JP6995478B2 - Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法 - Google Patents

Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法 Download PDF

Info

Publication number
JP6995478B2
JP6995478B2 JP2016512054A JP2016512054A JP6995478B2 JP 6995478 B2 JP6995478 B2 JP 6995478B2 JP 2016512054 A JP2016512054 A JP 2016512054A JP 2016512054 A JP2016512054 A JP 2016512054A JP 6995478 B2 JP6995478 B2 JP 6995478B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
certain embodiments
nucleoside
group
conjugated
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2016512054A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2016522683A5 (ja
JP2016522683A (ja
Inventor
プラカシュ,タジャ・ピー
セス,プニット・ピー
スウェイジ,エリック・イー
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ionis Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Ionis Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=51843959&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JP6995478(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ionis Pharmaceuticals Inc filed Critical Ionis Pharmaceuticals Inc
Publication of JP2016522683A publication Critical patent/JP2016522683A/ja
Publication of JP2016522683A5 publication Critical patent/JP2016522683A5/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP6995478B2 publication Critical patent/JP6995478B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00Drugs for disorders of the nervous system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y301/00Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/03Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
    • C12Y301/03048Protein-tyrosine-phosphatase (3.1.3.48)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10Type of nucleic acid
    • C12N2310/11Antisense
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10Type of nucleic acid
    • C12N2310/11Antisense
    • C12N2310/113Antisense targeting other non-coding nucleic acids, e.g. antagomirs
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10Type of nucleic acid
    • C12N2310/14Type of nucleic acid interfering N.A.
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10Type of nucleic acid
    • C12N2310/17Immunomodulatory nucleic acids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/31Chemical structure of the backbone
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/31Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315Phosphorothioates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/32Chemical structure of the sugar
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/32Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/3212'-O-R Modification
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/32Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/3222'-R Modification
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/32Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/33Chemical structure of the base
    • C12N2310/334Modified C
    • C12N2310/33415-Methylcytosine
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/34Spatial arrangement of the modifications
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/34Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/34Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/35Nature of the modification
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/35Nature of the modification
    • C12N2310/351Conjugate
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/35Nature of the modification
    • C12N2310/351Conjugate
    • C12N2310/3511Conjugate intercalating or cleaving agent
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/35Nature of the modification
    • C12N2310/351Conjugate
    • C12N2310/3513Protein; Peptide
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/35Nature of the modification
    • C12N2310/351Conjugate
    • C12N2310/3515Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/35Nature of the modification
    • C12N2310/352Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3525MOE, methoxyethoxy
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30Chemical structure
    • C12N2310/35Nature of the modification
    • C12N2310/353Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00Applications; Uses
    • C12N2320/30Special therapeutic applications
    • C12N2320/32Special delivery means, e.g. tissue-specific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Liquid Crystal Substances (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

