
３２．当該ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２５１のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬを含む、実施形態２９～３１のいずれか１つに記載の多重特異性タンパク質。
３３．当該ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２５１のＶＬを含む、実施形態３２に記載の多重特異性タンパク質。
３４．当該ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、ｓｃＦＶである、実施形態２５～３３のいずれか１つに記載の多重特異性タンパク質。
３５．当該ｓｃＦＶが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である、実施形態３４に記載の多重特異性タンパク質。
３６．当該ｓｃＦｖが、配列番号３３１のｓｃＦｖである、実施形態３５に記載の多重特異性タンパク質。
３７．当該リンパ球上の抗原に結合する抗原結合ドメインが、半減期延長部分にコンジュゲートされ、当該半減期延長部分が、免疫グロブリン（Ｉｇ）、Ｉｇの断片、Ｉｇ定常領域、又はＩｇ定常領域の断片である、実施形態２５～３６のいずれか１つに記載の多重特異性タンパク質。
３８．当該Ｉｇ定常領域又は当該Ｉｇ定常領域の断片が、当該タンパク質のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）への結合を低減する少なくとも１つの変異を含み、任意選択で、当該タンパク質のＦｃγＲへの結合を低減する変異が、Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓである、実施形態３７に記載の多重特異性タンパク質。
３９．当該タンパク質が、当該Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインに少なくとも１つの変異を含み、任意選択で、当該Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインにおける変異が、Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖである、実施形態３７又は３８に記載の多重特異性タンパク質。
４０．当該Ｉｇ定常領域が、配列番号１０９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３７～３９のいずれか１つに記載の多重特異性タンパク質。
４１．当該Ｉｇ定常領域が、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む、実施形態４０に記載の多重特異性タンパク質。
４２．配列番号３６０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態２５～４１のいずれか１つに記載の多重特異性タンパク質。
４３．配列番号３６０のアミノ酸配列を含む、実施形態４２に記載の多重特異性タンパク質。
４４．当該抗原結合ドメインが、配列番号３４１、４４８、及び４４９の配列を有するエピトープ内のＣＤ３に結合する、実施形態２５～４３のいずれか１つに記載の多重特異性タンパク質。
４５．当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、当該リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
４６．当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨを含む、実施形態４５に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
４７．当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨを含む、実施形態４６に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
４８．当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬを含む、実施形態４５～４７のいずれか１つに記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
４９．当該ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６３のＶＬを含む、実施形態４８に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
５０．当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるｓｃＦＶを含む、実施形態４５～４９のいずれか１つに記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
５１．当該リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む、実施形態５０に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
５２．当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５４のＨＣ１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ１を含む、実施形態４５～５１のいずれか１つに記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
５３．当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５４のＨＣ１を含む、実施形態５２に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
５４．当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号２２１のＬＣ１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＬＣ１を含む、実施形態４５～５３のいずれか１つに記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
５５．当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号２２１のＬＣ１を含む、実施形態５４に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
５６．当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３６０のＨＣ２と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ２を含む、実施形態４５～５５のいずれか１つに記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
５７．当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３６０のＨＣ２を含む、実施形態５６に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
５８．当該単離多重特異性タンパク質が、ＨＣ１及びＨＣ２のＣ末端にリジン（例えば、Ｋ４７７）を含む、実施形態５２～５７のいずれか１つに記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
５９．当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３６１のＨＣ１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ１を含む、実施形態５８に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
６０．当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３６１のＨＣ１を含む、実施形態５９に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
６１．当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３６２のＨＣ２と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ２を含む、実施形態５８～６０のいずれか１つに記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
６２．当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３６２のＨＣ２を含む、実施形態６１に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
実施例１．抗ｈＫ２抗体及びｓｃＦｖの作製
親ｍ１１Ｂ６抗体のヒト化からの抗体作製。
親マウス抗ＨＫ２抗体、ｍ１１Ｂ６は、Ｖａｉｓａｎｅｎら（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５０：９，１６０７－１６１７（２００４））に記載されている。ヒト化１１Ｂ６（本明細書ではｈｕ１１Ｂ６と称する）は、米国特許第９，３４５，７８２号及び同第１０，１００，１２５号において作製及び記載されている。
ｈｕ１１Ｂ６の遺伝子操作を開始して、改善された熱安定性などの改善された特性を有する追加の抗ＨＫ２抗体を作製した。モデリングを使用してｈｕ１１Ｂ６の熱安定性を改善するために場合により変更されることができるｈｕ１１Ｂ６フレームワークにおける残基の位置を同定した。同定された位置は、ＶＨにおける残基Ｐ４１、Ｉ４９、Ｍ７０、及びＡ８８、並びにＶＬにおけるＳ８０、Ｌ８２、Ａ８８、及びＹ９１であった（残基付番は、配列番号５のｈｕ１１Ｂ６＿ＶＨ及び配列番号２のｈｕ１１Ｂ６＿ＶＬのアミノ酸配列に従った）。
可変領域のうちの１つがコンビナトリアルライブラリを表し、第２のものが親ｈｕ１１Ｂ６ＶＨ又はＶＬである、ＶＨ－リンカー－ＶＬ配向で、バイナリコンビナトリアルｓｃＦｖライブラリを作製した。ＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳ（配列番号７）のリンカー配列を使用して、ＶＨ／ＶＬ領域をコンジュゲートさせた。遺伝子操作されたｓｃＦｖを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させ、上清中の生成されたｓｃＦｖを、ＥＬＩＳＡによってヒトｈＫ２への結合について試験し、ｈｕ１１Ｂ６の結合と比較した。ｈｕ１１Ｂ６と同等の結合を示す任意の新たなバリアントを集約し、５５℃、６０℃、及び６５℃で１０分間、上清をインキュベートした後にヒトｈＫ２への結合について更に試験した。５５℃、６０℃、及び６５℃でインキュベートした後にｈｕ１１Ｂ６への同等の結合を保持しており、熱安定性が改善していた分子を両配向（ＶＨ－リンカー－ＶＬ；ＶＬ－リンカー－ＶＨ）でマトリクス化し、更なる特性評価のために哺乳類ｓｃＦｖに変換した。マトリックス化したｓｃＦｖもＣＡＲコンストラクトに組み込み、実施例１１に更に記載する通り更に特性評価した。
加えて、親マウス１１Ｂ６の別のヒト化を、Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ（ＭＡｂｓ．２０１５；７（４）：７７８－９１）によって概説されているアプローチに従って、広範囲に及ぶ生殖系列の多様性で実施し、増強された熱安定性についてバリアントを慎重にスクリーニングした。配列保存に基づいて、ヒト重鎖生殖系列ＩＧＨＶ４－３０及び軽鎖生殖系列ＩＧＫＶ３Ｄ－１１を、フレームワーク適合について選択した。体細胞超変異部位及びマウス／ヒト生殖細胞系列の多様性の選択セットを含む残基を用いて、バイナリｓｃＦｖライブラリを構築した。バリアントをクローニングし、上記の通り大腸菌で発現させた。増強された熱安定性について、シングルポイントＥＬＩＳＡにおいて異なる温度で上清をスクリーニングした。マウス／ヒトキメラ１１Ｂ６ ｓｃＦＶを親対照として使用した。マウス１１Ｂ６と同様の結合活性及び６７℃のＴｍ値を維持していたクローンＫＬ２Ｂ３５９を、追加のプロファイリングのためにｓｃＦｖ－Ｆｃ及びＣＡＲ－Ｔに変換した。ＳＰＲによって測定されたＫＬ２Ｂ３５９のｈＫ２への親和性（ＫＤ）は、約０．７～１ｎＭであった。このキャンペーンからＨＣＦ３－ＬＣＤ６、ＨＣＧ５－ＬＣＢ７、ＫＬ２Ｂ３５７、ＫＬ２Ｂ３５８、及びＫＬ２Ｂ３６０も得られ、機能性について更に特性評価した。
ヒト免疫グロブリン遺伝子座を発現するトランスジェニックマウス（Ａｂｌｅｘｉｓ（登録商標））及びトランスジェニックラット（ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標））を使用した抗体作製。
ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）は、キメラヒト／ラットＩｇＨ座（ラットＣＨ座に連結された天然構成の２２のヒトＶＨ、全てのヒトＤ及びＪＨセグメントを含む）を完全なヒトＩｇＬ座（Ｊκ－Ｃκに連結された１２のＶκ及びＪλ－Ｃλに連結された１６のＶλ）と共に含有する。（例えば、Ｏｓｂｏｒｎ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９０（４）：１４８１－１４９０を参照されたい）。したがって、ラットは、ラット免疫グロブリンの低減した発現を呈し、導入されたヒト重
鎖及び軽鎖の導入遺伝子は、免疫化に応答して、クラススイッチ及び体細胞変異を受けて、完全ヒト可変領域を有する高親和性キメラヒト／ラットＩｇＧモノクローナル抗体を生成した。ＯｍｎｉＲａｔ（登録商標）の調製及び使用、並びにこのようなラットが有しているゲノム改変は、国際公開第１４／０９３９０８号に記載されている。
Ａｂｌｅｘｉｓ（登録商標）マウスは、ヒトＣＨ１及びＣＬドメインに連結されたヒト可変ドメイン、キメラヒト／マウスヒンジ領域、及びマウスＦｃ領域を有する抗体を生成する。Ａｂｌｅｘｉｓカッパマウス及びラムダマウス系統は、以下に記載されるように、その重鎖がヒト又はマウスのいずれであるかによって区別される。カッパマウスによって生成される抗体は、マウスＶＨ、ＤＨ及びＪＨエキソン及びマウスＶκ、Ｊκ、及びＣκエキソンに由来する配列を欠いている。内因性マウスＩｇλは、カッパマウスにおいて活性である。ヒトＩｇκ鎖は、約９０～９５％のナイーブレパートリーを含み、マウスＩｇλ鎖は、この系統において約５～１０％のナイーブレパートリーを含む。ラムダマウスによって生成される抗体は、マウスＶＨ、ＤＨ及びＪＨエキソン及びマウスＶλ、Ｊλ、及びＣλエキソンに由来する配列を欠いている。内因性マウスＩｇλは、ラムダマウスにおいて活性である。ヒトＩｇλ鎖は、約４０％のナイーブレパートリーを含み、マウスＩｇκ鎖は、約６０％のナイーブレパートリーを含む。Ａｂｌｅｘｉｓ（登録商標）の調製及び使用、並びにこのようなマウスが保有しているゲノム改変は、国際公開第１１／１２３７０８号に記載されている。
Ａｂｌｅｘｉｓマウス及びＯｍｎｉＲａｔラットを可溶性完全長ＫＬＫ２タンパク質（ヒトカリクレイン－２ ６－Ｈｉｓタンパク質）で免疫した。
ヒトカリクレイン－２ ６－Ｈｉｓタンパク質
ＶＰＬＩＥＧＲＩＶＧＧＷＥＣＥＫＨＳＱＰＷＱＶＡＶＹＳＨＧＷＡＨＣＧＧＶＬＶＨＰＱＷＶＬＴＡＡＨＣＬＫＫＮＳＱＶＷＬＧＲＨＮＬＦＥＰＥＤＴＧＱＲＶＰＶＳＨＳＦＰＨＰＬＹＮＭＳＬＬＫＨＱＳＬＲＰＤＥＤＳＳＨＤＬＭＬＬＲＬＳＥＰＡＫＩＴＤＶＶＫＶＬＧＬＰＴＱＥＰＡＬＧＴＴＣＹＡＳＧＷＧＳＩＥＰＥＥＦＬＲＰＲＳＬＱＣＶＳＬＨＹＳＥＫＶＴＥＦＭＬＣＡＧＬＷＴＧＧＫＤＴＣＧＧＤＳＧＧＰＬＶＣＮＧＶＬＱＧＩＴＳＷＧＰＥＰＣＡＬＰＥＫＰＡＶＹＴＫＶＶＨＹＲＫＷＩＫＤＴＩＡＡＮＰＨＨＨＨＨＨ（配列番号４５４）
Ａｂｌｅｘｉｓマウス及びＯｎｉＲａｔラット由来のリンパ球をリンパ節から抽出し、コホートごとに融合を行った。細胞を合わせ、ＣＤ１３８発現について選別した。可溶性ｈＫ２抗原を使用してハイスループット小型化ＭＳＤフォーマットで、ハイブリドーマスクリーニングを実施した。約＞３００個のサンプルがｈＫ２バインダーであると同定された。Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ ＳＰＲによる単一サイクル速度論法によって、＞３００個の抗ｈＫＬＫ２上清サンプルのヒトＫＬＫ２タンパク質への結合を測定した。更に、上清サンプルをヒトＫＬＫ３タンパク質への結合についても同様に試験した。並行して、上清を、フローサイトメトリーによって、ＫＬＫ２発現細胞株ＶＣａｐ及び陰性細胞株ＤＵ１４５への結合についても試験した。選択された細胞バインダーを、上記の通り、ＶＨ－ＶＬ及びＶＬ／ＶＨの両配向におけるｓｃＦｖ変換及び熱安定性試験に進めた。Ａｂｌｅｘｉｓマウス免疫キャンペーンから、ＫＬ２Ｂ４１３、ＫＬ２Ｂ３０、ＫＬ２Ｂ５３、及びＫＬ２Ｂ２４２が得られた。ＯｍｎｉＲａｔ免疫キャンペーンから、ＫＬ２Ｂ４６７及びＫＬ２Ｂ４９４が得られた。
上記の様々な免疫化及びヒト化キャンペーンを通して生成された抗体を、ｆａｂフォーマット、ｍＡｂフォーマット、ＶＨ－リンカーＶＬ配向のｓｃＦｖフォーマット、又はＶＬ－リンカー－ＶＨ配向のｓｃＦｖフォーマットで発現させ、以下に記載の通り更に分析した。上記配列番号７のリンカー配列を使用して、ＶＨ／ＶＬ領域をコンジュゲートさせた。
実施例２．抗ＫＬＫ２抗体の構造的特性評価
細胞内アッセイにおいて最も高い性能を示した抗体可変ドメイン及びｓｃＦｖ抗体断片の配列を本明細書に提供する。可変ドメインは、ｆａｂフォーマット、ＶＨ－リンカーＶＬ配向のｓｃＦｖフォーマット、又はＶＬ－リンカー－ＶＨ配向のｓｃＦｖフォーマットで発現させた。
可変ドメインＶＨ、ＶＬ、及びＣＤＲ
表３は、選択された抗ｈＫ２抗体のＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を示す。表４は、選択された抗ｈＫ２選択抗体のＫａｂａｔ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を示す。表５は、選択された抗ｈＫ２抗体のＫａｂａｔ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を示す。表６は、選択された抗ｈＫ２抗体のＡｂＭ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を示す。表７は、抗ｈＫ２のＡｂＭ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を示す。表８は、選択されたｈＫ２抗体の可変ドメイン配列及び配列番号をまとめる。表９は、ＶＨ及びＶＬ領域のタンパク質及びＤＮＡの配列番号を示す。
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配列番号２２５（ｍ１１Ｂ６ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＧＡＴＧＴＧＣＡＧＣＴＴＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＡＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＣＡＣＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＧＣＧＡＴＴＡＣＧＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＡＧＴＴＣＣＣＴＧＧＡＡＡＴＣＧＡＣＴＣＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＡＴＴＴＣＡＴＡＣＴＣＣＧＧＴＴＣＡＡＣＣＡＣＴＴＡＣＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＴＧＡＡＡＴＣＴＡＧＧＴＴＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＣＧＴＧＡＴＡＣＣＴＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＡＴＴＴＴＴＴＣＴＧＣＡＡＣＴＧＡＡＴＡＧＣＧＴＡＡＣＴＣＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＴＣＴＧＣＧＣＣＡＣＴＧＧＧＴＡＴＴＡＣＴＡＴＧＧＣＴＣＡＧＧＴＴＴＣＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＴＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＡＧＣＡＧＣ
配列番号２２６（ｈｕ１１Ｂ６ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＣＡＧＧＴＣＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＧＧＧＣＣＴＧＧＴＡＡＡＧＣＣＡＴＣＣＧＡＣＡＣＡＴＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＧＴＧＴＧＣＧＧＴＡＡＧＴＧＧＡＡＡＣＴＣＴＡＴＣＡＣＴＡＧＣＧＡＣＴＡＴＧＣＧＴＧＧＡＡＴＴＧＧＡＴＡＡＧＡＣＡＡＣＣＧＣＣＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＡＧＧＡＴＡＴＡＴＣＡＧＣＴＡＴＴＣＣＧＧＴＴＣＴＡＣＧＡＣＡＴＡＣＡＡＴＣＣＴＴＣＣＣＴＧＡＡＡＡＧＣＡＧＡＧＴＣＡＣＴＡＴＧＴＣＡＣＧＣＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＡＧＡＡＴＣＡＧＴＴＣＴＣＡＴＴＧＡＡＡＴＴＧＴＣＡＴＣＣＧＴＡＡＣＧＧＣＣＧＴＴＧＡＣＡＣＴＧＣＧＧＴＴＴＡＴＴＡＴＴＧＣＧＣＡＡＣＣＧＧＡＴＡＴＴＡＣＴＡＣＧＧＣＴＣＴＧＧＴＴＴＴＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＡＡＣＡＣＴＴＧＴＴＡＣＴＧＴＴＡＧＴＴＣＡ
配列番号２２７（ＨＣＦ３－ＬＣＤ６ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＡＡＧＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＧＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＧＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＧＴＴＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＣＡＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＣＣＴＧＴＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣ
配列番号２２８（ＨＣＧ５－ＬＣＢ７ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＡＡＧＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＧＣＣＧＴＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＡＧＣＧＡＣＴＡＣＧＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＣＣＧＣＣＡＧＴＴＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＡＣＡＴＣＡＧＣＴＡＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＣＡＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣＣＧＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＣＣＣＣＴＧＴＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣ
配列番号２２９（ＫＬ２Ｂ３５７，ＫＬ２Ｂ３６０ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＣＴＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＴＧＡＣＴＡＣＧＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＴＣＧＧＣＡＧＴＴＣＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＴＣＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＴＣＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＴＣＣＣＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＣＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＣＴＧＣＴＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＴＴＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＴＡＣＣＧＴＧＴＣＴＡＧＴ
配列番号２３０（ＫＬ２Ｂ３５８ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＣＴＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＴＧＡＣＴＡＣＧＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＴＣＧＧＣＡＧＣＣＡＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＴＣＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＴＣＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＴＣＣＣＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＣＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＣＴＧＣＴＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＴＴＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＴＡＣＣＧＴＧＴＣＴＡＧＴ
配列番号２３１（ＫＬ２Ｂ３５９ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＣＡＧＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＡＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＣＴＣＴＣＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＣＴＧＡＣＴＡＣＧＣＣＴＧＧＡＡＣＴＧＧＡＴＴＣＧＧＣＡＧＴＴＣＣＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＣＣＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴＣＧＧＣＴＡＣＡＴＣＴＣＣＴＡＣＴＣＣＧＧＴＴＣＣＡＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＴＣＣＣＧＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＧＣＧＡＣＡＣＣＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＴＣＣＴＣＣＧＴＧＡＣＣＧＣＴＧＣＴＧＡＴＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＴＧＣＣＡＣＣＧＧＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＴＴＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＴＡＣＣＧＴＧＴＣＴＡＧＴ
配列番号２３２（ＫＬ２Ｂ４１３ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＡＣＴＴＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＧＡＧＧＴＣＴＧＧＴＣＣＡＡＣＣＣＧＧＡＧＧＡＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＴＡＧＴＧＧＣＴＴＣＡＣＴＴＴＣＡＧＣＴＣＡＴＡＴＴＧＧＡＴＧＡＣＡＴＧＧＧＴＧＡＧＡＣＡＡＧＣＣＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＴＡＧＣＴＡＡＣＡＴＴＡＡＡＣＡＧＧＡＣＧＧＣＴＣＣＧＡＡＣＧＧＴＡＣＴＡＴＧＴＴＧＡＴＴＣＴＧＴＧＡＡＧＧＧＡＣＧＧＴＴＣＡＣＴＡＴＡＴＣＣＡＧＧＧＡＴＡＡＴＧＣＡＡＡＡＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＴＣＡＣＴＣＡＧＡＧＣＡＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＣＧＣＣＡＧＧＧＡＴＣＡＡＡＡＴＴＡＴＧＡＣＡＴＡＣＴＧＡＣＣＧＧＴＣＡＴＴＡＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＣＣＧＴＴＡＣＣＧＴＣＴＣＡＡＧＴ
配列番号２３３（ＫＬ２Ｂ３０ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＧＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＴＣＧＧＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＴＴＡＣＴＡＣＴＧＧＡＧＣＴＧＧＡＴＣＣＧＧＣＡＧＣＣＣＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＡＴＡＴＡＴＣＴＡＴＴＡＣＡＧＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＴＣＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＡＴＣＡＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＴＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＧＧＧＡＣＴＡＣＧＡＴＴＴＴＴＧＧＡＧＴＧＧＴＴＡＣＣＣＣＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２３４（ＫＬ２Ｂ５３ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＴＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＧＴＴＡＴＧＡＣＡＴＡＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＣＡＴＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＡＡＧＡＣＴＡＴＡＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＧＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＧＡＣＴＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＣＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＡＡＧＴＧＧＣＴＧＧＴＣＣＣＡＣＴＡＣＴＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡ
配列番号２３５（ＫＬ２Ｂ２４２ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＧＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＴＣＧＧＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＴＴＡＣＴＡＴＴＧＧＡＧＣＴＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＣＣＧＣＣＧＧＧＴＣＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧＣＧＴＴＴＡＴＡＴＧＴＣＡＧＴＧＧＧＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＣＴＣＡＡＧＡＧＴＣＧＡＧＴＣＡＣＣＴＴＧＴＣＡＣＴＡＧＡＣＣＣＧＴＣＣＡＧＧＡＡＣＣＡＧＴＴＧＴＣＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＡＧＴＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＴＴＧＴＧＣＧＧＧＡＧＡＴＡＧＴＧＧＧＡＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴＴＧＧＴＴＣＧＡＣＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２３６（ＫＬ２Ｂ４６７ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＧＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＴＡＣＴＡＴＧＧＣＡＴＧＣＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＡＴＴＴＡＴＡＴＣＡＴＡＴＧＡＴＧＧＡＡＧＴＡＡＴＡＡＡＴＡＣＴＡＴＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＣＣＡＣＣＴＣＣＣＴＴＡＴＡＧＴＧＧＧＡＧＣＴＡＣＴＧＧＧＣＣＴＴＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡ
配列番号２６３（ＫＬ２Ｂ４９４ ＶＨ ｃＤＮＡ）
ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＴＡＧＴＣＡＴＴＡＴＧＣＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＡＣＴＡＴＴＧＧＴＧＧＴＡＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＧＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＧＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＡＡＣＣＴＣＡＴＡＴＴＧＴＡＡＴＧＧＴＧＡＣＴＧＣＴＣＴＴＣＴＣＴＡＣＧＡＣＧＧＴＡＴＧＧＡＣＧＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
配列番号２３７（ｍ１１Ｂ６ ＶＬ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＴＣＣＡＧＣＡＴＣＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＴＣＴＴＴＧＧＧＧＣＡＧＣＧＧＧＣＡＡＣＡＡＴＴＴＣＡＴＧＣＣＧＴＧＣＡＴＣＴＧＡＡＡＧＴＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＴＧＧＡＡＣＴＴＣＴＣＴＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＧＣＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＡＣＴＣＣＴＴＡＴＡＴＡＴＧＣＣＧＣＴＴＣＣＡＡＣＧＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＡＧＴＡＣＣＡＧＣＡＣＧＣＴＴＴＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＧＴＣＣＧＧＣＡＣＡＧＡＣＴＴＴＴＣＣＣＴＣＡＡＴＡＴＣＣＡＡＣＣＴＧＴＴＧＡＡＧＡＡＧＡＣＧＡＴＴＴＴＴＣＣＡＴＧＴＡＴＴＴＴＴＧＣＣＡＡＣＡＧＡＣＡＣＧＣＡＡＧＧＴＴＣＣＡＴＡＴＡＣＡＴＴＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＴＡＡＡＣＴＴＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
配列番号２３８（ｈｕ１１Ｂ６ ＶＬ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＡＧＴＣＴＴＧＡＣＴＣＡＧＡＧＣＣＣＧＧＡＴＴＣＣＣＴＴＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＡＣＧＡＧＣＴＡＣＧＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＧＣＡＡＧＴＧＡＡＴＣＣＧＴＡＧＡＡＴＡＣＴＴＣＧＧＧＡＣＡＴＣＡＴＴＧＡＴＧＣＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＧＣＡＡＣＣＧＣＣＣＡＡＡＴＴＧＣＴＧＡＴＡＴＡＴＧＣＧＧＣＴＡＧＴＡＡＴＡＧＡＧＡＡＴＣＡＧＧＡＧＴＡＣＣＧＧＡＴＡＧＧＴＴＴＡＧＴＧＧＴＴＣＡＧＧＡＴＣＡＧＧＴＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＡＴＡＡＧＴＡＧＣＴＴＧＣＡＡＧＣＣＧＡＡＧＡＣＧＴＡＧＣＡＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＡＡＣＣＣＧＡＡＡＧＧＴＧＣＣＡＴＡＴＡＣＧＴＴＴＧＧＡＣＡＧＧＧＴＡＣＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
配列番号２３９（ＨＣＦ３－ＬＣＤ６ ＶＬ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＧＡＣＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＡＧＡＧＣＧＴＧＧＡＧＴＡＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＣＴＧＣＣＡＧＣＡＡＣＣＧＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＡＧＡＣＣＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＣＡＧＡＧＣＧＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＣＴＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＣＡＡＧＧＴＧＣＣＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧ
配列番号２４０（ＨＣＧ５－ＬＣＢ７ ＶＬ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＧＡＣＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＡＧＣＣＴＧＧＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＧＡＧＡＧＣＧＴＧＧＡＧＴＡＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＣＴＧＣＣＡＧＣＡＡＣＣＧＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＡＧＡＣＣＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＣＧＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＣＡＡＧＧＴＧＣＣＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧ
