CN114058617A - 缀合反义化合物及其用途 - Google Patents

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T·P·普拉卡什
P·P·塞思
E·E·斯韦兹
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Ionis Pharmaceuticals Inc
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Abstract

本文提供了具有缀合物基团的低聚化合物。在某些实施方案中，所述低聚化合物缀合至N‑乙酰基半乳糖胺。

Description

缀合反义化合物及其用途
本申请是申请日为2014年5月1日、申请号为201480035635.3、发明名称为“缀合反义化合物及其用途”的中国发明专利申请的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/US2014/036452的国家阶段申请，该国际申请要求2013年5月1日提交的第61/818442号美国临时申请、2013年5月15日提交的第61/823826号美国临时申请、2013年7月8日提交的第61/843887号美国临时申请、2013年8月29日提交的第61/871673号美国临时申请、2013年9月20日提交的第61/880790号美国临时申请、2014年4月8日提交的第61/976991号美国临时申请和2014年4月30日提交的第61/986867号美国临时申请的优先权。所述优先权申请的全部内容通过引用并入本文。
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发明背景
反义技术背后的原理是反义化合物与靶核酸杂交并且调节靶核酸的量、活性和/或功能。例如在某些情况下，反义化合物导致靶标的转录或翻译改变。可通过例如靶mRNA降解或占位型(occupancy-based)抑制来实现表达的所述调节。通过降解实现的RNA靶功能的调节的实例为在与DNA样反义化合物杂交时靶RNA的基于RNA酶H的降解。通过靶标降解实现的基因表达的调节的另一个实例为RNA干扰(RNAi)。RNAi是指通过利用RNA诱导的沉默复合物(RISC)的机制实现的反义介导的基因沉默。RNA靶功能的调节的另一个实例为通过占位型机制，如微小RNA天然采用的机制。微小RNA为调节蛋白质编码RNA的表达的小型非编码RNA。反义化合物与微小RNA的结合防止微小RNA与其信使RNA靶标结合，因此干扰微小RNA的功能。微小RNA模拟物可增强天然微小RNA功能。某些反义化合物改变前体mRNA(pre-mRNA)的剪接。不管具体机制是什么，序列特异性均使反义化合物具有作为用于靶标验证和基因功能化的工具以及用以选择性调节涉及疾病发病机理的基因的表达的治疗剂的吸引力。
反义技术是用于调节一种或多种特定基因产物的表达的有效手段并且可因此证明在许多治疗、诊断和研究应用中是特别有用的。可将化学修饰的核苷掺入反义化合物中，以增强一种或多种性质，如核酸酶抗性、药物代谢动力学或对靶核酸的亲合力。在1998年，反义化合物
Figure BDA0003357312860000021
(福米韦生(fomivirsen)；由Isis Pharmaceuticals Inc.，Carlsbad，CA开发)为第一种从美国食品药品监督管理局(FDA)获得销售许可的反义药物，并且目前为AIDS患者中巨细胞病毒(CMV)诱发的视网膜炎的治疗。对于另一个实例，靶向ApoB(KYNAMROTM)的反义寡核苷酸已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准为降脂药物和饮食的辅助治疗，以降低患有纯合型家族性高胆固醇血症(HoFH)的患者的低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、ApoB、总胆固醇(TC)和非高密度脂蛋白-胆固醇(非HDL-C)。
新的化学修饰改进了反义化合物的效力和效能，揭示了经口递送的可能性并且增强了皮下施用、减少了副作用的可能性并在患者方便性上产生改进。增加反义化合物的效力的化学修饰允许施用较低剂量，所述较低剂量减小了毒性的可能性并且降低治疗的总成本。增加降解抗性的修饰使从体内清除较慢，从而允许较不频繁的给药。不同类型的化学修饰可组合在一种化合物中以进一步优化化合物的效能。
发明概述
在某些实施方案中，本公开提供缀合反义化合物。在某些实施方案中，本公开提供包含与核酸转录物互补的反义寡核苷酸的缀合反义化合物。在某些实施方案中，本公开提供包括使细胞与包含与核酸转录物互补的反义寡核苷酸的缀合反义化合物接触的方法。在某些实施方案中，本公开提供包括使细胞与包含反义寡核苷酸的缀合反义化合物接触并且降低细胞中核酸转录物的量或活性的方法。
去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)先前已有描述。参见例如，Park等，PNAS第102卷，第47期，第17125-17129页(2005)。所述受体在肝脏细胞尤其是肝细胞上表达。此外，已显示，包含三个N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)配体的聚簇的化合物能够结合ASGP-R，从而导致化合物被摄取到细胞中。参见例如，Khorev等，Bioorganic and Medicinal Chemistry16，9，第5216-5231页(2008年5月)。因此，包含所述GalNAc聚簇的缀合物已用来促进将某些化合物摄取到肝脏细胞(确切地是肝细胞)中。例如，已显示，某些含有GalNAc的缀合物在体内增加双链siRNA化合物在肝脏细胞中的活性。在所述情况下，含有GalNAc的缀合物通常连接至siRNA双链体的有义链。因为在反义链最终与靶核酸杂交之前丢弃有义链，所以存在很少关于缀合物将干扰活性的问题。通常，缀合物连接至siRNA的有义链的3’末端。参见例如，美国专利8,106,022。本文描述的某些缀合物基团比先前描述的缀合物基团更有活性和/或更易于合成。
在本发明的某些实施方案中，缀合物连接至单链反义化合物，包括但不限于基于RNA酶H的反义化合物和改变前体mRNA靶核酸的剪接的反义化合物。在所述实施方案中，缀合物应该保持连接至反义化合物足以提供益处(摄取到细胞中的改进)的时间，但是随后应裂解或以其它方式不干扰对于活性所必需的后续步骤，如与靶核酸杂交以及与RNA酶H或与和剪接或剪接调节相关的酶相互作用。这种性质平衡在单链反义化合物的环境中比在其中缀合物可简单连接至有义链的siRNA化合物中更为重要。本文公开了与缺乏缀合物的相同反义化合物相比在体内在肝脏细胞中具有改进效力的缀合的单链反义化合物。已知这些化合物所需的性质平衡如改进的效力是令人惊奇的。
在某些实施方案中，本文的缀合物基团包含可裂解部分。如所指出的，不希望受机制的束缚，合乎逻辑的是，缀合物应在化合物上保持足以提供摄取增强的时间，但其后，希望缀合物的一些部分或理想的是缀合物的全部均裂解，从而释放呈其最具活性形式的母体化合物(例如，反义化合物)。在某些实施方案中，可裂解部分为可裂解核苷。所述实施方案通过经由一个或多个可裂解键(如具有磷酸二酯键联的那些)通过核苷使缀合物的其余部分(聚簇)连接至反义寡核苷酸来利用细胞中的内源性核酸酶。在某些实施方案中，聚簇通过磷酸二酯键联与可裂解核苷结合。在某些实施方案中，可裂解核苷通过磷酸二酯键联连接至反义寡核苷酸(反义化合物)。在某些实施方案中，缀合物基团可包含两个或三个可裂解核苷。在所述实施方案中，所述可裂解核苷通过可裂解键(如具有磷酸二酯键联的那些)彼此连接，连接至反义化合物和/或连接至聚簇。本文的某些缀合物不包含可裂解核苷而是包含可裂解键。显示了通过至少一个在细胞中易受裂解的键(可裂解键)来提供缀合物自寡核苷酸的充分裂解。
在某些实施方案中，缀合反义化合物为前药。向动物施用所述前药并且其最终代谢为更具活性的形式。例如，使缀合反义化合物裂解以去除缀合物的全部或部分，从而产生缺乏缀合物的全部或一些的反义化合物的活性(或更具活性)形式。
在某些实施方案中，缀合物连接在寡核苷酸的5’末端。某些所述5’-缀合物比具有连接在3’末端的类似缀合物基团的对应物更有效地裂解。在某些实施方案中，改进的活性可与改进的裂解相关。在某些实施方案中，在5’末端包含缀合物的寡核苷酸比在3’末端包含缀合物的寡核苷酸具有更大的效能(参见，例如，实施例56、81、83和84)。此外，5’-连接允许更简单的寡核苷酸合成。通常，在固体载体上在3’至5’方向上合成寡核苷酸。为了制得3’-缀合寡核苷酸，通常将预先缀合的3’核苷连接至固体载体，然后按常规构造寡核苷酸。然而，将所述缀合核苷连接至固体载体增加了合成的复杂性。此外，使用所述方法，缀合物则存在于寡核苷酸的整个合成中并且在后续步骤期间可能发生降解或可能限制可使用的反应和试剂的种类。使用本文针对5’-缀合寡核苷酸所述的结构和技术，可使用标准自动化技术合成寡核苷酸并且与最后(最5’)的核苷一起或在寡核苷酸从固体载体上裂解之后引入缀合物。
鉴于现有技术和本公开，普通技术人员可简单制得本文的任何缀合物和缀合寡核苷酸。此外，本文公开的某些所述缀合物和缀合寡核苷酸的合成更简单和/或需要更少步骤，并且因此比先前公开的缀合物的合成更低廉，从而在制造上提供优点。例如，某些缀合物基团的合成由较少合成步骤组成，从而导致相对先前所述的缀合物基团产率增加。缀合物基团如实施例46中的GalNAc3-10和实施例48中的GalNAc3-7比先前描述的缀合物简单得更多，所述先前描述的缀合物如需要装配更多化学中间体的U.S.8,106,022或U.S.7,262,177中所述的那些。因此，本文描述的这些和其它缀合物在与任何寡核苷酸一起使用方面优于先前描述的化合物，所述寡核苷酸包括单链寡核苷酸和双链寡核苷酸(例如，siRNA)的任一链。
类似地，本文公开了仅具有一个或两个GalNAc配体的缀合物基团。如所示出的，所述缀合物基团改进了反义化合物的活性。所述化合物比包含三个GalNAc配体的缀合物更易于制备。包含一个或两个GalNAc配体的缀合物基团可连接至任何反义化合物，包括单链寡核苷酸和双链寡核苷酸(例如，siRNA)的任一链。
在某些实施方案中，本文的缀合物大致上不改变耐受性的某些量度。例如，本文显示缀合反义化合物不比未缀合的母体化合物更具有免疫原性。因为效力得到改进，所以其中耐受性保持相同(或甚至与效力增益相比耐受性实际上仅略微变差)的实施方案对于治疗具有改进的性质。
在某些实施方案中，缀合允许人们以在不存在缀合的情况下具有较不吸引人的结果的方式改变反义化合物。例如，在某些实施方案中，用磷酸二酯键联替代完全的硫代磷酸酯反义化合物的一个或多个硫代磷酸酯键联造成耐受性的一些量度的改进。例如，在某些情况下，具有一个或多个磷酸二酯的所述反义化合物比其中每个键联为硫代磷酸酯的相同化合物具有更小的免疫原性。然而，在某些情况下，如实施例26中所示，用磷酸二酯键联同样替代一个或多个硫代磷酸酯键联还造成细胞摄取减少和/或效力损失。在某些实施方案中，本文描述的缀合反义化合物耐受所述键联变化，其中当与缀合的完全硫代磷酸酯对应物相比时摄取和效力损失很少或没有损失。事实上，在某些实施方案中，例如在实施例44、57、59和86中，包含缀合物和至少一个磷酸二酯核苷间键联的寡核苷酸实际上表现出增加的体内效力，即使是相对于也包含相同缀合物的完全硫代磷酸酯对应物来说。此外，因为缀合导致摄取/效力的实质增加，所以为实现改进的耐受性，所述实质增益的些微损失是可接受的。因此，在某些实施方案中，缀合反义化合物包含至少一个磷酸二酯键联。
在某些实施方案中，本文的反义化合物的缀合造成肝细胞中递送、摄取和活性的增加。因此，向肝脏组织递送更多的化合物。然而，在某些实施方案中，仅递送增加不能解释活性的整体增加。在某些所述实施方案中，更多化合物进入肝细胞。在某些实施方案中，即使是肝细胞摄取增加也不能解释活性的整体增加。在所述实施方案中，缀合化合物的生产性(productive)摄取增加。例如，如实施例102中所示，相对于非实质细胞，含有GalNAc的缀合物的某些实施方案增加了反义寡核苷酸在肝细胞中的富集。此富集对靶向在肝细胞中表达的基因的寡核苷酸是有益的。
在某些实施方案中，本文的缀合反义化合物造成肾暴露减少。例如，如实施例20中所示，包含含有GalNAc的缀合物的某些实施方案的反义寡核苷酸在肾中的浓度低于缺乏含有GalNAc的缀合物的反义寡核苷酸的浓度。这具有若干有益的治疗意义。对于不想要在肾中的活性的治疗适应症(indication)，对肾的暴露具有肾毒性的风险而没有相应的益处。此外，肾中的高浓度通常导致化合物流失至尿液，从而导致更快的清除。因此对于非肾靶标，肾积累是不希望的。
在某些实施方案中，本公开提供由下式表示的缀合反义化合物：
Figure BDA0003357312860000071
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
C为缀合物接头
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
在上图和在本文的类似图中，支链基团“D”支化多次，所述次数是适应由“q”指示的(E-F)基团数目所必需的。因此，在q＝1时，式为：
A-B-C-D-E-F
在q＝2时，式为：
Figure BDA0003357312860000081
在q＝3时，式为：
Figure BDA0003357312860000082
在q＝4时，式为：
Figure BDA0003357312860000083
在q＝5时，式为：
Figure BDA0003357312860000084
在某些实施方案中，提供具有以下结构的缀合反义化合物：
Figure BDA0003357312860000091
在某些实施方案中，提供具有以下结构的缀合反义化合物：
Figure BDA0003357312860000092
在某些实施方案中，提供具有以下结构的缀合反义化合物：
Figure BDA0003357312860000101
在某些实施方案中，提供具有以下结构的缀合反义化合物：
Figure BDA0003357312860000111
本公开提供以下非限制性编号的实施方案：
实施方案1.一种缀合反义化合物，其包含：包含12-30个连接核苷的反义寡核苷酸和缀合物基团，其中缀合物基团包含：可裂解部分；缀合物接头；以及细胞靶向部分。
实施方案2.如实施方案1所述的缀合反义化合物，其中：
可裂解部分共价结合至反义寡核苷酸；
缀合物接头共价结合至可裂解部分；并且
细胞靶向部分共价结合至缀合物接头。
实施方案3.如实施方案1或2所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含支链基团。
实施方案4.如实施方案3所述的缀合反义化合物，其中支链基团共价连接至缀合物接头。
实施方案5.如实施方案1-4中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含至少一个系链(tether)。
实施方案6.如实施方案5所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链共价连接至支链基团。
实施方案7.如实施方案1-6中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含至少一个配体。
实施方案8.如实施方案7所述的缀合反义化合物，其中至少一个配体中的每一个共价连接至系链。
实施方案9.如实施方案1-8所述的缀合反义化合物，其中化合物具有由以下式I表示的结构：
Figure BDA0003357312860000121
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
C为缀合物接头
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案10.如实施方案1-9中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分包含1-4个连接的可裂解部分核苷，其中反义寡核苷酸与第一可裂解部分核苷之间的键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案11.如实施方案10所述的缀合反义化合物，其中每个连接的可裂解部分核苷之间的每个核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案12.如实施方案10或11所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分包含1-3个连接的可裂解部分核苷。
实施方案13.如实施方案10或11所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分包含1-2个连接的可裂解部分核苷。
实施方案14.如实施方案10所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分包含一个可裂解部分核苷。
实施方案15.如实施方案1-14中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分为选自由以下组成的组的可裂解部分核苷：嘌呤、取代的嘌呤、嘧啶或取代的嘧啶。
实施方案16.如实施方案1-14中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分为选自胞苷、尿苷、腺苷、胸苷以及鸟苷的可裂解部分核苷。
实施方案17.如实施方案1-14中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分为选自脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧肌苷、胸苷、脱氧尿苷以及脱氧胞苷的可裂解部分脱氧核苷。
实施方案18.如实施方案1-17中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分包含脱氧腺苷。
实施方案19.如实施方案1-18中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分为脱氧腺苷。
实施方案20.如实施方案1-19中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000141
其中Bx、Bx1、Bx2和Bx3中的每一个独立地为杂环碱基部分。
实施方案21.如实施方案20所述的缀合反义化合物，其中杂环碱基部分选自以下：尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤或鸟嘌呤。
实施方案22.如实施方案1-19中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000142
实施方案23.如实施方案1-22中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含吡咯烷。
实施方案24.如实施方案1-23中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含PEG。
实施方案25.如实施方案1-24中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含酰胺。
实施方案26.如实施方案1-25中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含聚酰胺。
实施方案27.如实施方案1-26中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含胺。
实施方案28.如实施方案1-27中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含一个或多个二硫键。
实施方案29.如实施方案1-28中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含蛋白质结合部分。
实施方案30.如实施方案29所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分包含脂质。
实施方案31.如实施方案30所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分选自以下：胆固醇、胆酸、金刚烷乙酸、1-芘丁酸、二氢睾酮、1，3-二-O(十六烷基)甘油、香叶基氧基己基、十六烷基甘油、冰片、甲醇、1，3-丙二醇、十七烷基、棕榈酸、肉豆蔻酸、O3-(油酰基)石胆酸、O3-(油酰基)胆烯酸、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪)、维生素(例如，叶酸、维生素A、维生素E、生物素、吡哆醛)、肽、碳水化合物(例如，单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖、多糖)、溶内体组分(endosomolytic component)、类固醇(例如，熊果醇、龙舌兰皂苷配基(hecigenin)、薯蓣皂苷配基)、萜烯(例如，三萜烯、萨洒皂草配基、无羁萜、表无羁萜醇衍生的石胆酸)或阳离子脂质。
实施方案32.如实施方案1-31中任一个所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分为C16至C22长链饱和或不饱和脂肪酸、胆固醇、胆酸、维生素E、金刚烷或1-五氟丙基。
实施方案33.如实施方案1-32中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000161
其中n为1至20；并且p为1至6。在具有多于一个n的所述实施方案中，独立地选择每个n。
实施方案34.如实施方案1-33中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000171
其中n为1至20。
实施方案35.如实施方案1-33中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000181
Figure BDA0003357312860000182
以及
Figure BDA0003357312860000183
其中n为1至20。
实施方案36.如实施方案1-33中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000191
实施方案37.如实施方案1-33中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000201
Figure BDA0003357312860000202
以及
Figure BDA0003357312860000203
实施方案38.如实施方案1-33中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000204
其中n为1至20。
实施方案39.如实施方案1-33中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000211
实施方案40.如实施方案1-39中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含碳水化合物。
实施方案41.如实施方案1-40中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含碳水化合物聚簇。
实施方案42.如实施方案1-41中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含细胞表面受体配体。
实施方案43.如实施方案1-42中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含至少一个N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案44.如实施方案1-43中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含支链基团。
实施方案45.如实施方案44所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含醚。
实施方案46.如实施方案44或45所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000221
其中每个n独立地为1至20；并且
m为2至6。
实施方案47.如实施方案44或45所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000222
实施方案48.如实施方案44或45所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000231
以及
Figure BDA0003357312860000232
其中每个A1独立地为O、S、C＝O或NH；并且
每个n独立地为1至20。
实施方案49.如实施方案44或45所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000233
实施方案50.如任何实施方案1-49所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含系链。
实施方案51.如任何实施方案1-49所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含两个系链。
实施方案52.如任何实施方案1-49所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含三个系链。
实施方案53.如任何实施方案1-49所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含四个或更多个系链。
实施方案54.如实施方案1-53中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含PEG。
实施方案55.如实施方案1-54中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含酰胺。
实施方案56.如实施方案1-55中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含聚酰胺。
实施方案57.如实施方案1-56中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含胺。
实施方案58.如实施方案1-57中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少两个系链彼此不同。
实施方案59.如实施方案1-57中任一个所述的缀合反义化合物，其中所有系链彼此相同。
实施方案60.如实施方案1-59中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860000241
Figure BDA0003357312860000242
以及
Figure BDA0003357312860000243
其中每个n独立地为1至20；并且
每个p为1至约6。
实施方案61.如实施方案1-60中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860000251
Figure BDA0003357312860000252
以及
Figure BDA0003357312860000253
实施方案62.如实施方案1-61中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000254
其中每个n独立地为1至20。
实施方案63.如实施方案1-61中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000255
实施方案64.如实施方案1-63中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含至少一个配体。
实施方案65.如实施方案64所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含一个配体。
实施方案66.如实施方案64所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含两个配体。
实施方案67.如实施方案64所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含三个配体。
实施方案68.如实施方案64-67中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体共价连接至每个系链。
实施方案69.如实施方案1至68中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案70.如实施方案1至69中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案71.如实施方案1-70中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体选自以下：多糖、修饰的多糖、甘露糖、半乳糖、甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、D-吡喃甘露糖、L-吡喃甘露糖、D-阿拉伯糖、L-半乳糖、D-呋喃木糖、L-呋喃木糖、D-葡萄糖、L-葡萄糖、D-半乳糖、L-半乳糖、α-D-呋喃甘露糖、β-D-呋喃甘露糖、α-D-吡喃甘露糖、β-D-吡喃甘露糖、α-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃葡萄糖、α-D-呋喃葡萄糖、β-D-呋喃葡萄糖、α-D-呋喃果糖、α-D-吡喃果糖、α-D-吡喃半乳糖、β-D-吡喃半乳糖、α-D-呋喃半乳糖、β-D-呋喃半乳糖、葡糖胺、唾液酸、α-D-半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、2-氨基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖、2-脱氧-2-甲基氨基-L-吡喃葡萄糖、4，6-二脱氧-4-甲酰氨基-2，3-二-O-甲基-D-吡喃甘露糖、2-脱氧-2-磺氨基-D-吡喃葡萄糖、N-乙醇酰基-α-神经氨酸、5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖、2，3，4-三-O-乙酰基-1-硫代-6-O-三苯甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷甲酯、4-硫代-β-D-吡喃半乳糖、3，4，6，7-四-O-乙酰基-2-脱氧-1，5-二硫代-α-D-葡糖-庚吡喃糖苷乙酯、2，5-脱水-D-阿洛糖腈、核糖、D-核糖、D-4-硫代核糖、L-核糖、L-4-硫代核糖。
实施方案72.如实施方案1-71中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体为半乳糖。
实施方案73.如实施方案1-71中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体为甘露糖-6-磷酸。
实施方案74.如实施方案1-71中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体选自以下：
Figure BDA0003357312860000271
以及
Figure BDA0003357312860000272
其中每个R1选自OH和NHCOOH。
实施方案75.如实施方案1-71中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体选自以下：
Figure BDA0003357312860000273
以及
Figure BDA0003357312860000274
实施方案76.如实施方案1-71中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000275
实施方案77.如实施方案1-71中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000281
实施方案78.如实施方案1-77中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000282
其中每个n独立地为1至20。
实施方案79.如实施方案1-77中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000283
实施方案80.如实施方案1-79中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000291
其中每个n独立地为1至20；
Z为H或连接的固体载体；
Q为所述反义化合物；
X为O或S；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案81.如实施方案1-79中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000292
其中Z为H或连接的固体载体；
Q为所述反义化合物。
实施方案82.如实施方案1-81中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的核苷的2’-位。
实施方案83.如实施方案1-81中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的核苷的3’-位。
实施方案84.如实施方案1-81中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的核苷的5’-位。
实施方案85.如实施方案1-82中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的5’-末端核苷。
实施方案86.如实施方案1-84中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的3’-末端核苷。
实施方案87.如实施方案1-84中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的内部核苷。
实施方案88.如实施方案1-87中任一个所述的缀合反义化合物，其中相对于未缀合反义化合物，缀合物基团增加了肝细胞对缀合反义化合物的摄取。
实施方案89.如实施方案1-88中任一个所述的缀合反义化合物，其中相对于未缀合反义化合物，缀合物基团增加了肝脏细胞对缀合反义化合物的摄取。
实施方案90.如实施方案1-89中任一个所述的缀合反义化合物，其中相对于未缀合反义化合物，缀合物基团增加了缀合反义化合物在肝脏中的积累。
实施方案91.如实施方案1-90中任一个所述的缀合反义化合物，其中相对于未缀合反义化合物，缀合物基团减少了缀合反义化合物在肾中的积累。
实施方案92.如实施方案1-91中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。
实施方案93.如实施方案1-92中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰核苷。
实施方案94.如实施方案1-93中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸的每个核苷均为修饰核苷。
实施方案95.如实施方案1-94中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸为单链的。
实施方案96.如实施方案93-95所述的缀合反义化合物，其中至少一个修饰核苷包含修饰的糖部分。
实施方案97.如实施方案96所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含以下的糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案98.如实施方案97所述的缀合反义化合物，其中5’-区由2个连接的5’-区核苷组成。
实施方案99.如实施方案97所述的缀合反义化合物，其中5’-区由3个连接的5’-区核苷组成。
实施方案100.如实施方案97所述的缀合反义化合物，其中5’-区由4个连接的5’-区核苷组成。
实施方案101.如实施方案97所述的缀合反义化合物，其中5’-区由5个连接的5’-区核苷组成。
实施方案102.如实施方案97-101中任一个所述的缀合反义化合物，其中3’-区由2个连接的3’-区核苷组成。
实施方案103.如实施方案97-101中任一个所述的缀合反义化合物，其中3’-区由3个连接的3’-区核苷组成。
实施方案104.如实施方案97-91中任一个所述的缀合反义化合物，其中3’-区由4个连接的3’-区核苷组成。
实施方案105.如实施方案97-101中任一个所述的缀合反义化合物，其中3’-区由5个连接的3’-区核苷组成。
实施方案106.如实施方案97-105中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由5个连接的中心区核苷组成。
实施方案107.如实施方案97-105中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由6个连接的中心区核苷组成。
实施方案108.如实施方案97-105中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由7个连接的中心区核苷组成。
实施方案109.如实施方案97-105中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由8个连接的中心区核苷组成。
实施方案110.如实施方案97-105中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由9个连接的中心区核苷组成。
实施方案111.如实施方案97-105中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由10个连接的中心区核苷组成。
实施方案112.如实施方案1-111中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸由14至26个连接核苷组成。
实施方案113.如实施方案1-111中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸由15至25个连接核苷组成。
实施方案114.如实施方案1-111中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案115.如实施方案1-114中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个修饰核苷独立地包含2’-取代的糖部分或双环糖部分。
实施方案116.如实施方案115所述的缀合反义化合物，其中至少一个修饰核苷包含2’-取代的糖部分。
实施方案117.如实施方案116所述的缀合反义化合物，其中包含2’-取代的糖部分的每个修饰核苷包含独立地选自以下的2’取代基：卤素、任选取代的烯丙基、任选取代的氨基、叠氮基、任选取代的SH、CN、OCN、CF3、OCF3、O、S或N(Rm)-烷基；O、S或N(Rm)-烯基；O、S或N(Rm)-炔基；任选取代的O-亚烷基-O-烷基、任选取代的炔基、任选取代的烷芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的O-烷芳基、任选取代的O-芳烷基、O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)或O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每个Rm和Rn独立地为H、氨基保护基或取代或未取代的C1-C10烷基；
其中每个任选取代的基团被独立地选自以下的取代基任选取代：羟基、氨基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基(NO2)、巯基、硫代烷氧基(S-烷基)、卤素、烷基、芳基、烯基和炔基。
实施方案118.如实施方案116所述的缀合反义化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCH2F、OCHF2、OCF3、OCH2CH3、O(CH2)2F、OCH2CHF2、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3、O(CH2)2-SCH3、O(CH2)2-OCF3、O(CH2)3-N(R1)(R2)、O(CH2)2-ON(R1)(R2)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R3)-(CH2)2-N(R1)(R2)以及O(CH2)2-N(R3)-C(＝NR4)[N(R1)(R2)]；其中R1、R2、R3和R4各自独立地为H或C1-C6烷基。
实施方案119.如实施方案116所述的缀合反义化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2。
实施方案120.如实施方案116所述的缀合反义化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-MOE糖部分。
实施方案121.如实施方案116所述的缀合反义化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-OMe糖部分。
实施方案122.如实施方案116所述的缀合反义化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-F糖部分。
实施方案123.如实施方案1-122中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含糖替代物。
实施方案124.如实施方案123所述的缀合反义化合物，其中修饰核苷包含F-HNA糖部分。
实施方案125.如实施方案123所述的缀合反义化合物，其中修饰核苷包含HNA糖部分。
实施方案126.如实施方案1-125中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含双环糖部分。
实施方案127.如实施方案126所述的缀合反义化合物，其中双环糖部分为cEt糖部分。
实施方案128.如实施方案126所述的缀合反义化合物，其中双环糖部分为LNA糖部分。
实施方案129.如实施方案1-128中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷间键联。
实施方案130.如实施方案129所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸的每个核苷间键联为修饰的核苷间键联。
实施方案131.如实施方案129所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰键联和至少一个未修饰的磷酸二酯核苷间键联。
实施方案132.如实施方案129-131中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案133.如实施方案129-122中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案134.如实施方案129-133中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少2个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案135.如实施方案129-133中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少3个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案136.如实施方案129-132中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少4个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案137.如实施方案129-132中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少5个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案138.如实施方案129-132中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少6个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案139.如实施方案129-132中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少7个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案140.如实施方案129-132中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少8个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案141.如实施方案129-132中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少9个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案142.如实施方案129-132中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少10个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案143.如实施方案129-142中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于16个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案144.如实施方案129-142中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于15个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案145.如实施方案129-142中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于14个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案146.如实施方案129-142中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于13个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案147.如实施方案129-142中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于12个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案148.如实施方案129-142中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于11个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案149.如实施方案129-142中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于10个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案150.如实施方案129-142中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于9个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案151.如实施方案129-142中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于8个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案152.如实施方案129-142中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于7个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案153.如实施方案129-142中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于6个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案154.如实施方案129-153中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸的每个末端核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案155.如实施方案129-154中任一个所述的缀合反义化合物，其中连接反义寡核苷酸的两个脱氧核苷的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案156.如实施方案129-155中任一个所述的缀合反义化合物，其中连接反义寡核苷酸的两个修饰核苷的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案157.如实施方案129-156中任一个所述的缀合反义化合物，其中作为修饰核苷的3’的反义寡核苷酸的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案158.如实施方案129-157中任一个所述的缀合反义化合物，其中作为脱氧核苷的3’的反义寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案159.如实施方案1-158中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有选自以下的化学基序：
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM；以及
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个s为硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个y为磷酸二酯核苷间键联或硫代磷酸酯核苷间键联，前提是至少一个y为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案160.如实施方案1-158中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有选自以下的化学基序：
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM；以及
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个o为磷酸二酯核苷间键联，并且每个s为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案161.如实施方案159或160所述的缀合反义化合物，其中每个M独立地选自以下：2’-MOE核苷和双环核苷。
实施方案162.如实施方案161所述的缀合反义化合物，其中每个M独立地选自以下：2’-MOE核苷、cEt核苷以及LNA核苷。
实施方案163.如实施方案159或160所述的缀合反义化合物，其中每个M为2’-MOE核苷。
实施方案164.如实施方案159或160所述的缀合反义化合物，其中每个M为cEt核苷。
实施方案165.如实施方案159或160所述的缀合反义化合物，其中每个M为LNA核苷。
实施方案166.如实施方案1-165中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少8个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案167.如实施方案1-165中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少10个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案168.如实施方案1-165中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少12个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案169.如实施方案1-165中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少14个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案170.如实施方案1-165中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少16个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案171.如实施方案1-165中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少18个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案172.如实施方案1-171中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸与靶核酸至少90％互补。
实施方案173.如实施方案1-171中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸与靶核酸至少95％互补。
实施方案174.如实施方案1-171中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸与靶核酸100％互补。
实施方案175.如实施方案166-174中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶核酸为前体mRNA。
实施方案176.如实施方案166-174中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶核酸为mRNA。
实施方案177.如实施方案166-176中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶核酸在肝脏中表达。
实施方案178.如实施方案177所述的缀合反义化合物，其中靶核酸在肝细胞中表达。
实施方案179.如实施方案177或178所述的缀合反义化合物，其中靶核酸编码选自以下的蛋白质：雄激素受体、载脂蛋白(a)、载脂蛋白B、载脂蛋白C-III、C-反应蛋白、eIF-4E、因子VII、因子XI、糖皮质激素受体、胰高血糖素受体、蛋白酪氨酸磷酸酶1B、STAT3以及甲状腺素运载蛋白。
实施方案180.如实施方案166-179所述的缀合反义化合物，其中靶核酸为病毒核酸。
实施方案181.如实施方案180所述的缀合反义化合物，其中病毒核酸在肝脏中表达。
实施方案182.如实施方案181所述的缀合反义化合物，其中靶核酸为乙型肝炎病毒核酸。
实施方案183.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：17、18、19、20、21、22、23或24中的任一个的核碱基序列。
实施方案184.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：25、26、27、28、29或30中的任一个的核碱基序列。
实施方案185.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：31的核碱基序列。
实施方案186.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：32的核碱基序列。
实施方案187.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：33的核碱基序列。
实施方案188.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：34的核碱基序列。
实施方案189.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：35、36、37、38、39、40、41、42或43中的任一个的核碱基序列。
实施方案190.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：44、45、46、47或48的核碱基序列。
实施方案191.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：49、50、51、52、53、54、55、56、57、58或59中的任一个的核碱基序列。
实施方案192.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：60、61、62、63、64、65、66或67中的任一个的核碱基序列。
实施方案193.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：69、70、71或72中的任一个的核碱基序列。
实施方案194.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：73的核碱基序列。
实施方案195.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：74、75、76、77、78、79、80或81中的任一个的核碱基序列。
实施方案196.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：68的核碱基序列。
实施方案197.如实施方案1-179中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：82-103中的任一个的核碱基序列。
实施方案198.一种减小细胞中靶核酸的量或活性的方法，其包括使细胞与如实施方案1-197中任一个所述的缀合反义化合物接触。
实施方案199.如实施方案198所述的方法，其中细胞为肝脏细胞。
实施方案200.如实施方案199所述的方法，其中细胞为肝细胞。
实施方案201.如实施方案198-200中任一个所述的方法，其中细胞在体外。
实施方案202.如实施方案198-200中任一个所述的方法，其中细胞在动物中。
实施方案203.如实施方案202所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案204.如实施方案202所述的方法，其中动物为人。
实施方案205.一种药物组合物，其包含根据实施方案1-197中任一个所述的缀合反义化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
实施方案206.如实施方案205所述的药物组合物，其中药学上可接受的载体或稀释剂选自无菌水和无菌盐水。
实施方案207.一种治疗动物的疾病或病状的方法，其包括向动物施用如实施方案205或206所述的药物组合物并从而治疗动物的疾病或病状。
实施方案208.如实施方案207所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案209.如实施方案207所述的方法，其中动物为人。
实施方案210.如实施方案207-209中任一个所述的方法，其中疾病或病状为肝脏疾病或病状。
实施方案211.如实施方案207-210中任一个所述的方法，其中施用为肠胃外的。
实施方案212.如实施方案211所述的方法，其中施用为通过皮下注射。
实施方案213.如实施方案211所述的方法，其中施用为通过静脉内注射。
实施方案214.如实施方案211所述的方法，其中施用为通过肌肉内注射。
实施方案215.如实施方案207-214中任一个所述的方法，其中以1-10mg/kg的剂量提供缀合反义化合物。
实施方案216.如实施方案207-214中任一个所述的方法，其中以小于1mg/kg的剂量提供缀合反义化合物。
实施方案217.如实施方案207-216中任一个所述的方法，其中以大于10mg/kg的剂量提供缀合反义化合物。
实施方案218.如实施方案207-217中任一个所述的方法，其中提供缀合反义化合物持续至少2个月的给药期。
实施方案219.如实施方案207-217中任一个所述的方法，其中提供缀合反义化合物持续至少4个月的给药期。
实施方案220.如实施方案207-217中任一个所述的方法，其中提供缀合反义化合物持续至少6个月的给药期。
实施方案221.如实施方案207-217中任一个所述的方法，其中以约每周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案222.如实施方案207-217中任一个所述的方法，其中以约每两周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案223.如实施方案207-217中任一个所述的方法，其中以约每三周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案224.如实施方案207-217中任一个所述的方法，其中以每四周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案225.如实施方案207-217中任一个所述的方法，其中以每五周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案226.如实施方案207-217中任一个所述的方法，其中以每六周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案227.如实施方案207-217中任一个所述的方法，其中以每七周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案228.如实施方案207-217中任一个所述的方法，其中以每八周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案229.一种缀合反义化合物，其包含：包含12-30个连接核苷的反义寡核苷酸和缀合物基团，其中缀合物基团包含至少一个细胞靶向部分。
实施方案230.如实施方案229所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含2个细胞靶向部分。
实施方案231.如实施方案229所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含3个细胞靶向部分。
实施方案232.如实施方案229所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含4个细胞靶向部分。
实施方案233.如实施方案229-232中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个细胞靶向部分包含可裂解键。
实施方案234.如实施方案229-233中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个细胞靶向部分包含系链和配体。
实施方案235.如实施方案234所述的缀合反义化合物，其中配体为细胞表面受体配体。
实施方案236.如实施方案235所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含可裂解键。
实施方案237.如实施方案235所述的缀合反义化合物，其中每个系链包含可裂解键。
实施方案238.如实施方案229-237中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含缀合物接头。
实施方案239.如实施方案238所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含一个或多个可裂解键。
实施方案240.如实施方案229-239中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含支链基团。
实施方案241.如实施方案240所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含一个或多个可裂解键。
实施方案242.如实施方案229-241中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含可裂解部分。
实施方案243.如实施方案242所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分包含一个或多个可裂解键。
实施方案244.如实施方案229-243中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含至少一个可裂解键。
实施方案245.如实施方案229-243中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含至少两个可裂解键。
实施方案246.如实施方案229-243中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含至少3个可裂解键。
实施方案247.如实施方案229-243中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含至少4个可裂解键。
实施方案248.如实施方案229-243中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含至少5个可裂解键。
实施方案249.如实施方案229-248中任一个所述的缀合反义化合物，其包含选自以下的可裂解键：酰胺、聚酰胺、酯、醚、磷酸二酯、磷酸酯、氨基甲酸酯、二硫化物或肽。
实施方案250.如实施方案249所述的缀合反义化合物，其中肽为二肽。
实施方案251.如实施方案249所述的缀合反义化合物，其中肽为三肽。
实施方案252.如实施方案249所述的缀合反义化合物，其中肽为赖氨酸。
实施方案253.如实施方案249所述的缀合反义化合物，其中肽为赖氨酸衍生物。
实施方案254.如实施方案250-251中任一个所述的缀合反义化合物，其中一个或多个肽为赖氨酸。
实施方案255.如实施方案250-251中任一个所述的缀合反义化合物，其中两个或更多个肽为赖氨酸。
实施方案256.如实施方案229至255中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含：
Figure BDA0003357312860000481
其中每个j为1至3的整数；并且
其中每个n为1至20的整数。
实施方案257.如实施方案229至255中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含：
Figure BDA0003357312860000491
实施方案258.如实施方案229至257中任一个所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含：
Figure BDA0003357312860000492
Figure BDA0003357312860000501
其中每个j为1至3的整数；并且
其中每个n为1至20的整数。
实施方案259.如实施方案229至257中任一个所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含：
Figure BDA0003357312860000502
实施方案260.如实施方案229-259中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含碳水化合物。
实施方案261.如实施方案229-259中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含碳水化合物聚簇。
实施方案262.如实施方案229-259中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含细胞表面受体配体。
实施方案263.如实施方案229-259中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含至少一个N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案264.如实施方案229-263中任一个所述的缀合反义化合物，其中：
可裂解部分共价结合至反义寡核苷酸；
缀合物接头共价结合至可裂解部分；并且
细胞靶向部分共价结合至缀合物接头。
实施方案265.如实施方案229-264中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含支链基团。
实施方案266.如实施方案265所述的缀合反义化合物，其中支链基团共价连接至缀合物接头。
实施方案267.如实施方案229-266中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含至少一个系链。
实施方案268.如实施方案229-267中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链共价连接至支链基团。
实施方案269.如实施方案229-267中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含至少一个配体。
实施方案270.如实施方案269所述的缀合反义化合物，其中至少一个配体中的每一个共价连接至系链。
实施方案271.如实施方案229-270中任一个所述的缀合反义化合物，其中化合物具有由以下式I表示的结构：
Figure BDA0003357312860000521
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
C为缀合物接头
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案272.如实施方案229-271中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分包含1-4个连接的可裂解部分核苷，其中反义寡核苷酸与第一可裂解部分核苷之间的键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案273.如实施方案272所述的缀合反义化合物，其中每个连接的可裂解部分核苷之间的每个核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案274.如实施方案271或272所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分包含1-3个连接的可裂解部分核苷。
实施方案275.如实施方案271或272所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分包含1-2个连接的可裂解部分核苷。
实施方案276.如实施方案271所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分包含一个可裂解部分核苷。
实施方案277.如实施方案229至276中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分为选自由以下组成的组的可裂解部分核苷：嘌呤、取代的嘌呤、嘧啶或取代的嘧啶。
实施方案278.如实施方案229至276中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分为选自胞苷、尿苷、腺苷、胸苷和鸟苷的可裂解部分核苷。
实施方案279.如实施方案229至276中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分为选自脱氧腺苷、脱氧鸟苷、脱氧肌苷、胸苷、脱氧尿苷以及脱氧胞苷的可裂解部分脱氧核苷。
实施方案280.如实施方案229至280中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分包含脱氧腺苷。
实施方案281.如实施方案229至280中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分为脱氧腺苷。
实施方案282.如实施方案229至276中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000541
其中Bx、Bx1、Bx2和Bx3中的每一个独立地为杂环碱基部分。
实施方案283.如实施方案282所述的缀合反义化合物，其中杂环碱基部分选自以下：尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤或鸟嘌呤。
实施方案284.如实施方案229至276中任一个所述的缀合反义化合物，其中可裂解部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000542
实施方案285.如实施方案229至285中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含吡咯烷。
实施方案286.如实施方案229至286中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含PEG。
实施方案287.如实施方案229至287中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含酰胺。
实施方案288.如实施方案229至288中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含聚酰胺。
实施方案289.如实施方案229至289中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含胺。
实施方案290.如实施方案229至290中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含一个或多个二硫键。
实施方案291.如实施方案229至291中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含蛋白质结合部分。
实施方案292.如实施方案292所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分包含脂质。
实施方案293.如实施方案293所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分选自以下：胆固醇、胆酸、金刚烷乙酸、1-芘丁酸、二氢睾酮、1，3-二-O(十六烷基)甘油、香叶基氧基己基、十六烷基甘油、冰片、甲醇、1，3-丙二醇、十七烷基、棕榈酸、肉豆蔻酸、O3-(油酰基)石胆酸、O3-(油酰基)胆烯酸、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪)、维生素(例如，叶酸、维生素A、维生素E、生物素、吡哆醛)、肽、碳水化合物(例如，单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖、多糖)、溶内体组分、类固醇(例如，熊果醇、龙舌兰皂苷配基、薯蓣皂苷配基)、萜烯(例如，三萜烯，例如萨洒皂草配基、无羁萜、表无羁萜醇衍生的石胆酸)或阳离子脂质。
实施方案294.如实施方案229至293中任一个所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分为C16至C22长链饱和或不饱和的脂肪酸、胆固醇、胆酸、维生素E、金刚烷或1-五氟丙基。
实施方案295.如实施方案229至294中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000561
其中每个n独立地为1至20；并且p为1至6。
实施方案296.如实施方案229至295中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000571
其中每个n独立地为1至20。
实施方案297.如实施方案229至295中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000581
Figure BDA0003357312860000582
以及
Figure BDA0003357312860000583
其中每个n独立地为1至20。
实施方案298.如实施方案229至295中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000591
实施方案299.如实施方案229至295中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000601
Figure BDA0003357312860000602
以及
Figure BDA0003357312860000603
实施方案300.如实施方案229至295中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000604
其中n为1至20。
实施方案301.如实施方案229至295中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000611
实施方案302.如实施方案229至301中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含碳水化合物。
实施方案303.如实施方案229至302中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含碳水化合物聚簇。
实施方案304.如实施方案229至303中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含细胞表面受体配体。
实施方案305.如实施方案229至304中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含至少一个N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案306.如实施方案229至305中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含支链基团。
实施方案307.如实施方案306所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含醚。
实施方案308.如实施方案306或307所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000621
其中每个n独立地为1至20；并且
m为2至6。
实施方案309.如实施方案306或307所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000622
实施方案310.如实施方案306或307所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000631
以及
Figure BDA0003357312860000632
其中每个A1独立地为O、S、C＝O或NH；并且
每个n独立地为1至20。
实施方案311.如实施方案306或307所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000633
实施方案312.如实施方案306或307中任一个所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含：
Figure BDA0003357312860000634
其中每个j为1至3的整数；并且
其中每个n为1至20的整数。
实施方案313.如实施方案306或307中任一个所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含：
Figure BDA0003357312860000641
实施方案314.如任何实施方案229-313所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含系链。
实施方案315.如任何实施方案229-313所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含两个系链。
实施方案316.如任何实施方案229-313所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含三个系链。
实施方案317.如任何实施方案229-313所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含四个或更多个系链。
实施方案318.如实施方案229-317中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含PEG。
实施方案319.如实施方案229-318中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含酰胺。
实施方案320.如实施方案229-319中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含聚酰胺。
实施方案321.如实施方案229-320中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含胺。
实施方案322.如实施方案229-321中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少两个系链彼此不同。
实施方案323.如实施方案229-321中任一个所述的缀合反义化合物，其中所有系链彼此相同。
实施方案324.如实施方案229-323中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860000651
Figure BDA0003357312860000652
以及
Figure BDA0003357312860000653
其中每个n独立地为1至20；并且
每个p为1至约6。
实施方案325.如实施方案229-324中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860000661
Figure BDA0003357312860000662
以及
Figure BDA0003357312860000663
实施方案326.如实施方案229-324中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000664
其中每个n独立地为1至20。
实施方案327.如实施方案229-324中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000665
实施方案328.如实施方案229-328中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含至少一个配体。
实施方案329.如实施方案328所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含一个配体。
实施方案330.如实施方案328所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含两个配体。
实施方案331.如实施方案328所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含三个配体。
实施方案332.如实施方案328-331中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体共价连接至每个系链。
实施方案333.如实施方案229-332中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案334.如实施方案229-332中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案335.如实施方案229-332中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体选自以下：多糖、修饰多糖、甘露糖、半乳糖、甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、D-吡喃甘露糖、L-吡喃甘露糖、D-阿拉伯糖、L-半乳糖、D-呋喃木糖、L-呋喃木糖、D-葡萄糖、L-葡萄糖、D-半乳糖、L-半乳糖、α-D-呋喃甘露糖、β-D-呋喃甘露糖、α-D-吡喃甘露糖、β-D-吡喃甘露糖、α-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃葡萄糖、α-D-呋喃葡萄糖、β-D-呋喃葡萄糖、α-D-呋喃果糖、α-D-吡喃果糖、α-D-吡喃半乳糖、β-D-吡喃半乳糖、α-D-呋喃半乳糖、β-D-呋喃半乳糖、葡糖胺、唾液酸、α-D-半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、2-氨基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖、2-脱氧-2-甲基氨基-L-吡喃葡萄糖、4，6-二脱氧-4-甲酰胺基-2，3-二-O-甲基-D-吡喃甘露糖、2-脱氧-2-磺氨基-D-吡喃葡萄糖、N-乙醇酰基-α-神经氨酸、5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖、2，3，4-三-O-乙酰基-1-硫代-6-O-三苯甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷甲酯、4-硫代-β-D-吡喃半乳糖、3，4，6，7-四-O-乙酰基-2-脱氧-1，5-二硫代-α-D-葡糖-庚吡喃糖苷乙酯、2，5-脱水-D-阿洛糖腈、核糖、D-核糖、D-4-硫代核糖、L-核糖、L-4-硫代核糖。
实施方案336.如实施方案229-332中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体为半乳糖。
实施方案337.如实施方案229-332中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体为甘露糖-6-磷酸。
实施方案338.如实施方案229-332中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体选自以下：
Figure BDA0003357312860000681
以及
Figure BDA0003357312860000682
其中每个R1选自OH和NHCOOH。
实施方案339.如实施方案229-332中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体选自以下：
Figure BDA0003357312860000683
以及
Figure BDA0003357312860000684
实施方案340.如实施方案229-332中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000685
实施方案341.如实施方案229-332中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000691
实施方案342.如实施方案229-332中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000692
其中每个n独立地为1至20。
实施方案343.如实施方案229-336中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000693
实施方案344.如实施方案229-336中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000701
其中每个n独立地为1至20；
Z为H或连接的固体载体；
Q为所述反义化合物；
X为O或S；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案345.如实施方案229-336中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000702
其中Z为H或连接的固体载体；并且
Q为所述反义化合物。
实施方案346.如实施方案229-345中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的核苷的2’-位。
实施方案347.如实施方案229-345中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的核苷的3’-位。
实施方案348.如实施方案229-345中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的核苷的5’-位。
实施方案349.如实施方案229-345中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的5’-末端核苷。
实施方案350.如实施方案229-350中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的3’-末端核苷。
实施方案351.如实施方案229-350中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的内部核苷。
实施方案352.如实施方案229-351中任一个所述的缀合反义化合物，其中相对于未缀合反义化合物，缀合物基团增加了肝细胞对缀合反义化合物的摄取。
实施方案353.如实施方案229-352中任一个所述的缀合反义化合物，其中相对于未缀合反义化合物，缀合物基团增加了肝脏细胞对缀合反义化合物的摄取。
实施方案354.如实施方案229-353中任一个所述的缀合反义化合物，其中相对于未缀合反义化合物，缀合物基团增加了缀合反义化合物在肝脏中的积累。
实施方案355.如实施方案229-354中任一个所述的缀合反义化合物，其中相对于未缀合反义化合物，缀合物基团减少了缀合反义化合物在肾中的积累。
实施方案356.如实施方案229-355中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。
实施方案357.如实施方案229-356中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰核苷。
实施方案358.如实施方案229-357中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸的每个核苷均为修饰核苷。
实施方案359.如实施方案229-358中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸为单链的。
实施方案360.如实施方案357-359所述的缀合反义化合物，其中至少一个修饰核苷包含修饰的糖部分。
实施方案361.如实施方案359所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含以下的糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案362.如实施方案361所述的缀合反义化合物，其中5’-区由2个连接的5’-区核苷组成。
实施方案363.如实施方案361所述的缀合反义化合物，其中5’-区由3个连接的5’-区核苷组成。
实施方案364.如实施方案361所述的缀合反义化合物，其中5’-区由4个连接的5’-区核苷组成。
实施方案365.如实施方案361所述的缀合反义化合物，其中5’-区由5个连接的5’-区核苷组成。
实施方案366.如实施方案361-365中任一个所述的缀合反义化合物，其中3’-区由2个连接的3’-区核苷组成。
实施方案367.如实施方案361-365中任一个所述的缀合反义化合物，其中3’-区由3个连接的3’-区核苷组成。
实施方案368.如实施方案361-365中任一个所述的缀合反义化合物，其中3’-区由4个连接的3’-区核苷组成。
实施方案369.如实施方案361-365中任一个所述的缀合反义化合物，其中3’-区由5个连接的3’-区核苷组成。
实施方案370.如实施方案361-369中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由5个连接的中心区核苷组成。
实施方案371.如实施方案361-369中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由6个连接的中心区核苷组成。
实施方案372.如实施方案361-369中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由7个连接的中心区核苷组成。
实施方案373.如实施方案361-369中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由8个连接的中心区核苷组成。
实施方案374.如实施方案361-369中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由9个连接的中心区核苷组成。
实施方案375.如实施方案361-369中任一个所述的缀合反义化合物，其中中心区由10个连接的中心区核苷组成。
实施方案376.如实施方案229-376中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸由14至26个连接核苷组成。
实施方案377.如实施方案229-376中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸由15至25个连接核苷组成。
实施方案378.如实施方案229-376中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案379.如实施方案229-378中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个修饰核苷独立地包含2’-取代的糖部分或双环糖部分。
实施方案380.如实施方案379所述的缀合反义化合物，其中至少一个修饰核苷包含2’-取代的糖部分。
实施方案381.如实施方案380所述的缀合反义化合物，其中包含2’-取代的糖部分的每个修饰核苷包含独立地选自以下的2’取代基：卤素、任选取代的烯丙基、任选取代的氨基、叠氮基、任选取代的SH、CN、OCN、CF3、OCF3、O、S或N(Rm)-烷基；O、S或N(Rm)-烯基；O、S或N(Rm)-炔基；任选取代的O-亚烷基-O-烷基、任选取代的炔基、任选取代的烷芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的O-烷芳基、任选取代的O-芳烷基、O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)或O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每个Rm和Rn独立地为H、氨基保护基或取代或未取代的C1-C10烷基；
其中每个任选取代的基团被独立地选自以下的取代基任选取代：羟基、氨基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基(NO2)、巯基、硫代烷氧基(S-烷基)、卤素、烷基、芳基、烯基和炔基。
实施方案382.如实施方案380所述的缀合反义化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCH2F、OCHF2、OCF3、OCH2CH3、O(CH2)2F、OCH2CHF2、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3、O(CH2)2-SCH3、O(CH2)2-OCF3、O(CH2)3-N(R1)(R2)、O(CH2)2-ON(R1)(R2)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R3)-(CH2)2-N(R1)(R2)以及O(CH2)2-N(R3)-C(＝NR4)[N(R1)(R2)]；其中R1、R2、R3和R4各自独立地为H或C1-C6烷基。
实施方案383.如实施方案380所述的缀合反义化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2。
实施方案384.如实施方案380所述的缀合反义化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-MOE糖部分。
实施方案385.如实施方案380所述的缀合反义化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-OMe糖部分。
实施方案386.如实施方案380所述的缀合反义化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-F糖部分。
实施方案387.如实施方案229-386中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含糖替代物。
实施方案388.如实施方案387所述的缀合反义化合物，其中修饰核苷包含F-HNA糖部分。
实施方案389.如实施方案387所述的缀合反义化合物，其中修饰核苷包含HNA糖部分。
实施方案390.如实施方案229-389中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含双环糖部分。
实施方案391.如实施方案390所述的缀合反义化合物，其中双环糖部分为cEt糖部分。
实施方案392.如实施方案390所述的缀合反义化合物，其中双环糖部分为LNA糖部分。
实施方案393.如实施方案1-392中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷间键联。
实施方案394.如实施方案393所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸的每个核苷间键联为修饰的核苷间键联。
实施方案395.如实施方案394所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰键联和至少一个未修饰的磷酸二酯核苷间键联。
实施方案396.如实施方案393-395中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案397.如实施方案393-396中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案398.如实施方案393-396中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少2个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案399.如实施方案393-396中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少3个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案400.如实施方案393-396中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少4个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案401.如实施方案393-396中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少5个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案402.如实施方案393-396中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少6个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案403.如实施方案393-396中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少7个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案404.如实施方案393-396中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少8个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案405.如实施方案393-396中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少9个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案406.如实施方案393-396中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含至少10个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案407.如实施方案393-396或398-406中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于16个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案408.如实施方案393-396或398-406中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于15个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案409.如实施方案393-396或398-406中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于14个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案410.如实施方案393-396或398-406中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于13个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案411.如实施方案393-396或398-406中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于12个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案412.如实施方案393-396或398-406中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于11个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案413.如实施方案393-396或398-406中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于10个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案414.如实施方案393-396或398-406中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于9个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案415.如实施方案393-396或398-406中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于8个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案416.如实施方案393-396或398-406中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于7个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案417.如实施方案393-396或398-406中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含少于6个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案418.如实施方案393-418中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸的每个末端核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案419.如实施方案393-396或398-418中任一个所述的缀合反义化合物，其中连接反义寡核苷酸的两个脱氧核苷的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案420.如实施方案393-396或398-419中任一个所述的缀合反义化合物，其中连接反义寡核苷酸的两个修饰核苷的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案421.如实施方案393-396或398-420中任一个所述的缀合反义化合物，其中作为修饰核苷的3’的反义寡核苷酸的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案422.如实施方案393-396或398-418中任一个所述的缀合反义化合物，其中作为脱氧核苷的3’的反义寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案423.如实施方案229-422中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有选自以下的化学基序：
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM；以及
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个s为硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个y为磷酸二酯核苷间键联或硫代磷酸酯核苷间键联，前提是至少一个y为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案424.如实施方案229-422中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有选自以下的化学基序：
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM；以及
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个o为磷酸二酯核苷间键联，并且每个s为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案425.如实施方案423或424所述的缀合反义化合物，其中每个M独立地选自以下：2’-MOE核苷和双环核苷。
实施方案426.如实施方案425所述的缀合反义化合物，其中每个M独立地选自以下：2’-MOE核苷、cEt核苷以及LNA核苷。
实施方案427.如实施方案425或426所述的缀合反义化合物，其中每个M为2’-MOE核苷。
实施方案428.如实施方案425或426所述的缀合反义化合物，其中每个M为cEt核苷。
实施方案429.如实施方案425或426所述的缀合反义化合物，其中每个M为LNA核苷。
实施方案430.如实施方案229-429中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少8个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案431.如实施方案229-429中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少10个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案432.如实施方案229-429中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少12个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案433.如实施方案229-429中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少14个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案434.如实施方案229-429中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少16个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案435.如实施方案229-429中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少18个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案436.如实施方案229-435中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸与靶核酸至少90％互补。
实施方案437.如实施方案229-435中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸与靶核酸至少95％互补。
实施方案438.如实施方案229-435中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸与靶核酸100％互补。
实施方案439.如实施方案430-438中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶核酸为前体mRNA。
实施方案440.如实施方案430-438中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶核酸为mRNA。
实施方案441.如实施方案430-440中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶核酸在肝脏中表达。
实施方案442.如实施方案441所述的缀合反义化合物，其中靶核酸在肝细胞中表达。
实施方案443.如实施方案441或442所述的缀合反义化合物，其中靶核酸编码选自以下的蛋白质：雄激素受体、载脂蛋白(a)、载脂蛋白B、载脂蛋白C-III、C-反应蛋白、eIF-4E、因子VII、因子XI、糖皮质激素受体、胰高血糖素受体、蛋白酪氨酸磷酸酶1B、STAT3以及甲状腺素运载蛋白。
实施方案444.如实施方案430-440所述的缀合反义化合物，其中靶核酸为病毒核酸。
实施方案445.如实施方案444所述的缀合反义化合物，其中病毒核酸在肝脏中表达。
实施方案446.如实施方案445所述的缀合反义化合物，其中靶核酸为乙型肝炎病毒核酸。
实施方案447.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：17、18、19、20、21、22、23或24中的任一个的核碱基序列。
实施方案448.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：25、26、27、28、29或30中的任一个的核碱基序列。
实施方案449.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：31的核碱基序列。
实施方案450.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：32的核碱基序列。
实施方案451.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：33的核碱基序列。
实施方案452.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：34的核碱基序列。
实施方案453.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：35、36、37、38、39、40、41、42或43中的任一个的核碱基序列。
实施方案454.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：44、45、46、47或48的核碱基序列。
实施方案455.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：49、50、51、52、53、54、55、56、57、58或59中的任一个的核碱基序列。
实施方案456.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：60、61、62、63、64、65、66或67中的任一个的核碱基序列。
实施方案457.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：69、70、71或72中的任一个的核碱基序列。
实施方案458.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：73的核碱基序列。
实施方案459.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：74、75、76、77、78、79、80或81中的任一个的核碱基序列。
实施方案460.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：68的核碱基序列。
实施方案461.如实施方案229-443中任一个所述的缀合反义化合物，其中反义寡核苷酸包含SEQ ID NO.：82-103中的任一个的核碱基序列。
实施方案462.一种减小细胞中靶核酸的量或活性的方法，其包括使细胞与如实施方案229-461中任一个所述的缀合反义化合物接触。
实施方案463.如实施方案462所述的方法，其中细胞为肝脏细胞。
实施方案464.如实施方案462所述的方法，其中细胞为肝细胞。
实施方案465.如实施方案462-464中任一个所述的方法，其中细胞在体外。
实施方案466.如实施方案462-464中任一个所述的方法，其中细胞在动物中。
实施方案467.如实施方案466所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案468.如实施方案466所述的方法，其中动物为人。
实施方案469.一种药物组合物，其包含根据实施方案229-469中任一个所述的缀合反义化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
实施方案470.如实施方案469所述的药物组合物，其中药学上可接受的载体或稀释剂选自无菌水和无菌盐水。
实施方案471.一种治疗动物的疾病或病状的方法，其包括向动物施用如实施方案469或470所述的药物组合物并且由此治疗动物的疾病或病状。
实施方案472.如实施方案471所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案473.如实施方案471所述的方法，其中动物为人。
实施方案474.如实施方案471-473中任一个所述的方法，其中疾病或病状为肝脏疾病或病状。
实施方案475.如实施方案471-474中任一个所述的方法，其中施用为肠胃外的。
实施方案476.如实施方案475所述的方法，其中施用为通过皮下注射。
实施方案477.如实施方案475所述的方法，其中施用为通过静脉内注射。
实施方案478.如实施方案475所述的方法，其中施用为通过肌肉内注射。
实施方案479.如实施方案471-478中任一个所述的方法，其中以1-10mg/kg的剂量提供缀合反义化合物。
实施方案480.如实施方案471-478中任一个所述的方法，其中以小于1mg/kg的剂量提供缀合反义化合物。
实施方案481.如实施方案471-480中任一个所述的方法，其中以大于10mg/kg的剂量提供缀合反义化合物。
实施方案482.如实施方案471-481中任一个所述的方法，其中提供缀合反义化合物持续至少2个月的给药期。
实施方案483.如实施方案471-481中任一个所述的方法，其中提供缀合反义化合物持续至少4个月的给药期。
实施方案484.如实施方案471-481中任一个所述的方法，其中提供缀合反义化合物持续至少6个月的给药期。
实施方案485.如实施方案471-481中任一个所述的方法，其中以约每周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案486.如实施方案471-481中任一个所述的方法，其中以约每两周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案487.如实施方案471-481中任一个所述的方法，其中以约每三周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案488.如实施方案471-481中任一个所述的方法，其中以每四周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案489.如实施方案471-481中任一个所述的方法，其中以每五周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案490.如实施方案471-481中任一个所述的方法，其中以每六周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案491.如实施方案471-481中任一个所述的方法，其中以每七周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案492.如实施方案471-481中任一个所述的方法，其中以每八周一次剂量的给药频率提供缀合反义化合物。
实施方案493.一种缀合物化合物，其包含至少一个磷连接基团或中性连接基团和一个或多个配体。
实施方案494.如实施方案493所述的缀合物化合物，其包含两个或更多个配体。
实施方案495.如实施方案493所述的缀合物化合物，其包含三个配体。
实施方案496.如实施方案493至495中任一个所述的缀合物化合物，其中配体选自以下：多糖、修饰的多糖、甘露糖、半乳糖、甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、D-吡喃甘露糖、L-吡喃甘露糖、D-阿拉伯糖、L-半乳糖、D-呋喃木糖、L-呋喃木糖、D-葡萄糖、L-葡萄糖、D-半乳糖、L-半乳糖、α-D-呋喃甘露糖、β-D-呋喃甘露糖、α-D-吡喃甘露糖、β-D-吡喃甘露糖、α-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃葡萄糖、α-D-呋喃葡萄糖、β-D-呋喃葡萄糖、α-D-呋喃果糖、α-D-吡喃果糖、α-D-吡喃半乳糖、β-D-吡喃半乳糖、α-D-呋喃半乳糖、β-D-呋喃半乳糖、葡糖胺、唾液酸、α-D-半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、2-氨基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖、2-脱氧-2-甲基氨基-L-吡喃葡萄糖、4，6-二脱氧-4-甲酰胺基-2，3-二-O-甲基-D-吡喃甘露糖、2-脱氧-2-磺氨基-D-吡喃葡萄糖、N-乙醇酰基-α-神经氨酸、5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖、2，3，4-三-O-乙酰基-1-硫代-6-O-三苯甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷甲酯、4-硫代-β-D-吡喃半乳糖、3，4，6，7-四-O-乙酰基-2-脱氧-1，5-二硫代-α-D-葡糖-庚吡喃糖苷乙酯、2，5-脱水-D-阿洛糖腈、核糖、D-核糖、D-4-硫代核糖、L-核糖、L-4-硫代核糖。
实施方案497.如实施方案493至495中任一个所述的缀合物化合物，其中配体为N-乙酰基半乳糖胺。
实施方案498.如实施方案493至497中任一个所述的缀合物化合物，其中缀合物基团包含选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000891
Figure BDA0003357312860000892
以及
Figure BDA0003357312860000893
实施方案499.如实施方案493至498中任一个所述的缀合物化合物，其中缀合物化合物具有系链，所述系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000894
其中L为磷连接基团或中性连接基团；
Z1为C(＝O)O-R2；
Z2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；
R2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；并且
每个m1独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m1大于0。
实施方案500.如实施方案499所述的缀合物化合物，其中系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000895
其中Z2为H或CH3；并且
每个m1独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m1大于0。
实施方案501.如实施方案493至500中任一个所述的缀合物化合物，其中缀合物化合物共价连接至寡核苷酸。
实施方案502.一种低聚化合物，其包含寡核苷酸和至少一个缀合物基团，其中至少一个缀合物基团为如实施方案493至500中任一个所述的缀合物化合物。
实施方案503.一种化合物，其具有式(I)：
Figure BDA0003357312860000901
其中：
Bx为杂环碱基部分；并且
T1为羟基、氢、羟基保护基、磷部分或反应性磷基团。
实施方案504.一种化合物，其具有式(II)：
Figure BDA0003357312860000911
其中：
Bx为杂环碱基部分；并且
T1为羟基、氢、羟基保护基、磷部分或反应性磷基团。
实施方案505.如实施方案503或504中任一个所述的化合物，其中所述磷部分具有下式：
Figure BDA0003357312860000912
其中：
n为0或1；
Ra和Rc各自独立地为OH、SH、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、氨基或取代的氨基；并且
Rb为O或S。
实施方案506.一种低聚化合物，其包含寡核苷酸和至少一个缀合物基团，其中至少一个缀合物基团为式(III)的缀合物化合物：
Figure BDA0003357312860000921
其中：
Bx为杂环碱基部分；并且
T2为连接至核苷、核苷酸、寡核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物的核苷间连接基团。
实施方案507.一种低聚化合物，其包含寡核苷酸和至少一个缀合物基团，其中至少一个缀合物基团为式(IV)的缀合物化合物：
Figure BDA0003357312860000931
其中：
Bx为杂环碱基部分；并且
T2为连接至核苷、核苷酸、寡核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物的核苷间连接基团。
实施方案508.如实施方案503至507中任一个所述的化合物或低聚化合物，其中杂环碱基部分为嘧啶、取代的嘧啶、嘌呤或取代的嘌呤。
实施方案509.如实施方案503至507中任一个所述的化合物或低聚化合物，其中Bx为尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤或鸟嘌呤。
实施方案510.如实施方案503至507中任一个所述的化合物或低聚化合物，其中Bx为腺嘌呤。
实施方案511.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860000941
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
C为缀合物接头
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案512.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860000942
其中：
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
C为缀合物接头
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；
n1为0或1；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案513.如实施方案511或512所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000951
Figure BDA0003357312860000952
以及
Figure BDA0003357312860000953
其中每个L独立地为磷连接基团或中性连接基团；并且
每个n独立地为1至20。
实施方案514.如实施方案511或512所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000961
Figure BDA0003357312860000962
以及
Figure BDA0003357312860000963
实施方案515.如实施方案511或512所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有以下结构：
Figure BDA0003357312860000971
实施方案516.如实施方案511或512所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构之一：
Figure BDA0003357312860000972
以及
Figure BDA0003357312860000973
实施方案517.如实施方案511或512所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构之一：
Figure BDA0003357312860000974
以及
Figure BDA0003357312860000975
实施方案518.如实施方案511或512所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构之一：
Figure BDA0003357312860000976
以及
Figure BDA0003357312860000977
实施方案519.如实施方案511或518中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含吡咯烷。
实施方案520.如实施方案511或519中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头不包含吡咯烷。
实施方案521.如实施方案511或520中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含PEG。
实施方案522.如实施方案511或521中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含酰胺。
实施方案523.如实施方案511或522中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头不包含酰胺。
实施方案524.如实施方案511或523中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含聚酰胺。
实施方案525.如实施方案511或524中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含胺。
实施方案526.如实施方案511或525中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含一个或多个二硫键。
实施方案527.如实施方案511或526中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含蛋白质结合部分。
实施方案528.如实施方案527所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分包含脂质。
实施方案529.如实施方案528所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分选自以下：胆固醇、胆酸、金刚烷乙酸、1-芘丁酸、二氢睾酮、1，3-二-O(十六烷基)甘油、香叶基氧基己基、十六烷基甘油、冰片、甲醇、1，3-丙二醇、十七烷基、棕榈酸、肉豆蔻酸、O3-(油酰基)石胆酸、O3-(油酰基)胆烯酸、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪)、维生素(例如，叶酸、维生素A、维生素E、生物素、吡哆醛)、肽、碳水化合物(例如，单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖、多糖)、溶内体组分、类固醇(例如，熊果醇、龙舌兰皂苷配基、薯蓣皂苷配基)、萜烯(例如，三萜烯，例如萨洒皂草配基、无羁萜、表无羁萜醇衍生的石胆酸)或阳离子脂质。
实施方案530.如实施方案527至529中任一个所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分为C16至C22长链饱和或不饱和的脂肪酸、胆固醇、胆酸、维生素E、金刚烷或1-五氟丙基。
实施方案531.如实施方案511至512中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860000991
其中每个n独立地为1至20；并且p为1至6。
实施方案532.如实施方案511至512中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001001
其中每个n独立地为1至20。
实施方案533.如实施方案511至512中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001011
实施方案534.如实施方案511至512中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001012
其中n为1至20。
实施方案535.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860001021
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分；
D为支链基团；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案536.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860001022
其中
A为反义寡核苷酸；
D为支链基团；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案537.如实施方案511至536所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构之一：
Figure BDA0003357312860001031
其中每个A1独立地为O、S、C＝O或NH；并且
每个n独立地为1至20。
