TW202227101A - 用於調節血管收縮素原表現之化合物及方法 - Google Patents

用於調節血管收縮素原表現之化合物及方法 Download PDF

Info

Publication number
TW202227101A
TW202227101A TW110142878A TW110142878A TW202227101A TW 202227101 A TW202227101 A TW 202227101A TW 110142878 A TW110142878 A TW 110142878A TW 110142878 A TW110142878 A TW 110142878A TW 202227101 A TW202227101 A TW 202227101A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
modified
oligomeric compound
certain embodiments
nucleosides
compound
Prior art date
Application number
TW110142878A
Other languages
English (en)
Inventor
亞當 慕力克
蘇珊 M 弗瑞爾
Original Assignee
美商Ionis製藥公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商Ionis製藥公司 filed Critical 美商Ionis製藥公司
Publication of TW202227101A publication Critical patent/TW202227101A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1136—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against growth factors, growth regulators, cytokines, lymphokines or hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3521—Methyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy

Abstract

提供用於減少細胞或個體中的AGT RNA之量或活性且在某些情況下減少細胞或個體中的AGT之量之化合物、方法及醫藥組合物。此等化合物、方法及醫藥組合物可用於改善心血管疾病之至少一種症狀或標誌。此等化合物及醫藥組合物可用於改善RAAS路徑相關之疾病或病症之至少一種症狀或標誌。此等症狀及標誌包括高血壓、慢性腎病、中風、心肌梗塞、心臟衰竭、心臟瓣膜疾病、血管動脈瘤、外周動脈疾病及器官損傷。此等心血管疾病包括高血壓、頑固性高血壓、馬凡氏症候群(Marfan syndrome)及心臟衰竭。

