CN110191720A - 用于治疗血液学癌症的抗-CD20抗体、PI 3激酶-δ抑制剂以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体的组合 - Google Patents

用于治疗血液学癌症的抗-CD20抗体、PI 3激酶-δ抑制剂以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体的组合 Download PDF

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Abstract

本发明公开提供通过向有需要的受试对象给予治疗有效量的以下物质来治疗或减慢血液学恶性肿瘤的进展的方法和试剂盒：(i)PI3激酶(PI3K)‑δ的至少一种抑制剂(例如TGR‑1202)；(ii)至少一种抗‑CD20抗体(例如ublituximab)；以及(iii)至少一种抗‑PD‑1抗体(例如派姆单抗)或者抗‑PD‑L1抗体(例如atezolizumab)。还提供了治疗方案。

Description

用于治疗血液学癌症的抗-CD20抗体、PI 3激酶-δ抑制剂以及 抗-PD-1或抗-PD-L1抗体的组合
技术领域
本发明总体而言涉及癌症治疗领域。更具体而言，本发明涉及通过向有需要的受试对象给予治疗有效量的以下物质，来治疗或减慢血液学癌症的进展的方法和试剂盒，其中物质为：(i)至少一种PI3激酶(PI3K)-δ(例如TGR-1202)的抑制剂；(ii)至少一种抗-CD20抗体(例如ublituximab)；以及(iii)至少一种抗-PD1抗体(例如派姆单抗)或抗-PD-L1抗体(例如atezolizumab)。
背景技术
尽管科学和临床的研究进行了一个多世纪，但是到目前为止，治愈癌症仍是最大的医学挑战之一。癌症治疗主要依赖于手术、放疗和/或细胞毒性治疗。然而，在最近十年，靶向癌症治疗在肿瘤学领域开启了一个新的时代。靶向癌症治疗是多种药品，其经设计而干扰肿瘤生长和进展所必需的特异性分子；它们在广义上，分成单克隆抗体(mAb)或小分子。靶向治疗的一些实例包括CD20(例如用于治疗淋巴瘤的利妥昔单抗/),CD52(例如阿仑单抗/),VEGF(例如贝伐单抗/),HER2(例如用于治疗Her2-乳腺癌和胃癌的曲妥单抗/),EGFR(例如用于治疗结肠直肠癌的西妥昔单抗/),CTLA-4(例如用于治疗黑素瘤的伊匹单抗/),和PD-1(例如用于治疗鳞状和非鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)的nivolumab/和用于治疗NSCLC的派姆单抗/)。小分子治疗靶向癌细胞的调节障碍的途径，例如RAS,RAF,P13K,MEK,JAK,STAT和BTK。
尽管存在有效的血液学癌症的治疗方法，但是不理想的应答、复发-难治性疾病和/或对一种或多种治疗试剂的抗性仍是挑战。此外，具有更高风险的细胞遗传学异常的患者还呈现对已经批准的治疗非最佳的应答，以及更短的应答时间和无进展生存。因此，需要更有效、安全和持久的靶向组合治疗用于治疗血液学恶性肿瘤。
发明概述
本发明公开提供了用于血液学恶性肿瘤患者的新型组合治疗和治疗方案。
在一个方面中，本发明公开提供了用于治疗遭受慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试对象的方法，其包括在治疗阶段中向受试对象给予以下物质：(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，其中PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前体；(ii)治疗有效量的ublituximab；以及(iii)治疗有效量的抗-PD-1抗体。
在一个方面中，本发明公开提供了PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，用于治疗遭受慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试对象的方法中，该方法包括在治疗阶段向受试对象给予以下物质：(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，其中PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前体；(ii)治疗有效量的ublituximab；以及(iii)治疗有效量的抗-PD-1抗体。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体为派姆单抗。
在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂为TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)。
在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂、ublituximab和派姆单抗同时和/或依次给予受试对象。
在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂每天以如下剂量给予：大约200至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg或者大约1200mg。
在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂每天以大约800mg的剂量给予。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂配制用于口服给予。
在一些实施方案中，在治疗阶段，ublituximab以如下剂量给予：每4至7周大约一次,每5至7周大约一次,每5至6周大约一次,每周大约一次,每2周大约一次,每3周大约一次,每4周大约一次,每5周大约一次,每6周大约一次,或者每7周大约一次，给予大约450至大约1200mg,大约450至大约1000mg,大约500至大约1200mg,大约500至大约1000mg,大约500至大约900mg,大约600至大约1200mg,大约600至大约1000mg,大约600至大约900mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约750mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg,大约1100mg,或者大约1200mg。
在一些实施方案中，ublituximab以每6周大约一次给予大约900mg的剂量。
在一些实施方案中，在治疗阶段开始后，在第6周的第1天给予第一剂量的ublituximab。在一些实施方案中，ublituximab配制用于静脉内输注。
在一些实施方案中，派姆单抗以如下剂量给予：每2至4周大约一次、或者每3至4周大约一次、或者每3周大约一次给予大约100至大约300mg,大约100至大约200mg,大约100mg,大约150mg,大约200mg,或者大约250mg。在一些实施方案中，派姆单抗以每3周大约一次给予大约100mg或200mg的剂量。在一些实施方案中，以大约100mg的剂量给予第一剂量的派姆单抗。在一些实施方案中，派姆单抗配制用于静脉内输注。
在一些实施方案中，治疗阶段的持续时间为多达大约15周、多达大约14周、多达大约13周或者多达大约12周。在一些实施方案中，治疗阶段的持续时间为大约12周。
在一些实施方案中，本发明所述的方法进一步包括，在治疗阶段之前的诱导阶段，其包括向受试对象给予：(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，其中PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前体；以及(ii)治疗有效量的ublituximab。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂为TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)。
在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂和ublituximab在诱导阶段同时和/或依次给予受试对象。
在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂每天以如下剂量给予：在诱导阶段，大约200至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg,或者大约1200mg。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂在诱导阶段每天以大约800mg的剂量给予。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的。PI3-激酶δ抑制剂在诱导阶段过程中配制用于口服给予。
在一些实施方案中，ublituximab以如下剂量给予：在诱导阶段过程中，每1至3周大约一次,每1至2周大约一次,每1周大约一次,或者每2周大约一次,给予大约450至大约1200mg,大约450至大约1000mg,大约600至大约1200mg,大约600至大约1000mg,大约600至大约900mg,大约600mg至大约900mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,或者大约900mg。在一些实施方案中，ublituximab在诱导阶段过程中每1或2周大约一次给予大约900mg的剂量。在一些实施方案中，ublituximab在诱导阶段过程中配制用于静脉内输注。
在一些实施方案中，在诱导阶段的第1天给予第一剂量的ublituximab。在一些实施方案中，在诱导阶段过程中，第一剂量的ublituximab被分成在诱导阶段过程中在2或3个连续天内给予的2或3个亚剂量，或者被分成在2个连续天内给予的2个亚剂量。
在一些实施方案中，第一亚剂量的ublituximab包含多达150mg的ublituximab。在一些实施方案中，第二亚剂量的ublituximab包含多达750mg的ublituximab。
在一些实施方案中，诱导阶段的持续时间为多达大约12周,多达大约11周,多达大约10周,多达大约9周,或者多达大约8周。在一些实施方案中，诱导阶段的持续时间为大约8周。
在一些实施方案中，本发明所述的方法进一步包括在治疗阶段之后的维持阶段，其包括向受试对象给予治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂每天以如下剂量给予：在维持阶段过程中，大约200至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg,或者大约1200mg。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂在维持阶段过程中每天以大约800mg的剂量给予。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂在维持阶段过程中配制用于口服给予。
在一些实施方案中，维持阶段的持续时间是可任选的，只要观察到临床益处即可，或者直到无法控制的毒性或疾病进展发生。在一些实施方案中，当发生疾病进展时，维持阶段结束。在一些实施方案中，维持阶段的持续时间为至少3周。
在一些实施方案中，使用本发明所述的方法治疗的受试对象遭受复发-难治性CLL。
在一个方面中，本发明公开提供了用于治疗遭受复发-难治性慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试对象的方法，其包括在治疗阶段过程中向受试对象给予：(i)日剂量为大约800mg的PI3-激酶δ抑制剂，其中PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；(ii)在开始治疗阶段后，其中在第6周的第1天，给予第一剂量的ublituximab；以及(iii)每3周一次的大约100mg或200mg派姆单抗，其中当开始治疗阶段时，在第1天给予第一剂量的派姆单抗；其中治疗阶段的持续时间为大约12周；并且其中PI3-激酶δ抑制剂、ublituximab和派姆单抗同时和/或依次给予受试对象。
在一个方面中，本发明公开提供了PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，用于治疗遭受复发-难治性慢性淋巴细胞白血病(CLL)受试对象的方法中，该方法包括在治疗阶段过程中向受试对象给予：(i)日剂量为大约800mg的PI3-激酶δ抑制剂，其中PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；(ii)在治疗阶段开始后，在第6周的第1天，给予第一剂量的ublituximab；以及(iii)每3周一次的大约100mg或200mg派姆单抗，其中当开始治疗阶段时，在第1天给予第一剂量的派姆单抗；其中治疗阶段的持续时间为大约12周；并且其中PI3-激酶δ抑制剂、ublituximab和派姆单抗同时和/或依次给予受试对象。
在一个方面中，本发明所述的方法进一步包括在治疗阶段之前的诱导阶段，该方法包括向受试对象给予：(i)日剂量为大约800mg的PI3-激酶δ抑制剂，其中PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；以及(ii)每1或2周一次的大约900mg的ublituximab；其中在诱导阶段的第1天，给予第一剂量的ublituximab；其中诱导阶段的持续时间为大约8周；并且其中PI3-激酶δ抑制剂和ublituximab同时和/或依次给予受试对象。
在一些实施方案中，在诱导阶段过程中，第一剂量的ublituximab被分成2个亚剂量，其中第一亚剂量包含多达150mg的ublituximab；而第二亚剂量包含多达750mg的ublituximab；并且其中第一和第二亚剂量分别在诱导阶段的第1天和第2天给予。
在一些实施方案中，本发明的方法进一步包括在治疗阶段后的维持阶段，去包括向受试对象给予每天大约800mg的PI3-激酶δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，其中维持阶段的持续时间为至少3周。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的，并且配制用于口服给予。在一些实施方案中，ublituximab和派姆单抗配制用于静脉内输注。
在一个方面中，本发明公开提供了用于治疗遭受复发-难治性CLL的受试对象的试剂盒，该试剂盒包含：(i)单剂量或多剂量的ublituximab；(ii)单剂量或多剂量的PI3-激酶δ抑制剂，其中PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；(iii)单剂量或多剂量的抗-PD-1抗体；以及(iv)根据本发明的方法使用所述的ublituximab、所述的PI3-激酶δ抑制剂和所述的抗-PD-1抗体的说明书。在一些实施方案中，抗-PD-1抗体为派姆单抗。
在一个方面中，本发明公开提供了治疗遭受血液学癌症的受试对象的方法，其包括在治疗阶段向受试对象给予：(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂；(ii)治疗有效量的抗-CD20抗体；以及(iii)治疗有效量的抗-PD-1或抗-PD-L1抗体。
在一个方面中，本发明公开提供了PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其用于治疗遭受血液学癌症的受试对象的方法中，该方法包括在治疗阶段向受试对象给予：(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂；(ii)治疗有效量的抗-CD20抗体；以及(iii)治疗有效量的抗-PD-1或抗-PD-L1抗体。
在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂为TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体为ublituximab或者结合与ublituximab相同的抗原表位的抗体片段。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体为nivolumab,派姆单抗或pidilizumab。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为CTI-07,CTI-09,CTI-48,CTI-49,CTI-50,CTI-76,CTI-77,CTI-78,CTI-57,CTI-58,CTI-97,CTI-98,CTI-92,CTI-95,CTI-93,CTI-94,CTI-96,durvalumab,BMS-936559,atezolizumab或avelumab。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为CTI-48。
在一些实施方案中，血液学癌症为淋巴瘤,白血病或骨髓瘤。
在一些实施方案中，血液学癌症为急性淋巴细胞白血病(ALL),急性髓系白血病(AML),慢性淋巴细胞白血病(CLL),小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL),多发性骨髓瘤(MM),非Hodgkin淋巴瘤(NHL),外套细胞淋巴瘤(MCL),滤泡性淋巴瘤(FL),Waldenstrom巨球蛋白血症(WM),弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL),边缘区淋巴瘤(MZL),毛细胞白血病(HCL),Burkitt淋巴瘤(BL)和Richter转化。
在一些实施方案中，血液学癌症表达PD-1或PD-L1。
在一些实施方案中，血液学癌症为复发-难治性疾病。在一些实施方案中，血液学癌症为复发-难治性CLL。
在一个方面中，本发明公开提供了治疗遭受血液学癌症的受试对象的方法，其包括在治疗阶段给予受试对象：(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，其中PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；(ii)治疗有效量的ublituximab；以及(iii)治疗有效量的抗-PD-1抗体或抗-PD-L1抗体。
在一个方面中，本发明公开提供了PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，用于治疗遭受血液学癌症的受试对象的方法中，该方法包括在治疗阶段向受试对象给予：(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，其中PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；(ii)治疗有效量的ublituximab；以及(iii)治疗有效量的抗-PD-1抗体或抗-PD-L1抗体。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体为nivolumab,派姆单抗或pidilizumab。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为CTI-07,CTI-09,CTI-48,CTI-49,CTI-50,CTI-76,CTI-77,CTI-78,CTI-57,CTI-58,CTI-97,CTI-98,CTI-92,CTI-95,CTI-93,CTI-94,CTI-96,durvalumab,BMS-936559,atezolizumab或者avelumab。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为CTI-48。
在一些实施方案中，使用本发明所述的方法治疗的血液学癌症的受试对象为人类。
在一些实施方案中，本发明所述的方法进一步包括在治疗阶段前的诱导阶段，其包括向受试对象给予：(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，其中PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；以及(ii)治疗有效量的ublituximab。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂为TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)。
在一些实施方案中，本发明所述的方法进一步包括在治疗阶段后的维持阶段，其包括向受试对象给予治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。
在一些实施方案中，PI3-激酶δ抑制剂、ublituximab以及抗-PD-1抗体或抗-PD-L1抗体同时和/或依次给予受试对象。
在一个方面中，本发明公开提供了用于治疗遭受血液学癌症的受试对象的试剂盒，该试剂盒包含：(i)单剂量或多剂量的ublituximab；(ii)单剂量或多剂量的PI3-激酶δ抑制剂，其中PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；(iii)单剂量或多剂量的抗-PD-1或抗-PD-L1抗体；以及(iv)根据本发明的方法，使用所述的ublituximab、所述的PI3-激酶δ抑制剂和所述的抗-PD-1或抗-PD-L1抗体的说明书。
在一些实施方案中，试剂盒中的抗-PD-1抗体为派姆单抗。在一些实施方案中，试剂盒中的抗-PD-L1抗体为atezolizumab。在一些实施方案中，试剂盒中的PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。在一些实施方案中，试剂盒中的PI3-激酶δ抑制剂为TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)。
附图简述
图1是显示通过抗-PD-L1抗体,CTI-09,CTI-48,CTI-50,CTI-58和临床对照对PD-1与PD-L-1+细胞的结合的百分抑制情况的图。结果是使用FACS分析获得的。
图2A-2C是显示示例性抗-PD-L1抗体CTI-48抵抗人类PD-L1(图2A),小鼠PD-L1(图2B),和cyno PD-L1(图2C)的结合动力学的图。
图3是显示示例性抗-PD-L1抗体CTI-48展示对PD-L1+淋巴瘤细胞和原代NK细胞的ADCC活性的柱状图。
图4是显示在免疫封闭的报告(NFAT)生物测试中，使用选择性抗-PD-L1抗体、CTI-48和CTI-49，以及临床对照mAb，对PD-L1对T-细胞抑制的逆转的图。
图5是显示通过PD-L1抗体,CTI-48和临床对照mAb阻断PD-L1与B7.1结合的图。
图6是显示所公开的PD-L1抗体对IFN-γ产生的作用的图。将抗体以10μg/mL的浓度定量加入至混合的淋巴细胞反应(MLR)培养物中。将数据对媒介物对照归一化，并以合并均值+SEM(n＝6)示出。*p<0.05**p<0.01,***p<0.001表示当使用Dunnett的多重比较事后检验的普通单因素ANOVA与合适的同型对照(hIgGl)比较时的统计学意义。该图显示PD-L1抗体,CTI-48和临床对照mAb的并排比较。
图7为根据实施例1中讨论的阶段1/2研究，在9位CLL患者中无进展生存的月份的Kaplan-Meier图。
图8为实施例1所研究的9位CLL患者的每一位的平行图示(还称为“游泳者图示”)，以及他们在临床研究的每个阶段过程中(诱导/巩固/维持)无进展生存的天数。每个柱都表示研究中的各位患者。
发明详述
I.定义
为了有利于理解本发明，下文定义多个术语和短语。
开放性术语，例如动词“包含”、分词“包含”、动词“含有”、分词“含有”等，是指“包括”。这些开放性过渡短语用于引入元素、方法步骤等的开放性列表，其不排除其他的未引述的元素或方法步骤。
术语“CD20”(还称为B淋巴细胞CD20抗原、MS4A1、B淋巴细胞表面抗原B1、Bp35、白细胞表面抗原Leu-16)是指任何天然的CD20，除非另外说明。术语“CD20”涵盖“全长”未加工的CD20，以及在细胞内通过加工而得到的任何形式的CD20。该术语还涵盖CD20的天然形成的变体，例如拼接变体、等位基因变体和同种型。本发明所述的CD20多肽可以由多种来源分离得到，例如由人类组织类型或另一种来源；或者通过重组或合成方法制备。CD20序列的实例包括但不限于NCBI参考编号NP_068769.2和NP_690605.1。
术语“抗体”是指通过免疫球蛋白分子的可变区内的至少一个抗原识别位点，识别并特异性结合靶物(例如蛋白质、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或上述的组合)的免疫球蛋白分子。如本文所用，术语“抗体”涵盖完整的多克隆抗体、完整的单克隆抗体、抗体片段(例如Fab,Fab',F(ab')2和Fv片段)、单链Fv(scFv)突变体、多特异性抗体(例如由至少两个完整的抗体生成的双特异性抗体)、嵌合抗体、人源化抗体、人类抗体、融合蛋白质(包含抗体的抗原决定部分)以及任何其他改性的免疫球蛋白分子(包含抗原识别位点)，前体条件是抗体展现所需的生物学活性即可。根据免疫球蛋白的重链恒定结构域的性质(分别称为α、δ、ε、γ和μ)，抗体可以为五种主要种类的免疫球蛋白的任意一种：IgA,IgD,IgE,IgG和IgM，或者它们的亚类(同型)(例如IgG1,IgG2,IgG3,IgG4,IgA1和IgA2)。不同种类的免疫球蛋白具有不同的且公知的亚基结构，以及三维构造。抗体可以是裸露的或者与其他分子缀合，例如毒素、放射性同位素等。
“阻断”抗体或“拮抗剂”抗体为抑制或降低它所结合的抗原(例如CD20)的生物活性的抗体。在某些实施方案中，阻断抗体或拮抗剂抗体基本上或完全抑制抗原的生物学活性。理想的是，生物学活性降低10％,20％,30％,50％,70％,80％,90％,95％或者甚至100％。
术语“抗-CD20抗体”或“与CD20结合的抗体”是指如下抗体，其能够以足够的亲和性与CD20结合、使得抗体在靶向CD20中用作诊断和/或治疗试剂。抗-CD20抗体与不相关的非-CD20蛋白质结合的程度比抗体与CD20结合的程度低大约10％，这是通过例如放射性免疫测试(RIA)测量的。在某些实施方案中，与CD20结合的抗体具有≤1μM,≤100nM,≤10nM,≤1nM或≤0.1nM的解离常数。
术语“抗体片段”是指完整的抗体的部分，并其是指完整抗体的抗原决定可变区。抗体片段的实例包括但不限于Fab,Fab',F(ab')2,Fv片段,线性抗体,单链抗体,以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
“单克隆抗体”是指单一抗原决定簇或抗原表位的高度特异性识别和结合中，所涉及的同源抗体群。这与多克隆抗体相反，多克隆抗体通常包含定向针对不同的抗原决定簇的不同的抗体。术语“单克隆抗体”涵盖完全的和全长的单克隆抗体、以及抗体片段(例如例如Fab,Fab',F(ab')2,Fv)、单链(scFv)突变体、包含抗体部分的融合蛋白质以及包含抗原识别位点的任何其他修饰的免疫球蛋白分子。此外，“单克隆抗体”是指以任意种方式制备的这种抗体，其包括但不限于杂交瘤、噬菌体选择、重组表达和转基因动物。
术语“人源化抗体”是指非人类(例如鼠科)抗体的形式，其为免疫球蛋白链、嵌合免疫球蛋白或其包含最少非人类(例如鼠科)序列的片段。通常，人源化抗体为人类免疫球蛋白，其中得自互补性决定区(CDR)的残基被得自非人类物种(例如小鼠、大鼠、兔、仓鼠)的具有所需的特异性、亲和性和能力的CDR替代(Jones et al.,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann et al.,Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen et al.,Science 239:1534-1536(1988))。在一些情况下，人类免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被得自非人类物种的具有所需的特异性、亲和性和能力的抗体中相应的残基替代。人源化抗体可以通过Fv框架区和/或被替代的非人类残基中其他残基的取代而进一步修饰，从而改善并优化抗体的特异性、亲和性和/或能力。通常，人源化抗体包含至少一个、通常为两个或三个可变结构域的几乎全部，其中所述的结构域包含相当于非人类免疫球蛋白的所有的或几乎所有的CDR区，而FR区的全部或几乎全部为人类免疫球蛋白共有序列的那些。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)的至少一部分，通常为人类免疫球蛋白的至少一部分。用于生成人源化抗体的方法的实例在美国专利No.5,225,539或5,639,641中描述。
抗体的“可变区”是指单独的或组合的抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区。重链和轻链的可变区均由十个框架区(FR)构成，所述的框架区通过三个互补性决定区(CDR)连接，其还称为超变区。各链中的CDR通过FR密切接近地维持在一起，并且得自其他链的CDR有助于抗体的抗原结合位点的形成。具有至少两种技术用于测定CDR：(1)基于跨物种序列变异性的方法(即，Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th ed.,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))；以及(2)基于抗原-抗体复合物的晶体学研究的方法(Al-lazikani et al,J.Molec.Biol.273:927-948(1997))。此外，这两种方法的组合在本领域中有时用于测定CDR。
当涉及可变结构域中的残基(轻链大约残基1-107，重链的残基1-113)时，通常使用Kabat编号系统(例如Kabat et al.,上文所述)。
如同在Kabat中编号的氨基酸位置是指在Kabat等人,上文所述中，用于抗体编辑的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用该编号系统，实际上的线性氨基酸序列可以包含相当于可变结构域的FR或CDR的缩短序列或插入FR或CDR中的较少的或其他的氨基酸。例如重链可变结构域在H2的残基52之后可以包含单一的氨基酸插入物(根据Kabat，残基52a)以及在重链FR残基82之后插入的残基(例如根据Kabat，残基82a,82b或82c等)。通过将抗体序列的同源区域与“标准的”Kabat编号序列比对，对于给定抗体，可以测定残基的Kabat编号。相反，Chothia是指结构环的位置(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。当使用Kabat编号惯例时，根据环的长度，Chothia CDR-H1环在H32和H34之间结束(这是因为Kabat编号方案在H35A和H35B处放置插入物；如果35A和35B不存在，则环在32处结束；如果仅35A存在，则环在33处结束；如果35A和35B存在，则环在34处结束)。AbM超变区代表了Kabat CDR和Chothia结构环之间的平衡，并且被Oxford Molecular'sAbM抗体建模软件使用。
术语“人类抗体”是指由人类生产的抗体或具有氨基酸序列的抗体，其相当于使用本领域已知的任何技术制备的人生产的抗体。人类抗体的这种定义包括完整的或全长的抗体、其片段和/或包含至少一个人类重链和/或轻链多肽的抗体，例如包含鼠科轻链和人类重链多肽的抗体。
术语“嵌合抗体”是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列是由两个或多个物种衍生得到的抗体。通常，轻链和重链的可变区相当于由哺乳动物的一个物种(例如小鼠、大鼠、兔等)衍生得到的抗体的可变区，并且具有所需的特异性、亲和性和能力，同时恒定区与由另一个物种(通常为人类)衍生得到的抗体的序列同源，从而避免在该物种中引发免疫应答。
术语“抗原表位”或“抗原决定簇”在本文中可交换使用，并且是指能够被特定抗体识别并特异性结合的抗原的部分。当抗原为多肽时，抗原表位可以由连续的氨基酸和不连续的氨基酸(通过蛋白质的三级折叠并列设置)形成。由连续的氨基酸形成的抗原表位在蛋白质变性时，通常得到维持，而由三级折叠形成的抗原表位在蛋白质变性时，通常失去。在独特的空间构造中，抗原表位通常包含至少2个、更通常包含至少5个或8-10个氨基酸。
“结合亲和性”通常是指分子(例如抗体)及其结合伴侣(例如抗原)的单一结合位点之间非共价相互作用的总强度。除非另外指出，否则如本文所用，“结合亲和性”是指内在结合亲和性，其反映了结合对(例如抗体和抗原)成员之间的1:1相互作用。分子X与其伴侣Y的亲和性通常可以通过解离常数(Kd)表示。亲和性可以通过本领域已知的一般方法测量，包括本发明所述的那些。低亲和性的抗体通常缓慢地结合抗体，并且往往易于解离，而高亲和性的抗体通常更快地结合抗原，并且更长时间的维持结合。多种测量结合亲和性的方法是本领域已知的，这些方法的任意一种都可以用于本发明的目的。具体的示意性实施方案在本发明中描述。
“程序性死亡-1”或“PD-1”是指细胞表面免疫抑制受体属于T-细胞调节因子的CD28家族。在激活时，PD-1在B细胞、T细胞、单核细胞和自然杀伤细胞(NKT)中表达。PD-1与两个配体(PD-L1和PD-L2)结合。如本文所用，术语“PD-1”包括人类PD-1(hPD-1)、变体、同种型和hPD-1的物种同源物，以及与hPD-1具有至少一个共同的抗原表位的类似物。完整的hPD-1序列可以在GenBank Accession No.U64863中找到。
“程序性死亡配体-1”或“PD-L1”(还称为B7-H1)是用于PD-1的两个细胞表面糖蛋白配体之一(另一个为PD-L2，还称为B7-DC)，其在与PD-1结合时，下调节T细胞激活和细胞因子分泌。如本文所用，术语“PD-L1”包括人类PD-L1(hPD-L1)、变体、同种型和hPD-L1的物种同源物，以及与hPD-L1具有至少一个共同的抗原表位的类似物。完整的hPD-L1序列可以在GenBank Accession No.Q9NZQ7中找到。
如本文所用，短语“基本相似的”或“基本相同的”表示两个数字(通常与本发明的抗原有关的数值以及与参照/比较抗体有关的另一个数值)之间足够高的相似程度，使得本领域的任一技术人员认为在通过所述的值(例如Kd值)测量的生物学特征的内容中，两个值之间的差异较小或者不具有生物学和/或统计学意义。所述的两个值之间的差异作为参照/比较抗体的值的函数，低于大约50％、低于大约40％、低于大约30％、低于大约20％或者低于大约10％。
被“分离的”多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物为不能在自然界中找到的形式。分离的多肽、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物包含这些：它们被纯化到一定程度，使得它们不在为在自然界中发现它们时的形式。在一些实施方案中，经分离的抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是基本纯的。
如本文所用，“基本纯的”是指至少50％纯的(即，不含污染物)、至少90％纯的、至少95％纯的、至少98％纯的或者至少99％纯的材料。
“多核苷酸”或“核酸”在本文中可交换使用，是指任何长度的核苷酸的聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基、和/或它们的类似物或者可以通过DNA或RNA聚合物引入聚合物中的任何底物。多核苷酸可以包含改性的核苷酸，例如甲基化的核苷酸和它们的类似物。核苷酸结构的修饰如果存在，则可以在聚合物组装之前或之后进行。核苷酸的序列可以通过非核苷酸成分中断。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可交换使用，是指任何长度的氨基酸的聚合物。该聚合物可以是线性的或支化的，其可以包含改性氨基酸，并且其可以被非氨基酸中断。所述的术语还涵盖天然改性的或通过干预改性的氨基酸聚合物；例如二硫键形成，糖基化，脂质化，乙酰化，磷酸化或者任何其他的操作或修饰，例如与标记成分缀合。还包含在所述的定义内的是例如包含氨基酸的一个或多个类似物(例如包括非天然的氨基酸等)以及包含本领域已知的其他改性的多肽。应该理解的是，由于本发明的多肽是基于抗体，所以在某些实施方案中，所述的多肽可以形成单链或结合链。