配列番号２４１（ＫＬ２Ｂ３５７ ＶＬ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＡＣＴＣＴＣＴＧＧＣＴＧＴＧＴＣＴＣＴＧＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＡＴＣＡＡＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＣＣＧＡＧＴＣＣＧＴＧＧＡＡＴＡＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＴＣＴＣＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＣＣＧＣＣＴＣＣＡＡＣＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＴＧＣＣＣＧＡＴＡＧＡＴＴＴＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＴＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＡＴＧＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＣＴＡＣＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ
配列番号２４２（ＫＬ２Ｂ３５８，ＫＬ２Ｂ３５９，ＫＬ２Ｂ３６０ ＶＬ ｃＤＮＡ）
ＧＡＧＡＴＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＣＡＣＴＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣＣＴＣＣＧＡＧＴＣＣＧＴＧＧＡＡＴＡＣＴＴＣＧＧＣＡＣＣＴＣＴＣＴＧＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＴＡＧＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＣＣＧＣＣＴＣＣＡＡＣＧＴＣＧＡＡＴＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＣＧＣＴＡＧＡＴＴＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＡＣＴＴＴＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＣＴＣＣＧＴＧＧＡＡＣＣＣＧＡＧＧＡＴＴＴＣＧＣＴＧＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＣＣＣＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＣＴＡＣＡＣＡＴＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧ
配列番号２４３（ＫＬ２Ｂ４１３ ＶＬ ｃＤＮＡ）
ＧＡＡＡＴＣＧＴＡＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＴＴＣＴＴＧＡＧＴＧＣＡＴＣＡＧＴＴＧＧＧＧＡＴＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＴＡＣＴＴＧＴＡＧＡＧＣＡＴＣＴＣＡＡＧＧＴＡＴＴＴＣＴＴＣＡＴＡＣＴＴＧＴＣＴＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＴＧＧＣＡＡＧＧＣＡＣＣＣＡＡＡＣＴＣＴＴＧＡＴＣＴＡＣＧＣＣＡＣＣＴＣＴＡＣＡＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＣＴＡＧＧＴＴＴＴＣＡＧＧＣＴＣＣＧＧＣＴＣＴＧＧＴＡＣＣＧＡＧＴＴＣＡＣＣＣＴＣＡＣＴＡＴＡＡＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＣＧＣＴＡＣＴＴＡＴＴＡＴＴＧＴＣＡＧＣＡＧＣＴＴＡＡＴＴＣＴＴＡＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＡＣＴＡＡＧＧＴＣＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
配列番号２４４（ＫＬ２Ｂ３０ ＶＬ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＧＧＣＡＴＴＡＧＣＡＧＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＴＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＴＴＧＣＡＡＡＧＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＡＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＣＴＴＡＡＴＡＧＴＴＡＣＣＣＴＣＴＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
配列番号２４５（ＫＬ２Ｂ５３ ＶＬ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＡＣＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＴＴＣＣＴＡＡＧＴＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＴＴＧＣＡＣＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＣＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＡＡＧＴＡＴＡＡＣＡＧＴＧＣＣＣＣＧＴＡＣＡＣＴＴＴＴＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＣＧＡＣＴＧＧＡＧＡＴＴＡＡＡ
配列番号２４６（ＫＬ２Ｂ２４２ ＶＬ ｃＤＮＡ）
ＴＣＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡＧＴＧＴＣＣＧＴＧＴＣＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＡＣＡＧＣＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＴＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＴＴＧＧＧＧＧＡＡＡＡＴＴＡＴＧＣＴＴＧＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＣＣＣＴＧＴＧＴＴＧＧＴＣＡＴＣＴＡＴＣＡＡＧＡＴＡＧＴＡＡＧＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＧＧＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＣＴＣＴＧＧＧＡＡＣＡＣＡＧＣＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＧＡＣＣＣＡＧＧＣＴＣＴＧＧＡＴＧＡＧＧＣＴＧＡＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＧＣＧＴＧＧＧＡＣＡＡＣＡＧＴＡＴＴＧＴＧＧＴＡＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡ
配列番号２４７（ＫＬ２Ｂ４６７ ＶＬ ｃＤＮＡ）
ＣＡＧＴＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＧＧＴＧＴＣＡＧＴＧＧＣＣＣＣＣＧＧＧＣＡＧＡＣＧＧＣＣＡＧＴＡＴＴＡＣＣＴＧＴＧＧＧＧＧＡＧＡＣＡＡＣＡＴＴＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＴＣＧＴＣＴＡＴＧＡＴＡＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＧＧＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＣＴＣＴＧＧＧＡＣＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＣＧＡＡＧＣＣＧＧＧＧＡＴＧＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＴＧＧＴＡＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＡ
配列番号２７１（ＫＬＫ２Ｂ４９４＿ＶＬ ＤＮＡ）
ＴＣＴＴＣＴＧＡＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＧＧＴＧＴＣＡＧＴＧＧＣＣＣＣＡＧＧＡＣＡＧＡＣＧＧＣＣＡＧＧＡＴＴＡＣＣＴＧＴＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＴＣＧＴＣＴＡＴＧＡＴＧＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＧＧＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＣＴＣＴＧＧＧＡＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＣＧＡＡＧＣＣＧＧＧＧＡＴＧＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＣＡＴＧＴＧＧＴＡＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡ
コンセンサスＶＨ及びＶＬ配列
図１は、ｍｕ１１Ｂ６、ｈｕ１１Ｂ６、ＫＬ２Ｂ３５７、ＫＬ２Ｂ３５８、ＫＬ２Ｂ３５９、ＫＬ２Ｂ３６０、ＨＣＦ３、及びＨＣＧ５のＶＨドメインの配列アラインメントを示す。図２は、ｍｕ１１Ｂ６、ｈｕ１１Ｂ６、ＫＬ２Ｂ３５７、ＫＬ２Ｂ３５８、ＫＬ２Ｂ３５９、ＫＬ２Ｂ３６０、ＬＤＣ６、及びＬＣＢ７のＶＬドメインの配列アラインメントを示す。配列番号７５及び配列番号７４のコンセンサスアミノ酸配列を、それぞれＶＨ及びＶＬドメインについて決定した。ＨＣＤＲ及びＬＣＤＲ残基には下線を付す。
Figure 2022541332000018
式中、Ｘ１は、Ｄ若しくはＱである、Ｘ２は、Ａ若しくはＴである、Ｘ３は、Ｐ若しくはＦである、Ｘ４は、Ｇ若しくはＲである、Ｘ５は、Ｉ若しくはＭである、Ｘ６は、Ｉ若しくはＭである、Ｘ７は、Ａ若しくはＰである、又はＸ８は、Ｖ若しくはＡである。
Figure 2022541332000019
式中、Ｘ１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ２は、Ｄ又はＡであり、Ｘ３は、Ｓ又はＴであり、Ｘ４は、Ａ又はＳであり、Ｘ５は、Ｖ又はＬであり、Ｘ６は、Ｌ又はＰであり、Ｘ７は、Ｉ又はＬであり、Ｘ８は、Ｎ又はＳであり、Ｘ９は、Ｒ又はＫであり、Ｘ１０は、Ｋ又はＲであり、Ｘ１１は、Ｖ又はＲであり、Ｘ１２は、Ｖ又はＩであり、Ｘ１３は、Ｖ又はＩであり、Ｘ１４は、Ｑ又はＳであり、Ｘ１５は、Ｌ又はＶであり、Ｘ１６は、Ｑ又はＥであり、Ｘ１７は、Ｐ又はＡであり、Ｘ１８は、Ｆ又はＶであり、Ｘ１９は、Ａ又はＳであり、Ｘ２０は、Ｙ又はＦであり、Ｘ２１は、Ｑ又はＧであり、Ｘ２２は、Ｌ又はＶである。
Ｆａｂ－Ｆｃ及びｓｃＦｖ
ｈＫ２特異的ＶＨ／ＶＬ領域を、ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジＣＨ２－ＣＨ３及びＶＬ－ＣＬとして遺伝子操作し、ＩｇＧ２若しくはＩｇＧ４として発現させたか、又はＶＨ－リンカー－ＶＬ若しくはＶＬ－リンカー－ＶＨ配向のいずれかのｓｃＦｖとして遺伝子操作した。ｓｃＦｖに使用したリンカーは、上記配列番号７のリンカーであった。ｓｃＦＶを使用して、実施例７に記載の通り二重特異性抗体を作製した、又は実施例１１に記載の通りＣＡＲを作製した。
表１０は、ｍＡｂフォーマットの選択された抗ｈＫ２抗体のＨＣアミノ酸配列を示す。表１１は、ｍＡｂにおける選択された抗ｈＫ２抗体のＬＣのアミノ酸配列を示す。表１２は、ｍＡｂフォーマットの選択された抗ｈＫ２抗体のＨＣ及びＬＣのＤＮＡ配列番号をまとめる。表１３は、ＶＨ－リンカー－ＶＬ又はＶＬ－リンカー－ＶＨ配向の選択されたｓｃＦｖのアミノ酸配列を示す。
Figure 2022541332000020
Figure 2022541332000021
Figure 2022541332000022
Figure 2022541332000023
配列番号２８４（ｍ１１Ｂ６ ＨＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号２８５（ｈｕ１１Ｂ６ ＨＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号２９３（ＫＬ２Ｂ５３ ＨＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号２９４（ＫＬ２Ｂ２４２ ＨＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号２９５（ＫＬ２Ｂ４６７ ＨＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号２７４（ＫＬ２Ｂ４９４ ＨＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号２９６（ｍｕ１１Ｂ６ ＬＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号２９７（ｈｕ１１Ｂ６ ＬＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号４５０（ＫＬ２Ｂ３０ ＬＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号４５１（ＫＬ２Ｂ５３ ＬＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号３０５（ＫＬ２Ｂ２４２ ＬＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号３０６（ＫＬ２Ｂ４６７ ＬＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号２８２（ＫＬ２Ｂ４９４ ＬＣ ｃＤＮＡ）
ＴＣＴＴＣＴＧＡＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＧＧＴＧＴＣＡＧＴＧＧＣＣＣＣＡＧＧＡＣＡＧＡＣＧＧＣＣＡＧＧＡＴＴＡＣＣＴＧＴＧＧＧＧＧＡＡＡＣＡＡＣＡＴＴＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＧＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＴＣＧＴＣＴＡＴＧＡＴＧＡＴＡＧＣＧＡＣＣＧＧＣＣＣＴＣＡＧＧＧＡＴＣＣＣＴＧＡＧＣＧＡＴＴＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＣＴＣＴＧＧＧＡＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＧＧＴＣＧＡＡＧＣＣＧＧＧＧＡＴＧＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＧＡＴＣＡＴＧＴＧＧＴＡＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＴＣＣＴＡＧＧＴＣＡＧＣＣＣＡＡＧＧＣＴＧＣＡＣＣＣＡＧＴＧＴＣＡＣＴＣＴＧＴＴＣＣＣＧＣＣＣＴＣＣＴＣＴＧＡＧＧＡＧＣＴＴＣＡＡＧＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＡＣＡＣＴＧＧＴＧＴＧＴＣＴＣＡＴＡＡＧＴＧＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＧＧＧＡＧＣＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＧＧＡＡＧＧＣＣＧＡＴＡＧＣＡＧＣＣＣＣＧＴＣＡＡＧＧＣＧＧＧＡＧＴＧＧＡＧＡＣＣＡＣＣＡＣＡＣＣＣＴＣＣＡＡＡＣＡＡＡＧＣＡＡＣＡＡＣＡＡＧＴＡＣＧＣＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＴＡＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＣＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＣＣＣＡＣＡＧＡＡＧＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＣＡＧＧＴＣＡＣＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＣＣＴＡＣＡＧＡＡＴＧＴＴＣＡ
Figure 2022541332000024
Figure 2022541332000025
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Figure 2022541332000027
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実施例３．抗ｈＫ２抗体の生物物理学的特性評価
抗ｈＫ２抗体の親和性及び熱安定性。
可溶性ｈＫ２に対する選択されたｈＫ２抗体の親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した。ＳＰＲは、複合体の形成及び解離時の質量の変化を測定することによって、２つの結合パートナー間の相互作用の強度を試験するための無標識技術である。抗体を、抗Ｆｃ抗体でコーティングされたセンサチップ上に捕捉し、続いて、様々な濃度並びに指定の会合及び解離時間で可溶性ｈＫ２を注入した。解離後、表面を適切な溶液で再生して、次の相互作用の準備を行った。センサグラムを１：１ラングミュアモデルに適合させることによって、速度情報（オンレート及びオフレート定数）を抽出した。結合親和性（ＫＤ）を、速度定数（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）の比として報告する。選択されたｈＫ２抗体のＫＤ値を、表１４に列挙する。
自動プロメテウス機器を使用して示差走査蛍光測定（ＮａｎｏＤＳＦ）によって熱安定性を求めた。ＮａｎｏＤＳＦを使用して、リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４中０．５ｍｇ／ｍＬの濃度の分子のＴｍを測定した。サンプルを３８４ウェルサンプルプレートから２４ウェルキャピラリーにロードすることによって、測定を行った。各サンプルにつき、デュープリケートで測定を行った。熱走査は、１．０℃／分の速度で２０℃から９５℃までに及ぶ。固有のトリプトファン及びチロシンの蛍光を３３０ｎｍ及び３５０ｎｍの発光波長でモニタリングし、Ｆ３５０／Ｆ３３０ｎｍ比を温度に対してプロットして、アンフォールディング曲線を作成した。測定されたＴｍ値を、表１４に列挙する。
Figure 2022541332000029
Ａｂｌｅｘｉｓ免疫キャンペーンから生成されたＫＬ２Ｂ４１３ ｓｃＦｖは、ＮａｎｏＤＳＦによって測定したとき６７℃の熱安定性（Ｔｍ）を有しており、約３４ｎＭのヒトｈＫ２に対する結合親和性（ＫＤ）を有していた。再ヒト化キャンペーンについて得られ、そして、マウス１１Ｂ６と同様の結合親和性を維持していたクローンＫＬ２Ｂ３５９を、追加のプロファイリングのためにｓｃＦｖ－Ｆｃ及びＣＡＲ－Ｔに変換した。ＫＬ２Ｂ３５９ ｓｃＦｖは、６７℃のＴｍ及び約０．７～１ｎＭのｈＫ２に対する結合親和性（ＫＤ）を示す。ＫＬ２Ｂ３０、ＫＬ２Ｂ２４２、ＫＬ２Ｂ５３、ＫＬ２Ｂ４６７、及びＫＬ２Ｂ４９４ Ｆａｂは、０．５ｎＭ未満の結合親和性及び７０℃を超えるＴｍ値を示した。
エピトープのマッピング
水素－重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）によって、選択された抗ｈＫ２抗体及び抗ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体のエピトープ及びパラトープを求めた。ヒトＫＬＫ２抗原を、エピトープ及びパラトープマッピング実験に使用した。
簡潔に述べると、精製されたＫＬＫ２抗原を、重水標識バッファ中において抗ｈＫ２抗体又は抗ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体の有り及び無しでインキュベートした。水素－重水素交換（ＨＤＸ）混合物を、８Ｍ尿素、１Ｍ ＴＣＥＰ、ｐＨ３．０の添加によって異なる時点でクエンチした。クエンチしたサンプルを、室温でバッファＡ（Ｈ２Ｏ中１％アセトニトリル、０．１％ＦＡ）で平衡化した固定化ペプシン／ＦｐＸＩＩＩカラムに６００μＬ／分で通した。消化性断片を、バッファＡを用いて６００μＬ／分で逆相トラップカラムにロードし、１分間脱塩した（６００μＬのバッファＡ）。脱塩された断片を、２０分かけて１００μＬ／分で８％→３５％バッファＢ（９５％アセトニトリル、５％Ｈ２Ｏ、０．００２５％ＴＦＡ）の線形勾配を有するＣ１８カラムによって分離し、質量分析によって分析した。２７５℃のキャピラリー温度、分解能１５０，０００、及び質量範囲（ｍ／ｚ）３００～１，８００で、ＬＴＱ（商標）Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｆｕｓｉｏｎ Ｌｕｍｏｓ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して質量分析を実行した。ＢｉｏＰｈａｒｍａ Ｆｉｎｄｅｒ３．０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、ＨＤＸ実験の前に非重水素化サンプルのペプチド同定に使用した。ＨＤＥｘａｍｉｎｅｒバージョン２．５（Ｓｉｅｒｒａ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ，Ｍｏｄｅｓｔｏ，ＣＡ）を使用して、ＨＤＸ実験についてのＭＳ生データファイルから質量中心値を抽出した。
ｈＫ２抗体、ｈｕ１１Ｂ６、ＫＬ２Ｂ４９４、ＫＬ２Ｂ４６７、ＫＬ２Ｂ３０、ＫＬ２Ｂ４１３、及びＫＬ２Ｂ５３を溶解性ｈＫ２タンパク質と共にインキュベートした結果、異なるパターンの水素交換及び全体的な保護が得られた。保護されたセグメントをｈＫ２抗原の配列にマッピングして、結合エピトープを可視化した（図３）。ＫＬ２Ｂ４９４、ＫＬ２Ｂ４６７、及びＫＬ２Ｂ３０は、（ｉ）残基１７４～１７８（配列番号１１１、ＫＶＴＥＦ）（例えば、配列番号１１１の残基のうちの少なくとも３つ、すなわち、１７４～１７６におけるＫＶＴ残基に結合したＫＬ２Ｂ４９４、ＫＬ２Ｂ４６７、及びＫＬ２Ｂ３０）並びに（ｉｉ）残基２３０～２３４（配列番号１１２、ＨＹＲＫＷ）（例えば、配列番号１１２の残基のうちの少なくとも３つ、すなわち、２３０～２３２におけるＨＹＲ残基に結合したＫＬ２Ｂ４９４、ＫＬ２Ｂ４６７、及びＫＬ２Ｂ３０）の共通配列に結合した。また、ＫＬ２Ｂ４１３は、図３に示す通り、配列番号１１１の全ての残基及び配列番号１１２のＫＷ残基に結合した。本発明の実施形態は、ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、当該抗原結合ドメインが配列番号１１１及び配列番号１１２の配列を有するエピトープ内でｈＫ２に結合し、例えば、当該抗原結合ドメインが、配列番号１１１の全ての残基、又は少なくとも４つの残基、又は少なくとも３つの残基に結合し、配列番号１１２の全ての残基、又は少なくとも４つの残基、又は少なくとも３つの残基に結合する、単離タンパク質を提供する。
ＫＬ２Ｂ５３は、異なる保護パターンを示し、残基２７～３２（配列番号１１３、ＳＨＧＷＡＨ）、６０～７５（配列番号１１４、ＲＨＮＬＦＥＰＥＤＴＧＱＲＶＰ）、及び１３８～１４７（配列番号１１５、ＧＷＧＳＩＥＰＥＥ）からなる配列に結合した。
実施形態によれば、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質（例えば、ｈｕ１１Ｂ６、ＫＬ２Ｂ４９４、ＫＬ２Ｂ４６７、ＫＬ２Ｂ３０、ＫＬ２Ｂ４１３、又はＫＬ２Ｂ５３）は、配列番号１１１、１１２、１１３、１１４、及び１１５からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含むｈＫ２の不連続エピトープ（すなわち、その残基が配列中に離れて配置されているエピトープ）に特異的に結合するｈｋ２特異的抗原結合ドメインを含む。
抗ｈＫ２抗体ｈｕ１１Ｂ６、ＫＬ２Ｂ４９４、ＫＬ２Ｂ４６７、ＫＬ２Ｂ４１３、並びに抗ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体ＫＬＣＢ１１３及びＫＬＣＢ８０のパラトープを、ＨＤＥｘａｍｉｎｅｒ残基プロットからの重水素取り込みにおける有意差に基づいて同定した。ＫＬ２ＢＢ４９４は、そのうちの２つがＫＬ２Ｂ４９４重鎖可変ドメインに位置し（ＧＦＴＦＳＨ（配列番号）４５５）及びＴＡＶＹＹＣＡＫＰＨＩＶＭＶＴＡＬ（配列番号４５６））、１つのパラトープ領域が軽鎖可変ドメイン内に位置する（ＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲ（配列番号４５７））３つのパラトープ領域を含む。ＫＬ２Ｂ４６７は、そのうちの２つがＫＬ２Ｂ４６７重鎖可変ドメインに位置し（ＦＴＦＳＹ（配列番号）４５８）及びＧＳＹＷＡＦＤＹ（配列番号４５９））、１つのパラトープ領域が軽鎖可変ドメイン内に位置する（ＤＮＳＤ（配列番号４６０））３つのパラトープ領域を含む。Ｈｕ１１Ｂ６は、重鎖に位置する１つのエピトープ領域（ＧＮＳＩＴＳＤＹＡ（配列番号４６１））を含む。ＫＬ２Ｂ４１３は、重鎖可変ドメイン（ＧＦＴＦ（配列番号４６２）及びＡＲＤＱＮＹＤＩＬ（配列番号４６３））に位置する２つのパラトープ領域を含む。二重特異性ＫＬＣＢ８０のＫＬ２Ｂ３０は、重鎖に位置するパラトープ領域（アミノ酸残基ＴＩＦ及びＶＴＰＮＦ（配列番号４６４）を含む）及び軽鎖に位置するパラトープ領域（ＹＡＡＳＴＬＱＳＧ（配列番号４６５））を含む。二重特異性ＫＬＣＢ１１３のＫＬ２Ｂ５３は、重鎖に位置する１つのパラトープ領域（アミノ酸残基ＥＳＧＷＳＨＹ（配列番号４６６）を含む）を含む。図３８Ａ～３８Ｆは、これらの抗ｈＫ２抗体及び抗ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体の結合パラトープを示す（下線付き配列はＣＤＲ領域を示し、ハイライトされた配列はパラトープ領域を示す）。
実施例４：抗ＣＤ３抗体の作製
免疫
抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ３７６の作製は、米国特許出願公開第２０２０００４８３４９号に記載されている。
Ａｂｌｅｘｉｓトランスジェニックマウスプラットフォームを使用して抗ＣＤ３抗体を生成した。１３頭のカッパマウス及び１２頭のラムダマウスを含むＡｂｌｅｘｉｓマウスをＴＲＣＷ５で免疫した（配列番号３３８）。ＴＲＣＷ５は、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ，ＪＭＢ（２０００）３０２（４）：８９９－９１６によって報告されている通り、２６アミノ酸リンカーによってＣＤ３εの細胞外領域に融合しているＣＤ３δの細胞外領域で構成される。このポリペプチドは、そのＣ末端に、部位特異的ビオチン化に使用されるＣ末端Ａｖｉタグを有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを有していた（Ｆａｉｒｈｅａｄ ＆ Ｈｏｗａｒｔｈ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ（２０１５）；１２６６：１７１－１８４）。
ＴＲＣＷ５（配列番号３３８）：
ＦＫＩＰＩＥＥＬＥＤＲＶＦＶＮＣＮＴＳＩＴＷＶＥＧＴＶＧＴＬＬＳＤＩＴＲＬＤＬＧＫＲＩＬＤＰＲＧＩＹＲＣＮＧＴＤＩＹＫＤＫＥＳＴＶＱＶＨＹＲＭＧＳＡＤＤＡＫＫＤＡＡＫＫＤＤＡＫＫＤＤＡＫＫＤＧＳＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴＴＶＩＬＴＣＰＱＹＰＧＳＥＩＬＷＱＨＮＤＫＮＩＧＧＤＥＤＤＫＮＩＧＳＤＥＤＨＬＳＬＫＥＦＳＥＬＥＱＳＧＹＹＶＣＹＰＲＧＳＫＰＥＤＡＮＦＹＬＹＬＲＡＲＶＳＰＰＳＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＬＮＤＩＦＥＡＱＫＩＥＷＨＥ
マウスを週２回、７週間にわたって免疫した。４２日目に、６箇所の皮下及び２箇所の皮内注射を含む８部位に広げて５０μｇのＴＲＣＷ５及び５０μｇのＣＤ４０ ｍＡｂを投与することによって、マウスをハイブリドーマ融合のためにブーストした。最終的なブーストについては、マウスに、４．７４×１０７細胞／ｍＬで、ＣＤ３εを含むＴ細胞受容体複合体を内因的に発現するＴ細胞株であるＪｕｒｋａｔ細胞を２０μＬ注射した（（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ｅｔ ａｌ（１９７７）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１９（５）：６２１－６）。
リンパ節及び脾臓をマウスから摘出し、コホートごとに融合を実施した。リンパ節細胞をカウントし、ＦＯ骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ（ＣＲＬ－１６４６））と１：１の比で合わせ、抗体スクリーニングの前に３７℃で１０日間インキュベートした。次いで、製造業者の説明書に従って、プレート上に非特異的に固定化されたＴＲＣＷ５を使用するＴＲＣＷ５への結合についてのＥＬＩＳＡによって（ＥＬＩＳＡ、Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号３４０２２）、又はビオチン化ＴＲＣＷ５（ＳＰＡＲＣＬ ＥＬＩＳＡ、Ｌｕｍｉｇｅｎ）へのストレプトアビジンのコンジュゲーションによって、ハイブリドーマ融合細胞からの上清をアッセイした。４℃で一晩０．５ｕｇ／ｍＬのＴＲＣＷ５及び０．５ｕｇ／ｍＬのＨＶＥＭ－Ｆｃ（Ｒ＆Ｄカタログ番号３６５－ＨＶ）でプレートをコーティングすることによって、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。４℃で一晩、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中０．４％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を添加することによって、プレートをブロッキングした。０．０２％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ ２０を補充した１×ＰＢＳでプレートを洗浄した。各ウェルに対し、５０ｕＬのハイブリドーマ上清を適用し、室温で１時間インキュベートした。ブロッキングバッファで１：１０，０００希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｊａｃｋｓｏｎカタログ番号１１５－０３６－０７１）にコンジュゲートしたヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃを添加し、続いて室温で３０分間インキュベートすることによって、結合した抗体を検出した。３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質バッファ（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号３４０２２）を２５ｕＬ／ウェルで添加し、暗所で１０分間インキュベートした。２５ｕＬ／ウェルの４Ｍ Ｈ２ＳＯ４を添加することによって反応を停止させた。ＢｉｏＴｅｋ（登録商標）Ｅｐｏｃｈ２マイクロプレートリーダーを使用して、４５０ｎｍで発光を読み取った。バックグラウンドよりも少なくとも３倍高いシグナルを有するヒットを選択した。
２つのアッセイフォーマットの結果、４２６ヒット（ＥＬＩＳＡから２６４ヒット、ＳＰＡＲＣＬ ＥＬＩＳＡから１９４、７０ヒットは両方のアッセイで同定された）が得られた。これら４２６個の初期ヒットのうち、４９個のＥＬＩＳＡ、及び３２個のＳＰＡＲＣＬ ＥＬＩＳＡヒットを確認した。陽性バインダーに対応するハイブリドーマ融合物を再度供給し、フローサイトメトリーを使用して、Ｊｕｒｋａｔ細胞に結合する能力について試験した。結果は、平均蛍光指数（ＭＦＩ、表４を参照されたい）に基づいて、クローン００３＿Ｆ１２、クローン０３６＿Ｅ１０、及びクローン０６５＿Ｄ０３を含む３つの抗体が、ＣＤ３を内因的に発現するＪｕｒｋａｔ細胞に対して著しい結合を示すことを示唆した。クローン００３＿Ｆ１２及び０３６＿Ｅ１０（ヒトカッパマウスから）は、ＥＬＩＳＡによってヒトカッパ軽鎖について陽性であることが確認されたが、クローン０６５＿Ｄ０３（ヒトラムダマウスから）は、ヒトラムダについて陰性であった。次いで、これら３つのクローンの可変遺伝子を配列決定した。
Figure 2022541332000030
次に、これら３つのクローンを、初代ヒト及びカニクイザルＴ細胞に結合する能力についてスクリーニングした。簡潔に述べると、初代ヒト及びカニクイザル汎Ｔ細胞をフロー染色バッファ中に１×１０６細胞／ｍＬで再懸濁させ、細胞を５０，０００細胞／ウェルでプレーティングした。各ウェルに、５０ｕＬのハイブリドーマ上清を添加し、混合物を氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、２００μＬの染色バッファを添加し、３００×Ｇで５分間遠心分離することによって細胞をペレット化した。Ａｌｅｘａ－６４７にコンジュゲートした抗マウスＩｇＧを、５０μＬの総体積で染色バッファ中２μｇ／ｍＬで添加し、氷上で３０分間インキュベートした。１５０μＬの染色バッファを添加し、３００×Ｇで５分間遠心分離することによって細胞をペレット化した。細胞を、１：１，０００希釈したＳｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎ ｄｅａｄ ｃｅｌｌ ｓｔａｉｎを含有するランニングバッファ３０μＬに再懸濁させ、ｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒで実験した。細胞をＦＣＳ対ＳＣＳでゲーティングして、残屑を除去した。シングレットをＳＣＳ－Ａ対ＳＣＳ－Ｈでゲーティングし、シングレット集団から、Ｓｙｔｏｘ ｇｒｅｅｎによる低－陰性についてＢＬ１チャネルを用いて生細胞を選択した。ＲＬ１（Ａｌｅｘａ－６４７）幾何平均により試験物質を陰性対照と比較することによって、ＣＤ３結合を評価した。このアッセイでは、クローン０６５＿Ｄ０３が、最も高い細胞結合シグナルを示した（図４Ａ及び図４Ｂ）。
次いで、クローン０６５＿Ｄ０３の可変領域をＩｇＧ１骨格にクローニングし、ＣＤ３Ｂ８１５と呼ばれる抗体を得た（配列は、表１６に示す）。Ｊｕｒｋａｔ細胞への結合についてＣＤ３Ｂ８１５を再度スクリーニングしたところ、Ｊｕｒｋａｔ細胞への陽性結合を示した。
Figure 2022541332000031
ＣＤ３結合ドメインのヒト化及びｓｃＦｖフォーマット化
ＣＤ３Ｂ８１５のｖ領域の軽鎖（ＬＣ）を、ｓｃＦｖフォーマットでヒト化した。簡潔に述べると、ＣＤ３Ｂ８１５からのＬＣをヒトＩＧＫＶ１－３９＊０１－ＩＧＫＪ２＊０１生殖細胞系にグラフトし、ヒトからマウスへの復帰変異について２つの位置（Ｙ４９Ｋ及びＬ７８Ｖ）を同定した。この結果、Ｙ４９Ｋ、Ｌ７８Ｖのいずれか、又はＹ４９Ｋ及びＬ７８Ｖの両方を有するバリアントが得られた。ＣＤ３Ｂ８１５からのＬＣはまた、９２～９３位における脱アミド化のリスクを提示するＮＳモチーフを含んでいた。したがって、生成されたいくつかのバリアントもＮ９２Ｇを含んでいた。これらのバリアント及び関連する変異を表１７に記載する。
Figure 2022541332000032
表１８は、選択された抗ＣＤ３抗体のＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を示す。表１９は、選択された抗ＣＤ３抗体のＶＨ及びＶＬのＤＮＡ配列を示す。表２０は、Ｋａｂａｔ記述における選択された抗ＣＤ３抗体のＫａｂａｔ ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３のアミノ酸配列を示す。表２１は、Ｋａｂａｔ記述における選択された抗ＣＤ３抗体のＫａｂａｔ ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を示す。表２２は、選択されたＣＤ３抗体のＣＤＲ、ＶＨ、及びＶＬ配列をまとめる。図６は、ＣＤ３Ｂ８１５、ＣＤ３Ｗ２４４、ＣＤ３Ｗ２４５、ＣＤ３Ｗ２４６、及びＣＤ３Ｗ２４７のＶＬ領域のアラインメントを示す。
Figure 2022541332000033
Figure 2022541332000034
Figure 2022541332000035
Figure 2022541332000036
Figure 2022541332000037
Figure 2022541332000038
Figure 2022541332000039
Figure 2022541332000040
Figure 2022541332000041
Figure 2022541332000042
コンセンサス配列
図６は、ＣＤ３Ｂ８１５、ＣＤ３Ｗ２４４、ＣＤ３Ｗ２４５、ＣＤ３Ｗ２４６、及びＣＤ３Ｗ２４７のＶＬ領域のアラインメントを示す。ＨＣＤＲ及びＬＣＤＲ残基には下線を付す。配列番号１５７のコンセンサスアミノ酸配列をＶＬ領域について決定した。
Figure 2022541332000043
式中、Ｘ１は、Ｌ若しくはＭである、Ｘ２は、Ｇ若しくはＳである、Ｘ３は、Ｉ若しくはＳである、Ｘ４は、Ｖ若しくはＡである、Ｘ５は、Ｐ若しくはＶである、Ｘ６は、Ｅ若しくはＤである、Ｘ７は、Ｓ若しくはＴである、Ｘ８は、Ｆ若しくはＩである、Ｘ９は、Ｓ若しくはＴである、Ｘ１０は、Ｔ若しくはＰである、Ｘ１１は、Ｎ若しくはＧである、Ｘ１２は、Ｇ若しくはＫである、Ｘ１３は、Ｓ若しくはＡである、Ｘ１４は、Ｒ若しくはＫである、Ｘ１５は、Ｋ若しくはＹである、Ｘ１６は、Ｉ若しくはＶである、Ｘ１７は、Ｎ若しくはＳである、Ｘ１８は、Ｖ若しくはＬである、Ｘ１９は、Ｓ若しくはＰである、Ｘ２０は、Ｉ若しくはＦである、Ｘ２１は、Ｄ若しくはＴである、Ｘ２２は、Ｎ若しくはＧである、又はＸ２３は、Ｇ若しくはＱである。
熱ショック後のヒト化抗ＣＤ３ ｓｃＦｖバリアントのＣＤ３への結合。
大腸菌で発現させるために、リンカーＧＴＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１０８）を用いてＶＨ－リンカー－ＶＬ配向のｓｃＦＶとして、抗ＣＤ３分子の可変領域をフォーマット化し、次いで、組み換えＣＤ３（ホモ二量体ＣＤ３εγ－Ｆｃ、ＣＤ３Ｗ１４７、配列番号３３９）への結合、Ｔ細胞への結合、及び熱安定性についてスクリーニングした。
ＣＤ３Ｗ１４７（配列番号３３９）：
ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴＴＶＩＬＴＣＰＱＹＰＧＳＥＩＬＷＱＨＮＤＫＮＩＧＧＤＥＤＤＫＮＩＧＳＤＥＤＨＬＳＬＫＥＦＳＥＬＥＱＳＧＹＹＶＣＹＰＲＧＳＫＰＥＤＡＮＦＹＬＹＬＲＡＲＶＧＳＡＤＤＡＫＫＤＡＡＫＫＤＤＡＫＫＤＤＡＫＫＤＧＳＱＳＩＫＧＮＨＬＶＫＶＹＤＹＱＥＤＧＳＶＬＬＴＣＤＡＥＡＫＮＩＴＷＦＫＤＧＫＭＩＧＦＬＴＥＤＫＫＫＷＮＬＧＳＮＡＫＤＰＲＧＭＹＱＣＫＧＳＱＮＫＳＫＰＬＱＶＹＹＲＭＧＳＧＳＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＦＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＲＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＫＰＶＬＤＳＤＧＳＦＲＬＥＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＧＧＨＨＨＨＨＨ
簡潔に述べると、ｓｃＦｖをコードしている配列を、分泌のためにＰｅｌＢリーダー配列を有するｐＡＤＬ（商標）－２２ｃベクターにクローニングした。大腸菌細胞をプラスミドで形質転換し、１００μｇ／ｍＬのカルベニシリンを補充した２×ＹＴ微生物成長培地において３７℃で一晩成長させた。１ｍＭのＩＰＴＧを添加することによってタンパク質発現を誘導し、培養物を一晩成長させた。発現後、２，２００×ｇで５分間遠心分離することによって細胞をペレット化し、上清を収集し、ＥＬＩＳＡによってビオチン化ＣＤ３Ｗ１４７への結合について直接試験した。
大腸菌で発現したｓｃＦｖ－ＨＬタンパク質の配列を、表２４に示す。
Figure 2022541332000044
Figure 2022541332000045
抗ＣＤ３ ｓｃＦｖバリアントのＣＤ３への結合をＥＬＩＳＡによって判定した。ビオチン化ＣＤ３Ｗ１４７（配列番号３３９）を２倍希釈で０．０３９μｇ／ｍＬ～２．５μｇ／ｍＬの範囲の濃度でプレート上に固定化し、続いて、室温で４５分間インキュベートした。結合したｓｃＦｖを、ニワトリ抗ＨＡ－西洋ワサビペルオキシダーゼを使用して検出し、次いで、化学発光基質で検出した。ＣＤ３Ｂ８１５に由来する全ての試験したｓｃＦｖ分子がＣＤ３εに結合した（図５）。