实施方案538.如实施方案511至536所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构之一：
Figure BDA0003357312860001032
其中每个A1独立地为O、S、C＝O或NH；并且
每个n独立地为1至20。
实施方案539.如实施方案511至536所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001033
实施方案540.如实施方案511至536所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001041
实施方案541.如实施方案511至536中任一个所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含醚。
实施方案542.如实施方案511至536所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001042
每个n独立地为1至20；并且
m为2至6。
实施方案543.如实施方案511至536所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001051
实施方案544.如实施方案511至536所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001052
实施方案545.如实施方案511至536中任一个所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含：
Figure BDA0003357312860001053
Figure BDA0003357312860001061
其中每个j为1至3的整数；并且
其中每个n为1至20的整数。
实施方案546.如实施方案511至536中任一个所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含：
Figure BDA0003357312860001062
实施方案547.如实施方案511至546所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860001071
其中L选自磷连接基团和中性连接基团；
Z1为C(＝O)O-R2；
Z2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；
R2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；并且
每个m1独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m1大于0。
实施方案548.如实施方案511至546所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860001072
其中Z2为H或CH3；并且
每个m2独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m2大于0。
实施方案549.如实施方案511至546中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含PEG。
实施方案550.如实施方案511至546中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含酰胺。
实施方案551.如实施方案511至546中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含聚酰胺。
实施方案552.如实施方案511至546中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含胺。
实施方案553.如实施方案511至546中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少两个系链彼此不同。
实施方案554.如实施方案511至546中任一个所述的缀合反义化合物，其中所有系链彼此相同。
实施方案555.如实施方案511至546中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860001081
Figure BDA0003357312860001082
以及
Figure BDA0003357312860001083
其中每个n独立地为1至20；并且
每个p为1至约6。
实施方案556.如实施方案511至546中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860001091
实施方案557.如实施方案511至546中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001092
其中每个n独立地为1至20。
实施方案558.如实施方案511至546中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001093
实施方案559.如实施方案493至502或511至558中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001094
实施方案560.如实施方案493至502或511至558中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001101
实施方案561.如实施方案493至502或511至558中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含至少一个配体。
实施方案562.如实施方案493至502或511至558所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含一个配体。
实施方案563.如实施方案493至502或511至558所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含两个配体。
实施方案564.如实施方案493至502或511至558所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含三个配体。
实施方案565.如实施方案561至564中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体共价连接至每个系链。
实施方案566.如实施方案561至564中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案567.如实施方案561至564中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案568.如实施方案561至564中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体选自以下：多糖、修饰的多糖、甘露糖、半乳糖、甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、D-吡喃甘露糖、L-吡喃甘露糖、D-阿拉伯糖、L-半乳糖、D-呋喃木糖、L-呋喃木糖、D-葡萄糖、L-葡萄糖、D-半乳糖、L-半乳糖、α-D-呋喃甘露糖、β-D-呋喃甘露糖、α-D-吡喃甘露糖、β-D-吡喃甘露糖、α-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃葡萄糖、α-D-呋喃葡萄糖、β-D-呋喃葡萄糖、α-D-呋喃果糖、α-D-吡喃果糖、α-D-吡喃半乳糖、β-D-吡喃半乳糖、α-D-呋喃半乳糖、β-D-呋喃半乳糖、葡糖胺、唾液酸、α-D-半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、2-氨基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖、2-脱氧-2-甲基氨基-L-吡喃葡萄糖、4，6-二脱氧-4-甲酰氨基-2，3-二-O-甲基-D-吡喃甘露糖、2-脱氧-2-磺氨基-D-吡喃葡萄糖、N-乙醇酰基-α-神经氨酸、5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖、2，3，4-三-O-乙酰基-1-硫代-6-O-三苯甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷甲酯、4-硫代-β-D-吡喃半乳糖、3，4，6，7-四-O-乙酰基-2-脱氧-1，5-二硫代-α-D-葡糖-庚吡喃糖苷乙酯、2，5-脱水-D-阿洛糖腈、核糖、D-核糖、D-4-硫代核糖、L-核糖、L-4-硫代核糖。
实施方案569.如实施方案561至564中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体为半乳糖。
实施方案570.如实施方案561至564中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体为甘露糖-6-磷酸。
实施方案571.如实施方案561至564中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体选自以下：
Figure BDA0003357312860001111
以及
Figure BDA0003357312860001112
其中每个R1选自OH和NHCOOH。
实施方案572.如实施方案561至564中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体选自以下：
Figure BDA0003357312860001121
以及
Figure BDA0003357312860001122
实施方案573.如实施方案561至564中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001123
实施方案574.如实施方案561至564中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001124
实施方案575.如实施方案493至502或511至574中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001131
其中每个n独立地为1至20。
实施方案576.如实施方案493至502或511至574中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001132
实施方案577.如实施方案493至502或511至574中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001141
其中每个n独立地为1至20；
Q为所述反义化合物；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案578.如实施方案493至502或511至574中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001142
其中每个n独立地为1至20；
Q为所述反义化合物；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案579.如实施方案493至502或511至574中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001151
其中每个n独立地为1至20；
Q为所述反义化合物；
Z为H或连接的固体载体；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案580.如实施方案493至502或511至574中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001161
其中每个n独立地为1至20；
Q为所述反义化合物；
Z为H或连接的固体载体；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案581.如实施方案493至502或511至574中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001171
其中Q为所述反义化合物。
实施方案582.如实施方案493至502或511至574中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001172
其中Q为所述反义化合物。
实施方案583.如实施方案493至502或511至574中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001181
其中Q为所述反义化合物；并且
Z为H或连接的固体载体。
实施方案584.如实施方案493至502或511至574中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001191
其中Q为所述反义化合物；并且
Z为H或连接的固体载体。
实施方案585.一种缀合寡核苷酸，其包含寡核苷酸和缀合物基团，其中缀合物基团为如实施方案493至584中任一个所述的任何缀合物基团。
实施方案586.如实施方案585所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸包含至少一个修饰核苷。
实施方案587.如实施方案586所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷包含修饰碱基。
实施方案588.如实施方案586或587所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷包含糖替代物。
实施方案589.如实施方案588所述的缀合寡核苷酸，其中糖替代物为四氢吡喃。
实施方案590.如实施方案589中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中四氢吡喃为F-HNA。
实施方案591.如实施方案586至590中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸的剩余部分包含至少一个核苷，所述核苷包含修饰的糖。
实施方案592.如实施方案591所述的缀合寡核苷酸，其中包含修饰的糖的至少一个修饰核苷选自双环核苷和2’-修饰核苷。
实施方案593.如实施方案586所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷为双环核苷。
实施方案594.如实施方案593所述的缀合寡核苷酸，其中双环核苷为(4’-CH2-O-2’)BNA核苷。
实施方案595.如实施方案593所述的缀合寡核苷酸，其中双环核苷为(4’-(CH2)2-O-2’)BNA核苷。
实施方案596.如实施方案593所述的缀合寡核苷酸，其中双环核苷为(4’-C(CH3)H-O-2’)BNA核苷。
实施方案597.如实施方案586所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷为2’-修饰核苷。
实施方案598.如实施方案597所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷选自2’-F核苷、2’-OCH3核苷以及2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案599.如实施方案598所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-F核苷。
实施方案600.如实施方案598所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-OCH3核苷。
实施方案601.如实施方案598所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案602.如实施方案585-601中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸包含至少一个未修饰核苷。
实施方案603.如实施方案602所述的缀合寡核苷酸，其中未修饰核苷为核糖核苷。
实施方案604.如实施方案602所述的缀合寡核苷酸，其中未修饰核苷为脱氧核糖核苷。
实施方案605.如实施方案585至604中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸包含至少两个修饰核苷。
实施方案606.如实施方案605所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷包含相同修饰。
实施方案607.如实施方案605所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷包含不同修饰。
实施方案608.如实施方案605至607中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的至少一个包含糖替代物。
实施方案609.如实施方案605至608中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的至少一个包含2’-修饰。
实施方案610.如实施方案609所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个独立地选自2’-F核苷、2’-OCH3核苷以及2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案611.如实施方案610所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个为2’-F核苷。
实施方案612.如实施方案610所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个为2’-OCH3核苷。
实施方案613.如实施方案610所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个为2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案614.如实施方案586至613中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中基本上寡核苷酸的每个核苷均为修饰核苷。
实施方案615.如实施方案586至601或606至613中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸的每个核苷均为修饰核苷。
实施方案616.如实施方案586至615中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为单链的。
实施方案617.如实施方案586至615中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为双链的。
实施方案618.如实施方案586至615中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为反义化合物。
实施方案619.如实施方案586至615中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为基于RISC的寡核苷酸。
实施方案620.如实施方案586至615中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸激活RISC途径。
实施方案621.如实施方案586至615中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。
实施方案622.如实施方案586至621中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的5’-末端核苷。
实施方案623.如实施方案586至621中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的3’-末端核苷。
实施方案624.如实施方案586至621中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的内部核苷。
实施方案625.如实施方案586至624中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团增加了肝细胞对缀合寡核苷酸化合物的摄取。
实施方案626.如实施方案586至624中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团增加了肝脏细胞对缀合寡核苷酸化合物的摄取。
实施方案627.如实施方案586至626中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团增加了缀合寡核苷酸化合物在肝脏中的积累。
实施方案628.如实施方案586至627中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团减少了缀合寡核苷酸化合物在肾中的积累。
实施方案629.如实施方案586至628所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含以下的糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案630.如实施方案629所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由2个连接的5’-区核苷组成。
实施方案631.如实施方案629所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由3个连接的5’-区核苷组成。
实施方案632.如实施方案629所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由4个连接的5’-区核苷组成。
实施方案633.如实施方案629所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由5个连接的5’-区核苷组成。
实施方案634.如实施方案629-633中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由2个连接的3’-区核苷组成。
实施方案635.如实施方案629-633中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由3个连接的3’-区核苷组成。
实施方案636.如实施方案629-633中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由4个连接的3’-区核苷组成。
实施方案637.如实施方案629-633中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由5个连接的3’-区核苷组成。
实施方案638.如实施方案629-633中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由5个连接的中心区核苷组成。
实施方案639.如实施方案629-633中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由6个连接的中心区核苷组成。
实施方案640.如实施方案629-633中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由7个连接的中心区核苷组成。
实施方案641.如实施方案629-633中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由8个连接的中心区核苷组成。
实施方案642.如实施方案629-633中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由9个连接的中心区核苷组成。
实施方案643.如实施方案629-633中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由10个连接的中心区核苷组成。
实施方案644.如实施方案629-644中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸由14至26个连接核苷组成。
实施方案645.如实施方案629-644中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸由15至25个连接核苷组成。
实施方案646.如实施方案629-644中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案647.如实施方案629-644中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个修饰核苷独立地包含2’-取代的糖部分或双环糖部分。
实施方案648.如实施方案647所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个修饰核苷包含2’-取代的糖部分。
实施方案649.如实施方案648所述的缀合寡核苷酸化合物，其中包含2’-取代的糖部分的每个修饰核苷包含独立地选自以下的2’取代基：卤素、任选取代的烯丙基、任选取代的氨基、叠氮基、任选取代的SH、CN、OCN、CF3、OCF3、O、S或N(Rm)-烷基；O、S或N(Rm)-烯基；O、S或N(Rm)-炔基；任选取代的O-亚烷基-O-烷基、任选取代的炔基、任选取代的烷芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的O-烷芳基、任选取代的O-芳烷基、O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)或O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每个Rm和Rn独立地为H、氨基保护基或取代或未取代的C1-C10烷基；
其中每个任选取代的基团被独立地选自以下的取代基任选取代：羟基、氨基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基(NO2)、巯基、硫代烷氧基(S-烷基)、卤素、烷基、芳基、烯基和炔基。
实施方案650.如实施方案648所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCH2F、OCHF2、OCF3、OCH2CH3、O(CH2)2F、OCH2CHF2、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3、O(CH2)2-SCH3、O(CH2)2-OCF3、O(CH2)3-N(R1)(R2)、O(CH2)2-ON(R1)(R2)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R3)-(CH2)2-N(R1)(R2)以及O(CH2)2-N(R3)-C(＝NR4)[N(R1)(R2)]；其中R1、R2、R3和R4各自独立地为H或C1-C6烷基。
实施方案651.如实施方案648所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝H)NH2。
实施方案652.如实施方案648所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-MOE糖部分。
实施方案653.如实施方案648所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-OMe糖部分。
实施方案654.如实施方案648所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-F糖部分。
实施方案655.如实施方案629-644中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含糖替代物。
实施方案656.如实施方案655所述的缀合寡核苷酸化合物，其中修饰核苷包含F-HNA糖部分。
实施方案657.如实施方案655所述的缀合寡核苷酸化合物，其中修饰核苷包含HNA糖部分。
实施方案658.如实施方案629-657中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含双环糖部分。
实施方案659.如实施方案658所述的缀合寡核苷酸化合物，其中双环糖部分为cEt糖部分。
实施方案660.如实施方案658所述的缀合寡核苷酸化合物，其中双环糖部分为LNA糖部分。
实施方案661.如实施方案585至660中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷间键联。
实施方案662.如实施方案661所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸的每个核苷间键联为修饰的核苷间键联。
实施方案663.如实施方案661所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰键联和至少一个未修饰的磷酸二酯核苷间键联。
实施方案664.如实施方案661至663中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案665.如实施方案661至663中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案666.如实施方案661至662中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少2个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案667.如实施方案661至662中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少3个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案668.如实施方案661至662中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少4个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案669.如实施方案661至662中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少5个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案670.如实施方案661至662中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少6个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案671.如实施方案661至662中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少7个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案672.如实施方案661至662中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少8个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案673.如实施方案661至662中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少9个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案674.如实施方案661至662中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少10个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案675.如实施方案661或663至674中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于16个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案676.如实施方案661或663至674中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于15个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案677.如实施方案661或663至674中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于14个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案678.如实施方案661或663至674中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于13个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案679.如实施方案661或663至674中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于12个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案680.如实施方案661或663至674中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于11个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案681.如实施方案661或663至674中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于10个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案682.如实施方案661或663至674中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于9个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案683.如实施方案661或663至674中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于8个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案684.如实施方案661或663至674中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于7个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案685.如实施方案661或663至674中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于6个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案686.如实施方案585至685中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸的每个末端核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案687.如实施方案585至662或665至686中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中连接缀合寡核苷酸的两个脱氧核苷的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案688.如实施方案585至662或665至687中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中连接缀合寡核苷酸的两个修饰核苷的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案689.如实施方案585至662或665至688中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中作为修饰核苷的3’的缀合寡核苷酸的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案690.如实施方案585至662或665至689中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中作为脱氧核苷的3’的缀合寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案691.如实施方案585至662或665至690中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有选自以下的化学基序：
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM；以及
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个s为硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个y为磷酸二酯核苷间键联或硫代磷酸酯核苷间键联，前提是至少一个y为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案692.如实施方案585至662或665至690中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有选自以下的化学基序：
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM；以及
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个o为磷酸二酯核苷间键联，并且每个s为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案693.如实施方案691或692所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M独立地选自2’-MOE核苷和双环核苷。
实施方案694.如实施方案693所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M独立地选自2’-MOE核苷、cEt核苷以及LNA核苷。
实施方案695.如实施方案693或694所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M为2’-MOE核苷。
实施方案696.如实施方案693或694所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M为cEt核苷。
实施方案697.如实施方案693或694所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M为LNA核苷。
实施方案698.如实施方案585至697中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少8个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案699.如实施方案585至697中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少10个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案700.如实施方案585至697中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少12个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案701.如实施方案585至697中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少14个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案702.如实施方案585至697中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少16个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案703.如实施方案585至697中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少18个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案704.如实施方案585至697中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸与靶核酸至少90％互补。
实施方案705.如实施方案585至697中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸与靶核酸至少95％互补。
实施方案706.如实施方案585至697中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸与靶核酸100％互补。
实施方案707.如实施方案698至706中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为前体mRNA。
实施方案708.如实施方案698至706中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为mRNA。
实施方案709.如实施方案698至706中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为微小RNA。
实施方案710.如实施方案698至709中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸在肝脏中表达。
实施方案711.如实施方案698至709中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸在肝细胞中表达。
实施方案712.如实施方案698至709中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸编码选自以下的蛋白质：雄激素受体、载脂蛋白(a)、载脂蛋白B、载脂蛋白C-III、C-反应蛋白、eIF-4E、因子VII、因子XI、糖皮质激素受体、胰高血糖素受体、蛋白酪氨酸磷酸酶1B、STAT3以及甲状腺素运载蛋白。
实施方案713.如实施方案698至709中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为病毒核酸。
实施方案714.如实施方案713所述的缀合寡核苷酸化合物，其中病毒核酸在肝脏中表达。
实施方案715.如实施方案714所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为乙型肝炎病毒核酸。
实施方案716.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：17、18、19、20、21、22、23或24中的任一个的核碱基序列。
实施方案717.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：25、26、27、28、29或30中的任一个的核碱基序列。
实施方案718.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：31的核碱基序列。
实施方案719.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：32的核碱基序列。
实施方案720.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：33的核碱基序列。
实施方案721.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：34的核碱基序列。
实施方案722.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：35、36、37、38、39、40、41、42或43中的任一个的核碱基序列。
实施方案723.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：44、45、46、47或48的核碱基序列。
实施方案724.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：49、50、51、52、53、54、55、56、57、58或59中的任一个的核碱基序列。
实施方案725.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：60、61、62、63、64、65、66或67中的任一个的核碱基序列。
实施方案726.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：69、70、71或72中的任一个的核碱基序列。
实施方案727.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：73的核碱基序列。
实施方案728.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：74、75、76、77、78、79、80或81中的任一个的核碱基序列。
实施方案729.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：68的核碱基序列。
实施方案730.如实施方案585至708中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：82-103中的任一个的核碱基序列。
实施方案731.如实施方案585至731中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸为反义寡核苷酸。
实施方案732.一种减小细胞中靶核酸的量或活性的方法，其包括使细胞与如实施方案493至731中任一个所述的化合物或缀合反义化合物接触。
实施方案733.如实施方案732所述的方法，其中细胞为肝脏细胞。
实施方案734.如实施方案732所述的方法，其中细胞为肝细胞。
实施方案735.如实施方案732至734中任一个所述的方法，其中细胞在体外。
实施方案736.如实施方案732至734中任一个所述的方法，其中细胞在动物中。
实施方案737.如实施方案736所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案738.如实施方案736所述的方法，其中动物为人。
实施方案739.一种药物组合物，其包含根据实施方案493至731中任一个所述的化合物或缀合寡核苷酸和药学上可接受的载体或稀释剂。
实施方案740.如实施方案739所述的药物组合物，其中药学上可接受的载体或稀释剂选自无菌水和无菌盐水。
实施方案741.一种治疗动物的疾病或病状的方法，其包括向动物施用如实施方案739或740所述的药物组合物并且由此治疗动物的疾病或病状。
实施方案742.如实施方案741所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案743.如实施方案741所述的方法，其中动物为人。
实施方案744.如实施方案741至743中任一个所述的方法，其中疾病或病状为肝脏疾病或病状。
实施方案745.如实施方案741至743中任一个所述的方法，其中施用为肠胃外的。
实施方案746.如实施方案745所述的方法，其中施用为通过皮下注射。
实施方案747.如实施方案745所述的方法，其中施用为通过静脉内注射。
实施方案748.如实施方案745所述的方法，其中施用为通过肌肉内注射。
实施方案749.如实施方案741至748中任一个所述的方法，其中以1-10mg/kg的剂量提供缀合寡核苷酸。
实施方案750.如实施方案741至748中任一个所述的方法，其中以小于1mg/kg的剂量提供缀合寡核苷酸。
实施方案751.如实施方案741至748中任一个所述的方法，其中以大于10mg/kg的剂量提供缀合寡核苷酸。
实施方案752.如实施方案741至751中任一个所述的方法，其中提供缀合寡核苷酸持续至少2个月的给药期。
实施方案753.如实施方案741至751中任一个所述的方法，其中提供缀合寡核苷酸持续至少4个月的给药期。
实施方案754.如实施方案741至751中任一个所述的方法，其中提供缀合寡核苷酸持续至少6个月的给药期。
实施方案755.如实施方案741至751中任一个所述的方法，其中以约每周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案756.如实施方案741至751中任一个所述的方法，其中以约每两周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案757.如实施方案741至751中任一个所述的方法，其中以约每三周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案758.如实施方案741至751中任一个所述的方法，其中以每四周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案759.如实施方案741至751中任一个所述的方法，其中以每五周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案760.如实施方案741至751中任一个所述的方法，其中以每六周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案761.如实施方案741至751中任一个所述的方法，其中以每七周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案762.如实施方案741至751中任一个所述的方法，其中以每八周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案763.一种缀合反义化合物，其包含：包含12-30个连接核苷的反义寡核苷酸和缀合物基团，其中缀合物基团包含至少一个细胞靶向部分。
实施方案764.一种减小细胞中载脂蛋白C-III蛋白的活性或量的方法，其包括使细胞与如实施方案493至731中任一个所述的至少一种缀合反义化合物接触；并且由此减小细胞中载脂蛋白C-III蛋白的活性或量。
实施方案765.一种减少总胆固醇的方法，其包括使细胞与如实施方案493至731中任一个所述的至少一种化合物接触；并且由此减少总胆固醇。
实施方案766.一种减少甘油三酯的方法，其包括使细胞与如实施方案493至731中任一个所述的至少一种化合物接触；并且由此减少甘油三酯。
实施方案767.一种降低LDL的方法，其包括使细胞与如实施方案493至731中任一个所述的至少一种化合物接触；并且由此降低LDL。
实施方案768.一种增加HDL的方法，其包括使细胞与如实施方案493至731中任一个所述的至少一种化合物接触；并且由此增加HDL。
实施方案769.如实施方案764至768中任一个所述的方法，其中细胞在体外。
实施方案770.如实施方案764至768中任一个所述的方法，其中细胞在动物中。
实施方案771.如实施方案764至768中任一个所述的方法，其中动物为人。
实施方案772.如实施方案1-771中任一个所述的化合物或缀合寡核苷酸或其前药。
实施方案773.一种反义化合物的前药，其包含以下结构：
Figure BDA0003357312860001401
其中ASO表示如实施方案1-771中任一个所述的反义寡核苷酸。
实施方案774.一种包含所述结构的反义化合物的前药，其中前药的一种或多种代谢物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001402
并且其中ASO表示如实施方案1-771中任一个所述的反义寡核苷酸。
实施方案775.一种反义化合物的前药，其中前药的一种或多种代谢物包含如实施方案1-771中任一个所述的反义寡核苷酸。
实施方案776.一种前药，其包含：
Figure BDA0003357312860001411
其中ASO表示如权利要求1至731中任一项所述的反义寡核苷酸。
实施方案777.一种制造如实施方案1-771中任一个所述的反义寡核苷酸的方法。
实施方案778.一种制备如实施方案1-771中任一个所述的反义寡核苷酸的方法。
实施方案779.一种缀合物化合物，其包含至少一个磷连接基团或中性连接基团和一个或多个配体。
实施方案780.如实施方案779所述的缀合物化合物，其包含两个或更多个配体。
实施方案781.如实施方案779所述的缀合物化合物，其包含三个配体。
实施方案782.如实施方案779至781中任一个所述的缀合物化合物，其中配体选自以下：多糖、修饰的多糖、甘露糖、半乳糖、甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、D-吡喃甘露糖、L-吡喃甘露糖、D-阿拉伯糖、L-半乳糖、D-呋喃木糖、L-呋喃木糖、D-葡萄糖、L-葡萄糖、D-半乳糖、L-半乳糖、α-D-呋喃甘露糖、β-D-呋喃甘露糖、α-D-吡喃甘露糖、β-D-吡喃甘露糖、α-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃葡萄糖、α-D-呋喃葡萄糖、β-D-呋喃葡萄糖、α-D-呋喃果糖、α-D-吡喃果糖、α-D-吡喃半乳糖、β-D-吡喃半乳糖、α-D-呋喃半乳糖、β-D-呋喃半乳糖、葡糖胺、唾液酸、α-D-半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、2-氨基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖、2-脱氧-2-甲基氨基-L-吡喃葡萄糖、4，6-二脱氧-4-甲酰胺基-2，3-二-O-甲基-D-吡喃甘露糖、2-脱氧-2-磺氨基-D-吡喃葡萄糖、N-乙醇酰基-α-神经氨酸、5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖、2，3，4-三-O-乙酰基-1-硫代-6-O-三苯甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷甲酯、4-硫代-β-D-吡喃半乳糖、3，4，6，7-四-O-乙酰基-2-脱氧-1，5-二硫代-α-D-葡糖-庚吡喃糖苷乙酯、2，5-脱水-D-阿洛糖腈、核糖、D-核糖、D-4-硫代核糖、L-核糖、L-4-硫代核糖。
实施方案783.如实施方案779至781中任一个所述的缀合物化合物，其中配体为N-乙酰基半乳糖胺。
实施方案784.如实施方案779至783中任一个所述的缀合物化合物，其中缀合物基团包含选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001421
Figure BDA0003357312860001422
以及
Figure BDA0003357312860001423
实施方案785.如实施方案779至784中任一个所述的缀合物化合物，其中缀合物化合物具有系链，所述系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001431
其中L为磷连接基团或中性连接基团；
Z1为C(＝O)O-R2；
Z2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；
R2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；并且
每个m1独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m1大于0。
实施方案786.如实施方案785所述的缀合物化合物，其中系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001432
其中Z2为H或CH3；并且
每个m1独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m1大于0。
实施方案787.如实施方案779至786中任一个所述的缀合物化合物，其中缀合物化合物共价连接至寡核苷酸。
实施方案788.一种低聚化合物，其包含寡核苷酸和至少一个缀合物基团，其中至少一个缀合物基团为如实施方案780至786中任一个所述的缀合物化合物。
实施方案789.一种化合物，其具有式(V)：
Figure BDA0003357312860001441
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a或GalNAc3-11a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；并且其中Bx为杂环碱基部分。
实施方案790.一种化合物，其具有式(VIII)：
Figure BDA0003357312860001442
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案791.一种化合物，其具有式(IX)：
Figure BDA0003357312860001451
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案792.一种化合物，其具有式(X)：
Figure BDA0003357312860001452
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案793.一种化合物，其具有式(XI)：
Figure BDA0003357312860001461
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案794.一种化合物，其具有式(XII)：
Figure BDA0003357312860001462
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案795.一种化合物，其具有式(XIII)：
Figure BDA0003357312860001471
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案796.一种化合物，其具有式(XIV)：
Figure BDA0003357312860001472
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案797.一种化合物，其具有式(XV)：
Figure BDA0003357312860001481
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案798.一种化合物，其具有式(I)：
Figure BDA0003357312860001482
其中：
Bx为杂环碱基部分；并且
T1为羟基、氢、羟基保护基、磷部分或反应性磷基团。
实施方案799.一种化合物，其具有式(II)：
Figure BDA0003357312860001491
其中：
Bx为杂环碱基部分；并且
T1为羟基、氢、羟基保护基、磷部分或反应性磷基团。
实施方案800.如实施方案798或799中任一个所述的化合物，其中磷部分具有下式：
Figure BDA0003357312860001501
其中：
n为0或1；
Ra和Rc各自独立地为OH、SH、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、氨基或取代的氨基；并且
Rb为O或S。
实施方案801.一种低聚化合物，其包含寡核苷酸和至少一个缀合物基团，其中至少一个缀合物基团为式(III)的缀合物化合物：
Figure BDA0003357312860001502
其中；
Bx为杂环碱基部分；并且
T2为连接至核苷、核苷酸、寡核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物的核苷间连接基团。
实施方案802.一种低聚化合物，其包含寡核苷酸和至少一个缀合物基团，其中至少一个缀合物基团为式(IV)的缀合物化合物：
Figure BDA0003357312860001511
其中：
Bx为杂环碱基部分；并且
T2为连接至核苷、核苷酸、寡核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物的核苷间连接基团。
实施方案803.如实施方案798至802中任一个所述的化合物或低聚化合物，其中杂环碱基部分为嘧啶、取代的嘧啶、嘌呤或取代的嘌呤。
实施方案804.如实施方案798至802中任一个所述的化合物或低聚化合物，其中Bx为尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤或鸟嘌呤。
实施方案805.如实施方案798至802中任一个所述的化合物或低聚化合物，其中Bx为腺嘌呤。
实施方案806.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860001521
其中：
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
C为缀合物接头
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案807.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860001522
其中：
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
C为缀合物接头
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；
n1为0或1；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案808.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860001531
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分；
C为缀合物接头；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案809.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860001541
其中
A为反义寡核苷酸；
C为缀合物接头；
D为支链基团；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案810.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860001542
其中
A为反义寡核苷酸；
C为缀合物接头；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案811.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860001551
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分；
D为支链基团；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案812.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860001552
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案813.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860001561
其中
A为反义寡核苷酸；
D为支链基团；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案814.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001571
Figure BDA0003357312860001572
以及
Figure BDA0003357312860001573
其中每个L独立地为磷连接基团或中性连接基团；并且
每个n独立地为1至20。
实施方案815.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001581
Figure BDA0003357312860001582
以及
Figure BDA0003357312860001583
实施方案816.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001584
实施方案817.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构之一：
Figure BDA0003357312860001591
以及
Figure BDA0003357312860001592
实施方案818.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构之一：
Figure BDA0003357312860001593
实施方案819.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构之一：
Figure BDA0003357312860001594
实施方案820.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含吡咯烷。
实施方案821.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头不包含吡咯烷。
实施方案822.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含PEG。
实施方案823.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含酰胺。
实施方案824.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头不包含酰胺。
实施方案825.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含聚酰胺。
实施方案826.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含胺。
实施方案827.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含一个或多个二硫键。
实施方案828.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含蛋白质结合部分。
实施方案829.如实施方案828所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分包含脂质。
实施方案830.如实施方案829所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分选自以下：胆固醇、胆酸、金刚烷乙酸、1-芘丁酸、二氢睾酮、1，3-二-O(十六烷基)甘油、香叶基氧基己基、十六烷基甘油、冰片、甲醇、1，3-丙二醇、十七烷基、棕榈酸、肉豆蔻酸、O3-(油酰基)石胆酸、O3-(油酰基)胆烯酸、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪)、维生素(例如，叶酸、维生素A、维生素E、生物素、吡哆醛)、肽、碳水化合物(例如，单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖、多糖)、溶内体组分、类固醇(例如，熊果醇、龙舌兰皂苷配基、薯蓣皂苷配基)、萜烯(例如，三萜烯，例如萨洒皂草配基、无羁萜、表无羁萜醇衍生的石胆酸)或阳离子脂质。
实施方案831.如实施方案828至830中任一个所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分为C16至C22长链饱和或不饱和的脂肪酸、胆固醇、胆酸、维生素E、金刚烷或1-五氟丙基。
实施方案832.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001611
其中每个n独立地为1至20；并且p为1至6。
实施方案833.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001621
其中每个n独立地为1至20。
实施方案834.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001631
实施方案835.如实施方案806至810中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860001632
其中n为1至20。
实施方案836.如实施方案806至835所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构之一：
Figure BDA0003357312860001641
以及
Figure BDA0003357312860001642
其中每个A1独立地为O、S、C＝O或NH；并且
每个n独立地为1至20。
实施方案837.如实施方案806至835所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构之一：
Figure BDA0003357312860001643
其中每个A1独立地为O、S、C＝O或NH；并且
每个n独立地为1至20。
实施方案838.如实施方案806至835所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001644
实施方案839.如实施方案806至835所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001651
实施方案840.如实施方案806至835所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001652
实施方案841.如实施方案806至835所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001653
实施方案842.如实施方案806至835中任一个所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含醚。
实施方案843.如实施方案806至835所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001661
每个n独立地为1至20；并且
m为2至6。
实施方案844.如实施方案806至835所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001662
实施方案845.如实施方案806至835所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001671
实施方案846.如实施方案806至835中任一个所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含：
Figure BDA0003357312860001672
其中每个j为1至3的整数；并且
其中每个n为1至20的整数。
实施方案847.如实施方案806至835中任一个所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含：
Figure BDA0003357312860001681
实施方案848.如实施方案806至847所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860001682
其中L选自磷连接基团和中性连接基团；
Z1为C(＝O)O-R2；
Z2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；
R2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；并且
每个m1独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m1大于0。
实施方案849.如实施方案806至847所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860001691
其中Z2为H或CH3；并且
每个m2独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m2大于0。
实施方案850.如实施方案806至847中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含PEG。
实施方案851.如实施方案806至847中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含酰胺。
实施方案852.如实施方案806至847中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含聚酰胺。
实施方案853.如实施方案806至847中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含胺。
实施方案854.如实施方案806至847中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少两个系链彼此不同。
实施方案855.如实施方案806至847中任一个所述的缀合反义化合物，其中所有系链彼此相同。
实施方案856.如实施方案806至847中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860001701
Figure BDA0003357312860001702
以及
Figure BDA0003357312860001703
其中每个n独立地为1至20；并且
每个p为1至约6。
实施方案857.如实施方案806至847中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860001704
实施方案858.如实施方案806至847中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001705
其中每个n独立地为1至20。
实施方案859.如实施方案806至847中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个系链具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001711
实施方案860.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001712
实施方案861.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001713
实施方案862.如实施方案806至859中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含至少一个配体。
实施方案863.如实施方案806至859中任一个所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含一个配体。
实施方案864.如实施方案806至859中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含两个配体。
实施方案865.如实施方案806至859中任一个所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含三个配体。
实施方案866.如实施方案806至859中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体共价连接至每个系链。
实施方案867.如实施方案862至866中任一个所述的缀合反义化合物，其中至少一个配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案868.如实施方案862至866中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案869.如实施方案862至866中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体选自以下：多糖、修饰的多糖、甘露糖、半乳糖、甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、D-吡喃甘露糖、L-吡喃甘露糖、D-阿拉伯糖、L-半乳糖、D-呋喃木糖、L-呋喃木糖、D-葡萄糖、L-葡萄糖、D-半乳糖、L-半乳糖、α-D-呋喃甘露糖、β-D-呋喃甘露糖、α-D-吡喃甘露糖、β-D-吡喃甘露糖、α-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃葡萄糖、α-D-呋喃葡萄糖、β-D-呋喃葡萄糖、α-D-呋喃果糖、α-D-吡喃果糖、α-D-吡喃半乳糖、β-D-吡喃半乳糖、α-D-呋喃半乳糖、β-D-呋喃半乳糖、葡糖胺、唾液酸、α-D-半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、2-氨基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖、2-脱氧-2-甲基氨基-L-吡喃葡萄糖、4，6-二脱氧-4-甲酰氨基-2，3-二-O-甲基-D-吡喃甘露糖、2-脱氧-2-磺氨基-D-吡喃葡萄糖、N-乙醇酰基-α-神经氨酸、5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖、2，3，4-三-O-乙酰基-1-硫代-6-O-三苯甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷甲酯、4-硫代-β-D-吡喃半乳糖、3，4，6，7-四-O-乙酰基-2-脱氧-1，5-二硫代-α-D-葡糖-庚吡喃糖苷乙酯、2，5-脱水-D-阿洛糖腈、核糖、D-核糖、D-4-硫代核糖、L-核糖、L-4-硫代核糖。
实施方案870.如实施方案862至866中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体为半乳糖。
实施方案871.如实施方案862至866中任一个所述的缀合反义化合物，其中配体为甘露糖-6-磷酸。
实施方案872.如实施方案862至866中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体选自以下：
Figure BDA0003357312860001731
其中每个R1选自OH和NHCOOH。
实施方案873.如实施方案862至866中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体选自以下：
Figure BDA0003357312860001732
以及
Figure BDA0003357312860001733
实施方案874.如实施方案862至866中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001741
实施方案875.如实施方案862至866中任一个所述的缀合反义化合物，其中每个配体具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001742
实施方案876.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001743
其中每个n独立地为1至20。
实施方案877.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001751
实施方案878.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001752
实施方案879.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001761
实施方案880.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001762
实施方案881.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001771
实施方案882.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001772
实施方案883.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001773
实施方案884.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001781
实施方案885.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001782
实施方案886.如实施方案806至860中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860001791
实施方案887.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001792
其中每个n独立地为1至20；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案888.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001801
其中每个n独立地为1至20；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案889.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001811
其中每个n独立地为1至20；
A为反义寡核苷酸；
Z为H或连接的固体载体；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案890.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001821
其中每个n独立地为1至20；
A为反义寡核苷酸；
Z为H或连接的固体载体；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案891.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001831
其中A为反义寡核苷酸。
实施方案892.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001832
其中A为反义寡核苷酸。
实施方案893.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001841
其中A为反义寡核苷酸；并且
Z为H或连接的固体载体。
实施方案894.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001851
其中A为反义寡核苷酸；并且
Z为H或连接的固体载体。
实施方案895.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001852
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案896.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001861
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案897.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001871
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案898.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001872
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案899.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001881
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案900.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001882
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案901.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001891
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案902.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001892
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案903.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001901
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案904.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001911
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案905.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001921
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案906.如实施方案779至789中任一个所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860001931
并且其中A为反义寡核苷酸。
实施方案907.一种缀合寡核苷酸，其包含寡核苷酸和缀合物基团，其中缀合物基团为如实施方案779至907中任一个所述的任何缀合物基团。
实施方案908.如实施方案907所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸包含至少一个修饰核苷。
实施方案909.如实施方案908所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷包含修饰碱基。
实施方案910.如实施方案908或909所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷包含糖替代物。
实施方案911.如实施方案910所述的缀合寡核苷酸，其中糖替代物为四氢吡喃。
实施方案912.如实施方案911中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中四氢吡喃为F-HNA。
实施方案913.如实施方案908至912中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸的剩余部分包含至少一个核苷，所述核苷包含修饰的糖。
实施方案914.如实施方案913所述的缀合寡核苷酸，其中包含修饰的糖的至少一个修饰核苷选自双环核苷和2’-修饰核苷。
实施方案915.如实施方案914所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷为双环核苷。
实施方案916.如实施方案915所述的缀合寡核苷酸，其中双环核苷为(4’-CH2-O-2’)BNA核苷。
实施方案917.如实施方案915所述的缀合寡核苷酸，其中双环核苷为(4’-(CH2)2-O-2’)BNA核苷。
实施方案918.如实施方案915所述的缀合寡核苷酸，其中双环核苷为(4’-C(CH3)H-O-2’)BNA核苷。
实施方案919.如实施方案914所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷为2’-修饰核苷。
实施方案920.如实施方案919所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷选自2’-F核苷、2’-OCH3核苷以及2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案921.如实施方案920所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-F核苷。
实施方案922.如实施方案920所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-OCH3核苷。
实施方案923.如实施方案920所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案924.如实施方案907-923中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸包含至少一个未修饰核苷。
实施方案925.如实施方案924所述的缀合寡核苷酸，其中未修饰核苷为核糖核苷。
实施方案926.如实施方案924所述的缀合寡核苷酸，其中未修饰核苷为脱氧核糖核苷。
实施方案927.如实施方案907至926中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸包含至少两个修饰核苷。
实施方案928.如实施方案927所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷包含相同修饰。
实施方案929.如实施方案927所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷包含不同修饰。
实施方案930.如实施方案927至929中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的至少一个包含糖替代物。
实施方案931.如实施方案927至930中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的至少一个包含2’-修饰。
实施方案932.如实施方案931所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个独立地选自2’-F核苷、2’-OCH3核苷以及2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案933.如实施方案932所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个为2’-F核苷。
实施方案934.如实施方案932所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个为2’-OCH3核苷。
实施方案935.如实施方案932所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个为2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案936.如实施方案907至935中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中基本上寡核苷酸的每个核苷均为修饰核苷。
实施方案937.如实施方案907至927或930至936中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸的每个核苷均为修饰核苷。
实施方案938.如实施方案907至937中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为单链的。
实施方案939.如实施方案907至937中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为双链的。
实施方案940.如实施方案907至937中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为反义化合物。
实施方案941.如实施方案907至937中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为基于RISC的寡核苷酸。
实施方案942.如实施方案907至937中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸激活RISC途径。
实施方案943.如实施方案907至937中任一个所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。
实施方案944.如实施方案907至943中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的5’-末端核苷。
实施方案945.如实施方案907至943中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的3’-末端核苷。
实施方案946.如实施方案907至943中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的内部核苷。
实施方案947.如实施方案907至943中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团增加了肝细胞对缀合寡核苷酸化合物的摄取。
实施方案948.如实施方案907至943中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团增加了肝脏细胞对缀合寡核苷酸化合物的摄取。
实施方案949.如实施方案907至943中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团增加了缀合寡核苷酸化合物在肝脏中的积累。
实施方案950.如实施方案907至943中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团减少了缀合寡核苷酸化合物在肾中的积累。
实施方案951.如实施方案907至935或938至950所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含以下的糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案952.如实施方案951所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由2个连接的5’-区核苷组成。
实施方案953.如实施方案951所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由3个连接的5’-区核苷组成。
实施方案954.如实施方案951所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由4个连接的5’-区核苷组成。
实施方案955.如实施方案951所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由5个连接的5’-区核苷组成。
实施方案956.如实施方案951-955中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由2个连接的3’-区核苷组成。
实施方案957.如实施方案951-955中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由3个连接的3’-区核苷组成。
实施方案958.如实施方案951-955中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由4个连接的3’-区核苷组成。
实施方案959.如实施方案951-955中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由5个连接的3’-区核苷组成。
实施方案960.如实施方案951-959中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由5个连接的中心区核苷组成。
实施方案961.如实施方案951-959中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由6个连接的中心区核苷组成。
实施方案962.如实施方案951-959中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由7个连接的中心区核苷组成。
实施方案963.如实施方案951-959中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由8个连接的中心区核苷组成。
实施方案964.如实施方案951-959中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由9个连接的中心区核苷组成。
实施方案965.如实施方案951-959中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由10个连接的中心区核苷组成。
实施方案966.如实施方案951-965中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸由14至26个连接核苷组成。
实施方案967.如实施方案951-965中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸由15至25个连接核苷组成。
实施方案968.如实施方案951-965中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案969.如实施方案951-968中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个修饰核苷独立地包含2’-取代的糖部分或双环糖部分。
实施方案970.如实施方案969所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个修饰核苷包含2’-取代的糖部分。
实施方案971.如实施方案970所述的缀合寡核苷酸化合物，其中包含2’-取代的糖部分的每个修饰核苷包含独立地选自以下的2’取代基：卤素、任选取代的烯丙基、任选取代的氨基、叠氮基、任选取代的SH、CN、OCN、CF3、OCF3、O、S或N(Rm)-烷基；O、S或N(Rm)-烯基；O、S或N(Rm)-炔基；任选取代的O-亚烷基-O-烷基、任选取代的炔基、任选取代的烷芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的O-烷芳基、任选取代的O-芳烷基、O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)或O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每个Rm和Rn独立地为H、氨基保护基或取代或未取代的C1-C10烷基；
其中每个任选取代的基团被独立地选自以下的取代基任选取代：羟基、氨基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基(NO2)、巯基、硫代烷氧基(S-烷基)、卤素、烷基、芳基、烯基和炔基。
实施方案972.如实施方案970所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCH2F、OCHF2、OCF3、OCH2CH3、O(CH2)2F、OCH2CHF2、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3、O(CH2)2-SCH3、O(CH2)2-OCF3、O(CH2)3-N(R1)(R2)、O(CH2)2-ON(R1)(R2)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R3)-(CH2)2-N(R1)(R2)以及O(CH2)2-N(R3)-C(＝NR4)[N(R1)(R2)]；其中R1、R2、R3和R4各自独立地为H或C1-C6烷基。
实施方案973.如实施方案970所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2。
实施方案974.如实施方案970所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-MOE糖部分。
实施方案975.如实施方案970所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-OMe糖部分。
实施方案976.如实施方案970所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-F糖部分。
实施方案977.如实施方案951-968中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含糖替代物。
实施方案978.如实施方案977所述的缀合寡核苷酸化合物，其中修饰核苷包含F-HNA糖部分。
实施方案979.如实施方案977所述的缀合寡核苷酸化合物，其中修饰核苷包含HNA糖部分。
实施方案980.如实施方案951-968中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含双环糖部分。
实施方案981.如实施方案980所述的缀合寡核苷酸化合物，其中双环糖部分为cEt糖部分。
实施方案982.如实施方案980所述的缀合寡核苷酸化合物，其中双环糖部分为LNA糖部分。
实施方案983.如实施方案907至982中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷间键联。
实施方案984.如实施方案908所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸的每个核苷间键联为修饰的核苷间键联。
实施方案985.如实施方案983所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰键联和至少一个未修饰的磷酸二酯核苷间键联。
实施方案986.如实施方案983至985中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案987.如实施方案983至985中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案988.如实施方案983至984中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少2个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案989.如实施方案983至984中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少3个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案990.如实施方案983至984中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少4个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案991.如实施方案983至984中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少5个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案992.如实施方案983至984中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少6个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案993.如实施方案983至984中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少7个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案994.如实施方案983至984中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少8个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案995.如实施方案983至984中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少9个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案996.如实施方案983至984中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少10个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案997.如实施方案983或985至996中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于16个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案998.如实施方案983或985至996中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于15个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案999.如实施方案983或985至996中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于14个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1000.如实施方案983或985至996中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于13个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1001.如实施方案983或985至996中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于12个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1002.如实施方案983或985至996中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于11个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1003.如实施方案983或985至996中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于10个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1004.如实施方案983或985至996中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于9个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1005.如实施方案983或985至996中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于8个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1006.如实施方案983或985至996中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于7个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1007.如实施方案983或985至996中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于6个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1008.如实施方案907至1007中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸的每个末端核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1009.如实施方案907至984或997至1008中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中连接缀合寡核苷酸的两个脱氧核苷的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1010.如实施方案907至984或997至1009中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中连接缀合寡核苷酸的两个修饰核苷的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1011.如实施方案907至984或997至1010中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中作为修饰核苷的3’的缀合寡核苷酸的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1012.如实施方案907至984或997至1011中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中作为脱氧核苷的3’的缀合寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1013.如实施方案907至984或997至1012中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有选自以下的化学基序：
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM；以及
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个s为硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个y为磷酸二酯核苷间键联或硫代磷酸酯核苷间键联，前提是至少一个y为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1014.如实施方案907至984或997至1012中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有选自以下的化学基序：
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM；以及
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个o为磷酸二酯核苷间键联，并且每个s为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1015.如实施方案1013或1014所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M独立地选自以下：2’-MOE核苷和双环核苷。
实施方案1016.如实施方案1015所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M独立地选自以下：2’-MOE核苷、cEt核苷以及LNA核苷。
实施方案1017.如实施方案1015或1016所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M为2’-MOE核苷。
实施方案1018.如实施方案1015或1016所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M为cEt核苷。
实施方案1019.如实施方案1015或1016所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M为LNA核苷。
实施方案1020.如实施方案907至1019中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少8个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1021.如实施方案907至1019中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少10个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1022.如实施方案907至1019中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少12个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1023.如实施方案907至1019中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少14个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1024.如实施方案907至1019中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少16个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1025.如实施方案907至1019中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少18个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1026.如实施方案907至1019中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸与靶核酸至少90％互补。
实施方案1027.如实施方案907至1019中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸与靶核酸至少95％互补。
实施方案1028.如实施方案907至1019中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸与靶核酸100％互补。
实施方案1029.如实施方案1020至1028中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为前体mRNA。
实施方案1030.如实施方案1020至1028中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为mRNA。
实施方案1031.如实施方案1020至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为微小RNA。
实施方案1032.如实施方案1020至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸在肝脏中表达。
实施方案1033.如实施方案1020至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸在肝细胞中表达。
实施方案1034.如实施方案1020至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸编码选自以下的蛋白质：雄激素受体、载脂蛋白(a)、载脂蛋白B、载脂蛋白C-III、C-反应蛋白、eIF-4E、因子VII、因子XI、糖皮质激素受体、胰高血糖素受体、蛋白酪氨酸磷酸酶1B、STAT3、SRB-1以及甲状腺素运载蛋白。
实施方案1035.如实施方案1020至1031中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为病毒核酸。
实施方案1036.如实施方案1035所述的缀合寡核苷酸化合物，其中病毒核酸在肝脏中表达。
实施方案1037.如实施方案1036所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为乙型肝炎病毒核酸。
实施方案1038.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：17、18、19、20、21、22、23或24中的任一个的核碱基序列。
实施方案1039.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：25、26、27、28、29或30中的任一个的核碱基序列。
实施方案1040.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：31的核碱基序列。
实施方案1041.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：32的核碱基序列。
实施方案1042.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：33的核碱基序列。
实施方案1043.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：34的核碱基序列。
实施方案1044.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：35、36、37、38、39、40、41、42或43中的任一个的核碱基序列。
实施方案1045.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：44、45、46、47或48的核碱基序列。
实施方案1046.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：49、50、51、52、53、54、55、56、57、58或59中的任一个的核碱基序列。
实施方案1047.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：60、61、62、63、64、65、66或67中的任一个的核碱基序列。
实施方案1048.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：69、70、71或72中的任一个的核碱基序列。
实施方案1049.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：73的核碱基序列。
实施方案1050.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：74、75、76、77、78、79、80或81中的任一个的核碱基序列。
实施方案1051.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：68的核碱基序列。
实施方案1052.如实施方案907至1030中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：82-103、111或113中的任一个的核碱基序列。
实施方案1053.如实施方案907至1052中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸为反义寡核苷酸。
实施方案1054.一种药物组合物，其包含根据实施方案779至1053中任一个所述的化合物或缀合寡核苷酸和药学上可接受的载体或稀释剂。
实施方案1055.如实施方案1054所述的药物组合物，其中药学上可接受的载体或稀释剂选自无菌水和无菌盐水。
实施方案1056.一种减小细胞中靶核酸的量或活性的方法，其包括使细胞与如实施方案779至1053中任一个所述的化合物或缀合反义化合物或如实施方案1054至1055所述的药物组合物接触。
实施方案1057.如实施方案1056所述的方法，其中细胞为肝脏细胞。
实施方案1058.如实施方案1056所述的方法，其中细胞为肝细胞。
实施方案1059.如实施方案1056至1058中任一个所述的方法，其中细胞在体外。
实施方案1060.如实施方案1056至1058中任一个所述的方法，其中细胞在动物中。
实施方案1061.如实施方案1060所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案1062.如实施方案1060所述的方法，其中动物为人。
实施方案1063.一种治疗动物的疾病或病状的方法，其包括向动物施用如实施方案1054或1056所述的药物组合物并且由此治疗动物的疾病或病状。
实施方案1064.如实施方案1063所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案1065.如实施方案1063所述的方法，其中动物为人。
实施方案1066.如实施方案1063至1065中任一个所述的方法，其中疾病或病状为肝脏疾病或病状。
实施方案1067.如实施方案1063至1065中任一个所述的方法，其中施用为肠胃外的。
实施方案1068.如实施方案1067所述的方法，其中施用为通过皮下注射。
实施方案1069.如实施方案1067所述的方法，其中施用为通过静脉内注射。
实施方案1070.如实施方案1067所述的方法，其中施用为通过肌肉内注射。
实施方案1071.如实施方案741至748中任一个所述的方法，其中以1-10mg/kg的剂量提供缀合寡核苷酸。
实施方案1072.如实施方案1056至1070中任一个所述的方法，其中以小于1mg/kg的剂量提供缀合寡核苷酸。
实施方案1073.如实施方案1056至1070中任一个所述的方法，其中以大于10mg/kg的剂量提供缀合寡核苷酸。
实施方案1074.如实施方案1056至1073中任一个所述的方法，其中提供缀合寡核苷酸持续至少2个月的给药期。
实施方案1075.如实施方案1056至1073中任一个所述的方法，其中提供缀合寡核苷酸持续至少4个月的给药期。
实施方案1076.如实施方案1056至1073中任一个所述的方法，其中提供缀合寡核苷酸持续至少6个月的给药期。
实施方案1077.如实施方案1056至1073中任一个所述的方法，其中以约每周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1078.如实施方案1056至1073中任一个所述的方法，其中以约每两周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1079.如实施方案1056至1073中任一个所述的方法，其中以约每三周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1080.如实施方案1056至1073中任一个所述的方法，其中以每四周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1081.如实施方案1056至1073中任一个所述的方法，其中以每五周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1082.如实施方案1056至1073中任一个所述的方法，其中以每六周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1083.如实施方案1056至1073中任一个所述的方法，其中以每七周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1084.如实施方案1056至1073中任一个所述的方法，其中以每八周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1085.一种缀合反义化合物，其包含：包含12-30个连接核苷的反义寡核苷酸和缀合物基团，其中缀合物基团包含至少一个细胞靶向部分。
实施方案1086.一种减小细胞中载脂蛋白C-III蛋白的活性或量的方法，其包括使细胞与如实施方案779至1055中任一个所述的至少一种缀合反义化合物接触；并且由此减小细胞中载脂蛋白C-III蛋白的活性或量。
实施方案1087.一种减少总胆固醇的方法，其包括使细胞与如实施方案779至1055中任一个所述的至少一种化合物接触；并且由此减少总胆固醇。
实施方案1088.一种减少甘油三酯的方法，其包括使细胞与如实施方案779至1055中任一个所述的至少一种化合物接触；并且由此减少甘油三酯。
实施方案1089.一种降低LDL的方法，其包括使细胞与如实施方案779至1055中任一个所述的至少一种化合物接触；并且由此降低LDL。
实施方案1090.一种增加HDL的方法，其包括使细胞与如实施方案779至1055中任一个所述的至少一种化合物接触；并且由此增加HDL。
实施方案1091.如实施方案1086至1090中任一个所述的方法，其中细胞在体外。
实施方案1092.如实施方案1086至1090中任一个所述的方法，其中细胞在动物中。
实施方案1093.如实施方案1086至1090中任一个所述的方法，其中动物为人。
实施方案1094.如实施方案1-1055中任一个所述的化合物或缀合寡核苷酸或其前药。
实施方案1095.一种制造如实施方案1-1055中任一个所述的反义寡核苷酸的方法。
实施方案1096.一种制备如实施方案1-1055中任一个所述的反义寡核苷酸的方法。
实施方案1097.一种用于制造如实施方案1-1055中任一个所述的缀合反义化合物的方法，其中所述方法包括配制供人使用的缀合反义化合物，进行所配制的缀合反义化合物的色谱分析，以及包装准备销售的缀合反义化合物。
实施方案1098.一种缀合物化合物，其包含至少一个磷连接基团或中性连接基团和一个或多个配体。
实施方案1099.如权利要求1098所述的缀合物化合物，其包含两个或更多个配体。
实施方案1100.如权利要求1098所述的缀合物化合物，其包含三个配体。
实施方案1101.如权利要求1098至1100中任一项所述的缀合物化合物，其中配体选自以下：多糖、修饰的多糖、甘露糖、半乳糖、甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、D-吡喃甘露糖、L-吡喃甘露糖、D-阿拉伯糖、L-半乳糖、D-呋喃木糖、L-呋喃木糖、D-葡萄糖、L-葡萄糖、D-半乳糖、L-半乳糖、α-D-呋喃甘露糖、β-D-呋喃甘露糖、α-D-吡喃甘露糖、β-D-吡喃甘露糖、α-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃葡萄糖、α-D-呋喃葡萄糖、β-D-呋喃葡萄糖、α-D-呋喃果糖、α-D-吡喃果糖、α-D-吡喃半乳糖、β-D-吡喃半乳糖、α-D-呋喃半乳糖、β-D-呋喃半乳糖、葡糖胺、唾液酸、α-D-半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、2-氨基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖、2-脱氧-2-甲基氨基-L-吡喃葡萄糖、4，6-二脱氧-4-甲酰胺基-2，3-二-O-甲基-D-吡喃甘露糖、2-脱氧-2-磺氨基-D-吡喃葡萄糖、N-乙醇酰基-α-神经氨酸、5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖、2，3，4-三-O-乙酰基-1-硫代-6-O-三苯甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷甲酯、4-硫代-β-D-吡喃半乳糖、3，4，6，7-四-O-乙酰基-2-脱氧-1，5-二硫代-α-D-葡糖-庚吡喃糖苷乙酯、2，5-脱水-D-阿洛糖腈、核糖、D-核糖、D-4-硫代核糖、L-核糖、L-4-硫代核糖。
实施方案1102.如权利要求1098至1101中任一项所述的缀合物化合物，其中配体为N-乙酰基半乳糖胺。
实施方案1103.如权利要求1098至1102中任一项所述的缀合物化合物，其中缀合物基团包含选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860002151
Figure BDA0003357312860002152
以及
Figure BDA0003357312860002153
Figure BDA0003357312860002154
其中n为1至12；并且
其中m为1至12。
实施方案1104.如权利要求1098至1102中任一项所述的缀合物化合物，其中缀合物化合物具有系链，所述系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860002155
其中L为磷连接基团或中性连接基团；
Z1为C(＝O)O-R2；
Z2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；
R2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；并且
每个m1独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m1大于0。
实施方案1105.如权利要求1104所述的缀合物化合物，其中系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860002161
其中Z2为H或CH3；并且
每个m1独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m1大于0。
实施方案1106.如权利要求1098至1102中任一项所述的缀合物化合物，其中系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860002162
其中n为1至12；并且
其中m为1至12。
实施方案1107.如权利要求1098至1106中任一项所述的缀合物化合物，其中缀合物化合物共价连接至寡核苷酸。
实施方案1108.一种低聚化合物，其包含寡核苷酸和至少一个缀合物基团，其中至少一个缀合物基团为如权利要求1098至1108中任一项所述的缀合物化合物。
实施方案1109.一种化合物，其具有式(V)：
Figure BDA0003357312860002171
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a或GalNAc3-22a。
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；并且其中Bx为杂环碱基部分。
实施方案1110.一种化合物，其具有式(Va)：
Figure BDA0003357312860002172
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a或GalNAc3-22a。
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；并且其中Q13选自以下：卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2。
实施方案1111.如权利要求1109或1110所述的化合物，其中Bx选自腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶或胞嘧啶。
实施方案1112.如权利要求1109至1111中任一项所述的化合物，其中Q13O(CH2)2-OCH3。
实施方案1113.一种化合物，其具有式(XVI)：
Figure BDA0003357312860002181
