JP2020504095A - 抗PD−L1抗体との組み合わせのための抗Tim−3抗体 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明の抗体は、ファージディスプレイ、トランスジェニック動物、および/またはヒト化を用いることを含むがこれらに限定されない、既知の方法によって作製し得る。抗ヒトTim−3抗体を作製するために、ヒトTim−3タンパク質を使用前にPNGaseF酵素で前処理することができる。さらに、上記のように誘導された抗体は、本明細書に記載のアッセイを用いてさらにスクリーニングすることができる。
本発明の抗体は、WINNアッセイを用いて、インビボ免疫調節活性について試験することができる。WINNアッセイでは、ヒトNSCLC腫瘍細胞NCI−H292およびヒト免疫細胞(同種異系)を混合し、免疫不全マウスに同時移植し(co−implanted)、次いで免疫調節剤を投与する。免疫調節剤が腫瘍形成を阻害もしくは遅延する能力または腫瘍内存続性を支持する能力は、以下のようにして評価することができる。
本発明の抗体の有効性は、NCI−HCC827ヒトNSCLC(非小細胞肺癌)異種移植片モデルで試験することができ、モデルにおける定着腫瘍を遅延または破壊する能力を評価する。0日目に、1×107個のNCI−HCC827細胞をNSGマウス(7週齢、雌、1群あたりマウス8匹)の側腹部に皮下移植する。腫瘍が約400mm3の体積に達したら(約30〜32日目)、マウスに2.5×106個の事前に増殖させたヒトT細胞を注入する(i.v.)。この事前に増殖させたヒトT細胞は、全血からヒトT細胞を分離し、Dynabeads(登録商標)Human T−Activator CD3/CD28を用いて10日間増殖させることによって生成される。この事前に増殖させたヒトT細胞は、後で使用するために凍結保存してもよい。T細胞注入の1日後、マウスにヒトIgGまたは抗体Aを10mg/kgで毎週(合計4回投与)、腹腔内注射により投与する。グルーミングおよび歩行を含む動物の健康および行動を週に少なくとも2回モニタリングする。
本発明の抗体によってTim−3シグナルを阻止する機能は、T細胞活性化の際のサイトカインの放出を測定することによって評価することができる。T細胞活性化が本発明の抗体による処置によって促進されるとき、IFN−γなどのある特定のサイトカインのレベルは増加すると予想される。
本発明の抗体がヒトTim−3に結合する能力は、ELISAアッセイにより測定することができる。Tim−3結合アッセイのために、96ウェルプレート(Nunc)をヒトTim−3−Fc(R&D Systems)で4℃で一晩コーティングする。ウェルをブロッキング緩衝液(3%ウシ血清アルブミンを含有するPBS)で2時間ブロッキングする。ウェルを0.1%Tween−20を含有するPBSで3回洗浄する。次いで、抗体Aまたは対照IgG(100μl)を添加し、室温で1時間インキュベートする。洗浄後、プレートを100μlのヤギ抗ヒトIgG F(ab’)2−HRPコンジュゲート(Jackson Immuno Research)とともに室温で1時間インキュベートする。プレートを洗浄し、次いで100μlの3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジンとともにインキュベートする。450nmにおける吸光度をマイクロプレートリーダーで読み取る。半数効果濃度(EC50)をGraphPad Prism6ソフトウェアを用いて計算する。
本発明の抗体が細胞表面ヒトTim−3に結合する能力は、フローサイトメトリーアッセイを用いて測定することができる。ヒトTim−3発現DO11.10細胞系であるTim−3DO11.10細胞をこのアッセイに用いる。
本発明のある特定の抗体がTim−3へのホスファチジルセリンの結合を阻止する能力は、FACS分析によって測定することができる。この受容体−リガンド阻止アッセイのために、1×106個/mlのDO11.10細胞を12μMカンプトテシン(Sigma(登録商標))で37℃で3時間処理して、アポトーシスを誘導する。FITC−アネキシンV(Becton Dickinson(登録商標))をホスファチジルセリンの存在を検出するための陽性対照として用いる。ビオチン化hTIM−3−Fcは、カンプトテシン処理細胞に強く結合するが、非処理細胞には結合しない。カンプトテシン処理細胞を冷PBSで洗浄し、1×106個細胞/mlで結合緩衝液(Becton Dicknson(登録商標))に再懸濁する。50μg/mlのマウスIgGおよびラットIgGを細胞に添加し、室温で30分間インキュベートすることによって、Fc受容体をブロッキングする。抗体Aの6点滴定(1:3段階希釈)を開始濃度を90nMとして結合緩衝液中で調製し、1mlの細胞に添加し、次いで細胞を室温で60分間インキュベートする。次いで、hTIM−3−Fcビオチンを、0.05μg/ウェルで、200μlの体積中の適切な試料に添加し、室温で30分間インキュベートする。次いで、1200RPMで5分間の遠心分離により、細胞を結合緩衝液で2回洗浄する。2.4μl/ウェルのストレプトアビジン−FITC(Biolegend(登録商標))を含有する溶液(DPBS中1:10希釈)および5μl/ウェルのヨウ化プロピジウムを各ウェルに添加し、暗所にて室温で30分間インキュベートする。細胞を結合緩衝液で2回洗浄し、100μlのPBSに再懸濁する。試料をIntelliCyt iQueフローサイトメーターで読み取り、データをFlowJoソフトウェアで分析した。個々のMFI(すなわち平均蛍光強度)値をGraphPad Prismソフトウェアに入れて濃度応答曲線を作成し、該曲線からIC50値を外挿する。