在两个或多个核酸或多肽的内容中，术语“一致的”或百分“一致性”是指在比较和比对(如果需要，引入空隙)以达到最大对应时，相同的或者具有特定百分率的相同的核苷酸或氨基酸残基的两个或多个序列或亚序列，但是不能将任何保守的氨基酸取代视为序列一致性的一部分。使用序列比较软件或算法、或者通过视觉检查，测量百分一致性。本领域已知多种算法和软件可以用于获得氨基酸或核苷酸序列的比对。序列比对算法的一个此类非限定性实例为Karlin等人在Proc.Natl.Acad.Sci.87:2264-2268(1990)中所述的算法(其在Karlin et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.90:5873-5877(1993)中修改)，并被引入到NBLAST和XBLAST程序中(Altschul et al.,Nucleic Acids Res.25:3389-3402(1991))。在某些实施方案中，如Altschul et al.,Nucleic Acids Res.25:3389-3402(1997)中所述，可以使用Gapped BLAST。BLAST-2,WU-BLAST-2(Altschul et al.,Methods inEnzymology,266:460-480(1996)),ALIGN,ALIGN-2(Genentech,South San Francisco,CA)或Megalign(DNASTAR)均为其他公共可利用的可以用于比对序列的软件程序。在某些实施方案中，使用GCG软件中的GAP程序，测定两个核苷酸序列之间的百分一致性(例如使用NWSgapdna.CMP矩阵，并且间隙权重为40,50,60,70或90，长度权重为1,2,3,4,5或6)。在某些备选的实施方案中，引入Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48:444-453(1970))的算法的GCG软件包中的GAP程序可以用于测定两个氨基酸序列之间的百分一致性(例如使用Blossum 62或者PAM250矩阵，并且间隙权重为16,14,12,10,8,6或4，长度权重为1,2,3,4,5)。备选地，在某些实施方案中，使用Myers和Miller(CABIOS,4:11-17(1989))的算法，测定核苷酸或氨基酸序列之间的百分一致性。例如使用ALIGN程序(2.0版)并使用PAM120，测定百分一致性，其中具有残基表、间隙长度罚分为12，间隙罚分为4。本领域的任一技术人员可以测定特定比对软件为了最大比对而使用的合适的参数。在某些实施方案中，使用比对软件的缺省参数。在某些实施方案中，第一氨基酸序列与第二序列氨基酸的百分一致性“X”计算为100x(Y/Z)，其中Y为在第一和第二序列的比对(通过视觉检查或者特定的序列比对程序比对)中评分为相同匹配的氨基酸残基的数量，并且Z为第二序列中残基的总数。如果第一序列的长度长于第二序列，第一序列与第二序列的百分一致性大于第二序列与第二序列的百分一致性。
一个非限定性实例，如果任何特定的多核苷酸与参照序列具有某些百分序列一致性(例如至少80％一致的、至少85％一致的、至少90％一致性的，在一些实施方案中，至少95％,96％,97％,98％或99％一致的)，在某些实施方案中，可以使用Bestfit程序测定(Wisconsin Sequence Analysis Package,Version 8for Unix,Genetics ComputerGroup,University Research Park,575Science Drive,Madison,WI 53711)。Bestfit使用Smith和Waterman,Advances in Applied Mathematics 2:482 489(1981)的局部同源性算法，发现两个序列之间最佳的同源性链段。当根据本发明使用Bestfit或任何其他序列比对程序测定特定序列与参照序列是否是例如95％一致的，则设定参数，使得在参照核苷酸序列的全长上计算一致性的百分率，并且允许在参照序列中至多5％的核苷酸总数的同源性间隙。
在一些实施方案中，本发明的两个核酸或多肽基本上是一致的，这意味着当为了达到最大对应进行比较和比对时，它们具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％，并且在一些实施方案中为至少95％、96％、97％、98％、99％核苷酸或氨基酸残基一致性，这是使用序列比较算法或通过视觉检查测量的。在某些实施方案中，在长度为至少大约10,大约20,大约40-60个残基或者它们之间的任何整数值的序列区域上，或者在比60-80个残基、至少大约90-100个残基更长的区域上存在一致性，或者序列在所比较的全长序列上基本上是一致的，例如核苷酸序列的编码区域。
术语“受试对象”是指任何动物(例如哺乳动物)，包括但不限于人类、非人类、啮齿动物等，其是指特定治疗的受体。通常，术语“受试对象”和“患者”在本发明中可交换使用，是指人类受试对象。
术语“癌症”和“癌症的”是指或者描述哺乳动物的生理学状况，其中细胞群表征为不受控的或不受调节的细胞生长。癌症的实例包括例如癌,淋巴瘤,母细胞瘤,肉瘤和白血病。
如本文所用，术语“血液学癌症”或“血液学恶性肿瘤”是指影响血液细胞(例如T或B细胞)、骨髓或淋巴结的任何癌症类型(如上文定义)。本领域的任一技术人员应该理解，血液学癌症的三种主要的类别是淋巴瘤、白血病和骨髓瘤。恶性肿瘤可以是惰性的或侵入性的。可以使用本发明的方法或试剂盒治疗的血液学癌症的非限定性实例包括急性淋巴细胞白血病(ALL),急性髓系白血病(AML),慢性淋巴细胞白血病(CLL),小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL),多发性骨髓瘤(MM),非Hodgkin淋巴瘤(NHL),外套细胞淋巴瘤(MCL),滤泡性淋巴瘤(FL),Waldenstrom巨球蛋白血症(WM),弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL),边缘区淋巴瘤(MZL)(其包括结外MZL,结节性MZL和脾脏MZL),毛细胞白血病(HCL),Burkitt淋巴瘤(BL)和Richter转化。在一些实施方案中，DLBCL为活化的B细胞DLBCL(ABC-DLBCL)、生发中心B细胞样DLBCL(GBC-DLBCL)、双重打击DLBCL(DH-DLBCL)或三重打击DLBCL(TH-DLBCL)。在一些实施方案中，某些CLL(或其他白血病，例如本发明所述的那些)由于存在一个或多个基因突变，而被认为是“高风险的”。如本文所用，例如“高风险”CLL是指表征为以下基因突变的至少一个的CLL：17p del；11q del；p53；未突变的IgVH以及ZAP-70+和/或CD38+；和三倍体12。
“肿瘤”和“赘生物”是指由良性的(非癌症的)或恶性的(癌症的)(包括癌前病变)过度细胞生长或增殖所导致的任意一块组织。
术语“癌细胞”、“肿瘤细胞”和语法等价物是指由肿瘤或癌前病变衍生的总细胞群，包括非致瘤的细胞(其包含大部分肿瘤细胞群)和致瘤干细胞(癌症干细胞)。如本文所用，当术语“肿瘤细胞”单独指缺乏再生和分化能力以便区分这些肿瘤细胞与癌症干细胞的那些细胞时，通过术语“非致瘤的”修饰。
术语患者的“复发性”癌症是指之前取得完全的或部分缓解，但是在6个月或更长的时间后，证明疾病进展的证据的患者。
术语患者的“难治性”癌症是指在最后一次抗癌治疗后的6个月之内，经历治疗失败或疾病进展的患者。
术语“复发-难治性CLL”或“r/r CLL”是指在以下患者中发生的CLL，其中所述的患者根据CLL(IWCLL)应答标准国际研讨会(the International Workshop on CLL(IWCLL)response criteria)(Hallek,M.et al.,"Guidelines for the diagnosis andtreatment of chronic lymphocytic leukemia:a report from the InternationalWorkshop on Chronic Lymphocytic Leukemia updating the National CancerInstitute–Working Group 1996guidelines,"Blood111:5446-5456(2008),erratum inBlood 112:5259(2008))，之前取得完全或部分缓解，但是随后在6个月或更长的时间后发展成进行性疾病。
在公认的动物模型或人类临床试验中，与未治疗或使用安慰剂治疗比较，对治疗“未应答”或“较差的应答”(例如使用抗-CD20抗体)的肿瘤未显示统计学意义的改善，或者对原始治疗产生应答但随着治疗的继续仍生长。
术语“药物配制物”是指如下形式的制备物，其能够使活性组分的生物学活性是有效的，并且其不包含对给予该配制物的受试对象而言具有不可接受的毒性的其他成分。这种配制物可以无菌的。
术语“治疗有效量”是指所述的治疗试剂(例如抗体或小分子)有效地“治疗”受试对象或哺乳动物的疾病或紊乱的量。在癌症的情况下，试剂的治疗有效量可以减少癌细胞的数量；减小肿瘤的尺寸；抑制(即，减慢至某一程度或停止)癌细胞浸润至周围器官中；抑制(即，减慢至某一程度或停止)肿瘤转移；抑制肿瘤生长(达到某一程度)；和/或减轻一种或多种与癌症有关的症状(达到某一程度)。参见本发明中“治疗”的定义。对于药品可以抑制生长和/或杀死存在的癌细胞的程度而言，其可以是抑制细胞的和/或细胞毒性的。“预防有效量”是指在一定剂量和所需的时间内，有效取得所需的预防结果的量。通常但不是必须的，由于预防剂量在疾病之前或在疾病的前期阶段用于受试对象，所以预防有效量低于治疗有效量。
术语例如分词形式的“治疗”、名词形式的“治疗”、将来形式的“治疗”、“具有治疗作用”、分词形式的“减轻”、将来形式的“减轻”或“减慢进程”是指1)治愈、减慢、减轻所诊断的病理学状况或紊乱(例如血液学恶性肿瘤)的症状，和/或阻止其进展的治疗性措施；和2)预防和/或减慢靶向病理学状况或紊乱的发展的预防性或预防措施。因此，需要治疗的那些包括已经患有所述的紊乱的那些；倾向于患有所述的紊乱的那些；以及其中所述的紊乱有待于抑制的那些。在某些实施方案中，如果患者显示以下的一种或多种，则根据本发明的方法，受试对象成功治疗癌症：减少恶疾，增加生存时间，延长肿瘤进展的时间，减小肿瘤包块，减轻肿瘤负担和/或延长肿瘤转移的时间、延长肿瘤复发或进行性疾病、肿瘤应答、完全应答(CR)、部分应答(PR)、稳定疾病、无病进展生存期(PFS)、总体生存率(OS)的时间，其均是由the National Cancer Institute(NCI)and the U.S.Food and DrugAdministration(FDA)针对新药批准设定的标准来测量的。参见Johnson et al,J.Clin.Oncol.21:1404-1411(2003)。在一些实施方案中，如上文所定义，“治疗有效的”还涵盖毒性或不利副作用的减少，和/或耐受性的改善。
“给予”是指使用本领域那些技术人员已知的多种方法和传递系统，将包含治疗试剂的组合物物理性引入受试对象中。给予的途径包括口服、粘膜、局部、静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、脊髓或者其他的肠胃外给予途径，例如注射或输注。如本文所用，短语“肠胃外给予”是指给予方式，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、淋巴管内、病灶内、囊内、眶内、心脏内、皮内、腹膜内、进气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬脑膜外和胸骨内注射和输注，以及体内电穿孔。给予可以例如一次、多次、和/或在一个或多个延长时期内实施。
(1)抗-CD20抗体(例如ublituximab),(2)P13K-δ选择性抑制剂(例如TGR-1202)和(3)抗-PD-1抗体(例如派姆单抗)或抗-PD-L1抗体(例如atezolizumab)的“组合”是指这些试剂的每一种的一种或多种同时和/或依次给予相同的受试对象。通常，除非内容中具有不同的说明，否则“试剂的组合”是指将这三种试剂的每一种的一种或多种同时和/或依次给予相同的受试对象。
例如在给予P13K-δ选择性抑制剂之前或之后(例如小时(多个)、天(多个)、周(多个)或月(多个))、在给予抗-PD-1或抗-PD-L1抗体之前或之后(例如小时(多个)、天(多个)、周(多个)或月(多个))，给予抗-CD20抗体，构成给予试剂的组合，无论这些试剂在单一的药物配制物中一起给予，还是通过相同的或不同的给予途径在分开的药物配制物中给予。通过内容本领域的任一技术人员显而易见的是，“试剂的组合”可以进一步包括给予一种或多种其他的治疗试剂，如发明所述。
如本文所用，“诱导阶段”或“诱导治疗”是指在治疗阶段之前，给予第一试剂或试剂的组合。如果诱导阶段的治疗不能得到完全应答或其导致严重的副作用，则可以开始治疗阶段，其中可以加入或者替代使用其他试剂(参见“治疗阶段”)。诱导还称为原始疗法或原始治疗，并且以诱导疾病负担产生一些初始的降低为目标而给予。例如诱导治疗可以包括给予抗-CD20抗体(例如ublituximab)和P13K-δ抑制剂(例如TGR-1202)。然而，在一些实施方案中，诱导治疗不作为受试对象的治疗方案的一部分给予。
如本文所用，“治疗阶段”通常是指在诱导治疗后给予受试对象的治疗。在一些实施方案中，治疗阶段用于在诱导治疗后，杀死任何保留的恶性血液学细胞。例如如果在诱导阶段使用抗-CD20抗体和P13K-δ抑制剂，则治疗阶段可以包括给予其他的治疗试剂，例如PD-1抗体(例如派姆单抗)或PD-L1抗体(例如atezolizumab)。然而，在一些实施方案中，未给予诱导治疗，并且治疗阶段是指所有的试剂(例如P13激酶(PI3K)-δ抑制剂、抗-CD20抗体，以及抗-PD1或抗-PD-L1抗体)组合给予。“治疗阶段”还称为“巩固”、“巩固治疗”或“强化治疗”。
如本文所用，“维持阶段”或“维持治疗”是指在治疗阶段后发生的阶段，如本文所述。在维持阶段，患者被给予治疗以便帮助血液学癌症在成功治疗后免于返回。维持治疗可以包括使用在之前的治疗阶段中使用的相同的试剂进行治疗。在维持阶段中的试剂可以在延长的时间内给予。
在本发明公开中表示材料的量、比例、物理性质和/或用途的所有数字都可以理解为通过词语“大约”修饰，除非以其他方式清除表明。当术语“大约”用于指数字或数字范围时，其是指在例如试验变异范围(或者在统计学试验误差范围内)内被称为近似值的数字或数字范围，因此数字或数字范围可以在所述的数字或数字范围的1％至15％之间改变。
根据绝对立体化学，本发明所述的式A的化合物可以包含一个或多个不对称中心(手性中心)，因此可以形成对映异构体、非对映异构体和其他立体异构体形式，例如(R)-或(S)-。本发明公开是指涵盖所有这种可能的形式以及它们的外消旋和拆分形式，以及它们的混合物。基于本发明公开，可以根据本领域已知的方法分离单一的对映异构体。
如本文所用，术语“立体异构体”为用于单一分子的所有异构体的一般术语，其仅在原子的空间取向中不同。其包含具有多于一个手性中心的化合物的对映异构体和异构体(彼此非镜像(非对映异构体))。
术语“手性中心”是指连接四个不同基团的碳原子。
术语“对映异构体”和“对映异构的”是指不能附加在镜像上并因此是光学活性的分子，其中对映异构体在一个方向上旋转偏振光的平面，并且其镜像化合物在相反的方向上旋转偏振光的平面。
术语“外消旋的”是指等份对映异构体的混合物，并且其混合物是非光学活性的。
术语“拆分”是指分离、浓缩或耗尽分子的两种对映异构体形式的一种。
本发明公开涵盖式A所示的化合物的溶剂化物。溶剂化物通常不显著地改变化合物的生理学活性或毒性，并且可以原样发挥药理学等价物的作用。如本文所用，术语“溶剂化物”为本发明公开的化合物与溶剂分子的组合、物理结合和/或溶剂化，例如溶剂化物、一溶剂化物或半溶剂化物，其中溶剂分子与本发明公开的化合物的比例分别为大约2:1,大约1:1或大约1:2。这种物理结合涉及程度改变的离子和共价键，包括氢键。在某些例子中，可以分离溶剂化物，例如在一种或多种溶剂分子被引入结晶固体的晶格中时。因此，“溶剂化物”涵盖溶液相和可分离的溶剂化物。本发明的化合物可以以与药物可接受的溶剂形成溶剂化的形式存在，例如水、甲醇、乙醇等，并且本发明公开意图包含本发明的化合物的溶剂化和非溶剂化形式。一种类型的溶剂化物为水合物。“水合物”涉及特定的一小组溶剂化物，其中溶剂分子为水。溶剂化物通常可以发挥药物等价物的作用。溶剂化物的制备是本领域已知的。例如参见M.Caira et al.,J.Pharmaceut.Sci.,93(3):601-611(2004)；E.C.vanTonder et al.,AAPS Pharm.Sci.Tech.5(1):Article 12(2004)。制备溶剂化物的典型的非限定性工艺涉及在大约20℃至大约25℃的温度下将本发明公开的化合物溶解于所需的溶剂(有机物、水或它们的混合物)中，然后以足以形成晶体的速度冷却溶液，并通过已知的方法分离晶体，例如过滤。分析技术(例如红外光谱仪)可以用于证明溶剂在溶剂化物的晶体中的存在。
术语“前药”是指这样的化合物，其为化合物的非活性前体，在肌体内通过正常的代谢过程转化成活性形式。前药的设计通常在Hardma,et al.(eds.),Goodman andGilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics,9th ed.,pp.11-16(1996)中讨论。全面的讨论在Higuchi et al.,Prodrugs as Novel Delivery Systems,Vol.14,ASCDSymposium Series和Roche(ed.),Bioreversible Carriers in Drug Design,AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press(1987)中提供。为了说明，通过例如酯键或酰胺键的水解，前药可以转化成药物活性形式，由此在所得的产物上引入或暴露官能团。前药可以被设计成与内源化合物反应，从而形成水溶性缀合物，其进一步增强化合物的药物性质，例如增长的循环半衰期。备选地，前药可设计成使用例如葡萄糖醛酸、硫酸盐、谷胱甘肽、氨基酸或乙酸盐在官能团上形成共价修饰。所得的缀合物可以是非活性的，并且在尿中排泄，或者使得所得的缀合物比母体化合物更有效。高分子量的缀合物还可以被排泄至胆汁中，经过酶切割，并释放返回至循环中，由此有效地增加初始给予的化合物的生物学半衰期。本发明的化合物的前药意图涵盖在本发明的范围内。
本发明公开进一步涵盖式A所示的化合物的药物可接受的盐。药物可接受的加成盐的实例包括无机和有机酸加成盐和碱盐。药物可接受的盐包括但不限于金属盐，例如钠盐、钾盐、铯盐等；碱土金属，例如钙盐、镁盐等；有机胺盐，例如三乙基胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、乙胺盐、三乙胺盐、二环己基胺盐、N,N'-二苄基亚乙基二胺盐等；无机酸盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等；有机酸盐，例如柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、扁桃酸盐、乙酸盐、二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、甲酸盐、琥珀酸盐、巴莫酸盐、安息香酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐、甘油磷酸盐、酮戊二酸盐等；磺酸盐，例如甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等；天然氨基酸的盐，例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、正亮氨酸、酪氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、组氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、精氨酸和丝氨酸；以及非天然氨基酸的盐，例如D-二聚体或取代的氨基酸；胍的盐；以及取代的胍的盐，其中取代基选自硝基、氨基、烷基、烯基、炔基、铵、或者取代的铵盐和铝盐。
本发明所述的剂量以游离碱试剂的量表示，并且不包含抗衡离子(例如硫酸盐)或者任何水或溶剂分子的重量。
术语“P13K-delta选择性抑制剂”、“P13K-δ选择性抑制剂”、“P13K-delta抑制剂”和“P13K-δ抑制剂”在本发明中可交换使用，其是指这样的化合物，与P13K家族(a、b和g)的其他同种型相比，其更高效地选择性地抑制P13K-δ同种型的活性。例如P13K-δ选择性抑制剂可以为这样的化合物，与δ型P13-激酶相比，所述的化合物展现出50％抑制浓度(IC50)，这与其他型P13K同种型(即，a、b和g)的抑制IC50相比，低至少20倍或更低。
如本文所用，术语“协同”和“协同活性”是指通过本发明所述的试剂的组合给予(例如抗-CD20抗体,P13K-δ抑制剂和抗-PD1或抗-PD-L1抗体的三重组合)而产生的治疗措施，其高于各种试剂单独使用时和/或两种试剂组合时的试剂的加和作用。
如本发明公开和权利要求书所用，单数形式“a”、“an”和“the”包括复数形式，除非内容中另外清楚地表明。例如“a cell”包括单个细胞以及多个细胞，包括它们的混合物。
II.P13K-δ选择性抑制剂
本发明公开向血液学恶性肿瘤患者提供了新型的组合治疗和治疗方案。组合治疗尤其包括向有需要的受试对象给予治疗有效量的至少一种P13K-δ选择性抑制剂(例如式A所示的P13K-δ选择性抑制剂)，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。
磷酸肌醇3激酶(P13K)是在每个细胞类型中通过生成磷酸肌醇第二信使分子来调节多样的生物学功能的酶家族。P13K涉及多种细胞功能，包括细胞增殖和存活、细胞分化、细胞内运输和免疫力。由于这些磷酸肌醇第二信使的活性是通过它们的磷酸化状态确定的，所以发挥改性这些脂质作用的激酶和磷酸酶是正确执行细胞内信号传递事件的中心。P13K家族由四种不同的种类组成：I,II,III和IV类。I-III类为脂质激酶，IV类为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。
P13K的I类家族的成员为调节和催化亚基的二聚体。I类家族由四种同种型构成，通过110kDa催化亚基a,b,g和d确定。参见Engelman,J.A.,Nat.Rev.Genet.7:606-619(2006)。I类可以细分成两个亚类：Ia类，通过pl10a,b和d、以及调节亚基(p85,p55或p50)的组合形成；而Ib类，通过p110g和p101调节亚基形成。P13K的δ同种型在造血起源的细胞中高度表达，并受到强烈的上调节，并且通常在多种血液学恶性肿瘤中突变。
P13K-δ选择性抑制剂的一个实例为艾代拉里斯(商品名)，其由FDA在2014年批准用于治疗复发的CLL(与组合；参见Furman,R.R.et al.,N.Eng.J.Med.370:997-1007(2014))；复发的滤泡B细胞非Hodgkin淋巴瘤(FL)和复发的小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)(另一种类型的非Hodgkin淋巴瘤)。参见的全部描述信息(Gilead Sciences)。艾代拉里斯具有独特的且有限的毒性概况，包括免疫介导的大肠炎(级别3≥5％)、肺炎(级别3≥4％)和转氨酶升高(级别3≥8％)。因此，FDA对的批准伴有黑框警告，注意致命的且严重的毒性的可能性，包括肝脏、严重腹泻、大肠炎、肺炎和肠穿孔。Id。
P13K-δ选择性抑制剂的另一个实例为duvelisib(IPI-145)。参见O'Brian,S.等人,Blood 124:Abstract 3334(2014)。尽管duvelisib在研发剂量(25mg每天两次)下靶向P13K-δ和γ，但是其主要仅抑制δ同种型。Id。另一种P13K-δ选择性抑制剂为ACP-319(之前为AMG-319)。参见Lanasa,M.C.等人,Blood 122:Abstract 678(2013)。ACP-319目前由Acerta Pharma B.V.研发。ME-401是由MEI Pharma研发的新型口服P13K-δ选择性抑制剂。参见Moreno,O.等人,副标题为"Clinical Pharmacokinetics and Pharmacodynamics ofME-401,an Oral,Potent,and Selective Inhibitor of Phosphatidylinositol 3-Kinase P110δ,Following Single Ascending Administration to Healthy Volunteers"(Abstract#CT157)，其在the American Association for Cancer Research(AACR)AnnualMeeting,New Orleans(April 16-20,2016)呈现。INCB-50465是由Incyte Corporation研发的另一种P13K-δ选择性抑制剂，其在I/II期临床试验中用于治疗B细胞恶性肿瘤。参见Forero-Torres,A.等人,"Preliminary safety,efficacy,and pharmacodynamics of ahighly selective PI3Kδinhibitor,INCB050465,in patients with previouslytreated B-cell malignancies"(Abstract#CT056)，在the AACR Annual Meeting,NewOrleans(April 16-20,2016)呈现。
如本发明提供，用于所述的方法和试剂盒中的P13K-δ选择性抑制剂为式A所示的化合物，或者其立体异构体，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药：
在一个实施方案中，式A所示的化合物为(RS)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮。
在一个实施方案中，式A所示的化合物为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物和前药。在另一个实施方案中，式A所示的化合物为(R)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物和前药。这两种化合物的化学结构如下所示：
可以使用在国际专利公开No.WO 2011/055215 A2和美国专利申请公开No.2011/0118257 A1中所公开的一般合成方法来制备式A所示的P13K-δ选择性抑制剂，所述的每一份文件均以引用方式全文并入本文。
在优选的实施方案中，式A所示的P13K-δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物和前药。(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮及其盐的制备在国际公开No.WO 2014/006572和美国专利公开No.2014/0011819中描述。除了描述(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮的合成以外，WO 2014/006572和U.S.2014/0011819还公开了所述的分子抑制、调节和/或调控PI3K的信号传导的治疗活性。这种式A所示的P13K-δ抑制剂还在美国专利No.9,150,579中描述，其在2015年10月6日发表。
在特别优选的实施方案中，式A所示的P13K-δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮-对甲苯磺酸(PTSA)盐，其在口服给予时，展现出增强的溶解性和药代动力学。参见国际公开No.WO 2015/181728。(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮的PTSA盐还称为TGR-1202。如本文所用，术语“TGR-1202”是指(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮的PTSA盐。TGR-1202的通用国际非专有名称(INN)/美国采用的名称(USAN)为umbralisib甲苯磺酸盐。这些申请和专利的每一份均以引用方式全部并入本文。
TGR-1202是高度特异性的口服可用的PI3Kδ抑制剂，其以纳米摩尔的抑制潜力靶向δ同种型，并且对a、b和g同种型具有高度的选择性。在酶基测试中，TGR-1202抵抗人类PI3K同种型的效力如表1所示。
表1.TGR-1202抵抗人类PI3K同种型的效力
PI3K同种型(人类) IC<sub>50</sub>(nM)
a >10,000
b 1,116
g 1,065
d 22.23
在复发的且难治的血液学恶性肿瘤患者中，在单药I期剂量递增研究中评价TGR-1202的活性(例如参见Burris,H.A.et al.,J.Clinical Oncology(ASCO Annual MeetingAbstracts)32(15):2513(2014))。Burris报告，在复发的或难治的血液学恶性肿瘤患者中，TGR-1202是良好耐受的，并且在每天剂量≥800mg下，未报告肝脏毒性和临床活性迹象。
在一些实施方案中，就本发明所述的方法和试剂盒而言，式A所示的PI3K-δ抑制剂每天以如下剂量给予受试对象：大约200mg至大约1200mg,大约400mg至大约1000mg,大约400mg至大约800mg,大约400mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg,或大约1200mg。
在一些实施方案中，式A所示的PI3K-δ抑制剂配制用于口服给予。在一些实施方案中，TGR-1202，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前体配制用于口服给予。在一些实施方案中，TGR-1202，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前体在喂养条件下给予患者。
通常，在喂养条件下给予TGR-1202相对于在禁食条件下给予而言，得到更高的生物利用性(例如增加的AUC和Cmax)，如下表2所示。
表2.在禁食和喂养条件下口服给予TGR-1202的比较(口服单剂量200mg)
在一些实施方案中，就本发明所述的方法和试剂盒而言，PI3K-δ抑制剂是微粒化的。在一些实施方案中，TGR-1202，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药是微粒化的。
给予微粒化的TGR-1202与给予非微粒化的TGR-1202相比，得到更高的生物利用性(例如增加的AUC和Cmax)，如下表3所示。
表3.微粒化的和非微粒化的TGR-1202配制物的比较(口服单剂量200mg)
TGR-1202与治疗相关的转氨酶升高(transaminitis)或大肠炎无关，这将TGR-1202与艾代拉里斯区别开。在血液学癌症的管理中，当将TGR-1202与免疫检查点抑制剂(例如PD-1或PD-L1抗体)组合使用时，TGR-1202与艾代拉里斯之间在毒性概况方面的差异是具有深远意义的。
在一些实施方案中，就本发明所述的方法和试剂盒而言，TGR-1202，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药以选自如下的剂量给予：每天大约200至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约500至大约800mg,大约500至大约1000mg,大约600至大约800mg,大约600至大约1000mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg,或者大约1200mg。
在一些实施方案中，TGR-1202，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药每天以大约400mg至大约800mg的剂量给予。在一些实施方案中，TGR-1202，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药每天以大约400mg,大约600mg或大约800mg的剂量给予。本领域的任意技术人员认为，TGR-1202(或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药)的剂量，和/或给予TGR-1202(或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药)的频率在治疗过程中可以根据患者的临床应答、副作用等，或者在治疗的不同阶段(即，诱导、治疗或维持阶段)而改变(降低或升高)。
III.抗-CD20抗体
本发明公开提供了用于血液学癌症患者的组合治疗和治疗方案。组合治疗尤其包括向有需要的受试对象给予治疗有效量的至少一种抗-CD20抗体(例如ublituximab)。
CD20是一种疏水性跨膜磷蛋白，其主要在人类和小鼠的前B细胞和成熟外周B细胞中表达。在人类中，CD20还在大部分的成熟B细胞恶性肿瘤中强烈且均匀地表达，例如大部分的非HodgkinB细胞淋巴瘤(NHL)和B型慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)。CD20抗原在造血干细胞或浆细胞上不表达。
抗-CD20单克隆抗体已经并且持续地研发用于治疗B细胞疾病。嵌合抗-CD20单克隆抗体利妥昔单抗已经成为用于多种CD20阳性B细胞淋巴瘤的标准治疗方法，并且是最先批准用于肿瘤学适应症的mAb。Demarest,S.J.et al.,mAbs 3:338-351(2011)。然而，存在相当大量的患者，他们对于利妥昔单抗的治疗是难以治愈的，或者在使用利妥昔单抗(用作单一试剂，或者甚至与化疗方案组合)延长治疗的过程中发展出抗性。
除了利妥昔单抗以外，多种其他抗-CD20抗体是本领域已知的，包括例如ublituximab(TG-1101),ofatumumab(HuMax；Intracel),ocrelizumab,veltuzumab,GA101(阿托珠单抗),AME-133v(Applied Molecular Evolution),ocaratuzumab(MentrikBiotech),PRO131921,托西莫单抗,替伊莫单抗-噻西坦,hA20(Immunomedics,Inc.),BLX-301(Biolex Therapeutics),Reditux(Dr.Reddy’s Laboratories)和PRO70769(在WO2004/056312中描述)。
利妥昔单抗为定向针对CD20抗原的基因改造的嵌合鼠科/人类单克隆抗体。利妥昔单抗为在美国专利No.5,736,137中被称为“C2B8”的抗体。利妥昔单抗抗体的氨基酸序列和通过在中国仓鼠卵细胞(CHO)中重组表达进行生产的示例性方法在美国专利No.5,736,137中公开，该文献以引用方式全文并入本文。利妥昔单抗最初在1997年由FDA批准用于治疗非-Hodgkin淋巴瘤。利妥昔单抗以出售。
Ofatumumab为抗-CD20IgG1κ人类单克隆抗体。研究表明与利妥昔单抗相比，ofatumumab以较慢的速度与CD20解离，并结合近膜端抗原表位。Zhang等人,Mabs 1:326-331(2009)。抗原表位图谱表明与利妥昔单抗靶向的位置相比，ofatumumab结合与CD20的N-末端更近定位的抗原表位，并且包含抗原的细胞外的环。Id.。
