TW202243691A - 使用抗ｔｉｇｉｔ抗體與抗ｐｄ１抗體組合治療癌症之方法 - Google Patents

使用抗ｔｉｇｉｔ抗體與抗ｐｄ１抗體組合治療癌症之方法 Download PDF

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Abstract

本揭露提供了用特異性結合於TIGIT（具有Ig和ITIM結構域的T細胞免疫受體，WUCAM或Vstm3）及其抗原結合片段的抗體與抗PD1抗體組合治療癌症或增加、增強或刺激免疫反應之方法。

Description

使用抗TIGIT抗體與抗PD1抗體組合治療癌症之方法
本申請關於特異性結合TIGIT（具有Ig和ITIM結構域的T細胞免疫受體）的抗體與抗PD1抗體組合用於治療癌症。
TIGIT（T細胞免疫球蛋白和ITIM結構域）係I型跨膜蛋白，屬於CD28蛋白家族的成員，其在抗腫瘤免疫中對抑制T細胞和NK細胞介導的功能活性具有重要作用（Boles KS等人, 2009 Eur J Immunol [歐洲免疫學雜誌], 39: 695-703；Stanietsky N等人, 2009 PNAS 106: 17858-63；Yu X等人2009 Nat. Immunol [自然免疫學], 10: 48-57）。
在小鼠和人類中選殖編碼TIGIT的基因和cDNA並描述其特性。人類TIGIT的長度全長為244個胺基酸的序列（SEQ ID NO: 1），其中前21個胺基酸組成訊息肽。成熟人類TIGIT的胺基酸序列含有223個胺基酸（aa）殘基（NCBI登錄號：NM_173799）。成熟人類TIGIT的細胞外結構域（ECD）由以下組成：具有V型Ig樣結構域（對應於SEQ ID NO: 1胺基酸39-127）的120個胺基酸殘基（SEQ ID NO: 2，對應於SEQ ID NO: 1胺基酸22-141），接續21個胺基酸跨膜序列，以及具有基於免疫受體酪胺酸的抑制模體（ITIM）的82個胺基酸細胞質結構域（Yu X等人2009 Nat. Immunol [自然免疫學], 10: 48-57；Stengel KF等人2012 PNAS 109: 5399-04）。在ECD中，人類TIGIT相較於小鼠和石蟹獼猴，胺基酸序列同一性分別僅有59%和87%。
TIGIT表現於T細胞（包括活化的T細胞、記憶T細胞、調節性T [Treg] 細胞、卵泡T輔助 [Tfh] 細胞）和NK細胞上（Boles KS等人, 2009 Eur J Immunol [歐洲免疫學雜誌], 39: 695-703；Joller N等人, 2014 Immunity [免疫力] 40: 569-81；Levin SD等人, 2011 Eur J Immunol [歐洲免疫學雜誌], 41: 902-15；Stanietsky N等人, 2009 PNAS 106: 17858-63；Yu X等人2009 Nat. Immunol [自然免疫學], 10: 48-57）。
迄今為止，已識別出兩種TIGIT配位基，CD155（也稱為脊髓灰質炎病毒受體或PVR）和CD112（也稱為脊髓灰質炎病毒受體相關蛋白2、PVRL2、黏連蛋白-2）。此類配位基主要表現於APC（如樹突狀細胞、巨噬細胞）和腫瘤細胞上（Casado JG等人, 2009 Cancer Immunol Immunother [癌症免疫學與免疫療法] 58: 1517-26；Levin SD等人, 2011 Eur J Immunol [歐洲免疫學雜誌], 41: 902-15；Mendelsohn CL等人, 1989 56: 855-65；Stanietsky N等人, 2009 PNAS 106: 17858-63；Yu X等人2009 Nat. Immunol [自然免疫學], 10: 48-57）。TIGIT作為免疫「檢查點」分子，在與其配位基CD155和CD112接合時，會在免疫細胞中活化抑制性傳訊。TIGIT與CD155的結合親和力（Kd：約1 nM）遠高於其與CD112的結合親和力，而TIGIT: CD112交互作用是否在功能上與介導抑制性訊號相關，仍有待確定。共刺激受體CD226（DNAM-1）以較低親和力（Kd：約100 nM）與相同的配位基結合，但傳遞陽性訊號（Bottino C等人, 2003 J Exp Med [實驗醫學雜誌] 198: 557-67）。此外，CD96（Tactile）（「TIGIT樣」受體）在相同路徑中也具有類似的抑制作用（Chan CJ等人, 2014 Nat. Immunol [自然免疫學] 15: 431-8）。
TIGIT可以藉由不同的機轉抑制免疫反應。首先，TIGIT和PVR對樹突狀細胞（DC）的交互作用可以在DC中傳遞「反向傳訊」，造成IL-10分泌增加而IL-12分泌減少，進而抑制T細胞活化（Yu X等人Nat Immunol. [自然免疫] 2009 10: 48-57）。其次，TIGIT以較高的親和力與CD155結合，進而競爭DNAM-1-CD155交互作用。第三，TIGIT與T細胞的直接連接可下調TCR介導的活化和後續的增殖，而TIGIT與NK細胞結合，可阻斷NK細胞的細胞毒性（Joller N等人2011 186: 1338-42；Stanietsky N等人, 2009 PNAS 106: 17858-63）。第四，TIGIT在Treg上的表現與腫瘤組織中的高度活化和抑制表型有關，且TIGIT在Treg中的傳訊可能有利於Treg的穩定性（Joller N等人Immunity [免疫力] 2014 40: 569-81；Kurtulus S等人J Clin Invest. [臨床試驗雜誌] 2015 125: 4053-4062）。
TIGIT在其胞質尾區（cytoplasmic tail）具有免疫球蛋白尾部酪胺酸（ITT）樣模體，接續基於免疫受體酪胺酸的抑制模體（ITIM）（Yu X等人Nat Immunol. [自然免疫] 2009 10: 48-57；Engels N等人Curr Opin Immunol [免疫學當前觀點] 2011 23: 324-329）。此類模體可介導磷酸酶SHIP-1和β-抑制蛋白2的聚集（Li M等人J Biol Chem. [生物化學雜誌] 2014 289: 17647-17657；Liu S等人Cell death and differentiation [細胞死亡和分化] 2013 20: 456-464），進而提供了一種機轉，TIGIT可藉此在體內傳遞抑制性訊號以抑制活化訊號。
研究指出，TIGIT在腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）和周邊血液單核細胞（PBMC）中的表現增加，已在許多類型的癌症中觀察到，例如肺癌（Tassi等人, Cancer Res. [癌症研究] 2017 77: 851-861）、食道癌（Xie J等人, Oncotarget [腫瘤靶標] 2016 7: 63669-63678）、乳癌（Gil Del Alcazar CR等人2017 Cancer Discov. [癌症發現]）、急性骨髓性白血病（AML）（Kong Y等人, Clin Cancer Res. [臨床癌症研究] 2016 22: 3057-66）和黑色素瘤（Chauvin JM等人, J Clin Invest. [臨床試驗雜誌] 2015 125: 2046-2058）。TIGIT在AML中的表現增加，與患者存活結果的預後不良有關（Kong Y等人, Clin Cancer Res. [臨床癌症研究] 2016 22: 3057-66）。TIGIT傳訊的上調不僅在對癌症的免疫耐受中具有重要作用，對於慢性病毒感染的免疫耐受，也有重要作用。在HIV感染期間，TIGIT在T細胞上的表現顯著增加，並且與病毒載量和疾病進展呈正相關（Chew GM等人, 2016 PLoS Pathog. [科學公共圖書館•病原學] 12: e1005349）。此外，在體外和體內，單獨阻斷TIGIT受體或與其他阻斷組合，可拯救功能性「耗盡」的T細胞（Chauvin JM等人, J Clin Invest. [臨床試驗雜誌] 2015 125: 2046-2058；Chew GM等人, 2016 PLoS Pathog. [科學公共圖書館•病原學]12: e1005349；Johnston RJ等人Cancer Cell [癌細胞] 2014 26: 923-937）。在癌症和病毒感染的情況下，TIGIT傳訊的活化會阻礙免疫細胞功能，導致癌症生長或病毒感染延長。治療藥物對TIGIT介導的抑制性傳訊的抑制，可能恢復免疫細胞的功能活性（包括T細胞、NK細胞和樹突狀細胞 [DC]），進而增強抵抗癌症或慢性病毒感染的免疫力。
靶向PD1或PDL1的單株抗體可以阻斷這種相互作用並增強針對癌細胞的免疫反應。該等抗體已顯示出有助於治療幾種類型的癌症，包括皮膚黑色素瘤、非小細胞肺癌（NSCLC）、腎癌、膀胱癌、頭頸癌和何杰金氏淋巴瘤。大多數對單一藥劑檢查點抑制劑無反應的癌細胞會藉由先天機制逃避，該機制允許癌細胞得以生長並存活。結果，疾病以與自然病史相一致的速度發展。然而，與固有抗性不同的是，經過較長時間的臨床試驗隨訪後，具有先前臨床獲益的患者現已出現晚期復發，這表明出現了獲得性抗性（Jenkins等人, Br. J. Cancer [英國癌症雜誌] 118, 9-16 2018）。
因此，抗TIGIT抗體與抗PD1抗體的組合可以避免免疫細胞產生耐受性，在癌症或慢性病毒感染的治療中誘導有效的免疫反應。
本揭露關於癌症治療之方法，將抗TIGIT抗體與抗PD1抗體組合施用。
在特定的實施方式中，抗TIGIT抗體或抗原結合片段包含重鏈可變區（VH），該重鏈可變區包含具有選自SEQ ID NO: 3、4、5或13的胺基酸序列或其變體的一個、兩個或三個CDR，該等變體包含一個或多個保守取代，例如SEQ ID NO 3、4、5或13的胺基酸序列中的一個或兩個保守取代；和/或輕鏈可變區（VL），該輕鏈可變區包含具有選自SEQ ID NO: 6、7、或8的胺基酸序列或其變體的一個、兩個或三個CDR，該等變體包含一個或多個保守取代，例如SEQ ID NO: 6、7、或8的胺基酸序列中的一個或兩個保守取代。
在更特定的實施方式中，抗TIGIT抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區（VH），該重鏈可變區包含具有SEQ ID NO: 3的胺基酸序列或其變體的VH-CDR1，該變體包含一個或多個保守取代，例如一個或兩個保守取代；具有SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 13的胺基酸序列或其變體的VH-CDR2，該變體包含一個或多個保守取代，例如一個或兩個保守取代；以及具有SEQ ID NO: 5的胺基酸序列或其變體的VH-CDR3，該變體包含一個或多個保守取代，例如一個或兩個保守取代；和/或輕鏈可變區（VL），該輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO: 6的胺基酸序列或其變體的VL-CDR1，該變體包含一個或多個保守取代，例如一個或兩個保守取代；具有SEQ ID NO: 7的胺基酸序列或其變體的VL-CDR2，該變體包含一個或多個保守取代，例如一個或兩個保守取代；以及具有SEQ ID NO: 8的胺基酸序列或其變體的VL-CDR3，該變體包含一個或多個保守取代，例如一個或兩個保守取代。
本申請的抗TIGIT抗體或其抗原結合片段能夠與人TIGIT結合並且包含重鏈可變區，該重鏈可變區具有選自SEQ ID NO: 9、14、19的胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 9、14、19具有至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%序列同一性的序列。在一個實施方式中，序列的差異在於框架區。在一個實施方式中，抗體或其抗原結合片段包含由選自SEQ ID NO: 10、15或20的核苷酸序列或其變體編碼的重鏈可變區。
本申請的抗體或其抗原結合片段能夠與人TIGIT結合並且包含重鏈可變區，該重鏈可變區具有選自SEQ ID NO: 11、16、21、或24的胺基酸序列，或與SEQ ID NO: 11、16、21或24具有至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%序列同一性的序列。在一個實施方式中，序列的差異在於框架區。在一個實施方式中，抗體或其抗原結合片段包含由選自SEQ ID NO: 12、17或22的核苷酸序列或其變體編碼的重鏈可變區。
在一個實施方式中，抗體或其抗原結合片段能夠以約1 x 10 -9M至約1 x 10 -12M的Kd值與人TIGIT結合。例如，抗體或其抗原結合片段能夠以小於約1 x 10 -9M、小於約1 x 10 -10M、小於約1 x 10 -11M、或小於約1 x 10 -12M的Kd值與人TIGIT結合。
在一個實施方式中，抗體或其抗原結合片段包含IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4或其變體亞類的重鏈恒定區，和κ或λ型或其變體的輕鏈恒定區。在更特定的實施方式中，抗體的Fc區係人IgG1 Fc或其變體，例如SEQ ID NO: 18的Fc區。
一種癌症治療之方法，該方法包括向受試者施用有效量的抗TIGIT抗體或其抗原結合片段與抗PD1抗體或其抗原結合片段的組合。
該方法，其中該方法包括向受試者施用有效量的抗體或其抗原結合片段與抗PD1抗體的組合，該抗體或其抗原結合片段與人TIGIT特異性結合，並且包含： (i) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含 (a) SEQ ID NO: 3的HCDR（重鏈互補決定區）1，(b) SEQ ID NO: 4的HCDR2，和 (c) SEQ ID NO: 5的HCDR3；和輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含 (d) SEQ ID NO: 6的LCDR（輕鏈互補決定區）1，(e) SEQ ID NO: 7的LCDR2，和 (f) SEQ ID NO: 8的LCDR3；或 (ii) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含 (a) SEQ ID NO: 3的HCDR1，(b) SEQ ID NO: 13的HCDR2，和 (c) SEQ ID NO: 5的HCDR3；和輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含：(d) SEQ ID NO: 6的LCDR1，(e) SEQ ID NO: 7的LCDR2，和 (f) SEQ ID NO: 8的LCDR3。
該方法，其中該TIGIT抗體或其抗原結合片段包含： (i) 含有SEQ ID NO: 19的重鏈可變區（VH）、和含有SEQ ID NO: 21的輕鏈可變區（VL）； (ii) 含有SEQ ID NO: 14的重鏈可變區（VH）、和含有SEQ ID NO: 16的輕鏈可變區（VL）；或 (iii) 含有SEQ ID NO: 9的重鏈可變區（VH）、和含有SEQ ID NO: 11的輕鏈可變區（VL）。
該方法，其中該抗PD1抗體包含抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性結合人PD1，並且包含： 重鏈可變區，該重鏈可變區包含 (a) SEQ ID NO: 25的HCDR1，(b) SEQ ID NO: 26的HCDR2，和 (c) SEQ ID NO: 27的HCDR3；和輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含 (d) SEQ ID NO: 28的LCDR1，(e) SEQ ID NO: 29的LCDR2，和 (f) SEQ ID NO: 30的LCDR3。
該方法，其中該抗PD1抗體或其抗原結合片段特異性結合人PD1，並且包含含有SEQ ID NO: 32的胺基酸序列的重鏈可變區（VH）和含有SEQ ID NO: 33的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）。
該方法，其中該抗PD1抗體包含含有SEQ ID NO: 35的IgG4恒定結構域。
該方法，其中該抗TIGIT抗體係選自以下群組的抗體片段，該群組由以下組成：Fab、Fab'-SH、Fv、scFv、和(Fab')2片段。
該方法，其中該抗PDl抗體係選自以下群組的抗體片段，該群組由以下組成：Fab、Fab'-SH、Fv、scFv、和(Fab')2片段。
該方法，其中該癌症選自由以下組成之群組：乳癌、大腸癌、胰臟癌、頭頸癌、胃癌、腎癌、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、皮膚癌、間皮瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或肉瘤。
該方法，其中該小細胞肺癌係局限期小細胞肺癌。
該方法，其中該癌症係非小細胞肺癌。
該方法，其中該頭頸癌係鼻咽癌。
該方法，其中該食道癌係食管鱗狀細胞癌（ESCC）。
該方法，其中該癌症係子宮癌。
該方法，其中該胃癌係胃或胃食管連接處癌。
該方法，其中該子宮頸癌係復發或轉移性子宮頸癌。
該方法，其中該皮膚癌係基底細胞癌。
該方法，其中該癌症係胰臟癌。
該方法進一步包括施用化療。
該方法，其中該化療係化放療。
該方法，其中該抗PD1抗體以每三週200 mg給藥。
該方法，其中該抗TIGIT抗體以50 mg-900 mg的範圍給藥。
該方法，其中該抗TIGIT抗體以每三週50 mg給藥。
該方法，其中該抗TIGIT抗體以每三週150 mg給藥。
該方法，其中該抗TIGIT抗體以每三週450 mg給藥。
該方法，其中該抗TIGIT抗體以每三週900 mg給藥。
該方法，其中該抗TIGIT抗體以每三週1800 mg給藥。
胺基酸的保守胺基酸取代係本領域公知的並且示例性地顯示在下表中。通常，保守胺基酸取代意指胺基酸殘基被另一個具有類似側鏈的胺基酸殘基替換。
原始胺基酸殘基 單字母和三字母代碼 保守取代
丙胺酸 A或Ala Gly；Ser
精胺酸 R或Arg Lys；His
天冬醯胺 N或Asn Gln；His
天冬胺酸 D或Asp Gln；Asn
半胱胺酸 C或Cys Ser；Ala
麩醯胺酸 Q或Gln Asn
麩胺酸 E或Glu Asp；Gln
甘胺酸 G或Gly Ala
組胺酸 H或His Asn；Gln
異白胺酸 I或Ile Leu；Val
白胺酸 L或Leu Ile；val
離胺酸 K或Lys Arg；His
甲硫胺酸 M或Met Leu；Ile；Tyr
苯丙胺酸 F或Phe Tyr；Met；Leu
脯胺酸 P或Pro Ala
絲胺酸 S或Ser Thr
蘇胺酸 T或Thr Ser
色胺酸 W或Trp Tyr；Phe
酪胺酸 Y或Tyr Trp；Phe
纈胺酸 V或Val Ile；Leu
除非在本文件的其他地方具體定義，否則本文使用的所有其他技術和科學術語具有本發明所屬領域之普通技術人員通常理解的含義。
如本文所用，包括所附請求項，除非上下文另外明確說明，否則如「一個」、「一種」和「該」的單數形式包括它們相應的複數指代。
除非上下文另外明確說明，否則術語「或」意指術語「和/或」並且可與術語「和/或」互換使用。
貫穿本說明書和以下請求項，除非上下文另有要求，否則詞語「包含（comprise）」以及變化形式如「包含（comprises）」和「包含（comprising）」將理解為隱含包括所陳述的胺基酸序列、DNA序列、其步驟或組，但不排除任何其他胺基酸序列、DNA序列、步驟。當在本文中使用時，術語「包含」可以用術語「含有」或「包括」來取代，或者有時用「具有」取代。
術語「TIGIT」包括各種哺乳動物同種型，例如人TIGIT、人TIGIT的同源物，和包含TIGIT內至少一個表位的類似物。TIGIT（例如人TIGIT）的胺基酸序列和編碼該TIGIT的核苷酸序列係本領域已知的（參見Genbank AAI01289）。
如本文所用的術語「施用（administration/administering）」和「治療（treating/treatment）」，當應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，意指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組成物與該動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體接觸。細胞的處理涵蓋試劑與細胞的接觸以及試劑與流體的接觸，其中該流體與細胞接觸。術語「施用」或「治療」還包括藉由試劑、診斷劑、結合化合物或另一種細胞進行的例如細胞的體外和離體處理。本文中的術語「受試者」係指任何生物，較佳的是動物，更較佳的是哺乳動物（例如，大鼠、小鼠、狗、貓、兔），最較佳的是人。
本文術語「抗體」以最廣義使用並且具體地涵蓋抗體（包括全長單株抗體）和抗體片段只要它們識別抗原，例如TIGIT。抗體通常是單特異性的，但是還可以描述為不同特異性的、異特異性的、或多特異性的。抗體分子藉由特異性結合位點與抗原上的特定性抗原決定簇或表位結合。
