JP2018523652A - Ｐｄ−１アンタゴニストとｅｇｆｒ阻害剤の組み合わせ物 - Google Patents

Abstract

本発明は、ＰＤ−１アンタゴニストおよびＥＧＦＲ阻害剤を含む医薬組成物に関する。本組み合わせ物は、がんを治療するために共同的に治療上有効な量で、独立して、または別々に投与することができる。本発明はまた、薬剤を製造するためのこのような組み合わせ物の使用、医薬品としてのこのような組み合わせ物の使用、このような組み合わせ物を含む部分のキットおよびこのような組み合わせ物による治療方法を提供する。

Description

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され全体を参考として本明細書に組み込んだ配列リストを含有する。２０１６年７月２５日に作成された前記ＡＳＣＩＩ文書はＰＡＴ０５７００１＿ＳＬ．ｔｘｔの名称で、６４０３４バイトの大きさである。

開示の分野
本発明は、ＰＤ−１アンタゴニストおよびＥＧＦＲ阻害剤を含む医薬組成物に関する。本組み合わせ物は、肺がん、例えば、扁平上皮肺がんおよびＮＳＣＬＣ、結腸直腸がん、および乳がん、例えば、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）に共同的に治療上有効な量で、独立して、または別々に投与する。本発明はさらに、薬剤を製造するためのこのような組み合わせ物の使用、医薬品としてのこのような組み合わせ物の使用、このような組み合わせ物を含む部分のキット、本明細書で開示した組み合わせ物を使用する投与レジメン、ならびに組み合わせ物が関与する、肺がん、例えば、扁平上皮肺がんおよびＮＳＣＬＣ、結腸直腸がん、および乳がん、例えば、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）の治療方法に関する。

開示の背景
肺がんは、世界的に見て最も一般的ながんであり、肺がんの症例の約８５％をＮＳＣＬＣが占める。西欧諸国では、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）患者の１０〜１５％が、腫瘍に上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）変異を発現しており、アジア諸国では３０〜４０％もの高い割合が報告されたことがある。主要な発がん性ＥＧＦＲ変異（Ｌ８５８Ｒおよびｅｘ１９ｄｅｌ）が、ＥＧＦＲ ＮＳＣＬＣの約９０％の原因である。

古典的なＥＧＦＲ変異（Ｌ８５８ＲおよびＥｘ１９Ｄｅｌ）の他に、ＥＧＦＲエキソン２０挿入変異（Ｅｘ２０ｉｎｓ）が患者のＥＧＦＲ変異全体の４〜１０％を占めていると言われ、古典的（Ｌ８５８Ｒおよびｅｘ１９ｄｅｌ）ＥＧＦＲ変異から３番目に大きいＥＧＦＲ変異患者集団である。

ＥＧＦＲが変異した患者には、第１の療法としてＥＦＧＲ阻害剤を投与する。しかし、ほとんどの患者が、全般的に１０から１４カ月以内に、後天的抵抗性を獲得する。エルロチニブおよびゲフィニティブなどの可逆的な第一世代ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）で治療した、主要なＥＧＦＲ変異を有するＮＳＣＬＣ患者の最高５０％において、続発的に「ゲートキーパー」Ｔ７９０Ｍ変異が生じる。

第二世代ＥＧＦＲ ＴＫＩ（アファチニブおよびダコミチニブなど）は、この抵抗性機構を打破しようとして開発された。これらは、ＥＧＦＲ ＡＴＰ部位のシステイン７９７に共有結合する不可逆的薬剤で、前臨床モデルにおいて［Ｌ８５８Ｒ、ｅｘ１９ｄｅｌ］および後天的Ｔ７９０Ｍ変異の両方を活性化する効力がある。しかし、随伴する野生型（ＷＴ）ＥＧＦＲ阻害によって重篤な有害作用が引き起こされるために、臨床的有効性は限定されることがわかった。

このことは、ＷＴ ＥＧＦＲを温存しながら、ＥＧＦＲ変異［Ｌ８５８Ｒ、ｅｘ１９ｄｅｌ］および後天的Ｔ７９０Ｍを活性化するために比較的同等の効力も有する第三世代ＥＧＦＲ ＴＫＩの開発を導いた。こうしてＡＺＤ９２９１（メレレチニブ）およびＣＯ−１６８６（ロシレチニブ）などの第三世代ＥＦＧＲ ＴＫＩの臨床開発が開始し、当初は大いに見込みがあることが示された(例えば、“AZD9291 in EGFR Inhibitor-Resistant Non-Small-Cell Lung Cancer”, Hanne et al, N Engl J Med, 2015; 372; 1689-99 および“Rociletinib in EGFR-Mutated Non-Small-Cell Lung Cancer”, Sequist et al, J Med, 2015; 372; 1700-9を参照のこと)。また、“ASP8273, a novel mutant-selective irreversible EGFR inhibitor, inhibits growth of non-small cell lung cancer (NSCLC) cells with EGFR activating and T790M resistance mutations “Sakagami et al, AACR; Cancer Res 2014;74; 1728を参照のこと。

しかし、ＥＧＦＲ阻害剤による治療が全体的な生存の延長に明確につながることは示されなかった。

がんを治療するために、近年抗腫瘍免疫を増強する薬剤が開発されている。しかし、これらの治療は全種類のがんに有効ではなく、応答は長続きしないことが多く、多くの患者は治療によってほとんどまたは全く利益を受けない。例えば、肺がん、特に、ＮＳＣＬＣにおけるＰＤ−１阻害剤の活性は、今までのところ少数の患者に限定されている。したがって、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１療法などの免疫療法に抵抗性または難治性のがんに対して、さらなる治療選択肢を開発することが必要である。このような療法の例には、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブおよびＭＥＤＩ４７３６による療法が含まれる。

乳がんは、世界的に見て２番目に最も一般的ながんで、２０１２年の新たな症例数は約１７０万人で、がんによる最も一般的な死因の５番目で、約５２１，０００人が亡くなっている。これらの症例のうち約１５％が、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体（ＰＲ）またはＨＥＲ２を発現しないトリプルネガティブである。したがって、これらの患者は、その他の乳がんサブタイプの患者に利用可能な標的療法によって利益を得られない。トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）は、進行性の疾患であり、療法後の転帰は不良である。

結腸直腸がん（ＣＲＣ）は、世界的に見て３番目に最も一般的ながんで、２０１２年に約１４０万人が新たに診断されており、がんによる最も一般的な死因の４番目で、６９４，０００人が亡くなっている。ＣＲＣの患者の転帰は、腫瘍中の免疫浸潤と関係があり、ＣＲＣは免疫応答を刺激する療法によって利益を得ることができる。しかし、ミスマッチ修復が不十分な集団を除いても、プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）のチェックポイント阻害剤の予備実験は不本意であった。有効性の欠如の理由ははっきりしない。

したがって、扁平上皮肺がんおよびＮＳＣＬＣなどの肺がん、結腸直腸がんならびに乳がん、特にトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）の患者のために、より有効な治療選択肢が依然として必要とされている。抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１療法などの免疫療法に抵抗性または難治性であることがわかった、扁平上皮肺がんおよびＮＳＣＬＣなどの肺がん、結腸直腸がんならびに乳がん、特にトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）のがんのための治療選択肢も必要とされている。

開示の概要
ＴＥＣファミリータンパク質チロシンキナーゼＩＴＫ、ＲＬＫおよびＴＥＣは、Ｔ細胞活性化の制御および極性化に関与するＴ細胞受容体シグナル伝達の重要な成分であることが同定された。機能研究によって、ＴＥＣキナーゼは、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞分化をコントロールし、エフェクター機能を促進する経路の重要な媒介物であることが示された。ＩＴＫは、Ｔ細胞に特異的で、Ｔｈ２分化に不可欠である。ＴＥＣキナーゼは、現在では、極性化したＴ細胞応答の制御に治療上の可能性を引き起こすＴ細胞機能に重要な調節因子として浮上してきた。

化合物Ａ、すなわち、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミドは、ＴＥＣファミリーのキナーゼ、特に、ＩＴＫに対する交差反応性のために免疫調節機能を有することが見いだされた。ＩＴＫが発現するとＴｈ２細胞分化を制御する。ＴＥＣキナーゼ、特にＩＴＫを阻害すると、Ｔｈ２からＴｈ１細胞に平衡が傾くことがある。特に、本明細書で開示した抗体分子などのその他の免疫調節因子と組み合わせることで、化合物ＡによってＴｈ２からＴｈ１に微小環境が偏ると、患者によっては抗腫瘍性免疫応答が改善することがある。

したがって、本発明は、特定のがんの治療のために有利な効果をもたらすことができるＥＧＦＲ阻害剤とプログラム細胞死１（ＰＤ−１）アンタゴニストとの新規組み合わせ物を提供する。したがって、本発明は、がんに罹患している患者にとって安全で有効な治療を提供する療法を提供する。患者が可能な限り長くこのような治療に肯定的に反応し続けることも重要である。ＥＧＦＲ阻害剤およびプログラム細胞死１（ＰＤ−１）アンタゴニストの組み合わせ物は、扁平上皮肺がんおよびＮＳＣＬＣなどの肺がん、結腸直腸がんならびに乳がん、特にトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）の治療に特に有用であり得る。

本発明は、（ａ）表１で記載したようなＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−ＥのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ならびに表１で記載したようなＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−ＥのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、ならびにｉｉ）（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩を含むヒトプログラム細胞死−１（ＰＤ−１）アンタゴニストに結合することができる単離された抗体分子を含む医薬組み合わせ物を提供する。化合物Ａの有用な塩は、その塩酸塩またはメシル酸塩である。化合物Ａはまた、遊離型（すなわち、塩ではない）であってもよい。

本発明はまた、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１療法などの免疫療法に抵抗性、再発性または難治性であることがわかった、肺がん（例えば、扁平上皮肺がんおよびＮＳＣＬＣ）、結腸直腸がんおよび乳がん（特に、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ））などのがんの治療に有用な前述の医薬組み合わせ物を提供する。これらの療法の例には、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブおよびＭＥＤＩ４７３６による療法が含まれる。

本明細書で記載した医薬組み合わせ物は、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１療法などの免疫療法に抵抗性または難治性であることがわかった、扁平上皮肺がんおよびＮＳＣＬＣなどの肺がん、結腸直腸がんならびに乳がん、特にトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）などのがんの治療のために治療上有効な量を含む。これらの療法の例には、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブおよびＭＥＤＩ４７３６による療法が含まれる。

別の態様では、本発明は、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１療法などの免疫療法に抵抗性または難治性であることがわかった、扁平上皮肺がんおよびＮＳＣＬＣなどの肺がん、結腸直腸がんならびに乳がん（特にトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ））などのがんの治療のための薬剤を製造するための本明細書で記載した医薬組み合わせ物の使用を含む。これらの療法の例には、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブおよびＭＥＤＩ４７３６による療法が含まれる。

本明細書で記載した医薬組み合わせ物に関与する新規投薬レジメンも提供する。

抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅは、好ましくは、一定または固定用量で投与または使用する。

したがって、一態様では、本発明は、本明細書で記載した医薬組み合わせ物の対象への投与を含み、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅを約３００ｍｇから４００ｍｇの用量で３週間に１回または４週間に１回投与する、本明細書で記載したがんを治療する方法を取り上げる。特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅを約３００ｍｇの用量で３週間に１回投与する。その他の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅを好ましくは約４００ｍｇの用量で４週間に１回投与する。

抗ＰＤ−１抗体分子の一例の同じ用量を投与されている患者の様々な体重に対する予測Ｃトラフ（Ｃｍｉｎ）濃度を示した図である。抗ＰＤ−１抗体分子の２つのレジメンの体重対一定／固定用量投与で予測された平均定常状態Ｃ_トラフの比較を示した図である。 （集団または個体ベースの）Ｃｍｉｎ濃度の測定濃度対モデル予測濃度を示した図である。 薬物動態を分析するために使用したモデルの累積、時間経過および対象内変動を示した図である。影のある領域は９０％予測区間を表し、実線は各時点の予測平均であり、黒点は測定された薬物動態データを表す。 化合物Ａ（ＥＧＦ８１６としても知られている）、イブルチニブ、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、化合物Ａ（ＥＧＦ８１６）と抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ物、またはイブルチニブおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ物によって治療した後の、Ａ２０リンパ腫同種移植を有するマウスの生存パーセントを示した図である。 化合物Ａ（ＥＧＦ８１６としても知られている）、イブルチニブ、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、ＥＧＦ８１６と抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ物、またはイブルチニブおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体の組み合わせ物によって治療した後の、Ａ２０リンパ腫同種移植を有するマウスの平均腫瘍体積を示した図である。横棒は、ＥＧＦ８１６およびイブルチニブによる治療期間を示す。矢印は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与したときを示す。

開示の具体的な記載
がん、特に固形腫瘍を治療するために使用することができる治療上有効な組み合わせ物が必要とされている。本発明は、がんを治療するために使用することができる化合物Ａと表1に示したような抗ＰＤ−１抗体との組み合わせ物を対象とする。理論に縛られることは望まないが、特定のがんを治療するために本明細書で開示した新規な組み合わせ物の使用は、Ｔ細胞抗腫瘍応答をレスキューし、Ｔ細胞の内在性抗腫瘍応答を拡大する免疫応答に影響を及ぼすので、有利であると考えられる。Ｔ細胞は活性化されると表面上でのＰＤ−１の発現が増加し、ネガティブなシグナルを受けることができるようになり、それによってＴ細胞応答が阻害される。腫瘍細胞は、腫瘍に対するＴ細胞応答を早々に停止させるＰＤ−Ｌ１などのＰＤ−１の結合相手を発現することによってこの系を利用する。本発明の組み合わせ物では、抗ＰＤ１抗体分子はＴ細胞上のＰＤ−１を認識して結合し、それによって腫瘍細胞がＰＤ−１に結合するのを妨害し、Ｔ細胞活性を抑制する。抗ＰＤ−１抗体分子はＴ細胞に結合するがＴ細胞機能は妨害せず、したがって、Ｔ細胞が腫瘍殺滅効果を保持していることは確かである。

化合物Ａは、活性化している後天的抵抗性変異体（Ｌ８５８Ｒ、ｅｘ１９ｄｅｌおよびＴ７９０Ｍ）を選択的に阻害する一方、ＷＴ ＥＧＦＲを温存する、不可逆的な共有結合標的化ＥＧＦＲ阻害剤である（Jia et al, Cancer Res October 1, 2014 74; 1734を参照のこと）。化合物Ａは、臨床上適当な有効濃度でＷＴ ＥＧＦＲ阻害が示されないＥＧＦＲ変異体（Ｌ８５８Ｒ、ｅｘ１９ｄｅｌおよびＴ７９０Ｍ）がんモデル（インビトロおよびインビボ）において著しい有効性を示した。

化合物Ａは、インビボにおいて、ＥＧＦＲが活性化し抵抗性であるいくつかの腫瘍モデルで、強い腫瘍退縮を示した。これらには、適当な臨床の場を表すＨＣＣ８２７（ｅｘ１９ｄｅｌ）、Ｈ３２５５（Ｌ８５８Ｒ）およびＨ１９７５（Ｌ８５８Ｒ；Ｔ７９０Ｍ）が含まれる。モデル全てにおいて、化合物Ａは用量に依存して腫瘍増殖を阻害し、忍容性の良好な用量で確立された腫瘍の退縮を実現した。化合物Ａは、公知のＥＧＦＲによって影響を受けたがんを有するヒトにおいて抗腫瘍活性を改善することが予測される。

本明細書で論じたように、化合物Ａはまた、免疫調節能力を有することが見いだされた。したがって、化合物Ａはより有効な抗腫瘍免疫応答を刺激することが期待される。したがって、抗腫瘍免疫応答の増強は、本明細書で記載した疾患全体に有益であることが期待される。

組み合わせた低分子標的免疫療法の取り組みは、がん、例えば、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１療法などの免疫療法に抵抗性または難治性であることがわかった、扁平上皮肺がんおよびＮＳＣＬＣなどの肺がん、結腸直腸がんならびに乳がん、特にトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）に罹患した患者のために、扁平上皮肺がんおよびＮＳＣＬＣなどの肺がん、結腸直腸がんならびに乳がん、特にトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）においても、改善された持続療法などの臨床上の利益を提供することができる。これらの療法の例には、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブおよびＭＥＤＩ４７３６による療法が含まれる。

ＥＧＦＲ阻害剤
本発明は、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩の使用に関する。化合物Ａはまた、コード「ＥＧＦ８１６」としても知られ、本明細書では称されている。化合物Ａの特に有用な塩は、そのメシル酸塩である。内容を参考として本明細書に組み込んだ国際公開第２０１３／１８４７５７号パンフレットは、化合物Ａ、その調製方法および化合物Ａを含む医薬組成物について述べている。化合物Ａは以下の構造を有する：

化合物Ａは、遊離型（すなわち、塩ではない）であってもよい。あるいは、化合物Ａは塩として存在していてもよい。化合物Ａは、塩酸塩またはメシル酸塩（メチルスルホン酸塩）、より好ましくはモノメシル酸塩として存在していてもよい。前記メシル酸塩は、アモルファスまたは結晶状態であってもよい。化合物Ａの特に有用な塩型は、そのモノメシル酸塩３水和物である。化合物Ａの遊離型、塩型および医薬組成物は、国際出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１４／０６６４７５に記載されており、国際公開第２０１５／０８３０５９号パンフレットとして公開されている。