次いで、フローサイトメトリーを使用して、Ｔ細胞に結合する能力についてｓｃＦｖ分子を試験した。簡潔に述べると、ヒトＴ細胞を解凍し、１×１０＾６細胞／ｍＬでフロー染色バッファに再懸濁させ、５０，０００細胞／ウェルでプレーティングした。陽性対照であるＣＤ３Ｗ３６は、￥ｓｃＦｖ－ＬＨとしてフォーマット化された抗ＣＤ３抗体ＳＰ３４で構成されており、呼吸器合胞体ウイルスからのＦ－糖タンパク質を標的とするｓｃＦｖである陰性対照Ｂ２３を比較のために使用した。大腸菌上清を１５０μＬ／ウェルで添加し、４℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを染色バッファで洗浄し、染色バッファ中のＡｌｅｘａ－６４７にコンジュゲートした抗Ｈｉｓ抗体で検出した。インキュベーション後、２００μＬのＩｎｔｅｌｌｉＣｙｔランニングバッファを混合物に添加し、細胞を１：１，０００ Ｓｙｔｏｘ Ｇｒｅｅｎ ｄｅａｄ ｃｅｌｌ ｓｔａｉｎを含有するランニングバッファ３０μＬ中に再懸濁させ、ｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒで分析した。上記の通り、ゲーティング及び分析を行った。ＣＤ３Ｂ８１５に由来する全てのｓｃＦｖ分子が、Ｔ細胞結合と一致する平均蛍光指数を示した（表２５）。
Figure 2022541332000046
エピトープ同定
水素－重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）によって、ＣＤ３上のエピトープを決定した。そのＣＤ３ε上のエピトープは結晶構造（ＰＤＢ ＩＤ １ＳＹ６）から知られていたので、抗体クローンＯＫＴ３をＨＤＸ実験の対照として使用した（Ｋｊｅｒ－Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．；Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０１，７６７５－７６８０）。
ＨＤＸ－ＭＳのオンエクスチェンジ実験。血清アルブミンドメインに融合した２６ａａリンカー領域と融合したＣＤ３εγで構成された１０μＭのＣＤ３Ｗ２２０（配列番号３４０）１０μＬを、１．２モル過剰のリガンドの有り又は無しで、３０μＬのＨ２Ｏ又は重水素化バッファ（２０ｍＭのＭＥＳ、ｐＨ６．４、９５％Ｄ２Ｏ中１５０ｍＭのＮａＣｌ、又は２０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．４、９５％Ｄ２Ｏ中１５０ｍＭのＮａＣｌ）と混合することによって、オンエクスチェンジ反応を開始させた。反応混合物を１５、５０、１５０、５００、又は１，５００秒間１．２℃でインキュベートした。オンエクスチェンジした溶液を、冷却した４０μＬの８Ｍ尿素、１Ｍ ＴＣＥＰ、ｐＨ３．０を添加することによってクエンチし、直ちに分析した。
ＣＤ３Ｗ２２０（ＣＤ３εγ－ＨＳＡ－６ｘＨｉｓ）（配列番号３４０）：
ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴＴＶＩＬＴＣＰＱＹＰＧＳＥＩＬＷＱＨＮＤＫＮＩＧＧＤＥＤＤＫＮＩＧＳＤＥＤＨＬＳＬＫＥＦＳＥＬＥＱＳＧＹＹＶＣＹＰＲＧＳＫＰＥＤＡＮＦＹＬＹＬＲＡＲＶＧＳＡＤＤＡＫＫＤＡＡＫＫＤＤＡＫＫＤＤＡＫＫＤＧＳＱＳＩＫＧＮＨＬＶＫＶＹＤＹＱＥＤＧＳＶＬＬＴＣＤＡＥＡＫＮＩＴＷＦＫＤＧＫＭＩＧＦＬＴＥＤＫＫＫＷＮＬＧＳＮＡＫＤＰＲＧＭＹＱＣＫＧＳＱＮＫＳＫＰＬＱＶＹＹＲＭＧＧＧＳＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＳＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＥＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＱＡＡＬＧＬＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨＨＨ
ＨＤＸ－ＭＳデータ取得のための全般的な手順。自動ＨＤｘシステム（ＬＥＡＰ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｏｒｒｉｓｖｉｌｌｅ，ＮＣ）を用いて、ＨＤＸ－ＭＳサンプル調製を行った。カラム及びポンプは、プロテアーゼ、プロテアーゼＸＩＩＩ型（アスペルギルス・サイトイ（Aspergillus saitoi）由来のプロテアーゼ、ＩＸＸＩ型）／ペプシンカラム（ｗ／ｗ、１：１、２．１×３０ｍｍ）（ＮｏｖａＢｉｏＡｓｓａｙ Ｉｎｃ．，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）、トラップ、ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ１８ ＶａｎＧｕａｒｄ Ｐｒｅ－ｃｏｌｕｍｎ（２．１×５ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）、分析用、Ａｃｃｕｃｏｒｅ Ｃ１８（２．１×１００ｍｍ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）、及びＬＣポンプ、ＶＨ－Ｐ１０－Ａ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）であった。ローディングポンプ（プロテアーゼカラムからトラップカラムに）を、９９％の水、１％のアセトニトリル、０．１％のギ酸で６００μＬ／分に設定した。勾配ポンプ（トラップカラムから分析カラムへ）は、１００μＬ／分において２０分間で０．１％ギ酸水溶液中８％→２８％のアセトニトリルに設定した。
ＭＳデータ収集。２７５℃のキャピラリー温度、分解能１５０，０００、及び質量範囲（ｍ／ｚ）３００～１，８００で、ＬＴＱ（商標）Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｆｕｓｉｏｎ Ｌｕｍｏｓ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して質量分析を実行した。
ＨＤＸ－ＭＳデータ抽出。ＢｉｏＰｈａｒｍａ Ｆｉｎｄｅｒ３．０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、ＨＤＸ実験の前に非重水素化サンプルのペプチド同定に使用した。ＨＤＥｘａｍｉｎｅｒ２．５（Ｓｉｅｒｒａ Ａｎａｌｙｔｉｃｓ，Ｍｏｄｅｓｔｏ，ＣＡ）を使用して、ＨＤＸ実験についてのＭＳ生データファイルから質量中心値を抽出した。
ＨＤＸ－ＭＳデータ分析。抽出されたＨＤＸ－ＭＳデータをＥｘｃｅｌで更に分析した。全ての交換時点（１．２℃でｐＨ６．４又はｐＨ８．４）を、ｐＨ７．４及び２３℃における等価時点に変換した（例えば、１．２℃、ｐＨ６．４で１５秒は、２３℃、ｐＨ７．４で０．１５秒と等価である）、表２３）。
Figure 2022541332000047
結果。実施例５に記載の抗ＣＤ３アームとしてＣＤ３Ｗ２４５を含む二重特異性抗体であるＫＬＣＢ９１を組み換えＣＤ３ε（配列番号３４０）と共にインキュベートした結果、異なるパターンの全体的な保護及び抗原の特定のセグメントにおける保護度が得られた。ＫＬＣＢ９１及びＯＫＴ３はいずれも、高次構造非同一エピトープを示す非連続セグメント（図７）を保護していた。保護されたセグメントをＣＤ３εの結晶構造（ＰＤＢ １ＳＹ６）にマッピングして、３次元で結合エピトープを可視化した。
ＣＤ３ε（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ Ｐ０７７６６）に結合したＯＫＴ３の結晶構造と一致して、ＯＫＴ３のエピトープは、ＣＤ３ε（配列番号３４０及び図７）の残基２９～３７、７９～８４、及び８７～８９に及ぶペプチドからなることが見出された。ＣＤ３Ｗ２４５は、ＯＫＴ３と部分的に重複するエピトープに結合し、ＣＤ３ε配列番号３４０のアミノ酸残基２９～３７（ＰＱＹＰＧＳＥＩＬ、配列番号３４１）、５５～６３（ＧＳＤＥＤＨＬＳＬ、配列番号４４８）、及び７９～８４（ＰＲＧＳＫＰ、配列番号４４９）を含んでいた（図７）。
実施例５：二重特異性ｈＫ２×ＣＤ３抗体の作製
実施例１～３で作製された抗ｈＫ２抗体のＶＨ／ＶＬ領域及び実施例４の抗ＣＤ３抗体のＶＨ／ＶＬ領域を、二重特異性フォーマットに遺伝子操作し、ＩｇＧ１として発現させた。
ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性作製のためのＣＤ３ ｓｃＦｖの遺伝子操作
ＣＤ３ ＶＨ／ＶＬ領域を、配列番号７のリンカーを使用してＶＨ－リンカー－ＶＬ又はＶＬ－リンカー－ＶＨ配向のいずれかのｓｃＦｖとして遺伝子操作した（表１）。ｓｃＦｖフォーマットの抗ＣＤ３分子のアミノ酸配列を、表２６に示す。ＣＤ３に結合するＶＨ－リンカー－ＶＬ又はＶＬ－リンカー－ＶＨのｓｃＦｖ分子を、Ｆｃサイレンシング変異（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ）及び選択的ヘテロ二量体化を促進するように設計されたＴ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ変異を含むｓｃＦｖ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３フォーマットに更に遺伝子操作した。配列番号１０９のポリペプチドを定常ドメインヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３として使用した。ｓｃＦｖ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３フォーマット（ｓｃＦＶ－Ｆｖ）における抗ＣＤ３分子のアミノ酸配列を、表２７に示す。ｓｃＦｖフォーマット及びｓｃＦｖ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３フォーマット（ｓｃＦＶ－Ｆｖ）における抗ＣＤ３分子のＤＮＡ配列番号を、表２８に示す。
Figure 2022541332000048
Figure 2022541332000049
Figure 2022541332000050
Figure 2022541332000051
Figure 2022541332000052
Figure 2022541332000053
Figure 2022541332000054
配列番号３８４（ＣＤ３Ｗ２４４＿ＨＬ ｓｃＦｖ）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＣＴＡＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＧＣＧＧＴＣＴＧＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＣＧＣＧＧＴＴＧＧＧＧＣＣＣＡＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡＡＧＴＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＡＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＣＧＧＣＧＡＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＴＧＣＣＣＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＡＧＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＣＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＣＣＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧ
配列番号３８５（ＣＤ３Ｗ２４４＿ＬＨ ｓｃＦｖ）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＣＧＧＣＧＡＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＴＧＣＣＣＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＡＧＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＣＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＣＣＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡＡＧＴＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＡＡＧＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＣＴＡＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＧＣＧＧＴＣＴＧＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＣＧＣＧＧＴＴＧＧＧＧＣＣＣＡＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣ
配列番号３８６（ＣＤ３Ｗ２４５＿ＨＬ ｓｃＦｖ）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＣＴＡＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＧＣＧＧＴＣＴＧＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＣＧＣＧＧＴＴＧＧＧＧＣＣＣＡＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＧＡＧＧＧＡＡＡＧＴＣＣＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＣＡＧＣＧＡＡＡＧＣＡＡＧＴＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＡＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＣＧＧＣＧＡＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＴＧＣＣＣＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＣＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＣＣＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧ
配列番号３８７（ＣＤ３Ｗ２４５＿ＬＨ ｓｃＦｖ）
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配列番号３８８（ＣＤ３Ｗ２４６＿ＨＬ ｓｃＦｖ）
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配列番号３８９（ＣＤ３Ｗ２４６＿ＬＨ ｓｃＦｖ）
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配列番号３９１（ＣＤ３Ｗ２４７＿ＬＨ ｓｃＦｖ）
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配列番号３９３（ＣＤ３Ｗ２４８＿ＬＨ ｓｃＦｖ）
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配列番号３９５（ＣＤ３Ｗ２４４＿ＬＨ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ）
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配列番号４０１（ＣＤ３Ｗ２４７＿ＬＨ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ）
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配列番号４０２（ＣＤ３Ｗ２４８＿ＨＬ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ）
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配列番号４０３（ＣＤ３Ｗ２４８＿ＬＨ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ）
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ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性作製のためのＣＤ３ Ｆａｂの遺伝子操作
ＣＤ３特異的ＶＨ及びＶＬ領域を、それぞれＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３及びＶＬ－ＣＬフォーマットに遺伝子操作し、ＩｇＧ１として発現させた。Ｆｃサイレンシング変異Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ及び選択的ヘテロ二量体化を促進するように設計されたＣＨ３変異Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖを含む配列番号１５８のポリペプチドを使用して、ＣＤ３特異的ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を作製した（表２９）。
配列番号１５８（ｈｕＩｇＧ１＿Ｇ１ｍ（１７）＿ＡＡＳ＿ＺＷＡ）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＶＹＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＡＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３０９又は４４７のポリペプチドを使用して、ＣＤ３特異的ＶＬ－ＶＣを作製した（表３０）
配列番号３０９（ヒトカッパ軽鎖）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４４７（ヒトラムダ軽鎖）
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３及びＶＬ－ＣＬフォーマットにおける抗ＣＤ３分子のＤＮＡ配列の配列番号を表３１に示す。
Figure 2022541332000055
Figure 2022541332000056
Figure 2022541332000057
配列番号４７１（ＣＤ３Ｗ２４４、ＣＤＲＷ２４５、ＣＤ３Ｗ２４６、ＣＤ３Ｗ２４７、ＣＤ３Ｗ２４８ ＨＣ ｃＤＮＡ）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＧＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＧＧＴＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＴＡＣＡＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＡＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＣＴＡＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＧＡＣＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧＣＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＧＣＧＧＴＣＴＧＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＡＣＣＣＧＣＧＧＴＴＧＧＧＧＣＣＣＡＴＴＣＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＴＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＡＧＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＧＴＧＴＡＣＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＧＣＣＣＴＣＧＴＧＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＴＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ
配列番号３１１（ＣＤ３Ｗ２４４ ＬＣ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＣＧＧＣＧＡＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＴＧＣＣＣＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＡＧＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＣＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＣＣＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
配列番号４５２（ＣＤ３Ｗ２４５ ＬＣ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＣＧＧＣＧＡＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＴＧＣＣＣＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＣＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＣＣＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
配列番号３１３（ＣＤ３Ｗ２４６ ＬＣ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＣＧＧＣＧＡＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＴＧＣＣＣＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＣＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＣＣＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
配列番号３１４（ＣＤ３Ｗ２４７ ＬＣ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＴＣＧＧＣＧＡＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＣＧＴＧＣＣＣＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＡＡＡＧＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＧＣＣＡＧＣＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＣＣＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＴＧＧＣＣＡＴＡＣＡＣＣＴＴＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
配列番号３１５（ＣＤ３Ｗ２４８ ＬＣ ｃＤＮＡ）
ＧＡＣＡＴＣＴＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＴＣＣＴＧＴＣＴＧＴＧＡＧＴＣＣＡＧＧＡＧＡＡＡＧＡＧＴＣＡＧＴＴＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＣＡＧＡＧＣＡＴＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＡＴＡＣＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＧＡＡＣＡＡＡＴＧＧＴＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＴＴＣＴＣＡＴＡＡＡＧＴＡＴＧＣＴＴＣＴＧＡＧＴＣＴＡＴＣＴＣＴＧＧＧＡＴＣＣＣＴＴＣＣＡＧＧＴＴＴＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＴＡＣＴＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＡＣＡＧＴＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＡＡＧＡＴＡＴＴＧＣＡＧＡＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＡＡＧＴＧＧＧＡＧＣＴＧＧＣＣＧＴＡＣＡＣＧＴＴＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性作製のためのｈＫ２ｓｃＦｖ－Ｆｃの遺伝子操作
実施例２に記載の通り配列番号７のリンカー（表１）を使用してＶＨ－リンカー－ＶＬ又はＶＬ－リンカー－ＶＨ配向のいずれかのｓｃＦＶとして遺伝子操作されたｈＫ２ ＶＨ／ＶＬ領域を、Ｆｃサイレンシング変異（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ）及び選択的ヘテロ二量体化を促進するように設計されたＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗ変異を含むｓｃＦｖ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３フォーマットに更に遺伝子操作し、ＩｇＧ１として発現させた。配列番号１１０のポリペプチドを定常ドメインヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３として使用した。
配列番号１１０（ｈｕＩｇＧ１＿Ｇ１ｍ（１７）－ヒンジ－Ｆｃ＿Ｃ２２０Ｓ＿ＡＡＳ＿ＺＷＢ）
ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＶＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＬＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＬＴＷＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
ｓｃＦｖ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３フォーマット（ｓｃＦＶ－Ｆｖ）における抗ｈＫ２分子のアミノ酸配列を、表３２に示す。
Figure 2022541332000058
ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性作製のためのｈＫ２ Ｆａｂ－Ｆｃの遺伝子操作
ｈＫ２特異的ＶＨ及びＶＬ領域を、それぞれＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３及びＶＬ－ＣＬフォーマットで遺伝子操作した。Ｆｃサイレンシング変異Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ及び選択的ヘテロ二量体化を促進するように設計されたＣＨ３変異Ｔ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗを含む配列番号３７８のポリペプチドを使用して、ＫＬＫ２特異的ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）を作製した。
配列番号３７８（ｈｕＩｇＧ１＿Ｇ１ｍ（１７）＿ＡＡＳ＿ＺＷＢ）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＶＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＬＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＬＴＷＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３０９又は４４７のポリペプチドを使用して、ｈＫ２特異的ＶＬ－ＶＣを作製した。
配列番号３０９（ヒトカッパ軽鎖）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４４７（ヒトラムダ軽鎖）
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
ｈＫ２ Ｆａｂ－Ｆｃ ＨＣのアミノ酸配列配列を表３３に示す。
Figure 2022541332000059
ｈＫ２／ＣＤ３二重特異性
Ｆａｂとして遺伝子操作されたＣＤ３Ｂ３７６及びＣＤ３Ｗ２４５、並びに上記の通り両方の配向でｓｃＦｖとして遺伝子操作されたＫＬ２Ｂ３５９、ＫＬ２Ｂ４１３、ＫＬ２Ｂ４６７、及びＫＬ２Ｂ４９４のｈＫ２ ＶＨ／ＶＬを発現させて、二重特異性抗体を生成し、フォーマットｓｃＦｖ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３のｈＫ２結合アーム並びに重鎖：ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３及び軽鎖：ＶＬ－ＣＬのフォーマットのＣＤ３結合アームを有するｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体を得た。あるいは、ＬＨ－リンカー－ＶＨ配向でｓｃＦＶとして遺伝子操作された抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｗ２４５のＶＨ／ＶＬ領域、並びに上記の通りＦａｂとして遺伝子操作された抗ｈＫ２抗体ＫＬ２Ｂ３０、ＫＬ２Ｂ２４２、及びＫＬ２Ｂ５３のＶＨ／ＶＬ領域を発現させて、重鎖ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３及び軽鎖ＶＬ－ＣＬのフォーマットのｈＫ２結合アーム並びにフォーマットｓｃＦｖ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３のＣＤ３結合アームを有するｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体を得た。抗ｓｃＦｖを作製するために使用したリンカーは、配列番号７のリンカーである。
Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ ＣＨ３変異を１本の重鎖に遺伝子操作し、Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ ＣＨ３変異を上記の通り他の重鎖に遺伝子操作した。加えて、ＨＫ２結合アーム及びＣＤ３結合アームの両方を、上記の通りＦｃエフェクターサイレンシング変異Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓを含有するように遺伝子操作した。
ヒトラムダ－３生殖細胞系列に属するＫＬ２Ｂ２４２軽鎖は、不対遊離Ｃｙｓを除去し、潜在的な製造可能性の問題を防ぐために、Ｓｅｒ（Ｃ３３Ｓ）に変異した１つの遊離Ｃｙｓ残基を含有していた。
遺伝子操作された鎖を発現させ、得られた二重特異性抗体を標準的な方法を使用して精製した。実施例８及び９に記載の通り、二重特異性抗体を、そのｈＫ２及びＣＤ３への結合、並びにそのインビトロ及びインビボ細胞傷害性について特性評価した。表３４は、選択された抗ｈＫＬ２／ＣＤ３二重特異性抗体のＣＤＲ配列番号を示す。表３５は、選択された抗ｈＫＬ２／ＣＤ３二重特異性抗体のＶＨ、ＶＬ、及びｓｃＦｖの配列番号を示す。表３６は、選択された抗ｈＫＬ２／ＣＤ３二重特異性抗体のＨＣ１、ＨＣ２、ＬＣ１、及びＬＣ２の配列番号を示す。ＨＣ１及びＬＣ１は、ｈＫＬ２結合アームの重鎖及び軽鎖を指す。あるいは、ＨＣ１は、ｈＫｌ２結合アームのｓｃＦｖ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を指す場合もある。ＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３結合アームの重鎖及び軽鎖を指す。あるいは、ＨＣ２は、ＣＤ３結合アームのｓｃＦｖ－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３を指す場合もある。表３７ ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、及びＬＣ２のアミノ酸配列。表３７ ＨＣ１、ＬＣ１、ＨＣ２、及びＬＣ２のｃＤＮＡ配列。
Figure 2022541332000060
Figure 2022541332000061
Figure 2022541332000062
Figure 2022541332000063
Figure 2022541332000064
Figure 2022541332000065
Figure 2022541332000066
配列番号３６３（ＫＬ２Ｂ３５９－ＬＨ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ）
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配列番号３６４（ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ）
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配列番号３６５（ＫＬ２Ｂ４６７－ＬＨ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ）
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配列番号３６６（ＫＬ２Ｂ４９４－ＬＨ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ）
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配列番号３６７（ＫＬＫ２Ｂ３０ Ｆａｂ ＨＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号３０３（ＫＬＫ２Ｂ３０ Ｆａｂ ＬＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号３６８（ＫＬ２Ｂ５３ Ｆａｂ ＨＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号３０４（ＫＬ２Ｂ５３ Ｆａｂ ＬＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号３６９（ＫＬＫ２Ｂ２４２ Ｆａｂ ＨＣ ｃＤＮＡ及びＫＬ２Ｂ２４２ＬＣ＿Ｃ３３Ｓ Ｆａｂ ＨＣ）
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配列番号４４６（ＫＬＫ２Ｂ２４２ＬＣ＿Ｃ３３Ｓ Ｆａｂ ＬＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号３７０（ＫＬＫ２Ｂ３０ ｗＫ４７７ Ｆａｂ ＨＣ ｃＤＮＡ）
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配列番号３７３（ＣＤ３Ｗ２４５－ＬＨ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ ｃＤＮＡ）
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配列番号３７４（ＣＤ３Ｗ２４５－ＬＨ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ ｗ／Ｋ４４７）
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配列番号３７１（ＣＤ３Ｗ２４５ Ｆａｂ－ＨＣ－Ｆｃ）
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配列番号３１２（ＣＤ３Ｗ２４５ Ｆａｂ－ＬＣ－Ｆｃ）
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配列番号３７２（ＣＤ３Ｂ３７６ Ｆａｂ－ＨＣ－Ｆｃ）
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配列番号３１７（ＣＤ３Ｂ３７６ Ｆａｂ－ＬＣ－Ｆｃ）
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実施例６：ｈＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体の生物物理学的特性評価
選択されたｈＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体の親和性
ｈＫ２又はヒトＣＤ３に対する選択されたｈＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体の親和性を、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した。ＳＰＲは、複合体の形成及び解離時の質量の変化を測定することによって、２つの結合パートナー間の相互作用の強度を試験するための無標識技術である。抗体を、抗Ｆｃ抗体でコーティングされたセンサチップ上に捕捉し、続いて、様々な濃度並びに指定の会合及び解離時間で可溶性ｈＫ２又は可溶性組み換えヒトＣＤ３を注入した。解離後、表面を適切な溶液で再生して、次の相互作用の準備を行った。センサグラムを１：１ラングミュアモデルに適合させることによって、速度情報（オンレート及びオフレート定数）を抽出した。結合親和性（ＫＤ）を、速度定数（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）の比として報告する。選択されたｈＫ２／ＣＤ３二重特異性抗体のＫＤ値を、表３９に列挙する。
Figure 2022541332000067
選択されたｈＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体の熱安定性
自動プロメテウス機器を使用してＮａｎｏＤＳＦ法によって、二重特異性抗体サンプルの熱安定性を求めた。測定は、サンプルを３８４ウェルサンプルプレートから２４ウェルキャピラリーにロードすることによって行った。各サンプルにつき、デュープリケートで測定を行った。Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮａｎｏＤＳＦユーザインターフェース（Ｍｅｌｔｉｎｇ Ｓｃａｎタブ）を使用して、実施のための実験パラメータを設定した。サンプルの熱走査は、１．０℃／分の速度で２０℃から９５℃までに及ぶ。二重ＵＶ技術は、３３０ｎｍ及び３５０ｎｍの発光波長で固有のトリプトファン及びチロシンの蛍光をモニタリングし、この比（Ｆ３５０ｎｍ／Ｆ３３０ｎｍ）を温度に対してプロットして、アンフォールディング曲線を作成する。ＮａｎｏＤＳＦは、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）中０．５ｍｇ／ｍＬの濃度で全ての分子のＴｍを測定するために使用される。測定されたＴｍ値を、表４０に列挙する。
Figure 2022541332000068
ＡＣ－ＳＩＮＳ（親和性捕捉－自己相互作用ナノ粒子分光法）による自己会合能
ハイスループットスクリーニングアッセイを使用して、Ａｂ候補が自己相互作用する傾向を測定した。自己相互作用する傾向は、通常、乏しいＡｂ溶解度に置き換わり、下流のＡｂ製造における課題となる。このアッセイでは、金ナノ粒子（ＡｕＮＰ）をヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）捕捉抗体でコーティングし、その後、ポリクローナルヤギＩｇＧの存在下で候補Ａｂと共にインキュベートする。自己会合する任意の候補Ａｂは、ＡｕＮＰを近接させ、その結果、最大吸光度波長（λｍａｘ）とも呼ばれるナノ粒子のプラズモン波長（λｐ）のシフトが生じる。各候補Ａｂについてのシフト（Δλｍａｘ）の大きさは、その自己会合の強度を示す。自己会合能を示さない、ないし高い自己会合能を示す適切な対照抗体を、このアッセイで使用する。このアッセイで試験した全ての分子は、自己会合のリスクを示さなかった、ないしは低いリスクしか示さなかった。
実施例７：二重特異性ｈＫ２×ＣＤ３抗体のインビトロ及びインビボ特性評価
ｈＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体のインビトロ細胞傷害性
Ｉｎｃｕｃｙｔｅプラットフォームにおけるライブタイムラプスイメージングを使用して、Ｔ－細胞媒介細胞傷害性アッセイによって、作製した二重特異性抗体の細胞傷害能をンビトロで測定した。３：１のエフェクター：標的比（Ｅ：Ｔ比）で健常ドナーから単離された汎ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞の存在下で、ｈＫ２陽性細胞株ＶＣａＰ細胞において、二重特異性抗体を試験した。標的ＶＣａＰ細胞によって安定的に発現される色素からの蛍光シグナルを測定することによって、アポトーシスによる細胞死をモニタリングした。
