KR20240026203A - 안지오텐시노겐(agt)-관련 장애를 치료하는 방법 및 조성물 - Google Patents

안지오텐시노겐(agt)-관련 장애를 치료하는 방법 및 조성물 Download PDF

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겐지 피. 후지타
캉 린
니틴 메로트라
가브리엘 로비
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Abstract

본 발명은 대상체에서 AGT 유전자의 발현을 억제하는 방법 및, AGT 관련 장애, 예를 들어 고혈압을 갖는 대상체를 AGT 유전자를 표적으로 하는 RNAi 제제, 예를 들어 이중 가닥 RNAi 제제를 사용하여 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 AGT 유전자의 발현을 억제하는 이러한 RNAi 제제를 사용하여 대상체에서 혈압 수준을 감소시키는 방법에 관한 것이다.

Description

안지오텐시노겐(AGT)-관련 장애를 치료하는 방법 및 조성물
관련 출원
본 출원은 2021년 6월 30일자로 출원된 미국 특허 가출원 제63/216,758호 및 2021년 11월 8일자로 출원된 미국 특허 가출원 제63/276,808호에 대한 우선권의 이익을 주장한다. 이전 출원의 각각의 전문은 본원에 참조로 통합된다.
레닌-안지오텐신-알도스테론계(RAAS)는 혈압 조절에 중요한 역할을 한다. RAAS 캐스케이드는 신장의 방사구체 세포(juxtaglomerular cell)에 의해 순환계로 레닌을 방출하며 시작된다. 레닌 분비는 원위 세뇨관에서의 Na+ 부하, β-교감신경 자극, 또는 신장 관류 감소를 포함하는 여러 인자에 의해 자극된다. 혈장 내 활성 레닌은 안지오텐시노겐(간에 의해 생성됨)을 안지오텐신 I로 절단한 다음, 순환 및 국소 발현된 안지오텐신-전환 효소(ACE)에 의해 안지오텐신 II로 전환된다. RAAS에 대한 안지오텐신 II의 효과 대부분은 안지오텐신 II 1형 수용체(AT1R)와의 결합에 의해 발휘되어, 동맥 혈관수축, 관형 및 사구체 효과(예를 들어, 향상된 Na+ 재흡수 또는 사구체 여과율의 조절)를 유발한다. 또한, 아드레노코르티코트로핀, 항이뇨 호르몬, 카테콜아민, 엔도텔린, 세로토닌, 및 Mg2+ 및 K+의 수준과 같은 다른 자극과 함께, AT1R 자극은 알도스테론 방출로 이어지며, 이는 결국 신장 원위세뇨관에서 Na+ 및 K+ 배설을 촉진한다.
예를 들어, 과도한 안지오텐신 II 생성 또는 AT1R 자극을 유발하는 RAAS의 조절 장애는 고혈압을 초래하며, 이는 예를 들어 심장, 신장 및 동맥에서 산화 스트레스 증가, 염증 촉진, 비대 및 섬유증을 초래할 수 있고, 예를 들어 좌심실 섬유증, 동맥 리모델링 및 사구체경화증을 초래할 수 있다.
고혈압은 성인 모집단의 20~50%에 영향을 미치는, 선진국에서 가장 흔하고 조절 가능한 질환이다. 고혈압은 예컨대 기대 수명 단축, 만성 신장 질환, 뇌졸중, 심근경색, 심부전, 동맥류(예: 대동맥류), 말초 동맥 질환, 심장 손상(예: 심장 비대(enlargement) 또는 비대(hypertrophy))과 같은 다양한 질환, 장애 및 병태, 및 다른 심혈관 관련 질환, 장애 또는 병태에 대한 주요 위험 인자이다. 또한, 고혈압은 심혈관 발병률 및 사망률에 대한 중요한 위험 인자인 것으로 나타났으며, 이는 모든 뇌졸중의 62% 및 모든 심장 질환 사례의 49%를 차지하거나 이에 기여한다. 2017년, 고혈압의 진단, 예방 및 치료에 대한 지침에 변화가 있었으며, 이는 고혈압과 관련된 질환 및 장애의 발생 위험을 더욱 감소시키도록 혈압을 훨씬 낮추는 목표를 제공한다(문헌참조: 예를 들어, 문헌[Reboussin 등. Systematic Review for the 2017 ACC/AHA/AAPA/ABC/ACPM/AGS/APhA/ASH/ASPC/NMA/PCNA Guideline for the Prevention, Detection, Evaluation, and Management of High Blood Pressure in Adults: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 2017 Nov 7. pii: S0735-1097(17)41517-8. doi: 10.1016/j.jacc.2017.11.004]; 및 문헌[Whelton 등. (2017 ACC/AHA/AAPA/ABC/ACPM/AGS/APhA/ASH/ASPC/NMA/PCNA Guideline for the Prevention, Detection, Evaluation, and Management of High Blood Pressure in Adults: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 2017 Nov 7. pii: S0735-1097(17)41519-1. doi: 10.1016/j.jacc.2017.11.006])
고혈압을 치료하는 데 이용 가능한 항고혈압제의 수에도 불구하고, 2/3를 초과하는 대상체는 하나의 항고혈압제로 조절되지 않으며 상이한 약물 계열로부터 선택된 2개 이상의 항고혈압제를 필요로 한다. 이는 약물 수가 증가함에 따라 순응도가 감소하고 부작용이 증가함으로써, 혈압이 조절되는 대상체의 수를 추가로 감소시킨다. 또한, 몇몇 연구는 항고혈압 약물의 만성적인 사용과 신장 기능의 저하 사이의 잠재적인 관계를 제시해왔으며, 이는 혈압을 조절하는 항고혈압제가 혈압에 미치는 영향과 독립적으로 신장 기능에도 영향을 미친다는 것을 나타낸다(문헌참조: Tomlinson,등 (2013) PLoS ONE 8(11) Article ID e78465; The SPRINT Research Group (2015) NEJM 373(22):2103-2116, ClinicalTrials.gov number, NCT01206062; Kidney Disease: Improving Global Outcomes (KDIGO) CKD Work Group (2013) Kidney International Supplements 3:1~150; Kamaroff, et al. (2018( Hindawi International J Chron Dis Article ID 1382705 | https://doi.org/10.1155/2018/1382705).
따라서, 고혈압이 있는 대상체를 치료하는 추가 방법 및 요법에 대한 필요성이 당업계에 존재한다.
본 발명은 안지오텐시노겐(AGT) 유전자의 발현을 억제하고, AGT 발현의 감소로부터 혜택을 받을 장애를 갖는 대상체를 치료하고, AGT 관련 장애를 갖고 있는 대상체를 치료하고, 대상체의 혈압을 감소시키는 방법 및 조성물을 제공한다. 본 방법은 AGT 유전자를 표적으로 하는 RNAi 제제, 예를 들어 이중 가닥 RNAi 제제의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 양태에서, 본 발명은 대상체 내 안지오텐시노겐(AGT) 유전자의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 본 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg(예를 들어, 약 50 내지 약 200mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 800mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 400mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 500mg, 약 300mg 내지 약 4000mg, 약 400mg 내지 약 800mg, 약 400mg 내지 약 500mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg)의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고; 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 적어도 하나의 변형 뉴클레오티드를 포함하고; 뉴클레오티드 상의 변형 중 적어도 하나는 열 불안정화 뉴클레오티드 변형이므로, 대상체 내 AGT 유전자의 발현을 억제한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 안지오텐시노겐(AGT) 발현의 감소가 이득이 되는 대상체, 예를 들어 AGT 관련 장애, 예를 들어 고혈압이 발생할 위험이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg(예를 들어, 약 50 내지 약 200mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 800mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 400mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 500mg, 약 300mg 내지 약 4000mg, 약 400mg 내지 약 800mg, 약 400mg 내지 약 500mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg)의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고; 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 적어도 하나의 변형 뉴클레오티드를 포함하고; 뉴클레오티드 상의 변형 중 적어도 하나는 열 불안정화 뉴클레오티드 변형이므로, AGT 발현의 감소가 이득이 되는 대상체를 치료한다.
일 양태에서, 본 발명은 안지오텐시노겐(AGT) 관련 장애, 예를 들어 고혈압을 갖고 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg(예를 들어, 약 50 내지 약 200mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 800mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 400mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 500mg, 약 300mg 내지 약 4000mg, 약 400mg 내지 약 800mg, 약 400mg 내지 약 500mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg)의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고; 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 적어도 하나의 변형 뉴클레오티드를 포함하고; 뉴클레오티드 상의 변형 중 적어도 하나는 열 불안정화 뉴클레오티드 변형이므로, AGT 관련 장애를 갖고 있는 대상체를 치료한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 AGT 관련 장애, 예를 들어, 고혈압을 갖고 있는 대상체와 같은 대상체에서 혈압 수준을 감소시키는 방법을 제공한다. 본 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg(예를 들어, 약 50 내지 약 200mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 800mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 400mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 500mg, 약 300mg 내지 약 4000mg, 약 400mg 내지 약 800mg, 약 400mg 내지 약 500mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg)의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고; 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 적어도 하나의 변형 뉴클레오티드를 포함하고; 뉴클레오티드 상의 변형 중 적어도 하나는 열 불안정화 뉴클레오티드 변형이므로, 대상체에서 혈압 수준을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 고정 투여량이 월 1회의 간격으로 대상체에게 투여된다. 다른 구현예에서, 고정 투여량이 분기별 1회의 간격으로 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 고정 투여량이 2년 간격으로 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 50mg 내지 약 200mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 다른 구현예에서, 약 200mg 내지 약 400mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 400mg 내지 약 800mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 100mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 200mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 300mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 400mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 500mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 다른 구현예에서, 약 600mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 800mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 150mg의 고정 투여량이 6개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 300mg의 고정 투여량이 6개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 300mg의 고정 투여량이 3개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 600mg의 고정 투여량이 6개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염이 대상체에게 피하 또는 정맥 내 투여된다. 일부 구현예에서, 피하 투여는 피하 주사, 예를 들어 피하 자가 투여이다. 다른 구현예에서, 정맥내 투여는 정맥내 주사이다.
일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 21개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 22개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)를 포함하고, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)를 포함한다.
일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)로 이루어지고, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)으로 이루어진다.
일부 구현예에서, 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이다. 다른 구현예에서, 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이다.
일부 구현예에서, 센스 가닥의 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이다. 일부 구현예에서, 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이다.
일부 구현예에서, 뉴클레오티드 변형 중 적어도 하나는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: 데옥시-뉴클레오티드, 3'-말단 데옥시-티민(dT) 뉴클레오티드, 2'-O-메틸 변형 뉴클레오티드, 2'-플루오로 변형 뉴클레오티드, 2'-데옥시-변형 뉴클레오티드, 잠김 뉴클레오티드, 잠김 해제된 뉴클레오티드, 입체적으로 제한된 뉴클레오티드, 구속된 에틸 뉴클레오티드, 무염기성 뉴클레오티드, 2'-아미노-변형 뉴클레오티드, 2'-O-알릴-변형 뉴클레오티드, 2'-C-알킬-변형 뉴클레오티드, 2'-하이드록실-변형 뉴클레오티드, 2'-메톡시에틸 변형 뉴클레오티드, 2'-O-알킬-변형 뉴클레오티드, 모르폴리노 뉴클레오티드, 포스포라미데이트, 뉴클레오티드를 포함하는 비-천연 염기, 테트라하이드로피란 변형 뉴클레오티드, 1,5-안하이드로헥시톨 변형 뉴클레오티드, 시클로헥세닐 변형 뉴클레오티드, 포스포로티오에이트기를 포함하는 뉴클레오티드, 메틸포스포네이트기를 포함하는 뉴클레오티드, 5'-포스페이트를 포함하는 뉴클레오티드, 5'-포스페이트 모방체를 포함하는 뉴클레오티드, 열 불안정화 뉴클레오티드, 글리콜 변형 뉴클레오티드(GNA), 및 2-O-(N-메틸아세트아미드) 변형 뉴클레오티드; 및 이들의 조합.
일부 구현예에서, 뉴클레오티드 변형 중 적어도 하나는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: 데옥시-뉴클레오티드, 2'-O-메틸 변형 뉴클레오티드, 2'-플루오로 변형 뉴클레오티드, 2'-데옥시-변형 뉴클레오티드, 글리콜 변형 뉴클레오티드(GNA), 및 2-O-(N-메틸아세트아미드) 변형 뉴클레오티드; 및 이들의 조합.
일부 구현예에서, 이중 가닥 영역은 길이가 19~23개 뉴클레오티드쌍, 길이가 19~21개 뉴클레오티드쌍, 길이가 21~23개 뉴클레오티드쌍, 또는 길이가 21개 뉴클레오티드쌍이다.
일부 구현예에서, 각 가닥은 독립적으로 길이가 19~23개 뉴클레오티드, 길이가 19~25개 뉴클레오티드, 또는 길이가 21~23개 뉴클레오티드이다. 일부 구현예에서, 센스 가닥은 길이가 21개 뉴클레오티드이고, 안티센스 가닥은 길이가 23개 뉴클레오티드이다.
일부 구현예에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 1개 뉴클레오티드의 3' 오버행 또는 적어도 2개 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함한다.
일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 적어도 하나의 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합은 하나의 가닥의 3'-말단에 존재한다. 일부 구현예에서, 가닥은 안티센스 가닥이다. 다른 구현예에서, 가닥은 센스 가닥이다.
일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합은 하나의 가닥의 5'-말단에 존재한다. 일부 구현예에서, 가닥은 안티센스 가닥이다. 다른 구현예에서, 가닥은 센스 가닥이다.
일부 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합은 하나의 가닥의 5'- 및 3'-말단 둘 모두에 존재한다. 일부 구현예에서, 가닥은 안티센스 가닥이다.
일 양태에서, 본 발명은 대상체 내 안지오텐시노겐(AGT) 유전자의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 본 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg(예를 들어, 약 50 내지 약 200mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 800mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 400mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 500mg, 약 300mg 내지 약 4000mg, 약 400mg 내지 약 800mg, 약 400mg 내지 약 500mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg)의 고정 투여량을 대상체에게 투여하여, 대상체에서 AGT 유전자의 발현을 억제하는 단계를 포함하고, 여기서 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고; 화학적 변형은 다음과 같이 정의된다: a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 AGT 발현의 감소가 이득이 되는 대상체, 예를 들어 AGT 관련 장애, 예를 들어 고혈압이 발생할 위험이 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg(예를 들어, 약 50 내지 약 200mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 800mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 400mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 500mg, 약 300mg 내지 약 4000mg, 약 400mg 내지 약 800mg, 약 400mg 내지 약 500mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg)의 고정 투여량을 대상체에게 투여하여, AGT 발현의 감소가 이득이 되는 대상체를 치료하는 단계를 포함하고, 여기서 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고; 화학적 변형은 다음과 같이 정의된다: a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일 양태에서, 본 발명은 AGT 관련 장애, 예를 들어 고혈압을 갖고 있는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg(예를 들어, 약 50 내지 약 200mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 800mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 400mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 500mg, 약 300mg 내지 약 4000mg, 약 400mg 내지 약 800mg, 약 400mg 내지 약 500mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg)의 고정 투여량을 대상체에게 투여하여, AGT 관련 장애를 갖고 있는 대상체를 치료하는 단계를 포함하고, 여기서 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고; 화학적 변형은 다음과 같이 정의된다: a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 대상체의 혈압 수준을 감소시키는 방법을 제공한다. 본 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg(예를 들어, 약 50 내지 약 200mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 800mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 400mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 500mg, 약 300mg 내지 약 4000mg, 약 400mg 내지 약 800mg, 약 400mg 내지 약 500mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg)의 고정 투여량을 대상체에게 투여하여, 대상체의 혈압 수준을 감소시키는 단계를 포함하고, 여기서 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고; 화학적 변형은 다음과 같이 정의된다: a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이다.
일부 구현예에서, 고정 투여량이 월 1회의 간격으로 대상체에게 투여된다. 다른 구현예에서, 고정 투여량이 분기별 1회의 간격으로 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 고정 투여량이 2년 간격으로 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 50mg 내지 약 200mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 다른 구현예에서, 약 200mg 내지 약 400mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 400mg 내지 약 800mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 100mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 200mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 300mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 400mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 500mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 다른 구현예에서, 약 600mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약 800mg의 고정 투여량이 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 150mg의 고정 투여량이 6개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 300mg의 고정 투여량이 6개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 300mg의 고정 투여량이 3개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 600mg의 고정 투여량이 6개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 800mg의 고정 투여량이 3개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 800mg의 고정 투여량이 6개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염이 대상체에게 피하 또는 정맥 내 투여된다. 일부 구현예에서, 피하 투여는 피하 주사, 예를 들어 피하 자가 투여이다. 다른 구현예에서, 정맥내 투여는 정맥내 주사이다.
일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 21개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 22개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)를 포함하고, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)를 포함한다.
다른 구현예에서, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)로 이루어지고, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)로 이루어진다.
일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 리간드를 추가로 포함한다. 다른 구현예에서, 리간드는 센스 가닥의 3' 말단에 접합된다.
일부 구현예에서, 리간드는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc) 유도체이다. 다른 구현예에서, GalNAc 유도체는 1가, 2가, 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체를 포함한다.
일부 구현예에서, 리간드는 다음과 같다
다른 구현예에서, 센스 가닥의 3' 말단은 하기 개략도에 도시한 바와 같이 리간드에 접합되고
여기서, X는 O 또는 S이다.
일부 구현예에서, 대상체는 인간이다. 일부 구현예에서, 대상체는 적어도 130mm Hg의 수축기 혈압 또는 적어도 80mm Hg의 확장기 혈압을 갖는다. 다른 구현예에서, 대상체는 적어도 140mm Hg의 수축기 혈압 또는 적어도 80mm Hg의 확장기 혈압을 갖는다.
일부 구현예에서, 대상체는 염감도(salt sensitivity)에 민감한 군의 일부이거나, 과체중이거나, 비만이거나, 임신 중이거나, 임신할 계획이거나, 2형 당뇨병을 앓고 있거나, 1형 당뇨병을 앓고 있거나, 신장 기능이 감소된 대상체이다.
일부 구현예에서, AGT 발현의 감소가 이득이 되는 장애는 AGT 관련 장애이다. 일 구현예에서, AGT 관련 장애는 고혈압이다. 다른 구현예에서, AGT 관련 장애는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: 고혈압(high blood pressure), 고혈압(hypertension), 경계성 고혈압, 원발성 고혈압, 이차성 고혈압, 단독 수축기 또는 확장기 고혈압, 임신 관련 고혈압, 당뇨병성 고혈압, 저항성 고혈압, 불응성 고혈압, 발작성 고혈압, 신혈관성 고혈압, Goldblatt 고혈압, 안구 고혈압, 녹내장, 폐동맥 고혈압, 문맥 고혈압, 전신 정맥 고혈압, 수축기 고혈압, 불안정 고혈압; 고혈압성 심장 질환, 고혈압성 신장병증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 혈관병증, 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 망막병증, 만성 심부전, 심근병증, 당뇨병성 심장 근병증, 야간 저혈압, 사구체경화증, 대동맥 협착, 대동맥류, 심실 섬유증, 심부전, 심근경색, 협심증, 뇌졸중, 신장 질환, 신부전, 전신 경화증, 자궁내 성장 제한(IUGR), 태아 성장 제한, 비만, 간 지방증/지방간, 비알코올성 지방간염(NASH), 비알코올성 지방간 질환(NAFLD); 포도당 불내성, 2형 당뇨병, 및 대사 증후군. 일 구현예에서, AGT 관련 장애는 고혈압이다. 일 구현예에서, 고혈압은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: 고혈압(high blood pressure), 고혈압(hypertension), 경계성 고혈압, 원발성 고혈압, 이차성 고혈압, 단독 수축기 또는 확장기 고혈압, 임신 관련 고혈압, 당뇨병성 고혈압, 저항성 고혈압, 불응성 고혈압, 발작성 고혈압, 신혈관성 고혈압, Goldblatt 고혈압, 안구 고혈압, 녹내장, 폐동맥 고혈압, 문맥 고혈압, 전신 정맥 고혈압, 수축기 고혈압, 불안정 고혈압; 고혈압성 심장 질환, 및 고혈압성 신장병증.
일부 구현예에서, 혈압은 수축기 혈압 및/또는 확장기 혈압을 포함한다.
일부 구현예에서, 투여는 AGT 발현을 적어도 30%, 40% 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 감소시킨다. 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 또는 혈청 샘플의 AGT 단백질 수준은 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 감소된다.
일부 구현예에서, 투여는 수축기 혈압 및/또는 확장기 혈압을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 수축기 혈압 및/또는 확장기 혈압은 적어도 4mmHg, 5mmHg, 6mmHg, 7mmHg, 8mmHg, 9mmHg, 10mmHg 또는 20mmHg 감소된다.
일부 구현예에서, 본 방법은 고혈압 치료를 위한 추가 치료제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: 이뇨제, 안지오텐신 전환 효소(ACE) 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 베타-차단제, 혈관확장제, 칼슘 채널 차단제, 알도스테론 길항제, 알파2-작용제, 레닌 억제제, 알파-차단제, 말초 작용 아드레날린제, 선택적 D1 수용체 부분 작용제, 비선택적 알파-아드레날린 길항제, 합성 스테로이드성 항미네랄코르티코이드제; 전술한 것 중 임의의 조합; 및 제제의 조합으로서 제형화된 고혈압 치료제. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 안지오텐신 II 수용체 길항제를 포함한다. 다른 구현예에서, 안지오텐신 II 수용체 길항제는 로사르탄, 발사르탄, 올메사르탄, 에프로사르탄, 이르베사르탄 및 아질사르탄으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 추가 치료제는 고혈압 치료제를 포함한다. 일부 구현예에서, 고혈압 치료제는 올메사르탄, 암로디핀 및 인다파미드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 본 발명의 이중 가닥 RNAi 제제, 예를 들어 AD-85481, 및 올메사르탄, 암로디핀 및 인다파미드로 이루어진 군으로부터 선택된 고혈압 치료제의 약 600mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 방법은 AD-85481 및 올메사르탄의 약 600mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 AD-85481 및 암로디핀의 약 600mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 AD-85481 및 인다파미드의 약 600mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 방법은 혈압이 표준 치료 항고혈압제에 의해 적절히 조절되지 않는 대상체를 선택하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, RNAi 제제는 약제학적 조성물로서 투여된다.
일부 구현예에서, RNAi 제제는 비완충 용액으로 투여된다. 일부 구현예에서, 비완충 용액은 식염수 또는 물이다.
일부 구현예에서, RNAi 제제는 완충 용액과 투여된다. 일부 구현예에서, 완충 용액은 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카보네이트 또는 포스페이트, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서, 완충 용액은 포스페이트 완충 식염수(PBS)이다.
본 발명은 또한, 본 명세서에 기술된 바와 같이, 본 발명의 방법을 수행하기 위한 키트를 제공한다. 키트는 a) RNAi 제제 및 b) 사용 지침, 및 c) 임의로 RNAi 제제를 대상체에게 투여하기 위한 수단을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 또한 안지오텐시노겐(AGT)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염을 포함하는, AGT 관련 장애를 치료하기 위한 약제학적 조성물을 제공한다. 약제학적 조성물은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하는 dsRNA 제제를 포함하고, 여기서 안티센스 가닥은 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 뉴클레오티드 서열의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 뉴클레오티드 서열의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고; 5개 이하의 뉴클레오티드는 변형을 포함하지 않고; 뉴클레오티드 변형 중 적어도 하나는 열 불안정화 뉴클레오티드 변형이고; 이중 가닥 RNAi 제제는 월 1회 이하 적어도 50mg/투여량의 용량으로, 예를 들어 약 월 1회 약 50mg 내지 약 800mg의 투여량(예를 들어, 약 50 내지 약 200mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 800mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 400mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 500mg, 약 300mg 내지 약 4000mg, 약 400mg 내지 약 800mg, 약 400mg 내지 약 500mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg)으로 투여된다.
소정의 구현예에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 소정의 구현예에서, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 21개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 소정의 구현예에서, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)를 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 22개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 소정의 구현예에서, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)를 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)를 포함한다. 소정의 구현예에서, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)를 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 안티센스 가닥의 뉴클레오티드 서열은 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)로 이루어진다. 소정의 구현예에서, 센스 가닥의 뉴클레오티드 서열은 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)로 추가로 이루어진다.
소정의 구현예에서, 센스 가닥의 모든 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오티드는 뉴클레오티드 변형을 포함한다.
소정의 구현예에서, 뉴클레오티드 변형 중 적어도 하나는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: 데옥시-뉴클레오티드, 3'-말단 데옥시-티민(dT) 뉴클레오티드, 2'-O-메틸 변형 뉴클레오티드, 2'-플루오로 변형 뉴클레오티드, 2'-데옥시-변형 뉴클레오티드, 잠김 뉴클레오티드, 잠김 해제된 뉴클레오티드, 입체적으로 제한된 뉴클레오티드, 구속된 에틸 뉴클레오티드, 무염기성 뉴클레오티드, 2'-아미노-변형 뉴클레오티드, 2'-O-알릴-변형 뉴클레오티드, 2'-C-알킬-변형 뉴클레오티드, 2'-하이드록실-변형 뉴클레오티드, 2'-메톡시에틸 변형 뉴클레오티드, 2'-O-알킬-변형 뉴클레오티드, 모르폴리노 뉴클레오티드, 포스포라미데이트, 뉴클레오티드를 포함하는 비-천연 염기, 테트라하이드로피란 변형 뉴클레오티드, 1,5-안하이드로헥시톨 변형 뉴클레오티드, 시클로헥세닐 변형 뉴클레오티드, 포스포로티오에이트기를 포함하는 뉴클레오티드, 메틸포스포네이트기를 포함하는 뉴클레오티드, 5'-포스페이트를 포함하는 뉴클레오티드, 5'-포스페이트 모방체를 포함하는 뉴클레오티드, 열 불안정화 뉴클레오티드, 글리콜 변형 뉴클레오티드(GNA), 및 2-O-(N-메틸아세트아미드) 변형 뉴클레오티드; 및 이들의 조합. 소정의 구현예에서, 뉴클레오티드 변형 중 적어도 하나는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: 데옥시-뉴클레오티드, 2'-O-메틸 변형 뉴클레오티드, 2'-플루오로 변형 뉴클레오티드, 2'-데옥시-변형 뉴클레오티드, 글리콜 변형 뉴클레오티드(GNA), 및 2-O-(N-메틸아세트아미드) 변형 뉴클레오티드; 및 이들의 조합.
소정의 구현예에서, 뉴클레오티드 변형은 2'-메톡시에틸, 2'-플루오로, 2'-데옥시-변형 뉴클레오티드, 및 GNA; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 구현예에서, 이중 가닥 영역의 길이는 다음으로부터 선택된다: 길이가 19~23개 뉴클레오티드 쌍, 길이가 19~21개 뉴클레오티드 쌍, 길이가 21~23개 뉴클레오티드 쌍, 길이가 21개 뉴클레오티드 쌍, 길이가 19~30개 뉴클레오티드 쌍, 길이가 19~25개 뉴클레오티드 쌍, 길이가 23~27개 뉴클레오티드 쌍. 소정의 구현예에서, 이중 가닥 영역은 길이가 19~21개 뉴클레오티드 쌍인 길이를 갖는다.
소정의 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 또는 이의 염의 각각의 가닥의 길이는 독립적으로 다음으로부터 선택된다: 길이가 19~30개 뉴클레오티드, 길이가 19~23개 뉴클레오티드, 및 길이가 21~23개 뉴클레오티드. 소정의 구현예에서, 각각의 가닥은 독립적으로 길이가 21~23개 뉴클레오티드이다. 소정의 구현예에서, 센스 가닥은 길이가 21개 뉴클레오티드이고, 안티센스 가닥은 길이가 23개 뉴클레오티드이다.
소정의 구현예에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 1개 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함한다. 소정의 구현예에서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 2개 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함한다.
소정의 구현예에서, 제제는 적어도 하나의 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합을 추가로 포함한다. 소정의 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합은 하나의 가닥의 3'-말단에 존재한다. 소정의 구현예에서, 가닥은 안티센스 가닥이다. 소정의 구현예에서, 가닥은 센스 가닥이다.
소정의 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합은 하나의 가닥의 5'-말단에 존재한다. 소정의 구현예에서, 가닥은 안티센스 가닥이다. 소정의 구현예에서, 가닥은 센스 가닥이다.
소정의 구현예에서, 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합은 하나의 가닥의 5'- 및 3'-말단 모두에 존재한다. 소정의 구현예에서, 가닥은 안티센스 가닥이다.
본 발명은 안지오텐시노겐(AGT)의 발현을 억제하기 위한 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염을 포함하는, AGT 관련 장애를 치료하기 위한 약제학적 조성물을 제공한다. 약제학적 조성물은 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염을 포함하며, 제제는 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하되, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고; 화학적 변형은 다음과 같이 정의되고: a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이고; 약제학적 조성물은 적어도 50mg/투여량의 용량으로 월 1회 이하 투여된다.
소정의 구현예에서, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 소정의 구현예에서, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 21개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 소정의 구현예에서, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)를 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 22개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 소정의 구현예에서, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)를 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)를 포함한다. 소정의 구현예에서, 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)를 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 안티센스 가닥의 변형 뉴클레오티드 서열은 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)로 이루어진다. 소정의 구현예에서, 센스 가닥의 변형 뉴클레오티드 서열은 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)로 이루어진다.
소정의 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 리간드를 추가로 포함한다. 소정의 구현예에서, 리간드가 센스 가닥의 3' 말단에 접합된다. 소정의 구현예에서, 리간드는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc) 유도체이다. 소정의 구현예에서, GalNAc 유도체는 1가, 2가, 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체를 포함한다.
소정의 구현예에서, 리간드는 다음과 같다:
소정의 구현예에서, 센스 가닥의 3' 말단이 하기 개략도에 도시한 바와 같이 리간드에 접합되고
상기 식에서 X는 O 또는 S이다. 소정의 구현예에서, X는 O이다.
소정의 구현예에서, 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca를 포함하되, 센스 가닥의 3' 말단은 L96 (N-[트리스(GalNAc-알킬)-아미도데카노일)]-4-하이드록시프롤리놀 Hyp-(GalNAc-알킬)3)에 접합되고, 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa를 포함하고; 화학적 변형은 다음과 같이 정의된다: a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이다.
소정의 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 용량당 50mg 내지 500mg의 용량으로 투여된다. 소정의 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 용량당 50 내지 400mg의 용량으로 투여된다. 소정의 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 용량당 50 내지 300mg의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 약 50mg 내지 약 200mg의 고정 투여량으로 투여된다. 다른 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 약 200mg 내지 약 400mg의 고정 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 약 400mg 내지 약 800mg의 고정 투여량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 약 100mg의 고정 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 약 200mg의 고정 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 약 300mg의 고정 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 약 400mg의 고정 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 약 500mg의 고정 투여량으로 투여된다. 다른 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 약 600mg의 고정 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 약 800mg의 고정 투여량으로 투여된다.
소정의 구현예에서, 약제학적 조성물은 월 1회 내지 6개월마다 1회의 빈도로 투여된다. 소정의 구현예에서, 약제학적 조성물은 월 1회 내지 3개월마다 1회의 빈도로 투여된다. 소정의 구현예에서, 약제학적 조성물은 3개월마다 1회 내지 6개월마다 1회의 빈도로 투여된다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 월 1회의 간격으로 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 분기별 1회의 간격으로 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 연 2회의 간격으로 대상체에게 투여된다.
소정의 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제는 용량당 50 내지 400mg의 용량으로 월 1회 내지 6개월마다 1회의 빈도로 투여된다.
일부 구현예에서, 약 150mg의 고정 투여량이 6개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 300mg의 고정 투여량이 6개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 300mg의 고정 투여량이 3개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약 600mg의 고정 투여량이 6개월마다 1회 대상체에게 투여된다.
또 다른 구현예에서, 대상체는 약 800mg의 고정 투여량을 약 3개월마다 1회 투여받는다.
또 다른 구현예에서, 대상체는 약 800mg의 고정 투여량을 약 6개월마다 1회 투여받는다.
소정의 구현예에서, AGT 관련 장애는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: 고혈압(high blood pressure), 고혈압(hypertension), 경계성 고혈압, 원발성 고혈압, 이차성 고혈압, 단독 수축기 또는 확장기 고혈압, 임신 관련 고혈압, 당뇨병성 고혈압, 저항성 고혈압, 불응성 고혈압, 발작성 고혈압, 신혈관성 고혈압, Goldblatt 고혈압, 안구 고혈압, 녹내장, 폐동맥 고혈압, 문맥 고혈압, 전신 정맥 고혈압, 수축기 고혈압, 불안정 고혈압; 고혈압성 심장 질환, 고혈압성 신장병증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 혈관병증, 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 망막병증, 만성 심부전, 심근병증, 당뇨병성 심장 근병증, 야간 저혈압, 사구체경화증, 대동맥 협착, 대동맥류, 심실 섬유증, 심부전, 심근경색, 협심증, 뇌졸중, 신장 질환, 신부전, 전신 경화증, 자궁내 성장 제한(IUGR), 태아 성장 제한, 비만, 간 지방증/지방간, 비알코올성 지방간염(NASH), 비알코올성 지방간 질환(NAFLD); 포도당 불내성, 2형 당뇨병, 및 대사 증후군.
소정의 구현예에서, 대상체는 적어도 130mm Hg의 수축기 혈압 또는 적어도 80mm Hg의 확장기 혈압을 갖는다. 소정의 구현예에서, 대상체는 적어도 140mm Hg의 수축기 혈압 및 적어도 80mm Hg의 확장기 혈압을 갖는다.
소정의 구현예에서, 대상체는 염감도에 민감한 군의 일부이거나, 과체중이거나, 비만이거나, 임신 중이거나, 임신할 계획이거나, 2형 당뇨병을 앓고 있거나, 1형 당뇨병을 앓고 있다.
소정의 구현예에서, 대상체는 AGT 관련 장애를 갖고 있으며 추가로 염감도에 민감한 군의 일부이거나, 과체중이거나, 비만이거나, 임신 중이거나, 임신할 계획이거나, 2형 당뇨병을 앓고 있거나, 1형 당뇨병을 앓고 있다.
소정의 구현예에서, 대상체는 신장 기능이 저하되었다. 소정의 구현예에서, 대상체는 AGT 관련 장애를 갖고 있으며 추가로 신장 기능이 저하되었다.
소정의 구현예에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 캐리어를 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 약제학적 조성물은 피하 또는 정맥내 주사에 의해 투여를 위한 것이다.
본 발명은 AGT 관련 장애를 치료하는 방법에 있어서의 임의의 약제학적 조성물의 용도 또는 AGT 관련 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 약물의 제조 방법에 있어서의 용도를 추가로 제공한다.
도 1은 단일 위약, AD-85481의 10mg, 25mg, 50mg, 100mg 또는 200mg의 피하 투여 후 0일차에 AGT 베이스라인 대비 혈청 AGT의 변화율을 도시하는 그래프이다.
도 2는 단일 위약, AD-85481의 10mg, 25mg, 50mg, 100mg 또는 200mg의 피하 투여 후 8주차에 베이스라인 대비 수축기 혈압(SBP) 및 확장기 혈압(DBP)의 변화를 도시하는 그래프이다. 각 군의 대상체의 수는 x축을 따라 도시되어 있다.
도 3은 제2상 임상시험의 연구 설계 개략도이다.
도 4는 단일 용량 투여 후 6개월차에 AD-85481(질레베시란)의 안전성 및 효능을 평가하기 위한 제1상 임상시험 연구 설계 계략도이다.
도 5는 단일 위약, AD-85481의 10mg, 25mg, 50mg, 100mg, 200mg, 400mg 또는 800mg의 피하 투여 후 12주차 및 24주차에 AGT 베이스라인 대비 혈청 AGT의 변화율을 도시하는 그래프이다.
도 6은 단일 위약, AD-85481의 200mg, 400mg 또는 800mg의 피하 투여 후 8주차, 12주차 및 24주차에 베이스라인 대비 수축기 혈압(SBP) 및 확장기 혈압(DBP)의 변화를 도시하는 그래프이다. 베이스라인 SBP/DBP 중앙값: 200mg - 139/83mmHg; 400mg - 138/90mmHg; 800mg - 142/88mmHg. 12주차에, 위약으로 치료한 환자들은 추적 관찰할 필요가 없었다. 200mg 투여량 그룹의 환자 4명, 400mg의 환자 1명, 및 800mg의 환자 2명은 부가적으로 항고혈압 요법을 받았다.
도 7은 AD-85481의 피하 단일 고정 투여량 후 달성된 24시간에 걸친 일관된 혈압 감소를 도시하는 그래프이다. 좌측 그래프는 위약 또는 AD-85481의 단일 200mg, 400mg 또는 800mg의 피하 투여 후 8주차에 주간/야간 ABPM의 베이스라인 대비 변화를 도시한다. 8주차의 모든 환자들은 질레베시란만을 투여받고 있었다(구제 항고혈압제 없음). 시간별 조정 평균; 주간[오전 9시~오후 9시], 야간(오전 1시~오전 6시). 베이스라인 SBP/DBP 중앙값: 200mg - 139/83mmHg; 400mg - 138/90mmHg; 800mg - 142/88mmHg. 우측 그래프는 AD-85481의 단일 800mg 투여량의 투여 후 8주차에 24시간 수축기 혈압(SBP)을 도시한다.
도 8은 나트륨 결핍 동안 AD-85481(질레베시란)의 내약성을 평가하기 위한 연구 설계 개략도이다.
도 9는 저염 식단 또는 고염 식단 후 표시된 시점에 AD-85481(질레베시란) 또는 위약을 투여받은 환자의 베이스라인 대비 수축기 혈압(SBP) 및 확장기 혈압(DBP)의 변화를 보여주는 그래프이다.
도 10은 이르베사르탄 공동 투여 동안 AD-85481(질레베시란)의 안전성 및 내약성을 평가하기 위한 연구 설계 개략도이다.
본 발명은 안지오텐시노겐(AGT) 유전자의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 AGT 발현의 감소가 이득이 되는 장애를 갖고 있는 대상체를 치료하는 방법 또는 대상체의 AGT 관련 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 대상체의 혈압 수준을 감소시키는 방법을 제공한다. 본 방법은 본 명세서에 기술된 바와 같이, AGT를 표적으로 하는 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염의 고정 투여량, 예를 들어 약 50mg 내지 약 800mg를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
다음의 상세한 설명은 AGT 유전자의 발현을 억제하기 위한, AGT를 표적으로 하는 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염, 또는 이러한 RNAi 제제 또는 이의 염의 고정 투여량을 포함하는 약제학적 조성물을 사용하여, AGT 유전자의 발현을 억제하는 방법, AGT 유전자 발현의 감소가 이득이 되는 대상체, 예를 들어 AGT 관련 장애(예를 들어, 고혈압)에 취약하거나 이를 진단 받은 대상체를 치료하는 방법들을 개시한다.
Ⅰ. 정의
본 발명이 보다 용이하게 이해될 수 있도록 하기 위해, 먼저 특정 용어를 정의한다. 또한, 파라미터의 값 또는 값의 범위가 인용될 때마다, 인용된 값의 중간 값 및 범위가 또한 본 발명의 일부로 의도된다는 점에 유의해야 한다.
단수형 관사("a" 및 "an")는 본 명세서에서 관사의 문법적인 대상 중 하나 또는 하나 이상(즉, 적어도 하나)을 지칭한다. 예로서, "일 요소"는 하나의 요소 또는 하나 초과의 요소, 예를 들어, 복수의 요소를 의미한다.
용어 "포함하는(including)"은 본 명세서에서 문구 "~을 포함하지만, 이에 제한되지 않는"을 의미하기 위해 사용되고 이와 상호교환적으로 사용된다.
용어 "또는"은 본 명세서에서 문맥상 명백하게 달리 지시하지 않는 이상, 용어 "및/또는"을 의미하기 위해 사용되고 이와 상호교환적으로 사용된다. 예를 들어, "센스 가닥 또는 안티센스 가닥"은 "센스 가닥 또는 안티센스 가닥, 또는 센스 가닥 및 안티센스 가닥"으로 이해된다.
용어 "약"은 본 명세서에서 당업계의 통상적인 허용 오차 범위 내에 있음을 의미하기 위해 사용된다. 예를 들어, "약"은 평균으로부터 약 2 표준 편차로서 이해될 수 있다. 소정의 구현예에서, 약은 ±10%를 의미한다. 소정의 구현예에서, 약은 ±5%를 의미한다. 약이 일련의 수 또는 범위 앞에 존재하는 경우, "약"은 일련의 또는 범위 내의 각각의 수를 수식할 수 있는 것으로 이해된다. 한 숫자와 문맥상 분명한 바와 같이 논리적으로 포함될 수 있는 모든 후속 숫자 또는 정수를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 핵산 분자 내 뉴클레오티드의 수는 정수이어야 한다. 예를 들어, "21개 뉴클레오티드 핵산 분자의 적어도 19개 뉴클레오티드"는 19, 20, 또는 21개 뉴클레오티드가 표시된 특성을 가짐을 의미한다. 적어도가 일련의 수 또는 범위 앞에 존재하는 경우, "적어도"는 일련의 또는 범위 내의 각각의 수를 수식할 수 있는 것으로 이해한다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "미만" 또는 "이하"는 문구에 근접한 값으로 이해되고, 논리적으로 더 낮은 값 또는 정수는 문맥상 논리적으로 0에 근접한 값으로 이해한다. 예를 들어, "2개 이하 뉴클레오티드"의 오버행을 갖는 듀플렉스는 2, 1, 또는 0개 뉴클레오티드 오버행을 갖는다. "이하"가 일련의 수 또는 범위 앞에 존재하는 경우, "이하"는 일련의 또는 범위 내의 각각의 수를 수식할 수 있는 것으로 이해한다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 범위는 상한 및 하한 모두를 포함한다.
서열과 전사체 상의 그 지정된 부위 또는 다른 서열 사이에 모순이 있는 경우, 본 명세서에 인용된 뉴클레오티드 서열이 우선된다.
화학 구조와 화학명이 모순되는 경우 화학 구조가 우선된다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "AGT"와 상호교환적으로 사용되는 "안지오텐시노겐"은 당업계에 세르핀 펩티다아제 억제제, 클레이드 A, 멤버 8; 알파-1 항단백질분해효소; 항트립신; 세르핀 A8; 안지오텐신 I; 세르핀 A8; 안지오텐신 II; 알파-1 항단백질분해효소 안지오텐시노겐; 항트립신; 프리안지오텐시노겐2; ANHU; 세린 단백질분해효소 억제제; 및 시스테인 단백질분해효소 억제제로도 공지된, 잘 알려진 유전자 및 폴리펩티드를 지칭한다.
용어 "AGT"는, 이의 아미노산 및 완전한 코딩 서열을, 예를 들어, GenBank 수탁 번호 GI:188595658(NM_000029.3; 서열번호 1)에서 확인할 수 있는 인간 AGT; 이의 아미노산 및 완전한 코딩 서열을, 예를 들어, GenBank 수탁 번호 GI: 90075391(AB170313.1: 서열번호 3)에서 확인할 수 있는, 마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis) AGT; 이의 아미노산 및 완전한 코딩 서열을, 예를 들어, GenBank 수탁 번호 GI: 113461997(NM_007428.3: 서열번호 5)에서 확인할 수 있는, 마우스(무스 무스쿨루스(Mus musculus)) AGT; 및 이의 아미노산 및 완전한 코딩 서열을, 예를 들어, GenBank 수탁 번호 GI: GI:51036672(NM_134432: 서열번호 7)에서 확인할 수 있는 랫트 AGT(래투스 노르베기쿠스(Rattus norvegicus))를 포함한다.
AGT mRNA 서열의 추가적인 예가 공개적으로 이용 가능한 데이터베이스, 예를 들어 GenBank, UniProt, OMIM 및 마카카(Macaca) 게놈 프로젝트 웹사이트를 사용하여 쉽게 이용 가능하다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "AGT"는 또한 AGT 유전자의 자연 발생 DNA 서열 변이, 예컨대 AGT 유전자의 단일 뉴클레오티드 다형성(SNP)을 지칭한다. 예시적인 SNP는 www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp--_ref.cgi?geneId=183로 이용 가능한 dbSNP 데이터베이스에서 확인할 수 있다. AGT 유전자 내 서열 변이의 비제한적인 예는, 예를 들어, 미국 특허번호 제5,589,584호에 기술된 것들을 포함하며, 이의 전체 내용은 본원에 참조로서 통합된다. 예를 들어, AGT 유전자 내 서열 변이는 다음과 같이 포함할 수 있다: (전사 시작 부위에 대해) 위치 -532에서 C→T; 위치 -386에서 G→A; 위치 -218에서 G→A; 위치 -18에서 C→T; 위치 -6 및 -10에서 G→A 및 A→C; (미번역된) 위치 +10에서 C→T; 위치 +521에서 C→T(T174M); 위치 +597에서 T→C(P199P); 위치 +704에서 T→C(M235T; 또한, 예를 들어, 참조 SNP(refSNP) 군집 보고서 rs699 참조함, www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP에서 이용 가능함); 위치 +743에서 A→G(Y248C); 위치 +813에서 C→T(N271N); 위치 +1017에서 G→A(L339L); 위치 +1075에서 C→A(L359M); 및/또는 위치 +1162에서 G→A(V388M).
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "표적 서열"은 1차 전사 생성물의 RNA 처리 생성물인 mRNA를 포함하여, AGT 유전자의 전사 동안 형성된 mRNA 분자의 뉴클레오티드 서열의 연속 부분을 지칭한다. 서열의 표적 부분은 AGT 유전자의 전사 동안 형성된 mRNA 분자의 뉴클레오티드 서열 부분에서 또는 그 부분 근처에서 iRNA-지시 절단을 위한 기질로서 작용하기에 적어도 충분히 길 것이다. 일 구현예에서, 표적 서열은 AGT의 단백질 코딩 영역 내에 존재한다.
표적 서열은 길이가 약 19~36개 뉴클레오티드, 예를 들어, 바람직하게는 길이가 약 19~30개 뉴클레오티드일 수 있다. 예를 들어, 표적 서열은 길이가 약 19~30개 뉴클레오티드, 19~30, 19~29, 19~28, 19~27, 19~26, 19~25, 19~24, 19~23, 19~22, 19~21, 19~20, 20~30, 20~29, 20~28, 20~27, 20~26, 20~25, 20~24, 20~23, 20~22, 20~21, 21~30, 21~29, 21~28, 21~27, 21~26, 21~25, 21~24, 21~23개 뉴클레오티드, 또는 21~22개 뉴클레오티드일 수 있다. 앞서 언급된 범위 및 길이의 중간 범위 및 길이는 또한 본 발명의 일부로 고려된다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "서열을 포함하는 가닥"은 표준 뉴클레오티드 명명법을 사용하여 지칭된 서열에 의해 기술된 뉴클레오티드 쇄를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 지칭한다.
"G," "C," "A," "T," 및 "U"는 일반적으로 염기로서 각각 구아닌, 시토신, 아데닌, 티미딘 및 우라실을 함유하는 뉴클레오티드를 각각 의미한다. 그러나, 용어 "리보뉴클레오티드" 또는 "뉴클레오티드"는 또한 하기에 추가로 상세히 설명되는 것과 같이 변형 뉴클레오티드, 또는 대용 대체 모이어티(예를 들어, 표 2 참조)를 지칭할 수 있음이 이해될 것이다. 통상의 기술자는 구아닌, 시토신, 아데닌, 및 우라실이 이러한 대체 모이어티를 보유하는 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드의 염기쌍 형성 특성을 실질적으로 변경하지 않고 다른 모이어티에 의해 대체될 수 있음을 잘 알고 있다. 예를 들어, 비제한적으로, 이노신을 그 염기로 포함하는 뉴클레오티드는 아데닌, 시토신, 또는 우라실을 함유하는 뉴클레오티드와 염기쌍을 형성할 수 있다. 따라서, 우라실, 구아닌, 또는 아데닌을 함유하는 뉴클레오티드는 본 발명에서 특징화된 dsRNA의 뉴클레오티드 서열에서, 예를 들어 이노신을 함유하는 뉴클레오티드에 의해 대체될 수 있다. 또 다른 예에서, 올리고뉴클레오티드의 어느 곳에서나 아데닌 및 시토신은 각각 구아닌 및 우라실로 대체되어 표적 mRNA와 G-U 워블 염기쌍을 형성할 수 있다. 이러한 대체 모이어티를 함유하는 서열은 본 발명에서 특징화된 조성물 및 방법에 적합하다.
본 명세서에서 상호교환적으로 사용되는 용어 "iRNA", "RNAi 제제", "iRNA 제제", "RNA 간섭 제제"는 본 명세서에 정의된 용어와 같은 RNA를 함유하고, RNA-유도성 침묵화 복합체(RISC) 경로를 통한 RNA 전사체의 표적화된 절단을 매개하는 제제를 지칭한다. iRNA는 RNA 간섭(RNAi)으로 알려진 공정을 통해 mRNA의 서열-특이적 분해를 지시한다. iRNA는 세포, 예를 들어, 포유동물 대상체(바람직하게는 인간 대상체)와 같은 대상체 내의 세포에서 AGT 유전자의 발현을 조절, 예를 들어, 억제한다.