本文中的術語「單株抗體」或「mAb」或「Mab」係指基本上同質的抗體的群體，即，除了可能少量存在的可能天然發生的突變外，該群體中包含的抗體分子在胺基酸序列上係相同的。相比之下，常規（多株）抗體製劑典型地包括在其可變結構域中具有不同胺基酸序列的多種不同抗體，特別地其互補決定區（CDR），它們通常對不同的表位具有特異性。修飾語「單株」指示獲得自基本上均質的抗體群體的抗體的特徵並且不應理解為要求藉由任何具體方法產生抗體。可以藉由熟悉該項技術者已知之方法獲得單株抗體（mAb）。參見，例如Kohler G等人, Nature [自然] 1975 256: 495-497；美國專利案號4,376,110；Ausubel FM等人, CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY [分子生物學現代方法] 1992；Harlow E等人, ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL [抗體：實驗室手冊], Cold spring Harbor Laboratory [冷泉港實驗室] 1988；以及Colligan JE等人, CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY [免疫學現代方法] 1993。本文揭露的mAb可以是任何免疫球蛋白類，包括IgG、IgM、IgD、IgE、IgA及其任何亞類。產生mAb的雜交瘤可以在體外或在體內培養。高效價的mAb可以藉由體內產生獲得，其中將來自單個雜交瘤的細胞腹膜內注射到小鼠中，例如原始引發的Balb/c小鼠，以產生含有高濃度所需mAb的腹水。可以使用熟悉該項技術者熟知的柱層析方法從這樣的腹水，或從培養上清液中純化同種型IgM或IgG的MAb。
通常，基本抗體結構單元包含四聚體。每個四聚體包括兩對相同的多肽鏈，每對具有一條「輕鏈」（約25 kDa）和一條「重鏈」（約50-70 kDa）。每條鏈的胺基末端部分包括主要負責抗原識別的約100至110或更多胺基酸的可變區。重鏈的羧基末端部分可以定義為主要負責效應子功能的恒定區。典型地，人輕鏈被分類為κ和λ輕鏈。此外，人重鏈典型地分類為α、δ、ε、γ或μ，並且分別將抗體的同種型定義為IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。在輕鏈和重鏈內，可變區和恒定區藉由約12個或更多個胺基酸的「J」區連接，重鏈還包括約10個以上胺基酸的「D」區。
每個輕鏈/重鏈（VL/VH）對的可變區形成抗體結合位點。因此，一般而言，完整抗體具有兩個結合位點。除了雙功能或雙特異性抗體外，一般而言兩個結合位點係相同的。
典型地，重鏈和輕鏈的可變結構域包含三個高變區，也稱為「互補決定區（CDR）」，其位於相對保守的框架區（FR）之間。CDR通常由框架區對齊，使得能夠結合特異性表位。一般而言，從N末端到C末端，輕鏈和重鏈可變結構域兩者按順序都包含FR-1（或FR1）、CDR-1（或CDR1）、FR-2（FR2）、CDR-2（CDR2）、FR-3（或FR3）、CDR-3（CDR3）和FR-4（或FR4）。通常，每個結構域的胺基酸分配符合免疫學上感興趣的蛋白質序列的定義，Kabat等人, National Institutes of Health [國立衛生研究院], 貝塞斯達, 馬里蘭州; 第5版; NIH公開號91-3242 (1991)；Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. [高級防護化學] 32: 1-75；Kabat等人, (1977) J. Biol. Chem. [生物化學雜誌] 252: 6609-6616；Chothia等人, (1987) J Mol. Biol. [分子生物學雜誌] 196: 901-917或Chothia等人, (1989) Nature [自然] 342: 878-883。
術語「高變區」係指抗體中負責抗原結合的胺基酸殘基。高變區包含來自「CDR」（即，輕鏈可變結構域中的VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3以及重鏈可變結構域中的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3）的胺基酸殘基。參見，Kabat等人 (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest [免疫學上感興趣的蛋白質序列], 第5版 Public Health Service [公共衛生署], National Institutes of Health [國立衛生研究院], 貝塞斯達, 馬里蘭州（藉由序列定義抗體的CDR區）；還參見Chothia和Lesk (1987) J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌] 196: 901-917（藉由結構定義抗體的CDR區）。術語「框架」或「FR」殘基意指除了本文定義為CDR殘基的高變區殘基之外的那些可變結構域殘基。
除非另外說明，「抗體片段」或「抗原結合片段」係指抗體的抗原結合片段，即保留與全長抗體結合的抗原特異性結合的能力的抗體片段，例如保留一個或多個CDR區的片段。抗原結合片段的實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子，例如，單鏈Fv（ScFv）；奈米抗體以及從抗體片段形成的多特異性抗體。
與特定靶蛋白特異性結合的抗體也被描述為與特定靶蛋白特異性結合。這意指與其他蛋白相比，抗體表現出優先結合靶蛋白，但這種特異性不需要絕對的結合特異性。如果抗體的結合決定了樣品中靶蛋白的存在，例如，沒有產生不希望的結果，如假陽性，則抗體被認為係對其預期靶標為「特異性的」。可用於本發明之抗體或其結合片段會以比非靶蛋白的親和力高至少兩倍，較佳的是高至少10倍，更較佳的是高至少20倍，和最較佳的是高至少100倍的親和力結合至靶蛋白。將本文的抗體稱作與包含給定胺基酸序列（例如成熟人TIGIT分子的胺基酸序列）的多肽特異性結合，如果其與包含該序列的多肽結合但不與缺乏該序列的蛋白質結合。
表現「pH依賴性結合」、「pH依賴性靶結合」和「pH依賴性抗原結合」在本揭露中可以互換，表明本申請的抗體以pH依賴性方式與其靶標/抗原，即人TIGIT結合。特定地，與生理pH（例如pH 7.4）下的結合親和力和/或結合訊號相比，本申請的抗體在弱酸性pH值（例如pH 6.0，通常在腫瘤微環境中發現）下對其抗原顯示出更高的結合親和力和/或結合訊號。用於確定本申請的抗體的結合親和力和/或結合訊號強度之方法係本領域公知的，包括但不限於表面電漿共振（Biacore）或類似技術。更特定地，如藉由表面電漿共振（Biacore）或類似技術測量，本申請的抗體在pH 7.4/pH 6.0下具有大於2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100或更大的K D比率。可替代地或另外地，本申請的抗體在pH 6.0下的Rmax（RU）值至少比藉由表面電漿共振（Biacore）或類似技術測量的在pH 7.4下的Rmax高2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍。抗體的結合親和力可在25°C或37°C下測量。已發現腫瘤微環境顯示出比生理病症或正常組織相對更具酸性的pH（Zhang等人Focus on molecular Imaging [關注分子成像] 2010；Tannock和Rotin等人Cancer Res [癌症研究] 1989）。因此，具有上述pH依賴性結合的本申請的抗體作為抗TIGIT治療劑對於選擇性地靶向腫瘤微環境中的TIGIT陽性淋巴細胞係有利的，並且具有與淋巴細胞外周活化相關的較低毒性。
本文中的術語「人抗體」意指僅包含人免疫球蛋白蛋白質序列的抗體。如果在小鼠、小鼠細胞或源自小鼠細胞的雜交瘤中產生，人抗體可以含有鼠碳水化合物鏈。類似地，「小鼠抗體」或「大鼠抗體」意指分別僅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白蛋白質序列的抗體。
術語「人源化抗體」意指含有來自非人（例如鼠）抗體以及人抗體的序列的抗體形式。此類抗體含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。通常，人源化抗體將包含基本上至少一個、並且典型地兩個可變結構域的全部，其高變環的全部或基本上全部對應於非人類免疫球蛋白的那些，並且FR的全部或基本上全部係人類免疫球蛋白序列的那些。人源化抗體還將視需要包含免疫球蛋白恒定區（Fc）的至少一部分，典型地是人免疫球蛋白的至少一部分。當有必要區分人源化抗體與親本齧齒動物抗體時，將前綴「hum」、「hu」、「Hu」或「h」添加到抗體植株名稱中。人源化形式的齧齒動物抗體會通常包含親本齧齒動物抗體的相同CDR序列，但是可包括某些胺基酸取代以增加親和力，增加人源化抗體的穩定性，或出於其他原因。
本申請的抗體在治療癌症中具有潛在治療用途。本文的術語「癌症」或「腫瘤」意指或描述哺乳動物的特徵一般為細胞生長失調的生理病症。癌症的實例包括但不限於肺癌（包括小細胞肺癌、或非小細胞肺癌）、腎上腺癌、肝癌、胃部癌、子宮頸癌、黑色素瘤、腎癌、乳癌、結直腸癌、白血病、膀胱癌、骨癌、腦癌、子宮內膜癌、頭頸癌、淋巴瘤、卵巢癌、皮膚癌、甲狀腺瘤、或癌症的轉移性病變。
此外，本申請的抗體在控制病毒感染和其他人類疾病中具有潛在的治療用途，該等疾病在機理上關於免疫耐受或「耗盡」。在本申請的上下文中，術語「耗盡」係指導致免疫細胞在癌症或慢性病毒感染期間反應能力減弱的過程。
如本文所用的術語「治療有效量」係指當施用於受試者以治療疾病或障礙、或疾病或障礙的至少一種臨床症狀時，足以影響該疾病、障礙或症狀的治療的抗體的量。「治療有效量」可以隨抗體、疾病、障礙、和/或疾病或障礙的症狀、疾病、障礙、和/或疾病或障礙的症狀的嚴重程度、待治療的受試者的年齡、和/或待治療的受試者的體重而變化。在任何給定情況下的合適量對於熟悉該項技術者而言係顯而易見的，或者可以藉由常規實驗確定。在組合療法的情況下，「治療有效量」係指用於有效治療疾病、障礙或病症的組合中所包含的活性劑的總量。
如本文所用的「受試者」係哺乳動物，例如，齧齒動物或靈長類動物，較佳的是高等靈長類動物，例如人（例如患有本文所述之障礙或處於患有本文所述之障礙的風險的患者）。 抗 TIGIT 抗體
本揭露提供了特異性結合人TIGIT的抗體、抗原結合片段。此外，本揭露提供了具有期望的藥物動力學特徵和其他期望的屬性的抗體，其因此可用於降低癌症的可能性或治療癌症。本揭露進一步提供了包含抗體的藥物組成物以及製備和使用此類藥物組成物用於預防和治療癌症和相關障礙之方法。
本揭露提供了與TIGIT特異性結合的抗體或其抗原結合片段。本揭露之抗體或抗原結合片段包括但不限於如下所述產生的抗體或其抗原結合片段。
本揭露提供了與TIGIT特異性結合的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗體片段（例如，抗原結合片段）包含具有SEQ ID NO: 9、14或19的胺基酸序列的VH結構域。本揭露還提供了特異性結合TIGIT的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含VH CDR，該VH CDR具有本文提供的VH CDR中的任一個的胺基酸序列。在一方面，本揭露提供了與TIGIT特異性結合的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體包含（或替代地，由其組成）一個、兩個、三個或更多個VH CDR，該等VH CDR具有本揭露提供的VH CDR中的任一個的胺基酸序列。
本揭露提供了與TIGIT特異性結合的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 11、16或21的胺基酸序列的VL結構域。本揭露還提供了與TIGIT特異性結合的抗體或抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段包含VL CDR，該VL CDR具有本文列出的VL CDR中的任一個的胺基酸序列。特別地，本揭露提供了與TIGIT特異性結合的抗體或抗原結合片段，所述抗體或抗原結合片段包含（或替代地，由其組成）一個、兩個、三個或更多個VL CDR，該等VL CDR具有當前揭露的VL CDR中的任一個的胺基酸序列。
本揭露之其他抗體或其抗原結合片段包括已經突變，但在CDR區中具有與本文所述序列中描繪的CDR區至少60%、70%、80%、90%、95%或99%百分比同一性的胺基酸。在一些方面，其包括突變胺基酸序列，其中與提供的序列中揭露的CDR區相比時，在CDR區中突變不超過1、2、3、4或5個胺基酸。
本揭露之其他抗體包括其中胺基酸或編碼該等胺基酸的核酸已經突變；但與表5中所述之序列具有至少60%、70%、80%、90%、95%或99%百分比同一性的那些。在一些方面，其包括突變胺基酸序列，其中與本文所述之序列中描繪的可變區相比，在可變區中突變不超過1、2、3、4或5個胺基酸，同時保持基本上相同的治療活性。 抗 PD1 抗體
本揭露提供了例如在美國專利案號：8,735,553中發現的抗PD1抗體。PD1抗體也在本文中提供並且包含，例如，重鏈可變區（VH），該重鏈可變區包含互補決定區（CDR）：如在SEQ ID NO: 25中列出的HCDR1、如在SEQ ID NO: 26中列出的HCDR2、以及如在SEQ ID NO: 27中列出HCDR3；和輕鏈可變區（VL），該輕鏈可變區包含：如在SEQ ID NO: 28中列出的LCDR1、如在SEQ ID NO: 29中列出的LCDR2、以及如在SEQ ID NO: 30中列出的LCDR3。在此將該抗體指定為「BGB-A317」。
在另一個實施方式中，抗PD1抗體或抗原結合片段特異性結合人PD1，並且包含含有SEQ ID NO: 32的胺基酸序列的重鏈可變區（VH）和含有SEQ ID NO: 34的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）。在又另一個實施方式中，抗PD1抗體包含含有SEQ ID NO: 35的IgG4恒定結構域。 對 Fc 區框架的進一步改變
在其他方面，藉由用不同的胺基酸殘基替換至少一個胺基酸殘基來改變Fc區，以改變抗體的效應子功能。例如，可以用不同的胺基酸殘基替換一個或多個胺基酸，使得抗體對效應配位基具有改變的親和力，但保留親本抗體的抗原結合能力。親和力改變的效應子配位基可以是例如Fc受體或補體的C1組分。這種方法描述於例如Winter等人的美國專利案號5,624,821和5,648,260中。
在另一方面，可以用一個或多個不同的胺基酸殘基替換一個或多個胺基酸殘基，使得抗體具有改變的C1q結合和/或降低的或消除的補體依賴性細胞毒性（CDC）。該方法描述於例如Idusogie等人的美國專利案號6,194,551中。
在另一方面，改變一個或多個胺基酸殘基從而改變抗體固定補體的能力。該方法描述於例如Bodmer等人的PCT公開WO 94/29351中。在特定方面，本揭露之抗體或其抗原結合片段的一個或多個胺基酸被IgG1亞類和κ同種型的一個或多個同種異型胺基酸殘基替換。同種異型胺基酸殘基還包括但不限於IgG1、IgG2和IgG3亞類的重鏈恒定區以及κ同種型的輕鏈恒定區，如Jefferis等人, MAbs [單株抗體]. 1: 332-338 (2009) 所述。
在另一方面，藉由修飾一個或多個胺基酸來修飾Fc區以增加抗體介導抗體依賴性細胞毒性（ADCC）的能力和/或增加抗體對Fcγ受體的親和力。該方法描述於例如Presta的PCT公開WO 00/42072中。此外，已經繪製了人IgG1上針對FcγRI、FcγRII、FcγRIII和FcRn的結合位點，並且已經描述了具有改善的結合的變體（參見Shields等人, J. Biol. Chem. [生物化學雜誌] 276: 6591-6604, 2001）。
在又另一個方面，修飾抗體的糖基化。例如，可以製備無糖基化抗體（即，抗體缺乏或具有降低的糖基化）。可以改變糖基化以例如增加抗體對「抗原」的親和力。這種碳水化合物修飾可以藉由例如改變抗體序列內的一個或多個糖基化位點來實現。例如，可以進行一個或多個胺基酸取代，其導致消除一個或多個可變區框架糖基化位點，從而消除該位點的糖基化。這種無糖基化可以增加抗體對抗原的親和力。這種方法描述於例如Co等人的美國專利案號5,714,350和6,350,861中。
另外或可替代地，可以製備具有改變的糖基化類型的抗體，如具有減少量的岩藻糖基殘基的低岩藻糖基化抗體或具有增加的二等分GlcNac結構的抗體。已經證明這種改變的糖基化模式增加抗體的ADCC能力。這種碳水化合物修飾可以藉由例如在具有改變的糖基化機制的宿主細胞中表現抗體來實現。具有改變的糖基化機制的細胞已經在本領域中描述並且可以用作宿主細胞，在其中表現重組抗體從而產生具有改變的糖基化的抗體。例如，Hang等人的EP 1,176,195描述了具有功能破壞的FUT8基因的細胞系，該基因編碼岩藻糖基轉移酶，使得在這種細胞系中表現的抗體顯示出低岩藻糖基化。Presta的PCT公開WO 03/035835描述了變體CHO細胞系Lecl3細胞，其具有降低的將岩藻糖連接至Asn（297）-連接的碳水化合物的能力，也導致在該宿主細胞中表現的抗體的低岩藻糖基化（也參見Shields等人, (2002) J. Biol. Chem. [生物化學雜誌] 277: 26733-26740）。Umana等人的PCT公開WO 99/54342描述了細胞系，該等細胞系被工程化以表現糖蛋白修飾性糖基轉移酶（例如，β(1,4)-N乙醯基葡糖胺基轉移酶III（GnTIII）），使得在經工程化的細胞系中表現的抗體表現出增加的二等分GlcNac結構，這導致抗體的ADCC活性增加（還參見Umana等人, Nat. Biotech. [自然生物技術] 17: 176-180, 1999）。
在另一方面，如果期望ADCC的降低，許多先前的報導顯示人抗體亞類IgG4僅具有適度的ADCC並且幾乎沒有CDC效應子功能（Moore G L等人2010 MAbs [單株抗體], 2: 181-189）。另一方面，發現天然IgG4在應激條件下（如在酸性緩衝劑中或在升高的溫度下）較不穩定（Angal, S. 1993 Mol Immunol [分子免疫學], 30: 105-108；Dall'Acqua, W. 等人, 1998 Biochemistry [生物化學], 37: 9266-9273；Aalberse等人, 2002 Immunol [免疫學], 105: 9-19）。降低的ADCC可以藉由將抗體可操作地連接至用具有降低或無效的FcγR結合或C1q結合活性的改變的組合工程化的IgG4，從而降低或消除ADCC和CDC效應子功能來實現。考慮到抗體作為生物藥物的物理化學性質，IgG4的較不期望的固有特性之一係其兩條重鏈在溶液中動態分離以形成半抗體，這導致藉由稱為「Fab臂交換」的過程在體內產生雙特異性抗體（Van der Neut Kolfschoten M等人2007 Science [科學], 317: 1554-157）。228位（EU編號系統）絲胺酸突變為脯胺酸表現出對IgG4重鏈分離的抑制作用（Angal, S. 1993 Mol Immunol [分子免疫學], 30: 105-108；Aalberse等人, 2002 Immunol [免疫學], 105: 9-19）。據報導，鉸鏈區和γFc區中的一些胺基酸殘基對抗體與Fcγ受體的相互作用具有影響（Chappel S M等人1991 Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國國家科學院學報], 88: 9036-9040；Mukherjee, J. 等人, 1995 FASEB J [美國實驗生物學學會聯合會雜誌], 9: 115-119；Armour, K. L. 等人, 1999 Eur J Immunol [歐洲免疫學雜誌], 29: 2613-2624；Clynes, R. A. 等人, 2000 Nature Medicine [自然醫學], 6: 443-446；Arnold J. N., 2007 Annu Rev immunol [免疫學年鑒], 25: 21-50）。此外，在人群中一些罕見的IgG4同種型也可引起不同的物理化學特性（Brusco, A. 等人, 1998 Eur J Immunogenet [歐洲免疫遺傳學雜誌], 25: 349-55；Aalberse等人, 2002 Immunol [免疫學], 105: 9-19）。為了產生具有低ADCC、CDC和不穩定性的TIGIT抗體，可以修飾人IgG4的鉸鏈區和Fc區並引入許多改變。該等修飾的IgG4 Fc分子可在SEQ ID NO: 83-88，美國專利案號8,735,553中找到。 抗體產生
抗TIGIT抗體及其抗原結合片段可藉由本領域已知的任何方法產生，包括但不限於抗體四聚體的重組表現、化學合成和酶消化，而全長單株抗體可藉由例如雜交瘤或重組產生獲得。重組表現可以來自本領域已知的任何合適的宿主細胞，例如哺乳動物宿主細胞、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、昆蟲宿主細胞等。
本揭露還提供了編碼本文所述抗體的多核苷酸，例如編碼包含本文所述之互補決定區的重鏈或輕鏈可變區或區段的多核苷酸。在一些方面，編碼重鏈可變區的多核苷酸與編碼SEQ ID NO: 9、14或19的多肽的多核苷酸具有至少85%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%核酸序列同一性。在一些方面，編碼輕鏈可變區的多核苷酸與編碼SEQ ID NO: 11、16或21的多肽的多核苷酸具有至少85%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%核酸序列同一性。
本揭露之多核苷酸可以編碼抗TIGIT抗體的可變區序列。它們還可以編碼抗體的可變區和恒定區。一些多核苷酸序列編碼包含示例性抗TIGIT抗體之一的重鏈和輕鏈的可變區的多肽。一些其他多核苷酸編碼分別與一種鼠抗體的重鏈和輕鏈的可變區基本上相同的兩個多肽區段。