Ublituximab(还称为UBX,UTX,TG-1101,TGTX-1101,UtuxinTM,LFB-R603,TG20,EMAB603)为靶向CD20抗原上特异性且独特的抗原表位的单克隆抗体，并且其经生物改造而具有增强的临床活性和效力。参见Miller et al.,Blood 120:Abstract No.2756(2012)；Deng,C.et.al.,J.Clin.Oncol.31:Abstract No.8575(2013)；和O'Connor,O.A.et al.,"Aphase I trial of ublituximab(TG-1101),a novel glycoengineered anti-CD20monoclonal antibody(mAb)in B-cell non-Hodgkin lymphoma patients withprior exposure to rituximab,"J.Clin.Oncol.32:5s(2014),(suppl；AbstractNo.8524)。Ublituximab在美国专利No.9,234,045中也进行描述。Ublituximab经改造而具有有效的活性，展现独特的氨基酸序列并允许低的海藻糖含量(其被设计用于诱导优异的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC))。已经在多个患者群体(例如NHL、CLL)(单一试剂，以及与其他试剂的组合)中对Ublituximab进行研究。例如O'Connor等人(如上文所述)显示单药Ublituximab是良好耐受的，并且在rituxin暴露的患者中具有活性。在I期试验中，Lunning,M.et al.,American Society of Hematology Annual Meeting andExposition,December 5-8,2015,Abstract No.1538显示，Ublituximab和TGR-1202在复发/难治性B细胞NHL和高危CLL中证明了活性和有利的安全性概况。并且在II期试验中，Sharman J.et.al.,American Society of Hematology Annual Meeting andExposition,December 5-8,2015,Abstract No.3980显示，Ublituximab与依鲁替尼组合在复发的和/或难治性套细胞淋巴瘤患者中是高度活性的。
在优选的实施方案中，在本发明所述的方法(和试剂盒)中使用的抗-CD20抗体为ublituximab或抗-CD20抗体，其与ublituximab相同的抗原表位结合。在特别优选的实施方案中，抗-CD20抗体为ublituximab。
在一些实施方案中，ublituximab包含序列SEQ ID NO:1,2和3的VH CDR1,CDR2和CDR3区域，以及序列SEQ ID NO:6,7和8的VH CDR1,CDR2和CDR3区域。在一些实施方案中，ublituximab包含SEQ ID NO:4的VH和SEQ ID NO:9的VL。
Ublituximab包含下文提供的抗体序列：
可变重链(VH)CDR1:Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn(SEQ ID NO:1)
可变重链(VH)CDR2:Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr(SEQ ID NO:2)
可变重链(VH)CDR3:Ala Arg Tyr Asp Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Tyr(SEQ IDNO:3)
可变重链(VH):
Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala SerVal Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn Met His TrpVal Lys Gln Thr Pro Arg Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gly Ile Tyr Pro Gly AsnGly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Gly LysSer Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala ValTyr Phe Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly ThrSer Val Thr Val Ser Ser(SEQ ID NO:4)
恒定重链:
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys SerThr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu ProVal Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro AlaVal Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser SerSer Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr LysVal Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro CysPro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro LysAsp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val SerHis Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His AsnAla Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser ValLeu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val SerAsn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln ProArg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn GlnVal Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu TrpGlu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp SerAsp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln GlnGly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr GlnLys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys(SEQ ID NO:5)
可变轻链(VL)CDR1:Ser Ser Val Ser Tyr(SEQ ID NO:6)
可变轻链(VL)CDR2:Ala Thr Ser(SEQ ID NO:7)
可变轻链(VL)CDR3:Gln Gln Trp Thr Phe Asn Pro Pro Thr(SEQ ID NO:8)
可变轻链(VL):
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly GluLys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His Trp Tyr GlnGln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala SerGly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Phe Thr IleSer Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Phe AsnPro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys(SEQ ID NO:9)
恒定轻链:
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln LeuLys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu AlaLys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser ValThr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu SerLys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly LeuSer Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys(SEQ ID NO:10)
在一些实施方案中，在本发明所述的方法和试剂盒中，以如下剂量给予ublituximab：大约450mg至大约1200mg,大约500至大约1200mg,大约600至大约1200mg,大约500至大约1000mg,大约600至大约1000mg,大约600至大约900mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg或大约900mg。在某些实施方案中，以大约900mg的剂量给予ublituximab。
可以每1至9周大约一次、每周大约一次、每周大约两次、每2周大约一次、每3周大约一次、每4周大约一次、每5周大约一次、每6周大约一次、每7周大约一次、每8周大约一次或者每9周大约一次给予Ublituximab。本领域的任一技术人员将理解的是，ublituximab的剂量和/或给予ublituximab的频率在治疗过程中可以根据患者的临床应答、副作用等变化(降低或升高)。
在一些实施方案中，在治疗阶段中，以如下剂量给予ublituximab：大约450至大约1200mg,大约450至大约1000mg,大约500至大约1200mg,大约500至大约1000mg,大约500至大约900mg,大约600至大约1200mg,大约600至大约1000mg,大约600至大约900mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约750mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg,大约1100mg,大约1200mg,每4至7周大约一次,每5至7周大约一次,每5至6周大约一次,每周大约一次,每2周大约一次,每3周大约一次,每4周大约一次,每5周大约一次,每6周大约一次,或则每7周大约一次。
在一些实施方案中，本发明所述的方法和试剂盒包括在治疗阶段前的诱导阶段。在诱导阶段中，以如下剂量给予ublituximab：大约450至大约1200mg,大约450至大约1000mg,大约500至大约1200mg,大约500至大约1000mg,大约500至大约900mg,大约600至大约1200mg,大约600至大约1000mg,大约600至大约900mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg,大约1100mg,大约1200mg,每1至3周大约一次,每2至3周大约一次,每1至2周大约一次,每1周大约一次,每2周大约一次,或者每3周大约一次。
本领域的任一技术人员应该理解的是，ublituximab的剂量和/或给予ublituximab的频率在治疗过程(例如治疗阶段和/或诱导阶段)中可以根据患者的临床应答、副作用等变化(降低或升高)。
在一些实施方案中，ublituximab以静脉内(优选通过输注方式)方式配制和/或给予。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体或其片段结合与ublituximab相同的抗原表位。在一些实施方案中，抗-CD20抗体或其片段结合包含CD20的氨基酸N153-S179的序列。在一些实施方案中，抗-CD20抗体或其片段结合CD20的氨基酸N153-S179的不连续抗原表位。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体或其片段以一定的亲和性与CD20结合，其中所述的亲和性表征为解离常数KD低于大约10-7M,低于大约10-8M或低于大约10-9M。在一些实施方案中，抗-CD20抗体或其片段以一定的亲和性与CD20结合，其中所述的亲和性表征为解离常数KD为10-10至10-9M。在一些实施方案中，抗-CD20抗体或其片段以一定的亲和性与CD20结合，其中所述的亲和性表征为解离常数KD为0.7x 10-9M。如抗体结合解离常数的内容中所用，术语“大约”允许在用于测量抗体亲和性的方法中固有的变化程度。例如根据所用仪器的精确度水平、基于测量样品的数量的标准误差、以及舍入误差，术语“大约10-2M”可以包括例如0.05M至0.005M。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体对Fc-γRIII(CD16)展现高的亲和性。在一些实施方案中，由于抗体的Fc区对CD16高度的亲和性，所以此类抗体没有被IgG多克隆抗体、特别是血清中存在的IgG替代。在一些实施方案中，所述的抗体以至少2x106M-1,至少2x107M-1,2x108M-1或2x107M-1的亲和性与CD16(例如在噬菌体上表达)结合，例如通过Scatchard分析或BIAcore技术(无标记表面等离子体共振基技术)测定。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体是糖基化改造的。如本文所用，“糖基化改造的”抗-CD20抗体是指抗体Fc区域中的糖分子(N-多糖)已经在制造过程中通过遗传、酶、化学方法改变或改造、或者选择，从而例如增加抗体对效应器细胞上的Fc受体的亲和性，和/或降低其在Fc区域中特定的碳水化合物含量。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体展现糖基化模式，其表征为其Fc区域低的海藻糖含量。例如在一些实施方案中，组合物包含抗-CD20抗体，其中所述的抗体包含在Fc-γ糖基化位点上结合的N-糖苷-连接的糖链(Asn297,EU numbering)，其中在组合物的所有抗体的N-糖苷-连接的糖链中，海藻糖含量低于65％,低于60％,低于55％,低于50％,低于45％或低于40％。在一些实施方案中，在组合物的所有抗体的N-糖苷-连接的糖链中，海藻糖含量为15至45％、或者20至40％。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体展现强效的体外抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，并且可以据说是“ADCC-优化的”。在一些实施方案中，使用得自健康供体的自然杀伤(NK)细胞，在浓度50ng/ml下，抗-CD20抗体产生至少大约10％,至少大约15％,至少大约20％,至少大约25％或至少大约30％的ADCC平稳期。用于测量ADCC的技术是本领域已知的，并且在例如de Romeuf,C.等人,British Journal of Haematology 140:635-643(2008)中提供。在一些实施方案中，使用得自健康供体的NK细胞，在50ng/ml浓度下，抗-CD20抗体产生大约35％的ADCC平稳期。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体可以降低NF-κ-B活性。在一些实施方案中，抗-CD20抗体可以降低SNAIL表达。在一些实施方案中，抗-CD20抗体可以升高RKIP活性。在一些实施方案中，抗-CD20抗体可以升高PTEN活性。在一些实施方案中，抗-CD20抗体可以升高细胞对TRAIL凋亡的敏感性。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体是Fc-γ-RIIIA(CD16)优化的。能够活化III型Fc受体并具有特定的多糖结构的抗体已经在例如美国专利No.7,931,895中描述，其以引用方式全文并入本文。因此，在一些实施方案中，抗-CD20抗体在Asn 297(EU编号)处使用二触角和/或寡甘露糖苷型的N-糖基化修饰，如美国专利No.7,931,895中所述。例如在美国公开的申请No.2005/0271652中，提供了生产抗体的方法，其中所述的抗体对免疫系统的效应器细胞的受体CD16具有强的亲和性，其中所述的文献以引用方式全文并入本文。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体具有高的ADCC活性。例如在美国专利No.7,713,524中，提供了生产具有高ADCC活性的抗体的方法，其中所述的文献以引用方式全文并入本文。
因此，在一些实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)组成，其中VH结构域的至少一个CDR(即，一个、两个或三个)具有与序列SEQ ID NO:1,2或3的CDR1,CDR2或CDR3区域至少80％,85％,90％,95％,96％,97％,98％,99％或一致的氨基酸序列，其中抗体或者其包含VH结构域的抗原结合片段可以特异性地或优选地结合CD20。
在另一个实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)组成，其中VH结构域的至少一个CDR(即，一个、两个或三个)具有与序列SEQ ID NO:1,2或3的CDR1,CDR2或CDR3区域一致的氨基酸序列(除了1,2,3,4或5个保守性氨基酸取代以外)，其中抗体或者其包含VH结构域的抗原结合片段、变体或衍生物可以特异性地或优选地结合CD20。
在另一个实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由VH结构域组成，其中VH结构域具有与序列SEQ ID NO:4的VH氨基酸序列至少80％,85％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或100％一致的氨基酸序列，其中抗体或者其包含VH结构域的抗原结合片段、变体或衍生物可以特异性地或优选地结合CD20。
在另一个实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由重链组成，其中重链具有与包含SEQ ID NO:4和5的重链氨基酸序列至少至少80％,85％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或100％一致的氨基酸序列，其中抗体或者其包含重链的抗原结合片段、变体或衍生物可以特异性地或优选地结合CD20。
在一些实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由免疫球蛋白轻链可变结构域(VL结构域)组成，其中VL结构域的至少一个CDR(即，一个、两个或三个)具有与序列SEQ ID NO:6,7或8的CDR1,CDR2或CDR3区域至少80％,85％,90％,95％,96％,97％,98％,99％或一致的氨基酸序列，其中抗体或者其包含VL结构域的抗原结合片段可以特异性地或优选地结合CD20。
在另一个实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由免疫球蛋白轻链可变结构域(VL结构域)组成，其中VL结构域的至少一个CDR(即，一个、两个或三个)具有与序列SEQ ID NO:6,7或8的CDR1,CDR2或CDR3区域一致的氨基酸序列(除了1,2,3,4或5个保守性氨基酸取代以外)，其中抗体或者其包含VL结构域的抗原结合片段、变体或衍生物可以特异性地或优选地结合CD20。
在另一个实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由VL结构域组成，其中VL结构域具有与序列SEQ ID NO:9的VL氨基酸序列至少至少80％,85％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或100％一致的氨基酸序列，其中抗体或者其包含VH结构域的抗原结合片段、变体或衍生物可以特异性地或优选地结合CD20。
在另一个实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由轻链组成，其中轻链具有与包含SEQ ID NO:9和10的轻链氨基酸序列至少至少至少80％,85％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或100％一致的氨基酸序列，其中抗体或者其包含轻链的抗原结合片段、变体或衍生物可以特异性地或优选地结合CD20。
在一些实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL结构域)组成，其中VH结构域的至少一个CDR(即，一个、两个或三个)具有与序列SEQ ID NO:1,2或3的CDR1,CDR2或CDR3区域至少80％,85％,90％,95％,96％,97％,98％,99％或一致的氨基酸序列，其中VL结构域的至少一个CDR(即，一个、两个或三个)具有与序列SEQ ID NO:6,7或8的CDR1,CDR2或CDR3区域至少80％,85％,90％,95％,96％,97％,98％,99％或一致的氨基酸序列，并且其中抗体或者其包含VH结构域和VL结构域的抗原结合片段可以特异性地或优选地结合CD20。
在另一个实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由免疫球蛋白重链可变结构域(VH结构域)和免疫球蛋白轻链可变结构域(VL结构域)组成，其中VH结构域的至少一个CDR(即，一个、两个或三个)具有与序列SEQ ID NO:1,2或3的CDR1,CDR2或CDR3区域一致的氨基酸序列(除了1,2,3,4或5个保守性氨基酸取代以外)，其中VL结构域的至少一个CDR(即，一个、两个或三个)具有与序列SEQ ID NO:6,7或8的CDR1,CDR2或CDR3区域一致的氨基酸序列(除了1,2,3,4或5个保守性氨基酸取代以外)，并且其中抗体或者其包含VH和VL的抗原结合片段、变体或衍生物可以特异性地或优选地结合CD20。
在一些实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含序列SEQID NO:1,2和3的VH CDR1,CDR2和CDR3区域，以及SEQ ID NO:6,7和8的VL CDR1,CDR2和CDR3区域。
在另一个实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由VH结构域和VL结构域组成，其中VH具有与序列SEQ ID NO:4的VH氨基酸序列至少至少80％,85％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或一致的氨基酸序列，其中VL结构域具有与序列SEQ ID NO:9的VL氨基酸序列至少80％,85％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或一致的氨基酸序列，并且其中抗体或者其包含VH结构域和VL结构域的抗原结合片段、变体或衍生物可以特异性地或优选地结合CD20。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:4的VH和SEQID NO:9的VL。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体或其抗原结合片段结合包含SEQ ID NO:4的VH和SEQ ID NO:9的VL的抗体的相同的抗原表位。
在另一个实施方案中，分离的抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物包含、基本上由或者由重链和轻链组成，其中所述的重链具有与包含SEQ ID NO:4和5的重链氨基酸序列至少80％,85％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或100％一致的氨基酸序列，其中所述的轻链具有与包含SEQ ID NO:9和10的轻链氨基酸序列至少80％,85％,90％,91％,92％,93％,94％,95％,96％,97％,98％,99％或100％一致的氨基酸序列，并且其中抗体或者其包含重链和轻链的抗原结合片段、变体或衍生物可以特异性地或优选地结合CD20。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:4和5的重链和包含SEQ ID NO:9和10的轻链。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体或其抗原结合片段结合包含SEQ ID NO:4和SEQID NO:5的抗体的相同的抗原表位。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体为ublituximab。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体为EMAB603(参见WO2006/064121,该文献以引用方式全文并入本文)，其是由克隆子R603-12D11生产的，并且保藏在the CollectionNationale des Cultures de Microorganismes，登录号为CNCM I-3529。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体是在大鼠杂交瘤YB2/0细胞系中生产的(细胞YB2/3HL.P2.G11.16Ag.20，在the American Type Culture Collection(ATCC)登记，ATCC号为CRL-1662)。
能够特异性结合CD20并且保持所需的活性的抗体的精确化学结构取决于多种因素。由于可电离的氨基和羧基基团存在于分子中，所以可以获得酸性或碱性盐、或者中性形式的特定的多肽。当被放置在合适的环境条件下时保持其生物学活性的所有此类制备物均包含在本文所用的抗-CD20抗体的定义内。此外，抗体的一级氨基酸序列可以通过使用糖部分(糖基化)或通过其他补充分子(例如脂质、磷酸酯、乙酰基基团等)衍生化而增强。其还可以通过与糖类缀合而增强。这种增强的某些方面是通过生产宿主的翻译后加工系统来完成的；其他此类修饰可以在体内引入。在任何事件中，此类修饰包含在本文所用的抗-CD20抗体的定义中，只要抗-CD20抗体的所需的性质没被破坏即可。预计的是，此类修饰可以在多种测试中通过增强或减弱多肽的活性而定量或定性地影响活性。此外，链中单独的氨基酸残基可以通过氧化、还原或其他衍生化而修饰，并且多肽可以被切割从而获得保留活性的片段。不会破坏所需的性质(例如对CD20的结合特异性)的此类改变不会将多肽序列由本文所用的所关注的抗-CD20抗体的定义范围内除去。
关于多肽变体的制备和使用，本领域提供大量的指导。在制备抗-CD20结合分子的变体中，例如抗体或者其抗原结合片段、变体或衍生物，本领域的任一技术人员可以容易地确定对天然蛋白质的核苷酸或氨基酸序列的何种修饰会得到适用于药物组合物的治疗活性成分的变体。
可以仅在框架区或者仅在抗体分子的CDR区域内引入突变。引入的突变可以是沉默的或者是中性错义突变，即，对抗体结合抗原的能力不具有或具有较少的影响。这些类型的突变可以用于优化密码子的使用，或者改善杂交瘤的抗体的生产。备选地，非中性错义突变可以改变抗体结合抗原的能力。大部分沉默的且中性错义突变的位置可能在框架区内，而大部分非中性错义突变的位置可能在CDR内，但是这不是绝对必须的。本领域的任一技术人员能够设计并测试具有所需性质的突变分子，例如抗原结合活性未改变或者结合活性改变(例如抗原结合活性改善或者抗体特异性改变)。在诱变后，编码的蛋白质可以常规表达，并且可以使用本文所述的技术或通过本领域已知的常规修饰技术，测定编码蛋白质的功能和/或生物学活性(例如免疫特异性地结合CD20多肽的至少一个抗原表位的能力)。
在某些实施方案中，抗-CD20抗体包含至少一个优化的互补性决定区(CDR)。“优化的CDR”意图在于CDR是经修饰和优化的序列，其是基于持续的或改善的结合亲和性和/或抗-CD20活性(赋予包含优化的CDR的抗-CD20抗体)而选择的。“抗-CD20活性”可以包含例如调控与CD20有关的以下活性的一种或多种的活性，例如诱导B细胞凋亡的活性、诱导针对B细胞的ADCC的能力(例如CLL细胞)、抑制NF-κB活性的能力、抑制Snail表达的能力、去阻遏RKIP的能力、去阻遏PTEN的能力、使肿瘤细胞对TRAIL凋亡致敏的能力或者任何其他与CD20有关的活性。此类活性在例如Baritaki,S.等人,Int.J.Oncol.38:1683-1694(2011)中描述，该文献的内容以引用方式全文并入本文。所述的修饰可以涉及CDR内氨基酸残基的替代，使得抗-CD20抗体保持对CD20抗原的特异性，并且具有改善的结合亲和性和/或改善的抗-CD20活性。
在某些抗-CD20抗体或者其抗原结合片段中，一个或多个恒定区结构域的至少一部分被删除或以其他方式改变，从而提供所需的生物化学特征，例如与大致相同免疫原性的完全未改变抗体相比，降低的效应器功能、非共价二聚化的能力、增加的定位于肿瘤位点的能力、降低的血清半衰期或者增加的血清半衰期。例如某些抗体是结构域被删除的抗体，其包含与免疫球蛋白重链相似的多肽链，但是其缺少一个或多个重链结构域的至少一部分。例如在某些抗体中，改性抗体的恒定区的一个完整结构域被删除，例如CH2结构域的全部或部分被删除。
在某些抗-CD20抗体或者其抗原结合片段中，可以使用本领域已知的技术使Fc部分突变，从而降低效应器的功能。例如恒定区的修饰可以用于修饰二硫键或寡糖部分，其可以得到增强的定位，这是由于增强的抗原特异性或抗体灵活性。所得的生理学概况、生物利用度和修饰的其他生物化学作用可以使用公知的免疫技术而无需过度的试验容易地测量和定量。
在某些实施方案中，抗-CD20抗体或者其抗原结合片段在待治疗的动物中不会激发有害的免疫应答，例如在人类中。在一个实施方案中，抗-CD20抗体或者其抗原结合片段可以使用本领域公认的技术经修饰而降低它们的免疫原性。例如抗体可以人源化、灵长动物化(primatized)、去免疫化，或者可以制备嵌合抗体。这些类型的抗体衍生自非人类抗体，通常为鼠科或灵长动物的抗体，它们保持或者基本上保持了亲代抗体的抗原结合性质，但是其在人类中是较少免疫原性的。这可以通过多种方法实现，包括(a)将完整的非人类可变结构域接枝到人类恒定区上，从而生成嵌合抗体；(b)将一个或欧多个非人类互补性决定区(CDR)的至少一部分接枝到人类框架区和恒定区中，其中保留或未保留重要的框架残基；或者(c)移植完整的非人类可变结构域，但是使用人类样部分通过替换表面残基而“遮盖”它们。此类方法在Morrison,S.L.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.81:6851-6855(1984)；Morrison,S.L.等人,Adv.Immunol.44:65-92(1988)；Verhoeyen,M.等人,Science 239:1534-1536(1988)；Padlan,E.A.,Molec.Immun.28:489-498(1991)；Padlan,E.A.,Molec.Immun.31:169-217(1994),以及美国专利No.5,585,089,5,693,761,5,693,762和6,190,370中公开，所有这些文献以引用方式全文并入本文。
可以使用本领域已知的技术，由完整的前体或亲代抗体制备改性形式的抗体或者其抗原结合片段。
可以使用本领域已知的技术，制备或制造抗-CD20抗体或者其抗原结合片段。在某些实施方案中，抗体分子或者其片段是“重组生产的”，即，是使用重组DNA技术生产的。抗-CD20抗体或者其片段可以通过本领域已知的任何合适的技术生成，包括单克隆抗体的生成或单克隆抗体的制备，例如通过杂交瘤或噬菌体展示。
多种宿主表达载体系统可以用于表达抗体分子。可以使用两种表达载体共转染宿主细胞，第一载体编码重链衍生的多肽，第二载体编码轻链衍生的多肽。两种载体可以包含相同的可选择标志物，其能够等量地表达重链和轻链多肽。备选地，可以使用编码重链和轻链多肽的单一载体。在这种情况中，有利的是在重链之前放置轻链，以避免无毒性的重链过量(Proudfoot,Nature 322:52(1986)；Kohler,PNAS 77:2197(1980))。还可以使用编码重链衍生的多肽和轻链衍生的多肽的单一载体转染宿主细胞。用于重链和轻链的编码序列可以包含cDNA或基因组DNA。
表达载体或多个载体可以通过常规技术转移至宿主细胞中，然后通过常规的技术培养转染的细胞，从而生产抗体。因此，提供包含多肽的宿主细胞，其中所述的多肽编码与异源启动子可操作地连接的抗体或者其重链或轻链。在用于表达双链抗体的某些实施方案中，编码重链和轻链的载体可以在用于表达完整的免疫球蛋白分子的宿主细胞中共表达。
宿主表达系统代表了媒介物，通过该媒介物，可以生产并随后纯化所关注的编码序列，而且还代表了这样的细胞，当使用合适的核苷酸编码序列转化或转染该细胞时，其可以原位表达CD20抗体。这些包括但不限于微生物有机体，例如使用包含抗体编码序列的噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌(例如大肠杆菌(E.coli)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis))；使用包含抗体编码序列的重组酵母菌表达载体转化的酵母菌(例如酵母菌,毕赤酵母(Pichia))使用包含抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如杆状病毒(baculovirus))感染的昆虫细胞系统；使用重组病毒表达载体(例如花椰菜花叶病毒，CaMV；烟草花叶病毒，TMV)或使用包含抗体编码序列的重组质粒表达载体(例如Ti质粒)感染的植物细胞系统；或者容纳重组表达构建体的哺乳动物细胞系统(例如COS,CHO,BLK,293,3T3细胞)，其中所述的构建体包含由哺乳动物细胞基因组(例如金属硫蛋白启动子)或由哺乳动物病毒(例如腺病毒晚期启动子；牛痘病毒7.5K启动子)衍生的启动子。例如用于表达完整重组抗体分子的细菌细胞(例如大肠杆菌)或真菌细胞用于表达重组抗体分子。例如哺乳动物细胞(例如中国仓鼠卵(CHO)细胞)，联合载体(例如得自人类巨细胞病毒的主要中间早期基因启动子元件)为抗体的有效的表达系统(Cockett et al.,BioTechnology 8:2(1990))。在一些实施方案中，抗-CD20抗体在非CHO细胞的宿主细胞中生产。
一旦抗体被重组表达，则其可以通过本领域已知的用于纯化免疫球蛋白分子的任何方法纯化，例如通过色谱(例如离子交换色谱、亲和层析、特别是对蛋白质A后特定抗原的亲和层析，以及尺寸排阻柱色谱)、离心、差别性溶解度或者用于蛋白质纯化的任何其他的标准技术。
在一些实施方案中，抗-CD20抗体是由杂交瘤细胞系生产的，例如YB2/0(ATCCCRL-1662)。
IV.抗-PD-1或抗-PD-L1抗体
A.抗-PD-1抗体
本发明公开提供了用于血液学癌症患者的新型组合治疗和治疗方案。组合治疗尤其包括向有需要的受试对象给予治疗有效量的至少一种抗-PD1抗体(例如派姆单抗)。
程序性死亡受体-1(PD-1)是指在抗原刺激的T细胞、B细胞、单核细胞和NKT细胞上表达的细胞表面受体。在正常的组织中，T细胞上的PD-1作为免疫调节受体-配体系统的一部分发挥作用，其能够使T细胞自我耐受，从而防止自身免疫性和过度的免疫应答，这会损伤正常的组织。当PD-1未与其配体(PD-L1和PD-L2(在造血细胞和实质细胞上广泛表达))结合时，T细胞对T细胞受体特异性信号传递产生应答，并且具有正常的免疫应答。然而，PD-1与PD-L1和PD-L2结合会通过抑制T细胞增殖、细胞因子的释放和细胞毒性而抑制免疫应答(例如参见Brusa,D.et al.,Haematologica.98:953-963(2013))。PD-1受体-配体途径通过肿瘤细胞表达PD-L1和/或PD-L2，通过灭活肿瘤抗原反应性细胞毒性T细胞而入侵免疫监视。当肿瘤“绑架”PD-1受体-配体途径时，使得赘生性细胞增殖。
适用于本发明所述的方法(和试剂盒)的抗-PD-1抗体包括以高的特异性和亲和性与PD-1结合，阻断PD-L1和/或PD-L2的结合，和/或抑制PD-1信号传递途径的免疫抑制作用的那些。