일 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 표적 RNA 서열, 예를 들어, AGT 표적 mRNA 서열과 상호작용하여 표적 RNA의 절단을 지시하는 단일 가닥 RNA를 포함한다. 이론에 얽매이고자 하는 것 없이 세포 내로 도입된 긴 이중 가닥 RNA는 다이서(Dicer)로 알려진 III형 엔도뉴클레아제에 의해 siRNA로 분해되는 것으로 여겨진다(Sharp 등의 문헌[(2001) Genes Dev. 15:485]). 리보뉴클레아제 III형 효소인 다이서는 dsRNA를 특징적인 2개의 염기 3' 오버행을 갖는 19~23개 염기쌍의 짧은 간섭 dsRNA로 처리한다(Bernstein 등의 문헌[(2001) Nature 409:363]). 그 다음 siRNA는 하나 이상의 헬리카제가 siRNA 듀플렉스를 푸는 RNA-유도성 침묵화 복합체(RISC)로 혼입되어, 상보적 안티센스 가닥이 표적 인식을 유도할 수 있도록 한다(Nykanen 등의 문헌[(2001) Cell 107:309]). 적절한 표적 mRNA에 결합하면, RISC 내의 하나 이상의 엔도뉴클레아제는 표적을 절단하여 침묵을 유도한다(Elbashir 등의 문헌[(2001) Genes Dev. 15:188]). 따라서, 일 양태에서, 본 발명은 세포 내에서 생성되고 RISC 복합체의 형성을 촉진하여 표적 유전자, 즉, AGT 유전자의 침묵에 영향을 미치는 단일 가닥 RNA(siRNA)에 관한 것이다. 따라서, 용어 "siRNA"는 또한 전술한 것과 같은 iRNA를 지칭하도록 본 명세서에서 사용된다.
소정의 구현예에서, RNAi 제제는 표적 mRNA를 억제하기 위해 세포 또는 유기체 내로 도입되는 단일 가닥 siRNA(ssRNAi)일 수 있다. 단일 가닥 RNAi 제제는 RISC 엔도뉴클레아제, 아르고너트(Argonaute) 2에 결합하고, 이는 이어서 표적 mRNA를 절단한다. 단일 가닥 siRNA는 일반적으로 15~30개 뉴클레오티드이고 화학적으로 변형된다. 단일 가닥 siRNA의 설계 및 시험은 미국 특허번호 제8,101,348호 및 Lima 등의 문헌[(2012) Cell 150:883~894]에 기술되어 있고, 이의 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다. 본 명세서에 기술된 임의의 안티센스 뉴클레오티드 서열은 본 명세서에 기술된 것과 같거나 Lima 등의 문헌[(2012) Cell 150:883~894]에 기술된 방법에 의해 화학적으로 변형된 것과 같은 단일 가닥 siRNA으로서 사용될 수 있다.
소정의 구현예에서, 본 발명의 조성물, 용도, 및 방법에 사용하기 위한 "iRNA"는 이중 가닥 RNA이고, 본 명세서에서 "이중 가닥 RNA 제제", "이중 가닥 RNA(dsRNA) 분자", "dsRNA 제제" 또는 "dsRNA"로 지칭된다. 용어 "dsRNA"는 2개의 역평행하며 실질적으로 상보적인 핵산 가닥을 포함하는 듀플렉스 구조를 갖는 리보핵산 분자의 복합체를 지칭하고, 표적 RNA, 즉, AGT 유전자에 대해 "센스" 및 "안티센스" 배향을 갖는 것으로 지칭된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 이중 가닥 RNA(dsRNA)는 본 명세서에서 RNA 간섭 또는 RNAi로 지칭되는 전사후 유전자-침묵 매커니즘을 통해 표적 RNA, 예를 들어 mRNA의 분해를 촉발한다.
일반적으로, dsRNA 분자의 각 가닥의 뉴클레오티드 대부분은 비-리보뉴클레오티드, 예를 들어, 데옥시리보뉴클레오티드 또는 변형 뉴클레오티드이다. 또한, 본 명세서에서 사용된 것과 같은 "iRNA"는 화학적 변형을 갖는 리보뉴클레오티드를 포함할 수 있고; iRNA는 다수의 뉴클레오티드에서 실질적인 변형을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "변형 뉴클레오티드"는, 독립적으로 변형 당 모이어티, 변형 뉴클레오티드 간 결합, 또는 변형 핵염기, 또는 이의 임의의 조합을 갖는 뉴클레오티드를 지칭한다. 따라서, 용어 변형 뉴클레오티드는 뉴클레오시드 간 결합, 당 모이어티 또는 핵염기에 대한, 예를 들어 작용기 또는 원자의 치환, 추가 또는 제거를 포괄한다. 본 발명의 제제에 사용하기에 적합한 변형은 본 명세서에서 개시되거나 당업계에 공지된 모든 유형의 변형을 포함한다. siRNA 유형의 분자에 사용된 것과 같은 임의의 이러한 변형은 본 명세서 및 청구범위의 목적을 위해 "iRNA" 또는 "RNAi 제제"에 의해 포괄된다.
듀플렉스 영역은 RISC 경로를 통해 원하는 표적 RNA의 특이적 분해를 허용하는 임의의 길이일 수 있으며, 길이가 약 19 내지 36개 염기쌍의 범위, 예를 들어 길이가 약 19~30개 염기쌍, 길이가 약 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 또는 길이가 36 염기쌍, 예컨대 약 19~30, 19~29, 19~28, 19~27, 19~26, 19~25, 19~24, 19~23, 19~22, 19~21, 19~20, 20~30, 20~29, 20~28, 20~27, 20~26, 20~25, 20~24, 20~23, 20~22, 20~21, 21~30, 21~29, 21~28, 21~27, 21~26, 21~25, 21~24, 21~23개 또는 21~22개 염기쌍일 수 있다. 소정의 구현예에서, 듀플렉스 영역은 길이가 19~21개 염기쌍이다. 앞서 언급된 범위 및 길이의 중간 범위 및 길이는 또한 본 발명의 일부로 고려된다.
듀플렉스 구조를 형성하는 2개의 가닥은 하나의 더 큰 RNA 분자의 상이한 부분일 수 있거나 이들은 별도의 RNA 분자일 수 있다. 2개의 가닥이 하나의 더 큰 분자의 일부이고, 따라서 듀플렉스 구조를 형성하는 하나의 가닥의 3'-말단과 별개의 다른 가닥의 5'-말단 사이에 뉴클레오티드의 연속된 사슬에 의해 결합되어 있는 경우, 결합 RNA 사슬은 "헤어핀 루프"로서 지칭된다. 헤어핀 루프는 적어도 하나의 쌍을 형성하지 않는 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 헤어핀 루프는 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 23개 이상의 쌍을 형성하지 않는 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 헤어핀 루프는 10개 이하의 뉴클레오티드일 수 있다. 일부 구현예에서, 헤어핀 루프는 8개 이하의 쌍을 형성하지 않는 뉴클레오티드일 수 있다. 일부 구현예에서, 헤어핀 루프는 4~10개의 쌍을 형성하지 않는 뉴클레오티드일 수 있다. 일부 구현예에서, 헤어핀 루프는 4~8개의 뉴클레오티드일 수 있다.
dsRNA의 실질적으로 상보적인 2개의 가닥이 별개의 RNA 분자에 의해 포함된 경우, 이들 분자는 그럴 필요는 없지만 공유 결합될 수 있다. 2개의 가닥이 듀플렉스 구조를 형성하는 하나의 가닥의 3'-말단과 별개의 다른 가닥의 5'-말단 사이에 뉴클레오티드의 연속적인 사슬 이외의 수단에 의해 공유적으로 결합되어 있는 경우, 결합 구조가 "링커"로 지칭된다. RNA 가닥은 동일하거나 상이한 수의 뉴클레오티드를 가질 수 있다. 염기쌍의 최대 수는 dsRNA의 최단 가닥에서 듀플렉스 내에 존재하는 임의의 오버행을 제외한 뉴클레오티드의 수이다. 듀플렉스 구조 이외에, RNAi는 하나 이상의 뉴클레오티드 오버행을 포함할 수 있다.
소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA 제제는 dsRNA이며, 이의 각각의 가닥은 표적 RNA 서열, 예를 들어, AGT 유전자와 상호작용하여 표적 RNA의 절단을 지시하는 19~23개의 뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 표적 RNA 서열, 예를 들어 AGT 표적 mRNA 서열과 상호작용하여 표적 RNA의 절단을 지시하는 24~30개 뉴클레오티드의 dsRNA이다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "뉴클레오티드 오버행"은 이중 가닥 iRNA의 듀플렉스 구조로부터 돌출된 적어도 하나의 쌍을 형성하지 않는 뉴클레오티드를 지칭한다. 예를 들어, dsRNA의 한 가닥의 3'-말단이 다른 가닥의 5'-말단을 넘 어 확장되거나 그 반대의 경우, 뉴클레오티드 오버행이 있다. dsRNA는 적어도 하나의 뉴클레오티드의 오버행을 포함할 수 있고; 대안적으로, 오버행은 적어도 2개 뉴클레오티드, 적어도 3개 뉴클레오티드, 적어도 4개 뉴클레오티드, 적어도 5개 뉴클레오티드 또는 그 이상을 포함할 수 있다. 뉴클레오티드 오버행은 데옥시뉴클레오티드/뉴클레오시드를 포함하는 뉴클레오티드/뉴클레오시드 유사체를 포함하거나 이로 이루어질 수 있다. 오버행(들)은 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 이들의 임의의 조합 상에 있을 수 있다. 또한, 오버행의 뉴클레오티드(들)는 dsRNA의 안티센스 또는 센스 가닥의 5'-말단, 3'-말단 또는 양쪽 말단 상에 존재할 수 있다.
소정의 구현예에서, dsRNA의 안티센스 가닥은 3'-말단 또는 5'-말단에서 돌출된 1~10개 뉴클레오티드, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 뉴클레오티드를 갖는다. 소정의 구현예에서, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥, 또는 둘 모두 상의 오버행은 10개 뉴클레오티드보다 더 긴, 예를 들어, 길이가 1~30개 뉴클레오티드, 2~30개 뉴클레오티드, 10~30개 뉴클레오티드, 10~25개 뉴클레오티드, 10~20개 뉴클레오티드 또는 10~15개 뉴클레오티드보다 연장된 길이를 포함할 수 있다. 소정의 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 센스 가닥 상에 존재한다. 소정의 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 센스 가닥의 3' 말단 상에 존재한다. 소정의 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 센스 가닥의 5' 말단 상에 존재한다. 소정의 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 안티센스 가닥 상에 존재한다. 소정의 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 안티센스 가닥의 3' 말단 상에 존재한다. 소정의 구현예에서, 연장된 오버행은 듀플렉스의 안티센스 가닥의 5' 말단 상에 존재한다. 소정의 구현예에서, 연장된 오버행 내 하나 이상의 뉴클레오티드는 뉴클레오시드 티오포스페이트로 대체된다. 소정의 구현예에서, 오버행은 오버행이 생리학적 조건 하에서 안정한 헤어핀 구조를 형성할 수 있도록 자체 상보적인 부분을 포함한다.
"둔화(blunt)" 또는 "둔화 말단(blunt end)"은 이중 가닥 RNA 제제의 그 말단에 짝을 형성하지 않는 뉴클레오티드가 없음을, 즉, 뉴클레오티드 오버행이 없음을 의미한다. "둔화 말단" 이중 가닥 RNA 제제는 그 전체 길이에 걸친 이중 가닥으로, 즉, 분자의 양 말단에 뉴클레오티드 오버행이 없다. 본 발명의 RNAi 제제는 하나의 말단에 뉴클레오티드 오버행이 없거나(즉, 하나의 오버행 및 하나의 둔화 말단을 갖는 제제) 어느 한 말단에 뉴클레오티드 오버행이 없는 RNAi 제제를 포함한다. 가장 흔하게, 그러한 분자는 그 전체 길이에 걸친 이중 가닥일 것이다.
용어 "안티센스 가닥" 또는 "가이드 가닥"은 iRNA, 예를 들어, dsRNA의 가닥을 지칭하며, 이는 표적 서열, 예를 들어, AGT mRNA에 실질적으로 상보적인 영역을 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "상보성 영역"은 서열, 예를 들어 본 명세서에 정의된 표적 서열, 예컨대, AGT 뉴클레오티드 서열에 실질적으로 상보적인 안티센스 가닥 상의 영역을 지칭한다. 상보성 영역이 표적 서열에 완전히 상보적이지 않은 경우, 미스매치는 분자의 내부 또는 말단 영역에 존재할 수 있다. 일반적으로, 가장 허용되는 미스매치는 말단 영역, 예를 들어, iRNA의 5'- 또는 3'-말단의 5, 4, 또는 3개 뉴클레오티드 내에 존재한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 RNA 제제는 안티센스 가닥 내에 뉴클레오티드 미스매치를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 RNA 제제는 센스 가닥 내에 뉴클레오티드 미스매치를 포함한다. 일부 구현예에서, 뉴클레오티드 미스매치는, 예를 들어, iRNA의 3'-말단으로부터 5, 4, 3개 뉴클레오티드 내에 존재한다. 또 다른 구현예에서, 뉴클레오티드 미스매치는, 예를 들어, iRNA의 3'-말단 뉴클레오티드 내에 존재한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "센스 가닥" 또는 "패신저 가닥"은 그 용어가 본 명세서에 정의된 것과 같은 안티센스 가닥의 영역에 실질적으로 상보적인 영역을 포함하는 iRNA의 가닥을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형되는"은 대부분 변형되지만 전부 변형되지는 않으며, 5, 4, 3, 2, 또는 1개 이하의 미변형 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "절단 영역"은 절단 부위에 바로 근접하여 위치하는 영역을 지칭한다. 절단 부위는 절단이 일어나는 표적 상의 부위이다. 일부 구현예에서, 절단 영역은 절단 부위의 어느 하나의 말단 상에 있고 이에 바로 인접한 3개의 염기를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 영역은 절단 부위의 어느 하나의 말단 상에 있고 이에 바로 인접한 2개의 염기를 포함한다. 일부 구현예에서, 절단 부위는 구체적으로 안티센스 가닥의 뉴클레오티드 10 및 11에 의해 결합되는 부위에서 발생하며, 절단 영역은 뉴클레오티드 11, 12 및 13을 포함한다.
iRNA 내의, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 것과 같은 dsRNA 내의 상보적인 서열은, 하나 또는 둘 모두의 뉴클레오티드 서열의 전체 길이에 걸쳐 제2 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드에 대한 제1 뉴클레오티드 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드의 염기쌍 형성을 포함한다. 그러한 서열은 본 명세서에서 서로에 대해 "완전한 상보적"인 것으로 지칭될 수 있다. 그러나, 본 명세서에서 제1 서열이 제2 서열에 대하여 "실질적으로 상보적인" 것으로 지칭되는 경우, 2개의 서열은 완전히 상보적일 수 있거나, 이들은 최대 30개 염기쌍의 듀플렉스에 대한 혼성화 시 하나 이상, 그러나 일반적으로 5, 4, 3, 또는 2개 이하의 미스매칭된 염기쌍을 형성할 수 있는 한편, 이들의 궁극적인 적용, 예를 들어, RISC 경로를 통한 유전자 발현의 억제와 가장 관련된 조건 하에서 혼성화하는 능력을 유지한다. 그러나, 2개의 올리고뉴클레오티드가 혼성화 시, 하나 이상의 단일 가닥 오버행을 형성하도록 설계된 경우, 그러한 오버행은 상보성 결정과 관련하여 미스매치로서 간주되지 않는다. 예를 들어, 보다 긴 올리고뉴클레오티드가 보다 짧은 올리고뉴클레오티드에 완전히 상보적인 21개 뉴클레오티드의 서열을 포함하는, 길이가 21개의 뉴클레오티드인 하나의 올리고뉴클레오티드 및 길이가 23개의 뉴클레오티드인 또 다른 올리고뉴클레오티드를 포함하는 dsRNA는 본 명세서에 기술된 목적을 위해 "완전히 상보적"인 것으로 지칭될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "상보적" 서열은 또한 혼성화하는 이들의 능력과 관련하여 위의 요건이 충족되는 한, 비-왓슨-크릭(non-Watson-Crick) 염기쌍 또는 비-천연 및 변형 뉴클레오티드로부터 형성된 염기쌍을 포함하거나 이들로부터 전적으로 형성될 수 있다. 그러한 비-왓슨-크릭 염기쌍은 G:U 워블(Wobble) 또는 후그슈타인(Hoogsteen) 염기쌍 형성을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
이들 사용의 문맥으로부터 이해되는 것과 같이, 본 명세서의 용어 "상보적인", "완전히 상보적인" 및 "실질적으로 상보적인"은 dsRNA의 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이, 또는 이중 가닥 RNA 제제의 안티센스 가닥과 표적 서열 사이의 염기 매칭에 대해 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 메신저 RNA(mRNA)의 "적어도 일부에 실질적으로 상보적"인 폴리뉴클레오티드는 관심 mRNA(예를 들어, AGT 유전자를 암호화하는 mRNA)의 연속 부분에 실질적으로 상보적인 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드는 서열이 AGT 유전자를 암호화하는 mRNA의 비중단 부분에 실질적으로 상보적인 경우에 AGT mRNA의 적어도 일부에 상보적이다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 센스 가닥 폴리뉴클레오티드 및 안티센스 뉴클레오티드는 표적 AGT 서열에 완전히 상보적이다. 다른 구현예에서, 본 명세서에 개시된 센스 가닥 폴리뉴클레오티드 또는 안티센스 폴리뉴클레오티드는 표적 AGT 서열에 실질적으로 상보적이고, 그 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1 및 2 중 어느 하나의 뉴클레오티드 서열의 등가 영역 또는 서열번호 1 및 2 중 어느 하나의 단편에 적어도 80% 상보적인, 예컨대 적어도 90% 또는 95% 상보적인; 또는 100% 상보적인 연속 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
따라서, 일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 안티센스 가닥 폴리뉴클레오티드는 표적 AGT 서열에 완전히 상보적이다. 다른 구현예에서, 본 명세서에 개시된 안티센스 가닥 폴리뉴클레오티드는 표적 AGT 서열에 실질적으로 상보적이고, 그 전체 길이에 걸쳐 서열번호 1의 뉴클레오티드 서열의 등가 영역 또는 서열번호 1의 단편에 적어도 약 90% 상보적인, 예컨대 약 90% 또는 약 95% 상보적인 연속 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 소정의 구현예에서, 서열번호 1의 단편은 서열번호 1의 뉴클레오티드 638~658이다.
소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 안티센스 가닥의 뉴클레오티드 서열은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함한다. 소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 센스 가닥을 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 안티센스 가닥의 뉴클레오티드 서열은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)를 포함한다. 소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)를 포함하는 센스 가닥을 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 안티센스 가닥의 뉴클레오티드 서열은 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)로 이루어진다. 소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 가닥의 뉴클레오티드 서열이 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)로 이루어지는 센스 가닥을 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 안티센스 가닥의 변형 뉴클레오티드 서열은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함한다. 소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하는 센스 가닥을 추가로 포함한다. 화학적 변형은 다음과 같이 정의된다: a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이고; 여기서 센스 가닥의 3' 말단은 리간드, 예를 들어, N-[트리스(GalNAc-알킬)-아미도데카노일)]-4-하이드록시플롤리놀(Hyp-(GalNAc-알킬)3 또는 L96으로도 지칭됨)l에 임의로 공유 결합된다.
소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 안티센스 가닥의 변형 뉴클레오티드 서열은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)을 포함한다. 소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)를 포함하는 센스 가닥을 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 안티센스 가닥의 변형 뉴클레오티드 서열은 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)로 이루어진다. 소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥의 변형 뉴클레오티드 서열은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)로 이루어진다.
일반적으로, "iRNA"는 화학적 변형을 갖는 리보뉴클레오티드를 포함한다. 이러한 변형은 본 명세서에 개시되거나 당업계에 공지된 모든 유형의 변형을 포함할 수 있다. dsRNA 분자에 사용된 것과 같은 임의의 이러한 변형은 본 명세서 및 청구범위의 목적을 위해 "iRNA"에 의해 포괄된다.
본 발명의 일 양태에서, 본 발명의 방법 및 조성물에 사용하기 위한 제제는 안티센스 억제 메커니즘을 통해 표적 mRNA를 억제하는 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오티드 분자이다. 　 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오티드 분자는 표적 mRNA 내의 서열에 상보적이다. 　 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오티드는 mRNA에 대한 염기쌍 형성 및 번역 기계를 물리적으로 방해함으로써 화학량론적 방식으로 번역을 억제할 수 있다(Dias, N. 등의 문헌[(2002) Mol Cancer Ther 1:347~355] 참조). 　 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오티드 분자는 길이가 약 14 내지 약 30개의 뉴클레오티드일 수 있고, 표적 서열에 상보적인 서열을 가질 수 있다. 　 예를 들어, 단일-가닥 안티센스 올리고뉴클레오티드 분자는 본 명세서에 기술된 안티센스 서열 중 어느 하나와 적어도 약 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 인접 뉴클레오티드인 서열을 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는, dsRNA와 같은 "iRNA와 세포를 접촉시키는 것"이라는 문구는 임의의 가능한 수단에 의해 세포를 접촉시키는 것을 포함한다. iRNA와 세포의 접촉은 iRNA와 시험관내 세포를 접촉시키는 것 또는 iRNA와 생체내 세포를 접촉시키는 것을 포함한다. 접촉은 직접적으로 또는 간접적으로 수행될 수 있다. 따라서, 예를 들어, iRNA는 방법을 수행하는 개체에 의해 세포와 물리적 접촉에 놓일 수 있거나, 대안적으로, iRNA는 후속적으로 세포와 접촉하도록 허용하거나 이를 야기하는 상황에 놓일 수 있다.
시험관 내에서 세포와 접촉시키는 것은, 예를 들어 세포를 iRNA와 함께 인큐베이션함으로써 수행될 수 있다. 생체내 세포와의 접촉은, 예를 들어, iRNA를 세포가 위치한 조직 내로 또는 이의 부근에 주사하여, 또는 iRNA를 또 다른 영역, 예를 들어, 혈류 또는 피하 공간 내로 주사하여 접촉될 세포가 위치한 조직에 제제가 후속적으로 도달하도록 함으로써 수행될 수 있다. 예를 들어, iRNA는 iRNA를 관심 부위(예: 간)으로 유도하는 리간드, 예를 들어 GalNAc를 함유하거나 이에 결합될 수 있다. 시험관내 및 생체내 접촉 방법의 조합 또한 가능하다. 예를 들어, 세포를 시험관 내에서 iRNA와 접촉시킨 다음 대상체 내로 이식할 수도 있다.
소정의 구현예에서, iRNA와 세포를 접촉시키는 것은 세포 내로의 흡수(uptake 또는 absorption)를 촉진하거나 초래함으로써 "iRNA를 세포 내로 도입" 또는 "전달하는 것"을 포함한다. iRNA의 흡수 또는 취득은 비보조 확산 또는 활성 세포 과정을 통해, 또는 보조제 또는 보조 장치에 의해 일어날 수 있다. iRNA를 세포 내로 도입하는 것은 시험관내 또는 생체내에서 도입하는 것일 수 있다. 예를 들어, 생체내 도입을 위해, iRNA는 조직 부위 내로 주사되거나 전신 투여될 수 있다. 세포 내로의 시험관내 도입은 전기천공 및 지질감염과 같은 당업계에 공지된 방법을 포함한다. 추가의 접근법은 본 명세서 하기에 기술되어 있거나 당업계에 공지되어 있다.
용어 "지질 나노입자" 또는 "LNP"는 핵산 분자, 예를 들어, iRNA 또는 iRNA가 전사되는 플라스미드와 같은 약학적 활성 분자를 캡슐화하는 지질 층을 포함하는 소포이다. LNP는, 예를 들어, 미국 특허번호 제6,858,225호, 제6,815,432호, 제8,158,601호 및 제8,058,069호에 기술되어 있고, 이의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "대상체"는 내인성으로 또는 이종성으로 표적 유전자를 발현하는 영장류(예컨대, 인간, 비-인간 영장류, 예를 들어, 원숭이 및 침팬지), 또는 비-영장류(예컨대, 소, 돼지, 말, 염소, 토끼, 양, 햄스터, 기니피그, 고양이, 개, 랫트 또는 마우스)를 포함하는 포유류와 같은 동물이다. 일 구현예에서, 대상체는 인간, 예컨대 본 명세서에서 기술된 AGT 발현의 감소가 이득이 되는 질환 또는 장애를 치료받거나 평가받는 사람, AGT 발현의 감소가 이득이 되는 질환 또는 장애의 위험이 있는 사람; AGT 발현의 감소가 이득이 되는 질환 또는 장애를 가진 사람; 또는 AGT 발현의 감소가 이득이 되는 질환 또는 장애를 치료받는 사람이다. AGT 관련 장애, 예를 들어 고혈압에 대한 진단 기준이 아래에 제공된다. 일부 구현예에서, 대상체는 여성이다. 다른 구현예에서, 대상체는 남성이다. 소정의 구현예에서, 대상체는 염감도에 민감한 군의 일부, 예를 들어 흑인 또는 노인(> 65세)이다. 소정의 구현예에서, 대상체는 과체중 또는 비만, 예를 들어, 복부 비만을 앓고 있는 대상체이다. 소정의 구현예에서, 대상체는 앉아서 생활한다. 소정의 구현예에서, 대상체는 임신 중이거나 임신할 계획이 있다. 소정의 구현예에서, 대상체는 신장 기능이 저하되었다. 소정의 구현예에서, 대상체는 1형 당뇨병을 갖는다. 소정의 구현예에서, 대상체는 2형 당뇨병을 갖는다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "치료하는" 또는 "치료"는 AGT 관련 장애, 예를 들어 고혈압의 적어도 하나의 징후 또는 증상을 대상체에서 감소시키는 것과 같이 유익하거나 바람직한 결과를 지칭한다. 치료는 또한 원하지 않는 AGT 발현과 연관된 하나 이상의 징후 또는 증상 - 예를 들어, 안지오텐신 II 1형 수용체 활성화(AT1R)(예를 들어, 고혈압, 만성 신장 질환, 뇌졸줄, 심근경색, 심부전, 대동맥류, 말초 동맥 질환, 심장 질환, 산화 스트레스 증가, 예를 들어 초산화물 형성 증가, 염증, 혈관 수축, 나트륨 및 수분 보유, 칼슘 및 마그네슘 손실, 레닌 억제, 근세포 및 평활근 비대, 콜라겐 수착 증가, 혈관 자극, 심근 및 신장 섬유증, 심장 수축 속도 및 힘 증가, 심박수 변화, 예를 들어 부정맥 증가, 플라스미노겐 활성화제 억제제 1(PAI1)의 자극, 교감신경계의 활성화, 및 엔도텔린 분비 증가), 자궁내 성장 제한(IUGR) 또는 태아 성장 제한을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임신 관련 고혈압의 증상(예를 들어, 자간전증, 및 자간증), 악성 고혈압과 관련된 증상, 고알도스테론증과 관련된 증상 - 의 감소; 원하지 않는 AT1R 활성화 정도의 감소; 만성 AT1R 활성화 상태의 안정화(즉, 악화되지 않음); 원하지 않는 AT1R 활성화의 완화(amelioration) 또는 일시적 완화(palliation)(예를 들어, 고혈압, 만성 신장 질환, 뇌졸중, 심근경색, 심부전, 대동맥류, 말초 동맥 질환, 심장 질환, 산화 스트레스 증가, 예를 들어, 초산화물 형성 증가, 염증, 혈관 수축, 나트륨 및 수분 보유, 칼륨 및 마그네슘 손실, 레닌 억제, 근세포 및 평활근 비대, 콜라겐 수착 증가, 혈관 자극, 심근 및 신장 섬유증, 심장 수축 속도 및 힘 증가, 심박수 변화, 예를 들어, 부정맥 증가, 플라스미노겐 활성화제 억제제 1(PAI1)의 자극, 교감신경계의 활성화, 및 엔도텔린 분비 증가)를 검출할 수 있는지 또는 검출할 수 없는지에 관계없이 포함한다. AGT 관련 장애는 또한 비만, 간 지방증/지방간, 예를 들어, 비알코올성 지방간염(NASH) 및 비알코올성 지방간 질환(NAFLD); 포도당 불내성, 2형 당뇨병, 및 대사 증후군을 포함할 수 있다. "치료"는 또한 치료의 부재 하에 예상되는 생존률과 비교하여 생존률을 연장시키는 것을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "신장 기능 감소" 등은 다수의 인식된 기준, 예를 들어 사구체 여과율(GFR), 알부민뇨, 크레아티닌, 또는 BUN 중 어느 하나를 사용하여 진단될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 신장 기능 감소는 일시적이거나 만성적일 수 있다. 적어도 60의 GFR은 정상인 것으로 간주된다. GFR이 60 이하이면 신장 기능 감소를 나타내며, GFR이 > 15~60이면 신장 질환을 나타내고, GFR이 15 미만이면 신부전을 나타낸다. GFR은 통상적으로 소변 크레아티닌 수준에 기초하여 결정되며, 크레아티닌 수준이 높을수록 신장 기능이 낮다는 것을 나타낸다. 소변 내 알부민의 존재는 또한 신장 기능 감소를 나타낸다. 알부민의 절대 수준은 신장 기능 감소를 진단하기 위해 결정될 수 있다. 알부민 대 크레아티닌의 비율은 또한 신장 기능을 평가하기 위해 결정될 수 있다. 30mg/g 이하의 소변 알부민 대 크레아티닌 비율은 정상적인 신장 기능을 나타낸다. 30mg/g 초과의 소변 알부민 대 크레아티닌 비율은 신장 기능 감소를 나타낸다.
대상체 내 AGT 유전자 발현 또는 AGT 단백질 생성의 수준 또는 질환 마커 또는 증상과 관련하여 용어 "낮추다"는 그러한 수준의 통계적으로 유의미한 감소를 지칭한다. 감소는, 예를 들어, 관련 세포 또는 조직(예를 들어, 간 세포) 또는 기타 대상체 샘플(예를 들어, 이로부터 유래한 혈액 또는 혈청)에서의 검출 방법에 대한 검출 수준의 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이하일 수 있다. 소정의 구현예에서, "낮추다"는 본 명세서에 제공된 iRNA 제제의 임의의 용량을 투여하기 전의 혈청 내 AGT 단백질 수준에 비하여, 본 명세서에 제공된 iRNA 제제의 1회 이상의 용량을 투여한 후의 혈청 내 AGT 단백질의 감소이다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "예방" 또는 "예방하는"이 예를 들어, 노화, 유전적 요인, 호르몬 변화, 식단, 및 좌식 생활으로 인해, 예를 들어, AGT 관련 장애에 취약한 대상체에서 AGT 유전자의 발현 또는 AGT 단백질 생성의 감소가 이득이 되는 질환 또는 장애와 관련하여 사용될 때, 대상체는 아직 AGT 관련 장애에 대한 진단 기준을 충족하지 않는다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 예방은 AGT 관련 장애에 대한 진단 기준을 아직 충족하지 못하는 대상체에게 제제를 투여하여 대상체가 AGT 관련 장애를 발생시킬 가능성을 지연시키거나 감소시키는 것으로 이해될 수 있다. 제제가 약제학적 제제이기 때문에, 투여는 통상적으로 AGT 관련 장애에 대한 진단 기준을 아직 충족하지 못하지만 AGT 관련 장애가 발생하기 쉬운 대상체로 식별할 수 있는 의료 전문가의 지시 하에 이루어질 것으로 이해된다. 고혈압에 대한 진단 기준 및 고혈압에 대한 위험 인자가 아래에 제공된다. 소정의 구현예에서, 질환 또는 장애는, 예를 들어, 원하지 않는 AT1R 활성화의 증상, 예컨대 고혈압, 만성 신장 질환, 뇌졸중, 심근경색, 심부전, 대동맥류, 말초 동맥 질환, 심장 질환, 산화 스트레스 증가, 예를 들어, 초산화물 형성 증가, 염증, 혈관 수축, 나트륨 및 수분 보유, 칼륨 및 마그네슘 손실, 레닌 억제, 근세포 및 평활근 비대, 콜라겐 수착 증가, 혈관 자극, 심근 및 신장 섬유증, 심장 수축 속도 및 힘 증가, 심박수 변화, 예를 들어, 부정맥 증가, 플라스미노겐 활성화제 억제제 1(PAI1)의 자극, 교감신경계의 활성화, 및 엔도텔린 분비 증가이다. AGT 관련 장애는 또한 비만, 간 지방증/지방간, 예를 들어, 비알코올성 지방간염(NASH) 및 비알코올성 지방간 질환(NAFLD); 포도당 불내성, 2형 당뇨병, 및 대사 증후군을 포함할 수 있다. 예를 들어, 고혈압이 발생할 가능성은, 예를 들어 고혈압에 대한 하나 이상의 위험 인자를 갖는 개체가 고혈압에 걸리지 않거나 동일한 위험 인자를 갖고 본 명세서에 기술된 것과 같은 치료를 받지 않는 집단에 비해 중증도가 더 낮은 고혈압에 걸릴 때 감소된다. AGT 관련 장애, 예를 들어 고혈압이 발생하지 않거나 수개월 또는 수년 동안 고혈압이 발생하는 시간을 지연시키는 것이 효과적인 예방으로 간주된다. 예방은 iRNA 제제인 경우 1회를 초과하는 용량의 투여를 필요로 할 수 있다. 전술한 AGT 관련 질환 중 어느 하나에 걸릴 위험이 있는 대상체를 식별하는 적절한 방법이 제공되는 경우, 본 명세서에 제공된 iRNA 제제는 AGT 관련 질환의 예방 방법을 위한 약제학적 제제로서 또는 이의 방법에 사용될 수 있다. 다양한 AGT 관련 질환에 대한 위험 인자가 아래에서 논의된다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 용어 "안지오텐시노겐 관련 질환" 또는 "AGT 관련 질환"은 레닌-안지오텐신-알도스테론계(RAAS) 활성화에 의해 야기되거나 이와 연관된 질환 또는 장애, 또는 RAAS 불활성화에 반응하는 증상 또는 이의 진행의 질환 또는 장애이다. 용어 "안지오텐시노겐 관련 질환"은 AGT 발현의 감소가 이득이 되는 질환, 장애 또는 병태를 포함한다. 이러한 질환은 통상적으로 고혈압과 관련이 있다. 안지오텐시노겐 관련 질환의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: 고혈압, 예를 들어, 경계성 고혈압(고혈압 전단계로도 알려짐), 원발성 고혈압(본태성 고혈압 또는 특발성 고혈압으로도 알려짐), 이차성 고혈압(생존성 고혈압으로도 알려짐), 단독 수축기 또는 확장기 고혈압, 임신 관련 고혈압(예를 들어, 자간전증, 자간증 및 산후 자간전증), 당뇨병성 고혈압, 저항성 고혈압, 불응성 고혈압, 발작성 고혈압, 신혈관성 고혈압(신장성 고혈압으로도 알려짐), Goldblatt 고혈압, 안구 고혈압, 녹내장, 폐동맥 고혈압, 문맥 고혈압, 전신 정맥 고혈압, 수축기 고혈압, 불안정 고혈압; 고혈압성 심장 질환, 고혈압성 신장병증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 혈관병증(말초 혈관 질환 포함), 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 망막병증, 만성 심부전, 심근병증, 당뇨병성 심장 근병증, 사구체경화증, 대동맥 협착, 대동맥류, 심실 섬유증, 수면 무호흡증, 심부전(예를 들어, 좌심실 수축기 기능장애, 박출률 감소를 동반한 심부전), 심근경색, 협심증, 뇌졸중, 신장 질환, 예를 들어, 만성 신부전 또는 임의로 임심과 관련하여 당뇨병성 신장병증, 신부전, 예를 들어, 만성 신부전 및 전신 경화증(예를 들어, 경피증 신장 위기) 소정의 구현예에서, AGT 관련 질환은 자궁내 성장 제한(IUGR) 또는 태아 성장 제한을 포함한다. 소정의 구현예에서, AGT 관련 장애는 또한 비만, 간 지방증/지방간, 예를 들어, 비알코올성 지방간염(NASH) 및 비알코올성 지방간 질환(NAFLD); 포도당 불내성, 2형 당뇨병, 및 대사 증후군, 및 야간 저혈압을 포함할 수 있다.
고혈압에 대한 임계값 및 고혈압 단계가 아래에서 상세히 논의된다.
일 구현예에서, 안지오텐시노겐 관련 질환은 원발성 고혈압이다. "원발성 고혈압"은 환경적 또는 유전적 원인의 결과이다(예를 들어, 명백한 기저의 의학적 원인이 없는 결과).
일 구현예에서, 안지오텐시노겐 관련 질환은 이차성 고혈압이다. "이차성 고혈압"은 다수의 병인이 있을 수 있는 식별 가능한 기저 장애를 가지며, 이는 신장, 혈관, 및 내분비 원인 - 예를 들어, 신장 실질 질환(예를 들어, 다낭성 신장, 사구체 또는 간질 질환), 신장 혈관 질환(예를 들어, 신장 동맥 협착증, 섬유근 이형성증), 내분비 장애(예를 들어, 부신피질호르몬 또는 미네랄코르티코이드 과잉, 갈색 세포종, 갑상선기능항진증 또는 갑상선기능저하증, 성장 호르몬 과잉, 부갑상선기능항진증), 대동맥 협착, 또는 경구 피임제 사용 - 을 포함한다.
일 구현예에서, 안지오텐시노겐 관련 질환은 임신 관련 고혈압, 예를 들어, 임신의 만성 고혈압, 임신성 고혈압, 자간전증, 자간증, 만성 고혈압과 중첩된 자간전증, HELLP 증후군, 및 임신성 고혈압(또한 임신의 일시적 고혈압, 임신 후반부에 식별된 만성 고혈압, 및 임신 유도성 고혈압(PIH)으로도 알려짐)이다. 임신 관련 고혈압에 대한 진단 기준이 아래에 제공된다.
일 구현예에서, 안지오텐시노겐 관련 질환은 저항성 고혈압이다. "저항성 고혈압"은 상이한 부류의 3가지 항고혈압제(그 중 하나는 티아지드 이뇨제임)의 동시 사용에도 불구하고 목표 이상으로(예를 들어, 수축기 130mm Hg 초과 또는 확장기 90 초과) 유지되는 혈압이다. 4개 이상의 약물로 혈압이 조절되는 대상체는 저항성 고혈압을 갖는 것으로도 간주된다.
"치료적 유효량" 또는 "예방적 유효량"은 또한 합리적인 이득/위험 비율로 임의의 치료에 적용 가능한 일부 바람직한 효과를 생성하는 RNAi 제제의 양을 포함한다. 본 발명의 방법에 사용되는 iRNA는 그러한 치료에 적용가능한 합리적인 이득/위험 비율을 생성하기에 충분한 양으로 투여될 수 있다.
문구 "약제학적으로 허용가능한"은 본원에서 건전한 의학학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 사람 대상체 및 동물 대상체의 조직과의 접촉에 사용하기에 적합하며, 합리적인 이득/위험 비율에 상응하는 화합물, 물질, 조성물, 또는 투여 형태를 지칭하기 위해 사용된다.
본원에서 사용되는 문구 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 대상 화합물을 한 기관, 또는 신체의 한 부분에서 또 다른 기관, 또는 신체의 다른 부분으로 운반하거나 수송하는데 관여하는, 약제학적으로 허용가능한 물질, 조성물, 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 제조 보조제(예를 들어, 윤활제, 탈크 마그네슘, 칼슘 또는 아연 스테아레이트, 또는 스테아르산), 또는 용매 캡슐화 물질을 의미한다. 각각의 담체는 제형의 다른 성분과 호환성이며 치료 받는 대상체에게 해를 끼치지 않는다는 관점에서 "허용 가능"해야만 한다. 이러한 담체는 당업계에 공지되어 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 주사에 의한 투여를 위한 담체를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "샘플"은 대상체로부터 분리된 유사한 체액, 세포 또는 조직뿐만 아니라 대상체 내에 존재하는 체액, 세포 또는 조직의 집합체를 포함한다. 생물학적 유체의 예는 혈액, 혈청 및 장액, 혈장, 뇌척수액, 안액, 림프, 소변, 타액 등을 포함한다. 조직 샘플은 조직, 기관, 또는 국소 영역 유래의 샘플을 포함할 수 있다. 예를 들어, 샘플은 특정 기관, 기관의 일부 또는 해당 기관 내의 체액 또는 세포로부터 유래할 수 있다. 소정의 구현예에서, 샘플은 간(예를 들어, 전체 간 또는 간의 특정 부문 또는 예를 들어, 간세포와 같은 간 내 특정 유형의 세포)으로부터 유래할 수 있다. 일부 구현예에서, "대상체로부터 유래된 샘플"은 대상체로부터 수득된 소변을 지칭한다. "대상체로부터 유래된 샘플"은 대상체로부터의 혈액 또는 혈액 유래 혈청 또는 혈장을 지칭할 수 있다.
Ⅱ. 본 발명의 방법
본 발명은 안지오텐시노겐(AGT) 유전자의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 AGT 발현의 감소가 이득이 되는 대상체(예컨대 AGT 관련 장애(예를 들어, 고혈압)가 발생할 위험이 있는 대상체)를 치료하거나 대상체에서 AGT 관련 장애(예를 들어, 고혈압)를 치료하는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 AGT 관련 장애(예를 들어, 고혈압)를 가진 대상체와 같은 대상체의 혈압 수준을 감소시키는 방법을 제공한다. 본 방법은 본 명세서에 기술된 바와 같이, AGT를 표적으로 하는 이중 가닥 RNAi 제제의 고정 투여량, 예를 들어 약 50mg 내지 약 800mg를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
따라서, 일 양태에서, 본 발명은 대상체 내 안지오텐시노겐(AGT) 유전자의 발현을 억제하는 방법을 제공한다. 본 방법은 AGT의 발현을 억제하는 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제의 약 50mg 내지 약 800mg, 예를 들어, 약 50 내지 약 200mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 800mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 400mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 500mg, 약 300mg 내지 약 4000mg, 약 400mg 내지 약 800mg, 약 400mg 내지 약 500mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750 또는 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 앞서 언급된 값의 중간 값 및 범위 또한 본 발명의 일부로 고려된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "억제하는(inhibiting)"은 "감소시키는(reducing)", "침묵화하는(silencing)" "하향 조절하는(downregulating)", "억제하는(suppressing)", 및 기타 유사한 용어와 상호교환적으로 사용되고, 임의의 억제 수준을 포함한다.
문구 "AGT의 발현을 억제하는"은 (예를 들어, 마우스 AGT 유전자, 랫트 AGT 유전자, 원숭이 AGT 유전자, 또는 인간 AGT 유전자와 같은) 임의의 AGT 유전자뿐만 아니라 AGT 유전자의 변이체 또는 돌연변이의 발현의 억제를 지칭하는 것으로 의도된다. 따라서, AGT 유전자는 유전적으로 조작된 세포, 세포군 또는 유기체의 맥락에서 야생형 AGT 유전자, 돌연변이 AGT 유전자, 또는 유전자이식 AGT 유전자일 수 있다.
"AGT 유전자의 발현 억제"는 AGT 유전자의 임의의 억제 수준, 예를 들어, AGT 유전자 발현의 적어도 부분적인 억제를 포함한다. AGT 유전자의 발현은 AGT 유전자 발현과 관련된 임의의 변수의 수준 또는 수준의 변화, 예를 들어 AGT mRNA 수준 또는 AGT 단백질 수준에 기초하여 평가될 수 있다. 이러한 수준은, 예를 들어 대상체로부터 유래된 샘플을 포함하는 개별 세포 또는 세포군에서 평가될 수 있다. AGT는 주로 간에서 발현되지만, 뇌, 담낭, 심장 및 신장에서도 발현되고, 순환계에 존재하는 것으로 이해된다.
억제는 대조군 수준과 비교하여 AGT 발현과 관련된 하나 이상의 변수의 절대적 또는 상대적 수준의 감소에 의해 평가될 수 있다. 대조군 수준은 당업계에서 사용되는 임의의 유형의 대조군 수준, 예를 들어, 투여 전 베이스라인 수준, 또는 유사한 대상체, 세포, 또는 처리되지 않은 샘플 또는 대조군으로 처리된 샘플(예를 들어, 완충제로만 처리된 대조군 또는 불활성 제제 대조군)로부터 결정된 수준일 수 있다.
본 발명의 방법의 일부 구현예에서, AGT 유전자의 발현은 적어도 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%, 또는 검정의 검출 수준 미만으로 억제된다. 바람직한 구현예에서, AGT 유전자의 발현은 적어도 50% 억제된다. 추가적으로, 다른 조직(예를 들어, 뇌)에서의 발현을 상당히 억제하지 않고도, 특정 조직(예를 들어, 간)에서 AGT 발현을 억제하는 것이 바람직할 수 있는 것으로 이해된다. 바람직한 구현예에서, 발현 수준은 적절한 종 일치 세포주에서 10nM siRNA 농도로 PCT 출원 번호 PCT/US2019/032150의 실시예 2에 제공된 검정 방법을 사용하여 결정된다.
소정의 구현예에서, 생체내 발현의 억제는 예를 들어, RNA 발현 최하점에서 3mg/kg의 1회 투여량으로 투여될 때, 인간 유전자를 발현하는 설치류, 예를 들어, 인간 표적 유전자(즉, AGT)를 발현하는 AAV-감염 마우스 내 인간 유전자의 녹다운에 의해, 결정된다. 예를 들어, RNA 발현 최하점에서 3mg/kg의 1회 투여량을 투여한 후, 모델 동물 시스템에서의 내인성 유전자의 발현에 대한 녹다운 또한 결정될 수 있다. 이러한 시스템은 인간 유전자의 핵산 서열과 모델 동물 유전자가 충분히 유사해 인간 iRNA가 모델 동물 유전자의 효과적인 녹다운을 제공할 때 유용하다. 간에서의 RNA 발현은 PCT 출원번호 PCT/US2019/032150의 실시예 2에 제공된 PCR 방법을 사용하여 결정된다.
AGT 유전자의 발현 억제는 제1 세포 또는 세포군(이러한 세포는 예를 들어 대상체로부터 유래된 샘플에 존재할 수 있음)에 의해 발현된 mRNA 양의 감소에 의해 분명해질 수 있고, 여기서 AGT 유전자는 (예를 들어, 세포 또는 세포들을 본 발명의 iRNA와 접촉시킴으로써, 또는 본 발명의 iRNA를 세포가 존재하거나 존재했던 대상체에게 투여함으로써) 전사되고 처리되어, 제1 세포 또는 세포군과 실질적으로 동일하지만 그렇게 처리되지 않은 제2 세포 또는 세포군과 비교하여 AGT 유전자의 발현이 억제된다(대조군 세포(들)는 iRNA로 처리되지 않거나 관심 유전자에 대해 표적화된 iRNA로 처리되지 않음). 바람직한 구현예에서, 억제는 종 일치 세포주에서 10nM siRNA 농도를 사용하여 PCT 출원번호 PCT/US2019/032150의 실시예 2에 제공된 방법에 의해 평가되고, 처리된 세포의 mRNA 수준이 대조군 세포의 mRNA 수준의 백분율로서 하기 식을 사용하여 표현된다:
다른 구현예에서, AGT 유전자의 발현 억제는 AGT 유전자 발현과 기능적으로 연결된 파라미터, 예를 들어, 대상체로부터의 혈액 또는 혈청 내 AGT 단백질 수준의 감소의 측면에서 평가될 수 있다. AGT 유전자 침묵은 발현 작제물로부터 내인성 또는 이종성인 AGT를 발현하는 임의의 세포에서, 그리고 당업계에 공지된 임의의 검정에 의해 결정될 수 있다.
AGT 단백질의 발현 억제는 세포 또는 세포군에 의해 또는 대상체 샘플에서 발현되는 AGT 단백질의 수준(예를 들어, 대상체로부터 유래된 샘플 내 단백질의 수준)의 감소에 의해 분명해질 수 있다. 위에서 설명한 것과 같이, mRNA 억제의 평가의 경우, 처리된 세포 또는 세포군 내 단백질 발현 수준의 억제는 대조군 세포 또는 세포군 내 단백질 수준의 백분율, 또는 대상체 샘플, 예를 들어 혈액 또는 그로부터 유래된 혈청 내 단백질 수준의 변화로서 유사하게 표현될 수 있다.
AGT 유전자의 발현 억제를 평가하기 위해 사용될 수 있는 대조군 세포, 세포군, 또는 대상체 샘플은 아직 본 발명의 RNAi 제제와 접촉되지 않은 세포, 세포군, 또는 대상체 샘플을 포함한다. 예를 들어, 대조군 세포, 세포군, 또는 대상체 샘플은 RNAi 제제를 사용한 대상체의 치료 전에 개별 대상체(예를 들어, 인간 또는 동물 대상체) 또는 적절하게 매칭된 집단 대조군으로부터 유래될 수 있다.
세포 또는 세포군에 의해 발현되는 AGT mRNA의 수준은 mRNA 발현을 평가하기 위해 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 일 구현예에서, 샘플 내 AGT의 발현 수준은 전사된 폴리뉴클레오티드 또는 이의 일부, 예를 들어, AGT 유전자의 mRNA를 검출함으로써 결정된다. RNA는, 예를 들어 산성 페놀/구아니딘 이소티오시아네이트 추출(RNAzol B; Biogenesis), RNeasy?? RNA 제조 키트(Qiagen®), 또는 PAXgene??(PreAnalytix??, Switzerland)을 사용하는 것을 포함하여, RNA 추출 기술을 사용하여 세포로부터 추출될 수 있다. 리보핵산 혼성화를 사용하는 통상적인 검정 포맷은 핵 런-온 검정, RT-PCR, RNase 보호 검정, 노던 블롯팅, 인시튜 혼성화, 및 마이크로어레이 분석을 포함한다.