本発明の抗体がヒトガレクチン−9のヒトTim−3への結合を阻止する能力は、以下のようにして測定することができる。この受容体−リガンド阻止アッセイのために、96ウェルのストレプトアビジンでコーティングしたMSDプレート(Meso Scale Diagnostics)を150μlのブロッキング緩衝液(5%ウシ血清アルブミンを含有するPBST)で2時間ブロッキングする。ウェルを、0.2%Tween−20を含有する200μlのPBSで3回洗浄する。組換えヒトガレクチン−9(R&D Systems)をEZ−Link(商標)ビオチン(Thermo Scientific(商標))を用いてビオチン化し、次いで25μlの0.21μg/mlのヒト組換えガレクチン−9−ビオチンを次いで添加し、室温で2時間インキュベートする。プレートを、0.2%Tween−20を含有するPBSで3回洗浄する。ヒトTim−3−Fcタンパク質(R&D Systems)をスルホ−タグ(sulfo−tag)NHS−エステル試薬(Meso Scale Discovery(登録商標))を用いてルチニル化し(ruthinylated)、使用するまで少量のアリコーティングを−80℃で保存する。抗体を段階希釈し(13.5μg/mlから開始)、50μlの各抗体を50μlの0.05μg/mlの希釈hTim−3−Fc−ruthと混合し、室温で1時間インキュベートする。次いで、50μlの各組み合わせをプレートに添加し、室温で1.5時間インキュベートする。プレートを、0.2%Tween−20を含有するPBSで3回洗浄する。次いで、150μlの1×read緩衝液(Meso Scale Diagnostics)をプレートの各ウェルに添加し、プレートをSector Imager 2400(Meso Scale Diagnostics)で読み取る。
本発明の抗体がヒトTim−3へのヒトCEACAM1の結合を阻止する能力は、以下のようにして測定することができる。この受容体−リガンド阻止アッセイのために、96ウェルImmulon 4HBXプレート(Thermo Scientific)を100μl/ウェルの1μg/mlのヒトTim−3−Fcで4℃でコーティングする。プレートを0.2%Tween−20を含有するPBSで3回洗浄し、室温で1時間、3%BSAを含む200μl/ウェルのPBSでブロッキングする。次いでブロッキング緩衝液を除去し、50μlの滴定したAb(ポリクローナル抗ヒトTim−3、R&D Systems、抗体A、および対照ヒトIgGを含む)を600nMで開始してプレートに添加し、室温で1時間インキュベートする。次いで50μlの20μg/mlのCEACAM1(BIOTANG)を直接ウェルに添加し、室温で1時間インキュベートする(抗体の最終濃度は300nMであり、CEACAM1の最終濃度は10μg/mlである)。プレートを0.2%Tween−20を含有するPBSで3回洗浄し、100μlの0.2μg/mlのビオチン化ヒトCEACAM1抗体(R&D Systems)を添加し、次いで室温で1時間インキュベートする。プレートを0.2%Tween−20を含有するPBSで3回洗浄し、次いで100μlのストレプトアビジンペルオキシダーゼ(Jackson ImmunoResearch Laboratories)を添加し、次いで室温で1時間インキュベートする。プレートを0.2%Tween−20を含有するPBSで6回洗浄し、100μl/ウェルの1:1TMB基質溶液AおよびB(KPL)を用いて室温で10分間発色させる。次いで、反応を100μl/ウェルの0.1N H2SO4を用いて停止し、SpectraMax(登録商標)プレートリーダーで450nmで読み取る。
抗体AのFabは、抗体Aを固定化(アガロース樹脂)パパイン(ThermoFisher Scientific)で酵素的に切断し(clipping)、続いて遊離の可溶なFcおよび切断されていないIgGを抜き取るための標準ProAカラム(GE Healthcare Life Sciences)精製によって生成される。Fabを含有するフロースルーを収集して、濃縮し、緩衝液の交換をする。hTim−3−IgV−FLAGを、標準抗FLAG樹脂(Sigma−Aldrich)プロトコルを用いて293HEK上清から精製する。hTim−3−IgVドメインは、ヒトTim−3(配列番号1)のアミノ酸残基S22〜K130を表す。フロースルーを樹脂カラム中に複数回戻す。各実験後、SDS−PAGE(NuPAGE Novex 4〜12%ビス−Trisゲル;Invitrogen)およびHPLC(TSKgel G3000 SW XL(寸法:7.8mm、ID30CM、5μM;TOSHO BioScience)を用いて、hTim−3−FLAGタンパク質の品質を決定する。最良のラウンドのタンパク質を一緒に合わせて、最終バッチを作製する。