配列表
本出願は、配列表とともに電子形式で出願されている。この配列表は、2014年5月1日に作成された16KbのサイズのBIOL0248WOSEQ_ST25.txtという名前のファイルとして提供される。この配列表の電子形式の情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
アンチセンス技術の背後にある原理は、アンチセンス化合物が標的核酸にハイブリダイズし、標的核酸の量、活性、および/または機能を調節することである。例えば、ある特定の事例において、アンチセンス化合物は、標的の転写または翻訳の変化をもたらす。発現のそのような調節は、例えば、標的mRNA分解または占有に基づく阻害によって達成され得る。分解によるRNA標的機能の調節の一例には、DNA様アンチセンス化合物とのハイブリダイゼーション時の標的RNAのRNase Hに基づく分解がある。標的分解による遺伝子発現の調節のもう1つの例には、RNA干渉(RNAi)がある。RNAiは、RNA誘導サイレンシング複合体(RISC)を利用する機構を介したアンチセンス媒介性遺伝子サイレンシングを指す。RNA標的機能の調節のさらなる例は、マイクロRNAによって自然に用いられる機構等の占有に基づく機構によるものである。マイクロRNAは、タンパク質コードRNAの発現を調整する小非コードRNAである。マイクロRNAへのアンチセンス化合物の結合は、そのマイクロRNAのそのメッセンジャーRNA標的への結合を防ぎ、それ故にマイクロRNAの機能を妨げる。マイクロRNA模倣物は、生来のマイクロRNA機能を高めることができる。ある特定のアンチセンス化合物は、プレmRNAのスプライシングを変化させる。特異的機構にかかわらず、配列特異性は、標的の検証および遺伝子の機能化の手段、ならびに疾患の発病に関与する遺伝子の発現を選択的に調節する治療薬としてアンチセンス化合物を魅力的なものにする。
アンチセンス技術は、1つ以上の特異的な遺伝子産物の発現を調節するのに効果的な手段であり、それ故に、多くの治療的用途、診断的用途、および研究用途に一意的に有用であることが判明し得る。化学修飾ヌクレオシドは、アンチセンス化合物に組み込まれ、標的核酸のヌクレアーゼ耐性、薬物動態、または親和性等の1つ以上の特性を強化することができる。1998年、アンチセンス化合物であるVitravene(登録商標)(ホミビルセン、Isis Pharmaceuticals Inc.(Carlsbad,CA)によって開発されたもの)が、アメリカ食品医薬品局(FDA)の販売許可を得た最初のアンチセンス薬物であり、現在、AIDS患者におけるサイトメガロウイルス(CMV)誘導性網膜炎の治療薬である。
新たな化学修飾は、アンチセンス化合物の強度および有効性を改善しており、経口送達の可能性を見出し、皮下投与を強化し、副作用の可能性を減少させ、患者の利便性の向上につながっている。アンチセンス化合物の強度を増加させる化学修飾は、低用量の投与を可能にし、毒性の可能性を減少させ、全体の治療費を削減する。分解に対する耐性を増加させる修飾は、体内からのより緩徐な排除をもたらし、投薬頻度の低下を可能にする。異なる種類の化学修飾を1個の化合物内で組み合わせて、化合物の有効性をさらに最適化することができる。
ある特定の実施形態において、本開示は、共役アンチセンス化合物を提供する。ある特定の実施形態において、本開示は、核酸転写物に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物を提供する。ある特定の実施形態において、本開示は、細胞を核酸転写物に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物と接触させることを含む方法を提供する。ある特定の実施形態において、本開示は、細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物と接触させることと、細胞内の核酸転写物の量または活性を低減させることと、を含む方法を提供する。
アシアロ糖タンパク質受容体(ASGP-R)が以前に説明されている。例えば、Park et al.,PNAS vol.102,No.47,pp17125-17129(2005)を参照されたい。そのような受容体は、肝臓細胞、具体的には、肝細胞上で発現する。さらに、3個のN-アセチルガラクトサミン(GalNAc)リガンドのクラスターを含む化合物はASGP-Rに結合することができ、細胞内への化合物の取り込みをもたらすことが示されている。例えば、Khorev et al.,Bioorganic and Medicinal Chemistry,16,9,pp5216-5231(May 2008)を参照されたい。したがって、そのようなGalNAcクラスターを含む共役体を用いて、肝臓細胞、具体的には、肝細胞へのある特定の化合物の取り込みを促進している。例えば、ある特定のGalNAc含有共役体が生体内で肝臓細胞における二本鎖siRNA化合物の活性を増加させることが示されている。そのような事例において、GalNAc含有共役体は、典型的には、siRNA二本鎖のセンス鎖に結合される。アンチセンス鎖が最終的に標的核酸とハイブリダイズする前にセンス鎖が処分されるため、共役体が活性を妨げるといった懸念はほとんどない。典型的には、共役体は、siRNAのセンス鎖の3’末端に結合される。例えば、米国特許第8,106,022号を参照されたい。本明細書に記載されるある特定の共役基は、以前に説明された共役基よりも活性であり、かつ/または合成し易い。
本発明のある特定の実施形態において、共役体は、プレmRNA標的核酸のスプライシングを変化させるRNase Hベースのアンチセンス化合物およびアンチセンス化合物を含むが、これらに限定されない一本鎖アンチセンス化合物に結合される。そのような実施形態において、共役体は、利益(細胞内への取り込みの改善)を提供するのに十分な期間、アンチセンス化合物に結合したままであるべきであるが、切断されるか、またはさもなければスプライシングまたはスプライシング調節に関連した標的核酸へのハイブリダイゼーションおよびRNase Hまたは酵素との相互作用等の活性に必要なその後のステップを妨げないか、のいずれかであるべきである。このような特性のバランスは、siRNA化合物よりも一本鎖アンチセンス化合物状況下においてより重要であり、共役体は、単にセンス鎖に結合され得る。共役体を欠く同一のアンチセンス化合物と比較して、生体内で肝臓細胞の強度が向上している共役体一本鎖アンチセンス化合物が本明細書に開示される。これらの化合物の要求される特性バランスを考慮すると、そのような強度の向上は、驚くべきことである。
ある特定の実施形態において、本明細書における共役基は、切断可能な部分を含む。上述のように、機構によって束縛されることを望むことなく、共役体が、取り込みの強化を提供するのに十分長い期間、化合物に残存したままであるべきだが、その後、共役体の一部、または理想的には、共役体のすべてが切断されて、親化合物(例えば、アンチセンス化合物)をその最も活性な形態で放出することが望ましいことは論理的である。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、切断可能なヌクレオシドである。そのような実施形態は、ホスホジエステル結合等の1個以上の切断可能な結合によってヌクレオシドを介して共役体の残り(クラスター)をアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合させることによって、細胞内の内因性ヌクレアーゼをうまく利用する。ある特定の実施形態において、クラスターは、ホスホジエステル結合によって切断可能なヌクレオシドに結合される。ある特定の実施形態において、切断可能なヌクレオシドは、ホスホジエステル結合によってアンチセンスオリゴヌクレオチド(アンチセンス化合物)に結合される。ある特定の実施形態において、共役基は、2個または3個の切断可能なヌクレオシドを含み得る。そのような実施形態において、そのような切断可能なヌクレオシドは、切断可能な結合(ホスホジエステル結合等)によって、互いに、アンチセンス化合物に、かつ/またはクラスターに連結される。本明細書におけるある特定の共役体は、切断可能なヌクレオシドを含まず、代わりに切断可能な結合を含む。オリゴヌクレオチドからの共役体の十分な切断が、細胞における切断に対して脆弱な少なくとも1個の結合(切断可能な結合)によって提供されることが示される。
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、プロドラッグである。そのようなプロドラッグは、動物に投与され、最終的により活性な形態に代謝される。例えば、共役アンチセンス化合物は、切断されて、共役体のすべてまたは一部を除去し、共役体のすべてまたは一部を欠くアンチセンス化合物の活性(またはより活性な)形態をもたらす。
ある特定の実施形態において、共役体は、オリゴヌクレオチドの5’末端に結合される。ある特定のそのような5’共役体は、3’末端に結合される同様の共役基を有する対応物よりも効率的に切断される。ある特定の実施形態において、活性の改善は、切断の改善と相関し得る。ある特定の実施形態において、5’末端に共役体を含むオリゴヌクレオチドの有効性は、3’末端に共役体を含むオリゴヌクレオチドよりも高い(例えば、実施例56、81、83、および84を参照のこと)。さらに、5’結合は、より単純なオリゴヌクレオチド合成を可能にする。典型的には、オリゴヌクレオチドは、3’から5’の方向に固体支持体上で合成される。3’共役オリゴヌクレオチドを作製するために、典型的には、プレ共役3’ヌクレオシドを固体支持体に結合させ、その後、オリゴヌクレオチドを通常通りに構築する。しかしながら、その共役ヌクレオシドを固体支持体に結合させることは、合成を複雑にする。さらに、この手段を用いることにより、共役体は、次いでオリゴヌクレオチドの合成を通じて存在し、その後のステップ中で分解された状態になり得るか、または使用され得る反応物および試薬の種類を限定し得る。本明細書に記載される5’共役オリゴヌクレオチドの構造および技術を用いることにより、標準の自動化技術を用いてオリゴヌクレオチドを合成して、最終(最も5’側の)ヌクレオシドとの共役体を導入することができるか、またはオリゴヌクレオチドが固体支持体から切断された後にオリゴヌクレオチドを合成することができる。
当技術分野および本開示を考慮して、当業者であれば、本明細書の共役体および共役オリゴヌクレオチドのうちのいずれかを容易に作製することができる。さらに、本明細書に開示されるある特定のそのような共役体および共役オリゴヌクレオチドの合成は、以前に開示された共役体の合成よりも容易であり、かつ/またはわずかなステップしか必要とせず、それ故に安価であり、製造において利点を提供する。例えば、ある特定の共役基の合成は、以前に説明された共役基と比較して、より少ない合成ステップからなり、収率の増加をもたらす。実施例46のGalNAc3-10および実施例48のGalNAc3-7等の共役基は、より多くの化学中間体の構築を必要とする米国特許第8,106,022号または米国特許第7,262,177号に記載される共役体等の以前に説明された共役体よりもはるかに単純である。したがって、本明細書に記載されるこれらおよび他の共役体は、一本鎖オリゴヌクレオチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド(例えば、siRNA)のいずれかの鎖を含む任意のオリゴヌクレオチドと併せて用いる際に、以前に説明された化合物よりも有利である。
同様に、GalNAcリガンドを1つまたは2つしか有しない共役基が本明細書に開示される。示されるように、そのような共役基は、アンチセンス化合物の活性を改善する。そのような化合物は、3個のGalNAcリガンドを含む共役体よりも調製が簡単である。1つまたは2個のGalNAcリガンドを含む共役基は、一本鎖オリゴヌクレオチドおよび二本鎖オリゴヌクレオチド(例えば、siRNA)のいずれかの鎖を含む任意のアンチセンス化合物に結合され得る。
ある特定の実施形態において、本明細書における共役体は、ある程度の耐容性を実質的に変化させない。例えば、共役アンチセンス化合物の免疫原性が非共役親化合物の免疫原性よりも低いことが本明細書に示される。強度が改善されるため、耐容性が同一のままである(または強度の増加と比較して耐容性がほんのわずか低下した場合でさえも同一のままである)実施形態は、改善された治療特性を有する。
ある特定の実施形態において、共役は、共役の不在下においてあまり魅力的ではない結果を有する方法でアンチセンス化合物を変化させることを可能にする。例えば、ある特定の実施形態において、完全なホスホロチオエートアンチセンス化合物の1個以上のホスホロチオエート結合をホスホジエステル結合に置換することで、ある程度の耐容性の改善をもたらす。例えば、ある特定の事例において、1個以上のホスホジエステルを有するそのようなアンチセンス化合物の免疫原性は、各結合がホスホロチオエート結合である同一の化合物の免疫原性よりも低い。しかしながら、ある特定の事例において、実施例26に示されるように、1個以上のホスホロチオエート結合のホスホジエステル結合への同様な置換は、細胞取り込みの低下および/または強度の損失もまたもたらす。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される共役アンチセンス化合物は、完全なホスホロチオエート共役対応物と比較して、取り込みおよび強度をほとんどまたはまったく失うことなくそのような結合の変化に耐える。実際、ある特定の実施形態において、例えば、実施例44、57、59、および86において、共役体および少なくとも1個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドは、同様に同一の共役体を含む完全なホスホロチオエート対応物と比較した場合でも、生体内における強度の増加を実際に示す。さらに、共役が取り込み/強度の実質的な増加をもたらすため、その実質的な増加のわずかな損失は、耐容性の改善を達成するには許容範囲内であり得る。したがって、ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、少なくとも1個のホスホジエステル結合を含む。
ある特定の実施形態において、本明細書におけるアンチセンス化合物の共役は、肝細胞における送達、取り込み、および活性の増大をもたらす。したがって、より多くの化合物が肝臓組織に送達される。しかしながら、ある特定の実施形態において、そのような送達の増大だけでは、全体の活性増大を明白にしない。ある特定のそのような実施形態において、より多くの化合物が肝細胞に入る。ある特定の実施形態において、そのような肝細胞取り込みの増大でさえも、全体の活性増大を明白にしない。そのような実施形態において、共役化合物の生産的な取り込みが増大する。例えば、実施例102に示されるように、GalNAc含有共役体のある特定の実施形態は、非実質細胞と比較して、肝細胞におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃縮を増大させる。この濃縮は、肝細胞において発現される遺伝子を標的とするオリゴヌクレオチドに有益である。
ある特定の実施形態において、本明細書における共役アンチセンス化合物は、腎臓曝露の低下をもたらす。例えば、実施例20に示されるように、GalNAc含有共役体のある特定の実施形態を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、腎臓において、GalNAc含有共役体を欠くアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度よりも低い。これは、いくつかの有益な治療的意味を有する。腎臓における活性が要求されない治療的指標において、腎臓への曝露は、腎毒性の危険性を有し、それに見合う利益がない。さらに、腎臓における高濃度は、典型的には、尿への化合物の損失をもたらし、より迅速なクリアランスをもたらす。したがって、非腎臓標的の場合、腎臓内での蓄積は望ましくない。
ある特定の実施形態において、本開示は、以下の式によって表される共役アンチセンス化合物を提供し、
Figure 0006995478000001
式中、
Aは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Bは、切断可能な部分であり、
Cは、共役リンカーであり、
Dは、分岐基であり、
各Eは、テザーであり、
各Fは、リガンドであり、
qは、1~5の整数である。
本明細書における上述の図および同様の図において、分岐基「D」は、「q」で示される(E~F)基の数を収容するのに必要なだけ分岐を繰り返す。したがって、q=1の場合、式は、以下のものであり、
Figure 0006995478000002
q=2の場合、式は、以下のものであり、
Figure 0006995478000003
q=3の場合、式は、以下のものであり、
Figure 0006995478000004
q=4の場合、式は、以下のものであり、
Figure 0006995478000005
q=5の場合、式は、以下のものである。
Figure 0006995478000006
ある特定の実施形態において、以下の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
Figure 0006995478000007
ある特定の実施形態において、以下の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
Figure 0006995478000008
ある特定の実施形態において、以下の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
Figure 0006995478000009
ある特定の実施形態において、以下の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
Figure 0006995478000010
特定の変数のうちの2つ以上(例えば、2つ以上の「m」または「n」)を有する実施形態において、別途示されない限り、各々のそのような特定の変数は、独立して選択される。したがって、2つ以上のnを有する構造の場合、各nは、独立して選択さるため、互いに同一であり得るか、同一であり得ない。
前記一般的な説明および以下の詳細な説明は両方とも例示的かつ説明的であるのみであって、本開示を限定するものではないことを理解されたい。本明細書において、単数形の使用は、別途明確に記述されない限り、複数形を含む。本明細書で使用されるとき、「または(or)」の使用は、別途記述されない限り、「および/または(and/or)」を意味する。さらに、「~を含む(including)」という用語、ならびに「~を含む(includes)」および「含まれる(included)」等の他の形態の使用は、限定的ではない。また、「要素」または「成分」等の用語は、別途明確に記述されない限り、1つのユニットを含む複数の要素および複数の成分と2つ以上のサブユニットを含む複数の要素および複数の成分の両方を包含する。
本明細書で使用される節の見出しは、構成目的のみのためであり、記載される主題を限定するものと解釈されるべきではない。特許、特許出願、記事、書籍、および論文を含むが、これらに限定されない本出願において引用されるすべての文書または文書の一部は、参照によりそれらの全体があらゆる目的のために本明細書に明確に組み込まれる。
A. 定義
特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医化学および製薬化学に関連して用いられる学名、ならびにそれらの手順および技法は、周知であり、当技術分野で一般に使用されるものである。標準の技法は、化学合成および化学分析において使用され得る。ある特定のそのような技法および手順は、例えば、“Carbohydrate Modifications in Antisense Research”Edited by Sangvi and Cook,American Chemical Society,Washington D.C.,1994、“Remington’s Pharmaceutical Sciences,”Mack Publishing Co.,Easton,Pa.,21st edition,2005、および“Antisense Drug Technology,Principles,Strategies,and Applications”Edited by Stanley T.Crooke,CRC Press,Boca Raton,Florida、ならびにSambrook et al.,“Molecular Cloning, A laboratory Manual,”2nd Edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989において見出すことができ、これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。許容される場合、本開示を通して参照されるすべての特許、出願、公開された出願、および他の出版物、ならびに他のデータは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
別途示されない限り、以下の用語は、以下の意味を有する。
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオシド」とは、核酸塩基部分および糖部分を含む化合物を意味する。ヌクレオシドには、天然に存在するヌクレオシド(DNAおよびRNAに見られるもの)ならびに修飾ヌクレオシドが含まれるが、これらに限定されない。ヌクレオシドは、ホスフェート部分に連結され得る。
本明細書で使用されるとき、「化学修飾」とは、天然に存在する対応物と比較した場合の化合物の化学的相違を意味する。オリゴヌクレオチド化学修飾は、ヌクレオシド修飾(糖部分修飾および核酸塩基修飾を含む)ならびにヌクレオシド間結合修飾を含む。オリゴヌクレオチドに関して、化学修飾は、核酸塩基配列においてのみ相違を含まない。
本明細書で使用されるとき、「フラノシル」とは、4個の炭素原子と1個の酸素原子とを含む5員環を含む構造を意味する。
本明細書で使用されるとき、「天然に存在する糖部分」とは、天然に存在するRNAに見られるリボフラノシルまたは天然に存在するDNAに見られるデオキシリボフラノシルを意味する。
本明細書で使用されるとき、「糖部分」とは、ヌクレオシドの天然に存在する糖部分または修飾糖部分を意味する。
本明細書で使用されるとき、「修飾糖部分」とは、置換糖部分または糖代理物を意味する。
本明細書で使用されるとき、「置換糖部分」とは、天然に存在する糖部分ではないフラノシルを意味する。置換糖部分には、2’位、3’位、5’位、および/または4’位に置換基を含むフラノシルが含まれるが、これらに限定されない。ある特定の置換糖部分は、二環式糖部分である。
本明細書で使用されるとき、「2’-置換糖部分」とは、HまたはOH以外の2’位に置換基を含むフラノシルを意味する。別途示されない限り、2’-置換糖部分は、二環式糖部分ではない(すなわち、2’-置換糖部分の2’-置換基は、フラノシル環の別の原子への橋を形成しない)。
本明細書で使用されるとき、「MOE」とは、-OCHCHOCHを意味する。
本明細書で使用されるとき、「2’-Fヌクレオシド」は、2’位にフッ素を含む糖を含むヌクレオシドを指す。別途示されない限り、2’-Fヌクレオシドにおけるフッ素は、(天然リボースのOHを置換する)リボ位に存在する。
本明細書で使用されるとき、「糖代理物」という用語は、結果として生じるヌクレオシドサブユニットが一緒に結合し、かつ/または他のヌクレオシドに結合して、相補的なオリゴマー化合物にハイブリダイズすることができるオリゴマー化合物を形成することができるように、フラノシルを含まず、かつヌクレオシドの天然に存在する糖部分を置換することができる構造を意味する。そのような構造は、フラノシル(例えば、4、6、もしくは7員環)とは異なる数の原子、フラノシルの酸素の非酸素原子(例えば、炭素、硫黄、もしくは窒素)への置換、または原子の数の変化および酸素の置換の両方を含む環を含む。そのような構造はまた、置換糖部分(例えば、さらなる置換基を任意に含む6員炭素環式二環式糖代理物)について記載された置換に対応する置換も含み得る。糖代理物はまた、より複雑な糖置換物(例えば、ペプチド核酸の非環系)も含む。糖代理物には、モルフォリノ、シクロヘキセニル、およびシクロヘキシトールが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用されるとき、「二環式糖部分」とは、4~7員環の2個の原子をつないで第2の環を形成して、二環式構造をもたらす橋を含む4~7員環(フラノシルを含むが、これに限定されない)を含む修飾糖部分を意味する。ある特定の実施形態において、4~7員環は、糖環である。ある特定の実施形態において、4~7員環は、フラノシルである。ある特定のそのような実施形態において、橋は、フラノシルの2’-炭素と4’-炭素とをつなぐ。
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオチド」とは、ホスフェート結合基をさらに含むヌクレオシドを意味する。本明細書で使用されるとき、「連結したヌクレオシド」は、ホスフェート結合によって連結されてもされなくてもよく、それ故に、「連結したヌクレオチド」を含むが、これに限定されない。本明細書で使用されるとき、「連結したヌクレオシド」は、連続した配列において連結されるヌクレオシドである(すなわち、さらなるヌクレオシドは、連結される配列間に存在しない)。
本明細書で使用されるとき、「核酸塩基」とは、糖部分に連結されてオリゴヌクレオチドに組み込むことができるヌクレオシドを作成することができる原子団を意味し、この原子団は、別のオリゴヌクレオチドまたは核酸の相補的な天然に存在する核酸塩基と結合することができる。核酸塩基は、天然に存在し得るか、または修飾され得る。
本明細書で使用されるとき、「非修飾核酸塩基」または「天然に存在する核酸塩基」という用語は、RNAまたはDNAの天然に存在する複素環式核酸塩基を意味し、プリンは、アデニン(A)およびグアニン(G)をベースとし、ピリミジンは、チミン(T)、シトシン(C)(5-メチルCを含む)、およびウラシル(U)をベースとする。
本明細書で使用されるとき、「修飾核酸塩基」とは、天然に存在する核酸塩基ではない任意の核酸塩基を意味する。
本明細書で使用されるとき、「修飾ヌクレオシド」とは、天然に存在するRNAまたはDNAヌクレオシドと比較して、少なくとも1つの化学修飾を含むヌクレオシドを意味する。修飾ヌクレオシドは、修飾糖部分および/または修飾核酸塩基を含む。
本明細書で使用されるとき、「二環式ヌクレオシド」または「BNA」とは、二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
本明細書で使用されるとき、「拘束エチルヌクレオシド」または「cEt」とは、4’-CH(CH)-O-2’橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
本明細書で使用されるとき、「ロックド酸ヌクレオシド」または「LNA」とは、4’-CH-O-2’橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
本明細書で使用されるとき、「2’-置換ヌクレオシド」とは、HまたはOH以外の2’位に置換基を含むヌクレオシドを意味する。別途示されない限り、2’-置換ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドではない。
本明細書で使用されるとき、「デオキシヌクレオシド」とは、天然に存在するデオキシリボヌクレオシド(DNA)に見られる2’-Hフラノシル糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ある特定の実施形態において、2’-デオキシヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含み得るか、またはRNA核酸塩基(例えば、ウラシル)を含み得る。
本明細書で使用されるとき、「オリゴヌクレオチド」とは、複数個の連結したヌクレオシドを含む化合物を意味する。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、1個以上の非修飾リボヌクレオシド(RNA)および/または非修飾デオキシリボヌクレオシド(DNA)および/または1個以上の修飾ヌクレオシドを含む。
本明細書で使用されるとき、「オリゴヌクレオシド」とは、ヌクレオシド間結合のうちのいずれもリン原子を含有しないオリゴヌクレオチドを意味する。本明細書で使用されるとき、オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオシドを含む。
本明細書で使用されるとき、「修飾オリゴヌクレオチド」とは、少なくとも1個の修飾ヌクレオシドおよび/または少なくとも1個の修飾ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを意味する。
本明細書で使用されるとき、「結合」または「結合基」とは、2個以上の他の原子団を一緒に結合する原子団を意味する。
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオシド間結合」とは、オリゴヌクレオチド中の隣接したヌクレオシド間の共有結合を意味する。
本明細書で使用されるとき、「天然に存在するヌクレオシド間結合」とは、3’から5’へのホスホジエステル結合を意味する。
本明細書で使用されるとき、「修飾ヌクレオシド間結合」とは、天然に存在するヌクレオシド間結合以外の任意のヌクレオシド間結合を意味する。
本明細書で使用されるとき、「末端ヌクレオシド間結合」とは、オリゴヌクレオチドまたはその定義された領域の最後の2個のヌクレオシド間の結合を意味する。
本明細書で使用されるとき、「リン結合基」とは、リン原子を含む結合基を意味する。リン結合基には、以下の式を有する基が含まれるが、これに限定されず、
Figure 0006995478000011
式中、
およびRは各々、独立して、O、S、CH、NH、またはNJであり、Jは、C~Cアルキルまたは置換C~Cアルキルであり、
は、OまたはSであり、
は、OH、SH、C~Cアルキル、置換C~Cアルキル、C~Cアルコキシ、置換C~Cアルコキシ、アミノ、または置換アミノであり、
は、Rは、OまたはSである。
リン結合基には、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、ホスホラミデート、ホスホロチオアミデート、チオノアルキルホスホネート、ホスホトリエステル、チオノアルキルホスホトリエステル、およびボラノホスフェートが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオシド間リン結合基」とは、2個のヌクレオシドを直接結合するリン結合基を意味する。
本明細書で使用されるとき、「非ヌクレオシド間リン結合基」とは、2個のヌクレオシドを直接結合しないリン結合基を意味する。ある特定の実施形態において、非ヌクレオシド間リン結合基は、ヌクレオシドをヌクレオシド以外の基に結合させる。ある特定の実施形態において、非ヌクレオシド間リン結合基は、2個の基を結合するが、これらはいずれもヌクレオシドではない。
本明細書で使用されるとき、「中性結合基」とは、荷電されていない結合基を意味する。中性結合基には、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、MMI(-CH-N(CH)-O-)、アミド-3(-CH-C(=O)-N(H)-)、アミド-4(-CH-N(H)-C(=O)-)、ホルムアセタール(-O-CH-O-)、およびチオホルムアセタール(-S-CH-O-)が含まれるが、これらに限定されない。さらに、中性結合基には、シロキサン(ジアルキルシロキサン)、カルボン酸エステル、カルボキサミド、硫化物、スルホン酸エステル、およびアミドを含む非イオン性結合が含まれる(例えば、Carbohydrate Modifications in Antisense Research;Y.S.Sanghvi and P.D.Cook Eds.ACS Symposium Series 580;Chapters 3 and 4(pp.40-65)を参照されたい)。さらに、中性結合基は、混合されたN、O、S、およびCH成分部分を含む非イオン性結合を含む。
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオシド間中性結合基」とは、2個のヌクレオシドを直接結合する中性結合基を意味する。
本明細書で使用されるとき、「非ヌクレオシド間中性結合基」とは、2個のヌクレオシドを直接結合しない中性結合基を意味する。ある特定の実施形態において、非ヌクレオシド間中性結合基は、ヌクレオシドをヌクレオシド以外の基に結合させる。ある特定の実施形態において、非ヌクレオシド間中性結合基は、2個の基を結合するが、これらはいずれもヌクレオシドではない。
本明細書で使用されるとき、「オリゴマー化合物」とは、2つ以上の下部構造を含む重合体構造を意味する。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、1個以上の共役基および/または末端基を含む。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドからなる。オリゴマー化合物はまた、天然に存在する核酸も含む。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、1個以上の連結した単量体サブユニットの骨格を含み、各連結した単量体サブユニットは、複素環式塩基部分に直接的または間接的に結合される。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物はまた、複素環式塩基部分に連結されない単量体サブユニットも含み得、それにより脱塩基部位を提供し得る。ある特定の実施形態において、単量体サブユニット、糖部分または代理物、および複素環式塩基部分を結び付ける結合は、独立して修飾され得る。ある特定の実施形態において、複素環式塩基を含み得るか、または含み得ない結合糖単位は、ペプチド核酸における単量体等の模倣物と置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「末端基」とは、オリゴヌクレオチドの3’末端もしくは5’末端のいずれか、またはこれら両方に結合される1個以上の原子を意味する。ある特定の実施形態において、末端基は、共役基である。ある特定の実施形態において、末端基は、1個以上の末端基ヌクレオシドを含む。
本明細書で使用されるとき、「共役体」または「共役基」とは、オリゴヌクレオチドまたはオリゴマー化合物に結合される原子または原子団を意味する。概して、共役基は、薬力学的特性、薬物動態学的特性、結合特性、吸収特性、細胞分布特性、細胞取り込み特性、電荷特性、および/またはクリアランス特性を含むが、これらに限定されない、それらが結合する化合物の1つ以上の特性を修飾する。
本明細書で使用されるとき、共役基との関連での「共役リンカー」または「リンカー」とは、任意の原子または原子団を含む共役基の一部を意味し、(1)オリゴヌクレオチドを共役基の別の部分と共有結合させるか、または(2)共役基の2個以上の部分を共有結合させる。
共役基は、本明細書においてラジカルとして示され、アンチセンスオリゴヌクレオチド等のオリゴマー化合物への共有結合を形成するための結合を提供する。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物における結合点は、オリゴマー化合物の3’末端ヌクレオシドの3’-ヒドロキシル基の3’-酸素原子である。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物における結合点は、オリゴマー化合物の5’末端ヌクレオシドの5’-ヒドロキシル基の5’-酸素原子である。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物への結合を形成するための結合は、切断可能な結合である。ある特定のそのような実施形態において、そのような切断可能な結合は、切断可能な部分のすべてまたは一部を構成する。
ある特定の実施形態において、共役基は、切断可能な部分(例えば、切断可能な結合または切断可能なヌクレオシド)およびGalNAcクラスター部分等の炭水化物クラスター部分を含む。そのような炭水化物クラスター部分は、標的部分と、任意に、共役リンカーを含む。ある特定の実施形態において、炭水化物クラスター部分は、リガンドの数および同一性によって特定される。例えば、ある特定の実施形態において、炭水化物クラスター部分は、3個のGalNAc基を含み、「GalNAc」と表記される。ある特定の実施形態において、炭水化物クラスター部分は、4個のGalNAc基を含み、「GalNAc」と表記される。特定の炭水化物クラスター部分(特異的テザー、分岐、および共役リンカー基を有する)は、本明細書に記載され、ローマ数字、続いて下付き文字「a」で表記される。したがって、「GalNac3-1」は、3個のGalNac基、ならびに特異的に特定されたテザー、分岐、および結合基を有する共役基の特定の炭水化物クラスター部分を指す。そのような炭水化物クラスター断片は、切断可能な結合または切断可能なヌクレオシド等の切断可能な部分を介してオリゴマー化合物に結合される。
本明細書で使用されるとき、「切断可能な部分」とは、生理学的条件下で分割され得る結合または基を意味する。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、リソソーム等の細胞または細胞内コンパートメント内で切断される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ヌクレアーゼ等の内因性酵素によって切断される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、1個、2個、3個、4個、または4個以上の切断可能な結合を有する原子団を含む。
本明細書で使用されるとき、「切断可能な結合」とは、分割され得る任意の化学結合を意味する。ある特定の実施形態において、切断可能な結合は、アミド、ポリアミド、エステル、エーテル、ホスホジエステルの一方もしくは両方のエステル、リン酸エステル、カルバメート、ジスルフィド、またはペプチドの中から選択される。
本明細書で使用されるとき、「炭水化物クラスター」とは、足場またはリンカー基に結合される1個以上の炭水化物残基を有する化合物を意味する(例えば、炭水化物共役クラスターの例として、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Maier et al.,“Synthesis of Antisense Oligonucleotides Conjugated to a Multivalent Carbohydrate Cluster for Cellular Targeting,”Bioconjugate Chemistry,2003,(14):18-29、またはRensen et al.,“Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor,”J.Med.Chem.2004,(47):5798-5808を参照のこと)。
本明細書で使用されるとき、「炭水化物誘導体」とは、出発物質または中間体として炭水化物を用いて合成され得る任意の化合物を意味する。
本明細書で使用されるとき、「炭水化物」とは、天然に存在する炭水化物、修飾炭水化物、または炭水化物誘導体を意味する。
本明細書で使用されるとき、「保護基」とは、当業者に既知の任意の化合物または保護基を意味する。保護基の非限定的な例は、“Protective Groups in Organic Chemistry”,T.W.Greene,P.G.M.Wuts,ISBN 0-471-62301-6,John Wiley & Sons,Inc,New Yorkにおいて見出され得、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用されるとき、「一本鎖」とは、その相補体にハイブリダイズされず、かつ安定した自己二本鎖を形成するのに十分な自己相補性を欠くオリゴマー化合物を意味する。
本明細書で使用されるとき、「二本鎖」とは、互いにハイブリダイズされるオリゴマー化合物の対またはヘアピン構造を形成する単一の自己相補的なオリゴマー化合物を意味する。ある特定の実施形態において、二本鎖オリゴマー化合物は、第1および第2のオリゴマー化合物を含む。
本明細書で使用されるとき、「アンチセンス化合物」とは、オリゴヌクレオチドを含むか、またはそれからなる化合物を意味し、その少なくとも一部は、それがハイブリダイズすることができる標的核酸に相補的であり、少なくとも1つのアンチセンス活性をもたらす。
本明細書で使用されるとき、「アンチセンス活性」とは、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリダイゼーションに起因する任意の検出可能および/または測定可能な変化を意味する。ある特定の実施形態において、アンチセンス活性は、標的核酸転写物(例えば、mRNA)の量または活性の調節を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス活性は、プレmRNAのスプライシングの調節を含む。
本明細書で使用されるとき、「RNase Hベースのアンチセンス化合物」とは、アンチセンス化合物のアンチセンス活性の少なくとも一部が、アンチセンス化合物の標的核酸へのハイブリダイゼーションおよびその後のRNase Hによる標的核酸の切断に起因するアンチセンス化合物を意味する。
本明細書で使用されるとき、「RISCベースのアンチセンス化合物」とは、アンチセンス化合物のアンチセンス活性の少なくとも一部が、RNA誘導サイレンシング複合体(RISC)に起因するアンチセンス化合物を意味する。
本明細書で使用されるとき、「検出」または「測定」とは、検出または測定のための試験またはアッセイが実行されることを意味する。そのような検出および/または測定は、ゼロの値をもたらし得る。したがって、検出または測定のための試験が活性なし(ゼロの活性)の知見をもたらす場合、活性を検出または測定するステップは、それでもやはり実行されている。
本明細書で使用されるとき、「検出可能および/または測定可能な活性」とは、ゼロではない統計的に有意な活性を意味する。
本明細書で使用されるとき、「本質的に不変」とは、はるかに変化する別のパラメータと特に比較して、特定のパラメータに変化がほとんどまたは全くないことを意味する。ある特定の実施形態において、あるパラメータが5%未満変化するとき、そのパラメータは、本質的に不変である。ある特定の実施形態において、あるパラメータが2倍未満変化する場合、そのパラメータは、本質的に不変である一方で、別のパラメータは、少なくとも10倍変化する。例えば、ある特定の実施形態において、アンチセンス活性は、標的核酸の量の変化である。ある特定のそのような実施形態において、非標的核酸の量の変化が標的核酸の量の変化よりもはるかに小さい場合、それは本質的に不変であるが、変化がゼロである必要はない。
本明細書で使用されるとき、「発現」とは、遺伝子が最終的にタンパク質をもたらす工程を意味する。発現には、転写、転写後修飾(例えば、スプライシング、ポリアデニル化、5’-キャップの付加)、および翻訳が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用されるとき、「標的核酸」とは、アンチセンス化合物がハイブリダイズして所望のアンチセンス活性をもたらすよう意図される核酸分子を意味する。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、生理学的条件下でハイブリダイゼーションを可能にするのに十分なそれらの標的核酸に対する相補性を有する。
本明細書で使用されるとき、核酸塩基に関して「核酸塩基相補性」または「相補性」とは、別の核酸塩基と塩基対合することができる核酸塩基を意味する。例えば、DNAにおいて、アデニン(A)は、チミン(T)に相補的である。例えば、RNAにおいて、アデニン(A)は、ウラシル(U)に相補的である。ある特定の実施形態において、相補的核酸塩基とは、その標的核酸の核酸塩基と塩基対合することができるアンチセンス化合物の核酸塩基を意味する。例えば、アンチセンス化合物のある特定の位置の核酸塩基が、標的核酸のある特定の位置の核酸塩基と水素結合することができる場合、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間の水素結合の位置は、その核酸塩基対において相補的であると見なされる。ある特定の修飾を含む核酸塩基は、対応する核酸塩基と対合する能力を維持し得、それ故に、依然として核酸塩基相補性を有することができる。
本明細書で使用されるとき、核酸塩基に関して「非相補的な」とは、互いに水素結合を形成しない核酸塩基の対を意味する。
本明細書で使用されるとき、オリゴマー化合物(例えば、連結したヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、または核酸)に関して「相補的な」とは、そのようなオリゴマー化合物またはそれらの領域が核酸塩基相補性を介して別のオリゴマー化合物またはそれらの領域にハイブリダイズする能力を意味する。相補的なオリゴマー化合物は、各ヌクレオシドで核酸塩基相補性を有する必要はない。むしろ、いくつかのミスマッチが許容される。ある特定の実施形態において、相補的なオリゴマー化合物または領域は、核酸塩基の70%で相補的である(70%相補的である)。ある特定の実施形態において、相補的なオリゴマー化合物または領域は、80%相補的である。ある特定の実施形態において、相補的なオリゴマー化合物または領域は、90%相補的である。ある特定の実施形態において、相補的なオリゴマー化合物または領域は、95%相補的である。ある特定の実施形態において、相補的なオリゴマー化合物または領域は、100%相補的である。
本明細書で使用されるとき、「ミスマッチ」とは、第1および第2のオリゴマー化合物が整列するときに、第2のオリゴマー化合物の対応する位置で核酸塩基と対合することができない第1のオリゴマー化合物の核酸塩基を意味する。第1および第2のオリゴマー化合物のいずれかまたは両方ともにオリゴヌクレオチドであり得る。
本明細書で使用されるとき、「ハイブリダイゼーション」とは、相補的なオリゴマー化合物(例えば、アンチセンス化合物およびその標的核酸)の対合を意味する。特定の機構に限定されないが、最も一般的な対合機構には水素結合が含まれ、これは、相補的核酸塩基間のワトソン・クリック水素結合、フーグスティーン水素結合、または逆フーグスティーン水素結合であり得る。
本明細書で使用されるとき、「特異的にハイブリダイズする」とは、オリゴマー化合物が、ある核酸部位にハイブリダイズするよりも高い親和性で別の核酸部位にハイブリダイズする能力を意味する。
本明細書で使用されるとき、オリゴヌクレオチドまたはその部分に関して「完全に相補的な」とは、オリゴヌクレオチドまたはその部分の各核酸塩基が、相補的な核酸またはその連続した部分の核酸塩基と対合することができることを意味する。したがって、完全に相補的な領域は、いずれの鎖でもミスマッチまたは非ハイブリダイズ核酸塩基を含まない。
本明細書で使用されるとき、「パーセント相補性」とは、標的核酸の等長部分に相補的なオリゴマー化合物の核酸塩基の割合を意味する。パーセント相補性は、標的核酸の対応する位置の核酸塩基に相補的なオリゴマー化合物の核酸塩基の数をオリゴマー化合物の全長で割ることによって計算される。
本明細書で使用されるとき、「パーセント同一性」とは、第1の核酸の核酸塩基の総数で割った、第2の核酸の対応する位置の核酸塩基と同一の(化学修飾から独立した)種類の第1の核酸の核酸塩基の数を意味する。
本明細書で使用されるとき、「調節」とは、調節前の分子、機能、もしくは活性の量または質と比較した、分子、機能、もしくは活性の量または質の変化を意味する。例えば、調節は、遺伝子発現における増加(刺激もしくは誘導)または減少(阻害もしくは低減)のいずれかの変化を含む。さらなる例として、発現の調節は、調節の不在下における量と比較した、特定のスプライス変異体の絶対量または相対量の変化をもたらすプレmRNA処理のスプライス部位選択の変化を含み得る。
本明細書で使用されるとき、「化学モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその領域における化学修飾のパターンを意味する。モチーフは、オリゴヌクレオチドのある特定のヌクレオシドおよび/またはある特定の結合基での修飾によって定義され得る。
本明細書で使用されるとき、「ヌクレオシドモチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその領域におけるヌクレオシド修飾のパターンを意味する。そのようなオリゴヌクレオチドの結合は、修飾または非修飾であり得る。別途示されない限り、本明細書においてヌクレオシドのみを記載するモチーフは、ヌクレオシドモチーフであるよう意図される。したがって、そのような事例において、結合は限定されない。
本明細書で使用されるとき、「糖モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその領域における糖修飾のパターンを意味する。
本明細書で使用されるとき、「結合モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその領域における結合修飾のパターンを意味する。そのようなオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは、修飾または非修飾であり得る。別途示されない限り、本明細書において結合のみを記載するモチーフは、結合モチーフであるよう意図される。したがって、そのような事例において、ヌクレオシドは限定されない。
本明細書で使用されるとき、「核酸塩基修飾モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドに沿った核酸塩基への修飾のパターンを意味する。別途示されない限り、核酸塩基修飾モチーフは、核酸塩基配列から独立している。
本明細書で使用されるとき、「配列モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその部分に沿って整列した核酸塩基のパターンを意味する。別途示されない限り、配列モチーフは、化学修飾から独立しており、それ故に、化学修飾なしを含む化学修飾の任意の組み合わせを有し得る。
本明細書で使用されるとき、ヌクレオシドまたはある「種類」のヌクレオシドに関する「修飾の種類」とは、ヌクレオシドの化学修飾を意味し、修飾および非修飾ヌクレオシドを含む。したがって、別途示されない限り、「第1の種類の修飾を有するヌクレオシド」は、非修飾ヌクレオシドであり得る。
本明細書で使用されるとき、「別々に修飾された」とは、修飾の不在を含む、互いに異なる化学修飾または化学置換基を意味する。したがって、例えば、MOEヌクレオシドおよび非修飾DNAヌクレオシドは、DNAヌクレオシドが修飾されていなくても「別々に修飾される」。同様に、DNAおよびRNAは、これら両方ともに天然に存在する非修飾ヌクレオシドであっても「別々に修飾される」。同一であるが、異なる核酸塩基を含むヌクレオシドは、別々に修飾されない。例えば、2’-OMe修飾糖および非修飾アデニン核酸塩基を含むヌクレオシドと2’-OMe修飾糖および非修飾チミン核酸塩基を含むヌクレオシドは、別々に修飾されない。
本明細書で使用されるとき、「同一の種類の修飾」とは、修飾の不在を含む、互いに同一の修飾を指す。したがって、例えば、2個の非修飾DNAヌクレオシドは、DNAヌクレオシドが修飾されていなくても「同一の種類の修飾」を有する。同一の種類の修飾を有するそのようなヌクレオシドは、異なる核酸塩基を含み得る。
本明細書で使用されるとき、「別個の領域」とは、オリゴヌクレオチドの部分を意味し、任意の隣接する部分の化学修飾または化学修飾のモチーフは、別個の領域が互いに区別されることを可能にする少なくとも1つの相違点を含む。
本明細書で使用されるとき、「薬剤的に許容される担体または希釈剤」とは、動物への投与における使用に好適な任意の物質を意味する。ある特定の実施形態において、薬剤的に許容される担体または希釈剤は、滅菌生理食塩水である。ある特定の実施形態において、そのような滅菌生理食塩水は、医薬品グレードの生理食塩水である。
本明細書で使用されるとき、「代謝性障害」という用語は、主に代謝(食物を分解してエネルギーを生成することに関連した一連の複雑な化学反応)の異常調節を特徴とする疾患または状態を意味する。
本明細書で使用されるとき、「心血管障害」という用語は、主に心臓または血管の機能障害を特徴とする疾患または状態を意味する。
本明細書で使用されるとき、「単環式または多環式環系」という用語は、単環式または多環式ラジカル環系から選択されるすべての環系を含むよう意図されており、前記環は、縮合または連結され、脂肪族、脂環式、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アリールアルキル、複素環式、ヘテロアリール、ヘテロ芳香族、およびヘテロアリールアルキルから個別に選択される単一環系および混合環系を含むよう意図される。そのような単環式および多環式構造は、各々が同一のレベルの飽和を有するか、または各々が独立して、完全に飽和、部分的に飽和、もしくは完全に不飽和を含む様々な程度の飽和を有する環を含有し得る。各環は、複素環式環、および例えばベンズイミダゾール等の混合モチーフに存在し得るC環原子のみを含む環を生じさせるために、C、N、O、およびSから選択される環原子を含み得、1個の環は、炭素環原子のみを有し、縮合環は、2個の窒素原子を有する。単環式または多環式環系は、例えば、前記環のうちの1個に結合される2個の=O基を有するフタルイミド等の置換基とさらに置換され得る。単環式または多環式環系は、環原子を介した直接結合、複数の環原子を介した縮合、置換基を介した結合、または二機能性結合部分を介した結合等の様々な戦略を用いて親分子に結合され得る。
本明細書で使用されるとき、「プロドラッグ」とは、対象に投与されると、代謝して活性化合物またはより活性の化合物(例えば、薬物)を形成する化合物の不活性形態または活性の低い形態を意味する。
本明細書で使用されるとき、「置換基(substituent)」および「置換基(substituent group)」とは、指名された親化合物の原子または基を置換する原子または基を意味する。例えば、修飾ヌクレオシドの置換基は、天然に存在するヌクレオシドに見られる原子または基とは異なる任意の原子または基である(例えば、修飾された2’-置換基は、HまたはOH以外のヌクレオシドの2’位の任意の原子または基である)。置換基は、保護されても保護されなくてもよい。ある特定の実施形態において、本開示の化合物は、親化合物の1つの位置または2つ以上の位置に置換基を有する。置換基は、他の置換基ともさらに置換され得、親化合物に直接結合され得るか、またはアルキル基もしくはヒドロカルビル基等の結合基を介して結合され得る。
同様に、本明細書で使用されるとき、化学官能基に関する「置換基」とは、指名された官能基に通常存在する原子または原子団とは異なる原子または原子団を意味する。ある特定の実施形態において、置換基は、官能基の水素原子を置換する(例えば、ある特定の実施形態において、置換メチル基の置換基は、非置換メチル基の水素原子のうちの1個を置換する水素以外の原子または基である)。別途示されない限り、置換基としての使用に従順な基には、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル(-C(O)R-aa)、カルボキシル(-C(O)O-R-aa)、脂肪族基、脂環式基、アルコキシ、置換オキシ(-O-R-aa)、アリール、アラルキル、複素環式ラジカル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アミノ(-N(Rbb)(Rcc))、イミノ(=NRbb)、アミド(-C(O)N(Rbb)(Rcc)または-N(Rbb)C(O)Raa)、アジド(-N)、ニトロ(-NO)、シアノ(-CN)、カルバミド(-OC(O)N(Rbb)(Rcc)または-N(Rbb)C(O)ORaa)、ウレイド(-N(Rbb)C(O)N(Rbb)(Rcc))、チオウレイド(-N(Rbb)C(S)N(Rbb)(Rcc))、グアニジニル(-N(Rbb)C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc))、アミジニル(-C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc)または-N(Rbb)C(=NRbb)(Raa))、チオール(-SRbb)、スルフィニル(-S(O)Rbb)、スルホニル(-S(O)bb)、およびスルホンアミジル(-S(O)N(Rbb)(Rcc)または-N(Rbb)S-(O)bb)が含まれるが、これらに限定されない。式中、各Raa、Rbb、およびRccは、独立して、H、任意に連結された化学官能基、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、脂肪族、アルコキシ、アシル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、脂環式、複素環式、およびヘテロアリールアルキルを含むが、これらに限定されない好ましいリストを有するさらなる置換基である。本明細書に記載される化合物内の選択された置換基は、再帰的程度まで存在する。
本明細書で使用されるとき、本明細書で使用される「アルキル」とは、最大24個の炭素原子を含有する飽和直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味する。アルキル基の例として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、n-ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル等が挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、典型的には、1~約24個の炭素原子、より典型的には、1~約12個の炭素原子(C~C12アルキル)を含み、1~約6個の炭素原子がより好ましい。
本明細書で使用されるとき、「アルケニル」とは、最大24個の炭素原子を含有し、かつ少なくとも1個の炭素-炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖炭化水素鎖ラジカルを意味する。アルケニル基の例として、エテニル、プロペニル、ブテニル、1-メチル-2-ブテン-1-イル、1,3-ブタジエン等のジエン等が挙げられるが、これらに限定されない。アルケニル基は、典型的には、2~約24個の炭素原子、より典型的には、2~約12個の炭素原子を含み、2~約6個の炭素原子がより好ましい。本明細書で使用されるアルケニル基は、1個以上のさらなる置換基を任意に含み得る。
本明細書で使用されるとき、「アルキニル」とは、最大24個の炭素原子を含有し、かつ少なくとも1個の炭素-炭素三重結合を有する直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味する。アルキニル基の例として、エチニル、1-プロピニル、1-ブチニル等が挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル基は、典型的には、2~約24個の炭素原子、より典型的には、2~約12個の炭素原子を含み、2~約6個の炭素原子がより好ましい。本明細書で使用されるアルキニル基は、1個以上のさらなる置換基を任意に含み得る。
本明細書で使用されるとき、「アシル」とは、有機酸からのヒドロキシル基の除去によって形成されたラジカルを意味し、一般式-C(O)-Xを有し、式中、Xは、典型的には、脂肪族、脂環式、または芳香族である。例として、脂肪族カルボニル、芳香族カルボニル、脂肪族スルホニル、芳香族スルフィニル、脂肪族スルフィニル、芳香族ホスフェート、脂肪族ホスフェート等が挙げられる。本明細書で使用されるアシル基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
本明細書で使用されるとき、「脂環式」とは、環式環系を意味し、前記環は、脂肪族である。前記環系は、1個以上の環を含み得、少なくとも1個の環は、脂肪族である。好ましい脂環式基は、環内に約5~約9個の炭素原子を有する環を含む。本明細書で使用される脂環式基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
本明細書で使用されるとき、「脂肪族」とは、最大24個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味し、任意の2個の炭素原子の間の飽和は、一重、二重、または三重結合である。脂肪族基は、好ましくは、1~約24個の炭素原子、より典型的には、1~約12個の炭素原子を含有し、1~約6個の炭素原子がより好ましい。脂肪族基の直鎖または分岐鎖は、窒素、酸素、硫黄、およびリンを含む1個以上のヘテロ原子で中断され得る。ヘテロ原子によって中断されるそのような脂肪族基には、ポリアルコキシ、例えば、ポリアルキレングリコール、ポリアミン、およびポリイミンが含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される脂肪族基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
本明細書で使用されるとき、「アルコキシ」とは、アルキル基と酸素原子との間に形成されたラジカルを意味し、前記酸素原子を用いて、アルコキシ基を親分子に結合させる。アルコキシ基の例として、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシ、n-ペントキシ、ネオペントキシ、n-ヘキソキシ等が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用されるアルコキシ基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
本明細書で使用されるとき、「アミノアルキル」とは、アミノ置換されたC~C12アルキルラジカルを意味する。前記ラジカルのアルキル部分は、親分子と共有結合を形成する。アミノ基は、任意の位置に位置し得、アミノアルキル基は、アルキルおよび/またはアミノ部分のさらなる置換基で置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「アラルキル」および「アリールアルキル」とは、C~C12アルキルラジカルに共有結合される芳香族基を意味する。結果として生じるアラルキル(またはアリールアルキル)基のアルキルラジカル部分は、親分子と共有結合を形成する。例として、ベンジル、フェネチル等が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用されるアラルキル基は、ラジカル基を形成するアルキル、アリール、またはこれら両方の基に結合されるさらなる置換基を任意に含み得る。
本明細書で使用されるとき、「アリール」および「芳香族」とは、1個以上の芳香族環を有する単環式または多環式炭素環式環系ラジカルを意味する。アリール基の例として、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニル等が挙げられるが、これらに限定されない。好ましいアリール環系は、1個以上の環内に約5~約20個の炭素原子を有する。本明細書で使用されるアリール基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
本明細書で使用されるとき、「ハロ」および「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素から選択される原子を意味する。
本明細書で使用されるとき、「ヘテロアリール」および「ヘテロ芳香族」とは、単環式もしくは多環式芳香族環、環系、または縮合環系を含むラジカルを意味し、前記環のうちの少なくとも1つは、芳香族であり、1個以上のヘテロ原子を含む。ヘテロアリールは、縮合環のうちの1個以上がヘテロ原子を含有しない系を含む縮合環系もまた含むよう意図される。ヘテロアリール基は、典型的には、硫黄、窒素、または酸素から選択される1個の環原子を含む。ヘテロアリール基の例として、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニル等が挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールラジカルは、親分子に直接結合され得るか、または脂肪族基もしくはヘテロ原子等の結合部分を介して結合され得る。本明細書で使用されるヘテロアリール基は、さらなる置換基を任意に含み得る。
本明細書で使用されるとき、「共役化合物」とは、共役基としての使用に好適な任意の原子、原子団、または結合原子団を意味する。ある特定の実施形態において、共役化合物は、薬力学的特性、薬物動態学的特性、結合特性、吸収特性、細胞分布特性、細胞取り込み特性、電荷特性、および/またはクリアランス特性を含むが、これらに限定されない1つ以上の特性を有し得るか、または付与し得る。
本明細書で使用されるとき、別途示されないか、または修正されない限り、「二本鎖」という用語は、互いにハイブリダイズされる2個の別個のオリゴマー化合物を指す。そのような二本鎖化合物は、一方もしくは両方の鎖(オーバーハング)の一方もしくは両方の末端に1個以上のヌクレオシドまたはハイブリダイズしていないヌクレオシドを有し得、かつ/または1個以上のハイブリダイズしていない内部ヌクレオシド(ミスマッチ)を有し得るが、但し、生理学的関連条件下でハイブリダイゼーションを維持するのに十分な相補性が存在することを条件とする。
B. ある特定の化合物
ある特定の実施形態において、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび共役体を含む共役アンチセンス化合物を提供する。
a. ある特定のアンチセンスオリゴヌクレオチド
ある特定の実施形態において、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。そのようなアンチセンスオリゴヌクレオチドは、連結したヌクレオシドを含み、各ヌクレオシドは、糖部分および核酸塩基を含む。そのようなアンチセンスオリゴヌクレオチドの構造は、化学的特徴(例えば、修飾および修飾パターン)ならびに核酸塩基配列(例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列、同一性、および標的核酸の配列)の点から考慮され得る。
i. ある特定の化学的特徴
ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、1つ以上の修飾を含む。ある特定のそのような実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、1個以上の修飾ヌクレオシドおよび/または修飾ヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、修飾ヌクレオシドは、修飾糖部分および/または修飾核酸塩基を含む。
1. ある特定の糖部分
ある特定の実施形態において、本開示の化合物は、修飾糖部分を含む1個以上の修飾ヌクレオシドを含む。1個以上の糖修飾ヌクレオシドを含むそのような化合物は、天然に存在する糖部分を含むヌクレオシドのみを含むオリゴヌクレオチドと比較して、ヌクレアーゼ安定性の強化または標的核酸との結合親和性の増大等の望ましい特性を有し得る。ある特定の実施形態において、修飾糖部分は、置換糖部分である。ある特定の実施形態において、修飾糖部分は、糖代理物である。そのような糖代理物は、置換糖部分の置換に対応する1つ以上の置換を含み得る。
ある特定の実施形態において、修飾糖部分は、2’位および/または5’位の置換基を含むが、これらに限定されない1個以上の非架橋糖糖置換基を含む置換糖部分である。2’位に好適な糖置換基の例として、2’-F、2’-OCH(「OMe」または「O-メチル」)、および2’-O(CHOCH(「MOE」)が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、2’位の糖置換基は、アリル、アミノ、アジド、チオ、O-アリル、O-C~C10アルキル、O-C~C10置換アルキル、OCF、O(CHSCH、O(CH-O-N(Rm)(Rn)、およびO-CH-C(=O)-N(Rm)(Rn)から選択され、式中、各RmおよびRnは、独立して、Hまたは置換もしくは非置換C~C10アルキルである。5’位の糖置換基の例には、5’-メチル(RまたはS)、5’-ビニル、および5’-メトキシが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、置換糖は、2個以上の非架橋糖置換基、例えば、2’-F-5’-メチル糖部分を含む(さらなる5’,2’-ビス置換糖部分およびヌクレオシドについては、例えば、PCT国際出願第WO2008/101157号を参照のこと)。
2’-置換糖部分を含むヌクレオシドは、2’-置換ヌクレオシドと称される。ある特定の実施形態において、2’-置換ヌクレオシドは、ハロ、アリル、アミノ、アジド、SH、CN、OCN、CF、OCF、O、S、またはN(R)-アルキル;O、S、またはN(R)-アルケニル;O、S、またはN(R)-アルキニル;O-アルキレニル-O-アルキル、アルキニル、アラルキル、アラルキル、O-アルカリル、O-アラルキル、O(CHSCH、O-(CH-O-N(R)(R);またはO-CH-C(=O)-N(R)(R)から選択される2’-置換基を含み、式中、各RおよびRは、独立して、H、アミノ保護基、または置換もしくは非置換換C~C10アルキルである。これらの2’-置換基は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ(NO)、チオール、チオアルコキシ(S-アルキル)、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル、およびアルキニルから独立して選択される1個以上の置換基とさらに置換され得る。
ある特定の実施形態において、2’-置換ヌクレオシドは、F、NH、N、OCF、O-CH、O(CHNH、CH-CH=CH、O-CH-CH=CH、OCHCHOCH、O(CHSCH、O-(CH-O-N(R)(R)、O(CHO(CHN(CH、およびN-置換アセトアミド(O-CH-C(=O)-N(R)(R)から選択される2’-置換基を含み、式中、各RおよびRは、独立して、H、アミノ保護基、または置換もしくは非置換C~C10アルキルである。
ある特定の実施形態において、2’-置換ヌクレオシドは、F、OCF、O-CH、OCHCHOCH、O(CHSCH、O-(CH-O-N(CH、-O(CHO(CHN(CH、およびO-CH-C(=O)-N(H)CHから選択される2’-置換基を含む糖部分を含む。
ある特定の実施形態において、2’-置換ヌクレオシドは、F、O-CH、およびOCHCHOCHから選択される2’-置換基を含む糖部分を含む。
ある特定の修飾糖部分は、第2の環を形成して二環式糖部分をもたらす架橋糖置換基を含む。ある特定のそのような実施形態において、二環式糖部分は、4’フラノース環原子と2’フラノース環原子との間に橋を含む。そのような4’から2’の糖置換基の例には、-[C(R)(R)]-、-[C(R)(R)]-O-、-C(R)-N(R)-O-、または-C(R)-O-N(R)-;4’-CH-2’、4’-(CH-2’、4’-(CH-2’、4’-(CH)-O-2’(LNA);4’-(CH)-S-2’;4’-(CH-O-2’(ENA);4’-CH(CH)-O-2’(cEt);および4’-CH(CHOCH)-O-2’;ならびにこれらの類似体(例えば、2008年7月15日に発行された米国特許第7,399,845号を参照のこと);4’-C(CH)(CH)-O-2’およびその類似体(例えば、2009年1月8日に公開された国際公開第WO2009/006478号を参照のこと);4’-CH-N(OCH)-2’およびその類似体(例えば、2008年12月11日に公開された国際公開第WO2008/150729号を参照のこと);4’-CH-O-N(CH)-2’(例えば、2004年9月2日に公開されたUS2004/0171570号を参照のこと);4’-CH-O-N(R)-2’;ならびに4’-CH-N(R)-O-2’-(式中、各Rが、独立して、H、保護基、またはC~C12アルキルである);4’-CH-N(R)-O-2’(式中、Rが、H、C~C12アルキル、または保護基である)(2008年9月23日に発行された米国特許第7,427,672号を参照のこと);4’-CH-C(H)(CH)-2’(例えば、Chattopadhyaya,et al.,J.Org.Chem.,2009,74,118-134);ならびに4’-CH-C(=CH)-2’およびその類似体(2008年12月8日に公開されたPCT国際出願第WO2008/154401号を参照のこと)が挙げられるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態において、そのような4’から2’の橋は、独立して、-[C(R)(R)]-、-C(R)=C(R)-、-C(R)=N-、-C(=NR)-、-C(=O)-、-C(=S)-、-O-、-Si(R-、-S(=O)-、および-N(R)-から独立して選択される1~4の結合基を含み、
式中、
xは、0、1、または2であり、
nは、1、2、3、または4であり、
各RおよびRは、独立して、H、保護基、ヒドロキシル、C~C12アルキル、置換C~C12アルキル、C~C12アルケニル、置換C~C12アルケニル、C~C12アルキニル、置換C~C12アルキニル、C~C20アリール、置換C~C20アリール、複素環式ラジカル、置換複素環式ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、C~C脂環式ラジカル、置換C~C脂環式ラジカル、ハロゲン、OJ、NJ、SJ、N、COOJ、アシル(C(=O)-H)、置換アシル、CN、スルホニル(S(=O)-J)、またはスルホキシル(S(=O)-J)であり、
各JおよびJは、独立して、H、C~C12アルキル、置換C~C12アルキル、C~C12アルケニル、置換C~C12アルケニル、C~C12アルキニル、置換C~C12アルキニル、C~C20アリール、置換C~C20アリール、アシル(C(=O)-H)、置換アシル、複素環式ラジカル、置換複素環式ラジカル、C~C12アミノアルキル、置換C~C12アミノアルキル、または保護基である。
二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドまたはBNAと称される。二環式ヌクレオシドには、以下に示される、(A)α-L-メチレンオキシ(4’-CH-O-2’)BNA、(B)β-D-メチレンオキシ(4’-CH-O-2’)BNA(ロックド核酸またはLNAとも称される)、(C)エチレンオキシ(4’-(CH-O-2’)BNA、(D)アミノオキシ(4’-CH-O-N(R)-2’)BNA、(E)オキシアミノ(4’-CH-N(R)-O-2’)BNA、(F)メチル(メチレンオキシ)(4’-CH(CH)-O-2’)BNA(拘束エチルまたはcEtとも称される)、(G)メチレン-チオ(4’-CH-S-2’)BNA、(H)メチレン-アミノ(4’-CH2-N(R)-2’)BNA、(I)メチル炭素環式(4’-CH-CH(CH)-2’)BNA、および(J)プロピレン炭素環式(4’-(CH-2’)BNAが含まれるが、これらに限定されず、
Figure 0006995478000012
Figure 0006995478000013
式中、Bxは、核酸塩基部分であり、Rは、独立して、H、保護基、またはC~C12アルキルである。
さらなる二環式糖部分は、当技術分野で既知であり、例えば、Singh et al.,Chem.Commun.,1998,4,455-456、Koshkin et al.,Tetrahedron,1998,54,3607-3630、Wahlestedt et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,2000,97,5633-5638、Kumar et al.,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1998,8,2219-2222、Singh et al.,J.Org.Chem.,1998,63,10035-10039、Srivastava et al.,J.Am.Chem.Soc.,129(26)8362-8379(Jul.4,2007)、Elayadi et al.,Curr.Opinion Invens.Drugs,2001,2,558-561、Braasch et al.,Chem.Biol.,2001,8,1-7、Orum et al.,Curr.Opinion Mol.Ther.,2001,3,239-243、米国特許第7,053,207号、同第6,268,490号、同第6,770,748号、同第6,794,499号、同第7,034,133号、同第6,525,191号、同第6,670,461号、および同第7,399,845号、国際公開第WO2004/106356号、同第WO1994/14226号、同第WO2005/021570号、および同第WO2007/134181号、米国特許公開第US2004/0171570号、同第US2007/0287831号、および同第US2008/0039618号、米国特許第12/129,154号、同第60/989,574号、同第61/026,995号、同第61/026,998号、同第61/056,564号、同第61/086,231号、同第61/097,787号、および同第61/099,844、ならびにPCT国際出願第PCT/US2008/064591号、同第PCT/US2008/066154号、および同第PCT/US2008/068922号である。
ある特定の実施形態において、二環式糖部分およびそのような二環式糖部分を組み込むヌクレオシドは、異性体配置によってさらに定義される。例えば、4’-2’メチレン-オキシ橋を含むヌクレオシドは、α-L配置またはβ-D配置であり得る。以前に、α-L-メチレンオキシ(4’-CH-O-2’)二環式ヌクレオシドが、アンチセンス活性を示すアンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれている(Frieden et al.,Nucleic Acids Research,2003,21,6365-6372)。
ある特定の実施形態において、置換糖部分は、1個以上の非架橋糖置換基および1個以上の架橋糖置換基(例えば、5’-置換および4’-2’架橋糖)を含む(2007年11月22日に公開されたPCT国際出願第WO2007/134181号(LNAが例えば5’-メチルまたは5’-ビニル基で置換されている)を参照のこと)。
ある特定の実施形態において、修飾糖部分は、糖代理物である。ある特定のそのような実施形態において、天然に存在する糖の酸素原子は、例えば、硫黄、炭素、または窒素原子で置換される。ある特定のそのような実施形態において、そのような修飾糖部分は、上述の架橋および/または非架橋置換基も含む。例えば、ある特定の糖代理物は、4’-硫黄原子ならびに2’位(例えば、2005年6月16日に公開された米国特許出願第US2005/0130923号を参照のこと)および/または5’位での置換を含む。さらなる例として、4’-2’橋を有する炭素環式二環式ヌクレオシドが記載されている(例えば、Freier et al.,Nucleic Acids Research,1997,25(22),4429-4443、およびAlbaek et al.,J.Org.Chem.,2006,71,7731-7740を参照のこと)。
ある特定の実施形態において、糖代理物は、5個の原子以外を有する環を含む。例えば、ある特定の実施形態において、糖代理物は、モルフォリノを含む。モルフォリノ化合物およびオリゴマー化合物におけるそれらの使用は、多数の特許および公開論文(例えば、Braasch et al.,Biochemistry,2002,41,4503-4510、ならびに米国特許第5,698,685号、同第5,166,315号、同第5,185,444号、および同第5,034,506号を参照のこと)で報告されている。本明細書で使用されるとき、「モルフォリノ」という用語は、以下の構造を有する糖代理物を意味する。
Figure 0006995478000014
ある特定の実施形態において、モルフォリノは、例えば、上述のモルフォリノ構造由来の様々な置換基を付加または変更することによって修飾され得る。そのような糖代理物は、本明細書において「修飾モルフォリノ」と称される。
別の例として、ある特定の実施形態において、糖代理物は、6員テトラヒドロピランを含む。そのようなテトラヒドロピランは、さらに修飾または置換され得る。そのような修飾テトラヒドロピランを含むヌクレオシドには、ヘキシトール核酸(HNA)、アニトール核酸(ANA)、マニトール核酸(MNA)(Leumann,CJ.Bioorg.& Med.Chem.(2002)10:841-854を参照のこと)、フルオロHNA(F-HNA)、および以下の式VIを有する化合物が含まれるが、これらに限定されず、
Figure 0006995478000015
式中、独立して、式VIの前記少なくとも1個のテトラヒドロピランヌクレオシド類似体の各々について、
Bxは、核酸塩基部分であり、
およびTは各々、独立して、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に結合させるヌクレオシド間結合基であるか、またはTおよびTのうちの一方は、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に結合させるヌクレオシド間結合基であり、TおよびTのうちの他方は、H、ヒドロキシル保護基、結合共役基、または5’もしくは3’-末端基であり、
、q、q、q、q、q、およびqは各々、独立して、H、C~Cアルキル、置換C~Cアルキル、C~Cアルケニル、置換C~Cアルケニル、C~Cアルキニル、または置換C~Cアルキニルであり、
およびRの各々は、水素、ハロゲン、置換または非置換アルコキシ、NJ、SJ、N、OC(=X)J、OC(=X)NJ、NJC(=X)NJ、およびCNの中から独立して選択され、式中、Xは、O、S、またはNJであり、各J、J、およびJは、独立して、HまたはC~Cアルキルである。
ある特定の実施形態において、式VIの修飾THPヌクレオシドが提供され、式中、q、q、q、q、q、q、およびqが各々、Hである。ある特定の実施形態において、q、q、q、q、q、q、およびqのうちの少なくとも1つは、H以外である。ある特定の実施形態において、q、q、q、q、q、q、およびqのうちの少なくとも1つは、メチルである。ある特定の実施形態において、式VIのTHPヌクレオシドが提供され、式中、RおよびRのうちの一方がFである。ある特定の実施形態において、Rがフルオロであり、RがHであり、Rがメトキシであり、RがHであり、Rがメトキシエトキシであり、RがHである。
アンチセンス化合物への組み込みのためにヌクレオシドを修飾するために用いられ得る多くの他のビシクロおよびトリシクロ糖代理物環系も当技術分野で既知である(例えば、総説:Leumann,J.C,Bioorganic & Medicinal Chemistry,2002,10,841-854を参照のこと)。
2’-F-5’-メチル置換ヌクレオシド(他の開示された5’,2’-ビス置換ヌクレオシドについては、2008年8月21日に公開されたPCT国際出願第WO2008/101157号を参照のこと)、ならびにリボシル環酸素原子のSとの置換および2’位でのさらなる置換(2005年6月16日に公開された米国特許出願第US2005-0130923号を参照のこと)、またはあるいは二環式核酸の5’-置換(4’-CH-O-2’二環式ヌクレオシドが5’位で5’-メチルまたは5’-ビニル基でさらに置換される、2007年11月22日に公開されたPCT国際出願第WO2007/134181号を参照のこと)等であるが、これらに限定されない修飾の組み合わせも提供される。炭素環式二環式ヌクレオシドのオリゴマー化および生化学的研究に加えて、それらの合成および調製も記載されている(例えば、Srivastava et al.,J.Am.Chem.Soc.2007,129(26),8362-8379)。
ある特定の実施形態において、本開示は、修飾ヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを提供する。これらの修飾ヌクレオチドは、修飾糖、修飾核酸塩基、および/または修飾結合を含み得る。特異的修飾は、結果として生じるオリゴヌクレオチドが望ましい特徴を有するように選択される。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、1個以上のRNA様ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、1個以上のDNA様ヌクレオチドを含む。
2. ある特定の核酸塩基修飾
ある特定の実施形態において、本開示のヌクレオシドは、1個以上の非修飾核酸塩基を含む。ある特定の実施形態において、本開示のヌクレオシドは、1個以上の修飾核酸塩基を含む。
ある特定の実施形態において、修飾核酸塩基は、本明細書で定義されるユニバーサル塩基、疎水性塩基、乱交雑塩基、サイズ拡大塩基、およびフッ素化塩基から選択される。5-置換ピリミジン、6-アザピリミジン、ならびにN-2、N-6、およびO-6置換プリンには、本明細書で定義される、2-アミノプロピルアデニン、5-プロピニルウラシル;5-プロピニルシトシン;5-ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、2-アミノアデニン、6-メチルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、2-プロピルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、2-チオウラシル、2-チオチミンおよび2-チオシトシン、5-ハロウラシルおよびシトシン、5-プロピニル(-C≡C-CH)ウラシルならびにシトシンおよびピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、6-アゾウラシル、シトシンおよびチミン、5-ウラシル(シュードウラシル)、4-チオウラシル、8-ハロ、8-アミノ、8-チオール、8-チオアルキル、8-ヒドロキシルならびに他の8-置換アデニンおよびグアニン、5-ハロ、特に、5-ブロモ、5-トリフルオロメチルならびに他の5-置換ウラシルおよびシトシン、7-メチルグアニンおよび7-メチルアデニン、2-F-アデニン、2-アミノ-アデニン、8-アザグアニンおよび8-アザアデニン、7-デアザグアニンおよび7-デアザアデニン、3-デアザグアニンおよび3-デアザアデニン、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、乱交雑塩基、サイズ拡大塩基、およびフッ素化塩基が含まれる。さらに、修飾核酸塩基には、三環式ピリミジン、例えば、フェノキサジンシチジン([5,4-b][1,4]ベンゾオキサジン-2(3H)-オン)、フェノチアジンシチジン(1H-ピリミド[5,4-b][1,4]ベンゾチアジン-2(3H)-オン)、G-クランプ、例えば、置換フェノキサジンシチジン(例えば、9-(2-アミノエトキシ)-H-ピリミド[5,4-b][1,4]ベンゾオキサジン-2(3H)-オン)、カルバゾールシチジン(2H-ピリミド[4,5-b]インドール-2-オン)、ピリドインドールシチジン(H-ピリド[3’,2’:4,5]ピロロ[2,3-d]ピリミジン-2-オン)が含まれる。修飾核酸塩基には、プリンまたはピリミジン塩基が、他の複素環、例えば、7-デアザ-アデニン、7-デアザグアノシン、2-アミノピリジン、および2-ピリドンに置換される塩基も含まれ得る。さらに、核酸塩基には、米国特許第3,687,808号に開示される塩基、The Concise Encyclopedia Of Polymer Science and Engineering,Kroschwitz,J.I.,Ed.,John Wiley & Sons,1990,858-859に開示される塩基、Englisch et al.,Angewandte Chemie,International Edition,1991,30,613によって開示される塩基、およびSanghvi,Y.S.,Chapter 15,Antisense Research and Applications,Crooke,S.T.and Lebleu,B.,Eds.,CRC Press,1993,273-288によって開示される塩基が含まれる。
上述の修飾核酸塩基ならびに他の修飾核酸塩基のある特定の調製を教示する代表的な米国特許には、米国特許第3,687,808号、同第4,845,205号、同第5,130,302号、同第5,134,066号、同第5,175,273号、同第5,367,066号、同第5,432,272号、同第5,457,187号、同第5,459,255号、同第5,484,908号、同第5,502,177号、同第5,525,711号、同第5,552,540号、同第5,587,469号、同第5,594,121号、同第5,596,091号、同第5,614,617号、同第5,645,985号、同第5,681,941号、同第5,750,692号、同第5,763,588号、同第5,830,653号、および同第6,005,096号が含まれるが、これらに限定されず、これらのある特定の特許は、本出願と共同所有されており、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
3. ある特定のヌクレオシド間結合
ある特定の実施形態において、本開示は、連結したヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドを提供する。そのような実施形態において、ヌクレオシドは、任意のヌクレオシド間結合を用いて一緒に連結され得る。ヌクレオシド間結合基の2つの主なクラスは、リン原子の存在または不在によって定義される。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル(PO)、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホラミデート、およびホスホロチオエート(PS)を含むが、これらに限定されない。代表的な非リン含有ヌクレオシド間結合基は、メチレンメチルイミノ(-CH-N(CH)-O-CH-)、チオジエステル(-O-C(O)-S-)、チオノカルバメート(-O-C(O)(NH)-S-)、シロキサン(-O-Si(H)-O-)、およびN,N’-ジメチルヒドラジン(-CH-N(CH)-N(CH)-)を含むが、これらに限定されない。修飾結合は、天然ホスホジエステル結合と比較して、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性を変化させる、典型的には、増加させるために用いられ得る。ある特定の実施形態において、キラル原子を有するヌクレオシド間結合は、ラセミ混合物として、または別個の鏡像異性体として調製され得る。代表的なキラル結合は、アルキルホスホネートおよびホスホロチオエートを含むが、これらに限定されない。リン含有および非リン含有ヌクレオシド間結合の調製方法は、当業者に周知である。
本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、1つ以上の不斉中心を含有し、それ故に、絶対立体化学の点で、(R)もしくは(S)、糖アノマー等の場合、aもしくはβ、またはアミノ酸等の場合(D)もしくは(L)と定義され得る、鏡像異性体、ジアステレオマー、および他の立体異性体配置を生じさせる。本明細書に提供されるアンチセンス化合物には、すべてのそのような考えられる異性体、ならびにそれらのラセミ形態および光学的に純粋な形態が含まれる。
中性ヌクレオシド間結合には、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、MMI(3’-CH-N(CH)-O-5’)、アミド-3(3’-CH-C(=O)-N(H)-5’)、アミド-4((3’-CH-N(H)-C(=O)-5’)、ホルムアセタール(3’-O-CH-O-5’)、およびチオホルムアセタール(3’-S-CH-O-5’)が含まれるが、これらに限定されない。さらに、中性ヌクレオシド間結合には、シロキサン(ジアルキルシロキサン)、カルボン酸エステル、カルボキサミド、硫化物、スルホン酸エステル、およびアミドを含む非イオン性結合が含まれる(例えば、Carbohydrate Modifications in Antisense Research;Y.S.Sanghvi and P.D.Cook,Eds.,ACS Symposium Series 580;Chapters 3 and 4,40-65を参照のこと)。さらに、中性ヌクレオシド間結合には、混合したN、O、S、およびCH成分部分を含む非イオン性結合が含まれる。
4. ある特定のモチーフ
ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、1個以上の修飾ヌクレオシド(例えば、修飾糖および/または修飾核酸塩基を含むヌクレオシド)ならびに/または1個以上の修飾ヌクレオシド間結合を含む。オリゴヌクレオチドにおけるそのような修飾のパターンは、本明細書においてモチーフと称される。ある特定の実施形態において、糖、核酸塩基、および結合モチーフは、互いに独立している。
a. ある特定の糖モチーフ
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、定義されたパターンまたは糖修飾モチーフでオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配置された1種類以上の修飾糖部分および/または天然に存在する糖部分を含む。そのようなモチーフは、本明細書で論じられる糖修飾および/または他の既知の糖修飾のうちのいずれかを含み得る。
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、2個の外部領域または「ウィング」および中央もしくは内部領域または「ギャップ」を含むギャップマー糖モチーフを有する領域を含むか、またはそれからなる。ギャップマー糖モチーフの3個の領域(5’-ウィング、ギャップ、および3’-ウィング)は、ヌクレオシドの連続した配列を形成し、これらのウィングの各々のヌクレオシドの糖部分の少なくとも一部は、このギャップのヌクレオシドの糖部分の少なくとも一部とは異なる。具体的には、少なくとも、ギャップに最も近い(5’-ウィングの最も3’側のヌクレオシドおよび3’-ウィングの最も5’側のヌクレオシド)各ウィングのヌクレオシドの糖部分が、隣接するギャップヌクレオシドの糖部分とは異なり、それ故に、ウィングとギャップとの間の境界を定義する。ある特定の実施形態において、ギャップ内の糖部分は、互いに同一である。ある特定の実施形態において、ギャップは、ギャップの1個以上の他のヌクレオシドの糖部分とは異なる糖部分を有する1個以上のヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、2個のウィングの糖モチーフは、互いに同一である(対称性糖ギャップマー)。ある特定の実施形態において、5’-ウィングの糖モチーフは、3’-ウィングの糖モチーフとは異なる(不斉糖ギャップマー)。
i. ある特定の5’-ウィング
ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、1~8個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、1~7個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、1~6個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、1~5個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、2~5個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、3~5個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、4または5個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、1~4個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、1~3個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、1または2個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、2~4個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、2または3個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、3または4個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、1個のヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、2個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、3個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、4個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、5個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、6個の連結したヌクレオシドからなる。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも2個の二環式ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも3個の二環式ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも4個の二環式ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個のLNAヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングの各ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングの各ヌクレオシドは、拘束エチルヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングの各ヌクレオシドは、LNAヌクレオシドである。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の2’-置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の2’-MOEヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の2’-OMeヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングの各ヌクレオシドは、非二環式修飾ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングの各ヌクレオシドは、2’-置換ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングの各ヌクレオシドは、2’-MOEヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングの各ヌクレオシドは、2’-OMeヌクレオシドである。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングの各ヌクレオシドは、2’-デオキシヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個のリボヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングの各ヌクレオシドは、リボヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、5’-ウィングのヌクレオシドのうちの1個、2個以上、または各々は、RNA様ヌクレオシドである。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも1個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-MOEヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-OMeヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも1個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-MOEヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-OMeヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの5’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。
ii. ある特定の3’-ウィング
ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、1~8個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、1~7個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、1~6個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、1~5個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、2~5個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、3~5個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、4または5個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、1~4個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、1~3個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、1または2個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、2~4個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、2または3個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、3または4個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、1個のヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、2個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、3個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、4個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、5個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、6個の連結したヌクレオシドからなる。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個のLNAヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングの各ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングの各ヌクレオシドは、拘束エチルヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングの各ヌクレオシドは、LNAヌクレオシドである。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも2個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも3個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも4個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の2’-置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の2’-MOEヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の2’-OMeヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングの各ヌクレオシドは、非二環式修飾ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングの各ヌクレオシドは、2’-置換ヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングの各ヌクレオシドは、2’-MOEヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングの各ヌクレオシドは、2’-OMeヌクレオシドである。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングの各ヌクレオシドは、2’-デオキシヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個のリボヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングの各ヌクレオシドは、リボヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、5’-ウィングのヌクレオシドのうちの1個、2個以上、または各々は、RNA様ヌクレオシドである。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも1個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-MOEヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-OMeヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも1個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-MOEヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-OMeヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個のLNAヌクレオシドおよび少なくとも1個の非二環式修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個のLNAヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-置換ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個のLNAヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-MOEヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個のLNAヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-OMeヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個のLNAヌクレオシドおよび少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシド、少なくとも1個の非二環式修飾ヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシド、少なくとも1個の非二環式修飾ヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個のLNAヌクレオシド、少なくとも1個の非二環式修飾ヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシド、少なくとも1個の2’-置換ヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシド、少なくとも1個の2’-置換ヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個のLNAヌクレオシド、少なくとも1個の2’-置換ヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシド、少なくとも1個の2’-MOEヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシド、少なくとも1個の2’-MOEヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個のLNAヌクレオシド、少なくとも1個の2’-MOEヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。
ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の二環式ヌクレオシド、少なくとも1個の2’-OMeヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個の拘束エチルヌクレオシド、少なくとも1個の2’-OMeヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーの3’-ウィングは、少なくとも1個のLNAヌクレオシド、少なくとも1個の2’-OMeヌクレオシド、および少なくとも1個の2’-デオキシヌクレオシドを含む。
iii. ある特定の中央領域(ギャップ)
ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、6~20個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、6~15個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、6~12個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、6~10個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、6~9個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、6~8個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、6または7個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、7~10個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、7~9個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、7または8個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、8~10個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、8または9個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、6個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、7個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、8個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、9個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、10個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、11個の連結したヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、12個の連結したヌクレオシドからなる。
ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップの各ヌクレオシドは、2’-デオキシヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、ギャップは、1個以上の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップの各ヌクレオシドは、2’-デオキシヌクレオシドであるか、または「DNA様」の修飾ヌクレオシドである。そのような実施形態において、「DNA様」とは、ギャップマーおよびRNA分子を含む二本鎖がRNase Hを活性化することができるようにヌクレオシドがDNAと同様の特徴を有することを意味する。例えば、ある特定の条件下で、2’-(ara)-Fは、RNase Hの活性化を支援することが示されており、それ故に、DNA様である。ある特定の実施形態において、ギャップマーのギャップの1個以上のヌクレオシドは、2’-デオキシヌクレオシドではなく、DNA様でもない。ある特定のそのような実施形態において、ギャップマーは、それでもやはり、RNase Hの活性化を支援する(例えば、非DNAヌクレオシドの数または設置のおかげで)。
ある特定の実施形態において、ギャップは、1個以上の修飾ヌクレオシドによって中断された一続きの非修飾2’-デオキシヌクレオシドを含み、それ故に、3個のサブ領域(2つの一続きの、1個以上の2’-デオキシヌクレオシドおよび一続きの1個以上の中断修飾ヌクレオシド)をもたらす。ある特定の実施形態において、いずれの一続きの非修飾2’-デオキシヌクレオシドも、5、6、または7個のヌクレオシドより短い。ある特定の実施形態において、そのような短い続きは、短いギャップ領域を用いることによって達成される。ある特定の実施形態において、短い一続きは、より長いギャップ領域を中断することによって達成される。
ある特定の実施形態において、ギャップは、1個以上の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、cEt、FHNA、LNA、および2-チオ-チミジンの中から選択される1個以上の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、1個の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、5’-Meおよび5’-(R)-Meの中から選択される5’-置換糖部分を含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、2個の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、3個の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、4個の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、2個以上の修飾ヌクレオシドを含み、各修飾ヌクレオシドは同一である。ある特定の実施形態において、ギャップは、2個以上の修飾ヌクレオシドを含み、各修飾ヌクレオシドは異なる。
ある特定の実施形態において、ギャップは、1個以上の修飾結合を含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、1個以上のメチルホスホネート結合を含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、2個以上の修飾結合を含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、1個以上の修飾結合および1個以上の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、1個の修飾結合および1個の修飾ヌクレオシドを含む。ある特定の実施形態において、ギャップは、2個の修飾結合および2個以上の修飾ヌクレオシドを含む。
b. ある特定のヌクレオシド間結合モチーフ
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、定義されたパターンまたは修飾ヌクレオシド間結合モチーフでオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配置された修飾ヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、交互のヌクレオシド間結合モチーフを有する領域を含む。ある特定の実施形態において、本開示のオリゴヌクレオチドは、均一に修飾されたヌクレオシド間結合の領域を含む。ある特定のそのような実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合によって均一に連結された領域を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合によって均一に連結される。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルおよびホスホロチオエートから選択される。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステルおよびホスホロチオエートから選択され、少なくとも1個のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートである。
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも6個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも7個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも8個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも9個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも10個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも11個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも12個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも13個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも14個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも6個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも1個のブロックを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも7個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも1個のブロックを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも8個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも1個のブロックを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも9個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも1個のブロックを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも10個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも1個のブロックを含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも1個の12個の連続したホスホロチオエートヌクレオシド間結合の少なくとも1個のブロックを含む。ある特定のそのような実施形態において、少なくとも1個のそのようなブロックは、オリゴヌクレオチドの3’末端に位置する。ある特定のそのような実施形態において、少なくとも1個のそのようなブロックは、オリゴヌクレオチドの3’末端の3個のヌクレオシド内に位置する。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、15個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、14個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、13個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、12個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、11個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、10個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、9個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、8個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、7個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、6個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、5個未満のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。
c. ある特定の核酸塩基修飾モチーフ
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、定義されたパターンまたは核酸塩基修飾モチーフでオリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って配置された核酸塩基に対する化学修飾を含む。ある特定のそのような実施形態において、核酸塩基修飾は、ギャップモチーフで配置される。ある特定の実施形態において、核酸塩基修飾は、交互のモチーフで配置される。ある特定の実施形態において、各核酸塩基が修飾される。ある特定の実施形態において、核酸塩基のうちのいずれも化学修飾されない。
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、修飾核酸塩基のブロックを含む。ある特定のそのような実施形態において、ブロックは、オリゴヌクレオチドの3’末端に存在する。ある特定の実施形態において、ブロックは、オリゴヌクレオチドの3’末端の3個のヌクレオチド内に存在する。ある特定のそのような実施形態において、ブロックは、オリゴヌクレオチドの5’末端に存在する。ある特定の実施形態において、ブロックは、オリゴヌクレオチドの5’末端の3個のヌクレオチド内に存在する。