일부 구현예에서, AGT의 발현 수준은 핵산 프로브를 사용하여 결정된다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "프로브"는 특정 AGT에 선택적으로 결합할 수 있는 임의의 분자를 지칭한다. 프로브는 당업자에 의해 합성될 수 있거나 적절한 생물학적 제조물로부터 유래될 수 있다. 프로브는 표지되도록 특이적으로 설계될 수 있다. 프로브로서 사용될 수 있는 분자의 예는 RNA, DNA, 단백질, 항체 및 유기 분자를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
단리된 mRNA는 서던 또는 노던 분석, 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 분석 및 프로브 어레이를 포함하지만 이에 제한되지 않는 혼성화 또는 증폭 검정에 사용될 수 있다. mRNA 수준 결정을 위한 한 가지 방법은 단리된 mRNA를 AGT mRNA에 대해 혼성화할 수 있는 핵산 분자(프로브)와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, mRNA가 고체 표면 상에 고정되고, 예를 들어 단리된 mRNA를 아가로스 겔 상에서 전개시키고 mRNA를 겔로부터 니트로셀룰로오스와 같은 막으로 전달함으로써 프로브와 접촉된다. 대안적인 구현예에서, 프로브(들)는 고체 표면 상에 고정되고, mRNA는, 예를 들어, Affymetrix® 유전자 칩 어레이에서 프로브(들)와 접촉된다. 당업자는 AGT mRNA의 수준을 결정하는 데 사용하기 위해 공지된 mRNA 검출 방법을 용이하게 적용할 수 있다.
샘플에서 AGT의 발현 수준을 결정하기 위한 대안적인 방법은, 예를 들어, RT-PCR(실험적 구현예가 Mullis등의 1987, 미국 특허 제4,683,202호에 제시됨), 리가제 연쇄 반응(Barany의 문헌[(1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:189~193]), 자발적인 지속적 서열 복제(Guatelli 등의 문헌[(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1874~1878]), 전사 증폭 시스템(Kwoh 등의 문헌[(1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:1173~1177]), Q-베타 레플리카제(Lizardi 등의 문헌[(1988) Bio/Technology 6:1197]), 롤링 서클 복제(Lizardi 등의 미국 특허 제5,854,033호) 또는 임의의 다른 핵산 증폭 방법에 이어서, 당업자에게 잘 알려진 기술을 사용하는 증폭된 분자의 검출에 의해, 예를 들어 샘플의 mRNA의 (cDNA를 제조하기 위하여) 핵산 증폭 또는 역전사 효소의 프로세스를 포함한다. 핵산 분자가 매우 적은 수로 존재하는 경우, 이들 검출 체계는 핵산 분자의 검출에 특히 유용하다. 본 발명의 특정 양태에서, AGT의 발현 수준은 정량적 형광 RT-PCR(즉, TaqManTM 시스템)에 의해 결정된다. 바람직한 구현예에서, 발현 수준은 종 일치 세포주에서 10nM siRNA 농도를 사용하여 PCT 출원 번호 PCT/US2019/032150의 실시예 2에 제공된 방법에 의해 결정된다.
AGT 단백질 발현의 수준은 단백질 수준의 측정을 위해 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 이러한 방법은, 예를 들어 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 흡수분광법, 비색 검정, 분광광도측정 검정, 유동세포측정, 면역전기영동, 웨스턴 블롯팅, 방사선면역검정(RIA), 효소-결합된 면역흡착 검정(ELISA), 면역형광검정, 전기화학발광 검정 등을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법의 효능은 (예를 들어, 간 생검에서의) AGT mRNA 또는 단백질 수준의 감소에 의해 평가된다. 소정의 구현예에서, 천공 간 생검 샘플은 AGT 유전자 또는 단백질 발현의 감소를 모니터링하기 위한 조직 물질로서의 역할을 한다. 다른 구현예에서, 혈액 샘플은 AGT 단백질 발현의 감소를 모니터링하기 위한 대상체 샘플로서의 역할을 한다.
본 발명의 방법의 일부 구현예에서, iRNA가 대상체에게 투여되어 대상체 내의 특정 부위로 iRNA가 전달된다. AGT의 발현 억제는 대상체 내 특정 부위(예를 들어, 간 또는 혈액)로부터의 유체 또는 조직으로부터 유래된 샘플의 AGT mRNA 또는 AGT 단백질의 수준 또는 수준 변화의 측정을 사용하여 평가될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 분석물 수준의 검출 또는 결정이란 용어는 물질(예: 단백질, RNA)이 존재하는지 여부를 결정하는 단계를 수행하는 것을 의미하는 것으로 이해된다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, 검출 또는 결정 방법은 사용된 방법에 대한 검출 수준 미만인 분석물 수준의 검출 또는 측정을 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 AGT 관련 장애, 예를 들어 고혈압(high blood pressure)(예: 고혈압(high blood pressure))을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 AGT의 발현을 억제하는 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제의 약 50mg 내지 약 800mg, 예를 들어, 약 50~200mg, 약 200~400mg, 약 400~800mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 앞서 언급된 값의 중간 값 및 범위 또한 본 발명의 일부로 고려된다.
일부 구현예에서, AGT 관련 장애는 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: 고혈압(high blood pressure), 고혈압(hypertension), 경계성 고혈압, 원발성 고혈압, 이차성 고혈압, 단독 수축기 또는 확장기 고혈압, 임신 관련 고혈압, 당뇨병성 고혈압, 저항성 고혈압, 불응성 고혈압, 발작성 고혈압, 신혈관성 고혈압, Goldblatt 고혈압, 안구 고혈압, 녹내장, 폐동맥 고혈압, 문맥 고혈압, 전신 정맥 고혈압, 수축기 고혈압, 불안정 고혈압; 고혈압성 심장 질환, 고혈압성 신장병증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 혈관병증, 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 망막병증, 만성 심부전, 심근병증, 당뇨병성 심장 근병증, 야간 저혈압, 사구체경화증, 대동맥 협착, 대동맥류, 심실 섬유증, 심부전, 심근경색, 협심증, 뇌졸중, 신장 질환, 신부전, 전신 경화증, 자궁내 성장 제한(IUGR), 태아 성장 제한, 비만, 간 지방증/지방간, 비알코올성 지방간염(NASH), 비알코올성 지방간 질환(NAFLD); 포도당 불내성, 2형 당뇨병, 및 대사 증후군.
일 구현예에서, AGT 관련 장애는 고혈압이다. 일 구현예에서, 고혈압은 다음이다: 경계성 고혈압, 원발성 고혈압, 이차성 고혈압, 단독 수축기 또는 확장기 고혈압, 임신 관련 고혈압, 당뇨병성 고혈압, 저항성 고혈압, 불응성 고혈압, 발작성 고혈압, 신혈관성 고혈압, Goldblatt 고혈압, 안구 고혈압, 녹내장, 폐동맥 고혈압, 문맥 고혈압, 전신 정맥 고혈압, 수축기 고혈압, 불안정 고혈압; 고혈압성 심장 질환, 또는 고혈압성 신장병증.
추가 양태에서, 본 발명은 AGT 발현의 감소가 이득이 되는 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 AGT의 발현을 억제하는 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제의 약 50mg 내지 약 800mg, 예를 들어, 약 50~200mg, 약 200~400mg, 약 400~800mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 앞서 언급된 값의 중간 값 및 범위 또한 본 발명의 일부로 고려된다.
추가 양태에서, 본 발명은 대상체의 혈압 수준, 예를 들어, 수축기 혈압 및/또는 확장기 혈압을 감소시키는 방법을 제공한다. 본 방법은 AGT의 발현을 억제하는 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제의 약 50mg 내지 약 800mg, 예를 들어, 약 50~200mg, 약 200~400mg, 약 400~800mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 앞서 언급된 값의 중간 값 및 범위 또한 본 발명의 일부로 고려된다.
본 발명의 방법에서, 세포, 예를 들어 인간 대상체와 같은 대상체(예를 들어, AGT 관련 장애를 가진 대상체와 같이 치료를 필요로 하는 대상체) 내의 세포는 siRNA와 시험관내 생체내 접촉될 수 있고, 즉 세포는 대상체 내에 존재할 수 있다.
본 발명의 방법을 사용하는 치료에 적합한 세포는 AGT 유전자를 발현하는 임의의 세포, 예를 들어, 간 세포, 뇌 세포, 담낭 세포, 심장 세포, 또는 신장 세포일 수 있지만, 바람직하게는 간 세포이다. 본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 세포는 포유동물 세포, 예를 들어 영장류 세포(예컨대, 키메라 비-인간 동물 내 인간 세포를 포함하는 인간 세포 또는 비-인간 영장류 세포, 예를 들어 원숭이 세포 또는 침팬지 세포) 또는 비-영장류 세포일 수 있다. 소정의 구현예에서, 세포는 인간 세포, 예를 들어 인간 간 세포이다. 본 발명의 방법에서, AGT 발현은 세포에서 적어도 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%, 또는 검정의 검출 수준 미만의 수준으로 억제된다.
일 구현예에서, AGT를 표적으로 하는 dsRNA 제제가 대상체에게 투여되어, 예를 들어 대상체의 세포, 조직, 혈액, 소변 또는 다른 조직 또는 유체에서의 AGT 수준이 적어도 약 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 62%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 적어도 약 99% 이상 감소된다.
또 다른 구현예에서, AGT를 표적으로 하는 dsRNA 제제가 대상체에게 투여되어, 대상체의 혈압 수준, 예를 들어, 수축기 혈압 및/또는 확장기 혈압이 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10mmHg 이상 감소된다.
본 발명의 방법 및 용도에 따른 dsRNA 제제의 투여는 원발성 고옥살산뇨증이 있는 환자에게서 이러한 질환 또는 장애의 중증도, 징후, 증상 또는 마커를 감소시킬 수 있다. 이러한 맥락에서 "감소"는 이러한 수준의 통계학적으로 유의미한 감소를 의미한다. 감소는 예를 들어, 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 약 100%일 수 있다.
질환의 치료 또는 예방의 효능은, 예를 들어 질환 진행, 질환 경감, 증상 중증도, 통증 감소, 삶의 질, 치료 효과를 유지하는 데 필요한 약물의 용량, 질환 마커의 수준 또는 예방을 위해 치료되거나 표적화된 소정의 질환에 적절한 임의의 다른 측정 가능한 파라미터를 측정함으로써 평가될 수 있다. 이러한 파라미터 중 어느 하나 또는 파라미터의 임의의 조합을 측정함으로써 치료 또는 예방의 효능을 모니터링하는 것은 당업자의 능력 범위 내에 있다. 예를 들어, 원발성 고옥살산뇨증의 치료 효능은, 예를 들어 치료 중인 대상체의 옥살레이트 수준을 주기적 모니터링함으로써 평가될 수 있다. 이후 측정치와 초기 측정치의 비교는 의사에게 치료가 효과적인지의 징조를 제공한다. 이러한 파라미터 또는 파라미터의 임의의 조합을 측정함으로써 치료 또는 예방의 효능을 모니터링하는 것은 당업자의 능력 범위 내에 있다. AGT를 표적으로 하는 dsRNA 제제 또는 이의 약제학적 조성물의 투여와 관련하여, 원발성 고옥살산뇨증"에 대해 효과적인"은 임상적으로 적절한 방식으로의 투여가 환자의 적어도 통계학적으로 유의미적인 부분에 대해 이로운 효과, 예를 들어, 증상의 개선, 치유, 질환의 감소, 수명의 연장, 삶의 질 개선, 또는 원발성 고옥살산뇨증 및 관련 원인을 치료하는 것에 익숙한 의사에 의해 일반적으로 긍정적인 것으로 인식되는 다른 효과를 낳은 것을 의미한다.
치료 또는 예방 효과는 질환 상태의 하나 이상의 파라미터에서 통계학적으로 유의미한 개선이 있거나 달리 예상되는 증상이 악화되거나 발병하지 않음으로써 명백하다. 하나의 예로서, 질환의 측정 가능한 파라미터에서 적어도 10%, 및 바람직하게는 적어도 20%, 30%, 40%, 50% 또는 그 이상의 유리한 변화는 효과적인 치료임을 나타낼 수 있다. 소정의 dsRNA 제제 약물 또는 이러한 약물의 제형에 대한 효능은 또한 당업계에 공지된 소정의 질환에 대한 실험 동물 모델을 사용하여 판단될 수 있다. 실험 동물 모델을 사용하는 경우, 치료 효능은 마커 또는 증상의 통계적으로 유의미한 감소가 관찰될 때 뒷받침된다.
예를 들어, 적절한 척도를 사용하여 측정된 질환의 중증도를 감소시키는 임의의 양성 변화는 본 명세서에 기술된 것과 같은 dsRNA 제제 또는 dsRNA 제제 제형을 사용한 적절한 치료를 나타낸다.
본 발명의 생체내 방법은 대상체에게 iRNA를 함유하는 조성물을 투여하는 단계를 포함할 수 있고, 여기서 iRNA는 RNAi 제제가 투여될 포유동물의 AGT 유전자의 RNA 전사체의 적어도 일부에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 조성물은 경구, 복강내 또는 두개내(예를 들어, 심실내, 실질내 및 척수강내), 정맥내, 근육내, 피하, 경피, 기도(에어로졸), 비강, 직장을 포함하는 비경구 경로 및 국소(협측 및 설하 포함) 투여를 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 임의의 수단에 의해 투여될 수 있다. 소정의 구현예에서, 조성물은 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여된다. 소정의 구현예에서, 조성물은 피하 주사에 의해 투여된다. 소정의 구현예에서, 조성물은 근육내 주사에 의해 투여된다.
일부 구현예에서, 투여는 데포 주사를 통해 이루어진다. 데포 주사는 장기간 동안 일정한 방식으로 dsRNA 제제를 방출할 수 있다. 따라서, 데포 주사는 목적하는 효과, 예를 들어 목적하는 AGT 억제, 또는 치료적 또는 예방적 효과를 수득하기 위해 필요한 투여 빈도를 감소시킬 수 있다. 데포 주사는 또한 보다 일관된 혈청 농도를 제공할 수 있다. 데포 주사는 피하 주사 또는 근육내 주사를 포함할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 데포 주사는 피하 주사이다.
일부 구현예에서, 투여는 펌프를 통해 이루어 진다. 펌프는 외용 펌프 또는 수술적으로 이식된 펌프일 수 있다. 소정의 구현예에서, 펌프는 피하 이식된 삼투압 펌프이다. 다른 구현예에서, 펌프는 주입 펌프이다. 주입 펌프는 정맥내, 피하, 동맥 또는 경막외 주입을 위해 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 주입 펌프는 피하 주입 펌프이다. 다른 구현예에서, 펌프는 dsRNA를 간에 전달하는 수술적으로 이식된 펌프이다.
다른 투여 모드는 경막외, 뇌내, 뇌실내, 비강 투여, 동맥내, 심장내, 골내 주입, 경막내 및 유리체내 및 폐를 포함한다. 투여 방식은 국소 또는 전신 치료가 요구되는지 및 치료될 영역에 기초하여 선택될 수 있다. 투여 경로 및 부위는 표적화를 증진시키도록 선택될 수 있다.
iRNA는 바람직하게는 피하 투여되는데, 즉 피하 주사에 의해 피하 투여된다. 하나 이상의 주사를 사용하여 목적하는 용량의 iRNA를 대상체에게 전달할 수 있다. 주사는 일정 기간 동안 반복될 수 있다.
투여는 정기적 주기로 반복될 수 있다. 소정의 구현예에서, iRNA는 약 월 1회 내지 약 분기별 1회, 즉 약 3개월마다, 또는 약 분기별 1회 내지 약 연 2회, 즉 약 6개월에 1회 투여된다. 소정의 구현예에서, iRNA는 월 1회 투여된다. 다른 구현예에서, iRNA는 3개월마다, 또는 분기별 1회 투여된다. 또 다른 구현예에서, iRNA는 6개월마다 또는 연 2회 투여된다.
본 발명의 dsRNA 제제는 "나출(naked)" 형태로 투여되거나, "유리 dsRNA 제제"로서 투여될 수 있다. 나출된 dsRNA 제제는 약제학적 조성물의 부재 하에 투여된다. 나출된 dsRNA 제제는 적합한 완충 용액 중에 있을 수 있다. 완충 용액은 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카보네이트 또는 포스페이트, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 완충 용액은 포스페이트 완충 식염수(PBS)이다. dsRNA 제제를 함유하는 완충 용액의 pH 및 삼투압은 대상체에게 투여하기에 적합하도록 조정될 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 iRNA는 dsRNA 리포좀 제형과 같은 약제학적 조성물로서 투여될 수 있다. RNAi 제제는 비완충 용액 중의 약제학적 조성물로서 투여될 수 있다. 비완충 용액은 식염수 또는 물을 포함할 수 있다. 대안적으로, RNAi 제제는 완충 용액 중의 약제학적 조성물로서 투여될 수 있다. 완충 용액은 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카보네이트 또는 포스페이트, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 완충 용액은 포스페이트 완충 식염수(PBS)이다.
AGT 유전자 발현의 억제가 이득이 대상체는 AGT 관련 질환 또는 장애, 예를 들어 고혈압(예: 고혈압)에 취약하거나 이를 진단받은 대상체이다. 대상체는 적어도 130, 135, 140, 145, 150, 155 또는 160mmHg의 수축기 혈압 또는 적어도 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110mmHg의 확장기 혈압을 가질 수 있다. 대상체는 염감도에 민감하거나, 과체중, 비만, 임신 중이거나, 임신할 계획이 있을 수 있다. 대상체는 2형 당뇨병, 1형 당뇨병을 갖고 있거나 신장 기능이 감소될 수 있다.
본 방법은 고혈압 치료를 위한 추가 치료제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 병용 요법으로서 사용하기 위한 예시적인 치료제는 다음을 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다: 이뇨제, 안지오텐신 전환 효소(ACE) 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 베타-차단제, 혈관확장제, 칼슘 채널 차단제, 알도스테론 길항제, 알파2-작용제, 레닌 억제제, 알파-차단제, 말초 작용 아드레날린제, 선택적 D1 수용체 부분 작용제, 비선택적 알파-아드레날린 길항제, 합성 스테로이드성 항미네랄코르티코이드제; 전술한 것 중 임의의 조합; 및 제제의 조합으로서 제형화된 고혈압 치료제. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 안지오텐신 II 수용체 길항제, 예를 들어, 로사르탄, 발사르탄, 올메사르탄, 에프로사르탄, 이르베사르탄, 및 아질사르탄을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 치료제는 고혈압 치료제를 포함한다. 일부 구현예에서, 고혈압 치료제는 올메사르탄, 암로디핀 및 인다파미드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 본 발명의 이중 가닥 RNAi 제제, 예를 들어 AD-85481, 및 올메사르탄, 암로디핀 및 인다파미드로 이루어진 군으로부터 선택된 고혈압 치료제의 약 600mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 방법은 AD-85481 및 올메사르탄의 약 600mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 AD-85481 및 암로디핀의 약 600mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 AD-85481 및 인다파미드의 약 600mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 방법에 따른 iRNA의 투여는 AGT 관련 장애, 예를 들어 고혈압(예: 고혈압)의 예방 또는 치료를 유도할 수 있다. 다양한 유형의 고혈압에 대한 진단 기준이 아래에 제공되어 있다.
Ⅲ. 고혈압의 진단 기준, 위험 인자, 및 치료
최근 고혈압의 예방 및 치료에 대한 진료 지침이 개정되었다. 광범위한 보고서가 Reboussin 등의 문헌[Systematic Review for the 2017 ACC/AHA/AAPA/ABC/ACPM/AGS/APhA/ASH/ASPC/NMA/PCNA Guideline for the Prevention, Detection, Evaluation, and Management of High Blood Pressure in Adults: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 2017 Nov 7. pii: S0735-1097(17)41517~8. doi: 10.1016/j.jacc.2017.11.004.] 및 Whelton 등의 문헌[2017 ACC/AHA/AAPA/ABC/ACPM/AGS/APhA/ASH/ASPC/NMA/PCNA Guideline for the Prevention, Detection, Evaluation, and Management of High Blood Pressure in Adults: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 2017 Nov 7. pii: S0735-1097(17)41519-1. doi: 10.1016/j.jacc.2017.11.006.]에 의해 공개되었다. 새로운 가이드라인의 주요 내용이 아래에 제공된다. 그러나, 가이드라인은 본 출원의 출원 시점에 고혈압에 대한 진단 및 모니터링 기준 및 치료에 관한 당업자의 지식을 제공하는 것으로 이해되어야 하며, 본원에 참조로서 통합된다.
A. 진단 기준
고혈압과 심혈관 질환 위험 증가 사이에 지속적인 연관성이 존재하지만, 임상 및 공중 보건 의사 결정을 위해 혈압 수준을 분류하는 것이 유용하다. 혈압은 의료기관에서 측정된 평균 혈압(병원 측정 혈압(office pressure))에 기초하여 4가지 수준으로 분류될 수 있다: 아래 표에 나타낸 바와 같이, 정상, 상승, 및 1기 또는 2기 고혈압(Whelton 등(2017))
*수축기 혈압 및 확장기 혈압을 2가지 범주로 갖는 개인은 더 높은 혈압 범주로 지정되어야 한다.
혈압은 2회 이상에 걸쳐 얻은 평균 2회 이상의 신중한 판독치에 기초하여 혈압을 나타낸다. 신중한 혈압 판독치를 얻기 위한 모범 관행은 Whelton 등의 문헌(2017)에 상세히 기술되어 있으며, 당업계에 공지되어 있다.
이러한 분류는 이전에 JNC 7 보고서(Chobanian 등; the National High Blood Pressure Education Program Coordinating Committee. Seventh Report of the Joint National Committee on Prevention, Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Pressure. Hypertension. 2003;42:1206~52)에서 권장된 것과 다르며, 1기 고혈압은 현재 130~139mm Hg의 수축기 혈압(SBP) 또는 80~89mm Hg의 확장기 혈압(DBP)으로 정의되고, 본 문서의 2기 고혈압은 JNC 7 보고서의 1기 및 2기에 상응한다. 이러한 분류의 이론적 근거는 SBP/DBP와 심혈관 질환 위험 간의 연관성과 관련된 관찰 데이터, 혈압 저하에 대한 생활 방식 수정에 대한 무작위 연구, 및 심혈관 질환을 예방하기 위한 항고혈압 약물 치료에 대한 무작위 연구에 기초한다.
2기 고혈압이 있는 성인에서 심혈관 질환의 위험 증가는 잘 확립되어 있다. 관찰 데이터의 개별 연구 및 메타 분석의 수가 증가함에 따라, 정상적인 혈압에서 혈압 상승 및 1기 고혈압으로 심혈관 질환 위험의 구배가 점진적으로 더 높아지는 것으로 보고되었다. 이들 메타 분석 중 다수에서, 관상 동맥성 심장 질환 및 뇌졸중에 대한 위험 비율은 120~129/80~84mm Hg 대 <120/80mm Hg의 SBP/DBP의 비교에 대해 1.1 내지 1.5였고, 130~139/85~89mm Hg 대 <120/80mm Hg의 SBP/DBP의 비교에 대해 1.5 내지 2.0이었다. 이러한 위험 구배는 성별 및 인종/민족에 의해 정의된 하위그룹에 걸쳐 일관되게 나타났다. 더 높은 혈압과 관련된 심혈관 질환 위험의 상대적 증가는 약화되었지만, 노인에게서는 여전히 존재하였다. 혈압 상승 및 1기 및 2기 고혈압을 앓고 있는 개인에 대해서는 생활 방식 조절 및 약리학적 항고혈압 치료가 권장된다. 치료에 의해 혈압이 정상화되지 않더라도, 혈압 상승의 단계를 감소시킴으로써 임상적 혜택을 얻을 수 있다.
B. 위험 인자
고혈압은 유전적 요인, 생활 방식, 식단 및 이차 위험 인자를 포함하지만 이에 제한되지 않는 인자의 조합으로 인한 복합적 질환이다. 고혈압은 또한 임신과 관련이 있을 수 있다. 고혈압의 복잡한 성질로 인해, 고혈압의 치료를 위해 다수의 개입이 필요할 수 있는 것으로 이해된다. 또한, 식단 및 생활방식의 변경을 포함하는 비약리학적 개입은 고혈압의 예방 및 치료에 유용할 수 있다. 또한, 개입은 개체의 혈압을 완전히 정상화하지 않고도 임상적 이점을 제공할 수 있다.
1. 유전적 위험 인자
글루코코르티코이드-완화성 알도스테론증, 리들 증후군, 고든 증후군, 및 단일 유전자 돌연변이가 고혈압의 병태생리학을 완전히 설명하는 다른 것들과 같은, 여러 가지 단일 유전자 형태의 고혈압이 식별되었으며, 이들 장애는 드물다. 혈압 및 고혈압에 기여하는 공지된 유전자 변이체의 현재 목록은 25개 초과의 희귀 돌연변이 및 120개의 단일 뉴클레오티드 다형성을 포함한다. 그러나, 유전적 인자가 일부 개체에서 고혈압에 기여할 수 있지만, 유전적 변이는 혈압 변동성의 약 3.5%만을 차지하는 것으로 추정된다.
2. 식단 및 알코올 섭취
고혈압을 유발하는 일반적인 환경 및 생활 방식 위험 인자는 열악한 식습관, 충분하지 않은 신체 활동 및 과도한 알코올 섭취를 포함한다. 이러한 인자는 개인이 과체중 또는 비만이 되게 할 수 있으며, 이는 고혈압이 발생하거나 악화될 가능성을 더욱 증가시킬 수 있다. 혈압 상승은 허리-엉덩이 비율 증가 또는 기타 중앙 지방 분포 측정치와 훨씬 더 강력한 상관 관계가 있다. 어린 나이에서의 비만과 지속적인 비만은 나중에 고혈압과 강한 상관 관계가 있다. 정상 체중을 달성하면 고혈압 발생 위험을 비만이었던 적이 없는 사람의 위험으로 줄일 수 있다.
나트륨, 칼륨, 마그네슘 및 칼슘의 섭취는 또한 혈압에 상당한 영향을 미칠 수 있다. 나트륨 섭취는 혈압과 양의 상관 관계가 있고, 연령 관련 혈압 증가의 많은 부분을 차지한다. 특정 그룹은 흑인 및 노인(> 65세)을 포함하는 기타 그룹, 및 더 높은 혈압 수준 또는 만성 신장 질환, 당뇨병, 또는 대사 증후군과 같은 동반질환이 있는 그룹보다 나트륨 소비 증가에 더 민감하다. 종합하면, 이들 그룹은 모든 미국 성인의 절반 이상을 구성한다. 염감도는 혈압과 무관하게, 심혈관 질환 및 모든 원인으로 인한 사망 증가에 대한 마커일 수 있다. 현재, 염감도를 인식하기 위한 기술은 임상 환경에서 실용적이지 않다. 따라서, 염감도는 그룹 특성으로서 가장 잘 고려된다.
칼륨 섭취는 혈압 및 뇌졸중과 반비례하며, 더 높은 수준의 칼륨은 혈압에 대한 나트륨의 효과를 둔화시키는 것으로 보인다. 나트륨-칼륨 비율이 낮을수록 해당 수준의 나트륨 또는 칼륨 그 자체로 언급된 것보다 더 낮은 혈압과 연관된다. 심혈관 질환의 위험에 대해 유사한 관찰이 이루어졌다.
오랫동안 알코올 섭취는 고혈압과 관련이 있어 왔다. 미국에서, 알코올 섭취는 고혈압을 앓고 있는 집단의 약 10%를 차지하는 것으로 추정되었으며, 이 부담은 여성보다 남성에서 더 크다.
식단 또는 알코올 섭취의 변화는 고혈압의 예방 또는 치료의 양태일 수 있음을 이해할 것이다.
3. 신체 활동
신체 활동/신체 건강 및 혈압 수준 사이에는 잘 확립된 역상관 관계가 있다. 보통 수준의 신체 활동도 고혈압을 감소시키는 데 유익한 것으로 입증되었다.
신체 활동의 증가는 고혈압의 예방 또는 치료의 일 양태일 수 있음을 이해할 것이다.
4. 이차 위험 인자
이차성 고혈압은 중증 혈압 상승, 약리학적 저항성 고혈압, 고혈압의 갑작스러운 발병, 이전에 약물 요법으로 조절된 고혈압 환자에서의 혈압 증가, 노인에서 확장기 고혈압의 발병, 및 고혈압의 지속 기간 또는 중증도에 비해 불균형한 표적 기관 손상의 원인일 수 있다. 이차성 고혈압은 혈압이 상승한 젊은 환자(<30세)에게서 의심되어야 하지만, 원발성 고혈압이 더 어린 연령, 특히 흑인에게서 나타나는 것은 드물지 않으며, 신혈관 질환과 같은 일부 형태의 이차성 고혈압은 더 높은 연령(>65세)에서 보다 흔하다. 이차성 고혈압의 원인 중 다수는 특정 장애를 시사하는 임상 소견 또는 소견 그룹과 강력하게 관련이 있다. 이러한 경우, 기저 병태의 치료는 통상적으로 고혈압의 치료에 사용되는 제제를 투여하지 않고도 혈압 상승의 소견을 해결할 수 있다.
5. 임신
임신은 고혈압의 위험 인자이고, 임신 중 고혈압은 심혈관 질환 및 고혈압의 위험 인자이다. 임신 관련 고혈압에 대한 보고서가 2013년에 미국 산부인과학회(ACOG)에 의해 공개되었다(American College of Obstetricians and Gynecologists, Task Force on Hypertension in Pregnancy. Hypertension in pregnancy. Report of the American College of Obstetricians and Gynecologists' Task Force on Hypertension in Pregnancy. Obstet Gynecol. 2013;122:1122~31). 보고서의 주요 내용이 아래에 제공된다. 그러나, 보고서는 본 출원의 출원 시점에 임신 중 고혈압에 대한 진단 및 모니터링 기준 및 치료에 관한 당업자의 지식을 제공하는 것으로 이해되어야 하며, 본원에 참조로서 통합된다.'
자간전증에 대한 진단 기준이 아래 표에 제공되어 있다(ACOG 보고서의 표 1, 2013).
임신 중 혈압 관리는, 태아에게 해로울 수 있기 때문에 ACE 억제제 및 ARB를 포함하여 일반적으로 사용되는 많은 항고혈압제가 임신 중 금기시된다는 사실로 인해 복잡하다. 임신 중 항고혈압 치료의 목표는 중증 고혈압의 예방 및 임신 기간을 연장시켜 태아가 출산 전 성장할 시간을 더 갖도록 하는 가능성을 포함한다. 임신 관련 중증 고혈압에 대한 치료를 검토한 결과, 특정 제제를 권장하기에는 증거가 충분하지 않은 것으로 밝혀졌고, 오히려 이러한 환경에서는 임상의 경험이 권장되었다(Duley L, Meher S, Jones L 문헌[Drugs for treatment of very high blood pressure during pregnancy. Cochrane Database Syst Rev. 2013;7:CD001449.]).
C. 치료
고혈압의 치료는 종종 신장 기능 감소를 포함하여, 대상체가 치료를 받고 있을 수도 있는 다른 동반질환과 함께 빈번하게 존재하기 때문에 복잡하다. 고혈압이 있는 성인을 관리하는 임상의는 향후 심혈관 질환의 부작용의 위험을 감소시키는 데 특히 중점을 두고 전반적인 환자 건강에 중점을 두어야 한다. 모든 환자의 위험 인자는 포괄적인 비약리학적 및 약리학적 전략 세트와 통합된 방식으로 관리되어야 한다. 환자 혈압 및 향후 심혈관 질환 사건의 위험이 증가함에 따라, 혈압 관리를 강화해야 한다.
혈압 수준만을 기준으로 혈압 저하제를 사용한 고혈압 치료는 비용 효과적인 것으로 간주되지만, 절대 심혈관 질환 위험과 혈압 수준의 조합을 사용하여 이러한 치료를 가이드하는 것이 혈압 수준만을 사용하는 것보다 심혈관 질환의 위험을 감소시키는 데 더 효율적이고 비용 효과적이다. 단일 제제로 시작한 많은 환자는 이후 이들의 혈압 목표에 도달하기 위해 상이한 약리학적 계열의 2개 이상의 약물을 필요로 할 것이다. 각 제제의 약리학적 작용 메커니즘에 대한 지식이 중요하다. 초기 제제에 대한 보상 반응을 차단하거나 다른 승압제 메커니즘에 영향을 미치기 위해 제2 항고혈압제가 사용되는, 상보적 활성을 갖는 약물 요법은 혈압의 부가적 저하를 초래할 수 있다. 예를 들어, 티아지드 이뇨제는 레닌-안지오텐신-알도스테론 시스템을 자극할 수 있다. 티아지드에 ACE 억제제 또는 ARB를 첨가함으로써, 추가 혈압 저하 효과가 수득될 수 있다. 또한 병용 요법의 사용은 순응도를 개선할 수 있다. 항고혈압 약물 요법의 여러 가지 2 및 3-고정 투여량 약물 조합이 이용 가능하며, 성분 간에 상보적인 작용 메커니즘을 갖는다.
경구 항고혈압제를 열거한 Whelton 등(2017년)의 표 18이 아래에 제공되어 있다. 고혈압의 치료를 위한 치료제 및 이러한 부류에 속하는 약물의 부류가 제공된다. 투여량 범위, 빈도 및 의견도 제공된다.
*용량은 FDA 승인 라벨에 열거된 것과 다를 수 있다(https://dailymed.nlm.nih.gov/dailymed/에서 이용 가능함). ACE는 안지오텐신 전환 효소; ARB, 안지오텐신 수용체 차단제; BP, 혈압; BPH, 양성 전립선 비대증; CCB, 칼슘 채널 차단제; CKD, 만성 신장 질환; CNS, 중추신경계; CVD, 심혈관 질환; ER, 연장 방출; GFR, 사구체 여과율; HF, 심부전; HFr EF, 박출률 감소를 동반한 심부전; IHD, 허혈성 심장 질환; IR, 즉시 방출; LA, 지속성; 및 SR, 서방출을 나타낸다.
Chobanian 등의 문헌[(2003) The JNC 7 Report. JAMA 289(19):2560]이 출처이다.
Ⅳ. 본 발명의 방법에 사용하기 위한 iRNA 제제의 전달
본 발명의 방법에 사용하기 위한 iRNA 제제를 세포, 예를 들어 인간 대상체와 같은 대상체(예를 들어, AGT 관련 장애(예: 고혈압)를 갖고 있는 대상체와 같은, 치료를 필요로 하는 대상체) 내의 세포로 전달하는 것은 다수의 상이한 방식으로 달성될 수 있다. 예를 들어, 전달은 세포를 본 발명의 iRNA와 시험관내 또는 생체내 접촉시킴으로써 수행될 수 있다. 생체내 전달은 또한 iRNA, 예를 들어 dsRNA를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여함으로써 직접적으로 수행될 수 있다. 대안적으로, 생체내 전달은 iRNA를 암호화하고 iRNA의 발현을 유도하는 하나 이상의 벡터를 투여함으로써 간접적으로 수행될 수 있다. 이들 대안 방법들이 하기에서 추가적으로 논의된다.
일반적으로, (시험관 내 또는 생체 내에서) 핵산 분자를 전달하는 임의의 방법을 본 발명의 iRNA와 사용하기 위해 채택될 수 있다(예를 들어, Akhtar S. 및 Julian RL.의 문헌[(1992) Trends Cell. Biol. 2(5):139~144] 및 WO94/02595를 참조하고, 동 문헌은 그 전체가 참조로서 본원에 통합됨). 생체내 전달을 위해, iRNA 분자를 전달하기 위해 고려할 인자들에는, 예를 들어, 전달된 분자의 생물학적 안정성, 비-특이적 효과의 예방, 및 표적 조직에서의 전달된 분자의 축적이 포함된다. iRNA의 비특이적 효과는 국소 투여에 의해, 예를 들어, 조직으로의 직접적인 주사 또는 이식에 의해 또는 국소적으로 제제를 투여함에 의해 최소화될 수 있다. 치료 부위로의 국소 투여는 제제의 국소 농도를 최대화하고, 다르게는 제제에 의해 방해될 수 있거나 제제를 분해시킬 수 있는 전신 조직으로의 제제의 노출을 제한하고, 보다 낮은 총 용량의 iRNA 분자가 투여될 수 있게 한다. 여러 연구는 iRNA가 국소로 투여되는 경우 유전자 생성물의 성공적인 녹다운을 보여주었다. 예를 들어, 시노몰구스 원숭이를 대상으로 한 유리체내 주사에 의한 VEGF dsRNA의 안구내 전달(문헌참조: Tolentino, MJ. 등, (2004) Retina 24:132~138) 및 마우스를 대상으로 한 망막하 주사(문헌참조: Reich, SJ. 등 (2003) Mol. Vis. 9:210~216)는 모두 노화-관련 황반 변성의 실험 모델에서 신혈관 형성을 방지하는 것으로 나타났다. 또한, 마우스를 대상으로 한 dsRNA의 직접 종양내 주사는 종양 부피를 감소시키고(문헌참조: Pille, J. 등 (2005) Mol. Ther. 11:267~274) 종양 보유 마우스의 생존을 연장시킬 수 있다(문헌참조: Kim, WJ. 등(2006) Mol. Ther. 14:343~350; Li, S. 등(2007) Mol. Ther. 15:515~523). RNA 간섭은 또한 직접 주사에 의한 CNS로의 국소 전달에서 성공적이고(문헌참조: Dorn, G., 등(2004) Nucleic Acids 32:e49; Tan, PH., 등(2005) Gene Ther. 12:59~66; Makimura, H., 등(2002) BMC Neurosci. 3:18; Shishkina, GT., 등(2004) Neuroscience 129:521~528; Thakker, ER., 등(2004) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101:17270~17275; Akaneya,Y., 등(2005) J. Neurophysiol. 93:594~602) 비강내 투여에 의한 폐로의 국소 전달에서 성공적인 것으로 나타났다(문헌참조: Howard, KA., 등(2006) Mol. Ther. 14:476~484; Zhang, X., 등(2004) J. Biol. Chem. 279:10677~10684; Bitko, V., 등(2005) Nat. Med. 11:50~55). 질환의 치료를 위한 iRNA의 전신 투여를 위해, RNA는 변형될 수 있거나 대안적으로 약물 전달 시스템을 사용하여 전달될 수 있고; 방법 모두는 엔도- 및 엑소-뉴클레아제에 의해 생체내 dsRNA의 신속한 분해를 방지하는 작용을 한다. RNA 또는 약제학적 캐리어의 변형은 또한 iRNA 조성물을 표적 조직으로 표적화할 수 있게 하며, 바람직하지 않은 오프-표적 효과를 피할 수 있다. iRNA 분자는 콜레스테롤과 같은 친유성 기에 대한 화학적 접합에 의해 변형되어 세포 취득을 향상시키고 분해를 방지할 수 있다. 예를 들어, 친유성 콜레스테롤 모이어티에 접합된 ApoB에 대해 지시된 iRNA가 마우스에 전신 주사되고 간과 공장 둘 모두에서 apoB mRNA의 녹다운을 초래하였다(문헌참조: Soutschek, J., 등(2004) Nature 432:173~178). iRNA를 압타머에 접합시키는 것은 전립선암의 마우스 모델에서 종양 성장을 억제하고 종양 퇴행을 매개하는 것으로 나타났다(문헌참조: McNamara, JO. 등(2006) Nat. Biotechnol. 24:1005~1015). 대안적인 구현예에서, iRNA는 나노입자, 덴드리머, 폴리머, 리포좀 또는 양이온성 전달 시스템과 같은 약물 전달 시스템을 사용하여 전달될 수 있다. 양으로 하전된 양이온성 전달 시스템은 iRNA 분자(음으로 하전된)의 결합을 촉진시키고 또한 음으로 하전된 세포막에서 상호작용을 증진시켜 세포에 의한 iRNA의 효율적인 흡수를 가능하게 한다. 양이온성 지질, 덴드리머 또는 중합체는 iRNA에 결합될 수 있거나 iRNA를 내장하는 소포 또는 마이셀을 형성하도록 유도될 수 있다(문헌참조: 예를 들어, Kim SH, 등(2008) Journal of Controlled Release 129(2):107~116) 전신 투여될 때 소포체 또는 미셸의 형성은 iRNA의 분해를 추가로 방지한다. 양이온성-iRNA 복합체를 제조하고 투여하는 방법은 능히 당업자의 능력 범위 내에 있다(문헌참조: 예를 들어, Sorensen, DR., 등(2003) J. Mol. Biol 327:761~766; Verma, UN., 등(2003) Clin. Cancer Res. 9:1291~1300; Arnold, AS 등(2007) J. Hypertens. 25:197~205, 이의 전문이 본원에 참조로서 통합됨). iRNA의 전신 전달에 유용한 약물 전달 시스템의 일부 비제한적인 예는 DOTAP(Sorensen, DR. 등의 전술한 (2003) 문헌; Verma, UN 등의 전술한 (2003) 문헌), 올리고펙타민, "고형 핵산 지질 입자"(Zimmermann, TS 등의 문헌[(2006) Nature 441:111~114]), 카디오리핀(Chien, PY 등의 문헌[(2005) Cancer Gene Ther. 12:321~328]; Pal, A, 등의 문헌[(2005) Int J. Oncol. 26:1087~1091]), 폴리에틸렌이민(Bonnet ME 등의 문헌[(2008) Pharm. Res. Aug 16 Epub ahead of print]; Aigner, A.의 문헌[(2006) J. Biomed. Biotechnol. 71659]), Arg-Gly-Asp (RGD) 펩티드(Liu, S.의 문헌[(2006) Mol. Pharm. 3:472~487]), 및 폴리아미도아민(Tomalia, DA, 등의 문헌[(2007) Biochem. Soc. Trans. 35:61~67]; Yoo, H. 등의 문헌[(1999) Pharm. Res. 16:1799~1804])을 포함한다. 일부 구현예에서, 전신 투여를 위해 iRNA와 시클로덱스트린의 복합체를 형성한다. iRNA 및 시클로덱스트린의 투여 및 약학적 조성물 위한 방법은 미국 특허 제7,427,605호에서 찾을 수 있고, 이의 전문이 본원에 참조로 통합된다.
A. 본 발명의 방법에 사용하기 위한 벡터 암호화된 iRNA
AGT 유전자를 표적으로 하는 iRNA는 DNA 또는 RNA 벡터에 삽입된 전사 단위로부터 발현될 수 있다(예를 들어, Couture, A, 등의 문헌[TIG. (1996), 12:5~10; Skillern, A, 등의 국제 PCT 공개번호 WO 00/22113, Conrad의, 국제 PCT 공개번호 WO 00/22114, 및 Conrad의, 미국 특허번호 제6,054,299호를 참조함). 발현은 사용된 특정 작제물 및 표적 조직 또는 세포 유형에 따라 일시적(수 시간 내지 수 주)이거나 지속될(수 주 내지 수 개월 또는 그 이상) 수 있다. 이들 전이유전자는 선형 작제물, 환형 플라스미드 또는 바이러스 벡터로서 도입될 수 있고, 이는 통합 또는 비-통합 벡터일 수 있다. 전이유전자는 또한 염색체외 플라스미드로서 유전될 수 있도록 구성될 수 있다(문헌참조: Gassmann 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995) 92:1292).
iRNA의 개별 가닥 또는 가닥들은 발현 벡터 상의 프로모터로부터 전사될 수 있다. 2개의 별개의 가닥이 발현되어, 예를 들어, dsRNA를 생성하는 경우, 2개의 별개의 발현 벡터는 (예를 들어, 형질감염 또는 감염에 의해) 표적 세포 내로 공동 도입될 수 있다. 대안적으로, dsRNA의 각각의 개별 가닥은 동일한 발현 플라스미드에 위치한 프로모터 둘 모두에 의해 전사될 수 있다. 일 구현예에서, dsRNA는 dsRNA가 스템 및 루프 구조를 갖도록 링커 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 연결된 역위 반복 폴리뉴클레오티드로서 발현된다.
iRNA 발현 벡터는 일반적으로 DNA 플라스미드 또는 바이러스 벡터이다. 진핵 세포와 상용성인 발현 벡터, 바람직하게는 영양 세포와 상용성인 것들을 사용하여 본 명세서에 기술된 것과 같은 iRNA의 발현을 위한 재조합 작제물을 생성할 수 있다. 진핵 세포 발현 벡터는 당업계에 잘 알려져 있으며 다수의 상업적 공급원으로부터 입수 가능하다. 통상적으로, 바람직한 핵산 분절의 삽입을 위한 편리한 제한 부위를 함유하는 이러한 벡터가 제공된다. iRNA 발현 벡터의 전달은 예컨대 정맥내 또는 근육내 투여에 의하거나, 환자의 외식 표적 세포에 투여한 다음 이를 환자에게 재도입하는 것에 의하거나, 원하는 표적 세포로의 도입을 허용하는 임의의 다른 수단에 의한 전신 전달일 수 있다.
iRNA 발현 플라스미드는 양이온성 지질 캐리어(예를 들어, 올리고펙타민) 또는 비-양이온성 지질 기반 캐리어(예를 들어, Transit-TKO™)와의 복합체로서 표적 세포 내로 형질감염될 수 있다. 일주일 이상의 기간에 걸쳐 표적 RNA의 상이한 영역을 표적으로 하는 iRNA-매개 녹다운을 위한 다중 지질 형질감염도 본 발명에 의해 고려된다. 벡터의 숙주 세포 내로의 성공적인 도입은 다양한 공지된 방법을 사용하여 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 일시적인 형질감염은 녹색 형광 단백질(GFP)과 같은 형광 마커와 같은 리포터를 통해 신호 전달될 수 있다. 생체외 세포의 안정적인 형질감염은 형질감염된 세포에 하이그로마이신 B 내성과 같은 특정 환경 인자(예를 들어, 항생제 및 약물)에 대한 내성을 제공하는 마커를 사용하여 보장될 수 있다.
본 명세서에 기술된 방법 및 조성물과 사용될 수 있는 바이러스 벡터 시스템은 (a) 아데노바이러스 벡터; (b) 렌티바이러스 벡터, 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 레트로바이러스 벡터; (c) 아데노 관련 바이러스 벡터; (d) 헤르페스 심플렉스 바이러스 벡터; (e) SV 40 벡터; (f) 폴리오마 바이러스 벡터; (g) 파필로마 바이러스 벡터; (h) 피코나바이러스 벡터; (i) 폭스 바이러스 벡터, 예컨대, 오르토폭스, 예를 들어 백시니아 바이러스 벡터 또는 아비폭스, 예를 들어 카나리 폭스 또는 파울 폭스; 및 (j) 헬퍼 의존성 또는 거트리스(gutless) 아데노바이러스를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 복제 결함 바이러스가 유리할 수도 있다. 상이한 벡터는 세포의 게놈에 도입되거나 도입되지 않는다. 작제물은 경우에 따라 형질감염을 위한 바이러스 서열을 포함할 수 있다. 대안적으로, 작제물은 에피좀 복제가 가능한 벡터, 예를 들어 EPV 및 EBV 벡터에 통합될 수 있다. iRNA의 재조합 발현을 위한 작제물은 일반적으로 표적 세포 내 iRNA의 발현을 확실히 하기 위해 조절 요소, 예를 들어 프로모터, 인핸서 등을 필요로 한다. 벡터 및 작제물에 대해 고려할 다른 양태가 하기에 추가로 기술되어 있다.
iRNA의 전달에 유용한 벡터는 원하는 표적 세포 또는 조직에서 iRNA의 발현에 충분한 조절 요소(프로모터, 인핸서 등)를 포함할 것이다. 조절 요소는 구성적 또는 조절된/유도성 발현을 제공하도록 선택될 수 있다.
iRNA의 발현은, 예를 들어 특정 생리학적 조절인자, 예를 들어 순환 포도당 수준, 또는 호르몬에 민감한 유도성 조절 서열을 사용함으로써 정확하게 조절될 수 있다(문헌참조: Docherty 등, 1994, FASEB J. 8:20~24). 세포 또는 포유동물에서 dsRNA 발현의 조절에 적합한 이러한 유도성 발현 시스템은, 예를 들어 엑디손, 에스트로겐, 프로게스테론, 테트라사이클린, 이량체화의 화학적 유도제, 및 이소프로필-베타-D1-티오갈락토피라노시드(IPTG)에 의한 조절을 포함한다. 당업자는 iRNA 이식유전자의 의도된 용도에 기초하여 적절한 조절/프로모터 서열을 선택할 수 있을 것이다.
iRNA를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 바이러스 벡터가 사용될 수 있다. 예를 들어, 레트로바이러스 벡터가 사용될 수 있다(문헌참조: Miller 등, Meth. Enzymol. 217:581~599(1993)). 이들 레트로바이러스 벡터는 바이러스 게놈의 정확한 패키징 및 숙주 세포 DNA 내로의 통합에 필요한 성분을 함유한다. iRNA를 암호화하는 핵산 서열은 하나 이상의 벡터 내로 클로닝되며, 이는 핵산을 환자에게 전달하는 것을 용이하게 한다. 레트로바이러스 벡터에 대한 보다 상세한 내용은, 예를 들어, 문헌[Boesen 등, Biotherapy 6:291~302(1994)]에서 확인할 수 있으며, 이는 줄기 세포가 화학요법에 더 내성이 있게 하기 위해 조혈 줄기 세포에 mdr1 유전자를 전달하기 위한 레트로바이러스 벡터의 사용을 기술한다. 유전자 요법에서의 레트로바이러스 벡터 사용을 예시하는 다른 참조 문헌은 다음과 같다: Clowes 등의 문헌[J. Clin. Invest. 93:644~651 (1994)]; Kiem 등의 문헌[Blood 83:1467~1473(1994)]; Salmons 및 Gunzberg의 문헌[Human Gene Therapy 4:129~141(1993)]; 및 Grossman 및 Wilson의 문헌[Curr. Opin. in Genetics and Devel. 3:110~114(1993)]. 사용을 위해 고려되는 렌티바이러스 벡터는, 예를 들어, 본원에 참조로 인용되는 미국 특허 제6,143,520호; 제5,665,557호; 및 제5,981,276호에 기술된 HIV 기반 벡터를 포함한다.