Biacore T100機器を用いて、捕捉抗体AへのヒトTim−3−IgV−Fc単一アーム抗原(SAG)の結合のキネティクスを測定することができる。ヒトFabバインダー(Human Fab Binder)(GE Healthcare)をBiacore CM5センサーチップ表面にアミンカップリングさせることにより、ヒトFabバインダー表面を調製する。ランニング緩衝液としてHBS−EP緩衝液(GE Healthcare)を用いて、試験抗体をチップにより捕捉する。Tim−3 SAGを3の希釈係数で30nMから開始してランニング緩衝液に希釈して、0.04、0.12、0.37、1.11、3.33、10および30nMの濃度を得る。希釈したTim−3 SAG分析物または緩衝液を30μl/分で180秒間注入し、複合体の解離を1200秒間モニタリングする。各分析物結合サイクルの間に、30μl/分の10mMグリシン−HCl pH2.1の注入を用いて、5つの低濃度については2回の注入を30秒、および2つの高濃度については2回の注入を60秒にて行うことで、結合表面が再生される。所与の抗原/Ab相互作用の実験データを、質量輸送モデルを用いた1:1ラングミュアーを用いてフィッティングする。
抗体Bの有効性は、NCI−H827ヒトNSCLC異種移植片モデルで試験することができ、モデルにおける定着腫瘍を遅延または破壊する能力を評価する。0日目に、1×107個のH827細胞をNSGマウスの側腹部に皮下移植する(7週齢、雌、1群あたりマウス10匹)。ヒト異種移植腫瘍が定着したら、34日目にマウスに5×106個のヒトPBMCを注入する(i.v.)。35日目に開始して、マウスにヒトIgGまたは抗体B(抗PD−L1抗体)のいずれかを10mg/kgで毎週(合計3回投与)、腹腔内投与する。グルーミングおよび歩行を含む動物の健康および行動を週に少なくとも2回モニタリングする。体重および腫瘍体積を週に2回測定する。
表面プラズモン共鳴(Biacore)を用いて、ヒトPD−L1のキネティクスおよび平衡解離定数(KD )を抗体Bについて決定する。
抗体BがヒトPD−L1に結合する能力は、ELISAによって測定することができる。PD−L1結合アッセイのために、96ウェルプレート(Nunc)をヒトPD−L1−Fc(R&D Systems)で4℃で一晩コーティングする。ウェルをブロッキング緩衝液(5%脱脂粉乳を含むPBS)で2時間ブロッキングする。ウェルを0.1%Tween−20を含有するPBSで3回洗浄する。次いで抗体Bまたは対照IgG(100μl)を添加し、室温で1時間インキュベートする。洗浄後、プレートを100μlのヤギ抗ヒトIgG F(ab’)2−HRPコンジュゲート(Jackson Immuno Research)とともに室温で1時間インキュベートする。プレートを洗浄し、次いで100μlの3,3’,5,5’−テトラメチルベンジジンとともにインキュベートする。450nmにおける吸光度をマイクロプレートリーダーで読み取る。半数効果濃度(EC50)をGraphPad Prism6ソフトウェアを用いて計算する。
抗体Bが細胞表面の発現ヒトPD−L1に結合する能力は、フローサイトメトリーによって測定することができる。MDA−MB231細胞(PD−L1陽性ヒト乳房腺癌細胞株)を、200μlの染色緩衝液中の1ウェル当たり1.5×105個の細胞で96ウェルU底プレートに添加し、30分間4℃でインキュベートする。プレートを1200rpmで5分間遠心分離し、上清を除去する。100μlの抗体B−ビオチン(10μg/mlから始めて1:4で段階希釈する)を添加する。合計6つの段階希釈物を評価する。30分間4℃でインキュベートした後、細胞をDPBSで2回洗浄する。5μlのストレプトアビジン−PEを含有する100μlの検出緩衝液を添加する。4℃でさらに30分間インキュベートした後、プレートを遠心分離し、DPBSで2回洗浄する。FACS分析のために、細胞を200μlのDPBSに再懸濁する。
本発明の抗体がPD−1へのPD−L1の結合を阻止する能力は、ELISAによって測定することができる。受容体−リガンド阻止アッセイのために、様々な量の抗体Bまたは対照IgGを一定量のビオチン化PD−L1−Fc融合タンパク質(100ng/ウェル)と混合し、室温で1時間インキュベートする。混合物をPD−1−Fc(1μg/ml)でプレコーティングした96ウェルプレートに移し、次いで室温でさらに1時間インキュベートする。洗浄後、ストレプトアビジンHRPコンジュゲートを添加し、450nmでの吸光度を読み取る。IC50は、PD−1へのPD−L1の結合の50%阻害に必要な抗体濃度を表す。
