JP2023542297A - 異種プライムブーストワクチン - Google Patents

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Abstract

本発明は、第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）を含むワクチンの提供に関し、第一の成分（Ｋ）は、細胞透過性ペプチド、抗原ドメイン及びＴＬＲ作動薬が機能的に結合した複合体を含み、第二の成分（Ｖ）は、抗原ドメインを発現する腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスを含む。本発明は、さらに、がんの治療における本発明のワクチンの使用に関する。また、本発明は、抗原ドメインを発現する組換え水疱性口内炎ウイルス及びがんワクチンにおけるその使用を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、がんワクチンの分野、特に、第一の成分として細胞透過性ペプチド、抗原ドメイン及びＴＬＲ作動薬からなる複合体と、そのゲノム内に抗原ドメインをコードする組換えラブドウイルスを含む異種プライムブーストワクチンに関する。本発明は、さらに、がんの治療における異種プライムブーストワクチンの使用に関連し、異種プライムブーストワクチンで用いるための組換えラブドウイルスを提供する。
開発中のワクチン戦略のほとんどは、腫瘍抗原をコードするウイルスベクター等の同一薬剤による複数回の予防接種が必要である。最近では、異種プライムブースト免疫の概念を、ワクチン接種用にＳＶｍｎｅ ｇｐ１６０を発現し、ブーストとしてｇｐ１６０を発現する組換えワクチンウイルスを用いて、非ヒト霊長類モデルで試験する（非特許文献１）。この戦略として、同じ組換え抗原をコードする異なるワクチンプラットフォームの逐次投与があげられる。当初、異種プライムブーストの有効性は、マラリアやＨＩＶ－１等の感染症の動物実験で実証された。最近では、腫瘍患者に用いるためのプライムブースト技術が開発されている。例えば、バイシストロンメッセージとして切断型ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）と顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）を発現するプラスミドＤＮＡや、同じ修飾型ＨＥＲ２配列のみを含むアデノウイルスベクターが、ＨＥＲ２発現乳がん患者の治療に用いた（非特許文献２）。
異種プライムブースト技術の原理は、相同プライムブーストレジメンで用いられる場合、同じ抗原担体又は送達システムを連続的に投与した後、抗原担体又は送達システムに対する免疫反応を回避することによって、免疫システムに特定の組換え抗原への応答を強制することである。しかし、異種プライムブーストでは、組換え抗原に特異的な免疫原プライム細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を初回投与すると、抗原担体又は送達システムに対してもプライミングが発生する。例えば、「ブースト」期にウイルスベクター等の無関係の２番目の抗原担体又は送達システムを投与することによって、免疫システムは多数の新しい抗原に直面する。２番目の抗原担体又は送達システムは、既にプライミングされた細胞が存在する組換え抗原もコードするため、免疫システムによって強い記憶反応が惹起され、組換え抗原に特異的な以前にプライミングされたＣＴＬが拡大する。
異種プライムブーストワクチンの様々な形式が最近、腫瘍の治療と予防のために研究されており、前臨床試験と臨床試験で試験されている（例：非特許文献３を参照）。
腫瘍特異的免疫反応を誘導できる治療的がんワクチンは、腫瘍学における有望な治療アプローチになりつつある。しかし、腫瘍細胞を認識して殺傷しうる強固な長期細胞性免疫反応を誘導するために、自己耐性と腫瘍免疫回避を克服することは依然として困難である。現在、腫瘍免疫回避に対抗して、強固な細胞性免疫応答を誘導させうるために、複数の腫瘍特異的抗原を標的とする多数のがんワクチンが開発されている。
他の異種プライムブースト法では、腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）による治療の前に、アデノウイルスワクチンを用いた免疫化の併用を採用するが、当該ウイルスはいずれも同じ腫瘍関連抗原を発現する（非特許文献４）。しかし、この種の異種プライムブーストワクチン接種では、各腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を発現する２つの組換えウイルスを産生させる必要があり、技術的に困難である。さらに、アデノウイルス（Ａｄ）由来のベクターは、１回の注射（例：非特許文献５）後に、げっ歯類、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）及びヒトにおいて、強力な細胞性及び液性免疫応答を成功裏に誘導することが示されており、これにより、その後の適用時のベクターに対する強力な免疫応答により、同じアデノウイルスベクターを２回投与しなくてよい。さらに、アデノウイルスベクターに対する既存の免疫により、ｈＡｄ５等の特定のアデノウイルス血清型を臨床使用できない場合がある。他のアデノウイルスに基づく異種プライムブースト法は、アデノウイルス及びマラバＭＧ１ウイルス（非特許文献６）にクローン化された、ＨＰＶ１６及びＨＰＶ１８のＥ６タンパク質及びＥ７タンパク質に基づく四価変異導入遺伝子を利用する。しかし、本方法は、技術的に困難な２つのウイルスを生産する必要がある。
Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９２ Ｊａｎ ２４；２５５（５０４３）：４５６－９ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ－Ｍｅｔｈｏｄｓ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１５）２，１５０３１ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ２０１７，５，３ Ｂｒｉｄｌｅ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ １８．８（２０１０）：１４３０－１４３９ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｖｏｌ １０（４），Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００４， ｐａｇｅｓ ６１６－６２９ Ａｔｈｅｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ ２０１７ Ｏｃｔ；５（１０）：８４７－８５９
したがって、技術的に困難な２つのウイルスを組み込んだ異種プライムブーストワクチンの生産を回避すると同時に、抗ウイルスＣＤ８＋ＣＴＬの数を減らし、同時に抗腫瘍関連抗原ＣＤ８＋ＣＴＬの数と記憶免疫を増やすことにより、異種プライムブーストワクチンの抗腫瘍効果を向上させることによって、ＶＳＶ系異種プライムブーストワクチンの抗腫瘍効果を向上させる必要がある。
本発明は、２つの成分を含むワクチンを提供することにより、上記課題を解決するためのであり、第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）を含むワクチンであって、前記第一の成分（Ｋ）は複合体を含み、前記複合体は、以下の：（ｉ）細胞透過性ペプチド；（ｉｉ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメイン；及び（ｉｉｉ）少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬、からなるか、又は含み、ここで、前記ｉ）～ｉｉｉ）は共有結合しており、かつ、前記第二の成分（Ｖ）は腫瘍溶解性ラブドウイルスを含む。
特定の側面に関連するいかなる実施形態は、その特定の側面に対する複数の実施形態を構成する複数の層及び組み合わせにおいても、その特定の側面にも関連する他の実施形態と組み合わせることができることを理解すべきである。
第一の実施形態では、本発明は、２つの成分を含むワクチンを提供することにより、上記課題を解決するためのであり、第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）を含むワクチンであって、前記第一の成分（Ｋ）は複合体を含み、前記複合体は、以下の：（ｉ）細胞透過性ペプチド；（ｉｉ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメイン；及び（ｉｉｉ）少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬、からなるか、又は含み、ここで、前記ｉ）～ｉｉｉ）は共有結合しており、かつ、前記第二の成分（Ｖ）は腫瘍溶解性ラブドウイルスを含む。
一実施形態では、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の細胞透過性ペプチドは、配列番号２（Ｚ１３）、配列番号３（Ｚ１４）、配列番号４（Ｚ１５）、又は配列番号５（Ｚ１８）のいずれか１つに記載されたアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の複合体は、複数のＴＬＲペプチド作動薬、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上のＴＬＲペプチド作動薬を含み、これにより、本発明のワクチンの少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬は、好ましくは、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４及び／又はＴＬＲ５ペプチド作動薬である。
一実施形態では、本発明のワクチンのＴＬＲペプチド作動薬は、配列番号６及び／又は７で表されるアミノ酸配列、ＴＬＲ４作動薬は、配列番号８（ＴＬＲ４ペプチド作動薬ＥＤＡ）に記載されたアミノ酸配列及び／又は配列番号６又は７及び／又は配列番号８の機能的配列変異体を含む。
一実施形態では、本発明のワクチンのＴＬＲ２ペプチド作動薬は、アネキシンＩＩ又はその免疫調節断片である。
一実施形態では、本発明のワクチンのＴＬＲ２作動薬は、アネキシンＩＩをコードする配列番号６又は配列番号７で表されるアミノ酸配列、又はその断片又はその変異体を含む、又はからなるか、又は配列番号９（Ｈｉｇｈ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐ ｂｏｘ １ ｐｒｏｔｅｉｎ）で表されるアミノ酸配列、又はその少なくとも１つの免疫調節断片を含む、又はからなる。
ある実施形態では、ＴＬＲ２ペプチド作動薬は、配列番号９（Ｈｉｇｈ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐ ｂｏｘ １ ｐｒｏｔｅｉｎ）で表されるアミノ酸配列、又はその少なくとも１つの免疫調節断片を含む、又はからなる。
一実施形態では、本発明のＴＬＲ４作動薬は、配列番号８（ＥＤＡ）に記載されたアミノ酸配列を含む、又はからなる。
一つの実施形態では、本発明の前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質からなる群から選択され、ここで、前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、複数の抗原又は抗原エピトープ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の抗原又は抗原エピトープを含む。
ある実施形態では、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープを含むか、又はそれらからなる。
一実施形態では、本発明の少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープを含む、又はからなり、好ましくは、腫瘍関連抗原、腫瘍特異的抗原、又は腫瘍新抗原から選択される。
一実施形態では、前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、内分泌腫瘍、消化管腫瘍、泌尿生殖器及び婦人科腫瘍、乳がん、頭頸部腫瘍、造血器腫瘍、皮膚腫瘍、胸部及び呼吸器腫瘍を含む腫瘍の群から選択される。より具体的には、前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープは、肛門がん、虫垂がん、胆管がん、カルチノイド腫瘍、消化管結腸がん、肝外胆管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、肝細胞がん、膵がん、直腸がん、結腸直腸がん、又は転移性結腸直腸がんを含む消化管腫瘍又はがんの群から選択されてよい。好ましくは、前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープは、結腸直腸がん又は転移性結腸直腸がんの腫瘍関連抗原、腫瘍特異的抗原、又は腫瘍新抗原の群から選択される。
一実施形態では、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープは、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、ＩＬ１３Ｒアルファ２、ＡＳＣＬ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＰＲＡＭＥ、ＷＴ１からなる群から選択される抗原のエピトープである。
好ましい実施形態では、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ、ＭＡＧＥ－Ａ３及びＩＬ１３Ｒアルファ２からなる群から選択される抗原のエピトープであるか、好ましくは、少なくとも一つの腫瘍エピトープは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ及びＭＡＧＥ－Ａ３からなる群から選択される抗原のエピトープであるか、さらに好ましくは、少なくとも一つの腫瘍エピトープは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン及びＣＥＡからなる群から選択される抗原のエピトープであるか、よりさらに好ましくは、少なくとも一つの腫瘍エピトープは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン及びＣＥＡからなる群から選択される抗原のエピトープである。
一実施形態では、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、サバイビンの少なくとも１つのエピトープを含み、そのエピトープは、好ましくは、配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、少なくとも１０アミノ酸長のその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む。より好ましくは、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号２２で表されるアミノ酸配列からなるペプチドを含む。さらにより好ましくは、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号２３で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む。
一実施形態では、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、ＣＥＡの少なくとも１つのエピトープを含み、そのエピトープは、好ましくは、前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド、少なくとも１０アミノ酸長のその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体、より好ましくは、配列番号２６及び又は配列番号２７で表されるアミノ酸配列、より好ましくは、配列番号２５で表されるアミノ酸配列、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む。
一実施形態では、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインは、好ましくは、配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む、より好ましくは、配列番号１６及び配列番号１７で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む、ＡＳＣＬ２のエピトープを含む。
好ましい実施形態では、本発明のワクチンの抗原ドメインは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、以下の：ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及びＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；を含む。
好ましい一実施形態では、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインは、Ｎ末端からＣ末端方向に、配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド、少なくとも１０アミノ酸長のその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；配列番号１２で表されるアミノ酸配列であるペプチド、少なくとも１０アミノ酸長のその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、少なくとも１０アミノ酸長のその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；を含む。
好ましい一実施形態では、配列番号２４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドは、配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるペプチドのＮ末端に直接結合する。
好ましい一実施形態では、前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号２５で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；配列番号１８で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；を含む。
より好ましい一実施形態では、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号４５で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む。
本発明の好ましい一実施形態では、第一の成分（Ｋ）の複合体は、Ｎ末端からＣ末端方向に、細胞透過性ペプチド、抗原ドメイン及びＴＬＲ作動薬を含み、複合体は、配列番号６０で表されるアミノ酸配列又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む。
一実施形態では、本発明のワクチンの第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性ラブドウイルスが組換えラブドウイルス、好ましくは、ベシキュロウイルス属から選択される組換え腫瘍溶解性ラブドウイルス、好ましくは、ベシキュロウイルス、より好ましくは、水疱性口内炎ウイルスを含む。
一実施形態では、本明細書に記載される本発明の組換えベシキュロウイルス、特に腫瘍溶解性組換えベシキュロウイルスは、以下の：水疱性口内炎アラゴアウイルス（ＶＳＡＶ）、カラジャースウイルス（ＣＪＳＶ）、チャンディプラウイルス（ＣＨＰＶ）、コカルウイルス（ＣＯＣＶ）、水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）、イスファハンウイルス（ＩＳＦＶ）、マラバウイルス（ＭＡＲＡＶ）、水疱性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）、又はピリーウイルス（ＰＩＲＹＶ）からなる群から選択され、好ましくは、組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス、例えば、水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）又は水疱性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）のいずれかである。
一実施形態では、本発明の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス、例えば、水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）又は水疱性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）は、糖タンパク質Ｇをコードする機能的な遺伝子が欠損しており、及び／又は機能的な糖タンパク質Ｇが欠損しており、それは、糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が他のウイルスの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換されており、及び／又は、及び／又は糖タンパク質Ｇが他のウイルスの糖タンパク質ＧＰによって置換される。ある実施形態では、糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、アレナウイルスの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換されており、及び／又は糖タンパク質Ｇが、アレナウイルスの糖タンパク質ＧＰに置換されている。他の実施形態では、糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、ダンデノングウイルス又はモペイアウイルスの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換されており、及び／又は糖タンパク質Ｇがダンデノングウイルス又はモペイアウイルスの糖タンパク質ＧＰに置換されている。好ましくは、糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換されており、及び／又は 糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換されている。
好ましい実施形態では、上記の本発明の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス、例えば、水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）又は水疱性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）は、ＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰ及び／又はＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子を含み、ここで、ＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰが、配列番号４６で表されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％同一であるその機能的配列変異体を含む。
さらに、第二の成分（Ｖ）の本発明の組換え水疱性口内炎ウイルスは、好ましくは、そのゲノム中に、水疱性口内炎ウイルスの核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、リンタンパク質（Ｐ）、マトリクスタンパク質（Ｍ）、糖タンパク質（Ｇ）、及び本明細書に記載される第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインの少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープをコードする。ある実施形態では、第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスは、少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープをゲノム内にコードし、ここで、水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換され、及び／又は水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換されている。ある実施形態では、前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスが、水疱性口内炎ウイルス核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、リンタンパク質（Ｐ）、マトリクスタンパク質（Ｍ）及び上記第一構成要素（Ｋ）の複合体の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープをゲノム内にコードしており、水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換され、及び／又は糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換されている。ある実施形態では、第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスは、特に本明細書に記載されているように、第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインのアミノ酸配列からなる第二の抗原ドメインをゲノムにコードする。
一実施形態では、本発明のワクチンの第二の成分（Ｖ）の本発明の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスは、以下の：ＣＥＡ（配列番号２４）サバイビン（配列番号１２）ＡＳＣＬ２（配列番号１５）ＭＵＣ－１（配列番号１９）ＥｐＣＡＭ（配列番号４０）ＫＲａｓ（配列番号３０）ＭＡＧＥ－Ａ３（配列番号１０）を含む群から選択される少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープを含む第二の抗原ドメインをゲノムにコードする。本明細書に記載される本発明の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスの（第二）抗原ドメインは、好ましくは、ＣＥＡ（配列番号２４）の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープを含む。本明細書に記載される本発明の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスの（第二）抗原ドメインは、好ましくは、サバイビン（配列番号１２）の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープを含む。本明細書に記載される本発明の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスの（第二）抗原ドメインは、好ましくは、ＡＳＣＬ２（配列番号１５）の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープを含む。
好ましい実施形態では、本発明の前記第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスは、そのゲノム中に、Ｎ末端からＣ末端方向に、ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、及びＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体を含む抗原ドメインをコードする。本発明の前記第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスのゲノムにコードされる抗原ドメインは、配列番号４５からなるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、本発明に記載された本発明のワクチンは、それが必要な患者の腫瘍又はがんの治療及び／又は予防（又は予防）に用いるためのものである。したがって、本明細書に記載される本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）は、好ましくは、少なくとも１回、好ましくは、（Ｋ）－（Ｖ）の順序で、より好ましくは、Ｋ－Ｖ－Ｋの順序で投与される。本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）は、好ましくは、互いに１４日～約３０日の間に順次投与される。本明細書で開示されているように、抗原ドメインの抗原に対するＴ細胞の長期記憶を達成するために、本発明の前記第一の成分（Ｋ）は、例えば、本明細書で開示されているように、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の最後の投与から１４日、２１日、６０日、１８０日後に、例えば、Ｋ－Ｖ－Ｋ－Ｋの順序で、繰り返し投与されてよい。
本発明のワクチンは、化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター、免疫療法剤、又は標的薬と併用（治療において）されてよい。
一実施形態では、本明細書に記載される本発明のワクチンは、化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター、免疫療法剤、又は標的薬等の治療活性剤と併用投与される。本発明のワクチンと併用するための（治療における）免疫チェックポイントインヒビターは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のインヒビターであることが好ましく、これにより、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路インヒビターは、例えば、ワクチンの第一の成分（Ｋ）及び／又は第二の成分（Ｖ）と、同時、順次、又は交互に投与されうる。
一実施形態では、本発明は、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞による腫瘍浸潤を高める方法を提供し、それにより、本方法は、本明細書に記載される本発明によるワクチンを哺乳類、好ましくは、ヒトに投与することを含む。特に、本発明は、患者において腫瘍抗原特異的Ｔ細胞による腫瘍浸潤を高める方法を提供し、本方法は、本発明によるワクチンを患者（腫瘍又はがんに罹患する）に投与することを含む。
一実施形態では、本発明はさらに、組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスを提供し、これは、本明細書で定義される前記第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインの少なくとも１つ、２つ、３つ、又は好ましくは、すべての抗原又は抗原エピトープを含む第二の抗原ドメインをそのゲノム中にコードする。
本発明は、さらに、哺乳類における腫瘍に対する細胞毒性免疫応答を調節する際に、本発明のワクチンにおいて用いるのと同様に、本明細書で定義される組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスの使用に関する。
一実施形態では、本発明は、腫瘍に罹患した患者を治療する方法を提供し、当該方法は、本明細書に記載される本発明のワクチンを当該患者に投与することを含む。本明細書に記載されるように、治療方法は、例えば、本発明のワクチンと、例えば、免疫チェックポイントインヒビター及び／又は化学療法等の、少なくとも１つのさらなる医薬活性剤を投与することも含む。
一実施形態では、本発明は、結腸直腸がんの治療、予防及び／又は安定化のためのワクチン接種に用いるためのキットを提供し、これは、本明細書に記載されるワクチンと、結腸直腸がんの予防及び／又は治療に用いるための、本明細書に記載されるさらなる医薬活性剤とを含む。
さらなる実施形態では、本発明は、水疱性口内炎ウイルスを提供し、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる。すなわち、本発明のワクチンの前記第二の成分（Ｖ）のラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスが水疱性口内炎ウイルスであり、かつ、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる。好ましい実施形態では、本発明は、水疱性口内炎ウイルスを提供し、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムは配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなり、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする。すなわち、本発明のワクチンの前記第二の成分（Ｖ）のラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスは、水疱性口内炎ウイルスであってよく、かつ、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする。
さらに好ましい実施形態では、本発明は、２つの成分を含むワクチンを提供し、第一の成分（Ｋ）は複合体を含み、前記複合体は、以下の：（ｉ）細胞透過性ペプチド；（ｉｉ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメイン；及び（ｉｉｉ）少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬、からなるか、又は含み、ここで、前記ｉ）～ｉｉｉ）は共有結合しており、かつ、第二の成分（Ｖ）はラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスを含み、前記第二の成分（Ｖ）のラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスが水疱性口内炎ウイルスであり、かつ、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる。より好ましい実施形態では、本発明は、第一の成分（Ｋ）が複合体を含む二成分からなるワクチンを提供し、前記複合体は、以下の：（ｉ）細胞透過性ペプチド；（ｉｉ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメイン；及び（ｉｉｉ）少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬、からなるか、又は含み、かつ、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする。
さらなる側面では、本発明は、水疱性口内炎ウイルスと併用して治療、特に予防接種レジメンで用いるための配列番号６０のアミノ酸配列を含むか又は含むポリペプチドであって、ここで、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、ポリペプチドを提供する。好ましい実施形態では、本発明は、水疱性口内炎ウイルスと併用して治療、特に予防接種レジメンで用いるための配列番号６０のアミノ酸配列を含むか又は含むポリペプチドであって、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする、ポリペプチドを提供する。
もう一つの関連する側面では、本発明は、水疱性口内炎ウイルスに関し、ここで、水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムは、治療用、特に予防接種レジメンで用いるために、配列番号６０のアミノ酸配列を含むか又は構成するポリペプチドと併用し、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる。好ましい実施形態では、本発明は、本発明は、水疱性口内炎ウイルスに関し、ここで、水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムは、治療用、特に予防接種レジメンで用いるために、配列番号６０のアミノ酸配列を含むか又は構成するポリペプチドと併用し、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする。
さらに他の関連する側面では、本発明は、ポリペプチドと水疱性口内炎ウイルスとを含む部品キットを提供し、ここで、前記ポリペプチド配列番号６０で表されるアミノ酸配列を含むか、又はからなり、かつ、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなり、好ましくは、さらに、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の免疫チェックポイントインヒビター、又は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択される、免疫チェックポイントインヒビター、を含む。
好ましい実施形態では、本発明は、本発明は、ポリペプチドと水疱性口内炎ウイルスとを含む部品キットを提供し、ここで、前記ポリペプチド配列番号６０で表されるアミノ酸配列を含むか、又はからなり、かつ、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなり、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする。
（Ａ）さらなる導入遺伝子として１つ以上の腫瘍抗原を発現するＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに糖タンパク質Ｇを置換した本発明のワクチンの水疱性口内炎ウイルスのゲノム構成を示す図である。（Ｂ）細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）、マルチ抗原ドメイン（Ｍａｄ）及びＴＬＲ作動薬（ＴＬＲａｇ）を含むワクチンの第一の成分（Ｋ）を示す図である。 本発明の第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ「ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ」）を用いる異種プライムブーストワクチン接種は、いずれかのワクチンプラットフォームによる同種ワクチン接種よりも優れている。（Ａ－Ｃ）非腫瘍担がんＣ５７ＢＬ／６マウスを、に対して免疫した：すなわち、（Ａ）オボアルブミン（ＯＶＡ、モデル抗原）、（Ｂ）Ａｄｐｇｋ及びＲｅｐｓ１（ネオ抗原、Ｍ３８腫瘍モデル、Ｍａｄ２４；Ｍａｄ２４は２つのクラスＩネオエピトープ、すなわちａｄｐｇｋ及びｒｅｐｓ１（Ｙａｄａｖ ｅｔ ａｌ．，２０１４に記載されている））又は（Ｃ）Ｅ７（ウイルス抗原、Ｔｃ１腫瘍モデル）を、２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）を皮下投与するか、又は１０７ＴＣＩＤ５０のＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ（第二の成分（Ｖ））を矢印で示した日に（Ａ）ｉ．ｍ、（Ｂ、Ｃ）ｉ．ｖ投与して、各々腫瘍抗原を標的とした。免疫マウスの末梢血中の（Ａ）Ｏｖａ，（Ｂ）Ａｄｐｐｇｋ，（Ｃ）Ｅ７に特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞の比率を、ＭＨＣマルチマーを用いて各ワクチン接種７日後に測定した。 本発明の第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ「ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ」）を用いる異種プライムブーストワクチン接種は、いずれかのワクチンプラットフォームによる同種ワクチン接種よりも優れている。マウスを抗原ドメインの抗原としてＯＶＡをコードする２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）、すなわち本発明のワクチンのＭａｄ５（配列番号７４）で０及び１４日目に免疫し、１×１０７ ＴＣＩＤ５０ＶＳＶ－ＧＰ－Ｏｖａを第二の成分（Ｖ）としてｉ．ｍ．又は矢印で示すように７日目にｉ．ｖのいずれかで投与した。（Ａ）循環中のＣＤ８＋Ｔ細胞間のＯｖａ反応性ＣＴＬの頻度を、プライム後４、１４、２１、４４、７２、９８、１３４日目に評価した。免疫マウスの（Ｂ）脾臓と（Ｃ）骨髄におけるＯｖａ反応性ＣＴＬの数を、プライム後１９週目に測定した。表現型がエフェクター（ＫＬＲＧ１＋）とメモリー前駆体（ＣＤ１２７＋）であるＯｖａ特異的細胞傷害性Ｔ細胞の数を、最初のワクチン接種から１３４日後に、（Ｄ）末梢血、（Ｅ）脾臓、（Ｆ）骨髄で推定した。Ｍａｄ５マルチ抗原コンストラクトは、卵白アルブミンに由来するクラスＩとクラスＩＩエピトープ（各々、ＯＶＡ２５７－２６４及びＯＶＡ３２３－３３９）、自己抗原糖タンパク質１００に由来するクラスＩエピトープ（ｇｐ１００２５－３３）、Ｉ－ＥクラスＩＩ分子のα鎖に由来するクラスＩＩエピトープ（Ｅα５２－６８）の４つのマウス特異的抗原エピトープを含む。 第一の成分（Ｋ）によるプライミングは末梢抗原特異的ＣＴＬの機能性を改善する。（Ａ）実験計画の概略図である。触知可能なＴＣ－１腫瘍があるマウスに、ＴＣ－１腫瘍移植後第７日目に２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）（Ｍａｄ２５を含む抗原ドメインを皮下投与したもの）、第１４日目に１×１０７ ＴＣＩＤ５０ＶＳＶの第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＨＰＶを静脈内投与。）を接種するか、第７日目と１４日目に２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）を２回接種するか、第７日目と１４日目に第二の成分（Ｖ）を２回接種した。ＣＤ８リンパ球の分析のために、ＴＣ－１腫瘍の移植後２１日目に脾臓を採取した。ＶＳＶ－ＨＰＶは、ＨＰＶ１６に由来する３つの異なる抗原Ｅ２、Ｅ６＊及びＥ７＊（Ｍａｄ２５の同じ抗原ドメインを含む）をコードする全長遺伝子を含む。元のＥ６及びＥ７配列は、がん原性を消失させるように点突然変異するように変異させた。（Ｂ）ｅｘ ｖｉｖｏでのサイトカイン産生は、細胞内フローサイトメトリー染色で測定したＨＰＶ特異的ＣＤ８Ｔ細胞を再刺激した。（Ｃ）脾臓ＣＤ８Ｔ細胞によるグランザイムＢ発現は、フローサイトメトリーで測定した。グランザイムＢは脱顆粒マーカーである。 ワクチンの第一の成分（Ｋ）によるプライミングは、腫瘍内抗原特異的ＣＴＬの機能性を改善する。（Ａ）実験計画の概略図である。触知可能なＴＣ－１腫瘍があるマウスに、ＴＣ－１腫瘍移植後７日目にワクチンの２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）（抗原ドメイン：Ｍａｄ２５，ｓ．ｃ）、１４日目に１×１０７ ＴＣＩＤ５０ＶＳＶの第二の成分（Ｖ）（同一の抗原ドメインＭａｄ２５を含むＶＳＶ－ＨＰＶを静脈内投与したもの）を接種するか、又はＴＣ－１腫瘍移植後７日目と１４日目に第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＨＰＶ、静脈内投与）を２回接種した。腫瘍は移植後２１日目に採取し、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を分析した。ＶＳＶ－ＨＰＶは、３つの異なる抗原Ｅ２、Ｅ６＊及びＥ７＊（Ｍａｄ２５の同じ抗原ドメインを含む）をコードする全長遺伝子を含み、これらはＨＰＶ１６に由来する。元のＥ６及びＥ７配列は、がん原性を消失させるように点突然変異するように変異させた。（Ｂ）ＨＰＶ特異的ＣＤ８Ｔ細胞による活性化及び消耗マーカー発現（ＰＤ１、Ｔｉｍ３、ＫＬＲＧ１の場合）の頻度は、フローサイトメトリーによって測定された。（Ｃ）ｅｘ ｖｉｖｏで再刺激されたＨＰＶ特異的ＣＤ８Ｔ細胞によるサイトカイン産生は、細胞内フローサイトメトリー染色によって測定された。 異種ワクチン接種後の免疫抑制性腫瘍微小環境（ＴＭＥ）のリモデリング。触知可能なＴＣ－１腫瘍があるマウスに、各々７日目と１４日目に２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）（抗原ドメイン：配列番号７５で表されるアミノ酸配列を含むＭａｄ２５を皮下投与）と第二の成分（Ｖ）（抗原ドメインＭａｄ２５（配列番号７５）を含むＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶを静脈内投与した。）で免疫した。腫瘍は２１日目に採取し、腫瘍浸潤免疫細胞はフローサイトメトリーによって特徴付けられた。（Ａ）全ての白血球の中の様々な免疫細胞サブセットの比率と（Ｂ）全てのＤＣ内の異なる樹状細胞（ＤＣ）サブセットの比率を示す。 卵白アルブミンを発現する同系腫瘍モデルにおけるＫＶＫＫワクチンの治療効果：Ｃ５７ＢＬ／６マウスに３×１０５ ＥＧ．７細胞を注射した。マウスに、配列番号７７（与えられたｓ．ｃ．点線）で表されるアミノ酸配列を含む抗原ドメインＭａｄ３９を含む２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）、１×１０７ ＴＣＩＤ５０ＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡ（抗原ドメインＭａｄ３９とゲノム中のオボアルブミンをコードする完全長遺伝子を含む）を静脈内投与するか、２００μｇのαＰＤ－１抗体を静脈内投与し、四量体分析のためにワクチン接種７日後に採血した。第一の成分（Ｋ）又は第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡ）のいずれかの投与を、腫瘍移植後５、１２、１９、２６日目に実施した。αＰＤ－１抗体の投与は、腫瘍移植後７、１１、１５、１９、２３、２７日目に実施した。対照は模擬治療とαＰＤ－１抗体のみで実施した。ＶＶＶ、ＫＫＫＫ、ＫＶＫＫ、ＫＶＫＫ＋αＰＤ－１の４つの異なる治療レジメンを試験した。（Ａ）治療後の腫瘍増殖と（Ｂ）生存率を示す。各投与群の腫瘍増殖曲線横の括弧内に、全マウス（黒）中の完全奏効（灰色）、すなわち腫瘍フリーマウスの数を示す。（Ｃ）末梢血中のＯｖａ特異的ＣＴＬの頻度とＯｖａ四量体陽性細胞中のＰＤ－１陽性の比率（Ｄ）を示す。（Ｅ）３つの異なる治療群について、Ｏｖａ反応の大きさ（ｄａｙ２６）と腫瘍サイズ（ｄａｙ２５）の相関を示す。 ネオエピトープを標的とする同系腫瘍モデルにおける、ワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）を用いる治療用がんワクチン接種（ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ）の効能：Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右脇腹に２×１０５ ＭＣ－３８細胞を皮下注射した。マウスにＭａｄ２４を含む２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）又は１×１０７ ＴＣＩＤ５０の第二の成分（Ｖ）（Ｍａｄ２４からなるＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡを静脈内投与した。）を皮下投与してＡｄｐｇｋとＲｅｐｓ１（ＭＣ－３８ネオエピトープ、抗原ドメインＭａｄ２４、配列番号７６）のワクチンを指定の日に接種した（点線）。さらに、マウスに２００μｇのａＰＤ－Ｌ１抗体を指定の日に腹腔内投与した（点線）。ＭＣ－３８細胞注入後３、１０、１７、２４日目に第一の成分（Ｋ）又は第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ）を投与した。ＭＣ－３８細胞注入後６， １０、１３、１７、２０、２４、２７日目にαＰＤ－１抗体を投与した。対照は疑似処理とαＰＤ－１抗体のみで行った。ＶＶＶ、ＫＫＫＫ、ＫＶＫＫ、ＫＶＫＫ＋αＰＤ－１の４つの異なる治療レジメンを試験した。（Ａ）動物の腫瘍成長曲線と（Ｂ）生存率を示す。各投与群の腫瘍成長曲線の横の括弧内に全マウス（黒）中の完全反応者（灰色）、すなわち腫瘍フリーマウスの数を示した。（Ｃ）循環Ａｄｐｇｋ特異的ＣＤ８Ｔ細胞の頻度は、各ワクチン接種の７日後にフローサイトメトリーで評価した。 腫瘍ウイルス抗原を標的とする同系腫瘍モデルにおける第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡを用いた治療的がんワクチン接種の効能：概念実証として、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１．５×１０５ Ｔｃ－１細胞を右脇腹の皮下に注射した。抗原ドメインＭａｄ２５（配列番号７５）を含む２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）を用いて、マウスにＥ７（ＴＣ－１細胞に発現するＨＰＶ由来の腫瘍タンパク質）を皮下接種した。そして、指定の日に１×１０７ ＴＣＩＤ５０ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡを静脈内投与した。さらに、マウスには指定の日に２００μｇのαＰＤ－１抗体を静脈内投与した（黒い点線）。第一の成分（Ｋ）又は第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ）のいずれかの投与をＴＣ－１細胞注入後７、１４、２８、４９日目に行った。αＰＤ－１抗体の投与はＴＣ－１細胞注入後７、１４、２８日目に行った。対照は疑似処理とαＰＤ－１抗体のみで行った。ＶＶＶ、ＫＫＫＫ、ＫＶＫＫ、ＫＶＫＫ＋αＰＤ－１の４つの異なる治療レジメンを試験した。（Ａ）腫瘍成長曲線と（Ｂ）動物の生存率を示す。（Ｃ）各ワクチン接種の７日後に、血中のＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞の頻度をフローサイトメトリーで評価した。（Ｄ）抗原特異的ＣＴＬの比率と腫瘍サイズとの相関を示した。各投与群の腫瘍増殖曲線の横の括弧内に、全マウス（黒）中の完全反応者数（灰色）を示す。 ワクチンを接種したマウスにおける長期間持続する免疫記憶の生成：治療的ワクチン接種後に皮下腫瘍を拒絶した長期生存マウスにおいて、ワクチンを接種した抗原に対する循環腫瘍特異的ＣＴＬの存在を評価した。（Ａ）ＥＧ．７、（Ｂ）ＭＣ３８、（Ｃ）Ｔｃ１腫瘍を拒絶したマウスの末梢血中の（Ａ）Ｏｖａ特異的、（Ｂ）Ａｄｐｇｋ特異的、（Ｃ）Ｅ７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示した。 ワクチンを接種したマウスにおける腫瘍再チャレンジ保護：異なる治療群のマウスの生存したマウスを対側側面に（Ａ）ＥＧ．７又は（Ｂ）Ｔｃ１細胞で再チャレンジし、腫瘍の増殖を示した。パネルＢは３つの独立した実験から組み合わせたデータを示す。年齢を一致させた同腹子（対照）を含めた。各腫瘍増殖曲線の腫瘍増殖曲線の横の括弧内に、全マウス（黒）中の腫瘍フリーマウス（灰色）の数を示す。 成分Ｋは、ワクチン接種マウスにおける記憶Ｔ細胞の形成を促進する。（Ａ－Ｃ）非腫瘍担がんマウスを抗原ドメインＭａｄ５（配列番号７４）を含む２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）又は１×１０７ ＴＣＩＤ５０ＶＳＶ－ＧＰ－Ｏｖａ（抗原ドメインＭａｄ５と卵白アルブミンをコードする完全長遺伝子を構成）で皮下免疫した。０、１４、２８日目（矢印で示す）。ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のうち、ＣＤ１２７－ＫＬＲＧ－１－早期エフェクター細胞（ＥＥＣ）、ＫＬＲＧ－１＋短寿命エフェクター細胞（ＳＬＥＣｓ）、ＣＤ１２７＋記憶前駆エフェクター細胞（ＭＰＥＣｓ）の比率を、各免疫後７日目に末梢血で測定し、（Ａ）相同ワクチン接種（ＫＫＫ）、（Ｂ）相同ＶＳＶ－ＧＰ－Ｏｖａワクチン接種（ＶＶＶ）、（Ｃ）相同プライムブーストワクチン接種（ＫＶＫ）について図示した。 異種プライムブーストにおける第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）の免疫原性：（Ａ）第一の成分（Ｋ）（配列番号６０、「ＡＴＰ１２８」、ＶＳＶ－ＧＰ－空ウイルス（（ＶＳＶΦ）、配列番号４５で表される抗原ドメインをコードするＶＳＶ－ＧＰであるＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ１２８（配列番号８０）、配列番号４５で表される抗原ドメインとアネキシンＩＩ（配列番号７）の免疫調節断片を含む配列番号７１で表されるアミノ酸配列をコードするＶＳＶ－ＧＰであるＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ１２８ Ａｎａｘａ、又は腫瘍フリーマウスの血液細胞（３～５匹／群）に対するデキストラマー染色によって評価された、配列番号６０で表されるアミノ酸配列を含む複合体をゲノムにコードするＶＳＶ－ＧＰであるＶＳＶ－ＧＰ－ＡＴＰ１２８のいずれかを用いた３回のワクチン接種後のＣＥＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞の循環頻度を示す。（Ｂ）ＣＥＡ特異的循環ＣＤ８Ｔ細胞中のＫＬＲＧ １＋ＰＤ－１＋活性化細胞の量を定量した。＊、ｐ＜０．０５であった。＊＊、ｐ＜０．０１であった。 末梢におけるＣＥＡ特異的免疫反応：３回目に接種してから１週間後の脾臓において、ＩＦＮγ産生ＣＥＡ特異的Ｔ細胞をエリスポットアッセイ（Ａ）、サイトカイン産生ＣＤ８Ｔ細胞の細胞内染色（Ｂ）により定量した。ＫはＡＴＰ１２８（配列番号６０）である。ＶＳＶ－ＧＰ－空ウイルス（（ＶＳＶΦ）、ＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ１２８（配列番号８０）、ＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ１２８ Ａｎａｘａ、及びＶＳＶ－ＧＰ－ＡＴＰ１２８は、図１３に示した構成要素と同一である。＊，ｐ＜０．０５；＊＊，ｐ＜０．０１；＊＊＊，ｐ＜０．００１．。 グランザイムＢ陽性循環ＣＥＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞の頻度：未腫瘍マウスに、第一の成分Ｋ（「ＡＴＰ１２８（配列番号６０））、ＶＳＶ－ＧＰ－空ウイルス、ＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ１２８（Ｍａｄ１２８は、配列番号４５によるアミノ酸を含む抗原性カーゴを含む）、ＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ１２８ Ａｎａｘａ（配列番号７１で表されるアミノ酸配列を含む抗原ドメイン）又はＶＳＶ－ＧＰ－ＡＴＰ１２８（ＶＳＶ－ＧＰは、配列番号６０で表されるアミノ酸配列からなる第一の成分Ｋをゲノムにコードする）のいずれかのワクチンを３回接種した。血液細胞のデキストラマー染色により、グランザイムＢ（ＧｚＢ）陽性循環ＣＥＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞の頻度を評価した（１群５匹のマウスで試験した）。＊、ｐ＜０．０５、＊＊、ｐ＜０．０１であった。 第一の成分（Ｋ）によるプライミングは、末梢のＨＰＶ特異的Ｔ細胞の機能を改善する：Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに皮下注射した。０日目にＴＣ－１細胞と共に接種し、７日目と１４日目に第一の成分（Ｋ）（Ｍａｄ２５を含む抗原ドメインを皮下投与したもの）又は第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＨＰＶ、静脈内投与）のワクチンを接種した。血液、脾臓及び腫瘍を２１日目に採取し、フローサイトメトリー分析を行った。各群につき４～５匹のマウスを分析した。（Ａ）血液中のＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度と（Ｂ）数をフローサイトメトリーで測定した。マン・ホイットニー検定（＊、ｐ＜０．０５）。（Ｃ）活性化マーカーと消耗マーカーを発現する末梢のＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の比率を示す。Ｓｉｄａｋの多重比較による２－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ（＊＊＊、ｐ＜０．００１であった；＊＊＊＊、ｐ＜０．０００１）。 第一の成分（Ｋ）によるプライミングは、腫瘍内のＨＰＶ特異的Ｔ細胞の機能性を改善する：（Ａ－Ｊ）Ｃ５７ＢＬ／マウスに皮下注射した。を０日目にＴＣ－１細胞と共に接種し、７日目と１４日目に第一の成分Ｋ－（Ｍａｄ２５を含む抗原ドメインを皮下投与した）又は第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＨＰＶ、静脈内投与。）のワクチンを接種した。血液、脾臓及び腫瘍を２１日目に採取し、フローサイトメトリー分析を行った。各群につき４～５匹のマウスを分析した。（Ａ）腫瘍におけるＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度と（Ｂ）数をフローサイトメトリーで測定した。マン・ホイットニー検定（＊、ｐ＜０．０５）。 異種ワクチン接種後の遺伝子シグネチャーは、治療された腫瘍で強い免疫活性化を示す：ＴＣ－１腫瘍がある（Ａ－Ｉ）Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、実施例７及び８のように免疫するか、未処理にした（疑義）。腫瘍は、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ（登録商標）テクノロジーを用いてトランスクリプトーム分析のために、腫瘍移植後２３日目に採取した。（Ａ、Ｂ）各ワクチン接種群のＴＣ－１腫瘍における遺伝子発現は、模擬腫瘍に対して正規化し、（Ａ）有意に上方制御された（ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ［ＦＣ］＞２及びｐ＜０．０５）及び（Ｂ）有意に下方制御された（ＦＣ＜－２及びｐ値＜０．０５の負の逆数）遺伝子の比率が表示された。（Ｃ，Ｄ）ベン図は、異なるワクチンレジメン後の有意に（Ｃ）上方制御された遺伝子と（Ｄ）下方制御された遺伝子の総数、及び各遺伝子セット間の重複を示す。（Ｅ－Ｉ）ヒートマップは、相対的な遺伝子発現をｚスコアとして表示し、階層的クラスタリング（ユークリッド距離、平均リンケージ）を各列が１つの個他の腫瘍を表す試料データに適用した。（Ｅ）細胞傷害性Ｔ細胞、（Ｆ）サイトカイン、（Ｇ）樹状細胞、（Ｈ）ケモカイン、（Ｉ）抗原提示に関連する通常の遺伝子の発現を示した。各治療群について７～１０匹のマウスを解析し、両側ｔ検定を用いてｐ値を算出し、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｙｅｋｕｔｉｅｌｉ法を用いて算出した偽発見率（ＦＤＲ）調整ｐ値を報告した。 ＫＶワクチン接種後に特異的に上方制御された遺伝子：異種ＫＶワクチン接種後にＴＣ－１腫瘍で特異的に上方制御された遺伝子のリスト。ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ＞２．０（模擬治療腫瘍に正規化）及びＦＤＲ調整ｐ値＜０．０５の遺伝子を図１８Ｃに示す。 異種プライムブーストワクチン接種後の免疫抑制性腫瘍微小環境（ＴＭＥ）のリモデリング：触知可能なＴＣ－１腫瘍があるマウスを実施例７及び８のように免疫した。（Ａ）血漿中のサイトカイン及びケモカインレベルを１５日目に定量し、平均±ＳＥＭとして示した。Ｔｕｋｅｙの多重比較による一方向分散分析（＊ｐ＜０．０５，＊＊ｐ＜０．０１，；＊＊＊ ｐ＜０．００１，＊＊＊＊ｐ＜０．０００１，）。点線は定量化の限界を示す。（Ｂ－Ｃ）２１日目に腫瘍を採取し、腫瘍浸潤白血球をフローサイトメトリーで特性化した（各群につきマウスを２～３匹分析）。（Ｂ）全白血球中の各種免疫細胞サブセットの総ＣＤ４５＋白血球数（平均）と（Ｃ）の相対比率を示す。（Ｄ）代表的な免疫組織化学画像は、異なるワクチン接種後の腫瘍移植後２３日目のＴＣ－１腫瘍におけるＴ細胞浸潤（ＣＤ８）を示す。下のパネルは、上のパネルからボックス化された領域のより高い拡大図を示す。スケールバー：上段５００μｍ、下段５０μｍ。 第一の成分（Ｋ）がある素数の機能：マウスに１×１０５ ＴＣ－１細胞を皮下注射した。そして、２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）（Ｍａｄ２５を含む抗原ドメイン）でｓ．ｃ．で免疫した。７日後又は１×１０７ ＴＣＩＤ５０ＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶ ｉ．ｖ．で、基本的にＴＣ－１モデルについて上記のように腫瘍移植後１４日目に免疫した。点線で示すようにＫとＶのさらなる用量を投与し、腫瘍の増殖を監視した（ｎ＝７）。（Ａ）腫瘍の成長（平均±ＳＥＭ）、（Ｂ）生存、（Ｃ）個々の腫瘍の成長を示す。ログランク検定を行った（＊＊＊ｐ＜０．００１）。
以下に本発明を詳細に説明するが、本発明は、本明細書に記載される特定の方法論、プロトコル及び試薬に限定されないことを理解すべきである。また、ここで用いられている用語は、添付の請求項によってのみ限定される本発明の範囲を限定することは意図しないことを理解すべきである。特に定義しない限り、ここで用いられているすべての技術用語及び科学用語は、当業者が一般的に理解するのと同じ意味である。
以下、本発明の要素について説明する。当該要素は、特定の実施形態と共に列挙されるが、これらは、さらなる実施形態を創出すべく、いかなる方法で、いかなる数で組み合わせることができることを理解すべきである。様々に記載された実施例及び好ましい実施形態は、本発明を明示的に記載された実施形態のみに限定するように解釈すべきではない。当該記載は、明示的に記載された実施形態といかなる数の開示された及び／又は好ましい要素を組み合わせた実施形態を支持し、包含するように理解すべきである。さらに、本出願に記載されるすべての要素の順列及び組み合わせは、文脈では別段の指示がない限り、本出願の説明によって開示されたものとみなすべきである。
本明細書及び特許請求の範囲を通じて、文脈では別段の指示がない限り、用語「含む」及びその変形は、指定されたメンバー、整数又は工程を含むことを意味するが、他の非特定の部材、整数又は工程を除外することを意味しないと理解される。用語「からなる」は、用語「含む」の特定の実施形態であり、他の非特定の部材、整数又は工程は除外される。本発明の文脈では、用語「含む」は、用語「からなる」を含む。したがって、用語「含む」は、「からなる」をふくみ、例えば、用語「Ｘを含む」は、Ｘのみで構成される場合もあれば、Ｘ＋Ｙのようにさらなるものを含む場合もある。
用語「ａ（原文）」と「ａｎ（原文）」及び「ｔｈｅ（原文）」及び発明を記述する文脈（特にクレームの文脈）で用いられる類似の言及は、ここに別段の指示がない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、単数形と複数形の両方を含むと解釈される。ここでの値の範囲の引用は、範囲内にある個々の値を個別に参照するための簡略化された方法として機能することを単に意図する。ここで特に示されていない限り、個々の値は、ここで個別に引用さるように組み込まれている。明細書のいかなる文言も、発明の実施に不可欠なクレームされていない要素を示すものと解釈されてはならない。「実質的に」という語は、「完全に」を除外しない。例えば、Ｙから「実質的に自由である」組成物は、Ｙから完全に自由であってよい。必要に応じて、「実質的に」という語を発明の定義から省略してよい。
本明細書の数値ｘに用いる「約」とは、ｘ±１０％をいう。