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1114.一种化合物，其具有式(XVII)：
Figure BDA0003357312860002191
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1115.一种化合物，其具有式(XVIII)：
Figure BDA0003357312860002192
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1116.一种化合物，其具有式(XIX)：
Figure BDA0003357312860002201
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1117.一种化合物，其具有式(XX)：
Figure BDA0003357312860002202
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1118.一种化合物，其具有式(XXI)：
Figure BDA0003357312860002211
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1119.一种化合物，其具有式(XXII)：
Figure BDA0003357312860002212
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1120.一种化合物，其具有式(XXIII)：
Figure BDA0003357312860002221
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1121.一种化合物，其具有式(XXIIIa)：
Figure BDA0003357312860002222
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1122.一种化合物，其具有式(XXIV)：
Figure BDA0003357312860002231
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1123.一种化合物，其具有式(XXIVa)：
Figure BDA0003357312860002232
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1124.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860002241
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
C为缀合物接头
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案1125.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860002242
其中：
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
C为缀合物接头
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；
n1为0或1；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案1126.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860002251
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分；
C为缀合物接头；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案1127.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860002252
其中
A为反义寡核苷酸；
C为缀合物接头；
D为支链基团；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案1128.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860002261
其中
A为反义寡核苷酸；
C为缀合物接头；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案1129.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860002262
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分；
D为支链基团；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案1130.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860002271
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案1131.一种缀合反义化合物，其中化合物具有由下式表示的结构：
Figure BDA0003357312860002272
其中
A为反义寡核苷酸；
D为支链基团；
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
实施方案1132.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860002281
Figure BDA0003357312860002282
以及
Figure BDA0003357312860002283
其中每个L独立地为磷连接基团或中性连接基团；并且
每个n独立地为1至20。
实施方案1133.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860002291
Figure BDA0003357312860002292
以及
Figure BDA0003357312860002293
实施方案1134.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002301
实施方案1135.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构之一：
Figure BDA0003357312860002302
以及
Figure BDA0003357312860002303
实施方案1136.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构之一：
Figure BDA0003357312860002304
实施方案1137.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构之一：
Figure BDA0003357312860002305
实施方案1138.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含吡咯烷。
实施方案1139.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头不包含吡咯烷。
实施方案1140.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含PEG。
实施方案1141.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含酰胺。
实施方案1142.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头不包含酰胺。
实施方案1143.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含聚酰胺。
实施方案1144.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含胺。
实施方案1145.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含一个或多个二硫键。
实施方案1146.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头包含蛋白质结合部分。
实施方案1147.如权利要求1146所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分包含脂质。
实施方案1148.如权利要求1146所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分选自以下：胆固醇、胆酸、金刚烷乙酸、1-芘丁酸、二氢睾酮、1，3-二-O(十六烷基)甘油、香叶基氧基己基、十六烷基甘油、冰片、甲醇、1，3-丙二醇、十七烷基、棕榈酸、肉豆蔻酸、O3-(油酰基)石胆酸、O3-(油酰基)胆烯酸、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪)、维生素(例如，叶酸、维生素A、维生素E、生物素、吡哆醛)、肽、碳水化合物(例如，单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖、多糖)、溶内体组分、类固醇(例如，熊果醇、龙舌兰皂苷配基、薯蓣皂苷配基)、萜烯(例如，三萜烯，例如萨洒皂草配基、无羁萜、表无羁萜醇衍生的石胆酸)或阳离子脂质。
实施方案1149.如权利要求1146至1147中任一项所述的缀合反义化合物，其中蛋白质结合部分为C16至C22长链饱和或不饱和的脂肪酸、胆固醇、胆酸、维生素E、金刚烷或1-五氟丙基。
实施方案1150.如权利要求1124至1128中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860002321
其中每个n独立地为1至20；并且p为1至6。
实施方案1151.如权利要求1124至1128中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860002331
其中每个n独立地为1至20。
实施方案1152.如权利要求1124至1128中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860002341
实施方案1153.如权利要求1124至1128中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860002342
其中n为1至20。
实施方案1154.如权利要求1124至1154所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构之一：
Figure BDA0003357312860002351
其中每个A1独立地为O、S、C＝O或NH；并且
每个n独立地为1至20。
实施方案1155.如权利要求1124至1154所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构之一：
Figure BDA0003357312860002352
其中每个A1独立地为O、S、C＝O或NH；并且
每个n独立地为1至20。
实施方案1156.如权利要求1124至1154所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002353
实施方案1157.如权利要求1124至1154所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002361
实施方案1158.如权利要求1124至1154所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002362
实施方案1159.如权利要求1124至1154所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002363
实施方案1160.如权利要求1124至1154中任一项所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含醚。
实施方案1161.如权利要求1124至1154所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002371
每个n独立地为1至20；并且
m为2至6。
实施方案1162.如权利要求1124至1154所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002372
实施方案1163.如权利要求1124至1154所述的缀合反义化合物，其中支链基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002381
实施方案1164.如权利要求1124至1154中任一项所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含：
Figure BDA0003357312860002382
其中每个j为1至3的整数；并且
其中每个n为1至20的整数。
实施方案1165.如权利要求1124至1154中任一项所述的缀合反义化合物，其中支链基团包含：
Figure BDA0003357312860002391
实施方案1166.如权利要求1124至1165所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860002392
其中L选自磷连接基团和中性连接基团；
Z1为C(＝O)O-R2；
Z2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；
R2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；并且
每个m1独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m1大于0。
实施方案1167.如权利要求1124至1165所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860002401
其中Z2为H或CH3；并且
每个m2独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m2大于0。
实施方案1168.如权利要求1124至1165所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860002402
其中n为1至12；并且
其中m为1至12。
实施方案1169.如权利要求1124至1165中任一项所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含PEG。
实施方案1170.如权利要求1124至1165中任一项所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含酰胺。
实施方案1171.如权利要求1124至1165中任一项所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含聚酰胺。
实施方案1172.如权利要求1124至1165中任一项所述的缀合反义化合物，其中至少一个系链包含胺。
实施方案1173.如权利要求1124至1165中任一项所述的缀合反义化合物，其中至少两个系链彼此不同。
实施方案1174.如权利要求1124至1165中任一项所述的缀合反义化合物，其中所有系链彼此相同。
实施方案1175.如权利要求1124至1165中任一项所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860002411
Figure BDA0003357312860002412
以及
Figure BDA0003357312860002413
其中每个n独立地为1至20；并且
每个p为1至约6。
实施方案1176.如权利要求1124至1165中任一项所述的缀合反义化合物，其中每个系链选自以下：
Figure BDA0003357312860002414
Figure BDA0003357312860002415
以及
Figure BDA0003357312860002416
实施方案1177.如权利要求1124至1165中任一项所述的缀合反义化合物，其中每个系链具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002421
其中每个n独立地为1至20。
实施方案1178.如权利要求1124至1165中任一项所述的缀合反义化合物，其中每个系链具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002422
实施方案1179.如权利要求1124至1178中任一项所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含至少一个配体。
实施方案1180.如权利要求1124至1178中任一项所述的缀合反义化合物，其中细胞靶向部分包含一个配体。
实施方案1181.如权利要求1124至1178中任一项所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含两个配体。
实施方案1182.如权利要求1124至1178中任一项所述的缀合反义化合物，其中靶向部分包含三个配体。
实施方案1183.如权利要求1179至1182中任一项所述的缀合反义化合物，其中每个配体共价连接至每个系链。
实施方案1184.如权利要求1179至1182中任一项所述的缀合反义化合物，其中至少一个配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案1185.如权利要求1179至1182中任一项所述的缀合反义化合物，其中每个配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。
实施方案1186.如权利要求1179至1182中任一项所述的缀合反义化合物，其中配体选自以下：多糖、修饰的多糖、甘露糖、半乳糖、甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、D-吡喃甘露糖、L-吡喃甘露糖、D-阿拉伯糖、L-半乳糖、D-呋喃木糖、L-呋喃木糖、D-葡萄糖、L-葡萄糖、D-半乳糖、L-半乳糖、α-D-呋喃甘露糖、β-D-呋喃甘露糖、α-D-吡喃甘露糖、β-D-吡喃甘露糖、α-D-吡喃葡萄糖、β-D-吡喃葡萄糖、α-D-呋喃葡萄糖、β-D-呋喃葡萄糖、α-D-呋喃果糖、α-D-吡喃果糖、α-D-吡喃半乳糖、β-D-吡喃半乳糖、α-D-呋喃半乳糖、β-D-呋喃半乳糖、葡糖胺、唾液酸、α-D-半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、2-氨基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖、2-脱氧-2-甲基氨基-L-吡喃葡萄糖、4，6-二脱氧-4-甲酰氨基-2，3-二-O-甲基-D-吡喃甘露糖、2-脱氧-2-磺氨基-D-吡喃葡萄糖、N-乙醇酰基-α-神经氨酸、5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖、2，3，4-三-O-乙酰基-1-硫代-6-O-三苯甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷甲酯、4-硫代-β-D-吡喃半乳糖、3，4，6，7-四-O-乙酰基-2-脱氧-1，5-二硫代-α-D-葡糖-庚吡喃糖苷乙酯、2，5-脱水-D-阿洛糖腈、核糖、D-核糖、D-4-硫代核糖、L-核糖、L-4-硫代核糖。
实施方案1187.如权利要求1179至1182中任一项所述的缀合反义化合物，其中配体为半乳糖。
实施方案1188.如权利要求1179至1182中任一项所述的缀合反义化合物，其中配体为甘露糖-6-磷酸。
实施方案1189.如权利要求1179至1182中任一项所述的缀合反义化合物，其中每个配体选自以下：
Figure BDA0003357312860002431
其中每个R1选自OH和NHCOOH。
实施方案1190.如权利要求1179至1182中任一项所述的缀合反义化合物，其中每个配体选自以下：
Figure BDA0003357312860002441
以及
Figure BDA0003357312860002442
实施方案1191.如权利要求1179至1182中任一项所述的缀合反义化合物，其中每个配体具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002443
实施方案1192.如权利要求1179至1182中任一项所述的缀合反义化合物，其中每个配体具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002444
实施方案1193.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002451
实施方案1194.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002452
实施方案1195.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002461
其中每个n独立地为1至20。
实施方案1196.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002462
实施方案1197.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002471
实施方案1198.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002472
实施方案1199.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002481
实施方案1200.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002482
实施方案1201.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002491
实施方案1202.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002492
实施方案1203.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002493
实施方案1204.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002501
实施方案1205.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002502
实施方案1206.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002511
实施方案1207.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002512
实施方案1208.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002521
实施方案1209.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002522
实施方案1210.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002523
实施方案1211.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002531
实施方案1212.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002532
实施方案1213.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002541
实施方案1214.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002542
实施方案1215.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002551
实施方案1216.如权利要求1124至1153中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团包含具有以下结构的细胞靶向部分：
Figure BDA0003357312860002552
实施方案1217.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002561
其中每个n独立地为1至20；
Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1218.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002562
其中每个n独立地为1至20；
Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1219.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002571
其中每个n独立地为1至20；
Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；
Z为H或连接的固体载体；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1220.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002581
其中每个n独立地为1至20；
Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；
Z为H或连接的固体载体；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1221.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002591
其中Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1222.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002592
其中Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1223.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002601
其中Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1224.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002602
其中Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1225.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002611
其中Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1226.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002612
其中Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1227.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002621
其中Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1228.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002622
其中Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1229.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002631
其中Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1230.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002641
其中Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1231.如权利要求1124至1131中任一项所述的缀合反义化合物，其中缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860002642
其中Q13为H或O(CH2)2-OCH3；
A为反义寡核苷酸；并且
Bx为杂环碱基部分。
实施方案1232.如权利要求1217至1231中任一项所述的化合物，其中Bx选自腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶或胞嘧啶。
实施方案1233.如权利要求1217至1231中任一项所述的化合物，其中Bx为腺嘌呤。
实施方案1234.如权利要求1217至1231中任一项所述的化合物，其中Bx为胸腺嘧啶。
实施方案1235.如权利要求1217至1234中任一项所述的化合物，其中Q13为O(CH2)2-OCH3。
实施方案1236.如权利要求1217至1234中任一项所述的化合物，其中Q13为H。
实施方案1237.一种缀合寡核苷酸，其包含寡核苷酸和缀合物基团，其中缀合物基团为如权利要求1098至1236中任一项所述的任何缀合物基团。
实施方案1238.如权利要求1237所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸包含至少一个修饰核苷。
实施方案1239.如权利要求1237所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷包含修饰碱基。
实施方案1240.如权利要求1238或1239所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷包含糖替代物。
实施方案1241.如权利要求1240所述的缀合寡核苷酸，其中糖替代物为四氢吡喃。
实施方案1242.如权利要求1241中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中四氢吡喃为F-HNA。
实施方案1243.如权利要求1238至1242中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸的剩余部分包含至少一个核苷，所述核苷包含修饰的糖。
实施方案1244.如权利要求1243所述的缀合寡核苷酸，其中包含修饰的糖的至少一个修饰核苷选自双环核苷和2’-修饰核苷。
实施方案1245.如权利要求1244所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷为双环核苷。
实施方案1246.如权利要求1245所述的缀合寡核苷酸，其中双环核苷为(4’-CH2-O-2’)BNA核苷。
实施方案1247.如权利要求1245所述的缀合寡核苷酸，其中双环核苷为(4’-(CH2)2-O-2’)BNA核苷。
实施方案1248.如权利要求1245所述的缀合寡核苷酸，其中双环核苷为(4’-C(CH3)H-O-2’)BNA核苷。
实施方案1249.如权利要求1244所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个修饰核苷为2’-修饰核苷。
实施方案1250.如权利要求1249所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷选自2’-F核苷、2’-OCH3核苷以及2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案1251.如权利要求1250所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-F核苷。
实施方案1252.如权利要求1250所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-OCH3核苷。
实施方案1253.如权利要求1250所述的缀合寡核苷酸，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案1254.如权利要求1237-1253中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸包含至少一个未修饰核苷。
实施方案1255.如权利要求1254所述的缀合寡核苷酸，其中未修饰核苷为核糖核苷。
实施方案1256.如权利要求1254所述的缀合寡核苷酸，其中未修饰核苷为脱氧核糖核苷。
实施方案1257.如权利要求1237至1256中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸包含至少两个修饰核苷。
实施方案1258.如权利要求1257所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷包含相同修饰。
实施方案1259.如权利要求1257所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷包含不同修饰。
实施方案1260.如权利要求1257至1259中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的至少一个包含糖替代物。
实施方案1261.如权利要求1257至1260中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的至少一个包含2’-修饰。
实施方案1262.如权利要求1261所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个独立地选自2’-F核苷、2’-OCH3核苷以及2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案1263.如权利要求1262所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个均为2’-F核苷。
实施方案1264.如权利要求1262所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个均为2’-OCH3核苷。
实施方案1265.如权利要求1262所述的缀合寡核苷酸，其中至少两个修饰核苷中的每一个均为2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案1266.如权利要求1237至1265中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中基本上寡核苷酸的每个核苷均为修饰核苷。
实施方案1267.如权利要求1237至1257或1260至1266中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸的每个核苷均为修饰核苷。
实施方案1268.如权利要求1237至1267中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为单链的。
实施方案1269.如权利要求1237至1267中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为双链的。
实施方案1270.如权利要求1237至1267中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为反义化合物。
实施方案1271.如权利要求1237至1267中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为基于RISC的寡核苷酸。
实施方案1272.如权利要求1237至1267中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸激活RISC途径。
实施方案1273.如权利要求1237至1267中任一项所述的缀合寡核苷酸，其中寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。
实施方案1274.如权利要求1237至1273中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的5’-末端核苷。
实施方案1275.如权利要求1237至1273中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的3’-末端核苷。
实施方案1276.如权利要求1237至1273中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的内部核苷。
实施方案1277.如权利要求1237至1273中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团增加了肝细胞对缀合寡核苷酸化合物的摄取。
实施方案1278.如权利要求1237至1273中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团增加了肝脏细胞对缀合寡核苷酸化合物的摄取。
实施方案1279.如权利要求1237至1273中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团增加了缀合寡核苷酸化合物在肝脏中的积累。
实施方案1280.如权利要求1237至1273中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中相对于未缀合寡核苷酸化合物，缀合物基团减少了缀合寡核苷酸化合物在肾中的积累。
实施方案1281.如权利要求1237至1265或1268至1280所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含以下的糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1282.如权利要求1281所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由2个连接的5’-区核苷组成。
实施方案1283.如权利要求1281所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由3个连接的5’-区核苷组成。
实施方案1284.如权利要求1281所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由4个连接的5’-区核苷组成。
实施方案1285.如权利要求1281所述的缀合寡核苷酸化合物，其中5’-区由5个连接的5’-区核苷组成。
实施方案1286.如权利要求1281-1285中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由2个连接的3’-区核苷组成。
实施方案1287.如权利要求1281-1285中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由3个连接的3’-区核苷组成。
实施方案1288.如权利要求1281-1285中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由4个连接的3’-区核苷组成。
实施方案1289.如权利要求1281-1285中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中3’-区由5个连接的3’-区核苷组成。
实施方案1290.如权利要求1281-1289中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由5个连接的中心区核苷组成。
实施方案1291.如权利要求1281-1289中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由6个连接的中心区核苷组成。
实施方案1292.如权利要求1281-1289中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由7个连接的中心区核苷组成。
实施方案1293.如权利要求1281-1289中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由8个连接的中心区核苷组成。
实施方案1294.如权利要求1281-1289中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由9个连接的中心区核苷组成。
实施方案1295.如权利要求1281-1289中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中中心区由10个连接的中心区核苷组成。
实施方案1296.如权利要求1281-1295中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸由14至26个连接核苷组成。
实施方案1297.如权利要求1281-1295中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸由15至25个连接核苷组成。
实施方案1298.如权利要求1281-1295中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案1299.如权利要求1281-1298中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个修饰核苷独立地包含2’-取代的糖部分或双环糖部分。
实施方案1300.如权利要求1299所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个修饰核苷包含2’-取代的糖部分。
实施方案1301.如权利要求1300所述的缀合寡核苷酸化合物，其中包含2’-取代的糖部分的每个修饰核苷包含独立地选自以下的2’取代基：卤素、任选取代的烯丙基、任选取代的氨基、叠氮基、任选取代的SH、CN、OCN、CF3、OCF3、O、S或N(Rm)-烷基；O、S或N(Rm)-烯基；O、S或N(Rm)-炔基；任选取代的O-亚烷基-O-烷基、任选取代的炔基、任选取代的烷芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的O-烷芳基、任选取代的O-芳烷基、O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)或O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每个Rm和Rn独立地为H、氨基保护基或取代或未取代的C1-C10烷基；
其中每个任选取代的基团被独立地选自以下的取代基任选取代：羟基、氨基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基(NO2)、巯基、硫代烷氧基(S-烷基)、卤素、烷基、芳基、烯基和炔基。
实施方案1302.如权利要求1300所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCH2F、OCHF2、OCF3、OCH2CH3、O(CH2)2F、OCH2CHF2、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3、O(CH2)2-SCH3、O(CH2)2-OCF3、O(CH2)3-N(R1)(R2)、O(CH2)2-ON(R1)(R2)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R3)-(CH2)2-N(R1)(R2)以及O(CH2)2-N(R3)-C(＝NR4)[N(R1)(R2)]；其中R1、R2、R3和R4各自独立地为H或C1-C6烷基。
实施方案1303.如权利要求1300所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)，O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2。
实施方案1304.如权利要求1300所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-MOE糖部分。
实施方案1305.如权利要求1300所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-OMe糖部分。
实施方案1306.如权利要求1300所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-F糖部分。
实施方案1307.如权利要求1281-1298中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含糖替代物。
实施方案1308.如权利要求1307所述的缀合寡核苷酸化合物，其中修饰核苷包含F-HNA糖部分。
实施方案1309.如权利要求1307所述的缀合寡核苷酸化合物，其中修饰核苷包含HNA糖部分。
实施方案1310.如权利要求1281-1298中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含双环糖部分。
实施方案1311.如权利要求1310所述的缀合寡核苷酸化合物，其中双环糖部分为cEt糖部分。
实施方案1312.如权利要求1310所述的缀合寡核苷酸化合物，其中双环糖部分为LNA糖部分。
实施方案1313.如权利要求1237至1312中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷间键联。
实施方案1314.如权利要求1238所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸的每个核苷间键联为修饰的核苷间键联。
实施方案1315.如权利要求1313所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少一个修饰键联和至少一个未修饰的磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1316.-如权利要求1313或1315中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中至少一个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1317.-如权利要求1313或1315中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1318.如权利要求1313或1314中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少2个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1319.如权利要求1313或1314中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少3个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1320.如权利要求1313或1314中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少4个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1321.如权利要求1313或1314中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少5个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1322.如权利要求1313或1314中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少6个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1323.如权利要求1313或1314中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少7个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1324.如权利要求1313或1314中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少8个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1325.如权利要求1313或1314中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少9个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1326.如权利要求1313或1314中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含至少10个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1327.如权利要求1313或1315至1326中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于16个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1328.如权利要求1313或1315至1326中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于15个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1329.如权利要求1313或1315至1326中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于14个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1330.如权利要求1313或1315至1326中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于13个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1331.如权利要求1313或1315至1326中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于12个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1332.如权利要求1313或1315至1326中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于11个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1333.如权利要求1313或1315至1326中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于10个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1334.如权利要求1313或1315至1326中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于9个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1335.如权利要求1313或1315至1326中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于8个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1336.如权利要求1313或1315至1326中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于7个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1337.如权利要求1313或1315至1326中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含少于6个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1338.如权利要求1237至1337中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸的每个末端核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1339.如权利要求1237至1314或1327至1338中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中连接缀合寡核苷酸的两个脱氧核苷的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1340.如权利要求1237至1314或1327至1339中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中连接缀合寡核苷酸的两个修饰核苷的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1341.如权利要求1237至1314或1327至1340中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中作为修饰核苷的3’的缀合寡核苷酸的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1342.如权利要求1237至1314或1327至1341中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中作为脱氧核苷的3’的缀合寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1343.如权利要求1237至1314或1327至1342中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有选自以下的化学基序：
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM；以及
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个s为硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个y为磷酸二酯核苷间键联或硫代磷酸酯核苷间键联，前提是至少一个y为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1344.如权利要求1237至1314或1327至1342中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有选自以下的化学基序：
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM；以及
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个o为磷酸二酯核苷间键联，并且每个s为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1345.如权利要求1343或1344所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M独立地选自以下：2’-MOE核苷和双环核苷。
实施方案1346.如权利要求1345所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M独立地选自以下：2’-MOE核苷、cEt核苷以及LNA核苷。
实施方案1347.如权利要求1345或1346所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M为2’-MOE核苷。
实施方案1348.如权利要求1345或1346所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M为cEt核苷。
实施方案1349.如权利要求1345或1346所述的缀合寡核苷酸化合物，其中每个M为LNA核苷。
实施方案1350.如权利要求1237至1349中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少8个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1351.如权利要求1237至1349中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少10个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1352.如权利要求1237至1349中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少12个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1353.如权利要求1237至1349中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少14个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1354.如权利要求1237至1349中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少16个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1355.如权利要求1237至1349中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少18个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1356.如权利要求1237至1349中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸与靶核酸至少90％互补。
实施方案1357.如权利要求1237至1349中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸与靶核酸至少95％互补。
实施方案1358.如权利要求1237至1349中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸与靶核酸100％互补。
实施方案1359.如权利要求1350至1358中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为前体mRNA。
实施方案1360.如权利要求1350至1358中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为mRNA。
实施方案1361.如权利要求1350至1358中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为微小RNA。
实施方案1362.如权利要求1350至1358中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸在肝脏中表达。
实施方案1363.如权利要求1350至1358中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸在肝细胞中表达。
实施方案1364.如权利要求1350至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸编码选自以下的蛋白质：α1抗胰蛋白酶、雄激素受体、载脂蛋白(a)、载脂蛋白B、载脂蛋白C-III、C-反应蛋白、eIF-4E、因子VII、因子XI、糖皮质激素受体、胰高血糖素受体、蛋白酪氨酸磷酸酶1B、STAT3、SRB-1以及甲状腺素运载蛋白。
实施方案1365.如权利要求1350至1361中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为病毒核酸。
实施方案1366.如权利要求1365所述的缀合寡核苷酸化合物，其中病毒核酸在肝脏中表达。
实施方案1367.如权利要求1366所述的缀合寡核苷酸化合物，其中靶核酸为乙型肝炎病毒核酸。
实施方案1368.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：17、18、19、20、21、22、23或24中的任一个的核碱基序列。
实施方案1369.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：25、26、27、28、29或30中的任一个的核碱基序列。
实施方案1370.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：31的核碱基序列。
实施方案1371.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：32的核碱基序列。
实施方案1372.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：33的核碱基序列。
实施方案1373.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：34的核碱基序列。
实施方案1374.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：35、36、37、38、39、40、41、42或43中的任一个的核碱基序列。
实施方案1375.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：44、45、46、47或48的核碱基序列。
实施方案1376.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：49、50、51、52、53、54、55、56、57、58或59中的任一个的核碱基序列。
实施方案1377.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：60、61、62、63、64、65、66或67中的任一个的核碱基序列。
实施方案1378.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：69、70、71或72中的任一个的核碱基序列。
实施方案1379.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：73的核碱基序列。
实施方案1380.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：74、75、76、77、78、79、80或81中的任一个的核碱基序列。
实施方案1381.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：68的核碱基序列。
实施方案1382.如权利要求1237至1360中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：82-103、111或113中的任一个的核碱基序列。
实施方案1383.如权利要求1237至1382中任一项所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸为反义寡核苷酸。
实施方案1384.一种药物组合物，其包含根据权利要求1098至1383中任一项所述的化合物或缀合寡核苷酸和药学上可接受的载体或稀释剂。
实施方案1385.如权利要求1384所述的药物组合物，其中药学上可接受的载体或稀释剂选自无菌水和无菌盐水。
实施方案1386.一种减小细胞中靶核酸的量或活性的方法，其包括使细胞与如权利要求1098至1383中任一项所述的化合物或缀合反义化合物或如权利要求1384至1385所述的药物组合物接触。
实施方案1387.如权利要求1386所述的方法，其中细胞为肝脏细胞。
实施方案1388.如权利要求1386所述的方法，其中细胞为肝细胞。
实施方案1389.如权利要求1386至1388中任一项所述的方法，其中细胞在体外。
实施方案1390.如权利要求1386至1388中任一项所述的方法，其中细胞在动物中。
实施方案1391.如权利要求1060所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案1392.如权利要求1060所述的方法，其中动物为人。
实施方案1393.一种治疗动物的疾病或病状的方法，其包括向动物施用如权利要求1384或1386所述的药物组合物并且由此治疗动物的疾病或病状。
实施方案1394.如权利要求1393所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案1395.如权利要求1393所述的方法，其中动物为人。
实施方案1396.如权利要求1393至1395中任一项所述的方法，其中疾病或病状为肝脏疾病或病状。
实施方案1397.如权利要求1393至1395中任一项所述的方法，其中施用为肠胃外的。
实施方案1398.如权利要求1397所述的方法，其中施用为通过皮下注射。
实施方案1399.如权利要求1397所述的方法，其中施用为通过静脉内注射。
实施方案1400.如权利要求1397所述的方法，其中施用为通过肌肉内注射。
实施方案1401.如权利要求1393至1400中任一项所述的方法，其中以1-10mg/kg的剂量提供缀合寡核苷酸。
实施方案1402.如权利要求1393至1400中任一项所述的方法，其中以小于1mg/kg的剂量提供缀合寡核苷酸。
实施方案1403.如权利要求1393至1400中任一项所述的方法，其中以大于10mg/kg的剂量提供缀合寡核苷酸。
实施方案1404.如权利要求1393至1403中任一项所述的方法，其中提供缀合寡核苷酸持续至少2个月的给药期。
实施方案1405.如权利要求1393至1403中任一项所述的方法，其中提供缀合寡核苷酸持续至少4个月的给药期。
实施方案1406.如权利要求1393至1403中任一项所述的方法，其中提供缀合寡核苷酸持续至少6个月的给药期。
实施方案1407.如权利要求1393至1403中任一项所述的方法，其中以约每周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1408.如权利要求1393至1403中任一项所述的方法，其中以约每两周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1409.如权利要求1393至1403中任一项所述的方法，其中以约每三周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1410.如权利要求1393至1403中任一项所述的方法，其中以每四周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1411.如权利要求1393至1403中任一项所述的方法，其中以每五周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1412.如权利要求1393至1403中任一项所述的方法，其中以每六周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1413.如权利要求1393至1403中任一项所述的方法，其中以每七周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1414.如权利要求1393至1403中任一项所述的方法，其中以每八周一次剂量的给药频率提供缀合寡核苷酸。
实施方案1415.一种缀合反义化合物，其包含：包含12-30个连接核苷的反义寡核苷酸和缀合物基团，其中缀合物基团包含至少一个细胞靶向部分。
实施方案1416.一种减小细胞中载脂蛋白C-III蛋白的活性或量的方法，其包括使细胞与如权利要求1098至1385中任一项所述的至少一种缀合反义化合物接触；并且由此减小细胞中载脂蛋白C-III蛋白的活性或量。
实施方案1417.一种减少总胆固醇的方法，其包括使细胞与如权利要求1098至1385中任一项所述的至少一种化合物接触；并且由此减少总胆固醇。
实施方案1418.一种减少甘油三酯的方法，其包括使细胞与如权利要求1098至1385中任一项所述的至少一种化合物接触；并且由此减少甘油三酯。
实施方案1419.一种降低LDL的方法，其包括使细胞与如权利要求1098至1385中任一项所述的至少一种化合物接触；并且由此降低LDL。
实施方案1420.一种增加HDL的方法，其包括使细胞与如权利要求1098至1385中任一项所述的至少一种化合物接触；并且由此增加HDL。
实施方案1421.如权利要求1416至1420中任一项所述的方法，其中细胞在体外。
实施方案1422.如权利要求1416至1420中任一项所述的方法，其中细胞在动物中。
实施方案1423.如权利要求1416至1420中任一项所述的方法，其中动物为人。
实施方案1424.如权利要求1-1385中任一项所述的化合物或缀合寡核苷酸或其前药。
实施方案1425.一种制造如权利要求1-1385中任一项所述的反义寡核苷酸的方法。
实施方案1426.一种制备如权利要求1-1385中任一项所述的反义寡核苷酸的方法。
实施方案1427.一种用于制造如权利要求1-1385中任一项所述的缀合反义化合物的方法，其中所述方法包括配制供人使用的缀合反义化合物，进行所配制的缀合反义化合物的色谱分析，以及包装准备销售的缀合反义化合物。
实施方案1428.如实施方案1237至1360中任一个所述的缀合寡核苷酸化合物，其中缀合寡核苷酸包含SEQ ID NO.：117、118、119、120、121、122、123、124、125、126或127中的任一个的核碱基序列。
实施方案1429.一种化合物，其具有式(V)：
Figure BDA0003357312860002871
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a或GalNAc-23a。
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；并且其中Bx为杂环碱基部分。
实施方案1430.一种化合物，其具有式(Va)：
Figure BDA0003357312860002872
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a或GalNAc3-23a。
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；并且其中Q13选自以下：卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2。
实施方案1431.一种化合物，其具有式(XXV)：
Figure BDA0003357312860002881
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1432.一种化合物，其具有式(XXVI)：
Figure BDA0003357312860002882
其中：
T2包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物。
实施方案1433.一种化合物，其具有式(XXVII)：
Figure BDA0003357312860002891
其中：
CM表示可裂解部分并且T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1434.一种化合物，其具有式(XXVIII)：
Figure BDA0003357312860002892
其中：
T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1435.一种化合物，其具有式(XXIX)：
Figure BDA0003357312860002901
其中：
T3为包含核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物的基团。
实施方案1436.一种化合物，其具有式(XXX)：
Figure BDA0003357312860002902
其中：
CM表示可裂解部分并且T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1437.一种化合物，其具有式(XXXI)：
Figure BDA0003357312860002911
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1438.一种化合物，其具有式(XXXII)：
Figure BDA0003357312860002921
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1439.一种化合物，其具有式(XXXIII)：
Figure BDA0003357312860002922
其中：
T3为包含核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物的基团。
实施方案1440.一种化合物，其具有式(XXXIV)：
Figure BDA0003357312860002931
其中：
CM表示可裂解部分并且T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1441.一种化合物，其具有式(XXXV)：
Figure BDA0003357312860002932
其中：
T3为包含接头、核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物的基团。
实施方案1442.一种化合物，其具有式(XXXVI)：
Figure BDA0003357312860002941
其中：
CM表示可裂解部分并且T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1443.一种化合物，其具有式(XXXVII)：
Figure BDA0003357312860002942
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1444.一种化合物，其具有式(XXXVIII)：
Figure BDA0003357312860002951
其中：T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1445.一种化合物，其具有式(XXXIX)：
Figure BDA0003357312860002952
其中：T2为核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物。
实施方案1446.一种化合物，其具有式(XL)：
Figure BDA0003357312860002961
其中：T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1447.一种化合物，其具有式(XLI)：
Figure BDA0003357312860002962
其中每个Y选自O、S、取代或未取代的C1-C10烷基、氨基、取代的氨基、叠氮基、烯基或炔基；
并且其中T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1448.一种化合物，其具有式(XLII)：
Figure BDA0003357312860002971
其中每个Y选自O、S、取代或未取代的C1-C10烷基、氨基、取代的氨基、叠氮基、烯基或炔基；
并且其中T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1449.一种化合物，其具有式(XLIII)：
Figure BDA0003357312860002972
其中Y选自O、S、取代或未取代的C1-C10烷基、氨基、取代的氨基、叠氮基、烯基或炔基；
并且其中T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1450.一种化合物，其具有式(XLIV)：
Figure BDA0003357312860002981
其中T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1451.一种化合物，其具有式(XLV)：
Figure BDA0003357312860002982
其中T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1452.一种化合物，其具有式(XLV)：
Figure BDA0003357312860002983
其中T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1453.一种化合物，其具有式(XLV)：
Figure BDA0003357312860002991
其中T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1454.如实施方案1432至1453中任一个所述的化合物，其中T2或T3选自以下：
Figure BDA0003357312860002992
其中：
Bx为杂环碱基部分；
T4为H、羟基保护基或反应性磷基团；
X为O或S；
Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、巯基或取代的硫代基；
并且其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1455.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003001
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中Q选自以下：H、卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2；
并且其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1456.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003002
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1457.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003011
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1458.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003012
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1459.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003021
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1460.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003022
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、酰基、取代的酰基或取代的酰胺；并且
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1461.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003031
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中Q选自以下：卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2并且
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1462.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003041
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1463.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003042
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1464.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003051
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1465.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003061
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1466.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003062
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、酰基、取代的酰基或取代的酰胺；并且
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1467.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003071
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中Q选自以下：卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2；
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1468.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003081
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1469.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003091
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1470.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003101
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、酰基、取代的酰基或取代的酰胺；并且
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1471.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003111
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1472.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003121
其中X为O或S；
其中Bx为杂环碱基部分；
其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、酰基、取代的酰基或取代的酰胺；并且
其中T4为核苷、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1473.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003131
并且其中A为修饰寡核苷酸。
实施方案1474.一种化合物，其具有式(V)：
Figure BDA0003357312860003132
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a。
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；并且其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中X选自O或S。
实施方案1475.一种化合物，其具有式(Va)：
Figure BDA0003357312860003141
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a，
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；并且其中Q13选自以下：卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2；
并且其中X选自O或S。
实施方案1476.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003142
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中X选自O或S。
实施方案1477.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003151
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中X选自O或S。
实施方案1478.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003161
其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、卤素、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、巯基或取代的硫代基；
T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中X选自O或S。
实施方案1479.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003171
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；并且其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中Q选自以下：氢、卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2；
并且其中X选自O或S。
实施方案1480.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003181
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a，
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；并且其中Q或Q13选自以下：氢、卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2；
并且其中X选自O或S。
实施方案1481.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003191
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中Q选自以下：氢、卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2；
并且其中X选自O或S。
实施方案1482.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003201
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中Q选自以下：氢、卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2；
并且其中X选自O或S。
实施方案1483.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003211
其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、卤素、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、巯基或取代的硫代基；
T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中Q选自以下：氢、卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2；
并且其中X选自O或S。
实施方案1484.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003221
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；并且其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中X选自O或S
并且其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、卤素、氢、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、巯基或取代的硫代基。
实施方案1485.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003231
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；并且其中Q13选自以下：氢、卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2；
并且其中X选自O或S
并且其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、卤素、氢、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、巯基或取代的硫代基。
实施方案1486.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003241
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中X选自O或S
并且其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、卤素、氢、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、巯基或取代的硫代基。
实施方案1487.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003251
其中T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中X选自O或S。
并且其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、卤素、氢、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、巯基或取代的硫代基。
实施方案1488.一种化合物，其具有下式：
Figure BDA0003357312860003261
其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、巯基或取代的硫代基；
T3或T4中的一个选自以下：GalNAc3-1a、GalNAc3-2a、GalNAc3-3a、GalNAc3-4a、GalNAc3-5a、GalNAc3-6a、GalNAc3-7a、GalNAc3-8a、GalNAc3-9a、GalNAc3-10a、GalNAc3-11a、GalNAc3-12a、GalNAc3-13a、GalNAc3-14a、GalNAc3-15a、GalNAc3-16a、GalNAc3-17a、GalNAc3-18a、GalNAc3-19a、GalNAc3-20a、GalNAc3-21a、GalNAc3-22a、GalNAc3-23a、GalNAc-24a、GalNAc-25a、GalNAc-26a、GalNAc-27a、GalNAc-28a、GalNAc-29a、GalNAc-30a、GalNAc-31a以及GalNAc-32a；
并且T3或T4中的另一个选自以下：羟基、羟基保护基、核苷、寡核苷酸、单体亚基或低聚化合物；其中Bx为杂环碱基部分；
并且其中X为O或S；
并且其中Z为C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、卤素、氢、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、巯基或取代的硫代基。
实施方案1489.如实施方案1474至1488中任一个所述的化合物，其中Bx选自腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶、胞嘧啶或5-甲基胞嘧啶。
实施方案1490.如实施方案1474至1483或1485中任一个所述的化合物，其中Q或Q13为O(CH2)2-OCH3。
实施方案1491.一种化合物，其具有式(XVI)：
Figure BDA0003357312860003271
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1492.一种化合物，其具有式(XVII)：
Figure BDA0003357312860003272
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1493.一种化合物，其具有式(XVIII)：
Figure BDA0003357312860003281
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1494.一种化合物，其具有式(XIX)：
Figure BDA0003357312860003282
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1495.一种化合物，其具有式(XX)：
Figure BDA0003357312860003291
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物的基团。
实施方案1496.一种化合物，其具有式(XXI)：
Figure BDA0003357312860003292
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1497.一种化合物，其具有式(XXII)：
Figure BDA0003357312860003293
其中：
T2为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1498.一种化合物，其具有式(XXIII)：
Figure BDA0003357312860003301
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物的基团。
实施方案1499.一种化合物，其具有式(XXIIIa)：
Figure BDA0003357312860003302
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物的基团。
实施方案1500.一种化合物，其具有式(XXIV)：
Figure BDA0003357312860003311
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物的基团。
实施方案1501.一种化合物，其具有式(XXIVa)：
Figure BDA0003357312860003312
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物的基团。
实施方案1502.如实施方案1432至1502中任一个所述的化合物，其中低聚化合物为修饰寡核苷酸。
实施方案1503.如实施方案1502所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为缺口聚物。
实施方案1504.如实施方案1502所述的化合物，其中修饰寡核苷酸在结合互补靶核酸时激活RNA酶H。
实施方案1505.如实施方案1502至1504中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个修饰核苷。
实施方案1506.如实施方案1505所述的化合物，其中至少一个修饰核苷包含修饰碱基。
实施方案1507.如实施方案1505或1506所述的化合物，其中至少一个修饰核苷包含糖替代物。
实施方案1508.如实施方案1507所述的化合物，其中糖替代物为四氢吡喃。
实施方案1509.如实施方案1508所述的化合物，其中四氢吡喃为F-HNA。
实施方案1510.如实施方案1505至1509中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的剩余部分包含至少一个核苷，所述核苷包含修饰的糖。
实施方案1511.如实施方案1502至1510中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个核苷，所述核苷包含修饰的糖。
实施方案1512.如实施方案1511所述的化合物，其中包含修饰的糖的至少一个修饰核苷选自双环核苷和2’-修饰核苷。
实施方案1513.如实施方案1512所述的化合物，其中至少一个修饰核苷为双环核苷。
实施方案1514.如实施方案1513所述的化合物，其中双环核苷为(4’-CH2-O-2’)BNA核苷。
实施方案1515.如实施方案1513所述的化合物，其中双环核苷为(4’-(CH2)2-O-2’)BNA核苷。
实施方案1516.如实施方案1513所述的化合物，其中双环核苷为(4’-C(CH3)H-O-2’)BNA核苷。
实施方案1517.如实施方案1513所述的化合物，其中至少一个修饰核苷为2’-修饰核苷。
实施方案1518.如实施方案1512所述的化合物，其中至少一个2’-修饰核苷选自2’-F核苷、2’-OCH3核苷以及2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案1519.如实施方案1518所述的化合物，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-F核苷。
实施方案1520.如实施方案1518所述的化合物，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-OCH3核苷。
实施方案1521.如实施方案1518所述的化合物，其中至少一个2’-修饰核苷为2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案1522.如实施方案1502至1521中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个未修饰核苷。
实施方案1523.如实施方案1522所述的化合物，其中未修饰核苷为核糖核苷。
实施方案1524.如实施方案1522所述的化合物，其中未修饰核苷为脱氧核糖核苷。
实施方案1525.如实施方案1502至1524中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少两个修饰核苷。
实施方案1526.如实施方案1525所述的化合物，其中至少两个修饰核苷包含相同修饰。
实施方案1527.如实施方案1525所述的化合物，其中至少两个修饰核苷包含不同修饰。
实施方案1528.如实施方案1525至1527中任一个所述的化合物，其中至少两个修饰核苷中的至少一个包含糖替代物。
实施方案1529.如实施方案1525至1528中任一个所述的化合物，其中至少两个修饰核苷中的至少一个包含2’-修饰。
实施方案1530.如实施方案1529所述的化合物，其中至少两个修饰核苷中的每一个独立地选自2’-F核苷、2’-OCH3核苷和2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案1531.如实施方案1530所述的化合物，其中至少两个修饰核苷中的每一个均为2’-F核苷。
实施方案1532.如实施方案1530所述的化合物，其中至少两个修饰核苷中的每一个均为2’-OCH3核苷。
实施方案1533.如实施方案1530所述的化合物，其中至少两个修饰核苷中的每一个均为2’-O(CH2)2OCH3核苷。
实施方案1534.如实施方案1502至1533中任一个所述的化合物，其中基本上修饰寡核苷酸的每个核苷均为修饰核苷。
实施方案1535.如实施方案1502至1522或1525至1534中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的每个核苷均为修饰核苷。
实施方案1536.如实施方案1502至1533中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的至少4个核苷为脱氧核糖核苷。
实施方案1537.如实施方案1520至1533中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的至少5个核苷为脱氧核糖核苷。
实施方案1538.如实施方案1502至1533中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的至少6个核苷为脱氧核糖核苷。
实施方案1539.如实施方案1502至1533中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的至少7个核苷为脱氧核糖核苷。
实施方案1540.如实施方案1502至1533中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的至少8个核苷为脱氧核糖核苷。
实施方案1541.如实施方案1502至1533中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的至少9个核苷为脱氧核糖核苷。
实施方案1542.如实施方案1502至1533中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的至少10个核苷为脱氧核糖核苷。
实施方案1543.如实施方案1536至1542中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的每个脱氧核糖核苷由核苷间键联连续连接。
实施方案1544.如实施方案1502至1543中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为单链的。
实施方案1545.如实施方案1502至1543中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为双链的。
实施方案1546.如实施方案1502至1543中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为反义化合物。
实施方案1547.如实施方案1502至1543中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为基于RISC的寡核苷酸。
实施方案1548.如实施方案1502至1543中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸激活RISC途径。
实施方案1549.如实施方案1502至1547中任一个所述的化合物，其中寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。
实施方案1550.如实施方案1502至1534或1536至1546中任一个所述的化合物，其中化合物具有包含以下的糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1551.如实施方案1550所述的化合物，其中5’-区由2个连接的5’-区核苷组成。
实施方案1552.如实施方案1550所述的化合物，其中5’-区由3个连接的5’-区核苷组成。
实施方案1553.如实施方案1550所述的化合物，其中5’-区由4个连接的5’-区核苷组成。
实施方案1554.如实施方案1550所述的化合物，其中5’-区由5个连接的5’-区核苷组成。
实施方案1555.如实施方案1550至1554中任一个所述的化合物，其中3’-区由2个连接的3’-区核苷组成。
实施方案1556.如实施方案1550至1554中任一个所述的化合物，其中3’-区由3个连接的3’-区核苷组成。
实施方案1557.如实施方案1550至1554中任一个所述的化合物，其中3’-区由4个连接的3’-区核苷组成。
实施方案1558.如实施方案1550至1554中任一个所述的化合物，其中3’-区由5个连接的3’-区核苷组成。
实施方案1559.如实施方案1550至1558中任一个所述的化合物，其中中心区由5个连接的中心区核苷组成。
实施方案1560.如实施方案1550至1558中任一个所述的化合物，其中中心区由6个连接的中心区核苷组成。
实施方案1561.如实施方案1550至1558中任一个所述的化合物，其中中心区由7个连接的中心区核苷组成。
实施方案1562.如实施方案1550至1558中任一个所述的化合物，其中中心区由8个连接的中心区核苷组成。
实施方案1563.如实施方案1550至1558中任一个所述的化合物，其中中心区由9个连接的中心区核苷组成。
实施方案1564.如实施方案1550至1558中任一个所述的化合物，其中中心区由10个连接的中心区核苷组成。
实施方案1565.如实施方案1550至1564中任一个所述的化合物，其中化合物由14至26个连接核苷组成。
实施方案1566.如实施方案1550至1564中任一个所述的化合物，其中化合物由15至25个连接核苷组成。
实施方案1567.如实施方案1550至1564中任一个所述的化合物，其中化合物由16至20个连接核苷组成。
实施方案1568.如实施方案1550至1567中任一个所述的化合物，其中每个修饰核苷独立地包含2’-取代的糖部分或双环糖部分。
实施方案1569.如实施方案1568所述的化合物，其中至少一个修饰核苷包含2’-取代的糖部分。
实施方案1570.如实施方案1569所述的化合物，其中包含2’-取代的糖部分的每个修饰核苷包含独立地选自以下的2’取代基：卤素、任选取代的烯丙基、任选取代的氨基、叠氮基、任选取代的SH、CN、OCN、CF3、OCF3、O、S或N(Rm)-烷基；O、S或N(Rm)-烯基；O、S或N(Rm)-炔基；任选取代的O-亚烷基-O-烷基、任选取代的炔基、任选取代的烷芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的O-烷芳基、任选取代的O-芳烷基、O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)或O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每个Rm和Rn独立地为H、氨基保护基或取代或未取代的C1-C10烷基；
其中每个任选取代的基团被独立地选自以下的取代基任选取代：羟基、氨基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基(NO2)、巯基、硫代烷氧基(S-烷基)、卤素、烷基、芳基、烯基和炔基。
实施方案1571.如实施方案1569所述的化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCH2F、OCHF2、OCF3、OCH2CH3、O(CH2)2F、OCH2CHF2、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3、O(CH2)2-SCH3、O(CH2)2-OCF3、O(CH2)3-N(R1)(R2)、O(CH2)2-ON(R1)(R2)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R1)(R2)、OCH2C(＝O)-N(R3)-(CH2)2-N(R1)(R2)以及O(CH2)2-N(R3)-C(＝NR4)[N(R1)(R2)]；其中R1、R2、R3和R4各自独立地为H或C1-C6烷基。
实施方案1572.如实施方案1569所述的化合物，其中每个2’取代基独立地选自以下：卤素、OCH3、OCF3、OCH2CH3、OCH2CF3、OCH2-CH＝CH2、O(CH2)2-OCH3(MOE)、O(CH2)2-O(CH2)2-N(CH3)2、OCH2C(＝O)-N(H)CH3、OCH2C(＝O)-N(H)-(CH2)2-N(CH3)2以及OCH2-N(H)-C(＝NH)NH2。
实施方案1573.如实施方案1569所述的化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-MOE糖部分。
实施方案1574.如实施方案1569所述的化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-OMe糖部分。
实施方案1575.如实施方案1569所述的化合物，其中至少一个2’-修饰核苷包含2’-F糖部分。
实施方案1576.如实施方案1550至1575中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含糖替代物。
实施方案1577.如实施方案1576所述的化合物，其中修饰核苷包含F-HNA糖部分。
实施方案1578.如实施方案1576所述的化合物，其中修饰核苷包含HNA糖部分。
实施方案1579.如实施方案1550至1578中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少一个修饰核苷，所述修饰核苷包含双环糖部分。
实施方案1580.如实施方案1579所述的化合物，其中双环糖部分为cEt糖部分。
实施方案1581.如实施方案1579所述的化合物，其中双环糖部分为LNA糖部分。
实施方案1582.如实施方案1502至1581中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少一个修饰的核苷间键联。
实施方案1583.如实施方案1582所述的化合物，其中化合物的每个核苷间键联为修饰的核苷间键联。
实施方案1584.如实施方案1582所述的化合物，其中化合物包含至少一个修饰键联和至少一个未修饰的磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1585.如实施方案1582或1584中任一个所述的化合物，其中至少一个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1586.如实施方案1584或1585中任一个所述的化合物，其中每个修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1587.如实施方案1584或1585中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少2个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1588.如实施方案1584或1585中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少3个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1589.如实施方案1584或1585中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少4个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1590.如实施方案1584或1585中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少5个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1591.如实施方案1584或1585中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少6个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1592.如实施方案1584或1585中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少7个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1593.如实施方案1584或1585中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少8个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1594.如实施方案1584或1585中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少9个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1595.如实施方案1584或1585中任一个所述的化合物，其中化合物包含至少10个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1596.如实施方案1584或1595中任一个所述的化合物，其中化合物包含少于16个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1597.如实施方案1584或1595中任一个所述的化合物，其中化合物包含少于15个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1598.如实施方案1584或1595中任一个所述的化合物，其中化合物包含少于14个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1599.如实施方案1584或1595中任一个所述的化合物，其中化合物包含少于13个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1600.如实施方案1584或1595中任一个所述的化合物，其中化合物包含少于12个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1601.如实施方案1584或1595中任一个所述的化合物，其中化合物包含少于11个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1602.如实施方案1584或1595中任一个所述的化合物，其中化合物包含少于10个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1603.如实施方案1584或1595中任一个所述的化合物，其中化合物包含少于9个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1604.如实施方案1584或1595中任一个所述的化合物，其中化合物包含少于8个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1605.如实施方案1584或1595中任一个所述的化合物，其中化合物包含少于7个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1606.如实施方案1584或1595中任一个所述的化合物，其中化合物包含少于6个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1607.如实施方案1502至1605中任一个所述的化合物，其中化合物的每个末端核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1608.如实施方案1502至1605中任一个所述的化合物，其中连接化合物的两个脱氧核苷的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1609.如实施方案1502至1605中任一个所述的化合物，其中连接化合物的两个修饰核苷的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1610.如实施方案1502至1605中任一个所述的化合物，其中作为修饰核苷的3’的化合物的每个非末端核苷间键联为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1611.如实施方案1502至1605中任一个所述的化合物，其中作为脱氧核苷的3’的化合物的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1612.如实施方案1502至1588中任一个所述的化合物，其中化合物具有选自以下的化学基序：
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM
MsMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMsM
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMsM；以及
MsMyMyMyMy(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MyMyMyMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个s为硫代磷酸酯核苷间键联，并且每个y为磷酸二酯核苷间键联或硫代磷酸酯核苷间键联，前提是至少一个y为磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1613.如实施方案1502至1588中任一个所述的化合物，其中化合物具有选自以下的化学基序：
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM
MsMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMsM
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMsM；以及
MsMoMoMoMo(Ds)0-1(DsDs)(3-5)MoMoMoMsM；
其中每个M独立地为修饰核苷，每个D为脱氧核苷；每个o为磷酸二酯核苷间键联，并且每个s为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1614.如实施方案1612或1613所述的化合物，其中每个M独立地选自以下：2’-MOE核苷和双环核苷。
实施方案1615.如实施方案1614所述的化合物，其中每个M独立地选自以下：2’-MOE核苷、cEt核苷以及LNA核苷。
实施方案1616.如实施方案1612或1613所述的化合物，其中每个M为2’-MOE核苷。
实施方案1617.如实施方案1612或1613所述的化合物，其中每个M为cEt核苷。
实施方案1618.如实施方案1612或1613所述的化合物，其中每个M为LNA核苷。
实施方案1619.如实施方案1502至1618中任一个所述的化合物，其中化合物具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少8个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1620.如实施方案1502至1618中任一个所述的化合物，其中化合物具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少10个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1621.如实施方案1502至1618中任一个所述的化合物，其中化合物具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少12个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1622.如实施方案1502至1618中任一个所述的化合物，其中化合物具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少14个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1623.如实施方案1502至1618中任一个所述的化合物，其中化合物具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少16个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1624.如实施方案1502至1618中任一个所述的化合物，其中化合物具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少18个核碱基部分的核碱基序列。
实施方案1625.如实施方案1502至1618中任一个所述的化合物，其中化合物与靶核酸至少90％互补。
实施方案1626.如实施方案1502至1618中任一个所述的化合物，其中化合物与靶核酸至少95％互补。
实施方案1627.如实施方案1502至1618中任一个所述的化合物，其中化合物与靶核酸100％互补。
实施方案1628.如实施方案1627所述的化合物，其中靶核酸为前体mRNA。
实施方案1629.如实施方案1627所述的化合物，其中靶核酸为mRNA。
实施方案1630.如实施方案1627所述的化合物，其中靶核酸为微小RNA。
实施方案1631.如实施方案1627所述的化合物，其中靶核酸在肝脏中表达。
实施方案1632.如实施方案1627所述的化合物，其中靶核酸在肝细胞中表达。
实施方案1633.如实施方案1627所述的化合物，其中靶核酸编码选自以下的蛋白质：α1抗胰蛋白酶、雄激素受体、载脂蛋白(a)、载脂蛋白B、载脂蛋白C-III、C-反应蛋白、eIF-4E、因子VII、因子XI、糖皮质激素受体、胰高血糖素受体、蛋白酪氨酸磷酸酶1B、STAT3、SRB-1以及甲状腺素运载蛋白。
实施方案1634.如实施方案1627所述的化合物，其中靶核酸为病毒核酸。
实施方案1635.如实施方案1634所述的化合物，其中病毒核酸在肝脏中表达。
实施方案1636.如实施方案1634所述的化合物，其中靶核酸为乙型肝炎病毒核酸。
实施方案1637.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：17、18、19、20、21、22、23或24中的任一个的核碱基序列。
实施方案1638.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：25、26、27、28、29或30中的任一个的核碱基序列。
实施方案1639.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：31的核碱基序列。
实施方案1640.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：32的核碱基序列。
实施方案1641.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：33的核碱基序列。
实施方案1642.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：34的核碱基序列。
实施方案1643.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：35、36、37、38、39、40、41、42或43中的任一个的核碱基序列。
实施方案1644.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：44、45、46、47或48的核碱基序列。
实施方案1645.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：49、50、51、52、53、54、55、56、57、58或59中的任一个的核碱基序列。
实施方案1646.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：60、61、62、63、64、65、66或67中的任一个的核碱基序列。
实施方案1647.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：69、70、71或72中的任一个的核碱基序列。
实施方案1648.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：73的核碱基序列。
实施方案1649.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：74、75、76、77、78、79、80或81中的任一个的核碱基序列。
实施方案1650.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：68的核碱基序列。
实施方案1651.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物包含SEQ ID NO.：82-103、111或113中的任一个的核碱基序列。
实施方案1652.如实施方案1502至1627中任一个所述的化合物，其中化合物为反义寡核苷酸。
实施方案1653.一种药物组合物，其包含根据实施方案1502至1652中任一个所述的化合物或化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
实施方案1654.如实施方案1653所述的药物组合物，其中药学上可接受的载体或稀释剂选自无菌水和无菌盐水。
实施方案1655.一种减小细胞中靶核酸的量或活性的方法，其包括使细胞与如实施方案1498至1648中任一个所述的化合物或缀合反义化合物或如实施方案1653至1654所述的药物组合物接触。
实施方案1656.如实施方案1655所述的方法，其中细胞为肝脏细胞。
实施方案1657.如实施方案1655所述的方法，其中细胞为肝细胞。
实施方案1658.如实施方案1655至1657中任一个所述的方法，其中细胞在体外。
实施方案1659.如实施方案1655至1657中任一个所述的方法，其中细胞在动物中。
实施方案1660.如实施方案1659所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案1661.如实施方案1659所述的方法，其中动物为人。
实施方案1662.一种治疗动物的疾病或病状的方法，其包括向动物施用如实施方案1653或1654所述的药物组合物并且由此治疗动物的疾病或病状。
实施方案1663.如实施方案1662所述的方法，其中动物为小鼠。
实施方案1664.如实施方案1662所述的方法，其中动物为人。
实施方案1665.如实施方案1662至1664中任一个所述的方法，其中疾病或病状为肝脏疾病或病状。
实施方案1666.如实施方案1662至1665中任一个所述的方法，其中施用为肠胃外的。
实施方案1667.如实施方案1662至1665中任一个所述的方法，其中施用为通过皮下注射。
实施方案1668.如实施方案1662至1665中任一个所述的方法，其中施用为通过静脉内注射。
实施方案1669.如实施方案1662至1665中任一个所述的方法，其中施用为通过肌肉内注射。
实施方案1670.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中以1-10mg/kg的剂量提供化合物。
实施方案1671.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中以小于1mg/kg的剂量提供化合物。
实施方案1672.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中以大于10mg/kg的剂量提供化合物。
实施方案1673.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中提供化合物持续至少2个月的给药期。
实施方案1674.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中提供化合物持续至少4个月的给药期。
实施方案1675.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中提供化合物持续至少6个月的给药期。
实施方案1676.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中以约每周一次剂量的给药频率提供化合物。
实施方案1677.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中以约每两周一次剂量的给药频率提供化合物。
实施方案1678.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中以约每三周一次剂量的给药频率提供化合物。
实施方案1679.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中以每四周一次剂量的给药频率提供化合物。
实施方案1680.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中以每五周一次剂量的给药频率提供化合物。
实施方案1681.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中以每六周一次剂量的给药频率提供化合物。
实施方案1682.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中以每七周一次剂量的给药频率提供化合物。
实施方案1683.如实施方案1662至1669中任一个所述的方法，其中以每八周一次剂量的给药频率提供化合物。
实施方案1684.如实施方案1至1652中任一个所述的化合物或化合物或其前药。
实施方案1685.一种制造如实施方案1至1652中任一个所述的反义寡核苷酸的方法。
实施方案1686.一种制备如实施方案1至1652中任一个所述的反义寡核苷酸的方法。
实施方案1687.一种用于制造如实施方案1至1652中任一个所述的缀合反义化合物的方法，其中所述方法包括配制供人使用的缀合反义化合物，进行所配制的缀合反义化合物的色谱分析，以及包装准备销售的缀合反义化合物。
实施方案1688.如实施方案1179至1182中任一个所述的缀合反义化合物，其中系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860003511
其中每个n独立地为0、1、2、3、4、5、6或7。
实施方案1689.如实施方案1179至1182中任一个所述的缀合反义化合物，其中系链具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003521
实施方案1690.如实施方案1179至1182或1688至1689中任一个所述的缀合反义化合物，其中接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860003522