ヒトPD−L1はB7−1にも結合する。抗体BがB7−1へのPD−L1の結合を阻止する能力は、ELISAによって測定することができる。PD−L1/B7−1阻止アッセイの手順は、プレートを1μg/mlのB7−1−Fc(R&D Systems)でコーティングすることを除いて、PD−L1/PD−1阻止アッセイと同様である。PD−1へのPD−L1の結合の50%阻害に必要な抗体濃度(IC50)を、GraphPad prism6ソフトウェアを用いて計算する。
本発明の抗体によってTim−3シグナルを阻止する機能は、T細胞活性化の際のサイトカインの放出を測定することによって評価することができる。T細胞活性化が本発明の抗体による処置によって促進されるとき、IFN−γなどのある特定のサイトカインのレベルは増加すると予想される。
本発明の抗体の有効性は、NCI−HCC827ヒトNSCLC(非小細胞肺癌)異種移植片モデルで試験することができ、モデルにおける定着腫瘍を遅延または破壊する能力を評価する。0日目に、1×107個のNCI−HCC827細胞をNSGマウスの側腹部に皮下移植する(7週齢、雌、1群あたりマウス8匹)。腫瘍が約400mm3の体積に達したら(約30〜32日目)、マウスに2.5×106個の事前に増殖させたヒトT細胞を注入する(i.v.)。この事前に増殖させたヒトT細胞は、全血からヒトT細胞を分離し、Dynabeads(登録商標)Human T−Activator CD3/CD28を用いて10日間増殖させることによって生成される。この事前に増殖させたヒトT細胞は、後で使用するために凍結保存してもよい。T細胞注入の同じ日に、マウスにヒトIgGまたは抗体Aを10mg/kgで毎週(合計4回投与)、腹腔内注射により投与する。グルーミングおよび歩行を含む動物の健康および行動を週に少なくとも2回モニタリングする。
配列番号1(ヒトTim−3)(ホモサピエンス)
MFSHLPFDCVLLLLLLLLTRSSEVEYRAEVGQNAYLPCFYTPAAPGNLVPVCWGKGACPVFECGNVVLRTDERDVNYWTSRYWLNGDFRKGDVSLTIENVTLADSGIYCCRIQIPGIMNDEKFNLKLVIK
配列番号2(抗体AのHCDR1)(人工配列)
AASGFTFSSYYMS
配列番号3(抗体AのHCDR2)(人工配列)
AISGSGGSTYYADSVKG
配列番号4(抗体AのHCDR3)(人工配列)
ARYARTAFDL
配列番号5(抗体AのLCDR1)(人工配列)
QASQDIYNYLN
配列番号6(抗体AのLCDR2)(人工配列)
YAASSLQS
配列番号7(抗体AのLCDR3)(人工配列)
QQANSFPPT
配列番号8(抗体AのHCVR)(人工配列)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYARTAFDLWGQGTLVTVSS
配列番号9(抗体AのLCVR)(人工配列)
DIVMTQSPSSLSASVGDGVTITCQASQDIYNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGQGTKLEIK
配列番号10(抗体AのHC)(人工配列)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYARTAFDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号11(抗体AのLC)(人工配列)
DIVMTQSPSSLSASVGDGVTITCQASQDIYNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号12(抗体AのHCのDNA)(人工配列)
GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGCGGAGGGCTGGTGCAGCCGGGAGGCAGCCTCAGGCTGAGCTGCGCTGCGAGCGGGTTTACTTTCTCGTCGTACTATATGTCGTGGGTGAGACAAGCACCAGGTAAAGGACTTGAGTGGGTGTCCGCTATCTCAGGCAGCGGAGGATCCACCTACTACGCGGATTCAGTCAAGGGAAGATTCACTATCTCGCGCGACAATTCCAAGAACACCCTGTACCTCCAGATGAACTCGCTGCGGGCAGAAGATACGGCCGTGTACTACTGTGCCCGCTACGCCCGGACCGCCTTCGACTTGTGGGGTCAGGGAACCCTGGTCACTGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCACTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAGGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAAGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCATCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAAGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATTCCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA
配列番号13(抗体AのLCのDNA)(人工配列)
GACATCGTGATGACTCAAAGCCCTTCAAGCCTCTCGGCGTCAGTCGGTGATGGCGTGACCATTACCTGTCAAGCATCCCAAGACATCTACAACTACTTGAATTGGTACCAGCAGAAGCCAGGGAAAGCCCCGAAGCTGCTGATCTACGCCGCCTCCTCACTTCAGAGCGGAGTGCCATCCCGCTTTTCCGGATCGGGGAGCGGAACGGATTTCACTCTGACCATCTCGTCGCTGCAACCGGAGGACTTCGCGACTTACTATTGCCAGCAGGCTAACTCGTTCCCGCCCACTTTCGGACAGGGCACCAAGCTCGAAATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
配列番号14(ヒトCEACAM1)(ホモサピエンス)
MGHLSAPLHRVRVPWQGLLLTASLLTFWNPPTTAQLTTESMPFNVAEGKEVLLLVHNLPQQLFGYSWYKGERVDGNRQIVGYAIGTQQATPGPANSGRETIYPNASLLIQNVTQNDTGFYTLQVIKSDLVNEEATGQFHVYPELPKPSISSNNSNPVEDKDAVAFTCEPETQDTTYLWWINNQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLLSVTRNDTGPYECEIQNPVSANRSDPVTLNVTYGPDTPTISPSDTYYRPGANLSLSCYAASNPPAQYSWLINGTFQQSTQELFIPNITVNNSGSYTCHANNSVTGCNRTTVKTIIVTELSPVVAKPQIKASKTTVTGDKDSVNLTCSTNDTGISIRWFFKNQSLPSSERMKLSQGNTTLSINPVKREDAGTYWCEVFNPISKNQSDPIMLNVNYNALPQENGLSPGAIAGIVIGVVALVALIAVALACFLHFGKTGRASDQRDLTEHKPSVSNHTQDHSNDPPNKMNEVTYSTLNFEAQQPTQPTSASPSLTATEIIYSEVKKQ
配列番号15(ヒトガレクチン9)(ホモサピエンス)
MAFSGSQAPYLSPAVPFSGTIQGGLQDGLQITVNGTVLSSSGTRFAVNFQTGFSGNDIAFHFNPRFEDGGYVVCNTRQNGSWGPEERKTHMPFQKGMPFDLCFLVQSSDFKVMVNGILFVQYFHRVPFHRVDTISVNGSVQLSYISFQPPGVWPANPAPITQTVIHTVQSAPGQMFSTPAIPPMMYPHPAYPMPFITTILGGLYPSKSILLSGTVLPSAQRFHINLCSGNHIAFHLNPRFDENAVVRNTQIDNSWGSEERSLPRKMPFVRGQSFSVWILCEAHCLKVAVDGQHLFEYYHRLRNLPTINRLEVGGDIQLTHVQT
配列番号16(ヒトPD−L1)(ホモサピエンス)
MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET
配列番号17(抗体BのHCDR1)(人工配列)
KASGGTFSSYAIS
配列番号18(抗体BのHCDR2)(人工配列)
GIIPIFGTANYAQKFQG
配列番号19(抗体BのHCDR3)(人工配列)
ARSPDYSPYYYYGMDV
配列番号20(抗体BのLCDR1)(人工配列)
SGSSSNIGSNTVN
配列番号21(抗体BのLCDR2)(人工配列)
YGNSNRPS
配列番号22(抗体BのLCDR3)(人工配列)
QSYDSSLSGSV
配列番号23(抗体BのHCVR)(人工配列)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSPDYSPYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
配列番号24(抗体BのLCVR)(人工配列)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCQSYDSSLSGSVFGGGIKLTVLG
配列番号25(抗体BのHC)(人工配列)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSPDYSPYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAEGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号26(抗体BのLC)(人工配列)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCQSYDSSLSGSVFGGGIKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPAECS
配列番号27(抗体BのHCのDNA)(人工配列)
CAGGTCCAGCTGGTCCAGTCAGGGGCCGAGGTCAAAAAGCCAGGGTCATCTGTCAAAGTGTCTTGTAAGGCATCCGGGGGCACATTTTCCAGCTACGCTATCTCCTGGGTGAGACAGGCACCAGGGCAGGGTCTGGAGTGGATGGGCGGAATCATTCCCATCTTCGGGACCGCCAACTACGCTCAGAAGTTTCAGGGAAGGGTCACTATTACCGCCGACAAAAGCACATCTACTGCTTATATGGAGCTGTCTAGTCTGAGGTCTGAAGATACCGCAGTGTACTATTGCGCCCGGAGTCCCGACTATAGCCCTTACTATTACTATGGCATGGATGTCTGGGGCCAGGGAACCACAGTGACAGTCTCATCCGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGAGGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAAGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCATCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAAGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATTCCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA
配列番号28(抗体BのLCのDNA)(人工配列)
CAGTCCGTCCTGACACAGCCACCCTCAGCCTCTGGCACCCCTGGGCAGCGAGTGACAATCTCTTGTTCTGGGAGTTCCTCAAATATTGGTAGTAACACCGTGAATTGGTACCAGCAGCTGCCCGGCACAGCACCTAAGCTGCTGATCTATGGAAACTCAAATAGGCCATCCGGAGTCCCCGACCGGTTCTCTGGTAGTAAATCAGGCACTTCCGCCAGCCTGGCTATTAGCGGGCTGCAGTCTGAGGACGAAGCCGATTACTATTGCCAGTCTTACGATTCCAGCCTGTCTGGAAGTGTGTTTGGCGGAGGGATCAAGCTGACCGTCCTGGGCCAGCCTAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTACCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTGCAGAATGCTCT
配列番号29(アテゾリズマブLC)(人工配列)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号30(アテゾリズマブHC)(人工配列)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号31(デュルバルマブLC)(人工配列)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号32(デュルバルマブHC)(人工配列)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
配列番号33(アベルマブLC)(人工配列)
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
配列番号34(アベルマブHC)(人工配列)
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
配列番号35(BMS−936559 LCVR)(人工配列)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPTFGQGTKVEIK
配列番号36(BMS−936559 HCVR)(人工配列)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKTSGDTFSTYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGKAHYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARKFHFVSGSPFGMDVWGQGTTVTVSS
Claims (33)
- 癌の治療を必要としている患者に、有効量の抗ヒトTim−3(配列番号1)抗体を、有効量の抗ヒトPD−L1(配列番号16)抗体と同時に、別々に、または逐次的に組み合わせて投与することを含む、癌の治療方法であって、前記抗ヒトTim−3抗体が、配列番号2のアミノ酸配列を有するHCDR1、配列番号3のアミノ酸配列を有するHCDR2、配列番号4のアミノ酸配列を有するHCDR3、配列番号5のアミノ酸配列を有するLCDR1、配列番号6のアミノ酸配列を有するLCDR2、および配列番号7のアミノ酸配列を有するLCDR3を含む、方法。