아데노바이러스 또한 본 발명의 iRNA의 전달에 사용하기 위해 고려된다. 아데노바이러스는, 예를 들어 호흡기 상피에 유전자를 전달하기 위한 특히 매력적인 비히클이다. 아데노바이러스는 경미한 질환을 야기하는 호흡기 상피를 자연적으로 감염시킨다. 아데노바이러스 기반 전달 시스템의 다른 표적은 간, 중추신경계, 내피 세포, 및 근육이다. 아데노바이러스는 분열하지 않는 세포를 감염시킬 수 있다는 이점을 갖는다. Kozarsky 및 Wilson의 문헌[Current Opinion in Genetics and Development 3:499~503(1993)]에는 아데노바이러스 기반 유전자 요법에 대해 검토한 내용이 제시되어 있다. Bout 등의 문헌[Human Gene Therapy 5:3~10(1994)]에는 붉은털 원숭이의 호흡기 상피에 유전자를 전달하기 위한 아데노바이러스의 용도가 나타나 있다. 유전자 요법에서의 아데노바이러스의 용도에 대한 다른 인스턴스는 Rosenfeld 등의 문헌[Science 252:431~434(1991)]; Rosenfeld 등의 문헌[Cell 68:143~155(1992)]; Mastrangeli 등의 문헌[J. Clin. Invest. 91:225~234(1993)]; PCT 공개 WO94/12649; 및 Wang 등의 문헌[Gene Therapy 2:775~783(1995)]에서 확인할 수 있다. 본 발명에서 특징화된 iRNA를 발현시키기 위한 적절한 AV 벡터, 재조합 AV 벡터를 작제하기 위한 방법, 및 벡터를 표적 세포 내로 전달하기 위한 방법은 Xia H 등의 문헌[(2002), Nat. Biotech. 20: 1006~1010]에 기술되어 있다.
아데노 연관 바이러스(AAV) 벡터 또한 본 발명의 iRNA를 전달하는 데 사용될 수 있다(Walsh 등의 문헌[Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 204:289~300(1993)]; 미국 특허 제5,436,146호). 일 구현예에서, iRNA는, 예를 들어 U6 또는 H1 RNA 프로모터, 또는 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터를 갖는 재조합 AAV 벡터로부터 2개의 별도의 상보적 단일 가닥 RNA 분자로서 발현될 수 있다. 본 발명에서 특징화된 dsRNA를 발현시키기에 적합한 AAV 벡터, 재조합 AV 벡터를 작제하기 위한 방법, 및 벡터를 표적 세포 내로 전달하기 위한 방법은 Samulski R 등의 문헌[(1987), J. Virol. 61: 3096~3101]; Fisher K J 등의 문헌[(1996), J. Virol., 70: 520~532]; Samulski R 등의 문헌[(1989), J. Virol. 63: 3822~3826]; 미국 특허 제5,252,479호; 미국 특허 제5,139,941호; 국제 특허 출원 제WO 94/13788호; 및 국제 특허 출원 제WO 93/24641호에 기술되어 있으며, 이의 전체 개시 내용은 참조로서 본원에 통합된다.
본 발명의 iRNA의 전달에 적합한 또 다른 바이러스 벡터는 우두 바이러스와 같은 수두 바이러스, 예를 들어 변형된 바이러스 앙카라(MVA) 또는 NYVAC와 같은 약독화된 우두, 계두 또는 카나리아 두창과 같은 아비폭스이다.
바이러스 벡터의 향성은 외피 단백질 또는 다른 바이러스로부터의 다른 표면 항원으로 벡터를 위형화함으로써, 또는 적절한 경우 상이한 바이러스 캡시드 단백질을 치환함으로써 변형될 수 있다. 예를 들어, 렌티바이러스 벡터는 소포성 구내염 바이러스(VSV), 광견병, 에볼라, 모콜라 등의 표면 단백질로 위형화될 수 있다. AAV 벡터는 상이한 캡시드 단백질 혈청형을 발현하도록 벡터를 조작함으로써 상이한 세포를 표적화하도록 제조될 수 있다(예를 들어, Rabinowitz J E 등의 문헌[(2002), J Virol 76:791~801]을 참조하고, 그 전체 개시내용은 참조로서 본원에 통합됨).
벡터의 약제학적 제제는 벡터를 허용 가능한 희석제로 포함하거나, 유전자 전달 비히클이 삽입된 서방성 매트릭스를 포함할 수 있다. 대안적으로, 완전한 유전자 전달 벡터가 재조합 세포, 예를 들어 레트로바이러스 벡터로부터 온전하게 생산될 수 있는 경우, 약제학적 제제는 유전자 전달 시스템을 생산하는 하나 이상의 세포를 포함할 수 있다.
Ⅴ. 본 발명의 방법에 사용하기 위한 이중 가닥 iRNA 제제
본 발명의 방법에 사용하기 위한 적합한 이중 가닥 RNAi 제제는 AGT 유전자의 발현에서 형성된 mRNA의 적어도 일부에 상보적인 상보성 영역을 갖는 안티센스 가닥을 포함한다. 상보성 영역은 길이가 약 19~30개의 뉴클레오티드(예를 들어, 길이가 약 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 또는 19개의 뉴클레오티드)이다. AGT 유전자를 발현하는 세포와의 접촉 시, iRNA는 AGT 유전자(예를 들어, 사람, 영장류, 비-영장류, 또는 랫트 AGT 유전자)의 발현을 PCR 또는 분지형 DNA(bDNA) 기반 방법에 의해, 또는 단백질 기반 방법에 의해, 예를 들어, 웨스턴 블롯팅 또는 유동 세포측정 기술을 사용한 면역형광 분석에 의한 검정 시 적어도 50%까지 억제한다. 바람직한 구현예에서, 발현의 억제는 실시예, 특히 그 안에 제공된 적절한 유기체 세포주에서 10nM 농도의 siRNA를 사용하는 PCT 출원 PCT/US2019/032150의 실시예 2에 제공된 qPCR 방법에 의해 결정된다. 바람직한 구현예에서, 생체내 발현의 억제는 , 예를 들어, RNA 발현 최하점에서 3mg/kg의 단일 용량을 투여할 때, 인간 유전자를 발현하는 설치류, 예를 들어, 인간 표적 유전자를 발현하는 마우스 또는 AAV-감염 마우스 내 인간 유전자의 녹다운에 의해 결정된다. 간에서의 RNA 발현은 PCT 출원번호 PCT/US2019/032150의 실시예 2에 제공된 PCR 방법을 사용하여 결정된다.
dsRNA는 상보적인 2개의 RNA 가닥을 포함하는데, 이들은 dsRNA가 사용될 조건 하에 혼성화되어 듀플렉스 구조를 형성한다. dsRNA의 하나의 가닥(안티센스 가닥)은 표적 서열과 실질적으로 상보적이고, 일반적으로 완전히 상보적인 상보성 영역을 포함한다. 표적 서열은 AGT 유전자의 발현 동안에 형성된 mRNA의 서열로부터 유래될 수 있다. 다른 가닥(센스 가닥)은 안티센스 가닥에 상보적인 영역을 포함하여, 2개의 가닥은 적합한 조건 하에서 조합되는 경우 혼성화하여 듀플렉스 구조를 형성한다. 본 명세서의 다른 곳에 기술되고 당업계에 공지된 것과 같이, dsRNA의 상보적 서열은 별개의 올리고뉴클레오티드 상에 존재하는 것과는 달리, 단일 핵산 분자의 자체-상보적 영역으로서 또한 함유될 수 있다.
일반적으로, 듀플렉스 구조는 길이가 19 내지 30개의 염기쌍이다. 유사하게, 표적 서열에 대한 상보성 영역은 길이가 19 내지 30개의 뉴클레오티드이다.
일부 구현예에서, dsRNA는 길이가 약 19 내지 약 23개의 뉴클레오티드, 또는 길이가 약 25 내지 약 30개의 뉴클레오티드이다. 일반적으로, dsRNA는 다이서 효소에 대한 기질로서 작용하기에 충분히 길다. 예를 들어, 길이가 약 21~23개의 뉴클레오티드보다 긴 dsRNA가 다이서에 대한 기질로 작용할 수 있다는 것이 당업계에 널리 공지되어 있다. 당업자가 또한 인지하는 것과 같이, 절단을 위해 표적화된 RNA의 영역은 가장 흔히 보다 큰 RNA 분자, 종종 mRNA 분자의 일부일 것이다. 관련되는 경우, mRNA 표적의 "일부"는 그것이 RNAi-지시된 절단(즉, RISC 경로를 통한 절단)을 위한 기질이 되도록 하기에 충분한 길이의 mRNA 표적의 연속 서열이다.
당업자는 또한 듀플렉스 영역이 dsRNA의 일차 기능성 부분, 예를 들어, 약 19 내지 약 30개 염기쌍, 예를 들어, about 19-30, 19-29, 19-28, 19-27, 19-26, 19-25, 19-24, 19-23, 19-22, 19-21, 19-20, 20-30, 20-29, 20-28, 20-27, 20-26, 20-25, 20-24,20-23, 20-22, 20-21, 21-30, 21-29, 21-28, 21-27, 21-26, 21-25, 21-24, 21~23개, 또는 21~22개 염기쌍의 듀플렉스 영역이라는 것을 인식할 것이다. 소정의 구현예에서, 듀플렉스 영역은 19~21개 염기쌍이다. 따라서, 일 구현예에서, 절단을 위해 원하는 RNA를 표적화하는, 예를 들어, 15~30개 염기쌍의 기능성 듀플렉스로 가공되는 정도로, RNA 분자 또는 30개를 초과하는 염기쌍의 듀플렉스 영역을 갖는 RNA 분자의 복합체는 dsRNA이다. 따라서, 당업자는 일 구현예에서, miRNA가 dsRNA임을 인지할 것이다. 또 다른 구현예에서, dsRNA는 자연적으로 발생하는 miRNA가 아니다. 또 다른 구현예에서, AGT 유전자 발현을 표적으로 하는 데 유용한 iRNA 제제는 더 큰 dsRNA의 절단에 의해 표적 세포 내에서 생성되지 않는다.
본 명세서에 기술된 dsRNA는 하나 이상의 단일 가닥 뉴클레오티드 오버행, 예를 들어, 1~4, 2~4, 1~3, 2~3, 1, 2, 3, 또는 4개의 뉴클레오티드를 추가로 포함할 수 있다. 적어도 하나의 뉴클레오티드 오버행을 갖는 dsRNA는 이들의 둔화-말단 대응체에 비해 우수한 억제 특성을 가질 수 있다. 뉴클레오티드 오버행은 데옥시뉴클레오티드/뉴클레오시드를 포함하는 뉴클레오티드/뉴클레오시드 유사체를 포함하거나 이로 이루어질 수 있다. 오버행(들)은 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 이들의 임의의 조합 상에 있을 수 있다. 또한, 오버행의 뉴클레오티드(들)는 dsRNA의 안티센스 또는 센스 가닥의 5'-말단, 3'-말단 또는 양쪽 말단 상에 존재할 수 있다.
오버행은 한 가닥이 다른 가닥보다 길거나 동일한 길이의 두 가닥이 엇갈려서 생긴 결과일 수 있다. 오버행은 표적 mRNA와 미스매치를 형성할 수 있거나 이것은 표적화된 유전자 서열에 상보적일 수 있거나 또 다른 서열일 수 있다. 제1 및 제2 가닥은 또한, 예를 들어, 추가 염기에 의해 결합되어 헤어핀을 형성하거나, 다른 비염기 링커에 의해 결합될 수 있다.
일 구현예에서, RNAi 제제의 오버행 영역에서의 뉴클레오티드는 각각 독립적으로 2'-당 변형된 것, 예컨대 2'-F, 2'-O-메틸, 티미딘(T), 2'-O-메톡시에틸-5-메틸우리딘(Teo), 2'-O-메톡시에틸아데노신(Aeo), 2'-O-메톡시에틸-5-메틸시티딘(m5Ceo), 및 이의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는 변형 또는 미변형 뉴클레오티드일 수 있다. 예를 들어, TT는 어느 한 가닥의 어느 한 말단에 대해 오버행 서열일 수 있 다. 오버행은 표적 mRNA와 미스매치를 형성할 수 있거나 이것은 표적화된 유전자 서열에 상보적일 수 있거나 또 다른 서열일 수 있다.
RNAi 제제의 센스 가닥, 안티센스 가닥 또는 가닥 모두에서 5'- 또는 3'- 오버행은 인산화될 수 있다. 일부 구현예에서, 오버행 영역(들)은 2개의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트를 갖는 2개의 뉴클레오티드를 함유하고, 여기서 2개의 뉴클레오티드는 동일하거나 상이할 수 있다. 일 구현예에서, 오버행은 센스 가닥, 안티센스 가닥 또는 가닥 모두의 3'-말단에 존재한다. 일 구현예에서, 이 3'-오버행은 안티센스 가닥에 존재한다. 일 구현예에서, 이 3'-오버행은 센스 가닥에 존재한다.
RNAi 제제는 그 전체 안정성에 영향을 미치지 않으면서 RNAi의 간섭 활성을 강화할 수 있는 단일 오버행만을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단일 가닥 오버행은 센스 가닥의 3'-말단 말단 또는 대안적으로 안티센스 가닥의 3'-말단 말단에 위치할 수 있다. RNAi는 또한 안티센스 가닥의 5'-말단(또는 센스 가닥의 3'-말단) 또는 그 반대로 위치한 둔화 말단을 가질 수 있다. 일반적으로, RNAi의 안티센스 가닥은 3'-말단에서 뉴클레오티드 오버행을 갖고, 5'-말단은 둔화 말단이다. 이론에 의해 국한되고자 하는 것 없이, 안티센스 가닥의 5'-말단 및 안티센스 가닥의 3'-말단 오버행의 비대칭 둔화 말단은 RISC 공정으로 로딩되는 가이드 가닥을 선호한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 이중 가닥 RNAi 제제는 변형되지 않는다. 다른 구현예에서, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 이중 가닥 RNAi 제제는 변형되고, 예를 들어, 생체 내에서 표적 유전자(즉, AGT 유전자)의 발현을 억제하거나, 제제의 안정성 또는 다른 유익한 특성을 향상시킬 수 있는 화학적 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, 이중 가닥 RNAi 제제는 열 불안정화 뉴클레오티드 변형을 포함한다.
하기에 더 상세히 기술되는 바와 같이, 본 발명의 소정의 양태에서, 본 발명의 iRNA의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된다. 본 발명의 다른 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 모든 뉴클레오티드는 변형된다. "실질적으로 모든 뉴클레오티드가 변형되"는 본 발명의 iRNA는 대부분 변형되지만 완전히 변형되지는 않으며 5, 4, 3, 2, 또는 1개 이하의 미변형 뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
dsNA는 당업계에 공지된 표준 방법에 의해 합성될 수 있다. 본 발명의 이중 가닥 RNAi 화합물은 2단계 과정을 사용하여 제조될 수 있다. 첫 번째로, 이중 가닥 RNA 분자의 개별 가닥은 별도로 제조된다. 이어서, 성분 가닥이 어닐링된다. siRNA 화합물의 개별 가닥은 용액상 또는 고체상 유기 합성 또는 둘 모두를 사용하여 제조될 수 있다. 유기 합성은 비천연 또는 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 가닥이 용이하게 제조될 수 있다는 이점을 제공한다. 유사하게, 본 발명의 단일 가닥 올리고뉴클레오티드는 용액상 또는 고체상 유기 합성 또는 둘 모두를 사용하여 제조될 수 있다.
Ⅵ. 본 발명의 변형 iRNA
소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA, 예를 들어 dsRNA의 RNA는 변형되지 않고, 예를 들어 당업계에 공지되고 본원에 기술된 화학적 변형 또는 접합을 포함하지 않는다. 다른 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 RNA, 예를 들어 dsRNA는는 화학적으로 변형되어 안정성 또는 기타 이로운 특징을 증진시킨다. 본 발명의 소정의 구현예에서, 본 발명의 iRNA의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형된다. 본 발명의 다른 구현예에서, iRNA의 모든 뉴클레오티드 또는 iRNA의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형되고, 즉, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이하의 미변형 뉴클레오티드가 iRNA의 가닥에 존재한다.
본 발명에서 특징화된 핵산은 당업계에서 잘 확립된 방법, 예컨대 본원에 참조로서 통합된 Beaucage, S.L.(Edrs.) 등의 문헌["Current protocols in nucleic acid chemistry", John Wiley & Sons, Inc., New York, NY, USA]에 기술된 것과 같은 방법들에 의해 합성되거나 변형될 수 있다. 변형은, 예를 들어, 말단 변형, 예를 들어 5'-말단 변형(인산화, 접합, 역위 결합) 또는 3'-말단 변형(접합, DNA 뉴클레오티드, 역위 결합, 등); 염기 변형, 예를 들어 안정화 염기, 불안정화 염기, 또는 파트너의 확장된 레퍼토리와 염기쌍을 형성하는 염기와의 대체, 염기(무염기 뉴클레오티드), 또는 접합된 염기의 제거; 당 변형(예를 들어, 2'-위치 또는 4'-위치에서) 또는 당의 대체; 또는 포스포디에스테르 결합의 변형 또는 대체를 포함하는 골격 변형을 포함한다. 본 명세서에 기술된 구현예에 유용한 iRNA 화합물의 특정 예는 변형된 골격을 함유하거나 천연 뉴클레오티드 간 결합을 함유하지 않는 RNA를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 변형된 골격을 갖는 RNA는 골격에 인 원자를 갖지 않는 것들을 특히 포함한다. 본 명세서의 목적을 위해서 그리고 당업계에서 때로 언급되는 것과 같이, 이들의 뉴클레오시드 간 골격 내 인 원자를 갖지 않는 변형 RNA는 또한 올리고뉴클레오시드인 것으로 고려될 수 있다. 일부 구현예에서, 변형 iRNA는 이의 뉴클레오시드 간 골격 내 인 원자를 가질 것이다,
변형된 RNA 골격은, 예를 들어, 포스포로티오에이트, 키랄 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포트리에스테르, 아미노알킬포스포트리에스테르, 메틸 및 3'-알킬렌 포스포네이트 및 키랄 포스포네이트를 포함하는 다른 알킬 포스포네이트, 포스피네이트, 3'-아미노 포스포라미데이트 및 아미노알킬포스포라미데이트를 포함하는 포스포라미데이트, 티오노포스포라미데이트, 티오노알킬포스포네이트, 티오노알킬포스포트리에스테르, 및 정상적인 3'-5' 결합을 갖는 보라노포스페이트, 이들의 2'-5'-결합 유사체, 및 인접한 뉴클레오시드 단위의 쌍이 3'-5'에서 5'-3' 또는 2'-5'에서 5'-2'로 결합되는 역극성을 갖는 것들을 포함한다. 다양한 염, 예를 들어 나트륨 염, 혼합 염 및 유리산 형태가 또한 포함된다.
앞서 말한 인-함유 결합의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허번호 3,687,808; 4,469,863; 4,476,301; 5,023,243; 5,177,195; 5,188,897; 5,264,423; 5,276,019; 5,278,302; 5,286,717; 5,321,131; 5,399,676; 5,405,939; 5,453,496; 5,455,233; 5,466,677; 5,476,925; 5,519,126; 5,536,821; 5,541,316; 5,550,111; 5,563,253; 5,571,799; 5,587,361; 5,625,050; 6,028,188; 6,124,445; 6,160,109; 6,169,170; 6,172,209; 6, 239,265; 6,277,603; 6,326,199; 6,346,614; 6,444,423; 6,531,590; 6,534,639; 6,608,035; 6,683,167; 6,858,715; 6,867,294; 6,878,805; 7,015,315; 7,041,816; 7,273,933; 제7,321,029호; 및 미국 특허번호 제RE39464호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
그 안에 인 원자를 포함하지 않는 변형된 RNA 골격은 단쇄 알킬 또는 시클로알킬 뉴클레오시드 간 결합, 혼합 헤테로원자 및 알킬 또는 시클로알킬 뉴클레오시드 간 결합, 또는 하나 이상의 단쇄 헤테로원자 또는 헤테로시클릭 뉴클레오시드 간 결합에 의해 형성된 골격을 갖는다. 이들은 (부분적으로 뉴클레오시드의 당 부분으로부터 형성된) 모르폴리노 결합; 실록산 골격; 설파이드, 설폭사이드 및 설폰 골격; 포름아세틸 및 티오포름아세틸 골격; 메틸렌 포름아세틸 및 티오포름아세틸 골격; 알켄 함유 골격; 설파메이트 골격; 메틸렌이미노 및 메틸렌하이드라지노 골격; 설포네이트 및 설폰아미드 골격; 아미드 골격을 갖는 것들; 및 혼합 N, O, S, 및 CH2 성분 부분을 갖는 기타를 포함한다.
앞서 말한 올리고뉴클레오시드의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허번호 제5,034,506호; 제5,166,315호; 제5,185,444호; 제5,214,134호; 제5,216,141호; 제5,235,033호; 제5,64,562호; 제5,264,564호; 제5,405,938호; 제5,434,257호; 제5,466,677호; 제5,470,967호; 제5,489,677호; 제5,541,307호; 제5,561,225호; 제5,596,086호; 제5,602,240호; 제5,608,046호; 제5,610,289호; 제5,618,704호; 제5,623,070호; 제5,663,312호; 제5,633,360호; 제5,677,437호; 및 제5,677,439호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
적합한 RNA 모사체가 본 명세서에 제공된 iRNA에 사용하기 위해 고려되며, 뉴클레오티드 단위의 당 및 뉴클레오시드 간 결합, 즉, 골격 둘 모두가 신규 기로 대체된다. 염기 단위는 적당한 핵산 표적 화합물과의 혼성화를 위해 유지된다. 우수한 혼성화 특성을 갖는 것으로 나타난 RNA 모사체인 하나의 그러한 올리고머 화합물은 펩타이드 핵산(PNA)으로서 지칭된다. PNA 화합물에서, RNA의 당 골격은 아미드 함유 골격, 특히 아미노에틸글리신 골격으로 대체된다. 핵염기는 보유되고 직접적으로 또는 간접적으로 골격의 아미드 부분의 아자 질소 원자에 결합된다. PNA 화합물의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허번호 제5,539,082호; 제5,714,331호; 및 제5,719,262호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다. 발명의 iRNA에 사용하기에 적합한 추가 PNA 화합물은, 예를 들어, 문헌[Nielsen 등, Science, 1991, 254, 1497-1500]에 기술되어 있다.
발명에서 특징화된 일부 구현예는 포스포로티오에이트 골격을 갖는 RNA 및 헤테로원자 골격을 갖는 올리고뉴클레오시드, 그리고 특히 위에서 참조된 미국 특허번호 제5,489,677호의 --CH2--NH--CH2-, --CH2--N(CH3)--O--CH2--[메틸렌(메틸이미노) 또는 MMI 골격으로 공지됨], --CH2--O--N(CH3)--CH2--, --CH2--N(CH3)--N(CH3)--CH2-- 및 --N(CH3)--CH2--CH2--[여기서 천연 포스포디에스테르 골격은 --O--P--O--CH2--로 표시됨] 및 위에서 참조된 미국 특허번호 제5,602,240호의 아미드 골격을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 특징화된 RNA는 위에서 참조된 미국 특허번호 제5,034,506호의 모르폴리노 골격 구조를 갖는다.
변형된 RNA는 또한 하나 이상의 치환된 당 모이어티를 함유할 수 있다. iRNA, 예를 들어, 본 명세서에서 특징화된 dsRNA는 2'-위치에서 하기 중 하나를 포함할 수 있다: OH; F; O-, S-, 또는 N-알킬; O-, S-, 또는 N-알케닐; O-, S- 또는 N-알키닐; 또는 O-알킬-O-알킬로, 여기서 알킬, 알케닐 및 알키닐은 치환되거나 치환되지 않은 C1 내지 C10 알킬 또는 C2 내지 C10 알케닐 및 알키닐일 수 있다. 예시적인 적합한 변형은 O[(CH2)nO] mCH3, O(CH2).nOCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2) nCH3, O(CH2)nONH2, 및 O(CH2)nON[(CH2)nCH3)]2를 포함하고, 여기서, n 및 m은 1 내지 약 10이다. 다른 구현예에서, dsRNA는 2' 위치에서 하기 중 하나를 포함한다: C1 내지 C10 저급 알킬, 치환된 저급 알킬, 알크아릴, 아르알킬, O-알크아릴 또는 O-아르알킬, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, 헤테로시클로알킬, 헤테로시클로알크아릴, 아미노알킬아미노, 폴리알킬아미노, 치환된 실릴, RNA 절단 군, 리포터 군, 삽입제, iRNA의 약동학 성질을 개선시키기 위한 군, 또는 iRNA의 약력학 성질을 개선시키기 위한 군, 및 유사한 성질을 갖는 기타 치환체. 일부 구현예에서, 변형은 2'-메톡시에톡시(2'-O--CH2CH2OCH3, 또한 2'-O-(2-메톡시에틸) 또는 2'-MOE로서 공지됨)(문헌참조: Martin 등, Helv. Chim. Acta, 1995, 78:486-504) 즉, 알콕시-알콕시기를 포함한다. 또 다른 예시적인 변형은 본원의 하기 실시예에 기술된 것과 같이 2'-디메틸아미노옥시에톡시, 즉, 2'-DMAOE로도 공지된 O(CH2)2ON(CH3)2기, 및 2'-디메틸아미노에톡시에톡시(당업계에 2'-O-디메틸아미노에톡시에틸 또는 2'-DMAEOE로도 공지됨), 즉, 2'-O--CH2--O--CH2--N(CH2)2이다. 추가의 예시적인 변형은 다음을 포함한다: 5'-Me-2'-F 뉴클레오티드, 5'-Me-2'-OMe 뉴클레오티드, 5'-Me-2'-데옥시뉴클레오티드(이 세 패밀리의 R 및 S 이성체 모두); 2'-알콕시알킬; 및 2'-NMA(N-메틸아세트아미드).
기타 변형은 2'-메톡시(2'-OCH3), 2'-아미노프로폭시(2'-OCH2CH2CH2NH2), 2'-플루오로(2'-F)를 포함한다. 유사한 변형은 또한 iRNA의 RNA 상의 다른 위치, 특히 3' 말단 뉴클레오티드 상의 당의 3' 위치 또는 2'-5' 결합된 dsRNA 및 5' 말단 뉴클레오티드의 5' 위치에서 이루어질 수 있다. iRNA는 또한 펜토푸라노실 당 대신에 시클로부틸 모이어티와 같은 당 모사체를 가질 수 있다.
iRNA는 또한 핵염기(종종 당업계에서 단순히 "염기"로서 지칭됨) 변형 또는 치환을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "미변형" 또는 "천연" 핵염기는 퓨린 염기 아데닌(A) 및 구아닌(G), 및 피리미딘 염기 티민(T), 시토신(C) 및 우라실(U)을 포함한다. 변형 핵염기는 다른 합성 및 천연 핵염기, 예컨대 데옥시-티민(dT), 5-메틸시토신(5-me-C), 5-하이드록시메틸 시토신, 크산틴, 하이포크산틴, 2-아미노아데닌, 6-메틸 및 아데닌 및 구아닌의 기타 알킬 유도체, 2-프로필 및 아데닌 및 구아닌의 기타 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 5-프로피닐 우라실 및 시토신, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실(슈도우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 아날 기타 8-치환 아데닌 및 구아닌, 5-할로, 특히 5-브로모, 5-트리플루오로메틸 및 기타 5-치환 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-다아자아데닌 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌을 포함한다. 추가 핵염기는 미국 특허 제3,687,808호에 개시된 것들, Herdewijn, P.(ed.)의 문헌[Modified Nucleosides in Biochemistry, Biotechnology and Medicine, Wiley-VCH, 2008]에 개시된 것들, Kroschwitz, J. L,(ed.)의 문헌[The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, 페이지 858~859, John Wiley & Sons, 1990]에 개시된 것들, Englisch 등의 문헌[Angewandte Chemie, International Edition, 1991, 30, 613]에 개시된 것들, Sanghvi, Y S. 및 Crooke, S. T.와 Lebleu, B.(Ed.)의 문헌[Chapter 15, dsRNA Research and Applications, 페이지 289~302, CRC Press, 1993]에 개시된 것들을 포함한다. 이들 핵염기 중 일부는 특히 발명에서 특징화된 올리고머 화합물의 결합 친화도를 증가시키는데 유용하다. 이들은 2-아미노프로필아데닌, 5-프로피닐우라실 및 5-프로피닐시토신을 포함하는 5-치환 피리미딘, 6-아자피리미딘 및 N-2, N-6 및 0-6 치환 퓨린을 포함한다. 5-메틸시토신 치환은 예시적인 염기 치환이며, 이는 특히 2'-O-메톡시에틸 당 변형과 조합될 때, 핵산 듀플렉스 안정성을 0.6~1.2℃만큼 증가시키는 것으로 나타났다(Sanghvi, Y. S., Crooke, S. T. 및 Lebleu, B.(Eds.)의 문헌[dsRNA Research and Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276~278]).
전술한 변형 핵염기뿐만 아니라 다른 변형 핵염기 일부의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 전술한 미국 특허번호 제3,687,808, 4,845,205; 5,130,30; 5,134,066; 5,175,273; 5,367,066; 5,432,272; 5,457,187; 5,459,255; 5,484,908; 5,502,177; 5,525,711; 5,552,540; 5,587,469; 5,594,121, 5,596,091; 5,614,617; 5,681,941; 5,750,692; 6,015,886; 6,147,200; 6,166,197; 6,222,025; 6,235,887; 6,380,368; 6,528,640; 6,639,062; 6,617,438; 7,045,610; 7,427,672호; 및 제7,495,088호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
iRNA의 RNA는 또한 하나 이상의 잠김 핵산(LNA)을 포함하도록 변형될 수 있다. 잠김 핵산은 변형된 리보스 모이어티를 갖는 뉴클레오티드이고, 여기서 리보스 모이어티는 2' 및 4' 탄소를 연결하는 여분의 가교를 포함한다. 본 구조는 3'-엔도 구조 형태에서 리보스를 효과적으로 "잠근다". siRNA에 잠김 핵산을 첨가하는 것이 혈청에서 siRNA 안정성을 증가시키고 오프-표적 효과를 감소시키는 것으로 나타났다(Elmen, J. 등의 문헌[(2005) Nucleic Acids Research 33(1):439~447]; Mook, OR. 등의 문헌[(2007) Mol Canc Ther 6(3):833~843]; Grunweller, A. 등의 문헌[(2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185~3193)]).
잠김 핵산 뉴클레오티드의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 미국 특허번호 제6,268,490호; 제6,670,461호; 제6,794,499호; 제6,998,484호; 제7,053,207호; 제7,084,125호; 및 제7,399,845호로, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
일부 구현예에서, iRNA의 RNA는 또한 하나 이상의 이환식 당 모이어티를 포함하도록 변형될 수 있다. "이환식 당"은 2개 원자의 가교 결합에 의해 변형된 푸라노실 고리이다. "이환식 뉴클레오시드"("BNA")는 당 고리의 2개의 탄소 원자를 연결하여 이환식 고리 시스템을 형성하는 가교를 포함하는 당 모이어티를 갖는 뉴클레오시드이다. 소정의 구현예에서, 가교는 당 고리의 4'-탄소와 2'-탄소를 연결한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 제제는 하나 이상의 잠김 핵산(LNA)을 포함할 수 있다. 잠김 핵산은 변형 리보스 모이어티를 갖는 뉴클레오티드이고, 여기서 리보스 모이어티는 2' 및 4' 탄소를 결합하는 여분의 가교를 포함한다. 다시 말해, LNA는 4'-CH2-O-2' 가교를 포함하는 이환식 당 모이어티를 포함하는 뉴클레오티드이다. 본 구조는 3'-엔도 구조 형태에서 리보스를 효과적으로 "잠근다". siRNA로의 잠김 핵산의 첨가는 혈청에서 siRNA 안정성을 증가시키고 오프-표적 효과를 감소시키는 것으로 나타났다(Elmen, J. 등의 문헌[(2005) Nucleic Acids Research 33(1):439~447]; Mook, OR. 등의 문헌[(2007) Mol Canc Ther 6(3):833~843]; Grunweller, A. 등의 문헌[(2003) Nucleic Acids Research 31(12):3185~3193]). 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 사용하기 위한 이환식 뉴클레오시드의 예는 4'와 2' 리보실 고리 원자 사이에 가교를 포함하는 뉴클레오시드를 비제한적으로 포함한다. 특정 구현 예에서, 발명의 안티센스 폴리뉴클레오티드 제제는 4'에서 2'로의 가교결합을 포함하는 하나 이상의 이환식 뉴클레오시드를 포함한다. 이러한 4'에서 2'로 가교된 이환식 뉴클레오시드의 예는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: 4'-(CH2)-O-2'(LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2'(ENA); 4'-CH(CH3)-O-2'(또한 "제한된 에틸" 또는 "cEt"로도 지칭됨) 및 4'-CH(CH2OCH3)-O-2'(및 이의 유사체; 예를 들어, 미국 특허번호 제7,399,845호를 참조함); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2'(및 이의 유사체; 예를 들어, 미국 특허번호 제8,278,283호를 참조함); 4'-CH2-N(OCH3)-2'(및 이의 유사체; 예를 들어, 미국 특허번호 제8,278,425호를 참조함); 4'-CH2-O-N(CH3)-2'(예를 들어, 미국 공개번호 제2004/0171570호를 참조함); 4'-CH2-N(R)O-2', 여기서 R은 H, C1-C12 알킬, 또는 보호기(예를 들어, 미국 특허번호 제7,427,672호를 참조함); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2'(예를 들어, Chattopadhyaya 등의 문헌[J. Org. Chem., 2009, 74, 118~134]를 참조함); 및 4'-CH2-C(=CH2)-2'(및 이의 유사체; 예를 들어, 미국 특허번호 제8,278,426호를 참조함).
예를 들어 α-L-리보푸라노스 및 β-D-리보푸라노스를 포함하는 하나 이상의 입체화학적 당 구성을 갖는 임의의 전술한 이환식 뉴클레오시드가 제조될 수 있다(WO 99/14226를 참조함).
iRNA의 RNA는 또한 하나 이상의 제하된 에틸 뉴클레오티드를 포함하도록 변형될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "제한된 에틸 뉴클레오티드" 또는 "cEt"는 4'-CH(CH3)-O-2' 가교를 포함하는 이환식 당 모이어티를 포함하는 잠김 핵산이다. 일 구현예에서, 제한된 에틸 뉴클레오티드는 본 명세서에서 "S-cEt"로 지칭되는 S 형태로 존재한다.
본 발명의 iRNA는 또한 하나 이상의 "형태적으로 제한된 뉴클레오티드"("CRN")를 포함할 수 있다. CRN은 리보스의 C2' 및 C4' 탄소 또는 리보스의 C3 및 -C5' 탄소를 결합하는 링커를 갖는 뉴클레오티드 유사체이다. CRN은 리보스 고리를 안정한 형태로 잠그고 mRNA에 대한 혼성화 친화성을 증가시킨다. 링커는 안정성과 친화성을 위한 최적의 위치에 산소를 배치하여 리보스 고리 퍼커링을 감소시키기에 충분한 길이이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 UNA(잠김 해제된 핵산) 뉴클레오티드인 하나 이상의 단량체를 포함한다. UNA는 잠김 해제된 비환형 핵산이고, 여기서 당의 임의의 결합은 제거되어 잠김 해제된 "당" 잔기를 형성한다. 일례에서, UNA는 또한 C1'-C4' 사이의 결합(즉, C1'과 C4' 탄소 사이의 공유 탄소-산소-탄소 결합)이 제거된 단량체를 포괄한다. 또 다른 예에서, 당의 C2'-C3' 결합(즉, C2'와 C3' 탄소 사이의 공유 탄소-탄소 결합)이 제거되었다(문헌[Nuc. Acids Symp. Series, 52, 133~134 (2008)] 및 Fluiter 등의 문헌[Mol. Biosyst., 2009, 10, 1039] 참조하며, 본원에 참조로서 통합됨).
RNA 분자의 말단에 대한 잠재적인 안정화 변형은 N-(아세틸아미노카프로일)-4-하이드록시프롤리놀(Hyp-C6-NHAc), N-(카프로일-4-하이드록시프롤리놀(Hyp-C6), N-(아세틸-4-하이드록시프롤리놀(Hyp-NHAc), 티미딘-2'-O-데옥시티미딘(에테르), N-(아미노카프로일)-4-하이드록시프롤리놀(Hyp-C6-아미노), 2-도코사노일-우리딘-3"-포스페이트, 역염기 dT(idT) 등을 포함할 수 있다. 해당 변형의 개시내용은 PCT 공개번호 WO 2011/005861에서 확인할 수 있다.
본 발명의 iRNA의 뉴클레오티드의 기타 변형은 iRNA의 안티센스 가닥 상의 5' 포스페이트 또는 5' 포스페이트 모방체, 예를 들어, 5'-말단 포스페이트 또는 포스페이트 모방체를 포함한다. 적합한 포스페이트 모방체는, 예를 들어, 미국 공개번호 제2012/0157511호에 개시되어 있고, 이의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
A. 본 발명의 모티프를 포함하는 변형 iRNA
발명의 특정 양태에서, 발명의 이중 가닥 RNA 제제는, 예를 들어, 이의 전문이 본원에 참조로 인용된 국제특허번호 제2013/075035호에 개시된 것과 같은 화학적 변형을 갖는 제제를 포함한다. 국제특허번호 제2013/075035호는 3개의 연속 뉴클레오티드 상에서 dsRNAi 제제의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥으로, 특히 절단 부위에서 또는 그 근처에서 3개의 동일한 변형의 모티프를 제공한다. 일부 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 다르게는 완전히 변형될 수 있다. 이들 모티프의 도입은 경우에 따라 센스 또는 안티센스 가닥의 변형 패턴을 방해한다. dsRNAi 제제는 예를 들어, 센스 가닥 상에서 선택적으로 GalNAc 유도체 리간드와 접합될 수 있다.
보다 구체적으로, 이중 가닥 RNA 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 dsRNAi 제제의 적어도 하나의 가닥의 절단 부위의 또는 그 부근의 3개의 연속 뉴클레오티드 상에 3개의 동일한 변형의 하나 이상의 모티프를 갖도록 완전히 변형될 때, dsRNAi 제제의 유전자 침묵 활성이 관찰되었다.
따라서, 본 발명은 표적 유전자(즉, AGT 유전자)의 발현을 생체내 억제할 수 있는 이중 가닥 RNA 제제를 제공한다. RNAi 제제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함한다. RNAi 제제의 각각의 가닥은, 예를 들어, 길이가 17~30개의 뉴클레오티드, 길이가 25~30개의 뉴클레오티드, 길이가 27~30개의 뉴클레오티드, 길이가 19~25개의 뉴클레오티드, 길이가 19~23개의 뉴클레오티드, 길이가 19~21개의 뉴클레오티드, 길이가 21~25개의 뉴클레오티드, 또는 길이가 21~23개의 뉴클레오티드일 수 있다.
센스 가닥 및 안티센스 가닥은 통상적으로 듀플렉스 이중 가닥 RNA("dsRNA")를 형성하며, 이는 본 명세서에서 "dsRNAi 제제"로도 지칭된다. dsRNAi 제제의 듀플렉스 영역은, 예를 들어, 길이가 27~30개의 뉴클레오티드 쌍, 길이가 19~25개의 뉴클레오티드 쌍, 길이가 19~23개의 뉴클레오티드 쌍, 길이가 19~21개의 뉴클레오티드 쌍, 길이가 21~25개의 뉴클레오티드 쌍, 또는 길이가 21~23개의 뉴클레오티드 쌍일 수 있는 듀플렉스 영역일 수 있다. 또 다른 예에서, 듀플렉스 영역은 길이가 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 및 27개의 뉴클레오티드로부터 선택된다.
소정의 구현예에서, dsRNAi 제제는 하나 또는 둘 모두의 가닥의 3'-말단, 5'-말단, 또는 둘 모두의 말단에서 하나 이상의 오버행 영역 또는 캡핑 군을 함유할 수 있다. 오버행은 독립적으로 길이가 1~6개의 뉴클레오티드, 예를 들어, 길이가 2~6개의 뉴클레오티드, 길이가 1~5개의 뉴클레오티드, 길이가 2~5개의 뉴클레오티드, 길이가 1~4개의 뉴클레오티드, 길이가 2~4개의 뉴클레오티드, 길이가 1~3개의 뉴클레오티드, 길이가 2~3개의 뉴클레오티드, 또는 길이가 1~2개의 뉴클레오티드일 수 있다. 소정의 구현예에서, 오버행 영역은 위에서 제공된 것과 같이 연장된 오버행 영역을 포함할 수 있다. 오버행은 한 가닥이 다른 가닥보다 길거나 동일한 길이의 두 가닥이 엇갈려서 생긴 결과일 수 있다. 오버행은 표적 mRNA와 미스매치를 형성할 수 있거나 이것은 표적화된 유전자 서열에 상보적일 수 있거나 또 다른 서열일 수 있다. 제1 및 제2 가닥은 또한, 예를 들어, 추가 염기에 의해 결합되어 헤어핀을 형성하거나, 다른 비염기 링커에 의해 결합될 수 있다.
소정의 구현예에서, dsRNAi 제제의 오버행 영역에서의 뉴클레오티드는 각각 독립적으로 2'-당 변형된 것, 예컨대 2'-F, 2'-O-메틸, 티미딘(T), 2`-O-메톡시에틸-5-메틸우리딘(Teo), 2'-O-메톡시에틸아데노신(Aeo), 2'-O-메톡시에틸-5-메틸시티딘(m5Ceo), 및 이의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는 변형 또는 미변형 뉴클레오티드일 수 있다. 예를 들어, TT는 어느 한 가닥의 어느 한 말단에 대해 오버행 서열일 수 있 다. 오버행은 표적 mRNA와 미스매치를 형성할 수 있거나 이것은 표적화된 유전자 서열에 상보적일 수 있거나 또 다른 서열일 수 있다.
dsRNAi 제제의 센스 가닥, 안티센스 가닥 또는 가닥 둘 모두에서 5'- 또는 3'- 오버행은 인산화될 수 있다. 일부 구현예에서, 오버행 영역(들)은 2개의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트를 갖는 2개의 뉴클레오티드를 함유하고, 여기서 2개의 뉴클레오티드는 동일하거나 상이할 수 있다. 일부 구현예에서, 오버행은 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 둘 모두의 가닥의 3'-말단에 존재한다. 일부 구현예에서, 이 3'-오버행은 안티센스 가닥에 존재한다. 일부 구현예에서, 이 3'-오버행은 센스 가닥에 존재한다.
dsRNAi 제제는 그 전체 안정성에 영향을 미치지 않으면서 RNAi의 간섭 활성을 강화할 수 있는 단일 오버행만을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단일 가닥 오버행은 센스 가닥의 3'-말단 또는, 대안적으로 안티센스 가닥의 3'-말단에 위치할 수 있다. RNAi는 또한 안티센스 가닥의 5'-말단(또는 센스 가닥의 3'-말단) 또는 그 반대에 위치한 둔화 말단을 가질 수 있다. 일반적으로, dsRNAi 제제의 안티센스 가닥은 3'-말단에서 뉴클레오티드 오버행을 갖고, 5'-말단은 둔화 말단이다. 이론에 의해 국한되고자 하는 것 없이, 안티센스 가닥의 5'-말단에서 및 안티센스 가닥의 3'-말단 오버행에서 비대칭 둔화 말단은 RISC 공정으로 로딩되는 가이드 가닥을 선호한다.
소정의 구현예에서, 길이가 19개 뉴클레오티드인 이중 말단 둔화말단체이고, 여기서 센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 7, 8, 9에 있는 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-F 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다. 안티센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 11, 12, 13에 있는 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다.
또 다른 구현예에서, dsRNAi 제제는 길이가 20개 뉴클레오티드인 이중 말단 둔화말단체이고, 여기서 센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 8, 9, 10에서 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-F 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다. 안티센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 11, 12, 13에 있는 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다.
또 다른 구현예에서, dsRNAi 제제는 길이가 21개 뉴클레오티드인 이중 말단 둔화말단체이고, 여기서 센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 9, 10, 11에서 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-F 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다. 안티센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 11, 12, 13에 있는 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다.
소정의 구현예에서, dsRNAi 제제는 21개 뉴클레오티드 센스 가닥 및 23개 뉴클레오티드 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 9, 10, 11에 있는 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-F 변형의 적어도 하나의 모티프를 함유하고; 안티센스 가닥은 5' 말단으로부터 위치 11, 12, 13에 있는 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프를 함유하고, RNAi 제제의 하나의 말단은 둔화 말단인 한편, 다른 말단은 2개 뉴클레오티드 오버행을 포함한다. 바람직하게, 2개 뉴클레오티드 오버행은 안티센스 가닥의 3'-말단에 존재한다.
2개 뉴클레오티드 오버행이 안티센스 가닥의 3'-말단에 존재하는 경우, 말단인 3개의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 결합이 존재할 수 있고, 여기서 3개의 뉴클레오티드 중 2개는 오버행 뉴클레오티드이고, 3번째 뉴클레오티드는 오버행 뉴클레오티드 옆에 쌍을 형성한 뉴클레오티드이다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 추가로 센스 가닥의 5'-말단 및 안티센스 가닥의 5'-말단 둘 모두에서 말단 3개의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 결합을 갖는다. 소정의 구현예에서, 모티프의 일부인 뉴클레오티드를 포함하는 dsRNAi 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드이다. 소정의 구현예에서, 각각의 잔기는 독립적으로, 예를 들어, 교호(alternating) 모티프에서 2'-O-메틸 또는 3'-플루오로로 변형된다. 선택적으로, dsRNAi 제제는 리간드(바람직하게는 GalNAc3)를 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, dsRNAi 제제는 센스 및 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 센스 가닥은 길이가 25~30개의 뉴클레오티드 잔기이고, 5' 말단 뉴클레오티드(위치 1)에서 시작하여 제1 가닥의 위치 1 내지 23은 적어도 8개 리보뉴클레오티드를 포함하고; 안티센스 가닥은 길이가 36~66개의 뉴클레오티드 잔기이고, 3' 말단 뉴클레오티드에서 시작하여 센스 가닥의 위치 1~23과 쌍을 형성하는 위치에 적어도 8개의 리보뉴클레오티드를 포함하여 듀플렉스를 형성하고; 안티센스 가닥의 적어도 3' 말단 뉴클레오티드는 센스 가닥과 쌍을 형성하지 않고, 최대 6개의 연속 3' 말단 뉴클레오티드는 센스 가닥과 쌍을 형성하지 않아 1~6개 뉴클레오티드의 3' 단일 가닥 오버행을 형성하고; 안티센스 가닥의 5' 말단은 센스 가닥과 쌍을 형성하지 않는 10~30개 연속 뉴클레오티드를 포함하여, 10~30개 뉴클레오티드 단일 가닥 5' 오버행을 형성하고; 적어도 센스 가닥 5' 말단 및 3' 말단 뉴클레오티드는 센스 및 안티센스 가닥이 최대 상보성을 위해 정렬되는 경우 안티센스 가닥의 뉴클레오티드와 염기쌍을 형성하여, 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이에 실질적으로 듀플렉스된 영역을 형성하고; 안티센스 가닥은 이중 가닥 핵산이 포유류 세포 내로 도입되는 경우 표적 유전자 발현을 감소시키기 위해 안티센스 가닥 길이의 적어도 19개 리보뉴클레오티드를 따라 표적 RNA에 충분히 상보적이고; 센스 가닥은 3개의 연속 뉴클레오티드 상에 3개의 2'-F 변형의 적어도 하나의 모티프를 함유하며, 여기서 모티프 중 적어도 하나는 절단 부위에서 또는 그 부근에서 발생난다. 안티센스 가닥은 절단 부위에 또는 그 부근에 있는 3개의 연속 뉴클레오티드 상에 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함한다.
소정의 구현예에서, dsRNAi 제제는 센스 및 안티센스 가닥을 포함하고, 여기서 dsRNAi 제제는 5' 말단으로부터 위치 11, 12, 13에 있는 3개의 연속 뉴클레오티드 상에 3개의 2'-O-메틸 변형의 적어도 하나의 모티프와 적어도 25 내지 최대 29개 뉴클레오티드인 길이를 갖는 제1 가닥 및 최대 30개 뉴클레오티드인 길이를 갖는 제2 가닥을 포함하고; 제1 가닥의 3' 말단 및 제2 가닥의 5' 말단은 둔화 말단을 형성하고 제2 가닥은 제1 가닥보다 이의 3' 말단에서 1~4개 뉴클레오티드가 더 길고, 듀플렉스 영역은 길이가 적어도 25개의 뉴클레오티드이고, 제2 가닥은 RNAi 제제가 포유류 세포 내로 도입되는 경우 표적 유전자 발현을 감소시키기 위해 제2 가닥 길이의 적어도 19개 뉴클레오티드를 따라 표적 mRNA에 충분히 상보적이고, dsRNAi 제제의 다이서 절단이 우선적으로 제2 가닥의 3'-말단을 포함하는 siRNA를 생성하여 포유류에서 표적 유전자의 발현을 감소시킨다. 선택적으로, dsRNAi 제제는 리간드를 추가로 포함한다.