Description

用於調節血管收縮素原表現之化合物及方法
提供用於減少細胞或個體中的血管收縮素原RNA之量或活性且在某些情況下減少細胞或個體中的血管收縮素原(AGT)之量之化合物、方法及醫藥組合物。此等化合物及醫藥組合物可用於改善RAAS路徑相關之疾病或病症之至少一種症狀或標誌。此等疾病及病症包括高血壓、高血壓急症(亦即惡性高血壓)、頑固性高血壓、腎病(例如慢性腎病、多囊性腎病)、子癇前症、馬凡氏症候群(Marfan Syndrome)、中風、心臟病(例如心肌梗塞、心臟衰竭、鬱血性心臟衰竭、心臟瓣膜疾病)、血管動脈瘤、腹部動脈瘤、外周動脈疾病、器官損傷、肺動脈高血壓、肥胖、代謝症候群、NASH、NAFLD及其他RAAS相關之疾病、病症及/或疾患或其症狀。
血管收縮素原(AGT)亦稱為SERPINA8或ANHU，其係絲胺酸蛋白酶抑制劑(serpin)家族之成員且係腎素-血管收縮素-醛固酮系統(RAAS)之組分。其主要在肝臟中產生，且釋放至循環中，在循環中腎素將其轉化成血管收縮素I。血管收縮素I隨後由血管收縮素轉化酶(ACE)轉化成血管收縮素II。血管收縮素II係一種肽激素，其引起血管收縮，繼而可使血壓升高。血管收縮素II亦刺激腎上腺皮質分泌激素醛固酮。醛固酮使腎臟提高對鈉及水之重吸收，從而導致體內流體體積增加，其繼而可使血壓升高。RAAS路徑之過度刺激或活動可導致高血壓。慢性高血壓稱為高血壓。高血壓個體之高血壓需要心臟更努力地工作，以使血液經由血管循環。
高血壓仍為全球心血管疾病及中風所致死亡及失能之主要原因。儘管已進行廣泛研究且存在多種有效之治療性干預，但在美國，高血壓仍為一項重要的公共健康挑戰(Sigmund等人，Hypertension 2020，75: 902-917)。目前經批准用於治療高血壓之療法存在局限性，此乃因所有高血壓患者中有很大一部分未達成足夠之血壓控制。舉例而言，諸如ACE抑制劑及血管收縮素受體阻斷劑(ARB)等靶向腎素-血管收縮素系統(RAS)路徑之部分的藥物抑制RAAS路徑之能力有限(Nobakht等人，Nat Rev Nephrol，2011，7:356-359)。另外，某些抗高血壓藥物(諸如ACE抑制劑)禁用於患有腎病之高血壓患者，此乃因其可能損害患者之腎功能。
因此，需要找到抑制RAAS路徑且治療高血壓之替代治療。因此，本文之目標為提供用於治療此等疾病之化合物、方法及醫藥組合物。
本文提供用於減少細胞或個體中的AGT RNA之量或活性且在某些實施例中減少AGT蛋白之表現之化合物、方法及醫藥組合物。在某些實施例中，個體患有心血管疾病。在某些實施例中，個體患有高血壓。在某些實施例中，個體患有頑固性高血壓。在某些實施例中，個體患有馬凡氏症候群。在某些實施例中，個體患有腎病。在某些實施例中，可用於減少AGT RNA之量或活性之化合物為寡聚化合物。在某些實施例中，可用於減少AGT RNA之量或活性之化合物為經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，可用於降低AGT蛋白之表現之化合物為寡聚化合物。在某些實施例中，可用於降低AGT蛋白之表現之化合物為經修飾之寡核苷酸。
亦提供可用於改善RAAS路徑相關之疾病或適應症之至少一種症狀或標誌之方法。在某些實施例中，疾病為高血壓。在某些實施例中，疾病為頑固性高血壓。在某些實施例中，疾病為馬凡氏症候群。在某些實施例中，適應症為心臟衰竭。在某些實施例中，症狀或標誌包括高血壓、高血壓急症(亦即惡性高血壓)、子癇前症、中風、心臟病(例如心肌梗塞、心臟衰竭、鬱血性心臟衰竭、心臟瓣膜疾病)、血管動脈瘤、腹部動脈瘤、器官損傷、肺動脈高血壓、肥胖及其他RAAS路徑相關之疾病、病症及/或疾患或其症狀。
序列表
本申請案與呈電子格式之序列表一起提出申請。該序列表以創建於2021年11月16日之標題為BIOL0393TWSEQ_ST25.txt之檔案形式提供，其大小為32 KB。該序列表之電子格式中之資訊係以全文引用的方式併入本文中。
應理解，前述一般說明及以下詳細說明二者均僅為例示性及解釋性的，而不具有限制性。在本文中，除非另有明確說明，否則單數之使用包括複數。除非另有說明，否則如本文所用，使用「或」意指「及/或」。此外，術語「包括(including)」以及諸如「包括(includes及included)」等其他形式之使用不為限制性的。同樣，除非另有明確說明，否則諸如「要素」或「組分」等術語涵蓋構成一個單元之要素及組分以及構成一個以上亞單元之要素及組分。
本文所用之章節標題僅用於組織目的，而不應解釋為限制所描述之標的物。本申請案中引用之所有文件或文件部分，包括(但不限於)專利、專利申請案、文章、書、專著及GenBank、ENSEMBL及NCBI參考序列記錄在此關於本文所論述之文件部分以及全文係以引用的方式明確地併入。 定義
除非提供具體定義，否則與本文所闡述之分析化學、合成有機化學以及醫學及醫藥化學結合使用之命名法以及其中之程序及技術係此項技術中熟知且常用之彼等命名法以及程序及技術。在允許的情形下，本揭示案中通篇所提及之所有專利、申請案、公開申請案及其他出版物以及其他資料均係以全文引用的方式併入本文中。
除非另有指示，否則以下術語具有以下含義： 定義
如本文所用，「2’-去氧核苷」意指包含2’-H(H)去氧呋喃糖基糖部分之核苷。在某些實施例中，2’-去氧核苷為2’-β-D-去氧核苷且包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分，其具有如在天然去氧核糖核酸(DNA)中所發現之β-D組態。在某些實施例中，2’-去氧核苷可包含經修飾之核鹼基或可包含RNA核鹼基(尿嘧啶)。
如本文所用，「2’-MOE」意指2’-OCH 2CH 2OCH 3基團替代呋喃糖基糖部分之2’-OH基團。「2’-MOE糖部分」意指2’-OCH 2CH 2OCH 3基團替代呋喃糖基糖部分之2’-OH基團的糖部分。除非另有指示，否則2’-MOE糖部分呈β-D-核糖基組態。「MOE」意指O-甲氧基乙基。
如本文所用，「2’-MOE核苷」意指包含2’-MOE糖部分之核苷。
如本文所用，「2’-OMe」意指替代呋喃糖基糖部分之2’-OH基團之2’-OCH 3基團。如本文所用，「2’-O-甲基糖部分」或「2’-OMe糖部分」意指2’-OCH 3基團替代呋喃糖基糖部分之2’-OH基團的糖部分。除非另有指示，否則2’-OMe糖部分呈β-D-核糖基組態。
如本文所用，「2’-OMe核苷」意指包含2’-OMe糖部分之核苷。
如本文所用，「2’-取代之核苷」意指包含2’-取代之糖部分之核苷。如本文所用，關於糖部分之「2’-取代」意指糖部分包含至少一個不為H或OH之2'-取代基。
如本文所用，「5-甲基胞嘧啶」意指胞嘧啶經連接至5位之甲基修飾。5-甲基胞嘧啶係經修飾之核鹼基。
如本文所用，「約」意指在值之±10%內。舉例而言，若陳述「化合物影響約70%之AGT抑制」，則其暗示，AGT水準受抑制之範圍為63%至77%。
如本文所用，「投與」意指向個體提供醫藥劑。
如本文所用，「血管收縮素原」及「AGT」在本文中可互換使用。血管收縮素原亦稱為SERPINA8及ANHU。
如本文所用，「抗高血壓藥物」係指能夠降低血壓之藥物。此等藥物之實例包括(但不限於) RAAS抑制劑、利尿劑、鈣通道阻斷劑、腎上腺素能受體拮抗劑、腎上腺素能促效劑及血管舒張劑。在一個實例中，抗高血壓藥物卡托普利(captopril)可與本文所闡述之AGT化合物組合使用，以治療患有RAAS路徑相關之疾病、病症及/或疾患或處於患有RAAS路徑相關之疾病、病症及/或疾患之風險下的動物。
如本文所用，「反義活性」意指可歸因於反義化合物與其靶核酸之雜交的任何可偵測及/或可量測之變化。在某些實施例中，反義活性係靶核酸或由該靶核酸編碼之蛋白質的量或表現與在不存在反義化合物情形下之靶核酸水準或靶蛋白水準相比降低。
如本文所用，「反義化合物」意指能夠達成至少一種反義活性之寡聚化合物或寡聚雙鏈體。
如本文所用，關於治療之「改善」意指至少一種症狀相對於不存在該治療之情形下的相同症狀得以改良。在某些實施例中，改善係症狀之嚴重程度或頻率降低，或症狀延遲出現或其嚴重程度或頻率之進展減緩。指標之進展或嚴重程度可藉由主觀或客觀量度來確定，其為熟習此項技術者所已知。
如本文所用，「血壓」係指循環系統中血液對血管壁之壓力。動物之血壓主要由心臟跳動引起。在每一心跳期間，血壓在最大(收縮)血壓(SBP)與最小(舒張)血壓(DBP)之間變化。平均動脈壓(MAP)係在心跳週期期間之平均動脈壓。可藉由血壓計(blood pressure meter)(亦即血壓計(sphygmomanometer))量測血壓。正常靜息狀態下之血壓收縮壓小於120 mmHg且舒張壓小於80 mmHg，且通常表示為收縮壓(最高讀數)/舒張壓(最低讀數) mmHg。
如本文所用，「雙環核苷」或「BNA」意指包含雙環糖部分之核苷。
如本文所用，「雙環糖」或「雙環糖部分」意指包含兩個環之經修飾之糖部分，其中經由連結第一環中的兩個原子之橋形成第二環，藉此形成雙環結構。在某些實施例中，雙環糖部分之第一環係呋喃糖基部分。在某些實施例中，呋喃糖基糖部分係核糖基部分。在某些實施例中，雙環糖部分不包含呋喃糖基部分。
如本文所用，「cEt」意指4’至2’橋替代核糖基糖部分之2’OH-基團，其中該橋具有式4'-CH(CH 3)-O-2'，且其中該橋之甲基係呈 S組態。「cEt糖部分」係4’至2’橋替代核糖基糖部分之2’OH-基團的雙環糖部分，其中該橋具有式4'-CH(CH 3)-O-2'，且其中該橋之甲基係呈 S組態。「cEt」意指受約束乙基。
如本文所用，「cEt核苷」意指包含cEt糖部分之核苷。
如本文所用，「可裂解部分」意指在(例如)細胞內、個體、動物或人類體內之生理條件下裂解之鍵或原子團。
如本文所用，關於寡核苷酸之「互補」意指，當該寡核苷酸與另一核酸之核鹼基序列以相對方向對齊時，該寡核苷酸或其一或多個部分之至少70%的核鹼基能夠與另一核酸或其一或多個部分之核鹼基彼此氫鍵結。如本文所用，「互補核鹼基」意指能夠彼此形成氫鍵之核鹼基。互補核鹼基對包括腺嘌呤(A)與胸腺嘧啶(T)、腺嘌呤(A)與尿嘧啶(U)、胞嘧啶(C)與鳥嘌呤(G)及5-甲基胞嘧啶( mC)與鳥嘌呤(G)。互補寡核苷酸及/或靶核酸不需要在每一核苷處具有核鹼基互補性。相反地，一些錯配係可忍受的。如本文所用，關於寡核苷酸或其一部分之「完全互補」或「100%互補」意指，該寡核苷酸或其一部分與另一寡核苷酸或靶核酸在該兩個寡核苷酸中之較短者之每一核鹼基處互補，或若該等寡核苷酸具有相同長度，則在每一核苷處互補。
如本文所用，「結合基團」意指直接或間接地連接至寡核苷酸之原子團。結合基團包括結合部分及將該結合部分連接至寡核苷酸之結合連接體。
如本文所用，「結合連接體」意指單鍵或包含至少一個將結合部分連結至寡核苷酸之鍵的原子團。
如本文所用，「結合部分」意指經由結合連接體連接至寡核苷酸之原子團。
如本文所用，寡核苷酸背景中之「鄰接」係指彼此緊鄰之核苷、核鹼基、糖部分或核苷間鍵聯。舉例而言，「鄰接核鹼基」意指在序列中彼此緊鄰之核鹼基。
如本文所用，「掌性富集群體」意指複數個具有相同分子式之分子，其中群體內在特定掌性中心處含有特定立體化學組態之分子的數目或百分比大於在該特定掌性中心為立體隨機的情況下群體內在相同特定掌性中心處預期含有相同特定立體化學組態之分子的數目或百分比。在每一分子內具有多個掌性中心之分子的掌性富集群體可含有一或多個立體隨機掌性中心。在某些實施例中，分子為經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，分子為包含經修飾之寡核苷酸之化合物。
如本文所用，關於核苷間鍵聯之「掌性控制」意指，在該鍵聯處對於特定立體化學組態而言掌性為富集的。
如本文所用，「去氧區」意指5-12個鄰接核苷酸之區域，其中至少70%之核苷為2’-β-D-去氧核苷。在某些實施例中，每一核苷選自2’-β-D-去氧核苷、雙環核苷及2’-取代之核苷。在某些實施例中，去氧區支持RNA酶H活性。在某些實施例中，去氧區為間隙聚體之間隙或內部區域。
如本文所用，「間隙聚體」意指包含內部區域之經修飾之寡核苷酸，該內部區域位於具有一或多個核苷之外部區域之間，具有複數個支持RNA酶H裂解之核苷，其中構成內部區域之核苷在化學上不同於構成外部區域之一或多個核苷。內部區域可稱為「間隙」，且外部區域可稱為「翼」。內部區域為去氧區。內部區域或間隙之位置係指內部區域之核苷之順序且自內部區域之5’端開始計數。除非另有指示，否則「間隙聚體」係指糖模體。在某些實施例中，間隙之每一核苷為2’-β-D-去氧核苷。在某些實施例中，間隙包含在間隙之1位、2位、3位、4位或5位處的一個2’-取代之核苷，且間隙之其餘核苷為2’-β-D-去氧核苷。如本文所用，術語「MOE間隙聚體」指示具有包含2’-β-D-去氧核苷之間隙及包含2’-MOE核苷之翼的間隙聚體。如本文所用，術語「混合翼間隙聚體」指示具有翼之間隙聚體，該等翼包含含有至少兩種不同的糖修飾之經修飾之核苷。除非另有指示，否則間隙聚體可包含一或多個經修飾之核苷間鍵聯及/或經修飾之核鹼基，且此等修飾不一定遵循糖修飾之間隙聚體模式。
如本文所用，「熱點區」係靶核酸上之一系列核鹼基，其易受寡聚化合物介導之靶核酸量或活性降低之影響。
如本文所用，「雜交」意指互補寡核苷酸及/或核酸之配對或退火。雖然不限於特定機制，但最常見的雜交機制涉及互補核鹼基之間的氫鍵結，其可為沃森-克里克(Watson-Crick)、胡斯坦(Hoogsteen)或反向胡斯坦氫鍵結。
如本文所用，「高血壓」或「HTN」係指動物血壓升高之慢性醫學疾患。升高之血壓需要心臟更努力地工作，以使血液經由血管循環。若血壓持續處於或高於130/80 mmHg (階段1)或140/90 mmHg (階段2)，則稱存在高血壓。高血壓分為原發性(primary、essential)或繼發性的。原發性高血壓沒有明確原因，且認為與遺傳學、飲食、缺乏鍛煉及肥胖有關。繼發性高血壓由另一醫學疾患引起。高血壓係預期壽命縮短、慢性腎病、中風、心肌梗塞、心臟衰竭、血管動脈瘤(例如主動脈動脈瘤)、外周動脈疾病、器官損傷(例如心臟擴大或肥大)及其他心血管疾病、病症及/或疾患或其症狀之主要風險因素。抗高血壓藥物、飲食改變及生活方式改變可降低高血壓，且減少與高血壓相關之疾病、病症及/或疾患。高血壓可對藥物干預(亦即能藉由市售藥物療法控制)無抗性，或對藥物干預有抗性。
如本文所用，「核苷間鍵聯」意指寡核苷酸中鄰接核苷之間的共價鍵聯。如本文所用，「經修飾之核苷間鍵聯」意指除磷酸二酯核苷間鍵聯以外之任何核苷間鍵聯。「硫代磷酸酯核苷間鍵聯」係經修飾之核苷間鍵聯，其中磷酸二酯核苷間鍵聯之一個非橋接氧原子經硫原子置換。
如本文所用，「連接體核苷」意指將寡核苷酸直接或間接地連接至結合部分之核苷。連接體核苷位於寡聚化合物之結合連接體內。連接體核苷不被視為寡聚化合物之寡核苷酸部分之一部分，即使其與寡核苷酸鄰接。
如本文所用，「非雙環之經修飾糖部分」意指包含修飾(諸如取代基)之經修飾之糖部分，其在糖之兩個原子之間不會形成橋以致形成第二環。
如本文所用，「錯配」或「非互補」意指當將第一寡核苷酸與第二寡核苷酸對齊時，第一寡核苷酸之核鹼基不與第二寡核苷酸或靶核酸之相應核鹼基互補。
如本文所用，「模體」意指寡核苷酸中未經修飾及/或經修飾之糖部分、核鹼基及/或核苷間鍵聯之模式。
如本文所用，「核鹼基」意指未經修飾之核鹼基或經修飾之核鹼基。如本文所用，「未經修飾之核鹼基」係腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)、尿嘧啶(U)或鳥嘌呤(G)。如本文所用，「經修飾之核鹼基」係除未經修飾之A、T、C、U或G以外的能夠與至少一種未經修飾之核鹼基配對之原子團。「5-甲基胞嘧啶」係經修飾之核鹼基。通用鹼基係經修飾之核鹼基，其可與該五種未經修飾之核鹼基中之任一者配對。如本文所用，「核鹼基序列」意指靶核酸或寡核苷酸中鄰接核鹼基之順序，該順序與任何糖或核苷間鍵聯修飾無關。
如本文所用，「核苷」意指包含核鹼基及糖部分之化合物或化合物片段。核鹼基及糖部分各自獨立地未經修飾或經修飾。如本文所用，「經修飾之核苷」意指包含經修飾之核鹼基及/或經修飾之糖部分的核苷。經修飾之核苷包括缺少核鹼基之無鹼基核苷。「連接之核苷」係以鄰接序列相連結之核苷(亦即，在彼等連接之核苷之間不存在其他核苷)。
如本文所用，「寡聚化合物」意指寡核苷酸及視情況一或多種額外特徵，諸如結合基團或末端基團。寡聚化合物可與同第一寡聚化合物互補之第二寡聚化合物配對或可能不配對。「單股寡聚化合物」係未配對之寡聚化合物。術語「寡聚雙鏈體」意指由兩種具有互補核鹼基序列之寡聚化合物形成的雙鏈體。寡聚雙鏈體之每一寡聚化合物可稱為「雙鏈體化之寡聚化合物」。
如本文所用，「寡核苷酸」意指經由核苷間鍵聯連結的一股連接核苷，其中每一核苷及核苷間鍵聯可經修飾或未經修飾。除非另有指示，否則寡核苷酸係由8-50個連接之核苷組成。如本文所用，「經修飾之寡核苷酸」意指其中至少一個核苷或核苷間鍵聯經修飾之寡核苷酸。如本文所用，「未經修飾之寡核苷酸」意指不包含任何核苷修飾或核苷間修飾之寡核苷酸。
如本文所用，「器官損傷」或「終末器官損傷」係指在由循環系統供給之主要器官中發生的損傷，諸如心臟(例如心肌肥大、心臟功能減退及/或心臟衰竭)、腎臟(例如白蛋白尿、蛋白尿、腎功能減退及/或腎衰竭)、眼睛(例如高血壓性視網膜病變)、腦(例如中風)及諸如此類。高血壓可損害動物之器官。在某些實施例中，心臟損傷係纖維化、心臟細胞及/或肌肉肥大，從而導致心臟擴大。
如本文所用，「醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑」意指適用於投與給個體之任何物質。某些此等載劑使得能夠將醫藥組合物調配為(例如)錠劑、丸劑、糖衣錠、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液及菱形錠劑以供由個體經口攝取。在某些實施例中，醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑係無菌水、無菌鹽水、無菌緩衝溶液或無菌人工腦脊髓液。
如本文所用，「醫藥學上可接受之鹽」意指化合物之生理學及醫藥學上可接受之鹽。醫藥學上可接受之鹽保留母體化合物之期望生物活性，且不賦予其不期望之毒物學效應。
如本文所用，「醫藥組合物」意指適於向個體投與之物質混合物。舉例而言，醫藥組合物可包含寡聚化合物及無菌水溶液。在某些實施例中，醫藥組合物在某些細胞株中在自由攝取分析中顯示活性。
如本文所用，「前藥」意指在個體或其細胞內轉化成與体外形式不同之形式的治療劑。通常，藉由存在於細胞或組織中之酶(例如內源性或病毒酶)或化學品之作用及/或藉由生理條件促進前藥在個體內之轉化。
如本文所用，「減少量或活性」係指相對於未經處理之樣品或對照樣品中之轉錄表現或活性減少或阻斷轉錄表現或活性，且不一定指示轉錄表現或活性之完全消除。
如本文所用，「腎素-血管收縮素-醛固酮系統」、「腎素-血管收縮素-醛固酮系統路徑」、「RAAS路徑」或「RAAS」係指多組分酶促路徑，其中前體組分(血管收縮素原)被各種酶(諸如腎素及血管收縮素轉化酶(ACE))轉化成下游組分，諸如血管收縮素I及血管收縮素II。血管收縮素I刺激路徑中類固醇醛固酮之分泌。RAAS路徑調控血壓及流體平衡。
如本文所用，「腎素-血管收縮素系統」或「RAS」或「RAS路徑」係指RAAS路徑之一部分。促效劑或拮抗劑已靶向此路徑之各種組分以阻斷該等組分之產生。舉例而言，已開發腎素抑制劑、ACE抑制劑、血管收縮素-受體阻斷劑(ARB)及諸如此類，以抑制或阻斷RAS路徑。然而，由於各種機制或不良效應，靶向各種RAS路徑組分之市售療法在完全抑制或阻斷RAS路徑方面無效(Nobakht等人，Nat Rev Nephrol，2011，7:356-359)。
如本文所用，「RAAS相關之疾病、病症及/或疾患」或「RAAS路徑相關之疾病、病症及/或疾患」係指動物中與RAAS相關之任何疾病、病症或疾患。RAAS相關之疾病、病症及/或疾患之實例包括預期壽命縮短、高血壓(例如非頑固性高血壓、頑固性高血壓)、腎病(例如慢性腎病、多囊性腎病)、中風、心臟病(例如心肌梗塞、心臟衰竭、心臟瓣膜疾病)、血管動脈瘤(例如主動脈動脈瘤)、外周動脈疾病、器官損傷(例如心臟損傷或肥大)、組織纖維化及其他心血管疾病、病症及/或疾患或其症狀。在某些實施例中，RAAS相關之疾病、病症及/或疾患不包括高血壓。
如本文所用，「頑固性高血壓」或「RHTN」定義為a)儘管同時使用3種或更多種來自不同藥物類別之抗高血壓劑且以最大耐受劑量投與，但血壓仍高於治療目標(通常≥130/80 mmHg)；或b)僅在投與至少4種不同類別之抗高血壓劑以達成控制後，才將血壓控制在治療目標或低於治療目標。
除非另有指定，否則如本文所用，「RNA」意指RNA轉錄物且包括前mRNA及成熟mRNA。
如本文所用，「RNAi化合物」意指反義化合物，其至少部分地經由RISC或Ago2起作用以調節靶核酸及/或由靶核酸編碼之蛋白質。RNAi化合物包括(但不限於)雙股siRNA、單股RNA (ssRNA)及微RNA，包括微RNA模擬物。在某些實施例中，RNAi化合物調節靶核酸之量、活性及/或剪接。術語RNAi化合物不包括經由RNA酶H起作用之反義化合物。
如本文所用，關於寡核苷酸之「自互補」意指寡核苷酸至少部分地與自身雜交。
如本文所用，「標準活體外分析」意指實例中所闡述之分析及其合理變化形式。
如本文所用，「標準活體內分析」意指實例中所闡述之分析及其合理變化形式。
如本文所用，「立體隨機掌性中心」在具有相同分子式之分子群體背景下意指具有隨機立體化學組態之掌性中心。舉例而言，在包含立體隨機掌性中心之分子群體中，具有立體隨機掌性中心( S)組態之分子的數目可與具有立體隨機掌性中心( R)組態之分子的數目相同，但不一定相同。當掌性中心之立體化學組態係並非為控制立體化學組態而設計之合成方法的結果時，可將其視為隨機的。在某些實施例中，立體隨機掌性中心係立體隨機硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
如本文所用，「個體」意指人類或非人類動物。
如本文所用，「糖部分」意指未經修飾之糖部分或經修飾之糖部分。如本文所用，「未經修飾之糖部分」意指如在RNA中發現之2’-OH(H) β-D-核糖基部分(「未經修飾之RNA糖部分」)，或如在DNA中發現之2’-H(H) β-D-去氧核糖基糖部分(「未經修飾之DNA糖部分」)。未經修飾之糖部分在1’位、3’位及4’位中之每一者處具有一個氫，在3’位處具有氧且在5’位處具有兩個氫。如本文所用，「經修飾之糖部分」或「經修飾之糖」意指經修飾之呋喃糖基糖部分或糖替代物。
如本文所用，「糖替代物」意指經修飾之糖部分，其具有除呋喃糖基部分以外的可將核鹼基連接至另一基團之部分，諸如寡核苷酸中之核苷間鍵聯、結合基團或末端基團。包含糖替代物之經修飾核苷可併入至寡核苷酸內之一或多個位置中，且此等寡核苷酸能夠與互補寡聚化合物或靶核酸雜交。
如本文所用，「症狀」或「標誌」意指指示疾病或病症之存在或程度的任何身體特徵或測試結果。在某些實施例中，症狀對於個體或檢查或測試該個體之醫學專業人士顯而易見。在某些實施例中，標誌在進行包括(但不限於)死後測試之侵入性診斷測試時顯而易見。
如本文所用，「靶核酸」及「靶RNA」意指反義化合物經設計欲影響之核酸。
如本文所用，「靶區」意指寡聚化合物經設計欲與之雜交之靶核酸之一部分。
如本文所用，「末端基團」意指共價連接至寡核苷酸末端之化學基團或原子團。
如本文所用，「治療有效量」意指醫藥劑為個體提供治療益處之量。舉例而言，治療有效量改良疾病之症狀。 某些實施例
本揭示案提供以下非限制性編號實施例：
實施例1：一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由14至30個連接之核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 12-15之核鹼基序列中之任一者之至少14個、至少15個或16個鄰接核鹼基的核鹼基序列，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
實施例2：一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由14至30個連接之核苷組成且具有包含至少14個、至少15個或至少16個與以下互補之鄰接核鹼基之核鹼基序列： SEQ ID NO: 1之核鹼基2046-2061之等長部分； SEQ ID NO: 1之核鹼基2271-2286之等長部分； SEQ ID NO: 1之核鹼基2272-2287之等長部分； 其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
實施例3：一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由16個連接之核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 12之核鹼基序列之核鹼基序列，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
實施例4：一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由16個連接之核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 13之核鹼基序列之核鹼基序列，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
實施例5：一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由16個連接之核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 14之核鹼基序列之核鹼基序列，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
實施例6：一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由16個連接之核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 15之核鹼基序列之核鹼基序列，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
實施例7：如實施例1至6中任一實施例之寡聚化合物，其中當在該經修飾之寡核苷酸之整個核鹼基序列上量測時，該經修飾之寡核苷酸具有與SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2中之任一者之核鹼基序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%互補之核鹼基序列。
實施例8：如實施例1至7中任一實施例之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個雙環糖部分。
實施例9：如實施例8之寡聚化合物，其中該雙環糖部分具有4’-2’橋，其中該4’-2’橋選自-CH 2-O-及-CH(CH 3)-O-。
實施例10：如實施例1至9中任一實施例之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個非雙環之經修飾糖部分。
實施例11：如實施例10之寡聚化合物，其中該非雙環之經修飾糖部分為2’-MOE糖部分或2’-OMe糖部分。
實施例12：如實施例1至11中任一實施例之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個糖替代物。
實施例13：如實施例12之寡聚化合物，其中該糖替代物為嗎啉基、經修飾之嗎啉基、PNA、THP及F-HNA中之任一者。
實施例14：如實施例1至13中任一實施例之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸為間隙聚體。
實施例15：如實施例14之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有包含以下之糖模體： 5’區，其由1-6個連接之5’區核苷組成； 中央區，其由6-10個連接之中央區核苷組成；及 3’區，其由1-6個連接之3’區核苷組成；其中 該等5’區核苷中之每一者及該等3’區核苷中之每一者包含經修飾之糖部分，且該等中央區核苷中之至少6者包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分。
實施例16：如實施例14之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有包含以下之糖模體： 5’區，其由1-6個連接之5’區核苷組成； 中央區，其由6-10個連接之中央區核苷組成；及 3’區，其由1-6個連接之3’區核苷組成；其中 該等5’區核苷中之每一者及該等3’區核苷中之每一者包含經修飾之糖部分，且該等中央區核苷中之每一者包含2’-去氧核糖基糖部分。
實施例17：如實施例14之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有包含以下之糖模體： 5’區，其由3個連接之5’區核苷組成； 中央區，其由10個連接之中央區核苷組成；及 3’區，其由3個連接之3’區核苷組成；其中 該等5’區核苷中之每一者及該等3’區核苷中之每一者包含經2’-MOE修飾之糖部分或經cEt修飾之糖部分，且該等中央區核苷中之每一者包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分。
實施例18：如實施例14之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有包含以下之糖模體： 5’區，其由3個連接之5’區核苷組成； 中央區，其由10個連接之中央區核苷組成；及 3’區，其由43個連接之3’區核苷組成；其中 該等5’區核苷中之每一者及該等3’區核苷中之每一者包含經2’-MOE修飾之糖部分或經cEt修飾之糖部分，且該等中央區核苷中之至少6者包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分。
實施例19：如實施例1至18中任一實施例之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之糖模體(5’至3’)：eekddddddddddkke、ekkddddddddddkke、kkkdyddddddddkkk、kkkddydddddddkkk、kkkdddyddddddkkk、kkkddddddddddkkk或eeeeeddddddddddeeeee；其中『e』表示2’-MOE糖部分，『k』表示cEt糖部分，『d』表示2’-β-D-去氧核糖基糖部分，且『y』表示2’-OMe糖部分。
實施例20：如實施例1至19中任一實施例之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷間鍵聯。
實施例21：如實施例20之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之每一核苷間鍵聯為經修飾之核苷間鍵聯。
實施例22：如實施例20或實施例21之寡聚化合物，其中至少一個核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例23：如實施例20及22中任一實施例之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例24：如實施例20、22及23中任一實施例之寡聚化合物，其中每一核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯或硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例25：如實施例21之寡聚化合物，其中每一核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例26：如實施例1至20或22至24中任一實施例之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有soossssssssssos之核苷間鍵聯模體；其中， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯且o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例27：如實施例1至26中任一實施例之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核鹼基。
實施例28：如實施例27之寡聚化合物，其中該經修飾之核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
實施例29：如實施例1至28中任一實施例之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸由12-30個、12-22個、12-20個、14-18個、14-20個、15-17個、15-25個或16-20個連接之核苷組成。
實施例30：如實施例1至28中任一實施例之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸由16個連接之核苷組成。
實施例31：如實施例1至30中任一實施例之寡聚化合物，其包含結合基團。
實施例32：如實施例31之寡聚化合物，其中該結合基團包含含有1-3個GalNAc配位體之GalNAc簇。
實施例33：如實施例31及32中任一實施例之寡聚化合物，其中該結合基團包含由單鍵組成之結合連接體。
實施例34：如實施例31至33中任一實施例之寡聚化合物，其中該結合基團包含可裂解連接體。
實施例35：如實施例31至34中任一實施例之寡聚化合物，其中該結合基團包含含有1-3個連接體核苷之結合連接體。
實施例36：如實施例31至35中任一實施例之寡聚化合物，其中該結合基團在該經修飾之寡核苷酸之5’端處連接至該經修飾之寡核苷酸。
實施例37：如實施例31至35中任一實施例之寡聚化合物，其中該結合基團在該經修飾之寡核苷酸之3’端處連接至該經修飾之寡核苷酸。
實施例38：如實施例1至37中任一實施例之寡聚化合物，其中該寡聚化合物係單股寡聚化合物。
實施例39：如實施例1至37中任一實施例之寡聚化合物，其由該經修飾之寡核苷酸組成。
實施例40：一種寡聚雙鏈體，其包含如實施例1至37中任一實施例之寡聚化合物。
實施例41：一種反義化合物，其包含如實施例1至39中任一實施例之寡聚化合物或如實施例40之寡聚雙鏈體，或由其組成。
實施例42：一種醫藥組合物，其包含如實施例1至39中任一實施例之寡聚化合物或如實施例40之寡聚雙鏈體以及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
實施例43：一種根據以下化學結構之化合物或其鹽，
Figure 02_image001
(SEQ ID NO: 12)。
實施例44：一種根據以下化學結構之化合物，
Figure 02_image003
(SEQ ID NO: 12)。
實施例45：一種根據以下化學結構之化合物或其鹽，
Figure 02_image005
(SEQ ID NO: 13)。
實施例46：一種根據以下化學結構之化合物，
Figure 02_image007
(SEQ ID NO: 13)。
實施例47：一種根據以下化學結構之化合物或其鹽，
Figure 02_image009
(SEQ ID NO: 14)。
實施例48：一種根據以下化學結構之化合物，
Figure 02_image011
(SEQ ID NO: 14)。
實施例49：一種根據以下化學結構之化合物或其鹽，
Figure 02_image013
(SEQ ID NO: 15)。
實施例50：一種根據以下化學結構之化合物，
Figure 02_image015
(SEQ ID NO: 15)。
實施例51：如實施例43、45、47及49中任一實施例之經修飾之寡核苷酸，其為該化學結構之鈉鹽或鉀鹽。
實施例52：一種醫藥組合物，其包含如實施例43至51中任一實施例之經修飾之寡核苷酸以及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
實施例53：一種化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸： mC esG eo mC koT dsG dsA dsT dsT dsT dsG dsT ds mC ds mC dsG koG ksG e(SEQ ID NO: 12)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-β-D-MOE糖部分， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例54：一種化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：T es mC koG koG dsT dsT dsG dsG dsA dsA dsT dsT ds mC dsT koT ksT e(SEQ ID NO: 13)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-β-D-MOE糖部分， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例55：一種化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：G ksT ks mC ksG dsG ysT dsT dsG dsG dsA dsA dsT dsT ds mC ksT ksT k(SEQ ID NO: 15)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， y = 2'-OMe核糖部分，且 s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
實施例56：一種化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：T ks mC koG koG dsU ysT dsG dsG dsA dsA dsT dsT ds mC dsT koT ksT k(SEQ ID NO: 14)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， U =尿嘧啶核鹼基， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， y = 2'-OMe核糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
實施例57：如實施例53至56中任一實施例之化合物，其包含共價連接至結合基團之該經修飾之寡核苷酸。
實施例58:如實施例53至56中任一實施例之醫藥組合物，及醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑。
實施例59：一種如實施例53至56中任一實施例之經修飾之寡核苷酸的掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有特定立體化學組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
實施例60：如實施例59之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有( Sp)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
實施例61：如實施例59之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有( Rp)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
實施例62：如實施例59之掌性富集群體，其中該群體富集在每一硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有特定獨立選擇之立體化學組態的經修飾之寡核苷酸。
實施例63：如實施例59之掌性富集群體，其中該群體富集在每一硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有( Sp)組態的經修飾之寡核苷酸或富集在每一硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有( Rp)組態的經修飾之寡核苷酸。
實施例64：如實施例59之掌性富集群體，其中該群體富集在一個特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(Rp)組態且在其餘硫代磷酸酯核苷間鍵聯中之每一者處具有(Sp)組態的經修飾之寡核苷酸。
實施例65：如實施例59之掌性富集群體，其中該群體富集沿5’至3’方向具有至少3個呈Sp、Sp及Rp組態之鄰接硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。
實施例66：一種如實施例59至65中任一實施例之經修飾之寡核苷酸的群體，其中該經修飾之寡核苷酸之所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為立體隨機的。
實施例67：一種方法，其包括向個體投與如任一前述實施例之醫藥組合物。
實施例68：一種治療與RAAS路徑相關之疾病的方法，其包括向患有與RAAS路徑相關之疾病或處於患有該疾病風險下之個體投與治療有效量之如任一前述實施例之醫藥組合物，藉此治療該與RAAS路徑相關之疾病。
實施例69：如實施例68之方法，其中該疾病係心血管疾病。
實施例70：如實施例68及69中任一實施例之方法，其中該疾病選自高血壓、頑固性高血壓、馬凡氏症候群、心臟衰竭、腎病、肥胖、代謝症候群、NASH及NAFLD。
實施例71：如實施例68至70中任一實施例之方法，其中該疾病之至少一種症狀或標誌得以改善。
實施例72：如實施例71之方法，其中該症狀或標誌係以下中之任一者：高血壓、高血壓急症(亦即惡性高血壓)、中風、子癇前症、血管動脈瘤、腹部動脈瘤、外周動脈疾病、器官損傷或肺動脈高血壓。
實施例73：如實施例67至72中任一實施例之方法，其中該醫藥組合物全身投與。
實施例74：如實施例73中任一實施例之方法，其中該醫藥組合物係以皮下或肌內任一方式投與。
實施例75：一種如實施例1至37中任一實施例之寡聚化合物或如實施例40之寡聚雙鏈體之用途，其用於減少細胞中之AGT表現。
實施例76：如實施例75之用途，其中AGT RNA之水準降低。
實施例77：如實施例75之用途，其中AGT蛋白之水準降低。 I. 某些寡核苷酸
在某些實施例中，本文提供寡聚化合物，該等寡聚化合物包含由連接之核苷組成的寡核苷酸。寡核苷酸可為未經修飾之寡核苷酸(RNA或DNA)或可為經修飾之寡核苷酸。相對於未經修飾之RNA或DNA，經修飾之寡核苷酸包含至少一種修飾。亦即，經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷(包含經修飾之糖部分及/或經修飾之核鹼基)及/或至少一個經修飾之核苷間鍵聯。 A. 某些經修飾之核苷
經修飾之核苷包含經修飾之糖部分或經修飾之核鹼基或者經修飾之糖部分及經修飾之核鹼基二者。 1. 某些糖部分
在某些實施例中，經修飾之糖部分係非雙環之經修飾糖部分。在某些實施例中，經修飾之糖部分係雙環或三環糖部分。在某些實施例中，經修飾之糖部分係糖替代物。此等糖替代物可包含一或多個取代，該(等)取代對應於其他類型的經修飾之糖部分之彼等取代。
在某些實施例中，經修飾之糖部分係非雙環之經修飾糖部分，其包含具有一或多個取代基之呋喃糖基環，該等取代基均不橋接該呋喃糖基環之兩個原子以形成雙環結構。此等非橋接取代基可位於呋喃糖基之任何位置，包括(但不限於)位於2’位、4’位及/或5’位之取代基。在某些實施例中，非雙環之經修飾糖部分之一或多個非橋接取代基具有支鏈。適於非雙環之經修飾糖部分的2’-取代基之實例包括(但不限於)：2’-F、2'-OCH 3(「OMe」或「O-甲基」)及2'-O(CH 2) 2OCH 3(「MOE」或「O-甲氧基乙基」)。在某些實施例中，2’-取代基選自：鹵基、烯丙基、胺基、疊氮基、SH、CN、OCN、CF 3、OCF 3、O-C 1-C 10烷氧基、經取代之O-C 1-C 10烷氧基、O-C 1-C 10烷基、經取代之O-C 1-C 10烷基、S-烷基、N(R m)-烷基、O-烯基、S-烯基、N(R m)-烯基、O-炔基、S-炔基、N(R m)-炔基、O-伸烷基-O-烷基、炔基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基、O-芳烷基、O(CH 2) 2SCH 3、O(CH 2) 2ON(R m)(R n)或OCH 2C(=O)-N(R m)(R n)，其中每一R m及R n獨立地為H、胺基保護基團或經取代或未經取代之C 1-C 10烷基，以及Cook等人，U.S. 6,531,584；Cook等人，U.S. 5,859,221；及Cook等人，U.S. 6,005,087中所闡述之2’-取代基。該等2'-取代基之某些實施例可進一步經一或多個獨立地選自以下之取代基取代：羥基、胺基、烷氧基、羧基、苄基、苯基、硝基(NO 2)、硫醇、硫基烷氧基、硫基烷基、鹵素、烷基、芳基、烯基及炔基。適於非雙環之經修飾糖部分的4’-取代基之實例包括(但不限於)烷氧基(例如甲氧基)、烷基及Manoharan等人，WO 2015/106128中所闡述之彼等基團。適於非雙環之經修飾糖部分的5’-取代基之實例包括(但不限於)：5’-甲基(R或S)、5'-乙烯基及5’-甲氧基。在某些實施例中，非雙環之經修飾糖部分包含一個以上非橋接糖取代基，例如2'-F-5'-甲基糖部分以及Migawa等人，WO 2008/101157及Rajeev等人，US2013/0203836中所闡述的經修飾之糖部分及經修飾之核苷。
在某些實施例中，2’-取代之非雙環之經修飾核苷包含糖部分，該糖部分包含選自以下之非橋接2’-取代基：F、NH 2、N 3、OCF 3、OCH 3、O(CH 2) 3NH 2、CH 2CH=CH 2、OCH 2CH=CH 2、OCH 2CH 2OCH 3、O(CH 2) 2SCH 3、O(CH 2) 2ON(R m)(R n)、O(CH 2) 2O(CH 2) 2N(CH 3) 2及N-取代之乙醯胺(OCH 2C(=O)-N(R m)(R n))，其中每一R m及R n獨立地為H、胺基保護基團或經取代或未經取代之C 1-C 10烷基。
在某些實施例中，2’-取代之非雙環之經修飾核苷包含糖部分，該糖部分包含選自以下之非橋接2’-取代基：F、OCF 3、OCH 3、OCH 2CH 2OCH 3、O(CH 2) 2SCH 3、O(CH 2) 2ON(CH 3) 2、O(CH 2) 2O(CH 2) 2N(CH 3) 2及OCH 2C(=O)-N(H)CH 3(「NMA」)。
在某些實施例中，2’-取代之非雙環之經修飾核苷包含糖部分，該糖部分包含選自以下之非橋接2’-取代基：F、OCH 3及OCH 2CH 2OCH 3。
在某些實施例中，經修飾之呋喃糖基糖部分及併有此等經修飾之呋喃糖基糖部分的核苷進一步由異構組態定義。舉例而言，2'-去氧呋喃糖基糖部分可呈除天然β-D-去氧核糖基組態外之七種異構組態。此等經修飾之糖部分闡述於(例如) WO 2019/157531中，該案以引用的方式併入本文中。2’-經修飾之糖部分相對於2’-去氧呋喃糖基糖部分在2’位具有另一立體中心；因此，此等糖部分具有總計十六種可能的異構組態。除非另有指定，否則本文所闡述之2’-經修飾之糖部分係呈β-D-核糖基異構組態。
某些經修飾之糖部分包含取代基，該取代基橋接呋喃糖基環之兩個原子以形成第二環，從而產生雙環糖部分。在某些此等實施例中，雙環糖部分在4'與2'呋喃糖環原子之間包含橋。此等4’至2’橋接糖取代基之實例包括(但不限於)：4'-CH 2-2'、4'-(CH 2) 2-2'、4'-(CH 2) 3-2'、4'-CH 2-O-2' (「LNA」)、4'-CH 2-S-2'、4'-(CH 2) 2-O-2' (「ENA」)、4'-CH(CH 3)-O-2' (稱為「受約束乙基」或「cEt」)、4’-CH 2-O-CH 2-2’、4’-CH 2-N(R)-2’、4'-CH(CH 2OCH 3)-O-2' (「受約束MOE」或「cMOE」)及其類似物(例如，參見Seth等人，U.S. 7,399,845；Bhat等人，U.S. 7,569,686；Swayze等人，U.S. 7,741,457；及Swayze等人，U.S. 8,022,193)、4'-C(CH 3)(CH 3)-O-2'及其類似物(例如，參見Seth等人，U.S. 8,278,283)、4'-CH 2-N(OCH 3)-2'及其類似物(例如，參見Prakash等人，U.S. 8,278,425)、4'-CH 2-O-N(CH 3)-2' (例如，參見Allerson等人，U.S. 7,696,345及Allerson等人，U.S. 8,124,745)、4'-CH 2-C(H)(CH 3)-2' (例如，參見Zhou等人， J. Org. Chem.,2009， 74，118-134)、4'-CH 2-C(=CH 2)-2'及其類似物(例如，參見Seth等人，U.S. 8,278,426)、4’-C(R aR b)-N(R)-O-2’、4’-C(R aR b)-O-N(R)-2’、4'-CH 2-O-N(R)-2'及4'-CH 2-N(R)-O-2'，其中每一R、R a及R b獨立地為H、保護基團或C 1-C 12烷基(例如，參見Imanishi等人，U.S. 7,427,672)。