正常なドナー汎Ｔ細胞をＫＬＫ２＋ＶＣａＰ細胞とコインキュベートした。ＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体を、９６時間にわたって０～１００ｎＭで投与した。３：１のエフェクター対標的（ＥＴ）比を使用した。図８Ａは、標的細胞死を定量するための、リアルタイムでｉｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定されたＫＬ２Ｂ×ＣＤ３二重特異性分子のインビトロ標的細胞傷害性を示す。標的細胞は、標的細胞死を定量化するためにリアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。ＶＣａＰ細胞のリアルタイム速度殺傷曲線のＡＵＣに基づいて、全腫瘍細胞溶解をグラフ化した（図８Ａ）。図８Ｂは、標的細胞死からのアポトーシスシグナルを測定するための、蛍光カスパーゼ３／７試薬によって測定されたＫＬ２Ｂ×ＣＤ３二重特異性分子のインビトロ標的細胞傷害性を示す。緑色蛍光カスパーゼ３／７試薬を使用して、標的細胞死からのアポトーシスシグナルを測定した。リアルタイムカスパーゼ３／７活性曲線のＡＵＣに基づいて、総カスパーゼ３／７活性をグラフ化した（図８Ｂ）。データは、二重特異性ｈＫ２／ＣＤ３抗体が、時間の増加と共に生存可能なＶＣａＰ細胞が用量依存的に減少するのを促進し、したがって、ＶＣａＰ腫瘍細胞のＴ細胞媒介死を誘導することを示す。したがって、二重特異性ｈＫ２×ＣＤ３抗体は、Ｔ細胞の活性化を媒介するのに有効であり、用量依存的なＫＬＫ２＋腫瘍細胞の殺傷を示す。
ｈＫ２×ＣＤ３二重特異性分子によるインビトロＴ細胞の活性化及び増殖
ｈＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体を、Ｔ細胞の活性化及び増殖を促進する能力について試験した。正常なドナー汎Ｔ細胞をＣＦＳＥ（５ｕＭ）で標識し、ＫＬＫ２（＋）ＶＣａｐ細胞と共培養した。ＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体を、９６時間にわたって０～１００ｎＭで投与した。３：１のエフェクター対標的（ＥＴ）比を使用した。９６時間コインキュベートした後、細胞を収集し、ＣＤ２５、ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５の頻度を求めた。異なる用量におけるＣＤ２５陽性細胞の頻度を使用して、インビトロＴ活性化をグラフ化した（図９Ａ）。０ｎＭ処理群を使用して増殖ゲートを決定した。増殖ゲートに入る細胞の頻度を使用して、インビトロＴ細胞増殖をグラフ化した（図９Ｂ）。データから、様々なＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体によるＴ細胞の用量依存的活性化及び増殖が確認される。
ｈＫ２×ＣＤ３二重特異性分子によるインビトロＴ細胞サイトカイン放出。
Ｔ細胞サイトカイン放出に対する抗ｈＫ２×ＣＤ３抗体の効果をインビトロで測定した。上記のインビトロ細胞傷害性実験から上清サンプルを収集した。様々な用量のｈＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体でＩＦＮ－及びＴＮＦ－α濃度を定量するために１３－ｐｌｅｘサイトカインＬｕｍｉｎｅｘアッセイを実行した。図１０Ａ及び図１０Ｂは、用量依存的にＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体によって誘発された、活性化されたＴ細胞による機能的サイトカインの放出を示す。
Ｔ細胞ヒト化マウスにおける得られた皮下（ＳＣ）ヒト前立腺異種移植モデルにおけるｈＫ２×ＣＤ３抗体の有効性。
この試験の目的は、ヒト前立腺腫瘍ＶＣａＰ皮下マウス異種移植モデルにおいてＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性のインビボ有効性を評価することである。ヒト前立腺腫瘍ＶＣａＰ皮下マウス異種移植モデルにおいて、ＫＬＫ２×ＣＤ３二重特異性抗体のインビボ有効性を評価した。得られたＳＣヒト前立腺ＶＣａＰ異種移植片において、ＫＬＫ２×ＣＤ３分子の抗腫瘍有効性を評価した。無傷の雄ＮＳＧマウスを使用して、ヒト腫瘍及びヒトＴ細胞を移植するための好適な宿主を提供した。ヒト前立腺細胞株ＶＣａＰは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手した。指数関数的成長中にＶＣａＰ細胞を収集し、マウスの右側腹部に、０．２ｍＬの体積に１×１０７個の細胞を皮下注射した。各動物につき、２０ｅ６個のヒトＴ細胞を腹腔内注射した。３つの用量レベルを５倍漸増で評価した：０．２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、及び５ｍｇ／ｋｇ（図３９Ａ）。二重特異性抗体を週２回腹腔内投与した。最初の腹腔内投与の６時間後に眼の血液をサンプリングし、Ｌｕｍｉｎｅｘベースのアッセイを使用して機能的サイトカインレベルを測定した（図３９Ｂ）。腫瘍体積及び体重の測定値を、全ての試験を通して週２回収集した。デルタ腫瘍成長阻害パーセント（ΔＴＧＩ）は、ΔＴＧＩ％＝（［（ＴＶｃ－ＴＶｃ０）－（ＴＶｔ－ＴＶｔ０）］／（ＴＶｃ－ＴＶｃ０））×１００（式中、「ＴＶｃ」は、所与の対照群の平均腫瘍量であり、「ＴＶｃ０」は、所与の対照群の平均初期腫瘍量であり、「ＴＶｔ」は、処理群の平均腫瘍量であり、「ＴＶｔ０」は、処理群の平均初期腫瘍量である）として計算される、処理群及び対照群の平均腫瘍量の差として定義した。ＴＧＩ％は、（［ＴＶｃ－ＴＶｔ］／ＴＶｃ）×１００と定義した。
本発明の少なくとも１つのＫＬＫ２×ＣＤ３化合物は、用量依存的抗腫瘍効果を示した、すなわち、ＫＬＣＢ８０は、１ｍｇ／ｋｇで周辺腫瘍成長阻害を示し、５ｍｇ／ｋｇで強固な抗腫瘍効果を示した。最初の投与の６時間後におけるサイトカイン評価は、活性ＫＬＣＢ８０の上記バックグラウンド機能的サイトカイン放出を示し、これはインビボにおける有効性と一致する。
実施例８：１１Ｂ６を含むＣＡＲの作製及び特性評価。
ｈＫ２ １１Ｂ６ ｓｃＦｖ ＣＡＲの構築及び発現
ｈＫ２標的化抗体１１Ｂ６に由来するｓｃＦｖを含むｈＫ２ ＣＡＲコンストラクト（ＣＡＲ１３：ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ及びＣＡＲ１５：ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）を、図１１に示すように構築した。Ｄｙｎａｂｅａｄｓ Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ｅｘｐａｎｄｅｒ ＣＤ３／ＣＤ２８で刺激したＴ細胞をエレクトロポレーションに供し、次いで、ＯＰＴＩ－ＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で３回洗浄し、５０×１０６／ｍＬの最終濃度でＯＰＴＩ－ＭＥＭに再懸濁させた。続いて、０．１ｍＬの細胞（５Ｅ６）を、ＲＮＡをコードしているＩＶＴ ＣＡＲ１０μｇと混合し、エレクトロポレーションした。エレクトロポレーション後、Ｔ細胞を６ウェルプレートに移し、直ちに３７℃のインキュベーターに戻した。初代ヒトＴ細胞に、ｍＲＮＡなし（モック）、又はｈＫ２ ｓｃＦｖ ＣＡＲ若しくは無関係の対照ＣＡＲのいずれかを発現するｍＲＮＡ１０μｇをエレクトロポレーションした。エレクトロポレーションの２４時間後、２μｇ／ｍＬのビオチン化Ｌタンパク質及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥ（図１２、上図）、又はビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）及びストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥ（図１２、下図）で染色した後に、フローサイトメトリーによってＣＡＲ表面発現を測定した。
エレクトロポレーションの２４時間後、Ｔ細胞をカウントした。１Ｅ５Ｔ細胞を各々収集した。２００μＬ／ウェルのマイクロタイタープレート用ＦＡＣＳバッファを使用して、細胞をＦＡＣＳバッファで２回洗浄し、上清を廃棄した。全てのウェルを、タンパク質Ｌを含有する染色バッファ（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、カタログ番号Ｍ０００９７１：５００；２ｕｇ／ｍＬ）１００μＬで染色し、光から保護しながら、４℃で少なくとも３０分間インキュベートした。１５０μＬ／ウェルのマイクロタイタープレート用ＦＡＣＳバッファを使用して、ＦＡＣＳバッファを２回添加することによって細胞を洗浄した。室温で４分間、４００×ｇで遠心分離を行った。次いで、上清を廃棄した。全てのウェルを１００μＬのストレプトアビジン－Ｒ－フィコエリトリン（ＳＡ－ＰＥ、１：２５０）及びＬｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ色素（１：１０００）で染色し、光から保護しながら４℃で少なくとも３０分間インキュベートした。次いで、細胞のフローサイトメトリー分析の準備を整えた。
図１２の上図に示されるように、タンパク質Ｌ染色は、ＫＬＫ２ ＨＬ及びＬＨ ＣＡＲの両方で観察されたが（それぞれ４１．４％及び６６．３％）、ｍＲＮＡエレクトロポレーションを伴わないＴ細胞である対照Ｔ細胞ではバックグラウンド染色（約５．５％）しかみられなかった。図１２の下図に示されるように、初代ヒトＴ細胞におけるＣＡＲ発現は、Ｊ＆Ｊ内部ビオチン標識組み換えＫＬＫ２タンパク質（ビオチン－Ｈｋ２タンパク質、ロット：２０１８８０１０、ＣＢＩＳＩＤ：ＫＬ２Ｗ１２．ＣＢ．００３、２．４ｍｇ／ｍＬ、１ｍＭベンズアミジン）、続いてＳＡ－ＰＥを介しても検出することができた。図示されるように、Ｔ細胞は、フローサイトメトリーによって測定したとき、ＫＬＫ２ ＬＨ ＣＡＲ（８２．７％）を効率的に発現したが、ｍＲＮＡエレクトロポレーションを伴わないＴ細胞である対照Ｔ細胞又は未開示の対照ＣＡＲ（非ＫＬＫ２特異的）ではバックグラウンド染色（約１．７３％又は１．１９％）しかみられなかった。結果は、代表的なドナーＴ細胞について示されており、複数のドナーで再現可能であった（少なくともｎ＝３）。
表４１は、ＣＡＲ１３及び１５の配列番号を示す。
ｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍細胞の殺傷
フローサイトメーターを使用したＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）ベースの細胞傷害性アッセイのために共培養を行って、１１Ｂ６ ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞傷害性について試験した。
Ｔ細胞を以下のように調製した。ＥＰの２４時間後、Ｔ細胞をカウントし、最も濃縮された／所望のＥ：Ｔに必要な濃度で再懸濁させた。Ｔ細胞を１００μＬ／ウェルのアッセイで添加した（２×１０６細胞／ｍＬ、１００μＬを１０：１のＥ：Ｔ比、すなわち２Ｅ４個の標的細胞あたり２Ｅ５Ｔ個の細胞でプレーティング）。１０：１のＥ：Ｔ濃度のストックを作製し、完全Ｔ細胞培地（Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒｗ／ＣＴＳ、５％ヒト血清、１％ ＧｌｕｔａＭａｘ）で０．３１２５：１になるように２倍連続希釈を行った。９６ウェルの丸底組織培養処理プレートを使用して、Ｔ細胞をトリプリケートでプレーティングした（１００ｕＬ／ウェル）。
ＣＴＶ標識標的細胞を以下のように調製した。２０μＬのＤＭＳＯをＣＴＶ染色溶液のバイアルに添加した。この原液を、５μＭの染色溶液にするために２０ｍＬのＰＢＳ（３７℃に加温）で希釈した。１０Ｅ６個の腫瘍細胞を収集し、ＰＢＳで２回洗浄し、４Ｅ６／ｍＬ（２．５ｍＬ）に再懸濁させた。等体積（２．５ｍＬ）のＣＴＶ染色溶液を添加した。細胞を３７℃のインキュベーター内で２０分間インキュベートした。４０ｍＬのＰＲＭＩ＋２０％ＦＢＳを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させた。細胞を５分時間インキュベートした。細胞を４００×ｇで５分間遠心分離した。細胞ペレットを、予熱しておいたＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地に再懸濁させた。その間に、Ｔ細胞を上記の所望のＥ／Ｔ比で播種した。腫瘍細胞株Ｖｃａｐ（ＫＬＫ２＋）及びＤＵ１４５（ＫＬＫ２－）を再度カウントし、次いで、細胞をデュープリケートで２Ｅ５／ｍＬ及び１００ｕＬに再懸濁させた。平底９６ウェルプレートにおいて、細胞を、標識された腫瘍細胞株とコインキュベートした。
フローサイトメーターを使用して以下の通り細胞傷害性アッセイを行った。２０時間の共培養後、全ての細胞をＵ底９６ウェルプレートに移し、洗浄した。２０時間の共培養後、全ての細胞を平底９６ウェルプレートから回収し、Ｕ底９６ウェルプレートに移し、次いで、洗浄した。３０μＬの０．２５％トリプシンを全てのウェルに添加し、３７℃のインキュベーターで５分間インキュベートした。５分後、全ての腫瘍細胞をＵ底９６ウェルプレートに回収した。細胞を、４００×ｇで５分間、２回遠心分離及び洗浄した。次いで、細胞ペレットを、希釈した（１：１０００）ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（商標）Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ染色色素（１００μＬ）に再懸濁させた。細胞を４℃で３０分間インキュベートし、４００×ｇで５分間細胞を遠心分離することによって、２回ＦＡＣＳバッファで洗浄した。洗浄後、１００μＬのＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ（商標）固定バッファ（５０ｕＬのＦＡＣＳバッファ＋５０ｕＬの固定バッファ）を使用して、全ての細胞を１０分間固定した。細胞を、４００×ｇで５分間、１回遠心分離及び洗浄した。細胞ペレットをＦＡＣＳバッファに再懸濁させた。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析した。
以下の式を使用して、細胞傷害活性百分率を計算した：
特異的死％＝Ｎｅａｒ ＩＲ％＋ＣＴＶ＋（死）細胞－自然Ｎｅａｒ ＩＲ％＋ＣＴＶ＋／（１００％－自然Ｎｅａｒ ＩＲ％＋ＣＴＶ＋（死）細胞）×１００％。
一過性トランスフェクションの２４時間後、標的細胞（ｈＫ２陽性Ｖｃａｐ及びｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞）をＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）蛍光色素で標識し、次いで、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞と共培養した。モックＴ細胞が、陰性エフェクター対照として機能した。細胞を、図１３に示すように、０．３１２５：１～１０：１の範囲のエフェクター対標的細胞（Ｅ／Ｔ）比で２０時間共培養した。殺傷パーセントは、ＣＡＲ－Ｔ細胞なしで培養された生存標的細胞の数に対する、共培養物中に残存する生存（生存能色素陰性）標的（ＣＴＶ陽性）細胞の絶対数の比として測定した。図示されるように、１０：１～０．３１２５：１のＥ／Ｔ比で、ｈＫ２ ＣＡＲ ＬＨ Ｔ細胞は、ｈＫ２（＋）ヒト前立腺癌細胞株ＶＣａｐ細胞を特異的かつ効率的に溶解した（図１３、上図）が、Ｋ２（－）ＤＵ１４５細胞（図１３、下図）は溶解せず、一方、モック又はｈＫ２ ＨＬ ＣＡＲであるＴ細胞ではバックグラウンド細胞傷害性しかみられなかった。
ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、標的細胞の免疫細胞媒介細胞溶解の効力アッセイとして、リアルタイム細胞分析システムとしてのｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅを用いて、リアルタイム細胞傷害性についても試験した。
５０μＬの標的癌細胞培養培地を９６ウェルＥ－プレート（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の各ウェルに添加し、バックグラウンドインピーダンスを測定し、細胞指数として表した。次いで、接着標的細胞ＶＣａｐ及びＤＵ１４５を解離させ、１００μＬの体積で、５Ｅ４（ＶＣａｐ）、５Ｅ３（ＤＵ１４５）細胞／Ｅプレートのウェルの密度で播種し、電極表面上に受動的に接着させた。播種後、Ｅプレートを層流フード内において周囲温度で３０分間保持し、次いで、細胞培養インキュベーター内のＲＴＣＡ ＭＰ機器に移した。実験期間（９６時間）全体にわたって１５分間隔でデータ記録を直ちに開始した。
処理を適用した時（癌細胞播種の２４時間後）に、データ収集を一時停止し、各ウェルから５０μＬの培地を除去し、エフェクターＣＡＲ－Ｔ細胞を５０μＬの体積で、様々なエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比で添加した。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ及び未開示の対照ＣＡＲ（非ｈＫ２特異的）Ｔ細胞を再懸濁させた。次いで、９６ウェルプレートにおいてデュープリケートで２倍希釈を行った（５：１～０．１５６：１のＥ／Ｔ比）。標的＋モックエフェクター対照（ＲＮＡエレクトロポレーションＴ細胞なし）も標的細胞に添加した。
標的細胞ＶＣａｐ（５Ｅ４）及びＤＵ１４５（５Ｅ３）を、様々なＥ／Ｔ比でおよそ７２時間、モック、１０μｇのｍＲＮＡエレクトロポレーション（トランスフェクションの２４時間後）ｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ ＬＨ、又は対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と共にインキュベートした。ＶＣａｐ及びＤＵ１４５についての正規化された細胞指数（ＣＩ）プロットを、それぞれ図１４及び図１５に示す。単独で播種された場合、標的細胞はプレートに接着し、増殖して、ＣＩの読み出しを増加させる。Ｔ細胞を標的細胞に添加すると、ｈＫ２ ＣＡＲ及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、５：１～０．１５６：１のＥ／Ｔ比において、ｈＫ２（＋）ＶＣａＰ細胞の細胞溶解、及びその後のＣＩの進行的減少を媒介した。
ｈＫ２ １１Ｂ６ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン産生
細胞傷害性Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮ－γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させ、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞がｈＫ２（＋）腫瘍細胞によって認識され、活性化され得るかどうかを判定するために、実施例３に記載の通り、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅベースの殺傷アッセイから上清を回収した。約７０時間の共培養後、上清を回収し、ＥＬＩＳＡキット（ヒトＩＦＮ－γＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（商標）Ｄｅｌｕｘｅ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、カタログ番号４３０１０６）と共に提供された指示書に従って、ＥＬＩＳＡによってアッセイした。
抗原刺激されたＣＡＲ－Ｔ細胞のＩＦＮ－γ産生を、図１６に示す。ｈＫ２ ＣＡＲ ＬＨ及び対照ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａｐ細胞との共培養中にＥ：Ｔ比依存的にＩＦＮ－γを分泌したが、ｈＫ２－陰性ＤＵ１４５細胞との共培養中には分泌しなかった。未開示の対照ＣＡＲは、抗原発現レベルがｈＫ２よりもはるかに高いことから、はるかに多量のＩＦＮ－γを分泌した。デュープリケートの培養物からの平均ＩＦＮ－γ濃度±ＳＤ（ｐｇ／ｍＬ）を記録した。
実施例９：追加のｓｃＦｖ ＣＡＲコンストラクトの作製及び特性評価
実施例１に記載の通り、ｓｃＦｖとしてクローニングされた１１Ｂ６の外部ドメインは、高温（５５℃）で結合を保持しなかったので、追加のキャンペーンを開始して、親１１Ｂ６から新たなヒト化抗体を生成させた。
抗体１１Ｂ６に由来する熱安定化ｓｃＦｖを含有するｈＫ２ ＣＡＲを作製した（ＣＡＲ１～ＣＡＲ１２、ＣＡＲ１４、ＣＡＲ１６）。熱安定化ｓｃＦｖを含有するＣＡＲコンストラクトの説明及び配列番号を表１３に提供する。説明における名称（ＨＣＧ５、ＬＣＤ６、ＨＣＦ３、ＬＣＢ７）は、実施例１で同定されたＶＨ鎖又はＶＬ鎖を指し、２０ＡＡは、ｓｃＦｖ中のＶＨ／ＶＬ対間の２０アミノ酸長のリンカーを指す。ＣＡＲにおけるｓｃＦｖをＶＨ－Ｌ－ＶＬ又はＶＬ－Ｌ－ＶＨ配向のいずれかでクローニングした。
また、作製されたｓｃＦｖをＣＡＲコンストラクト（ＣＡＲ１７～ＣＡＲ３６）に組み込み、更に特性評価した。表４１は、作製されたＣＡＲコンストラクト及びその配列番号を示す。使用したシグナル配列は、ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡ（配列番号２４）である。
Figure 2022541332000069
ＣＡＲのｓｃＦＶアミノ酸配列を、実施例２の表１３に示す。
ＣＡＲの完全長ＥＣＤドメイン及び完全長アミノ酸配列を以下に列挙する。
配列番号２９－細胞外抗原結合ドメイン１（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号３０－細胞外抗原結合ドメイン２（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号３１－細胞外抗原結合ドメイン３（ＨＬ＿ＨＣＦ３＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号３２－細胞外抗原結合ドメイン４（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号３３－細胞外抗原結合ドメイン５（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＤＩＶＬＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＡＳＥＳＶＥＹＦＧＴＳＬＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＡＡＳＮＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＱＳＶＱＡＥＤＶＳＶＹＦＣＱＱＴＲＫＶＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＤＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＮＳＩＴＳＤＹＡＷＮＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＭＧＹＩＳＹＳＧＳＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＰＶＤＴＡＶＹＹＣＡＴＧＹＹＹＧＳＧＦＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号３４－細胞外抗原結合ドメイン６（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
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配列番号３５－細胞外抗原結合ドメイン７（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
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配列番号３６－細胞外抗原結合ドメイン８（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
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配列番号３７－細胞外抗原結合ドメイン９（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ）
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配列番号３８－細胞外抗原結合ドメイン１０（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ）
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配列番号３９－細胞外抗原結合ドメイン１１（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ）
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配列番号４０－細胞外抗原結合ドメイン１２（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ）
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配列番号４１－細胞外抗原結合ドメイン１３（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ）
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配列番号４２－細胞外抗原結合ドメイン１４（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
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配列番号４３－細胞外抗原結合ドメイン１５（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
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配列番号４４－細胞外抗原結合ドメイン１６（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ）
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配列番号１４９（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）
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配列番号１５０（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）
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配列番号１５１（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ）
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配列番号１５２（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨ）
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配列番号４１０（ＫＬ２Ｂ３５７＿ＨＬ）
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配列番号４１１（ＫＬ２Ｂ３５７＿ＬＨ）
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配列番号４１２（ＫＬ２Ｂ３５８＿ＨＬ）
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配列番号４１３（ＫＬ２Ｂ３５８＿ＬＨ）
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配列番号４１４（ＫＬ２Ｂ３６０＿ＨＬ）
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配列番号４１５（ＫＬ２Ｂ３６０＿ＬＨ）
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配列番号４１６（ＫＬ２Ｂ３０＿ＨＬ）
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配列番号４１７（ＫＬ２Ｂ３０＿ＬＨ）
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配列番号４１８（ＫＬ２Ｂ５３＿ＨＬ）
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配列番号４１９（ＫＬ２Ｂ５３＿ＬＨ）
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配列番号４２０（ＫＬ２Ｂ２４２＿ＨＬ）
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配列番号４２１（ＫＬ２Ｂ２４２＿ＬＨ）
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配列番号４２２（ＫＬ２Ｂ４６７＿ＨＬ）
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配列番号４２３（ＫＬ２Ｂ４６７＿ＬＨ）
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配列番号４２４（ＫＬ２Ｂ４９４＿ＨＬ）
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配列番号４２５（ＫＬ２Ｂ４９４＿ＬＨ）
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配列番号４６－ＣＡＲ １（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３１）
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配列番号４７－ＣＡＲ ２（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３２）
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配列番号４８－ＣＡＲ ３（ＨＬ＿ＨＣＦ３＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３６）
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配列番号４９－ＣＡＲ ４（ＨＬ＿ＨＣＧ５＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３７）
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配列番号５０－ＣＡＲ ５（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３８）
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配列番号５１－ＣＡＲ ６（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４０）
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配列番号５２－ＣＡＲ ７（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４１）
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配列番号５３－ＣＡＲ ８（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４３）
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配列番号５４－ＣＡＲ ９（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣＧ５＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４４）
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配列番号５５－ＣＡＲ １０（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣＦ３＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４６）
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配列番号５６－ＣＡＲ １１（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＢ７＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３３）
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配列番号５７－ＣＡＲ １２（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣＤ６＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３４）
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配列番号５８－ＣＡＲ １３（ＨＬ＿ＨＣヒト化＿ＬＣヒト化＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３５）
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配列番号５９－ＣＡＲ １４（ＬＨ＿ＬＣＤ６＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４３９）
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配列番号６０－ＣＡＲ １５（ＬＨ＿ＬＣヒト化＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４２）
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配列番号６１－ＣＡＲ １６（ＬＨ＿ＬＣＢ７＿ＨＣヒト化＿２０ＡＡ；ｐＤＲ００００８３４４５）
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＞配列番号１５３－ＣＡＲ１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ；ＰＢＤ００００９１６２８）
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＞配列番号１５４－ＣＡＲ１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ；ＰＢＤ００００９１６２３）
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＞配列番号１５５－ＣＡＲ１９（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ；ＰＢＤ００００９１５７６）
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＞配列番号１５６－ＣＡＲ２０（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨ；ＰＢＤ００００９１５７７）
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配列番号４２６（ＣＡＲ２１）
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配列番号４２７（ＣＡＲ２２）
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配列番号４２８（ＣＡＲ２３）
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配列番号４２９（ＣＡＲ２４）
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配列番号４３０（ＣＡＲ２５）
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配列番号４３１（ＣＡＲ２６）
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配列番号４３２（ＣＡＲ２７）
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配列番号４３３（ＣＡＲ２８）
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配列番号４３４（ＣＡＲ２９）
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配列番号４３５（ＣＡＲ３０）
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配列番号４３６（ＣＡＲ３１）
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配列番号４３７（ＣＡＲ３２）
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配列番号４３８（ＣＡＲ３３）
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配列番号４３９（ＣＡＲ３４）
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配列番号４４０（ＣＡＲ３５）
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配列番号４４１（ＣＡＲ３６）
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異なるｓｃＦｖをベースとするＣＡＲを同定するために、Ｊｕｒｋａｔ－Ｌｕｃｉａ（商標）ＮＦＡＴ細胞（ＪＮＬ）を介したその抗原依存性活性化を評価した。活性化Ｔ細胞（ＮＦＡＴ）の核因子は、最初に免疫細胞の調節因子として同定された転写因子のファミリーである。Ｔ細胞が活性化されると、カルシウムが流入し、ＮＦＡＴのＮ末端でセリンリッチな核局在化シグナルを脱リン酸化するカルシニューリンが活性化され、ＮＦＡＴが核内移行する。理論に束縛されることを望むものではないが、ｓｃＦｖクラスタリングによるトニックシグナル伝達は、ＪＮＬレポーター細胞株においてＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるホタルルシフェラーゼによって後で検出することができる。
レンチウイルスの形質導入を以下のように行った。ＪＮＬ細胞を収集し、１Ｅ６／ｍＬになるように再懸濁させた。５００μＬのＪＮＬ細胞及びレンチウイルスウイルスをＭＯＩ３で添加し、上下にピペッティングすることによって混合した。混合物を３７℃のインキュベーターで２４時間インキュベートした。５００μＬのＪＮＬ培地を各ウェルに添加し、３７℃のインキュベーターで培養を続けた。４日目に細胞をＴ２５フラスコに移した。５～６日目に、形質導入の検証を行った。１５０μＬの細胞を収集して、使用した特定のＣＡＲに適切な検出試薬（例えば、ＣＡＲを検出するためのビオチン－ｈＫ２タンパク質）を介してＣＡＲ発現を調べた。凍結又はアッセイにおいて使用するのに十分な細胞が得られるまで、ＪＮＬ細胞を５×１０５／ｍＬで維持した。
熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲを、抗原依存性活性についてＪＮＬレポーターアッセイにおいて評価した。シグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞に、様々なｈＫ２ＣＡＲコンストラクトを形質導入した。このアッセイは、以下のように行った。２：１のエフェクター対標的比で、標的細胞株との共培養を行った。ＪＮＬ細胞をスピンダウンして、培地中の任意の分泌されたルシフェラーゼを除去し、次いで、ＪＮＬ細胞を４×１０５／ｍＬで新鮮培地に再懸濁させた。細胞を収集した。次いで、抗原陽性及び抗原陰性の標的細胞株の両方を２Ｅ５／ｍＬで調製した。１００μＬのＪＮＬを１００μＬの標的細胞に添加した。ＪＮＬのみの対照については、標的細胞の代わりに１００μＬの培地を添加した。陽性対照の場合、ＪＮＬ細胞のみ又はＣＡＲＪＮＬ細胞を１×細胞刺激カクテルに添加し、３７℃のインキュベーター内で２４時間インキュベートした。１５０μＬの上清を９６ウェルプレートに収集し、遠心分離して細胞を除去した。１００μＬの上清をプレートからソリッドボトム黒色プレートに移した。次いで、１００μＬのＱｕａｎｔｉ－ｌｕｃ ｌｕｃｉａ検出試薬を添加した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎマルチプレートリーダーで読み取る前に、混合物を室温で５分間インキュベートした。