化合物Ａはまた、ＴＥＣファミリーのキナーゼの１つまたは複数のキナーゼを阻害する。Ｔｅｃファミリーキナーゼには、例えば、ＩＴＫ、ＢＭＸ、ＴＥＣ、ＲＬＫおよびＢＴＫが含まれ、Ｔ細胞受容体およびケモカイン受容体シグナル伝達の伝播の中心である（Schwartzberg et al. (2005) Nat. Rev. Immunol. p. 284-95）。例えば、化合物ＡはＩＴＫを１．３ｎＭの生化学的ＩＣ５０で阻害することができる。ＩＴＫは、Ｔｈ２細胞の生存に不可欠な酵素で、これが阻害されると、Ｔｈ２とＴｈ１細胞の間の平衡が傾く。インビボにおけるＩＴＫ阻害剤イブルチニブまたは化合物Ａと抗ＰＤ−Ｌ１抗体による組み合わせ治療によって、いくつかのモデルにおいていずれか単一の薬剤と比較して優れた有効性が引き起こされる。

ＩＴＫ阻害（イブルチニブによる）とチェックポイント阻害の組み合わせは、数多くの同系マウスモデル、例えば、ＩＴＫを発現するがＢＴＫを発現しないモデルにおいて、いずれか単一の薬剤よりも有効である。ＩＴＫ阻害とチェックポイント遮断の相乗効果は、マウスがん細胞系（Ａ２０、ＣＴ２６および４Ｔ１）を使用してマウスの同種移植において試験されたことがある(Sagiv-Barfi et al. (2015) Blood. p. 2079-86)。抗ＰＤ−Ｌ１抗体とイブルチニブ（ＩＴＫ阻害剤）の組み合わせ物は、３つのモデル全てにおいて、いずれか単一の薬剤よりも著しく有効であることが示された。これらの実験において、治療効果は、イブルチニブの投与がほんの８日間で、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与が全体で５回であるにもかかわらず持続した。この組み合わせ物で治療したＣＴ２６腫瘍を有するマウスの約半分が治癒した（いずれか単一の薬剤で治療したマウスは治癒しなかった）。ＣＴ２６腫瘍を接種したこれらのマウスの再曝露では、この細胞系に特異的な長期の抗腫瘍記憶が示された（Sagiv-Barfi et al. (2015) Blood. p. 2079-86）。さらに、腫瘍特異的Ｔ細胞が、イブルチニブおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体で治療したマウスの血中および脾臓において見いだされた。Ａ２０リンパ腫モデルにおいて化合物Ａを使用して同様の実験を実施した（例えば、実施例４を参照のこと）。化合物Ａおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはイブルチニブおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかの組み合わせ物は、単一の薬剤よりも有効であった。化合物Ａおよびイブルチニブはほんの１０日間投与し、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与は全体で５回であった。化合物Ａおよびイブルチニブは、一過性に投与したのみであるが、化合物Ａおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体ならびにイブルチニブおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体の生存に対する効果は６０日を超えて延長した。抗ＰＤ−Ｌ１抗体および化合物Ａの組み合わせ物は、Ａ２０リンパ腫同種移植を有するマウスにおいて腫瘍退縮を引き起こした。したがって、一部の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩は、ＰＤ−１の阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体分子）の抗腫瘍効果を増強し、または増強するために使用される。

一部の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、エルロチニブ、ゲフィチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ、ネシツムマブ、ＰＦ−００２９９８０４、ニモツズマブまたはＲＯ５０８３９４５の１つまたは複数から選択される。

ＰＤ−１アンタゴニスト
本発明に有用なＰＤ−１分子は表１に示し、本明細書に全体を参考として組み込んだ、２０１５年７月３０日に国際公開第２０１５／１１２９００号パンフレットとして公開された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１２７５４に記載されている。

一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子はヒト化抗ＰＤ−１抗体で、重鎖可変ドメインおよび定常領域、軽鎖可変ドメインおよび定常領域またはその両方を含み、表１で記載したようなＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのアミノ酸配列を含むか、または表１のヌクレオチド配列によってコードされる。抗ＰＤ−１抗体分子は、場合によって、表２に示したように重鎖、軽鎖またはその両方のリーダー配列あるいはそれらと実質的に同一の配列を含む。

さらに別の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書で記載した抗体、例えば、表１で記載したＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−Ｅのいずれかから選択される、または表１のヌクレオチド配列によってコードされる抗体の重鎖可変領域の少なくとも１個、２個または３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。

一実施形態、例えば、可変領域、ＣＤＲ（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲもしくはＫａｂａｔ ＣＤＲ）、または本明細書で、例えば、表１で述べたその他の配列を含む実施形態では、抗体分子は単一特異的抗体分子、２特異的抗体分子であるか、または抗体の抗原結合断片、例えば、半抗体または半抗体の抗原結合断片を含む抗体分子である。

一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子には、以下のいずれかを含めることができる：配列番号１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨならびに配列番号１１のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１２のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；
配列番号４から選択されたＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号６のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨならびに配列番号１４のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；
配列番号２１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨならびに配列番号３１のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３２のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ；または
配列番号２４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２６のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨならびに配列番号３４のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３５のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３６のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ。

その他の実施形態では、前記抗体は、配列番号７または２７のいずれかと少なくとも８５％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号１７または３７のいずれかと少なくとも８５％同一なアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは１本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）から選択される。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４から選択された重鎖定常領域を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、カッパまたはラムダの軽鎖定常領域から選択された軽鎖定常領域を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、２２８位に変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域およびカッパ軽鎖定常領域を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、２２８位または２１４位にセリンからプロリンへの変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域およびカッパ軽鎖定常領域を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、２９７位にアスパラギンからアラニンへの変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域およびカッパ軽鎖定常領域を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、アスパラギンからアラニンへの変異および配列番号２１７のプロリンからアラニンへの変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域およびカッパ軽鎖定常領域を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、２３４位のロイシンからアラニンへの変異および２３５位のロイシンからアラニンへの変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖定常領域およびカッパ軽鎖定常領域を含む。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、ヒトＰＤ−１に約０．２ｎＭ未満の解離定数（Ｋ_Ｄ）で結合することができる。

一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定すると、ヒトＰＤ−１に約０．２ｎＭ未満、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、または０．０２ｎＭ、例えば、約０．１３ｎＭから０．０３ｎＭ、例えば、約０．０７７ｎＭから０．０８８ｎＭ、例えば、約０．０８３ｎＭのＫ_Ｄで結合する。

その他の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定すると、カニクイザルＰＤ−１に約０．２ｎＭ未満、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、または０．０２ｎＭ、例えば、約０．１１ｎＭから０．０８ｎＭ、例えば、約０．０９３ｎＭのＫ_Ｄで結合する。

ある特定の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定すると、ヒトＰＤ−１およびカニクイザルＰＤ−１の両方に類似のＫ_Ｄ、例えば、ｎＭの範囲で結合する。一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、ＥＬＩＳＡによって測定すると、ヒトＰＤ−１−Ｉｇ融合タンパク質に約０．１ｎＭ未満、０．０７５ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭまたは０．０１ｎＭ、例えば、約０．０４ｎＭのＫ_Ｄで結合する。

一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、ＦＡＣＳ分析によって測定すると、ヒトＰＤ−１を発現するＪｕｒｋａｔ細胞（例えば、ヒトＰＤ−１をトランスフェクトしたＪｕｒｋａｔ細胞）に約０．１ｎＭ未満、０．０７５ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２５ｎＭまたは０．０１ｎＭ、例えば、約０．０６ｎＭのＫ_Ｄで結合する。

一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、ＦＡＣＳ分析によって測定すると、カニクイザルＴ細胞に約１ｎＭ未満、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭまたは０．１ｎＭ、例えば、約０．４ｎＭのＫ_Ｄで結合する。

一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、ＦＡＣＳ分析によって測定すると、カニクイザルＰＤ−１を発現する細胞（例えば、カニクイザルＰＤ−１をトランスフェクトした細胞）に約１ｎＭ未満、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭまたは０．０１ｎＭ、例えば、約０．６ｎＭのＫ_Ｄで結合する。

ある特定の実施形態では、前記抗体分子はマウスまたはラットＰＤ−１と交差反応しない。その他の実施形態では、前記抗体はアカゲザルＰＤ−１と交差反応する。例えば、交差反応は、Ｂｉａｃｏｒｅ法またはＰＤ−１を発現する細胞（例えば、ヒトＰＤ−１発現３００．１９細胞）を使用する結合アッセイによって測定することができる。その他の実施形態では、前記抗体分子はＰＤ−１の細胞外Ｉｇ様ドメインに結合する。

その他の実施形態では、前記抗体分子はＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２もしくはその両方、またはＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２もしくはその両方を発現する細胞への結合を抑制することができる。一部の実施形態では、前記抗体分子はＰＤ−１を発現する細胞（例えば、ヒトＰＤ−１発現３００．１９細胞）へのＰＤ−Ｌ１結合を約１．５ｎＭ未満、１ｎＭ、０．８ｎＭ、０．６ｎＭ、０．４ｎＭ、０．２ｎＭもしくは０．１ｎＭ、例えば、約０．７９ｎＭと約１．０９ｎＭの間、例えば、約０．９４ｎＭまたは約０．７８ｎＭもしくはそれ未満、例えば、約０．３ｎＭのＩＣ５０で抑制する（例えば、ブロックする）。一部の実施形態では、前記抗体はＰＤ−１を発現する細胞（例えば、ヒトＰＤ−１発現３００．１９細胞）へのＰＤ−Ｌ２結合を約２ｎＭ未満、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭもしくは０．２ｎＭ、例えば、約１．０５ｎＭと約１．５５ｎＭの間、または約１．３ｎＭもしくはそれ未満、例えば、約０．９ｎＭのＩＣ５０で抑制する（例えば、ブロックする）。

その他の実施形態では、前記抗体分子は抗原特異的Ｔ細胞応答を増強することができる。

一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、ＳＥＢ Ｔ細胞活性化アッセイまたはヒト全血エクスビボアッセイで測定すると、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用したときのＩＬ−２の発現と比較して、ブドウ球菌性（staphylococcal）エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）（例えば、２５μｇ／ｍＬで）によって活性化した細胞のＩＬ−２の発現を、少なくとも約２、３、４、５倍、例えば、約２から３倍、例えば、約２から２．６倍、例えば、約２．３倍増加させる。

一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、ＩＦＮ−γ活性アッセイで測定すると、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用したときのＩＮＦ−γの発現と比較して、抗ＣＤ３（例えば、０．１μｇ／ｍＬで）によって刺激したＴ細胞のＩＦＮ−γの発現を少なくとも約２、３、４、５倍、例えば、約１．２から３．４倍、例えば、約２．３倍増加させる。

一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、ＩＦＮ−γ活性アッセイで測定すると、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用したときのＩＦＮ−γの発現と比較して、ＳＥＢ（例えば、３ｐｇ／ｍＬで）によって活性化したＴ細胞のＩＦＮ−γの発現を少なくとも約２、３、４、５倍、例えば、約０．５から４．５倍、例えば、約２．５倍増加させる。

一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、ＩＦＮ−γ活性アッセイで測定すると、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用したときのＩＦＮ−γの発現と比較して、ＣＭＶペプチドで活性化したＴ細胞のＩＦＮ−γの発現を少なくとも約２、３、４、５倍、例えば、約２から３．６倍、例えば、約２．８倍増加させる。

一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、少なくともｎ（例えば、ｎ＝２または４）細胞分裂を経過したＣＤ８^＋Ｔ細胞のパーセンテージによって測定すると、アイソタイプ対照（例えば、ＩｇＧ４）を使用したときのＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖と比較して、ＣＭＶペプチドで活性化したＣＤ８^＋Ｔ細胞の増殖を少なくとも約１、２、３、４、５倍、例えば、約１．５倍増加させる。

ある特定の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、サルで測定すると、Ｃｍａｘが約１００μｇ／ｍＬと約５００μｇ／ｍＬの間、約１５０μｇ／ｍＬと約４５０μｇ／ｍＬの間、約２５０μｇ／ｍＬと約３５０μｇ／ｍＬの間、または約２００μｇ／ｍＬと約４００μｇ／ｍＬの間、例えば、約２９２．５μｇ／ｍＬである。

ある特定の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、サルで測定すると、Ｔ_１／２が約２５０時間と約６５０時間の間、約３００時間と約６００時間の間、約３５０時間と約５５０時間の間、または約４００時間と約５００時間の間、例えば、約４６５．５時間である。

一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定すると、ＰＤ−１に５×１０^−４より小さい、１×１０^−４、５×１０^−５または１×１０^−５ｓ^−１、例えば、約２．１３×１０^−４ｓ^−１Ｋｄで結合する。一部の実施形態では、前記抗体分子は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定すると、ＰＤ−１に１×１０^４より速い、５×１０^４、１×１０^５または５×１０^５Ｍ^−１ｓ^−１、例えば、約２．７８×１０^５Ｍ^−１ｓ^−１のＫａで結合する。

本発明の好ましい抗体分子はＢＡＰ０４９−クローンＥである。

投薬および投与レジメン
ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）またはその薬学的に許容される塩および免疫チェックポイント分子の阻害剤、例えば、ＰＤ−１の阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体分子）はそれぞれ、組み合わせると所望する抗腫瘍活性を実現する用量および／または時間スケジュールで投与することができる。

本発明は、以下の投与レジメンを提供する。

化合物Ａは、５ｍｇと１００ｍｇの間、例えば、１０ｍｇと７５ｍｇの間、１５ｍｇと５０ｍｇの間、２０ｍｇと３０ｍｇの間、１０ｍｇと４０ｍｇの間、１０ｍｇと２５ｍｇの間または２５ｍｇと４０ｍｇの間の用量で、例えば、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇまたは１００ｍｇの用量で、例えば、１日２回、１日１回、２日に１回、３日に１回または１週間に１回投与することができる。

抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ＢＡＰ０４９クローンＥは、注射（例えば、皮下または静脈内）によって、約２００ｍｇから５００ｍｇ、例えば、約２５０ｍｇから４５０ｍｇ、約３００ｍｇから４００ｍｇ、約２５０ｍｇから３５０ｍｇ、約３５０ｍｇから４５０ｍｇまたは約３００ｍｇもしくは約４００ｍｇの用量（例えば、一定用量）で投与することができる。投与スケジュール（例えば、一定用量スケジュール）は、例えば、週１回から２、３、４、５または６週間に１回まで変化させることができる。例えば、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇから４００ｍｇまでの用量で３週間に１回または４週間に１回投与する。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇの用量で４週間に１回投与する。一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇの用量で３週間に１回投与する。

一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、約３００ｍｇの用量で３週間に１回投与する。好ましい一実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、約４００ｍｇの用量で４週間に１回投与する。

一実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）は、１０ｍｇと５０ｍｇの間（例えば、２５ｍｇ）の用量で、例えば、１日１回投与する。一部の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）は、経口的に投与する。一実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）は、１０ｍｇと５０ｍｇの間（例えば、２５ｍｇ）の用量で、例えば、１日１回、例えば、経口的に投与し、ＰＤ−１阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ＢＡＰ０４９−クローンＥ）は、３００ｍｇと５００ｍｇの間の用量（例えば、４００ｍｇの用量）で、例えば、４週間に１回、例えば、静脈内注入によって投与する。一部の実施形態では、この組み合わせ物は、１回または複数回の投与サイクルで、例えば、１回または複数回の２８日投与サイクルで、例えば、１回から６回の２８日投与サイクルで投与する。

ある特定の実施形態では、化合物Ａは、所与のサイクルの特定の日には投与してはならない。例えば、ある特定の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）は、任意の２８日投与サイクル、例えば、１回目の２８日投与サイクルの１日目から５日目、１日目から６日目、または１日目から７日目、または１日目から８日目、または１日目から９日目、好ましくは１日目から１０日目に投与する。例えば、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）は、２５ｍｇの用量で、任意の投与サイクル、例えば、最初の投与サイクルの１日目から１０日目に投与する。例えば、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）は、５０ｍｇの用量で、任意の投与サイクル、例えば、最初の投与サイクルの１日目から１０日目に投与する。

ある特定の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）は、最初の投与サイクルまたは任意のその後の投与サイクルの１１日目から２８日目には投与しない。

ＰＤ−１阻害剤による継続療法は、持続する抗腫瘍免疫応答を妨害することがある。したがって、本明細書では、所与の投与サイクル後に化合物ＡもＰＤ−１阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ＢＡＰ０４９−クローンＥ）も投与しない期間である休薬または治療中断期間を検討する。

例えば、休薬期間とは、化合物ＡおよびＰＤ−１阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ＢＡＰ０４９−クローンＥ）の１つを順次投与した後で、化合物ＡおよびＰＤ−１阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ＢＡＰ０４９−クローンＥ）のもう１方を投与する前に、化合物ＡもＰＤ−１阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体分子、例えば、ＢＡＰ０４９−クローンＥ）も投与しない数日間のことである。休薬期間は、例えば、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日および１４日から選択された数日間であってもよい。

したがって、本発明はまた、医薬組み合わせ物による治療を、疾患進行の証拠が出現するまで、一定期間または休薬期間の間中断し、医薬組み合わせ物を疾患進行の証拠に対して投与する投与レジメンを提供する。疾患進行は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１．またはｉｒＲＣによって腫瘍応答を判定することによって測定することができる。

例えば、化合物Ａまたは抗体Ｂまたは組み合わせ療法は、６カ月後に中断し、患者の疾患の進行を追跡した。治療中断期間または休薬期間がある場合、患者は、疾患進行の臨床的または放射線学的証拠が出現するまで、安全性および有効性のアセスメントを継続することができ、疾患進行の証拠が出現した時点で治療を再開することができる。