在某些實施例中，此等4’至2’橋獨立地包含1至4個獨立地選自以下之連接基團：-[C(R a)(R b)] n-、-[C(R a)(R b)] n-O-、-C(R a)=C(R b)-、-C(R a)=N-、-C(=NR a)-、-C(=O)-、-C(=S)-、-O-、-Si(R a) 2-、-S(=O) x-及-N(R a)-； 其中： x係0、1或2； n係1、2、3或4； 每一R a及R b獨立地為H、保護基團、羥基、C 1-C 12烷基、經取代之C 1-C 12烷基、C 2-C 12烯基、經取代之C 2-C 12烯基、C 2-C 12炔基、經取代之C 2-C 12炔基、C 5-C 20芳基、經取代之C 5-C 20芳基、雜環基團、經取代之雜環基團、雜芳基、經取代之雜芳基、C 5-C 7脂環族基團、經取代之C 5-C 7脂環族基團、鹵素、OJ 1、NJ 1J 2、SJ 1、N 3、COOJ 1、醯基(C(=O)-H)、經取代之醯基、CN、磺醯基(S(=O) 2-J 1)或亚砜基(sulfoxyl)(S(=O)-J 1)；且 每一J 1及J 2獨立地為H、C 1-C 12烷基、經取代之C 1-C 12烷基、C 2-C 12烯基、經取代之C 2-C 12烯基、C 2-C 12炔基、經取代之C 2-C 12炔基、C 5-C 20芳基、經取代之C 5-C 20芳基、醯基(C(=O)-H)、經取代之醯基、雜環基團、經取代之雜環基團、C 1-C 12胺基烷基、經取代之C 1-C 12胺基烷基或保護基團。
其他雙環糖部分為此項技術中所已知，例如，參見：Freier等人， Nucleic Acids Research，1997， 25( 22)，4429-4443；Albaek等人， J. Org. Chem.，2006， 71，7731-7740；Singh等人， Chem. Commun.，1998， 4，455-456；Koshkin等人， Tetrahedron，1998， 54，3607-3630；Kumar等人， Bioorg. Med. Chem. Lett.，1998， 8，2219-2222；Singh等人， J. Org. Chem.，1998， 63，10035-10039；Srivastava等人， J. Am. Chem. Soc.，2007， 129 ，8362-8379；Wengel等人，U.S. 7,053,207；Imanishi等人，U.S. 6,268,490；Imanishi等人，U.S. 6,770,748；Imanishi等人，U.S. RE44,779；Wengel等人，U.S. 6,794,499；Wengel等人，U.S. 6,670,461； Wengel等人，U.S. 7,034,133；Wengel等人，U.S. 8,080,644；Wengel等人，U.S. 8,034,909；Wengel等人，U.S. 8,153,365；Wengel等人，U.S. 7,572,582；Ramasamy等人，U.S. 6,525,191；Torsten等人，WO 2004/106356；Wengel等人，WO 1999/014226；Seth等人，WO 2007/134181；Seth等人，U.S. 7,547,684；Seth等人，U.S. 7,666,854；Seth等人，U.S. 8,088,746；Seth等人，U.S. 7,750,131；Seth等人，U.S. 8,030,467；Seth等人，U.S. 8,268,980；Seth等人，U.S. 8,546,556；Seth等人，U.S. 8,530,640；Migawa等人，U.S. 9,012,421；Seth等人，U.S. 8,501,805；以及Allerson等人，美國專利公開案第US2008/0039618號及Migawa等人，美國專利公開案第US2015/0191727號。
在某些實施例中，雙環糖部分及併有此等雙環糖部分之核苷進一步由異構組態定義。舉例而言，LNA核苷(本文所闡述)可呈α-L組態或呈β-D組態。
Figure 02_image017
α-L-亞甲基氧基(4’-CH 2-O-2’)或α-L-LNA雙環核苷已併入至顯示反義活性之寡核苷酸中(Frieden等人， Nucleic Acids Research ，2003， 21，6365-6372)。在本文中，雙環核苷之一般描述包括兩種異構組態。除非另有指定，否則當在本文中所例示之實施例中鑑別出特定雙環核苷(例如LNA或cEt)之位置時，其呈β-D組態。
在某些實施例中，經修飾之糖部分包含一或多個非橋接糖取代基及一或多個橋接糖取代基(例如，5’-取代之糖及4’-2’橋接糖)。
在某些實施例中，經修飾之糖部分係糖替代物。在某些此等實施例中，糖部分之氧原子經(例如)硫、碳或氮原子置換。在某些此等實施例中，此等經修飾之糖部分亦包含如本文所闡述之橋接及/或非橋接取代基。舉例而言，某些糖替代物包含4’-硫原子及位於2'位(例如，參見Bhat等人，U.S. 7,875,733及Bhat等人，U.S. 7,939,677)及/或5’位之取代。
在某些實施例中，糖替代物包含具有不為5個原子之環。舉例而言，在某些實施例中，糖替代物包含6員四氫吡喃(「THP」)。此等四氫吡喃可進一步經修飾或經取代。包含此等經修飾之四氫吡喃之核苷包括(但不限於)己糖醇核酸(「HNA」)、安醇(anitol)核酸(「ANA」)、甘露醇核酸(「MNA」) (例如，參見Leumann，CJ. Bioorg. & Med. Chem.2002， 10，841-854)、氟HNA:
Figure 02_image019
(「F-HNA」，例如，參見Swayze等人，U.S. 8,088,904；Swayze等人，U.S. 8,440,803；Swayze等人，U.S. 8,796,437；及Swayze等人，U.S. 9,005,906；F-HNA亦可稱為F-THP或3'-氟四氫吡喃)及具有下式之包含其他經修飾之THP化合物的核苷：
Figure 02_image021
其中，獨立地，對於每一經修飾之THP核苷： Bx為核鹼基部分； T 3及T 4各自獨立地為將經修飾之THP核苷連接至寡核苷酸之其餘部分的核苷間連接基團，或T 3及T 4中之一者為將經修飾之THP核苷連接至寡核苷酸之其餘部分的核苷間連接基團且T 3及T 4中之另一者為H、羥基保護基團、連接之結合基團或5'或3'末端基團； q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6及q 7各自獨立地為H、C 1-C 6烷基、經取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、經取代之C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基或經取代之C 2-C 6炔基；且 R 1及R 2各自獨立地選自：氫、鹵素、經取代或未經取代之烷氧基、NJ 1J 2、SJ 1、N 3、OC(=X)J 1、OC(=X)NJ 1J 2、NJ 3C(=X)NJ 1J 2及CN，其中X為O、S或NJ 1，且每一J 1、J 2及J 3獨立地為H或C 1-C 6烷基。
在某些實施例中，提供經修飾之THP核苷，其中q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6及q 7各自為H。在某些實施例中，q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6及q 7中之至少一者不為H。在某些實施例中，q 1、q 2、q 3、q 4、q 5、q 6及q 7中之至少一者為甲基。在某些實施例中，提供經修飾之THP核苷，其中R 1及R 2中之一者為F。在某些實施例中，R 1為F且R 2為H，在某些實施例中，R 1為甲氧基且R 2為H，且在某些實施例中，R 1為甲氧基乙氧基且R 2為H。
在某些實施例中，糖替代物包含具有5個以上原子及一個以上雜原子之環。舉例而言，已報導包含嗎啉基糖部分之核苷及其在寡核苷酸中之用途(例如，參見Braasch等人，Biochemistry，2002， 41，4503-4510及Summerton等人，U.S. 5,698,685；Summerton等人，U.S. 5,166,315；Summerton等人，U.S. 5,185,444；及Summerton等人，U.S. 5,034,506)。如本文所用，術語「嗎啉基」意指具有以下結構之糖替代物：
Figure 02_image023
。
在某些實施例中，可(例如)藉由相較於以上嗎啉基結構添加或改變各種取代基對嗎啉基進行修飾。此等糖替代物在本文中稱為「經修飾之嗎啉基」。
在某些實施例中，糖替代物包含非環狀部分。包含此等非環狀糖替代物之核苷及寡核苷酸之實例包括(但不限於)：肽核酸(「PNA」)、非環狀丁基核酸(例如，參見Kumar等人， Org. Biomol. Chem.，2013， 11，5853-5865)以及Manoharan等人，WO2011/133876中所闡述之核苷及寡核苷酸。
此項技術中已知許多其他雙環及三環糖及糖替代物環系統可用於經修飾之核苷中。 2. 某些經修飾之核鹼基
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含未經修飾之核鹼基的核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之核鹼基的核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個不包含核鹼基之核苷，稱為無鹼基核苷。
在某些實施例中，經修飾之核鹼基選自：5-取代之嘧啶、6-氮雜嘧啶、烷基或炔基取代之嘧啶、烷基取代之嘌呤以及N-2、N-6及O-6取代之嘌呤。在某些實施例中，經修飾之核鹼基選自：2-胺基丙基腺嘌呤、5-羥甲基胞嘧啶、黃嘌呤、次黃嘌呤、2-胺基腺嘌呤、6-N-甲基鳥嘌呤、6-N-甲基腺嘌呤、2-丙基腺嘌呤、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶及2-硫胞嘧啶、5-丙炔基(-C≡C-CH 3)尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶、6-偶氮胸腺嘧啶、5-核糖基尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶；8-鹵基、8-胺基、8-硫醇、8-硫基烷基、8-羥基、8-氮雜及其他8-取代之嘌呤；5-鹵基、具體而言5-溴、5-三氟甲基、5-鹵基尿嘧啶及5-鹵基胞嘧啶；7-甲基鳥嘌呤、7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-胺基腺嘌呤、7-去氮鳥嘌呤、7-去氮腺嘌呤、3-去氮鳥嘌呤、3-去氮腺嘌呤、6-N-苯甲醯基腺嘌呤、2-N-異丁醯基鳥嘌呤、4-N-苯甲醯基胞嘧啶、4-N-苯甲醯基尿嘧啶、5-甲基4-N-苯甲醯基胞嘧啶、5-甲基4-N-苯甲醯基尿嘧啶、通用鹼基、疏水性鹼基、混雜鹼基、大小擴大之鹼基及氟化鹼基。其他經修飾之核鹼基包括三環嘧啶，諸如1,3-二氮雜吩噁嗪-2-酮、1,3-二氮雜吩噻嗪-2-酮及9-(2-胺基乙氧基)-1,3-二氮雜吩噁嗪-2-酮(G-鉗)。經修飾之核鹼基亦可包括嘌呤或嘧啶鹼基經其他雜環置換之彼等核鹼基，該等其他雜環例如7-去氮-腺嘌呤、7-去氮鳥苷、2-胺基吡啶及2-吡啶酮。其他核鹼基包括Merigan等人，U.S. 3,687,808中所揭示之彼等核鹼基； The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering，Kroschwitz，J.I.編輯，John Wiley & Sons，1990，858-859；Englisch等人， Angewandte Chemie，國際版，1991， 30，613；Sanghvi，Y.S.， Antisense Research and Applications，Crooke，S.T.及Lebleu，B.編輯，CRC Press，第15章，1993，273-288中所揭示之彼等核鹼基；及 Antisense Drug Technology，Crooke S.T.編輯，CRC Press，第6章及第15章，2008，163-166及442-443中所揭示之彼等核鹼基。
教示某些上述經修飾之核鹼基以及其他經修飾之核鹼基的製備之公開案包括(但不限於) Manoharan等人，US2003/0158403；Manoharan等人，US2003/0175906；Dinh等人，U.S. 4,845,205；Spielvogel等人，U.S. 5,130,302；Rogers等人，U.S. 5,134,066；Bischofberger等人，U.S. 5,175,273；Urdea等人，U.S. 5,367,066；Benner等人，U.S. 5,432,272；Matteucci等人，U.S. 5,434,257；Gmeiner等人，U.S. 5,457,187；Cook等人，U.S. 5,459,255；Froehler等人，U.S. 5,484,908；Matteucci等人，U.S. 5,502,177；Hawkins等人，U.S. 5,525,711；Haralambidis等人，U.S. 5,552,540；Cook等人，U.S. 5,587,469；Froehler等人，U.S. 5,594,121；Switzer等人，U.S. 5,596,091；Cook等人，U.S. 5,614,617；Froehler等人，U.S. 5,645,985；Cook等人，U.S. 5,681,941；Cook等人，U.S. 5,811,534；Cook等人，U.S. 5,750,692；Cook等人，U.S. 5,948,903；Cook等人，U.S. 5,587,470；Cook等人，U.S. 5,457,191；Matteucci等人，U.S. 5,763,588；Froehler等人，U.S. 5,830,653；Cook等人，U.S. 5,808,027；Cook等人，6,166,199；及Matteucci等人，U.S. 6,005,096。 3. 某些經修飾之核苷間鍵聯
在某些實施例中，可使用任何核苷間鍵聯將經修飾之寡核苷酸之核苷連接在一起。根據存在或不存在磷原子來定義兩種主要類別之核苷間連接基團。代表性含磷核苷間鍵聯包括(但不限於)磷酸二酯，其含有磷酸二酯鍵(「P(O 2)=O」) (亦稱為未經修飾之鍵聯或天然鍵聯)；磷酸三酯；甲基膦酸酯；胺基磷酸酯；硫代磷酸酯(「P(O 2)=S」)及二硫代磷酸酯(「HS-P=S」)。代表性不含磷核苷間連接基團包括(但不限於)亞甲基甲基亞胺基(-CH 2-N(CH 3)-O-CH 2-)、硫代二酯、硫羰胺基甲酸酯(-O-C(=O)(NH)-S-)；矽氧烷(-O-SiH 2-O-)；及N,N'-二甲基肼(-CH 2-N(CH 3)-N(CH 3)-)。經修飾之核苷間鍵聯與天然磷酸二酯核苷間鍵聯相比可用於改變、通常增加寡核苷酸之核酸酶抗性。在某些實施例中，可將具有掌性原子之核苷間鍵聯製備成外消旋混合物或分開之鏡像異構物。製備含磷及不含磷核苷間鍵聯之方法為熟習此項技術者所熟知。
具有掌性中心之代表性核苷間鍵聯包括(但不限於)烷基膦酸酯及硫代磷酸酯。可將包含具有掌性中心之核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸製備成包含立體隨機核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸之群體，或製備成包含呈特定立體化學組態之硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸之群體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體包含硫代磷酸酯核苷間鍵聯，其中所有該等硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為立體隨機的。此等經修飾之寡核苷酸可使用隨機選擇每一硫代磷酸酯核苷間鍵聯之立體化學組態之合成方法來生成。儘管如此，如熟習此項技術者所充分理解，每一個別寡核苷酸分子之每一個別硫代磷酸酯具有確定之立體組態。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集包含一或多個呈特定獨立選擇之立體化學組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯的經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，群體中至少65%之分子中存在特定組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，群體中至少70%之分子中存在特定組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，群體中至少80%之分子中存在特定組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，群體中至少90%之分子中存在特定組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，群體中至少99%之分子中存在特定組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯。經修飾之寡核苷酸之此等掌性富集群體可使用此項技術中已知之合成方法來生成，例如以下文獻中所闡述之方法：Oka等人， JACS125，8307 (2003)；Wan等人 Nuc. Acid. Res. 42，13456 (2014)；及WO 2017/015555。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集具有至少一種呈 (Sp )組態之所指示硫代磷酸酯的經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集具有至少一種呈 (Rp )組態之硫代磷酸酯的經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，包含 (Rp )及/或 (Sp )硫代磷酸酯之經修飾之寡核苷酸分別包含以下各式中之一或多者，其中「B」指示核鹼基：
Figure 02_image025
除非另有指示，否則本文所闡述之經修飾之寡核苷酸的掌性核苷間鍵聯可為立構隨機的或呈特定立體化學組態。
中性核苷間鍵聯包括(但不限於)磷酸三酯、甲基膦酸酯、MMI (3'-CH 2-N(CH 3)-O-5')、醯胺-3 (3'-CH 2-C(=O)-N(H)-5')、醯胺-4 (3'-CH 2-N(H)-C(=O)-5')、甲縮醛(3'-O-CH 2-O-5')、甲氧基丙基(MOP)及硫基甲縮醛(3'-S-CH 2-O-5')。其他中性核苷間鍵聯包括非離子鍵聯，其包含矽氧烷(二烷基矽氧烷)、羧酸酯、羧醯胺、硫化物、磺酸酯及醯胺(例如，參見 Carbohydrate Modifications in Antisense Research; Y.S. Sanghvi及P.D. Cook編輯，ACS Symposium Series 580；第3章及第4章，40-65)。其他中性核苷間鍵聯包括包含混合之N、O、S及CH 2組成部分之非離子鍵聯。 B. 某些模體
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之糖部分的經修飾之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個包含經修飾之核鹼基的經修飾之核苷。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含一或多個經修飾之核苷間鍵聯。在此等實施例中，經修飾之寡核苷酸之經修飾、未經修飾及經不同修飾之糖部分、核鹼基及/或核苷間鍵聯定義模式或模體。在某些實施例中，糖部分、核鹼基及核苷間鍵聯之模式各自彼此獨立。因此，經修飾之寡核苷酸可由其糖模體、核鹼基模體及/或核苷間鍵聯模體來描述(如本文所用，核鹼基模體描述對核鹼基之修飾，與核鹼基之序列無關)。 1. 某些糖模體
在某些實施例中，寡核苷酸包含以限定模式或糖模體沿寡核苷酸或其一部分排列的一或多種類型之經修飾之糖及/或未經修飾之糖部分。在某些情況下，此等糖模體包括(但不限於)本文所論述之糖修飾中之任一者。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸具有間隙聚體模體，該間隙聚體模體由兩個外部區或「翼」及中央或內部區或「間隙」定義。間隙聚體模體之三個區(5’翼、間隙及3’翼)形成核苷之鄰接序列，其中每一翼之核苷之至少一些糖部分不同於間隙之核苷之至少一些糖部分。具體而言，每一翼中最靠近間隙之核苷(5’翼之最3’端核苷及3’翼之最5’端核苷)之至少糖部分不同於相鄰間隙核苷之糖部分，由此界定翼與間隙之間的邊界(亦即，翼/間隙接點)。在某些實施例中，間隙內之糖部分彼此相同。在某些實施例中，間隙包括一或多個核苷，該(等)核苷所具有之糖部分不同於間隙之一或多個其他核苷之糖部分。在某些實施例中，兩個翼之糖模體彼此相同(對稱間隙聚體)。在某些實施例中，5'翼之糖模體不同於3'翼之糖模體(不對稱間隙聚體)。
在某些實施例中，間隙聚體之翼包含1-6個核苷。在某些實施例中，間隙聚體之每一翼之每一核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，間隙聚體之每一翼之至少一個核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，間隙聚體之每一翼之至少兩個核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，間隙聚體之每一翼之至少三個核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，間隙聚體之每一翼之至少四個核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，間隙聚體之每一翼之至少五個核苷包含經修飾之糖部分。
在某些實施例中，間隙聚體之間隙包含7-12個核苷。在某些實施例中，間隙聚體之間隙之至少六個核苷包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，間隙聚體之間隙之每一核苷包含2’-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，間隙聚體之間隙之每一核苷包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，間隙聚體之間隙之至少一個核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，間隙聚體之間隙之至少一個核苷包含2’-OMe糖部分。
在某些實施例中，間隙聚體為去氧間隙聚體。在某些實施例中，在每一翼/間隙接點之間隙側的核苷包含2’-去氧核糖基糖部分，且在每一翼/間隙接點之翼側的核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，間隙聚體之間隙之至少六個核苷包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，間隙之每一核苷包含2’-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，間隙聚體之每一翼之每一核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，間隙之一個核苷包含經修飾之糖部分且間隙之每一其餘核苷包含2’-去氧核糖基糖部分。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含具有完全經修飾之糖模體的部分或由其組成。在此等實施例中，經修飾之寡核苷酸的完全經修飾之部分的每一核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，整個經修飾之寡核苷酸之每一核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含具有完全經修飾之糖模體的部分或由其組成，其中完全經修飾之部分內的每一核苷包含相同的經修飾之糖部分，在本文中稱為均勻經修飾之糖模體。在某些實施例中，完全經修飾之寡核苷酸為均勻經修飾之寡核苷酸。在某些實施例中，均勻經修飾之寡核苷酸之每一核苷包含相同的2’-修飾。
在本文中，間隙聚體之三個區之長度(核苷數目)可使用記法[5’翼中之核苷數目]-[間隙中之核苷數目]-[3’翼中之核苷數目]來提供。因此，5-10-5間隙聚體由每一翼中之5個連接之核苷及間隙中之10個連接之核苷組成。倘若此命名法隨後為特定修飾，則該修飾為每一翼之每一糖部分中的修飾且間隙核苷包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分。因此，5-10-5 MOE間隙聚體由5’翼中之5個連接之2’-MOE核苷、間隙中之10個連接之2’-β-D-去氧核苷及3’翼中之5個連接之2’-MOE核苷組成。3-10-3 cEt間隙聚體由5’翼中之3個連接之cEt核苷、間隙中之10個連接之2’-β-D-去氧核苷及3’翼中之3個連接之cEt核苷組成。5-8-5間隙聚體由5’翼中之包含經修飾之糖部分的5個連接之核苷、間隙中之8個連接之2’-去氧核苷及3’翼中之包含經修飾之糖部分的5個連接之核苷組成。混合翼間隙聚體在5’翼及/或3’翼中具有至少兩個不同的經修飾糖。5-8-5或5-8-4混合翼間隙聚體在5’翼及/或3’翼中具有至少兩個不同的經修飾之糖部分。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸為5-10-5 MOE間隙聚體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸為4-10-6 MOE間隙聚體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸為6-10-4 MOE間隙聚體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸為5-8-5 MOE間隙聚體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸為X-Y-Z MOE間隙聚體，其中X及Z獨立地選自1、2、3、4、5或6個連接之2’-MOE核苷，且Y為7、8、9、10或11個連接之去氧核苷。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸具有選自以下之糖模體(5’至3’)：meeemddddddddddmmmmm，其中『d』表示2’-去氧核糖基糖部分，『e』表示2’-MOE糖部分，且『m』表示2’-OMe糖部分。 2. 某些核鹼基模體
在某些實施例中，寡核苷酸包含以所定義之模式或模體沿寡核苷酸或其一部分排列的經修飾及/或未經修飾之核鹼基。在某些實施例中，每一核鹼基均經修飾。在某些實施例中，核鹼基均不經修飾。在某些實施例中，每一嘌呤或每一嘧啶均經修飾。在某些實施例中，每一腺嘌呤均經修飾。在某些實施例中，每一鳥嘌呤均經修飾。在某些實施例中，每一胸腺嘧啶均經修飾。在某些實施例中，每一尿嘧啶均經修飾。在某些實施例中，每一胞嘧啶均經修飾。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸中之一些或所有胞嘧啶核鹼基為5-甲基胞嘧啶。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之所有胞嘧啶核鹼基均為5-甲基胞嘧啶且所有其他核鹼基均為未經修飾之核鹼基。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含經修飾之核鹼基之嵌段。在某些此等實施例中，嵌段位於寡核苷酸之3’端。在某些實施例中，嵌段位於寡核苷酸之3’端的3個核苷內。在某些實施例中，嵌段位於寡核苷酸之5’端。在某些實施例中，嵌段位於寡核苷酸之5’端的3個核苷內。
在某些實施例中，具有間隙聚體模體之寡核苷酸包含含有經修飾之核鹼基之核苷。在某些此等實施例中，一個包含經修飾之核鹼基之核苷位於具有間隙聚體模體之寡核苷酸之中央間隙中。在某些此等實施例中，核苷之糖部分為2'-去氧核糖基糖部分。在某些實施例中，經修飾之核鹼基選自：2-硫嘧啶及5-丙炔嘧啶。 3. 某些核苷間鍵聯模體
在某些實施例中，寡核苷酸包含以所定義之模式或模體沿寡核苷酸或其一部分排列的經修飾及/或未經修飾之核苷間鍵聯。在某些實施例中，每一核苷間連接基團為磷酸二酯核苷間鍵聯(P(O 2)=O)。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之每一核苷間連接基團為硫代磷酸酯核苷間鍵聯(P(O 2)=S)。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之每一核苷間鍵聯獨立地選自硫代磷酸酯核苷間鍵聯及磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，每一硫代磷酸酯核苷間鍵聯獨立地選自立體隨機硫代磷酸酯、 (Sp)硫代磷酸酯及 (Rp)硫代磷酸酯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之糖模體為間隙聚體且間隙內之核苷間鍵聯全部均經修飾。在某些此等實施例中，翼中之一些或所有核苷間鍵聯為未經修飾之磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，末端核苷間鍵聯經修飾。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之糖模體為間隙聚體，且核苷間鍵聯模體在至少一個翼中包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯，其中該至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯不為末端核苷間鍵聯，且其餘核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些此等實施例中，所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為立體隨機的。在某些實施例中，翼中之所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為 (Sp )硫代磷酸酯，且間隙包含至少一個 Sp, Sp, Rp模體。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集包含此等核苷間鍵聯模體之經修飾之寡核苷酸。
在某些實施例中，所有核苷間鍵聯均為磷酸二酯核苷間鍵聯或硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且掌性模體為(5’至3’)： Sp-o-o-o- Sp- Sp- Sp- Rp- Sp- Sp- Rp- Sp- Sp- Sp- Sp- Sp- Sp- Sp- Sp或 Sp-o-o-o- Sp- Sp- Sp- Rp- Sp- Sp- Sp- Sp- Sp- Sp- Sp- Sp- Sp- Sp- Sp，其中每一『 Sp』表示( Sp)硫代磷酸酯核苷間鍵聯，每一『 Rp』為 Rp核苷間鍵聯，且每一『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之群體富集包含此等核苷間鍵聯模體之經修飾之寡核苷酸。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸具有sooosssssssssssooss之核苷間鍵聯模體，其中每一「s」表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯且每一「o」表示磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸具有如下核苷間鍵聯模體(5’至3’)：sooooossssssssssoss，其中每一「s」表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且每一「o」表示磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸具有如下核苷間鍵聯模體(5’至3’)：soooossssssssssooss，其中每一「s」表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且每一「o」表示磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸具有如下核苷間鍵聯模體(5’至3’)：sooosssssssssooss，其中每一「s」表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且每一「o」表示磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸具有如下核苷間鍵聯模體(5’至3’)：sooossssssssssoooss，其中每一「s」表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且每一「o」表示磷酸二酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸具有如下核苷間鍵聯模體(5’至3’)：sooosssssssssssssss，其中每一「s」表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且每一「o」表示磷酸二酯核苷間鍵聯。 C. 某些長度
可增加或減小寡核苷酸之長度，而不消除活性。舉例而言，在Woolf等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309，1992中，測試了一系列長度為13-25個核鹼基之寡核苷酸在卵母細胞注射模型中誘導靶核酸裂解之能力。長度為25個核鹼基且在寡核苷酸末端附近具有8個或11個錯配鹼基之寡核苷酸能夠引導靶核酸之特異性裂解，但程度較不含錯配之寡核苷酸低。類似地，使用13個核鹼基寡核苷酸(包括具有1或3個錯配之彼等寡核苷酸)達成靶標特異性裂解。
在某些實施例中，寡核苷酸(包括經修飾之寡核苷酸)可具有多種長度範圍中之任一者。在某些實施例中，寡核苷酸由X至Y個連接之核苷組成，其中X表示範圍內最少之核苷數目，且Y表示範圍內最大之核苷數目。在某些此等實施例中，X及Y各自獨立地選自8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49及50；條件係X≤Y。舉例而言，在某些實施例中，寡核苷酸由12至13、12至14、12至15、12至16、12至17、12至18、12至19、12至20、12至21、12至22、12至23、12至24、12至25、12至26、12至27、12至28、12至29、12至30、13至14、13至15、13至16、13至17、13至18、13至19、13至20、13至21、13至22、13至23、13至24、13至25、13至26、13至27、13至28、13至29、13至30、14至15、14至16、14至17、14至18、14至19、14至20、14至21、14至22、14至23、14至24、14至25、14至26、14至27、14至28、14至29、14至30、15至16、15至17、15至18、15至19、15至20、15至21、15至22、15至23、15至24、15至25、15至26、15至27、15至28、15至29、15至30、16至17、16至18、16至19、16至20、16至21、16至22、16至23、16至24、16至25、16至26、16至27、16至28、16至29、16至30、17至18、17至19、17至20、17至21、17至22、17至23、17至24、17至25、17至26、17至27、17至28、17至29、17至30、18至19、18至20、18至21、18至22、18至23、18至24、18至25、18至26、18至27、18至28、18至29、18至30、19至20、19至21、19至22、19至23、19至24、19至25、19至26、19至29、19至28、19至29、19至30、20至21、20至22、20至23、20至24、20至25、20至26、20至27、20至28、20至29、20至30、21至22、21至23、21至24、21至25、21至26、21至27、21至28、21至29、21至30、22至23、22至24、22至25、22至26、22至27、22至28、22至29、22至30、23至24、23至25、23至26、23至27、23至28、23至29、23至30、24至25、24至26、24至27、24至28、24至29、24至30、25至26、25至27、25至28、25至29、25至30、26至27、26至28、26至29、26至30、27至28、27至29、27至30、28至29、28至30或29至30個連接之核苷組成。 D. 某些經修飾之寡核苷酸
在某些實施例中，將上述修飾(糖、核鹼基、核苷間鍵聯)併入至經修飾之寡核苷酸中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸之特徵在於其修飾模體及總長度。在某些實施例中，此等參數各自彼此獨立。因此，除非另有指示，否則具有間隙聚體糖模體之寡核苷酸之每一核苷間鍵聯可經修飾或未經修飾，且可遵循或可不遵循糖修飾之間隙聚體修飾模式。舉例而言，糖間隙聚體之翼區內的核苷間鍵聯可彼此相同或不同，且可與糖模體之間隙區之核苷間鍵聯相同或不同。同樣，此等糖間隙聚體寡核苷酸可包含一或多個經修飾之核鹼基，此與糖修飾之間隙聚體模式無關。除非另有指示，否則所有修飾均與核鹼基序列無關。 E. 經修飾之寡核苷酸之某些群體
群體中所有經修飾之寡核苷酸均具有相同分子式的經修飾之寡核苷酸之群體可為立體隨機群體或掌性富集群體。在立體隨機群體中，所有經修飾之寡核苷酸之所有掌性中心均為立體隨機的。在掌性富集群體中，至少一個特定掌性中心在該群體之經修飾之寡核苷酸中不為立體隨機的。在某些實施例中，掌性富集群體之經修飾之寡核苷酸富集β-D核糖基糖部分，且所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為立體隨機的。在某些實施例中，掌性富集群體之經修飾之寡核苷酸富集β-D核糖基糖部分及至少一個呈特定立體化學組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯二者。 F. 核鹼基序列
在某些實施例中，寡核苷酸(未經修飾或經修飾之寡核苷酸)進一步由其核鹼基序列描述。在某些實施例中，寡核苷酸具有與第二寡核苷酸或鑑別之參照核酸(諸如靶核酸)互補之核鹼基序列。在某些此等實施例中，寡核苷酸之一部分具有與第二寡核苷酸或鑑別之參照核酸(諸如靶核酸)互補之核鹼基序列。在某些實施例中，寡核苷酸之一部分或整個長度上之核鹼基序列與第二寡核苷酸或核酸(諸如靶核酸)至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%互補。 II. 某些寡聚化合物
在某些實施例中，本文提供寡聚化合物，其由寡核苷酸(經修飾或未經修飾)及視情況一或多個結合基團及/或末端基團組成。結合基團由一或多個結合部分及將結合部分連接至寡核苷酸之結合連接體組成。結合基團可連接至寡核苷酸之一端或兩端及/或連接在任一內部位置。在某些實施例中，結合基團連接至經修飾之寡核苷酸之核苷的2'位。在某些實施例中，連接至寡核苷酸之一端或兩端的結合基團為末端基團。在某些此等實施例中，結合基團或末端基團連接在寡核苷酸之3’端及/或5’端。在某些此等實施例中，結合基團(或末端基團)連接在寡核苷酸之3’端。在某些實施例中，結合基團連接在寡核苷酸之3’端附近。在某些實施例中，結合基團(或末端基團)連接在寡核苷酸之5’端。在某些實施例中，結合基團連接在寡核苷酸之5’端附近。
末端基團之實例包括(但不限於)結合基團、封端基團、磷酸酯部分、保護基團、無鹼基核苷、經修飾或未經修飾之核苷及兩個或更多個獨立地經修飾或未經修飾之核苷。 A. 某些結合基團
在某些實施例中，寡核苷酸共價連接至一或多個結合基團。在某些實施例中，結合基團使所連接之寡核苷酸之一或多種性質改質，包括(但不限於)藥效學、藥物動力學、穩定性、結合、吸收、組織分佈、細胞分佈、細胞攝取、電荷及清除。在某些實施例中，結合基團賦予所連接之寡核苷酸新的性質，例如使得能夠偵測寡核苷酸之螢光團或報導基團。某些結合基團及結合部分先前已予以闡述，例如：膽固醇部分(Letsinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，1989，86，6553-6556)；膽酸(Manoharan等人， Bioorg. Med. Chem. Lett.，1994， 4，1053-1060)；硫醚，例如己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等人， Ann. N.Y. Acad. Sci.，1992， 660，306-309；Manoharan等人， Bioorg. Med. Chem. Lett. ，1993， 3，2765-2770)；硫膽固醇(Oberhauser等人， Nucl. Acids Res.，1992， 20，533-538)；脂肪族鏈，例如十二烷-二醇或十一烷基殘基(Saison-Behmoaras等人， EMBO J. ，1991， 10，1111-1118；Kabanov等人， FEBS Lett.，1990， 259，327-330；Svinarchuk等人， Biochimie，1993， 75，49-54)；磷脂，例如二-十六烷基-外消旋-甘油或1,2-二-O-十六烷基-外消旋-甘油-3-H-膦酸三乙基銨(Manoharan等人， Tetrahedron Lett.，1995， 36，3651-3654；Shea等人， Nucl. Acids Res.，1990， 18，3777-3783)；聚胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人， Nucleosides & Nucleotides，1995， 14，969-973)；或金剛烷乙酸、棕櫚基部分(Mishra等人， Biochim. Biophys. Acta，1995， 1264 ，229-237)；十八烷基胺或己胺基-羰基-羥膽固醇部分(Crooke等人， J. Pharmacol. Exp. Ther. ，1996， 277，923-937)；生育酚基團(Nishina等人， Molecular Therapy Nucleic Acids，2015， 4，e220；及Nishina等人， Molecular Therapy ，2008， 16，734-740)；或GalNAc簇(例如WO2014/179620)。 1. 結合部分
結合部分包括(但不限於)嵌插物、報導分子、聚胺、聚醯胺、肽、碳水化合物、維生素部分、聚乙二醇、硫醚、聚醚、膽固醇、硫膽固醇、膽酸部分、葉酸鹽、脂質、親脂基團、磷脂、生物素、吩嗪、菲啶、蒽醌、金剛烷、吖啶、螢光黃、玫瑰紅、香豆素、螢光團及染料。
在某些實施例中，結合部分包含活性原料藥，例如阿司匹林(aspirin)、華法林(warfarin)、苯丁吡唑酮(phenylbutazone)、布洛芬(ibuprofen)、舒洛芬(suprofen)、芬布芬(fen-bufen)、酮洛芬(ketoprofen)、( S)-(+)-普拉洛芬(pranoprofen)、卡洛芬(carprofen)、丹磺醯肌胺酸(dansylsarcosine)、2,3,5-三碘苯甲酸、芬戈莫德(fingolimod)、氟芬那酸(flufenamic acid)、醛葉酸、苯并噻二嗪、氯噻嗪、二氮呯、吲哚美辛(indo-methicin)、巴比妥酸鹽(barbiturate)、頭孢菌素(cephalosporin)、磺胺藥、抗糖尿病藥、抗細菌劑或抗生素。 2. 結合連接體
結合部分經由結合連接體連接至寡核苷酸。在某些寡聚化合物中，結合連接體為單一化學鍵(亦即，結合部分經由單鍵直接連接至寡核苷酸)。在某些寡聚化合物中，結合部分經由更複雜之結合連接體連接至寡核苷酸，該更複雜之結合連接體包含一或多個結合連接體部分，該(等)結合連接體部分係構成結合連接體之亞單元。在某些實施例中，結合連接體包含諸如烴基鏈等鏈結構或諸如乙二醇、核苷或胺基酸單元等重複單元之寡聚物。
在某些實施例中，結合連接體包含一或多個選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚及羥基胺基。在某些此等實施例中，結合連接體包含選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺及醚基。在某些實施例中，結合連接體包含選自烷基及醯胺基之基團。在某些實施例中，結合連接體包含選自烷基及醚基之基團。在某些實施例中，結合連接體包含至少一個磷部分。在某些實施例中，結合連接體包含至少一個磷酸基。在某些實施例中，結合連接體包括至少一個中性連接基團。
在某些實施例中，結合連接體、包括上文所闡述之結合連接體為雙官能連接部分，例如此項技術中已知可用於將結合基團連接至母體化合物之彼等雙官能連接部分，諸如本文所提供之寡核苷酸。一般而言，雙官能連接部分包含至少兩個官能基。選擇一個官能基結合至母體化合物上之特定位點，且選擇另一官能基結合至結合基團。雙官能連接部分中所用官能基之實例包括(但不限於)用於與親核基團反應之親電子體及用於與親電子基團反應之親核體。在某些實施例中，雙官能連接部分包含一或多個選自以下之基團：胺基、羥基、羧酸、硫醇、烷基、烯基及炔基。
結合連接體之實例包括(但不限於)吡咯啶、8-胺基-3,6-二氧雜辛酸(ADO)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺基酯(SMCC)及6-胺基己酸(AHEX或AHA)。其他結合連接體包括(但不限於)經取代或未經取代之C 1-C 10烷基、經取代或未經取代之C 2-C 10烯基或經取代或未經取代之C 2-C 10炔基，其中較佳取代基之非限制性列表包括羥基、胺基、烷氧基、羧基、苄基、苯基、硝基、硫醇、硫基烷氧基、鹵素、烷基、芳基、烯基及炔基。
在某些實施例中，結合連接體包含1-10個連接體核苷。在某些實施例中，結合連接體包含2-5個連接體核苷。在某些實施例中，結合連接體包含恰好3個連接體核苷。在某些實施例中，結合連接體包含TCA模體。在某些實施例中，此等連接體核苷為經修飾之核苷。在某些實施例中，此等連接體核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，連接體核苷未經修飾。在某些實施例中，連接體核苷包含選自以下之視情況經保護之雜環鹼基：嘌呤、經取代之嘌呤、嘧啶或經取代之嘧啶。在某些實施例中，可裂解部分為選自以下之核苷：尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、4-N-苯甲醯基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、4-N-苯甲醯基-5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤、6-N-苯甲醯基腺嘌呤、鳥嘌呤及2-N-異丁醯基鳥嘌呤。通常期望連接體核苷在寡聚化合物到達靶組織後自寡聚化合物裂解。因此，連接體核苷通常經由可裂解鍵彼此連接及連接至寡聚化合物之其餘部分。在某些實施例中，此等可裂解鍵係磷酸二酯鍵。
在本文中，連接體核苷不視為寡核苷酸之一部分。因此，在寡聚化合物包含由指定數目或範圍之連接核苷組成及/或與參照核酸具有指定互補性百分比之寡核苷酸且寡聚化合物亦包含含有結合連接體(包含連接體核苷)之結合基團的實施例中，彼等連接體核苷不計入寡核苷酸之長度且不用於確定寡核苷酸對於參照核酸之互補性百分比。舉例而言，寡聚化合物可包含(1)經修飾之寡核苷酸，其由8-30個核苷組成及(2)結合基團，其包含1-10個與經修飾之寡核苷酸之核苷鄰接的連接體核苷。在此一寡聚化合物中，鄰接連接之核苷總數大於30。或者，寡聚化合物可包含由8-30個核苷組成的經修飾之寡核苷酸且無結合基團。在此一寡聚化合物中，鄰接連接之核苷總數不超過30。除非另有指示，否則結合連接體包含不超過10個連接體核苷。在某些實施例中，結合連接體包含不超過5個連接體核苷。在某些實施例中，結合連接體包含不超過3個連接體核苷。在某些實施例中，結合連接體包含不超過2個連接體核苷。在某些實施例中，結合連接體包含不超過1個連接體核苷。
在某些實施例中，期望結合基團自寡核苷酸裂解。舉例而言，在某些情況中，包含特定結合部分之寡聚化合物較佳由特定細胞類型攝取，但一旦寡聚化合物已被攝取，則期望裂解結合基團以釋放未結合之寡核苷酸或母體寡核苷酸。因此，某些結合連接體可包含一或多個可裂解部分。在某些實施例中，可裂解部分為可裂解鍵。在某些實施例中，可裂解部分為包含至少一個可裂解鍵之原子團。在某些實施例中，可裂解部分包含具有一個、兩個、三個、四個或四個以上可裂解鍵之原子團。在某些實施例中，可裂解部分在細胞或亞細胞區室(諸如溶酶體)內部選擇性裂解。在某些實施例中，可裂解部分由內源性酶(諸如核酸酶)選擇性裂解。
在某些實施例中，可裂解鍵選自：醯胺、酯、醚、磷酸二酯之一個或兩個酯、磷酸酯、胺基甲酸酯或二硫化物。在某些實施例中，可裂解鍵為磷酸二酯之一個或兩個酯。在某些實施例中，可裂解部分包含磷酸酯或磷酸二酯。在某些實施例中，可裂解部分為寡核苷酸與結合部分或結合基團之間的磷酸酯或磷酸二酯鍵聯。