实施方案1691.如实施方案1179至1182或1688至1689中任一个所述的缀合反义化合物，其中接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860003523
其中每个n独立地为0、1、2、3、4、5、6或7。
实施方案1692.如实施方案1179至1182或1688至1689中任一个所述的缀合反义化合物，其中接头具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003524
实施方案1693.一种化合物，其具有式(XXVI)：
Figure BDA0003357312860003525
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1694.如实施方案1693所述的化合物，其中接头包含胺、酰胺、酯、醚、吡咯烷、PEG、聚酰胺或二硫键。
实施方案1695.如实施方案1693或1694所述的化合物，其中接头不包含吡咯烷。
实施方案1696.如实施方案1693至1695中任一个所述的化合物，其中接头具有下式：
Figure BDA0003357312860003531
实施方案1697.如实施方案1693至1696中任一个所述的化合物，其中T2具有下式：
Figure BDA0003357312860003532
其中：
CM为可裂解部分并且T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1698.如实施方案1693至1697中任一个所述的化合物，其中T2具有下式：
Figure BDA0003357312860003533
其中：
T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1699.如实施方案1693至1698中任一个所述的化合物，其中T2或T3为包含低聚化合物的基团，并且其中低聚化合物为修饰寡核苷酸。
实施方案1700.如实施方案1699所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由10至30个连接核苷组成，其中至少一个核苷为修饰核苷。
实施方案1701.如实施方案1699或1700所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含选自以下的至少一个修饰核苷：2’-MOE核苷、2’-OMe核苷、2’-F核苷、(4’-CH2-O-2’)双环核苷、(4’-(CH2)2-O-2’)双环核苷、(4’-C(CH3)H-O-2’)双环核苷；和吗啉代。
实施方案1702.如实施方案1699或1701中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸具有包含以下的缺口聚物糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1703.如实施方案1702所述的化合物，其中每个5’-区核苷为修饰核苷；每个3’-区核苷为修饰核苷；并且每个中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1704.如实施方案1702至1704中任一个所述的化合物，其中5’-区由2-5个连接的5’-区核苷组成；3’-区由2-5个连接的3’-区核苷组成；并且中心区由8-10个中心区核苷组成。
实施方案1705.如实施方案1699至1704中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1706.如实施方案1699至1705中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1707.如实施方案1699至1706中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1708.如实施方案1699至1707中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸在修饰寡核苷酸的5’-末端处连接至化合物的剩余部分。
实施方案1709.如实施方案1699至1707中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸在修饰寡核苷酸的3’-末端处连接至化合物的剩余部分。
实施方案1710.如实施方案1699至1709中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为反义寡核苷酸。
实施方案1711.如实施方案1699至1710中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为单链的。
实施方案1712.如实施方案1699至1710中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为双链的。
实施方案1713.如实施方案1699至1712中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸激活RISC途径。
实施方案1714.如实施方案1699至1712中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。
实施方案1715.如实施方案1699至1712中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸改变靶前体mRNA的剪接。
实施方案1716.如实施方案1699至1715中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸与靶核酸互补。
实施方案1717.如实施方案1716所述的化合物，其中靶核酸选自以下：前体mRNA、微小RNA或长的非编码RNA。
实施方案1718.如实施方案1699至1717中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成。
实施方案1719.如实施方案1699至1717中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由18至22个连接核苷组成。
实施方案1720.如实施方案1699至1717中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案1721.一种向动物施用如实施方案1693至1720中任一个所述的化合物的方法。
实施方案1722.一种治疗代谢病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如实施方案1693至1720中任一个所述的化合物。
实施方案1723.一种治疗心血管病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如实施方案1693至1720中任一个所述的化合物。
实施方案1724.一种化合物，其具有式(XXXI)：
Figure BDA0003357312860003571
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1725.如实施方案1724所述的化合物，其中接头包含胺、酰胺、酯、醚、吡咯烷、PEG、聚酰胺或二硫键。
实施方案1726.如实施方案1724或1725所述的化合物，其中接头不包含吡咯烷。
实施方案1727.如实施方案1724至1726中任一个所述的化合物，其中接头为：
Figure BDA0003357312860003572
实施方案1728.如实施方案1724至1727中任一个所述的化合物，其中T2具有下式：
Figure BDA0003357312860003581
其中：
CM表示可裂解部分并且T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1729.如实施方案1724至1728中任一个所述的化合物，其中T2具有下式：
Figure BDA0003357312860003582
其中：
T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1730.如实施方案1724至1729中任一个所述的化合物，其中T2或T3为包含低聚化合物的基团，并且其中低聚化合物为修饰寡核苷酸。
实施方案1731.如实施方案1730所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由10至30个连接核苷组成，其中至少一个核苷为修饰核苷。
实施方案1732.如实施方案1730或1731所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含选自以下的至少一个修饰核苷：2’-MOE核苷、2’-OMe核苷、2’-F核苷、(4’-CH2-O-2’)双环核苷、(4’-(CH2)2-O-2’)双环核苷、(4’-C(CH3)H-O-2’)双环核苷；和吗啉代。
实施方案1733.如实施方案1730至1732中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸具有包含以下的缺口聚物糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1734.如实施方案1733所述的化合物，其中每个5’-区核苷为修饰核苷；每个3’-区核苷为修饰核苷；并且每个中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1735.如实施方案1733至1734中任一个所述的化合物，其中5’-区由2-5个连接的5’-区核苷组成；3’-区由2-5个连接的3’-区核苷组成；并且中心区由8-10个中心区核苷组成。
实施方案1736.如实施方案1730至1735中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1737.如实施方案1730至1736中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1738.如实施方案1730至1737中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1739.如实施方案1730至1738中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸在修饰寡核苷酸的5’-末端处连接至化合物的剩余部分。
实施方案1740.如实施方案1730至1738中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸在修饰寡核苷酸的3’-末端处连接至化合物的剩余部分。
实施方案1741.如实施方案1730至1740中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为反义寡核苷酸。
实施方案1742.如实施方案1730至1741中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为单链的。
实施方案1743.如实施方案1730至1741中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为双链的。
实施方案1744.如实施方案1730至1743中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸激活RISC途径。
实施方案1745.如实施方案1730至1743中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。
实施方案1746.如实施方案1730至1743中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸改变靶前体mRNA的剪接。
实施方案1747.如实施方案1730至1746中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸与靶核酸互补。
实施方案1748.如实施方案1747所述的化合物，其中靶核酸选自以下：前体mRNA、微小RNA或长的非编码RNA。
实施方案1749.如实施方案1730至1748中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成。
实施方案1750.如实施方案1730至1748中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由18至22个连接核苷组成。
实施方案1751.如实施方案1730至1748中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案1752.一种向动物施用如实施方案1724至1751中任一个所述的化合物的方法。
实施方案1753.一种治疗代谢病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如实施方案1724至1751中任一个所述的化合物。
实施方案1754.一种治疗心血管病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如实施方案1724至1751中任一个所述的化合物。
实施方案1755.一种化合物，其具有式(XXXII)：
Figure BDA0003357312860003611
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1756.如实施方案1755所述的化合物，其中接头包含胺、酰胺、酯、醚、吡咯烷、PEG、聚酰胺或二硫键。
实施方案1757.如实施方案1755或1756所述的化合物，其中接头不包含吡咯烷。
实施方案1758.如实施方案1755至1757中任一个所述的化合物，其中接头为：
Figure BDA0003357312860003621
实施方案1759.如实施方案1755至1758中任一个所述的化合物，其中T2具有下式：
Figure BDA0003357312860003622
其中：
CM为可裂解部分并且T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1760.如实施方案1755至1759中任一个所述的化合物，其中T2具有下式：
Figure BDA0003357312860003623
其中：
T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1761.如实施方案1755至1760中任一个所述的化合物，其中T2或T3为包含低聚化合物的基团，并且其中低聚化合物为修饰寡核苷酸。
实施方案1762.如实施方案1761所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由10至30个连接核苷组成，其中至少一个核苷为修饰核苷。
实施方案1763.如实施方案1761或1762所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含选自以下的至少一个修饰核苷：2’-MOE核苷、2’-OMe核苷、2’-F核苷、(4’-CH2-O-2’)双环核苷、(4’-(CH2)2-O-2’)双环核苷、(4’-C(CH3)H-O-2’)双环核苷；和吗啉代。
实施方案1764.如实施方案1761至1763中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸具有包含以下的缺口聚物糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1765.如实施方案1764所述的化合物，其中每个5’-区核苷为修饰核苷；每个3’-区核苷为修饰核苷；并且每个中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1766.如实施方案1764至1765中任一个所述的化合物，其中5’-区由2-5个连接的5’-区核苷组成；3’-区由2-5个连接的3’-区核苷组成；并且中心区由8-10个中心区核苷组成。
实施方案1767.如实施方案1761至1766中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1768.如实施方案1761至1767中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1769.如实施方案1761至1768中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1770.如实施方案1761至1769中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸在修饰寡核苷酸的5’-末端处连接至化合物的剩余部分。
实施方案1771.如实施方案1761至1769中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸在修饰寡核苷酸的3’-末端处连接至化合物的剩余部分。
实施方案1772.如实施方案1761至1771中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为反义寡核苷酸。
实施方案1773.如实施方案1761至1772中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为单链的。
实施方案1774.如实施方案1761至1772中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为双链的。
实施方案1775.如实施方案1761至1774中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸激活RISC途径。
实施方案1776.如实施方案1761至1774中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。
实施方案1777.如实施方案1761至1774中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸改变靶前体mRNA的剪接。
实施方案1778.如实施方案1761至1777中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸与靶核酸互补。
实施方案1779.如实施方案1779所述的化合物，其中靶核酸选自以下：前体mRNA、微小RNA或长的非编码RNA。
实施方案1780.如实施方案1761至1779中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成。
实施方案1781.如实施方案1761至1779中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由18至22个连接核苷组成。
实施方案1782.如实施方案1761至1779中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案1783.一种向动物施用如实施方案1755至1782中任一个所述的化合物的方法。
实施方案1784.一种治疗代谢病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如实施方案1755至1782中任一个所述的化合物。
实施方案1785.一种治疗心血管病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如实施方案1755至1782中任一个所述的化合物。
实施方案1786.一种化合物，其具有式(XXXVIII)：
Figure BDA0003357312860003651
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1787.如实施方案1786所述的化合物，其中接头包含胺、酰胺、酯、醚、吡咯烷、PEG、聚酰胺或二硫键。
实施方案1788.如实施方案1786或1787所述的化合物，其中接头不包含吡咯烷。
实施方案1789.如实施方案1786至1788中任一个所述的化合物，其中接头为：
Figure BDA0003357312860003661
实施方案1790.如实施方案1786至1789中任一个所述的化合物，其中T2具有下式：
Figure BDA0003357312860003662
其中：
CM为可裂解部分并且T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1791.如实施方案1786至1790中任一个所述的化合物，其中T2具有下式：
Figure BDA0003357312860003663
其中：
T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1792.如实施方案1786至1791中任一个所述的化合物，其中T2或T3为包含低聚化合物的基团，并且其中低聚化合物为修饰寡核苷酸。
实施方案1793.如实施方案1792所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由10至30个连接核苷组成，其中至少一个核苷为修饰核苷。
实施方案1794.如实施方案1792或1793所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含选自以下的至少一个修饰核苷：2’-MOE核苷、2’-OMe核苷、2’-F核苷、(4’-CH2-O-2’)双环核苷、(4’-(CH2)2-O-2’)双环核苷、(4’-C(CH3)H-O-2’)双环核苷；和吗啉代。
实施方案1795.如实施方案1792至1794中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸具有包含以下的缺口聚物糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1796.如实施方案1795所述的化合物，其中每个5’-区核苷为修饰核苷；每个3’-区核苷为修饰核苷；并且每个中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1797.如实施方案1795至1796中任一个所述的化合物，其中5’-区由2-5个连接的5’-区核苷组成；3’-区由2-5个连接的3’-区核苷组成；并且中心区由8-10个中心区核苷组成。
实施方案1798.如实施方案1792至1797中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1799.如实施方案1792至1798中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1800.如实施方案1792至1799中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1801.如实施方案1792至1800中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸在修饰寡核苷酸的5’-末端处连接至化合物的剩余部分。
实施方案1802.如实施方案1792至1800中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸在修饰寡核苷酸的3’-末端处连接至化合物的剩余部分。
实施方案1803.如实施方案1792至1802中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为反义化合物。
实施方案1804.如实施方案1792至1803中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为单链的。
实施方案1805.如实施方案1792至1803中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为双链的。
实施方案1806.如实施方案1792至1805中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸激活RISC途径。
实施方案1807.如实施方案1792至1805中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。
实施方案1808.如实施方案1792至1805中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸改变靶前体mRNA的剪接。
实施方案1809.如实施方案1792至1808中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸与靶核酸互补。
实施方案1810.如实施方案1809所述的化合物，其中靶核酸选自以下：前体mRNA、微小RNA或长的非编码RNA。
实施方案1811.如实施方案1792至1810中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成。
实施方案1812.如实施方案1792至1810中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由18至22个连接核苷组成。
实施方案1813.如实施方案1792至1810中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案1814.一种向动物施用如实施方案1786至1813中任一个所述的化合物的方法。
实施方案1815.一种治疗代谢病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如实施方案1786至1813中任一个所述的化合物。
实施方案1816.一种治疗心血管病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如实施方案1786至1813中任一个所述的化合物。
实施方案1817.一种化合物，其具有式(XL)：
Figure BDA0003357312860003691
其中：
T2为包含核苷、核苷酸、单体亚基、反应性酯、接头、可裂解部分或低聚化合物的基团。
实施方案1818.如实施方案1817所述的化合物，其中接头包含胺、酰胺、酯、醚、吡咯烷、PEG、聚酰胺或二硫键。
实施方案1819.如实施方案1817或1818所述的化合物，其中接头不包含吡咯烷。
实施方案1820.如实施方案1817至1819中任一个所述的化合物，其中接头为：
Figure BDA0003357312860003701
实施方案1821.如实施方案1817至1820中任一个所述的化合物，其中T2具有下式：
Figure BDA0003357312860003702
其中：
CM为可裂解部分并且T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1822.如实施方案1817至1821中任一个所述的化合物，其中T2具有下式：
Figure BDA0003357312860003703
其中：
T3为核苷、核苷酸、单体亚基或低聚化合物。
实施方案1823.如实施方案1817至1822中任一个所述的化合物，其中T2或T3为包含低聚化合物的基团，并且其中低聚化合物为修饰寡核苷酸。
实施方案1824.如实施方案1823所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由10至30个连接核苷组成，其中至少一个核苷为修饰核苷。
实施方案1825.如实施方案1824所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含选自以下的至少一个修饰核苷：2’-MOE核苷、2’-OMe核苷、2’-F核苷、(4’-CH2-O-2’)双环核苷、(4’-(CH2)2-O-2’)双环核苷、(4’-C(CH3)H-O-2’)双环核苷；和吗啉代。
实施方案1826.如实施方案1824至1825中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸具有包含以下的缺口聚物糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1827.如实施方案1826所述的化合物，其中每个5’-区核苷为修饰核苷；每个3’-区核苷为修饰核苷；并且每个中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1828.如实施方案1825至1826中任一个所述的化合物，其中5’-区由2-5个连接的5’-区核苷组成；3’-区由2-5个连接的3’-区核苷组成；并且中心区由8-10个中心区核苷组成。
实施方案1829.如实施方案1824至1828中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1830.如实施方案1824至1829中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸包含至少一个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1831.如实施方案1824至1830中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1832.如实施方案1824至1831中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸在修饰寡核苷酸的5’-末端处连接至化合物的剩余部分。
实施方案1833.如实施方案1824至1831中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸在修饰寡核苷酸的3’-末端处连接至化合物的剩余部分。
实施方案1834.如实施方案1824至1833中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为反义寡核苷酸。
实施方案1835.如实施方案1824至1834中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为单链的。
实施方案1836.如实施方案1824至1834中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为双链的。
实施方案1837.如实施方案1824至1836中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸激活RISC途径。
实施方案1838.如实施方案1824至1836中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。
实施方案1839.如实施方案1824至1836中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸改变靶前体mRNA的剪接。
实施方案1840.如实施方案1824至1839中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸与靶核酸互补。
实施方案1841.如实施方案1840所述的化合物，其中靶核酸选自以下：前体mRNA、微小RNA或长的非编码RNA。
实施方案1842.如实施方案1824至1841中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由12至30个连接核苷组成。
实施方案1843.如实施方案1824至1841中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由18至22个连接核苷组成。
实施方案1844.如实施方案1824至1841中任一个所述的化合物，其中修饰寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案1845.一种向动物施用如实施方案1817至1844中任一个所述的化合物的方法。
实施方案1846.一种治疗代谢病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如实施方案1817至1844中任一个所述的化合物。
实施方案1847.一种治疗心血管病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如实施方案1817至1844中任一个所述的化合物。
实施方案1848.一种方法，其包括向动物施用缀合反义化合物，其中所述缀合反义化合物包含具有缺口聚物糖基序的修饰寡核苷酸和包含GalNAc的缀合物。
实施方案1849.一种减小动物中的细胞中的靶核酸的量或活性的方法，其包括向所述动物施用包含修饰寡核苷酸和缀合物的缀合反义化合物，其中所述修饰寡核苷酸具有缺口聚物糖基序并且所述缀合物包含GalNAc；并且由此减小所述动物中的所述细胞中的所述靶核酸的量或活性。
实施方案1850.如实施方案1848或1849所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003741
实施方案1851.如实施方案1848或1849所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003742
实施方案1852.如实施方案1848或1849所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003751
实施方案1853.如实施方案1848或1849所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003752
实施方案1854.如实施方案1848或1849所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003753
实施方案1855.如实施方案1848或1849所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003761
实施方案1856.如实施方案1848或1849所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003762
实施方案1857.如实施方案1848或1849所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003763
实施方案1858.如实施方案1848或1849所述的方法，其中缀合物具有选自以下结构的支链基团：
Figure BDA0003357312860003764
实施方案1859.如实施方案1848或1849所述的方法，其中缀合物具有选自以下结构的接头：
Figure BDA0003357312860003771
其中每个n独立地选自0、1、2、3、4、5、6或7。
实施方案1860.如实施方案1848至1859中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷间键联。
实施方案1861.如实施方案1860所述的方法，其中修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1862.如实施方案1860或1861所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少一个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1863.如实施方案1860或1861所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少2个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1864.如实施方案1860或1861所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少3个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1865.如实施方案1860或1861所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少4个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1866.如实施方案1860或1861所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少5个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1867.如实施方案1860或1861所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少6个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1868.如实施方案1860或1861所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少7个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1869.如实施方案1848至1868中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸的每个核苷间键联选自磷酸二酯核苷间键联和硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1870.如实施方案1869所述的方法，其中修饰寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1871.如实施方案1848至1870中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸与靶核酸至少80％互补。
实施方案1872.如实施方案1848至1870中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸与靶核酸至少85％互补。
实施方案1873.如实施方案1848至1870中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸与靶核酸至少90％互补。
实施方案1874.如实施方案1848至1870中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸与靶核酸100％互补。
实施方案1875.如实施方案1848至1874中任一个所述的方法，其中靶核酸在肝脏中表达。
实施方案1876.如实施方案1848至1875中任一个所述的方法，其中靶核酸在肝细胞中表达。
实施方案1877.如实施方案1848至1876中任一个所述的方法，其中靶核酸编码选自以下的蛋白质：雄激素受体、载脂蛋白(a)、载脂蛋白B、载脂蛋白C-III、C-反应蛋白、eIF-4E、因子VII、因子XI、糖皮质激素受体、胰高血糖素受体、蛋白酪氨酸磷酸酶1B、STAT3以及甲状腺素运载蛋白。
实施方案1878.一种调节细胞中的前体mRNA靶核酸的剪接的方法，其包括使所述细胞与缀合反义化合物接触，其中所述缀合反义化合物包含修饰寡核苷酸和缀合物；并且其中所述缀合物包含GalNac；并且由此调节所述细胞中的所述前体mRNA靶核酸的剪接。
实施方案1879.如实施方案1878所述的方法，其中前体mRNA靶核酸在肝细胞中表达。
实施方案1880.如实施方案1878或1879所述的方法，其中细胞在体外。
实施方案1881.如实施方案1878或1879所述的方法，其中细胞在体内。
实施方案1882.如实施方案1878或1879所述的方法，其中细胞在动物中。
实施方案1883.如实施方案1878至1882中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少一个修饰核苷。
实施方案1884.如实施方案1883所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少一个核苷，所述核苷包含2’-O(CH2)2OCH3修饰。
实施方案1885.如实施方案1883或1884所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少一个核苷，所述核苷包含2’-OCH3修饰。
实施方案1886.如实施方案1878至1885中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少一个双环核苷。
实施方案1887.如实施方案1886所述的方法，其包含(4’-CH2-O-2’)BNA核苷。
实施方案1888.如实施方案1886或1887所述的方法，其包含(4’-(CH2)2-O-2’)BNA核苷。
实施方案1889.如实施方案1886至1888中任一个所述的方法，(4’-C(CH3)H-O-2’)BNA核苷。
实施方案1890.如实施方案1878至1889中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸的每个核苷均为修饰核苷。
实施方案1891.如实施方案1890所述的方法，其中修饰寡核苷酸的每个修饰核苷包含相同修饰。
实施方案1892.如实施方案1890所述的方法，其中修饰寡核苷酸的至少两个修饰核苷包含彼此不同的修饰。
实施方案1893.如实施方案1878至1889或1891至1892中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸的至少一个核苷为未修饰的脱氧核苷。
实施方案1894.如实施方案1878至1893中任一个所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003801
实施方案1895.如实施方案1878至1893中任一个所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003811
实施方案1896.如实施方案1878至1893中任一个所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003812
实施方案1897.如实施方案1878至1893中任一个所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003813
实施方案1898.如实施方案1878至1893中任一个所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003821
实施方案1899.如实施方案1878至1893中任一个所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003822
实施方案1900.如实施方案1878至1893中任一个所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003823
实施方案1901.如实施方案1878至1893中任一个所述的方法，其中缀合物包含以下结构：
Figure BDA0003357312860003831
实施方案1902.如实施方案1878至1893中任一个所述的方法，其中缀合物具有选自以下结构的支链基团：
Figure BDA0003357312860003832
实施方案1903.如实施方案1878至1893中任一个所述的方法，其中缀合物具有选自以下结构的接头：
Figure BDA0003357312860003833
其中每个n独立地选自0、1、2、3、4、5、6或7。
实施方案1904.如实施方案1878至1903中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少一个修饰的核苷间键联。
实施方案1905.如实施方案1904所述的方法，其中修饰的核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1906.如实施方案1904或1905所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少一个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1907.如实施方案1904或1905所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少2个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1908.如实施方案1904或1905所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少3个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1909.如实施方案1904或1905所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少4个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1910.如实施方案1904或1905所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少5个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1911.如实施方案1904或1905所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少6个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1912.如实施方案1904或1905所述的方法，其中修饰寡核苷酸包含至少7个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1913.如实施方案1904或1905中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸的每个核苷间键联选自磷酸二酯核苷间键联和硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1914.如实施方案1913所述的方法，其中修饰寡核苷酸的每个核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。
实施方案1915.如实施方案1878至1913中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸的至少一个核苷为吗啉代核苷。
实施方案1916.如实施方案1878至1913中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸的每个核苷为吗啉代核苷。
实施方案1917.一种包含反义寡核苷酸和缀合物的前药，其中所述缀合物包含至少一个GalNAc并且所述反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义寡核苷酸。
实施方案1918.如实施方案1917所述的前药，其中基于RNA酶H的反义寡核苷酸为缺口聚物。
实施方案1919.如实施方案1917或1918所述的前药，其中缀合物在反义寡核苷酸的5’-末端处连接至反义寡核苷酸。
实施方案1920.一种包含反义寡核苷酸和缀合物的前药，其中所述缀合物包含至少一个GalNAc并且所述反义寡核苷酸为改变前体mRNA的剪接的反义寡核苷酸。
实施方案1921.如实施方案1917至1920中任一个所述的前药，其中前药的体内代谢产生缺乏缀合物的反义寡核苷酸。
实施方案1922.如实施方案1917至1921中任一个所述的前药，其中前药在体内的效力是缺乏缀合物的反义寡核苷酸的至少5倍。
实施方案1923.如实施方案1917至1921中任一个所述的前药，其中前药在体内的效力是缺乏缀合物的反义寡核苷酸的至少8倍。
实施方案1924.如实施方案1917至1921中任一个所述的前药，其中前药在体内的效力是缺乏缀合物的反义寡核苷酸的至少10倍。
实施方案1925.一种向动物施用如实施方案1917至1924中任一个所述的前药的方法。
实施方案1926.一种包含反义寡核苷酸和缀合物的化合物，其中所述缀合物包含至少一个GalNAc，其中所述反义寡核苷酸具有缺口聚物糖基序，并且其中所述反义寡核苷酸的核碱基序列不与选自以下的靶核酸100％互补：小鼠Raf激酶C、小鼠Fas受体或人磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)。
实施方案1927.如实施方案1926所述的化合物，其中缀合物连接至反义寡核苷酸的5’-末端。
实施方案1928.如实施方案1926或1927中任一个所述的化合物，其中反义寡核苷酸的核苷间键联包含至少一个磷酸二酯键联和至少一个硫代磷酸酯键联。
实施方案1929.如实施方案1926至1928中任一个所述的化合物，其中缀合物基团不包含胆烷。
实施方案1930.如实施方案1926至1929中任一个所述的化合物，其中支链基团包含季碳或氨基酸。
实施方案1931.一种包含反义寡核苷酸和缀合物的化合物，其中所述缀合物包含至少一个GalNAc，其中所述反义寡核苷酸具有缺口聚物糖基序，并且其中所述反义寡核苷酸的核碱基序列与可被调节用于治疗代谢或心血管病症的靶核酸互补。
实施方案1932.如实施方案1931所述的化合物，其中缀合物连接至反义寡核苷酸的5’-末端。
实施方案1933.如实施方案1931或1932中任一个所述的化合物，其中反义寡核苷酸的核苷间键联包含至少一个磷酸二酯键联和至少一个硫代磷酸酯键联。
实施方案1934.如实施方案1931至1933中任一个所述的化合物，其中缀合物基团不包含胆烷。
实施方案1935.如实施方案1931至1934中任一个所述的化合物，其中支链基团包含季碳或氨基酸。
实施方案1936.一种包含反义寡核苷酸和缀合物的化合物，其中所述缀合物包含至少一个GalNAc，并且其中所述反义寡核苷酸包含至少一个磷酸二酯键联和至少一个硫代磷酸酯键联。
实施方案1937.如实施方案1936所述的化合物，其中缀合物连接至反义寡核苷酸的5’-末端。
实施方案1938.如实施方案1936或1937中任一个所述的化合物，其中反义寡核苷酸具有缺口聚物糖基序。
实施方案1939.如实施方案1936至1938中任一个所述的化合物，其中缀合物基团不包含胆烷。
实施方案1940.如实施方案1936至1939中任一个所述的化合物，其中支链基团包含季碳或氨基酸。
实施方案1941.一种包含反义寡核苷酸和缀合物的化合物，其中所述缀合物包含至少一个GalNAc，其中所述缀合物基团不包含胆烷；并且其中所述反义寡核苷酸具有缺口聚物糖基序。
实施方案1942.如实施方案1941所述的化合物，其中缀合物连接至反义寡核苷酸的5’-末端。
实施方案1943.如实施方案1941或1942中任一个所述的化合物，其中反义寡核苷酸的核苷间键联包含至少一个磷酸二酯键联和至少一个硫代磷酸酯键联。
实施方案1944.如实施方案1941至1943中任一个所述的化合物，其中支链基团包含季碳或氨基酸。
实施方案1945.一种包含反义寡核苷酸和缀合物的化合物，其中所述缀合物包含至少一个GalNAc，其中所述反义寡核苷酸具有缺口聚物糖基序，并且其中所述支链基团包含季碳或氨基酸。
实施方案1946.如实施方案1945所述的化合物，其中缀合物连接至反义寡核苷酸的5’-末端。
实施方案1947.如实施方案1945或1946中任一个所述的化合物，其中反义寡核苷酸的核苷间键联包含至少一个磷酸二酯键联和至少一个硫代磷酸酯键联。
实施方案1948.如实施方案1945至1957中任一个所述的化合物，其中缀合物基团不包含胆烷。
实施方案1949.一种包含反义寡核苷酸和缀合物的化合物，其中所述缀合物包含至少一个GalNAc，并且其中所述反义寡核苷酸改变前体mRNA的剪接。
实施方案1950.如实施方案1926至1949中任一个所述的化合物，其中反义寡核苷酸由10至30个连接核苷组成。
实施方案1951.如实施方案1926至1949中任一个所述的化合物，其中反义寡核苷酸由18至22个连接核苷组成。
实施方案1952.如实施方案1926至1949中任一个所述的化合物，其中反义寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案1953.如实施方案1926至1949中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸由10至30个连接核苷组成。
实施方案1954.如实施方案1926至1949中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸由18至22个连接核苷组成。
实施方案1955.如实施方案1848至1916中任一个所述的方法，其中修饰寡核苷酸由16至20个连接核苷组成。
实施方案1956.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003881
其中X为具有六至十一个连续键合的原子的取代或未取代的系链。
实施方案1957.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003891
其中X为具有十个连续键合的原子的取代或未取代的系链。
实施方案1958.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003892
其中X为具有四至十一个连续键合的原子的取代或未取代的系链并且其中系链包含恰好一个酰胺键。
实施方案1959.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003901
其中Y和Z独立地选自C1-C12取代或未取代的烷基、烯基或炔基，或包含醚、酮、酰胺、酯、氨基甲酸酯、胺、哌啶、磷酸酯、磷酸二酯、硫代磷酸酯、三唑、吡咯烷、二硫化物或硫醚的基团。
实施方案1960.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003902
其中Y和Z独立地选自C1-C12取代或未取代的烷基，或包含恰好一个醚或恰好两个醚、酰胺、胺、哌啶、磷酸酯、硫酸二酯或硫代磷酸酯的基团。
实施方案1961.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003911
其中Y和Z独立地选自C1-C12取代或未取代的烷基。
实施方案1962.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003912
其中m和n独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12。
实施方案1963.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003913
其中m为4、5、6、7或8，并且n为1、2、3或4。
实施方案1964.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003921
其中X为具有四至十三个连续键合的原子的取代或未取代的系链，并且其中X不包含醚基团。
实施方案1965.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003922
其中X为具有八个连续键合的原子的取代或未取代的系链，并且其中X不包含醚基团。
实施方案1966.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003931
其中X为具有四至十三个连续键合的原子的取代或未取代的系链，并且其中系链包含恰好一个酰胺键，并且其中X不包含醚基团。
实施方案1967.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003932
其中X为具有四至十三个连续键合的原子的取代或未取代的系链并且其中系链由酰胺键和取代或未取代的C2-C11烷基组成。
实施方案1968.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003933
其中Y选自C1-C12取代或未取代的烷基、烯基或炔基，或包含醚、酮、酰胺、酯、氨基甲酸酯、胺、哌啶、磷酸酯、磷酸二酯、硫代磷酸酯、三唑、吡咯烷、二硫化物或硫醚的基团。
实施方案1969.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003941
其中Y选自C1-C12取代或未取代的烷基，或包含醚、胺、哌啶、磷酸酯、磷酸二酯或硫代磷酸酯的基团。
实施方案1970.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003942
其中Y选自C1-C12取代或未取代的烷基。
实施方案1971.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003951
其中n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。
实施方案1972.一种包含细胞靶向部分的化合物，所述细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860003952
其中n为4、5、6、7或8。
实施方案1973.一种包含缀合物基团和反义寡核苷酸的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含恰好一个GalNAc，并且其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的5’末端。
实施方案1974.一种包含缀合物基团和反义寡核苷酸的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含恰好两个GalNAc配体，并且其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的5’末端。
实施方案1975.一种包含缀合物基团和反义寡核苷酸的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含恰好一个GalNAc，并且其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的3’末端。
实施方案1976.一种包含缀合物基团和反义寡核苷酸的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含恰好两个GalNAc配体，并且其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的3’末端。
实施方案1977.一种包含缀合物基团和反义寡核苷酸的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含1-4个GalNAc配体，并且其中反义寡核苷酸为缺口聚物。
实施方案1978.如实施方案1977所述的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团连接至反义寡核苷酸的5’末端。
实施方案1979.如实施方案1977-1978中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含接头，所述接头不包含二硫化物。
实施方案1980.如实施方案1977-1979中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含接头，所述接头不包含硫醚。
实施方案1981.如实施方案1977-1980中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含接头，所述接头不包含吡咯烷。
实施方案1982.如实施方案1977-1981中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团不包含多环部分。
实施方案1983.如实施方案1977-1981中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含支链基团，所述支链基团不包含多环部分。
实施方案1984.如实施方案1977-1983中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含接头，所述接头不包含脂质部分。
实施方案1985.如实施方案1977-1984中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团与反义寡核苷酸之间的键联不为硫代磷酸酯基团。
实施方案1986.如实施方案1977-1985中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，其中修饰核苷为2’-O-甲氧基乙基(MOE)修饰的核苷。
实施方案1987.如实施方案1977-1986中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中反义寡核苷酸包含至少一个修饰核苷，其中修饰核苷为cEt修饰核苷。
实施方案1988.如实施方案1977-1987中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中反义寡核苷酸包含至少一个硫代磷酸酯核苷间键联和至少一个磷酸二酯核苷间键联。
实施方案1989.如实施方案1977-1987中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中缺口聚物的翼包含至少两个不同的糖修饰。
实施方案1990.如实施方案1977-1989中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中反义寡核苷酸的序列选自SEQ ID NO.17-159。
实施方案1991.一种包含缀合物基团和反义寡核苷酸的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含如实施方案1956-1972中任一个所述的细胞靶向部分。
实施方案1992.一种包含缀合物基团和反义寡核苷酸的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含如实施方案1956-1972中任一个所述的细胞靶向部分，并且其中反义寡核苷酸包含缺口聚物。
实施方案1993.一种包含缀合物基团和反义寡核苷酸的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含如实施方案1956-1972中任一个所述的细胞靶向部分，并且其中反义寡核苷酸的糖统一被修饰。
实施方案1994.一种包含缀合物基团和反义寡核苷酸的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含如实施方案1956-1972中任一个所述的细胞靶向部分，并且其中反义寡核苷酸为单链的。
实施方案1995.一种包含缀合物基团和反义寡核苷酸的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含如实施方案1956-1972中任一个所述的细胞靶向部分，并且其中反义寡核苷酸为双链的。
实施方案1996.如实施方案1991-1995中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物连接至反义寡核苷酸的5’末端。
实施方案1997.如实施方案1991-1995中任一个所述的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物连接至反义寡核苷酸的3’末端。
实施方案1998.一种包含缀合物基团和反义寡核苷酸的缀合反义寡核苷酸，其中缀合物基团包含1-4个GalNAc配体，并且其中反义寡核苷酸的糖统一被修饰。
在具有多于一个具体变量(例如，多于一个“m”或“n”)的实施方案中，除非另外指出，否则独立选择每个所述具体变量。因此，对于具有多于一个n的结构，独立地选择每个n，所以它们可为或可不为彼此相同的。
详述
应该理解，上述一般描述和以下详细描述均仅为示例性和解释性的并且不限制本公开。在本文中，除非另外确切说明，否则单数的使用包括复数。如本文所使用，除非另外说明，否则“或”的使用意指“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其它形式如“包括(includes)”和“包括(included)”的使用不是限制性的。另外，除非另外确切说明，否则术语如“元件”或“组分”既涵盖包含一个单元的元件和组分，又涵盖包含多于一个子单元的元件和组分。
本文所使用的小节标题仅出于组织性目的并且不解释为限制所描述的主题。本申请中引用的所有文件或文件的部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍和论文，均出于任何目的特此明确地以引用的方式整体并入。
A.定义
除非提供确切的定义，否则结合本文所描述的分析化学、合成有机化学和医药化学所使用的命名法和这些化学领域的工序和技术为本领域熟知和常用的那些。标准技术可用于化学合成和化学分析。某些所述技术和工序可例如见于由Sangvi和Cook编著的“Carbohydrate Modifications in Antisense Research”，American Chemical Society，Washington D.C.，1994；″Remington's Pharmaceutical Sciences，″Mack PublishingCo.，Easton，Pa.，第21版，2005；和由Stanley T.Crooke编著的“Antisense DrugTechnology，Principles，Strategies，and Applications”，CRC Press，Boca Raton，Florida；以及Sambrook等，“Molecular Cloning，A laboratory Manual”，第2版，ColdSpring Harbor Laboratory Press，1989，所述参考文献出于任何目的特此以引用的方式并入。如果允许，本公开通篇提及的所有专利、申请、已公布的申请和其它出版物以及其它数据以引用的方式整体并入本文。
除非另外指出，否则以下术语具有以下含义：
如本文所使用，“核苷”意指包含核碱基部分和糖部分的化合物。核苷包括但不限于天然存在的核苷(如在DNA和RNA中发现的)和修饰核苷。核苷可连接至磷酸部分。
如本文所使用，“化学修饰”意指当与天然存在的对应物相比时化合物的化学差异。寡核苷酸的化学修饰包括核苷修饰(包括糖部分修饰和核碱基修饰)和核苷间键联修饰。就寡核苷酸而言，化学修饰不包括仅在核碱基序列上的差异。
如本文所使用，“呋喃糖基”意指包含5元环的结构，所述5元环包含四个碳原子和一个氧原子。
如本文所使用，“天然存在的糖部分”意指如在天然存在的RNA中发现的呋喃核糖基或如在天然存在的DNA中发现的脱氧呋喃核糖基。
如本文所使用，“糖部分”意指核苷的天然存在的糖部分或修饰的糖部分。
如本文所使用，“修饰的糖部分”意指取代的糖部分或糖替代物。
如本文所使用，“取代的糖部分”意指并非天然存在的糖部分的呋喃糖基。取代的糖部分包括但不限于在2’-位、3’-位、5’-位和/或4’-位上包含取代基的呋喃糖基。某些取代的糖部分为双环糖部分。
如本文所使用，“2’-取代的糖部分”意指在2’-位上包含除H或OH之外的取代基的呋喃糖基。除非另外指出，否则2’-取代的糖部分不是双环糖部分(即，2’-取代的糖部分的2’-取代基与呋喃糖基环的另一个原子不形成桥联。
如本文所使用，“MOE”意指-OCH2CH2OCH3。
如本文所使用，“2’-F核苷”是指包含在2’位上包含氟的糖的核苷。除非另外指出，否则2’-F核苷中的氟在核糖位上(替代天然核糖的OH)。
如本文所使用，术语“糖替代物”意指如下结构：所述结构不包含呋喃糖基并且能够替代核苷的天然存在的糖部分，使得所得到的核苷亚基能够连接在一起和/或与其它核苷连接以形成能够与互补的低聚化合物杂交的低聚化合物。所述结构包括如下环：所述环包含与呋喃糖基(例如，4元环、6元环或7元环)不同的原子数；用非氧原子(例如，碳、硫或氮)替代呋喃糖基的氧；或原子数和氧替代均有所变化。所述结构还可包含对应于对于取代的糖部分所描述的那些取代的取代(例如，任选包含另外取代基的6元碳环双环糖替代物)。糖替代物还包括更复杂的糖代替物(例如，肽核酸的非环系统)。糖替代物包括但不限于吗啉代、环己烯基和环己六醇。
如本文所使用，“双环糖部分”意指包含4至7元环的修饰的糖部分(包括但不限于呋喃糖基)，所述糖部分包含连接4至7元环的两个原子以形成第二个环，从而产生双环结构的桥联。在某些实施方案中，4至7元环为糖环。在某些实施方案中，4至7元环为呋喃糖基。在某些所述实施方案中，桥联连接了呋喃糖基的2’-碳和4’-碳。
如本文所使用，“核苷酸”意指还包含磷酸酯连接基团的核苷。如本文所使用，“连接核苷”可或可不通过磷酸酯键联连接并且因此包括但不限于“连接的核苷酸”。如本文所使用，“连接核苷”为以连续顺序连接的核苷(即，在那些连接的核苷之间不存在另外的核苷)。
如本文所使用，“核碱基”意指可连接至糖部分以形成能够掺入到寡核苷酸中的核苷的原子基团，并且其中原子基团能够与另一个寡核苷酸或核酸的互补的天然存在的核碱基键合。核碱基可为天然存在的或可为修饰的。
如本文所使用，术语“未修饰的核碱基”或“天然存在的核碱基”意指RNA或DNA的天然存在的杂环核碱基：嘌呤碱基腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G)；以及嘧啶碱基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)(包括5-甲基C)和尿嘧啶(U)。
如本文所使用，“修饰核碱基”意指并非天然存在的核碱基的任何核碱基。
如本文所使用，“修饰核苷”意指与天然存在的RNA或DNA核苷相比包含至少一个化学修饰的核苷。修饰核苷包含修饰的糖部分和/或修饰的核碱基。
如本文所使用，“双环核苷”或“BNA”意指包含双环糖部分的核苷。
如本文所使用，“约束的乙基核苷”或“cEt”意指包含双环糖部分的核苷，所述双环糖部分包含4’-CH(CH3)-O-2’桥联。
如本文所使用，“锁核酸核苷”或“LNA”意指包含双环糖部分的核苷，所述双环糖部分包含4’-CH2-O-2’桥联。
如本文所使用，“2’-取代的核苷”意指在2’-位上包含除H或OH之外的取代基的核苷。除非另外指出，否则2’-取代的核苷不是双环核苷。
如本文所使用，“脱氧核苷”意指包含如在天然存在的脱氧核糖核苷(DNA)中所发现的2’-H呋喃糖基糖部分的核苷。在某些实施方案中，2’-脱氧核苷可包含修饰的核碱基或可包含RNA核碱基(例如，尿嘧啶)。
如本文所使用，“寡核苷酸”意指包含多个连接核苷的化合物。在某些实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个未修饰的核糖核苷(RNA)和/或未修饰的脱氧核糖核苷(DNA)和/或一个或多个修饰核苷。
如本文所使用，“寡核苷”意指其中没有核苷间键联含有磷原子的寡核苷酸。如本文所使用，寡核苷酸包含寡核苷。
如本文所使用，“修饰寡核苷酸”意指包含至少一个修饰核苷和/或至少一个修饰的核苷间键联的寡核苷酸。
如本文所使用，“键联”或“连接基团”意指将两个或更多个其它原子基团连接在一起的原子基团。
如本文所使用，“核苷间键联”意指寡核苷酸中相邻核苷之间的共价键联。
如本文所使用，“天然存在的核苷间键联”意指3’至5’磷酸二酯键联。
如本文所使用，“修饰的核苷间键联”意指除了天然存在的核苷间键联之外的任何核苷间键联。
如本文所使用，“末端核苷间键联”意指寡核苷酸或其限定区域的最后两个核苷之间的键联。
如本文所使用，“磷连接基团”意指包含磷原子的连接基团。磷连接基团包括但不限于具有下式的基团：
Figure BDA0003357312860004031
其中：
Ra和Rd各自独立地为O、S、CH2、NH或NJ1，其中J1为C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；
Rb为O或S；
Rc为OH、SH、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、氨基或取代的氨基；并且
J1为Rb为O或S。
磷连接基团包括但不限于磷酸二酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸酯、氨基磷酸酯、硫代氨基磷酸酯、硫羰基烷基膦酸酯、磷酸三酯、硫羰基烷基磷酸三酯以及硼烷磷酸酯。
如本文所使用，“核苷间磷连接基团”意指直接连接两个核苷的磷连接基团。
如本文所使用，“非核苷间磷连接基团”意指不直接连接两个核苷的磷连接基团。在某些实施方案中，非核苷间磷连接基团将核苷连接至除核苷之外的基团。在某些实施方案中，非核苷间磷连接基团连接两个基团，所述两个基团中没有一个为核苷。
如本文所使用，“中性连接基团”意指不带电荷的连接基团。中性连接基团包括但不限于磷酸三酯、甲基膦酸酯、MMI(-CH2-N(CH3)-O-)、酰胺-3(-CH2-C(＝O)-N(H)-)、酰胺-4(-CH2-N(H)-C(＝O)-)、甲乙缩醛(-O-CH2-O-)以及硫代甲乙缩醛(-S-CH2-O-)。另外的中性连接基团包括包含硅氧烷(二烷基硅氧烷)、羧酸酯、羧酰胺、硫化物、磺酸酯和酰胺的非离子键联(参见例如：Carbohydrate Modifications in Antisense Research；Y.S.Sanghvi和P.D.Cook编著ACS Symposium Series 580；第3和4章，(第40-65页))。另外的中性连接基团包括包含混合的N、O、S和CH2组成部分的非离子键联。
如本文所使用，“核苷间中性连接基团”意指直接连接两个核苷的中性连接基团。
如本文所使用，“非核苷间中性连接基团”意指不直接连接两个核苷的中性连接基团。在某些实施方案中，非核苷间中性连接基团将核苷连接至除核苷之外的基团。在某些实施方案中，非核苷间中性连接基团连接两个基团，所述两个基团中没有一个为核苷。
如本文所使用，“低聚化合物”意指包含两个或更多个子结构的聚合结构。在某些实施方案中，低聚化合物包含寡核苷酸。在某些实施方案中，低聚化合物包含一个或多个缀合物基团和/或端基。在某些实施方案中，低聚化合物由寡核苷酸组成。低聚化合物还包括天然存在的核酸。在某些实施方案中，低聚化合物包含一个或多个连接的单体亚基的骨架，其中每个连接的单体亚基直接或间接地连接至杂环碱基部分。在某些实施方案中，低聚化合物还可包括没有连接至杂环碱基部分的单体亚基，从而提供无碱基位点。在某些实施方案中，连结单体亚基、糖部分或糖替代物以及杂环碱基部分的键联可独立地修饰。在某些实施方案中，可或可不包括杂环碱基的键联-糖单元可被模拟物如肽核酸中的单体取代。
如本文所使用，“端基”意指连接至寡核苷酸的3’末端或5’末端中的任一或两者的一个或多个原子。在某些实施方案中，端基为缀合物基团。在某些实施方案中，端基包含一个或多个端基核苷。
如本文所使用，“缀合物”或“缀合物基团”意指结合至寡核苷酸或低聚化合物的原子或原子基团。通常，缀合物基团改变它们所连接至的化合物的一种或多种性质，包括但不限于药效学、药物代谢动力学、结合、吸收、细胞分布、细胞摄取、电荷和/或清除性质。
如本文所使用，在缀合物基团背景下的“缀合物接头”或“接头”意指包含任何原子或原子基团的缀合物基团的一部分并且其(1)将寡核苷酸共价连接至缀合物基团的另一个部分或(2)共价连接缀合物基团的两个或更多个部分。
缀合物基团在本文中示为基团，提供用于形成至低聚化合物如反义寡核苷酸的共价连接的键。在某些实施方案中，低聚化合物上的连接点为低聚化合物的3’末端核苷的3’-羟基的3’-氧原子。在某些实施方案中，低聚化合物上的连接点为低聚化合物的5’末端核苷的5’-羟基的5’-氧原子。在某些实施方案中，用于形成至低聚化合物的连接的键为可裂解键。在某些所述实施方案中，所述可裂解键构成可裂解部分的全部或部分。
在某些实施方案中，缀合物基团包含可裂解部分(例如，可裂解键或可裂解核苷)和碳水化合物聚簇部分，如GalNAc聚簇部分。所述碳水化合物聚簇部分包含：靶向部分和任选地缀合物接头。在某些实施方案中，通过配体的数目和身份来鉴定碳水化合物聚簇部分。例如，在某些实施方案中，碳水化合物聚簇部分包含3个GalNAc基团并且命名为“GalNAc3”。在某些实施方案中，碳水化合物聚簇部分包含4个GalNAc基团并且命名为“GalNAc4”。本文描述了具体的碳水化合物聚簇部分(具有具体系链、支链基团和缀合物接头基团)并且由后面跟着下标“a”的罗马数字命名。因此“GalNac3-1a”是指具有3个GalNac基团和明确鉴定的系链、支链基团和连接基团的缀合物基团的具体碳水化合物聚簇部分。所述碳水化合物聚簇片段通过可裂解部分(如可裂解键或可裂解核苷)连接至低聚化合物。
如本文所使用，“可裂解部分”意指能够在生理条件下裂解的键或基团。在某些实施方案中，可裂解部分在细胞或亚细胞区室(如内体或溶酶体)内部裂解。在某些实施方案中，可裂解部分通过内源性酶如核酸酶裂解。在某些实施方案中，可裂解部分包含具有一个、两个、三个、四个或多于四个可裂解键的原子基团。在某些实施方案中，可裂解部分为磷酸二酯键联。
如本文所使用，“可裂解键”意指能够被断裂的任何化学键。在某些实施方案中，可裂解键选自以下：酰胺、聚酰胺、酯、醚、磷酸二酯的一个或两个酯、磷酸酯、氨基甲酸酯、二硫化物或肽。
如本文所使用，“碳水化合物聚簇”意指具有连接至支架或接头基团的一个或多个碳水化合物残基的化合物。(对于碳水化合物缀合物聚簇的实例，参见，例如，Maier等，“Synthesis of Antisense Oligonucleotides Conjugated to a MultivalentCarbohydrate Cluster for Cellular Targeting，”Bioconjugate Chemistry，2003，(14)：18-29，所述参考文献以引用的方式整体并入本文，或Rensen等，“Design andSynthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targetingof Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor，”J.Med.Chem.2004，(47)：5798-5808)。
如本文所使用，“修饰的碳水化合物”意指相对于天然存在的碳水化合物具有一个或多个化学修饰的任何碳水化合物。
如本文所使用，“碳水化合物衍生物”意指可使用碳水化合物作为起始材料或中间体合成的任何化合物。
如本文所使用，“碳水化合物”意指天然存在的碳水化合物、修饰的碳水化合物或碳水化合物衍生物。
如本文所使用，“保护基”意指本领域技术人员已知的任何化合物或保护基。保护基的非限制性实例可见于″Protective Groups in Organic Chemistry″，T.W.Greene、P.G.M.Wuts，ISBN 0-471-62301-6，John Wiley&Sons，Inc，New York，所述参考文献以引用的方式整体并入本文。
如本文所使用，“单链的”意指不与其补体杂交并且缺乏足够自身互补性以形成稳定自身双链体的低聚化合物。
如本文所使用，“双链的”意指彼此杂交的低聚化合物对或形成发夹结构的单个自身互补的低聚化合物。在某些实施方案中，双链低聚化合物包含第一和第二低聚化合物。
如本文所使用，“反义化合物”意指包含寡核苷酸或由寡核苷酸组成的化合物，所述寡核苷酸的至少一部分与其能够杂交的靶核酸互补，从而导致至少一种反义活性。
如本文所使用，“反义活性”意指可归因于反义化合物与其靶核酸的杂交的任何可检测和/或可测量的变化。在某些实施方案中，反义活性包括靶核酸转录物(例如mRNA)的量或活性的调节。在某些实施方案中，反义活性包括前体mRNA的剪接的调节。
如本文所使用，“基于RNA酶H的反义化合物”意指反义化合物，其中反义化合物的至少一些反义活性可归因于反义化合物与靶核酸的杂交和随后的RNA酶H对靶核酸的裂解。
如本文所使用，“基于RISC的反义化合物”意指反义化合物，其中反义化合物的至少一些反义活性可归因于RNA诱导的沉默复合物(RISC)。
如本文所使用，“检测”或“测量”意指用于进行检测或测量的测试或测定。所述检测和/或测量可能得到零值。因此，如果用于检测或测量的测试得到没有活性(活性为零)的发现，尽管如此，也已经进行了检测或测量活性的步骤。
如本文所使用，“可检测和/或可测量的活性”意指不为零的在统计学上显著的活性。
如本文所使用，“基本上未变化”意指具体地相对于变化更多的另一个参数，具体参数几乎没有或没有变化。在某些实施方案中，当参数变化小于5％时，所述参数基本上未变化。在某些实施方案中，如果参数变化小于两倍而另一个参数变化至少十倍，则所述参数基本上未变化。例如，在某些实施方案中，反义活性为靶核酸的量的变化。在某些所述实施方案中，如果非靶核酸的量比靶核酸的量变化的小得多，那么所述非靶核酸的量基本上未变化，但变化不必需为零。
如本文所使用，“表达”意指基因最终产生蛋白质的过程。表达包括但不限于转录、转录后修饰(例如，剪接、聚腺苷酸化、添加5’-帽)以及翻译。
如本文所使用，“靶核酸”意指反义化合物意图与其杂交以产生希望的反义活性的核酸分子。反义寡核苷酸与其靶核酸具有足够的互补性以允许在生理条件下杂交。
如本文所使用，在提到核碱基时的“核碱基互补性”或“互补性”意指能够与另一个核碱基碱基配对的核碱基。例如，在DNA中，腺嘌呤(A)与胸腺嘧啶(T)互补。例如，在RNA中，腺嘌呤(A)与尿嘧啶(U)互补。在某些实施方案中，互补核碱基意指能够与其靶核酸的核碱基碱基配对的反义化合物的核碱基。例如，如果反义化合物的某个位置上的核碱基能够与靶核酸的某个位置上的核碱基氢键合，那么寡核苷酸与靶核酸之间的氢键合的位置被认为在所述核碱基对上是互补的。包含某些修饰的核碱基可维持与对应核碱基配对的能力，并且因此仍能够具有核碱基互补性。
如本文所使用，关于核碱基的“非互补性”意指彼此不形成氢键的核碱基对。
如本文所使用，关于低聚化合物(例如，连接核苷、寡核苷酸或核酸)的“互补性”意指所述低聚化合物或其区域与另一个低聚化合物或其区域通过核碱基互补性杂交的能力。互补的低聚化合物不必需在每个核苷上均具有核碱基互补性。相反，容忍一些错配。在某些实施方案中，互补的低聚化合物或区域在70％的核碱基上互补(70％互补)。在某些实施方案中，互补的低聚化合物或区域80％互补。在某些实施方案中，互补的低聚化合物或区域90％互补。在某些实施方案中，互补的低聚化合物或区域95％互补。在某些实施方案中，互补的低聚化合物或区域100％互补。
如本文所使用，“错配”意指当第一和第二低聚化合物对准时，不能够与第二低聚化合物的对应位置上的核碱基配对的第一低聚化合物的核碱基。第一和第二低聚化合物中的任一或两者可为寡核苷酸。
如本文所使用，“杂交”意指互补低聚化合物(例如，反义化合物及其靶核酸)的配对。虽然不限于具体机制，但配对的最常见机制涉及氢键合，所述氢键合可为互补核碱基之间的Watson-Crick、Hoogsteen或反向Hoogsteen氢键合。
如本文所使用，“特异性杂交”意指低聚化合物与一个核酸位点杂交比它与另一个核酸位点杂交具有更大亲合力的能力。
如本文所使用，关于寡核苷酸或其部分的“完全互补”意指寡核苷酸或其部分的每个核碱基均能够与互补核酸或其邻接部分的核碱基配对。因此，完全互补区在任一链中均不包含错配或未杂交的核碱基。
如本文所使用，“互补百分比”意指与靶核酸的等长部分互补的低聚化合物的核碱基的百分数。通过将与靶核酸中的对应位置上的核碱基互补的低聚化合物的核碱基数除以低聚化合物的总长度来计算互补百分比。
如本文所使用，“同一性百分比”意指与第二核酸中的对应位置上的核碱基相同类型(不依赖于化学修饰)的第一核酸中的核碱基数除以第一核酸中的核碱基总数。
如本文所使用，“调节”意指当与调节前的分子、功能或活性的量或质量相比时分子、功能或活性的量或质量的变化。例如，调节包括基因表达的变化，增加(刺激或诱导)或减少(抑制或降低)。作为另一个实例，表达的调节可包括前体mRNA加工的剪接位点选择的变化，从而导致与不存在调节情况下的量相比的具体剪接变体的绝对或相对量的变化。
如本文所使用，“化学基序”意指寡核苷酸或其区域中的化学修饰的模式(pattern)。可通过寡核苷酸的某些核苷和/或某些连接基团上的修饰来定义基序。
如本文所使用，“核苷基序”意指寡核苷酸或其区域中的核苷修饰的模式。这样的寡核苷酸的键联可为修饰或未修饰的。除非另外指出，否则本文中仅描述核苷的基序意图为核苷基序。因此，在所述情况下，键联不受限制。
如本文所使用，“糖基序”意指寡核苷酸或其区域中的糖修饰的模式。
如本文所使用，“键联基序”意指寡核苷酸或其区域中的键联修饰的模式。这样的寡核苷酸的核苷可为修饰或未修饰的。除非另外指出，否则本文中仅描述键联的基序意图为键联基序。因此，在所述情况下，核苷不受限制。
如本文所使用，“核碱基修饰基序”意指沿着寡核苷酸的核碱基的修饰的模式。除非另外指出，否则核碱基修饰基序不依赖于核碱基序列。
如本文所使用，“序列基序”意指沿着寡核苷酸或其部分布置的核碱基的模式。除非另外指出，否则序列基序不依赖于化学修饰并且因此可具有化学修饰的任何组合，包括没有化学修饰。
如本文所使用，关于核苷或一种“类型”的核苷的“修饰类型”意指核苷的化学修饰并且包括修饰和未修饰的核苷。因此，除非另外指出，否则“具有第一类型的修饰的核苷”可为未修饰的核苷。
如本文所使用，“不同修饰的”意指彼此不同的化学修饰或化学取代基，包括不存在修饰。因此，例如，MOE核苷和未修饰的DNA核苷为“不同修饰的”，即使DNA核苷为未修饰的。同样，DNA和RNA为“不同修饰的”，即使这两者均为天然存在的未修饰的核苷。相同但包含不同核碱基的核苷不为不同修饰的。例如，包含2’-OMe修饰的糖和未修饰的腺嘌呤核碱基的核苷和包含2’-OMe修饰的糖和未修饰的胸腺嘧啶核碱基的核苷不为不同修饰的。
如本文所使用，“相同类型的修饰”是指彼此相同的修饰，包括不存在修饰。因此，例如，两个未修饰的DNA核苷具有“相同类型的修饰”，即使DNA核苷为未修饰的。具有相同类型修饰的所述核苷可包含不同的核碱基。
如本文所使用，“单独区域”意指寡核苷酸的部分，其中任何相邻部分的化学修饰或化学修饰的基序包括至少一个差异以允许单独的区域彼此区分。
如本文所使用，“药学上可接受的载体或稀释剂”意指适合用于向动物施用的任何物质。在某些实施方案中，药学上可接受的载体或稀释剂为无菌盐水。在某些实施方案中，所述无菌盐水为药用级盐水。
如本文所使用，术语“代谢病症”意指主要特征在于代谢失调-与食物分解产生能量相关的一系列复杂化学反应的疾病或病状。
如本文所使用，术语“心血管病症”意指主要特征在于心脏或血管功能受损的疾病或病状。
如本文所使用，术语“单环系统或多环系统”意指包括选自单一或多环基团环系统的所有环系统，其中环稠合或连接并且意图包括单独地选自以下的单环系统和混合环系统：脂肪族、脂环族、芳基、杂芳基、芳烷基、芳基烷基、杂环、杂芳基、杂芳香族和杂芳基烷基。所述单环结构和多环结构可含有环，所述环各自具有相同水平的饱和或各自独立地具有不同程度的饱和，包括完全饱和、部分饱和或完全不饱和。每个环可包含选自C、N、O和S的环原子以产生杂环以及仅包含C环原子的环，所述环可存在于混合基序中，例如像苯并咪唑，其中一个环仅具有碳环原子并且稠环具有两个氮原子。单环系统或多环系统可进一步被取代基取代，例如像具有两个连接至环中的一个的＝O基团的邻苯二甲酰亚胺。单环系统或多环系统可使用各种策略连接至母体分子，如直接通过环原子、通过多个环原子稠合、通过取代基或通过双官能连接部分。
如本文所使用，“前药”意指化合物的无活性或具有较小活性的形式，当向受试者施用时，所述前药被代谢形成活性或更具活性的化合物(例如，药物)。
如本文所使用，“取代基(substituent)”和“取代基(substituent group)”意指替代指定母体化合物的原子或基团的原子或基团。例如，修饰核苷的取代基为不同于在天然存在的核苷中发现的原子或基团的任何原子或基团(例如，修饰的2’-取代基为在核苷的2’-位上的除H或OH之外的任何原子或基团)。取代基可为保护或未保护的。在某些实施方案中，本公开的化合物在母体化合物的一个位置上或多于一个位置上具有取代基。取代基还可进一步被其它取代基取代并且可直接连接或通过连接基团如烷基或烃基连接至母体化合物。
同样，如本文所使用，关于化学官能团的“取代基”意指不同于通常存在于指定官能团中的原子或原子基团的原子或原子基团。在某些实施方案中，取代基替代官能团的氢原子(例如，在某些实施方案中，取代的甲基的取代基为替代未取代的甲基的一个氢原子的除氢之外的原子或基团)。除非另外指出，否则适合用作取代基的基团包括但不限于卤素、羟基、烷基、烯基、炔基、酰基(-C(O)Raa)、羧基(-C(O)O-Raa)、脂族基团、脂环基、烷氧基、取代的氧基(-O-Raa)、芳基、芳烷基、杂环基、杂芳基、杂芳基烷基、氨基(-N(Rbb)(Rcc))、亚氨基(＝NRbb)、酰胺基(-C(O)N(Rbb)(Rcc)或-N(Rbb)C(O)Raa)、叠氮基(-N3)、硝基(-NO2)、氰基(-CN)、脲基(carbamido)(-OC(O)N(Rbb)(Rcc)或-N(Rbb)C(O)ORaa)、脲基(ureido)(-N(Rbb)C(O)N(Rbb)(Rcc))、硫脲基(-N(Rbb)C(S)N(Rbb)(Rcc))、胍基(-N(Rbb)C(＝NRbb)N(Rbb)(Rcc))、脒基(-C(＝NRbb)N(Rbb)(Rcc)或-N(Rbb)C(＝NRbb)(Raa))、巯基(-SRbb)、亚硫酰基(-S(O)Rbb)、磺酰基(-S(O)2Rbb)以及氨磺酰基(-S(O)2N(Rbb)(Rcc)-或-N(Rbb)S(O)2Rbb)。其中每个Raa、Rbb和Rcc独立地为H、任选连接的化学官能团或另外的具有优选列表的取代基，所述列表包括但不限于烷基、烯基、炔基、脂肪族、烷氧基、酰基、芳基、芳烷基、杂芳基、脂环族、杂环和杂芳基烷基。本文描述的化合物内的所选取代基以一定递归度存在。
如本文所使用，如本文所使用的“烷基”意指含有最多至二十四个碳原子的饱和直链或支链烃基。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、正己基、辛基、癸基、十二烷基等。烷基通常包括1至约24个碳原子，更通常地1至约12个碳原子(C1-C12烷基)，其中1至约6个碳原子更优选。
如本文所使用，“烯基”意指含有最多至二十四个碳原子并且具有至少一个碳-碳双键的直链或支链链烃基。烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基、二烯如1，3-丁二烯等。烯基通常包括2至约24个碳原子，更通常地2至约12个碳原子，其中2至约6个碳原子更优选。如本文所使用的烯基可任选地包括一个或多个另外的取代基。
如本文所使用，“炔基”意指含有最多至二十四个碳原子并且具有至少一个碳-碳三键的直链或支链烃基。炔基的实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基等。炔基通常包括2至约24个碳原子，更通常地2至约12个碳原子，其中2至约6个碳原子更优选。如本文所使用的炔基可任选地包括一个或多个另外的取代基。
如本文所使用，“酰基”意指通过从有机酸中去除羟基形成的基团并且具有通式-C(O)-X，其中X通常为脂肪族、脂环族或芳香族。实例包括脂肪族羰基、芳香族羰基、脂肪族磺酰基、芳香族亚硫酰基、脂肪族亚硫酰基、芳香族磷酸酯、脂肪族磷酸酯等。如本文所使用的酰基可任选地包括另外的取代基。
如本文所使用，“脂环族”意指其中环为脂肪族的环系统。环系统可包含一个或多个环，其中至少一个环为脂肪族。优选的脂环族包括其中具有约5至约9个碳原子的环。如本文所使用的脂环族可任选地包括另外的取代基。
如本文所使用，“脂肪族”意指含有最多至二十四个碳原子的直链或支链烃基，其中任何两个碳原子之间的饱和度为单键、双键或三键。脂肪族基团优选含有1至约24个碳原子，更通常地1至约12个碳原子，其中1至约6个碳原子更优选。脂肪族基团的直链或支链可被一个或多个杂原子中断，所述杂原子包括氮、氧、硫和磷。被杂原子中断的所述脂肪族基团包括但不限于聚烷氧基，如聚亚烷基二醇、聚胺和聚亚胺。如本文所使用的脂肪族基团可任选地包括另外的取代基。
如本文所使用，“烷氧基”意指在烷基与氧原子之间形成的基团，其中氧原子用来将烷氧基连接至母体分子。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、新戊氧基、正己氧基等。如本文所使用的烷氧基可任选地包括另外的取代基。
如本文所使用，“氨基烷基”意指氨基取代的C1-C12烷基。基团的烷基部分与母体分子形成共价键。氨基可位于任何位置并且氨基烷基可在烷基和/或氨基部分上被另外的取代基取代。
如本文所使用，“芳烷基”和“芳基烷基”意指共价连接至C1-C12烷基的芳香族基团。所得到的芳烷基(或芳基烷基)的烷基部分与母体分子形成共价键。实例包括但不限于苯甲基、苯乙基等。如本文所使用的芳烷基可任选地包括连接至烷基、芳基或形成基团的这两个基团的另外的取代基。
如本文所使用，“芳基”和“芳香族”意指具有一个或多个芳环的单环或多环碳环系统基团。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基、茚满基、茚基等。优选的芳环系统在一个或多个环中具有约5至约20个碳原子。如本文所使用的芳基可任选地包括另外的取代基。
如本文所使用，“卤代基”和“卤素”意指选自氟、氯、溴和碘的原子。
如本文所使用，“杂芳基”和“杂芳香族”意指包含单环或多环芳环、环系统或稠环系统的基团，其中至少一个环为芳香族的并且包括一个或多个杂原子。杂芳基还意图包括稠环系统，所述稠环系统包括其中一个或多个稠环不含有杂原子的系统。杂芳基通常包括一个选自硫、氮或氧的环原子。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、喹喔啉基等。杂芳基可直接或通过连接部分如脂肪族基团或杂原子连接至母体分子。如本文所使用的杂芳基可任选地包括另外的取代基。
如本文所使用，“缀合物化合物”意指适合用作缀合物基团的任何原子、原子基团或连接的原子基团。在某些实施方案中，缀合物化合物可具有或赋予一种或多种性质，包括但不限于药效学、药物代谢动力学、结合、吸收、细胞分布、细胞摄取、电荷和/或清除性质。
如本文所使用，除非另外指出或修改，术语“双链的”是指彼此杂交的两个单独的低聚化合物。所述双链化合物可在一个或两个链的一个或两个末端上具有一个或多个或非杂交的核苷(突出端)和/或一个或多个内部非杂交核苷(错配)，前提是存在足够互补性，以维持在生理学相关条件下的杂交。
B.某些化合物
在某些实施方案中，本发明提供缀合反义化合物，所述缀合反义化合物包含反义寡核苷酸和缀合物。
a.某些反义寡核苷酸
在某些实施方案中，本发明提供反义寡核苷酸。所述反义寡核苷酸包含连接核苷，每个核苷包含糖部分和核碱基。可根据化学特征(例如，修饰和修饰的模式)和核碱基序列(例如，反义寡核苷酸的序列、靶核酸的身份和序列)来考虑所述反义寡核苷酸的结构。
i.某些化学特征
在某些实施方案中，反义寡核苷酸包含一个或多个修饰。在某些所述实施方案中，反义寡核苷酸包含一个或多个修饰核苷和/或修饰的核苷间键联。在某些实施方案中，修饰核苷包含修饰的糖部分和/或修饰的核碱基。
1.某些糖部分
在某些实施方案中，本公开的化合物包含一个或多个修饰核苷，所述修饰核苷包含修饰的糖部分。相对于仅包含包含有天然存在的糖部分的核苷的寡核苷酸，包含一个或多个糖修饰的核苷的所述化合物可具有希望的性质，如增强的核酸酶稳定性或增大的与靶核酸的结合亲合力。在某些实施方案中，修饰的糖部分为取代的糖部分。在某些实施方案中，修饰的糖部分为糖替代物。所述糖替代物可包含对应于取代的糖部分的那些取代的一个或多个取代。
在某些实施方案中，修饰的糖部分为包含一个或多个非桥联糖取代基的取代的糖部分，包括但不限于在2’位和/或5’位上的取代基。适于2’-位的糖取代基的实例包括但不限于：2’-F、2’-OCH3(“OMe”或“O-甲基”)和2’-O(CH2)2OCH3(“MOE”)。在某些实施方案中，2’位上的糖取代基选自烯丙基、氨基、叠氮基、硫代基、O-烯丙基、O-C1-C10烷基、O-C1-C10取代的烷基；OCF3、O(CH2)2SCH3、O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)以及O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每个Rm和Rn独立地为H或取代或未取代的C1-C10烷基。5’-位上的糖取代基的实例包括但不限于：5’-甲基(R或S)；5’-乙烯基和5’-甲氧基。在某些实施方案中，取代的糖包含多于一个非桥联糖取代基，例如，2’-F-5’-甲基糖部分(对于另外的5’，2’-双取代的糖部分和核苷，参见，例如，PCT国际申请WO 2008/101157)。
包含2’-取代的糖部分的核苷称为2’-取代的核苷。在某些实施方案中，2’-取代的核苷包含选自以下的2’-取代基：卤代基、烯丙基、氨基、叠氮基、SH、CN、OCN、CF3、OCF3、O、S或N(Rm)-烷基；O、S或N(Rm)-烯基；O、S或N(Rm)-炔基；O-亚烷基-O-烷基、炔基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基、O-芳烷基、O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)或O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每个Rm和Rn独立地为H、氨基保护基或取代或未取代的C1-C10烷基。这些2’-取代基可被独立地选自以下的一个或多个取代基进一步取代：羟基、氨基、烷氧基、羧基、苯甲基、苯基、硝基(NO2)、巯基、硫代烷氧基(S-烷基)、卤素、烷基、芳基、烯基以及炔基。
在某些实施方案中，2’-取代的核苷包含选自以下的2’-取代基：F、NH2、N3、OCF3、O-CH3、O(CH2)3NH2、CH2-CH＝CH2、O-CH2-CH＝CH2、OCH2CH2OCH3、O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)、O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2以及N-取代的乙酰胺(O-CH2-C(＝O)-N(Rm)(Rn)，其中每个Rm和Rn独立地为H、氨基保护基或取代或未取代的C1-C10烷基。
在某些实施方案中，2’-取代的核苷包含糖部分，所述糖部分包含选自以下的2’-取代基：F、OCF3、O-CH3、OCH2CH2OCH3、O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(CH3)2、-O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2以及O-CH2-C(＝O)-N(H)CH3。
在某些实施方案中，2’-取代的核苷包含糖部分，所述糖部分包含选自以下的2’-取代基：F、O-CH3和OCH2CH2OCH3。
某些修饰的糖部分包含桥联糖取代基，所述桥联糖取代基形成第二个环，从而产生双环糖部分。在某些所述实施方案中，双环糖部分在4’呋喃糖环原子与2’呋喃糖环原子之间包含桥联。所述4’至2’糖取代基的实例包括但不限于：-[C(Ra)(Rb)]n-、-[C(Ra)(Rb)]n-O-、-C(RaRb)-N(R)-O-或-C(RaRb)-O-N(R)-；4’-CH2-2’、4’-(CH2)2-2’、4’-(CH2)3-2’、4’-(CH2)-O-2’(LNA)；4’-(CH2)-S-2’；4’-(CH2)2-O-2’(ENA)；4’-CH(CH3)-O-2’(cEt)和4’-CH(CH2OCH3)-O-2’以及其类似物(参见，例如，2008年7月15日授权的美国专利7,399,845)；4’-C(CH3)(CH3)-O-2’及其类似物(参见，例如，2009年1月8日公布的WO2009/006478)；4’-CH2-N(OCH3)-2’及其类似物(参见，例如，2008年12月11日公布的WO2008/150729)；4’-CH2-O-N(CH3)-2’(参见，例如，2004年9月2日公布的US2004/0171570)；4’-CH2-O-N(R)-2’以及4’-CH2-N(R)-O-2’-，其中每个R独立地为H、保护基或C1-C12烷基；4’-CH2-N(R)-O-2’，其中R为H、C1-C12烷基或保护基(参见，2008年9月23日授权的美国专利7,427,672)；4’-CH2-C(H)(CH3)-2’(参见，例如，Chattopadhyaya等，J.Org.Chem.，2009，74，118-134)；以及4’-CH2-C(＝CH2)-2’及其类似物(参见，2008年12月8日公布的已公布的PCT国际申请WO 2008/154401)。
在某些实施方案中，所述4’至2’桥联独立地包含1至4个连接的基团，所述基团独立地选自以下：-[C(Ra)(Rb)]n-、-C(Ra)＝C(Rb)-、-C(Ra)＝N-、-C(＝NRa)-、-C(＝O)-、-C(＝S)-、-O-、-Si(Ra)2-、-S(＝O)x-以及-N(Ra)-；
其中：
x为0、1或2；
n为1、2、3或4；
每个Ra和Rb独立地为H、保护基、羟基、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、C5-C7脂环基、取代的C5-C7脂环基、卤素、OJ1、NJ1J2、SJ1、N3、COOJ1、酰基(C(＝O)-H)、取代的酰基、CN、磺酰基(S(＝O)2-J1)或亚磺酰基(S(＝O)-J1)；并且
每个J1和J2独立地为H、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、酰基(C(＝O)-H)、取代的酰基、杂环基、取代的杂环基、C1-C12氨基烷基、取代的C1-C12氨基烷基或保护基。
包含双环糖部分的核苷称为双环核苷或BNA。双环核苷包括但不限于如下所描绘的(A)α-L-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA、(B)β-D-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA(也称为锁核酸或LNA)、(C)亚乙基氧基(4’-(CH2)2-O-2’)BNA、(D)氨基氧基(4’-CH2-O-N(R)-2’)BNA、(E)氧氨基(4’-CH2-N(R)-O-2’)BNA、(F)甲基(亚甲基氧基)(4’-CH(CH3)-O-2’)BNA(也称为约束乙基或cEt)、(G)亚甲基-硫代基(4’-CH2-S-2’)BNA、(H)亚甲基-氨基(4’-CH2-N(R)-2’)BNA、(I)甲基碳环(4’-CH2-CH(CH3)-2’)BNA，以及(J)丙烯碳环(4’-(CH2)3-2’)BNA。
Figure BDA0003357312860004201
其中Bx为核碱基部分并且R独立地为H、保护基或C1-C12烷基。
另外的双环糖部分为本领域中已知的，例如：Singh等，Chem.Commun.，1998，4，455-456；Koshkin等，Tetrahedron，1998，54，3607-3630；Wahlestedt等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，2000，97，5633-5638；Kumar等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，1998，8，2219-2222；Singh等，J.Org.Chem.，1998，63，10035-10039；Srivastava等，J.Am.Chem.Soc.，129(26)8362-8379(2007年7月4日)；Elayadi等，Curr.OpinionInvens.Drugs，2001，2，558-561；Braasch等，Chem.Biol.，2001，8，1-7；Orum等，Curr.Opinion Mol.Ther.，
2001，3，239-243；美国专利号7,053,207、6,268,490、6,770,748、6,794,499、7,034,133、6,525,191、6,670,461和7,399,845；WO 2004/106356、WO1994/14226、WO 2005/021570和WO 2007/134181；美国专利公布号US2004/0171570、US2007/0287831和US2008/0039618；美国专利序列号12/129,154、60/989,574、61/026,995、61/026,998、61/056,564、61/086,231、61/097,787和61/099,844；以及PCT国际申请号PCT/US2008/064591、PCT/US2008/066154和PCT/US2008/068922。
在某些实施方案中，双环糖部分和掺入所述双环糖部分的核苷通过异构构型进一步定义。例如，包含4’-2’亚甲基-氧基桥联的核苷可呈α-L构型或呈β-D构型。先前，已将α-L-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)双环核苷掺入到显示反义活性的反义寡核苷酸中(Frieden等，Nucleic Acids Research，2003，21，6365-6372)。
在某些实施方案中，取代的糖部分包含一个或多个非桥联糖取代基和一个或多个桥联糖取代基(例如，5’-取代的糖和4’-2’桥联的糖)。(参见，11/22/07公布的PCT国际申请WO 2007/134181，其中LNA被例如5’-甲基或5’-乙烯基取代)。
在某些实施方案中，修饰的糖部分为糖替代物。在某些所述实施方案中，天然存在的糖的氧原子被例如硫、碳或氮原子取代。在某些所述实施方案中，所述修饰的糖部分还包含如上所述的桥联取代基和/或非桥联取代基。例如，某些糖替代物包含4’-硫原子和2’-位(参见，例如，2005年6月16日公布的已公布的美国专利申请US2005/0130923)和/或5’位上的取代。通过另外举例的方式，具有4’-2’桥联的碳环双环核苷已有所描述(参见，例如，Freier等，Nucleic Acids Research，1997，25(22)，4429-4443和Albaek等，J.Org.Chem.，2006，71，7731-7740)。
在某些实施方案中，糖替代物包含具有除了5个原子以外的环。例如，在某些实施方案中，糖替代物包含吗啉代。吗啉代化合物及其在低聚化合物中的用途已报道于许多专利和出版的文章中(参见例如：Braasch等，Biochemistry，2002，41，4503-4510；和美国专利5,698,685；5,166,315；5,185,444和5,034,506)。如在此所使用，术语“吗啉代”意指具有以下结构的糖替代物：
Figure BDA0003357312860004221
在某些实施方案中，可例如通过添加或改变来自以上吗啉代结构的各种取代基来修饰吗啉代。所述糖替代物在本文中称为“修饰的吗啉代”。
对于另一个实例，在某些实施方案中，糖替代物包含六元四氢吡喃。所述四氢吡喃可被进一步修饰或取代。包含所述修饰的四氢吡喃的核苷包括但不限于己糖醇核酸(HNA)、anitol核酸(ANA)、甘露醇核酸(MNA)(参见Leumann，CJ.Bioorg.&Med.Chem.(2002)10：841-854)、氟代HNA(F-HNA)以及具有式VI的那些化合物：
Figure BDA0003357312860004222
其中独立地对于式VI的所述至少一个四氢吡喃核苷类似物中的每一个：
Bx为核碱基部分；
T3和T4各自独立地为将四氢吡喃核苷类似物连接至反义化合物的核苷间连接基团或T3和T4中的一个为将四氢吡喃核苷类似物连接至反义化合物的核苷间连接基团并且T3和T4中的另一个为H、羟基保护基、连接的缀合物基团或5’或3’-端基；
q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自独立地为H、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；并且
R1和R2中的每一个独立地选自以下：氢、卤素、取代或未取代的烷氧基、NJ1J2、SJ1、N3、OC(＝X)J1、OC(＝X)NJ1J2、NJ3C(＝X)NJ1J2以及CN，其中X为O、S或NJ1，并且每个J1、J2和J3独立地为H或C1-C6烷基。
在某些实施方案中，提供了式VI的修饰的THP核苷，其中q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自为H。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中的至少一个不是H。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中的至少一个为甲基。在某些实施方案中，提供了式VI的THP核苷，其中R1和R2中的一个为F。在某些实施方案中，R1为氟代基并且R2为H，R1为甲氧基并且R2为H，并且R1为甲氧基乙氧基并且R2为H。
许多其它双环和三环糖替代物环系统也为本领域中已知的，其可用来修饰核苷以掺入到反义化合物中(参见，例如，综述文章：Leumann，J.C，Bioorganic&MedicinalChemistry，2002，10，841-854)。
还提供了修饰的组合，不限于如2’-F-5’-甲基取代的核苷(对于其它公开的5’，2’-双取代核苷，参见8/21/08公布的PCT国际申请WO 2008/101157)和用S替代核糖基环氧原子以及在2’-位上的进一步取代(参见2005年6月16日公布的已公布的美国专利申请US2005-0130923)或替代地双环核酸的5’-取代(参见11/22/07公布的PCT国际申请WO2007/134181，其中4’-CH2-O-2’双环核苷在5’位上被5’-甲基或5’-乙烯基进一步取代)。碳环双环核苷的合成和制备连同其低聚和生物化学研究也已有所描述(参见，例如，Srivastava等，J.Am.Chem.Soc.2007，129(26)，8362-8379)。
在某些实施方案中，本公开提供了包含修饰核苷的寡核苷酸。那些修饰核苷酸可包括修饰的糖、修饰的核碱基和/或修饰的键联。选择具体的修饰，使得所得到的寡核苷酸具有希望的特征。在某些实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个RNA样核苷。在某些实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个DNA样核苷酸。
2.某些核碱基修饰
在某些实施方案中，本公开的核苷包含一个或多个未修饰核碱基。在某些实施方案中，本公开的核苷包含一个或多个修饰核碱基。
在某些实施方案中，修饰核碱基选自以下：通用碱基、疏水碱基、混杂碱基、尺寸膨胀碱基以及如本文所定义的氟化碱基。5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和N-2、N-6和O-6取代的嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶；5-丙炔基胞嘧啶；5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基(-C≡C-CH3)尿嘧啶和胞嘧啶以及嘧啶碱基的其它炔基衍生物、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶、8-卤代基、8-氨基、8-巯基、8-硫代烷基、8-羟基和其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-卤代基具体地为5-溴、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-氨基-腺嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤和7-脱氮腺嘌呤、3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤、通用碱基、疏水碱基、混杂碱基、尺寸膨胀碱基以及如本文所定义的氟化碱基。另外的修饰核碱基包括三环嘧啶如吩噁嗪胞嘧啶([5，4-b][1，4]苯并嗪-2(3H)-酮)、吩噻嗪胞嘧啶(1H-嘧啶并[5，4-b][1，4]苯并噻嗪-2(3H)-酮)；G-夹如取代的吩噁嗪胞嘧啶(例如9-(2-氨基乙氧基)-H-嘧啶并[5，4-b][1，4]苯并嗪-2(3H)-酮)、咔唑胞嘧啶(2H-嘧啶并[4，5-b]吲哚-2-酮)、吡啶并吲哚胞嘧啶(H-吡啶并[3’，2’：4，5]吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-酮)。修饰核碱基还可包括其中嘌呤或嘧啶碱基被其它杂环例如7-脱氮-腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤、2-氨基吡啶和2-吡啶酮替代的那些。另外的核碱基包括公开于美国专利号3,687,808中的那些、公开于The Concise Encyclopedia Of Polymer Science AndEngineering，Kroschwitz，J.I.编著，John Wiley&Sons，1990，858-859中的那些；由Englisch等，Angewandte Chemie，国际版，1991，30，613公开的那些；以及由Sanghvi，Y.S.，第15章，Antisense Research and Applications，Crooke，S.T.和Lebleu，B.编著，CRCPress，1993，273-288公开的那些。
教导某些上述修饰核碱基以及其它修饰核碱基的制备的代表性美国专利包括但不限于U.S.3,687,808；4,845,205；5,130,302；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121；5,596,091；5,614,617；5,645,985；5,681,941；5,750,692；5,763,588；5,830,653和6,005,096，某些所述美国专利与本申请共有，并且所述美国专利中的每一个均以引用的方式整体并入本文。
3.某些核苷间键联
在某些实施方案中，本公开提供了包含连接核苷的寡核苷酸。在所述实施方案中，核苷可使用任何核苷间键联连接在一起。通过磷原子的存在或不存在来定义两大类核苷间连接基团。代表性含磷核苷间键联包括但不限于磷酸二酯(PO)、磷酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯以及硫代磷酸酯(PS)。代表性的不含磷的核苷间连接基团包括但不限于亚甲基甲基亚氨基(-CH2-N(CH3)-O-CH2-)、硫二酯(-O-C(O)-S-)、氨基甲硫羰酸酯(-O-C(O)(NH)-S-)；硅氧烷(-O-Si(H)2-O-)；以及N，N’-二甲基肼(-CH2-N(CH3)-N(CH3)-)。与天然磷酸二酯键联相比，修饰的键联可用来改变(通常为增加)寡核苷酸的核酸酶抗性。在某些实施方案中，具有手性原子的核苷间键联可制备为外消旋混合物或制备为单独的对映异构体。代表性手性键联包括但不限于烷基膦酸酯和硫代磷酸酯。制备含磷和不含磷核苷间键联的方法是本领域技术人员熟知的。
本文描述的寡核苷酸含有一个或多个不对称中心并且因此产生对映异构体、非对映异构体和可根据绝对立体化学定义为(R)或(S)、或如对于糖端基异构体或定义为(D)或(L)如对于氨基酸等的其它立体异构构型。在本文提供的反义化合物中包括所有所述可能的异构体以及其外消旋形式和光学纯形式。
中性核苷间键联包括但不限于磷酸三酯、甲基膦酸酯、MMI(3’-CH2-N(CH3)-O-5’)、酰胺-3(3’-CH2-C(＝O)-N(H)-5’)、酰胺-4(3’-CH2-N(H)-C(＝O)-5’)、甲乙缩醛(3’-O-CH2-O-5’)以及硫代甲乙缩醛(3’-S-CH2-O-5’)。另外的中性核苷间键联包括包含硅氧烷(二烷基硅氧烷)、羧酸酯、羧酰胺、硫化物、磺酸酯以及酰胺的非离子键联(参见例如：Carbohydrate Modifications in Antisense Research；Y.S.Sanghvi和P.D.Cook编著，ACS座谈会系列580；第3和4章，40-65)。另外的中性核苷间键联包括包含混合的N、O、S和CH2组成部分的非离子键联。
4.某些基序
在某些实施方案中，反义寡核苷酸包含一个或多个修饰核苷(例如，包含修饰的糖和/或修饰的核碱基的核苷)和/或一个或多个修饰的核苷间键联。寡核苷酸上的所述修饰的模式在本文中称为基序。在某些实施方案中，糖、核碱基和键联基序彼此独立。
a.某些糖基序
在某些实施方案中，寡核苷酸包含以限定的模式或糖修饰基序沿着寡核苷酸或其区域布置的一种或多种类型的修饰的糖部分和/或天然存在的糖部分。所述基序可包括本文讨论的任何糖修饰和/或其它已知的糖修饰。
在某些实施方案中，寡核苷酸包含具有缺口聚物糖基序的区域或由所述区域组成，所述缺口聚物糖基序包含两个外部区域或“翼”以及中心或内部区域或“缺口”。缺口聚物糖基序的三个区域(5’-翼、缺口和3’-翼)形成连续的核苷序列，其中每个翼的核苷的至少一些糖部分不同于缺口的核苷的至少一些糖部分。确切来说，每个翼的核苷的至少最接近缺口的糖部分(5’-翼的最3’核苷和3’-翼的最5’核苷)不同于邻近缺口核苷的糖部分，从而限定了翼与缺口之间的边界。在某些实施方案中，缺口内的糖部分彼此相同。在某些实施方案中，缺口包括一个或多个核苷，所述核苷具有不同于缺口的一个或多个其它核苷的糖部分的糖部分。在某些实施方案中，两翼的糖基序彼此相同(对称的糖缺口聚物)。在某些实施方案中，5’-翼的糖基序不同于3’-翼的糖基序(不对称的糖缺口聚物)。
i.某些5’-翼
在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由1至8个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由1至7个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由1至6个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由1至5个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由2至5个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由3至5个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由4或5个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由1至4个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由1至3个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由1或2个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由2至4个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由2或3个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由3或4个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由1个核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由2个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由3个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由4个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由5个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼由6个连接核苷组成。
在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个双环核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少两个双环核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少三个双环核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少四个双环核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个约束乙基核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个LNA核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼的每个核苷均为双环核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼的每个核苷均为约束乙基核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼的每个核苷均为LNA核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼的每个核苷均为非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼的每个核苷均为2’-取代的核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼的每个核苷均为2’-MOE核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼的每个核苷均为2’-OMe核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼的每个核苷均为2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个核糖核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼的每个核苷均为核糖核苷。在某些实施方案中，5’-翼的核苷中的一个、多于一个、或每一个为RNA样核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个双环核苷和至少一个非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个双环核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个双环核苷和至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个双环核苷和至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个双环核苷和至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个约束乙基核苷和至少一个非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的5’-翼包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-脱氧核苷。
ii.某些3’-翼
在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由1至8个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由1至7个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由1至6个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由1至5个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由2至5个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由3至5个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由4或5个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由1至4个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由1至3个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由1或2个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由2至4个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由2或3个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由3或4个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由1个核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由2个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由3个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由4个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由5个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼由6个连接核苷组成。
在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个双环核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个约束乙基核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个LNA核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼的每个核苷均为双环核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼的每个核苷均为约束乙基核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼的每个核苷均为LNA核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少两个非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少三个非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少四个非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼的每个核苷均为非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼的每个核苷均为2’-取代的核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼的每个核苷均为2’-MOE核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼的每个核苷均为2’-OMe核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼的每个核苷均为2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个核糖核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼的每个核苷均为核糖核苷。在某些实施方案中，5’-翼的核苷中的一个、多于一个、或每一个为RNA样核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个双环核苷和至少一个非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个双环核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个双环核苷和至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个双环核苷和至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个双环核苷和至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个约束乙基核苷和至少一个非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个约束乙基核苷和至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个LNA核苷和至少一个非双环修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-取代的核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-MOE核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-OMe核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个LNA核苷和至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个双环核苷、至少一个非双环修饰核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个约束乙基核苷、至少一个非双环修饰核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个LNA核苷、至少一个非双环修饰核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个双环核苷、至少一个2’-取代的核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个约束乙基核苷、至少一个2’-取代的核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个LNA核苷、至少一个2’-取代的核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个双环核苷、至少一个2’-MOE核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个约束乙基核苷、至少一个2’-MOE核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个LNA核苷、至少一个2’-MOE核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。
在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个双环核苷、至少一个2’-OMe核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个约束乙基核苷、至少一个2’-OMe核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的3’-翼包含至少一个LNA核苷、至少一个2’-OMe核苷以及至少一个2’-脱氧核苷。
iii.某些中心区(缺口)
在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由6至20个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由6至15个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由6至12个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由6至10个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由6至9个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由6至8个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由6或7个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由7至10个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由7至9个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由7或8个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由8至10个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由8或9个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由6个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由7个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由8个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由9个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由10个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由11个连接核苷组成。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口由12个连接核苷组成。