ある特定の実施形態において、核酸塩基修飾は、オリゴヌクレオチドの特定の位置における天然塩基の機能である。例えば、ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの各プリンまたは各ピリミジンが修飾される。ある特定の実施形態において、各アデニンが修飾される。ある特定の実施形態において、各グアニンが修飾される。ある特定の実施形態において、各チミンが修飾される。ある特定の実施形態において、各シトシンが修飾される。ある特定の実施形態において、各ウラシルが修飾される。
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドのシトシン部分のうちのいくつかもしくはすべてが5-メチルシトシン部分であるか、またはいずれも5-メチルシトシン部分ではない。本明細書において、5-メチルシトシンは、「修飾核酸塩基」ではない。したがって、別途示されない限り、非修飾核酸塩基は、5-メチルを有するシトシン残基および5-メチルを欠くシトシン残基の両方を含む。ある特定の実施形態において、すべてまたはいくつかのシトシン核酸塩基のメチル化状態が特定される。
ある特定の実施形態において、核酸塩基に対する化学修飾は、ある特定の共役基の核酸塩基への結合を含む。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの各プリンまたは各ピリミジンは、共役基を含むように任意に修飾され得る。
d. ある特定の全長
ある特定の実施形態において、本開示は、様々な範囲の長さのうちのいずれかのオリゴヌクレオチドを提供する。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、X~Y個の連結したヌクレオシドからなり、ここで、Xは、その範囲の最小数のヌクレオシドを表し、Yは、その範囲の最大数のヌクレオシドを表す。ある特定のそのような実施形態において、XおよびYは各々、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、および50から独立して選択されるが、但し、XがY以下であることを条件とする。例えば、ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、8~9、8~10、8~11、8~12、8~13、8~14、8~15、8~16、8~17、8~18、8~19、8~20、8~21、8~22、8~23、8~24、8~25、8~26、8~27、8~28、8~29、8~30、9~10、9~11、9~12、9~13、9~14、9~15、9~16、9~17、9~18、9~19、9~20、9~21、9~22、9~23、9~24、9~25、9~26、9~27、9~28、9~29、9~30、10~11、10~12、10~13、10~14、10~15、10~16、10~17、10~18、10~19、10~20、10~21、10~22、10~23、10~24、10~25、10~26、10~27、10~28、10~29、10~30、11~12、11~13、11~14、11~15、11~16、11~17、11~18、11~19、11~20、11~21、11~22、11~23、11~24、11~25、11~26、11~27、11~28、11~29、11~30、12~13、12~14、12~15、12~16、12~17、12~18、12~19、12~20、12~21、12~22、12~23、12~24、12~25、12~26、12~27、12~28、12~29、12~30、13~14、13~15、13~16、13~17、13~18、13~19、13~20、13~21、13~22、13~23、13~24、13~25、13~26、13~27、13~28、13~29、13~30、14~15、14~16、14~17、14~18、14~19、14~20、14~21、14~22、14~23、14~24、14~25、14~26、14~27、14~28、14~29、14~30、15~16、15~17、15~18、15~19、15~20、15~21、15~22、15~23、15~24、15~25、15~26、15~27、15~28、15~29、15~30、16~17、16~18、16~19、16~20、16~21、16~22、16~23、16~24、16~25、16~26、16~27、16~28、16~29、16~30、17~18、17~19、17~20、17~21、17~22、17~23、17~24、17~25、17~26、17~27、17~28、17~29、17~30、18~19、18~20、18~21、18~22、18~23、18~24、18~25、18~26、18~27、18~28、18~29、18~30、19~20、19~21、19~22、19~23、19~24、19~25、19~26、19~29、19~28、19~29、19~30、20~21、20~22、20~23、20~24、20~25、20~26、20~27、20~28、20~29、20~30、21~22、21~23、21~24、21~25、21~26、21~27、21~28、21~29、21~30、22~23、22~24、22~25、22~26、22~27、22~28、22~29、22~30、23~24、23~25、23~26、23~27、23~28、23~29、23~30、24~25、24~26、24~27、24~28、24~29、24~30、25~26、25~27、25~28、25~29、25~30、26~27、26~28、26~29、26~30、27~28、27~29、27~30、28~29、28~30、または29~30個の連結したヌクレオシドからなり得る。ある範囲またはある特定の数にかかわらず、化合物のオリゴヌクレオチドのヌクレオシドの数が限定される実施形態において、この化合物は、それでもやはり、さらなる他の置換基をさらに含み得る。例えば、8~30個のヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、31個のヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドを除外するが、別途示されない限り、そのようなオリゴヌクレオチドは、例えば、1個以上の共役基、末端基、または他の置換基をさらに含み得る。
さらに、オリゴヌクレオチドが全長範囲および特定の長さを有する領域によって説明され、かつそれらの領域の特定の長さの合計が全長範囲の上限未満である場合、オリゴヌクレオチドは、特定の領域の長さを超えてさらなるヌクレオシドを有し得るが、但し、ヌクレオシドの総数が全長範囲の上限を超えないことを条件とする。
5. ある特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドの化学的モチーフ
ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの化学構造的特徴は、それらの糖モチーフ、ヌクレオシド間結合モチーフ、核酸塩基修飾モチーフ、および全長によって特徴付けられる。ある特定の実施形態において、そのようなパラメータは各々、互いに独立している。したがって、ギャップマー糖モチーフを有するオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、修飾されても修飾されなくてもよく、糖修飾のギャップマー修飾パターンに従っても従わなくてもよい。したがって、糖ギャップマーのウィング領域内のヌクレオシド間結合は、互いに同一であるか、または異なり得、ギャップ領域のヌクレオシド間結合と同一であるか、または異なり得る。同様に、そのような糖ギャップマーオリゴヌクレオチドは、糖修飾のギャップマーパターンから独立して1個以上の修飾核酸塩基を含み得る。当業者であれば、そのようなモチーフが組み合わされて様々なオリゴヌクレオチドを作成し得ることを認識する。
ある特定の実施形態において、ヌクレオシド間結合およびヌクレオシド修飾の選択は、互いに独立していない。
i. ある特定の配列および標的
ある特定の実施形態において、本発明は、標的核酸に相補的な配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供する。そのようなアンチセンス化合物は、標的核酸にハイブリダイズすることができ、少なくとも1つのアンチセンス活性をもたらす。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、1個以上の標的核酸に特異的にハイブリダイズする。ある特定の実施形態において、特異的にハイブリダイズするアンチセンス化合物は、標的核酸に対して、ハイブリダイゼーションを可能にし、かつアンチセンス活性をもたらすのに十分な相補性と、任意の非標的に対して、特異的ハイブリダイゼーションが所望される条件下(例えば、生体内または治療的使用のために生理学的条件下、かつ生体外アッセイの場合、アッセイが実行される条件下)で非標的核酸配列への非特異的ハイブリダイゼーションを回避するか、または減少させるのに不十分な相補性とを有する領域を含む核酸塩基配列と、を有する。ある特定の実施形態において、標的および非標的が両方ともに標的配列を含むが、オリゴヌクレオチドは、標的と非標的との間で選択的である。そのような実施形態において、選択性は、一方の核酸分子と比較した他方の核酸分子の標的領域の相対近接性に起因し得る。
ある特定の実施形態において、本開示は、オリゴヌクレオチドの全長にわたって標的核酸に完全に相補的なオリゴヌクレオチドを含むアンチセンス化合物を提供する。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、標的核酸に99%相補的である。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、標的核酸に95%相補的である。ある特定の実施形態において、そのようなオリゴヌクレオチドは、標的核酸に90%相補的である。
ある特定の実施形態において、そのようなオリゴヌクレオチドは、標的核酸に85%相補的である。ある特定の実施形態において、そのようなオリゴヌクレオチドは、標的核酸に80%相補的である。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸に完全に相補的であり、かつオリゴヌクレオチドの全長にわたって標的核酸に少なくとも80%相補的な領域を含む。ある特定のそのような実施形態において、完全な相補性の領域は、6~14核酸塩基長である。
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイズ領域および末端領域を含む。ある特定のそのような実施形態において、ハイブリダイズ領域は、12~30個の連結したヌクレオシドからなり、標的核酸に完全に相補的である。ある特定の実施形態において、ハイブリダイズ領域は、標的核酸と比較して、1つのミスマッチを含む。ある特定の実施形態において、ハイブリダイズ領域は、標的核酸と比較して、2つのミスマッチを含む。ある特定の実施形態において、ハイブリダイズ領域は、標的核酸と比較して、3つのミスマッチを含む。ある特定の実施形態において、末端領域は、1~4個の末端ヌクレオシドからなる。ある特定の実施形態において、末端ヌクレオシドは、3’末端に存在する。ある特定の実施形態において、末端ヌクレオシドのうちの1個以上は、標的核酸に相補的ではない。
アンチセンス機構は、標的核酸とのオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを伴う任意の機構を含み、このハイブリダイゼーションは、生物学的効果をもたらす。ある特定の実施形態において、そのようなハイブリダイゼーションは、例えば、標的核酸の翻訳、転写、またはスプライシングを伴う細胞機構の同時に起こる阻害または刺激による標的核酸分解または占有のいずれかをもたらす。
標的RNAの分解を伴う一種のアンチセンス機構は、RNase H媒介アンチセンスである。RNase Hは、RNA:DNA二本鎖のRNA鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼである。「DNA様」の一本鎖アンチセンス化合物が哺乳類細胞におけるRNase H活性を誘発することが当技術分野で既知である。したがって、RNase Hの活性化は、RNA標的の切断をもたらし、それにより遺伝子発現のDNA様オリゴヌクレオチド媒介阻害の効率を大幅に向上させる。
ある特定の実施形態において、共役基は、切断可能な部分を含む。ある特定の実施形態において、共役基は、1個以上の切断可能な結合を含む。ある特定の実施形態において、共役基は、リンカーを含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、タンパク質結合部分を含む。ある特定の実施形態において、共役基は、細胞標的部分(細胞標的基とも称される)を含む。ある特定の実施形態において、細胞標的部分は、分岐基を含む。ある特定の実施形態において、細胞標的部分は、1個以上のテザーを含む。ある特定の実施形態において、細胞標的部分は、炭水化物または炭水化物クラスターを含む。
ii. ある特定の切断可能な部分
ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、切断可能な結合である。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、切断可能な結合を含む。ある特定の実施形態において、共役基は、切断可能な部分を含む。ある特定のそのような実施形態において、切断可能な部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに結合する。ある特定のそのような実施形態において、切断可能な部分は、細胞標的部分に直接結合する。ある特定のそのような実施形態において、切断可能な部分は、共役リンカーに結合する。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスフェートまたはホスホジエステルを含む。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、切断可能なヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体である。ある特定の実施形態において、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体は、プリン、置換プリン、ピリミジン、または置換ピリミジンから選択される任意に保護された複素環式塩基を含む。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ウラシル、チミン、シトシン、4-N-ベンゾイルシトシン、5-メチルシトシン、4-N-ベンゾイル-5-メチルシトシン、アデニン、6-N-ベンゾイルアデニン、グアニン、および2-N-イソブチリルグアニンから選択される任意に保護された複素環式塩基を含むヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの3’位に結合され、かつホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合によってリンカーに結合される2’-デオキシヌクレオシドである。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの3’位に結合され、かつホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合によってリンカーに結合される2’-デオキシアデノシンである。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの3’位に結合され、かつホスホジエステル結合によってリンカーに結合される2’-デオキシアデノシンである。
ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの3’位に結合される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの5’位に結合される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの2’位に結合される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合によってアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合のいずれかによってリンカーに結合される。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合によってリンカーに結合される。ある特定の実施形態において、共役基は、切断可能な部分を含まない。
ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、標的細胞によって内部に取り入れられた後にのみ、複合体が動物に投与された後に切断される。細胞内で切断可能な部分が切断され、それにより活性アンチセンスオリゴヌクレオチドを放出する。理論によって束縛されることを望むものではないが、切断可能な部分が細胞内で1個以上のヌクレアーゼによって切断されることが考えられる。ある特定の実施形態において、1個以上のヌクレアーゼは、切断可能な部分とリンカーとの間のホスホジエステル結合を切断する。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000016
式中、Bx、Bx、Bx、およびBxの各々は、独立して、複素環式塩基部分である。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000017
iii. ある特定のリンカー
ある特定の実施形態において、共役基は、リンカーを含む。ある特定のそのような実施形態において、リンカーは、切断可能な部分に共有結合される。ある特定のそのような実施形態において、リンカーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドに共有結合される。ある特定の実施形態において、リンカーは、細胞標的部分に共有結合される。ある特定の実施形態において、リンカーは、固体支持体への共有結合をさらに含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、タンパク質結合部分への共有結合をさらに含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、固体支持体への共有結合をさらに含み、タンパク質結合部分への共有結合もさらに含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、テザーリガンドの結合のために複数の位置を含む。ある特定の実施形態において、リンカーは、テザーリガンドの結合のために複数の位置を含み、分岐基に結合されない。ある特定の実施形態において、リンカーは、1個以上の切断可能な結合をさらに含む。ある特定の実施形態において、共役基は、リンカーを含まない。
ある特定の実施形態において、リンカーは、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル(-S-)、およびヒドロキシルアミノ(-O-N(H)-)基から選択される基を含む少なくとも1個の線状基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、アルキル、アミド、およびエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、アルキルおよびエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、少なくとも1個のリン結合基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、少なくとも1個のホスホジエステル基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、少なくとも1個の中性結合基を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、細胞標的部分および切断可能な部分に共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、細胞標的部分およびアンチセンスオリゴヌクレオチドに共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、細胞標的部分、切断可能な部分、および固体支持体に共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、細胞標的部分、切断可能な部分、固体支持体、およびタンパク質結合部分に共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、1個以上の切断可能な結合を含む。
ある特定の実施形態において、リンカーは、足場基に共有結合される線状基を含む。ある特定の実施形態において、足場は、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル、およびヒドロキシルアミノ基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。ある特定の実施形態において、足場は、アルキル、アミド、およびエーテル基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。ある特定の実施形態において、足場は、少なくとも1個の単環式または多環式環系を含む。ある特定の実施形態において、足場は、少なくとも2個の単環式または多環式環系を含む。ある特定の実施形態において、線状基は、足場基に共有結合され、足場基は、切断可能な部分およびリンカーに共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、足場基に共有結合され、足場基は、切断可能な部分、リンカー、および固体支持体に共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、足場基に共有結合され、足場基は、切断可能な部分、リンカー、およびタンパク質結合部分に共有結合される。ある特定の実施形態において、線状基は、足場基に共有結合され、足場基は、切断可能な部分、リンカー、タンパク質結合部分、および固体支持体に共有結合される。ある特定の実施形態において、足場基は、1個以上の切断可能な結合を含む。
ある特定の実施形態において、リンカーは、タンパク質結合部分を含む。ある特定の実施形態において、タンパク質結合部分は、例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、1-ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、1,3-ビス-O(ヘキサデシル)グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、1,3-プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、O3-(オレオイル)リトコール酸、O3-(オレオイル)コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン)、ビタミン(例えば、葉酸塩、ビタミンA、ビタミンE、ビオチン、ピリドキサール)、ペプチド、炭水化物(例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、多糖)、エンドソーム溶解成分、ステロイド(例えば、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン)、テルペン(例えば、トリテルペン、例えば、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸)、またはカチオン性脂質を含むが、これらに限定されない脂質である。ある特定の実施形態において、タンパク質結合部分は、C16~C22長鎖飽和もしくは不飽和脂肪酸、コレステロール、コール酸、ビタミンE、アダマンタン、または1-ペンタフルオロプロピルである。
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000018
式中、各nは、独立して、1~20であり、pは、1~6である。
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000019
式中、各nは、独立して、1~20である。
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000020
式中、nは、1~20である。
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000021
式中、各Lは、独立して、リン結合基または中性結合基であり、
各nは、独立して、1~20である。
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000022
Figure 0006995478000023
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000024
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000025
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000026
式中、nは、1~20である。
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000027
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000028
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000029
ある特定の実施形態において、共役リンカーは、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000030
ある特定の実施形態において、共役リンカーは、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000031
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000032
ある特定の実施形態において、リンカーは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000033
式中、各nは、独立して、0、1、2、3、4、5、6、または7である。
iv. ある特定の細胞標的部分
ある特定の実施形態において、共役基は、細胞標的部分を含む。ある特定のそのような細胞標的部分は、アンチセンス化合物の細胞取り込みを増加させる。ある特定の実施形態において、細胞標的部分は、分岐基、1個以上のテザー、および1個以上のリガンドを含む。ある特定の実施形態において、細胞標的部分は、分岐基、1個以上のテザー、1個以上のリガンド、および1個以上の切断可能な結合を含む。
1. ある特定の分岐基
ある特定の実施形態において、共役基は、分岐基および少なくとも2個のテザーリガンドを含む標的部分を含む。ある特定の実施形態において、分岐基は、共役リンカーを結合する。ある特定の実施形態において、分岐基は、切断可能な部分を結合する。ある特定の実施形態において、分岐基は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを結合する。ある特定の実施形態において、分岐基は、リンカーおよびテザーリガンドの各々に共有結合される。ある特定の実施形態において、分岐基は、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテルおよびヒドロキシルアミノ基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。ある特定の実施形態において、分岐基は、アルキル、アミド、およびエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態において、分岐基は、アルキルおよびエーテル基から選択される基を含む。ある特定の実施形態において、分岐基は、単環式または多環式環系を含む。ある特定の実施形態において、分岐基は、1個以上の切断可能な結合を含む。ある特定の実施形態において、共役基は、分岐基を含まない。
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000034
Figure 0006995478000035
式中、各nは、独立して、1~20であり、
jは、1~3であり、
mは、2~6である。
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000036
各nは、独立して、1~20であり、
mは、2~6である。
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000037
Figure 0006995478000038
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000039
式中、各Aは、独立して、O、S、C=O、またはNHであり、
各nは、独立して、1~20である。
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000040
式中、各Aは、独立して、O、S、C=O、またはNHであり、
各nは、独立して、1~20である。
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000041
式中、Aは、O、S、C=O、またはNHであり、
各nは、独立して、1~20である。
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000042
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000043
ある特定の実施形態において、分岐基は、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000044
2. ある特定のテザー
ある特定の実施形態において、共役基は、分岐基に共有結合される1個以上のテザーを含む。ある特定の実施形態において、共役基は、結合基に共有結合される1個以上のテザーを含む。ある特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、アミド、およびポリエチレングリコール基から選択される1個以上の基を含む線状脂肪族基である。ある特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル、置換アルキル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、アミド、ホスホジエステルおよびポリエチレングリコール基から選択される1個以上の基を含む線状脂肪族基である。ある特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル、エーテル、およびアミド基から選択される1個以上の基を含む線状脂肪族基である。ある特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル、置換アルキル、ホスホジエステル、エーテル、およびアミド基から選択される1個以上の基を含む線状脂肪族基である。ある特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキルおよびホスホジエステルから選択される1個以上の基を含む線状脂肪族基である。ある特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも1個のリン結合基または中性結合基を含む。
ある特定の実施形態において、テザーは、1個以上の切断可能な結合を含む。ある特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介して分岐基に結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、ホスホジエステル基を介して分岐基に結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、リン結合基または中性結合基を介して分岐基に結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介して分岐基に結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介してリガンドに結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介してリガンドに結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介してリガンドに結合される。ある特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介してリガンドに結合される。
ある特定の実施形態において、各テザーは、リガンドと分岐基との間に約8~約20の原子鎖長を含む。ある特定の実施形態において、各テザー基は、リガンドと分岐基との間に約10~約18の原子鎖長を含む。ある特定の実施形態において、各テザー基は、約13の原子鎖長を含む。
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000045
式中、各nは、独立して、1~20であり、
各pは、1~約6である。
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000046
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000047
式中、各nは、独立して、1~20である。
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000048
式中、Lは、リン結合基または中性結合基のいずれかであり、
は、C(=O)O-Rであり、
は、H、C~Cアルキル、または置換C~Cアルキであり、
は、H、C~Cアルキル、または置換C~Cアルキであり、
各mは、独立して、0~20であり、少なくとも1つのmは、各テザーに対して0を超える。
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000049
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000050
式中、Zは、HまたはCHであり、
各mは、独立して、0~20であり、少なくとも1つのmは、各テザーに対して0を超える。
ある特定の実施形態において、テザーは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000051
または
Figure 0006995478000052
、式中、各nは、独立して、0、1、2、3、4、5、6、または7である。
ある特定の実施形態において、テザーは、リン結合基を含む。ある特定の実施形態において、テザーは、いかなるアミド結合も含まない。ある特定の実施形態において、テザーは、リン結合基を含み、いかなるアミド結合も含まない。
3. ある特定のリガンド
ある特定の実施形態において、本開示は、各リガンドがテザーに共有結合されるリガンドを提供する。ある特定の実施形態において、各リガンドは、標的細胞において少なくとも1種類の受容体に対する親和性を有するように選択される。ある特定の実施形態において、哺乳類肝臓細胞の表面において少なくとも1種類の受容体に対する親和性を有するリガンドが選択される。ある特定の実施形態において、肝アシアロ糖タンパク質受容体(ASGP-R)に対する親和性を有するリガンドが選択される。ある特定の実施形態において、各リガンドは、炭水化物である。ある特定の実施形態において、各リガンドは、ガラクトース、N-アセチルガラクトースアミン、マンノース、グルコース、グルコサミン、およびフコースから独立して選択される。ある特定の実施形態において、各リガンドは、N-アセチルガラクトースアミン(GalNAc)である。ある特定の実施形態において、標的部分は、2~6個のリガンドを含む。ある特定の実施形態において、標的部分は、3個のリガンドを含む。ある特定の実施形態において、標的部分は、3個のN-アセチルガラクトースアミンリガンドを含む。
ある特定の実施形態において、リガンドは、炭水化物、炭水化物誘導体、修飾炭水化物、多価炭水化物クラスター、多糖、修飾多糖、または多糖誘導体である。ある特定の実施形態において、リガンドは、アミノ糖またはチオ糖である。例えば、アミノ糖は、当技術分野で既知の任意の数の化合物、例えば、グルコサミン、シアル酸、α-D-ガラクトサミン、N-アセチルガラクトサミン、2-アセトアミド-2-デオキシ-D-ガラクトピラノース(GalNAc)、2-アミノ-3-O-[(R)-1-カルボキシエチル]-2-デオキシ-β-D-グルコピラノース(β-ムラミン酸)、2-デオキシ-2-メチルアミノ-L-グルコピラノース、4,6-ジデオキシ-4-ホルムアミド-2,3-ジ-O-メチル-D-マンノピラノース、2-デオキシ-2-スルホアミノ-D-グルコピラノース、およびN-スルホ-D-グルコサミン、およびN-グリコロイル-α-ノイラミン酸から選択され得る。例えば、チオ糖は、5-チオ-β-D-グルコピラノース、メチル2,3,4-トリ-O-アセチル-1-チオ-6-O-トリチル-α-D-グルコピラノシド、4-チオ-β-D-ガラクトピラノース、およびエチル3,4,6,7-テトラ-O-アセチル-2-デオキシ-1,5-ジチオ-α-D-グルコ-ヘプトピラノシドからなる群から選択され得る。
ある特定の実施形態において、「GalNac」または「Gal-NAc」は、文献内で一般にN-アセチルガラクトサミンと称される2-(アセチルアミノ)-2-デオキシ-D-ガラクトピラノースを指す。ある特定の実施形態において、「N-アセチルガラクトサミン」は、2-(アセチルアミノ)-2-デオキシ-D-ガラクトピラノースを指す。ある特定の実施形態において、「GalNac」または「Gal-NAc」は、2-(アセチルアミノ)-2-デオキシ-D-ガラクトピラノースを指す。ある特定の実施形態において、「GalNac」または「Gal-NAc」は、β形態:2-(アセチルアミノ)-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノースおよびα形態:2-(アセチルアミノ)-2-デオキシ-D-ガラクトピラノースの両方を含む、2-(アセチルアミノ)-2-デオキシ-D-ガラクトピラノースを指す。ある特定の実施形態において、β形態:2-(アセチルアミノ)-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノースおよびα形態:2-(アセチルアミノ)-2-デオキシ-D-ガラクトピラノースはどちらも、同義に使用され得る。したがって、1つの形態が示される構造において、これらの構造は、他の形態も同様に含むよう意図される。例えば、α形態:2-(アセチルアミノ)-2-デオキシ-D-ガラクトピラノースの構造が示される場合、この構造は、他の形態も同様に含むよう意図される。ある特定の実施形態において、ある特定の好ましい実施形態において、β形態:2-(アセチルアミノ)-2-デオキシ-D-ガラクトピラノースが好ましい実施形態である。
Figure 0006995478000053
Figure 0006995478000054
Figure 0006995478000055
ある特定の実施形態において、1個以上のリガンドは、以下の中から選択される構造を有し、
Figure 0006995478000056
式中、各Rは、OHおよびNHCOOHから選択される。
ある特定の実施形態において、1個以上のリガンドは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000057
ある特定の実施形態において、1個以上のリガンドは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000058
ある特定の実施形態において、1個以上のリガンドは、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000059
i. ある特定の共役体
ある特定の実施形態において、共役基は、上述の構造的特徴を含む。ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000060
式中、各nは、独立して、1~20である。
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000061
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000062
式中、各nは、独立して、1~20であり、
Zは、Hまたは結合固体支持体であり、
Qは、アンチセンス化合物であり、
Xは、OまたはSであり、
Bxは、複素環式塩基部分である。
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000063
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000064
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000065
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000066
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000067
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000068
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000069
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000070
ある特定の実施形態において、共役体は、ピロリジンを含まない。
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000071
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000072
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000073
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000074
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000075
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000076
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000077
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000078
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000079
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000080
ある特定のそのような実施形態において、共役基は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000081
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000082
式中、Xは、6~11個の連続結合原子の置換または非置換テザーである。
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000083
式中、Xは、10個の連続結合原子の置換または非置換テザーである。
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000084
式中、Xは、4~11個の連続結合原子の置換または非置換テザーであり、前記テザーは、正確に1個のアミド結合を含む。
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000085
式中、YおよびZは、C~C12置換もしくは非置換アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル基、またはエーテル、ケトン、アミド、エステル、カルバメート、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、トリアゾール、ピロリジン、ジスルフィド、もしくはチオエーテルを含む基から独立して選択される。
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000086
式中、YおよびZは、C~C12置換もしくは非置換アルキル基、または正確に1個のエーテルもしくは正確に2個のエーテル、アミド、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、もしくはホスホロチオエートを含む基から独立して選択される。
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000087
式中、YおよびZは、C~C12置換または非置換アルキル基から独立して選択される。
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000088
式中、mおよびnは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、および12から独立して選択される。
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000089
式中、mは、4、5、6、7、または8であり、nは、1、2、3、または4である。
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000090
式中、Xは、4~13個の連続結合原子の置換または非置換テザーであり、Xは、エーテル基を含まない。
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000091
式中、Xは、8個の連続結合原子の置換または非置換テザーであり、Xは、エーテル基を含まない。
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000092
式中、Xは、4~13個の連続結合原子の置換または非置換テザーであり、前記テザーは、正確に1個のアミド結合を含み、Xは、エーテル基を含まない。
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000093
式中、Xは、4~13個の連続結合原子の置換または非置換テザーであり、前記テザーは、アミド結合および置換または非置換C~C11アルキル基からなる。
ある特定の実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000094
式中、Yは、C~C12置換もしくは非置換アルキル、アルケニル、またはアルキニル基、またはエーテル、ケトン、アミド、エステル、カルバメート、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、トリアゾール、ピロリジン、ジスルフィド、もしくはチオエーテルを含む基から選択される。
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000095
式中、Yは、C~C12置換もしくは非置換アルキル基、またはエーテル、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、もしくはホスホロチオエートを含む基から選択される。
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000096
式中、Yは、C~C12置換または非置換アルキル基から選択される。
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000097
式中、nは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、または12である。
ある特定のそのような実施形態において、共役基の細胞標的部分は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000098
式中、nは、4、5、6、7、または8である。
b. ある特定の共役アンチセンス化合物
ある特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの2’、3’、または5’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000099
式中、
Aは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Bは、切断可能な部分であり、
Cは、共役リンカーであり、
Dは、分岐基であり、
各Eは、テザーであり、
各Fは、リガンドであり、
qは、1~5の整数である。
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000100
式中、
Aは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Cは、共役リンカーであり、
Dは、分岐基であり、
各Eは、テザーであり、
各Fは、リガンドであり、
qは、1~5の整数である。
ある特定のそのような実施形態において、共役リンカーは、少なくとも1個の切断可能な結合を含む。
ある特定のそのような実施形態において、分岐基は、少なくとも1個の切断可能な結合を含む。
ある特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも1個の切断可能な結合を含む。
ある特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの2’、3’、または5’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000101
式中、
Aは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Bは、切断可能な部分であり、
Cは、共役リンカーであり、
各Eは、テザーであり、
各Fは、リガンドであり、
qは、1~5の整数である。
ある特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの2’、3’、または5’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000102
式中、
Aは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Cは、共役リンカーであり、
各Eは、テザーであり、
各Fは、リガンドであり、
qは、1~5の整数である。
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000103
式中、
Aは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Bは、切断可能な部分であり、
Dは、分岐基であり、
各Eは、テザーであり、
各Fは、リガンドであり、
qは、1~5の整数である。
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の構造を有し、
Figure 0006995478000104
式中、
Aは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Dは、分岐基であり、
各Eは、テザーであり、
各Fは、リガンドであり、
qは、1~5の整数である。
ある特定のそのような実施形態において、共役リンカーは、少なくとも1個の切断可能な結合を含む。
ある特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも1個の切断可能な結合を含む。
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000105
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000106
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の中から選択される構造を有する。
Figure 0006995478000107
上述の共役体、共役アンチセンス化合物、テザー、リンカー、分岐基、リガンド、切断可能な部分、ならびに他の修飾のある特定の調製を教示する代表的な米国特許、米国特許出願公開物、および国際特許出願公開物には、米国特許第5,994,517号、同第6,300,319号、同第6,660,720号、同第6,906,182号、同第7,262,177号、同第7,491,805号、同第8,106,022号、同第7,723,509号、同第2006/0148740号、同第2011/0123520号、国際公開第WO2013/033230号、および同第WO2012/037254号が含まれるが、これらに限定されず、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
上述の共役体、共役アンチセンス化合物、テザー、リンカー、分岐基、リガンド、切断可能な部分、ならびに他の修飾のある特定の調製を教示する代表的な出版物には、BIESSEN et al.,“The Cholesterol Derivative of a Triantennary Galactoside with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor:a Potent Cholesterol Lowering Agent”J.Med.Chem.(1995)38:1846-1852、BIESSEN et al.,“Synthesis of Cluster Galactosides with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor”J.Med.Chem.(1995)38:1538-1546、LEE et al.,“New and more efficient multivalent glyco-ligands for asialoglycoprotein receptor of mammalian hepatocytes”Bioorganic & Medicinal Chemistry(2011)19:2494-2500、RENSEN et al.,“Determination of the Upper Size Limit for Uptake and Processing of Ligands by the Asialoglycoprotein Receptor on Hepatocytes in Vitro and in Vivo”J.Biol.Chem.(2001)276(40):37577-37584、RENSEN et al.,“Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteinss to the Hepatic Asialoglycoproteins Receptor”J.Med.Chem.(2004)47:5798-5808、SLIEDREGT et al.,“Design and Synthesis of Novel Amphiphilic Dendritic Galactosides for Selective Targeting of Liposomes to the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor”J.Med.Chem.(1999)42:609-618、およびValentijn et al.,“Solid-phase synthesis of lysine-based cluster galactosides with high affinity for the Asialoglycoprotein Receptor”Tetrahedron,1997,53(2),759-770が含まれるが、これらに限定されず、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、RNase Hベースのオリゴヌクレオチド(ギャップマー等)またはスプライス調節オリゴヌクレオチド(完全修飾オリゴヌクレオチド等)、および少なくとも1つ、2つ、または3個のGalNAc基を含む任意の共役基を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の参考文献:Lee,Carbohydr Res,1978,67,509-514、Connolly et al.,J Biol Chem,1982,257,939-945、Pavia et al.,Int J Pep Protein Res,1983,22,539-548、Lee et al.,Biochem,1984,23,4255-4261、Lee et al.,Glycoconjugate J,1987,4,317-328、Toyokuni et al.,Tetrahedron Lett,1990,31,2673-2676、Biessen et al.,J Med Chem,1995,38,1538-1546、Valentijn et al.,Tetrahedron,1997,53,759-770、Kim et al.,Tetrahedron Lett,1997,38,3487-3490、Lee et al.,Bioconjug Chem,1997,8,762-765、Kato et al.,Glycobiol,2001,11,821-829、Rensen et al.,J Biol Chem,2001,276,37577-37584、Lee et al.,Methods Enzymol,2003,362,38-43、Westerlind et al.,Glycoconj J,2004,21,227-241、Lee et al.,Bioorg Med Chem Lett,2006,16(19),5132-5135、Maierhofer et al.,Bioorg Med Chem,2007,15,7661-7676、Khorev et al.,Bioorg Med Chem,2008,16,5216-5231、Lee et al.,Bioorg Med Chem,2011,19,2494-2500、Kornilova et al.,Analyt Biochem,2012,425,43-46、Pujol et al.,Angew Chemie Int Ed Engl,2012,51,7445-7448、Biessen et al.,J Med Chem,1995,38,1846-1852、Sliedregt et al.,J Med Chem,1999,42,609-618、Rensen et al.,J Med Chem,2004,47,5798-5808、Rensen et al.,Arterioscler Thromb Vasc Biol,2006,26,169-175、van Rossenberg et al.,Gene Ther,2004,11,457-464、Sato et al.,J Am Chem Soc,2004,126,14013-14022、Lee et al.,J Org Chem,2012,77,7564-7571、Biessen et al.,FASEB J,2000,14,1784-1792、Rajur et al.,Bioconjug Chem,1997,8,935-940、Duff et al.,Methods Enzymol,2000,313,297-321、Maier et al.,Bioconjug Chem,2003,14,18-29、Jayaprakash et al.,Org Lett,2010,12,5410-5413、Manoharan,Antisense Nucleic Acid Drug Dev,2002,12,103-128、Merwin et al.,Bioconjug Chem,1994,5,612-620、Tomiya et al.,Bioorg Med Chem,2013,21,5275-5281、国際公開第WO1998/013381号、同第WO2011/038356号、同第WO1997/046098号、同第WO2008/098788号、同第WO2004/101619号、同第WO2012/037254号、同第WO2011/120053号、同第WO2011/100131号、同第WO2011/163121号、同第WO2012/177947号、同第WO2013/033230号、同第WO2013/075035号、同第WO2012/083185号、同第WO2012/083046号、同第WO2009/082607号、同第WO2009/134487号、同第WO2010/144740号、同第WO2010/148013号、同第WO1997/020563号、同第WO2010/088537号、同第WO2002/043771号、同第WO2010/129709号、同第WO2012/068187号、同第WO2009/126933号、同第WO2004/024757号、同第WO2010/054406号、同第WO2012/089352号、同第WO2012/089602号、同第WO2013/166121号、同第WO2013/165816号、米国特許第4,751,219号、同第8,552,163号、同第6,908,903号、同第7,262,177号、同第5,994,517号、同第6,300,319号、同第8,106,022号、同第7,491,805号、同第7,491,805号、同第7,582,744号、同第8,137,695号、同第6,383,812号、同第6,525,031号、同第6,660,720号、同第7,723,509号、同第8,541,548号、同第8,344,125号、同第8,313,772号、同第8,349,308号、同第8,450,467号、同第8,501,930号、同第8,158,601号、同第7,262,177号、同第6,906,182号、同第6,620,916号、同第8,435,491号、同第8,404,862号、同第7,851,615;公開された米国特許出願公開第US2011/0097264号、同第US2011/0097265号、同第US2013/0004427号、同第US2005/0164235号、同第US2006/0148740号、同第US2008/0281044号、同第US2010/0240730号、同第US2003/0119724号、同第US2006/0183886号、同第US2008/0206869号、同第US2011/0269814号、同第US2009/0286973号、同第US2011/0207799号、同第US2012/0136042号、同第US2012/0165393号、同第US2008/0281041号、同第US2009/0203135号、同第US2012/0035115号、同第US2012/0095075号、同第US2012/0101148号、同第US2012/0128760号、同第US2012/0157509号、同第US2012/0230938号、同第US2013/0109817号、同第US2013/0121954号、同第US2013/0178512号、同第US2013/0236968号、同第US2011/0123520号、同第US2003/0077829号、同第US2008/0108801号、および同第US2009/0203132号のうちのいずれかにおいて見出される任意の共役基を含み、これらの各々は、参照によりその全体が組み込まれる。
C. ある特定の用途および特徴
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、生体内で標的RNAの強力な減少を示す。ある特定の実施形態において、非共役アンチセンス化合物は、腎臓に蓄積する。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、肝臓に蓄積する。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、良好な耐容性を示す。そのような特性は、共役アンチセンス化合物を、代謝性、心臓血管、および他の疾患、障害、または状態に関与する標的RNAを含むが、これらに限定されない多くの標的RNAの阻害に特に有用にする。したがって、肝臓組織を、そのような疾患、障害、または状態に関連したRNAを標的にする共役アンチセンス化合物と接触させることによって、そのような疾患、障害、または状態を治療する方法が本明細書に提供される。したがって、本発明の共役アンチセンス化合物を用いて、様々な代謝性、心臓血管、および他の疾患、障害、または状態のうちのいずれかを改善するための方法も提供される。
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、特定の組織濃度で非共役対応物よりも強力である。いかなる理論または機構によって束縛されることを望むことなく、ある特定の実施形態において、共役体は、共役アンチセンス化合物がより効率的に細胞に入るか、またはより生産的に細胞に入ることを可能にし得る。例えば、ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、その非共役対応物と比較して、より高い標的還元を示し得、共役アンチセンス化合物およびその非共役対応物は両方ともに、同一の濃度で組織に存在する。例えば、ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、その非共役対応物と比較して、より高い標的還元を示し得、共役アンチセンス化合物およびその非共役対応物は両方ともに、同一の濃度で肝臓に存在する。
オリゴヌクレオチドの生産的および非生産的な取り込みは、以前に論じられている(例えば、Geary,R.S.,E.Wancewicz,et al.(2009).“Effect of Dose and Plasma Concentration on Liver Uptake and Pharmacologic Activity of a 2’-Methoxyethyl Modified Chimeric Antisense Oligonucleotide Targeting PTEN.”Biochem.Pharmacol.78(3):284-91、およびKoller,E.,T.M.Vincent,et al.(2011).“Mechanisms of single-stranded phosphorothioate modified antisense oligonucleotide accumulation in hepatocytes.”Nucleic Acids Res.39(11):4795-807を参照のこと)。本明細書に記載される共役基は、生産的な取り込みを改善し得る。
ある特定の実施形態において、本明細書に記載される共役基は、特定の種類の細胞または組織に対する共役アンチセンス化合物の親和性を増加させることによって強度をさらに改善し得る。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される共役基は、1個以上の細胞表面受容体による共役アンチセンス化合物の認識を増加させることによって強度をさらに改善し得る。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される共役基は、共役アンチセンス化合物のエンドサイトーシスを促進することによって強度をさらに改善し得る。
ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、共役アンチセンス化合物が細胞に入った後に共役体がアンチセンスオリゴヌクレオチドから切断されることを可能にすることによって強度をさらに改善し得る。したがって、ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチドに必要な用量よりも低い用量で投与され得る。
ホスホロチオエート結合は、以前にアンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれている。そのようなホスホロチオエート結合は、ヌクレアーゼに耐性を示すため、オリゴヌクレオチドの安定性を改善する。さらに、ホスホロチオエート結合は、ある特定のタンパク質にも結合し、肝臓におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの蓄積をもたらす。より少ないホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドは、肝臓にあまり蓄積せず、腎臓により多く蓄積する(例えば、Geary,R.,“Pharmacokinetic Properties of 2’-O-(2-Methoxyethyl)-Modified Oligonucleotide Analogs in Rats,”Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics,Vol.296,No.3,890-897、およびPharmacological Properties of 2’-O-Methoxyethyl Modified Oligonucleotides in Antisense a Drug Technology,Chapter 10,Crooke,S.T.,ed.,2008を参照のこと)。ある特定の実施形態において、より少ないホスホロチオエートヌクレオシド間結合およびより多くのホスホジエステルヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、肝臓にあまり蓄積せず、腎臓により多く蓄積する。肝臓における疾患を治療する際、これは、(1)薬物が所望の作用部位(肝臓)にあまり到達せず、(2)薬物が尿に流出し、(3)腎臓が比較的高い濃度の、腎臓に毒性をもたらし得る薬物に曝露される、といったいくつかの理由のため、望ましくない。したがって、肝臓疾患の場合、ホスホロチオエート結合は、重要な利益を提供する。
しかしながら、ある特定の実施形態において、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合によって均一に連結されたオリゴヌクレオチドの投与は、1つ以上の炎症誘発反応を誘導する(例えば、J Lab Clin Med.1996 Sep;128(3):329-38.“Amplification of antibody production by phosphorothioate oligodeoxynucleotides”.Branda et al.を参照されたく、例えば、Toxicologic Properties in Antisense a Drug Technology,Chapter 12,pages 342-351,Crooke,S.T.,ed.,2008も参照のこと)。ある特定の実施形態において、ヌクレオシド間結合の多くがホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドの投与は、1つ以上の炎症誘発反応を誘導する。
ある特定の実施形態において、炎症誘発作用の程度は、いくつかの可変物(例えば、骨格修飾、オフ標的作用、核酸塩基修飾、および/またはヌクレオシド修飾)に依存し得る(例えば、Toxicologic Properties in Antisense a Drug Technology,Chapter 12,pages 342-351,Crooke,S.T.,ed.,2008を参照されたい)。ある特定の実施形態において、炎症誘発作用の程度は、1つ以上の可変物を調整することによって軽減され得る。例えば、所与のオリゴヌクレオチドの炎症誘発作用の程度は、任意の数のホスホロチオエートヌクレオシド間結合をホスホジエステルヌクレオシド間結合に置き換え、それによりホスホロチオエートヌクレオシド間結合の総数を減少させることによって軽減され得る。
ある特定の実施形態において、ホスホロチオエート結合の数を減少させることが望ましく、そうすることで、安定性を失うことも、肝臓から腎臓への分布を変化させることもなく減少させることができる。例えば、ある特定の実施形態において、ホスホロチオエート結合の数は、ホスホロチオエート結合をホスホジエステル結合に置き換えることによって減少され得る。そのような実施形態において、より少ないホスホロチオエート結合およびより多くのホスホジエステル結合を有するアンチセンス化合物は、より低い炎症誘発反応を誘導するか、全く誘導しない。より少ないホスホロチオエート結合およびより多くのホスホジエステル結合を有するアンチセンス化合物はより低い炎症誘発反応を誘導するが、より少ないホスホロチオエート結合およびより多くのホスホジエステル結合を有するアンチセンス化合物は、肝臓に蓄積せず、より多くのホスホロチオエート結合を有するアンチセンス化合物と比較して、同一または同様の用量で有効性がより低くあり得る。したがって、ある特定の実施形態において、複数のホスホジエステル結合および複数のホスホロチオエート結合を有するが、安定性および肝臓への良好な分布も有するアンチセンス化合物を設計することが望ましい。
ある特定の実施形態において、ホスホロチオエート結合のうちのいくつかが炎症誘発性の低いホスホジエステルヌクレオシド間結合と置き換えられる場合でも、共役アンチセンス化合物は、非共役対応物と比較して、肝臓により多く蓄積し、腎臓にはあまり蓄積しない。ある特定の実施形態において、ホスホロチオエート結合のうちのいくつかが炎症誘発性の低いホスホジエステルヌクレオシド間結合と置き換えられる場合でも、共役アンチセンス化合物は、その非共役対応物と比較して、肝臓により多く蓄積し、その非共役対応物ほど尿に排泄されない。ある特定の実施形態において、共役体を使用することで、より強力でより良好な耐性のアンチセンス薬物を設計することが可能になる。実際には、ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、非共役対応物よりも大きい治療指数を有する。これは、炎症誘発応答の危険性がより低く、かつ腎毒性の危険性もより低いため、共役アンチセンス化合物がより高い絶対用量で投与されることを可能にする。このより高い用量は、排除(代謝)が同様であると見込まれるため、低頻度で投薬されることを可能にする。さらに、上述のように、化合物がより強力であるため、治療活性を失うことなく次の投薬の前に濃度をより低くすることができ、さらに長い投薬間期間を可能にする。
ある特定の実施形態において、いくつかのホスホロチオエート結合の包含がなお望ましい。例えば、末端結合がエキソヌクレアーゼに対して脆弱であるため、ある特定の実施形態において、これらの結合は、ホスホロチオエートまたは他の修飾結合である。2個のデオキシヌクレオシドを結合するヌクレオシド間結合がエンドヌクレアーゼに対して脆弱であるため、ある特定の実施形態において、これらのこれらの結合は、ホスホロチオエートまたは他の修飾結合である。デオキシヌクレオシドが結合デオキシヌクレオシドの5’側にある修飾ヌクレオシドとデオキシヌクレオシドとの間のヌクレオシド間結合がエンドヌクレアーゼに対して脆弱であるため、ある特定の実施形態において、これらのこれらの結合は、ホスホロチオエートまたは他の修飾結合である。修飾ヌクレオシドが結合の5’側にある、ある特定の種類の2個の修飾ヌクレオシド間、およびある特定の種類のデオキシヌクレオシドと修飾ヌクレオシドとの間のヌクレオシド間結合がヌクレアーゼ消化に十分に耐性を示すため、この結合は、ホスホジエステルであり得る。
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、16個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、15個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、14個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、13個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、12個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、11個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、10個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、9個未満のホスホロチオエート結合を含む。ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、8個未満のホスホロチオエート結合を含む。
ある特定の実施形態において、本明細書に記載される1個以上の共役基を含むアンチセンス化合物は、そのような1個以上の共役基を欠く親アンチセンス化合物と比較して、増加した活性および/または強度および/または耐容性を有する。したがって、ある特定の実施形態において、そのような共役基のオリゴヌクレオチドへの結合が望ましい。そのような共役基は、オリゴヌクレオチドの5’末端および/または3’末端に結合され得る。ある特定の事例において、5’末端での結合が合成的に望ましい。典型的には、オリゴヌクレオチドは、当技術分野で周知の技法を用いて、3’末端ヌクレオシドの固体支持体への結合および3’から5’までのヌクレオシドの連続カップリングによって合成される。したがって、共役基が3’末端で所望される場合、(1)共役基を3’末端ヌクレオシドに結合させ、オリゴヌクレオチドのその後の調製のために、その共役ヌクレオシドを固体支持体に結合させるか、または(2)合成後に、共役基を完全なオリゴヌクレオチドの3’末端ヌクレオシドに結合させることができる。これらの手段のいずれもあまり効率的ではなく、それ故に、これらはいずれも費用のかかる手段である。具体的には、共役ヌクレオシドの固体支持体への結合は、本明細書の実施例において実証されるが、非効率的なプロセスである。ある特定の実施形態において、共役基を5’末端ヌクレオシドに結合させることは、3’末端での結合よりも合成的に容易である。特徴のはっきりした標準の反応を用いて、非共役3’末端ヌクレオシドを固体支持体に結合させ、このオリゴヌクレオチドを調製することができる。その後、最終カップリングステップで共役基を有する5’ヌクレオシドを結合させることのみを必要とする。ある特定の実施形態において、これは、3’-共役オリゴヌクレオチドを調製するために典型的に行われる共役ヌクレオシドの固体支持体への直接結合よりも効率的である。本明細書の実施例は、5’末端での結合を実証する。加えて、ある特定の共役基は、合成利点を有する。例えば、リン結合基を含むある特定の共役基は、以前に報告された共役基(例えば、国際公開第WO/2012/037254号)を含む他の共役基よりも合成的に単純であり、かつ効率的に調製される。
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、対象に投与される。そのような実施形態において、本明細書に記載される1個以上の共役基を含むアンチセンス化合物は、そのような1個以上の共役基を欠く親アンチセンス化合物と比較して、増加した活性および/または強度および/または耐容性を有する。機構によって束縛されることなく、共役基が、標的細胞または組織への分布、送達、および/または取り込みに役立つと考えられる。ある特定の実施形態において、標的細胞または組織に入ると、共役基のすべてまたは一部が切断されて、活性オリゴヌクレオチドを放出することが望ましい。ある特定の実施形態において、すべての共役基がオリゴヌクレオチドから切断される必要はない。例えば、実施例20において、共役オリゴヌクレオチドをマウスに投与し、各々がオリゴヌクレオチドに残った共役基の異なる部分を含むいくつかの異なる化学種を検出した(表10a)。この共役アンチセンス化合物は、良好な強度を示した(表10)。したがって、ある特定の実施形態において、共役基の複数の部分的切断のそのような代謝物プロファイルは、活性/強度を妨げない。それにもかかわらず、ある特定の実施形態において、プロドラッグ(共役オリゴヌクレオチド)が単一の活性化合物を産出することが望ましい。ある特定の事例において、活性化合物の複数の形態が見出される場合、各形態の相対量および活性を決定する必要があり得る。ある特定の実施形態において、規制調査が要求される場合(例えば、USFDAまたは対応物)、単一の(または主に単一の)活性種を有することが望ましい。ある特定のそのような実施形態において、そのような単一の活性種が共役基の任意の部分を欠くアンチセンスオリゴヌクレオチドであることが望ましい。ある特定の実施形態において、5’末端の共役基は、共役基の完全な代謝をもたらす可能性が高い。機構によって束縛されることなく、5’末端(例えば、5’ヌクレアーゼ)の代謝に関与する内因性酵素が3’対応物よりも活性/効率的であり得る。ある特定の実施形態において、これらの特定の共役基は、単一の活性種への代謝により従順である。ある特定の実施形態において、ある特定の共役基は、オリゴヌクレオチドへの代謝により従順である。
D. アンチセンス
ある特定の実施形態において、本発明のオリゴマー化合物は、アンチセンス化合物である。そのような実施形態において、オリゴマー化合物は、標的核酸に相補的である。ある特定の実施形態において、標的核酸は、RNAである。ある特定の実施形態において、標的核酸は、非コードRNAである。ある特定の実施形態において、標的核酸は、タンパク質をコードする。ある特定の実施形態において、標的核酸は、mRNA、プレmRNA、マイクロRNA、小非コードRNAを含む非コードRNA、およびプロモーター指向性RNAから選択される。ある特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、2個以上の標的核酸に少なくとも部分的に相補的である。例えば、本発明のオリゴマー化合物は、マイクロRNA模倣物であり、これは、典型的には、複数の標的に結合する。
ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも70%相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも80%相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも90%相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも95%相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも98%相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的核酸の核酸塩基配列に100%相補的な核酸塩基配列を有する部分を含む。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、アンチセンス化合物の全長にわたって、標的核酸の核酸塩基配列に少なくとも70%、80%、90%、95%、98%、または100%相補的である。
アンチセンス機構は、オリゴマー化合物の標的核酸とのハイブリダイゼーションを伴う任意の機構を含み、このハイブリダイゼーションは、生物学的効果をもたらす。ある特定の実施形態において、そのようなハイブリダイゼーションは、例えば、標的核酸の、または標的核酸が別の方法で相互作用し得る核酸の翻訳、転写、またはポリアデニル化を伴う細胞機構の同時に起こる阻害または刺激により、標的核酸の分解または占有のいずれかをもたらす。
標的RNAの分解を伴う一種のアンチセンス機構は、RNase H媒介アンチセンスである。RNase Hは、RNA:DNA二本鎖のRNA鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼである。「DNA様」の一本鎖アンチセンス化合物が哺乳類細胞におけるRNase H活性を誘発することが当技術分野で既知である。したがって、RNase Hの活性化は、RNA標的の切断をもたらし、それにより遺伝子発現のDNA様オリゴヌクレオチド媒介阻害の効率を大幅に向上させる。
アンチセンス機構には、RISC経路を利用するRNAi機構も含まれるが、これらに限定されない。そのようなRNAi機構には、siRNA、ssRNA、およびマイクロRNA機構が含まれるが、これらに限定されない。そのような機構は、マイクロRNA模倣物および/または抗マイクロRNAの作成を含む。
アンチセンス機構には、マイクロRNAまたはmRNA以外の非コードRNAをハイブリダイズさせるか、または模倣する機構も含まれるが、これに限定されない。そのような非コードRNAには、1個以上の核酸の転写または翻訳をもたらすプロモーター指向性RNAならびに短いRNAおよび長いRNAが含まれるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態において、本明細書に記載される共役体を含むオリゴヌクレオチドは、RNAi化合物である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される共役体を含むオリゴマーオリゴヌクレオチドは、ssRNA化合物である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される共役体を含むオリゴヌクレオチドは、第2のオリゴマー化合物と対合されて、siRNAを形成する。ある特定のそのような実施形態において、第2のオリゴマー化合物は、共役体も含む。ある特定の実施形態において、第2のオリゴマー化合物は、任意の修飾または非修飾核酸である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される共役体を含むオリゴヌクレオチドは、siRNA化合物におけるアンチセンス鎖である。ある特定の実施形態において、本明細書に記載される共役体を含むオリゴヌクレオチドは、siRNA化合物におけるセンス鎖である。共役オリゴマー化合物が二本鎖siRnAである実施形態において、共役体は、センス鎖に、アンチセンス鎖に、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方に存在し得る。
D. 標的核酸、領域、およびセグメント
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、任意の核酸を標的とする。ある特定の実施形態において、標的核酸は、臨床的に関連する標的タンパク質をコードする。そのような実施形態において、標的核酸の調節は、臨床的利益をもたらす。ある特定の標的核酸には、表1に例証される標的核酸が含まれるが、これらに限定されない。
Figure 0006995478000108
標的プロセスは、アンチセンス相互作用が生じて所望の効果が結果的に生じるように、通常、標的核酸内の少なくとも1個の標的領域、セグメント、または部位の決定を含む。
ある特定の実施形態において、標的領域は、核酸の構造的に定義された領域である。例えば、ある特定のそのような実施形態において、標的領域は、3’UTR、5’UTR、エキソン、イントロン、コーディング領域、翻訳開始領域、翻訳終結領域、または他の定義された核酸領域もしくは標的セグメントを包含し得る。
ある特定の実施形態において、標的セグメントは、共役アンチセンス化合物が標的とされる標的領域の少なくとも約8核酸塩基部分である。標的セグメントは、標的セグメントのうちの1個の5’末端から少なくとも8個の連続した核酸塩基を含むDNAまたはRNA配列を含み得る(残りの核酸塩基は、標的セグメントの5’末端のすぐ上流で開始し、DNAまたはRNAが約8~約30個の核酸塩基を含むまで続く連続した一続きの同一のDNAまたはRNAである)。標的セグメントは、標的セグメントのうちの1個の3’末端から少なくとも8個の連続した核酸塩基を含むDNAまたはRNA配列によっても表される(残りの核酸塩基は、標的セグメントの3’末端のすぐ下流で開始し、DNAまたはRNAが約8~約30個の核酸塩基を含むまで続く連続した一続きの同一のDNAまたはRNAである)。標的セグメントは、標的セグメントの配列の内部部分から少なくとも8個の連続した核酸塩基を含むDNAまたはRNA配列によっても表され、共役アンチセンス化合物が約8~約30個の核酸塩基を含むまでいずれかの方向または両方向に延在し得る。
ある特定の実施形態において、表1に列記される核酸を標的にするアンチセンス化合物は、本明細書に記載されるように修飾され得る。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、本明細書に記載される修飾糖部分、非修飾糖部分、または修飾および非修飾糖部分の混合物を有し得る。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、本明細書に記載される修飾ヌクレオシド間結合、非修飾ヌクレオシド間結合、または修飾および非修飾ヌクレオシド間結合の混合物を有し得る。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、本明細書に記載される修飾核酸塩基、非修飾核酸塩基、または修飾および非修飾核酸塩基の混合物を有し得る。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、本明細書に記載されるモチーフを有し得る。
ある特定の実施形態において、表1に列記される核酸を標的にするアンチセンス化合物は、本明細書に記載されるように共役され得る。
1. B型肝炎(HBV)
B型肝炎は、血液および血液製剤、ならびに汚染された注射針等の汚染物質によって非経口的に、感染した母親または保菌者である母親からその子孫まで性的および縦関係的に伝染したウイルス性疾患である。世界保健機関は、世界中で20億を超える人々が感染しており、1年に約400万人が急性症例であり、1年に100万人が死亡し、3.5~4億人が慢性保菌者であると推定している(World Health Organization:Geographic Prevalence of Hepatitis B Prevalence,2004.http://www.who.int/vaccines-surveillance/graphics/htmls/hepbprev.htm)。
ウイルスであるHBVは、ヒトおよび非ヒト霊長類のみに感染する二本鎖肝臓指向性ウイルスである。ウイルス複製は、主に肝臓で起こり、程度は低いが、腎臓、膵臓、骨髄、および脾臓でも起こる(Hepatitis B virus biology.Microbiol Mol Biol Rev.64:2000;51-68)。ウイルスおよび免疫マーカーは、血液中で検出可能であり、特徴的な抗原-抗体パターンは、経時的に進化する。第1の検出可能なウイルスマーカーは、HBsAgであり、その後にB型肝炎e抗原(HBeAg)およびHBV DNAが続く。力価は、インキュベーション期間中は高くあり得るが、HBV DNAおよびHBeAgのレベルは、疾患の発病時に低下し始め、臨床的疾患のピーク時に検出不能になり得る(Hepatitis B virus infection-natural history and clinical consequences.N Engl J Med.350:2004;1118-1129)。HBeAgは、血液中で検出可能なウイルスマーカーであり、活性ウイルス複製、ひいては高ウイルス量および高感染性と相関する(Hepatitis B e antigen-the dangerous end game of hepatitis B.N Engl J Med.347:2002;208-210)。抗HBsAbおよび抗HBcAb(IgG)の存在は、以前に感染した個人の回復および免疫力を示す。
米国肝臓病学会(AASLD)および欧州肝臓病学会(EASL)が現在推奨する慢性HBV感染療法には、インターフェロンα(INFα)、ペグ化インターフェロンα-2a(Peg-IFN2a)、エンテカビル、およびテノフォビルが含まれる。ヌクレオシドおよび核酸塩基療法であるエンテカビルおよびテノフォビルは、ウイルス量をうまく減少させるが、HBeAgセロコンバージョン率およびHBsAg損失率は、IFNα療法を用いて得られるものよりもさらに低い。ラミブジン(3TC)、テルビブジン(LdT)、およびアデフォビルを含む他の同様の療法も用いられるが、一般にヌクレオシド/核酸塩基療法の場合、耐性発生は、治療効果を制限する。
したがって、当技術分野における新たな抗ウイルス療法の発見および開発が必要とされている。さらに、HBeAgおよびHBsAgのセロコンバージョン率を増加させることができる新たな抗HBV療法が必要とされている。近年の臨床研究は、HBeAgのセロコンバージョンおよび減少(Fried et al(2008)Hepatology 47:428)とHBsAgの減少(Moucari et al(2009)Hepatology 49:1151)との間の相関を見出している。高レベルの抗原が免疫学的寛容を誘導すると考えられるため、抗原レベルの減少は、HBV感染の免疫学的制御を可能にしたかもしれない。現在のHBVに対するヌクレオシド療法は、HBVの血清レベルを劇的に減少させることができるが、HBeAgおよびHBsAgレベルにはほとんど影響を及ぼさない。
HBVを標的とするアンチセンス化合物は、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第WO2011/047312号、同第WO2012/145674号、および同第WO2012/145697号に以前に開示されている。臨床研究は、患者におけるHBVを標的とするアンチセンス化合物の影響を評価するよう計画されている。しかしながら、患者にさらなるより有力な治療選択肢を提供することが依然として必要とされている。
HBV核酸を標的にするある特定の共役アンチセンス化合物
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、配列番号1として本明細書に組み込まれるGENBANK(登録商標)受入番号U95551.1の配列を有するHBV核酸を標的にする。ある特定のそのような実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号1に少なくとも90%、少なくとも95%、または100%相補的である。
ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号3の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号3の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号4の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号4の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号5の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号5の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号6の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号6の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号7の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号7の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号8の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号8の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号9の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号9の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号10の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号10の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号11の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号11の核酸塩基配列を含む。
Figure 0006995478000109
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 505358および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 505358は、式:Ges mCes Aes Ges Aes Gds Gds Tds Gds Ads Ads Gds mCds Gds Ads Aes Ges Tes Ges mCeを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 509934および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 509934は、式:mCes mCes Aes Aes Tes Tds Tds Ads Tds Gds mCds mCds Tds Ads mCds Aes Ges mCes mCes Teを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 510100および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 510100は、式:Ges Ges mCes Ads Tds Ads Gds mCds Ads Gds mCds Ads Gds Ges Aes Tes Geを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 552023および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 552023は、式:Aes Ges Ges Aes Ges Tes Tds mCds mCds Gds mCds Ads Gds Tds Ads Tds Ges Ges Aes Teを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 552024および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 552024は、式:Ges Tes Ges Aes Aes Ges mCds Gds Ads Ads Gds Tds Gds mCds Ads mCds Aes mCes Ges Geを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 552032および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 552032は、式:Ges Tes Ges mCes Aes Ges Ads Gds Gds Tds Gds Ads Ads Gds mCds Gds Aes Aes Ges Teを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 552859および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 552859は、式:Aes Gks Gks Tds Gds Ads Ads Gds mCds Gds Ads Ads Gds Tks Gks mCeを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
kは、cEt修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 552925および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 552925は、式:Tes mCks mCds Gds mCds Ads Gds Tds Ads Tds Gds Gds Aks Tes mCks Geを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
kは、cEt修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 577119および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 577119は、式:Aks Ads Tks Tds Tks Ads Tds Gds mCds mCds Tds Ads mCds Aes Ges mCes mCes Teを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
kは、cEt修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、以下の化学構造を有する化合物は、5’-Xを有するISIS 505358を含むか、またはそれからなり、式中、Xは、本明細書に記載される共役基である。
Figure 0006995478000110
ある特定の実施形態において、化合物は、以下の化学構造を有するISIS 712408を含むか、またはそれからなる。
Figure 0006995478000111
ある特定の実施形態において、化合物は、以下の化学構造を有するISIS 695324を含むか、またはそれからなる。
Figure 0006995478000112
ある特定の実施形態において、化合物は、配列番号3、5’-GalNAc、および以下の化学構造によって表される化学修飾を含むか、またはそれらからなり、
Figure 0006995478000113
式中、Rが、-OCHCHOCH(MOE)であり、ならびにRが、Hであるか、またはRおよびRが一緒になって橋を形成するかのいずれかであり、そこで、Rが、-O-であり、Rが、-CH-、-CH(CH)-、または-CHCH-であり、結果として生じる橋が、-O-CH-、-O-CH(CH)-、および-O-CHCH-から選択されるように、RおよびRが直接連結され、
同一の環上にて各環のRおよびRの各対について、独立して各環について、Rが、Hおよび-OCHCHOCHから選択され、ならびにRが、Hであるか、またはRおよびRが一緒になって橋を形成するかのいずれかであり、そこで、Rが、-O-であり、Rが、-CH-、-CH(CH)-、または-CHCH-であり、結果として生じる橋が、-O-CH-、-O-CH(CH)-、および-O-CHCH-から選択されるように、RおよびRが直接連結され、
が、Hおよび-CHから選択され、
Zが、SおよびOから選択される。
ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第WO2012/145697号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第WO2012/145697号に開示される、配列番号5~310、321~802、804~1272、1288~1350、1364~1372、1375、1376、および1379のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第WO2011/047312号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオと、本明細書に記載される共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第WO2011/047312号に開示される、配列番号14~22のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第WO2012/145674号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第WO2012/145674号に開示される配列番号18~35のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第WO2013/159109号に開示される二本鎖オリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、一方の鎖が国際公開第WO2013/159109号に開示される配列番号30~125のうちのいずれかの核酸塩基配列を有する二本鎖オリゴヌクレオチドを含む。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
HBV治療指標
ある特定の実施形態において、本発明は、HBV核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を用いて対象におけるHBVの発現を調節するための方法を提供する。ある特定の実施形態において、HBVの発現が低下する。
ある特定の実施形態において、本発明は、医薬組成物中のHBV核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を用いて対象を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態において、対象は、HBV関連状態を有する。ある特定の実施形態において、HBV関連状態には、慢性HBV感染、炎症、線維症、硬変、肝臓癌、血清肝炎、黄疸、肝臓癌、肝臓炎、肝線維症、肝硬変、肝不全、びまん性肝細胞炎症性疾患、血球貪食症候群、血清肝炎、およびHBVウイルス血症が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、HBV関連状態は、B型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス抗原の存在についての陽性試験、またはB型肝炎ウイルス抗原に特異的な抗体の存在についての陽性試験と相まって、インフルエンザ様疾患、脱力感、疼痛、頭痛、発熱、食欲喪失、下痢、黄疸、嘔気および嘔吐、身体の肝臓領域の痛み、粘土色または灰色の便、体中の痒み、および暗色の尿のうちのいずれかまたはすべてを含み得る症状を有し得る。ある特定の実施形態において、対象は、HBV関連状態の危険性がある。この対象には、B型肝炎ウイルスに感染した個人への性的曝露、生涯にわたるB型肝炎ウイルス感染を有する個人との同居、B型肝炎ウイルスに感染したヒト血液への曝露、不正薬物の注入、血友病を有する人との接触、およびB型肝炎がよく見られる地域への訪問を含む、HBV関連状態を発症する1つ以上の危険因子を有する対象が含まれる。ある特定の実施形態において、対象は、HBV関連状態の治療を必要とすると特定されている。
ある特定の実施形態は、HBVに感染している動物におけるHBV DNAおよび/またはHBV抗原レベルを低減させる方法を提供し、前記動物に、HBV核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を投与することを含む。ある特定の実施形態において、抗原は、HBsAGまたはHBeAGである。ある特定の実施形態において、HBV抗原の量を十分に低減させて、セロコンバージョンをもたらすことができる。
ある特定の実施形態において、本発明は、HBV核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を用いて薬剤を調製するための方法を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、治療に用いるためのHBV核酸を標的にする共役アンチセンス化合物またはその薬剤的に許容される塩を提供する。
ある特定の実施形態は、HBV関連状態の治療に用いるためのHBV核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を提供する。HBV関連状態には、慢性HBV感染、炎症、線維症、硬変、肝臓癌、血清肝炎、黄疸、肝臓癌、肝臓炎、肝線維症、肝硬変、肝不全、びまん性肝細胞炎症性疾患、血球貪食症候群、血清肝炎、およびHBVウイルス血症が含まれるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態は、HBVに感染している動物におけるHBV DNAおよび/またはHBV抗原レベルを低減させるために用いるためのHBV核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を提供し、前記動物に、HBV核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を投与することを含む。ある特定の実施形態において、抗原は、HBsAGまたはHBeAGである。ある特定の実施形態において、HBV抗原の量を十分に低減させて、セロコンバージョンをもたらすことができる。
本明細書に記載される化合物のうちのいずれかを前述の方法および使用において用いることができることが理解されるであろう。例えば、ある特定の実施形態において、前述の方法および使用におけるHBV核酸を標的にする共役アンチセンス化合物には、配列番号3~11のうちのいずれかの少なくとも8連続核酸塩基配列を含む配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物;配列番号3~11のうちのいずれかの核酸塩基配列を含む配列番号1を標的にする共役アンチセンス化合物;ISIS 505358、ISIS 509934、ISIS 510100、ISIS 552023、ISIS 552024、ISIS 552032、ISIS 552859、ISIS 552925、もしくはISIS 577119と、共役基とを含むか、またはそれらからなる化合物;および参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第WO2012/145697号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、共役基とを含む化合物;国際公開第WO2012/145697号に開示される配列番号5~310、321~802、804~1272、1288~1350、1364~1372、1375、1376、および1379のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む化合物;国際公開第WO2011/047312号に開示される配列番号14~22のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む化合物;国際公開第WO2012/145674号に開示される配列番号18~35のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む化合物;または一方の鎖が国際公開第WO2013/159109号に開示される配列番号30~125のうちのいずれかの核酸塩基配列を有する二本鎖オリゴヌクレオチドを含む化合物が含まれ得るが、これらに限定されない。
2. トランスサイレチン(TTR)
TTR(別名、プレアルブミン、高サイロキシン血症、プレアルブミン異常、チロキシン;老人性全身性アミロイドーシス、アミロイド多発ニューロパチー、アミロイドーシスI、PALB;トランスサイレチン障害、HST2651;TBPA;プレアルブミン障害甲状腺機能正常性過剰サイロキシン血症)は、チロキシンおよびレチノールの輸送に関与する血清/血漿および脳脊髄液タンパク質である(Sakaki et al,Mol Biol Med.1989,6:161-8)。構造的に、TTRは、ホモ四量体であり、タンパク質の点変異およびミスフォールディングは、アミロイド原線維の沈着につながり、老人性全身性アミロイドーシス(SSA)、家族性アミロイド多発ニューロパチー(FAP)、および家族性アミロイド心臓病(FAC)等の障害と関連している。
TTRは、主に肝臓および脳脈絡叢によって合成され、程度は低いが、ヒト網膜によっても合成される(Palha,Clin Chem Lab Med,2002,40,1292-1300)。肝臓で合成されるトランスサイレチンが血液中に分泌される一方で、脈絡叢に由来するトランスサイレチンは、CSFに向かう運命にある。脈絡叢において、トランスサイレチン合成は、全局所タンパク質合成の約20%に相当し、全CSFタンパク質の25%にも相当する(Dickson et al.,J Biol Chem,1986,261,3475-3478)。
遺伝子および免疫組織化学的診断試験を使用することで、TTRアミロイドーシスを有する患者は、世界各地で見つけられている。最近の研究は、TTRアミロイドーシスが以前に考えられていたような稀な風土病ではなく、高齢者人口の25%にも影響を及ぼし得ることを示している(Tanskanen et al,Ann Med.2008;40(3):232-9)。
生化学的レベルで、TTRは、FAP患者のアミロイド沈着における主要なタンパク質成分と特定され(Costa et al,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1978,75:4499-4503)、後に、タンパク質の30位でのメチオニンのバリンとの置換がその疾患を引き起こす最も一般的な分子欠損であることが見出された(Saraiva et al,J.Clin.Invest.1984,74:104-119)。FAPにおいて、TTR凝集体およびアミロイド原線維の広く行き渡った全身性細胞外沈着は、結合組織にわたって、特に末梢神経系で生じる(Sousa and Saraiva,Prog.Neurobiol.2003,71:385-400)。TTR沈着後、軸索変性が生じ、小径の無髄および有髄線維で始まり、および最終的に神経節部位でニューロンの損失につながる。
TTRを標的とするアンチセンス化合物は、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第US2005/0244869号、国際公開第WO2010/017509号、および同第WO2011/139917号に以前に開示されている。TTRを標的とするアンチセンスオリゴ核酸塩基、ISIS-TTRRxは、現在、第II/III相臨床試験において家族性アミロイド多発ニューロパチーを有する対象を治療する際のその有効性を試験するためのものである。しかしながら、患者にさらなるより有力な治療選択肢を提供することが依然として必要とされている。
TTR核酸を標的にするある特定の共役アンチセンス化合物
ある特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、配列番号2として本明細書に組み込まれるGENBANK(登録商標)受入番号NM_000371.3の配列を有するTTR核酸を標的にする。ある特定のそのような実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号2に少なくとも90%、少なくとも95%、または100%相補的である。
ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号12~19のうちのいずれか1つの少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号12~19のうちのいずれか1つの核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号12の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号12の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号13の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号13の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号14の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号14の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号15の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号15の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号16を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号78の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号16を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号78の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号17の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号17の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号18の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号18の核酸塩基配列を含む。
ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号19の少なくとも8連続核酸塩基配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物は、配列番号19の核酸塩基配列を含む。
Figure 0006995478000114
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 420915および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 420915は、式:Tes mCes Tes Tes Ges Gds Tds Tds Ads mCds Ads Tds Gds Ads Ads Aes Tes mCes mCes mCeを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 304299および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 304299は、式:mCes Tes Tes Ges Ges Tds Tds Ads mCds Ads Tds Gds Ads Ads Ads Tes mCes mCes mCes Aeを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 420921および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 420921は、式:Ges Ges Aes Aes Tes Ads mCds Tds mCds Tds Tds Gds Gds Tds Tds Aes mCes Aes Tes Geを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 420922および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 420922は、式:Tes Ges Ges Aes Aes Tds Ads mCds Tds mCds Tds Tds Gds Gds Tds Tes Aes mCes Aes Teを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 420950および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 420950は、式:Tes Tes Tes Tes Aes Tds Tds Gds Tds mCds Tds mCds Tds Gds mCds mCes Tes Ges Ges Aeを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 420955および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 420955は、式:Ges Aes Aes Tes Ges Tds Tds Tds Tds Ads Tds Tds Gds Tds mCds Tes mCes Tes Ges mCeを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 420957および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 420957は、式:Aes Ges Ges Aes Aes Tds Gds Tds Tds Tds Tds Ads Tds Tds Gds Tes mCes Tes mCes Teを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、化合物は、ISIS 420959および共役基を含むか、またはそれらからなる。ISIS 420959は、式:Aes mCes Aes Ges Ges Ads Ads Tds Gds Tds Tds Tds Tds Ads Tds Tes Ges Tes mCes Teを有する修飾オリゴヌクレオチドであり、式中、
Aは、アデニンであり、
mCは、5’-メチルシトシンであり、
Gは、グアニンであり、
Tは、チミンであり、
eは、2’-O-メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、
dは、2’-デオキシヌクレオシドであり、
sは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある特定の実施形態において、以下の化学構造を有する化合物は、5’-Xを有するISIS 420915を含むか、またはそれからなり、式中、Xは、本明細書に記載される共役基である。
Figure 0006995478000115
ある特定の実施形態において、化合物は、以下の化学構造を有するISIS 682877を含むか、またはそれからなる。
Figure 0006995478000116
ある特定の実施形態において、化合物は、以下の化学構造を有するISIS 682884を含むか、またはそれからなる。
Figure 0006995478000117
ある特定の実施形態において、化合物は、配列番号12、5’-GalNAc、および以下の化学構造によって表される化学修飾を含むか、またはそれらからなり、
Figure 0006995478000118
式中、Rが、-OCHCHOCH(MOE)であり、Rが、Hであるか、またはRおよびRが一緒になって橋を形成するかのいずれかであり、そこで、Rが、-O-であり、Rが、-CH-、-CH(CH)-、または-CHCH-であり、結果として生じる橋が、-O-CH-、-O-CH(CH)-、および-O-CHCH-から選択されるように、RおよびRが直接連結され、
同一の環上にてRおよびRの各対について、独立して各環について、Rが、Hおよび-OCHCHOCHから選択され、ならびにRが、Hであるか、またはRおよびRが一緒になって橋を形成するかのいずれかであり、そこで、Rが、-O-であり、Rが、-CH-、-CH(CH)-、または-CHCH-であり、結果として生じる橋が、-O-CH-、-O-CH(CH)-、および-O-CHCH-から選択されるように、RおよびRが直接連結され、
が、Hおよび-CHから選択され、
Zが、SおよびOから選択される。
ある特定の実施形態において、化合物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第WO2011/139917号または米国特許第US8,101,743号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、国際公開第WO2011/139917号に開示される、配列番号8~160、170~177のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、米国特許第US8,101,743号に開示される、配列番号12~89のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む。ある特定の実施形態において、化合物は、米国特許第US8,101,743号に開示される、配列番号90~133のうちのいずれかの好ましい標的セグメントに相補的な核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