ＪＮＬ細胞におけるＣＡＲ発現（ＣＡＲ１～１０）を、ビオチン化ｈＫ２、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによって判定し、結果を図１７に示す。形質導入されたＪＮＬ細胞におけるＣＡＲ発現は、選択されたクローンの全てについて確認され、細胞の６０～７５％が異なるクローン及び親１１Ｂ６ ＣＡＲにわたって検出可能な発現を示した。指定のＣＡＲクローンを含有するＪＮＬ細胞及び非形質導入ＪＮＬ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株（ＶＣａｐ又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、発光強度としてルシフェラーゼ活性を測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルを１．５倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。
ＣＡＲコンストラクトとその同種細胞抗原（標的細胞上のｈＫ２）との間の結合によって、ＪＮＬ細胞においてルシフェラーゼが発現した（図１８）。指定のＣＡＲクローンを含有するＪＮＬ細胞及びＪＮＬ細胞（非形質導入、以後「ＵＴＤ」）を標的細胞株（ＶＣａｐ又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、発光強度としてルシフェラーゼ活性を測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルを１．５倍上回った場合、クローンは活性であるとみなした。１０個のクローン全て並びに親１１Ｂ６ ＣＡＲ ＨＬ及びＬＨについて、抗原依存性活性化はみられなかった。
実施例１０：Ｔ細胞上の追加のｓｃＦｖ ＣＡＲの発現
熱安定化１１Ｂ６ ＣＡＲ Ｔ細胞の機能を評価するために、レンチウイルス形質導入を使用して、熱安定化１１Ｂ６及び親ｓｃＦｖが形質導入されたＣＡＲ－Ｔ細胞を作製した。感染多重度（ＭＯＩ）３で、初代ヒトＴ細胞に熱安定化１１Ｂ６及び親ｓｃＦｖ ＣＡＲレンチウイルスを形質導入した。形質導入の１４日後に、ビオチン化ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ）、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによってＣＡＲ発現を判定した。
実験プロトコルは以下の通りであった。
レンチウイルスパッケージングを行った。１５０ｍｍ２あたり１４Ｅ６個のＬｅｎｔｉ－Ｘ（商標）２９３Ｔ細胞を、丸底のＣｏｒｎｉｎｇ（商標）ＢｉｏＣｏａｔ（商標）コラーゲンＩでコーティングされた培養皿に播種し、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ培地を使用して３７℃で一晩インキュベートした。
８０～８５％の理想的な培養密度のＬｅｎｔｉ－Ｘ（商標）２９３Ｔ細胞を用いて、以下を調製した。培養培地を２１ｍＬの２９３Ｔ成長培地で置き換えた。リポフェクタミン２０００を室温で希釈し、ＯｐｔｉＭＥＭを平衡化した。希釈したリポフェクタミン２０００を、混合プラスミドに滴下し、十分に混合した。混合物を室温で２５分間インキュベートした。トランスフェクション混合物をＬｅｎｔｉ－Ｘ２９３Ｔ細胞に滴下し、プレートを穏やかに旋回させて混合した。混合物を３７℃のインキュベーター内でインキュベートした。トランスフェクションの２４時間後及び４８時間後にレンチウイルスを収集した。上記試薬を表４２にまとめる。
Figure 2022541332000070
レンチウイルスの濃縮を以下のように行った。レンチウイルス含有上清を収集し、０．４５μｍの酢酸セルロースフィルターを通して濾過する前に過剰な２９３Ｔ細胞が辺りを浮遊している場合、５００×ｇで１０分間遠心分離した。上清を滅菌容器に移し、１／３の体積のＬｅｎｔｉ－Ｘ濃縮物（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３１２３２）と合わせ、穏やかに反転させることによって混合した。混合物を４℃のインキュベーター内でインキュベートした。サンプルを、１，５００×ｇで４５分間、４℃で遠心分離したところ、遠心分離後に白色ペレットが見えた。ペレットを乱すことなく上清を慎重に除去した。１，５００×ｇで短時間遠心分離した後、残留上清をピペットで除去した。冷Ｔ細胞成長を使用して、ペレットを元の体積の１／１０に穏やかに再懸濁させた。ウイルスを２００μＬに分注し、直ちに－８０℃で保存した。
ウイルス力価測定は、以下のように行った。対数期のＳｕｐＴ１を完全ＲＰＭＩで成長させた。１ウェルあたり１００μＬ、２０，０００個／ｍＬのＳｕｐＴ１細胞を、平坦な９６ウェルプレートに播種した。次いで、ウイルス力価測定を９６ウェル丸底プレートで行った）。１００μＬの培地をプレートの全てのウェルに添加した。ウイルスのアリコートを、手で－８０℃の冷凍庫から解凍した。アリコートを上下にピペッティングして十分に混合し、５０μＬのウイルスを最初のウェルに添加し、続いて、十分に混合した。５０μＬのウイルスを次のウェルにピペッティングして入れることによって、連続１：３希釈を行った。次いで、５０μＬの培地を、一次Ａｂのみ、二次Ａｂのみ、及び非形質導入対照に添加した。各５０μＬを力価測定プレートからアッセイプレート内の１００μＬのＳｕｐＴ１細胞にマルチチャネルピペットで移し、３７℃で一晩インキュベートした。１００μＬの予熱した培地を各サンプルに添加し、更に２日間インキュベートした。フローサイトメトリーによって形質導入効率を求めた。サンプルを丸底９６ウェルプレートに移し、１４００ＲＰＭで３分間回転させた。上清を素早く廃棄し、続いてブロッティングして、フード内の過剰な培地を除去した。１５０μＬのＦＡＣＳバッファで洗浄を繰り返した。次いで、ＣＡＲコンストラクトに適切な染色プロトコルを行った。フローサイトメトリー分析の前に、１５０μＬのＦＡＣＳバッファにサンプルを再懸濁させた。
ウイルス力価の計算：力価＝（ＣＡＲ陽性％／１００）×２×１０４×２０×希釈倍数
複数コピーの統合を除外するために、２０％に最も近い形質導入の力価が使用される。
Ｔ細胞活性化、形質導入、及び増殖を以下のように行った。ナイーブＴ細胞のバイアルを水浴中で解凍し、９ｍＬの予熱されたＴ細胞培地（ＴＣＭ ＣＴＳ ＯｐＴｍｉｚｅｒ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ＋５％ヒト血清＋ＩＬ－２ １００ＩＵ／ｍＬ）を含有する１５ｍＬのコニカルチューブに滴下した。クライオバイアルを１ｍＬの培地で洗浄して最大数を回収し、室温で８分間３００×ｇで回転させた。ペレットを新鮮な１０ｍＬのＴＣＭに再懸濁させ、カウントし、１ｍＬあたり１Ｅ６細胞になるように再懸濁させた。２４ウェルプレートに、１ウェル当たり５Ｅ５個の細胞を添加した。総体積が１ウェルあたり１ｍＬになるように、１ウェルあたり１．５×１０６個のＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを５００μＬの体積に添加した。活性化の２４時間後、ウイルスを室温で解凍した。ウイルスを感染多重度（ＭＯＩ）３で添加し、穏やかに旋回させて混合し、インキュベーターでプレートに戻した。（レンチウイルス機能力価は、ＳｕｐＴ１力価アッセイで以前に求めた。）ウイルスが添加されていない非形質導入（ＵＴＤ）のために１つのウェルを確保した。
形質導入の２４時間後、１ｍＬのＴＣＭを各ウェルに添加した。この時点（２日目）以降にペニシリン－ストレプトマイシンを添加した。３～５日目に、２ｍＬの細胞につき４ｍＬのＴＣＭを添加し、Ｔ２５組織培養処理フラスコに移した。フラスコをインキュベーター内に水平に配置した（３日目）。Ｔ細胞培養のために等体積のＴＣＭを添加した（４日目）。５～１４日目に、細胞を１日おきに確認し、生存率、サイズ、及び総細胞数を記録した。１ｍＬあたり１００万個の細胞になるように細胞密度を調整した。理想的な収集時間はドナー依存性であり、細胞サイズ及び拡大の倍率によって決定される。全般的に、１００～２００倍の拡大で、ＭＯＸＩフローセルカウンターに基づいて、細胞サイズが８μｍ未満であったときに細胞を冷凍した。
レンチウイルス形質導入効率を、以下のように収集日に確認した。培養物を十分に混合した。１００μＬのＴ細胞を、１００μＬのＦＡＣＳバッファの入った９６ウェルプレートの対応するウェルに収集し、混合し、室温で３分間、１３００ＲＰＭで回転させた。細胞を２００μＬのＦＡＣＳバッファに再懸濁させ、４℃で遠心分離を繰り返した。
形質導入の１４日後、細胞を１００μＬのビオチン標識ｈＫ２（１μｇ／ｍＬ、ＦＡＣＳバッファで希釈）に再懸濁させ、氷上で３０分間インキュベートした。１００μＬのＦＡＣＳバッファを添加し、４℃でスピン洗浄した。更に２００μＬのＦＡＣＳバッファを添加した後、スピン洗浄を繰り返した。二次抗体ＳＡ－ＰＥ（１：２５０）を含有するマスター溶液１００μＬで染色し、ｌｉｖｅ ｄｅａｄ ｆｉｘａｂｌｅ ｓｔａｉｎ（１：５００）、αＣＤ３、αＣＤ４、及びαＣＤ８抗体を氷上で３０分間施した。１００μＬのＦＡＣＳバッファを添加し、４℃でスピン洗浄し、廃棄し、４℃でスピン洗浄する前に２００μＬのＦＡＣＳバッファに再懸濁させた。フローサイトメトリーによって分析する前に、サンプルを１００μＬのＦＡＣＳバッファに再懸濁させた。
細胞の収集及び冷凍は以下のように行った。最終細胞数を求めた。培養物を収集し、３００×ｇで１０分間、室温で遠心分離した。５０ｍＬのコニカルチューブに適合するように、培養物をより少ない体積の培地に再懸濁させた。チューブを４℃で１０分間マグネットに入れ、「脱ビーズ」した。細胞をチューブから穏やかに移してビーズ／マグネットの摂動を最小化し、正確な体積を記録した。カウントを繰り返した。遠心分離を３００×ｇで１０分間行い、上清を廃棄した。冷却容器内のＣＳ－１０ ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）細胞冷凍保存培地中で細胞を冷凍した。直ちに容器を－８０℃に２４～４８時間移した後、液体窒素中で永続的に保存した。結果を図２７に示し、形質導入Ｔ細胞の表面上のｈＫ２ ＣＡＲ発現を確認する。分析した１０個の熱安定化クローン及び親１１Ｂ６ ＨＬ及びＬＨの各々によって検出されたｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の百分率（陽性％）の要約を図に提供する。ＣＡＲ１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）、ＣＡＲ１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）、ＣＡＲ１９（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ）、及びＣＡＲ２０（ＨＫ２Ｂ３５９＿ＬＨ）の表面発現の結果を図２７に示す。図示されるように、異なるクローンは、１７．９％～４２．７％の範囲の異なるＣＡＲ発現レベルを有する。ＣＡＲ陽性ＣＤ３＋Ｔ細胞の百分率は、ＣＡＲ１７については５６．０％、ＣＡＲ１８については５１．２％、ＣＡＲ１９については４５．１％、ＣＡＲ２０については５９．９％、そして、非形質導入細胞（図中ＵＴＤ）については０．０６５％であった。全てのＣＡＲ Ｔ＋細胞を、後続の機能アッセイのために等価なＣＡＲ＋Ｔ細胞に対して正規化した。
実施例１１：ＣＡＲ－Ｔ細胞は腫瘍細胞の殺傷を媒介する
ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、抗原依存性細胞傷害性についてリアルタイムＩｎｃｕＣｙｔｅ腫瘍殺傷アッセイで評価した。熱安定化ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞及び親１１Ｂ６ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＣＡＲ発現データに基づいて計算した１：１又は０．５：１のエフェクター：標的比で８８時間、ＶＣａＰ細胞（図２０）又はＰＣ３細胞（図２１）とコインキュベートした。ＣＡＲ１７、ＣＡＲ１８、ＣＡＲ１９、及びＣＡＲ２０を形質導入したＣＡＲ－Ｔ細胞を、Ｔ細胞上のＣＡＲ発現に基づいて計算した１：１又は０．５：１のエフェクター対標的（ＥＴ）比で９６時間、ｈＫ２陽性ＶＣａＰ細胞及びｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞とコインキュベートした。ＣＡＲ１７、ＣＡＲ１８、ＣＡＲ１９、及びＣＡＲ２０を形質導入したＣＡＲ－Ｔ細胞の経時的な腫瘍細胞成長阻害パーセントを、ＶＣａｐ細胞については図３０に、ＤＵ１４５細胞については図３１に示す。標的細胞は、リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。試験したＣＡＲ－Ｔ細胞は、約１００％のＴＧＩを達成したが、非形質導入対照は、いかなるＴＧＩも示さなかった。ｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞中の試験したＣＡＲ－Ｔ細胞では、ＴＧＩは観察されなかった。
実施例１２：熱安定化ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン産生
１：１のＥ／Ｔ比でＶＣａＰ細胞と共にｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を一晩（およそ２０時間）共培養したものから上清を回収し、１３－ｐｌｅｘ Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘヒト高感度Ｔ細胞キット（ＨＳＴＣＭＡＧ２８ＳＰＭＸ１３）を使用して分析した。ｈＫ２ ＣＡＲ改変Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａｐ細胞との共培養中にはサイトカインを分泌したが、非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）では最少であった。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるサイトカイン放出の結果を図２２に示す。
１：１のＥ／Ｔ比でＶＣａＰ、ＤＵ１４５（５Ｅ４細胞）細胞と共にｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を一晩（およそ２０時間）共培養したものから上清を回収した。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２発現ＶＣａｐ細胞との共培養中にはＩＦＮ－γを分泌したが、ｈＫ２－陰性ＤＵ１４５細胞との共培養中には分泌しなかった。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ放出を図２３に示す。デュープリケートの培養からの平均ＩＦＮ－γ濃度±ＳＤ（ｐｇ／ｍＬ）を示す。異なる熱安定化ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ細胞と共培養したとき、異なる量のＩＦＮ－γを生成した。
実施例１３：ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔの増殖
ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞を増殖アッセイで評価した。Ｔ細胞増殖は、インビボ免疫機能の重要なインビトロパラメータである。熱安定化１１Ｂ６ ＣＡＲ Ｔ細胞の機能を更に評価するために、熱安定化１１Ｂ６及び親ｓｃＦｖ ＣＡＲ－Ｔ細胞をＣＴＶで標識して、Ｔ細胞増殖を評価した。
ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞を、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ、５μＭ）で標識し、ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ及びｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲに染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ－Ｔ細胞の頻度を求めた。図示されるように、ｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞をゲーティングすることにより、ｈＫ２（＋）Ｖｃａｐ細胞は、全てのＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞の増殖（図３３）及び活性化マーカーＣＤ２５のアップレギュレーション（図３４）を促進したが、ｈＫ２（－）ＤＵ１４５細胞は促進しなかった。ＣＤ３／２８ビーズで刺激したＴ細胞及びＴ細胞のみをそれぞれ陽性対照及び陰性対照として使用した。任意の刺激なしのＴ細胞のみは増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激されたＴ細胞は等価な増殖パターンを示した。図３５に示されるように、ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖した。様々なＣＡＲコンストラクトで遺伝子操作されたＴ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ－Ｔ細胞数を示した。ＣＡＲ－Ｔ細胞数は、３つの技術的複製物からの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいていた。
プロトコルは以下の通りであった。腫瘍細胞Ｖｃａｐ及びＤＵ１４５を収集し、ＰＢＳで２回洗浄し、腫瘍細胞の増殖をブロックするために、３７℃のインキュベーターにおいて１．５時間、１００ｕｇ／ｍＬのマイトマイシンＣ（ＭＭＣ）を含有するＰＢＳ中１０Ｅ６／ｍＬで再懸濁させた。２０μＬのＤＭＳＯをＣＴＶ染色溶液のバイアルに添加した。５μＬの溶液を、５ｍＬ（１：１０００）のＰＢＳ（３７℃に加温）で希釈して、５μＭの染色溶液を提供した。２Ｅ６個のＴ細胞をカウントし、回収し、ＰＢＳで２回洗浄し、４Ｅ６／ｍＬ（０．５ｍＬ）で再懸濁させた。等体積（０．５ｍＬ）のＣＴＶ染色溶液を添加した。細胞を３７℃で２０分間インキュベートした。次いで、４ｍＬのＰＲＭＩ＋２０％ＦＢＳを細胞に添加して、任意の非結合色素を吸収させた。細胞を５分間インキュベートし、４００×ｇで５分間遠心分離した。細胞ペレットを、予熱しておいたＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ培地に再懸濁させた。Ｔ細胞をカウントし、１Ｅ５個の細胞（１００ｕＬ）を９６ウェル平底プレートに播種した。
その間に、ＭＭＣ処理した腫瘍細胞ｈＫ２（＋）ＶＣａｐ及びＨＫ２（－）ＤＵ１４５を回収し、１．５時間後にカウントし、次いで、１Ｅ６／ｍＬで再懸濁させた。１Ｅ５個の細胞（１００μＬ）を９６ウェルプレート内でＴ細胞と共培養した。Ｔ細胞のみ、及び３：１の比のＣＤ３／２８ビーズ対細胞を添加したＴ細胞を、それぞれ陰性対照及び陽性対照として使用した。
５日間共培養した後、全ての細胞を各ウェルから回収した。細胞を遠心分離し、４００×ｇで５分間２回洗浄し、次いで、９６ウェルＵ底プレートにおいてｈＫ２ＣＡＲ、ＣＤ３、ＣＤ８、及びＣＤ２５、ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ（Ｎｅａｒ－ＩＲ）で染色した。洗浄後、全ての細胞を１００μＬのＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ（商標）固定バッファ（５０ｕＬのＦＡＣＳバッファ＋５０ｕＬの固定バッファ）を使用して１０分間固定した。染色されたサンプルを、インキュベーション期間の終了後にマルチカラーフローサイトメトリーによって分析した。
データ分析は、以下のように行った。ＣＴＶヒストグラムを調製した。単独で培養されたＴ細胞の右端ピーク（ＣＴＶ明）、及び集団の残りを捕捉するためのＣＴＶ希釈ゲートを包含するように、ＣＴＶ未希釈ゲートを設定した。これを全てのサンプルに適用した。
実施例１４．ＣＡＲ１７、ＣＡＲ１８、ＣＡＲ１９又はＣＡＲ２０を形質導入したＣＡＲ－Ｔ細胞の特性評価。
ＣＡＲ－Ｔ細胞の活性化は、抗原依存性である
生成されたＣＡＲ－Ｔ細胞を、実施例５に記載の通り、抗原依存性活性についてＪＮＬレポーターアッセイにおいて評価した。簡潔に述べると、シグナル伝達応答性ＮＦＡＴプロモーターによって駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含有するＪｕｒｋａｔ細胞（ＪＮＬ細胞と呼ばれる）に、ＣＡＲ１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）、ＣＡＲ１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）、ＣＡＲ１９（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ）、又はＣＡＲ２０（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨ）コンストラクトを形質導入した。ビオチン化ｈＫ２、続いて、ストレプトアビジンコンジュゲートしたＰＥによって、各ＣＡＲの発現を判定した。選択されたクローンについて、形質導入されたＪＮＬ細胞におけるＣＡＲ発現が確認され、図２８に示す通り、細胞の４６～５０％がＫＬ２Ｂ３５９ベースのＣＡＲを発現し、細胞の７３．７～９６％がＫＬ２Ｂ４１３ベースのＣＡＲを発現していた。各ＣＡＲを発現するＪＮＬ細胞のパーセントは以下の通りであった。ＣＡＲ１７（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ）：７３．７％。ＣＡＲ１８（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ）：９３．６％、ＣＡＲ１９（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＨＬ）：４６％、ＣＡＲ２０（ＫＬ２Ｂ３５９＿ＬＨ）：５０．８％。
ｈＫ２ ＣＡＲコンストラクトとその同種細胞抗原（標的細胞上のｈＫ２）との間の結合によって、ＪＮＬ細胞におけるルシフェラーゼが発現する。その目的のために、試験ＣＡＲコンストラクトを形質導入したＪＮＬ細胞又は非形質導入ＮＪＬ細胞（ＵＴＤ）を、標的細胞株（ＶＣａｐ、ＬＮＣａＰ／ｈＫ２（ｈＫ２を組み換え発現するＬＮＣａＰ細胞）、ＬＮＣａＰ、Ｃ４－２Ｂ、２２Ｒｖ１、又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、ルシフェラーゼ活性を発光強度として測定した。発光強度が抗原発現細胞の存在下でＵＴＤ細胞のレベルを１．５倍上回った場合、コンストラクトは活性であるとみなした。試験したＣＡＲコンストラクトについては、抗原依存性活性化はみられなかった。図２９は、図に示されるＣＡＲ－Ｔ細胞の試験標的細胞への結合から生じたＲＬＵ（相対光単位）を示す。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原依存的に腫瘍細胞の殺傷を媒介する
ＣＡＲ１７、ＣＡＲ１８、ＣＡＲ１９、及びＣＡＲ２０を形質導入したＣＡＲ－Ｔ細胞を、Ｔ細胞上のＣＡＲ発現に基づいて計算した１：１又は０．５：１のエフェクター対標的（ＥＴ）比で９６時間、ｈＫ２陽性ＶＣａＰ細胞及びｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞とコインキュベートした（実施例１１）。標的細胞は、リアルタイムでＩｎｃｕＣｙｔｅイメージングシステムによって測定された赤色核色素を安定的に発現していた。経時的な腫瘍細胞成長阻害パーセントを、ＶＣａｐ細胞については図３０に、ＤＵ１４５細胞については図３１に示す。腫瘍細胞成長阻害（％）＝（初期生存標的細胞数－現時点の生存標的細胞数）／初期生存細胞数×１００（％）。試験したＣＡＲ－Ｔ細胞は、約１００％のＴＧＩを達成したが、非形質導入対照は、いかなるＴＧＩも示さなかった。ｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞中の試験したＣＡＲ－Ｔ細胞では、ＴＧＩは観察されなかった。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原刺激時にサイトカインを産生する
細胞傷害性Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮ－γは、腫瘍の免疫監視作用を発揮させるのに非常に重要であり、これにより、増殖を直接阻害し、インビボ及びインビトロにおいて一部の悪性腫瘍のアポトーシスを誘導することができる。ｈＫ２ ＣＡＲ改変ヒトＴ細胞がｈＫ２陽性腫瘍細胞によって認識及び活性化され得るかどうかを判定するために、指定のＣＡＲクローンを形質導入した初代Ｔ細胞及び対照非形質導入Ｔ細胞（ＵＴＤ）を標的細胞株（ＬＮＣａＰ／ｈＫ２、ＬＮＣａＰ、Ｃ４－２Ｂ、２２Ｒｖ１、又はＤＵ１４５細胞）と共培養し、ＩＦＮ－γ濃度測定のために上清を回収した。図３２に示されるように、ｈＫ２ ＣＡＲ細胞を形質導入したＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｈＫ２を組み換え発現するＬＮＣａｐ細胞（ＬＮＣａｐ／ｈＫ２）細胞との共培養中にＩＦＮ－γを分泌し、また、非常に低いｈＫ２発現Ｃ４－２Ｂ及びＬＮＣａｐ細胞との共培養中にも分泌したが、ｈＫ２－陰性ＤＵ１４５細胞では分泌しなかった。デュープリケートの培養からの平均ＩＦＮ－γ濃度±ＳＤ（ｐｇ／ｍＬ）を図に示す。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原依存的に活性化され、脱顆粒のマーカーをアップレギュレートする
主に、標的腫瘍細胞を殺傷する溶解顆粒の免疫分泌を通して、ＣＤ８＋Ｔリンパ球及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの細胞傷害性リンパ球によって、腫瘍細胞を認識及び殺傷することができる。このプロセスは、顆粒膜と免疫エフェクター細胞の細胞質膜との融合を伴い、その結果、典型的にはＣＤ１０７ａなどの溶解顆粒を取り囲む脂質二重層に存在するリソソーム関連タンパク質の表面曝露が生じる。したがって、ＣＤ１０７ａの膜発現は、免疫細胞活性化及び細胞傷害性脱顆粒のマーカーを構成する。
脱顆粒アッセイは、下記のように行った。標的細胞（５×１０４個）を、９６ウェルプレートにおいて１ウェルあたり０．１ｍＬで等数のエフェクター細胞と共培養した。対照ウェルは、Ｔ細胞のみを含有していた。１μＬ／サンプルのモネンシン（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に加えて抗ＣＤ１０７ａ（１ウェルあたり５μＬ）を添加し、３７℃で４時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、ｈＫ２ ＣＡＲ、ＣＤ３、及びＣＤ８の発現について染色し、フローサイトメーターＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａで分析した。
脱顆粒アッセイの結果を図３３に示す。ＣＤ１０７Ａ＋ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ細胞の増加は、ｈＫ２陽性Ｖｃａｐ細胞との共培養において明らかであったが、ｈＫ２陰性ＤＵ１４５との共培養は効果を有していなかった。腫瘍細胞刺激なしのＣＡＲ－Ｔ細胞のみ及びＵＴＤ対照では、バックグラウンド染色（＜２％）しかみられなかった。イオノマイシン（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（商標）細胞刺激カクテル；５００×）と組み合わせたフォルボール１２－ミリステート１３－アセテート（ＰＭＡ）は、この４時間細胞培養モデルにおけるＣＤ１０７ａ細胞表面発現の一貫した誘導因子であり、これを陽性対照として使用した。結果を代表的なドナーＴ細胞について示し、この結果は、複数のドナーで再現可能であった。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原依存的に増殖する
ＣＡＲ－Ｔ細胞を、実施例９に記載のＴ細胞増殖アッセイプロトコルを使用してその増殖について評価した。ｈＫ２ ＣＡＲ－Ｔ及び非形質導入（ＵＴＤ）Ｔ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ；５μＭ）で標識し、ｈＫ２陽性ＶＣａｐ及びｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞と共培養した。共培養の５日後、細胞を収集し、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＮｅａｒＩＲ ｌｉｖｅ／ｄｅａｄ Ｄｙｅ、及びｈＫ２ＣＡＲで染色した。Ｆｌｏｗｊｏソフトウェアを備えるＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーターでフローサイトメトリー分析を行った。リンパ球を生ＣＤ３によって同定し、ＣＴＶ色素希釈及び活性化マーカーＣＤ２５を有するＣＡＲ－Ｔ細胞の頻度を求めた。ＣＤ３＋Ｔ細胞でゲーティングすることにより、ｈＫ２陽性Ｖｃａｐ細胞は、図３４及び３５に示すように各試験したＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖を、そして、図３６及び３７に示すように活性化マーカーＣＤ２５のアップレギュレーションを促進したが、ｈＫ２陰性ＤＵ１４５細胞は促進しなかった。任意の刺激なしのＴ細胞のみは増殖せず、ＣＤ３／２８ビーズで刺激されたＴ細胞は等価な増殖パターンを示した。ｈＫ２ ＣＡＲ＋Ｔ細胞は、ＶＣａｐ細胞と５日間共培養した後に、ＣＤ３／２８ビーズ陽性対照よりもロバストに増殖した。異なる試験したＣＡＲ－Ｔ細胞は、異なる増殖活性を有し、異なるＣＡＲ－Ｔ細胞数を示した。増殖しているＴ細胞及びＣＤ２５を発現しているＴ細胞の百分率は、デュープリケートからの平均絶対細胞数＋／－ＳＥＭに基づいていた。
実施例１５：ＡＤＣの作製及び特性評価。
ｈＫ２に結合する抗体又は抗原結合ドメインを、Ｉｎ－１１１、Ｚｒ－８９、又はＬｕ－１７７ Ａｃ－２２５などの様々な放射性金属で標識し、雄ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ（ＮＳＧ，Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）又はＢａｌｂ－ｃ若しくはＳＨＯ Ｎｕｄｅマウスにおいて、ＬＮＣａＰ、ＶＣａＰ、又はＣ４－２Ｂを含む得られた皮下（ＳＣ）ヒト前立腺モデルで、インビボ腫瘍体内分布又は腫瘍有効性を評価する。ｈＫ２に結合する抗体若しくは抗原結合ドメイン又はアイソタイプ対照抗体の様々な用量を、異なる量の放射活性（１０～１０００ｎＣｉ）で標識し、腫瘍取り込み又は有効性を測定する。

Claims (250)

  1. カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、前記抗原結合ドメインが、配列番号１１１、１１２、１１３、１１４、及び１１５からなる群から選択される配列を有するｈＫ２上のエピトープに結合する、単離タンパク質。
  2. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、ＫＶＴＥＦ（配列番号１１１）及びＨＹＲＫＷ（配列番号１１２）の配列を有するエピトープ内のｈＫ２に結合する、請求項１に記載の単離タンパク質。
  3. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、ｈＫ２への結合について参照抗体と競合し、前記参照抗体が、以下を含む、請求項１に記載の単離タンパク質：
    ａ．配列番号１３７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１３８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
    ｂ．配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
    ｃ．配列番号１６４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
    ｄ．配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６７のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
    ｅ．配列番号１６８のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６９のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
    ｆ．配列番号２０４のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号２０５のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；又は
    ｇ．配列番号１６６のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号４４４のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３。
  4. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、ｈＫ２への結合について参照抗体と競合し、前記参照抗体が、配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びに配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項３に記載の単離タンパク質。
  5. 以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１～４に記載の単離タンパク質
    ａ．それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
    ｂ．それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
    ｃ．それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１；
    ｄ．それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
    ｅ．それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
    ｆ．それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、及び２０９；
    ｇ．それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
    ｈ．それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
    ｉ．それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、及び１８１；
    ｊ．それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
    ｋ．それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３；又は
    ｌ．それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９。
  6. それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項５に記載の単離タンパク質。
  7. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ、又はＶＨＨである、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  8. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、Ｆａｂである、請求項７に記載の単離タンパク質。
  9. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、ＶＨＨである、請求項７に記載の単離タンパク質。
  10. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、ｓｃＦＶである、請求項７に記載の単離タンパク質。
  11. 前記ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）、及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）、又はＶＬ、Ｌ１、及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、請求項１０に記載の単離タンパク質。
  12. 前記Ｌ１が、以下を含む、請求項１１に記載の単離タンパク質
    ａ．約５～５０個のアミノ酸、
    ｂ．約５～４０個のアミノ酸、
    ｃ．約１０～３０個のアミノ酸、又は
    ｄ．約１０～２０個のアミノ酸。
  13. 前記Ｌ１が、配列番号７、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、又は１０８のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の単離タンパク質。
  14. 前記Ｌ１が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の単離タンパク質。
  15. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１３７、１６２、１６４、１６６、１６８、又は２０４のＶＨ及び配列番号１３８、１６３、１６５、１６７、１６９、又は２０５のＶＬを含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  16. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項１５に記載の単離タンパク質：
    ａ．配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；又は
    ｂ．配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；又は
    ｃ．配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；又は
    ｄ．配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；又は
    ｅ．配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；又は
    ｆ．配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ；又は
    ｇ．配列番号１６６のＶＨ及び配列番号４４４のＶＬ。
  17. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬを含む、請求項１５に記載の単離タンパク質。
  18. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１３３、１３４、３０８、３１６、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、及び４０９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  19. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号４０４又は４０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  20. カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２）に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号７５の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号７４の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離タンパク質。
  21. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号４、５、６、１３９、１５９、又は１６１のＶＨ及び配列番号１、２、３、１４０、又は１６０のＶＬを含み、ただし、前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号５のＶＨ及び配列番号２のＶＬの両方を含むことはない、請求項２０に記載の単離タンパク質。
  22. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項２１に記載の単離タンパク質：