本発明の医薬組み合わせ物および本明細書で記載した投与レジメンで治療するのに適した疾患は、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））または乳がん（例えば、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ））である。一部の実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤、（Ｒ，Ｅ）−Ｎ−（７−クロロ−１−（１−（４−（ジメチルアミノ）ブタ−２−エノイル）アゼパン−３−イル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）−２−メチルイソニコチンアミド（化合物Ａ）は、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））または乳がん（例えば、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ））を治療するためにＰＤ−１の阻害剤（例えば、抗ＰＤ−１抗体分子）と組み合わせて投与する。

組成物
本発明はまた、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ活性媒介疾患、特にがんの治療において、（特に、共同的に活性を有するように）特に、それらを同時に、別々に、または順次使用するための指示と一緒に、本明細書で記載した本発明による組み合わせ製品を含む医薬製品または包装商品に関する。

本発明の実施形態はまた、本明細書で記載した本発明によって有用な化合物の薬学的に許容される塩を含む。本明細書では、「薬学的に許容される塩」とは、親化合物が、存在する酸または塩基部分が塩形態に変換されることによって修飾された、開示化合物の誘導体を意味する。薬学的に許容される塩の例には、限定はしないが、アミンなどの塩基性残基の無機または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩などが含まれる。本発明の薬学的に許容される塩には、例えば、毒性のない無機または有機酸から形成された、親化合物の従来の毒性のない塩が含まれる。本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般的に、このような塩は、これらの化合物の遊離の酸性または塩基性形態を化学量論的な量の適切な塩基または酸と水中または有機溶媒中または２つの混合物中で反応させることによって調製することができ、一般的には、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルなどの非水性媒体が好ましい。適切な塩のリストは、それぞれ全体を参考として本明細書に組み込んだ、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418およびJournal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977)に見いだされる。

化合物Ａの好ましい塩は、メシル酸塩である。

「薬学的に許容される」という表現は、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー反応またはその他の問題もしくは合併症を伴わずに、妥当な便益／危険比に見合って、健全な医学的判断の範囲内で、人間および動物の組織と接触させて使用するために適した化合物、材料、組成物および／または剤形を意味するために本明細書では使用する。

本発明は、記載した組み合わせ相手および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む医薬組み合わせ物、特に医薬組み合わせ製品に関する。

「組み合わせ物」とは、組み合わせ使用または組み合わせ製品のための指示がある、または指示がない別々の相手の製剤を意味する。したがって、組み合わせ相手は、特に以下に定義するように、販売も互いに独立している全く別々の医薬剤形または医薬組成物であってもよく、この場合、共同して活性があるので、同時に、または順次使用するために使用を組み合わせる指示だけが包装装置、例えば、パンフレットなどにおいて、または、例えば、医師および医療従事者に提供されたその他の情報（例えば、口頭伝達、書面による伝達など）において提供されている。

「組み合わせ製品」には、抗ＰＤ−１抗体および化合物Ａ、またはその薬学的に許容される塩および場合によってはさらなる組み合わせ相手（例えば、「併用剤（co-agent）」とも称される、以下に説明したような別の薬物）を同時に、または時間間隔内に別々に独立して投与することができる、特に、これらの時間間隔によって、組み合わせの相手が協同的な(＝共同)、例えば、相乗的な効果を示すことができる、組み合わせ投与のための部分のキットが含まれる。本明細書では、「同時投与」または「組み合わせ投与」などの用語は、それらを必要とする単一の対象（例えば、患者）に選択された組み合わせ相手の投与を包含することを意味し、薬剤を同じ投与経路で、および／または同時に投与する必要はない治療レジメンを含むものとする。したがって、本明細書では「組み合わせ製品」という用語は、２つ以上の活性成分を混合または一緒にすることによって生じ、（一緒にすることもできる）活性成分の固定された、および固定されていない組み合わせ物の両方を含む医薬製品を意味する。

用語「固定していない組み合わせ」とは、活性成分がいずれも別々の実体として、特に時間制限なく、同時に、並行して、または順次患者に投与され、このような投与が患者の体内に２つの化合物の治療上有効なレベルをもたらすことを意味する。後者は、カクテル療法、例えば、３つ以上の活性成分の投与にも適用される。したがって、「固定されていない組み合わせ物」という用語は、組み合わせ相手、（ｉ）抗ＰＤ−１抗体および（ｉｉ）本明細書で定義したような化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩（もし存在するならばさらに、１つまたは複数の併用剤）を互いに独立して、または組み合わせ相手の明確に異なる量を含む様々な固定された組み合わせ物の使用によって、すなわち、同時に、または異なる時点で、投与することができ、組み合わせ相手はまた、互いに独立して販売され、それらの組み合わせ使用の可能性の指示のみが、包装装置、例えば、パンフレットなど、または、例えば、医師および医療従事者に提供されたその他の情報において提供されている、全く別々の医薬剤形または医薬製剤として使用することができるという意味で、特に「部分のキット」を規定する。独立した製剤または部分のキットの部分は次に、例えば、同時に、または時間的にずらして、すなわち、様々な時点で、部分のキットのいかなる部分についても同じ、または異なる時間間隔で、投与することができる。非常に好ましくは、部分の組み合わせ使用において治療する疾患に対する効果が、組み合わせ相手（ｉ）および（ｉｉ）のいずれか１つだけの使用によって得られる効果よりも大きくて、したがって、共同して活性があるように、時間間隔を選択する。組み合わせ調製物における組み合わせ相手（ｉ）の全量の投与する組み合わせ相手（ｉｉ）に対する比は、例えば、治療する患者小集団の必要性または、例えば、患者の年齢、性別、体重などによって必要性が異なる可能性がある単一の患者の必要性に対処するために、変化させることができる。

任意の実施形態における組み合わせ相手（ｉ）および（ｉｉ）は、好ましくは共同的に（予防上または特に治療上）活性があるように製剤化するかまたは使用する。これは特に、少なくとも１つの有益な効果、例えば、組み合わせ相手（ｉ）および（ｉｉ）の効果の相互増強、特に、例えば、相加効果を上回る相乗作用、さらに有利な効果(例えば、単一の化合物のいずれにおいても見いだされないさらなる治療効果)、少ない副作用、組み合わせ相手（ｉ）および（ｉｉ）の１つまたは両方の効力のない用量での組み合わせ治療効果、ならびに非常に好ましくは組み合わせ相手（ｉ）および（ｉｉ）の明確な相乗作用があることを意味する。例えば、「共同的に（治療上）活性がある」という用語は、化合物が、好ましくは治療する温血動物、特にヒトにおいて、まだ（好ましくは相乗的な）相互作用（共同治療効果）を示すような時間間隔で、別々に、または順次（時間的にずらした方法、特に、配列特異的な方法で）投与してもよいことを意味する。共同治療効果は、特に、以下の血液レベルによって判定することができ、両化合物は治療するヒトの血液中に少なくともある特定の時間間隔中存在するが、これは化合物が血液中に同時に存在していなくても共同的に活性を有する場合を排除しないことを示す。

したがって、本発明は組み合わせた調製物または医薬的に固定された組み合わせ物またはこのような調製物および組み合わせ物の組み合わせ物などを同時に、別々にまたは順次使用するための組み合わせ製品に関する。

さらに、組み合わせ相手は、（ｉ）この組み合わせ製品が医師に渡る前に（例えば、本発明の化合物およびその他の治療剤を含むキットの場合）；（ｉｉ）医者自身が（または、医師の指導の下で）投与直前に；（ｉｉｉ）患者自身によって、例えば、本発明の化合物およびその他の治療剤の順次投与中に、組み合わせ療法に一緒に組み込むことができる。

ある特定の実施形態では、前記の方法のいずれかはさらに、１つまたは複数のその他の（例えば、第３の）併用剤、特に化学療法剤の投与を含む。

この場合はまた、本発明による対応する製品を形成する組み合わせ相手は、固定された医薬組成物を形成するために混合してもよく、または別々にもしくは対で（すなわち、その他の薬物物質の前、同時または後で）投与してもよい。

本発明による組み合わせ製品は、さらに、または加えて、特にがん療法のために、化学療法、放射線療法、免疫療法、外科的処置、またはこれらの組み合わせと組み合わせて投与することができる。前述のように、その他の治療戦略の場合、アジュバント療法と同様に長期間の療法が可能である。その他の可能な治療とは、腫瘍退縮後の患者の状態を維持するための療法であるか、または、例えば、危険性のある患者における化学防御療法であってもよい。

別の態様では、本発明は、薬学的に許容される担体と一緒に製剤化された本明細書で記載した抗体分子を含む、組成物、例えば、薬学的に許容される組成物を提供する。本明細書では、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合した、ありとあらゆる溶媒、分散媒、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。担体は、（例えば、注射または注入による）静脈内、筋肉内、皮下、非経口、直腸内、脊髄内または表皮投与に適することができる。

本発明の組成物は、様々な形態であってもよい。これらには、例えば、液体、半固体および固体剤形、例えば、液体溶液（例えば、注射可能および注入可能な溶液）、分散剤または懸濁剤、リポソームおよび坐剤が含まれる。好ましい形態は、企図する投与様式および治療適用に左右される。典型的に好ましい組成物は、注射可能または注入可能な溶液の形態である。好ましい投与様式は非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。好ましい実施形態では、本明細書で開示した組み合わせ物は、静脈内注入または注射によって投与する。別の好ましい実施形態では、本明細書で開示した組み合わせ物は、筋肉内または皮下注射によって投与する。

本明細書では、「非経口投与」および「非経口的に投与した」という表現は、腸内および局所投与以外の、通常、注射による投与様式を意味し、限定はしないが、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節腔内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入を含む。

治療用組成物は典型的には製造および保存条件下において無菌かつ安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散剤、リポソームまたは高い抗体濃度に適したその他の秩序構造物として製剤化することができる。滅菌した注射可能溶液は、上記に列記した成分の１つまたは組み合わせを含む適切な溶媒中に必要な量で活性化合物（すなわち、抗体または抗体部分）を組み込み、必要ならば、その後濾過滅菌することによって調製することができる。一般的に、分散剤は、基本的な分散媒体および前記で列記した成分以外の必要な成分を含有する滅菌媒体中に活性成分を組み込むことによって調製する。滅菌した注射可能な溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、前もって滅菌濾過したそれらの溶液から活性成分および任意の追加的な所望の成分の粉末を生成する真空乾燥および凍結乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散剤の場合は必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。注射可能な組成物の持続吸収は、組成物に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによってもたらすことができる。

本明細書で開示した組み合わせ物は、当技術分野で公知の様々な方法によって投与することができ、治療適用は多いが、好ましい投与経路／様式は、抗体の静脈内注射または注入および化合物Ａの経口投与である。例えば、抗体分子は、用量が約３５から４４０ｍｇ／ｍ^２、典型的に約７０から３１０ｍｇ／ｍ^２、より典型的に約１１０から１３０ｍｇ／ｍ^２に達するように、静脈注入によって２０ｍｇ／分を超える、例えば、２０〜４０ｍｇ／分、典型的には４０ｍｇ／分以上の速度で投与することができる。実施形態では、抗体分子は、用量が約１から１００ｍｇ／ｍ^２、好ましくは約５から５０ｍｇ／ｍ^２、約７から２５ｍｇ／ｍ^２、より好ましくは約１０ｍｇ／ｍ^２に達するように、静脈注入によって１０ｍｇ／分未満、好ましくは５ｍｇ／分以下の速度で投与することができる。当業者ならば良くわかるように、投与経路および／または様式は、所望する結果に応じて変化するだろう。ある特定の実施形態では、活性化合物は、インプラント、経皮パッチおよびマイクロカプセル化送達系を含む放出制御製剤などの迅速な放出から化合物を防御する担体と共に調製することができる。生分解性、生体適合性ポリマー、例えば、酢酸エチレンビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸を使用することができる。このような製剤を調製するための多くの方法は特許されているか、または当業者には一般的に知られている。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978を参照のこと。

投薬レジメンは、所望する最適な応答（例えば、治療応答）を実現するために調整する。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、数回に分けた用量を徐々に投与してもよく、または治療状況の緊急性によって適応となれば、用量を比例的に低下または増加させてもよい。投与を簡単にするため、および投薬を均一にするために、非経口用組成物を単位剤形で製剤化することが特に有利である。本明細書では、単位剤形とは、治療する対象のための単位投薬として適した物理的に分離された単位を意味し、各単位は、必要な医薬担体と関連して所望する治療効果を生じるために計算された活性化合物の予め決定された量を含有する。本発明の単位剤形の詳細は、（ａ）活性化合物の特有の特性および実現する特定の治療効果、ならびに（ｂ）個々の感受性を治療するためにこのような活性化合物を調合する当技術分野固有の制限によって決定され、直接左右される。

抗体分子の治療または予防有効量の非限定的な範囲の一例は、０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１〜２５ｍｇ／ｋｇである。これらは別々に、または同時に送達することができる。ある特定の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体分子は、注射によって（例えば、皮下または静脈内）約１から４０ｍｇ／ｋｇ、例えば、１から３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約５から２５ｍｇ／ｋｇ、約１０から２０ｍｇ／ｋｇ、約１から５ｍｇ／ｋｇ、１から１０ｍｇ／ｋｇ、３から１０ｍｇ／ｋｇ、５から１５ｍｇ／ｋｇ、１０から２０ｍｇ／ｋｇ、１５から２５ｍｇ／ｋｇまたは約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与し、化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩は注射によって（例えば、皮下または静脈内）約１から４０ｍｇ／ｋｇ、例えば、３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。投与スケジュールは、例えば、週１回から２、３または４週間に１回まで変化させることができる。抗体分子は、用量が約３５から４４０ｍｇ／ｍ^２、典型的に約７０から３１０ｍｇ／ｍ^２、より典型的に約１１０から１３０ｍｇ／ｍ^２に達するように、静脈注入によって、２０ｍｇ／分を超える、例えば、２０〜４０ｍｇ／分、典型的には４０ｍｇ／分以上の速度で投与することができる。実施形態では、約１１０から１３０ｍｇ／ｍ^２の注入速度は約３ｍｇ／ｋｇのレベルを実現する。その他の実施形態では、抗体分子は、用量が約１から１００ｍｇ／ｍ^２、例えば、約５から５０ｍｇ／ｍ^２、約７から２５ｍｇ／ｍ^２、または約１０ｍｇ／ｍ^２に達するように、静脈注入によって１０ｍｇ／分未満、例えば、５ｍｇ／分以下の速度で投与することができる。一部の実施形態では、抗体は約３０分の期間にわたって注入する。

本発明の医薬組成物は、「治療有効量」または「予防有効量」の本発明の抗体または抗体部分を含むことができる。「治療有効量」とは、所望する治療結果を実現するために、投薬量および必要な期間中における有効な量を意味する。改変された抗体または抗体断片の治療上有効な量は、個体の病状、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望する応答を惹起する抗体または抗体部分の能力などの要素によって変動し得る。治療有効量はまた、改変された抗体または抗体断片のいかなる毒性効果または有害な効果よりも治療上有益な効果が上回る量である。開示した組み合わせ物の「治療上有効な投薬量」は、好ましくは測定可能なパラメーター、例えば、腫瘍増殖速度を未治療の対象に対して少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、さらにより好ましくは少なくとも約８０％阻害する。本明細書で開示した組み合わせ物が測定可能なパラメーター、例えば、がんを阻害する能力は、臨床試験において評価することができ、熟練の医師が評価することができる。

「予防有効量」とは、所望する予防結果を実現するために、投薬量および必要な期間中における有効な量を意味する。典型的には、予防用量は疾患の前または初期段階において対象に使用するので、予防有効量は治療有効量よりも少ない。

本明細書で記載したような抗体分子を含むキットも本発明の範囲内である。このキットには、使用指示書、その他の試薬、例えば、標識、治療剤またはキレートもしくはその他の方法の結合に有用な薬剤、標識もしくは治療剤に対する抗体、または放射線防御組成物、投与用の抗体を調製するための装置またはその他の材料、薬学的に許容される担体および対象に投与するための装置またはその他の材料を含む、１つまたは複数のその他の要素を含めることができる。

一態様では、本発明は、本明細書で記載したがん性腫瘍の増殖が阻害または低減されるように、表１で示した抗ＰＤ−１抗体分子および化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩を含む組み合わせ物を使用して、インビボにおいて対象を治療することに関する。抗ＰＤ−１抗体および化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩、この組み合わせ物は、単独で使用してがん性腫瘍の増殖を阻害するか、あるいは以下に記載したように、（例えば、がんまたは感染性疾患のための）標準治療の処置、別の抗体もしくはその抗原結合断片、免疫調節因子（例えば、共刺激分子の活性化因子もしくは阻害分子の阻害剤）、ワクチン、例えば、治療用がんワクチン、細胞免疫療法のその他の形態の１つまたは複数と組み合わせて使用することができる。

本明細書で記載した組み合わせ物は、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）または扁平上皮細胞肺がんなどの肺がんの治療のために使用することができる。がんは、局所進行性または転移性のＮＳＣＬＣであってもよい。さらに、がんは、エルロチニブ、ゲフィチニブおよび／またはイコチニブによる治療に抵抗性であってもよい。さらに、がんは、メレレチニブおよび／またはロシレチニブによる治療に抵抗性であってもよい。

組み合わせ物を投与されているがん対象は、以前に標準治療（例えば、エルロチニブ、ゲフィチニブおよびイコチニブ）で治療されたことがある、またはいかなる治療もまだ受けたことがない肺がんの患者であってもよい。一例では、本明細書で記載した組み合わせ物は、標準治療で治療されたことがあるが、疾患進行を示す肺がんの患者を治療するために使用する。