在某些實施例中，可裂解部分包含一或多個連接體核苷或由其組成。在某些此等實施例中，該一或多個連接體核苷經由可裂解鍵彼此連接及/或連接至寡聚化合物之其餘部分。在某些實施例中，此等可裂解鍵為未經修飾之磷酸二酯鍵。在某些實施例中，可裂解部分為2'-去氧核苷，該2'-去氧核苷藉由磷酸二酯核苷間鍵聯連接至寡核苷酸之3'或5'末端核苷且藉由磷酸酯或硫代磷酸酯核苷間鍵聯共價連接至結合連接體或結合部分之其餘部分。在某些此等實施例中，可裂解部分為2'-去氧腺苷。 3. 細胞靶向部分
在某些實施例中，結合基團包含細胞靶向部分。在某些實施例中，結合基團具有以下通式：
Figure 02_image027
其中n為1至約3，當n為1時m為0，當n為2或大於2時m為1，j為1或0，且k為1或0。
在某些實施例中，n為1，j為1且k為0。在某些實施例中，n為1，j為0且k為1。在某些實施例中，n為1，j為1且k為1。在某些實施例中，n為2，j為1且k為0。在某些實施例中，n為2，j為0且k為1。在某些實施例中，n為2，j為1且k為1。在某些實施例中，n為3，j為1且k為0。在某些實施例中，n為3，j為0且k為1。在某些實施例中，n為3，j為1且k為1。
在某些實施例中，結合基團包含具有至少一個拴系配位體之細胞靶向部分。在某些實施例中，細胞靶向部分包含兩個共價連接至分枝基團之拴系配位體。在某些實施例中，細胞靶向部分包含三個共價連接至分枝基團之拴系配位體。 B. 某些末端基團
在某些實施例中，寡聚化合物包含一或多個末端基團。在某些此等實施例中，寡聚化合物包含經穩定化之5’-磷酸酯。經穩定化之5’-磷酸酯包括(但不限於) 5’-膦酸酯，包括(但不限於) 5’-乙烯基膦酸酯。在某些實施例中，末端基團包含一或多個無鹼基核苷及/或反向核苷。在某些實施例中，末端基團包含一或多個2’連接之核苷。在某些此等實施例中，2’連接之核苷為無鹼基核苷。 III. 寡聚雙鏈體
在某些實施例中，本文所闡述之寡聚化合物包含具有與靶核酸之核鹼基序列互補之核鹼基序列的寡核苷酸。在某些實施例中，寡聚化合物與第二寡聚化合物配對以形成寡聚雙鏈體。此等寡聚雙鏈體包含具有與靶核酸互補之部分的第一寡聚化合物及具有與該第一寡聚化合物互補之部分的第二寡聚化合物。在某些實施例中，寡聚雙鏈體之第一寡聚化合物包含以下或由其組成：(1)經修飾或未經修飾之寡核苷酸及視情況結合基團，及(2)第二經修飾或未經修飾之寡核苷酸及視情況結合基團。寡聚雙鏈體之一種或全部兩種寡聚化合物可包含結合基團。寡聚雙鏈體之每一寡聚化合物之寡核苷酸可包括非互補懸垂核苷。 IV. 反義活性
在某些實施例中，寡聚化合物及寡聚雙鏈體能夠與靶核酸雜交，從而產生至少一種反義活性；此等寡聚化合物及寡聚雙鏈體為反義化合物。在某些實施例中，當反義化合物在標準細胞分析中使靶核酸之量或活性降低25%或更多時，其具有反義活性。在某些實施例中，反義化合物選擇性地影響一或多種靶核酸。此等反義化合物包含如下核鹼基序列：其與一或多種靶核酸雜交，從而產生一或多種期望之反義活性，且不與一或多種非靶核酸雜交或不以導致產生顯著不期望之反義活性的方式與一或多種非靶核酸雜交。
在某些反義活性中，反義化合物與靶核酸之雜交使得裂解靶核酸之蛋白質募集。舉例而言，某些反義化合物導致RNA酶H介導之靶核酸裂解。RNA酶H係細胞內核酸酶，其裂解RNA:DNA雙鏈體之RNA股。此一RNA:DNA雙鏈體中之DNA不需要為未經修飾之DNA。在某些實施例中，本文闡述足夠為「DNA樣」以引發RNA酶H活性之反義化合物。在某些實施例中，容許間隙聚體之間隙中存在一或多個非DNA樣核苷。
在某些反義活性中，反義化合物或反義化合物之一部分加載至RNA誘導之沈默複合物(RISC)中，最終導致靶核酸裂解。舉例而言，某些反義化合物使得靶核酸由亞古爾蛋白(Argonaute)裂解。加載至RISC中之反義化合物為RNAi化合物。RNAi化合物可為雙股(siRNA)或單股(ssRNA)。
在某些實施例中，反義化合物與靶核酸之雜交不會使裂解該靶核酸之蛋白質募集。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸之雜交導致靶核酸之剪接改變。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸之雜交導致抑制靶核酸與蛋白質或其他核酸之間的結合相互作用。在某些實施例中，反義化合物與靶核酸之雜交導致靶核酸之轉譯改變。
可直接或間接地觀察反義活性。在某些實施例中，觀察或偵測反義活性涉及觀察或偵測靶核酸或由該靶核酸編碼的蛋白質之量的變化、核酸或蛋白質之剪接變異體之比率的變化及/或細胞或個體之表型變化。 V. 某些靶核酸
在某些實施例中，寡聚化合物包含含有與靶核酸互補之部分的寡核苷酸或由其組成。在某些實施例中，靶核酸為內源性RNA分子。在某些實施例中，靶核酸編碼蛋白質。在某些此等實施例中，靶核酸選自：成熟mRNA及前mRNA，包括內含子、外顯子及非轉譯區。在某些實施例中，靶核酸為成熟mRNA。在某些實施例中，靶核酸為前mRNA。在某些實施例中，靶區完全位於內含子內。在某些實施例中，靶區跨內含子/外顯子接點。在某些實施例中，靶區至少50%位於內含子內。 A. 與靶核酸之互補性 / 錯配
可引入錯配鹼基而不消除活性。舉例而言，Gautschi等人(J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471，2001年3月)展示與bcl-2 mRNA具有100%互補性且與bcl-xL mRNA具有3個錯配之寡核苷酸能夠降低bcl-2及bcl-xL二者在活體外及活體內之表現。此外，此寡核苷酸展示強效活體內抗腫瘤活性。Maher及Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358，1988)測試了一系列串聯之14核鹼基寡核苷酸及包含兩個或三個串聯寡核苷酸之序列的28及42核鹼基寡核苷酸分別在兔網狀紅血球分析中阻止人類DHFR之轉譯的能力。三個14核鹼基寡核苷酸中之每一者單獨地能夠抑制轉譯，但較28或42核鹼基寡核苷酸處於更適中之水準。
在某些實施例中，寡核苷酸在寡核苷酸之整個長度上與靶核酸互補。在某些實施例中，寡核苷酸與靶核酸99%、95%、90%、85%或80%互補。在某些實施例中，寡核苷酸在寡核苷酸之整個長度上與靶核酸至少80%互補且包含與靶核酸100%或完全互補之部分。在某些實施例中，完全互補之部分的長度為6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個核鹼基。
在某些實施例中，寡核苷酸相對於靶核酸包含一或多個錯配核鹼基。在某些實施例中，針對靶標之反義活性因該錯配而降低，但針對非靶標之活性所降低之量更大。因此，在某些實施例中，寡核苷酸之選擇性得以改良。在某些實施例中，錯配特定地定位於具有間隙聚體模體之寡核苷酸內。在某些實施例中，錯配位於自間隙區5’端之1位、2位、3位、4位、5位、6位、7位、8位、9位、10位或11位處。在某些實施例中，錯配位於自5’翼區或3’翼區5’端之1位、2位、3位、4位、5位或6位處。 B.       AGT
在某些實施例中，寡聚化合物包含與靶核酸互補之寡核苷酸或由其組成，其中該靶核酸係AGT核酸。在某些實施例中，AGT核酸具有SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NM_000029.3)或SEQ ID NO: 2 (自核苷酸230700001至230718000截短之GENBANK登錄號NC_000001.11之互補序列)中所示之序列。
在某些實施例中，使細胞與同SEQ ID NO: 1及2中之任一者互補之寡聚化合物接觸使AGT RNA之量降低，且在某些實施例中使AGT蛋白之量降低。在某些實施例中，寡聚化合物由經修飾之寡核苷酸組成。在某些實施例中，使細胞與同SEQ ID NO: 1及2中之任一者互補之寡聚化合物接觸使細胞中AGT RNA之量降低，且在某些實施例中使細胞中AGT蛋白之量降低。在某些實施例中，細胞在活體外。在某些實施例中，細胞在個體體內。在某些實施例中，寡聚化合物由經修飾之寡核苷酸組成。在某些實施例中，使個體中之細胞與同SEQ ID NO: 1及2中之任一者互補之寡聚化合物接觸改善心血管疾病之一或多種症狀或標誌。在某些實施例中，疾病為高血壓。在某些實施例中，疾病為頑固性高血壓。在某些實施例中，疾病為馬凡氏症候群。在某些實施例中，疾病為心臟衰竭。在某些實施例中，症狀或標誌選自高血壓、慢性腎病、中風、心肌梗塞、心臟衰竭、心臟瓣膜疾病、血管動脈瘤、外周動脈疾病及器官損傷。
在某些實施例中，當根據標準細胞分析投與時，與SEQ ID NO: 1及2中之任一者互補之寡聚化合物能夠使活體外AGT RNA之可偵測量降低至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在某些實施例中，當根據標準活體外分析投與時，與SEQ ID NO: 1或2互補之寡聚化合物能夠使活體外AGT之量降低至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在某些實施例中，與SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2互補之寡聚化合物能夠使個體之AGT RNA之可偵測量降低至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。 VI. 某些結合化合物
在某些實施例中，本文所闡述之寡聚化合物包含寡核苷酸(經修飾或未經修飾)及視情況一或多個結合基團及/或末端基團，或由其組成。結合基團由一或多個結合部分及將結合部分連接至寡核苷酸之結合連接體組成。結合基團可連接至寡核苷酸之一端或兩端及/或連接在任一內部位置。在某些實施例中，結合基團連接至經修飾之寡核苷酸之核苷的2'位。在某些實施例中，連接至寡核苷酸之一端或兩端的結合基團為末端基團。在某些此等實施例中，結合基團或末端基團連接在寡核苷酸之3’端及/或5’端。在某些此等實施例中，結合基團(或末端基團)連接在寡核苷酸之3’端。在某些實施例中，結合基團連接在寡核苷酸之3’端附近。在某些實施例中，結合基團(或末端基團)連接在寡核苷酸之5’端。在某些實施例中，結合基團連接在寡核苷酸之5’端附近。
在某些實施例中，寡核苷酸經修飾。在某些實施例中，化合物之寡核苷酸具有與靶核酸互補之核鹼基序列。在某些實施例中，寡核苷酸與信使RNA (mRNA)互補。在某些實施例中，寡核苷酸與前mRNA互補。在某些實施例中，寡核苷酸與有義轉錄物互補。
末端基團之實例包括(但不限於)結合基團、封端基團、磷酸酯部分、保護基團、經修飾或未經修飾之核苷及兩個或更多個獨立地經修飾或未經修飾之核苷。
在某些實施例中，寡核苷酸共價連接至一或多個結合基團。在某些實施例中，結合基團使所連接之寡核苷酸之一或多種性質改質，包括(但不限於)藥效學、藥物動力學、穩定性、結合、吸收、組織分佈、細胞分佈、細胞攝取、電荷及清除。在某些實施例中，結合基團賦予所連接之寡核苷酸新的性質，例如使得能夠偵測寡核苷酸之螢光團或報導基團。某些結合基團及結合部分先前已予以闡述，例如：膽固醇部分(Letsinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，1989，86，6553-6556)；膽酸(Manoharan等人， Bioorg. Med. Chem. Lett.，1994， 4，1053-1060)；硫醚，例如己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan等人， Ann. N.Y. Acad. Sci.，1992， 660，306-309；Manoharan等人， Bioorg. Med. Chem. Lett. ，1993， 3，2765-2770)；硫膽固醇(Oberhauser等人， Nucl. Acids Res.，1992， 20，533-538)；脂肪族鏈，例如十二烷-二醇或十一烷基殘基(Saison-Behmoaras等人， EMBO J. ，1991， 10，1111-1118；Kabanov等人， FEBS Lett.，1990， 259，327-330；Svinarchuk等人， Biochimie，1993， 75，49-54)；磷脂，例如二-十六烷基-外消旋-甘油或1,2-二-O-十六烷基-外消旋-甘油-3-H-膦酸三乙基銨(Manoharan等人， Tetrahedron Lett.，1995， 36，3651-3654；Shea等人， Nucl. Acids Res.，1990， 18，3777-3783)；聚胺或聚乙二醇鏈(Manoharan等人， Nucleosides & Nucleotides，1995， 14，969-973)；或金剛烷乙酸、棕櫚基部分(Mishra等人， Biochim. Biophys. Acta，1995， 1264 ，229-237)；十八烷基胺或己胺基-羰基-羥膽固醇部分(Crooke等人， J. Pharmacol. Exp. Ther. ，1996， 277，923-937)；生育酚基團(Nishina等人， Molecular Therapy Nucleic Acids，2015， 4，e220；及Nishina等人， Molecular Therapy ，2008， 16，734-740)；或GalNAc簇(例如WO2014/179620)。 1.    結合部分
結合部分包括(但不限於)嵌插物、報導分子、聚胺、聚醯胺、肽、碳水化合物(例如GalNAc)、維生素部分、聚乙二醇、硫醚、聚醚、膽固醇、硫膽固醇、膽酸部分、葉酸鹽、脂質、磷脂、生物素、吩嗪、菲啶、蒽醌、金剛烷、吖啶、螢光黃、玫瑰紅、香豆素、螢光團及染料。
在某些實施例中，結合部分包含活性原料藥，例如阿司匹林、華法林、苯丁吡唑酮、布洛芬、舒洛芬、芬布芬、酮洛芬、( S)-(+)-普拉洛芬、卡洛芬、丹磺醯肌胺酸、2,3,5-三碘苯甲酸、芬戈莫德、氟芬那酸、醛葉酸、苯并噻二嗪、氯噻嗪、二氮呯、吲哚美辛、巴比妥酸鹽、頭孢菌素、磺胺藥、抗糖尿病藥、抗細菌劑或抗生素。 2.          結合連接體
結合部分經由結合連接體連接至寡核苷酸。在某些化合物中，結合連接體為單一化學鍵(亦即，結合部分經由單鍵直接連接至寡核苷酸)。在某些化合物中，結合部分經由更複雜之結合連接體連接至寡核苷酸，該更複雜之結合連接體包含一或多個結合連接體部分，該(等)結合連接體部分係構成結合連接體之亞單元。在某些實施例中，結合連接體包含諸如烴基鏈等鏈結構或諸如乙二醇、核苷或胺基酸單元等重複單元之寡聚物。
在某些實施例中，結合連接體包含一或多個選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚及羥基胺基。在某些此等實施例中，結合連接體包含選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺及醚基。在某些實施例中，結合連接體包含選自烷基及醯胺基之基團。在某些實施例中，結合連接體包含選自烷基及醚基之基團。在某些實施例中，結合連接體包含至少一個磷部分。在某些實施例中，結合連接體包含至少一個磷酸基。在某些實施例中，結合連接體包括至少一個中性連接基團。
在某些實施例中，結合連接體、包括上文所闡述之結合連接體為雙官能連接部分，例如此項技術中已知可用於將結合基團連接至母體化合物之彼等雙官能連接部分，諸如本文所提供之寡核苷酸。一般而言，雙官能連接部分包含至少兩個官能基。選擇一個官能基結合至母體化合物上之特定位點，且選擇另一官能基結合至結合基團。雙官能連接部分中所用官能基之實例包括(但不限於)用於與親核基團反應之親電子體及用於與親電子基團反應之親核體。在某些實施例中，雙官能連接部分包含一或多個選自以下之基團：胺基、羥基、羧酸、硫醇、烷基、烯基及炔基。
結合連接體之實例包括(但不限於)吡咯啶、8-胺基-3,6-二氧雜辛酸(ADO)、4-(N-馬來醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸琥珀醯亞胺基酯(SMCC)及6-胺基己酸(AHEX或AHA)。其他結合連接體包括(但不限於)經取代或未經取代之C 1-C 10烷基、經取代或未經取代之C 2-C 10烯基或經取代或未經取代之C 2-C 10炔基，其中較佳取代基之非限制性列表包括羥基、胺基、烷氧基、羧基、苄基、苯基、硝基、硫醇、硫基烷氧基、鹵素、烷基、芳基、烯基及炔基。
在某些實施例中，結合連接體包含1-10個連接體核苷。在某些實施例中，此等連接體核苷為經修飾之核苷。在某些實施例中，此等連接體核苷包含經修飾之糖部分。在某些實施例中，連接體核苷未經修飾。在某些實施例中，連接體核苷包含選自以下之視情況經保護之雜環鹼基：嘌呤、經取代之嘌呤、嘧啶或經取代之嘧啶。在某些實施例中，可裂解部分為選自以下之核苷：尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、4-N-苯甲醯基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、4-N-苯甲醯基-5-甲基胞嘧啶、腺嘌呤、6-N-苯甲醯基腺嘌呤、鳥嘌呤及2-N-異丁醯基鳥嘌呤。通常期望連接體核苷在化合物到達靶組織後自化合物裂解。因此，連接體核苷通常經由可裂解鍵彼此連接及連接至化合物之其餘部分。在某些實施例中，此等可裂解鍵為磷酸二酯鍵。
在本文中，連接體核苷不視為寡核苷酸之一部分。因此，在化合物包含由指定數目或範圍之連接核苷組成及/或與參照核酸具有指定互補性百分比之寡核苷酸且化合物亦包含含有結合連接體(包含連接體核苷)之結合基團的實施例中，彼等連接體核苷不計入寡核苷酸之長度且不用於確定寡核苷酸對於參照核酸之互補性百分比。舉例而言，化合物可包含(1)經修飾之寡核苷酸，其由8-30個核苷組成及(2)結合基團，其包含1-10個與經修飾之寡核苷酸之核苷鄰接的連接體核苷。在此一化合物中，鄰接連接之核苷總數大於30。或者，化合物可包含由8-30個核苷組成的經修飾之寡核苷酸且無結合基團。在此一化合物中，鄰接連接之核苷總數不超過30。除非另有指示，否則結合連接體包含不超過10個連接體核苷。在某些實施例中，結合連接體包含不超過5個連接體核苷。在某些實施例中，結合連接體包含不超過3個連接體核苷。在某些實施例中，結合連接體包含不超過2個連接體核苷。在某些實施例中，結合連接體包含不超過1個連接體核苷。
在某些實施例中，期望結合基團自寡核苷酸裂解。舉例而言，在某些情況中，包含特定結合部分之化合物較佳由特定細胞類型攝取，但一旦化合物已被攝取，則期望裂解結合基團以釋放未結合之寡核苷酸或母體寡核苷酸。因此，某些結合連接體可包含一或多個可裂解部分。在某些實施例中，可裂解部分為可裂解鍵。在某些實施例中，可裂解部分為包含至少一個可裂解鍵之原子團。在某些實施例中，可裂解部分包含具有一個、兩個、三個、四個或四個以上可裂解鍵之原子團。在某些實施例中，可裂解部分在細胞或亞細胞區室(諸如溶酶體)內部選擇性裂解。在某些實施例中，可裂解部分由內源性酶(諸如核酸酶)選擇性裂解。
在某些實施例中，可裂解鍵選自：醯胺、酯、醚、磷酸二酯之一個或兩個酯、磷酸酯、胺基甲酸酯或二硫化物。在某些實施例中，可裂解鍵為磷酸二酯之一個或兩個酯。在某些實施例中，可裂解部分包含磷酸酯或磷酸二酯。在某些實施例中，可裂解部分為寡核苷酸與結合部分或結合基團之間的磷酸酯鍵聯。
在某些實施例中，可裂解部分包含一或多個連接體核苷或由其組成。在某些此等實施例中，該一或多個連接體核苷經由可裂解鍵彼此連接及/或連接至化合物之其餘部分。在某些實施例中，此等可裂解鍵為未經修飾之磷酸二酯鍵。在某些實施例中，可裂解部分為2'-去氧核苷，該2'-去氧核苷藉由磷酸酯核苷間鍵聯連接至寡核苷酸之3'或5'末端核苷且藉由磷酸酯或硫代磷酸酯鍵聯共價連接至結合連接體或結合部分之其餘部分。在某些此等實施例中，可裂解部分為2'-去氧腺苷。 3. 某些細胞靶向結合部分
在某些實施例中，結合基團包含細胞靶向結合部分。在某些實施例中，結合基團具有以下通式：
Figure 02_image029
其中n為1至約3，當n為1時m為0，當n為2或大於2時m為1，j為1或0，且k為1或0。
在某些實施例中，n為1，j為1且k為0。在某些實施例中，n為1，j為0且k為1。在某些實施例中，n為1，j為1且k為1。在某些實施例中，n為2，j為1且k為0。在某些實施例中，n為2，j為0且k為1。在某些實施例中，n為2，j為1且k為1。在某些實施例中，n為3，j為1且k為0。在某些實施例中，n為3，j為0且k為1。在某些實施例中，n為3，j為1且k為1。
在某些實施例中，結合基團包含具有至少一個拴系配位體之細胞靶向部分。在某些實施例中，細胞靶向部分包含兩個共價連接至分枝基團之拴系配位體。在某些實施例中，細胞靶向部分包含三個共價連接至分枝基團之拴系配位體。
在某些實施例中，細胞靶向部分包含分枝基團，該分枝基團包含一或多個選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚及羥基胺基。在某些實施例中，分枝基團包含分枝脂肪族基團，該分枝脂肪族基團包含選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺、二硫化物、聚乙二醇、醚、硫醚及羥基胺基。在某些此等實施例中，分枝脂肪族基團包含選自以下之基團：烷基、胺基、側氧基、醯胺及醚基。在某些此等實施例中，分枝脂肪族基團包含選自烷基、胺基及醚基之基團。在某些此等實施例中，分枝脂肪族基團包含選自烷基及醚基之基團。在某些實施例中，分枝基團包含單環或多環系統。
在某些實施例中，細胞靶向部分之每一系鏈包含一或多個選自以下之呈任何組合之基團：烷基、經取代之烷基、醚、硫醚、二硫化物、胺基、側氧基、醯胺、磷酸二酯及聚乙二醇。在某些實施例中，每一系鏈係直鏈脂肪族基團，其包含一或多個選自以下之呈任何組合之基團：烷基、醚、硫醚、二硫化物、胺基、側氧基、醯胺及聚乙二醇。在某些實施例中，每一系鏈係直鏈脂肪族基團，其包含一或多個選自以下之呈任何組合之基團：烷基、磷酸二酯、醚、胺基、側氧基及醯胺。在某些實施例中，每一系鏈係直鏈脂肪族基團，其包含一或多個選自以下之呈任何組合之基團：烷基、醚、胺基、側氧基及醯胺。在某些實施例中，每一系鏈係直鏈脂肪族基團，其包含一或多個選自以下之呈任何組合之基團：烷基、胺基及側氧基。在某些實施例中，每一系鏈係直鏈脂肪族基團，其包含一或多個選自烷基及側氧基之呈任何組合之基團。在某些實施例中，每一系鏈係直鏈脂肪族基團，其包含一或多個選自烷基及磷酸二酯之呈任何組合之基團。在某些實施例中，每一系鏈包含至少一個磷連接基團或中性連接基團。在某些實施例中，每一系鏈包含長度為約6至約20個原子之鏈。在某些實施例中，每一系鏈包含長度為約10至約18個原子之鏈。在某些實施例中，每一系鏈包含長度為約10個原子之鏈。
在某些實施例中，細胞靶向部分之每一配位體對靶細胞上之至少一種類型之受體具有親和力。在某些實施例中，每一配位體對哺乳動物肝臟細胞表面上之至少一種類型之受體具有親和力。在某些實施例中，每一配位體對肝去唾液酸糖蛋白受體(ASGP-R)具有親和力。在某些實施例中，每一配位體為碳水化合物。在某些實施例中，每一配位體獨立地選自半乳糖、N-乙醯基半乳糖胺(GalNAc)、甘露糖、葡萄糖、葡萄糖胺及岩藻糖。在某些實施例中，每一配位體為N-乙醯基半乳糖胺(GalNAc)。在某些實施例中，細胞靶向部分包含3個GalNAc配位體。在某些實施例中，細胞靶向部分包含2個GalNAc配位體。在某些實施例中，細胞靶向部分包含1個GalNAc配位體。
在某些實施例中，細胞靶向部分之每一配位體為碳水化合物、碳水化合物衍生物、經修飾之碳水化合物、多糖、經修飾之多糖或多糖衍生物。在某些此等實施例中，結合基團包含碳水化合物簇(例如，參見Maier等人，「Synthesis of Antisense Oligonucleotides Conjugated to a Multivalent Carbohydrate Cluster for Cellular Targeting」， Bioconjugate Chemistry，2003， 14，18-29或Rensen等人，「Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor」， J. Med. Chem.2004， 47，5798-5808)。在某些此等實施例中，每一配位體為胺基糖或硫糖。舉例而言，胺基糖可選自此項技術中已知之諸多化合物，諸如唾液酸、α-D-半乳糖胺、β-胞壁酸、2-去氧-2-甲基胺基-L-葡萄吡喃糖、4,6-二去氧-4-甲醯胺基-2,3-二- O-甲基-D-吡喃甘露糖、2-去氧-2-磺胺基-D-葡萄吡喃糖及 N-磺基-D-葡糖胺及 N-乙醇醯基-α-神經胺酸。舉例而言，硫糖可選自5-硫基-β-D-葡萄吡喃糖、甲基2,3,4-三- O-乙醯基-1-硫基-6- O-三苯甲基-α-D-葡萄吡喃糖苷、4-硫基-β-D-半乳吡喃糖及乙基3,4,6,7-四- O-乙醯基-2-去氧-1,5-二硫基-α-D- 葡萄-庚糖吡喃糖苷。
在某些實施例中，結合基團包含具有下式之細胞靶向部分：
Figure 02_image031
。
在某些實施例中，結合基團包含具有下式之細胞靶向部分：
Figure 02_image033
。
在某些實施例中，結合基團包含具有下式之細胞靶向部分：
Figure 02_image035
。
在某些實施例中，結合基團包含具有下式之細胞靶向部分：
Figure 02_image037
。
在某些實施例中，結合基團包含具有下式之細胞靶向部分：
Figure 02_image037
。
在某些實施例中，化合物包含在本文中描述為「LICA-1」之結合基團。LICA-1具有下式：
Figure 02_image039
在某些實施例中，本文所闡述之包含LICA-1及位於結合連接體內之可裂解部分的化合物具有下式：
Figure 02_image041
。 其中oligo為寡核苷酸。
代表性美國專利、美國專利申請公開案、國際專利申請公開案及教示某些上述結合基團、包含結合基團之化合物、系鏈、結合連接體、分枝基團、配位體、可裂解部分以及其他修飾之製備的其他出版物包括(但不限於) US 5,994,517、US 6,300,319、US 6,660,720、US 6,906,182、US 7,262,177、US 7,491,805、US 8,106,022、 US 7,723,509、 US 2006/0148740、US 2011/0123520、WO 2013/033230及WO 2012/037254；Biessen等人， J. Med. Chem. 1995， 38，1846-1852；Lee等人， Bioorganic & Medicinal Chemistry2011, 19，2494-2500；Rensen等人， J. Biol. Chem. 2001， 276，37577-37584；Rensen等人， J. Med. Chem. 2004， 47，5798-5808；Sliedregt等人， J. Med. Chem. 1999， 42，609-618；及Valentijn等人， Tetrahedron ，1997， 53 ，759-770。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸包含間隙聚體或完全經修飾之糖模體以及包含至少一個、兩個或三個GalNAc配位體之結合基團。在某些實施例中，化合物包含在以下參考文獻中之任一者中所發現之結合基團：Lee， Carbohydr Res，1978，67，509-514；Connolly等人， J Biol Chem，1982，257，939-945；Pavia等人， Int J Pep Protein Res，1983，22，539-548；Lee等人， Biochem，1984，23，4255-4261；Lee等人， Glycoconjugate J，1987，4，317-328；Toyokuni等人， Tetrahedron Lett，1990，31，2673-2676；Biessen等人， J Med Chem，1995，38，1538-1546；Valentijn等人， Tetrahedron，1997，53，759-770；Kim等人， Tetrahedron Lett，1997，38，3487-3490；Lee等人， Bioconjug Chem，1997，8，762-765；Kato等人， Glycobiol，2001，11，821-829；Rensen等人， J Biol Chem，2001，276，37577-37584；Lee等人， Methods Enzymol，2003，362，38-43；Westerlind等人， Glycoconj J，2004，21，227-241；Lee等人， Bioorg Med Chem Lett，2006，16(19)，5132-5135；Maierhofer等人， Bioorg Med Chem，2007，15，7661-7676；Khorev等人， Bioorg Med Chem，2008，16，5216-5231；Lee等人， Bioorg Med Chem，2011，19，2494-2500；Kornilova等人，Analyt Biochem，2012，425，43-46；Pujol等人， Angew Chemie Int Ed Engl，2012，51，7445-7448；Biessen等人， J Med Chem，1995，38，1846-1852；Sliedregt等人， J Med Chem，1999，42，609-618；Rensen等人， J Med Chem，2004，47，5798-5808；Rensen等人， Arterioscler Thromb Vasc Biol，2006，26，169-175；van Rossenberg等人， Gene Ther，2004，11，457-464；Sato等人， J Am Chem Soc，2004，126，14013-14022；Lee等人， J Org Chem，2012，77，7564-7571；Biessen等人， FASEB J，2000，14，1784-1792；Rajur等人， Bioconjug Chem，1997，8，935-940；Duff等人， Methods Enzymol，2000，313，297-321；Maier等人， Bioconjug Chem，2003，14，18-29；Jayaprakash等人， Org Lett，2010，12，5410-5413；Manoharan， Antisense Nucleic Acid Drug Dev，2002，12，103-128；Merwin等人， Bioconjug Chem，1994，5，612-620；Tomiya等人，Bioorg Med Chem，2013，21，5275-5281；國際申請案WO1998/013381；WO2011/038356；WO1997/046098；WO2008/098788；WO2004/101619；WO2012/037254；WO2011/120053；WO2011/100131；WO2011/163121；WO2012/177947；WO2013/033230；WO2013/075035；WO2012/083185；WO2012/083046；WO2009/082607；WO2009/134487；WO2010/144740；WO2010/148013；WO1997/020563；WO2010/088537；WO2002/043771；WO2010/129709；WO2012/068187；WO2009/126933；WO2004/024757；WO2010/054406；WO2012/089352；WO2012/089602；WO2013/166121；WO2013/165816；美國專利4,751,219；8,552,163；6,908,903；7,262,177；5,994,517；6,300,319；8,106,022；7,491,805；7,491,805；7,582,744；8,137,695；6,383,812；6,525,031；6,660,720；7,723,509；8,541,548；8,344,125；8,313,772；8,349,308；8,450,467；8,501,930；8,158,601；7,262,177；6,906,182；6,620,916；8,435,491；8,404,862；7,851,615；已公開之美國專利申請公開案US2011/0097264；US2011/0097265；US2013/0004427；US2005/0164235；US2006/0148740；US2008/0281044；US2010/0240730；US2003/0119724；US2006/0183886；US2008/0206869；US2011/0269814；US2009/0286973；US2011/0207799；US2012/0136042；US2012/0165393；US2008/0281041；US2009/0203135；US2012/0035115；US2012/0095075；US2012/0101148；US2012/0128760；US2012/0157509；US2012/0230938；US2013/0109817；US2013/0121954；US2013/0178512；US2013/0236968；US2011/0123520；US2003/0077829；US2008/0108801；及US2009/0203132。 VII. 某些醫藥組合物
在某些實施例中，本文闡述包含一或多種寡聚化合物之醫藥組合物。在某些實施例中，該一或多種寡聚化合物各自由經修飾之寡核苷酸組成。在某些實施例中，醫藥組合物包含醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑。在某些實施例中，醫藥組合物包含鹽水溶液及一或多種寡聚化合物，或由其組成。在某些實施例中，醫藥組合物包含無菌鹽水溶液及一或多種寡聚化合物，或由其組成。在某些實施例中，無菌鹽水係醫藥級鹽水。在某些實施例中，醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及水，或由其組成。在某些實施例中，醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及無菌水，或由其組成。在某些實施例中，無菌水係醫藥級水。在某些實施例中，醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)，或由其組成。在某些實施例中，無菌PBS係醫藥級PBS。
在某些實施例中，醫藥組合物包含一或多種寡聚化合物及一或多種賦形劑。在某些實施例中，賦形劑選自水、鹽溶液、乙醇、聚乙二醇、明膠、乳糖、澱粉酶、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、羥甲基纖維素及聚乙烯吡咯啶酮。
在某些實施例中，寡聚化合物可與醫藥學上可接受之活性及/或惰性物質混合以供製備醫藥組合物或調配物。用於調配醫藥組合物之組合物及方法取決於多種準則，包括(但不限於)投與途徑、疾病程度或欲投與之劑量。
在某些實施例中，包含寡聚化合物之醫藥組合物涵蓋該寡聚化合物之任何醫藥學上可接受之鹽、該寡聚化合物之酯或此等酯之鹽。在某些實施例中，包含含有一或多種寡核苷酸之寡聚化合物的醫藥組合物在投與給個體(包括人類)時能夠提供(直接或間接地)生物活性代謝物或其殘餘物。因此，舉例而言，本揭示案亦係關於寡聚化合物之醫藥學上可接受之鹽、前藥、此等前藥之醫藥學上可接受之鹽及其他生物等效形式。適宜的醫藥學上可接受之鹽包括(但不限於)鈉鹽及鉀鹽。在某些實施例中，前藥包含一或多個連接至寡核苷酸之結合基團，其中結合基團由體內之內源性核酸酶裂解。
在多種方法中已將脂質部分用於核酸療法中。在某些此等方法中，將核酸(諸如寡聚化合物)引入至由陽離子脂質及中性脂質之混合物製得的預形成之脂質體或脂質複合物(lipoplex)中。在某些方法中，在不存在中性脂質之情形下形成具有單陽離子脂質或聚陽離子脂質之DNA複合物。在某些實施例中，選擇脂質部分以增加醫藥劑至特定細胞或組織之分佈。在某些實施例中，選擇脂質部分以增加醫藥劑至脂肪組織之分佈。在某些實施例中，選擇脂質部分以增加醫藥劑至肌肉組織之分佈。
在某些實施例中，醫藥組合物包含遞送系統。遞送系統之實例包括(但不限於)脂質體及乳液。某些遞送系統可用於製備某些醫藥組合物，包括彼等包含疏水性化合物之醫藥組合物。在某些實施例中，使用某些有機溶劑，諸如二甲亞碸。
在某些實施例中，醫藥組合物包含一或多種組織特異性遞送分子，該(等)遞送分子經設計以將一或多種包含本文所提供之寡聚化合物之醫藥劑遞送至特定組織或細胞類型。舉例而言，在某些實施例中，醫藥組合物包括包覆有組織特異性抗體之脂質體。
在某些實施例中，醫藥組合物包含共溶劑系統。某些此等共溶劑系統包含(例如)苄醇、非極性表面活性劑、水可混溶性有機聚合物及水相。在某些實施例中，此等共溶劑系統用於疏水性化合物。此一共溶劑系統之非限制性實例為VPD共溶劑系統，其係包含3% w/v苄醇、8% w/v非極性表面活性劑聚山梨醇酯80™及65% w/v聚乙二醇300之無水乙醇溶液。此等共溶劑系統之比例可相當大地改變，而不顯著地改變其溶解性及毒性特徵。此外，共溶劑組分之屬性(identity)可改變：例如，可使用其他表面活性劑代替聚山梨醇酯80™；聚乙二醇之分數大小可改變；其他生物相容性聚合物可替代聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯啶酮；且可用其他糖或多糖取代右旋糖。
在某些實施例中，醫藥組合物經製備用於經口投與。在某些實施例中，醫藥組合物經製備用於經頰投與。在某些實施例中，醫藥組合物經製備用於藉由注射投與(例如靜脈內、皮下、肌內、鞘內(IT)、腦室內(ICV)、神經內、神經周等)。在某些此等實施例中，醫藥組合物包含載劑且在水溶液中調配，該水溶液為諸如水或生理學相容性緩衝液，諸如漢克氏溶液(Hanks's solution)、林格氏溶液(Ringer's solution)或生理鹽水緩衝液。在某些實施例中，包括其他成分(例如幫助溶解或充當防腐劑之成分)。在某些實施例中，使用適當液體載劑、懸浮劑及諸如此類製備可注射懸浮液。某些注射用醫藥組合物係以單位劑型(例如於安瓿中或於多劑量容器中)呈現。某些注射用醫藥組合物係於油性或水性媒劑中之懸浮液、溶液或乳液，且可含有諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑等調配劑。適用於注射用醫藥組合物中之某些溶劑包括(但不限於)親脂性溶劑及脂肪油(諸如芝麻油)、合成脂肪酸酯(諸如油酸乙酯或甘油三酯)及脂質體。
在某些條件下，本文所揭示之某些化合物充當酸。儘管此等化合物可以質子化(游離酸)形式、或電離及與陽離子締合(鹽)形式來繪製或描述，但此等化合物之水溶液以此等形式平衡存在。舉例而言，水溶液中寡核苷酸之磷酸酯鍵聯以游離酸、陰離子及鹽形式平衡存在。除非另有指示，否則本文所闡述之化合物意欲包括所有此等形式。此外，某些寡核苷酸具有若干此等鍵聯，其各自處於平衡狀態。因此，溶液中之寡核苷酸以一系列形式存在於多個位置，全部處於平衡狀態。術語「寡核苷酸」意欲包括所有此等形式。所繪製之結構必然繪示單一形式。然而，除非另有指示，否則此等圖式同樣意欲包括對應形式。在本文中，繪示化合物之游離酸之結構繼之以術語「或其鹽」明確地包括可為完全或部分質子化/去質子化/與陽離子締合之所有此等形式。在某些情況下，鑑別出一或多種特定陽離子。
在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在含鈉水溶液中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在含鉀水溶液中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在PBS中。在某些實施例中，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在水中。在某些此等實施例中，利用NaOH及/或HCl調整溶液之pH以達成期望pH。
在本文中，對某些具體劑量予以闡述。劑量可呈劑量單位形式。為清晰起見，經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物之劑量(或劑量單位) (以毫克計)指示該經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物之游離酸形式之質量。如上文所闡述，在水溶液中，游離酸與陰離子及鹽形式處於平衡狀態。然而，出於計算劑量之目的，假定經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物以無溶劑、無乙酸鈉、無水之游離酸形式存在。舉例而言，倘若經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物在包含鈉之溶液(例如鹽水)中，則該經修飾之寡核苷酸或寡聚化合物可部分或完全去質子化且與Na+離子締合。然而，質子之質量仍然計入劑量之重量，而Na+離子之質量不計入劑量之重量。當寡聚化合物包含結合基團時，在計算此寡聚化合物之劑量時包括結合基團之質量。若結合基團亦具有酸，則出於計算劑量之目的，同樣假定結合基團完全質子化。 VIII. 某些組合物1.      1205407號化合物
在某些實施例中，1205407號化合物表徵為3-10-3 MOE/cEt混合翼間隙聚體，其在5’端與結合基團結合。化合物1205407具有CGCTGATTTGTCCGGG (SEQ ID NO: 12)之序列(自5’至3’)，其中核苷1至3具有e-e-k (自5’至3’)之糖修飾，其中核苷14至16具有k-k-e之糖修飾，其中每一『e』表示2'- MOE糖部分，且每一『k』係指cEt糖部分；且核苷4至13中之每一者為2’-β-D-去氧核苷；其中核苷2至3、3至4及14至15之間的核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯且核苷1至2、4至5、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14及15至16之間的核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且其中每一胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。1205407號化合物具有5’-參己基胺基-(THA)-C 6GalNAc 3封端，其由如下結構表示，其中磷酸基連接至5'-核苷之5'-氧原子：
Figure 02_image043
。
在某些實施例中，1205407號化合物由以下化學記法表示：THA-C6-GalNAc 3- mC esG eo mC koT dsG dsA dsT dsT dsT dsG dsT ds mC ds mC dsG koG ksG e(SEQ ID NO: 12)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-β-D-MOE糖部分， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o=磷酸二酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，1205407號化合物由以下化學結構表示：
Figure 02_image045
(SEQ ID NO: 12)，或其鹽。
在某些實施例中，1205407號化合物之鈉鹽由以下化學結構表示：
Figure 02_image047
(SEQ ID NO: 12)。
在某些實施例中，1205407號化合物係呈陰離子形式。 2. 1205408號化合物
在某些實施例中，1205408號化合物表徵為3-10-3 MOE/cEt混合翼間隙聚體，其在5’端與結合基團結合。化合物1205408具有TCGGTTGGAATTCTTT (SEQ ID NO: 13)之序列(自5’至3’)，其中核苷1至3具有e-k-k (自5’至3’)之糖修飾且其中核苷14至16具有k-k-e之糖修飾；其中每一『e』表示2'- MOE糖部分，且每一『k』係指cEt糖部分；且核苷4至13中之每一者為2’-β-D-去氧核苷；其中核苷2至3、3至4及14至15之間的核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯且核苷1至2、4至5、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14及15至16之間的核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且其中每一胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。1205408號化合物具有5’-參己基胺基-(THA)-C 6GalNAc 3封端，其由如下結構表示，其中磷酸基連接至5'-核苷之5'-氧原子：
Figure 02_image043
。
在某些實施例中，1205408號化合物由以下化學記法表示：THA-C6-GalNAc 3- T es mC koG koG dsT dsT dsG dsG dsA dsA dsT dsT ds mC dsT koT ksT e(SEQ ID NO: 13)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’- β-D-MOE糖部分， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o=磷酸二酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，1205408號化合物由以下化學結構表示：
Figure 02_image050
(SEQ ID NO: 13)，或其鹽。
在某些實施例中，1205408號化合物之鈉鹽由以下化學結構表示：
Figure 02_image052
(SEQ ID NO: 13)。
在某些實施例中，1205408號化合物係呈陰離子形式。 3. 1250837號化合物
在某些實施例中，1250837號化合物表徵為3-10-3間隙聚體，其在5’端與結合基團結合。化合物1250837具有GTCGGTTGGAATTCTT (SEQ ID NO: 15)之序列(自5’至3’)，其中核苷1至3及14至16具有cEt糖修飾，其中核苷5具有2’-OMe核糖，且其中核苷4及6至13中之每一者為2’-β-D-去氧核苷；其中核苷之間的每一核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且其中每一胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。1250837號化合物具有5’-參己基胺基-(THA)-C 6GalNAc 3封端，其由如下結構表示，其中磷酸基連接至5'-核苷之5'-氧原子：
Figure 02_image043
。
在某些實施例中，1250837號化合物由以下化學記法表示：THA-C6-GalNAc 3- G ksT ks mC ksG dsG ysT dsT dsG dsG dsA dsA dsT dsT ds mC ksT ksT k(SEQ ID NO: 15)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， y = 2'-OMe核糖部分，且 s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，1250837號化合物由以下化學結構表示：
Figure 02_image055
(SEQ ID NO: 15)，或其鹽。
在某些實施例中，1250837號化合物之鈉鹽由以下化學結構表示：
Figure 02_image057
(SEQ ID NO: 15)。
在某些實施例中，1250837號化合物係呈陰離子形式。 4. 1250851號化合物
在某些實施例中，1250851號化合物表徵為3-10-3間隙聚體，其在5’端與結合基團結合。化合物1250851具有TCGGUTGGAATTCTTT (SEQ ID NO: 14)之序列(自5’至3’)，其中核苷1至3及14至16具有cEt糖修飾，其中核苷5具有2’-OMe核糖，且其中核苷4及6至13中之每一者為2’-β-D-去氧核苷；其中核苷2至3、3至4及14至15之間的核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯且核苷1至2、4至5、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、10至11、11至12、12至13、13至14及15至16之間的核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且其中每一胞嘧啶為5-甲基胞嘧啶。1250851號化合物具有5’-參己基胺基-(THA)-C 6GalNAc 3封端，其由如下結構表示，其中磷酸基連接至5'-核苷之5'-氧原子：
Figure 02_image043
。
在某些實施例中，1250851號化合物由以下化學記法表示：THA-C6-GalNAc 3- T ks mC koG koG dsU ysT dsG dsG dsA dsA dsT dsT ds mC dsT koT ksT k(SEQ ID NO: 14)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， U =尿嘧啶核鹼基， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， y = 2'-OMe核糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o=磷酸二酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，1250851號化合物由以下化學結構表示：