    ａ．配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｂ．配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｃ．配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｄ．配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｅ．配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｆ．配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｇ．配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｈ．配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｉ．配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｊ．配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｋ．配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｌ．配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｍ．配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｎ．配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｏ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｐ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｑ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｒ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｓ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｔ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｕ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｖ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｗ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｘ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｙ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｚ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ａａ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｂｂ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；又は
    ｃｃ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ。
  23. 以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項２０～２２のいずれか一項に記載の単離タンパク質
    ａ．それぞれ配列番号６３、６４、６６、６７、６９、及び７１；
    ｂ．それぞれ配列番号６３、６５、６６、６８、７０、及び７１；
    ｃ．それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１；
    ｄ．それぞれ配列番号７２、７３、６６、６７、６９、及び７１；又は
    ｅ．それぞれ配列番号７２、７３、６６、６８、７０、及び７１；又は
    ｆ．それぞれ配列番号７２、７３、６６、６７、６９、及び７１。
  24. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ、又はＶＨＨである、請求項２１に記載の単離タンパク質。
  25. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、Ｆａｂである、請求項２４に記載の単離タンパク質。
  26. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、ＶＨＨである、請求項２４に記載の単離タンパク質。
  27. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、ｓｃＦＶである、請求項２４に記載の単離タンパク質。
  28. 前記ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）、及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）、又はＶＬ、Ｌ１、及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、請求項２７に記載の単離タンパク質。
  29. 前記Ｌ１が、以下を含む、請求項２８に記載の単離タンパク質
    ａ．約５～５０個のアミノ酸、
    ｂ．約５～４０個のアミノ酸、
    ｃ．約１０～３０個のアミノ酸、
    ｄ．又は約１０～２０個のアミノ酸。
  30. 前記Ｌ１が、配列番号７、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、又は１０８のアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の単離タンパク質。
  31. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１３５、１３６、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、又は３２３のアミノ酸配列を含む、請求項２１～３０のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  32. 単一特異性タンパク質である、請求項１～３１のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  33. 多重特異性タンパク質である、請求項１～３１のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  34. 前記多重特異性タンパク質が、二重特異性タンパク質である、請求項３３に記載の単離タンパク質。
  35. 前記多重特異性タンパク質が、三重特異性タンパク質である、請求項３３に記載の単離タンパク質。
  36. リンパ球上の抗原に結合する抗原結合ドメインを含む、請求項３４又は３５に記載の多重特異性タンパク質。
  37. 前記リンパ球が、Ｔ細胞である、請求項３６に記載の多重特異性タンパク質。
  38. 前記Ｔ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項３７に記載の多重特異性タンパク質。
  39. 前記リンパ球が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項３８に記載の多重特異性タンパク質。
  40. 前記リンパ球上の抗原が、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、又はＮＫＧ２Ｃである、請求項３６のいずれか一項に記載の多重特異性タンパク質。
  41. 前記リンパ球上の抗原が、ＣＤ３εである、請求項４０に記載の多重特異性タンパク質。
  42. 前記ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項４１に記載の多重特異性タンパク質：
    ａ．配列番号１１６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１１７のＨＣＤＲ２、配列番号１１８のＨＣＤＲ３、配列番号１１９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１２０のＬＣＤＲ２、及び配列番号１２１のＬＣＤＲ３；又は
    ｂ．配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬ。
  43. 前記ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５７のＶＬを含む、請求項４１に記載の多重特異性タンパク質。
  44. 前記ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項４３に記載の多重特異性タンパク質：
    ａ．配列番号２５５の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６０のＬＣＤＲ３；又は
    ｂ．配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３；又は
    ｃ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
    ｄ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５０のＶＬ；又は
    ｅ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬ；又は
    ｆ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５２のＶＬ；又は
    ｇ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５３のＶＬ；又は
    ｈ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５４のＶＬ。
  45. 前記ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む、請求項４３に記載の多重特異性タンパク質。
  46. 前記ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨ及び配列番号２５１のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬを含む、請求項４３又は４５に記載の多重特異性タンパク質。
  47. 前記ｈＫ２に結合する結合ドメインが、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項４１～４６のいずれか一項に記載の多重特異性タンパク質
    ａ．それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
    ｂ．それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
    ｃ．それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１；
    ｄ．それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
    ｅ．それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
    ｆ．それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、及び２０９；
    ｇ．それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
    ｈ．それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
    ｉ．それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１９０、及び１８１；
    ｊ．それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
    ｋ．それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
    ｌ．それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９；
    ｍ．それぞれ配列番号６３、６４、６６、６７、６９、及び７１；
    ｎ．それぞれ配列番号６３、６５、６６、６８、７０、及び７１；
    ｏ．それぞれ配列番号７２、７３、６６、６７、６９、及び７１；
    ｐ．それぞれ配列番号７２、７３、６６、６８、７０、及び７１；
    ｑ．配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
    ｒ．配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
    ｓ．配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
    ｔ．配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
    ｕ．配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；
    ｖ．配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ；
    ｗ．配列番号１６６のＶＨ及び配列番号４４４のＶＬ；
    ｘ．配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｙ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｚ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ａａ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；又は
    ｂｂ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ。
  48. 前記ｈＫ２に結合する結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項４７に記載の多重特異性タンパク質。
  49. 前記ＣＤ３に結合する結合ドメインが、以下を含む、請求項４１～４８のいずれか一項に記載の多重特異性タンパク質
    ａ．配列番号１１６のＨＣＤＲ１、配列番号１１７のＨＣＤＲ２、配列番号１１８のＨＣＤＲ３、配列番号１１９のＬＣＤＲ１、配列番号１２０のＬＣＤＲ２、及び配列番号１２１のＬＣＤＲ３；又は
    ｂ．配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６０のＬＣＤＲ３；又は
    ｃ．配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３；又は
    ｄ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
    ｅ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５０のＶＬ；又は
    ｆ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬ；又は
    ｇ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５２のＶＬ；又は
    ｈ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５３のＶＬ；又は
    ｉ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５４のＶＬ；又は
    ｊ．配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬ。
  50. 半減期延長部分にコンジュゲートしている、請求項１～４９のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  51. 前記半減期延長部分が、免疫グロブリン（Ｉｇ）、前記Ｉｇの断片、Ｉｇ定常領域、前記Ｉｇ定常領域の断片、Ｆｃ領域、トランスフェリン、アルブミン、アルブミン結合ドメイン、又はポリエチレングリコールである、請求項５０に記載の単離タンパク質。
  52. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、Ｆｃ領域を含む、請求項５１に記載の単離タンパク質。
  53. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、ＣＨ２ドメインを含む、請求項５２に記載の単離タンパク質。
  54. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、ＣＨ３ドメインを含む、請求項５２に記載の単離タンパク質。
  55. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、請求項５２に記載の単離タンパク質。
  56. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む、請求項５５に記載の単離タンパク質。
  57. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む、請求項５６に記載の単離タンパク質。
  58. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の断片のＮ末端にコンジュゲートされる、請求項５０～５７のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  59. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の断片のＣ末端にコンジュゲートされる、請求項５０～５７のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  60. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、第２のリンカー（Ｌ２）を介して前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる、請求項５０～５７のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  61. 前記Ｌ２が、配列番号７、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、又は１０８のアミノ酸配列を含む、請求項６０に記載の単離タンパク質。
  62. 前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の断片が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、請求項５１～６１のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  63. 前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の断片が、ＩｇＧ１である、請求項６２に記載の単離タンパク質。
  64. 前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の断片が、前記タンパク質のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）への結合を低減する少なくとも１つの変異を含む、請求項５１～６３のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  65. 前記タンパク質の前記ＦｃγＲへの結合を低減する前記少なくとも１つの変異が、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番がＥＵインデックスに従う、請求項６４に記載の単離タンパク質。
  66. 前記タンパク質の前記ＦｃγＲへの結合を低減する前記変異が、Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓである、請求項６５に記載の単離タンパク質。
  67. 前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の断片が、前記タンパク質の前記ＦｃγＲへの結合を増強する少なくとも１つの変異を含む、請求項５１～６６に記載の単離タンパク質。
  68. 前記タンパク質の前記ＦｃγＲへの結合を増強する前記少なくとも１つの変異が、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番がＥＵインデックスに従う、請求項６７に記載の単離タンパク質。
  69. 前記ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、若しくはＦｃγＲＩＩＩ、又はこれらの任意の組み合わせである、請求項６４～６８のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  70. 前記Ｉｇ定常領域又は前記Ｉｇ定常領域の断片が、前記タンパク質の半減期を調節する少なくとも１つの変異を含む、請求項５１～６３のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  71. 前記タンパク質の半減期を調節する少なくとも１つの変異が、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ、及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番がＥＵインデックスに従う、請求項７０に記載の単離タンパク質。
  72. 前記Ｉｇ定常領域のＣＨ３ドメインに少なくとも１つの変異を含む、請求項５１～６３のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  73. 前記Ｉｇ定常領域の前記ＣＨ３ドメインにおける前記少なくとも１つの変異が、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番がＥＵインデックスに従う、請求項７２に記載の単離タンパク質。
  74. 前記Ｉｇ定常領域の前記ＣＨ３ドメインにおける前記変異が、Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖである、請求項７３に記載の単離タンパク質。
  75. 前記ＩｇＧ定常領域が、配列番号１０９、１１０、１５８、又は３７８を含む、請求項７３又は７４に記載の単離タンパク質。
  76. 前記ＩｇＧ定常領域が、配列番号１０９又は３７８を含む、請求項７５に記載の単離タンパク質。
  77. 以下を含む、請求項１～１８又は５０～７６のいずれか一項に記載の単離タンパク質
    ａ．配列番号２１０の重鎖（ＨＣ）及び配列番号２２１の軽鎖（ＬＣ）；
    ｂ．配列番号２１１のＨＣ及び配列番号２２２のＬＣ；
    ｃ．配列番号２１２のＨＣ及び配列番号２２３のＬＣ；
    ｄ．配列番号２１３のＨＣ及び配列番号２２４のＬＣ；又は
    ｅ．配列番号２１９のＨＣ及び配列番号２２０のＬＣ。
  78. 配列番号３５４と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ及び配列番号２２１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＬＣを含む、請求項１～７６のいずれかに記載の単離タンパク質。
  79. ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、前記抗原結合ドメインが、以下を含む、単離タンパク質：
    ａ．それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；並びに／又は
    ｂ．配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；並びに／又は
    ｃ．配列番号２１０のＨＣ及び配列番号２２１のＬＣ。
  80. ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、前記抗原結合ドメインが、以下を含む、単離タンパク質：
    ａ．それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；並びに／又は
    ｂ．配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；並びに／又は
    ｃ．配列番号３５４のＨＣ及び配列番号２２１のＬＣ。
  81. ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、前記抗原結合ドメインが、以下を含む、単離タンパク質：
    ａ．それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；並びに／又は
    ｂ．配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；並びに／又は
    ｃ．配列番号２１１のＨＣ及び配列番号２２２のＬＣ。
  82. ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、前記抗原結合ドメインが、以下を含む、単離タンパク質：
    ａ．それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；並びに／又は
    ｂ．配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；並びに／又は
    ｃ．配列番号２１２のＨＣ及び配列番号２２３のＬＣ。
  83. ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、前記抗原結合ドメインが、以下を含む、単離タンパク質：
    ａ．それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；並びに／又は
    ｂ．配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；並びに／又は
    ｃ．配列番号２１３のＨＣ及び配列番号２２４のＬＣ。
  84. ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む単離タンパク質であって、前記抗原結合ドメインが、以下を含む、単離タンパク質：
    ａ．それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、及び２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３；並びに／又は
    ｂ．配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ；並びに／又は
    ｃ．配列番号２１９のＨＣ及び配列番号２２０のＬＣ。
  85. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項７９～８４のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  86. ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインを含む多重特異性タンパク質である、請求項７９～８４のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  87. 前記ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項８６に記載の多重特異性タンパク質：
    ａ．配列番号１１６の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１１７のＨＣＤＲ２、配列番号１１８のＨＣＤＲ３、配列番号１１９の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号１２０のＬＣＤＲ２、及び配列番号１２１のＬＣＤＲ３；又は
    ｂ．配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬ。
  88. 前記ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５７のＶＬを含む、請求項８６又は８７に記載の多重特異性タンパク質。
  89. 前記ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項８６又は８７に記載の多重特異性タンパク質：
    ａ．配列番号２５５の重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６０のＬＣＤＲ３；又は
    ｂ．配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３；又は
    ｃ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；又は
    ｄ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５０のＶＬ；又は
    ｅ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬ；又は
    ｆ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５２のＶＬ；又は
    ｇ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５３のＶＬ；又は
    ｈ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５４のＶＬ。
  90. 前記ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む、請求項８６に記載の多重特異性タンパク質。
  91. 前記ＣＤ３εに結合する抗原結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨ及び配列番号２５１のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬを含む、請求項８６又は９０に記載の多重特異性タンパク質。
  92. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項１～３２のいずれか一項に記載の単離タンパク質。
  93. 前記ＣＡＲが、以下を含む、請求項９２に記載の単離タンパク質
    ａ．請求項１～３２のいずれか一項に記載のｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
    ｂ．膜貫通ドメインと、
    ｃ．少なくとも１つの共刺激ドメインを任意選択で含む細胞内シグナル伝達ドメイン。
  94. 前記ＣＡＲが、ＣＤ８ａヒンジ領域を更に含む、請求項９２又は９３に記載の単離タンパク質。
  95. 以下である、請求項９２～９４のいずれか一項に記載の単離タンパク質
    ａ．前記ＣＤ８ａヒンジ領域が、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む；
    ｂ．前記膜貫通ドメインが、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む；並びに／又は
    ｃ．前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン及び配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む。
  96. ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及びリンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインを含む、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  97. 前記リンパ球抗原が、Ｔ細胞抗原である、請求項９６に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  98. 前記Ｔ細胞抗原が、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗原である、請求項９７に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  99. 前記リンパ球抗原が、ＮＫ細胞抗原である、請求項９８に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  100. 前記リンパ球抗原が、ＣＤ３、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ８、ＫＩ２Ｌ４、ＮＫＧ２Ｅ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｆ、ＢＴＮＬ３、ＣＤ１８６、ＢＴＮＬ８、ＰＤ－１、ＣＤ１９５、又はＮＫＧ２Ｃである、請求項９６～９９のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  101. 前記リンパ球抗原が、ＣＤ３εである、請求項１００に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  102. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又は前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ｄＡｂ、又はＶＨＨを含む、請求項９６～１００のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  103. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又は前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、Ｆａｂを含む、請求項１０２に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  104. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又は前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、ＶＨＨを含む、請求項１０２に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  105. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメイン及び／又は前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、ｓｃＦＶを含む、請求項１０２に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  106. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインがＦａｂを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインがｓｃＦＶを含む、請求項１０２に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  107. 前記ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、第１のリンカー（Ｌ１）、及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ１－ＶＬ）、又はＶＬ、Ｌ１、及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ１－ＶＨ）を含む、請求項１０５又は１０６に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  108. 前記Ｌ１が、以下を含む、請求項１０７に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．約５～５０個のアミノ酸、
    ｂ．約５～４０個のアミノ酸、
    ｃ．約１０～３０個のアミノ酸、又は
    ｄ．約１０～２０個のアミノ酸。
  109. 前記Ｌ１が、配列番号７、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、又は１０８のアミノ酸配列を含む、請求項１０８に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  110. 前記Ｌ１が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１０９に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  111. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１１１、１１２、１１３、１１４、又は１１５に記載のｈＫ２上のエピトープに特異的に結合する、請求項９６～１１０のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  112. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１１１及び１１２に記載のｈＫ２上のエピトープに特異的に結合する、請求項１１１に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  113. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１１１、１１２、１１３、１１４、及び１１５からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含むｈＫ２の不連続エピトープに特異的に結合する、請求項１１１又は１１２に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  114. 前記ＣＤ３εに結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３４１、４４８、又は４４９に記載のＣＤ３ε上のエピトープに特異的に結合する、請求項９６～１１３のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  115. 前記ＣＤ３εに結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３４１、４４８、及び４４９からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含むＣＤ３ε上の不連続エピトープに特異的に結合する、請求項１１４に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  116. 前記ＣＤ３εに結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３４１、４４８、及び４４９に記載のＣＤ３ε上のエピトープに特異的に結合する、請求項１１５に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  117. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号６３、７２、１４１、１４７、１７０、１７６、１８８、１９４、１９６、１９８、２００、２０６、又は２１６のＨＣＤＲ１、配列番号６４、６５、７３、１４２、１４８、１７１、１７７、１８９、１９５、１９７、１９９、２０１、２０７、又は２１７のＨＣＤＲ２、配列番号６６、１４３、１７２、１７８、１８４、１９０、２０８、又は２１８のＨＣＤＲ３、配列番号６７、６８、１４４、１７３、１７９、１８２、１８５、又は１９１のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、１４５、１７４、１８０、１８６、１９２、又は４７０のＬＣＤＲ２、及び配列番号７１、１４６、１７５、１８１、１８７、１９３、又は２０９のＬＣＤＲ３を含む、請求項９６～１１６のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  118. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１１７に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