本揭露還提供了用於產生抗TIGIT抗體的表現載體和宿主細胞。表現載體的選擇取決於表現載體的預期宿主細胞。通常，表現載體含有可操作地連接至編碼抗TIGIT抗體鏈或抗原結合片段的多核苷酸的啟動子和其他調節序列（例如增強子）。在一些方面，除了在誘導條件的控制下，使用誘導型啟動子來防止插入序列的表現。誘導型啟動子包括例如阿拉伯糖、lacZ、金屬硫蛋白啟動子或熱激啟動子。可以在非誘導條件下、而不在偏向宿主細胞更好耐受其表現產物的編碼序列的群體的情況下擴大經轉化的生物體的培養。除啟動子外，其他調節元件也可以是有效表現抗TIGIT抗體或抗原結合片段所需要或期望的。該等元件通常包括ATG起始密碼子和相鄰的核糖體結合位點或其他序列。此外，藉由包含適合於使用中的細胞系統的增強子，可以提高表現效率（參見例如，Scharf等人, Results Probl. Cell Differ. [細胞分化中的結果和問題] 20: 125, 1994；和Bittner等人, Meth. Enzymol. [酶學方法], 153: 516, 1987）。例如，SV40增強子或CMV增強子可以用來增加哺乳動物宿主細胞中的表現。
用於攜帶並表現抗TIGIT抗體鏈的宿主細胞可以是原核或真核的。大腸桿菌係一種可用於選殖並表現本揭露多核苷酸的原核宿主。其他適用的微生物宿主包括桿菌，如枯草芽孢桿菌，和其他腸桿菌科，如沙門氏菌屬、沙雷氏菌屬和各種假單胞菌屬。在該等原核宿主中，還可以製備表現載體，其通常含有與宿主細胞相容的表現控制序列（例如複製起點）。此外，將存在任何數量的多種熟知的啟動子，如乳糖啟動子系統、色胺酸（trp）啟動子系統、β-內醯胺酶啟動子系統或來自噬菌體λ的啟動子系統。啟動子通常視需要用操縱子序列控制表現，並具有核糖體結合位點序列等，用於活化和完成轉錄和翻譯。其他微生物如酵母也可用於表現抗TIGIT多肽。也可以使用昆蟲細胞與桿狀病毒載體的組合。
在其他方面，哺乳動物宿主細胞用於表現和產生本揭露之抗TIGIT多肽。例如，它們可以是表現內源性免疫球蛋白基因的雜交瘤細胞系或攜帶外源性表現載體的哺乳動物細胞系。該等包括任何正常的必死或正常或異常的永生的動物或人細胞。例如，已經開發了許多能夠分泌完整免疫球蛋白的合適宿主細胞系，包括CHO細胞系、各種COS細胞系、HEK293細胞、骨髓瘤細胞系、轉化的B細胞和雜交瘤。使用哺乳動物組織細胞培養物來表現多肽一般在例如Winnacker, From Genes to Clones [從基因到選殖], VCH出版社, NY, N.Y., 1987中討論。用於哺乳動物宿主細胞的表現載體可以包括表現控制序列，例如複製起點、啟動子和增強子（參見例如Queen等人, Immunol. Rev. [免疫學綜述] 89: 49-68, 1986）和必要的加工資訊位點，例如核糖體結合位點、RNA剪接位點、聚腺苷酸化位點和轉錄終止子序列。該等表現載體通常含有衍生自哺乳動物基因或哺乳動物病毒的啟動子。合適的啟動子可以是組成型的、細胞類型特異性的、階段特異性的、和/或可調控的或可調節的。有用的啟動子包括但不限於金屬硫蛋白啟動子、組成型腺病毒主要晚期啟動子、地塞米松誘導型MMTV啟動子、SV40啟動子、MRP polIII啟動子、組成型MPSV啟動子、四環素誘導型CMV啟動子（例如人立即早期CMV啟動子）、組成型CMV啟動子和本領域已知的啟動子-增強子組合。 檢測和診斷方法
本揭露之抗體或抗原結合片段可用於多種應用，包括但不限於檢測TIGIT之方法。在一方面，抗體或抗原結合片段可用於檢測生物樣品中TIGIT的存在。本文所用的術語「檢測」包括定量或定性檢測。在某些方面，生物樣品包括細胞或組織。在其他方面，該等組織包括相對於其他組織以更高水平表現TIGIT的正常和/或癌性組織。
在一方面，本揭露提供了檢測生物樣品中TIGIT的存在之方法。在某些方面，該方法包括在允許抗體與抗原結合的條件下，將生物樣品與抗TIGIT抗體接觸，並檢測抗體和抗原之間是否形成複合物。生物樣品可以包括但不限於尿液或血液樣品。
還包括診斷與TIGIT表現相關的障礙之方法。在某些方面，該方法包括使測試細胞與抗TIGIT抗體接觸；藉由檢測抗TIGIT抗體與TIGIT多肽的結合，測定測試細胞中TIGIT的表現水平（定量或定性）；以及將測試細胞的表現水平與對照細胞（例如，與測試細胞相同組織來源的正常細胞或非TIGIT表現細胞）中的TIGIT表現水平進行比較，其中與對照細胞相比，測試細胞中較高水平的TIGIT表現表明存在與TIGIT表現相關的障礙。 治療方法
本揭露之抗體或抗原結合片段可用於多種應用，包括但不限於治療TIGIT相關障礙或疾病之方法。在一方面，TIGIT相關障礙或疾病係癌症。
在一方面，本揭露提供了治療癌症之方法。在某些方面，該方法包括向有需要的患者施用有效量的抗TIGIT抗體或抗原結合片段。癌症可包括但不限於乳癌、頭頸癌、胃癌、腎癌、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、皮膚癌、間皮瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤和肉瘤。
本發明之抗體或抗原結合片段可以藉由任何合適的方式施用，包括腸胃外、肺內和鼻內，並且如果需要用於局部治療、病灶內施用。腸胃外輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。給藥可以藉由任何合適的途徑，例如藉由注射，例如靜脈內或皮下注射，這部分取決於施用係短暫的還是長期的。本文考慮了多種給藥方案，包括但不限於單次施用或在不同時間點的多次施用、推注施用、和脈衝輸注。
本發明之抗體或抗原結合片段可以以符合良好醫學實踐的方式配製、給藥和施用。關於這點要考慮的因素包括治療的特定障礙、治療的特定哺乳動物、個體患者的臨床病症、障礙的起因、藥劑的遞送位點、施用方法、施用方案、和醫療從業者已知的其他因素。抗體不需要但視需要與目前用於預防或治療所研究的障礙的一種或多種藥劑一起配製。此類其他藥劑的有效量取決於配製物中存在的抗體的量、障礙或治療的類型、以及上文討論的其他因素。該等通常以與如本文所述相同的劑量和施用途徑使用，或以本文所述劑量的約1%-99%使用，或以經驗/臨床確定為合適的任何劑量和任何途徑使用。
為預防或治療疾病，本發明之抗體或抗原結合片段的合適的劑量將取決於待治療的疾病的類型、抗體的類型、疾病的嚴重程度和病程、施用抗體係用於預防還是治療目的、先前療法、患者的臨床病史和對抗體的反應、以及主治醫生的判斷。抗體適當地以一次或經一系列治療施用於患者。取決於疾病的類型和嚴重性，約1 μg/kg至100 mg/kg的抗體可以是用於向患者施用的初始候選劑量，無論是例如藉由一次或多次分開施用，還是藉由連續輸注。取決於上述因素，一個典型的日劑量可以為約1 μg/kg至100 mg/kg或更多。對於幾天或更長時間內的重複施用，取決於病症，治療通常會持續直到出現疾病症狀的期望抑制。這樣的劑量可以間歇地施用，例如每週或每三週（例如使得患者接受約兩個至約二十個，或例如約六個劑量的抗體）。施用初始較高負載劑量，隨後施用一個或多個較低劑量。但是，其他給藥方案可以是有用的。藉由常規技術和測定可以容易地監測該療法的進展。 組合療法
在一方面，本揭露之TIGIT抗體可與其他治療劑（例如抗PD1抗體）組合使用。可與本揭露之TIGIT抗體一起使用的其他治療劑包括但不限於化療劑（例如，紫杉醇或紫杉醇藥劑；（例如Abraxane®）、多西他賽；卡鉑；拓撲替康；順鉑；伊立替康、多柔比星、來那度胺、5-氮雜胞苷、異環磷醯胺、奧沙利鉑、培美曲塞二鈉、環磷醯胺、依託泊苷、地西他濱、氟達拉濱、長春新鹼、苯達莫司汀、苯丁酸氮芥、白消安、吉西他濱、美法侖、噴司他丁、米托蒽醌、培美曲塞二鈉）、酪胺酸激酶抑制劑（例如，EGFR抑制劑（例如，厄洛替尼）、多激酶抑制劑（例如，MGCD265、RGB-286638）、CD-20靶向劑（例如，利妥昔單抗、奧法木單抗、RO5072759、LFB-R603）、CD52靶向劑（例如，阿侖單抗）、潑尼松龍、達貝泊汀α、來那度胺、Bcl-2抑制劑（例如，奧利默森鈉）、極光激酶抑制劑（例如，MLN8237、TAK-901）、蛋白酶體抑制劑（例如，硼替佐米）、CD-19靶向劑（例如，MEDI-551、MOR208）、MEK抑制劑（例如，ABT-348）、JAK-2抑制劑（例如，INCB018424）、mTOR抑制劑（例如，坦羅莫司（temsirolimus）、依維莫司）、BCR/ABL抑制劑（例如，伊馬替尼）、ET-A受體拮抗劑（例如，ZD4054）、TRAIL受體2（TR-2）促効劑（例如，CS-1008）、HGF/SF抑制劑（例如，AMG 102）、EGEN-001、Polo樣激酶1抑制劑（例如，BI 672）。
本揭露之TIGIT抗體可與其他治療劑（例如抗PD1抗體）組合使用。抗PD1抗體可包括但不限於美國專利案號：8,735,553中揭露的抗體。由默克公司（Merck）揭露的派姆單抗（以前稱為MK-3475）係人源化lgG4-K免疫球蛋白，分子量約為149 kDa，其靶向PD1受體，並且抑制PD1受體配位基PD-L1與PD-L2的結合。派姆單抗已被批准用於轉移性黑色素瘤和轉移性非小細胞肺癌（NSCLC）的適應症，並且正在進行用於治療頭頸部鱗狀細胞癌（HNSCC）和難治性何杰金氏淋巴瘤（cHL）的臨床研究。納武單抗（如由百時美施貴寶公司（Bristol-Meyers Squibb）揭露）係全人lgG4-K單株抗體。納武單抗（植株5C4）揭露於美國專利案號US 8,008,449和WO 2006/121 168中。納武單抗被批准用於治療黑色素瘤、肺癌、腎癌、和何杰金氏淋巴瘤。 藥物組成物和配製物
還提供了包含抗TIGIT抗體或抗原結合片段、或包含編碼抗TIGIT抗體或抗原結合片段的序列的多核苷酸的組成物，包括藥物配製物。在某些實施方式中，組成物包含與TIGIT結合的一種或多種抗體或抗原結合片段，或包含編碼與TIGIT結合的一種或多種抗體或抗原結合片段的序列的一種或多種多核苷酸。該等組成物還可包含合適的載劑，例如本領域熟知的藥學上可接受的賦形劑，包括緩衝劑。
藉由將具有所需純度的這種抗體或抗原結合片段與一種或多種視需要的藥學上可接受的載劑混合來製備本文所述之TIGIT抗體或抗原結合片段的藥物配製物（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition [雷明頓藥物科學第16版], Osol, A. 編 (1980)），呈凍乾配製物或水溶液的形式。藥學上可接受的載劑在所採用的劑量和濃度下對於接受者通常是無毒性的，並且包括但不限於：緩衝劑，如磷酸鹽、檸檬酸鹽、和其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫胺酸；防腐劑（如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六甲雙銨；苯紮氯銨；氯化本索寧；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；和間甲酚）；低分子量（少於約10個殘基）的多肽；蛋白質，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反離子，如鈉；金屬錯合物（例如Zn-蛋白錯合物）；和/或非離子型表面活性劑，如聚乙二醇（PEG）。本文的示例性藥學上可接受的載劑還包括間質藥物分散劑，例如可溶性中性活性透明質酸酶糖蛋白（sHASEGP），例如人可溶性PH-20透明質酸酶糖蛋白，例如rHuPH20（HYLENEX ®，百特國際有限公司（Baxter International, Inc.））。在美國專利案號US 7,871,607和2006/0104968中描述了某些示例性sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20。在一方面，將sHASEGP與一種或多種另外的糖胺聚糖酶如軟骨素酶組合。
示例性凍乾抗體配製物描述於美國專利案號6,267,958中。水性抗體配製物包括美國專利案號6,171,586和WO 2006/044908中描述的那些，後者包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。
可以製備緩釋製劑。緩釋製劑的合適實例包括含有抗體的固體疏水性聚合物的半透性基質，該基質為成形制品的形式，例如膜或微膠囊。
用於體內施用的配製物通常是無菌的。無菌可以例如藉由無菌過濾膜過濾而容易地實現。 藥物組成物和套組
在一些方面，本揭露提供了組成物，例如藥學上可接受的組成物，其包括與至少一種藥學上可接受的賦形劑一起配製的如本文所述之抗TIGIT抗體。如本文所用，術語「藥學上可接受的賦形劑」包括生理學上相容的任何和所有溶劑、分散介質、等滲劑和吸收延遲劑等。賦形劑可適於靜脈內、肌內、皮下、腸胃外、直腸、脊柱或表皮施用（例如藉由注射或輸注）。
本文的組成物可以是多種形式。該等包括例如液體、半固體和固體劑型，如液體溶液（例如可注射和輸注溶液）、分散液或懸浮液、脂質體和栓劑。合適的形式取決於預期的施用方式和治療應用。典型的合適組成物係可注射或輸注溶液的形式。一種合適的施用方式係腸胃外（例如靜脈內、皮下、腹膜內、肌內）。在一些實施方式中，抗體藉由靜脈內輸注或注射來施用。在某些實施方式中，抗體藉由肌內或皮下注射來施用。 實例 實例 1 ：抗 TIGIT 單株抗體的生成
基於常規雜交瘤融合技術產生抗TIGIT單株抗體（mAb）（de St Groth和Sheidegger, 1980 J Immunol Methods [免疫學方法雜誌] 35: 1；Mechetner, 2007 Methods Mol Biol [分子生物學方法] 378: 1），略作修改。選擇在酶聯免疫吸附測定（ELISA）和螢光活化細胞分選（FACS）測定中具有高結合活性的mAb用於進一步表徵。 用於免疫和結合測定的 TIGIT 重組蛋白
編碼全長人TIGIT（SEQ ID NO: 1）的cDNA基於其GenBank序列（登錄號：NM_173799）由義翹神州公司（Sino Biological）（中國北京）合成或購自該公司。PCR擴增對應於SEQ ID NO: 1的胺基酸（AA）1-141的全長人TIGIT的細胞外結構域（ECD）的編碼區，並選殖到基於pcDNA3.1的表現載體（英傑公司（Invitrogen）, 卡爾斯巴德, 加利福尼亞州, 美國）中，其中C末端融合到小鼠IgG2a的Fc結構域或人IgG1重鏈的Fc結構域，其分別產生兩種重組融合蛋白表現質體TIGIT-mIgG2a和TIGIT-huIgG1。TIGIT融合蛋白之示意圖如圖1所示。為了產生重組融合蛋白，將TIGIT-mIgG2a和TIGIT-huIgG1質體瞬時轉染到293G細胞（內部開發）中，並在裝備有旋轉振盪器的CO 2培養箱中培養7天。收集含有重組蛋白的上清液並離心澄清。使用蛋白A柱（目錄號：17127901，通用生命科學公司（GE Life Sciences））純化TIGIT-mIgG2a和TIGIT-huIgG1。將TIGIT-mIgG2a和TIGIT-huIgG1蛋白用磷酸鹽緩衝鹽水（DPBS）透析，並以小等分試樣保存在-80°C冰箱中。 穩定表現細胞系
為了建立表現全長人TIGIT（huTIGIT）或猴TIGIT（mkTIGIT，登錄號：XM_005548101.2）的穩定細胞系，將TIGIT基因（由中國南京金斯瑞公司（Genescript）合成）選殖到逆轉錄病毒載體pFB-Neo（目錄號：217561，美國安捷倫公司）。根據先前的方案（Zhang T等人2005, Blood [血液]）產生雙嗜性逆轉錄病毒載體。將含有huTIGIT和mkTIGIT的載體分別轉導到Jurkat和NK92MI細胞（ATCC, 馬納薩斯（Manassas）, 維吉尼亞州, 美國）中，以產生細胞系Jurkat/huTIGIT和NK92MI/mkTIGIT。使用G418和FACS結合測定藉由在培養基中培養來選擇高表現細胞系。 免疫、雜交瘤融合和選殖
用100 µL含有10 µg TIGIT-mIgG2a和水溶性佐劑（目錄號KX0210041，KangBiQuan，中國北京）的抗原混合物腹膜內（i.p.）免疫8-12週齡Balb/c小鼠（來自北京華阜康生物科技有限公司（HFK BIOSCIENCE CO., LTD）, 中國北京）。3週後重複該過程。第二次免疫後兩週，藉由ELISA和FACS評價小鼠血清的TIGIT結合。血清篩選後十天，藉由i.p. 注射50 µg的TIGIT-mIgG2a加強具有最高抗TIGIT抗體血清滴定度的小鼠。加強後三天，使用標準技術（Gefter等人, Somat Cell Genet [體細胞遺傳學], 1977 3 (2): 231-6），分離脾細胞並將其與鼠骨髓瘤細胞系SP2/0細胞（ATCC）融合。 藉由 ELISA 和 FACS 評估抗體的 TIGIT 結合活性
雜交瘤植株的上清液最初藉由Methods in Molecular Biology [分子生物學方法] (2007) 378: 33-52中描述的ELISA進行篩選。簡言之，將TIGIT-huIgG1蛋白包被在96孔板中。使用HRP-連接的抗小鼠IgG抗體（目錄號7076S，細胞傳導技術公司（Cell Signaling Technology），美國）和底物（目錄號00-4201-56，伊生物技術公司（eBioscience），美國）來產生波長為450 nm的顏色吸收訊號，其藉由使用讀板器（SpectraMax Paradigm，分子設備公司（Molecular Devices），美國）來測量。使用上述NK92MI/huTIGIT或NK92mi/mkTIGIT細胞藉由FACS進一步驗證ELISA陽性植株。將表現TIGIT的細胞（10 5個細胞/孔）與ELISA陽性雜交瘤上清液一起孵育，隨後與Alexa Fluro-647標記的山羊抗小鼠IgG抗體（目錄號A0473，碧雲天生物技術公司（Beyotime Biotechnology），中國）結合。使用流式細胞儀（Guava easyCyte 8HT，默克密理博公司（Merck-Millipore），美國）定量細胞螢光。
對來自雜交瘤的在ELISA和FACS篩選中顯示陽性訊號的條件培養基進行功能測定，以鑒定在基於人免疫細胞的測定中具有良好功能活性的抗體（參見以下部分）。對具有所需功能活性的抗體進一步亞選殖和表徵。 雜交瘤亞選殖和對無血清或低血清培養基的適應
如上所述藉由ELISA、FACS和功能測定進行初步篩選後，藉由有限稀釋亞選殖陽性雜交瘤植株。從每塊板基於ELISA和FACS篩選選擇三個陽性亞選殖並藉由功能測定表徵。藉由功能測定驗證的靠前抗體亞植株適於在含3% FBS的CDM4MAb培養基（目錄號SH30801.02, Hyclone, 美國）中生長。 單株抗體的表現和純化
將用抗體表現質體（目錄號R79007, 英傑公司）瞬時轉染的雜交瘤細胞或293G細胞在CDM4MAb培養基（目錄號SH30801.02, Hyclone）中或在Freestyle™ 293表現培養基（目錄號12338018, 英傑公司）中培養，並在CO 2培養箱中在37°C下孵育5至7天。藉由離心收集條件培養基並在純化前通過0.22 μm膜過濾。依照製造商的指導應用含有鼠或重組抗體的上清液並結合到蛋白A柱（目錄號17127901，通用生命科學公司）。該程序通常產生純度高於90%的抗體。將蛋白A親和純化的抗體用PBS透析或使用HiLoad 16/60 Superdex200柱（目錄號17531801，通用生命科學公司）進一步純化以除去聚集體。藉由測量280 nm處的吸光度來確定蛋白質濃度。將最終的抗體製劑以等分試樣儲存在-80°C冰箱中。 實例 2 ： TIGIT 抗體的選殖和序列分析
根據製造商的方案，使用Ultrapure RNA套組（目錄號74104，凱傑公司（QIAGEN），德國）收穫鼠雜交瘤植株以製備總細胞RNA。使用來自英傑公司的cDNA合成套組（目錄號：18080-051）合成第一條股cDNA，並使用PCR套組（目錄號：CW0686，CWBio，中國北京）進行編碼鼠mAb的重鏈可變區（ Vh）和κ鏈可變區（ Vk）的核苷酸序列的PCR擴增。根據先前報導的序列（Brocks等人2001 Mol Med [分子醫學] 7: 461）藉由英傑公司（中國北京）合成用於 Vh和 Vk的抗體cDNA選殖的寡核苷酸引物。然後將PCR產物亞選殖到pEASY-Blunt選殖載體（目錄號：C B101-02，全式金公司（TransGen），中國）中，並藉由金唯智公司（Genewiz）（中國北京）定序。從DNA定序結果推導出 Vh和 Vk區的胺基酸序列。
藉由比較序列同源性分析鼠mAb，並且基於序列相似性分組（圖2A-B）。根據Kabat（Wu和Kabat 1970 J. Exp. Med. [實驗醫學雜誌] 132: 211-250）和IMGT（Lefranc 1999 Nucleic Acids Research [核酸研究] 27: 209-212）系統藉由序列注釋並藉由IMGT網站上基於互聯網的序列分析來定義互補決定區（CDR）。代表性靠前植株mu1217（Vh和Vk）的胺基酸序列在表1中列出（SEQ ID NO: 9和11）。mu1217的CDR序列在表2中列出（SEQ ID NO: 3-8）。
[ 表 1] mu1217 Vh和 Vk區的胺基酸序列
mu1217 Vh SEQ ID NO9
mu1217 Vk SEQ ID NO11
[ 表 2] mu1217 Vh和 Vk區的CDR序列（胺基酸）
mAbs CDR1 CDR2 CDR3
mu1217，Vh SEQ ID NO 3 SEQ ID NO 4 SEQ ID NO 5
mu1217，Vk SEQ ID NO 6 SEQ ID NO 7 SEQ ID NO 8
注：基於Kabat系統定義CDR序列
實例 3 ：藉由 SPR 測定純化的鼠抗 TIGIT 抗體的親和力
藉由使用BIAcore™ T-200（通用生命科學公司）進行SPR測定，表徵在ELISA和FACS中具有高結合活性以及在基於細胞的測定中具有有效功能活性的TIGIT抗體（如實例1和2中所述）的結合動力學。簡言之，將抗人IgG抗體固定在活化的CM5生物感測器晶片（目錄號：BR100530，通用生命科學公司）上。使加Fc標籤的人TIGIT流過晶片表面並被抗人IgG抗體捕獲。然後使純化的鼠抗體的連續稀釋液（0.12 nM至10 nM）流過晶片表面，並藉由使用一對一Langmuir結合模型（BIA評估軟體，通用生命科學公司）分析表面電漿共振訊號的變化以計算締合速率（ k on）和解離速率（ k off）。將平衡解離常數（ K D）計算為比率 k off/k on。包括mu1217、mu1257、mu1226和mu242的靠前mAb的結合親和力譜圖示於圖3和表3中。