特に定義されない限り、本明細書で用いられるすべての技術的及び科学的用語は、本発明が属する当業者が一般的に理解するのと同じ意味である。本明細書に記載されるものと同様又は同等の方法及び材料を本発明の実施又は試験に用いることができるが、適当な方法及び材料を以下に記載する。本明細書に記載されているすべての出版物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。競合する場合は、定義を含む現在の明細書が他の定義に優先する。さらに、材料、方法、及び実施例は例示のみであり、制限することを意図しない。
第一の側面では、本発明は、第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）を含むワクチンを提供し、前記第一の成分（Ｋ）は複合体を含み、前記複合体は、以下の：
（ｉ）細胞透過性ペプチド；
（ｉｉ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメイン；及び
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬、
からなるか、又は含み、
ここで、前記ｉ）～ｉｉｉ）は共有結合しており、かつ、
前記第二の成分（Ｖ）は腫瘍溶解性ラブドウイルスを含む。
特に、第二の成分（Ｖ）の、ラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスは、第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメイン、又は少なくとも１つの抗原（断片）又はその抗原エピトープをコードされてよい。つまり、少なくとも１つの対応する抗原（断片）又はエピトープは、（１）第一の成分（Ｋ）の複合体に含まれ、かつ、（２）第二の成分（Ｖ）のラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルス（例えば、のゲノムにおいて）によりコードされてよい。第一の成分及び第二の成分の対応する抗原に関する詳細は、以下で説明する。
意外にも、本発明のワクチンは、（ｉ）抗原ドメインのエピトープに対する多エピトープ細胞傷害性Ｔ細胞媒介免疫の刺激、（ｉｉ）Ｔｈ細胞の誘導、（ｉｉｉ）免疫記憶の促進、（ｉｖ）抗ベクター対抗標的Ｔ細胞応答の比率のシフトをもたらし、同時に複数のウイルスの産生に関連する技術的課題を克服することが示された。
好ましくは、本発明のワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の複合体は、ペプチド、ポリペプチド、特に、組換えペプチド、組換えポリペプチド、又は組換えタンパク質である。本明細書で用いられる用語「組換え」とは、当該ポリペプチド又は当該タンパク質が天然に存在しないことを意味する。したがって、本発明の第一の成分（Ｋ）（の使用）の複合体は、組換えポリペプチド又は組換えタンパク質であり、通常、成分（ｉ）から（ｉｉｉ）を含み、成分（ｉ）から（ｉｉｉ）は異なる起源であり、すなわち、当該組み合わせは天然には存在しない。
本明細書で用いられる用語「ワクチン」は、宿主において免疫応答を誘導／誘発することができ、感染及び／又は疾患を治療及び／又は予防することを可能にする、いかなる化合物／剤又はそれらの組み合わせをいう。本発明のワクチンは、適応免疫応答の細胞、すなわちＢ細胞及び／又はＴ細胞に影響を及ぼすことによって、疾患の経過に影響を及ぼす。ワクチンの効果としては、例えば、細胞性免疫の誘導や、その抗原に対するＴ細胞の応答の変化があげられる。本発明のワクチンは、例えば、治療的投与又は予防的投与用に用いることができる。
本明細書で用いられる用語「異種プライムブースト」は、各々が免疫応答を高めることが望まれる少なくとも１つの共通抗原又は抗原エピトープを含む２つの異なる（「異種」）ベクター又は送達システムの投与をいう。特に、異なる（「異種」）ベクター又は送達システムの一方は最初に投与され（免疫応答を「プライミング」するため）、他方は後で投与される（「ブースト」）、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０日又はそれ以上の日数又は週後に投与される。例えば、第一の成分（Ｋ）は、本明細書で定義される少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ（抗原ドメイン）を含む複合体を含み、第二の成分（Ｖ）の組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルスは、第一の成分（Ｋ）の複合体中の対応する抗原又は抗原エピトープと配列が同一である少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープをコード／発現する。したがって、本発明の組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルスのゲノム中にコードされる抗原ドメインに含まれる少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、第一の成分（Ｋ）の複合体中に含まれる対応する抗原ドメインと同一の配列を含むことができ、例えば、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメイン中に含まれる少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープと同一の配列を含んでよい。本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインと、本発明に開示された組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルスによってゲノム中にコードされる抗原ドメインは、例えば、重複してよい。本明細書で用いられる用語「重複する」は、例えば、各々の配列には他の各配列と同一の連続した配列要素があり、当該重複する配列は、本明細書にて定義されるように、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む２つのアミノ酸配列をいう。例えば、第一の成分（Ｋ）と、組換えラブドウイルスのゲノムにコードされている抗原ドメインの複合体、又は本発明で開示される腫瘍溶解性組換えラブドウイルスのアミノ酸配列は、約１０、１５、２０、２５～約３０、３５、４０、４５、５０まで、又は約１０アミノ酸から約１５、２０、２５アミノ酸までの長さの連続した配列要素において同一であってよく、これにより、同一の配列要素は、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む。本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインのアミノ酸配列と、第二の成分（Ｖ）のゲノムにコードされている抗原ドメインのアミノ酸配列は、同一の配列とはＮ末端及び／又はＣ末端が異なってよく、例えば、異なる抗原又は抗原エピトープを含んでよいことを理解すべきである。
本明細書で用いられる用語「ワクチン」は、本明細書に記載される本発明のワクチンが、特に医学的使用、特に疾患の治療のための使用、例えば、がん、腫瘍性疾患、又は腫瘍及び／又はがんの治療又は予防のための使用を意味する。例えば、本発明の第一の成分（Ｋ）及び／又は第二の成分（Ｖ）を含むワクチンは、医学的使用、特にがん、腫瘍性疾患、又は腫瘍の治療又は予防のための使用を意味する。
本発明のワクチンは、単一の組成に限定されず、少なくとも２つの異なる成分を含み、例えば、別々の包装単位で提供されてよいことを理解すべきである。すなわち、本発明のワクチンは、２つの異なる成分、本明細書で定義される第一の成分Ｋと本明細書で定義される第二の成分（Ｖ）を含む組み合わせである。特に、異種プライムブーストワクチン接種計画における異なる投与時点で、好ましくは、第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）は、異なる組成及び／又は別々の包装単位で構成される。したがって、本明細書に記載されているワクチンは、例えば本明細書に記載されているキットとして提供されてよい。
本発明の文脈では、すなわち本出願全体を通して用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」及びこれらの用語の変形は、各々、通常のペプチド結合によって、あるいは、例えばイソステリックペプチドの場合のように、修飾されたペプチド結合によって互いに結合された少なくとも２つのアミノ酸を含む、ペプチド、オリゴペプチド、オリゴマー又は融合タンパク質を含むタンパク質をいう。ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質は、Ｌ－アミノ酸及び／又はＤ－アミノ酸から構成されてよい。好ましくは、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質は、Ｌ－アミノ酸から（完全に）構成されるか、又はＤ－アミノ酸から（完全に）構成されることにより、「逆相ペプチド配列」を形成する。本明細書で用いられる用語レトロインバーソ（ペプチド）配列は、配列の方向が逆になり、各アミノ酸残基のキラリティーが反転した（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８，７４４－７４６（１９９４）を参照。Ｂｒａｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３６８，６９２－６９３（１９９４））線形ペプチド配列の異性体をいう。特に、本明細書で用いられる用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、又は「タンパク質」には、ペプチドが天然の親ペプチドの生物学的作用を模倣又は拮抗してよい非ペプチド構造要素を含むペプチドアナログとして定義される「ペプチドミメティクス」も含まれる。ペプチドミメティクスには、酵素的に切断可能なペプチド結合等の古典的なペプチド特性がない。例えば、本発明のワクチンが、抗原ドメインが、免疫原性のためにペプチド上の特定の形状又は二次構造を必要とするエピトープを含む場合、又は抗原ドメインの急速な酵素分解に対する安定性を提供する場合に、第一の成分の複合体におけるペプチドミメティクスを用いることは、特に有用又は好ましい。
例えば、一実施形態では、本発明の第一の成分（Ｋ）は、これらのアミノ酸に加えて遺伝暗号によって定義される２０アミノ酸以外のアミノ酸を含むペプチド、ポリペプチド又はタンパク質から構成されてよく、又は遺伝暗号によって定義される２０アミノ酸以外のアミノ酸から構成されてよい。特に、本発明の文脈におけるペプチド、ポリペプチド又はタンパク質は、翻訳後の成熟過程又は当業者には公知の化学的過程等の天然の過程によって修飾されたアミノ酸から等しく構成されてよい。当該修飾については文献に詳しく記載されている。当該修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸鎖、さらにはカルボキシ末端又はアミノ末端のどこでも生じる。特に、ペプチド又はポリペプチドは、ユビキチン化に続いて分岐したり、分岐の有無にかかわらず環状になったりしてよい。この種の修飾は、当業者に公知の天然又は合成の翻訳後プロセスの結果であってよい。
特に、本発明の文脈では、本明細書で用いられる用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」には、修飾ペプチド、ポリペプチド及びタンパク質も含まれる。例えば、ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質の修飾としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有結合固定、脂質又は脂質誘導体の共有結合固定、ホスファチジルイノシトールの共有結合固定、共有又は非共有の架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、ペグ化を含むグリコシル化、ヒドロキシル化、ヨウ化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセス、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セネロイル化、硫酸化、アルギニル化又はユビキチン化等のアミノ酸付加があげられる。当該修飾については、文献（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（１９９３）２ｎｄ Ｅｄ．，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８３）Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｓｅｉｆｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｆａｃｔｏｒｓ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６－６４６ ａｎｄ Ｒａｔｔａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ａｇｉｎｇ，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ，６６３：４８－６２）に完全に詳述されている。したがって、本明細書で用いられる用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」は、例えば、リポペプチド、リポタンパク質、グリコペプチド、糖タンパク質等も含んでよい。
ある実施形態では、第一の成分（Ｋ）の複合体はペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である。特に好ましい実施形態では、本発明のワクチンの複合体（Ｋ）は、「古典的な」ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質であり、「古典的な」ペプチド、ポリペプチド又はタンパク質とは、通常、遺伝暗号によって定義される２０個のアミノ酸から選択されたアミノ酸から構成され、ペプチド結合によって互いに連結されている。
一実施形態では、本発明のワクチンの複合体（Ｋ）は、少なくとも２０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、好ましくは、少なくとも８０、少なくとも９０、より好ましくは、少なくとも１００、少なくとも１１０、さらに好ましくは、少なくとも１２０、少なくとも１３０、特に好ましくは、少なくとも１４０、最も好ましくは、少なくとも１５０アミノ酸残基を含むポリペプチド又はタンパク質である。
好ましい実施形態では、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体は、組換えペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である、以下の：１）組換えＤＮＡ技術を用いて結合された異なる起源のＤＮＡ分子の組み合わせの発現から生じる半合成又は合成起源のポリペプチド；（２）半合成又は合成起源のポリペプチドで、その起源又は操作により、自然界でそれが結合するタンパク質の全部又は部分と結合していないもの；（３）半合成又は合成起源のポリペプチドで、自然界でそれが結合するポリペプチド以外のポリペプチドと結合するもの；又は（４）半合成又は合成起源のポリペプチドで、自然界には存在しないもの；である。本発明の例えば複合体（Ｋ）等の組換えポリペプチドは、例えば十分に確立されたプロトコルを用いた原核生物及び真核生物の発現系（例えばＬａＶａｌｌｉｅ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９５）５．１．１－５．１．８；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９８）５．１０．１－５．１０．４１）、又は例えば固相合成（Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ．２００７；２（１２）：３２４７－５６等を参照。）等、当業界で公知であるいかなる方法で製造されてよい。
一実施形態では、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体は、細胞透過性ペプチド（「ＣＰＰ」）を含む。本明細書で用いられる用語「細胞浸透性ペプチド」（「ＣＰＰ」）は、一般的に、異なる種類のカーゴ分子を、細胞膜を介して輸送することができ、したがって、様々な分子カーゴ（ナノサイズの粒子から化学的小分子及び大きなＤＮＡ断片まで）の細胞内取り込みを促進する短ペプチドを示すために用いられる。細胞浸透性ペプチドに結合したカーゴ分子の「細胞内移行」は、一般的に、カーゴ分子の細胞膜を介した輸送、ひいてはカーゴ分子の細胞内への侵入を意味する。特定の場合では、カーゴ分子はその後、細胞質内で放出されたり、細胞内小器官に指向さられたり、さらに細胞表面に提示されたりする。本発明の、当該細胞透過性ペプチドを含む細胞透過性ペプチド又は複合体の細胞透過性、又は内在化は、生細胞及び固定細胞のフローサイトメトリー又は蛍光顕微鏡観察、当該ペプチド又は複合体を形質導入した細胞の免疫細胞化学、及びウェスタンブロットを含む、当業者に公知である標準的な方法によって確認されてよい。
細胞透過性ペプチドには、通常、リジン又はアルギニン等の正電荷を帯びたアミノ酸を相対的に多く含むアミノ酸組成、又は極性／電荷を帯びたアミノ酸と非極性の疎水性アミノ酸の交互パターンを含む配列がある。これら２種類の構造は、各々ポリカチオン又は両親媒性という。細胞透過性ペプチドは、サイズ、アミノ酸配列、及び電荷が異なるが、すべてのＣＰＰには、細胞膜を移行し、細胞質又は細胞のオルガネラへの様々な分子カーゴの送達を促進するという共通の機能の特徴がある。現在、ＣＰＰの移行の理論は、３つの主要な侵入メカニズム：膜への直接浸透、エンドサイトーシスを介した侵入、及び移行構造の形成を介した移行を区別する。ＣＰＰの導入は現在進行中の研究分野である。細胞透過性ペプチドは、がんやウイルスインヒビターを含む様々な疾患の治療における薬物送達剤として、また細胞の標識化や画像化のための造影剤として、医学分野において多くの応用が見出されている。
通常、細胞浸透性ペプチド（ＣＰＰ）は、細胞膜を通過してほとんどの細胞型に浸透する機能がある８～５０残基のペプチドである。あるいは、天然のタンパク質に存在するという起源を反映して、タンパク質伝達ドメイン（ＰＴＤ）ともいう。ＦｒａｎｋｅｌとＰａｂｏは同時にＧｒｅｅｎとＬｏｗｅｎｓｔｅｉｎに、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ－ＴＡＴ）由来のトランス活性化転写活性化因子が細胞に浸透する機能について報告した（Ｆｒａｎｋｅｌ，Ａ．Ｄ．ａｎｄ Ｃ．Ｏ．Ｐａｂｏ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ．Ｃｅｌｌ，１９８８．５５（６）：ｐ．１１８９－９３）。１９９１年、キイロショウジョウバエのＡｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオドメイン（ＤＮＡ結合ドメイン）の神経細胞への形質導入が報告された（Ｊｏｌｉｏｔ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｎｅｕｒａｌ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１９９１．８８（５）：ｐ．１８６４－８）。１９９４年、そのアミノ酸配列を備えるペネトラチンという最初の１６量体ペプチドＣＰＰがＡｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａのホメオドメインの３番目のヘリックスから特性化され（Ｄｅｒｏｓｓｉ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ ｈｅｌｉｘ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ ｈｏｍｅｏｄｏｍａｉｎ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９９４．２６９（１４）：ｐ．１０４４４－５０）、１９９８年にはタンパク質の形質導入に必要なアミノ酸配列があるＴＡＴの最小ドメインが同定された（Ｖｉｖｅｓ，Ｅ．，Ｐ．Ｂｒｏｄｉｎ，ａｎｄ Ｂ．Ｌｅｂｌｅｕ，Ａ ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ＨＩＶ－１ Ｔａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂａｓｉｃ ｄｏｍａｉｎ ｒａｐｉｄｌｙ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅｕｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９９７．２７２（２５）：ｐ．１６０１０－７）。過去２０年にわたり、多数のペプチドがウイルスタンパク質、例えばＶＰ２２（Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｇ．ａｎｄ Ｐ．Ｏ’Ｈａｒｅ，Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｂｙ ａ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｃｅｌｌ，１９９７．８８（２）：ｐ．２２３－３３）やＺＥＢＲＡ（Ｒｏｔｈｅ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ＺＥＢＲＡ ｔｒａｎｓ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０１０．２８５（２６）：ｐ．２０２２４－３３）、あるいは毒、例えばメリチン（Ｄｅｍｐｓｅｙ，Ｃ．Ｅ．，Ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｍｅｌｉｔｔｉｎ ｏｎ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，１９９０．１０３１（２）：ｐ．１４３－６１）、マストポラン（Ｋｏｎｎｏ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｅｕｍｅｎｉｎｅ ｍａｓｔｏｐａｒａｎ－ＡＦ（ＥＭＰ－ＡＦ），ａ ｎｅｗ ｍａｓｔ ｃｅｌｌ ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ ｔｈｅ ｖｅｎｏｍ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｌｉｔａｒｙ ｗａｓｐ（Ａｎｔｅｒｈｙｎｃｈｉｕｍ ｆｌａｖｏｍａｒｇｉｎａｔｕｍ ｍｉｃａｄｏ）．Ｔｏｘｉｃｏｎ，２０００．３８（１１）：ｐ．１５０５－１５）、マウロカルシン（Ｅｓｔｅｖｅ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｃｏｒｐｉｏｎ ｔｏｘｉｎ ｍａｕｒｏｃａｌｃｉｎｅ ｉｎｔｏ ｃｅｌｌｓ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｏｘｉｎ ｃｒｏｓｓｅｓ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００５．２８０（１３）：ｐ．１２８３３－９）、クロタミン（Ｎａｓｃｉｍｅｎｔｏ，Ｆ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｏｔａｍｉｎｅ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎｔｏ ｃｅｌｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｈｅｐａｒａｎ ｓｕｌｆａｔｅ ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００７．２８２（２９）：ｐ．２１３４９－６０）又はブフォリン（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｂｕｆｏｒｉｎ ２．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４．４３（４９）：ｐ．１５６１０－６）を含む様々な起源から報告がある。ポリアルギニン（Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１２）（Ｆｕｔａｋｉ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｒｇｉｎｉｎｅ－ｒｉｃｈ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ａｎ ａｂｕｎｄａｎｔ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｐｅｒｍｅａｂｌｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｈａｖｉｎｇ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｓ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｆｏｒ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００１．２７６（８）：ｐ．５８３６－４０）又はトランスポーター（Ｐｏｏｇａ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎ．ＦＡＳＥＢ Ｊ，１９９８．１２（１）：ｐ．６７－７７）を含む合成ＣＰＰも設計された。開示されたＣＰＰのいずれも、例えば、本発明の複合体における細胞浸透性ペプチドとして用いることができる。
本発明のＣＰＰを用いると、効率的な送達、すなわち、抗原提示細胞（ＡＰＣ）へ、特に樹状細胞（ＤＣ）へ、したがって樹状細胞の抗原処理機構へ、特に少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを輸送及び負荷することができる。
好ましくは、本発明で用いるためのＣＰＰは、エプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）の「ＺＥＢＲＡ」タンパク質に由来する。「ＺＥＢＲＡ」（Ｚｔａ、Ｚ、ＥＢ１、ＢＺＬＦ１ともいう）とは、一般に、エプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）の塩基性ロイシンジッパー（ｂＺＩＰ）転写活性化因子をいう。細胞透過性を示すＺＥＢＲＡの最小ドメインは、ＺＥＢＲＡの１７０残基～２２０残基に及ぶことが確認されている。ＺＥＢＲＡのアミノ酸配列はＮＣＢＩの受託番号ＹＰ＿４０１６７３で開示されており、配列番号１で表される２４５アミノ酸を含む。
配列番号１
ウイルスタンパク質ＺＥＢＲＡに由来するＣＰＰは、（ｉ）直接転座と（ｉｉ）脂質ラフト媒介エンドサイトーシス（Ｒｏｔｈｅ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ ＺＥＢＲＡ ｔｒａｎｓ－ａｃｔｉｖａｔｏｒ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０１０．２８５（２６）：ｐ．２０２２４－３３）の両方によって、生体膜を介してタンパク質カーゴを伝達することが報告されている。
これらの２つの侵入メカニズムは、ＭＨＣクラスＩとＭＨＣクラスＩＩの両方のカーゴ抗原のＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞への提示を各々促進すると考えられている。したがって、ＺＥＢＲＡ由来ＣＰＰは、抗原ドメイン（ＭＡＤ）を含む本発明の複合体（Ｋ）等のマルチエピトープペプチドを樹状細胞（ＤＣ）に送達し、その後、ＣＴＬ及びＴｈ細胞の活性化及び抗腫瘍機能を促進しうる。したがって、ＣＰＰは、本発明で用いるための複合体を抗原提示細胞（ＡＰＣ）に効率的に送達し、マルチエピトープＭＨＣクラスＩ及びＩＩ制限提示に導くことができる。例えば、米国特許出願第２０１８／０１３３３２７号に開示されたＺＥＢＲＡ由来ＣＰＰは、好ましくは、本発明の複合体（Ｋ）のために用いるが、より好ましくは、本発明の第一の複合体（Ｋ）のＣＰＰは、米国特許出願第２０１８／０１３３３２７号に開示されたＺ１３、Ｚ１４、Ｚ１５又はＺ１８を選択し、それにより、ＣＰＰ Ｚ１３、Ｚ１４、Ｚ１５、Ｚ１８は、配列番号２（ＫＲＹＫＮＲＶＡＳＲＫＳＲＡＫＦＫＱＬＬＱＨＹＲＥＶＡＡＡＫＳＳＥＮＤＲＬＲＬＬＬＫ、Ｚ１３）、配列番号３（ＫＲＹＫＮＲＶＡＳＲＫＳＲＡＫＦＫＱＬＬＱＨＹＲＥＶＡＡＡＫ、Ｚ１４）、配列番号４（ＫＲＹＫＮＲＶＡＳＲＫＳＲＡＫＦＫ、Ｚ１５）、又は配列番号５（ＲＥＶＡＡＡＫＳＳ ＥＮＤ ＲＬＲＬＬＬＫ、Ｚ１８）で表されるアミノ酸を含むか又はからなる。
例えば、本発明の複合体（Ｋ）と併用できるＣＰＰは、各々の配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の配列同一性を共有する、本明細書に記載される配列のいずれかの配列変異体を含んでよい。配列変異体は、例えば、本明細書に記載される配列のいずれかの断片を含んでよく、それによって、用語「断片」は、本明細書に記載される配列の切断、すなわち、本明細書に記載されるネイティブ配列のアミノ酸配列と比較してＮ末端、Ｃ末端及び／又は配列内で切断されたアミノ酸配列をいう。
本発明の文脈では用いられる用語「配列変異体」は、対応する参照配列と比較して、各配列にあらゆる変更がある。本明細書で用いられる用語「配列変異体」としては、ヌクレオチド配列変異体及びアミノ酸配列変異体、好ましくは、アミノ酸変異体があげられる。好ましくは、参照配列は、本明細書に記載されるＣＰＰ配列、又は「配列及び配列番号の表」及び配列表に各々記載されている配列、すなわち配列番号１～配列番号８０等の、本明細書に記載される配列のいずれかである。好ましくは、配列変異体は、配列の全長にわたって、参照配列と特に、少なくとも７０％、少なくとも７５％、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも８５％、さらに好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を共有し、これにより、配列同一性は以下に記載するように計算される。一般に、本明細書に記載されるすべての変異体配列について、各々の参照配列に対する％－同一性が高いほど、配列変異体はより好ましい。特に、配列変異体は参照配列の特定の機能を保持する。
本発明の配列同一性は、例えば、同一又は類似の長さの配列に特に適する、各々の参照配列と比較される各配列の全長にわたって決定される（いわゆる「グローバルアラインメント」）こともあれば、不等長の配列により適した、定義される長さがより短い配列にわたり決定される（いわゆる「ローカルアラインメント」）場合もある。上記の文脈では、例えば、クエリアミノ酸配列に対する「配列同一性」が少なくとも９５％であるアミノ酸配列は、対象アミノ酸配列が、クエリアミノ酸配列の各１００アミノ酸につき最大５つのアミノ酸変化を含んでよいことを除き、対象アミノ酸配列の配列がクエリ配列と同一であることを意味することを意図する。換言すれば、クエリアミノ酸配列との同一性少なくとも９５％であるアミノ酸配列を得るために、対象配列のアミノ酸残基の最大５％（１００のうちの５）が、他のアミノ酸で挿入又は置換されるか、又は削除されてよい。２つ以上の配列の同一性とホモロジーを比較する方法は、当業界では公知である。２つの配列が同一である比率は、例えば数学的アルゴリズムを用いて決定されてよい。用いられる数学的アルゴリズムの好ましいが限定ではない例は、Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａ／．（１９９３），ＰＮＡＳ ＵＳＡ，９０：５８７３－５８７７のアルゴリズムである。当該アルゴリズムは、ＢＬＡＳＴプログラムファミリー（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０又はＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，２５：３３８９－３４０２）に統合されており、ワールドワイドウェブサイトｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖにあるＮＣＢＩのホームページからアクセスできる）とＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９０），Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．８３，６３－９８；Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ ８５，２４４４－２４４８．）で利用できる。当該プログラムによって、他の配列とある程度同一である配列が識別されうる。さらに、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ，１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８７－３９５；Ｗｏｍｂｌｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ． ２０００；１３２：３－２２）で利用可能なプログラム、例えばプログラムＢＥＳＴＦＩＴとＧＡＰは、アルゴリズムを用いて、２つの配列間の類似性の最も優れた単一の領域を見つける（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７，１９５－１９７．）。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２に記載されているように、「ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ」を利用してよい。あるいは、ＰＳＩ－Ｂｌａｓｔを用いて、分子間の遠い関係を検出する反復検索を実行することもできる。上記のＢＬＡＳＴ、ギャップ付きＢＬＡＳＴプログラムのいずれかを用いる場合、各々のプログラムのデフォルトパラメータ（例：ＸＢＬＡＳＴとＮＢＬＡＳＴ）を用いることができる。本明細書で開示されているように、配列の比較に用いられる数学的アルゴリズムの他の好ましい非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ， ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズムである。当該アルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの部分であるＡＬＩＧＮプログラム（第２．０版）に組み込まれる。ＡＬＩＧＮプログラムは、例えば、ＰＡＭ １２０質量残基テーブル、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを用いてアミノ酸配列を比較するために用いてよい。配列分析のためのさらなるアルゴリズムは当業界で公知であり、Ｔｏｒｅｌｌｉｓ ａｎｄ Ｒｏｂｏｔｔｉ，１９９４，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：３－５に記載されているＡＤＶＡＮＣＥ及びＡＤＡＭを含む。あるいは、Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：３８３－４０２に記載されているように、ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗアルゴリズムを用いてタンパク質配列アラインメントを実行してもよい。
本発明で開示されているアミノ酸配列のアミノ酸置換は、「保存的」又は「非保存的」なアミノ酸置換であってよい。本発明における（Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ）とは、例えば、塩基性アミノ酸残基（Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ）を他の塩基性アミノ酸残基（Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，ｌｉｅ）に置換すること、脂肪族アミノ酸残基を他の脂肪族アミノ酸残基に置換すること、芳香族アミノ酸残基（Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｔｒｐ）を他の芳香族アミノ酸残基に置換すること、トレオニンをセリンに、ロイシンをイソロイシンに置換すること等である。
１つ以上のＬ－アミノ酸を１つ以上のＤ－アミノ酸で置換することは、本発明の文脈では、保存的置換とみなされる。アミノ酸置換の例を以下の表１に示す：
表１
本発明における「非保存的置換」とは、ポリペプチド中のアミノ酸を、側鎖の性質が著しく異なるアミノ酸で置換することをいう。非保存的置換は、定義された群内ではなく群間でアミノ酸を用いてよく、（ａ）置換領域のペプチド骨格の構造（例えば、グリシンのプロリン）、（ｂ）電荷又は疎水性、又は（ｃ）側鎖の大部分に影響を与える。限定ではない例として、通常の非保存的置換は、塩基性又は脂肪族アミノ酸で置換された酸性アミノ酸；小さなアミノ酸で置換された芳香族アミノ酸；疎水性アミノ酸で置換された親水性アミノ酸であってよい。本発明の文脈では、保存的アミノ酸置換が好ましい。
本発明の文脈では、本明細書で用いられる用語「ＭＨＣクラスＩ」は、主要組織適合性複合体分子の２つの主要クラスのうちの１つを示す。ＭＨＣクラスＩ（「ＭＨＣ Ｉ」とも表記される）分子は、体内のすべての有核細胞に存在する。ＭＨＣクラスＩの機能は、細胞傷害性細胞（ＣＴＬ）に対するエピトープを提示することである。ヒトでは、ＭＨＣクラスＩ分子はα－とβ２－ミクログロブリン（ｂ２ｍ）の２つのポリペプチド鎖からなる。α鎖のみが多型でＨＬＡ遺伝子にコードされているが、ｂ２ｍサブユニットは多型ではなくβ２ミクログロブリン遺伝子にコードされている。本発明の文脈では、本明細書で用いられる用語「ＭＨＣクラスＩＩ」は、主要組織適合性複合体分子の他の主要なクラスを示す。ＭＨＣクラスＩＩ（「ＭＨＣ ＩＩ」とも表記される）分子は、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞等のいくつかの特殊な細胞型にのみ存在し、これらはすべて専用の抗原提示細胞（ＡＰＣ）である。
一実施形態では、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体は、複数のＴＬＲペプチド作動薬、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上のＴＬＲペプチド作動薬を含む。
本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体（又は、例えば、本願発明で用いるために）に含まれるＴＬＲペプチド作動薬は、自己アジュバント性と共に、樹状細胞に対するワクチンの第一の成分の標的化能を高めうる。本発明で用いるための複合体において、ＣＰＰ及び本発明の少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープへのＴＬＲペプチド作動薬の物理的結合は、抗原を内在化し、処理し、提示する抗原提示細胞、特に樹状細胞の同時刺激による免疫応答を強化する。
本発明の文脈では、特に本発明の第一の成分（Ｋ）の文脈で用いられるように、「ＴＬＲペプチド作動薬」は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の作動薬であり、すなわち、ＴＬＲに結合し、ＴＬＲを活性化し、特に生物学的応答を生成する。さらに、ＴＬＲペプチド作動薬は、上記で定義されたペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である。ＴＬＲペプチド作動薬は、好ましくは、１０～約１５０，１６０，１７０，１８０，１９０アミノ酸、より好ましくは、１５～１３０アミノ酸、さらにより好ましくは、２０～１２０アミノ酸、特に好ましくは、２５～１１０アミノ酸、最も好ましくは、３０～１００アミノ酸を含む。
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質ドメインを特徴とする膜貫通タンパク質である。馬蹄形のロイシン富化反復（ＬＲＲ）を含む細胞外ドメインは、多様な微生物に由来する共通の分子パターンの認識に関与する。Ｔｏｌｌ様受容体としてはＴＬＲ１－１０があげられる。ＴＬＲ受容体及びその修飾及び誘導体を活性化しうる化合物は、当業界では十分に報告がある。ＴＬＲ１は細菌リポタンパク質及びそのアセチル化型によって活性化されてよく、ＴＬＲ２はさらに、グラム陽性細菌糖脂質、ＬＰＳ、ＬＰ Ａ、ＬＴＡ、線毛、外膜タンパク質、細菌由来又は宿主由来の熱ショックタンパク質、及びマイコバクテリアリポアラビノマンナンによって活性化されうる。ＴＬＲ３は、特にウイルス由来のｄｓＲＮＡ、又は化合物ポリ（ＬＣ）によって活性化されうる。ＴＬＲ４は、グラム陰性ＬＰＳ、ＬＴＡ、宿主由来又は細菌由来の熱ショックタンパク質、ウイルスコート又はエンベロープタンパク質、タキソール又はその誘導体、オリゴ糖及びフィブロネクチンを含むヒアルロナンによって活性化されうる。ＴＬＲ５は細菌の鞭毛又はフラジェリンによって活性化されうる。ＴＬＲ６はマイコバクテリアリポタンパク質及びＢ群連鎖球菌の熱不安定性可溶性因子（ＧＢＳ－Ｆ）又はスタフィロコッカス・モジュリンによって活性化されうる。ＴＬＲ７はイミダゾキノリンによって活性化されうる。ＴＬＲ９は非メチル化ＣｐＧ ＤＮＡ又はクロマチン－ＩｇＧ複合体（例：Ｄｅ Ｎａｒｄｏ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ７４（２０１５）１８１－１８９を参照）によって活性化されうる。
本発明で用いるための複合体に含まれるＴＬＲペプチド作動薬は、好ましくは、ＴＬＲ１、２、４、５、６、及び／又は１０の作動薬である。ＴＬＲは、細胞表面（ＴＬＲ１、２、４、５、６、及び１０）又はエンドソーム等の細胞内オルガネラの膜（ＴＬＲ３、４、７、８、及び９）のいずれかに発現する。エンドソーム受容体の天然リガンドは、核酸系分子であることが判明した（ＴＬＲ４を除く）。細胞表面に発現するＴＬＲ１、２、４、５、６、及び１０は、細胞外微生物（Ｍｏｎｉｅ，Ｔ．Ｐ．，Ｂｒｙａｎｔ，Ｃ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．２００９：Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｔｙ：Ｌｅｓｓｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＴＬＲｓ ａｎｄ ＮＬＲｓ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．３４（１１），５５３－５６１）の分子パターンを認識する。ＴＬＲはいくつかの細胞型で発現するが、実質的にすべてのＴＬＲはＤＣで発現しており、これらの特殊化した細胞はあらゆる可能性のある病原体や危険信号を感知しうる。
しかし、ＴＬＲ２、４、５はＤＣの表面で構成的に発現する。したがって、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体からなるＴＬＲペプチド作動薬は、より好ましくは、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４及び／又はＴＬＲ５のペプチド作動薬である。さらに好ましくは、ＴＬＲペプチド作動薬は、ＴＬＲ２ペプチド作動薬及び／又はＴＬＲ４ペプチド作動薬である。特に好ましくは、ＴＬＲペプチド作動薬は、ＴＬＲ４ペプチド作動薬であるか、又はあるいは、ＴＬＲ２とＴＬＲ４作動薬の両方である。ＴＬＲ２は、細菌、ウイルス、寄生虫、及び真菌に由来する多種多様なリガンドを検出できる。リガンド特異性は、ＴＬＲ１、６、又は１０等の他のＴＬＲ、又はデクチン１、ＣＤ１４、又はＣＤ３６等の非ＴＬＲ分子とＴＬＲ２との相互作用によって決定される場合が多い。ＴＬＲ１とのヘテロ二量体の形成により、ＴＬＲ２がＰａｍ３ＣＳＫ４やペプチドグリカン（ＰＧＡ；Ｇａｙ，Ｎ．Ｊ．，ａｎｄ Ｇａｎｇｌｏｆｆ，Ｍ．（２００７）：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｌｉｇａｎｄｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７６，１４１－１６５；Ｓｐｏｈｎ，Ｒ．，Ｂｕｗｉｔｔ－Ｂｅｃｋｍａｎｎ，Ｕ．，ｅｔ ａｌ．（２００４）：Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ ａｄｊｕｖａｎｔｓ ａｎｄ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２－Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．Ｖａｃｃｉｎｅ ２２（１９），２４９４－２４９９）等の（ｍｙｃｏ）細菌由来のトリアシルリポタンパク質又はリポペプチドを同定することができる。ＴＬＲ２及び６のヘテロ二量体化により、ジアシルリポペプチド及びザイモサンが検出できる。リポ多糖類（ＬＰＳ）及びその誘導体は、ＴＬＲ４のリガンドであり、ＴＬＲ５（Ｂｒｙａｎｔ，Ｃ．Ｅ．，Ｓｐｒｉｎｇ，Ｄ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．（２０１０）．Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｏｓｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．８（１），８－１４）のフラジェリンである。
ＴＬＲ２は、微生物や菌類によって発現される分子を含む、広範で構造的に多様なリガンドと相互作用する。天然及び合成のリポペプチド（例：Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｆｅｒｍｅｎｔａｓマクロファージ活性化リポペプチド（ＭＡＬＰ－２））、ペプチドグリカン（黄色ブドウ球菌等のＰＧ）、様々な細菌株由来のリポ多糖（ＬＰＳ）、多糖（例えばザイモサン）、グラム陽性菌由来のグリコシルホスファチジルイノシトール固定構造（例えば、マイコバクテリアからのリポテイコ酸（ＬＴＡ）とリポ－アラビノマンナン、結核菌からのリポマンナ）等、複数のＴＬＲ２作動薬が同定されている。特定のウイルス決定因子もＴＬＲ２（Ｂａｒｂａｌａｔ Ｒ，Ｌａｕ Ｌ，Ｌｏｃｋｓｌｅｙ ＲＭ，Ｂａｒｔｏｎ ＧＭ．Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｏｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｙｐｅ Ｉ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｖｉｒａｌ ｂｕｔ ｎｏｔ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｉｇａｎｄｓ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９：１０（１１）：１２００－７）を介して誘発されうる。細菌のリポペプチドは細胞壁の構造成分である。それらは、システイン残基を介してペプチドを結合させることができるアシル化されたｓ－グリセルシステイン部分からなる。細菌のリポペプチドであるＴＬＲ２作動薬の例としては、ＭＡＬＰ－２やそれの合成アナログであるジ－パルミトイル－Ｓ－グリセルシステイン（Ｐａｍ２Ｃｙｓ）又はトリ－パルミトイル－Ｓ－グリセルシステイン（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）があげられる。
さらに、高移動度群ボックス１タンパク質（ＨＭＧＢ１）とそのペプチド断片は、ＴＬＲ２を介した炎症活性（例えば、Ａｕｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０１８）２４：１９を参照。）のエンハンサーとして作用すると想定されている。例えば、ＴＬＲ２を介したシグナル伝達のエンハンサーとして用いることができるＨＭＧＢ１由来のペプチドは、例えば国際公開第２００６／０８３３０１号で開示されたもの、又は例えばΔ３０ ＨＭＧＢ１であり、ＴＬＲ２／ＴＬＲ４ペプチド作動薬と併用してＴＬＲ２を介した炎症活性のエンハンサーとして作用しうる。したがって、一実施形態では、ワクチンの第一の成分（Ｋ）の本発明の複合体は、例えば、ＴＬＲ作動薬Δ３０ ＨＭＧＢ１の部分、又はＴＬＲ２／ＴＬＲ４ペプチド作動薬と併用して国際公開第２００６／０８３３０１号で開示されているもの、例えばＡＮＡＸＡ（配列番号６）又は配列番号７等のその配列変異体を含んでよい。したがって、第一の成分（Ｋ）の本発明の複合体は、Δ３０ ＨＭＧＢ１（配列番号８）で開示されているＴＬＲペプチド作動薬、又はその免疫調節断片、又は国際公開第２００６／０８３３０１号で開示されているペプチドＨｐ－１－ＨＰ－１６６のいずれか、好ましくは、Ｈｐ－３１、Ｈｐ－４６、Ｈｐ－１０６を含んでよい。例えば、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、少なくともＴＬＲペプチド作動薬ＥＤＡ（配列番号８）とΔ３０ ＨＭＧＢ１（配列番号９）、又はＥＤＡ（配列番号８）とＨｐ－３１、又はＨｐ－４６、又はＨｐ－１０６を含むことができ、好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、少なくともＴＬＲペプチド作動薬ＡＮＡＸＡ（配列番号６）とΔ３０ ＨＭＧＢ１（配列番号９）、又はＡＮＡＸＡ（配列番号６）とＨｐ－３１、Ｈｐ－４６、又はＨｐ－１０６、又はＡＮＡＸＡ配列変異体（配列番号７）とＨｐ－３１、又はＨｐ－４６、又はＨｐ－１０６を含んでよい。当該併用は、例えば、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体のより強い自己アジュバントが望まれる場合に有利である。
ＴＬＲ４と、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｍｉｎｎｅｓｏｔａ Ｒ ５９５（ＭＰＬＡ）のモノホスホリル脂質Ａ、リポ多糖類（ＬＰＳ）、マンナン（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、グリコイノシトールリン脂質（トリパノソーマ）、ウイルスエンベロープタンパク質（ＲＳＶ及びＭＭＴＶ）、フィブリノーゲン及び熱ショックタンパク質を含む内因性抗原等、多様なリガンドが相互作用する。当該ＴＬＲ４の作動薬は、例えばＡｋｉｒａ Ｓ，Ｕｅｍａｔｓｕ Ｓ，Ｔａｋｅｕｃｈｉ Ｏ．Ｐａｔｈｏｇｅｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｃｅｌｌ．Ｆｅｂ ２４；２００６：１２４（４）：７８３－８０１又はＫｕｍａｒ Ｈ，Ｋａｗａｉ Ｔ，Ａｋｉｒａ Ｓ．Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．Ｏｃｔ ３０；２００９ ３８８（４）：６２１－５に記載されている。グラム陰性菌の外膜に存在するＬＰＳは、ＴＬＲ４リガンドの中で最も広く研究されている。適当なＬＰＳ由来のＴＬＲ４作動薬ペプチドは、例えば国際公開第２０１３／１２００７３号に記載されている。本発明のと、ＴＬＲペプチド作動薬は第一の成分（Ｋ）の複合体に好まれるが、ＬＰＳ等の非ペプチドＴＬＲ作動薬を用いて、複合体に共有結合させることができる。例えば、ＬＰＳの酸加水分解後に露出した３－デオキシ－ｄ－マンノオクト－２－ウロソン酸（Ｋｄｏ）の還元末端のカルボニル基と、タンパク質（例：Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１１；７５１：３１７－２７を参照。）に結合した二機能性リンカーのアミノオキシ基との間で抱合が行われる。
ある実施形態では、ＴＬＲペプチド作動薬は、少なくとも７０％又は少なくとも７５％、好ましくは、少なくとも８０％又は少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％又は少なくとも９５％、さらに好ましくは、少なくとも９７％又は少なくとも９８％、特に好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性を共有する（天然に存在する）タンパク質の断片、又はその変異体である。当該断片の最小長は、少なくとも２０又は２５、好ましくは、少なくとも３０又は３５、より好ましくは、少なくとも４０又は５０、さらに好ましくは、６０又は７０、さらにより好ましくは、少なくとも８０又は９０、例えば少なくとも１００アミノ酸である。特に、この断片はＴＬＲ作動薬機能性を示す。タンパク質の断片は、タンパク質の「ＴＬＲ作動薬ドメイン」を提供するように有利に選択されてよいが、好ましくは、タンパク質の他のドメイン（ＴＬＲ作動薬ドメイン以外）を含まない。したがって、ある実施形態では、ＴＬＲ作動薬は他の免疫学的活性ドメイン（ＴＬＲ作動薬ドメイン以外）を構成せず、より好ましくは、ＴＬＲ作動薬は他の生物学的活性ドメイン（ＴＬＲ作動薬ドメイン以外）を構成しない。例えば、ある実施形態では、ＴＬＲ作動薬はフラジェリン（ＴＬＲ作動薬の機能性に加えて、さらなるドメインを含む）ではない。しかしながら、ある実施形態では、ＴＬＲ作動薬は、フラジェリンのＴＬＲ作動薬ドメインを含むフラジェリンの断片であってよい（フラジェリンの他のドメインは含まない）。
他の適当なＴＬＲペプチド作動薬は、本明細書に記載されているように、Ｈｐ９１又はその断片又は変異体を含むか、それらから構成される。Ｈｐ９１は、例えば米国特許第９，５３９，３２１号に記載されているようにＴＬＲ４作動薬であり、以下のアミノ酸配列：
［配列番号５３］を備える。
ＴＬＲ５は、ほぼすべての運動性細菌によって発現されるフラジェリン分子の領域に誘引される。したがって、フラジェリン、又はフラジェリンに由来するペプチド又はタンパク質及び／又はフラジェリンの変異体又は断片は、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体によって構成されるＴＬＲペプチド作動薬としても適する。
ある実施形態では、本発明のＴＬＲペプチド作動薬は、フラジェリン及び／又はその非修飾断片又は断片でないことが好ましい。例えば、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体において、エントリモド（ＣＢＬＢ５０２）をＴＬＲ５ペプチド作動薬として用いることができる。
したがって、本発明で用いるためのＴＬＲペプチド作動薬の例としては、ＴＬＲ２リポペプチド作動薬ＭＡＬＰ－２、Ｐａｍ２Ｃｙｓ及びＰａｍ３Ｃｙｓ又はその修飾体、ＴＬＲ４作動薬ＬＰＳの異なる形態、例えばＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ野生型Ｌ３－ＬＰＳ及び変異型ペンタアシル化ＬｐｘＬ１－ＬＰＳ、及びＴＬＲ５作動薬のフラゲリンがあげられる。
しかし、本発明のワクチン（用）の第一の成分の複合体によって構成されるＴＬＲペプチド作動薬は、リポペプチドでもリポタンパク質でもなく、糖ペプチドでも糖タンパク質でもないことが好ましく、より好ましくは、本発明のワクチン（用）の第一の成分の複合体によって構成されるＴＬＲペプチド作動薬は、本明細書で定義される古典的なペプチド、ポリペプチド又はタンパク質である。
好ましいＴＬＲ２／４ペプチド作動薬は、国際公開第２０１２／０４８１９０号及び米国特許出願第１３／０３３１５４６に詳細に記載されているアネキシンＩＩ又はその免疫調節断片であり、特に国際公開第２０１２／０４８１９０号のアネキシンＩＩコード配列番号４又は配列番号７で表されるアミノ酸配列を含むＴＬＲ２ペプチド作動薬又はその断片又は変異体が好ましい。
それにより、上記した、配列番号６
で表されるアミノ酸配列又はその配列変異体からなる、若しくは含む、ＴＬＲ２／４ペプチド作動薬、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体から構成される成分（ｉｉｉ）、すなわち少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬として特に好ましい。
配列番号６で表されるＴＬＲペプチド作動薬の特に好ましい機能的配列変異体は、配列番号７：
で表されるＴＬＲペプチド作動薬である。
したがって、上記した配列番号７で表されるアミノ酸配列又はその配列変異体からなる、若しくは含むＴＬＲ２／４ペプチド作動薬、本発明のワクチン／キットの第一の成分（Ｋ）の複合体の成分（ｉｉｉ）として、少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬として特に好ましい。換言すると、第一の成分（Ｋ）の複合体におけるＴＬＲペプチド作動薬は、配列番号７で表されるアミノ酸配列であるペプチドアミノ酸配列からなる、若しくは含む、又は当該配列と配列同一性が少なくとも７０％の（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）であるその機能的配列変異体が最も好ましい。
ＴＬＲ４に関しては、ＴＬＲペプチド作動薬が特に好まれ、特にＴＬＲ４に結合するモチーフ、特に（ｉ）天然のＬＰＳリガンドを模倣するペプチド（ＲＳ ０１：Ｇｌｎ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ及びＲＳ０９：Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ）、（ｉｉ）フィブロネクチン由来のペプチドに対応する。細胞の糖タンパク質フィブロネクチン（ＦＮ）には、３つのエキソンの選択的スプライシングによって１つの遺伝子から生成された複数のアイソフォームがある。これらのアイソフォームの１つは、ＴＬＲ４と相互作用するエクストラドメインＡ（ＥＤＡ）である。
さらに適当なＴＬＲペプチド作動薬は、フィブロネクチンＥＤＡドメイン又はその断片又は変異体を含む。当該適当なフィブロネクチンＥＤＡドメイン又はその断片又は変異体は、欧州特許第１ ９１３ ９５４号、欧州特許出願第２ ４７６ ４４０号、米国特許出願第２００９／０２２０５３２号、及び国際公開第２０１１／１０１３３２号に開示されている。これにより、上記の配列番号８で表されるアミノ酸配列又はその配列変異体からなる、若しくは含むＴＬＲ４ペプチド作動薬は、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体から成る成分（ｉｉｉ）、すなわち少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬として特に好ましい。
本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体は、少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬を含み、好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、複数のＴＬＲペプチド作動薬、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上のＴＬＲペプチド作動薬を含み、より好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、（少なくとも）２又は３つのＴＬＲペプチド作動薬を含み、さらにより好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、（少なくとも）４又は５つのＴＬＲペプチド作動薬を含む。本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体が、複数のＴＬＲペプチド作動薬を含む場合、当該ＴＬＲペプチド作動薬は、特に、本発明で用いるための複合体において、例えば、他のＴＬＲペプチド作動薬及び／又は成分（ｉ）、すなわち細胞透過性ペプチド、及び／又は成分（ｉｉ）、すなわち抗原又は抗原エピトープにも共有結合することが理解される。
本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体が含むＴＬＲペプチド作動薬は、例えば、同じでも異なっていてもよい。本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体が含むＴＬＲペプチド作動薬は、互いに異なっていることが好ましい。
特に好ましい実施形態では、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、１つの単一ＴＬＲペプチド作動薬、例えば、本明細書に記載されるものから選択された１つの単一ＴＬＲ作動薬を含む。特に好ましい実施形態では、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、１つの単一ＴＬＲペプチド作動薬を含み、本発明に記載された１つの単一ＴＬＲペプチド作動薬を除き、ＴＬＲ作動薬の特性を持つさらなる成分を含まない。
一実施形態では、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインは、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む。本明細書で用いられる用語「抗原」は、適応免疫応答の受容体、特に抗体、Ｔ細胞受容体、及び／又はＢ細胞受容体の標的として機能するいかなる構造物質である。「エピトープ」は、「抗原決定基」ともいい、免疫系、特に抗体、Ｔ細胞受容体、及び／又はＢ細胞受容体によって認識され、免疫応答を促す抗原の部分（又は断片）である。したがって、１つの抗原には、少なくとも１つのエピトープが、すなわち、１つの抗原が複数のエピトープが、又は複数のエピトープがあってよい。本発明の文脈では、本明細書で用いられる用語「エピトープ」は主に、抗原提示細胞の表面に提示され、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）に結合するＴ細胞エピトープを示すために用いられる。ＭＨＣクラスＩ分子によって提示されるＴ細胞エピトープは、通常、排他的ではないが、８～１１アミノ酸長のペプチドであるが、ＭＨＣクラスＩＩ分子は、一般的には、排他的ではないが、アミノ酸長が１２～２５アミノ酸より長いペプチドを提示する。
好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインに含まれる少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープは、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質からなる群から選択される。本発明の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープは、例えば、少なくとも一つ、すなわち、一つ以上のペプチド、ポリペプチド又はタンパク質をともに連結したものを含んでよいと理解されるべきである。
一実施形態では、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインは、複数の抗原又は抗原エピトープを含み、例えば、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の抗原又は抗原エピトープを含んでよい。好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体に含まれる１つ以上の抗原又は抗原エピトープが連続して（又は重複して）配置され、特に複数の抗原又は抗原エピトープ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の抗原又は抗原エピトープが第一の成分の抗原ドメインに連続して配置される。これは特に、第一の成分（Ｋ）の複合体に含まれるすべての抗原及び／又は抗原エピトープが、介在する配列なしに互いに機能的に直接連結されることを意味する。例えば、本発明のＣＰＰ又はＴＬＲａｇは、複数の抗原又は抗原エピトープのアミノ酸配列内に位置しない。本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の要素（ｉ）～（ｉｉｉ）は、以下のＮ末端からＣ末端の順に位置することが好ましい。
（ｉ）ＣＰＰ－（ｉｉ）抗原ドメイン－（ｉｉｉ）ＴＬＲａｇ