    ｂ．それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
    ｃ．それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１；
    ｄ．それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
    ｅ．それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
    ｆ．それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、及び２０９；
    ｇ．それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
    ｈ．それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
    ｉ．それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１９０、及び１８１；
    ｊ．それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
    ｋ．それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３；又は
    ｌ．それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８１、４７０、及び２０９。
  119. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１１８に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  120. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項１１８に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質：
    ａ．配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
    ｂ．配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
    ｃ．配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
    ｄ．配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
    ｅ．配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；
    ｆ．配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ；又は
    ｇ．配列番号１６６のＶＨ及び配列番号４４４のＶＬ。
  121. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬを含む、請求項１１７～１１９のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  122. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号７５のＶＨ及び配列番号７４のＶＬを含む、請求項９６～１１５のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  123. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号４、５、６、１３７、１３９、１５９、又は１６１のＶＨ及び配列番号１、２、３、１４０、又は１６０のＶＬを含み、ただし、前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号５のＶＨ及び配列番号２のＶＬの両方を含むことはない、請求項１２２に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  124. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項１２３に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質：
    ａ．配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｂ．配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｃ．配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｄ．配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｅ．配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｆ．配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｇ．配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｈ．配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｉ．配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｊ．配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｋ．配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｌ．配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｍ．配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｎ．配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｏ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｐ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｑ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｒ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｓ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｔ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｕ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｖ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｗ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｘ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｙ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｚ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ａａ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｂｂ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；又は
    ｃｃ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ。
  125. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１３３、１３４、１３５、１３６、３０８、３１６、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９のアミノ酸配列を含む、請求項１２４に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  126. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号４０４又は４０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１２４に記載の単離タンパク質。
  127. 前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号２５５又は１１６のＨＣＤＲ１、配列番号２５６又は１１７のＨＣＤＲ２、配列番号２５７又は１１８のＨＣＤＲ３、配列番号２５８又は１１９のＬＣＤＲ１、配列番号２５９又は１２０のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６０、２６１、又は１２１のＬＣＤＲ３を含む、請求項９６～１２５のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  128. 前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３を含む、請求項１２６に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  129. 前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５７のＶＬを含む、請求項１２６又は１２７に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  130. 前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項１２８又は１２９に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６０のＬＣＤＲ３；
    ｂ．配列番号２５５のＨＣＤＲ１、配列番号２５６のＨＣＤＲ２、配列番号２５７のＨＣＤＲ３、配列番号２５８のＬＣＤＲ１、配列番号２５９のＬＣＤＲ２、及び配列番号２６１のＬＣＤＲ３；
    ｃ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２４９のＶＬ；
    ｄ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５０のＶＬ；
    ｅ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬ；
    ｆ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５２のＶＬ；
    ｇ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５３のＶＬ；又は
    ｈ．配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５４のＶＬ。
  131. 前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨ及び配列番号２５１のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬを含む、請求項１２９に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  132. 前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項９６～１２６のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．配列番号１１６のＨＣＤＲ１、配列番号１１７のＨＣＤＲ２、配列番号１１８のＨＣＤＲ３、配列番号１１９のＬＣＤＲ１、配列番号１２０のＬＣＤＲ２、及び配列番号１２１のＬＣＤＲ３；又は
    ｂ．配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬ。
  133. 前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、又は３３７のアミノ酸配列を含む、請求項１３２に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  134. 前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、請求項９６～１３２に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  135. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域若しくは第１のＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる、及び／又は前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、第２の免疫グロブリン（Ｉｇ）定常領域若しくは第２のＩｇ定常領域の断片にコンジュゲートされる、請求項９６～１３４のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  136. 前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインと前記第１のＩｇ定常領域又は前記第１のＩｇ定常領域の断片との間、及び前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインと前記第２のＩｇ定常領域又は前記第２のＩｇ定常領域の断片との間に、第２のリンカー（Ｌ２）を更に含む、請求項１３５に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  137. 前記Ｌ２が、配列番号７、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、又は１０８のアミノ酸配列を含む、請求項１３６に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  138. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、Ｆｃ領域を含む、請求項１３７に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  139. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、ＣＨ２ドメインを含む、請求項１３８に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  140. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、ＣＨ３ドメインを含む、請求項１３９に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  141. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む、請求項１４０に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  142. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む、請求項１４１に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  143. 前記Ｉｇ定常領域の断片が、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む、請求項１４２に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  144. 前記第１のＩｇ定常領域又は前記第１のＩｇ定常領域の断片、及び前記第２のＩｇ定常領域又は前記第２のＩｇ定常領域の断片が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、請求項１３８に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  145. 前記第１のＩｇ定常領域又は前記第１のＩｇ定常領域の断片及び前記第２のＩｇ定常領域又は前記第２のＩｇ定常領域の断片が、ＩｇＧ１である、請求項１４４に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  146. 前記第１のＩｇ定常領域又は前記第１のＩｇ定常領域の断片、及び前記第２のＩｇ定常領域又は前記第２のＩｇ定常領域の断片が、前記多重特異性タンパク質のＦｃγＲへの結合を低減する少なくとも１つの変異を含む、請求項１４５に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  147. 前記多重特異性タンパク質の前記ＦｃγＲへの結合を低減する前記少なくとも１つの変異が、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｄ２６５Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｎ２９７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３６５Ｅ／Ｌ３５８Ｍ、Ｈ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｓ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ、及びＳ２２８Ｐ／Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓからなる群から選択され、残基の付番がＥＵインデックスに従う、請求項１４６に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  148. 前記多重特異性タンパク質の前記ＦｃγＲへの結合を低減する変異が、Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓである、請求項１４７に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  149. 前記第１のＩｇ定常領域又は前記第１のＩｇ定常領域の断片、及び前記第２のＩｇ定常領域又は前記第２のＩｇ定常領域の断片が、前記多重特異性タンパク質のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）への結合を増強する少なくとも１つの変異を含む、請求項１４４に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  150. 前記多重特異性タンパク質の前記ＦｃγＲへの結合を増強する前記少なくとも１つの変異が、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ、及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅからなる群から選択され、残基の付番がＥＵインデックスに従う、請求項１４９に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  151. 前記ＦｃγＲが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、若しくはＦｃγＲＩＩＩ、又はこれらの任意の組み合わせである、請求項１４６～１５０のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  152. 前記第１のＩｇ定常領域又は第１のＩｇ定常領域の断片、及び第２のＩｇ定常領域又は第２のＩｇ定常領域の断片が、多重特異性タンパク質の半減期を調節する少なくとも１つの変異を含む、請求項１４４に記載の単離多重特異性タンパク質。
  153. 前記多重特異性タンパク質の前記半減期を調節する前記少なくとも１つの変異が、Ｈ４３５Ａ、Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ、Ｔ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ａ、及びＨ４３５Ｒからなる群から選択され、残基の付番がＥＵインデックスに従う、請求項１５２に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  154. 前記第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは前記第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの変異及び／又は前記第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは前記第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの変異を含む、請求項１５２又は１５３のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  155. 前記第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは前記第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける前記少なくとも１つの変異及び／又は前記第２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは前記第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける少なくとも１つの変異が、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３６６Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３９４Ｓ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｉ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｍ／Ｔ３９４Ｗ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｖ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３６６Ａ／Ｋ４０９Ｆ、Ｔ３５０Ｖ／Ｌ３５１Ｙ／Ｆ４０５Ａ／Ｙ４０７Ｖ、及びＴ３５０Ｖ／Ｔ３６６Ｌ／Ｋ３９２Ｌ／Ｔ３９４Ｗからなる群から選択され、残基の付番がＥＵインデックスに従う、請求項１５４に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  156. 前記第１のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは第１のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける前記変異及び前記２のＩｇ定常領域のＣＨ３ドメイン若しくは第２のＩｇ定常領域の断片のＣＨ３ドメインにおける前記変異が、それぞれ、Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖである、請求項１５５に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  157. 前記第１のＩｇ定常領域又は前記第１のＩｇ定常領域の断片及び前記第２のＩｇ定常領域又は前記第２のＩｇ定常領域の断片が、以下の変異を含む、請求項１３５～１５６のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ及び前記第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ；又は
    ｂ．前記第１のＩｇ定常領域におけるＬ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ及び前記第２のＩｇ定常領域におけるＬ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ＿Ｔ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ。
  158. 前記第１のＩｇ定常領域が、配列番号１１０又は配列番号３７８を有する、請求項１５７に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  159. 前記第２のＩｇ定常領域が、配列番号１０９及び配列番号１５８を有する、請求項１５７又は１５８のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  160. 前記第１のＩｇ定常領域が、配列番号３７８と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含み、前記第２のＩｇ定常領域が、配列番号１０９と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１３５～１５７のいずれか一項に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  161. 前記単離タンパク質が、配列番号３０９と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を更に含む、請求項１６０に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  162. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２７５、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３６のｓｃＦＶを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５１のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
  163. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３６のｓｃＦＶを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５１のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
  164. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３４のｓｃＦＶを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５２のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
  165. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１３４のｓｃＦＶを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５２のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
  166. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３２５のｓｃＦＶを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号２５１のＶＬを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５３のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
  167. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；並びに／又は
    ｃ．当該単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５４のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む。
  168. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＨ及び配列番号１６３のＶＬと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＶＬを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶと少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるｓｃＦＶを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５４のＨＣ１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ２を含む。
  169. 前記単離多重特異性タンパク質が、ＨＣ１及びＨＣ２のＣ末端にリジン（例えば、Ｋ４７７）を含み、前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３６１のＨＣ１と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ１及び配列番号３６２のＨＣ２と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるＨＣ２を含む、請求項１６７又は１６８に記載の単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質。
  170. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６６のＶＨ及び配列番号４４４のＶＬを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５５のＨＣ１、配列番号４４５のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む。
  171. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５６のＨＣ１、配列番号２２２のＬＣ１、及び配列番号３６０のＨＣ２を含む。
  172. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３２５のｓｃＦＶを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５３のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
  173. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、及び１２１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３１６のｓｃＦＶを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号１２２のＶＨ及び配列番号１２３のＶＬを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５７のＨＣ１、配列番号３５９のＨＣ２、及び配列番号２７２のＬＣ２を含む。
  174. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、２０９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、配列番号３１６のｓｃＦＶを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の結合ドメインが、配列番号２４８のＶＨ及び配列番号１５１のＶＬを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３５７のＨＣ１、配列番号３５８のＨＣ２、及び配列番号２６７のＬＣ２を含む。
  175. ｈＫ２に結合する第１のドメイン及びＣＤ３に結合する第２のドメインを含み、以下である、単離抗ｈＫ２／抗ＣＤ３タンパク質
    ａ．前記ｈＫ２に結合する第１の結合ドメインが、それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記リンパ球抗原に結合する第２のドメインが、それぞれ配列番号２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、及び２６１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む；
    ｂ．前記ｈＫ２に結合する第１の抗原結合ドメインが、配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬを含み、前記リンパ球抗原に結合する第２の抗原結合ドメインが、配列番号３３１のｓｃＦＶを含む；並びに／又は
    ｃ．前記単離多重特異性タンパク質が、配列番号３６１のＨＣ１、配列番号２２１のＬＣ１、及び配列番号３６２のＨＣ２を含む。
  176. 治療剤又は造影剤にコンジュゲートした請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質を含む、免疫コンジュゲート。
  177. 請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  178. 請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質をコードしている、ポリヌクレオチド。
  179. ポリヌクレオチドであって、
    ａ．請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質をコードしている；及び／又は
    ｂ．配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６３、２７１、２７４、２８２、２９２、２９３、２９４、２９５、３０３、３０４、３０５、３０６、３１２、３１７、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、４５０、若しくは４５１のポリヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
  180. ポリヌクレオチドであって、
    ａ．請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である単離タンパク質をコードしている；及び／又は
    ｂ．配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６３、２７１、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、３０３、３０４、３０５、３０６、３１２、３１６、３１７、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、４４６、４５０、若しくは４５１のポリヌクレオチド配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるポリヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
  181. 請求項１７９又は１８０に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  182. 請求項１８１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  183. 請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質を生成する方法であって、前記タンパク質が発現する条件で請求項１８２に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞によって生成された前記タンパク質を回収することと、を含む、方法。
  184. 治療剤又は造影剤にコンジュゲートした請求項９６～１７５のいずれか一項に記載の単離二重特異性タンパク質を含む、免疫コンジュゲート。
  185. 請求項９６～１７５のいずれか一項に記載の単離二重特異性タンパク質と、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  186. ポリヌクレオチドであって、
    ａ．請求項９６～１７５のいずれか一項に記載の二重特異性タンパク質をコードしている；及び／又は
    ｂ．配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６３、２７１、２７４、２８２、２９２、２９３、２９４、２９５、３０３、３０４、３０５、３０６、３１２、３１６、３１７、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、４５０、若しくは４５１のポリヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
  187. ポリヌクレオチドであって、
    ａ．請求項９６～１７５のいずれか一項に記載の単離タンパク質と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一である単離タンパク質をコードしている；及び／又は
    ｂ．配列番号２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６３、２７１、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、３０３、３０４、３０５、３０６、３１２、３１６、３１７、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、４４６、４５０、若しくは４５１のポリヌクレオチド配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるポリヌクレオチド配列を含む、ポリヌクレオチド。
  188. 請求項１８６又は１８７に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  189. 請求項１８８に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  190. 請求項９６～１７５のいずれか一項に記載の単離二重特異性タンパク質を生成する方法であって、前記多重特異性タンパク質が発現する条件で請求項１８９に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞によって生成された前記多重特異性タンパク質を回収することと、を含む、方法。
  191. 対象におけるｈＫ２発現癌を治療する方法であって、治療有効量の請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質、請求項９６～１７５のいずれか一項に記載の単離二重特異性タンパク質、請求項１７６若しくは１８４に記載の免疫コンジュゲート、又は請求項１７７若しくは１８５に記載の医薬組成物を、前記ｈＫ２発現癌を治療するのに十分な時間にわたって、前記対象に投与することを含む、方法。
  192. 対象におけるｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減する方法であって、請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質、請求項９６～１７５のいずれか一項に記載の単離二重特異性タンパク質、請求項１７６若しくは１８４に記載の免疫コンジュゲート、又は請求項１７７若しくは１８５に記載の医薬組成物を、前記ｈＫ２発現腫瘍細胞の量を低減するのに十分な時間にわたって、前記対象に投与することを含む、方法。
  193. 対象におけるｈＫ２発現癌の定着を予防する方法であって、請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質、請求項９５～１７５のいずれか一項に記載の単離二重特異性タンパク質、請求項１７６若しくは１８４に記載の免疫コンジュゲート、又は請求項１７７若しくは１８５に記載の医薬組成物を前記対象に投与して、前記対象における前記ｈＫ２発現癌の定着を予防することを含む、方法。
  194. ｈＫ２発現癌を発症するリスクを有する対象における非癌性状態を治療する方法であって、請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質、請求項９６～１７５のいずれか一項に記載の単離多重特異性タンパク質、請求項１７６若しくは１８４に記載の免疫コンジュゲート、又は請求項１７７若しくは１８５に記載の医薬組成物を前記対象に投与して、前記非癌性状態を治療することを含む、方法。