TTR治療指標
ある特定の実施形態において、本発明は、TTR核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を用いて対象におけるTTRの発現を調節するための方法を提供する。ある特定の実施形態において、TTRの発現が低下する。
ある特定の実施形態において、本発明は、医薬組成物中のTTR核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を用いて対象を治療するための方法を提供する。ある特定の実施形態において、対象は、トランスサイレチン関連疾患、障害、もしくは状態、またはそれらの症状を有する。ある特定の実施形態において、トランスサイレチン関連疾患、障害、または状態は、トランスサイレチンアミロイドーシスである。「トランスサイレチン関連アミロイドーシス」または「トランスサイレチンアミロイドーシス」または「トランスサイレチンアミロイド疾患」とは、本明細書で使用されるとき、トランスサイレチン含有アミロイド原線維の形成をもたらすトランスサイレチンの機能不全または異常調節と関連したあらゆる病変または疾患である。トランスサイレチンアミロイドーシスには、遺伝性TTRアミロイドーシス、軟膜アミロイドーシス、家族性アミロイド多発ニューロパチー(FAP)、家族性アミロイド心筋症、家族性眼軟膜アミロイドーシス、老人性心アミロイドーシス、または老人性全身性アミロイドーシスが含まれるが、これらに限定されない。
ある特定の実施形態において、本発明は、TTR核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を用いて薬剤を調製するための方法を提供する。
ある特定の実施形態において、本発明は、治療に用いるためのTTR核酸を標的にする共役アンチセンス化合物またはその薬剤的に許容される塩を提供する。
ある特定の実施形態は、トランスサイレチン関連疾患、障害、もしくは状態、またはその症状の治療に用いるためのTTR核酸を標的にする共役アンチセンス化合物を提供する。ある特定の実施形態において、トランスサイレチン関連疾患、障害、または状態は、トランスサイレチンアミロイドーシスである。
本明細書に記載される化合物のうちのいずれかを前述の方法および使用において用いることができることが理解されるであろう。例えば、ある特定の実施形態において、前述の方法および使用におけるTTR核酸を標的にする共役アンチセンス化合物には、配列番号12~19のうちのいずれか1つの少なくとも8連続核酸塩基配列を含む配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物;配列番号12~19のうちのいずれか1つの核酸塩基配列を含む配列番号2を標的にする共役アンチセンス化合物;ISIS 420915、ISIS 304299、ISIS 420921、ISIS 420922、ISIS 420950、ISIS 420955、ISIS 420957、もしくはISIS 420959と、共役基とを含むか、またはそれらからなる化合物;参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際公開第WO2011/139917号または米国特許第US8,101,743号に開示されるアンチセンスオリゴヌクレオチドと、共役基とを含む化合物;国際公開第WO2011/139917号に開示される配列番号8~160、170~177のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む化合物;米国特許第US8,101,743号に開示される配列番号12~89のうちのいずれかの核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基;または米国特許第US8,101,743号に開示される配列番号90~133のうちのいずれかの好ましい標的セグメントに相補的な核酸塩基配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドと、本明細書に記載される共役基とを含む化合物が含まれ得るが、これらに限定されない。前記参照される配列番号のうちのすべての核酸塩基配列が参照により本明細書に組み込まれる。
E. ある特定の医薬組成物
ある特定の実施形態において、本開示は、1個以上のアンチセンス化合物を含む医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態において、そのような医薬組成物は、好適な薬剤的に許容される希釈剤または担体を含む。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、滅菌生理食塩溶液および1個以上のアンチセンス化合物を含む。ある特定の実施形態において、そのような医薬組成物は、滅菌生理食塩溶液および1個以上のアンチセンス化合物からなる。ある特定の実施形態において、滅菌生理食塩水は、医薬品グレードの生理食塩水である。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、1個以上のアンチセンス化合物および滅菌水を含む。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、1個以上のアンチセンス化合物および滅菌水からなる。ある特定の実施形態において、滅菌生理食塩水は、医薬品グレードの水である。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、1個以上のアンチセンス化合物およびリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を含む。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、1個以上のアンチセンス化合物および滅菌リン酸緩衝生理食塩水(PBS)からなる。ある特定の実施形態において、滅菌生理食塩水は、医薬品グレードのPBSである。
ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、医薬組成物または製剤を調製するために薬剤的に許容される活性および/または不活性物質と混合され得る。組成物および医薬組成物を製剤化するための方法は、投与経路、疾患の程度、または投与される用量を含むが、これらに限定されないいくつかの基準に依存する。
アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、任意の薬剤的に許容される塩、エステル、またはそのようなエステルの塩を包含する。ある特定の実施形態において、アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、ヒトを含む動物への投与時に、生物学的に活性な代謝物またはその残渣を(直接的または間接的に)提供することができる1個以上のオリゴヌクレオチドを含む。したがって、例えば、本開示は、アンチセンス化合物の薬剤的に許容される塩、プロドラッグ、そのようなプロドラッグの薬剤的に許容される塩、および他の生物学的等価物を対象とする。好適な薬剤的に許容される塩には、ナトリウム塩およびカリウム塩が含まれるが、これらに限定されない。
プロドラッグは、体内で内因性ヌクレアーゼによって切断されて活性アンチセンスオリゴヌクレオチドを形成するオリゴヌクレオチドの一方または両方の末端におけるさらなるヌクレオシドの組み込みを含み得る。
脂質部分は、様々な方法で核酸療法において用いられている。ある特定のそのような方法において、核酸は、カチオン性脂質と中性脂質の混合物から作られた事前形成されたリポソームまたはリポプレックスに導入される。ある特定の方法において、モノまたはポリカチオン性脂質とのDNA複合体は、中性脂質の存在なしで形成される。ある特定の実施形態において、脂質部分は、特定の細胞または組織への薬剤の分布を増加させるように選択される。ある特定の実施形態において、脂質部分は、脂肪組織への薬剤の分布を増加させるように選択される。ある特定の実施形態において、脂質部分は、筋肉組織への薬剤の分布を増加させるように選択される。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、1個以上の修飾オリゴヌクレオチドおよび1個以上の賦形剤を含む。ある特定のそのような実施形態において、賦形剤は、水、食塩水、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、滑石、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、およびポリビニルピロリドンから選択される。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、送達系を含む。送達系の例として、リポソームおよびエマルジョンが挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の送達系は、疎水性化合物を含む医薬組成物を含むある特定の医薬組成物の調製に有用である。ある特定の実施形態において、ジメチルスルホキシド等のある特定の有機溶媒が用いられる。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、特定の組織または細胞型に本開示の1個以上の薬剤を送達するように設計された1個以上の組織特異的送達分子を含む。例えば、ある特定の実施形態において、医薬組成物は、組織特異的抗体でコーティングされたリポソームを含む。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、共溶媒系を含む。ある特定のそのような共溶媒系は、例えば、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー、および水相を含む。ある特定の実施形態において、そのような共溶媒系は、疎水性化合物に用いられる。そのような共溶媒系の非限定的な例にはVPD共溶媒系があり、これは、3w/v%のベンジルアルコール、8w/v%の非極性界面活性剤ポリソルベート80(商標)、および65w/v%のポリエチレングリコール300を含む無水エタノールの溶液である。そのような共溶媒系の割合は、それらの溶解度および毒性特性を著しく変化させることなく大幅に変化し得る。さらに、共溶媒成分の同一性は変化し得、例えば、他の界面活性剤をポリソルベート80(商標)の代わりに使用してもよく、ポリエチレングリコールの画分サイズは変化し得、他の生体適合性ポリマーは、ポリエチレングリコール、例えば、ポリビニルピロリドンに取って代わり得、他の糖または多糖は、デキストロースと置き換わり得る。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、経口投与のために調製される。ある特定の実施形態において、医薬組成物は、口腔投与のために調製される。
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、注入による投与(例えば、静脈内、皮下、筋肉内等)のために調製される。ある特定のそのような実施形態において、医薬組成物は、担体を含み、水溶液、例えば、水または生理学的に相溶性の緩衝液、例えば、ハンクス溶液、リンガー溶液、または生理学的生理食塩水緩衝液等の中で製剤化される。ある特定の実施形態において、他の成分(例えば、溶解に役立つか、または防腐剤の役目を果たす成分)が含まれる。ある特定の実施形態において、注入可能な懸濁液は、適切な液体担体、懸濁化剤等を用いて調製される。注入用のある特定の医薬組成物は、単位剤形で、例えば、アンプル単位で提供されるか、または多用量容器内に提供される。注入用のある特定の医薬組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルジョンであり、懸濁化剤、安定化剤、および/または分散剤等の製剤化剤を含有し得る。注入用の医薬組成物における使用に好適なある特定の溶媒には、親油性溶媒および脂肪油、例えば、ゴマ油、合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド、およびリポソームが含まれるが、これらに限定されない。水性注入懸濁液は、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストラン等の懸濁液の粘度を増加させる物質を含有し得る。任意に、そのような懸濁液は、好適な安定剤または高度に濃縮された溶液の調製を可能にする薬剤の溶解度を増加させる薬剤も含有し得る。
ある特定の実施形態において、医薬組成物は、経粘膜投与のために調製される。ある特定のそのような実施形態において、浸透する障壁に適切な浸透剤が製剤化において用いられる。そのような浸透剤は、一般に当技術分野で既知である。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、治療的に効果的な量のオリゴヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態において、治療的に効果的な量は、疾患の症状を防止するか、疾患の症状を軽減するか、もしくは疾患の症状を改善するか、または治療される対象の生存期間を延長させるのに十分な量である。治療的に効果的な量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される1個以上の修飾オリゴヌクレオチドは、プロドラッグとして製剤化される。ある特定の実施形態において、生体内投与時に、プロドラッグは、オリゴヌクレオチドの生物学的に、薬剤的に、または治療的により活性な形態に化学変換される。ある特定の実施形態において、プロドラッグは、対応する活性形態よりも投与し易いため、有用である。例えば、ある特定の事例において、プロドラッグは、対応する活性形態よりも生物学的に利用可能である(例えば、経口投与によって)。ある特定の事例において、プロドラッグは、対応する活性形態と比較して、改善された溶解度を有し得る。ある特定の実施形態において、プロドラッグは、対応する活性形態よりも水溶性が低い。ある特定の事例において、そのようなプロドラッグは、水溶解度が移動性に害を及ぼす細胞膜にわたって優れた透過性を有する。ある特定の実施形態において、プロドラッグは、エステルである。ある特定のそのような実施形態において、エステルは、投与時にカルボン酸に代謝的に加水分解される。ある特定の事例において、カルボン酸含有化合物は、対応する活性形態である。ある特定の実施形態において、プロドラッグは、酸基に結合される短ペプチド(ポリアミノ酸)を含む。ある特定のそのような実施形態において、ペプチドは、投与時に切断されて、対応する活性形態を形成する。
ある特定の実施形態において、本開示は、細胞内の標的核酸の量または活性を低減させる、組成物および方法を提供する。ある特定の実施形態において、細胞は、動物内に存在する。ある特定の実施形態において、動物は、哺乳動物である。ある特定の実施形態において、動物は、齧歯動物である。ある特定の実施形態において、動物は、霊長類である。ある特定の実施形態において、動物は、非ヒト霊長類である。ある特定の実施形態において、動物は、ヒトである。
ある特定の実施形態において、本開示は、本開示のオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を動物に投与する方法を提供する。好適な投与経路には、経口投与、直腸投与、経粘膜投与、腸内投与、経腸投与、局所投与、坐薬投与、吸入による投与、髄腔内投与、脳室内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、眼内投与、腫瘍内投与、ならびに非経口(例えば、静脈内、筋肉内、髄内、および皮下)投与が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、薬学的髄腔内薬が投与されて、全身曝露ではなく局所曝露を達成する。例えば、医薬組成物は、所望の罹患部に(例えば、肝臓に)直接注入され得る。
参照による非限定的な開示および組み込み
本明細書に記載されるある特定の化合物、組成物、および方法がある特定の実施形態に従って具体的に記載されているが、以下の実施例は、本明細書に記載される化合物を例証する役目のみを果たし、それを限定するようには意図されていない。本出願に列挙される参考文献、GenBank受入番号等の各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書におけるある特定の化合物、組成物、および方法は、特定の数の特定の要素または特徴を「正確に含む」か、または「正確に含んでいる」とされる。そのような記述を用いて、化合物、組成物、または方法がさらなる他の要素を含み得るが、特定の要素または特徴の数が特定された数であることを示す。例えば、「正確に1個のGalNAcを含む共役体」は、唯一のGalNAcを含有する共役体であるが、その1個のGalNAcに加えて他の要素も含有し得る。
本出願に添付される配列表が必要に応じて各配列を「RNA」または「DNA」のいずれか一方と特定するが、実際には、それらの配列は、化学修飾の任意の組み合わせで修飾され得る。当業者であれば、修飾オリゴヌクレオチドを説明するための「RNA」または「DNA」のそのような指定が、ある特定の事例において、任意であることを容易に認識する。例えば、2’-OH糖部分およびチミン塩基を含むヌクレオシドを含むオリゴヌクレオチドは、修飾糖を有するDNA(DNAの天然2’-Hの場合、2’-OH)または修飾塩基を有するRNA(RNAの天然ウラシルの場合、チミン(メチル化ウラシル))と記載され得る。
したがって、配列表中のものを含むが、これらに限定されない本明細書に提供される核酸配列は、修飾核酸塩基を有するそのような核酸を含むが、これらに限定されない天然または修飾RNAおよび/またはDNAの任意の組み合わせを含有する核酸を包含するよう意図される。さらなる例であって制限するものではなく、核酸塩基配列「ATCGATCG」を有するオリゴヌクレオチドは、修飾または非修飾にかかわらず、RNA塩基、例えば、配列「AUCGAUCG」を有するオリゴヌクレオチド、ならびに「AUCGATCG」等のいくつかのDNA塩基およびいくつかのRNA塩基を有するオリゴヌクレオチド、ならびに「ATmeCGAUCG」等の他の修飾塩基を有するオリゴヌクレオチドを含むそのような化合物を含むが、これらに限定されないそのような核酸塩基配列を有する任意のオリゴヌクレオチドを包含し、式中、meCは、5位にメチル基を含むシトシン塩基を示す。
以下の実施例は、本開示のある特定の実施形態を例証するものであり、限定するものではない。さらに、特定の実施形態が提供される場合、本発明者らは、それらの特定の実施形態の一般的適用を企図している。例えば、特定のモチーフを有するオリゴヌクレオチドの開示は、そのモチーフまたは同様のモチーフを有するさらなるオリゴヌクレオチドへの合理的な支持を提供する。同様に、例えば、特定の高親和性修飾が特定の位置に出現する場合、同一の位置での他の高親和性修飾は、別途示されない限り、好適であると見なされる。
実施例1:ホスホラミダイト(化合物1、1a、および2)の調製のための一般的方法
Figure 0006995478000119
化合物1、1a、および2を、本明細書に記載される当技術分野で周知の手順通りに調製した(Seth et al.,Bioorg.Med.Chem.,2011,21(4),1122-1125,J.Org.Chem.,2010,75(5),1569-1581,Nucleic Acids Symposium Series,2008,52(1),553-554)、ならびに公開されたPCT国際出願(国際公開第WO2011/115818号、同第WO2010/077578号、同第WO2010/036698号、同第WO2009/143369号、同第WO2009/006478、および同第WO2007/090071号)、ならびに米国特許第7,569,686号も参照のこと)。
実施例2:化合物7の調製
Figure 0006995478000120
化合物3(2-アセトアミド-1,3,4,6-テトラ-O-アセチル-2-デオキシ-β-Dガラクトピラノースまたはガラクトサミンペンタアセテート)は、市販のものである。化合物5を公開された手順(Weber et al.,J.Med.Chem.,1991,34,2692)に従って調製した。
実施例3:化合物11の調製
Figure 0006995478000121
化合物8および9は、市販のものである。
実施例4:化合物18の調製
Figure 0006995478000122
化合物11を実施例3に例証される手順通りに調製した。化合物14は、市販のものである。化合物17を、Rensen et al.(J.Med.Chem.,2004,47,5798-5808)によって報告された同様の手順を用いて調製した。
実施例5:化合物23の調製
Figure 0006995478000123
化合物19および21は、市販のものである。
実施例6:化合物24の調製
Figure 0006995478000124
化合物18および23を実施例4および5に例証される手順通りに調製した。
実施例7:化合物25の調製
Figure 0006995478000125
化合物24を実施例6に例証される手順通りに調製した。
実施例8:化合物26の調製
Figure 0006995478000126
化合物24を実施例6に例証される手順通りに調製する。
実施例9:3’末端にGalNAc-1を含む共役ASO(化合物29)の一般的調製
Figure 0006995478000127
Figure 0006995478000128
保護されたGalNAc-1は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000129
共役基GalNAc-1のGalNAcクラスター部分(GalNAc-1)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。GalNAc-1は、以下の式を有する。
Figure 0006995478000130
固体支持体結合保護GalNAc-1(化合物25)を実施例7に例証される手順通りに調製した。3’末端にGalNAc-1を含むオリゴマー化合物29を、自動DNA/RNA合成における標準の手順を用いて調製した(Dupouy et al.,Angew.Chem.Int.Ed.,2006,45,3623-3627を参照のこと)。ホスホラミダイト構築ブロック(化合物1および1a)を実施例1に例証される手順通りに調製した。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて既定の配列および組成を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序および量を調整して、本明細書に記載されるギャップトオリゴマー化合物を調製することができる。そのようなギャップトオリゴマー化合物は、任意の所与の標的によって指示される既定の組成および塩基配列を有し得る。
実施例10:5’末端にGalNAc-1を含む共役ASO(化合物34)の一般的調製
Figure 0006995478000131
Figure 0006995478000132
Unylinker(商標)30は、市販のものである。5’末端にGalNAc-1クラスターを含むオリゴマー化合物34を、自動DNA/RNA合成における標準の手順を用いて調製する(Dupouy et al.,Angew.Chem.Int.Ed.,2006,45,3623-3627を参照のこと)。ホスホラミダイト構築ブロック(化合物1および1a)を実施例1に例証される手順通りに調製した。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて既定の配列および組成を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序および量を調整して、本明細書に記載されるギャップトオリゴマー化合物を調製することができる。そのようなギャップトオリゴマー化合物は、任意の所与の標的によって指示される既定の組成および塩基配列を有し得る。
実施例11:化合物39の調製
Figure 0006995478000133
Figure 0006995478000134
化合物4、13、および23を実施例2、4、および5に例証される手順通りに調製した。化合物35をRouchaud et al.,Eur.J.Org.Chem.,2011,12,2346-2353に公開された同様の手順を用いて調製する。
実施例12:化合物40の調製
Figure 0006995478000135
化合物38を実施例11に例証される手順通りに調製する。
実施例13:化合物44の調製
Figure 0006995478000136
Figure 0006995478000137
化合物23および36を実施例5および11に例証される手順通りに調製する。化合物41を、国際公開第WO2009082607号に公開された同様の手順を用いて調製する。
実施例14:化合物45の調製
Figure 0006995478000138
化合物43を実施例13に例証される手順通りに調製する。
実施例15:化合物47の調製
Figure 0006995478000139
化合物46は、市販のものである。
実施例16:化合物53の調製
Figure 0006995478000140
化合物48および49は、市販のものである。化合物17および47を実施例4および15に例証される手順通りに調製する。
実施例17:化合物54の調製
Figure 0006995478000141
化合物53を実施例16に例証される手順通りに調製する。
実施例18:化合物55の調製
Figure 0006995478000142
化合物53を実施例16に例証される手順通りに調製する。
実施例19:固相技法による3’位にGalNAc-1を含む共役ASOの調製のための一般的方法(ISIS 647535、647536、および651900の調製)
別途明記されない限り、オリゴマー化合物の合成に用いるすべての試薬および溶液を商業的供給源から購入する。標準のホスホラミダイト構築ブロックおよび固体支持体を、例えば、T、A、G、およびC残基を含む、ヌクレオシド残基の組み込みのために用いる。無水アセトニトリル中のホスホラミダイトの0.1M溶液をβ-D-2’-デオキシリボヌクレオシドおよび2’-MOEに用いた。
カラムに充填されたGalNAc-1を充填したVIMAD固体支持体(110μmol/g、Guzaev et al.,2003)におけるホスホラミダイトカップリング方法を用いて、ASO合成を、ABI 394合成装置(1~2μmolの規模)またはGE Healthcare Bioscience AeKTAオリゴパイロット合成装置(40~200μmolの規模)上で実行した。このカップリングステップについて、固体支持体の充填に対して4倍超過したホスホラミダイトを送達し、ホスホラミダイト縮合を10分間行った。すべての他のステップは、製造業者から提供された標準のプロトコルに従った。トルエン中の6%ジクロロ酢酸の溶液を用いて、ヌクレオチドの5’-ヒドロキシル基からジメトキシトリチル(DMT)基を除去した。カップリングステップ中、無水CHCN中の4,5-ジシアノイミダゾール(0.7M)を活性剤として用いた。ホスホロチオエート結合を、3分間の接触時間で、1:1のピリジン/CHCNのキサンタンヒドリドの0.1M溶液との硫化によって導入した。6%の水を含有するCHCN中の20%のtert-ブチルヒドロペルオキシドの溶液を酸化剤として用いて、12分間の接触時間で、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を提供した。
所望の配列が構築された後、シアノエチルホスフェート保護基を、45分間の接触時間で、トリエチルアミンとアセトニトリルの1:1(v/v)の混合物を用いて脱保護した。固体支持体結合ASOをアンモニア水(28~30重量%)中に懸濁し、55℃で6時間加熱した。
その後、非結合ASOを濾過し、アンモニアを沸去した。残渣を強力なアニオン交換カラム上での高圧液体クロマトグラフィーによって精製した(GE Healthcare Bioscience、Source 30Q、30μm、2.54×8cm、A=30%CHCN水溶液中100mM酢酸アンモニウム、B=A中1.5M NaBr、60分後0~40%のB、流量14mL/分-1、λ=260nm)。残渣を逆相カラム上でのHPLCにより脱塩して、固体支持体への初期充填に基づいて15~30%の単離収率で所望のASOを得た。ASOを、Agilent 1100 MSDシステムを用いたイオン対HPLCカップリングMS分析によって特徴付けた。
当技術分野で周知の標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて共役体を含まないアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成した。
これらの方法を用いて、ApoC IIIを標的とする3個の別個のアンチセンス化合物を調製した。以下の表4に要約されるように、ApoC IIIを標的とする3個のアンチセンス化合物の各々は、同一の核酸塩基配列を有し、ISIS 304801は、すべてのホスホロチオエート結合を有する5-10-5MOEギャップマーであり、ISIS 647535は、GalNAc-1をその3’末端で共役させたことを除いて、ISIS 304801と同一であり、ISIS 647536は、その化合物のある特定のヌクレオシド間結合がホスホジエステル結合であることを除いて、ISIS 647535と同一であった。表4にさらに要約されるように、SRB-1を標的とする2個の別個のアンチセンス化合物を合成した。ISIS 440762は、すべてのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を有する2-10-2 cEtギャップマーであり、ISIS 651900は、その3’末端にGalNAc-1を含めたことを除いて、ISIS 440762と同一であった。
Figure 0006995478000143
下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「k」は、6’-(S)-CH二環式ヌクレオシド(例えば、cEt)を示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。上付き文字「m」は、5-メチルシトシンを示す。「GalNAc-1」は、先に実施例9に示された構造を有する共役基を示す。GalNAc-1が、ASOを共役体の残りに連結させる切断可能なアデノシンを含み、「GalNAc-1」と指定されることに留意されたい。上述の表でこの命名法を用いて、共役体の一部であるアデノシンを含む全核酸塩基配列を示す。したがって、上述の表において、「Ado」を省略して「GalNAc-1」で終了する配列を列記することもできる。下付き文字「a」を用いて切断可能なヌクレオシドまたは切断可能な部分を欠く共役基の部分を示すこの慣例をこれらの実施形態にわたって用いる。切断可能な部分を欠く共役基のこの部分は、本明細書において「クラスター」または「共役クラスター」または「GalNAcクラスター」と称される。ある特定の事例において、これは、そのクラスターおよびその切断可能な部分を別々に提供することによって共役基を説明するのに好都合である。
実施例20:huApoC IIIトランスジェニックマウスにおけるヒトApoC IIIの用量依存的アンチセンス阻害
それぞれヒトApoC IIIを標的とし、かつ上に記載されるISIS 304801およびISIS 647535を別々に試験し、用量依存的試験において、ヒトApoC IIIトランスジェニックマウスにおけるヒトApoC IIIを阻害するそれらの能力について評価した。
処理
ヒトApoCIIIトランスジェニックマウスを12時間の明暗周期で維持し、Teklad実験食餌を不断給餌した。実験開始前に動物を研究施設で少なくとも7日間順化させた。ASOをPBS中に調製し、0.2ミクロンのフィルターを通して濾過して滅菌した。注入のためにASOを0.9%PBS中に溶解した。
ヒトApoC IIIトランスジェニックマウスに、ISIS 304801もしくは647535を、0.08、0.25、0.75、2.25、もしくは6.75μmol/kgで、または対照としてPBSを、週1回2週間、腹腔内に注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終用量の投与から48時間後に血液を各マウスから採取し、マウスを屠殺し、組織を収集した。
ApoC III mRNA分析
標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR) を用いてマウスの肝臓におけるApoC III mRNAレベルを決定した。PBS処理対照に規準化する前に(Ribogreenを用いて)ApoC III mRNAレベルを全RNAに対して相対的に決定した。以下の結果は、PBS処理対照に規準化された各処理群のApoC III mRNAレベルの平均パーセントとして提示され、「%PBS」で表示される。各ASOの半数効果濃度(ED50)も以下の表5に示される。
例証されるように、PBS対照と比較して、両方のアンチセンス化合物がApoC III RNAを減少させた。さらに、GalNAc-1に共役されるアンチセンス化合物(ISIS 647535)は、GalNAc-1共役体を欠くアンチセンス化合物(ISIS 304801)よりも実質的に強力であった。
Figure 0006995478000144
ApoC IIIタンパク質分析(比濁アッセイ)
2013年3月29日の出版前にオンラインで公開されたGraham et al(Circulation Research)によって報告された手順を用いて、血漿ApoC IIIタンパク質分析を決定した。
マウスから単離した約100μLの血漿を、希釈することなく、Olympus臨床分析器および市販の比濁ApoC IIIアッセイ(Kamiya、カタログ番号KAI-006、Kamiya Biomedical,Seattle,WA)を用いて分析した。アッセイプロトコルを供給業者が説明する通りに実行した。
以下の表6に示されるように、PBS対照と比較して、両方のアンチセンス化合物がApoC IIIタンパク質を減少させた。さらに、GalNAc-1に共役されるアンチセンス化合物(ISIS 647535)は、GalNAc-1共役体を欠くアンチセンス化合物(ISIS 304801)よりも実質的に強力であった。
Figure 0006995478000145
血漿トリグリセリドおよびコレステロールを、Bligh and Dyerの方法(Bligh,E.G.and Dyer,W.J.Can.J.Biochem.Physiol.37:911-917、1959)(Bligh,E and Dyer,W,Can J Biochem Physiol,37,911-917,1959)(Bligh,E and Dyer,W,Can J Biochem Physiol,37,911-917,1959)を用いて抽出し、Beckmann Coulter臨床分析器および市販の試薬を用いて測定した。
トリグリセリドレベルを、PBSを注入したマウスに対して相対的に測定し、「%PBS」で表示する。結果が表7に提示される。例証されるように、両方のアンチセンス化合物がトリグリセリドレベルを低下させた。さらに、GalNAc-1に共役されるアンチセンス化合物(ISIS 647535)は、GalNAc-1共役体を欠くアンチセンス化合物(ISIS 304801)よりも実質的に強力であった。
Figure 0006995478000146
血漿試料をHPLCによって分析して、総コレステロールの量およびコレステロール(HDLおよびLDL)の異なる画分の量を決定した。結果が表8および9に提示される。例証されるように、両方のアンチセンス化合物が総コレステロールレベルを低下させ、LDLを低下させ、HDLを上昇させた。さらに、GalNAc-1に共役されるアンチセンス化合物(ISIS 647535)は、GalNAc-1共役体を欠くアンチセンス化合物(ISIS 304801)よりも実質的に強力であった。HDLレベルの増加およびLDLレベルの減少は、ApoC IIIのアンチセンス阻害の心臓血管の有益な影響である。
Figure 0006995478000147
Figure 0006995478000148
薬物動態分析(PK)
ASOのPKも評価した。肝臓および腎臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出した。試料をIP-HPLC-MSを利用するMSD1で分析した。全長ISIS 304801および647535の組織レベル(μg/g)を測定し、結果が表10に提供される。例証されるように、総全長アンチセンス化合物の肝臓濃度は、これら2個のアンチセンス化合物と同様であった。したがって、GalNAc-1共役アンチセンス化合物が肝臓でより活性であるが(上のRNAおよびタンパク質データによって実証されるように)、肝臓内で著しく高い濃度では存在しない。実際には、計算されたEC50(表10に提供される)は、共役化合物の強度の観察された増加が蓄積の増加に完全に起因するわけではないことを裏付ける。この結果は、共役体が、肝臓蓄積単独以外の機構によって、恐らくアンチセンス化合物の細胞への生産的な取り込みを改善することによって、強度を改善したことを示唆する。
結果は、腎臓におけるGalNAc-1共役アンチセンス化合物の濃度が、GalNAc共役体を欠くアンチセンス化合物の濃度よりも低いことも示す。これは、いくつかの有益な治療的意味を有する。腎臓における活性が要求されない治療的指標において、腎臓への曝露は、腎毒性の危険性を有し、それに見合う利益がない。さらに、腎臓における高濃度は、典型的には、尿への化合物の損失をもたらし、より迅速なクリアランスをもたらす。したがって、非腎臓標的の場合、腎臓蓄積は望ましくない。これらのデータは、GalNAc-1共役が腎臓蓄積を減少させることを示唆する。
Figure 0006995478000149
ISIS 647535の代謝物も特定し、それらの質量を高分解能質量分析によって確認した。観察された代謝物の切断部位および構造を以下に示す。標準の手順を用いて全長ASOの相対%を計算し、結果を表10aに提示する。ISIS 647535の主な代謝物は、全共役体を欠く全長ASO(すなわち、ISIS 304801)であり、これは、以下に示される切断部位Aでの切断に由来する。さらに、他の切断部位に由来するさらなる代謝物も観察された。これらの結果は、細胞内の酵素によって切断され得るか、またはサイトゾルの還元環境下で切断し得るか、またはエンドソームおよびリゾソーム内の酸性pHに適応性のある、GalNAc-1糖とASOとの間のエステル、ペプチド、ジスルフィド、ホスホラミデート、またはアシルヒドラゾン等の他の切断可能な結合の導入も有用であり得ることを示唆する。
Figure 0006995478000150
Figure 0006995478000151
Figure 0006995478000152
Figure 0006995478000153
実施例21:単回投与試験におけるヒトApoC IIIトランスジェニックマウスにおけるヒトApoC IIIのアンチセンス阻害
それぞれヒトApoC IIIを標的とし、かつ表4に記載されるISIS 304801、647535、および647536を、単回投与試験において、ヒトApoC IIIトランスジェニックマウスにおけるヒトApoC IIIを阻害するそれらの能力についてさらに評価した。
処理
ヒトApoCIIIトランスジェニックマウスを12時間の明暗周期に維持し、Teklad実験食餌を不断給餌した。実験開始前に動物を研究施設で少なくとも7日間順化させた。ASOをPBS中に調製し、0.2ミクロンのフィルターを通して濾過して滅菌した。注入のためにASOを0.9%PBS中に溶解した。
ヒトApoC IIIトランスジェニックマウスに、ISIS 304801、647535、もしくは647536(上述のもの)、またはPBS処理対照を、以下に示される投与量で1回、腹腔内注入した。処理群は、3匹の動物から成り、対照群は、4匹の動物から成った。治療前および最終服用後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の72時間後にマウスを屠殺した。
試料を収集し、分析して、肝臓におけるApoC III mRNAおよびタンパク質レベル、血漿トリグリセリド、ならびにHDLおよびLDL画分を含むコレステロールを決定し、上述(実施例20)のように評価した。これらの分析からのデータが以下の表11~15に提示される。血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。ALTおよびASTレベルは、アンチセンス化合物がすべての投与量で良好な耐性であったことを示した。
これらの結果は、GalNAc-1共役体を欠くアンチセンス化合物(ISIS 304801)と比較して、3’末端GalNAc-1共役体を含むアンチセンス化合物(ISIS 647535および647536)の強度の改善を示す。さらに、GalNAc-1共役体およびいくつかのホスホジエステル結合を含むISIS 647536は、同一の共役体を含むISIS 647535と同程度に強力であり、ASO内のすべてのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
Figure 0006995478000154
Figure 0006995478000155
Figure 0006995478000156
Figure 0006995478000157
Figure 0006995478000158
これらの結果は、GalNAc-1共役体がアンチセンス化合物の強度を改善することを裏付ける。これらの結果は、GalNAc-1共役アンチセンス化合物の同等の強度も示し、これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、混合結合(6個のホスホジエステル結合を有するISIS 647536)および同一のアンチセンス化合物の完全なホスホロチオエートバージョン(ISIS 647535)を有する。
ホスホロチオエート結合は、アンチセンス化合物にいくつかの特性を提供する。例えば、これらは、ヌクレアーゼ消化に抵抗し、タンパク質に結合し、腎臓/尿ではなく肝臓における化合物の蓄積をもたらす。これらは、肝臓における兆候を治療する際に特に望ましい特性である。しかしながら、ホスホロチオエート結合は、炎症性応答とも関連している。したがって、化合物におけるホスホロチオエート結合の数を減少させることにより、炎症の危険性の減少が見込まれるが、肝臓中の化合物の濃度も低下させ、腎臓および尿中の濃度を増加させ、ヌクレアーゼの存在下で安定性を低下させ、全体の強度を低下させる。これらの結果は、ある特定のホスホロチオエート結合がホスホジエステル結合に置換されたGalNAc-1共役アンチセンス化合物が、肝臓における標的に対して、完全なホスホロチオエート結合を有する対応物と同程度に強力であることを示す。そのような化合物は、より炎症誘発性が低いと見込まれる(PSの減少が炎症性効果の減少をもたらすことを示す実験を説明する実施例24を参照のこと)。
実施例22:生体内におけるSRB-1を標的とするGalNAc-1共役修飾ASOの影響
それぞれSRB-1を標的とし、かつ表4に記載されるISIS 440762および651900を、用量依存的試験において、Balb/cマウスにおけるSRB-1を阻害するそれらの能力について評価した。
処理
6週齢の雄Balb/cマウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、ISIS 440762、651900、またはPBS処理対照を、以下に示される投与量で1回、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の48時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)肝臓におけるSRB-1 mRNAレベルを決定した。PBS処理対照に規準化する前に(Ribogreenを用いて)SRB-1 mRNAレベルを全RNAに対して相対的に決定した。以下の結果は、PBS処理対照に規準化された各処理群のSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示され、「%PBS」で表示される。
表16に例証されるように、両方のアンチセンス化合物がSRB-1 mRNAレベルを低下させた。さらに、GalNAc-1共役体(ISIS 651900)を含むアンチセンス化合物は、GalNAc-1共役体を欠くアンチセンス化合物(ISIS 440762)よりもはるかに強力であった。これらの結果は、異なる標的に相補的であり、かつ異なる化学修飾ヌクレオシドを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて、GalNAc-1共役体の強度利益が観察されることを実証し、この事例において、修飾ヌクレオシドは、拘束エチル糖部分(二環式糖部分)を含む。
Figure 0006995478000159
実施例23:ヒト末梢血単核細胞(hPBMC)アッセイプロトコル
BD Vautainer CPTチューブ法を用いてhPBMCアッセイを実行した。US HealthWorks clinic(Faraday & El Camino Real、Carlsbad)においてインフォームドコンセントを得た志願ドナー由来の全血試料を得て、4~15個のBD Vacutainer CPT8mLチューブ(VWRカタログ番号BD362753)内に収集した。PBMCアッセイデータシートを用いて、各ドナーのCPTチューブ内の開始合計全血量の近似値を記録した。
血液試料を、チューブの8~10回の穏やかな反転による遠心分離の直前に再度混合した。CPTチューブを、水平(スイングアウト)ローター内で、室温(18~25℃)で30分間、ブレーキオフで1500~1800RCFで遠心分離した(2700RPM、Beckman Allegra 6R)。細胞を(Ficollとポリマーゲル層との間の)バフィーコート界面から回収し、50mLの滅菌円錐チューブに移し、最大5個のCPTチューブ/50mLの円錐チューブ/ドナーをプールした。その後、細胞をPBS(Ca++、Mg++を含まない;GIBCO)で2回洗浄した。チューブを最大50mLまで満たし、数回反転させて混合した。その後、試料を、室温で15分間、330×gで遠心分離し(1215RPM、Beckman Allegra 6R)、ペレットを乱すことなくできるだけ多くの上澄みを吸引した。チューブを穏やかに回転させて細胞ペレットを取り除き、細胞をRPMI+10% FBS+pen/strep(約1mL/10mLの開始全血量)中に再懸濁した。60μLの試料を、600μLのVersaLyse試薬(Beckman Coulter、カタログ番号A09777)を有する試料バイアル(Beckman Coulter)にピペット注入し、10~15秒間穏やかにボルテックスした。試料を室温で10分間インキュベートさせ、係数前に再度混合した。PBMC細胞型を用いたVicell XR細胞生存率分析器(Beckman Coulter)で細胞懸濁液を計数した(1:11の希釈係数を他のパラメータで保存した)。生細胞/mLおよび生存率を記録した。細胞懸濁液をRPMI+10%FBS+pen/strep中で1×10生PBMC/mLに希釈した。
細胞を96ウェル組織培養プレート(Falcon Microtest)の50μL/ウェル中に5×10でプレーティングした。RPMI+10%FBS+pen/strep中で希釈した2倍濃度のオリゴ/対照の50μL/ウェルを実験テンプレートに従って添加した(合計100μL/ウェル)。プレートを振盪器に設置し、約1分間混合させた。37℃、5%COで24時間インキュベートした後、プレートを400×gで10分間遠心分離し、その後、MSDサイトカインアッセイ(すなわち、ヒトIL-6、IL-10、IL-8、およびMCP-1)のために上澄みを除去した。
実施例24:hPBMCアッセイにおけるGalNAc-1共役ASOの炎症誘発作用の評価
表17に列記されるアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)を、実施例23に記載されるプロトコルを用いたhPBMCアッセイにおいて炎症誘発作用について評価した。ISIS 353512は、このアッセイにおいてIL-6放出に対する高応答物として知られる内部標準物である。hPBMCを新鮮な志願ドナーから単離し、0、0.0128、0.064、0.32、1.6、8、40、および200μm濃度のASOで処理した。
IL-6のレベルを一次読み出しとして用いた。標準の手順を用いてEC50およびEmaxを計算した。結果が2つのドナー由来のEmax/EC50の平均比率として表され、「Emax/EC50」で表示される。より低い比率は、炎症誘発応答の相対的減少を示し、より高い比率は、炎症誘発応答の相対的増加を示す。
試験化合物に関して、炎症誘発性が最も低い化合物は、PS/PO結合ASO(ISIS 616468)であった。GalNAc-1共役ASO(ISIS 647535)は、その非共役対応物(ISIS 304801)よりもわずかに炎症誘発性が低かった。これらの結果は、いくつかのPO結合の組み込みが炎症誘発反応を減少させ、GalNAc-1共役体の添加が化合物の炎症誘発性を高めず、炎症誘発応答を減少させ得ることを示す。したがって、混合PS/PO結合およびGalNAc-1共役体の両方を含むアンチセンス化合物が、完全PS結合アンチセンス化合物(GalNAc-1共役体の有無にかかわらず)と比較して、より低い炎症誘発応答をもたらすことが予想されるであろう。これらの結果は、GalNAc3-1共役アンチセンス化合物、特に減少したPS含有量を有するものの炎症誘発性がより低いことを示す。
総合して、これらの結果は、GalNAc-1共役化合物、特に減少したPS含有量を有するものを、対応物であるGalNAc-1共役体を欠く完全PSアンチセンス化合物よりも高い用量で投与することができることを示唆する。これらの化合物の半減期が実質的に異なることが予想されないため、そのようなより高い投与量は、結果として低頻度の投薬につながる。GalNAc-1共役化合物がより強力であり(実施例20~22を参照のこと)、化合物の濃度が所望のレベル未満に低下した時点で再投薬が必要であるため、実際には、そのような投与の頻度はさらに低く、そのような所望のレベルは、強度に基づく。
Figure 0006995478000160
下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「k」は、6’-(S)-CH二環式ヌクレオシド(例えば、cEt)を示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。上付き文字「m」は、5-メチルシトシンを示す。「Ado’-GalNAc-1」は、示されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドの3’末端に結合される、実施例9に示される構造GalNAc-1を有する共役体を示す。
Figure 0006995478000161
実施例25:生体外におけるヒトApoC IIIを標的とするGalNAc-1共役修飾ASOの影響
上述のISIS 304801および647535を生体外で試験した。トランスジェニックマウス由来の25,000細胞/ウェルの密度の初代肝細胞を、0.03,0.08、0.24、0.74、2.22、6.67、および20μm濃度の修飾オリゴヌクレオチドで処理した。約16時間の処理期間後、RNAを細胞から単離し、mRNAレベルを定量的リアルタイムPCRで測定し、hApoC III mRNAレベルをRIBOGREENで測定された全RNA含有量に従って調整した。
標準の方法を用いてIC50を計算し、結果を表19に提示する。例証されるように、対照ISIS 304801と比較して、同程度の強度がISIS 647535で処理した細胞において観察された。
Figure 0006995478000162
この実験において、生体内で観察されるGalNAc-1共役の大きな強度利益は、生体外では観察されなかった。生体外での初代肝細胞におけるその後の遊離取り込み実験は、GalNAc共役体を欠くオリゴヌクレオチドと比較して、様々なGalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドの強度の増加を示した(実施例60、82、および92を参照のこと)。
実施例26:ApoC III ASO活性へのPO/PS結合の影響
ヒトApoC IIIトランスジェニックマウスに、ISIS 304801もしくはISIS 616468(両方ともに上述のもの)またはPBS処理対照を、25mg/kgで週1回2週間、腹腔内注入した。処理群は、3匹の動物から成り、対照群は、4匹の動物から成った。治療前および最終服用後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の72時間後にマウスを屠殺した。
試料を収集し、分析して、上述のように肝臓におけるApoC IIIタンパク質レベルを決定した(実施例20)。これらの分析からのデータが以下の表20に提示される。
これらの結果は、完全PS(ISIS 304801)と比較して、ウィングにPO/PSを有するアンチセンス化合物(ISIS 616468)の強度の減少を示す。
Figure 0006995478000163
実施例27:化合物56
Figure 0006995478000164
化合物56は、Glen Researchから市販されているか、またはShchepinov et al.,Nucleic Acids Research,1997,25(22),4447-4454によって報告された公開された手順に従って調製することができる。
実施例28:化合物60の調製
Figure 0006995478000165
化合物4を実施例2に例証される手順通りに調製した。化合物57は、市販のものである。化合物60を構造分析で確認した。
本明細書に提示されるものを含むが、これらに限定されない他の単保護された置換または非置換アルキルジオールを用いて既定の組成を有するホスホラミダイトを調製することができるため、化合物57は、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。
実施例29:化合物63の調製
Figure 0006995478000166
化合物61および62を、Tober et al.,Eur.J.Org.Chem.,2013,3,566-577、およびJiang et al.,Tetrahedron,2007,63(19),3982-3988によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
あるいは、化合物63を、Kim et al.の科学文献および特許文献(Synlett,2003,12,1838-1840、およびKim et al.の公開されたPCT国際出願第WO2004063208号)に報告される手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例30:化合物63bの調製
Figure 0006995478000167
化合物63aを、Hanessian et al.,Canadian Journal of Chemistry,1996,74(9),1731-1737によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例31:化合物63dの調製
Figure 0006995478000168
化合物63cを、Chen et al.,Chinese Chemical Letters,1998,9(5),451-453によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例32:化合物67の調製
Figure 0006995478000169
実施例2に例証される手順通りに化合物64を調製した。化合物65を、Or et al.の公開されたPCT国際出願第WO2009003009号によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。本明細書に提示されるものを含むが、これらに限定されない他の保護基を用いることができるため、化合物65に用いた保護基は、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。
実施例33:化合物70の調製
Figure 0006995478000170
実施例2に例証される手順通りに化合物64を調製した。化合物68は、市販のものである。本明細書に提示されるものを含むが、これらに限定されない他の保護基を用いることができるため、化合物68に用いた保護基は、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。
実施例34:化合物75aの調製
Figure 0006995478000171
化合物75をShchepinov et al.,Nucleic Acids Research,1997,25(22),4447-4454によって報告された公開された手順に従って調製する。
実施例35:化合物79の調製
Figure 0006995478000172
化合物76をShchepinov et al.,Nucleic Acids Research,1997,25(22),4447-4454によって報告された公開された手順に従って調製した。
実施例36:化合物79aの調製
Figure 0006995478000173
化合物77を実施例35に例証される手順通りに調製する。
実施例37:固体支持体による5’末端にホスホジエステル結合GalNAc-2共役体を含む共役オリゴマー化合物82の調製のための一般的方法(方法I)
Figure 0006995478000174
Figure 0006995478000175
GalNAc-2は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000176
共役基GalNAc-2のGalNAcクラスター部分(GalNAc-2)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。GalNAc-2は、以下の式を有する。
Figure 0006995478000177
VIMAD結合オリゴマー化合物79bを、自動DNA/RNA合成における標準の手順を用いて調製した(Dupouy et al.,Angew.Chem.Int.Ed.,2006,45,3623-3627を参照のこと)。ホスホラミダイト化合物56および60を、それぞれ、実施例27および28にそれぞれ例証される手順通りに調製した。本明細書に提示されるものを含むが、これらに限定されない他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて、5’末端にホスホジエステル結合共役基を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序および量を調整して、任意の既定の配列および組成を有する本明細書に記載されるオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例38:5’末端にホスホジエステル結合GalNAc-2共役体を含むオリゴマー化合物82の調製のための代替方法(方法II)
Figure 0006995478000178
VIMAD結合オリゴマー化合物79bを、自動DNA/RNA合成における標準の手順を用いて調製した(Dupouy et al.,Angew.Chem.Int.Ed.,2006,45,3623-3627を参照のこと)。GalNAc-2クラスターホスホラミダイト(化合物79)を実施例35に例証される手順通りに調製した。この代替方法は、合成の最終ステップでのホスホジエステル結合GalNAc-2共役体のオリゴマー化合物への一段階導入を可能にする。本明細書に提示されるものを含むが、これらに限定されない他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて5’末端にホスホジエステル共役体を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序および量を調整して、任意の既定の配列および組成を有する本明細書に記載されるオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例39:固体支持体による5’末端にGalNAc-3共役体(5’末端結合のためにGalNAc-1修飾されたもの)を含むオリゴマー化合物83hの調製のための一般的方法
Figure 0006995478000179
Figure 0006995478000180
化合物18を実施例4に例証される手順通りに調製した。化合物83aおよび83bは、市販のものである。ホスホジエステル結合ヘキシルアミンを含むオリゴマー化合物83eを標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて調製した。保護されたオリゴマー化合物をアンモニア水で処理することにより、5’-GalNAc-3共役オリゴマー化合物(83h)を得た。
GalNAc-3は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000181
共役基GalNAc-3のGalNAcクラスター部分(GalNAc-3)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。GalNAc-3は、以下の式を有する。
Figure 0006995478000182
実施例40:固体支持体による3’末端にホスホジエステル結合GalNAc-4共役体を含むオリゴマー化合物89の調製のための一般的方法
Figure 0006995478000183
Figure 0006995478000184
Figure 0006995478000185
GalNAc-4は、以下の構造を有する。
Figure 0006995478000186
式中、CMは、切断可能な部分である。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、以下のものである:
Figure 0006995478000187
共役基GalNAc-4のGalNAcクラスター部分(GalNAc-4)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。GalNAc-4は、以下の式を有する。
Figure 0006995478000188
保護されたUnylinker機能化固体支持体化合物30は、市販のものである。化合物84を、文献に報告される手順と同様の手順を用いて調製する(Shchepinov et al.,Nucleic Acids Research,1997,25(22),4447-4454、Shchepinov et al.,Nucleic Acids Research,1999,27,3035-3041、およびHornet et al.,Nucleic Acids Research,1997,25,4842-4849を参照のこと)。
ホスホラミダイト構築ブロック(化合物60および79a)を実施例28および36に例証される手順通りに調製する。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて、既定の配列および組成を有する3’末端にホスホジエステル結合共役体を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定するようには意図されていない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序および量を調整して、任意の既定の配列および組成を有する本明細書に記載されるオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例41:固相技法による5’位にホスホジエステル結合GalNAc-2(Bxがアデニンである実施例37を参照のこと)共役体を含むASOの調製のための一般的方法(ISIS 661134の調製)
別途明記されない限り、オリゴマー化合物の合成に用いるすべての試薬および溶液を商業的供給源から購入する。標準のホスホラミダイト構築ブロックおよび固体支持体を、例えば、T、A、G、およびC残基を含む、ヌクレオシド残基の組み込みのために用いる。ホスホラミダイト化合物56および60を用いて、5’末端のホスホジエステル結合GalNAc-2共役体を合成した。無水アセトニトリル中のホスホラミダイトの0.1M溶液をβ-D-2’-デオキシリボヌクレオシドおよび2’-MOEに用いた。
カラムに充填されたVIMAD固体支持体(110μmol/g、Guzaev et al.,2003)におけるホスホラミダイトカップリング方法を用いて、ASO合成を、ABI 394合成装置(1~2μmolの規模)またはGE Healthcare Bioscience AeKTAオリゴパイロット合成装置(40~200μmolの規模)上で実行した。このカップリングステップについて、固体支持体の初期充填に対して4倍超過したホスホラミダイトを送達し、ホスホラミダイトカップリングを10分間行った。すべての他のステップは、製造業者から提供された標準のプロトコルに従った。トルエン中の6%ジクロロ酢酸の溶液を用いて、ヌクレオチドの5’-ヒドロキシル基からジメトキシトリチル(DMT)基を除去した。カップリングステップ中、無水CHCN中の4,5-ジシアノイミダゾール(0.7M)を活性剤として用いた。ホスホロチオエート結合を、3分間の接触時間で、1:1のピリジン/CHCNのキサンタンヒドリドの0.1M溶液との硫化によって導入した。6%の水を含有するCHCN中の20%のtert-ブチルヒドロペルオキシドの溶液を酸化剤として用いて、12分間の接触時間で、ホスホジエステルヌクレオシド間結合を提供した。
所望の配列が構築された後、シアノエチルホスフェート保護基を、45分間の接触時間で、トルエン中の20%ジエチルアミン(v/v)を用いて脱保護した。固体支持体結合ASOをアンモニア水(28~30重量%)中に懸濁し、55℃で6時間加熱した。
その後、非結合ASOを濾過し、アンモニアを沸去した。残渣を強力なアニオン交換カラム上での高圧液体クロマトグラフィーによって精製した(GE Healthcare Bioscience、Source 30Q、30μm、2.54×8cm、A=30%CHCN水溶液中100mM酢酸アンモニウム、B=A中1.5M NaBr、60分後0~40%のB、流量14mL/分-1、λ=260nm)。残渣を逆相カラム上でのHPLCにより脱塩して、固体支持体への初期充填に基づいて15~30%の単離収率で所望のASOを得た。ASOを、Agilent 1100 MSDシステムを用いたイオン対HPLCカップリングMS分析によって特徴付けた。
Figure 0006995478000189
下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「k」は、6’-(S)-CH二環式ヌクレオシド(例えば、cEt)を示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。上付き文字「m」は、5-メチルシトシンを示す。GalNAc-2の構造は、実施例37に示される。
実施例42:固相技法による5’位にGalNAc-3共役体を含むASOの調製のための一般的方法(ISIS 661166の調製)
ISIS 661166の合成を、実施例39および41に例証される手順と同様の手順を用いて実行した。
ISIS 661166は、5’位がGalNAc-3共役体を含む5-10-5MOEギャップマーである。ASOを、Agilent 1100 MSDシステムを用いたイオン対HPLCカップリングMS分析によって特徴付けた。
Figure 0006995478000190
下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。上付き文字「m」は、5-メチルシトシンを示す。「5’-GalNAc-3a」の構造は、実施例39に示される。
実施例43:生体内におけるSRB-1を標的とする5’末端でのホスホジエステル結合GalNAc-2の用量依存的試験(Bxがアデニンである実施例37および41を参照のこと)
5’末端にホスホジエステル結合GalNAc-2共役体を含むISIS 661134(実施例41を参照のこと)を、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。非共役ISIS 440762および651900(3’末端にGalNAc-1共役体、実施例9を参照のこと)を比較のために試験に含め、先の表4に記載する。
処理
6週齢の雄Balb/cマウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、ISIS 440762、651900、661134、またはPBS処理対照を、以下に示される投与量で1回、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるSRB-1 mRNAレベルを決定した。PBS処理対照に規準化する前に(Ribogreenを用いて)SRB-1 mRNAレベルを全RNAに対して相対的に決定した。以下の結果は、PBS処理対照に規準化された各処理群のSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示され、「%PBS」で表示される。前記方法と同様の方法を用いてED50を測定し、以下に提示する。
表22に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させた。実際には、5’末端にホスホジエステル結合GalNAc-2共役体(ISIS 661134)または3’末端に連結されたGalNAc-1共役体(ISIS 651900)を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド(ISIS 440762)と比較して、強度の大幅な改善を示した。さらに、5’末端にホスホジエステル結合GalNAc-2共役体を含むISIS 661134は、3’末端にGalNAc-1共役体を含むISIS 651900と比較して、等効力であった。
Figure 0006995478000191
3’GalNAc-1および5’GalNAc-2の構造は、先の実施例9および37に記載されている。
薬物動態分析(PK)
高用量群(7mg/kg)のASOのPKを試験し、実施例20に例証される様式と同一の様式で評価した。肝臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出した。661134(5’GalNAc-2)およびISIS 651900(3’GalNAc-1)の全長代謝物を特定し、これらの質量を高分解能質量分析によって確認した。結果は、5’末端にホスホジエステル結合GalNAc-2共役体を含むASO(ISIS 661134)に対して検出された主な代謝物が、ISIS 440762であったことを示した(データ示されず)。検出可能なレベルでさらなる代謝物は観察されなかった。その対応物とは異なり、先の表10aに報告された代謝物と同様のさらなる代謝物が、3’末端にGalNAc-1共役体を有するASO(ISIS 651900)で観察された。これらの結果は、ホスホジエステル結合GalNAc-1またはGalNAc-2共役体を有することで、それらの強度を損なうことなくASOのPKプロファイルを改善し得ることを示唆する。
実施例44:SRB-1を標的とする3’末端にGalNAc-1共役体(実施例9を参照のこと)を含むASOのアンチセンス阻害へのPO/PS結合の影響
それぞれSRB-1を標的とする3’末端にGalNAc-1共役体を含むISIS 655861および655862を、単回投与試験においてマウスにおけるSRB-1を阻害するそれらの能力について試験した。親非共役化合物ISIS 353382を比較のために試験に含めた。
ASOは5-10-5MOEギャップマーであり、ギャップ領域は、10個の2’-デオキシリボヌクレオシドを含み、各ウィング領域は、5個の2’-MOE修飾ヌクレオシドを含む。ASOを先の実施例19に例証される方法と同様の方法を用いて調製し、以下の表23に示す。
Figure 0006995478000192
下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。上付き文字「m」は、5-メチルシトシンを示す。「GalNAc-1」の構造は、実施例9に示される。
処理
6週齢の雄Balb/cマウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、ISIS 353382、655861、655862、またはPBS処理対照を、以下に示される投与量で1回、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。治療前および最終服用後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の72時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるSRB-1 mRNAレベルを決定した。PBS処理対照に規準化する前に(Ribogreenを用いて)SRB-1 mRNAレベルを全RNAに対して相対的に決定した。以下の結果は、PBS処理対照に規準化された各処理群のSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示され、「%PBS」で表示される。前記方法と同様の方法を用いてED50を測定し、以下に報告する。
表24に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、PBS処理対照と比較して、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させた。実際には、3’末端にGalNAc-1共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド(ISIS 655861および655862)は、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド(ISIS 353382)と比較して、強度の大幅な改善を示した。さらに、混合PS/PO結合を有するISIS 655862は、完全PS(ISIS 655861)と比較して、強度の改善を示した。
Figure 0006995478000193
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。臓器重量も評価した。結果は、PBS対照と比較して、ASOで処理したマウスにおいて、トランスアミナーゼレベル(表25)の増加も臓器重量(データ示されず)の増加も観察されなかったことを示した。さらに、混合PS/PO結合を有するASO(ISIS 655862)は、完全PS(ISIS 655861)と比較して、同様のトランスアミナーゼレベルを示した。
Figure 0006995478000194
実施例45:PFPエステル(化合物110a)の調製
Figure 0006995478000195
Figure 0006995478000196
化合物4(9.5g、28.8mmole)を化合物103aまたは103b(38mmole)で個別に処理し、ジクロロメタン(200mL)中のTMSOTf(0.5当量)および分子篩で処理し、室温で16時間撹拌した。この時点で、セライトを通して有機層を濾過し、その後、重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー(2%→10%メタノール/ジクロロメタン)によって精製して、80%超の収率で化合物104aおよび104bを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物104aおよび104bを化合物100a~d(実施例47)と同一の条件で処理して、90%超の収率で化合物105aおよび105bを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物105aおよび105bを化合物901a~dと同一の条件下で化合物90と個別に処理して、化合物106a(80%)および106b(20%)を得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物106aおよび106bを化合物96a~d(実施例47)と同一の条件で処理して、107a(60%)および107b(20%)を得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物107aおよび107bを化合物97a~d(実施例47)と同一の条件で処理して、40~60%の収率で化合物108aおよび108bを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物108a(60%)および108b(40%)を化合物100a~d(実施例47)と同一の条件で処理して、80%超の収率で化合物109aおよび109bを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物109aを化合物101a~d(実施例47)と同一の条件で処理して、30~60%の収率で化合物110aを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。あるいは、化合物110bを化合物109bから開始して同様の様式で調製することができる。
実施例46:PFPエステル(オリゴヌクレオチド111)との共役のための一般的手順;ISIS 666881(GalNAc-10)の調製
標準の固相オリゴヌクレオチド手順を用いて5’-ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチドを合成し、精製した。5’-ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチドを0.1M四ホウ酸ナトリウム(pH8.5、200μL)中に溶解し、DMSO(50μL)中に溶解した3当量の選択されたPFPエステル化GalNAcクラスターを添加した。ASO溶液への添加時にPFPエステルが沈殿した場合、すべてのPFPエステルが溶液中に存在するまでDMSOを添加した。室温で約16時間混合した後、反応が完了した。結果として生じた溶液を水で希釈して12mLにし、その後、3000Daの質量カットオフでスピンフィルターに3000rpmで沈降させた。このプロセスを2回繰り返して、小分子不純物を除去した。その後、この溶液を凍結乾燥乾固させ、濃縮アンモニア水中に再溶解し、室温で2.5時間混合し、その後、真空内で濃縮して、アンモニアの大部分を除去した。共役オリゴヌクレオチドを精製し、RP-HPLCによって脱塩し、凍結乾燥させて、GalNAc共役オリゴヌクレオチドを得た。
Figure 0006995478000197
オリゴヌクレオチド111をGalNAc-10と共役する。共役基GalNAc-10のGalNAcクラスター部分(GalNAc-10)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、以下のGalNAc-10で合成されたオリゴヌクレオチド(ISIS 666881)に示される-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-10(GalNAc-10-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000198
この一般的手順に従って、ISIS 666881を調製した。標準の固相オリゴヌクレオチド手順を用いて5’-ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチド(ISIS 660254)を合成し、精製した。ISIS 660254(40mg、5.2μmol)を0.1M四ホウ酸ナトリウム(pH8.5、200μL)中に溶解し、DMSO(50μL)中に溶解した3当量のPFPエステル(化合物110a)を添加した。ASO溶液への添加時にPFPエステルが沈殿した場合、PFPエステルを完全に溶解するためにさらなるDMSO(600μL)が必要であった。室温で約16時間混合した後、反応が完了した。この溶液を水で希釈して全体積12mLにし、3000Daの質量カットオフでスピンフィルターに3000rpmで沈降させた。このプロセスを2回繰り返して、小分子不純物を除去した。この溶液を凍結乾燥乾固させ、濃縮アンモニア水中に再溶解し、室温で2.5時間混合し、その後、真空内で濃縮して、アンモニアの大部分を除去した。共役オリゴヌクレオチドを精製し、RP-HPLCによって脱塩し、凍結乾燥させて、90重量%の収率でISIS 666881(42mg、4.7μmol)を得た。
Figure 0006995478000199
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、Cは、5-メチルシトシンを示す。下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。共役基は、太字で表示されている。
実施例47:GalNAc-8を含むオリゴヌクレオチド102の調製
Figure 0006995478000200
Figure 0006995478000201
Figure 0006995478000202
三酸90(4g、14.43mmol)をDMF(120mL)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(12.35mL、72mmole)中に溶解した。トリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル(8.9mL、52mmole)をアルゴン下で滴加し、反応物を室温で30分間撹拌させた。Boc-ジアミン91aまたは91b(68.87mmol)をN,N-ジイソプロピルエチルアミン(12.35mL、72mmole)とともに添加し、反応物を室温で16時間撹拌させた。この時点で、DMFを減圧下で75%超還元し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で油に還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー(2%→10%メタノール/ジクロロメタン)によって精製して、約80%の収率で化合物92aおよび92bを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物92aまたは92b(6.7mmole)を20mLのジクロロメタンおよび20mLのトリフルオロ酢酸で、室温で16時間処理した。結果として生じた溶液を蒸発させ、その後、メタノール中に溶解し、DOWEX-OH樹脂で30分間処理した。結果として生じた溶液を濾過し、減圧下で油に還元して、85~90%の収率の化合物93aおよび93bを得た。
化合物7または64(9.6mmole)をDMF(20mL)中のHBTU(3.7g、9.6mmole)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(5mL)で15分間処理した。これに、化合物93aまたは93b(3mmole)のいずれかを添加し、室温で16時間撹拌させた。この時点で、DMFを減圧下で75%超還元し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で油に還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー(5%→20%メタノール/ジクロロメタン)によって精製して、20~40%の収率で化合物96a~dを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物96a~d(0.75mmole)を、ラネーニッケル上で3時間、エタノール(75mL)中で個別に水素化した。この時点で、セライトを通して触媒を濾去し、エタノールを減圧下で除去して、80~90%の収率で化合物97a~dを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物23(0.32g、0.53mmole)をDMF(30mL)中のHBTU(0.2g、0.53mmole)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.19mL、1.14mmole)で15分間処理した。これに、化合物97a~d(0.38mmole)を個別に添加し、室温で16時間撹拌させた。この時点で、DMFを減圧下で75%超還元し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で油に還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー(2%→20%メタノール/ジクロロメタン)によって精製して、30~40%の収率で化合物98a~dを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物99(0.17g、0.76mmole)をDMF(50mL)中のHBTU(0.29g、0.76mmole)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.35mL、2.0mmole)で15分間処理した。これに、化合物97a~d(0.51mmole)を個別に添加し、室温で16時間撹拌させた。この時点で、DMFを減圧下で75%超還元し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で油に還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー(5%→20%メタノール/ ジクロロメタン)によって精製して、40~60%の収率で化合物100a~dを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物100a~d(0.16mmole)を、10%Pd(OH)/C上で3時間、メタノール/酢酸エチル(1:1、50mL)中で個別に水素化した。この時点で、セライトを通して触媒を濾去し、有機物を減圧下で除去して、80~90%の収率で化合物101a~dを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
化合物101a~d(0.15mmole)をDMF(15mL)およびピリジン(0.016mL、0.2mmole)中に個別に溶解した。トリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル(0.034mL、0.2mmole)をアルゴン下で滴加し、反応物を室温で30分間撹拌させた。この時点で、DMFを減圧下で75%超還元し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、およびブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で油に還元した。結果として生じた油をシリカゲルクロマトグラフィー(2%→5%メタノール/ジクロロメタン)によって精製して、約80%の収率で化合物102a~dを得た。LCMSおよびプロトンNMRは、その構造と一致した。
Figure 0006995478000203
実施例46に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-8共役基を含むオリゴマー化合物102を調製した。共役基GalNAc-8のGalNAcクラスター部分(GalNAc-8)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。好ましい一実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。
GalNAc-8(GalNAc-8-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000204
実施例48:GalNAc-7を含むオリゴヌクレオチド119の調製
Figure 0006995478000205
Figure 0006995478000206
文献(J.Med.Chem.2004,47,5798-5808)に記載される手順に従って化合物112を合成した。
化合物112(5g、8.6mmol)を1:1メタノール/酢酸エチル(22mL/22mL)中に溶解した。炭素(0.5g)上水酸化パラジウムを添加した。反応混合物を室温で12時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、そのパッドを1:1メタノール/酢酸エチルで洗浄した。濾液と洗浄物を合わせ、濃縮乾固させて、化合物105a(定量的)を得た。この構造を、LCMSによって確認した。
化合物113(1.25g、2.7mmol)、HBTU(3.2g、8.4mmol)、およびDIEA(2.8mL、16.2mmol)を無水DMF(17mL)中に溶解し、反応混合物を室温で5分間撹拌した。これに、無水DMF(20mL)中の化合物105a(3.77g、8.4mmol)の溶液を添加した。反応物を室温で6時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、油を得た。残渣をCHCl(100mL)中に溶解し、飽和NaHCO水溶液(100mL)およびブライン(100mL)で洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ(NaSO)、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中10~20%MeOHで溶出して、化合物114(1.45g、30%)を得た。この構造を、LCMSおよびH NMR分析によって確認した。
化合物114(1.43g、0.8mmol)を1:1メタノール/酢酸エチル(4mL/4mL)中に溶解した。炭素(湿性、0.14g)上パラジウムを添加した。反応混合物を水素で洗い流し、室温で12時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過した。このセライトパッドをメタノール/酢酸エチル(1:1)で洗浄した。濾液と洗浄物を一緒に合わせ、減圧下で蒸発させて、化合物115(定量的)を得た。この構造を、LCMSおよびH NMR分析によって確認した。
化合物83a(0.17g、0.75mmol)、HBTU(0.31g、0.83mmol)、およびDIEA(0.26mL、1.5mmol)を無水DMF(5mL)中に溶解し、反応混合物を室温で5分間撹拌した。これに、無水DMF中の化合物115(1.22g、0.75mmol)の溶液を添加し、反応物を室温で6時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をCHCl中に溶解した。有機層を飽和NaHCO水溶液およびブラインで洗浄し、無水NaSO上で乾燥させ、濾過した。有機層を濃縮乾固させ、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中3~15%MeOHで溶出して、化合物116(0.84g、61%)を得た。この構造を、LC MSおよびH NMR分析によって確認した。
Figure 0006995478000207
化合物116(0.74g、0.4mmol)を1:1メタノール/酢酸エチル(5mL/5mL)中に溶解した。炭素(湿性、0.074g)上パラジウムを添加した。反応混合物を水素で洗い流し、室温で12時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過した。このセライトパッドをメタノール/酢酸エチル(1:1)で洗浄した。濾液と洗浄物を一緒に合わせ、減圧下で蒸発させて、化合物117(0.73g、98%)を得た。この構造を、LCMSおよびH NMR分析によって確認した。
化合物117(0.63g、0.36mmol)を無水DMF(3mL)中に溶解した。この溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(70μL、0.4mmol)およびトリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル(72μL、0.42mmol)を添加した。反応混合物を室温で12時間撹拌し、飽和NaHCO水溶液に注いだ。この混合物をジクロロメタンで抽出し、ブラインで洗浄し、無水NaSO上で乾燥させた。このジクロロメタン溶液を濃縮乾固させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ジクロロメタン中5~10%MeOHで溶出して、化合物118(0.51g、79%)を得た。この構造を、LCMS、ならびにHおよびHおよび19F NMRによって確認した。
Figure 0006995478000208
実施例46に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-7共役基を含むオリゴマー化合物119を調製した。共役基 GalNAc-7のGalNAcクラスター部分(GalNAc-7)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。
GalNAc-7(GalNAc-7-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000209
実施例49:GalNAc-5を含むオリゴヌクレオチド132の調製
Figure 0006995478000210
化合物120(14.01g、40mmol)およびHBTU(14.06g、37mmol)を無水DMF(80mL)中に溶解した。トリエチルアミン(11.2mL、80.35mmol)を添加し、5分間撹拌した。反応混合物を氷浴中で冷却し、無水DMF(20mL)中の化合物121(10g、mmol)の溶液を添加した。さらなるトリエチルアミン(4.5mL、32.28mmol)を添加し、反応混合物をアルゴン雰囲気下で18時間撹拌した。TLC(1:1の酢酸エチル:ヘキサン;Rf=0.47)によって反応を監視した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をEtOAc(300mL)中に取り込み、1M NaHSO(3×150mL)、飽和NaHCO水溶液(3×150mL)、およびブライン(2×100mL)で洗浄した。有機層をNaSOで乾燥させた。乾燥剤を濾去し、有機層を回転蒸発によって濃縮した。粗混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中35~50%EtOAcを用いて溶出して、化合物122(15.50g、78.13%)を得た。この構造を、LCMSおよびH NMR分析によって確認した。質量(m/z)589.3[M+H]
水(20mL)およびTHF(10mL)中のLiOH(92.15mmol)の溶液を、メタノール(15mL)中に溶解した冷却した化合物122の溶液(7.75g、13.16mmol)に添加した。反応混合物を室温で45分間撹拌し、TLC(1:1のEtOAc:ヘキサン)によって監視した。反応混合物を減圧下で濃縮して、半分の体積にした。残りの溶液を氷浴中で冷却して、濃縮HClを添加して中和した。反応混合物を希釈し、EtOAc(120mL)で抽出し、ブライン(100mL)で洗浄した。エマルジョンを形成し、一晩静置した後に取り除いた。有機層を分離し、乾燥させ(NaSO4)、濾過し、蒸発させて、化合物123(8.42g)を得た。残留塩は、過剰な質量の推定原因である。LCMSは、この構造と一致した。この生成物をさらに精製することなく使用した。M.W.計算値:574.36、M.W.実測値:575.3[M+H]
Figure 0006995478000211
文献(J.Am.Chem.Soc.2011,133,958-963)に記載される手順に従って化合物126を合成した。
Figure 0006995478000212
Figure 0006995478000213
化合物123(7.419g、12.91mmol)、HOBt(3.49g、25.82mmol)、および化合物126(6.33g、16.14mmol)をDMF(40mL)中に溶解し、結果として生じた反応混合物を氷浴中で冷却した。これに、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(4.42mL、25.82mmol)、PyBop(8.7g、16.7mmol)、続いて、Bopカップリング試薬(1.17g、2.66mmol)をアルゴン雰囲気下で添加した。氷浴を除去し、溶液を室温まで温めた。1時間後に反応が完了し、TLC(89:10:1のDCM:MeOH:AA)によって決定した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をEtOAc(200mL)中に溶解し、1M NaHSO(3×100mL)、飽和NaHCO水溶液(3×100mL)、およびブライン(2×100mL)で洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ(NaSO)、濾過し、濃縮した。残渣を50%ヘキサン/EtOAC:100%EtOAcの勾配でのシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、白色の発泡体として化合物127(9.4g)を得た。LCMSおよびH NMRは、その構造と一致した。質量(m/z)778.4[M+H]
トリフルオロ酢酸(12mL)をジクロロメタン(12mL)中の化合物127(1.57g、2.02mmol)の溶液に添加し、室温で1時間撹拌した。反応混合物を減圧下でトルエン(30mL)と共蒸発乾固させた。得られた残渣をアセトニトリル(30mL)およびトルエン(40mL)と2回共蒸発させて、トリフルオロ酢酸塩として化合物128(1.67g)を得て、さらに精製することなく次のステップで使用した。LCMSおよびH NMRは、その構造と一致した。質量(m/z)478.2[M+H]
丸底フラスコ内で、化合物7(0.43g、0.963mmol)、HATU(0.35g、0.91mmol)、およびHOAt(0.035g、0.26mmol)を一緒に合わせ、減圧下で、P上で4時間乾燥させ、その後、無水DMF(1mL)中に溶解し、5分間撹拌した。これに無水DMF(0.2mL)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.2mL)中の化合物128(0.20g、0.26mmol)の溶液を添加した。反応混合物を室温で、アルゴン雰囲気下で撹拌した。30分間後に反応が完了し、LCMSおよびTLC(7%MeOH/DCM)によって決定した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をDCM(30mL)中に溶解し、1M NaHSO(3×20mL)、飽和NaHCO水溶液(3×20mL)、およびブライン(3×20mL)で洗浄した。有機相を分離し、NaSO上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をジクロロメタン中5~15%MeOHを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物129(96.6mg)を得た。LC MSおよびH NMRは、その構造と一致する。質量(m/z)883.4[M+2H]
20mLのシンチレーションバイアル内で化合物129(0.09g、0.051mmol)をメタノール(5mL)中に溶解した。これに、少量の10%Pd/C(0.015mg)を添加し、反応容器をHガスで洗い流した。反応混合物を室温で18時間、H雰囲気下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、このセライトパッドをメタノールで洗浄した。濾液洗浄物を一緒にプールし、減圧下で濃縮して、化合物130(0.08g)を得た。LCMSおよびH NMRは、その構造と一致した。この生成物をさらに精製することなく使用した。質量(m/z)838.3[M+2H]
10mLの先の尖った丸底フラスコに、化合物130(75.8mg、0.046mmol)、0.37Mピリジン/DMF(200μL)、および撹拌棒を添加した。この溶液に、0.7Mトリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル/DMF(100μL)を撹拌しながら滴加した。1時間後に反応が完了し、LC MSによって決定した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をCHCl(約10mL)中に溶解した。有機層をNaHSO(1M、10mL)、飽和NaHCO水溶液(10mL)、およびブライン(10mL)にそれぞれ3回分配した。有機相を分離し、NaSO上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、化合物131(77.7mg)を得た。LCMSは、この構造と一致した。さらに精製することなく使用した。質量(m/z)921.3[M+2H]
Figure 0006995478000214
実施例46に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-5共役基を含むオリゴマー化合物132を調製した。共役基GalNAc-5のGalNAcクラスター部分(GalNAc-5)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。
GalNAc-5(GalNAc-5-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000215
実施例50:GalNAc-118を含むオリゴヌクレオチド144の調製
Figure 0006995478000216
Figure 0006995478000217
化合物134の合成。Merrifieldフラスコに、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、およびアセトニトリルで洗浄したアミノメチルVIMAD樹脂(2.5g、450μmol/g)を添加した。この樹脂は、アセトニトリル(4mL)中で膨潤した。20(1.0mmol、0.747g)、TBTU(1.0mmol、0.321g)、アセトニトリル(5mL)、およびDIEA(3.0mmol、0.5mL)を添加して、化合物133を100mLの丸底フラスコ内で事前に活性化した。この溶液を5分間撹拌させ、その後、振盪しながらMerrifieldフラスコに添加した。懸濁液を3時間振盪させた。反応混合物を排出し、樹脂をアセトニトリル、DMF、およびDCMで洗浄した。DCM中500nm(消光係数=76000)でDMTカチオンの吸光度を測定することにより新たな樹脂充填を定量化し、238μmol/gであると決定した。無水酢酸溶液中で10分間3回懸濁することにより、この樹脂をキャップした。
反復性Fmocベースの固相ペプチド合成方法を用いて、固体支持体結合化合物141を合成した。少量の固体支持体を回収し、アンモニア水(28~30重量%)中に6時間懸濁した。切断された化合物をLC-MSによって分析し、観察された質量は、その構造と一致した。質量(m/z)1063.8[M+2H]
固相ペプチド合成方法を用いて、固体支持体結合化合物142を合成した。
Figure 0006995478000218
DNA合成装置において標準の固相合成を用いて、固体支持体結合化合物143を合成した。
固体支持体結合化合物143をアンモニア水(28~30重量%)中に懸濁し、55℃で16時間加熱した。溶液を冷却し、固体支持体を濾過した。濾液を濃縮し、残渣を水中に溶解し、強アニオン交換カラム上でHPLCによって精製した。全長化合物144を含有する画分を一緒にプールし、脱塩した。結果として生じたGalNAc-11共役オリゴマー化合物をLC-MSによって分析し、観察された質量は、その構造と一致した。
共役基GalNAc-11のGalNAcクラスター部分(GalNAc-11)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。
GalNAc-11(GalNAc-11-CM)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000219
実施例51:GalNAc-6を含むオリゴヌクレオチド155の調製
Figure 0006995478000220
文献(Analytical Biochemistry 1995,229,54-60)に記載されるように、化合物146を合成した。
Figure 0006995478000221
化合物4(15g、45.55mmol)および化合物35b(14.3グラム、57mmol)をCHCl(200mL)中に溶解した。活性化分子篩(4Å、2g、粉末)を添加し、反応物を窒素雰囲気下で30分間撹拌させた。TMS-OTfを添加し(4.1mL、22.77mmol)、反応物を室温で一晩撹拌させた。完了した時点で、飽和NaHCO水溶液(500mL)および粉砕氷(約150g)を注いで反応物を反応停止処理した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、MgSO上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮してオレンジ色の油を得た。粗物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、CHCl中2~10%MeOHで溶出して、化合物112(16.53g、63%)を得た。LCMSおよびH NMRは、予想した化合物と一致した。
化合物112(4.27g、7.35mmol)を1:1のMeOH/EtOAc(40mL)中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を15分間泡立てて反応混合物をパージした。パールマン触媒(炭素上水酸化パラジウム、400mg)を添加し、この溶液を通して水素ガスを30分間泡立てた。完了した時点で(TLC(CHCl中10%MeOH)およびLCMS)、セライトパッドを通して触媒を濾去した。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物105a(3.28g)を得た。LCMSおよび1H NMRは、所望の生成物と一致した。
化合物147(2.31g、11mmol)を無水DMF(100mL)中に溶解した。N,N-ジイソプロピルエチルアミン(DIEA、3.9mL、22mmol)、続いて、HBTU(4g、10.5mmol)を添加した。反応混合物を窒素下で約15分間撹拌させた。これに、乾燥DMF中の化合物105a(3.3g、7.4mmol)の溶液を添加し、窒素雰囲気下で2時間撹拌した。反応物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO水溶液およびブラインで洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ(MgSO)、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップを得た。粗物質をカラムクロマトグラフィー(CHCl中2~5%MeOH)によって精製して、化合物148(3.44g、73%)を得た。LCMSおよびH NMRは、予想した生成物と一致した。
化合物148(3.3g、5.2mmol)を1:1のMeOH/EtOAc(75mL)中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を15分間泡立てて反応混合物をパージした。パールマン触媒(炭素上水酸化パラジウム)を添加した(350mg)。この溶液を通して水素ガスを30分間泡立てた。完了した時点で(TLC(DCM中10%MeOH)およびLCMS)、セライトパッドを通して触媒を濾去した。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物149((2.6g)を得た。LCMSは、所望の生成物と一致した。残渣を乾燥DMF(10mL)中に溶解し、次のステップで即座に使用した。
Figure 0006995478000222
化合物146(0.68g、1.73mmol)を乾燥DMF(20mL)中に溶解した。これに、DIEA(450μL、2.6mmol、1.5当量)およびHBTU(1.96g、0.5.2mmol)を添加した。反応混合物を室温で15分間、窒素下で撹拌させた。無水DMF(10mL)中の化合物149(2.6g)の溶液を添加した。DIEAを添加することにより(必要に応じて)、反応物のpHをpH=9~10に調整した。反応物を室温で2時間、窒素下で撹拌させた。完了した時点で、反応物をEtOAc(100mL)で希釈し、飽和NaHCO水溶液で洗浄し、続いて、ブラインで洗浄した。有機相を分離し、MgSO上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、CHCl中2~10%MeOHで溶出して、化合物150(0.62g、20%)を得た。LCMSおよびH NMRは、所望の生成物と一致した。
化合物150(0.62g)を1:1のMeOH/EtOAc(5L)中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を15分間泡立てて反応混合物をパージした。パールマン触媒(炭素上水酸化パラジウム)を添加した(60mg)。この溶液を通して水素ガスを30分間泡立てた。完了した時点で(TLC(DCM中10%MeOH)およびLCMS)、触媒を濾去した(シリンジチップTeflonフィルター、0.45μm)。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物151(0.57g)を得た。LCMSは、所望の生成物と一致した。この生成物を4mLの乾燥DMF中に溶解し、次のステップで即座に使用した。
Figure 0006995478000223
化合物83a(0.11g、0.33mmol)を無水DMF(5mL)中に溶解し、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(75μL、1mmol)およびPFP-TFA(90μL、0.76mmol)を添加した。接触時に反応混合物は赤紫色になり、その後30分間かけて徐々にオレンジ色になった。TLCおよびLCMSによって反応の進行を監視した。完了した時点で(PFPエステルの形成)、DMFを中の化合物151(0.57g、0.33mmol)の溶液を添加した。N,N-ジイソプロピルエチルアミンを添加することにより(必要に応じて)、反応物のpHをpH=9~10に調整した。反応混合物を窒素下で約30分間撹拌した。完了した時点で、溶媒の大部分を減圧下で除去した。残渣をCHClで希釈し、飽和NaHCO水溶液で洗浄し、続いて、ブラインで洗浄した。有機相を分離し、MgSO上で乾燥させ、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップを得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(CHCl中2~10%MeOH)によって精製して、化合物152(0.35g、55%)を得た。LCMSおよびH NMRは、所望の生成物と一致した。
化合物152(0.35g、0.182mmol)を1:1のMeOH/EtOAc(10mL)中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を15分間泡立てて反応混合物をパージした。パールマン触媒(炭素上水酸化パラジウム)を添加した(35mg)。この溶液を通して水素ガスを30分間泡立てた。完了した時点で(TLC(DCM中10%MeOH)およびLCMS)、触媒を濾去した(シリンジチップTeflonフィルター、0.45μm)。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物153(0.33g、定量的)を得た。LCMSは、所望の生成物と一致した。
化合物153(0.33g、0.18mmol)を窒素下で撹拌しながら無水DMF(5mL)中に溶解した。これに、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(65μL、0.37mmol)およびPFP-TFA(35μL、0.28mmol)を添加した。反応混合物を窒素下で約30分間撹拌した。接触時に反応混合物は赤紫色になり、徐々にオレンジ色になった。さらにN,-ジイソプロピルエチルアミンを添加することにより、反応混合物のpHをpH=9~10で維持した。TLCおよびLCMSによって反応の進行を監視した。完了した時点で、溶媒の大部分を減圧下で除去した。残渣をCHCl(50mL)で希釈し、飽和NaHCO水溶液で洗浄し、続いて、ブラインで洗浄した。有機層をMgSO上で乾燥させ、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップを得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、CHCl中2~10%MeOHで溶出して、化合物154(0.29g、79%)を得た。LCMSおよびH NMRは、所望の生成物と一致した。
Figure 0006995478000224
実施例46に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-6共役基を含むオリゴマー化合物155を調製した。共役基GalNAc-6のGalNAcクラスター部分(GalNAc-6)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。
GalNAc-6(GalNAc-6-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000225
実施例52:GalNAc-9を含むオリゴヌクレオチド160の調製
Figure 0006995478000226
文献(J.Med.Chem.2004,47,5798-5808)に記載される手順に従って化合物156を合成した。
化合物156(18.60g、29.28mmol)をメタノール(200mL)中に溶解した。炭素(6.15g、10重量%、充填(乾燥ベース)、マトリックス炭素粉末、湿式)上パラジウムを添加した。反応混合物を室温で18時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、このセライトパッドをメタノールで完全に洗浄した。合わせた濾液を洗浄し、濃縮乾固させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中5~10%メタノールで溶出して、化合物157(14.26g、89%)を得た。質量(m/z)544.1[M-H]
化合物157(5g、9.17mmol)を無水DMF(30mL)中に溶解した。HBTU(3.65g、9.61mmol)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(13.73mL、78.81mmol)を添加し、反応混合物を室温で5分間撹拌した。これに、化合物47(2.96g、7.04mmol)の溶液を添加した。反応物を室温で8時間撹拌した。反応混合物を飽和NaHCO水溶液に注いだ。この混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ(NaSO)、濾過し、蒸発させた。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中50%酢酸エチルで溶出して、化合物158(8.25g、73.3%)を得た。この構造を、MSおよびH NMR分析によって確認した。
化合物158(7.2g、7.61mmol)を減圧下でP上で乾燥させた。乾燥させた化合物を無水DMF(50mL)中に溶解した。これに、1H-テトラゾール(0.43g、6.09mmol)およびN-メチルイミダゾール(0.3mL、3.81mmol)および2-シアノエチル-N,N,N’,N’-テトライソプロピルホスホロジアミダイト(3.65mL、11.50mmol)を添加した。反応混合物をアルゴン雰囲気下で4時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル(200mL)で希釈した。反応混合物を飽和NaHCOおよびブラインで洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ(NaSO)、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中50~90%酢酸エチルで溶出して、化合物159(7.82g、80.5%)を得た。この構造を、LCMSおよび31P NMR分析によって確認した。
Figure 0006995478000227
共役基標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて、GalNAc-9を含むオリゴマー化合物160を調製した。化合物159の3つの単位を固体支持体に、続いて、ヌクレオチドホスホラミダイトにカップリングした。保護されたオリゴマー化合物をアンモニア水で処理して、化合物160を得た。共役基GalNAc-9のGalNAcクラスター部分(GalNAc-9)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-9(GalNAc-9-CM)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000228
実施例53:化合物18(GalNAc-1aおよびGalNAc-3a)の調製のための代替手順
Figure 0006995478000229
ラクトン161をジアミノプロパン(3~5当量)またはMono-Boc保護ジアミノプロパン(1当量)と反応させて、アルコール162aまたは162bを得た。非保護プロパンジアミンを上述の反応で用いた場合、過剰なジアミンを高真空下で蒸発させて除去し、CbzClを用いて162a中の遊離アミノ基を保護して、カラムクロマトグラフィーによって精製した後に、白色の固体として162bを得た。アルコール162bをTMSOTfの存在下で化合物4とさらに反応させ163aを得て、触媒水素化を用いてCbz基を除去することにより、これを163bに変換した。ペンタフルオロフェニル(PFP)エステル164を、三酸113(実施例48を参照のこと)をDMF(0.1~0.5M)中のPFPTFA(3.5当量)およびピリジン(3.5当量)と接触させることによって調製した。トリエステル164をアミン163b(3~4当量)およびDIPEA(3~4当量)と直接反応させて、化合物18を得た。上述の方法は、中間体精製を大幅に促進し、実施例4に記載される手順を用いて形成される副生成物の形成を最小限に抑える。
実施例54:化合物18(GalNAc-1aおよびGalNAc-3a)の調製のための代替手順
Figure 0006995478000230
先の実施例53に概説される手順を用いて酸113からトリPFPエステル164を調製し、モノBoc保護ジアミンと反応させて、本質的に定量的な収率で165を得た。Boc基を塩酸またはトリフルオロ酢酸で除去して、トリアミンを得て、これをDIPEA等の好適な塩基の存在下でPFP活性化酸166と反応させて、化合物18を得た。
DMF中のPFPTFA(1~1.2当量)およびピリジン(1~1.2当量)で処理することにより、PFP保護Gal-NAc酸166を対応する酸から調製した。次いで、アセトニトリルおよび水中のTEMPO(0.2当量)およびBAIBを用いて酸化することにより、前駆酸を対応するアルコールから調製した。先の実施例47に記載される条件を用いて1,6-ヘキサンジオール(または1,5-ペンタンジオールもしくは他のn値の他のジオール)(2~4当量)およびTMSOTfと反応させることにより、前駆アルコールを糖中間体4から調製した。
実施例55:生体内におけるSRB-1を標的とする3’-共役基または5’-共役基のいずれかを含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験(GalNAc-1、3、8、および9の比較)
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。非共役ISIS 353382を標準物として含めた。様々なGalNAc共役基の各々を、ホスホジエステル結合2’-デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの3’末端または5’末端のいずれかに結合させた。
Figure 0006995478000231
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、Cは、5-メチルシトシンを示す。下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。共役基は、太字で表示されている。
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示した。GalNAc-9の構造は、先の実施例52に示した。GalNAc-3の構造は、先の実施例39に示した。GalNAc-8の構造は、先の実施例47に示した。
処理
6週齢の雄Balb/cマウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、ISIS 353382、655861、664078、661161、665001、または生理食塩水を、以下に示される投与量で1回、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるSRB-1 mRNAレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水(対照)に規準化された各処理群のSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示される。
表27に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させた。実際には、3’末端にホスホジエステル結合GalNAc-1およびGalNAc-9共役体(ISIS 655861およびISIS 664078)ならびに5’末端に連結されたGalNAc-3およびGalNAc-8共役体(ISIS 661161およびISIS 665001)を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド(ISIS 353382)と比較して、強度の大幅な改善を示した。さらに、3’末端にGalNAc-9共役体を含むISIS 664078は、3’末端にGalNAc-1共役体を含むISIS 655861と比較して、本質的に等効力であった。それぞれ、GalNAc-3またはGalNAc-9を含む5’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドISIS 661161およびISIS 665001は、3’共役アンチセンスオリゴヌクレオチド(ISIS 655861およびISIS 664078)と比較して、強度を増加させた。
Figure 0006995478000232
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびBUNも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ALT、AST、総ビリルビン、およびBUN値が、以下の表に示される。
Figure 0006995478000233
実施例56:生体内におけるSRB-1を標的とする3’-共役基または5’-共役基のいずれかを含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験(GalNAc-1、2、3、5、6、7、および10の比較)
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。非共役ISIS 353382を標準物として含めた。3’末端にGalNAc共役基を結合させたISIS 655861を除いて、様々なGalNAc共役基の各々を、ホスホジエステル結合2’-デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの5’末端に結合させた。
Figure 0006995478000234
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、Cは、5-メチルシトシンを示す。下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。共役基は、太字で表示されている。