あるいは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の要素（ｉ）－（ｉｉｉ）は、（ｉ）－（ｉｉｉ）－（ｉｉ）、又は（ｉｉ）－（ｉ）－（ｉｉｉ）の順に連結されてよく、又は、例えば、当該方法で連続的に配置され、上記のように要素（ｉ）－（ｉｉｉ）のいずれでもないスペーサー又はリンカー、すなわち細胞透過性ペプチド、又は成分ｃ）、すなわちＴＬＲペプチド作動薬によって互いに連結されてよい抗原及び／又は抗原エピトープである。しかし、（ｉ）－（ｉｉ）－（ｉｉｉ）の順で本発明の抗原ドメインの要素が直接連鎖することが好ましい。
しかし、あるいは、本明細書に記載される様々な抗原及び／又は抗原エピトープは、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体中に他の方法で配置されてよく、例えば、２つ以上の抗原及び／又は抗原エピトープの間に配置された要素（ｉ）及び／又は成分（ｉｉｉ）、あるいは例えば、本発明の複合体の要素（ｉ）及び／又は要素（ｉｉｉ）の各々の他端に配置された１つ以上の抗原及び／又は抗原エピトープがある。本明細書で用いられる用語「（１つの）要素」又は「（複数の）要素」は、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体の機能的又は構造的要素をいう。したがって、ＣＰＰ、抗原ドメイン及びＴＬＲａｇは、各々本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の要素という場合がある。
１つの好ましい実施形態では、本発明の第一の成分の複合体に含まれる少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープ及び／又は少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープであり、例えば、本発明の第一の成分（Ｋ）は、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含み、これは少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープ及び／又は少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープである。本明細書で用いられる用語「ＣＤ４＋エピトープ」又は「ＣＤ４＋制限エピトープ」は、ＣＤ４＋Ｔ細胞によって認識されるエピトープを示し、特にＭＨＣクラスＩＩ分子の溝にある抗原断片からなるエピトープをいう。本発明の第一の成分（Ｋ）（用）に含まれる単一のＣＤ４＋エピトープは、約６、７、８、９、１０、１１、１２～約２５、３０、４０、５０、６０、７５，１００個のアミノ酸からなることが好ましい。
本発明の文脈で用いられる本明細書で用いられる用語「ＣＤ８＋エピトープ」又は「ＣＤ８＋制限エピトープ」は、ＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識されるエピトープを示し、このエピトープは、特にＭＨＣクラスＩ分子の溝に横たわる抗原断片からなる。本発明で用いるための複合体に含まれる単一のＣＤ８＋エピトープは、約８～１１個のアミノ酸、又は例えば約８～１５個のアミノ酸、又は約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５から約５０、６０、７０、８０、９０，１００個のアミノ酸からなることが好ましい。
また、本発明の少なくとも１つの抗原は、がん／腫瘍関連抗原、がん／腫瘍特異的抗原、又は病原体由来の抗原タンパク質の抗原決定基に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープを含むか又は少なくとも１つの抗原エピトープは、がん／腫瘍関連抗原、がん／腫瘍特異的抗原、又は病原体由来の抗原タンパク質の抗原決定基に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープからなることが好ましい。より好ましくは、少なくとも１つの抗原は、がん／腫瘍関連抗原又はがん／腫瘍特異的抗原の抗原決定基に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープを含むか又は少なくとも１つの抗原エピトープは、がん／腫瘍関連抗原又はがん／腫瘍特異的抗原の抗原決定基に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープからなることが好ましい。最も好ましくは、少なくとも１つの抗原は、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原の抗原決定基に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープを含むか又は少なくとも１つの抗原エピトープは、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原の抗原決定基に対応するＣＤ４＋エピトープ及び／又はＣＤ８＋エピトープからなることが好ましい。本明細書で用いられる用語「がんエピトープ」は、「腫瘍エピトープ」という用語と同義に用いることができる。本明細書に記載される腫瘍又はがんの種類は、良性、前悪性、又は悪性、転移性又は非転移性である。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含み、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープはＣＤ４＋エピトープを含むか又はからなり、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープはＣＤ８＋エピトープを含むか又はからなることが好ましい。現在では、Ｔｈ細胞（ＣＤ４＋）は、ＤＣライセンスにおいても、腫瘍部位におけるＣＴＬ（ＣＤ８＋）の補充及び維持においても、抗腫瘍免疫応答において中心的な役割を果たすことが確立されている。したがって、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含む、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体であって、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープがＣＤ４＋エピトープを含むか又はからなり、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープがＣＤ８＋エピトープを含むか又はからなるものは、ＣＴＬ及びＴｈ細胞を同時プライミングしうる統合免疫応答を提供し、したがって、１つのＣＤ８＋エピトープのみ又は１つのＣＤ４＋エピトープのみに対する免疫よりも好ましい。例えば、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、α－ＣＤ４＋エピトープ及びｇｐ１００－ＣＤ８＋エピトープを含むことが好ましい。
本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含み、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープは、少なくとも２つ、例えば２、３、４、５、６、７、８、９以上、ＣＤ４＋エピトープ及び／又は少なくとも２つ、例えば２、３、４、５、６、７、８、９以上、ＣＤ８＋エピトープを含むことが好ましい。これにより、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープは、好ましくは、異なる抗原又は抗原エピトープであり、より好ましくは、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープは互いに異なるが、同じ種類の腫瘍に関連する。本発明のワクチンにおける抗原ドメインの使用は、（ｉ）抗原喪失変異体の増殖を回避し、（ｉｉ）不均一な腫瘍塊内の異なる腫瘍細胞を標的とし、（ｉｉｉ）例えば、治療対象の腫瘍によって発現される異なるＴＡＡによって誘引されうる、又は例えば、治療対象の腫瘍上の各々のＴＡＡの異なる発現レベルによって誘引されうる、患者間の腫瘍の変動性を回避する。したがって、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、特に、少なくとも４つの抗原又は抗原エピトープ、特に少なくとも２つのＣＤ８＋エピトープ及び少なくとも２つのＣＤ４＋エピトープを含むことが好ましい。本発明で用いるための当該複合体は、マルチエピトープＣＤ８ＣＴＬ及びＣＤ４Ｔｈ細胞を、本発明のワクチンの第二の成分（Ｖ）と相乗的に機能するように誘導し、腫瘍細胞に対抗し、効率的な抗腫瘍免疫を促進する。Ｔｈ細胞は、ワクチン接種後にモニタリングされる長期的な細胞性免疫の維持にも関与する。本発明のワクチン（用）の当該複合体は、ワクチンの第二の成分（Ｖ）と相乗的に作用し、ポリクローン性、多エピトープ性免疫応答及び多機能性ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導し、したがって、特に本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体を第二の成分（Ｖ）の投与に先立って投与した場合に、有効な抗腫瘍活性を誘導する。
本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含み、より好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、少なくとも３つの抗原又は抗原エピトープを含み、さらにより好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、少なくとも４つの抗原又は抗原エピトープを含み、特に好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、少なくとも５つの抗原又は抗原エピトープを含み、最も好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、少なくとも６つの抗原又は抗原エピトープを含む。本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体に含まれる抗原又は抗原エピトープは、同一でも異なっていてもよく、好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体に含まれる抗原又は抗原エピトープは互いに異なる。本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープと少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープを含むことが好ましい。
本発明で用いるワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体は、複数のＣＤ４＋エピトープ、例えば、同じ抗原又は異なる抗原に由来する２つ以上のＣＤ４＋エピトープを含み、好ましくは、ＣＤ８＋エピトープを含まないことが好ましい。また、本発明で用いるワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体は、複数のＣＤ８＋エピトープ、例えば、同じ抗原又は異なる抗原に由来する２つ以上のＣＤ８＋エピトープを含み、好ましくは、ＣＤ４＋エピトープを含まないことが好ましい。しかし、最も好ましいのは、本発明で用いるワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体は、（ｉ）少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープ、例えば、同じ抗原又は異なる抗原に由来する２つ以上のＣＤ４＋エピトープ、及び（ｉｉ）少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープ、例えば、同じ抗原又は異なる抗原に由来する２つ以上のＣＤ８＋エピトープを含むことである。
例えば、一実施形態では、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインは、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含むかからなる、少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む。本発明で用いられる、腫瘍エピトープ又は腫瘍抗原は、腫瘍細胞で産生されるペプチド抗原である。多くの腫瘍抗原がマウスだけでなくヒトでも同定されており、例えば、Ｋｒａｓ及びｐ５３の様々な異常産物が様々な腫瘍で見出される。
例えば、一実施形態では、第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインは、腫瘍関連抗原又は腫瘍特異的抗原を含むか、又はそれらからなる少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含んでよい。本明細書で用いられる用語「腫瘍関連抗原」（ＴＡＡ）は、腫瘍細胞によって発現されるタンパク質又はポリペプチド抗原をいう。例えば、ＴＡＡは、腫瘍細胞によって発現される１つ以上の表面タンパク質又はポリペプチド、核タンパク質又は糖タンパク質、又はそれらの断片であってよい。例えば、ヒト腫瘍関連抗原には、分化抗原（メラノサイト分化抗原等）、変異抗原（ｐ５３等）、過剰発現細胞抗原（ＨＥＲ２等）、ウイルス抗原（ヒトパピローマウイルスタンパク質等）、及び精巣及び卵巣の生殖細胞に発現するが、正常な体細胞では沈黙するがん／精巣（ＣＴ）抗原（ＭＡＧＥ及びＮＹ－ＥＳＯ－１等）がある。多くのＴＡＡはがん又は腫瘍に特異的ではなく、正常な組織にも認められる場合がある。
本明細書で用いられる用語「腫瘍特異的抗原」（ＴＳＡ）は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子の文脈では、腫瘍細胞表面に提示され、新抗原特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）によって特異的に認識されるペプチドのレパートリーをいう。ＴＳＡはまた、本発明の文脈では「腫瘍新抗原」ともいう。免疫学的観点からは、腫瘍新抗原は真に外来のタンパク質であり、正常なヒトの臓器／組織には全く存在しない。ウイルス性の病因を持たないほとんどのヒト腫瘍では、腫瘍新抗原は、例えば、一塩基変異（ＳＮＶ）、挿入及び欠失（ｉｎｄｅｌ）、遺伝子融合、フレームシフト変異、及び構造的変異（ＳＶ）を含む様々な非同義の遺伝子変化に由来してよい。本明細書で用いられる用語「腫瘍特異的抗原」（ＴＳＡ）としては、例えば、ヒトパピローマウイルス又はメルケル細胞ポリオーマウイルス（ＭＣＰｙＶ）の抗原等の腫瘍ウイルス抗原があげられる。通常、がんウイルス抗原は、各々のウイルスに感染した細胞上でのみ発現する。腫瘍－新抗原は、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１９，Ｐａｇｅｓ ９８０－９９２に開示されているように、当業界で公知のｉｎ ｓｉｌｉｃｏ予測ツールを用いて同定することができる。
本発明の抗原ドメインの少なくとも一つの腫瘍エピトープ、少なくとも一つのＴＡＡ、又は少なくとも一つのＴＳＡは、好ましくは、内分泌腫瘍、消化管腫瘍、泌尿生殖器及び婦人科腫瘍、頭頸部腫瘍、造血器腫瘍、皮膚腫瘍、胸部及び呼吸器腫瘍を含む腫瘍又はがんの群から選択される。
より具体的には、本発明の抗原ドメインの少なくとも一つの腫瘍エピトープ、又は少なくとも一つのＴＡＡ、又は少なくとも一つのＴＳＡは、トリプルネガティブ乳がんを含む乳がん、胆道がん；膀胱がん；膠芽腫や髄芽腫を含む脳腫瘍；子宮頸がん；絨毛がん；結腸がん；子宮内膜がん；食道がん；胃がん；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、虫垂がん、胆管がん、カルチノイド腫瘍、消化管結腸がん、肝外胆管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、大腸がん又は転移性大腸がん、急性リンパ性及び骨髄性白血病を含む血液腫瘍；Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病・リンパ腫；有毛細胞白血病；慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫；ＡＩＤＳ関連白血病、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫；ボーエン病、パジェット病等を含む上皮内腫瘍；肝臓がん；非小細胞肺がんを含む肺がん、ホジキン病を含むリンパ腫、リンパ球性リンパ腫；神経芽腫；膠芽腫、扁平上皮がんを含む口腔がん；上皮細胞、間質細胞、生殖細胞、間葉細胞由来を含む卵巣がん；膵臓がん；前立腺がん；直腸がん；平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫及び骨肉腫等の肉腫；黒色腫、メルケル細胞がん、カポジ肉腫、基底細胞がん、扁平上皮がん等の皮膚がん；セミノーマ、非セミノーマ（奇形腫、絨毛がん）、間質腫瘍、胚細胞腫瘍等の胚性腫瘍を含む精巣がん；甲状腺腺がん、髄様がんを含む甲状腺がん；腺がん、ウィルムス腫瘍を含む腎がん、を含む腫瘍及び／又はがんの群から選択される。
特に好ましくは、少なくとも１つの腫瘍エピトープ、又は少なくとも１つのＴＡＡ、又は本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインの少なくとも１つのＴＳＡが、結腸直腸がん、転移性結腸直腸がん、膵臓がん、又はトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）を含む乳がんの腫瘍又はがんの群から選択される。本明細書で用いられる用語「トリプルネガティブ乳がん」とは、治療薬の分子標的であるエストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰｇＲ）、及びＨＥＲ２が発現しない乳がんをいう。ＴＮＢＣは浸潤性乳がん症例の１０～２０％を占め、複数の分子サブタイプを含む。通常、ＴＮＢＣに罹患した患者は、本質的に攻撃的な臨床行動と治療のための認識された分子標的がないために、他の乳がんサブタイプの患者と比較して比較的予後が悪い。トリプルネガティブ乳がんは表現型であり、分子アッセイにおけるその主要な構成要素は、基底様腫瘍、正常な乳房様腫瘍、そして最近認識された、珍しいが興味深いクローディン低分子サブタイプであり、ＢＲＣＡ１欠損サブタイプも含まれる。ＴＮＢＣによって発現されるＴＡＡは、例えば、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥ、ＡＳＣＬ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１を含む。
本明細書で用いられる用語「膵臓がん」又は「膵臓がん」は、膵臓細胞に由来するがんに関連する。好ましくは、本明細書で用いられる用語「膵臓がん」は、膵管腺がん及びＩＳＴの形態学的変異体、例えば腺扁平上皮がん、コロイド／粘液がん、未分化／未分化がん、印環細胞がん、髄様がん、肝様がんを含む膵臓腺がんをいう。膵臓腺がんは、予後不良で発生率が増加する致死的な状態である。膵臓がんは通常高齢者の疾患である。３０歳未満で診断される患者は極めて稀であり、新たに診断された患者の９０％は５５歳以上であり、その大多数は７０代及び８０代であり、女性と比較して男性の発生率が高い。膵がんは、メソテリン、サバイビン、ＮＹ－ＥＳＯ－１からなる腫瘍関連抗原の発現を特徴とする。
本明細書で用いられる用語「結腸直腸がん（大腸がん、別名「腸がん」）」は、結腸がんと直腸がん（ＣＣ）を含むがんである。どちらの個々のがんにも多くの共通点があるが、がんの出発点である。Ｓｉｅｇｅｌ，Ｒ．，Ｃ．Ｄｅｓａｎｔｉｓ，ａｎｄ Ａ．Ｊｅｍａｌ，Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，２０１４．ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ，２０１４．６４（２）：ｐ．１０４－１７によると、２００６～２０１０年の米国では、腫瘍部位他の発生率は近位結腸（結腸の最初と中間部）でわずかに重要である。１０万人に約１９件の症例があり、症例の４２％を占める。次いで直腸がんが２８％、遠位結腸（結腸の下部）が１０万人に１０件の発生率である。解剖学的には、「結腸直腸がん」としては、（ｉ）盲腸がん（回盲弁がんを含む）、虫垂がん、上行結腸がん、肝曲がん、横行結腸がん、脾曲がん、下行結腸がん、Ｓ状結腸がん（Ｓ状結腸（曲）がんを含む）等の結腸がんのほか、結腸の重複部位のがん、（ｉｉ）結腸・直腸がん、直腸Ｓ状結腸がん等の直腸Ｓ状結腸接合部がん、（ｉｉｉ）直腸膨大部がん等の直腸がんがあげられる。
大腸がんは、好ましくは、盲腸がん（回盲弁がんを含む）、虫垂がん、上行結腸がん、肝彎曲がん、横行結腸がん、脾彎曲がん、下行結腸がん、Ｓ状結腸がん（Ｓ状結腸（屈曲）がんを含む）又はこれらの合併等、結腸がんである。
また、大腸がんは、好ましくは、（ｉ）結腸及び直腸がん、（ｉｉ）直腸Ｓ状結腸がん等、直腸Ｓ状結腸接合部がんである。さらに、大腸がんは、直腸膨大部がん等、直腸がんであることも好ましい。
結腸直腸がんは、例えば細胞型等の異なる細胞型から構成され、結腸直腸がんには、結腸直腸腺がん、結腸直腸間質腫瘍、原発性結腸直腸リンパ腫、結腸直腸平滑筋肉腫、結腸直腸黒色腫、結腸直腸扁平上皮がん及び結腸直腸カルチノイド腫瘍（例えば、盲腸、虫垂、上行結腸、横行結腸、下行結腸、Ｓ状結腸及び／又は直腸のカルチノイド腫瘍）が含まれる。したがって、望ましい大腸がんの種類には、結腸直腸腺がん、結腸直腸間質腫瘍、原発性結腸直腸リンパ腫、結腸直腸平滑筋肉腫、結腸直腸黒色腫、結腸直腸扁平上皮がん、結腸直腸カルチノイド腫瘍（例えば、盲腸、虫垂、上行結腸、横行結腸、下行結腸、Ｓ状結腸及び／又は直腸のカルチノイド腫瘍）等がある。より好ましくは、結腸直腸がんは結腸直腸腺がん又は結腸直腸カルチノイドがんである。さらに好ましくは、結腸直腸がんは結腸直腸腺がんである。すなわち、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープは、本明細書に記載される結腸直腸がん細胞型のいずれからも選択されてよい。
結腸直腸がんは、ＴＭＮ病期分類システムによる腫瘍の病期分類に応じて、異なるＴＡＡ、又はＴＳＡを発現するため、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインの抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープは、ＴＡＡ、又はＴＳＡを含むことが好ましく、例えば、以下のステージのＴＳＡ（「Ｔ」ステージ）：ＴＸ－原発腫瘍を評価できない、Ｔ０－原発腫瘍の証拠がない、Ｔａ－非浸潤性乳頭がん、Ｔｉｓ－上皮内がん：上皮内又は固有層の浸潤、Ｔ１－腫瘍が粘膜下に浸潤、Ｔ２－腫瘍が固有筋層に浸潤、Ｔ３－腫瘍が固有筋層を介して結腸周囲組織に浸潤、Ｔ４ａ－腫瘍が臓側腹膜の表面に浸潤しており、Ｔ４ｂ－腫瘍が他の臓器又は構造に直接浸潤又は付着する；リンパ節の次のステージ（「Ｎ」ステージ）：ＮＸ－所属リンパ節を評価できない、Ｎ０－所属リンパ節転移なし、Ｎ１－３所属リンパ節転移あり、Ｎ １ａ－１所属リンパ節転移あり、Ｎ１ｂ－２－３所属リンパ節転移あり、Ｎ１ｃ－２－３所属リンパ節転移なし、Ｎ２ａ－４以上のリンパ節転移あり、Ｎ２ａ－４－６所属リンパ節転移あり、Ｎ２ｂ－７以上の所属リンパ節転移あり；Ｍ０－遠隔転移なし、Ｍ１－Ｍ１ａを伴う遠隔転移－１つの臓器又は部位に限局した転移（例、肝臓、肺、卵巣、非所属リンパ節）、Ｍ１ｂ－１つ以上の臓器／部位又は腹膜に転移。これらの病期は、大腸がんの以下の数値的病期分類に統合されてよい：０期：Ｔｉｓ、Ｎ０、Ｍ０；Ｉ期：Ｔ１、Ｎ０、Ｍ０又はＴ２、Ｎ０、Ｍ０；ＩＩＡ期：Ｔ３、Ｎ０、Ｍ０；ＩＩＢ期：Ｔ４ａ、Ｎ０、Ｍ０；ＩＩＣ期：Ｔ４ｂ、Ｎ０、Ｍ０；ＩＩＩＡ期：Ｔ１－Ｔ２、Ｎ１／Ｎ１ｃ、Ｍ０又はＴ１、Ｎ２ａ、Ｍ０；ＩＩＩＢ期：Ｔ３－Ｔ４ａ、Ｎ１／Ｎ１ｃ、Ｍ０又はＴ２－Ｔ３、Ｎ２ａ、Ｍ０又はＴ１－Ｔ２、Ｎ２ｂ、Ｍ０；ＩＩＩＣ期：Ｔ４ａ、Ｎ２ａ、Ｍ０又はＴ３－Ｔ４ａ、Ｎ２ｂ、Ｍ０又はＴ４ｂ、Ｎ１－Ｎ２、Ｍ０；ＩＶＡ期：いかなるＴ、いかなるＮ、Ｍ１ａ、ＩＶＢ期：いかなるＴ、いかなるＮ、Ｍ１ｂ。簡潔には、０期では、がんは結腸又は直腸の内層を越えて増殖しない；Ｉ期では、がんは粘膜から筋肉層に拡がっている；ＩＩ期では、がんは筋肉層を越えて付近の臓器の漿膜に拡がっている；ＩＩＩ期では、がんが付近のリンパ節に拡がっているか、がん細胞がリンパ節付近の組織に拡がっている；ＩＶ期では、がんが血液やリンパ節を介して体の他の部位に転移する。
上記の結腸直腸がん細胞の種類と病期の様々な腫瘍関連抗原が報告されており、例えばＣＥＡ、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ１、サバイビン、ＷＴ１、ＲＮＦ４３、ＴＯＭＭ３４、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、ＫＯＣ１、ＡＲＴ４、ＫＲａｓ、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＣＯＡ－１ ＳＡＰ、ＴＧＦ－βＲＩＩ、ｐ５３、ＡＳＣＬ２、ＩＬ１３Ｒアルファ２、ＡＳＣＬ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＰＲＡＭＥ、ＳＡＲＴ １－３（例：Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ２０１８ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２８；２４（４８）：５４１８－５４３２）等があげられる。すなわち、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＡＳＣＬ２、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、メソテリン、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、ＩＬ１３Ｒアルファ２、ＡＳＣＬ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＰＲＡＭＥからなる群から選択される抗原のエピトープである。
黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）
ＭＡＧＥ（黒色腫関連抗原）遺伝子ファミリーの哺乳類メンバーは、本来、正常な成体組織では完全に無症状であると報告されてきたが、例外として雄の生殖細胞と、いくつかの胎盤がある。対照的に、これらの遺伝子は様々な種類の腫瘍で発現していた。したがって、本発明で用いるための複合体は、ＭＡＧＥファミリーの抗原（「ＭＡＧＥ」抗原）又はそのエピトープを含むことが好ましい。ＭＡＧＥファミリーのうち、特にＭＡＧＥ－Ａ３とＭＡＧＥ－Ｄ４が好まれ、ＭＡＧＥ－Ａ３が特に好まれる。健康な細胞におけるＭＡＧＥ－Ａ３の正常な機能は不明である。例えば、がん／精巣抗原１．３という場合もあるＭＡＧＥ－Ａ３は、腫瘍特異的なタンパク質であり、多くの腫瘍で同定されている。ＭＡＧＥ－Ａ３のアミノ酸配列を以下に示す。
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、配列番号１０で表されるアミノ酸配列の少なくとも一つの抗原を含む。
メソテリン
メソテリンは当初、卵巣がんにおいて「ｍＡｂＫ１」という抗体に反応するタンパク質として同定されたが、悪性中皮腫や膵臓、卵巣、肺の腺がんを含む多くのヒトのがんに高発現する腫瘍抗原である。ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ １３４２１によるメソテリンのアミノ酸配列を以下に示す。
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、配列番号１１で表されるアミノ酸配列の少なくとも一つの抗原を含む。
サバイビン
ある実施形態では、複合体（第一の成分の）の抗原ドメインはサバイビンの少なくとも１つのエピトープを含む。サバイビンは、バキュロウイルスアポトーシスインヒビターリピート含有５又はＢＩＲＣ５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｏ １５３９２）ともいい、アポトーシスインヒビター（ＩＡＰ）ファミリーの一員である。サバイビンタンパク質は、カスパーゼの活性化を阻害するように機能し、それによってアポトーシス又はプログラム細胞死の負の調節をもたらす。サバイビンのアミノ酸配列を以下に示す。
したがって、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、本明細書に記載される、配列番号１２で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含む。特に、当該第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含むことが好ましい。
サバイビンのいくつかのエピトープは当業者に公知である。好ましいサバイビンエピトープは、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体によって構成され、以下のエピトープ（以下に示すエピトープ配列は、上記のサバイビン配列の断片であり、したがって、下線を引いた上記のサバイビン配列に示されている；以下のエピトープ配列は、１つのエピトープをいうこともあれば、複数の（重複する）エピトープをいう場合もある）を含む。
ＲＩＳＴＦＫＮＷＰＦ
［配列番号２２］
すなわち、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、配列番号２２で表されるアミノ酸配列かを含む。
すなわち、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、スルビビンのエピトープを含むことが好ましい。より好ましくは、第一の成分（Ｋ）の複合体は、配列番号１２で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片（少なくとも１５アミノ酸、より好ましくは、少なくとも２０アミノ酸、さらにより好ましくは、少なくとも２５アミノ酸、最も好ましくは、少なくとも３０アミノ酸）、又は配列同一性が少なくとも７０％であるその機能的配列変異体（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）を含む。さらにより好ましくは、第一の成分（Ｋ）の複合体は、配列番号２２で表されるアミノ酸配列であるペプチドを含む。最も好ましくは、複合体は、配列番号２３で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％の（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）であるその機能的配列変異体を含む。
ＮＹ－ＥＳＯ－１
ＮＹ－ＥＳＯ－１（「がん／精巣抗原１」、「ニューヨーク食道扁平上皮がん１」、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ ７８３５８ともいう）は、多くの種類のがんで再発現するよく知られたがん精巣抗原（ＣＴＡ）である。ＮＹ－ＥＳＯ－１は、自発的な体液性及び細胞性の免疫反応を誘発し、発現パターンが制限されているという特徴があるため、がん免疫療法の良い候補標的となる。ＮＹ－ＥＳＯ－１に特異的な免疫反応は、様々な種類のがんで観察されている。ＮＹ－ＥＳＯ－１のアミノ酸配列を以下に示す。
好ましい実施形態では、本明細書に記載される本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、メソテリン、サバイビン及びＮＹ－ＥＳＯ－１からなる群から選択される抗原のエピトープである。例えば、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、メソテリン、サバイビン又はメソテリンとＮＹ－ＥＳＯ－１、又はサバイビンとＮＹ－ＥＳＯ－１から選択されるエピトープである。一実施形態では、本明細書に記載される本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、抗原メソテリン、ＮＹ－ＥＳＯ－１、又はサバイビン、又はその断片、又は腫瘍抗原の配列変異体、又はその断片のエピトープを含む。本明細書で用いられる用語「断片」は、抗原の少なくとも１０個の連続したアミノ酸、可能であれば抗原の少なくとも１５個の連続したアミノ酸、さらに可能であれば抗原の少なくとも２０個の連続したアミノ酸、さらに可能であれば抗原の少なくとも２５個の連続したアミノ酸、最も可能であれば抗原の少なくとも３０個の連続したアミノ酸を含む。「配列変異体」とは、上で定義されたとおり、すなわち、配列変異体とは、その（アミノ酸）配列が、参照配列と少なくとも７０％、可能であれば少なくとも７５％、さらに可能であれば少なくとも８０％、さらに可能であれば少なくとも８５％、さらに可能であれば少なくとも９０％、特に可能であれば少なくとも９５％、最も可能であれば少なくとも９９％同一である。「機能的」配列変異体とは、抗原、抗原断片、又はエピトープの文脈では、例えば抗原（断片）によって構成されるエピトープの機能が損なわれていないか、又は削除されていないこと、すなわち、免疫原性があり、可能であれば全長抗原に含まれるエピトープと同じ免疫原性を有することを意味する。しかし、本明細書に記載されているように、例えばがん／腫瘍抗原（断片）によって構成されるエピトープのアミノ酸配列は、変異していないため、好ましくは、参照エピトープ配列と同一である。例えば、本明細書に記載される本発明のワクチンは、本明細書に記載される抗原の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０以上のエピトープ（例えばメソテリン、サバイビン、ＮＹ－ＥＳＯ－１）から選択された少なくとも１つ、２つ、又はすべてのエピトープを含む抗原ドメインを含み、膵臓がんの状況において特に有用でありうる。
ＰＲＡＭＥ
ＰＲＡＭＥ（腫瘍に選択的に発現する黒色腫抗原ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ ７８３９５）は別名、がん精巣抗原（ＣＴ１３０）、ＭＡＰＥ（腫瘍に選択的に発現する黒色腫抗原）、ＯＩＰ４（ＯＰＡ－ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ４）として知られており、がん精巣抗原（ＣＴＡ）ファミリーに属する。正常な体細胞組織におけるＰＲＡＭＥ発現は、精巣、精巣上体、子宮内膜、卵巣、副腎での発現が低い成体生殖細胞にエピジェネティックに制限されている。ＣＴＡメンバーのＮＹ－ＥＳＯ－１と同様に、ＰＲＡＭＥは黒色腫における免疫原性腫瘍関連抗原として同定され、その発見以来、その発現はトリプルネガティブ乳がんを含む様々な固形及び血液悪性腫瘍で証明されている。ＰＲＡＭＥのアミノ酸配列を以下に示す：
ＡＳＣＬ２（Ａｃｈａｅｔｅ－ｓｃｕｔｅ ホモログ２）
ある実施形態では、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、ＡＳＣＬ２の少なくとも１つのエピトープを含む。ＡＳＣＬ２は、胎盤発生中の増殖栄養膜の維持に不可欠な塩基性ヘリックスループヘリックス転写因子である。ＡＳＣＬ２は、腸腫瘍で過剰発現される増殖の推定調節因子であることが見出された。ＡＳＣＬ２のアミノ酸配列を以下に示す。
したがって、当該第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む。より好ましくは、当該第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号１８で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む。
ＡＳＣＬ２のいくつかのエピトープは当業者に公知である。好ましいＡＳＣＬ２エピトープは、本発明で用いるための複合体で構成されており、以下のエピトープを含む（以下に示すエピトープ配列は上記のＡＳＣＬ２配列の断片であるため、上記のＡＳＣＬ２配列に下線を引いて示す；以下のエピトープ配列の各々は、１つのエピトープをいうこともあれば、複数の（重複する）エピトープをいう場合もある）：
ＳＡＶＥＹＩＲＡＬＱ
［配列番号１６］
ＥＲＥＬＬＤＦＳＳＷ
［配列番号１７］
したがって、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、配列番号１６で表されるアミノ酸配列及び／又は配列番号１７で表されるアミノ酸配列を含む。すなわち、抗原ドメインは、配列番号１６で表されるアミノ酸配列からなるペプチド及び／又は配列番号１７で表されるアミノ酸配列であるペプチドを含むことが好ましい。
したがって、本発明に用いる第一の成分（Ｋ）の複合体は、ＡＳＣＬ２のエピトープを含むことが好ましい。より好ましくは、第一の成分（Ｋ）の複合体は、配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片（少なくとも１５アミノ酸、より好ましくは、少なくとも２０アミノ酸、さらにより好ましくは、少なくとも２５アミノ酸、最も好ましくは、少なくとも３０アミノ酸）、又は配列同一性が少なくとも７０％（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％である）その機能的配列変異体を含む。さらにより好ましくは、第一の成分（Ｋ）の複合体は、配列番号１６で表されるアミノ酸配列であるペプチド及び／又は配列番号１７で表されるアミノ酸配列であるペプチドを含む。最も好ましくは、第一の成分（Ｋ）の複合体は、配列番号１８で表されるアミノ酸配列であるペプチド又は少なくとも７０％の配列同一性（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）であるその機能的配列変異体を含む。
ムチン－１（ＭＵＣ－１）
ＭＵＣ－１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ １５９４１）はヒト上皮性ムチンであり、細胞接着に作用する。ＭＵＣ－１のアミノ酸配列を以下に示す。
すなわち、本発明で用いるための第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、本明細書に記載されている配列番号１９で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含む。
ＭＵＣ－１のいくつかのエピトープは当業者に公知である。好ましいＭＵＣ－１エピトープは、本発明に用いるための第一の成分（Ｋ）の複合体で構成されており、以下のエピトープを含む（以下に示すエピトープ配列は、上記のＭＵＣ－１配列の断片であるため、下線を引いた上記のＭＵＣ－１配列に示されている；以下のエピトープ配列の各々は、１つのエピトープをいうこともあれば、複数の（重複する）エピトープをいう場合もある）：
ＧＳＴＡＰＰＶＨＮ
［配列番号２０］
ＴＡＰＰＡＨＧＶＴＳ
［配列番号２１］
したがって、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、配列番号２０で表されるアミノ酸配列及び／又は配列番号２１で表されるアミノ酸配列を含む。
がん胎児性抗原（ＣＥＡ）
ある実施形態では、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインはＣＥＡの少なくとも１つのエピトープを含む。ＣＥＡは細胞内接着糖タンパク質である。ＣＥＡは通常、胎児の発育中に消化管組織で産生されるが、出生前に産生が停止する。そのため、ＣＥＡは通常、健康な成人の血液中に非常に低いレベルでしか存在しない。ＣＥＡのアミノ酸配列を以下に示す。
すなわち、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、本明細書に記載されている配列番号２４で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含む。好ましくは、当該第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む。より好ましくは、抗原ドメインは、配列番号２５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む。
ＣＥＡのいくつかのエピトープは当業者に公知である。本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体から構成されることが好ましいＣＥＡエピトープには、以下のエピトープ（以下に示すエピトープ配列は上記のＣＥＡ配列の断片であるため、下線を引いた上記のＣＥＡ配列に示されている；以下のエピトープ配列の各々は、１つのエピトープをいうこともあれば、複数の（重複する）エピトープをいう場合もある）がある。
ＹＬＳＧＡＮＬＮＬＳ
［配列番号２６］
ＳＷＲＩＮＧＩＰＱＱ
［配列番号２７］
したがって、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、配列番号２６で表されるアミノ酸配列及び／又は配列番号２７で表されるアミノ酸配列を含む。すなわち、当該第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号２６で表されるアミノ酸配列であるペプチド及び／又は配列番号２７で表されるアミノ酸配列であるペプチドを含むことが好ましい。
したがって、本発明に用いる第一の成分（Ｋ）の複合体は、ＣＥＡのエピトープを含むことが好ましい。より好ましくは、複合体は、配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片（少なくとも１５アミノ酸、より好ましくは、少なくとも２０アミノ酸、さらにより好ましくは、少なくとも２５アミノ酸、最も好ましくは、少なくとも３０アミノ酸）、又は配列同一性が少なくとも７０％（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％）であるその機能的配列変異体を含む。さらにより好ましくは、第一の成分（Ｋ）の複合体は、配列番号２６で表されるアミノ酸配列であるペプチド及び／又は配列番号２７で表されるアミノ酸配列であるペプチドを含む。最も好ましくは、第一の成分（Ｋ）の複合体は、配列番号２５で表されるアミノ酸配列であるペプチド又は配列同一性が少なくとも７０％（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％）であるその機能的配列変異体を含む。
形質転換成長因子β受容体２（ＴＧＦβＲ２）
ＴＧＦβ受容体は、単一パスセリン／スレオニンキナーゼ受容体である。いくつかの異なるアイソフォームで存在する。ＴＧＦβＲ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ ３７１３７）には、プロテインキナーゼドメインがあり、他の受容体タンパク質とヘテロ二量体複合体を形成し、ＴＧＦ－βと結合する膜貫通タンパク質である。この受容体／リガンド複合体は、タンパク質をリン酸化し、その後、核に入り、細胞増殖に関連する遺伝子のサブセットの転写を調節する。
したがって、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分の第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、本明細書に記載される配列番号２８で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含み、本発明の抗原ドメインで用いるための少なくとも一つの抗原を含む。
Ｐ５３
Ｐ５３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ ０４６３７）は、ゲノム変異を防ぐ役割を持つ腫瘍抑制タンパク質である。Ｐ５３には多くの抗がん機能の機序があり、アポトーシス、ゲノム安定性、血管新生の阻害に関与する。ｐ５３の抗がん作用にはいくつかの機序があり、ＤＮＡが損傷を受けたときにＤＮＡ修復タンパク質を活性化する。ＤＮＡ損傷認識のＧ１／Ｓ制御点で細胞周期を維持することで増殖を停止させることができる；そしてアポトーシスを開始させることができる。
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、配列番号２９で表されるアミノ酸配列、又は本明細書に記載されるその断片又は変異体を含み、本発明の抗原ドメインで用いるための少なくとも一つの抗原を含む。
キルステン・ラス（Ｋｉｒｓｔｅｎ Ｒａｓ ＫＲａｓ）
Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ ２ Ｋｉｒｓｔｅｎ ｒａｔ ｓａｒｃｏｍａ ｖｉｒａｌ ｏｎｃｏｇｅｎｅ ｈｏｍｏｌｏｇ及びＫＲＡＳとしても知られるＧＴＰアーゼＫＲａｓは、正常な組織シグナル伝達に不可欠な機能を果たしており、ＫＲＡＳ遺伝子の変異は多くのがんの発生に不可欠なステップである。他のｒａｓサブファミリーのメンバーと同様に、ＫＲＡＳタンパク質はＧＴＰアーゼであり、多くのシグナル伝達経路の初期のプレーヤーである。ＫＲＡＳは通常、Ｃ末端にイソプレン基が存在するため、細胞膜に結合する。ＫＲＡＳのアミノ酸配列を以下に示す。
すなわち、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、本明細書に記載されているような配列番号３０で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含む。
Ｋｉｒｓｔｅｎ Ｒａｓのいくつかのエピトープは当業者に公知である。好ましいＫｉｒｓｔｅｎ Ｒａｓエピトープは、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体で構成され、以下のエピトープを含む（以下に示すエピトープ配列は、上記のＫｉｒｓｔｅｎ Ｒａｓ配列の断片であり、したがって、下線を引いた上記のＫｉｒｓｔｅｎ Ｒａｓ配列に示されている；以下のエピトープ配列は、１つのエピトープをいうこともあれば、複数の（重複する）エピトープをいう場合もある）。
ＶＶＧＡＧＧＶＧ
［配列番号３１］
すなわち、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、配列番号３１で表されるアミノ酸配列を含む。
Ｏ－結合Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）トランスフェラーゼ（ＯＧＴ）
ＯＧＴ（Ｏ－結合Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）転移酵素、Ｏ－ＧｌｃＮＡｃ転移酵素、ＯＧＴａｓｅ、Ｏ－結合Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素、ウリジン二リン－Ｎ－アセチルグルコサミン：ポリペプチドβ－Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素、タンパク質Ｏ－結合β－Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｏ １５２９４）は、ＵＤＰ－Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンというシステム名である酵素：タンパク質－Ｏ－β－Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミニルトランスフェラーゼ）は、「ＵＤＰ－Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミン：プロテイン－Ｏ－β－Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミニルトランスフェラーゼ」というシステム名である酵素である。ＯＧＴは、細胞内タンパク質のセリン又はスレオニン残基にＯ－グリコシド結合した単一のＮ－アセチルグルコサミンの付加を触媒する。ＯＧＴは、ヒト体内の多くの生物学的機能の部分である。ＯＧＴは、ＡＫＴ１のスレオニン３０８リン酸化を阻害し、ＩＲＳ１リン酸化の速度（セリン３０７とセリン６３２／６３５）を高め、インスリンシグナル伝達を低下させ、インスリンシグナルの成分をグリコシル化することによって、筋細胞及び脂肪細胞のインスリン抵抗性に関与する。さらに、ＯＧＴは、Ｎ－アセチルグルコサミンを添加して、セリン及びスレオニン残基の細胞内グリコシル化を触媒する。研究によると、ＯＧＴ対立遺伝子は胚発生に不可欠であり、ＯＧＴは細胞内グリコシル化と胚性幹細胞の活力に必要であることが示されている。ＯＧＴは転写因子とＲＮＡポリメラーゼＩＩを修飾する翻訳後修飾も触媒するが、この修飾の具体的な機能はほとんど知られていない。ＯＧＴの配列を以下に示す。
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、本明細書に記載される配列番号３２で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含み、本発明の抗原ドメインで用いるための少なくとも一つの抗原を含む。
カスパーゼ５（ＣＡＳＰ５）
カスパーゼ５（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ ５１８７８）は、他のタンパク質をアスパラギン酸残基でタンパク質分解的に切断する酵素で、カスパーゼというシステインプロテアーゼに属する。カスパーゼ１、カスパーゼ４、マウスのカスパーゼ４ホモログであるカスパーゼ１１と並んで炎症性のカスパーゼであり、免疫系での役割を担っている。ＣＡＳＰ５のアミノ酸配列を以下に示す。
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、本明細書に記載される配列番号３３で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含み、本発明の抗原ドメインで用いるための少なくとも一つの抗原を含む。
大腸腫瘍関連抗原－１（ＣＯＡ－１）
ＣＯＡ－１は、２００３年にＭａｃｃａｌｌｉら（Ｍａｃｃａｌｌｉ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ（ＣＯＡ－１）ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ ＣＤ４（＋） Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００３．６３（２０）：ｐ．６７３５－４３）によって、大腸及び黒色腫細胞に強く発現するものとして同定された（データは入手できない）。その変異は、腫瘍細胞と正常細胞の識別を妨げうる。ＣＯＡ－１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ ５ Ｔ １２４）のアミノ酸配列を以下に示す。
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、本明細書に記載される配列番号３４で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含み、本発明の抗原ドメインで用いるための少なくとも一つの抗原を含む。
Ｔ細胞が認識する扁平上皮がん抗原（ＳＡＲＴ）
ＳＡＲＴファミリー内では、ＳＡＲＴ－３／ＳＡＲＴ１－３が最も好まれる。したがって、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、ＳＡＲＴファミリーの抗原（「ＳＡＲＴ」抗原）又はそのエピトープを含むことが好ましい。本発明で用いるための複合体は、ＳＡＲＴ－３又はそのエピトープを含むことがより好ましい。Ｔ細胞３によって認識される扁平上皮がん抗原は、がん患者においてＨＬＡ－Ａ ２４制限及び腫瘍特異的細胞傷害性Ｔリンパ球を誘導されてよい腫瘍エピトープを有する。ＳＡＲＴ－３はｍＲＮＡスプライシングの調節に関与すると考えられている。
ＩＬ１３Ｒアルファ２（ＩＬ１３Ｒアルファ２）
ＩＬＲアルファ２はインターロイキン１３（ＩＬ－１３）と極めて高い親和性で結合する（したがって、これを隔離しうる）が、ＩＬ－４との結合はできない。ＩＬ－１３とＩＬ－４の両方の負の調節因子として作用するが、その機序はまだ解明されていない。ＩＬ１３Ｒアルファ２のアミノ酸配列を以下に示す。
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、本明細書に記載される配列番号３５で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含み、本発明の抗原ドメインで用いるための少なくとも一つの抗原を含む。
ＩＬ１３Ｒアルファ２のいくつかのエピトープは当業者に公知である。好ましいＩＬ１３Ｒアルファ２エピトープは、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体で構成され、以下のエピトープを含む（以下に示すエピトープ配列は、上記のＩＬ１３Ｒアルファ２配列の断片であり、したがって、下線を引いた上記のＩＬ１３Ｒアルファ２配列に示されている；以下のエピトープ配列は、１つのエピトープをいうこともあれば、複数の（重複する）エピトープをいう場合もある）：
ＬＰＦＧＦＩＬ
［配列番号３６］
したがって、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、配列番号３６で表されるアミノ酸配列を含む。
ＫＯＣ１
インスリン様成長因子２ ｍＲＮＡ結合タンパク質３（ＩＧＦ ２ ＢＰ ３）、ＩＭＰ ３、ＫＯＣ１、ＶＩＣＫＺ ３としても知られるＫＯＣ１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｏ ００４２５）は、ｍＲＮＡ結合タンパク質である。しかし、発現データは入手できず、その配列は以下に示すとおりである。
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、本明細書に記載される配列番号３７で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含み、本発明の抗原ドメインで用いるための少なくとも一つの抗原を含む。
ＴＯＭＭ３４
ＴＯＭＭ３４（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ １５７８５）は前駆体タンパク質のミトコンドリアへの取り込みに関与する。そのエピトープの多くは当業者に知られており、以下に示すアミノ酸配列から選択されてよい。
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、本明細書に記載される配列番号３８で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含み、本発明の抗原ドメインで用いるための少なくとも一つの抗原を含む。
ＲＮＦ４３
ＲＮＦ４３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｑ ６８ ＤＶ ７）はＲＩＮＧ型Ｅ ３ユビキチンリガーゼであり、膜貫通ドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン、外部ドメイン、及び細胞質ＲＩＮＧドメインを含むと予測されている。ＲＮＦ４３はＷｎｔシグナル伝達を負に調節すると考えられており、ＲＮＦ４３の発現はフリズル受容体のユビキチン化の増加、細胞内分布の変化をもたらし、これらの受容体の表面レベルの低下をもたらす。そのエピトープの多くは当業者に知られており、ＲＮＦ４３のアミノ酸配列は以下のように示されている。
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、本明細書に記載される配列番号３９で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含み、本発明の抗原ドメインで用いるための少なくとも一つの抗原を含む。
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）／血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ １５６９２）は、もともと血管透過性因子（ＶＰＦ）として知られており、血管新生と血管新生を刺激する細胞によって産生されるシグナルタンパク質である。血液循環が不十分な場合に組織への酸素供給を回復するシステムの部分である。ＶＥＧＦの正常な機能は、胚発生中の新しい血管、損傷後の新しい血管、運動後の筋肉、そして閉塞した血管を迂回するための新しい血管（側副循環）を作り出すことである。ＶＥＧＦ（ＶＥＧＦＲ）の受容体には、主にＶＥＧＦＲ１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ １７９４８）、ＶＥＧＦＲ２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ ３５９６８）、ＶＥＧＦＲ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ ３５９１６）の３つのサブタイプがある。ここでは、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２及びＶＥＧＦＲ３の配列を参照により援用する。
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ １７９４８、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ ３５９６８）及びＶＥＧＦＲ３（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ ３５９１６）で表されるアミノ酸配列、又はこれらの配列の断片又はその配列変異体を含み、本発明の抗原ドメインで用いるための少なくとも１つの抗原を含む。
ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニット（βｈＣＧ）
ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）は、着床後の胚によって産生されるホルモンである。あるがん腫瘍はこのホルモンを産生する；そのため、患者が妊娠していないときに濃度の上昇が測定された場合は、がんの診断につながりうる。ｈＣＧは、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及びｈＣＧに特有のβ（β）サブユニットと同一のα（アルファ）サブユニットであるヘテロ二量体である。ｈＣＧゴナドトロピンのβサブユニット（β－ｈＣＧ）は１４５個のアミノ酸を含み、６つの高度に相同な遺伝子によってコードされている。
ＥｐＣＡＭ（ＥｐＣＡＭ）
ＥｐＣＡＭ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ １６４２２）は、細胞接着を仲介する糖タンパク質である。ＥｐＣＡＭのアミノ酸配列を以下に示す。
すなわち、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、本明細書に記載されている配列番号４０で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含む。
ＥｐＣＡＭのいくつかのエピトープは当業者に公知である。本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体で構成されることが好ましいＥｐＣＡＭエピトープは、以下のエピトープ（以下に示すエピトープ配列は、上記のＥｐＣＡＭ配列の断片であり、したがって、下線を引いた上記のＥｐＣＡＭ配列に示されている；以下のエピトープ配列は、１つのエピトープをいうこともあれば、複数の（重複する）エピトープをいう場合もある）を含む。
ＧＬＫＡＧＶＩＡＶは、
［配列番号４１］
すなわち、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、本明細書に記載されている配列番号４１で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含む。
ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）
ＨＥＲ２はＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）ファミリーに属する。多くのＨＬＡ－Ａエピトープが当業者に公知である。ＨＥＲ２のアミノ酸配列を以下に示す。
すなわち、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の好ましい複合体は、本明細書に記載されている配列番号４２で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含む。上記のように、ＨＥＲ２の適当ながん／腫瘍エピトープは文献から公知であるか、例えばｖａｎ ｄｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ Ｐ，Ｓｔｒｏｏｂａｎｔ Ｖ，Ｖｉｇｎｅｒｏｎ Ｎ，Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅ Ｂ．Ｐｅｐｔｉｄｅ ｄａｔａｂａｓｅ：Ｔ ｃｅｌｌ－ｄｅｆｉｎｅｄ ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎ ２０１３；ＵＲＬ：ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｏｒｇ／ｐｅｐｔｉｄｅ／：を用いることによって同定されてよい。ここでは、ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識されるヒト腫瘍抗原は、その発現パターンに基づいて、又はデータベース（ＴＡＮＴＩＧＥＮ ｖｅｒｓｉｏｎ １．０，Ｄｅｃ １，２００９；ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｂｙ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｃｏｒｅ ａｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｄａｎａ－Ｆａｒｂｅｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ；ＵＲＬ：ｃｖｃ．ｄｆｃｉ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ｔａｄｂ／）から、大きく４つの群に分類される。
ＷＴ１
ＷＴ１（ウィルムス腫瘍タンパク質、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ １９５４４）は、細胞の発生と細胞の生存に重要な役割を果たす転写因子である。ＷＴ１をコードする遺伝子は複雑な構造を特徴とし、１１番染色体に位置する。細胞の成長と分化に関与し、体の機能の連続した段階に強い影響を与える。ＷＴ１遺伝子は、例えば、多くの異なる変異を受ける可能性があり、また、変異なしに過剰発現する可能性もある。ウィルムス腫瘍等の疾患の分子基盤は、先天性ＷＴ１変異であるが、この遺伝子の体細胞変異は、急性及び慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、及び急性リンパ性白血病として他のいくつかの血液腫瘍でも起こる。変異を伴わないこの遺伝子の発現増加は、白血病及び固形腫瘍で観察される。ＷＴ１のアミノ酸配列を以下に示す：
すなわち、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）の好ましい複合体は、本明細書に記載される配列番号４３で表されるアミノ酸配列、又はその断片又は変異体を含み、本発明の抗原ドメインで用いるための少なくとも一つの抗原を含む。
好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ及びＩＬ１３Ｒアルファ２からなる群から選択される抗原のエピトープである、少なくとも一つの腫瘍エピトープを含む。より好ましくは、本発明で用いられる複合体は、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ及びＩＬ１３Ｒアルファ２からなる群から選択される抗原のエピトープである、少なくとも一つの腫瘍エピトープを含む。これらの抗原は、結腸直腸がんの症状において特に有用である。また、本発明で用いるための複合体は、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ及びＩＬ１３Ｒアルファ２からなる群から選択される少なくとも１つの腫瘍抗原、又はその断片、又は腫瘍抗原の配列変異体又はその断片の配列変異体を含むことが好ましい。また、本発明で用いるための複合体は、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ及びＩＬ１３Ｒアルファ２からなる群から選択される少なくとも１つの腫瘍抗原、又はその断片の配列変異体を含むことが好ましい。