Figure 02_image059
(SEQ ID NO: 14)，或其鹽。
在某些實施例中，1250851號化合物之鈉鹽由以下化學結構表示：
Figure 02_image061
(SEQ ID NO: 14)。
在某些實施例中，1250851號化合物係呈陰離子形式。 VI. 某些比較組合物
在某些實施例中，757456號化合物係比較化合物。757456號化合物先前闡述於以引用方式併入本文中之WO2017062816中，且具有CACAAACAAGCTGGTCGGTT (SEQ ID NO: 28)之序列(自5’至3’)，其中該化合物包含結合基團及經修飾之寡核苷酸；其中該經修飾之寡核苷酸為5-10-5 MOE間隙聚體，其中該中央間隙區段由十個2’-β-D-去氧核苷組成且5’翼及3’翼區段各自由五個經2’-MOE修飾之核苷組成。每一核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。所有胞嘧啶殘基均為5-甲基胞嘧啶。757456號化合物具有5’-參己基胺基-(THA)-C 6GalNAc 3封端，其由如下結構表示，其中磷酸基連接至5'-核苷之5'-氧原子：
Figure 02_image043
在某些實施例中，568637號化合物係比較化合物。568637號化合物先前闡述於以引用方式併入本文中之WO2017062816中，且具有CGCTGATTTGTCCGGG (SEQ ID NO: 12)之序列(自5’至3’)，其中該化合物由經修飾之寡核苷酸組成；其中該經修飾之寡核苷酸之長度為16個核苷且具有如由糖模體eekddddddddddkke所描述之混合糖部分；其中每一『d』表示2'-β-D-去氧核糖基糖部分，每一『e』表示2'- MOE糖部分，且每一『k』表示cEt糖部分。每一核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。所有胞嘧啶殘基均為5-甲基胞嘧啶。
在某些實施例中，1176644號化合物係比較化合物。1176644號化合物係具有5’-參己基胺基-(THA)-C 6GalNAc 3封端之568637號化合物。與568637號化合物類似，1176644號化合物具有CGCTGATTTGTCCGGG (SEQ ID NO: 12)之序列(自5’至3’)，其中該化合物包含經修飾之寡核苷酸；其中該經修飾之寡核苷酸之長度為16個核苷且具有如由糖模體eekddddddddddkke所描述之混合糖部分；其中每一『d』表示2'-β-D-去氧核糖基糖部分，每一『e』表示2'- MOE糖部分，且每一『k』表示cEt糖部分。每一核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。所有胞嘧啶殘基均為5-甲基胞嘧啶。
在某些實施例中，本文所闡述之化合物優於WO2017062816中所闡述之化合物，此乃因其展示一或多種改良之性質，諸如效能。
舉例而言，與757456號化合物相比，1205407號化合物展示改良之活體內效能。如實例5中所示，在2.7 mg/kg之劑量下，1205407號化合物分別達成93%及90%之AGT RNA及蛋白質抑制。相比之下，在3.3 mg/kg之劑量下，757456號化合物分別達成65%及60%之AGT RNA及蛋白質抑制。因此，在此分析中，1205407號化合物較757456號化合物更強效。舉例而言，如實例6之研究1中所示，1205407號化合物在肝臟及血漿中之ED 50為0.1。相比之下，757456號化合物在肝臟及血漿中之ED 50為1.3。因此，在此分析中，1205407號化合物較757456號化合物更強效。
舉例而言，與757456號化合物相比，1205407號化合物展示改良之離體效能。如實例8中所示，使用Hepatopac系統，1205407號化合物之離體IC 50為0.04 nM。相比之下，757456號化合物之離體IC 50＞20 µM。因此，在此分析中，1205407號化合物較757456號化合物更強效。
舉例而言，與757456號化合物或1176644號化合物相比，1205407號化合物展示改良之活體外效能。如實例7中所示，當在活體外利用兩種不同的引子探針集測試時，1205407號化合物之IC 50為8 nM及12 nM。相比之下，在相同之活體外培養條件下，757456號化合物之IC 50為868 nM及709 nM。相比之下，在相同之活體外培養條件下，1176644號化合物之IC 50為35 nM及43 nM。因此，在此分析中，1205407號化合物較757456號化合物或1176644號化合物更強效。
舉例而言，與757456號化合物或1176644號化合物相比，1205407號化合物展示改良之活體內效能。如實例6之研究2中所示，1205407號化合物在基因轉殖小鼠研究中之ED 50為0.11且ED 75為0.38。相比之下，757456號化合物之ED 50為2.1且ED 75為2.68。相比之下，1176644號化合物之ED 50為0.38且ED 75為0.61。因此，在此分析中，1205407號化合物較757456號化合物或1176644號化合物更強效。 非限制性揭示內容及以引用之方式併入
本文所列示之每一文獻及專利公開案均係以全文引用的方式併入。
雖然已根據某些實施例具體地闡述本文所闡述之某些化合物、組合物及方法，但以下實例僅用於闡釋本文所闡述之化合物且不意欲限制該等化合物。本申請案中所列舉之每一參考文獻、GenBank登錄號及諸如此類均係以全文引用的方式併入本文中。
儘管伴隨此申請之序列表視需要將每一序列鑑別為「RNA」或「DNA」，但實際上，彼等序列可用任何化學修飾組合加以修飾。熟習此項技術者將容易地瞭解，在某些情況下，諸如「RNA」或「DNA」等描述經修飾之寡核苷酸之名稱為任意的。舉例而言，可將包含含有2’-OH糖部分及胸腺嘧啶鹼基之核苷的寡核苷酸描述為具有經修飾之糖部分(2’-OH替代DNA之一個2’-H)的DNA或描述為具有經修飾之鹼基(胸腺嘧啶(甲基化尿嘧啶)替代RNA之尿嘧啶)的RNA。因此，本文所提供之核酸序列(包括(但不限於)序列表中之彼等核酸序列)意欲涵蓋含有天然或經修飾之RNA及/或DNA之任何組合的核酸，包括(但不限於)具有經修飾之核鹼基的此等核酸。作為另一實例但無限制性，具有核鹼基序列「ATCGATCG」之寡聚化合物涵蓋具有此核鹼基序列之任何寡聚化合物，無論經修飾抑或未經修飾，包括(但不限於)包含RNA鹼基之此等化合物，諸如具有序列「AUCGAUCG」之彼等化合物；及具有一些DNA鹼基及一些RNA鹼基之彼等化合物，諸如「AUCGATCG」；及具有其他經修飾之核鹼基之寡聚化合物，諸如「AT mCGAUCG」，其中 mC指示在5位包含甲基之胞嘧啶鹼基。
本文所闡述之某些化合物(例如經修飾之寡核苷酸)具有一或多個非對稱中心，且由此產生鏡像異構物、非鏡像異構物及其他立體異構組態，該等組態可就絕對立體化學而言定義為( R)或( S)、α或β (諸如對於糖變旋異構物)或者(D)或(L) (諸如對於胺基酸等)。本文所提供之繪製或描述為具有某些立體異構組態之化合物僅包括所指示之化合物。除非另有指定，否則本文所提供的以未定義之立體化學繪製或描述之化合物包括所有此等可能的異構物，包括其立體隨機形式及光學純形式。同樣，除非另有指示，否則亦包括本文化合物之所有順式及反式異構物以及互變異組態式。本文所闡述之寡聚化合物包括掌性純或富集混合物以及外消旋混合物。舉例而言，具有複數個硫代磷酸酯核苷間鍵聯之寡聚化合物包括硫代磷酸酯核苷間鍵聯之掌性受控或隨機之此等化合物。除非另有指示，否則本文所闡述之化合物意欲包括相應之鹽形式。
本文所闡述之化合物包括一或多個原子經指示元素之非放射性同位素或放射性同位素置換之變化形式。舉例而言，包含氫原子之本文化合物涵蓋針對每一 1H氫原子之所有可能的氘取代。本文化合物所涵蓋之同位素取代包括(但不限於)： 2H或 3H替代 1H， 13C或 14C替代 12C， 15N替代 14N， 17O或 18O替代 16O及 33S、 34S、 35S或 36S替代 32S。在某些實施例中，非放射性同位素取代可賦予寡聚化合物新的性質，該等新的性質對於用作治療或研究工具有益。在某些實施例中，放射性同位素取代可使化合物適於研究或診斷目的，諸如成像。 實例
以下實例闡釋本揭示案之某些實施例且不具有限制性。此外，在提供具體實施例之情形下，本發明人考慮了彼等具體實施例之通用應用。 實例 1 ：與人類 AGT 核酸互補的經修飾之寡核苷酸之設計
如以下各表中所闡述，設計與人類AGT核酸互補的經修飾之寡核苷酸。所有以下各表中之「起始位點」指示靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補之最5'端核苷。「終止位點」指示靶核酸序列中與經修飾之寡核苷酸互補之最3'端核苷。以下各表中所列示之每一經修飾之寡核苷酸與SEQ ID NO: 1 (GENBANK登錄號NM_000029.3)或與SEQ ID NO: 2 (自核苷酸230700001至230718000截短之GENBANK登錄號NC_000001.11之互補序列)或與該二者100%互補。
表1中的經修飾之寡核苷酸之長度為16個核苷且具有如下表中所指示之混合糖部分，其中每一『d』表示2'-β-D-去氧核糖基糖部分，每一『e』表示2'- MOE糖部分，且每一『k』表示cEt糖部分。每一核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。所有胞嘧啶殘基均為5-甲基胞嘧啶。568637係先前在WO 2017/062816中所描述之比較化合物。 表 1與人類AGT RNA互補的具有統一PS核苷間鍵聯之3-10-3 MOE/cEt混合翼間隙聚體
化合物ID SEQ ID NO: 1 起始位點 SEQ ID NO: 1 終止位點 SEQ ID NO: 2 起始位點 SEQ ID NO: 2 終止位點 序列(5' 至3') 糖模體 (5' 至3') SEQ ID NO
568637 2046 2061 14940 14955 CGCTGATTTGTCCGGG eekddddddddddkke 12
表2至6中的經修飾之寡核苷酸均具有5’-參己基胺基-(THA)-C 6GalNAc 3封端，其由如下結構表示，其中磷酸基連接至5'-核苷之5'-氧原子：
Figure 02_image043
。
表2中的經修飾之寡核苷酸之長度為16個核苷且具有如所指示之混合糖部分，其中每一『d』表示2'-β-D-去氧核糖基糖部分，每一『e』表示2'- MOE糖部分，且每一『k』係指cEt糖部分。間隙聚體之核苷間模體為(自5'至3')：soossssssssssos；其中每一『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯，且每一『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯。所有胞嘧啶殘基均為5-甲基胞嘧啶。 表 2與人類AGT RNA互補的具有混合PO/PS核苷間鍵聯之GalNAc結合之3-10-3 MOE/cEt混合翼間隙聚體
化合物ID SEQ ID NO: 1 起始位點 SEQ ID NO: 1 終止位點 SEQ ID NO: 2 起始位點 SEQ ID NO: 2 終止位點 序列(5' 至3') 糖模體 (5' 至3') SEQ ID NO
1205407 2046 2061 14940 14955 THA-GalNAc-CGCTGATTTGTCCGGG eekddddddddddkke 12
1205408 2271 2286 15165 15180 THA-GalNAc-TCGGTTGGAATTCTTT ekkddddddddddkke 13
1205410 2046 2061 14940 14955 THA-GalNAc-CGCTGATTTGTCCGGG ekkddddddddddkke 12
表3中的經修飾之寡核苷酸之長度為16個核苷且具有如所指示之混合糖部分，其中每一『d』表示2'-β-D-去氧核糖基糖部分，每一『e』表示2'- MOE糖部分，每一『k』係指cEt糖部分，且每一『y』係指2'-OMe核糖。間隙聚體之核苷間模體為(自5'至3')：soossssssssssos；其中每一『o』表示磷酸二酯核苷間鍵聯，且每一『s』表示硫代磷酸酯核苷間鍵聯。所有胞嘧啶殘基均為5-甲基胞嘧啶，除非由加粗加下劃線之『 C 』指示，在該情形下，胞嘧啶未甲基化。 表 3與人類AGT RNA互補且具有混合PO/PS核苷間鍵聯之在間隙中具有2’-OMe之GalNAc結合之3-10-3 cEt間隙聚體
化合物ID SEQ ID NO: 1 起始位點 SEQ ID NO: 1 終止位點 SEQ ID NO: 2 起始位點 SEQ ID NO: 2 終止位點 序列(5' 至3') 糖模體 (5' 至3') SEQ ID NO
1299239 637 652 7279 7294 THA-GalNAc-CTCATUGTGGATGACG kkkddydddddddkkk 16
1299240 637 652 7279 7294 THA-GalNAc-CTCATTGTGGATGACG kkkdddyddddddkkk 17
1299247 711 726 7353 7368 THA-GalNAc-TGAATUGGAGCAGGTA kkkddydddddddkkk 18
1299248 711 726 7353 7368 THA-GalNAc-TGAATTGGAGCAGGTA kkkdddyddddddkkk 19
1251199 785 800 7427 7442 THA-GalNAc-CGGTGTCAAGTTTTGC kkkdyddddddddkkk 20
1251204 1826 1841 14720 14735 THA-GalNAc-GTTGGGTAGACTCTGT kkkdyddddddddkkk 21
1250850 2046 2061 14940 14955 THA-GalNAc-CGCTGATTTGTCCGGG kkkdyddddddddkkk 12
1251213 2268 2283 15162 15177 THA-GalNAc-GTTGGAATTCTTTTTG kkkdyddddddddkkk 22
1250851 2271 2286 15165 15180 THA-GalNAc-TCGGUTGGAATTCTTT kkkdyddddddddkkk 14
表4中的經修飾之寡核苷酸之長度為16個核苷且具有如所指示之混合糖模體，其中『d』表示2'-β-D-去氧核糖基糖部分，『e』表示2'-MOE糖部分，且『k』係指cEt糖部分。每一核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。所有胞嘧啶殘基均為5-甲基胞嘧啶。 表 4與人類AGT RNA互補的具有統一PS核苷間鍵聯之GalNAc結合之3-10-3 MOE/cEt混合翼間隙聚體
化合物ID SEQ ID NO: 1 起始位點 SEQ ID NO: 1 終止位點 SEQ ID NO: 2 起始位點 SEQ ID NO: 2 終止位點 序列(5' 至3') 糖模體 (5' 至3') SEQ ID NO
1176644 2046 2061 14940 14955 THA-GalNAc-CGCTGATTTGTCCGGG eekddddddddddkke 12
1176648 2271 2286 15165 15180 THA-GalNAc-TCGGTTGGAATTCTTT ekkddddddddddkke 13
1176649 2272 2287 15166 15181 THA-GalNAc-GTCGGTTGGAATTCTT ekkddddddddddkke 15
1176653 2046 2061 14940 14955 THA-GalNAc-CGCTGATTTGTCCGGG ekkddddddddddkke 12
1231463 1834 1849 14728 14743 THA-GalNAc-GTTAAGCTGTTGGGTA kkkddddddddddkkk 23
表5中的經修飾之寡核苷酸之長度為16個核苷且具有如所指示之混合糖模體，其中『d』表示2'-β-D-去氧核糖基糖部分，『e』表示2'-MOE糖部分，『k』係指cEt糖部分，且『y』係指2'-OMe核糖。每一核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。所有胞嘧啶殘基均為5-甲基胞嘧啶，除非由加粗加下劃線之『 C 』指示，在該情形下，胞嘧啶未甲基化。 表 5與人類AGT RNA互補且具有統一PS核苷間鍵聯的在間隙中具有2’-OMe之GalNAc結合之3-10-3 cEt間隙聚體
化合物ID SEQ ID NO: 1 起始位點 SEQ ID NO: 1 終止位點 SEQ ID NO: 2 起始位點 SEQ ID NO: 2 終止位點 序列(5' 至3') 糖模體 (5' 至3') SEQ ID NO
1250835 2046 2061 14940 14955 THA-GalNAc-CGCTGATTTGTCCGGG kkkdyddddddddkkk 12
1250836 2271 2286 15165 15180 THA-GalNAc-TCGGUTGGAATTCTTT kkkdyddddddddkkk 14
1250837 2272 2287 15166 15181 THA-GalNAc-GTCGGTTGGAATTCTT kkkdyddddddddkkk 15
1250840 711 726 7353 7368 THA-GalNAc-TGAAUTGGAGCAGGTA kkkdyddddddddkkk 24
1250842 1729 1744 13760 13775 THA-GalNAc-TTGCAGGTTCAGCTCG kkkdyddddddddkkk 25
1251216 1822 1837 14716 14731 THA-GalNAc-GGTAGACTCTGTGGGC kkkdyddddddddkkk 26
1251228 2268 2283 15162 15177 THA-GalNAc-GTTGGAATTCTTTTTG kkkdyddddddddkkk 27
表6中的經修飾之寡核苷酸係具有統一硫代磷酸酯核苷間鍵聯之5-10-5 MOE間隙聚體。該化合物之長度為20個核苷，其中該中央間隙區段由十個2’-β-D-去氧核苷組成且5’翼及3’翼區段各自由五個經2’-MOE修飾之核苷組成。每一核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。所有胞嘧啶殘基均為5-甲基胞嘧啶。757456係先前在WO 2017/062816中所描述之比較化合物。 表 6與人類AGT RNA互補的具有統一PS核苷間鍵聯之GalNAc結合之5-10-5 MOE間隙聚體
化合物 ID SEQ ID NO: 1 起始位點 SEQ ID NO: 1 終止位點 SEQ ID NO: 2 起始位點 SEQ ID NO: 2 終止位點 序列 (5' 至 3') 糖模體 (5' 至 3') SEQ ID NO
757456 2281 2300 15175 15194 THA-GalNAc-CACAAACAAGCTGGTCGGTT eeeeeddddddddddeeeee 28
實例 2 ： HepG2 細胞中人類 AGT 之劑量依賴性活體外抑制
藉由電穿孔，用稀釋至如以下各表中所指定之不同濃度的經修飾之寡核苷酸處理密度為每孔10,000個細胞之經培養HepG2細胞。在大約24小時之處理期後，如先前所闡述使用人類AGT引子-探針集RTS3721 (闡述於上文中)量測AGT RNA水準。使用引子探針集RTS104 (正向序列GAAGGTGAAGGTCGGAGTC，在本文中指定為SEQ ID NO: 9；反向序列GAAGATGGTGATGGGATTTC，在本文中指定為SEQ ID NO: 10；探針序列CAAGCTTCCCGTTCTCAGCC，在本文中指定為SEQ ID NO: 11)，以人類GAPDH表現水準對AGT RNA水準作正規化。結果在以下各表中呈現為相對於未經處理之對照細胞之AGT抑制百分比。如本文所用，值『0』指示利用經修飾之寡核苷酸處理不抑制AGT mRNA水準。 表 7HepG2細胞中經修飾之寡核苷酸之多劑量分析
化合物編號 抑制 % IC 50(µM)
23 nM 94 nM 375 nM 1500 nM 6000 nM
1250840 0 0 5 25 51 5.3
1231463 0 8 14 47 77 1.8
1205407 0 19 52 81 91 0.4
1250850 12 25 49 74 93 0.4
1251213 0 6 3 33 71 2.8
1251228 0 0 4 34 58 3.9
1205408 3 5 15 47 77 1.8
1250836 0 9 22 48 75 1.7
1250851 11 7 24 61 80 1.1
1250837 11 4 29 61 83 1.0
1299239 13 37 65 92 97 0.8
1299240 23 56 85 97 96 1.9
1205410 6 16 31 68 98 0.2
1250835 10 20 50 87 86 0.4
實例 3 ：靶向人類 AGT 的經修飾之寡核苷酸在 CD-1 小鼠中之耐受性
CD1小鼠係常用於安全性及功效測試之多用途小鼠模型。利用選自上述研究之經修飾之寡核苷酸治療小鼠，且評估各種血漿化學標記物之水準變化。 治療
利用15 mg/kg經修飾之寡核苷酸皮下注射6至8週齡雄性CD-1小鼠組，每週一次，持續六週(總計7次治療)。一組雄性CD-1小鼠注射鹽水。在最後一次投與後72小時，使小鼠安樂死。 血漿化學標記物
為評估經修飾之寡核苷酸對肝臟功能之效應，使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c，Melville，NY)量測血尿素氮(BUN)、白蛋白、丙胺酸轉胺酶(ALT)、天冬胺酸轉胺酶(AST)、肌酸酐(CREA)及總膽紅素(TBIL)之血漿水準。結果呈現於下表中。 表 8雄性CD-1小鼠中之血漿化學標記物
化合物編號 BUN (mg/dL) 白蛋白 (g/dL) ALT (IU/L) AST (IU/L) TBIL (mg/dL) CREA (mg/dL)
鹽水 23 3 31 49 0.14 0.08
1176644 24 3 52 56 0.13 0.11
1176648 25 3 70 51 0.12 0.11
1176653 22 3 309 330 0.12 0.09
1205407 21 3 123 83 0.12 0.09
1205408 24 3 64 78 0.12 0.13
1205410 26 3 161 121 0.13 0.11
1231463 27 3 132 188 0.19 0.13
將在第6週自小鼠組獲得之血液送至IDEXX BioResearch，以量測血球計數。計數包括紅血球(RBC)計數、白血球(WBC)計數、血紅素(HGB)、血容比(HCT)、平均紅血球容積(MCV)、平均紅血球血紅素(MCH)、平均紅血球血紅素濃度(MCHC)及個別白血球計數，諸如單核球(MON)、嗜中性球(NEU)、淋巴球(LYM)及血小板(PLT)之計數。結果呈現於下以下各表中。 表 9雄性CD-1小鼠中之血球計數
化合物編號 WBC (K/uL) RBC (M/uL) HGB (g/dL) HCT (%) MCV (fL) MCH (pg) MCHC (g/dL) NEU (/uL) LYM (/uL) MON (/uL) PLT (K/uL)
鹽水 8 9 14 47 52 16 31 1133 6142 390 1290
1176644 6 9 14 46 50 16 31 919 4533 231 1182
1176648 4 9 14 44 50 16 31 703 3370 227 1186
1176653 8 10 15 48 48 15 32 989 6505 361 829
1205407 9 10 15 47 47 15 33 901 7171 355 1228
1205408 9 9 15 46 48 15 32 1633 6745 501 1446
1205410 6 9 14 45 50 16 32 714 5112 227 994
1231463 8 10 15 46 48 16 32 872 6365 481 1260
在第1天及第35天量測小鼠體重，且每一組之平均體重呈現於下表中。在研究結束時量測肝臟、脾及腎臟重量，且呈現於下表中。所引起的器官重量之任何變化超出經修飾之寡核苷酸之預期範圍的經修飾之寡核苷酸排除在進一步研究之外 表 10 體重及器官重量 (g)
化合物編號 體重 (g) 肝臟重量 (g) 腎臟重量 (g) 脾重量 (g)
第 1 天 第 35 天
PBS 31.7 37.7 2.1 0.7 0.2
1176644 31.0 37.7 2.5 0.5 0.1
1176648 32.4 40.0 2.5 0.6 0.1
1176653 32.0 40.7 2.8 0.7 0.1
1205407 31.7 39.2 2.7 0.6 0.1
1205408 30.5 38.3 2.2 0.5 0.1
1205410 29.8 35.2 2.4 0.5 0.1
1231463 32.5 39.6 2.5 0.5 0.1
實例 4 ：靶向人類 AGT 的經修飾之寡核苷酸在 Sprague-Dawley 大鼠中之耐受性
Sprague-Dawley大鼠係用於安全性及功效評估之多用途模型。利用來自上文實例中所闡述研究之Ionis經修飾之寡核苷酸治療大鼠，且評估各種血漿化學標記物之水準變化。 研究1 治療
使雄性Sprague-Dawley大鼠維持在12小時明/暗循環下，且隨意餵食Purina正常大鼠飼料。每組4隻Sprague-Dawley大鼠各自每週皮下注射15 mg/kg Ionis寡核苷酸，持續6週(總計6個劑量)。在最後一次劑量後72小時，使大鼠安樂死；且收穫器官、尿液及血漿以供進一步分析。 血漿化學標記物
為評估Ionis寡核苷酸對肝功能之效應，使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c，Melville，NY)量測轉胺酶之血漿水準。量測ALT (丙胺酸轉胺酶)及AST (天冬胺酸轉胺酶)之血漿水準，且結果以IU/L表示呈現於下表中。亦使用同一臨床化學分析儀量測總膽紅素(TBIL)、肌酸酐、白蛋白及血尿素氮(BUN)之血漿水準，且結果亦呈現於下表中。 表 11Sprague-Dawley大鼠中之血漿化學標記物
化合物編號 BUN (mg/dL) 白蛋白 (g/dL) ALT (IU/L) AST (IU/L) TBIL (mg/dL) CREA (mg/dL)
鹽水 17 3 27 78 0.13 0.23
1205407 15 3 69 182 0.15 0.25
1205408 20 3 34 151 0.36 0.25
器官重量
在研究結束時量測肝臟、心臟、脾及腎臟重量，且呈現於下表中。 表 12器官重量(g)
化合物編號 肝臟 (g) 腎臟 (g) 脾 (g)
鹽水 13.7 3.4 0.8
1205407 15.2 3.6 1.2
1205408 18.3 4.0 1.2
腎臟功能
為評估Ionis經修飾之寡核苷酸對腎臟功能之效應，使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c，Melville，NY)量測尿總蛋白質及肌酸酐水準。總蛋白質對肌酸酐之比率(P/C比)呈現於下表中。 表 13Sprague-Dawley大鼠中之總蛋白質對肌酸酐比率
化合物編號 P/C 比
鹽水 1.1
1205407 2.1
1205408 0.7
研究2 治療
使雄性Sprague-Dawley大鼠維持在12小時明/暗循環下，且隨意餵食Purina正常大鼠飼料。每組4隻Sprague-Dawley大鼠各自每週皮下注射15 mg/kg Ionis寡核苷酸，持續6週(總計6個劑量)。在最後一次劑量後72小時，使大鼠安樂死；且收穫器官、尿液及血漿以供進一步分析。 血漿化學標記物
為評估Ionis寡核苷酸對肝功能之效應，使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c，Melville，NY)量測轉胺酶之血漿水準。量測ALT (丙胺酸轉胺酶)及AST (天冬胺酸轉胺酶)之血漿水準，且結果以IU/L表示呈現於下表中。亦使用同一臨床化學分析儀量測總膽紅素(TBIL)、肌酸酐、白蛋白及血尿素氮(BUN)之血漿水準，且結果亦呈現於下表中。 表 14Sprague-Dawley大鼠中之血漿化學標記物
化合物編號 BUN (mg/dL) 白蛋白 (g/dL) ALT (IU/L) AST (IU/L) TBIL (mg/dL) CREA (mg/dL)
鹽水 16 3 28 112 0.11 0.27
1250837 18 4 32 129 0.14 0.23
1250851 18 3 119 641 0.41 0.25
器官重量
在研究結束時量測肝臟、心臟、脾及腎臟重量，且呈現於下表中。 表 15器官重量(g)
化合物編號 肝臟 (g) 腎臟 (g) 脾 (g)
鹽水 12.242 3.388 1.051
1250837 13.771 3.580 1.184
1250851 14.850 3.756 1.166
腎臟功能
為評估Ionis經修飾之寡核苷酸對腎臟功能之效應，使用自動化臨床化學分析儀(Hitachi Olympus AU400c，Melville，NY)量測尿總蛋白質及肌酸酐水準。總蛋白質對肌酸酐之比率(P/C比)呈現於下表中。 表 16Sprague-Dawley大鼠中之總蛋白質對肌酸酐比率
化合物編號 P/C 比
鹽水 0.9
1250837 1.1
1250851 0.8
實例 5 ：與人類 AGT 互補的經修飾之寡核苷酸在基因轉殖小鼠中之活性
Curt Sigmund博士之實驗室藉由插入含有整個人類血管收縮素原基因(大約11.5 kb)以及5' (1.2 kb)及3' (1.4 kb)側接序列之14 kb基因轉殖構築體而開發出基因轉殖AGT小鼠模型(Yang G等人，1994. J Biol Chem 269(51):32497-502)，且使用該模型進一步測試上文所闡述之經修飾之寡核苷酸。 治療
將AGT基因轉殖小鼠分組，每組2隻小鼠。每一小鼠每週皮下注射2.7 mg/kg經修飾之寡核苷酸(第0天及第7天，總計2個劑量)。一組2隻小鼠接受鹽水作為陰性對照。另外，一組2隻小鼠接受3.3 mg/kg之比較經修飾之寡核苷酸757456 (第0天及第7天，總計2個劑量)。在最後一次劑量後三天(第10天)，將小鼠處死。收集肝臟及血漿以供分析。 RNA 及蛋白質分析
自肝臟組織中提取RNA用於即時PCR分析，以使用人類引子探針集RTS3721 (闡述於上文中)量測AGT RNA之量。結果呈現為相對於鹽水對照之AGT RNA抑制百分比，其以如藉由RIBOGREEN®所量測之總RNA含量作正規化。另外，提取血漿，以使用ELISA套組(人類總血管收縮素原分析套組，IBL，目錄號27412)量測血漿中之人類AGT蛋白水準。結果呈現為相對於鹽水對照之AGT蛋白抑制百分比。 表 17基因轉殖小鼠中人類AGT RNA及蛋白質之減少
化合物編號 劑量 (mg/kg) 肝臟中之抑制 % (AGT RNA) 血漿中之抑制 % (AGT 蛋白 )
757456 3.3 65 60
1231463 2.7 93 87
1176644 2.7 90 91
1176648 2.7 93 90
1176653 2.7 96 93
1205407 2.7 93 90
1205408 2.7 94 91
1205410 2.7 96 92
1250842 2.7 88 65
1251204 2.7 44 47
實例 6 ：與人類 AGT RNA 互補的經修飾之寡核苷酸在基因轉殖小鼠中之效能，多劑量
在上文所闡述之基因轉殖小鼠模型中，以劑量依賴性方式進一步測試經修飾之寡核苷酸。 治療
將AGT基因轉殖小鼠分組，每組2隻小鼠。每一小鼠以下表中所指示之濃度皮下注射兩個劑量(在第0天及第7天)之經修飾之寡核苷酸。一組4隻小鼠接受PBS作為陰性對照。在最後一次劑量後72小時(第10天)，使小鼠安樂死。收集肝臟及血漿以供分析。在一些研究中添加757456號化合物作為比較化合物。 研究1 RNA 及蛋白質分析
自肝臟組織中提取RNA用於即時PCR分析，以使用人類引子探針集RTS3721 (闡述於上文中)量測AGT RNA之量。結果呈現為相對於鹽水對照之AGT RNA抑制百分比，其以如藉由RIBOGREEN®所量測之總RNA含量作正規化。另外，提取血漿，以使用ELISA套組(人類總血管收縮素原分析套組，IBL，目錄號27412)量測血漿中之人類AGT蛋白水準。結果呈現為相對於鹽水對照之AGT蛋白抑制百分比。 表 18基因轉殖小鼠中人類AGT RNA及蛋白質之減少(%)
化合物編號 劑量 (mg/kg) 肝臟中之抑制 % (AGT RNA) ED 50(mg/kg) 血漿中之抑制 % (AGT 蛋白 )
757456 4.5 81 1.3 81
1.5 41 49
0.5 39 31
1205407 4.5 97 0.1 97
1.5 95 94
0.5 75 79
1205408 4.5 97 0.2 95
1.5 91 90
0.5 75 74
1205410 4.5 98 0.1 98
1.5 97 96
0.5 83 85
1231463 4.5 97 0.3 94
1.5 90 87
0.5 70 65
1250835 4.5 88 0.2 91
1.5 86 84
0.5 72 73
1250836 4.5 95 0.1 96
1.5 93 93
0.5 82 77
1250837 4.5 96 0.2 94
1.5 89 88
0.5 62 69
1250840 4.5 96 0.3 95
1.5 81 85
0.5 47 64
1250850 4.5 91 0.2 93
1.5 78 84
0.5 74 78
1250851 4.5 96 0.1 96
1.5 94 95
0.5 77 81
1251199 4.5 92 0.2 91
1.5 84 83
0.5 69 69
1251213 4.5 91 0.2 93
1.5 84 86
0.5 74 75
1251216 4.5 90 0.3 91
1.5 79 80
0.5 46 68
1251228 4.5 94 0.2 95
1.5 83 88
0.5 58 67
1299247 4.5 99 0.1 98
1.5 98 97
0.5 83 84
1299248 4.5 89 0.3 91
1.5 74 84
0.5 49 61
研究2 RNA 及蛋白質分析
自肝臟組織中提取RNA用於即時PCR分析，以使用人類引子探針集RTS3721 (闡述於上文中)量測AGT RNA之量。結果呈現為相對於鹽水對照之AGT RNA抑制百分比，其以如藉由RIBOGREEN®所量測之總RNA含量作正規化。另外，提取血漿，以使用ELISA套組(人類總血管收縮素原分析套組，IBL，目錄號27412)量測血漿中之人類AGT蛋白水準。結果呈現為相對於鹽水對照之AGT蛋白抑制百分比。 表 19基因轉殖小鼠中人類AGT RNA及蛋白質之減少
化合物編號 劑量 (mg/kg) 肝臟中之抑制 % (AGT RNA) ED50 (mg/kg) 血漿中之抑制 % (AGT 蛋白 )
1205407 5.0 98 0.14 96
1.7 93 90
0.6 85 80
0.2 56 37
0.1 30 29
1205408 5.0 98 0.27 95
1.7 93 88
0.6 73 76
0.2 37 23
0.1 9 0
1250837 5.0 85 0.53 83
1.7 84 84
0.6 57 64
0.2 26 40
0.1 0 46
1250851 5.0 94 0.23 95
1.7 89 91
0.6 76 76
0.2 32 49
0.1 32 37
研究3 RNA 及蛋白質分析
自肝臟組織中提取RNA用於即時PCR分析，以使用人類引子探針集RTS3721 (闡述於上文中)量測AGT RNA之量。結果呈現為相對於鹽水對照之AGT RNA抑制百分比，其以如藉由RIBOGREEN®所量測之總RNA含量作正規化。另外，提取血漿，以使用ELISA套組(人類總血管收縮素原分析套組，IBL，目錄號27412)量測血漿中之人類AGT蛋白水準。結果呈現為相對於鹽水對照之AGT蛋白抑制百分比。如本文所用，值『0』指示利用經修飾之寡核苷酸處理不抑制AGT水準。 表 20基因轉殖小鼠中人類AGT RNA及蛋白質之減少
化合物編號 劑量 (mg/kg) 肝臟中之抑制 % (AGT RNA) ED50 (mg/kg) ED75 (mg/kg) 血漿中之抑制 % (AGT 蛋白 )
757456 10 88 2.1 2.68 88
3.3 74 72
0.1 0 0
0.04 0 0
1205407 1.5 86 0.11 0.38 87
0.5 68 62
0.17 38 29
0.06 35 11
1176644 1.5 76 0.38 0.61 71
0.5 62 51
0.17 0 5
0.06 0 0
1250837 1.5 74 0.22 0.67 67
0.5 60 52
0.17 38 28
0.06 0 0
1176649 1.5 83 0.20 0.59 82
0.5 50 56
0.17 17 17
0.06 0 0
實例 7 ：基因轉殖小鼠肝細胞中人類 AGT 之劑量依賴性活體外抑制
本研究中使用上文所闡述之基因轉殖AGT小鼠模型。在自該等基因轉殖小鼠中提取之原代小鼠肝細胞中，測試以上研究中所闡述的經修飾之寡核苷酸在各種劑量下對AGT RNA之抑制。
將原代小鼠基因轉殖肝細胞以20,000個細胞/孔之密度平鋪，且藉由自由攝取稀釋至如以下各表中所指定之不同濃度的經修飾之寡核苷酸進行處理。在培育隔夜後，使用人類AGT引子-探針集RTS3721(正向序列CCCTGATGGGAGCCAGTGT，在本文中指定為SEQ ID NO: 3；反向序列AGCAGGGAGAAGCCCTTCA，在本文中指定為SEQ ID NO: 4；探針序列CCCTGGCTTTCAACACCTACGTCCACT，在本文中指定為SEQ ID NO: 5)量測AGT RNA水準。另外，使用第二人類AGT引子探針集RTS4039 (正向序列GGACAAGGTGGAGGGTCTCA，在本文中指定為SEQ ID NO: 6；反向序列AGATCCTTGCAGCACCAGTTG，在本文中指定為SEQ ID NO: 7；探針序列ATGAAGAAACTATCTCCCCGGACCATCCA，在本文中指定為SEQ ID NO: 8)量測人類AGT RNA水準證實數據。以如藉由RIBOGREEN®所量測之總RNA含量對AGT RNA水準作正規化。結果在以下各表中呈現為相對於未經處理之對照細胞之AGT抑制百分比。如本文所用，值『0』指示利用經修飾之寡核苷酸處理不抑制AGT mRNA水準。亦呈現每一經修飾之寡核苷酸之半最大抑制濃度(IC 50)。使用非線性回歸，使用log(抑制劑)對反應之4參數可變斜率法，將底值及頂值分別固定為0及100來計算IC 50(Prism)。 表 21原代小鼠肝細胞中經修飾之寡核苷酸之多劑量分析
化合物編號 抑制% (RTS3721) IC 50(µM)
0.61 nM 2.44 nM 9.77 nM 39.06 nM 156.25 nM 625 nM 2500 nM 10000 nM
757456 0 0 0 0 39 52 32 20 868
1205407 36 19 51 74 86 94 88 77 8
1176644 0 8 25 51 79 88 86 88 35
1176649 0 0 25 33 60 74 72 53 95
1250837 0 0 12 27 61 67 72 73 145
表 22原代小鼠肝細胞中經修飾之寡核苷酸之多劑量分析
化合物編號 抑制% (RTS4039) IC 50(µM)
0.61 nM 2.44 nM 9.77 nM 39.06 nM 156.25 nM 625 nM 2500 nM 10000 nM
757456 0 0 0 3 43 50 37 7 709
1205407 27 21 44 69 84 89 87 83 12
1176644 0 16 16 48 74 85 82 82 43
1176649 0 0 13 35 55 74 73 65 116
1250837 2 0 14 28 57 66 70 67 169
實例 8 ： HepatoPac® 中人類 AGT 之劑量依賴性離體抑制
HepatoPac®套組係可自BIOIVT獲得之市售肝臟模型系統，其由與支持性基質細胞共培養之微圖案化肝細胞「島」組成。處理前，使96孔HepatoPac板於新鮮維持培養基中在37℃及10% CO 2下平衡48小時。將經修飾之寡核苷酸以下表中所描述之濃度稀釋至維持培養基中48小時。48小時後，用不含額外寡核苷酸之新鮮維持培養基更換培養基。在寡核苷酸添加後96小時收集細胞溶解物，且使用引子探針集RTS3721 (闡述於上文中)藉由RT-PCR進行分析。結果在以下各表中呈現為相對於未經處理之對照細胞之AGT抑制百分比。如本文所用，值『0』指示利用經修飾之寡核苷酸處理不抑制AGT mRNA水準。在Prism中使用可變斜率4參數邏輯式回歸計算IC 50，將曲線之底值及頂值分別設為5及100。 表 23Hepatopac®細胞中經修飾之寡核苷酸之多劑量分析
化合物編號 抑制 % IC 50(µM)
6.4 nM 32 nM 160 nM 800 nM 4000 nM 20000 nM
757456 31 31 21 16 29 16 ＞20
1250850 0 3 18 61 78 86 0.85
1205407 27 52 70 84 93 92 0.04
1205410 9 46 63 89 95 99 0.06
實例 9 ：靶向人類 AGT 的經修飾之寡核苷酸在食蟹猴中之效應
利用選自上文實例中所闡述研究中之經修飾之寡核苷酸治療食蟹猴。 治療
在研究之前，將該等猴子隔離，之後為馴化期，在此期間每天觀察動物之一般健康情況。該等猴子年齡為2-4歲且重2-4 kg。九組4隻隨機分配之雄性食蟹猴各自在背部四個不同的部位之間以順時針輪轉方式皮下注射Ionis寡核苷酸或鹽水。在第1天、第4天及第8天之負載劑量後，每週一次(在第15天、第22天、第29天、第36天、第43天、第50天、第57天、第64天、第71天、第78天及第85天)向猴子投用20 mg/kg Ionis寡核苷酸。4隻食蟹猴之對照組以類似方式注射0.9%鹽水且用作對照組。
在研究期間，至少每天一次觀察猴子是否有生病或痛苦之征象。任何顯示嚴重虛弱或毒性征象之動物，尤其是若似乎瀕臨死亡，則出於人道原因，在咨詢主治獸醫師後儘快實施安樂死。在最後一次劑量後大約48小時的第87天，藉由在深度麻醉下驅血對動物進行排定之安樂死。實例中所闡述之方案已獲機構動物照護及使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee，IACUC)批准。 體重及器官重量量測
為評估Ionis寡核苷酸對動物整體健康之效應，量測體重及器官重量。屍體剖檢前量測終末體重。亦量測器官重量，且所有重量量測值均呈現於下表中。 表 24體重及器官重量(g)
化合物編號 終末體重 肝臟與膽囊 腎臟 脾
鹽水 2967 60 13 3
1205407 2956 96 15 5
1205408 2971 72 13 3
1205410 2868 101 14 4
1231463 2923 69 13 5
1250835 2949 93 16 6
1250836 2973 71 14 6
1250837 2712 63 15 3
1250850 3044 97 17 5
1250851 2806 63 15 3
腎臟及肝臟功能
為評估Ionis寡核苷酸對肝功能及腎臟功能之效應，在第87天自所有研究組收集血液樣品。猴子在血液收集前禁食隔夜。在不含抗凝劑之管中收集血液以用於血清分離。使管在室溫下保持最少90分鐘，且接著以3000 rpm離心10分鐘以獲得血清。使用Toshiba 200FR NEO化學分析儀(Toshiba Co.，Japan)量測各種肝臟功能標記物之水準。量測血尿素氮(BUN)、肌酸酐(CREA)、總蛋白質(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)、白蛋白/球蛋白(A/G)計算比、丙胺酸轉胺酶(ALT)、天冬胺酸轉胺酶(AST)、總膽紅素(TBIL)之血漿水準，且結果呈現於下表中。 表 25食蟹猴血漿中之肝臟功能標記物
化合物編號 BUN (mg/dL) CREA (mg/dL) TP (g/dL) ALB (g/dL) GLO (g/dL) A/G 比 ALT (IU/L) AST (IU/L) TBIL (mg/dL)
鹽水 28 0.8 6.9 4.1 2.8 1.5 50 57 0.25
1205407 23 0.8 6.9 4.0 2.9 1.4 67 55 0.20
1205408 26 0.8 6.7 4.0 2.7 1.5 53 50 0.27
1205410 21 0.9 6.9 3.9 3.0 1.3 145 72 0.26
1231463 22 0.8 7.3 4.0 3.4 1.2 112 75 0.26
1250835 19 0.9 7.4 3.8 3.6 1.1 129 82 0.25
1250836 23 1.1 7.7 3.9 3.8 1.1 150 95 0.34
1250837 21 0.8 6.9 4.2 2.7 1.6 91 68 0.28
1250850 21 0.8 7.4 4.0 3.4 1.2 85 86 0.25
1250851 20 0.8 6.8 4.1 2.7 1.6 63 64 0.27
促發炎性蛋白質分析
為評估Ionis經修飾之寡核苷酸在食蟹猴中之任何發炎性效應，採集血液樣品以供分析。猴子在血液收集前禁食隔夜。在第85天(投藥前，及投藥後24小時)，自每一動物收集大約0.8 mL血液且置於不含抗凝劑之管中以用於血清分離。使管在室溫下保持最少90 min，且接著在室溫下以3,000 rpm離心10 min以獲得血清。使用Toshiba 120 FR NEO化學分析儀(Toshiba Co., Japan)量測補體C3。另一發炎標記物C反應蛋白(CRP)與上文針對肝臟功能所測試之臨床化學參數一起測試。 表 26食蟹猴之促發炎性蛋白質分析
化合物編號 補體 C3 (mg/dL) CRP (mg/L)
第 85 天 ( 投藥前 ) 第 86 天 ( 投藥後 24 小時 ) 第 87 天
鹽水 110 110 2
1205407 94 91 10
1205408 93 93 4
1205410 117 111 14
1231463 92 102 6
1250835 84 75 15
1250836 78 82 9
1250837 82 87 1
1250850 86 83 12
1250851 86 92 3
血液學
為評估Ionis經修飾之寡核苷酸對食蟹猴血液學參數之任何效應，在第87天自每一可用研究動物收集大約0.5 mL血液之血液樣品。樣品收集在含有K 2-EDTA之管中。使用ADVIA2120i血液分析儀(Siemens, USA)分析樣品之紅血球(RBC)計數、血紅素(HGB)、血容比(HCT)、平均紅血球容積(MCV)、平均紅血球血紅素(MCH)、平均紅血球血紅素濃度(MCHC)、血小板計數(PLT)、白血球(WBC)計數、個別白血球計數(諸如單核球(MON)、嗜中性球(NEU)及淋巴球(LYM)之計數)。 表 27食蟹猴之血球計數
化合物編號 WBC (^3/µL) RBC (^6/µL) HGB (g/dL) HCT (%) MCV (fL) MCH (pg) MCHC (g/dL) NEU (%) LYM (%) MON (%) PLT (^3/µL)
鹽水 13 6 14 45 78 24 30 39 55 4 403
1205407 11 6 13 43 77 23 30 40 56 3 377
1205408 12 6 13 44 78 23 30 43 51 3 375
1205410 8 6 13 45 81 24 30 32 63 2 312
1231463 10 6 13 45 78 24 30 28 66 3 338
1250835 10 6 14 47 79 24 30 28 65 4 370
1250836 12 6 14 45 75 23 31 29 66 3 354
1250837 7 6 13 43 77 24 31 37 59 3 288
1250850 8 5 13 42 78 23 30 29 66 3 376
1250851 9 6 14 45 77 24 31 45 51 2 356
尿液分析
在收集新鮮尿液的前一天，將食物取出隔夜，但供應水。在第87天，使用濕冰上之清潔籠盤自所有動物收集新鮮尿液樣品(清晨第一次尿)，以用於尿分析及尿液化學。尿分析/尿液化學參數包括肌酸酐(UCRE)、蛋白質/肌酸酐(P/C)比、微量蛋白(UTP)及尿液微量白蛋白(UALB)，該等參數使用Toshiba 120FR自動化化學分析儀(Toshiba Co., Japan)量測。 表 28食蟹猴之尿分析及尿液化學標記物
化合物編號 UTP (mg/dL) UALB (mg/dL) P/C 比 UCRE (mg/dL)
鹽水 7 0.57 0.15 55
1205407 7 0.29 0.19 37
1205408 7 0.47 0.14 52
1205410 7 0.34 0.19 52
1231463 7 0.37 0.13 63
1250835 12 0.58 0.14 95
1250836 10 0.54 0.11 114
1250837 7 0.41 0.16 49
1250850 7 0.55 0.08 105
1250851 9 0.74 0.07 140 