在某些实施方案中，缺口聚物的缺口的每个核苷均为2’-脱氧核苷。在某些实施方案中，缺口包含一个或多个修饰核苷。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口的每个核苷均为2’-脱氧核苷或为“DNA样”的修饰核苷。在所述实施方案中，“DNA样”意指核苷具有与DNA类似的特征，使得包含缺口聚物和RNA分子的双链体能够激活RNA酶H。例如，在某些条件下，2’-(ara)-F已显示支持RNA酶H激活，并且因此为DNA样的。在某些实施方案中，缺口聚物的缺口的一个或多个核苷不为2’-脱氧核苷并且不为DNA样的。在某些所述实施方案中，尽管如此，缺口聚物仍然支持RNA酶H激活(例如，凭借非DNA核苷的数目或位置)。
在某些实施方案中，缺口包含被一个或多个修饰核苷中断的未修饰的2’-脱氧核苷的链段(stretch)，从而产生三个子区(两个具有一个或多个2’-脱氧核苷的链段和一个具有一个或多个中断的修饰核苷的链段)。在某些实施方案中，未修饰的2’-脱氧核苷的链段不长于5、6或7个核苷。在某些实施方案中，通过使用短缺口区来实现所述短链段。在某些实施方案中，通过中断较长的缺口区来实现短链段。
在某些实施方案中，缺口包含一个或多个修饰核苷。在某些实施方案中，缺口包含选自以下的一个或多个修饰核苷：cEt、FHNA、LNA和2-硫代-胸苷。在某些实施方案中，缺口包含一个修饰核苷。在某些实施方案中，缺口包含选自以下的5’-取代的糖部分：5’-Me和5’-(R)-Me。在某些实施方案中，缺口包含两个修饰核苷。在某些实施方案中，缺口包含三个修饰核苷。在某些实施方案中，缺口包含四个修饰核苷。在某些实施方案中，缺口包含两个或更多个修饰核苷并且每个修饰核苷是相同的。在某些实施方案中，缺口包含两个或更多个修饰核苷并且每个修饰核苷是不同的。
在某些实施方案中，缺口包含一个或多个修饰的键联。在某些实施方案中，缺口包含一个或多个甲基膦酸酯键联。在某些实施方案中，缺口包含两个或更多个修饰的键联。在某些实施方案中，缺口包含一个或多个修饰的键联和一个或多个修饰的核苷。在某些实施方案中，缺口包含一个修饰的键联和一个修饰的核苷。在某些实施方案中，缺口包含两个修饰的键联和两个或更多个修饰的核苷。
b.某些核苷间键联基序
在某些实施方案中，寡核苷酸包含以限定的模式或修饰的核苷间键联基序沿着寡核苷酸或其区域布置的修饰的核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含具有交替的核苷间键联基序的区域。在某些实施方案中，本公开的寡核苷酸包含具有统一修饰的核苷间键联的区域。在某些所述实施方案中，寡核苷酸包含通过硫代磷酸酯核苷间键联统一连接的区域。在某些实施方案中，寡核苷酸通过硫代磷酸酯核苷间键联统一连接。在某些实施方案中，寡核苷酸的每个核苷间键联选自磷酸二酯和硫代磷酸酯。在某些实施方案中，寡核苷酸的每个核苷间键联选自磷酸二酯和硫代磷酸酯并且至少一个核苷间键联为硫代磷酸酯。
在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少6个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少7个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少8个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少9个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少10个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少11个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少12个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少13个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少14个硫代磷酸酯核苷间键联。
在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个具有至少6个连续的硫代磷酸酯核苷间键联的嵌段。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个具有至少7个连续的硫代磷酸酯核苷间键联的嵌段。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个具有至少8个连续的硫代磷酸酯核苷间键联的嵌段。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个具有至少9个连续的硫代磷酸酯核苷间键联的嵌段。在某些实施方案中，寡核苷酸包含至少一个具有至少10个连续的硫代磷酸酯核苷间键联的嵌段。在某些实施方案中，寡核苷酸至少包含具有至少一种12个连续的硫代磷酸酯核苷间键联的嵌段。在某些所述实施方案中，至少一个所述嵌段位于寡核苷酸的3’末端。在某些所述实施方案中，至少一个所述嵌段位于寡核苷酸的3’末端的3个核苷内。在某些实施方案中，寡核苷酸包含少于15个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含少于14个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含少于13个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含少于12个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含少于11个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含少于10个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含少于9个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含少于8个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含少于7个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含少于6个硫代磷酸酯核苷间键联。在某些实施方案中，寡核苷酸包含少于5个硫代磷酸酯核苷间键联。
c.某些核碱基修饰基序
在某些实施方案中，寡核苷酸包含对以限定的模式或核碱基修饰基序沿着寡核苷酸或其区域布置的核碱基的化学修饰。在某些所述实施方案中，核碱基修饰以有缺口的基序布置。在某些实施方案中，核碱基修饰以交替基序布置。在某些实施方案中，每个核碱基均为修饰的。在某些实施方案中，没有一个核碱基为化学修饰的。
在某些实施方案中，寡核苷酸包含修饰核碱基的嵌段。在某些所述实施方案中，嵌段处于寡核苷酸的3’-末端。在某些实施方案中，嵌段在寡核苷酸的3’-末端的3个核苷酸内。在某些所述实施方案中，嵌段处于寡核苷酸的5’-末端。在某些实施方案中，嵌段在寡核苷酸的5’-末端的3个核苷酸内。
在某些实施方案中，核碱基修饰随寡核苷酸的具体位置上的天然碱基变化。例如，在某些实施方案中，寡核苷酸中的每个嘌呤或每个嘧啶均为修饰的。在某些实施方案中，每个腺嘌呤均为修饰的。在某些实施方案中，每个鸟嘌呤均为修饰的。在某些实施方案中，每个胸腺嘧啶均为修饰的。在某些实施方案中，每个胞嘧啶均为修饰的。在某些实施方案中，每个尿嘧啶均为修饰的。
在某些实施方案中，寡核苷酸中的一些、所有或没有一个胞嘧啶部分为5-甲基胞嘧啶部分。在本文中，5-甲基胞嘧啶不为“修饰核碱基”。因此，除非另外指出，否则未修饰的核碱基包括具有5-甲基的胞嘧啶残基和缺乏5甲基的那些胞嘧啶残基。在某些实施方案中，指定了所有或一些胞嘧啶核碱基的甲基化状态。
在某些实施方案中，对核碱基的化学修饰包括将某些缀合物基团连接至核碱基。在某些实施方案中，寡核苷酸中的每个嘌呤或每个嘧啶可任选地被修饰以包含缀合物基团。
d.某些总长度
在某些实施方案中，本公开提供了具有各种长度范围中的任何一个的寡核苷酸。在某些实施方案中，寡核苷酸由X至Y个连接核苷组成，其中X表示范围内的最小核苷数并且Y表示范围内的最大核苷数。在某些所述实施方案中，X和Y各自独立地选自：8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49和50；前提是X≤Y。例如，在某些实施方案中，寡核苷酸可由8至9、8至10、8至11、8至12、8至13、8至14、8至15、8至16、8至17、8至18、8至19、8至20、8至21、8至22、8至23、8至24、8至25、8至26、8至27、8至28、8至29、8至30、9至10、9至11、9至12、9至13、9至14、9至15、9至16、9至17、9至18、9至19、9至20、9至21、9至22、9至23、9至24、9至25、9至26、9至27、9至28、9至29、9至30、10至11、10至12、10至13、10至14、10至15、10至16、10至17、10至18、10至19、10至20、10至21、10至22、10至23、10至24、10至25、10至26、10至27、10至28、10至29、10至30、11至12、11至13、11至14、11至15、11至16、11至17、11至18、11至19、11至20、11至21、11至22、11至23、11至24、11至25、11至26、11至27、11至28、11至29、11至30、12至13、12至14、12至15、12至16、12至17、12至18、12至19、12至20、12至21、12至22、12至23、12至24、12至25、12至26、12至27、12至28、12至29、12至30、13至14、13至15、13至16、13至17、13至18、13至19、13至20、13至21、13至22、13至23、13至24、13至25、13至26、13至27、13至28、13至29、13至30、14至15、14至16、14至17、14至18、14至19、14至20、14至21、14至22、14至23、14至24、14至25、14至26、14至27、14至28、14至29、14至30、15至16、15至17、15至18、15至19、15至20、15至21、15至22、15至23、15至24、15至25、15至26、15至27、15至28、15至29、15至30、16至17、16至18、16至19、16至20、16至21、16至22、16至23、16至24、16至25、16至26、16至27、16至28、16至29、16至30、17至18、17至19、17至20、17至21、17至22、17至23、17至24、17至25、17至26、17至27、17至28、17至29、17至30、18至19、18至20、18至21、18至22、18至23、18至24、18至25、18至26、18至27、18至28、18至29、18至30、19至20、19至21、19至22、19至23、19至24、19至25、19至26、19至29、19至28、19至29、19至30、20至21、20至22、20至23、20至24、20至25、20至26、20至27、20至28、20至29、20至30、21至22、21至23、21至24、21至25、21至26、21至27、21至28、21至29、21至30、22至23、22至24、22至25、22至26、22至27、22至28、22至29、22至30、23至24、23至25、23至26、23至27、23至28、23至29、23至30、24至25、24至26、24至27、24至28、24至29、24至30、25至26、25至27、25至28、25至29、25至30、26至27、26至28、26至29、26至30、27至28、27至29、27至30、28至29、28至30或29至30个连接核苷组成。在其中化合物的寡核苷酸的核苷数限制至一定范围或具体数字的实施方案中，化合物仍然还可包含另外的其它取代基。例如，包含8-30个核苷的寡核苷酸不包括具有31个核苷的寡核苷酸，但是，除非另外指出，否则这样的寡核苷酸还可包含例如一个或多个缀合物基团、端基或其它取代基。
另外，在通过总长度范围和通过具有指定长度的区域来描述寡核苷酸时并且在区域的指定长度的总和小于总长度范围的上限时，寡核苷酸可具有超出指定区域的那些核苷的另外的核苷，前提是核苷的总数不超过总长度范围的上限。
5.某些反义寡核苷酸化学基序
在某些实施方案中，反义寡核苷酸的化学结构特征通过其糖基序、核苷间键联基序、核碱基修饰基序和总长度来表征。在某些实施方案中，所述参数各自彼此独立。因此，具有缺口聚物糖基序的寡核苷酸的每个核苷间键联均可为修饰或未修饰的并且可或可不遵循糖修饰的缺口聚物修饰模式。因此，糖-缺口聚物的翼区内的核苷间键联可为彼此相同或不同的，并且可与缺口区的核苷间键联相同或不同。同样，所述糖-缺口聚物寡核苷酸可包含一个或多个独立于糖修饰的缺口聚物模式的修饰核碱基。本领域技术人员将了解，可将所述基序组合以产生各种寡核苷酸。
在某些实施方案中，核苷间键联和核苷修饰的选择彼此之间不是独立的。
i.某些序列和靶标
在某些实施方案中，本发明提供了具有与靶核酸互补的序列的反义寡核苷酸。所述反义化合物能够与靶核酸杂交，产生至少一种反义活性。在某些实施方案中，反义化合物与一种或多种靶核酸特异性杂交。在某些实施方案中，特异性杂交的反义化合物具有核碱基序列，所述核碱基序列包含与靶核酸具有足够互补性以允许杂交和产生反义活性并且与任何非靶标具有不足够的互补性以便在希望特异性杂交的条件下(例如，在用于体内或治疗用途的生理条件下，和在体外测定的情况下进行测定的条件下)避免或减少与非靶核酸序列的非特异性杂交的区域。在某些实施方案中，寡核苷酸在靶标与非靶标之间为选择性的，即使靶标和非靶标均包含靶序列。在所述实施方案中，选择性可由与另一种核酸分子相比一种核酸分子的靶区域的相对可接近性造成。
在某些实施方案中，本公开提供了包含寡核苷酸的反义化合物，所述寡核苷酸在寡核苷酸的整个长度上与靶核酸完全互补。在某些实施方案中，寡核苷酸与靶核酸99％互补。在某些实施方案中，寡核苷酸与靶核酸95％互补。在某些实施方案中，所述寡核苷酸与靶核酸90％互补。
在某些实施方案中，所述寡核苷酸与靶核酸85％互补。在某些实施方案中，所述寡核苷酸与靶核酸80％互补。在某些实施方案中，反义化合物包含与靶核酸完全互补并且在寡核苷酸的整个长度上与靶核酸至少80％互补的区域。在某些所述实施方案中，具有完全互补性的区域的长度为6至14个核碱基。
在某些实施方案中，寡核苷酸包含杂交区和末端区。在某些所述实施方案中，杂交区由12-30个连接核苷组成并且与靶核酸完全互补。在某些实施方案中，相对于靶核酸，杂交区包括一个错配。在某些实施方案中，相对于靶核酸，杂交区包括两个错配。在某些实施方案中，相对于靶核酸，杂交区包括三个错配。在某些实施方案中，末端区由1-4个末端核苷组成。在某些实施方案中，末端核苷处于3’末端。在某些实施方案中，一个或多个末端核苷不与靶核酸互补。
反义机制包括涉及寡核苷酸与靶核酸的杂交的任何机制，其中杂交产生生物作用。在某些实施方案中，所述杂交导致靶核酸降解或占位并伴有细胞机器的抑制或刺激，涉及例如靶核酸的翻译、转录或剪接。
涉及靶RNA的降解的一种类型的反义机制为RNA酶H介导的反义。RNA酶H为裂解RNA：DNA双链体的RNA链的细胞核酸内切酶。本领域已知“DNA样”的单链反义化合物在哺乳动物细胞中引发RNA酶H活性。因此，RNA酶H的激活导致RNA靶标的裂解，从而极大地增强了基因表达的DNA样寡核苷酸介导的抑制的效率。
在某些实施方案中，缀合物基团包含可裂解部分。在某些实施方案中，缀合物基团包含一个或多个可裂解键。在某些实施方案中，缀合物基团包含接头。在某些实施方案中，接头包含蛋白质结合部分。在某些实施方案中，缀合物基团包含细胞靶向部分(也称为细胞靶向基团)。在某些实施方案中，细胞靶向部分包含支链基团。在某些实施方案中，细胞靶向部分包含一个或多个系链。在某些实施方案中，细胞靶向部分包含碳水化合物或碳水化合物聚簇。
ii.某些可裂解部分
在某些实施方案中，可裂解部分为可裂解键。在某些实施方案中，可裂解部分包含可裂解键。在某些实施方案中，缀合物基团包含可裂解部分。在某些所述实施方案中，可裂解部分连接至反义寡核苷酸。在某些所述实施方案中，可裂解部分直接连接至细胞靶向部分。在某些所述实施方案中，可裂解部分连接至缀合物接头。在某些实施方案中，可裂解部分包含磷酸酯或磷酸二酯。在某些实施方案中，可裂解部分为可裂解核苷或核苷类似物。在某些实施方案中，核苷或核苷类似物包含选自以下的任选保护的杂环碱基：嘌呤、取代的嘌呤、嘧啶或取代的嘧啶。在某些实施方案中，可裂解部分为包含选自以下的任何保护的杂环碱基的核苷：尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、4-N-苯甲酰基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、4-N-苯甲酰基-5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤、6-N-苯甲酰基腺嘌呤、鸟嘌呤以及2-N-异丁酰基鸟嘌呤。在某些实施方案中，可裂解部分为2’-脱氧核苷，所述2’-脱氧核苷通过磷酸二酯键联连接至反义寡核苷酸的3’位并且通过磷酸二酯或硫代磷酸酯键联连接至接头。在某些实施方案中，可裂解部分为2’-脱氧腺苷，所述2’-脱氧腺苷通过磷酸二酯键联连接至反义寡核苷酸的3’位并且通过磷酸二酯或硫代磷酸酯键联连接至接头。在某些实施方案中，可裂解部分为2’-脱氧腺苷，所述2’-脱氧腺苷通过磷酸二酯键联连接至反义寡核苷酸的3’位并且通过磷酸二酯键联连接至接头。
在某些实施方案中，可裂解部分连接至反义寡核苷酸的3’位。在某些实施方案中，可裂解部分连接至反义寡核苷酸的5’位。在某些实施方案中，可裂解部分连接至反义寡核苷酸的2’位。在某些实施方案中，可裂解部分通过磷酸二酯键联连接至反义寡核苷酸。在某些实施方案中，可裂解部分通过磷酸二酯或硫代磷酸酯键联连接至接头。在某些实施方案中，可裂解部分通过磷酸二酯键联连接至接头。在某些实施方案中，缀合物基团不包括可裂解部分。
在某些实施方案中，在将复合物施用至动物之后，仅在被靶细胞内化之后，可裂解部分才被裂解。在细胞内部，可裂解部分裂解，从而释放活性反义寡核苷酸。虽然不希望受理论的束缚，但是据信可裂解部分在细胞内被一种或多种核酸酶裂解。在某些实施方案中，一种或多种核酸酶裂解可裂解部分与接头之间的磷酸二酯键联。在某些实施方案中，可裂解部分具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004421
其中Bx、Bx1、Bx2和Bx3中的每一个独立地为杂环碱基部分。在某些实施方案中，可裂解部分具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004422
iii.某些接头
在某些实施方案中，缀合物基团包含接头。在某些所述实施方案中，接头共价结合至可裂解部分。在某些所述实施方案中，接头共价结合至反义寡核苷酸。在某些实施方案中，接头共价结合至细胞靶向部分。在某些实施方案中，接头还包含对固体载体的共价连接。在某些实施方案中，接头还包含对蛋白质结合部分的共价连接。在某些实施方案中，接头还包含对固体载体的共价连接并且还包含对蛋白质结合部分的共价连接。在某些实施方案中，接头包括多个用于连接束缚配体(tethered ligand)的位置。在某些实施方案中，接头包括多个用于连接束缚配体的位置并且不连接至支链基团。在某些实施方案中，接头还包含一个或多个可裂解键。在某些实施方案中，缀合物基团不包括接头。
在某些实施方案中，接头包括至少线性基团，所述线性基团包含选自以下的基团：烷基、酰胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚(-S-)和羟氨基(-O-N(H)-)。在某些实施方案中，线性基团包含选自以下的基团：烷基、酰胺和醚基团。在某些实施方案中，线性基团包含选自烷基和醚基团的基团。在某些实施方案中，线性基团包含至少一个磷连接基团。在某些实施方案中，线性基团包含至少一个磷酸二酯基团。在某些实施方案中，线性基团包括至少一个中性连接基团。在某些实施方案中，线性基团共价连接至细胞靶向部分和可裂解部分。在某些实施方案中，线性基团共价连接至细胞靶向部分和反义寡核苷酸。在某些实施方案中，线性基团共价连接至细胞靶向部分、可裂解部分和固体载体。在某些实施方案中，线性基团共价连接至细胞靶向部分、可裂解部分、固体载体和蛋白质结合部分。在某些实施方案中，线性基团包括一个或多个可裂解键。
在某些实施方案中，接头包括共价连接至支架基团的线性基团。在某些实施方案中，支架包括支链脂肪族基团，所述支链脂肪族基团包含选自以下的基团：烷基、酰胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚和羟氨基。在某些实施方案中，支架包括支链脂肪族基团，所述支链脂肪族基团包含选自以下的基团：烷基、酰胺和醚基团。在某些实施方案中，支架包括至少一个单环系统或多环系统。在某些实施方案中，支架包括至少两个单环系统或多环系统。在某些实施方案中，线性基团共价连接至支架基团并且支架基团共价连接至可裂解部分和接头。在某些实施方案中，线性基团共价连接至支架基团并且支架基团共价连接至可裂解部分、接头和固体载体。在某些实施方案中，线性基团共价连接至支架基团并且支架基团共价连接至可裂解部分、接头和蛋白质结合部分。在某些实施方案中，线性基团共价连接至支架基团并且支架基团共价连接至可裂解部分、接头、蛋白质结合部分和固体载体。在某些实施方案中，支架基团包括一个或多个可裂解键。
在某些实施方案中，接头包括蛋白质结合部分。在某些实施方案中，蛋白质结合部分为脂质，例如像包括但不限于：胆固醇、胆酸、金刚烷乙酸、1-芘丁酸、二氢睾酮、1，3-二-O(十六烷基)甘油、香叶基氧基己基、十六烷基甘油、冰片、甲醇、1，3-丙二醇、十七烷基、棕榈酸、肉豆蔻酸、O3-(油酰基)石胆酸、O3-(油酰基)胆烯酸、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪)、维生素(例如，叶酸、维生素A、维生素E、生物素、吡哆醛)、肽、碳水化合物(例如，单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖、多糖)、溶内体组分、类固醇(例如，熊果醇、龙舌兰皂苷配基、薯蓣皂苷配基)、萜烯(例如，三萜烯，例如萨洒皂草配基、无羁萜、表无羁萜醇衍生的石胆酸)或阳离子脂质。在某些实施方案中，蛋白质结合部分为C16至C22长链饱和或不饱和的脂肪酸、胆固醇、胆酸、维生素E、金刚烷或1-五氟丙基。
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004451
其中每个n独立地为1至20；并且p为1至6。
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004461
其中每个n独立地为1至20。
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004471
Figure BDA0003357312860004472
以及
Figure BDA0003357312860004473
其中n为1至20。
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004481
Figure BDA0003357312860004482
以及
Figure BDA0003357312860004483
其中每个L独立地为磷连接基团或中性连接基团；并且
每个n独立地为1至20。
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004491
Figure BDA0003357312860004501
以及
Figure BDA0003357312860004502
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004503
Figure BDA0003357312860004504
以及
Figure BDA0003357312860004505
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004511
Figure BDA0003357312860004512
以及
Figure BDA0003357312860004513
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004514
其中n为1至20。
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004521
以及
Figure BDA0003357312860004522
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004523
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004524
在某些实施方案中，缀合物接头具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004525
在某些实施方案中，缀合物接头具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004526
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004527
在某些实施方案中，接头具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004531
其中每个n独立地为0、1、2、3、4、5、6或7。
iv.某些细胞靶向部分
在某些实施方案中，缀合物基团包含细胞靶向部分。某些所述细胞靶向部分使反义化合物的细胞摄取增加。在某些实施方案中，细胞靶向部分包含支链基团、一个或多个系链和一个或多个配体。在某些实施方案中，细胞靶向部分包含支链基团、一个或多个系链、一个或多个配体以及一个或多个可裂解键。
1.某些支链基团
在某些实施方案中，缀合物基团包含靶向部分，所述靶向部分包含支链基团和至少两个束缚配体。在某些实施方案中，支链基团连接缀合物接头。在某些实施方案中，支链基团连接可裂解部分。在某些实施方案中，支链基团连接反义寡核苷酸。在某些实施方案中，支链基团共价连接至接头和每个束缚配体。在某些实施方案中，支链基团包含支链脂肪族基团，所述支链脂肪族基团包含选自以下的基团：烷基、酰胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚和羟氨基。在某些实施方案中，支链基团包含选自以下的基团：烷基、酰胺和醚基团。在某些实施方案中，支链基团包含选自烷基和醚基团的基团。在某些实施方案中，支链基团包含单环系统或多环系统。在某些实施方案中，支链基团包含一个或多个可裂解键。在某些实施方案中，缀合物基团不包括支链基团。
在某些实施方案中，支链基团具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004541
其中每个n独立地为1至20；
j为1至3；并且
m为2至6。
在某些实施方案中，支链基团具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004551
其中每个n独立地为1至20；并且
m为2至6。
在某些实施方案中，支链基团具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004561
Figure BDA0003357312860004562
以及
Figure BDA0003357312860004563
在某些实施方案中，支链基团具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004564
其中每个A1独立地为O、S、C＝O或NH；并且
每个n独立地为1至20。
在某些实施方案中，支链基团具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004571
以及
Figure BDA0003357312860004572
其中每个A1独立地为O、S、C＝O或NH；并且
每个n独立地为1至20。
在某些实施方案中，支链基团具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004573
其中A1为O、S、C＝O或NH；并且
每个n独立地为1至20。
在某些实施方案中，支链基团具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004574
在某些实施方案中，支链基团具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004575
在某些实施方案中，支链基团具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004581
2.某些系链
在某些实施方案中，缀合物基团包含共价连接至支链基团的一个或多个系链。在某些实施方案中，缀合物基团包含共价连接至连接基团的一个或多个系链。在某些实施方案中，每个系链为包含选自以下的一个或多个基团的线性脂肪族基团：处于任何组合的烷基、醚、硫醚、二硫化物、酰胺和聚乙二醇基团。在某些实施方案中，每个系链为包含选自以下的一个或多个基团的线性脂肪族基团：处于任何组合的烷基、取代的烷基、醚、硫醚、二硫化物、酰胺、磷酸二酯和聚乙二醇基团。在某些实施方案中，每个系链为包含选自以下的一个或多个基团的线性脂肪族基团：处于任何组合的烷基、醚和酰胺基团。在某些实施方案中，每个系链为包含选自以下的一个或多个基团的线性脂肪族基团：处于任何组合的烷基、取代的烷基、磷酸二酯、醚和酰胺基团。在某些实施方案中，每个系链为包含选自以下的一个或多个基团的线性脂肪族基团：处于任何组合的烷基和磷酸二酯。在某些实施方案中，每个系链包含至少一个磷连接基团或中性连接基团。
在某些实施方案中，系链包括一个或多个可裂解键。在某些实施方案中，系链通过酰胺或醚基团连接至支链基团。在某些实施方案中，系链通过磷酸二酯基团连接至支链基团。在某些实施方案中，系链通过磷连接基团或中性连接基团连接至支链基团。在某些实施方案中，系链通过醚基团连接至支链基团。在某些实施方案中，系链通过酰胺或醚基团连接至配体。在某些实施方案中，系链通过醚基团连接至配体。在某些实施方案中，系链通过酰胺或醚基团连接至配体。在某些实施方案中，系链通过醚基团连接至配体。
在某些实施方案中，每个系链在配体与支链基团之间包含约8至约20个原子的链长。在某些实施方案中，每个系链基团在配体与支链基团之间包含约10至约18个原子的链长。在某些实施方案中，每个系链基团包含约13个原子的链长。
在某些实施方案中，系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004591
Figure BDA0003357312860004592
以及
Figure BDA0003357312860004593
其中每个n独立地为1至20；并且
每个p为1至约6。
在某些实施方案中，系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004594
Figure BDA0003357312860004595
以及
Figure BDA0003357312860004596
在某些实施方案中，系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004597
其中每个n独立地为1至20。
在某些实施方案中，系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004601
其中L为磷连接基团或中性连接基团；
Z1为C(＝O)O-R2；
Z2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；
R2为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基；并且
每个m1独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m1大于0。
在某些实施方案中，系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004602
在某些实施方案中，系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004603
其中Z2为H或CH3；并且
每个m1独立地为0至20，其中对于每个系链，至少一个m1大于0。
在某些实施方案中，系链具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004611
其中每个n独立地为0、1、2、3、4、5、6或7。
在某些实施方案中，系链包含磷连接基团。在某些实施方案中，系链不包含任何酰胺键。在某些实施方案中，系链包含磷连接基团并且不包含任何酰胺键。
3.某些配体
在某些实施方案中，本公开提供了配体，其中每个配体共价连接至系链。在某些实施方案中，每个配体经过选择以对靶细胞上的至少一种类型的受体具有亲合力。在某些实施方案中，选择对哺乳动物肝脏细胞表面上的至少一种类型的受体具有亲合力的配体。在某些实施方案中，选择对肝去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)具有亲合力的配体。在某些实施方案中，每个配体为碳水化合物。在某些实施方案中，每个配体独立地选自半乳糖、N-乙酰基半乳糖胺、甘露糖、葡萄糖、葡糖胺以及岩藻糖。在某些实施方案中，每个配体为N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)。在某些实施方案中，靶向部分包含2至6个配体。在某些实施方案中，靶向部分包含3个配体。在某些实施方案中，靶向部分包含3个N-乙酰基半乳糖胺配体。
在某些实施方案中，配体为碳水化合物、碳水化合物衍生物、改性的碳水化合物、多价碳水化合物聚簇、多糖、改性的多糖或多糖衍生物。在某些实施方案中，配体为氨基糖或硫代糖。例如，氨基糖可选自任何数目的本领域中已知的化合物，例如葡糖胺、唾液酸、α-D-半乳糖胺、N-乙酰基半乳糖胺、2-乙酰氨基-2-脱氧-D-吡喃半乳糖(GalNAc)、2-氨基-3-O-[(R)-1-羧乙基]-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖(β-胞壁酸)、2-脱氧-2-甲基氨基-L-吡喃葡萄糖、4，6-二脱氧-4-甲酰氨基-2，3-二-O-甲基-D-吡喃甘露糖、2-脱氧-2-磺氨基-D-吡喃葡萄糖和N-磺基-D-葡糖胺以及N-乙醇酰基-α-神经氨酸。例如，硫代糖可选自由以下组成的组：5-硫代-β-D-吡喃葡萄糖、2，3，4-三-O-乙酰基-1-硫代-6-O-三苯甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷甲酯、4-硫代-β-D-吡喃半乳糖以及3，4，6，7-四-O-乙酰基-2-脱氧-1，5-二硫代-α-D-葡糖-庚吡喃糖苷乙酯。
在某些实施方案中，“GalNac”或“Gal-NAc”是指2-(乙酰氨基)-2-脱氧-D-吡喃半乳糖，在文献中通常称为N-乙酰基半乳糖胺。在某些实施方案中，“N-乙酰基半乳糖胺”是指2-(乙酰氨基)-2-脱氧-D-吡喃半乳糖。在某些实施方案中，“GalNac”或“Gal-NAc”是指2-(乙酰氨基)-2-脱氧-D-吡喃半乳糖。在某些实施方案中，“GalNac”或“Gal-NAc”是指2-(乙酰氨基)-2-脱氧-D-吡喃半乳糖，其包括β形式：2-(乙酰氨基)-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖和α形式：2-(乙酰氨基)-2-脱氧-D-吡喃半乳糖。在某些实施方案中，β形式：2-(乙酰氨基)-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖和α形式：2-(乙酰氨基)-2-脱氧-D-吡喃半乳糖可互换使用。因此，在其中描绘一种形式的结构中，这些结构也意图包括另一种形式。例如，在针对α形式：2-(乙酰氨基)-2-脱氧-D-吡喃半乳糖示出结构时，该结构也意图包括另一种形式。在某些实施方案中，在某些优选的实施方案中，β形式2-(乙酰氨基)-2-脱氧-D-吡喃半乳糖为优选的实施方案。
Figure BDA0003357312860004621
2-(乙酰氨基)-2-脱氧-D-吡喃半乳糖
Figure BDA0003357312860004622
2-(乙酰氨基)-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖
Figure BDA0003357312860004631
2-(乙酰氨基)-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖
在某些实施方案中，一个或多个配体具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004632
其中每个R1选自OH和NHCOOH。
在某些实施方案中，一个或多个配体具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004633
以及
Figure BDA0003357312860004634
在某些实施方案中，一个或多个配体具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004641
在某些实施方案中，一个或多个配体具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004642
i.某些缀合物
在某些实施方案中，缀合物基团包含以上结构特征。在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004643
其中每个n独立地为1至20。
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004651
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004652
其中每个n独立地为1至20；
Z为H或连接的固体载体；
Q为反义化合物；
X为O或S；并且
Bx为杂环碱基部分。
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004661
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004662
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004663
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004671
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004672
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004673
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004681
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004682
在某些实施方案中，缀合物不包含吡咯烷。
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004691
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004692
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004701
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004702
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004703
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004711
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004712
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004713
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004721
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004722
在某些所述实施方案中，缀合物基团具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004731
在某些实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004732
其中X为具有六至十一个连续键合的原子的取代或未取代的系链。
在某些实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004741
其中X为具有十个连续键合的原子的取代或未取代的系链。
在某些实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004742
其中X为具有四至十一个连续键合的原子的取代或未取代的系链并且其中系链包含恰好一个酰胺键。
在某些实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004743
其中Y和Z独立地选自C1-C12取代或未取代的烷基、烯基或炔基，或包含醚、酮、酰胺、酯、氨基甲酸酯、胺、哌啶、磷酸酯、磷酸二酯、硫代磷酸酯、三唑、吡咯烷、二硫化物或硫醚的基团。
在某些所述实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004751
其中Y和Z独立地选自C1-C12取代或未取代的烷基，或包含恰好一个醚或恰好两个醚、酰胺、胺、哌啶、磷酸酯、硫酸二酯或硫代磷酸酯的基团。
在某些所述实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004752
其中Y和Z独立地选自C1-C12取代或未取代的烷基。
在某些所述实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004761
其中m和n独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12。
在某些所述实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004762
其中m为4、5、6、7或8，并且n为1、2、3或4。
在某些实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004763
其中X为具有四至十三个连续键合的原子的取代或未取代的系链，并且其中X不包含醚基团。
在某些实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004771
其中X为具有八个连续键合的原子的取代或未取代的系链，并且其中X不包含醚基团。
在某些实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004772
其中X为具有四至十三个连续键合的原子的取代或未取代的系链，并且其中系链包含恰好一个酰胺键，并且其中X不包含醚基团。
在某些实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004773
其中X为具有四至十三个连续键合的原子的取代或未取代的系链并且其中系链由酰胺键和取代或未取代的C2-C11烷基组成。
在某些实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004781
其中Y选自C1-C12取代或未取代的烷基、烯基或炔基，或包含醚、酮、酰胺、酯、氨基甲酸酯、胺、哌啶、磷酸酯、磷酸二酯、硫代磷酸酯、三唑、吡咯烷、二硫化物或硫醚的基团。
在某些所述实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004782
其中Y选自C1-C12取代或未取代的烷基，或包含醚、胺、哌啶、磷酸酯、磷酸二酯或硫代磷酸酯的基团。
在某些所述实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004791
其中Y选自C1-C12取代或未取代的烷基。
在某些所述实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004792
其中n为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。
在某些所述实施方案中，缀合物基团的细胞靶向部分具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004793
其中n为4、5、6、7或8。
b.某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合物在核苷的2’、3’或5’位上结合至反义寡核苷酸的核苷。在某些实施方案中，缀合反义化合物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004801
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
C为缀合物接头
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
在某些实施方案中，缀合反义化合物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004802
其中
A为反义寡核苷酸；
C为缀合物接头
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
在某些所述实施方案中，缀合物接头包含至少一个可裂解键。
在某些所述实施方案中，支链基团包含至少一个可裂解键。
在某些实施方案中，每个系链包含至少一个可裂解键。
在某些实施方案中，缀合物在核苷的2’、3’或5’位上结合至反义寡核苷酸的核苷。
在某些实施方案中，缀合反义化合物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004811
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
C为缀合物接头
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
在某些实施方案中，缀合物在核苷的2’、3’或5’位上结合至反义寡核苷酸的核苷。在某些实施方案中，缀合反义化合物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004821
其中
A为反义寡核苷酸；
C为缀合物接头
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
在某些实施方案中，缀合反义化合物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004822
其中
A为反义寡核苷酸；
B为可裂解部分
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
在某些实施方案中，缀合反义化合物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004831
其中
A为反义寡核苷酸；
D为支链基团
每个E为系链；
每个F为配体；并且
q为1与5之间的整数。
在某些所述实施方案中，缀合物接头包含至少一个可裂解键。
在某些实施方案中，每个系链包含至少一个可裂解键。
在某些实施方案中，缀合反义化合物具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004832
在某些实施方案中，缀合反义化合物具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004841
在某些实施方案中，缀合反义化合物具有选自以下的结构：
Figure BDA0003357312860004842
在某些实施方案中，缀合反义化合物具有以下结构：
Figure BDA0003357312860004851
教导某些上述缀合物、缀合反义化合物、系链、接头、支链基团、配体、可裂解部分以及其它修饰的制备的代表性美国专利、美国专利申请公布和国际专利申请公布包括但不限于US 5,994,517、US 6,300,319、US 6,660,720、US 6,906,182、US 7,262,177、US 7,491,805、US 8,106,022、US 7,723,509、US 2006/0148740、US 2011/0123520、WO 2013/033230和WO 2012/037254，所述专利中的每一个均以引用的方式整体并入本文。
教导某些上述缀合物、缀合反义化合物、系链、接头、支链基团、配体、可裂解部分以及其它修饰的代表性出版物包括但不限于BIES SEN等，″The Cholesterol Derivativeof a Triantennary Galactoside with High Affinity for the HepaticAsialoglycoprotein Receptor：a Potent Cholesterol Lowering Agent″J.Med.Chem.(1995)38：1846-1852；BIESSEN等，″Synthesis of Cluster Galactosides with HighAffinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor″J.Med.Chem.(1995)38：1538-1546；LEE等，″New and more efficient multivalent glyco-ligands forasialoglycoprotein receptor of mammalian hepatocytes″Bioorganic&MedicinalChemistry(2011)19：2494-2500；RENSEN等，″Determination of the Upper Size Limitfor Uptake and Processing of Ligands by the Asialoglycoprotein Receptor onHepatocytes in Vitro and in Vivo″J.Biol.Chem.(2001)276(40)：37577-37584；RENSEN等，″Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-TerminatedGlycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic AsialoglycoproteinReceptor″J.Med.Chem.(2004)47：5798-5808；SLIEDREGT等，″Design and Synthesis ofNovel Amphiphilic Dendritic Galactosides for Selective Targeting of Liposomesto the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor″J.Med.Chem.(1999)42：609-618以及Valentijn等，“Solid-phase synthesis of lysine-based cluster galactosides withhigh affinity for the Asialoglycoprotein Receptor”Tetrahedron，1997，53(2)，759-770，所述参考文献中的每一个均以引用的方式整体并入本文。
在某些实施方案中，缀合反义化合物包含基于RNA酶H的寡核苷酸(如缺口聚物)或剪接调节寡核苷酸(如完全修饰的寡核苷酸)和包含至少一个、两个或三个GalNAc基团的任何缀合物基团。在某些实施方案中，缀合反义化合物包含见于任何以下参考文献中的任何缀合物基团：Lee，Carbohydr Res，1978，67，509-514；Connolly等，J Biol Chem，1982，257，939-945；Pavia等，Iht J Pep Protein Res，1983，22，539-548；Lee等，Biochem，1984，23，4255-4261；Lee等，Glycoconjugate J，1987，4，317-328；Toyokuni等，Tetrahedron Lett，1990，31，2673-2676；Biessen等，J Med Chem，1995，38，1538-1546；Valentijn等，Tetrahedron，1997，53，759-770；Kim等，Tetrahedron Lett，1997，38，3487-3490；Lee等，Bioconjug Chem，1997，8，762-765；Kato等，Glycobiol，2001，11，821-829；Rensen等，JBiol Chem，2001，276，37577-37584；Lee等，Methods Enzymol，2003，362，38-43；Westerlind等，Glycoconj J，2004，21，227-241；Lee等，Bioorg Med Chem Lett，2006，16(19)，5132-5135；Maierhofer等，Bioorg Med Chem，2007，15，7661-7676；Khorev等，BioorgMed Chem，2008，16，5216-5231；Lee等，Bioorg Med Chem，2011，19，2494-2500；Korbilova等，Analyt Biochem，2012，425，43-46；Pujol等，Angew Chemie Int Ed Engl，2012，51，7445-7448；Biessen等，J Med Chem，1995，38，1846-1852；Sliedregt等，J Med Chem，1999，42，609-618；Rensen等，J Med Chem，2004，47，5798-5808；Rensen等，Arterioscler ThrombVasc Biol，2006，26，169-175；van Rossenberg等，Gene Ther，2004，11，457-464；Sato等，JAm Chem Soc，2004，126，14013-14022；Lee等，J Org Chem，2012，77，7564-7571；Biessen等，FASEB J，2000，14，1784-1792；Rajur等，Bioconjug Chem，1997，8，935-940；Duff等，Methods Enzymol，2000，313，297-321；Maier等，Bioconjug Chem，2003，14，18-29；Jayaprakash等，Org Lett，2010，12，5410-5413；Manoharan，Antisense Nucleic AcidDrug Dev，2002，12，103-128；Merwin等，Bioconjug Chem，1994，5，612-620；Tomiya等，Bioorg Med Chem，2013，21，5275-5281；国际申请WO1998/013381；WO2011/038356；WO1997/046098；WO2008/098788；WO2004/101619；WO2012/037254；WO2011/120053；WO2011/100131；WO2011/163121；WO2012/177947；WO2013/033230；WO2013/075035；WO2012/083185；WO2012/083046；WO2009/082607；WO2009/134487；WO2010/144740；WO2010/148013；WO1997/020563；WO2010/088537；WO2002/043771；WO2010/129709；WO2012/068187；WO2009/126933；WO2004/024757；WO2010/054406；WO2012/089352；WO2012/089602；WO2013/166121；WO2013/165816；美国专利4,751,219；8,552,163；6,908,903；7,262,177；5,994,517；6,300,319；8,106,022；7,491,805；7,491,805；7,582,744；8,137,695；6,383,812；6,525,031；6,660,720；7,723,509；8,541,548；8,344,125；8,313,772；8,349,308；8,450,467；8,501,930；8,158,601；7,262,177；6,906,182；6,620,916；8,435,491；8,404,862；7,851,615；已公布的美国专利申请公布US2011/0097264；US2011/0097265；US2013/0004427；US2005/0164235；US2006/0148740；US2008/0281044；US2010/0240730；US2003/0119724；US2006/0183886；US2008/0206869；US2011/0269814；US2009/0286973；US2011/0207799；US2012/0136042；US2012/0165393；US2008/0281041；US2009/0203135；US2012/0035115；US2012/0095075；US2012/0101148；US2012/0128760；US2012/0157509；US2012/0230938；US2013/0109817；US2013/0121954；US2013/0178512；US2013/0236968；US2011/0123520；US2003/0077829；US2008/0108801以及US2009/0203132；所述参考文献中的每一个均以引用的方式整体并入。
C.某些用途和特征
在某些实施方案中，缀合反义化合物表现出有效的体内靶RNA减少。在某些实施方案中，未缀合反义化合物在肾中积累。在某些实施方案中，缀合反义化合物在肝脏中积累。在某些实施方案中，缀合反义化合物为耐受良好的。所述性质使得缀合反义化合物特别有用于抑制许多靶RNA，包括但不限于涉及代谢、心血管和其它疾病、病症或病状的那些。因此，本文提供了通过使肝脏组织与靶向与所述疾病、病症或病状相关的RNA的缀合反义化合物接触来治疗所述疾病、病症或病状的方法。因此，还提供了用于使用本发明的缀合反义化合物来改善各种代谢、心血管和其它疾病、病症或病状中的任何一种的方法。
在某些实施方案中，缀合反义化合物在特定的组织浓度下比未缀合的对应物更有效。不希望受任何理论或机制的束缚，在某些实施方案中，缀合物可允许缀合反义化合物更有效地进入细胞或更有成效地进入细胞。例如，在某些实施方案中，缀合反义化合物与其未缀合的对应物相比可表现出更大的靶标减少，其中缀合反义化合物和其未缀合的对应物均以相同的浓度存在于组织中。例如，在某些实施方案中，缀合反义化合物与其未缀合的对应物相比可表现出更大的靶标减少，其中缀合反义化合物和其未缀合的对应物均以相同的浓度存在于肝脏中。
先前已讨论了寡核苷酸的产生性和非产生性摄取(参见例如Geary，R.S.，E.Wancewicz等(2009).″Effect of Dose and Plasma Concentration on Liver Uptakeand Pharmacologic Activity of a 2’-Methoxyethyl Modified Chimeric AntisenseOligonucleotide Targeting PTEN.″Biochem.Pharmacol.78(3)：284-91；&Koller，E.，T.M.Vincent等(2011).″Mechanisms of single-stranded phosphorothioate modifiedantisense oligonucleotide accumulation in hepatocytes.″Nucleic Acids Res.39(11)：4795-807)。本文描述的缀合物基团可改进产生性摄取。
在某些实施方案中，本文描述的缀合物基团可通过增加缀合反义化合物对特定类型的细胞或组织的亲合力来进一步改进效力。在某些实施方案中，本文描述的缀合物基团可通过增加一种或多种细胞表面受体对缀合反义化合物的识别来进一步改进效力。在某些实施方案中，本文描述的缀合物基团可通过促进缀合反义化合物的内吞作用来进一步改进效力。
在某些实施方案中，可裂解部分可通过允许缀合物在缀合反义化合物进入细胞之后从反义寡核苷酸中裂解来进一步改进效力。因此，在某些实施方案中，可以低于对未缀合的反义寡核苷酸来说将为必要的剂量施用缀合反义化合物。
先前已将硫代磷酸酯键联掺入到反义寡核苷酸中。所述硫代磷酸酯键联对核酸酶具有抗性并且因此改进了寡核苷酸的稳定性。此外，硫代磷酸酯键联还结合某些蛋白质，这导致反义寡核苷酸在肝脏中的积累。具有较少硫代磷酸酯键联的寡核苷酸在肝脏中积累较少并且在肾中积累较多(参见，例如Geary，R.，“Pharmacokinetic Properties of 2’-O-(2-Methoxyethyl)-Modified Oligonucleotide Analogs in Rats，”Journal ofPharmacology and Experimental Therapeutics，第296卷，第3期，890-897；&Antisense aDrug Technology中的Pharmacological Properties of 2’-O-Methoxyethyl ModifiedOligonucleotides，第10章，Crooke，S.T.编著，2008)。在某些实施方案中，具有较少硫代磷酸酯核苷间键联和较多磷酸二酯核苷间键联的寡核苷酸在肝脏中积累较少并且在肾中积累较多。当治疗肝脏中的疾病时，出于以下若干原因这是不希望的：(1)较少药物到达希望作用的部位(肝脏)；(2)药物逸散到尿液中；以及(3)肾暴露于相对高浓度的药物，这可导致肾中毒。因此，对于肝脏疾病，硫代磷酸酯键联提供重要益处。
然而，在某些实施方案中，统一被硫代磷酸酯核苷间键联连接的寡核苷酸的施用诱发一种或多种促炎性反应。(参见例如：J Lab Clin Med.1996年9月；128(3)：329-38.“Amplification of antibody production by phosphorothioateoligodeoxynucleotides”.Branda等；并且还参见例如：Antisense a Drug Technology中的Toxicologic Properties，第12章，第342-351页，Crooke，S.T.编著，2008)。在某些实施方案中，其中大多数核苷间键联包含硫代磷酸酯核苷间键联的寡核苷酸的施用诱发一种或多种促炎性反应。
在某些实施方案中，促炎性作用的程度可取决于若干变量(例如骨架修饰、脱靶效应、核碱基修饰和/或核苷修饰)，参见例如：Antisense a Drug Technology中的Toxicologic Properties，第12章，第342-351页，Crooke，S.T.编著，2008)。在某些实施方案中，促炎性作用的程度可通过调节一个或多个变量来减轻。例如，给定寡核苷酸的促炎性作用的程度可通过用磷酸二酯核苷间键联替代任何数目的硫代磷酸酯核苷间键联并且由此减少硫代磷酸酯核苷间键联的总数来减轻。
在某些实施方案中，将希望减少硫代磷酸酯键联的数目，如果可以在不丧失稳定性并且不使分布从肝脏转移至肾的情况下实现的话。例如，在某些实施方案中，可通过用磷酸二酯键联替代硫代磷酸酯键联来减少硫代磷酸酯键联的数目。在这样一个实施方案中，具有较少硫代磷酸酯键联和较多磷酸二酯键联的反义化合物可诱发较少的促炎性反应或不诱导促炎性反应。虽然具有较少硫代磷酸酯键联和较多磷酸二酯键联的反义化合物可诱发较少的促炎性反应，但是具有较少硫代磷酸酯键联和较多磷酸二酯键联的反义化合物可以不在肝脏中积累并且与具有较多硫代磷酸酯键联的反义化合物相比在相同或类似的剂量下可为功效较小的。在某些实施方案中，因此希望设计具有多个磷酸二酯键和多个硫代磷酸酯键但还具有稳定性和对肝脏的良好分布的反义化合物。
在某些实施方案中，缀合反义化合物比未缀合的对应物在肝脏中积累更多并且在肾中积累更少，即使在一些硫代磷酸酯键联被较少促炎性的磷酸二酯核苷间键联替代时也是如此。在某些实施方案中，缀合反义化合物与其未缀合的对应物相比在肝脏中积累更多并且没有同样多地排泄到尿液中，即使在一些硫代磷酸酯键联被较少促炎性的磷酸二酯核苷间键联替代时也是如此。在某些实施方案中，缀合物的使用允许人们设计更有效并且耐受性更好的反义药物。事实上，在某些实施方案中，缀合反义化合物具有比未缀合的对应物更大的治疗指数。这允许缀合反义化合物在较高绝对剂量下施用，因为存在较小的促炎性应答风险和较小的肾毒性风险。这种较高剂量允许人们较不频繁地给药，因为预期清除(代谢)为类似的。此外，因为化合物更有效，如上所述，所以可允许浓度在下一次剂量之前变低而不失去治疗活性，从而允许给药之间的甚至更长的时间段。
在某些实施方案中，包括一些硫代磷酸酯键联仍是希望的。例如，末端键联易受到核酸外切酶的破坏，所以在某些实施方案中，那些键联为硫代磷酸酯或其它修饰的键联。连接两个脱氧核苷的核苷间键联易受到核酸内切酶的破坏，所以在某些实施方案中，那些键联为硫代磷酸酯或其它修饰的键联。修饰核苷与脱氧核苷(其中脱氧核苷在键联脱氧核苷的5’侧上)之间的核苷间键联易受到核酸内切酶的破坏，所以在某些实施方案中，那些键联为硫代磷酸酯或其它修饰的键联。某些类型的两个修饰核苷之间和脱氧核苷与某种类型的修饰核苷(其中修饰核苷处于键联的5’侧)之间的核苷间键联对核酸酶消化具有足够的抗性，键联可为磷酸二酯。
在某些实施方案中，缀合反义化合物的反义寡核苷酸包含少于16个硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，缀合反义化合物的反义寡核苷酸包含少于15个硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，缀合反义化合物的反义寡核苷酸包含少于14个硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，缀合反义化合物的反义寡核苷酸包含少于13个硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，缀合反义化合物的反义寡核苷酸包含少于12个硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，缀合反义化合物的反义寡核苷酸包含少于11个硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，缀合反义化合物的反义寡核苷酸包含少于10个硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，缀合反义化合物的反义寡核苷酸包含少于9个硫代磷酸酯键联。在某些实施方案中，缀合反义化合物的反义寡核苷酸包含少于8个硫代磷酸酯键联。
在某些实施方案中，包含本文描述的一个或多个缀合物基团的反义化合物与缺乏所述一个或多个缀合物基团的母体反义化合物相比具有增加的活性和/或效力和/或耐受性。因此，在某些实施方案中，所述缀合物基团连接至寡核苷酸为希望的。所述缀合物基团可连接在寡核苷酸的5’-末端和/或3’-末端。在某些情况下，5’-末端的连接在合成上是希望的。通常，通过使用本领域中熟知的技术将3’末端核苷连接至固体载体并且从3’至5’依次偶联核苷来合成寡核苷酸。因此，如果希望缀合物基团位于3’-末端处，那么人们可(1)将缀合物基团连接至3’-末端核苷并且将所述缀合的核苷连接至固体载体用于随后寡核苷酸的制备或(2)在合成之后将缀合物基团连接至完全寡核苷酸的3’-末端核苷。这些方法中没有一个是非常有效的并且因此均为昂贵的。具体来说，虽然在本文的实施例中展示，但缀合核苷至固体载体的连接是低效的过程。在某些实施方案中，将缀合物基团连接至5’-末端核苷比连接在3’-末端处在合成上更容易。人们可将非缀合的3’末端核苷连接至固体载体并且使用标准和表征良好的反应制备寡核苷酸。然后人们仅需要在最后的偶联步骤连接具有缀合物基团的5’核苷。在某些实施方案中，这比将缀合核苷直接连接至固体载体(如通常进行来制备3’-缀合寡核苷酸)更有效。本文的实施例展示了5’-末端处的连接。另外，某些缀合物基团具有合成优点。例如，包含磷连接基团的某些缀合物基团比包括先前报道的缀合物基团的其它缀合物基团在合成上更简单并且制备更有效(例如，WO/2012/037254)。
在某些实施方案中，向受试者施用缀合反义化合物。在所述实施方案中，包含本文描述的一个或多个缀合物基团的反义化合物与缺乏所述一个或多个缀合物基团的母体反义化合物相比具有增加的活性和/或效力和/或耐受性。不受机制的束缚，据信缀合物基团有助于分布、递送和/或摄取到靶细胞或组织中。在某些实施方案中，一旦在靶细胞或组织内部，就希望缀合物基团的所有或部分裂解，以释放活性寡核苷酸。在某些实施方案中，整个缀合物基团从寡核苷酸中裂解是不必要的。例如，在实施例20中，向小鼠施用缀合寡核苷酸并且检测到许多不同的化学物质，所述化学物质各自包含剩余在寡核苷酸上的缀合物基团的不同部分(表23a)。此缀合反义化合物展示出良好的效力(表23)。因此，在某些实施方案中，缀合物基团的多个部分裂解的所述代谢特征不干扰活性/效力。尽管如此，在某些实施方案中，希望前药(缀合寡核苷酸)产生单一活性化合物。在某些情况下，如果发现活性化合物的多种形式，那么确定每一个的相对量和活性可为必要的。在其中需要监管审查(例如，USFDA或对应机构)的某些实施方案中，希望具有单一(或主要为单一的)活性物质。在某些所述实施方案中，希望所述单一活性物质为缺乏缀合物基团的任何部分的反义寡核苷酸。在某些实施方案中，5’-末端处的缀合物基团更可能导致缀合物基团的完全代谢。不受机制的束缚，负责5’末端(例如，5’核苷)处的代谢的内源性酶可比3’对应物更有活性/更有效。在某些实施方案中，特定缀合物基团更适于单一活性物质的代谢。在某些实施方案中，某些缀合物基团更适于寡核苷酸的代谢。
D.反义
在某些实施方案中，本发明的低聚化合物为反义化合物。在所述实施方案中，低聚化合物与靶核酸互补。在某些实施方案中，靶核酸为RNA。在某些实施方案中，靶核酸为非编码RNA。在某些实施方案中，靶核酸编码蛋白质。在某些实施方案中，靶核酸选自mRNA、前体mRNA、微小RNA、非编码RNA(包括小型非编码RNA)以及启动子指导的RNA(promoter-directed RNA)。在某些实施方案中，低聚化合物至少部分地与多于一种靶核酸互补。例如，本发明的低聚化合物可为微小RNA模拟物，其通常结合多个靶标。
在某些实施方案中，反义化合物包含具有与靶核酸的核碱基序列至少70％互补的核碱基序列的部分。在某些实施方案中，反义化合物包含具有与靶核酸的核碱基序列至少80％互补的核碱基序列的部分。在某些实施方案中，反义化合物包含具有与靶核酸的核碱基序列至少90％互补的核碱基序列的部分。在某些实施方案中，反义化合物包含具有与靶核酸的核碱基序列至少95％互补的核碱基序列的部分。在某些实施方案中，反义化合物包含具有与靶核酸的核碱基序列至少98％互补的核碱基序列的部分。在某些实施方案中，反义化合物包含具有与靶核酸的核碱基序列100％互补的核碱基序列的部分。在某些实施方案中，反义化合物在反义化合物的整个长度上与靶核酸的核碱基序列至少70％、80％、90％、95％、98％或100％互补。
反义机制包括涉及低聚化合物与靶核酸的杂交的任何机制，其中杂交产生生物作用。在某些实施方案中，所述杂交导致靶核酸降解或占位并伴有细胞机器的抑制或刺激，涉及例如靶核酸或靶核苷酸可能以另外的方式与其相互作用的核酸的翻译、转录或聚腺苷酸化。
涉及靶RNA的降解的一种类型的反义机制为RNA酶H介导的反义。RNA酶H为裂解RNA：DNA双链体的RNA链的细胞核酸内切酶。本领域已知“DNA样”的单链反义化合物在哺乳动物细胞中引发RNA酶H活性。因此，RNA酶H的激活导致RNA靶标的裂解，从而极大地增强了基因表达的DNA样寡核苷酸介导的抑制的效率。
反义机制还包括但不限于利用RISC途径的RNAi机制。所述RNAi机制包括但不限于siRNA、ssRNA和微小RNA机制。所述机制包括产生微小RNA模拟物和/或抗微小RNA。
反义机制还包括但不限于杂交或模拟非编码RNA而不是微小RNA或mRNA的机制。所述非编码RNA包括但不限于启动子指导的RNA和影响一种或多种核酸的转录或翻译的短和长RNA。
在某些实施方案中，包含本文描述的缀合物的寡核苷酸为RNAi化合物。在某些实施方案中，包含本文描述的缀合物的低聚寡核苷酸为ssRNA化合物。在某些实施方案中，包含本文描述的缀合物的寡核苷酸与第二低聚化合物配对以形成siRNA。在某些所述实施方案中，第二低聚化合物也包含缀合物。在某些实施方案中，第二低聚化合物为任何修饰或未修饰的核酸。在某些实施方案中，包含本文描述的缀合物的寡核苷酸为siRNA化合物中的反义链。在某些实施方案中，包含本文描述的缀合物的寡核苷酸为siRNA化合物中的有义链。在其中缀合低聚化合物为双链siRNA的实施方案中，缀合物可位于有义链、反义链或有义链和反义链两者上。
D.靶核酸、区域和区段
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向任何核酸。在某些实施方案中，靶核酸编码临床相关的靶蛋白。在所述实施方案中，靶核酸的调节产生临床益处。某些靶核酸包括但不限于表1中所示的靶核酸。
表1：某些靶核酸
Figure BDA0003357312860004961
靶向过程通常包括确定靶核酸内的至少一个靶区域、区段或位点用于发生反义相互作用，使得将产生希望的作用。
在某些实施方案中，靶区域为核酸的结构限定区。例如，在某些所述实施方案中，靶区域可涵盖3’UTR、5’UTR、外显子、内含子、编码区、翻译起始区、翻译终止区，或其它限定的核酸区域或靶区段。
在某些实施方案中，靶区段为缀合反义化合物靶向的靶区域的至少约8个核碱基部分。靶区段可包括从靶区段之一的5’-末端起包含至少8个连续核碱基的DNA或RNA序列(其余核碱基为紧邻靶区段的5’-末端上游开始并且继续直到DNA或RNA包含约8至约30个核碱基为止的相同DNA或RNA的连续链段)。靶区段还由从靶区段之一的3’-末端起包含至少8个连续核碱基的DNA或RNA序列表示(其余核碱基为紧邻靶区段的3’-末端下游开始并且继续直到DNA或RNA包含约8至约30个核碱基为止的相同DNA或RNA的连续链段)。靶区段还可由从靶区段的序列的内部起包含至少8个连续核碱基的DNA或RNA序列表示，并且可在任一或两个方向上延伸直到缀合反义化合物包含约8至约30个核碱基。
在某些实施方案中，靶向表1中列出的核酸的反义化合物可如本文所述进行修饰。在某些实施方案中，反义化合物可具有修饰的糖部分、未修饰的糖部分或如本文所述的修饰和未修饰的糖部分的混合物。在某些实施方案中，反义化合物可具有修饰的核苷间键联、未修饰的核苷间键联或如本文所述的修饰和未修饰的核苷间键联的混合物。在某些实施方案中，反义化合物可具有修饰的核碱基、未修饰的核碱基或如本文所述的修饰和未修饰的核碱基的混合物。在某些实施方案中，反义化合物可具有如本文所述的基序。
在某些实施方案中，靶向表1中列出的核酸的反义化合物可如本文所述进行缀合。
1.雄激素受体(AR)
AR为涉及作为前列腺癌驱动物的转录因子。AR通过结合至其激素配体来激活：雄激素、睾酮和/或DHT。雄激素剥夺疗法(也称为“化学阉割”)为对抗激素敏感、雄激素依赖的前列腺癌的第一线治疗策略，所述疗法减少循环雄激素水平并从而抑制AR活性。然而，雄激素剥夺疗法经常导致“阉割抗性的”晚期前列腺癌的出现和生长，其中AR信号传导独立于配体结合而被重新激活。晚期前列腺癌中的阉割抗性下的机制仍不清楚。
靶向AR核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860004981
登录号NT_011669.17核碱基5079000至5270000的序列的AR核酸，所述序列作为SEQ ID NO：1并入本文。在某些所述实施方案中，缀合反义化合物与SEQ ID NO：1至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：1的缀合反义化合物包含选自SEQ ID NO：17-24中的任一个的核碱基序列的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ IDNO：1的缀合反义化合物包含选自SEQ ID NO：17-24中的任一个的核碱基序列的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表2：靶向AR SEQ ID NO：1的反义化合物
Figure BDA0003357312860004991
AR治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供用于使用靶向AR核酸的缀合反义化合物来调节受试者中AR的表达的方法。在某些实施方案中，减少了AR的表达。
在某些实施方案中，本发明提供用于使用药物组合物中的靶向AR核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有前列腺癌，如阉割抗性前列腺癌。在某些实施方案中，受试者具有对二芳基乙内酰脲雄激素受体(AR)抑制剂(如MDV3100，也称为恩杂鲁胺(Enzalutamide))具有抗性的前列腺癌。MDV3100或恩杂鲁胺为由Medivation开发用于治疗阉割抗性前列腺癌的实验性雄激素受体拮抗剂药物。在某些实施方案中，受试者具有乳腺癌。在某些方面中，受试者的乳腺癌可具有以下特征中的一个或多个：雄激素受体阳性、依赖于雄激素生长、雌激素受体(ER)阴性、不依赖雌激素生长、孕酮受体(PR)阴性、不依赖孕酮生长，或Her2/neu阴性。在某些方面中，乳腺癌或乳腺癌细胞为顶泌的。
在某些实施方案中，本发明提供用于使用靶向AR核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
2.载脂蛋白(a)(Apo(a))
一个Apo(a)蛋白通过二硫键连接至单个ApoB蛋白以形成脂蛋白(a)(Lp(a))颗粒。Apo(a)蛋白与纤溶酶原，尤其是在三环IV 2型重复结构域内，具有高度同源性。据认为，Apo(a)中的三环重复结构域可负责其促血栓形成和抗纤溶性质，从而潜在增强了动脉粥样硬化的进展。Apo(a)由IL-6转录性调节并且在研究中在用IL-6抑制剂(托珠单抗(tocilizumab)治疗的类风湿性关节炎患者中，血浆水平在3个月的治疗后降低了30％。Apo(a)已显示优先结合氧化的磷脂并且加强血管炎症。此外，研究表明Lp(a)颗粒还可刺激内皮渗透性、诱导纤溶酶原激活物抑制剂1型表达并且激活巨噬细胞白细胞介素-8分泌。重要的是，最近遗传关联研究揭示Lp(a)为心肌梗塞、中风、外周血管疾病和腹主动脉瘤的独立风险因素。此外，在早熟冠状动脉疾病(Precocious Coronary Artery Disease；PROCARDIS)研究中，Clarke等描述了冠心病与血浆Lp(a)浓度之间稳健并独立的关联。另外，Solfrizzi等表明增加的血清Lp(a)可关系到阿尔茨海默氏病(AD)的风险增加。靶向Apo(a)的反义化合物先前已公开于WO2005/000201和US 61/651,539中，所述专利以引用的方式整体并入本文。靶向Apo(a)的反义寡核苷酸ISIS-APOARx目前处于I期临床试验以研究其安全性特征。
靶向Apo(a)核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860005001
登录号NM_005577.2的序列的Apo(a)核酸，所述序列作为SEQ ID NO：2并入本文。在某些所述实施方案中，缀合反义化合物与SEQ ID NO：2至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：2的缀合反义化合物包含选自SEQ ID NO：25-30中的任一个的核碱基序列的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ IDNO：2的缀合反义化合物包含选自SEQ ID NO：25-30中的任一个的核碱基序列的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表3：靶向Apo(a)SEQ ID NO：2的反义化合物
Figure BDA0003357312860005011
Apo(a)治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向Apo(a)核酸的缀合反义化合物来调节受试者中Apo(a)的表达的方法。在某些实施方案中，减少了Apo(a)的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中的靶向Apo(a)核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有心血管和/或代谢疾病、病症或病状。在某些实施方案中，受试者具有高胆固醇血症、非家族性高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、杂合型家族性高胆固醇血症、纯合型家族性高胆固醇血症、混合型血脂异常、动脉粥样硬化、发展动脉粥样硬化的风险、冠心病、冠心病史、早期发作冠心病、冠心病的一种或多种风险因素、II型糖尿病、具有血脂异常的II型糖尿病、血脂异常、高甘油三酯血症、高脂血症、高脂肪酸血症(hyperfattyacidemia)、肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎和/或非酒精性脂肪肝疾病。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向Apo(a)核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
3.载脂蛋白B(ApoB)
ApoB(也称为载脂蛋白B-100；ApoB-100、载脂蛋白B-48；ApoB-48和Ag(x)抗原)为在脂质的装配和分泌中和在不同种类的脂蛋白的运输和受体介导的摄取和递送中起到不可缺少的作用的大型糖蛋白。ApoB执行各种活性，从饮食脂质的吸收和加工至循环脂蛋白水平的调节。(Davidson和Shelness，Annu.Rev.Nutr.，2000，20，169-193)。后一种性质是造成其与动脉粥样硬化易感性的相关性的基础，所述动脉粥样硬化易感性与含ApoB的脂蛋白的周围浓度高度相关(Davidson和Shelness，Annu.Rev.Nutr.，2000，20，169-193)。ApoB-100为LDL-C的主要蛋白质组分并且含有这种脂蛋白物质与LDL受体相互作用所需要的结构域。LDL-C水平升高对于心血管疾病(包括动脉粥样硬化)而言为风险因素。靶向ApoB的反义化合物先前已公开于WO2004/044181中，所述专利以引用的方式整体并入本文。靶向ApoB的反义寡核苷酸KYNAMROTM已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准为降脂药品和饮食的辅助治疗，以减少患有纯合型家族性高胆固醇血症(HoFH)的患者的低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、ApoB、总胆固醇(TC)和非高密度脂蛋白-胆固醇(非HDL-C)。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向ApoB核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860005032
登录号NM_000384.1的序列的ApoB核酸，所述序列作为SEQ ID NO：3并入本文。在某些所述实施方案中，缀合反义化合物与SEQ ID NO：3至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：3的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：31的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：3的缀合反义化合物包含SEQID NO：31的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表4：靶向ApoB SEQ ID NO：3的反义化合物
Figure BDA0003357312860005031
ApoB治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向ApoB核酸的缀合反义化合物来调节受试者中ApoB的表达的方法。在某些实施方案中，减少了ApoB的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向ApoB核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有心血管和/或代谢疾病、病症或病状。在某些实施方案中，受试者具有高胆固醇血症、非家族性高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、杂合型家族性高胆固醇血症、纯合型家族性高胆固醇血症、混合型血脂异常、动脉粥样硬化、发展动脉粥样硬化的风险、冠心病、冠心病史、早期发作冠心病、冠心病的一种或多种风险因素、II型糖尿病、具有血脂异常的II型糖尿病、血脂异常、高甘油三酯血症、高脂血症、高脂肪酸血症(hyperfattyacidemia)、肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎和/或非酒精性脂肪肝疾病。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向ApoB核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
4.载脂蛋白C-III(ApoCIII)
ApoCIII为HDL和富含甘油三酯(TG)的脂蛋白的成分。ApoCIII水平升高与TG水平升高和疾病如心血管疾病、代谢综合征、肥胖和糖尿病相关。TG水平升高与胰腺炎相关。ApoCIII显示通过抑制脂蛋白脂肪酶(LPL)和通过干扰结合细胞表面糖胺聚糖基质的脂蛋白抑制脂解来清除富含TG的脂蛋白。靶向ApoCIII的反义化合物先前已公开于WO2004/093783和WO2012/149495中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。目前，靶向ApoCIII的反义寡核苷酸ISIS-APOCIIIRx处于II期临床试验以评估其在糖尿病或高甘油三酯血症的治疗中的有效性。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向ApoCIII核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有从核碱基20262640至20266603截短的
Figure BDA0003357312860005041
登录号NT_033899.8的序列的ApoCIII核酸，所述序列作为SEQ ID NO：4并入本文。在某些所述实施方案中，缀合反义化合物与SEQ ID NO：4至少90％、至少95％或100％互补。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860005052
登录号NM_000040.1的序列的ApoCIII核酸，所述序列作为SEQ ID NO：5并入本文。在某些所述实施方案中，缀合反义化合物与SEQ ID NO：5至少90％、至少95％或100％互补。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：5的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：32的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：5的缀合反义化合物包含SEQID NO：32的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表5：靶向ApoCIII SEQ ID NO：5的反义化合物
Figure BDA0003357312860005051
ApoCIII治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向ApoCIII核酸的缀合反义化合物来调节受试者中ApoCIII的表达的方法。在某些实施方案中，减少了ApoCIII的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向ApoCIII核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有心血管和/或代谢疾病、病症或病状。在某些实施方案中，受试者具有高甘油三酯血症、非家族性高甘油三酯血症、家族性高甘油三酯血症、杂合型家族性高甘油三酯血症、纯合型家族性高甘油三酯血症、混合型血脂异常、动脉粥样硬化、发展动脉粥样硬化的风险、冠心病、冠心病史、早期发作冠心病、冠心病的一种或多种风险因素、II型糖尿病、具有血脂异常的II型糖尿病、血脂异常、高脂血症、高胆固醇血症、高脂肪酸血症、肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎、胰腺炎和/或非酒精性脂肪肝疾病。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向ApoCIII核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
5.C-反应蛋白(CRP)
CRP(也称为PTX1)为响应于各种炎症性细胞因子而在肝脏中产生的必要的人急性期反应物。该蛋白质首次鉴定于1930年，为高度保守的并且据认为是感染性或炎症性病状的早期指示。血浆CRP水平响应于感染、局部缺血、创伤、烧伤和炎症性病状而增加1,000倍。在其中患者接受降脂疗法(如他汀类疗法)的临床试验中，已展示具有LDL-C和CRP减少的患者相对于仅经历LDL-C减少的患者具有减小的未来冠状事件的风险。靶向CRP的反义化合物先前已公开于WO2003/010284和WO2005/005599中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。靶向CRP的反义寡核苷酸ISIS-CRPRx目前处于2期临床试验以研究其在治疗患有类风湿性关节炎和阵发性心房纤维颤动的受试者中的有效性。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向CRP核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860005061
登录号M11725.1的序列的CRP核酸，所述序列作为SEQ ID NO：6并入本文。在某些所述实施方案中，缀合反义化合物与SEQ ID NO：6至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：6的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：33的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：6的缀合反义化合物包含SEQID NO：33的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表6：靶向CRP SEQ ID NO：6的反义化合物
Figure BDA0003357312860005071
CRP治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向CRP核酸的缀合反义化合物来调节受试者中CRP的表达的方法。在某些实施方案中，减少了CRP的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向CRP核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有心血管和/或代谢疾病、病症或病状。在某些实施方案中，受试者具有高胆固醇血症、非家族性高胆固醇血症、家族性高胆固醇血症、杂合型家族性高胆固醇血症、纯合型家族性高胆固醇血症、混合型血脂异常、动脉粥样硬化、发展动脉粥样硬化的风险、冠心病、冠心病史、早期发作冠心病、冠心病的一种或多种风险因素。在某些实施方案中，个体具有阵发性心房纤维颤动、急性冠状综合征、血管损伤、动脉闭塞、不稳定心绞痛、外周血管疾病后(post peripheral vasculardisease)、心肌梗塞(MI)后(post myocardial infarction)、血栓形成、深静脉血栓、末期肾病(ESRD)、慢性肾衰竭、补体激活、充血性心力衰竭或系统性血管炎。在某些实施方案中，个体已具有中风。在某些实施方案中，个体经历了选自以下的程序：选择性支架放置、血管成形术、经皮腔内血管成形术(PTCA)后(post percutaneous transluminalangioplasty)、心脏移植、肾透析或心肺旁路。在某些实施方案中，个体具有炎症性疾病。在某些所述实施方案中，炎症性疾病选自以下：炎症性肠病、溃疡性结肠炎、类风湿性关节炎或骨关节炎。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向CRP核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
6.eIF4E
eIF4E的过表达已在许多人癌症和癌症衍生的细胞系中有所报道并且还导致动物模型中细胞的致癌转化和浸润/转移性表型。不像非转化的培养细胞，转化的细胞系不依赖血清生长因子的存在表达eIF4E(Rosenwald，Cancer Lett.，1995，98，77-82)。过量的eIF4E导致海拉细胞的异常生长和肿瘤形态并且还引起NIH 3T3和Rat2成纤维细胞的致瘤转化，如通过非贴壁依赖性生长、培养物中转化灶的形成和裸鼠中的肿瘤形成来判断(DeBenedetti等，Proc.Natl.Acad.Sci.U S A，1990，87，8212-8216；和Lazaris-Karatzas等，Nature，1990，345，544-547)。
在若干人癌症中发现eIF4E升高，所述人癌症包括但不限于非霍奇金氏淋巴瘤、结肠腺瘤和癌瘤以及喉、头和颈、前列腺、乳房和膀胱癌症(Crew等，Br.J.Cancer，2000，82，161-166；Graff等，Clin.Exp.Metastasis，2003，20，265-273；Haydon等，Cancer，2000，88，2803-2810；Kerekatte等，Int.J.Cancer，1995，64，27-31；Rosenwald等，Oncogene，1999，18，2507-2517；Wang等，Am.J.Pathol.，1999，155，247-255)。eIF4E的上调为结肠癌发生的早期事件，并且经常通过细胞周期蛋白D1水平的增加来实现(Rosenwald等，Oncogene，1999，18，2507-2517)。靶向eIF4E的反义化合物先前已公开于WO2005/028628中，所述专利以引用的方式整体并入本文。靶向eIF4E的反义寡核苷酸ISIS-eIF4ERx目前处于1/2期临床试验以研究其在治疗患有癌症的受试者中的有效性。
靶向eIF4E核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860005092
登录号M15353.1的序列的eIF4E核酸，所述序列作为SEQ ID NO：7并入本文。在某些所述实施方案中，缀合反义化合物与SEQ ID NO：7至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：7的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：34的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：7的缀合反义化合物包含SEQID NO：34的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表7：靶向eIF4E SEQ ID NO：7的反义化合物
Figure BDA0003357312860005091
eIF4E治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向eIF4E核酸的缀合反义化合物来调节受试者中eIF4E的表达的方法。在某些实施方案中，减少了eIF4E的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向eIF4E核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有癌症。在某些方面中，癌症为前列腺癌。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向eIF4E核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
7.因子VII
凝血因子VII(也称为血清凝血酶原转变加速剂)为组织因子凝血途径的重要组分。临床医生已将因子VII活性的水平升高与若干血栓性疾病(如心脏病发作)中的预后差联系在一起，并且与癌症患者死亡的第二主要原因的癌症相关的血栓形成联系在一起。在临床前研究中，因子VII的反义抑制在三天里使因子VII活性快速减小大于90％，其中未观察到出血增加，所述出血为目前可供使用的抗血栓形成药物的常见副作用。靶向因子VII的反义化合物先前已公开于WO2009/061851、WO2012/174154和PCT申请号PCT/US2013/025381中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。计划临床研究来评估ISIS-FVIIRx在急性临床环境中(如手术后)预防患者发展有害血凝块。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向因子VII核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有从核碱基1255000至1273000)截短的
Figure BDA0003357312860005101
登录号NT_027140.6的序列的因子VII核酸，所述序列作为SEQ ID NO：8并入本文。在某些所述实施方案中，靶向SEQ ID NO：8的缀合反义化合物与SEQ ID NO：8至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：8的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：35-43的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：8的缀合反义化合物包含SEQID NO：35-43的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表8：靶向因子VII SEQ ID NO：8的反义化合物
Figure BDA0003357312860005111
Figure BDA0003357312860005121
因子VII治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向因子VII核酸的缀合反义化合物来调节受试者中因子VII的表达的方法。在某些实施方案中，减少了因子VII的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向因子VII核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有血栓栓塞病状或处于发展血栓栓塞病状的风险中，如心脏病发作、中风、深静脉血栓形成或肺栓塞。在某些实施方案中，受试者处于发展血栓栓塞病状的风险中和/或以另外的方式有抗凝血疗法的需要。所述受试者的实例包括经历主要矫形手术的那些和有慢性抗凝血治疗需要的患者。在某些实施方案中，受试者具有炎症性疾病、病症或病状或处于发展炎症性疾病、病症或病状的风险中。在某些实施方案中，受试者具有以下疾病或处于发展以下疾病的风险中：过敏性疾病(例如，过敏性鼻炎、慢性鼻窦炎)、自身免疫疾病(例如，多发性硬化、关节炎、硬皮病、牛皮癣、乳糜泻)、心血管疾病、结肠炎、糖尿病(例如，1型胰岛素依赖性糖尿病)、超敏反应(例如，1型、2型、3型或4型超敏反应)、感染性疾病(例如，病毒感染、分枝杆菌感染、蠕虫感染)、后葡萄膜炎、气道高反应性、哮喘、特应性皮炎、结肠炎、子宫内膜异位、甲状腺疾病(例如，格雷夫斯病)以及胰腺炎。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向因子VII核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
8.因子XI
凝血因子XI(也称为血浆促凝血酶原激酶前体(plasma thromboplastinantecedent))为凝血途径的重要成员。高水平的因子XI增加了血栓形成的风险，所述血栓形成为涉及造成大多数心脏病发作和中风的异常血凝块形成的过程。因子XI的水平升高还增加了静脉血栓形成的风险，所述静脉血栓形成为手术之后的常见问题，所述手术具体为主要骨科手术，如膝盖或髋关节置换。缺乏因子XI的人们具有较低的血栓栓塞事件发生率，其中出血风险的增加最小。靶向因子XI的反义化合物先前已公开于WO2010/045509和WO2010/121074中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。目前，靶向因子XI的反义寡核苷酸ISIS-FXIRx处于2期临床研究以评估ISIS-FXIRx在全膝关节成形术后的患者中减少血栓形成事件数目而不增加出血的有效性。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向因子XI核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860005142
登录号NM_000128.3的序列的因子XI核酸，所述序列作为SEQ ID NO：9并入本文。在某些所述实施方案中，缀合反义化合物与SEQ ID NO：9至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：9的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：44-48的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：9的缀合反义化合物包含SEQID NO：44-48的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表9：靶向因子XI SEQ ID NO：9的反义化合物
Figure BDA0003357312860005141
因子XI治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向因子XI核酸的缀合反义化合物来调节受试者中因子XI的表达的方法。在某些实施方案中，减少了因子XI的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向因子XI核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有血栓栓塞病状或处于发展血栓栓塞病状的风险中，如心脏病发作、中风、深静脉血栓形成或肺栓塞。在某些实施方案中，受试者处于发展血栓栓塞病状的风险中和/或以另外的方式有抗凝血疗法的需要。所述受试者的实例包括经历主要矫形手术的那些和有慢性抗凝血治疗需要的患者。在某些实施方案中，受试者具有炎症性疾病、病症或病状或处于发展炎症性疾病、病症或病状的风险中。在某些实施方案中，受试者具有以下疾病或处于发展以下疾病的风险中：过敏性疾病(例如，过敏性鼻炎、慢性鼻窦炎)、自身免疫疾病(例如，多发性硬化、关节炎、硬皮病、牛皮癣、乳糜泻)、心血管疾病、结肠炎、糖尿病(例如，1型胰岛素依赖性糖尿病)、超敏反应(例如，1型、2型、3型或4型超敏反应)、感染性疾病(例如，病毒感染、分枝杆菌感染、蠕虫感染)、后葡萄膜炎、气道高反应性、哮喘、特应性皮炎、结肠炎、子宫内膜异位、甲状腺疾病(例如，格雷夫斯病)以及胰腺炎。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向因子XI核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
9.糖皮质激素受体(GCCR)
编码人糖皮质激素受体(也称为核受体亚家族3C组成员1；NR3C1；GCCR；GCR；GRL；糖皮质激素受体、淋巴细胞)的互补DNA克隆首次于1985年分离(Hollenberg等，Nature，1985，318，635-641；Weinberger等，Science，1985，228，740-742)。该基因位于人染色体5q11-q13上并且由9个外显子组成(Encio和Detera-Wadleigh，J Biol Chem，1991，266，7182-7188；Gehring等，Proc Natl Acad Sci U S A，1985，82，3751-3755)。
人糖皮质激素受体由三个主要结构域组成，即N-末端激活结构域、中心DNA结合结构域和C-末端配体结合结构域(Giguere等，Cell，1986，46，645-652)。在不存在配体的情况下，糖皮质激素受体与若干其它蛋白质形成大的异聚复合物，当配体结合时糖皮质激素受体与所述异聚复合物解离。
在肝脏中，糖皮质激素激动剂通过激活糖皮质激素受体来增加肝葡萄糖产生，其随后导致糖异生酶磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶的表达增加。通过糖异生，通过非己糖前体如乳酸盐、丙酮酸盐和丙氨酸形成葡萄糖(Link，Curr OpinInvestig Drugs，2003，4，421-429)。
靶向GCCR的反义化合物先前已公开于WO2007/035759、WO2005/071080和PCT申请号PCT/US2012/061984中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。靶向GCCR的反义寡核苷酸ISIS-GCCRRx最近完成了I期临床研究，具有阳性结果。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向GCCR核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有从核碱基3818000至3980000截短的GENBANK登录号NT_029289.10的补体的序列的GCCR核酸，所述序列作为SEQ ID NO：10并入本文。在某些所述实施方案中，靶向SEQ ID NO：10的缀合反义化合物与SEQ ID NO：10至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：10的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：49-59的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：10的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：49-59的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表10：靶向GCCR SEQ ID NO：10的反义化合物
Figure BDA0003357312860005171
GCCR治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向GCCR核酸的缀合反义化合物来调节受试者中GCCR的表达的方法。在某些实施方案中，减少了GCCR的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向GCCR核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有代谢相关疾病，包括代谢综合征、糖尿病、胰岛素抗性、糖尿病性血脂异常、高甘油三酯血症、肥胖以及体重增加。
糖尿病的特征在于许多身体症状和生理症状。本领域技术人员已知与2型糖尿病相关的任何症状可如在上述方法中所阐述来改善或以另外的方式调节。在某些实施方案中，症状为选自由以下组成的组的身体症状：葡萄糖水平增加、增重增加、尿频、异常口渴、极度饥饿、极度疲劳、视力模糊、频繁感染、四肢刺痛或麻木、皮肤干燥瘙痒、体重减轻、溃疡愈合缓慢以及牙龈肿痛。在某些实施方案中，症状为选自由以下组成的组的生理症状：胰岛素抗性增加、葡萄糖水平增加、脂肪质量增加、代谢速率降低、葡萄糖清除率降低、葡萄糖耐受性降低、胰岛素敏感性降低、肝胰岛素敏感性降低、脂肪组织尺寸和重量增加、身体脂肪增加以及体重增加。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向GCCR核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
10.胰高血糖素受体(GCGR)
糖尿病为特征在于胰岛素分泌和/或作用受损的慢性代谢病症。在2型糖尿病(T2DM)中，胰岛素抗性导致胰岛素不能控制糖异生酶的活性，并且许多受试者还在禁食和餐后状态下表现出不适当的循环胰高血糖素水平。胰高血糖素从胰岛的α-细胞中分泌并且通过调节肝葡萄糖产生来调节葡萄糖体内平衡(Quesada等，J.Endocrinol.2008.199：5-19)。胰高血糖素通过激活其受体GCGR对靶组织施加其作用。胰高血糖素受体为62kDa蛋白质，其为B类G-蛋白偶联的受体家族的成员(Brubaker等，Recept.Channels.2002.8：179-88)。GCGR激活引起由G蛋白(Gsα和Gq)产生的信号转导，由此Gsα激活腺苷酸环化酶，这导致cAMP产生，从而导致蛋白激酶A的水平增加。肝脏中的GCGR信号传导通过诱导糖原分解和糖异生连同抑制糖原生成来导致肝葡萄糖产生增加(Jiang和Zhang.Am.J.Physiol.Endocrinol.Metab.2003.284：E671-E678)。GCGR还在肝外组织中表达，所述肝外组织包括心脏、肠平滑肌、肾、脑以及脂肪组织(Hansen等，Peptides.1995.16：1163-1166)。
靶向GCGR的反义化合物先前已公开于WO2004/096996、WO2004/096016、WO2007/035771和WO2013/043817中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。靶向GCGR的反义寡核苷酸ISIS-GCGRRx最近完成了I期临床研究，具有阳性结果。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向GCGR核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有从核碱基16865000至16885000截短的
Figure BDA0003357312860005192
登录号NW_926918.1的序列的GCGR核酸，所述序列作为SEQ ID NO：11并入本文。在某些所述实施方案中，靶向SEQ ID NO：11的缀合反义化合物与SEQ ID NO：11至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：11的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：60-67的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：11的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：60-67的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表11：靶向GCGR SEQ ID NO：11的反义化合物
Figure BDA0003357312860005191
Figure BDA0003357312860005201
GCGR治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向GCGR核酸的缀合反义化合物来调节受试者中GCGR的表达的方法。在某些实施方案中，减少了GCGR的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向GCGR核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有代谢相关疾病，包括代谢综合征、糖尿病、胰岛素抗性、糖尿病性血脂异常、高甘油三酯血症、肥胖以及体重增加。
糖尿病的特征在于许多身体和生理体征和/或症状。本领域技术人员已知与2型糖尿病相关的任何症状可如在上述方法中所阐述来改善或以另外的方式调节。在某些实施方案中，症状或体征为身体症状或体征，如葡萄糖水平增加、增重增加、尿频、异常口渴、极度饥饿、极度疲劳、视力模糊、频繁感染、四肢刺痛或麻木、皮肤干燥瘙痒、体重减轻、溃疡愈合缓慢以及牙龈肿痛。在某些实施方案中，症状或体征为选自由以下组成的组的生理症状或体征：胰岛素抗性增加、葡萄糖水平增加、脂肪质量增加、代谢速率降低、葡萄糖清除率降低、葡萄糖耐受性降低、胰岛素敏感性降低、肝胰岛素敏感性降低、脂肪组织尺寸和重量增加、身体脂肪增加以及体重增加。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向GCGR核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
11.乙型肝炎(HBV)
乙型肝炎为通过受污染的材料如血液和血液制品、受污染的针肠胃外传播、性传播以及由受感染的或为携带者的母亲垂直传播给其后代的病毒性疾病。据世界卫生组织估计全世界已有大于20亿人感染，其中每年约4百万急性病例、每年1百万死亡以及3.5-4亿慢性携带者(World Health Organization：Geographic Prevalence of Hepatitis BPrevalence，2004.http://www.who.int/vaccines-surveillance/graphics/htmls/hepbprev.htm)。
HBV病毒为仅感染人和非人灵长类动物的双链嗜肝病毒。病毒复制主要发生在肝脏中，并且在较小程度上，发生在肾、胰腺、骨髓和脾脏中(Hepatitis B virusbiology.Microbiol Mol Biol Rev.64：2000；51-68.)。病毒和免疫标志物在血液中可检测并且特征性抗原-抗体模式随时间推移而发展。第一可检测病毒标志物为HBsAg，接着为乙型肝炎e抗原(HBeAg)和HBV DNA。在孵育时期期间滴度可能为高的，但HBV DNA和HBeAg水平在疾病发作时开始下降并且在临床疾病顶峰时可能为不可检测的(Hepatitis B virusinfection-natural history and clinical consequences.N Engl J Med..350：2004；1118-1129)。HBeAg为血液中可检测的病毒标志物并且与活性病毒复制、并且因此高病毒载量和感染性相关(Hepatitis B e antigen-the dangerous end game of hepatitis B.NEngl J Med.347：2002；208-210)。抗HBsAb和抗HBcAb(IgG)的存在表明了先前感染的个体的恢复和免疫。
目前由美国肝脏疾病研究协会(AASLD)和欧洲肝脏研究协会(EASL)推荐的用于慢性HBV感染的疗法包括干扰素α(INFα)、聚乙二醇化干扰素α-2a(Peg-IFN2a)、恩替卡韦(entecavir)和替诺福韦(tenofovir)。核苷和核碱基疗法(恩替卡韦和替诺福韦)在减少病毒载量上是成功的，但HBeAg血清转化和HBsAg消失的速率甚至比使用IFNα疗法所获得的那些还要低。还使用了包括拉米夫定(lamivudine)(3TC)、替比夫定(telbivudine)(LdT)和阿德福韦(adefovir)的其它类似疗法，但一般来说对于核苷/核碱基疗法，抗性的出现限制了治疗功效。
因此，本领域中存在发现和开发新的抗病毒疗法的需要。另外，存在对能够增加HBeAg和HBsAg血清转化速率的新的抗HBV疗法的需要。最近的临床研究发现了血清转化与HBeAg减少(Fried等(2008)Hepatology 47：428)和HBsAg减少(Moucari等(2009)Hepatology 49：1151)之间的关系。抗原水平的减少可允许HBV感染的免疫学控制，因为据认为高水平抗原诱导免疫耐受性。目前用于HBV的核苷疗法能够急剧减少HBV的血清水平，但对HBeAg和HBsAg水平几乎没有影响。
靶向HBV的反义化合物先前已公开于WO2011/047312、WO2012/145674和WO2012/145697中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。计划临床研究以评估靶向HBV的反义化合物在患者中的作用。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向HBV核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860005221
登录号U95551.1的序列的HBV核酸，所述序列作为SEQ ID NO：12并入本文。在某些所述实施方案中，靶向SEQID NO：12的缀合反义化合物与SEQ ID NO：12至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：12的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：68的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：12的缀合反义化合物包含SEQID NO：68的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表12：靶向HBV SEQ ID NO：12的反义化合物
Figure BDA0003357312860005231
HBV治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向HBV核酸的缀合反义化合物来调节受试者中HBV的表达的方法。在某些实施方案中，减少了HBV的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向HBV核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有HBV相关的病状。在某些实施方案中，HBV相关的病状包括但不限于：慢性HBV感染、炎症、纤维化、硬化、肝癌、血清性肝炎、黄疸、肝癌、肝脏炎症、肝纤维化、肝硬化、肝衰竭、弥漫性肝细胞炎症性疾病、噬血细胞综合征、血清性肝炎以及HBV病毒血症。在某些实施方案中，当与对于存在乙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒抗原的阳性测试或对于存在特异于乙型肝炎病毒抗原的抗体的阳性测试结合时，HBV相关的病状可具有以下病状，所述病状可包括以下中的任何或所有：流感样疾病、虚弱、疼痛、头痛、发热、食欲不振、腹泻、黄疸、恶心和呕吐、身体肝脏区域上的疼痛、泥色或灰色粪便、浑身瘙痒以及深色尿。在某些实施方案中，受试者处于HBV相关病状的风险中。这包括具有发展HBV相关病状的一种或多种风险因素的受试者，所述一种或多种风险因素包括性暴露于感染乙型肝炎病毒的个体、与具有终身乙型肝炎病毒感染的个体生活在相同的房子中、暴露于感染乙型肝炎病毒的人血液、注射违禁药物、具有血友病的人以及参观乙型肝炎常见的地区。在某些实施方案中，受试者被鉴定为有治疗HBV相关病状的需要。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向HBV核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
12.蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)
PTP1B为PTP家族的成员(Barford等，Science 1994.263：1397-1404)并且为胞质酶(Neel和Tonks，Curr.Opin.Cell Biol.1997.9：193-204)。PTP1B普遍表达，包括作为胰岛素代谢的关键调节物的组织如肝脏、肌肉和脂肪(Goldstein，Receptor 1993.3：1-15)，其中所述PTP1B为主要PTP酶。
PTP1B被认为是胰岛素信号传导的阴性调节物。PTP1B与胰岛素受体相互作用并且将其脱磷酸化，因此减弱并且潜在地终止胰岛素信号传导转导(Goldstein等，J.Biol.Chem.2000.275：4383-4389)。已在敲除小鼠模型中展示了PTP1B在胰岛素信号传导中的生理作用。保护缺乏PTP1B基因的小鼠避免胰岛素抗性和肥胖(Elchebly等，Science1999.283：1544-1548)。PTP1B缺陷型小鼠具有低肥胖、增加的基础代谢速率以及总能量消耗并且被保护避免饮食诱导的肥胖。胰岛素刺激的葡萄糖摄取在骨骼肌中升高，而脂肪组织不受影响，从而证明PTP1B缺陷型小鼠中的胰岛素敏感性增加为组织特异性(Klaman等，Mol.Cell.Biol.2000.20：5479-5489)。这些小鼠为表型正常的并且还对饮食诱导的肥胖、胰岛素抗性有抗性并且在高脂肪饮食方面具有显著较低的甘油三酯水平。因此，抑制罹患II型糖尿病、代谢综合征、糖尿病性血脂异常或相关的代谢疾病的患者中的PTP1B将为有益的。
靶向PTP1B的反义化合物先前已公开于WO2001/053528、WO2002/092772、WO2004/071407、WO2006/044531、WO2012/142458、WO2006/044531和WO2012/142458中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。靶向PTP1B的反义寡核苷酸ISIS-PTP1BRx最近完成了I期临床研究，具有阳性结果。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向PTP1B核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860005252
登录号NM_002827.2的序列(所述序列作为SEQ ID NO：13并入本文)或从核碱基14178000至14256000截短的GENBANK登录号NT_011362.9的序列(所述序列作为SEQ ID NO：14并入本文)的PTP1B核酸。在某些所述实施方案中，靶向SEQ ID NO：13的缀合反义化合物与SEQ ID NO：13至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：13的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：69-72的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：13的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：69-72的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表13：靶向PTP1B SEQ ID NO：13的缀合反义化合物
Figure BDA0003357312860005251
PTP1B治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向PTP1B核酸的缀合反义化合物来调节受试者中PTP1B的表达的方法。在某些实施方案中，减少了PTP1B的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向PTP1B核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有代谢相关疾病，包括代谢综合征、糖尿病、胰岛素抗性、糖尿病性血脂异常、高甘油三酯血症、肥胖以及体重增加。
糖尿病的特征在于许多身体症状和生理症状。本领域技术人员已知与2型糖尿病相关的任何症状可如在上述方法中所阐述来改善或以另外的方式调节。在某些实施方案中，症状为选自由以下组成的组的身体症状：葡萄糖水平增加、增重增加、尿频、异常口渴、极度饥饿、极度疲劳、视力模糊、频繁感染、四肢刺痛或麻木、皮肤干燥瘙痒、体重减轻、溃疡愈合缓慢以及牙龈肿痛。在某些实施方案中，症状为选自由以下组成的组的生理症状：胰岛素抗性增加、脂肪质量增加、代谢速率降低、葡萄糖清除率降低、葡萄糖耐受性降低、胰岛素敏感性降低、肝胰岛素敏感性降低、脂肪组织尺寸和重量增加、身体脂肪增加以及体重增加。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向PTP1B核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
13.STAT3
STAT(转录的信号转导物和激活物)家族蛋白包含在转录的信号转导和激活中起双重作用的DNA结合蛋白。目前，存在六个不同的STAT家族成员(STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5和STAT6)和若干同种型(STAT1α、STAT1β、STAT3α和STAT3β)。STAT的活性通过各种细胞因子和促有丝分裂刺激物来调节。细胞因子与其受体的结合导致与这些受体相关的詹纳斯蛋白酪氨酸激酶(JAK)的激活。这使STAT磷酸化，从而导致STAT应答基因易位至细胞核和转录激活。STAT上的特定酪氨酸残基上的磷酸化导致其激活，从而导致结合特定基因启动子序列的STAT的同二聚体和/或异二聚体的形成。通过STAT激活由细胞因子介导的事件包括细胞增殖和分化以及细胞凋亡的预防。
STAT激活的特异性是由于特异性细胞因子，即，每个STAT应答于少数特异性细胞因子。还已发现其它非细胞因子信号传导分子(如生长因子)激活STAT。这些因子对与蛋白酪氨酸激酶相关的细胞表面受体的结合也引起STAT的磷酸化。
具体来说，已发现STAT3(也称为急性期应答因子(APRF))应答于白细胞介素-6(IL-6)以及表皮生长因子(EGF)(Darnell，Jr.，J.E.等，Science，1994，264，1415-1421)。另外，已发现STAT3在通过干扰素引起的信号转导中具有重要作用(Yang，C.-H.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1998，95，5568-5572)。有证据表明STAT3可通过MAPK途径来调节。ERK2诱导丝氨酸磷酸化并且还与STAT3缔合(Jain，N.等，Oncogene，1998，17，3157-3167)。
STAT3在大多数细胞类型中表达(Zhong，Z.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91，4806-4810)。它诱导涉及响应于组织损伤和炎症的基因表达。STAT3还已显示通过表达bcl-2防止细胞凋亡(Fukada，T.等，Immunity，1996，5，449-460)。
最近，在转化细胞的线粒体中检测到STAT3，并且其显示出促进糖酵解和氧化磷酸化活性，类似于癌细胞(Gough，D.J.等，Science，2009，324，1713-1716)。线粒体中STAT3的抑制通过激活的Ras使恶性转化受损。数据证实了除了其细胞核作用以外的线粒体中STAT3的Ras介导的转化功能。
STAT3的异常表达或组成型表达与许多疾病过程相关。
靶向STAT3的反义化合物先前已公开于WO2012/135736和WO2005/083124中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。靶向STAT3的反义寡核苷酸ISIS-STAT3Rx目前处于1/2期临床试验以研究其在治疗患有癌症的受试者中的有效性。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向STAT3核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860005282
登录号NM_139276.2的序列的STAT3核酸，所述序列作为SEQ ID NO：15并入本文。在某些所述实施方案中，靶向SEQ ID NO：15的缀合反义化合物与SEQ ID NO：15至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：15的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：73的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：15的缀合反义化合物包含SEQID NO：73的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表14：靶向STAT3 SEQ ID NO：15的反义化合物
Figure BDA0003357312860005281
STAT3治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向STAT3核酸的缀合反义化合物来调节受试者中STAT3的表达的方法。在某些实施方案中，减少了STAT3的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向STAT3核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有过度增殖性疾病、病症或病状。在某些实施方案中，所述过度增殖性疾病、病症和病状包括癌症以及相关的恶性肿瘤和转移。在某些实施方案中，所述癌症包括肺癌(包括非小细胞肺癌(NSCLC))、胰腺癌、结肠直肠癌、多发性骨髓瘤、肝细胞癌(HCC)、成胶质细胞瘤、卵巢癌、骨肉瘤、头颈癌、乳腺癌、表皮样癌、肠腺瘤、前列腺癌以及胃癌。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向STAT3核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
14.甲状腺素运载蛋白(TTR)
TTR(也称为前白蛋白、高甲状腺素血症(hyperthytoxinemia)、前白蛋白异常的(dysprealbuminemic)、甲状腺素；老年全身性淀粉样变性、淀粉样多神经病、淀粉样变性I、PALB；甲状腺素运载蛋白异常的(dystransthyretinemic)、HST2651；TBPA；前白蛋白异常的甲状腺机能正常的高甲状腺素血症(dysprealbuminemic euthyroidalhyperthyroxinemia))为负责甲状腺素和视黄醇运输的血清/血浆和脑脊液蛋白(Sakaki等，Mol Biol Med.1989，6：161-8)。在结构上，TTR为同四聚体；蛋白质的点突变和错折叠导致淀粉样纤维沉积并且与如老年全身性淀粉样变性(SSA)、家族性淀粉样多神经病(FAP)和家族性淀粉样心肌病(FAC)的病症相关。
TTR主要通过肝脏和脑的脉络丛来合成并且在较小程度上通过人的视网膜来合成(Palha，Clin Chem Lab Med，2002，40，1292-1300)。在肝脏中合成的甲状腺素运载蛋白分泌到血液中，而源于脉络丛的甲状腺素运载蛋白的目的地为CSF。在脉络丛中，甲状腺素运载蛋白合成代表了约20％的总局部蛋白合成和多达25％的总CSF蛋白(Dickson等，J BiolChem，1986，261，3475-3478)。
随着遗传和免疫组织化学诊断测试的可用，已在全世界许多国家发现了患有TTR淀粉样变性的患者。最近研究表明TTR淀粉样变性不像先前所认为的那样是罕见的地方病，并且可影响多达25％的老年人口(Tanskanen等，Ann Med.2008；40(3)：232-9)。
在生物化学水平上，TTR被鉴定为FAP患者的淀粉样沉积物中的主要蛋白质组分(Costa等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1978，75：4499-4503)，并且后来发现在蛋白质的位置30上用甲硫氨酸取代缬氨酸为引起疾病的最常见的分子缺陷(Saraiva等，J.Clin.Invest.1984，74：104-119)。在FAP中，TTR聚集体和淀粉样纤维的广泛全身性细胞外沉积发生在整个结缔组织上，具体来说在外周神经系统中(Sousa和Saraiva，Prog.Neurobiol.2003，71：385-400)。TTR沉积之后，开始于小直径的无髓和有髓纤维的轴突退化发生，并且最终导致神经节部位处的神经元丢失。