好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含み、これは、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ、ＭＡＧＥ－Ａ３及びＩＬ１３Ｒアルファ２からなる群から選択される抗原のエピトープであり、例えば、配列番号 ４８、５０、５１、２２、２６、２７、３１、４４及び３６のいずれかによるエピトープである。好ましくは、本発明で用いられる複合体は、少なくとも１つの腫瘍エピトープを含み、これは、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＩＬ１３Ｒアルファ２及びＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープであり、例えば、配列番号 ４１、２０、２１、２２、２６、２７、３１、４４、３６、１６及び１７のいずれかによるエピトープである。より好ましくは、少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ及びＭＡＧＥ－Ａ３からなる群から選択される抗原のエピトープであり、例えば、配列番号 ４８、２０、２１、２２、２６、２７、３１及び４４のいずれかによるエピトープである。より好ましくは、少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ、ＭＡＧＥ－Ａ３及びＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープであり、例えば、配列番号 ４１、２０、２１、２２、２６、２７、３１、４４、１６及び１７のいずれかによるエピトープである。さらに好ましくは、少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン及びＣＥＡからなる群から選択される抗原のエピトープであり、例えば、配列番号 ４１、２０、２１、２３、２６及び２７のいずれかによるエピトープである；さらに好ましくは、少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ及びＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープであり、例えば、配列番号 ４１、２０、２１、２２、２６、２７、１６及び１７のいずれかによるエピトープである；そして最も好ましくは、少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＥｐＣＡＭ、サバイビン、ＣＥＡ及びＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープであり、例えば、配列番号４１、２２、２６、２７、１６及び１６のいずれかによるエピトープである。
好ましい実施形態では、本明細書に記載される本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥ、ＡＳＣＬ２、及びＮＹ－ＥＳＯ－１からなる群から選択される抗原のエピトープであり、好ましくは、本明細書に記載される本発明のワクチンの抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥ、ＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープであり、好ましくは、本明細書に記載される本発明のワクチンの抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥであり、本明細書に記載される本発明のワクチンの抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＡＳＣＬ２からなる群から選択される抗原のエピトープであることが好ましく、本明細書に記載される本発明のワクチンの抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＡＳＣＬ２、ＰＲＡＭＥからなる群から選択される抗原のエピトープであることが好ましく、本明細書に記載される本発明のワクチンの抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＵＣ－１、ＮＹ－ＥＳＯ－１からなる群から選択される抗原のエピトープであることが好ましく、本明細書に記載される本発明のワクチンの抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＡＳＣＬ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１である。一実施形態では、本発明のワクチンの抗原ドメインは、抗原ＭＡＧＥ－Ａ３、ＡＳＣＬ２、ＭＵＣ－１、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１の少なくとも１つのエピトープを含むことがより好ましい。
好ましくは、本発明のワクチンの抗原ドメインは、
ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｃ）サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｅ）ＫＲａｓの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｇ）ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を好ましくは、含む。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、好ましくは、
ｉ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｉｉ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２０で表されるエピトープ及び配列番号２１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｉｉｉ）サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｉｖ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｖ）ＫＲａｓの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号３１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｖｉ）ＭＡＧＥ－Ａ３（例えば、配列番号４４で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、
ｉ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｉｉ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２０で表されるエピトープ及び配列番号２１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｉｉｉ）サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｉｖ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｖ）ＫＲａｓの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号３１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｖｉ）ＭＡＧＥ－Ａ３（例えば、配列番号４４で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、
ｖｉｉ）ＡＳＣＬ２（例えば、配列番号１６で表されるエピトープ及び配列番号１７で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、好ましくは、
ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；
ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；
サバイビンの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；
ＣＥＡの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；
ＫＲａｓの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；及び／又は
ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体、を含む。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、好ましくは、
ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；
ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；
サバイビンの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；
ＣＥＡの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；
ＫＲａｓの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；
ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；及び／又は
ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体、を含む。
本明細書で用いられる用語抗原の「断片」は、抗原の少なくとも１０個の連続したアミノ酸、好ましくは、抗原の少なくとも１５個の連続したアミノ酸、より好ましくは、抗原の少なくとも２０個の連続したアミノ酸、さらにより好ましくは、抗原の少なくとも２５個の連続したアミノ酸、そして最も好ましくは、抗原の少なくとも３０個の連続したアミノ酸を含む。したがって、ＥｐＣＡＭ（配列番号４０）の断片は、ＥｐＣＡＭの少なくとも１０個の連続したアミノ酸、好ましくは、ＥｐＣＡＭの少なくとも１５個の連続したアミノ酸、より好ましくは、ＥｐＣＡＭの少なくとも２０個の連続したアミノ酸、さらにより好ましくは、ＥｐＣＡＭの少なくとも２５個の連続したアミノ酸、そして最も好ましくは、ＥｐＣＡＭの少なくとも３０個の連続したアミノ酸を含む。ＭＵＣ－１（配列番号１９）の断片は、ＭＵＣ－１の少なくとも１０個の連続したアミノ酸、好ましくは、ＭＵＣ－１の少なくとも１５個の連続したアミノ酸、より好ましくは、ＭＵＣ－１の少なくとも２０個の連続したアミノ酸、さらにより好ましくは、ＭＵＣ－１の少なくとも２５個の連続したアミノ酸、そして最も好ましくは、ＭＵＣ－１の少なくとも３０個の連続したアミノ酸を含む。スルビビン（配列番号１２）の断片は、スルビビンの少なくとも１０個の連続したアミノ酸、好ましくは、スルビビンの少なくとも１５個の連続したアミノ酸、より好ましくは、スルビビンの少なくとも２０個の連続したアミノ酸、さらにより好ましくは、スルビビンの少なくとも２５個の連続したアミノ酸、そして最も好ましくは、スルビビンの少なくとも３０個の連続したアミノ酸を含む。ＣＥＡ（配列番号２４）の断片は、ＣＥＡの少なくとも１０個の連続したアミノ酸、好ましくは、ＣＥＡの少なくとも１５個の連続したアミノ酸、より好ましくは、ＣＥＡの少なくとも２０個の連続したアミノ酸、さらにより好ましくは、ＣＥＡの少なくとも２５個の連続したアミノ酸、そして最も好ましくは、ＣＥＡの少なくとも３０個の連続したアミノ酸を含む。ＫＲａｓ（配列番号３０）の断片は、ＫＲａｓの少なくとも１０個の連続したアミノ酸、好ましくは、ＫＲａｓの少なくとも１５個の連続したアミノ酸、より好ましくは、ＫＲａｓの少なくとも２０個の連続したアミノ酸、さらにより好ましくは、ＫＲａｓの少なくとも２５個の連続したアミノ酸、そして最も好ましくは、ＫＲａｓの少なくとも３０個の連続したアミノ酸を含む。そして、ＭＡＧＥ－Ａ３（配列番号１０）の断片は、ＭＡＧＥ－Ａ３の少なくとも１０個の連続したアミノ酸、好ましくは、ＭＡＧＥ－Ａ３の少なくとも１５個の連続したアミノ酸、より好ましくは、ＭＡＧＥ－Ａ３の少なくとも２０個の連続したアミノ酸、さらにより好ましくは、ＭＡＧＥ－Ａ３の少なくとも２５個の連続したアミノ酸、そして最も好ましくは、ＭＡＧＥ－Ａ３の少なくとも３０個の連続したアミノ酸を含む。さらに、ＡＳＣＬ２（配列番号１５）の断片は、ＡＳＣＬ２の少なくとも１０個の連続したアミノ酸、好ましくは、ＡＳＣＬ２の少なくとも１５個の連続したアミノ酸、より好ましくは、ＡＳＣＬ２の少なくとも２０個の連続したアミノ酸、さらにより好ましくは、ＡＳＣＬ２の少なくとも２５個の連続したアミノ酸、そして最も好ましくは、ＡＳＣＬ２の少なくとも３０個の連続したアミノ酸、を含む。
当該断片の機能的配列変異体には、少なくとも７０％、少なくとも７５％、好ましくは、少なくとも８０％、より好ましくは、少なくとも８５％、さらに好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％が参照配列と同一である（アミノ酸）配列であり、当該断片に含まれるエピトープの少なくとも１つ、好ましくは、すべてのエピトープのエピトープ機能が維持される。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。より好ましくは、当該複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、好ましくは、
ｖｉｉｉ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１によるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｉｘ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２０で表されるエピトープ及び配列番号２１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ｘｉ）ＭＡＧＥ－Ａ３（例えば、配列番号４４で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
つまり、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。より好ましくは、当該複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、好ましくは、
ｘｉｉ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１によるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｉｉｉ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２０で表されるエピトープ及び配列番号２１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｉｖ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ｘｖ）ＫＲａｓの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号３１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体、を含む。
すなわち、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び、
ｅ）ＫＲａｓの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。より好ましくは、当該複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、好ましくは、
ｘｖｉ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｖｉｉ）サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｖｉｉｉ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ｘｉｘ）ＭＡＧＥ－Ａ３（例えば、配列番号４４で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
すなわち、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｃ）サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を好ましくは、含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。より好ましくは、当該複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
ある実施形態では、前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；を含む。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、好ましくは、
ｘｘ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２０で表されるエピトープ及び配列番号２１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｘｉ）サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ｘｘｉｉ）ＭＡＧＥ－Ａ３（例えば、配列番号４４で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
すなわち、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｃ）サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。より好ましくは、当該複合体は、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
より好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、
ｘｘｉｉｉ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｘｉｖ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２０で表されるエピトープ及び配列番号２１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｘｖ）サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｘｘｖｉ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体、を含む。
すなわち、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｃ）サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。より好ましくは、当該複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
より好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、
ｘｘｖｉｉ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｘｖｉｉｉ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２０で表されるエピトープ及び配列番号２１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｘｉｘ）サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｘｘ）ＡＳＣＬ２（例えば、配列番号１６で表されるエピトープ及び配列番号１７で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｘｘｘｉ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
より好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、
ｘｘｘｉｉ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｘｘｉｉｉ）サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｘｘｉｖ）ＡＳＣＬ２（例えば、配列番号１６で表されるエピトープ及び配列番号１７で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｘｘｘｖ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；を含む。
すなわち、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｃ）サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｇ）ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
特に、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、
ｘｘｘｖｉ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｘｘｖｉｉ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２０で表されるエピトープ及び配列番号２１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｘｘｖｉｉｉ）サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ｘｘｘｉｘ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。より好ましくは、当該複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は特に好ましくは、
ｘｌ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｌｉ）サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｌｉｉ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ｘｌｉｉｉ）ＡＳＣＬ２（例えば、配列番号１６で表されるエピトープ及び配列番号１７で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は特に好ましくは、
ｘｌｉｖ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｌｖ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２０で表されるエピトープ及び配列番号２１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び、
ｘｌｖｉ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；を含む。
すなわち、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。より好ましくは、当該複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ２、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
より好ましくは、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；を含む。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は特に好ましくは、
ｘｌｖｉｉ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
ｘｌｖｉｉｉ）サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ｘｌｖｉｘ）ＡＳＣＬ２（例えば、配列番号１６で表されるエピトープ及び配列番号１７で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
さらにより好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、Ｎ末端からＣ末端方向に以下の：
ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；
サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び、
ＡＳＣＬ２（例えば、配列番号１６で表されるエピトープ及び配列番号１７で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
さらにより好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、Ｎ末端からＣ末端方向に以下の：
ｉ）配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さ（少なくとも１５アミノ酸、より好ましくは、少なくとも２０アミノ酸、さらにより好ましくは、少なくとも２５アミノ酸、最も好ましくは、少なくとも３０アミノ酸）であるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）であるその機能的配列変異体；
ｉｉ）配列番号１２で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さ（少なくとも１５アミノ酸、より好ましくは、少なくとも２０アミノ酸、さらにより好ましくは、少なくとも２５アミノ酸、最も好ましくは、少なくとも３０アミノ酸）であるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）であるその機能的配列変異体；及び、
ｉｉｉ）配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さ（少なくとも１５アミノ酸、より好ましくは、少なくとも２０アミノ酸、さらにより好ましくは、少なくとも２５アミノ酸、最も好ましくは、少なくとも３０アミノ酸）であるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）であるその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＣＥＡ、サバイビン及びＡＳＣＬ２以外の抗原又は抗原のさらなるエピトープを含まず、より好ましくは、当該複合体は、他の（腫瘍）エピトープを含まない。
好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体において、（ｉ）配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド又はその断片又は変異体のＣ末端が、（ｉｉ）配列番号１２で表されるアミノ酸配列であるペプチド又はその断片又は変異体のＮ末端に直接連結されている。また、（ｉｉ）配列番号１２で表されるアミノ酸配列であるペプチド又はその断片又は変異体のＣ末端が、（ｉｉｉ）配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド又はその断片又は変異体のＮ末端に直接連結されている。
さらにより好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、Ｎ末端からＣ末端方向に、
ｉ）配列番号２５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）であるその機能的配列変異体；
ｉｉ）配列番号２３で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）であるその機能的配列変異体；及び、
ｉｉｉ）配列番号１８で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）であるその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＣＥＡ、サバイビン及びＡＳＣＬ２以外の抗原又は抗原のさらなるエピトープを含まず、より好ましくは、当該複合体は、他の（腫瘍）エピトープを含まない。
好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体において、（ｉ）配列番号２５で表されるアミノ酸配列であるペプチド又はその変異体のＣ末端が、（ｉｉ）配列番号２３で表されるアミノ酸配列であるペプチド又はその変異体のＮ末端に直接連結されている。また、（ｉｉ）配列番号２３で表されるアミノ酸配列であるペプチド又はその変異体のＣ末端が、（ｉｉｉ）配列番号１８で表されるアミノ酸配列であるペプチド又はその変異体のＮ末端に直接連結されている。
最も好ましくは、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体は、その抗原ドメインにおいて、配列番号４５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）であるその機能的配列変異体を含む。当該複合体は、好ましくは、ＣＥＡ、サバイビン及びＡＳＣＬ２以外の抗原又は抗原のさらなるエピトープを含まず、より好ましくは、当該複合体は、他の（腫瘍）エピトープを含まない。
また、本明細書に開示された本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体が、例えば、配列番号３、４５、６、又は配列番号４、４５、７、又は配列番号５、４５、７、又は例えば、配列番号３、４５、７、又は配列番号４、４５、７、又は配列番号５、４５、７、又は、例えば、配列番号３、４５、８、又は、配列番号４、４５、８、又は配列番号５、４５、８からなってよい。あるいは、本明細書に記載される本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）は、例えば、ＴＬＲ作動薬ＡＮＡＸＡ又はその配列変異体（例：配列番号６、７）とＴＬＲ作動薬Δ３０－ＨＭＧＢ１（配列番号９）との併用を含んでよく、例えば、の第一の成分（Ｋ）の複合体は、配列番号２、４５、６、９、又は配列番号３、４５、６、９、又は配列番号４、４５、６、９、又は配列番号５、４５、６、９、又は配列番号２、４５、７、９、又は配列番号３、４５、７、９、又は配列番号４、４５、７、９、又は配列番号５、４５、７、９、又は当該配列と配列同一性が（少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％の配列同一性）７０％以上の配列で表される上記の配列のいずれかの機能的配列変異体を含んでよい。例えば、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、好ましくは、ペプチド結合を介して連結されたＮ末端からＣ末端方向の上記アミノ酸配列を含む。本発明に記載された配列は、例えば、また、個々のアミノ酸配列間のリンカー又はスペーサー配列を含んでよい。
具体的には、好ましくは、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体は、配列番号６０で表されるアミノ酸配列、又は配列同一性が少なくとも７０％、好ましくは、少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、さらに好ましくは、少なくとも８５％、さらにより好ましくは、少なくとも９０％、特に好ましくは、少なくとも９５％、最も好ましくは、少なくとも９９％であるその機能的配列変異体からなる。当該複合体は、好ましくは、ＣＥＡ、サバイビン及びＡＳＣＬ２以外の抗原又は抗原のさらなるエピトープを含まず、より好ましくは、当該複合体は他の（腫瘍）エピトープを含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、具体的には、好ましくは、
ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。より好ましくは、当該複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、具体的には、好ましくは、
ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ＡＳＣＬ２（例えば、配列番号１６で表されるエピトープ及び配列番号１７で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＣＥＡ、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、具体的には、好ましくは、
ＡＳＣＬ２（例えば、配列番号１６で表されるエピトープ及び配列番号１７で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、及び
ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体、を含む。
すなわち、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
ＣＥＡの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；及び
ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、具体的には、好ましくは、
サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ＡＳＣＬ２（例えば、配列番号１６で表されるエピトープ及び配列番号１７で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
すなわち、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
サバイビンの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；及び
ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、具体的には、好ましくは、
サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；を含む。
すなわち、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
サバイビンの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；及び
ＣＥＡの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、具体的には、好ましくは、
サバイビンの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２２で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；及び
ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；を含む。
すなわち、上記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、好ましくは、
サバイビンの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；及び
ＣＥＡの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
具体的には、好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の当該複合体は、好ましくは、
サバイビンの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；
ＣＥＡの１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体；
ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープの断片又はその機能的配列変異体、を含む。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、具体的には、好ましくは、
ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号４１で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体；を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。より好ましくは、当該複合体は、ＡＳＣＬ２、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、具体的には、好ましくは、
ＣＥＡの１つ以上のエピトープ（例えば、配列番号２６で表されるエピトープ及び配列番号２７で表されるエピトープ）又はその機能的配列変異体を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。より好ましくは、当該複合体は、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
また、本発明の第一の成分（Ｋ）（用）の複合体は、具体的には、好ましくは、
ＡＳＣＬ２（例えば、配列番号１６で表されるエピトープ及び配列番号１７で表されるエピトープ）の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、を含む。
当該複合体は、好ましくは、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＣＥＡ、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ又はＩＬ１３Ｒアルファ２のいずれのエピトープも含まない。
ラブドウイルス
ラブドウイルス科には１８属１３４種が含まれ、約１０－１６ ｋｂのネガティブセンス一本鎖ＲＮＡゲノムである（Ｗａｌｋｅ ｅｔ ａｌ．，ＩＣＴＶ Ｖｉｒｕｓ Ｔａｘｏｎｏｍｙ Ｐｒｏｆｉｌｅ：Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，９９：４４７－４４８（２０１８））。
ラブドウイルス科のメンバーを特徴づける特徴としては、以下の：長さ１００－４３０ｎｍ、直径４５－１００ｎｍの弾丸状又は桿状の粒子であり、マトリクス層と脂質エンベロープに囲まれたヘリカルヌクレオカプシドから構成され、１０．８－１６．１ｋｂのネガティブセンス一本鎖ＲＮＡであり、セグメント化されていない；構造タンパク質である核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、リンタンパク質（Ｐ）、マトリクスタンパク質（Ｍ）、糖タンパク質（Ｇ）をコードする少なくとも５つの遺伝子をコードするゲノム；うちの一つ以上があげられる。
一実施形態では、本明細書に記載される本発明のワクチンの第二の成分（Ｖ）は、組換えラブドウイルスである。つまり、第二の成分（Ｖ）のラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスは、好ましくは、組換えラブドウイルスである。本明細書で用いられる用語「組換え」とは、ラブドウイルスが自然発生ではないことをいう。
本発明のラブドウイルスは、以下の属：アルメンドラウイルス、キュリオウイルス、サイトラブドウイルス、ジコルハウイルス、エフェメロウイルス、ハパウイルス、レダンテウイルス、リッサウイルス、ノビラブドウイルス、ヌクレオラブドウイルス、ペルラブドウイルス、シグマウイルス、スプリビウイルス、スリプウイルス、チブロウイルス、トゥパウイルス、バリコサウイルス又はベシキュロウイルスに属してよい。好ましくは、本発明のラブドウイルスは、ベシキュロウイルス属に属し、例えば、本発明で用いるためのラブドウイルスは、アラゴアスベシキュロウイルス、アメリカバットベシキュロウイルス、カラジャスベシキュロウイルス、チャンディプラベシキュロウイルス、コカルベシキュロウイルス、インディアベシキュロウイルス、イスファハンベシキュロウイルス、ジュローナベシキュロウイルス、マルパイススプリングベシキュロウイルス、マラバベシキュロウイルス、モレトンベシキュロウイルス、ニュージャージーベシキュロウイルス、ペリネベシキュロウイルス、ピリーベシキュロウイルス、ラジベシキュロウイルス、ユグボグダノバックベシキュロウイルス、又はムーサウイルスのいずれかである。
好ましくは、本発明の組換えラブドウイルスは、腫瘍溶解性ラブドウイルスである。この点では、腫瘍溶解性は当業界で公知である通常の意味であり、ラブドウイルスががん細胞に感染して溶解（分解）する機能をいうが、非がん細胞は有意な範囲で溶解されない。
好ましくは、本発明のラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスは、複製能があり、がん細胞内で複製されうる。特に、組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスは、複製能があってよい。本発明の組換えラブドウイルスの腫瘍溶解活性は、当業者（代表的なインビトロ試験法はＭｕｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，７４（１３）、３５６７－７８，２０１４）に公知の異なるアッセイ系で試験されてよい。腫瘍溶解性ラブドウイルスは、特定の種類のがん細胞のみに感染し、溶解する場合があることを理解すべきである。また、腫瘍溶解作用はがん細胞の種類によって異なる場合がある。
好ましい実施形態では、本発明の組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルスは、ベシキュロウイルス属に属する。ベシキュロウイルス種は、主に、ゲノムの系統解析と組み合わせた血清学的手段によって定義される。宿主域や伝播機構等の生物学的特性は、属内のウイルス種を区別するためにも用いられる。このように、ベシキュロウイルス属は、完全なＬ配列から推測される最尤木によって十分に支持された明確な単系統群を形成する。
ベシキュロウイルス属内の異なる種に分類されたウイルスは、以下の特徴：Ａ）Ｌの最小アミノ酸配列の分岐が２０％である；Ｂ）Ｎの最小アミノ酸配列の分岐が１０％である；Ｃ）Ｇの最小アミノ酸配列の分岐が１５％である；Ｄ）血清学的検査で区別できる；Ｅ）は、宿主や節足動物の媒介生物の違いによって証明されるように、異なる生態学的ニッチを占めている；の１つ以上であってよい。
水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、特にＶＳＶ－ＧＰ（国際公開公報第２０１０／０４０５２６号に開示されているＬＣＭＶのＧＰがある組換えＶＳＶ）が望ましい。ＶＳＶ－ＧＰの有利な特性には、以下の：非常に強力で高速なキラー（＜８時間）；腫瘍溶解性ウイルス；全身投与可能；神経毒性を廃止して神経向性を有意に減少させる；溶解的に再生する；自然免疫の強い活性化；免疫調節カーゴと抗原のための約３ｋｂのスペース；リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）由来のアレナウイルス糖タンパク質との組換え体；野生型ＶＳＶ（ＶＳＶ－Ｇ）と比較して神経毒性が低く、中和抗体反応及び補体破壊に対する感受性が低いという点で好ましい安全性の特徴；抗ウイルス自然免疫反応（例えば、Ｉ型ＩＦＮシグナル伝達）を獲得して反応する能力がない腫瘍細胞で特異的に複製される；「健康な細胞」での不全複製は、正常組織から急速に排除される；腫瘍細胞でのウイルス複製は細胞死につながり、その結果、腫瘍関連抗原の放出、局所的な炎症、抗腫瘍免疫の誘導が起こる；１つ以上が含まれると考えられている。
本発明の組換えベシキュロウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えベシキュロウイルスは、好ましくは、水疱性口内炎アラゴアウイルス（ＶＳＡＶ）、カラジャースウイルス（ＣＪＳＶ）、チャンディプラウイルス（ＣＨＰＶ）、コカルウイルス（ＣＯＣＶ）、水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）、イスファハンウイルス（ＩＳＦＶ）、マラバウイルス（ＭＡＲＡＶ）、水疱性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）、又はピリーウイルス（ＰＩＲＹＶ）からなる群から選択され、より好ましくは、本発明の組換えベシキュロウイルスは、水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）又は水疱性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）のいずれかから選択される。
好ましい一実施形態では、本発明の組換え水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）又は水疱性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）又は水疱性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）に複製能がある。本明細書で用いられる用語「複製能のある」又は「複製能のあるウイルス」は、細胞内で複製するためにゲノム内にすべての情報を含むウイルスをいう。例えば、本発明の組換え水疱性口内炎ウイルスの複製能は、Ｔａｎｉ ｅｔ ａｌ．ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＶＩＲＯＬＯＧＹ，Ａｕｇ．２００７，ｐ．８６０１－８６１２；又はＧａｒｂｕｔｔ ｅｔ ａｌ．ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＶＩＲＯＬＯＧＹ，Ｍａｙ ２００４，ｐ．５４５８－５４６５に開示されている方法により評価することができる。
本発明の好ましい実施形態では、水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムは、配列番号８０と同一のＲＮＡ配列からなるか、又は含む。本発明の他の好ましい実施形態では、水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムは、各々のアミノ酸配列を変更せず、遺伝コードの変性によりＲＮＡゲノムの核酸が交換されるそれらの配列からなるか、又は含んでよい。本発明の他の好ましい実施形態では、水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムは、配列番号８０と同一又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のＲＮＡ配列からなるか、又は含む。
さらなる実施形態では、本発明は、水疱性口内炎ウイルスを提供し、ここで、水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムは、配列番号８０と同一又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一のＲＮＡ配列からなるか、又は含み、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする。
野生型ＶＳＶ株等の特定の野生型ラブドウイルス株は、神経毒性があると考えられていることが公知である。また、感染者は主に糖タンパク質に対する抗体価が高く、速やかに強い液性反応を起こすことが報告されている。一般にラブドウイルスの糖タンパク質Ｇを標的とする中和抗体及びＶＳＶは、ウイルスの拡散を制限し、それによってウイルスの再感染からの個人の保護を仲介しうる。しかしながら、ウイルス中和は、本明細書に記載されるワクチンに含まれる本発明の組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルスの反復適用を制限するであろう。
これらの欠点を排除するために、例えば、ラブドウイルス野生型糖タンパク質Ｇを他のウイルス由来の糖タンパク質に置換することができる。この点で糖タンパク質の置換とは、（ｉ）野生型糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子を他のウイルスの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換すること、及び／又は（ｉｉ）野生型糖タンパク質Ｇを他のウイルスの糖タンパク質ＧＰに置換することをいう。
例えば、本明細書に記載される組換えＶＳＶ、好ましくは、腫瘍溶解性組換えＶＳＶの糖タンパク質Ｇは、エンベロープがある一本鎖ＲＮＡウイルスであるフィロウイルス科に属するエボラウイルス（ＥＢＯＶ）又はその報告されている株（例：スーダン、レストン、ザイール、タイフォレスト）の糖タンパク質ＧＰに置換されてよい。
一実施形態では、ＥＢＯＶの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子は、ＥＢＯＶ株スーダン、レストン、ザイール又はタイフォレストのいずれかのアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列のいずれかと少なくとも配列同一性が８０、８５、９０又は９５％である配列をコードするが、本明細書に記載される糖タンパク質ＧＰを含む組換えＶＳＶ、好ましくは、腫瘍溶解性組換えＶＳＶの機能的特性は維持される。本明細書に記載される糖タンパク質及び各々の変異体の機能的特性を評価するための対応する方法は、例えばＪ Ｖｉｒｏｌ．２０１０ Ｊａｎ；８４（２）：９８３－９９２，ｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１４ Ｊｕｌ １；７４（１３）：３５６７－７８に開示されているように行うことができる。
一実施形態では、本明細書に記載されるＶＳＶの野生型糖タンパク質Ｇは、例えば、アレナウイルスの糖タンパク質（ＧＰ）に置換されてよい。アレナウイルス科は、現在認識されている２２のウイルス種を含む独自のアレナウイルス属からなる。アレナウイルスはエンベロープがある一本鎖ＲＮＡウイルスであり、ゲノムは大（Ｌ）と小（Ｓ）と指定された二つのＲＮＡセグメントからなる。Ｌゲノムセグメント（～約７．２ｋｂ）は、ウイルスのＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼと亜鉛結合タンパク質をコードする。Ｓゲノムセグメント（～約３．５ｋｂ）は、ヌクレオカプシドタンパク質とエンベロープ糖タンパク質を、反対の極性の非重複オープンリーディングフレームでコードする。ＳセグメントとＬセグメントの両方の遺伝子は、遺伝子間非コード領域によって分離され、１つ以上のヘアピン構成を形成する場合がある。各ＲＮＡセグメントの５’及び３’の非翻訳末端配列には、各末端に１９ヌクレオチドにわたる比較的保存された逆相補的配列がある。ヌクレオカプシド抗原はほとんどのアレナウイルスで共有され、定量的関係はアフリカのウイルスと西半球のウイルスの基本的な分裂を示す。個々のウイルスは、エンベロープ糖タンパク質に含まれるエピトープの特異性に依存する中和アッセイによって免疫学的に区別される。したがって、ＶＳＶの野生型糖タンパク質は、例えば、アレナウイルス科のメンバー、例えば、Ａｌｌｐａｈｕａｙｏ（ＡＬＬＶ）、Ａｍａｐａｒｉ（ＡＭＡＶ）、Ｂｅａｒ ｃａｎｙｏｎ（ＢＣＮＶ）、Ｃｕｐｉｘｉ（ＣＰＸＶ）、Ｆｌｅｘａｌ（ＦＬＥＶ）、Ｇｕａｎａｒｉｔｏ（ＧＴＯＶ）、Ｉｐｐｙ（ＩＰＰＹＶ）、Ｊｕｎｉｎ（ＪＵＮＶ）、Ｌａｓｓａ（ＬＡＳＶ）、Ｌａｔｉｎｏ（ＬＡＴＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎（ＬＣＭＶ）、Ｍａｃｈｕｐｏ（ＭＡＣＶ）、Ｍｏｂａｌａ（ＭＯＢＶ）、Ｍｏｐｅｉａ（ＭＯＰＶ）、Ｏｌｉｖｅｒｏｓ（ＯＬＶＶ）、Ｐａｒａｎａ（ＰＡＲＶ）、Ｐｉｃｈｉｎｄｅ（ＰＩＣＶ）、Ｐｉｒｉｔａｌ（ＰＩＲＶ）、Ｓａｂｉａ（ＳＡＢＶ）、Ｔａｃａｒｉｂｅ（ＴＣＲＶ）、Ｔａｍｉａｍｉ（ＴＡＭＶ）、又はＷｈｉｔｅｗａｔｅｒ Ａｒｒｏｙｏ（ＷＷＡＶ）の糖タンパク質に置換されてよい。
一実施形態では、本明細書に記載される組換えＶＳＶ、好ましくは、腫瘍溶解性組換えＶＳＶの糖タンパク質Ｇは、配列番号７２で表されるアミノ酸配列を含むラッサウイルスの（成熟型）糖タンパク質ＧＰ、又は配列番号７２のアミノ酸配列と配列同一性が少なくとも８０、８５、９０又は９５％である配列によって置換されてよいが、配列番号７２に記載されているアミノ酸配列をコードする糖タンパク質ＧＰを含む組換えＶＳＶ、好ましくは、腫瘍溶解性組換えＶＳＶの機能的特性は維持される。ラッサウイルス（ＬＡＳＶ）はアレナウイルス科の一員であり、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）がその原型である。
好ましい実施形態では、組換えラブドウイルス糖タンパク質Ｇは、ダンデノングウイルス（ＤＡＮＤＶ）又はモペイア（ＭＯＰＶ）ウイルスの糖タンパク質ＧＰで置換される。より好ましい実施形態では、組換えラブドウイルスは水疱性口内炎ウイルスであり、糖タンパク質Ｇは、ダンデノングウイルス（ＤＡＮＤＶ）又はモペイア（ＭＯＰＶ）ウイルスの糖タンパク質ＧＰで置換される。
ＶＳＶの野生型糖タンパク質を、本明細書で開示される上記いずれかの糖タンパク質で置換することによって提供される利点は、（ｉ）ＶＳＶ－Ｇを介した神経毒性の消失、及び（ｉｉ）（マウスで示されているような）抗体によるベクター中和の欠如である。
ダンデノングウイルス（ＤＡＮＤＶ）は、旧世界のアレナウイルスである。現在までに、当業者に公知である菌株は１つだけであり、これは糖タンパク質ＧＰを含み、本発明の組換えラブドウイルスに含まれる糖タンパク質ＧＰのドナーとして本発明内で用いることができる。本発明の組換えラブドウイルスに含まれるＤＡＮＤＶ糖タンパク質ＧＰには、６つ以上のグリコシル化部位、特に７つのグリコシル化部位がある。通常の好ましい糖タンパク質ＧＰは、Ｇｅｎｂａｎｋ番号ＥＵ １３６０３８でアクセス可能なＤＡＮＤＶに含まれる。一実施形態では、ＤＮＡＤＶの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子は、配列番号４７で表されるアミノ酸配列、又は配列番号４７のアミノ酸配列と配列同一性が少なくとも８０、８５、９０又は９５％である配列をコードするが、配列番号４７で表されるアミノ酸配列をコードする糖タンパク質ＧＰを含む組換えラブドウイルスの機能的特性は維持される。
モペイアウイルス（ＭＯＰＶ）は、旧世界のアレナウイルスである。当業者に公知である株がいくつかあり、それらは糖タンパク質ＧＰを含み、本発明の組換えラブドウイルスに含まれる糖タンパク質ＧＰのドナーとして本発明内で選択されてよい。本発明の組換えラブドウイルスに含まれるＭＯＰＶ糖タンパク質ＧＰには、６つ以上のグリコシル化部位、特に７つのグリコシル化部位がある。通常の好ましい糖タンパク質ＧＰは、Ｇｅｎｂａｎｋ番号ＡＹ ７７２１７０でアクセス可能なモペイアウイルスに含まれる。一実施形態では、ＭＯＰＶの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子は、配列番号４８で表されるアミノ酸配列、又は配列番号４８のアミノ酸配列と配列同一性が少なくとも６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０又は９５％である配列をコードするが、配列番号４８に示されるようなアミノ酸配列をコードする糖タンパク質ＧＰを含む組換えラブドウイルスの機能的特性は維持される。本明細書に記載される糖タンパク質及びその変異体の機能的特性は、例えば、Ｊ Ｖｉｒｏｌ．２０１４ Ｍａｙ；８８（９）：４８９７－９０７に開示されているような当業界で公知の方法により評価しうる。
特に好ましい実施形態では、ラブドウイルス糖タンパク質Ｇは、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰに、好ましくは、ＷＥ－ＨＰＩ株に置換される。さらに好ましい実施形態では、ラブドウイルスは、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰを、好ましくは、ＷＥ－ＨＰＩ株に置換した水疱性口内炎ウイルスである。当該ＶＳＶは、例えば国際公開第２０１０／０４０５２６号又は国際公開第２００６／００８０７４号に記載されており、「ＶＳＶ－ＧＰ」という。 提供される利点は、（ｉ）ＶＳＶ－Ｇを介した神経毒性の消失、及び（ｉｉ）（マウスで示されているような）抗体によるベクター中和の欠如である。ＬＣＭＶのエンベロープ糖タンパク質（ＬＣＭＶ ＧＰ）は、最初は前駆体ポリペプチドのＧＰ－Ｃとして発現され、これが細胞プロテアーゼによって翻訳後にＧＰ－１とＧＰ－２に処理される。ＧＰ－１は、α－ジストログリカンとして同定されているＬＣＭＶの細胞受容体と相互作用する。ＧＰ－２は融合ペプチドと膜貫通ドメインを含む。
リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰにはＧＰ１とＧＰ２がある。本発明は、異なるＬＣＭＶ株由来の糖タンパク質を含む。特に、ＬＣＭＶ－ＧＰは、ＬＣＭＶ野生型又はＬＣＭＶ株ＬＣＭＶ－ＷＥ、ＬＣＭＶ－ＷＥ－ＨＰＩ、ＬＣＭＶ－ＷＥ－ＨＰｌｏｐｔに由来されてよい。好ましい実施形態では、ＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子は、配列番号４６で表されるアミノ酸配列であるタンパク質、又は配列番号４６のアミノ酸配列と配列同一性が少なくとも８０、８５、９０、９５％、９８％、９９％であるアミノ酸配列をコードするが、配列番号１１で表されるアミノ酸配列をコードする糖タンパク質ＧＰを含む、組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルス、より具体的には組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスの機能的特性は維持される。
好ましい実施形態では、本発明の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスは、少なくとも、ゲノム内で、配列番号４９に記載されたアミノ酸配列又は配列番号４９と配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％である機能的変異体を含む水疱性口内炎ウイルス核タンパク質（Ｎ）、配列番号５０に記載されたアミノ酸配列又は配列番号５０と配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％である機能的変異体を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号５１に記載されたアミノ酸配列又は配列番号５１と配列同一性が少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％である機能的変異体を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５２に記載されたアミノ酸配列又は配列番号５２と配列同一性が少なくとも８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％、８０％である機能的変異体を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）をコードする。
前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスが、水疱性口内炎ウイルス核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、リンタンパク質（Ｐ）、マトリクスタンパク質（Ｍ）及び請求項２２～５４のいずれか一項に記載の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープをゲノム内にコードしており、水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換され、及び／又は糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換されており、かつ
核タンパク質（Ｎ）は、配列番号４９で表されるアミノ酸又は配列番号４９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％同一のアミノ酸で表される機能的変異体を含み、
リンタンパク質（Ｐ）は、配列番号５０で表されるアミノ酸又は配列番号４９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％同一のアミノ酸で表される機能的変異体を含み、
大型タンパク質（Ｌ）は、配列番号５１で表されるアミノ酸又は配列番号４９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％同一のアミノ酸で表される機能的変異体を含み、かつ、
マトリクスタンパク質（Ｍ）は、配列番号５２で表されるアミノ酸又は配列番号４９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％同一のアミノ酸で表される機能的変異体を含む。
例えば、上記の機能的変異体は、水疱性口内炎ウイルスの核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、リンタンパク質（Ｐ）、マトリクスタンパク質（Ｍ）、又は糖タンパク質（Ｇ）の基本的な機能を失わずに、これらの配列を修飾する。本明細書で用いられる機能的変異体は、その基本的な機能又は活性の全部又は部分が保持されている。例えば、プロテインＬはポリメラーゼであり、ウイルスの転写と複製の際に不可欠な機能がある。その機能的変異体は、当該機能の少なくとも部分を保持しなければならない。基本的な機能又は活性を保持するための優れた指標は、これらの機能的変異体を含む、腫瘍細胞を複製して感染させることができるウイルスの生産が成功することである。ウイルスの産生、及び腫瘍細胞における感染と複製の検査は、当業者（代表的なインビトロ試験法はＭｕｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，７４（１３）、３５６７－７８，２０１４）に公知の異なる分析システムで検査されうる。すなわち、本発明のワクチンは、本明細書に記載されるウイルス核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、リンタンパク質（Ｐ）、マトリクスタンパク質（Ｍ）又は糖タンパク質（Ｇ）配列をゲノムにコードする組換え水疱性口内炎ウイルス（Ｖ）を含んでよい。
本明細書に記載される本発明の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスは、本明細書に記載される本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインのアミノ酸配列を含む第二の抗原ドメインをゲノムにコードする。特に、本明細書に記載される本発明の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスのゲノムにコードされる抗原ドメインは、本明細書に記載される第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインと同一のアミノ酸配列を含む。例えば、組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスに関連して本明細書に開示される抗原ドメイン及び各々のアミノ酸配列は、本発明の前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは同一のアミノ酸配列の抗原ドメインを含むこと、又は、本発明の第一の成分（Ｋ）の関連において開示された抗原ドメインが、本明細書に記載される本発明の第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインと同一のアミノ酸配列の抗原ドメインを含むことを条件とする。