          <![CDATA[<110>  美商IONIS製藥公司(Ionis Pharmaceuticals, Inc.)]]>
          <![CDATA[<120>  用於調節血管收縮素原表現之化合物及方法]]>
          <![CDATA[<130>  BIOL0393TW]]>
          <![CDATA[<150>  63/232,109]]>
          <![CDATA[<151>  2021-08-11]]>
          <![CDATA[<150>  63/115,499]]>
          <![CDATA[<151>  2020-11-18]]>
          <![CDATA[<160>  28    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  2587]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          atcccatgag cgggcagcag ggtcagaagt ggcccccgtg ttgcctaagc aagactctcc       60
          cctgccctct gccctctgca cctccggcct gcatgtccct gtggcctctt gggggtacat      120
          ctcccggggc tgggtcagaa ggcctgggtg gttggcctca ggctgtcaca cacctaggga      180
          gatgctcccg tttctgggaa ccttggcccc gactcctgca aacttcggta aatgtgtaac      240
          tcgaccctgc accggctcac tctgttcagc agtgaaactc tgcatcgatc actaagactt      300
          cctggaagag gtcccagcgt gagtgtcgct tctggcatct gtccttctgg ccagcctgtg      360
          gtctggccaa gtgatgtaac cctcctctcc agcctgtgca caggcagcct gggaacagct      420
          ccatccccac ccctcagcta taaatagggc atcgtgaccc ggccggggga agaagctgcc      480
          gttgttctgg gtactacagc agaagggtat gcggaagcga gcaccccagt ctgagatggc      540
          tcctgccggt gtgagcctga gggccaccat cctctgcctc ctggcctggg ctggcctggc      600
          tgcaggtgac cgggtgtaca tacacccctt ccacctcgtc atccacaatg agagtacctg      660
          tgagcagctg gcaaaggcca atgccgggaa gcccaaagac cccaccttca tacctgctcc      720
          aattcaggcc aagacatccc ctgtggatga aaaggcccta caggaccagc tggtgctagt      780
          cgctgcaaaa cttgacaccg aagacaagtt gagggccgca atggtcggga tgctggccaa      840
          cttcttgggc ttccgtatat atggcatgca cagtgagcta tggggcgtgg tccatggggc      900
          caccgtcctc tccccaacgg ctgtctttgg caccctggcc tctctctatc tgggagcctt      960
          ggaccacaca gctgacaggc tacaggcaat cctgggtgtt ccttggaagg acaagaactg     1020
          cacctcccgg ctggatgcgc acaaggtcct gtctgccctg caggctgtac agggcctgct     1080
          agtggcccag ggcagggctg atagccaggc ccagctgctg ctgtccacgg tggtgggcgt     1140
          gttcacagcc ccaggcctgc acctgaagca gccgtttgtg cagggcctgg ctctctatac     1200
          ccctgtggtc ctcccacgct ctctggactt cacagaactg gatgttgctg ctgagaagat     1260
          tgacaggttc atgcaggctg tgacaggatg gaagactggc tgctccctga tgggagccag     1320
          tgtggacagc accctggctt tcaacaccta cgtccacttc caagggaaga tgaagggctt     1380
          ctccctgctg gccgagcccc aggagttctg ggtggacaac agcacctcag tgtctgttcc     1440
          catgctctct ggcatgggca ccttccagca ctggagtgac atccaggaca acttctcggt     1500
          gactcaagtg cccttcactg agagcgcctg cctgctgctg atccagcctc actatgcctc     1560
          tgacctggac aaggtggagg gtctcacttt ccagcaaaac tccctcaact ggatgaagaa     1620
          actatctccc cggaccatcc acctgaccat gccccaactg gtgctgcaag gatcttatga     1680
          cctgcaggac ctgctcgccc aggctgagct gcccgccatt ctgcacaccg agctgaacct     1740
          gcaaaaattg agcaatgacc gcatcagggt gggggaggtg ctgaacagca ttttttttga     1800
          gcttgaagcg gatgagagag agcccacaga gtctacccaa cagcttaaca agcctgaggt     1860
          cttggaggtg accctgaacc gcccattcct gtttgctgtg tatgatcaaa gcgccactgc     1920
          cctgcacttc ctgggccgcg tggccaaccc gctgagcaca gcatgaggcc agggccccag     1980
          aacacagtgc ctggcaaggc ctctgcccct ggcctttgag gcaaaggcca gcagcagata     2040
          acaaccccgg acaaatcagc gatgtgtcac ccccagtctc ccaccttttc ttctaatgag     2100
          tcgactttga gctggaaagc agccgtttct ccttggtcta agtgtgctgc atggagtgag     2160
          cagtagaagc ctgcagcggc acaaatgcac ctcccagttt gctgggttta ttttagagaa     2220
          tgggggtggg gaggcaagaa ccagtgttta gcgcgggact actgttccaa aaagaattcc     2280
          aaccgaccag cttgtttgtg aaacaaaaaa gtgttccctt ttcaagttga gaacaaaaat     2340
          tgggttttaa aattaaagta tacatttttg cattgccttc ggtttgtatt tagtgtcttg     2400
          aatgtaagaa catgacctcc gtgtagtgtc tgtaatacct tagttttttc cacagatgct     2460
          tgtgattttt gaacaatacg tgaaagatgc aagcacctga atttctgttt gaatgcggaa     2520
          ccatagctgg ttatttctcc cttgtgttag taataaacgt cttgccacaa taagcctcca     2580
          aaaaaaa                                                               2587
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  18000]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人(Homo sapiens)]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          cagagcaaga ccccaactct aaaacaacac acaaaaatac agccatttct cctgggtgaa       60
          atgggggagc tcagactatt ttgttttatt tgtcaggagt ctaaagccca tgtgagccaa      120
          cttaagaaaa ttctgtttgt atttgagtgt tctttattgg aaagaaatgg acttttccct      180
          aatgagccca ttttacaaat cgagagctcc aaatgcccgg ttccagcccc catgatatag      240
          atgggcagca atgaggacca gaaatgctgg gaagtgtcct tgtcatgcaa ggaaaacttg      300
          gaacttcaag gatccatcat gggatgcagg acagtaggct ccacccctct tcctgctttc      360
          cagtaaatga tgttcagggc tcacatgcct cttccaaggc atgatgtggg gttgcagttc      420
          tgatcccagc agagaacaag gctcctgtga aacaattagt tttggctcag aggcaaaaaa      480
          tggaaacccc attcctgtat ttacccttca ttctttcctt acctcataca gctggttcca      540
          ggtttgattg catcatatac ataaataaat aatctgcttt cctggtttgg tttagttttg      600
          ctggagagag gagtttatgt gttcatccca tgactagctg ggtggtcaag agattggaaa      660
          gtaggagttc tagtttagac caagtctcat ctcagaaacc acagagtaga actgatccca      720
          aacgtcatca tccctgtagg gaaaagaaag agagatcaga ctgttactgt gtctatatag      780
          aaagggaaga cataagagac tccattttga aaaagagcta tactttaaac aattgctttg      840
          ctgagatgtt gttaatttgt agctttgccc cagccacttt gacccaacct ggagctcaca      900
          aaaacatgtg ttgtataaaa tcaaggttta agggatctag ggctgtgtca aagtggctgg      960
          ggcaaagcta caaattaaca acatctcagc aaagcaattg tttaaagtac agctcttttt     1020
          caaaatggag tctcttatgt cttccctttc tatatagaca cagtaacagt ctgatctctc     1080
          ttttttttcc ctacatatcc caatagcacc tgcctgacta atacatcatg ctctgctgac     1140
          tccatatgtg gctggtttcc tggatccgat tctgactgat ggtatctgtt ctcacgctgc     1200
          taataaagac ataccagaga ctgggtaatt tataaagaaa aagaggttta atggacttat     1260
          gtgttccacg tggctgggga ggcctcacaa tcatggtgga aggtgaagga ggagcaaaag     1320
          cacatcttac atggtggctg gcaaaagaga gaaagcatgt tcaggggaac tcccctttat     1380
          aaaaccatca gatctcatga gacttatgca ctatcacaag aacagcatca gaaagatcca     1440
          ccctcatgat tcaattacct cccactgggt ccctcccatg acacatggga attatgggag     1500
          ctacaattgg agatttgggt ggggacacag ccaaaccata tcagatggct tatttggttt     1560
          ctatgtagaa cctctgcttt tcattcaaca gtcttcattt agccacagat aagctctgtc     1620
          cctaacttcc actgatggaa tgtacacata agaaacttcc actgatggaa tgaacacaga     1680
          aggtgcctac tgggaagaaa actggcctga atctgagctg ggtcaaatgt ctgcagtcag     1740
          tttgaatggc tgctccttat gggaataatt tacattctca ataaaattct ctagcaattt     1800
          tctgattgat tttaatgagc tttaaagcct tacgtagaag atcccccagc tgatagtcag     1860
          ccttgggcat ggattaaggg cttttaacca atcttgcaac aagtttaagc agatattctt     1920
          tattgggtcc aatctaacca aaattatttt cttatgttct ccccagtaac gtgtcattat     1980
          taagagaagt ttggcttgct tagaggccaa atttagaggg tcctgaaatt ttattttctt     2040
          ttacaccact ttccagcatg ttacctgatc agttgtttat tatctttgct gttgaatgga     2100
          gtgatcattc caagggcccg aggcaggagg cccaggcaca gtggaaactc tcccaaagac     2160
          caggatcttt gttttgttcc ctgacatatg ctgagcacca ggaatagtga gtgaatgaaa     2220
          caaattgtga ggctttaaag agccgaaata tttaaacact gggcacaagg ttgttgctta     2280
          atcagtgcta gatccttacc tcccccttgt gtccaggtgg acttgttact gcagttaaac     2340
          cacttgctga tcctcaaaca actagttagt ggcacagcca ggcctaggac cccagtctct     2400
          actgttccaa ctaacccatt cgcaggcagg agcactttga atggtctctt attttaaaaa     2460
          aattaaatta aaattgtcta tttatttaga gacagagtct tactctgtag cccaggctcg     2520
          agtgcagtgg tgcaatcata gctcactgta acctccatct cctggcctca aaaagtgttt     2580
          gaattacaga tgcgaggcac tgtacctggc ccgaatgttc tgttcagaca aagccacctc     2640
          taagtcgctg tggggcccca gacaagtgat ttttgaggag tccctatcta taggaacaaa     2700
          gtaattaaaa aaatgtattt cagaatttac aggcccatgt gagatatgat ttttttaaat     2760
          gaagatttag agtaatgggt aaaaaagagg tatttgtgtg tttgttgatt gttcagtcag     2820
          tgaatgtaca gcttctgcct catatccagg caccatctct tcctgctctt tgttgttaaa     2880
          tgttccattc ctgggtaatt tcatgtctgc catcgtggat atgccgtggc tccttgaacc     2940
          tgcttgtgtt gaagcaggat cttccttcct gtcccttcag tgccctaata ccatgtattt     3000
          aaggctggac acatcaccac tcccaacctg cctcacccac tgcgtcactt gtgatcactg     3060
          gcttctggcg actctcacca aggtctctgt catgccctgt tataatgact acaaaagcaa     3120
          gtcttaccta taggaaaata agaattataa cccttttact ggtcatgtga aacttaccat     3180
          ttgcaatttg tacagcataa acacagaaca gcacatcttt caatgcctgc atcctgaagg     3240
          cattttgttt gtgtctttca atctggctgt gctattgttg gtgtttaaca gtctccccag     3300
          ctacactgga aacttccaga aggcactttt cacttgcttg tgtgttttcc ccagtgtcta     3360
          ttagaggcct ttgcacaggg taggctcttt ggagcagctg aaggtcacac atcccatgag     3420
          cgggcagcag ggtcagaagt ggcccccgtg ttgcctaagc aagactctcc cctgccctct     3480
          gccctctgca cctccggcct gcatgtccct gtggcctctt gggggtacat ctcccggggc     3540
          tgggtcagaa ggcctgggtg gttggcctca ggctgtcaca cacctaggga gatgctcccg     3600
          tttctgggaa ccttggcccc gactcctgca aacttcggta aatgtgtaac tcgaccctgc     3660
          accggctcac tctgttcagc agtgaaactc tgcatcgatc actaagactt cctggaagag     3720
          gtcccagcgt gagtgtcgct tctggcatct gtccttctgg ccagcctgtg gtctggccaa     3780
          gtgatgtaac cctcctctcc agcctgtgca caggcagcct gggaacagct ccatccccac     3840
          ccctcagcta taaatagggc atcgtgaccc ggccggggga agaagctgcc gttgttctgg     3900
          gtactacagc agaaggtaag ccgggggccc cctcagctcc ttctcggtct tgtctctctc     3960
          agatgtaact gagctgtggg ctaggaggaa aaggccggga ggaggcacgg tgatgactga     4020
          aaaacctctc ccctctcata agaccagtca tccggacgcg ggctttcccc cactcggtgc     4080
          ccacctgggg tcttacagga ggagctgctc ctcctcagca ataggacaag atggtcaggt     4140
          cttcctgctt ccgctgagaa aagttagggt cctcaggaac ggagcagact ggtacaggaa     4200
          cagagtcatc atggccaaga gtccaccggg tcctcttgcc atcaggagga atagcagggc     4260
          ttgtgcagga attggggctg gagggaaggg ccgggctcgg tcagtctcca gctgggatcc     4320
          ccagagtggt caccctaccc ctccctcgag acagactgcc tgactgtgtg tcatcaggct     4380
          ggtcaccatc tccctgaacc tcgatttgct cacctataaa atggaactaa taacgatgcc     4440
          tgggctccct gtctcagggg ctctggtata gctgaagaga actaatataa catgaaagtg     4500
          ctttctaagc tttgggataa gctaaaaggc agattccaat tttattcgag ggcagcgtag     4560
          attggtgctt cagctcgtgg atgacagagt cagggggcct ggttctgagt cctagttctg     4620
          tctcttccca gctgtgtgac gttgaacaag tcactggacc tctctgttcc tctgcaaaac     4680
          agcatgaacc aattcattaa ctacttctcc aggatgcagt aggtcccagg gactatccta     4740
          ggaatgtggg ctgtattagt aaacacaaca gcgggaaccc tgttccgggg ctcacattca     4800
          catcagagca aacagacaaa gacgctggac agaataagtg cataactaca tggtacagag     4860
          ggttataagg agggaaaagg ggagctggat gagagagttg agagtgcccg gtgtggtggg     4920
          gaaagctgca gggtgaaata ctgcatcagg gaaacctcag ggaaggtgag gactatggtg     4980
          aggtcagagg ggttgatatg agaacagtgc cctgcaaatg gcaggcacca caggagcatg     5040
          agccgtcatc ttcaccttta gcattcagcc cgggagaagt agggagacat agaaggggca     5100
          ggtgctggcc aagaggcagg ggcaggagag gagaaggcgg aggggcactc agggcgaggg     5160
          tgtcaggccc gccaccccag agcaccatta ctcccaggac gcggctgcgt gcagacctgg     5220
          aaccagccta gggagcagcc gcagatcaca actgagaaca aacgacagtc tctgcctcaa     5280
          aaatggccca tggaattgcg tctctggaga cgctgcctga gcaggagcag cacagtgagc     5340
          gggctgcatc gaccagcgcc atccaaaccc cgaacagttg gcgcttgtca ggcaggactt     5400
          cccagcagtc ggttcccaca ggtttcccct gttgacctga tttgatgtga ctgtctagat     5460
          taggtgtgaa ctggtggctt aggcttctct gcacagaaag gcctgcaagc agcagagaga     5520
          gttttctgtt ccatttttcc atgtcatgtg gctcttcctg agaacagcgg atggagtcaa     5580
          atgcatgggg agtggggtga gatggtagct gaggtcagaa tttggcattt gaatgactga     5640
          agcagaacaa aacacaccag gtacttcagc agctgcaccg tgttgagggc aggtgctggt     5700
          tacgggtctg ggtgagggaa gccagctgcc aatgtaagaa gaatgactgg gtatgcttag     5760
          atgaagcaga aaaatctagg catcaaggtg gccttgagtc agtgatgaca cgctacagct     5820
          ccaaggaagc ctggcctagc cctgggggga cagaaaaggc caagaagtga cgatattgca     5880
          gtacaccccc ctccacaaga aatgagtgag atgtggtaca aaatgttaga attgaatgaa     5940
          tcaatagaat aaacgttcat cccttcaatc aagaagagtc agatgaaatg aattagcagg     6000
          gccagcccaa gaacctcttc tgggggtctc agggtagctt tcatttgtag cagctgaggc     6060
          tgaagcccag ctgcaaggcc tttgagagaa cgtggtgctg gacccgtgtc tagggcaggg     6120
          gttctaaacc ctgcttacat atcagagtca cctgagaatt ttctattttt tttttttttt     6180
          ttttatacgt ggtcccagca cagactaagg aatccaacta tcattgggca agccatgcta     6240
          ggtatgcatg cctttggggc tctgcagggg atagcgctat gcagggatgg ttgagagctg     6300
          gttttggggt tgagacacgt gggaaatact tggactttgg gctgagcctg tggtgctcaa     6360
          tcccggctgc atgttgggac cacagggaga tgacaaaacc atccccagcc ctcaccctag     6420
          ggccctcgaa tgagcatctc aggggtctag gaggcctcca caaagaccta ctgattggca     6480
          cacacttgtt tctctaggaa gagaacttac agctgcaggc aggagcatgt cttaatctgc     6540
          ttgggctgcc ataagtacca cagactggga gggtttaaca acagaaatgt gttatctcac     6600
          agttctggaa gctagaagcc tgggagccag ccatcagcag agttggtttc ctctgggtcc     6660
          tctatccttg gcttgtagat ggccgtcttc tctctgtgtc cccacatggt cttccctctg     6720
          tgtccccaca tggtcttccc tctgtgtgtg tccatgtcct catctcctct tctcataagg     6780
          acacaggtca tattagatca gggctcaccc tcatggcctc attttaactt aatcatctct     6840
          ttaaagatcc tgtctccaaa taatggtcac attctgaggt cctggggttg aggacttcaa     6900
          cacgggcatt atggccgttg ggggaggtag gacataattc agctgatatt ggtgcatttt     6960
          gcacttggat catgtagata ttttccatgg agctttgaat ccatttcttc ttttttttgt     7020
          agacatgaat ggatttattc tgggctaaat ggtgacaggg aatattgaga caatgaaaga     7080
          tctggttaga tggcacttaa aggtcagtta ataaccacct ttcacccttt gcaaaatgat     7140
          atttcagggt atgcggaagc gagcacccca gtctgagatg gctcctgccg gtgtgagcct     7200
          gagggccacc atcctctgcc tcctggcctg ggctggcctg gctgcaggtg accgggtgta     7260
          catacacccc ttccacctcg tcatccacaa tgagagtacc tgtgagcagc tggcaaaggc     7320
          caatgccggg aagcccaaag accccacctt catacctgct ccaattcagg ccaagacatc     7380
          ccctgtggat gaaaaggccc tacaggacca gctggtgcta gtcgctgcaa aacttgacac     7440
          cgaagacaag ttgagggccg caatggtcgg gatgctggcc aacttcttgg gcttccgtat     7500
          atatggcatg cacagtgagc tatggggcgt ggtccatggg gccaccgtcc tctccccaac     7560
          ggctgtcttt ggcaccctgg cctctctcta tctgggagcc ttggaccaca cagctgacag     7620
          gctacaggca atcctgggtg ttccttggaa ggacaagaac tgcacctccc ggctggatgc     7680
          gcacaaggtc ctgtctgccc tgcaggctgt acagggcctg ctagtggccc agggcagggc     7740
          tgatagccag gcccagctgc tgctgtccac ggtggtgggc gtgttcacag ccccaggcct     7800
          gcacctgaag cagccgtttg tgcagggcct ggctctctat acccctgtgg tcctcccacg     7860
          ctctctggac ttcacagaac tggatgttgc tgctgagaag attgacaggt tcatgcaggc     7920
          tgtgacagga tggaagactg gctgctccct gatgggagcc agtgtggaca gcaccctggc     7980
          tttcaacacc tacgtccact tccaaggtaa ggcaaacctc tctgctggct ctggccctag     8040
          gacttagtat ccaatgtgta gctgagatca gccagtcagg ccttggagat gggcaggggg     8100
          cagccctgcg gacatacctg gtgaccaccc ttgagaagtg gggaagtggc tgctccgctg     8160
          ggtccctgga tgggccgtcc acctcctgga cctgctgccc tactatgtgc acgactatac     8220
          aacatccttt ttcttacatc atttaatccc cttatgatgt ggtgaagagg tatttgtgcc     8280
          tttgtttacc agtgaagaaa tagagactcg gagaaacaaa gtgccttgct caagatggca     8340
          cagccaccag tgggggtcct gggattgaaa cccacatctc ctggccccac agcccagttc     8400
          tacactcaga agggtcaggt tcatatctct tgagaaggtc aggaactggg gtccctggcc     8460
          catgcagaaa taagcaattg gcttgcttaa atccctttca tgttaggagg ggcattactg     8520
          aaaaccctct actacaaaga ttgttgattt tttttttttt ttttattgag acagggtctt     8580
          gttctgtcac ccaggctgca gtgtagtggt gccatcattg ctcactgtag ccttgaactc     8640
          ctggcctcaa gcgatcctcc cacctctgcc ttccaaagtg ttgggattaa aggtgtgagc     8700
          cactgcaccc agccacagat tgcttaaagc attcatttaa caaatacttg ttgaggattt     8760
          gctacttgta agactttaag cctggcatct cagaggaggc cagaggaggg ctgtataggc     8820
          cctgcctcca ggcttttaaa ggtcaatggg caaatgccta ggatttggag ctgcagggaa     8880
          acgtgctcca caaggtaact cagggaagcc tcggggctct cagaggacag aggtcactgg     8940
          ggagcggaga gcaggccttg cctggcagtg agggcaacag ggctggtgaa gctaggagca     9000
          agcatgatga gcccagcctg cagagtttgg ggcaaggaac gaggatgggg cggttggctt     9060
          ggcatgagtg ttgaaccaga aaatgggcct ggggagggca gagctggaga cactttgaac     9120
          gccatgcttg gtaggtgtgg gaatggggac gcgttctgtt cagaggtcat cccggaagcc     9180
          tgccgtgtgc agactggagg cagggaggat tgtttgaagg ttacgcaaga gtccaggcac     9240
          acagtcacgg gaacacgtgc tcagggagca gctcggcaaa tccatgggtg gggtggggct     9300
          gaggggtgtg tctaagagac actgaggagg ctctgtcaag atgttaacct cgtgagggac     9360
          agagagccag gcgggaggtg aaagacaaga ctgtggagaa agaggttcag tggcgcatag     9420
          tgatttttct taccacaaca acctccttga ggtctttccc ttcgggttca gggagaggtg     9480
          atagatgggg ggattgctca gccctggcac tgactggtca caggggcaga ggccagcccg     9540
          agggttgccc ggttgagggt ggcagcacac tgtgcagggc agagcaggga cacatggact     9600
          tagcctgctg tccctaggag aagtgctggg aggagcgctc actgagaagg agggtcctgc     9660
          agaaggcaaa ggcaagaaag ccagtggcat ctgaaatggg tctcccttcg aaagagagca     9720
          catccacctg acccagaccg cagagccagg ccaggaggaa gaggaggaag aataaaaaag     9780
          ccaaccacat cgggactcaa aggaagccca ggatcctcgc cggcctccac cgcatgctgc     9840
          cctgaccctg ccccacttcc taactttgct ggcctcagtt tccgtcaaag gaggcagcca     9900
          cttcctgccc acatggtctg tccagtgagg agatcggggg ctgtctcggg acctctaggt     9960
          ttccctttag caatgatgtt ctatttacat gacctcagca ggcagctaga tgtgtcccac    10020
          tagagaggac ctgaggatct ggggcctgat gggctccagg gtaccgtctg cccagtgctt    10080
          gctgtgctcc tgagcatggg gcgctggccc tggtggtttc catgacacca ggtcctgact    10140
          tgacctcgac agatttacct agcctccgga tgagaatggt gagctgtgca tgtcagacga    10200
          gcagagggaa gacggcagcc actctcatgt caaatcccag cgtcttttgg gaggcagctt    10260
          ccctttttta gtttagtttg ttggaagaaa agaattgtcc ctttcccccc tctaaactaa    10320
          aagccttgcc agcccaggtg ggcagcaccg aggtccctgc agggaacgtg caaggggaac    10380
          cctgcagttt cccgctcaca tgcccttccg agactgagtg ctccgaggac tgaggacgag    10440
          aaatatgcca ggtctgccac tgccttctta cgagacccgg acccagggga ggcacagcca    10500
          tgcccagctc ctgcctgcca gttctgtcct cccagctgcc ctactttcat gctgggacct    10560
          ccaattcagt acaaagggag acctcactgt ttctgaacca tctctactca gactcccaag    10620
          tgccacgtgc ccaggggact gttctgtgac aaacttatac acaacttcac cctattctcc    10680
          taagaacaac cgcagaatag gcctttcagg atgagtggga ggacagccga gggcagggat    10740
          gtgctagtgt aaggtcgagg cagagggtgg gctgctgtca tggaaagacc ccaggtaact    10800
          gcgtcacaca caaatttgtg tccttctccc acaacgggct ctcccgagtt ctctgtcatc    10860
          tgcacggccc tgtgagcagg aggggaaaca gagggctcac ccctgccccc aaggcccagt    10920
          gtgcaaatcc attcatcaca acgaggttgt gtgagtctcc ccagtagcaa gggctgctga    10980
          ggaatggagc cctcgtttcc ggggcctgcg tggcccactc tgtattctat gactgtgatg    11040
          ggggagggtg ggggccacag gacagctggt gggctctgcc atggctgggg ctagacatgg    11100
          attaaaaagt gagtatgagc aggggcctct aggagtggtg ggatagtgcg gtggtggcca    11160
          catgtcattc tacgtgcgtc caaacctaca gaatgtaaaa caccaggagg gagactcaaa    11220
          gaaaactatc aactttgagt gctgaggacg tgtcagtgta ggttcgtcag ttgcaacaaa    11280
          tgggccacgc tggtgtgaga tgttgatcac gggggaggct gtgtagtggg ggacaagagt    11340
          tatatgggaa ctttctgtac tttctgctcg attttgctgt gaacctaaag tcactctaaa    11400
          aaataacatc tcttaaattt tttaaaaagt gagtgtgtca aaccacagcc tttgggtcag    11460
          gacagttcta ggtttgagtt gacctggcag gtaccagtgg cttatgtccc ttaaggtgac    11520
          agatgcaaaa cccccggttt ggtgcctggc atgttgtgtg tcttgcaggt ggcggttagg    11580
          gctgcctcag tgaactcaaa tggctgcatt ttacaggaga aatatttgag ccacacttgc    11640
          ggtcctgtgg ccaggagaat gcagagtggc ctgggggggg ccaaggaagg aggctgaggc    11700
          agggcgaggg gcaggatctg ggcctttggt gtctgccagc cctcattcct gcccctgtct    11760
          tgggtgactc ttccctccct gtctcctgtc tggatttcag ggaagatgaa gggcttctcc    11820
          ctgctggccg agccccagga gttctgggtg gacaacagca cctcagtgtc tgttcccatg    11880
          ctctctggca tgggcacctt ccagcactgg agtgacatcc aggacaactt ctcggtgact    11940
          caagtgccct tcactgagag cgcctgcctg ctgctgatcc agcctcacta tgcctctgac    12000
          ctggacaagg tggagggtct cactttccag caaaactccc tcaactggat gaagaaacta    12060
          tctccccggt aggagcctcc cggtctcccc tggaatgtgg gagccacact gtcctgccca    12120
          ggctgggggc ggggtgggga gtagacacac ctgagctgag ccttgggtgc agagcagggc    12180
          agggccgcgg tggcacgggg ctgggcaggc ggcctgtgtg tctgtctacc agtcctctat    12240
          ccagccagca cccagctctc cagttagtgt ctgtctttca agtgcaggca aggtaaagga    12300
          ggagaggaag aatgcttttt ctacacttac acttgcctgg tagttttgga gggggagaaa    12360
          acattgcaat ccgccctctg agagaggacc attttggtcc cacacctgac acacagcaca    12420
          cctgtgacat ccaagagctt cttggaactg acttgccagg agggttcgga cttcgcgtga    12480
          gcgggggtgg ggccttctca gggagcgtcc cttgactcca gaacgccctt gctggcggct    12540
          ggcggctggg tggggatagg tgttgttagc tcctctttcc tgctgcaatt cctttccaca    12600
          gagccctgga ctcaaactac acatcacccc agatcatcga ggcctggaaa tctgctccca    12660
          gaggcaggca ttgagtgaca cgatggcttg acatcaactc tgggtgtttt ttatgtttta    12720
          aaaattgtga tggtaaaata tacgtaacaa aatttgccat cgtaaccatt ttcgagtgca    12780
          cagttcagtg gtactaggcc cattcacact gttgtgcagc catcaccccc gtccatctcc    12840
          atttatcttc tcaacttccc aaactgaagc tctgtcctgc tgaaacacta actctccatt    12900
          tccccttccc cttggccccg gcaaccacca cgatgtcctc gaggttcacc catgttgtag    12960
          cacatgtcag aatgtccttc cttttgaagg ctgaataata ttccattgca tgtggttacc    13020
          accttttgtg tatccactca tccatcgatg gacacgtggg ttgcttccac ctttgagctg    13080
          ctgtgaatag tgcagtgtac cctgtaaaca tgggtgtact gtcagctctt ataagtgctt    13140
          gatacatcac tggaaatgtc catgggctct gaaggatgcc aaaagatgga agaggctcta    13200
          tacgaagatc aatcgagttg acatagcaac gtgtccagca cgaggttgac actgtaccct    13260
          cctgcctctc tccttttcat gggtgtcatg tcatcaagaa cactgctgtg gcagtagtaa    13320
          gacacagtgc attatttcag agaatagcat ttaaaaatta cccaagtaac acaccttcaa    13380
          tgcagccaac ctaaaaacag aatgcaccaa aggacaacca ttcctaggtc ctcatcggta    13440
          aatcttctat gtccctcaca tagtattgca aatgacatga aggattttta ttgtaggttt    13500
          tgctgaaatt ttccccaagg gggaggatga cttagttggg tgatgggggg agcaaacatc    13560
          cctgtcgtca gggttgggtg caaggagcat aagcctgcct ggcctctggg agagccctca    13620
          ctgtgtggcc tggagccttc ctaactgtgc atcatctccc caggaccatc cacctgacca    13680
          tgccccaact ggtgctgcaa ggatcttatg acctgcagga cctgctcgcc caggctgagc    13740
          tgcccgccat tctgcacacc gagctgaacc tgcaaaaatt gagcaatgac cgcatcaggg    13800
          tgggggaggt atgtgtgagc ctgtgtctgt gcctgacctg ggttccaagt gtgcacaggg    13860
          tgggaggcat ggatgtaagg gacacagagg aggctatggg tggggccagc agggcaagag    13920
          ggagcggaga gtagggccaa aggtgggaga gaagtagcca gagcattctg gggccttcca    13980
          ggtgcagagc agcaaatccc tccccatccc tgctgtgcct cctcctgcta ggtgtgtgtt    14040
          ccatggtcct gcttggcctt gccttgcctc agggtcctcc agggttccta tagtggagtt    14100
          gaaaccggga tgaagacagc aagcacccct ggacctggtg ccctgggccc agccccttct    14160
          tcagggaaat gctgagcagc agacagaatg tccccctgcc atgtggcacc atgcacatct    14220
          gcagctacca aggatgtgcc ttgatgttct gggccctgtg ctcagtgctg gggagaaagt    14280
          gggagttctt acgggggcca gcgggaagag ccctctgtgc taagttagct aagccctggc    14340
          actggtgggc catggccaag ggagccagga attctgcctg ggacatcagg gcagaatgtg    14400
          aagatgggag gatgtaaggg gtgtgttagg gaggagccgg catgtgagtt tggccattgt    14460
          ggccaattaa cggtcatcta cacacagaca cacccttgcc tacactgagg ggcaggcata    14520
          cactgtgcat cctcctggca ggctggaaaa tgtccccctc caggacagtg cacagcacag    14580
          aggtcctgag cccaccccgg ccctctagcc ctcagcaccc tgggtcaccc agtgcgccct    14640
          cagaatgatc ctgatgtctg ctgctttgca ggtgctgaac agcatttttt ttgagcttga    14700
          agcggatgag agagagccca cagagtctac ccaacagctt aacaagcctg aggtcttgga    14760
          ggtgaccctg aaccgcccat tcctgtttgc tgtgtatgat caaagcgcca ctgccctgca    14820
          cttcctgggc cgcgtggcca acccgctgag cacagcatga ggccagggcc ccagaacaca    14880
          gtgcctggca aggcctctgc ccctggcctt tgaggcaaag gccagcagca gataacaacc    14940
          ccggacaaat cagcgatgtg tcacccccag tctcccacct tttcttctaa tgagtcgact    15000
          ttgagctgga aagcagccgt ttctccttgg tctaagtgtg ctgcatggag tgagcagtag    15060
          aagcctgcag cggcacaaat gcacctccca gtttgctggg tttattttag agaatggggg    15120
          tggggaggca agaaccagtg tttagcgcgg gactactgtt ccaaaaagaa ttccaaccga    15180
          ccagcttgtt tgtgaaacaa aaaagtgttc ccttttcaag ttgagaacaa aaattgggtt    15240
          ttaaaattaa agtatacatt tttgcattgc cttcggtttg tatttagtgt cttgaatgta    15300
          agaacatgac ctccgtgtag tgtctgtaat accttagttt tttccacaga tgcttgtgat    15360
          ttttgaacaa tacgtgaaag atgcaagcac ctgaatttct gtttgaatgc ggaaccatag    15420
          ctggttattt ctcccttgtg ttagtaataa acgtcttgcc acaataagcc tccaaaaatt    15480
          ttatctttca tttagcagcc aaacagatgt atacaattca gcagatagac tgtgcaaacg    15540
          aaagtgcttt cctggacttt ggatggaatt tccatgggag gtctgagcca gtacttagca    15600
          gtcctttgaa gttttaggtg atgcttttct ctggacactt ccattggtaa gcagtggtgg    15660
          ccatctgtgt gatggacagg gggcgggaag agggtgacag ggaaggcccc ataccccatg    15720
          tggcacctgg gaaaggaacc aggcagatgg gacttcttcc gtcctggtga cacagggcca    15780
          gactgctgct ggtattgtgc cccgggagtg gaaggtagag aaataaatct tcacaaataa    15840
          atatttgcaa ttttccccca tctgttgagt gcctctgcct gctcctcctc gatgggatta    15900
          ggcccacagt tcggaatctt ggggagagcc aaggaagcgg taggcaccca gtaggcccac    15960
          ggccgtcggc tgatagcaat ggtgatgctg tcctacctac ttgtgtaagg cattcgatct    16020
          tcctcccttc catacatatt gaaataaata agccgcgcaa tgtgttagct attgatcaga    16080
          actaaagtga agtcagccac ggggattaca aatctcggct tctcccctca tgttcctgag    16140
          agtcttcccc tggttttgaa cacatctccc tagctcgatg tcaaggtgag ggattctgtc    16200
          ggcaacagca gtgcccttag ttgcttcgtc gtaactcccc gtcaccggtt ttattcagtt    16260
          accttccagt cccactctca gagcttcctg gcttgttctg ctctcaaagc gggtagagct    16320
          ggcacacatg gactctccga aacggctgca agatgccaag tttctcggaa gaactggaag    16380
          cacagagacc agaagtgcct taaggtctcg ctattcagtg tggcgcttag accggcagtg    16440
          gcggcagctg ccctgggagc ttgttagaat gtggcttctc acgcccctcc tggacctaca    16500
          gagtcagaat ctgcagtttt acaggaggtc caggcttgga agttgctcgt agagacctga    16560
          gacagcgcag ccacgtgctg gaaacaaagc atttaagttt gtgactttat tttaaaaggc    16620
          agcaggcagt cgacaaacca atttcttcta cttagaggcg gcttcggctt ctggaagtcg    16680
          ctaggagtat aaagttgcca accagcgctg ttctcccgct gttttctgtg cacttataaa    16740
          tgggaagtta ggtcaggata gatctctcag ctattacaag gatacaaaat acgaacattc    16800
          tacaagttac ttaacacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca caaaattaat    16860
          tccacaggtc agtttctctg aaacattttt tcactaaatt ctaagtcttc ctggagttgc    16920
          aagtgcctat ctcctagaca aggcaattac tcaccaacta aaatcactgt caatctgaga    16980
          tttcggctgg gcatgagacc atggtcaggg gatgctttga acagcctctg aggaaattag    17040
          tgagtttgaa aaatggaaag atttttatta ctcacttggc agtaaaacct gatggggaca    17100
          gacgtcaggc tgtttaagat cctcagaaga aaaagttgat agtgtgaata ttcctaaatt    17160
          tgccacacga agatgtacat gtgattataa ggtgctgttg cagaagcccc tgggggtgtt    17220
          atgggatata cactatatgg gccactttac cttcctaaaa tctgaaaaac ttcaactact    17280
          gaaacatgga ctgaaggttt tgaatagtgg atggtgaatt tgaataccat cccgtgtgat    17340
          ttttttttct agcagacttt agttttttag agcagtttta agcccacacc aaaactgaga    17400
          ggaagataca gcaatttctc atataccccc tactaccttc cagtctcccc cattattgac    17460
          atcccccacc cagagtggtc catttcttac aacccacgaa cctacattga cacatcatta    17520
          ttactcaacg tccatagttt acattagggt tggctcttgg tgttgtacat tctatgggtt    17580
          tagacaattt tcaggagttt cactgacctg aaaatcctct gtgtccctcc tattcacccc    17640
          tccttccctc ctaaccactg gtaaccaccg atcctattcc catcttctcc atagttttgc    17700
          ctttcccacc caggatgtca tatagtggaa tcattcagta tgtggccttt ccagattagc    17760
          ctctttcact tagtaatgtg catttaagtt tcctccatgt cttttcatga tcgctcattt    17820
          cttttttatt gctaaatact atgccactgt ctggatgtgt cacagtttat ttattcacct    17880
          actgaaggac atcttgcttg tttccaagtt gtggcaattg cgaattaagc tgctacagac    17940
          acccatgtgt gggtttttgt gtggacatgt ttaccccaca caatttttaa agttgctcaa    18000
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          ccctgatggg agccagtgt                                                    19
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          agcagggaga agcccttca                                                    19
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  27]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  探針]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          ccctggcttt caacacctac gtccact                                           27
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          ggacaaggtg gagggtctca                                                   20
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          agatccttgc agcaccagtt g                                                 21
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  29]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  探針]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          atgaagaaac tatctccccg gaccatcca                                         29
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          gaaggtgaag gtcggagtc                                                    19
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  引子]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          gaagatggtg atgggatttc                                                   20
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  探針]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          caagcttccc gttctcagcc                                                   20
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          cgctgatttg tccggg                                                       16
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          tcggttggaa ttcttt                                                       16
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  在該等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          tcggutggaa ttcttt                                                       16
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          gtcggttgga attctt                                                       16
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在該等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          ctcatugtgg atgacg                                                       16
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          ctcattgtgg atgacg                                                       16
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  在該等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          tgaatuggag caggta                                                       16
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          tgaattggag caggta                                                       16
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          cggtgtcaag ttttgc                                                       16
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          gttgggtaga ctctgt                                                       16
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          gttggaattc tttttg                                                       16
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          gttaagctgt tgggta                                                       16
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  misc_feature]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  在該等位置處之鹼基為RNA]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          tgaautggag caggta                                                       16
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          ttgcaggttc agctcg                                                       16
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          ggtagactct gtgggc                                                       16
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  16]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          gttggaattc tttttg                                                       16
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成寡核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          cacaaacaag ctggtcggtt                                                   20
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022