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示した。GalNAc-2の構造は、先の実施例37に示した。GalNAc-3の構造は、先の実施例39に示した。GalNAc-5の構造は、先の実施例49に示した。GalNAc-6の構造は、先の実施例51に示した。GalNAc-7の構造は、先の実施例48に示した。GalNAc-10の構造は、先の実施例46に示した。
処理
6週齢の雄Balb/cマウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、ISIS 353382、655861、664507、661161、666224、666961、666981、666881、または生理食塩水を、以下に示される投与量で1回皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるSRB-1 mRNAレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水(対照)に規準化された各処理群のSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示される。
表30に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させた。実際には、共役アンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド(ISIS 353382)と比較して、強度の大幅な改善を示した。5’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドは、3’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドと比較して、強度のわずかな増加を示した。
Figure 0006995478000235
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびBUNも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ALT、AST、総ビリルビン、およびBUN値が、以下の表31に示される。
Figure 0006995478000236
実施例57:生体内におけるApoC IIIを標的とする3’-共役基を含むオリゴヌクレオチドの作用持続時間試験
マウスに以下に示される用量を1回注入し、ApoC-IIIおよび血漿トリグリセリド(血漿TG)レベルを42日間にわたって監視した。各群におけるヒトAPOC-IIIを発現する3匹のトランスジェニックマウスを用いて、この試験を実行した。
Figure 0006995478000237
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、Cは、5-メチルシトシンを示す。下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。共役基は、太字で表示されている。
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示した。
Figure 0006995478000238
上の表に見られるように、作用持続時間は、非共役オリゴヌクレオチドと比較して、3’-共役基の添加とともに増加した。共役完全PSオリゴヌクレオチド647535と比較して、共役混合PO/PSオリゴヌクレオチド647536の作用持続時間がさらに増加した。
実施例58:生体内におけるSRB-1を標的とする3’-共役基を含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験(GalNAc-1およびGalNAc-11の比較)
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。非共役ISIS 440762を非共役標準物として含めた。共役基の各々を、ホスホジエステル結合2’-デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの3’末端に結合させた。
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示した。GalNAc-11の構造GalNAcは、先の実施例50に示した。
処理
6週齢の雄Balb/cマウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、ISIS 440762、651900、663748、または生理食塩水を、以下に示される投与量で1回、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるSRB-1 mRNAレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水(対照)に規準化された各処理群のSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示される。
表34に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させた。3’末端にホスホジエステル結合GalNAc-1およびGalNAc-11共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド(ISIS 651900およびISIS 663748)は、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド(ISIS 440762)と比較して、強度の大幅な増加を示した。2個の共役オリゴヌクレオチド、GalNAc-1およびGalNAc-11は、等効力であった。
Figure 0006995478000239
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、Cは、5-メチルシトシンを示す。下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「k」は、6’-(S)-CH二環式ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。共役基は、太字で表示されている。
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびBUNも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ALT、AST、総ビリルビン、およびBUN値が、以下の表35に示される。
Figure 0006995478000240
実施例59:生体内におけるFXIを標的とするGalNAc-1共役ASOの影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、複数回投与試験においてマウスにおけるFXIのアンチセンス阻害について試験した。ISIS 404071を非共役標準物として含めた。共役基の各々を、ホスホジエステル結合2’-デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの3’末端に結合させた。
Figure 0006995478000241
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、Cは、5-メチルシトシンを示す。下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。共役基は、太字で表示されている。
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示した。
処理
6週齢の雄Balb/cマウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、ISIS 404071、656172、656173、またはPBS処理対照を、以下に示される投与量で週2回3週間、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるFXI mRNAレベルを決定した。ELISAを用いて血漿FXIタンパク質レベルも測定した。PBS処理対照に規準化する前に(RIBOGREEN(登録商標)を用いて)FXI mRNAレベルを全RNAに対して相対的に決定した。以下の結果は、各処理群のFXI mRNAレベルの平均パーセントとして提示される。データをPBS処理対照に規準化し、「%PBS」で表示する。前記方法と同様の方法を用いてED50を測定し、以下に提示する。
Figure 0006995478000242
表37に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でFXI mRNAレベルを低下させた。3’-GalNAc-1共役基を含むオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド(ISIS 404071)と比較して、強度の大幅な増加を示した。PS結合のうちのいくつかをPO(ISIS 656173)と置き換えることによって、これら2個の共役オリゴヌクレオチドの間で強度の増加がさらに提供された。
表37aに例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でFXIタンパク質レベルを低下させた。3’-GalNAc-1共役基を含むオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド(ISIS 404071)と比較して、強度の大幅な増加を示した。PS結合のうちのいくつかをPO(ISIS 656173)と置き換えることによって、これら2個の共役オリゴヌクレオチドの間で強度の増加がさらに提供された。
Figure 0006995478000243
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビン、総アルブミン、CRE、およびBUNも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ALT、AST、総ビリルビン、およびBUN値が、以下の表に示される。
Figure 0006995478000244
実施例60:生体外におけるSRB-1を標的とする共役ASOの影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、複数回投与試験において初代マウス肝細胞におけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。ISIS 353382を非共役標準物として含めた。共役基の各々を、ホスホジエステル結合2’-デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの3’末端または5’末端に結合させた。
Figure 0006995478000245
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、Cは、5-メチルシトシンを示す。下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。共役基は、太字で表示されている。
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示した。GalNAc-3aの構造は、先の実施例39に示した。GalNAc-8aの構造は、先の実施例47に示した。GalNAc-9aの構造は、先の実施例52に示した。GalNAc-6aの構造は、先の実施例51に示した。GalNAc-2aの構造は、先の実施例37に示した。GalNAc-10aの構造は、先の実施例46に示した。GalNAc-5aの構造は、先の実施例49に示した。GalNAc-7aの構造は、先の実施例48に示した。
処理
上に列記されるオリゴヌクレオチドを、25,000細胞/ウェルの密度でプレーティングし、かつ0.03、0.08、0.24、0.74、2.22、6.67、または20nMの修飾オリゴヌクレオチドで処理した初代マウス肝細胞において生体外で試験した。約16時間の治療期間後、RNAを細胞から単離し、mRNAレベルを定量的リアルタイムPCRによって測定し、RIBOGREEN(登録商標)によって測定された総RNA含有量に従ってSRB-1 mRNAレベルを調整した。
標準の方法を用いてIC50を計算し、結果を表40に提示する。結果は、オリゴヌクレオチドの細胞への進入を人工的に促進するために試薬も電気穿孔技法も用いない遊離取り込み条件下で、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドは、GalNAc共役体を含まない親オリゴヌクレオチド(ISIS 353382)よりも肝細胞において著しく強力であったことを示す。
Figure 0006995478000246
実施例61:GalNAc-12を含むオリゴマー化合物175の調製
Figure 0006995478000247
Figure 0006995478000248
Figure 0006995478000249
Figure 0006995478000250
Figure 0006995478000251
化合物169は、市販のものである。ベンジル(ペルフルオロフェニル)グルタレートを化合物171に添加することによって化合物172を調製した。PFP-TFAおよびDIEAをDMF中の5-(ベンジルオキシ)-5-オキソペンタン酸に添加することによって、ベンジル(ペルフルオロフェニル)グルタレートを調製した。実施例46に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-12共役基を含むオリゴマー化合物175を化合物174から調製した。共役基GalNAc-12のGalNAcクラスター部分(GalNAc-12)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-12(GalNAc-12-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000252
実施例61:GalNAc-13を含むオリゴマー化合物180の調製
Figure 0006995478000253
Figure 0006995478000254
Figure 0006995478000255
実施例2に示される一般的手順を用いて、化合物176を調製した。実施例49に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-13共役基を含むオリゴマー化合物180を化合物177から調製した。共役基GalNAc-13のGalNAcクラスター部分(GalNAc-13)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-13(GalNAc-13-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000256
実施例63:GalNAc-14を含むオリゴマー化合物188の調製
Figure 0006995478000257
Figure 0006995478000258
Figure 0006995478000259
化合物181および185は、市販のものである。実施例46に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-14共役基を含むオリゴマー化合物188を化合物187から調製した。共役基GalNAc-14のGalNAcクラスター部分(GalNAc-14)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-14(GalNAc-14-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000260
実施例64:GalNAc-15を含むオリゴマー化合物197の調製
Figure 0006995478000261
Figure 0006995478000262
Figure 0006995478000263
化合物189は、市販のものである。実施例31に示される一般的手順を用いて、化合物195を調製した。標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて、GalNAc-15共役基を含むオリゴマー化合物197を化合物194および195から調製した。共役基GalNAc-15のGalNAcクラスター部分(GalNAc-15)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-15(GalNAc-15-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000264
実施例65:生体内におけるSRB-1を標的とする5’-共役基を含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験(GalNAc-3、12、13、14、および15の比較)
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。非共役ISIS 353382を標準物として含めた。GalNAc共役基の各々を、ホスホジエステル結合2’-デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能な部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの5’末端に結合させた。
Figure 0006995478000265
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、Cは、5-メチルシトシンを示す。下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。共役基は、太字で表示されている。
GalNAc-3の構造は、先の実施例39に示した。GalNAc-12aの構造は、先の実施例61に示した。GalNAc-13aの構造は、先の実施例62に示した。GalNAc-14aの構造は、先の実施例63に示した。GalNAc-15aの構造は、先の実施例64に示した。
処理
6~8週齢のC57bl6マウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、ISIS 353382、661161、671144、670061、671261、671262、または生理食塩水を、以下に示される投与量で1回または2回、皮下注入した。2回投与されたマウスは、第1の投与の3日後に第2の投与を受けた。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるSRB-1 mRNAレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水(対照)に規準化された各処理群のSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示される。
表42に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドdenosyori は、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させた。単回用量を受けた動物と2回の用量を受けた動物との間で標的ノックダウンの著しい差は観察されなかった(ISIS 353382の投与量30および2×15mg/kg、ならびにISIS 661161の投与量5および2×2.5mg/kgを参照のこと)。ホスホジエステル結合GalNAc-3、12、13、14、および15共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド(ISIS 335382)と比較して、強度の大幅な増加を示した。
Figure 0006995478000266
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびBUNも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な差は見られなかった(データ示されず)。ALT、AST、総ビリルビン、およびBUN値が、以下の表43に示される。
Figure 0006995478000267
実施例66:5’-GalNAcクラスターを含むSRB-1を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害への様々な切断可能な部分の影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。GalNAc共役基の各々を、ホスホジエステルの連結したヌクレオシドの切断可能な部分(CM)によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの5’末端に結合させた。
Figure 0006995478000268
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、Cは、5-メチルシトシンを示す。下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。共役基は、太字で表示されている。
GalNAc-3の構造は、先の実施例39に示した。GalNAc-13aの構造は、先の実施例62に示した。
処理
6~8週齢のC57bl6マウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、ISIS 661161、670699、670700、670701、671165、または生理食塩水を、以下に示される投与量で1回、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるSRB-1 mRNAレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水(対照)に規準化された各処理群のSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示される。
表45に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させた。様々な切断可能な部分を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドはすべて、同様の強度を示した。
Figure 0006995478000269
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびBUNも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な差は見られなかった(データ示されず)。ALT、AST、総ビリルビン、およびBUN値が、以下の表46に示される。
Figure 0006995478000270
実施例67:GalNAc-16を含むオリゴマー化合物199の調製
Figure 0006995478000271
実施例7および9に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-16共役基を含むオリゴマー化合物199を調製する。共役基GalNAc-16のGalNAcクラスター部分(GalNAc-16)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-16(GalNAc-16-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000272
実施例68:GalNAc-17を含むオリゴマー化合物200の調製
Figure 0006995478000273
実施例46に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-17共役基を含むオリゴマー化合物200を調製した。GalNAc-17のGalNAcクラスター部分(GalNAc-17)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-17(GalNAc-17-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000274
実施例69:GalNAc-18を含むオリゴマー化合物201の調製
Figure 0006995478000275
実施例46に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-18共役基を含むオリゴマー化合物201を調製した。共役基GalNAc-18のGalNAcクラスター部分(GalNAc-18)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-18(GalNAc-18-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000276
実施例70:GalNAc-19を含むオリゴマー化合物204の調製
Figure 0006995478000277
実施例52に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-19共役基を含むオリゴマー化合物204を化合物64から調製した。共役基GalNAc-19のGalNAcクラスター部分(GalNAc-19)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-19(GalNAc-19-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000278
実施例71:GalNAc-20を含むオリゴマー化合物210の調製
Figure 0006995478000279
PFP-TFAおよびDIEAを、トリフリン酸無水物を6-アミノヘキサン酸に添加することによって調製したアセトニトリル中の6-(2,2,2-トリフルオロアセトアミド)ヘキサン酸に添加することによって、化合物205を調製した。反応混合物を80℃に加熱し、その後、室温まで下げた。実施例52に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-20共役基を含むオリゴマー化合物210を化合物208から調製した。共役基GalNAc-20のGalNAcクラスター部分(GalNAc-20)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-20(GalNAc-20-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000280
実施例72:GalNAc-21を含むオリゴマー化合物215の調製
Figure 0006995478000281
化合物211は、市販のものである。実施例52に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-21共役基を含むオリゴマー化合物215を化合物213から調製した。共役基GalNAc-21のGalNAcクラスター部分(GalNAc-21)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-21(GalNAc-21-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000282
実施例73:GalNAc-22を含むオリゴマー化合物221の調製
Figure 0006995478000283
Figure 0006995478000284
ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリドを用いて、化合物220を化合物219から調製した。実施例52に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-21共役基を含むオリゴマー化合物221を化合物220から調製する。共役基GalNAc-22のGalNAcクラスター部分(GalNAc-22)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、-P(=O)(OH)-A-P(=O)(OH)-である。GalNAc-22(GalNAc-22-CM-)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000285
実施例74:5’-GalNAc共役基を含むSRB-1を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害への様々な切断可能な部分の影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。GalNAc共役基の各々を、それぞれのオリゴヌクレオチドの5’末端に結合させた。
Figure 0006995478000286
すべての表において、大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、Cは、5-メチルシトシンを示す。下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示し、「o’」は、-O-P(=O)(OH)-を示す。共役基は、太字で表示されている。
GalNAc-3の構造は、先の実施例39に示した。GalNAc-17aの構造は、先の実施例68に示し、GalNAc-18aの構造は、実施例69に示した。
処理
6~8週齢のC57BL/6マウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、表47に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で1回、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、SRB-1 mRNAレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水(対照)に規準化された各処理群のSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示される。
表48に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させた。GalNAc共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の強度を示し、GalNAc共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
Figure 0006995478000287
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスに対して相対的に測定した。総ビリルビンおよびBUNも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった(データ示されず)。ALT、AST、総ビリルビン、およびBUN値が、以下の表49に示される。
Figure 0006995478000288
実施例75:5’-共役基を含むオリゴヌクレオチドの薬物動態分析
実施例65、66、および74に記載される処理手順に従って得た肝臓試料を用いて、上の表41、44、および47におけるASOのPKを評価した。肝臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出し、内部標準とともにIP-HPLC-MSによって分析した。適切なUVピークを統合することによってすべての代謝物の合わせた組織レベル(μg/g)を測定し、適切な抽出イオンクロマトグラム(EIC)を用いて、共役体(この場合、ISIS番号353382の「親」)を欠く全長ASOの組織レベルを測定した。
Figure 0006995478000289
上の表50における結果は、特にGalNAc共役基を有するオリゴヌクレオチドとGalNAc共役基を有しないオリゴヌクレオチドとの間の投薬の差を考慮に入れた場合、オリゴヌクレオチド投与の72時間後に、GalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチドの肝臓組織レベルが、GalNAc3共役基を含まない親オリゴヌクレオチド(ISIS 353382)の肝臓組織レベルよりも高かったことを示す。さらに、72時間までに、GalNAc共役基を含む各オリゴヌクレオチドの40~98%が親化合物に代謝され、GalNAc共役基がオリゴヌクレオチドから切断されたことを示す。
実施例76:GalNAc-23を含むオリゴマー化合物230の調製
Figure 0006995478000290
Figure 0006995478000291
化合物222は、市販のものである。44.48mL(0.33mol)の化合物222をピリジン(500mL)中の塩化トシル(25.39g、0.13mol)で16時間処理した。その後、反応物を蒸発させて油にし、EtOAc中に溶解し、水、飽和NaHCO、ブラインで洗浄し、NaSO上で乾燥させた。酢酸エチルを濃縮乾固させ、カラムクロマトグラフィーによって精製し、EtOAc/ヘキサン(1:1)、続いて、CHCl中10%メタノールで溶出して、無色の油として化合物223を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。10g(32.86mmol)の1-トシルトリエチレングリコール(化合物223)を、DMSO(100mL)中のアジ化ナトリウム(10.68g、164.28mmol)で、室温で17時間処理した。その後、反応混合物を水上に注ぎ、EtOAcで抽出した。有機層を水で3回洗浄し、NaSO上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させて、5.3gの化合物224(92%)を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。1-アジドトリエチレングリコール(化合物224、5.53g、23.69mmol)および化合物4(6g、18.22mmol)を、4A分子篩(5g)およびジクロロメタン(100mL)中のTMSOTf(1.65mL、9.11mmol)で、不活性雰囲気下で処理した。14時間後、反応物を濾過して篩を除去し、有機層を飽和NaHCO、水、ブラインで洗浄し、NaSO上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させ、カラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中2~4%メタノールの勾配で溶出して、化合物225を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。化合物225(11.9g、23.59mmol)をパールマン触媒上で、EtOAc/メタノール(4:1、250mL)中で水素化した。8時間後、触媒を濾去し、溶媒を除去乾固して、化合物226を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。
化合物227を生成するために、DMF(100mL)中のニトロメタントリスプロピオン酸(4.17g、15.04mmol)およびヒューニッヒ塩基(10.3mL、60.17mmol)の溶液をペンタフルオロトリフルオロアセテート(9.05mL、52.65mmol)で液滴処理した。30分間後、反応物を氷水上に注ぎ、EtOAcで抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、NaSO上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させ、その後、ヘプタンから再結晶化して、白色の固体として化合物227を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。化合物227(1.5g、1.93mmol)および化合物226(3.7g、7.74mmol)をアセトニトリル(15mL)中で、室温で2時間撹拌した。その後、反応物を蒸発乾固し、カラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中2~10%メタノールの勾配で溶出して、化合物228を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。化合物228(1.7g、1.02mmol)をエタノール(100mL)中のラネーニッケル(約2g、湿性)で、水素雰囲気下で処理した。12時間後、触媒を濾去し、有機層を蒸発させて固体にし、これを次のステップで直接使用した。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。この固体(0.87g、0.53mmol)をDMF(5mL)中のベンジルグルタル酸(0.18g、0.8mmol)、HBTU(0.3g、0.8mmol)、およびDIEA(273.7μL、1.6mmol)で処理した。16時間後、DMFを減圧下で65℃で除去して油にし、この油をジクロロメタン中に溶解した。有機層を飽和NaHCO、ブラインで洗浄し、NaSO上で乾燥させた。有機層を蒸発させた後、化合物をカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中2~20%メタノールの勾配で溶出して、カップリング生成物を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。ベンジルエステルをパールマン触媒で、水素雰囲気下で1時間脱保護した。その後、この触媒を濾去し、溶媒を除去乾固して、酸を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。酸(486mg、0.27mmol)を乾燥DMF(3mL)中に溶解した。ピリジン(53.61μL、0.66mmol)を添加し、反応物をアルゴンでパージした。ペンタフルオロトリフルオロアセテート(46.39μL、0.4mmol)を反応混合物に緩徐に添加した。反応物の色が淡黄色からワイン色に変化し、少しの煙を発し、この煙をアルゴン流で吹き飛ばした。反応物を室温で1時間撹拌させた(反応の完了をLCMSによって確認した)。この溶媒を減圧下(回転蒸発)で70℃で除去した。残渣をDCMで希釈し、1N NaHSO、ブライン、飽和重炭酸ナトリウム、および再度ブラインで洗浄した。有機物をNaSO上で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、黄色の脆性発泡体として225mgの化合物229を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。
実施例46に例証される一般的手順を用いて、GalNAc-23共役基を含むオリゴマー化合物230を化合物229から調製した。GalNAc-23共役基のGalNAcクラスター部分(GalNAc-23)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。GalNAc-23(GalNAc-23-CM)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000292
実施例77:GalNAc共役体を含むSRB-1を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。
Figure 0006995478000293
Figure 0006995478000294
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示し、GalNAc-3は、実施例39に示し、GalNAc-9aは、実施例52に示し、GalNAc-10aは、実施例46に示し、GalNAc-19は、実施例70に示し、GalNAc-20は、実施例71に示し、GalNAc-23は、実施例76に示した。
処理
6~8週齢のC57BL/6マウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)の各々に、表51に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で1回、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、SRB-1 mRNAレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水(対照)に規準化された各処理群のSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示される。
表52に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させた。
Figure 0006995478000295
標準のプロトコルを用いて、血清中の肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)も測定した。総ビリルビンおよびBUNも評価した。体重の変化を評価し、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった(データ示されず)。ALT、AST、総ビリルビン、およびBUN値が、以下の表53に示される。
Figure 0006995478000296
実施例78:GalNAc共役体を含むアンギオテンシノーゲンを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験において正常血圧のSprague Dawleyラットにおけるアンギオテンシノーゲン(AGT)のアンチセンス阻害について試験した。
Figure 0006995478000297
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示した。
処理
6週齢の雄Sprague Dawleyラットの各々に、表54に列記されるオリゴヌクレオチドまたはPBSを、以下に示される投与量で週1回、合計3回の投与で、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にラットを屠殺した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるAGT mRNAレベルを決定した。全アンギオテンシノーゲンELISA(カタログ番号JP27412、IBL International,Toronto,ON)を用いて、1:20,000で希釈したAGT血漿タンパク質レベルを測定した。以下の結果は、PBS対照に規準化された各処理群の肝臓におけるAGT mRNAレベルまたは血漿におけるAGTタンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。
表55に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるAGT mRNAおよび血漿タンパク質レベルを低下させ、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドは、GalNAc共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
Figure 0006995478000298
標準のプロトコルを用いて、屠殺時に血漿中の肝臓トランスアミナーゼレベル、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)、ならびに体重も測定した。結果が以下の表56に示される。
Figure 0006995478000299
実施例79:GalNAc共役体を含むAPOC-IIIを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
以下の表57に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
Figure 0006995478000300
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示し、GalNAc-3は、実施例39に示し、GalNAc-7は、実施例48に示し、GalNAc-10は、実施例46に示し、GalNAc-13は、実施例62に示した。
処理
ヒトAPOC-IIIを発現する6~8週齢のトランスジェニックマウスの各々に、表57に列記されるオリゴヌクレオチドまたはPBSを1回皮下注入した。各処理群は、3匹の動物から成った。投薬前に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後72時間、1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、および6週間時点のレベルを決定した。実施例20に記載されるように、血漿トリグリセリドおよびAPOC-IIIタンパク質レベルを測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに規準化された各処理群の血漿トリグリセリドおよびAPOC-IIIレベルの平均パーセントとして提示され、親オリゴヌクレオチドの投与量がGalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチドの投与量の3倍であったにもかかわらず、GalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチドが共役基(ISIS 304801)を有しない親オリゴヌクレオチドよりも長い作用持続時間を示したことを示す。
Figure 0006995478000301
Figure 0006995478000302
実施例80:GalNAc共役体を含むα-1抗トリプシン(A1AT)を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表59に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおけるA1ATの用量依存的阻害試験において試験した。
Figure 0006995478000303
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示し、GalNAc-3は、実施例39に示し、GalNAc-7は、実施例48に示し、GalNAc-10は、実施例46に示し、GalNAc-13は、実施例62に示した。
処理
6週齢の雄C57BL/6マウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)の各々に、表59に列記されるオリゴヌクレオチドまたはPBSを、以下に示される投与量で週1回、合計3回の投与で、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるA1AT mRNAレベルを決定した。マウスα1-抗トリプシンELISA(カタログ番号41-A1AMS-E01、Alpco,Salem,NH)を用いて、A1AT血漿タンパク質レベルを決定した。以下の結果は、PBS対照に規準化された各処理群の肝臓におけるA1AT mRNAおよび血漿タンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。
表60に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるA1AT mRNAおよびA1AT血漿タンパク質レベルを低下させた。GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドは、親(ISIS 476366)よりも著しく強力であった。
Figure 0006995478000304
標準のプロトコルを用いて、屠殺時に血漿中の肝臓トランスアミナーゼおよびBUNレベルを測定した。体重および臓器重量も測定した。結果が以下の表61に示される。体重は、ベースラインと比較した%として示される。臓器重量は、PBS対照群と比較した体重の%として示される。
Figure 0006995478000305
実施例81:GalNAcクラスターを含むA1ATを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
表59に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
6週齢の雄C57BL/6マウスの各々に、表59に列記されるオリゴヌクレオチドまたはPBSを1回皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。投薬の前日に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後5、12、19、および25日時点のレベルを決定した。ELISAを用いて血漿A1ATタンパク質レベルを測定した(実施例80を参照のこと)。以下の結果は、ベースラインレベルに規準化された各処理群の血漿A1ATタンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。結果は、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドがGalNAc共役体を欠く親(ISIS 476366)よりも強力であり、かつより長い作用持続時間を有したことを示す。さらに、5’-GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチド(ISIS 678381、678382、678383、および678384)は、概して、3’-GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチド(ISIS 656326)よりもさらに強力であり、さらに長い作用持続時間を有した。
Figure 0006995478000306
実施例82:GalNAc共役体を含むSRB-1を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体外におけるアンチセンス阻害
処理の2時間前に、初代マウス肝細胞を15,000細胞/ウェルで96ウェルプレートに播種した。表63に列記されるオリゴヌクレオチドをウィリアムE培地に2、10、50、または250nMで添加し、細胞を37℃、5%COで一晩インキュベートした。オリゴヌクレオチド添加の16時間後に細胞を溶解し、RNease 3000 BioRobot(Qiagen)を用いて全RNAを精製した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、SRB-1 mRNAレベルを決定した。Prism 4ソフトウェア(GraphPad)を用いて、IC50値を決定した。結果は、様々な異なるGalNAc共役基および様々な異なる切断可能な部分を含むオリゴヌクレオチドが、生体外遊離取り込み実験において、GalNAc共役基を欠く親オリゴヌクレオチド(ISIS 353382および666841)よりも著しく強力であることを示す。
Figure 0006995478000307
Figure 0006995478000308
Figure 0006995478000309
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示し、GalNAc-3は、実施例39に示し、GalNAc-5は、実施例49に示し、GalNAc-6は、実施例51に示し、GalNAc-7は、実施例48に示し、GalNAc-8は、実施例47に示し、GalNAc-9は、実施例52に示し、GalNAc-10は、実施例46に示し、GalNAc-12は、実施例61に示し、GalNAc-13は、実施例62に示し、GalNAc-14は、実施例63に示し、GalNAc-15は、実施例64に示し、GalNAc-17は、実施例68に示し、GalNAc-18は、実施例69に示し、GalNAc-19は、実施例70に示し、GalNAc-20は、実施例71に示し、GalNAc-23は、実施例76に示した。
実施例83:GalNAcクラスターを含む第XI因子を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表64に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおける第XI因子の用量依存的阻害試験において試験した。
Figure 0006995478000310
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示し、GalNAc-3は、実施例39に示し、GalNAc-7は、実施例48に示し、GalNAc-10は、実施例46に示し、GalNAc-13は、実施例62に示した。
処理
6~8週齢のマウスの各々に、以下に列記されるオリゴヌクレオチドまたはPBSを、以下に示される投与量で週1回、合計3回の投与で、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムPCRを用いて肝臓における第XI因子mRNAレベルを測定し、標準のプロトコルに従ってシクロフィリンに規準化した。肝臓トランスアミナーゼ、BUN、およびビリルビンも測定した。以下の結果は、PBS対照に規準化された各処理群の平均パーセントとして提示される。
表65に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓における第XI因子mRNAを低下させた。結果は、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドが、GalNAc共役体を欠く親(ISIS 404071)よりも強力であったことを示す。さらに、5’-GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチド(ISIS 663086、678347、678348、および678349)は、3’-GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチド(ISIS 656173)よりもさらに強力であった。
Figure 0006995478000311
実施例84:GalNAc共役体を含む第XI因子を標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
表64に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
6~8週齢のマウスの各々に、表64に列記されるオリゴヌクレオチドまたはPBSを1回皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。投薬の前日に尾出血によって血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後3、10、および17日間時点のレベルを決定した。R & D Systems(Minneapolis,MN)の第XI因子捕捉およびビオチン化検出抗体(それぞれ、カタログ番号AF2460およびBAF2460)、ならびにOptEIA試薬セットB(カタログ番号550534、BD Biosciences,San Jose,CA)を用いて、第XI因子血漿タンパク質レベルをELISAによって測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに規準化された各処理群の第XI因子血漿タンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。結果は、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドが、GalNAc共役体を欠く親(ISIS 404071)よりも強力であり、より長い作用持続時間を有したことを示す。さらに、5’-GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチド(ISIS 663086、678347、678348、および678349)は、3’-GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチド(ISIS 656173)よりもさらに強力であり、さらに長い作用持続時間を有した。
Figure 0006995478000312
実施例85:GalNAc共役体を含むSRB-1を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表63に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。
処理
6~8週齢のC57BL/6マウスの各々に、表63に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で週1回、合計3回の投与で、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の48時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、SRB-1 mRNAレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水(対照)に規準化された各処理群の肝臓におけるSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示される。
表67および68に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させた。
Figure 0006995478000313
Figure 0006995478000314
標準のプロトコルを用いて、肝臓トランスアミナーゼレベル、総ビリルビン、BUN、および体重も測定した。各処理群の平均値が以下の表69に示される。
Figure 0006995478000315
実施例86:GalNAcクラスターを含むTTRを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表70に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてヒトTTR遺伝子を発現するトランスジェニックマウスにおけるヒトトランスサイレチン(TTR)のアンチセンス阻害について試験した。
処理
8週齢のTTRトランスジェニックマウスの各々に、以下の表に列記されるオリゴヌクレオチドおよび投与量またはPBSを、週1回3週間、合計3回の投与で、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺した。この実験を通して様々な時点で尾出血を実行し、血漿TTRタンパク質、ALT、およびASTレベルを測定し、表72~74に報告した。動物を屠殺した後、血漿ALT、AST、およびヒトTTRレベルを測定し、体重、臓器重量、および肝臓におけるヒトTTR mRNAレベルも測定した。臨床分析器(AU480、Beckman Coulter,CA)を用いて、TTRタンパク質レベルを測定した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるヒトTTR mRNAレベルを決定した。表71~74に提示される結果は、各処理群の平均値である。mRNAレベルは、PBS群の平均と比較した平均値である。血漿タンパク質レベルは、ベースラインでのPBS群の平均値と比較した平均値である。体重は、個々の処理群それぞれを屠殺するまでのベースラインからの平均体重変化率である。示される臓器重量は、動物の体重に規準化されており、各処理群の平均規準化臓器重量は、PBS群の平均規準化臓器重量と比較して提示される。
表71~74において、「BL」は、第1の投与の直前に測定したベースラインを示す。表71および72に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でTTR発現レベルを低下させた。GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドは、GalNAc共役体を欠く親(ISIS 420915)よりも強力であった。さらに、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドおよび混合PS/POヌクレオシド間結合は、GalNAc共役体および完全PS結合を含むオリゴヌクレオチドよりもさらに強力であった。
Figure 0006995478000316
表72の説明文を実施例74で見つけることができる。GalNAc-1の構造は、実施例9に示した。GalNAc-3の構造は、実施例39に示した。GalNAc-7の構造は、実施例48に示した。GalNAc-10の構造は、実施例46に示した。GalNAc-13の構造は、実施例62に示した。GalNAc-19の構造は、実施例70に示した。
Figure 0006995478000317
Figure 0006995478000318
Figure 0006995478000319
Figure 0006995478000320
実施例87:GalNAcクラスターを含むTTRを標的とするオリゴヌクレオチドの単回投与による生体内における作用持続時間
ISIS番号420915および660261(表70を参照のこと)を、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。ISIS番号420915、682883、および682885(表70を参照のこと)も、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
ヒトTTRを発現する8週齢の雄トランスジェニックマウスの各々に、100mg/kgのISIS番号420915または13.5mg/kgのISIS番号660261を1回皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。投薬前に尾出血を実行して、ベースライン、ならびに投与後3、7、10、17、24、および39日目のレベルを決定した。実施例86に記載されるように、血漿TTRタンパク質レベルを測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに規準化された各処理群の血漿TTRレベルの平均パーセントとして提示される。
Figure 0006995478000321
処理
ヒトTTRを発現する雌トランスジェニックマウスの各々に、100mg/kgのISIS番号420915、10.0mg/kgのISIS番号682883、または10.0mg/kgの682885を1回皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。投薬前に尾出血を実行して、ベースライン、ならびに投与後3、7、10、17、24、および39日目のレベルを決定した。実施例86に記載されるように、血漿TTRタンパク質レベルを測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに規準化された各処理群の血漿TTRレベルの平均パーセントとして提示される。
Figure 0006995478000322
表75および76における結果は、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠く親オリゴヌクレオチド(ISIS 420915)よりも強力であり、より長い作用持続時間を有することを示す。
実施例88:GalNAc共役体を含むSMNを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるスプライシング調節
表77に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおけるヒト運動ニューロン生存(SMN)のスプライシング調節について試験した。
Figure 0006995478000323
GalNAc-7の構造は、先の実施例48に示した。「X」は、Gene Tools(Philomath,OR)によって生成された5’一次アミンを示し、GalNAc-7は、以下に示されるリンカーの-NH-C-O部分を欠くGalNAc-7の構造を示す。
Figure 0006995478000324
ISIS番号703421および703422は、モルフォリノオリゴヌクレオチドであり、これら2個のオリゴヌクレオチドの各ヌクレオチドは、モルフォリノヌクレオチドである。
処理
ヒトSMNを発現する6週齢のトランスジェニックマウスに、表78に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を1回皮下注入した。各処理群は、2匹の雄および2匹の雌から成った。投与の3日後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRを用いて、エキソン7を有する場合とエキソン7を有しない場合の肝臓におけるヒトSMN mRNAレベルを決定した。Ribogreen試薬を用いて総RNAを測定した。SMN mRNAレベルを総mRNAに規準化し、生理食塩水処理群の平均にさらに規準化した。結果として生じたエキソン7を含むSMN mRNAとエキソン7を欠くSMN mRNAとの平均比が、表78に示される。結果は、スプライシングを調節し、かつGalNAc共役体を含む完全修飾オリゴヌクレオチドが、GlaNAc共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも肝臓におけるスプライシングの変化に著しく強力であることを示す。さらに、この傾向は、2’-MOEおよびモルフォリノ修飾オリゴヌクレオチドを含む複数の化学修飾において維持される。
Figure 0006995478000325
実施例89:GalNAc共役体を含むアポリポタンパク質A(Apo(a))を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表79に列記されるオリゴヌクレオチドを、トランスジェニックマウスにおけるApo(a)の用量依存的阻害試験について試験した。
Figure 0006995478000326
GalNAc-7の構造は、実施例48に示した。
処理
8週齢の雌C57BL/6マウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)の各々に、表79に列記されるオリゴヌクレオチドまたはPBSを、以下に示される投与量で週1回、合計6回の投与で、皮下注入した。各処理群は、3~4匹の動物から成った。第1の投与の前日に、かつ各投与後週1回、尾出血を実行して、血漿Apo(a)タンパク質レベルを決定した。最終投与の2日後にマウスを屠殺した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるApo(a)mRNAレベルを決定した。ELISAを用いてApo(a)血漿タンパク質レベルを決定し、肝臓トランスアミナーゼレベルを決定した。表80におけるmRNAおよび血漿タンパク質の結果は、PBS処理群と比較した処理群の平均パーセントとして提示される。血漿タンパク質レベルをPBS群のベースライン(BL)値にさらに規準化した。平均絶対トランスアミナーゼレベルおよび体重(ベースライン平均と比較した%)が表81に報告される。
表80に例証されるように、オリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるApo(a)mRNAおよび血漿タンパク質レベルを低下させた。さらに、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドは、GalNAc共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であり、より長い作用持続時間を有した。表81に例証されるように、トランスアミナーゼレベルおよび体重はオリゴヌクレオチドの影響を受けず、オリゴヌクレオチドが良好な耐容性を示したことを示す。
Figure 0006995478000327
Figure 0006995478000328
実施例90:GalNAcクラスターを含むTTRを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表82に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてヒトTTR遺伝子を発現するトランスジェニックマウスにおけるヒトトランスサイレチン(TTR)のアンチセンス阻害について試験した。
処理
TTRトランスジェニックマウスの各々に、表83に列記されるオリゴヌクレオチドおよび投与量またはPBSを、週1回3週間、合計3回の投与で、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。第1の投与の前に、尾出血を実行して、ベースライン(BL)での血漿TTRタンパク質レベルを決定した。最終投与の72時間後にマウスを屠殺した。臨床分析器(AU480、Beckman Coulter,CA)を用いて、TTRタンパク質レベルを測定した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.Eugene,OR)を用いて、肝臓におけるヒトTTR mRNAレベルを決定した。表83に提示される結果は、各処理群の平均値である。mRNAレベルは、PBS群の平均と比較した平均値である。血漿タンパク質レベルは、ベースラインでのPBS群の平均値と比較した平均値である。「BL」は、第1の投与の直前に測定したベースラインを示す。表83に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でTTR発現レベルを低下させた。GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドは、GalNAc共役体を欠く親(ISIS 420915)よりも強力であり、ホスホジエステルまたはデオキシアデノシンの切断可能な部分を含むオリゴヌクレオチドは、共役体を欠く親と比較して、強度の著しい改善を示した(ISIS番号682883および666943対420915、ならびに実施例86および87を参照のこと)。
Figure 0006995478000329
表82の説明文を実施例74で見つけることができる。GalNAc-3の構造は、実施例39に示した。GalNAc-7の構造は、実施例48に示した。GalNAc-10の構造は、実施例46に示した。GalNAc-13の構造は、実施例62に示した。
Figure 0006995478000330
実施例91:非ヒト霊長類におけるGalNAc共役体を含む第VII因子を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表84に列記されるオリゴヌクレオチドを、無限用量増加試験(non-terminal,dose escalation study)においてサルにおける第VII因子のアンチセンス阻害について試験した。
処理
処置した(non-naive)サルの各々に、増加用量の表84に列記されるオリゴヌクレオチドまたはPBSを、0、15、および29日目に皮下注入した。各処理群は、4匹の雄および1匹の雌から成った。第1の投与の前とその後の様々な時点で、血液採取を実行して、血漿第VII因子タンパク質レベルを決定した。ELISAによって第VII因子タンパク質レベルを測定した。表85に提示される結果は、第1の投与の直前に測定したベースライン(BL)でのPBS群の平均値と比較した各処理群の平均値である。表85に例証されるように表85、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で第VII因子の発現レベルを低下させ、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドは、サルにおいてGalNAc共役体を欠くオリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
Figure 0006995478000331
表84の説明文を実施例74で見つけることができる。GalNAc-10の構造は、実施例46に示した。
Figure 0006995478000332
実施例92:GalNAc共役体を含むApo-CIIIを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる初代肝細胞におけるアンチセンス阻害
初代マウス肝細胞を15,000細胞/ウェルで96ウェルプレートに播種し、マウスApoC-IIIを標的とする表86に列記されるオリゴヌクレオチドを、0.46、1.37、4.12、または12.35、37.04、111.11、もしくは333.33nMまたは1.00μmで添加した。オリゴヌクレオチドとともに24時間インキュベートした後、細胞を溶解し、RNeasy(Qiagen)を用いて総RNAを精製した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムPCRおよびRIBOGREEN(登録商標)RNA定量化試薬(Molecular Probes,Inc.)を用いて、ApoC-III mRNAレベルを決定した。Prism 4ソフトウェア(GraphPad)を用いて、IC50値を決定した。結果は、切断可能な部分がホスホジエステル結合デオキシアデノシンかホスホジエステル結合デオキシアデノシンかにかかわらず、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。
Figure 0006995478000333
GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示し、GalNAc-3は、実施例39に示し、GalNAc-7は、実施例48に示し、GalNAc-10は、実施例46に示し、GalNAc-13は、実施例62に示し、GalNAc-19は、実施例70に示した。
実施例93:混合ウィングおよび5’-GalNAc共役体を含むSRB-1を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表87に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。
Figure 0006995478000334
GalNAc-3の構造は、先の実施例39に示し、GalNAc-7aの構造は、先の実施例48に示した。下付き文字「e」は、2’-MOE修飾ヌクレオシドを示し、「d」は、β-D-2’-デオキシリボヌクレオシドを示し、「k」は、6’-(S)-CH二環式ヌクレオシド(cEt)を示し、「s」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合(PS)を示し、「o」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合(PO)を示す。上付き文字「m」は、5-メチルシトシンを示す。
処理
6~8週齢のC57BL/6マウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、表87に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で1回、皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムPCRを用いて、肝臓におけるSRB-1 mRNAレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、SRB-1 mRNAレベルをシクロフィリンmRNAレベルに規準化した。結果は、生理食塩水対照群と比較した各処理群のSRB-1 mRNAレベルの平均パーセントとして提示される。表88に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させ、GalNAc共役体を含み、かつ完全cEtまたは混合糖修飾のいずれかのウィングを有するギャップマーオリゴヌクレオチドは、共役体を欠き、かつ完全cEt修飾ウィングを含む親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、およびBUNも測定し、各処理群の平均値が表88に示される。体重は、オリゴヌクレオチド投与の直前に測定したベースライン体重(%BL)と比較した平均体重率として示される。
Figure 0006995478000335
実施例94:2’-糖修飾および5’-GalNAc共役体を含むSRB-1を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表89に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。
Figure 0006995478000336
下付き文字「m」は、2’-O-メチル修飾ヌクレオシドを示す。完全な表の説明文については、実施例74を参照されたい。GalNAc-3の構造は、先の実施例39に示し、GalNAc-7aの構造は、先の実施例48に示した。
処理
実施例93に記載されるプロトコルを用いて試験を完了した。結果が以下の表90に示され、GalNAc共役体を含む2’-MOE修飾オリゴヌクレオチドと2’-OMe修飾オリゴヌクレオチドとが両方ともに、共役体を欠くそれぞれの親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、およびBUNの測定結果は、これらの化合物がすべて良好な耐容性であったことを示した。
Figure 0006995478000337
実施例95:二環式ヌクレオシドおよび5’-GalNAc共役体を含むSRB-1を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表91に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。
Figure 0006995478000338
下付き文字「g」は、フルオロ-HNAヌクレオシドを示し、下付き文字「l」は、2’-O-CH-4’橋を含むロックドヌクレオシドを示す。他の省略形については、実施例74の表の説明文を参照されたい。GalNAc-1の構造は、先の実施例9に示し、GalNAc-3の構造は、先の実施例39に示し、GalNAc-7aの構造は、先の実施例48に示した。
処理
実施例93に記載されるプロトコルを用いて試験を完了した。結果が以下の表92に示され、GalNAc共役体および様々な二環式ヌクレオシド修飾を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠くが二環式ヌクレオシド修飾を含む親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。さらに、GalNAc共役体およびフルオロ-HNA修飾を含むオリゴヌクレオチドは、共役体を欠くがフルオロ-HNA修飾を含む親よりも著しく強力であった。体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、およびBUNの測定結果は、これらの化合物がすべて良好な耐容性であったことを示した。
Figure 0006995478000339
実施例96:GalNAc共役基を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの血漿タンパク質結合
ApoC-IIIを標的とする表57に列記されるオリゴヌクレオチドおよびApo(a)を標的とする表93におけるオリゴヌクレオチドを限外濾過アッセイにおいて試験して、血漿タンパク質結合を評価した。
Figure 0006995478000340
表の説明文については、実施例74を参照されたい。GalNAc-7aの構造は、先の実施例48に示した。
Ultrafree-MC限外濾過ユニット(30,000NMWL、低結合再生セルロース膜、Millipore,Bedford,MA)を300μLの0.5%Tween 80で事前に条件付け、2000gで10分間遠心分離し、その後、HO中300μLの300μg/mL対照オリゴヌクレオチド溶液で事前に条件付け、2000gで16分間遠心分離した。これらの試験で用いる表57および93の各試験オリゴヌクレオチドのフィルターへの非特異的結合を評価するために、HO中300μLの250ng/mLオリゴヌクレオチド溶液(pH7.4)を事前に条件付けたフィルターに設置し、2000gで16分間遠心分離した。ELISAアッセイによって濾過していない試料および濾過した試料を分析して、オリゴヌクレオチド濃度を決定した。3つの複製物を用いて各試料の平均濃度を得た。濾過していない試料と比較した濾過した試料の平均濃度を用いて、血漿の不在下でフィルターによって回収されたオリゴヌクレオチドの割合(%回収)を決定する。
薬物を使用していない健常なヒト志願者、カニクイザル、およびCD-1マウス由来のK3-EDTA中に収集された凍結全血漿試料をBioreclamation LLC(Westbury,NY)から購入した。試験オリゴヌクレオチドを、2つの濃度(5μg/mLおよび150μg/mL)で血漿の1.2mLの一定分量に添加した。各スパイクした血漿試料の一定分量(300μL)を事前に条件付けられたフィルターユニット内に設置し、37℃で30分間インキュベートした直後に2000gで16分間遠心分離した。ELISAによって、濾過してスパイクした血漿試料および濾過していないスパイクした血漿試料の一定分量を分析して、各試料中のオリゴヌクレオチドの濃度を決定した。1つの濃度毎に3つの複製物を用いて、各試料中の結合オリゴヌクレオチドおよび非結合オリゴヌクレオチドの平均割合を決定した。濾過していない試料の濃度と比較した濾過した試料の平均濃度を用いて、血漿タンパク質に結合されていない血漿中のオリゴヌクレオチドの割合(%非結合)を決定する。各オリゴヌクレオチドの%非結合を%回収で割ることによって、最終非結合オリゴヌクレオチド値を非特異的結合に対して補正する。最終%非結合値を100から差し引くことによって、最終%結合オリゴヌクレオチド値を決定する。各種の血漿において試験した2つの濃度のオリゴヌクレオチド(5μg/mLおよび150μg/mL)の結果が表94に示される。結果は、GalNAc共役基が血漿タンパク質結合に大きな影響を与えないことを示す。さらに、完全PSヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドも混合PO/PS結合を有するオリゴヌクレオチドも血漿タンパク質に結合し、完全PS結合を有するオリゴヌクレオチドは、混合PO/PS結合を有するオリゴヌクレオチドよりも若干高い程度に血漿タンパク質に結合する。
Figure 0006995478000341
実施例97:GalNAc共役基を含むTTRを標的とする修飾オリゴヌクレオチド
GalNAc共役体を含む表95に示されるオリゴヌクレオチドを、TTRを標的とするように設計した。
Figure 0006995478000342
表95の説明文を実施例74で見つけることができる。GalNAc-1の構造は、実施例9に示した。GalNAc-3の構造は、実施例39に示した。GalNAc-7の構造は、実施例48に示した。GalNAc-10の構造は、実施例46に示した。GalNAc-13の構造は、実施例62に示した。GalNAc-19の構造は、実施例70に示した。
実施例98:hPMBCアッセイにおけるGalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドの炎症誘発作用の評価
表96に列記されるオリゴヌクレオチドを、実施例23および24に記載されるようにhPMBCアッセイにおいて炎症誘発作用について試験した(オリゴヌクレオチドの説明については、表17、70、82、および95を参照のこと)。ISIS 353512は、正の対照として用いられる高応答物であり、他のオリゴヌクレオチドは、表70、82、および95に記載されるものである。1人の志願ドナー由来の血液を用いて表96に示される結果を得た。結果は、混合PO/PSヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドが、完全PS結合を有する同一のオリゴヌクレオチドと比較して、著しく低い炎症誘発応答をもたらしたことを示す。さらに、GalNAc共役基は、このアッセイにおいて大きく影響しなかった。
Figure 0006995478000343
実施例99:アシアロ糖タンパク質受容体に対するGalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドの結合親和性
アシアロ糖タンパク質受容体に対する表97に列記されるオリゴヌクレオチド(オリゴヌクレオチドの説明については、表63を参照のこと)の結合親和性を、競合的受容体結合アッセイにおいて試験した。競合相手のリガンドであるα1-酸糖タンパク質(AGP)を、50mM酢酸ナトリウム緩衝液(pH5)中で1Uノイラミニダーゼ-アガロースとともに37℃で16時間インキュベートし、シアル酸アッセイまたはサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)のいずれかで90%を超える脱シアル化を確認した。Atsma et al.(J Lipid Res.1991 Jan;32(1):173-81を参照のこと)の手順に従って、一塩化ヨウ素を用いてAGPをヨウ素化した。この方法において、脱シアル化α1-酸糖タンパク質(de-AGP)を、10mM塩化ヨウ素、Na125I、および0.25M NaOH中の1Mグリシンに添加した。室温で10分間インキュベートした後、3 KDMWCOスピンカラムを利用してこの混合物を2回濃縮することによって、125I標識de-AGPを遊離125Iから分離した。このタンパク質を、Agilent SEC-3カラム(7.8×300mm)およびβ-RAMカウンタを装備したHPLCシステムにおいて標識効率および純度について試験した。125I標識de-AGPおよびASOを含有する様々なGalNAcクラスターを利用した競合実験を以下の通りに実行した。ヒトHepG2細胞(10細胞/mL)を、2mLの適切な成長培地中の6ウェルプレートにプレーティングした。10%ウシ胎児血清(FBS)、2mM L-グルタミン、および10mM HEPESを補充したMEM培地を用いた。細胞を、それぞれ、5%および10%COで、37℃で16~20時間インキュベートした。実験前に細胞をFBSを有しない培地で洗浄した。細胞を、2%FBSを有する適切な成長培地を含有する1mLの競合混合物、10-8125I標識de-AGP、および10-11~10-5Mの範囲の濃度のASOを含有するGalNAcクラスターとともに、37℃で30分間インキュベートした。10-2M GalNAc糖の存在下で非特異的結合を決定した。細胞をFBSを有しない培地で2回洗浄して、非結合125I標識de-AGPおよび競合相手であるGalNAc ASOを除去した。1%β-メルカプトエタノールを含有するQiagenのRLT緩衝液を用いて、細胞を溶解した。10分間の短時間凍結/解凍サイクル後に溶解物を丸底アッセイチューブに移し、γ-カウンタでアッセイした。非特異的結合を差し引いた後に、125Iタンパク質カウントを最も低いGalNAc-ASO濃度カウントの値で割った。非線形回帰アルゴリズムを用いた単一部位競合結合等式に従って阻害曲線を当てはめて、結合親和性(K)を計算した。
表97における結果を5つの異なる日に実行した実験から得た。上付き文字「a」の付いたオリゴヌクレオチドの結果は、2つの異なる日に実行した実験の平均である。結果は、5’末端にGalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチドがヒトHepG2細胞上のアシアロ糖タンパク質受容体に結合し、3’末端にGalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチドよりも1.5~16倍高い親和性を有することを示す。
Figure 0006995478000344
実施例100:生体内におけるApo(a)を標的とするGalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表98aに列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
Figure 0006995478000345
GalNAc-7の構造は、実施例48に示した。
処理
ヒトApo(a)を発現する雌トランスジェニックマウスの各々に、表98bに列記されるオリゴヌクレオチドおよび投与量またはPBSを、週1回、合計6回の投与で、皮下注入した。各処理群は、3匹の動物から成った。投薬の前日に血液を採取して、血漿中のApo(a)タンパク質のベースラインレベル、ならびに第1の投与後72時間、1週間、および2週間時点のレベルを決定した。第1の投与後3週間、4週間、5週間、および6週間時点でさらに血液を採取する。ELISAを用いて血漿Apo(a)タンパク質レベルを測定した。表98bにおける結果は、ベースラインレベル(%BL)に規準化された各処理群の血漿Apo(a)タンパク質レベルの平均パーセントとして提示され、結果は、GalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチドがApo(a)発現の強力な減少を示したことを示す。この強力な影響は、完全PSヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドおよび混合POおよびPS結合を含むオリゴヌクレオチドにおいて観察された。
Figure 0006995478000346
実施例101:安定した部分を介して連結されたGalNAcクラスターを含むオリゴヌクレオチドによるアンチセンス阻害
表99に列記されるオリゴヌクレオチドを生体内におけるマウスAPOC-III発現の阻害について試験した。C57Bl/6マウスの各々に、表99に列記されるオリゴヌクレオチドまたはPBSを1回皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。ISIS 440670で処理した各マウスは、2、6、20、または60mg/kgの投与を受けた。ISIS 680772または696847で処理した各マウスは、0.6、2、6、または20mg/kgを受けた。ISIS 696847のGalNAc共役基は、安定した部分(容易に切断可能なホスホジエステル含有結合の代わりにホスホロチオエート結合)を介して連結されている。投与の72時間後に動物を屠殺した。リアルタイムPCRを用いて、肝臓におけるAPOC-III mRNAレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、APOC-III mRNAレベルをシクロフィリンmRNAレベルに規準化した。結果は、生理食塩水対照群と比較した各処理群のAPOC-III mRNAレベルの平均パーセントとして表99に提示される。結果は、GalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチドが、共役基を欠くオリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。さらに、切断可能な部分を介してオリゴヌクレオチドに連結されたGalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチド(ISIS 680772)は、安定した部分を介してオリゴヌクレオチドに連結されたGalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチド(ISIS 696847)よりもさらに強力であった。
Figure 0006995478000347
GalNAc-7の構造は、実施例48に示した。
実施例102:GalNAc共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの肝臓における分布
GalNAc共役体を含まないISIS 353382(表23を参照のこと)およびGalNAc共役体を含むISIS 655861(表23を参照のこと)の肝臓における分布を評価した。雄balb/cマウスに、ISIS 353382または655861を、表100に列記される投与量で1回、皮下注入した。2匹の動物から成った18mg/kgのISIS 655861群を除いて、各処理群は、3匹の動物から成った。投与の48時間後に動物を屠殺して、オリゴヌクレオチドの肝臓における分布を決定した。1細胞当たりのアンチセンスオリゴヌクレオチド分子の数を測定するために、ルテニウム(II)トリス-ビピリジン標識(MSD TAG、Meso Scale Discovery)を、アンチセンスオリゴヌクレオチドを検出するために用いるオリゴヌクレオチドプローブに共役させた。表100に提示される結果は、1細胞当たり何百万ものオリゴヌクレオチド分子単位の各処理群のオリゴヌクレオチドの平均濃度である。結果は、等価用量で、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドが、全肝臓および肝細胞において、GalNAc共役体を含まないオリゴヌクレオチドよりも高い濃度で存在したことを示す。さらに、GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドは、非実質肝臓細胞において、GalNAc共役体を含まないオリゴヌクレオチドよりも低い濃度で存在した。1細胞当たりの肝細胞および非実質肝臓細胞におけるISIS 655861の濃度が同様であった一方で、肝臓は、約80体積%肝細胞であった。したがって、肝臓内に存在するISIS 655861オリゴヌクレオチドの大部分が肝細胞内に見られる一方で、肝臓内に存在するISIS 353382オリゴヌクレオチドの大部分は、非実質肝臓細胞内に見られた。
Figure 0006995478000348
実施例103:GalNAc共役体を含むAPOC-IIIを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
以下の表101に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
Figure 0006995478000349
GalNAc-3の構造は、実施例39に示し、GalNAc-19は、実施例70に示した。
処理
ヒトAPOC-IIIを発現する雌トランスジェニックマウスの各々に、表101に列記されるオリゴヌクレオチドまたはPBSを1回皮下注入した。各処理群は、3匹の動物から成った。投薬前に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後3、7、14、21、28、35、および42日間のレベルを決定した。実施例20に記載されるように、血漿トリグリセリドおよびAPOC-IIIタンパク質レベルを測定した。表102における結果は、ベースラインレベルに規準化された各処理群の血漿トリグリセリドおよびAPOC-IIIレベルの平均パーセントとして提示される。実施例79の表58における結果と以下の表102における結果の比較は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合およびホスホロチオエートヌクレオシド間結合の両方を含むオリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合のみを含む等価オリゴヌクレオチドよりも増加した作用持続時間を示したことを示す。
Figure 0006995478000350
実施例104:5’-GalNAc共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0006995478000351
化合物120は市販されており、化合物126の合成は実施例49に記載されている。化合物120(1g、2.89mmol)、HBTU(0.39g、2.89mmol)、およびHOBt(1.64g、4.33mmol)を、DMF(10mL)中に溶解し、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(1.75mL、10.1mmol)を添加した。約5分後、アミノヘキサン酸ベンジルエステル(1.36g、3.46mmol)をこの反応物に添加した。3時間後、反応混合物を100mLの1M NaHSO4に注ぎ、2×50mL酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、3×40mL飽和NaHCOおよび2倍ブラインで洗浄し、NaSOで乾燥させ、濾過し、濃縮した。この生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(DCM:EA:Hex=1:1:1)によって精製して、化合物231を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。化合物231(1.34g、2.438mmol)をジクロロメタン(10mL)中に溶解し、トリフルオロ酢酸(10mL)を添加した。室温で2時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮し、トルエン(3×10mL)と共蒸発させた。残渣を減圧下で乾燥させて、トリフルオロ酢酸塩として化合物232を得た。化合物166の合成は、実施例54に記載される。化合物166(3.39g、5.40mmol)をDMF(3mL)中に溶解した。化合物232(1.3g、2.25mmol)の溶液をDMF(3mL)中に溶解し、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(1.55mL)を添加した。反応物を室温で30分間撹拌し、その後、水(80mL)に注ぎ、水層をEtOAc(2×100mL)で抽出した。有機相を分離し、飽和NaHCO水溶液(3×80mL)、1M NaHSO(3×80mL)、およびブライン(2×80mL)で洗浄し、その後、乾燥させ(NaSO)、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物233を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。化合物233(0.59g、0.48mmol)をメタノール(2.2mL)および酢酸エチル(2.2mL)中に溶解した。炭素上パラジウム(10重量%Pd/C、湿性、0.07g)を添加し、反応混合物を水素雰囲気下で3時間撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、濃縮して、カルボン酸を得た。カルボン酸(1.32g、1.15mmol、クラスター遊離酸)をDMF(3.2mL)中に溶解した。これに、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.3mL、1.73mmol)およびPFPTFA(0.30mL、1.73mmol)を添加した。室温で30分間撹拌した後、反応混合物を水(40mL)に注ぎ、EtOAc(2×50mL)で抽出した。上述のように標準の後処理を完了して、化合物234を得た。LCMSおよびNMRは、その構造と一致した。実施例46に記載される一般的手順を用いて、オリゴヌクレオチド235を調製した。共役基GalNAc-24のGalNAcクラスター部分(GalNAc-24)をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。GalNAc-24(GalNAc-24-CM)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000352
実施例105:GalNAc-25共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0006995478000353
化合物166の合成は、実施例54に記載される。実施例46に記載される一般的手順を用いて、オリゴヌクレオチド236を調製した。
あるいは、以下に示されるスキームを用いてオリゴヌクレオチド236を合成し、実施例10に記載される手順を用いて、化合物238を用いてオリゴヌクレオチド236を形成した。
Figure 0006995478000354
共役基GalNAc-25のGalNAcクラスター部分(GalNAc-25)をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。GalNAc-25(GalNAc-25-CM)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000355
実施例106:5’-GalNAcまたは5’-GalNAc共役体を含むSRB-1を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表103および104に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるSRB-1のアンチセンス阻害について試験した。
処理
6週齢の雄C57BL/6マウス(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)に、2、7、もしくは20mg/kgのISIS番号440762;または0.2、0.6、2、6、もしくは20mg/kgのISIS番号686221、686222、もしくは708561;または生理食塩水を1回皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。最終投与の72時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムPCRを用いて、肝臓におけるSRB-1 mRNAレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、SRB-1 mRNAレベルをシクロフィリンmRNAレベルに規準化した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、用量依存的様式でSRB-1 mRNAレベルを低下させ、ED50結果が、表103および104に提示される。以前の研究において、三価GalNAc共役オリゴヌクレオチドが二価GalNAc共役オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であり、これは、次いで、一価GalNAc共役オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことが示されたが(例えば、Khorev et al.,Bioorg.& Med.Chem.,Vol.16,5216-5231(2008)を参照のこと)、表103および104に示されるように、一価、二価、および三価GalNAcクラスターを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、同様の強度でSRB-1 mRNAレベルを低下させた。
Figure 0006995478000356
表の説明文については、実施例93を参照されたい。GalNAc-13aの構造は、実施例62に示し、GalNAc-24aの構造は、実施例104に示した。
Figure 0006995478000357
表の説明文については、実施例93を参照されたい。GalNAc-25aの構造は、実施例105に示した。
実施例75に記載される手順を用いて、表103および104における肝臓中のオリゴヌクレオチドの濃度も評価した。以下の表104aおよび104bに示される結果は、肝臓組織のオリゴヌクレオチド(μg)/g単位のUVによって測定された各処理群の平均総アンチセンスオリゴヌクレオチド組織レベルである。結果は、GalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチドがGalNAc共役基を欠く同一の用量のオリゴヌクレオチドよりも著しく高いレベルで肝臓に蓄積したことを示す。さらに、それらのそれぞれの共役基に1、2、または3個のGalNAcリガンドを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドはすべて同様のレベルで肝臓に蓄積した。上記のKhorev et al.の文献参照を考慮すると、これは意外な結果であり、上の表103および104に示される活性データと一致する。
Figure 0006995478000358
Figure 0006995478000359
実施例107:GalNAc-26またはGalNAc-27共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0006995478000360
DMF中HBTUおよびDIEAを用いて、オリゴヌクレオチド239を化合物47(実施例15を参照のこと)と酸64(実施例32を参照のこと)とのカップリングによって合成する。結果として生じたアミド含有化合物をホスフィチル化し、その後、実施例10に記載される手順を用いて、オリゴヌクレオチドの5’末端に付加する。共役基GalNAc-26のGalNAcクラスター部分(GalNAc-26)をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。GalNAc-26(GalNAc-26-CM)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000361
GalNAc共役基をオリゴヌクレオチドの3’末端に付加するために、実施例7に記載される手順を用いて、化合物47と64の反応から形成されたアミドを固体支持体に付加する。その後、実施例9に記載される手順を用いて、オリゴヌクレオチド合成を完了して、オリゴヌクレオチド240を形成する。
Figure 0006995478000362
共役基GalNAc-27のGalNAcクラスター部分(GalNAc-27)をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。GalNAc-27(GalNAc-27-CM)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000363
実施例108:生体内におけるApo(a)を標的とするGalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表105に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおける単回投与試験において試験した。
Figure 0006995478000364
GalNAc-7の構造は、実施例48に示した。
処理
ヒトApo(a)を発現する雄トランスジェニックマウスの各々に、表106に列記されるオリゴヌクレオチドおよび投与量またはPBSを1回皮下注入した。各処理群は、4匹の動物から成った。投薬の前日に血液を採取して、血漿中のApo(a)タンパク質のベースラインレベルおよび第1の投与後の1週間時点のレベルを決定した。週1回約8週間、さらに血液を採取する。ELISAを用いて血漿Apo(a)タンパク質レベルを測定した。表106における結果は、ベースラインレベル(%BL)に規準化された各処理群の血漿Apo(a)タンパク質レベルの平均パーセントとして提示され、結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドがApo(a)タンパク質の発現を低下させたことを示す。さらに、GalNAc共役基を含むオリゴヌクレオチドは、共役基を含まないオリゴヌクレオチドよりもさらに強力なApo(a)発現の減少を示した。
Figure 0006995478000365
実施例109:GalNAc-28またはGalNAc-29共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0006995478000366
オリゴヌクレオチド241を実施例71に記載される手順と同様の手順を用いて合成して、ホスホラミダイト中間体を形成し、続いて、実施例10に記載される手順を用いてオリゴヌクレオチドを合成する。共役基GalNAc-28のGalNAcクラスター部分(GalNAc-28)をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。GalNAc-28(GalNAc-28-CM)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000367
GalNAc共役基をオリゴヌクレオチドの3’末端に付加するために、実施例71に記載される手順と同様の手順を用いてヒドロキシル中間体を形成し、その後、実施例7に記載される手順を用いてこれを固体支持体に付加する。その後、実施例9に記載される手順を用いてオリゴヌクレオチド合成を完了させて、オリゴヌクレオチド242を形成する。
Figure 0006995478000368
共役基GalNAc-29のGalNAcクラスター部分(GalNAc-29)をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。GalNAc-29(GalNAc-29-CM)の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000369
実施例110:GalNAc-30共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0006995478000370
Figure 0006995478000371
GalNAc-30共役基を含むオリゴヌクレオチド246(式中、Yが、O、S、置換もしくは非置換C~C10アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される)を上に示されるように合成する。共役基GalNAc-30のGalNAcクラスター部分(GalNAc-30)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、Yは、切断可能な部分の一部である。ある特定の実施形態において、Yは、安定した部分の一部であり、切断可能な部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。GalNAc-30の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000372
実施例111:GalNAc-31またはGalNAc-32共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
Figure 0006995478000373
Figure 0006995478000374
GalNAc-31共役基を含むオリゴヌクレオチド250(式中、Yが、O、S、置換もしくは非置換C~C10アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される)を上に示されるように合成する。共役基GalNAc-31のGalNAcクラスター部分(GalNAc-31)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの5’末端に直接隣接したY含有基は、切断可能な部分の一部である。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの5’末端に直接隣接したY含有基は、安定した部分の一部であり、切断可能な部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。GalNAc-31の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000375
GalNAc-32共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成は、以下に示される。
Figure 0006995478000376
Figure 0006995478000377
GalNAc-32共役基を含むオリゴヌクレオチド252(式中、Yが、O、S、置換もしくは非置換C~C10アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される)を上に示されるように合成する。共役基GalNAc-32のGalNAcクラスター部分(GalNAc-32)を任意の切断可能な部分と組み合わせて、様々な共役基を得ることができる。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの5’末端に直接隣接したY含有基は、切断可能な部分の一部である。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの5’末端に直接隣接したY含有基は、安定した部分の一部であり、切断可能な部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。GalNAc-32の構造を以下に示す。
Figure 0006995478000378
実施例112:GalNAc共役体を含む修飾オリゴヌクレオチド
SRB-1を標的とする表107のオリゴヌクレオチドをGalNAc共役基で合成して、GalNAcリガンドを含有する共役基を含むオリゴヌクレオチドの強度をさらに試験した。
Figure 0006995478000379
実施例113:B型肝炎ウイルス(HBV)を標的とするGalNAc共役基を含む修飾オリゴヌクレオチド
以下の表108に列記されるオリゴヌクレオチドを、HBVを標的とするように設計した。ある特定の実施形態において、切断可能な部分は、ホスホジエステル結合である。
Figure 0006995478000380
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
[態様1] 修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、8~80個の連結したヌクレオシドからなり、かつトランスサイレチン(TTR)をコードする配列番号2に少なくとも85%、90%、95%、または100%相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
[態様2] 前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号2の核酸塩基507~608内で相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号2に少なくとも85%、90%、95%、または100%相補的である、態様1に記載の化合物。
[態様3] 前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号2の核酸塩基507~526、508~527、515~534、516~535、580~599、585~604、587~606、または589~608内で相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号2に少なくとも85%、90%、95%、または100%相補的である、態様1に記載の化合物。
[態様4] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、10~30個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号12、13、14、15、16、17、18、または19の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも8個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、態様1に記載の化合物。
[態様5] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号12、13、14、15、16、17、18、または19に列挙される配列を含む核酸塩基配列を有する、態様4に記載の化合物。
[態様6] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号12、13、14、15、16、17、18、または19に列挙される配列からなる核酸塩基配列を有する、態様4に記載の化合物。
[態様7] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、20個の連結したヌクレオシドからなる、態様1~6のいずれかに記載の化合物。
[態様8] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも1個の修飾糖を含む、態様1~7のいずれかに記載の化合物。
[態様9] 前記修飾糖が二環糖である、態様8に記載の化合物。
[態様10] 前記二環糖が、4’-(CH)-O-2’(LNA)、4’-(CH-O-2’(ENA)、および4’-CH(CH)-O-2’(cEt)からなる群から選択される、態様9に記載の化合物。
[態様11] 前記修飾糖が2’-O-メトキシエチルである、態様8に記載の化合物。
[態様12] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも1個の修飾核酸塩基を含む、態様1~11のいずれかに記載の化合物。
[態様13] 前記修飾核酸塩基が5-メチルシトシンである、態様12に記載の化合物。
[態様14] 配列番号12、13、14、15、16、17、18、または19に列挙される配列からなる核酸塩基配列を有する20個の連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドが、
10個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
5個の連結したヌクレオシドからなる5’ウィングセグメントと、
5個の連結したヌクレオシドからなる3’ウィングセグメントと、を含み、
前記ギャップセグメントが、前記5’ウィングセグメントと前記3’ウィングセグメントとの間に位置付けられ、前記5’ウィングセグメントの各ヌクレオシドが、2’-O-メトキシエチル糖を含み、前記3’ウィングセグメントの各ヌクレオシドが、2’-O-メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンが、5-メチルシトシンである、態様1~13のいずれかに記載の化合物。
[態様15] 前記化合物が一本鎖である、態様1~14のいずれかに記載の化合物。
[態様16] 前記化合物が二本鎖である、態様1~14のいずれかに記載の化合物。
[態様17] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも1個の修飾ヌクレオシド間結合を含む、態様1~16のいずれかに記載の化合物。
[態様18] 前記修飾ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様17に記載の化合物。
[態様19] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも1個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様18に記載の化合物。
[態様20] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも2個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様18に記載の化合物。
[態様21] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも3個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様18に記載の化合物。
[態様22] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも4個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様18に記載の化合物。
[態様23] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも5個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様18に記載の化合物。
[態様24] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも6個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様18に記載の化合物。
[態様25] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも7個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様18に記載の化合物。
[態様26] 前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、ホスホジエステルヌクレオシド間結合およびホスホロチオエートヌクレオシド間結合から選択される、態様19~25のいずれかに記載の化合物。
[態様27] 前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含み、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様18に記載の化合物。
[態様28] ISIS 304299および共役基からなる化合物。
[態様29] ISIS 420915および共役基からなる化合物。
[態様30] ISIS 420921および共役基からなる化合物。
[態様31] ISIS 420922および共役基からなる化合物。
[態様32] ISIS 420950および共役基からなる化合物。
[態様33] ISIS 420955および共役基からなる化合物。
[態様34] ISIS 420957および共役基からなる化合物。
[態様35] ISIS 420959および共役基からなる化合物。
[態様36] 前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドの5’末端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結される、態様1~35のいずれかに記載の化合物。
[態様37] 前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドの3’末端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結される、態様1~35のいずれかに記載の化合物。
[態様38] 前記共役基が、正確に1個のリガンドを含む、態様1~37のいずれかに記載の化合物。
[態様39] 前記共役基が、正確に2個のリガンドを含む、態様1~37のいずれかに記載の化合物。
[態様40] 前記共役基が、3個以上のリガンドを含む、態様1~37のいずれかに記載の化合物。
[態様41] 前記共役基が、正確に3個のリガンドを含む、態様1~37のいずれかに記載の化合物。
[態様42] 各リガンドが、多糖、修飾多糖、マンノース、ガラクトース、マンノース誘導体、ガラクトース誘導体、D-マンノピラノース、L-マンノピラノース、D-アラビノース、L-ガラクトース、D-キシロフラノース、L-キシロフラノース、D-グルコース、L-グルコース、D-ガラクトース、L-ガラクトース、α-D-マンノフラノース、β-D-マンノフラノース、α-D-マンノピラノース、β-D-マンノピラノース、α-D-グルコピラノース、β-D-グルコピラノース、α-D-グルコフラノース、β-D-グルコフラノース、α-D-フルクトフラノース、α-D-フルクトピラノース、α-D-ガラクトピラノース、β-D-ガラクトピラノース、α-D-ガラクトフラノース、β-D-ガラクトフラノース、グルコサミン、シアル酸、α-D-ガラクトサミン、N-アセチルガラクトサミン、2-アミノ-3-O-[(R)-1-カルボキシエチル]-2-デオキシ-β-D-グルコピラノース、2-デオキシ-2-メチルアミノ-L-グルコピラノース、4,6-ジデオキシ-4-ホルムアミド-2,3-ジ-O-メチル-D-マンノピラノース、2-デオキシ-2-スルホアミノ-D-グルコピラノース、N-グリコロイル-α-ノイラミン酸、5-チオ-β-D-グルコピラノース、メチル2,3,4-トリ-O-アセチル-1-チオ-6-O-トリチル-α-D-グルコピラノシド、4-チオ-β-D-ガラクトピラノース、エチル3,4,6,7-テトラ-O-アセチル-2-デオキシ-1,5-ジチオ-α-D-グルコ-ヘプトピラノシド、2,5-アンヒドロ-D-アロノニトリル、リボース、D-リボース、D-4-チオリボース、L-リボース、L-4-チオリボースの中から選択される、態様38~41のいずれかに記載の化合物。
[態様43] 各リガンドが、N-アセチルガラクトサミンである、態様42に記載の化合物。
[態様44] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000381