結腸直腸がん、乳がん又は膵臓がん等、本明細書に記載されるがんの種類に関連する多数の異なる抗原又は抗原エピトープが、例えば、異なる抗原又は抗原エピトープのサブセット、特に本明細書に記載される第一の成分（Ｋ）の抗原ドメイン等の異なる抗原ドメインによって構成されうる結腸直腸がん、乳がん又は膵臓がんの関連において相互に補完するサブセット、及び本発明の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスの抗原ドメインに分配されうることが理解される。
すなわち、本明細書に開示された第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインと、本明細書に開示された組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルス又は組換えベシキュロウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えベシキュロウイルスによってコードされる抗原ドメインがともに、少なくとも一つの同一の抗原又は抗原エピトープを含み、それにより、本発明の第一の成分の複合体の抗原ドメイン及び／又は本発明の組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルス、又は組換えベシキュロウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えベシキュロウイルスの抗原ドメインが、配列が非同一のさらなる抗原又は抗原エピトープを、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０含む。本明細書で用いられる用語「非同一」は、各々の抗原又は抗原エピトープのアミノ酸の差異が１０％、１５％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、又は７０％を超える配列をいう。例えば本明細書に記載される２つの抗原又は抗原エピトープ間の相対的な配列の差異は、本明細書に記載される「ＢＬＡＳＴ」アルゴリズムを用いて決定されてよい。
したがって、ある実施形態では、本明細書に記載される第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインと、組換えベシキュロウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えベシキュロウイルスのゲノムにコードされている抗原ドメインがともに、配列が同一である少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを構成し、それにより、第一の成分（Ｋ）の複合体及び／又は組換えベシキュロウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えベシキュロウイルス、好ましくは、小胞性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）又は小胞性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）の抗原ドメインが、さらに、本明細書に記載されるような非同一の１、２、３、４、５、６つ以上の抗原又は抗原エピトープを構成する。
ある実施形態では、本明細書で開示されているように、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインと、組換えベシキュロウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えＶＳＶのゲノムにコードされている、第一の成分の複合体の抗原ドメインに含まれている少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープが、配列が同一であることを条件として、組換えベシキュロウイルスのゲノムにコードされている抗原ドメインは、本明細書で開示されているように、非同一である１、２、３、４つ以上の抗原又は抗原エピトープを構成する。
例えば、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインと組換えベシキュロウイルスの抗原ドメイン、好ましくは、腫瘍溶解性組換えベシキュロウイルスのインディアナ口内炎ウイルスの抗原ドメインは、１つの抗原又は抗原エピトープを構成し、その配列は、１、２、３、４、５、６つ以上のアミノ酸置換を含むか、例えば、対応する抗原ドメインの各々の配列と約８０％同一であり、好ましくは、約８５％同一であり、より好ましくは、約９０％、より好ましくは、９５％、又は９８％同一である。
特に好ましくは、本明細書に記載される本発明の組換えベシキュロウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えベシキュロウイルスは、そのゲノム中に配列番号４５又は配列番号５９からなるアミノ酸配列を含む少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープをコードする。
本発明のワクチン又はキットは、治療用であってよい。一実施形態では、本明細書に記載される本発明のワクチン／キットは、哺乳動物における細胞毒性免疫応答を調節するためのものであり、好ましくは、腫瘍又は腫瘍性疾患に罹患し、それが必要な患者に用いられる。本明細書で用いられる用語「細胞毒性免疫応答」は、ＴＣ、細胞傷害性Ｔリンパ球、ＣＴＬ、Ｔキラー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞又はキラーＴ細胞としても知られる少なくとも１つ以上の細胞傷害性Ｔ細胞をいい、例えば、感染した細胞（特にウイルス）、又は、例えば、がん細胞、腫瘍細胞等、他の方法で損傷された細胞を殺傷する（例えば、Ｈａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ２０１７純；３８（６）：４３２－４４３を参照。）。より具体的には、本明細書に記載される本発明のワクチン／キットは、例えば腫瘍又は腫瘍性疾患に罹患し、それが必要な患者等の、哺乳類の腫瘍に対する細胞毒性免疫応答を調節するために用いられる。
好ましくは、本発明のワクチン／キットは、トリプルネガティブ乳がんを含む乳がん、胆道がん；膀胱がん；膠芽腫や髄芽腫を含む脳腫瘍；子宮頸がん；絨毛がん；結腸がん；子宮内膜がん；食道がん；胃がん；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、虫垂がん、胆管がん、カルチノイド腫瘍、消化管結腸がん、肝外胆管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、大腸がん又は転移性大腸がん、急性リンパ性及び骨髄性白血病を含む血液腫瘍；Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病・リンパ腫；有毛細胞白血病；慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫；ＡＩＤＳ関連白血病、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫；ボーエン病、パジェット病等を含む上皮内腫瘍；肝臓がん；非小細胞肺がんを含む肺がん、ホジキン病を含むリンパ腫、リンパ球性リンパ腫；神経芽腫；膠芽腫、扁平上皮がんを含む口腔がん；上皮細胞、間質細胞、生殖細胞、間葉細胞由来を含む卵巣がん；膵臓がん；前立腺がん；直腸がん；平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫及び骨肉腫等の肉腫；黒色腫、メルケル細胞がん、カポジ肉腫、基底細胞がん、扁平上皮がん等の皮膚がん；セミノーマ、非セミノーマ（奇形腫、絨毛がん）、間質腫瘍、胚細胞腫瘍等の胚性腫瘍を含む精巣がん；甲状腺腺がん、髄様がんを含む甲状腺がん；腺がん、ウィルムス腫瘍を含む腎がんに対して、より好ましくは、大腸がん、又は転移性大腸がん、膵臓腺がんを含む膵がん、及び、トリプルネガティブ乳がんを含む乳がんに対して、さらに好ましくは、大腸がん、又は転移性大腸がんに対して、細胞毒性免疫応答を調節するために用いられ、かつ、これにより大腸がん又は転移性大腸がんは、本明細書に記載されるＴＭＮシステムによるすべての細胞型及びステージを含む。
すなわち、本発明はまた、複合体を含む第一の成分（Ｋ）を提供し、ここで、前記複合体は、以下の：
（ｉ）細胞透過性ペプチド；
（ｉｉ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメイン；及び
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬、
を含み、ここで、前記ｉ）～ｉｉｉ）は共有結合しており、治療用であり、ここで、第一の成分（Ｋ）は、ラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスを含む第二の成分（Ｖ）と併用投与される。
すなわち、本発明は、ラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルス治療用の腫瘍溶解性ラブドウイルスを含む第二の成分（Ｖ）も提供し、ここで、第二の成分（Ｖ）は、複合体を含む第一の成分（Ｋ）と併用投与され、ここで、前記複合体は、以下の：
（ｉ）細胞透過性ペプチド；
（ｉｉ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメイン；及び
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬、
を含み、ここで、前記ｉ）～ｉｉｉ）は共有結合する。
上記のワクチンの第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）の詳細な説明は、各々適用される。特に、第二の成分（Ｖ）のラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスは、第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメイン、又は少なくとも１つの抗原（断片）又はその抗原エピトープをコードされてよい。つまり、少なくとも１つの対応する抗原（断片）又はエピトープは、（１）第一の成分（Ｋ）の複合体に含まれ、（２）第二の成分（Ｖ）のラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスによって（例えば、ゲノムにおいて）コードされることができる。ワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）に関するさらなる詳細は適宜適用される。さらに、ワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）の治療上の使用及び投与に関する詳細が適宜適用される。
特に、本明細書に記載される第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）の「併用（組み合わせ）」とは、通常、本明細書に記載される第一の成分（Ｋ）による処理と、本明細書に記載される第二の成分（Ｖ）による処理が組み合わされていることを意味する。つまり、１つの成分（第一又は第二）が他の成分と同じ日に投与されていなくても、その治療スケジュールは絡み合っている。特に、一方、例えば第一の成分を最初に（「プライム」として）投与してもよく、他方、例えば第二の成分を後で（「ブースト」として）投与してよい。例えば、「プライム」から数日又は数週間後に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０等に投与してよい。これにより、通常、プライムとブーストの間隔は、強い免疫反応が見られるように選択される。ある実施形態では、第一の成分（Ｋ）及び／又は第二の成分（Ｖ）を繰り返し投与してよい。これに関連して、「プライム」成分（例えば、第一の成分（Ｋ））は、「ブースト」成分（例えば、第二の成分（Ｖ））の投与後に再び投与されてよい。したがって、第一の成分（Ｋ）及び／又は第二の成分（Ｖ）の投与を少なくとも２回繰り返すことができる。
一実施形態では、例えば本発明のワクチン（用）の第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、各々少なくとも１回、哺乳類、好ましくは、腫瘍又は腫瘍性疾患に罹患し、それが必要なヒトに投与される。したがって、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）は、本明細書に記載される腫瘍、がん又は腫瘍性疾患に罹患したヒト又はそれが必要な患者に少なくとも１回投与され、その後、ワクチンの第二の成分（Ｖ）が投与される。例えば、本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、少なくとも１回、２回、３回、又は４回以上投与されうる。
本明細書に記載される本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、Ｋ－Ｖ又はＶ－Ｋの順に投与されうるが、本明細書で用いられる用語「Ｋ－Ｖ」とは、第一の成分（Ｋ）の投与に続いて、本明細書に記載されるワクチンの第二の成分（Ｖ）の投与をいう。しかし、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）を用いたプライムワクチン接種の後に、第二の成分（Ｖ）を用いたブーストを行うと、例えば、多エピトープＣＤ８ ＣＴＬ及びＣＤ４ Ｔｈ細胞によって評価されるように、より強い免疫応答が得られることが見出された。
本発明の用途のワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、第一の成分（Ｋ）の後に第二の成分（Ｖ）を投与するという順序で投与されることが特に好ましい。
本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）及び／又は第二の成分（Ｖ）の投与回数を増やすと、細胞傷害性Ｔ細胞反応が増強されることがわかった。特に、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）を反復して投与する場合、Ｋ－Ｖ－Ｋの順が望ましい。本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、Ｋ－Ｖ－Ｖ－Ｋ、Ｋ－Ｋ－Ｖ、Ｖ－Ｋ－Ｋ等の異なる投与スケジュールで投与されてよいが、本発明の第一の成分（Ｋ）をプライムとして使用し、その後に第二の成分（Ｖ）を用いてブーストする投与スキームは、本明細書で開示されているように、ワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）の抗原ドメインに含まれる少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープに対するＣＤ８Ｔ細胞応答を有利に増加させる結果となるため、好ましい。
上記の投与スキームは、本発明のワクチンの第一の成分Ｋのさらなる投与及び／又は反復投与を妨げるものではないことを理解すべきである。したがって、一実施形態では、本明細書に記載される本発明で用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、以下のＫ－Ｖ－Ｋ、Ｋ－Ｖ－Ｋ－Ｋ、Ｋ－Ｖ－Ｖ－Ｋ、好ましくは、Ｋ－Ｖ－Ｋ、Ｋ－Ｖ－Ｋである投与スキームのいずれかにすなわち投与されてよい。
一実施形態では、ワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、連続して投与することができ、例えば、本発明で用いるワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１日の間隔で、又は、互いに約５、６、７、８、９、１０日から約１１、１２、１３、１４、１５、１６、１９、２０、１９、２０日の間隔で、又は互いに約１１、１２、１３、１４日から約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１日の間隔、で投与される。例えば、本明細書に記載される発明で用いる第一の成分Ｋを第０日に投与し、その後、発明の第二の成分（Ｖ）を２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１８日、１９日、２０日、２１日後に投与してよい。第二の成分（Ｖ）、すなわち、本明細書に記載される組換え水疱性口内炎ウイルスは、発明の第一の成分（Ｋ）の投与後、少なくとも７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１８日、２１日後に投与されることが好ましい。
一実施形態では、本発明で用いるための第一の成分（Ｋ）は、本発明の第一の成分（Ｋ）の最後の投与から約１０日、１１日、１２日、１３日、１４日後に、約２０日、２１日、２２日、２４日、２６日、２８日、３０日、３５日、４２日、４９日、又は５６日後に、少なくとも一回投与される。本発明の第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）の連続投与の間隔は、少なくとも５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、又は例えば少なくとも７日、１４日、２１日、又は２８日であることが好ましい。例えば、本発明で用いるための第一の成分（Ｋ）を０日目に投与し、７日目、１４日目、２１日目、又は２８日目に発明の第二の成分（Ｖ）を投与した後、１４日目、２１日目、２８日目、又は３５日目に発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）を２回目に投与してよい。本発明で用いるための第一の成分（Ｋ）は、例えば、追加的にブーストとして、例えば、１４日、２１日、２８日、３５日、４２日、４９日又は５６日以降、本明細書に開示される本発明の第一の成分（Ｋ）の最後の投与後に投与してよい。
例えば、本発明で用いるためのワクチンは、以下の投与スキームにすなわち投与することができ、「Ｋ」は本発明に開示された本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）を示し、「Ｖ」は本発明のワクチンの２番目の成分（Ｖ）を示す。
（１）０日目：Ｋ、７日目：Ｖ、１４日目：Ｋ、２１日目：Ｋ
（２）０日目：Ｋ、１４日目：Ｖ、２１日目：Ｋ、２８日目：Ｋ
（３）０日目：Ｋ、１４日目：Ｖ、２８日目：Ｋ、３５日目：Ｋ
（４）０日目：Ｋ、１４日目：Ｖ、２８日目：Ｋ、４２日目：Ｋ
（５）０日目：Ｋ、２１日目：Ｖ、２８日目：Ｋ、３５日目：Ｋ
（６）０日目：Ｋ、２１日目：Ｖ、３５日目：Ｋ、４２日目：Ｋ
（７）０日目：Ｋ、２８日目：Ｖ、３５日目：Ｋ、４９日目：Ｋ
（８）０日目：Ｋ、２８日目：Ｖ、３５日目：Ｋ、５６日目：Ｋ
（９）０日目：Ｋ、２１日目：Ｖ、２８日目：Ｋ、３５日目：Ｖ、４２日目：Ｋ
ある実施形態では、本発明に用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）は、投与スケジュールＫ－Ｖ－Ｋにすなわち本発明に用いるためのワクチンを患者に最初に接種した後、それが必要な患者に維持療法として投与されてよい、例えば、本発明に用いるための第一の成分（Ｋ）は、次の投与スケジュールにすなわち投与されてよい：Ｋ－Ｖ－Ｋ－Ｋｎ、ここで、ｎは１から２０までの整数であり、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９は、本発明に開示された本発明に用いるための第一の成分Ｋの投与回数を示しており、これにより、Ｋｎの投与とＫｎ＋１の投与との間の時間間隔は、約７日、１４日、２１日、２８日から約３５日、４２日、６０日、７０日、８０日、１８日、１９日、２０日、又は約１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日から約９０日、１２０日までであり、投与スキームＫ－Ｖ－Ｋによる投与が上記のように開示されている。
一実施形態では、本発明は、本発明の第一の成分（Ｋ）又は第一の成分（Ｋ）の複合体を含む第一の医薬組成物を提供する。本明細書で用いられるように、本明細書に記載される本発明の第一の成分（Ｋ）は、ヒト又は動物、好ましくは、ヒトへの投与に適した医薬組成物に製剤化されたＣＰＰ、抗原ドメイン及びＴＬＲペプチド作動薬を含む、本明細書に記載される本発明の複合体を含む医薬組成物をいうこともできる。通常の製剤は、例えば、本明細書に記載される本発明の複合体と、生理的に許容される担体、賦形剤又は安定剤とを、水溶液又は水性又は非水性懸濁液の形で混合することによって調製されてよい。担体、賦形剤、修飾剤又は安定剤は、用いられる用量と濃度では無毒である。それらには、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、その他の無機酸又は有機酸及びそれらの塩等の緩衝系；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化物質；オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド等の防腐剤；ヘキサメトニウム塩化物；ベンザルコニウム塩化物、ベンゼトニウム塩化物；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチルパラベンやプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；とｍ－クレゾール；血清アルブミン、ゼラチン、免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドンやポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン等のアミノ酸；単糖、二糖、オリゴ糖又は多糖、及びグルコース、マンノース、ショ糖、トレハロース、デキストリン又はデキストランを含むその他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトールやソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩を形成する対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；及び／又はＴＷＥＥＮ（商標）ＴＭ（ポリソルベート）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）ＴＭ又は脂肪酸エステル、脂肪酸エーテル又は糖エステル等のイオン性又は非イオン性界面活性剤があげられる。賦形剤には、放出修飾又は吸収修飾機能があってよい。
例えば、本明細書に記載される第一の成分（Ｋ）を含む本発明の医薬組成物は、本発明の第一の成分Ｋの約０．００１ｍｇ／ｍｌ、０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０．７５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、１．５ｍｇ／ｍｌ、 ２ｍｇ／ｍｌから約２．５ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、７．５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、１５ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌまでを含んでよい。本発明の第一の成分（Ｋ）を含む本発明の第一の医薬組成物は、例えば、約１ｎｍｏｌ、１．５ｎｍｏｌ、２ｎｍｏｌ、３ｎｍｏｌ、４ｎｍｏｌ、５ｎｍｏｌから約６ｎｍｏｌ、７．５ｎｍｏｌ、１０ｎｍｏｌ、１２．５ｎｍｏｌ、１５ｎｍｏｌ、２０ｎｍｏｌ、５０ｎｍｏｌ、１００ｎｍｏｌ、１５０ｎｍｏｌ、２００ｎｍｏｌまで、約１０μｌ、２５μｌ、５０μｌ、７５μｌから約１００μｌ、１５０μｌ、２００μｌ、２５０μｌ、５００μｌ、７５０μｌ、１ｍｌ、１．５ｍｌ、２ｍｌ、２．５ｍｌ、３ｍｌ、３．５ｍｌ、４ｍｌ、４．５ｍｌ、５ｍｌ、７．５ｍｌ、又は１０ｍｌの体積で、本発明の第一の成分（Ｋ）を含んでよい。
一実施形態では、上記で開示した本発明の第一の医薬組成物は、例えば、ｐＨ４．０、ｐＨ４．５、ｐＨ５．０、ｐＨ５．５、ｐＨ６．０、ｐＨ６．５、ｐＨ７．０、ｐＨ７．５及びｐＨ８．０の約４～８のｐＨ緩衝液である。この点に関する緩衝液の例としては、ヒスチジン、リン酸塩、トリス、クエン酸塩、酢酸塩、酢酸ナトリウム、リン酸塩、コハク酸塩及び他の有機酸があげられる。緩衝液の濃度は、例えば緩衝液と製剤の望ましい等張性（例えば、再構成された製剤の）に応じて、約１ｍＭから約３０ｍＭまで、又は約３ｍＭから約２０ｍＭまでとされてよい。ある実施形態では、適当な緩衝剤は、約１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、又は５０ｍＭの濃度で存在する。
一実施形態では、本発明は、本発明のワクチンの第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスを含む第二の医薬組成物を提供する。すなわち、本発明の組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルスは、動物又はヒトへの投与を容易にするために、本発明で用いるための医薬組成物に製剤化される。通常の製剤は、例えば、水溶液又は水性又は非水性懸濁液の形で、組換えウイルスを生理学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤と混合することによって調製されてよい。担体、賦形剤、修飾剤又は安定剤は、用いられる用量と濃度では無毒である。それらには、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、その他の無機酸又は有機酸及びそれらの塩等の緩衝系；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化物質；オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド等の防腐剤；ヘキサメトニウム塩化物；ベンザルコニウム塩化物、ベンゼトニウム塩化物；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチルパラベンやプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；とｍ－クレゾール；血清アルブミン、ゼラチン、免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドンやポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン等のアミノ酸；単糖、二糖、オリゴ糖又は多糖、及びグルコース、マンノース、ショ糖、トレハロース、デキストリン又はデキストランを含むその他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトールやソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩を形成する対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；及び／又はＴＷＥＥＮ（商標）ＴＭ（ポリソルベート）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）ＴＭ又は脂肪酸エステル、脂肪酸エーテル又は糖エステル等のイオン性又は非イオン性界面活性剤があげられる。賦形剤は、放出修飾又は吸収修飾機能を有する場合もある。
一実施形態では、本明細書に記載される本発明の組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルス、好ましくは、組換えＶＳＶ、特に腫瘍溶解性組換えＶＳＶは、トリス、アルギニン及び場合によっては、クエン酸塩を含む医薬組成物に製剤化される。トリスは、好ましくは、約１ｍＭ～約１００ｍＭの濃度で用いられる。アルギニンは、好ましくは、約１ｍＭ～約１００ｍＭの濃度で用いられる。クエン酸塩は１００ｍＭまでの濃度で存在しうる。好ましい製剤は約５０ｍＭのトリスと５０ｍＭのアルギニンからなる。医薬組成物は、液体、凍結液体又は凍結乾燥された形で提供される。凍結した液体は、－７０℃～－８５℃の間の温度、及び約－１５℃、－１６℃、－１７℃、－１８℃、－１９℃、－２０℃、－２１℃、－８５℃、－２３℃、－２４℃又は約－２５℃の温度を含む、約０℃～約－２２℃の温度で保存されてよい。
本明細書に記載される本発明の組換えベシキュロウイルスを含む本発明の第二の医薬組成物の使用目的に応じて、組換えラブドウイルスのＴＣＩＤ５０によって測定された約１０８個から１０１３個の感染性粒子は、例えば、一回の他の投与、好ましくは、一回の投与によって投与されうる、ヒト又はそれが必要な患者への投与のための最初の候補投与量とされてよい。
例えば、本発明の組換えベシキュロウイルスは、ＴＣＩＤ５０で測定した約１０８，１０９、１０１０、１０１１から約１０１２、１０１３の感染性粒子、又はＴＣＩＤ５０で測定した約１０７，１０８から約１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３の感染性粒子の有効濃度で投与されてよい。例えば、最初に高い負荷用量を投与し、その後、本明細書に記載される本発明の投与スケジュールにすなわち一つ以上の低い用量を投与するか、又はその逆は、治療されるがんの種類に応じて有用であってよい。この治療法の進行は、従来の技術及び分析によって容易に監視される。本発明の組換えラブドウイルス又は組換えベシキュロウイルスの有効量又は有効標的濃度は、ＴＣＩＤ５０で表すことができる。ＴＣＩＤ５０は、例えば、Ｓｐｅａｒｍａｎ－Ｋａｅｒｂｅｒ（例：Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｖｉｒｏｌ ２０１６ Ｍａｙ １２；５（２）：８５－８６）の方法を用いて決定してよい。望ましい範囲は、１×１０８／ｍｌから１×１０１４／ｍｌのＴＣＩＤ５０の間の有効標的濃度を含む。好ましくは、有効標的濃度は約１×１０９から約１×１０１２／ｍｌであり、より好ましくは、約１×１０９から約１×１０１１／ｍｌである。一実施形態では、有効標的濃度は約１×１０１０／ｍｌである。好ましい実施形態では、標的濃度は５×１０１０／ｍｌである。他の実施形態では、有効標的濃度は約１．５×１０１１／ｍｌである。一実施例では、有効目標濃度は約１×１０１２／ｍｌである。他の実施例では、有効目標濃度は約１．５×１０１３／ｍｌである。あるいは、組換えラブドウイルスの有効濃度は、望ましくは約１０８～１０１４ベクターゲノム／ｍｌ（ｖｇ／ｍＬ）の範囲であり、例えば約１０９ｖｇ／ｍｌ、１０１０ｖｇ／ｍｌ、１０１１ｖｇ／ｍｌから約１０１２ｖｇ／ｍｌ、１０１３ｖｇ／ｍｌまでの範囲である。感染単位は、ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．；６２（６）：１９６３－７３（１９８８）に記載されたとおりである。
一実施形態では、本明細書に記載される本発明に用いるためのワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）、又は本発明の第一及び第二の医薬組成物は、各々独立して腫瘍内（「ｉ．ｔ．」）、静脈内（「ｉ．ｖ．」）、皮下（「ｓ．ｃ．」）、筋肉内（「ｉ．ｍ．」）、腹腔内（「ｉ．ｐ．」）で投与される。ただし、好ましくは、本発明に係るワクチンの第一の成分（Ｋ）は、腫瘍内（「ｉ．ｔ．」）、皮下（「ｓ．ｃ．」）、筋肉内（「ｉ．ｍ．」）、腹腔内（「ｉ．ｐ．」）、皮下（「ｓ．ｃ．」）、筋肉内（「ｉ．ｍ．」）のいずれかで投与される。好ましくは、本明細書に記載される本発明に用いるワクチンの第二の成分（Ｖ）、又は本発明の第二の医薬組成物は静脈内（ｉ．ｖ．）に投与される。
他の関連する実施形態では、組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルス、組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス、又は本明細書に記載される本発明の第二の医薬組成物を少なくとも１回腫瘍内に投与し、その後静脈内に投与する。さらに関連する実施形態では、組換えラブドウイルス、特に腫瘍溶解性組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルス組換え水疱性口内炎ウイルス、特に腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス、又は本発明の第二の医薬組成物のその後の静脈内投与は、例えば本明細書に記載される投与スケジュールに従ってよい。
組換えラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えラブドウイルス、又は組換えＶＳＶ、好ましくは、本明細書に記載される腫瘍溶解性組換えＶＳＶ、又は本発明の第二の成分（Ｖ）の有効用量は、例えば、処理される領域のサイズ、用いられるウイルス力価、投与経路、及び方法の望ましい効果に応じて、範囲内のすべての数値を含む約５０μｌ、１００μｌ、１５０μｌ、２００μｌ、２５０μｌ、３５０μｌ、５００μｌ、１ｍｌから約２ｍｌ、２．５ｍｌ、３ｍｌ、４ｍｌ、５ｍｌ、７．５ｍｌ、１０ｍｌまでの容量で送達されてよい。本発明の第二の成分（Ｖ）の腫瘍内送達については、腫瘍内に送達できる容量が限られているため、より小さい容量の送達又は投与が望ましい及び／又は有利である場合がある。本発明の第二の成分（Ｖ）の少量のみで腫瘍に注入されてよく、例えば、組換えラブドウイルス、特に腫瘍溶解性組換えラブドウイルス、又は組換えＶＳＶ、特に腫瘍溶解性組換えＶＳＶ、又は本発明の第二の成分（Ｖ）の有効量を送達するために、数回の注入で腫瘍を標的とすることが有利であろう。腫瘍に注入されてよい所定の医薬組成物の量は、例えば、所望の治療効果を達成しない不十分な量の第二の医薬組成物のみを投与されないように制限されてよい。その場合、例えば国際公開第２０１３／１０２１４４号に開示されているような組換えヒアルロニダーゼを第二の医薬組成物に含めて、本発明の第二の医薬組成物の注入量を増加させることが有利であろう。
例えば、本明細書に記載される第二の成分（Ｖ）を全身投与で注入する場合、又は本発明の第二の医薬組成物の場合、投与量は当然に大きくなるであろう。例えば、静脈内投与の場合、その量は、約２ｍｌ、３ｍｌ、４ｍｌ、５ｍｌ、６ｍｌ、７ｍｌ、８ｍｌ、９ｍｌ、１０ｍｌ、１１ｍｌ、１２ｍｌ、１３ｍｌ、１４ｍｌ、１５ｍｌ、１６ｍｌ、１７ｍｌ、１８ｍｌ、１９ｍｌ、２０ｍｌ、２５ｍｌ、３０ｍｌ、３５ｍｌ、４０ｍｌ、４５ｍｌ、５０ｍｌ、５５ｍｌ、６０ｍｌ、７５ｍｌ、８０ｍｌ、８５ｍｌ、９０ｍｌ、９５ｍｌ、９９ｍｌ、又は約１００ｍｌを含み、１ｍｌから１００ｍｌの間が好ましい。好ましい実施形態では、その量は約５ｍｌ～１５ｍｌの間、より好ましくは、約６ｍｌ、７ｍｌ、８ｍｌ、９ｍｌ、１０ｍｌ、１１ｍｌ、１２ｍｌ、１３ｍｌ、又は約１４ｍｌである。本明細書で用いられる用語「有効量」は、所望の治療効果を生じる本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）及び／又は第二の成分（Ｖ）の量又は濃度である。
好ましくは、同じ製剤、又は例えば、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）、又は本発明の第一及び第二の医薬組成物の腫瘍内投与及び静脈内投与に医薬組成物が用いられる。腫瘍内投与と静脈内投与の用量及び／又は体積比は、約１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９又は約１：２０である。例えば、用量及び／又は体積比が１：１の場合、同じ用量及び／又は体積が腫瘍内及び静脈内に投与されることを意味するのに対し、例えば、用量及び／又は体積比が約１：２０の場合、静脈内投与の用量及び／又は体積が腫瘍内投与の用量及び／又は体積の２０倍であることを意味する。腫瘍内投与と静脈内投与の用量及び／又は体積比は約１：９が望ましい。
本発明のワクチンの用量、例えば、ワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）の用量は、個人に単回又は複数回投与として投与される場合、薬物動態学的特性、被験者の状態及び特性（性別、年齢、体重、健康、サイズ）、症状の程度、同時治療、治療の頻度及び望ましい効果を含む様々な要因によって異なる。
一実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるような組換え水疱性口内炎ウイルス（「ｒＶＳＶ」）、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスを提供する。特に、本発明のｒＶＳＶは、水疱性口内炎アラゴアウイルス（ＶＳＡＶ）、カラジャースウイルス（ＣＪＳＶ）、チャンディプラウイルス（ＣＨＰＶ）、コカルウイルス（ＣＯＣＶ）、水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）、イスファハンウイルス（ＩＳＦＶ）、マラバウイルス（ＭＡＲＡＶ）、水疱性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）、又はピリーウイルス（ＰＩＲＹＶ）からなる群から選択され、好ましくは、組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス、例えば、水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）又は水疱性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）のいずれかである。
一実施形態では、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、配列番号４９、５０、５１、５２の各々の配列同一性が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％である各々の機能的変異体を含む、水疱性口内炎ウイルスの核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、リンタンパク質（Ｐ）、マトリクスタンパク質（Ｍ）をコードする。
一実施形態では、本明細書に記載されるｒＶＳＶの野生型糖タンパク質Ｇは、例えば、本明細書に記載されるアレナウイルスの糖タンパク質（ＧＰ）に置換されてよく、好ましくは、本明細書に記載されるラッサウイルス（ＬＡＳＶ）、ダンデノングウイルス（ＤＡＮＤＶ）、モペイア（ＭＯＰＶ）ウイルス、又はリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質に置換されてよく、特に本明細書に記載されるリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質に置換されてよい。
本発明のｒＶＳＶのＶＳＶ糖タンパク質Ｇは、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰに置換されてよく、好ましくは、国際公開第２０１０／０４０５２号又は国際公開第２００６／００８０７４号に開示されているＷＥ－ＨＰＩ株のＧＰに置換される。
上記に開示されている本発明のｒＶＳＶによってコードされるリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰは、ＧＰ１又はＧＰ２であってよい。本発明のｒＶＳＶの糖タンパク質ＧＰは、例えば、上記のように、ＬＣＭＶ野生型又はＬＣＭＶ株ＬＣＭＶ－ＷＥ、ＬＣＭＶ－ＷＥ－ＨＰＩ、ＬＣＭＶ－ＷＥ－ＨＰｌｏｐｔに由来される異なるＬＣＭＶ株由来の糖タンパク質を含んでよい。好ましい実施形態では、ＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子は、配列番号５３で表されるアミノ酸配列であるタンパク質、又は配列番号５３で表されるアミノ酸配列をコードする糖タンパク質ＧＰの機能的特性がある配列番号５３のアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも８０、８５、９０、９５％、９８％、９９％であるアミノ酸配列を含む機能的変異体をコードする。本発明のｒＶＳＶに用いるための糖タンパク質ＧＰは、例えば、ラッサウイルス（ＬＡＳＶ）、又は本発明に記載されたモペイアウイルス（ＭＯＰＶ）に由来しうる。
一実施形態では、本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＳＡＲＴ、メソテリン、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＷＴ１又はその断片からなる群から選択された抗原の本明細書に記載される少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープ、又は腫瘍抗原の配列変異体又はその断片の配列変異体、好ましくは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ、ＭＡＧＥ－Ａ３及びＩＬ１３Ｒアルファ２、好ましくは、少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ及びＭＡＧＥ－Ａ３からなる群から選択された抗原のエピトープであり、より好ましくは、少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン及びＣＥＡからなる群から選択された抗原のエピトープであり、さらにより好ましくは、少なくとも１つの腫瘍エピトープは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、サバイビン及びＣＥＡからなる群から選択された抗原のエピトープであり、より好ましくは、ＡＳＣＬ２、サバイビン及びＣＥＡからなる群から選択された抗原の上記開示の少なくとも１つのエピトープである。
好ましい実施形態では、上記に定義された本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム内に、スルビビンのエピトープを含む抗原ドメインをコードし、これは、好ましくは、配列番号１２で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含み、より好ましくは、配列番号２２で表されるアミノ酸配列、より好ましくは、配列番号２３で表されるアミノ酸配列、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む。
好ましい実施形態では、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム内に、好ましくは、配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体、より好ましくは、配列番号２６及び配列番号２７で表されるアミノ酸配列、より好ましくは、配列番号２５で表されるアミノ酸配列、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む抗原ドメインをコードする。
好ましい実施形態では、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、ゲノム内に、好ましくは、配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体、より好ましくは、配列番号１６及び配列番号１７で表されるアミノ酸配列、より好ましくは、配列番号１８で表されるアミノ酸配列、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含むＡＳＣＬ２のエピトープを含む抗原ドメインをコードする。
本発明の最も好ましい実施形態では、水疱性口内炎ウイルスは、配列番号８０と同一又は配列同一性が少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８５％、８４％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、８３％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％であるＲＮＡ配列を含むか、又はからなる。
本発明のさらに最も好ましい実施形態では、水疱性口内炎ウイルスは、配列番号８０と同一又は配列同一性が少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８５％、８４％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、８３％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％であるＲＮＡ配列を含むか、又はからなり、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする。
好ましい実施形態では、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、Ｎ末端からＣ末端の方向に、以下の：ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及びＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；を含む抗原をコードする。
好ましくは、第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスの第二の抗原ドメインは、そのゲノム中に、Ｎ末端からＣ末端方向に、
配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は少なくとも７０％の配列同一性があるその機能的配列変異体；
配列番号１２で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は少なくとも７０％の配列同一性があるその機能的配列変異体；及び
配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は少なくとも７０％の配列同一性があるその機能的配列変異体；を含む抗原をコードする。
すなわち、組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスは、ゲノム中に、好ましくは、Ｎ末端からＣ末端方向に、以下の：
配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるその機能的配列変異体；
配列番号１２で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるその機能的配列変異体；及び
配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるその機能的配列変異体；を含む抗原をコードする。
より具体的には、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、そのＣ末端が、配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるペプチドのＮ末端に直接連結されている、配列番号２４で表されるアミノ酸配列からなるペプチド又はその断片又は変異体を含むゲノム（第二）抗原ドメイン、をコードしており；かつ、配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるペプチド又はその断片又は変異体のＣ末端が配列番号１５で表されるアミノ酸配列からなるペプチドのＮ末端、又はその断片又は変異体に直接連結されている。
より具体的には、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に（第二の）抗原ドメインに、配列番号２５で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるその機能的配列変異体；配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるその機能的配列変異体；及び配列番号１８で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるその機能的配列変異体を含む抗原をコードする。
特に好ましくは、本明細書に記載される本発明によるｒＶＳＶは、ゲノムに、配列番号４５で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む、本発明のｒＶＳＶの（第二の）抗原ドメインをコードする。
ある実施形態では、本明細書に記載される本発明によるｒＶＳＶは、例えば、本明細書に記載される抗原ドメインを含むポリペプチドと、そのＮ末端又はＣ末端、好ましくは、そのＣ末端に共有結合されたＴＬＲペプチド作動薬をそのゲノム中にコードしてよい。例えば、本明細書に記載されるｒＶＳＶのゲノムにコードされているポリペプチドは、本明細書に記載される、配列番号４５からなるアミノ酸配列からなる抗原ドメインとＴＬＲペプチド作動薬を含み、より具体的には、ｒＶＳＶのゲノムにコードされているポリペプチドは、配列番号４５からなるアミノ酸配列からなる抗原ドメインと、配列番号７で表されるアミノ酸配列からなるＴＬＲペプチド作動薬ａｎａｘａを含む。より好ましくは、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、例えば、配列番号７１で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードしてよい。
特に好ましくは、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、以下の配列番号５４で表されるアミノ酸配列：
からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ、ＶＳＶ－Ｐ）をコードする。
さらに、好ましくは、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、以下の配列番号５５で表されるアミノ酸配列：
からなるアミノ酸を含む核タンパク質（Ｎ、ＶＳＶ－Ｎ）をコードする。
さらに、好ましくは、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、以下の配列番号５６で表されるアミノ酸配列：
からなるアミノ酸を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）をコードする。
さらに、好ましくは、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、以下の配列番号５７で表されるアミノ酸配列：
からなるアミノ酸を含む大型タンパク質（Ｌ）をコードする。
さらに、好ましくは、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、以下の配列番号５８で表されるアミノ酸配列：
からなるアミノ酸を含む糖タンパク質（ＧＰ）をコードする。
さらに、好ましくは、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、以下の配列番号５９で表されるアミノ酸配列：
からなるアミノ酸を含む抗原ドメインをコードする。
本発明のｒＶＳＶは、例えば、本発明に記載された配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９の各々の機能的配列変異体を含むことができ、これらは上記の各配列と配列同一性が少なくとも９０％、９２．５％、９５％、９７％、９８％、９９％である。本発明のｒＶＳＶは、本明細書に記載される、そのゲノム中において、配列番号５４、５５、５６、５７、５８、５９の配列変異体の１、２、３、４又は全てをコードしてよいことが理解される。
ある実施形態では、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の少なくとも１つの抗原又は抗原ドメインとアミノ酸配列が同一である、少なくとも１つの抗原又は抗原ドメインを含む抗原ドメインをコードする。本発明に記載された本発明のｒＶＳＶは、例えば、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインに含まれる対応する抗原又は抗原エピトープと配列的に非同一のさらなる１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のさらなる抗原又は抗原エピトープを、そのゲノム中にさらにコードしうる。本明細書で用いられる用語「非同一」は、各々の抗原又は抗原エピトープとアミノ酸が１０％、１５％、２０％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、又は７０％を超えて異なる配列をいう。例えば、本明細書に記載される２つの抗原又は抗原エピトープの間の相対的な配列の違いは、本明細書に記載される「ＢＬＡＳＴ」アルゴリズムを用いて決定されてよい。
ある実施形態では、本明細書に記載される本発明の組換えｒＶＳＶ、又は本明細書に記載される第一の成分（Ｋ）の複合体は、その配列が、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体又は本明細書に記載されるｒＶＳＶの抗原ドメインのいずれかの各々の抗原ドメインの配列を含まれないか非同一である、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０の抗原又は抗原エピトープにおいて同一であるが配列をさらに含む。
本発明のｒＶＳＶは、ゲノム中に、例えば、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインに含まれる上記のＣＥＡの抗原又は抗原エピトープと配列が同一である、少なくとも１つの上記開示のＣＥＡの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメインをそのゲノム中にコードするか、又は本発明のｒＶＳＶは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインに含まれるサバイビンの抗原又は抗原エピトープと配列が同一である、少なくとも１つの上記開示のサバイビンの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメインをそのゲノム中にコードする、又は、本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインに含まれるＡＳＣＬ２の抗原又は抗原エピトープと配列が同一である、本明細書に記載されるＡＳＣＬ２の抗原又は抗原エピトープを少なくとも１つ含む抗原ドメインをコードし、より好ましくは、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインに含まれるＣＥＡ及びサバイビンの抗原又は抗原エピトープと配列が同一である、本明細書に記載されるＣＥＡ及びサバイビンの抗原又は抗原エピトープを少なくとも２つ含む抗原ドメインをコードする、又は、本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、本発明に係る第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインに含まれるＣＥＡ及びＡＳＣＬ２の抗原又は抗原エピトープと配列が同一である、本明細書に記載されるＣＥＡ及びＡＳＣＬ２の少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメインをコードし、又は、本発明のｒＶＳＶは、そのゲノム中に、本発明に係る第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインに含まれるサバイビン及びＡＳＣＬ２の抗原又は抗原エピトープと配列が同一である、本明細書に記載されるサバイビン及びＡＳＣＬ２の少なくとも２つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメインをコードし、特に、本発明のｒＶＳＶは、ゲノムに、ＣＥＡの少なくとも３つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメインをコードし、本明細書に記載されるサバイビン及びＡＳＣＬ２のうち、本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメインに含まれるＣＥＡ、サバイビン及びＡＳＣＬ２の抗原又は抗原エピトープと配列が同一であるもの、をコードする。本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶ、又は本明細書に記載される本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、含まれていない、又は本発明の第一の成分（Ｋ）又はｒＶＳＶの複合体において配列が非同一のさらなる抗原又は抗原エピトープを含んでよいことを理解すべきである。
本発明はまた、組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、上記等の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスを、特に本発明のワクチンに用いるために提供する。ワクチンの文脈における上記のウイルスの実施形態及び好ましい又は詳細な側面は、本発明の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスに適宜適用されることが理解される。特に、本発明はまた、組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスを提供し、そのゲノム中に、複合体／第一の成分（Ｋ）について上記のように少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープをコードし、ここで、水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子がリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換され、及び／又は糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換される。上記の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスは、そのゲノム中に、水疱性口内炎ウイルスの核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、リンタンパク質（Ｐ）、マトリクスタンパク質（Ｍ）、糖タンパク質（Ｇ）と、複合体／第一構成要素（Ｋ）について上述したような少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープをコードしてよく、ここで、水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子がリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換され、及び／又は糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換される。
ある実施形態では、本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶは、上記に開示されているワクチンで用いるためのものである。したがって、本発明で用いられる組換え水疱性口内炎ウイルスは、好ましくは、本発明のワクチンの第二の成分（Ｖ）に含まれている／構成されている。例えば、本発明のワクチンに含まれる本発明の組換え水疱性口内炎ウイルスは、例えば、本明細書に記載されるような医薬組成物に含まれてよい。
ある実施形態では、本明細書に記載される本発明の水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルスは、本明細書に記載される第一の成分（Ｋ）の複合体と併用してよく、場合によっては、化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター等の免疫療法剤、又は標的薬と併用することができる。したがって、本明細書に記載される本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体は、本明細書に記載されるワクチンの組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスと併用することができ、場合によっては、本明細書に記載される化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター等の免疫療法剤、又は標的薬と併用することができる。
本発明のワクチンのある実施形態では、第一の成分（Ｋ）の複合体は、配列番号６０で表されるアミノ酸配列からなり、第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスは、そのゲノム中に、以下の：
配列番号５４からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）；
配列番号５５からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）；
配列番号５６からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）；
配列番号５７からなるアミノ酸配列からなる大型タンパク質（Ｌ）；
配列番号５８からなるアミノ酸配列からなる糖タンパク質（ＧＰ）；及び
配列番号５９からなるアミノ酸配列からなる抗原ドメイン、をコードする。
部品のキット
さらなる側面では、本発明は以下の：
（１）前記第一の成分（Ｋ）は複合体を含み、前記複合体は、以下の：
（ｉ）細胞透過性ペプチド；
（ｉｉ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメイン；及び
（ｉｉｉ）少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬、
からなるか、又は含み、
ここで、前記ｉ）～ｉｉｉ）は共有結合しており、かつ、
（２）第二の成分（Ｖ）は腫瘍溶解性ラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスを含む、部品のキットも提供する。
一般に、ワクチンの第一の成分（Ｋ）について本明細書に記載されている詳細な説明と実施形態は、部品キットの第一の成分（Ｋ）に適用される。同様に、ワクチンの第二の成分（Ｖ）について本明細書に記載されている詳細な説明と実施形態は、部品キットの第二の成分（Ｖ）に適用される。特に、第二の成分（Ｖ）のラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスは、ワクチンについて本明細書に記載されているように、第一の成分（Ｋ）の複合体の抗原ドメイン、又は少なくとも１つの抗原（断片）又はその抗原エピトープをコードしてよい。つまり、少なくとも１つの対応する抗原（断片）又はエピトープは、（ｉ）第一の成分（Ｋ）の複合体に含まれ、（ｉｉ）第二の成分（Ｖ）（すなわち、ウイルスが当該抗原（断片）又はエピトープを発現しうる）のラブドウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性ラブドウイルスによってコードされる（例えば、のゲノムにおいて）ことができる。対応する抗原を含む第一及び第二の成分に関するさらなる詳細、及びワクチンに関して本明細書に記載されているように、その医学的使用及び投与に関する詳細もキットに適用される。
ある実施形態では、キットは、第一の容器が第一の成分（Ｋ）（第二の成分（Ｖ）ではない）を含み、第二の容器が第二の成分（Ｖ）（第一の成分（Ｋ）ではない）を含む別個の容器で構成される。
例えば、部品のキットは、以下の：
（１）配列番号６０で表されるアミノ酸配列含む、又はからなる第一の成分（Ｋ）の複合体；及び
（２）ゲノムにコードされている第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスを含み、そのゲノム中に以下の、