Claims (75)

  1. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由14至30個連接之核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 12-15之核鹼基序列中之任一者之至少14個、至少15個或至少16個鄰接核鹼基的核鹼基序列，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
  2. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由14至30個連接之核苷組成且具有包含至少14個、至少15個或至少16個與以下互補之鄰接核鹼基之核鹼基序列： SEQ ID NO: 1之核鹼基2046-2061之等長部分； SEQ ID NO: 1之核鹼基2271-2286之等長部分； SEQ ID NO: 1之核鹼基2272-2287之等長部分； 其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
  3. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由16個連接之核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 12之核鹼基序列之核鹼基序列，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
  4. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由16個連接之核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 13之核鹼基序列之核鹼基序列，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
  5. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由16個連接之核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 14之核鹼基序列之核鹼基序列，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
  6. 一種寡聚化合物，其包含經修飾之寡核苷酸，該經修飾之寡核苷酸由16個連接之核苷組成且具有包含SEQ ID NO: 15之核鹼基序列之核鹼基序列，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種選自經修飾之糖部分及經修飾之核苷間鍵聯的修飾。
  7. 如請求項1至6中任一項之寡聚化合物，其中當在該經修飾之寡核苷酸之整個核鹼基序列上量測時，該經修飾之寡核苷酸具有與SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2中之任一者之核鹼基序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%互補之核鹼基序列。
  8. 如請求項1至7中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個雙環糖部分。
  9. 如請求項8之寡聚化合物，其中該雙環糖部分具有4’-2’橋，其中該4’-2’橋選自-CH 2-O-及-CH(CH 3)-O-。
  10. 如請求項1至9中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個非雙環之經修飾糖部分。
  11. 如請求項10之寡聚化合物，其中該非雙環之經修飾糖部分為2’-MOE糖部分或2’-OMe糖部分。
  12. 如請求項1至11中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一種糖替代物。
  13. 如請求項12之寡聚化合物，其中該糖替代物為嗎啉基、經修飾之嗎啉基、PNA、THP及F-HNA中之任一者。
  14. 如請求項1至13中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸為間隙聚體。
  15. 如請求項14之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有包含以下之糖模體： 5’區，其由1-6個連接之5’區核苷組成； 中央區，其由6-10個連接之中央區核苷組成；及 3’區，其由1-6個連接之3’區核苷組成；其中 該等5’區核苷中之每一者及該等3’區核苷中之每一者包含經修飾之糖部分，且該等中央區核苷中之至少6者包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分。
  16. 如請求項14之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有包含以下之糖模體： 5’區，其由1-6個連接之5’區核苷組成； 中央區，其由6-10個連接之中央區核苷組成；及 3’區，其由1-6個連接之3’區核苷組成；其中 該等5’區核苷中之每一者及該等3’區核苷中之每一者包含經修飾之糖部分，且該等中央區核苷中之每一者包含2’-去氧核糖基糖部分。
  17. 如請求項14之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有包含以下之糖模體： 5’區，其由3個連接之5’區核苷組成； 中央區，其由10個連接之中央區核苷組成；及 3’區，其由3個連接之3’區核苷組成；其中 該等5’區核苷中之每一者及該等3’區核苷中之每一者包含經2’-MOE修飾之糖部分或經cEt修飾之糖部分，且該等中央區核苷中之每一者包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分。
  18. 如請求項14之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有包含以下之糖模體： 5’區，其由3個連接之5’區核苷組成； 中央區，其由10個連接之中央區核苷組成；及 3’區，其由43個連接之3’區核苷組成；其中 該等5’區核苷中之每一者及該等3’區核苷中之每一者包含經2’-MOE修飾之糖部分或經cEt修飾之糖部分，且該等中央區核苷中之至少6者包含2’-β-D-去氧核糖基糖部分。
  19. 如請求項1至18中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有選自以下之糖模體(5’至3’)：eekddddddddddkke、ekkddddddddddkke、kkkdyddddddddkkk、kkkddydddddddkkk、kkkdddyddddddkkk、kkkddddddddddkkk或eeeeeddddddddddeeeee；其中『e』表示2’-MOE糖部分，『k』表示cEt糖部分，『d』表示2’-β-D-去氧核糖基糖部分，且『y』表示2’-OMe糖部分。
  20. 如請求項1至19中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核苷間鍵聯。
  21. 如請求項20之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸之每一核苷間鍵聯為經修飾之核苷間鍵聯。
  22. 如請求項20或21之寡聚化合物，其中至少一個核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  23. 如請求項20及22中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個磷酸二酯核苷間鍵聯。
  24. 如請求項20、22及23中任一項之寡聚化合物，其中每一核苷間鍵聯為磷酸二酯核苷間鍵聯或硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  25. 如請求項21之寡聚化合物，其中每一核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  26. 如請求項1至20或22至24中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸具有soossssssssssos之核苷間鍵聯模體；其中， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
  27. 如請求項1至26中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸包含至少一個經修飾之核鹼基。
  28. 如請求項27之寡聚化合物，其中該經修飾之核鹼基為5-甲基胞嘧啶。
  29. 如請求項1至28中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸由14-30個、14-22個、14-20個、14-18個、14-20個、15-17個、15-25個或16-20個連接之核苷組成。
  30. 如請求項1至28中任一項之寡聚化合物，其中該經修飾之寡核苷酸由16個連接之核苷組成。
  31. 如請求項1至30中任一項之寡聚化合物，其包含結合基團。
  32. 如請求項31之寡聚化合物，其中該結合基團包含含有1-3個GalNAc配位體之GalNAc簇。
  33. 如請求項31及32中任一項之寡聚化合物，其中該結合基團包含由單鍵組成之結合連接體。
  34. 如請求項31至33中任一項之寡聚化合物，其中該結合基團包含可裂解連接體。
  35. 如請求項31至34中任一項之寡聚化合物，其中該結合基團包含含有1-3個連接體核苷之結合連接體。
  36. 如請求項31至35中任一項之寡聚化合物，其中該結合基團在該經修飾之寡核苷酸的5’-核苷處連接至該經修飾之寡核苷酸。
  37. 如請求項31至35中任一項之寡聚化合物，其中該結合基團在該經修飾之寡核苷酸的3’-核苷處連接至該經修飾之寡核苷酸。
  38. 如請求項1至37中任一項之寡聚化合物，其中該寡聚化合物為單股寡聚化合物。
  39. 如請求項1至30中任一項之寡聚化合物，其由該經修飾之寡核苷酸組成。
  40. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物或其鹽，
    Figure 03_image064
    (SEQ ID NO: 12)。
  41. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物，
    Figure 03_image066
    (SEQ ID NO: 12)。
  42. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物或其鹽，
    Figure 03_image068
    (SEQ ID NO: 13)。
  43. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物，
    Figure 03_image070
    (SEQ ID NO: 13)。
  44. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物或其鹽，
    Figure 03_image072
    (SEQ ID NO: 14)。
  45. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物，
    Figure 03_image074
    (SEQ ID NO: 14)。
  46. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物或其鹽，
    Figure 03_image076
    (SEQ ID NO: 15)。
  47. 一種根據以下化學結構之寡聚化合物，
    Figure 03_image078
    (SEQ ID NO: 15)。
  48. 如請求項40、42、44及47中任一項之寡聚化合物，其為鈉鹽或鉀鹽。
  49. 一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸： mC esG eo mC koT dsG dsA dsT dsT dsT dsG dsT ds mC ds mC dsG koG ksG e(SEQ ID NO: 12)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-β-D-MOE糖部分， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
  50. 一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：T es mC koG koG dsT dsT dsG dsG dsA dsA dsT dsT ds mC dsT koT ksT e(SEQ ID NO: 13)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， e = 2’-β-D-MOE糖部分， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
  51. 一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：G ksT ks mC ksG dsG ysT dsT dsG dsG dsA dsA dsT dsT ds mC ksT ksT k(SEQ ID NO: 15)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， y = 2'-OMe核糖部分，且 s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
  52. 一種寡聚化合物，其包含根據以下化學記法之經修飾之寡核苷酸：T ks mC koG koG dsU ysT dsG dsG dsA dsA dsT dsT ds mC dsT koT ksT k(SEQ ID NO: 14)，其中： A =腺嘌呤核鹼基， mC = 5-甲基胞嘧啶核鹼基， G =鳥嘌呤核鹼基， T =胸腺嘧啶核鹼基， U =尿嘧啶核鹼基， k = cEt糖部分， d = 2’-β-D-去氧核糖基糖部分， y = 2'-OMe核糖部分， s =硫代磷酸酯核苷間鍵聯，且 o =磷酸二酯核苷間鍵聯。
  53. 如請求項49至52中任一項之寡聚化合物，其包含共價連接至結合基團之該經修飾之寡核苷酸。
  54. 一種寡聚雙鏈體，其包含如請求項1至53中任一項之寡聚化合物。
  55. 一種反義化合物，其包含如請求項1至53中任一項之寡聚化合物或如請求項54之寡聚雙鏈體，或由其組成。
  56. 一種如請求項40至53中任一項之寡聚化合物之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有特定立體化學組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之化合物。
  57. 如請求項56之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有( Sp)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之化合物。
  58. 如請求項56之掌性富集群體，其中該群體富集包含至少一個具有( Rp)組態之特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯之化合物。
  59. 如請求項56之掌性富集群體，其中該群體富集在每一硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有特定獨立選擇之立體化學組態之化合物。
  60. 如請求項56之掌性富集群體，其中該群體富集在每一硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有( Sp)組態之化合物或在每一硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有( Rp)組態之經修飾之寡核苷酸。
  61. 如請求項56之掌性富集群體，其中該群體富集在一個特定硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(Rp)組態且在每一其餘硫代磷酸酯核苷間鍵聯處具有(Sp)組態之化合物。
  62. 如請求項56之掌性富集群體，其中該群體富集沿5’至3’方向具有至少3個呈Sp、Sp及Rp組態之鄰接硫代磷酸酯核苷間鍵聯之化合物。
  63. 一種如請求項40至53中任一項之寡聚化合物之群體，其中該寡聚化合物之所有硫代磷酸酯核苷間鍵聯均為立體隨機的。
  64. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至53中任一項之寡聚化合物、如請求項54之寡聚雙鏈體、如請求項55之反義化合物或如請求項56至63中任一項之群體以及醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
  65. 一種方法，其包括向個體投與如請求項64之醫藥組合物。
  66. 一種治療與RAAS路徑相關之疾病的方法，其包括向患有與RAAS路徑相關之疾病或處於患有該疾病風險下之個體投與治療有效量之如請求項64之醫藥組合物，藉此治療該與RAAS路徑相關之疾病。
  67. 如請求項66之方法，其中該疾病為心血管疾病。
  68. 如請求項66及67中任一項之方法，其中該疾病選自高血壓、頑固性高血壓、馬凡氏症候群(Marfan syndrome)、心臟衰竭、腎病、肥胖、代謝症候群、NASH及NAFLD。
  69. 如請求項66至68中任一項之方法，其中該疾病之至少一種症狀或標誌得以改善。
  70. 如請求項69之方法，其中該症狀或標誌係以下中之任一者：高血壓、高血壓急症(亦即惡性高血壓)、中風、子癇前症、血管動脈瘤、腹部動脈瘤、外周動脈疾病、器官損傷或肺動脈高血壓。
  71. 如請求項65至70中任一項之方法，其中全身投與該醫藥組合物。
  72. 如請求項65至71中任一項之方法，其中皮下或肌內投與該醫藥組合物。
  73. 一種如請求項1至53中任一項之寡聚化合物、如請求項54之寡聚雙鏈體、如請求項55之反義化合物或如請求項56至63中任一項之群體之用途，其用於減少細胞中之AGT表現。
  74. 如請求項73之用途，其中AGT RNA之水準降低。
  75. 如請求項73之用途，其中AGT蛋白之水準降低。
TW110142878A 2020-11-18 2021-11-18 用於調節血管收縮素原表現之化合物及方法 TW202227101A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063115499P 2020-11-18 2020-11-18
US63/115,499 2020-11-18
US202163232109P 2021-08-11 2021-08-11
US63/232,109 2021-08-11