治療するがんは、Ｌ８５８Ｒ、ｅｘ１９ｄｅｌおよびＴ７９０Ｍおよびそれらの組み合わせからなる群から選択されるＥＧＦＲ変異を有するがん、例えば、ＮＳＣＬＣであってもよい。優勢ながん原性ＥＧＦＲ変異（Ｌ８５８Ｒおよびｅｘ１９ｄｅｌ）は、ＥＧＦＲ ＮＳＣＬＣの約９０％を占める。第２の「ゲートキーパー」Ｔ７９０Ｍ変異もある特定の患者において生じていることがある。

本明細書で記載した組み合わせ物は、抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１療法などの免疫療法に抵抗性または難治性のがんの治療のために使用することができる。これらの療法の例には、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブおよびＭＥＤＩ４７３６による療法が含まれる。

別の実施形態では、本発明の組み合わせ物は、単独で、または１つもしくは複数のその他の薬剤と組み合わせて投与することができ、この組み合わせ物は、いずれかの順番で、または同時に投与することができる。一例では、本明細書で開示した併用治療は、１つまたは複数のさらなる治療剤、例えば、１つまたは複数の抗がん剤、細胞傷害性薬剤もしくは細胞分裂阻害剤、ホルモン治療薬、ワクチンおよび／またはその他の免疫療法薬と同時に製剤化された、および／または同時に投与された本発明の組成物を含むことができる。その他の実施形態では、本明細書で記載した組み合わせ物は、手術、照射、凍結療法および／または温熱療法を含むその他の治療処置様式と組み合わせて投与することができる。このような併用療法によって、投与治療剤のより少ない投薬量を有利に利用することができ、したがって、様々な単独療法に伴う毒性または合併症の可能性を回避することができる。

「と組み合わせた」とは、療法または治療剤を、同時に投与および／または一緒に送達するために製剤化しなければならないことを意味するものではないが、これらの送達方法は本明細書で記載した範囲内である。抗ＰＤ−１抗体および化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩は、１つまたは複数のその他のさらなる療法もしくは治療剤と並行して、前に、または後で投与することができる。抗ＰＤ−１抗体および化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩およびその他の薬剤または治療プロトコールは、いかなる順番で投与してもよい。全般的に、各薬剤は、その薬剤のために決定された用量および／または時間スケジュールで投与する。使用したさらなる治療剤は、単一の組成物と一緒に投与するか、様々な組成物と別々に投与することができることはさらに理解されるだろう。全般的に、組み合わせて使用したさらなる治療剤のレベルは、それらを個々に使用するときのレベルを超えないレベルで使用されることが予測される。一部の実施形態では、組み合わせて使用するレベルは、個々の使用するレベルよりも低くなる。

ある特定の実施形態では、本発明の組み合わせ物は、当技術分野で公知のＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の１つまたは複数のその他の阻害剤と組み合わせて投与する。アンタゴニストは、抗体、それらの抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質またはオリゴペプチドであってもよい。一部の実施形態では、その他の抗ＰＤ−１抗体は、ＭＤＸ−１１０６、Ｍｅｒｃｋ３４７５またはＣＴ−０１１から選択する。一部の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、イムノグロブリン配列のＦｃ領域）に融合したＰＤ−ＬｌもしくはＰＤ−Ｌ２の細胞外もしくはＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。一部の実施形態では、ＰＤ−１阻害剤はＡＭＰ−２２４である。一部の実施形態では、ＰＤ−Ｌｌ阻害剤は抗ＰＤ−Ｌｌ抗体である。一部の実施形態では、抗ＰＤ−Ｌｌ結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ−４７３６、ＭＳＢ−００１０７１８ＣまたはＭＤＸ−１１０５から選択する。ＢＭＳ−９３６５５９としても知られているＭＤＸ−１１０５は、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレットに記載された抗ＰＤ−Ｌｌ抗体である。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（それぞれ配列番号２０および２１で示された重鎖および軽鎖可変領域配列）は、国際公開第２０１０／０７７６３４号パンフレットで記載された抗ＰＤ−Ｌｌである。

ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８またはＢＭＳ−９３６５５８としても知られているＭＤＸ−１１０６は、国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットに記載された抗ＰＤ−１抗体である。ＭＫ−３４７５またはＳＣＨ−９００４７５としても知られているＭｅｒｃｋ３７４５は、国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットに記載された抗ＰＤ−１抗体である。ピリディズマブ（ＣＴ−０１１；Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピリディズマブおよびその他のヒト化抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は国際公開第２００９／１０１６１１号パンフレットに開示されている。その他の実施形態では、抗ＰＤ−１抗体はペンブロリズマブである。ペンブロリズマブ（ＭＫ−３４７５としても知られている商品名キイトルーダ、以前はランブロリズマブ）は、例えば、Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44において開示されている。ＡＭＰ−２２４（例えば、国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレットおよび国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレットにおいて開示されたＢ７−ＤＣＩｇ；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）は、ＰＤ−１とＢ７−Ｈ１との間の相互作用をブロックするＰＤ−Ｌ２ Ｆｃ融合可溶性受容体である。その他の抗ＰＤ−１抗体には、ＡＭＰ５１４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、特に、例えば、米国特許第８６０９０８９号明細書、米国特許出願公開第２０１００２８３３０号明細書および／または米国特許出願公開第２０１２０１１４６４９号明細書で開示された抗ＰＤ−１抗体が含まれる。

本発明の組み合わせ物と組み合わせることができるその他の薬剤の例には、標準治療の化学療法剤を含めることができ、限定はしないが、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、硫酸ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注入（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロランブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注入（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、塩酸ダウノルビシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、クエン酸ダウノルビシンリポソーム注入（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシウレア（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（Ｙｔｔｒｉｕｍ９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラント（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））を伴うポリフェプロザン２０、クエン酸タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注入用塩酸トポテカン（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、イブリチニブ、イデラリシブおよびブレンツキシマブベドチンが含まれる。

アルキル化剤の例には、限定はしないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホン酸塩、ニトロソウレアおよびトリアゼン）：ウラシルマスタード（Ａｍｉｎｏｕｒａｃｉｌ Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（Ｈｅｍｅｌ（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホラミン、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））およびダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））が含まれる。さらなる例示的なアルキル化剤には、限定はしないが、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））；テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）およびＴｅｍｏｄａｌ（登録商標））；ダクチノマイシン（アクチノマイシン−Ｄとしても知られる、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；メルファラン（Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコリシンおよびフェニルアラニンマスタードとしても知られる、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても知られる、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）およびＭｙｌｅｒａｎ（登録商標））；カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））；ロムスチン（ＣＣＮＵとしても知られる、ＣｅｅＮＵ（登録商標））；シスプラチン（ＣＤＤＰとしても知られる、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）およびＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）−ＡＱ）；クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）およびＮｅｏｓａｒ（登録商標））；ダカルバジン（ＤＴＩＣ、ＤＩＣおよびイミダゾールカルボキサミドとしても知られる、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても知られる、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；プレドニムスチン；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード、ムスチンおよびメクロロエタミン塩酸塩としても知られる、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））；ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；チオテパ（チオホスホラミド、ＴＥＳＰＡおよびＴＳＰＡとしても知られる、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））；およびベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標）が含まれる。

アントラサイクリンの例には、例えば、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）およびＲｕｂｅｘ（登録商標））；ブレオマイシン（ｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ダウノルビシン（ダウノルビシン塩酸塩、ダウノマイシンおよびルビドマイシン塩酸塩、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム型（ダウノルビシンクエン酸塩リポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））；ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標））；イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｉｄａｍｙｃｉｎ ＰＦＳ（登録商標））；マイトマイシンＣ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；およびデスアセチルラビドマイシンが含まれる。

単独の、または別の免疫調節剤（例えば、抗ＬＡＧ−３、抗ＰＤ−Ｌ１または抗ＴＩＭ−３抗体分子）と組み合わせた抗ＰＤ−１抗体分子と組み合わせて使用することができるビンカアルカロイドの例には、限定はしないが、ビノレルビン酒石酸塩（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））およびビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標））；ビンブラスチン（ビンブラスチン硫酸塩、ビンカロイコブラスチンおよびＶＬＢとしても知られる、Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）およびＶｅｌｂａｎ（登録商標））；ならびにビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））が含まれる。

３つ（またはそれ以上）の薬剤のレジメンにおける用量の例は以下の通りである。ＰＤ−１抗体分子は、例えば、約１から４０ｍｇ／ｋｇ、例えば、１から３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約５から２５ｍｇ／ｋｇ、約１０から２０ｍｇ／ｋｇ、約１から５ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる。

バイオマーカー
本発明はさらに、本発明の組み合わせ物で治療することによって最も利益を得ることができる患者を選択することを含む。患者の選択は、ＰＤ−１の存在またはＴＡＭＳの存在を判定することによって実現することができる。理論に縛られることは望まないが、一部の実施形態では、患者がＰＤ−Ｌ１の発現が高いがんを有している、および／またはがんに抗腫瘍免疫細胞、例えば、ＴＩＬが浸潤している、および／または以下に記載したＣＤ１６３もしくはＣＤ１６３／ＣＤ８を検索することによって判定されたＴＡＭＳレベルが高い場合、患者は本発明の組み合わせ物による治療に応答しやすい。

ＰＤ−１を有する患者の選択
一例では、ＰＤ−１の存在の判定は、ＣＤ８、ＰＤ−Ｌ１および／またはＩＦＮ−γが陽性の細胞をアッセイすることによって抗腫瘍免疫細胞を判定することであってもよく、したがって、ＣＤ８、ＰＤ−Ｌ１および／またはＩＦＮ−γのレベルは、微小環境におけるＴＩＬレベルの表示として役立ち得る。ある特定の実施形態では、がんの微小環境とは、ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８／ＩＦＮ−γのトリプルポジティブを意味する。

したがって、特定の態様では、本出願は、腫瘍試料のＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８およびＩＦＮ−γの１つまたは複数が陽性であるかどうかを判定する方法を提供し、腫瘍試料のマーカーの１つまたは複数、例えば、２つ、または３つ全てが陽性であるならば、場合によって、１つまたは複数のその他の免疫調節剤または抗がん剤と組み合わせて、治療有効量の抗ＰＤ−１抗体分子を患者に投与する。

以下の適応症において、患者の大部分は、ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８／ＩＦＮ−γについてトリプルポジティブ：ＴＮ乳がんである。患者の大部分または一部がこれらのマーカーについてトリプルポジティブであるかどうかにかかわらず、これらのマーカーについて患者をスクリーニングすることによって、化合物Ａおよび場合によっては１つまたは複数のその他の免疫調節剤（例えば、抗ＴＩＭ−３抗体分子、抗ＬＡＧ−３抗体分子または抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子）および／または抗がん剤と組み合わせたＰＤ−１抗体（例えば、ＰＤ−１ブロッキング抗体）による療法にうまく応答する可能性が特に高い一部の患者を同定することが可能である。

一部の実施形態では、がん試料は、ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８／ＩＦＮ−γのトリプルポジティブとして分類される。この測定は、おおまかに、２つの閾値、１個の細胞が陽性に分類されるかどうか、およびその試料が全体として陽性に分類されるかどうかに分けることができる。第１に、１個の細胞内で、ＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８および／またはＩＦＮ−γのレベルを測定することができる。一部の実施形態では、これらのマーカーの１つまたは複数が陽性の細胞は、対照細胞または参照値と比較して、マーカーのレベルがより高い細胞である。例えば、一部の実施形態では、所与の細胞において高いＰＤ−Ｌ１レベルとは、患者の対応する非がん性組織におけるＰＤ−Ｌ１のレベルよりも高いレベルのことである。別の例では、一部の実施形態では、所与の細胞において高いＣＤ８またはＩＦＮ−γレベルとは、典型的にＴＩＬで認められるタンパク質レベルのことである。第２に、試料においてＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８および／またはＩＦＮ−γが陽性の細胞のパーセンテージを測定することもできる。（１個の細胞が３つのマーカー全てを発現する必要はない）。一部の実施形態では、トリプルポジティブ試料とは、これらのマーカーが陽性の細胞のパーセンテージが、例えば、参照値よりも高い、または対照試料よりも高い試料のことである。

その他の実施形態では、試料中のＰＤ−Ｌ１、ＣＤ８および／またはＩＦＮ−γ全体のレベルを測定することができる。この場合、試料中の高いＣＤ８またはＩＦＮ−γレベルとは、ＴＩＬが浸潤した腫瘍において典型的に認められるタンパク質のレベルであってもよい。同様に、高いＰＤ−Ｌ１レベルとは、腫瘍試料、例えば、腫瘍微小環境において典型的に認められるタンパク質のレベルであってもよい。

ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８／ＩＦＮ−γがトリプルポジティブの患者のサブセットを同定することによって、ＰＤ−１抗体療法に応答しやすい患者の特定の小集団を明らかにする。例えば、多くのＩＭ−ＴＮ（免疫調節性トリプルネガティブ）乳がん患者は、ＰＤ−Ｌ１／ＣＤ８／ＩＦＮ−γについてトリプルポジティブである。ＩＭ−ＴＮ乳がんは、例えば、Brian D. Lehmann et al., “Identification of human triple-negative breast cancer subtypes and preclinical models for selection of targeted therapies”, J Clin Invest. Jul 1, 2011; 121(7): 2750-2767に記載されている。トリプルネガティブ乳がんは、エストロゲン受容体（ＥＲ）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）およびＨｅｒ２／ｎｅｕを発現しないがんである。これらのがんは典型的に、ＥＲ、ＰＲおよびＨｅｒ２／ｎｅｕを標的とする薬剤に応答しないので、治療が困難である。トリプルネガティブ乳がんはさらに様々なクラスに分類することができ、その１つは免疫調節性である。Ｌｅｈｍａｎｎ等によって記載されたように、ＩＭ−ＴＮ乳がんは、免疫細胞プロセスに関与する因子、例えば、１つまたは複数の免疫細胞シグナル伝達（例えば、ＴＨ１／ＴＨ２経路、ＮＫ細胞経路、Ｂ細胞受容体シグナル伝達経路、ＤＣ経路およびＴ細胞受容体シグナル伝達）、サイトカインシグナル伝達（例えば、サイトカイン経路、ＩＬ−１２経路およびＩＬ−７経路）、抗原プロセシングおよび提示、核となる免疫シグナル伝達経路によるシグナル伝達（例えば、ＮＦＫＢ、ＴＮＦおよびＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達）、Ｔ細胞機能、免疫転写、インターフェロン（ＩＦＮ）応答および抗原プロセシングに関与する遺伝子が豊富である。したがって、一部の実施形態では、治療するがんは、ＩＭ−ＴＮ乳がんの１つまたは複数のマーカー、例えば、１つまたは複数の免疫細胞シグナル伝達（例えば、ＴＨ１／ＴＨ２経路、ＮＫ細胞経路、Ｂ細胞受容体シグナル伝達経路、ＤＣ経路およびＴ細胞受容体シグナル伝達）、サイトカインシグナル伝達（例えば、サイトカイン経路、ＩＬ−１２経路およびＩＬ−７経路）、抗原プロセシングおよび提示、核となる免疫シグナル伝達経路によるシグナル伝達（例えば、ＮＦＫＢ、ＴＮＦおよびＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達）、Ｔ細胞機能、免疫転写、インターフェロン（ＩＦＮ）応答および抗原プロセシングに関与する遺伝子を促進する因子が陽性である、または陽性であることが判定されたがんである。

ＥＧＦＲ変異を有する患者の選択
ＥＧＦＲ活性化変異（例えば、Ｌ８５８Ｒおよび／またはｅｘ１９ｄｅｌ）および／または後天的ＥＧＦＲ Ｔ７９０Ｍ変異を有する腫瘍を有する患者は、本発明の組み合わせ物から特に利益を得ることができる。

ＥＧＦＲ変異状態は、当技術分野で利用可能な試験、例えば、ＱＩＡＧＥＮ ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ（登録商標）ＥＧＦＲ試験およびｃｏｂａｓ（登録商標）ＥＧＦＲ変異試験ｖ２によって判定することができる。ｔｈｅｒａｓｃｒｅｅｎ ＥＧＦＲ ＲＧＱ ＰＣＲキットは、ＥＧＦＲがん遺伝子における特異的変異を検出するためのＦＤＡ承認の定性的リアルタイムＰＣＲアッセイである。ＥＧＦＲ変異の証拠は、既存の地域データおよび腫瘍試料の試験から得ることができる。ＥＧＦＲ変異状態は、任意の利用可能な腫瘍組織から判定することができる。

さらなる用語は、以下および出願全体にわたって定義する
用語「プログラム細胞死１」または「ＰＤ−１」には、アイソフォーム、ほ乳類、例えば、ヒトＰＤ−１、ヒトＰＤ−１の種相同体およびＰＤ−１と少なくとも１つの共通エピトープを含む類似体が含まれる。ＰＤ−１、例えば、ヒトＰＤ−１のアミノ酸配列は、当技術分野では公知である、例えば、Shinohara T et al. （1994） Genomics 23（3）:704-6; Finger LR, et al. Gene （1997）197（1-2）:177-87。

本明細書では、冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の文法上の対象の１つまたは２つ以上（例えば、少なくとも１つ）を意味する。

用語「または（or）」は、本明細書では、文脈で明らかに他の場合が示されていない限り、用語「および／または（and/or）」と同義に使用される。

「約（about）」および「約（approximately）」は全般的に、所与の測定値の性質または精度の測定された量の誤差の許容される程度を意味する。誤差の程度の例は、所与の値または値の範囲の２０パーセント（％）以内、典型的には１０％以内、より典型的には５％以内である。