を含む、態様1~37のいずれかに記載の化合物。
[態様45] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000382

を含む、態様1~37のいずれかに記載の化合物。
[態様46] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000383

を含む、態様1~37のいずれかに記載の化合物。
[態様47] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000384

を含む、態様1~37のいずれかに記載の化合物。
[態様48] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000385

を含む、態様1~37のいずれかに記載の化合物。
[態様49] 前記共役基が、少なくとも1個のリン結合基または中性結合基を含む、態様1~48のいずれかに記載の化合物。
[態様50] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000386

Figure 0006995478000387

Figure 0006995478000388

の中から選択される構造を含み、
式中、nが、1~12であり、
mが、1~12である、態様1~49のいずれかに記載の化合物。
[態様51] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000389

の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、Lが、リン結合基または中性結合基のいずれかであり、
が、C(=O)O-Rであり、
が、H、C~Cアルキル、または置換C~Cアルキであり、
が、H、C~Cアルキル、または置換C~Cアルキであり、
各mが、独立して、0~20であり、少なくとも1つのmが、各テザーに対して0を超える、態様1~49のいずれかに記載の化合物。
[態様52] 共役基が、以下
Figure 0006995478000390

の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、Zが、HまたはCHであり、
各mが、独立して、0~20であり、少なくとも1つのmが、各テザーに対して0を超える、態様1~51のいずれかに記載の化合物。
[態様53] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000391

の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、nが、1~12であり、
mが、1~12である、態様1~51のいずれかに記載の化合物。
[態様54] 前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドに共有結合される、態様1~53のいずれかに記載の化合物。
[態様55] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000392

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bが、前記切断可能な部分であり、
Cが、前記共役リンカーであり、
Dが、前記分岐基であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様1~54のいずれかに記載の化合物。
[態様56] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000393

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bが、前記切断可能な部分であり、
Cが、前記共役リンカーであり、
Dが、前記分岐基であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
各nが、独立して、0または1であり、
qが、1~5の整数である、態様1~54のいずれかに記載の化合物。
[態様57] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000394

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bが、前記切断可能な部分であり、
Cが、前記共役リンカーであり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様1~54のいずれかに記載の化合物。
[態様58] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000395

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Cが、前記共役リンカーであり、
Dが、前記分岐基であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様1~54のいずれかに記載の化合物。
[態様59] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000396

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Cが、前記共役リンカーであり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様1~54のいずれかに記載の化合物。
[態様60] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000397

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bが、前記切断可能な部分であり、
Dが、前記分岐基であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様1~54のいずれかに記載の化合物。
[態様61] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000398

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bが、前記切断可能な部分であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様1~54のいずれかに記載の化合物。
[態様62] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000399

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Dが、前記分岐基であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様1~54のいずれかに記載の化合物。
[態様63] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000400

の中から選択される構造を有し、
式中、各Lが、独立して、リン結合基または中性結合基であり、
各nが、独立して、1~20である、態様1~62のいずれかに記載の化合物。
[態様64] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000401

の中から選択される構造を有する、態様1~62のいずれかに記載の化合物。
[態様65] 前記共役リンカーが、以下の構造
Figure 0006995478000402

を有する、態様1~62のいずれかに記載の化合物。
[態様66] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000403

の中から選択される構造を有する、態様1~62のいずれかに記載の化合物。
[態様67] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000404

の中から選択される構造を有する、態様1~62のいずれかに記載の化合物。
[態様68] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000405

の中から選択される構造を有する、態様1~63のいずれかに記載の化合物。
[態様69] 前記共役リンカーがピロリジンを含む、態様1~63のいずれかに記載の化合物。
[態様70] 前記共役リンカーがピロリジンを含まない、態様1~64のいずれかに記載の化合物。
[態様71] 前記共役リンカーがPEGを含む、態様1~63または69~70のいずれかに記載の化合物。
[態様72] 前記共役リンカーがアミドを含む、態様1~63または69~71のいずれかに記載の化合物。
[態様73] 前記共役リンカーが少なくとも2個のアミドを含む、態様1~63または69~72のいずれかに記載の化合物。
[態様74] 前記共役リンカーがアミドを含まない、態様1~63または71のいずれかに記載の化合物。
[態様75] 前記共役リンカーがポリアミドを含む、態様1~63または69~73のいずれかに記載の化合物。
[態様76] 前記共役リンカーがアミンを含む、態様1~63または69~75のいずれかに記載の化合物。
[態様77] 前記共役リンカーが1個以上のジスルフィド結合を含む、態様1~63または69~76のいずれかに記載の化合物。
[態様78] 前記共役リンカーがタンパク質結合部分を含む、態様1~63または69~77のいずれかに記載の化合物。
[態様79] 前記タンパク質結合部分が脂質を含む、態様78に記載の化合物。
[態様80] 前記タンパク質結合部分が、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、1-ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、1,3-ビス-O(ヘキサデシル)グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、1,3-プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、O3-(オレオイル)リトコール酸、O3-(オレオイル)コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン)、ビタミン(例えば、葉酸塩、ビタミンA、ビタミンE、ビオチン、ピリドキサール)、ペプチド、炭水化物(例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、多糖)、エンドソーム溶解成分、ステロイド(例えば、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン)、テルペン(例えば、トリテルペン、例えば、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸)、またはカチオン性脂質の中から選択される、態様78に記載の化合物。
[態様81] 前記タンパク質結合部分が、C16~C22長鎖飽和もしくは不飽和脂肪酸、コレステロール、コール酸、ビタミンE、アダマンタン、または1-ペンタフルオロプロピルの中から選択される、態様78に記載の化合物。
[態様82] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000406

の中から選択される構造を有し、
式中、各nが、独立して、1~20であり、pが、1~6である、態様1~63のいずれかに記載の化合物。
[態様83] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000407

の中から選択される構造を有し、
式中、各nが、独立して、1~20である、態様1~63のいずれかに記載の化合物。
[態様84] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000408

の中から選択される構造を有する、態様1~63のいずれかに記載の化合物。
[態様85] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000409

の中から選択される構造を有し、
式中、nが、1~20である、態様1~63のいずれかに記載の化合物。
[態様86] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000410

の中から選択される構造を有する、態様1~63のいずれかに記載の化合物。
[態様87] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000411

の中から選択される構造を有し、
式中、各nが、独立して、0、1、2、3、4、5、6、または7である、態様1~63のいずれかに記載の化合物。
[態様88] 前記共役リンカーが、以下の構造
Figure 0006995478000412

を有する、態様1~63のいずれかに記載の化合物。
[態様89] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000413

のうちの1つを有し、
式中、各Aが、独立して、O、S、C=O、またはNHであり、
各nが、独立して、1~20である、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様90] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000414

のうちの1つを有し、
式中、各Aが、独立して、O、S、C=O、またはNHであり、
各nが、独立して、1~20である、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様91] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000415

を有する、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様92] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000416

を有する、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様93] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000417

を有する、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様94] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000418

を有する、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様95] 前記分岐基がエーテルを含む、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様96] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000419

を有し、
各nが、独立して、1~20であり、
mが、2~6である、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様97] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000420

を有する、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様98] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000421

を有する、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様99] 前記分岐基が、
Figure 0006995478000422

Figure 0006995478000423

Figure 0006995478000424

Figure 0006995478000425

または
Figure 0006995478000426

を含み、
式中、各jが、1~3の整数であり、
各nが、1~20の整数である、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様100] 前記分岐基が、
Figure 0006995478000427

Figure 0006995478000428

Figure 0006995478000429

Figure 0006995478000430

または
Figure 0006995478000431

を含む、態様1~88のいずれかに記載の化合物。
[態様101] 各テザーが、以下
Figure 0006995478000432

の中から選択され、
式中、Lが、リン結合基および中性結合基から選択され、
が、C(=O)O-Rであり、
が、H、C~Cアルキル、または置換C~Cアルキであり、
が、H、C~Cアルキル、または置換C~Cアルキであり、
各mが、独立して、0~20であり、少なくとも1つのmが、各テザーに対して0を超える、態様1~100のいずれかに記載の化合物。
[態様102] 各テザーが、以下
Figure 0006995478000433

の中から選択され、
式中、Zが、HまたはCHであり、
各mが、独立して、0~20であり、少なくとも1つのmが、各テザーに対して0を超える、態様1~100のいずれかに記載の化合物。
[態様103] 各テザーが、以下
Figure 0006995478000434

の中から選択され、
式中、nが、1~12であり、
mが、1~12である、態様1~100のいずれかに記載の化合物。
[態様104] 少なくとも1個のテザーがエチレングリコールを含む、態様1~100のいずれかに記載の化合物。
[態様105] 少なくとも1個のテザーがアミドを含む、態様1~100または102のいずれかに記載の化合物。
[態様106] 少なくとも1個のテザーがポリアミドを含む、態様1~100または102のいずれかに記載の化合物。
[態様107] 少なくとも1個のテザーがアミンを含む、態様1~100または102のいずれかに記載の化合物。
[態様108] 少なくとも2個のテザーが互いに異なる、態様1~100または102~107のいずれかに記載の化合物。
[態様109] 前記テザーのすべてが互いに同一である、態様1~100または102~107のいずれかに記載の化合物。
[態様110] 各テザーが、以下
Figure 0006995478000435

の中から選択され、
式中、各nが、独立して、1~20であり、
各pが、1~約6である、態様1~100のいずれかに記載の化合物。
[態様111] 各テザーが、以下
Figure 0006995478000436

の中から選択される、態様1~100のいずれかに記載の化合物。
[態様112] 各テザーが、以下の構造
Figure 0006995478000437

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20である、態様1~100のいずれかに記載の化合物。
[態様113] 各テザーが、以下の構造
Figure 0006995478000438

を有する、態様1~100のいずれかに記載の化合物。
[態様114] 前記テザーが、以下
Figure 0006995478000439

または
Figure 0006995478000440

の中から選択される構造を有し、
式中、各nが、独立して、0、1、2、3、4、5、6、または7である、態様1~100のいずれかに記載の化合物。
[態様115] 前記テザーが、以下
Figure 0006995478000441

の中から選択される構造を有する、態様1~100のいずれかに記載の化合物。
[態様116] 前記リガンドがガラクトースである、態様1~115のいずれかに記載の化合物。
[態様117] 前記リガンドがマンノース-6-ホスフェートである、態様1~115のいずれかに記載の化合物。
[態様118] 各リガンドが、以下
Figure 0006995478000442

の中から選択され、
式中、各Rが、OHおよびNHCOOHから選択される、態様1~115のいずれかに記載の化合物。
[態様119] 各リガンドが、以下
Figure 0006995478000443

の中から選択される、態様1~115のいずれかに記載の化合物。
[態様120] 各リガンドが、以下の構造
Figure 0006995478000444

を有する、態様1~115のいずれかに記載の化合物。
[態様121] 各リガンドが、以下の構造
Figure 0006995478000445

を有する、態様1~115のいずれかに記載の化合物。
[態様122] 前記共役基が細胞標的部分を含む、態様1~121のいずれかに記載の化合物。
[態様123] 前記共役基が、以下の構造
Figure 0006995478000446

を有する細胞標的部分を含み、
式中、各nが、独立して、1~20である、態様122に記載の化合物。
[態様124] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000447

を有する、態様122のいずれかに記載の化合物。
[態様125] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000448

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20である、態様122に記載の化合物。
[態様126] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000449

を有する、態様122に記載の化合物。
[態様127] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000450

を含む、態様122に記載の化合物。
[態様128] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000451

を含む、態様122に記載の化合物。
[態様129] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000452

を有する、態様122に記載の化合物。
[態様130] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000453

を有する、態様122に記載の化合物。
[態様131] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000454

を含む、態様122に記載の化合物。
[態様132] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000455

を有する、態様122に記載の化合物。
[態様133] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000456

を含む、態様122に記載の化合物。
[態様134] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000457

を含む、態様122に記載の化合物。
[態様135] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000458

を含む、態様122に記載の化合物。
[態様136] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000459

を有する、態様122に記載の化合物。
前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000460

を有する、態様122に記載の化合物。
[態様137] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000461

を有する、態様122に記載の化合物。
[態様138] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000462

を有する、態様122に記載の化合物。
[態様139] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000463

を有する、態様122に記載の化合物。
[態様140] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000464

を含む、態様122に記載の化合物。
[態様141] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000465

を含む、態様122に記載の化合物。
[態様142] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000466

を含む、態様122に記載の化合物。
[態様143] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000467

を含む、態様122に記載の化合物。
[態様144] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000468

を有する、態様122に記載の化合物。
[態様145] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000469

を含む、態様122に記載の化合物。
[態様146] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000470

を有する、態様122に記載の化合物。
[態様147] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000471

を含み、
式中、各Yが、O、S、置換もしくは非置換C~C10アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、態様122に記載の化合物。
[態様148] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000472

を含み、
式中、各Yが、O、S、置換もしくは非置換C~C10アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、態様1~121のいずれかに記載の化合物。
[態様149] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000473

を有し、
式中、各Yが、O、S、置換もしくは非置換C~C10アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、態様122に記載の化合物。
[態様150] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000474

を含む、態様1~149のいずれかに記載の化合物。
[態様151] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000475

を含む、態様1~149のいずれかに記載の化合物。
[態様152] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000476

を含む、態様1~149のいずれかに記載の化合物。
[態様153] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000477

を含む、態様1~149のいずれかに記載の化合物。
[態様154] 前記共役基が、ホスホジエステル、アミド、デオキシヌクレオシド、またはエステルの中から選択される切断可能な部分を含む、態様1~153のいずれかに記載の化合物。
[態様155] 前記共役基が、ホスホジエステル切断可能な部分を含む、態様1~154のいずれかに記載の化合物。
[態様156] 前記共役基が、切断可能な部分を含まず、前記共役基が、前記共役基と前記オリゴヌクレオチドとの間にホスホロチオエート結合を含む、態様1~152のいずれかに記載の化合物。
[態様157] 前記共役基が、アミド切断可能な部分を含む、態様1~156のいずれかに記載の化合物。
[態様158] 前記共役基が、エステル切断可能な部分を含む、態様1~156のいずれかに記載の化合物。
[態様159] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000478

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20であり、
13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様160] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000479

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20であり、
13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様161] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000480

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20であり、
13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Zが、Hまたは結合固体支持体であり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様162] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000481

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20であり、
13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Zが、Hまたは結合固体支持体であり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様163] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000482

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様164] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000483

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様165] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000484

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様166] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000485

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様167] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000486

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様168] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000487

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様169] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000488

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様170] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000489

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様171] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000490

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様172] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000491

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様173] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000492

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様174] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000493

を含み、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様175] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000494

を含み、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様176] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000495

を含み、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様1~158のいずれかに記載の化合物。
[態様177] Bが、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、またはシトシン、もしくは5-メチルシトシンの中から選択される、態様159~176のいずれかに記載の化合物。
[態様178] Bがアデニンである、態様159~177のいずれかに記載の化合物。
[態様179] Bがチミンである、態様159~177のいずれかに記載の化合物。
[態様180] Q13がO(CH-OCHである、態様159~176のいずれかに記載の化合物。
[態様181] Q13がHである、態様159~176のいずれかに記載の化合物。
[態様182] 態様1~181のいずれかに記載の前記化合物またはその塩と、薬剤的に許容される担体または希釈剤のうちの少なくとも1つと、を含む、組成物。
[態様183] 態様1~181のいずれかに記載の前記化合物を含むプロドラッグ。
[態様184] 動物に、態様1~181のいずれかに記載の前記化合物、態様182に記載の前記組成物、または態様183に記載の前記プロドラッグを投与することを含む、方法。
[態様185] 前記動物がヒトである、態様184に記載の方法。
[態様186] 前記化合物の投与が、トランスサイレチンアミロイドーシスを予防するか、治療するか、改善するか、またはその進行を遅延させる、態様184または185に記載の方法。
[態様187] 前記化合物または組成物と第2の薬剤とを共投与することを含む、態様184~186のいずれかに記載の方法。
[態様188] 前記化合物または組成物と前記第2の薬剤とが同時に投与される、態様187に記載の方法。
[態様189] 前記投与が脈絡叢に対してである、態様184~188のいずれかに記載の方法。
[態様190] 動物におけるトランスサイレチンmRNAまたはタンパク質発現を減少させる方法であって、前記動物に、態様1~181のいずれかに記載の前記化合物、態様182に記載の前記組成物、または態様183に記載の前記プロドラッグを投与することを含み、それにより前記動物におけるトランスサイレチンmRNAまたはタンパク質発現を減少させる、方法。
[態様191] 前記動物がヒトである、態様190に記載の方法。
[態様192] トランスサイレチンmRNAまたはタンパク質発現の減少が、トランスサイレチンアミロイドーシスを予防するか、治療するか、改善するか、またはその進行を遅延させる、態様190または191に記載の方法。
[態様193] 前記化合物または組成物と第2の薬剤とを共投与することを含む、態様190~192のいずれかに記載の方法。
[態様194] 前記化合物または組成物と前記第2の薬剤とが同時に投与される、態様193に記載の方法。
[態様195] 前記化合物または組成物が脈絡叢に投与される、態様190~194のいずれかに記載の方法。
[態様196] 対象におけるトランスサイレチンアミロイドーシスを治療する方法であって、前記対象に、治療的に有効な量の態様1~181のいずれかに記載の前記化合物、態様182に記載の前記組成物、または態様183に記載の前記プロドラッグを投与することを含む、方法。
[態様197] 前記化合物または組成物の投与が、情動不安、協調運動障害、眼振、痙性対麻痺、筋協調の欠如、視覚障害、不眠症、異常感覚、ミオクローヌス、失明、言語障害、手根管症候群、てんかん、くも膜下出血、脳卒中および脳出血、水頭症、運動失調、ならびに痙性麻痺、昏睡、感覚性ニューロパチー、感覚異常、感覚鈍麻、運動ニューロパチー、自律性ニューロパチー、起立性低血圧、周期的便秘、周期的下痢、嘔気、嘔吐、発汗減少、陰萎、胃排出遅延、尿閉、尿失禁、進行性心疾患、疲労、息切れ、体重減少、食欲不振、無感覚、刺痛、脱力感、舌肥大、ネフローゼ症候群、うっ血性心不全、労作時呼吸困難、末梢浮腫、不整脈、動悸、意識朦朧、失神、体位性低血圧、末梢神経疾患、感覚運動障害、下肢ニューロパチー、上肢ニューロパチー、痛覚過敏、温度感覚変化、下肢の脱力、悪液質、末梢浮腫、肝腫大、紫斑病、拡張機能障害、心室性期外収縮、脳神経障害、深部腱反射低下、硝子体内アミロイド沈着、硝子体混濁、ドライアイ、緑内障、瞳孔のホタテガイ様外観、および水貯留による下肢の腫脹からなる群から選択されるトランスサイレチンアミロイドーシスに関連した少なくとも1つの症状を緩和する、態様196に記載の方法。
[態様198] 前記化合物または組成物と第2の薬剤とを共投与することを含む、態様196または197に記載の方法。
[態様199] 前記化合物または組成物と前記第2の薬剤とが同時に投与される、態様198に記載の方法。
[態様200] 前記化合物または組成物が脈絡叢に投与される、態様196~199のいずれかに記載の方法。
[態様201] 前記対象がヒトである、態様196~200のいずれかに記載の方法。
[態様202] 修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、8~80個の連結したヌクレオシドからなり、かつB型肝炎ウイルス(HBV)をコードする配列番号1に少なくとも85%、90%、95%、または100%相補的な核酸塩基配列を有する、化合物。
[態様203] 前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号1の核酸塩基1583~1602、1780~1799、411~427、1266~1285、1577~1596、1585~1604、1583~1598、1264~1279、または1780~1797内で相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号1に少なくとも85%、90%、95%、または100%相補的である、態様202に記載の化合物。
[態様204] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、10~30個の連結したヌクレオシドからなり、かつ配列番号3、4、5、6、7、8、9、10、または11の核酸塩基配列のうちのいずれかの少なくとも8個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、態様202に記載の化合物。
[態様205] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号3、4、5、6、7、8、9、10、または11に列挙される配列を含む核酸塩基配列を有する、態様204に記載の化合物。
[態様206] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号3、4、5、6、7、8、9、10、または11に列挙される配列からなる核酸塩基配列を有する、態様204に記載の化合物。
[態様207] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、
連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
連結したヌクレオシドからなる5’ウィングセグメントと、
連結したヌクレオシドからなる3’ウィングセグメントと、を含み、
前記ギャップセグメントが、前記5’ウィングセグメントと前記3’ウィングセグメントとの間に位置付けられ、前記5’ウィングセグメントの各ヌクレオシドが、2’-O-メトキシエチル糖を含み、前記3’ウィングセグメントの各ヌクレオシドが、2’-O-メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンが、5-メチルシトシンである、態様202~206のいずれかに記載の化合物。
[態様208] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、
連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
連結したヌクレオシドからなる5’ウィングセグメントと、
連結したヌクレオシドからなる3’ウィングセグメントと、を含み、
前記ギャップセグメントが、前記5’ウィングセグメントと前記3’ウィングセグメントとの間に位置付けられ、前記5’ウィングセグメントの各ヌクレオシドが、2’-O-メトキシエチル糖または拘束エチル糖を含み、前記3’ウィングセグメントの各ヌクレオシドが、2’-O-メトキシエチル糖または拘束エチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり、各シトシンが、5-メチルシトシンである、態様202~207のいずれかに記載の化合物。
[態様209] 前記化合物が一本鎖である、態様202~208のいずれかに記載の化合物。
[態様210] 前記化合物が二本鎖である、態様202~208のいずれかに記載の化合物。
[態様211] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも1個の修飾ヌクレオシド間結合を含む、態様202~210のいずれかに記載の化合物。
[態様212] 前記修飾ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様211に記載の化合物。
[態様213] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも1個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様212に記載の化合物。
[態様214] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも2個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様212に記載の化合物。
[態様215] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも3個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様212に記載の化合物。
[態様216] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも4個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様212に記載の化合物。
[態様217] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも5個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様212に記載の化合物。
[態様218] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも6個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様212に記載の化合物。
[態様219] 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも7個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、態様212に記載の化合物。
[態様220] 前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、ホスホジエステルヌクレオシド間結合およびホスホロチオエートヌクレオシド間結合から選択される、態様213~219のいずれかに記載の化合物。
[態様221] 前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含み、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様212に記載の化合物。
[態様222] ISIS 505358および共役基からなる化合物。
[態様223] ISIS 509934および共役基からなる化合物。
[態様224] ISIS 510100および共役基からなる化合物。
[態様225] ISIS 552023および共役基からなる化合物。
[態様226] ISIS 552024および共役基からなる化合物。
[態様227] ISIS 552032および共役基からなる化合物。
[態様228] ISIS 552859および共役基からなる化合物。
[態様229] ISIS 552925および共役基からなる化合物。
[態様230] ISIS 577119および共役基からなる化合物。
[態様231] 前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドの5’末端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結される、態様202~230のいずれかに記載の化合物。
[態様232] 前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドの3’末端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結される、態様202~230のいずれかに記載の化合物。
[態様233] 前記共役基が、正確に1個のリガンドを含む、態様202~232のいずれかに記載の化合物。
[態様234] 前記共役基が、正確に2個のリガンドを含む、態様202~232のいずれかに記載の化合物。
[態様235] 前記共役基が、3個以上のリガンドを含む、態様202~232のいずれかに記載の化合物。
[態様236] 前記共役基が、正確に3個のリガンドを含む、態様202~232のいずれかに記載の化合物。
[態様237] 各リガンドが、多糖、修飾多糖、マンノース、ガラクトース、マンノース誘導体、ガラクトース誘導体、D-マンノピラノース、L-マンノピラノース、D-アラビノース、L-ガラクトース、D-キシロフラノース、L-キシロフラノース、D-グルコース、L-グルコース、D-ガラクトース、L-ガラクトース、α-D-マンノフラノース、β-D-マンノフラノース、α-D-マンノピラノース、β-D-マンノピラノース、α-D-グルコピラノース、β-D-グルコピラノース、α-D-グルコフラノース、β-D-グルコフラノース、α-D-フルクトフラノース、α-D-フルクトピラノース、α-D-ガラクトピラノース、β-D-ガラクトピラノース、α-D-ガラクトフラノース、β-D-ガラクトフラノース、グルコサミン、シアル酸、α-D-ガラクトサミン、N-アセチルガラクトサミン、2-アミノ-3-O-[(R)-1-カルボキシエチル]-2-デオキシ-β-D-グルコピラノース、2-デオキシ-2-メチルアミノ-L-グルコピラノース、4,6-ジデオキシ-4-ホルムアミド-2,3-ジ-O-メチル-D-マンノピラノース、2-デオキシ-2-スルホアミノ-D-グルコピラノース、N-グリコロイル-α-ノイラミン酸、5-チオ-β-D-グルコピラノース、メチル2,3,4-トリ-O-アセチル-1-チオ-6-O-トリチル-α-D-グルコピラノシド、4-チオ-β-D-ガラクトピラノース、エチル3,4,6,7-テトラ-O-アセチル-2-デオキシ-1,5-ジチオ-α-D-グルコ-ヘプトピラノシド、2,5-アンヒドロ-D-アロノニトリル、リボース、D-リボース、D-4-チオリボース、L-リボース、L-4-チオリボースの中から選択される、態様202~236のいずれかに記載の化合物。
[態様238] 各リガンドがN-アセチルガラクトサミンである、態様237に記載の化合物。
[態様239] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000496

を含む、態様202~238のいずれかに記載の化合物。
[態様240] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000497

を含む、態様202~238のいずれかに記載の化合物。
[態様241] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000498

を含む、態様202~238のいずれかに記載の化合物。
[態様242] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000499

を含む、態様202~238のいずれかに記載の化合物。
[態様243] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000500

を含む、態様202~238のいずれかに記載の化合物。
[態様244] 前記共役基が、少なくとも1個のリン結合基または中性結合基を含む、態様202~243のいずれかに記載の化合物。
[態様245] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000501

Figure 0006995478000502

Figure 0006995478000503

の中から選択される構造を含み、
式中、nが、1~12であり、
mが、1~12である、態様202~244のいずれかに記載の化合物。
[態様246] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000504

の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、Lが、リン結合基または中性結合基のいずれかであり、
が、C(=O)O-Rであり、
が、H、C~Cアルキル、または置換C~Cアルキであり、
が、H、C~Cアルキル、または置換C~Cアルキであり、
各mが、独立して、0~20であり、少なくとも1つのmが、各テザーに対して0を超える、態様202~245のいずれかに記載の化合物。
[態様247] 共役基が、以下
Figure 0006995478000505

の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、Zが、HまたはCHであり、
各mが、独立して、0~20であり、少なくとも1つのmが、各テザーに対して0を超える、態様202~246のいずれかに記載の化合物。
[態様248] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000506

の中から選択される構造を有するテザーを有し、
式中、nが、1~12であり、
mが、1~12である、態様202~247のいずれかに記載の化合物。
[態様249] 前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドに共有結合される、態様202~248のいずれかに記載の化合物。
[態様250] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000507

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bが、前記切断可能な部分であり、
Cが、前記共役リンカーであり、
Dが、前記分岐基であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様202~249のいずれかに記載の化合物。
[態様251] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000508

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bが、前記切断可能な部分であり、
Cが、前記共役リンカーであり、
Dが、前記分岐基であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
各nが、独立して、0または1であり、
qが、1~5の整数である、態様202~249のいずれかに記載の化合物。
[態様252] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000509

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bが、前記切断可能な部分であり、
Cが、前記共役リンカーであり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様202~249のいずれかに記載の化合物。
[態様253] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000510

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Cが、前記共役リンカーであり、
Dが、前記分岐基であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様202~249のいずれかに記載の化合物。
[態様254] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000511

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Cが、前記共役リンカーであり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様202~249のいずれかに記載の化合物。
[態様255] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000512

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bが、前記切断可能な部分であり、
Dが、前記分岐基であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様202~249のいずれかに記載の化合物。
[態様256] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000513

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bが、前記切断可能な部分であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様202~249のいずれかに記載の化合物。
[態様257] 前記化合物が、以下の式
Figure 0006995478000514

によって表される構造を有し、
式中、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Dが、前記分岐基であり、
各Eが、テザーであり、
各Fが、リガンドであり、
qが、1~5の整数である、態様202~249のいずれかに記載の化合物。
[態様258] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000515

の中から選択される構造を有し、
式中、各Lが、独立して、リン結合基または中性結合基であり、
各nが、独立して、1~20である、態様202~257のいずれかに記載の化合物。
[態様259] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000516

の中から選択される構造を有する、態様202~257のいずれかに記載の化合物。
[態様260] 前記共役リンカーが、以下の構造
Figure 0006995478000517

を有する、態様202~257のいずれかに記載の化合物。
[態様261] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000518

の中から選択される構造を有する、態様202~257のいずれかに記載の化合物。
[態様262] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000519

の中から選択される構造を有する、態様202~257のいずれかに記載の化合物。
[態様263] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000520

の中から選択される構造を有する、態様202~257のいずれかに記載の化合物。
[態様264] 前記共役リンカーがピロリジンを含む、態様202~263のいずれかに記載の化合物。
[態様265] 前記共役リンカーがピロリジンを含まない、態様202~263のいずれかに記載の化合物。
[態様266] 前記共役リンカーがPEGを含む、態様202~265のいずれかに記載の化合物。
[態様267] 前記共役リンカーがアミドを含む、態様202~266のいずれかに記載の化合物。
[態様268] 前記共役リンカーが少なくとも2個のアミドを含む、態様202~266のいずれかに記載の化合物。
[態様269] 前記共役リンカーがアミドを含まない、態様202~266のいずれかに記載の化合物。
[態様270] 前記共役リンカーがポリアミドを含む、態様202~269のいずれかに記載の化合物。
[態様271] 前記共役リンカーがアミンを含む、態様202~270のいずれかに記載の化合物。
[態様272] 前記共役リンカーが1個以上のジスルフィド結合を含む、態様202~271のいずれかに記載の化合物。
[態様273] 前記共役リンカーがタンパク質結合部分を含む、態様202~272のいずれかに記載の化合物。
[態様274] 前記タンパク質結合部分が脂質を含む、態様273に記載の化合物。
[態様275] 前記タンパク質結合部分が、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、1-ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、1,3-ビス-O(ヘキサデシル)グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、1,3-プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、O3-(オレオイル)リトコール酸、O3-(オレオイル)コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン)、ビタミン(例えば、葉酸塩、ビタミンA、ビタミンE、ビオチン、ピリドキサール)、ペプチド、炭水化物(例えば、単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、多糖)、エンドソーム溶解成分、ステロイド(例えば、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン)、テルペン(例えば、トリテルペン、例えば、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸)、またはカチオン性脂質の中から選択される、態様273に記載の化合物。
[態様276] 前記タンパク質結合部分が、C16~C22長鎖飽和もしくは不飽和脂肪酸、コレステロール、コール酸、ビタミンE、アダマンタン、または1-ペンタフルオロプロピルの中から選択される、態様273に記載の化合物。
[態様277] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000521

の中から選択される構造を有し、
式中、各nが、独立して、1~20であり、pが、1~6である、態様202~276のいずれかに記載の化合物。
[態様278] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000522

の中から選択される構造を有し、
式中、各nが、独立して、1~20である、態様202~277のいずれかに記載の化合物。
[態様279] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000523

の中から選択される構造を有する、態様202~277のいずれかに記載の化合物。
[態様280] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000524

の中から選択される構造を有し、
式中、nが、1~20である、態様202~277のいずれかに記載の化合物。
[態様281] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000525

の中から選択される構造を有する、態様202~277のいずれかに記載の化合物。
[態様282] 前記共役リンカーが、以下
Figure 0006995478000526

の中から選択される構造を有し、
式中、各nが、独立して、0、1、2、3、4、5、6、または7である、態様202~277のいずれかに記載の化合物。
[態様283] 前記共役リンカーが、以下の構造
Figure 0006995478000527

を有する、態様202~277のいずれかに記載の化合物。
[態様284] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000528

のうちの1つを有し、
式中、各Aが、独立して、O、S、C=O、またはNHであり、
各nが、独立して、1~20である、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様285] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000529

のうちの1つを有し、
式中、各Aが、独立して、O、S、C=O、またはNHであり、
各nが、独立して、1~20である、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様286] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000530

を有する、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様287] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000531

を有する、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様288] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000532

を有する、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様289] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000533

を有する、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様290] 前記分岐基がエーテルを含む、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様291] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000534

を有し、
各nが、独立して、1~20であり、
mが、2~6である、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様292] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000535

を有する、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様293] 前記分岐基が、以下の構造
Figure 0006995478000536

を有する、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様294] 前記分岐基が、以下
Figure 0006995478000537

Figure 0006995478000538

Figure 0006995478000539

Figure 0006995478000540

または
Figure 0006995478000541

を含み、
式中、各jが、1~3の整数であり、
各nが、1~20の整数である、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様295] 前記分岐基が、以下
Figure 0006995478000542

Figure 0006995478000543

Figure 0006995478000544

Figure 0006995478000545

または
Figure 0006995478000546

を含む、態様202~283のいずれかに記載の化合物。
[態様296] 各テザーが、以下
Figure 0006995478000547

の中から選択され、
式中、Lが、リン結合基および中性結合基から選択され、
が、C(=O)O-Rであり、
が、H、C~Cアルキル、または置換C~Cアルキであり、
が、H、C~Cアルキル、または置換C~Cアルキであり、
各mが、独立して、0~20であり、少なくとも1つのmが、各テザーに対して0を超える、態様202~295のいずれかに記載の化合物。
[態様297] 各テザーが、以下
Figure 0006995478000548

の中から選択され、
式中、Zが、HまたはCHであり、
各mが、独立して、0~20であり、少なくとも1つのmが、各テザーに対して0を超える、態様202~295のいずれかに記載の化合物。
[態様298] 各テザーが、以下
Figure 0006995478000549

の中から選択され、
式中、nが、1~12であり、
mが、1~12である、態様202~295のいずれかに記載の化合物。
[態様299] 少なくとも1個のテザーがエチレングリコールを含む、態様202~295のいずれかに記載の化合物。
[態様300] 少なくとも1個のテザーがアミドを含む、態様202~295または297のいずれかに記載の化合物。
[態様301] 少なくとも1個のテザーがポリアミドを含む、態様202~295または297のいずれかに記載の化合物。
[態様302] 少なくとも1個のテザーがアミンを含む、態様202~295または297のいずれかに記載の化合物。
[態様303] 少なくとも2個のテザーが互いに異なる、態様202~295または297のいずれかに記載の化合物。
[態様304] 前記テザーのすべてが互いに同一である、態様202~295または297のいずれかに記載の化合物。
[態様305] 各テザーが、以下
Figure 0006995478000550

の中から選択され、
式中、各nが、独立して、1~20であり、
各pが、1~約6である、態様202~304のいずれかに記載の化合物。
[態様306] 各テザーが、以下
Figure 0006995478000551

の中から選択される、態様202~304のいずれかに記載の化合物。
[態様307] 各テザーが、以下の構造
Figure 0006995478000552

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20である、態様202~304のいずれかに記載の化合物。
[態様308] 各テザーが、以下の構造
Figure 0006995478000553

を有する、態様202~304のいずれかに記載の化合物。
[態様309] 前記テザーが、以下
Figure 0006995478000554

または
Figure 0006995478000555

の中から選択される構造を有し、
式中、各nが、独立して、0、1、2、3、4、5、6、または7である、態様202~304のいずれかに記載の化合物。
[態様310] 前記テザーが、以下
Figure 0006995478000556

の中から選択される構造を有する、態様202~304のいずれかに記載の化合物。
[態様311] 前記リガンドがガラクトースである、態様202~310のいずれかに記載の化合物。
[態様312] 前記リガンドがマンノース-6-ホスフェートである、態様202~310のいずれかに記載の化合物。
[態様313] 各リガンドが、以下
Figure 0006995478000557

の中から選択され、
式中、各Rが、OHおよびNHCOOHから選択される、態様202~310のいずれかに記載の化合物。
[態様314] 各リガンドが、以下
Figure 0006995478000558

の中から選択される、態様202~310のいずれかに記載の化合物。
[態様315] 各リガンドが、以下の構造
Figure 0006995478000559

を有する、態様202~310のいずれかに記載の化合物。
[態様316] 各リガンドが、以下の構造
Figure 0006995478000560


を有する、態様202~310のいずれかに記載の共役アンチセンス化合物。
[態様317] 前記共役基が細胞標的部分を含む、態様202~317のいずれかに記載の化合物。
[態様318] 前記共役基が、以下の構造
Figure 0006995478000561

を有する細胞標的部分を含み、
式中、各nが、独立して、1~20である、態様317に記載の化合物。
[態様319] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000562

を有する、態様317に記載の化合物。
[態様320] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000563

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20である、態様317に記載の化合物。
[態様321] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000564

を有する、態様317に記載の化合物。
[態様322] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000565

を含む、態様317に記載の化合物。
[態様323] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000566

を含む、態様317に記載の化合物。
[態様324] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000567

を有する、態様317に記載の化合物。
[態様325] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000568

を有する、態様317に記載の化合物。
[態様326] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000569

を含む、態様37に記載の化合物。
[態様327] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000570

を有する、態様317に記載の化合物。
[態様328] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000571

を含む、態様317に記載の化合物。
[態様329] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000572

を含む、態様317に記載の化合物。
[態様330] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000573

を含む、態様317に記載の化合物。
[態様331] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000574

を有する、態様317に記載の化合物。
前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000575

を有する、態様317に記載の化合物。
[態様332] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000576

を有する、態様317に記載の化合物。
[態様333] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000577