在本发明公开的任意一个实施方案中，抗-PD-1抗体包括以下抗原结合部分或片段，其与PD-1受体结合，并且在抑制配体结合和上调节免疫系统中展现出与那些完整抗体相似的功能性。在某些实施方案中，抗-PD-1抗体或者其抗原结合部分为嵌合的、人源化的或人类单克隆抗体，或者它们的部分。在某些实施方案中，抗体为人源化抗体。在其他的实施方案中，抗体为人类抗体。可以使用IgG1,IgG2,IgG3或IgG4同型抗体。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体或者其抗原结合部分包含重链恒定区，其为人类IgG1或IgG4同型。在一些实施方案中，抗体包含轻链恒定区，其为人类κ或λ恒定区。在其他的实施方案中，抗-PD-1抗体或者其抗原结合部分为单克隆抗体或者其抗原结合部分。
在一些实施方案中，用于本发明的方法(和试剂盒)的抗-PD-1抗体为nivolumab,派姆单抗或pidilizumab。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体为Nivolumab(商品名之前指定为5C4,BMS-936558,MDX-1106,或ONO-4538)。Nivolumab为完全人源化的IgG4(S228P)PD-1抗体，其选择性的防止与PD-1配体(PD-L1和PD-L2)相互作用，由此阻断抗肿瘤T-细胞功能的下调节(美国专利No.8,008,449；WO2006/121168；Wang et al.,Cancer Immunol Res.2:846-56(2014)；Topalian,S.L.et al.,N Engl J Med 366:2443-2454(2012)；Topalian,S.L.et al.,Current Opinion in Immunology 24:207-212(2012)；Topalian,S.L.etal.,J Clin Oncol 31(suppl):3002(2013))。Nivolumab已经由美国FDA批准用于治疗与不可切除的或转移性黑素瘤、转移性鳞状非小细胞肺癌、晚期的肾细胞癌和经典型Hodgkin淋巴瘤患者。
派姆单抗(商品名还称为lambrolizumab和MK-3475)为定向针对PD-1的人源化单克隆IgG4κ抗体。Hamid,O.et al.,N Engl J Med 369:134-144(2013)。派姆单抗在例如美国专利No.8,354,509、8,900,587和WO2009/114335中描述。派姆单抗已经由美国FDA批准用于治疗完全黑素瘤、非小细胞肺癌以及头颈鳞状细胞癌患者。例如参见Poole,R.M.,Drugs 74:1973-1981(2014)。在优选的实施方案中，用于本发明所述的方法(和试剂盒的)抗-PD-1抗体为派姆单抗。
Pidilizumab(还称为CT-011和MDV9300)为与PD-1结合的人源化IgG1κ单克隆抗体。Pidilizumab由Medivation研发用于治疗癌症和感染性疾病。Pidilizumab在例如美国专利No.8,686,119 B2,WO 2013/014668 A1,WO2009/101611,Berger,R.et al.,ClinicalCancer Research 14:3044-3051(2008),和Armand,P.et al.,J Clin Oncol 31:4199-4206(2013)中描述。
尽管不希望被理论所束缚，据信诸如CLL之类的血液学癌症利用免疫失调而逃避细胞死亡并促进肿瘤生存。临床前数据证明在单独的CLL(B调节免疫表现型)和CLL中的T细胞库中重要的PD-1信号传递。参见Ringelstein-Harlev,S.et al.,Blood 124:3319(2014)。因此，抗-PD-1抗体(例如派姆单抗)可以治疗性地直接靶向单独的CLL，并且纠正宿主T细胞功能的缺陷(其可以使CLL逃避免疫监视)。
由两项研究得到的最近的数据证明，派姆单抗和nivolumab在治疗Hodgkin淋巴瘤和B细胞淋巴增生性紊乱的重度预治疗患者中的活性和效力。参见See Moskowitz,C.H.etal.,"PD-1blockade with the monoclonal antibody pembrolizumab(MK-3475)inpatients with classical Hodgkin lymphoma after brentuximab vedotin failure:preliminary results from a phase1b study(KEYNOTE-013),"Blood 124:290(2014))和Lesokhin,A.M.et al.,"Preliminary Results of a Phase I Study of Nivolumab(BMS-936558)in Patients with Relapsed or Refractory Lymphoid Malignancies,"Blood124:291(2014)。
在一些实施方案中，在本发明所述的方法(和试剂盒)中，以如下剂量给予派姆单抗：每2至4周大约一次、每3至4周大约一次、每2周大约一次、每3周大约一次、或者每4周大约一次给予大约100至大约300mg,大约100至大约200mg,大约100mg,大约150mg,大约200mg,大约250mg或大约3000mg。本领域的任一技术人员应该理解的是，派姆单抗的剂量和/或给予派姆单抗的频率在治疗过程中可以根据患者的临床应答、副作用等，或者在不同的治疗阶段(诱导、治疗或维持)而改变(降低或升高)。
在一些实施方案中，派姆单抗以静脉内(优选通过输注)方式配制和/或给予。
其他的抗-PD-1抗体可以用于本发明所述的方法和试剂盒中，例如AMP 514(Amplimmune),PDR-001(Novartis),MEDI-0690(还称为AMP-514)(MedImmune LLC),SHR-1210(Incyte Corp.),REGN-2810(Regeneron Pharmaceuticals,Inc.),PF-06801591(Pfizer),TSR-042(还称为ANB011)(Tesaro,Inc.),BGB-A317(BeiGene,Ltd.),和JS001(Shanghai Junshi Bioscience Co.,Ltd.)。
在一些实施方案中，抗-PD-1抗体为AMP-224(Amplimmune；还称为B7-DCIg)。AMP-224在例如WO2010/027827和WO2011/066342中公开。AMP-224为阻断PD-1和B7-H1之间的相互作用的PD-L2Fc融合蛋白质。
可以用于本发明的方法和试剂盒中的其他抗-PD-1抗体在美国专利No.8,609,089,美国专利公开No.2010/028330和/或美国专利公开No.2012/0114649中描述。
B.抗-PD-L1抗体
本发明公开提供了用于治疗血液学恶性肿瘤患者的新型组合治疗和治疗方案。组合治疗尤其包括向有需要的受试对象给予治疗有效量的至少一种抗-PD-L1抗体。PD-L1为PD-1受体的主要配体。由于抗-PD-1和抗-PD-L1抗体靶向相同的信号传递途径，并且在临床试验中在多种癌症中已经展示相似的效力水平，包括肾细胞癌(RCC)(参见Brahmer,J.R.etal.,N Engl J Med 366:2455-2465(2012)；Topalian,S.L.et al.,N Engl J Med366:2443-2454(2012a)；WO 2013/173223)，并且在本发明公开的任意一种方法(和试剂盒)中，可以使用抗-PD-L1抗体，替代抗-PD-1抗体。
PD-L1(之前称为B7-H1)为在许多细胞类型上表达的B7家族成员，包括抗原提呈细胞(“APC”)和激活的T细胞(Yamazaki,T.et al.,J Immunol.169:5538-5545(2002))。PD-L1与PD-1(CD279)和B7-l结合。T-细胞表达的B7-1与PD-L1的结合以及T-细胞表达的PD-L1与B7-1的结合使得T细胞受到抑制(Butte,M.J.et al.,Immunity 27:111-122(2007))。还有证据表明类似于其他的B7家族成员，PD-L1还可以向T细胞提供共刺激信号(Subudhi,S.K.et al.,J Clin.Invest.113:694-700(2004)；Tamura,H.et al.,Blood 97:1809-1816(2001))。此外，细胞表面上PD-L1的表达还显示通过IFN-γ刺激而受到上调节。
PD-1与其配体伴侣PD-L1(B7-H1；CD274)和PD-L2(B7-DC；CD273)之间的相互作用是与调节T细胞激活有关的重要的负共刺激信号传递体积。PD-1可以在T细胞、B细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、激活的单核细胞和树突状细胞(DC)上表达。PD-1由激活的(但不是未刺激的)人类CD4+和CD8+T细胞、B细胞和髓性细胞表达。Nishimura,H.et al.,Int.Immunol.8:773-780(1996)；Boettler,T.et al.,J Virol.80:3532-3540(2006)。存在至少4种PD-1变体，其由激活的人类T细胞克隆得到，包括缺乏(i)外显子2,(ii)外显子3,(iii)外显子2和3,或(iv)外显子2至4的转录物。Nielsen,C.et al.,Cell.Immunol.235:109-116(2005)。
正常的人类组织很少在它们的细胞表面上表达PD-L1蛋白质(除了扁桃体、胎盘以及肺和肝脏中的少部分巨噬细胞)，表明在正常的生理学条件下，PD-L1 mRNA处于严格的转录后调节之下。相反，PD-L1蛋白质在多种人类癌症中在细胞表面上大量表达。Chen,L.andHan,X.,J.Clin.Invest.125:3384-3391(2015)。
另一方面，PD-L2的表达比PD-L1的表达更受限。例如PD-L2在DC、巨噬细胞和骨髓源肥大细胞上诱导表达。
此外，多项研究显示PD-L1的受体，其不依赖于PD-1。B7.1也已经被鉴定为PD-L1的结合伴侣。Butte,M.J.et al.,Immunity 27:111-122(2007)。化学交联研究表明，PD-L1和B7.1可以通过它们的IgV样结构域相互作用。B7.1:PD-L1相互作用可以诱导穿向T细胞的抑制信号。PD-L1通过B7.1连接在CD4+ T细胞上、或者B7.1通过PD-L1连接在CD4+T细胞上会传递抑制信号。缺乏CD28和CTLA-4的T细胞当受到抗-CD3加B7.1涂敷的珠的刺激时，显示降低的增殖和细胞因子产生。在缺乏B7.1(即,CD28,CTLA-4和PD-L1)的所有受体的T细胞中，T细胞增殖和细胞因子产生不再受到抗-CD3加B7.1涂敷的珠的抑制。这表明，B7.1特异性地通过缺乏CD28和CTLA-4的T细胞上的PD-L1起作用。类似地，缺乏PD-1的T细胞当受到抗-CD3加PD-L1涂敷的珠的刺激时，显示降低的增殖和细胞因子产生，证明对PD-L1与T细胞上B7.1的连接的抑制作用。当T细胞缺乏PD-L1的所有已知的受体(即，无PD-1和B7.1)时，T相比增殖不再受到抗-CD3加PD-L1涂敷的珠的损害。因此，PD-L1可以通过B7.1或PD-1对T细胞发挥抑制作用。
已经在多种鼠科和人类癌症中发现PD-L1表达，包括人类肺癌、卵巢癌和结肠癌，以及多种骨髓瘤中(Iwai,Y.et al.,PNAS 99:12293-12297(2002)；Ohigashi,Y.et al.,Clin Cancer Res 11:2947-2953(2005))。PD-L1已经表明通过增加抗原特异性T细胞克隆的凋亡而在肿瘤免疫力中起作用(Dong,H.et al.,Nat Med 8:793-800(2002))。
可以用于本发明的方法(和试剂盒)中的抗-PD-L1抗体及其功能片段具有用于治疗癌症或恶性疾病的多种功能性，包括但不限于具有抗体依赖的细胞毒性(ADCC)活性、具有抗肿瘤活性、抑制PD-L1与PD-1的结合、以及防止T细胞激活而产生的PD-1介导的抑制。
此外，通过PD-1的信号传递的拮抗作用(包括阻断PD-L1与PD-1和/或B7.1相互作用)的结果是，本发明公开的抗体及其功能片段将阻止PD-L1免于向T细胞和其他抗原提呈细胞发送负共刺激信号，由此增强抗肿瘤免疫力及抵抗癌症和恶性疾病的免疫防御。
PD-L1抗体可以是多克隆的、单克隆的、嵌合的、人类、部分或全部人源化的和/或重组的。例如在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为多克隆抗体或其PD-L1结合功能片段。在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为单克隆抗体或其PD-L1结合功能片段。在一些实施方案中，抗体及其功能片段可以结合人类、短尾猴和/或鼠科PD-L1。
多克隆抗体可以通过本领域已知的方法获得，例如通过使用PD-L1抗原免疫所选的动物，收集动物的血清，并由血清分离和/或纯化抗体。单克隆抗体(mAb)可以通过本领域已知的方法获得，例如通过产生抗体的细胞与永生细胞融合从而得到杂交瘤，和/或通过使用组合抗体库技术由免疫的动物的骨髓和脾细胞提取的mRNA生成mAb。重组抗体可以通过本领域已知的方法获得，例如使用噬菌体或酵母菌展示技术和/或表达或共表达抗体多肽。制备抗体的其他技术是本领域已知的，并且可以用于获得在本发明所述的方法中使用的抗体。
如本文所用，术语“PD-L1结合功能片段”或“功能片段”是指保持结合PD-L1的能力的抗-PD-L1抗体的一个或多个片段。结合片段的实例包括：(i)Fab片段(由VL,VH,CL和CH1结构域组成的单价片段)；(ii)F(ab')2片段(包含两个Fab片段的二价片段，其通过在铰链区的二硫键连接)；(iii)Fd片段(包含VH和CH1结构域)；(iv)Fv片段(包含抗体单一臂的VL和VH结构域)；(v)dAb片段(包含VH结构域)；以及(vi)分离的互补性决定区(CDR)，例如VHCDR3。其他实例包括单链Fv(scFv)构建体。例如参见Bird,R.E.et al.,Science 242:423-426(1988)；Huston,J.S.et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988)。其他实例包括PD-L1结合结构域免疫球蛋白融合蛋白质，其包含：(i)与免疫球蛋白铰链区多肽融合的PD-L1结合结构域多肽(例如重链可变区、轻链可变区、或者通过接头肽与轻链可变区融合的重链可变区)；(ii)与铰链区融合的免疫球蛋白重链CH2恒定区；以及(iii)与CH1恒定区融合的免疫球蛋白重链CH3恒定区。
本发明公开的抗体的铰链区可以通过使用例如丝氨酸残基替代一个或多个半胱氨酸残基来修饰，从而防止二聚化作用。例如参见美国专利申请公开No.2003/0118592；美国专利申请公开No.U.S.2003/0133939。此外，在一些实施方案中，本发明公开的抗体可以包含其的突变，包括但不限于具有点突变S239D/1332E,S239D,1332E或其任意组合的IgG1的变体Fc部分，或者具有点突变S228P的IgG4的变体Fe部分。此类修饰可以改变本发明公开的抗体及其功能片段与Fe受体(FcR)的结合，在一些实施方案中，抗体可以被修饰得更稳定，而在一些实施方案中，抗体可以被修饰成增强ADCC功能。当测定残基数量时，对于给定抗体，残基的Kabat编号可以通过将抗体序列的同源区域与“标准的”Kabat编号序列比对来测定。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体的糖基化模式可以是修饰的或改变的。例如在一些实施方案中，本发明公开的抗体及其功能片段可以是低海藻糖抗体，或者它们可以是脱海藻糖的，或者抗体可以以如下方式表达或产生：它们整体缺乏海藻糖(即，少海藻糖的(afucosylated))。修饰抗体或功能片段的海藻糖含量可以通过本领域多种已知的手段完成，例如在FUT8缺陷型或者具有突变形式的FUT8的细胞中表达抗体或功能片段。低海藻糖或脱海藻糖的抗体及其功能片段具有增加的ADCC活性。除了海藻糖改变以外，本发明公开的抗体及其功能片段可以包含除了糖基化模式以外的其他的功能修饰。例如在位置297(例如N297A和N297Q)的修饰可以防止整体Fc区域被糖基化，由此消除Fe功能、ADCC和CDC。
在一些实施方案中，用于本发明的方法和试剂盒的抗-PD-L1抗体为CTI-07,CTI-09,CTI-48,CTI-49,CTI-50,CTI-76,CTI-77,CTI-78,CTI-57,CTI-58,CTI-92,CTI-93,CTI-94,CTI-95,CTI-96,CTI-97,CTI-98或其功能片段。参见2017年6月28日提交的美国专利申请No.15/636,610和PCT/US2017/039810，这些文件以引用方式全文并入本文。表4和5提供了这些抗-PD-L1抗体及其功能片段的示例性重链CDR序列(HCDR1,HCDR2和HCDR3)和轻链CDR序列(LCDR1,LCDR2和LCDR3)。
在一些实施方案中，用于本发明的方法和试剂盒的抗-PD-L1抗体为CTI-48，其还称为CK-301。由Checkpoint Therapeutics,Inc.和TG Therapeutics,Inc.研发的CK-301是新型的全人类PD-L1特异性IgG1抗体，其对PD-L1展现出次纳摩尔的结合亲和性。在酶联免疫吸附测试(ELISA)和细胞基竞争测试中，CK-301阻断PD-L1与PD-1和B7-1的结合。CK-301的I期临床试验正在进行中。参见Gorelik,L.,et al.,"Preclinical characterizationof a novel fully human IgG1anti-PD-L1 mAb CK-301,"American Association forCancer Research Annual Meeting(AACR),Washington,D.C.,Abstract No.4606(April4,2017)。
表4
表5
此外，本发明公开的抗-PD-L1抗体及其功能片段还可以包含多个构架区。例如在一些实施方案中，本发明公开的抗体及其功能片段包含SEQ ID NO:37-45和/或54-58。
在一些实施方案中，可变重链构架区1包含SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:38。在一些实施方案中，可变重链构架区2包含SEQ ID NO:39，可变重链构架区3包含SEQ ID NO:40，和/或可变重链构架区4包含SEQ ID NO:41。
在一些实施方案中，可变轻链构架区1包含SEQ ID NO:42，可变轻链构架区2包含SEQ ID NO:43，可变轻链构架区3包含SEQ ID NO:44，SEQ ID NO:87或SEQ ID NO:88，和/或可变轻链构架区4包含SEQ ID NO:45。
在一些实施方案中，可变重链序列包含选自SEQ ID NOS:47,48,49,50,51和52的氨基酸序列。在其他的实施方案中，可变重链序列包含选自SEQ ID NO:62,63,64,65,66和67的氨基酸序列。
在一些实施方案中，可变轻链序列包含SEQ ID NO:53。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体或者其功能片段包含含有SEQ ID NO:46的重链。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体或者其功能片段包含含有以下部分的重链：含有SEQ ID NO:17的HCDR1；含有SEQ ID NO:25的HCDR2；和含有SEQ ID NO:28的氨基酸6-13的HCDR3；以及含有以下部分的轻链：含有SEQ ID NO:32的LCDR1；含有SEQ ID NO:34的LCDR2；和含有SEQ ID NO:36的LCDR3。
在一些实施方案中，HCDR3包含SEQ ID NO:28，而在一些实施方案为中，CDRH3包含SEQ ID NO:29。
在一些实施方案中，可变重链构架区1包含SEQ ID NO:60，可变重链构架区2包含SEQ ID NO:39，可变重链构架区3包含SEQ ID NO:61，和/或可变重链构架区4包含SEQ IDNO:41。
在一些实施方案中，可变轻链构架区1包含SEQ ID NO:56，可变轻链构架区2包含SEQ ID NO:57，可变轻链构架区3包含SEQ ID NO:58，和/或可变轻链构架区4包含SEQ IDNO:45。
在一些实施方案中，可变重链序列包含SEQ ID NO:59或60，在一些实施方案中，可变轻链序列包含SEQ ID NO:61。
在一些实施方案中，构架区的某些改变可以是特别有利的。例如在构架区的第一位置处，谷氨酸(E)取代谷氨酰胺(Q)，抗体的一条重链可以增加制备产物的稳定性效率。因此，本发明公开的抗体和片段的一些实施方案将引入这些修饰。因此，在一些实施方案中，本发明公开的抗体或功能片段的重链将包含SEQ ID NO:47-52，而在其他的实施方案中，本发明公开的抗体或功能片段的重链将包含SEQ ID NO:59-60或62-67。此外，在一些实施方案中，本发明公开的抗体或功能片段的重链将包含SEQ ID NO:81-82，或者由包含SEQ IDNO:69-78的核苷酸序列编码的多肽。
在一些实施方案中，本发明公开的抗体的轻链或功能片段包含SEQ ID NO:53或61。此外，在一些实施方案中，本发明公开的抗体的轻链或功能片段包含由含有SEQ ID NO:79-80的核酸序列编码的多肽。
本领域任一一个普通的技术人员将理解的是，在不损害本发明的抗-PD-L1抗体和功能片段的结合亲和性或功能的条件下，可以是本发明公开的序列进行某些改变。因此，在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体或功能片段与本发明公开的序列共有大约80％,大约81％,大约82％,大约83％,大约84％,大约85％,大约86％,大约87％,大约88％,大约89％,大约90％,大约91％,大约92％,大约93％,大约94％,大约95％,大约96％,大约97％,大约98％或大约99％的序列一致性。
在一些实施方案中，本发明公开提供了编码抗-PD-L1抗体或其功能片段的分离的核酸序列，例如SEQ ID NO:69-80。
本发明公开的抗体及其功能片段可以通过序列或者通过功能特征来定义。例如本发明公开的抗体及其功能片段可以具有至少3.0x10-8,至少2.5x10-8,至少2.0x10-8,至少1.5x10-8,至少1.0x10-8,至少0.5x10-8,至少9.95x10-9,至少9.90x10-9,至少9.85x10-9,至少9.80x10-9,至少9.75x10-9,至少9.70x10-9,至少9.65x10-9,至少9.60x10-9,至少9.55x10-9,至少9.5x10-9,至少9.45x10-9,至少9.40x10-9,至少9.35x10-9,至少9.30x10-9,至少9.25x10-9,至少9.20x10-9,至少9.15x10-9,至少9.10x10-9,至少9.05x10-9,至少9.0x10-9,至少8.95x10-9,至少8.90x10-9,至少8.85x10-9,至少8.80x10-9,至少8.75x10-9,至少8.70x10-9,至少8.65x10-9,至少8.60x10-9,至少8.55x10-9,至少8.5x10-9,至少8.45x10-9,至少8.40x10-9,至少8.35x10-9,至少8.30x10-9,至少8.25x10-9,至少8.20x10-9,至少8.15x10-9,至少8.10x10-9,至少8.05x10-9,至少8.0x10-9,至少7.95x10-9,至少7.90x10-9,至少7.85x10-9,至少7.80x10-9,至少7.75x10-9,至少7.70x10-9,至少7.65x10-9,至少7.60x10-9,至少7.55x10-9,至少7.5x10-9,至少7.45x10-9,至少7.40x10-9,至少7.35x10-9,至少7.30x10-9,至少7.25x10-9,至少7.20x10-9,至少7.15x10-9,至少7.10x10-9,至少7.05x10-9,至少7.0x10-9,至少6.95x10-9,至少6.90x10-9,至少6.85x10-9,至少6.80x10-9,至少6.75x10-9,至少6.70x10-9,至少6.65x10-9,至少6.60x10-9,至少6.55x10-9,至少6.5x10-9,至少6.45x10-9,至少6.40x10-9,至少6.35x10-9,至少6.30x10-9,至少6.25x10-9,至少6.20x10-9,至少6.15x10-9,至少6.10x10-9,至少6.05x10-9,至少6.0x10-9,至少5.95x10-9,至少5.90x10-9,至少5.85x10-9,至少5.80x10-9,至少5.75x10-9,至少5.70x10-9,至少5.65x10-9,至少5.60x10-9,至少5.55x10-9,至少5.5x10-9,至少5.45x10-9,至少5.40x10-9,至少5.35x10-9,至少5.30x10-9,至少5.25x10-9,至少5.20x10-9,至少5.15x10-9,至少5.10x10-9,至少5.05x10-9,至少5.0x10-9,至少4.95x10-9,至少4.90x10-9,至少4.85x10-9,至少4.80x10-9,至少4.75x10-9,至少4.70x10-9,至少4.65x10-9,至少4.60x10-9,至少4.55x10-9,至少4.5x10-9,至少4.45x10-9,至少4.40x10-9,至少4.35x10-9,至少4.30x10-9,至少4.25x10-9,至少4.20x10-9,至少4.15x10-9,至少4.10x10-9,至少4.05x10-9,至少4.0x10-9,至少3.95x10-9,至少3.90x10-9,至少3.85x10-9,至少3.80x10-9,至少3.75x10-9,至少3.70x10-9,至少3.65x10-9,至少3.60x10-9,至少3.55x10-9,至少3.5x10-9,至少3.45x10-9,至少3.40x10-9,至少3.35x10-9,至少3.30x10-9,至少3.25x10-9,至少3.20x10-9,至少3.15x10-9,至少3.10x10-9,至少3.05x10-9,至少3.0x10-9,至少2.95x10-9,至少2.90x10-9,至少2.85x10-9,至少2.80x10-9,至少2.75x10-9,至少2.70x10-9,至少2.65x10-9,至少2.60x10-9,至少2.55x10-9,至少2.5x10-9,至少2.45x10-9,至少2.40x10-9,至少2.35x10-9,至少2.30x10-9,至少2.25x10-9,至少2.20x10-9,至少2.15x10-9,至少2.10x10-9,至少2.05x10-9,至少2.0x10-9,至少1.95x10-9,至少1.90x10-9,至少1.85x10-9,至少1.80x10-9,至少1.75x10-9,至少1.70x10-9,至少1.65x10-9,至少1.60x10-9,至少1.55x10-9,至少l.5x10-9,至少1.45x10-9,至少1.40x10-9,至少1.35x10-9,至少1.30x10-9,至少1.25x10-9,至少1.20x10-9,至少1.15x10-9,至少1.10x10-9,至少1.05x10-9,至少1.0x10-9,至少0.95x10-9,至少0.90x10-9,至少0.85x10-9,至少0.80x10-9,至少0.75x10-9,至少0.70x10-9,至少0.65x10-9,至少0.60x10-9,至少0.55x10-9,至少0.5x10-9,至少0.45x10-9,至少0.40x10-9,至少0.35x10-9,至少0.30x10-9,至少0.25x10-9,至少0.20x10-9,至少0.15x10-9,至少0.10x10-9,至少0.05x10-9,至少9.5x10-10至少9.0x10-10至少8.5x10-10至少8.0x10-10或者它们之间的任意值的KD。例如本发明公开的抗体及其功能片段可以具有8.2x10-10,2.31x10-9,8.24x10-9,3.25x10-9,3.46x10-9,1.91x10-9,7.97x10-8,2.41x10-8,9.5x10-10或者8.6x10-10的KD值。
类似地，本发明公开的抗体及其功能片段可以具有4.0x10-5μg/ml至9.5x10-7μg/ml之间的IC50值，或者它们之间的任意值。例如本发明的抗体及其功能片段可以具有9.19x10-7,4.156x10-5,9.985x10-7,1.037x10-6或者3.463x10-6的IC50值。
在一些实施方案中，本领域那些技术人员已知的其他抗-PD-L1抗体可以用于本发明所述的方法(和试剂盒)中。例如可以使用在2015年10月1日出版的美国专利公开No.2015/0274835、在2014年12月4日出版的美国专利公开No.2014/0356353、以及2010年7月8日出版的WO2010/077634中所公开的PD-L1抗体。
在一些实施方案中，在本发明所述的方法和试剂盒中使用的抗-PD-L1抗体为durvalumab,BMS-936559,atezolizumab或avelumab。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为Durvalumab(还称为MEDI4736)，其为特异性结合PD-L1的人类IgG1抗体。Durvalumab由AstraZeneca和MedImmune研发，并且在例如Lutzky等人,Proc Am Soc Clin Oncol.35(Abstract No.3001)(2014)；美国专利No.8,779,108；2014年12月4日出版的美国专利申请公开No.2014/0356353；Khleif,S.等人,Proceedings from the European Cancer Congress 2013；September 27-October1,2013,Amsterdam,The Netherlands,Abstract No.802；Brahmer,J.R.等人,J Clin Oncol32(suppl.):5s(摘要No.8021)(2014)中描述。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为BMS-936559(还称为MDX1105和12A4)。BMS-936559由Bristol-Myers Squibb研发，是一种以高亲和性抑制PD-L1与PD-1和CD80结合的全长人类IgG4单克隆抗体。BMS-936559在例如美国专利No.7,943,743,WO2007/005874和WO2013/173223中描述。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为Atezolizumab(商品名(Genentech/Roche)；还称为MPDL3280A和RG7446)。Atezolizumab是与PD-L1结合的全长人源化IgG1单克隆抗体。Atezolizumab在例如美国专利No.8,217,149和7,943,743，以及Herbst,R.S.等人,J Clin Oncol 31(suppl):3000Abstract(2013)中描述。在2016年，接受美国FDA批准用于治疗膀胱癌。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为Avelumab(还称为MSB0010718C)，其由Pfizer和Merck研发。Avelumab为全长人类抗-PD-L1 IgG1抗体，其目前在临床试验中在多种肿瘤类型中研究。Avelumab在美国专利公开No.2014/0341917)；Kelly,K.等人,J Clin Oncol34(suppl；摘要No.3055)(2016)；Kaufman.H.等人,J Clin Oncol 34(suppl；摘要No.9508)(2016)；Heery,C.R.等人,J Clin Oncol 33(suppl；摘要No.3055)(2015)；Heery C.R.等人,J Clin Oncol 33(suppl；摘要No.TPS3101)(2015)；和Boyerinas,B.等人,CancerImmunol.Res.3:1148-1157(2015)中描述。
在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为CX-072(CytomX Therapeutics)，其为靶向PD-L1的probody。在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为GX-P2(Genexine)，其为抗-PD-L1融合蛋白质。
在一些实施方案中，在本发明的方法和试剂盒中，不使用靶向DP-L1的抗体，还可以使用靶向PD-L1的小分子。例如Curis,Inc.研发的CA-170为口服可用的小分子，其选择性地靶向并抑制PD-L1,PD-L2，以及免疫激活中T-细胞激活(VISTA)检查点调节因子的V-结构域免疫球蛋白抑制剂。Curis目前正在I期试验中在患有晚期实体肿瘤和淋巴瘤的患者中研究CA-170。参见www.clinicaltrials.gov(NCT02812875)。
V.药物组合物
用于本发明所述的方法和试剂盒的PI3K-δ抑制剂,抗-CD20抗体以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体可以配制成适用于给予的药物组合物。药物组合物可以包含药物可接受的赋形剂。如本文所用，药物可接受的赋形剂包括但不限于适用于所需的特定剂型的任何及所有的溶剂,分散介质,其他液体媒介物,分散或悬浮助剂,稀释剂,颗粒剂和/或分散剂,表面活性剂,等渗剂,增稠剂或乳化剂,防腐剂,粘结剂,润滑剂或油,着色剂,甜味剂或风味剂,稳定剂,抗氧化剂,抗微生物或抗真菌剂,渗透压调节剂,pH调节剂,缓冲剂,螯合剂,冷冻保护剂和/或膨胀剂。用于配制药物组合物的多种赋形剂以及用于制备组合物的技术是本领域已知的(参见Remington:The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,A.R.Gennaro(Lippincott,Williams&Wilkins,Baltimore,MD,2006；incorporated byreference in its entirety))。
示例性的稀释剂包括但不限于碳酸钙或碳酸钠,磷酸钙,磷酸氢钙,磷酸钙,乳糖,蔗糖,纤维素,微晶纤维素,高岭土,甘露醇,山梨醇和/或它们的组合。
示例性的颗粒剂和/或分散剂包括但不限于淀粉,预糊化淀粉,微晶淀粉,褐藻酸,胍尔豆胶,琼脂,聚(乙烯基-吡咯烷酮),(普罗维通),交联的聚(乙烯基-吡咯烷酮)(交聚维酮),纤维素,甲基纤维素,羧甲基纤维素,交联的羧甲基纤维素钠(交联甲羧纤维素),硅酸镁铝十二烷基硫酸钠和/或它们的组合。
示例性的表面活性剂和/或乳化剂包括但不限于天然乳化剂(例如阿拉伯树胶,琼脂,褐藻酸,海藻酸钠,黄蓍胶,chondrux,胆固醇,黄原胶,胶质,凝胶,蛋黄,干酪素,羊毛脂,胆固醇,蜡和卵磷脂),山梨糖醇酐脂肪酸酯(例如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯[80],脱水山梨醇单棕酸酯[40],单油酸甘油酯,聚氧乙烯酯,聚乙二醇脂肪酸酯(例如),聚氧乙烯醚(例如聚氧乙烯十二烷基醚[30]),F 68,188和/或它们的组合。
示例性的粘结剂包括但不限于淀粉,凝胶,糖(例如蔗糖,葡萄糖,右旋糖,糊精,糖蜜,乳糖,乳糖醇,甘露醇),氨基酸(例如甘氨酸),天然和合成树胶(例如阿拉伯树胶,海藻酸钠),乙基纤维素,羟乙基纤维素,羟丙基甲基纤维素和/或它们的组合。
示例性的抗氧化剂包括但不限于α生育酚,抗坏血酸,维生素C棕榈酸酯,苄醇丁基羟基苯甲醚,m-甲酚,蛋氨酸,丁基羟基甲苯,硫代甘油,偏亚硫酸氢钠或偏亚硫酸氢钾,丙酸,没食子酸丙酯,抗坏血酸钠和/或它们的组合。
示例性的螯合剂包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA),柠檬酸一水合物,依地酸钠,富马酸,苹果酸,磷酸,依地酸钠,酒石酸,依地酸三钠和/或它们的组合。
示例性的抗微生物或抗真菌试剂包括但不限于杀藻胺,苄索氯铵,对羟基苯甲酸甲酯,对羟基苯甲酸乙酯,对羟基苯甲酸丙酯,对羟基苯甲酸丁酯,苯甲酸,羟基苯甲酸,苯甲酸钾或苯甲酸钠,山梨酸钾或山梨酸钠,丙酸钠,山梨酸和/或它们的组合。
示例性的防腐剂包括但不限于维生素A,维生素C,维生素E,β-胡罗卜素,柠檬酸,抗坏血酸,丁基羟基苯甲醚,乙二胺,十二烷基硫酸钠(SLS),十二烷基乙醚硫酸钠(SLES)和/或它们的组合。