本発明の組成物および方法は、特定の配列を有するポリペプチドおよび核酸、またはそれらと実質的に同一もしくは類似の配列、例えば、特定の配列に対して少なくとも８５％、９０％、９５％またはそれ以上同一の配列を包含する。アミノ酸配列の文脈では、用語「実質的に同一」は、本明細書では、第１および第２のアミノ酸配列が共通の構造ドメインおよび／または共通の機能的活性を有することができるように、第２のアミノ酸配列において整列したアミノ酸残基とｉ）同一であるか、またはｉｉ）保存的置換である、十分な、または最小限の数のアミノ酸残基を含有する第１のアミノ酸を意味する。例えば、参照配列、例えば、本明細書で提供した配列に少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一性を有する共通の構造ドメインを含有するアミノ酸配列である。

ヌクレオチド配列の文脈では、用語「実質的に同一」は、本明細書では、第１および第２のヌクレオチド配列が、共通の機能的活性を有するポリペプチドをコードするか、または共通の構造ポリペプチドドメインまたは共通の機能的ポリペプチド活性をコードするように、第２の核酸配列において整列したヌクレオチドに同一である、十分な、または最小限の数のヌクレオチドを含有する第１の核酸配列を意味する。例えば、参照配列、例えば、本明細書で提供した配列に少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一性を有するヌクレオチド配列である。

用語「機能的バリアント」とは、天然に生じる配列に実質的に同一なアミノ酸配列を有する、または実質的に同一なヌクレオチド配列によってコードされ、天然に生じる配列の１つまたは複数の活性を有することができるポリペプチドを意味する。

配列間の相同性または配列同一性(用語は本明細書では同義に使用される）の計算は以下の通りに実施する。

２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列のパーセント同一性を判定するために、比較が最適になるように配列を整列させる（例えば、最適なアラインメントのために第１および第２のアミノ酸または核酸配列の１つまたは両方にギャップを導入することができ、非相同な配列は比較のために無視することができる）。好ましい実施形態では、比較のために整列させた参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、さらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次に、対応するアミノ酸の位置またはヌクレオチドの位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列の位置が第２の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められている場合、分子はその位置において同一である（本明細書では、アミノ酸または核酸の「同一性」とは、アミノ酸または核酸の「相同性」と等価である）。

２つの配列の間のパーセント同一性は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入することが必要なギャップの数および各ギャップの長さを考慮した、配列によって共有されている同一な位置の数の関数である。

本明細書では、「単離した」という用語は、本来の、または天然の環境（例えば、天然に生じるのであれば、天然の環境）から取り出された物質を意味する。例えば、生きた動物に存在する天然に生じるポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離しないが、天然系に共存する物質のいくらかまたは全てからヒトの介入によって分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドを単離する。このようなポリヌクレオチドは、ベクターの一部であってもよく、かつ／またはこのようなポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、組成物の一部であってもよく、さらにこのようなベクターまたは組成物はそれが天然に認められる環境の一部でなくても単離される。

本明細書では、用語「抗体分子」とは、タンパク質、例えば、イムノグロブリン鎖または少なくとも１個のイムノグロブリン可変ドメイン配列を含むその断片を意味する。用語「抗体分子」には、例えば、モノクローナル抗体（イムノグロブリンＦｃ領域を有する完全長抗体を含む）が含まれる。ある実施形態では、抗体分子は完全長抗体または完全長イムノグロブリン鎖を含む。ある実施形態では、抗体分子は完全長抗体の抗原結合もしくは機能的断片、または完全長イムノグロブリン鎖を含む。別の例では、抗体分子は２個の重（Ｈ）鎖可変ドメイン配列および２個の軽（Ｌ）鎖可変ドメイン配列を含み、それによって、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆｄ’、Ｆｖ、１本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、１個の可変ドメイン抗体、ダイアボディ（Ｄａｂ）（２価および２特異的）および完全な抗体もしくは組換えＤＮＡ技術を使用して新規に合成された抗体の改変によって生成することができるキメラ（例えば、ヒト化）抗体などの、２個の抗原結合部位を形成する。これらの機能的抗体断片は、それぞれの抗原または受容体と選択的に結合する能力を保持する。抗体および抗体断片は、限定はしないが、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む抗体の任意のクラス、および抗体の任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）に由来するものであり得る。抗体分子の調製は、モノクローナルまたはポリクローナルであってもよい。抗体分子はまた、ヒト、ヒト化、ＣＤＲグラフト、またはインビトロ生成抗体であってもよい。抗体は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４から選択された重鎖定常領域を有することができる。抗体はまた、例えば、カッパまたはラムダから選択された軽鎖を有することができる。用語「イムノグロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書の「抗体」という用語と同義に使用される。

抗体分子の抗原結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインから構成される１価断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結した２個のＦａｂ断片を含む２価断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインから構成されるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の１腕のＶＬおよびＶＨドメインから構成されるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインから構成されるダイアボディ（ｄＡｂ）断片、（ｖｉ）ラクダまたはラクダ化可変ドメイン、（ｖｉｉ）１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦＶ）、（ｖｉｉｉ）１ドメイン抗体が含まれる。これらの抗体断片は、当業者には公知の従来の技術を使用して得られ、断片は、有用性のためにインタクトな抗体と同じ方法でスクリーニングする。用語「抗体」には、インタクトな分子およびそれらの機能的断片が含まれる。抗体の定常領域は、抗体の特性を変更するために（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体糖鎖付加、システイン残基の数、エフェクター細胞機能または補体機能の１つまたは複数を増加、または減少させるために）変化、例えば、変異させることができる。

ある実施形態では、抗体分子は単一特異的抗体分子であり、単一のエピトープに結合する。例えば、単一特異的抗体分子は複数のイムノグロブリン可変ドメイン配列を有し、それぞれは同じエピトープに結合する。

ある実施形態では、抗体分子は、多特異的抗体分子であり、例えば、複数のイムノグロブリン可変ドメイン配列を含み、複数のうち第１のイムノグロブリン可変ドメイン配列は第１のエピトープに結合特異性を有し、複数のうち第２のイムノグロブリン可変ドメイン配列は第２のエピトープに結合特異性を有する。ある実施形態では、第１および第２のエピトープは同じ抗原、例えば、同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。ある実施形態では、第１および第２のエピトープは重なっている。ある実施形態では、第１および第２のエピトープは重なっていない。ある実施形態では、第１および第２のエピトープは異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。ある実施形態では、多特異的抗体分子は第３、第４または第５のイムノグロブリン可変ドメインを含む。ある実施形態では、多特異的抗体分子は２特異的抗体分子、３特異的抗体分子または４特異的抗体分子である。

ある実施形態では、多特異的抗体分子は２特異的抗体分子である。２特異的抗体は２つ以下の抗原に特異性を有する。２特異的抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有する第１のイムノグロブリン可変ドメイン配列および第２のエピトープに結合特異性を有する第２のイムノグロブリン可変ドメイン配列が特徴である。ある実施形態では、第１および第２のエピトープは同じ抗原、例えば、同じタンパク質（または多量体タンパク質のサブユニット）上にある。ある実施形態では、第１および第２のエピトープは重なっている。ある実施形態では、第１および第２のエピトープは重なっていない。ある実施形態では、第１および第２のエピトープは異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（または多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。ある実施形態では、２特異的抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列ならびに第２のエピトープに結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列および軽鎖可変ドメイン配列を含む。ある実施形態では、２特異的抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有する半抗体および第２のエピトープに結合特異性を有する半抗体を含む。ある実施形態では、２特異的抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有する半抗体またはその断片および第２のエピトープに結合特異性を有する半抗体またはその断片を含む。ある実施形態では、２特異的抗体分子は、第１のエピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖまたはその断片および第２のエピトープに結合特異性を有するｓｃＦｖまたはその断片を含む。ある実施形態では、第１のエピトープはＰＤ−１上に位置し、第２のエピトープはＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ−１および／またはＣＥＡＣＡＭ−５）、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２上に位置する。

ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲまたはＦＷ）と称される、より保存された領域が組み込まれた「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と称する超可変領域に細分することができる。

フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、いくつかの方法によって正確に定義された（Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Chothia, C. et al. (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917; and the AbM definition used by Oxford Molecular's AbM antibody modeling softwareを参照のこと。全般的に、例えば、Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. and Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg)を参照のこと）。

本明細書では、用語「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」は、抗原特異性および結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の配列を意味する。一般的に、各重鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）があり、各軽鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）がある。

所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列範囲は、Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）、Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）に記載されているものを含むいくつかの周知のスキームのいずれかを使用して判定することができる。本明細書では、「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキームに従って定義されたＣＤＲはまた、時々「超可変ループ」と称される。

例えば、Ｋａｂａｔでは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のＣＤＲアミノ酸残基は３１〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）に番号付けられ、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＣＤＲアミノ酸残基は２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）に番号付けられる。Ｃｈｏｔｈｉａでは、ＶＨのＣＤＲアミノ酸は２６〜３２（ＨＣＤＲ１）、５２〜５６（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）に番号付けられ、ＶＬのアミノ酸残基は２６〜３２（ＬＣＤＲ１）、５０〜５２（ＬＣＤＲ２）および９１〜９６（ＬＣＤＲ３）に番号付けられる。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方のＣＤＲ定義を組み合わせることによって、ＣＤＲは、ヒトＶＨにおけるアミノ酸残基２６〜３５（ＨＣＤＲ１）、５０〜６５（ＨＣＤＲ２）および９５〜１０２（ＨＣＤＲ３）ならびにヒトＶＬにおけるアミノ酸残基２４〜３４（ＬＣＤＲ１）、５０〜５６（ＬＣＤＲ２）および８９〜９７（ＬＣＤＲ３）から構成される。

全般的に、特に指定しなければ、抗ＰＤ−１抗体分子は、例えば、表１で記載した１つまたは複数のＫａｂａｔ ＣＤＲおよび／またはＣｈｏｔｈｉａ超可変ループのいずれかの組み合わせを含むことができる。一実施形態では、以下の定義：ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方を組み合わせたＣＤＲ定義によるＨＣＤＲ１ならびにＫａｂａｔのＣＤＲ定義によるＨＣＣＤＲ２〜３およびＬＣＣＤＲ１〜３は、表１で記載した抗ＰＤ−１抗体分子のために使用する。定義全てに基づいて、各ＶＨおよびＶＬは典型的に、アミノ末端からカルボキシ末端まで、以下の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置された３個のＣＤＲおよび４個のＦＲを含む。

用語「抗原結合部位」とは、ＰＤ−１ポリペプチド、またはそのエピトープに結合する境界面を形成する決定基を含む抗体分子の部分を意味する。タンパク質（またはタンパク質様物質）に関して、抗原結合部位は典型的に、ＰＤ−１ポリペプチドに結合する境界面を形成する（少なくとも４つのアミノ酸またはアミノ酸様物質の）１つまたは複数のループを含む。典型的に、抗体分子の抗原結合部位には、少なくとも１個または２個のＣＤＲおよび／または超可変ループ、またはより典型的には少なくとも３、４、５もしくは６個のＣＤＲおよび／または超可変ループが含まれる。

本明細書では、「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一分子組成物である抗体分子の調製物を意味する。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに単一の結合特異性および親和性を示す。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術またはハイブリドーマ技術を使用しない方法（例えば、組換え法）によって作製することができる。

「有効なヒト」タンパク質とは、抗体応答、例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答の中和を惹起しないタンパク質である。ＨＡＭＡは、いくつかの環境において、例えば、慢性もしくは再発性の病的状態の治療において、例えば、抗体分子が反復投与される場合、問題となることがある。ＨＡＭＡ応答は、血清からの抗体クリアランスを増加させ(例えば、Saleh et al., Cancer Immunol. Immunother., 32:180-190 (1990)を参照のこと)、アレルギー反応を起こさせることもあるので(例えば、LoBuglio et al., Hybridoma, 5:5117-5123 (1986)を参照のこと)、抗体の反復投与を無効にする可能性があり得る。

ヒト化またはＣＤＲグラフト抗体は、ドナーＣＤＲと置換された（イムノグロブリン重鎖および軽鎖の）少なくとも１個または２個の、しかし一般的には３個全てのレシピエントＣＤＲを有する。抗体は、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部分と置換されていてもよく、またはＣＤＲのいくつかのみが非ヒトＣＤＲと置換されていてもよい。必要なのは、ヒト化抗体のＰＤ−１への結合に必要なＣＤＲの数を置換することだけである。好ましくは、ドナーは齧歯類の抗体、例えば、ラットまたはマウスの抗体で、レシピエントはヒトフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークである。典型的には、ＣＤＲをもたらすイムノグロブリンは「ドナー」と呼ばれ、フレームワークをもたらすイムノグロブリンは「アクセプター」と呼ばれる。一実施形態では、ドナーイムノグロブリンは非ヒト（例えば、齧歯類）である。アクセプターフレームワークは天然に生じる（例えば、ヒト）フレームワークもしくはコンセンサスフレームワーク、またはそれらに約８５％以上、好ましくは９０％、９５％、９９％以上同一の配列である。

本明細書では、用語「コンセンサス配列」とは、関連する配列のファミリーにおいて、最も頻繁に生じるアミノ酸（またはヌクレオチド）から形成される配列を意味する（例えば、Winnaker, From Genes to Clones (Verlagsgesellschaft, Weinheim, Germany 1987を参照のこと）。タンパク質のファミリーでは、コンセンサス配列におけるそれぞれの位置は、ファミリーにおいてその位置で最も頻繁に生じるアミノ酸によって占有されている。２つのアミノ酸が同じ頻度で生じるならば、いずれもコンセンサス配列に含めることができる。「コンセンサスフレームワーク」とは、コンセンサスイムノグロブリン配列におけるフレームワーク領域を意味する。

本明細書で開示した組み合わせ療法の有効性および疾患進行の出現は、腫瘍応答のＲＥＣＩＳＴ基準(Therasse P, Arbuck S, Eisenhauer E, et al (2000) New Guidelines to Evaluate the Response to Treatment in Solid Tumors, Journal of National Cancer Institute, Vol. 92; 205-16)およびRECIST 1.1ガイドライン改訂版(Eisenhauer E, et al (2009). New response evaluation criteria in solid tumors: revised RECIST guideline (version 1.1). European Journal of Cancer; Vol.45: 228-47.)を使用して測定することができる。

最良総合効果の主たる解析は、治験責任医師による一連の病変の総合効果に基づく。試験中の患者の最良総合効果に基づいて、次に以下の割合を計算する：
奏効率（ＯＲＲ）は、ＣＲまたはＰＲの最良総合効果を有する患者の割合である。これはまた、一部のプロトコールまたは出版物において「客観的な奏効率」と称される。
疾患制御率（ＤＣＲ）は、ＣＲまたはＰＲまたはＳＤの最良総合効果を有する患者の割合である。
別の取り組みは、ベースライン後のある特定の時点での進行速度をまとめて示すことである。この場合、以下の定義を使用する：
早期進行率（ＥＰＲ）は、治療開始８週間以内に疾患が進行した患者の割合である。

腫瘍反応アセスメントはまた、免疫関連効果判定基準（immune-related Response Criteria）（ｉｒＲＣ）（Wolchok JD, Hoos A, O'Day S et al (2009) Guidelines for the Evaluation of Immune Therapy Activity in Solid Tumors: Immune-Related Response Criteria, Clin Cancer Res; 15:7412-20およびNishino M, Giobbie-Hurder A, Gargano M, et al (2013) Developing a Common Language for Tumor Response to Immunotherapy: Immune-Related Response Criteria Using Unidimensional Measurements, Clin Cancer Res; 19:3936-3943に従って地域によって判定することができる。

本発明の様々な態様をさらに詳細に以下に記載する。さらなる定義は明細書全体にわたって記載する。

実施例１：ヒト化抗ＰＤ−１抗体の特徴付け
結合親和性および特異性
ヒト化ＢＡＰ０４９−クローン−ＢおよびＢＡＰ０４９−クローンＥの作製およびそれらの特徴付けは、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０１２７５４に記載されており、２０１５年７月３０日に国際公開第２０１５／１１２９００号パンフレットとして公開された。
マウス抗ＰＤ−１モノクローナル抗体ＢＡＰ０４９をヒト化した。特有の可変領域配列を有する１６個のヒト化ＢＡＰ０４９クローンの配列および試験試料が得られた。これらのクローンの生物学的機能（例えば、抗原結合およびリガンドブロック）、構造特性およびＣＨＯ細胞における一過性発現をさらに分析した。

結合親和性および特異性
ヒトＰＤ−１タンパク質に対するヒト化抗ＰＤ−１抗体の一例の結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ法を使用して測定した。結果は、Ｋａ＝２．７８×１０^５Ｍ^−１ｓ^−１；Ｋｄ＝２．１３×１０^−４ｓ^−１；Ｋ_Ｄ＝０．０８２７±０．００５５０５ｎＭである。

ヒト化技術および方法
ＢＡＰ０４９のヒト化は、ヒト生殖系列可変領域フレームワーク（ＦＷ）のコンビナトリアルライブラリーを使用して実施した。この技術は、ヒト生殖系列ＦＷ１、ＦＷ２およびＦＷ３配列を無作為に組み合わせることによって構築したヒト可変領域（ＶＲ）のライブラリーにインフレームでマウスＣＤＲを移動させることが必要である。重鎖（ＨＣ）（ＫａｂａｔヒトＨＣサブグループＩ）用にＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号６７）、軽鎖（ＬＣ）（ＫａｂａｔヒトκサブグループＩ）用にＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１０６）の１個だけのＦＷ４配列を使用した。ＶＲ配列のライブラリーをヒト定常領域（ＣＲ）配列、ＨＣのヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）およびＬＣのヒトκＣＲに融合させ、得られた完全なＩｇＧのライブラリーをスクリーニングのためにＣＨＯ細胞で発現させた。スクリーニングは、組織培養上清を用いて実施し、完全な細胞のＥＬＩＳＡ法またはＦＡＣＳで抗原発現細胞に対する結合力を測定した。