소정의 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥은 3개의 연속 뉴클레오티드 상에서 3개의 동일한 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함하고, 여기서 모티프 중 하나는 센스 가닥 내 절단 부위에서 일어난다.
소정의 구현예에서, dsRNAi 제제의 안티센스 가닥은 또한 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함하고, 여기서 모티프 중 하나는 안티센스 가닥 내 절단 부위에서 또는 그 부근에서 발생한다.
길이가 19~23개의 뉴클레오티드인 듀플렉스 영역을 갖는 dsRNAi 제제의 경우, 안티센스 가닥의 절단 부위는 통상적으로 5'-말단으로부터 10, 11 및 12 위치 주변에 있다. 따라서 3개의 동일한 변형의 모티프는 안티센스 가닥의 9, 10, 11 위치; 10, 11, 12 위치; 11, 12, 13 위치; 12, 13, 14 위치; 또는 13, 14, 15 위치에 일어날 수 있고, 계수는 안티센스 가닥의 5'-말단에서 첫 번째 뉴클레오티드에서 시작하거나, 계수는 안티센스 가닥의 5'-말단에서 듀플렉스 영역 내 첫 번째 쌍을 형성하는 뉴클레오티드에서 시작한다. 안티센스 가닥 내 절단 부위는 또한 5'-말단으로부터 dsRNAi 제제의 듀플렉스 영역의 길이에 따라 변화할 수 있다.
RNAi 제제의 센스 가닥은 가닥의 절단 부위에서 3개의 연속 뉴클레오티드 상에 3개의 동일한 변형의 적어도 하나의 모티프를 포함할 수 있고; 안티센스 가닥은 가닥의 절단 부위에서 또는 그 부근에서 3개의 연속 뉴클레오티드 상에 3개의 동일한 변형의 적어도 하나의 모티프를 가질 수 있다. 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 dsRNA 듀플렉스를 형성할 때, 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 센스 가닥 상의 3개의 뉴클레오티드 중 하나의 모티프와 안티센스 가닥 상의 3개의 뉴클레오티드 중 하나의 모티프가 적어도 하나의 뉴클레오티드 중복을 갖도록 정렬될 수 있고, 즉, 센스 가닥 내 모티프의 3개의 뉴클레오티드 중 적어도 하나는 안티센스 가닥 내 모티프의 3개의 뉴클레오티드 중 적어도 하나와 염기쌍을 형성한다. 대안적으로, 적어도 2개의 뉴클레오티드는 중복될 수 있거나, 모든 3개의 뉴클레오티드는 중복될 수 있다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥은 3개의 연속 뉴클레오티드 상에 3개의 동일한 변형의 하나 초과의 모티프를 포함할 수 있다. 제1 모티프는 가닥의 절단 부위에 또는 그 부근에 존재할 수 있고, 다른 모티프는 윙(wing) 변형일 수 있다. 본원에서 용어 "윙 변형"은 동일한 가닥의 절단 부위에 또는 그 부근에 모티프로부터 분리된 가닥의 또 다른 부분에 존재하는 모티프를 지칭한다. 윙 변형은 첫 번째 모티프에 인접하거나 적어도 하나 이상의 뉴클레오티드에 의해 분리된다. 모티프가 서로 바로 인접해 있는 경우, 모티프의 화학적 작용은 서로 구별되며, 모티프가 하나 이상의 뉴클레오티드에 의해 분리되어 있는 경우, 화학적 작용은 동일하거나 상이할 수 있다. 2개 이상의 윙 변형이 존재할 수 있다. 예를 들어, 2개의 윙 변형이 존재하는 경우, 각각의 윙 변형은 절단 부위에 또는 그 부근에 있는 첫 번째 모티프에 대해 하나의 말단에서 발생하거나 리드(lead) 모티프의 어느 한 측면 상에서 발생한다.
센스 가닥과 마찬가지로, dsRNAi 제제의 안티센스 가닥은 3개의 연속 뉴클레오티드 상에 3개의 동일한 변형의 하나 초과의 모티프를 포함할 수 있으며, 모티프 중 적어도 하나는 가닥의 절단 부위에 또는 그 부근에서 발생한다. 이러한 안티센스 가닥은 또한 센스 가닥에 존재할 수 있는 윙 변형과 유사한 정렬로 하나 이상의 윙 변형을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의윙 변형은 통상적으로 가닥의 3'-말단, 5'-말단, 또는 양 말단에 첫 번째 하나 또는 두 개의 말단 뉴클레오티드를 포함하지 않는다.
다른 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 윙 변형은 통상적으로 가닥의 3'-말단, 5'-말단, 또는 양 말단에서 듀플렉스 영역 내에 첫 번째 하나 또는 두 개의 쌍을 형성하는 뉴클레오티드를 포함하지 않는다.
dsRNAi 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 각각 적어도 하나의 윙 변형을 포함하는 경우, 윙 변형은 듀플렉스 영역의 동일한 말단 상에 있을 수 있고, 1, 2 또는 3개 뉴클레오티드의 중첩을 가질 수 있다.
dsRNAi 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥이 각각 적어도 2개의 윙 변형을 포함하는 경우, 센스 가닥 및 안티센스 가닥은 정렬되어 하나의 가닥에서 각각 두 개의 변형이 1, 2 또는 3개 뉴클레오티드의 중첩을 갖는 듀플렉스 영역의 하나의 말단 상에 있고; 하나의 가닥에서 각각 두 개의 변형이 1, 2 또는 3개 뉴클레오티드의 중첩을 갖는 듀플렉스 영역의 다른 말단 상에 있고; 하나의 가닥에서 두 개의 변형이 리드 모티프의 양측 상에 있으며, 듀플렉스 영역에 1, 2 또는 3개 뉴클레오티드의 중첩을 갖는다.
일부 구현예에서, 모티프의 일부인 뉴클레오티드를 포함하는 dsRNAi 제제의 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오티드는 변형될 수 있다. 각각의 뉴클레오티드는 동일하거나 상이한 변형으로 변형될 수 있으며, 이는 비-결합 포스페이트 산소 중 하나 또는 둘 모두 또는 결합 포스페이트 산소 중 하나 이상의 하나 이상의 변경; 리보스 당의 성분, 예를 들어, 리보스 당의 2'-하이드록실의 변경; 포스페이트 모이어티를 "데포스포" 링커로 대량 대체; 천연 발생 염기의 변형 또는 대체; 및 리보스-포스페이트 골격의 대체 또는 변형을 포함할 수 있다.
핵산은 서브유닛의 중합체이므로, 많은 변형, 예를 들어, 염기, 또는 포스페이트 모이어티의 변형, 또는 포스페이트 모이어티의 비-결합 O의 변형이 핵산 내에서 반복되는 위치에서 발생한다. 일부 경우에, 변형은 핵산 내의 모든 대상체 위치에서 발생하지만, 많은 경우에 그렇지 않을 것이다. 예로서, 변형은 3'- 또는 5' 말단 위치에서만 발생할 수 있고, 말단 영역 내, 예를 들어, 말단 뉴클레오티드 상의 위치에서 또는 가닥의 마지막 2, 3, 4, 5, 또는 10개 뉴클레오티드에서만 발생할 수 있다. 변형은 이중 가닥 영역, 단일 가닥 영역 또는 둘 모두에서 발생할 수 있다. 변형은 RNA의 이중 가닥 영역에서만 발생할 수 있거나 RNA의 단일 가닥 영역에서만 발생할 수 있다. 예를 들어, 비-결합 O 위치에서 포스포로티오에이트 변형은 한쪽 또는 양쪽 말단에서만 발생할 수 있고, 말단 영역 내, 예를 들어, 말단 뉴클레오티드 상의 위치에서 또는 가닥의 마지막 2, 3, 4, 5, 또는 10개 뉴클레오티드에서만 발생할 수 있거나, 이중 가닥 및 단일 가닥 영역, 특히 말단에서 발생할 수 있다. 5'- 말단 또는 말단들은 인산화될 수 있다.
예를 들어, 안정성을 향상시키거나, 오버행에 특정 염기를 포함하거나, 변형 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 대리물을 단일 가닥 오버행에, 예를 들어, 5'- 또는 3'-오버행에, 또는 둘 모두에 포함하는 것이 가능할 수 있다. 예를 들어, 오버행에 퓨린 뉴클레오티드를 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 일부 구현예에서 3' 또는 5' 오버행의 염기 모두 또는 일부는, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 변형으로 변형될 수 있다. 변형은, 예를 들어, 당업계에 공지된 변형을 갖는 리보스 당의 2' 위치에서의 변형의 사용, 예를 들어, 데옥시리보뉴클레오티드, 2'-데옥시-2'-플루오로(2'-F) 또는 핵염기의 리보당 대신 변형 2'-O-메틸의 사용, 및 포스페이트 군에서의 변형, 예를 들어, 포스포로티오에이트 변형의 사용을 포함할 수 있다. 오버행은 표적 서열과 상동성일 필요는 없다.
일부 구현예에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 잔기는 LNA, CRN, cET, UNA, HNA, CeNA, 2'-메톡시에틸, 2'-O-메틸, 2'-O-알릴, 2'-C-알릴, 2'-데옥시, 2'-하이드록실, 또는 2'-플루오로로 독립적으로 변형된다. 가닥은 하나 초과의 변형을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 잔기는 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로로 독립적으로 변형된다.
적어도 2개의 상이한 변형은 통상적으로 센스 가닥 및 안티센스 가닥 상에 존재한다. 그러한 2개의 변형은 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로 변형, 또는 기타일 수 있다.
소정의 구현예에서, Na 또는 Nb는 교호 패턴의 변형을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "교호 모티프"는 하나 이상의 변형을 갖는 모티프를 지칭하며, 각각의 변형은 한 가닥의 교호 뉴클레오티드 상에서 발생한다. 교호 뉴클레오티드는 하나 걸러 뉴클레오티드 당 하나 또는 3개 뉴클레오티드 당 하나 또는 유사한 패턴을 지칭할 수 있다. 예를 들어, A, B 및 C 각각이 뉴클레오티드에 대한 하나의 유형의 변형을 나타내는 경우, 교호 모티프는 "ABABABABABAB…" "AABBAABBAABB…" "AABAABAABAAB…" "AAABAAABAAAB…" "AAABBBAAABBB…" 또는 "ABCABCABCABC…" 등일 수 있다.
교호 모티프에 포함된 변형의 유형은 동일하거나 상이할 수 있다. 예를 들어, A, B, C, D 각각이 뉴클레오티드 상에 한 가지 유형의 변형을 나타내는 경우, 교호 패턴, 즉, 다른 모든 뉴클레오티드 상의 변형은 동일할 수 있지만, 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 각각은 "ABABAB…", "ACACAC…" "BDBDBD…" 또는 "CDCDCD…" 등과 같은 교호 모티프 내 변형 중 몇 가지 가능성으로부터 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 dsRNAi 제제는 전환한 안티센스 가닥 상의 교호 모티프에 대한 변형 패턴에 비해 센스 가닥 상의 교호 모티프에 대한 변형 패턴을 포함한다. 전환(shift)은 센스 가닥의 뉴클레오티드의 변형 군이 안티센스 가닥의 뉴클레오티드의 상이하게 변형된 군에 상응하도록 할 수 있고 그 반대의 경우도 마찬가지일 수 있다. 예를 들어, 센스 가닥이 dsRNA 듀플렉스 내 안티센스 가닥과 쌍을 형성하는 경우, 센스 가닥 내 교호 모티프는 가닥의 5'에서 3'로 "ABABAB"로 시작할 수 있고, 안티센스 가닥 내 교호 모티프는 듀플렉스 영역 내 가닥의 5'에서 3'로 "BABABA"로 시작할 수 있다. 또 다른 예로서, 센스 가닥 내 교호 모티프는 가닥의 5'에서 3'로 "AABBAABB"로 시작할 수 있고, 안티센스 가닥 내 교호 모티프는 듀플렉스 영역 내 가닥의 5'에서 3'로 "BBAABBAA"로 시작할 수 있어 센스 가닥과 안티센스 가닥 사이의 변형 패턴의 완전하거나 부분적인 전환이 있다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제는 센스 가닥 상의 2'-O-메틸 변형 및 2'-F 변형의 교호 모티프의 패턴을 포함하고, 이는 초기에 안티센스 가닥 상의 2'-O-메틸 변형 및 2'-F 변형의 교호 모티프의 변형에 대해 전환을 갖고, 초기에 즉, 센스 가닥 상의 2'-O-메틸 변형 뉴클레오티드는 안티센스 가닥 상의 2'-F 변형 뉴클레오티드와 염기쌍을 형성하고, 그 반대도 마찬가지이다. 센스 가닥의 1 위치는 2'-F 변형으로 시작할 수 있고, 안티센스 가닥의 1 위치는 2'-O-메틸 변형으로 시작할 수 있다.
센스 가닥 또는 안티센스 가닥에 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 하나 이상의 모티프를 도입하는 것은 센스 가닥 또는 안티센스 가닥에 존재하는 초기 변형 패턴을 방해한다. 센스 또는 안티센스 가닥에 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 하나 이상의 모티프를 도입함으로써 센스 또는 안티센스 가닥의 변형 패턴의 이러한 방해는 표적 유전자에 대한 유전자 침묵 활성을 향상시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프가 임의의 가닥에 도입될 때, 모티프 옆의 뉴클레오티드의 변형은 모티프의 변형과 상이한 변형이다. 예를 들어, 모티프를 포함하는 서열의 부분은 "...NaYYYNb..."이며, 여기서 "Y"는 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 모티프의 변형을 나타내고, "Na" 및 "Nb"는 Y의 변형과 상이한 모티프 "YYY" 옆의 뉴클레오티드에 대한 변형을 나타내며, 여기서 Na 및 Nb는 동일하거나 상이한 변형일 수 있다. 대안적으로, 윙 변형이 존재할 때 Na 또는 Nb가 존재하거나 부재할 있다.
iRNA는 추가로 적어도 하나의 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 연결을 포함할 수 있다. 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 연결 변형은 가닥의 임의의 위치의 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 두 가닥 모두의 임의의 뉴클레오티드 상에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 뉴클레오티드 간 연결 변형은 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 모든 뉴클레오티드에서 발생할 수 있고; 각각의 뉴클레오티드 간 연결 변형은 센스 가닥 또는 안티센스 가닥 상의 교호 패턴으로 발생할 수 있고; 센스 가닥 또는 안티센스 가닥은 교호 패턴으로 뉴클레오티드 간 연결 변형 둘 모두를 포함할 수 있다. 센스 가닥 상의 뉴클레오티드 간 연결 변형의 교호 패턴은 안티센스 가닥과 동일하거나 상이할 수 있고, 센스 가닥 상의 뉴클레오티드 간 연결 변형의 교호 패턴은 안티센스 가닥 상의 뉴클레오티드 간 연결 변형의 교호 패턴에 상대적인 전환을 가질 수 있다. 일 구현예에서, 이중-가닥 RNAi 제제는 6-8개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결을 포함한다. 일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 5'-말단에서 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결을 포함하고 3'-말단에서 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결을 포함하고, 센스 가닥은 5'-말단 또는 3'-말단에서 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결을 포함한다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제는 오버행 영역에 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 연결 변형을 포함한다. 예를 들어, 오버행 영역은 2개의 뉴클레오티드 사이에 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 연결을 갖는 2개의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 뉴클레오티드 간 연결 변형은 또한 오버행 뉴클레오티드를 듀플렉스 영역 내의 말단 쌍을 형성하는 뉴클레오티드와 연결하기 위해 만들어질 수 있다. 예를 들어, 적어도 2, 3, 4개, 또는 모든 오버행 뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 연결을 통해 연결될 수 있고, 선택적으로, 오버행 뉴클레오티드를 오버행 뉴클레오티드 옆에 있는 쌍을 형성하는 뉴클레오티드와 연결하는 추가의 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 연결이 있을 수 있다. 예를 들어, 말단 3개의 뉴클레오티드 사이에 적어도 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결이 있을 수 있고, 여기서 3개의 뉴클레오티드 중 2개는 오버행 뉴클레오티드이고, 세 번째는 오버행 뉴클레오티드 옆의 쌍을 형성하는 뉴클레오티드이다. 이들 말단 3개의 뉴클레오티드는 안티센스 가닥의 3'-말단, 센스 가닥의 3'-말단, 안티센스 가닥의 5'-말단, 또는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 2개 뉴클레오티드 오버행이 안티센스 가닥의 3'-말단에 있고, 말단 3개의 뉴클레오티드 사이의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결이 있을 수 있고, 여기서 3개의 뉴클레오티드 중 2개는 오버행 뉴클레오티드이고, 3번째 뉴클레오티드는 오버행 뉴클레오티드 옆에 쌍을 형성하는 뉴클레오티드이다. 선택적으로, dsRNAi 제제는 추가로 센스 가닥의 5'-말단 및 안티센스 가닥의 5'-말단 둘 모두에서 말단 3개의 뉴클레오티드 사이에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결을 갖는다.
일 구현예에서, dsRNAi 제제는 듀플렉스 내에서 표적과 미스매치(들), 또는 이들의 조합을 포함한다. 미스매치는 오버행 영역 또는 듀플렉스 영역에서 발생할 수 있다. 염기쌍은 해리 또는 용융을 촉진하는 경향에 따라 순위가 매겨질 수 있다(예를 들어, 특정 쌍형성의 결합 또는 해리의 자유 에너지에 따라 가장 간단한 접근법은 개별 쌍을 기준으로 쌍을 검사하는 것이지만, 다음 이웃 또는 유사한 검정이 또한 사용될 수 있다). 해리를 촉진시키는 측면에서: A:U는 G:C 보다 바람직하고; G:U는 G:C 보다 바람직하고; I:C는 G:C 보다 바람직하다(I=이노신). 미스매치, 예를 들어, 비-정준형 또는 정준형 이외의 쌍형성(본 명세서의 다른 곳에 기술된 것과 같이)은 정준형(A:T, A:U, G:C) 쌍형성 보다 바람직하고; 범용 염기를 포함하는 쌍형성은 정준형 쌍형성보다 바람직하다.
소정의 구현예에서, dsRNAi 제제는 듀플렉스의 5'-말단에서 안티센스 가닥의 해리를 촉진하기 위해, 하기를 포함하는 군으로부터 독립적으로 선택된 안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 듀플렉스 영역 내에서 처음 1, 2, 3, 4, 또는 5개 염기쌍 중 적어도 하나를 포함한다: A:U, G:U, I:C, 및 미스매치쌍, 예를 들어, 비-정준형 또는 정준형 쌍형성 이외의 것 또는 범용 염기를 포함하는 쌍.
듀플렉스 구현예에서, 안티센스 가닥 내 5'-말단으로부터 듀플렉스 영역 내의 1 위치에 있는 뉴클레오티드는 A, dA, dU, U, 및 dT로부터 선택된다. 대안적으로, 안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 듀플렉스 영역 내의 처음 1, 2, 또는 3개 염기쌍 중 적어도 하나는 AU 염기쌍이다. 예를 들어, 안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 듀플렉스 영역 내의 첫 번째 염기쌍은 AU 염기쌍이다.
또 다른 구현예에서, 센스 가닥의 3'-말단에서의 뉴클레오티드는 데옥시-티민(dT)이거나 안티센스 가닥의 3'-말단에서의 뉴클레오티드는 데옥시-티민(dT)이다. 예를 들어, 데옥시-티민 뉴클레오티드의 짧은 서열, 예를 들어, 센스, 안티센스, 또는 두 가닥 모두의 3'-말단 상의 2개의 dT 뉴클레오티드가 있다.
소정의 구현예에서, 센스 가닥 서열은 식 I로 나타낼 수 있으며:
5' np-Na-(X X X )i-Nb-Y Y Y -Nb-(Z Z Z )j-Na-nq 3' (I)
식 중:
i 및 j는 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
p 및 q는 각각 독립적으로 0~6이고;
각각의 Na는 독립적으로 0~25개 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고, 각각의 서열은 적어도 2개의 상이하게 변형 뉴클레오티드를 포함하고;
각각의 Nb는 독립적으로 0~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고;
각각의 np 및 nq는 독립적으로 오버행 뉴클레오티드를 나타내고;
여기서 Nb 및 Y는 동일한 변형을 갖지 않고;
XXX, YYY, 및 ZZZ 각각은 독립적으로 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 하나의 모티프를 나타낸다. 바람직하게 YYY는 모든 2'-F 변형 뉴클레오티드이다.
일부 구현예에서, Na 또는 Nb는 교호 패턴의 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, YYY 모티프는 센스 가닥의 절단 부위에 또는 이의 부근에서 존재한다. 예를 들어, dsRNAi 제제가 길이가 17~23개의 뉴클레오티드인 듀플렉스 영역을 갖는 경우, YYY 모티프는 센스 가닥의 절단 부위에 또는 그 부근에서 발생할 수 있고(예를 들어, 위치 6, 7, 8; 7, 8, 9; 8, 9, 10; 9, 10, 11; 10, 11, 12; 또는 11, 12, 13에서 발생할 수 있음), 계수는 제1 뉴클레오티드로부터, 5'-말단으로부터 시작하거나; 선택적으로, 계수는 듀플렉스 영역 내 제1 쌍형성 뉴클레오티드에서 5'-말단으로부터 시작한다.
일 구현예에서, i는 1이고 j는 0이거나, i는 0이고 j는 1이거나, i 및 j 둘 모두는 1이다. 센스 가닥은 따라서 다음 식으로 나타낼 수 있다:
5' np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq 3' (Ib);
5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Na-nq 3' (Ic); 또는
5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq 3' (Id).
센스 가닥을 식 (Ib)로 나타내는 경우, Nb는 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낼 수 있다.
센스 가닥을 식 (Ic)로 나타내는 경우, Nb는 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낼 수 있다.
센스 가닥을 식 (Id)로 나타내는 경우, 각각의 Nb는 독립적으로 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 바람직하게는, Nb는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이다. 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15, 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낼 수 있다.
X, Y 및 Z 각각은 서로 동일하거나 상이할 수 있다.
다른 구현예에서, i는 0이고, j는 0이고, 센스 가닥은 하기 식으로 나타낼 수 있다:
5' np- Na -YYY- Na-nq 3' (Ia).
센스 가닥을 식 (Ia)로 나타내는 경우, 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15, 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낼 수 있다.
일 구현예에서, RNAi의 안티센스 가닥 서열은 식 (II)로 나타낼 수 있으며:
5' nq'-Na'-(Z'Z'Z')k-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-(X'X'X')l-N'a-np' 3' (II)
식 중:
k 및 l는 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
p' 및 q'는 각각 독립적으로 0~6이고;
각각의 Na'는 독립적으로 0~25개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고, 각각의 서열은 적어도 2개의 상이하게 변형 뉴클레오티드를 포함하고;
각각의 Nb'는 독립적으로 0~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고;
각각의 np' 및 nq'는 독립적으로 오버행 뉴클레오티드를 나타내고;
여기서 Nb' 및 Y'는 동일한 변형을 갖지 않고;
X'X'X', Y'Y'Y', 및 Z'Z'Z'는 각각 독립적으로 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 하나의 모티프를 나타낸다.
일부 구현예에서, Na' 또는 Nb'는 교호 패턴의 변형을 포함한다.
Y'Y'Y' 모티프는 안티센스 가닥의 절단 부위에 또는 그 부근에 존재한다. 예를 들어, dsRNAi 제제가 길이가 17~23개의 뉴클레오티드인 듀플렉스 영역을 갖는 경우, Y'Y'Y' 모티프는 안티센스 가닥의 위치 9, 10, 11; 10, 11, 12; 11, 12, 13; 12, 13, 14; 또는 13, 14, 15에서 발생할 수 있고, 계수는 제1 뉴클레오티드로부터, 5'-말단으로부터 시작하거나; 선택적으로, 계수는 듀플렉스 영역 내 제1 쌍형성 뉴클레오티드에서 5'-말단으로부터 시작한다. 바람직하게는, Y'Y'Y' 모티프는 위치 11, 12, 13에서 발생한다.
소정의 구현예에서, Y'Y'Y' 모티프는 모든 2'-OMe 변형 뉴클레오티드이다.
소정의 구현예에서, k는 1이고 l은 0이거나, k는 0이고 l은 1이거나, k 및 l 둘 모두는 1이다.
안티센스 가닥은 따라서 하기의 식으로 나타낼 수 있다:
5' nq'-Na'-Z'Z'Z'-Nb'-Y'Y'Y'-Na'-np' 3' (IIb);
5' nq'-Na'-Y'Y'Y'-Nb'-X'X'X'-np' 3' (IIc); 또는
5' nq'-Na'- Z'Z'Z'-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'- X'X'X'-Na'-np' 3' (IId).
안티센스 가닥을 식 (IIb)로 나타내는 경우, Nb '은 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 Na'는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.
안티센스 가닥을 식 (IIc)로 나타내는 경우, Nb'는 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 Na'는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.
안티센스 가닥을 식 (IId)로 나타내는 경우, 각각의 Nb'는 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 Na'는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 바람직하게, Nb는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6이다.
또 다른 구현예에서, k는 0이고 l는 0이고, 안티센스 가닥은 하기 식으로 나타낼 수 있다:
5' np'-Na'-Y'Y'Y'- Na'-nq' 3' (Ia).
안티센스 가닥을 식 (IIa)로 나타내는 경우, 각각의 Na'는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.
X', Y' 및 Z' 각각은 서로 동일하거나 상이할 수 있다.
센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 뉴클레오티드는 LNA, CRN, UNA, cEt, HNA, CeNA, 2'-메톡시에틸, 2'-O-메틸, 2'-O-알릴, 2'-C-알릴, 2'-하이드록실, 또는 2'-플루오로로 독립적으로 변형될 수 있다. 예를 들어, 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 각각의 뉴클레오티드는 독립적으로 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로로 변형된다. 각각의 X, Y, Z, X', Y' 및 Z'는 특히 2'-O-메틸 변형 또는 2'-플루오로 변형을 나타낼 수 있다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제의 센스 가닥은 듀플렉스 영역이 21개 뉴클레오티드인 경우에 가닥의 9, 10, 및 11 위치에서 존재하는 YYY 모티프를 포함할 수 있고, 계수는 5'-말단으로부터 제1 뉴클레오티드로부터 시작하거나, 선택적으로, 계수는 5'-말단으로부터 듀플렉스 영역 내에서 제1 쌍형성 뉴클레오티드에서 시작하고; Y는 2'-F 변형을 나타낸다. 센스 가닥은 추가로 듀플렉스 영역의 반대 말단에 윙 변형으로서 XXX 모티프 또는 ZZZ 모티프를 포함할 수 있고; XXX 및 ZZZ는 각각 독립적으로 2'-OMe-변형 또는 2'-F 변형을 나타낸다.
일부 구현예에서, 안티센스 가닥은 가닥의 위치 11, 12, 13에서 존재하는 Y'Y'Y' 모티프를 포함할 수 있고, 계수는 5'-말단으로부터 제1 뉴클레오티드로부터 시작하거나, 임의로, 계수는 5'-말단으로부터 듀플렉스 영역 내에서 제1 쌍형성 뉴클레오티드에서 시작하고; Y'는 2'-O-메틸 변형을 나타낸다. 안티센스 가닥은 추가로 듀플렉스 영역의 반대 말단에 윙 변형으로서 X'X'X' 모티프 또는 Z'Z'Z' 모티프를 포함할 수 있고; X'X'X' 및 Z'Z'Z'는 각각 독립적으로 2'-OMe-변형 또는 2'-F 변형을 나타낸다.
위의 식 (Ia), (Ib), (Ic), 및 (Id) 중 어느 하나로 나타낸 센스 가닥은 듀플렉스를 형성하고, 여기서 안티센스 가닥은 각각 식 (IIa), (IIb), (IIc), 및 (IId) 중 어느 하나로 나타낸다.
따라서, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 dsRNAi 제제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함할 수 있고, 각각의 가닥은 14 내지 30개 뉴클레오티드를 갖고, iRNA 듀플렉스는 하기 식 (III)으로 표시되며:
센스: 5' np -Na-(X X X)i -Nb- Y Y Y -Nb -(Z Z Z)j-Na-nq 3'
안티센스: 3' np'-Na'-(X'X'X')k-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-(Z'Z'Z')l-Na'-nq' 5'
(III)
식 중:
i, j, k, 및 l는 각각 독립적으로 0 또는 1이고;
p, p', q, 및 q'는 각각 독립적으로 0~6이고;
각각의 Na 및 Na '는 독립적으로 0~25개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타내고, 각각의 서열은 적어도 2개의 상이하게 변형된 뉴클레오티드를 포함하고;
각각의 Nb 및 Nb '는 독립적으로 0~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 나타내고;
여기서, 각각의 np', np, nq', 및 nq는 이의 각각이 존재하거나 존재하지 않을 수 있고, 독립적으로 오버행 뉴클레오티드를 나타내고;
XXX, YYY, ZZZ, X'X'X', Y'Y'Y' 및 Z'Z'Z'는 각각 독립적으로 3개의 연속 뉴클레오티드 상의 3개의 동일한 변형의 하나의 모티프를 나타낸다.
일 구현예에서, i는 0이고 j는 0이거나; i는 1이고 j는 0이거나; i는 0 이고 j는 1이거나; i 및 j 둘 모두는 0이거나; i 및 j 둘 모두는 1이다. 또 다른 구현예에서, k는 0이고 l는 0이거나; k는 1이고 l는 0이고; k는 0이고 l는 1이거나; k 및 I 둘 모두는 0이거나; k 및 I 둘 모두는 1이다.
iRNA 듀플렉스를 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥의 예시적인 조합은 하기 식을 포함한다:
5' Np - Na -Y Y Y -Na-nq 3'
3' np'-Na'-Y'Y'Y' -Na'nq' 5'
(IIIa)
5' np -Na -Y Y Y -Nb -Z Z Z -Na-nq 3'
3' np'-Na'-Y'Y'Y'-Nb'-Z'Z'Z'-Na'nq' 5'
(IIIb)
5' np-Na- X X X -Nb -Y Y Y - Na-nq 3'
3' np'-Na'-X'X'X'-Nb '-Y'Y'Y'-Na'nq' 5'
(IIIc)
5' np -Na -X X X -Nb-Y Y Y -Nb- Z Z Z -Na-nq 3'
3' np'-Na'-X'X'X'-Nb'-Y'Y'Y'-Nb'-Z'Z'Z'-Na-nq' 5'
(IIId)
dsRNAi 제제를 식 (IIIa)로 나타내는 경우, 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15, 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.
dsRNAi 제제를 식 (IIIb)로 나타내는 경우, 각각의 Nb는 독립적으로 1~10, 1~7, 1~5, 또는 1~4개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.
dsRNAi 제제를 식 (IIIc)로 나타내는 경우, 각각의 Nb, Nb'는 독립적으로 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 Na는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다.
dsRNAi 제제를 식 (IIId)로 나타내는 경우, 각각의 Nb, Nb'는 독립적으로 0~10, 0~7, 0~10, 0~7, 0~5, 0~4, 0~2, 또는 0개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 Na, Na '는 독립적으로 2~20, 2~15 또는 2~10개의 변형 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드 서열을 나타낸다. 각각의 Na, Na', Nb, 및 Nb '는 독립적으로 교호 패턴의 변형을 포함한다.
식 (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), 및 (IIId)의 X, Y, 및 Z 각각은 서로 동일하거나 상이할 수 있다.
dsRNAi 제제를 식 (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), 및 (IIId)로 나타내는 경우, Y 뉴클레오티드 중 적어도 하나는 Y' 뉴클레오티드 중 하나와 염기쌍을 형성할 수 있다. 대안적으로, Y 뉴클레오티드 중 적어도 2개는 상응하는 Y' 뉴클레오티드와 염기쌍을 형성하거나; Y 뉴클레오티드 중 3개 모두는 상응하는 Y' 뉴클레오티드와 염기쌍을 형성한다.
dsRNAi 제제를 식 (IIIb) 또는 식 (IIId)로 나타내는 경우, Z 뉴클레오티드 중 적어도 하나는 Z' 뉴클레오티드 중 하나와 염기쌍을 형성할 수 있다. 대안적으로, Z 뉴클레오티드 중 적어도 2개는 상응하는 Z' 뉴클레오티드와 염기쌍을 형성하거나; Z 뉴클레오티드 중 3개 모두는 상응하는 Z' 뉴클레오티드와 염기쌍을 형성한다.
dsRNAi 제제를 식 (IIIc) 또는 식 (IIId)로 나타내는 경우, X 뉴클레오티드 중 적어도 하나는 X' 뉴클레오티드 중 하나와 염기쌍을 형성할 수 있다. 대안적으로, X 뉴클레오티드 중 적어도 2개는 상응하는 X' 뉴클레오티드와 염기쌍을 형성하거나; X 뉴클레오티드 중 3개 모두는 상응하는 X' 뉴클레오티드와 염기쌍을 형성한다.
소정의 구현예에서, Y 뉴클레오티드 상에서의 변형은 Y' 뉴클레오티드 상에서의 변형과 상이하거나, Z 뉴클레오티드 상에서의 변형은 Z' 뉴클레오티드 상에서의 변형과 상이하거나, X 뉴클레오티드 상에서의 변형은 X' 뉴클레오티드 상에서의 변형과 상이하다.
소정의 구현예에서, dsRNAi 제제를 식 (IIId)로 나타내는 경우, Na 변형은 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로 변형이다. 또 다른 구현예에서, RNAi 제제를 식 (IIId)로 나타내는 경우, Na 변형은 2'-O-메틸 또는 2'-플루오로 변형이고, np' >0이고 적어도 하나의 np'는 인접 뉴클레오티드에 포스포로티오에이트 결합을 통해 결합된다. 또 다른 구현예에서, RNAi 제제를 식 (IIId)로 나타내는 경우, Na 변형은 2-O-메틸 또는 2-플루오로 변형이고, np'>0이고 적어도 하나의 np'는 인접 뉴클레오티드에 포스포로티오에이트 결합을 통해 결합되고, 센스 가닥은 2가 또는 3가 분지형 링커(후술됨)를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체에 접합된다. 다른 구현예에서, RNAi 제제를 식 (IIId)로 나타내는 경우, Na 변형은 2-O-메틸 또는 2-플루오로 변형이고, np' >0이고 적어도 하나의 np'는 인접 뉴클레오티드에 포스포로티오에이트 결합을 통해 결합되고, 센스 가닥은 적어도 하나의 포스포로티오에이트 결합을 포함하고, 센스 가닥은 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체에 접합된다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제를 식 (IIIa)로 나타내는 경우, Na 변형은 2-O-메틸 또는 2-플루오로 변형이고, np' >0이고 적어도 하나의 np'는 인접 뉴클레오티드에 포스포로티오에이트 결합을 통해 결합되고, 센스 가닥은 적어도 하나의 포스포로티오에이트 결합을 포함하고, 센스 가닥은 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체에 접합된다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제는 식 (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), 및 (IIId)로 나타낸 적어도 2개의 듀플렉스를 함유하는 다량체이고, 여기서 듀플렉스는 링커에 의해 결합된다. 링커는 절단가능하거나 절단가능하지 않을 수 있다. 선택적으로, 다량체는 추가로 리간드를 포함한다. 듀플렉스 각각은 동일한 유전자 또는 2개의 상이한 유전자를 표적화할 수 있거나; 듀플렉스 각각은 2개의 상이한 표적 부위에서 동일한 유전자를 표적화할 수 있다.
일부 구현예에서, dsRNAi 제제는 식 (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), 및 (IIId)로 나타낸 3개, 4개, 5개, 6개 이상의 듀플렉스를 함유하는 다량체이고, 여기서 듀플렉스는 링커에 의해 연결된다. 링커는 절단가능하거나 절단가능하지 않을 수 있다. 선택적으로, 다량체는 추가로 리간드를 포함한다. 듀플렉스 각각은 동일한 유전자 또는 2개의 상이한 유전자를 표적화할 수 있거나; 듀플렉스 각각은 2개의 상이한 표적 부위에서 동일한 유전자를 표적화할 수 있다.
일 구현예에서, 식 (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), 및 (IIId) 중 적어도 하나로 나타낸 2개의 dsRNAi 제제는 5' 말단, 및 3' 말단의 하나 또는 둘 모두에서 서로 연결되고, 선택적으로 리간드에 접합된다. 제제의 각각은 동일한 유전자 또는 2개의 상이한 유전자를 표적화할 수 있거나; 제제의 각각은 2개의 상이한 표적 부위에서 동일한 유전자를 표적화할 수 있다.
소정의 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 함유하는 적은 수의 뉴클레오티드, 예를 들어, 2'-플루오로 변형을 갖는 10개 이하의 뉴클레오티드를 함유할 수 있다. 예를 들어, RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 갖는 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0개 뉴클레오티드를 함유할 수 있다. 특정 구현예에서, 발명의 RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 갖는 10개 뉴클레오티드, 예를 들어, 센스 가닥에서 2'-플루오로 변형을 갖는 4개 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥에서 2'-플루오로 변형을 갖는 6개 뉴클레오티드를 함유한다. 또 다른 특정 구현예에서, 발명의 RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 갖는 6개 뉴클레오티드, 예를 들어, 센스 가닥에서 2'-플루오로 변형을 갖는 4개 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥에서 2'-플루오로 변형을 갖는 2개 뉴클레오티드를 함유한다.
다른 구현예에서, 발명의 RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 함유하는 매우 낮은 수의 뉴클레오티드, 예를 들어, 2'-플루오로 변형을 함유하는 2개 이하의 뉴클레오티드를 함유할 수 있다. 예를 들어, RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 갖는 0개의 뉴클레오티드 중 2개, 1개를 함유할 수 있다. 특정 구현예에서, RNAi 제제는 2'-플루오로 변형을 갖는 2개 뉴클레오티드, 예를 들어, 센스 가닥에서 2-플루오로 변형을 갖는 0개 뉴클레오티드 및 안티센스 가닥에서 2'-플루오로 변형을 갖는 2개 뉴클레오티드를 함유할 수 있다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 다량체 iRNA가 다양한 공개 문헌에 기술되어 있다. 이러한 공개 문헌은 WO2007/091269, 미국 특허 제7,858,769호, WO2010/141511, WO2007/117686, WO2009/014887, 및 WO2011/031520를 포함하고, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로 인용된다.
하기에서 더 상세히 기술되는 것과 같이, 하나 이상의 탄수화물 모이어티의 iRNA로의 접합을 함유하는 iRNA는 iRNA의 하나 이상의 성질을 최적화할 수 있다. 많은 경우에, 탄수화물 모이어티는 iRNA의 변형된 서브유닛에 부착될 것이다. 예를 들어, iRNA의 하나 이상의 리보뉴클레오티드 서브유닛의 리보스 당은 또 다른 모이어티, 예를 들어, 탄수화물 리간드가 부착된 비-탄수화물(바람직하게는, 환형) 캐리어와 대체될 수 있다. 서브유닛의 리보스 당이 그렇게 대체된 리보뉴클레오티드 서브유닛은 본 명세서에서 리보스 대체 변형 서브유닛(RRMS)으로 지칭된다. 환형(cyclic) 담체는 탄소환식 고리 시스템일 수 있고, 즉 모든 고리(ring) 원자는 탄소 원자 또는 헤테로환형(heterocyclic) 고리 시스템이고, 즉 하나 이상의 고리 원자는 헤테로원자, 예를 들어 질소, 산소, 황일 수 있다. 환형 담체는 단환식(monocyclic) 고리 시스템일 수 있거나, 2개 이상의 고리, 예를 들어, 융합된 고리를 함유할 수 있다. 환형 캐리어는 완전히 포화된 고리 시스템일 수 있거나, 이것은 하나 이상의 이중 결합을 함유할 수 있다.
리간드는 캐리어를 통해 폴리뉴클레오티드에 부착될 수 있다. 캐리어는 (i) 적어도 하나의 "골격 부착점", 바람직하게는 2개의 "골격 부착점" 및 (ii) 적어도 하나의 "테더링 부착점"을 포함한다. 본원에 사용된 "골격 부착점"은 작용기, 예를 들어, 하이드록실 군, 또는 일반적으로 이를 위해 이용가능한 결합을 지칭하고, 이는 골격, 예를 들어, 리보핵산의 포스페이트, 또는 변형 포스페이트, 예를 들어 황 함유 골격으로의 캐리어의 혼입에 적합하다. 일부 구현예에서 "테더링 부착점"(TAP)은 선택된 모이어티를 연결하는, 환형 캐리어의 구성 고리 원자, 예를 들어, 탄소 원자 또는 헤테로원자(골격 부착점을 제공하는 원자와 구별됨)를 지칭한다. 모이어티는 예를 들어, 탄수화물, 예를 들어, 단당류, 이당류, 삼당류, 사당류, 올리고사카라이드, 또는 폴리사카라이드일 수 있다. 임의로, 선택된 모이어티는 환형 캐리어로의 삽입 테더에 의해 연결된다. 따라서, 환형 캐리어는 종종 작용기, 예를 들어, 아미노기를 포함하거나, 일반적으로 또 다른 화학적 실체, 예를 들어, 구성 고리에 대한 리간드의 혼입 또는 테더링에 적합한 결합을 제공할 것이다.
iRNA는 캐리어를 통해 리간드에 접합될 수 있되, 캐리어는 환형 작용기 또는 비환형 작용기일 수 있고; 바람직하게는, 환형 작용기는 피롤리디닐, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, [1,3]디옥솔란, 옥사졸리디닐, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐, 티아졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 퀴녹살리닐, 피리다지노닐, 테트라하이드로푸릴 및 데칼린으로부터 선택되고; 바람직하게는, 비환형 작용기는 세리놀 골격 또는 디에탄올아민 골격이다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, iRNA 제제는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하며, 각각의 가닥은 14 내지 40개 뉴클레오티드를 갖는다. RNAi 제제는 식 (L)로 나타낼 수 있다:
식 (L)에서, B1, B2, B3, B1', B2', B3', 및 B4'는 각각 독립적으로 2'-O-알킬, 2'-치환 알콕시, 2'-치환 알킬, 2'-할로, ENA, 및 BNA/LNA로 이루어진 군으로부터 선택된 변형을 함유하는 뉴클레오티드이다. 일 구현예에서, B1, B2, B3, B1', B2', B3', 및 B4'는 각각 2'-OMe 변형을 함유한다. 일 구현예에서, B1, B2, B3, B1', B2', B3', 및 B4'는 각각 2'-OMe 또는 2'-F 변형을 함유한다. 일 구현예에서, B1, B2, B3, B1', B2', B3', 및 B4' 중 적어도 하나는 2'-O-N-메틸아세트아미도(2'-O-NMA 변형을 함유한다.
C1은 안티센스 가닥의 시드 영역에 대향하는 부위(즉, 안티센스 가닥의 5'-말단의 위치 2~8)에 위치하는 열 불안정화 뉴클레오티드이다. 예를 들어, C1은 안티센스 가닥의 5'-말단의 위치 2~8에서 뉴클레오티드와 쌍을 이루는 센스 가닥의 위치에 있다. 일 실시예에서, C1은 센스 가닥의 5'-말단으로부터 위치 15에 있다. C1 뉴클레오티드는 무염기성 변형; 듀플렉스에서 반대 뉴클레오티드를 갖는 미스매치; 및 당 변형, 예컨대 2'-데옥시 변형 또는 비환형 뉴클레오티드, 예를 들어, 잠김 해제된 핵산(UNA) 또는 글리세롤 핵산(GNA)을 포함할 수 있는 열 불안정화 변형을 갖는다. 일 구현예에서, C1은 i) 안티센스 가닥에서 반대 뉴클레오티드를 갖는 미스매치; ii) 다음으로 이루어진 군:
; 및 iii) 다음으로 이루어진 군:
, , , , , 및 으로부터 선택된 당 변형으로 이루어진 군으로부터 선택된 열 불안정화 변형을 갖고, 여기서 B는 변형 또는 미변형 핵염기이고, R1 및 R2는 독립적으로 H, 할로겐, OR3, 또는 알킬이고; R3은 H, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 아랄킬, 헤테로아릴 또는 당이다. 일 구현예에서, C1에서의 열 불안정화 변형은 G:G, G:A, G:U, G:T, A:A, A:C, C:C, C:U, C:T, U:U, T:T, 및 U:T로 이루어진 군으로부터 선택된 미스매치이고; 선택적으로, 미스매치 쌍 내의 적어도 하나의 핵염기는 2'-데옥시 핵염기이다. 일 실시예에서, C1에서의 열 불안정화 변형은 GNA 또는 이다.
T1, T1', T2', 및 T3'은 각각 독립적으로 뉴클레오티드에 2'-OMe 변형의 입체 벌크 이하인 입체 벌크를 제공하는 변형을 포함하는 뉴클레오티드를 나타낸다. 입체 벌크는 변형의 입체 효과의 합을 지칭한다. 뉴클레오티드의 변형의 입체 효과를 결정하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 변형은 뉴클레오티드의 리보스 당의 2' 위치에 있을 수 있거나, 비-리보스 뉴클레오티드, 비환형 뉴클레오티드, 또는 리보스 당의 2' 위치와 유사하거나 동등한 뉴클레오티드의 골격에 대한 변형일 수 있고, 뉴클레오티드에 2'-OMe 변형의 입체 벌크보다 이하인 입체 벌크를 제공한다. 예를 들어, T1, T1', T2', 및 T3'은 DNA, RNA, LNA, 2'-F, 및 2'-F-5'-메틸로부터 각각 독립적으로 선택된다. 일 구현예에서, T1은 DNA이다. 일 구현예에서, T1'은 DNA, RNA 또는 LNA이다. 일 구현예에서, T2'는 DNA 또는 RNA이다. 일 구현예에서, T3'은 DNA 또는 RNA이다.
n1, n3, 및 q1은 독립적으로 길이가 4 내지 15개의 뉴클레오티드이다.
n5, q3, 및 q7은 독립적으로 길이가 1~6개의 뉴클레오티드(들)이다.
n4, q2, 및 q6은 독립적으로 길이가 1~3개의 뉴클레오티드(들)이고; 대안적으로, n4는 0이다.
q5는 독립적으로 길이가 0~10개의 뉴클레오티드(들)이다.
n2 및 q4는 독립적으로 길이가 0~3개의 뉴클레오티드(들)이다.
대안적으로, n4는 길이가 0~3개의 뉴클레오티드(들)이다.
일 구현예에서, n4는 0일 수 있다. 일 실시예에서, n4는 0이고, q2 및 q6은 1이다. 또 다른 예에서, n4는 0이고, q2 및 q6은 1이고, 센스 가닥의 위치 1~5 내에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, n4, q2, 및 q6은 각각 1이다.
일 구현예에서, n2, n4, q2, q4, 및 q6은 각각 1이다.
일 구현예에서, C1은 센스 가닥이 길이가 19~22개의 뉴클레오티드인 경우, 센스 가닥의 5' 말단의 위치 14~17에 있고, n4는 1이다. 일 구현예에서, C1은 센스 가닥의 5'-말단의 위치 15에 있다.
일 구현예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에서 시작한다. 일 실시예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에 있고, q6은 1과 같다.
일 구현예에서, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에서 시작한다. 일 실시예에서, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에 있고, q2은 1과 같다.
예시적인 구현예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에서 시작하고, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에서 시작한다. 일 실시예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에서 시작하고, q6은 1과 같고, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에서 시작하고, q2는 1과 같다.
일 구현예에서, T1' 및 T3'는 길이가 11개의 뉴클레오티드에 의해 분리된다(즉, T1' 및 T3' 뉴클레오티드를 계수하지 않음).
일 구현예에서, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에 있다. 일 실시예에서, T1'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에 있고, q2는 1과 같고, 변형은 2' 위치 또는 비-리보스 내 위치에 있고, 비환형 또는 골격은 2'-OMe 리보스보다 덜 입체적인 벌크를 제공한다.
일 구현예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에 있다. 일 실시예에서, T3'은 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에 있고, q6은 1과 같고, 변형은 2' 위치 또는 비-리보스 내 위치에 있고, 비환형 또는 골격은 2'-OMe 리보스 보다 덜 하거나 동등한 입체적인 벌크를 제공한다.
일 구현예에서, T1은 센스 가닥의 절단 부위에 있다. 일 실시예에서, T1은 센스 가닥이 길이가 19~22개의 뉴클레오티드인 경우, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 11에 있고, n2는 1이다. 예시적인 구현예에서, T1은 센스 가닥이 길이가 19~22개의 뉴클레오티드인 경우, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 11에 있는 센스 가닥의 절단 부위에 있고, n2는 1이다.
일 구현예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 6에서 시작한다. 일 실시예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 6~10에 있고, q4는 1이다.
예시적인 구현예에서, T1은, 예를 들어, 센스 가닥이 길이가 19~22개의 뉴클레오티드인 경우, 센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 11에 있는 센스 가닥의 절단 부위에 있고, n2는 1이고; T1'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 14에 있고, q2는 1과 같고, T1'에 대한 변형은 리보스 당의 2' 위치에 또는 비-리보스 내의 위치에 있고, 비환형 또는 골격은 2'-OMe 리보스 보다 덜 입체적인 벌크를 제공하고; T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 6~10에 있고, q4는 1이고; T3'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 2에 있고, q6는 1과 같고, T3'에 대한 변형은 2' 위치에 또는 비-리보스 내 위치에 있고, 비환형 또는 골격은 2'-OMe 리보스 보다 덜 하거나 동등한 입체적인 벌크를 제공한다.