靶向TTR的反义化合物先前已公开于US2005/0244869、WO2010/017509和WO2011/139917中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。靶向TTR的反义寡核苷酸ISIS-TTRRx目前处于2/3期临床试验以研究其在治疗患有家族性淀粉样多神经病的受试者中的有效性。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向TTR核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860005301
登录号NM_000371.3的序列的TTR核酸，所述序列作为SEQ ID NO：16并入本文。在某些所述实施方案中，靶向SEQID NO：16的缀合反义化合物与SEQ ID NO：16至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：16的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：74-81的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：16的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：74-81的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表15：靶向TTR SEQ ID NO：16的反义化合物
Figure BDA0003357312860005311
TTR治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向TTR核酸的缀合反义化合物来调节受试者中TTR的表达的方法。在某些实施方案中，减少了TTR的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向TTR核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有甲状腺素运载蛋白相关的疾病、病症或病状或其症状。在某些实施方案中，甲状腺素运载蛋白相关的疾病、病症或病状为甲状腺素运载蛋白淀粉样变性。如本文所使用的“甲状腺素运载蛋白相关的淀粉样变性”或“甲状腺素运载蛋白淀粉样变性”或“甲状腺素运载蛋白淀粉样病”为与甲状腺素运载蛋白的功能异常或调节异常相关的任何病理或疾病，所述甲状腺素运载蛋白的功能异常或调节异常导致形成含甲状腺素运载蛋白的淀粉样纤维。甲状腺素运载蛋白淀粉样变性包括但不限于遗传性TTR淀粉样变性、软脑膜淀粉样变性、家族性淀粉样多神经病(FAP)、家族性淀粉样心肌病、家族性眼软脑膜淀粉样变性、老年心脏淀粉样变性或老年全身性淀粉样变性。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向TTR核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
15.PCSK9
PCSK9(也称为前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶科星(kexin)9)为枯草杆菌蛋白酶丝氨酸蛋白酶家族的成员。其它八种哺乳动物枯草杆菌蛋白酶PCSK1-PCSK8(也称为PC1/3、PC2、弗林蛋白酶、PC4、PC5/6、PACE4、PC7和S1P/SKI-1)为在分泌途径中加工各种各样的蛋白质并且在各种生物过程中起作用的前蛋白转化酶(Bergeron，F.(2000)J.Mol.Endocrinol.24，1-22；Gensberg，K.，(1998)Semin.Cell Dev.Biol.9，11-17；Seidah，N.G.(1999)Brain Res.848，45-62；Taylor，N.A.，(2003)FASEB J.17，1215-1227以及Zhou，A.，(1999)J.Biol.Chem.274，20745-20748)。PCSK9已被提出在胆固醇代谢中起作用。PCSK9mRNA表达通过在小鼠中喂食饮食胆固醇来下调(Maxwell，K.N.，(2003)J.LipidRes.44，2109-2119)，通过HepG2细胞中的他汀类来上调(Dubuc，G.，(2004)Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.24，1454-1459)并且在固醇调节元件结合蛋白(SREBP)转基因小鼠中上调(Horton，J.D.，(2003)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 100，12027-12032)，类似于胆固醇生物合成酶和低密度脂蛋白受体(LDLR)。此外，已发现PCSK9错义突变与常染色体显性高胆固醇血症的形式(Hchola3)相关(Abifadel，M.等(2003)Nat.Genet.34，154-156、Timms，K.M.，(2004)Hum.Genet.114，349-353；Leren，T.P.(2004)Clin.Genet.65，419-422)。PCSK9还可在确定一般人群中的LDL胆固醇水平中起作用，因为单核苷酸多态性(SNP)与日本人中的胆固醇水平相关(Shioji，K.，(2004)J.Hum.Genet.49，109-114)。
靶向PCSK9的反义化合物先前已公开于美国专利8,084,437；8,093,222；8,664,190以及国际申请WO 2008/066776和WO 2009/148605中。然而，仍存在为患者提供另外的并且更有效的治疗选择的需要。
靶向PCSK9核酸的某些缀合反义化合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物靶向具有
Figure BDA0003357312860005321
登录号的序列的PCSK9核酸，所述序列作为SEQ ID NO：160并入本文。在某些所述实施方案中，靶向SEQ IDNO：160的缀合反义化合物与SEQ ID NO：160至少90％、至少95％或100％互补。
在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：160的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：156-159的至少8个连续核碱基序列。在某些实施方案中，靶向SEQ ID NO：160的缀合反义化合物包含SEQ ID NO：156-159的核碱基序列。在某些实施方案中，所述缀合反义化合物包含缀合物，所述缀合物包含1-3个GalNAc配体。在某些实施方案中，所述反义化合物包含本文所公开的缀合物。
表15：靶向PCSK9 SEQ ID NO：156的反义化合物
Figure BDA0003357312860005331
PCSK9治疗适应症
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向PCSK9核酸的缀合反义化合物来调节受试者中PCSK9的表达的方法。在某些实施方案中，减少了PCSK9的表达。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用药物组合物中靶向PCSK9核酸的缀合反义化合物来治疗受试者的方法。在某些实施方案中，受试者具有PCSK9相关的疾病、病症或病状或其症状。在某些实施方案中，PCSK9相关的疾病、病症或病状为代谢或心血管疾病。
在某些实施方案中，本发明提供了用于使用靶向PCSK9核酸的缀合反义化合物制备药品的方法。
E.某些核酸GalNAc缀合物
在某些实施方案中，缀合反义化合物包含连接至GalNAc缀合物的具有在以下表16中的反义化合物的核碱基序列的反义化合物。在某些实施方案中，缀合反义化合物包含连接至GalNAc缀合物的具有以下表16中的反义化合物的核碱基序列和化学修饰的反义化合物。除非另外指出，否则所有核苷间键联为硫代磷酸酯核苷间键联。下标“l”指示LNA双环核苷。下标“d”指示2’-脱氧核苷。下标“e”指示2’-MOE修饰核苷。下标“v”指示2-氨基-2’-脱氧腺苷。
表16
Figure BDA0003357312860005341
Figure BDA0003357312860005351
Figure BDA0003357312860005361
适用于与本文的任何缀合物缀合的另外序列和寡核苷酸
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的真核起始因子4E(eIF4E)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向dIF4E的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向dIF4E的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向eIF4E的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于US 7,425,544中的那些，所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 7,425,544中的SEQ ID NO：18-122中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 7,425,544中的SEQ ID NO：212-459中的任一个的核碱基序列的反义链和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的转录3的信号转导物和激活物(STAT3)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向STAT3的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向STAT3的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向STAT3的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于WO 2012/135736、WO 2005/083124和US 6,727,064中的那些；所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2012/135736中的SEQID NO：9-426、430-442、445-464、471-498、500-1034、1036-1512和1541-2757中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2005/083124中的SEQ ID NO：2-81、108-150和159-381中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 6,727,064中的SEQ ID NO：2-81和108-150中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的糖皮质激素受体(GCCR)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向GCCR的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向GCCR的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向GCCR的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于WO2005/071080、WO 2007/035759和WO 2007/136988中的那些；所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2005/071080中的SEQ ID NO：30-216和306-310中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2007/035759中的SEQ ID NO：26-113中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所公开的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2007/136988中的SEQ ID NO：413-485中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所公开的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的胰高血糖素受体(GCGR)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向GCGR的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向GCGR的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向GCGR的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于US 7,750,142；US 7,399,853；WO 2007/035771和WO 2007/134014中的那些；所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 7,750,142中的SEQ IDNO：20-399中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 7,399,853中的SEQ ID NO：20-399中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2007/035771中的SEQ ID NO：2的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2007/134014中的SEQ ID NO：486-680中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向PTP1B的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向PT1B的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向PTP1B的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于US 7,563,884和WO 2007/131237中的那些，所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 7,563,884中的SEQ ID NO 17-96和244-389中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2007/131237中的SEQ ID NO 886-1552中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向FGFR4的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向FGFR4的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向FGFR4的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于WO 2009/046141中的那些，所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2009/046141中的SEQ ID NO 21-24、28、29、36、38、39、43、48、51、54-56、58-60、64-66和92-166中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的α-1-抗胰蛋白酶(A1AT)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向A1AT的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向A1AT的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向A1AT的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于WO2013/142514中的那些，所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2013/142514中的SEQ ID NO 20-41中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的因子VII的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向因子VII的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向因子VII的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向因子VII的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于WO 2013/119979和WO 2009/061851中的那些，所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2013/119979中的SEQ ID NO 21-659中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2009/061851中的SEQ ID NO 4-159和168-611中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的因子XI的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向因子XI的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向因子XI的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向因子XI的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于WO 2010/045509和WO 2010/121074中的那些，所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2010/045509中的SEQ ID NO 15-270中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO2010/121074中的SEQ ID NO 15-270中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的乙型肝炎病毒(HBV)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向HBV的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向HBV的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向HBV的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于WO 2012/145697和WO 2012/145697中的那些，所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2012/145697中的SEQ ID NO 5-310、321-802、804-1272、1288-1350、1364-1372、1375、1376和1379中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2011/047312中的SEQID NO 14-22中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的甲状腺素运载蛋白(TTR)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向TTR的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向TTR的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向TTR的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于WO 2011/139917和US 8,101,743中的那些，所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2011/139917中的SEQ ID NO 8-160、170-177中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 8,101,743中的SEQ ID NO 12-89中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有与公开于US 8,101,743中的SEQ ID NO 90-133中的任一个的优选靶区段互补的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的载脂蛋白(a)(apo(a))的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向apo(a)的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向apo(a)的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向apo(a)的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于WO2013/177468；US 8,673,632；US 7,259,150和美国专利申请公布号US 2004/0242516中的那些；所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO2013/177468中的SEQ ID NO 12-130、133、134中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 8,673,632中的SEQID NO 11-45和85-96中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 7,259,150中的SEQ ID NO 11-45中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于美国专利申请公布号US 2004/0242516中的SEQ ID NO 7-41中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的载脂蛋白B(ApoB)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向ApoB的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向ApoB的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向ApoB的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于美国专利申请公布号US 2010/0331390、US 2009/0306180和US 2005/0009088中的那些；所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 2010/0331390中的SEQ ID NO：20的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 2009/0306180中的SEQ ID NO 16-213中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 2005/0009088中的SEQ ID NO 17-70、124-317、319-333、335-502、504-804和864-887中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的载脂蛋白C-III(ApoC-III)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向ApoC-III的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向ApoC-III的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向ApoC-III的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于美国专利申请公布号US 2013/0317085中的那些；所述专利申请公布以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 2013/0317085中的SEQ IDNO 19-96和209-221中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/9型科星(PCSK9)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向PCSK9的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向PCSK9的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向PCSK9的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于US 8,143,230和US 8,664,190中的那些；所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 8,143,230中的SEQ ID NO 329-403中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于US 8,664,190中的SEQ ID NO 4-455和458-461中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
在某些实施方案中，化合物包含靶向本领域中已知的C反应蛋白(CRP)的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，靶向CRP的反义寡核苷酸为RNAi(siRNA或ssRNA)化合物。在某些实施方案中，靶向CRP的反义寡核苷酸为基于RNA酶H的反义化合物。适用于缀合的靶向CRP的反义寡核苷酸的实例包括但不限于公开于WO 2003/010284、WO2005/005599和WO 2007/143317中的那些；所述专利以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2003/010284中的SEQ ID NO 10-63中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO 2005/005599中的SEQ ID NO 19-72、76-259和598-613中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。在某些实施方案中，化合物包含具有公开于WO2007/143317中的SEQ ID NO 409-412中的任一个的核碱基序列的反义寡核苷酸和本文所述的缀合物基团。所有上述提到的SEQ ID NO的核碱基序列均以引用的方式并入本文。
F.某些药物组合物
在某些实施方案中，本公开提供了包含一种或多种反义化合物的药物组合物。在某些实施方案中，所述药物组合物包含合适的药学上可接受的稀释剂或载体。在某些实施方案中，药物组合物包含无菌盐水溶液和一种或多种反义化合物。在某些实施方案中，所述药物组合物由无菌盐水溶液和一种或多种反义化合物组成。在某些实施方案中，无菌盐水为药用级盐水。在某些实施方案中，药物组合物包含一种或多种反义化合物和无菌水。在某些实施方案中，药物组合物由一种或多种反义化合物和无菌水组成。在某些实施方案中，无菌盐水为药用级水。在某些实施方案中，药物组合物包含一种或多种反义化合物和磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在某些实施方案中，药物组合物由一种或多种反义化合物和无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)组成。在某些实施方案中，无菌盐水为药用级PBS。
在某些实施方案中，反义化合物可与药学上可接受的活性物质和/或惰性物质混合用于制备药物组合物或制剂。组合物和用于配制药物组合物的方法取决于许多标准，包括但不限于施用途径、疾病的程度或待施用的剂量。
包含反义化合物的药物组合物涵盖任何药学上可接受的盐、酯或所述酯的盐。在某些实施方案中，包含反义化合物的药物组合物包含一种或多种寡核苷酸，当向动物(包括人)施用时，所述一种或多种寡核苷酸能够(直接地或间接地)提供生物活性代谢物或其残余物。因此，例如，本公开还涉及反义化合物的药学上可接受的盐、前药、所述前药的药学上可接受的盐以及其它生物等效物。合适的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。
前药可包括在寡核苷酸的一个或两个末端处掺入另外的核苷(所述核苷被体内的内源性核酸酶裂解)以形成活性反义寡核苷酸。
脂质部分已用于各种方法中的核酸疗法中。在某些所述方法中，将核酸引入到由阳离子脂质和中性脂质的混合物制成的预先形成的脂质体或脂质复合物中。在某些方法中，在不存在中性脂质的情况下形成具有单阳离子脂质或聚阳离子脂质的DNA复合物。在某些实施方案中，对脂质部分进行选择，以增加药剂至具体细胞或组织的分布。在某些实施方案中，对脂质部分进行选择，以增加药剂至脂肪组织的分布。在某些实施方案中，对脂质部分进行选择，以增加药剂至肌肉组织的分布。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含一种或多种修饰寡核苷酸和一种或多种赋形剂。在某些所述实施方案中，赋形剂选自水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉酶、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素以及聚乙烯吡咯烷酮。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含递送系统。递送系统的实例包括但不限于脂质体和乳剂。某些递送系统有用于制备某些药物组合物，所述药物组合物包括包含疏水化合物的那些。在某些实施方案中，使用了某些有机溶剂如二甲亚砜。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含设计来将本公开的一种或多种药剂递送至特定组织或细胞类型的一个或多个组织特异性递送分子。例如，在某些实施方案中，药物组合物包括涂覆有组织特异性抗体的脂质体。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含共溶剂系统。某些所述共溶剂系统包含例如苯甲醇、非极性表面活性剂、水可混溶的有机聚合物以及水相。在某些实施方案中，所述共溶剂系统用于疏水化合物。所述共溶剂系统的非限制性实例为VPD共溶剂系统，其为包含3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨酯80TM和65％w/v聚乙二醇300的无水乙醇溶液。所述共溶剂系统的比例可在不显著改变其溶解度和毒性特征的情况下明显改变。此外，共溶剂组分的身份可改变：例如，可使用其它表面活性剂替代聚山梨酯80TM；可改变聚乙二醇的分数大小；其它生物相容的聚合物可替代聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮；并且其它糖或多糖可取代右旋糖。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物被制备用于经口施用。在某些实施方案中，药物组合物被制备用于经颊施用。
在某些实施方案中，药物组合物被制备用于通过注射(例如，静脉内、皮下、肌肉内等)施用。在某些所述实施方案中，药物组合物包含载体并且配制在水溶液中，如水或生理上相容的缓冲液如汉克斯溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液。在某些实施方案中，包括其它成分(例如，帮助溶解或充当防腐剂的成分)。在某些实施方案中，使用适当的液体载体、悬浮剂等制备可注射悬浮液。某些注射用药物组合物以单位剂型呈现，例如在安瓿中或在多剂量容器中。某些注射用药物组合物为油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳液，并且可含有配制剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。某些适用于注射用药物组合物的溶剂包括但不限于亲脂溶剂和脂肪油(如芝麻油)、合成脂肪酸酯(如油酸乙酯或甘油三酯)以及脂质体。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或右旋糖酐。任选地，所述悬浮液还可含有合适的稳定剂或增加药剂溶解度的试剂，以允许制备高度浓缩的溶液。
在某些实施方案中，制备药物组合物用于透粘膜施用。在某些所述实施方案中，在配制中使用适用于待渗透的屏障的渗透剂。所述渗透剂通常为本领域中已知的。
在某些实施方案中，本文提供的药物组合物包含治疗有效量的寡核苷酸。在某些实施方案中，治疗有效量足以预防、减轻或改善疾病的症状或延长正在治疗的受试者的存活。确定治疗有效量完全在本领域技术人员的能力范围内。
在某些实施方案中，本文提供的一种或多种修饰寡核苷酸被配制成前药。在某些实施方案中，当体内施用时，前药化学转化为寡核苷酸的生物学、药学或治疗学上更具活性的形式。在某些实施方案中，前药为有用的，因为它们比对应的活性形式更容易施用。例如，在某些情况下，前药可比对应的活性形式生物利用度更高(例如，通过经口施用)。在某些情况下，与对应的活性形式相比，前药可具有改进的溶解度。在某些实施方案中，前药比对应的活性形式水溶性更小。在某些情况下，所述前药具有优越的跨越细胞膜传输的能力，其中水溶性不利于迁移性。在某些实施方案中，前药为酯。在某些所述实施方案中，当施用时酯被代谢水解为羧酸。在某些情况下，含有羧酸的化合物为对应的活性形式。在某些实施方案中，前药包含结合至酸基团的短肽(聚氨基酸)。在某些所述实施方案中，当施用时肽裂解以形成对应的活性形式。
在某些实施方案中，本公开提供了用于减少细胞中靶核酸的量或活性的组合物和方法。在某些实施方案中，细胞在动物中。在某些实施方案中，动物为哺乳动物。在某些实施方案中，动物为啮齿动物。在某些实施方案中，动物为灵长类动物。在某些实施方案中，动物为非人灵长类动物。在某些实施方案中，动物为人。
在某些实施方案中，本公开提供了向动物施用包含本公开的寡核苷酸的药物组合物的方法。合适的施用途径包括但不限于经口、直肠、透粘膜、肠、肠内、局部、栓剂、通过吸入、鞘内、脑室内、腹膜内、鼻内、眼内、瘤内以及肠胃外(例如，静脉内、肌肉内、髓内和皮下)。在某些实施方案中，施用鞘内药物(pharmaceutical intrathecal)以实现局部暴露而非全身暴露。例如，可将药物组合物直接注射在希望作用的区域中(例如，到肝脏中)。
非限制性公开并且以引用的方式并入
虽然已根据某些实施方案具体描述了本文所述的某些化合物、组合物和方法，但以下实施例仅用以说明本文所述的化合物并且不意图限制所述化合物。本申请中引用的每个参考文献、GenBank登录号和类似物均以引用的方式整体并入本文。
本文中的某些化合物、组合物和方法被描述为“恰好包含(comprising exactly)”或“恰好包含(comprises exactly)”具体数目的具体元件或特征。所述描述用来表明虽然化合物、组合物或方法可包含另外的其它元件，但具体元件或特征的数目为确定的数目。例如，“恰好包含一个GalNAc的缀合物”为含有一个并且仅含有一个GalNAc的缀合物，但是它可含有除了一个GalNAc以外的其它元件。
虽然在要求时随附本文件的序列表将每个序列鉴定为“RNA”或“DNA”，但实际上，那些序列可用任何化学修饰组合来修饰。本领域技术人员将容易了解，在某些情况下，这种命名为“RNA”或“DNA”来描述修饰寡核苷酸是任意的。例如，包含含有2’-OH糖部分和胸腺嘧啶碱基的核苷的寡核苷酸可被描述为具有修饰的糖(对于DNA的天然2’-H为2’-OH)的DNA或具有修饰碱基(对于RNA的天然尿嘧啶为胸腺嘧啶(甲基化尿嘧啶))的RNA。
因此，本文提供的核酸序列(包括但不限于序列表中的那些)意图涵盖含有任何组合的天然或修饰RNA和/或DNA的核酸，包括但不限于具有修饰核碱基的所述核酸。通过进一步举例而非限制的方式，具有核碱基序列“ATCGATCG”的寡核苷酸涵盖具有所述核碱基序列(无论修饰的或未修饰的)的任何寡核苷酸，包括但不限于包含RNA碱基的所述化合物，如具有序列“AUCGAUCG”的那些和具有一些DNA碱基和一些RNA碱基如“AUCGATCG”的那些以及具有其它修饰碱基如“ATmeCGAUCG”的寡核苷酸，其中meC指示在5-位上包含甲基的胞嘧啶碱基。
实施例
以下实施例说明了本公开的某些实施方案并且不是限制性的。此外，在提供具体实施方案时，发明人已预期了那些具体实施方案的一般应用。例如，具有具体基序的寡核苷酸的公开为具有相同或类似基序的另外的寡核苷酸提供了合理支持。并且，例如，在特别高亲合力的修饰出现在具体位置上时，相同位置上的其它高亲合力修饰也认为是合适的，除非另外指出。
实施例
以下实施例说明了本公开的某些实施方案并且不是限制性的。此外，在提供具体实施方案时，发明人已预期了那些具体实施方案的一般应用。例如，具有具体基序的寡核苷酸的公开为具有相同或类似基序的另外的寡核苷酸提供了合理支持。并且，例如，在特别高亲合力的修饰出现在具体位置上时，相同位置上的其它高亲合力修饰也认为是合适的，除非另外指出。
实施例1：用于制备亚磷酰胺化合物1、1a和2的一般方法
Figure BDA0003357312860005491
根据描述于本文的说明书中的本领域熟知的工序制备化合物1、1a和2(参见Seth等，Bioorg.Med.Chem.，2011，21(4)，1122-1125、J.Org.Chem.，2010，75(5)，1569-1581，Nucleic Acids Symposium Series，2008，52(1)，553-554)；并且还参见已公布的PCT国际申请(WO 2011/115818、WO 2010/077578、WO2010/036698、WO2009/143369、WO 2009/006478和WO 2007/090071)和美国专利7,569,686)。
实施例2：化合物7的制备
Figure BDA0003357312860005501
化合物3(2-乙酰氨基-1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-β-D吡喃半乳糖或半乳糖胺五乙酸酯)为商业上可获得的。根据公布的工序制备化合物5(Weber等，J.Med.Chem.，1991，34，2692)。
实施例3：化合物11的制备
Figure BDA0003357312860005502
化合物8和9为商业上可获得的。
实施例4：化合物18的制备
Figure BDA0003357312860005511
根据实施例3中说明的工序制备化合物11。化合物14为商业上可获得的。使用由Rensen等，J.Med.Chem.，2004，47，5798-5808所报道的类似工序制备化合物17。
实施例5：化合物23的制备
Figure BDA0003357312860005512
化合物19和21为商业上可获得的。
实施例6：化合物24的制备
Figure BDA0003357312860005521
根据实施例4和5中说明的工序制备化合物18和23。
实施例7：化合物25的制备
Figure BDA0003357312860005522
根据实施例6中说明的工序制备化合物24。
实施例8：化合物26的制备
Figure BDA0003357312860005531
根据实施例6中说明的工序制备化合物24。
实施例9：在3’末端包含GalNAc3-1的缀合ASO化合物29的一般制备
Figure BDA0003357312860005541
Figure BDA0003357312860005551
其中受保护的GalNAc3-1具有以下结构：
Figure BDA0003357312860005552
缀合物基团GalNAc3-1的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-1a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。其中GalNAc3-1a具有下式：
Figure BDA0003357312860005561
根据实施例7中说明的工序制备固体载体结合的受保护的GalNAc3-1，即化合物25。使用自动化DNA/RNA合成中的标准工序制备在3’末端包含GalNAc3-1的低聚化合物29(参见Dupouy等，Angew.Chem.Int.Ed.，2006，45，3623-3627)。根据实施例1中说明的工序制备亚磷酰胺结构单元，即化合物1和1a。所述的亚磷酰胺意在为代表性的并且不意图为限制性的，因为可使用其它亚磷酰胺结构单元来制备具有预先确定的序列和组成的低聚化合物。可调节添加至固体载体的亚磷酰胺的顺序和量以制备如本文所述的有缺口的低聚化合物。所述有缺口的低聚化合物可具有如任何给定靶标所指示的预先确定的组成和碱基序列。
实施例10：在5’末端包含GalNAc3-1的缀合ASO化合物34的一般制备
Figure BDA0003357312860005571
UnylinkerTM 30为商业上可获得的。使用自动化DNA/RNA合成中的标准工序制备在5’末端包含GalNAc3-1聚簇的低聚化合物34(参见Dupouy等，Angew.Chem.Int.Ed.，2006，45，3623-3627)。根据实施例1中说明的工序制备亚磷酰胺结构单元，即化合物1和1a。所述的亚磷酰胺意在为代表性的并且不意图为限制性的，因为可使用其它亚磷酰胺结构单元来制备具有预先确定的序列和组成的低聚化合物。可调节添加至固体载体的亚磷酰胺的顺序和量以制备如本文所述的有缺口的低聚化合物。所述有缺口的低聚化合物可具有如任何给定靶标所指示的预先确定的组成和碱基序列。
实施例11：化合物39的制备
Figure BDA0003357312860005581
根据实施例2、4和5中说明的工序制备化合物4、13和23。使用公布于以下的类似工序制备化合物35：Rouchaud等，Eur.J.Org.Chem.，2011，12，2346-2353。
实施例12：化合物40的制备
Figure BDA0003357312860005591
根据实施例11中说明的工序制备化合物38。
实施例13：化合物44的制备
Figure BDA0003357312860005592
Figure BDA0003357312860005601
根据实施例5和11中说明的工序制备化合物23和36。使用公布于WO 2009082607中的类似工序制备化合物41。
实施例14：化合物45的制备
Figure BDA0003357312860005611
根据实施例13中说明的工序制备化合物43。
实施例15：化合物47的制备
Figure BDA0003357312860005612
化合物46为商业上可获得的。
实施例16：化合物53的制备
Figure BDA0003357312860005621
化合物48和49为商业上可获得的。根据实施例4和15中说明的工序制备化合物17和47。
实施例17：化合物54的制备
Figure BDA0003357312860005631
根据实施例16中说明的工序制备化合物53。
实施例18：化合物55的制备
Figure BDA0003357312860005641
根据实施例16中说明的工序制备化合物53。
实施例19：用于通过固相技术制备在3’位包含GalNAc3-1的缀合ASO的一般方法(ISIS 647535、647536和651900的制备)
除非另外说明，否则用于合成低聚化合物的所有试剂和溶液均购自商业来源。使用标准亚磷酰胺结构单元和固体载体来掺入核苷残基，所述核苷残基包括例如T、A、G和mC残基。0.1M的亚磷酰胺在无水乙腈中的溶液用于β-D-2’-脱氧核糖核苷和2’-MOE。
在ABI 394合成器(1-2μmol规模)上或在GE Healthcare Bioscience
Figure BDA0003357312860005642
oligopilot合成器(40-200μmol规模)上通过填充在柱中的负载GalNAc3-1的VIMAD固体载体(110μmol/g，Guzaev等，2003)上的亚磷酰胺偶联方法来进行ASO合成。对于偶联步骤，以超过固体载体上的负载量4倍的量递送亚磷酰胺并且持续10min进行亚磷酰胺缩合。所有其它步骤均按照制造商供应的标准方案。使用6％二氯乙酸在甲苯中的溶液来从核苷酸的5’-羟基上去除二甲氧基三苯甲基(DMT)。无水CH3CN中的4，5-二氰基咪唑(0.7M)用作偶联步骤过程中的活化剂。通过用苍耳烷氢化物在1∶1吡啶/CH3CN中的0.1M溶液硫化3分钟的接触时间来引入硫代磷酸酯键联。使用20％叔丁基过氧化氢在含有6％水的CH3CN中的溶液作为氧化剂来提供磷酸二酯核苷间键联，其中接触时间为12分钟。
在装配希望的序列之后，使用三乙胺和乙腈的1∶1(v/v)混合物将磷酸氰基乙酯保护基去保护，其中接触时间为45分钟。将固体载体结合的ASO悬浮在氨水(28wt％-30wt％)中并且在55℃下加热6h。
然后过滤未结合的ASO并且将氨煮沸掉。残余物通过高压液相色谱法在强阴离子交换柱上纯化(GE Healthcare Bioscience，Source 30Q，30μm，2.54x8cm，A＝30％水性CH3CN中的100mM乙酸铵，B＝A中的1.5M NaBr，在60min内为0％-40％的B，流速14mL min-1，λ＝260nm)。残余物通过HPLC在反相柱上脱盐以得到基于固体载体上的初始负载量为15％-30％的分离产率的希望的ASO。使用Agilent 1100 MSD系统通过离子对HPLC偶联的MS分析来表征ASO。
使用本领域中熟知的标准寡核苷酸合成工序合成不包含缀合物的反义寡核苷酸。
使用这些方法，制备了靶向ApoC III的三种单独的反义化合物。如以下表17中所概述，靶向ApoC III的三种反义化合物中的每一种均具有相同的核碱基序列；ISIS 304801为具有所有硫代磷酸酯键联的5-10-5 MOE缺口聚物；ISIS 647535与ISIS 304801相同，除了ISIS 647535具有缀合在其3’末端的GalNAc3-1；并且ISIS 647536与ISIS 647535相同，除了所述化合物的某些核苷间键联为磷酸二酯键联。如表17中进一步概述，合成了靶向SRB-1的两种单独的反义化合物。ISIS 440762为具有所有硫代磷酸酯核苷间键联的2-10-2cEt缺口聚物；ISIS 651900与ISIS 440762相同，除了ISIS 651900在其3’-末端包括GalNAc3-1。
表17
靶向ApoC III和SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860005661
下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷(例如cEt)；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o’”指示-O-P(＝O)(OH)-。上标“m”指示5-甲基胞嘧啶。“GalNAc3-1”指示具有先前在实施例9中示出的结构的缀合物基团。应注意，GalNAc3-1包含将ASO连接至缀合物的剩余部分的可裂解腺苷，所述可裂解腺苷命名为“GalNAc3-1a”。这种命名法用于上表以显示整个核碱基序列，包括作为缀合物的一部分的腺苷。因此，在上表中，序列还可列为以“GalNAc3-1”结尾，其中省略“Ado”。在全部这些实施例中使用了这种惯例：使用下标“a”来指示缺乏可裂解核苷或可裂解部分的缀合物基团的部分。缺乏可裂解部分的缀合物基团的此部分在本文中是指“聚簇”或“缀合物聚簇”或“GalNAc3聚簇”。在某些情况下，通过单独提供其聚簇和其可裂解部分来方便地描述缀合物基团。
实施例20：huApoC III转基因小鼠中的人ApoC III的剂量依赖性反义抑制
在剂量依赖性研究中，针对其抑制人ApoC III转基因小鼠中的人ApoC III的能力，对各自靶向人ApoC III并且以上描述的ISIS 304801和ISIS 647535进行单独测试和评价。
处理
将人ApoCIII转基因小鼠维持在12小时亮/暗循环中并且随意喂食Teklad实验室食物。在开始实验之前，使动物在研究设备中适应至少7天。在PBS中制备ASO并且通过过滤通过0.2微米过滤器进行灭菌。将ASO溶解于0.9％PBS中用于注射。
每周一次在0.08μmol/kg、0.25μmol/kg、0.75μmol/kg、2.25μmol/kg或6.75μmol/kg下用ISIS 304801或647535或使用PBS作为对照腹膜内注射人ApoC III转基因小鼠，持续两周。每个处理组由4只动物组成。在施用最后剂量之后的四十八小时，从每只小鼠中抽血并且将小鼠处死并收集组织。
ApoC III mRNA分析
使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860005671
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案来测定小鼠肝脏中的ApoC III mRNA水平。在归一化为PBS处理的对照之前，测定相对于总RNA的ApoC III mRNA水平(使用Ribogreen)。以下结果以归一化为PBS处理的对照的每个处理组的ApoC III mRNA水平的平均百分比呈现并且表示为“％PBS”。每个ASO的半数最大有效剂量(ED50)也呈现于以下表18中。
如所说明的，相对于PBS对照，这两种反义化合物使ApoC III RNA减少。此外，缀合至GalNAc3-1的反义化合物(ISIS 647535)大致上比缺乏GalNAc3-1缀合物的反义化合物(ISIS 304801)更有效。
表18
ASO处理对人ApoC III转基因小鼠中ApoC III mRNA水平的影响
Figure BDA0003357312860005681
ApoC III蛋白分析(浊度测定)
使用在2013年3月29日印刷之前在线公布的Graham等，Circulation Research所报道的工序确定血浆ApoC III蛋白分析。
在不稀释的情况下使用Olympus临床分析器和商业上可获得的浊度ApoC III测定(Kamiya，Cat#KAI-006，Kamiya Biomedical，Seattle，WA)来分析从小鼠中分离的大约100μl血浆。如供应商所述执行测定方案。
如以下表19中所示，相对于PBS对照，这两种反义化合物使ApoC III蛋白减少。此外，缀合至GalNAc3-1的反义化合物(ISIS 647535)大致上比缺乏GalNAc3-1缀合物的反义化合物(ISIS 304801)更有效。
表19
ASO处理对人ApoC III转基因小鼠中ApoC III血浆蛋白水平的影响
Figure BDA0003357312860005682
Figure BDA0003357312860005691
通过Bligh和Dyer(Bligh，E.G.和Dyer，W.J.Can.J.Biochem.Physiol.37：911-917，1959)(Bligh，E和Dyer，W，Can J Biochem Physiol，37，911-917，1959)(Bligh，E和Dyer，W，Can J Biochem Physiol，37，911-917，1959)的方法提取血浆甘油三酯和胆固醇并且通过使用Beckmann Coulter临床分析器和商业上可获得的试剂来测量。
相对于PBS注射的小鼠测量甘油三酯水平并且表示为“％PBS”。结果呈现于表20中。如所说明的，这两种反义化合物使甘油三酯水平降低。此外，缀合至GalNAc3-1的反义化合物(ISIS 647535)大致上比缺乏GalNAc3-1缀合物的反义化合物(ISIS 304801)更有效。
表20
ASO处理对转基因小鼠中甘油三酯水平的影响
Figure BDA0003357312860005692
通过HPLC分析血浆样品来测定总胆固醇和不同级分的胆固醇(HDL和LDL)的量。结果呈现于表21和22中。如所说明的，这两种反义化合物使总胆固醇水平降低；均使LDL降低；并且均使HDL升高。此外，缀合至GalNAc3-1的反义化合物(ISIS 647535)大致上比缺乏GalNAc3-1缀合物的反义化合物(ISIS 304801)更有效。HDL水平增加和LDL水平降低为反义抑制ApoC III的心血管有益作用。
表21
ASO处理对转基因小鼠中总胆固醇水平的影响
Figure BDA0003357312860005701
表22
ASO处理对转基因小鼠中HDL和LDL胆固醇水平的影响
Figure BDA0003357312860005702
药物代谢动力学分析(PK)
还评价了ASO的PK。使用标准方案切碎并且提取肝脏和肾样品。在MSD1上利用IP-HPLC-MS分析样品。测量全长ISIS 304801和647535的组织水平(μg/g)并且结果提供于表23中。如所说明的，对于两种反义化合物，总全长反义化合物的肝脏浓度类似。因此，即使GalNAc3-1-缀合的反义化合物在肝脏中更具活性(如通过以上RNA和蛋白质数据所展示)，但它在肝脏中不以大致上更高的浓度存在。事实上，所计算的EC50(提供于表23中)证实了所观察到的缀合化合物的效力增加不能完全归因于积累增加。此结果表明缀合物不仅仅通过肝脏积累的机制，还可能通过改进细胞对反义化合物的产生性摄取来改进效力。
结果还显示GalNAc3-1缀合反义化合物在肾中的浓度低于缺乏GalNAc缀合物的反义化合物的浓度。这具有若干有益的治疗意义。对于不想要在肾中的活性的治疗适应症(indication)，对肾的暴露具有肾毒性的风险而没有相应的益处。此外，肾中的高浓度通常导致化合物流失至尿液，从而导致更快的清除。因此，对于非肾靶标，肾积累为不希望的。这些数据表明GalNAc3-1缀合使肾积累减少。
表23
转基因小鼠中ASO处理的PK分析
Figure BDA0003357312860005711
还鉴定了ISIS 647535的代谢物并且通过高分辨率质谱分析证实了其质量。以下示出所观察到的代谢物的裂解位点和结构。使用标准工序计算全长ASO的相对％并且结果呈现于表23a中。ISIS 647535的主要代谢物为缺乏整个缀合物的全长ASO(即ISIS304801)，其由在以下示出的裂解位点A处裂解产生。此外，还观察到由其它裂解位点产生的另外代谢物。这些结果表明在GalNAc3-1糖与ASO之间引入其它可裂解键如酯、肽、二硫化物、氨基磷酸酯或酰基腙也可以是有用的，所述可裂解键可被细胞内部的酶裂解或所述可裂解键可在细胞液的还原性环境中裂解或所述可裂解键对内体和溶酶体内部的酸性pH不稳定。
表23a
所观察到的ISIS 647535的全长代谢物
Figure BDA0003357312860005721
Figure BDA0003357312860005722
Figure BDA0003357312860005731
实施例21：单一施用研究中人ApoC III转基因小鼠中的人ApoC III的反义抑制
在单一施用研究中，针对其抑制人ApoC III转基因小鼠中的人ApoC III的能力，对各自靶向人ApoC III并且描述于表17中的ISIS 304801、647535和647536进行进一步评价。
处理
将人ApoCIII转基因小鼠维持在12小时亮/暗循环中并且随意喂食Teklad实验室食物。在开始实验之前，使动物在研究设备中适应至少7天。在PBS中制备ASO并且通过过滤通过0.2微米过滤器进行灭菌。将ASO溶解于0.9％PBS中用于注射。
在以下示出的剂量下，用ISIS 304801、647535或647536(以上所述)或用PBS处理的对照腹膜内注射人ApoC III转基因小鼠一次。处理组由3只动物组成并且对照组由4只动物组成。在处理之前以及在最后一次剂量之后，从每只小鼠中抽血并且分析血浆样品。在最后施用之后72小时将小鼠处死。
收集样品并且分析以测定肝脏中的ApoC III mRNA和蛋白质水平；血浆甘油三酯；以及胆固醇，包括如上所述(实施例20)评估的HDL和LDL级分。来自那些分析的数据呈现于以下表24-28中。使用标准方案，相对于盐水注射的小鼠测量血清中的肝脏转氨酶水平，即丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。ALT和AST水平显示反义化合物在所有施用的剂量下为耐受良好的。
这些结果显示了与缺乏GalNAc3-1缀合物的反义化合物(ISIS 304801)相比，在3’末端包含GalNAc3-1缀合物的反义化合物(ISIS 647535和647536)的效力的改进。此外，包含GalNAc3-1缀合物和一些磷酸二酯键联的ISIS 647536与ISIS 647535一样有效，所述ISIS 647535包含相同的缀合物并且ASO内的所有核苷间键联为硫代磷酸酯。
表24
ASO处理对人ApoC III转基因小鼠中ApoC III mRNA水平的影响
Figure BDA0003357312860005751
表25
ASO处理对人ApoC III转基因小鼠中ApoC III血浆蛋白水平的影响
Figure BDA0003357312860005752
表26
ASO处理对转基因小鼠中甘油三酯水平的影响
Figure BDA0003357312860005761
表27
ASO处理对转基因小鼠中总胆固醇水平的影响
Figure BDA0003357312860005762
表28
ASO处理对转基因小鼠中HDL和LDL胆固醇水平的影响
Figure BDA0003357312860005771
这些结果证实GalNAc3-1缀合物改进了反义化合物的效力。结果还显示了其中反义寡核苷酸具有混合的键联的GalNAc3-1缀合反义化合物(具有六个磷酸二酯键联的ISIS647536)和相同反义化合物的全部硫代磷酸酯型式(ISIS 647535)的相等效力。
硫代磷酸酯键联为反义化合物提供若干性质。例如，它们抗核酸酶消化并且它们结合导致化合物在肝脏中积累而不是在肾/尿液中积累的蛋白质。这些为希望的性质，特别是当治疗肝脏中的适应症时。然而，硫代磷酸酯键联还与炎症性应答相关。因此，减少化合物中硫代磷酸酯键联的数目预期会减小炎症的风险，但是也降低化合物在肝脏中的浓度，增加在肾和尿液中的浓度，减小在核酸酶存在下的稳定性并且降低总体效力。本结果显示其中某些硫代磷酸酯键联已被磷酸二酯键联替代的GalNAc3-1缀合反义化合物与具有全部硫代磷酸酯键联的对应物在对抗肝脏中的靶标方面一样有效。所述化合物预期为促炎性较少的(参见实施例24，其描述了显示PS的减少导致炎症性作用减小的实验)。
实施例22：靶向SRB-1的GalNAc3-1缀合的修饰ASO在体内的作用
在剂量依赖性研究中，针对其抑制Balb/c小鼠中的SRB-1的能力，对各自靶向SRB-1并且描述于表17中的ISIS 440762和651900进行评价。
处理
在以下示出的剂量下，用ISIS 440762、651900或用PBS处理的对照皮下注射六周龄雄性Balb/c小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)一次。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后48小时将小鼠处死以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860005781
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定肝脏SRB-1 mRNA水平。在归一化为PBS处理的对照之前，测定相对于总RNA的SRB-1 mRNA水平(使用Ribogreen)。以下结果以归一化为PBS处理的对照的每个处理组的SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现并且表示为“％PBS”。
如表29中所说明的，这两种反义化合物使SRB-1 mRNA水平降低。此外，包含GalNAc3-1缀合物的反义化合物(ISIS 651900)比缺乏GalNAc3-1缀合物的反义化合物(ISIS440762)大致上更有效。这些结果展示使用与不同靶标互补并且具有不同化学修饰核苷的反义寡核苷酸观察到GalNAc3-1缀合物的效力益处，在这种情况下，修饰核苷包含约束乙基糖部分(双环糖部分)。
表29
ASO处理对Balb/c小鼠中SRB-1 mRNA水平的影响
Figure BDA0003357312860005791
实施例23：人外周血单核细胞(hPBMC)测定方案
使用BD Vautainer CPT管法进行hPBMC测定。从在美国健康工作诊所(Faraday&ElCamino Real，Carlsbad)具有知情同意书的志愿供体中获得全血样品并且收集在4-15个BDVacutainer CPT 8 ml管中(VWR Cat.#BD362753)。使用PBMC测定数据表记录每个供体的CPT管中的大约起始总全血体积。
通过将管轻轻倒置8-10次在离心之前立即重新混合血液样品。将CPT管在具有制动的1500-1800 RCF(2700RPM Beckman Allegra 6R)下、在水平(摆动)转子中在室温(18-25℃)下离心30min。从血沉棕黄层界面(在Ficoll与聚合物凝胶层之间)取回细胞；转移至无菌50ml圆锥管并且汇集至5个CPT管/50ml圆锥管/供体。然后用PBS(无Ca++、Mg++；GIBCO)洗涤细胞两次。将管加满至50ml并且通过倒置若干次来混合。然后将样品在室温下在330 xg下(在Beckman Allegra 6R中的1215RPM)离心15分钟并且在不干扰沉淀物的情况下尽可能多的抽吸上清液。通过轻轻旋转管使细胞沉淀物脱落并且将细胞重新悬浮在RPMI+10％FBS+青霉素/链霉素(大约1ml/10ml起始全血体积)中。将60μl样品用移液管移入到具有600μl VersaLyse试剂(Beckman Coulter Cat#A09777)的样品小瓶(Beckman Coulter)中并且轻轻涡旋10-15秒。使样品在室温下孵育10min并且在计数之前再次混合。使用PBMC细胞类型(1∶11的稀释因子与其它参数一起存储)在Vicell XR细胞活力分析器(BeckmanCoulter)上计数细胞悬浮液。记录活细胞/ml和活力。在RPMI+10％FBS+青霉素/链霉素中将细胞悬浮液稀释至1x107活PBMC/ml。
将细胞以5x105涂布在50μl/孔的96孔组织培养平板(Falcon Microtest)中。根据实验模板(总共100μl/孔)添加50μl/孔的稀释在RPMI+10％FBS+青霉素/链霉素中的2x浓度寡核苷酸/对照。将平板放置在振荡器上并且允许混合大约1min。在37℃、5％CO2下孵育24小时之后，将平板在400 x g下离心10分钟，之后去除上清液用于MSD细胞因子测定(即人IL-6、IL-10、IL-8和MCP-1)。
实施例24：在hPBMC测定中评价GalNAc3-1缀合ASO的促炎性作用
使用实施例23中描述的方案，在hPBMC测定中评价列于表30中的反义寡核苷酸(ASO)的促炎性作用。ISIS 353512为已知为测定中的IL-6释放的高响应者的内标物。从新鲜志愿供体中分离hPBMC并且用0μM、0.0128μM、0.064μM、0.32μM、1.6μM、8μM、40μM和200μM浓度下的ASO处理。在24小时处理之后，测量细胞因子水平。
IL-6的水平用作原始读出。使用标准工序计算EC50和Emax。结果表达为来自两个供体的Emax/EC50的平均比率并且表示为“Emax/EC50”。较低的比率表明促炎性反应相对减小并且较高的比率表明促炎性反应相对增加。
对于测试化合物，促炎性最小的化合物为PS/PO连接的ASO(ISIS 616468)。GalNAc3-1缀合ASO(ISIS 647535)比其未缀合的对应物ISIS 304801的促炎性稍小。这些结果表明掺入一些PO键联使促炎性反应减小并且添加GalNAc3-1缀合物并不使化合物更具有促炎性并且可能减小促炎性反应。因此，人们将预期包含混合的PS/PO键联和GalNAc3-1缀合物的反义化合物将相对于具有或不具有GalNAc3-1缀合物的全部PS连接的反义化合物产生较低的促炎性反应。这些结果表明GalNAc3-1缀合反义化合物(尤其是具有减小的PS含量的那些)为促炎性较小的。
总之，这些结果表明GalNAc3-1缀合化合物(尤其是具有减小的PS含量的缀合化合物)可在比缺乏GalNAc3-1缀合物的对应全部PS反义化合物更高的剂量下施用。因为不预期这些化合物的半衰期是大致上不同的，所以所述较高施用将导致较不频繁的给药。事实上，所述施用可为甚至更不频繁的，因为GalNAc3-1缀合化合物为更有效的(参见实施例20-22)并且一旦化合物的浓度下降到低于希望的水平，重新给药是必要的，其中所述希望的水平基于效力。
表30
修饰ASO
Figure BDA0003357312860005811
下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷(例如cEt)；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o’”指示-O-P(＝O)(OH)-。上标“m”指示5-甲基胞嘧啶。“Ado’-GalNAc3-1a”指示所指的具有连接至反义寡核苷酸的3’-末端的在实施例9中示出的结构GalNAc3-1的缀合物。
表31
靶向ApoC III的ASO在hPBMC测定中的促炎性作用
Figure BDA0003357312860005821
实施例25：靶向人ApoC III的GalNAc3-1缀合的修饰ASO在体外的作用
在体外测试以上所述的ISIS 304801和647535。用0.03μM、0.08μM、0.24μM、0.74μM、2.22μM、6.67μM和20μM浓度的修饰寡核苷酸处理密度为25,000个细胞/孔的来自转基因小鼠的原代肝细胞。在大约16小时的处理期后，从细胞中分离RNA并且通过定量实时PCR测量mRNA水平并且如通过RIBOGREEN所测量，根据总RNA含量调节hApoC III mRNA水平。
使用标准方法计算IC50并且结果呈现于表32中。如所说明的，与对照ISIS 304801相比，在用ISIS 647535处理的细胞中观察到可比的效力。
表32
靶向原代肝细胞中的人ApoC III的修饰ASO
Figure BDA0003357312860005822
在本实验中，在体外没有观察到在体内所观察到的GalNAc3-1缀合的极大效力益处。随后体外的在原代肝细胞中的自由摄取实验确实显示了包含各种GalNAc缀合物的寡核苷酸相对于缺乏GalNAc缀合物的寡核苷酸的效力增加。(参见实施例60、82和92)
实施例26：PO/PS键联对ApoC III ASO活性的影响
每周一次以25mg/kg的ISIS 304801或ISIS 616468(上述两者)或用PBS处理的对照腹膜内注射人ApoC III转基因小鼠，持续两周。处理组由3只动物组成并且对照组由4只动物组成。在处理之前以及在最后一次剂量之后，从每只小鼠中抽血并且分析血浆样品。在最后施用之后72小时将小鼠处死。
如上所述收集样品并且分析以测定肝脏中的ApoC III蛋白水平(实施例20)。来自那些分析的数据呈现于以下表33中。
这些结果表明相对于全部PS(ISIS 304801)，在翼中具有PO/PS的反义化合物(ISIS 616468)效力减小。
表33
ASO处理对人ApoC III转基因小鼠中ApoC III蛋白水平的影响
Figure BDA0003357312860005831
实施例27：化合物56
Figure BDA0003357312860005841
化合物56可从Glen Research商业上获得或可根据由Shchepinov等，NucleicAcids Research，1997，25(22)，4447-4454所报道的已公布工序制备。
实施例28：化合物60的制备
Figure BDA0003357312860005842
根据实施例2中说明的工序制备化合物4。化合物57为商业上可获得的。通过结构分析来证实化合物60。
化合物57意在为代表性的并且不意图为限制性的，因为可使用其它单保护的取代或未取代的烷基二醇包括但不限于在本文的说明书中呈现的那些来制备具有预先确定的组成的亚磷酰胺。
实施例29：化合物63的制备
Figure BDA0003357312860005843
使用类似于由Tober等，Eur.J.Org.Chem.，2013，3，566-577；和Jiang等，Tetrahedron，2007，63(19)，3982-3988所报道的那些的工序制备化合物61和62。
或者，使用类似于由Kim等，Synlett，2003，12，1838-1840；和Kim等，已公布的PCT国际申请WO 2004063208的科学和专利文献中所报道的那些的工序制备化合物63。实施例30：化合物63b的制备
Figure BDA0003357312860005851
使用类似于由Hanessian等，Canadian Journal of Chemistry，1996，74(9)，1731-1737所报道的那些的工序制备化合物63a。
实施例31：化合物63d的制备
Figure BDA0003357312860005852
使用类似于由Chen等，Chinese Chemical Letters，1998，9(5)，451-453所报道的那些的工序制备化合物63c。
实施例32：化合物67的制备
Figure BDA0003357312860005853
根据实施例2中说明的工序制备化合物64。使用类似于由Or等，已公布的PCT国际申请WO 2009003009所报道的那些的工序制备化合物65。用于化合物65的保护基意在为代表性的并且不意图为限制性的，因为可使用其它保护基包括但不限于在本文的说明书中呈现的那些。
实施例33：化合物70的制备
Figure BDA0003357312860005861
根据实施例2中说明的工序制备化合物64。化合物68为商业上可获得的。用于化合物68的保护基意在为代表性的并且不意图为限制性的，因为可使用其它保护基包括但不限于在本文的说明书中呈现的那些。
实施例34：化合物75a的制备
Figure BDA0003357312860005862
根据由Shchepinov等，Nucleic Acids Research，1997，25(22)，4447-4454所报道的公布的工序制备化合物75。
实施例35：化合物79的制备
Figure BDA0003357312860005871
根据由Shchepinov等，Nucleic Acids Research，1997，25(22)，4447-4454所报道的公布的工序制备化合物76。
实施例36：化合物79a的制备
Figure BDA0003357312860005872
根据实施例35中说明的工序制备化合物77。
实施例37：用于通过固体载体制备在5’末端包含磷酸二酯连接的GalNAc3-2缀合物的缀合低聚化合物82的一般方法(方法I)
Figure BDA0003357312860005881
其中GalNAc3-2具有以下结构：
Figure BDA0003357312860005891
缀合物基团GalNAc3-2的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-2a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。其中GalNAc3-2a具有下式：
Figure BDA0003357312860005892
使用用于自动化DNA/RNA合成的标准工序制备VIMAD结合的低聚化合物79b(参见Dupouy等，Angew.Chem.Int.编辑，2006，45，3623-3627)。分别根据实施例27和28中说明的工序制备亚磷酰胺化合物56和60。所说明的亚磷酰胺意在为代表性的并且不意图为限制性的，因为可使用其它亚磷酰胺结构单元包括但不限于在本文的说明书中呈现的那些来制备在5’末端具有磷酸二酯连接的缀合物基团的低聚化合物。可调节添加至固体载体的亚磷酰胺的顺序和量来制备具有任何预先确定的序列和组成的如本文所述的低聚化合物。
实施例38：用于制备在5’末端包含磷酸二酯连接的GalNAc3-2缀合物的低聚化合物82的替代方法(方法II)
Figure BDA0003357312860005901
使用用于自动化DNA/RNA合成的标准工序制备VIMAD结合的低聚化合物79b(参见Dupouy等，Angew.Chem.Int.Ed.，2006，45，3623-3627)。根据实施例35中说明的工序制备GalNAc3-2聚簇亚磷酰胺，即化合物79。此替代方法允许在合成的最后一步将磷酸二酯连接的GalNAc3-2缀合物一步装至低聚化合物。所说明的亚磷酰胺意在为代表性的并且不意图为限制性的，因为可使用其它亚磷酰胺结构单元包括但不限于在本文的说明书中呈现的那些来制备在5’末端具有磷酸二酯缀合物的低聚化合物。可调节添加至固体载体的亚磷酰胺的顺序和量来制备具有任何预先确定的序列和组成的如本文所述的低聚化合物。
实施例39：用于通过固体载体制备在5’末端包含GalNAc3-3缀合物的低聚化合物83h(针对5’末端连接修饰的GalNAc3-1)的一般方法
Figure BDA0003357312860005911
Figure BDA0003357312860005921
根据实施例4中说明的工序制备化合物18。化合物83a和83b为商业上可获得的。使用标准寡核苷酸合成工序制备包含磷酸二酯连接的己胺的低聚化合物83e。用氨水处理受保护的低聚化合物提供5’-GalNAc3-3缀合的低聚化合物(83h)。
其中GalNAc3-3具有以下结构：
Figure BDA0003357312860005922
缀合物基团GalNAc3-3的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-3a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。其中GalNAc3-3a具有下式：
Figure BDA0003357312860005931
实施例40：用于通过固体载体制备在3’末端包含磷酸二酯连接的GalNAc3-4缀合物的低聚化合物89的一般方法
Figure BDA0003357312860005932
Figure BDA0003357312860005941
其中GalNAc3-4具有以下结构：
Figure BDA0003357312860005951
其中CM为可裂解部分。在某些实施方案中，可裂解部分为：
Figure BDA0003357312860005952
缀合物基团GalNAc3-4的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-4a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。其中GalNAc3-4a具有下式：
Figure BDA0003357312860005961
受保护的Unylinker官能团化的固体载体化合物30为商业上可获得的。使用类似于文献中所报道的那些的工序制备化合物84(参见Shchepinov等，Nucleic AcidsResearch，1997，25(22)，4447-4454；Shchepinov等，Nucleic Acids Research，1999，27，3035-3041；以及Hornet等，Nucleic Acids Research，1997，25，4842-4849)。
根据实施例28和36中说明的工序制备亚磷酰胺结构单元，即化合物60和79a。所说明的亚磷酰胺意在为代表性的并且不意图为限制性的，因为可使用其它亚磷酰胺结构单元来制备具有预先确定的序列和组成的在3’末端具有磷酸二酯连接的缀合物的低聚化合物。可调节添加至固体载体的亚磷酰胺的顺序和量来制备具有任何预先确定的序列和组成的如本文所述的低聚化合物。
实施例41：用于通过固相技术制备在5’位上包含磷酸二酯连接的GalNAc3-2(参见实施例37，Bx为腺嘌呤)缀合物的ASO的一般方法(ISIS 661134的制备)
除非另外说明，否则用于合成低聚化合物的所有试剂和溶液均购自商业来源。使用标准亚磷酰胺结构单元和固体载体来掺入核苷残基，所述核苷残基包括例如T、A、G和mC残基。使用亚磷酰胺化合物56和60来合成5’末端处的磷酸二酯连接的GalNAc3-2缀合物。0.1M的亚磷酰胺在无水乙腈中的溶液用于β-D-2’-脱氧核糖核苷和2’-MOE。
在ABI 394合成器(1-2μmol规模)上或在GE Healthcare Bioscience
Figure BDA0003357312860005971
oligopilot合成器(40-200μmol规模)上通过填充在柱中的VIMAD固体载体(110μmol/g，Guzaev等，2003)上的亚磷酰胺偶联方法来进行ASO合成。对于偶联步骤，以超过固体载体的初始负载量4倍的量递送亚磷酰胺并且持续10min进行亚磷酰胺偶联。所有其它步骤按照制造商供应的标准方案。使用6％二氯乙酸在甲苯中的溶液来从核苷酸的5’-羟基上去除二甲氧基三苯甲基(DMT)。无水CH3CN中的4，5-二氰基咪唑(0.7M)用作偶联步骤过程中的活化剂。通过用苍耳烷氢化物在1∶1吡啶/CH3CN中的0.1M溶液硫化3分钟的接触时间来引入硫代磷酸酯键联。使用20％叔丁基过氧化氢在含有6％水的CH3CN中的溶液作为氧化剂来提供磷酸二酯核苷间键联，其中接触时间为12分钟。
在装配希望的序列之后，使用20％甲苯中的二乙胺(v/v)将磷酸氰基乙酯保护基去保护，其中接触时间为45分钟。将固体载体结合的ASO悬浮在氨水(28wt％-30wt％)中并且在55℃下加热6h。
然后过滤未结合的ASO并且将氨煮沸掉。残余物通过高压液相色谱法在强阴离子交换柱上纯化(GE Healthcare Bioscience，Source 30Q，30μm，2.54x8cm，A＝30％水性CH3CN中的100mM乙酸铵，B＝A中的1.5M NaBr，在60min内为0％-40％的B，流速14mL min-1，λ＝260nm)。残余物通过HPLC在反相柱上脱盐以得到基于固体载体上的初始负载量为15％-30％的分离产率的希望的ASO。使用Agilent 1100 MSD系统通过离子对HPLC偶联的MS分析来表征ASO。
表34
靶向SRB-1的在5’位上包含磷酸二酯连接的GalNAc3-2缀合物的ASO
Figure BDA0003357312860005981
下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷(例如cEt)；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。上标“m”指示5-甲基胞嘧啶。GalNAc3-2a的结构在实施例37中示出。
实施例42：用于通过固相技术制备在5’位上包含GalNAc3-3缀合物的ASO的一般方法(ISIS 661166的制备)
使用如实施例39和41中所说明的类似工序进行ISIS 661166的合成。
ISIS 661166为5-10-5 MOE缺口聚物，其中5’位包含GalNAc3-3缀合物。使用Agilent 1100 MSD系统通过离子对HPLC偶联的MS分析来表征ASO。
表34a
靶向Malat-1的通过己基氨基磷酸二酯键联在5’位上包含GalNAc3-3缀合物的ASO
Figure BDA0003357312860005982
下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。上标“m”指示5-甲基胞嘧啶。“5’-GalNAc3-3a”的结构在实施例39中示出。
实施例43：靶向SRB-1的5’末端处的磷酸二酯连接的GalNAc3-2(参见实施例37和41，Bx为腺嘌呤)的体内剂量依赖性研究
在剂量依赖性研究中，测试在5’末端包含磷酸二酯连接的GalNAc3-2缀合物的ISIS 661134(参见实施例41)对小鼠中SRB-1的反义抑制。未缀合的ISIS 440762和651900(3’末端处的GalNAc3-1缀合物，参见实施例9)包括在研究中用于比较并且先前描述于表17中。
处理
在以下示出的剂量下，用ISIS 440762、651900、661134或用PBS处理的对照皮下注射六周龄雄性Balb/c小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)一次。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死，以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860005991
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定肝脏SRB-1 mRNA水平。在归一化为PBS处理的对照之前，测定相对于总RNA的SRB-1 mRNA水平(使用Ribogreen)。以下结果以归一化为PBS处理的对照的每个处理组的SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现并且表示为“％PBS”。使用如先前所述的类似方法测量ED50并且在以下呈现。
如表35中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低SRB-1 mRNA水平。事实上，在5’末端包含磷酸二酯连接的GalNAc3-2缀合物的反义寡核苷酸(ISIS 661134)或包含连接在3’末端的GalNAc3-1缀合物的反义寡核苷酸(ISIS 651900)与未缀合的反义寡核苷酸(ISIS 440762)相比显示出效力的大致改进。此外，在5’末端包含磷酸二酯连接的GalNAc3-2缀合物的ISIS 661134与在3’末端包含GalNAc3-1缀合物的ISIS 651900相比效力相等。
表35
靶向SRB-1的含有GalNAc3-1或GalNAc3-2的ASO
Figure BDA0003357312860006001
先前在实施例9和37中描述了3’GalNAc3-1和5’GalNAc3-2的结构。
药物代谢动力学分析(PK)
如实施例20中所说明，以相同方式检验和评价来自高剂量组(7mg/kg)的ASO的PK。使用标准方案切碎并且提取肝脏样品。鉴定了661134(5’GalNAc3-2)和ISIS 651900(3’GalNAc3-1)的全长代谢物并且通过高分辨率质谱分析证实了其质量。结果显示针对在5’末端包含磷酸二酯连接的GalNAc3-2缀合物的ASO(ISIS 661134)所检测到的主要代谢物为ISIS 440762(数据未示出)。在可检测水平下没有观察到另外的代谢物。不像其对应物，针对在3’末端具有GalNAc3-1缀合物的ASO(ISIS 651900)观察到类似于先前在表23a中报道的那些的另外的代谢物。这些结果表明具有磷酸二酯连接的GalNAc3-1或GalNAc3-2缀合物可在不损害其效力的情况下改进ASO的PK特征。
实施例44：PO/PS键联对靶向SRB-1的在3’末端包含GalNAc3-1缀合物(参见实施例9)的ASO的反义抑制的影响
在单一施用研究中，针对其抑制小鼠中SRB-1的能力，对各自靶向SRB-1的在3’末端包含GalNAc3-1缀合物的ISIS 655861和655862进行测试。在研究中包括母体未缀合化合物ISIS 353382用于比较。
ASO为5-10-5MOE缺口聚物，其中缺口区包含十个2’-脱氧核糖核苷并且每个翼区包含五个2’-MOE修饰核苷。使用如先前在实施例19中所说明的类似方法制备ASO并且在以下表36中描述。
表36
靶向SRB-1的在3’末端包含GalNAc3-1缀合物的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006011
下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。上标“m”指示5-甲基胞嘧啶。“GalNAc3-1”的结构在实施例9中示出。
处理
在以下示出的剂量下，用ISIS 353382、655861、655862或用PBS处理的对照皮下注射六周龄雄性Balb/c小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)一次。每个处理组由4只动物组成。在处理之前以及在最后一次剂量之后，从每只小鼠中抽血并且分析血浆样品。在最后施用之后72小时将小鼠处死，以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006012
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定肝脏SRB-1 mRNA水平。在归一化为PBS处理的对照之前，测定相对于总RNA的SRB-1 mRNA水平(使用Ribogreen)。以下结果以归一化为PBS处理的对照的每个处理组的SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现并且表示为“％PBS”。使用如先前所述的类似方法测量ED50并且在以下报道。
如表37中所说明，与PBS处理的对照相比，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低SRB-1 mRNA水平。事实上，在3’末端包含GalNAc3-1缀合物的反义寡核苷酸(ISIS655861和655862)与未缀合反义寡核苷酸(ISIS 353382)相比显示出效力的大致改进。此外，相对于全部PS(ISIS 655861)，具有混合的PS/PO键联的ISIS 655862显示出效力的改进。
表37
PO/PS键联对靶向SRB-1的在3’末端包含GalNAc3-1缀合物的ASO的反义抑制的影响
Figure BDA0003357312860006021
使用标准方案，相对于盐水注射的小鼠测量血清中的肝脏转氨酶水平，即丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。还评价了器官重量。结果展示相比于PBS对照，在用ASO处理的小鼠中没有观察到转氨酶水平(表38)或器官重量(数据未示出)上升。此外，与全部PS(ISIS 655861)相比，具有混合的PS/PO键联的ASO(ISIS 655862)显示出类似的转氨酶水平。
表38
PO/PS键联对靶向SRB-1的在3’末端包含GalNAc3-1缀合物的ASO的转氨酶水平的影响
Figure BDA0003357312860006031
实施例45：PFP酯化合物110a的制备
Figure BDA0003357312860006041
Figure BDA0003357312860006051
单独用化合物103a或103b(38毫摩尔)和TMSOTf(0.5当量)以及二氯甲烷(200mL)中的分子筛处理化合物4(9.5g，28.8毫摩尔)，并且在室温下搅拌16小时。这时使有机层过滤通过硅藻土，然后用碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层分离并且通过硫酸钠干燥，过滤并且在减压下缩减。通过硅胶色谱法(2％--＞10％甲醇/二氯甲烷)纯化所得到的油状物，得到＞80％产率的化合物104a和104b。LCMS和质子NMR与结构一致。
将化合物104a和104b处理至与对于化合物100a-d(实施例47)相同的条件，得到＞90％产率的化合物105a和105b。LCMS和质子NMR与结构一致。
在与对于化合物901a-d相同的条件下单独用化合物90处理化合物105a和105b，得到化合物106a(80％)和106b(20％)。LCMS和质子NMR与结构一致。
将化合物106a和106b处理至与对于化合物96a-d(实施例47)相同的条件，得到107a(60％)和107b(20％)。LCMS和质子NMR与结构一致。
将化合物107a和107b处理至与对于化合物97a-d(实施例47)相同的条件，得到40％-60％产率的化合物108a和108b。LCMS和质子NMR与结构一致。
将化合物108a(60％)和108b(40％)处理至与对于化合物100a-d(实施例47)相同的条件，得到＞80％产率的化合物109a和109b。LCMS和质子NMR与结构一致。
将化合物109a处理至与对于化合物101a-d(实施例47)相同的条件，得到30％-60％产率的化合物110a。LCMS和质子NMR与结构一致。或者，可以类似方式用化合物109b起始制备化合物110b。
实施例46：用于与PFP酯(寡核苷酸111)缀合的一般工序；ISIS666881(GalNAc3-10)的制备
使用标准固相寡核苷酸工序合成并纯化5’-己基氨基修饰的寡核苷酸。将5’-己基氨基修饰的寡核苷酸溶解于pH 8.5的0.1M四硼酸钠(200μL)中，并且添加3当量的溶解于DMSO(50μL)中的所选的PFP酯化GalNAc3聚簇。如果在添加至ASO溶液时PFP酯沉淀，那么添加DMSO直到所有PFP酯溶解。在室温下混合约16h之后反应完全。用水将所得到的溶液稀释至12mL，然后在具有3000Da的质量截留的旋转过滤器中在3000rpm下离心沉降。将此过程重复两次以去除小分子杂质。然后将溶液冻干至干燥并且重新溶解于浓氨水中，并且在室温下混合2.5h，接着在真空中浓缩以去除大部分氨。通过RP-HPLC将缀合寡核苷酸纯化和脱盐并且将其冻干以提供GalNAc3缀合的寡核苷酸。
Figure BDA0003357312860006071
将寡核苷酸111与GalNAc3-10缀合。缀合物基团GalNAc3-10的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-10a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-，如用以下GalNAc3-10合成的寡核苷酸(ISIS666881)中所示。GalNAc3-10(GalNAc3-10a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006072
根据此一般工序制备ISIS 666881。使用标准固相寡核苷酸工序合成并且纯化5’-己基氨基修饰的寡核苷酸ISIS 660254。将ISIS 660254(40mg，5.2μmol)溶解于pH 8.5的0.1M四硼酸钠(200μL)中，并且添加3当量溶解于DMSO(50μL)中的PFP酯(化合物110a)。在添加至ASO溶液时PFP酯沉淀，则需要另外的DMSO(600μL)来完全溶解PFP酯。在室温下混合16h之后反应完全。用水将溶液稀释至12mL总体积，并且在具有3000Da的质量截留的旋转过滤器中在3000rpm下离心沉降。将此过程重复两次以去除小分子杂质。将溶液冻干至干燥并且重新溶解于浓氨水中，同时在室温下混合2.5h，接着在真空中浓缩以去除大部分氨。通过RP-HPLC将缀合的寡核苷酸纯化和脱盐并且将其冻干，得到90重量％产率的ISIS 666881(42mg，4.7μmol)。
GalNAc3-10缀合的寡核苷酸
Figure BDA0003357312860006081
大写字母指示每个核苷的核碱基并且mC指示5-甲基胞嘧啶。下标：“e”指示2'-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。缀合物基团以粗体表示。
实施例47：包含GalNAc3-8的寡核苷酸102的制备
Figure BDA0003357312860006091
Figure BDA0003357312860006101
Figure BDA0003357312860006111
将三元酸90(4g，14.43mmol)溶解于DMF(120mL)和N，N-二异丙基乙胺(12.35mL，72毫摩尔)中。在氩气下逐滴添加三氟乙酸五氟苯基酯(8.9mL，52毫摩尔)，并且使反应物在室温下搅拌30分钟。连同N，N-二异丙基乙胺(12.35mL，72毫摩尔)一起添加Boc-二胺91a或91b(68.87mmol)，并且使反应物在室温下搅拌16小时。这时在减压下使DMF缩减＞75％，然后将混合物溶解于二氯甲烷中。将有机层用碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层分离并且通过硫酸钠干燥，过滤并且在减压下缩减至油状物。通过硅胶色谱法(2％--＞10％甲醇/二氯甲烷)纯化所得到的油状物，得到大约80％产率的化合物92a和92b。LCMS和质子NMR与结构一致。
在室温下用20mL二氯甲烷和20mL三氟乙酸将化合物92a或92b(6.7毫摩尔)处理16小时。蒸发所得到的溶液，然后溶解于甲醇中，并且用DOWEX-OH树脂处理30分钟。过滤所得到的溶液并且在减压下缩减至油状物，得到85％-90％产率的化合物93a和93b。
将化合物7或64(9.6毫摩尔)在DMF(20mL)中用HBTU(3.7g，9.6毫摩尔)和N，N-二异丙基乙胺(5mL)处理15分钟。向其中添加化合物93a或93b(3毫摩尔)，并且使其在室温下搅拌16小时。这时在减压下使DMF减少＞75％，然后将混合物溶解于二氯甲烷中。将有机层用碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层分离并且通过硫酸钠干燥，过滤并且在减压下缩减至油状物。通过硅胶色谱法(5％--＞20％甲醇/二氯甲烷)纯化所得到的油状物，得到20％-40％产率的化合物96a-d。LCMS和质子NMR与结构一致。
在乙醇(75mL)中通过雷尼镍单独地将化合物96a-d(0.75毫摩尔)氢化3小时。这时通过过滤通过硅藻土来去除催化剂并且在减压下去除乙醇，得到80％-90％产率的化合物97a-d。LCMS和质子NMR与结构一致。
将化合物23(0.32g，0.53毫摩尔)在DMF(30mL)中用HBTU(0.2g，0.53毫摩尔)和N，N-二异丙基乙胺(0.19mL，1.14毫摩尔)处理15分钟。单独地向其中添加化合物97a-d(0.38毫摩尔)，并且使其在室温下搅拌16小时。这时在减压下使DMF减少＞75％，然后将混合物溶解于二氯甲烷中。将有机层用碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层分离并且通过硫酸钠干燥，过滤并且在减压下缩减至油状物。通过硅胶色谱法(2％--＞20％甲醇/二氯甲烷)纯化所得到的油状物，得到30％-40％产率的化合物98a-d。LCMS和质子NMR与结构一致。
将化合物99(0.17g，0.76毫摩尔)在DMF(50mL)中用HBTU(0.29g，0.76毫摩尔)和N，N-二异丙基乙胺(0.35mL，2.0毫摩尔)处理15分钟。单独地向其中添加化合物97a-d(0.51毫摩尔)，并且使其在室温下搅拌16小时。这时在减压下使DMF减少＞75％，然后将混合物溶解于二氯甲烷中。将有机层用碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层分离并且通过硫酸钠干燥，过滤并且在减压下缩减至油状物。通过硅胶色谱法(5％--＞20％甲醇/二氯甲烷)纯化所得到的油状物，得到40％-60％产率的化合物100a-d。LCMS和质子NMR与结构一致。
单独地在甲醇/乙酸乙酯(1∶1，50mL)中通过10％Pd(OH)2/C将化合物100a-d(0.16毫摩尔)氢化3小时。这时通过过滤通过硅藻土来去除催化剂并且在减压下去除有机物，得到80％-90％产率的化合物101a-d。LCMS和质子NMR与结构一致。
单独地将化合物101a-d(0.15毫摩尔)溶解于DMF(15mL)和吡啶(0.016mL，0.2毫摩尔)中。在氩气下逐滴添加三氟乙酸五氟苯基酯(0.034mL，0.2毫摩尔)，并且使反应物在室温下搅拌30分钟。这时在减压下使DMF减少＞75％，然后将混合物溶解于二氯甲烷中。将有机层用碳酸氢钠、水和盐水洗涤。然后将有机层分离并且通过硫酸钠干燥，过滤并且在减压下缩减至油状物。通过硅胶色谱法(2％--＞5％甲醇/二氯甲烷)纯化所得到的油状物，得到大约80％产率的化合物102a-d。LCMS和质子NMR与结构一致。
Figure BDA0003357312860006131
使用实施例46中说明的一般工序制备包含GalNAc3-8缀合物基团的低聚化合物102。缀合物基团GalNAc3-8的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-8a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在优选的实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。
GalNAc3-8(GalNAc3-8a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006141
实施例48：包含GalNAc3-7的寡核苷酸119的制备
Figure BDA0003357312860006142
Figure BDA0003357312860006151
根据文献中描述的工序合成化合物112(J.Med.Chem.2004，47，5798-5808)。
将化合物112(5g，8.6mmol)溶解于1∶1甲醇/乙酸乙酯(22mL/22mL)中。添加碳上氢氧化钯(0.5g)。将反应混合物在氢气下在室温下搅拌12h。将反应混合物过滤通过硅藻土垫并且用1∶1甲醇/乙酸乙酯洗涤该垫。合并滤液和洗涤物并且浓缩至干燥，得到化合物105a(定量的)。通过LCMS证实结构。
将化合物113(1.25g，2.7mmol)、HBTU(3.2g，8.4mmol)和DIEA(2.8mL，16.2mmol)溶解于无水DMF(17mL)中并且将反应混合物在室温下搅拌5min。向其中添加化合物105a(3.77g，8.4mmol)在无水DMF(20mL)中的溶液。将反应物在室温下搅拌6h。在减压下去除溶剂以得到油状物。将残余物溶解于CH2Cl2(100mL)中并且用饱和NaHCO3水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机相分离、干燥(Na2SO4)、过滤并且蒸发。通过硅胶柱色谱法纯化残余物并且用10％至20％的二氯甲烷中的MeOH洗脱，得到化合物114(1.45g，30％)。通过LCMS和1H NMR分析来证实结构。
将化合物114(1.43g，0.8mmol)溶解于1∶1甲醇/乙酸乙酯(4mL/4mL)中。添加钯碳(湿润，0.14g)。用氢气冲洗反应混合物并且在氢气下在室温下搅拌12h。将反应混合物过滤通过硅藻土垫。用甲醇/乙酸乙酯(1∶1)洗涤硅藻土垫。将滤液和洗涤物合并在一起并且在减压下蒸发，得到化合物115(定量的)。通过LCMS和1H NMR分析来证实结构。
将化合物83a(0.17g，0.75mmol)、HBTU(0.31g，0.83mmol)和DIEA(0.26mL，1.5mmol)溶解于无水DMF(5mL)中并且将反应混合物在室温下搅拌5min。向其中添加化合物115(1.22g，0.75mmol)在无水DMF中的溶液并且将反应物在室温下搅拌6h。在减压下去除溶剂并且将残余物溶解于CH2Cl2中。将有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤并且通过无水Na2SO4干燥并且过滤。将有机层浓缩至干燥，并且通过硅胶柱色谱法纯化所获得的残余物并且用3％至15％的二氯甲烷中的MeOH洗脱，得到化合物116(0.84g，61％)。通过LC MS和1HNMR分析来证实结构。
Figure BDA0003357312860006161
将化合物116(0.74g，0.4mmol)溶解于1∶1甲醇/乙酸乙酯(5mL/5mL)中。添加钯碳(湿润，0.074g)。用氢气冲洗反应混合物并且在氢气下在室温下搅拌12h。将反应混合物过滤通过硅藻土垫。用甲醇/乙酸乙酯(1∶1)洗涤硅藻土垫。将滤液和洗涤物合并在一起并且在减压下蒸发，得到化合物117(0.73g，98％)。通过LCMS和1H NMR分析来证实结构。
将化合物117(0.63g，0.36mmol)溶解于无水DMF(3mL)中。向此溶液中添加N，N-二异丙基乙胺(70μL，0.4mmol)和三氟乙酸五氟苯基酯(72μL，0.42mmol)。将反应混合物在室温下搅拌12h并且倾入到饱和NaHCO3水溶液中。将混合物用二氯甲烷萃取，用盐水洗涤并且通过无水Na2SO4干燥。将二氯甲烷溶液浓缩至干燥并且用硅胶柱色谱法纯化并且用5％至10％的二氯甲烷中的MeOH洗脱，得到化合物118(0.51g，79％)。通过LCMS以及1H与1H和19FNMR证实结构。
Figure BDA0003357312860006171
使用实施例46中说明的一般工序制备包含GalNAc3-7缀合物基团的低聚化合物119。缀合物基团GalNAc3-7的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-7a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。
GalNAc3-7(GalNAc3-7a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006181
实施例49：包含GalNAc3-5的寡核苷酸132的制备
Figure BDA0003357312860006182
将化合物120(14.01g，40mmol)和HBTU(14.06g，37mmol)溶解于无水DMF(80mL)中。添加三乙胺(11.2mL，80.35mmol)并且搅拌5min。在冰浴中冷却反应混合物并且添加化合物121(10g，mmol)在无水DMF(20mL)中的溶液。添加另外的三乙胺(4.5mL，32.28mmol)并且将反应混合物在氩气气氛下搅拌18h。通过TLC(乙酸乙酯∶己烷；1∶1；Rf＝0.47)监测反应。在减压下去除溶剂。将残余物吸收于EtOAc(300mL)中并且用1M NaHSO4(3x150mL)、饱和NaHCO3水溶液(3x150mL)和盐水(2x100mL)洗涤。用Na2SO4干燥有机层。通过过滤去除干燥剂并且通过旋转蒸发浓缩有机层。通过硅胶柱色谱法纯化粗混合物并且通过使用35％-50％的己烷中的EtOAc洗脱，得到化合物122(15.50g，78.13％)。通过LCMS和1H NMR分析来证实结构。质量m/z 589.3[M+H]+。
将LiOH(92.15mmol)在水(20mL)和THF(10mL)中的溶液添加至溶解于甲醇(15mL)中的化合物122(7.75g，13.16mmol)的冷却溶液中。将反应混合物在室温下搅拌45min并且通过TLC(EtOAc∶己烷；1∶1)监测。在减压下将反应混合物浓缩至一半体积。在冰浴中冷却剩余的溶液并且通过添加浓HCl来中和。将反应混合物稀释，用EtOAc(120mL)萃取并且用盐水洗涤(100mL)。当静置过夜时形成乳液并且澄清。将有机层分离、干燥(Na2SO4)、过滤并且蒸发，得到化合物123(8.42g)。残余的盐可能为质量过量的原因。LCMS与结构一致。产物无需任何进一步纯化即使用。计算的分子量：574.36；实测的分子量：575.3[M+H]+。
Figure BDA0003357312860006191
根据文献中描述的工序合成化合物126(J.Am.Chem.Soc.2011，133，958-963)。
Figure BDA0003357312860006201
Figure BDA0003357312860006211
将化合物123(7.419g，12.91mmol)、HOBt(3.49g，25.82mmol)和化合物126(6.33g，16.14mmol)溶解于DMF(40mL)中，并且在冰浴中冷却所得到的反应混合物。在氩气气氛下，向其中添加N，N-二异丙基乙胺(4.42mL，25.82mmol)、PyBop(8.7g，16.7mmol)，接着添加Bop偶联试剂(1.17g，2.66mmol)。去除冰浴并且使溶液升温至室温。在1h后反应完成，如通过TLC(DCM∶MeOH∶AA；89∶10∶1)所测定的。在减压下浓缩反应混合物。将残余物溶解于EtOAc(200mL)中并且用1M NaHSO4(3x100mL)、饱和NaHCO3水溶液(3x100mL)和盐水(2x100mL)洗涤。将有机相分离、干燥(Na2SO4)、过滤并且浓缩。通过硅胶柱色谱法用50％己烷/EtOAC至100％EtOAc梯度纯化残余物，得到呈白色泡沫的化合物127(9.4g)。LCMS和1H NMR与结构一致。质量m/z 778.4[M+H]+。
将三氟乙酸(12mL)添加至化合物127(1.57g，2.02mmol)在二氯甲烷(12mL)中的溶液中，并且在室温下搅拌1h。在减压下使反应混合物与甲苯(30mL)共蒸发至干燥。使所获得的残余物与乙腈(30mL)和甲苯(40mL)共蒸发两次，得到呈三氟乙酸盐的化合物128(1.67g)并且无需进一步纯化即用于下一步。LCMS和1H NMR与结构一致。质量m/z 478.2[M+H]+。
将化合物7(0.43g，0.963mmol)、HATU(0.35g，0.91mmol)和HOAt(0.035g，0.26mmol)合并在一起并且在圆底烧瓶中在减压下通过P2O5干燥4h，然后溶解于无水DMF(1mL)中并且搅拌5min。向其中添加化合物128(0.20g，0.26mmol)在无水DMF(0.2mL)和N，N-二异丙基乙胺(0.2mL)中的溶液。在氩气气氛下在室温下搅拌反应混合物。在30min之后反应完全，如通过LCMS和TLC(7％MeOH/DCM)所测定的。在减压下浓缩反应混合物。将残余物溶解于DCM(30mL)中并且用1M NaHSO4(3x20mL)、饱和NaHCO3水溶液(3x20mL)和盐水(3x20mL)洗涤。将有机相分离、通过Na2SO4干燥、过滤并且浓缩。通过硅胶柱色谱法使用5％-15％的二氯甲烷中的MeOH来纯化残余物，得到化合物129(96.6mg)。LC MS和1H NMR与结构一致。质量m/z 883.4[M+2H]+。
在20mL闪烁瓶中将化合物129(0.09g，0.051mmol)溶解于甲醇(5mL)中。向其中添加少量的10％Pd/C(0.015mg)并且用H2气体冲洗反应容器。将反应混合物在H2气氛下在室温下搅拌18h。将反应混合物过滤通过硅藻土垫并且用甲醇洗涤硅藻土垫。将滤液洗涤物汇集在一起并且在减压下浓缩，得到化合物130(0.08g)。LCMS和1H NMR与结构一致。产物无需进一步纯化即使用。质量m/z 838.3[M+2H]+。
向10mL刻度的圆底烧瓶中添加化合物130(75.8mg，0.046mmol)、0.37M吡啶/DMF(200μL)和搅拌棒。在搅拌的情况下向此溶液中逐滴添加0.7M三氟乙酸五氟苯基酯/DMF(100μL)。在1h后反应完成，如通过LC MS所测定的。在减压下去除溶剂并且将残余物溶解于CHCl3(大约10mL)中。将有机层用NaHSO4(1M，10mL)、饱和NaHCO3水溶液(10mL)和盐水(10mL)各分配三次。将有机相分离并且通过Na2SO4干燥、过滤并且蒸发，得到化合物131(77.7mg)。LCMS与结构一致。无需进一步纯化即使用。质量m/z 921.3[M+2H]+。
Figure BDA0003357312860006231
使用实施例46中说明的一般工序制备包含GalNAc3-5缀合物基团的低聚化合物132。缀合物基团GalNAc3-5的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-5a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。
GalNAc3-5(GalNAc3-5a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006241
实施例50：包含GalNAc4-11的寡核苷酸144的制备
Figure BDA0003357312860006251
Figure BDA0003357312860006261
化合物134的合成。向Merrifield烧瓶中添加用乙腈、二甲基甲酰胺、二氯甲烷和乙腈洗涤的氨甲基VIMAD树脂(2.5g，450μmol/g)。树脂在乙腈(4mL)中溶胀。通过添加20(1.0mmol，0.747g)、TBTU(1.0mmol，0.321g)、乙腈(5mL)和DIEA(3.0mmol，0.5mL)将化合物133在100mL圆底烧瓶中预先活化。使此溶液搅拌5min，然后在振荡的情况下添加至Merrifield烧瓶。使悬浮液振荡3h。排出反应混合物并且用乙腈、DMF和DCM洗涤树脂。通过测量DCM中的DMT阳离子在500nm(消光系数＝76000)处的吸光度来定量新树脂负载量并且测定为238μmol/g。通过悬浮于乙酸酐溶液中持续十分钟，进行三次，来将树脂加帽。
使用反复基于Fmoc(iterative Fmoc-based)的固相肽合成方法来合成固体载体结合的化合物141。取出少量固体载体并且悬浮于氨水(28wt％-30wt％)中持续6h。通过LC-MS分析裂解的化合物并且所观察到的质量与结构一致。质量m/z 1063.8[M+2H]+。
使用固相肽合成方法来合成固体载体结合的化合物142。
Figure BDA0003357312860006271
在DNA合成器上使用标准固相合成来合成固体载体结合的化合物143。
将固体载体结合的化合物143悬浮于氨水(28wt％-30wt％)中并且在55℃下加热16h。冷却溶液并且过滤固体载体。浓缩滤液，将残余物溶解于水中并且通过HPLC在强阴离子交换柱上纯化。将含有全长化合物144的级分汇集在一起并且脱盐。通过LC-MS分析所得到的GalNAc4-11缀合的低聚化合物并且所观察到的质量与结构一致。
缀合物基团GalNAc4-11的GalNAc4聚簇部分(GalNAc4-11a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。
GalNAc4-11(GalNAc4-11a-CM)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006281
实施例51：包含GalNAc3-6的寡核苷酸155的制备
Figure BDA0003357312860006282
如文献中所描述来合成化合物146(Analytical Biochemistry 1995，229，54-60)。
Figure BDA0003357312860006291
将化合物4(15g，45.55mmol)和化合物35b(14.3克，57mmol)溶解于CH2Cl2(200ml)中。添加活化的分子筛(
Figure BDA0003357312860006292
2g，粉末状)，并且使反应物在氮气气氛下搅拌30分钟。添加TMS-OTf(4.1ml，22.77mmol)并且使反应物在室温下搅拌过夜。当完成时，通过倾入到饱和NaHCO3水溶液(500ml)和碎冰(大约150g)的溶液中来猝灭反应。将有机层分离、用盐水洗涤、通过MgSO4干燥、过滤并且在减压下浓缩至橙色油状物。通过硅胶柱色谱法纯化粗材料并且用2％-10％的CH2Cl2中的MeOH洗脱，得到化合物112(16.53g，63％)。LCMS和1H NMR与预期的化合物一致。
将化合物112(4.27g，7.35mmol)溶解于1∶1 MeOH/EtOAc(40ml)中。通过使氩气流鼓泡穿过溶液15分钟来吹扫反应混合物。添加Pearlman氏催化剂(碳上氢氧化钯，400mg)，并且使氢气鼓泡穿过溶液30分钟。在完成时(TLC 10％的CH2Cl2中的MeOH和LCMS)，通过过滤通过硅藻土垫来去除催化剂。通过旋转蒸发来浓缩滤液，并且在高真空下简单干燥以得到化合物105a(3.28g)。LCMS和1H NMR与希望的产物一致。
将化合物147(2.31g，11mmol)溶解于无水DMF(100mL)中。添加N，N-二异丙基乙胺(DIEA，3.9mL，22mmol)，接着添加HBTU(4g，10.5mmol)。使反应混合物在氮气下搅拌大约15分钟。向其中添加化合物105a(3.3g，7.4mmol)在干燥DMF中的溶液并且在氮气气氛下搅拌2h。将反应物用EtOAc稀释并且用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将有机相分离、干燥(MgSO4)、过滤并且浓缩至橙色浆状物。通过柱色谱法2％-5％的CH2Cl2中的MeOH来纯化粗材料，得到化合物148(3.44g，73％)。LCMS和1H NMR与预期的产物一致。
将化合物148(3.3g，5.2mmol)溶解于1∶1 MeOH/EtOAc(75ml)中。通过使氩气流鼓泡穿过溶液15分钟来吹扫反应混合物。添加Pearlman氏催化剂(碳上氢氧化钯)(350mg)。使氢气鼓泡穿过溶液30分钟。在完成时(TLC 10％的DCM中的MeOH和LCMS)，通过过滤通过硅藻土垫来去除催化剂。通过旋转蒸发浓缩滤液并且将其在高真空下简单干燥，得到化合物149(2.6g)。LCMS与希望的产物一致。将残余物溶解于干燥DMF(10ml)中，其立即用于下一步。
Figure BDA0003357312860006301
将化合物146(0.68g，1.73mmol)溶解于干燥DMF(20ml)中。向其中添加DIEA(450μL，2.6mmol，1.5当量)和HBTU(1.96g，0.5.2mmol)。使反应混合物在氮气下在室温下搅拌15分钟。添加化合物149(2.6g)在无水DMF(10mL)中的溶液。通过添加DIEA(如果必要的话)将反应物的pH调节至pH＝9-10。使反应物在氮气下在室温下搅拌2h。在完成时，将反应物用EtOAc(100mL)稀释，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤、接着用盐水洗涤。将有机相分离、通过MgSO4干燥、过滤并且浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物并且用2％-10％的CH2Cl2中的MeOH洗脱，得到化合物150(0.62g，20％)。LCMS和1H NMR与希望的产物一致。
将化合物150(0.62g)溶解于1∶1 MeOH/EtOAc(5L)中。通过使氩气流鼓泡穿过溶液15分钟来吹扫反应混合物。添加Pearlman氏催化剂(碳上氢氧化钯)(60mg)。使氢气鼓泡穿过溶液30分钟。在完成时(TLC 10％的DCM中的MeOH和LCMS)，通过过滤(注射器针头式特氟龙过滤器，0.45μm)来去除催化剂。通过旋转蒸发来浓缩滤液并且将其在高真空下简单干燥，得到化合物151(0.57g)。LCMS与希望的产物一致。将产物溶解于4mL干燥DMF中并且立即用于下一步。
Figure BDA0003357312860006321
将化合物83a(0.11g，0.33mmol)溶解于无水DMF(5mL)中并且添加N，N-二异丙基乙胺(75μL，1mmol)和PFP-TFA(90μL，0.76mmol)。当接触时反应混合物变为洋红色，并且在接下来的30分钟里逐渐变为橙色。通过TLC和LCMS监测反应的进展。当完成时(形成PFP酯)，添加化合物151(0.57g，0.33mmol)在DMF中的溶液。通过添加N，N-二异丙基乙胺(如果必要的话)将反应物的pH调节至pH＝9-10。将反应混合物在氮气下搅拌大约30min。当完成时，在减压下去除大部分溶剂。用CH2Cl2稀释残余物并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤，接着用盐水洗涤。将有机相分离、通过MgSO4干燥、过滤并且浓缩至橙色浆状物。通过硅胶柱色谱法(2％-10％的CH2Cl2中的MeOH)纯化残余物，得到化合物152(0.35g，55％)。LCMS和1H NMR与希望的产物一致。
将化合物152(0.35g，0.182mmol)溶解于1∶1 MeOH/EtOAc(10mL)中。通过使氩气流鼓泡穿过溶液15分钟来吹扫反应混合物。添加Pearlman氏催化剂(碳上氢氧化钯)(35mg)。使氢气鼓泡穿过溶液30分钟。在完成时(TLC 10％的DCM中的MeOH和LCMS)，通过过滤(注射器针头式特氟龙过滤器，0.45μm)来去除催化剂。通过旋转蒸发来浓缩滤液并且将其在高真空下简单干燥，得到化合物153(0.33g，定量的)。LCMS与希望的产物一致。
在氮气下搅拌的情况下，将化合物153(0.33g，0.18mmol)溶解于无水DMF(5mL)中。向其中添加N，N-二异丙基乙胺(65μL，0.37mmol)和PFP-TFA(35μL，0.28mmol)。将反应混合物在氮气下搅拌大约30min。在接触时反应混合物变为洋红色，并且逐渐变为橙色。通过添加更多的N，-二异丙基乙胺将反应混合物的pH维持在pH＝9-10。通过TLC和LCMS监测反应的进展。当完成时，在减压下去除大部分溶剂。用CH2Cl2(50mL)稀释残余物，并且用饱和NaHCO3水溶液洗涤，接着用盐水洗涤。将有机层通过MgSO4干燥、过滤并且浓缩至橙色浆状物。通过柱色谱法纯化残余物并且用2％-10％的CH2Cl2中的MeOH洗脱，得到化合物154(0.29g，79％)。LCMS和1H NMR与希望的产物一致。
Figure BDA0003357312860006331
使用实施例46中说明的一般工序制备包含GalNAc3-6缀合物基团的低聚化合物155。缀合物基团GalNAc3-6的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-6a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。
GalNAc3-6(GalNAc3-6a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006341
实施例52：包含GalNAc3-9的寡核苷酸160的制备
Figure BDA0003357312860006342
根据文献中描述的工序合成化合物156(J.Med.Chem.2004，47，5798-5808)。
将化合物156(18.60g，29.28mmol)溶解于甲醇(200mL)中。添加钯碳(6.15g，10wt％，负载量(干基)，基质碳粉，湿润)。将反应混合物在氢气下在室温下搅拌18h。将反应混合物过滤通过硅藻土垫并且用甲醇彻底洗涤硅藻土垫。洗涤合并的滤液并且浓缩至干燥。通过硅胶柱色谱法纯化残余物并且用5％-10％的二氯甲烷中的甲醇洗脱，得到化合物157(14.26g，89％)。质量m/z 544.1[M-H]-。
将化合物157(5g，9.17mmol)溶解于无水DMF(30mL)中。添加HBTU(3.65g，9.61mmol)和N，N-二异丙基乙胺(13.73mL，78.81mmol)并且将反应混合物在室温下搅拌5分钟。向其中添加化合物47(2.96g，7.04mmol)的溶液。将反应物在室温下搅拌8h。将反应混合物倾入到饱和NaHCO3水溶液中。用乙酸乙酯萃取混合物，并且将有机层用盐水洗涤并干燥(Na2SO4)、过滤和蒸发。通过硅胶柱色谱法纯化所获得的残余物并且用50％的己烷中的乙酸乙酯洗脱，得到化合物158(8.25g，73.3％)。通过MS和1H NMR分析来证实结构。
在减压下通过P2O5干燥化合物158(7.2g，7.61mmol)。将干燥的化合物溶解于无水DMF(50mL)中。向其中添加1H-四唑(0.43g，6.09mmol)和N-甲基咪唑(0.3mL，3.81mmol)以及2-氰乙基-N，N，N’，N’-四异丙基二氨基磷酸酯(3.65mL，11.50mmol)。将反应混合物在氩气气氛下搅拌4h。用乙酸乙酯(200mL)稀释反应混合物。用饱和NaHCO3和盐水洗涤反应混合物。将有机相分离、干燥(Na2SO4)、过滤并且蒸发。通过硅胶柱色谱法纯化残余物并且用50％-90％的己烷中的乙酸乙酯洗脱，得到化合物159(7.82g，80.5％)。通过LCMS和31P NMR分析来证实结构。
Figure BDA0003357312860006361
使用标准寡核苷酸合成工序制备包含GalNAc3-9缀合物基团的低聚化合物160。将化合物159的三个单元偶联至固体载体，接着偶联核苷酸亚磷酰胺。用氨水处理受保护的低聚化合物得到化合物160。缀合物基团GalNAc3-9的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-9a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-9(GalNAc3-9a-CM)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006362
实施例53：用于制备化合物18(GalNAc3-1a和GalNAc3-3a)的替代工序
Figure BDA0003357312860006371
使内酯161与二氨基丙烷(3-5当量)或单-Boc保护的二氨基丙烷(1当量)反应，以提供醇162a或162b。当未受保护的丙二胺用于上述反应时，通过在高真空下蒸发来去除过量的二胺并且使用CbzCl保护162a中的游离氨基，以在通过柱色谱法纯化之后提供呈白色固体的162b。在TMSOTf的存在下，使醇162b与化合物4进一步反应，以提供163a，所述163a通过使用催化氢化去除Cbz基团而转化为163b。通过使三元酸113(参见实施例48)与DMF(0.1M至0.5M)中的PFPTFA(3.5当量)和吡啶(3.5当量)反应来制备五氟苯基(PFP)酯164。使三酯164与胺163b(3-4当量)和DIPEA(3-4当量)直接反应，以提供化合物18。以上方法极大地促进中间体的纯化并且使副产物的形成最小化，所述副产物使用实施例4中描述的工序形成。
实施例54：用于制备化合物18(GalNAc3-1a和GalNAc3-3a)的替代工序
Figure BDA0003357312860006381
使用实施例53中概述的工序由酸113制备三PFP酯164并且使其与单-Boc保护的二胺反应，以提供基本上定量产率的165。用盐酸或三氟乙酸去除Boc基团以提供三胺，所述三胺在合适的碱如DIPEA的存在下与PFP活化的酸166反应，以提供化合物18。
通过用DMF中的PFPTFA(1-1.2当量)和吡啶(1-1.2当量)处理来由对应的酸制备PFP保护的Gal-NAc酸166。继而通过使用乙腈和水中的TEMPO(0.2当量)和BAIB的氧化来由对应的醇制备前体酸。使用先前在实施例47中描述的条件，通过与1，6-己二醇(或1，5-戊二醇或对于其它n值的其它二元醇)(2-4当量)和TMSOTf反应来由糖中间体4制备前体醇。
实施例55：靶向SRB-1的包含3’-缀合物基团或5’-缀合物基团的寡核苷酸(比较GalNAc3-1、3、8和9)的体内剂量依赖性研究
在剂量依赖性研究中测试以下列出的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。包括未缀合的ISIS 353382作为标准物。各种GalNAc3缀合物基团中的每一个均通过磷酸二酯连接的2’-脱氧腺苷核苷(可裂解部分)连接在相应寡核苷酸的3’或5’末端处。
表39
靶向SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006391
大写字母指示每个核苷的核碱基并且mC指示5-甲基胞嘧啶。下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。缀合物基团以粗体表示。
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出。GalNAc3-9的结构先前在实施例52中示出。GalNAc3-3的结构先前在实施例39中示出。GalNAc3-8的结构先前在实施例47中示出。
处理
在以下示出的剂量下用ISIS 353382、655861、664078、661161、665001或用盐水皮下注射六周龄雄性Balb/c小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)一次。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死，以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006392
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定肝脏SRB-1 mRNA水平。以下结果以归一化为盐水对照的每个处理组的SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现。
如表40中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低SRB-1 mRNA水平。事实上，在3’末端包含磷酸二酯连接的GalNAc3-1和GalNAc3-9缀合物的反义寡核苷酸(ISIS655861和ISIS 664078)和包含连接在5’末端的GalNAc3-3和GalNAc3-8缀合物的反义寡核苷酸(ISIS 661161和ISIS 665001)与未缀合的反义寡核苷酸(ISIS 353382)相比显示出效力的大致改进。此外，在3’末端包含GalNAc3-9缀合物的ISIS 664078与在3’末端包含GalNAc3-1缀合物的ISIS 655861相比基本上效力相等。分别包含GalNAc3-3或GalNAc3-9的5’缀合的反义寡核苷酸ISIS 661161和ISIS 665001与3’缀合的反义寡核苷酸(ISIS 655861和ISIS664078)相比具有增加的效力。
表40
靶向SRB-1的含有GalNAc3-1、3、8或9的ASO
Figure BDA0003357312860006411
使用标准方案，相对于盐水注射的小鼠测量血清中的肝脏转氨酶水平，即丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。还评价了总胆红素和BUN。评价了体重变化，其中与盐水组相比没有显著变化。ALT、AST、总胆红素和BUN值在下表中示出。
表41
Figure BDA0003357312860006421
实施例56：靶向SRB-1的包含3’-缀合物基团或5’-缀合物基团的寡核苷酸(比较GalNAc3-1、2、3、5、6、7和10)的体内剂量依赖性研究
在剂量依赖性研究中测试以下列出的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。包括未缀合的ISIS 353382作为标准物。各种GalNAc3缀合物基团中的每一个均通过磷酸二酯连接的2’-脱氧腺苷核苷(可裂解部分)连接在相应寡核苷酸的5’末端处，具有连接在3’末端处的GalNAc3缀合物基团的ISIS 655861除外。
表42
靶向SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006431
大写字母指示每个核苷的核碱基并且mC指示5-甲基胞嘧啶。下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。缀合物基团以粗体表示。
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出。GalNAc3-2a的结构先前在实施例37中示出。GalNAc3-3a的结构先前在实施例39中示出。GalNAc3-5a的结构先前在实施例49中示出。GalNAc3-6a的结构先前在实施例51中示出。GalNAc3-7a的结构先前在实施例48中示出。GalNAc3-10a的结构先前在实施例46中示出。
处理
在以下示出的剂量下用ISIS 353382、655861、664507、661161、666224、666961、666981、666881或用盐水皮下注射六周龄雄性Balb/c小鼠(Jackson Laboratory，BarHarbor，ME)一次。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006432
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定肝脏SRB-1 mRNA水平。以下结果以归一化为盐水对照的每个处理组的SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现。
如表43中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低SRB-1 mRNA水平。事实上，缀合反义寡核苷酸与未缀合反义寡核苷酸(ISIS 353382)相比显示出效力的大致改进。5’缀合的反义寡核苷酸与3’缀合的反义寡核苷酸相比显示出效力稍微增加。
表43
Figure BDA0003357312860006441
使用标准方案，相对于盐水注射的小鼠测量血清中的肝脏转氨酶水平，即丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。还评价了总胆红素和BUN。评价了体重变化，其中与盐水组相比没有显著变化。ALT、AST、总胆红素和BUN值在以下表44中示出。
表44
Figure BDA0003357312860006451
实施例57：靶向ApoC III的包含3’-缀合物基团的寡核苷酸的体内作用持续时间研究
用以下指示的剂量注射小鼠一次并且经过42天的过程监测ApoC-III和血浆甘油三酯(血浆TG)水平。在每个组中使用3只表达人APOC-III的转基因小鼠进行研究。
表45
靶向ApoC III的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006461
大写字母指示每个核苷的核碱基并且mC指示5-甲基胞嘧啶。下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。缀合物基团以粗体表示。
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出。
表46
ApoC III mRNA(第1天时的％盐水)和血浆TG水平(第1天时的％盐水)
ASO 剂量 靶标 第3天 第7天 第14天第35天 第42天
盐水 0mg/kg ApoC-III 98 100 10095 116
ISIS 304801 30mg/kg ApoC-III 28 30 4165 74
ISIS 647535 10mg/kg ApoC-III 16 19 2574 94
ISIS 647536 10mg/kg ApoC-III 18 16 1735 51
盐水 0mg/kg 血浆TG 121 130 123105 109
ISIS 304801 30mg/kg 血浆TG 34 37 5069 69
ISIS 647535 10mg/kg 血浆TG 18 14 2418 71
ISIS 647536 10mg/kg 血浆TG 21 19 1532 35
如上表中可看出，与未缀合寡核苷酸相比，作用持续时间随着3’-缀合物基团的添加而增加。与缀合的全部PS寡核苷酸647535相比，对于缀合的混合PO/PS寡核苷酸647536存在作用持续时间的进一步增加。
实施例58：靶向SRB-1的包含3’-缀合物基团的寡核苷酸(比较GalNAc3-1和GalNAc4-11)的体内剂量依赖性研究
在剂量依赖性研究中测试以下列出的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。包括未缀合的ISIS 440762作为未缀合标准物。缀合物基团中的每一个均通过磷酸二酯连接的2’-脱氧腺苷核苷可裂解部分连接在相应寡核苷酸的3’末端处。
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出。GalNAc3-11a的结构先前在实施例50中示出。
处理
在以下示出的剂量下用ISIS 440762、651900、663748或用盐水皮下注射六周龄雄性Balb/c小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)一次。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死，以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006471
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定肝脏SRB-1 mRNA水平。以下结果以归一化为盐水对照的每个处理组的SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现。
如表47中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低SRB-1 mRNA水平。在3’末端包含磷酸二酯连接的GalNAc3-1和GalNAc4-11缀合物的反义寡核苷酸(ISIS651900和ISIS 663748)与未缀合的反义寡核苷酸(ISIS 440762)相比显示出效力的大致改进。两种缀合寡核苷酸GalNAc3-1和GalNAc4-11效力相等。
表47
靶向SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006481