ヒト化方法は、ヒト化クローンのスクリーニングのための比較対象として役立ち得る、適切なキメラｍＡｂ（マウスＶＲ、ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、ヒトκ）の構築および発現から開始するステップワイズ法で実施した。ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）重鎖およびヒトカッパ軽鎖の定常領域アミノ酸配列を表３に示す。

ＬＣおよびＨＣのＶＲのヒト化は、２つの独立したステップで実施した。ヒト化ＬＣ（ｈｕＬＣ）のライブラリーをキメラＨＣ（マウスＶＲ、ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ））と組み合わせ、得られた「半ヒト化」ｍＡｂの結合活性をＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。適切な結合活性（≧キメラｍＡｂの結合）を備えたクローンのｈｕＬＣを選択した。同様に、ヒト化ＨＣ（ｈｕＨＣ）のライブラリーをキメラＬＣ（マウスＶＲ、ヒトκ）と組み合わせ、結合活性をＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。適切な結合活性（≧キメラｍＡｂの結合）を備えたクローンのｈｕＨＣを選択した。

次に、選択したｈｕＬＣおよびｈｕＨＣの可変領域の配列を決定して、特有の配列を有するｈｕＬＣおよびｈｕＨＣを同定した（最初の選択方法から得られたいくつかのクローンは同じＬＣまたはＨＣを共有し得る）。次に、特有のｈｕＬＣおよびｈｕＨＣを無作為に組み合わせてヒト化ｍＡｂ（ｈｕｍＡｂ）の小さなライブラリーを作製し、ＣＨＯ細胞で発現させ、抗原発現細胞においてＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳ法でスクリーニングした。キメラ比較対象ｍＡｂの結合と同じかまたは優れた結合活性を有するクローンがヒト化方法の最終生成物である。

キメラ抗体の構築
ＬＣ配列の１０２位にＣｙｓ、ＴｙｒまたはＳｅｒ残基のいずれかを有するキメラ抗体の３つのバリアントを調製した。３つのキメラ抗体、すなわち、ＢＡＰ０４９−ｃｈｉ（Ｃｙｓ）、ＢＡＰ０４９−ｃｈｉ（Ｔｙｒ）およびＢＡＰ０４９−ｃｈｉ（Ｓｅｒ）（それぞれＢＡＰ０４９−ｃｈｉ、ＢＡＰ０４９−ｃｈｉ−ＹおよびＢＡＰ０４９−ｃｈｉ−Ｓとしても知られている）をＣＨＯ細胞で発現させ、ＰＤ−１発現Ｊｕｒｋａｔ細胞に対する結合について標識したマウス抗体と競合する能力を試験した。３つのバリアントは競合実験で区別がつかなかった。結果は、３つのキメラｍＡｂ（Ｃｙｓ、Ｔｙｒ、Ｓｅｒ）が同様に、標識したマウスｍＡｂ ＢＡＰ０４９の結合と十分に競合することを示している。キメラｍＡｂ曲線とマウスｍＡｂ曲線の間のわずかな差は、おそらくｍＡｂ濃度を判定するために使用した方法の違いによるものだろう。マウスｍＡｂの濃度は、ＯＤ２８０測定値によって判定し、一方、上清中のキメラｍＡｂ濃度はＥＬＩＳＡでＩｇＧ４標準物を使用して判定した。生殖系列残基Ｔｙｒは、ヒト化抗体のために選択した。

ヒト化抗体クローン
ヒト化の方法によって、キメラ抗体の結合親和性と同程度の結合親和性を備えた１６個のクローンが生成した。各クローンについて、結合データに加えてＶＲ配列をｍＡｂの試料と共に提供した。試料は、ＣＨＯ細胞の一過性トランスフェクションによって調製し、組織培養上清を濃縮した。溶液中の抗体濃度は、ＩｇＧ４特異的ＥＬＩＳＡによって判定した。

１６個の特有のクローンは、４個の特有のＨＣ配列および９個の特有のＬＣ配列の組み合わせである。ＨＣ ＦＷ領域については、ＨＣ配列は２個の異なるＶＨＦＷ１の１個、３個の異なるＶＨＦＷ２の１個および２個の異なるＶＨＦＷ３配列の１個の組み合わせである。ＬＣ ＦＷ領域については、ＬＣ配列は５個の異なるＶＬＦＷ１の１個、３個の異なるＶＬＦＷ２の１個および４個の異なるＶＬＦＷ３配列の１個の組み合わせである。ヒト化ＢＡＰ０４９クローンＢおよびＥの重鎖および軽鎖可変ドメインのアミノ酸およびヌクレオチド配列を表１に示す。ヒト化ＢＡＰ０４９クローンの重鎖および軽鎖ＣＤＲのアミノ酸およびヌクレオチド配列も表１に示す。

ヒト化クローンの分析
結合活性および結合特異性の分析
結合活性および特異性は、一定濃度のＡｌｅｘａ ４８８標識マウスｍＡｂ、試験ｍＡｂの系列希釈およびＰＤ−１発現３００．１９細胞を使用した競合結合アッセイで測定した。試験ｍＡｂの標識ｍＡｂに対する濃度比が様々なｍＡｂ混合物とのインキュベーションは、４℃で３０分間であった。結合した標識マウスｍＡｂは、次にＦＡＣＳ機器を使用して定量した。実験は２回実施した。実験の精度内で、ヒト化クローンは全て、標識マウスｍＡｂの結合との競合において類似の活性を示す。この活性はまた、親マウスｍＡｂおよびキメラｍＡｂの活性と同程度である。ｍＡｂは、互いを比較して順位付けした。例えば、両実験において、ある特定のクローンの曲線がキメラｍＡｂ曲線の右にある場合は弱い競合剤であり、ある特定のクローンの曲線がキメラｍＡｂ曲線の左にある場合は良好な競合剤である。

ヒト化クローンの選択
クローンＢおよびＥを含む選択したクローンはさらに、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合をブロックする能力およびヒトＰＢＭＣによるインビトロアッセイにおけるＴ細胞活性の増強を試験した。

リガンド結合のブロック
マウス抗ＰＤ−１ｍＡｂは、天然のリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の細胞上で発現したＰＤ−１への結合を低濃度でブロックする。ヒト化クローンが親マウスｍＡｂのブロック能力を保持しているかどうかは、マウスおよびキメラ抗体との競合実験で試験した。

ｍＡｂのブロック能力は、一定濃度のＰＤ−Ｌ１−ｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ融合タンパク質またはＰＤ−Ｌ２−ｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ融合タンパク質、試験するｍＡｂの系列希釈およびＰＤ−１発現３００．１９細胞を使用した競合結合アッセイで評価した。インキュベーションは４℃で３０分間であった。結合したリガンド融合タンパク質は、ＩｇＧ４ｍＡｂを認識しないヤギ抗ヒトＩｇＧのＰＥコンジュゲートＦ（ａｂ’）２断片（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２０４３−０９）およびフローサイトメトリーで検出した。実験の精度内で、ヒト化クローン、キメラ抗体およびマウス親ｍＡｂは、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２リガンドの両方に同程度のブロック活性を示した。

ヒト化抗ＰＤ−１抗体、ＢＡＰ０４９の発現
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における発現を評価するために５個のヒト化クローンを選択した。

Ｌｏｎｚａ’ｓ ＧＳ Ｘｃｅｅｄベクター（重鎖についてはＩｇＧ４ｐｒｏΔｋおよび軽鎖についてはカッパ）を使用して、単一遺伝子ベクター（ＳＧＶ）を構築した。ＳＧＶを増幅して、容量２．８Ｌで発現させるためにＣＨＯＫ１ＳＶ ＧＳ−ＫＯ細胞に一過性同時トランスフェクトした。

発現培養物をトランスフェクションの６日後に収集し、遠心および滅菌濾過によって清澄にした。清澄にした細胞培養物上清は、１ステップタンパク質Ａクロマトグラフィーを使用して精製した。精製した物質を１ｍｇ／ｍｌの濃度で使用して、対照試料である抗体を含めて、ＳＥ−ＨＰＬＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＩＥＦおよびＬＡＬの形態の生成物品質分析を実施した。

ベクター構築
軽鎖および重鎖可変ドメインをコードする領域の配列は、ＧｅｎｅＡｒｔ ＡＧによって合成された。Ｎ末端制限部位ＨｉｎｄＩＩＩおよびＣ末端制限部位ＢｓｉＷＩ（軽鎖）およびＡｐａＩ（重鎖）を使用して、軽鎖可変ドメインをコードする領域はｐＸＣ−Ｋａｐｐａに、重鎖可変ドメインをコードする領域はｐＸＣ−ＩｇＧ４ｐｒｏ ΔＫベクターにそれぞれサブクローニングした。陽性クローンはＰＣＲ増幅（プライマー１０５３：ＧＣＴＧＡＣＡＧＡＣＴＡＡＣＡＧＡＣＴＧＴＴＣＣ（配列番号２２６）および１０７２：ＣＡＡＡＴＧＴＧＧＴＡＴＧＧＣＴＧＡ（配列番号２２７））によってスクリーニングし、制限酵素消化（ＥｃｏＲＩ−ＨＦおよびＨｉｎｄＩＩＩ−ＨＦの２重消化を使用する）および関心のある遺伝子のヌクレオチド配列決定によって確認した。

ＤＮＡ増幅
単一の細菌コロニーをアンピシリン５０μｇ／ｍｌを含有するＬｕｒｉａ Ｂｅｒｔａｎｉ（ＬＢ）培地（ＬＢ Ｂｒｏｔｈ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｌ７２７５）１５ｍｌに採取し、２２０ｒｐｍで震盪しながら３７℃で一晩インキュベートした。得られた開始培養物を使用して、アンピシリン５０μｇ／ｍｌを含有するＬｕｒｉａ Ｂｅｒｔａｎｉ（ＬＢ）培地１Ｌに接種し、２２０ｒｐｍで震盪しながら３７℃で一晩インキュベートした。ベクターＤＮＡはＱＩＡＧＥＮ Ｐｌａｓｍｉｄ Ｐｌｕｓ Ｇｉｇａｐｒｅｐ ｓｙｓｔｅｍ（ＱＩＡＧＥＮ、１２９９１）を使用して単離した。いずれの場合も、ＤＮＡ濃度はＮａｎｏｄｒｏｐ１０００分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して測定し、ＥＢ緩衝液（Ｔｒｉｓ−Ｃｌ１０ｍＭ、ｐＨ８．５）で１ｍｇ／ｍｌに調節した。単一遺伝子ベクターのＤＮＡ品質は、吸光度比Ａ２６０／Ａ２８０を測定することによってアセスメントした。これは、１．８８と１．９０の間であることが確認された。

ＣＨＯＫ１ＳＶ ＧＳ−ＫＯ細胞の培養
ＣＨＯＫ１ＳＶ ＧＳ−ＫＯ細胞は、グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、２５０３０−１２３）６ｍＭを補給したＣＤ−ＣＨＯ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１０７４３−０２９）で培養した。細胞は震盪培養器で３６．５℃、５％ＣＯ_２、８５％湿度、１４０ｒｐｍでインキュベートした。細胞は、常法通り２×１０^５細胞／ｍｌを接種して３〜４日毎に継代培養して、トランスフェクションに利用するために十分な細胞を得るために増殖させた。２０回継代した細胞は廃棄した。

ＣＨＯＫ１ＳＶ ＧＳ−ＫＯ細胞の一過性トランスフェクション
一過性トランスフェクションは、最短２週間培養したＣＨＯＫ１ＳＶ ＧＳ−ＫＯ細胞を使用して実施した。トランスフェクションの２４時間前に細胞を継代培養し、細胞の生存能はトランスフェクト時に＞９９％であった。

トランスフェクトは全て、プレートをベースにしたエレクトロポレーションシステム、Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅ ＭＸＣｅｌｌ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用してエレクトロポレーションによって実施した。各トランスフェクションでは、生細胞を予め温めた培地に２．８６×１０^７細胞／ｍｌになるように再懸濁した。ＤＮＡ（重鎖および軽鎖ＳＧＶの比１：１）８０μｇおよび細胞懸濁液７００μｌを各キュベット／ウェルに分注した。細胞を３００Ｖ、１３００μＦでエレクトロポレーションした。トランスフェクトした細胞をエルレンマイヤーフラスコ内の予め温めた培地に移し、キュベット／ウェルを予め温めた培地で２回濯ぎ、これもフラスコに移した。トランスフェクトした細胞培養物は震盪培養器で３６．５℃、５％ＣＯ_２、８５％湿度、１４０ｒｐｍで６日間インキュベートした。細胞生存能および生細胞濃度は、Ｃｅｄｅｘ ＨｉＲｅｓ自動細胞計数機（Ｒｏｃｈｅ）を使用して収集時に測定した。

プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー
細胞培養上清を収集し、２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって清澄にし、次に０．２２μｍ ＰＥＳ膜フィルターで濾過した。清澄になった上清は、予め充填した５ｍｌＨｉＴｒａｐ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲＥカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、１１−００３４−９４）を使用してＡＫＴＡ精製機（１０ｍｌ／分）で精製した。カラムは、リン酸ナトリウム５０ｍＭ、塩化ナトリウム１２５ｍＭ、ｐＨ７．０（平衡化緩衝液）５カラム体積（ＣＶ）で平衡化した。試料添加後、カラムを平衡化緩衝液２ＣＶ、次いでリン酸ナトリウム５０ｍＭ、塩化ナトリウム１Ｍ、ｐＨ７．０ ３ＣＶで洗浄し、平衡化緩衝液２ＣＶで反復洗浄した。次に、生成物はギ酸ナトリウム１０ｍＭ、ｐＨ３．５、５ＣＶ超で溶出した。タンパク質を含有する溶出画分は、すぐにｐＨをｐＨ７．２に調整し、０．２μｍフィルターで濾過した。

単一のタンパク質含有ピークが溶出相中に認められた。このピークは、ＳＥ−ＨＰＬＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析したところｍＡｂを含有することが示された。回収されたタンパク質収量を表５に示す。クローンは、３２．４から４３．０ｍｇ／Ｌの範囲で一過性に発現した。

ＳＥ−ＨＰＬＣ分析
プロテインＡ精製抗体の試料は、Ｚｏｒｂａｘ ＧＦ−２５０ ４μｍ ９．４ｍｍ ＩＤ×２５０ｍｍカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ）を用いたＡｇｉｌｅｎｔ １２００ ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ ｓｙｓｔｅｍによるＳＥ−ＨＰＬＣによって２連で分析した。濃度１ｍｇ／ｍｌの試料の一定量を注射前に０．２μｍフィルターで濾過した。一定量８０μｌをそれぞれ注射し、１ｍｌ／分で１５分間流した。可溶性凝集レベルは、Ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ）ソフトウェアを使用して分析した。

試験した抗体および対照ＩｇＧ４抗体について、検出したピーク領域全体のパーセンテージを示す滞留時間によるクロマトグラフィープロファイルを得た。生成物は約８．６５から８．７２分に単一のタンパク質ピークを示し、これはヒトＩｇＧ４抗体対照（約８．６４分）に相当し、単量体抗体と合致する。可溶性凝集体に合致する少量（最高約４〜５％）の高分子量不純物が約７．４３分と８．０８分の間の滞留時間で検出された。

ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析
還元試料は、分析のためにＮｕＰａｇｅ４×ＬＤＳ試料緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＮＰ０００７）およびＮｕＰａｇｅ １０×試料還元剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＮＰ０００９）と混合することによって調製し、７０℃で１０分間インキュベートして調製した。非還元試料については、還元剤および熱インキュベーションを省いた。試料は、１．５ｍｍ ＮｕＰａｇｅ ４〜１２％ Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ Ｎｏｖｅｘ成型済みゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＮＰ０３３５ＰＫ２）で、ＮｕＰａｇｅ ＭＥＳ ＳＤＳ泳動用緩衝液を用いて変性条件下で電気泳動した。ＳｅｅＢｌｕｅ Ｐｌｕｓ２着色分子量標準物（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＬＣ５９２５）および対照ＩｇＧ４抗体１ｍｇ／ｍｌの一定量１０μｌをゲルに含めた。１ｍｇ／ｍｌの各試料１μｌをゲルに添加した。一旦電気泳動したら、ゲルをＩｎｓｔａｎｔＢｌｕｅ（ＴｒｉｐｌｅＲｅｄ、ＩＳＢ０１Ｌ）で室温で３０分間染色した。染色したゲルの画像をＢｉｏＳｐｅｃｔｒｕｍ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＵＶＰ）で分析した。

分析によって、抗体生成物の存在および純度の良好なレベルが確認された。非還元条件下では、対照ＩｇＧ４抗体に相当する９８ｋＤａに近い優勢なタンパク質バンドが認められた。対照ＩｇＧ４抗体および１つの試験クローンは、非還元条件下で約７０ｋＤａに重鎖および軽鎖半抗体に対応するかすかなバンドをさらに示す。これは、対照抗体であることが期待される。還元条件下では、重鎖（４９ｋＤａマーカーの位置に近い）および軽鎖（２８ｋＤａマーカーの位置に近い）の大きさに合致し、対照ＩｇＧ４抗体で見いだされたバンドに相当する２本のバンドが認められた。