- 前記抗ヒトTim−3抗体が、配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号9のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記抗ヒトTim−3抗体が、配列番号10のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号11のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項2に記載の方法。
- 前記抗ヒトPD−L1抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、またはアベルマブである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗ヒトPD−L1抗体が、配列番号17のアミノ酸配列を有するHCDR1、配列番号18のアミノ酸配列を有するHCDR2、配列番号19のアミノ配列を有するHCDR3、配列番号20のアミノ酸配列を有するLCDR1、配列番号21のアミノ酸配列を有するLCDR2、および配列番号22のアミノ酸配列を有するLCDR3を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗ヒトPD−L1抗体が、配列番号23のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号24のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項5に記載の方法。
- 前記抗ヒトPD−L1抗体が、配列番号25のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号26のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項6に記載の方法。
- 前記癌が、メラノーマ、肺癌、頭頸部癌、大腸癌、膵臓癌、胃癌、腎臓癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、食道癌、軟部組織肉腫、または肝臓癌である、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記肺癌が非小細胞肺癌である、請求項8に記載の方法。
- 前記抗ヒトTim−3抗体および抗ヒトPD−L1抗体のうちの少なくとも1つを、電離放射線と同時に、別々に、または逐次的に組み合わせて投与する、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗ヒトTim−3抗体および前記抗ヒトPD−L1抗体のうちの少なくとも1つが、1つ以上の化学療法剤と同時に、別々に、または逐次的に組み合わせて投与される、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 癌の治療において、抗ヒトPD−L1(配列番号16)抗体と同時に、別々に、または逐次的に組み合わせて使用するための抗ヒトTim−3(配列番号1)抗体であって、前記抗ヒトTim−3抗体が、配列番号2のアミノ酸配列を有するHCDR1、配列番号3のアミノ酸配列を有するHCDR2、配列番号4のアミノ酸配列を有するHCDR3、配列番号5のアミノ酸を有するLCDR1、配列番号6のアミノ酸配列を有するLCDR2、および配列番号7のアミノ酸配列を有するLCDR3を含む、抗ヒトTim−3抗体。
- 前記抗ヒトTim−3抗体が、配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号9のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項12に記載の使用のための抗ヒトTim−3抗体。
- 前記抗ヒトTim−3抗体が、配列番号10のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号11のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項13に記載の使用のための抗ヒトTim−3抗体。
- 前記抗ヒトPD−L1抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、またはアベルマブである、請求項12〜14のいずれか一項に記載の使用のための抗ヒトTim−3抗体。
- 前記抗ヒトPD−L1抗体が、配列番号17のアミノ酸配列を有するHCDR1、配列番号18のアミノ酸配列を有するHCDR2、配列番号19のアミノ酸配列を有するHCDR3、配列番号20のアミノ酸配列を有するLCDR1、配列番号21のアミノ酸配列を有するLCDR2、および配列番号22のアミノ酸配列を有するLCDR3を含む、請求項12〜14のいずれか一項に記載の使用のための抗ヒトTim−3抗体。