用于控制pH的示例性的缓冲剂可以包括但不限于磷酸钠,柠檬酸钠,琥珀酸钠,组氨酸(或组氨酸-HCl),苹果酸钠,碳酸钠和/或它们的组合。
示例性的润滑剂包括但不限于硬脂酸镁,硬脂酸钙,硬脂酸,二氧化硅,滑石,麦芽,氢化植物油,聚乙二醇,苯甲酸钠,十二烷基硫酸钠或十二烷基硫酸镁和/或它们的组合。
本发明所述的药物组合物或配制物可以在冷冻过程中可以包含冷冻保护剂从而稳定本发明所述的多核苷酸。示例性的冷冻保护剂包含但不限于甘露醇,蔗糖,海藻糖,乳糖,甘油,右旋糖和/或它们的组合。
药物组合物可以通过任何合适的方法给予，例如通过肠胃外、心室内、口服、局部、直肠、阴道、鼻内、口腔给予或者通过移植库给予。如本文所用，术语“肠胃外”包括皮下,静脉内,肌肉内,关节内,滑液内,胸骨内,鞘内,肝内,病灶内和颅骨内注射或输注技术。
肠胃外配制物可以是单丸剂剂量、输注、或者加载丸剂剂量然后给予维持剂量。这些组合物可以以特定固定的或可变的间隔给予，例如每周两次或每周一次。在一些实施方案中，抗-CD20抗体和/或抗-PD-1或抗-PD-L1抗体通过输注以静脉内方式给予。
在某些实施方案中，药物组合物可以以可接受的剂型口服给予，例如包括胶囊、片剂、水性悬液或溶液。在某些实施方案中，药物组合物还可以通过鼻用气雾剂或吸入给予。这种组合物可以在盐水中、使用苄醇或其他合适的防腐剂、吸附促进剂(以增强生物利用性)和/或其他常用的溶解或分散剂制备成溶液。
用于本发明的试剂的剂量如本文所述。然而，本领域那些技术人员应该理解的是，用于任何特定患者的特定剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所使用的特定的治疗试剂、患者年龄、体重、一般健康、性别、饮食、给予时间、排泄速率、药品组合以及待治疗的特定疾病的严重性。医务人员对这些因素的判断在本领域那些普通技术人员的范围内。量还取决于待治疗的个体患者、给予途径、配制物的类型、所使用的化合物的特征、疾病的严重性和所需的作用。所使用的量可以通过本领域公知的药理学和药代动力学原理来测定。
VI.组合物的给予
在一些实施方案中，将与本发明所述的方法组合使用的试剂(即，本发明所述的PI3K-δ选择性抑制剂、抗-CD20抗体、以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体)分开给予受试对象。
在一些实施方案中，将与本发明所述的方法组合使用的试剂(即，本发明所述的PI3K-δ选择性抑制剂、抗-CD20抗体、以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体)依次给予的受试对象，但是注意如下，具体的给予顺序是不重要的。
在一些实施方案中，所述的试剂是同时或依次给予的。在一些实施方案中，所述的试剂包含在相同的药物组合物中。在一些实施方案中，所述的试剂配制用于口服给予(例如TGR-1202)。
在一些实施方案中，试剂的组合在诱导、治疗和/或维持阶段依次给予。
在一些实施方案中，所有试剂的组合在治疗阶段同时给予。在一些实施方案中，无诱导阶段。
在一些实施方案中，一起给予两种试剂(例如ublituximab和TGR-1202)，以便诱导部分抗肿瘤应答，然后给予第三试剂(例如ublituximab,TGR-1202以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体)，从而增强抗肿瘤应答。在一些实施方案中，在将所有的试剂(即，本发明所述的PI3K-δ选择性抑制剂、抗-CD20抗体、以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体)给予所述的受试对象以后，观察到完全抗肿瘤应答(CR)。在一些实施方案中，给予本发明所述的任何方法的受试对象取得完全应答，并伴有轻微后遗症(MRD)。
在一些实施方案中，当所有三种试剂组合给予时，给予本发明所述的任何方法的受试对象取得部分应答(PR)。在一些实施方案中，给予本发明所述的任何方法的受试对象取得部分应答(PR)或持续至少两个月的完全应答(CR)。
在一些实施方案中，在维持治疗中给予至少一种试剂(本发明所述的PI3K-δ选择性抑制剂、抗-CD20抗体、或者抗-PD-1或抗-PD-L1抗体)，以便保持血液学癌症在成功治疗后返回。在一些实施方案中，在维持治疗中在延长的时期内给予所述的试剂，例如直至不可控的毒性或者发生疾病进展。在一些实施方案中，当发生疾病进展时，结束维持治疗。
在一些实施方案中，可以将其他的治疗试剂与本发明所述的PI3K-δ选择性抑制剂、抗-CD20抗体和/或抗-PD-1或抗-PD-L1抗体共同配制和/或共同给予。在一些实施方案中，本发明所述的方法进一步包括向受试对象给予至少一种其他的治疗试剂。在一些实施方案中，至少一种其他的治疗试剂选自有丝分裂抑制剂,烷基化试剂,抗代谢物,蒽环类抗生素,长春花生物碱,植物碱,氮芥,蛋白酶抑制剂,嵌入性抗生素,生长因子抑制剂,细胞周期抑制剂,生物应答调节剂,抗激素,血管生成抑制剂,抗雄激素,DNA交互剂,嘌呤类似物,拓扑异构酶I抑制剂,拓扑异构酶II抑制剂,微管蛋白相互作用试剂,激素试剂,胸苷酸合成酶抑制剂,非-BTK和非-P13K-δ酪氨酸激酶抑制剂,血管生成抑制剂,EGF抑制剂,VEGF抑制剂,CDK抑制剂,SRC抑制剂,c-Kit抑制剂,Her1/2抑制剂,myc的抑制剂,抗肿瘤抗体,针对生长因子受体的单克隆抗体,蛋白激酶调节剂,放射性同位素,免疫治疗,糖皮质激素和它们的任意的组合。
在一些实施方案中，至少一种其他的治疗试剂为抗癌试剂，其选自DNA交互剂,例如顺铂或阿霉素；拓扑异构酶II抑制剂,例如依托泊苷；拓扑异构酶I抑制剂,例如CPT-11或托泊替康；微管蛋白相互作用试剂,例如紫杉醇,多西他赛或埃博霉素(例如伊沙匹隆),天然形成的或合成的；激素试剂,例如tamoxifen；胸苷酸合成酶抑制剂,例如5-氟代尿嘧啶；抗代谢物,例如甲氨蝶呤；其他的酪氨酸激酶抑制剂,例如Iressa和OSI-774；血管生成抑制剂；EGF抑制剂；VEGF抑制剂；CDK抑制剂；SRC抑制剂；c-Kit抑制剂；Her1/2抑制剂和定向针对生长因子受体的单克隆抗体,例如爱必妥(EGF)和赫塞汀(Her2)；以及其他的蛋白激酶调节剂。在本发明的方法和试剂盒中使用的其他抗癌试剂是肿瘤学领域中那些技术人员已知的。
在一些实施方案中，至少一种其他的治疗试剂选自蛋白酶抑制剂,硼替佐米卡非佐米(PR-171),PR-047,戒酒硫,lactacystin,PS-519,eponemycin,epoxomycin,阿克那霉素,CEP-1612,MG-132,CVT-63417,PS-341,乙烯砜三肽抑制剂,利托那韦,PI-083,(+/-)-7-甲基omuralide,(-)-7-甲基omuralide,来那度胺和它们的组合。
在一些实施方案中，至少一种其他治疗试剂为已知用于治疗血液学恶性疾病的化疗的组合，例如"CHOP"(一种组合，其包含(i)环磷酰胺,例如cytoxan,(ii)阿霉素或其他的拓扑异构酶II抑制剂,例如adriamycin,(iii)长春新碱或其他的vincas,例如oncovin；和(iv)类固醇,例如氢化可的松或泼尼松龙)；"R-CHOP"(一种组合，其包含美罗华,环磷酰胺,阿霉素,长春新碱和强的松)；"ICE"(一种组合，其包含异环磷酰胺,卡铂和依托泊苷)；"R-ICE"(一种组合，其包含美罗华,异环磷酰胺,卡铂和依托泊苷)；"R-ACVBP"(利妥昔单抗,阿霉素,环磷酰胺,长春花碱酰胺,博来霉素和强的松的组合)；"DA-EPOCH-R"(剂量调节的依托泊苷,阿霉素,环磷酰胺,长春新碱,强的松和利妥昔单抗的组合)；"R-苯达莫司汀"(苯达莫司汀和利妥昔单抗的组合)；"GemOx或R-GemOx"(吉西他滨和奥沙利铂的组合,具有或不具有利妥昔单抗)；以及"DHAP"(一种组合，其包含地塞米松,阿糖胞苷和顺铂)。
包含PI3K-δ抑制剂、抗-CD20抗体以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体(或者超过任意的或所有试剂的一种)可以以任何顺序或以任何间隔给予，如本领域那些技术人员测定。例如式A所示的PI3K-δ抑制剂、ublituximab或者与ublituximab相同的抗原表位结合的抗-CD20抗体、以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体可以依次(以任何顺序)、同时、或者依次和同时给予的任意组合给予。式A所示的PI3K-δ抑制剂、ublituximab或者与ublituximab相同的抗原表位结合的抗-CD20抗体、以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体的任意组合可以在相同的药物组合物中或者在分开的药物组合物中给予。
试剂的组合的给予(无论是同时和/或依次(以任何顺序))可以根据分钟(例如0-60分钟)、小时(例如0-24小时)、天(例如0-7天)和/或周(例如0-52周)的所需间隔的任意数量进行，其可以由本领域的任一技术人员测定。定量给予还可以在一段时间内改变，例如在一段时间内(例如1,2,3,4,5或6周)开始每周一次定量给予，然后每两周定量给予一次，每三周一次，每四周一次，每周五一次，或者每六周一次。可以调节剂量方案，从而提供最佳的所需的应答(例如肿瘤退化或缓解)。示例性的剂量和定量给予间隔还可以在一段时间内(例如根据患者的临床应答、副作用等)或者在不同的治疗时期(诱导、治疗或维持)内改变。
VII.治疗血液学癌症的方法
在一个方面中，本发明公开提供了通过向有需要的受试对象给予治疗有效量的以下物质来治疗或减慢血液学癌症的进展的方法：(i)PI3K-δ的至少一种抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；(ii)至少一种抗-CD20抗体，或者其与ublituximab相同的抗原表位结合的片段；以及(iii)至少一种抗-PD1或抗-PD-L1抗体。在一些实施方案中，给予至少所有的三种试剂(即，PI3K-δ抑制剂、抗-CD20抗体以及抗-PD1或抗-PD-L1抗体)在治疗阶段发生。在一些实施方案中，治疗阶段之前为诱导阶段。在一些实施方案中，治疗阶段并非在诱导阶段之前。
多种类型的血液学癌症可以通过本发明公开的方法(和试剂盒)治疗。在一些实施方案中，血液学癌症选自急性淋巴细胞白血病(ALL),急性髓系白血病(AML),慢性淋巴细胞白血病(CLL),小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL),多发性骨髓瘤(MM),非Hodgkin淋巴瘤(NHL),外套细胞淋巴瘤(MCL),滤泡性淋巴瘤(FL),Waldenstrom巨球蛋白血症(WM),弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL),边缘区淋巴瘤(MZL)(其包括结外MZL和结节性MZL),毛细胞白血病(HCL),Burkitt淋巴瘤(BL)和Richter转化。
在一些实施方案中，血液学癌症选自慢性淋巴细胞白血病(CLL),小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL),非Hodgkin淋巴瘤(NHL),外套细胞淋巴瘤(MCL),滤泡性淋巴瘤(FL),弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和边缘区淋巴瘤(MZL)。
在一些实施方案中，癌症表达CD20。
在一些实施方案中，癌症表达PD-1。
在一些实施方案中，癌症表达PD-L1。
在一些实施方案中，癌症是化疗难以治愈的。
在一些实施方案中，癌症是非-TGR-1202P13K-δ抑制剂(例如艾代拉里斯或Duvelisib)难以治愈的。
在一些实施方案中，癌症是非-ublituximab抗-CD20抗体难以治愈的。在一些实施方案中，癌症是利妥昔单抗难以治愈的。
在一些实施方案中，当将所述的试剂事先单独给予受试对象时(即，所述的试剂用作单一治疗)，癌症是所述的任何试剂难以治愈的，即，抗-CD20抗体、P13K-δ选择性抑制剂、或者抗-PD-1或抗-PD-L1抗体。
在一些实施方案中，癌症是复发的。
在一些实施方案中，人类受试对象具有选自17p del,11q del,p53,未突变的IgVH及ZAP-70+和/或CD38+,以及三倍体12的一个或多个基因突变。
在本发明所述的方法(和试剂盒)中使用的P13K-δ抑制剂、抗-CD20抗体、以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体可以以任何顺序或以任何间隔给予，其可以由本领域的任一技术人员测定。例如P13K-δ抑制剂、抗-CD20抗体、以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体可以依次(以任何顺序)、同时、或者通过依次和同时给予的任意组合给予。P13K-δ抑制剂、抗-CD20抗体、以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体可以在相同的药物组合物中或者在分开的药物组合物中给予。
P13K-δ抑制剂、抗-CD20抗体、以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体的给予(无论是同时和/或依次(以任何顺序))可以根据分钟(例如0-60分钟)、小时(例如0-24小时)、天(例如0-7天)和/或周(例如0-52周)的所需间隔的任意数量进行，其可以由本领域的任一技术人员确定并测定。示例性的剂量和定量给予间隔还可以在一段时间内(例如根据患者的临床应答、副作用等)或者在不同的治疗时期(诱导、治疗或维持)内改变。
在一些实施方案中，在本发明所述的方法中的治疗阶段持续多达大约18周,多达大约17周,多达大约16周,多达大约15周,多达大约14周,多达大约13周,或者多达大约12周。在一些实施方案中，治疗阶段持续大约12周。
在一些实施方案中，在治疗阶段中，P13K-δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，其每天以大约200至大约1200mg,大约400至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约500至大约1200mg,大约500至大约1000mg,大约500至大约800mg,大约400mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg或者大约1200mg的剂量给予。在一些实施方案中，P13K-δ抑制剂、或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药微粒化和/或配制用于口服给予。在一些实施方案中，P13K-δ抑制剂、或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药在喂养条件下给予。在一些实施方案中，P13K-δ抑制剂、或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药在治疗阶段中每天以大约800mg给予。在优选的实施方案中，P13K-δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮的PTSA盐，其还称为TGR-1202或umbralisib甲苯磺酸盐。
在一些实施方案中，在治疗阶段中，抗-CD20抗体为ublituximab，其以如下剂量给予：大约450至大约1200mg,大约450至大约1000mg,大约500至大约1200mg,大约500至大约1000mg,大约500至大约900mg,大约600至大约1200mg,大约600至大约1000mg,大约600至大约900mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约750mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg,大约1100mg,大约1200mg,每4至7周大约一次,每5至7周大约一次,每5至6周大约一次,每周大约一次,每2周大约一次,每3周大约一次,每4周大约一次,每5周大约一次,每6周大约一次,或者每7周大约一次。
在一些实施方案中，ublituximab以大约900mg的剂量每6周给予大约一次。在一些实施方案中，在开始治疗阶段后，在第6周的第1天，给予第一剂量的ublituximab。在一些实施方案中，ublituximab配制用于静脉内输注。
在一些实施方案中，在治疗阶段中，抗-PD-1抗体为派姆单抗，其每2至4周大约一次,每3至4周大约一次,每2周大约一次,每3周大约一次,或者每4周大约一次给予大约100至大约300mg,大约100至大约200mg,大约100mg,大约150mg,大约200mg,大约250mg或大约300mg。在一些实施方案中，派姆单抗以大约100mg或200mg的剂量每2,3或4周给予大约一次。在一些实施方案中，当开始治疗阶段时，在第1天给予第一剂量的派姆单抗。在一些实施方案中，派姆单抗配制用于静脉内输注。
在一些实施方案中，在治疗阶段中，抗-PD-L1抗体为atezolizumab，其每2至5周给予大约500mg至大约1500mg的剂量。在一些实施方案中，atezolizumab以每3周给予大约1200mg的剂量。在一些实施方案中，当开始治疗阶段时，在第1天给予第一剂量的atezolizumab。在一些实施方案中，atezolizumab配制用于静脉内输注。
在一些实施方案中，本发明所述的方法进一步包括在治疗阶段之前的诱导阶段。诱导阶段持续多达大约12周,多达大约11周,多达大约10周,多达大约9周或者多达大约8周。在一些实施方案中，诱导阶段持续大约8周。
在一些实施方案中，在诱导阶段中，PI3K-δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，其每天以大约200至大约1200mg,大约400至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约500至大约1200mg,大约500至大约1000mg,大约500至大约800mg,大约400mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg或者大约1200mg的剂量范围给予。在一些实施方案中，PI3K-δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药微粒化和/或配制用于口服给予。
在一些实施方案中，PI3K-δ抑制剂((S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮)，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药在喂养条件下给予。在优选的实施方案中，PI3K-δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药在诱导阶段中每天以大约800mg给予。
在一些实施方案中，在诱导阶段中，抗-CD20抗体为ublituximab，其每1至3周大约一次,每2至3周大约一次,每1至2周大约一次,每1周大约一次,每2周大约一次或者每3周大约一次给予大约450至大约1200mg,大约450至大约1000mg,大约500至大约1200mg,大约500至大约1000mg,大约500至大约900mg,大约600至大约1200mg,大约600至大约1000mg,大约600至大约900mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg或者大约1000mg。在一些实施方案中，ublituximab在诱导阶段中每1或2周大约一次给予大约900mg的剂量。在一些实施方案中，在诱导阶段的第1天给予第一剂量的ublituximab。在一些实施方案中，第一剂量的ublituximab在诱导阶段中在2或3个连续天内分成2或3个待给予的亚剂量，或者在诱导阶段中在2个连续天内分成2个待给予的亚剂量。在一些实施方案中，第一亚剂量的ublituximab包含多达150mg的ublituximab。在一些实施方案中，第二亚剂量的ublituximab包含多达750mg的ublituximab。在一些实施方案中，ublituximab配制用于静脉内输注。
在一些实施方案中，本发明所述的方法进一步包括治疗阶段后的维持阶段。维持阶段可以持续长达可观察到临床益处，或者直至不可控的毒性或疾病进展发生为止。在一些实施方案中，当发生疾病进展时，维持阶段结束。在一些实施方案中，维持阶段持续至少3周,至少6周,至少9周,至少12周或者至少15周。
在一些实施方案中，在维持阶段中，PI3K-δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，其每天以大约200至大约1200mg,大约400至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约500至大约1200mg,大约500至大约1000mg,大约500至大约800mg,大约400mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg或者大约1200mg的剂量范围给予。在一些实施方案中，PI3K-δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药微粒化和/或配制用于口服给予。在一些实施方案中，PI3K-δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药在喂养条件下给予。在优选的实施方案中，PI3K-δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药在维持阶段中每天以大约800mg给予。
尽管不希望被理论所束缚，但是据信，在治疗阶段加入抗-PD-1抗体(例如派姆单抗)或者抗-PD-L1抗体(例如atezolizumab或CK-301)可以增强在诱导阶段后，诱导血液学癌症凋亡的宿主T细胞的效力，其中在所述的诱导阶段中，给予抗-CD20抗体(例如ublituximab)和PI3K-δ抑制剂(例如TGR-1202)的组合。
VIII.试剂盒
在一个方面中，本发明公开还提供了治疗遭受血液学癌症的受试对象的试剂盒，该试剂盒包含：(i)单剂量或多剂量的抗-CD20抗体，或者其与ublituximab相同的抗原表位结合的片段；(ii)单剂量或多剂量的PI3K-δ抑制剂，其中PI3K-δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；(iii)单剂量或多剂量的抗-PD1或抗-PD-L1抗体；以及(iv)根据本发明所述的方法使用试剂(i)-(iii)的说明书。
在一些实施方案中，试剂盒中的抗-CD20抗体为ublituximab，或者与ublituximab相同的抗原表位结合的抗-CD20抗体(或其片段)。在一些实施方案中，单剂量的ublituximab包含大约50至大约1200mg,大约100至大约1000mg,大约150至大约900mg,大约250至大约1200mg,大约250至大约900mg,大约350至大约1200mg,大约350至大约900mg,大约450至大约1200mg,大约450至大约900mg,大约550至大约1200mg,大约550至大约900mg,大约650至大约1200mg,大约650至大约900mg,大约750至大约1200mg,大约750至大约900mg,大约50mg,大约100mg,大约150mg,大约200mg,大约250mg,大约300mg,大约350mg,大约400mg,大约450mg,大约500mg,大约550mg,大约600mg,大约650mg,大约700mg,大约750mg,大约800mg,大约850mg,大约900mg,大约950mg或者大约1000mg的ublituximab。在一些实施方案中，ublituximab剂量配制用于静脉内输注。
在一些实施方案中，试剂盒中的PI3K-δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。在一些实施方案中，试剂盒中的PI3K-δ抑制剂是微粒化的。在一些实施方案中，PI3K-δ抑制剂配制用于口服给予。在一些实施方案中，PI3K-δ抑制剂包含大约100至大约1200mg,大约200至大约1000mg,大约300至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约100mg,200mg,大约300mg,大约400mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg或者大约1200mg的(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。在一些实施方案中，试剂盒中的PI3K-δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮的PTSA盐，其还称为TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)。在一些实施方案中，单剂量的TGR-1202为用于口服给予的片剂或胶囊。
在一些实施方案中，试剂盒中的抗-PD-1抗体为例如nivolumab,派姆单抗或pidilizumab，或者本发明所述的或本领域那些技术人员已知的任何其他的抗-PD-1抗体。在一些实施方案中，抗-PD-1抗体为派姆单抗。在一些实施方案中，单剂量包含大约25mg至大约300mg,大约50mg至300mg,大约100至大约300mg,大约150至300mg,大约200至300mg,大约25mg,大约50mg,大约75mg,大约100mg,大约125mg,大约150mg,大约173mg,大约200mg,or大约250mg或者大约300mg的派姆单抗。在一些实施方案中，单剂量的派姆单抗配制用于静脉内输注。
在一些实施方案中，试剂盒中的抗-PD-L1抗体为例如durvalumab,BMS-936559,atezolizumab,avelumab，或者本发明所述的或本领域那些技术人员已知的任何其他的抗-PD-L1抗体(即，CTI-07,CTI-09,CTI-48,CTI-49,CTI-50,CTI-76,CTI-77,CTI-78,CTI-57或CTI-58)。在一些实施方案中，抗-PD-L1抗体为atezolizumab。在一些实施方案中，单剂量包含大约1200mg的atezolizumab。在一些实施方案中，单剂量atezolizumab配制用于静脉内输注。
在一些实施方案中，试剂盒进一步包含其他的抗癌试剂。在一些实施方案中，其他的抗癌试剂为选自以下的化疗试剂：DNA交互剂,例如顺铂或阿霉素；拓扑异构酶II抑制剂,例如依托泊苷；拓扑异构酶I抑制剂,例如CPT-11或托泊替康；微管蛋白相互作用试剂,例如紫杉醇,多西他赛或埃博霉素(例如伊沙匹隆),天然形成的或合成的；激素试剂,例如tamoxifen；胸苷酸合成酶抑制剂,例如5-氟代尿嘧啶；抗代谢物,例如甲氨蝶呤；其他的酪氨酸激酶抑制剂,例如Iressa和OSI-774；血管生成抑制剂；EGF抑制剂；VEGF抑制剂；CDK抑制剂；SRC抑制剂；c-Kit抑制剂；Her1/2抑制剂以及定向针对生长因子受体的单克隆抗体,例如爱必妥(EGF)和赫塞汀(Her2)；以及其他的蛋白激酶调节剂。
本领域任一技术人员容易地意识到，用于本发明所述的方法中的本发明所述的公开的试剂组合(例如抗-CD20抗体,PI3K-δ抑制剂,以及抗-PD-1或抗-PD-L1抗体)可以容易地引入本领域公知的所建立的试剂盒格式之一中。
本发明通过以下实施例进一步说明，所述的这些实施例不应该解释为是进一步限定。在整个说明书中引用的所有专利和非专利参考文献的内容均以引用方式明确地全文并入本文。
实施例
实施例1-在患有复发的/难治性(r/r)慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中，派姆单抗与Ublituximab(TG-1101)和Umbralisib甲苯磺酸盐(TGR-1202)组合的I/II期研究
背景
根据the American Cancer Society在2017年报告称，估计有20,110例CLL新病例，并且总计4,660位由于该疾病死亡。CLL主要影响老年人，其占被诊断为白血病病例的三分之一，并且表征为克隆成熟B淋巴细胞在血液、骨髓和二级淋巴组织中累积。CLL为异质性疾病，并且具有严重的高风险的细胞遗传学异常(包括17p删除,P53基因突变和11q删除)，其通常更难以治疗。参见Dohner,H.et al.,N Eng J Med 343:1910-1916(2000)。
CLL为利用免疫失调以逃避细胞死亡并促进肿瘤生存的紊乱。化疗方案与单克隆抗体治疗组合，包括CLL患者的现行护理标准。对能够耐受化疗的CLL患者进行前沿治疗(Frontline therapy)通常包括抗-CD20单克隆抗体利妥昔单抗，并与氟达拉滨和环磷酰胺,或苯达莫司汀组合。还可以使用苯丁酸氮芥与抗-CD20单克隆抗体的组合。参见Fischer等人,ASH Annual Meeting,Abstract No.435(2012)；Eichhorst,B.等人,Blood122:526-526(2013)。除了利妥昔单抗，其他的抗-CD20抗体(包括atumumab和obinutuzumab)也已经考虑用于治疗CLL(例如参见Goede,V.等人,N Eng J Med 370:1101-1110(2014))。
使用依鲁替尼的治疗已经证明CLL患者的临床效力。参见Byrd,J.C.等人,N Engl J Med 371:213-223(2014)。此外，还报告使用艾代拉里斯和利妥昔单抗对复发疾病的CLL患者进行组合治疗。参见Furman,R.R.等人,N Eng J Med 370:997-1007(2014)。尽管idealisib-利妥昔单抗组合治疗和依鲁替尼证明了在r/r CLL患者中的临床活性，但是治疗方案是有疗效的，并且都极少使得患者得到完全应答，或者外周血或骨髓中微小残留阴性疾病。
近期的数据表明PD-1及其配体PD-L1/PD-L2在CLL中介导了免疫逃避。然而，Ding,W.等人,"Pembrolizumab in patients with CLL and Richter transformation or withrelapsed CLL,"Blood 129:3419-3427(2017)的近期研究证明，单独的派姆单抗("pembro")在CLL患者中是无效的(ORR 0％，中位值PFS 2.4个月)。在5位r/r CLL患者中，3位对依鲁替尼/nivolumab组合产生应答。Jain,N.等人,"Nivolumab Combined withIbrutinib for CLL and Richter Transformation:A Phase II Trial,"58th ASH AnnualMeeting；San Diego,California；December 2-6,2016.文摘号No.59。重要的相互作用可以存在于PI3K信号传递和免疫检查点监视之间，通过这种相互作用，PI3K的抑制会降低PD-L1肿瘤表达。在本实施例中，umbralisib甲苯磺酸盐(下一代，高度特异性的PI3K-δ抑制剂)的安全性和活性在r/r CLL中在pembro和糖改造的抗-CD20单克隆抗体ublituximab的组合中进行测试。据信，这是PD-1抑制剂与PI3K-δ抑制剂的组合的第一份报告，以及可能的协同活性的评估。
研究设计
在本I/II期多中心临床研究中，将派姆单抗,TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)和ublituximab给予10位CLL患者(其中1位患者具有Richter转化(RT))，这些患者患有需要治疗的复发的或难治性疾病。
实施本研究以评估在ublituximab+TGR-1202的组合诱导治疗后，派姆单抗+TGR-1202+ublituximab的安全性。因此，三重组合的安全性是主要终点。
本研究还评价了在复发-难治性CLL患者中，在ublituximab+TGR-1202的组合诱导治疗后，派姆单抗+TGR-1202+ublituximab的临床效力。因此，三重组合的效力为次级终点。测量总缓解率(ORR)、完全缓解率(CRR)和无进展生存(PFS)作为该组的效力。
根据2008年国际研讨会关于慢性淋巴细胞白血病(IWCLL)的指导原则，定义应答和效力终点。参见Hallek,M.等人,Blood 111:5446-5456(2008)。
患者必须满足所有以下纳入标准，从而合格地参与本研究：
1.CLL组—B-细胞CLL的诊断，具有根据病历卡内记录的IWCLL标准而建立的诊断。患者必须接受至少2个周期的一个先前的标准治疗方案(将先前的抗-CD20抗体或细胞毒性药品(包括调查研究的或商业可用的疗法)作为单一试剂或者作为组合治疗的成分给予)。
2.RT组—CLL的Richter转化的组织学证明的诊断。患者必须接受针对CLL或RT的至少一次先前系列的治疗。
3.CLL组—允许(warrant)治疗(其符合用于初始治疗的所接受的IWCLL标准)的CLL。以下条件的任意一种都构成了允许治疗的CLL：
a.进行性骨髓衰竭的证明，其是通过贫血症和/或血小板减少的发作或恶化表明，或者
b.大片的(即，脾的下边缘低于左肋缘≥6cm)进行性或者症状性脾肿大，或者
c.大片的(即，最长直径≥10cm)进行性或者症状性淋巴结病，或者
d.在未感染的情况下，进行性淋巴球增多，并且在2个月的时间内，血液绝对淋巴细胞计数(ALC)增加≥50％，或者淋巴细胞倍增时间<6个月(只要初始ALC≥30,000/L即可)，或者
e.对皮质类固醇或其他标准的治疗应答较差的自身免疫性贫血和/或血小板减少症，或者
f.全身症状，其在未感染的情况下，定义为以下疾病相关症状或迹象的任意一种或多种：
i.在之前的6个月内，无意识的体重减轻≥10％，或者
ii.明显的疲劳(≥2级)，或者
iii.在≥2周内，发烧>100.5℉或38.0℃，或者
iv.盗汗>1个月。
4.充分的器官系统功能，定义如下：
a.绝对嗜中性细胞计数(ANC)>750/血小板计数>40,000，
b.总胆红素≤正常值上限(ULN)1.5倍，
c.如果无肝脏受累，丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)2.5xULN，或者如果已知的肝脏受累，丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)≤5x ULN，
d.计算肌酐清除率>30mL/min(通过Cockcroft-Gault式计算)。
5.ECOG体力状态≤2。
6.男性或女性≥18岁。
7.能够吞咽和保持口服药剂。
8.具有生育潜力的女性受试对象必须经历无菌手术，绝经期后(根据学会指导原则)，或者必须在开始研究药品之前2周，在治疗期间以及在最后剂量的研究药品之后的30天内，使用医学可接受的节育措施。具有生殖潜力的所有女性受试对象在第1周期的第1天之前的3天内，都必须具有阴性妊娠检验。生殖潜力的女性或男性可以不参与，除非他们同意使用医学可接受的节育措施。具有生育潜力的受试对象必须使用两种形式的医学可接受的节育措施，包括：避孕套、隔膜、子宫帽、子宫内避孕器(IUD)、无菌手术(输卵管结扎或伴侣经历输精管切除术)或口服避孕剂，OR必须同意在研究药品开始之前2周，在本研究参与过程中以及在最后剂量的研究药品之后30天内，完全避免异性间性交。仅在周期的某些事件禁欲(例如在排卵的几天内、在排卵后以及中断)并非可接受的节育方法。研究医生必须批准节育的形式。女性受试对象在参与本研究时不应该怀孕，或者在最后剂量的研究药品后30天内不应该怀孕。男性受试对象在本研究时不应该生育孩子或捐赠精子，或者在最后剂量的研究药品后30天内不应该生育孩子或捐赠精子。
9.自愿并能够服从研究和随访程序，并且给出书面知情同意书。
在本研究中，满足以下排除标准的任意一项的患者不被招募：
1.在募集的14天内，患者接受癌症治疗(即，化疗、放疗、免疫治疗、生物治疗、激素治疗、手术和/或肿瘤栓塞)或者任何研究药品。
2.证明慢性活动性乙型肝炎(不包括具有先前乙型肝炎接种或阳性血清乙型肝炎抗体的患者的HBV)、慢性活动性丙型肝炎感染(不包括通过PCR证明的阴性丙型肝炎)、巨细胞病毒(CMV)或者已知的HIV病史。
3.证明持续性系统性细菌、真菌或病毒感染，除了皮肤或指甲的局部真菌感染以外(患者在研究者的自由判断下可以接受预防性抗病毒或抗细菌治疗)。
4.任何严重的和/或不受控的医学状况或者可能影响他们参与本研究的其他情况，例如：
a.记录的充血性心力衰竭症状或历史(NY心脏协会功能分类III-IV)，
b.在3个月的随机选择中的心肌梗死，