[ 表 3] 藉由SPR測定雜交瘤抗體的結合親和力
抗體 k on （ M -1s -1 ） k off （ s -1 ） K D （ nM ）
mu1217 4.33E + 06 3.96E-05 9.15E-12
mu1257 3.99E + 06 4.20E-05 1.05E-11
mu1266 1.07E + 07 8.49E-05 7.94E-12
mu242 5.12E + 06 7.13E-05 1.39E-11
實例 4 ： 鼠抗人 TIGIT mAb mu1217 的人源化 mAb 人源化和工程化
AAAAA
對於mu1217的人源化，藉由與IMGT中的人免疫球蛋白基因數據庫運行對比，搜索人種系IgG基因中與mu1217可變區的cDNA序列具有高度同源性的序列。選擇以高頻率存在於人抗體庫（Glanville等人, PNAS 106: 20216-20221 2009）中並且與mu1217高度同源的人IGVH和IGVƘ基因作為人源化的模板。
藉由CDR移植進行人源化（Methods in Molecular Biology, Vol 248: Antibody Engineering, Methods and Protocols[分子生物學方法，第248卷：抗體工程，方法和方案], Humana出版社）和使用內部開發的表現載體將人源化抗體（hu1217）工程化為人IgG1mf形式。在第一輪的人源化中，框架區中從鼠到人胺基酸殘基的突變由模擬的3D結構指導，並且在最初的人源化抗體1217（hu1217-1-1，具有六個CDR，該等CDR具有SEQ ID NO: 3、13、5（重鏈CDR）和SEQ ID NO: 6、7、8（輕鏈CDR）的胺基酸序列，具有SEQ ID NO: 14的胺基酸序列並由SEQ ID NO: 15的核苷酸序列編碼的重鏈可變區，以及具有SEQ ID No:16的胺基酸序列並由SEQ ID NO: 17的核苷酸序列編碼的輕鏈可變區）中保留了具有結構重要性的鼠框架殘基，以維持CDR的規範結構。特定地，將mu1217 Vκ的CDR（SEQ ID NO: 6-8）移植到保留了1個鼠框架殘基（V 58）的人種系可變基因IGVκ3-15的框架中，導致Hu1217-1-1的人源化 Vκ序列（SEQ ID NO: 16表示胺基酸序列，以及SEQ ID NO: 17表示核苷酸序列）。將mu1217 Vh的H-CDR2（SEQ ID NO: 4）、H-CDR1和H-CDR3（SEQ ID NO: 3和5）的N末端移植到保留了兩個鼠框架（SEQ ID NO: 10的T 24和I 37）殘基的人種系可變基因IGVH3-7的框架中。在hu1217人源化變體中，僅移植了Kabat H-CDR2的N末端的一半，因為根據模擬的3D結構，預測只有N末端的一半對抗原結合很重要。所得Hu1217-1-1的人源化 Vh序列的胺基酸序列和核苷酸序列分別顯示在SEQ ID NO: 14和SEQ ID NO: 15中。
使用內部開發的表現載體將Hu1217-1-1構建為人全長抗體形式，該等表現載體含有分別稱為IgG1mf（SEQ ID NO: 18）和κ鏈的人IgG1變體的恒定區，具有容易適應的亞選殖位點。藉由將上述兩種構建體共轉染到293G細胞中並使用蛋白A柱（目錄號17543802，通用生命科學公司）純化來實現hu1217-1-1抗體的表現和製備。將純化的抗體在PBS中濃縮至0.5-5 mg/mL並以等分試樣儲存在-80°C冰箱中。
基於hu1217-1-1模板，我們進行了幾次單突變，將 Vκ的框架區中保留的鼠殘基轉化為相應的人種系殘基，該等人種系殘基包括 Vκ中的V58I，T24A和I37V Vh。得到的hu1217-2A-1（T24A）、hu1217-2B-1（I37V）、和hu1217-1-2a（V58I）都具有與hu1217-1-1相似的結合和功能活性。使用在特定位置含有突變的引物和定點誘變套組（目錄號FM111-02，全式金公司，中國北京）進行所有人源化突變。藉由定序分析驗證所需的突變。如前所述在結合和功能測定中測試hu1217衍生的變體抗體。
藉由在CDR和框架區中引入突變以改善用於人類治療用途的分子和生物物理特性來進一步工程化Hu1217抗體。考慮因素包括胺基酸組成、熱穩定性（T m）、表面疏水性和等電點（pI），同時保持功能活性。
總之，從上述突變過程中衍生出經過良好工程化的人源化單株抗體hu1217-2-2（SEQ ID NO: 3、5-8、13和19-21），並對其進行詳細表徵。結果表明，hu1217-2-2和hu1217-1-1在結合親和力和功能活性（如抑制TIGIT介導的下游傳訊）方面非常相似。
對於親和力測定，抗體被抗人Fc表面捕獲，並用於基於表面電漿共振（SPR）技術的親和力測定。抗TIGIT抗體的SPR測定的結合譜圖的結果總結於表4中。Hu1217-2-2與hu1217-1-1顯示出非常相似的結合譜圖，平均解離常數分別為0.415 nM和0.266 nM，與ch1217的平均解離常數接近。
[ 表 4] 藉由SPR測定hu1217抗體的結合親和力
抗體 測試 1 測試 2 平均值
k on （ M -1s -1 ） k off （ s -1 ） K D （ nM ） k on （ M -1s -1 ） k off （ s -1 ） K D （ nM ） K D （ nM ）
ch1217* 1.56 x 10 6 4.43 x 10 -4 0.283 - - - NA**
hu1217-1-1 1.45 x 10 6 4.48 x 10 -4 0.309 1.33 x 10 6 6.94 x 10 -4 0.520 0.415
hu1217-2-2 1.80 x 10 5 2.29 x 10 -4 0.127 1.50 x 10 6 6.08 x 10 -4 0.404 0.266
[ 表 5]hu1217抗體的CDR
抗體 CDR1 CDR2 CDR3
hu1217-1-1， Vh SEQ ID NO 3 SEQ ID NO 13 SEQ ID NO 5
hu1217-2-2， Vh SEQ ID NO 3 SEQ ID NO 13 SEQ ID NO 5
hu1217-1-1， Vκ SEQ ID NO 6 SEQ ID NO 7 SEQ ID NO 8
hu1217-2-2， Vκ SEQ ID NO 6 SEQ ID NO 7 SEQ ID NO 8
還證實了以上所示的所有人源化抗體對分離自健康供體的原代人免疫細胞的功能活性（在實例7中描述）。 實例 5 ：不同形式的 1217 與天然 TIGIT 的結合活性
為了評估抗TIGIT抗體與活細胞上的天然TIGIT的結合活性，將NK92mi細胞工程化以過表現人TIGIT。將活NK92mi/TIGIT細胞接種在96孔板中，並與連續稀釋的抗TIGIT抗體一起孵育。將山羊抗人IgG用作二抗來檢測抗體與細胞表面的結合。與人天然TIGIT的劑量依賴性結合的EC 50值藉由用GraphPad Prism將劑量反應數據與四參數邏輯模型擬合來確定。如圖4A-B和表6所示。人源化1217抗體、hu1217-1-1和hu1217-2-2在活細胞上顯示與天然TIGIT良好的結合親和力。
[ 表 6] 人源化1217變體與天然TIGIT的劑量依賴性結合的EC 50
抗體 EC 50 （ ug/mL ）
測試 1 測試 2
Ch1217 0.100 -
hu1217-1-1 0.114 0.084
hu1217-2-2    0.068
實例 6 ：抗 TIGIT 抗體阻斷 TIGIT 與其配位基 PVR 和 PVR-L2 的相互作用
TIGIT以高親和力（Kd：約1 nM）與PVR結合，可與CD266-PVR相互作用競爭（Yu X等人2009 Nat. Immunol [自然免疫學], 10: 48-57）
為了確定抗TIGIT抗體是否可以阻斷TIGIT-PVR與TIGIT-PVR-L2相互作用，將HEK293細胞工程化以表現高水平的PVR或PVR-L2。將得到的細胞系分別命名為HEK293/PVR和HEK293/PVR-L2。藉由流動式細胞測量術測定可溶性TIGIT（TIGIT-mIgG2a融合蛋白）與PVR或PVR-L2的結合（圖5A）。對TIGIT-配位基相互作用的阻斷藉由添加連續稀釋的抗TIGIT抗體定量測定。如圖5B所示，hu1217-2-2/IgG1（包含野生型IgG1 Fc區並具有與hu1217-2-2/IgG1mf相同的VH和VL序列的人源化形式）和hu1217-2-2/IgG1mf可以以劑量依賴性方式阻斷TIGIT與PVR的結合，IC 50分別為0.64和0.55 μg/mL。同樣，hu1217-2-2/IgG1和hu1217-2-2/IgG1mf阻斷TIGIT-PVR-L2相互作用的IC 50分別為0.25和0.18 μg/mL。 實例 7 ：藉由抗 TIGIT 抗體活化 CMV 特異性人 T 細胞
使用識別人CMV PP65肽（NLVPMVATV，495-503，HLA-A2.1限制性）的天然衍生T細胞進一步評估TIGIT抗體的功能活性（Boeckh等人, 2011 J Clin Invest. [臨床試驗雜誌]121: 1673-80）。簡而言之，用PP65肽（純度 ＞ 98%，由上海吉爾生化（GL Biochem）合成）在含有10% FBS的完全RPMI中模擬來自HLA-A2.1 +健康供體的PBMC，持續一週。將pp65引發的PBMC用作效應細胞。在測定之前，將靶細胞HCT116細胞（HLA-A2.1 +，10 4）用pp65肽（5 μg/mL）脈衝30 min，並在存在或不存在抗TIGIT抗體或空白對照（僅培養基）的96孔板中與等量的pp65致敏的PBMC共培養過夜。如圖6A-B所示，hu1217-2-2/IgG1促進pp65特異性T細胞在細胞培養上清液中以劑量依賴性方式對兩個供體分泌IFN-γ。 實例 8 ：抗 TIGIT 抗體增強 NK 細胞介導的細胞毒性
已知TIGIT在自然殺傷（NK）細胞上以相對較高的水平組成性表現，並且TIGIT與其配位基之間的相互作用抑制NK細胞介導的細胞毒性（Wang F等人2015 Eur. J. Immunology [歐洲免疫學雜誌] 45: 2886-97；Stanietsky N等人, 2009 Proc Natl Acad Sci USA [美國國家科學院學報] 106: 17858-63）。
為了確認人源化抗TIGIT抗體是否可以促進NK介導的細胞毒性，根據先前描述的方案，藉由逆轉錄病毒轉導，將NK細胞系NK92MI工程化以作為效應細胞共表現TIGIT和DNAM-1受體（NK92MI/TIGIT-DNAM-1）（Zhang等人, 2006 Cancer Res. [癌症研究] 66: 5927-5933）。類似地建立表現PVR的肺癌細胞系SK-MES-1/PVR作為靶標。
使用CytoTox 96非放射性細胞毒性測定套組（普洛麥格公司（Promega），威斯康辛州麥迪森），藉由LDH釋放測定確定NK92MI/TIGIT-DNAM-1細胞對SK-MES-1/PVR細胞的細胞毒性。簡言之，將NK92MI/TIGIT-DNAM-1細胞（8 x 10 5）與SK-MES-1/PVR細胞（2 x 10 4）在抗TIGIT Ab（0.007-30 μg/mL）存在下在96孔V-底板中共培養5小時。LDH-釋放測定。使用以下方程確定特異性裂解：特異性裂解百分比 = [（實驗-效應子自發-靶標自發）/（靶標最大-靶標自發）] x 100。結果表明，抗TIGIT抗體hu1217-2-2/IgG1mf以劑量依賴性方式增強NK細胞殺傷（EC 50：0.185 μg/mL）（圖7A-B）。 實例 9 ：抗 TIGIT 抗體藉由 FcγR 介導的胞啃降低 TIGIT 受體的表面表現。
胞啃係細胞表面分子從供體細胞轉移到受體細胞的現象（Joly E等人2003 Nat. Immunol [自然免疫學]；Machlenkin A等人2008 Cancer Res. [癌症研究]；Beum PV等人2008 J. Immunol [免疫學雜誌]；Rossi EA等人2013 Blood [血液]）。抗體誘導的胞啃藉由Fcγ受體（FcγR）導致細胞表面受體的下調（Carlsten等人2016 Clin Cancer Res [臨床癌症研究]；Beum等人2011 J. Immunology [免疫學雜誌]）。因此，藉由胞啃下調靶受體可能導致傳訊減弱。鑒於該等觀察，hu1217-2-2/IgG1可能會在FcγR +細胞存在的情況下誘導TIGIT受體的胞啃，從而導致較低的表面表現。為了解決這種可能性，將Jurkat/TIGIT細胞與表現各種FcγR（包括FcγRIIA H131、FcγRIIB、FcγRIIIA V158）的HEK細胞和生物素標記的hu1217-2-2/IgG1wt（人源化抗體，其包含與hu1217-2-2/IgG1mf相同的VL和VH序列以及野生型IgG1 Fc區）或hu1217-2-2/IgG1mf孵育過夜。藉由用SA-APC（博奇公司）確定TIGIT受體的表面表現。如圖8所示，與陰性對照人IgG處理的細胞相比，hu1217-2-2/IgG1而非hu1217-2-2/IgG1mf導致TIGIT表面表現顯著降低，表明Jurkat/TIGIT細胞表面TIGIT的降低係FcγR結合依賴性的。此外，10%的人血清（含有高水平的內源性IgG）的存在可以部分減少FcγRIIA H131或FcγRIIIA V158介導的，而不是FcγRIIB介導的TIGIT受體的胞啃，表明FcγRIIB可以發揮關鍵作用，減少體內抗TIGIT mAb（例如，hu1217-2-2/IgG1wt）的TIGIT表面表現。該等觀察結果也與之前的發現一致（Ganesan LP等人2012 J Immunol [免疫學雜誌] 189: 4981-8；Taylor RP等人2015 Blood [血液] 125: 762-6）。 實例 10 ：抗 TIGIT 抗體的 ADCC 和 CDC 效應子功能
使用如下所述之體外測定確定抗TIGIT抗體在人原代PBMC中誘導ADCC和CDC的能力。 使用人 PBMC 作為靶細胞的 ADCC
設置了基於流動式細胞測量術的ADCC測定以確定TIGIT抗體是否可以在TIGIT +T細胞中誘導ADCC。藉由共轉導含有 CD16 V158 （V158等位基因）和 FcRγcDNA的表現質體，從NK92MI細胞（ATCC）中產生測定效應細胞系NK92MI/CD16V細胞。用PHA（1 μg/ml）刺激健康供體的人PBMC，以上調TIGIT表現。如圖9A所示，T細胞，包括CD4 +效應子（CD3 +CD4 +Foxp3 -）、CD8 +和調節性T細胞（CD4 +Foxp3 +）都表現大量的TIGIT。將該等活化的PBMC（來自3名健康供體）用作靶細胞。將螢光染料CFSE標記的NK92MI/CD16V細胞（5 x 10 4）與等量的靶細胞在TIGIT抗體（hu1217-2-2/IgG1mf或hu1217-2-2/IgG1wt，30 μg/mL）或對照抗體（陽性對照抗CD3抗體OKT3（5 μg/ml，博奇公司）或陰性對照人IgG，30 μg/mL）存在下共培養40小時。與人IgG和hu1217-2-2/IgG1mf相比，hu1217-2-2/IgG1wt可以藉由ADCC導致Treg的適度減少。然而，在總T細胞和CD8 +T細胞中未觀察到明顯的ADCC作用（圖9B）。 使用人 PBMC 作為靶細胞的 CDC
藉由使用預活化的人PBMC和來自健康供體的新鮮自體血清，確定hu1217-2-2/IgG1mf和hu1217-2-2/IgG1wt是否會觸發CDC。CDC的細胞裂解藉由細胞滴定度glo測定套組（普洛麥格公司，北京，中國）確定。簡言之，將PBMC用PHA（10 μg/mL）預活化3天，然後在37°C下在RPMI1640加自體血清（15%）和抗TIGIT或對照抗體（0.01-100 μg/mL）中孵育過夜。藉由在反應結束時細胞裂解後從活細胞釋放的ATP的減少測定由CDC導致的細胞死亡。將抗MHC-I A、B、C用作陽性對照。使用96孔螢光計（PHERA Star FS，BMG萊伯泰科公司（BMG LABTECH））進行螢光讀數，並且如下由相對螢光單位（RFU）讀數計算CDC活性：% CDC活性 = [（RFU測試 - RFU背景）/（總細胞裂解時的RFU - RFU背景）] x 100。實驗結果表明，hu1217-2-2/IgG1mf和hu1217-2-2/IgG1wt與分離自兩個不同供體的PBMC都沒有可檢測的CDC。相反，陽性對照抗體（抗MHC-I）誘導顯著的CDC活性（圖10）。 實例 11 ： Hu1217-2-2/IgG1 的 pH 依賴性結合親和力
為了研究pH是否會影響hu1217-2-2/IgG1的結合特性，在pH 7.4和pH 6.0的運行緩衝液中進行了靶向結合SPR測試，以進行比較。將抗體hu1217-2-2/IgG1固定在CM5晶片（GE公司）上。TIGIT-his的系列稀釋液在pH 7.4或pH 6.0的運行緩衝液HBS中流過固定的hu1217-2-2/IgG1。
如下表7所列結果所示，與在pH 7.4（生理pH值）下獲得的數據相比，hu1217-2-2/IgG1在pH 6.0（酸性pH值，與腫瘤微環境的pH相似）下對人TIGIT顯示出更高的結合親和力（KD）和更強的結合訊號（Rmax）。該等結果表明，抗體作為靶向腫瘤環境中TIGIT陽性淋巴細胞的治療劑具有潛在的優勢，因為hu1217-2-2/IgG1可能更有選擇性地靶向腫瘤微環境中的TIGIT陽性淋巴細胞，同時具有與活化周邊淋巴細胞有關的較低的潛在毒性。
[ 表 7] 藉由SPR檢測hu1217-2-2/IgG1在pH 7.4和pH 6.0時的結合親和力
pH k on （ M -1s -1 ） k off （ s -1 ） K D （ M ） Rmax （ RU ）
7.4 4.34E + 05 9.53E-05 2.19E-10 21
6.0 2.54E + 06 7.60E-05 2.99E-11 37
實例 12 ： hu1217-2-2 抗體毒理學
與CD3+人周邊血液單核細胞相比，抗體hu1217-2-2在TIGIT受體佔用測定中顯示出與人源化TIGIT敲入型小鼠的CD3+脾細胞相當的結合親和力（EC50分別為48.8 ng/ml和63.2 ng/ml）。此外，以 ≥ 0.4 mg/kg的劑量，藉由每週腹膜內給藥，hu1217-2-2對人源化TIGIT敲入型小鼠的GL261腫瘤生長有明顯的抑制作用。
hu1217-2-2的毒性和安全性特性在人源化TIGIT敲入型小鼠的4週重複劑量毒理學研究和在石蟹獼猴的13週重複劑量毒理學研究中得到了表徵。還在具有皮下MC-38腫瘤的人源化TIGIT敲入型小鼠的4週重複劑量研究中評估了hu1217-2-2。基於hu1217-2-2的靶序列同源性和跨物種的TIGIT結合活性，認為石蟹獼猴係毒性研究的相關物種。
每2週一次以10、30或100 mg/kg的hu1217-2-2重複給藥13週後，在猴子中未觀察到明顯的毒性。猴子研究中的毒物動力學譜圖表明，全身暴露似乎與劑量成正比，沒有性別差異。在猴子的13週給藥期間，沒有觀察到累積現象。由於沒有觀察到臨床病理學或組織病理學的變化，因此沒有明顯的免疫毒性。
與人IgG相比，用hu1217-2-2處理非活化周邊血液單核細胞後，從體外細胞介素釋放測定中沒有觀察到細胞介素釋放的明顯增加。結果表明，hu1217-2-2引起急性細胞介素釋放綜合症的概率很低。
總的來說，在猴子的毒性研究中沒有發現明顯的毒性。在人或猴的組織中沒有發現意外的組織交叉反應性。毒物動力學譜圖顯示全身暴露的劑量比例增加，沒有明顯的累積或性別差異。在13週的猴子毒性研究中，hu1217-2-2的未觀測到不良效應水平（NOAEL）為100 mg/kg。 實例 13 ： hu1217-2-2 臨床藥理學
共有11名患者用以下治療：hu1217-2-2，劑量水平為50 mg（n = 1）、150 mg（n = 3）、450 mg（n = 4）、和900 mg（n = 3），與BGB-A317（劑量為200 mg）組合。最大的施用劑量係hu1217-2-2（1800 mg），與BGB-A317（200 mg Q3W）組合。靜脈內輸注後hu1217-2-2的血清濃度以雙指數方式下降，並且hu1217-2-2的暴露量（Cmax和AUC）從50 mg到900 mg大約按劑量比例增加（圖11）。
外周TIGIT受體佔用數據可用於用hu1217-2-2治療的11名患者，劑量為50 mg（n = 1）、150 mg（n = 3）、450 mg（n = 4）、和900 mg（n = 3）。在所有測試的劑量水平上，包括50 mg的最低劑量，周邊血液中的CD8、CD4、NK和Treg細胞都觀察到完全的TIGIT受體佔用（100%）。 實例 14 ：在 PBMC 測定中， hu1217-2-2 單獨或與 BGB-A317 組合促進 IFN-γ 分泌
為了確定hu1217-2-2與BGB-A317的組合是否能比單一療法更好地增強原代人免疫細胞的活化，預刺激來自健康供體的PBMC以上調TIGIT表現，並用作效應細胞。將PD-L1和T細胞接合劑（OS8）陽性的A549細胞（A549/OS8-PD-L1）用作靶細胞。將預活化的PBMC與A549/OS8-PD-L1和A549/PD-L1的混合物在hu1217-2-2和BGB-A317存在下或任一抗體單獨存在下在指定濃度下共培養18小時。藉由ELISA測定IFN-γ產生。將IFN-γ分泌用作T細胞活化的讀數。結果顯示，以劑量依賴性方式用hu1217-2-2處理PBMC，增加IFN-γ產生。相對於單獨使用hu1217-2-2或BGB-A317的增加，hu1217-2-2和BGB-A317的組合明顯增加了IFN-γ產生，表明TIGIT和PD1的組合阻斷可以緩解活化後效應細胞耗盡，該數據在圖12中顯示。 實例 15 ： hu1217-2-2 減少小鼠膠質瘤腫瘤模型中的腫瘤生長