を有する、態様317に記載の化合物。
[態様334] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000578

を有する、態様317に記載の化合物。
[態様335] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000579

を含む、態様317に記載の化合物。
[態様336] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000580

を含む、態様317に記載の化合物。
[態様337] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000581

を含む、態様317に記載の化合物。
[態様338] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000582

を含む、態様317に記載の化合物。
[態様339] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000583

を有する、態様317に記載の化合物。
[態様340] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000584

を含む、態様317に記載の化合物。
[態様341] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000585

を有する、態様317に記載の化合物。
[態様342] 前記細胞標的部分が、以下
Figure 0006995478000586

を含み、
式中、各Yが、O、S、置換もしくは非置換C~C10アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、態様317に記載の化合物。
[態様343] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000587

を含み、
式中、各Yが、O、S、置換もしくは非置換C~C10アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、態様202~317のいずれかに記載の化合物。
[態様344] 前記細胞標的部分が、以下の構造
Figure 0006995478000588

を有し、
式中、各Yが、O、S、置換もしくは非置換C~C10アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される、態様317に記載の化合物。
[態様345] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000589

を含む、態様202~317のいずれかに記載の化合物。
[態様346] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000590

を含む、態様202~317のいずれかに記載の化合物。
[態様347] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000591

を含む、態様202~317のいずれかに記載の化合物。
[態様348] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000592

を含む、態様202~317のいずれかに記載の化合物。
[態様349] 前記共役基が、ホスホジエステル、アミド、デオキシヌクレオシド、またはエステルの中から選択される切断可能な部分を含む、態様202~348のいずれかに記載の化合物。
[態様350] 前記共役基が、ホスホジエステル切断可能な部分を含む、態様202~348のいずれかに記載の化合物。
[態様351] 前記共役基が、切断可能な部分を含まず、前記共役基が、前記共役基と前記オリゴヌクレオチドとの間にホスホロチオエート結合を含む、態様202~348のいずれかに記載の化合物。
[態様352] 前記共役基が、アミド切断可能な部分を含む、態様202~351のいずれかに記載の化合物。
[態様353] 前記共役基が、エステル切断可能な部分を含む、態様202~351のいずれかに記載の化合物。
[態様354] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000593

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20であり、
13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様355] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000594

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20であり、
13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様356] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000595

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20であり、
13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Zが、Hまたは結合固体支持体であり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様357] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000596

を有し、
式中、各nが、独立して、1~20であり、
13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Zが、Hまたは結合固体支持体であり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様358] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000597

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様359] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000598

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様360] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000599

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様361] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000600

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様362] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000601

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様363] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000602

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様364] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000603

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様365] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000604

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様366] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000605

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様367] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000606

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様368] 前記化合物が、以下の構造
Figure 0006995478000607

を有し、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様369] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000608

を含み、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様370] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000609

を含み、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様371] 前記共役基が、以下
Figure 0006995478000610

を含み、
式中、Q13が、HまたはO(CH-OCHであり、
Aが、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Bxが、複素環式塩基部分である、態様202~353のいずれかに記載の化合物。
[態様372] Bが、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、またはシトシン、もしくは5-メチ
ルシトシンの中から選択される、態様354~371のいずれかに記載の化合物。
[態様373] Bがアデニンである、態様354~372のいずれかに記載の化合物。
[態様374] Bがチミンである、態様354~372のいずれかに記載の化合物。
[態様375] Q13がO(CH-OCHである、態様354~371のいずれかに記載の化合物。
[態様376] Q13がHである、態様354~371のいずれかに記載の化合物。
[態様377] 態様202~376のいずれかに記載の前記化合物またはその塩と、薬剤的に許容される担体または希釈剤のうちの少なくとも1つと、を含む、組成物。
[態様378] 態様202~376のいずれかに記載の前記化合物を含むプロドラッグ。
[態様379] 対象におけるHBV関連疾患、障害、または状態を治療する方法であって、前記対象に、態様202~376のいずれかに記載の前記化合物、態様377に記載の前記組成物、または態様378に記載の前記プロドラッグを投与することを含み、前記疾患、障害、または状態が、黄疸、肝炎、肝線維症、炎症、肝硬変、肝不全、肝臓癌、びまん性肝細胞炎症性疾患、血球貪食症候群、血清肝炎、HBVウイルス血症、または肝疾患関連移植である、方法。
[態様380] HBVに感染している対象におけるHBV抗原レベルを低減させる方法であって、前記対象に、態様202~376のいずれかに記載の前記化合物、態様377に記載の前記組成物、または態様378に記載の前記プロドラッグを投与することを含み、それにより前記対象におけるHBV抗原レベルを低減させる、方法。
[態様381] 前記HBV抗原がHBsAGである、態様380に記載の方法。
[態様382] 前記HBV抗原がHBeAGである、態様380に記載の方法。
[態様383] 以下の構造
Figure 0006995478000611

を含む化合物であって、
式中、Xが、GalNAcを含む共役基である、化合物。
[態様384] 以下の構造
Figure 0006995478000612

を含む化合物。
[態様385] 以下の構造
Figure 0006995478000613

を含む化合物。
[態様386] 以下の構造
Figure 0006995478000614

を含む化合物であって、
式中、Rが、-OCHCHOCH(MOE)であり、ならびにRが、Hであるか、またはRおよびRが一緒になって橋を形成するかのいずれかであり、そこで、Rが、-O-であり、Rが、-CH-、-CH(CH)-、または-CHCH-であり、結果として生じる橋が、-O-CH-、-O-CH(CH)-、および-O-CHCH-から選択されるように、RおよびRが直接連結され、
同一の環上にて各環のRとRの各対について、独立して各環について、Rが、Hおよび-OCHCHOCHから選択され、ならびにRが、Hであるか、またはRおよびRが一緒になって橋を形成するかのいずれかであり、そこで、Rが、-O-であり、Rが、-CH-、-CH(CH)-、または-CHCH-であり、結果として生じる橋が、-O-CH-、-O-CH(CH)-、および-O-CHCH-から選択されるように、RおよびRが直接連結され、
が、Hおよび-CHから選択され、
Zが、SおよびOから選択される、化合物。
[態様387] 以下の構造
Figure 0006995478000615

を含む化合物であって、
式中、Xが、GalNAcを含む共役基である、化合物。
[態様388] 以下の構造
Figure 0006995478000616

を含む化合物。
[態様389] 以下の構造
Figure 0006995478000617

を含む化合物。
[態様390] 以下の構造
Figure 0006995478000618

を含む化合物であって、
式中、Rが、-OCHCHOCH(MOE)であり、ならびにRが、Hであるか、またはRおよびRが一緒になって橋を形成するかのいずれかであり、そこで、Rが、-O-であり、Rが、-CH-、-CH(CH)-、または-CHCH-であり、結果として生じる橋が、-O-CH-、-O-CH(CH)-、および-O-CHCH-から選択されるように、RおよびRが直接連結され、
同一の環上にて各環のRとRの各対について、独立して各環について、Rが、Hおよび-OCHCHOCHから選択され、ならびにRが、Hであるか、またはRおよびRが一緒になって橋を形成するかのいずれかであり、そこで、Rが、-O-であり、Rが、-CH-、-CH(CH)-、または-CHCH-であり、結果として生じる橋が、-O-CH-、-O-CH(CH)-、および-O-CHCH-から選択されるように、RおよびRが直接連結され、
が、Hおよび-CHから選択され、
Zが、SおよびOから選択される、化合物。

Claims (26)

  1. 修飾オリゴヌクレオチドおよび共役基を含む化合物であって、当該修飾オリゴヌクレオチドは配列番号3の核酸塩基配列からなり;そしてここで当該共役基は、
    Figure 0006995478000619
    を含み;当該共役基は、当該修飾オリゴヌクレオチドの5’末端で当該修飾オリゴヌクレオチドに結合する、前記化合物。
  2. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも1個の修飾糖を含む、請求項1に記載の化合物。
  3. 少なくとも1個の修飾糖が、二環糖である、請求項2に記載の化合物。
  4. 少なくとも1個の修飾糖が、2’-O-メトキシエチル、拘束エチル、3’-フルオロ-HNA、または4’-(CH-O-2’橋、ここでnは1または2である、を含む、請求項2または3に記載の化合物。
  5. 少なくとも1個の修飾糖が、2’-O-メトキシエチルである、請求項2に記載の化合物。
  6. 少なくとも1個のヌクレオシドが修飾核酸塩基を含む、請求項1~5のいずれか1項に記載の化合物。
  7. 前記修飾核酸塩基が、5-メチルシトシンである、請求項6に記載の化合物。
  8. a.前記共役基が:
    Figure 0006995478000620

    を含み;ここで切断可能な部分(CM)は生理学的条件下で分割され得る結合または基である;および/または
    b.前記共役基が:
    Figure 0006995478000621

    を含む、請求項1~7のいずれか1項に記載の化合物。
  9. 前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合が、ホスホジエステルヌクレオシド間結合およびホスホロチオエートヌクレオシド間結合から選択される、請求項1~8のいずれか1項に記載の化合物。
  10. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも5個のホスホジエステルヌクレオシド間結合を含む、請求項9に記載の化合物。
  11. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも2個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む、請求項9に記載の化合物。
  12. 前記修飾オリゴヌクレオチが一本鎖である、請求項1~11のいずれか1項に記載の化合物。
  13. 前記修飾オリゴヌクレオチが二本鎖である、請求項1~11のいずれか1項に記載の化合物。
  14. 前記修飾オリゴヌクレオチドが:
    連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと;
    連結したヌクレオシドからなる5’ウィングセグメントと;
    連結したヌクレオシドからなる3’ウィングセグメントと;を含み、
    ここで当該ギャップセグメントは当該5’ウィングセグメントと当該3’ウィングセグメントとの間に位置付けられ、そして各ウィングセグメントの各ヌクレオシドは修飾糖を含む、請求項1~13のいずれか1項に記載の化合物。
  15. 前記修飾オリゴヌクレオチドの前記ギャップセグメント中の各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項14に記載化合物。
  16. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、各ウィングセグメントにおいて少なくとも1個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合をさらに含む、請求項15に記載の化合物。
  17. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号3からなる核酸塩基配列を有する20個の連結したヌクレオシドからなり、そしてここで当該修飾オリゴヌクレオチドは:
    10個の連結したデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと;
    5個の連結したヌクレオシドからなる5’ウィングセグメントと;
    5個の連結したヌクレオシドからなる3’ウィングセグメントと;を含み、
    ここで当該ギャップセグメントは当該5’ウィングセグメントと当該3’ウィングセグメントとの間に位置付けられ、そして各ウィングセグメントの各ヌクレオシドは2’-O-メトキシエチル糖を含み、そして各シトシン残基は5-メチルシトシンである、請求項1に記載の化合物。
  18. 前記修飾オリゴヌクレオチドの前記ギャップセグメント中の各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項17に記載の化合物。
  19. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、各ウィングセグメント中に少なくとも1個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合をさらに含む、請求項18に記載の化合物。
  20. 前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である、請求項17に記載の化合物。
  21. 前記修飾オリゴヌクレオチドが一本鎖である、請求項17~20のいずれか1項に記載の化合物。
  22. 化合物が、以下の式:
    Figure 0006995478000622

    またはその薬剤的に許容される塩からなる、請求項1に記載の化合物。
  23. 請求項1~22のいずれか1項に記載の化合物、および薬剤的に許容される担体または希釈剤を含む、組成物。
  24. 対象におけるHBV関連疾患、障害、または状態を治療するための医薬組成物であって、請求項1~22のいずれか1項に記載の化合物または請求項23に記載の組成物を含み、ここで当該疾患、障害、または状態は、黄疸、肝炎、肝線維症、炎症、肝硬変、肝不全、肝臓癌、びまん性肝細胞炎症性疾患、血球貪食症候群、血清肝炎、HBVウイルス血症、または肝疾患関連移植である、前記医薬組成物。
  25. HBVに感染している対象におけるHBV抗原レベルを低減させるための医薬組成物であって、請求項1~22のいずれか1項に記載の化合物または請求項23に記載の組成物を含む、前記医薬組成物。
  26. 前記HBV抗原が、HBsAGまたはHBeAGである、請求項25に記載の医薬組成物。
JP2016512054A 2013-05-01 2014-05-01 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法 Active JP6995478B2 (ja)

Applications Claiming Priority (15)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361818442P 2013-05-01 2013-05-01
US61/818,442 2013-05-01
US201361823826P 2013-05-15 2013-05-15
US61/823,826 2013-05-15
US201361843887P 2013-07-08 2013-07-08
US61/843,887 2013-07-08
US201361871673P 2013-08-29 2013-08-29
US61/871,673 2013-08-29
US201361880790P 2013-09-20 2013-09-20
US61/880,790 2013-09-20
US201461976991P 2014-04-08 2014-04-08
US61/976,991 2014-04-08
US201461986867P 2014-04-30 2014-04-30
US61/986,867 2014-04-30
PCT/US2014/036463 WO2014179627A2 (en) 2013-05-01 2014-05-01 Compositions and methods for modulating hbv and ttr expression

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019211075A Division JP2020039355A (ja) 2013-05-01 2019-11-22 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法
JP2019211074A Division JP6866459B2 (ja) 2013-05-01 2019-11-22 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2016522683A JP2016522683A (ja) 2016-08-04
JP2016522683A5 JP2016522683A5 (ja) 2017-06-15
JP6995478B2 true JP6995478B2 (ja) 2022-01-14

Family

ID=51843959

Family Applications (20)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016512052A Active JP6216444B2 (ja) 2013-05-01 2014-05-01 アポリポタンパク質(a)発現を調節するための組成物および方法
JP2016512053A Active JP6387084B2 (ja) 2013-05-01 2014-05-01 アポリポタンパク質c−iiiの発現を調節するための組成物および方法
JP2016512051A Active JP6769866B2 (ja) 2013-05-01 2014-05-01 共役アンチセンス化合物およびそれらの使用
JP2016512054A Active JP6995478B2 (ja) 2013-05-01 2014-05-01 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法
JP2016512055A Active JP6456362B2 (ja) 2013-05-01 2014-05-01 組成物および方法
JP2017182019A Active JP6592486B2 (ja) 2013-05-01 2017-09-22 アポリポタンパク質(a)発現を調節するための組成物および方法
JP2018148112A Active JP6652602B2 (ja) 2013-05-01 2018-08-07 アポリポタンパク質c−iiiの発現を調節するための組成物および方法
JP2018236205A Expired - Fee Related JP6639629B2 (ja) 2013-05-01 2018-12-18 組成物および方法
JP2019170394A Active JP7429103B2 (ja) 2013-05-01 2019-09-19 アポリポタンパク質(a)発現を調節するための組成物および方法
JP2019211074A Active JP6866459B2 (ja) 2013-05-01 2019-11-22 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法
JP2019211075A Pending JP2020039355A (ja) 2013-05-01 2019-11-22 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法
JP2019229981A Ceased JP2020058370A (ja) 2013-05-01 2019-12-20 組成物および方法
JP2020008836A Pending JP2020074787A (ja) 2013-05-01 2020-01-23 アポリポタンパク質c−iiiの発現を調節するための組成物および方法
JP2020158332A Active JP7177127B2 (ja) 2013-05-01 2020-09-23 共役(conjugated)アンチセンス化合物およびそれらの使用
JP2021023118A Withdrawn JP2021074021A (ja) 2013-05-01 2021-02-17 組成物および方法
JP2021065088A Active JP7339294B2 (ja) 2013-05-01 2021-04-07 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法
JP2021181533A Pending JP2022017514A (ja) 2013-05-01 2021-11-05 アポリポタンパク質(a)発現を調節するための組成物および方法
JP2022180094A Pending JP2023012548A (ja) 2013-05-01 2022-11-10 共役(conjugated)アンチセンス化合物およびそれらの使用
JP2023093703A Pending JP2023113843A (ja) 2013-05-01 2023-06-07 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法
JP2023181938A Pending JP2024010070A (ja) 2013-05-01 2023-10-23 アポリポタンパク質(a)発現を調節するための組成物および方法

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016512052A Active JP6216444B2 (ja) 2013-05-01 2014-05-01 アポリポタンパク質(a)発現を調節するための組成物および方法
JP2016512053A Active JP6387084B2 (ja) 2013-05-01 2014-05-01 アポリポタンパク質c−iiiの発現を調節するための組成物および方法
JP2016512051A Active JP6769866B2 (ja) 2013-05-01 2014-05-01 共役アンチセンス化合物およびそれらの使用

Family Applications After (16)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016512055A Active JP6456362B2 (ja) 2013-05-01 2014-05-01 組成物および方法
JP2017182019A Active JP6592486B2 (ja) 2013-05-01 2017-09-22 アポリポタンパク質(a)発現を調節するための組成物および方法
JP2018148112A Active JP6652602B2 (ja) 2013-05-01 2018-08-07 アポリポタンパク質c−iiiの発現を調節するための組成物および方法
JP2018236205A Expired - Fee Related JP6639629B2 (ja) 2013-05-01 2018-12-18 組成物および方法
JP2019170394A Active JP7429103B2 (ja) 2013-05-01 2019-09-19 アポリポタンパク質(a)発現を調節するための組成物および方法
JP2019211074A Active JP6866459B2 (ja) 2013-05-01 2019-11-22 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法
JP2019211075A Pending JP2020039355A (ja) 2013-05-01 2019-11-22 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法
JP2019229981A Ceased JP2020058370A (ja) 2013-05-01 2019-12-20 組成物および方法
JP2020008836A Pending JP2020074787A (ja) 2013-05-01 2020-01-23 アポリポタンパク質c−iiiの発現を調節するための組成物および方法
JP2020158332A Active JP7177127B2 (ja) 2013-05-01 2020-09-23 共役(conjugated)アンチセンス化合物およびそれらの使用
JP2021023118A Withdrawn JP2021074021A (ja) 2013-05-01 2021-02-17 組成物および方法
JP2021065088A Active JP7339294B2 (ja) 2013-05-01 2021-04-07 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法
JP2021181533A Pending JP2022017514A (ja) 2013-05-01 2021-11-05 アポリポタンパク質(a)発現を調節するための組成物および方法
JP2022180094A Pending JP2023012548A (ja) 2013-05-01 2022-11-10 共役(conjugated)アンチセンス化合物およびそれらの使用
JP2023093703A Pending JP2023113843A (ja) 2013-05-01 2023-06-07 Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法
JP2023181938A Pending JP2024010070A (ja) 2013-05-01 2023-10-23 アポリポタンパク質(a)発現を調節するための組成物および方法

Country Status (35)

Country Link
US (23) US9714421B2 (ja)
EP (11) EP2991661B1 (ja)
JP (20) JP6216444B2 (ja)
KR (16) KR20230006933A (ja)
CN (12) CN112921036A (ja)
AU (19) AU2014259759B2 (ja)
BR (6) BR112015027319A8 (ja)
CA (5) CA2921162A1 (ja)
CL (2) CL2015003217A1 (ja)
CR (2) CR20190269A (ja)
CY (2) CY1121879T1 (ja)
DK (4) DK3524680T3 (ja)
DO (3) DOP2015000268A (ja)
EA (2) EA031393B1 (ja)
ES (4) ES2730015T3 (ja)
HK (5) HK1221486A1 (ja)
HR (2) HRP20190987T1 (ja)
HU (2) HUE043697T2 (ja)
IL (18) IL296543A (ja)
LT (2) LT2992009T (ja)
ME (1) ME03390B (ja)
MX (11) MX2015015220A (ja)
MY (2) MY198359A (ja)
NZ (6) NZ631512A (ja)
PE (2) PE20161430A1 (ja)
PH (3) PH12015502493B1 (ja)
PL (2) PL2992009T3 (ja)
PT (3) PT2992098T (ja)
RS (2) RS58981B1 (ja)
RU (8) RU2019110030A (ja)
SG (5) SG11201508800WA (ja)
SI (2) SI2992009T1 (ja)
UA (2) UA120287C2 (ja)
WO (5) WO2014179626A2 (ja)
ZA (2) ZA201507216B (ja)

Families Citing this family (413)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5809058B2 (ja) 2008-10-15 2015-11-10 アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド 第11因子発現の調節
BRPI0923225A2 (pt) 2008-12-02 2016-10-04 Chiralgen Ltd metodo para sintese de acidos nucleicos modificados no atomo de fosforo
KR101885383B1 (ko) 2009-07-06 2018-08-03 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 신규한 핵산 프로드러그 및 그의 사용 방법
JP5868324B2 (ja) 2010-09-24 2016-02-24 株式会社Wave Life Sciences Japan 不斉補助基
WO2012068405A2 (en) 2010-11-17 2012-05-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of alpha synuclein expression
CN103796657B (zh) 2011-07-19 2017-07-11 波涛生命科学有限公司 合成官能化核酸的方法
EP2751270B1 (en) * 2011-08-29 2018-08-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
WO2013148260A1 (en) 2012-03-30 2013-10-03 Washington University Methods for modulating tau expression for reducing seizure and modifying a neurodegenerative syndrome
WO2013159108A2 (en) * 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
WO2013177468A2 (en) * 2012-05-24 2013-11-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating apolipoprotein(a) expression
WO2013173789A2 (en) 2012-05-17 2013-11-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide compositions
US9574193B2 (en) 2012-05-17 2017-02-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating apolipoprotein (a) expression
EP2873674B1 (en) 2012-07-13 2020-05-06 Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. Chiral nucleic acid adjuvant
EP4219516A3 (en) 2012-07-13 2024-01-10 Wave Life Sciences Ltd. Chiral control
SG11201500239VA (en) 2012-07-13 2015-03-30 Wave Life Sciences Japan Asymmetric auxiliary group
PL2920304T3 (pl) * 2012-11-15 2019-07-31 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Koniugaty oligonukleotydowe
EP2951305B1 (en) * 2013-01-30 2018-08-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Lna oligonucleotide carbohydrate conjugates
WO2014127268A2 (en) * 2013-02-14 2014-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein c-iii (apociii) expression in lipoprotein lipase deficient (lpld) populations
AU2014259759B2 (en) * 2013-05-01 2020-06-18 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods
CN105164261B (zh) 2013-05-01 2022-03-18 莱古路斯治疗法股份有限公司 用于增强的细胞摄取的化合物和方法
CN105378080A (zh) 2013-05-01 2016-03-02 莱古路斯治疗法股份有限公司 用于调节mir-122的微小rna化合物和方法
PT3013959T (pt) 2013-06-27 2020-02-04 Roche Innovation Ct Copenhagen As Oligómeros antissentido e conjugados dirigidos para pcsk9
DK3019200T3 (da) * 2013-07-11 2022-06-20 Alnylam Pharmaceuticals Inc Oligonukleotid-ligand-konjugater og fremgangsmåde til fremstiling deraf
JP6617702B2 (ja) 2013-07-15 2019-12-11 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア Fty720のアザサイクリック拘束アナログ
TW202246503A (zh) 2013-07-19 2022-12-01 美商百健Ma公司 用於調節τ蛋白表現之組合物
US9943604B2 (en) 2013-09-20 2018-04-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Targeted therapeutic nucleosides and their use
CA2925107A1 (en) * 2013-10-02 2015-04-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene
US11162096B2 (en) 2013-10-14 2021-11-02 Ionis Pharmaceuticals, Inc Methods for modulating expression of C9ORF72 antisense transcript
US9994846B2 (en) 2013-10-25 2018-06-12 Regulus Therapeutics Inc. MicroRNA compounds and methods for modulating miR-21 activity
WO2015071388A1 (en) * 2013-11-14 2015-05-21 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Apob antisense conjugate compounds
WO2015105083A1 (ja) * 2014-01-07 2015-07-16 塩野義製薬株式会社 アンチセンスオリゴヌクレオチド及び糖誘導体を含む二本鎖オリゴヌクレオチド
WO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
US10322173B2 (en) 2014-01-15 2019-06-18 Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. Chiral nucleic acid adjuvant having anti-allergic activity, and anti-allergic agent
JPWO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
KR102423317B1 (ko) 2014-01-16 2022-07-22 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 키랄 디자인
EP3105331B1 (en) 2014-02-11 2021-06-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof
US10006027B2 (en) 2014-03-19 2018-06-26 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating Ataxin 2 expression
IL247600B (en) 2014-03-19 2022-06-01 Ionis Pharmaceuticals Inc Preparations for the modulation of ataxin 2 expression
SI3126499T1 (sl) 2014-04-01 2020-09-30 Biogen Ma Inc. Sestave za moduliranje izražanja SOD-1
WO2015168514A1 (en) * 2014-05-01 2015-11-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Method for synthesis of reactive conjugate clusters
RU2701645C2 (ru) * 2014-05-01 2019-09-30 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы модулирования экспрессии фактора комплемента в
BR122020024443B1 (pt) 2014-05-01 2022-02-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc Composto e composição farmacêutica para modulação da expressão de angptl3
WO2015168532A2 (en) 2014-05-01 2015-11-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating pkk expression
MX2016014013A (es) 2014-05-01 2016-11-15 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para modular la expresion del receptor de la hormona del crecimiento.
GB201408623D0 (en) 2014-05-15 2014-07-02 Santaris Pharma As Oligomers and oligomer conjugates
SG11201609376SA (en) 2014-05-22 2016-12-29 Alnylam Pharmaceuticals Inc Angiotensinogen (agt) irna compositions and methods of use thereof
GB201410693D0 (en) 2014-06-16 2014-07-30 Univ Southampton Splicing modulation
BR112017001931A2 (pt) 2014-08-07 2017-11-28 Regulus Therapeutics Inc direcionamento de micrornas para distúrbios metabólicos
KR102620328B1 (ko) 2014-10-03 2024-01-02 콜드스프링하버러보러토리 핵 유전자 산출량의 표적화 증강
JP6626101B2 (ja) * 2014-10-10 2019-12-25 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft GalNAcホスホラミダイト、その核酸結合体およびそれらの使用
WO2016061487A1 (en) * 2014-10-17 2016-04-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Polynucleotide agents targeting aminolevulinic acid synthase-1 (alas1) and uses thereof
JOP20200092A1 (ar) 2014-11-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها
JP2017535552A (ja) 2014-11-17 2017-11-30 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. アポリポタンパク質C3(APOC3)iRNA組成物およびその使用方法
JP2018504380A (ja) 2014-12-18 2018-02-15 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. Reversir(商標)化合物
US10793855B2 (en) 2015-01-06 2020-10-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for modulating expression of C9ORF72 antisense transcript
WO2016115490A1 (en) 2015-01-16 2016-07-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulation of dux4
JP2018510621A (ja) 2015-02-13 2018-04-19 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有3(PNPLA3)iRNA組成物およびその使用方法
JP6826984B2 (ja) * 2015-02-15 2021-02-10 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドArcturus Therapeutics,Inc. アシル−アミノ−lnaオリゴヌクレオチドおよび/またはヒドロカルビル−アミノ−lnaオリゴヌクレオチド
US11129844B2 (en) 2015-03-03 2021-09-28 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating MECP2 expression
JP6833705B2 (ja) 2015-04-03 2021-02-24 アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. Tmprss6発現を調節するための化合物及び方法
WO2016164746A1 (en) 2015-04-08 2016-10-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene
US10407678B2 (en) 2015-04-16 2019-09-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for modulating expression of C9ORF72 antisense transcript
WO2016172734A1 (en) 2015-04-24 2016-10-27 California Institute Of Technology Reactivation of x chromosome genes
EP3310918B1 (en) 2015-06-18 2020-08-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Polynucleotide agents targeting hydroxyacid oxidase (glycolate oxidase, hao1) and methods of use thereof
WO2016209862A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glucokinase (gck) irna compositions and methods of use thereof
AU2016285724A1 (en) 2015-06-29 2017-11-16 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modified CRISPR RNA and modified single CRISPR RNA and uses thereof
CN109477106B (zh) 2015-07-10 2022-10-04 Ionis制药公司 二酰基甘油酰基转移酶2(dgat2)的调节剂
US10494632B2 (en) 2015-07-10 2019-12-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Insulin-like growth factor binding protein, acid labile subunit (IGFALS) compositions and methods of use thereof
JPWO2017010575A1 (ja) * 2015-07-16 2018-04-26 協和発酵キリン株式会社 β2GPI遺伝子発現抑制核酸複合体
MA43072A (fr) * 2015-07-22 2018-05-30 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
MX369556B (es) 2015-08-06 2019-11-12 Hoffmann La Roche Procesos para la preparacion de derivados acidos de n-acetilgalactosamina (galnac).
CN105111118B (zh) * 2015-08-14 2017-04-12 天津小新医药科技有限公司 L‑薄荷醇类p2y12受体拮抗剂、制备方法及其用途
CN105111119B (zh) * 2015-08-14 2017-04-12 天津小新医药科技有限公司 一类卤代苯l‑薄荷醇类p2y12受体拮抗剂及其用途
US20190055550A1 (en) 2015-08-24 2019-02-21 Roche Innovation Center Copenhagen A/S LNA-G Process
PE20181131A1 (es) 2015-09-02 2018-07-17 Alnylam Pharmaceuticals Inc COMPOSICIONES DE ARNi PARA LIGANDO 1 DE MUERTE CELULAR PROGRAMADA 1 (PD-L1) Y METODOS DE USO DE LAS MISMAS
US20180273577A1 (en) 2015-09-24 2018-09-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of kras expression
EP3352753A4 (en) 2015-09-24 2019-03-13 The Regents of The University of California SYNTHETIC SPHINGOLIPIDE-SIMILAR MOLECULES, MEDICAMENTS, METHODS FOR THEIR SYNTHESIS AND TREATMENT PROCEDURES
WO2017053720A1 (en) * 2015-09-25 2017-03-30 Tarveda Therapeutics, Inc. RNAi CONJUGATES, PARTICLES AND FORMULATIONS THEREOF
EP3353303B1 (en) 2015-09-25 2023-08-02 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating ataxin 3 expression
US11116843B2 (en) 2015-09-25 2021-09-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
US20210052631A1 (en) * 2015-09-25 2021-02-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
JOP20210043A1 (ar) * 2015-10-01 2017-06-16 Arrowhead Pharmaceuticals Inc تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa
KR20180073584A (ko) 2015-10-02 2018-07-02 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스 올리고뉴클레오타이드 접합 방법
AU2016334804B2 (en) 2015-10-09 2022-03-31 University Of Southampton Modulation of gene expression and screening for deregulated protein expression
WO2017068087A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotide detection method
WO2017067970A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S In vitro toxicity screening assay
EP3371201A4 (en) 2015-11-06 2019-09-18 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds for use in therapy
MX2018005277A (es) 2015-11-06 2018-08-01 Ionis Pharmaceuticals Inc Modular la expresion de apolipoproteina (a).
PL3377510T3 (pl) 2015-11-16 2021-05-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Amidofosforyn klastra GalNAc
EP3389670A4 (en) 2015-12-04 2020-01-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. METHODS OF TREATING BREAST CANCER
US11096956B2 (en) 2015-12-14 2021-08-24 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers and uses thereof
AU2016370653A1 (en) 2015-12-14 2018-06-21 Cold Spring Harbor Laboratory Antisense oligomers for treatment of Autosomal Dominant Mental Retardation-5 and Dravet Syndrome
WO2017120365A1 (en) 2016-01-05 2017-07-13 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing lrrk2 expression
US10894985B2 (en) 2016-01-12 2021-01-19 Sitokine Limited Methods for predicting response to treatment
JP6988481B2 (ja) 2016-01-26 2022-01-05 日産化学株式会社 一本鎖オリゴヌクレオチド
KR20180103166A (ko) * 2016-01-29 2018-09-18 교와 핫꼬 기린 가부시키가이샤 핵산 복합체
WO2017132669A1 (en) * 2016-01-31 2017-08-03 University Of Massachusetts Branched oligonucleotides
KR20230048446A (ko) 2016-03-07 2023-04-11 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 치료용 화합물을 위한 표적화 리간드
CA3013797A1 (en) 2016-03-09 2017-09-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for inhibiting pmp22 expression
US20170283496A1 (en) 2016-03-14 2017-10-05 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for reduction of pd-l1 expression
US10577607B2 (en) 2016-03-16 2020-03-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of DYRK1B expression
EP3429690A4 (en) 2016-03-16 2019-10-23 Ionis Pharmaceuticals, Inc. METHOD FOR MODULATING KEAP1
EP3228326A1 (en) 2016-04-05 2017-10-11 Silence Therapeutics GmbH Nucleic acid linked to a trivalent glycoconjugate
MA45478A (fr) * 2016-04-11 2019-02-20 Arbutus Biopharma Corp Compositions de conjugués d'acides nucléiques ciblés
EP3443094B1 (en) 2016-04-13 2022-10-19 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing c9orf72 expression
JP6985288B2 (ja) 2016-04-14 2021-12-22 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft トリチル−モノ−GalNAc化合物とその利用
MA45295A (fr) 2016-04-19 2019-02-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composition d'arni de protéine de liaison de lipoprotéines haute densité (hdlbp/vigiline) et procédés pour les utiliser
EP3449002A4 (en) 2016-04-29 2019-09-25 Nanyang Technological University ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES CONTAINING A G-QUADRUPLEX
MA45270A (fr) 2016-05-04 2017-11-09 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
US11105794B2 (en) 2016-06-17 2021-08-31 Hoffmann-La Roche Inc. In vitro nephrotoxicity screening assay
AU2017286811A1 (en) 2016-06-17 2018-11-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of gys1 expression
MA45496A (fr) 2016-06-17 2019-04-24 Hoffmann La Roche Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b
CN109312403B (zh) 2016-06-17 2023-06-27 豪夫迈·罗氏有限公司 体外肾毒性筛选测定法
JP7022687B2 (ja) * 2016-06-30 2022-02-18 協和キリン株式会社 核酸複合体
EP3481430A4 (en) 2016-07-11 2020-04-01 Translate Bio Ma, Inc. NUCLEIC ACID CONJUGATES AND USES THEREOF
JP7197463B2 (ja) 2016-07-15 2022-12-27 アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド Smn2の調節のための化合物及び方法
IL291323B2 (en) 2016-07-15 2023-09-01 Am Chemicals Llc Solid non-nucleoside supports and phosphoramidite building blocks for oligonucleotide synthesis
WO2018031933A2 (en) 2016-08-12 2018-02-15 University Of Massachusetts Conjugated oligonucleotides
EP3500581A4 (en) 2016-08-17 2021-10-06 Solstice Biologics, Ltd. POLYNUCLEOTIDE CONSTRUCTS
KR20230115344A (ko) * 2016-09-02 2023-08-02 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 표적화 리간드
JOP20190065A1 (ar) 2016-09-29 2019-03-28 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير عن tau
KR20190065341A (ko) * 2016-10-06 2019-06-11 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 올리고머 화합물들의 접합 방법
EP3532044A4 (en) 2016-10-27 2020-07-29 California Institute of Technology HDAC-INHIBITING COMPOSITIONS FOR REACTIVATING THE X-CHROMOSOME
JOP20190104A1 (ar) 2016-11-10 2019-05-07 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير عن atxn3
TW201831684A (zh) * 2016-11-11 2018-09-01 美商艾洛斯生物製藥公司 用於cccDNA之寡核苷酸標靶策略
TWI788312B (zh) 2016-11-23 2023-01-01 美商阿尼拉製藥公司 絲胺酸蛋白酶抑制因子A1 iRNA組成物及其使用方法
WO2018102397A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 PureTech Health LLC Exosomes for delivery of therapeutic agents
EP3548620A4 (en) 2016-12-02 2020-07-22 Cold Spring Harbor Laboratory MODULATION OF THE EXPRESSION OF LNC05
MX2019006803A (es) * 2016-12-13 2019-11-18 Am Sciences Inc Composicion farmaceutica para prevenir o tratar la hepatitis b.
KR20230166146A (ko) 2016-12-16 2023-12-06 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스티레틴(TTR) iRNA 조성물을 사용하여 TTR-관련 질병을 치료하거나 예방하는 방법
CN108239644B (zh) * 2016-12-23 2021-05-28 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种小干扰核酸和药物组合物及其用途
US10329620B2 (en) 2017-01-12 2019-06-25 Cardioforecast Ltd. Methods and kits for treating cardiovascular disease
US20190345496A1 (en) 2017-01-13 2019-11-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating relb expression
EP3568477A1 (en) 2017-01-13 2019-11-20 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating rela expression
EP3568480A1 (en) 2017-01-13 2019-11-20 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating nfkb2 expression
WO2018130583A1 (en) 2017-01-13 2018-07-19 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating nfkb1 expression
US20190338286A1 (en) 2017-01-13 2019-11-07 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides for modulating rel expression
CA3052801A1 (en) 2017-02-06 2018-08-09 Nissan Chemical Corporation Single-stranded oligonucleotide
US11180756B2 (en) * 2017-03-09 2021-11-23 Ionis Pharmaceuticals Morpholino modified oligomeric compounds
WO2018164275A1 (ja) 2017-03-10 2018-09-13 国立研究開発法人国立成育医療研究センター アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび糖原病Ia型予防または治療用組成物
JOP20190215A1 (ar) 2017-03-24 2019-09-19 Ionis Pharmaceuticals Inc مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9
EP3385272A1 (en) * 2017-04-05 2018-10-10 Silence Therapeutics GmbH Further novel oligonucleotide-ligand conjugates
BR112019021359A2 (pt) 2017-04-11 2020-05-05 Arbutus Biopharma Corp moléculas, composições, compostos, métodos para administrar um sirna, para preparar um composto e para tratar uma infecção, composto ou sal, conjugado de galnac e uso de um composto
MA50278A (fr) 2017-04-18 2020-02-26 Alnylam Pharmaceuticals Inc Méthodes pour le traitement de sujets atteints d'une infection par le virus de l'hépatite b (vhb)
WO2018215049A1 (en) 2017-05-23 2018-11-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for galnac oligonucleotide conjugates
JP6952366B2 (ja) * 2017-05-26 2021-10-20 国立研究開発法人国立循環器病研究センター Pcsk9を標的としたアンチセンス核酸
US11603532B2 (en) 2017-06-02 2023-03-14 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods of use thereof
EP3599844A4 (en) * 2017-06-07 2021-01-13 University of Massachusetts ANTI-ADAM33 OLIGONUCLEOTIDES AND RELATED PROCESSES
EP3652317A1 (en) 2017-07-13 2020-05-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lactate dehydrogenase a (ldha) irna compositions and methods of use thereof
CN110997918A (zh) 2017-07-26 2020-04-10 日产化学株式会社 单链寡核苷酸
WO2019027009A1 (ja) * 2017-08-02 2019-02-07 協和発酵キリン株式会社 核酸複合体
WO2019027015A1 (ja) * 2017-08-02 2019-02-07 協和発酵キリン株式会社 核酸複合体
WO2019030313A2 (en) 2017-08-11 2019-02-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S OLIGONUCLEOTIDES FOR MODULATION OF UBE3C EXPRESSION
EP3668984A4 (en) 2017-08-18 2021-09-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. MODULATION OF THE NOTCH SIGNALING PATH FOR THE TREATMENT OF RESPIRATORY DISORDERS
WO2019038228A1 (en) 2017-08-22 2019-02-28 Roche Innovation Center Copenhagen A/S OLIGONUCLEOTIDES FOR MODULATION OF TOM1 EXPRESSION
EP4303321A2 (en) 2017-08-25 2024-01-10 Stoke Therapeutics, Inc. Antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
US10517889B2 (en) 2017-09-08 2019-12-31 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of SMAD7 expression
US20200270611A1 (en) * 2017-09-14 2020-08-27 Janssen Biopharma, Inc. Galnac derivatives
MX2020003608A (es) 2017-09-29 2020-09-25 Intellia Therapeutics Inc Composiciones y métodos para la edición del gen ttr y el tratamiento de la amiloidosis attr.
WO2019073018A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Roche Innovation Center Copenhagen A/S METHODS OF IDENTIFYING ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE IMPROVED OLIGONUCLEOTIDE PHOSPHOROTHIOATE STEREODEFINIS VARIANTS USING PARTIALLY STEREODEFINIS OLIGONUCLEOTIDE SUB LIBRARIES
IL272566B1 (en) 2017-10-16 2024-03-01 Hoffmann La Roche Nucleic acid molecule to reduce papd5 and papd7 mRNA to treat hepatitis b infection
SG11202002940QA (en) 2017-11-01 2020-04-29 Alnylam Pharmaceuticals Inc Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof
TWI809004B (zh) 2017-11-09 2023-07-21 美商Ionis製藥公司 用於降低snca表現之化合物及方法
EP3710587A1 (en) 2017-11-16 2020-09-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Kisspeptin 1 (kiss1) irna compositions and methods of use thereof
WO2019100039A1 (en) 2017-11-20 2019-05-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Serum amyloid p component (apcs) irna compositions and methods of use thereof
CN111050807B (zh) * 2017-12-01 2024-05-28 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
US11414665B2 (en) 2017-12-01 2022-08-16 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, composition and conjugate comprising the same, and preparation method and use thereof
WO2019105418A1 (zh) 2017-12-01 2019-06-06 苏州瑞博生物技术有限公司 双链寡核苷酸、含双链寡核苷酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
CN110945130B (zh) * 2017-12-01 2024-04-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
AU2018377716A1 (en) 2017-12-01 2020-04-09 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd Nucleic acid, composition and conjugate containing same, and preparation method and use
WO2019105403A1 (zh) * 2017-12-01 2019-06-06 苏州瑞博生物技术有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
US11660347B2 (en) 2017-12-01 2023-05-30 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, composition and conjugate containing same, preparation method, and use thereof
JP2021505175A (ja) 2017-12-11 2021-02-18 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス Fndc3bの発現を調節するためのオリゴヌクレオチド
WO2019115417A2 (en) 2017-12-12 2019-06-20 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating rb1 expression
EP3724206B1 (en) 2017-12-14 2023-06-28 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
US20200308588A1 (en) 2017-12-18 2020-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. High mobility group box-1 (hmgb1) irna compositions and methods of use thereof
WO2019126641A2 (en) 2017-12-21 2019-06-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of frataxin expression
JP2021507253A (ja) 2017-12-21 2021-02-22 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft Htra1 rnaアンタゴニストについてのコンパニオン診断
WO2019122277A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Novel thiophosphoramidites
JP7476101B2 (ja) 2017-12-22 2024-04-30 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス ホスホロジチオアートヌクレオシド間結合を含むギャップマーオリゴヌクレオチド
JP7476102B2 (ja) 2017-12-22 2024-04-30 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス ホスホロジチオアートヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチド
EP3677588A4 (en) * 2017-12-26 2020-11-25 Guangzhou Ribobio Co., Ltd. MODIFIED OLIGONUCLEOTIDES AND COMPOUND WHICH CAN BE USED FOR THE SYNTHESIS OF THEM
CN109957566B (zh) * 2017-12-26 2023-08-25 广州市锐博生物科技有限公司 修饰的寡核苷酸和可用于合成修饰的寡核苷酸的化合物
CN116375774A (zh) 2017-12-29 2023-07-04 苏州瑞博生物技术股份有限公司 缀合物及其制备方法和用途
WO2019140102A1 (en) * 2018-01-10 2019-07-18 Translate Bio Ma, Inc. Compositions and methods for facilitating delivery of synthetic nucleic acids to cells
US20210095274A1 (en) 2018-01-10 2021-04-01 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating pias4 expression
US20200362347A1 (en) 2018-01-12 2020-11-19 Bristol-Myers Squibb Company Antisense oligonucleotides targeting alpha-synuclein and uses thereof
KR20200109338A (ko) 2018-01-12 2020-09-22 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스 알파-시누클레인 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 이의 용도
JP2021510295A (ja) 2018-01-12 2021-04-22 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス Gsk3b発現を調節するためのオリゴヌクレオチド
BR112020013994A2 (pt) 2018-01-12 2020-12-08 Bristol-Myers Squibb Company Oligonucleotídeos antissenso que direcionam alfa-sinucleína e seus usos
PE20211242A1 (es) 2018-01-15 2021-07-09 Ionis Pharmaceuticals Inc Moduladores de la expresion dnm2
CN111615558A (zh) 2018-01-17 2020-09-01 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 用于调节erc1表达的寡核苷酸
WO2019141723A1 (en) 2018-01-18 2019-07-25 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting srebp1
WO2019145386A1 (en) 2018-01-26 2019-08-01 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides for modulating csnk1d expression
EP3752612A4 (en) 2018-02-12 2021-11-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. MODIFIED COMPOUNDS AND USES THEREOF
JP2021513851A (ja) 2018-02-14 2021-06-03 ディープ ゲノミクス インコーポレイテッドDeep Genomics Incorporated ウィルソン病に対するオリゴヌクレオチド療法
BR112020016347A2 (pt) 2018-02-21 2021-01-12 Bristol-Myers Squibb Company Oligonucleotídeos antisense de camk2d e seus usos
US11732260B2 (en) 2018-03-02 2023-08-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for the modulation of amyloid-β precursor protein
AU2019228607B2 (en) 2018-03-02 2024-03-07 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of IRF4 expression
JP6884268B2 (ja) * 2018-03-09 2021-06-09 第一三共株式会社 糖原病Ia型治療薬
US11661601B2 (en) 2018-03-22 2023-05-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating FMR1 expression
SG11202009680XA (en) 2018-04-05 2020-10-29 Hoffmann La Roche Use of fubp1 inhibitors for treating hepatitis b virus infection
CN112041440A (zh) 2018-04-11 2020-12-04 Ionis制药公司 Ezh2表达的调节剂
WO2019215067A1 (en) 2018-05-07 2019-11-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Massively parallel discovery methods for oligonucleotide therapeutics
JOP20200280A1 (ar) * 2018-05-09 2020-11-05 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير الوراثي عن fxi
MX2020011911A (es) 2018-05-09 2021-01-29 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos y metodos para reducir de la expresion de atxn3.
TW202016304A (zh) 2018-05-14 2020-05-01 美商阿尼拉製藥公司 血管收縮素原(AGT)iRNA組成物及其使用方法
AU2019287635A1 (en) 2018-06-14 2020-12-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for increasing STMN2 expression
UY38282A (es) 2018-06-27 2019-12-31 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos y métodos para la reducción de la expresión de lrrk2
KR20230143199A (ko) 2018-07-03 2023-10-11 에프. 호프만-라 로슈 아게 타우 발현을 조절하기 위한 올리고뉴클레오티드
WO2020007826A1 (en) 2018-07-05 2020-01-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting mbtps1
WO2020011744A2 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting cers5
WO2020011745A2 (en) 2018-07-11 2020-01-16 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Antisense oligonucleotides targeting cers6
SG11202100348SA (en) 2018-07-13 2021-02-25 Hoffmann La Roche Oligonucleotides for modulating rtel1 expression
AU2019310097A1 (en) 2018-07-25 2021-02-04 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing ATXN2 expression
US20210292358A1 (en) 2018-07-31 2021-09-23 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides comprising a phosphorotrithioate internucleoside linkage
EP3830101A1 (en) 2018-07-31 2021-06-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotides comprising a phosphorotrithioate internucleoside linkage
EP3833397A4 (en) 2018-08-08 2023-06-14 Arcturus Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND AGENTS AGAINST NON-ALCOHOLIC STEATOHEPATITIS
EP3833763A4 (en) 2018-08-10 2023-07-19 University of Massachusetts MODIFIED OLIGONUCLEOTIDES TARGETING SNPs
TW202023574A (zh) 2018-08-13 2020-07-01 美商阿尼拉製藥公司 B型肝炎病毒(HBV)dsRNA劑組合物及其使用方法
CN111655849B (zh) * 2018-08-21 2024-05-10 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的药物组合物和缀合物及其用途
US20220160870A1 (en) 2018-08-28 2022-05-26 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Neoantigen engineering using splice modulating compounds
CA3105385A1 (en) 2018-09-18 2020-03-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof
TW202023573A (zh) 2018-09-19 2020-07-01 美商Ionis製藥公司 Pnpla3表現之調節劑
US11896674B2 (en) 2018-09-30 2024-02-13 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. SiRNA conjugate, preparation method therefor and use thereof
EP3867382A4 (en) * 2018-10-18 2022-09-07 Murdoch University ANTISENSE THERAPY FOR PTP1B-RELATED DISEASES
US10913951B2 (en) 2018-10-31 2021-02-09 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Silencing of HNF4A-P2 isoforms with siRNA to improve hepatocyte function in liver failure
CN113286885A (zh) 2018-11-09 2021-08-20 诺华股份有限公司 用靶向apo(a)的经缀合的反义化合物降低心血管事件的风险的方法
TW202028222A (zh) 2018-11-14 2020-08-01 美商Ionis製藥公司 Foxp3表現之調節劑
JP2022509059A (ja) 2018-11-15 2022-01-20 アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド Irf5発現の調節因子
JP7455831B2 (ja) 2018-11-21 2024-03-26 アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド プリオン発現を低減するための化合物及び方法
US20220025367A1 (en) 2018-11-23 2022-01-27 Sanofi Novel rna compositions and methods for inhibiting angptl8
EP3888663A1 (en) 2018-11-30 2021-10-06 Kyowa Kirin Co., Ltd. Nucleic acid complex
EP3898977A1 (en) 2018-12-20 2021-10-27 Praxis Precision Medicines, Inc. Compositions and methods for the treatment of kcnt1 related disorders
GB201821269D0 (en) 2018-12-28 2019-02-13 Nippon Shinyaku Co Ltd Myostatin signal inhibitor
KR20210110839A (ko) * 2018-12-28 2021-09-09 쑤저우 리보 라이프 사이언스 컴퍼니, 리미티드 핵산, 핵산을 함유하는 조성물 및 접합체, 이의 제조 방법 및 용도
CN111377985B (zh) * 2018-12-29 2023-11-10 苏州瑞博生物技术股份有限公司 化合物和缀合物及其制备方法和用途
CN113330117B (zh) * 2019-01-18 2024-05-28 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
US11214803B2 (en) 2019-01-31 2022-01-04 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of YAP1 expression
BR112021016460A2 (pt) 2019-02-20 2021-10-13 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotídeo gapmer antissenso de fita simples, sal farmaceuticamente aceitável de um oligonucleotídeo, conjugado, composição farmacêutica e invenção
KR20210132681A (ko) 2019-02-20 2021-11-04 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스 신규 포스포라미디트
CN109799330B (zh) * 2019-02-22 2021-03-02 华中科技大学同济医学院附属同济医院 神经氨酸及神经氨酸酶抑制剂在慢性心力衰竭中的应用
CN113474633A (zh) 2019-02-26 2021-10-01 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 寡核苷酸配制方法
MX2021010152A (es) 2019-02-27 2021-09-14 Ionis Pharmaceuticals Inc Moduladores de la expresion de malat1.
WO2020172755A1 (en) * 2019-02-28 2020-09-03 Deep Genomics Incorporated Ligand clusters and methods of their use and preparation
JOP20210261A1 (ar) 2019-03-29 2023-01-30 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتعديل ube3a-ats
CA3132178A1 (en) 2019-04-02 2020-10-08 Aliye Seda Yilmaz-Elis Antisense oligonucleotides for immunotherapy
AU2020252374A1 (en) 2019-04-03 2021-11-11 Bristol-Myers Squibb Company ANGPTL2 antisense oligonucleotides and uses thereof
CN113286888B (zh) 2019-05-22 2023-12-22 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途
JP2022533419A (ja) 2019-05-22 2022-07-22 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 核酸、薬物組成物及び複合体ならびに調製方法と使用
CN113811613B (zh) 2019-05-22 2024-04-05 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途
CN113227376B (zh) * 2019-05-22 2024-04-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途
CN113891939B (zh) 2019-05-24 2024-04-02 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途
KR20220012284A (ko) 2019-05-24 2022-02-03 쑤저우 리보 라이프 사이언스 컴퍼니, 리미티드 핵산, 약학 조성물, 컨쥬게이트와 이의 제조 방법 및 용도
US20220235359A1 (en) 2019-05-24 2022-07-28 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, pharmaceutical composition, conjugate, preparation method, and use
EP3976791A4 (en) 2019-05-28 2023-10-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. COMPOUNDS AND METHODS FOR REDUCING FOOT EXPRESSION
BR112021023488A2 (pt) 2019-05-31 2022-01-18 Aligos Therapeutics Inc Oligonucleotídeos de gapmer modificados e métodos de uso
EP3801011A1 (en) 2019-06-04 2021-04-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ttr locus with a beta-slip mutation and methods of use
WO2020264055A1 (en) 2019-06-25 2020-12-30 Amgen Inc. Purification methods for carbohydrate-linked oligonucleotides
EP3956450A4 (en) 2019-07-26 2022-11-16 Ionis Pharmaceuticals, Inc. COMPOUNDS AND METHODS FOR MODULATION OF GFAP
WO2021022109A1 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. SERPIN FAMILY F MEMBER 2 (SERPINF2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
WO2021022108A2 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. CARBOXYPEPTIDASE B2 (CPB2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
WO2021030522A1 (en) 2019-08-13 2021-02-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. SMALL RIBOSOMAL PROTEIN SUBUNIT 25 (RPS25) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
JP2022544587A (ja) * 2019-08-15 2022-10-19 アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド 結合修飾オリゴマー化合物及びその使用
JP2022546040A (ja) 2019-08-27 2022-11-02 サノフイ Pcsk9を阻害するための組成物および方法
JP2022546055A (ja) 2019-08-29 2022-11-02 スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド 化合物、薬物複合体及びその調製方法と使用
EP4022062A1 (en) 2019-08-30 2022-07-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Neurofilament light chain (nfl) as a biomarker for transthyretin amyloidosis polyneuropathy
KR20220058578A (ko) 2019-09-03 2022-05-09 아크투루스 쎄라퓨틱스, 인크. 치료 활성 접합체의 아시알로당단백질 수용체 매개 전달
WO2021049504A1 (ja) * 2019-09-10 2021-03-18 第一三共株式会社 肝臓送達用GalNAc-オリゴヌクレオチドコンジュゲートおよび製造方法
CN114423430A (zh) 2019-09-20 2022-04-29 豪夫迈·罗氏有限公司 使用核心蛋白别构调节剂治疗hbv感染的方法
EP4045062A1 (en) 2019-10-14 2022-08-24 Astrazeneca AB Modulators of pnpla3 expression
EP4045652A1 (en) 2019-10-18 2022-08-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Solute carrier family member irna compositions and methods of use thereof
AU2020369515A1 (en) 2019-10-22 2022-04-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complement component C3 iRNA compositions and methods of use thereof
TW202132567A (zh) 2019-11-01 2021-09-01 美商阿尼拉製藥公司 亨汀頓蛋白(HTT)iRNA劑組成物及其使用方法
KR20220115946A (ko) 2019-11-13 2022-08-19 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 안지오텐시노겐 (agt) 관련 장애를 치료하기 위한 방법 및 조성물
WO2021102373A1 (en) 2019-11-22 2021-05-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Ataxin3 (atxn3) rnai agent compositions and methods of use thereof
CN112876534B (zh) * 2019-11-29 2024-02-09 苏州瑞博生物技术股份有限公司 肝靶向化合物及缀合物
AU2020402885A1 (en) 2019-12-13 2022-06-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Human chromosome 9 open reading frame 72 (C9orf72) iRNA agent compositions and methods of use thereof
WO2021126734A1 (en) 2019-12-16 2021-06-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Patatin-like phospholipase domain containing 3 (pnpla3) irna compositions and methods of use thereof
CN111041025B (zh) 2019-12-17 2021-06-18 深圳市瑞吉生物科技有限公司 基于结合N-乙酰半乳糖胺多肽的mRNA靶向分子及其制备方法
CN114867856A (zh) 2019-12-19 2022-08-05 豪夫迈·罗氏有限公司 Saraf抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途
WO2021122910A1 (en) 2019-12-19 2021-06-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of sbds inhibitors for treating hepatitis b virus infection
WO2021122921A1 (en) 2019-12-19 2021-06-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of cops3 inhibitors for treating hepatitis b virus infection
EP4077667A1 (en) 2019-12-19 2022-10-26 F. Hoffmann-La Roche AG Use of sept9 inhibitors for treating hepatitis b virus infection
EP4077668A1 (en) 2019-12-19 2022-10-26 F. Hoffmann-La Roche AG Use of scamp3 inhibitors for treating hepatitis b virus infection
TW202137987A (zh) 2019-12-24 2021-10-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於治療hbv之靶向hbv的治療性寡核苷酸及tlr7促效劑之醫藥組合
WO2021130270A1 (en) 2019-12-24 2021-07-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical combination of antiviral agents targeting hbv and/or an immune modulator for treatment of hbv
JP2023509869A (ja) 2019-12-24 2023-03-10 エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー Tlr7アゴニストを用いたウイルス感染症の処置方法
WO2021153687A1 (ja) * 2020-01-30 2021-08-05 エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 核酸複合体及びそれを含む医薬組成物
WO2021163066A1 (en) 2020-02-10 2021-08-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for silencing vegf-a expression
WO2021167841A1 (en) 2020-02-18 2021-08-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Apolipoprotein c3 (apoc3) irna compositions and methods of use thereof
BR112022016238A2 (pt) 2020-02-28 2022-10-11 Ionis Pharmaceuticals Inc Compostos e métodos para modular smn2
EP4114947A1 (en) 2020-03-05 2023-01-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing complement component c3-associated diseases
CA3174725A1 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof
JP2023516748A (ja) 2020-03-06 2023-04-20 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド トランスサイレチン(ttr)の発現を阻害するための組成物および方法
EP4121534A1 (en) 2020-03-18 2023-01-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating subjects having a heterozygous alanine-glyoxylate aminotransferase gene (agxt) variant
AU2021244329A1 (en) 2020-03-23 2022-09-29 Amgen Inc. Monoclonal antibodies to chemically-modified nucleic acids and uses thereof
TW202204615A (zh) 2020-03-26 2022-02-01 美商阿尼拉製藥公司 冠狀病毒iRNA組成物及其使用方法
US20230113556A1 (en) * 2020-03-26 2023-04-13 National Cerebral And Cardiovascular Center Antisense nucleic acid targeting apoc3
KR20230008729A (ko) 2020-04-06 2023-01-16 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 Myoc 발현을 사일런싱하기 위한 조성물 및 방법
CA3179678A1 (en) 2020-04-07 2021-10-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for silencing scn9a expression
EP4133077A1 (en) 2020-04-07 2023-02-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Transmembrane serine protease 2 (tmprss2) irna compositions and methods of use thereof
WO2021206917A1 (en) 2020-04-07 2021-10-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. ANGIOTENSIN-CONVERTING ENZYME 2 (ACE2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
BR112022021813A2 (pt) 2020-04-27 2023-01-17 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composições de agente de apolipoproteína e (apoe) irna e métodos de uso das mesmas
CN111575279A (zh) * 2020-04-27 2020-08-25 江苏为真生物医药技术股份有限公司 利用asgpr小分子配体特异性捕获肝细胞外囊泡或循环肿瘤细胞的方法
JP2023523790A (ja) 2020-04-30 2023-06-07 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド 補体因子B(CFB)iRNA組成物およびその使用方法
JP2023524065A (ja) 2020-05-01 2023-06-08 アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド Atxn1を調節するための化合物及び方法
WO2021231107A1 (en) 2020-05-11 2021-11-18 Stoke Therapeutics, Inc. Opa1 antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
EP4150090A1 (en) 2020-05-15 2023-03-22 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of otoferlin (otof)
WO2021231679A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of gap junction protein beta 2 (gjb2)
WO2021231698A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate lyase (asl)
WO2021231691A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of retinoschisin 1 (rsi)
EP4150077A1 (en) 2020-05-15 2023-03-22 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of transmembrane channel-like protein 1 (tmc1)
EP4150086A1 (en) 2020-05-15 2023-03-22 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of leucine rich repeat kinase 2 (lrrk2)
CA3162416C (en) 2020-05-15 2023-07-04 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate synthetase (ass1)
EP4150076A1 (en) 2020-05-15 2023-03-22 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for the adar-mediated editing of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2)
US11408000B2 (en) 2020-06-03 2022-08-09 Triplet Therapeutics, Inc. Oligonucleotides for the treatment of nucleotide repeat expansion disorders associated with MSH3 activity
EP4162050A1 (en) 2020-06-09 2023-04-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai compositions and methods of use thereof for delivery by inhalation
WO2021249484A1 (zh) * 2020-06-10 2021-12-16 南京明德新药研发有限公司 缀合基团及其缀合物
IL299063A (en) 2020-06-18 2023-02-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Xanthine dehydrogenase (xdh) RNA compositions and methods of using them
AR122731A1 (es) 2020-06-26 2022-10-05 Hoffmann La Roche Oligonucleótidos mejorados para modular la expresión de fubp1
KR20230029837A (ko) 2020-06-29 2023-03-03 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 Plp1을 조절하기 위한 화합물 및 방법
CN111744019B (zh) 2020-07-01 2023-08-04 深圳瑞吉生物科技有限公司 基于甘露糖的mRNA靶向递送系统及其应用
WO2022011262A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and compositions for treating epilepsy
KR20230046319A (ko) * 2020-08-13 2023-04-05 암젠 인크 MARC1 발현을 억제하기 위한 RNAi 작제물 및 방법
JP2023538630A (ja) 2020-08-21 2023-09-08 エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー B型肝炎ウイルス感染症を処置するためのa1cf阻害剤の使用
WO2022066847A1 (en) 2020-09-24 2022-03-31 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dipeptidyl peptidase 4 (dpp4) irna compositions and methods of use thereof
TW202229552A (zh) 2020-10-05 2022-08-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 G蛋白-偶合受體75(GPR75)iRNA組成物及其使用方法
CN116887842A (zh) 2020-10-16 2023-10-13 赛诺菲 用于抑制angptl3的新型rna组合物和方法
WO2022079221A1 (en) 2020-10-16 2022-04-21 Sanofi Rna compositions and methods for inhibiting lipoprotein(a)
EP4232582A1 (en) 2020-10-23 2023-08-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Mucin 5b (muc5b) irna compositions and methods of use thereof
AU2021380809A1 (en) 2020-11-13 2023-06-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. COAGULATION FACTOR V (F5) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
TW202227101A (zh) 2020-11-18 2022-07-16 美商Ionis製藥公司 用於調節血管收縮素原表現之化合物及方法
WO2022106695A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 Alpha Anomeric Sas Nucleic acid duplexes
WO2022125490A1 (en) 2020-12-08 2022-06-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Coagulation factor x (f10) irna compositions and methods of use thereof
GB2603454A (en) 2020-12-09 2022-08-10 Ucl Business Ltd Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
WO2022136466A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Argonaute RNA Limited Treatment of cardiovascular disease
CN116669746A (zh) 2020-12-29 2023-08-29 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的药物组合物与siRNA缀合物及制备方法和用途
EP4274896A1 (en) 2021-01-05 2023-11-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Complement component 9 (c9) irna compositions and methods of use thereof
WO2022162157A1 (en) * 2021-01-30 2022-08-04 E-Therapeutics Plc Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
AU2022214281A1 (en) * 2021-01-30 2023-07-27 E-Therapeutics Plc Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
WO2022162161A1 (en) * 2021-01-30 2022-08-04 E-Therapeutics Plc Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
AU2022215065A1 (en) * 2021-01-30 2023-07-27 E-Therapeutics Plc Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof
TW202246500A (zh) 2021-02-02 2022-12-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於抑制 rtel1 表現之增強型寡核苷酸
KR20230146048A (ko) 2021-02-12 2023-10-18 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 1(sod1) irna 조성물 및 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 1- (sod1-) 관련 신경퇴행성 질환을 치료하거나 예방하기 위한 이의 사용 방법
EP4294449A1 (en) * 2021-02-18 2023-12-27 Oneglobe Holdings Limited Compositions for conjugating oligonucleotides and carbohydrates
EP4298220A1 (en) 2021-02-25 2024-01-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Prion protein (prnp) irna compositions and methods of use thereof
JP2024515423A (ja) 2021-02-26 2024-04-10 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド ケトヘキソキナーゼ(KHK)iRNA組成物およびその使用方法
CA3212128A1 (en) 2021-03-04 2022-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof
PE20240696A1 (es) 2021-03-08 2024-04-10 Servier Lab Oligonucleotidos antisentido para inhibir la expresion de la alfa-sinucleina
WO2022189861A1 (en) 2021-03-08 2022-09-15 Tollys Carbohydrate conjugates of tlr3 ligands and uses thereof
EP4305169A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycogen synthase kinase 3 alpha (gsk3a) irna compositions and methods of use thereof
KR20230162024A (ko) 2021-03-29 2023-11-28 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 헌팅틴(HTT) iRNA 제제 조성물 및 이의 사용 방법
WO2022212153A1 (en) 2021-04-01 2022-10-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Proline dehydrogenase 2 (prodh2) irna compositions and methods of use thereof
IL307926A (en) 2021-04-26 2023-12-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Transmembrane assemblies, serine 6 ((TMPRSS6 IRNA) and methods of using them
JP2024519293A (ja) 2021-04-29 2024-05-10 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド シグナル伝達兼転写活性化因子6(STAT6)iRNA組成物およびその使用方法
WO2022232650A1 (en) * 2021-04-30 2022-11-03 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing agt expression
WO2022245583A1 (en) 2021-05-18 2022-11-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Sodium-glucose cotransporter-2 (sglt2) irna compositions and methods of use thereof
EP4341405A1 (en) 2021-05-20 2024-03-27 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for adar-mediated editing
WO2022256283A2 (en) 2021-06-01 2022-12-08 Korro Bio, Inc. Methods for restoring protein function using adar
TW202317762A (zh) 2021-06-02 2023-05-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 含有類PATATIN磷脂酶結構域3(PNPLA3)的iRNA組成物及其使用方法
BR112023025224A2 (pt) 2021-06-04 2024-02-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc Quadro de leitura aberto 72 do cromossomo humano 9 (c9orf72) composições de agente de irna e métodos de uso dos mesmos
AR126070A1 (es) 2021-06-08 2023-09-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones y métodos para tratar o prevenir la enfermedad de stargardt y/o trastornos asociados con la proteína transportadora de retinol 4 (rbp4)
EP4355759A1 (en) 2021-06-18 2024-04-24 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for reducing ifnar1 expression
KR20240040729A (ko) 2021-06-23 2024-03-28 유니버시티 오브 매사추세츠 자간전증 및 기타 혈관신생 질환의 치료를 위한 최적화된 항-flt1 올리고뉴클레오타이드 화합물
CN117858948A (zh) * 2021-06-24 2024-04-09 伊莱利利公司 新的治疗剂递送部分及其用途
KR20240023630A (ko) * 2021-06-24 2024-02-22 일라이 릴리 앤드 캄파니 신규 rna 치료제 및 그의 용도
WO2023278410A1 (en) 2021-06-29 2023-01-05 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for adar-mediated editing
US20230194709A9 (en) 2021-06-29 2023-06-22 Seagate Technology Llc Range information detection using coherent pulse sets with selected waveform characteristics
KR20240026203A (ko) 2021-06-30 2024-02-27 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 안지오텐시노겐(agt)-관련 장애를 치료하는 방법 및 조성물
AU2022304946A1 (en) * 2021-07-02 2024-02-15 Tuojie Biotech (Shanghai) Co., Ltd. Nucleic acid ligand and conjugate thereof, and preparation method therefor and use thereof
JPWO2023282346A1 (ja) 2021-07-08 2023-01-12
IL310003A (en) 2021-07-08 2024-03-01 Nippon Shinyaku Co Ltd A substance that lowers nephrotoxicity
EP4368176A1 (en) 2021-07-08 2024-05-15 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Nephrotoxicity reducing agent
TW202333748A (zh) 2021-07-19 2023-09-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 用於處置具有或有風險發展非原發性高草酸鹽尿疾病或病症的個體的方法及組成物
AU2022316139A1 (en) 2021-07-23 2024-01-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Beta-catenin (ctnnb1) irna compositions and methods of use thereof
EP4377458A1 (en) 2021-07-29 2024-06-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa reductase (hmgcr) irna compositions and methods of use thereof
CA3226651A1 (en) * 2021-08-03 2023-02-09 Kallanthottathil G. Rajeev Compositions and methods for targeted rna delivery
CN117795074A (zh) 2021-08-03 2024-03-29 阿尔尼拉姆医药品有限公司 转甲状腺素蛋白(TTR)iRNA组合物和其使用方法
WO2023014765A1 (en) 2021-08-04 2023-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. iRNA COMPOSITIONS AND METHODS FOR SILENCING ANGIOTENSINOGEN (AGT)
TW202334413A (zh) 2021-08-13 2023-09-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 第十二因子(F12)iRNA組成物及其使用方法
WO2023041508A2 (en) 2021-09-14 2023-03-23 Argonaute RNA Limited Treatment of cardiovascular disease
WO2023044370A2 (en) 2021-09-17 2023-03-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Irna compositions and methods for silencing complement component 3 (c3)
KR20240056619A (ko) * 2021-09-18 2024-04-30 제노바 테라퓨틱스 컴퍼니 리미티드 Lpa 억제제 및 이의 용도
CA3232420A1 (en) 2021-09-20 2023-03-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Inhibin subunit beta e (inhbe) modulator compositions and methods of use thereof
CN116916963A (zh) * 2021-09-23 2023-10-20 上海舶望制药有限公司 具有二胺支架的用于靶向递送治疗剂的多价配体簇
CA3234835A1 (en) 2021-10-22 2023-04-27 Korro Bio, Inc. Methods and compositions for disrupting nrf2-keap1 protein interaction by adar mediated rna editing
TW202333749A (zh) 2021-10-29 2023-09-01 美商艾拉倫製藥股份有限公司 補體因子b(cfb)irna組成物及其使用方法
WO2023076450A2 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. HUNTINGTIN (HTT) iRNA AGENT COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
AU2022384619A1 (en) 2021-11-11 2024-04-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical combinations for treatment of hbv
WO2023102188A1 (en) * 2021-12-03 2023-06-08 Quralis Corporation Gapmer antisense oligonucleotides with modified backbone chemistries
GB202117758D0 (en) 2021-12-09 2022-01-26 Ucl Business Ltd Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders
WO2023109935A1 (zh) * 2021-12-16 2023-06-22 上海拓界生物医药科技有限公司 一种dsRNA、其制备方法及应用
WO2023109940A1 (zh) * 2021-12-16 2023-06-22 上海拓界生物医药科技有限公司 靶向lpa的sirna及缀合物
WO2023111210A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination of oligonucleotides for modulating rtel1 and fubp1
WO2023138659A1 (zh) * 2022-01-20 2023-07-27 上海拓界生物医药科技有限公司 一种dsRNA、其应用及制备方法
TW202345865A (zh) * 2022-01-24 2023-12-01 大陸商上海舶望製藥有限公司 抑制LPA(Apo(a))蛋白表達的組合物和方法
WO2023141314A2 (en) 2022-01-24 2023-07-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Heparin sulfate biosynthesis pathway enzyme irna agent compositions and methods of use thereof
CN116917477B (zh) * 2022-01-30 2024-04-09 大睿生物医药科技(上海)有限公司 含有n-乙酰半乳糖胺的靶向配体
US20240167040A1 (en) 2022-02-21 2024-05-23 Hoffmann-La Roche Inc. Antisense oligonucleotide
CN114703184A (zh) * 2022-03-11 2022-07-05 厦门甘宝利生物医药有限公司 Lpa抑制剂及其用途
WO2023178144A2 (en) 2022-03-16 2023-09-21 Empirico Inc. Galnac compositions for improving sirna bioavailability
CN115028670B (zh) * 2022-06-24 2023-07-28 四川大学华西医院 一种n-乙酰基-d-半乳糖胺三聚体前体的制备方法
WO2024001172A1 (en) * 2022-06-27 2024-01-04 Ractigen Therapeutics Oligonucleotide modulators activating complement factor h expression
WO2024013361A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Proqr Therapeutics Ii B.V. Oligonucleotides for adar-mediated rna editing and use thereof
WO2024013360A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Proqr Therapeutics Ii B.V. Chemically modified oligonucleotides for adar-mediated rna editing
CN116814621A (zh) * 2022-08-05 2023-09-29 厦门甘宝利生物医药有限公司 一种抑制apoc3基因表达的rna抑制剂及其应用
WO2024039776A2 (en) 2022-08-18 2024-02-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Universal non-targeting sirna compositions and methods of use thereof
WO2024059165A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 17b-hydroxysteroid dehydrogenase type 13 (hsd17b13) irna compositions and methods of use thereof
WO2024098061A2 (en) 2022-11-04 2024-05-10 Genkardia Inc. Oligonucleotide-based therapeutics targeting cyclin d2 for the treatment of heart failure
WO2024108217A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Genkardia Inc. Methods and compositions for preventing, treating, or reversing cardiac diastolic dysfunction
CN116925160B (zh) * 2023-09-15 2023-12-08 天津全和诚科技有限责任公司 一种GalNAc含糖环中间体及其制备方法
CN117568313B (zh) * 2024-01-15 2024-04-26 上海贝斯昂科生物科技有限公司 基因编辑组合物及其用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012037254A1 (en) 2010-09-15 2012-03-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. MODIFIED iRNA AGENTS
WO2012145697A1 (en) 2011-04-21 2012-10-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
WO2012177784A2 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compostions and methods of use thereof