c.QTcF>470msec，
d.医药不能良好控制的心绞痛，
e.控制较差的或临床显著的动脉粥样硬化性血管疾病，包括在3个月的随机选择中的脑血管意外(CVA)、短暂性脑缺血发作(TIA)、血管成形术、心脏/血管支架术。
5.在2年的研究募集中的恶性疾病，除了充分治疗的基底、鳞状细胞癌或非黑色素瘤皮肤癌，子宫颈原位癌，在6个月内未使用膀胱内化疗或BCG治疗的表浅性膀胱癌，局部前列腺癌，以及在间隔至少3个月的2次连续的测量中PSA<1.0mg/dL(其中最近的一次为研究进入的4周内)。
6.患有主动性自身免疫性疾病的患者(除了自身免疫性溶血性贫血或特发性血小板减少性紫癜(ITP))。
定量给予时间表
给予以下3个阶段的定量给予时间表，治疗10位(10)受试对象。
诱导阶段(周期1和2，每个周期＝28天)
合格的患者每天口服接受800mg的TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)。
合格的患者在周期1和2的第1,8和15天通过静脉内(IV)输注还接受900mg的ublituximab。就周期1而言，ublituximab的定量给予分为2天，从而降低肿瘤溶解综合征和输注相关反应的风险(第1天高达150mg，第2天高达750mg)。
治疗或巩固阶段(周期3-6，每个周期＝21天)
在治疗阶段，根据一些定量给予时间表，每3周，与ublituximab组合开始给予派姆单抗，并且每天给予TGR-1202：
Ublituximab：周期4和6的第15天，IV输注900mg。
TGR-1202：800mg每天口服剂量。
派姆单抗：剂量水平1：就四个周期的治疗而言，每3周IV输注给予100mg派姆单抗。在每个21天的周期的第1天，给予派姆单抗。剂量水平2：就四个周期的治疗而言，每3周IV输注给予200mg派姆单抗。在每个21天周期的第1天，给予派姆单抗。
维持阶段(周期7+，每个周期＝28天)
在周期6结束时，患者继续每天800mg的TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)，作为维持治疗，直到进行性疾病(PD)或不可接受的毒性为止。给予IWCLL 2008标准进行应答评估，并且在umbralisib甲苯磺酸盐+ublituximab(2months),umbralisib甲苯磺酸盐,ublituximab,pembro(6个月)之后，而且在第12个月使用umbralisib甲苯磺酸盐的维持过程中进行。在筛选、第2个月和第6个月时，获得外周血和/或骨髓活检用于相关分析。就相关分析而言，富集并冷冻保存单核细胞。将冷冻的细胞经过多色免疫分型，从而分析：B细胞(CD5,CD38,CD3,HLA-DR,CD19,PDL2,CD27,PDL1和生活力)和T/NK细胞(CD8,CD56,CCCR7,CD3,CD4,IgG4,CD19,TIM-3,CD25,PD1和生活力)。
在诱导阶段结束后，进行应答评估和相关取样，然后患者接受派姆单抗，并结合TGR-1202和ublituximab。两个分开阶段的这种独特的设计(ublituximab+TGR-1202，然后为派姆单抗+TGR-1202+ublituximab)被首次设计用于体内CLL的研究、PD-1信号传递阻断在CLL中的重要性和活性，同时评估派姆单抗、并结合ublituximab和TGR-1202的增加的毒性。
本研究在两组(每个剂量水平3-6位患者)使用传统的3+3I期研究设计用于剂量递增。如果在第一派姆单抗剂量水平(100mg)下，第一组的三位受试对象均未经历剂量限制性毒性(DLT)，则剂量递增进行至下一个水平(200mg)。如果未观察到剂量限制性毒性，则在第一剂量水平下评价最少三位受试对象。在100mg派姆单抗剂量水平下，在3位受试对象中报告无DLT。在第一组3位招募的受试对象中，在200mg派姆单抗剂量水平下，报告升高的ALT/AST具有一位DLT，必须在该剂量水平下再招募3位受试对象。未报告其他的DLT。
患者具有并将继续治疗，直至发生明确的疾病进展、不可接受的毒性或者因为其他原因由研究中退出。除了因为进展以外的原因中断研究治疗的患者将由招募开始时的一年时间内继续随访进展和/或生存情况。表6列出在各个研究访问时进行的所有必需的评估。
表6.对CLL患者的研究评估和治疗时间表
*第1天输注150mg，第2天输注750mg
治疗给予具有+/-1天时间窗。身体检查、生命体征、ECOG PS、血液学和血清化学访问天数具有-1天时间窗。
2治疗给予+/-3天时间窗。对于周期2至6，身体检查、生命体征、ECOG PS、血液学和血清化学访问天数具有-3天时间窗。
3治疗给予和试验室或其他评估具有+/-7天时间窗。
4如果观察到临床显著的不良事件或异常结果，其在治疗访问结束时未解决，则在研究药品中断后30天，继续监测并记录。
5在周期1/第1天之前30天内基线CT扫描。
6CT扫描/应答评估具有+/-7天时间窗。根据护理标准，在周8(周期2结束时),周24(周期6结束时),在研究时12个月后,然后在12个月后在研究者自由判断下进行CT扫描/应答评估。
7至少每3个月或者根据研究者的自由判断下访问。
8在周期1/第1天之前至少72小时进行血清妊娠检验。如果患者经历绝经期或者不再具有子宫/卵巢，则可以省略该过程。
9在周期1之前30天内取得外周血和骨髓样品。仅在周期2结束之前14天内取得外周血样品。可以在派姆单抗之前，在周期3第1天收集该样品。仅在周期6结束后7天内取得外周血和骨髓样品。根据需要，骨髓样品还用于效力评价。
方法评估
除了临床检查以外，在本研究中，对所募集的所有患者使用成像基评价。对于x射线肿瘤评估而言，CT扫描是优选的方法，而MRI扫描可以用于患者(对于该患者，该方法可能是优选的备选方法)中。如果进行MRI，应该进行胸部的非增强CT。增强扫描是优选的，但是对于使用造影剂在医学上产生不当的患者而言，可以省略含碘或钆的造影材料。胸部x-射线、超声波、内镜检查、腹腔镜检查、PET、放射性核素扫描或者肿瘤标记物未考虑用于应答评估。
对于射线照相评价而言，相同的评估方法和相同的技术(例如扫描类型、扫描仪、患者位置、造影剂剂量、注射/扫描间隔)用于表征在基线处、研究治疗过程中以及随访时，各种鉴定且报告的病变。然而，如果患者在基线处未使用造影剂成像，则使用造影剂进行随后的评估，除非患者不能耐受造影剂。
靶病变
在基线处，选择多大6个淋巴结作为靶病变，其用于定量研究治疗过程中的疾病状态。理想的是，靶病变位于肌体的分开的区域。仅需要选择外周淋巴结作为靶病变。然而，如果无论何时涉及这些位点，都评估疾病的纵膈区域和腹膜区域，则是最佳的。
在基线处，并根据研究评估时间表，测量并记录靶病变。对于各个靶病变，记录横截面维度(最长的横截面直径，即，LD×LPD)(以cm计)。计算并记录各个靶病变的垂直直径的乘积(PPD)(以cm计)以及所有靶病变的乘积的总和(SPD)(以cm计)。基线SPD用作参考值，通过该值，在治疗过程中表征客观的肿瘤应答。单个病变的最低LD和最低SPD用作参照值，通过该值，表征CLL的进展。所有的LD和LPD直径均以厘米报告，并且所有的PPD和SPD均以平方厘米报告。
如果淋巴结包块在基线处是异常的并且是可测量的，则选择淋巴结包块作为淋巴结靶病变。如果淋巴结病变具有>1.5cm的单直径，则认为该淋巴结病变是异常的，并且如果淋巴结病变具有2个垂直直径，其横截面可以精确地测量，并且LD≥1.0cm，LPD也≥1.0cm，则认为该淋巴结病变是可测量的。
在随访的时间点，考虑单个病变的LD和所有淋巴结靶病变的SPD。由于一个或两个直径均>0cm且<1.0cm的淋巴结靶病变都不可能可靠地测量，所以对于满足这些标准的各个直径，指定为1.0cm的缺省值，并且所得的PPD用于SPD计算中。基于这种惯例，即使SPD值>0cm2(即，如果所有的淋巴结测量均<1.0cm2)，也可以取得CR。
LD测量>1.5cm、LPD测量>1.0cm的新的淋巴结被认为是进行性疾病(PD)。
在其中大的淋巴结包块分成多个成分的情况下，所有的子成分(无论尺寸如何)都用于计算SPD。病变的进展基于子成分的SPD。病变的子成分具有所计算的真实的PPD。类似地，可观察到的即非异常又不测量的病变子成分具有用于计算SPD的1.0cm2(1.0cm×1.0cm)的缺省PPD。
如果病变合并，则建立病变之间的边界，这样可以继续测量各个单个病变的LD。如果病变以如下方式合并：它们不在能通过所述的边界分开，则新的合并的病变是二维(bi-dimensionally)测量的。
脾和肝脏
通过CT/MRI扫描和基线处的身体检查，并根据研究评估的时间表来评估脾和肝脏。各个器官的最长垂直纬度(LVD)的基线和最低值用作参照值，用于进一步表征在治疗过程中，CLL的可测量纬度的客观肿瘤应答。所有的脾和肝脏的LVD测量均以厘米报告。
通过成像，如果脾的LVD>12cm(LVD是通过观察脾的切片数量乘以切片厚度而获得的(例如如果在厚度为0.5cm的14个连续的横截面图像中观察脾，则LVD记录为7cm))，则认为脾是增大的。
对于在基线处或脾最低LVD处脾肿大的患者而言，脾的各个应答和进展评价仅考虑为相对于基线或最低值处脾的增大的变化，而非相对于总的脾LVD的变化。
需要在LVD中脾的增大由基线处降低50％(降低最低2cm)或者通过图像降低至≤12cm用于宣布脾肿大应答。相反，需要脾增大由最低值增加≥50％(最低增加2cm)用于宣布脾进展。通过成像，如果肝脏的LVD>18cm，则认为其增大。
需要在干燥的增大中，其LVD由基线降低50％(降低最低2cm)或者降低至≤18cm用于宣布肝肿大应答。相反，需要肝脏增大由最低增加≥50％(最低增加2cm)用于宣布肝进展。
非靶病变
未选择作为靶病变进行定量的任何其他的可测量且异常的淋巴结病变都认为是非靶病变。此外，CLL的非可测量的证据(例如上述两个直径均<1.0cm的淋巴结病变、淋巴结外病变、骨病变、软脑膜疾病、腹水、胸腔或心包积液、皮肤或肺的淋巴管炎、未证明且随后未实施成像技术的腹部包块、囊性病变、之前辐射过的病变以及伪影病变)被认为是非靶疾病。
在治疗过程中，在基线处和规定的间隔下，记录非靶疾病的存在或缺乏。如果在基线处存在，则应该记录多达6种非靶病变。基线处的非靶疾病用作一般参照值，用于进一步表征在治疗过程中在客观肿瘤应答的评估过程中CLL的回撤或进展。不需要测量，并且这些病变记录为“存在”或“缺乏”。
肿瘤或应答和进展的定义
为了满足完全应答(CR)的标准，所有以下标准必须满足：
(1)无新疾病的证据。
(2)外周血中ALC<4x 109/L。
(3)在LD中，所有靶淋巴结包块回归正常尺寸，≤1.5cm。
(4)正常的脾和肝脏的尺寸。
(5)所有淋巴结非靶疾病回归正常，并且所有可检测值消失。
(6)非淋巴结非靶疾病。
(7)形态学阴性骨髓，其定义为<30％的有核细胞为淋巴样细胞，并且骨髓样品中无淋巴样淋巴小结(对于各年龄而言为正常细胞)。
(8)外周血计数满足所有以下标准：
(i)ANC>1.5x 109/L，无需外源生长因子(例如G-CSF)；
(ii)血小板计数≥100x 109/L，无需外源生长因子；
(iii)血红蛋白≥110g/L(11.0g/dL)，无需红细胞灌注，或者无需外源生长因子(例如红细胞生成素)。
达到CR所有标准(包括骨髓标准)、但是患有持续性贫血、血小板减少症、嗜中性白血球减少症或下细胞骨髓(其与之前或正在发生的药品毒性有关(并且CLL无关))的患者被认为是骨髓不完全恢复(CRi)的CR。
为了满足部分应答(PR)的标准，所有以下标准必须满足：
(1)无新疾病的证据。
(2)疾病状态的变化满足≥2的以下标准(2种情况除外，其中仅1个标准被满足)：1)淋巴结病仅在基线处存在；2)淋巴结病和淋巴球增多在基线处存在。在这2种情况下，仅淋巴结病必须改善至以下说明的程度：
(i)在患有基线淋巴球增多(ALC≥4x 109/L)的患者中，外周血ALC由基线降低≥50％或者降低至<4x 109/L；
(ii)靶淋巴结病变的SPD由基线降低≥50％；
(iii)在基线处患有脾增大的患者中，脾肿大应答如上文定义；
(iv)在基线处患有肝脏增大的患者中，肝肿大应答如上文定义；
(v)在CLL骨髓浸润或在B-淋巴小结中由基线降低≥50％。
(3)具有恶化的非靶脾、肝脏或非靶疾病，其满足定义的PD的标准。
(4)外周血计数满足以下标准之一：
(i)ANC>1.5x 109/L或者增加超过基线>50％，无需外源生长因子(例如G-CSF)；
(ii)血小板计数>100x 109/L或者增加超过基线>50％，无需外源生长因子；(iii)血红蛋白>110g/L(11.0g/dL)或者增加超过基线>50％，无需红细胞灌注，或者无需外源生长因子(例如红细胞生成素)。
为了满足稳定疾病(SD)的标准，以下标准必须满足：
(1)无新疾病的证据。
(2)没有足够的肿瘤收缩的证据以定性PR，也没有足够的肿瘤生长的证据以定性疾病的决定性进展(PD)。
发生以下事件的任意一种表明决定性PD：
(1)无新疾病的证据。
(i)新的淋巴结，测量其LD>1.5cm，LPD>1.0cm；
(ii)新的或复发的脾肿大，并且最低LVD为14cm；
(iii)新的或复发的肝肿大，并且最低LVD为20cm；
(iv)已经解决的淋巴结外病变的明确再现；
(v)任何尺寸的新的明确的淋巴结外病变；
(vi)*新的非靶疾病(例如积液、腹水或者与CLL有关的其他器官异常)。
*分离的新的积液、腹水或者其他器官异常不足以单独地作为PD的证据，除非组织学证实。因此，如果这仅是显然的新疾病的临床表现，则不应该宣布PD。
(2)靶病变、脾或肝脏、或者非靶疾病恶化的证据。
(i)在靶病变的SPD中由最低增加≥50％；
(ii)在单个淋巴结或淋巴结外包块(其现在具有>1.5cm的LD和>1.0cm的LPD)的LD由最低增加≥50％；
(iii)脾进展，定义为脾增大由最低增加≥50％(最低增加2cm，并且最低LVD为14cm)；
(iv)肝脏进展，定义为肝脏增大由最低增加≥50％(最低增加2cm，并且最低LVD为20cm)；
(v)非靶疾病(例如积液、腹水或与CLL有关的其他器官异常)的尺寸的明确增大；
(vi)转化成通过活组织检查所建立的更侵入性的组织学(例如Richter综合征)(如果患者没有更早的CLL进展的客观记录，则活组织检查的日期被认为是CLL进展的日期)。
(3)血小板计数或血红蛋白减少，其归因于CLL，但不因为自体免疫现象，并且通过骨髓活组织检查证明，显示克隆CLL细胞浸润：
(i)当前血小板计数<100x 109/L，并且由最高的研究中血小板计数降低>50％；
(ii)当前血红蛋白<110g/L(11.0g/dL)，并且由最高的研究中血红蛋白降低>20g/L(2g/dL)。
如果关于是否是真实的进展不确定，则患者继续研究治疗，并且在密切观察下保持进展状态未决的证明(通过IRC)。具体而言，在恶化CLL的客观证据缺乏的情况下，全身症状的恶化不被认为是定义疾病进展；在此类患者中，考虑造成全身症状的CLL相关和非CLL相关的原因。
在研究治疗暂时中断的过程中，疾病恶化(例如并发的疾病)并非一定表明对研究治疗的抗性。在这些情况下，考虑CT/MRI或其他相关的评价，从而记录定义疾病进展是否发生。如果随后的评价表明患者经历持续的定义CLL进展，则进展日期为进展首次被客观记录的时点。
在不具有PD证据的患者中，任意一种以下状况的发生都表明无价值的应答状态(NE)：
(1)无图像或者不足的或缺失的图像。
(2)肝脏和脾的图像在所述的时点缺失(除非脾图像的缺失不会导致已知经历脾切除术的患者的NE指定)。
结果
最初治疗10位患者：9位患有CLL(3位在100mg pembro组，6位在200mg pembro组)，并且1位患有Richter转化(100mg pembro组)。本实施例报告9位CLL pts，对其进行安全性或效力评价。基线人口统计学如下：男性/女性(5/4)，年龄中位数71岁(范围60-81)，中位数既往治疗1(1-3)，78％难治疗的。56％在研究招募之前使用BTK抑制剂(依鲁替尼或acalabrutinib)治疗，所有这些人对于BTK治疗都是难治性的。78％具有至少1个高风险遗传特征(del17p,del11q,TP53mut,Notch1mut或复杂核型)。在周期3-6中(umbralisib甲苯磺酸盐,ublituximab,以及pembro组合)所有级别的并且级别≥3的不良事件(AE)都列于表7中。记录中，仅发生一例剂量限制性毒性(DLT)(ALT/AST评价–200mg pembro组)，其引发扩展至6位患者，未报告其他的DLT。最大耐受剂量(MTD)未达到，因此，满足主要研究终点。未观察到预计级别≥3的PI3K-δ相关的毒性的增加(包括肺炎、大肠炎和转氨酶升高(1事件))。对于非BTK难治性患者，ORR为75％(3/4)，对于BTK难治性患者，ORR为60％(3/5)。
在该分析时，仅一位患者经历进展性疾病(PD)，并且未观察到死亡(图7)。九位患者中的八位在研究中保持随访(范围4-21+个月)。在记录中，患者1选择不参与维持阶段，并且取得持续21+个月的无治疗无进展生存(PFS)。图8包括所有9位CLL研究患者的“游泳者图”。4位患者具有详细的相关分析。在1位患者中，在使用pembro治疗后表达PD-L1/PD-L2的骨髓CLL细胞增加20倍。主要T细胞亚群(包括Tregs)的比例和PD1水平在治疗期间未大幅改变。
表7：在使用umbralisib甲苯磺酸盐+ublituximab+pembro的周期3-6中，所有因果关系的不良事件(AE)(n＝9)(所有级别>20％并且所有级别为3/4AE)
不良事件(AE) 所有级别(N) 所有级别(％) 级别3/4(N) 级别3/4(％)
嗜中性白血球减少症 4 44 3 33
咳嗽 4 44
白细胞减少症 3 33 1 11
食欲减退 3 33
贫血症 2 22 1 11
血液ALK磷酸酶增加 2 22
寒冷 2 22
疲劳 2 22
头痛 2 22
甲状腺机能减退 2 22
水肿 2 22
口咽痛 2 22
皮疹 2 22
血小板减少症 2 22
AST/ALT增加 1 11 1 11
结论
这是在CLL患者中首次报告与抗-PD-1治疗组合研究的PI3K-δ抑制剂。umbralisib甲苯磺酸盐+ublituximab+pembro的三重组合在对BTK抑制剂治疗难治的患者中具有良好的耐受，并具有持久的应答。招募在CLL和Richter转化组中继续进行。
实施例2—用于治疗B-细胞恶性疾病患者的Ublituximab,TGR-1202,和Atezolizumab的组合
研究设计
在I/II期临床研究中，将ublituximab,TGR-1202和atezolizumab给予B-细胞恶性疾病(例如CLL,NHL)的患者，包括复发的或难治性疾病的需要治疗的那些。实施本研究以测定在复发-难治性B-细胞恶性疾病患者中在ublituximab+TGR-1202的组合诱导治疗后TGR-1202+ublituximab+atezolizumab的安全性。
本研究还评价在复发-难治性B-细胞恶性疾病患者中在ublituximab+TGR-1202的组合诱导治疗后TGR-1202+ublituximab+atezolizumab的临床效力。以该组的总缓解率、完全缓解率、和无进展生存作为效力测量。
定量给予的时间表以及抗肿瘤应答的评估如实施例1中所述，不同之处在于在治疗阶段给予抗-PD-L1抗体(atezolizumab)，替代抗-PD-1抗体(派姆单抗)。就此而言，尽管在诱导和治疗阶段，ublituximab和TGR-1202的剂量如实施例1中所述，但是在治疗阶段，抗-PD-L1抗体(atezolizumab)的剂量如下所述：
剂量水平1：Atezolizumab：4个治疗周期，每3周600mg IV输注。在每个21天的周期的第1天，给予Atezolizumab。
剂量水平2：Atezolizumab：4个治疗周期，每3周1200mg IV输注。在每个21天的周期的第1天，给予Atezolizumab。
实施例3—用于治疗B-细胞恶性疾病患者的Ublituximab,TGR-1202,和Atezolizumab(无诱导阶段)的组合
研究设计
在I/II期临床研究中，将ublituximab,TGR-1202和atezolizumab给予B-细胞恶性疾病(例如CLL,NHL,Richter转化)的患者，包括复发的、难治性或侵入性疾病的需要治疗的那些。实施本研究以测定在复发-难治性B-细胞恶性疾病患者中在未进行ublituximab+TGR-1202的组合诱导治疗的情况下，TGR-1202+ublituximab+atezolizumab的三重组合的安全性。
本研究还评价在复发-难治性B-细胞恶性疾病患者中在未进行ublituximab+TGR-1202的组合诱导治疗的情况下，TGR-1202+ublituximab+atezolizumab的临床效力。以该组的总缓解率、完全缓解率、和无进展生存作为效力测量。抗肿瘤应答的评估如实施例1中报告来实施。
由于无诱导阶段，所以用于该三重组合的定量给予的时间表如实施例1的治疗阶段所述，不同之处在于给予抗-PD-L1抗体(atezolizumab)，替代抗-PD-1抗体(派姆单抗)。此外，与实施例1不同，所有三种试剂(TGR-1202+ublituximab+atezolizumab)都在周期1的第1天一起给予。用于ublituximab和TGR-1202的剂量与实施例1所述相同，并且用于抗-PD-L1抗体(atezolizumab)的剂量与实施例2所述相同。
实施例4—优化的PD-L1抗体的生产
使用得自Pierce的the EZ-Link Sulfo-NHS-Biotinylation Kit将抗原生物素化。山羊抗人F(ab')2κ-FITC(LC-FITC),Extravidin-PE(EA-PE)和链霉亲和素-633(SA-633)分别得自Southern Biotech,Sigma和Molecular Probes。链霉亲和素MicroBeads和MACS LC分离柱购自Miltenyi Biotec。
亲和力成熟
使用三种成熟策略，进行静止(naive)克隆子的结合优化：VH CDRH1/CDRH2的多样化、VH基因的PCR诱变、以及集中于CDRH3上的VH诱变。
CTI-07谱系
第一轮优化集中于由文库中选择改进的结合剂，其中CTI-07VH基因使用本领域已知的技术通过诱变PCR而多样化。第1轮：通过在酵母菌的表面上递呈VH突变形式的全长CTI-07IgG来进行选择。将这些文库与100nM生物素化的PD-L1温育，然后，通过抗-LC FITC试剂(IgG表达)和SA-633(抗原结合的检测)检测IgG表达，并通过碘丙啶染色检测活力细胞。通过FACS选择顶级抗原结合/IgG表达细胞。第2轮：根据第1轮，进行选择，但是使用10nM生物素化的PD-L1用于区分抗原的结合。第3轮：根据第1和2轮，实施文库的表达。第3轮使用多特异性试剂(PSR)，由选择输出除去非特异性的抗体(Xu,Y.et.al.,PEDS 26:663-670(2013))。将这些文库与1:10稀释的生物素化PSR试剂温育，通过抗-LC FITC试剂(IgG表达)检测IgG表达，并通过EA-PE(抗原结合的检测)检测PSR结合，再通过碘丙啶染色检测活力细胞。将顶级的1-2％IgG阳性、PSR阴性、PI阴性细胞分类，并进入第4轮。第4轮：根据第2轮进行选择，但是使用1nM生物素化PD-L1用于区分抗原的结合。将顶级克隆子(Top clone)铺平板，并测序，从而测定独特的IgG序列。将独特的IgG序列提交用于抗体生产、纯化和表征。
第二轮优化集中于由文库中选择改进的结合剂，其中在所述的文库中，VH基因通过诱变PCR多样化，同时还使用简并CDRH3oligo，从而提高CHRH3内的诱变率。该扩增技术是使用本领域已知的技术进行的。第1轮：通过在酵母菌的表面上递呈VH突变形式的全长亲代IgG来进行选择。将这些文库与10nM生物素化的PD-L1温育，然后，通过抗-LC FITC试剂(IgG表达)和SA-633(抗原结合的检测)检测IgG表达，并通过碘丙啶染色检测活力细胞。通过FACS选择顶级抗原结合/IgG表达细胞。第2轮：根据第1轮进行选择，但是使用2nM生物素化的PDL1用于区分抗原的结合。将顶级克隆子铺平板，并测序，从而测定独特的IgG序列。将独特的IgG序列提交用于抗体生产、纯化和表征。
CTI-09谱系
CTI-09优化使用CDRH1和CDRH2花斑：CTI-09的CDRH3通过PCR扩增，然后与多样性为1x 108的CDRH1和CDRH2变体重组至预制的载体文库中。第1轮：通过在酵母菌的表面上递呈VH突变形式的全长CTI-09IgG来进行选择。将这些文库与100nM生物素化的PD-L1温育。通过Miltenyi MACS系统，通过磁性分离来选择抗原阳性细胞。简言之，将与b-PDL1温育的文库与链霉亲和素磁珠温育。酵母菌/珠复合物被捕获在MACS LS柱上，而未标记的细胞进入废液。然后将b-PD-L1结合细胞洗脱至介质中，用于第2轮选择过程的增殖。第2轮：通过在酵母菌的表面上递呈VH突变形式的全长CTI-07IgG来进行选择。将这些文库与20nM生物素化的PD-L1温育，然后通过抗-LC FITC试剂(IgG表达)和SA-633(抗原结合的检测)检测IgG表达，并通过碘丙啶染色检测活力细胞。通过FACS选择顶级抗原结合/IgG表达细胞。第3轮：根据第1和2轮进行文库表达。第3轮使用多特异性试剂(PSR)，由选择输出除去非特异性的抗体(Xu et.al.,supra)。将这些文库与1:10稀释的生物素化PSR试剂温育，通过抗-LC FITC试剂(IgG表达)检测IgG表达，并通过EA-PE(抗原结合的检测)检测PSR结合，再通过碘丙啶染色检测活力细胞。将顶级的1-2％IgG阳性、PSR阴性、PI阴性细胞分类，并进入第4轮。第4轮：将诱导的第3轮输出与20nM b-PD-L1温育。细胞成团，并洗涤，从而除去任何保留的b-PD-L1。将该细胞团再次悬浮于1uM未标记的PD-L1中。通过抗原结合剂在一定时间内保留b-PD-L1抗原的能力来区分顶级抗原结合剂。将顶级克隆子铺平板，并测序，从而测定独特的IgG序列。将独特的IgG序列提交用于抗体生产、纯化和表征。
抗体生产和纯化
使酵母菌克隆子生长至饱和，然后在30℃下在摇动下诱导48小时。诱导后，酵母菌细胞形成团，收获上清液用于纯化。使用蛋白质A柱纯化IgG，使用乙酸pH 2.0洗脱。通过木瓜蛋白酶消化生成Fab片段，并在KappaSelect(GE Healthcare LifeSciences)上纯化。
实施例5—与PD-L1抗体的竞争性FACS
使用PD-L1表达载体转染中国仓鼠卵(CHO)细胞，随后针对蛋白质的表达(PD-L1+细胞)进行选择。将CHO细胞与1μg/ml生物素-标记的PD-1温育1小时。
在与生物素-标记PD-1温育后，将抗-PD-L1抗体以4倍稀释加入上清液中，起始浓度为10μm/ml，并使其温育1小时。洗涤细胞，然后与链霉亲和素-PE接触。通过流式细胞仪，分析链霉亲和素-PE染色，从而测定PD-1与抗-PD-L1抗体结合的百分抑制率。
表8
临床对照mAb CTI-09 CTI-48 CTI-50 CTI-58
IC<sub>50</sub>,g/ml 9.19e-007 4.156e-005 9.985e-007 1.037e-006 3.463e-006
计算几种抗体的IC50值，包括临床对照mAb(由SEQ ID NO:83代表的VH结构域和由SEQ ID NO:84代表的VL结构域所定义),CTI-09,CTI-48,CTI-50和CTI-58，并且可以在表8中找到。图1示出本研究的结果。
实施例6—抗体的结合动力学、特异性和选择性
使用八位字节数据分析来测定用于评估抗体结合动力学的亲和性量度。在动力学缓冲剂中以20ug/mL(默认浓度)制备2mL加载样品。将至少200uL等分至96孔黑色平板中。样品的浓度范围基于相互作用的估计KD(如果可用)。通常，系列稀释范围为0.1KD至10KD。使用动力学缓冲剂作为样品稀释剂对样品柱进行7-点稀释。样品柱的最后一个孔用在后期的数据分析中用作参照孔，应该仅包含动力学缓冲剂。
将生物传感器在室温下在动力学缓冲剂(1x PBS,0.1％BSA,0.02％Tween20,0.05％Sodium Azide)中水合作用10分钟。
表9
样品ID 加载样品ID K<sub>D</sub>(M) kon(l/Ms) kdis(l/s)
huPDL1 CTI-48 8.47E-10 7.20E+05 6.10E-04
msPDL1 CTI-48 N/A N/A N/A
cynoPDL1 CTI-48 5.55E-10 1.14E+06 6.35E-04
一个示例性抗-PD-L1抗体CTI-48的动力学值可以在表9中找到。试验结果示于图2中。
实施例7—抗体结合的亲和性
通常如之前所述进行ForteBio亲和性测量(例如参见Estep,P.等人,mAbs 5:270–278(2013))。简言之，通过将IgG在线加载于AHQ传感器上来进行ForteBio亲和性测量。将传感器在测试缓冲剂中离线平衡30分钟，然后在线监测60秒用于基线建立。将具有加载的IgG的传感器暴露于100nM抗原达5分钟；此后，将它们转移至测试缓冲剂中达5分钟，用于偏离率测量(off-rate measurement)。使用1:1结合模型，分析动力学。
表10
Ab名称 VH CDR3谱系 IgG K<sub>D</sub>(M)一价 kon(1/Ms) koff(1/s)
CTI-09 1 N.B.
CTI-48 1 8.24E-10 7.68E+05 6.33E-04
CTI-49 1 2.31E-09 7.28E+05 1.68E-03
CTI-76 1 8.24E-09 6.62E+05 5.45E-03
CTI-77 1 3.25E-09 5.44E+05 1.77E-03
CTI-78 1 3.46E-09 6.18E+05 2.14E-03
CTI-50 1 1.91E-09 7.94E+05 1.52E-03
CTI-07 2 7.97E-08 4.92E+05 3.92E-02
CTI-58 2 2.41E-08 4.61E+05 1.11E-02
临床对照mAb NA 9.5E-10
CTI-57 2 8.6E-10 5.2E+05 4.5E-04
CTI-97 1 1.82E-09 5.11E+05 9.28E-04
CTI-98 1 1.70E-09 5.02E+05 8.52E-04
用于多种示例性PD-L1抗体的结合值示于表10中(N.B.＝未结合)。
实施例8—抗-PD-L1抗体的ADCC活性
进行报告基因生物测试，以测定所公开的抗-PD-L1抗体的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。所述的测试使用SUDHL-1淋巴瘤细胞和供体PBMC。在1或3μg/ml浓度下检验多种抗体。
针对示例性抗-PD-L1抗体CTI-48示于图3中的本研究的结果在与所公开的抗体温育4小时后通过百分细胞毒性来表示。
实施例9—免疫阻断报告基因测试
使用PD1/PD-L1阻断测试试剂盒(Promega,CS187111)，在96孔板中进行免疫阻断测试。在所述的测试中，发生三个主要的事件。事件1：当改造的Jurkat PD-1效应器细胞和aAPC(人工抗原提呈细胞)PD-L1细胞通过TCR/TCR激活剂相互作用而参与时，发生TCR介导的NFAT激活。事件2：当不存在阻断抗体时，NFAT信号通过PD-1:PD-L1连接而受到抑制。事件3：通过加入抗-PD-1或抗-PDL1阻断抗体，回收NFAT信号。
在测试前一天，通过将2.5mL FBS加入22.5mL F-12中在用于解冻使用的PD-L1细胞的50mL圆锥管中制备20mL细胞回收介质(10％FBS/F-12)。将一小瓶解冻使用的PD-L1细胞(CS187103)由冰箱储存中取出，并转移至干冰上的工作台上。将小瓶在37℃的水浴中解冻，直至细胞恰好溶解(大约3-4分钟)。通过上下吸取，将细胞悬液在小瓶中温和地混合。将所有的细胞(0.5mL)都转移至装有14.5mL细胞回收介质的标记有“PD-L1细胞”的管中，然后温和地倒置。将细胞悬液转移至无菌试剂库中。立即使用多通道移液管，对测试平板而言，每个孔加入100μL细胞回收介质，至外部孔中。将平板在37℃下在CO2孵化器过夜温育。
在测试当天，制备新鲜的测试缓冲剂(RPMI 1640+1％FBS)，并在测试缓冲剂中，对各种测试抗体制备七点三倍系列稀释，最终浓度为2X。在测试平板上，由所有的孔中除去95μL介质，并将40μL系列稀释的测试抗体加入包含PD-L1细胞的孔中。将每孔80μL的测试缓冲剂加入各平板的外部孔中。
将解冻使用的PD-1效应器细胞(CS187105)转移至测试平板上，并将该平板在37℃下在CO2孵化器中温育6小时。在6小时诱导后，将测试平板由CO2孵化器中取出，并在环境温度下平衡5-10分钟。将80μL Bio-GloTM Reagent加入每个测试孔中，并将平板在环境温度下再温育5-10分钟。在POLARstar Omega平板读取器中在0.5秒积分时间下，测量荧光。
使用最终浓度为10μg/mL,3.33μg/mL,1.11μg/mL,0.37μg/mL,0.123μg/mL,0.041μg/mL和0.014μg/mL测试以下抗体：CTI-2,临床对照mAb,CTI-09,CTI-48,CTI-50,CTI-07和CTI-58。
示例性PD-L1抗体(包括临床对照mAb,CTI-48和CTI-49)的结果示于下表11中。
表11
临床对照mAb CTI-48 CTI-49
EC<sub>50</sub>,g/ml 9.213e-008 7.750e-008 9.191e-008
实施例10—PD-L1/B7.1抑制剂筛选测试
市售可得的测试试剂盒用于筛选和概括所公开的抗体的相互作用和PD-L1/B7.1相互作用。所述的试剂盒在96孔形式中包含生物素-标记的B7-1(CD80)、纯化的PD-L1、链霉亲和素-标记的HRP、以及用于100结合反应的测试缓冲剂。所述的试剂盒用于通过链霉亲和素-HRP检测生物素-标记的B7.1。
首先，将PD-L1涂敷在96孔板上。然后，将所公开的抗体、阳性对照、底物对照或孔板的任意一种加入各孔中，并温育，然后加入B7.1-生物素。最后，使用链霉亲和素-HRP处理平板，然后通过加入HRP底物，从而产生化学发光，其随后可以通过化学发光读取器测量。
在30μg/mL,10μg/mL,3.33μg/mL,1.11μg/mL,0.37μg/mL和0.123μg/mL浓度下，针对它们对PD-L1和B7.1的结合上的抑制作用，测试以下抗体：CTI-1,CTI-2,CTI-33,CTI-48和CTI-55。
示例性结果显示所公开抗体的结合抑制的IC50范围为0.1816至0.5056μg/mL。例如计算CTI-48的IC50为0.1816μg/mL。CTI-48与临床对照mAb的活性比较示于图5中。
实施例11—PD-L1抗体对IFN-γ产生的作用
将抗体按计量分配至混合的淋巴细胞反应(MLR)培养物中，从而测定所公开的抗体对IFN-γ产生的作用。在浓度为10μg/mL的抗体与MLR培养物中4天后，测定IFN-γ产生的倍数变化。示例性的结果(包括合适的同型对照(hIgG1)的那些)示于图6中。如图6所示，CTI-48诱导对临床对照mAb的相当的应答。此外，许多测试PD-L1抗体在IFN-γ产生中激发具有统计学意义的升高，包括CTI-33和CTI-55超过对照水平升高大约10倍。
上文借助于功能构建模块(示出指定的功能及其关系)描述本发明。为了便于描述，本发明已经任意的定义了这些功能构建模块的界限。备选的界限可以定义，只要指定的功能及其关系适当地实施即可。
具体实施方案的上述描述完全表明本发明的一般性质，使得其他人在不脱离本发明的一般概念的情况下，可以利用本领域技术范围内的知识，容易地修改和/或适应多种应用(例如具体的实施方案)，而无需过度的试验。因此，基于本发明提供的教导和指导，所述的适应和修改意图涵盖在所公开的实施方案的等价物的含义和范围内。应该理解的是，本发明的短语或术语是为了描述而不是限定，使得本说明书的术语或短语根据所述的教导和指导由技术人员解释说明。
本说明书中提及的所有专利和出版物都表明本发明公开所属技术领域那些普通技术人员的水平。所有的专利和出版物均以引用方式并入本文，如同每一份出版物都明确地且单独的表明以引用方式并入本文。
序列表
<110> TG治疗有限公司
理森制药股份公司
法国分馏及生物技术实验室
<120> 用于治疗血液学癌症的抗-CD20抗体
<130> 3261.00pc01
<150> 62/385,723
<151> 2016-09-09
<160> 88
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr
1 5
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Arg Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Gly Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Asp Tyr Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 5