在人源化TIGIT敲入型小鼠的GL261小鼠膠質瘤癌症模型中也測試了hu1217-2-2的抗腫瘤活性。將GL261細胞（1 × 10 7）皮下植入人源化TIGIT敲入型小鼠中。植入3天後，將小鼠隨機分配到4個組，並且如所示用DPBS（媒介物）或hu1217-2-2腹膜內治療29天。每週測量腫瘤體積兩次。數據以每組12隻動物的平均腫瘤體積 ± SEM表示。如圖13和表8所示，每週一次（QW）施用hu1217-2-2誘導劑量依賴性抗腫瘤活性。在治療的第29天（第四次用藥後7天），hu1217-2-2在所有測試劑量（分別為0.4、2和10 mg/kg QW）下誘導了明顯的TGI（56%、94%和100%的TGI）（表8）。
在給藥前以及第一次給藥hu1217-2-2後的2、8、24、48、96和168小時（每個時間點3隻小鼠，每隻小鼠用於不超過2個時間點）收集血樣（約100 μL）。血清中hu1217-2-2的濃度藉由ELISA測定確定，並且每個時間點的hu1217-2-2的血清濃度藉由將劑量反應數據與5參數邏輯模型擬合來確定。第一次注射後7天，表徵了3個劑量（0.4、2和10 mg/kg）的hu1217-2-2的藥物動力學特性，觀察到hu1217-2-2的劑量依賴性暴露（Cmax第一劑量和AUC0-168 h）（表9）。在整個研究中，治療對動物體重無明顯影響。
[ 表 8] hu1217-2-2在人源化TIGIT敲入型小鼠的GL261合成腫瘤模型中的劑量依賴性功效
供試品 劑量（ QW ） N TGI （第 29 天） 在第 29 天的平均腫瘤體積（ mm 3 ） 相對於媒介物治療的 p 值
媒介物 — 12 a — 1459.1 —
hu1217-2-2 0.4 mg/kg 12 56% 644.8 0.0612
2 mg/kg 12 94% 85.0 0.0021
10 mg/kg 12 100% 1.5 0.0020
縮寫：QW，每週一次；TGI，腫瘤生長抑制；使用t檢驗計算p值。在治療的第29天計算TGI。
[ 表 9] 人源化TIGIT敲入型小鼠單次給藥後hu1217-2-2的藥物動力學參數
供試品 劑量 C max ，第 1 次劑量 （ µg /mL ） AUC 0-168 h （ µg/mL•h ） t ½ （天）
媒介物 — — — —
hu1217-2-2 0.4 mg/kg 4.0 376.9 11.1
2 mg/kg 16.2 2311.8 13.8
10 mg/kg 98.1 12264.4 8.8
對於表9，在給藥前以及第一次給藥hu1217-2-2後的2、8、24、48、96和168小時（每個時間點3隻小鼠，每隻小鼠用於不超過2個時間點）收集血樣（約100 μL）。血清中hu1217-2-2的濃度藉由ELISA測定確定，並且每個時間點的hu1217-2-2的血清濃度藉由將劑量反應數據與5參數邏輯模型擬合來確定。 實例 16 ：人源化 TIGIT 敲入型小鼠模型的 MC38 小鼠大腸癌模型中 hu1217-2-2 和抗 PD1 抗體的組合
在人源化TIGIT敲入型小鼠的MC38小鼠大腸癌模型中，研究了hu1217-2-2與抗小鼠PD1（muPD1）的組合的抗腫瘤活性。將MC38腫瘤細胞（1 × 10 6）皮下植入人源化TIGIT敲入型小鼠中。植入7天後，將小鼠隨機分配到4個組，並且如所示用媒介物（DPBS）、muPD1（1 mg/kg腹膜內注射，每5天一次（Q5D））、hu1217-2-2（3 mg/kg腹膜內注射，Q5D）或組合治療。
每週測量腫瘤體積兩次。數據以10隻動物的平均腫瘤體積 ± SEM表示。使用學生t檢驗計算p值。hu1217-2-2與muPD1的組合顯示出比任何單獨的抗體（muPD1單獨為73%或hu1217-2-2單獨為11%）顯示更高的TGI（102%）（圖14和表10）。在整個研究中，治療對動物體重無明顯影響。
[ 表 10] hu1217-2-2與抗小鼠PD1抗體組合的功效
供試品 劑量（ Q5D ） N TGI （第 15 天） 在第 15 天的平均腫瘤體積（ mm 3 ） 沒有腫瘤的數
媒介物 — 10 — 2410.1 0/10
muPD1 1 mg/kg 10 73% 831.0 4/10
hu1217-2-2 3 mg/kg 10 11% 2165.5 0/10
muPD1 + hu1217-2-2 1 mg/kg的muPD1 + 3 mg/kg的hu1217-2-2 10 102% 208.1 8/10
實例 17 ：抗 TIGIT 和抗 PD1 抗體給藥
在正在進行的Ph1/1b研究中測試了hu1217-2-2的劑量，範圍從50 mg到900 mg，最大為1800 mg，每3週一次，與200 mg的抗PD1抗體BGB-A317結合，每3週一次。所有測試的hu1217-2-2劑量水平都藉由了劑量限制性毒性（DLT）窗口，沒有任何明顯的安全性或耐受性事件。hu1217-2-2暴露大約以呈劑量比例方式增加。因此，選擇施用劑量為900 mg的hu1217-2-2作為推薦的II期劑量。
在研究中的所有測試劑量下，在周邊血液中的循環T細胞和NK細胞中觀察到完全的TIGIT受體佔用。如上所述，數據顯示，在50 mg時實現了100%的受體佔用。預計900 mg劑量的hu1217-2-2增加整個給藥間隔內組織中TIGIT受體的有效濃度和飽和度的可能性。
研究中關於hu1217-2-2的藥物動力學數據表明，hu1217-2-2的暴露量與患者的體重之間缺乏明顯的關係，因此表明固定劑量的hu1217-2-2將是最佳的。對於hu1217-2-2抗體與BGB-A317的組合，選擇固定劑量為900 mg的hu1217-2-2，以及固定劑量為200 mg的BGB-A317，每3週一次靜脈內施用。BGB-A317劑量根據以前的BGB-A317研究中2至5 mg/kg之間的相當安全性和功效特性選擇。 實例 18 ： hu1217-2-2 抗體與 BGB-A317 抗體的組合
啟動了1期研究，調查hu1217-2-2與BGB-A317組合，使用或不使用化療在不可切除的局部晚期或轉移性實體腫瘤患者中的安全性/耐受性、藥物動力學（PK）和初步抗腫瘤活性。
被納入研究的患者每3週一次用遞增劑量的hu1217-2-2（50、150、450或900 mg）與BGB-A317（200 mg）組合治療；所有患者都清除了劑量限制性毒性（DLT）期，沒有出現需要從治療中移除患者或減少劑量的毒性。因此，hu1217-2-2似乎係安全和耐受性良好的。 實例 19 ： hu1217-2-2 抗體與抗 PD1 抗體（ BGB-A317 ）組合治療局限期小細胞肺癌
BGB-A317作為單一藥劑或與化療一起在局部晚期或轉移性非鱗狀NSCLC、鱗狀NSCLC和ES-SCLC的2期試驗中進行了測試，並且BGB-A317加化療顯示出抗癌活性；17名小細胞肺癌（SCLC）患者中有13名對BGB-A317加化療的一線治療有反應。BGB-A317加鉑類雙藥化療作為局部晚期和轉移性非鱗狀和鱗狀NSCLC的一線治療的兩項3期研究顯示，無進展生存期作為主要終點的結果係積極的。hu1217-2-2和BGB-A317抗體具有不重疊的抗癌機制，並且在治療SCLC方面可能具有協同和/或附加活性。 實例 20 ： hu1217-2-2 抗體與 BGB-A317 抗 PD1 抗體和化放療組合，以治療局限期小細胞肺癌
抗PD-L1加抗TIGIT與放射療法組合，作為新型的免疫治療，已在小鼠模型中進行評估（Grapin等人, J Immunother Cancer [癌症免疫治療雜誌] 2019; 7: 160-71）。該實驗比較了抗PD-L1加抗TIGIT加放射療法期間的腫瘤反應，相對於單一藥劑療法加放射療法或單獨放射療法的腫瘤反應。在CT26模型中，放射療法與抗TIGIT和抗PD-L1療法組合時顯著更加有效，在3 × 8 Gy低分級放射療法中，小鼠的完全反應率為9/10（90%），相對而言，抗TIGIT、抗PD-L1和單獨放射療法的完全反應率分別為2/10（20%）、3/10（30%）、0/10（0%）。抗TIGIT、抗PD-L1和單獨放射療法在相同分級RT中，觀察到小鼠完全反應率分別為3/12（25%）、8/12（66.7%）、1/10（10%），相對的，抗TIGIT和抗PD-L1與18 × 2 Gy的正常分級放射療法的組合中，觀察到小鼠完全反應率為7/12（58.3%）。SCLC特性為具有相對較高的TIGIT和PVR表現，並且PVR高表現與預後不良相關（Yu等人, Cancer Res. [癌症研究] 2018; 1538-7445.AM2018-3637）。
hu1217-2-2和BGB-A317組合化放療的新型治療策略，旨在增強目前SCLC幅度有限的改善，尤其是在局限期，仍然只有化療組合放療作為標準治療。研究中將使用BGB-A317，以200 mg每3週一次靜脈注射，同時結合化放療4個週期，之後再使用BGB-A317，以200 mg每3週一次靜脈注射。
此方案將與以下療法進行比較：BGB-A317 200 mg靜脈注射，每3週一次，加hu1217-2-2 900 mg靜脈注射，每3週一次，同時進行4個週期的化放療，之後再進行BGB-A317 200 mg靜脈注射，每3週一次，加hu1217-2-2 900 mg靜脈注射，每3週一次。
較佳的化療方案為第1天順鉑75 mg/m2，以及第1、2、3天依託泊苷100 mg/m2，持續4個週期。第一週期後可根據腎臟、血液學或其他毒性情況調整劑量。放射療法應在C1D1與化療同時開始，可接受的時間範圍最遲應與第 3 週期第1天化療同時進行。建議的總劑量為3週內45 Gy或6.5週內60-70 Gy，由試驗主持人決定。依據當地的標準治療，允許的預防性顱腦照射總劑量為2週內25 Gy（25 Gy，每天10次分量）。治療方案詳見下表11。
[ 表 11] hu1217-2-2和BGB-A317與化療的組合的劑量、施用頻率和施用途徑
研究藥物 劑量 施用的頻率 施用途徑 治療持續時間
BGB-A317 200 mg 每個週期（21天）的第1天 靜脈內 如上所述
hu1217-2-2 900 mg 每個週期（21天）的第1天 靜脈內 如上所述
順鉑 + 依託泊苷 順鉑 75 mg/m 2 每個週期（21天）的第1天 靜脈內 前4個週期
依託泊苷 100 mg/m 2 每個週期（21天）的第1、2、和3天 靜脈內 前4個週期
卡鉑 + 依託泊苷 卡鉑 AUC 5 每個週期（21天）的第1天 靜脈內 前4個週期
依託泊苷 100 mg/m 2 每個週期（21天）的第1、2、和3天 靜脈內 前4個週期
縮寫：AUC，濃度時間曲線下的面積 實例 21 ： hu1217-2-2 抗體與 BGB-A317 抗 PD1 抗體組合治療非小細胞肺癌（ NSCLC ）
肺癌係最常見的癌症，2018年全球大約有209萬新診斷病例和176萬死亡病例，這相當於癌症中最高的發病率和最常見的癌症相關死亡率。該疾病在男性中比在女性中更常見，占男性所有癌症的16.8%，並且占女性所有癌症的8.8%。在中國，肺癌係男性和女性癌症相關死亡的首要原因，2015年估計有61.02萬例死亡，估計有73.33萬新病例（Chen等人, CA Cancer J Clin. [CA：臨床醫師癌症雜誌] 2016; 66 (2): 115-32）。非小細胞肺癌（NSCLC）起源於肺部的上皮細胞，並且占所有肺癌的80%至85%。NSCLC有3種主要的組織學亞型，腺癌占所有NSCLC的40%，鱗狀細胞癌占25%，以及大細胞癌占所有NSCLC的10%。
NSCLC患者的預後相對較差，儘管它在很大程度上取決於檢測到癌症的階段。肺癌的分期在世界範圍內係根據惡性腫瘤的腫瘤、淋巴結和轉移（TNM）分類，第七版進行的（Goldstraw等人, J Thorac Oncol [胸肺腫瘤期刊] 2007; 2 (8): 706-14）。如果肺癌在早期被診斷出來，可以藉由手術或化學放射療法治癒。不幸的是，肺癌病例通常是在相對晚期發現的。大約三分之一的NSCLC患者出現局部晚期III期疾病，包括局部縱隔淋巴結或器官受累。III期患者的五年生存率從36%（IIIA期）到13%（IIIC期）不等。55%的新診斷的NSCLC患者有遠端轉移（四期）。IVA期患者表現為對側肺部受累、惡性胸腔積液和惡性心包積液，或在胸部以外的單個部位（例如遠端淋巴結或器官，如腦、肝或骨）出現轉移。IVB期患者的疾病已擴散到遠端淋巴結或器官的多個部位。IV期NSCLC患者的5年生存率為5%（Siegel等人, A Cancer Journal for Clinicians [臨床醫生癌症雜誌] 2020; 70 (1): 7-30）。鱗狀NSCLC患者可接受含吉西他濱、長春瑞濱或紫杉烷的基於鉑的雙藥。向非鱗狀NSCLC患者施用基於培美曲塞的卡鉑或順鉑的組合化療。基於KEYNOTE 024試驗的結果，單一藥劑派姆單抗被美國食品和藥物管理局（FDA）批准為轉移性NSCLC患者的一線治療藥物，其腫瘤表現高水平PD-L1（腫瘤比例評分[TPS] ≥ 50%）（Reck等人, N Engl J Med. [新英格蘭醫學雜誌] 2016; 375 (19): 1823-33）。在這項研究中，與基於鉑的化療相比，派姆單抗在6個月的OS率（80.2%比對72.4% [95% CI：0.4、0.9]）和進展生存期（PFS；10.3個月比對6個月[95% CI：6.7，NR]）方面有明顯改善。根據KEYNOTE 021的結果，派姆單抗與培美曲塞和基於鉑的治療的組合也已被FDA加速批准作為非鱗狀NSCLC IIIB或IV期患者的一線治療，並且無EGFR或ALK基因組異常（Langer等人, Lancet Oncol. [柳葉刀腫瘤學] 2016; 17 (11): 1497-1508）。
據報導，在NSCLC中，TIGIT在腫瘤浸潤性淋巴細胞中的表現上調（Tassi等人, Cancer Res [癌症研究]. 2017; 77: 851-61）。已經顯示單獨阻斷TIGIT受體或與PD1/PD-L1阻斷組合可在體外和體內拯救功能性「耗盡」的T細胞（Johnston等人, Cancer Cell. [癌細胞] 2014; 26: 923-3；Chauvin等人, J Clin Invest. [臨床試驗雜誌] 2015; 125: 2046-58）。在小鼠模型中，TIGIT阻斷與抗PD1/PD-L1抗體的組合顯示出明顯優於單一療法的抗腫瘤功效（Johnston等人, 2014同上；Dixon等人, J Immunol. [免疫學雜誌] 2018; 200: 3000-7）。
這項試驗將評估hu1217-2-2與BGB-A317組合施用於先前未經治療的、PD-L1選擇的、無EGFR或ALK基因組異常的局部晚期、不可切除或轉移性NSCLC患者。根據一種或多種作用機制，藉由hu1217-2-2阻斷TIGIT和BGB-A317阻斷PD1，預計將比單獨使用BGB-A317提高功效。 在每個21天週期的第1天，先施用BGB-A317 200 mg，隨後施用hu1217-2-2 900 mg（每3週一次）。用此劑量治療的NSCLC（鱗狀）患者的早期讀數顯示，疾病穩定（SD），病變自基線的變化為-11.1。 實例 22 ： hu1217-2-2 抗體與 BGB-A317 抗 PD1 抗體組合治療鼻咽癌
鼻咽癌（NPC）在世界範圍內相對不常見，129,079個新病例僅占2018年診斷的所有癌症的0.7%，而 ＞ 70%的新病例在東亞和東南亞，中國的年齡標準化率（世界）為3.0/10萬。在流行地區中，在中國，男性的發病率高於女性，2015年的比例約為2.5比1（Bray等人, CA Cancer J Clin. [CA：臨床醫師癌症雜誌] 2018; 68 (6): 394-424和Chen等人, CA Cancer J Clin. [CA：臨床醫師癌症雜誌] 2016; 66 (2): 115-32）。
在幾個流行地區，NPC的發病率和死亡率已經下降，這可能是生活方式改變的結果，以及管理方面的進展，包括放射療法技術的改進、化療的更廣泛應用和更準確的疾病分期（Lau等人, BMC Cancer [BMC癌症] 13: 298, 2013；Hsu等人, Cancer Epidemiol Biomarkers Prev [癌症流行病學生物標誌物和預防] 15: 856-861, 2006）。NPC仍然係癌症死亡的首要原因，全球每年的死亡發生率大約為72,987例（Bray等人, 同上）。根據分化程度的不同，NPC根據世界衛生組織（WHO）的標準被分為三種病理亞型。具有表面角質的分化腫瘤被定義為I型，而II型和III型分別指非角質化的分化腫瘤和未分化的腫瘤。1991年，II型和III型被組合為單一類別的非角化性癌。在NPC流行的地區，非角質化的亞型構成大多數病例（＞ 95%），並且總是與Epstein-Barr病毒（EBV）感染相關，而I型疾病在世界其他地區更常見（Wei等人, Lancet [柳葉刀] 2005; 365: 2041-54；Nicholls等人, Adv Anat Path [解剖病理學進展] 1997; 4: 71-84）。EBV感染係研究最廣泛的NPC的病因因素。根據EBV編碼RNA的原位雜交技術，該病毒只在所有的腫瘤細胞中檢測到，而在正常的鼻咽上皮細胞中沒有，這表明EBV活化在NPC的發病機制中係必要的（Pathmanathan等人, N Engl J Med. [新英格蘭醫學雜誌] 1995; 333: Chan等人, Cancer Res [癌症研究] 2000; 60: 5365-70）。NPC在中國南方和東南亞地區流行。標準的一線治療係含鉑的多藥化療。然而，對於一線治療以外的治療，目前還沒有達成共識。臨床上仍然需要更有效且耐受性好的新藥劑。
如前所述，抗TIGIT抗體提供了從免疫抑制性腫瘤微環境中拯救免疫細胞的潛在機制，從而誘導高效的抗腫瘤免疫反應。研究表明，TIGIT途徑與PD1合作，最大限度地抑制效應性腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL），並促進對抗PD1療法的抗性。
一線復發或轉移性NPC的標準護理治療由含鉑的多藥化療組成；然而，對於鉑難治性/復發或轉移性NPC患者，一線設定（setting）之外沒有標準的治療方案。最近，其他抗PD1抗體的臨床研究，如納武單抗、派姆單抗、卡瑞利珠單抗（camrelizumab）、和特瑞普利單抗（toripalimab）單一療法，在二線或以上治療設定的晚期NPC患者中表現出良好的臨床活性（中位ORR，20.5%至34%；中位OS，16.5至17.4個月；中位PFS，1.9至6.5個月）。在之前的臨床試驗中，BGB-A317作為單一療法的NPC患者擴大佇列的初步數據也令人鼓舞（中位ORR：43%；中位OS，未達到；中位PFS，12.4個月）。但目前的一個挑戰係，PD1抑制僅使一部分難治/復發或轉移性NPC患者受益，對這一患者群體更有效的治療需求仍然沒有得到滿足。
在該試驗中，患者將單獨接受BGB-A317 + hu1217-2-2或BGB-A317作為比較。患者將每3週一次靜脈內接受BGB-A317 200 mg + hu1217-2-2 900 mg，直至研究者根據RECIST v1.1評估的疾病進展、不可接受的毒性或臨床益處喪失，以先發生者為准。
在試驗期間，根據RECIST v1.1，前24週將每6週（± 7天）進行一次腫瘤評估，第1年的剩餘時間每9週（± 7天）進行一次評估，此後每12週（± 7天）進行一次評估，不考慮管理毒性的劑量延遲。為了確定BGB-A317和hu1217-2-2組合的PK特性，將在各個時間點收集血液樣品。在基線（第1週期第1天的預先劑量）、第一次腫瘤反應時（下一週期第1天的預先劑量）和疾病進展後的治療結束（EOT）訪視時，將採集可選的血液樣品（每個時間點10 mL）。
[ 表 12] NPC中hu1217-2-2和BGB-A317的計畫劑量、施用頻率和施用途徑
研究藥物 劑量 施用 頻率 施用 途徑 治療持續時間
hu1217-2-2 900 mg 每個週期（21天）的第1天 靜脈內 如上所述
BGB-A317 200 mg 每個週期（21天）的第1天 靜脈內 如上所述
[ 表 13] NPC中hu1217-2-2和BGB-A317的施用
週期 A 組（ BGB-A317 + hu1217-2-2 ） B 組（ BGB-A317 ）
第1天，週期1和週期2 BGB-A317輸注60（± 5）分鐘，隨後 hu1217-2-2輸注60（± 5）分鐘 患者監測 ≥ 120分鐘 BGB-A317輸注60（± 5）分鐘 患者監測 ≥ 60分鐘
第1天，週期3開始 BGB-A317輸注30（± 5）分鐘，隨後 hu1217-2-2輸注30（± 5）分鐘 患者監測 ≥ 30分鐘 BGB-A317輸注30（± 5）分鐘 患者監測 ≥ 30分鐘
初步臨床結果顯示，鼻咽癌患者在施用hu1217-2-2與BGB-A317組合36週後沒有進展。腫瘤病變（TL）最初出現時大小為31 mm，在36週的治療過程中恢復到23 mm，導致腫瘤大小從基線減少25.81%，並且從最低點沒有變化。
[ 表 14]
治療 / 疾病類型 訪視 評估 日期（研究天數） TL SLD （ mm ） TL 最低點（ mm ） TL 百分比自基線的變化 TL 百分比自最低點的變化 衍生的靶病變反應 靶病變反應 出現新病變 總體反應
hu1217-2-2 150 mg + BGB-A317 200 mg/ 鼻咽癌 篩選 （-14） 31                     
6週 （46） 23 31 -25.81 -25.81 SD SD 否 SD
12週 （87） 25 23 -19.35 8.70 SD SD 否 SD
18週 （129） 26 23 -16.13 13.04 SD SD 否 SD
24週 （172） 25 23 -19.35 8.70 SD SD 否 SD
30週 （214） 26 23 -16.13 13.04 SD SD 否 SD
36週 （256） 23 23 -25.81 0.00 SD SD 否 SD
實例 23 ： hu1217-2-2 抗體與 BGB-A317 抗 PD1 抗體組合治療食道癌
食道癌係世界上第七大最常見的癌症，也是癌症死亡的第六大常見原因。發病率最高的地區從伊朗北部到中亞各共和國，並進入中國北部。食道癌最常見的組織學類型係食管鱗狀細胞癌（ESCC），這在東歐和亞洲更為常見。超過三分之二被診斷為食道癌的患者將有晚期或轉移性疾病，中位生存期為8至10個月，並且預期5年生存率 ＜ 5%。該等數據，再加上相對缺乏高效的治療方法，表明被診斷為一般食道癌和具體的ESCC的患者有大量未滿足的醫療需求。