Family Cites Families (371)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US4668777A (en) 1981-03-27 1987-05-26 University Patents, Inc. Phosphoramidite nucleoside compounds
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
DE3329892A1 (de) 1983-08-18 1985-03-07 Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
USRE34036E (en) 1984-06-06 1992-08-18 National Research Development Corporation Data transmission using a transparent tone-in band system
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US4751219A (en) 1985-02-05 1988-06-14 Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
EP0260032B1 (en) 1986-09-08 1994-01-26 Ajinomoto Co., Inc. Compounds for the cleavage at a specific position of RNA, oligomers employed for the formation of said compounds, and starting materials for the synthesis of said oligomers
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
GB8712540D0 (en) * 1987-05-28 1987-07-01 Ucb Sa Expression of human proapolipoprotein a-i
EP0366685B1 (en) 1987-06-24 1994-10-19 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Nucleoside derivatives
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
JP3019994B2 (ja) 1987-11-30 2000-03-15 ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション 新規なオリゴデオキシヌクレオチド、それを使用した標的遺伝子の発現をブロックする方法、及び新規なオリゴデオキシヌクレオチド並びにそれを使用した標的遺伝子の発現を阻止する方法
US5403711A (en) 1987-11-30 1995-04-04 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid hybridization and amplification method for detection of specific sequences in which a complementary labeled nucleic acid probe is cleaved
EP0406309A4 (en) 1988-03-25 1992-08-19 The University Of Virginia Alumni Patents Foundation Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5194599A (en) 1988-09-23 1993-03-16 Gilead Sciences, Inc. Hydrogen phosphonodithioate compositions
US5256775A (en) 1989-06-05 1993-10-26 Gilead Sciences, Inc. Exonuclease-resistant oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5721218A (en) 1989-10-23 1998-02-24 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides with inverted polarity
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
DE69034150T2 (de) 1989-10-24 2005-08-25 Isis Pharmaceuticals, Inc., Carlsbad 2'-Modifizierte Oligonukleotide
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US6005087A (en) 1995-06-06 1999-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5859221A (en) 1990-01-11 1999-01-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US7101993B1 (en) 1990-01-11 2006-09-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides containing 2′-O-modified purines
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5623065A (en) 1990-08-13 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped 2' modified oligonucleotides
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
US5220007A (en) 1990-02-15 1993-06-15 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of RNA and production of encoded polypeptides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
DK0455905T3 (da) 1990-05-11 1998-12-07 Microprobe Corp Dipsticks til nukleinsyrehybridiseringsassays og fremgangsmåde til kovalent immobilisering af oligonukleotider
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5223618A (en) 1990-08-13 1993-06-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5378825A (en) 1990-07-27 1995-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
ATE154246T1 (de) 1990-07-27 1997-06-15 Isis Pharmaceuticals Inc Nuklease resistente, pyrimidin modifizierte oligonukleotide, die die gen-expression detektieren und modulieren
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5386023A (en) 1990-07-27 1995-01-31 Isis Pharmaceuticals Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling
DK0541722T3 (da) 1990-08-03 1996-04-22 Sterling Winthrop Inc Forbindelser og fremgangsmåder til inhibering af genekspression
US5177196A (en) 1990-08-16 1993-01-05 Microprobe Corporation Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
JPH06505704A (ja) 1990-09-20 1994-06-30 ギリアド サイエンシズ,インコーポレイテッド 改変ヌクレオシド間結合
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US6582908B2 (en) 1990-12-06 2003-06-24 Affymetrix, Inc. Oligonucleotides
US5948903A (en) 1991-01-11 1999-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 3-deazapurines
US5672697A (en) 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
EP0538194B1 (de) 1991-10-17 1997-06-04 Novartis AG Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
EP0637965B1 (en) 1991-11-26 2002-10-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5792608A (en) 1991-12-12 1998-08-11 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
US5700922A (en) 1991-12-24 1997-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
DK1695979T3 (da) * 1991-12-24 2011-10-10 Isis Pharmaceuticals Inc Gappede modificerede oligonukleotider
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
CA2140542A1 (en) 1992-07-27 1994-02-03 Abeysingle Padmapriya Oligonucleotide alkylphosphonothioates
JPH08504559A (ja) 1992-12-14 1996-05-14 ハネウエル・インコーポレーテッド 個別に制御される冗長巻線を有するモータシステム
DK0677056T3 (da) 1993-01-25 1996-08-05 Hybridon Inc Oligonukleotid-alkylphosphonater og -alkylphosphonothioater
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304620D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Compounds
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
CA2159631A1 (en) 1993-03-30 1994-10-13 Sanofi Acyclic nucleoside analogs and oligonucleotide sequences containing them
ATE160572T1 (de) 1993-03-31 1997-12-15 Sanofi Sa Oligonucleotide mit amidverkettungen die phosphoesterverkettungen einsetzen
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5801154A (en) 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
NZ278490A (en) 1993-12-09 1998-03-25 Univ Jefferson Chimeric polynucleotide with both ribo- and deoxyribonucleotides in one strand and deoxyribonucleotides in a second strand
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5728518A (en) 1994-01-12 1998-03-17 The Immune Response Corporation Antiviral poly-and oligonucleotides
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US5646269A (en) 1994-04-28 1997-07-08 Gilead Sciences, Inc. Method for oligonucleotide analog synthesis
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US5599706A (en) 1994-09-23 1997-02-04 Stinchcomb; Dan T. Ribozymes targeted to apo(a) mRNA
US5681940A (en) 1994-11-02 1997-10-28 Icn Pharmaceuticals Sugar modified nucleosides and oligonucleotides
US6172045B1 (en) 1994-12-07 2001-01-09 Neorx Corporation Cluster clearing agents
US6908903B1 (en) 1994-12-07 2005-06-21 Aletheon Pharmaceuticals, Inc. Cluster clearing agents
US5652356A (en) 1995-08-17 1997-07-29 Hybridon, Inc. Inverted chimeric and hybrid oligonucleotides
US20030119724A1 (en) 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
JP2000501414A (ja) 1995-11-22 2000-02-08 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 生体分子の細胞取り込みを高めるリガンド
US5998203A (en) 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
WO1998013381A1 (fr) 1996-09-26 1998-04-02 Ajinomoto Co., Inc. Proteines modifiees physiologiquement actives et compositions medicamenteuses les contenant
USRE44779E1 (en) 1997-03-07 2014-02-25 Santaris Pharma A/S Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogues
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
NZ503765A (en) 1997-09-12 2002-04-26 Exiqon As Bi-cyclic and tri-cyclic nucleotide analogues
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US20040171564A1 (en) 1997-11-20 2004-09-02 Honkanen Richard E. Antisense oligonucleotide modulation of human serine/threonine protein phosphatase gene expression
US20030228597A1 (en) 1998-04-13 2003-12-11 Cowsert Lex M. Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation
US6300319B1 (en) 1998-06-16 2001-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted oligonucleotide conjugates
US6043352A (en) 1998-08-07 2000-03-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides
WO2000010599A2 (en) 1998-08-19 2000-03-02 North American Vaccine, Inc. IMMUNOGENIC β-PROPIONAMIDO-LINKED POLYSACCHARIDE PROTEIN CONJUGATE USEFUL AS A VACCINE PRODUCED USING AN N-ACRYLOYLATED POLYSACCHARIDE
RU2249463C2 (ru) * 1998-08-19 2005-04-10 Бакстер Хелфкэа С.А. Иммуногенный конъюгат бета-пропионамид-связанного полисахарида с белком, использующийся в качестве вакцины
US6166239A (en) 1998-09-04 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide protecting groups
ID30093A (id) 1999-02-12 2001-11-01 Sankyo Co Analog-analog nukleosida dan oligonukleotida baru
US20030170249A1 (en) 1999-02-19 2003-09-11 Hakomori Sen-Itiroh Vaccines directed to cancer-associated carbohydrate antigens
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
US6159694A (en) 1999-04-08 2000-12-12 Isis Pharmaceuticals Inc. Antisense modulation of stat3 expression
US7098192B2 (en) 1999-04-08 2006-08-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of STAT3 expression
KR20070118315A (ko) 1999-04-21 2007-12-14 와이어쓰 폴리뉴클레오티드 서열의 기능을 억제하기 위한 조성물
JP2002543214A (ja) 1999-05-04 2002-12-17 エクシコン エ/エス L−リボ−lna類縁体
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
US6383812B1 (en) 1999-05-28 2002-05-07 Academia Sinica Anti liver disease drug R-YEEE and method of synthesizing branched galactose-terminal glycoproteins
US20080281041A1 (en) 1999-06-07 2008-11-13 Rozema David B Reversibly Masked Polymers
US8541548B2 (en) 1999-06-07 2013-09-24 Arrowhead Madison Inc. Compounds and methods for reversible modification of biologically active molecules
US6656730B1 (en) 1999-06-15 2003-12-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs
EP1210363A2 (en) 1999-07-16 2002-06-05 Hyseq, Inc. Novel angiopoietin materials and methods
JP4151751B2 (ja) 1999-07-22 2008-09-17 第一三共株式会社 新規ビシクロヌクレオシド類縁体
DE19935303A1 (de) * 1999-07-28 2001-02-08 Aventis Pharma Gmbh Oligonukleotide zur Inhibierung der Expression von humanem eg5
US20020082227A1 (en) 1999-09-30 2002-06-27 Scott Henry Use of oligonucleotides for inhibition of complement activation
US20050112118A1 (en) 1999-12-02 2005-05-26 Myriad Genetics, Incorporated Compositions and methods for treating inflammatory disorders
KR20020062652A (ko) 1999-12-09 2002-07-26 상꾜 가부시키가이샤 고지혈증의 치료 또는 예방제의 시험방법
AU2698301A (en) 1999-12-30 2001-07-16 K.U. Leuven Research And Development Cyclohexene nucleic acids
US20020055479A1 (en) 2000-01-18 2002-05-09 Cowsert Lex M. Antisense modulation of PTP1B expression
US6602857B1 (en) 2000-01-18 2003-08-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US7179796B2 (en) 2000-01-18 2007-02-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US6261840B1 (en) 2000-01-18 2001-07-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US7491805B2 (en) 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US8202979B2 (en) 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
US7833992B2 (en) 2001-05-18 2010-11-16 Merck Sharpe & Dohme Conjugates and compositions for cellular delivery
AU2001241541A1 (en) 2000-02-17 2001-08-27 Millennium Predictive Medicine, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of human prostate cancer
WO2002018388A1 (fr) 2000-08-29 2002-03-07 Takeshi Imanishi Analogues de nucleosides et derives d'oligonucleotides renfermant ces analogues
US6426220B1 (en) 2000-10-30 2002-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of calreticulin expression
AU2002217980A1 (en) 2000-12-01 2002-06-11 Cell Works Inc. Conjugates of glycosylated/galactosylated peptide
WO2002087541A1 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Protiva Biotherapeutics Inc. Lipid-based formulations for gene transfer
EP1403367A4 (en) 2001-06-08 2005-08-17 Sankyo Co A MEDICAMENT TEST METHOD FOR TREATING OR PREVENTING DISEASES SUCH AS HYPERLIPEMIA
US20030175906A1 (en) 2001-07-03 2003-09-18 Muthiah Manoharan Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
CA2452458A1 (en) 2001-07-03 2003-01-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20030158403A1 (en) 2001-07-03 2003-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US6964950B2 (en) 2001-07-25 2005-11-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of C-reactive protein expression
US7425545B2 (en) * 2001-07-25 2008-09-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of C-reactive protein expression
US7227014B2 (en) * 2001-08-07 2007-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of apolipoprotein (a) expression
US7259150B2 (en) * 2001-08-07 2007-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein (a) expression
WO2003014397A1 (en) 2001-08-09 2003-02-20 Biomedlab Corporation Probe for detection of enteric virus detection kit and method for enteric virus with the same
AU2002334307A1 (en) 2001-09-04 2003-03-18 Exiqon A/S Novel lna compositions and uses thereof
US7439043B2 (en) 2001-10-10 2008-10-21 Neose Technologies, Inc. Galactosyl nucleotide sugars
CN1615440A (zh) 2001-11-16 2005-05-11 杰南技术公司 含有血管生成素-样蛋白质3angptl3的组合物及其使用方法
US20100240730A1 (en) 2002-02-20 2010-09-23 Merck Sharp And Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
WO2004011624A2 (en) 2002-07-31 2004-02-05 Nucleonics, Inc. Double stranded rna structures and constructs, and methods for generating and using the same
US8729036B2 (en) 2002-08-07 2014-05-20 University Of Massachusetts Compositions for RNA interference and methods of use thereof
WO2004024757A2 (en) 2002-09-11 2004-03-25 Santaris Pharma A/S Modified pna molecules
CA2502649A1 (en) 2002-10-18 2004-04-29 Nucleonics Inc. Double-stranded rna structures and constructs, and methods for generating and using the same
CA2504694C (en) 2002-11-05 2013-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
EP1560840B1 (en) 2002-11-05 2015-05-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
US7511131B2 (en) 2002-11-13 2009-03-31 Genzyme Corporation Antisense modulation of apolipoprotein B expression
US20060009410A1 (en) 2002-11-13 2006-01-12 Crooke Rosanne M Effects of apolipoprotein B inhibition on gene expression profiles in animals
JP4986109B2 (ja) 2002-11-13 2012-07-25 ジェンザイム・コーポレーション アポリポタンパク質b発現のアンチセンス調節
AU2003295600A1 (en) 2002-11-14 2004-06-15 Dharmacon, Inc. Functional and hyperfunctional sirna
US6673661B1 (en) 2002-12-20 2004-01-06 Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. Self-aligned method for forming dual gate thin film transistor (TFT) device
AU2003299818A1 (en) 2002-12-20 2004-07-22 Applera Corporation Genetic polymorphisms associated with myocardial infarction, methods of detection and uses thereof
JP4152955B2 (ja) 2003-01-09 2008-09-17 ポステック・ファウンデーション 新規フォスフォアミダイト化合物
WO2004072046A2 (en) 2003-02-12 2004-08-26 Carex S.A. Quinoline derivatives and their use for modulation of lxr activity
US7803781B2 (en) 2003-02-28 2010-09-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of growth hormone receptor expression and insulin-like growth factor expression
CA2518475C (en) * 2003-03-07 2014-12-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Irna agents comprising asymmetrical modifications
JP2006522158A (ja) * 2003-04-03 2006-09-28 アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド iRNA複合体
US7598227B2 (en) 2003-04-16 2009-10-06 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of apolipoprotein C-III expression
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
EP2666858A1 (en) 2003-04-17 2013-11-27 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Modified iRNA agents
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
US7750142B2 (en) 2003-04-28 2010-07-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of glucagon receptor expression
US7399853B2 (en) 2003-04-28 2008-07-15 Isis Pharmaceuticals Modulation of glucagon receptor expression
WO2004101619A1 (ja) 2003-05-15 2004-11-25 Shionogi Co., Ltd. 機能的糖ペプチドの合理的設計および合成
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
ATE555118T1 (de) 2003-08-28 2012-05-15 Takeshi Imanishi Neue synthetische nukleidsäuren vom typ mit quervernetzter n-o-bindung
NZ545134A (en) 2003-09-18 2009-06-26 Lilly Co Eli Modulation of eIF4E expression
CA2538252C (en) 2003-09-18 2014-02-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-thionucleosides and oligomeric compounds
US7959919B2 (en) 2003-11-19 2011-06-14 Novelmed Therapeutics, Inc. Method of inhibiting factor B-mediated complement activation
WO2005065686A1 (en) 2004-01-07 2005-07-21 Adipogen Pharmaceuticals Pty Limited Differentiation modulating agents and uses therefor
EP2363480A3 (en) 2004-01-20 2015-10-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of glucocorticoid receptor expression
US20050244869A1 (en) 2004-04-05 2005-11-03 Brown-Driver Vickie L Modulation of transthyretin expression
WO2005097155A1 (ja) 2004-04-08 2005-10-20 Takara Bio Inc. 神経突起伸長誘導剤
EP1752536A4 (en) 2004-05-11 2008-04-16 Alphagen Co Ltd POLYNUCLEOTIDE CAUSING RNA INTERFERENCE AND METHOD OF REGULATING GENE EXPRESSION WITH THE USE OF THE SAME
JP2008501694A (ja) 2004-06-03 2008-01-24 アイシス ファーマシューティカルズ、インク. 遺伝子調節の使用のために個別に修飾された鎖を有する二本鎖組成物
AU2005269758B2 (en) 2004-07-20 2011-11-03 Genentech, Inc. Compositions and methods of using angiopoietin-like 4 protein
EP1771474B1 (en) 2004-07-20 2010-01-27 Genentech, Inc. Inhibitors of angiopoietin-like 4 protein, combinations, and their use
PT2409713E (pt) 2004-08-10 2015-10-09 Genzyme Corp Oligonucleótidos para utilização em modulação dos níveis de lipoproteínas e colesterol em humanos
AU2005272816B2 (en) 2004-08-10 2011-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemically modified oligonucleotides
WO2006031461A2 (en) 2004-09-09 2006-03-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidinyl groups for attaching conjugates to oligomeric compounds
US20090036355A1 (en) 2004-10-13 2009-02-05 Sanjay Bhanot Antisense Modulation of PTP1B Expression
WO2006047842A2 (en) 2004-11-08 2006-05-11 K.U. Leuven Research And Development Modified nucleosides for rna interference
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
WO2006078217A1 (en) 2005-01-24 2006-07-27 Avaris Ab COMPLEX CONTAINING SiRNA, ShRNA OR ANTISENSE MOLECULE AND FUNCTIONAL ENTITY, FOR IMPROVED SPECIFICITY AND DELIVERY
WO2007031081A2 (en) * 2005-09-15 2007-03-22 Santaris Pharma A/S RNA ANTAGONIST COMPOUNDS FOR THE INHIBITION OF APO-Bl00 EXPRESSION
AU2006292293B2 (en) 2005-09-19 2012-09-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of glucocorticoid receptor expression
EP2096170B1 (en) 2005-09-19 2011-08-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of glucagon receptor expression
US7951934B2 (en) * 2006-01-26 2011-05-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and their uses directed to huntingtin
CA2640171C (en) 2006-01-27 2014-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
ES2471978T3 (es) 2006-05-05 2014-06-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compuestos y procedimientos para modular la expresión de ApoB
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
WO2007134181A2 (en) 2006-05-11 2007-11-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-modified bicyclic nucleic acid analogs
CA2660052A1 (en) 2006-08-04 2008-02-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the modulation of jnk proteins
WO2008022309A2 (en) 2006-08-18 2008-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
US8658211B2 (en) 2006-08-18 2014-02-25 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
CA2663601C (en) 2006-09-22 2014-11-25 Dharmacon, Inc. Duplex oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by rna interference
EP2092065B2 (en) 2006-10-18 2019-07-24 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Antisense compounds
TW200838551A (en) 2006-11-27 2008-10-01 Isis Pharmaceuticals Inc Methods for treating hypercholesterolemia
US8093222B2 (en) 2006-11-27 2012-01-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
KR101503937B1 (ko) 2006-12-08 2015-03-18 렉시컨 파마슈티컬스 인코퍼레이티드 Angptl3 에 대한 단일클론 항체
CA2839162A1 (en) * 2006-12-20 2008-06-26 Xoma Technology Ltd. Methods for the treatment of il-1-.beta. related diseases
EP2125852B1 (en) 2007-02-15 2016-04-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted-2'-f modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
WO2008098788A2 (en) 2007-02-16 2008-08-21 Ktb Tumorforschungsgesellschaft Mbh Receptor and antigen targeted prodrug
KR20090122465A (ko) 2007-03-01 2009-11-30 어드벤스드 비젼 테라피스, 인코포레이티드 염증성 질환의 치료
JP2010519911A (ja) 2007-03-02 2010-06-10 エムディーアールエヌエー,インコーポレイテッド Myc遺伝子の発現を抑制するための核酸化合物およびその使用
AU2008242583B2 (en) 2007-04-23 2013-10-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of RNA interference agents
US8278425B2 (en) 2007-05-30 2012-10-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
EP2173760B2 (en) 2007-06-08 2015-11-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
WO2009003009A1 (en) 2007-06-26 2008-12-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrrolidine as anti-infectives
CA2692579C (en) 2007-07-05 2016-05-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
CN101821277B (zh) 2007-08-15 2014-05-07 Isis制药公司 四氢吡喃核酸类似物
MX2010003606A (es) 2007-10-01 2010-07-02 Isis Pharmaceuticals Inc Modulacion antisentido de la expresion del receptor del factor de crecimiento fibroblastico 4.
AU2008323970B2 (en) 2007-11-09 2014-05-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of Factor 7 expression
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
CA2930393C (en) 2007-12-04 2022-11-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides
US20110027248A1 (en) * 2007-12-27 2011-02-03 Hiroyuki Yoneyama Sugar Chain-Related Gene and Use Thereof
AU2009241591A1 (en) 2008-01-31 2009-11-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Optimized methods for delivery of DSRNA targeting the PCSK9 gene
EP2265627A2 (en) 2008-02-07 2010-12-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs
US20110269814A1 (en) 2008-03-26 2011-11-03 Alnylam Pharamaceuticals, Inc. 2'-f modified rna interference agents
CA2721183C (en) 2008-04-11 2019-07-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
WO2009143369A2 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Method of preparing nucleosides and analogs thereof without using chromatography
WO2009148605A2 (en) 2008-06-04 2009-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
EP3093351B1 (en) 2008-07-09 2018-04-18 Celera Corporation Genetic polymorphisms associated with cardiovascular diseases, methods of detection and uses thereof
WO2010017509A1 (en) 2008-08-07 2010-02-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of transthyretin expression for the treatment of cns related disorders
EP3587434A1 (en) 2008-09-23 2020-01-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with click components for conjugation with ligands
DK2356129T3 (da) 2008-09-24 2013-05-13 Isis Pharmaceuticals Inc Substituerede alpha-L-bicykliske nukleosider
US8604192B2 (en) 2008-09-24 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Cyclohexenyl nucleic acids analogs
JP5809058B2 (ja) 2008-10-15 2015-11-10 アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド 第11因子発現の調節
EA020312B1 (ru) * 2008-10-20 2014-10-30 Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина
CN102264374B (zh) 2008-10-24 2015-01-07 Isis制药公司 5′和2′双取代的核苷和由其制备的低聚化合物
EP2358398A2 (en) 2008-10-24 2011-08-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and methods
KR102042721B1 (ko) 2008-11-10 2019-11-11 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 치료제 운반용 신규 지질 및 조성물
WO2010083615A1 (en) 2009-01-26 2010-07-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein c-iii expression
EP2391343B1 (en) 2009-01-29 2017-03-01 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation for the delivery of nucleic acids
AU2010221419B2 (en) 2009-03-02 2015-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid chemical modifications
FR2943060B1 (fr) 2009-03-13 2013-01-04 Commissariat Energie Atomique Agents chelatants d'ions metalliques, leurs procedes de preparation et leurs applications
CA2758927A1 (en) 2009-04-15 2010-10-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of inflammatory responses by factor xi
CA3042927C (en) 2009-05-05 2022-05-17 Arbutus Biopharma Corporation Lipid compositions for the delivery of therapeutic agents
US9200276B2 (en) 2009-06-01 2015-12-01 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Polynucleotides for multivalent RNA interference, compositions and methods of use thereof
KR20230098713A (ko) 2009-06-10 2023-07-04 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 향상된 지질 조성물
BRPI1010689A2 (pt) 2009-06-15 2016-03-15 Alnylam Pharmaceuticals Inc "dsrna formulado por lipídios direcionados para o gene pcsk9"
JP2014501097A (ja) 2009-07-06 2014-01-20 アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド 生物由来物質の産生を高めるための組成物及び方法
US9512164B2 (en) 2009-07-07 2016-12-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide end caps
US8927513B2 (en) 2009-07-07 2015-01-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5′ phosphate mimics
US20120214862A1 (en) 2009-07-16 2012-08-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of factor 7 expression
WO2011017521A2 (en) 2009-08-06 2011-02-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
TWI458493B (zh) 2009-09-25 2014-11-01 Iner Aec Executive Yuan 新穎肝標靶藥劑與合成方法
ES2651308T3 (es) 2009-10-16 2018-01-25 Glaxo Group Limited Inhibidores antisentido de HBV
TWI391144B (zh) 2009-10-26 2013-04-01 Iner Aec Executive Yuan 一種定量肝殘餘功能的檢驗方法與其新穎肝受體造影檢驗藥劑
TWI388338B (zh) 2009-10-26 2013-03-11 Iner Aec Executive Yuan 對聚合醣鏈進行放射標誌以作為肝受體造影劑之方法
EP2496238A4 (en) * 2009-11-03 2013-10-02 Alnylam Pharmaceuticals Inc FORMULATED LIPID COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING TRANSTHYRETIN EXPRESSION (TTR)
WO2011072290A2 (en) 2009-12-11 2011-06-16 The Regents Of The University Of Michigan Targeted dendrimer-drug conjugates
CN106146591B (zh) 2010-01-08 2020-07-31 Ionis制药公司 血管生成素样3表达的调节
WO2011100131A2 (en) 2010-01-28 2011-08-18 Alnylam Pharmacuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
ES2562817T3 (es) 2010-02-24 2016-03-08 Arrowhead Research Corporation Composiciones para el suministro dirigido de ARNip
WO2011115818A1 (en) 2010-03-17 2011-09-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
JP2013528665A (ja) 2010-03-26 2013-07-11 メルサナ セラピューティックス, インコーポレイテッド ポリヌクレオチドの送達のための修飾ポリマー、その製造方法、およびその使用方法
US20130109817A1 (en) 2010-03-26 2013-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Modified Polymers for Delivery of Polynucleotides, Method of Manufacture, and Methods of Use Thereof
US9102938B2 (en) 2010-04-01 2015-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 2′ and 5′ modified monomers and oligonucleotides
WO2011133876A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
US9725479B2 (en) 2010-04-22 2017-08-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5′-end derivatives
EP3091027B1 (en) 2010-04-28 2018-01-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5' modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
JP6005628B2 (ja) 2010-04-28 2016-10-12 アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. 修飾ヌクレオシド、その類似体、およびこれらから調製されるオリゴマー化合物
BR112012027547B1 (pt) 2010-04-29 2022-06-14 Ionis Pharmaceuticals, Inc Oligonucleotídeo modificado de fita simples, composição, e seus usos para tratar amiloidose transtirretina, reduzir os seus sintomas e para reduzir a expressão de mrna ou de proteína de transtirretina
WO2011163121A1 (en) 2010-06-21 2011-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
US8603994B2 (en) 2010-11-11 2013-12-10 Valted, Llc Transcriptional repression leading to Parkinson's disease
WO2012068187A1 (en) 2010-11-19 2012-05-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Poly(amide) polymers for the delivery of oligonucleotides
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
JP2014504295A (ja) 2010-12-17 2014-02-20 アローヘッド リサーチ コーポレイション siRNA用ガラクトースクラスター−薬物動態調節剤標的指向部分
CA2822161C (en) 2010-12-29 2018-05-29 Philipp Hadwiger Small molecule conjugates for intracellular delivery of nucleic acids
US10017764B2 (en) 2011-02-08 2018-07-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
BR112013024768B1 (pt) 2011-04-01 2022-02-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc Composto para inibição da expressão de mrna e proteína stat3, uso do composto e composição farmacêutica
US8658783B2 (en) 2011-04-13 2014-02-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
TW201303013A (zh) 2011-04-21 2013-01-16 Isis Pharmaceuticals Inc B型肝炎病毒(hbv)表現之調節
RU2016138742A (ru) 2011-04-27 2018-12-12 Айсис Фармасьютикалс, Инк. МОДУЛИРОВАНИЕ ЭКСПРЕССИИ АПОЛИПОПРОТЕИНА СIII (АроСIII)
WO2012174154A1 (en) 2011-06-13 2012-12-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of inflammatory responses by factor vii
CA2839437A1 (en) 2011-06-16 2012-12-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of fibroblast growth factor receptor 4 expression
CN103649103A (zh) 2011-06-21 2014-03-19 阿尔尼拉姆医药品有限公司 用于抑制载脂蛋白c-iii(apoc3)基因表达的组合物与方法
WO2012177639A2 (en) 2011-06-22 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Bioprocessing and bioproduction using avian cell lines
US20130017250A1 (en) * 2011-07-15 2013-01-17 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods For High Density Lipoprotein Cholesterol Regulation
US8932572B2 (en) 2011-08-26 2015-01-13 Arrowhead Madison Inc. Poly(vinyl ester) polymers for in vivo nucleic acid delivery
EP2751270B1 (en) 2011-08-29 2018-08-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
KR101840512B1 (ko) 2011-09-20 2018-03-20 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 Gcgr 발현의 안티센스 조절
KR20140084232A (ko) 2011-10-25 2014-07-04 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 Gccr 발현의 안티센스 조절
KR20220045091A (ko) 2011-11-18 2022-04-12 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스티레틴(TTR) 관련 질병을 치료하기 위한 RNAi 제제, 조성 및 그의 사용방법
CA2863958A1 (en) 2012-02-08 2013-08-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating factor vii expression
WO2013142514A1 (en) 2012-03-19 2013-09-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating alpha-1-antitrypsin expression
WO2013142571A2 (en) 2012-03-20 2013-09-26 Cornell University Assays for the identification of compounds that modulate lipid homeostasis
US9133461B2 (en) * 2012-04-10 2015-09-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the ALAS1 gene
WO2013159108A2 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
WO2013159109A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
EP3919620A1 (en) 2012-05-02 2021-12-08 Sirna Therapeutics, Inc. Short interfering nucleic acid (sina) compositions
TW201808342A (zh) 2012-05-02 2018-03-16 喜納製藥公司 包含四galnac之新穎結合物及傳送寡核苷酸之方法
WO2013177468A2 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating apolipoprotein(a) expression
WO2013173789A2 (en) 2012-05-17 2013-11-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide compositions
US9574193B2 (en) 2012-05-17 2017-02-21 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modulating apolipoprotein (a) expression
WO2013192233A1 (en) 2012-06-18 2013-12-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and method for improved cellular uptake of antisense compounds
EP2879718B1 (en) 2012-08-06 2023-06-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Processes for the preparation of carbohydrate conjugated rna agents
US9695418B2 (en) 2012-10-11 2017-07-04 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleosides and uses thereof
PL2920304T3 (pl) 2012-11-15 2019-07-31 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Koniugaty oligonukleotydowe
WO2014118272A1 (en) 2013-01-30 2014-08-07 Santaris Pharma A/S Antimir-122 oligonucleotide carbohydrate conjugates
EP2951305B1 (en) 2013-01-30 2018-08-15 F.Hoffmann-La Roche Ag Lna oligonucleotide carbohydrate conjugates
AU2014259759B2 (en) 2013-05-01 2020-06-18 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods
KR20200085922A (ko) 2013-05-16 2020-07-15 다이니뽄 스미토모 세이야쿠 가부시키가이샤 신경 전구 세포를 사용한 세포 치료에 있어서의 이식 보조제
AU2014284152B2 (en) 2013-06-21 2020-01-23 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulation of target nucleic acids
PT3013959T (pt) 2013-06-27 2020-02-04 Roche Innovation Ct Copenhagen As Oligómeros antissentido e conjugados dirigidos para pcsk9
AU2014284398B2 (en) 2013-07-02 2019-10-31 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of growth hormone receptor
DK3019200T3 (da) 2013-07-11 2022-06-20 Alnylam Pharmaceuticals Inc Oligonukleotid-ligand-konjugater og fremgangsmåde til fremstiling deraf
CA2921842A1 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of complement factor b
US9943604B2 (en) 2013-09-20 2018-04-17 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Targeted therapeutic nucleosides and their use
WO2015071388A1 (en) 2013-11-14 2015-05-21 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Apob antisense conjugate compounds
EP3077511A4 (en) 2013-12-06 2017-07-05 Dicerna Pharmaceuticals Inc. Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (ttr) by double-stranded rna
MX2016014013A (es) 2014-05-01 2016-11-15 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para modular la expresion del receptor de la hormona del crecimiento.
RU2701645C2 (ru) 2014-05-01 2019-09-30 Ионис Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы модулирования экспрессии фактора комплемента в
WO2015168514A1 (en) 2014-05-01 2015-11-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Method for synthesis of reactive conjugate clusters
BR122020024443B1 (pt) 2014-05-01 2022-02-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc Composto e composição farmacêutica para modulação da expressão de angptl3
WO2015168532A2 (en) 2014-05-01 2015-11-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating pkk expression
US10570169B2 (en) 2014-05-22 2020-02-25 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
WO2015188194A1 (en) 2014-06-06 2015-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for enhanced intestinal absorption of conjugated oligomeric compounds
EP3371201A4 (en) * 2015-11-06 2019-09-18 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds for use in therapy
MX2018005277A (es) * 2015-11-06 2018-08-01 Ionis Pharmaceuticals Inc Modular la expresion de apolipoproteina (a).

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012037254A1 (en) 2010-09-15 2012-03-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. MODIFIED iRNA AGENTS
WO2012145697A1 (en) 2011-04-21 2012-10-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression
WO2012177784A2 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compostions and methods of use thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZIMMERMANN A.U. et al.,Carbohydrate conjugation to siRNA for liver-specific delivery.,Hepatology,Vol.52, Supp. SUPPL.1(2010),pp.587A, Abstract Number: 547,Retrieved from STN, Accession No.0050381852 EMBASE, [retrieved on 2018.06.25]

Also Published As

Publication number Publication date
KR20210151260A (ko) 2021-12-13
US9127276B2 (en) 2015-09-08
EP3524680A1 (en) 2019-08-14
JP2020039355A (ja) 2020-03-19
CN105378082A (zh) 2016-03-02
KR20230006933A (ko) 2023-01-11
BR112015027321A2 (pt) 2017-09-26
RU2697152C2 (ru) 2019-08-12
ES2778442T3 (es) 2020-08-10
JP2020074787A (ja) 2020-05-21
MX2019010441A (es) 2019-10-17
US9145558B2 (en) 2015-09-29
KR20160002977A (ko) 2016-01-08
WO2014179629A3 (en) 2015-01-22
US20210087566A1 (en) 2021-03-25
KR102315836B1 (ko) 2021-10-22
AU2019200820A1 (en) 2019-02-28
WO2014179626A3 (en) 2015-02-26
EA031393B1 (ru) 2018-12-28
RU2699985C2 (ru) 2019-09-11
MX2015015234A (es) 2016-10-03
RU2015151202A3 (ja) 2018-03-27
KR20200090966A (ko) 2020-07-29
KR102558571B1 (ko) 2023-07-21
AU2020207820A1 (en) 2020-08-06
US20180273952A1 (en) 2018-09-27
JP7177127B2 (ja) 2022-11-22
AU2019200820B2 (en) 2020-04-30
EP2992009A1 (en) 2016-03-09
BR112015027369A8 (pt) 2018-01-02
US10883104B2 (en) 2021-01-05
CA2921167A1 (en) 2014-11-06
IL261901B (en) 2020-05-31
JP2019056001A (ja) 2019-04-11
KR20210129257A (ko) 2021-10-27
CR20150612A (es) 2016-03-03
KR102212275B1 (ko) 2021-02-05
AU2019203674A1 (en) 2019-06-27
IL284000A (en) 2021-07-29
RU2019110030A (ru) 2019-05-06
EP2992009A4 (en) 2016-12-28
IL274064A (en) 2020-06-30
KR102424855B1 (ko) 2022-07-26
CA2921162A1 (en) 2014-11-06
WO2014179626A2 (en) 2014-11-06
WO2014179629A8 (en) 2016-06-02
CY1121879T1 (el) 2020-10-14
AU2017200365B2 (en) 2018-11-08
AU2017200365A1 (en) 2017-02-23
SI2992098T1 (sl) 2019-06-28
BR112015027319A8 (pt) 2018-01-02
JP6216444B2 (ja) 2017-10-18
US9163239B2 (en) 2015-10-20
EP3546579A1 (en) 2019-10-02
CN105378085A (zh) 2016-03-02
NZ753018A (en) 2022-01-28
RU2019124314A (ru) 2019-08-21
CA2921518A1 (en) 2014-11-06
CN113293163A (zh) 2021-08-24
CR20190269A (es) 2019-09-13
HUE050394T2 (hu) 2020-11-30
EP3524680B1 (en) 2020-11-11
EP2991656A2 (en) 2016-03-09
HK1221486A1 (zh) 2017-06-02
WO2014179625A1 (en) 2014-11-06
AU2014259759B2 (en) 2020-06-18
KR20160003723A (ko) 2016-01-11
JP2016526018A (ja) 2016-09-01
JP2018027091A (ja) 2018-02-22
EP2992098A4 (en) 2017-01-11
AU2014259757B2 (en) 2017-03-02
EP2992098B1 (en) 2019-03-27
JP2023012548A (ja) 2023-01-25
IL263843A (en) 2019-01-31
IL284593B2 (en) 2023-02-01
RU2015151203A (ru) 2017-06-02
LT2992098T (lt) 2019-07-10
UA121017C2 (uk) 2020-03-25
US9932580B2 (en) 2018-04-03
CN110079524A (zh) 2019-08-02
HK1221403A1 (zh) 2017-06-02
IL242125B (en) 2019-02-28
MX2015015239A (es) 2016-10-03
KR20160002975A (ko) 2016-01-08
ZA201507218B (en) 2023-09-27
US20160076032A1 (en) 2016-03-17
AU2014259756A1 (en) 2015-10-22
PH12015502493A1 (en) 2016-02-22
US20160090595A1 (en) 2016-03-31
RU2015151202A (ru) 2017-06-06
US11299736B1 (en) 2022-04-12
JP2022017514A (ja) 2022-01-25
AU2019202598A1 (en) 2019-05-02
MX2015015264A (es) 2016-08-12
RU2650510C2 (ru) 2018-04-16
US20230151365A1 (en) 2023-05-18
KR20210037752A (ko) 2021-04-06
CN114058617A (zh) 2022-02-18
KR20160002976A (ko) 2016-01-08
EP2992097A2 (en) 2016-03-09
EP3633039A1 (en) 2020-04-08
CL2015003217A1 (es) 2016-07-08
CN108064162B (zh) 2021-12-03
BR112015027377A2 (pt) 2017-08-29
PT2992098T (pt) 2019-07-05
RU2015151204A (ru) 2017-06-02
IL264580A (en) 2019-02-28
NZ728517A (en) 2021-12-24
AU2017203436B2 (en) 2018-10-18
NZ712737A (en) 2021-08-27
PT2992009T (pt) 2020-09-21
RU2015151199A (ru) 2017-06-05
US20210024923A1 (en) 2021-01-28
JP6592486B2 (ja) 2019-10-16
CA2921514A1 (en) 2014-11-06
JP6456362B2 (ja) 2019-01-23
HK1221485A1 (zh) 2017-06-02
JP2020007361A (ja) 2020-01-16
PH12015502493B1 (en) 2016-02-22
EP2992097A4 (en) 2017-01-04
HRP20190987T1 (hr) 2019-09-20
IL284593B (en) 2022-10-01
EP2991661A1 (en) 2016-03-09
EP2992098A2 (en) 2016-03-09
AU2017200950A1 (en) 2017-03-02
AU2018267625A1 (en) 2018-12-13
BR112015027319A2 (pt) 2017-09-26
KR20220108195A (ko) 2022-08-02
AU2014259750A1 (en) 2015-10-22
US11851655B2 (en) 2023-12-26
PT3524680T (pt) 2021-01-04
CN105378085B (zh) 2019-02-15
JP2021074021A (ja) 2021-05-20
RU2015151204A3 (ja) 2018-03-27
RU2686080C2 (ru) 2019-04-24
HK1221475A1 (zh) 2017-06-02
EP3828275A1 (en) 2021-06-02
US20160090596A1 (en) 2016-03-31
KR101857707B1 (ko) 2018-05-14
RU2018136140A (ru) 2018-12-17
IL273184A (en) 2020-04-30
BR112015027377A8 (pt) 2017-10-03
US20150126720A1 (en) 2015-05-07
BR112015027369A2 (pt) 2017-09-26
RU2670614C2 (ru) 2018-10-24
AU2019204784A1 (en) 2019-07-25
JP2021020901A (ja) 2021-02-18
US9181550B2 (en) 2015-11-10
MX2015015263A (es) 2016-12-16
SG10201906382QA (en) 2019-08-27
BR112015027369B1 (pt) 2021-06-08
CY1123369T1 (el) 2021-12-31
US20150176007A1 (en) 2015-06-25
KR20230113835A (ko) 2023-08-01
US10927372B2 (en) 2021-02-23
PH12018501963A1 (en) 2020-07-20
IL296543A (en) 2022-11-01
DOP2015000268A (es) 2015-11-30
US20200224198A1 (en) 2020-07-16
EP2992097B1 (en) 2019-11-06
IL264241A (en) 2019-02-28
SI2992009T1 (sl) 2020-10-30
MX2019010443A (es) 2019-10-17
AU2017200950B2 (en) 2019-01-17
JP2023113843A (ja) 2023-08-16
KR20190084138A (ko) 2019-07-15
AU2014259750B2 (en) 2019-02-28
US20190055554A1 (en) 2019-02-21
US20210395734A1 (en) 2021-12-23
NZ631537A (en) 2017-05-26
AU2021204244B2 (en) 2023-10-19
JP2020039354A (ja) 2020-03-19
IL270464B (en) 2021-07-29
HUE043697T2 (hu) 2019-09-30
CN105392488B (zh) 2021-04-30
AU2020217347A1 (en) 2020-08-27
US10683499B2 (en) 2020-06-16
AU2014259757A1 (en) 2015-10-22
CN110042098B (zh) 2023-02-24
RU2015151199A3 (ja) 2018-03-27
EP2991661A4 (en) 2017-02-15
RU2015151200A3 (ja) 2019-01-14
KR102235678B1 (ko) 2021-04-05
DK3524680T3 (da) 2020-12-14
US20180273953A1 (en) 2018-09-27
NZ631512A (en) 2016-10-28
LT2992009T (lt) 2020-11-10
EP4155403A1 (en) 2023-03-29
MX2020002184A (es) 2020-07-14
WO2014179620A1 (en) 2014-11-06
ES2730015T3 (es) 2019-11-07
IL273312A (en) 2020-04-30
MX2020004209A (es) 2020-08-13
IL272617A (en) 2020-03-31
IL273184B (en) 2021-07-29
US20210130823A1 (en) 2021-05-06
IL263843B (en) 2020-03-31
JP2024010070A (ja) 2024-01-23
AU2022202770A1 (en) 2022-05-19
EP3690049A1 (en) 2020-08-05
AU2017200365C1 (en) 2019-04-18
KR20180051678A (ko) 2018-05-16
ME03390B (me) 2020-01-20
JP2021107408A (ja) 2021-07-29
US10844379B2 (en) 2020-11-24
JP6652602B2 (ja) 2020-02-26
SG11201508800WA (en) 2015-11-27
RU2018136140A3 (ja) 2022-04-27
US20180044676A1 (en) 2018-02-15
DOP2021000095A (es) 2021-09-15
BR112015027321A8 (pt) 2018-01-02
WO2014179627A3 (en) 2015-04-16
RS60796B1 (sr) 2020-10-30
AU2014259759A1 (en) 2015-10-22
CN105377887B (zh) 2020-11-03
US9932581B2 (en) 2018-04-03
KR102482890B1 (ko) 2022-12-30
ZA201507216B (en) 2017-08-30
AU2014259755B2 (en) 2018-08-30
IL274064B (en) 2021-06-30
CN110042098A (zh) 2019-07-23
BR112015027377B1 (pt) 2023-01-10
PE20152002A1 (es) 2016-01-21
AU2019204784B2 (en) 2022-01-27
JP7339294B2 (ja) 2023-09-05
JP2018183184A (ja) 2018-11-22
CN112921036A (zh) 2021-06-08
EP2991656B1 (en) 2019-12-18
AU2014259756B2 (en) 2017-02-23
DK2992098T3 (da) 2019-06-17
KR20210014758A (ko) 2021-02-09
EP2991661B1 (en) 2019-03-13
IL264241B (en) 2020-04-30
JP6866459B2 (ja) 2021-04-28
JP2016526874A (ja) 2016-09-08
CA2921514C (en) 2023-10-24
EA036584B1 (ru) 2020-11-26
SG10201801507RA (en) 2018-03-28
UA120287C2 (uk) 2019-11-11
EP2991656A4 (en) 2017-02-22
NZ631552A (en) 2017-02-24
IL264580B (en) 2020-04-30
DK2991656T3 (da) 2020-03-23
CL2016002262A1 (es) 2017-06-09
MY178929A (en) 2020-10-23
CN105378082B (zh) 2020-06-09
KR20160002974A (ko) 2016-01-08
US9181549B2 (en) 2015-11-10
JP2016523515A (ja) 2016-08-12
EA201891479A1 (ru) 2018-11-30
JP2016522683A (ja) 2016-08-04
AU2024200296A1 (en) 2024-02-08
NZ740338A (en) 2022-04-29
DK2992009T3 (da) 2020-09-14
IL283660A (en) 2021-07-29
SG10201801813YA (en) 2018-04-27
AU2019204784C1 (en) 2022-11-03
WO2014179627A9 (en) 2015-02-26
SG11201508870VA (en) 2015-11-27
IL284593A (en) 2021-08-31
CN108064162A (zh) 2018-05-22
MX2021008899A (es) 2021-08-19
JP2016522817A (ja) 2016-08-04
AU2018267625B2 (en) 2020-09-10
BR122018009831B1 (pt) 2021-12-21
RU2015151200A (ru) 2019-01-14
US20180002693A1 (en) 2018-01-04
EA201592093A1 (ru) 2016-06-30
HK1221404A1 (zh) 2017-06-02
US20150126719A1 (en) 2015-05-07
AU2019203674B2 (en) 2021-03-25
KR20240042220A (ko) 2024-04-01
WO2014179627A2 (en) 2014-11-06
IL242126B (en) 2019-01-31
AU2017203436A1 (en) 2017-06-08
MX2015015220A (es) 2016-01-12
MY198359A (en) 2023-08-28
WO2014179629A2 (en) 2014-11-06
AU2021204244A1 (en) 2021-07-22
IL242132B (en) 2018-10-31
IL242124B (en) 2019-02-28
CN111593051A (zh) 2020-08-28
AU2014259755A1 (en) 2015-10-22
MX2021008901A (es) 2021-08-19
CN105392488A (zh) 2016-03-09
BR112015027322A2 (pt) 2017-09-26
IL273205A (en) 2020-04-30
PL2992009T3 (pl) 2020-11-30
RU2018112167A (ru) 2019-03-07
HRP20201378T1 (hr) 2020-11-27
AU2020233603A1 (en) 2020-10-01
ES2819213T3 (es) 2021-04-15
US20140343123A1 (en) 2014-11-20
KR102138781B1 (ko) 2020-07-28
US20220275365A9 (en) 2022-09-01
JP6387084B2 (ja) 2018-09-05
RS58981B1 (sr) 2019-08-30
JP6639629B2 (ja) 2020-02-05
JP7429103B2 (ja) 2024-02-07
BR112015027322A8 (pt) 2018-01-02
JP6769866B2 (ja) 2020-10-14
US20160017323A1 (en) 2016-01-21
DOP2016000287A (es) 2017-02-15
JP2020058370A (ja) 2020-04-16
CN110066795A (zh) 2019-07-30
PE20161430A1 (es) 2017-01-06
NZ725538A (en) 2021-02-26
ES2885174T3 (es) 2021-12-13
US9957504B2 (en) 2018-05-01
EP2992009B1 (en) 2020-06-24
RU2670614C9 (ru) 2018-11-23
PL2992098T3 (pl) 2019-09-30
US20190367914A1 (en) 2019-12-05
US20160076030A1 (en) 2016-03-17
US9714421B2 (en) 2017-07-25
PH12019501191A1 (en) 2021-03-01
KR102651423B1 (ko) 2024-03-27
US20150126718A1 (en) 2015-05-07
CA2921509A1 (en) 2014-11-06
IL261901A (en) 2018-10-31
CN105377887A (zh) 2016-03-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6866459B2 (ja) Hbvおよびttr発現を調節するための組成物および方法
RU2782034C2 (ru) Композиции и способы модулирования экспрессии hbv и ttr
EA046363B1 (ru) Олигомерные соединения для модулирования экспрессии ttr

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20170501

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20170501

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20180629

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20180928

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20190218

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20190516

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20190724

C60 Trial request (containing other claim documents, opposition documents)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60

Effective date: 20191122

C116 Written invitation by the chief administrative judge to file amendments

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C116

Effective date: 20191204

C22 Notice of designation (change) of administrative judge

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22

Effective date: 20191204

C22 Notice of designation (change) of administrative judge

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22

Effective date: 20200805

RD02 Notification of acceptance of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422

Effective date: 20210226

C13 Notice of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C13

Effective date: 20210316

C22 Notice of designation (change) of administrative judge

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22

Effective date: 20210413

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20210226

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20210611

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20210513

C22 Notice of designation (change) of administrative judge

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22

Effective date: 20211005

C23 Notice of termination of proceedings

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C23

Effective date: 20211012

C03 Trial/appeal decision taken

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C03

Effective date: 20211116

C30A Notification sent

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C3012

Effective date: 20211116

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20211215

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6995478

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150