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202227101A true TW202227101A (zh) 2022-07-16

Family

ID=81588468

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110142878A TW202227101A (zh) 2020-11-18 2021-11-18 用於調節血管收縮素原表現之化合物及方法

Country Status (10)

Country Link
US (2) US11447521B2 (zh)
EP (1) EP4136092A4 (zh)
JP (1) JP2023549563A (zh)
KR (1) KR20230108728A (zh)
AU (1) AU2021381363A1 (zh)
CA (1) CA3201661A1 (zh)
IL (1) IL302817A (zh)
MX (1) MX2023005736A (zh)
TW (1) TW202227101A (zh)
WO (1) WO2022109139A1 (zh)

Family Cites Families (236)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US5132418A (en) 1980-02-29 1992-07-21 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4500707A (en) 1980-02-29 1985-02-19 University Patents, Inc. Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US4973679A (en) 1981-03-27 1990-11-27 University Patents, Inc. Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates
US4415732A (en) 1981-03-27 1983-11-15 University Patents, Inc. Phosphoramidite compounds and processes
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
DE3329892A1 (de) 1983-08-18 1985-03-07 Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
USRE34036E (en) 1984-06-06 1992-08-18 National Research Development Corporation Data transmission using a transparent tone-in band system
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
FR2567892B1 (fr) 1984-07-19 1989-02-17 Centre Nat Rech Scient Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US4751219A (en) 1985-02-05 1988-06-14 Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
EP0260032B1 (en) 1986-09-08 1994-01-26 Ajinomoto Co., Inc. Compounds for the cleavage at a specific position of RNA, oligomers employed for the formation of said compounds, and starting materials for the synthesis of said oligomers
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
ATE113059T1 (de) 1987-06-24 1994-11-15 Florey Howard Inst Nukleosid-derivate.
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
EP0348458B1 (en) 1987-11-30 1997-04-09 University Of Iowa Research Foundation Dna molecules stabilized by modifications of the 3'-terminal phosphodiester linkage and their use as nucleic acid probes and as therapeutic agents to block the expression of specifically targeted genes
US5403711A (en) 1987-11-30 1995-04-04 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid hybridization and amplification method for detection of specific sequences in which a complementary labeled nucleic acid probe is cleaved
JPH03503894A (ja) 1988-03-25 1991-08-29 ユニバーシィティ　オブ　バージニア　アランミ　パテンツ　ファウンデイション オリゴヌクレオチド　ｎ‐アルキルホスホラミデート
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5194599A (en) 1988-09-23 1993-03-16 Gilead Sciences, Inc. Hydrogen phosphonodithioate compositions
US5256775A (en) 1989-06-05 1993-10-26 Gilead Sciences, Inc. Exonuclease-resistant oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5591722A (en) 1989-09-15 1997-01-07 Southern Research Institute 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5721218A (en) 1989-10-23 1998-02-24 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides with inverted polarity
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5264562A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs with novel linkages
EP0942000B1 (en) 1989-10-24 2004-06-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-Modified oligonucleotides
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5859221A (en) 1990-01-11 1999-01-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5623065A (en) 1990-08-13 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped 2' modified oligonucleotides
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US6005087A (en) 1995-06-06 1999-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5670633A (en) 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US7101993B1 (en) 1990-01-11 2006-09-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides containing 2′-O-modified purines
US5646265A (en) 1990-01-11 1997-07-08 Isis Pharmceuticals, Inc. Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5220007A (en) 1990-02-15 1993-06-15 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of RNA and production of encoded polypeptides
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
GB9009980D0 (en) 1990-05-03 1990-06-27 Amersham Int Plc Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides
EP0455905B1 (en) 1990-05-11 1998-06-17 Microprobe Corporation Dipsticks for nucleic acid hybridization assays and methods for covalently immobilizing oligonucleotides
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5223618A (en) 1990-08-13 1993-06-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5378825A (en) 1990-07-27 1995-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
WO1992002258A1 (en) 1990-07-27 1992-02-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5386023A (en) 1990-07-27 1995-01-31 Isis Pharmaceuticals Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
AU667459B2 (en) 1990-08-03 1996-03-28 Sanofi Compounds and methods for inhibiting gene expression
US5177196A (en) 1990-08-16 1993-01-05 Microprobe Corporation Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
CA2092002A1 (en) 1990-09-20 1992-03-21 Mark Matteucci Modified internucleoside linkages
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US6582908B2 (en) 1990-12-06 2003-06-24 Affymetrix, Inc. Oligonucleotides
US5948903A (en) 1991-01-11 1999-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 3-deazapurines
US5672697A (en) 1991-02-08 1997-09-30 Gilead Sciences, Inc. Nucleoside 5'-methylene phosphonates
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
EP0538194B1 (de) 1991-10-17 1997-06-04 Novartis AG Bicyclische Nukleoside, Oligonukleotide, Verfahren zu deren Herstellung und Zwischenprodukte
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
CA2122365C (en) 1991-11-26 2010-05-11 Brian Froehler Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US5792608A (en) 1991-12-12 1998-08-11 Gilead Sciences, Inc. Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use
US5359044A (en) 1991-12-13 1994-10-25 Isis Pharmaceuticals Cyclobutyl oligonucleotide surrogates
US5700922A (en) 1991-12-24 1997-12-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
FR2687679B1 (fr) 1992-02-05 1994-10-28 Centre Nat Rech Scient Oligothionucleotides.
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
EP0577558A2 (de) 1992-07-01 1994-01-05 Ciba-Geigy Ag Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
GB9304620D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Compounds
DK0691968T3 (da) 1993-03-30 1998-02-23 Sanofi Sa Acykliske nukleosid-analoge og oligonukleotidsekvenser indeholdende disse
WO1994022891A1 (en) 1993-03-31 1994-10-13 Sterling Winthrop Inc. Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5801154A (en) 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
KR100386337B1 (ko) 1993-12-09 2004-03-24 토마스 제퍼슨 대학교 진핵세포에서부위-특이적돌연변이를위한화합물과그방법
US5446137B1 (en) 1993-12-09 1998-10-06 Behringwerke Ag Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides
US5519134A (en) 1994-01-11 1996-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolidine-containing monomers and oligomers
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5627053A (en) 1994-03-29 1997-05-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US5646269A (en) 1994-04-28 1997-07-08 Gilead Sciences, Inc. Method for oligonucleotide analog synthesis
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597909A (en) 1994-08-25 1997-01-28 Chiron Corporation Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use
US6908903B1 (en) 1994-12-07 2005-06-21 Aletheon Pharmaceuticals, Inc. Cluster clearing agents
US6172045B1 (en) 1994-12-07 2001-01-09 Neorx Corporation Cluster clearing agents
US5652356A (en) 1995-08-17 1997-07-29 Hybridon, Inc. Inverted chimeric and hybrid oligonucleotides
US20030119724A1 (en) 1995-11-22 2003-06-26 Ts`O Paul O.P. Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
AU1039397A (en) 1995-11-22 1997-06-27 Johns Hopkins University, The Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules
AU2529697A (en) 1996-03-15 1997-10-01 University Of Florida Oligonucleotides targeted to angiotensinogen mrna
WO1998013381A1 (fr) 1996-09-26 1998-04-02 Ajinomoto Co., Inc. Proteines modifiees physiologiquement actives et compositions medicamenteuses les contenant
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
USRE44779E1 (en) 1997-03-07 2014-02-25 Santaris Pharma A/S Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogues
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
AU9063398A (en) 1997-09-12 1999-04-05 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US20030228597A1 (en) 1998-04-13 2003-12-11 Cowsert Lex M. Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation
US6300319B1 (en) 1998-06-16 2001-10-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Targeted oligonucleotide conjugates
US6043352A (en) 1998-08-07 2000-03-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides
DK1165136T3 (da) 1999-03-05 2004-01-12 Searle Llc Kombinationsterapi af angiotensinomdannende enzyminhibitor og epoxy-steriodal aldosteronantagonist til behandling af cardiovaskulær sygdom
CN102180924A (zh) 1999-05-04 2011-09-14 桑塔里斯制药公司 L-核糖-lna类似物
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
US6902888B1 (en) 1999-05-21 2005-06-07 Myriad Genetics, Inc. Diabetes gene
WO2000071751A1 (en) 1999-05-21 2000-11-30 Myriad Genetics, Inc. Diabetes gene
US6383812B1 (en) 1999-05-28 2002-05-07 Academia Sinica Anti liver disease drug R-YEEE and method of synthesizing branched galactose-terminal glycoproteins
US20080281041A1 (en) 1999-06-07 2008-11-13 Rozema David B Reversibly Masked Polymers
US8541548B2 (en) 1999-06-07 2013-09-24 Arrowhead Madison Inc. Compounds and methods for reversible modification of biologically active molecules
EP1244667B1 (en) 1999-12-30 2006-04-05 K.U. Leuven Research & Development Cyclohexene nucleic acids
US7491805B2 (en) 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US6426220B1 (en) 2000-10-30 2002-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of calreticulin expression
AU2002217980A1 (en) 2000-12-01 2002-06-11 Cell Works Inc. Conjugates of glycosylated/galactosylated peptide
US20030077829A1 (en) 2001-04-30 2003-04-24 Protiva Biotherapeutics Inc.. Lipid-based formulations
US20030175906A1 (en) 2001-07-03 2003-09-18 Muthiah Manoharan Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
JP2005504020A (ja) 2001-07-03 2005-02-10 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド ヌクレアーゼ耐性キメラオリゴヌクレオチド
US20030158403A1 (en) 2001-07-03 2003-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20100240730A1 (en) 2002-02-20 2010-09-23 Merck Sharp And Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
WO2004024757A2 (en) 2002-09-11 2004-03-25 Santaris Pharma A/S Modified pna molecules
WO2004044136A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2’-modified nucleosides for use in gene modulation
CA2504694C (en) 2002-11-05 2013-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
EP1560931B1 (en) 2002-11-14 2011-07-27 Dharmacon, Inc. Functional and hyperfunctional sirna
US20040185559A1 (en) 2003-03-21 2004-09-23 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of diacylglycerol acyltransferase 1 expression
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
EP2660322A3 (en) 2003-04-17 2013-11-13 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Modified iRNA agents
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
WO2004101619A1 (ja) 2003-05-15 2004-11-25 Shionogi Co., Ltd. 機能的糖ペプチドの合理的設計および合成
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
ES2382807T3 (es) 2003-08-28 2012-06-13 Takeshi Imanishi Nuevos ácidos nucleicos artificiales del tipo de enlace N-O con reticulación
AU2004274021B2 (en) 2003-09-18 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-thionucleosides and oligomeric compounds
WO2005121372A2 (en) 2004-06-03 2005-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double strand compositions comprising differentially modified strands for use in gene modulation
AU2005272816B2 (en) 2004-08-10 2011-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemically modified oligonucleotides
US20090203132A1 (en) 2004-09-09 2009-08-13 Swayze Eric E Pyrrolidinyl groups for attaching conjugates to oligomeric compounds
CA2580504C (en) 2004-09-17 2013-10-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced antisense oligonucleotides
WO2006047842A2 (en) 2004-11-08 2006-05-11 K.U. Leuven Research And Development Modified nucleosides for rna interference
US20060148740A1 (en) 2005-01-05 2006-07-06 Prosensa B.V. Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells
US20080206869A1 (en) 2005-01-24 2008-08-28 Avaris Ab Nucleic Acid Complex
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
ES2516815T3 (es) 2006-01-27 2014-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en la posición 6
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
AU2007249349B2 (en) 2006-05-11 2012-03-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-Modified bicyclic nucleic acid analogs
US8658211B2 (en) 2006-08-18 2014-02-25 Arrowhead Madison Inc. Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
AU2007285782B2 (en) 2006-08-18 2010-06-24 Arrowhead Research Corporation Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides
ES2526295T5 (es) 2006-10-18 2021-05-04 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos antisentido
EP2125852B1 (en) 2007-02-15 2016-04-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted-2'-f modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
EP2129402A2 (en) 2007-02-16 2009-12-09 KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH Receptor and antigen targeted prodrug
CA2685127C (en) 2007-04-23 2019-01-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of rna interference agents
AU2008260277C1 (en) 2007-05-30 2014-04-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
EP2173760B2 (en) 2007-06-08 2015-11-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
CN101796062B (zh) 2007-07-05 2014-07-30 Isis制药公司 6-双取代双环核酸类似物
WO2009023855A2 (en) 2007-08-15 2009-02-19 Isis Pharmaceuticals, Inc. Tetrahydropyran nucleic acid analogs
US8546556B2 (en) 2007-11-21 2013-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc Carbocyclic alpha-L-bicyclic nucleic acid analogs
EP3156077B1 (en) 2007-12-04 2022-03-09 Arbutus Biopharma Corporation Targeting lipids
MX2010008394A (es) 2008-01-31 2010-11-12 Alnylam Pharmaceuticals Inc Metodos optimizados para administracion de arndc focalizando el gen pcsk9.
WO2009100320A2 (en) 2008-02-07 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs
WO2009142822A2 (en) 2008-03-26 2009-11-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 2-f modified rna interference agents
WO2009126933A2 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
US8252762B2 (en) 2008-08-25 2012-08-28 Excaliard Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotides directed against connective tissue growth factor and uses thereof
WO2010039548A2 (en) 2008-09-23 2010-04-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition
US8604192B2 (en) 2008-09-24 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Cyclohexenyl nucleic acids analogs
EP2356129B1 (en) 2008-09-24 2013-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides
JP5747282B2 (ja) 2008-11-10 2015-07-15 テクミラ ファーマシューティカルズ コーポレイションＴｅｋｍｉｒａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 治療薬を送達するための新規な脂質及び組成物
EP3243504A1 (en) 2009-01-29 2017-11-15 Arbutus Biopharma Corporation Improved lipid formulation
CN105903022A (zh) 2009-05-05 2016-08-31 阿尔尼拉姆医药品有限公司 脂质组合物
PT3431076T (pt) 2009-06-10 2021-10-26 Arbutus Biopharma Corp Formulação lipídica melhorada
WO2010148013A2 (en) 2009-06-15 2010-12-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene
US9012421B2 (en) 2009-08-06 2015-04-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
US8552163B2 (en) 2009-09-25 2013-10-08 Johns Hopkins University Liver-targeting agents and their synthesis
US20120270884A1 (en) 2009-10-01 2012-10-25 Symphony Evolution, Inc. Methods of Treating Aneurysmal Dilatation, Blood Vessel Wall Weakness and Specifically Abdominal Aortic and Thoracic Aneurysm Using Matrix Metalloprotease-2 Inhibitors
TWI388338B (zh) 2009-10-26 2013-03-11 Iner Aec Executive Yuan 對聚合醣鏈進行放射標誌以作為肝受體造影劑之方法
TWI391144B (zh) 2009-10-26 2013-04-01 Iner Aec Executive Yuan 一種定量肝殘餘功能的檢驗方法與其新穎肝受體造影檢驗藥劑
WO2011072290A2 (en) 2009-12-11 2011-06-16 The Regents Of The University Of Michigan Targeted dendrimer-drug conjugates
WO2011100131A2 (en) 2010-01-28 2011-08-18 Alnylam Pharmacuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
CA2788600C (en) 2010-02-24 2019-12-03 Arrowhead Research Corporation Compositions for targeted delivery of sirna
US20130109817A1 (en) 2010-03-26 2013-05-02 Mersana Therapeutics, Inc. Modified Polymers for Delivery of Polynucleotides, Method of Manufacture, and Methods of Use Thereof
JP2013528665A (ja) 2010-03-26 2013-07-11 メルサナ セラピューティックス， インコーポレイテッド ポリヌクレオチドの送達のための修飾ポリマー、その製造方法、およびその使用方法
WO2011123621A2 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc. 2' and 5' modified monomers and oligonucleotides
WO2011133876A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
US20130236968A1 (en) 2010-06-21 2013-09-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
WO2012007327A1 (en) 2010-07-12 2012-01-19 Dkfz Deutsches Krebsforschungszentrum Wogonin for the prevention and therapy of cardiac hypertrophy
AU2011302152B2 (en) 2010-09-15 2015-06-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
WO2012068187A1 (en) 2010-11-19 2012-05-24 Merck Sharp & Dohme Corp. Poly(amide) polymers for the delivery of oligonucleotides
CA2816155C (en) 2010-12-17 2020-10-27 Arrowhead Research Corporation Galactose cluster-pharmacokinetic modulator targeting moiety for sirna
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
ES2605990T3 (es) 2010-12-29 2017-03-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugados de molécula pequeña para la administración intracelular de ácidos nucleicos
US10017764B2 (en) 2011-02-08 2018-07-10 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
RU2631805C2 (ru) 2011-06-21 2017-09-26 Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы ингибирования экспрессии генов аполипопротеина с-iii (арос3)
WO2013022966A1 (en) * 2011-08-11 2013-02-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Linkage modified gapped oligomeric compounds and uses thereof
BR112014004585A2 (pt) 2011-08-26 2017-06-13 Arrowhead Res Corp polímeros de poli(éster vinílico) para liberação de ácido nucleico in vivo
WO2013033230A1 (en) 2011-08-29 2013-03-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
KR20220045091A (ko) 2011-11-18 2022-04-12 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스티레틴（ＴＴＲ） 관련 질병을 치료하기 위한 ＲＮＡｉ 제제, 조성 및 그의 사용방법
EP3336189A1 (en) 2012-04-20 2018-06-20 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
TW201808342A (zh) 2012-05-02 2018-03-16 喜納製藥公司 包含四ｇａｌｎａｃ之新穎結合物及傳送寡核苷酸之方法
EP2844261B1 (en) 2012-05-02 2018-10-17 Sirna Therapeutics, Inc. SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) COMPOSITIONS
US20150297629A1 (en) 2012-07-27 2015-10-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of renin-angiotensin system (ras) related diseases by angiotensinogen
EP2906699A4 (en) 2012-10-11 2016-06-08 Ionis Pharmaceuticals Inc OLIGOMER COMPOUNDS WITH BICYCLIC NUCLEOSIDES AND USES THEREOF
MX363068B (es) 2012-11-15 2019-03-07 Roche Innovation Ct Copenhagen As Conjugados de oligonucleotido.
PL2992009T3 (pl) 2013-05-01 2020-11-30 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Kompozycje i sposoby modulowania ekspresji apolipoproteiny(a)
NZ630921A (en) 2013-05-01 2017-12-22 Regulus Therapeutics Inc Compounds and methods for enhanced cellular uptake
NZ716816A (en) * 2013-08-28 2022-05-27 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulation of prekallikrein (pkk) expression
US10119136B2 (en) 2014-01-09 2018-11-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. RNAi agents modified at the 4′-C position
CN112301031A (zh) 2014-05-22 2021-02-02 阿尔尼拉姆医药品有限公司 血管紧张素原(AGT)iRNA组合物及其使用方法
WO2016196111A1 (en) * 2015-06-01 2016-12-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Polynucleotide agents targeting angiotensinogen (agt) and methods of use thereof
MA43072A (fr) 2015-07-22 2018-05-30 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
BR122020023854B1 (pt) * 2015-10-08 2022-11-29 Ionis Pharmaceuticals, Inc Composto compreendendo oligonucleotídeo modificado e seu uso, uso do oligonucleotídeo modificado, composição e seu uso
CA3090901A1 (en) * 2018-02-12 2019-08-15 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modified compounds and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
US20220298200A1 (en) 2022-09-22
EP4136092A1 (en) 2023-02-22
US11447521B2 (en) 2022-09-20
IL302817A (en) 2023-07-01
KR20230108728A (ko) 2023-07-18
CA3201661A1 (en) 2022-05-27
MX2023005736A (es) 2023-05-25
US20220153775A1 (en) 2022-05-19
EP4136092A4 (en) 2023-10-11
WO2022109139A1 (en) 2022-05-27
JP2023549563A (ja) 2023-11-27
AU2021381363A1 (en) 2023-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2706964C2 (ru) Модуляция экспрессии ангиопоэтин-подобного белка 3
JP2020072732A (ja) プレカリクレイン（ｐｋｋ）発現の調節
TW201723176A (zh) Ｋｒａｓ表現之調節劑
JP2023093644A (ja) アンジオテンシノーゲンの発現を調節するための化合物及び方法
JP6092226B2 (ja) Ｇｃｇｒ発現のアンチセンス調整
JP6043347B2 (ja) 線維芽細胞増殖因子受容体４の発現のアンチセンス調節
JP2018511307A (ja) Ｔｍｐｒｓｓ６発現を調節するための化合物及び方法
KR20180105730A (ko) 근육긴장성 이영양증-단백질 키나제(dmpk) 발현의 조절 방법
JP6158833B2 (ja) ベータ−カテニン関連疾患を処置するための有機組成物
JP7289347B2 (ja) Ｐｃｓｋ９発現のモジュレーター
TWI769197B (zh) 用於治療多囊腎病之組成物
TW202023573A (zh) Pnpla3表現之調節劑
KR20210008498A (ko) Fxi 발현을 감소시키기 위한 화합물 및 방법
JP2022552249A (ja) Ｐｎｐｌａ３発現のモジュレーター
TW202227101A (zh) 用於調節血管收縮素原表現之化合物及方法
TW202216996A (zh) 調節ｐｌｐ１之化合物及方法
CN116615540A (zh) 用于调节血管紧张素原表达的化合物和方法
CN116670280A (zh) 用于调节因子xii的化合物和方法
TW202405171A (zh) 血管收縮素原調節組合物及其使用方法
TW202016305A (zh) Ａｐｏｌ１表現之調節劑