與化療相比，抗PD1療法作為ESCC的二線治療已顯示出優越的功效。KEYNOTE-181試驗招募了628名復發的局部晚期或轉移性食道癌患者，該等患者在先前一線系統治療晚期疾病時或之後出現進展，與化療相比，接受派姆單抗治療的患者的主要終點OS有明顯改善（10.3個月對比6.7個月，HR，0.62；95% CI：0.46至0.90）。ATTRACTION-3試驗招募了419名患有不可切除的晚期、復發性或轉移性ESCC的患者，該等患者對 ≥ 1種氟嘧啶和基於鉑的方案難治或不耐受，據報導，與研究者選擇的他紫杉烷化療相比，使用納武單抗治療的患者的主要終點OS有明顯改善（10.9個月對比8.4個月；HR，0.77；95% CI：0.62至0.96）。無論PD-L1表現水平如何，都能觀察到總的生存獲益。
抗TIGIT抗體的施用提供了從免疫抑制性腫瘤微環境中拯救免疫細胞的潛在機制，從而誘導高效的抗腫瘤免疫反應。研究表明，TIGIT途徑與PD1合作，最大限度地抑制效應TIL，並促進對抗PD1療法的抗性。如上述試驗所述，靶向PD1/PD-L1途徑的阻斷抗體在治療ESCC方面取得了顯著效果。因此，抗TIGIT抗體可以顯著改善和/或延長抗PD1療法在ESCC中的治療效果。
患有不可切除、局部晚期、復發或轉移性ESCC且一線化療失敗的患者代表了有著巨大的未滿足醫療需求的患者群體。因此，本試驗旨在比較BGB-A317加hu1217-2-2對比BGB-A317作為單一藥劑治療PD-L1表現陽性和食道癌患者的功效。食道癌可以是不可切除的、局部晚期的、復發的或轉移的ESCC。
患者將每3週一次靜脈內接受BGB-A317（200 mg）加hu1217-2-2（900 mg），直至研究者根據RECIST v1.1評估的出現不可接受的毒性或患者退出治療。患者將在每個21天週期的第1天（即每3週一次）接受BGB-A317 200 mg，隨後在每個21天週期的第1天施用hu1217-2-2 900 mg。
[ 表 15] ESCC治療的計畫劑量、施用頻率和施用途徑
研究藥物 劑量 施用時間 施用途徑 治療持續時間
hu1217-2-2 900 mg 每個21天週期的第1天 靜脈內 如上所述
BGB-A317 200 mg 每個21天週期的第1天 靜脈內 如上所述。
[ 表 16] 施用研究藥物並監測ESCC的治療時間
週期 BGB-A317 加 hu1217-2-2
第1天，週期1和週期2 BGB-A317輸注60（± 5）分鐘，隨後hu1217-2-2（A組）或安慰劑（B組）輸注60（± 5）分鐘 患者監測 ≥ 120分鐘
第1天，週期3開始 BGB-A317輸注30（± 5）分鐘，隨後hu1217-2-2（A組）或安慰劑（B組）輸注30（± 5）分鐘 患者監測 ≥ 30分鐘
初步臨床結果顯示，食道癌患者在施用hu1217-2-2與BGB-A317組合6週後沒有進展。腫瘤病變（TL）最初出現時大小為38 mm，並且隨著治療過程中恢復到23 mm，導致腫瘤大小從基線和最低點減少39.47%。
[ 表 17]
治療/ 疾病類型 訪視 評估 日期（研究天數） TL SLD（mm） TL 最低點（mm） TL百分比自基線的變化 TL百分比自最低點的變化 衍生的靶病變反應 靶病變反應 出現新病變 總體反應
hu1217-2-2 450 mg + BGB-A317 200 mg/ 食道癌 篩選 （-7） 38                     
6週 （44） 23 38 -39.47 -39.47 PR SD 否 SD
實例 24 ： hu1217-2-2 抗體與 BGB-A317 抗 PD1 抗體組合治療子宮頸癌
子宮頸癌係第四大最常見的癌症，也是婦女癌症死亡的第四大原因，2018年全球約有57萬新診斷病例和31萬例死亡。全球子宮頸癌的估計的年齡標準化發病率為每10萬名婦女中13.1例，並且各國之間差異很大，發病率範圍從每10萬名婦女小於2例到75例。中國和印度共占全球子宮頸癌負擔的超過三分之一，中國有10.6萬例病例和4.8萬例死亡，印度有9.7萬例病例和6萬例死亡（Arbyn等人, Lancet Glob Health. [柳葉刀全球健康] 2020; 8: e191-e203）。
據估計，15%至61%的婦女會出現復發或轉移性子宮頸癌，通常是在完成初級治療後的前2年內。對於在基於鉑的一線治療後出現進展的患者，治療選擇有限，而且沒有建立護理標準。單一的細胞抑制劑僅導致了有限的反應率和有限的持續時間。這表明子宮頸癌和/或轉移性子宮頸癌患者有重大的未滿足的醫療需求。
子宮頸癌的最主要原因係持續的乳頭瘤病毒感染。人乳頭瘤病毒（HPV）在99%的宮頸腫瘤（特別是致癌亞型，如HPV 16和18）中被檢測到。由於HPV已被認為係子宮頸癌中最重要的致病因素，因此，子宮頸癌係有吸引力的免疫療法靶標，因為病毒蛋白係強烈的免疫刺激物。2018年6月，派姆單抗獲得了US FDA的加速批准，用於治療化療時或化療後疾病進展且腫瘤表現程式性死亡配位基1（PD-L1）的子宮頸癌患者。
鑒於該適應症中報導的抗PD1抗體具有良好的抗腫瘤活性，並且鑒於抗TIGIT抗體可以提高抗PD1療法的治療效果的科學原理，hu1217-2-2與BGB-A317的組合可以為子宮頸癌的治療帶來顯著的臨床益處。
該試驗將評估hu1217-2-2與BGB-A317組合在子宮頸癌、轉移性子宮頸癌或先前治療過的復發性子宮頸癌患者中的施用。試驗的第一階段將對子宮頸癌患者施用hu1217-2-2與BGB-A317的組合，而不考慮PD-L1表現。患者將按1 : 1的比例隨機接受hu1217-2-2（900 mg，每三週（Q3W））與BGB-A317（200 mg Q3W）的組合或作為單一療法的BGB-A317（200 mg Q3W）。第一階段結束後，將招募更多的患者。該等患者將施用hu1217-2-2（900 mg Q3W）與BGB-A317（200 mg Q3W）的組合。 實例 25 ： hu1217-2-2 抗體與 BGB-A317 抗 PD1 抗體組合治療實性瘤
在針對實性瘤的試驗中，hu1217-2-2與BGB-A317組合施用。表18顯示了七（7）名患者的反應，該等患者被施用hu1217-2-2與BGB-317的組合，其中使用不同劑量的hu1217-2-2，但保持BGB-A317的劑量為200 mg。在下面的病例中，腫瘤病變（TL）在組合療法下出現了消退，並且在六個病例中，導致疾病穩定（SD），其中一個患者有部分反應（PR）。總的來說，組合治療後，腫瘤消退或沒有進展。例如，作為部分反應者的胃/胃食管交界處患者的TL大小為84 mm，經過6週的治療後，其TL大小減少到53 mm，從而使TL從基線和最低點減少了36.9%。
[ 表 18]
治療 / 疾病類型 訪視 評估 日期（研究天數） TL SLD （ mm ） TL 最低點（ mm ） TL 百分比自基線的變化 TL 百分比自最低點的變化 衍生的靶病變反應 靶病變反應 出現新病變 總體反應
hu1217-2-2 150 mg + BGB-A317 200 mg/ 鼻咽癌 篩選 （-14） 31                     
6週 （46） 23 31 -25.81 -25.81 SD SD 否 SD
12週 （87） 25 23 -19.35 8.70 SD SD 否 SD
18週 （129） 26 23 -16.13 13.04 SD SD 否 SD
24週 （172） 25 23 -19.35 8.70 SD SD 否 SD
30週 （214） 26 23 -16.13 13.04 SD SD 否 SD
36週 （256） 23 23 -25.81 0.00 SD SD 否 SD
  
hu1217-2-2 450 mg + BGB-A317 200 mg/ 子宮癌 篩選 （-14） 81                     
6週 （45） 91 81 12.35 12.35 SD SD 否 SD
18週 （151） 38 40 -53.09 -5.00 NE PD 否 PD
     
hu1217-2-2 450 mg + BGB-A317 200 mg/ 胃或胃食管連接處癌 篩選 （-7） 84                     
6週 （47） 53 84 -36.90 -36.90 PR PR 否 PR
  
hu1217-2-2 450 mg + BGB-A317 200 mg/ 基底細胞癌 篩選 （-13） 91                     
6週 （49） 87 91 -4.40 -4.40 SD SD 否 SD
12週 （85） 90 87 -1.10 3.45 SD SD 否 SD
18週 （130） 88 87 -3.30 1.15 SD SD 否 SD
24週 （175） 89 87 -2.20 2.30 SD SD 否 SD
30週 （217） 90 87 -1.10 3.45 SD SD 否 SD
  
hu1217-2-2 450 mg + BGB-A317 200 mg/ 食道癌 篩選 （-7） 38                     
6週 （44） 23 38 -39.47 -39.47 PR SD 否 SD
  
hu1217-2-2 900 mg + BGB-A317 200 mg/ 肉瘤 篩選 （-7） 53.8                     
6週 （38） 45.7 53.8 -15.06 -15.06 SD SD 否 SD
  
hu1217-2-2 900 mg + BGB-A317 200 mg/ 胰臟癌 篩選 （-28） 101                     
6週 （43） 100 101 -0.99 -0.99 SD SD 否 SD
實例 26 ： hu1217-2-2 抗體以劑量遞增與 BGB-A317 抗 PD1 抗體組合
在晚期、轉移性、不可切除的實性瘤患者中進行了1期劑量遞增研究，對於該等患者，標準療法無效、無法忍受或無法獲得。患者在第1個週期的第1天以50 mg的劑量靜脈內（IV）接受hu1217-2-2作為單一藥劑，並在第1個週期的第8天以200 mg IV接受BGB-A317。如果能耐受，患者接受四次劑量遞增的hu1217-2-2，劑量範圍從150-900 mg，在第29天和此後每三週（Q3W）依次加BGB-A317 200 mg，直到停藥。鼻咽癌患者在hu1217-2-2劑量為150 mg（Q3W），組合BGB-A317 200 mg（Q3W）持續54週下癌症穩定，這係測試的最長持續時間。hu1217-2-2以450 mg的劑量（Q3W）與200 mg的BGB-A317（Q3W）組合下，子宮癌患者和另一名基底細胞癌患者的病情穩定。在此相同的劑量下，胃癌患者有部分反應。最後，900 mg劑量的hu1217-2-2（Q3W）與200 mg的BGB-A317（Q3W）的組合導致六名癌症患者病情穩定（2名腎癌患者，1名黑色素瘤患者，1名肉瘤患者，1名胰臟癌患者和1名唾液腺癌患者）。這個劑量的施用在間皮瘤患者中也出現一次部分反應。 實例 27 ： hu1217-2-2 抗體與 BGB-A317 和 BAT1706 抗體組合用於治療肝細胞癌
BAT1706係貝伐單抗（bevacizumab）注射液（貝伐單抗注射液（Bevacizumab Injection），品牌名Avastin®）的類似生物製品。貝伐單抗係重組人源化免疫球蛋白G1（IgG1）單株抗體，其以高親和力與人血管內皮生長因數（VEGF）結合。貝伐單抗能夠選擇性地以高親和力與所有人VEGF A同種型結合，並阻斷VEGF與VEGF受體-1（VEGFR-1）和VEGF受體2（VEGFR-2）的結合，從而中和VEGF的生物活性。它係目前唯一的抗腫瘤血管生成藥物，其在延長癌症患者的總生存期和無進展生存期方面有確切的臨床功效。一些隨機、對照的II期和III期研究表明，與單獨使用標準化療相比，貝伐單抗與標準化療組合治療可使總生存期、無進展生存期和總緩解率得到統計學上的顯著改善。
體外藥效學比較研究的結果表明，BAT1706和貝伐單抗均表現出與VEGF的特異性結合，這與文獻報導一致。用人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）增殖抑制測試來測量BAT1706的生物活性。結果表明，BAT1706與貝伐單抗對HUVEC的生長表現出類似的劑量依賴性關係，兩者均表現出對VEGF的有效中和功效。發現BAT1706的生物活性在 (1.0 ± 0.2) × 104 U/mg的預定範圍內與貝伐單抗相當。
比較了BAT1706和貝伐單抗在幾種人癌症模型（NSCLC、卵巢癌和橫紋肌肉瘤）中的抗致瘤作用。將NCI-H358人NSCLC細胞皮下接種於非肥胖性糖尿病/嚴重組合免疫缺陷（NOD/SCID）雌性小鼠，以建立人NSCLC異種移植模型。動物被分為以下5組，每組由8只雌性小鼠組成： 媒介物對照組 貝伐單抗5.0 mg/kg組 貝伐單抗0.5 mg/kg組 BAT1706 5.0 mg/kg組 BAT1706 0.5 mg/kg組。 允許腫瘤生長到平均體積為128 mm 3。此後，在隨後的3週內，每週的第1、3和5天藉由尾靜脈注射進行施用。功效係藉由腫瘤重量、腫瘤體積和相對腫瘤生長抑制（TGI）來測量的。也觀察到了腫瘤潛伏期，但未評估統計學意義。在該研究中，與媒介物對照組相比，BAT1706和貝伐單抗用於評估腫瘤潛伏期的靶腫瘤重量係相同的（600 mm3）。BAT1706 5 mg/kg和貝伐單抗5 mg/kg組的平均腫瘤體積，但不是BAT1706 0.5 mg/kg和貝伐單抗0.5 mg/kg組的平均腫瘤體積在劑量終止後1天與媒介物對照組有統計學上的顯著差異。腫瘤重量數據與腫瘤體積數據一致。值得注意的是，BAT1706和貝伐單抗的配對劑量（0.5或5 mg/kg）的腫瘤體積和腫瘤重量結果沒有統計學差異。BAT1706 5 mg/kg和貝伐單抗5 mg/kg的相對TGI（%）分別為94%和93%。0.5 mg/kg的BAT1706和0.5 mg/kg的貝伐單抗的相對TGI（%）分別為67%和63%。總之，BAT1706以劑量依賴性方式顯示出與貝伐珠單抗相似的功效。
在SK-OV-3人卵巢癌細胞異種移植模型小鼠模型和673人橫紋肌肉瘤細胞異種移植小鼠模型中也出現了類似的結果，其中BAT1706以劑量依賴性方式顯示出與貝伐單抗相似的功效。兩項研究中的所有治療組都沒有出現死亡或嚴重毒性的跡象，並且兩種抗體在整個治療過程中都有良好的耐受性。
在紐西蘭進行的一項I期研究評估了BAT1706的安全性，並在健康受試者中比較了EU-貝伐單抗和US-貝伐單抗。共有125名健康受試者接受了3種研究藥物：BAT1706、EU-貝伐單抗、或US-貝伐單抗中的1種的單次、1 mg/kg施用，作為90分鐘的IV輸注，並且研究結果顯示，BAT1706的單次IV輸注係安全的，並且耐受性良好，只與輕微的注射部位反應有關。
在中國進行的一項單獨的I期研究（BAT1706-002-CR）也評估了BAT1706的安全性，並在健康受試者中與貝伐單抗（歐洲）進行了比較。共有80名健康受試者（BAT1706組39名受試者和貝伐單抗組41名受試者）接受了研究藥物的單次、1 mg/kg施用。研究結果顯示，兩種藥物都表現出良好的安全性和耐受性特徵。在紐西蘭和中國的研究中，沒有任何受試者報告出現抗藥抗體陽性結果。
肝細胞癌（HCC）係主要的全球健康問題，占所有報告的肝癌病例的85%-90%（該術語與HCC經常互換使用）（El-Serag等人, Gastroenterology [胃腸病學] 2007; 132 (7): 2557-76）。根據世界衛生組織的GLOBOCAN 2012數據庫，肝癌係當年第六大最常見的癌症類型，全世界有78.2萬個新病例；它也是癌症相關死亡的第二個常見原因，估計造成74.6萬人死亡（Torre等人, CA Cancer J Clin. [CA：臨床醫師癌症雜誌] 2015; 65 (2): 87-108）。大多數HCC病例（＞ 80%）發生在東亞和撒哈拉以南非洲，典型的發病率為 ＞ 20人/10萬人。僅中國就占了全世界HCC新病例和HCC相關死亡病例的大約50%（Torre, 同上）。南歐國家，如西班牙、義大利和希臘，往往有更適中的發病率（大約每10萬人中有10至20人），而北美、南美、北歐和大洋洲的HCC發病率相對較低（每10萬人中有 ＜ 5人）（El-Serag等人, Gastroenterology. [胃腸病學] 2012; 142 (6): 1264-73）。
如前所述，抗PD-1/PD-L1抑制劑單一療法已顯示出對先前治療的HCC的臨床益處（Qin等人, Lancet Oncol. [柳葉刀腫瘤學]2020; 21 (4): 571-80）。然而，與索拉非尼相比，它在一線HCC患者中沒有顯示出明顯的改善（Yau等人, Ann Oncol. [腫瘤學年鑒] 2019; 30, (增刊5); v874-v75）。鑒於HCC中報導的抗PD-1抗體具有良好的抗腫瘤活性，並且鑒於TIGIT可以改善抗PD-1療法的治療效果，hu1217-2-2與BGB-A317的組合可以在該適應症中帶來顯著的臨床益處。
在HCC患者中已經觀察到貝伐單抗的單藥活性（Boige等人, Oncologist. [腫瘤學家]2012; 17:1063-72；Siegel J Clin Oncol [臨床腫瘤學雜誌] 2008; 26: 2992-8）。與PD-L1抑制劑組合，貝伐單抗在其他類型的腫瘤中顯示出免疫調節作用，具有良好的臨床益處和安全性特性（Wallin等人, Nat Commun. [自然通訊]2016; 7: 12624）。IMbrave150研究和Orient32研究的陽性結果表明，將抗PD-1/PD-L1抑制劑與抗血管生成藥劑組合具有協同作用。
在研究hu1217-2-2與BGB-A317的組合加BAT1706作為晚期HCC患者的一線治療的有效性和安全性的研究中，該研究將招募大約90名患者，按2 : 1的比例隨機分配到以下2個治療組中的一個： A組（n = 60）：每3週一次靜脈內注射hu1217-2-2 900 mg（以21天的週期給藥）+ 每3週一次靜脈內注射BGB-A317 200 mg（以21天的週期給藥）+ 每3週一次靜脈內注射BAT1706 15 mg/kg（以21天的週期給藥）。 B組（n = 30）：每3週一次靜脈內注射BGB-A317 200 mg（以21天的週期給藥）+ 每3週一次靜脈內注射BAT1706 15 mg/kg（以21天的週期給藥）。
如上所揭露的，靶向TIGIT提供了從免疫抑制性腫瘤微環境中拯救免疫細胞的潛在機制，從而誘導高效的抗腫瘤免疫反應。研究表明，TIGIT途徑與PD-1合作，最大限度地抑制效應腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL），並促進對抗PD-1療法的抗性。靶向PD-1/PD-L1途徑的抗體在治療HCC方面已經取得了成果，因此，用hu1217-2-2與BGB-A317和BAT1706的組合可以顯著改善HCC的治療。
無
圖1為 TIGIT-mIgG2a（頂部）和TIGIT-huIgG1（底部）之示意圖。TIGIT ECD：TIGIT細胞外結構域。N：N-末端。C：C-末端。 圖2A至圖2B為抗TIGIT抗體Vh（A）和Vk（B）區域之系統發生樹。使用DNASTAR的Megalign軟體對候選抗TIGIT抗體的Vh和Vk序列進行比對。序列同源性在系統發生樹中顯示。 圖3為藉由表面電漿共振（SPR）測定純化的鼠抗TIGIT抗體之親和力。 圖4A至圖4B為藉由流動式細胞測量術測定TIGIT結合。 圖5A至圖5B為(A) 顯示抗TIGIT mAb對TIGIT-配位基相互作用的抑制之示意圖。(B) 藉由流動式細胞測量術測定可溶性TIGIT（TIGIT-huIgG1融合蛋白）與表現TIGIT配位基的HEK293細胞（HEK293/PVR或HEK293/PVR-L2）的結合。對TIGIT-配位基相互作用的阻斷藉由添加連續稀釋的抗TIGIT抗體定量測定。結果以兩次重複的平均值 ± SD表示。 圖6A至圖6B為藉由抗TIGIT mAb活化CMV特異性人T細胞。在抗TIGIT抗體存在下，用CMV肽脈衝的靶細胞HCT116細胞（10 4）刺激人CMV肽（NLVPMVATV，495-503）致敏的HLA-A2.1 +PBMC（4 x 10 4）過夜。藉由ELISA測定培養上清液中的IFN-γ。所有條件均一式三份進行。結果以平均值 ± SD表示。 圖7A至圖7B為抗TIGIT mAb促進NK細胞介導之細胞毒性。(A) 在工程化的NK92MI/TIGIT-DNAM-1穩定細胞系上的TIGIT和DNAM-1表現。(B) 如實例8所述，在hu1217-2-2/IgG1mf（0.007-30 μg/ml）的存在下，藉由乳酸脫氫酶（LDH）釋放測定確定NK92MI/TIGIT-DNAM-1細胞對SK-MES-1/PVR細胞的殺傷。結果以三次重複的平均值 ± SD表示。 圖8為抗TIGIT mAb hu1217-2-2/IgG1wt藉由FcγR介導的胞啃（trogocytosis）降低TIGIT受體之表面表現。在生物素標記的抗TIGIT mAb的存在下，將Jurkat/TIGIT細胞與表現FcγR的HEK293細胞在完全培養基中孵育過夜。在一些情況下，添加10%的人AB血清以確定大量人IgG對胞啃的作用。藉由用SA-APC（博奇公司（Biolegend））染色確定TIGIT受體的表面表現。藉由流動式細胞測量術確定MFI。所有數據點一式兩份。結果以平均值 ± SD表示。 圖9A為顯示抗TIGIT mAb對人周邊血液單核細胞（PBMC）之ADCC作用。藉由流動式細胞測量術確定健康供體的PHA刺激的PBMC上的TIGIT表現。CD4 +（CD4 +Foxp3 -）、CD8 +T效應子和調節性T細胞（Treg，CD4 +Foxp3 +）都表現了顯著水平的TIGIT（18%-41%）。顯示的數據係來自3名健康供體的代表性結果。 圖9B為在TIGIT mAb（30 μg/mL）或對照抗體（以5 μg/ml的OKT3作為陽性對照，並且以30 μg/ml的huIgG作為陰性對照）的存在下，使用CD16 +人NK細胞系NK92MI/CD16V作為效應細胞和PHA刺激的PBMC作為靶細胞進行ADCC測定，持續42小時。藉由流動式細胞測量術確定CD3 +、CD8 +T細胞和Treg的百分比。 圖10為顯示抗TIGIT mAb對人PBMC的CDC作用。使用PHA刺激的PBMC作為靶細胞和自體血清作為補體來源進行CDC測定。在最終濃度為15%的自體血清中，將預活化的PBMC與抗TIGIT mAb（0.01-100 µg/ml）共培養3天後，如實例11中所述藉由細胞滴定度發光測定測量並計算CDC百分比（y軸）。顯示了供體A和B的數據。將HuIgG用作陰性對照，而將抗MHC-A、B、C用作陽性對照。 圖11為描繪了靜脈內輸注50 mg至900 mg後hu1217-2-2的血清濃度之下降。 圖12為顯示hu1217-2-2作為單一藥劑或與BGB-A317組合促進IFN-γ體外分泌。 圖13為顯示hu1217-2-2作為單一藥劑在小鼠膠質瘤模型中可以減少腫瘤生長。 圖14為顯示了hu1217-2-2與抗PD1抗體組合在TIGIT敲除的MC大腸癌小鼠模型中的功效。 