配列番号５４からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、
配列番号５５からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、
配列番号５６からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、
配列番号５７からなるアミノ酸配列からなる大型タンパク質（Ｌ）、
配列番号５８からなるアミノ酸配列からなる糖タンパク質（ＧＰ）、及び
配列番号５９からなるアミノ酸配列からなる抗原ドメイン、をコードする。
ある実施形態では、部品のキットは、以下の：
（１）配列番号６０で表されるアミノ酸配列含む、又はからなる第一の成分（Ｋ）の複合体；及び
（２）ゲノムにコードされている第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスを含み、ここで、水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０と配列同一性が少なくとも、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９２％、９１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は同一のＲＮＡ配列を含むか又はからなり、好ましくは、水疱性口内炎ウイルスは、そのゲノム中に以下の、
配列番号５４からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、
配列番号５５からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、
配列番号５６からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、
配列番号５７からなるアミノ酸配列からなる大型タンパク質（Ｌ）、
配列番号５８からなるアミノ酸配列からなる糖タンパク質（ＧＰ）、及び
配列番号４５又は５９からなるアミノ酸配列を含む抗原ドメイン、をコードする。
さらなる側面では、本発明は、ポリペプチド及び水疱性口内炎ウイルスを含む部品のキットを提供しここで、ポリペプチドは、配列番号６０のアミノ酸配列からなるか、又は含み、ここで、水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０と配列同一性が少なくとも、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９２％、９１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は同一のＲＮＡ配列を含むか又はからなる。
好ましい実施形態では、本発明は、本発明は、ポリペプチドと水疱性口内炎ウイルスとを含む部品キットを提供し、ここで、前記ポリペプチドは配列番号６０で表されるアミノ酸配列を含むか、又はからなり、かつ、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなり、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする。
さらに、部品キットは、例えば以下の組み合わせに関して説明されているように、さらなる成分を含んでよい。特に、部品キットは、化学療法剤、免疫療法剤（免疫チェックポイントインヒビター等）、又は本明細書に記載される標的薬剤（例：併用の場合）を含んでよい。好ましくは、部品キットは、さらに、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の免疫チェックポイントインヒビター、又は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択される、免疫チェックポイントインヒビター、を含む。
ある実施形態では、部品キットは、抗体は、配列番号６１で表されるアミノ酸配列である重鎖可変領域と、配列番号６２で表されるアミノ酸配列である軽鎖可変領域とを含む。ある実施形態では、部品キットは、配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。ある実施形態では、部品キットは、配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。ある実施形態では、部品キットは、配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。ある実施形態では、部品キットは、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。
ある実施形態では、キットは、さらに、例えばワクチンと併用するため、化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター、標的薬剤、又は本明細書に記載されている免疫療法剤の少なくとも一つを含む。
医薬用途
本発明のワクチンは、腫瘍細胞の溶解を効率的に誘導し、高い免疫原性、すなわち、本発明のワクチンの抗原ドメインに含まれる少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープに対する長く持続するＣＤ８Ｔ細胞の免疫応答を特徴とする。すなわち、本発明のワクチンは、本明細書に記載される腫瘍の治療及び／又は予防に有用である。
したがって、一側面では、本発明は、腫瘍又はがんに苦しむ患者を治療する方法に関し、その方法は、本明細書に記載される本発明のワクチンを当該患者に投与することを含む。換言すれば、本発明は、腫瘍又はがんを治療する（その治療が必要な患者が罹患する）方法を提供し、当該方法は、当該患者に（有効量の）ワクチンを投与することを含む。
本発明は、また、医薬に用いる
本明細書に記載されるワクチン、
本明細書に記載される（腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎）ウイルス、
本明細書に記載されるキット、と提供する。
特に、本明細書に記載されているワクチン、（腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎）ウイルス又はキットは、腫瘍又はがん、特にそれが必要な患者の治療及び／又は予防（又は予防）に用いることができる。
本明細書に記載されている用途及び方法については、腫瘍は、内分泌腫瘍、消化管腫瘍、泌尿生殖器及び婦人科腫瘍、乳がん、頭頸部腫瘍、造血器腫瘍、皮膚腫瘍、胸部及び呼吸器腫瘍を含む腫瘍の群から選択される。より具体的には、前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープは、肛門がん、虫垂がん、胆管がん、カルチノイド腫瘍、消化管結腸がん、肝外胆管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、肝細胞がん、膵がん、直腸がん、結腸直腸がん、又は転移性結腸直腸がんを含む消化管腫瘍又はがんの群から選択されてよい。腫瘍は、好ましくは、結腸直腸がん、又は転移性結腸直腸がんのいずれかである。
ある実施形態では、ワクチンの第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）を各々少なくとも１回投与する。ある実施形態では、第一の成分（Ｋ）を第二の成分（Ｖ）の投与の前に投与する。特に、第一の成分（Ｋ）は、少なくとも２回、好ましくは、第二の成分（Ｖ）の投与の前後に投与されてよい。第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）は、好ましくは、Ｋ－Ｖ－Ｋ、Ｋ－Ｖ－Ｋ、Ｋ－Ｖ－Ｖ－Ｋの順に、より好ましくは、Ｋ－Ｖ－Ｋ、又はＫ－Ｖ－Ｋ－Ｋの順に投与する。場合によっては、ワクチンの第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）を第一の成分（Ｋ）の順に投与し、その後に第二の成分（Ｖ）を、好ましくは、Ｋ－Ｖ－Ｋの順に投与されてよい。
ある実施形態では、ワクチンの第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）を順番に投与する。例えば、本発明で用いるワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１日の間隔で、又は、互いに約５、６、７、８、９、１０日から約１１、１２、１３、１４、１５、１６、１９、２０、１９、２０日の間隔で、又は互いに約１１、１２、１３、１４日から約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１日の間隔、で投与される。ある実施形態では、第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）を約７日から約３０日の間隔で投与する。第一の成分（Ｋ）は、好ましくは、第二の成分（Ｖ）の投与後、約１０、１１、１２、１３、１４日から約２０、２２、２４、２６、２８、３０日の間に少なくとも１回投与する。ある実施形態では、第一の成分（Ｋ）は、第一の成分（Ｋ）の最後の投与後、約２１日から約１８０日の間に少なくとも１回投与されてよい。
ある実施形態では、ワクチンは、本明細書に記載される、免疫チェックポイントインヒビター、化学療法剤、又は標的薬等の免疫療法剤の一つ以上と同時投与される。チェックポイントモジュレーターは、ワクチンの投与と同時に、連続的に、交互に、又はその後に投与される。ある実施形態では、チェックポイントモジュレーターは、ワクチン投与の約１～約１４日前から投与される。
好ましくは、ワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、静脈内、皮下、又は筋肉内に投与される。ワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、好ましくは、異なる投与経路で投与される。ある実施形態では、ワクチンの第一の成分（Ｋ）は筋肉内に投与され、ワクチンの第二の成分（Ｖ）は静脈内、又は腫瘍内、好ましくは、静脈内に投与される。
ある実施形態では、第一の成分（Ｋ）の複合体の用量は約０．５ｎｍｏｌ～約１０ｎｍｏｌである。つまり、ワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体の約０．５ｎｍｏｌ～約１０ｎｍｏｌが好ましく投与される。
ある実施形態では、ワクチンの第二の成分（Ｖ）のｒＶＳＶの用量は、約１０６ ＴＣＩＤ５０から約１０１１ ＴＣＩＤ５０であってよく、換言すれば、ワクチンの第二の成分（Ｖ）の組換えＶＳＶは、約１０６ ＴＣＩＤ５０～約１０１１ ＴＣＩＤ５０まで投与される。
特に（本明細書に記載される本発明で用いるためのワクチンの文脈では；本明細書に記載される本発明に用いられるウイルス；本明細書に記載される本発明で用いるための第一の成分（Ｋ）の複合体；本明細書に記載される発明による使用方法；本明細書に記載される本発明の使用キット；又は本明細書に記載される本発明で用いるためのポリペプチド）、第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）は、異種プライムブーストワクチンとして投与される。
本発明の一側面では、本明細書に記載されるワクチンで治療される患者は、トリプルネガティブ乳がんを含む乳がん、胆道がん；膀胱がん；膠芽腫や髄芽腫を含む脳腫瘍；子宮頸がん；絨毛がん；結腸がん；子宮内膜がん；食道がん；胃がん；消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、虫垂がん、胆管がん、カルチノイド腫瘍、消化管結腸がん、肝外胆管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、大腸がん又は転移性大腸がん、急性リンパ性及び骨髄性白血病を含む血液腫瘍；Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病・リンパ腫；有毛細胞白血病；慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫；ＡＩＤＳ関連白血病、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫；ボーエン病、パジェット病等を含む上皮内腫瘍；肝臓がん；非小細胞肺がんを含む肺がん、ホジキン病を含むリンパ腫、リンパ球性リンパ腫；神経芽腫；膠芽腫、扁平上皮がんを含む口腔がん；上皮細胞、間質細胞、生殖細胞、間葉細胞由来を含む卵巣がん；膵臓がん；前立腺がん；直腸がん；平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫及び骨肉腫等の肉腫；黒色腫、メルケル細胞がん、カポジ肉腫、基底細胞がん、扁平上皮がん等の皮膚がん；セミノーマ、非セミノーマ（奇形腫、絨毛がん）、間質腫瘍、胚細胞腫瘍等の胚性腫瘍を含む精巣がん；甲状腺腺がん、髄様がんを含む甲状腺がん；腺がん、ウィルムス腫瘍を含む腎がんに罹患している。
一側面では、本発明のワクチンで治療される患者は、後期結腸直腸がん（ＣＲＣ）、又は後期転移性結腸直腸がん（ｍＣＲＣ）に罹患しており、それにより、本明細書で用いられる用語「後期」ＣＲＣ、ｍＣＲＣとしては、ＩＩＩＣ期：Ｔ４ａ、Ｎ２ａ、Ｍ０又はＴ３－Ｔ４ａ、Ｎ２ｂ、Ｍ０又はＴ４ｂ、Ｎ１－Ｎ２、Ｍ０、ＩＶＡ期：いかなるＴ、いかなるＮ、Ｍ１ａ及びＩＶＢ期：いかなるＴ、いかなるＮ、Ｍ１ｂ（ＴＮＭの病期分類による）があげられ、これにより、ＣＲＣ又はｍＣＲＣ腫瘍は、例えば、「マイクロサテライト安定」（ＭＳＳ）又は「マイクロサテライト不安定」（ＭＳＩ）であってよく、好ましくは、ＣＲＣ又はｍＣＲＣ腫瘍はＭＳＳである。
すなわち、本明細書に記載される本発明のワクチンは、例えば、本明細書に記載される投与スキームにすなわち、腫瘍／がんに罹患した患者に投与されてよい。
一側面では、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）は、各々、それが必要な患者に、例えば、腫瘍内（「ｉ．ｔ．」）、静脈内（「ｉ．ｖ．」）、皮下（「ｓ．ｃ．」）、筋肉内（「ｉ．ｍ．」）、腹腔内（「ｉ．ｐ．」）で投与される。ただし、本発明によるワクチンの第一の成分（Ｋ）は、腫瘍内（「ｉ．ｔ．」）、静脈内（「ｉ．ｖ．」）、皮下（「ｓ．ｃ．」）、筋肉内（「ｉ．ｍ．」）、腹腔内（「ｉ．ｐ．」）、より好ましくは、皮下（「ｓ．ｃ．」）、筋肉内（「ｉ．ｍ．」）に基づき、本文書に開示された管理スケジュールに用いる。治療対象の患者には、例えば、本明細書に記載されるワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）を投与してよい。
併用
また、本発明は、本明細書に記載されるようなワクチンの併用治療、及び現在用いられている、及び／又は先行技術で公知である治療又は方法と比較して特定の利点を提供する方法を提供する。これらの利点には、例えば、インビボでの効能（例えば、臨床反応の改善、反応の延長、反応速度の増加、反応期間、疾患安定化率、安定化期間、疾患進行までの期間、無増悪生存期間（ＰＦＳ）及び／又は全生存期間（ＯＳ）、後の耐性の発生等）、安全で忍容性の高い投与、有害事象の頻度と重篤度の減少等がある。
本発明で用いるためのワクチンは、例えば、最先端又は標準治療化合物等の他の薬理活性剤と併用することができる。当該化合物としては、例えば、上記のような細胞静止物質又は細胞毒性物質、細胞増殖インヒビター、抗血管新生物質、ステロイド、免疫モジュレーター／チェックポイントモジュレーターがあげられる。
上記の薬理活性物質は、本明細書に記載される発明で用いるために、ワクチンと同時に、順次、交互に投与されてよいことを理解されたい。薬理活性物質は、例えば、本発明のワクチンによる治療の前又は後に標準治療として投与することもできる。
本発明の文脈では、本発明で用いるためのワクチンは、例えば本明細書に記載されるような１つ以上の化学療法剤と併用するのが好ましい。
一実施形態では、本発明で用いるためのワクチン、又はその第一（Ｋ）又は第二（Ｖ）成分、又は本発明に開示された本発明のｒＶＳＶは、本発明に開示されたような化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター等の免疫療法剤、又は標的薬と併用される（すなわち、と組み合わせて用いる）ことが好ましい。
本発明に関連して用いられる用語「免疫療法剤」は、宿主の免疫系を誘導、強化、回復又は抑制する物質、又は免疫系の成分を利用又は由来する薬剤をいう。本発明のワクチンと併用するための免疫療法剤は、好ましくは、既知の免疫療法剤から選択されてよい。免疫療法剤は、インターフェロン、インターロイキン、又は腫瘍壊死因子、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、又はチェックポイントモジュレーターを含む群から選択される。
本明細書で用いられる用語「チェックポイントモジュレーター」（「免疫チェックポイントモジュレーター」ともいう）は、１以上のチェックポイント分子の機能を調節（例えば、全体的又は部分的に減らす、抑制する、干渉する、活性化する、刺激する、増やす、強化する、又は支援する）する分子又は化合物をいう。したがって、免疫チェックポイントモジュレーターは、「免疫チェックポイントインヒビター」（「チェックポイントインヒビター」又は「インヒビター」ともいう）又は「免疫チェックポイント活性化剤」（「チェックポイント活性化剤」又は「活性化剤」ともいう）である。「免疫チェックポイントインヒビター」（「チェックポイントインヒビター」又は「インヒビター」ともいう）は、１つ以上のチェックポイント分子の機能を全体的又は部分的に低下、阻害、干渉、又は負の調節を行う。「免疫チェックポイント活性化剤」（「チェックポイント活性化剤」又は「活性化剤」ともいう）は、１つ以上のチェックポイント分子の機能を全体的又は部分的に活性化、刺激、増加、強化、支持、又は正の調節を行う。免疫チェックポイントモジュレーターは通常、（ｉ）自己耐性及び／又は（ｉｉ）免疫応答の振幅及び／又は期間を調節されてよい。好ましくは、本発明で用いられる免疫チェックポイントモジュレーターは、１つ以上のヒトチェックポイント分子の機能を調節し、したがって「ヒトチェックポイントインヒビター」である。
チェックポイント分子は、タンパク質等の分子であり、通常免疫経路に関与し、例えば、Ｔ細胞の活性化、Ｔ細胞の増殖及び／又はＴ細胞の機能を調節する。したがって、チェックポイントモジュレーターによって調節（例えば、全体的又は部分的に減少し、抑制され、干渉され、活性化され、刺激され、増加され、強化され、又は支持される）されるチェックポイント分子の機能は、通常Ｔ細胞の活性化、Ｔ細胞の増殖及び／又はＴ細胞の機能の（調節）である。このように、免疫チェックポイント分子は、自己耐性及び生理的免疫応答の期間と振幅を調節し、維持する。免疫チェックポイント分子の多くは、Ｂ７：ＣＤ２８ファミリー又は腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーに属し、特定のリガンドの結合により、細胞質ドメインに動員されるシグナル伝達分子を活性化する。
人工Ｔ細胞受容体（キメラＴ細胞受容体、キメラ免疫受容体、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ともいう）は、いかなる特異性を免疫エフェクター細胞に移植する人工的な受容体である。人工Ｔ細胞受容体（ＣＡＲ）は養子細胞移植の文脈において好まれる。そのために、患者からＴ細胞を取り出し、大腸がんに特異的な受容体を発現するように修飾する。その後、がん細胞を認識して殺傷することができるＴ細胞を、患者に再導入する。
好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーター（本発明のワクチン、本発明の第一の成分（Ｋ）、本発明の第二の成分（Ｖ）、又は本発明のｒＶＳＶと併用し、医薬、特に本発明の腫瘍又はがんの治療及び／又は予防に用いる。）は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＧＩＴＲ、ＴＮＦＲ及び／又はＦａｓＲ／ＤｃＲ３から選択される１つ以上の免疫チェックポイント点分子のアクチベーター又はインヒビターである。又はその１つ以上のリガンドのアクチベーター又はインヒビターである。
より好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは、（共）刺激性チェックポイント分子のアクチベーター、阻害性チェックポイント分子のインヒビター、又はその併用である。したがって、免疫チェックポイントモジュレーターは、より好ましくは、（ｉ）ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ及び／又はＩＣＯＳのアクチベーター、又は（ｉｉ）Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＴＮＦＲ及び／又はＦａｓＲ／ＤｃＲ３のインヒビターである。
さらに好ましくは、免疫チェックポイントモジュレーターは阻害性チェックポイント分子のインヒビターである（ただし、好ましくは、刺激性チェックポイント分子のインヒビターでない）。したがって、免疫チェックポイントモジュレーターは、さらに好ましくは、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、ＶＩＳＴＡ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＧＡＲＰ、ＰＳ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＴＤＯ、ＴＮＦＲ及び／又はＤｃＲ３のインヒビターである。
また、免疫チェックポイントモジュレーターは、好ましくは、刺激性又は共刺激性チェックポイント分子のアクチベーターである（ただし、好ましくは、抑制性チェックポイント分子のアクチベーターでない）。したがって、免疫チェックポイントモジュレーターは、より好ましくは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ及び／又はＩＣＯＳのアクチベーター、又はそのリガンドである。
免疫チェックポイントモジュレーターは、さらに好ましくは、ＣＤ４０経路、ＩＤＯ経路、ＣＴＬＡ－４経路及び／又はＰＤ－１経路のモジュレーターである。特に、免疫チェックポイントモジュレーターは、好ましくは、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１及び／又はＩＤＯのモジュレーターであり、免疫チェックポイントモジュレーターは、さらに好ましくは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１及び／又はＩＤＯのインヒビター又はＣＤ４０のアクチベーターであり、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１及び／又はＩＤＯのインヒビターであり、免疫チェックポイントモジュレーターは、最も好ましくは、ＣＴＬＡ－４及び／又はＰＤ－１のインヒビターである。
免疫チェックポイントモジュレーターは、さらに好ましくは、ＣＤ４０経路、ＩＤＯ経路、ＬＡＧ３経路、ＣＴＬＡ－４経路及び／又はＰＤ－１経路のモジュレーターである。特に、免疫チェックポイントモジュレーターは、好ましくは、ＣＤ４０、ＬＡＧ ３、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ ２、ＰＤ－１及び／又はＩＤＯのモジュレーターであり、免疫チェックポイントモジュレーターは、さらに好ましくは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、ＬＡＧ３及び／又はＩＤＯのインヒビター又はＣＤ４０のアクチベーターであり、免疫チェックポイントモジュレーターは、さらに好ましくは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＬＡＧ３及び／又はＩＤＯのインヒビターであり、免疫チェックポイントモジュレーターは、さらに好ましくは、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ－４及び／又はＰＤ－１のインヒビターであり、免疫チェックポイントモジュレーターは、最も好ましくは、ＣＴＬＡ－４及び／又はＰＤ－１のインヒビターである。
したがって、チェックポイントモジュレーター（本発明のワクチン、本発明の第一の成分（Ｋ）、本発明の第二の成分（Ｖ）、又は本発明のｒＶＳＶと併用し、医薬、特に本発明の腫瘍又はがんの治療及び／又は予防に用いる。）は、ＣＤ４０経路、ＣＴＬＡ－４経路又はＰＤ－１経路の既知のモジュレーターから選択されてよい。腫瘍又はがんの治療のために本明細書で定義されている複合体と併用するチェックポイントモジュレーターは、好ましくは、ＣＤ４０経路、ＬＡＧ ３経路、ＣＴＬＡ－４経路又はＰＤ－１経路の既知のモジュレーターから選択される。特に、免疫チェックポイントモジュレーターは、好ましくは、ＰＤ－１インヒビターである。ＣＴＬＡ－４経路及びＰＤ－１経路の好ましいインヒビターとしては、モノクローナル抗体のＹｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）及びＴｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（ファイザー／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）のほか、オプジーボ（登録商標）（ニボルマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペムブロリズマブ；ＭＳＤ）、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／アストラゼネカ）、ＭＥＤＩ４７３６（アストラゼネカ；国際公開第２０１１／０６６３８９号を参照）、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ロッシュ／ジェネンテック；参考米国特許第８，２１７，１４９号）、Ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ（ＣＴ－０１１；キュアテック）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４；アストラゼネカ）、ａｖｅｌｕｍａｂ（メルク ＫＧａａＡ／ファイザー）、ＭＩＨ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）及びランブロリズマブ（例えば、国際公開第２００８／１５６７１２号；Ｈａｍｉｄ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６９：１３４－１４４においてｈＰＤ１０９Ａ及びそのヒト化誘導体ｈ４０９Ａｌｌ、ｈ４０９Ａ１６及びｈ４０９Ａ１７として開示されている）があげられる。より好ましいチェックポイントインヒビターとしては、ＣＴＬＡ－４インヒビターのＹｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）及びＴｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（ファイザー／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）のほか、ＰＤ－１インヒビターのＯｐｄｉｖｏ（登録商標）（ニボルマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペムブロリズマブ；ＭＳＤ）、Ｐｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ（ＣＴ－０１１；キュアテック）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４；アストラゼネカ）、ＡＭＰ－２２４及びランブロリズマブ（例えば、国際公開第２００８／１５６７１２号；Ｈａｍｉｄ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６９：１３４－１４４においてｈＰＤ１０９Ａ及びそのヒト化誘導体ｈ４０９Ａｌｌ、ｈ４０９Ａ１６及びｈ４０９Ａ１７として開示されている）があげられる。上記のように、ＬＡＧ３インヒビターの好ましい例は、抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体ＢＭＳ－９８６０１６（ブリストル・マイヤーズスクイブ）である。ＬＡＧ３インヒビターの他の好ましい例としては、国際公開第２００９／０４４２７３号及びＢｒｉｇｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５：６２２５－６２３１に開示されているように、ＬＡＧ５２５（ノバルティス）、ＩＭＰ３２１（Ｉｍｍｕｔｅｐ）及びＬＡＧ３－Ｉｇ、並びにヒトＬＡＧ３を阻害するマウス又はヒト化抗体（例：国際公開第２００８／１３２６０１号に記載されているＩＭＰ７０１）、又はヒトＬＡＧ３を阻害する完全ヒト抗体（欧州特許出願公開第２３２０９４０号に開示されているようなもの）があげられる。
特に好ましくは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のチェックポイントインヒビター（例えば、医薬において、本発明のワクチン、本発明の第一の成分（Ｋ）、本発明の第二の成分（Ｖ）、本発明のキット、又は本発明のｒＶＳＶと併用される。）である。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のチェックポイントインヒビターの好ましい例としては、例えば、ペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１抗体）；ニボルマブ（抗ＰＤ－１抗体）；ピジリズマブ（抗ＰＤ－１抗体）；セミプリマブ（抗ＰＤ－１抗体）、ＰＤＲ－００１（抗ＰＤ－１抗体）；ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５（抗ＰＤ－１抗体）、アテゾリズマブ（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）；アベルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）；デュルバルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１抗体）があげられる。つまり、免疫チェックポイントインヒビターは、ペムブロリズマブ；ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択されてよい。
ペムブロリズマブ（以前はランブロリズマブとも呼ばれていた；商品名キートルーダ；ＭＫ－３４７５ともいう）は、例えば、Ｈａｍｉｄ，Ｏ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６９（２）：１３４－４４に開示されており、ＰＤ－１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体であり、Ｆｃを介した細胞毒性を阻害するように設計されたＣ２２８Ｐの変異を含む。例えば、ペムブロリズマブは米国特許第８，３５４，５０９号及び国際公開第２００９／１１４３３５号に開示されている。切除不能又は転移性黒色腫患者及び転移性ＮＳＣＬＣ患者の治療薬としてＦＤＡに承認されている。
ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４－９４－４；ＢＭＳ－９３６５５８又はＭＤＸ１１０６ｂ）は、ＰＤ－１を特異的に阻害する完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体であり、検出可能な抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）がない。ニボルマブは、例えば米国特許第８，００８，４４９号及び国際公開第２００６／１２１１６８号に開示されている。切除不能又は転移性黒色腫、転移性ＮＳＣＬＣ及び進行性腎細胞がんに罹患した患者の治療薬としてＦＤＡによって承認されている。
ピディリズマブ（ＣＴ－０１１；キュアテック）はＰＤ－１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピディリズマブは例えば国際公開第２００９／１０１６１１号に開示されている。
ＰＤＲ－００１又はＰＤＲ００１は、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２のＰＤ－１への結合を阻害する高親和性リガンド遮断ヒト化抗ＰＤ－１ ＩｇＧ４抗体である。ＰＤＲ－００１は国際公開第２０１５／１１２９００号及び国際公開第２０１７／０１９８９６号に開示されている。
抗体ＰＤ１－１からＰＤ１－５は、表２に示すような配列で定義される抗体分子であり、ＨＣは（全長の）重鎖、ＬＣは（全長の）軽鎖を示す。
セミプリマブ（別名「ＲＥＧＮ－２８１０」）は、ＰＤ－１に対する完全ヒトモノクローナル抗体であり、例えば国際公開第２０１５／１１２８００号に開示されている。
アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃ）は、完全ヒト抗ＰＤ免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）ラムダモノクローナル抗体であり、例えば国際公開第２０１３／０７９１７４号に開示されている。
アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａとしても知られる）は、ＰＤ－Ｌ１を標的とするファージ由来のヒトＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体であり、例えばＤｅｎｇ ｅｔ ａｌ．ｍＡｂｓ ２０１６；８：５９３－６０３に記載されている。尿路上皮がん患者の治療薬としてＦＤＡに承認されている。
デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）はＰＤ－Ｌ１に特異性が高い、ヒトＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体であり、例えばＳｔｅｗａｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２０１５；３：１０５２－１０６２又はＩｂｒａｈｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０１５；４２：４７４－４８３に記載されている。
Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（ｓｕｐｒａ）らによって開示された、又は臨床試験中であることが公知であるさらなるＰＤ－１アンタゴニスト、例えばＡＭＰ－２２４、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＢＭＳ－９３６５５９、ＪＳ００１－ＰＤ－１、ＳＨＲ－１２１０、ＢＭＳ－９３６５５９、ＴＳＲ－０４２、ＪＮＪ－６３７２３２８３、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａは、上記のアンタゴニストのかわりに、又は上記のアンタゴニストと併用することができる。
本明細書で用いられる用語ＩＮＮは、米国法４２ＵＳＣ§２６２サブセクション（ｋ）及び他の法域における同等の規制に基づいて認可されたバイオシミラー抗体を含むがこれに限定されない、オリジネーター抗体と同じ又は実質的に同じアミノ酸配列であるすべてのバイオシミラー抗体も含むことを意味する。
上記のＰＤ－１アンタゴニスト（例えば、医薬において、本発明のワクチンと併用するために）は、各々の製造、治療用途及び特性に関して当業界で公知である。
具体的には、上記抗ＰＤ－１抗体分子のＰＤ－１－１～ＰＤ１－５は、以下に：
（ＰＤ１－１：）配列番号６１で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；又は
（ＰＤ１－２：）配列番号６３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；又は
（ＰＤ１－３：）配列番号６５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；又は
（ＰＤ１－４：）配列番号６７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；又は
（ＰＤ１－５：）配列番号６９で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号７０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖；と定義する。
ある実施形態（特に、本明細書で用いられるための第一の成分（Ｋ）の複合体、本明細書で用いられるためのウイルス、本明細書で用いられるためのワクチン、本明細書で用いられるためのポリペプチド又はキット）では、免疫チェックポイントインヒビターは、ペムブロリズマブ；ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号７０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択される。
すなわち、本発明のワクチン又は本発明のキットは、好ましくは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の免疫チェックポイントインヒビターをさらに含み、好ましくは、ペムブロリズマブ；ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号７０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択される。
ある実施形態では、本明細書に記載されているワクチンは、以下の：
（１）配列番号６０で表されるアミノ酸配列を含む、又はからなる、第一の成分（Ｋ）の複合体；及び；
（２）第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスであって、そのゲノム中に、
配列番号５４からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、
配列番号５５からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、
配列番号５６からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、
配列番号５７からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）
配列番号５８からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び
配列番号５９からなるアミノ酸配列を含む抗原ドメインをコードする、
を含み、
さらに、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の免疫チェックポイントインヒビターを含んでよく、好ましくは、好ましくは、ペムブロリズマブ；ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号７０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択される
本明細書に記載されているワクチンは、好ましくは、
（１）配列番号６０で表されるアミノ酸配列を含む、又はからなる、第一の成分（Ｋ）の複合体；及び；
（２）第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスであって、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなり、好ましくは、そのゲノム中に、
配列番号５４からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、
配列番号５５からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、
配列番号５６からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、
配列番号５７からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）
配列番号５８からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び
配列番号５９からなるアミノ酸配列を含む抗原ドメインをコードする、
を含み、好ましくは、さらに、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の免疫チェックポイントインヒビター、又は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択される、免疫チェックポイントインヒビター、を含む。
ある実施形態では、当該ワクチンは配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。ある実施形態では、配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。ある実施形態では、当該ワクチンは配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。ある実施形態では、当該ワクチンは配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。ある実施形態では、当該ワクチンは配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含む。
本発明の文脈では、本発明のワクチン、本発明に開示された第一の成分（Ｋ）及び／又は第二の成分（Ｖ）、又は本発明によるｒＶＳＶと併用して、複数の免疫チェックポイントモジュレーター（例えばチェックポイントインヒビター）を用いることができ、特に、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９又は１０の異なる免疫チェックポイントモジュレーター（例えばチェックポイントインヒビター）を用いて、好ましくは、２、３、４又は５の異なる免疫チェックポイントモジュレーター（例えばチェックポイントインヒビター）を用いて、より好ましくは、２、３又は４の異なる免疫チェックポイントモジュレーター（例えばチェックポイントインヒビター）を用いて、さらに好ましくは、２又は３の異なる免疫チェックポイントモジュレーター（例えばチェックポイントインヒビター）を用いて、最も好ましくは、２の異なる免疫チェックポイントモジュレーター（例えばチェックポイントインヒビター）を用いる。したがって、（例えばチェックポイントインヒビター）免疫チェックポイントモジュレーターは、特に、異なるチェックポイント分子経路を調節（例えば、阻害する）することを意味する。
したがって、ＰＤ－１経路とＣＴＬＡ－４経路の免疫チェックポイントモジュレーターの好ましい組み合わせは、（ｉ）ニボルマブ（メディー４７３６；抗ＰＤ－Ｌ１抗体）とイピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４）、又は（ｉｉ）デュルバルマブ（抗ＣＴＬＡ－４）とトレメリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４）、ＰＤ－１、ＰＤ－１－２、ＰＤ－１－３、ＰＤ－１－４、ＰＤ－１－５、及びイピリムマブである。
本発明の文脈における少なくとも２つの異なる免疫チェックポイントモジュレーターの他の好ましい組み合わせとしては、（ｉ）ＫＩＲインヒビターとＣＴＬＡ－４インヒビターの組み合わせから選択される組み合わせ、例えばリリルマブ／イピリムマブ；（ｉｉ）ＫＩＲインヒビターとＰＤ－１経路のインヒビターの組み合わせ、例えばＰＤ－１インヒビター、例えばリリルマブ／ニボルマブ；（ｉｉｉ）ＬＡＧ ３インヒビターとＰＤ－１経路のインヒビターの組み合わせ、例えば、本明細書に記載されるＰＤ－１インヒビター又はＰＤ－Ｌ１インヒビター、例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－１、ＰＤ－１、ＰＤ－１－３、ＰＤ－１－４、ＰＤ－１－５、又は例えば、Ｗｏｏ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７２：９１７－２７又はＢｕｔｌｅｒ Ｎ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：１８８－９５に記載されたもの、当該組み合わせの好ましい例としては、ニボルマブ／ＢＭＳ－９８６０１６及びＰＤＲ ００１／ＬＡＧ ５２５があげられる。（ｉｖ）例えば、Ｆｕ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７１：５４４５－５４に記載されているように、ＩＣＯＳを標的とするチェックポイントモジュレーターとＣＴＬＡ－４のインヒビターの組み合わせ；（ｖ）Ｃｕｒｒａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１１，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６（４）：ｅｌ ９４９９に記載されているように、４－１ＢＢを調節するチェックポイントモジュレーターとＣＴＬＡ－４のインヒビターの組み合わせ；（ｖｉ）ＰＤ１とＣＤ２７を標的とするチェックポイントモジュレーターの組み合わせ（ニボルマブ／バルリルマブ、アテゾリズマブ／バルリルマブ等）；（ｖｉｉ）ＯＸ ４０とＣＴＬＡ－４を標的とするチェックポイントモジュレーターの組み合わせ（ＭＥＤＩ ６４６９／トレメリムマブ等）；（ｖｉｉｉ）ＯＸ４０とＰＤ－１を標的とするチェックポイントモジュレーターの組み合わせ（ＭＥＤＩ６４６９／ＭＥＤＩ４７３６、ＭＯＸＲ０９１６／ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ６３８３／ＭＥＤＩ４７３６、ＧＳＫ３１７４９９８／ペムブロリズマブ等）；（ｉｘ）ＰＤ－１と４－１ ＢＢを標的とするチェックポイントモジュレーターの組み合わせ（ニボルマブ／ウレルマブ、ペムブロリズマブ／ＰＦ－０５０８２５６６、アベルマブ／ＰＦ－０５０８２５６６等）；（ｘ）ＰＤ－１とＩＤＯを標的とするチェックポイントモジュレーターの組み合わせ（イピリムマブ／インドキシモド、ペムブロリズマブ／ＩＮＣＢ０２４３６０、ＭＥＤＩ４７３６／ＩＮＣＢ０２４３６０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＧＤＣ－０９１９、アテゾリズマブ／ＩＮＣＢ０２４３６０等）；（ｘ）ＰＤ－１、ＰＤ－１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５（ｘ）ＰＤ－１とＣＳＦ１Ｒを標的とするチェックポイントモジュレーターの組み合わせ（ペムブロリズマブ／ＰＬＸ３３９７、ニボルマブ／ＦＰＡ００８、ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＯ５５０９５５４等）；（ｘ）ＰＤ－１とＧＩＴＲを標的とするチェックポイントモジュレーターの組み合わせ（ニボルマブ／ＢＭＳ－９８６１５６、ペムブロリズマブ／ＭＫ－４１６６又はＰＤ－１－１、ＰＤ－１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５等）；（ｘ）ＰＤ－１とＣＤ４０を標的とするチェックポイントモジュレーターの組み合わせ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＯ７００９７８９等）；（ｘ）ＰＤ－１とＢ７－Ｈ３を標的とするチェックポイントモジュレーターの組み合わせ（ペムブロリズマブ／エノブリツズマブ又はＰＤ－１－１、ＰＤ－１－２、ＰＤ－１－３、ＰＤ－１－４、ＰＤ－１－５等）；（ｘ）ＣＴＬＡ－４とＢ７－Ｈ３を標的とするチェックポイントモジュレーターの組み合わせ（イピリムマブ／エノブリツズマブ等）及び（ｘ）ＫＩＲと４－１ ＢＢを標的とするチェックポイントモジュレーターの組み合わせ（リリルマブ／ウレルマブ等）があげられる。
特に好ましくは、本発明のワクチン、本発明に開示された第一の成分（Ｋ）及び／又は第二の成分（Ｖ）、又は本発明によるｒＶＳＶと併用する免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせは、少なくとも（ｉ）ＣＴＬＡ－４のインヒビター及び（ｉｉ）ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ ２のインヒビター、好ましくは、少なくとも（ｉ）ＣＴＬＡ－４のインヒビター及び（ｉｉ）ＰＤ－１のインヒビターを含む。
それらの好ましい組み合わせの例としては、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）とＯｐｄｉｖｏ（登録商標）（ニボルマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）の組み合わせ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）とＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５の組み合わせ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）とＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ペムブロリズマブ；ＭＳＤ）の組み合わせ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）とＤｕｒｖａｌｕｍａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／アストラゼネカ）の組み合わせ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）とＭＥＤＩ４７３６（アストラゼネカ；国際公開第２０１１／０６６３８９号を参照）の組み合わせ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）とＭＰＤＬ３２８０Ａ（ロッシュ／ジェネンテック；参考米国特許第８，２１７，１４９号）の組み合わせ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）とＰｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ（ＣＴ－０１１；キュアテック）の組み合わせ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）とＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４；アストラゼネカ）の組み合わせ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）とａｖｅｌｕｍａｂ（メルクＫＧａＡ／ファイザー）の組み合わせ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）とＭＩＨ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）の組み合わせ、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）とＡＭＰ－２２４の併用、Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）（アストラゼネカ；国際公開第２０１１／０６６３８９号を参照）とランブロリズマブの併用、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（ファイザー／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＯｐｄｉｖｏ（登録商標）（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）の併用、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（ファイザー／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＫｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）（ロッシュ／ジェネンテック；参考米国特許第８，２１７，１４９号）の併用、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（ファイザー／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＤｕｒｖａｌｕｍａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／アストラゼネカ）の併用、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（ファイザー／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＭＥＤＩ４７３６（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）の併用、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（ファイザー／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＭＰＤＬ３２８０Ａ（ニボルマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）の併用、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（ファイザー／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＰｉｄｉｌｉｚｕｍａｂ（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）の併用、Ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ（アストラゼネカ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＭＥＤＩ０６８０（イピリムマブ；ブリストル・マイヤーズスクイブ）の併用、トレメリムマブ（メルク／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とアベルマブ（ファイザー ＫＧａＡ／ファイザー）の組み合わせ、トレメリムマブ（ファイザー／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＭＩＨ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）の組み合わせ、トレメリムマブ（ファイザー／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とＡＭＰ－２２４の組み合わせ、トレメリムマブ（アストラゼネカ／ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）とランブロリズマブの組み合わせ、があげられる。
また、本発明のワクチン（すなわち、本明細書で開示されているように、第一の成分（Ｋ）及び／又は第二の成分（Ｖ））は、好ましくは、（ｉ）上記等のＰＤ－１経路のインヒビター、例えばＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ ２のインヒビター、及び（ｉｉ）Ｔ細胞性免疫グロブリンムチン－３（ＴＩＭ－３）のインヒビターと併用する。ある実施形態では、ＰＤ－１経路のインヒビターとＴＩＭ－３のインヒビターは、ほぼ同時に、同じ又は異なる投与経路を介して投与されてよい。他の実施形態では、ＰＤ－１経路のインヒビターは、ＴＩＭ－３のインヒビターより先に投与される。理論に縛られることなく、ＰＤ－１経路に加えて、ＴＩＭ－３等のさらなるチェックポイントを標的とすることで、治療中にＴＩＭ－３等のさらなるチェックポイントの上方制御による再発を防ぐことができると考えられる。
一実施形態では、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶが標的薬と組み合わされることが好ましい。標的薬（本明細書に開示された本発明のｒＶＳＶ、又は本明細書に開示された本発明のワクチン、又は医薬、特に本明細書に開示された腫瘍の治療に用いるためのその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれかと併用するために）としては、ＶＥＧＦ標的薬、ＥＧＦＲ標的薬、又は抗体薬物複合体があげられる。ＶＥＧＦ標的薬の好ましい例としては、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、ラムシルマブ（サイラムザ（登録商標））又はｚｉｖ－ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ（ザルトラップ（登録商標））があげられる。ＥＧＦＲ標的薬の好ましい例としては、セツキシマブ（エルビタックス（登録商標））、パニツムマブ（ベクティビックス（登録商標））又はレゴラフェニブ（スチバーガ（登録商標））があげられる。抗体－薬物複合体の好ましい例としては、Ａｄｏ－トラスツズマブエムタンシン（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標））、ＳＹＤ９８５、トラスツズマブｖｃ－ｓｅｃｏ－ＤＵＢＡ、ＡＢＴ－４１４、デパツキシマブマフォドチン、ＡＭＧ５９５、ＩＭＧＮ２８９、ラプリツキマブエムタンシン、ＡＢＢＶ－２２１、ＳＧＮ－７５、ＭＤＸ－１２０３、ＢＭＳ－９３６５６１、ＳＧＮ－ＣＤ７０Ａ、ＡＭＧ１７２、ゲムツズマブオゾガマイシン（ＧＯ）、ＳＡＲ３４１９、コルツキシマブ・ラブタンシン、ＢＡＹ９４－９３４３、アネツマブ・ラブタンシン、ピナツズマブベドチン、ラベツズマブゴビテカン、サシツズマブゴビテカン、ＭＬＮ２７０４、ナラツキマブエムタンシン、ブレンツキシマブベドチン、又はロバルピツズマブテシリン、があげられる。
本発明に記載された併用治療は、例えば、物質の固定されていない（例：自由な）組み合わせとして、又は部品のキットがあげられる固定された組み合わせの形で投与される。これに関連して、本発明の意味における「併用」又は「組み合わせ」は、複数の活性剤の混合又は組み合わせの結果として生じる製品を含み、限定されるものではないが、固定及び非固定（例：自由な）の組み合わせ（キットを含む）及び用途の両方があげられ、例えば、成分又は剤の同時、ほぼ同時、順次、連続、交互又は別個の使用を含む。本明細書で用いられる用語「固定された組み合わせ」は、活性剤が両方とも単一の実体又は用量の形で患者に同時に投与されることを意味する。本明細書で用いられる用語「固定されていない組み合わせ」は、活性剤が両方とも個他の実体として同時に、ほぼ同時に、又は特定の時間制限なく連続的に患者に投与されることを意味し、当該投与は患者の体内で治療効果レベルの２つの化合物を提供する。後者はカクテル療法にも適用されるが、それは例えば３つ以上の活性剤の投与である。
本発明で用いるための免疫チェックポイントインヒビター及びワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明に開示された本発明のｒＶＳＶによる併用治療は、例えば、抗腫瘍免疫応答を抑制する免疫チェックポイント経路の活性化によって特徴付けられ、それによって免疫監視を回避する腫瘍において有利でありうる。通常、当該腫瘍は上記の免疫チェックポイント経路遺伝子の発現増加によって特徴付けられ、これは例えば、組織又は腫瘍生検での免疫組織化学によって検出されうる。例えば、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１の発現は、腫瘍組織におけるＰＤ－１の発現をｉｎ ｓｉｔｕで評価するために、例えば２８－８、２２Ｃ３、ＳＰ１４２、又はＳＰ２６３等の特定の抗体を利用するコンパニオン診断キットを用いて行われうる。通常、腫瘍内のＰＤ－１陽性細胞の数が多いほど、その腫瘍に罹患する患者が免疫チェックポイントインヒビターによる治療に反応する可能性が高くなる。例えば、患者の１～５％で腫瘍細胞のＰＤ－１（又はＰＤ－Ｌ１）発現が検出されれば低発現、約５～１０％のＰＤ－１（又はＰＤ－Ｌ１）発現が検出されれば中程度、約１０％～約５０％以上の腫瘍細胞（例えば、細胞の約１５％、２０％、２５％、３０％、３５％から約５０％以上、６０％、７５％）でＰＤ－１（ＰＤ－Ｌ１）発現が検出されれば高（強）発現とみなされる。対応するキット又はアッセイは市販されており、例えば抗体ＳＰ１４５２、ＳＰ２６３、２２Ｃ３、又は２８－８（例えば、Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，１６：２，１３１－１３３を参照。）があげられる。したがって、本発明のワクチンとＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイントインヒビターの併用は、少なくとも低発現のＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１、好ましくは、中程度のＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１発現、好ましくは、高発現のＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１を特徴とする腫瘍の治療のために有利又は望ましい場合がある。例えば、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明のｒＶＳＶは、がんの治療及び／又は１つ以上の症状の改善に用いるために、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明のｒＶＳＶとＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１経路インヒビターを同時に、順次又は交互に投与されてよい。それにより、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１経路インヒビターを、例えば、約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重、０．１ｍｇ／ｋｇ体重、０．５ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重から約５ｍｇ／ｋｇ体重、７．５ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重、又は約２．５ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重で、かつ、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明の本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶを、上記に開示されている用量で投与してよい。
他の実施形態では、ＰＤ－１経路インヒビターを静脈内に投与し、ワクチンの第二の成分（Ｖ）、すなわち、本発明で用いられる組換えベシキュロウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換えベシキュロウイルスを腫瘍内に少なくとも１回、又は静脈内に少なくとも１回投与する。
一実施形態では、ＰＤ－１経路インヒビターは、例えば、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明の本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶの投与の１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日前に少なくとも１回、２回又は３回投与されてよい。あるいは、ＰＤ－１経路インヒビター又はＰＤ－Ｌ１経路インヒビターは、例えば、例えば、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明の本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶとほぼ同時又は交互に投与されてよい。本明細書で用いられる用語「ほぼ同時」は、ワクチンの第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）と、ＰＤ－１経路インヒビター又はＰＤ－Ｌ１経路インヒビターを、一般的に同じ期間内、例えば同じ日に投与することをいうが、必ずしも同時に投与するとは限らない。本明細書で用いられる用語「交互投与」は、一般に、例えば、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明の本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶ又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路インヒビターを、例えば数日又は１週間にわたって一定期間投与し、その後の一定期間、例えば数日又は１週間にわたって各々の他の治療薬を投与し、その後、１サイクル以上のパターンを繰り返すことをいう