일 구현예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 8에서 시작한다. 일 실시예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 8에서 시작하고, q4는 2이다.
일 구현예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 9에서 시작한다. 일 실시예에서, T2'는 안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 위치 9에 있고, q4는 1이다.
일 구현예에서, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 6이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내에서 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 인터뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 6이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 6이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 7이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'은 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 6이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 7이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 6이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 6이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고,n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 5이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 선택적으로, 안티센스 가닥의 3'-말단에 적어도 2개의 추가 TT를 갖는다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 5이고, T2'는 2'-F이고, q4는 1이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 선택적으로, 안티센스 가닥의 3' 말단에 적어도 2개의 추가 TT를 갖고; 센스 가닥의 위치 1~5 내에 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 결합 변형(센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 결합 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 결합 변형(안티센스 가닥의 5'-말단으로부터 계수함)을 포함한다.
RNAi 제제는 센스 가닥 또는 안티센스 가닥의 5'-말단에 인 함유 기를 포함할 수 있다. 5'-말단 인 함유 기는 5'-말단 포스페이트(5'-P), 5'-말단 포스포로티오에이트(5'-PS), 5'-말단 포스포로디티오에이트(5'-PS2), 5'-말단 비닐포스포네이트(5'-VP), 5'-말단 메틸포스포네이트(MePhos), 또는 5'-데옥시-5'-C-말로닐 ()일 수 있다. 5'-말단 인 함유 기가 5'-말단 비닐포스포이트(5'-VP)인 경우, 5'-VP는 5'-E-VP 이성질체(즉, 트랜스-비닐포스페이트, ), 5'-Z-VP 이성질체(즉, 시스-비닐포스페이트, ), 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 센스 가닥의 5'-말단에 인 함유 기를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 5'-말단에 인 함유 기를 포함한다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 5'-P를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 5'-PS를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-PS를 포함한다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 5'-VP를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-VP를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-E-VP를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-Z-VP를 포함한다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 5'-PS2를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, RNAi 제제는 5'-PS2를 포함한다. 일 구현예에서, RNAi 제제는 안티센스 가닥에 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. dsRNA 제제는 또한 5'-PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'- PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'- VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. dsRNAi RNA 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'- PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'- VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'-F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'는 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3는 4이고, q4는 0이고, B3'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'는 2'-F이고, q6는 1이고, B4'는 2'-F이고, q7은 1이다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- PS를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- VP를 포함한다. 5'-VP는 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2를 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐을 포함한다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-P는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-VP(예를 들어, 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합) 및 표적화 리간드를 포함한다.
일 구현예에서, 5'-VP는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- PS2 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS2는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-데옥시-5'-C-말로닐은 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-P는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-VP(예를 들어, 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합) 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-VP는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS2는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-OMe이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-데옥시-5'-C-말로닐은 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-P는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-VP(예를 들어, 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합) 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-VP는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS2 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS2는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, T2'는 2'-F이고, q4는 2이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 5이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-데옥시-5'-C-말로닐은 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-P 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-P는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-PS 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- VP(예를 들어, 5'-E-VP, 5'-Z-VP, 또는 이들의 조합) 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-VP는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'- PS2 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-PS2는 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
일 구현예에서, B1은 2'-OMe 또는 2'-F이고, n1은 8이고, T1은 2'F이고, n2는 3이고, B2는 2'-OMe이고, n3은 7이고, n4는 0이고, B3은 2'-OMe이고, n5는 3이고, B1'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q1은 9이고, T1'은 2'-F이고, q2는 1이고, B2'는 2'-OMe 또는 2'-F이고, q3은 4이고, q4는 0이고, B3'은 2'-OMe 또는 2'-F이고, q5는 7이고, T3'은 2'-F이고, q6은 1이고, B4'는 2'-F 이고, q7은 1이고; 센스 가닥의 위치 1~5 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함), 및 위치 1 및 2에서의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형 및 안티센스 가닥의 위치 18~23 내의 2개의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결 변형(안티센스 가닥의 5' 말단으로부터 계수함)을 포함한다. RNAi 제제는 또한 5'-데옥시-5'-C-말로닐 및 표적화 리간드를 포함한다. 일 구현예에서, 5'-데옥시-5'-C-말로닐은 안티센스 가닥의 5'-말단에 있고, 표적화 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 있다.
특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드; 및
(iii) 위치 1, 3, 5, 7, 9 내지 11, 13, 17, 19 및 21에서의 2'-F 변형 및 위치 2, 4, 6, 8, 12, 14 내지 16, 18 및 20에서의 2'-OMe 변형(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 위치 1, 3, 5, 9, 11 내지 13, 15, 17, 19, 21, 및 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2, 4, 6 내지 8, 10, 14, 16, 18, 20, 및 22에서의 2'F 변형(5' 말단으로부터 계수함);
(iii) 뉴클레오티드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오티드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
여기서, dsRNA 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오티드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1, 3, 5, 7, 9 내지 11, 13, 15, 17, 19 및 21에서의 2'-F 변형 및 위치 2, 4, 6, 8, 12, 14, 16, 18 및 20에서의 2'-OMe 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iv) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 위치 1, 3, 5, 7, 9, 11 내지 13, 15, 17, 19, 및 21 내지 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2, 4, 6, 8, 10, 14, 16, 18, 및 20에서의 2'F 변형(5' 말단으로부터 계수함);
(iii) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오티드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오티드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오티드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 6, 8, 10 및 12 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 위치 7 및 9에서의 2'-F 변형, 및 위치 11에서의 데옥시-뉴클레오티드(예를 들어, dT)(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iv) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 위치 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15, 17 및 19 내지 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2, 4 내지 6, 8, 10, 12, 14, 16, 및 18에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오티드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오티드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오티드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 6, 8, 10, 12, 14, 및 16 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 7, 9, 11, 13, 및 15에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 위치 1, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 및 21 내지 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2 내지 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 및 20에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오티드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오티드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오티드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 9, 및 12 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 10 및 11에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 위치 1, 3, 5, 7, 9, 11 내지 13, 15, 17, 19, 및 21 내지 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2, 4, 6, 8, 10, 14, 16, 18, 및 20에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함);
(iii) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오티드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오티드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오티드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1, 3, 5, 7, 9 내지 11, 및 13에서의 2'-F 변형, 및 위치 2, 4, 6, 8, 12, 및 14 내지 21에서의 2'-OMe 변형; 및
(iv) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 위치 1, 3, 5 내지 7, 9, 11 내지 13, 15, 17 내지 19, 및 21 내지 23에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 2, 4, 8, 10, 14, 16, 및 20에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오티드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오티드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오티드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1, 2, 4, 6, 8, 12, 14, 15, 17, 및 19 내지 21에서의 2'-OMe 변형 및 위치 3, 5, 7, 9 내지 11, 13, 16, 및 18에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 25개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 위치 1, 4, 6, 7, 9, 11 내지 13, 15, 17, 및 19 내지 23에서의 2'-OMe 변형 및 위치 2, 3, 5, 8, 10, 14, 16, 및 18에서의 2'-F 변형, 및 위치 24 및 25에서의 데옥시-뉴클레오티드(예를 들어, dT)(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오티드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오티드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 4개의 뉴클레오티드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 6, 8 및 12 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 7 및 9 내지 11에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 위치 1, 3 내지 5, 7, 8, 10 내지 13, 15, 및 17 내지 23에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 2, 6, 9, 14, 및 16에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오티드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오티드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오티드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 6, 8 및 12 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 7 및 9 내지 11에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 23개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 위치 1, 3 내지 5, 7, 10 내지 13, 15, 및 17 내지 23에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 2, 6, 8, 9, 14, 및 16에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오티드 위치 21과 22 사이, 및 뉴클레오티드 위치 22와 23 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단에서 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오티드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
또 다른 특정 구현예에서, 본 발명의 RNAi 제제는 다음을 포함하며:
(a) 다음을 갖는 센스 가닥:
(i) 19개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 3'-말단에 부착된 ASGPR 리간드로서, 상기 ASGPR 리간드는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 3개의 GalNAc 유도체를 포함하는, ASGPR 리간드;
(iii) 위치 1 내지 4, 6 및 10 내지 19에서의 2'-OMe 변형 및 위치 5 및 7 내지 9에서의 2'-F 변형; 및
(iv) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 및 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
및
(b) 다음을 갖는 안티센스 가닥:
(i) 21개 뉴클레오티드의 길이;
(ii) 위치 1, 3 내지 5, 7, 10 내지 13, 15, 및 17 내지 21에서의 2'-OMe 변형, 및 위치 2, 6, 8, 9, 14, 및 16에서의 2'-F 변형(5' 말단으로부터 계수함); 및
(iii) 뉴클레오티드 위치 1과 2 사이, 뉴클레오티드 위치 2와 3 사이, 뉴클레오티드 위치 19와 20 사이, 및 뉴클레오티드 위치 20과 21 사이의 포스포로티오에이트 뉴클레오티드 간 연결(5' 말단으로부터 계수함);
여기서, RNAi 제제는 안티센스 가닥의 3'-말단에 2개의 뉴클레오티드 오버행을, 그리고 안티센스 가닥의 5'-말단에 둔화 말단을 갖는다.
소정의 구현예에서, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 iRNA는 표 3, 표 5 또는 표 6에 열거된 제제로부터 선택된 제제이다. 이들 제제는 리간드를 추가로 포함할 수 있다.
Ⅶ. 리간드
본 발명의 방법에 사용하기 위한 이중 가닥 RNAi 제제는, 예를 들어, 세포 내로 iRNA의 활성, 세포 분포, 또는 세포 흡수를 향상시키는 하나 이상의 리간드, 모이어티, 또는 접합체에 선택적으로 접합될 수 있다. 리간드는 3'-말단, 5'-말단, 또는 두 말단 모두에서 센스 가닥, 안티센스 가닥, 또는 두 가닥 모두에 부착될 수 있다. 예를 들어, 리간드는 센스 가닥에 접합될 수 있다. 일부 구현예에서, 리간드는 센스 가닥의 3'-말단에 접합된다.
이러한 모이어티는 콜레스테롤 모이어티와 같은 지질 모이어티를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다(문헌참조: Letsinger 등, Proc. Natl. Acid. Sci. USA, 1989, 86: 6553~6556). 다른 구현예에서, 리간드는 콜산(문헌참조: Manoharan 등, Biorg. Med. Chem. Let., 1994, 4:1053~1060), 티오에테르, 예를 들어, 베릴-S-트리틸티올(문헌참조: Manoharan 등, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306~309; Manoharan 등, Biorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765~2770), 티오콜레스테롤(문헌참조: Oberhauser 등, Nucl. Acids Res., 1992, 20:533~538), 지방족 사슬, 예를 들어, 도데칸디올 또는 운데실 잔기(문헌참조: Saison-Behmoaras 등, EMBO J, 1991, 10:1111~1118; Kabanov 등, FEBS Lett., 1990, 259:327~330; Svinarchuk 등, Biochimie, 1993, 75:49~54), 인지질, 예를 들어, 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸-암모늄 1,2-디-O-헥사데실-rac-글리세로-3-포스포네이트(문헌참조: Manoharan 등, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651~3654; Shea 등, Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777~3783), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 사슬(문헌참조: Manoharan 등, Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969~973), 또는 아다만탄 아세트산(문헌참조: Manoharan 등, Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651~3654), 또는 손바닥 모이어티(문헌참조: Mishra 등, Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229~237), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐옥시콜레스테롤 모이어티(문헌참조: Crooke 등, J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923~937)이다. 일 구현예에서, 리간드는 GalNAc 리간드이다. 특히 일부 구현예에서, 리간드는 GalNAc3이다. 리간드는 개재 테더를 통해 직접적으로 또는 간접적으로 결합, 바람직하게는 공유 결합된다.
소정의 구현예에서, 리간드는 이것이 도입되는 iRNA 제제의 분포, 표적화 또는 수명을 변경시킨다. 바람직한 구현예에서, 리간드는, 예를 들어, 이러한 리간드가 부재하는 종과 비교하여 선택된 표적, 예를 들어, 분자, 세포 또는 세포 유형, 구획, 예를 들어 세포 또는 기관 구획, 조직, 기관 또는 신체의 영역에 대해 증진된 친화성을 제공한다. 바람직한 리간드는 듀플렉스된 핵산에서 듀플렉스 쌍형성에 관여하지 않는다.
리간드는 천연 발생 물질, 예컨대 단백질(예를 들어, 인간 혈청 알부민(HSA), 저밀도 지질단백질(LDL) 또는 글로불린); 탄수화물(예를 들어, 덱스트란, 풀루란, 키틴, 키토산, 이눌린, 시클로덱스트린, N-아세틸글루코사민, N-아세틸갈락토사민 또는 히알루론산); 또는 지질을 포함할 수 있다. 리간드는 또한 재조합 또는 합성 분자, 예컨대 합성 중합체, 예를 들어 합성 폴리아미노산일 수 있다. 폴리아미노산의 예는 폴리라이신(PLL), 폴리 L-아스파르트산, 폴리 L-글루탐산, 스티렌-말레산 무수물 공중합체, 폴리(L- 락티드-코-글리콜화된) 공중합체, 디비닐 에테르-말레산 무수물 공중합체, N-(2-하이드록시프로필)메타크릴아미드 공중합체 (HMPA), 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리비닐 알코올(PVA), 폴리우레탄, 폴리(2-에틸아크릴산), N-이소프로필아크릴아미드 중합체 또는 폴리포스파진을 포함한다. 폴리아민의 예는 다음을 포함한다: 폴리에틸렌이민, 폴리리신(PLL), 스퍼민, 스퍼미딘, 폴리아민, 슈도펩타이드-폴리아민, 펩티도미메틱 폴리아민, 덴드리머 폴리아민, 아르기닌, 아미딘, 프로타민, 양이온성 지질, 양이온성 포르피린, 폴리아민의 4차 염 또는 알파 나선 펩타이드.
리간드는 또한 표적화 군, 예를 들어, 세포 또는 조직 표적화 제제, 예를 들어, 렉틴, 당단백질, 지질 또는 단백질, 예를 들어, 콩팥 세포와 같은 특정 세포 유형에 결합하는 항체를 포함할 수 있다. 표적화 군은 티로트로핀, 멜라노트로핀, 렉틴, 당단백질, 계면활성제 단백질 A, 뮤신 탄수화물, 다가 락토스, 다가 갈락토스, N-아세틸-갈락토사민, N-아세틸-글루코사민 다가 만노스, 다가 푸코스, 글리코실화된 폴리아미노산, 다가 갈락토스, 트랜스페린, 비스포스포네이트, 폴리글루타메이트, 폴리아스파르테이트, 지질, 콜레스테롤, 스테로이드, 담즙산, 폴레이트, 비타민 B12, 비타민 A, 비오틴, 또는 RGD 펩타이드 또는 RGD 펩타이드 모사체일 수 있다. 소정의 구현예에서, 리간드는 다가 갈락토스, 예를 들어, N-아세틸-갈락토사민이다.
리간드의 다른 예는 염료, 중간증량제(예를 들어, 아크리딘), 가교제(예를 들어, 소랄렌, 미토마이신 C), 포르피린(TPPC4, 텍사피린, 삭피린), 다환 방향족 탄화수소(예를 들어, 페나진, 디히드로페나진), 인공 엔도뉴클레아제(예를 들어, EDTA), 친유성 분자, 예를 들어, 콜레스테롤, 콜산, 아다만탄 아세트산, 1-피렌 부티르산, 디하이드로테스토스테론, 1,3-Bis-O(헥사데실)글리세롤, 게라닐옥시헥실기, 헥사데실글리세롤, 보르놀, 멘톨, 1,3-프로판디올, 헵타데실기, 팔미트산, 미리스트산,O3-(올레오일)리소콜산, O3-(올레오일)콜레산, 디메톡시트리틸, 또는 페녹사진) 및 펩타이드 접합체(예를 들어, 안테나피디아 펩타이드, Tat 펩타이드), 알킬화제, 포스페이트, 아미노, 메르캅토, PEG(예를 들어, PEG-40K), MPEG, [MPEG]2, 폴리아미노, 알킬, 치환된 알킬, 방사성 표지된 마커, 효소, 합텐(예를 들어, 비오틴), 수송/흡수 촉진자(예를 들어, 아스피린, 비타민 E, 엽산), 합성 리보뉴클레아제(예를 들어, 이미다졸, 비스이미다졸, 히스타민, 이미다졸 클러스터, 아크리딘-이미다졸 접합체, 테트라아자마크로사이클의 Eu3+ 복합체), 디니트로페닐, HRP, 또는 AP를 포함한다.
리간드는 단백질, 예를 들어, 당단백질, 또는 펩타이드, 예를 들어, 공동-리간드에 대한 특이적 친화성을 갖는 분자, 또는 항체, 예를 들어, 간세포와 같은 특정 세포 유형에 결합하는 항체일 수 있다. 리간드는 또한 호르몬 및 호르몬 수용체를 포함할 수 있다. 이들은 또한 비-펩타이드 종, 예를 들어, 지질, 렉틴, 탄수화물, 비타민, 조인자, 다가 락토스, 다가 갈락토스, N- 아세틸-갈락토사민, N-아세틸-글루코사민 다가 만노스 또는 다가 푸코스를 포함할 수 있다. 리간드는, 예를 들어, 리포폴리사카라이드, p38 MAP 키나제의 활성화제 또는 NF-κB의 활성화제일 수 있다.
리간드는 예를 들어, 미세소관, 마이크로필라멘트 또는 중간 필라멘트를붕괴시킴에 의해 세포의 세포골격을, 예를 들어, 파괴함으로써 iRNA 제제의 세포로의 흡수를 증가시킬 수 있는 물질, 예를 들어 약물일 수 있다. 약물은, 예를 들어, 탁솔, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 시토칼라신, 노코다졸, 자플라키놀리드, 라트린쿨린 A, 팔로이딘, 스윈홀리드 A, 인다노신, 또는 미오세빈일 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 것과 같은 iRNA에 부착된 리간드는 약동학적 조절제(PK 조절제)로서 작용한다. PK 조절제는 친유성체, 담즙산, 스테로이드, 인지질 유사체, 펩타이드, 단백질 결합제, PEG, 비타민 등을 포함한다. 예시적인 PK 조절제는 콜레스테롤, 지방산, 콜산, 리토콜산, 디알킬글리세리드, 디아실글리세리드, 인지질, 스핑고지질, 나프록센, 이부프로펜, 비타민 E, 비오틴 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 다수의 포스포로티오에이트 결합을 포함하는 올리고뉴클레오티드는 또한 혈청 단백질에 결합하는 것으로 공지되어 있고, 따라서, 짧은 올리고뉴클레오티드, 예를 들어, 골격 내 다수의 포스포로티오에이트 결합을 포함하는 약 5개 염기, 10개 염기, 15개 염기 또는 20개 염기의 올리고뉴클레오티드도 본 발명에 리간드로서(예를 들어, PK 조절 리간드로서) 적용될 수 있다. 또한, 혈청 성분(예를 들어, 혈청 단백질)에 결합하는 압타머는 또한 본 명세서에 기술된 구현예에서 PK 조절 리간드로서 사용하기에 적합하다.
발명의 리간드-접합 iRNA는 (하기에서 기술하는 것과 같이) 올리고뉴클레오티드 상으로의 결합 분자의 부착으로부터 유래된 것과 같은 펜던트 반응성 관능기를 함유하는 올리고뉴클레오티드의 사용에 의해 합성될 수 있다. 이러한 반응성 올리고뉴클레오티드는 상업적으로 이용가능한 리간드, 임의의 다양한 보호기를 보유하는 합성된 리간드, 또는 이에 부착된 결합 모이어티를 갖는 리간드와 직접 반응할 수 있다.
본 발명의 접합체에 사용되는 올리고뉴클레오티드는 널리 공지된 고체상 합성 기술을 통해 편리하고 통상적으로 제조될 수 있다.
본 발명의 리간드-접합된 iRNA 및 리간드-분자 함유 서열-특이적 연결된 뉴클레오시드에서, 올리고뉴클레오티드 및 올리고뉴클레오시드는 표준 뉴클레오티드 또는 뉴클레오시드 전구체, 또는 이미 연결 모이어티를 보유하는 뉴클레오티드 또는 뉴클레오시드 접합 전구체, 이미 리간드 분자를 보유하는 리간드-뉴클레오티드 또는 뉴클레오시드-접합체 전구체, 또는 비-뉴클레오시드 리간드-보유 빌딩 블록을 사용하여 적합한 DNA 합성기 상에서 제조될 수 있다.
이미 연결 모이어티를 보유하는 뉴클레오시드 접합 전구체를 사용하는 경우, 서열-특이적 연결된 뉴클레오시드의 합성은 통상적으로 완료되고, 리간드 분자는 연결 모이어티와 반응하여 리간드-접합 올리고뉴클레오티드를 형성한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 연결된 뉴클레오시드는 상업적으로 이용가능하고 올리고뉴클레오티드 합성에 통상적으로 사용되는 표준 포스포르아미디트 및 비표준 포스포르아미디트에 추가하여 리간드-뉴클레오시드 접합체로부터 유래된 포스포르아미디트를 사용하여 자동화된 합성기에 의해 합성된다.
A. 지질 접합체
소정의 구현예에서, 리간드 또는 접합체는 지질 또는 지질 기반 분자이다. 그러한 지질 또는 지질 기반 분자는 바람직하게는 혈청 단백질, 예를 들어, 인간 혈청 알부민(HSA)에 결합한다. HSA 결합 리간드는 표적 조직, 예를 들어 신체의 비-신장 표적 조직으로의 접합체의 분포를 가능하게 한다. 예를 들어, 표적 조직은 간의 실질 세포를 포함하는 간일 수 있다. HSA에 결합할 수 있는 다른 분자는 또한 리간드로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 나프록센 또는 아스피린이 사용될 수 있다. 지질 또는 지질 기반 리간드는 (a) 접합체의 분해에 대한 내성을 증가시킬 수 있거나, (b) 표적 세포 또는 세포막으로의 표적화 또는 수송을 증가시킬 수 있거나, (c) 혈청 단백질, 예를 들어, HSA로의 결합을 조정하기 위해 사용될 수 있다.
지질 기반 리간드를 사용하여 접합체의 표적 조직으로의 결합을 억제, 예를 들어, 조절할 수 있다. 예를 들어, 보다 강하게 HSA에 결합하는 지질 또는 지질 기반 리간드는 콩팥으로 표적화될 가능성이 적고 따라서 신체로부터 제거될 가능성이 적다. HSA에 덜 강하게 결합하는 지질 또는 지질 기반 리간드를 사용하여 접합체를 콩팥에 표적화시킬 수 있다.
소정의 구현예에서, 지질 기반 리간드는 HSA에 결합한다. 바람직하게는, 이는 접합체가 비-신장 조직에 바람직하게 분포되기에 충분한 친화도로 HSA에 결합한다. 그러나, 친화도는 HSA-리간드 결합이 역행될 수 없을 정도로 강하지 않는 것이 바람직하다.
다른 구현예에서, 지질 기반 리간드는 HSA에 약하게 결합하거나 전혀 결합하지 않아, 접합체가 신장에 바람직하게 분포될 것이다. 신장 세포를 표적으로 하는 다른 모이어티는 또한 지질 기반 리간드 대신에 또는 이에 추가로 사용될 수 있다.
또 다른 양태에서, 리간드는 모이어티, 예를 들어, 표적 세포, 예를 들어, 증식 세포에 의해 흡수되는 비타민이다. 이들은 특히 예를 들어 악성 또는 비악성 유형의 원치 않는 세포 증식을 특징으로 하는 장애, 예를 들어 암세포를 치료하는 데 유용하다. 예시적인 비타민은 비타민 A, E, 및 K를 포함한다. 다른 예시적인 비타민은 B 비타민, 예를 들어, 엽산, B12, 리보플라빈, 비오틴, 피리독살 또는 간 세포와 같은 표적 세포에 의해 흡수되는 다른 비타민 또는 영양물을 포함한다. 또한 HSA 및 저밀도 지질단백질(LDL)이 포함된다.
B. 세포 투과 제제
또 다른 양태에서, 리간드는 세포 투과 제제, 바람직하게는 나선형 세포 투과 제제이다. 바람직하게는, 제제는 양친매성이다. 예시적인 제제는 tat 또는 안테노페디아와 같은 펩타이드이다. 제제가 펩타이드인 경우, 이는 펩티딜모사체, 인버토머, 비펩타이드 또는 슈도-펩타이드 결합 및 D-아미노산의 사용을 포함하여 변형될 수 있다. 바람직하게는 나선형 제제는 바람직하게 친유성 및 소유성 상을 갖는 알파-나선형 제제이다.
리간드는 펩타이드 또는 펩티도모사체일 수 있다. (본원에서 올리고펩티도모사체라고도 지칭되는) 펩티도모사체는 천연 펩타이드와 유사한 한정된 3차원 구조로 폴딩할 수 있는 분자이다. iRNA 제제로의 펩타이드 및 펩티도모사체의 부착은 예를 들어, 세포 인지 및 흡착을 증진시킴에 의해 iRNA의 약동학적 분포에 영향을 미칠 수 있다. 펩타이드 또는 펩티도모사체 모이어티는 약 5~50개 아미노산 길이, 예를 들어, 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50개 아미노산 길이일 수 있다.
펩타이드 또는 펩티도모사체는 예를 들어, 세포 투과 펩타이드, 양이온성 펩타이드, 양친매성 펩타이드 또는 소수성 펩타이드(예를 들어, 주로 Tyr, Trp, 또는 Phe로 이루어진)일 수 있다. 펩타이드 모이어티는 덴드리머 펩타이드, 구속된 펩타이드 또는 가교결합된 펩타이드일 수 있다. 또 다른 대안에서, 펩타이드 모이어티는 소수성 막 전좌 서열(MTS)을 포함할 수 있다. 예시적인 소수성 MTS-함유 펩타이드는 아미노산 서열 AAVALLPAVLLALLAP(서열번호 13)를 갖는 RFGF이다. 소수성 MTS를 함유하는 RFGF 유사체(예를 들어, 아미노산 서열 AALLPVLLAAP(서열번호 14))는 또한 표적화 모이어티일 수 있다. 펩타이드 모이어티는 "전달" 펩타이드일 수 있으며, 이는 펩타이드, 올리고뉴클레오티드, 및 단백질을 포함하는 큰 극성 분자를 세포막을 가로질러 운반할 수 있다. 예를 들어, HIV Tat 단백질(GRKKRRQRRRPPQ(서열번호 15) 및 드로소필라 안테나피디아 단백질(RQIKIWFQNRRMKWKK(서열번호 16)) 유래의 서열은 전달 펩타이드로서 기능할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 펩타이드 또는 펩티도모사체는 DNA의 무작위 서열, 예를 들어 파지-디스플레이 라이브러리, 또는 OBOC(one-bead-one-compound) 조합 라이브러리로부터 식별된 펩타이드에 의해 암호화될 수 있다(문헌참조: Lam 등, Nature, 354:82~84, 1991). 세포 표적화 목표를 위해 혼입된 단량체 단위를 통해 dsRNA 제제에 테터링된 펩타이드 또는 펩티도모사체의 예는 아르기닌-글리신-아스파르트산(RGD)-펩타이드, 또는 RGD 모방체이다. 펩타이드 모이어티는 길이가 약 5개의 아미노산 내지 약 40개의 아미노산 범위일 수 있다. 펩타이드 모이어티는 예를 들어, 안정성을 증가시키거나 형태적 성질을 지시하기 위해 구조적 변형을 가질 수 있다. 하기 기술된 임의의 구조적 변형이 사용될 수 있다.
발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 RGD 펩타이드는 선형 또는 환형일 수 있고, 변형되어, 예를 들어, 글리코실화되거나 메틸화되어 특이적 조직(들)로의 표적화를 촉진시킬 수 있다. RGD-함유 펩타이드 및 펩티도모사체는 합성 RGD 모방체 뿐만 아니라 D-아미노산을 포함할 수 있다. RGD에 추가로, 당업자는 인테그린 리간드를 표적화하는 다른 모이어티를 사용할 수 있다. 이러한 리간드의 바람직한 접합체는 PECAM-1 또는 VEGF를 표적화한다.
"세포 투과 펩타이드"는 세포, 예를 들어, 미생물 세포, 예컨대, 세균 또는 진균류 세포, 또는 포유동물 세포, 예컨대, 인간 세포를 투과할 수 있다. 미생물 세포-투과 펩타이드는 예를 들어, α-나선 선형 펩타이드(예를 들어, LL-37 또는 세로핀 P1), 디설파이드 결합-함유 펩타이드(예를 들어, α-데펜신, β-데펜신 또는 박테네신), 또는 단지 하나 또는 2개의 주요 아미노산을 함유하는 펩타이드(예를 들어, PR-39 또는 인돌리시딘)일 수 있다. 세포 투과 펩타이드는 또한 핵 국소화 신호(NLS)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 세포 투과 펩타이드는 HIV-1 gp41의 융합 펩타이드 도메인 및 SV40 대형 T 항원의 NLS로부터 유래된 MPG와 같은 이분형 양친매성 펩타이드일 수 있다(문헌참조: Simeoni 등, Nucl. Acids Res. 31:2717~2724, 2003).
C. 탄수화물 접합체
본 발명의 조성물 및 방법의 일부 구현예에서, iRNA는 추가로 탄수화물을 포함한다. 탄수화물 접합된 iRNA는 본 명세서에 기술된 것과 같이 생체 내 치료학적 용도에 적합한 조성물 뿐만 아니라 핵산의 생체 내 전달에 유리하다. 본 명세서에서 사용되는 것과 같이, "탄수화물"은 각각의 탄소 원자에 결합된 산소, 질소 또는 황 원자와 함께 적어도 6개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 단당류 유닛(선형, 분지형 또는 환형일 수 있는)으로 이루어진 탄수화물 자체인 화합물; 또는 이의 일부로서 각각의 탄소 원자에 결합된 산소, 질소 또는 황 원자와 함께 각각 적어도 6개의 탄소 원자를 갖는 하나 이상의 단당류 유닛(선형, 분지형 또는 환형일 수 있는)으로 이루어진 탄수화물 모이어티를 갖는 화합물을 지칭한다. 대표적인 탄수화물은 당(모노-, 디-, 트리-, 및 약 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 단당류 유닛을 함유하는 올리고사카라이드) 및 폴리사카라이드, 예를 들어, 전분, 글리코겐, 셀룰로스 및 폴리사카라이드 검을 포함한다. 특이적 단당류는 C5 이상(예를 들어, C5, C6, C7, 또는 C8) 당을 포함하고; 이당류 및 삼당류는 2개 또는 3개의 단당류 유닛(예를 들어, C5, C6, C7, 또는 C8)을 갖는 당을 포함한다.
소정의 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 탄수화물 접합체는 단당류이다.
일 구현예에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 탄수화물 접합체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
또 다른 구현예에서, 발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 탄수화물 접합체는 단당류이다. 일 구현예에서, 단당류는 다음과 같은 N-아세틸갈락토사민이다
본 명세서에 기술된 구현예에 사용하기 위한 또 다른 대표적인 탄수화물 접합체는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지 않고,
X 또는 Y 중 하나가 올리고뉴클레오티드인 경우, 다른 하나는 수소이다.
일부 구현예에서, 적합한 리간드는 국제특허번호 제2019/055633호에 기술된 리간드이고, 이의 전문이 본원에 참조로 인용된다. 일 구현예에서, 리간드는 하기의 구조를 포함한다.
본 발명의 소정의 구현예에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 1가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 제제에 부착된다. 일부 구현예에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 2가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 제제에 부착된다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, GalNAc 또는 GalNAc 유도체는 3가 링커를 통해 본 발명의 iRNA 제제에 부착된다.
일 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 RNAi 제제는 iRNA 제제, 예를 들어, dsRNA 제제의 센스 가닥의 5'말단, 또는 본 명세서에 기술된 이중 표적화 RNAi 제제의 하나 또는 둘 모두의 센스 가닥의 5'말단에 부착된 하나의 GalNAc 또는 GalNAc 유도체를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 이중 가닥 RNAi 제제는 다수의(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 또는 6개) GalNAc 또는 GalNAc 유도체를 포함하고, 각각은 독립적으로 다수의 1가 링커를 통해 이중가닥 RNAi 제제의 다수의 뉴클레오티드에 부착된다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 본 발명의 iRNA 제제의 2개의 가닥이 하나의 가닥의 3'-말단과 별개의 다른 가닥의 5'-말단 사이에 중단되지 않은 뉴클레오티드 사슬에 의해 연결되어 다수의 쌍을 형성하지 않은 뉴클레오티드를 포함하는 헤어핀 루프를 형성하는 하나의 더 큰 분자의 일부인 경우, 헤어핀 루프 내의 각각의 쌍을 형성하지 않은 뉴클레오티드는 1가 링커를 통해 부착된 GalNAc 또는 GalNAc 유도체를 독립적으로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 탄수화물 접합체는 전술된 하나 이상의 추가 리간드, 예를 들어 PK 조절제 또는 세포 투과 펩타이드를 추가로 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 사용하기에 적합한 추가 탄수화물 접합체 및 링커는 PCT 공개번호 국제특허번호 제2014/179620호 및 국제특허번호 제2014/179627호에 기술된 것들을 포함하고, 이의 각각의 전문은 본원에 참조로 인용된다.
D. 링커
일부 구현예에서, 본원에 기술된 접합체 또는 리간드는 절단될 수 있거나 절단될 수 없는 다양한 링커로 iRNA 올리고뉴클레오타이에 부착될 수 있다.
용어 "링커" 또는 "결합 기"는 화합물의 두 부분을 연결하는, 예를 들어 화합물의 두 부분을 공유적으로 부착하는 유기 모이어티를 의미한다. 링커는 통상적으로 직접 결합 또는 산소 또는 황과 같은 원자, NR8, C(O), C(O)NH, SO, SO2, SO2NH와 같은 단위 또는 원자 사슬, 예를 들어, 하지만 비제한적으로, 치환되거나 비치환된 알킬, 치환되거나 비치환된 알케닐, 치환되거나 비치환된 알키닐, 아릴알킬, 아릴알케닐, 아릴알키닐, 헤테로아릴알킬, 헤테로아릴알케닐, 헤테로아릴알키닐, 헤테로사이클릴알킬, 헤테로사이클릴알케닐, 헤테로사이클릴알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로사이클릴, 시클로알킬, 시클로알케닐, 알킬아릴알킬, 알킬아릴알케닐, 알킬아릴알키닐, 알케닐아릴알킬, 알케닐아릴알케닐, 알케닐아릴알키닐, 알키닐아릴알킬, 알키닐아릴알케닐, 알키닐아릴알키닐, 알킬헤테로아릴알킬, 알킬헤테로아릴알케닐, 알킬헤테로아릴알키닐, 알케닐헤테로아릴알킬, 알케닐헤테로아릴알케닐, 알케닐헤테로아릴알키닐, 알키닐헤테로아릴알킬, 알키닐헤테로아릴알케닐, 알키닐헤테로아릴알키닐, 알킬헤테로사이클릴알킬, 알킬헤테로사이클릴알케닐, 알킬헤테로사이클릴알키닐, 알케닐헤테로사이클릴알킬, 알케닐헤테로사이클릴알케닐, 알케닐헤테로사이클릴알키닐, 알키닐헤테로사이클릴알킬, 알키닐헤테로사이클릴알케닐, 알키닐헤테로사이클릴알키닐, 알킬아릴, 알케닐아릴, 알키닐아릴, 알킬헤테로아릴, 알케닐헤테로아릴, 알키닐헤테로아릴을 포함하고, 여기서 하나 이상의 메틸렌은 O, S, S(O), SO2, N(R8), C(O), 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴, 또는 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릭에 의해 중단되거나 종결될 수 있고; 여기서 R8은 수소, 아실, 지방족 또는 치환된 지방족이다. 일 구현예에서, 링커는 약 1~24개 원자, 2~24, 3~24, 4~24, 5~24, 6~24, 6~18, 7~18, 8~18, 7~17, 8~17, 6~16, 7~17, 또는 8~16개 원자이다.
절단성 연결기는 세포 외부에서는 충분히 안정하지만, 표적 세포로 진입 시에 절단되어 링커가 함께 유지하고 있던 2개의 부분을 방출하는 기이다. 바람직한 구현예에서, 절단성 연결기는 대상체의 혈액에서 또는 제2 참조 조건(예를 들어, 혈액 또는 혈청 중에서 발견되는 조건을 모방하거나 나타내도록 선택될 수 있는) 하에서 표적 세포에서 또는 제1 참조 조건(예를 들어, 세포내 조건을 모방하거나 나타내도록 선택될 수 있는) 하에서 적어도 약 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 이상 또는 적어도 100배 더 신속하게 절단된다.
절단성 연결기는 절단제, 예를 들어, pH, 산화환원 전위 또는 분해 분자의 존재에 민감하다. 일반적으로, 절단제는 혈청 또는 혈액에서 보다 세포 내부에서 보다 높은 수준 또는 활성인 상태로 보다 만연해 있거나 발견된다. 그러한 분해제의 예에는 다음이 포함된다: 예를 들어, 머캅탄과 같은 산화 또는 환원 효소 또는 환원제를 포함하며, 환원에 의해 산화환원 절단 가능한 결합 기를 분해시킬 수 있는 세포에 존재하는, 특정 기질에 대해 선택되거나 어떠한 기질 특이성을 갖지 않는 산화환원제; 에스테라제; 엔도좀 또는 산성 환경을 생성할 수 있는 제제, 예를 들어, 5 이하의 pH를 초래하는 것들; 일반산, (기질 특이적일 수 있는) 펩티다제 및 포스파타아제로서 작용함으로써 산 절단 가능한 결합 기를 가수분해하거나 분해할 수 있는 효소.
절단 가능한 결합 기, 예컨대 디설파이드 결합은 pH에 민감할 수 있다. 인간 혈청의 pH는 7.4이고, 평균 세포 내 pH는 약간 더 낮아 약 7.1~7.3 범위이다. 엔도좀은 5.5~6.0의 범위에서 보다 산성의 pH를 갖고, 리소좀은 약 5.0에서 심지어 보다 산성의 pH를 갖는다. 일부 링커는 바람직한 pH에서 절단되어 세포 내부의 리간드로부터 양이온성 지질을 방출하거나 세포의 목적하는 구획으로 양이온성 지질을 방출하는 절단가능한 연결기를 갖는다.
링커는 특정 효소에 의해 절단될 수 있는 절단가능한 연결기를 포함할 수 있다. 링커로 혼입된 절단 가능한 결합 기의 유형은 표적이 되는 세포에 좌우될 수 있다. 예를 들어, 간-표적화 리간드는 에스테르 기를 포함하는 링커를 통해 양이온성 지질에 결합될 수 있다. 간 세포는 에스테라제가 풍부하며, 따라서 링커는 에스테라제가 풍부하지 않은 세포 유형에서 보다 간 세포에서 보다 효율적으로 절단된다. 에스테라제가 풍부한 다른 세포 유형은 폐, 신피질 및 고환의 세포를 포함한다.
펩타이드 결합을 함유하는 링커는 간 세포 및 활막세포와 같은 펩티다아제가 풍부한 세포 유형을 표적으로 하는 경우에 사용될 수 있다.
일반적으로, 후보 절단 가능한 결합 기의 적합성은 후보 연결기를 절단하는 분해제의 능력(또는 조건)을 시험함으로써 평가될 수 있다. 또한 혈액 내에서 또는 다른 비표적 조직과 접촉할 때 절단에 저항하는 능력에 대해 후보 절단 가능한 결합 기를 테스트하는 것이 또한 바람직할 것이다. 따라서, 당업자는 제1 조건과 제2 조건 사이의 절단에 대한 상대적인 감수성을 결정할 수 있고, 여기서 제1 조건은 표적 세포에서의 절단을 나타내도록 선택되고, 제2 조건은 다른 조직 또는 생물학적 유체, 예를 들어 혈액 또는 혈청 내의 절단을 나타내도록 선택된다. 평가는 무세포 시스템, 세포, 세포 배양물, 기관 또는 조직 배양물 또는 전체 동물에서 수행될 수 있다. 무세포 또는 배양 조건에서 초기 평가를 수행하고 전체 동물에서의 추가적인 평가에 의해 확인하는 것이 유용할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 유용한 후보 화합물은 혈액 또는 혈청(또는 세포외 조건을 모방하도록 선택된 시험관내 조건 하에서)과 비교하여 세포(또는 세포내 조건을 모방하도록 선택된 시험관내 조건 하에서)에서 적어도 약 2, 4, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100배 더 신속하게 절단된다.
i. 산화환원 절단성 연결기
소정의 구현예에서, 절단성 연결기는 환원 또는 산화 시 절단되는 산화환원 절단성 연결기이다. 환원적으로 절단 가능한 결합 기의 예는 디설파이드 결합기(-S-S-)이다. 후보 절단 가능한 결합 기가 적합한 "환원적으로 절단 가능한 결합 기"인지 또는 예를 들어 특정 iRNA 모이어티 및 특정 표적화제와 사용하기에 적합한지의 여부를 결정하기 위해, 당업자는 본 명세서에 기술된 방법을 살펴볼 수 있다. 예를 들어, 후보물은 세포, 예를 들어 표적 세포에서 관찰되는 절단률을 모방하는, 당업계에 공지된 시약을 사용하여, 디티오트레이톨(DTT) 또는 기타 환원제를 사용한 인큐베이션에 의해 평가될 수 있다. 후보물은 또한 혈액 또는 혈청 조건을 모방하도록 선택된 조건 하에서 평가될 수 있다. 하나에서, 후보 화합물은 혈액에서 최대 약 10%만큼 절단된다. 다른 구현예에서, 유용한 후보 화합물은 혈액(또는 세포외 조건을 모방하도록 선택된 시험관내 조건 하에서)과 비교하여, 세포(또는 세포내 조건을 모방하도록 선택된 시험관내 조건 하에서)에서 적어도 약 2, 4, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 약 100배 더 신속하게 분해된다. 후보 화합물의 절단률은 세포내 배지를 모방하도록 선택된 조건 및 세포외 배지를 모방하도록 선택된 조건과 비교하여 표준 효소 동역학 검정을 사용하여 결정될 수 있다.
ii. 포스페이트 기반 절단 가능한 결합 기
다른 구현예에서, 절단 가능한 링커는 포스페이트 기반 절단 가능한 결합 기를 포함한다. 표스페이트 기반 절단 가능한 결합 기는 포스페이트 기를 분해하거나 가수분해하는 제제에 의해 절단된다. 세포에서 포스페이트 군을 절단하는 제제의 예는 세포의 포스파타제와 같은 효소이다. 포스페이트 기반 연결기의 예는 -O-P(O)(ORk)-O-, -O-P(S)(ORk)-O-, -O-P(S)(SRk)-O-, -S-P(O)(ORk)-O-, -O-P(O)(ORk)-S-, -S-P(O)(ORk)-S-, -O-P(S)(ORk)-S-, -S-P(S)(ORk)-O-, -O-P(O)(Rk)-O-, -O-P(S)(Rk)-O-, -S-P(O)(Rk)-O-, -S-P(S)(Rk)-O-, -S-P(O)(Rk)-S-, -O-P(S)( Rk)-S-이다. 바람직한 구현예는 -O-P(O)(OH)-O-, -O-P(S)(OH)-O-, -O-P(S)(SH)-O-, -S-P(O)(OH)-O-, -O-P(O)(OH)-S-, -S-P(O)(OH)-S-, -O-P(S)(OH)-S-, -S-P(S)(OH)-O-, -O-P(O)(H)-O-, -O-P(S)(H)-O-, -S-P(O)(H)-O, -S-P(S)(H)-O-, -S-P(O)(H)-S-, 및 -O-P(S)(H)-S-이다. 바람직한 구현예는 -O-P(O)(OH)-O-이다. 이들 후보물은 전술된 것들과 유사한 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
iii. 산 절단성 연결기
다른 구현예에서, 절단성 링커는 산 절단성 연결기를 포함한다. 산 절단성 연결기는 산성 조건 하에서 절단되는 연결기이다. 바람직한 구현예에서, 산 절단성 연결기는 pH가 약 6.5 이하(예를 들어, 약 6.0, 5.5, 5.0 이하)인 산성 환경에서 또는 일반 산으로서 작용할 수 있는 효소와 같은 제제에 의해 절단된다. 세포에서, 엔도좀 및 리소좀과 같은 특정 낮은 pH 소기관은 산 절단성 연결기에 대한 절단 환경을 제공할 수 있다. 산 절단성 연결기의 예는 하이드라존, 에스테르, 및 아미노산의 에스테르를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 산 절단가능한 군은 화학식 -C=NN-, C(O)O, 또는 -OC(O)를 가질 수 있다. 바람직한 구현예는 에스테르의 산소에 부착된 탄소(알콕시 군)가 아릴 군, 치환된 알킬 군 또는 3급 알킬 군, 예를 들어, 디메틸 펜틸 또는 t-부틸인 경우이다. 이들 후보물은 전술된 것들과 유사한 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
iv. 에스테르 기반 결합 기
다른 구현예에서, 절단 가능한 링커는 에스테르 기반 절단 가능한 결합 기를 포함한다. 에스테르 기반 절단 가능한 결합 기는 세포 내 에스테라제 및 아미다제와 같은 효소에 의해 절단된다. 에스테르 기반 절단 가능한 결합 기의 예는 알킬렌, 알케닐렌 및 알키닐렌 기의 에스테르를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 에스테르 절단 가능한 결합 기는 일반 화학식 -C(O)O- 또는 -OC(O)-를 갖는다. 이들 후보물은 전술된 것들과 유사한 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
v. 펩타이드 기반 절단 기
또 다른 구현예에서, 절단 가능한 링커는 펩타이드 기반 절단 가능한 결합 기를 포함한다. 펩타이드 기반 절단 가능한 결합 기는 세포 내 펩티다아제 및 프로테아제와 같은 효소에 의해 절단된다. 펩타이드 기반 절단 가능한 결합 기는 아미노산 사이에 형성되어 올리고펩타이드(예를 들어, 디펩타이드, 트리펩타이드 등) 및 폴리펩타이드를 수득하는 펩타이드 결합이다. 펩타이드 기반 절단 가능한 기는 아미드 기(-C(O)NH-)를 포함하지 않는다. 아미드 기는 임의의 알킬렌, 알케닐렌 또는 알키넬렌 사이에 형성될 수 있다. 펩타이드 결합은 아미노산 사이에 형성되어 펩타이드 및 단백질을 수득하는 특별한 유형의 아미드 결합이다. 펩타이드 기반 절단 기는 일반적으로, 아미노산 사이에 형성되어 펩타이드 및 단백질을 수득하고 전체 아미드 작용기를 포함하지 않는 펩타이드 결합(즉, 아미드 결합)으로 제한된다. 펩타이드 기반 절단성 연결기는 일반 식 - NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)을 갖고, 여기서 RA 및 RB는 2개의 인접한 아미노산의 R 기이다. 이들 후보물은 전술된 것들과 유사한 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 iRNA는 링커를 통해 탄수화물에 접합된다. 본 발명의 조성물 및 방법의 링커를 갖는 iRNA 탄수화물 접합체의 비제한적인 예는 다음을 포함하지만 이에 한정되지는 않으며:
(식 XLIV), X 또는 Y 중 하나가 올리고뉴클레오티드인 경우, 다른 하나는 수소이다.
본 발명의 조성물 및 방법의 소정의 구현예에서, 리간드는 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 "GalNAc"(N-아세틸갈락토사민) 유도체이다.
일 구현예에서, 본 발명의 dsRNA는 식 (XLV) - (XLVI) 중 임의의 것에 도시된 구조의 군으로부터 선택된 2가 또는 3가 분지형 링커에 접합된다:
식 중:
q2A, q2B, q3A, q3B, q4A, q4B, q5A, q5B 및 q5C는 각 경우에 독립적으로 0~20을 나타내고, 여기서 반복 단위는 동일하거나 상이할 수 있고;
P2A, P2B, P3A, P3B, P4A, P4B, P5A, P5B, P5C, T2A, T2B, T3A, T3B, T4A, T4B, T4A, T5B, T5C는 부재하는 각 경우에 각각 독립적으로 CO, NH, O, S, OC(O), NHC(O), CH2, CH2NH 또는 CH2O이고;
Q2A, Q2B, Q3A, Q3B, Q4A, Q4B, Q5A, Q5B, Q5C는 부재하는 각 경우에 독립적으로 알킬렌, 치환된 알킬렌이고, 여기서 하나 이상의 메틸렌은 O, S, S(O), SO2, N(RN), C(R')=C(R''), C≡C 또는 C(O) 중 하나 이상에 의해 중단되거나 종결될 수 있고;
R2A, R2B, R3A, R3B, R4A, R4B, R5A, R5B, R5C는 부재하는 각 경우에 각각 독립적으로 NH, O, S, CH2, C(O)O, C(O)NH, NHCH(Ra)C(O), -C(O)-CH(Ra)-NH-, CO, CH=N-O, , , , , 또는 헤테로시클릴이고;
L2A, L2B, L3A, L3B, L4A, L4B, L5A, L5B 및 L5C는 리간드를 나타내고; 즉, 각각의 발생에 대해 각각 독립적으로 단당류(예컨대 GalNAc), 이당류, 삼당류, 사당류, 올리고당류 또는 다당류를 나타내고; Ra는 H 또는 아미노산 측쇄이다. 3가 결합 GalNAc 유도체는, 표적 유전자의 발현을 억제하기 위해 식 (XLIX)의 것들과 같은 RNAi 제제와 함께 사용하기에 특히 유용하며:
,
여기서 L5A, L5B 및 L5C는 GalNAc 유도체와 같은 단당류를 나타낸다.