                         序列表
          <![CDATA[<110>  百濟神州有限公司（BeiGene, Ltd.）]]>
          <![CDATA[<120>  使用抗TIGIT抗體與抗PD1抗體組合治療癌症之方法]]>
          <![CDATA[<130>  F21W0812PR6]]>
          <![CDATA[<140>  TW 111102344]]>
          <![CDATA[<141>  2022-01-20]]>
          <![CDATA[<160>  24    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn 3.5版]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  244]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Met Arg Trp Cys Leu Leu Leu Ile Trp Ala Gln Gly Leu Arg Gln Ala 
          1               5                   10                  15      
          Pro Leu Ala Ser Gly Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Ala Glu Lys Gly Gly Ser Ile Ile Leu Gln Cys His Leu Ser 
                  35                  40                  45              
          Ser Thr Thr Ala Gln Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln 
              50                  55                  60                  
          Leu Leu Ala Ile Cys Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Phe Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln 
                          85                  90                  95      
          Ser Leu Thr Val Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr 
                      100                 105                 110         
          Tyr Pro Asp Gly Thr Tyr Thr Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu 
                  115                 120                 125             
          Ser Ser Val Ala Glu His Gly Ala Arg Phe Gln Ile Pro Leu Leu Gly 
              130                 135                 140                 
          Ala Met Ala Ala Thr Leu Val Val Ile Cys Thr Ala Val Ile Val Val 
          145                 150                 155                 160 
          Val Ala Leu Thr Arg Lys Lys Lys Ala Leu Arg Ile His Ser Val Glu 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Leu Arg Arg Lys Ser Ala Gly Gln Glu Glu Trp Ser Pro Ser 
                      180                 185                 190         
          Ala Pro Ser Pro Pro Gly Ser Cys Val Gln Ala Glu Ala Ala Pro Ala 
                  195                 200                 205             
          Gly Leu Cys Gly Glu Gln Arg Gly Glu Asp Cys Ala Glu Leu His Asp 
              210                 215                 220                 
          Tyr Phe Asn Val Leu Ser Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Cys Ser Phe Phe 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Glu Thr Gly 
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn Ile Ser Ala Glu Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Ser Ile Ile Leu Gln Cys His Leu Ser Ser Thr Thr Ala Gln 
                      20                  25                  30          
          Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln Leu Leu Ala Ile Cys 
                  35                  40                  45              
          Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser Phe Lys Asp Arg Val 
              50                  55                  60                  
          Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln Ser Leu Thr Val Asn 
          65                  70                  75                  80  
          Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr Tyr Pro Asp Gly Thr 
                          85                  90                  95      
          Tyr Thr Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu Ser Ser Val Ala Glu 
                      100                 105                 110         
          His Gly Ala Arg Phe Gln Ile Pro 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Asp Tyr Tyr Met Tyr 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Tyr Ile Thr Lys Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Gln Thr Asn Tyr Asp Phe Thr Met Asp Tyr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ser Val Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Trp Ala Ser Ala Arg His Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Tyr Trp Ile Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Tyr Ile Thr Lys Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Val Ser Arg Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gln Thr Asn Tyr Asp Phe Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  357]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc cctgaaactc       60
          tcctgtgcaa cctctggatt cactttcagt gactattaca tgtattggat tcggcagact      120
          ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatac attactaagg gtggtggtag cacctattat      180
          ccagacactg taaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac      240
          ctgcaagtga gccgtctgaa gtctgaggac acagccatat attactgtgc aagacagact      300
          aactacgact ttactatgga ctactggggt caaggaacct cagtcacggt ctcctca         357
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Ser Ile Ile Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Asn Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Trp Ala Ser Ala Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  321]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          gacattgtga tgacccagtc tcacaaattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc       60
          atcatctgca aggccagtca ggatgtgggt acttctgtag cctggtatca acagaaacca      120
          gggcaatctc ctaacctact gatttactgg gcatccgccc ggcacactgg agtccctgat      180
          cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagcaa tgtacagtct      240
          gaagacttgg cagattattt ctgtcagcaa tatagcagtt atcctctcac gttcggtgct      300
          gggaccaagc tggagctgaa a                                                321
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu1217-1-1 HCDR2]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Tyr Ile Thr Lys Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu1217-1-1 VH pro]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Tyr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Tyr Ile Thr Lys Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gln Thr Asn Tyr Asp Phe Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  357]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu1217-1-1 VH DNA]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgcagc ctggaggcag cctgagactg       60
          agctgcgcca ccagcggctt caccttctcc gactactaca tgtactggat caggcaggcc      120
          cctggcaaag gcctggagtg ggtggcctac atcaccaagg gcggcggcag cacctactac      180
          cccgatagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa caccctgtac      240
          ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc caggcagacc      300
          aactacgact tcaccatgga ctactggggc cagggcacac tggtgaccgt gagcagc         357
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu1217-1-1 VK pro]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Trp Ala Ser Ala Arg His Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  321]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu1217-1-1 VK DNA]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          gagatcgtga tgacccagag ccctgccaca ctgagcgtga gccctggcga gagagccacc       60
          ctgagctgca aggccagcca ggatgtgggc accagcgtgg cctggtacca gcagaaaccc      120
          ggccaggctc ccaggctgct gatctactgg gccagcgcca gacacacagg cgtgcctgcc      180
          agatttagcg gcagcggcag cggcaccgag tttaccctga ccatcagcag cctgcagtcc      240
          gaggacttcg ccgtgtacta ctgccagcag tacagcagct accccctgac attcggcggc      300
          ggcaccaagg tggagatcaa g                                                321
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  329]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  IgG1mf]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
                      100                 105                 110         
          Pro Ala Pro Pro Ala Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 
                  115                 120                 125             
          Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 
              130                 135                 140                 
          Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 
                          165                 170                 175     
          Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 
                      180                 185                 190         
          Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 
                  195                 200                 205             
          Ala Leu Ala Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 
              210                 215                 220                 
          Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 
                          245                 250                 255     
          Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 
                      260                 265                 270         
          Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 