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 6
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 7
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Ala Thr Ser
1
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Gln Gln Trp Thr Phe Asn Pro Pro Thr
1 5
<210> 9
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Phe Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Phe Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 10
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Gly Thr Phe Ser Arg Ser Ala Ile Ser
1 5
<210> 12
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Gly Thr Phe Ser Gly Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Gly Thr Phe Trp Arg Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Gly Thr Phe Gly Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Gly Thr Phe Gly Thr Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Gly Thr Phe Ser Pro Lys Ala Ile Ser
1 5
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Tyr Thr Leu Ser Ser His Gly Ile Thr
1 5
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 19
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 20
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
Val Ile Ile Pro Ile Trp Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 22
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
Gly Ile Tyr Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
Gly Ile Tyr Pro Arg Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 24
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Pro Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 25
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
Trp Ile Ser Ala His Ser Gly His Ala Ser Asn Ala Gln Lys Val Glu
1 5 10 15
Asp
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
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Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
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<211> 13
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
Ala Arg Val His Ala Ala Leu Tyr His Gly Met Asp Val
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
Ala Arg Val His Ala Ala Leu Tyr Tyr Gly Met Asp Val
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Asp Ser Asn Tyr Val Gln
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 32
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val His
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 34
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Asn Arg His Val Ile
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 36
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Trp Val
1 5 10
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<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 38
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 38
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 39
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 39
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
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<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 40
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
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Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 42
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 42
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys
20
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 43
Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val Ile Tyr
1 5 10 15
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<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 44
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser
1 5 10 15
Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
20 25 30
Tyr Cys
<210> 45
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 45
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
1 5 10
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<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 46
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
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50 55 60
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100 105 110
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115 120
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<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 47
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Arg Ser
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 49
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 49
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Trp Arg Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ile Pro Ile Trp Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 50
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Tyr Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 51
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Tyr Pro Arg Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 52
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Pro Lys
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Ile Pro Ile Phe Gly Pro Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 53
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 53
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Ser Cys Thr Arg Ser Ser Gly Ser Ile Asp Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val
35 40 45
Ile Tyr Glu Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly
65 70 75 80
Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser
85 90 95
Asn Asn Arg His Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 54
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 54
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 55
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 55
Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Arg Ser Leu Thr Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 56
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 56
Leu Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys
20
<210> 57
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 57
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
1 5 10 15
<210> 58
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 58
Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 59
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 59
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Ser Ser His
20 25 30
Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala His Ser Gly His Ala Ser Asn Ala Gln Lys Val
50 55 60
Glu Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 60
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 60
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Ser Ser His
20 25 30
Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Trp Ile Ser Ala His Ser Gly His Ala Ser Asn Ala Gln Lys Val
50 55 60
Glu Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
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Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Val His Ala Ala Leu Tyr His Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 61
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
Leu Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
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Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 62
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 62
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Arg Ser
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Glu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<210> 63
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 63
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Val Ile Ile Pro Ala Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<210> 64
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 64
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Trp Arg Tyr
20 25 30
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Gly Val Ile Ile Pro Ile Trp Gly Lys Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 65
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 65
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Ser Tyr
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<210> 66
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Gly Thr Tyr
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<210> 67
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 67
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Pro Lys
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<210> 68
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 68
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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65 70 75 80
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<210> 69
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
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tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca agtccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagaggcaga 300
cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 70
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc cgttcggcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagtt atcatccctg cgtttggtga ggcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagaggcaga 300
cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 71
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggta 60
tcatgcaagg cttctggagg caccttcagc gggtatgcta tctcttgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagtt atcatccctg cttttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggcaga 300
cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 72
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 72
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttctgg aggtatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagtt atcatcccta tctggggtaa agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggcaga 300
cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 73
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcggg agctatgcta tctcttgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atctatcctg cttttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagaggcaga 300
cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 74
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 74
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcggg acgtatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atctatccta ggtttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagaggcaga 300
cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 75
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 75
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc ccgaaggcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagtg atcatcccta tctttggtcc ggcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc tagaggcaga 300
cagatgttcg gtgcaggcat cgatttctgg ggccagggca ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 76
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 76
gaggttcagc tggtgcagtc tggaggtgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggtta cacccttagc agccatggta tcacctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctc acagtggtca cgcaagcaat 180
gcacagaagg tcgaggacag agtcaccatg accacagaca catccacgaa cacagcctac 240
atggagctga ggagcctgac agctgacgac acggcggtgt actactgcgc cagagtccat 300
gccgccttgt actacggtat ggacgtctgg gggcaaggga ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 77
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 77
gaggttcagc tggtgcagtc tggaggtgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggtta cacccttagc agccatggta tcacctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctc acagtggtca cgcaagcaat 180
gcacagaagg tcgaggacag agtcaccatg accacagaca catccacgaa cacagcctac 240
atggagctga ggagcctgac agctgacgac acggcggtgt actactgcgc cagagtccat 300
gccgccttgt accacggtat ggacgtctgg gggcaaggga ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 78
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 78
gaggttcagc tggtgcagtc tggaggtgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggtta cacccttagc agccatggta tcacctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctc acagtggtca cgcaagcaat 180
gcacagaagg tcgaggacag agtcaccatg accacagaca catccacgaa cacagcctac 240
atggagctga ggagcctgac agctgacgac acggcggtgt actactgcgc cagagtgtgg 300
agggccttgt accacggtat ggacgtctgg gggcaaggga ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 79
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 79
aattttatgc tgactcagcc ccactctgtg tcggagtctc cggggaagac ggtaaccatc 60
tcctgcaccc gcagcagtgg cagcattgac agcaactatg tgcagtggta ccagcagcgc 120
ccgggcagtg cccccaccac tgtgatctat gaggataacc aaagaccctc tggggtccct 180
gatcggttct ctggctccat cgacagctcc tccaactctg cctccctcac catctctgga 240
ctgaagactg aggacgaggc tgactactac tgtcagtctt atgatagcaa caataggcat 300
gtgatattcg gcggagggac caagctgacc gtccta 336
<210> 80
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 80
ttgtctgtgc tgactcagcc accctcagtg tcagtggccc caggacagac ggccaggatt 60
acctgtgggg gaaacaacat tggaagtaaa ggtgtgcact ggtaccagca gaagccaggc 120
caggcccctg tgctggtcgt ctatgatgat agcgaccggc cctcagggat ccctgagcga 180
ttctctggct ccaactctgg gaacacggcc accctgacca tcagcagggt cgaagccggg 240
gatgaggccg actattactg tcaggtgtgg gacagtagta gtgatcattg ggtgttcggc 300
ggagggacca agctgaccgt ccta 324
<210> 81
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 81
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Gln Met Phe Gly Ala Gly Ile Asp Phe Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 82
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 82
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Ser Ser His
20 25 30
Gly Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala His Ser Gly His Ala Ser Asn Ala Gln Lys Val
50 55 60
Glu Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val His Ala Ala Leu Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 83
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 83
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 84
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 84
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 85
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 85
Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Leu Arg His Val Ile
1 5 10
<210> 86
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 86
Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Ile Arg His Val Ile
1 5 10
<210> 87
<211> 34
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 87
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Trp
1 5 10 15
Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
20 25 30
Tyr Cys
<210> 88
<211> 34
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 88
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Val
1 5 10 15
Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
20 25 30
Tyr Cys

Claims (147)

1.一种用于治疗遭受慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试对象的方法，其包括在治疗阶段向所述的受试对象给予：
(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；
(ii)治疗有效量的ublituximab；以及
(iii)治疗有效量的抗-PD-1抗体。
2.权利要求1所述的方法，其中所述的抗-PD-1抗体为派姆单抗。
3.权利要求1或2所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。
4.权利要求2或3所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂、ublituximab和所述派姆单抗同时和/或依次给予所述的受试对象。
5.权利要求1,2,3或4的任意一项所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂每天以如下剂量给予：大约200至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg或者大约1200mg。
6.权利要求5所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂每天以大约800mg的剂量给予。
7.权利要求1-6的任意一项所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的。
8.权利要求7所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂被配制用于口服给予。
9.权利要求1-8的任意一项所述的方法，其中所述的ublituximab以如下剂量给予：每4至7周大约一次,每5至7周大约一次,每5至6周大约一次,每周大约一次,每2周大约一次,每3周大约一次,每4周大约一次,每5周大约一次,每6周大约一次或者每7周大约一次给予大约450至大约1200mg,大约450至大约1000mg,大约500至大约1200mg,大约500至大约1000mg,大约500至大约900mg,大约600至大约1200mg,大约600至大约1000mg,大约600至大约900mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约750mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg,大约1100mg或者大约1200mg。
10.权利要求9所述的方法，其中所述的ublituximab以每6周大约一次大约900mg的剂量给予。
11.权利要求9或10所述的方法，其中所述的第一剂量的ublituximab为在所述的治疗阶段开始后，在所述的第6周的第1天给予。
12.权利要求1-11的任意一项所述的方法，其中所述的ublituximab被配制用于静脉内输注。