例えば、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明の本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶ及びＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１経路インヒビターは、例えば連続的に投与することもでき、これは例えば、連続的投与という場合もある。例えば、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明の本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶ又はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路インヒビターの用量を１回以上、最初の期間（例えば、数日又は１週間の経過）に投与し、その後、２番目の期間（例えば、数日又は１週間の経過）に他の各々の治療薬（ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１インヒビター又は例えば、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明の本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶ）を投与してよい。また、必ずしも規則的な順序にではなく、本発明で用いるためのＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路インヒビター又は例えば、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明の本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶを治療期間中の異なる日に投与することを含む、重複投与スキームを採用することもできる。例えば、用いる薬剤や被験者の状態に応じて、これらの一般的なガイドラインの変形を採用することもできる。
一実施形態では、例えば、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明の本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶを、例えば本明細書に記載される投与スキームに投与することができ、これにより、ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１経路インヒビターを、ワクチンの第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）の投与の間に断続的に投与されてよい。すなわち、本発明による治療方法は、本発明のワクチン及び本明細書に記載されるＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１経路インヒビターが必要な患者に投与することを含む。
一実施形態では、例えば、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明の本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶを併用しうる。例えば、例えば、本発明で用いるためのワクチン、又はその成分（Ｋ）又は（Ｖ）のいずれか、又は本発明の本明細書に記載される本発明のｒＶＳＶと組み合わせてワクチンとして提供される。本明細書に記載される本発明の第一の成分（Ｋ）と本発明の第二の成分（Ｖ）、又は本明細書に記載される本発明によるｒＶＳＶの併用は、本明細書に記載される１つ以上の化学療法剤、本明細書に記載される１つ以上の免疫療法剤、又は本明細書に記載される１つ以上の標的薬とさらに組み合わせることができることを理解すべきである。一実施形態では、（例えば治療では）本明細書に記載される本発明の第二の成分（Ｖ）、又は本明細書に定義された本発明のｒＶＳＶは、本明細書に記載される本発明の第一の成分（Ｋ）と併用するためのものである。第二の成分（Ｖ）、又は本発明に開示された本発明のｒＶＳＶの第一の成分（Ｋ）との併用は、本発明に開示された１つ以上の化学療法剤、本発明に開示された１つ以上の免疫療法剤、又は本発明に開示された１つ以上の標的薬とさらに併用されてよいことを理解されたい。本発明に記載されたように用いられる例示的な組み合わせには、本発明の第一の成分（Ｋ）及び／又は本発明の第二の成分（Ｖ）の組み合わせ、又はキットにおいて本発明に記載された第一及び第二の医薬組成物を提供することが含まれる。当該組み合わせは、本明細書に記載される発明の第一の成分（Ｋ）の提供、又は本明細書に記載される第一の医薬組成物と（ｉ）本明細書に記載される１つ以上の化学療法剤、（ｉｉ）上記に開示されている１つ以上の免疫療法剤、（ｉｉｉ）１つ以上の標的薬との組み合わせの提供、又は本明細書に記載される発明の第二の成分（Ｖ）本明細書に記載される発明のｒＶＳＶ又は本明細書に記載される第一の医薬組成物と（ｉｖ）本明細書に記載される１つ以上の化学療法剤、（ｖ）上記に開示されている１つ以上の免疫療法剤、（ｖｉ）１つ以上の標的薬との組み合わせの提供に限定されてよい。
一側面では、本発明は、本明細書で定義される本発明の第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）を含む組み合わせを提供する。一実施形態では、本発明の第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）を含む組み合わせは、ワクチンとして用いるためのものである。したがって、本発明の組み合わせは、本明細書に記載されるように用いられるためのものであり、例えば、本明細書に記載される投与スキームのいずれかに投与されてよく、又は、例えば、本明細書に記載されるような１つ以上のさらなる治療活性剤と組み合わせてよい（例えば、化学療法剤、標的薬、又は免疫チェックポイントインヒビター等の免疫療法剤は、全て上記のとおりである）。
たとえば、当該組み合わせ、キット、及び用途では、好ましくは、以下の成分：
（１）配列番号６０で表されるアミノ酸配列含む、又はからなる第一の成分（Ｋ）の複合体；及び
（２）ゲノムにコードされている第二の成分（Ｖ）の組換え水疱性口内炎ウイルス、好ましくは、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスを含み、ここで、水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０と配列同一性が少なくとも、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９２％、９１％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は同一のＲＮＡ配列を含むか又はからなり、好ましくは、水疱性口内炎ウイルスは、そのゲノム中に以下の、
配列番号５４からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、
配列番号５５からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、
配列番号５６からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、
配列番号５７からなるアミノ酸配列からなる大型タンパク質（Ｌ）、
配列番号５８からなるアミノ酸配列からなる糖タンパク質（ＧＰ）、及び
配列番号４５又は５９からなるアミノ酸配列を含む抗原ドメイン、をコードする、ものが組み合わされてよい。
さらに、当該組み合わせ、キット及び用途は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の免疫チェックポイントインヒビターをさらに含んでよく、好ましくは、ペムブロリズマブ、ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択される、免疫チェックポイントインヒビター、を含む。
それに応じて、本発明で用いるための組み合わせは、例えば、本明細書に記載されるような投与計画及び投与レジメンに組み合わせを当該患者に投与することを含む、がんに罹患した患者を治療する方法においても用いることができる。
さらに、本発明は、本明細書に記載されるような腫瘍又はがんの治療、予防及び／又は安定化のためのワクチン接種に用いるためのキットも提供し、これは、本明細書に記載されているような医薬組成物又は本明細書に記載されているようなワクチンと、本明細書に記載されるような結腸直腸がん又は転移性結腸直腸がん等の腫瘍又はがんの予防及び／又は治療における本発明で用いるための当該医薬組成物又は当該ワクチンの使用説明書を含む。
一側面では、本発明は、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞による腫瘍浸潤を高める方法を提供し、それにより、本発明のワクチンを、本明細書に開示されているように、哺乳類、好ましくは、ヒトに投与することを含む。例えば、本発明の方法による使用のための本発明のワクチンは、例えば、本明細書に開示されているように、免疫チェックポイントインヒビターと併用投与されてよい。
さらなる側面では、本発明は、腫瘍又はがんの治療、予防及び／又は安定化に用いるための、好ましくは、がんの予防及び／又は治療に用いるためのワクチン接種キットを提供し、キットは、以下の：
（i）上記に定義された本発明のワクチン、
（ii）上記に記載された少なくとも１つの薬理活性剤
の少なくとも１つを含む。
特に、本発明のキットは、その各部分（ｉ）、（ｉｉ）の複数の成分を含んでよい。例えば、本発明のキットは、本発明の少なくとも２つの異なるワクチンを部分（ｉ）として含むことができ、及び／又は本明細書に記載されるように複数の薬理活性剤を含んでよい。
例えば、本発明のキットは、部分（ｉ）として本発明の２つの異なるワクチンを含むことができ、例えば、本発明に開示されているように、異なる抗原を含んでよい異なる抗原ドメインを含むワクチンの２つの第一の成分を含んでよい。本発明に開示されているキットは、例えば、異なるＴＬＲ作動薬を含む、又は異なるＣＰＰを含む、部分（ｉ）として本発明の複数のワクチンを含んでよい。例えば、本発明に開示されているキットは、本発明に開示されている２つ、３つ又は４つの医薬活性剤等、複数を含んでよい。当該医薬活性剤の組み合わせは、治療されるがん及び／又は病態に依存する。
本明細書に記載されるようなキットの様々な成分は、１つ以上の容器に包装されてよい。上記の成分は、凍結乾燥又は乾燥された形で提供されるか、適当な緩衝液に溶解されてよい。さらに、本発明のキットには、場合によっては、使用説明書が含まれてよい。
好ましい実施形態では、本発明のキットは、結腸直腸がん、転移性結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がん、又は膵臓がんの治療に用いるためのものである。
当該キットは、本明細書に記載される本発明のワクチン（用）、及び／又は本明細書に記載される医薬組成物を用いることによって、好ましくは、さらに、結腸直腸がんを治療するための指示が記載された添付文書又は説明書を含む。
一実施形態では、本発明は、細胞が本発明の組換えラブドウイルス又は組換え水疱性口内炎ウイルスを産生することを特徴とするウイルス産生細胞も提供する。
例えば、本発明の組換えラブドウイルス又は組換え水疱性口内炎ウイルスの生産に用いることができる細胞は、いかなる由来のものであってよく、単離細胞として、又は細胞集団に含まれる細胞として存在してよい。本発明の組換えラブドウイルス又は組換え水疱性口内炎ウイルスを産生する細胞は、哺乳類細胞であることが好ましい。より好ましい実施形態では、本発明のウイルス産生細胞は、哺乳類細胞が、多能性成人前駆細胞（ＭＡＰＣ）、神経幹細胞（ＮＳＣ）、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ細胞、いかなるＨＥＫ２９３細胞（例：ＨＥＫ２９３Ｆ又はＨＥＫ２９３Ｔ）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞又はＶｅｒｏ細胞又は骨髄由来腫瘍浸潤細胞（ＢＭ－ＴＩＣ）であることを特徴とする。
あるいは、本発明のウイルス産生細胞は、ヒト細胞、サル細胞、マウス細胞又はハムスター細胞であってよい。当業者は、所与の細胞がウイルスを産生するか否か、ひいては特定の細胞が本発明の範囲内に入るか否かを試験するのに用いるのに適した方法を知っている。この点において、本発明の細胞が産生するウイルスの量は特に限定されない。好ましいウイルス力価は、それ以上の下流処理を行わずに感染後の所定の細胞培養の粗上清から１×１０７ ＴＣＩＤ５０／ｍｌ以上又は１×１０８ゲノムコピー／ｍｌ以上である。
特定の実施形態では、本発明のウイルス産生細胞は、ＶＳＶのタンパク質Ｎ、Ｌ、Ｐ及びＭをコードする遺伝子ｎ、ｌ、ｐ及びｍと、ＬＣＭＶ－ＧＰ、Ｄａｎｄｅｎｏｎｇ－ＧＰ又はＭｏｐｅｉａ－ＧＰ糖タンパク質をコードする遺伝子ｇｐからなる群から選択される遺伝子の少なくとも１つの発現のための１つ以上の発現カセットを含むことを特徴とする。
本発明の文脈におけるウイルス産生細胞としては、複製不可能なベクターから本発明の組換えラブドウイルス又は組換え水疱性口内炎ウイルスを生産するための古典的なパッケージング細胞のほか、複製可能なベクターから組換えラブドウイルスを生産するための産生細胞があげられる。パッケージング細胞は、通常、パッケージングされるべき各ベクターにはない、及び／又はウイルスの生産に必要な、必須遺伝子の発現のための１つ以上のプラスミドを含む。当該細胞は、目的に適した適当な細胞株を選択できる当業者に公知である。
本発明の組換えラブドウイルス又は水疱性口内炎ウイルスは、例えば、当業者に公知である方法に製造することができ、（１）細胞に導入されたｃＤＮＡを用いるか、又は（２）ヘルパー細胞に導入されたｃＤＮＡの組み合わせを用いるか、又は（３）細胞に導入されたｃＤＮＡをさらに感染性又は非感染性の組換えラブドウイルスを製造するために必要な残りの成分又は活性をトランスに提供するヘルパー／ミニウイルスに感染させることができるが、これらに限定されない。当該方法のいずれか（例：ヘルパー／ミニウイルス、ヘルパー細胞株、又はｃＤＮＡトランスフェクションのみ）を用いる場合、必要な最小成分は、（１）ラブドウイルスＮタンパク質、Ｐタンパク質、及びＬタンパク質によるゲノム（又は抗原ゲノム）ＲＮＡのカプセル化、及び（２）ゲノム又は抗原ゲノム（複製中間体）ＲＮＡ同等物の複製のためのシス作用シグナルを含むＤＮＡ分子である。
複製要素又はレプリコンは、ラブドウイルスのリーダー配列とトレーラー配列の５’と３’末端に最小に含まれるＲＮＡの鎖である。ゲノムの意味では、リーダーは３’末端にあり、トレーラーは５’末端にある。これら２つの複製シグナルの間に配置されたＲＮＡは、順番に複製される。リーダー領域とトレーラー領域はさらに、Ｎタンパク質によるカプセル化と、転写と複製を開始するために必要なポリメラーゼ結合のために、最小のシス作用要素を含まなければならない。組換えラブドウイルスを調製するために、Ｇ遺伝子を含むミニウイルスは、Ｇタンパク質ｍＲＮＡを生成するための適当な開始及び終了シグナルがあるリーダー領域、トレーラー領域、及びＧ遺伝子も含む。ミニウイルスがさらにＭ遺伝子を含む場合、Ｍタンパク質ｍＲＮＡを生成するための適当な開始及び終了シグナルも提示する必要がある。
組換えラブドウイルスゲノム内に含まれるいかなる遺伝子について、その遺伝子は、それらの遺伝子の発現及びタンパク質産物（Ｓｃｈｎｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，ｐ．２３１８－２３２３， １９９６）を生成しうる適当な転写開始及び終了シグナルによって隣接することになる。「非感染性」の組換えラブドウイルスを生産するためには、組換えラブドウイルスは、最小レプリコン要素及びＮ、Ｐ、及びＬタンパク質を備え、Ｍ遺伝子を含む必要がある。これにより、細胞から出芽したウイルス粒子が生成されるが、非感染性粒子である。「感染性」粒子を生成するためには、ウイルス粒子は、付着タンパク質又は受容体リガンド等を用いて、ウイルス粒子の結合及び融合を仲介できるタンパク質をさらに含まなければならない。ラブドウイルスの本来の受容体リガンドはＧタンパク質である。
組換えラブドウイルスを構築しうるあらゆる細胞が用いられる。感染性ウイルス粒子を調製する１つの方法としては、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼ又はＴ３又はＳＰ６ポリメラーゼ等の他の適当なバクテリオファージポリメラーゼをコードするプラスミドコードに感染させた適当な細胞株があげられる。次に、Ｇ、Ｎ、Ｐ、Ｌ及びＭのラブドウイルスタンパク質をコードする遺伝子を含む個々のｃＤＮＡを細胞に導入する。これらのｃＤＮＡは、組換えラブドウイルス粒子を構築するためのタンパク質を提供する。細胞は、当業界で公知であるいかなる方法でトランスフェクトされてよい。
また、細胞株には、ラブドウイルスゲノムＲＮＡ相当物を含む「ポリシストロン性ｃＤＮＡ」もトランスフェクトされる。感染性の組換えラブドウイルス粒子が感染細胞内で溶解することを意図する場合、Ｎ、Ｐ、Ｍ及びＬタンパク質をコードする遺伝子は、あらゆる異種核酸セグメントと同様に存在しなければならない。感染性の組換えラブドウイルス粒子が溶解することを意図しない場合、Ｍタンパク質をコードする遺伝子はポリシストロンＤＮＡに含まれない。「ポリシストロンｃＤＮＡ」とは、Ｎ、Ｐ及びＬタンパク質をコードする遺伝子を含む少なくとも転写単位からなるｃＤＮＡを意味する。組換えラブドウイルスポリシストロンＤＮＡは、タンパク質変異体又はそのポリペプチド断片、又は治療用核酸又はタンパク質をコードする遺伝子を含んでよい。あるいは、最初に産生されたウイルス粒子又はその断片に最初に結合するいかなるタンパク質をトランスで供給することもできる。
また、本明細書に記載される本発明の抗原ドメインをコードするポリシストロンｃＤＮＡも考えられる。考えられるポリシストロンｃＤＮＡは、タンパク質変異体をコードする遺伝子、レポーターをコードする遺伝子、治療用核酸、及び／又はＮ－Ｐ－Ｌ遺伝子又はＮ－Ｐ－Ｌ－Ｍ遺伝子のいずれかを含んでよい。組換えラブドウイルスを生成する最初のステップは、ｃＤＮＡからゲノム又は抗原ゲノム同等物であるＲＮＡの発現である。その後、そのＲＮＡはＮタンパク質によってパッケージ化され、次にＰ／Ｌタンパク質によって複製される。こうして作られた組換えウイルスは回収できる。組換えＲＮＡゲノムにＧタンパク質が存在しない場合、通常はトランス状態で供給される。Ｇタンパク質とＭタンパク質がともに存在しない場合、両方ともトランス状態で供給される。「非感染性ラブドウイルス」粒子を調製するための手順は、細胞に導入されたポリシストロン性ｃＤＮＡがラブドウイルスのみのＮ、Ｐ及びＬ遺伝子を含むことを除いて、上記と同じでよい。非感染性ラブドウイルス粒子のポリシストロン性ｃＤＮＡは、さらにタンパク質をコードする遺伝子を含んでよい。
通常、導入された細胞は、望ましい温度（通常約３７度）で少なくとも２４時間インキュベートされる。 非感染性ウイルス粒子については、上清を採取し、ウイルス粒子を分離する。感染性ウイルス粒子については、ウイルスを含む上清を採取し、新鮮な細胞に移す。新鮮な細胞を約４８時間培養し、上清を採取する。
例えば、本発明の組換えラブドウイルス又は組換え水疱性口内炎ウイルスの生産のために代替的に用いることができる細胞株は、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２８９（２０１９）１４４－１４９に開示されている方法によるヒト細胞株２９３ＳＦ－３Ｆ６である。
本発明はまた、本明細書に記載されるワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体をコードするポリヌクレオチド、好ましくは、配列番号４５又は６０で表されるアミノ酸配列をコードする本発明のポリヌクレオチド、又は、配列同一性が少なくとも７５％、８０％、８５％、より好ましくは、少なくとも９０％、９５％、９８％であるその機能的変異体をコードする。本明細書で用いられる用語「ポリヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド塩基の一本鎖又は二本鎖ポリマーを５’から３’末端まで読み取ったものをいう。ポリヌクレオチドとしてはＲＮＡ及びＤＮＡがあげられ、天然源から単離されたり、インビトロで合成されたり、天然分子と合成分子の組み合わせから調製されたりする。ここでは、ポリヌクレオチド分子の長さをヌクレオチド（ｎｔと略記）又は塩基対（ｂｐと略記）の観点から示す。本明細書で用いられる用語「ヌクレオチド」は、文脈が許す限り、一本鎖と二本鎖の両方の分子に対して用いられる。この用語を二本鎖分子に適用する場合、全長を示すために用いられ、用語「塩基対」と同等であると理解されるであろう。
一側面では、本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。本明細書で用いられる用語「宿主細胞」は、原核生物（原核生物の宿主細胞）又は真核生物の細胞（真核生物の宿主細胞）をいう。例えば、本発明で用いるための宿主細胞は、酵母細胞、昆虫細胞又は哺乳類細胞であってよい。例えば、本発明の宿主細胞は、Ｓｆ９、Ｓｆ２１、Ｓ２、Ｈｉ５又はＢＴＩ－ＴＮ－５Ｂ１－４細胞から選択された昆虫細胞であってよく、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｆｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓ、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ及びＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓから選択された酵母細胞であってよく、又は、例えば、本発明の宿主細胞は、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨＥＫ２９３Ｅ、ＨＥＫ２９３Ｆ、ＮＳ０、ｐｅｒ、Ｃ６、ＭＣＦ－７、ＨｅＬａ、Ｃｏｓ－１、Ｃｏｓ－７、ＰＣ－１２、３Ｔ３、Ｖｅｒａ、ｖｅｒｏ－７６、ＰＣ３、Ｕ８７、ＳＡＯＳ－２、ＬＮＣＡＰ、ＤＵ１４５、Ａ４３１、Ａ５４９、Ｂ３５、Ｈ１２９９、ＨＵＶＥＣ、Ｊｕｒｋａｔ、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＤＡ－Ｂ－４６８、ＭＤＡ－ＭＢ－４３５、Ｃａｃｏ－２、ＣＨＯ、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ－Ｂ１１、ＣＨＯ－ＤＧ４４、ＢＨＫ、ＡＧＥ１．ＨＮ、Ｎａｍａｌｗａ、ＷＩ－３８、ＭＲＣ－５、ＨｅｐＧ２、Ｌ－９２９、ＲＡＢ－９、ＳＩＲＣ、ＲＫ１３、１１Ｂ１１、１Ｄ３、２．４Ｇ２、Ａ－１０、Ｂ－３５、Ｃ－６、Ｆ４／８０、ＩＥＣ－１８、Ｌ２、ＭＨ１Ｃ１、ＮＲＫ、ＮＲＫ－４９Ｆ、ＮＲＫ－５２Ｅ、ＲＭＣ、ＣＶ－１、ＢＴ、ＭＤＢＫ、ＣＰＡＥ、ＭＤＣＫ．１、ＭＤＣＫ．２、及びＤ－１７から選択された哺乳類細胞であってよい。本発明で用いるための原核細胞としては、例えば、ＢＬ２１、Ｌｅｍｏ２１、大腸菌Ｋ１２を含む大腸菌等の細菌があげられてよい。本発明の宿主細胞は、例えば、ＬａＶａｌｌｉｅ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９５）５．１．１－５．１．８；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９８）５．１０．１－５．１０．４１等の標準的なプロトコルに、本明細書に記載される本発明の第一の成分（Ｋ）の複合体の組換え生産に用いることができる。
さらなる側面では、本発明は、水疱性口内炎ウイルスと組み合わせて治療、特に予防接種レジメンで用いるための配列番号６０のアミノ酸配列を含むか又は含むポリペプチドを提供し、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる。
好ましい実施形態では、本発明は、水疱性口内炎ウイルスと併用して治療、特に予防接種レジメンで用いるための配列番号６０のアミノ酸配列を含むか又は含むポリペプチドであって、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする、ポリペプチドを提供する。
もう一つの関連する側面では、本発明は、治療用、特に予防接種レジメンのために用いる水疱性口内炎ウイルスに関し、ここで、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる。
好ましい実施形態では、本発明は、本発明は、水疱性口内炎ウイルスに関し、ここで、水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムは、治療用、特に予防接種レジメンで用いるために、配列番号６０のアミノ酸配列を含むか又は構成するポリペプチドと併用し、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする。
好ましくは、上記で用いるためのポリペプチド及びウイルスにおいて、以下の成分の：
（１）配列番号６０で表されるアミノ酸配列からなる又は含むポリペプチド；及び
（２）前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、ここで、前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、をコードする、が組み合わされる。
さらに、上記で用いるためのポリペプチド及びウイルスは、さらに、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の免疫チェックポイントインヒビターとの組み合わせをさらに含んでよく、好ましくは、ペムブロリズマブ、ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択される。
本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態に範囲を限定されるものではない。実際、本明細書に記載されるものに加えて、本発明の様々な変更は、前述の説明、及び本発明の原理を例示する添付の図及び詳細な例から、当業者に明らかになるであろう。
材料及び方法
倫理声明
すべての動物実験は、動物保護に関するスイス連邦法、オーストリア連邦科学研究経済省及び機関及び州のジュネーブ獣医当局によって承認され、各々オーストリアのインスブルック医科大学及び動物保護に関するスイス連邦法の機関ガイドラインに実施された。
マウス
６～８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｒｊ又はＢ６（Ｃ）／Ｒｊ－Ｔｙｒｃ／ｃマウスをＪａｎｖｉｅｒ（フランスのル・ジェネスト島）又はＣｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ（フランスのリュブレス）から得た。
着床用腫瘍細胞株
Ｅ．Ｇ．ＯＶＡ細胞はＡＴＣＣから購入され、０．４ｍｇ／ｍｌのゲネチシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を含む完全なＲＰＭＩ １６４０培地で維持した。Ｂ１６－ＯＶＡ細胞はＢｅｒｔｒａｎｄ Ｈｕａｒｄ（フランスのグルノーブル所在のグルノーブル＝アルプ大学）から提供され、１ｍｇ／ｍｌのゲネチシンを含む完全なＲＰＭＩ １６４０培地で維持した。ＴＣ－１細胞はＴ．Ｃ．Ｗｕ（ジョンズ・ホプキンス大学（米国メリーランド州））から提供され、０．４ｍｇ／ｍｌのゲネチシンを含む完全なＲＰＭＩ １６４０で培養した。ＭＣ－細胞はＧｏｔｔｆｒｉｅｄ Ｂａｉｅｒ（オーストリア・インスブルック医科大学）からの厚意の贈呈であり、５％のゲンタマイシンを含む完全なＤＭＥＭで維持した。腫瘍移植用に、マウスに３×１０５のＥ．Ｇ７－ＯＶＡ細胞、２×１０５のＢ１６－ＯＶＡ又は２×１０５のＭＣ－３８細胞を右側面に、又は１×１０５のＴＣ－１細胞を背面に皮下注射した。腫瘍の成長を監視するために、キャリパーを用いて腫瘍の直径を週に２～３回測定し、体積を
０．４×長さ×幅２
の式を用いて計算した。腫瘍の大きさが各々の施設の獣医当局によって指定されたサイズに達した場合、又は腫瘍に潰瘍の兆候が見られた場合に、マウスを屠殺した。動物はＣＯ２窒息と頸椎脱臼によって安楽死させた。
ワクチン構築物の生成
第一の成分（Ｋ）の複合体の組換えタンパク質ワクチン構築物は、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ社によって自社で設計され、大腸菌で産生された。精製プロセスでは、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ １１４による広範な洗浄とその後のアフィニティークロマトグラフィーによって、ワクチンからエンドトキシンを除去した。エンドトキシン含有量は、ＬＡＬ発色分析を用いて各ワクチンバッチで定量した。エンドトキシン濃度が（ガイドライン）１０ ＥＵ／ｍｇタンパク質未満のバッチのみを、さらなるインビトロ及びインビボ実験に用いた。第一の成分（Ｋ）ＯＶＡワクチンは、オボアルブミン由来のＣＤ８及びＣＤ４Ｈ－２ｂエピトープの両方を含むが、Ｍａｄ２４（多抗原ドメイン２４）を含む第一の成分（Ｋ）は、免疫原性ネオエピトープＡｄｐｇｋ及びＲｅｐｓ１を含む。ＨＰＶ抗原に関しては、第一の成分（Ｋ）は、Ｅ７ ＨＰＶ由来のＣＤ８及びＣＤ４Ｈ－２ｂエピトープの両方を含むＭａｄ２５（多抗原ドメイン２５）を含む。
組換えウイルスＶＳＶ－ＧＰ、ＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡ及びＶＳＶ－ＧＰ－ルシフェラーゼ（ＶＳＶ－ＧＰ－Ｌｕｃ）は以前に記載されているが（Ｍｕｉｋ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７４（１３）：３５６７－３５７８；Ｔｏｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８８（９）：４８９７－４９０７；Ｄｏｌｄ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ ３：１６０２１）、ＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ２４及びＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶをｄｅ ｎｏｖｏで生成した。ＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ２４ ２４（Ｙａｄａｖ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎａｔｕｒｅ ５１５（７５２８）：５７２－５７６）は免疫原性ネオエピトープＡｄｐｇｋ及びＲｅｐｓ１を発現し、ＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶは野生型Ｅ２に加えて弱毒化Ｅ６／Ｅ７融合構築物（Ｃａｓｓｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｖａｃｃｉｎｅ ２２（３－４）：５２０－５２７）をコードする。すべての組換えウイルス変異体を、上記のようにレスキューし、自家生産さした（Ｈｅｉｌｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ｖｉｒｕｓｅｓ １１：９８９）。ウイルスはショ糖クッションを用いて精製し、ＢＨＫ－２１細胞（ＡＴＣＣ）で力価測定した。
予防接種とチェックポイント阻害
非腫瘍担がん動物の予防接種では、マウスを異なる治療群に無作為に割り付けた。Ｅ．Ｇ７－ＯＶＡモデルでは、マウスは腫瘍移植後５日目に最初のワクチン接種を受け、その後７日間隔で３回の追加免疫を受けた。ＭＣ－３８腫瘍を移植したマウスは、腫瘍移植後３日目、１０日目、１７日目、２４日目にワクチン接種を受けた。ＴＣ－１腫瘍があるマウスは、各治療群の平均腫瘍サイズが同程度になるように、腫瘍移植後７日目の初回免疫前に腫瘍サイズに基づいて群分けした。腫瘍移植後１４、２８、４９日目にワクチン接種が繰り返した。マウスには、２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）の複合体（関連するＴＡＡを標的とする）を皮下投与するか又は、第二の成分（Ｖ）の各々のウイルス（ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ又はＶＳＶ－ＧＰ）の１×１０７ ＴＣＩＤ５０を、上記の日に外側尾静脈に静注してのいずれかでワクチン接種を行った。
チェックポイント阻害のために、Ｅ．Ｇ７－ＯＶＡ担がんマウスに、腫瘍移植後７日目～４日間ごとにαＰＤ－１抗体（クローンＲＭＰ １－１４、ＢｉｏＸｃｅｌｌ）２００μｇを静脈内投与した。ＭＣ－３８腫瘍モデルでは、腫瘍移植後６、１０、１３、１７、２０、２４、２７日目に２００μｇのαＰＤ－Ｌ１抗体（クローン１０Ｆ．９Ｇ２、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を腹腔内注射した。ＴＣ－１腫瘍があるマウスには、腫瘍移植後７、１５、２８、４９日目に２００μｇのαＰＤ－１抗体を静脈内注射した。
フローサイトメトリー
４０μＭセルストレーナーを用いた機械的解離によって脾臓と骨髄から単一細胞懸濁液を調製した。その後、Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ（商標）Ｌｙｓｉｎｇバッファー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて赤血球を溶解した。全血については、表面染色後に溶解した。腫瘍浸潤白血球（ＴＩＬ）は、製造会社の指示に従い、マウス腫瘍解離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いて精製した。簡単に説明すると、ＴＣ－１腫瘍組織をメスで２～４ｍＭに切断し、腫瘍解離酵素（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を含むプレーンＤＭＥＭ培地に懸濁し、固形腫瘍プログラムを用いて加熱システム付きＧｅｎｔｌｅ ＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）で消化した。酵素による消化は、冷ＰＢＳ ０．５％ ＢＳＡ溶液で細胞を冷却して停止させた。７０ｍＭセルストレーナーでろ過した後、ＣＤ４５＋細胞を製造会社の指示に従いＣＤ４５ ＴＩＬマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いて精製し、フローサイトメトリー分析に用いた。
腫瘍浸潤性白血球サブセットの表現型判定には、ＣＤ４５（３０Ｆ１１）、ＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０）、ＣＤ３（１７Ａ２）、ＣＤ４（ＲＭＡ４－４）、ＣＤ８（５３－６．７）、ＣＤ２５（３Ｃ７）、ＫＬＲＧ１（２Ｆ１）、ＣＤ２７９（２９Ｆ．１Ａ１２）、ＣＤ３６６（ＲＭＴ３－２３）、Ｌｙ６Ｃ（ＡＬ－２１）、Ｌｙ６Ｇ（１Ａ８）、Ｌｙ６Ｃ／Ｇ（ＲＢ６－８Ｃ５）、ＣＤ３３５（２９Ａ１．４）、ＣＤ１１ｃ（ＨＬ３）、ＣＤ１０３（Ｍ２９０）、Ｉ－Ａ／Ｉ－Ｅ（Ｍ５／１１４．５．２）、ＦｏｘＰ３（ＦＪＫ－１６ｓ）、ＣＤ２０６（Ｃ０６８Ｃ２）、ＣＤ６８（ＦＡ－１１）、ＣＤ２７９、ＣＤ３６６、ＣＤ６８、ＣＤ２０６、Ｌｙ６Ｃ／ＧはＢｉｏｌｅｇｅｎｄ製、ＦｏｘＰ３はｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製であるが、それ以外はＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（米国カリフォルニア州サンノゼ）製である、表面を染色した。死滅細胞は、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社のＬＩＶＥ／ＤＥＡＤイエロー又はアクア蛍光反応性染料で特定し、分析から除外した。
細胞内染色は、示されたペプチドで刺激した後、ブレフェルジンＡ（ゴルジプラグＢＤバイオサイエンス）の存在下、ＣＤ１０７ａ ｍＡｂ（１Ｄ４Ｂ、ＢＤバイオサイエンス）の存在下で６時間行った。細胞内染色は、ＩＦＮ－γ（ＸＭＧ１．２、ＢＤバイオサイエンス）、ＴＮＦ－α（ＭＰ６－ＸＴ２２、ＢＤバイオサイエンス）、及び対応するアイソタイプコントロール（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対するｍＡｂで行った。グランザイムＢ細胞内染色では、ブレフェルジンＡ（ＢＤバイオサイエンス株式会社ゴルジプラグ）の存在下で細胞を４時間培養した。グランザイムＢに対するｍＡｂで細胞内染色を行った（ＲＥＡ２２６ミルテニ）。製造会社の指示に従いＢＤバイオサイエンスキットを用いて固定化と透過化を行った。試料は、ＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｇａｌｌｉｏｓフローサイトメーター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）、又はＡｔｔｕｎｅ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で取得した。
フローサイトメトリーデータを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０．５．３（ＦｌｏｗＪｏ，ＬＬＣ（米国オレゴン州））又はＫａｌｕｚａ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）ソフトウェアを用いて分析した。
トランスクリプトーム分析
採取時に腫瘍組織を液体窒素でスナップ凍結し、ＲＬＴ緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ）とＳｐｅｅｄＭｉｌｌ ＰＬＵＳ（ドイツ イェナ Ａｎａｌｙｔｉｋ Ｊｅｎａ）を用いてホモジネートを調製した後、フェノール／クロロホルム抽出を行った。その後、ＲＮＡを含む水相を処理し、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、製造会社の指示に従いＲＮＡを単離した。抽出したＲＮＡの品質は、Ｔａｐｅｓｔａｔｉｏｎ ４２００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）のＲＮＡ ＳｃｒｅｅｎＴａｐｅ Ａｓｓａｙ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ドイツヴァルトブロン））を用いて評価した。抽出したＲＮＡについて、ｎＣｏｕｎｔｅｒ ＰａｎＣａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｅ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ Ｐａｎｅｌ及びｎＣｏｕｎｔｅｒ ＦＬＥＸ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ（ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（米国ワシントン州シアトル））を用いて発現の差異を分析した。プロファイリングされたデータを、製造会社の推奨事項（Ｋｕｌｋａｒｎｉ（２０１１）“Ｄｉｇｉｔａｌ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ ｎＣｏｕｎｔｅｒ ｓｙｓｔｅｍ．“Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｃｈａｐｔｅｒ ２５：Ｕｎｉｔ２５Ｂ．１０）で前処理し、ヒートマップを、ｎＳｏｌｖｅｒ４．０ソフトウェアを用いて生成した。ｎＳｏｌｖｅｒソフトウェアから正規化された遺伝子数を用いて、ＣｌｕｓｔＶｉｓ（Ｍｅｔｓａｌｕ ａｎｄ Ｖｉｌｏ（２０１５）“ＣｌｕｓｔＶｉｓ：ａ ｗｅｂ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｖｉｓｕａｌｉｚｉｎｇ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ ｄａｔａ ｕｓｉｎｇ Ｐｒｉｎｃｉｐａｌ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｈｅａｔｍａｐ．“Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ４３（Ｗ１）：Ｗ５６６－５７０）を用いた主成分分析（ＰＣＡ）で計算した。ベン図をｗｅｂｔｏｏｌ（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｐｓｂ．ｕｇｅｎｔ．ｂｅ／ｗｅｂｔｏｏｌｓ／Ｖｅｎｎ／）を用いて生成した。
多重化ＥＬＩＳＡ
免疫動物の血漿中に存在するサイトカイン及びケモカインを、製造会社の指示に従いＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘ（商標）Ｍｏｕｓｅ Ａｎｔｉ－Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｐａｎｅｌ（１３ ｐｌｅｘ）（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を用いて分析した。データはＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘＴＭ Ｃｌｏｕｄ－ｂａｓｅｄ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を用いて分析した。
免疫組織化学
腫瘍を４％ホルムアルデヒド緩衝液で固定し、パラフィンに包埋した。２～３μｍの厚さの切片をヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）で染色した。免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて、ＣＤ８（細胞内シグナル伝達、＃９８９４１、希釈１：２０００）に対する一次抗体を用いてＴ細胞を評価した。抗原検索セクションはクエン酸緩衝液中で加熱された。次のＨ２Ｏ２中でのインキュベーションによる内因性ペルオキシダーゼのブロッキング、タンパク質ブロッキング試薬の適用によるバックグラウンドの低減、及び各々の一次抗体の適用ステップは、手動又は自動でオートステナー（ラボビジョンＡＳ ３６０、サーモサイエンティフィック、米国フリーモント）で行った。酵素標識ポリマーとジアミノベンジジンをクロモゲンとして抱合した二次抗体製剤を用いた。切片をヘマトキシリンで対比染色した。治療レジメンに盲検化された経験豊富な病理医が、オリンパスＢＸ－５３顕微鏡（東京・オリンパス）で切片を評価した。
統計
プリズムソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて統計解析を行い、Ｐ＜０．０５であれば統計的に有意であるとみなした。使用された統計的検定には、図の凡例に示されているように、対になっていない両側ｔ検定、Ｔｕｋｅｙの多重比較による一方向ＡＮＯＶＡ、Ｓｉｄａｋの多重比較による２方向ＡＮＯＶＡ検定、Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ検定、Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ検定、及びＬｏｇ－ｒａｎｋ検定が含まれた。Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｙｅｋｕｔｉｅｌｉの手順を用いて、ｔ検定によって返されるｐ値からＦＤＲを計算した。
実施例
特に断りのない限り、以下に記述する例では、ＫＩＳＩＭＡともいう第一の成分（Ｋ）は、（ｉ）配列番号２で表される細胞透過性ペプチド（Ｚ１３）、（ｉｉ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む（マルチ）抗原ドメイン（Ｍａｄ）、及び（ｉｉｉ）配列番号６又は配列変異体配列番号７のいずれかで表されるＴＬＲペプチド作動薬Ａｎａｘａの複合体であり、（ｉ）から（ｉｉｉ）までの成分はＮ末端からＣ末端の順に共有結合する。構成体Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ、Ｚ１３Ｍａｄ１０Ａｎａｘａ及びＺ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａにおいて、ＴＬＲペプチド作動薬Ａｎａｘａは配列番号６で表される配列である。構成体Ｚ１３Ｍａｄ２４Ａｎａｘａ、Ｚ１３Ｍａｄ２５Ａｎａｘａ及びＺ１３Ｍａｄ３９Ａｎａｘａにおいて、ＴＬＲペプチド作動薬Ａｎａｘａは配列番号７で表される配列である。ＫＩＳＩＭＡ－ＯＶＡはＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａである。
プライミングとして第一の成分（Ｋ）を使用し、かつ、第二の成分（Ｖ）を用いる異種プライムブーストワクチン接種は、最も高い抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答を誘発する。
キシマペプチドワクチンとＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ腫瘍溶解性ワクチンの異種混合を特徴づけるために、モデル抗原（ＯＶＡ）、ネオ抗原（Ａｄｐｇｋ）及びウイルス抗原（ＨＰＶ－Ｅ７）を用いて多くの免疫原性試験を行った。腫瘍がないＣ５７ＢＬ／６マウスに、ＯＶＡ及びＡｄｐｇｋ抗原（図２Ａ及び２Ｂ）については０、７、及び１４日目に、又はＨＰＶ－Ｅ７抗原（図２Ｃ）については０、７、２１、及び４２日目に、１つのプライム及び２つのブーストを用いて、ＫＩＳＩＭＡ－Ａｇ（Ｋ）又はＶＳＶ－Ａｇ（Ｖ）、又はＶＳＶ－ＧＰ－ｅｍｐｔｙ（Ｖ（φ））で３回ワクチンを接種した。各ワクチン接種の１週間後にマウスを出血させ、Ａｇ特異的ＣＤ８Ｔ細胞を検出するマルチマー染色を行い、フローサイトメトリー（ＯＶＡ抗原とＡｄｐｇｋ抗原は各群５匹、ＨＰＶ抗原は各群３匹）によって分析した。Ｚ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（ｓ．ｃ．）；ＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡ（筋肉内投与（ｉ．ｍ。））（図２Ａ）；Ｚ１３Ｍａｄ１２Ａｎａｘａ及びＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ２４（ｉ．ｖ．）（図２Ｂ）、Ｚ１３Ｍａｄ１０Ａｎａｘａ（ｓ．ｃ．）及びＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶ－Ｅ２－Ｅ６－Ｅ７（ｉ．ｖ．）（図２Ｃ）。
ＶＳＶ－ＧＰ抗原の投与経路
静脈内（ｉ．ｖ．）投与と筋肉内（ｉ．ｍ．）投与の２つの接種経路を用いて、ＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡとＺ１３Ｍａｄ５Ａｎａｘａ（ｓ．ｃ．）の併用投与をナイーブマウスで比較した。ＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡ ｉ．ｖ．によるブーストは、最も強力な循環ＯＶＡ特異的免疫応答を誘導し、ｉ．ｍ．ルート（図３参照）によって注入された場合よりもはるかに急速に減少する。観察期間終了の１３４日目には、ＯＶＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞の数もｉ．ｖ．対ｉ．ｍ．群は、脾臓と骨髄で増加した（図３参照）。
さらに、エフェクター及びメモリーＯＶＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞は、ＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡ注射、循環及びリンパ系臓器（脾臓及び骨髄）のｉ．ｍ．に対してｉ．ｖ．後に有意に高かった。
抗原特異的Ｔ細胞反応は、ＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡを皮下、ｉ．ｍ．、ｉ．ｖ．又は腹腔内（ｉ．ｐ．）で投与されたマウスでも評価された。）経路を介してＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡを投与されたマウスにおいても評価された。ＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡは皮下、腹腔内投与された。ｉ．ｍは、ｉ．ｖ．経路と比較してＯＶＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞反応が劣っていた。
本発明のワクチンの免疫原性
ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウス（１群５匹）に、０日目と２８日目（０週目と４週目）に、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ、配列番号６０）１０ｎｍｏｌを尾部基部に皮下接種し、１４日目（２週目）に、異なるＶＳＶ－ＧＰ構築物：、すなわち、ＶＳＶ－ＧＰ－空ウイルス（ＶＳＶΦ）、配列番号４５に抗原ドメインをコードするＶＳＶ－ＧＰであるＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ１２８（配列番号８０）、配列番号４５で表されるアミノ酸配列を含む抗原ドメインとアネキシンＩＩ（配列番号７）の免疫調節断片を含む配列番号７１で表されるアミノ酸配列をコードするＶＳＶ－ＧＰであるＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ１２８Ａｎａｘａ又は配列番号６０で表されるアミノ酸配列を含む複合体をゲノムにコードするＶＳＶ－ＧＰであるＶＳＶ－ＧＰ－ＡＴＰの一つである、１０７ ＴＣＩＤ５０を静脈内接種した。
ＣＥＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞を定量するために、３５日目（５週目）に血液細胞をマルチマー染色（Ａ）した。ＰＤ－１とＫＬＲＧ１（Ｂ）の発現もフローサイトメトリーで評価した。
図１３Ａは異なる実験群のマルチマー陽性細胞の比率（ＣＤ８Ｔ細胞の％）を示し、図１３Ｂはマルチマー陽性細胞中のＰＤ－１－ＫＬＲＧ１－、ＰＤ－１－ＫＬＲＧ１＋、ＰＤ－１＋ＫＬＲＧ１－、ＰＤ－１＋ＫＬＲＧ１＋の比率を示す。
末梢におけるＣＥＡ特異的免疫反応
ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウス（各群５匹）に、０日目と２８日目（０週目と４週目）に、本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ、配列番号６０）１０ｎｍｏｌを尾底に皮下接種し、１４日目（２週目）に、異なるＶＳＶ－ＧＰ構成体の一つ（ｃｆ．使用例３）のＴＣＩＤ１０７を静脈内投与した。
ＣＥＡ特異的ＩＦＮ産生Ｔ細胞を定量するために、３５日目（５週目）に脾臓細胞に対してＥＬＩＳｐｏｔ分析（Ａ）を行った。簡単に説明すると、脾臓細胞をＣＥＡペプチドプールと２４時間インキュベートした。ＣＥＡ特異的サイトカイン産生ＣＤ８Ｔ細胞を定量するために、３５日目（５週目）に脾臓細胞を細胞内染色（Ｂ）した。簡単に説明すると、脾臓細胞をＣＥＡペプチドプールと６時間インキュベートし、その中には染色とフローサイトメトリーによる分析の前に、タンパク質輸送インヒビターと５時間インキュベートしたものも含まれていた。
図１４Ａは異なる実験群のＣＥＡ特異的ＩＦＮ産生細胞（Ｔ細胞１００万個あたり）の数を示し、図１４ＢはＣＤ８Ｔ細胞中のサイトカイン産生細胞の比率を示す。
「ＡＴＰ１２８」とは、配列番号６０で表されるアミノ酸配列からなるポリペプチドからなる本発明のワクチンの第一の成分（Ｋ）の複合体をいい、「Ｍａｄ１２８」とは、配列番号４５で表されるアミノ酸配列を含む本発明の抗原ドメインをいい、「ＶＳＶφ」とは、ＬＣＭＶのＧＰのみを発現するが、ゲノム中の抗原ドメインをコードしないＶＳＶ－ＧＰをいう。
グランザイムＢ陽性循環ＣＥＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞の頻度
ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｋ、配列番号６０、（「ＡＴＰ１２８」））に、０日目と２８日目（０週目と４週目）に本発明のワクチンの第一の成分Ｋ １０ｎｍｏｌを尾底に皮下接種し、１４日目（２週目）に異なるＶＳＶ－ＧＰコンストラクトの一つである１０７ ＴＣＩＤ５０を静脈内接種した。
３５日目（５週目）に血球を細胞内染色し、ＣＥＡ特異的グランザイムＢ産生ＣＤ８Ｔ細胞を定量した。簡単に説明すると、マルチマーと細胞内染色の前に、血球をタンパク質輸送インヒビターと４時間インキュベートし、フローサイトメトリーで分析した。
図１５はＣＥＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞）中のグランザイムＢ産生細胞の比率を実験群別に示したものである。
図１５に見られるように、ＣＰＰ機能性がない抗原ドメインを含む本発明の組換えＶＳＶは、末梢において優れた多機能性ＣＥＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞応答を示す。
異種ワクチン接種は腫瘍微小環境（ＴＭＥ）における免疫抑制を逆転させる
マウスに図４Ａに示すようにワクチンを接種し、例７に記載した。ＨＰＶ Ｅ７抗原エピトープを構成する抗原ドメイン（Ｍａｄ２５、配列番号７５）とＶＳＶ－ＧＰ－Ｅ７がゲノム内に同じＥ７抗原エピトープをコードするワクチンを使用した異種プライムブースト後のＴＭＥと腫瘍浸潤白血球（ＴＩＬ）の分析は、第二の成分（Ｖ）の投与から一週間後の２７日目に評価されたＴＣ－１腫瘍モデルにおいて（「ＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶブースト」）、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ（登録商標）ベースのトランスクリプトーム分析、フローサイトメトリー、及び免疫組織化学によって行われた。
異種ＫＶワクチン接種後、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ（登録商標）ベースのトランスクリプトーム分析によってＴＣ－１ ＴＭＥの劇的な変化がいくつかの遺伝子（図１８ＡとＢ）の発現の違いによって強調されて観察された。パネル遺伝子全体の６４．９％がＫＶ治療腫瘍で上方制御されていたのに対し、同種ＶＶワクチン接種後では３６．８％であった。これは、複数の免疫経路（図１８Ａ）のより強い活性化を示す。これらの遺伝子のうち２４４はＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶの免疫活性化作用に起因しうるが、２４３の遺伝子セットは異種ワクチン接種群でのみ上方制御された（図１８Ｃ）。ＫＶ治療で独自に上方制御された遺伝子は、自然免疫応答と適応免疫応答の両方に関与する（図１９）。興味深いことに、異種ワクチン接種は、がんの進行に関与するＣｄｋｎ １ ａ及びＭｓｌｎを含む３５の遺伝子（図１８ＢとＤ）の発現も負に調節した。さらに、異種ＫＶワクチン接種は、細胞傷害性Ｔ細胞（図１８Ｅ）、樹状細胞（ＤＣ）（図１８Ｇ）、サイトカイン（図１８Ｆ）、ケモカイン（図１８Ｈ）、及び抗原プロセシングと提示（図１８Ｉ）に関連する複数の免疫遺伝子を活性化した。階層的なクラスタリングにより、特定のワクチンの組み合わせを受けたマウスの腫瘍は同様のトランスクリプトームを持っていたため、一緒にクラスター化する可能性が高いことが明らかになった。生物学的には、グランザイム（Ｇｒｚｍａ、Ｇｒｚｍｂ及びＧｒｚｍｋ）やパーフォリン（Ｐｒｆ １）（図１８Ｅ）等の細胞毒性遺伝子のレベルの上昇に加えて、ＣＴＬの浸潤の増加と抗原提示（図１８Ｉ）は、異種ワクチン接種の結果として腫瘍細胞の殺傷が強化されることを示唆した。さらに、交差提示を含むＤＣ機能と成熟を示すより多くの遺伝子が異種治療された腫瘍で上方制御され、これは抗腫瘍免疫（図１８Ｇ）を支持する。すべてのワクチンの組み合わせは抗原処理機構の構成要素を上方制御したが、相同ＶＶワクチン接種はＭＨＣＩ及びＭＨＣＩＩ分子をコードする遺伝子により強い影響を与えた；一方、ＫＶワクチン接種は非古典的ＭＨＣを積極的に制御した（図１８Ｉ）。
ＫＶワクチン接種の免疫活性化効果の結果として、炎症性サイトカインと抗炎症性サイトカインがともに上方制御された。注目すべきことに、Ｉ型及びＩＩ型インターフェロン（図１８Ｆ）のレベルの上昇は、抗原提示経路に関与する遺伝子の上方制御を説明するであろう。また、Ｔ細胞エフェクター機能に重要なＩｆｎｇやＴｎｆ等のサイトカインは、異種ワクチン接種後のＴＣ－１腫瘍で上昇した（図１８Ｆ）。最後に、ＶＶとＫＶの両方のワクチン接種は、治療されたＴＣ－１腫瘍でいくつかのケモカインの発現を誘導した。興味深いことに、腫瘍で上方制御されたサイトカインとケモカインの部分は、異種ＫＶワクチンを接種したマウスの血漿中でも上昇しており、ＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶブーストの１日後に、ＩＦＮ－γ、ＣＣＬ５、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ２、ＩＬ－６、ＣＸＣＬ１、ＩＬ－１βのレベルが上昇した（図２０Ａ）。
トランスクリプトーム分析からの観察は、腫瘍浸潤白血球（ＴＩＬ）の数（図２０Ｂ）と種類（図６）の分析によってさらに裏付けられた。主要な白血球集団は、いくつかのマーカーの組み合わせと図６に示された腫瘍内の再分配によって定量化された。骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、未熟骨髄細胞の不均一な集団、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、腫瘍関連マクロファージ－２（ＴＡＭ２は、炎症誘発性のＴＡＭ１とは異なり）等の免疫抑制細胞は、免疫療法の主要な障害である。未治療のＴＣ－１腫瘍からのＴＩＬは、主にＭ２様腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ－２）や骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）等の免疫抑制細胞で構成されており、これらを合わせると腫瘍浸潤免疫細胞の８０％以上を占めているが、Ｔ細胞は浸潤（図６ Ａ）の１％しか占めていない。治療的ワクチン接種は、ＴＩＬの深い変化を誘発し、ＣＤ８＋とＣＤ４＋の両方のＴ細胞集団の著しい流入とＴＡＭ－２の劇的な減少をもたらし、その結果、ＴＡＭ－１：ＴＡＭ－２比の上昇は再分配を示唆した。さらに、異種ＫＶワクチン接種は、腫瘍浸潤免疫細胞（図６ Ａ）の２５％以上を占めるＣＤ８＋Ｔ細胞の最も強い流入を促進した。このように、どちらのワクチン接種レジメンも免疫細胞の腫瘍への輸送を促進したが、ＫＶワクチン接種は最も高い比率のＣＴＬであるＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞を引き付け、ＴＡＭ－１：ＴＡＭ－２比を増加させることでＴＭＥをリモデリングし、腫瘍細胞のクリアランスに好ましい環境を作り出した。上記のように開示されたワクチンの使用は、ＣＤ８及びエフェクターＣＤ４Ｔ細胞の比率を増加させ、ＴＡＭ１／ＴＡＭ２比の大幅な改善を特徴とする好ましいＴＭＥを示す。
次に、免疫組織化学を実施し、免疫浸潤の位置を確認した。ブースト９日後に採取した腫瘍のＣＤ８染色では、未治療のＴＣ－１腫瘍の一般的な免疫排除表現型が確認され、腫瘍辺縁（図２０ Ｃ）に少数のＣＤ８＋Ｔ細胞が限定されていた。ＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤は、同種のＫＫ及びＶＶワクチンレジメンで増加したが、異種の組み合わせＫＶは、腫瘍の最深部に大量の細胞傷害性Ｔ細胞の存在を示した。
ワクチンの第一の成分（Ｋ）によるプライミングは末梢抗原特異的ＣＴＬの機能性を改善する
触知可能なＴＣ－１腫瘍があるマウスに、抗原ドメインがＭａｄ２５を構成する２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）のワクチンを皮下投与した。７日目と１４日目に第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶ－Ｅ２－Ｅ６－Ｅ７を静脈内投与。）の１×１０７ ＴＣＩＤ５０を接種するか、７日目と１４日目に２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）のワクチンを２回接種するか、７日目と１４日目に第二の成分（Ｖ）を２回接種する（図４）。ＣＤ８リンパ球の分析のため、ＴＣ－１腫瘍の移植後２１日目に脾臓を採取した。用いられるＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶ－Ｅ２－Ｅ６－Ｅ７には、ＨＰＶ１６に由来する３つの異なる抗原Ｅ２、Ｅ６＊、Ｅ７＊（Ｍａｄ２５の同じ抗原ドメインを含む）をコードする完全長の遺伝子が含まれる。元のＥ６とＥ７の配列は、がん原性を破棄する点突然変異を持つように変異された。ｅｘ ｖｉｖｏで再刺激されたＨＰＶ特異的ＣＤ８Ｔ細胞によるサイトカイン産生を細胞内フローサイトメトリー染色（図４Ｂ）で測定したところ、対照条件と比較してＩＦＮγ＋－ＣＤ１０７＋細胞、ＩＦＮγ＋－ＴＮＦα＋細胞、及びＩＦＮγ＋－ＴＮＦα＋－ＣＤ１０７＋細胞が有意に増加しており、異種ワクチン接種（ＫＶ）が同種ワクチン接種（ＶＶ）よりも強い反応をもたらすことが示されている。（Ｃ）脾臓ＣＤ８Ｔ細胞によるグランザイムＢ発現をフローサイトメトリーで測定したところ、異種ワクチン接種（ＫＶ）は同種ワクチン接種（ＶＶ又はＫＫ）よりも強い反応をもたらすことが示された。
非腫瘍担がん動物での結果と一致して、第一の成分（Ｋ）－ＨＰＶプライム後にＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶブーストを行うと、同種ＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶ治療と比較して、末梢でのＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度（図１６Ａ）と絶対数（図１６Ｂ）が有意に高くなった。免疫抑制性腫瘍微小環境がＴ細胞の急速な消耗を誘発することはよく公知であるため、循環抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の表現型を評価した。図１６Ｃに示すように、ＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のごく部分のみが末梢で消耗した表現型を示し、ＰＤ－１とＴｉｍ－３の発現を特徴とした。
ワクチンの第一の成分（Ｋ）によるプライミングは腫瘍内抗原特異的ＣＴＬの機能を改善する