大写字母指示每个核苷的核碱基并且mC指示5-甲基胞嘧啶。下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o’”指示-O-P(＝O)(OH)-。缀合物基团以粗体表示。
使用标准方案，相对于盐水注射的小鼠测量血清中的肝脏转氨酶水平，即丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。还评价了总胆红素和BUN。评价了体重变化，其中与盐水组相比没有显著变化。ALT、AST、总胆红素和BUN值在以下表48中示出。
表48
Figure BDA0003357312860006482
实施例59：靶向FXI的GalNAc3-1缀合的ASO的体内作用
在多剂量研究中测试以下列出的寡核苷酸对小鼠中的FXI的反义抑制。包括ISIS404071作为未缀合标准物。缀合物基团中的每一个均通过磷酸二酯连接的2’-脱氧腺苷核苷可裂解部分连接在相应寡核苷酸的3’末端处。
表49
靶向FXI的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006491
大写字母指示每个核苷的核碱基并且mC指示5-甲基胞嘧啶。下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。缀合物基团以粗体表示。
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出。
处理
在以下示出的剂量下用ISIS 404071、656172、656173或用PBS处理的对照皮下注射六周龄雄性Balb/c小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)，一周两次，持续3周。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006492
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定肝脏FXI mRNA水平。还使用ELISA测量了血浆FXI蛋白水平。在归一化为PBS处理的对照之前，确定相对于总RNA的FXI mRNA水平(使用
Figure BDA0003357312860006493
)。以下结果以每个处理组的FXImRNA水平的平均百分比呈现。将数据归一化为PBS处理的对照并且表示为“％PBS”。使用如先前所述的类似方法测量ED50并且在以下呈现。
表50
因子XI mRNA(％盐水)
Figure BDA0003357312860006501
如表50中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低FXI mRNA水平。包含3’-GalNAc3-1缀合物基团的寡核苷酸与未缀合的反义寡核苷酸(ISIS 404071)相比显示出效力的大致改进。在两种缀合寡核苷酸之间，通过用PO取代一些PS键联(ISIS 656173)来进一步提供效力改进。
如表50a中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低FXI蛋白水平。包含3’-GalNAc3-1缀合物基团的寡核苷酸与未缀合的反义寡核苷酸(ISIS 404071)相比显示出效力的大致改进。在两种缀合寡核苷酸之间，通过用PO取代一些PS键联(ISIS 656173)来进一步提供效力改进。
表50a
因子XI蛋白(％盐水)
Figure BDA0003357312860006511
使用标准方案，相对于盐水注射的小鼠测量血清中的肝脏转氨酶水平，即丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。还评价了总胆红素、总白蛋白、CRE和BUN。评价了体重变化，其中与盐水组相比没有显著变化。ALT、AST、总胆红素和BUN值在下表中示出。
表51
Figure BDA0003357312860006512
实施例60：靶向SRB-1的缀合ASO的体外作用
在多剂量研究中测试以下列出的寡核苷酸对原代小鼠肝细胞中的SRB-1的反义抑制。包括ISIS 353382作为未缀合标准物。缀合物基团中的每一个均通过磷酸二酯连接的2’-脱氧腺苷核苷可裂解部分连接在相应寡核苷酸的3’或5’末端处。
表52
靶向SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006521
大写字母指示每个核苷的核碱基并且mC指示5-甲基胞嘧啶。下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。缀合物基团以粗体表示。
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出。GalNAc3-3a的结构先前在实施例39中示出。GalNAc3-8a的结构先前在实施例47中示出。GalNAc3-9a的结构先前在实施例52中示出。GalNAc3-6a的结构先前在实施例51中示出。GalNAc3-2a的结构先前在实施例37中示出。GalNAc3-10a的结构先前在实施例46中示出。GalNAc3-5a的结构先前在实施例49中示出。GalNAc3-7a的结构先前在实施例48中示出。
处理
在体外在小鼠原代肝细胞中测试以上列出的寡核苷酸，所述小鼠原代肝细胞以25,000个细胞/孔的密度涂布并且用0.03nM、0.08nM、0.24nM、0.74nM、2.22nM、6.67nM或20nM修饰寡核苷酸处理。在大约16小时的处理期之后，从细胞中分离RNA并且通过定量实时PCR测量mRNA水平并且如通过
Figure BDA0003357312860006532
所测量，根据总RNA含量调节SRB-1 mRNA水平。
使用标准方法计算IC50并且结果呈现于表53中。结果显示，在其中没有使用试剂或电穿孔技术来人工促进寡核苷酸进入到细胞中的自由摄取条件下，包含GalNAc缀合物的寡核苷酸比不包含GalNAc缀合物的母体寡核苷酸(ISIS 353382)在肝细胞中显著更有效。
表53
Figure BDA0003357312860006531
a多次运行的平均值。
实施例61：包含GalNAc3-12的低聚化合物175的制备
Figure BDA0003357312860006541
Figure BDA0003357312860006551
Figure BDA0003357312860006561
化合物169为商业上可获得的。通过向化合物171添加苯甲基(全氟苯基)戊二酸酯来制备化合物172。通过向DMF中的5-(苯甲氧基)-5-氧戊酸添加PFP-TFA和DIEA来制备苯甲基(全氟苯基)戊二酸酯。使用实施例46中说明的一般工序由化合物174制备包含GalNAc3-12缀合物基团的低聚化合物175。缀合物基团GalNAc3-12的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-12a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某一实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-12(GalNAc3-12a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006562
实施例62：包含GalNAc3-13的低聚化合物180的制备
Figure BDA0003357312860006571
Figure BDA0003357312860006581
使用实施例2中示出的一般工序制备化合物176。使用实施例49中说明的一般工序由化合物177制备包含GalNAc3-13缀合物基团的低聚化合物180。缀合物基团GalNAc3-13的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-13a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某一实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-13(GalNAc3-13a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006582
实施例63：包含GalNAc3-14的低聚化合物188的制备
Figure BDA0003357312860006591
化合物181和185为商业上可获得的。使用实施例46中说明的一般工序由化合物187制备包含GalNAc3-14缀合物基团的低聚化合物188。缀合物基团GalNAc3-14的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-14a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-14(GalNAc3-14a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006601
实施例64：包含GalNAc3-15的低聚化合物197的制备
Figure BDA0003357312860006602
Figure BDA0003357312860006611
化合物189为商业上可获得的。使用实施例31中示出的一般工序制备化合物195。使用标准寡核苷酸合成工序由化合物194和195制备包含GalNAc3-15缀合物基团的低聚化合物197。缀合物基团GalNAc3-15的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-15a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-15(GalNAc3-15a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006612
实施例65：靶向SRB-1的包含5’-缀合物基团的寡核苷酸(比较GalNAc3-3、12、13、14和15)的体内剂量依赖性研究
在剂量依赖性研究中测试以下列出的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。包括未缀合的ISIS 353382作为标准物。GalNAc3缀合物基团中的每一个均通过磷酸二酯连接的2’-脱氧腺苷核苷(可裂解部分)连接在相应寡核苷酸的5’末端处。
表54
靶向SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006621
大写字母指示每个核苷的核碱基并且mC指示5-甲基胞嘧啶。下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。缀合物基团以粗体表示。
GalNAc3-3a的结构先前在实施例39中示出。GalNAc3-12a的结构先前在实施例61中示出。GalNAc3-13a的结构先前在实施例62中示出。GalNAc3-14a的结构先前在实施例63中示出。GalNAc3-15a的结构先前在实施例64中示出。
处理
在以下示出的剂量下用ISIS 353382、661161、671144、670061、671261、671262或用盐水皮下注射六至八周龄C57b16小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)一次或两次。给药两次的小鼠在第一次剂量之后三天接受第二次剂量。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死，以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006632
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定肝脏SRB-1 mRNA水平。以下结果以归一化为盐水对照的每个处理组的SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现。
如表55中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低SRB-1 mRNA水平。在接受单一剂量的动物与接受两次剂量的动物之间没有观察到靶敲除的显著差异(参见ISIS 353382剂量30mg/kg和2x15mg/kg；以及ISIS 661161剂量5mg/kg和2x2.5mg/kg)。包含磷酸二酯连接的GalNAc3-3、12、13、14和15缀合物的反义寡核苷酸与未缀合的反义寡核苷酸(ISIS 335382)相比显示出效力的大致改进。
表55
SRB-1 mRNA(％盐水)
Figure BDA0003357312860006631
使用标准方案，相对于盐水注射的小鼠测量血清中的肝脏转氨酶水平，即丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。还评价了总胆红素和BUN。评价了体重变化，其中与盐水组相比没有显著差异(数据未示出)。ALT、AST、总胆红素和BUN值在以下表56中示出。
表56
Figure BDA0003357312860006641
实施例66：各种可裂解部分对通过包含5’-GalNAc3聚簇的靶向SRB-1的寡核苷酸进行的体内反义抑制的影响
在剂量依赖性研究中测试以下列出的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。GalNAc3缀合物基团中的每一个均通过磷酸二酯连接的核苷(可裂解部分(CM))连接在相应寡核苷酸的5’末端处。
表57
靶向SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006651
大写字母指示每个核苷的核碱基并且mC指示5-甲基胞嘧啶。下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。缀合物基团以粗体表示。
GalNAc3-3a的结构先前在实施例39中示出。GalNAc3-13a的结构先前在实施例62中示出。
处理
在以下示出的剂量下用ISIS 661161、670699、670700、670701、671165或用盐水皮下注射六至八周龄C57b16小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)一次。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死，以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006652
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定肝脏SRB-1 mRNA水平。以下结果以归一化为盐水对照的每个处理组的SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现。
如表58中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低SRB-1 mRNA水平。包含各种可裂解部分的反义寡核苷酸均显示出类似的效力。
表58
SRB-1 mRNA(％盐水)
Figure BDA0003357312860006661
使用标准方案，相对于盐水注射的小鼠测量血清中的肝脏转氨酶水平，即丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。还评价了总胆红素和BUN。评价了体重变化，其中与盐水组相比没有显著差异(数据未示出)。ALT、AST、总胆红素和BUN值在以下表56中示出。
表59
Figure BDA0003357312860006671
实施例67：包含GalNAc3-16的低聚化合物199的制备
Figure BDA0003357312860006681
使用实施例7和9中说明的一般工序制备包含GalNAc3-16缀合物基团的低聚化合物199。缀合物基团GalNAc3-16的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-16a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-16(GalNAc3-16a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006691
实施例68：包含GalNAc3-17的低聚化合物200的制备
Figure BDA0003357312860006692
使用实施例46中说明的一般工序制备包含GalNAc3-17缀合物基团的低聚化合物200。缀合物基团GalNAc3-17的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-17a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-17(GalNAc3-17a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006693
实施例69：包含GalNAc3-18的低聚化合物201的制备
Figure BDA0003357312860006701
使用实施例46中说明的一般工序制备包含GalNAc3-18缀合物基团的低聚化合物201。缀合物基团GalNAc3-18的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-18a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-18(GalNAc3-18a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006702
实施例70：包含GalNAc3-19的低聚化合物204的制备
Figure BDA0003357312860006711
使用实施例52中说明的一般工序由化合物64制备包含GalNAc3-19缀合物基团的低聚化合物204。缀合物基团GalNAc3-19的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-19a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-19(GalNAc3-19a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006712
实施例71：包含GalNAc3-20的低聚化合物210的制备
Figure BDA0003357312860006721
通过将PFP-TFA和DIEA添加至乙腈中的6-(2，2，2-三氟乙酰氨基)己酸来制备化合物205，所述乙腈中的6-(2，2，2-三氟乙酰氨基)己酸通过将三氟甲磺酸酐添加至6-氨基己酸来制备。将反应混合物加热至80℃，然后降低至室温。使用实施例52中说明的一般工序由化合物208制备包含GalNAc3-20缀合物基团的低聚化合物210。缀合物基团GalNAc3-20的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-20a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-20(GalNAc3-20a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006731
实施例72：包含GalNAc3-21的低聚化合物215的制备
Figure BDA0003357312860006741
化合物211为商业上可获得的。使用实施例52中说明的一般工序由化合物213制备包含GalNAc3-21缀合物基团的低聚化合物215。缀合物基团GalNAc3-21的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-21a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-21(GalNAc3-21a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006751
实施例73：包含GalNAc3-22的低聚化合物221的制备
Figure BDA0003357312860006761
使用二异丙基铵四唑由化合物219制备化合物220。使用实施例52中说明的一般工序由化合物220制备包含GalNAc3-21缀合物基团的低聚化合物221。缀合物基团GalNAc3-22的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-22a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，可裂解部分为-P(＝O)(OH)-Ad-P(＝O)(OH)-。GalNAc3-22(GalNAc3-22a-CM-)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006771
实施例74：各种可裂解部分对通过包含5’-GalNAc3缀合物的靶向SRB-1的寡核苷酸进行的体内反义抑制的影响
在剂量依赖性研究中测试以下列出的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。GalNAc3缀合物基团中的每一个均连接在相应寡核苷酸的5’末端处。
表60
靶向SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006781
在所有表格中，大写字母指示每个核苷的核碱基并且mC指示5-甲基胞嘧啶。下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)；并且“o”’指示-O-P(＝O)(OH)-。缀合物基团以粗体表示。
GalNAc3-3a的结构先前在实施例39中示出。GalNAc3-17a的结构先前在实施例68中示出，并且GalNAc3-18a的结构在实施例69中示出。
处理
在以下示出的剂量下用列于表60中的寡核苷酸或用盐水皮下注射六至八周龄C57BL/6小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)一次。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006782
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定SRB-1 mRNA水平。以下结果以归一化为盐水对照的每个处理组的SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现。
如表61中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低SRB-1 mRNA水平。包含GalNAc缀合物的反义寡核苷酸显示出类似的效力并且比缺乏GalNAc缀合物的母体寡核苷酸显著更有效。
表61
SRB-1 mRNA(％盐水)
Figure BDA0003357312860006791
使用标准方案，相对于盐水注射的小鼠测量血清中的肝脏转氨酶水平，即丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。还评价了总胆红素和BUN。评价了体重变化，其中与盐水组相比没有显著变化(数据未示出)。ALT、AST、总胆红素和BUN值在以下表62中示出。
表62
Figure BDA0003357312860006801
实施例75：包含5’-缀合物基团的寡核苷酸的药物代谢动力学分析
使用根据实施例65、66和74中描述的处理工序所获得的肝脏样品来评价以上表54、57和60中的ASO的PK。使用标准方案切碎并提取肝脏样品并且与内标物一起通过IP-HPLC-MS进行分析。通过对适当的UV峰进行积分来测量所有代谢物的组合的组织水平(μg/g)，并且使用适当的萃取离子色谱图(EIC)测量缺少缀合物的全长ASO(“母体”，在这种情况下为Isis No.353382)的组织水平。
表63
肝脏中的PK分析
Figure BDA0003357312860006811
以上表63中的结果显示，在寡核苷酸施用之后72小时，尤其当考虑到具有与不具有GalNAc3缀合物基团的寡核苷酸之间的给药差异时，包含GalNAc3缀合物基团的寡核苷酸的肝脏组织水平比不包含GalNAc3缀合物基团的母体寡核苷酸(ISIS 353382)更高。此外，至72小时，40％-98％的包含GalNAc3缀合物基团的每个寡核苷酸代谢为母体化合物，表明GalNAc3缀合物基团从寡核苷酸上裂解。
实施例76：包含GalNAc3-23的低聚化合物230的制备
Figure BDA0003357312860006821
Figure BDA0003357312860006831
化合物222为商业上可获得的。将44.48ml(0.33mol)的化合物222用吡啶(500mL)中的甲苯磺酰氯(25.39g，0.13mol)处理16小时。然后将反应物蒸发至油状物，溶解于EtOAc中并且用水、饱和NaHCO3、盐水洗涤，并且通过Na2SO4干燥。将乙酸乙酯浓缩至干燥并且通过柱色谱法纯化，用EtOAc/己烷(1∶1)洗脱，接着用10％的CH2Cl2中的甲醇洗脱，得到呈无色油状物的化合物223。LCMS和NMR与结构一致。在室温下将10g(32.86mmol)的1-甲苯磺酰基三甘醇(化合物223)用DMSO(100mL)中的叠氮化钠(10.68g，164.28mmol)处理17小时。然后将反应混合物倾倒在水上，并且用EtOAc萃取。将有机层用水洗涤三次并且通过Na2SO4干燥。将有机层浓缩至干燥，得到5.3g的化合物224(92％)。LCMS和NMR与结构一致。在惰性气氛下用4A分子筛(5g)和二氯甲烷(100mL)中的TMSOTf(1.65ml，9.11mmol)处理1-叠氮基三甘醇(化合物224，5.53g，23.69mmol)和化合物4(6g，18.22mmol)。在14小时之后，过滤反应物以去除分子筛，并且将有机层用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤，并且通过Na2SO4干燥。将有机层浓缩至干燥并且通过柱色谱法纯化，用2％至4％梯度的二氯甲烷中的甲醇洗脱，得到化合物225。LCMS和NMR与结构一致。通过Pearlman氏催化剂在EtOAc/甲醇(4∶1，250mL)中氢化化合物225(11.9g，23.59mmol)。在8小时之后，通过过滤去除催化剂并且去除溶剂至干燥，得到化合物226。LCMS和NMR与结构一致。
为了生成化合物227，用五氟三氟乙酸酯(9.05ml，52.65mmol)逐滴处理硝基甲烷三丙酸(4.17g，15.04mmol)和Hunig氏碱(10.3ml，60.17mmol)在DMF(100mL)中的溶液。在30分钟之后，将反应物倾倒在冰水上并且用EtOAc萃取。将有机层用水、盐水洗涤，并且通过Na2SO4干燥。将有机层浓缩至干燥并且然后从庚烷中重结晶，得到呈白色固体的化合物227。LCMS和NMR与结构一致。将化合物227(1.5g，1.93mmol)和化合物226(3.7g，7.74mmol)在室温下在乙腈(15mL)中搅拌2小时。然后将反应物蒸发至干燥并且通过柱色谱法纯化，用2％至10％梯度的二氯甲烷中的甲醇洗脱，得到化合物228。LCMS和NMR与结构一致。在氢气气氛中，用乙醇(100mL)中的雷尼镍(约2g湿润)处理化合物228(1.7g，1.02mmol)。在12小时之后，通过过滤去除催化剂并且将有机层蒸发至固体，所述固体直接用于下一步。LCMS和NMR与结构一致。用DMF(5mL)中的苯甲基戊二酸(0.18g，0.8mmol)、HBTU(0.3g，0.8mmol)和DIEA(273.7μl，1.6mmol)处理此固体(0.87g，0.53mmol)。在16小时之后，在减压下在65℃下去除DMF至油状物，并且将油状物溶解于二氯甲烷。将有机层用饱和NaHCO3、盐水洗涤，并且通过Na2SO4干燥。在有机层蒸发之后，通过柱色谱法纯化化合物并且用2％至20％梯度的二氯甲烷中的甲醇洗脱，得到偶联的产物。LCMS和NMR与结构一致。将苯甲酯在氢气气氛下用Pearlman氏催化剂去保护，持续1小时。然后通过过滤去除催化剂并且去除溶剂至干燥，得到酸。LCMS和NMR与结构一致。将酸(486mg，0.27mmol)溶解于干燥DMF(3mL)中。添加吡啶(53.61μl，0.66mmol)并且用氩气吹扫反应物。将五氟三氟乙酸酯(46.39μl，0.4mmol)缓慢添加至反应混合物中。反应物的颜色从浅黄色变为酒红色，并且放出轻烟，所述轻烟用氩气流吹走。使反应物在室温下搅拌一小时(通过LCMS证实反应完全)。在减压下(旋转蒸发)在70℃下去除溶剂。将残余物用DCM稀释并且用1N NaHSO4、盐水、饱和碳酸氢钠洗涤并再次用盐水洗涤。将有机物通过Na2SO4干燥、过滤并且浓缩至干燥，得到225mg的呈易碎黄色泡沫的化合物229。LCMS和NMR与结构一致。
使用实施例46中说明的一般工序由化合物229制备包含GalNAc3-23缀合物基团的低聚化合物230。GalNAc3-23缀合物基团的GalNAc3聚簇部分(GalNAc3-23a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。GalNAc3-23(GalNAc3-23a-CM)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860006851
实施例77：通过包含GalNAc3缀合物的靶向SRB-1的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在剂量依赖性研究中测试以下列出的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。
表64
靶向SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006861
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出，GalNAc3-3a在实施例39中示出，GalNAc3-9a在实施例52中示出，GalNAc3-10a在实施例46中示出，GalNAc3-19a在实施例70中示出，GalNAc3-20a在实施例71中示出，并且GalNAc3-23a在实施例76中示出。
处理
在以下示出的剂量下用列于表64中的寡核苷酸或用盐水各自皮下注射六至八周龄C57BL/6小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)一次。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006862
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定SRB-1 mRNA水平。以下结果以归一化为盐水对照的每个处理组的SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现。
如表65中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低SRB-1 mRNA水平。
表65
SRB-1 mRNA(％盐水)
Figure BDA0003357312860006871
使用标准方案，还测量了血清中的肝脏转氨酶水平，即丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。还评价了总胆红素和BUN。评价了体重变化，其中与盐水组相比没有显著变化(数据未示出)。ALT、AST、总胆红素和BUN值在以下表66中示出。
表66
Figure BDA0003357312860006881
实施例78：通过包含GalNAc3缀合物的靶向血管紧张素原的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在剂量依赖性研究中测试以下列出的寡核苷酸对血压正常的斯普拉道来大鼠中的血管紧张素原(AGT)的反义抑制。
表67
靶向AGT的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006891
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出。
处理
在以下示出的剂量(总共三次剂量)下，每周一次用列于表67中的寡核苷酸或用PBS各自皮下注射六周龄雄性斯普拉道来大鼠。每个处理组由4只动物组成。在最后剂量之后72小时将大鼠处死。使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006893
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测量AGT肝脏mRNA水平。用1∶20,000稀释的血浆使用总血管紧张素原ELISA(目录号JP27412，IBL International，Toronto，ON)来测量AGT血浆蛋白水平。以下结果以归一化为PBS对照的每个处理组的肝脏中AGT mRNA水平或血浆中AGT蛋白水平的平均百分比呈现。
如表68中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低AGT肝脏mRNA和血浆蛋白水平，并且包含GalNAc缀合物的寡核苷酸比缺乏GalNAc缀合物的母体寡核苷酸显著更有效。
表68
AGT肝脏mRNA和血浆蛋白水平
Figure BDA0003357312860006892
使用标准方案，在处死时还测量了血浆中的肝脏转氨酶水平(即丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST))和体重。结果在以下表69中示出。
表69
肝脏转氨酶水平和大鼠体重
Figure BDA0003357312860006901
实施例79：包含GalNAc3缀合物的靶向APOC-III的寡核苷酸的体内作用持续时间
在单一剂量研究中测试列于以下表70中的寡核苷酸在小鼠中的作用持续时间。
表70
靶向APOC-III的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006902
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出，GalNAc3-3a在实施例39中示出，GalNAc3-7a在实施例48中示出，GalNAc3-10a在实施例46中示出，并且GalNAc3-13a在实施例62中示出。
处理
用列于表70中的寡核苷酸或用PBS各自皮下注射表达人APOC-III的六至八周龄转基因小鼠一次。每个处理组由3只动物组成。在给药之前抽血以确定基线并且在剂量之后72小时、1周、2周、3周、4周、5周和6周时抽血。如实施例20中所描述来测量血浆甘油三酯和APOC-III蛋白水平。以下结果以归一化为基线水平的每个处理组的血浆甘油三酯和APOC-III水平的平均百分比呈现，表明包含GalNAc缀合物基团的寡核苷酸表现出比不具有缀合物基团的母体寡核苷酸(ISIS 304801)更长的作用持续时间，即使母体剂量为包含GalNAc缀合物基团的寡核苷酸剂量的三倍也是如此。
表71
转基因小鼠中的血浆甘油三酯和APOC-III蛋白水平
Figure BDA0003357312860006921
实施例80：通过包含GalNAc3缀合物的靶向α-1抗胰蛋白酶(A1AT)的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在研究中测试列于以下表72中的寡核苷酸对小鼠中的A1AT的剂量依赖性抑制。
表72
靶向A1AT的修饰ASO
Figure BDA0003357312860006931
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出，GalNAc3-3a在实施例39中示出，GalNAc3-7a在实施例48中示出，GalNAc3-10a在实施例46中示出，并且GalNAc3-13a在实施例62中示出。
处理
在以下示出的剂量(总共三次剂量)下，每周一次用列于表72中的寡核苷酸或用PBS各自皮下注射六周龄雄性C57BL/6小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死。使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006932
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定A1AT肝脏mRNA水平。使用小鼠α1-抗胰蛋白酶ELISA(目录号41-A1AMS-E01，Alpco，Salem，NH)测定A1AT血浆蛋白水平。以下结果以归一化为PBS对照的每个处理组的A1AT肝脏mRNA和血浆蛋白水平的平均百分比呈现。
如表73中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低A1AT肝脏mRNA和A1AT血浆蛋白水平。包含GalNAc缀合物的寡核苷酸比母体(ISIS 476366)显著更有效。
表73
A1AT肝脏mRNA和血浆蛋白水平
Figure BDA0003357312860006941
使用标准方案在处死时测量血浆中的肝脏转氨酶和BUN水平。还测量了体重和器官重量。结果在以下表74中示出。体重以相对于基线的％示出。器官重量以相对于PBS对照组的体重的％示出。
表74
Figure BDA0003357312860006951
实施例81：包含GalNAc3聚簇的靶向A1AT的寡核苷酸的体内作用持续时间
在单一剂量研究中测试列于表72中的寡核苷酸在小鼠中的作用持续时间。
处理
用列于表72中的寡核苷酸或用PBS各自皮下注射六周龄雄性C57BL/6小鼠一次。每个处理组由4只动物组成。在给药前一天抽血以确定基线并且在剂量之后5天、12天、19天和25天时抽血。通过ELISA测量血浆A1AT蛋白水平(参见实施例80)。以下结果以归一化为基线水平的每个处理组的血浆A1AT蛋白水平的平均百分比呈现。结果显示，包含GalNAc缀合物的寡核苷酸更有效并且比缺乏GalNAc缀合物的母体(ISIS 476366)具有更长的作用持续时间。此外，包含5’-GalNAc缀合物的寡核苷酸(ISIS 678381、678382、678383和678384)通常比包含3’-GalNAc缀合物的寡核苷酸(ISIS 656326)甚至更有效并且作用持续时间甚至更长。
表75
小鼠中的血浆A1AT蛋白水平
Figure BDA0003357312860006961
实施例82：通过包含GalNAc3缀合物的靶向SRB-1的寡核苷酸进行的体外反义抑制
在处理之前2小时，以15,000个细胞/孔将小鼠原代肝脏肝细胞接种于96孔平板中。以2nM、10nM、50nM或250nM在Williams E培养基中添加列于表76中的寡核苷酸，并且将细胞在37℃下在5％CO2中孵育过夜。在寡核苷酸添加之后16小时使细胞裂解，并且使用RNease 3000 BioRobot(Qiagen)纯化总RNA。使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860006972
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定SRB-1 mRNA水平。使用Prism 4软件(GraphPad)确定IC50值。结果显示，包含各种不同GalNAc缀合物基团和各种不同可裂解部分的寡核苷酸在体外自由摄取实验中比缺乏GalNAc缀合物基团的母体寡核苷酸(ISIS353382和666841)显著更有效。
表76
SRB-1表达的体外抑制
Figure BDA0003357312860006971
Figure BDA0003357312860006981
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出，GalNAc3-3a在实施例39中示出，GalNAc3-5a在实施例49中示出，GalNAc3-6a在实施例51中示出，GalNAc3-7a在实施例48中示出，GalNAc3-8a在实施例47中示出，GalNAc3-9a在实施例52中示出，GalNAc3-10a在实施例46中示出，GalNAc3-12a在实施例61中示出，GalNAc3-13a在实施例62中示出，GalNAc3-14a在实施例63中示出，GalNAc3-15a在实施例64中示出，GalNAc3-17a在实施例68中示出，GalNAc3-18a在实施例69中示出，GalNAc3-19a在实施例70中示出，GalNAc3-20a在实施例71中示出，并且GalNAc3-23a在实施例76中示出。
实施例83：通过包含GalNAc3聚簇的靶向因子XI的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在研究中测试列于以下表77中的寡核苷酸对小鼠中的因子XI的剂量依赖性抑制。
表77
靶向因子XI的修饰寡核苷酸
Figure BDA0003357312860006991
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出，GalNAc3-3a在实施例39中示出，GalNAc3-7a在实施例48中示出，GalNAc3-10a在实施例46中示出，并且GalNAc3-13a在实施例62中示出。
处理
在以下示出的剂量(总共三次剂量)下，每周一次用以下列出的寡核苷酸或用PBS各自皮下注射六至八周龄小鼠。每个处理组由4只动物组成。在最后剂量之后72小时将小鼠处死。根据标准方案使用实时PCR测量因子XI肝脏mRNA水平并且归一化为亲环蛋白。还测量了肝脏转氨酶、BUN和胆红素。以下结果以归一化为PBS对照的每个处理组的平均百分比呈现。
如表78中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低因子XI肝脏mRNA。结果显示包含GalNAc缀合物的寡核苷酸比缺乏GalNAc缀合物的母体(ISIS 404071)更有效。此外，包含5’-GalNAc缀合物的寡核苷酸(ISIS 663086、678347、678348和678349)甚至比包含3’-GalNAc缀合物的寡核苷酸(ISIS 656173)更有效。
表78
因子XI肝脏mRNA、肝脏转氨酶、BUN和胆红素水平
Figure BDA0003357312860007001
实施例84：包含GalNAc3缀合物的靶向因子XI的寡核苷酸的体内作用持续时间
在单一剂量研究中测试列于表77中的寡核苷酸在小鼠中的作用持续时间。
处理
用列于表77中的寡核苷酸或用PBS各自皮下注射六至八周龄小鼠一次。每个处理组由4只动物组成。在给药前一天通过尾部放血抽血以确定基线并且在剂量之后3天、10天和17天时抽血。使用来自R&D Systems，Minneapolis，MN的因子XI捕获和生物素化的检测抗体(分别为目录号AF2460和BAF2460)和OptEIA Reagent Set B(目录号550534，BDBiosciences，San Jose，CA)通过ELISA测量血浆因子XI蛋白水平。以下结果以归一化为基线水平的每个处理组的血浆因子XI蛋白水平的平均百分比呈现。结果显示包含GalNAc缀合物的寡核苷酸比缺乏GalNAc缀合物的母体(ISIS 404071)更有效且作用持续时间更长。此外，包含5’-GalNAc缀合物的寡核苷酸(ISIS 663086、678347、678348和678349)甚至比包含3’-GalNAc缀合物的寡核苷酸(ISIS 656173)更有效并且作用持续时间甚至更长。
表79
小鼠中的血浆因子XI蛋白水平
Figure BDA0003357312860007011
实施例85：通过包含GalNAc3缀合物的靶向SRB-1的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在剂量依赖性研究中测试列于表76中的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。
处理
在以下示出的剂量(总共三次剂量)下，每周一次用列于表76中的寡核苷酸或用盐水各自皮下注射六至八周龄C57BL/6小鼠。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后48小时将小鼠处死以使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860007022
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定SRB-1 mRNA水平。以下结果以归一化为盐水对照的每个处理组的肝脏SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现。
如表80和81中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低SRB-1 mRNA水平。
表80
肝脏中的SRB-1 mRNA
Figure BDA0003357312860007021
表81
肝脏中的SRB-1 mRNA
Figure BDA0003357312860007031
还使用标准方案测量了肝脏转氨酶水平、总胆红素、BUN和体重。每个处理组的平均值在以下表82中示出。
表82
Figure BDA0003357312860007032
实施例86：通过包含GalNAc3聚簇的靶向TTR的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在剂量依赖性研究中测试列于以下表83中的寡核苷酸对表达人TTR基因的转基因小鼠中的人甲状腺素运载蛋白(TTR)的反义抑制。
处理
每周一次用列于下表中的寡核苷酸和剂量或用PBS各自皮下注射八周龄TTR转基因小鼠，持续三周，总共三次剂量。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死。在整个实验的各个时间点进行尾部放血，测量血浆TTR蛋白、ALT和AST水平并且报道于表85-87中。在将动物处死之后，测量血浆ALT、AST和人TTR水平以及体重、器官重量和肝脏人TTR mRNA水平。使用临床分析器(AU480，Beckman Coulter，CA)测量TTR蛋白水平。根据标准方案使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860007041
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)来测定肝脏人TTR mRNA水平。呈现于表84-87中的结果为每个处理组的平均值。mRNA水平为相对于PBS组的平均值的平均值。血浆蛋白水平为相对于基线处的PBS组的平均值的平均值。体重为每个单独处理组的直到处死时从基线的重量变化的平均百分比。将示出的器官重量归一化为动物的体重，然后相对于PBS组的平均归一化器官重量呈现每个处理组的平均归一化器官重量。
在表84-87中，“BL”指示基线，即刚好在第一次剂量之前取得的测量结果。如表84和85中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低TTR表达水平。包含GalNAc缀合物的寡核苷酸比缺乏GalNAc缀合物的母体(ISIS 420915)更有效。此外，包含GalNAc缀合物和混合的PS/PO核苷间键联的寡核苷酸甚至比包含GalNAc缀合物和全部PS键联的寡核苷酸更有效。
表83
靶向人TTR的寡核苷酸
Figure BDA0003357312860007051
表85的图例可见于实施例74。GalNAc3-1的结构在实施例9中示出。GalNAc3-3a的结构在实施例39中示出。GalNAc3-7a的结构在实施例48中示出。GalNAc3-10a的结构在实施例46中示出。GalNAc3-13a的结构在实施例62中示出。GalNAc3-19a的结构在实施例70中示出。
表84
人TTR的体内反义抑制
Figure BDA0003357312860007052
表85
人TTR的体内反义抑制
Figure BDA0003357312860007061
表86
转氨酶水平、体重变化和相对器官重量
Figure BDA0003357312860007062
表87
转氨酶水平、体重变化和相对器官重量
Figure BDA0003357312860007071
实施例87：单一剂量的包含GalNAc3聚簇的靶向TTR的寡核苷酸的体内作用持续时间
在单一剂量研究中测试ISIS号420915和660261(参见表83)在小鼠中的作用持续时间。在单一剂量研究中还测试ISIS号420915、682883和682885(参见表83)在小鼠中的作用持续时间。
处理
用100mg/kg ISIS No.420915或13.5mg/kg ISIS No.660261各自皮下注射表达人TTR的八周龄雄性转基因小鼠一次。每个处理组由4只动物组成。在给药之前进行尾部放血以确定基线并且在剂量之后第3天、第7天、第10天、第17天、第24天和第39天时进行尾部放血。如实施例86中所描述来测量血浆TTR蛋白水平。以下结果以归一化为基线水平的每个处理组的血浆TTR水平的平均百分比呈现。
表88
血浆TTR蛋白水平
Figure BDA0003357312860007081
处理
用100mg/kg ISIS No.420915、10.0mg/kg ISIS No.682883或10.0mg/kg 682885各自皮下注射表达人TTR的雌性转基因小鼠一次。每个处理组由4只动物组成。在给药之前进行尾部放血以确定基线并且在剂量之后第3天、第7天、第10天、第17天、第24天和第39天时进行尾部放血。如实施例86中所描述来测量血浆TTR蛋白水平。以下结果以归一化为基线水平的每个处理组的血浆TTR水平的平均百分比呈现。
表89
血浆TTR蛋白水平
Figure BDA0003357312860007082
表88和89中的结果显示包含GalNAc缀合物的寡核苷酸比缺乏缀合物的母体寡核苷酸(ISIS 420915)更有效并且作用持续时间更长。
实施例88：通过包含GalNAc3缀合物的靶向SMN的寡核苷酸进行的体内剪接调节
测试列于表90中的寡核苷酸对小鼠中的人存活运动神经元(SMN)的剪接调节。
表90
靶向SMN的修饰ASO
Figure BDA0003357312860007091
GalNAc3-7a的结构先前在实施例48中示出。“X”指示通过Gene Tools(Philomath，OR)产生的5’伯胺，并且GalNAc3-7b指示缺乏如下所示的接头的-NH-C6-O部分的GalNAc3-7a的结构：
Figure BDA0003357312860007092
ISIS号703421和703422为吗啉代寡核苷酸，其中两个寡核苷酸中的每个核苷酸为吗啉代核苷酸。
处理
用列于表91中的寡核苷酸或用盐水皮下注射表达人SMN的六周龄转基因小鼠一次。每个处理组由2只雄性和2只雌性组成。在剂量之后3天将小鼠处死，以根据标准方案使用实时PCR测定具有和不具有外显子7的肝脏人SMN mRNA水平。使用Ribogreen试剂测量总RNA。将SMN mRNA水平归一化为总mRNA，并且进一步归一化为盐水处理组的平均值。包括外显子7的SMN mRNA与缺失外显子7的SMN mRNA的所得平均比率在表91中示出。结果显示，调节剪接并包含GalNAc缀合物的完全修饰的寡核苷酸比缺乏GalNAc缀合物的母体寡核苷酸在改变肝脏中的剪接上显著更有效。此外，对于多种修饰化学包括2’-MOE和吗啉代修饰的寡核苷酸，将维持这个趋势。
表91
靶向人SMN的寡核苷酸的体内作用
Figure BDA0003357312860007101
实施例89：通过包含GalNAc3缀合物的靶向载脂蛋白A(Apo(a))的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在研究中测试列于以下表92中的寡核苷酸对转基因小鼠中的Apo(a)的剂量依赖性抑制。
表92
靶向Apo(a)的修饰ASO
Figure BDA0003357312860007111
GalNAc3-7a的结构在实施例48中示出。
处理
在以下示出的剂量(总共六次剂量)下，每周一次用列于表92中的寡核苷酸或用PBS各自皮下注射八周龄雌性C57BL/6小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)。每个处理组由3-4只动物组成。在第一次剂量前一天进行尾部放血并且每周在每次剂量之后进行尾部放血以测定血浆Apo(a)蛋白水平。在最后施用之后两天将小鼠处死。使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860007112
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)根据标准方案测定Apo(a)肝脏mRNA水平。使用ELISA测定Apo(a)血浆蛋白水平，并且测定肝脏转氨酶水平。表93中的mRNA和血浆蛋白结果以相对于PBS处理组的处理组平均百分比呈现。将血浆蛋白水平进一步归一化为PBS组的基线(BL)值。平均绝对转氨酶水平和体重(相对于基线平均值的％)报道于表94中。
如表93中所说明，用寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低Apo(a)肝脏mRNA和血浆蛋白水平。此外，包含GalNAc缀合物的寡核苷酸比缺乏GalNAc缀合物的母体寡核苷酸显著更有效并且作用持续时间更长。如表94中所说明，转氨酶水平和体重不受寡核苷酸的影响，表明寡核苷酸为耐受良好的。
表93
Apo(a)肝脏mRNA和血浆蛋白水平
Figure BDA0003357312860007121
表94
Figure BDA0003357312860007122
实施例90：通过包含GalNAc3聚簇的靶向TTR的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在剂量依赖性研究中测试列于以下表95中的寡核苷酸对表达人TTR基因的转基因小鼠中的人甲状腺素运载蛋白(TTR)的反义抑制。
处理
每周一次用列于表96中的寡核苷酸和剂量或用PBS各自皮下注射TTR转基因小鼠，持续三周，总共三次剂量。每个处理组由4只动物组成。在第一次剂量之前，进行尾部放血以测定基线(BL)处的血浆TTR蛋白水平。在最后施用之后72小时将小鼠处死。使用临床分析器(AU480，Beckman Coulter，CA)测量TTR蛋白水平。根据标准方案使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860007123
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.Eugene，OR)来测定肝脏人TTRmRNA水平。呈现于表96中的结果为每个处理组的平均值。mRNA水平为相对于PBS组的平均值的平均值。血浆蛋白水平为相对于基线处的PBS组的平均值的平均值。“BL”指示基线，即刚好在第一次剂量之前取得的测量结果。如表96中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低TTR表达水平。包含GalNAc缀合物的寡核苷酸比缺乏GalNAc缀合物的母体(ISIS420915)更有效，并且包含磷酸二酯或脱氧腺苷可裂解部分的寡核苷酸与缺乏缀合物的母体相比显示出效力的显著改进(参见ISIS号682883和666943相对于420915并且参见实施例86和87)。
表95
靶向人TTR的寡核苷酸
Figure BDA0003357312860007131
表95的图例可见于实施例74。GalNAc3-3a的结构在实施例39中示出。GalNAc3-7a的结构在实施例48中示出。GalNAc3-10a的结构在实施例46中示出。GalNAc3-13a的结构在实施例62中示出。
表96
人TTR的体内反义抑制
Figure BDA0003357312860007141
实施例91：通过包含GalNAc3缀合物的靶向因子VII的寡核苷酸在非人灵长类动物中进行的体内反义抑制
在非终止的剂量递增研究(non-terminal，dose escalation study)中测试列于以下表97中的寡核苷酸对猴子中的因子VII的反义抑制。
处理
用递增剂量的列于表97中的寡核苷酸或用PBS在第0天、第15天和第29天时各自皮下注射非首次用于实验的猴子。每个处理组由4只雄性和1只雌性组成。在第一次剂量之前并且在此后的各个时间点进行抽血以测定血浆因子VII蛋白水平。通过ELISA测量因子VII蛋白水平。呈现于表98中的结果为相对于基线(BL)处的PBS组的平均值(刚好在第一次剂量之前取得的测量结果)的每个处理组的平均值。如表98中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低因子VII表达水平，并且包含GalNAc缀合物的寡核苷酸与缺乏GalNAc缀合物的寡核苷酸相比在猴子中显著更有效。
表97
靶向因子VII的寡核苷酸
Figure BDA0003357312860007151
表97的图例可见于实施例74。GalNAc3-10a的结构在实施例46中示出。
表98
因子VII血浆蛋白水平
Figure BDA0003357312860007152
实施例92：通过包含GalNAc3缀合物的靶向Apo-CIII的反义寡核苷酸在原代肝细胞中进行的反义抑制
以15,000个细胞/孔将小鼠原代肝细胞接种于96孔平板中，并且以0.46nM、1.37nM、4.12nM或12.35nM、37.04nM、111.11nM或333.33nM或1.00μM添加靶向小鼠ApoC-III的列于表99中的寡核苷酸。在用寡核苷酸孵育24小时之后，使细胞裂解并且使用RNeasy(Qiagen)纯化总RNA。使用实时PCR和
Figure BDA0003357312860007153
RNA定量试剂(Molecular Probes，Inc.)根据标准方案测定ApoC-III mRNA水平。使用Prism 4软件(GraphPad)确定IC50值。结果显示无论可裂解部分是否为磷酸二酯或磷酸二酯连接的脱氧腺苷，包含GalNAc缀合物的寡核苷酸均比缺乏缀合物的母体寡核苷酸显著更有效。
表99
小鼠原代肝细胞中小鼠APOC-III表达的抑制
Figure BDA0003357312860007161
GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出，GalNAc3-3a在实施例39中示出，GalNAc3-7a在实施例48中示出，GalNAc3-10a在实施例46中示出，GalNAc3-13a在实施例62中示出，并且GalNAc3-19a在实施例70中示出。
实施例93：通过包含混合翼和5’-GalNAc3缀合物的靶向SRB-1的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在剂量依赖性研究中测试列于表100中的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。
表100
靶向SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860007171
GalNAc3-3a的结构先前在实施例39中示出，并且GalNAc3-7a的结构先前在实施例48中示出。下标：“e”指示2’-MOE修饰核苷；“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷(cEt)；“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联(PS)；“o”指示磷酸二酯核苷间键联(PO)。上标“m”指示5-甲基胞嘧啶。
处理
在以下示出的剂量下用列于表100中的寡核苷酸或用盐水皮下注射六至八周龄C57BL/6小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)一次。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死。使用实时PCR测量肝脏SRB-1 mRNA水平。根据标准方案将SRB-1 mRNA水平归一化为亲环蛋白mRNA水平。结果以相对于盐水对照组的每个处理组的SRB-1 mRNA水平的平均百分比呈现。如表101中所说明，用反义寡核苷酸处理以剂量依赖性方式降低SRB-1 mRNA水平，并且包含GalNAc缀合物并具有为全部cEt或混合糖修饰的翼的缺口聚物寡核苷酸比缺乏缀合物并包含全部cEt修饰的翼的母体寡核苷酸显著更有效。
还测量了体重、肝脏转氨酶、总胆红素和BUN，并且每个处理组的平均值在表101中示出。体重以相对于刚好在寡核苷酸剂量之前测量的基线体重的体重平均百分比(％BL)示出。
表101
SRB-1 mRNA、ALT、AST、BUN和总胆红素水平以及体重
Figure BDA0003357312860007181
实施例94：通过包含2’-糖修饰和5’-GalNAc3缀合物的靶向SRB-1的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在剂量依赖性研究中测试列于表102中的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。
表102
靶向SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860007182
下标“m”指示2’-O-甲基修饰的核苷。对于完整的表格图例参见实施例74。GalNAc3-3a的结构先前在实施例39中示出，并且GalNAc3-7a的结构先前在实施例48中示出。
处理
使用实施例93中描述的方案完成研究。结果在以下表103中示出并且显示包含GalNAc缀合物的2’-MOE和2’-OMe修饰的寡核苷酸比缺乏缀合物的相应母体寡核苷酸显著更有效。体重、肝脏转氨酶、总胆红素和BUN测量的结果表明化合物均为耐受良好的。
表103
SRB-1 mRNA
Figure BDA0003357312860007191
实施例95：通过包含双环核苷和5’-GalNAc3缀合物的靶向SRB-1的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在剂量依赖性研究中测试列于表104中的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。
表104
靶向SRB-1的修饰ASO
Figure BDA0003357312860007201
下标“g”指示氟-HNA核苷，下标“l”指示包含2’-O-CH2-4’桥联的锁核苷。对于其它缩写参见实施例74表格图例。GalNAc3-1a的结构先前在实施例9中示出，GalNAc3-3a的结构先前在实施例39中示出，并且GalNAc3-7a的结构先前在实施例48中示出。
处理
使用实施例93中描述的方案完成研究。结果在以下表105中示出并且显示包含GalNAc缀合物和各种双环核苷修饰的寡核苷酸比缺乏缀合物并包含双环核苷修饰的母体寡核苷酸显著更有效。此外，包含GalNAc缀合物和氟-HNA修饰的寡核苷酸比缺乏缀合物并包含氟-HNA修饰的母体显著更有效。体重、肝脏转氨酶、总胆红素和BUN测量的结果表明化合物均为耐受良好的。
表105
SRB-1 mRNA、ALT、AST、BUN和总胆红素水平以及体重
Figure BDA0003357312860007211
实施例96：包含GalNAc3缀合物基团的反义寡核苷酸的血浆蛋白结合
在超滤测定中测试靶向ApoC-III的列于表70中的寡核苷酸和靶向Apo(a)的列于表106中的寡核苷酸以便评估血浆蛋白结合。
表106
靶向Apo(a)的修饰寡核苷酸
Figure BDA0003357312860007212
对于表格图例参见实施例74。GalNAc3-7a的结构先前在实施例48中示出。
将Ultrafree-MC超滤单元(30,000NMWL，低结合再生的纤维素膜，Millipore，Bedford，MA)用300μL的0.5％Tween 80预调节并且在2000g下离心10分钟，然后用300μL的对照寡核苷酸在H2O中的300μg/mL溶液预调节并且在2000g下离心16分钟。为了评估待用于研究中的来自表70和106的每个测试寡核苷酸对过滤器的非特异性结合，将300μL的pH 7.4的寡核苷酸在H2O中的250ng/mL溶液放置于预调节的过滤器中并且在2000g下离心16分钟。通过ELISA测定分析未过滤和过滤的样品以测定寡核苷酸浓度。对于每个样品，使用三次重复以获得平均浓度。相对于未过滤样品的过滤样品的平均浓度用来确定在不存在血浆的情况下通过过滤器回收的寡核苷酸的百分比(％回收)。
收集于K3-EDTA中的来自正常的无药物人志愿者、食蟹猴和CD-1小鼠的冷冻全血浆样品购自Bioreclamation LLC(Westbury，NY)。在两种浓度(5μg/mL和150μg/mL)下将测试寡核苷酸添加至1.2mL血浆等分试样中。将每个掺加的血浆样品的等分试样(300μL)放置于预调节的过滤器单元中并且在37℃下孵育30分钟，接着立即在2000g下离心16分钟。通过ELISA分析过滤和未过滤的掺加的血浆样品的等分试样，以测定每个样品中的寡核苷酸浓度。每个浓度使用三次重复，以确定每个样品中结合和未结合的寡核苷酸的平均百分数。使用相对于未过滤样品的浓度的过滤样品的平均浓度来确定血浆中未结合至血浆蛋白的寡核苷酸的百分比(％未结合)。通过将每个寡核苷酸的％未结合除以％回收来校正非特异性结合的最终未结合寡核苷酸值。通过从100中扣除最终％未结合值来确定最终％结合寡核苷酸值。对于在每种血浆中测试的两种浓度的寡核苷酸(5μg/mL和150μg/mL)，结果在表107中示出。结果显示GalNAc缀合物基团对血浆蛋白结合不具有显著影响。此外，具有全部PS核苷间键联的寡核苷酸和具有混合PO/PS键联的寡核苷酸均结合血浆蛋白，并且具有全部PS键联的那些寡核苷酸比具有混合PO/PS键联的那些寡核苷酸结合血浆蛋白的程度略微更大。
表107
结合至血浆蛋白的修饰寡核苷酸的百分比
Figure BDA0003357312860007231
实施例97：包含GalNAc3缀合物基团的靶向TTR的修饰寡核苷酸
将包含GalNAc缀合物的示于表108中的寡核苷酸设计成靶向TTR。
表108
靶向TTR的修饰寡核苷酸
Figure BDA0003357312860007241
表108的图例可见于实施例74。GalNAc3-1的结构在实施例9中示出。GalNAc3-3a的结构在实施例39中示出。GalNAc3-7a的结构在实施例48中示出。GalNAc3-10a的结构在实施例46中示出。GalNAc3-13a的结构在实施例62中示出。GalNAc3-19a的结构在实施例70中示出。
实施例98：在hPMBC测定中评价包含GalNAc缀合物的寡核苷酸的促炎性作用
在如实施例23和24中所描述的hPMBC测定中测试列于表109中的寡核苷酸的促炎性作用。(对于寡核苷酸的描述参见表30、83、95和108。)ISIS 353512为用作阳性对照的高响应者，并且其它寡核苷酸描述于表83、95和108中。使用来自一位志愿者供体的血液获得示于表109中的结果。结果显示，与具有全部PS键联的相同寡核苷酸相比，包含混合PO/PS核苷间键联的寡核苷酸产生显著较低的促炎性反应。此外，GalNAc缀合物基团在此测定中不具有显著作用。
表109
Figure BDA0003357312860007242
Figure BDA0003357312860007251
实施例99：包含GalNAc缀合物的寡核苷酸对去唾液酸糖蛋白受体的结合亲和力
在竞争性受体结合测定中测试列于表110中的寡核苷酸对去唾液酸糖蛋白受体的结合亲和力(对于寡核苷酸的描述，参见表76)。将竞争配体α1-酸糖蛋白(AGP)在50mM乙酸钠缓冲液(pH 5)中用1U神经氨酸酶-琼脂糖在37℃下孵育16小时，并且通过唾液酸测定或尺寸排阻色谱法(SEC)来证实＞90％的去唾液酸化。根据Atsma等的工序使用一氯化碘来碘化AGP(参见J Lipid Res.1991年1月；32(1)：173-81)。在此方法中，将去唾液酸化的α1-酸糖蛋白(de-AGP)添加至0.25M NaOH中的10mM氯化碘、Na125I和1M甘氨酸中。在室温下孵育10分钟之后，通过利用3KDMWCO自旋柱将混合物浓缩两次来从游离的125I中分离出125I-标记的de-AGP。在配备有Agilent SEC-3柱(7.8x300 mm)和β-RAM计数器的HPLC系统上测试蛋白质的标记效率和纯度。如下进行利用125I-标记的de-AGP和含有ASO的各种GalNAc-聚簇的竞争实验。将人HepG2细胞(106个细胞/毫升)涂布在6孔平板上处于2ml适当的生长培养基中。使用了用10％胎牛血清(FBS)、2mM L-谷氨酰胺和10mM HEPES补充的MEM培养基。将细胞分别在5％和10％CO2下在37℃下孵育16-20小、时。在实验之前用不具有FBS的培养基洗涤细胞。将细胞在37℃下用1ml含有适当生长培养基的竞争混合物孵育30min，所述培养基具有2％FBS、10-8M 125I-标记的de-AGP和浓度在10-11M至10-5M范围内的含有GalNAc-聚簇的ASO。在10-2M GalNAc糖的存在下确定非特异性结合。将细胞用不具有FBS的培养基洗涤两次，以去除未结合的125I-标记的de-AGP和竞争者GalNAc ASO。使用含有1％β-巯基乙醇的Qiagen的RLT缓冲液使细胞裂解。在简短的10min冻/融循环之后将裂解液转移至圆底测定管中并且在γ-计数器上测定。在将125I蛋白计数除以最低GalNAc-ASO浓度计数的值之前扣除非特异性结合。使用非线性回归算法根据单一位点竞争结合方程式拟合抑制曲线以计算结合亲和力(KD’s)。
从在五个不同日子进行的实验中获得表110中的结果。用上标“a”标志的寡核苷酸的结果为在两个不同日子进行的实验的平均值。结果显示，在5’-末端包含GalNAc缀合物基团的寡核苷酸以比在3’-末端包含GalNAc缀合物基团的寡核苷酸大1.5倍至16倍的亲和力结合人HepG2细胞上的去唾液酸糖蛋白受体。
表110
去唾液酸糖蛋白受体结合测定结果
Figure BDA0003357312860007261
实施例100：靶向Apo(a)的包含GalNAc缀合物基团的寡核苷酸的体内反义抑制
在单一剂量研究中测试列于以下表111a中的寡核苷酸在小鼠中的作用持续时间。
表111a
靶向APO(a)的修饰ASO
Figure BDA0003357312860007262
GalNAc3-7a的结构在实施例48中示出。
处理
每周一次用列于表111b中的寡核苷酸和剂量或用PBS各自皮下注射表达人Apo(a)的雌性转基因小鼠，总共6次剂量。每个处理组由3只动物组成。在给药前一天抽血以测定血浆中Apo(a)蛋白的基线水平并且在第一次剂量之后72小时、1周和2周时抽血。在第一次剂量之后3周、4周、5周和6周时将发生另外的抽血。使用ELISA测量血浆Apo(a)蛋白水平。表111b中的结果以归一化为基线水平的每个处理组的血浆Apo(a)蛋白水平的平均百分比(％BL)呈现。结果显示包含GalNAc缀合物基团的寡核苷酸表现出Apo(a)表达的有效减少。对于包含全部PS核苷间键联的寡核苷酸和包含混合PO和PS键联的寡核苷酸观察到这种有效作用。
表111b
Apo(a)血浆蛋白水平
Figure BDA0003357312860007271
实施例101：通过包含经由稳定部分连接的GalNAc聚簇的寡核苷酸进行的反义抑制
测试列于表112中的寡核苷酸对小鼠APOC-III表达的体内抑制。用列于表112中的寡核苷酸或用PBS各自皮下注射C57Bl/6小鼠一次。每个处理组由4只动物组成。用ISIS440670处理的每只小鼠接受2mg/kg、6mg/kg、20mg/kg或60mg/kg的剂量。用ISIS 680772或696847处理的每只小鼠接受0.6mg/kg、2mg/kg、6mg/kg或20mg/kg。ISIS 696847的GalNAc缀合物基团经由稳定部分连接，所述稳定部分为硫代磷酸酯键联而不是能够易于裂解的含磷酸二酯的键联。在剂量之后72小时将动物处死。使用实时PCR测量肝脏APOC-IIImRNA水平。根据标准方案将APOC-III mRNA水平归一化为亲环蛋白mRNA水平。结果以相对于盐水对照组的每个处理组的APOC-III mRNA水平的平均百分比呈现于表112中。结果显示包含GalNAc缀合物基团的寡核苷酸比缺乏缀合物基团的寡核苷酸显著更有效。此外，包含经由可裂解部分连接至寡核苷酸的GalNAc缀合物基团的寡核苷酸(ISIS 680772)甚至比包含经由稳定部分连接至寡核苷酸的GalNAc缀合物基团的寡核苷酸(ISIS 696847)更有效。
表112
靶向小鼠APOC-III的修饰寡核苷酸
Figure BDA0003357312860007281
GalNAc3-7a的结构在实施例48中示出。
实施例102：包含GalNAc缀合物的反义寡核苷酸在肝脏中的分布
评价了不包含GalNAc缀合物的ISIS 353382(参见表36)和包含GalNAc缀合物的ISIS 655861(参见表36)的肝脏分布。以列于表113中的剂量用ISIS 353382或655861皮下注射雄性balb/c小鼠一次。每个处理组由3只动物组成，除了ISIS 655861的18mg/kg组，所述组由2只动物组成。在剂量之后48小时将动物处死以确定寡核苷酸的肝脏分布。为了测量每个细胞的反义寡核苷酸分子的数量，将钌(II)三-联吡啶标签(MSD TAG，Meso ScaleDiscovery)缀合至用来检测反义寡核苷酸的寡核苷酸探针。呈现于表113中的结果为以百万个寡核苷酸分子/细胞单位计的每个处理组的寡核苷酸的平均浓度。结果显示，在等效剂量下，包含GalNAc缀合物的寡核苷酸比不包含GalNAc缀合物的寡核苷酸以更高的浓度存在于总肝脏和肝细胞中。此外，包含GalNAc缀合物的寡核苷酸比不包含GalNAc缀合物的寡核苷酸以更低的浓度存在于非实质肝脏细胞中。虽然ISIS 655861在肝细胞和非实质肝脏细胞中的浓度为每个细胞类似的，但是肝脏大约为80体积％肝细胞。因此，存在于肝脏中的大多数ISIS 655861寡核苷酸见于肝细胞中，而存在于肝脏中的大多数ISIS 353382寡核苷酸见于非实质肝脏细胞中。
表113
Figure BDA0003357312860007291
实施例103：包含GalNAc3缀合物的靶向APOC-III的寡核苷酸的体内作用持续时间
在单一剂量研究中测试列于以下表114中的寡核苷酸在小鼠中的作用持续时间。
表114
靶向APOC-III的修饰ASO
Figure BDA0003357312860007301
GalNAc3-3a的结构在实施例39中示出，并且GalNAc3-19a在实施例70中示出。
处理
用列于表114中的寡核苷酸或用PBS各自皮下注射表达人APOC-III的雌性转基因小鼠一次。每个处理组由3只动物组成。在给药之前抽血以确定基线并且在剂量之后3天、7天、14天、21天、28天、35天和42天时抽血。如实施例20中所描述来测量血浆甘油三酯和APOC-III蛋白水平。表115中的结果以归一化为基线水平的每个处理组的血浆甘油三酯和APOC-III水平的平均百分比呈现。实施例79的表71中的结果与以下表115中的结果的比较显示，包含磷酸二酯和硫代磷酸酯核苷间键联的混合物的寡核苷酸表现出比仅包含硫代磷酸酯核苷间键联的相当(equivalent)寡核苷酸增加的作用持续时间。
表115
转基因小鼠中的血浆甘油三酯和APOC-III蛋白水平
Figure BDA0003357312860007311
实施例104：包含5’-GalNAc2缀合物的寡核苷酸的合成
Figure BDA0003357312860007321
化合物120为商业上可获得的，并且化合物126的合成描述于实施例49中。将化合物120(1g，2.89mmol)、HBTU(0.39g，2.89mmol)和HOBt(1.64g，4.33mmol)溶解于DMF(10mL中，并且添加N，N-二异丙基乙胺(1.75mL，10.1mmol)。在约5min之后，将氨基己酸苄基酯(1.36g，3.46mmol)添加至反应物中。在3h之后，将反应混合物倾入100mL的1M NaHSO4中并且用2x50mL乙酸乙酯萃取。合并有机层并且用3x40mL饱和NaHCO3和2x盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并且浓缩。通过硅胶柱色谱法(DCM∶EA∶Hex，1∶1∶1)纯化产物，得到化合物231。LCMS和NMR与结构一致。将化合物231(1.34g，2.438mmol)溶解于二氯甲烷(10mL)中并且添加三氟乙酸(10mL)。在室温下搅拌2h之后，将反应混合物在减压下浓缩并且与甲苯共蒸发(3x10mL)。在减压下干燥残余物，得到呈三氟乙酸盐的化合物232。化合物166的合成描述于实施例54中。将化合物166(3.39g，5.40mmol)溶解于DMF(3mL)中。将化合物232(1.3g，2.25mmol)的溶液溶解于DMF(3mL)中并且添加N，N-二异丙基乙胺(1.55mL)。将反应物在室温下搅拌30分钟，然后倾入水(80mL)并且用EtOAc(2x100mL)萃取水层。将有机相分离并且用饱和NaHCO3水溶液(3x80mL)、1M NaHSO4(3x80mL)和盐水(2x80mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)、过滤并且浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，得到化合物233。LCMS和NMR与结构一致。将化合物233(0.59g，0.48mmol)溶解于甲醇(2.2mL)和乙酸乙酯(2.2mL)中。添加钯碳(10wt％Pd/C，湿润，0.07g)，并且将反应混合物在氢气气氛下搅拌3h。将反应混合物过滤通过硅藻土垫并且浓缩以得到羧酸。将羧酸(1.32g，1.15mmol，不含聚簇的酸)溶解于DMF(3.2mL)中。向其中添加N，N-二异丙基乙胺(0.3mL，1.73mmol)和PFPTFA(0.30mL，1.73mmol)。在室温下搅拌30min之后，将反应混合物倾入水(40mL)中并且用EtOAc(2x50mL)萃取。如上所述完成标准的后处理，得到化合物234。LCMS和NMR与结构一致。使用实施例46中描述的一般工序制备寡核苷酸235。缀合物基团GalNAc2-24的GalNAc2聚簇部分(GalNAc2-24a)可与寡核苷酸上存在的任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。GalNAc2-24(GalNAc2-24a-CM)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860007331
实施例105：包含GalNAc1-25缀合物的寡核苷酸的合成
Figure BDA0003357312860007332
化合物166的合成描述于实施例54中。使用实施例46中描述的一般工序制备寡核苷酸236。
或者，使用以下示出的方案合成寡核苷酸236，并且使用实施例10中描述的工序使用化合物238来形成寡核苷酸236。
Figure BDA0003357312860007341
缀合物基团GalNAc1-25的GalNAc1聚簇部分(GalNAc1-25a)可与寡核苷酸上存在的任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。GalNAc1-25(GalNAc1-25a-CM)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860007342
实施例106：通过包含5’-GalNAc2或5’-GalNAc3缀合物的靶向SRB-1的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在剂量依赖性研究中测试列于表116和117中的寡核苷酸对小鼠中的SRB-1的反义抑制。
处理
用2mg/kg、7mg/kg或20mg/kg的ISIS No.440762，或用0.2mg/kg、0.6mg/kg、2mg/kg、6mg/kg或20mg/kg的ISIS No.686221、686222或708561，或用盐水皮下注射六周龄雄性C57BL/6小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)一次。每个处理组由4只动物组成。在最后施用之后72小时将小鼠处死。使用实时PCR测量肝脏SRB-1 mRNA水平。根据标准方案将SRB-1 mRNA水平归一化为亲环蛋白mRNA水平。反义寡核苷酸以剂量依赖性方式降低SRB-1mRNA水平，并且ED50结果呈现于表116和117中。虽然先前研究显示三价GalNAc-缀合的寡核苷酸比二价GalNAc-缀合的寡核苷酸显著更有效，但是所述二价GalNAc-缀合的寡核苷酸继而比一价GalNAc缀合的寡核苷酸显著更有效(参见，例如，Khorev等，Bioorg.&Med.Chem.，第16卷，5216-5231(2008))，用包含一价、二价和三价GalNAc聚簇的反义寡核苷酸处理以与表116和117中所示类似的效力降低SRB-1 mRNA水平。
表116
靶向SRB-1的修饰寡核苷酸
Figure BDA0003357312860007351
对于表格图例，参见实施例93。GalNAc3-13a的结构在实施例62中示出，并且GalNAc2-24a的结构在实施例104中示出。
表117
靶向SRB-1的修饰寡核苷酸
Figure BDA0003357312860007352
对于表格图例，参见实施例93。GalNAc1-25a的结构在实施例105中示出。
使用实施例75中描述的工序，还评价了表116和117中的寡核苷酸在肝脏中的浓度。如通过UV以μg寡核苷酸/克肝脏组织的单位所测量，示于以下表117a和117b中的结果为每个处理组的平均总反义寡核苷酸组织水平。结果显示，包含GalNAc缀合物基团的寡核苷酸以显著高于相同剂量的缺乏GalNAc缀合物基团的寡核苷酸的水平在肝脏中积累。此外，在其相应缀合物基团中包含一个、两个或三个GalNAc配体的反义寡核苷酸均以类似水平在肝脏中积累。由以上引用的Khorev等参考文献来看此结果为令人惊奇的并且与示于以上表116和117中的活性数据一致。
表117a
包含GalNAc2或GalNAc3缀合物基团的寡核苷酸的肝脏浓度
Figure BDA0003357312860007361
表117b
包含GalNAc1缀合物基团的寡核苷酸的肝脏浓度
Figure BDA0003357312860007362
Figure BDA0003357312860007371
实施例107：包含GalNAc1-26或GalNAc1-27缀合物的寡核苷酸的合成
Figure BDA0003357312860007372
通过使用DMF中的HBTU和DIEA将化合物47(参见实施例15)偶联至酸64(参见实施例32)来合成寡核苷酸239。将所得到的含酰胺化合物亚磷酸酯化，然后使用实施例10中描述的工序添加至寡核苷酸的5’-末端。缀合物基团GalNAc1-26的GalNAc1聚簇部分(GalNAc1-26a)可与寡核苷酸上存在的任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。GalNAc1-26(GalNAc1-26a-CM)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860007373
为了将GalNAc1缀合物基团添加至寡核苷酸的3’-末端，使用实施例7中描述的工序将由化合物47和64反应所形成的酰胺添加至固体载体上。然后使用实施例9中描述的工序完成寡核苷酸合成以便形成寡核苷酸240。
Figure BDA0003357312860007374
缀合物基团GalNAc1-27的GalNAc1聚簇部分(GalNAc1-27a)可与寡核苷酸上存在的任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。GalNAc1-27(GalNAc1-27a-CM)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860007381
实施例108：通过靶向Apo(a)的包含GalNAc缀合物基团的寡核苷酸进行的体内反义抑制
在单一剂量研究中在小鼠中测试列于以下表118中的寡核苷酸。
表118
靶向APO(a)的修饰ASO
Figure BDA0003357312860007382
GalNAc3-7a的结构在实施例48中示出。
处理
用列于表119中的寡核苷酸和剂量或用PBS各自皮下注射表达人Apo(a)的雄性转基因小鼠一次。每个处理组由4只动物组成。在给药前一天抽血以确定血浆中Apo(a)蛋白的基线水平并且在第一次剂量之后1周时抽血。另外的抽血将每周发生，持续大约8周。使用ELISA测量血浆Apo(a)蛋白水平。表119中的结果以归一化为基线水平的每个处理组的血浆Apo(a)蛋白水平的平均百分比(％BL)呈现。结果显示反义寡核苷酸减少Apo(a)蛋白表达。此外，包含GalNAc缀合物基团的寡核苷酸表现出甚至比不包含缀合物基团的寡核苷酸更有效的Apo(a)表达减少。
表119
Apo(a)血浆蛋白水平
Figure BDA0003357312860007391
实施例109：包含GalNAc1-28或GalNAc1-29缀合物的寡核苷酸的合成
Figure BDA0003357312860007392
使用类似于实施例71中描述的那些的工序形成亚磷酰胺中间体，接着使用实施例10中描述的工序合成寡核苷酸来合成寡核苷酸241。缀合物基团GalNAc1-28的GalNAc1聚簇部分(GalNAc1-28a)可与寡核苷酸上存在的任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。GalNAc1-28(GalNAc1-28a-CM)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860007401
为了将GalNAc1缀合物基团添加至寡核苷酸的3’-末端，使用类似于实施例71中描述的那些的工序形成羟基中间体，然后使用实施例7中描述的工序将所述羟基中间体添加至固体载体。然后使用实施例9中描述的工序完成寡核苷酸合成以便形成寡核苷酸242。
Figure BDA0003357312860007402
缀合物基团GalNAc1-29的GalNAc1聚簇部分(GalNAc1-29a)可与寡核苷酸上存在的任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。GalNAc1-29(GalNAc1-29a-CM)的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860007403
实施例110：包含GalNAc1-30缀合物的寡核苷酸的合成
Figure BDA0003357312860007404
Figure BDA0003357312860007411
如上所示，合成包含GalNAc1-30缀合物基团的寡核苷酸246，其中Y选自O、S、取代或未取代的C1-C10烷基、氨基、取代的氨基、叠氮基、烯基或炔基。缀合物基团GalNAc1-30的GalNAc1聚簇部分(GalNAc1-30a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，Y为可裂解部分的一部分。在某些实施方案中，Y为稳定部分的一部分，并且可裂解部分存在于寡核苷酸上。GalNAc1-30a的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860007412
实施例111：包含GalNAc2-31或GalNAc2-32缀合物的寡核苷酸的合成
Figure BDA0003357312860007413
如上所示，合成包含GalNAc2-31缀合物基团的寡核苷酸250，其中Y选自O、S、取代或未取代的C1-C10烷基、氨基、取代的氨基、叠氮基、烯基或炔基。缀合物基团GalNAc2-31的GalNAc2聚簇部分(GalNAc2-31a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，直接与寡核苷酸的5’-末端相邻的含Y基团为可裂解部分的一部分。在某些实施方案中，直接与寡核苷酸的5’-末端相邻的含Y基团为稳定部分的一部分，并且可裂解部分存在于寡核苷酸上。GalNAc2-31a的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860007421
以下示出包含GalNAc2-32缀合物的寡核苷酸的合成。
Figure BDA0003357312860007422
如上所示，合成包含GalNAc2-32缀合物基团的寡核苷酸252，其中Y选自O、S、取代或未取代的C1-C10烷基、氨基、取代的氨基、叠氮基、烯基或炔基。缀合物基团GalNAc2-32的GalNAc2聚簇部分(GalNAc2-32a)可与任何可裂解部分组合以提供各种缀合物基团。在某些实施方案中，直接与寡核苷酸的5’-末端相邻的含Y基团为可裂解部分的一部分。在某些实施方案中，直接与寡核苷酸的5’-末端相邻的含Y基团为稳定部分的一部分，并且可裂解部分存在于寡核苷酸上。GalNAc2-32a的结构在以下示出：
Figure BDA0003357312860007431
实施例112：包含GalNAc1缀合物的修饰寡核苷酸
用GalNAc1缀合物基团合成靶向SRB-1的表120中的寡核苷酸，以便进一步测试包含含有一个GalNAc配体的缀合物基团的寡核苷酸的效力。
表120
Figure BDA0003357312860007441
序列表
<110> IONIS制药公司
<120> 缀合反义化合物及其用途
<130> CORE0115WO
<150> 61/818,442
<151> 2013-05-01
<150> 61/823,826
<151> 2013-05-15
<150> 61/843,887
<151> 2013-07-08
<150> 61/871,673
<151> 2013-08-29
<150> 61/880,790
<151> 2013-09-20
<150> 61/976,991
<151> 2014-04-08
<150> 61/986,867
<151> 2014-04-30
<160> 160
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 191001
<212> DNA
<213> 智人()
<400> 1
ctgacagaaa gcagatcatt ggttgcctga ggaggaggag tataggagag gtggagggaa 60
aatgtacaaa gtggcacaat aaaaactttt ggaatcatag atatattcac tatcttgatt 120
gagtgatgat ttcatgagtg cacgcgtgtg tcaaaaatga tcaatttatg caactttaaa 180
tatgtgcagt ttattgtata tatcaattat acctcagtac ggctattaaa aagaaaccct 240
ctggctgcac aatgcagaac tgattctagg aaagagtgga gggaggatga ccatttacag 300
tgctccaggt ggaagagaac ggtgccttct ggaagtgaac taggttggca acaacagaga 360
tgaaataaat gggcagatgt gtgagatact taggaaataa aacccgatgg tcaccatttt 420
ccaaaggtca gctcatcctg gctttccaga gcaaagagct agggaagact ttattaataa 480
atccctcttg aagttgcaga ggaagcttat agcagaaact tactctcaac ctgactaatc 540
tgagagaaca cctctggttc catttgatta ctaaaaaact gcaaagaaca ggaggagaaa 600
gaagaagaaa gctggtacaa acagtgaact tatataatat taatcaataa ttgtctcttg 660
ttcttaaaag caatgggaag aaaatgagat ttgagctgga agatcagagt tcaaaatcca 720
aataaagtat atggccctaa tatgcttata gtagttaacc tttcctgata atgatataat 780
tgttgacagc accatcttta aaaataaaaa taacatagta atccttcaga tttgtagaat 840
gctttcctgt ttacaagttt gttctataca cattatgtct tttaaatgac acactagcct 900
tctgagggta acttatattg gcaacagttt tcagatgtgg aaactgtgaa gacaatgttg 960
gtgatgtgga agcaacataa actttggagt ctttcagacc caggtttgaa tgtcagactg 1020
ctttttattc agagtaactt cagagcatta tttctcacct taattttttt tcaggcctct 1080
ttgtgtctat gtgtcctctt cactcctgtc cattgttcat tcagtgattt ttgcaccttc 1140
cttcactgtt agtgtgtaga cacatagttc tcctggctct gagacctatg ttaattccat 1200
tctaccatcc tgccagccca ctcaattcct attgagcaat gctagttgaa agttgtggtg 1260
ggattaaatg ttgcaatgag tattcaaatg aggttgaagt atctacgcat tctacttaca 1320
tatggtgagg tatattcaag gaaggctgta gccattaaaa tctcaggaaa taatttttca 1380
cctcctcagg tgaaagggtc ttcaggcctt tgtgttctgg aaggttcatt tatagccatt 1440
tcccaaatga caatgcgatt gatgagtcta gagtctagct caaatagcaa tggactggaa 1500
gactagttta ggttttacta atgtggaaca tagaacaaat tatgtccttg tttcagcctg 1560
ttcatctgtg aaatagagcc tatcatatcc agtcttcctt gcctttaggt ttgagttacc 1620
ttctttggtc aaggtaagta aatgcctatg atgtttggct gtgcacaaga taaagctaca 1680
acaaagctac aacccatctt ttctctgtag aagactgcaa aaagcaaaag agacccaggc 1740
aaaaatctcg gaatgacttt tggaacagag agcctcccca gaatcagaag tcaaaggaat 1800
ttaaaacata gggaggccca gggtctctac tgacataaag gaaagatgtt ttccttatag 1860
gtttacgttt acattttctc tctctttcca ttcccacttg catctccacc tttacacagg 1920
gcttatggga cctcctccac aaaagagcag ttgcagtaac ccacatcatc ctctacgcct 1980
ggctgtccat caagaggcga aaagcagccc tatataggtt ctatccttgg atagttccag 2040
ttgtaaagtt taaaatatgc gaaggcaact tggaaaagca agcggctgca tacaaagcaa 2100
acgtttacag agctctggac aaaattgagc gcctatgtgt acatggcaag tgtttttagt 2160
gtttgtgtgt ttacctgctt gtctgggtga ttttgccttt gagagtctgg atgagaaatg 2220
catggttaaa ggcaattcca gacaggaaga aaggcagaga agagggtaga aatgacctct 2280
gattcttggg gctgagggtt cctagagcaa atggcacaat gccacgaggc ccgatctatc 2340
cctatgacgg aatctaaggt ttcagcaagt atctgctggc ttggtcatgg cttgctcctc 2400
agtttgtagg agactctccc actctcccat ctgcgcgctc ttatcagtcc tgaaaagaac 2460
ccctggcagc caggagcagg tattcctatc gtccttttcc tccctccctc gcctccaccc 2520
tgttggtttt ttagattggg ctttggaacc aaatttggtg agtgctggcc tccaggaaat 2580
ctggagccct ggcgcctaaa ccttggttta ggaaagcagg agctattcag gaagcagggg 2640
tcctccaggg ctagagctag cctctcctgc cctcgcccac gctgcgccag cacttgtttc 2700
tccaaagcca ctaggcaggc gttagcgcgc ggtgagggga ggggagaaaa ggaaagggga 2760
ggggagggaa aaggaggtgg gaaggcaagg aggccggccc ggtgggggcg ggacccgact 2820
cgcaaactgt tgcatttgct ctccacctcc cagcgccccc tccgagatcc cggggagcca 2880
gcttgctggg agagcgggac ggtccggagc aagcccagag gcagaggagg cgacagaggg 2940
aaaaagggcc gagctagccg ctccagtgct gtacaggagc cgaagggacg caccacgcca 3000
gccccagccc ggctccagcg acagccaacg cctcttgcag cgcggcggct tcgaagccgc 3060
cgcccggagc tgccctttcc tcttcggtga agtttttaaa agctgctaaa gactcggagg 3120
aagcaaggaa agtgcctggt aggactgacg gctgcctttg tcctcctcct ctccaccccg 3180
cctcccccca ccctgccttc cccccctccc ccgtcttctc tcccgcagct gcctcagtcg 3240
gctactctca gccaaccccc ctcaccaccc ttctccccac ccgccccccc gcccccgtcg 3300
gcccagcgct gccagcccga gtttgcagag aggtaactcc ctttggctgc gagcgggcga 3360
gctagctgca cattgcaaag aaggctctta ggagccaggc gactggggag cggcttcagc 3420
actgcagcca cgacccgcct ggttaggctg cacgcggaga gaaccctctg ttttccccca 3480
ctctctctcc acctcctcct gccttcccca ccccgagtgc ggagccagag atcaaaagat 3540
gaaaaggcag tcaggtcttc agtagccaaa aaacaaaaca aacaaaaaca aaaaagccga 3600
aataaaagaa aaagataata actcagttct tatttgcacc tacttcagtg gacactgaat 3660
ttggaaggtg gaggattttg tttttttctt ttaagatctg ggcatctttt gaatctaccc 3720
ttcaagtatt aagagacaga ctgtgagcct agcagggcag atcttgtcca ccgtgtgtct 3780
tcttctgcac gagactttga ggctgtcaga gcgctttttg cgtggttgct cccgcaagtt 3840
tccttctctg gagcttcccg caggtgggca gctagctgca gcgactaccg catcatcaca 3900
gcctgttgaa ctcttctgag caagagaagg ggaggcgggg taagggaagt aggtggaaga 3960
ttcagccaag ctcaaggatg gaagtgcagt tagggctggg aagggtctac cctcggccgc 4020
cgtccaagac ctaccgagga gctttccaga atctgttcca gagcgtgcgc gaagtgatcc 4080
agaacccggg ccccaggcac ccagaggccg cgagcgcagc acctcccggc gccagtttgc 4140
tgctgctgca gcagcagcag cagcagcagc agcagcagca gcagcagcag cagcagcagc 4200
agcagcagca gcagcaagag actagcccca ggcagcagca gcagcagcag ggtgaggatg 4260
gttctcccca agcccatcgt agaggcccca caggctacct ggtcctggat gaggaacagc 4320
aaccttcaca gccgcagtcg gccctggagt gccaccccga gagaggttgc gtcccagagc 4380
ctggagccgc cgtggccgcc agcaaggggc tgccgcagca gctgccagca cctccggacg 4440
aggatgactc agctgcccca tccacgttgt ccctgctggg ccccactttc cccggcttaa 4500
gcagctgctc cgctgacctt aaagacatcc tgagcgaggc cagcaccatg caactccttc 4560
agcaacagca gcaggaagca gtatccgaag gcagcagcag cgggagagcg agggaggcct 4620
cgggggctcc cacttcctcc aaggacaatt acttaggggg cacttcgacc atttctgaca 4680
acgccaagga gttgtgtaag gcagtgtcgg tgtccatggg cctgggtgtg gaggcgttgg 4740
agcatctgag tccaggggaa cagcttcggg gggattgcat gtacgcccca cttttgggag 4800
ttccacccgc tgtgcgtccc actccttgtg ccccattggc cgaatgcaaa ggttctctgc 4860
tagacgacag cgcaggcaag agcactgaag atactgctga gtattcccct ttcaagggag 4920
gttacaccaa agggctagaa ggcgagagcc taggctgctc tggcagcgct gcagcaggga 4980
gctccgggac acttgaactg ccgtctaccc tgtctctcta caagtccgga gcactggacg 5040
aggcagctgc gtaccagagt cgcgactact acaactttcc actggctctg gccggaccgc 5100
cgccccctcc gccgcctccc catccccacg ctcgcatcaa gctggagaac ccgctggact 5160
acggcagcgc ctgggcggct gcggcggcgc agtgccgcta tggggacctg gcgagcctgc 5220
atggcgcggg tgcagcggga cccggttctg ggtcaccctc agccgccgct tcctcatcct 5280
ggcacactct cttcacagcc gaagaaggcc agttgtatgg accgtgtggt ggtggtgggg 5340
gtggtggcgg cggcggcggc ggcggcggcg gcggcggcgg cggcggcggc ggcggcgagg 5400
cgggagctgt agccccctac ggctacactc ggccccctca ggggctggcg ggccaggaaa 5460
gcgacttcac cgcacctgat gtgtggtacc ctggcggcat ggtgagcaga gtgccctatc 5520
ccagtcccac ttgtgtcaaa agcgaaatgg gcccctggat ggatagctac tccggacctt 5580
acggggacat gcggtaagtt tttccttcca gaaatgtcgc ctttcggccc agggcagagt 5640
cactctgtgt tctggggtat ctagcggctc ctacctgcgc gaacactcag attgcccctg 5700
ggagagctca gcagggtaaa cctagagctc tcccgtggac tcccggcctg ccagaggttt 5760
aacctgagct ctcctaattt ctgctgcgtg ccctgggtgc tgattcctgc cctcccagat 5820
tcttcaactc ccccaaccgc cccaaattct cactacctcc tggtactcga ggtcccaaac 5880
agaaatccta ttgcacgggc caccttcaga gataaagctc ccaagccctc cactcttcct 5940
ttcctcctgt cctcaaagtc tgagaacctc aacaggaatt tgggcaattt ctcctcttca 6000
ggtctgttag gatttcactt tcagcctgcg cagattagag tcaaaaagac cggcccaata 6060
gcttctcagc gggtatcctc cagagaggta aagtgaaatt ctcggttagg gaaagaaagt 6120
ggtctctggg tgctgaggtc tgctgtgtga aagggtgaac ttctttctcc tgaagcaact 6180
ggggacttgc tccagggctg gaggtcagta gagataatcc aaaccgtcat gtttagagta 6240
ggcagagggg caactttctt ggtaaagact tcacaggatt tgcactcaca gtttctcaac 6300
gttggttgac tatgttgaaa gtagttgctt gggtcggttt tctcttgtaa agtgtttatt 6360
ttctctgtgg attataacag atccacagcc ccctacttca ggtttgcatc agatctataa 6420
agaggagaat attcttttaa tgtacaattt aattaggctt gactctgact tacaaaactg 6480
ttggaaaaca tttttttgta aagcatttcc tgctatttca gtgtgctcca aaatctccac 6540
tggggagggt ggagtgaggt tttttattat attcctttat ttttaggaca tgtttgcatt 6600
ttagaatatg tgcagttagc tctaacaaat tgagtaagaa ctcttaatga cctatgagcc 6660
gtaatcttac cccaaagttt taattagcat atgagaaaag tggcaggcaa ttgcatcgtg 6720
cttattaaaa attattcctc accgcagttg ttgagcttct tggagaccat gctgaagatt 6780
ttctccccca gcaaattaag atattagttt atctgctgag ggaggacaga ctgaattggg 6840
gaattaactc ctcaggtagg ccaggtgctg atgtccctgt ggacttttgt cttattcttt 6900
gtttctatgg ctgttttctt ttacctgtga cttctccgaa atttctttgt tagccttaac 6960
atctttgttt ggggacttaa atccagcaat ttgccttctt tcactgatgc tttccttctt 7020
acaaggtaga tagcacagtg ttagtaaaga aagaaagagg agggtaggat ttcatattat 7080
ttcgtgggct gttgaagaaa cagcttctta ccaggcttta cattccatta ggtttttaat 7140
gtttgactta caagattttc agagggttca tttgatattg tcaaagtctt ttccagttaa 7200
tttagactct tcatttttgt aatgggttta tgctatggga caaaaaaagt attcttcatt 7260
ttataagaac aaatttactt ggtagggtta attttttttc tagggctgtc actagacggt 7320
ggagcccctc ttctactgta aacttttctt gggggaaaat gtctaaggtg cattttgacc 7380
tgccatgata ctaaacccag acactggaac cttccatctt ctgcatgcct cccccacaac 7440
ttacttactt aacagggaaa aaactgatgg ttccacatat ttgctaaaaa atgtgtgcct 7500
tcaaagacaa aaccaaaatt tttagggaat aactatagag agcaaaagtt actcccatca 7560
agtagacaac gagcttggtg attttatttc aggtcttaat gaaaaaagct tctttatgag 7620
gaaggttatc atatcttggt gcctccttga cagtccgctt aaattaatga cataaactaa 7680
tgagaattta gcagttcctg cagaaagtac aagtttattt tttttttctg gtttgtgatt 7740
gctgcactga atatgaggag tctagttaaa gggacaactg gtgttcctgt cttgtgagtt 7800
gacgaagact ttccatttct aggatataga aaatccttaa gccggtttat tgaaaattaa 7860
tcaatttaat cagaatgcaa tcaattccaa tacaaaagtt agtattttct ttctttttat 7920
tgaaaattaa tttaatcaga atacaatcaa ttccaatcca aaagttgata ttttcttact 7980
ttctcttttt ttccctcatt ttgtagggat acaatttggt gaaaggcaag agatttctta 8040
agccaaagca agagtgtctt ccctctctgt gttgcatgca ttatgtgcca tgtttgagct 8100
aaaaatctca aaattgggca ggcttccaat gacctgttgg gtccctccct ttaccattca 8160
tgtgtgtgtt tatgtacata attttgtgga ggggtttttt taaaccttag taacatctgc 8220
actcactctg tgttcttata catttacagt gtttctgctg agaggaggga agatgcaaag 8280
gtggtctctt ttacttaatt tagcatgtgg tttgaacaga aggaaaaata aaaagtgatg 8340
gggcttgtgt gcaaccctga tgatatttta tggagctgtc tgtcttctct ctgagatcaa 8400
acaggactac aactttgtta attgaccact ggctcccttg gcaaaagtag ggcttcttat 8460
attccagcaa gcagcacaat aatatgacaa aaatttattc ttgggagttg ggttctaaga 8520
gagtgcatgc cagaattaga gtttggggtt tagagaaatt atccagatgc caaaagaaca 8580
ttttaatttt tctcttggta atttgttctg gtctccatag taggtagtat tttagtagtg 8640
ctttgatatt gacaagtctt gctccctttc tctattagat ttttcaaaat aaggcatttt 8700
attaattcct ctttccttct cctctctcct ctcagttatc aagcattttt atgactatct 8760
tacaagcaac agtttgtctt gtaaagcaga attttccttt gaaaccaaga cagattattt 8820
ctgcccatag gcttcaggaa ccaatatttt ggcaagaagc atcttttctt tgtggtcagc 8880
aaataggtgg tgagttctgt ctggatccca acaatcaaca cctgaggacc aaatagccac 8940
actgggtggc accccattcg gaagtataca caggaagtag ccctcttgct tgttcacagc 9000
tcaagtcagc caaagattaa cactggtgag agatattttc aaagaagttt gcaggcttcc 9060
aattgcaggg tcattttggg gtgctttctt gcctgtacta attttatctc atcaagcttc 9120
cattctttga gctgtaaact ttgaaataat atactggatt tgctggtacg tttaattttc 9180
tttgttaagt gttttcattc ccatagtaat ttttcatcta gtgtacatat atgcatttaa 9240
aacaaaaatt ctttggtctc cttatgcgta tatgcactgc ggcttgtaca cgtacaagct 9300
acttggtggg attatgtgaa ctggagttag aaatgtggac aattttatta tgattatttt 9360
taatggtgat atcaagatca ccagtttcat tcggaacctt gcataagcag ggagcagaat 9420
gcggactggg tgtggcaaag caagggctta ttttatagcc aaacctgaaa tcacaactct 9480
gaaaaataaa aaaaaaaaaa accaaacaaa aaaatcaagt tttgtgagct tggtcagaga 9540
aggaaaagga aatctctccc taccccccac ctccaccatt ttctctttgt ctgcagcttc 9600
ctcaagtgct gcctgtcccc gattttcttt tattccactc ctttcatgtt tttgacattg 9660
aaatacagac tcttctttcc acttctcagg gtatttttct tattacacct gtggcatgct 9720
cctaaagaat ttctttttta aaaaaaatct gtagagtagt agattagatt aaccccagta 9780
tctctccctt aagactagat gacatgaggg gattgcaaaa tgaatagctg ggtttttttt 9840
tttttttttt tttttacctt gaggttaaag cctggttcaa cagttgctga gagagttaac 9900
tagattgctt gaggacttgg caatttcata aagtattttg tcttatgctg tctctgtctc 9960
tgtcttgatc tctgtctctc tctgtctact gtaatgttgg ctactttctc tcagagcctg 10020
agagacagct ctgagacact tcccaggtct gttcggttca gacctcagta gctggatcac 10080
aagcagtacc caatatgcat atgagggtgc gtgctgcaag tgtccggctg ggctaatctg 10140
cttaagcttc ataaaaatta atcatttgaa aacaaagaaa gatattaaag aaattattct 10200
atctccgact tcccctatca gcattccatc aagttctggg atgttaaatt cagagaaagt 10260
taaccttatc ttaaacacaa agttgacttt taaacaaaat tgcttataaa gttctgtaca 10320
gttaccagca ttggttgccc tttgtcgtac ggaagagaat tatgaaatct catatttaca 10380
tagcattctt ccaaaaaaag agacggtgtt ttccagttta ttcactgcat tcgtgtaagt 10440
gtgagtaggc caggaggggt gcttagtgat tacccttttg ctaggtaaca aagtagaaag 10500
ttagattttc tatgatattt gtttaccacg taggggaacc tctctagagc aatactccca 10560
agctttttct tcttgaaatt tcccacctga cagataatac tttagattgt tgctcttaag 10620
gacttctctc agtagctgct acatagagat gattgtccgt gaattattgc ttgcacactc 10680
atgggtgatg ctactccctc tctctcatgg caattcttgc tgccaacctg caggccacac 10740
caggattgag ggcagctcat ctcgataaat ttatagcatt aaagtgctgg gtcatttgag 10800
aatgttgtca atttaggtta cttagtacct aagttttatt ctttaaataa cagctttatt 10860
gagacgtaat ttacaatcca tacaattcac tcatctaaag tgtacagttt catgcttttt 10920
agaatattca gagttgtgca accattattg caatcaattt tagaacattt taatcacccc 10980
caaaggaaac cctatgcacc tttgtgttca tccccctata ttccctcagt ccttagcaac 11040
caataatcta cttctatcta tggatgtgct tattctaaca ttttgtatga atgaaatcat 11100
gtaatatgtg gtcttttgtg actagcttct ttcacataaa atatgttttc aaggtcatcc 11160
atgttgaagc acatatcagt acttcactat tttttatagc ctaataatgt tccactatat 11220
ggatatacca cattctatct atccatttat caggtgatga gcattacggt tgtttccacc 11280
ttttggctat tatgaataat actgctgtga acattcacgt gcaagtttat tgtggacata 11340
ttcagtccac atattttgga cattttcagt tcttttggat acatacatag gattgaaatc 11400
tctgagtcat atgatacctc tgtgtttatc cttttgaaga actgtcaaac tgttttctaa 11460
agtgtctgca ctgttttaca atcccatcag caacctatgg gggtccattt cttccacatc 11520
cttgccaaca cttgttattc tctgtctttt tcattatagc tatattagtg ggtgtgaagt 11580
ggtacctcat tgtggctttt atttccattt ccctaataac aaataatgtt cagtatccat 11640
gttcttattg gccatttgta tatcttcttt tttgagaaat atctatttgg atcctttgct 11700
cagtttttag ttgggttttt tattattgag ttttaagatt tttaaaaaat atattctgga 11760
tacatgtcct ttaatagatt gtgatttgta gatatttttt cacattctgt gagttgtctt 11820
ttttactttc cttttttttc tttttacgtt cttaatggta tctagattga agcacaaaaa 11880
tgtttttaag tttgatgaag tccaattcat ctatttattt tctgttttgg cttatgattt 11940
tggcgtcgta tctaagaagt ctttgcctaa tccaagatca caaagattta catatgtttc 12000
cttctaagag ttttatagtt ttcgctattt acatttaggt ctttcatcag ttttgatgta 12060
atgtttatat atgactgagg taggggtcca acttcattct tttgcatgta gatattcagt 12120
tctcacaata ttgttgttga atctttcctc acttaactgt cttggcaccc tttgtgtaaa 12180
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aaatgccaca cctcctcctg tttccctagt ctccgtgcag agatggaagt gggagataga 26340
catgggttcc tttcagccct gagttcatgc cagggttttc tttccctcta gctggactga 26400
ggtaggagga gaggttgaag tccaccaata agaccatgag tgaagaagac taaagtactt 26460
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cggcattgtt gtaagtatgt agagaaactg gtacacagta ggcacacaat caatgtcacc 151560
gtacccttca gcccttcttt tgtggatgaa aaatggtctt tgtgctccca gtcaccactg 151620
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gaggaagggg ctcaaaggga a 191001
<210> 2
<211> 6489
<212> DNA
<213> 智人()
<400> 2
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<211> 14121
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<213> 智人()
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ggcctgctgg gcaacccagg aggcttggat gaccgtctac cccagtgttt ttgggatgga 120
aagttccaca ttctgagaac cctcagtccc tgggcaacct ggggtggtta gtcaccacag 180
cttgtggctt gggcccatga cagcaggtag aaatgacgtg gactgccgcc agccgggcac 240
agtggctcac gcctgtaatc ccagcacttt gggaggctga ggcatgtgga tcacttgagg 300
tcaggagttc gaaaccagcc tggtcaacac ggtgaaaccc catctctgct aaaaaaaaaa 360
aatatatata tataaattag ccaggcatgg tgacgtgcac ctgtggtccc agctactcag 420
gaggctgagg cacaagaatc acttgaaccc gggaggtgga ggttgcagtg agattgcacc 480
agtgcactct ccagcctggc aacagagcaa gactctgtct caaacaaaca aaacaaaaca 540
aacaaaaaga cgtaagatgt ggaccgctgg agaatggggg tgctgcctgc agtcaaaacg 600
gagtgggggt gcccagctca gggccagaat gatcctattc ccggcacttc tcagtgaggc 660
tctgtggctc acctaagaaa ccagcctccc ttgcaggcaa cggcctagct ggcctggtct 720
ggaggctctc ttcaaatatt tacatccaca cccaagatac agtcttgaga tttgactcgc 780
atgattgcta tgggacaagt tttcatctgc agtttaaatc tgtttcccaa cttacattag 840
gggtttggaa ttctagatcg tatttgaagt gttggtgcca cacacacctt aacacctgca 900
cgctggcaac aaaaccgtcc gctctgcagc acagctgggg tcacctgacc tttctcctgt 960
cccccccact tgagctcagt ggctgggcag caggggatgc atggccactg gccggccagg 1020
tgcagctctc agctggggtg ttcagaggac gcctgtgtcc tcccctcccc catccctctg 1080
tcacccttgg aggcagagaa ctttgcccgt cagtcccatg gggaatgtca acaggcaggg 1140
gcagcactgc agagatttca tcatggtctc ccaggccctc aggctcctct gccttctgct 1200
tgggcttcag ggctgcctgg ctgcaggtgc gtccggggag gttttctcca taaacttggt 1260
ggaagggcag tgggcaaatc caggagccag cccgggcttc ccaaaccccg cccttgctcc 1320
ggacaccccc atccaccagg agggttttct ggcggctcct gttcaatttc tttccttcta 1380
gaaaccagca tccaggcaca ggaggggagg cccttcttgg tggcccaggc tttggcggga 1440
ttatttttca aagaacttta ggagtgggtg gtgctttcct ggcccccatg ggcccctgcc 1500
tgtgaggtcg gacaagcgca gggagtctgg ggcctctcag agtgcaggaa gtgcgcacag 1560
ggtgctccca ggctggggag cacaggtagg ggacggtgcg tgggggatgg cgcctggggc 1620
atgggggatg gggtgtggga aacggcatgt ggggcgtagg ggatggggtg tggaggatcg 1680
ggggtgggga tggcgtgtgg ggtgtggggg atgggccgtg ggggggtggg gcctgggaaa 1740
cagcatgtgg ggcatggggt gtgggggtga ggtgtgggaa agtgtgtggg gtgtggggga 1800
tggggcatgg aaagggcgtg tggggtgcag gggatggggc atggaggtgt gggggatggg 1860
gtgtgtgggg tgtcggggat ggggcatgtg gggtgtgggg gatggggcat ggaaagggcg 1920
tgtggggtgc agaggatggg gcatgggggg gtggggatgg cgagtggggc tggggcctgg 1980
gaatggtgag tggggcatgg ggatggcgag tagggggtgt ggcgtgagga tggctagtgg 2040
ggcgtgggga tggcgtgtgg ggatggcgag tggggggtgg gctgtgaggg acagtgcctg 2100
ggatgtgggg ctgcagccct agctcacagc atggccttat gaccccggcc accttcctgc 2160
cccaggcggg gtcgctaagg cctcaggagg agaaacacgg gacatgccgt ggaagccggg 2220
gcctcacaga ggtgagcagg gactgccact ggttttgtcc tggggcccag tgggggccaa 2280
catcacctcc ttcccctccc atggcaaaga gccagcccgc ggggtggcta ctgcagtgcc 2340
ccccaaggag ggtgttccct gctcgagagg aagtgaccgc tccagcttgg ccttccctgg 2400
gactggggtg caggcgattt tatcttcttt gctccattct gttccttcca gataatcgtg 2460
tgttcttcat caggttttcc tcagttcttg agagcttttc tgatgcaaat ctgctttcac 2520
cccagggcgg tcaccggctc tgctcacacc agcctccaag ggtgtgggtg tcccgggagt 2580
gtgggtgtcc cgggggcgtg ggtgtcccag gagtgtgggt gtcccggggg cgtgggtgtc 2640
ccgggagtgt gggtgtcccg ggggcgtggg tgtcccggga gtgtgggtgt cccggaggcg 2700
agggtgtccc gggagtgtgg gtgtcccggg ggagtgggtg tcccgggagt gtgggtgtcc 2760
cggaggcgag ggtgtcccgg gagtgtgggt gtcccggggg cgtgggtgtc ccgggagtgt 2820
gggtgtcccg ggggagtggg tgtcccggga gtgtgggtgt cccggaggcg agggtgtccc 2880
gggagtgtgg gtgtcccggg ggagtgggtg tcccgggagt gtgggtgtcc cggaggcgag 2940
ggtgtcccgg gagtgtgggt gtcccggggg cgtgggtgtc ccgggagcgt gggtgtcccg 3000
ggggcgtggg tgtcccggga gtgtgggtgt cccgggggcg tgggtgtccc gggagtgtgg 3060
gtgtcccggg ggcgtgggtg tcccgggagt gtgggtgtcc cgggagtgtg ggtgttccgg 3120
aggcgagggt gtcccgggag tgtgcgtgtc ccgggggcgt gggtgtcccg ggggcgtggg 3180
tgtcccgggg gcgtgggtgt tccggaggcg agggtatccc agaagtgtga gtgtcccagg 3240
ggcgtgggtg tcccgggggt gtgggtgtcc cgggggcgtg ggtgtcccgg gagtgtgggt 3300
gttccggagg tgagggtgtc ccgggagtgt gggtgttccg gaggcgaggg tgtcccggga 3360
gtgtgggtgt cccgggggcg tgggtgtccc gggagtgtgg gtgttccgga ggtgagggtg 3420
tcccgggagt gtgggtgttc cggaggcgag ggtgtcccgg gagtgtgggt gtcccagggg 3480
cgtgggtgtc ccgggagtgt gggtgttccg gaggcgaggg tgtcccggga gtgtgggtgt 3540
tccggaggcg agggtgtccc gggagtgtgg gtgtcccggg ggcgtgggtg tcccgggggt 3600
tgtgggtgtc ccgggagtgt gggtgttccg gaggcgaggg tgtcccggga gtgtgggtgt 3660