13.权利要求1-12的任意一项所述的方法，其中所述的派姆单抗以如下剂量给予：每2至4周大约一次,每3至4周大约一次,或者每3周大约一次给予大约100至大约300mg,大约100至大约200mg,大约100mg,大约150mg,大约200mg或者大约250mg。
14.权利要求13所述的方法，其中所述的派姆单抗以每3周大约一次大约100mg或200mg的剂量给予。
15.权利要求13或14所述的方法，其中所述的第一剂量的派姆单抗以大约100mg的剂量给予。
16.权利要求1-15的任意一项所述的方法，其中所述的派姆单抗被配制用于静脉内输注。
17.权利要求1-16的任意一项所述的方法，其中所述的治疗阶段的持续时间为长达大约15周、长达大约14周、长达大约13周、或者长达大约12周。
18.权利要求17所述的方法，其中所述的治疗阶段的持续时间为大约12周。
19.权利要求1-18的任意一项所述的方法，其在所述的治疗阶段之前，进一步包括诱导阶段，其包括向所述的受试对象给予：
(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；以及
(ii)治疗有效量的ublituximab。
20.权利要求19所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。
21.权利要求19或20所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂和所述的ublituximab在所述的诱导阶段中同时和/或依次给予所述的受试对象。
22.权利要求19-21的任意一项所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的诱导阶段每天以如下剂量给予：大约200至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg或者大约1200mg。
23.权利要求22所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的诱导阶段每天以大约800mg的剂量给予。
24.权利要求19-23的任意一项所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的。
25.权利要求24所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的诱导阶段被配制用于口服给予。
26.权利要求19-25的任意一项所述的方法，其中所述的ublituximab在所述的诱导阶段以如下剂量给予：每1至3周大约一次、每1至2周大约一次、每1周大约一次、或者每2周大约一次给予大约450至大约1200mg,大约450至大约1000mg,大约600至大约1200mg,大约600至大约1000mg,大约600至大约900mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg或者大约900mg。
27.权利要求26所述的方法，其中所述的ublituximab在所述的诱导阶段一每1或2周大约一次大约900mg的剂量给予。
28.权利要求19-27的任意一项所述的方法，其中所述的ublituximab在所述的诱导阶段被配制用于静脉内输注。
29.权利要求19-28的任意一项所述的方法，其中所述的第一剂量的ublituximab在所述的诱导阶段的第1天给予。
30.权利要求29所述的方法，其中所述的第一剂量的ublituximab在所述的诱导阶段被分成在所述的诱导阶段中在2或3个连续天内给予的2或3个亚剂量，或者分成在2个连续天内给予的2个亚剂量。
31.权利要求30所述的方法，其中所述的第一亚剂量的ublituximab包含多达150mg的ublituximab。
32.权利要求30或31所述的方法，其中所述的第二亚剂量的ublituximab包含多达750mg的ublituximab。
33.权利要求19-32的任意一项所述的方法，其中所述的诱导阶段的持续时间为长达大约12周,长达大约11周,长达大约10周,长达大约9周或者长达大约8周。
34.权利要求33所述的方法，其中所述的诱导阶段的持续时间为大约8周。
35.权利要求1-34的任意一项所述的方法，其在所述的治疗阶段后，进一步包含维持阶段，其包括向所述的受试对象给予治疗有效量的所述的PI3-激酶δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。
36.权利要求35所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的维持阶段每天以如下剂量给予：大约200至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg或者大约1200mg。
37.权利要求36所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的维持阶段每天以大约800mg的剂量给予。
38.权利要求36或37所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的。
39.权利要求38所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的维持阶段被配制用于口服给予。
40.权利要求35-39的任意一项所述的方法，其中所述的维持阶段的持续时间为只要观察到临床益处即可，或者直至不可控的毒性或疾病进展发生。
41.权利要求40所述的方法，其中当疾病进展发生时，所述的维持阶段结束。
42.权利要求40或41所述的方法，其中所述的维持阶段的持续时间为至少3周。
43.权利要求1-42的任意一项所述的方法，其中所述的受试对象遭受复发-难治性CLL。
44.一种用于治疗遭受复发-难治性慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试对象的方法，其包括在治疗阶段向所述的受试对象给予：
(i)每日量的大约800mg的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；
(ii)每6周一次大约900mg的ublituximab，其中所述的第一剂量的ublituximab在所述的治疗阶段开始后，在所述的第6周的第1天给予；以及
(iii)每3周一次大约100mg或200mg派姆单抗，其中所述的第一剂量的派姆单抗在所述的治疗阶段开始后，在第1天给予；
其中所述的治疗阶段的持续时间为大约12周；以及
其中所述的PI3-激酶δ抑制剂、所述的ublituximab和所述的派姆单抗同时和/或依次给予所述的受试对象。
45.权利要求44所述的方法，其在所述的治疗阶段之前进一步包括诱导阶段，其包括向所述的受试对象给予：
(i)每日量的大约800mg的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；以及
(ii)每1或2周一次的大约900mg的ublituximab；其中所述的第一剂量的ublituximab在所述的诱导阶段的第1天给予；
其中所述的诱导阶段的持续时间为大约8周；以及
其中所述的PI3-激酶δ抑制剂和所述的ublituximab同时和/或依次给予所述的受试对象。
46.权利要求45所述的方法，其中所述的第一剂量的ublituximab在所述的诱导阶段被分成2个亚剂量，其中所述的第一亚剂量包含多达150mg的ublituximab；所述的第二亚剂量包含多达750mg的ublituximab；以及其中所述的第一和第二亚剂量分别在所述的诱导阶段的第1天和第2天给予。
47.权利要求44-46的任意一项所述的方法，其在所述的治疗阶段后进一步包括维持阶段，其包括每天向所述的受试对象给予大约800mg的PI3-激酶δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，其中所述的维持阶段的持续时间为至少3周。
48.权利要求44-47的任意一项所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的，并且被配制用于口服给予。
49.权利要求44-48的任意一项所述的方法，其中所述的ublituximab和所述的派姆单抗被配制用于静脉内输注。
50.一种用于治疗遭受复发-难治性CLL的受试对象的试剂盒，该试剂盒包含：
(i)单剂量或多剂量的ublituximab；
(ii)单剂量或多剂量的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；以及
(iii)单剂量或多剂量的抗-PD-1抗体；以及
(iv)根据权利要求1-49的任意一项所述的方法，使用所述的ublituximab、所述的PI3-激酶δ抑制剂和所述的抗-PD-1抗体的说明书。
51.权利要求50所述的试剂盒，其中所述的抗-PD-1抗体为派姆单抗。
52.一种用于治疗遭受血液学癌症的受试对象的方法，其包括在治疗阶段向所述的受试对象给予：
(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂；
(ii)治疗有效量的抗-CD20抗体；以及
(iii)治疗有效量的抗-PD-1或抗-PD-L1抗体。
53.权利要求52所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。
54.权利要求53所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。
55.权利要求52-54的任意一项所述的方法，其中所述的抗-CD20抗体为ublituximab，或者与ublituximab相同的抗原表位结合的抗体片段。
56.权利要求52-55的任意一项所述的方法，其中所述的抗-PD-1抗体为nivolumab,派姆单抗或pidilizumab。
57.权利要求52-55的任意一项所述的方法，其中所述的抗-PD-L1抗体为CTI-07,CTI-09,CTI-48,CTI-49,CTI-50,CTI-76,CTI-77,CTI-78,CTI-57,CTI-58,CTI-97,CTI-98,CTI-92,CTI-95,CTI-93,CTI-94,CTI-96,durvalumab,BMS-936559,atezolizumab或者avelumab。
58.权利要求52-57的任意一项所述的方法，其中所述的血液学癌症为淋巴瘤,白血病或者骨髓瘤。
59.权利要求58所述的方法，其中所述的血液学癌症为急性淋巴细胞白血病(ALL),急性髓系白血病(AML),慢性淋巴细胞白血病(CLL),小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL),多发性骨髓瘤(MM),非Hodgkin淋巴瘤(NHL),外套细胞淋巴瘤(MCL),滤泡性淋巴瘤(FL),Waldenstrom巨球蛋白血症(WM),弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL),边缘区淋巴瘤(MZL),毛细胞白血病(HCL),Burkitt淋巴瘤(BL)和Richter转化。
60.权利要求58或59所述的方法，其中所述的血液学癌症表达PD-1或PD-L1。
61.权利要求58-60的任意一项所述的方法，其中所述的血液学癌症为复发-难治性疾病。
62.权利要求58-61的任意一项所述的方法，其中所述的血液学癌症为复发-难治性CLL。
63.一种治疗遭受血液学癌症的受试对象的方法，其包括在治疗阶段向所述的受试对象给予：
(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；
(ii)治疗有效量的ublituximab；以及
(iii)治疗有效量的抗-PD-1抗体或抗-PD-L1抗体。
64.权利要求63所述的方法，其中所述的抗-PD-1抗体为nivolumab,派姆单抗或者pidilizumab。
65.权利要求63所述的方法，其中所述的抗-PD-L1抗体为CTI-07,CTI-09,CTI-48,CTI-49,CTI-50,CTI-76,CTI-77,CTI-78,CTI-57,CTI-58,CTI-97,CTI-98,CTI-92,CTI-95,CTI-93,CTI-94,CTI-96,durvalumab,BMS-936559,atezolizumab或者avelumab。
66.权利要求1-49或52-65的任意一项所述的方法，其中所述的受试对象为人类。
67.权利要求52-66的任意一项所述的方法，其在所述的治疗阶段之前，进一步包括向所述的受试对象给予：
(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；以及
(ii)治疗有效量的ublituximab。
68.权利要求67所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。
69.权利要求52-68的任意一项所述的方法，其在所述的治疗阶段后，进一步包括维持阶段，其包括向所述的受试对象给予治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。
70.权利要求52-69的任意一项所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂、所述的ublituximab、以及所述的抗-PD-1抗体or抗-PD-L1抗体同时和/或依次给予所述的受试对象。
71.权利要求1-49或52-70的任意一项所述的方法，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)。
72.权利要求52-55,57-63或65-71的任意一项所述的方法，其中所述的抗-PD-L1抗体为CTI-48。
73.一种用于治疗遭受血液学癌症的受试对象的试剂盒，该试剂盒包含：
(i)单剂量或多剂量的ublituximab；
(ii)单剂量或多剂量的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；
(iii)单剂量或多剂量的抗-PD-1或抗-PD-L1抗体；以及
(iv)根据权利要求52-71的任意一项所述的方法，使用所述的ublituximab、所述的PI3-激酶δ抑制剂、以及所述的抗-PD-1或抗-PD-L1抗体的说明书。
74.权利要求73所述的试剂盒，其中其中所述的抗-PD-1抗体为派姆单抗。
75.权利要求73所述的试剂盒，其中其中所述的抗-PD-L1抗体为atezolizumab。
76.权利要求73-75的任意一项所述的试剂盒，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。
77.权利要求50-51或73-76的任意一项所述的试剂盒，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)。
78.一种在治疗遭受慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试对象的方法中使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其包括在治疗阶段向所述的受试对象给予：
(i)治疗有效量的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；
(ii)治疗有效量的ublituximab；以及
(iii)治疗有效量的抗-PD-1抗体。
79.根据权利要求78使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的抗-PD-1抗体为派姆单抗。
80.根据权利要求78或79使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。
81.根据权利要求79或80使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂、所述的ublituximab和所述的派姆单抗同时和/或依次给予所述的受试对象。
82.根据权利要求78,79,80或81的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂每天以如下剂量给予：大约200至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg或者大约1200mg。
83.根据权利要求82使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂每天以大约800mg剂量给予。
84.根据权利要求78-83使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的。
85.根据权利要求84使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂被配制用于口服给予。
86.根据权利要求78-85使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中以如下剂量给予ublituximab：每4至7周大约一次,每5至7周大约一次,每5至6周大约一次,每1周大约一次,每2周大约一次,每3周大约一次,每4周大约一次,每5周大约一次,每6周大约一次或者每7周大约一次给予大约450至大约1200mg,大约450至大约1000mg,大约500至大约1200mg,大约500至大约1000mg,大约500至大约900mg,大约600至大约1200mg,大约600至大约1000mg,大约600至大约900mg,大约500mg,大约600mg,大约700mg,大约750mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg,大约1100mg或者大约1200mg。
87.根据权利要求86使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中每6周大约一次给予剂量为大约900mg的ublituximab。
88.根据权利要求86或87使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的第一剂量的ublituximab在所述的治疗阶段开始后，在所述的第6周的第1天给予。
89.根据权利要求78-88的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的ublituximab被配制用于静脉内输注。
90.根据权利要求78-89的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的派姆单抗以如下剂量给予：每2至4周大约一次，每3至4周大约一次或者每3周大约一次给予大约100至大约300mg,大约100至大约200mg,大约100mg,大约150mg,大约200mg或者大约250mg。
91.根据权利要求90使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的派姆单抗每3周大约一次以大约100mg或200mg的剂量给予。
92.根据权利要求90或91使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的第一剂量的派姆单抗以大约100mg的剂量给予。
93.根据权利要求78-92的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的派姆单抗被配制用于静脉内输注。
94.根据权利要求78-93的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的治疗阶段的持续时间为长达大约15周,长达大约14周,长达大约13周或者长达大约12周。
95.根据权利要求94使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的治疗阶段的持续时间为大约12周。
96.根据权利要求78-95的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其在所述的治疗阶段之前，进一步包括诱导阶段，其包括向所述的受试对象给予：
(i)治疗有效量的所述的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；以及
(ii)治疗有效量的ublituximab。
97.根据权利要求96使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。
98.根据权利要求96或97使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂和ublituximab在所述的诱导阶段中同时和/或依次给予所述的受试对象。
99.根据权利要求96-98的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的诱导阶段每天以如下剂量给予：大约200至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg或者大约1200mg。
100.根据权利要求99使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的诱导阶段每天以大约800mg的剂量给予。
101.根据权利要求96-100的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的。
102.根据权利要求101使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的诱导阶段被配制用于口服给予。
103.根据权利要求96-102的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的ublituximab在所述的诱导阶段以如下剂量给予：每1至3周大约一次,每1至2周大约一次,每1周大约一次或者每2周大约一次给予大约450至大约1200mg,大约450至大约1000mg,大约600至大约1200mg,大约600至大约1000mg,大约600至大约900mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg或者大约900mg。
104.根据权利要求103使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的ublituximab在所述的诱导阶段每1或2周大约一次给予大约900mg的剂量。
105.根据权利要求96-104的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的ublituximab在所述的诱导阶段被配制适用于静脉内输注。
106.根据权利要求96-105的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的第一剂量的ublituximab在所述的诱导阶段的第1天给予。
107.根据权利要求106使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的第一剂量的ublituximab在所述的诱导阶段被分成在所述的诱导阶段在2或3个连续天内给予的2或3个亚剂量，或者被分成在2个连续天内给予的2个亚剂量。
108.根据权利要求107使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的第一亚剂量的ublituximab包含多达150mg的ublituximab。
109.根据权利要求107或106使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的第二亚剂量的ublituximab包含多达750mg的ublituximab。
110.根据权利要求96-109的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的诱导阶段的持续时间为长达大约12周,长达大约11周,长达大约10周,长达大约9周或者长达大约8周。
111.根据权利要求110使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的诱导阶段的持续时间为大约8周。
112.根据权利要求78-111的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其在所述的治疗阶段后，进一步包括维持阶段，其包括向所述的受试对象给予治疗有效量的所述的PI3-激酶δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。
113.根据权利要求112使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的维持阶段每天以如下剂量给予：大约200至大约1200mg,大约400至大约1000mg,大约400至大约800mg,大约600mg,大约700mg,大约800mg,大约900mg,大约1000mg或者大约1200mg。
114.根据权利要求113使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的维持阶段每天以大约800mg的剂量给予。
115.根据权利要求113或114使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的。
116.根据权利要求115使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂在所述的维持阶段被配制用于口服个月。
117.根据权利要求112-120的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的维持阶段的持续时间为只要观察到临床益处即可，或者直至不可控的毒性或疾病进展发生。
118.根据权利要求117使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中当疾病进展发生时，所述的维持阶段结束。
119.根据权利要求117或118使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的维持阶段的持续时间为至少3周。
120.根据权利要求78-119的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其所述的受试对象遭受复发-难治性CLL。
121.一种用于治疗遭受复发-难治性慢性淋巴细胞白血病(CLL)的受试对象的方法的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其包括在治疗阶段向所述的受试对象给予：
(i)每日量为大约800mg的所述的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；
(ii)每6周一次大约900mg的ublituximab，其中所述的第一剂量的ublituximab在所述的治疗阶段开始后的第6周的第1天给予；以及
(iii)每3周一次给予大约100mg或200mg的派姆单抗，其中所述的第一剂量的派姆单抗在所述的治疗阶段开始时的第1天给予；
其中所述的治疗阶段的持续时间为大约12周；以及
其中所述的PI3-激酶δ抑制剂、所述的ublituximab和所述的派姆单抗同时和/或依次给予所述的受试对象。
122.根据权利要求121使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其在所述的治疗阶段之前，进一步包括诱导阶段，其包括向所述的受试对象给予：
(i)每日量为大约800mg的所述的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；以及
(ii)每1或2周一次大约900mg的ublituximab，其中所述的第一剂量的ublituximab在所述的诱导阶段的第1天给予；
其中所述的诱导阶段的持续时间为大约8周；以及
其中所述的PI3-激酶δ抑制剂和所述的ublituximab同时和/或依次给予所述的受试对象。
123.根据权利要求122使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的第一剂量的ublituximab在所述的诱导阶段被分成2个亚剂量，其中所述的第一亚剂量包含多达150mg的ublituximab；所述的第二亚剂量包含多达750mg的ublituximab；以及其中所述的第一和第二亚剂量分别在所述的诱导阶段的第1天和第2天给予。
124.根据权利要求121-123的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其在所述的治疗阶段之后，进一步包括维持阶段，其包括向所述的受试对象每天给予大约800mg所述的PI3-激酶δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药，其中所述的维持阶段的持续时间为至少3周。
125.根据权利要求121-124的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂是微粒化的，并且被配制用于口服给予。
126.根据权利要求121-125的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的ublituximab和所述的派姆单抗被配制用于静脉内输注。
127.一种在治疗遭受血液学癌症的受试对象的方法中使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的方法包括在治疗阶段向所述的受试对象给予：
(i)治疗有效量的所述的PI3-激酶δ抑制剂；
(ii)治疗有效量的抗-CD20抗体；以及
(iii)治疗有效量的抗-PD-1或抗-PD-L1抗体。
128.根据权利要求127使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。
129.根据权利要求128使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。
130.根据权利要求127-129的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的抗-CD20抗体为ublituximab，或者与ublituximab相同的抗原表位结合的抗体片段。
131.根据权利要求127-130的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的抗-PD-1抗体为nivolumab,派姆单抗或者pidilizumab。
132.根据权利要求127-130的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的抗-PD-L1抗体为CTI-07,CTI-09,CTI-48,CTI-49,CTI-50,CTI-76,CTI-77,CTI-78,CTI-57,CTI-58,CTI-97,CTI-98,CTI-92,CTI-95,CTI-93,CTI-94,CTI-96,durvalumab,BMS-936559,atezolizumab或者avelumab。
133.根据权利要求127-132的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的血液学癌症为淋巴瘤,白血病或者骨髓瘤。
134.根据权利要求133使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的血液学癌症为急性淋巴细胞白血病(ALL),急性髓系白血病(AML),慢性淋巴细胞白血病(CLL),小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL),多发性骨髓瘤(MM),非Hodgkin淋巴瘤(NHL),外套细胞淋巴瘤(MCL),滤泡性淋巴瘤(FL),Waldenstrom巨球蛋白血症(WM),弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL),边缘区淋巴瘤(MZL),毛细胞白血病(HCL),Burkitt淋巴瘤(BL)和Richter转化。
135.根据权利要求133或134使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的血液学癌症表达PD-1或PD-L1。
136.根据权利要求133-135的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的血液学癌症为复发-难治性疾病。
137.根据权利要求133-136的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的血液学癌症为复发-难治性CLL。
138.一种治疗遭受血液学癌症的受试对象的方法，其包括在治疗阶段向所述的受试对象给予：
(i)治疗有效量的所述的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；
(ii)治疗有效量的ublituximab；以及
(iii)治疗有效量的抗-PD-1抗体或抗-PD-L1抗体。
139.根据权利要求138使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的抗-PD-1抗体为nivolumab,派姆单抗或者pidilizumab。
140.根据权利要求138使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的抗-PD-L1抗体为CTI-07,CTI-09,CTI-48,CTI-49,CTI-50,CTI-76,CTI-77,CTI-78,CTI-57,CTI-58,CTI-97,CTI-98,CTI-92,CTI-95,CTI-93,CTI-94,CTI-96,durvalumab,BMS-936559,atezolizumab或者avelumab。
141.根据权利要求78-140的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的受试对象为人类。
142.根据权利要求127-141的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其在所述的治疗阶段之前，进一步包括诱导阶段，其包括向所述的受试对象给予：
(i)治疗有效量的所述的PI3-激酶δ抑制剂，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为(S)-2-(1-(4-氨基-3-(3-氟代-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-6-氟代-3-(3-氟代苯基)-4H-色烯-4-酮，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药；以及
(ii)治疗有效量的ublituximab。
143.根据权利要求142使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为对甲苯磺酸(PTSA)盐的形式。
144.根据权利要求127-143的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其在所述的治疗阶段之后，进一步包括维持阶段，其包括向所述的受试对象给予治疗有效量的所述的PI3-激酶δ抑制剂，或者其药物可接受的盐、溶剂化物或前药。
145.根据权利要求127-144的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂、所述的ublituximab、以及所述的抗-PD-1抗体或抗-PD-L1抗体同时和/或依次给予所述的受试对象。
146.根据权利要求127-145的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的PI3-激酶δ抑制剂为TGR-1202(umbralisib甲苯磺酸盐)。
147.根据权利要求127-130,132-138或者140-146的任意一项使用的PI3-激酶δ抑制剂和/或ublituximab，其中所述的抗-PD-L1抗体为CTI-48。
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