等電点電気泳動（ＩＥＦ）分析
プロテインＡ精製抗体の非還元試料は、以下に記載した通りに電気泳動した。

プロテインＡ精製試料５μｇを、１．０ｍｍ Ｎｏｖｅｘ ｐＨ３〜１０勾配ゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＥＣ６６５５２ＢＯＸ）で製造者推奨の泳動条件を使用して電気泳動した。ＩＥＦ ｐＨ３〜１０マーカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、３９２１２−０１）の一定量１０μｌをゲルに含めた。一旦電気泳動したら、ゲルを１０％ＴＣＡ溶液で３０分間固定し、次いでＩｎｓｔａｎｔＢｌｕｅ（ＴｒｉｐｌｅＲｅｄ、ＩＳＢ０１Ｌ）で室温で一晩染色した。染色したゲルの画像をＢｉｏＳｐｅｃｔｒｕｍ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＵＶＰ）で分析した。

試験したクローンは、ｐＨ７．４と８．０マーカーの間に電荷アイソフォームを示す。検出された電荷アイソフォームは、６．９９と７．５６の間と予測された、これらの抗体で理論的に計算されたｐＩよりも少し塩基性である。全般的により塩基性の電荷アイソフォームに傾くことは、分子上の糖鎖付加などの翻訳後修飾の存在を示唆する。クローンＣおよびクローンＥは、同程度の電荷アイソフォームを示し、理論的に計算されたｐＩとも合致し、両者とも同じである（６．９９）。対照ＩｇＧ４抗体は、期待通りの振る舞いをした。

ヒト化抗ＰＤ−１抗体の特徴
結合親和性および特異性
表１に示したようなクローンＢおよびクローンＥを含むヒト化抗ＰＤ−１抗体の一例のヒトＰＤ−１タンパク質に対する結合は、Ｂｉａｃｏｒｅ法を使用して測定した。結果は、Ｋａ＝２．７８×１０^５Ｍ^−１ｓ^−１；Ｋｄ＝２．１３×１０^−４ｓ^−１；Ｋ_Ｄ＝０．０８２７±０．００５５０５ｎＭである。

ヒトＰＤ−１発現３００．１９細胞に対する同じヒト化抗ＰＤ−１抗体の結合は、ＦＡＣＳ分析を使用して測定した。その結果は、抗ＰＤ−１抗体（ヒトＩｇＧ４）がヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照と比較してヒトＰＤ−１に対して高い親和性で結合することを示す。

例示されたヒト化抗ＰＤ−１抗体は、カニクイザルＰＤ−１タンパク質およびカニクイザルＰＤ−１発現３００．１９細胞に対して高い親和性を表すことが見いだされた。Ｂｉａｃｏｒｅ法によって測定したように、抗ＰＤ−１抗体はカニクイザルＰＤ−１に０．０９３±０．０１５ｎＭのＫ_Ｄで結合する。カニクイザルＰＤ−１に対する結合親和性は、ヒトＰＤ−１に対する結合親和性と同程度である。

さらに結合を分析することによって、例示されたヒト化抗ＰＤ−１抗体は、マウスＰＤ−１と交差反応しないか、または親細胞系と交差反応することが示される。

ＰＤ−１とそのリガンドとの相互作用のブロック
例示されたヒト化抗ＰＤ−１抗体がＰＤ−１とその公知のリガンド、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の両方との相互作用をブロックする能力を調べた。その結果は、抗ＰＤ−１抗体がヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照および抗体を含まない対照と比較して、ヒトＰＤ−１を発現する３００．１９細胞上のＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２の結合をブロックすることを示す。抗ＰＤ−１抗体は、３００．１９細胞上のＰＤ−Ｌ１結合を０．９４±０．１５ｎＭのＩＣ５０でブロックした。同抗体は、３００．１９細胞上のＰＤ−Ｌ２結合を１．３±０．２５ｎＭのＩＣ５０でブロックした。

細胞活性
例示されたヒト化抗ＰＤ−１抗体が、ブドウ球菌性（Staphylococcal）エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）によって刺激されたＩＬ−２の発現を増強する能力をヒト全血のエクスビボアッセイで試験した。ＩＬ−２測定の前に、希釈したヒト全血をＳＥＢの存在下または非存在下で抗ＰＤ−１抗体と３７℃で４８時間インキュベートした。結果は、抗ＰＤ−１抗体がヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照（ＳＥＢ ２５μｇ／ｍＬ；ｎ＝５ドナー）と比較してＳＥＢ刺激ＩＬ−２発現を２．２８±０．３２倍増加させたことを示す。

実施例２：ＥＧＦ８１６はＴＥＣファミリーのキナーゼの強力な阻害剤である。
Ｔｅｃファミリーキナーゼには、ＩＴＫ、ＢＭＸ、ＴＥＣ、ＲＬＫおよびＢＴＫが含まれ、Ｔ細胞受容体およびケモカイン受容体シグナル伝達の伝播の中心である。変異ＥＧＦＲの強力な阻害剤である化合物Ａは、インビトロにおいてＴｅｃファミリーキナーゼの強力な阻害を示す。表７に示したように、生化学をベースにしたアッセイでは、化合物Ａは３つのＴ細胞Ｔｅｃファミリーメンバー：ＩＴＫ、ＴＥＣおよびＴＸＫに対して１桁ｎＭの効力を示した。細胞アッセイでは、化合物Ａは、Ｔ細胞ＴｅｃファミリーメンバーのＩＬ２産生、マウスＣＤ４Ｔ細胞増殖およびヒトＣＤ４Ｔ細胞増殖それぞれを２１、１０７および１４０ｎＭのＩＣ_５０で強力に阻害した。マウスＢ細胞増殖およびＴＭＤ−８（ＢＴＫ依存性）増殖アッセイにおけるＩＣ_５０値の上昇によって示されたように、Ｂ細胞Ｔｅｃファミリーキナーゼに対する効力は小さかった。

インビトロアッセイ法（表７に記載されたアッセイ）：
ＩＴＫ、ＴＥＣおよびＴＸＫの生化学的アッセイは、Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ’ ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ ＬａｂＣｈｉｐ（商標）技術を使用して実施した。この技術は、蛍光ペプチド基質のリン酸化生成物への変換を測定するために微小流体チップを使用する。生成物変換を、様々な化合物濃度の存在下で判定し、ＩＣ_５０値を計算した。

細胞ＩＬ−２産生アッセイは、ＪｕｒｋａＴ細胞を使用して実施した。様々な濃度の化合物の存在下で一晩ＣＤ３／ＣＤ２８を刺激して、条件培地中のＩＬ−２含量をＥＬＩＳＡによって測定し、化合物ＩＣ_５０を判定した。

マウスＣＤ４Ｔ細胞アッセイでは、ＣＤ４＋Ｔ細胞をマウス脾臓から精製し、抗ＣＤ３をコーティングした組織培養プレートに播種した。細胞は様々な濃度の化合物の存在下で３７℃で４８時間インキュベートした。次に、^３Ｈ−チミジンを添加し、細胞をさらに３７℃で１８時間インキュベートした。その後細胞を収集し、ベータカウンターで読み取った。

ヒトＣＤ４Ｔ細胞アッセイにおいて、ｌｅｕｋｏｐａｋから単離した初代ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞は、Ｔ細胞増殖を刺激するために抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズの存在下で培養した。４日後、細胞生存能は、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏを使用して測定した。

マウスＢ細胞アッセイでは、Ｂ細胞をマウス脾臓から精製し、抗ＩｇＭおよびｍ−ＩＬ４を補給した組織培養プレートに播種した。細胞は様々な濃度の化合物の存在下で３７℃でインキュベートした。３日後、細胞生存能は、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏを使用して測定した。

ＢＴＫ依存性ＴＭＤ−８細胞増殖アッセイでは、ＴＭＤ−８細胞は様々な濃度の化合物の存在下で３７℃でインキュベートした。３日後、細胞生存能は、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏを使用して測定した。

実施例３
Ｔ細胞は、免疫制御において不可欠の役割を担っている。Ｔ細胞Ｔｅｃファミリーキナーゼは、Ｔ細胞機能における重要な要素で、次に免疫機能を調節することができる。化合物ＡはＴ細胞Ｔｅｃファミリーキナーゼの強力な阻害を示したので、インビボにおけるその潜在的免疫調節効果をさらに調べた。免疫系で頻繁に使用される機能的アセスメントであるＴ細胞依存性抗体応答（ＴＤＡＲ）アッセイで化合物Ａを試験した。化合物Ａをラットに３０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で５週間経口投与した。本調査の動物には試験日の１１および２５日目に、回復群には２８および４２日目に、動物にＫＬＨ（キーホールリンペットヘモシアニン）抗原３００μｇを投与した。抗ＫＬＨ ＩｇＭおよび抗ＫＬＨ ＩｇＧ抗体の血清学的アセスメントのための試料を収集した（本調査の動物からは投与前の試験日１９、２１、２３、２５および３６日目；回復動物からはＫＬＨ注射前の回復日数４２および５３日目）。並行した媒体対照と値を比較したとき、化合物Ａで治療した動物ではＫＬＨ免疫化後に免疫調節応答が示された。表８に示したように、抗ＫＬＨ ＩｇＭ抗体（１次応答）の減少は、雌雄両ラットの全試験群において試験日数１９〜２１日目がピークであった。この減少はまた、雌ラットの試験日２１、２３、２５日目（１次応答、時間経過）および３６日目（追加免疫後）の平均抗ＫＬＨ ＩｇＭ値において認められた。抗ＫＬＨ ＩｇＧ抗体では、平均濃度の減少は、雌雄両ラットの試験日１９、２１、２３および２５日目に明らかであった。雌ラットでは試験日３６日目に、平均濃度の減少が検出された。

化合物Ａ治療停止後に回復が示された。化合物Ａに関連した雌雄両ラットにおける抗ＫＬＨ抗体産生の減少は可逆的であった。これには、回復サンプリング時点（回復日数４２および５３日目）では、並行した対照と類似であった値によって示されるように、一次応答−抗ＫＬＨＩｇＭ、および２次的な抗ＫＬＨＩｇＧ産生によって測定されるアイソタイプスイッチの両方が含まれる。

要約すると、１次ＩｇＭ抗体形成およびＩｇＧ抗体へのアイソタイプスイッチに対する化合物Ａのインビボにおける効果は３０ｍｇ／ｋｇで示された。この効果は、化合物Ａ停止後に逆行した。あわせて考えると、インビトロにおける生化学的／細胞データおよびインビボにおけるＴＤＡＲの結果は、化合物Ａが潜在的な免疫調節能力を有することを示した。

実施例４：抗ＰＤ−Ｌ１抗体および化合物Ａの組み合わせ物のインビボにおける薬理学
化合物Ａは、Ａ２０リンパ腫モデルでインビボにおいて抗ＰＤ−Ｌ１抗体分子の一例と組み合わせた。図４に示したように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と化合物Ａ、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体とイブルチニブの組み合わせ物は、任意の単一薬剤よりも有効であった。化合物Ａおよびイブルチニブの投与は１０日間のみであり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与は全体で５回であった。化合物Ａおよびイブルチニブは、一過性に投与しただけであっても、化合物Ａおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体ならびにイブルチニブおよび抗ＰＤ−Ｌ１抗体の生存に対する効果は６０日を超えて長引いた。図５に示したように、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と化合物Ａの組み合わせ物はまた、Ａ２０リンパ腫同種移植を有するマウスにおける腫瘍退縮を引き起こした。図５では、横棒はＥＧＦ８１６およびイブルチニブによる治療期間を示し、矢印は抗ＰＤ−Ｌ１抗体を投与したときを示す。

化合物Ａと抗ＰＤ−Ｌ１抗体との組み合わせ物はまた忍容性が良好で、治療期間中全用量において治療した動物に正の体重変化が認められた。

実施例５：一定用量スケジュールの薬物動態分析
薬物動態（ＰＫ）モデリングに基づくと、一定用量の使用は、適切なＣｍｉｎ濃度での患者への曝露を実現することが期待される。患者の９９．５％超がＥＣ５０を上回り、患者の９３％超がＥＣ９０を上回るだろう。３００ｍｇを３週間に１回（Ｑ３Ｗ）かまたは４００ｍｇを４週間に１回（Ｑ４Ｗ）使用する例示された抗ＰＤ−１抗体分子（ＢＡＰ０４９−クローンＥ）で予測される平均定常状態Ｃｍｉｎは、平均して２０μｇ／ｍＬ（最高体重、１５０ｋｇ）を上回ることが期待される。

用量／レジメン（３００ｍｇ ｑ３ｗまたは４００ｍｇ ｑ４ｗ）のいずれかで認められた、例示された抗ＰＤ−１抗体分子の定常状態で期待される平均Ｃｍｉｎ濃度は、ＥＣ５０（０．４２μｇ／ｍＬ）よりも少なくとも７７倍高く、ＥＣ９０よりも約８．６倍高いものとなる。エクスビボにおける効力は、ＳＥＢエクスビボアッセイにおけるＩＬ−２変化に基づく。

患者の１０％未満は、３００ｍｇ Ｑ３Ｗまたは４００ｍｇ Ｑ４Ｗのいずれかで３．６μｇ／ｍＬ未満のＣｍｉｎ濃度を実現することが期待される。患者の０．５％未満は、３００ｍｇ Ｑ３Ｗまたは４００ｍｇ Ｑ４Ｗのいずれかで０．４μｇ／ｍＬ未満のＣｍｉｎ濃度を実現することが期待される。

例示された抗ＰＤ−１抗体分子の同じ用量を投与されている患者の様々な体重に対して予測されたＣトラフ（Ｃｍｉｎ）濃度を図１に示す。体重をベースにした用量投与は、固定用量と比較する（３．７５ｍｇ／ｋｇ Ｑ３Ｗ対３００ｍｇ Ｑ３Ｗおよび５ｍｇ／ｋｇ Ｑ４Ｗ対４００ｍｇ Ｑ４Ｗ）。図１は、例示された抗ＰＤ−１抗体分子の一定用量投与を支持する。

ＰＫモデルをさらに検証する。図２に示したように、測定濃度対モデル予測濃度は、統一線上にある。図３は、モデルが蓄積、時間経過および対象内の変動を捉えていることを示す。

したがって、抗体分子の推奨用量は４００ｍｇ Ｑ４Ｗを選択することができる。代わりの３００ｍｇ Ｑ３Ｗの投与レジメンも４００ｍｇ Ｑ４Ｗと類似の曝露を実現することが期待され、所与の投与サイクルにおいてＱ３Ｗスケジュールがより便利な場合、組み合わせレジメンで使用することができる。

実施例６：結腸直腸がん（ＣＲＣ）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）またはトリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）の成人患者における、抗体分子の一例（抗体Ｂ）と組み合わせた化合物Ａの第Ｉｂ相多施設非盲検試験
この試験では、調査する薬物は、化合物Ａおよび抗体分子Ｂ、抗ＰＤ−１受容体組換えヒト化モノクローナル抗体である。

この試験で試験した、例示された抗体分子、抗体Ｂ（ＢＡＰ０４９−クローン−Ｅ）は、プログラム細胞死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）およびプログラム細胞死リガンド−２（ＰＤ−Ｌ２）のＰＤ−１への結合をブロックするヒト化抗プログラム細胞死−１（ＰＤ−１）ＩｇＧ４モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。これは、ＰＤ−１に高い親和性で結合し、その生物学的活性を阻害する。この抗体分子のアミノ酸配列を本明細書の表１に記載する。

この試験は、用量漸増部およびその後の用量拡大部から構成される。試験治療を２８日投与サイクルで投与する。

試験期間
漸増部および拡大部に組み入れられる患者は、以下の試験期間中に参加する：
・スクリーニング期間
・治療期間１−最高６サイクルから構成することができる
・治療中断期間
・治療期間２
・安全性追跡期間
・疾患進行追跡

本試験を通じて使用した投与サイクルは２８日投与サイクルである。

スクリーニング期間
一旦患者が試験のインフォームドコンセントに署名をしたら、スクリーニング期間を開始する。患者は、組み入れ基準全てを満たしどの除外基準も満たさないことを確認するために評価する。

治療期間１
治療期間１の間に、患者が許容できない毒性を経験するか、疾患進行の臨床証拠があるか、および／または治験責任医師もしくは患者の判断で治療を中止しない限り、試験治療を最高６サイクル投与する。疾患進行の放射線学的証拠を有するが、臨床上の利益の証拠がある患者は、６サイクルが完了するまで試験治療を継続してもよい。

治療中断期間
一旦患者が治療期間１を完了したら、試験治療を中断し、患者は試験治療中断期間に入る。患者は、安全性アセスメント（毎月）および腫瘍アセスメント（２カ月毎）のために通院を継続する。

一旦患者が疾患進行の臨床上または放射線学的証拠を有したら、治療を再開してもよい。

治療期間２
患者は、療法を中断する前に投与されていたものと同じ用量およびスケジュールで試験治療を再開することができる。抗体Ｂ＋化合物Ａを投与されている患者では、治療期間２における試験治療は、治療期間１のように投与する（１サイクルのみ）。患者は全て、試験治療を再開する前に、例えば、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１またはｉｒＲＣ基準を使用して、腫瘍アセスメントを受ける。

この腫瘍アセスメントは、治療期間２のベースラインスキャンとして使用する。

試験治療２サイクルの完了後、患者がいかなる＞グレード２の試験治療関連毒性も経験しなかったならば、患者は、研究施設の標準治療に従うアセスメントを低減したスケジュールか、または３カ月毎のいずれかより頻繁な方で試験を継続してもよい。治療期間２中に放射線学的に疾患進行を有し、臨床上の利益の証拠を有する患者は、試験治療を継続してもよい。