触知可能なＴＣ－１腫瘍があるマウスに、ＴＣ－１腫瘍移植後７日目に抗原ドメインＭａｄ２５（ｓ．ｃ．を管理する。）を有するワクチンの２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）、１４日目に同じ抗原ドメインＭａｄ２５（静脈内投与。）を含む第二の成分（Ｖ）の１×１０７ ＴＣＩＤを（ＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶ－Ｅ２－Ｅ６－Ｅ７）、又はＴＣ－１腫瘍移植後７日目と１４日目に第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶ－Ｅ２－Ｅ６－Ｅ７静脈内投与）を２回接種した（図５）。腫瘍を移植後２１日目に採取し、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を分析した。ＨＰＶ特異的ＣＤ８Ｔ細胞による活性化及び消耗マーカー発現（ＰＤ１、Ｔｉｍ３、ＫＬＲＧ１の場合）の頻度をフローサイトメトリー（図５Ｂ）で測定した。しかし、ＨＰＶ－Ｅ７特異的に末梢で消耗した表現型を示したのはごく部分（図１６Ｃ、上記の例７を参照）であったが、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞の大部分は両方のマーカーを発現しており、消耗を示唆していた（図５Ｂ）。興味深いことに、ＫＶワクチンを接種したマウスの腫瘍内ＰＤ－１＋Ｔｉｍ－３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞では、依然として早期活性化マーカーＫＬＲＧ－１の発現率が高く、相同なＶＶ投与マウスと比較して消耗が進んでいないことが示唆された。Ｔ細胞の消耗はマーカーの発現から始まり、機能の喪失、最終的には細胞死へと続く進行性のプロセスであるため、ＣＤ８＋Ｔ細胞の機能性は、ｅｘ ｖｉｖｏ再刺激後のサイトカイン分泌を測定することによって評価された。ｅｘ ｖｉｖｏ再刺激されたＨＰＶ特異的ＣＤ８Ｔ細胞によるサイトカイン産生は、細胞内フローサイトメトリー染色（図５Ｃ）によって測定された。末梢では、ＫＶを接種したマウスでは、ＶＶを接種したマウスと比較して、脾臓のＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の比率が有意に高く（図４Ｂ例７）、ＶＶを接種したマウスと比較して、脾臓のＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の比率が有意に高く（図４Ｃ、例７）、ＣＴＬを産生するグランザイムＢの頻度が高かったが、腫瘍内ではＣＤ８＋Ｔ細胞の比率が非常に高く活性化されていることが判明し、そこでは、ほとんどのＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が多機能性であり、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α及び／又はＣＤ１０７ａを産生していた（図５Ｃ）。脾臓からの結果によると、ＫＶを接種すると、ＶＶを接種した場合と比較して、多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞の比率が有意に高く、特にＩＦＮ－γ＋ＴＮＦ－α＋ＣＤ１０７ａ＋三重陽性細胞が誘発され、表現型データが確認され、ＫＶが誘発した抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の非常に細胞毒性が強く、消耗が少ない表現型が強調された。
どちらのワクチン接種レジメンでも、腫瘍内のＣＤ８＋Ｔ細胞の高い浸潤を誘発することができ、その約６０％がマルチマー染色（図１７ＡとＢ）によってＨＰＶ－Ｅ７特異的であることが判明した。周辺部とは対照的に、腫瘍内では、２つのワクチン接種レジメンの間で、ＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度（図１７Ａ）と数（図１７Ｂ）に違いはなかった。
全体として、第一の成分（Ｋ）によるプライミングと第二の成分（Ｖ）によるブーストは、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のより高い大きさの誘導を支持するだけでなく、腫瘍へのそれらの動員を促進し、相同ウイルスワクチン接種と比較してそれらの機能性を高める。
卵白アルブミンを発現する同系腫瘍モデルにおける異種ＫＶＫＫワクチンの治療効果
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに３×１０５ ＥＧ．７細胞を注入した。マウスに抗原ドメインＭａｄ３９（配列番号７７で表されるアミノ酸配列）を構成する２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）皮下投与した。（点線）、オボアルブミン（抗原ドメインＭａｄ３９を含む）をコードする完全長遺伝子をゲノム内に含む１×１０７ ＴＣＩＤ５０ ＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡを静脈内投与するか、２００μｇのαＰＤ－１抗体を静脈内投与し、ワクチン接種７日後に血液を採取して四量体分析を行った。第一の成分（Ｋ）又は第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＧＰ－ＯＶＡ）の投与は、腫瘍移植後５、１２、１９、２６日目に行われた。αＰＤ－１抗体の投与は、腫瘍移植後７、１１、１５、１９、２３、２７日目に行われた。対照は、模擬治療とαＰＤ－１抗体のみで実施された。ＶＶＶ、ＫＫＫＫ、ＫＶＫＫ、ＫＶＫＫ＋αＰＤ－１の４つの異なる治療レジメンが試験された。治療後の腫瘍増殖（図７Ａ）と生存（図７Ｂ）が評価された。各治療群の腫瘍増殖曲線の横の括弧内に、全マウス（黒）中の完全奏効（灰色）、腫瘍フリーマウスの数が示されている。Ｏｖａ特異的ＣＴＬ（図７Ｃ）の頻度と、末梢血（図７Ｄ）中のＯｖａ四量体陽性細胞中のＰＤ－１陽性の比率を分析した。卵子反応の大きさ（２６日目）と腫瘍の大きさ（２５日目）の相関を、三つの異なる治療群（図７Ｅ）について分析した。
ネオエピトープを標的とした同系腫瘍モデルにおけるワクチンの第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）を用いた治療用がんワクチンの効能（ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ）
Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右脇腹に２×１０５のＭＣ－３８細胞を皮下注射した。マウスにＭａｄ２４を含む２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）を皮下投与してＡｄｐｇｋとＲｅｐｓ１（ＭＣ－３８ネオエピトープ、抗原ドメインＭａｄ２４、配列番号７６）のワクチンを接種した。又はＭａｄ２４を含む第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ）１×１０７ ＴＣＩＤ５０を指定の日に静脈内投与した（点線）。さらに、マウスに２００μｇのαＰＤ－Ｌ１抗体を指定の日に腹腔内投与した（点線）。ＭＣ－３８細胞注入後３、１０、１７、２４日目に第一の成分（Ｋ）又は第二の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ）の投与を行った。ＭＣ－３８細胞注入後６、１０、１３、１７、２０、２４、２７日目にαＰＤ－１抗体の投与を行った。対照は模擬治療とαＰＤ－１抗体のみで実施した。ＶＶＶ、ＫＫＫＫ、ＫＶＫＫ、ＫＶＫＫ＋αＰＤ－１の４つの異なる治療レジメンが試験された。動物の腫瘍増殖（図８Ａ）と生存（図８Ｂ）がモニターされた。各投与群の腫瘍増殖曲線の横の括弧内に、全マウス（黒）中の完全反応者（灰色）、腫瘍フリーマウスの数が示されている。循環Ａｄｐｇｋ特異的ＣＤ８Ｔ細胞の頻度は、各ワクチン接種の７日後（図８Ｃ）にフローサイトメトリーによって評価された。
がんウイルス抗原を標的とした同系腫瘍モデルにおける第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡを用いた治療的がんワクチン接種の効能
Ｃ５７ＢＬ／６マウスの右脇腹に１．５×１０５ ＴＣ－１細胞を皮下注射した。マウスに抗原ドメインＭａｄ２５（配列番号７５）を構成する２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）を皮下投与してＥ７（ＴＣ－１細胞に発現するＨＰＶ由来腫瘍タンパク質）のワクチンを接種した。そして１×１０７ ＴＣＩＤ５０ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡを指定の日に静脈内投与した（点線）。さらに、マウスには指定の日に２００μｇのαＰＤ－１抗体を静脈内投与した（点線）。第一の成分（Ｋ）又は２番目の成分（Ｖ）（ＶＳＶ－ＧＰ－ＴＡＡ）のいずれかの投与をＴＣ－１細胞注入後７、１４、２８、４９日目に行った。αＰＤ－１抗体の投与はＴｃ－１細胞注入後７、１４、２８日目に行った。対照は疑似処理とαＰＤ－１抗体のみで行った。ＶＶＶ、ＫＫＫＫ、ＫＶＫＫ、ＫＶＫＫ＋αＰＤ－１の４つの異なる治療レジメンを試験した。動物の腫瘍成長曲線（図９ Ａ）と生存（図９ Ｂ）をモニターした。各ワクチン接種の７日後（図９Ｃ）に、血中のＨＰＶ－Ｅ７特異的ＣＤ８Ｔ細胞の頻度をフローサイトメトリーで評価した。抗原特異的ＣＴＬの比率と腫瘍サイズとの相関を示した（図９Ｄ）。各投与群の腫瘍増殖曲線の横の括弧内に、全マウス（黒）中の完全反応者数（灰色）を示す。
異種プライムブーストワクチンは、ワクチンを接種したマウスに長期の免疫記憶を発生させる
ワクチンを接種したマウスの免疫記憶を評価するために、治療的ワクチン接種後に皮下腫瘍を拒絶した長期生存マウスにおいて、ワクチンを接種した抗原に対する循環腫瘍特異的ＣＴＬの存在を評価した。ＥＧ．７（図１０Ａ）、ＭＣ３８（図１０Ｂ）、ＴＣ－１腫瘍（図１０Ｃ）を各々拒絶したマウスの末梢血中のＯｖａ特異的（図１０Ａ）、Ａｄｐｇｋ特異的（図１０Ｂ）、Ｅ７特異的（図１０Ｃ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度を示した。
ワクチン接種マウスにおける腫瘍再チャレンジ保護
異なる治療群（実施例９、１０、１１）の生存マウスを対側側面に各々ＥＧ．７、ＭＣ３８又はＴＣ－１細胞で再チャレンジし、その後の腫瘍増殖をモニターした。図１１ＡはＥＧ．７－ＯＶＡ群の結果を示し、図１１Ｂは３つの独立したＴＣ－１実験から組み合わせたデータを示す。年齢を一致させた同腹子（対照）を含めた。腫瘍成長曲線ごとの腫瘍成長曲線の横の括弧内に、全マウス（黒）中の腫瘍フリーマウス（灰色）の数を示す。３つの腫瘍モデル（ＥＧ．７、ＭＣ３８及びＴＣ－１）すべての結果を以下の表３にまとめる。

表３：治療したＥ．Ｇ７、ＭＣ－３８及びＴＣ－１腫瘍が長期寛解したマウスの腫瘍再チャレンジ保護
要約すると、ＫＶＫ異種プライムブースト（表３Ａ－Ｃ）は、ほぼすべての再チャレンジマウスが新たに移植された腫瘍を急速に拒絶したため、有効な記憶反応を発現した。興味深いことに、ＴＣ－１保有マウスでは、相同ＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶ処理長期生存者の６０％のみが再チャレンジから保護されたが、これは異種ワクチン接種と比較して記憶前駆細胞の形成が減少したことを反映しうる。同様に、相同ＶＳＶ－ＧＰ－Ｍａｄ２４ワクチン接種時にＭＣ－３８腫瘍を拒絶することに成功した長期生存者のうち、再チャレンジ後も腫瘍フリーのままであったのは７５％のみであった。
成分（Ｋ）はワクチン接種マウスにおける記憶Ｔ細胞の形成を促進する
非腫瘍担がんマウスに、０、１４及び２８日目に、抗原ドメインＭａｄ５（配列番号７４）を構成する２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）を皮下投与、又はオボアルブミン（抗原ドメインＭａｄ５を含む）をコードする完全長遺伝子を構成する１×１０７ ＴＣＩＤ５０ＶＳＶ－ＧＰ－Ｏｖａを筋肉内投与して、免疫した。Ｏｖａ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のうち、ＣＤ１２７－ＫＬＲＧ－１－早期エフェクター細胞（ＥＥＣ）、ＫＬＲＧ－１＋短寿命エフェクター細胞（ＳＬＥＣｓ）、ＣＤ１２７＋記憶前駆エフェクター細胞（ＭＰＥＣｓ）の比率を、相同ワクチン接種（ＫＫＫ）（図１２Ａ）、相同ＶＳＶ－ＧＰ－Ｏｖａワクチン接種（ＶＶＶ）（図１２Ｂ）、及び異種プライムブーストワクチン接種（ＫＶＫ）（図１２Ｃ）について、２回の初回免疫の７日後と３回の免疫の２８日後に末梢血で測定した。
第一の成分（Ｋ）プライムはＴＣ－１腫瘍モデルにおける異種ワクチン接種の治療効果に極めて重要である
第一の成分（Ｋ）プライムの役割に取り組むために、腫瘍発生後１４日目（ブーストの時間）の第二の成分（ＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶ）治療を第一の成分（Ｋ）プライムの有無で評価した（図２１Ａ）。簡単に説明すると、マウスに１×１０５ ＴＣ－１細胞を皮下注射した。そして、２ｎｍｏｌの第一の成分（Ｋ）（Ｍａｄ２５を構成する抗原ドメイン）ｐｒｉｍｅ ｓ．ｃ．で７日後、又は腫瘍移植後１４日目に１×１０７ ＴＣＩＤ５０ＶＳＶ－ＧＰ－ＨＰＶ ｉ．ｖ．で、基本的にＴＣ－１モデルについて上述したように、免疫した。図２１Ａの点線で示されているように、ＫとＶの追加用量を投与した。
ウイルス治療のみでは腫瘍の増殖が遅くなったが、寛解は認められなかった（図２１ＡとＣ）。対照的に、第一の成分（Ｋ）プライム後のウイルス治療では、すべての腫瘍で完全寛解が得られた；大きな腫瘍でも（図２１ＢとＣ）。これは、第一の成分（Ｋ）によるプライミングが、移植２週間後にウイルスで治療された大きな腫瘍の腫瘍退縮を誘導するために不可欠であることを強く示す。これらのデータは、第一の成分（Ｋ）プライムが、ＴＣ－１腫瘍モデルにおける第二の成分（Ｖ）ブーストに続く強い腫瘍寛解の免疫学的基盤を築くことを示唆する。
総合すると、例に示されているデータは、本明細書に記載されているように、第一の成分（Ｋ）と第二の成分（Ｖ）を持つ異種プライムブーストワクチンを強く支持する。このアプローチは、末梢及び腫瘍内のＴ細胞レベルを有意に強化するだけでなく、より免疫を支持する組成に向けてＴＭＥを大きく再形成することにもつながる。
配列と配列番号の表（配列リスト）：

Claims (127)

  1. 第一の成分（Ｋ）及び第二の成分（Ｖ）を含むワクチンであって、前記第一の成分（Ｋ）は複合体を含み、前記複合体は、以下の：
    （ｉ）細胞透過性ペプチド；
    （ｉｉ）少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープを含む抗原ドメイン；及び
    （ｉｉｉ）少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬、
    からなるか、又は含み、
    ここで、前記ｉ）～ｉｉｉ）は共有結合しており、かつ、
    前記第二の成分（Ｖ）は腫瘍溶解性ラブドウイルスを含む、ワクチン。
  2. 前記第一の成分（Ｋ）の複合体は、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質である、請求項１に記載のワクチン。
  3. 前記第一の成分（Ｋ）の複合体は、組換えペプチド、組換えポリペプチド、又は組換えタンパク質である、請求項１又は２に記載のワクチン。
  4. 前記第一の成分（Ｋ）の細胞透過性ペプチドは、配列番号２（Ｚ１３）、配列番号３（Ｚ１４）、配列番号４（Ｚ１５）、又は配列番号５（Ｚ１８）のいずれか１つに記載されたアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のワクチン。
  5. 前記第一の成分（Ｋ）の複合体は、複数のＴＬＲペプチド作動薬、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上のＴＬＲペプチド作動薬を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のワクチン。
  6. 少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬は、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４及び／又はＴＬＲ５ペプチド作動薬である、請求項１～５のいずれか一項に記載のワクチン。
  7. 少なくとも１つのＴＬＲペプチド作動薬は、ＴＬＲ２ペプチド作動薬及び／又はＴＬＲ４ペプチド作動薬である、請求項１～６のいずれか一項に記載のワクチン。
  8. ＴＬＲペプチド作動薬は、配列番号６及び／又は７で表されるアミノ酸配列、又は配列番号６及び／又は７で表されるアミノ酸配列の機能的配列変異体を含むか又はからなる、請求項１～７のいずれか一項に記載のワクチン。
  9. ＴＬＲ２ペプチド作動薬は、アネキシンＩＩ又はその免疫調節断片である、請求項１～８のいずれか一項に記載のワクチン。
  10. ＴＬＲ２作動薬は、アネキシンＩＩをコードする、国際特許公開第２０１２／０４８１９０号明細書にて配列番号４又は７で表されるアミノ酸配列、又はその断片又はその変異体を含む、又はからなる、請求項１～９のいずれか一項に記載のワクチン。
  11. ＴＬＲ４作動薬は、配列番号８（ＴＬＲ４ペプチド作動薬ＥＤＡ）に記載されたアミノ酸配列を含む、又はからなる、請求項１～１０のいずれか一項に記載のワクチン。
  12. ＴＬＲ２作動薬は、配列番号９（Ｈｉｇｈ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐ ｂｏｘ １ ｐｒｏｔｅｉｎ）で表されるアミノ酸配列、又はその少なくとも１つの免疫調節断片を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のワクチン。
  13. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質からなる群から選択される、請求項１～１２のいずれか一項に記載のワクチン。
  14. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、複数の抗原又は抗原エピトープ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の抗原又は抗原エピトープを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載のワクチン。
  15. 複数の抗原又は抗原エピトープ、特に２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の抗原又は抗原エピトープは、前記第一の成分の抗原ドメインに連続して位置する、請求項１～１４のいずれか一項に記載のワクチン。
  16. 少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、少なくとも１つのＣＤ４＋エピトープ及び／又は少なくとも１つのＣＤ８＋エピトープである、請求項１～１５のいずれか一項に記載のワクチン。
  17. 少なくとも１つの抗原又は抗原エピトープは、少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープを含む、又はからなる、請求項１～１６のいずれか一項に記載のワクチン。
  18. 前記第一の成分（Ｋ）の少なくとも１つの腫瘍エピトープは、腫瘍関連抗原、腫瘍特異的抗原、又は腫瘍新抗原から選択される、請求項１７に記載のワクチン。
  19. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍エピトープは、内分泌腫瘍、消化管腫瘍、泌尿生殖器及び婦人科腫瘍、乳がん、頭頸部腫瘍、造血器腫瘍、皮膚腫瘍、胸部及び呼吸器腫瘍を含む腫瘍の群から選択される、請求項１７又は１８に記載のワクチン。
  20. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープは、肛門がん、虫垂がん、胆管がん、カルチノイド腫瘍、消化管結腸がん、肝外胆管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、肝細胞がん、膵がん、直腸がん、結腸直腸がん、又は転移性結腸直腸がんを含む消化管腫瘍又はがんの群から選択される、請求項１７～１９のいずれか一項に記載のワクチン。
  21. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープは、結腸直腸がん又は転移性結腸直腸がんの腫瘍関連抗原、腫瘍特異的抗原、又は腫瘍新抗原の群から選択される、請求項１７～２０のいずれか一項に記載のワクチン。
  22. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープは、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ２、ＭＵＣ－１、ＴＯＭＭ３４、ＲＮＦ４３、ＫＯＣ１、ＶＥＧＦＲ、βｈＣＧ、サバイビン、ＣＥＡ、ＴＧＦβＲ２、ｐ５３、ＫＲａｓ、ＯＧＴ、ＣＡＳＰ５、ＣＯＡ－１、ＭＡＧＥ、ＳＡＲＴ、ＩＬ１３Ｒアルファ２、ＡＳＣＬ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＰＲＡＭＥ、ＷＴ１からなる群から選択される抗原のエピトープである、請求項１７～２１のいずれか一項に記載のワクチン。
  23. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインの少なくとも１つの腫瘍又はがんエピトープは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ、ＭＡＧＥ－Ａ３及びＩＬ１３Ｒアルファ２からなる群から選択される抗原のエピトープであるか又は、少なくとも一つの腫瘍エピトープは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン、ＣＥＡ、ＫＲａｓ及びＭＡＧＥ－Ａ３からなる群から選択される抗原のエピトープであるか、又は、少なくとも一つの腫瘍エピトープは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン及びＣＥＡからなる群から選択される抗原のエピトープであるか、又は、少なくとも一つの腫瘍エピトープは、ＡＳＣＬ２、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ－１、サバイビン及びＣＥＡからなる群から選択される抗原のエピトープである、請求項１７～２２のいずれか一項に記載のワクチン。
  24. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、サバイビンの少なくとも１つのエピトープを含む、請求項１～２３のいずれかに記載のワクチン。
  25. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、少なくとも１０アミノ酸長のその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載のワクチン。
  26. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号２３で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載のワクチン。
  27. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号２２で表されるアミノ酸配列からなるペプチドを含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載のワクチン。
  28. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、ＣＥＡの少なくとも１つのエピトープを含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載のワクチン。
  29. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド、少なくとも１０アミノ酸長のその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載のワクチン。
  30. 抗原ドメインは、配列番号２５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載のワクチン。
  31. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号２６で表されるアミノ酸配列であるペプチド及び／又は配列番号２７で表されるアミノ酸配列であるペプチドを含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載のワクチン。
  32. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、ＡＳＣＬ２の少なくとも１つのエピトープを含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載のワクチン。
  33. 前記前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、少なくとも１０アミノ酸長のその断片、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載のワクチン。
  34. 前記前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号１８で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載のワクチン。
  35. 抗原ドメインが、配列番号１６で表されるアミノ酸配列からなるペプチド及び／又は配列番号１７で表されるアミノ酸配列であるペプチドを含む、請求項１～３４のいずれか一項に記載のワクチン。
  36. 抗原ドメインは以下の：
    ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｃ）サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｅ）ＫＲａｓの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体、及び／又は
    ｇ）ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載のワクチン。
  37. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、以下の：
    ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載のワクチン。
  38. 抗原ドメインは、以下の：
    ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｅ）ＫＲａｓの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載のワクチン。
  39. 抗原ドメインは、以下の：
    ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｃ）サバイビンの１つ以上のエピトープエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載のワクチン。
  40. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、以下の：
    ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載のワクチン。
  41. 抗原ドメインは、以下の：
    ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｃ）サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｆ）ＭＡＧＥ－Ａ３の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載のワクチン。
  42. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、以下の：
    ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｃ）サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載のワクチン。
  43. 抗原ドメインは、以下の：
    ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｂ）ＭＵＣ－１の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項４２に記載のワクチン。
  44. 抗原ドメインは、以下の：
    ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    を含む、請求項４３に記載のワクチン。
  45. 抗原ドメインは、以下の：
    ａ）ＥｐＣＡＭの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｃ）サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ｄ）ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び／又は
    ｇ）ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載のワクチン。
  46. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、以下の：
    サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項４５に記載のワクチン。
  47. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、以下の：
    サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項４５に記載のワクチン。
  48. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、以下の：
    ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項４５に記載のワクチン。
  49. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、以下の：
    サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項４５～４８のいずれか一項に記載のワクチン。
  50. 抗原ドメインは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、以下の：
    ＣＥＡの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    サバイビンの１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；及び
    ＡＳＣＬ２の１つ以上のエピトープ又はその機能的配列変異体；
    を含む、請求項４９に記載のワクチン。
  51. 抗原ドメインは、Ｎ末端からＣ末端の方向に、以下の：
    配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は少なくとも７０％の配列同一性があるその機能的配列変異体；
    配列番号１２で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は少なくとも７０％の配列同一性があるその機能的配列変異体；及び
    配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は少なくとも７０％の配列同一性があるその機能的配列変異体；
    を含む、請求項１～５０のいずれか一項に記載のワクチン。
  52. 配列番号２４で表されるアミノ酸配列からなるペプチド又はその断片又はその変異体のＣ末端が、配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるペプチド又はその断片又はその変異体のＮ末端に直接連結されており、かつ、配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるペプチド又はその断片又はその変異体のＣ末端が、配列番号１５で表されるアミノ酸配列からなるペプチド又はその断片又はその変異体のＮ末端に直接連結されている、請求項５１に記載のワクチン。
  53. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号２５で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；配列番号１８で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；を含む、請求項５２に記載のワクチン。
  54. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号４５で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む、請求項５３に記載のワクチン。
  55. 前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインは、配列番号６０で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体を含む、請求項５４に記載のワクチン。
  56. 前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性ラブドウイルスが組換えラブドウイルスである、請求項１～５５のいずれか一項に記載のワクチン。
  57. 前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換えラブドウイルスがベシキュロウイルス属から選択される、請求項５６に記載のワクチン。
  58. 腫瘍溶解性組換えベシキュロウイルスが、以下の：水疱性口内炎アラゴアウイルス（ＶＳＡＶ）、カラジャースウイルス（ＣＪＳＶ）、チャンディプラウイルス（ＣＨＰＶ）、コカルウイルス（ＣＯＣＶ）、水疱性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）、イスファハンウイルス（ＩＳＦＶ）、マラバウイルス（ＭＡＲＡＶ）、水疱性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）、又はピリーウイルス（ＰＩＲＹＶ）からなる群から選択される、請求項５７に記載のワクチン。
  59. 腫瘍溶解性組換えベシキュロウイルスが組換え水疱性口内炎ウイルス、インディアナ水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＩＶ）又はニュージャージー水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＮＪＶ）である、請求項５７又は５８に記載のワクチン。
  60. 腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスには複製能がある、請求項５９に記載のワクチン。
  61. 腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスには、
    （ｉ）糖タンパク質Ｇをコードする機能的な遺伝子が欠損しており、及び／又は
    （ｉｉ）機能的な糖タンパク質Ｇが欠損する、
    請求項５９又は６０に記載のワクチン。
  62. （ｉ）糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が他のウイルスの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換されており、及び／又は
    （ｉｉ）糖タンパク質Ｇが他のウイルスの糖タンパク質ＧＰに置換されている、
    請求項５９～６１のいずれか一項に記載のワクチン。
  63. （ｉ）糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、アレナウイルスの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換されており、及び／又は
    （ｉｉ）糖タンパク質Ｇが、アレナウイルスの糖タンパク質ＧＰに置換されている、
    請求項６２に記載されたワクチン。
  64. （ｉ）糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、ダンデノングウイルス又はモペイアウイルスの糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換されており、及び／又は
    （ｉｉ）糖タンパク質Ｇがダンデノングウイルス又はモペイアウイルスの糖タンパク質ＧＰに置換されている、
    請求項６２又は請求項６３に記載されたワクチン。
  65. （ｉ）糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換されており、及び／又は
    （ｉｉ） 糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換されている、
    請求項６１～６４のいずれか一項に記載のワクチン。
  66. ＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰが、配列番号４６で表されるアミノ酸配列、又はそれと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％同一であるその機能的配列変異体を含む、請求項６５に記載のワクチン。
  67. 前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスが、請求項２２～５４のいずれか一項に記載の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープをゲノム内にコードしており、水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換され、及び／又は水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換されている、請求項５９～６６のいずれか一項に記載のワクチン。
  68. 前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスが、水疱性口内炎ウイルス核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、リンタンパク質（Ｐ）、マトリクスタンパク質（Ｍ）及び請求項２２～５４のいずれか一項に記載の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープをゲノム内にコードしており、水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換され、及び／又は糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換されている、請求項５９～６７のいずれか一項に記載のワクチン。
  69. 前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスが、水疱性口内炎ウイルス核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、リンタンパク質（Ｐ）、マトリクスタンパク質（Ｍ）及び請求項２２～５４のいずれか一項に記載の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープをゲノム内にコードしており、水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子が、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換され、及び／又は糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換されており、かつ
    核タンパク質（Ｎ）は、配列番号４９で表されるアミノ酸又は配列番号４９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％同一のアミノ酸で表される機能的変異体を含み、
    リンタンパク質（Ｐ）は、配列番号５０で表されるアミノ酸又は配列番号４９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％同一のアミノ酸で表される機能的変異体を含み、
    大型タンパク質（Ｌ）は、配列番号５１で表されるアミノ酸又は配列番号４９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％同一のアミノ酸で表される機能的変異体を含み、かつ、
    マトリクスタンパク質（Ｍ）は、配列番号５２で表されるアミノ酸又は配列番号４９と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％同一のアミノ酸で表される機能的変異体を含む、
    請求項５９～６８のいずれか一項に記載のワクチン。
  70. 前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスは、請求項２２～５４のいずれか一項に記載の前記第一の成分（Ｋ）の抗原ドメインのアミノ酸配列からなる第二の抗原ドメインをゲノムにコードする、請求項５９～６９のいずれか一項に記載のワクチン。
  71. 前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスのゲノムがコードする前記第二の抗原ドメインは、以下の：
    ＣＥＡ（配列番号２４）
    サバイビン（配列番号１２）
    ＡＳＣＬ２（配列番号１５）
    ＭＵＣ－１（配列番号１９）
    ＥｐＣＡＭ（配列番号４０）
    ＫＲａｓ（配列番号３０）
    ＭＡＧＥ－Ａ３（配列番号１０）
    を含む群から選択される少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープを含む、請求項７０に記載のワクチン。
  72. 前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスのゲノムがコードする前記第二の抗原ドメインが、ＣＥＡ（配列番号２４）の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープを含む、請求項７１に記載のワクチン。
  73. 前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスのゲノムがコードする前記第二の抗原ドメインが、サバイビン（配列番号１２）の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープを含む、請求項７１又は７２に記載のワクチン。
  74. 前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスのゲノムがコードする前記第二の抗原ドメインが、ＡＳＣＬ２（配列番号１５）の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープを含む、請求項７１～７３のいずれか一項に記載のワクチン。
  75. 前記第二の成分（Ｖ）の前記第二の抗原ドメインが、好ましくは、Ｎ末端からＣ末端方向に、以下の：
    配列番号２４で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は少なくとも７０％の配列同一性があるその機能的配列変異体；
    配列番号１２で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は少なくとも７０％の配列同一性があるその機能的配列変異体；及び
    配列番号１５で表されるアミノ酸配列であるペプチド、又は少なくとも１０アミノ酸の長さであるその断片、又は少なくとも７０％の配列同一性があるその機能的配列変異体；
    を含む、請求項７１～７４のいずれか一項に記載のワクチン。
  76. 前記第二の成分（Ｖ）の前記第二の抗原ドメインが、配列番号２５で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；配列番号１８で表されるアミノ酸配列からなるペプチド、又は配列同一性が少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％であるそれらの機能的配列変異体；を含む、請求項７５に記載のワクチン。
  77. 前記第二の成分（Ｖ）の前記第二の抗原ドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列からなる第二の抗原ドメインをゲノムにコードする、請求項７６に記載のワクチン。
  78. 前記第一の成分（Ｋ）の複合体が、配列番号６０のアミノ酸配列からなり、前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎が、ゲノムに以下の：
    配列番号５４からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、
    配列番号５５からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、
    配列番号５６からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、
    配列番号５７からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、
    配列番号５８からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び
    配列番号５９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、
    をコードする、請求項７７に記載のワクチン。
  79. 患者の腫瘍又はがんの治療及び／又は予防に用いるための、請求項１～７８のいずれか一項に記載のワクチン。
  80. 腫瘍が内分泌腫瘍、消化管腫瘍、泌尿生殖器腫瘍、婦人科腫瘍、頭頸部腫瘍、造血器腫瘍、皮膚腫瘍、胸部腫瘍及び呼吸器腫瘍からなる群から選択される、請求項７９に記載のワクチン。
  81. 腫瘍が肛門がん、虫垂がん、胆管がん、カルチノイド腫瘍、消化管結腸がん、肝外胆管がん、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、肝細胞がん、膵がん、直腸がん、結腸直腸がん又は転移性結腸直腸がんからなる消化管腫瘍の群から選択される、請求項７９又は８０に記載のワクチン。
  82. 腫瘍が結腸直腸がん又は転移性結腸直腸がんである、請求項８１に記載のワクチン。
  83. 前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）が各々少なくとも一回投与される、請求項７９～８２のいずれか一項に記載のワクチン。
  84. 前記第二の成分（Ｖ）の投与前に前記第一の成分（Ｋ）が投与される、請求項８３に記載のワクチン。
  85. 前記第一の成分（Ｋ）が少なくとも二回投与されるか、又は、前記第二の成分（Ｖ）の投与の前と後に投与される、請求項８３又は８４に記載ワクチン。
  86. 前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）がＫ－Ｖ－Ｋ、Ｋ－Ｖ－Ｋ、Ｋ－Ｖ－Ｖ－Ｋの順、又はＫ－Ｖ－Ｋ、又はＫ－Ｖ－Ｋの順に投与される、請求項８５に記載のワクチン。
  87. 前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）が、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、１９、２０、２１日の間隔で、又は、互いに約５、６、７、８、９、１０日から約１１、１２、１３、１４、１５、１６、１９、２０、１９、２０日の間隔で、又は互いに約１１、１２、１３、１４日から約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１日の間隔、で投与される、請求項８３～８６のいずれか一項に記載のワクチン。
  88. 前記第一の成分（Ｋ）は、前記第二の成分（Ｖ）の投与後、約１０、１１、１２、１３、１４日から約２０、２２、２４、２６、２８、３０日までの間に少なくとも一回投与される、請求項８７に記載のワクチン。
  89. 請求項２２～５４のいずれか一項に記載の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープをゲノムにコードする、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスであって、水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子がリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換され、及び／又は前記糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換されている、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス。
  90. 水疱性口内炎ウイルスの核タンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）、リンタンパク質（Ｐ）、マトリクスタンパク質（Ｍ）、糖タンパク質（Ｇ）及び請求項２２～５４のいずれか一項に記載の少なくとも一つの抗原又は抗原エピトープをゲノムにコードする、請求項８９に記載の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスであって、水疱性口内炎ウイルスの糖タンパク質Ｇをコードする遺伝子がリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）の糖タンパク質ＧＰをコードする遺伝子に置換され、及び／又は前記糖タンパク質ＧがＬＣＭＶの糖タンパク質ＧＰに置換されている、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス。
  91. 請求項６９～７８のいずれか一項で特定された、腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス。
  92. 腫瘍又はがんの治療及び／又は予防に用いるための、請求項８９～９１のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス。
  93. 請求項１～８８のいずれか一項に記載のワクチンに用いるための、請求項８９～９２のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス。
  94. 化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター、免疫療法剤、又は標的薬と併用するための、請求項５５又は請求項１～５４のいずれか一項に記載の第一の成分（Ｋ）の複合体。
  95. 請求項８９～９１のいずれか一項に記載のワクチンの腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルスと併用するための、場合によっては、化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター、免疫療法剤、又は標的薬と併用するための、請求項５５に記載される第一の成分（Ｋ）の複合体。
  96. 請求項５５に記載の前記第一の成分（Ｋ）の複合体と併用するための、場合によっては、化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター、免疫療法剤、又は標的薬と併用するための、請求項８９～９１のいずれか一項に記載のワクチンの腫瘍溶解性組換え水疱性口内炎ウイルス。
  97. 化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター、免疫療法剤、又は標的薬と併用するための、請求項７９～８８のいずれか一項に記載のワクチン。
  98. 腫瘍に罹患し、治療が必要な患者を治療する方法であって、請求項１～７８のいずれか一項に記載のワクチンの有効量を患者に投与することを含む、方法。
  99. 腫瘍が内分泌腫瘍、消化管腫瘍、泌尿生殖器腫瘍、婦人科腫瘍、乳がん、頭頸部腫瘍、造血器腫瘍、皮膚腫瘍、胸部腫瘍及び呼吸器腫瘍、大腸がん及び転移性大腸がんからなる群から選択される、請求項９８に記載の方法。
  100. ワクチンが、化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター、免疫療法剤、又は標的薬と同時投与される、請求項９８又は９９に記載の方法。
  101. チェックポイントモジュレーターが、ワクチンの投与と同時に、順次、交互に、又はその後に投与される、請求項１００に記載の方法。
  102. チェックポイントモジュレーターが、ワクチンの投与の約１日前～約１４日前に投与される、請求項１０１に記載の方法。
  103. 前記ワクチンの前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）が、静脈内、皮下、又は筋肉内に投与される、請求項９８～１０２のいずれか一項に記載の方法。
  104. 前記ワクチンの前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）が、異なる投与経路で投与される、請求項９８～１０３のいずれか一項に記載の方法。
  105. 前記ワクチンの前記第一の成分（Ｋ）が筋肉内に投与され、及び前記第二の成分（Ｖ）が静脈内、腫瘍内、又は静脈内に投与される、請求項１０４に記載の方法。
  106. 前記ワクチンの前記第一の成分（Ｋ）の前記複合体の約０．５ｎｍｏｌ～約１０ｎｍｏｌが投与される、請求項９８～１０５のいずれか一項に記載の方法。
  107. 前記ワクチンの前記第二の成分（Ｖ）の組換えＶＳＶが約１０６ ＴＣＩＤ５０～約１０１１ ＴＣＩＤ５０まで投与される、請求項９８～１０６のいずれか一項に記載の方法。
  108. 前記ワクチンの前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）、又は、請求項７７又は請求項７８に記載の前記ワクチンの前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）が、前記第一の成分（Ｋ）の次に順に前記第二の成分（Ｖ）が投与されるか、又は、Ｋ－Ｖ－Ｋの順に投与される、請求項９８～１０７のいずれか一項に記載の方法。
  109. 前記ワクチンの前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）が順次投与される、請求項９８～１０８のいずれか一項に記載の方法であって、前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）が約７日～約３０日の間隔で投与される、方法。
  110. 前記第一の成分（Ｋ）の最後の投与から約２１日～約１８０日後までの間に、少なくとも一度、前記第一の成分（Ｋ）を患者に投与することを含む、請求項９８～１０９のいずれか一項に記載の方法。
  111. 請求項１～７８のいずれか一項に記載のワクチンを含む、腫瘍又はがんの治療及び／又は予防のためのワクチン接種に用いるためのキット。
  112. さらに、ワクチンと併用される化学療法剤、免疫チェックポイントインヒビター、免疫療法剤、又は標的薬の少なくとも一つを含む、請求項１１１に記載のキット。
  113. 腫瘍又はがんに罹患した患者に、請求項１～７８のいずれか一項に記載のワクチンを投与することを含む、患者の腫瘍抗原特異的Ｔ細胞による腫瘍の浸潤を高める方法。
  114. 水疱性口内炎ウイルスであって、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、水疱性口内炎ウイルス。
  115. 前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：
    配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、
    配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、
    配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、
    配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、
    配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び
    配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、
    をコードする、請求項１１４に記載の水疱性口内炎ウイルス。
  116. 前記第二の成分（Ｖ）の腫瘍溶解性ラブドウイルスが水疱性口内炎ウイルスであり、かつ、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８２で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、水疱性口内炎ウイルス。
  117. 前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：
    配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、
    配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、
    配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、
    配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、
    配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び
    配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、
    をコードする、請求項１１６に記載の水疱性口内炎ウイルス。
  118. 水疱性口内炎ウイルスと併用して免疫療法で用いるための配列番号６０のアミノ酸配列を含むか又はからなるポリペプチドであって、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、ポリペプチド。
  119. 前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：
    配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、
    配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、
    配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、
    配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、
    配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び
    配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、
    をコードする、請求項１１８に記載のポリペプチド。
  120. 配列番号６０で表されるアミノ酸配列を含むか、又はからなる、ポリペプチドと併用して、免疫化レジメンで用いるための、水疱性口内炎ウイルスであって、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、水疱性口内炎ウイルス。
  121. 前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：
    配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、
    配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、
    配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、
    配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、
    配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び
    配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、
    をコードする、請求項１２０に記載の水疱性口内炎ウイルス。
  122. ポリペプチドと水疱性口内炎ウイルスとを含む部品キットであって、ここで、前記ポリペプチド配列番号６０で表されるアミノ酸配列を含むか、又はからなり、かつ、前記水疱性口内炎ウイルスのＲＮＡゲノムが配列番号８０で表されるＲＮＡ配列と同一か、又は少なくとも７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％が同一であるＲＮＡ配列を含む又はからなる、部品キット。
  123. 前記水疱性口内炎ウイルスのゲノムが以下の：
    配列番号５０からなるアミノ酸を含むリンタンパク質（Ｐ）、
    配列番号４９からなるアミノ酸配列を含む核タンパク質（Ｎ）、
    配列番号５２からなるアミノ酸配列を含むマトリクスタンパク質（Ｍ）、
    配列番号５１からなるアミノ酸配列を含む大型タンパク質（Ｌ）、
    配列番号５３からなるアミノ酸配列を含む糖タンパク質（ＧＰ）、及び
    配列番号４５又は４９からなるアミノ酸配列を含む、抗原ドメイン、
    をコードする、請求項１２２に記載の部品キット。
  124. 免疫チェックポイントインヒビターが、ペムブロリズマブ、ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択される、請求項９４又は９５に記載の第一の成分（Ｋ）の複合体、請求項９６に記載のウイルス、請求項９７に記載のワクチン、請求項１００に記載の方法、又は請求項１１２に記載のキット。
  125. さらに、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の免疫チェックポイントインヒビター、又は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択される、免疫チェックポイントインヒビター、を含む、請求項７８又は請求項１１６に記載のワクチン、又は請求項１２２又は１２３に記載の部品キット
  126. さらに、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の免疫チェックポイントインヒビター、又は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ；ピジリズマブ；セミプリマブ；ＰＤＲ－００１；アテゾリズマブ；アベルマブ；デュルバルマブ、配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体；配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体からなる群から選択される、免疫チェックポイントインヒビター、を併用する、請求項１１８又は１１９に記載のポリペプチド、又は請求項１２０又は１２１に記載のウイルス。
  127. 前記第一の成分（Ｋ）及び前記第二の成分（Ｖ）は異種プライムブーストワクチンとして投与される、請求項７９～８８及び９７のいずれか一項に記載のワクチン；請求項９３、９６、１２０、１２１、１２４及び１２６のいずれか一項に記載のウイルス；請求項９５及び１２４のいずれか一項に記載の第一の成分（Ｋ）の複合体；請求項９８から１１０、１１３及び１２４のいずれか一項に記載の方法；請求項１１１、１１２及び１２４のいずれか一項に記載のキット；又は請求項１１８、１１９及び１２６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
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