GalNAc 유도체를 접합시키는 적합한 2가 및 3가 분지형 링커 군의 예는 식 II, VII, XI, X, 및 XIII로서 앞서 언급된 구조를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
RNA 접합체의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 미국 특허번호 4,828,979; 4,948,882; 5,218,105; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730; 5,552,538; 5,578,717, 5,580,731; 5,591,584; 5,109,124; 5,118,802; 5,138,045; 5,414,077; 5,486,603; 5,512,439; 5,578,718; 5,608,046; 4,587,044; 4,605,735; 4,667,025; 4,762,779; 4,789,737; 4,824,941; 4,835,263; 4,876,335; 4,904,582; 4,958,013; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,082,830; 5,112,963; 5,214,136; 5,245,022; 5,254,469; 5,258,506; 5,262,536; 5,272,250; 5,292,873; 5,317,098; 5,371,241, 5,391,723; 5,416,203, 5,451,463; 5,510,475; 5,512,667; 5,514,785; 5,565,552; 5,567,810; 5,574,142; 5,585,481; 5,587,371; 5,595,726; 5,597,696; 5,599,923; 5,599,928;5,688,941; 6,294,664; 6,320,017; 6,576,752; 6,783,931; 6,900,297;제7,037,646호; 및 제8,106,022호를 포함하지만 이에 제한되지 않으며, 이들 각각의 전문은 본원에 참조로서 통합된다.
주어진 화합물의 모든 위치가 균일하게 변형될 필요는 없으며 실제로 앞서 언급한 변형 중 하나 이상이 단일 화합물 또는 심지어 iRNA 내의 단일 뉴클레오시드에 도입될 수 있다. 본 발명은 또한 키메라 화합물인 iRNA 화합물을 포함한다.
본 발명과 관련하여 "키메라" iRNA 화합물 또는 "키메라"는 iRNA 화합물, 바람직하게는 dsRNAi 제제이고, 이는 2개 이상의 화학적으로 상이한 영역을 함유하고, 이들 각각은 적어도 하나의 단량체 유닛, 즉 dsRNA 화합물의 경우에 뉴클레오티드로 이루어진다. 이들 iRNA는 통상적으로 적어도 하나의 영역을 함유하고, 여기서 RNA는 iRNA에 뉴클레아제 분해에 대해 증가된 내성, 표적 핵산에 대한 증가된 세포 취득 또는 증가된 결합 친화성을 부여하도록 변형된다. iRNA의 추가의 영역은 RNA:DNA 또는 RNA:RNA 하이브리드를 절단할 수 있는 효소에 대한 기질로서 작용할 수 있다. 예를 들어, RNase H는 RNA:DNA 듀플렉스의 RNA 가닥을 절단하는 세포 엔도뉴클레아제이다. RNase H의 활성화는 따라서 RNA 표적을 절단하여 유전자 발현의 iRNA 억제의 효율을 증진시킨다. 결과적으로, 상응하는 결과는 흔히 키메라 dsRNA가 사용되는 경우 동일한 표적 영역에 하이브리드화하는 포스포로티오에이트 데옥시 dsRNA와 비교하여, 보다 짧은 iRNA를 사용하여 수득될 수 있다. RNA 표적의 절단은 통상적으로 겔 전기영동 및 필요한 경우, 당업계에 공지된 연합된 핵산 하이브리드화 기술에 의해 검출될 수 있다.
특정 경우에, iRNA의 RNA는 비-리간드 군에 의해 변형될 수 있다. 다수의 비-리간드 분자는 iRNA에 접합되어 iRNA의 활성, 세포 분포 또는 세포 취득을 증진시키고, 이러한 접합을 수행하기 위한 과정은 과학 문헌에서 이용가능하다. 이러한 비-리간드 모이어티는 지질 모이어티, 예컨대 콜레스테롤(Kubo, T. 등의 문헌[Biochem. Biophys. Res. Comm., 2007, 365(1):54~61]; Letsinger 등의 문헌[Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86:6553]), 콜산(Manoharan 등의 문헌[Bioorg. Med. Chem. Lett., 1994, 4:1053]), 티오에테르, 예를 들어, 헥실-S-트리틸티올(Manoharan 등의 문헌[Ann. N.Y. Acad. Sci., 1992, 660:306]; Manoharan 등의 문헌[Bioorg. Med. Chem. Let., 1993, 3:2765]), 티오콜레스테롤(Oberhauser 등의 문헌[Nucl. Acids Res., 1992, 20:533]), 도데칸디올 또는 운데실 잔기와 같은 지방족 사슬(Saison-Behmoaras 등의 문헌[EMBO J., 1991, 10:111]; Kabanov 등의 문헌[FEBS Lett., 1990, 259:327]; Svinarchuk 등의 문헌[Biochimie, 1993, 75:49]), 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸암모늄 1,2-디-O-헥사데실-rac-글리세로-3-H-포스포네이트와 같은 인지질(Manoharan 등의 문헌[Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651]; Shea 등의 문헌[Nucl. Acids Res., 1990, 18:3777]), 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 사슬(Manoharan 등의 문헌[Nucleosides & Nucleotides, 1995, 14:969]), 또는 아다만탄 아세트산(Manoharan 등의 문헌[Tetrahedron Lett., 1995, 36:3651]), 팔미틸 모이어티(Mishra 등의 문헌[Biochim. Biophys. Acta, 1995, 1264:229]), 또는 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐-옥시콜레스테롤 모이어티(Crooke 등의 문헌[J. Pharmacol. Exp. Ther., 1996, 277:923])를 포함한다. 이러한 RNA 접합체의 제조를 교시하는 대표적인 미국 특허는 앞서 열거되었다. 통상적인 접합 프로토콜은 서열의 하나 이상의 위치에서 아미노링커를 함유하는 RNA의 합성을 포함한다. 아미노 군은 이어서 적당한 커플링 또는 활성화 시약을 사용하여 접합된 분자와 반응시킨다. 접합 반응은 고체 지지체에 여전히 결합된 RNA를 사용하거나 용액 상에서 RNA의 절단 후 수행될 수 있다. HPLC에 의한 RNA 접합체의 정제는 통상적으로 순수한 접합체를 제공한다.
Ⅷ. 본 발명의 약제학적 조성물
본 발명은 또한 본 발명의 방법에 사용하기 위한 iRNA를 포함하는 약제학적 조성물 및 제형을 포함한다. 일 구현예에서, 본 명세서에 기술된 것과 같은 iRNA를 함유하는 약제학적 조성물 및 약제학적으로 허용 가능한 캐리어가 본 명세서에 제공된다. iRNA를 함유하는 약제학적 조성물은 AGT 관련 장애, 예를 들어 고혈압을 예방하거나 치료하는 데 유용하다. 이러한 약제학적 조성물은 전달 방식을 기준으로 제형화된다.
본 발명의 RNAi 제제를 포함하는 약제학적 조성물은, 예를 들어 완충액이 있거나 없는 용액, 또는 약제학적으로 허용 가능한 캐리어를 함유하는 조성물일 수 있다. 이러한 조성물은, 예를 들어 수성 또는 결정질 조성물, 리포솜 제형, 미셀라 제형, 유화액, 및 유전자 요법 벡터를 포함한다.
본 발명의 방법에서, RNAi 제제는 용액으로 투여될 수 있다. 유리 RNAi 제제는 완충되지 않은 용액으로, 예를 들어 식염수 또는 물 중에서 투여될 수 있다. 대안적으로, 유리 siRNA는 적절한 완충액으로 투여될 수도 있다. 완충 용액은 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카보네이트 또는 포스페이트, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 완충 용액은 포스페이트 완충 식염수(PBS)이다. RNAi 제제를 함유하는 완충 용액의 pH 및 삼투압은 대상체에게 투여하기에 적합하도록 조정될 수 있다.
일부 구현예에서, 완충 용액은, 삼투압이 원하는 값으로, 예를 들어 인간 혈장의 생리학적 값으로 유지되도록, 용액의 삼투압을 제어하기 위한 제제를 추가로 포함한다. 삼투압을 제어하기 위해 완충 용액에 첨가될 수 있는 용질은 단백질, 펩타이드, 아미노산, 대사되지 않은 중합체, 비타민, 이온, 당, 대사산물, 유기산, 지질, 또는 염을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 용액의 삼투압을 제어하기 위한 제제는 염이다. 소정의 구현예에서, 용액의 삼투압 제어하기 위한 제제는 염화나트륨 또는 염화칼륨이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 발열원이 없거나 비-발열성이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 국소 또는 전신 치료가 바람직한지의 여부 및 치료될 부위에 따라 다양한 방식으로 투여될 수 있다. 투여는 국소(예를 들어, 경피 패치에 의함), 폐, 예를 들어 분무기를 포함하는 분말 또는 에어로졸의 흡입 또는 통기에 의해; 기관내, 비강내, 표피 및 경피, 경구 또는 비경구 투여일 수 있다. 비경구 투여는 정맥내, 동맥내, 피하, 복강내 또는 근육내 주사 또는 주입; 예를 들어 이식된 장치를 통한 피하; 또는 두개내, 예를 들어 실질내, 척추강내 또는 뇌실내 투여에 의한 것을 포함한다.
일례로는 비경구 전달을 통한, 예를 들어 피하 (SC), 근육내(IM), 또는 정맥내(IV) 전달에 의한 전신 투여용으로 제형화된 조성물이다. 본 발명의 약제학적 조성물은 AGT 유전자의 발현을 억제하기에 충분한 용량으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 AGT 유전자의 발현을 억제하기에 충분한 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, iRNA 제제의 약 50mg 내지 약 800mg의 고정 투여량(예를 들어, 약 50 내지 약 200mg, 약 50mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 800mg, 약 100mg 내지 약 500mg, 약 100mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 300mg, 약 200mg 내지 약 400mg, 약 200mg 내지 약 500mg, 약 200mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 800mg, 약 300mg 내지 약 500mg, 약 300mg 내지 약 4000mg, 약 400mg 내지 약 800mg, 약 400mg 내지 약 500mg, 예를 들어, 약 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 또는 약 800mg)이 대상체에게 투여된다.
반복 투여 용법은 치료학적 양의 iRNA를 정기적인 기준으로, 예컨대 매월, 2개월마다, 3개월마다, 4개월마다, 5개월마다, 6개월마다, 3~6개월 마다 1회, 또는 1년에 1회로 투여하는 것을 포함할 수 있다. 소정의 구현예에서, iRNA는 약 월 1회 내지 약 분기별 1회 내지 약 6개월 마다 1회 투여된다.
초기 치료 용법 후, 치료제는 덜 빈번한 기준으로 투여될 수 있다. 치료 기간은 질환의 중증도에 기초하여 결정될 수 있다.
다른 구현예에서, 약제학적 조성물의 단일 용량은 오래 지속되어, 용량은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개월 이하의 간격으로 투여될 수 있다. 본 발명의 일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물의 단일 용량은 약 월 1회 투여된다. 본 발명의 일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물의 단일 투여량은 분기마다(즉, 약 3개월마다) 투여된다. 본 발명의 다른 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물의 단일 투여량은 일년에 2번(즉, 약 6개월마다 1회) 투여된다.
당업자는 특정 요인들이 대상체를 효과적으로 치료하기 위해 요구되는 용량 및 타이밍에 영향을 줄 수 있음을 인지하며, 이는 대상체에 존재하는 돌연변이, 이전의 치료, 대상체의 일반 건강 및/또는 연령 및 존재하는 다른 질환을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한, 적절한 예방학적 또는 치료학적 유효량의 조성물을 사용한 대상체의 치료는 단일 치료 또는 일련의 치료를 포함할 수 있다.
iRNA는 특정 조직(예를 들어, 간세포)을 표적화하는 방식으로 전달될 수 있다.
발명의 약학적 조성물은 용제, 유화액 및 리포좀 함유 제형을 포 함하지만 이에 제한되지 않는다. 이들 조성물은 미리 형성된 액체, 자가-유화 고체 및 자가-유화 반고체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 성분으로부터 생성 될 수 있다. 제형은 간을 표적으로 하는 것을 포함한다.
유닛 투여 형태로 편리하게 제시될 수 있는 발명의 약학적 제형은 제약 산업에 잘 공지된 종래의 기술에 따라 제조될 수 있다. 그러한 기술들은 활성 성분을 약학적 담체(들) 또는 부형제(들)과 회합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 액체 캐리어와 활성 성분을 균일하게 및 친밀하게 연합시킴으로써 제조된다.
Ⅸ. 키트
본 발명은 또한 본 발명의 방법 중 어느 하나를 수행하기 위한 키트를 제공한다. 이러한 키트는 하나 이상의 이중 가닥 RNAi 제제(들) 및 사용 지침, 예를 들어 이중 가닥 RNAi 제제(들)의 고정 투여량을 투여하기 위한 지침을 포함한다. 이중 가닥 RNAi 제제는 바이알 또는 미리-충전된 주사기에 담길 수 있다. 선택적으로 키트는 이중 가닥 RNAi 제제를 투여하기 위한 수단(예를 들어, 사전에 충전된 주사기와 같은 주사 장치), 또는 AGT의 억제를 측정하기 위한 수단(예를 들어, AGT mRNA, AGT 단백질, 및/또는 AGT 활성의 억제를 측정하기 위한 수단)을 추가로 포함할 수 있다. AGT의 억제를 측정하기 위한 이러한 수단은, 예를 들어, 혈장 샘플과 같은, 대상체로부터의 샘플을 수득하기 위한 수단을 포함할 수 있다. 임의로, 본 발명의 키트는 치료적 유효량 또는 예방적 유효량을 결정하기 위한 수단을 추가로 포함할 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야의 통상적인 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기재된 것들과 유사하거나 등가인 방법 및 재료가 본 발명에서 특성화된 iRNA 및 방법의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 재료가 하기에 기재되어 있다. 본 명세서에서 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 참조 문헌은 그 내용 전체가 참조로 인용된다. 상기 문헌들과 내용상 상충하는 경우가 발생하는 경우에는, 정의를 포함하는 본 명세서가 우선할 것이다. 또는, 재료, 방법 및 실시예는 단지 예시적인 것이고 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본 발명은 제한하는 것으로 해석되어서는 안되는 다음의 실시예에 의해 추가로 예시된다. 본 출원 전반에 걸쳐 인용된 모든 참조, 특허 및 공개된 특허 출원의 전문뿐만 아니라 서열 목록이 본원에 참조로서 통합된다.
실시예
핵산 서열 제공에서 사용되는 뉴클레오티드 단량체의 약어. 달리 명시되지 않는 한, 이들 단량체가 올리고뉴클레오티드에 존재할 때, 이들은 5'-3'-포스포디에스테르 결합에 의해 상호 결합된다는 것을 이해할 것이다.
실시예 1. AGT dsRNA의 제1상 임상시험
다기관, 무작위 배정, 이중 맹검, 활성 대조군 단일 투여량 및 다회 투여량 임상시험을 설계하여 고혈압 환자에게 AD-85481을 피하 투여(SC)하는 것의 안전성, 내약성, 약동학(PK), 및 약력학(PD) 효과를 평가하였다.
본 연구는 4개의 파트를 포함한다.
파트 A: 고혈압 환자에서 단일 상승 용량(SAD) 단계;
파트 B: 염 섭취가 조절된 고혈압 환자에서 단일 용량(SD);
파트 C: 고혈압 환자에서 다회 용량(MD) 단계; 및
파트 D: 비만인 고혈압 환자에서 다회 용량(MD) 단계.
연구의 모든 파트에서 안전성, 내약성, 및 이용 가능한 PD 및 PK 데이터에 대한 지속적인 검토를 수집하였다.
진단 및 주요 적격성 기준
본 연구에는 고혈압(평균 좌위 수축기 혈압[SBP] >130 및 ≤159mmHg)이 있는 18~65세 성인이 포함되었다. 이차 고혈압 또는 평균 좌위 확장기 혈압[DBP] ≥100mmHg인 환자는 제외시켰다. 연구 준수 또는 데이터 해석(당뇨병 또는 임의의 심혈관 사례의 병력 포함)을 방해할 임상적으로 유의미한 의학적 상태 또는 동반질환이 있거나, 현재 혈압에 영향을 미치는 것으로 알려진 약물을 복용 중이거나 이를 사용할 것으로 예상되는 환자도 제외시켰다.
시험 약물, 투여량 및 투여 방법
고혈압 환자에서 혈압을 낮추기 위한 전략으로서 안지오텐시노겐(AGT)의 생성을 억제하도록 설계된 화학적으로 변형된 N-아세틸갈락토사민(GalNAc)-접합 소형 간섭 RNA(siRNA)인 시험 약물 AD-85481을 피하 주사로 1회(파트 A 및 B) 투여하거나 2회 피하 주사를 1주차에 1회 및 12주차에 1회(파트 C 및 D) 투여하였다.
화학적 변형은 다음과 같이 정의된다: a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Ggn)은 구아노신-글리콜 핵산(GNA)이고, s는 포스포로티오에이트 결합임. 센스 가닥의 3' 말단은 N-[트리스(GalNAc-알킬)-아미도데카노일)]-4-하이드록시프롤리놀(또한 Hyp-(GalNAc-알킬)3 또는 L96으로 지칭됨) 리간드에 공유 결합된다.
위약 대조군, 투여량, 및 투여 방법
파트 A 및 B에서, AD-85481에 대한 대조 약물은 위약(피하 투여용 생리식염수 0.9%)이었다.
파트 C 및 D에서, AD-85481에 대한 위약 치료는 피하 투여용 생리식염수 0.9%이다. 이르베사르탄에 대한 위약 치료는 이르베사르탄의 외관과 일치하는 불활성 위약 정제이다.
활성 비교 대조군, 투여량, 및 투여 방법
본 연구의 파트 C 및 D에서, 150mg 이르베사르탄의 1일 1회 경구(PO) 투여량이 활성 비교 대조군으로서 사용된다.
치료 및 연구 참여 기간
AD-85481의 1회 피하 투여량이 파트 A 및 B에서 투여되었다. 파트 C 및 D에서, 12주에 걸쳐 2회 피하 투여량의 연구 약물이 투여된다.
통계적 방법
샘플 크기는 실제적인 고려 사항에 기초하였으며, 이러한 유형의 초기 단계 연구와 일치한다.
전체 분석 세트(Full Analysis Set, FAS)는 무작위 배정된 치료에 따라 그룹화된 임의의 양의 연구 약물을 투여받은 모든 환자를 포함하였다. PK 분석 세트는 적어도 1회 용량의 연구 약물을 투여받고 AD-85481 농도를 결정하기 위한 적어도 1개의 투여 후 혈액 샘플을 갖고 평가 가능한 PK 데이터를 가진 모든 환자를 포함하였다. PD 분석 세트는 적어도 1회 용량의 연구 약물을 투여받고 혈청 AGT의 결정을 위한 적어도 1개의 투여 후 혈액 샘플을 가진 모든 환자를 포함하였다.
AD-85481 활성을 FAS를 사용하여 분석하였다. PK 및 PD 분석 세트를 사용하여 PK 및 PD 분석을 각각 수행하였다.
통계적 분석은 주로 성질상 기술적이다. 연속 변수에 대한 기술 통계(예를 들어, 평균, 표준 편차, 중앙값, 최소값 및 최대값)가 제시된다. 빈도 및 백분율은 범주형 및 순서형 변수에 대해 제시된다. 임상 실험실 데이터, 심전도(ECG), 및 활력 징후 데이터에 대한 기술 통계가 제공된다.
연구 설계 근거
제1상, 다기관, 무작위 배정, 이중 맹검 연구의 AD-85481이 고혈압 환자에게 피하(SC) 투여되었다. 연구의 일차 목적은 고혈압 환자에서의 AD-85481의 단일 또는 다회 투여량의 안전성과 내약성을 평가하는 것이었다. 연구는 4개의 파트로 수행하였다: 단일 상승 투여량(SAD) 단계(파트 A), 염 섭취를 조절한 환자에서의 단일 투여량(SD) 단계(파트 B), 다회 투여량(MD) 단계(파트 C), 및 비만 환자에서의 MD 단계(파트 D).
연구는 AD-85481의 안전성과 내약성에 대한 초기 통찰력을 제공하도록 설계되었다. 승인된 항고혈압제의 공지된 안전성 프로파일에 기초하여, 본 연구는 AGT의 예상 최저치 동안(AD-85481 투여 후 4~6주로 추정됨) 빈번한 데이터 수집을 통해 혈압, 혈청 전해질, 및 크레아티닌을 주의 깊게 모니터링하도록 설계되었다. 임상 실험실 평가 및 혈압 데이터는 AGT 최저치에 대응하기 위해 시험 약물 투여 후 주기적으로 수집하였다.
AD-85481의 안전성에 더하여, 본 연구는 다음의 이차 또는 탐색적 연구 질문에 대한 통찰이 가능하도록 설계되었다.
AD-85481의 약력학(PD): PD 효과는 혈장 AGT 수준의 베이스라인 대비 변화를 결정하기 위해 혈청 AGT의 연속 측정에 의해 직접 입증되었다. AGT의 하류 효과기(혈장 레닌 농도, 혈장 레닌 활성, 안지오텐신 I, 안지오텐신 II, 알도스테론)도 탐색적 바이오마커로서 혈액 및 소변 시료에서 측정될 수 있다.
AD-85481의 약물동등성(PK): AD-85481의 PK 파라미터는 예를 들어 qPCR에 의한 AD-85481 및 잠재적 대사산물의 혈장 및 소변 수준의 결정에 의해 평가되었다.
혈압 감소: 본 연구는 치료적 혈압 감소를 평가할 수 있도록 고혈압 환자(처음 ESC/ESH 기준에 따라 1등급에 해당함)를 등록하였다. 단일 투여 단계(파트 A 및 B)는 기간이 짧으며 불활성 위약 군을 사용한다. 최상의 윤리 표준을 준수하기 위해, 보다 긴 MD 단계(파트 C 및 D)는 AD-85481 치료에 대한 활성 대조군으로서 확립된 안지오텐신 II 수용체 차단제(ARB)(이르베사르탄)를 사용한다. AD-85481의 탐색적 평가는 24시간 보행 혈압 모니터링(ABPM)에 의해 평가된 SBP 및 DBP의 베이스라인 대비 변화, 및 진동측정 자동화 진료실 혈압(AOBP) 및 진동측정 가정 혈압 모니터링(HBPM)에 의해 평가된 SBP 및 DBP의 베이스라인 대비 변화를 포함한다.
현재 지침에서 권장하는 바와 같이, 환자는 시험 약물 투여 전 약 3~4주 동안 이전의 항고혈압제를 중단하고, 자동화된 진료실 혈압(AOBP) 측정 및 외래 환자 24시간 보행 혈압 모니터링(ABPM)으로 혈압을 모니터링하였다. 더 높은 정밀도를 갖는 것 이외에, 후자의 방법은 최고-최저 혈압 비율 및 일주기 리듬(24~35%의 고혈압 환자에서 손실되는 정상 야간 혈압 강하 패턴의 잠재적 회복 포함)을 평가한다. 점진적 PD 효과를 특성화하고 병원에 있지 않은 동안 잠재적 저혈압에 대한 긴밀한 안전성 모니터링을 제공하기 위해, 제3 방법인 진동측정 가정 혈압 모니터링(HBPM)을 통해 보다 빈번한(매일) 측정을 수집한다.
저염 섭취가 AD-85481에 대한 혈압 반응에 미치는 영향: 고혈압은 일부 환자에서 염에 민감하기 때문에, 모든 연구 환자는 스크리닝부터 치료 종료(EOT)까지 나트륨 섭취량을 1일 약 2.0g으로 제한하는 지침이 포함된 식이요법에 대한 교육 자료를 받는다. 참고로, 이는 고혈압 환자 및 일반 모집단 모두를 위한 2018 ESC/ESH 가이드라인에서 권장하는 나트륨 섭취량이다.
또한, 다른 RAAS-억제 약물과 함께 이전에 입증된 저염 상태(1.15g/일 나트륨)에서 증가된 약리학 및 안전성의 가능성을 평가하기 위해, 염 섭취를 조절한 환자의 파트 B 연구 1 코호트를 연구한다. 파트 B 환자는 염 민감성 혈압 반응에 대한 직접 시험을 위해 나트륨 섭취량을 변화시키는 2주 식이 하위 프로토콜을 완료한다. 파트 B 동안, 음식은 공통 프로토콜에 따라 연구/대사 주방에서 준비되고 환자에게 제공된다. 환자는 저염 식단의 준수를 촉진하고 염 결핍의 도입 시 증가된 잠재적 AD-85481 약리학에 대한 모니터링을 향상시키기 위해 2주 하위 프로토콜의 첫 주 동안 입원한다. AGT 저하 및 염 결핍 후, 고염분 섭취 단독에 대한 혈압 반응을 특성화한다. AD-85481의 효과에 대한 탐색적 평가변수는 저염 조건 대 고염 조건 하에서 ABPM 및 AOBP에 의해 평가된 SBP 및 DBP의 베이스라인 대비 변화 결정을 포함한다.
비만: 고혈압 환자의 대부분은 과체중 또는 비만일 것으로 예상된다. 또한, 비만 증가는 고혈압과 인과적으로 관련이 있을 가능성이 있다. 파트 D는 체중이 PK 및 PD 파라미터에 미치는 영향을 평가하기 위해 체질량 지수(BMI)가 클래스 I 내지 III 비만 범위 내인 환자로 이루어진 1개의 코호트를 연구한다.
전임상 연구는 전형적인 RAAS 경로와 구별될 수 있는 메커니즘을 통해 식단 유도 비만 및 간 지방증 둘 다에 대한 기여자로서 AGT와 관련이 있으므로, 체중 감소를 탐색적 평가변수로서 평가한다. 인체 계측법(허리 둘레, 허리-엉덩이 비율) 및 체성분의 방사선 평가(이중 에너지 x-선 흡수계측법; DEXA)를 수집하여 체중 변화가 체지방의 손실로 인한 것인지 여부를 결정한다. 체중 감소에 따라 개선되는 지질 및 포도당 대사의 생화학적 파라미터(지질 프로파일, HbA1c, 공복 혈당)를 대략 3개월마다 측정한다. 주목할 점은, 파트 A, B, 및 C는 정상 내지 과체중, 및 경증(클래스 I) 비만 범위(BMI ≥18kg/m2 및 ≤35kg/m2)의 환자를 등록시킨다. 파트 D의 단일 코호트는 비만 환자(BMI >30kg/m2 및 ≤50kg/m2)로 제한된다. AD-85481의 효과에 대한 탐색적 평가변수는 비만 환자에서 (이중 에너지 x-선 흡수계측법(DEXA)에 의해 평가했을 때) 체중, 허리 둘레, 허리-엉덩이 비율, 및 체성분의 베이스라인 대비 변화의 결정을 포함한다.
연구의 추가적인 탐색적 목적은 HbA1c, 공복 혈장 포도당, 및 혈청 지질 프로파일의 베이스라인 대비 변화를 결정함으로써 대사 증후군 파라미터에 대한 ALN-AD-85481의 효과에 대한 평가; 및 혈장 레닌 농도, 혈장 레닌 활성, 안지오텐신 I, 안지오텐신 II, 및 알도스테론의 베이스라인 대비 변화를 결정함으로써 RAAS의 탐색적 바이오마커에 대한 AD-85481의 효과에 대한 평가를 전반적으로 포함한다.
시험 약물 투여량 및 진행.
파트 A의 투여량은 10mg, 25mg, 50mg, 100mg, 200mg, 및 < 400mg이다. 6개의 코호트 각각에 12명의 환자가 속하며(중간 투여량 수준, 더 낮은 투여량 수준, 또는 이전 코호트의 확장을 평가하기 위한 3개의 선택적 코호트가 파트 A에 등록되어 투여 반응 또는 안전성 및 내약성을 보다 잘 특성화함), AD-85481:위약을 2:1 무작위 배정한다. 최저 투여량은 혈압 저하에 영향을 미칠 것으로 예상되지 않는다. 혈압 저하 활성은 50mg 투여량에서 처음 관찰되며 혈청 AGT가 적어도 80% 낮아질 것으로 예상되었다.
제1상 - 파트 A
파트 A에서 혈청 AGT의 베이스라인 대비 저하. 선정 및 제외 기준을 충족하는 대상체는 1일차에 AD-85481 또는 위약의 단일 투여량을 투여받았다. 혈액 샘플을 AD-85481 또는 위약의 투여 전에, 투여 후 6주 동안 매주, 치료 후 8주차 및 12주차에, 이어서 추적관찰 기간 동안 3개월마다 채취하였다. 혈청 AGT 수준이 고체상 샌드위치 ELISA에 의해 결정되었고, 베이스라인 대비 AGT의 저하가 각 시점에 결정되었다.
총 60명의 고혈압 환자가 연구의 파트 A에서 치료를 완료하였다. 환자들은 위약(코호트 당 n=4) 또는 AD-85481(코호트 당 n=8)을 투여받았다. 파트 A에 참여하는 대상체의 인구통계학 및 베이스라인 특성이 아래 표에 제시되어 있다.
파트 A의 안전성 프로파일. 연구의 일차 목적은 고혈압 환자에서 AD-85481의 단일 투여량의 안전성과 내약성을 평가하는 것이었다. 아래 표에서 입증된 바와 같이, AD-85481의 안전성 프로파일은 안전성을 우려할 필요 없이 허용 가능했다. 대부분의 이상반응은 중증도가 경증 또는 중등증이었고, 중재 없이 해결되었다. 사망이나 연구 참여 중단으로 이어지는 이상반응, 또는 치료 관련 중대한 이상반응(SAE)은 없었다. 전립선암의 중증 SAE는 스크리닝 기간에 실시한 생검에 기반하여 200mg을 투여받은 1명의 환자에서 보고되었고, 투여 후 양성으로 보고되었다. 저혈압에 대한 개입이 필요한 환자는 없었으며, 연구 과정 동안 혈청 알라닌 아미노전이효소(ALT), 혈청 크레아티닌, 또는 혈청 칼륨의 임상적으로 유의미한 상승은 관찰되지 않았다. 5명의 환자가 경미한 주사 부위 반응을 보고하였다.
AD-85481의 단일 투여량의 투여가 혈청 AGT의 수준에 미치는 효과가 도 1에 제시되어 있다.
10mg 투여량에서 54%의 평균 최대 AGT 감소가 관찰되었으며, 4주차에 10mg 단일 투여량에서 52%의 평균 감소가 관찰되었다.
25mg 투여량에서 69%의 평균 최대 AGT 감소가 관찰되었으며, 4주차에 25mg 단일 투여량에서 69%의 평균 감소가 관찰되었다.
50mg 투여량에서 74%의 평균 최대 AGT 감소가 관찰되었으며, 4주차에 50mg 단일 투여량에서 68%의 평균 감소가 관찰되었다.
100mg 투여량에서 94%의 평균 최대 AGT 감소가 관찰되었으며, 4주차에 100mg 단일 투여량에서 92%의 평균 감소가 관찰되었다.
200mg 투여량에서 96%의 평균 최대 AGT 감소가 관찰되었으며, 4주차에 200mg 단일 투여량에서 95%의 평균 감소가 관찰되었다.
이들 데이터는 AD-85481의 단일 투여량으로 치료한 후 혈청 AGT의 지속적인 투여량 의존적 감소를 입증한다. 또한, AD-85481의 더 높은 단일 투여량을 투여받은 대상체에서 혈청 AGT 수준의 90%를 초과하는 감소가 관찰되었으며, AGT의 감소는 3개월 초과 동안 지속되었으며, 예를 들어, 적어도 분기별 1회의 만성 투여 간격이 효과적임을 입증한다.
파트 A의 베이스라인 대비 혈압 조절. AD-85481의 평가에는 24시간 보행 혈압 모니터링(ABPM)에 의해 평가된 SBP 및 DBP의 베이스라인 대비 변화 및 진동측정 자동 진료실 혈압(AOBP) 및 진동측정 가정 혈압 모니터링(HBPM)에 의해 평가된 SBP 및 DBP의 베이스라인 대비 변화가 포함되었다.
도 2에 도시된 바와 같이, AD-85481의 100mg 단일 투여량은 24시간 보행 혈압 측정(ABPM)에 의해 결정 시, 위약과 비교했을 때 8주차에 수축기 및 확장기 혈압을 각각 약 10.1mmHg 및 약 5.5mmHg만큼 감소시켰다. AD-85481의 200mg 단일 투여 후, 24시간 보행 혈압 측정(ABPM)에 의해 결정 시, 위약과 비교하여 8주차에 수축기 및 확장기 혈압을 각각 약 11mmHg 및 약 7.7mmHg만큼 감소된 것이 관찰되었다.
이들 데이터는 AD-85481의 단일 투여량을 투여받은 대상체에서 SBP 및 DBP의 투여량 의존적 감소를 입증한다. 구체적으로, AD-85481의 단일 투여(예를 들어, 100mg 또는 200mg) 후 8주차에 24시간 SBP에서 10mmHg를 초과하는 감소가 관찰되었다.
요약
요약하면, 이러한 단일 상승 투여량 연구는 AD-85481의 최대 효과를 특성화하고 3개월에 걸친 기간 동안 AD-85481 치료의 지속성을 입증하였다. 이들 데이터는 AD-85481(또한 ALN-AGT01로도 지칭됨)의 단일 피하 투여가 경증 내지 중등도 고혈압 환자에서 치료 관련 중대한 이상반응 없이 내약성이 양호함을 입증한다. AD-85481의 투여는 혈청 AGT의 투여량 의존적이고 지속적인 감소를 초래하였다. 3개월 이상 동안 지속된 AD-85481의 더 높은 단일 투여 후 90%를 초과하는 AGT 감소가 관찰되었으며, 이는 빈번하지 않은 투여 간격이 필요함을 입증한다.
혈압 감소는 AD-85481의 단일 고정 투여량의 투여 후의 AGT 녹다운을 반영하였으며, 100mg 이상의 단일 투여 후 8주차에 24시간 SBP의 >10mm Hg 감소가 관찰되었다.
고혈압을 치료하기 위한 현재의 방법 및 치료제와 비교하여, 이들 중 다수는 신장 기능에 대한 부정적인 효과와 관련이 있으며, 이들 데이터는 AGT의 간 특이적 침묵이 효과적이며, 따라서 개선된 신장 안전성을 제공한다는 것을 추가로 입증한다. AD-85481의 연장된 작용 지속기간은, 일정하고 지속적인 혈압 반응, 일중 BP 변동의 둔화, 및 향상된 순응도를 제공할 수 있다는 점에서 현재의 치료제보다 더 우월한데, 이는 빈번하지 않은 투여가 요구되고 전체 알약 부담이 감소하기 때문이다.
실시예 2. AGT dsRNA의 제2상 임상시험
경증 내지 중등증 고혈압 환자를 대상으로 피하(SC)로 투여되는 ALN-AGT01의 안전성, 유효성 및 약력학(PD)을 평가하기 위해 무작위 배정된, 이중 맹검, 위약 대조, 용량 범위의 다기관 연구를 설계하였다. 무작위 배정 전에, 환자는 적어도 4주의 휴약 기간 동안 (복용 중인 경우) 이전 항고혈압제를 중단한다. 스크리닝 기간을 완료하고 등록을 위한 모든 선정/제외 기준을 충족하는 환자는 ALN-AGT01 또는 위약을 12개월 이중 맹검(DB) 치료 기간의 처음 6개월 동안 투여받는다.
진단 및 주요 적격성 기준
본 연구는 치료받지 않은 고혈압을 앓고 있거나, 다음 계열의 하나 이상의 항고혈압제로 안정적인 치료를 받고 있는 성인(18세 내지 75세)을 포함한다: 안지오텐신 전환 효소 억제제, 안지오텐신 II-수용체 차단제, 레닌 억제제, 칼슘 채널 차단제, 티아지드 이뇨제, 및/또는 티아지드 유사 이뇨제. 환자는 기본 항고혈압 약물의 휴약 후 적어도 4주차에 ABPM에 의한 주간 평균 수축기 혈압(SBP)이 ≥135mmHg 및 ≤160mmHg이어야 한다. 이차성 고혈압 또는 기립성 저혈압이 있는 환자는 제외된다.
시험 약물, 투여량 및 투여 방법
AD-85481로도 공지된 ALN-AGT01은 안지오텐시노겐(AGT)에 대한 간-발현 전령 RNA를 표적으로 하는 피하 투여되는 N-아세틸갈락토사민-접합 소형 간섭 RNA이다. 위에는 ALN-AGT01의 미변형 뉴클레오티드 서열 및 변형 뉴클레오티드 서열이 제공된다.
ALN-AGT01을 투여받도록 무작위 배정된 환자들은 12개월 DB 기간 및 DB 연장 기간 동안, 150mg의 ALN-AGT01 SC를 6개월마다 1회, 300mg의 ALN-AGT01 SC를 6개월마다 1회, 300mg의 ALN-AGT01 SC를 3개월마다 1회, 또는 600mg의 ALN-AGT01 SC를 6개월마다 1회 투여받는다. 위약을 투여받도록 무작위 배정된 환자는 6개월차부터 ALN-AGT01의 4가지 초기 용량 요법 중 하나에 무작위 배정된다.
대조 치료, 투여량 및 투여 방법
위약(SC 투여를 위한 염화나트륨 0.9% w/v)은 3개월마다 1회, 그리고 연구 약물과 동일한 부피로 투여될 것이다. 6개월마다 1회 투여받는 환자
ALN-AGT01 요법은 투여 방문 시 위약 SC를 투여받게 되며, 투여 방문 시 위약은 맹검을 유지하기 위해 ALN-AGT01을 투여받지 않는다.
치료 및 연구 참여 기간
ALN-AGT01 치료 기간은 최대 24개월이다. 각 환자에 대한 추정 총 연구 기간은 최대 2개월의 스크리닝, 이어서 최대 24개월의 치료, 및 최대 18개월의 추적관찰 기간을 포함하여 최대 44개월이다.
연구 근거
연구 ALN-AGT01-002(KARDIA-1)는 경증 내지 중등증 고혈압 환자를 대상으로 SC 투여되는 ALN-AGT01의 안전성, 유효성 및 약력학(PD)을 평가하도록 설계된 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조, 용량 범위, 다기관 제2상 임상시험이다. 환자는 12개월의 이중 맹검(DB) 기간의 처음 6개월 동안 4가지 ALN-AGT01 치료 요법 또는 위약 중 하나에 무작위 배정된다. DB 기간의 첫 6개월 후, 위약군의 환자는 4개의 초기 단계 중 하나에 재무작위 배정된다.
DB 기간의 나머지 6개월 동안 ALN-AGT01 요법을 받는 반면, ALN-AGT01에 무작위 배정된 환자는 원래 배정된 요법을 유지한다. 12개월의 DB 기간 완료 후, 환자는 ALN-AGT01 오픈 라벨 연장(OLE) 연구에 참여할 자격이 있을 수 있다. 개별 환자가 OLE 연구의 가용성 전에 12개월차에 도달하는 경우, OLE 연구가 개방되고 전환될 때까지 추가로 최대 12개월 동안 DB 연장 기간에서 현재 맹검 투여를 계속할 수 있다.
본 연구의 일차 목적은 보행 혈압 모니터링(ABPM)에 의해 평가 시, 3개월차까지 베이스라인 대비 수축기 혈압(SBP)에 미치는 영향을 평가함으로써 고혈압 치료에 대한 ALN-AGT01의 효능을 평가하는 것이다. 연구의 이차 및 탐색적 목적은 혈압 반응의 다른 척도에 대한 ALN-AGT01의 효능을 평가하고 순환하는 AGT 농도의 감소를 포함하여 ALN-AGT01의 PD 효과를 평가하는 것을 포함한다.
목적 및 평가변수
약어: ABPM=보행 혈압 모니터링; ADA=항약물 항체; AE=이상 사례; AGT=안지오텐시노겐; Ang=안지오텐신; BMI=체질량 지수; DBP=확장기 혈압; ECG=심전도; HbA1c=헤모글로빈 A1C; HBPM=가정 혈압 모니터링; PD=약력학; PK=약동학; RAAS=레닌-안지오텐신-알도스테론계; SBP=수축기 혈압.
연구 설계 요약
본 임상시험은 경증 내지 중등증 고혈압 환자를 대상으로 SC 투여되는 ALN-AGT01의 안전성, 효능, 및 PD를 평가하도록 설계된 제2상, 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조, 용량 범위, 다기관 연구이다. 연구 설계의 개략도가 도 3에 제공되어 있다.
무작위 배정 전에, 환자는 적어도 4주의 휴약 기간 동안 (복용 중인 경우) 이전 항고혈압제를 중단한다.
스크리닝 기간을 완료하고 등록을 위한 모든 선정/제외 기준을 충족하는 환자는 1:1:1:1:1로 무작위 배정되어 12개월 DB 치료 기간에 걸쳐 다음 요법 중 하나를 투여받는다. 무작위 배정은 인종(흑인 대 다른 모든 인종) 및 베이스라인 혈압(평균 24시간 SBP < 또는 ≥145mmHg)에 따라 계층화될 것이다.
● 3개월마다 1회 위약 SC, 6개월차에 초기 4가지ALN-AGT01 요법 중 하나로 재무작위배정(1:1:1:1)됨
● 6개월마다 1회 150mg ALN-AGT01 SC
● 6개월마다 1회 300mg ALN-AGT01 SC
● 3개월마다 1회 300mg ALN-AGT01 SC
● 6개월마다 1회 600mg ALN-AGT01 SC
6개월마다 1회 ALN-AGT01 요법을 받는 환자는 투여 방문 시 위약 SC를 투여받게 되며, 투여 방문 시 맹검을 유지하기 위해 ALN-AGT01 투여받지 않는다.
3개월차에, ABPM에 의한 주간 평균 SBP ≥135mmHg에 대해 종래의 경구 항고혈압제를 첨가할 수 있다. 3개월 후, 목표치를 초과하는 지속적인 혈압 상승을 위해 경구 항고혈압제를 추가할 수도 있다.(목표치는 다음과 같이 정의됨: 진료실 SBP <140mmHg, 가정 혈압 모니터링[HBPM] SBP
<135mmHg, 또는 ABPM에 의한 주간 평균 SBP <135mmHg). 적절한 환자에서 경구 항고혈압제(복용 중인 경우)는 5개월차부터 6개월차까지 일시적으로 보류될 것이며(5개월차 진료실 SBP
<155 mmHg - 1개의 경구 항고혈압제를 복용하는 경우 - 또는 진료실 SBP <150mmHg - 2개의 제제를 복용하는 경우), ABPM에 의해 6개월차에 (위약 대비) ALN-AGT01 단독의 효과를 평가한다. 이 4주의 기간 동안, 매일 HBPM에 의해 혈압을 주의 깊게 모니터링하고, 진료실 SBP >170mmHg가 확인되는 경우(또는 증상이 동반되는 진료실 SBP >160mmHg이 확인되는 경우) 항고혈압제를 재시작한다.
환자는 12개월의 복용전 평가를 완료 시, ALN-AGT01 OLE 연구에 참여할 자격이 있을 수 있다. 개별 환자가 OLE 연구의 가용성 전에 12개월차에 도달하는 경우, OLE 연구가 개방되고 전환될 때까지 추가로 최대 12개월 동안 DB 연장 기간에서 현재 맹검 투여를 계속할 수 있다. OLE 연구의 등록이 개방되면, 적합한 환자는 12, 18, 또는 24개월차(어느 방문이든 먼저 발생하는 시점)에 OLE 연구로 전환할 수 있다.
DB 연장 기간에는 혈압을 면밀히 모니터링하고, 혈압을 목표 범위 내로 유지하기 위해 항고혈압 요법의 개별 변형이 허용된다.
선정 기준
환자는 다음 기준이 모두 적용되는 경우 연구에 선정될 자격이 있다.
연령 및 성별
1. 18세 내지 75세 선정
2. 남성 또는 여성
환자 및 질환 특성
3. 치료받지 않은 고혈압(항고혈압제를 투여받지 않음)이 있거나, ACE 억제제, ARB, 레닌 억제제, CCB, 티아지드 이뇨제, 및/또는 티아지드 유사 이뇨제 계열의 1가지 이상의 항고혈압제로 안정적인 요법을 받고 있음. 일반적으로, 안정적인 요법은 스크리닝 전 30일 이내에 항고혈압제 또는 투여량에 변화가 없는 것으로 정의됨.
4. ABPM에 의한 주간 평균 SBP ≥135mmHg 및 ≤160mmHg, 항고혈압제 없음. 고혈압에 대해 이전에 약물을 복용한 환자는 이 ABPM 전 ≥4주 동안 항고혈압제가 제외되어야 함.
5.
제외 기준
다음 기준 중 어느 하나에 해당하는 환자는 연구에서 제외된다.
질병 특이적 병태
1. 이차 고혈압
2. 앉은 자세에서 일어선 후 약 1~3분 이내에 진료실 혈압에 의해 ≥20mmHg SBP 또는 ≥10mmHg DBP의 강하로 정의되는 기립성 저혈압(증상성 또는 무증상성).
실험실 평가
3. 적어도 4주의 휴약 후 다음 실험실 파라미터 평가 중 어느 하나에 해당하는 경우:
a. ALT 또는 아스파르테이트 아미노전이효소(AST) >2Х 정상 상한치(ULN)
b. 총 빌리루빈 >1.5ХULN. 기록된 길버트 증후군에 부차적인 총 빌리루빈 상승을 보인 환자는 총 빌리루빈이 <2ХULN인 경우 적합하다.
c. 국제 정상화 비율(INR) >2.0(INR <3.5인 경구 항응혈제[예: 아스피린]를 투여 중인 환자는 허용됨)
d. 칼륨 상승 >5mEq/L
e. ≤30mL/분/1.73m2의 eGFR(계산은 신장 질환 식이 조절 공식에 기초함)
이전/병용 요법
4. 무작위 배정 전 지난 30일 이내에 임상시험용 제제를 투여받았거나 연구 등록 전 다른 임상시험의 추적관찰 중임. 현지 또는 지역 규제 당국으로부터 보건 당국 승인(응급 사용 포함)을 받은 모든 제제는 임상시험용으로 간주되지 않음.
5. 현재, 혈압에 유의미한 영향을 미치는 것으로 알려진 약물 또는 약초 보충제를 복용 중이거나, 무작위 배정 전 30일 이내에 복용했거나, 연구 과정 동안 투여받을 것으로 예상되는 경우(본태성 고혈압의 치료를 위한 약물은 제외). 고혈압 위기와 관련이 있는 모노아민 산화효소(MAO) 억제제와 같은 약물을 필요로 하는 환자는 제외되어야 함. Whelton의 문헌[PK, Hypertension. 2018 Jun;71(6):e13-e115]
6. 현재, 베타 차단제를 복용 중이거나 무작위 배정 전 30일 이내에 복용함
7. 현재, 나트륨-글루코오스 공동 수송체 2(SGLT2) 억제제를 를 복용 중이거나, 무작위 배정 전 30일 이내에 복용했거나, 연구 과정 동안 투여받을 것으로 예상되는 경우.
8. 비스테로이드성 항염증제(NSAID)의 처방은 허용되지 않음. 또한, 일반의약품 NSAID의 만성적/지속적 사용은 허용되지 않음. 진통제의 경우 파라세타몰/아세트아미노펜(최대 2g/일)이 허용됨.
9. 연구 과정 동안 유기 질산염 제제(예: 니트로글리세린, 이소소르비드 질산염, 이소소르비드 이질산염, 펜타에리트리톨)를 사용이 예상됨.
10. 무작위 배정 전 6개월 이내에 RNAi 치료제(승인된 또는 임상시험용)를 투여받음
의학적 상태
11. ARB, ACE 억제제(기침 제외), 또는 직접 레닌 억제제에 대한 불내성의 현재 또는 이전 병력
12. RAAS 억제제로 치료해야 하는 고혈압 이외의 의학적 상태
13. 다수의 약물 알레르기의 병력 또는 올리고뉴클레오티드 또는 GalNAc에 대한 알레르기 반응의 병력
14. 제1형 당뇨병, 잘 조절되지 않는 제2형 당뇨병(헤모글로빈 A1c[HbA1c] >8.0%), 새롭게 진단된 제2형 당뇨병(무작위 배정 전 6개월 이내), 또는 당뇨병의 알려진 진단 없이 스크리닝 동안 당뇨병의 실험실 증거(공복 혈장 포도당 ≥126mg/dL[7.0mmol/L], 무작위 혈장 포도당 ≥200mg/dL[11.1mmol/L], 또는 HbA1c ≥6.5%)
15. 중증 알부민뇨 증가의 병력(소변 알부민:크레아티닌 비율 >300mg/g 또는 >300mg/일) 또는 스크리닝 시 이 진단과 일치하는 실험실 결과
16. 알려진 인간 면역결핍 바이러스가 있거나 현재 또는 만성 C형 간염 바이러스(HCV) 또는 B형 간염 바이러스(HBV) 감염의 증거가 있음
17. 무작위 배정 전 6개월 이내에 심혈관 사건(예: 뇌졸중, 일과성 허혈 발작, 심근경색, 불안정 협심증, 관상 동맥 우회술, 경피적 관상 동맥 중재, 심부전으로 인한 입원)의 병력
18. 임상적으로 유의미한 판막성 심장 질환
19. 뉴욕심장협회 II-IV 심부전
20. 무작위 배정 전 3개월 내에 재발성 및 고증후성 심실빈맥, 빠른 심실 반응을 동반한 심방세동, 또는 심실상빈맥으로 정의되는 조절되지 않는 중대한 심장 부정맥
21. 연구 치료 기간 동안 간 이식을 받았거나 활성 간 이식 대기자 명단에 있을 것으로 예상되는 경우
22. 신장 이식 이력 또는 면역억제 요법을 받고 있는 중인 경우
23. 연구원이 판단하기에 연구 준수 또는 데이터 해석을 방해할 다른 의학적 상태이거나 동반질환이 있거나, 연구원이 판단하기에 연구에 참여하는 것이 환자의 안전을 위태롭게 할 수 있는 경우
24. 연구원이 판단하기에 무작위 배정 전 7일 이내에 임상적으로 유의미하게 질병이 있는 경우
25. 스크리닝 전 지난 6개월 동안 >10%의 체중 변화가 알려진 경우
26. 잠재적으로 시험 약물 투여 또는 국소 내약성 평가를 방해할 수 있는 SC 주사(들)에 대한 불내성 이력
27. 연구 기간 동안 대수술 또는 전신 마취가 계획된 경우
피임, 임신 및 모유 수유
28. 연구 기간 동안 피임 요건을 준수할 의향이 없는 경우
29. 여성 환자가 임신 중이거나, 임신을 계획하고 있거나, 모유 수유 중인 경우.