                  275                 280                 285             
          Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val 
              290                 295                 300                 
          Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu1217-2-2 VH pro]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Tyr Ile Thr Lys Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gln Thr Asn Tyr Asp Phe Thr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  357]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu1217-2-2 VH DNA]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          gaggtgcagc tggtggagag cggaggagga ctggtgcagc ctggaggcag cctgagactg       60
          agctgcgccg ccagcggctt caccttctcc gactactaca tgtactgggt caggcaggcc      120
          cctggcaaag gcctggagtg ggtggcctac atcaccaagg gcggcggcag cacctactac      180
          cccgatagcg tgaagggcag gttcaccatc agcagggaca acgccaagaa caccctgtac      240
          ctgcagatga acagcctgag ggccgaggat accgccgtgt actactgcgc caggcagacc      300
          aactacgact tcaccatgga ctactggggc cagggcacac tggtgaccgt gagcagc         357
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu1217-2-2 VK pro]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Trp Ala Ser Ala Arg His Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  321]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu1217-2-2 VK DNA]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          gagatcgtga tgacccagag ccctgccaca ctgagcgtga gccctggcga gagagccacc       60
          ctgagctgca aggccagcca ggatgtgggc accagcgtgg cctggtacca gcagaaaccc      120
          ggccaggctc ccaggctgct gatctactgg gccagcgcca gacacacagg catccctgcc      180
          agatttagcg gcagcggcag cggcaccgag tttaccctga ccatcagcag cctgcagtcc      240
          gaggacttcg ccgtgtacta ctgccagcag tacagcagct accccctgac attcggcggc      300
          ggcaccaagg tggagatcaa g                                                321
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  10A7 VH pro]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 
                      20                  25                  30          
          Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Tyr Ile Arg Ser Gly Ser Gly Ile Val Phe Tyr Ala Asp Thr Val 
              50                  55                  60                  
          Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg Pro Leu Gly His Asn Thr Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  113]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  10A7 VK pro]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Tyr Tyr Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Lys Glu Asn Leu Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 
                  35                  40                  45              
          Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Ile Arg Phe Ser Gly Val 
              50                  55                  60                  
          Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 
                          85                  90                  95      
          Gly Ile Asn Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile 
                      100                 105                 110         
          Lys 
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Val Ile Tyr Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  12]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val 
          1               5                   10 
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Lys Ser Ser Glu Ser Val Ser Asn Asp Val Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr 
          1               5     
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  354]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  4B6 DNA-VH]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          caggtgcagc tgcaggagtc gggaccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc       60
          acctgcactg tctctgggtt ttcattaacc agctatggtg tacactggat ccggcagccc      120
          ccagggaagg gactggagtg gatcggggtc atatacgccg atggaagcac aaattataat      180
          ccctccctca agagtcgagt gaccatatca aaagacacct ccaagaacca ggtttccctg      240
          aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agcctatggt      300
          aactactggt acatcgatgt ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca            354
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  4B6 VH]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Val Ile Tyr Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 
                          85                  90                  95      
          Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  321]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  4B6 VL]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc       60
          atcaactgca agtccagcga gagtgtgagt aatgatgtag cttggtacca gcagaaacca      120
          ggacagcctc ctaagctgct cattaactat gcatttcatc gcttcactgg ggtccctgac      180
          cgattcagtg gcagcgggta tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcaggct      240
          gaagatgtgg cagtttatta ctgtcaccag gcttatagtt ctccgtacac gtttggccag      300
          gggaccaagc tggagatcaa a                                                321
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  4B6 VL]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Ser Asn Asp 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Asn Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  327]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  huIgG4mt10 pro]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Pro Val Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
                  115                 120                 125             
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
              130                 135                 140                 
          Ala Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 
                          165                 170                 175     
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp 
                      180                 185                 190         
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
              210                 215                 220                 
          Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                          245                 250                 255     
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
                      260                 265                 270         
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 
                  275                 280                 285             
          Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 
              290                 295                 300                 
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 
                          325
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021

Claims (29)

  1. 一種癌症治療之方法，該方法包括向受試者施用有效量的抗TIGIT抗體或其抗原結合片段與抗PD1抗體或其抗原結合片段的組合。
  2. 如請求項1所述之方法，其中該方法包括向受試者施用有效量的抗體或其抗原結合片段與抗PD1抗體的組合，該抗體或其抗原結合片段與人TIGIT特異性結合，並且包含： (i) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含 (a) SEQ ID NO: 3的HCDR（重鏈互補決定區）1，(b) SEQ ID NO: 13的HCDR2，和 (c) SEQ ID NO: 5的HCDR3；和輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含 (d) SEQ ID NO: 6的LCDR（輕鏈互補決定區）1，(e) SEQ ID NO: 7的LCDR2，和 (f) SEQ ID NO: 8的LCDR3；或 (ii) 重鏈可變區，該重鏈可變區包含 (a) SEQ ID NO: 3的HCDR1，(b) SEQ ID NO: 4的HCDR2，和 (c) SEQ ID NO: 5的HCDR3；和輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含：(d) SEQ ID NO: 6的LCDR1，(e) SEQ ID NO: 7的LCDR2，和 (f) SEQ ID NO: 8的LCDR3。
  3. 如請求項2所述之方法，其中該抗TIGIT抗體或其抗原結合片段包含： (i) 含有SEQ ID NO:19的重鏈可變區（VH）、和含有SEQ ID NO: 21的輕鏈可變區（VL）； (ii) 含有SEQ ID NO: 14的重鏈可變區（VH）、和含有SEQ ID NO: 16的輕鏈可變區（VL）；或 (iii) 含有SEQ ID NO: 9的重鏈可變區（VH）、和含有SEQ ID NO: 11的輕鏈可變區（VL）。
  4. 如請求項1所述之方法，其中該抗PD1抗體包含抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性結合人PD1，並且包含： 重鏈可變區，該重鏈可變區包含 (a) SEQ ID NO: 25的HCDR1，(b) SEQ ID NO: 26的HCDR2，和 (c) SEQ ID NO: 27的HCDR3；和輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含 (d) SEQ ID NO: 28的LCDR1，(e) SEQ ID NO: 29的LCDR2，和 (f) SEQ ID NO: 30的LCDR3。
  5. 如請求項4所述之方法，其中該抗PD1抗體或其抗原結合片段特異性結合人PD1，並且包含含有SEQ ID NO: 32的胺基酸序列的重鏈可變區（VH）和含有SEQ ID NO: 34的胺基酸序列的輕鏈可變區（VL）。
  6. 如請求項4或5所述之方法，其中該抗PD1抗體包含含有SEQ ID NO: 35的IgG4恒定結構域。
  7. 如請求項1所述之方法，其中該抗TIGIT抗體係選自以下群組的抗體片段，該群組由以下組成：Fab、Fab'-SH、Fv、scFv、和(Fab')2片段。
  8. 如請求項1所述之方法，其中該抗PD1抗體係選自以下群組的抗體片段，該群組由以下組成：Fab、Fab'-SH、Fv、scFv、和(Fab')2片段。
  9. 如請求項1所述之方法，該方法進一步包括施用有效量的抗VEGF抗體。
  10. 如請求項9所述之方法，其中該抗VEGF抗體係貝伐單抗或BAT1706。
  11. 如請求項1或請求項9所述之方法，其中該癌症選自由以下組成之群組：乳癌、大腸癌、胰臟癌、頭頸癌、胃癌、腎癌、肝癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、食道癌、卵巢癌、子宮癌、子宮頸癌、皮膚癌、間皮瘤、淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或肉瘤。
  12. 如請求項9所述之方法，其中該小細胞肺癌係局限期小細胞肺癌。
  13. 如請求項9所述之方法，其中該癌症係非小細胞肺癌。
  14. 如請求項9所述之方法，其中該頭頸癌係鼻咽癌。
  15. 如請求項9所述之方法，其中該食道癌係食管鱗狀細胞癌（ESCC）。
  16. 如請求項9所述之方法，其中該癌症係子宮癌。
  17. 如請求項9所述之方法，其中該胃癌係胃或胃食管連接處癌。
  18. 如請求項9所述之方法，其中該子宮頸癌係復發或轉移性子宮頸癌。
  19. 如請求項9所述之方法，其中該皮膚癌係基底細胞癌。
  20. 如請求項9所述之方法，其中該癌症係胰臟癌。
  21. 如請求項9所述之方法，其中該腎癌係肝細胞癌。
  22. 如請求項1所述之方法，該方法進一步包括施用化療。
  23. 如請求項20所述之方法，其中該化療係化放療。
  24. 如請求項1所述之方法，其中該抗PD1抗體以每三週200 mg給藥。
  25. 如請求項22所述之方法，其中該抗TIGIT抗體以50 mg-900 mg的範圍給藥。
  26. 如請求項23所述之方法，其中該抗TIGIT抗體以每三週50 mg給藥。
  27. 如請求項23所述之方法，其中該抗TIGIT抗體以每三週150 mg給藥。
  28. 如請求項23所述之方法，其中該抗TIGIT抗體以每三週450 mg給藥。
  29. 如請求項23所述之方法，其中該抗TIGIT抗體以每三週900 mg給藥。
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