  195. 前記ｈＫ２発現癌が、前立腺癌又は乳癌である、請求項１９１～１９４のいずれか一項に記載の方法。
  196. 前記前立腺癌が、再発性、難治性、悪性、若しくは去勢抵抗性の前立腺癌、又はこれらの任意の組み合わせである、請求項１９５に記載の方法。
  197. 前記乳癌が、アンドロゲン受容体（ＡＲ）陽性乳癌、再発性、難治性、若しくは悪性の乳癌、又はこれらの任意の組み合わせである、請求項１９５に記載の方法。
  198. 前記非癌性状態が、前立腺肥大、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、又は診断された前立腺癌の非存在下において高い前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）レベルを有する状態である、請求項１９５に記載の方法。
  199. 前記単離タンパク質又は前記単離多重特異性タンパク質が、第２の治療剤と組み合わせて投与される、請求項１９１～１９８のいずれか一項に記載の方法。
  200. 前記第２の治療剤が、手術、化学療法、アンドロゲン枯渇療法、若しくは放射線、又はこれらの任意の組み合わせである、請求項１９９に記載の方法。
  201. 対象における前立腺癌又は乳癌の存在を検出する方法であって、請求項１７６又は１８４に記載の免疫コンジュゲートを、前立腺癌又は乳癌を有する疑いがある対象に投与することと、前記免疫コンジュゲートが結合している生物学的構造を可視化し、それによって前立腺癌又は乳癌の存在を検出することと、を含む、方法。
  202. 請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質、請求項９６～１７５のいずれか一項に記載の単離二重特異性タンパク質、請求項１７６若しくは１８４に記載の免疫コンジュゲート、又は請求項１７７若しくは１８５に記載の医薬組成物を含むキット。
  203. 請求項１～９５のいずれか一項に記載の単離タンパク質に結合する、抗イディオタイプ抗体。
  204. 以下を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）：
    ａ．ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む細胞外ドメインと、
    ｂ．膜貫通ドメインと、
    ｃ．少なくとも１つの共刺激ドメインを任意選択で含む細胞内シグナル伝達ドメイン。
  205. ＣＤ８ａヒンジ領域を更に含む、請求項２０４に記載のＣＡＲ。
  206. 以下である、請求項２０４又は２０５に記載のＣＡＲ
    ａ．前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８ａ膜貫通領域（ＣＤ８Ａ－ＴＭ）ポリペプチドを含み；
    ｂ．前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）成分を含む共刺激ドメイン及びＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）成分を含む一次シグナル伝達ドメインを含む。
  207. 以下である、請求項２０４又は２０６に記載のＣＡＲ
    ａ．前記ＣＤ８ａヒンジ領域が、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む；
    ｂ．前記膜貫通ドメインが、配列番号２６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む；並びに／又は
    ｃ．前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号２７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する共刺激ドメイン及び配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を有する一次シグナル伝達ドメインを含む。
  208. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号６３、７２、１４１、１４７、１７０、１７６、１８８、１９４、１９６、１９８、２００、２０６、又は２１６のＨＣＤＲ１、配列番号６４、６５、７３、１４２、１４８、１７１、１７７、１８３、１８９、１９５、１９７、１９９、２０１、２０７、又は２１７のＨＣＤＲ２、配列番号６６、１４３、１７２、１７８、１８４、１９０、２０８、又は２１８のＨＣＤＲ３、配列番号６７、６８、１４４、１７３、１７９、１８２、１８５、又は１９１のＬＣＤＲ１、配列番号６９、７０、１４５、１７４、１８０、１８６、１９２、又は４７０のＬＣＤＲ２、及び配列番号７１、１４６、１７５、１８１、１８７、１９３、又は２０９のＬＣＤＲ３を含む、請求項２０４～２０７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  209. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項２０４～２０８のいずれか一項に記載のＣＡＲ
    ａ．それぞれ配列番号６３、６４、６６、６７、６９、及び７１；
    ｂ．それぞれ配列番号６３、６５、６６、６７、６９、及び７１；
    ｃ．それぞれ配列番号６３、６５、６６、６８、７０、及び７１；
    ｄ．それぞれ配列番号１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
    ｅ．それぞれ配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
    ｆ．それぞれ配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、及び１８１；
    ｇ．それぞれ配列番号１７０、１８３、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
    ｈ．それぞれ配列番号１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、及び１９３；
    ｉ．それぞれ配列番号２０６、２０７、２０８、１８２、４７０、又は２０９；
    ｊ．それぞれ配列番号７２、７３、６６、６７、６９、及び７１；
    ｋ．それぞれ配列番号７２、７３、６６、６８、７０、及び７１；
    ｌ．それぞれ配列番号１４７、１４８、１４３、１４４、１４５、及び１４６；
    ｍ．それぞれ配列番号１９４、１９５、１７２、１７３、１７４、及び１７５；
    ｎ．それぞれ配列番号１９６、１９７、１７８、１７９、１８０、及び１８１；
    ｏ．それぞれ配列番号１９８、１９９、１８４、１８５、１８６、及び１８７；
    ｐ．それぞれ配列番号２００、２０１、１９０、１９１、１９２、及び１９３；又は
    ｑ．それぞれ配列番号２１６、２１７、２１８、１８２、４７０、及び２０９。
  210. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１６３のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１６２のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、請求項２０４～２０９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  211. 請求項２０４～２０９のいずれか一項に記載のＣＡＲであって、前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１３８のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３７のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む；又は配列番号１４０のＶＬのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに配列番号１３９のＶＨのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む、ＣＡＲ。
  212. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項２０４～２１１のいずれか一項に記載のＣＡＲ
    ａ．配列番号１３７のＶＨ及び配列番号１３８のＶＬ；
    ｂ．配列番号１６２のＶＨ及び配列番号１６３のＶＬ；
    ｃ．配列番号１６４のＶＨ及び配列番号１６５のＶＬ；
    ｄ．配列番号１６６のＶＨ及び配列番号１６７のＶＬ；
    ｅ．配列番号１６８のＶＨ及び配列番号１６９のＶＬ；
    ｆ．配列番号２０４のＶＨ及び配列番号２０５のＶＬ；又は
    ｇ．配列番号１６６のＶＨ及び配列番号４４４のＶＬ。
  213. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号７５のＶＨ及び配列番号７４のＶＬを含む、請求項２０４～２１２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  214. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１３８又は配列番号１４０のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＬ及び配列番号１３７又は配列番号１３９のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含むＶＨを含む、請求項２０４～２１１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  215. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、配列番号１、２、３、１４０、若しくは１６０のＶＬ及び／又は配列番号４、５、６、１３９、１５９、若しくは１６１のＶＨを含む、請求項２１３に記載のＣＡＲ。
  216. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、以下を含む、請求項２１５に記載のＣＡＲ：
    ａ．配列番号４のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｂ．配列番号４のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｃ．配列番号４のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｄ．配列番号４のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｅ．配列番号４のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｆ．配列番号５のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｇ．配列番号５のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｈ．配列番号５のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｉ．配列番号５のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｊ．配列番号６のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｋ．配列番号６のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｌ．配列番号６のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｍ．配列番号６のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｎ．配列番号６のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｏ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｐ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｑ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｒ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｓ．配列番号１３９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｔ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｕ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ｖ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｗ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；
    ｘ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ；
    ｙ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１のＶＬ；
    ｚ．配列番号１５９のＶＨ及び配列番号２のＶＬ；
    ａａ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号３のＶＬ；
    ｂｂ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１４０のＶＬ；又は
    ｃｃ．配列番号１６１のＶＨ及び配列番号１６０のＶＬ。
  217. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインが、ｓｃＦＶである、請求項２０４～２１６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  218. 前記ｓｃＦｖが、ＶＬとＶＨとの間に第１のリンカー（Ｌ１）を含む、請求項２１７に記載のＣＡＲ。
  219. 前記Ｌ１が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項２１８に記載のＣＡＲ。
  220. 前記ｓｃＦＶが、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、１３３、１３４、１３５、１３６、３０８、３１６、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、又は４０９のアミノ酸配列を含む、請求項２１９に記載のＣＡＲ。
  221. 前記ｓｃＦＶが、配列番号４０４又は配列番号４０５のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２１９に記載のＣＡＲ。
  222. 前記ｓｃＦｖが、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、又は配列番号１３６のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２１９に記載のＣＡＲ。
  223. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む前記細胞外ドメインが、シグナルポリペプチドを更に含む、請求項２１７～２２２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  224. 前記シグナルポリペプチドが、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、請求項２２３に記載のＣＡＲ。
  225. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー９（ＣＤ１３７）成分、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ｚ）成分、表面抗原分類（ＣＤ２７）成分、表面抗原分類スーパーファミリーメンバー成分、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチド成分を含む、請求項２０４～２２４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  226. 前記ＣＤ１３７成分が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、請求項２０４～２２５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  227. 前記ＣＤ３ｚ成分が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、請求項２０４～２２６のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  228. 前記細胞内シグナル伝達ドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列を含む、請求項２０４～２２７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  229. 前記ＣＤ８ａ－ＴＭポリペプチドが、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、請求項２０４～２２８のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  230. 前記ＣＤ８ａヒンジ領域が、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、請求項２０４～２２９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  231. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む前記細胞外ドメインが、配列番号２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、１４９、１５０、１５１、１５２、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、又は４２５のアミノ酸配列を含む、請求項２２３～２３０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  232. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む前記細胞外ドメインが、配列番号４１６又は配列番号４１７のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２２３～２３０のいずれかに記載のＣＡＲ。
  233. 前記ｈＫ２に結合する抗原結合ドメインを含む前記細胞外ドメインが、配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１、又は配列番号１５２のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２２３～２３０のいずれかに記載のＣＡＲ。
  234. 配列番号４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、１５３、１５４、１５５、１５６、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、又は４４１のアミノ酸配列を含む、請求項２０４～２３３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  235. 配列番号４３２又は配列番号４３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２０４～２３３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  236. 配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、又は配列番号１５６のアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％）同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２０４～２３３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  237. 請求項２０４～２３６のいずれか一項に記載のＣＡＲを発現する、単離リンパ球。
  238. 前記リンパ球が、Ｔリンパ球である、請求項２３７に記載の単離リンパ球。
  239. 前記リンパ球が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である、請求項２３８に記載の単離リンパ球。
  240. 請求項２０４～２３６のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードしている、単離ポリヌクレオチド。
  241. 請求項２４０に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  242. 請求項２４０に記載のポリヌクレオチド又は請求項２４１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  243. 請求項２３７～２３９のいずれか一項に記載のリンパ球と、医薬的に許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
  244. ｈＫ２発現癌を有する対象を治療する方法であって、治療有効量の請求項２３７～２３９のいずれか一項に記載のリンパ球を、それを必要としている対象に投与し、それによって、前記リンパ球が、前記対象における前記ｈＫ２発現癌の殺傷を媒介することを含む、方法。
  245. 前記ｈＫ２発現癌が、前立腺癌又は乳癌である、請求項２４４に記載の方法。
  246. 前記ｈＫ２発現癌が、前立腺癌である、請求項２４５に記載の方法。
  247. 癌細胞の標的化殺傷の方法であって、前記癌細胞を、請求項２４４～２４６のいずれか一項に記載のリンパ球と接触させ、それによって、前記リンパ球が前記癌細胞の標的化殺傷を誘導することを含む、方法。
  248. 前記癌細胞が、前立腺癌細胞又は乳癌細胞である、請求項２４７に記載の方法。
  249. 前記癌細胞が、前立腺癌細胞である、請求項２４８に記載の方法。
  250. 対象における癌の存在を検出する方法であって、
    ａ．前記対象から得られた細胞サンプルを請求項２０４～２３６のいずれか一項に記載のＣＡＲと接触させ、それによって、ＣＡＲ－細胞複合体を形成することと、
    ｂ．前記ＣＡＲ－細胞複合体を検出することと、ここで、前記ＣＡＲ－細胞複合体の検出が、前記対象における前記癌の存在を示す、
    を含む、方法。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7506817B2 (ja) 2019-07-26 2024-06-26 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド カリクレイン関連ペプチダーゼ２抗原結合ドメインを含むタンパク質及びその使用

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW202210510A (zh) * 2020-05-27 2022-03-16 美商健生生物科技公司 包含ｃｄ３抗原結合域之蛋白質及其用途
CA3189293A1 (en) * 2020-07-17 2022-01-20 Janssen Biotech, Inc. Anti-idiotypic antibodies against anti-klk2 antibodies
MX2023008803A (es) * 2021-01-27 2023-08-04 Janssen Biotech Inc Inmunoconjugados que comprenden dominios de union al antigeno de la peptidasa 2 relacionada con la calicreina y sus usos.
KR20230160874A (ko) * 2021-03-24 2023-11-24 얀센 바이오테크 인코포레이티드 CD79b, CD20 및 CD3을 표적으로 하는 삼중특이적 항체
CA3214963A1 (en) * 2021-03-31 2022-10-06 Janssen Biotech, Inc. Materials and methods for immune effector cells redirection
TW202313127A (zh) * 2021-05-27 2023-04-01 美商健生生物科技公司 治療前列腺癌之組合物及方法
US20230265218A1 (en) 2022-02-23 2023-08-24 Xencor, Inc. Anti-cd28 x anti-psma antibodies
WO2024089551A1 (en) * 2022-10-25 2024-05-02 Janssen Biotech, Inc. Msln and cd3 binding agents and methods of use thereof
CN117187180B (zh) * 2023-11-03 2024-01-26 四川大学 一种Th17细胞及其培养方法和应用及其诱导液

Family Cites Families (63)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3854480A (en) 1969-04-01 1974-12-17 Alza Corp Drug-delivery system
US3832253A (en) 1973-03-21 1974-08-27 Baxter Laboratories Inc Method of making an inflatable balloon catheter
US4667014A (en) 1983-03-07 1987-05-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH, useful as LHRH antagonists
US4452775A (en) 1982-12-03 1984-06-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Cholesterol matrix delivery system for sustained release of macromolecules
CA1200416A (en) 1983-05-13 1986-02-11 Societe Des Produits Nestle S.A. Food process
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US5075109A (en) 1986-10-24 1991-12-24 Southern Research Institute Method of potentiating an immune response
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
JPH04167172A (ja) 1990-10-31 1992-06-15 Nec Corp ベクトルプロセッサ
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5932448A (en) 1991-11-29 1999-08-03 Protein Design Labs., Inc. Bispecific antibody heterodimers
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
ATE305140T1 (de) 1996-07-15 2005-10-15 Mayo Foundation Verfahren zur detektion der hk2 polypeptide
US6818749B1 (en) 1998-10-31 2004-11-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Variants of humanized anti carcinoma monoclonal antibody cc49
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
PT1354034E (pt) 2000-11-30 2008-02-28 Medarex Inc Roedores transgénicos transcromossómicos para produção de anticorpos humanos
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
JP2005538706A (ja) 2001-07-12 2005-12-22 ジェファーソン フーテ， スーパーヒト化抗体
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
WO2005075662A2 (en) * 2004-01-28 2005-08-18 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with kallikrein 2 (klk2)
EP3050963B1 (en) 2005-03-31 2019-09-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Process for production of polypeptide by regulation of assembly
DE102005028778A1 (de) 2005-06-22 2006-12-28 SUNJÜT Deutschland GmbH Mehrlagige Folie mit einer Barriere- und einer antistatischen Lage
JP5474531B2 (ja) 2006-03-24 2014-04-16 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 操作されたヘテロ二量体タンパク質ドメイン
EP2035456A1 (en) 2006-06-22 2009-03-18 Novo Nordisk A/S Production of bispecific antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
US8748356B2 (en) 2007-10-19 2014-06-10 Janssen Biotech, Inc. Methods for use in human-adapting monoclonal antibodies
AU2008343589A1 (en) 2007-12-19 2009-07-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Design and generation of human de novo pIX phage display libraries via fusion to pIX or pVII, vectors, antibodies and methods
CA2722466A1 (en) 2008-04-29 2009-11-05 Tariq Ghayur Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
JP2012505654A (ja) 2008-10-14 2012-03-08 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗体をヒト化及び親和性成熟する方法
US8637454B2 (en) 2009-01-06 2014-01-28 Dyax Corp. Treatment of mucositis with kallikrein inhibitors
EP2424567B1 (en) 2009-04-27 2018-11-21 OncoMed Pharmaceuticals, Inc. Method for making heteromultimeric molecules
US9580491B2 (en) 2010-03-31 2017-02-28 Ablexis, Llc Genetic engineering of non-human animals for the production of chimeric antibodies
PT2560993T (pt) 2010-04-20 2024-09-16 Genmab As Proteínas contendo anticorpo heterodimérico fc e métodos para a produção das mesmas
JP6022444B2 (ja) 2010-05-14 2016-11-09 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション ヘテロ二量体タンパク質ならびにそれを生産および精製するための方法
EP2420253A1 (en) 2010-08-20 2012-02-22 Leadartis, S.L. Engineering multifunctional and multivalent molecules with collagen XV trimerization domain
RS59589B1 (sr) 2010-11-05 2019-12-31 Zymeworks Inc Dizajniranje stabilnog heterodimernog antitela sa mutacijama u fc domenu
EP3674320A3 (en) 2011-10-27 2020-08-12 Genmab A/S Production of heterodimeric proteins
EP2771037B1 (en) 2011-10-28 2016-08-03 Fredax AB Therapeutic agents and uses thereof
JP6326371B2 (ja) 2011-11-04 2018-05-16 ザイムワークス，インコーポレイテッド Ｆｃドメインにおける変異を有する安定なヘテロ二量体抗体デザイン
SI2794905T1 (sl) 2011-12-20 2020-08-31 Medimmune, Llc Modificirani polipeptidi za ogrodja bispecifičnega protitelesa
AU2013249985B2 (en) 2012-04-20 2017-11-23 Merus N.V. Methods and means for the production of Ig-like molecules
CN104640562A (zh) 2012-07-13 2015-05-20 酵活有限公司 包含抗-cd3构建体的双特异性不对称异二聚体
PT2931030T (pt) 2012-12-14 2020-08-03 Open Monoclonal Tech Inc Polinucleótidos que codificam anticorpos de roedores com idiótipos humanos e animais que os compreendem
CA2907140A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods to control c-terminal lysine, galactose and sialic acid content in recombinant proteins
KR102442738B1 (ko) 2013-11-19 2022-09-15 프레닥스 에이비 인간화된 안티 칼리크레인-2 항체
GB2520353A (en) * 2013-11-19 2015-05-20 Fredax Ab Antibody polypeptides and uses thereof
JP6744313B2 (ja) 2015-01-02 2020-08-26 ダイアックス コーポレーション 血漿カリクレインおよび第ｘｉｉ因子に対する二重特異性抗体
EP3865139B1 (en) 2015-02-18 2023-05-03 Enlivex Therapeutics Rdo Ltd Combination immune therapy and cytokine control therapy for cancer treatment
CN108026179A (zh) 2015-10-02 2018-05-11 豪夫迈·罗氏有限公司 结合间皮素和cd3的双特异性t细胞活化性抗原结合分子
WO2017087826A1 (en) 2015-11-18 2017-05-26 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Systems, methods, and compositions for imaging androgen receptor axis activity in carcinoma, and related therapeutic compositions and methods
WO2018060301A1 (en) 2016-09-30 2018-04-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies against cd3
SG10201913656TA (en) 2017-04-26 2020-03-30 Eureka Therapeutics Inc Cells expressing chimeric activating receptors and chimeric stimulating receptors and uses thereof
EP3684816B1 (en) 2017-09-22 2024-05-29 Kite Pharma, Inc. Chimeric polypeptides and uses thereof
CR20200568A (es) * 2018-05-24 2021-02-26 Janssen Biotech Inc Antcuerpos anti-cd3 y usos de estos
UY38800A (es) 2019-07-26 2021-01-29 Janssen Biotech Inc Receptor de antígeno quimérico (car) anti-hk2
CR20220025A (es) 2019-07-26 2022-05-04 Janssen Biotech Inc Proteínas que comprenden dominios de unión al antígeno de la peptidasa 2 relacionada con la calicreína y sus usos
MX2023008803A (es) 2021-01-27 2023-08-04 Janssen Biotech Inc Inmunoconjugados que comprenden dominios de union al antigeno de la peptidasa 2 relacionada con la calicreina y sus usos.

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7506817B2 (ja) 2019-07-26 2024-06-26 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド カリクレイン関連ペプチダーゼ２抗原結合ドメインを含むタンパク質及びその使用

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CL2023000499A1 (es) 2023-08-04
CA3147735A1 (en) 2021-02-04
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ECSP22015276A (es) 2022-03-31
US20210040210A1 (en) 2021-02-11
CR20220025A (es) 2022-05-04
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TW202118788A (zh) 2021-05-16
PE20220649A1 (es) 2022-04-28
US20240124583A1 (en) 2024-04-18
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