治療終了時（ＥＯＴ）の来院
患者が治療期間１、治療中断期間または治療期間２であるかどうかにかかわらず、ＥＯＴ来院は試験治療の永久中止決定の１４日以内に行う。参加した患者は全て、ＥＯＴ来院を完了しなければならない。

用量および治療スケジュール
ｉ．ｖ．注入のためのバイアル中の凍結乾燥物（ＬＹＶＩ）として抗体Ｂは、固定用量として４００ｍｇの用量で４週間に１回投与する。抗体Ｂは、ｉ．ｖ．注入として３０分間、または臨床的に指示されれば最高２時間投与する。抗体Ｂの投与は、最高７日間遅延してもよい。

化合物Ａは、抗体Ｂ注入の前後に投与することができる。

化合物Ａは、最初は他の臨床研究によって前もって確立された薬理学的活性の証拠がある低用量以下で投与する。例えば、化合物Ａの開始用量は、最初のサイクルのみは１日目から１０日目まで毎日２５ｍｇで投与し、その後停止してもよい。投与組み合わせ物が安全であることが判定されたならば、化合物Ａの用量は、その用量レベルでの安全性および忍容性を確認するためにさらなる患者で試験するか、または漸増させる。例えば、化合物Ａの開始用量は、最初のサイクルは１日目から１０日目まで毎日５０ｍｇまで漸増させ、その後停止してもよい。用量漸増は、療法の最初の２サイクルで観察された任意の用量規定毒性（ＤＬＴ）をベースにしたベイジアンロジスティック回帰分析モデル（ＢＬＲＭ）によって導く。ＢＬＲＭは、がん患者における最大耐量（ＭＴＤ）／推奨拡大用量（ＲＤＥ）を推定するために良く確立された方法である。適合ＢＬＲＭは、将来における患者の試験に対するＤＬＴの危険性をコントロールするための過量投与制御を伴う用量漸増原則（ＥＷＯＣ）によって導く。小さなデータセットに対するＢａｙｅｓｉａｎ応答適合モデルの使用は、ＥＭＡ（Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｏｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ ｉｎ ｓｍａｌｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ Ｆｅｂｒｕａｒｙ １ ２００７）によって承認され、膨大な出版物によって支持され、その開発および適切な使用は、ＦＤＡのクリティカルパスイニシアチブの１つの態様である。

ＭＴＤは、組み合わせ物による最初の治療の５６日後の治療患者の３３％以上においてＤＬＴの原因とならないことが期待される、薬物用量の最高の組み合わせ物と定義される。

用量拡大
一旦組み合わせ物のＭＴＤ／ＲＤＥが判定されたら、組み合わせ物の安全性、忍容性および予備的な有効性をさらにアセスメントするために試験の拡大部を開始する。

結果として、化合物Ａの用量は、多数の用量レベルまたはスケジュールを試験することなく同定することが期待される。組み合わせ物の薬物動態活性をアセスメントするために、患者は全てベースライン時および約２回の療法サイクル後に再度、腫瘍生検を受ける。標的疾患適応症（ＣＲＣ、ＮＳＣＬＣおよびＴＮＢＣ）それぞれにおいて、リンパ球および骨髄系細胞を含む免疫細胞による腫瘍浸潤における変化の範囲は、所与の組み合わせ物のいかなる潜在的利益の決定にも寄与することができる。

本試験に組み入れる資格のある患者の組み入れ基準
１．年齢≧１８歳
２．標準療法にも関わらず進行した、または標準療法に不耐性の、または標準療法が存在しない、ＲＥＣＩＳＴバージョン１．１によって判定されたような測定可能な疾患を有する、進行性／転移性がんを有する患者。患者は以下の群の１つに合致しなければならない：
・ＣＲＣ（ＰＣＲおよび／またはＩＨＣを含む局所アッセイによってミスマッチ修復欠損ではない）
・ＮＳＣＬＣ（腺癌）
・ＴＮＢＣ
３．米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）一般状態≦２
４．患者は、生検に適した疾患部位を有していて、治療施設のガイドラインに従って腫瘍生検の候補でなければならない。患者は、ベースライン時および本試験の治療中に再度新たに腫瘍生検を受ける意思がなければならない。
５．ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１に特異的な前治療が原因のいかなる毒性も療法の中止につながらないならば、ＰＤ−１／ＰＤＬ−１阻害剤による前治療は可能である。

主要除外基準
１．症状を有する中枢神経系（ＣＮＳ）転移、または局所的なＣＮＳ特異的療法（放射線療法または手術など）もしくは過去２週間以内に副腎皮質ステロイド用量の増加を必要とするＣＮＳ転移の存在。
２．その他のｍＡｂに対する重度の過敏症反応の病歴。
３．以下に定義された臨床検査値範囲外の患者：
・クレアチニンクリアランス（コッククロフト・ゴールト式を使用して計算するか、または測定する）＜４０ｍＬ／分
・総ビリルビン量＞１．５×ＵＬＮ、ジルベール症候群の患者は除くが、総ビリルビン量＞３．０×ＵＬＮまたは直接ビリルビン＞１．５×ＵＬＮならば除外される
・アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）＞３×ＵＬＮ、肝臓が関与した腫瘍を有する患者は除くが、ＡＬＴ＞５×ＵＬＮならば除外される
・アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）＞３×ＵＬＮ、肝臓が関与した腫瘍を有する患者は除くが、ＡＳＴ＞５×ＵＬＮならば除外される
・増殖因子の支持のない好中球絶対数＜１．０×１０^９／Ｌ
・増殖因子または輸血の支持のない血小板数＜７５×１０^９／Ｌ
・増殖因子または輸血の支持のないヘモグロビン（Ｈｇｂ）＜９ｇ／ｄＬ
・適切な補充療法にもかかわらずカリウム、マグネシウム、カルシウムまたはリン酸異常＞ＣＴＣＡＥグレード１
４．以下のいずれかを含む、心機能障害または臨床的に重要な心疾患：
・治療を必要とするうっ血性心不全（ＮＹＨＡグレード≧２）、コントロールできない高血圧または臨床的に重要な不整脈などの臨床的に重要な、および／またはコントロールできない心臓疾患
・ＥＣＧまたは先天性ＱＴ延長症候群のスクリーニングにおいて、女性ではＱＴｃＦ＞４７０ｍｓｅｃまた男性では＞４５０ｍｓｅｃ
・試験登録＜３カ月前に急性心筋梗塞または不安定狭心症
５．自己免疫疾患の活性がある、知られている、または疑いがある患者。白斑症、I型糖尿病、ホルモン補充のみを必要とする自己免疫症状による甲状腺機能低下症の残存、全身治療を必要としない乾癬、または外部からの引き金がないと再発しないことが期待される状態の患者は、登録を許可する。
６．スクリーニング時のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染。
７．漸増部：スクリーニング時の活性のあるＢ型肝炎（ＨＢＶ）ウイルスまたはＣ型肝炎（ＨＣＶ）ウイルス感染。
拡大部：活性のあるＨＢＶまたはＨＣＶを有する患者を除外するが、ＨＢＶまたはＨＣＶの治療を受けている患者は除く。
８．本試験で治療しているもの以外の悪性疾患。この除外基準の例外には、以下が含まれる：治療法によって治療され、試験治療前２年以内に再発したことがない悪性腫瘍、完全に切除された基底細胞および扁平上皮細胞皮膚がん、低悪性度とみなされ、治療を全く必要としない任意の悪性腫瘍ならびに生体位で完全に切除された任意の種類の癌腫。
９．試験治療の初回投与前２週間以内の全身の抗がん治療。主要な遅延毒性を有する細胞毒性剤、例えば、マイトマイシンＣおよびニトロソウレアでは、６週間の洗い出し期間が指示される。ＣＴＬＡ−４アンタゴニストなどの抗がん免疫療法を受けている患者では、６週間の洗い出し期間が指示される。
１０．全身の抗生物質療法を必要とする活性のある感染症。
１１．副腎不全の状態でステロイド補充投与以外の全身のステロイド療法による長期治療を必要とする患者。局所、吸入、経鼻および眼科用ステロイドは許可される。
１２．免疫抑制治療薬（前述のようなステロイド以外）の全身治療を受けている患者。
１３．試験治療開始前４週間以内の感染性疾患（例えば、インフルエンザ、水痘、肺炎球菌）に対するいかなる生ワクチンの使用。
生ワクチンの使用は、試験期間全体を通じて許可されない。
１４．試験治療の初回投与前２週間以内の大手術（縦隔鏡検査、中心静脈アクセス装置の挿入および栄養管の挿入は大手術とはみなされない）。
１５．試験薬の初回投与前２週間以内の放射線療法、骨痛または限局的有痛性腫瘍塊の治療のためなどの限定された領域への姑息的放射線照射は除く。治療への応答のアセスメントを可能にするために、患者は照射されたことがない測定可能な疾患が残存していなければならない。
１６．試験治療の初回投与前２週間以内の介入試験、治験への参加。
１７．前がん療法による、≧ＣＴＣＡＥグレード２毒性の存在（脱毛症、末梢神経障害および聴覚毒性は除くが、≧ＣＴＣＡＥグレード３ならば除外する）。
１８．試験薬の開始前≦２週間の造血コロニー刺激成長因子（例えば、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ）の使用。試験治療の初回投与の少なくとも２週間前に開始していれば、赤血球刺激剤は許可される。
１９．安全性の問題、臨床試験の手順の適応性または試験結果の解釈によって、治験責任医師が判断した、患者が臨床試験に参加できない病状。
２０．妊婦または授乳中の女性で、妊娠はｈＣＧ臨床検査陽性によって確認される受胎後および妊娠期間が終了するまでの女性の状態と定義される。内分泌腫瘍の稀な症例の場合、ｈＣＧレベルは正常限界を上回るが、患者は妊娠していないことがある。これらの場合、妊娠を排除するために血清ｈＣＧ試験を反復し（上昇の結果は得られない）、膣／骨盤超音波を行うべきである。医薬情報担当者が結果の確認および考察を行い、これらの患者を試験に登録することができる。
２１．試験治療中、および試験治療の最後の投与から９０日間、非常に有効な避妊方法を使用していなければ、生理学的に妊娠することができる女性全てと定義される、出産可能な女性。

Claims (40)

1. ｉ）表１で記載したようなＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−ＥのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ならびに表１で記載したようなＢＡＰ０４９−クローン−ＢまたはＢＡＰ０４９−クローン−ＥのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むヒトプログラム細胞死−１（ＰＤ−１）に結合することができる単離された抗体分子、ならびに
   ｉｉ）化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩
   を含む医薬組み合わせ物。
2. 請求項１に記載のＰＤ−１抗体が、
   （ａ）配列番号１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ならびに配列番号１１のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１２のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、
   （ｂ）配列番号４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号６のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨならびに配列番号１４のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号１５のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、
   （ｃ）配列番号２１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨならびに配列番号３１のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３２のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、または
   （ｄ）配列番号２４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２６のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨならびに配列番号３４のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３５のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３６のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬ、ならびに
   ｉｉ）化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩
   を含む、請求項１に記載の医薬組み合わせ物。
3. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号２１のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２３のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨならびに配列番号３１のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３２のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３３のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１に記載の医薬組み合わせ物。
4. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号２４のＨＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号２５のＨＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号２６のＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＨならびに配列番号３４のＬＣＤＲ１アミノ酸配列、配列番号３５のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３６のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むＶＬを含む、請求項１に記載の医薬組み合わせ物。
5. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号７もしくは２７のいずれかと少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％もしくは９８％同一なアミノ酸配列を含む、または好ましくは配列番号７もしくは２７のいずれかと同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、請求項１または請求項２に記載の医薬組み合わせ物。
6. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号１７もしくは３７のいずれかと少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％もしくは９８％同一なアミノ酸配列を含む、または好ましくは配列番号１７もしくは３７のいずれかと同一なアミノ酸を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１または請求項２に記載の医薬組み合わせ物。
7. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号２７と少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％もしくは９８％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３７と少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％もしくは９８％同一なアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１または請求項２に記載の医薬組み合わせ物。
8. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１または請求項２に記載の医薬組み合わせ物。
9. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号２９と少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％もしくは９８％同一なアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３９と少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％もしくは９８％同一なアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１または請求項２に記載の医薬組み合わせ物。
10. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１または請求項２に記載の医薬組み合わせ物。
11. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号７と少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％もしくは９８％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１７と少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％もしくは９８％同一なアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１または請求項２に記載の医薬組み合わせ物。
12. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、請求項１または請求項２に記載の医薬組み合わせ物。
13. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号９と少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％もしくは９８％同一なアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１９と少なくとも８５％、８７％、９０％、９２％、９３％、９５％、９７％もしくは９８％同一なアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１または請求項２に記載の医薬組み合わせ物。
14. ＰＤ−１抗体分子が、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１または請求項２に記載の医薬組み合わせ物。
15. 化合物Ａの前記薬学的に許容される塩がメシル酸塩である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ物。
16. がんを治療する方法で使用するための、請求項１から１５のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ物。
17. 抗ＰＤ−１または抗ＰＤ−Ｌ１療法などの免疫療法に抵抗性または難治性であるがんを治療する方法で使用するための請求項１から１６のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ物。
18. 前記がんが、肺がん、結腸直腸がんまたは乳がんである、請求項１６または請求項１７に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
19. 前記肺がんが、扁平上皮肺がんまたはＮＳＣＬＣである、請求項１８に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
20. 前記がんが、結腸直腸がんである、請求項１８に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
21. 前記乳がんが、トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）である、請求項１８に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
22. 治療上有効な量のＰＤ−１抗体分子および治療上有効な量の化合物Ａを含む、請求項１６から２１のいずれか一項に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
23. 抗ＰＤ−１抗体分子を約３００ｍｇから４００ｍｇまでの用量で３週間に１回または４週間に１回投与する、請求項１６から２２のいずれか一項に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
24. 抗ＰＤ−１抗体分子を約４００ｍｇの用量で４週間に１回投与する、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
25. 抗ＰＤ−１抗体分子を約３００ｍｇの用量で３週間に１回投与する、請求項１６から２３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
26. 化合物Ａを５ｍｇと１００ｍｇの間の用量、例えば、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇおよび１００ｍｇの用量で投与する、請求項１６から２５のいずれか一項に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
27. ＰＤ−１抗体分子および化合物Ａまたはその薬学的に許容される塩を別々に、または一緒に投与する、請求項１６から２６のいずれか一項に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
28. ＰＤ−１抗体分子および化合物Ａを同時に、または時間間隔内で別々に独立して投与し、場合によってその後１回または複数のサイクルで反復投与する、請求項１６から２７のいずれか一項に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
29. 前記ＰＤ−１抗体分子および化合物Ａを同時に、または時間間隔内で別々に独立して投与し、その後１回または複数のサイクルで反復投与し、各サイクルの後に休薬期間を設ける、請求項２８に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
30. 化合物Ａを１日１回、例えば、１日から１０日まで連続して、例えば、２８日投与サイクルの１日目から１０日目まで投与する、請求項２９に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
31. 化合物Ａを１日１回、例えば、１日から１０日まで連続して、例えば、２８日投与サイクルの１日目から１０日目まで毎日１回投与し、前記ＰＤ−１抗体分子を４００ｍｇの用量で同じ２８日投与サイクルで１回投与し、場合によってその後１回または複数のサイクルで反復投与する、請求項３０に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
32. 化合物Ａを２５ｍｇ、５０、７５もしくは１００ｍｇの用量で、１日１回、２８日投与サイクルの１日目から１０日目まで毎日投与し、前記ＰＤ−１抗体分子を４００ｍｇの用量で同じ２８日投与サイクルで１回投与し、場合によってその後１回または複数のサイクルで反復投与する、請求項３１に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
33. 化合物Ａを２５ｍｇ、５０、７５もしくは１００ｍｇの用量で、１日１回、２８日投与サイクルの１日目から１０日目まで毎日投与し、前記ＰＤ−１抗体分子を４００ｍｇの用量で同じ２８日投与サイクルで１回投与し、その後１回または複数のサイクルで反復投与し、各サイクルの後に休薬期間を設ける、請求項３２に記載の使用のための医薬組み合わせ物。
34. 治療上有効な量の請求項１から１５のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ物をそれを必要とする対象に投与するステップを含む、それを必要とする対象におけるがんを治療する方法。
35. 治療上有効な量の請求項１から１５のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ物をそれを必要とする対象に投与するステップを含む、それを必要とする対象におけるＮＳＣＬＣを治療する方法。
36. 治療上有効な量の請求項１から１５のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ物をそれを必要とする対象に投与するステップを含む、それを必要とする対象におけるＣＲＣを治療する方法。
37. 治療上有効な量の請求項１から１５のいずれか一項に記載の医薬組み合わせ物をそれを必要とする対象に投与するステップを含む、それを必要とする対象におけるＴＢＮＣを治療する方法。
38. ＮＳＣＬＣ、結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がんまたはＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１療法に抵抗性または難治性になったがんの治療のための薬剤を製造するための、化合物Ａ、またはその薬学的に許容される塩と組み合わせた、請求項１から１２のいずれか一項に記載のヒトプログラム細胞死−１（ＰＤ−１）に結合することができる単離された抗体分子の使用。
39. 前記ＮＳＣＬＣ、結腸直腸がん、トリプルネガティブ乳がんがＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１療法に抵抗性または難治性になっている、請求項３８に記載の使用。
40. 前記ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１療法がペムブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブおよびＭＥＤＩ４７３６．ＰＤ−１による療法である、請求項３８または３９に記載の使用。