tccggaggcg agggtgtccc gggagtgtgg gtgtcccggg ggtgtgggtg tcccgggggt 3720
gtgggtgtcc cgggagtgtg ggtgtcccgg gggagtgggt gtcccgggag tgtgggtgtt 3780
ccggaggcga gggtgtccca ggagcgtggg tgtcccggag gcgagggtgt cccgggagcg 3840
tgggtgtccc gggggcgtgg gtgtcccggg agtgtgggtg tcccggggga gtgggtgtcc 3900
cgggagtgtg ggtgtcccgg aggcgagggt gtcccaggag tgtgggtgtc ccgggggcgt 3960
gggtgtcccg ggagtgtggg tgttccagag gcgagggtat cccagaagtg tgagtgtccc 4020
gggggtgtgg gtgtcccggg ggtcgtgggt gtcccgggag tgtgggtgtt ccagaggcga 4080
gggtgtcccg ggagtgtggg tgtcccaggg gtgtgggtgt cccgggggcg tgggtgtccc 4140
gggagtgtgg gtgtcccggg ggagtgggtg tcccgggagt gtgggtgttc cggaggcgag 4200
ggtgtcccgg gagtgtgggt gttccggagg cgagggtgtc ccgggagcgt gggtgtcccg 4260
ggggcgtggg tgtcccggga gcgtgggtgt cccaggggtg tgggtgtccc gggggcgtgg 4320
gtgtcccggg agtgtgggtg tcccggggga gtggatgtcc cgggagtgtg ggtgttccgg 4380
aggcgagggt gtcccgggag tgtgggtgtt ccggaggcga gggtgtcccg ggagtgtggg 4440
tgtcccgggg gcgtgggtgt cccgggagtg tgggtgtccc gggggcgtgg gtatcccaga 4500
agtgtgagtg tcccaggggc gtgggtgtcc ggggggcgtg ggtgtcccgg gggtgtgggt 4560
gtcccggggg tcgtgggtgt cccgggagcg tgggtgtcgg ggactgcagg gacatgggcc 4620
tcccctccca ctcctgccgc ccagggcacc tcctgtgagg actcggagtc cgtgagttcc 4680
cacctccttg agcccgattc tttggtgtcc ccgcctgcat cctcagcctc cttccaaacc 4740
agaccagttc tctaggggcg tcgacgtgtg aaactgattt taaagaaaac aggcagtggc 4800
ctttctctcg gccccacgtg gcccagtagc gctcaccttc cgtcccttct tccgcgctca 4860
gtaaccaatt taggccgctc ctgcagaact cgggctcctg cccaccggcc cacagcgtcc 4920
acctgaggcc tcgtcctccc agcaaaggtc gtccctccgg aacgcgcctc ctgcggcctc 4980
tccagagccc ctcccgcgcg tcctctcagc cccgctcgcc tcctcccggg gcctccctct 5040
cccgcctgcc cccaggcccg tctcccctcg cgggctgagg caggttcggg cagcacggcc 5100
gccccggggc gggggtcact ctccaccacc gcgtggtgcc cacagctcac ggcgctcccg 5160
ggtgacggtc ccctcggctg tagggcgtcc tgaagagcgg cctgctcgga gctgagcgca 5220
cggggttgcc tcgccctggg cgtctctggc cctcaccagc cccgtcttcc catgggcaaa 5280
acggcggtcc tgtttgtcca caagtaaccg tcggggttac ggaggggcca ggagctgcgg 5340
cggggggctg tgctctcagg accggcccca ggaggatccg cgcgaggtct ggagctctca 5400
ggggtcgcgg gggacagagg ggccccaagc ggaggcgggg aaggcggcag aagcccagga 5460
ccgccaagag ctggcgagga agcccggggc tcgctgtcgg gggagccggg caggggccgc 5520
gcctcggacc aggacggagg cctggggaag gcggatctgg ccgccggaga cgcggtgcgg 5580
gtggagacga gggatttgga tttccgcggg cggctgtacg gatttccacg cgcggttcac 5640
gtgggcccca gggggttgcc cggcacccgg ggccgcgccg ccttctcctc gccggcatcg 5700
acccgcagcc tcacgtttac gcggcggcgc ccgcagcccc cttcggcccg gcttccgcgc 5760
gtgcccccga gcgcgccctc gggatcagcc cccggaagca gagaggccag gccgggaagg 5820
atgggcgacg ggggtggctg acccgggagc acggcaggga ggacacccag ccaggcccgc 5880
gagcagcgcc gctcccctcc tccaggacgg gcgggaacct gcgatgcccc cgccgcgtgg 5940
gccgtggggc ggtctccgag gcactgggcg gggcacgcgg tgggcgcttc acggaactcg 6000
catttcccag tcttcgtaac ccaggaggaa gcccacggcg tcctgcaccg gcgccggcgc 6060
gccaacgcgt tcctggagga gctgcggccg ggctccctgg agagggagtg caaggaggag 6120
cagtgctcct tcgaggaggc ccgggagatc ttcaaggacg cggagaggac ggtgagccca 6180
gcctcggggc gccccgcgcc gcggacactg caggcggcgg tgaaccaggc cgcgtggggc 6240
cgcctgcgtc tctttggctg cggctgtggg cggcgaacac gcagcggcgc ccgcgcggcg 6300
ctttctgcgg gggtcgcttt ccgcccgggg tgactccgct ttcctgggcg atgcccccca 6360
cccccaggca cgcgctctcc ccgtgcggcc gcaccgcgca tgccggtttt cacatcagaa 6420
aatacgattt gcaaagcaca cttagggtgt cccccttaac ttcccaaggg agtcccccca 6480
gtccccgaag ggtccagggc agcctgcgca tcgcagacgc gcgcggctcg cagaagggac 6540
gtggtgagaa gctggcccac agcatgccac cagcggcacc tcctcagggc acgtgtcggg 6600
gagaaacaac acttagggac ctgggacttt ctccagctca cgctcacggg tcacctcaca 6660
ctccaagatc acctcaaaga ggacacctca cacagggcac acttcacact cacaggtcac 6720
ctcacactca caggacacct cacactcaca gggcacactt cacactcacg ggtcacctca 6780
cactccaaga tcacctcaaa gaggacacct cacacagggc acacttcaca ctcacaggtc 6840
acctcacact cacaggacac ctcacactca cagggcacac ttcacactca cgggtcacct 6900
cacactccaa gatcacctca aagaggacac ctcacacagg gcacacttca cactcacggg 6960
tcacctcaca ctcacaggac acctcacaca agacacctca cacggggcac acttcacact 7020
cacaggtcac ctcacaccca caggacacct cacacagggc acacttcaca ctcacgggtc 7080
acctcacact cacaggacac ctcacacaag acacctcaca cggggcacac ttcacactca 7140
caggtcacct cacacccaca ggacacctca cacagggcac acttcacact cacgggtcac 7200
ctcacactca caggacacct cacactcagg gcgcacttca cactcacggg tcacctcaca 7260
cccacaggac acctcacaga ggtcacctca cacaggacac ctcacactca gggtgcactt 7320
caaacccaca ggtcatttca cctcacactc acaggacacc tcacacaaga taccacacgg 7380
ggcacacttc acactcacag gtcacctcac actcacagga cacctcacag aggtcacctc 7440
acacggggca cacttcacac tcacaggtca cctcacaccc acaggacacc tcacagaggt 7500
cacctcacac ccacaggaca cctcacacag gacacctcac agaggtcacc tcacacccac 7560
aggacacctc acactcatag gtcacctcag tcttacagga caactcacac tcacaggtca 7620
ccttactctc acaggacacc tcacactcac aggtcacctt actctcacag gacacctcac 7680
tctcacagga cacctcacac agggcacact tcactcccac aggtcaccat acctcacaca 7740
gatcacctca tactcacaga tcacttcatt ctcacaggat acctcacact cagggcacac 7800
ttcacactca caggtcacac ctcacacaga tcatctcatt ctcacaggac acctccctct 7860
cacaggtcac ctcacactca caggacacct cacagaggtc acctcacacc cacaggacac 7920
ctcacagagg tcacctcaca cggggcacac ttcacactca ggtcacctca cacccacagg 7980
acacctcaca gaggtcacct cacacccaca ggacaactca cagaggtcac ctcacacagg 8040
acacctcaca aaggtcacct cacacccaca ggacacctca cactcatagg tcacctcagt 8100
cttacaggac aactcacact cacaggtcac cttactctca caggacacct cacactcaca 8160
ggtcacctta ctctcacagg acacctcaca cagggcacac ttcactccca caggtcacca 8220
tacctcacac agatcacctc atactcacag atcacttcat tctcacagga tacctcacac 8280
tcagggcaca cttcacactc acaggtcaca cctcacacag atcatctcat tctcacagga 8340
cacctccctc tcacaggtca ccttacactc atctcacact cacaggtcgc cacacctcac 8400
actcacagga tgcctcacac tcacagaacc acatctcata tgcacaagac acctcacact 8460
caggacacct catgctcaaa gaagcctcac actcacagga ggtccagctg tctgaggcaa 8520
aggctaacat gaccctttcc agacaaattg aggatggtca tgcctagcat ttttatacac 8580
ctagttttga aagcatttct catctgttgt attctcacag caccccgtga gtttaagttc 8640
aggtggccaa cagtttcttc agcaatcact tttttctgtg gagtgctttt gctgtttgtg 8700
gaatattttg catctgctac tgcaccctct ccccgtatgt gtggccaccc tgtcagaggt 8760
ggagctgtgg ctcagagcct gtgtacctcg tcccaggtcc acagctcagc gacagaagag 8820
tcagggttga acctcgggtg ttctgacttg ggagcaggaa atgtgtggtc acccatagtt 8880
ccagatgtcc tggggagggg ccaagattag aagaaaccta cctcagctcc agaggaaagt 8940
ctggcttcct gagcccaccc cgccagaccc aggtccaagt cccccaaccc cagttcatgg 9000
tgtgtccagt gcttaccgtt gggtgctctg gtgaaggtgc atctcacgag gcttgctctc 9060
ttgttccttc agaagctgtt ctggatttct tacagtggtg agtggatgat caccaccagt 9120
cctgcctgca acccttctca gcttactgac accagcccac tccacagatg gggaccagtg 9180
tgcctcaagt ccatgccaga atgggggctc ctgcaaggac cagctccagt cctatatctg 9240
cttctgcctc cctgccttcg agggccggaa ctgtgagacg cgtaaggccc cactttgggt 9300
cccatatttg cagagggccc tggggagctg gtggaggtgg cctggccaac cgggctgcag 9360
ggtgcacaac ctggtggggt gtgtaggccg ggcattcagg gctcagcccc agttggaaat 9420
tggtctaggt gaccttgaaa tcccttccag tctgaggtct ttgacaggga cccaaggttc 9480
tgattatcag actcagtggc cccttgggct cccggccctg ggcaattctc agccctcgag 9540
atggcccagc tgagagtccc tgtgtccctg tcccacttcc acatcccacc acgcaggacc 9600
gcttggtaaa cttccccttc tctactttcc attacaaagg tttgaggggt ttgttttttt 9660
tttaaccatc tgaatattaa attatcacaa agtttgaggc ccccaacctc ccttgggttc 9720
agtaattcac tagaaggact catagaatcc actgaagtgg atacactcac aggtaccgtt 9780
tattacagca aaggatgcag gcttaagtct gcagagggac caggcacaag cttccccttg 9840
tcctctccct gtggggtcat gtggacagtc cttaattctc ccagaatgac gtgtgacgag 9900
acgtgggaag tactgccaac ttgggaagct ctacgagccc cggtgtccag aggttttatc 9960
agggctcaat cacatagacc cagctgacca cccgcatggc tgacctcagt ctcagcccct 10020
ccagaggcta cgccgatagt gcggcccaag gccccaccat acatcacatt gtcagctaga 10080
ccatccagca tggctcaagg cccaggtaaa caccaacatt ccctcaggca agaccttcca 10140
agggcttagc ggtcatttcc caggagccaa ggcaaaggct accctttctc tggcacagca 10200
gttcatcctt gaccacccaa gaccacattc ttacactgaa tgagctctcc tgtgcagcag 10260
ccattttctt ctctaagcag aagagagccc agcaagctgg aggaggctga agagagaggc 10320
ttcctgctgg tcatctgggt ccagaatgcc tggagatctc tgctcagccc tggtgcccag 10380
cagccctggt gtgcatcctg cagggcaggc cttcccgccg gagtcctgga cttgctcagg 10440
gccactcccc ttgcccatgt caaccaaagt caggctgccg gttctgcttc ttctgtctga 10500
gcccatgacc agtgctggga ctaactgtcc ccaggcgggc tcacggtggt acgaggccag 10560
cttggagaac tgtctcagct ctctggtcct ctcgtcagtt gggtctctga ttggaaagtc 10620
ccttggacac ttttaccatc cccattggac tttcactttc ccccaggctc ccatcagctg 10680
ctcggaagag tggtcaccct ggaggccact gcccaccagc caggcacccc ccaaatgcaa 10740
ccgcagccag cactgccagc cactggcaag gctgttcaga catgtggctc ctctgatcca 10800
cgccttgtcc tttggatcag tccacggagc aggtggtgcc aagctcaggc tctgtcaccc 10860
acagctcagt gccaccttcc aggcagaaca ccactgctga cccagggcat ggccaccccg 10920
ggggctggct ctcgctgacc cccagaagcc cctctcaggg tgtccccttc ctgtccccag 10980
acaaggatga ccagctgatc tgtgtgaacg agaacggcgg ctgtgagcag tactgcagtg 11040
accacacggg caccaagcgc tcctgtcggt gccacgaggg gtactctctg ctggcagacg 11100
gggtgtcctg cacacccaca ggtgaccagg cttcatgtcc cagtcccaga tgacaccagt 11160
ccctgtccca ctacggatta tcttactgga caaaagacgg gtgggagtgg cttcacatct 11220
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caggccagag cgacagtgac taggatgggc accctggggg caatccctga atggcctcag 11340
gccccctgcc aattctaggc agaccagggg agccaagcaa ggcactatct cacgtccaac 11400
tcccactcgc aggacctccg ccagggttca tgaatctact tcggcacagc caatgtctgt 11460
actgactgct gcccactctg cattccaaaa ctcgtaaagg ctcctgggaa aatgggatgt 11520
ttctccaaac cagcctggaa cgaatgggct gcacttccaa aagcagggac accccacacc 11580
cactgtgtct caaagaggcg gacgtgccca ccctggccac acagcctggg actcagcctg 11640
ccacctcctc gggcttcctt tctggcccaa gaccttgatt gaagcagatc aaaactaagc 11700
atgggatcaa aacaacacag tttgattcat ctttaggtag aatttcattc accttctact 11760
aaagtcaaac aacacatctt ctccctgaaa agtgagcaga gggcggtttt aagacgtaag 11820
ccctctgttt cctccaaaac cagccctgac cattgtctcc tcagccagcc acttcttcaa 11880
gggcctctca tggccgggcc ccaccagtca ggcccagccg aggccctgcc ttccaccacc 11940
cctgggccct gggagctcct gctcctgggg gcctcccata gcctcggcct caaggcctct 12000
cagaggatgg gtgtttctga atctttccta gtggcacgtt catccctcac aaatctctgc 12060
atctttctga cttttgtttt acacagttga atatccatgt ggaaaaatac ctattctaga 12120
aaaaagaaat gccagcaaac cccaaggccg aattgtgggg ggcaaggtgt gccccaaagg 12180
ggagtgtcca tggcaggtaa ggcttcccct ggcttcagga ttccaagccc tgagggtctt 12240
gaagcctttt gaatgtgaac aacagctctg gaagggaaaa tgggcaggtc agccccaagc 12300
ccaccaggct ccaagtcagc acacctagca cctccagctc gcggcacccc catgctttta 12360
gtggggcaag gaaggagaaa agaaaacgac actcactgag ggtctaccct gtgcagagaa 12420
ccctgcgaga tgccccatcc gagttgtcac gtcgtcctca cggttactct ttgaggtggg 12480
atctttgcct gatctttgca aaatcaggag cattggatca aagctatgtg aagatcctgt 12540
gaggtgaaca gtgaaatctc acagcgacat ttgtattctt gggccgtgcc caagagcacg 12600
tctcggctag agaggggcac agcctcccag agccaggtct gagcagcttt gcctgggagg 12660
gatctgcaaa gaccccagga tttcagaaag aaattgtgca atgccagagg ttccttggca 12720
tgcccgggag ggcgagtcat cagagaaaca atgacagcaa tgtgacttcc acacctcctg 12780
tccccccgcc caggtcctgt tgttggtgaa tggagctcag ttgtgtgggg ggaccctgat 12840
caacaccatc tgggtggtct ccgcggccca ctgtttcgac aaaatcaaga actggaggaa 12900
cctgatcgcg gtgctgggtg ggtaccactc tcccctgtcc gaccgcggtg ctgggtgggt 12960
gccactcttc cctgtccgac cgcggtgctg ggtgggtgcc actctcccct gtccgaccgc 13020
ggtgctgggt gggtgccact ctcccctgtc cgaccgcggt gctgggtggg tgccactctc 13080
cgctgtccga ccgcggtgct gggtgggtac cactctcccc tgtctgaccg cagctctcaa 13140
gtgtctcagg ggctgtggct ctgggcttcg tgctgtcact tccacagaca gacagacatc 13200
cccaaaaggg gagcaaccat gctgggcacg actgctgtgg ccaccgtgct ctcagccact 13260
ttcccatgcc caaataaaac gataaaagac tgggggcttc tgcccatcct gcctcacttg 13320
accaagagcc cagaagagga tgcgacaccc agggcctcat gggaccaccg gctggcaggg 13380
gttctgctca ctgggtttat gggtgagacg agcactccca ggagggccac tgggccggga 13440
agaactgtgg agaatcgggg cacgccctgt cctcccagct gccagggcac agcatccctt 13500
ccccacctca acacccagac cccagattca ccccagttca cttgtcccca cacgagccac 13560
aggctgccac ctggggcagg ctggccccac cttggggtta gatgcaggtc cccttgcccc 13620
agaaggagac tgcagcccct gcagacctag aaatggccac agcccatccc catgcaccag 13680
ggggtgaggt ggcaggtggt ggaaagggcc tgaggggggc ttcttccttc caggcgagca 13740
cgacctcagc gagcacgacg gggatgagca gagccggcgg gtggcgcagg tcatcatccc 13800
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gacgctggcc ttcgtgcgct tctcattggt cagcggctgg ggccagctgc tggaccgtgg 13980
cgccacggcc ctggagctca tggtcctcaa cgtgccccgg ctgatgaccc aggactgcct 14040
gcagcagtca cggaaggtgg gagactcccc aaatatcacg gagtacatgt tctgtgccgg 14100
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atatcttcac tggagaaagt aaaaaagtac agaaaaatat gtagaagaaa atctaccatc 7140
atctcacatc cagagatatc catggtaaat attttaatac aattcctgtg aagttattca 7200
gtacacatta atagagtttg aaaacataat ctaatataaa agcatgaaat tcataaagat 7260
attttaaaat aaagttaata tgtatgtgtg tatatgtatt tttatatata cacaaacata 7320
tatgcttatt atttttattg tgagcattcc cccatattat tagaaaacca tgattttttg 7380
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tgttaggtcc tagtatcata tgtggagagg ggatacttgg caagtaaaac agtacctatc 21360
taccatgtgg ccacaacagg gcagatcagg gtccctggta ggatggaggc agccatcaag 21420
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ctgtgtagaa ttccatggtg tatatgtacc acattttctt tatgcagtct tctgttgatg 105960
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tgcacagtct ctgtcacagc tactaaactc tgcccttgtg gcaggaacat agtcattgac 147180
ggtactcaaa tagaacaggc atggctgtgt tccaataaaa ctttatttac aaatacaggc 147240
tgcaagtagg atttggccca taggccaaag tttgctggcc cctatattga ccaaaacaaa 147300
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catttgttca ggaaaaataa ttgtaaatat atagtttcaa attacataat acaaaaattc 147420
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catctcctgc ccctggtacc tgccttggca ccacaaaggt acccatagag gggaggaact 12720
gtgggggggg cgggcccagg gtggggctga ccccagcctc cccccacacc cccagtgcaa 12780
caccgcttcg tgttcaagag atgcgggccc gacggtcagt gggtgcgtgg accccggggg 12840
cagccttggc gtgatgcctc ccagtgccag atggatggcg aggagattga ggtccaggtc 12900
agtgggcggc aggcaggcgc ggtggggctg gatgggaacg ggcatggggg cccctgcctg 12960
gccctcacag gccactgtaa ctcgcagaag gaggtggcca agatgtacag cagcttccag 13020
gtgatgtaca cagtgggcta cagcctgtcc ctgggggccc tgctcctcgc cttggccatc 13080
ctggggggcc tcaggtagga ttccgccagc gcccggggcg gccgcagagg acagggagga 13140
ggacgggcgc tgactggctg tgcccacagc aagctgcact gcacccgcaa tgccatccac 13200
gcgaatctgt ttgcgtcctt cgtgctgaaa gccagctccg tgctggtcat tgatgggctg 13260
ctcaggaccc gctacagcca gaaaattggc gacgacctca gtgtcagcac ctggctcagt 13320
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gcggtgttca tgcaatatgg catcgtggcc aactactgct ggctgctggt ggagggcctg 13500
tacctgcaca acctgctggg cctggccacc ctccccgaga ggagcttctt cagcctctac 13560
ctgggcatcg gctggggtga gtgggctggc atgagagggg gttaaggcag gctgaccaag 13620
cctttgggac cacagctgct gccccccaca ggtgccccca tgctgttcgt cgtcccctgg 13680
gcagtggtca agtgtctgtt cgagaacgtc cagtgagtat gagcggctgg acagcctggg 13740
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ccagtatgtg agtggcctgg cctcgcaggt gctggaccag caatgacaac atgggcttct 13980
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ctgtctgaga gcgctgggag ggagccggca cccagacagg acaccaggac actggccagc 14160
accctggaca ctgagccagg ctgttcctcc ctggctgtgt gcccaccagc cccagggcta 14220
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gagagaggca cagggatgcc agccccaccc ctgcccgggg gttggaacac gtggggccca 14940
agcctttccc tccccctgct cttattgggt gcagttgcca tggcgctggg tgtcaggccc 15000
ccaggacagg ttggcctcag ccccatcgct acggtgtcca ccgtgggggt ccccaggtgt 15060
ctgcagactg ctttccgtgg cgatgctggg tggcatagct gtgcccagca gggagcttgt 15120
gtcgctctgc acccctcaga gcggagactg ggcatctccg atgaggccca cagcaggtcc 15180
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agcggaacac cagcaaccac agggcctcat cttcgcccgg ccacggccct cccagcaagg 15360
agctgcagtt tgggaggggt ggtggcagcc aggattcatc tgcggagacc cccttggctg 15420
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tgggtggtca gcgccagtgc gggctgttga agggtccccc tgctgtccca gttcactcag 15900
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cgccagtcct cgtgccacac agagaggtcc ggcctacgcc agtcctcgtg ccacacagag 16560
aggtccggcc tacgccagtc ctcttgccac ctcgtggtgg gtgggcgccc tgcttgccag 16620
ccagggagca ccaggaaaga gctgcctcct gcgtgctgga cacaggaggt gcttcagggt 16680
ggggtctccc attgtgtggg gcccaacctg agtctaaggg cccagggacc acacagcggg 16740
ggtggagaca aattcagggt agaagctgtg aggggcctgt ggtcagcccc ccggggggtc 16800
cctgcagcag gcactgtgag acctactgag gtgtgtgcat gggctgggga aggagccagt 16860
caggtgcccc tgctctgagg agctgctggg aagtgctgct gggccctggg ggaaggggtg 16920
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gggcaaatga ggggacagga ggcctctgag gaaaggtaaa tagaattact cacccgccag 17040
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tgactttgat accctggaat ctggtgtctg tggacacaaa aatactacta aaatgagagt 18060
ggagaccagg aaaaaggaag acatgaacta catgaaggac caaatctagg agagtcagaa 18120
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gactagtaca tagaaaacta aacaaatgag gctgggtgca gtggctcatg cctgtaatcc 18300
cagcactttg gggggccaag gcgggcgaat cacctgaggt caggagttcg agaccagcct 18360
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gactccgtct caaaaaaaaa aaaaaagaaa gaaaaaacca agcaaatgaa aaaagaaggc 18600
aattaataat tccaaagaaa agaaaaattt gggcagaaaa gaacaaaaca agcagaattt 18660
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cggatcacaa ggccaggagt ttgagaccat cctggctaac aaggagaaac cccatctcta 19020
ctaaaaatta gccaggcgtg gtggtgggcg cctgtagtcc cagctactcg ggaggctgag 19080
gcaggagaat ggcgtgaacc caggaggcgc agcttgcagt gagccgagat cgcgccactg 19140
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cactcactca gccccgggtc ctcccctgcc tgctctttct ctgaccctgc cctccactgt 19440
tcctttttct tctttctctc cctgttgtgt ccaggaacca ggcaccaccc tcatttcttc 19500
ttgatcaatc tttaaaaacc agcagtgctc agctaactct tcatctatct cccccgacct 19560
ggggctctgc tgaatccacg ctttagaccc agctatcagc tcggcatgta cagctggatg 19620
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ctcctaacag gacccctgct gctaccccgg accctgcaac ccattcccac acagcagcca 19740
gatgctttga cacccgaagt ctcctatgaa tccgatgagg cctctgcacc acacctcatt 19800
ttacagaagt acaggggaaa caggggtctg ttgacaccac agagatgcag ctggccaaag 19860
gcagaatgtg gggtacacga ctgtcaaacg ccaggggtcc ttacacgaat ggtggaaaaa 19920
gaggggcatg ttacggatgg aggctcggga cacatgggcg ccgccttccc atgctgccag 19980
caacccacca ggaacctatt a 20001
<210> 12
<211> 3182
<212> DNA
<213> 乙型肝炎病毒()
<400> 12
aattccacaa cctttcacca aactctgcaa gatcccagag tgagaggcct gtatttccct 60
gctggtggct ccagttcagg agcagtaaac cctgttccga ctactgcctc tcccttatcg 120
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ctaggacccc ttctcgtgtt acaggcgggg tttttcttgt tgacaagaat cctcacaata 240
ccgcagagtc tagactcgtg gtggacttct ctcaattttc tagggggaac taccgtgtgt 300
cttggccaaa attcgcagtc cccaacctcc aatcactcac caacctcctg tcctccaact 360
tgtcctggtt atcgctggat gtgtctgcgg cgttttatca tcttcctctt catcctgctg 420
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ctaattccag gatcctcaac caccagcacg ggaccatgcc gaacctgcat gactactgct 540
caaggaacct ctatgtatcc ctcctgttgc tgtaccaaac cttcggacgg aaattgcacc 600
tgtattccca tcccatcatc ctgggctttc ggaaaattcc tatgggagtg ggcctcagcc 660
cgtttctcct ggctcagttt actagtgcca tttgttcagt ggttcgtagg gctttccccc 720
actgtttggc tttcagttat atggatgatg tggtattggg ggccaagtct gtacagcatc 780
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ctaacaaaac aaagagatgg ggttactctc tgaattttat gggttatgtc attggaagtt 900
atgggtcctt gccacaagaa cacatcatac aaaaaatcaa agaatgtttt agaaaacttc 960
ctattaacag gcctattgat tggaaagtat gtcaacgaat tgtgggtctt ttgggttttg 1020
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acctttaccc cgttgcccgg caacggccag gtctgtgcca agtgtttgct gacgcaaccc 1200
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cttctcatct gccggaccgt gtgcacttcg cttcacctct gcacgtcgca tggagaccac 1620
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aatgtcaacg accgaccttg aggcatactt caaagactgt ttgtttaaag actgggagga 1740
gttgggggag gagattagat taaaggtctt tgtactagga ggctgtaggc ataaattggt 1800
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gtacgagatc ttctagatac cgcctcagct ctgtatcggg aagccttaga gtctcctgag 2040
cattgttcac ctcaccatac tgcactcagg caagcaattc tttgctgggg ggaactaatg 2100
actctagcta cctgggtggg tgttaatttg gaagatccag catctagaga cctagtagtc 2160
agttatgtca acactaatat gggcctaaag ttcaggcaac tcttgtggtt tcacatttct 2220
tgtctcactt ttggaagaga aaccgttata gagtatttgg tgtctttcgg agtgtggatt 2280
cgcactcctc cagcttatag accaccaaat gcccctatcc tatcaacact tccggaaact 2340
actgttgtta gacgacgagg caggtcccct agaagaagaa ctccctcgcc tcgcagacga 2400
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gcctgctagg ttttatccaa aggttaccaa atatttacca ttggataagg gtattaaacc 2700
ttattatcca gaacatctag ttaatcatta cttccaaact agacactatt tacacactct 2760
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attgggactt caatcccaac aaggacacct ggccagacgc caacaaggta ggagctggag 3000
cattcgggct gggtttcacc ccaccgcacg gaggcctttt ggggtggagc cctcaggctc 3060
agggcatact acaaactttg ccagcaaatc cgcctcctgc ctccaccaat cgccagacag 3120
gaaggcagcc taccccgctg tctccacctt tgagaaacac tcatcctcag gccatgcagt 3180
gg 3182
<210> 13
<211> 3318
<212> DNA
<213> 智人()
<400> 13
gtgatgcgta gttccggctg ccggttgaca tgaagaagca gcagcggcta gggcggcggt 60
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cggcagacgg cgcagtgggc cgagaaggag gcgcagcagc cgccctggcc cgtcatggag 180
atggaaaagg agttcgagca gatcgacaag tccgggagct gggcggccat ttaccaggat 240
atccgacatg aagccagtga cttcccatgt agagtggcca agcttcctaa gaacaaaaac 300
cgaaataggt acagagacgt cagtcccttt gaccatagtc ggattaaact acatcaagaa 360
gataatgact atatcaacgc tagtttgata aaaatggaag aagcccaaag gagttacatt 420
cttacccagg gccctttgcc taacacatgc ggtcactttt gggagatggt gtgggagcag 480
aaaagcaggg gtgtcgtcat gctcaacaga gtgatggaga aaggttcgtt aaaatgcgca 540
caatactggc cacaaaaaga agaaaaagag atgatctttg aagacacaaa tttgaaatta 600
acattgatct ctgaagatat caagtcatat tatacagtgc gacagctaga attggaaaac 660
cttacaaccc aagaaactcg agagatctta catttccact ataccacatg gcctgacttt 720
ggagtccctg aatcaccagc ctcattcttg aactttcttt tcaaagtccg agagtcaggg 780
tcactcagcc cggagcacgg gcccgttgtg gtgcactgca gtgcaggcat cggcaggtct 840
ggaaccttct gtctggctga tacctgcctc ttgctgatgg acaagaggaa agacccttct 900
tccgttgata tcaagaaagt gctgttagaa atgaggaagt ttcggatggg gctgatccag 960
acagccgacc agctgcgctt ctcctacctg gctgtgatcg aaggtgccaa attcatcatg 1020
ggggactctt ccgtgcagga tcagtggaag gagctttccc acgaggacct ggagccccca 1080
cccgagcata tccccccacc tccccggcca cccaaacgaa tcctggagcc acacaatggg 1140
aaatgcaggg agttcttccc aaatcaccag tgggtgaagg aagagaccca ggaggataaa 1200
gactgcccca tcaaggaaga aaaaggaagc cccttaaatg ccgcacccta cggcatcgaa 1260
agcatgagtc aagacactga agttagaagt cgggtcgtgg ggggaagtct tcgaggtgcc 1320
caggctgcct ccccagccaa aggggagccg tcactgcccg agaaggacga ggaccatgca 1380
ctgagttact ggaagccctt cctggtcaac atgtgcgtgg ctacggtcct cacggccggc 1440
gcttacctct gctacaggtt cctgttcaac agcaacacat agcctgaccc tcctccactc 1500
cacctccacc cactgtccgc ctctgcccgc agagcccacg cccgactagc aggcatgccg 1560
cggtaggtaa gggccgccgg accgcgtaga gagccgggcc ccggacggac gttggttctg 1620
cactaaaacc catcttcccc ggatgtgtgt ctcacccctc atccttttac tttttgcccc 1680
ttccactttg agtaccaaat ccacaagcca ttttttgagg agagtgaaag agagtaccat 1740
gctggcggcg cagagggaag gggcctacac ccgtcttggg gctcgcccca cccagggctc 1800
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gcaactctcc actccatatt tatttaaaca attttttccc caaaggcatc catagtgcac 1920
tagcattttc ttgaaccaat aatgtattaa aattttttga tgtcagcctt gcatcaaggg 1980
ctttatcaaa aagtacaata ataaatcctc aggtagtact gggaatggaa ggctttgcca 2040
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gtgatattgt gggtaacgtg agaagataga acaatgctat aatatataat gaacacgtgg 2160
gtatttaata agaaacatga tgtgagatta ctttgtcccg cttattctcc tccctgttat 2220
ctgctagatc tagttctcaa tcactgctcc cccgtgtgta ttagaatgca tgtaaggtct 2280
tcttgtgtcc tgatgaaaaa tatgtgcttg aaatgagaaa ctttgatctc tgcttactaa 2340
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tcctaagcct gttgctgaag tcattgtcgc tcagcaatag ggtgcagttt tccaggaata 2460
ggcatttgcc taattcctgg catgacactc tagtgacttc ctggtgaggc ccagcctgtc 2520
ctggtacagc agggtcttgc tgtaactcag acattccaag ggtatgggaa gccatattca 2580
cacctcacgc tctggacatg atttagggaa gcagggacac cccccgcccc ccacctttgg 2640
gatcagcctc cgccattcca agtcaacact cttcttgagc agaccgtgat ttggaagaga 2700
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taaaccattt ttacaaaa 3318
<210> 14
<211> 78001
<212> DNA
<213> 智人()
<400> 14
cagattccgg gtctcatccc tagaccaaag atatctgaat catttggcga tgggtccagg 60
aacctgcatt attcaacaca cttcccaggt gaccgtaaat gtcaaaagac aaaattacaa 120
caaacttaaa catcttaatt ggcttcattc atgattctag aatcgggcaa gacttcattc 180
ctcaaaatag cacaagtgtc ccaatgagct gagcagagga ggttggtttt atagacagaa 240
aagggctgaa aaaagcagaa acaaagaaca aaaagcagat tggtcatttc aaagttactt 300
tccttgtaag gcaggaacag ggaaacagaa caagagagaa ataactgatt ggtcgcatcg 360
ggttacttca ggttactttt tgttgtaagg attaaagcaa agggaacttc attatgttga 420
ttaaaacggt ctgcttggga aatcagggtg tgtatctctc ttctgatttt gtgaaaggtt 480
atcagtctga tgatgtagaa ctttagcatg agtgactcca ttttgatttt tagtctagtc 540
tgttgagacc ctaatgccag aacttttttt gtttgtttgt ttcgctcttg ttgcccaggc 600
tggagtgcag tggagctatc ttggctcact gcaacctctg cctccagggt tcaagcgatt 660
ctcctgcctc agcctcccaa gtagctggga ttacaggcat gcgccaccac gcccggctaa 720
tttttttttt tttttttttt tttagcagaa accgagtttc accatgttgg tcaggctggt 780
ctcggactct tgacctcagg tgatccacct gcgtcggtct cccaaagtgc tgggattaca 840
ggtgtgagcc accacaccca gccctttttt ttcaagacag ggtctctctc tgccacccaa 900
ggtggagtgc agtggcgcca aaacagctca ctgcagcttc cacctcctgg gctcaggtga 960
tcttcctgcc tcagcctccc cagcagctgg gccccaccac accggctaat tttttaactt 1020
ttagtagtga cgaggtctga ttctgttacc caggctggtc tggaactcct ggcctcaaga 1080
catccgcctg cctctgcctc ccaaagtgct gggattacag atgtaagcca ccgcgcctgg 1140
gctcctatga tttttattta acataatgca ccatggaatt tgtgctctgc ttagttcagt 1200
ctgagcagga gttccttgat acttcgggaa acactgaaaa tcattccatc cccatccatt 1260
cattcctgca gcacccaagt ggaaattctg cgtttcagac agggacacta cccttagaga 1320
gcagtgggct tccccagcag cgtagtgaaa catgatactc ctgagtttca tgaaaaaagg 1380
gcagacatct ggccagagct gggaggcagg aaatagagca cggtgccctc ctcccatact 1440
ccagcttgga ttactgaggc tggggcccag gccctgcagg aaaggaggtg catgactact 1500
ttaaggccac tcactctgtg actcaacggg ccgggtcggg gctggaactc aatgccctcc 1560
cgggcctgga gagcccacgc gccgtgggcg gggctcccgg ggtcgcctag gcaacaggcg 1620
cgcgccgcgc ccgagcccag agccccaaag cggaggaggg aacgcgcgct attagatatc 1680
tcgcggtgct ggggccactt cccctagcac cgcccccggc tcctccccgc ggaagtgctt 1740
gtcgaaattc tcgatcgctg attggtcctt ctgcttcagg ggcggagccc ctggcaggcg 1800
tgatgcgtag ttccggctgc cggttgacat gaagaagcag cagcggctag ggcggcggta 1860
gctgcagggg tcggggattg cagcgggcct cggggctaag agcgcgacgc ggcctagagc 1920
ggcagacggc gcagtgggcc gagaaggagg cgcagcagcc gccctggccc gtcatggaga 1980
tggaaaagga gttcgagcag atcgacaagt ccgggagctg ggcggccatt taccaggtgc 2040
gggagcgccc cggagcgtgg cgggcccttc gcttaggccg cttgaacatc ccctcagacc 2100
tccaggcccc agactccctc tgggtcttgc cctctgcctc gctcctactg cttgaggatt 2160
cgatgggaca gcgacgcact gcgtcccccc accctttgtc cccggggcgg gcgtgtttct 2220
cgccgcagcg tcggagcccc cttcgatccc ccacctccct tctgttctcc agctcgggtg 2280
atctctcaag ccgggggacc gccggtctgt gctctcaacg cgaatccctc gcaccccgac 2340
cccgccccct gcctgtccac tctttgtccc ctggggtgat ttagcacccc cactatttcc 2400
ttttctggag tggaccacct cagactctct tcctttgtct ccctggggga aaaggttact 2460
ccccccgtcc ctccttcaca tttcctttcc cctagtctca gtgtgcgtcg agtcccagag 2520
atgacagtcc cctttcccct ttctgttcat tcatttattg gataggagtt ggcaagctta 2580
ttctgtgcta ggcaccgctt aggcattgga ggtggtgttt gctaatcagg acaggcaaga 2640
tcctagcctt agtggggcct agagtcgaat agggcaatca aacacaaaag caaataattt 2700
cagatagtga caggtgctgt gaagagaacg acttcctaac ggggtacagg gtgactgcat 2760
agaaggccgg ctgtcttaga gaaggggatc agggaaggcc tgtcaaagga ggagacattt 2820
gctttgtgag ctgaaccaag aggagcagaa agccgtgaga atatggggct aaagaacctt 2880
ctagccagga ggcctgcggt acccactcca ttggggccat gatattattc tttcaggcag 2940
ggactcagga aggttaacgt tttaaccctc tctaaaatag catctttcct caatgagcag 3000
cttagtcttt ggtcgtggca gagatgacct tgtcttagga gtcatctcct tgtgtgttaa 3060
aaagttagga aaggagggtt tctcatatat ctataaaaca agtagttaaa aacacaaaga 3120
gctcttcctt tcacaagcag ctgaataaga tacatactcc caattaaatg tcattgcggg 3180
ggttgttaag attaactaaa accacacttg cacagtatct taaataagcg atatacagaa 3240
tagagagatt ttgttacttg tgtaaaggga gacagcagat gattctgttt tcagcttata 3300
ggctcaaaag gcaaattgtg agatccatca gctgtagtat taaaatctat tttgagctcc 3360
gcttagaaag gaaaaaaggt ttaagcagtt ctttggtatg cttgactaac aaaagccttt 3420
ttttttggca gccttgattt tcatgtggat ttacatcaag cttatttgac aggattcttt 3480
ttatttggac tgtagtgtgt atattagttt ctgctagact aatatttcta accactgtaa 3540
tctatatact aataagtatg attgatcagt atataaaatt tgtatgccat atctggtctc 3600
tgaattagct gaatgaattc cataagggac tttgagactg tgtagacaaa ttttctgcat 3660
cagtttaatg cagtagagtc taaaatgtct ttaaatgaaa attgttggtc tgaagtgttg 3720
gagttgatta tgatacaccc catcacagtg gaagcattgt ggagagaagt cttttccact 3780
gaaattgact gagttgacaa caagaaatac gtattgtaac ttagttctta gttgaatttt 3840
atttcttaca attttaagcc agagtgggtt gacctgtcac ccaagcatgg ttaaaattgt 3900
attcagcatg caactagcat ggagtgtgtc agtcttcaat tcatttcctt cattgttctt 3960
aagtttttct gccacaatta aaccccacaa gttagtcaag gtgttgagat tttcactgct 4020
tcttaatgga ttgccacatt ccctgaggta gtttcttttg gtcttagaga attgtcaggg 4080
ccagcttttc tcacctccac tgtatggata tttttctttt ctaagatctt gaaatcagaa 4140
gcttttctcc taagtgtaaa agtagctctt tgtcatacaa ctgtagcgtt ttctgaaaca 4200
gagttcagat gaccttgagt ctaaagtggc taactttcca aggtgtgtat cgctttacca 4260
aaaccattat ttttcaagga ttcaaagaat gtgtttacaa ttgatagaaa atggaagttt 4320
aaaaaaatta atactttata gcatgttgaa atgagggcag ccttatacaa agtcatactt 4380
tgagcttgcc tagcctattg tgatcagaga ataatgtaat ttttgcttac aacttggtaa 4440
gcaggtcagt tattctaact tattttctga ttagaacaaa aagatgtaaa aacttgaaaa 4500
ctattgggaa aagaacaaag agtgaagagg acttttgagt gctgaggaat gtggcagctt 4560
ggaaaacaaa ctttttaggc agagattctt tgctaggtca gtttgataaa gtgagcataa 4620
ccgtattttt aatctttaat gctaatgaat agcatagatg ctaataagca tctaggtcta 4680
taaaaagtca gctttgatag tgtatataga tggctttaaa cattgttttc tagcatttaa 4740
acactttcaa atcatccggt tgcttgattg ggcctagctg tctaagagga gagaatgagc 4800
ccagatgagg aaaagagatt gattttactg agctagaatg agaggagaga gggttgagtg 4860
aatgaaaaga atagctcatg tgctcccctc catctgtagt ttaagagggg ttgggtccgg 4920
tgttttgctt gttttctcgt ctgtaaattc tttgattctc tgacaccact cactatattt 4980
cattgtgaat gatttgattg tttcagataa aggggactgc aataatacct tgtgacatga 5040
aggcaagatt tattcatgtt agaggcaggc tttgtaaaat gggccactct tccaattgac 5100
atttgttttt atagctgttt tcattatgaa atacaatcta atgcctgact aggttaaaac 5160
catgttgtaa caatagttca ctaaaattcc ttactgatat acagcttatg ttgttatatt 5220
ccaaaaagat gaatattaaa atttgccaat aatgtttatt taaatactat tttcttcaga 5280
ggaaaaaaaa ctattttatg caaaggagaa agatctatac actatgactc acttcactta 5340
aaaaaaaaaa gactaacgga aatgacatgg agagactggg aagttctagt catcttgagt 5400
gacccattag atctaaatgt tcttgtttag ccctggtttg agtgaactaa atttaggtgt 5460
ctgatcagta ctttggaaat ggtgtaaatg cctttgtaat tgtctggact gatattagat 5520
taactgggag cacaagtaga aatagtgaag gaaagaactt tttgctattg ttatttgaca 5580
tcactggcat atttatagga atactttggt gtttttggaa gtaagtaaac caaccagtgg 5640
ttctaaaaag tcagctgggg gataatggta atgccgctgt ttcttagctg caagttatct 5700
gccgttactt ctcctccatt ttgcatttta tcttgaatag ctcctcaaaa cctattaaaa 5760
tacctggtat tgaataatgt aattgaatgt gtactgaatt tcacagtgga aatgaataag 5820
aaatttcctg tggaggtttt ttgacttagc tactgaaata acggcctttt gttgtgtgat 5880
tctttccctt ttctctttgt taaagaaaac tgtcttgtga tcttgtagat tacagaatcc 5940
ttttggcaat ttctgttcct agcactgctt tttctttctt tctttctttt aaatagaaat 6000
ggggttttgc tgtgttgccc aggttggtct tgaactcctg gcttcaagcg atcctcccac 6060
cttggcctcc tgaagttggg attgcaggcg tgagcaggta ctttttctga ggcctgcctg 6120
agcctatata tattttgcac aatttggcat tcctccctac agtgtttatg ctgatttgtt 6180
tctggtaaca actaatactg gcaaatcggc tgggcatgtt actttatgct gcccatattc 6240
aggaaaattg gaattctagc tgggtcattg ttcccagatg atgtagtttg gcaccagcca 6300
ttccatgttc acattttgag tatccaggag ggctggggac tttggagtag ttggtgattc 6360
cctctgccac atttcactgg ttggtcacta tggcatcctt tccaccacac tagtagtcta 6420
ggttctcaga tgttgcttat gagcctgcaa tggtttctag tttcacactg cagaaatgag 6480
tgaagccggt tacccgttaa tatggtccca tcatcactag agtaattcat tgttctaaaa 6540
ccagatctga gtctctcact cctctgcaac tacttctgat tctttcataa cacttgtaaa 6600
gtccaaactc ctctttagca tggcagccag cttccagtcc ttccctccta tgtggcttcc 6660
attctagcca gacaagaaag ggcagcgttc tccaaactca tcctcgccct tcattcctct 6720
ataccattgc tgagcacttt gttgaggatg cctctcccgt tcaatctagc ttgcatcttc 6780
cagctcgaat gtgtgcttcc ttgcaccaga gttttgttcc gtcacctgtg tgttttcata 6840
caagctggca catatctctt ctaaagccct gctgtcattg tagctgcgtc tttacaaaca 6900
tttttttttt aaatttttat aaagtcaagg tctcactata ttgcccaggc tggtctcaaa 6960
ctcctgggct caagtgatcc tcctgccttg gcctcccaga gtgctgggat tataggtatg 7020
agacactgtg cccagctgta gctgctactt tatatcccag gtctatctcc aatggagccc 7080
aagcttcctg aggccacctg ttgtatcttt ctcattcatc ttgaagtcct ctgctcctgg 7140
cacagagtag gtacctaaca agagttggga ttgaattgat ggtcagtact ttgctagcct 7200
gatggtataa agatgtacaa aacatgttcc tggctcccac tctagggggg caatgatgga 7260
aacaaataga ttagcccaca ttagtaccaa tagtagaggt cactctggga gaaggccccc 7320
accacatttt gagtcatggc ctaatgaggt aatttagtat tgcctgctgc agtggctttg 7380
gaagaaaggc tggcattctt agccagtaga agctgatacc actgatttgt ttcacagaag 7440
ctttaaatat aacaataaat ttgtgcttgg cctacggtga actttacagg caacttggag 7500
gtaatatgtt tgtctctcta agaattgttg aattcctctt ccctcatccc tcctgactgg 7560
ttctcacaag cctagcgggc ctttgcatgt ggttggttca taaaatactt tttgattttg 7620
ggatataaaa tatagttctc cataaaataa cgactgttac caagtctttg attttttttt 7680
tcaaactata aatggtaatg acattctttg gcctttgatc agaccaccct taggggcaag 7740
agagtagttt catgttttgc tttttctagt gtcccctgtg tctgggtata gttgcagtct 7800
cagctgtcat actaacagtg ctgagtgagt cccttacttt ctttgggttt tggtttctcc 7860
cttgtaaaaa tgatcctgga ctaactgatc attaagttca ggtcaagtaa taaaaatcct 7920
taatgtactc acaaatacaa tttaatgttc ctgaataatc cttgtaaaaa ctgcagcagt 7980
tactcagttt tgtaaggtgt ggttgggtac tattaggctc aaaagtttat aggagctttg 8040
tgagtatagt taacaactca aaagaatggg gtgttttttc ccgaggggca tgaaatgttt 8100
ttgataaata gagttcattt gacttggtaa tgtggaaaat gagtagccct gacacgtacg 8160
ctatgctttt gcagtttttc tctcaagtag caattgggtg gcttttcctg taaaagatag 8220
aggaactgat tcttgagaat ttacgaaagc ttcaacccta actaggtatg caaagaatag 8280
ttgcccttta tgttgtaatt ttaggaagaa acctacatct ggtctaagtt tcatttgaat 8340
aatatgatag tttacacatc tgccatattt gagaagaaag tacctaagtc tccagcattt 8400
tagaaataat gctttacttt gtgtagaaat ggtctttaga gtttaatagc tgctgccctc 8460
tcctttttca aagcagcttg acataatcat gagtatcttg ctgacagctt gtaaattttg 8520
attgtatgaa aactgaaaat aagaccattt cacatggaag attccctcct gccctgaaac 8580
agccaaagaa aactgtagcc atcaaatcta ttgatctctg ggctttggta caagtcacac 8640
tactacaaat aaaataatac caagtactta taaatgattt tcagtccttt taaagtttat 8700
ttttttaata ttttttttga gatggggtct tgctgtgtcg tccaggctgg agtgcagtgg 8760
cacaatcttg gctcactgca acctccacct cctgggctca agtgatcctc ccacctcagg 8820
ctcccaagta gctgagacta caggcatgtg ccatcacgcc cagctaattt ttgtattttt 8880
ttggagtaga gatgggattt tgctgtgttg cccaggctgg tcttgaactc ctgggcttaa 8940
gccatctgtc tgcctcaggc tcccaaagtg ttgggattac aggtgtgagc cactgtgccc 9000
ggcccagccc tttttttaag agaaaaacgt atgacatcgt tcgatttact gagtgcttat 9060
ggttttacta aggcagtaag gttttatgga taccctatgg taattagata gaattagtgc 9120
tctgaagtca gctctgtaat atggactcag agtaaacatg gcaaagggac acttaaggtc 9180
tgcattttct ctgggaaata aacgtattct ttactactct gaatctagtg ctgggaaatt 9240
ctaaatcctt cttgaggatt aaccacttga agtaaagttt tgggtcccaa gtaggcttgt 9300
gtccctgtct ccttctcttt acttttcaga tgtttcttcc tagagactga ggtatatttt 9360
acttttacag atgaagaagg aagcctcggc tgtgtttgtg gcttttgtgg gtgagcaaca 9420
tcacttgcaa agataagatg agcatagcaa aactaggctt tcaaaataat ttttaaaaat 9480
ttcttagtga ttagaaaagg aaaactcttc ccttgtctct gttaagaaac gtttttcgac 9540
ttttttcctt tcttaatgga tcttttattg gcacttctct tccttttgca gaatcttact 9600
taaaagtcac tacgttacat tacagcaaac agcttagcta atttttatcc agatgggccc 9660
cggttacagg attgtacact attgcgaatt tcttacagga aagtgaacat caagtaatta 9720
ttccaaatag agttctctta agaacgtgag ttacttaaaa atgtctaagg atgaagtcac 9780
ttctgaatat aacttcactc aagagaacaa ataagcaaac tgcatttagc ataacatggt 9840
aaattagctt taactctcct tgatgtttga acatttgtcg ctgttaacta ctgtttcact 9900
tttcaaatag tcagggctta gtttgcttct gtaaggataa agggaaaata cgccttcact 9960
gagtcataaa tatttttgtg gctaactttt gcacagagaa aagaggcctc taagaaggta 10020
cccagtgaat ttttttttcg gggcagggag agaatatgtc attttttggt ttgttgttgt 10080
tgttgtcatt gttttgcttt gttgttttta ctctgaactg aactgtatct tgacagcact 10140
tttgaattaa gagcattact cttattgttc tctactacct ggacgccacc tccctgttgc 10200
catagtgtta aggatcatgc tccgaggtgg ggtgaggcag aatggggcca agatcagaaa 10260
gttacattaa gctacatcag gtttatacaa gcataaaacc aaatttttgg agcagtcccc 10320
agaatacaac ctggtttagc cacacctaaa ggttgctctt gaatattcct tgagaatcca 10380
catccctaga atgctgggtt tcaatgggcc ctttatgtac ctatcatggt gtcatttctg 10440
agcatttcta aatattcctt catgtcttac tgacagtttt tcttgaataa atcttaggaa 10500
tattagtgcc attatcagta ttttgtttgg tctgttcaca ccacaaataa ctacccaggt 10560
ctgctacttg cccctatttc tctacctgct aatgaaaatg cttttgaaag tttgagtaac 10620
agtattggag tgtgcacagt ggtattggta ggttctgtac tcatccttaa ccacttgttt 10680
tcatcctttg tgagcttgaa gtttctccaa aaaatttatc acaaaactta tcagacatag 10740
ttaatacact cagagagaga atcactgaaa aagtagatgt agtttaacaa acccagtgcc 10800
ttttttttac ccatgaatac atatttgtca actaaacctc attttgcaac ttgttccact 10860
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gagccgagat cataccattg cactacagcc tgggggacaa gagtgaaact ctgtctcaaa 11820
aaaaaaaaaa aaattaagtg atttctttgc tttgtgacac ttctactttt ccagcaagta 11880
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aggtgcctgc cacgatgccc ggctaatttt tttttttttt tttgtatttt tagtagagat 14400
ggggtttcat catgttggcc aggctggtct tgaactcctg acctcaggtg atccatccac 14460
ctcggcctcc caaagtgttg ggattacagg catcagccac tgcctccggc caggtatttg 14520
tatttttagt ctctatgcct taccgtctca gatcaggagg atttggtgat ttatcgaatg 14580
tgggggaagg ggaagaagag gaaacgggag gaatgttcca gattagggaa atagctagat 14640
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ctttatactt ttttgtgtat gtgaaattaa aaccaaccac tcaggaccaa tttctctgaa 14940
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attattctct tattgtatat atttttcctc tcttcctttt catgtttcct ctgccattac 15540
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ggtctttgcc tctcatggag ccttgcatat gctgtttcct ctgcctggaa tatcctacct 19560
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gaggggacac taagatgaga gtccaaagca cttcttctca gactcctggc tgctaatggg 42240
ttgctgcctc tacttcttca cttagcagat agctttaaaa tgagtaatgc attttaccat 42300
ggagcccgta agagacattc acccagttgt ggaccgagga gaagggtgtt aaacccagat 42360
tgtgatgttt cacttgatga agtgcttaat ataaacatgg aaatatttcc gcaaggataa 42420
actggctttt atgcctgtgt gttttcagga gaaatagaaa tctctaatca aatattgcca 42480
gcttttcacc caagtttgac tttttgccta attgagtttg ggaggtgtct gaataatgga 42540
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taccagagtt ttgtaagcat gttacccctt tgtgttcatt gggagatcat ctgttacctt 42660
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tgcaggcatc ggcaggtctg gaaccttctg tctggctgat acctgcctct tgctggtaag 70080
gaggccctcg cgggtgccct ggggagctcc tctacctgct ctgctgtgat gttttttcct 70140
aagtagaaac tgaagcgctc ctcttccaaa atacagagac tcactgtgtt agtctgtttt 70200
tgcgttacta ataaaggcgt acctgagact cggtaatttg taaagaaaag aggtttaact 70260
ggctcccggt tctgcaggct gtacaagcat ggcaccagca tctgctcggc tcctggggag 70320
gcctcaggga gcttccagtc atggtggaag gtgaagggga gcaggagcaa gagatggggg 70380
aggtcccaga ctcttaacca gctctcttgt gaatgcattg cctcagggag ggcaccaagc 70440
ctttcatgag ggacctgtcc ccctgaccca gacacctccc acccagcccc acctccaaca 70500
ctagggatca catttcagca tgagattggg aggggacaga catctaacgg tgttattaac 70560
gttgcccttg agaattggac ctggctgact tatatctcct ctctggcttt cagatggaca 70620
agaggaaaga cccttcttcc gttgatatca agaaagtgct gttagaaatg aggaagtttc 70680
ggatggggct gatccagaca gccgaccagc tgcgcttctc ctacctggct gtgatcgaag 70740
gtgccaaatt catcatgggg gactcttccg tgcaggtcag cattgccttt gtttgaatcc 70800
aggtgtgacc attttaactt ttttgtcttt gaaggaggct gtcagttgta aaagttcaaa 70860
caccgtctgg tgtcagggga aatagctacc cttcatgttt aaaatagcta gaaagttgtc 70920
aaaatgttca ccatgttgca ctttgtgcct ttgaagtgct cacatagaga gcattgatag 70980
gaagacgaga ctttattttc aaaagatttc atcttccaag tacatggctg cagccctgag 71040
aggccgagag cccctcgcca agccgtcacc tctgctcatg caaagggatt tcctgacaaa 71100
ccagccgaag tgaacactaa taggacttcc tcttgctgct ctttcaagga tcagtggaag 71160
gagctttccc acgaggacct ggagccccca cccgagcata tccccccacc tccccggcca 71220
cccaaacgaa tcctggagcc acacaatggg aaatgcaggg agttcttccc aaatcaccag 71280
tgggtgaagg aagagaccca ggaggataaa gactgcccca tcaaggaaga aaaaggaagc 71340
cccttaaatg ccgcacccta cggcatcgaa aggtaatatg attgggtccc agcttgttgg 71400
ggtgagggga aatgactttc tgttctagaa acacacgctg gtactgaaac cctgtggatg 71460
cagcctcctg ttggcaagca gcgcttccgc atccttgggg aacagggcgc gtggaccaca 71520
gccactccac tcctggctgc tggaggtccg gtattgggca cagggtggcc gcaggacatg 71580
agccacttct gtgggcttct agtgccacct tgtggtgctt gttggaatga ggggctcgga 71640
gccaccgagt agggtttttc tgccccccct gacgacagcg ccctccccca ggtttccgga 71700
cagtcctgaa atgtgatgtc caggcttgag tgccctcagt ccccacagtg gtcctttggg 71760
gaatgtaacc ttttttatgt ggtcttgatt aaatcccatt ttacttcctt gcaggttaac 71820
aaccattatt gagtacctat tgatatgtgt ggtgtactga gttaactaga acatgtcccc 71880
tggtctgtgt tctagaccat cttgctggga aaaaggcaga cccaaagcat attttggtgg 71940
gggcccatgg acagtgatgt gatagaggtg tccgctgagg tggtcaggga aggctgcttg 72000
cagtaggtgg ccgtgcacgg aaagtttgca gaatgagcag gtgttagttc cagctggaga 72060
tgactgccgg ctgtgccctt ggtacctgct ttctggaggg aagttttaag acgtgtgcat 72120
acttgaccca gcagttgtat acatggagaa atttactttg cagcaactct caaaacaagc 72180
gtgtaaagat gtgtataggt agttgtgttt gttgtggcat tgtttgtagt agtgaaaaat 72240
tagagacagg ccaatgatat aaccagggac ctgatcaatt atgttctctc ccggtgttgg 72300
gatattctgt agctcttaaa gaatgagatc tgggtgtact gatgtggcca gacattgcaa 72360
ttgcagtaca tgagaaggca aatcatacag tagtgtgtac accagtgagt cctccagcca 72420
gataaatcct cacagtgacc agtcgcccag gcaccttgtg aaccctaccc tgggtgtggg 72480
tgctatctga agtacctggg ggagggggtg acaagtggac ttcaggctga tgtgggccct 72540
ggcctggccc tccctccaag cagagggggc tggctcgctg gaaggttaac atcatccaac 72600
tctgtctaca cgtggcttgt tttttcctag aattcctgcc acaatagcag catccttgcc 72660
attcattttc tccaaagtga gtaacccatc tctgccctct gattcctcag catgagtcaa 72720
gacactgaag ttagaagtcg ggtcgtgggg ggaagtcttc gaggtgccca ggctgcctcc 72780
ccagccaaag gggagccgtc actgcccgag aaggacgagg accatgcact gagttactgg 72840
aagcccttcc tggtcaacat gtgcgtggct acggtcctca cggccggcgc ttacctctgc 72900
tacagggtat gtttccactg acagacgcgc tggcgagatg ctcgtgtgca gagagcactg 72960
gccgctagcc cgatggtagg attcagttct gtggtgcatc tgagccagtc tcagaagaaa 73020
cagatcaaag gtttttaaag tctggaactg tggaagggct aacaagagaa ttaaggatcg 73080
atgcactggg gttttaagga gccctctggt cccaagaata taagagtcta atctcagggc 73140
cttaacctat tcaggagtaa gtagagaaaa tgccaaatac gtctgtttct ctctctcttt 73200
ttttttttat tcctttgttt ttggaaaaaa atagagttac aacacattgt tgtttttaac 73260
ctttataaaa agcagctttt tgttatttct ggaacaaaaa aaaacaaagt aggcacttat 73320
gaaactttct cataccctta ggtgatgtaa tcagccatat aatttatatt tgatttccca 73380
gggaaggaat cccaaacttt tacgaatgta aactcccttg gagaagaggg ttaggacgct 73440
gttgcgctca agcccccctc agctgtgtgc acactgagcc aggacagggt ctttgagctt 73500
tcccactata agaagaacag caacaaaagg ccgtctagaa aaacagaacc tgcctctgct 73560
tctgctcagg gtgtccccgc tgggtttcca ttgtcctttc tccattgctc cctcctgtga 73620
cagccatctt gctcatgtac cagccctcat caccccatcc ccataaatgg gtgtcctcga 73680
ggcctctgcc tgggggtcag aggtcaccac agggtggcca ttggcatgtc aacccgctgt 73740
taattcagag aagtgggctc cacctcattg ggagaagtgc catttcagca gaaattcaca 73800
cgttagacgt gtgttgctgt taagtaaggg gaagagagag gactagcctc agagctctgg 73860
ccatggaaat gacctcctaa gactttttcg tggttttaaa tattttacct ctttccaggt 73920
ggcatctgag tacatcagat ggttttgcaa aatgcaaaca attttttcct tggggatgat 73980
ttttggggag agggggctac tgtaaaaaat aaaaccaaaa ccccctttgc tccctcggag 74040
gttgaagttg ccggggggtg tggccggggt catgcatgag gcgacagctc tgcaggtgcg 74100
ggtctgggct catctgaact gtttggtttc attccagttc ctgttcaaca gcaacacata 74160
gcctgaccct cctccactcc acctccaccc actgtccgcc tctgcccgca gagcccacgc 74220
ccgactagca ggcatgccgc ggtaggtaag ggccgccgga ccgcgtagag agccgggccc 74280
cggacggacg ttggttctgc actaaaaccc atcttccccg gatgtgtgtc tcacccctca 74340
tccttttact ttttgcccct tccactttga gtaccaaatc cacaagccat tttttgagga 74400
gagtgaaaga gagtaccatg ctggcggcgc agagggaagg ggcctacacc cgtcttgggg 74460
ctcgccccac ccagggctcc ctcctggagc atcccaggcg ggcggcacgc caacagcccc 74520
ccccttgaat ctgcagggag caactctcca ctccatattt atttaaacaa ttttttcccc 74580
aaaggcatcc atagtgcact agcattttct tgaaccaata atgtattaaa attttttgat 74640
gtcagccttg catcaagggc tttatcaaaa agtacaataa taaatcctca ggtagtactg 74700
ggaatggaag gctttgccat gggcctgctg cgtcagacca gtactgggaa ggaggacggt 74760
tgtaagcagt tgttatttag tgatattgtg ggtaacgtga gaagatagaa caatgctata 74820
atatataatg aacacgtggg tatttaataa gaaacatgat gtgagattac tttgtcccgc 74880
ttattctcct ccctgttatc tgctagatct agttctcaat cactgctccc ccgtgtgtat 74940
tagaatgcat gtaaggtctt cttgtgtcct gatgaaaaat atgtgcttga aatgagaaac 75000
tttgatctct gcttactaat gtgccccatg tccaagtcca acctgcctgt gcatgacctg 75060
atcattacat ggctgtggtt cctaagcctg ttgctgaagt cattgtcgct cagcaatagg 75120
gtgcagtttt ccaggaatag gcatttgcct aattcctggc atgacactct agtgacttcc 75180
tggtgaggcc cagcctgtcc tggtacagca gggtcttgct gtaactcaga cattccaagg 75240
gtatgggaag ccatattcac acctcacgct ctggacatga tttagggaag cagggacacc 75300
ccccgccccc cacctttggg atcagcctcc gccattccaa gtcaacactc ttcttgagca 75360
gaccgtgatt tggaagagag gcacctgctg gaaaccacac ttcttgaaac agcctgggtg 75420
acggtccttt aggcagcctg ccgccgtctc tgtcccggtt caccttgccg agagaggcgc 75480
gtctgcccca ccctcaaacc ctgtggggcc tgatggtgct cacgactctt cctgcaaagg 75540
gaactgaaga cctccacatt aagtggcttt ttaacatgaa aaacacggca gctgtagctc 75600
ccgagctact ctcttgccag cattttcaca ttttgccttt ctcgtggtag aagccagtac 75660
agagaaattc tgtggtggga acattcgagg tgtcaccctg cagagctatg gtgaggtgtg 75720
gataaggctt aggtgccagg ctgtaagcat tctgagctgg gcttgttgtt tttaagtcct 75780
gtatatgtat gtagtagttt gggtgtgtat atatagtagc atttcaaaat ggacgtactg 75840
gtttaacctc ctatccttgg agagcagctg gctctccacc ttgttacaca ttatgttaga 75900
gaggtagcga gctgctctgc tatatgcctt aagccaatat ttactcatca ggtcattatt 75960
ttttacaatg gccatggaat aaaccatttt tacaaaaata aaaacaaaaa aagcaaggtg 76020
ttttggtata ataccttttc aggtgtgtgt ggatacgtgg ctgcatgacc gggtgggtgg 76080
gggggagtgt ctcagggtct tctgtgacct cacagaactg tcagactgta cagttttcca 76140
acttgccata ttcatgatgg gtttgcattt tagctgcaac aataaaattt ttttctaaag 76200
aacatgaatt tggggtgctt cccatttttt tctttgctta atagagctaa accaggatga 76260
gtaactcctg tttctttcta tccctgctga tgtgaaacag atgttgtcaa tcagctgggg 76320
ttagagtttt ccacttctaa gaattaacct cagcatccct gcattgccag caccctcagg 76380
ctggagcgct ttccttgact gtgagcttgt tgaacacctt aggcctcagc ccatttcctt 76440
cccaaattga cgctttgcct gtgtagggcc ctcagataac ttaacaaact taccagtgtt 76500
gtttgaagaa cagtgttttg agttgtaatc tcaaaaccat atcccttacc caattacctg 76560
taagacacaa tggttaccac atctcagtac gtaaagtcca cttgatatag aattgactta 76620
gaaataagac agattagtat agtttttcat ttgtgtacaa aattaaacaa tgtaaattcc 76680
ccccaaagtg atttttttga ctttttgaag taattttgga cttgcaaaat gttgccaaaa 76740
tagtacgaag agttccccag taccctcgaa gtttcctcga ctgtttcaaa gctggctgca 76800
ggcccaggct catgagactg ggaagaggac aggctgtggt catgtggacc cacaggggcc 76860
tggggctgca gaagtcagtg tggcttccac catttcaggt ataaaaaagg gcatctaagc 76920
tttcaagaag agggaggatg ctctagggca gcggtcccca accttttctg gcaccaggaa 76980
ccggttccat ggaagacaat tttttcacag gcctgggggt ggtgagggat ggttttggga 77040
tagaaacttc cacctcagat catcaggcat cagattctca taaggagctt gcaacctgat 77100
ctcttgcaca cattcagttc acaatagggt tcacgctcct aagagaacct gatgctgcag 77160
ctgatctaac aggagatgga gctcaggtgg tcatgctcag tcgctcgcca ctcacctcct 77220
gccatgcagt ccagttccta acaggcctca gaccagtacc ggtctgtggc ctgggggttg 77280
aggacccctg ctctaggctg gtactgctga tgcttaaaaa gagagggttt gccagaaatc 77340
agatgggaca aaagggcaaa ggccgtgcca cagagtgccc atatagggga gagcacgcct 77400
ggagccttcg agagcatgca gagaagcctg gagactgcat ttaccggagc tgctgcctga 77460
ggccaccctc caagtgtccc cacagcgcac cacaagacca caggagtgac ctcctcactg 77520
gcaggtattt ggggaaacaa ctgctgtcta ctcttttggg taaaaagtga aacaccaata 77580
gtttaattga aatttcagaa aattgaacat atgaacaagg caaataaata ctaagtaagt 77640
taaaaacaca aaatatgtcc aggaagtatc gatgagaatg ttcaagttaa agttctccaa 77700
tgccattgct acagcaacct caaaccctag gttctctctg cactattaac acagacatct 77760
caggacatgg tttgcttttt tttaagactt aaataggaaa ctaatttttc tttctttaaa 77820
gcaattgcgt tcttcagtga actctttctt taggccagtt gatggcttct tagcagttta 77880
ttgacgagat cctagggtag cttccgaagc tgggttgatt gattgcattt gggtgcggat 77940
ggccaaagtg agtggcccta ctgcctgtgc tgctcagggc tcctgggctg atgtggtggc 78000
t 78001
<210> 15
<211> 4978
<212> DNA
<213> 智人()
<400> 15
ggtttccgga gctgcggcgg cgcagactgg gagggggagc cgggggttcc gacgtcgcag 60
ccgagggaac aagccccaac cggatcctgg acaggcaccc cggcttggcg ctgtctctcc 120
ccctcggctc ggagaggccc ttcggcctga gggagcctcg ccgcccgtcc ccggcacacg 180
cgcagccccg gcctctcggc ctctgccgga gaaacagttg ggacccctga ttttagcagg 240
atggcccaat ggaatcagct acagcagctt gacacacggt acctggagca gctccatcag 300
ctctacagtg acagcttccc aatggagctg cggcagtttc tggccccttg gattgagagt 360
caagattggg catatgcggc cagcaaagaa tcacatgcca ctttggtgtt tcataatctc 420
ctgggagaga ttgaccagca gtatagccgc ttcctgcaag agtcgaatgt tctctatcag 480
cacaatctac gaagaatcaa gcagtttctt cagagcaggt atcttgagaa gccaatggag 540
attgcccgga ttgtggcccg gtgcctgtgg gaagaatcac gccttctaca gactgcagcc 600
actgcggccc agcaaggggg ccaggccaac caccccacag cagccgtggt gacggagaag 660
cagcagatgc tggagcagca ccttcaggat gtccggaaga gagtgcagga tctagaacag 720
aaaatgaaag tggtagagaa tctccaggat gactttgatt tcaactataa aaccctcaag 780
agtcaaggag acatgcaaga tctgaatgga aacaaccagt cagtgaccag gcagaagatg 840
cagcagctgg aacagatgct cactgcgctg gaccagatgc ggagaagcat cgtgagtgag 900
ctggcggggc ttttgtcagc gatggagtac gtgcagaaaa ctctcacgga cgaggagctg 960
gctgactgga agaggcggca acagattgcc tgcattggag gcccgcccaa catctgccta 1020
gatcggctag aaaactggat aacgtcatta gcagaatctc aacttcagac ccgtcaacaa 1080
attaagaaac tggaggagtt gcagcaaaaa gtttcctaca aaggggaccc cattgtacag 1140
caccggccga tgctggagga gagaatcgtg gagctgttta gaaacttaat gaaaagtgcc 1200
tttgtggtgg agcggcagcc ctgcatgccc atgcatcctg accggcccct cgtcatcaag 1260
accggcgtcc agttcactac taaagtcagg ttgctggtca aattccctga gttgaattat 1320
cagcttaaaa ttaaagtgtg cattgacaaa gactctgggg acgttgcagc tctcagagga 1380
tcccggaaat ttaacattct gggcacaaac acaaaagtga tgaacatgga agaatccaac 1440
aacggcagcc tctctgcaga attcaaacac ttgaccctga gggagcagag atgtgggaat 1500
gggggccgag ccaattgtga tgcttccctg attgtgactg aggagctgca cctgatcacc 1560
tttgagaccg aggtgtatca ccaaggcctc aagattgacc tagagaccca ctccttgcca 1620
gttgtggtga tctccaacat ctgtcagatg ccaaatgcct gggcgtccat cctgtggtac 1680
aacatgctga ccaacaatcc caagaatgta aactttttta ccaagccccc aattggaacc 1740
tgggatcaag tggccgaggt cctgagctgg cagttctcct ccaccaccaa gcgaggactg 1800
agcatcgagc agctgactac actggcagag aaactcttgg gacctggtgt gaattattca 1860
gggtgtcaga tcacatgggc taaattttgc aaagaaaaca tggctggcaa gggcttctcc 1920
ttctgggtct ggctggacaa tatcattgac cttgtgaaaa agtacatcct ggccctttgg 1980
aacgaagggt acatcatggg ctttatcagt aaggagcggg agcgggccat cttgagcact 2040
aagcctccag gcaccttcct gctaagattc agtgaaagca gcaaagaagg aggcgtcact 2100
ttcacttggg tggagaagga catcagcggt aagacccaga tccagtccgt ggaaccatac 2160
acaaagcagc agctgaacaa catgtcattt gctgaaatca tcatgggcta taagatcatg 2220
gatgctacca atatcctggt gtctccactg gtctatctct atcctgacat tcccaaggag 2280
gaggcattcg gaaagtattg tcggccagag agccaggagc atcctgaagc tgacccaggt 2340
agcgctgccc catacctgaa gaccaagttt atctgtgtga caccaacgac ctgcagcaat 2400
accattgacc tgccgatgtc cccccgcact ttagattcat tgatgcagtt tggaaataat 2460
ggtgaaggtg ctgaaccctc agcaggaggg cagtttgagt ccctcacctt tgacatggag 2520
ttgacctcgg agtgcgctac ctcccccatg tgaggagctg agaacggaag ctgcagaaag 2580
atacgactga ggcgcctacc tgcattctgc cacccctcac acagccaaac cccagatcat 2640
ctgaaactac taactttgtg gttccagatt ttttttaatc tcctacttct gctatctttg 2700
agcaatctgg gcacttttaa aaatagagaa atgagtgaat gtgggtgatc tgcttttatc 2760
taaatgcaaa taaggatgtg ttctctgaga cccatgatca ggggatgtgg cggggggtgg 2820
ctagagggag aaaaaggaaa tgtcttgtgt tgttttgttc ccctgccctc ctttctcagc 2880
agctttttgt tattgttgtt gttgttctta gacaagtgcc tcctggtgcc tgcggcatcc 2940
ttctgcctgt ttctgtaagc aaatgccaca ggccacctat agctacatac tcctggcatt 3000
gcacttttta accttgctga catccaaata gaagatagga ctatctaagc cctaggtttc 3060
tttttaaatt aagaaataat aacaattaaa gggcaaaaaa cactgtatca gcatagcctt 3120
tctgtattta agaaacttaa gcagccgggc atggtggctc acgcctgtaa tcccagcact 3180
ttgggaggcc gaggcggatc ataaggtcag gagatcaaga ccatcctggc taacacggtg 3240
aaaccccgtc tctactaaaa gtacaaaaaa ttagctgggt gtggtggtgg gcgcctgtag 3300
tcccagctac tcgggaggct gaggcaggag aatcgcttga acctgagagg cggaggttgc 3360
agtgagccaa aattgcacca ctgcacactg cactccatcc tgggcgacag tctgagactc 3420
tgtctcaaaa aaaaaaaaaa aaaaaagaaa cttcagttaa cagcctcctt ggtgctttaa 3480
gcattcagct tccttcaggc tggtaattta tataatccct gaaacgggct tcaggtcaaa 3540
cccttaagac atctgaagct gcaacctggc ctttggtgtt gaaataggaa ggtttaagga 3600
gaatctaagc attttagact tttttttata aatagactta ttttcctttg taatgtattg 3660
gccttttagt gagtaaggct gggcagaggg tgcttacaac cttgactccc tttctccctg 3720
gacttgatct gctgtttcag aggctaggtt gtttctgtgg gtgccttatc agggctggga 3780
tacttctgat tctggcttcc ttcctgcccc accctcccga ccccagtccc cctgatcctg 3840
ctagaggcat gtctccttgc gtgtctaaag gtccctcatc ctgtttgttt taggaatcct 3900
ggtctcagga cctcatggaa gaagaggggg agagagttac aggttggaca tgatgcacac 3960
tatggggccc cagcgacgtg tctggttgag ctcagggaat atggttctta gccagtttct 4020
tggtgatatc cagtggcact tgtaatggcg tcttcattca gttcatgcag ggcaaaggct 4080
tactgataaa cttgagtctg ccctcgtatg agggtgtata cctggcctcc ctctgaggct 4140
ggtgactcct ccctgctggg gccccacagg tgaggcagaa cagctagagg gcctccccgc 4200
ctgcccgcct tggctggcta gctcgcctct cctgtgcgta tgggaacacc tagcacgtgc 4260
tggatgggct gcctctgact cagaggcatg gccggatttg gcaactcaaa accaccttgc 4320
ctcagctgat cagagtttct gtggaattct gtttgttaaa tcaaattagc tggtctctga 4380
attaaggggg agacgacctt ctctaagatg aacagggttc gccccagtcc tcctgcctgg 4440
agacagttga tgtgtcatgc agagctctta cttctccagc aacactcttc agtacataat 4500
aagcttaact gataaacaga atatttagaa aggtgagact tgggcttacc attgggttta 4560
aatcataggg acctagggcg agggttcagg gcttctctgg agcagatatt gtcaagttca 4620
tggccttagg tagcatgtat ctggtcttaa ctctgattgt agcaaaagtt ctgagaggag 4680
ctgagccctg ttgtggccca ttaaagaaca gggtcctcag gccctgcccg cttcctgtcc 4740
actgccccct ccccatcccc agcccagccg agggaatccc gtgggttgct tacctaccta 4800
taaggtggtt tataagctgc tgtcctggcc actgcattca aattccaatg tgtacttcat 4860
agtgtaaaaa tttatattat tgtgaggttt tttgtctttt tttttttttt ttttttttgg 4920
tatattgctg tatctacttt aacttccaga aataaacgtt atataggaac cgtaaaaa 4978
<210> 16
<211> 938
<212> DNA
<213> 智人()
<400> 16
gttgactaag tcaataatca gaatcagcag gtttgcagtc agattggcag ggataagcag 60
cctagctcag gagaagtgag tataaaagcc ccaggctggg agcagccatc acagaagtcc 120
actcattctt ggcaggatgg cttctcatcg tctgctcctc ctctgccttg ctggactggt 180
atttgtgtct gaggctggcc ctacgggcac cggtgaatcc aagtgtcctc tgatggtcaa 240
agttctagat gctgtccgag gcagtcctgc catcaatgtg gccgtgcatg tgttcagaaa 300
ggctgctgat gacacctggg agccatttgc ctctgggaaa accagtgagt ctggagagct 360
gcatgggctc acaactgagg aggaatttgt agaagggata tacaaagtgg aaatagacac 420
caaatcttac tggaaggcac ttggcatctc cccattccat gagcatgcag aggtggtatt 480
cacagccaac gactccggcc cccgccgcta caccattgcc gccctgctga gcccctactc 540
ctattccacc acggctgtcg tcaccaatcc caaggaatga gggacttctc ctccagtgga 600
cctgaaggac gagggatggg atttcatgta accaagagta ttccattttt actaaagcag 660
tgttttcacc tcatatgcta tgttagaagt ccaggcagag acaataaaac attcctgtga 720
aaggcacttt tcattccact ttaacttgat tttttaaatt cccttattgt cccttccaaa 780
aaaaagagaa tcaaaatttt acaaagaatc aaaggaattc tagaaagtat ctgggcagaa 840
cgctaggaga gatccaaatt tccattgtct tgcaagcaaa gcacgtatta aatatgatct 900
gcagccatta aaaagacaca ttctgtaaaa aaaaaaaa 938
<210> 17
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列()
<220>

Claims (36)

1.一种制备化合物的方法，其包括以下步骤：
Figure FDA0003357312850000011
2.一种未缀合反义寡核苷酸，其由下式组成：
Tks mCksAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAds mCdsTdsTks mCk
其中大写字母指示每个核苷的核碱基并且mC指示5-甲基胞嘧啶；下标“k”指示6’-(S)-CH3双环核苷；下标“d”指示β-D-2’-脱氧核糖核苷；下标“s”指示硫代磷酸酯核苷间键联；其中剩余的核碱基为腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)和胸腺嘧啶(T)。
3.一种化合物，其具有式(XXXIX)：
Figure FDA0003357312850000012
其中：T2为低聚化合物；
其中所述低聚化合物为修饰寡核苷酸；
其中所述化合物具有包含与靶核酸的等长部分互补的至少16个核碱基部分的核碱基序列；
并且其中靶核酸编码选自以下的蛋白质：C-反应蛋白、eIF-4E和SRB-1。
4.如权利要求3所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸为缺口聚物，并且其中所述修饰寡核苷酸包含至少一种修饰核苷。
5.如权利要求4所述的化合物，其中所述至少一种修饰核苷包含修饰碱基。
6.如权利要求3所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸包含至少一个含有修饰的糖的核苷；其中所述包含修饰的糖的至少一个修饰核苷选自双环核苷和2’-修饰核苷。
7.如权利要求6所述的化合物，其中所述至少一个修饰核苷为双环核苷；其中所述双环核苷为(4’-CH2-O-2’)BNA核苷、(4’-(CH2)2-O-2’)BNA核苷或(4’-C(CH3)H2O-2’)BNA核苷。
8.如权利要求6所述的化合物，其中所述至少一个修饰核苷为2’-修饰核苷，其中所述至少一个2’-修饰核苷选自2’-F核苷、2’-OCH3核苷以及2’-O(CH2)2OCH3核苷。
9.如权利要求3-8中任一项所述的化合物，其中所述化合物与靶核酸100％互补。
10.如权利要求3-8中任一项所述的化合物，其中所述化合物包含SEQ ID NO.：33的核碱基序列。
11.如权利要求3-8中任一项所述的化合物，其中所述化合物包含SEQ ID NO.：34的核碱基序列。
12.一种缀合反义化合物，其包含修饰寡核苷酸和具有以下结构的缀合物：
Figure FDA0003357312850000021
其中所述修饰寡核苷酸与编码人因子XI蛋白的靶核酸的等长部分至少80％互补。
13.如权利要求12所述的化合物，其中所述靶核酸具有SEQ ID NO：9的核碱基序列。
14.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸与编码人因子XI蛋白的靶核酸的等长部分至少90％互补。
15.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸与编码人因子XI蛋白的靶核酸的等长部分至少95％或100％互补。
16.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸由10至30个连接核苷组成。
17.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸由15-30、18-24、19-22或20个连接核苷组成。
18.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸具有包含SEQ ID NO：44-48的任一个核碱基序列的至少12、至少13、至少14、至少15、至少16、至少17、至少18、至少19或至少20个连续核碱基的核碱基序列。
19.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸包含修饰核碱基、修饰糖部分和修饰核苷间键联中的至少一种。
20.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸包含选自以下的至少一个修饰核苷：2’-MOE核苷、2’-OMe核苷、2’-F核苷、(4’-CH2-O-2’)双环核苷、(4’-(CH2)2-O-2’)双环核苷、(4’-C(CH3)H-O-2’)双环核苷；和吗啉代。
21.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸具有包含以下的缺口聚物糖基序：
由2-8个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中至少两个5’-区核苷为修饰核苷，并且其中最3’的5’-区核苷为修饰核苷；
由2-8个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中至少两个3’-区核苷为修饰核苷，并且其中最5’的3’-区核苷为修饰核苷；以及
由5-10个连接的中心区核苷组成的在所述5’-区与所述3’-区之间的中心区，每个所述中心区核苷独立地选自以下：修饰核苷和未修饰的脱氧核苷，其中最5’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷并且最3’的中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
22.如权利要求21所述的化合物，其中每个5’-区核苷为修饰核苷；每个3’-区核苷为修饰核苷；并且每个中心区核苷为未修饰的脱氧核苷。
23.如权利要求21所述的化合物，其中所述5’-区由2-5个连接的5’-区核苷组成；所述3’-区由2-5个连接的3’-区核苷组成；所述中心区由8-10个中心区核苷组成。
24.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸具有包含以下的缺口聚物糖基序，其包含：
由5个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中每个5’-区核苷为2’-MOE核苷；
由10个连接的中心区核苷组成的中心区，其中每个中心区核苷包含2’-脱氧核苷糖部分；和
由5个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中每个3’-区核苷为2’-MOE核苷。
25.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸包含至少一个硫代磷酸酯核苷间键联。
26.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸包含至少一个磷酸二酯核苷间键联。
27.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸的每个核苷间键为硫代磷酸酯核苷间键联或磷酸二酯核苷间键联。
28.如权利要求12所述的化合物，其中所述缀合物连接至所述修饰寡核苷酸的5’-末端核苷。
29.如权利要求12所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸为单链的。
30.一种缀合反义化合物，其由修饰寡核苷酸和具有以下结构的缀合物组成：
Figure FDA0003357312850000051
其中所述修饰寡核苷酸由20个核碱基组成，
其中所述修饰寡核苷酸具有SEQ ID NO.：44的核碱基序列，
其中所述修饰寡核苷酸具有包含以下的缺口聚物糖基序：
由5个连接的5’-区核苷组成的5’-区，其中每个5’-区核苷为2’-MOE核苷；
由10个连接的中心区核苷组成的中心区，其中每个中心区核苷包含2’-脱氧核苷糖部分；以及
由5个连接的3’-区核苷组成的3’-区，其中每个3’-区核苷为2’-MOE核苷，
其中所述修饰寡核苷酸包含至少一个磷酸二酯核苷间键联和至少一个硫代磷酸酯核苷间键联，以及
其中每个胞嘧啶为5-甲基胞嘧啶。
31.如权利要求12或30所述的化合物，其中所述修饰寡核苷酸为钠盐。
32.一种组合物，其包含如权利要求12-31中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
33.如权利要求32所述的组合物，其中所述药学上可接受的载体或稀释剂为磷酸盐缓冲盐水。
34.如权利要求12至31中任一项所述的化合物或如权利要求32或权利要求33所述的组合物在制备药物中的用途。
35.如权利要求12至31中任一项所述的化合物或如权利要求32或权利要求33所述的组合物在制备用于治疗或预防血栓栓塞事件的药物中的用途。
36.一种治疗心血管病症的方法，其包括向有需要的受试者施用如权利要求12至31中任一项所述的化合物或如权利要求32或权利要求33所述的组合物。
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