- 前記抗ヒトPD−L1抗体が、配列番号23のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号24のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項16に記載の使用のための抗ヒトTim−3抗体。
- 前記抗ヒトPD−L1抗体が、配列番号25のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号26のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項17に記載の使用のための抗ヒトTim−3抗体。
- 前記癌が、メラノーマ、肺癌、頭頸部癌、大腸癌、膵臓癌、胃癌、腎臓癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、食道癌、軟部組織肉腫、または肝臓癌である、請求項12〜18のいずれか一項に記載の使用のための抗ヒトTim−3抗体。
- 前記肺癌が非小細胞肺癌である、請求項19に記載の使用のための抗ヒトTim−3抗体。
- 前記抗ヒトTim−3抗体および前記抗ヒトPD−L1抗体のうちの少なくとも1つが、電離放射線と同時に、別々に、または逐次的に組み合わせて投与される、請求項12〜20のいずれか一項に記載の使用のための抗ヒトTim−3抗体。
- 前記抗ヒトTim−3抗体および前記抗ヒトPD−L1抗体のうちの少なくとも1つが、1つ以上の化学療法剤と同時に、別々に、または逐次的に組み合わせて投与される、請求項12〜21のいずれか一項に記載の使用のための抗ヒトTim−3抗体。
- 癌の治療のための医薬の製造のための抗ヒトTim−3(配列番号1)抗体の使用であって、前記医薬が抗ヒトPD−L1(配列番号16)抗体と同時に、別々に、または逐次的に投与され、前記抗ヒトTim−3抗体が、配列番号2のアミノ酸配列を有するHCDR1、配列番号3のアミノ酸配列を有するHCDR2、配列番号4のアミノ酸配列を有するHCDR3、配列番号5のアミノ酸配列を有するLCDR1、配列番号6のアミノ酸配列を有するLCDR2、および配列番号7のアミノ酸配列を有するLCDR3を含む、使用。
- 前記抗ヒトTim−3抗体が、配列番号8のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号9のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項23に記載の使用。
- 前記抗ヒトTim−3抗体が、配列番号10のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号11のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項24に記載の使用。
- 抗ヒトPD−L1抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、またはアベルマブである、請求項23〜25のいずれか一項に記載の使用。
- 前記抗ヒトPD−L1抗体が、配列番号17のアミノ酸配列を有するHCDR1、配列番号18のアミノ酸配列を有するHCDR2、配列番号19のアミノ酸配列を有するHCDR3、配列番号20のアミノ酸配列を有するLCDR1、配列番号21のアミノ酸配列を有するLCDR2、および配列番号22のアミノ酸配列を有するLCDR3を含む、請求項23〜25のいずれか一項に記載の使用。
- 前記抗ヒトPD−L1抗体が、配列番号23のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および配列番号24のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、請求項27に記載の使用。
- 前記抗ヒトPD−L1抗体が、配列番号25のアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号26のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む、請求項28に記載の使用。
- 前記癌が、メラノーマ、肺癌、頭頸部癌、大腸癌、膵臓癌、胃癌、腎臓癌、膀胱癌、前立腺癌、乳癌、卵巣癌、食道癌、軟部組織肉腫、または肝臓癌である、請求項23〜29のいずれか一項に記載の使用。
- 前記肺癌が非小細胞肺癌である、請求項30に記載の使用。
- 前記抗ヒトTim−3抗体および前記抗ヒトPD−L1抗体のうちの少なくとも1つが、電離放射線と同時に、別々に、または逐次的に組み合わせて投与される、請求項23〜31のいずれか一項に記載の使用。
- 前記抗ヒトTim−3抗体および前記抗ヒトPD−L1抗体のうちの少なくとも1つが、1つ以上の化学療法剤と同時に、別々に、または逐次的に組み合わせて投与される、請求項23〜32のいずれか一項に記載の使用。
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