알코올 또는 니코틴 사용 및 약물 남용
30. 전체 연구 과정 동안 알코올 섭취를 제한할 의향이 없거나 제한할 수 없는 경우. >2 단위/일의 알코올 섭취는 연구 기간 동안 제외됨(단위: 와인 1잔[약 125mL] = 증류주 1회량[약 1액량온스] = 생맥주 ½파인트[약 284mL]).
31. 연구원이 판단하기에 스크리닝 전 지난 12개월 이내에 알코올 또는 약물 남용(법적 또는 불법 약물)의 이력
32. 진료실 혈압 측정 전 30분 이내에 니코틴 또는 담배 함유 제품(코담배, 씹는 담배, 엽궐련, 궐련, 파이프, 니코틴 패치, 또는 전자 담배를 포함하나 이에 국한되지 않음)의 사용을 절제할 의향이 없거나 절제할 수 없는 경우
기타 제한 사항
33. 제3 교대조 또는 야간 교대조 근로자
34. 팔 둘레가 스폰서가 제공한 혈압 기구 중 어느 하나의 최대 커프 크기를 초과하는 경우
35. 명시된 대로 HBPM을 수행할 수 없거나 수행할 의향이 없는 경우
효능 분석
일차 평가변수는 ABPM에 의해 평가된 3개월차의 베이스라인 대비 SBP의 변화이다. 일차 평가변수에 대한 투여량 반응 관계의 일차 가설
다중 비교 모델링(MCP Mod) 접근법을 사용하여 ALN-AGT01 투여량 및 위약이 시험된다(문헌[ Bretz F, Pinheiro JC,Branson M. Combining multiple comparisons and modeling techniques in dose-response studies. Biometrics. 2005 Sep;61(3):738~48]). 투여량-반응 경향의 존재는 초기에 0.05의 양측 유의 수준에서 사전 지정된 투여량-반응 모델 세트에 대해 검정되고, 다중도에 대해 조정된다(MCP 단계). 여러 후보 모델이 SAP에서 사전 지정될 것이다. 그런 다음, 피팅된 '최상의' 투여량 반응 모델에 기초하여 투여량-반응 곡선을 추가로 추정한다(모델링 단계). 또한, Dunnett 검정을 사용하여 각각의 ALN-AGT01 투여군을 위약과 비교한다.
3개월차에 ABPM에 의해 평가된 DBP 변화 및 6개월차에 ABPM에 의해 평가된 SBP 및 DBP 변화의 이차 평가변수에 대해, 각각의 ALN-AGT01 투여군을 위약과 비교한다. 진료실 SBP 및 DBP 변화의 경우, 각각의 ALN-AGT01 투여군을 3개월차 및 6개월차에 위약과 비교하고, 또한 1개월차부터 3개월차 및 1개월차부터 6개월차까지의 시간 조정 평균을 사용한다.
일차 및 이차 평가변수 전체에 다중도 조정은 적용되지 않는다.
약력학 분석
약력학 분석은 혈청 AGT 및 RAAS 경로의 다른 탐색적 바이오마커 수준의 변화에 대한 평가를 포함할 것이다. 관찰된 수준 및 모든 측정된 바이오마커에 대한 베이스라인 대비 상대 변화에 대한 기술 통계가 투여 후 각 시점에 대해 제시될 것이다.
치료군 전반에 걸친 바이오마커 수준(절대 및/또는 베이스라인 대비 변화)의 통계적 비교를 탐색할 수 있다. 분석에 대한 자세한 내용은 SAP에 명시된다.
모집단 PK/PD 분석은 ALN-AGT01 치료 후 PD 저하에 대한 투여량-반응 관계를 평가하기 위해 수행될 수 있다. 또한, 혈청 AGT의 저하와 혈압 사이의 관계는 모델링 프레임워크 내에서 탐색될 수 있다. 수행되는 경우, 이러한 분석은 약물계측 분석 계획에 기술될 것이며, 결과는 별도의 보고서로 제시될 것이다.
약동학 분석
기술 통계를 사용하여 ALN-AGT01의 혈장 농도 및 그 대사산물 AS(N-1)3' ALN-AGT01이 요약될 것이다.
모집단 PK 분석은 본 연구의 PK 데이터에 대해 수행될 수 있다. 수행되는 경우, 분석 방법은 약리학 분석 계획에서 기술될 것이고, 결과는 별도의 보고서로 제시될 것이다.
안전성 분석
일차 파라미터는 치료 후 발생 AE(이하 단순히 AE로 지칭됨)의 빈도이다. 안전성 파라미터는 또한 활력 징후, ECG, 임상 실험실 평가 및 신체검사를 포함한다. 노출 정도가 요약된다.
이전 약물 및 병용 약물은 세계보건기구 약물 사전(the World Health Organization Drug Dictionary)을 사용하여 코드화될 것이다. 해부학적 치료 화학물질 분류 시스템 및 선호 용어(PT)에 의해 결과가 표로 작성된다.
이상 사례는 규제 활동을 위한 의학용어집(MedDRA) 전신 기관 분류(SOC) 및 PT에 따라 분류된다. 이상 사례, SAE, 관련 AE, 연구 약물 중단을 초래하는 AE, 및 사망을 초래하는 AE는 각 치료군에 대해 SOC 및 PT별로 요약된다. 사망, SAE, 및 연구 약물 중단을 초래하는 AE에 대한 환자별 목록을 제공한다.
시간 경과에 따른 관찰 값 및 베이스라인 대비 변화를 요약한 임상 실험실 파라미터, ECG, 및 활력 징후에 대한 기술 통계가 제공된다. 베이스라인 등급(또는 카테고리)에서 최악의 베이스라인 이후 등급(또는 카테고리)까의 실험실 이동표는 등급이 매겨거나 분류되는 실험실 파라미터에 대해 제시된다. 비정상적인 신체검사 소견이 목록으로 제시된다.
실시예 3. AD-85481(질레베시란) 단일 투여 후 고혈압 환자에서 6개월차의 순환 AGT 및 혈압의 지속적인 감소
고혈압이 있는 대상체에게 단일 고정 투여량 투여 후 6개월차에 AD-85481(질레베시란)의 안전성과 효능을 평가하기 위해 다기관, 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조, 단일 상승 고정 투여량 연구가 수행되었다. (ClinicalTrials.gov 식별자: NCT03934307, 파트 A).
본 연구에는 고혈압(수축기 혈압(SBP)이 >130 내지 ≤165mmHg인 대상체)이 있지만 항고혈압 약물을 투여 중이지 않고, 24시간 보행 혈압 모니터링(ABPM)이 ≥130mmHg이고, BMI가 ≥18 내지 ≤35kg/m2인 18 내지 65세의 성인이 포함되었다. 이차 고혈압 환자는 제외되었다. 환자는 치료 경험이 없거나, 이전에 항고혈압 약물을 투여받은 경우 스크리닝 전 ≥2주 동안 휴약하였다.
총 84명의 고혈압 환자가 최대 800mg의 질레베시란의 상승 단일 고정 투여량 연구에 등록되었다. 대상체의 인구통계학 및 베이스라인 특징은 아래 표에 제시된다.
환자에게 위약 또는 AD-85481의 단일 10mg, 25mg, 50mg, 100mg, 200mg, 400mg 또는 800mg의 고정 투여량을 피하 투여하였다(도 4).
안전성 및 내약성, 혈청 AGT의 베이스라인 대비 변화, 및 혈장 및 소변 약동학 파라미터가 평가되었다. 혈압의 베이스라인 대비 변화 또한 24시간 ABPM에 의해 평가되었다. 구체적으로, 베이스라인 대비 혈압 변화는 8주차, 12주차, 및 24주차에 보행 혈압 모니터링(ABPM)에 의해 측정되었다. 8주차 이후, 환자에게 임상적으로 유의한 혈압 저하가 발생한 경우, 부가 치료를 개시하였다. 환자들은 12주차 이후에 맹검 해제되었다. AD-85481로 치료한 환자는 추적관찰 기간에 들어갔고, 위약으로 치료한 환자는 안전성 추적관찰 기간을 완료할 필요가 없었다.
이중 맹검 단계(12주 시점) 동안 프로토콜에 따라 안전성 및 내약성을 평가하였다. AD-85481 투여는 치료 관련 중대한 이상 사례(SAE) 없이 일반적으로 내약성이 양호했다. 대부분의 이상 사례(AE)는 중증도가 경증 또는 중등증이었고, 중재 없이 해결되었다. 사망 또는 연구 중단을 초래하는 AE는 보고되지 않았다. 전립선암의 중증 및 중대한 AE는 스크리닝 기간 동안 수행되었고 투여 후 양성으로 보고된 생검에 기초하여, 200mg의 AD-85481을 투여받은 1명의 환자에게서 보고되었다. 위약을 투여받은 1명의 환자에게서 중증이며 중대한 시신경허혈성 신경병증 AE가 보고되었다. 24주차까지 추가 SAE는 관찰되지 않았다. 저혈압에 대한 중재가 필요한 환자는 없었다. 혈청 ALT, 혈청 크레아티닌 또는 혈청 칼륨에서의 임상적으로 유의한 상승은 보고되지 않았다. AD-85481로 치료한 5명의 환자는 모두 경증이며 일시적인 주사 부위 반응을 나타냈다.
혈청 AGT의 농도는 AD-85481의 단일 투여 후에 측정되었다. 도 5에 도시된 바와 같이, 베이스라인 대비 혈청 AGT의 ≥90% 감소가 ≥100mg의 AD-85481의 단일 투여량에서 3주차부터 관찰되어 12주차까지 지속되었다. AD-85481의 단일 800 용량을 투여받은 모든 환자는 24주차까지 혈청 AGT에서 >90%의 감소를 유지하였다.
AD-85481의 평가는 또한 24시간 보행 혈압 모니터링(ABPM)에 의해 결정된 SBP 및 DBP에서의 베이스라인 대비 변화를 포함하였다. AD-85481의 단일 용량을 투여의 지속적인 혈압 강하 효과가 입증되었다. 도 6에 도시된 바와 같이, >10mmHg의 평균 24시간 SBP 감소가 8주차에 ≥200mg의 고정 투여량을 투여받은 투여량 그룹 전체에 걸쳐 달성되었고, BP에서의 임상적으로 의미 있는 감소가 24주차까지 유지되었다. AD-85481의 단일 800mg 투여 후, 24주차에 >20mmHg의 평균 24시간 SBP 감소가 관찰되었다. 해당 그룹(800mg)의 8명의 환자 중, 6명이 부가적인 항고혈압제 요법 없이 24주차에 >20mmHg의 평균 24시간 SBP 감소를 달성하였다. 또한, 혈청 AGT 감소는 다회 투여량에 걸쳐 24시간 SBP 감소와 상관 관계가 있었다.
24시간에 걸쳐 일관된 혈압 감소 또한 관찰되었다. 8주차에 ≥200mg의 AD-85481 투여량으로 주간 및 야간 SBP 둘 다에서의 현저한 감소가 입증되었다(도 7). 주간 및 야간 SBP의 이러한 감소는 후기 시점(12주차 및 24주차; 데이터는 도시되지 않음)까지 지속되었다. 주간 및 야간 동안의 유사한 개선이 DBP에 대해서도 관찰되었다(데이터 미도시).
결론적으로, AD-85481의 단일 피하 투여 고정 투여량은 경증 내지 중등증 고혈압 환자에서 내약성이 양호하여, 고혈압 환자에서의 지속적인 개발을 뒷받침한다. AD-85481의 단일 800mg 고정 투여량 투여 후 혈청 AGT에서의 >90%의 지속적인 감소 및 24시간 SBP에서의 >20mmHg의 평균 감소가 관찰되었다. AD-85481은 ≥200mg의 투여량 그룹 전반에 걸쳐 8주차에 24시간 SBP에서의 >10mmHg 감소를 초래하였으며, 임상적으로 의미 있는 BP 감소가 24주차까지 유지되었다. AD-85481은 주간과 야간 모두에서 일관되고 지속적인 BP 감소를 나타냈다. 이들 데이터는 고혈압에서 AD-85481의 분기별 및 연 2회 투여량 투여 모두에 대한 추가 평가를 뒷받침한다.
실시예 4. 나트륨 고갈 동안 고혈압 환자에서의 AD-85481(질레베시란)의 안전성 및 내약성
고혈압을 앓고 있는 대상체에게 단일 고정 투여량 투여 후 AD-85481(질레베시란)의 안전성 및 효능을 평가하기 위한 다기관, 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조, 단일 상승 고정 투여량 연구에서(ClinicalTrials.gov 식별자: NCT03934307, 파트 A),나트륨 소비를 다양화 하는 2주간의 식이 하위 연구가 수행되었다(NCT03934307, 파트 B). 본 연구의 목적은 AD-85481 치료에 대한 잠재적 염 민감성 혈압 반응을 식별하는 것이었다(도 8). 간략하게, 저염 식단(0.23g/일 나트륨)을 투여 전 -22일차 내지 -15일차, 및 투여 후 43일차 내지 50일차에 대상체에게 제공하였다. 고염 식단(5.75g/일 나트륨)을 투여 전 -15일차 내지 -8일차, 및 투여 후 50일차 내지 57일차에 대상체에게 제공하였다.
환자들은 위약(코호트 당 n=4) 또는 AD-85481(코호트 당 n=8)의 800mg의 고정 투여량을 단일 피하 투여 받았다. 대상체의 인구통계학 및 베이스라인 특성은 아래 표에 제시되어 있다.
안전성 및 내약성, 혈청 AGT의 베이스라인 대비 변화, 및 혈장 및 소변 약동학 파라미터가 평가되었다. 혈압의 베이스라인 대비 변화 또한 저염 및 고염 식단 조건 하에서 평가되었다.
안전성이 연구 시작부터 85일차까지 보고되었다. AD-85481의 안전성 프로파일은 안정성에 대한 우려 없이 허용 가능했다. 모든 이상반응은 중증도가 경증이었고, 중재 없이 해결되었다. 사망이나 중대한 이상반응(SAE)은 보고되지 않았으며, 연구 중단을 초래하는 이상반응(AE)은 없었다. 주사 부위 반응 또는 저혈압의 AE는 없었으며, 나트륨 박탈 기간 동안을 포함하여, 저혈압에 대한 중재가 필요한 환자는 없었다. AD-85481 치료군에서 혈청 알라닌 아미노전이효소(ALT), 혈청 크레아티닌, 또는 혈청 칼륨에서의 임상적으로 유의한 상승은 보고되지 않았다. 1명의 위약 치료 환자는 알코올 섭취에서 기인한 >3x 정상 상한치(upper limit of normal, ULN)의 일시적인 ALT 상승을 나타냈다.
AD-85481의 평가는 또한 24시간 보행 혈압 모니터링(ABPM)에 의해 결정된 SBP 및 DBP에서의 베이스라인 대비 변화를 포함하였다. >90%의 혈청 AGT 수준의 감소는 800mg의 AD-85481을 단독으로 1회 투여한 후 2주차와 12주차 사이에 달성되어 지속되었다(데이터 미도시). 도 9에 도시된 바와 같이, 저염 식단을 따르는 모든 환자에 대해 투여 전에 24시간 SBP 및 DBP의 감소가 관찰되었다. 고염 식단으로 전환 시에 혈압이 증가하였다. AD-85481 또는 위약을 투여한 후, 위약 치료 환자에 비해 AD-85481에 대한 저염 식단 후의 혈압 변화가 더 확연했던 반면, 고염 식단은 AD-85481의 혈압 저하 효과를 조절하였다.
실시예 5. 이르베사르탄 공동 투여 동안의 고혈압 환자에서의 AD-85481(질레베시란)의 안전성 및 내약성
고혈압을 앓고 있는 대상체에 대한 단일 고정 용량 투여 후 AD-85481(질레베시란)의 안전성과 효능을 평가하기 위한 다기관, 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조, 단일 상승 고정 용량 연구(ClinicalTrials.gov 식별자: NCT03934307, 파트 A)에서, 이르베사르탄 공동 투여 동안 고혈압 환자에서 AD-85481(질레베시란)의 안전성과 내약성을 평가하기 위한 하위 연구가 수행되었다(NCT03934307, 파트 E). 간략하게, 모든 환자는 1일차에 피하 투여로 AD-85481의 오픈 라벨 단일 800mg 고정 투여량을 투여받았다. 41일차에, 24시간 평균 수축기 혈압(SBP)이 ≥120mmHg인 환자(N=10)는 43일차부터 57일차까지 1일 1회 이르베사르탄(300mg 경구)을 14일 동안 투여받았다(도 10).
대상체의 인구통계학 및 베이스라인 특징은 아래 표에 제시된다.
안전성 및 내약성, 혈청 AGT의 베이스라인 대비 변화, 및 혈장 및 소변 약동학 파라미터가 평가되었다. 혈압의 베이스라인 대비 변화 또한 24시간 ABPM에 의해 평가되었다.
안전성이 연구 시작부터 85일차까지 보고되었다. AD-85481의 안전성 프로파일은 약물 관련 중대한 이상반응(SAE) 없이 일반적으로 내약성이 양호했다. 모든 이상반응은 중증도가 경증이었다. 이르베사르탄 부가요법군에서 급성 빈혈의 1건의 경미한 SAE가 있었으나, 이는 젤레베시란 투여 전 스크리닝 동안 실시한 생검을 동반한 식도위십이지장경 검사의 합병증인, 연구 약물과 관련이 없는 것으로 간주되었다. 이르베사르탄 투여 동안 저혈압 사례에 대한 우려 AE는 없었다. 또한, 저혈압에 대해 개입이 필요한 환자는 없었다. 혈청 ALT, 혈청 크레아티닌 또는 혈청 칼륨의 임상적으로 유의한 상승은 보고되지 않았다.
AD-85481의 평가는 또한 24시간 보행 혈압 모니터링(ABPM)에 의해 결정된 SBP 및 DBP에서의 베이스라인 대비 변화를 포함하였다. >90%의 혈청 AGT 수준의 감소는 800mg의 AD-85481을 단독으로 1회 투여한 후 2주차와 12주차 사이에 달성되어 지속되었다(데이터 미도시). 매일 경구 투여하는 이르베사르탄 300mg의 부가요법은 혈청 AGT 수준에 추가적인 영향을 미치지 않았다. 아래 표에 나타낸 바와 같이, 질레베시란의 800mg의 고정 투여량을 1회 피하 투여하자 수축기 및 확장기 BP가 모두 감소하였고(1~41일차), 2주 동안 매일 이르베사르탄을 추가 투여하자 수축기 및 확장기 BP가 추가로 감소하였다(43~57일차).
실시예 4 및 실시예 5의 요약
질레베시란의 800mg 고정 투여량을 1회 피하 투여한 경우, 경증 내지 중등증 고혈압 환자에서 일반적으로 내약성이 양호했으며, 저염 식단 또는 이르베사르탄과의 공동 투여 동안 보고된 저혈압 AE는 없었다. 또한, 고염 식단은 질레베시란의 BP 저하 효과를 조절하는 것으로 나타났으며, 이는 표준 개입이 잠재적 저혈압 이상반응을 치료하는 데 효과적일 수 있다는 증거를 제공한다. 질레베시란을 사용한 부가 이르베사르탄 치료는 크레아티닌 또는 칼륨의 임상적으로 유의한 변화 없이 BP를 추가로 감소시켰다.
균등물
당업자는 단지 통상적인 실험을 사용하여 본원에 기술된 특정 구현예 및 방법에 대한 많은 균등물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 이러한 균등물은 다음 청구범위의 범주에 의해 포함되는 것으로 의도된다.
비공식 서열 목록
서열번호 1
>gi|188595658|ref|NM_000029.3| 호모 사피엔스 안지오텐시노겐(세르핀 펩티다아제 억제제, 클레이드 A, 구성원 8)(AGT), mRNA
ATCCCATGAGCGGGCAGCAGGGTCAGAAGTGGCCCCCGTGTTGCCTAAGCAAGACTCTCCCCTGCCCTCT
GCCCTCTGCACCTCCGGCCTGCATGTCCCTGTGGCCTCTTGGGGGTACATCTCCCGGGGCTGGGTCAGAA
GGCCTGGGTGGTTGGCCTCAGGCTGTCACACACCTAGGGAGATGCTCCCGTTTCTGGGAACCTTGGCCCC
GACTCCTGCAAACTTCGGTAAATGTGTAACTCGACCCTGCACCGGCTCACTCTGTTCAGCAGTGAAACTC
TGCATCGATCACTAAGACTTCCTGGAAGAGGTCCCAGCGTGAGTGTCGCTTCTGGCATCTGTCCTTCTGG
CCAGCCTGTGGTCTGGCCAAGTGATGTAACCCTCCTCTCCAGCCTGTGCACAGGCAGCCTGGGAACAGCT
CCATCCCCACCCCTCAGCTATAAATAGGGCATCGTGACCCGGCCGGGGGAAGAAGCTGCCGTTGTTCTGG
GTACTACAGCAGAAGGGTATGCGGAAGCGAGCACCCCAGTCTGAGATGGCTCCTGCCGGTGTGAGCCTGA
GGGCCACCATCCTCTGCCTCCTGGCCTGGGCTGGCCTGGCTGCAGGTGACCGGGTGTACATACACCCCTT
CCACCTCGTCATCCACAATGAGAGTACCTGTGAGCAGCTGGCAAAGGCCAATGCCGGGAAGCCCAAAGAC
CCCACCTTCATACCTGCTCCAATTCAGGCCAAGACATCCCCTGTGGATGAAAAGGCCCTACAGGACCAGC
TGGTGCTAGTCGCTGCAAAACTTGACACCGAAGACAAGTTGAGGGCCGCAATGGTCGGGATGCTGGCCAA
CTTCTTGGGCTTCCGTATATATGGCATGCACAGTGAGCTATGGGGCGTGGTCCATGGGGCCACCGTCCTC
TCCCCAACGGCTGTCTTTGGCACCCTGGCCTCTCTCTATCTGGGAGCCTTGGACCACACAGCTGACAGGC
TACAGGCAATCCTGGGTGTTCCTTGGAAGGACAAGAACTGCACCTCCCGGCTGGATGCGCACAAGGTCCT
GTCTGCCCTGCAGGCTGTACAGGGCCTGCTAGTGGCCCAGGGCAGGGCTGATAGCCAGGCCCAGCTGCTG
CTGTCCACGGTGGTGGGCGTGTTCACAGCCCCAGGCCTGCACCTGAAGCAGCCGTTTGTGCAGGGCCTGG
CTCTCTATACCCCTGTGGTCCTCCCACGCTCTCTGGACTTCACAGAACTGGATGTTGCTGCTGAGAAGAT
TGACAGGTTCATGCAGGCTGTGACAGGATGGAAGACTGGCTGCTCCCTGATGGGAGCCAGTGTGGACAGC
ACCCTGGCTTTCAACACCTACGTCCACTTCCAAGGGAAGATGAAGGGCTTCTCCCTGCTGGCCGAGCCCC
AGGAGTTCTGGGTGGACAACAGCACCTCAGTGTCTGTTCCCATGCTCTCTGGCATGGGCACCTTCCAGCA
CTGGAGTGACATCCAGGACAACTTCTCGGTGACTCAAGTGCCCTTCACTGAGAGCGCCTGCCTGCTGCTG
ATCCAGCCTCACTATGCCTCTGACCTGGACAAGGTGGAGGGTCTCACTTTCCAGCAAAACTCCCTCAACT
GGATGAAGAAACTATCTCCCCGGACCATCCACCTGACCATGCCCCAACTGGTGCTGCAAGGATCTTATGA
CCTGCAGGACCTGCTCGCCCAGGCTGAGCTGCCCGCCATTCTGCACACCGAGCTGAACCTGCAAAAATTG
AGCAATGACCGCATCAGGGTGGGGGAGGTGCTGAACAGCATTTTTTTTGAGCTTGAAGCGGATGAGAGAG
AGCCCACAGAGTCTACCCAACAGCTTAACAAGCCTGAGGTCTTGGAGGTGACCCTGAACCGCCCATTCCT
GTTTGCTGTGTATGATCAAAGCGCCACTGCCCTGCACTTCCTGGGCCGCGTGGCCAACCCGCTGAGCACA
GCATGAGGCCAGGGCCCCAGAACACAGTGCCTGGCAAGGCCTCTGCCCCTGGCCTTTGAGGCAAAGGCCA
GCAGCAGATAACAACCCCGGACAAATCAGCGATGTGTCACCCCCAGTCTCCCACCTTTTCTTCTAATGAG
TCGACTTTGAGCTGGAAAGCAGCCGTTTCTCCTTGGTCTAAGTGTGCTGCATGGAGTGAGCAGTAGAAGC
CTGCAGCGGCACAAATGCACCTCCCAGTTTGCTGGGTTTATTTTAGAGAATGGGGGTGGGGAGGCAAGAA
CCAGTGTTTAGCGCGGGACTACTGTTCCAAAAAGAATTCCAACCGACCAGCTTGTTTGTGAAACAAAAAA
GTGTTCCCTTTTCAAGTTGAGAACAAAAATTGGGTTTTAAAATTAAAGTATACATTTTTGCATTGCCTTC
GGTTTGTATTTAGTGTCTTGAATGTAAGAACATGACCTCCGTGTAGTGTCTGTAATACCTTAGTTTTTTC
CACAGATGCTTGTGATTTTTGAACAATACGTGAAAGATGCAAGCACCTGAATTTCTGTTTGAATGCGGAA
CCATAGCTGGTTATTTCTCCCTTGTGTTAGTAATAAACGTCTTGCCACAATAAGCCTCCAAAAAAAA
서열번호 2
서열번호 1의 역상보체
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서열번호 3
>gi|90075391|dbj|AB170313.1| 필리핀원숭이(Macaca fascicularis) 뇌 cDNA 클론: QmoA-10278, 인간 안지오텐시노겐(세린(또는 시스테인) 단백분해효소 억제제와 유사, 클레이드 A(알파-1 항단백질분해효소, 항트립신), 구성원 8)(AGT), mRNA, RefSeq: NM_000029.1
AAGAAGCTGCCATTGTTCTGGGTACTACAGCAGAAGGGTATGCAGAAGCGAGCACCCCAGTCCGAGATGG
CTCCTGCCAGCGTGAGCCTGAGGGCCACCATCCTCTGCCTCCTGGCCTGGGCTGGCCTGGCCACAGGTGA
CCGGGTGTACATACACCCCTTCCACCTCGTCATCCACAATGAGAGTACCTGTGAGCAGCTGGCAAAGGCC
GATGCTGGGAAGCCCAAAGATCCCACCTTCACACCTGTTCCGATACAGGCCAAGACGTCTCCTGTGGATG
AAAAGGCCCTGCAGGACCAGCTAGTGCTGGTTGCCGCAAAACTCGACACCGAGGACAAGTTGAGAGCCGC
GATGGTCGGGATGCTGGCCAACTTCTTGGGCTTCCGTATATATGGCATGCACAGTGAGCTATGGGGCGTG
GTCCATGGGGCCACCATCCTCTCCCCAACGGCTGTCTTTGGCACCCTGGCCTCTCTCTACCTGGGAGCGT
TGGACCACACAGCCGACAGGCTACAGGCAATCCTGGGCGTCCCTTGGAAGGACAAGAACTGCACCTCCCG
GCTGGATGCGCACAAGGTCCTCTCTGCCCTGCAGGCTGTACAGGGCCTGCTGGTGGCCCAGGGCAGGGCT
GACGGCCAGTCCCAGCTGCTGTTGTCCACAGTGGTGGGTCTCTTCACAGCCCCAGATCTGCACCTGAAGC
AGCCGTTTGTGCAGGGCCTGGCTCTCTATGCCCCTGTGGTCCTCCCACGCTCTCTGGACTTCACAGACCT
GGAAGTCGCTGCTGAGAAGATTGACAGGTTCATGCAGGCTGTGACAGGATGGAAGATTAGCAGCCCCCTG
ACGGGAGCCAGTGCGGACAGCACCCTGGTTTTCAACACCTACGTCCATTTCCAAGGGAAGATGAGGGACT
TCTTCCTGCTGGCTGAGCCCCAGGAGTTCTGGGTGGACAACAGCACCTCAGTGTCTGTCCCCATGCTGTC
TGGCGTGGGCACCTTCCAGCACTGGAGCGACGCCCAGGACAACTTCTCAGTGACTCAAGTGCCCTTTACT
GAGAGCGCCTGCTTGCTGCTGATTCAGCCTCACTACGCCTCTGACCTGGACAAGGTGGAGGGTCTCACTT
TCCAGCAAAACTCCCTCAACTGGATGAAGAAACTGTCTCCCCGGGCCATCCACCTGACCATGCCCCGACT
GGTGCTGCGAGGATCTTATGACCTGCAGGACCTGCTTGCCCAGGCTGAGCTGCCCGCCATTCTGGGCACC
GAGCTGAACCTGCAAAAATTGAGCAATGACAACCTCAGGGTGGGGAAGGTGCTGAACAGCATTCTTTTTG
AACTCGAAGCGGATGAGAGAGAGCCCACAGAGTCTACCCGACAGCTGAACAGGCCTGAGTTCTTGGAGGT
GACCCTGGACCGCCCATTCCTGTTTGCTGTGTATGATCAAAGTGCCACTGCCCTGCACTTCCTGGGCCGT
GTGGCCAACCCGCTGAGCCCAGCATGAGGCCAGGGCCCCAGAACACAGCGCCTGGCAAGGCCTCTGCCCC
TGGCCTTTGAGGCGAAGGCCAGCAGCAGATATGTAACTCTGGAAAAACCAGCGATTTGTCACCCCCAGTC
TCCCACCTTTTCTTCTAATGAGTCAACTTCGAGCTGGAAAGCAGTCGTTTCTCCTTGGTCTAAGTGGTGC
TGCGTGAGCAGTAAGAAACCTGTGGCAGCACAAATGCGCCTCCCAGGTTGCTGGGTTTATTTTAGAGAAT
GGGGGTGGGGAGGCAAGAACCAGTGTTTAGCGCGGGACCACCGTTCCAAAAAGAATTCCAACCGACCAGC
TTGTTTGTGAAACA
서열번호 4
서열번호 3의 역상보체
TGTTTCACAAACAAGCTGGTCGGTTGGAATTCTTTTTGGAACGGTGGTCCCGCGCTAAACACTGGTTCTTGCCTCCCCACCCCCATTCTCTAAAATAAACCCAGCAACCTGGGAGGCGCATTTGTGCTGCCACAGGTTTCTTACTGCTCACGCAGCACCACTTAGACCAAGGAGAAACGACTGCTTTCCAGCTCGAAGTTGACTCATTAGAAGAAAAGGTGGGAGACTGGGGGTGACAAATCGCTGGTTTTTCCAGAGTTACATATCTGCTGCTGGCCTTCGCCTCAAAGGCCAGGGGCAGAGGCCTTGCCAGGCGCTGTGTTCTGGGGCCCTGGCCTCATGCTGGGCTCAGCGGGTTGGCCACACGGCCCAGGAAGTGCAGGGCAGTGGCACTTTGATCATACACAGCAAACAGGAATGGGCGGTCCAGGGTCACCTCCAAGAACTCAGGCCTGTTCAGCTGTCGGGTAGACTCTGTGGGCTCTCTCTCATCCGCTTCGAGTTCAAAAAGAATGCTGTTCAGCACCTTCCCCACCCTGAGGTTGTCATTGCTCAATTTTTGCAGGTTCAGCTCGGTGCCCAGAATGGCGGGCAGCTCAGCCTGGGCAAGCAGGTCCTGCAGGTCATAAGATCCTCGCAGCACCAGTCGGGGCATGGTCAGGTGGATGGCCCGGGGAGACAGTTTCTTCATCCAGTTGAGGGAGTTTTGCTGGAAAGTGAGACCCTCCACCTTGTCCAGGTCAGAGGCGTAGTGAGGCTGAATCAGCAGCAAGCAGGCGCTCTCAGTAAAGGGCACTTGAGTCACTGAGAAGTTGTCCTGGGCGTCGCTCCAGTGCTGGAAGGTGCCCACGCCAGACAGCATGGGGACAGACACTGAGGTGCTGTTGTCCACCCAGAACTCCTGGGGCTCAGCCAGCAGGAAGAAGTCCCTCATCTTCCCTTGGAAATGGACGTAGGTGTTGAAAACCAGGGTGCTGTCCGCACTGGCTCCCGTCAGGGGGCTGCTAATCTTCCATCCTGTCACAGCCTGCATGAACCTGTCAATCTTCTCAGCAGCGACTTCCAGGTCTGTGAAGTCCAGAGAGCGTGGGAGGACCACAGGGGCATAGAGAGCCAGGCCCTGCACAAACGGCTGCTTCAGGTGCAGATCTGGGGCTGTGAAGAGACCCACCACTGTGGACAACAGCAGCTGGGACTGGCCGTCAGCCCTGCCCTGGGCCACCAGCAGGCCCTGTACAGCCTGCAGGGCAGAGAGGACCTTGTGCGCATCCAGCCGGGAGGTGCAGTTCTTGTCCTTCCAAGGGACGCCCAGGATTGCCTGTAGCCTGTCGGCTGTGTGGTCCAACGCTCCCAGGTAGAGAGAGGCCAGGGTGCCAAAGACAGCCGTTGGGGAGAGGATGGTGGCCCCATGGACCACGCCCCATAGCTCACTGTGCATGCCATATATACGGAAGCCCAAGAAGTTGGCCAGCATCCCGACCATCGCGGCTCTCAACTTGTCCTCGGTGTCGAGTTTTGCGGCAACCAGCACTAGCTGGTCCTGCAGGGCCTTTTCATCCACAGGAGACGTCTTGGCCTGTATCGGAACAGGTGTGAAGGTGGGATCTTTGGGCTTCCCAGCATCGGCCTTTGCCAGCTGCTCACAGGTACTCTCATTGTGGATGACGAGGTGGAAGGGGTGTATGTACACCCGGTCACCTGTGGCCAGGCCAGCCCAGGCCAGGAGGCAGAGGATGGTGGCCCTCAGGCTCACGCTGGCAGGAGCCATCTCGGACTGGGGTGCTCGCTTCTGCATACCCTTCTGCTGTAGTACCCAGAACAATGGCAGCTTCTT
서열번호 5
>gi|113461997|ref|NM_007428.3| 생쥐(Mus musculus) 안지오텐시노겐(세르핀 펩티다아제 억제제, 클레이드 A, 구성원 8)(Agt), mRNA
GATAGCTGTGCTTGTCTAGGTTGGCGCTGAAGGATACACAGAAGCAAATGCACAGATCGGAGATGACTCC
CACGGGGGCAGGCCTGAAGGCCACCATCTTCTGCATCTTGACCTGGGTCAGCCTGACGGCTGGGGACCGC
GTATACATCCACCCCTTCCATCTCCTTTACCACAACAAGAGCACCTGCGCCCAGCTGGAGAACCCCAGTG
TGGAGACACTCCCAGAGTCAACGTTCGAGCCTGTGCCCATTCAGGCCAAGACCTCCCCTGTGAATGAGAA
GACCCTGCATGATCAGCTCGTGCTGGCCGCCGAGAAGCTAGAGGATGAGGACCGGAAGCGGGCTGCCCAG
GTCGCAATGATCGCCAACTTCGTGGGCTTCCGCATGTACAAGATGCTGAATGAGGCAGGAAGTGGGGCCA
GTGGGGCCATCCTCTCACCACCAGCTCTCTTTGGCACCCTGGTCTCTTTCTACCTTGGATCCTTAGATCC
CACGGCCAGCCAGCTGCAGACGCTGCTGGATGTCCCTGTGAAGGAGGGAGACTGCACCTCCCGACTAGAT
GGACACAAGGTCCTCGCTGCCCTGCGGGCCATTCAGGGCTTGCTGGTCACCCAGGGTGGGAGCAGCAGCC
AGACACCCCTGCTACAGTCCATTGTGGTGGGGCTCTTCACTGCTCCAGGCTTTCGTCTAAAGCACTCATT
TGTTCAGAGCCTGGCTCTCTTTACCCCTGCCCTCTTCCCACGCTCTCTGGATTTATCCACTGACCCAGTT
CTTGCCACTGAGAAAATCAACAGGTTCATAAAGGCTGTGACAGGGTGGAAGATGAACTTGCCACTGGAGG
GGGTCAGTACAGACAGCACCCTACTTTTCAACACCTACGTTCACTTCCAAGGAACGATGAGAGGTTTCTC
TCAGCTGCCTGGAGTCCATGAATTCTGGGTGGACAACAGCATCTCGGTGTCTGTGCCCATGATCTCCGGC
ACTGGCAACTTCCAGCACTGGAGTGACACCCAGAACAACTTCTCCGTGACGTGCGTGCCCCTAGGTGAGA
GAGCCACCCTGCTGCTCATCCAGCCCCACTGCACCTCAGATCTCGACAGGGTGGAGGCCCTCATCTTCCG
GAACGACCTCCTGACTTGGATAGAGAACCCGCCTCCTCGGGCCATCCGCCTGACTCTGCCCCAGCTGGAA
ATCCGAGGATCCTACAATCTGCAGGACCTGCTGGCTGAGGACAAGCTGCCCACCCTTTTGGGTGCGGAGG
CAAATCTGAACAACATTGGTGACACCAACCCCCGAGTGGGAGAGGTTCTCAATAGCATCCTCCTCGAACT
CAAAGCAGGAGAGGAGGAACAGCCGACCACGTCTGTCCAGCAGCCTGGCTCACCGGAGGCACTGGATGTG
ACCCTGAGCAGCCCCTTCCTGTTCGCCATCTACGAGCAGGACTCAGGCACGCTGCACTTTCTGGGCAGAG
TGAATAACCCCCAGAGTGTGGTGTGAGGCCTTGTGCCTAGCCATGGAGACAAGGCCGGTGTCGGAGAACC
GTTCTGGGCAAAACTCAGTGCTGTCACCCCTGGCTCCCCATCACGCCTTGTAGCGCGGCAGAGGCCGTCT
CCTTGGAGACTGCGCTGACCGAGAATAAATGATGAGCAGCAGAGCCTCCTGGGATGTGGGTTTGTTTGGA
TACTGGGGTGACAGCCAGAAGCTGGCACTCTGCACAGGACTGCCACTCTGGAAGAAATTTGGACCAAAAA
ACTGTTTGTGACACCAAAAAGCACCCCCCCTTTTTTTTATTTGAGGACAGAAATTGGGTTTTAACATTAA
AATGCACATTATCCCCTTAAAAAAAAAAAAAAAAAA
서열번호 6
서열번호 5의 역상보체
TTTTTTTTTTTTTTTTTTAAGGGGATAATGTGCATTTTAATGTTAAAACCCAATTTCTGTCCTCAAATAAAAAAAAGGGGGGGTGCTTTTTGGTGTCACAAACAGTTTTTTGGTCCAAATTTCTTCCAGAGTGGCAGTCCTGTGCAGAGTGCCAGCTTCTGGCTGTCACCCCAGTATCCAAACAAACCCACATCCCAGGAGGCTCTGCTGCTCATCATTTATTCTCGGTCAGCGCAGTCTCCAAGGAGACGGCCTCTGCCGCGCTACAAGGCGTGATGGGGAGCCAGGGGTGACAGCACTGAGTTTTGCCCAGAACGGTTCTCCGACACCGGCCTTGTCTCCATGGCTAGGCACAAGGCCTCACACCACACTCTGGGGGTTATTCACTCTGCCCAGAAAGTGCAGCGTGCCTGAGTCCTGCTCGTAGATGGCGAACAGGAAGGGGCTGCTCAGGGTCACATCCAGTGCCTCCGGTGAGCCAGGCTGCTGGACAGACGTGGTCGGCTGTTCCTCCTCTCCTGCTTTGAGTTCGAGGAGGATGCTATTGAGAACCTCTCCCACTCGGGGGTTGGTGTCACCAATGTTGTTCAGATTTGCCTCCGCACCCAAAAGGGTGGGCAGCTTGTCCTCAGCCAGCAGGTCCTGCAGATTGTAGGATCCTCGGATTTCCAGCTGGGGCAGAGTCAGGCGGATGGCCCGAGGAGGCGGGTTCTCTATCCAAGTCAGGAGGTCGTTCCGGAAGATGAGGGCCTCCACCCTGTCGAGATCTGAGGTGCAGTGGGGCTGGATGAGCAGCAGGGTGGCTCTCTCACCTAGGGGCACGCACGTCACGGAGAAGTTGTTCTGGGTGTCACTCCAGTGCTGGAAGTTGCCAGTGCCGGAGATCATGGGCACAGACACCGAGATGCTGTTGTCCACCCAGAATTCATGGACTCCAGGCAGCTGAGAGAAACCTCTCATCGTTCCTTGGAAGTGAACGTAGGTGTTGAAAAGTAGGGTGCTGTCTGTACTGACCCCCTCCAGTGGCAAGTTCATCTTCCACCCTGTCACAGCCTTTATGAACCTGTTGATTTTCTCAGTGGCAAGAACTGGGTCAGTGGATAAATCCAGAGAGCGTGGGAAGAGGGCAGGGGTAAAGAGAGCCAGGCTCTGAACAAATGAGTGCTTTAGACGAAAGCCTGGAGCAGTGAAGAGCCCCACCACAATGGACTGTAGCAGGGGTGTCTGGCTGCTGCTCCCACCCTGGGTGACCAGCAAGCCCTGAATGGCCCGCAGGGCAGCGAGGACCTTGTGTCCATCTAGTCGGGAGGTGCAGTCTCCCTCCTTCACAGGGACATCCAGCAGCGTCTGCAGCTGGCTGGCCGTGGGATCTAAGGATCCAAGGTAGAAAGAGACCAGGGTGCCAAAGAGAGCTGGTGGTGAGAGGATGGCCCCACTGGCCCCACTTCCTGCCTCATTCAGCATCTTGTACATGCGGAAGCCCACGAAGTTGGCGATCATTGCGACCTGGGCAGCCCGCTTCCGGTCCTCATCCTCTAGCTTCTCGGCGGCCAGCACGAGCTGATCATGCAGGGTCTTCTCATTCACAGGGGAGGTCTTGGCCTGAATGGGCACAGGCTCGAACGTTGACTCTGGGAGTGTCTCCACACTGGGGTTCTCCAGCTGGGCGCAGGTGCTCTTGTTGTGGTAAAGGAGATGGAAGGGGTGGATGTATACGCGGTCCCCAGCCGTCAGGCTGACCCAGGTCAAGATGCAGAAGATGGTGGCCTTCAGGCCTGCCCCCGTGGGAGTCATCTCCGATCTGTGCATTTGCTTCTGTGTATCCTTCAGCGCCAACCTAGACAAGCACAGCTATC
서열번호 7
>gi|51036672|ref|NM_134432.2| 랫투스 노르베기커스(Rattus norvegicus) 안지오텐시노겐(세르핀 펩티다아제 억제제, 클레이드 A, 구성원 8)(Agt), mRNA
CCTTGCTCCATCTTGGCTAAGCCTGGATTCCCATGGTCCCCCGACCTGGGTCCTCCCCCAGCCTCTGTAC
AGAGTAGCCTGGGAATAGATCCATCTTCACCCCCTCGAGTATAAATAAGGCTGCTTGGTTCACCAGGGGA
TAGCTGTGCTTGTCTGGGCTGGAGCTAAAGGACACACAGAAGCAAGTCCACAGATCCGTGATGACTCCCA
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ATACATCCACCCCTTTCATCTCCTCTACTACAGCAAGAGCACCTGCGCCCAGCTGGAGAACCCCAGTGTG
GAGACGCTCCCAGAGCCAACCTTTGAGCCTGTGCCCATTCAGGCCAAGACCTCCCCCGTGGATGAGAAGA
CCCTGCGAGATAAGCTCGTGCTGGCCACTGAGAAGCTAGAGGCTGAGGATCGGCAGCGAGCTGCCCAGGT
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GGGGCCGTCCTCTCTCCACCGGCCCTCTTTGGCACCCTGGTCTCTTTCTACCTTGGATCGTTGGATCCCA
CGGCCAGCCAGTTGCAGGTGCTGCTGGGCGTCCCTGTGAAGGAGGGAGACTGCACCTCCCGGCTGGACGG
ACATAAGGTCCTCACTGCCCTGCAGGCTGTTCAGGGCTTGCTGGTCACCCAGGGTGGAAGCAGCAGCCAG
ACACCCCTGCTACAGTCCACCGTGGTGGGCCTCTTCACTGCCCCAGGCTTGCGCCTAAAACAGCCATTTG
TTGAGAGCTTGGGTCCCTTCACCCCCGCCATCTTCCCTCGCTCTCTGGACTTATCCACTGACCCAGTTCT
TGCTGCCCAGAAAATCAACAGGTTTGTGCAGGCTGTGACAGGGTGGAAGATGAACTTGCCACTAGAGGGG
GTCAGCACGGACAGCACCCTATTTTTCAACACCTACGTTCACTTCCAAGGGAAGATGAGAGGCTTCTCCC
AGCTGACTGGGCTCCATGAGTTCTGGGTGGACAACAGCACCTCAGTGTCTGTGCCCATGCTCTCGGGCAC
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GTCACCCTGCTGCTGATCCAGCCCCAGTGCGCCTCAGATCTCGACAGGGTGGAGGTCCTCGTCTTCCAGC
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TCGGGGATCCTACAACCTGCAGGACCTGCTGGCTCAGGCCAAGCTGTCTACCCTTTTGGGTGCTGAGGCA
AATCTGGGCAAGATGGGTGACACCAACCCCCGAGTGGGAGAGGTTCTCAACAGCATCCTCCTTGAACTCC
AAGCAGGCGAGGAGGAGCAGCCCACAGAGTCTGCCCAGCAGCCTGGCTCACCCGAGGTGCTGGACGTGAC
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TTGGAGATGGCGCTAACTGAGAATAAATGATGAGCAGCAGCCTCCTGGGGTGTGGGTTTGTTTGGACACT
GGGGTGAGAGCCAGGAGCTGGCACTCTGTATAGGAGGACTGCCATCCTGGAAAAAAAAAATGGACCAAAC
AACTGTTTGTGAAATAAAAAAAAAAAAATTCCCTTTTTATTTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
서열번호 8
서열번호 7의 역상보체
TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCAAATAAAAAGGGAATTTTTTTTTTTTTATTTCACAAACAGTTGTTTGGTCCATTTTTTTTTTCCAGGATGGCAGTCCTCCTATACAGAGTGCCAGCTCCTGGCTCTCACCCCAGTGTCCAAACAAACCCACACCCCAGGAGGCTGCTGCTCATCATTTATTCTCAGTTAGCGCCATCTCCAAGGAGACGGCCTCTGCCTTGCTGGAAGGAGTGACGGGAAGCCAGGGGTGAAGGCACTGATTTTTGCCCAGGATAGCTCTCTGACGCTGGCCTTGTCTCCATGGCTACACAGGAGGCATCACACCACATTTTGGGGGTTATCCACTCTGCCCAGAAAGTGCAGCGCACCTGAGTCCCGCTCGTAGATGGCGAACAGGAACGGACTGCTCAGGGTCACGTCCAGCACCTCGGGTGAGCCAGGCTGCTGGGCAGACTCTGTGGGCTGCTCCTCCTCGCCTGCTTGGAGTTCAAGGAGGATGCTGTTGAGAACCTCTCCCACTCGGGGGTTGGTGTCACCCATCTTGCCCAGATTTGCCTCAGCACCCAAAAGGGTAGACAGCTTGGCCTGAGCCAGCAGGTCCTGCAGGTTGTAGGATCCCCGAATTTCCAGCTGCGGCAGGGTCAGACGGATGGCCCGAGGAGGCGGGTTCTTTATCCAAGTCAGGAAGTCGTGCTGGAAGACGAGGACCTCCACCCTGTCGAGATCTGAGGCGCACTGGGGCTGGATCAGCAGCAGGGTGACACTCTCACCCAGGGGCACGCGTGTCACGGAGAAGTTGTTCTGGGCGTCACTCCAGTGCTGGAAGTTGCCAGTGCCCGAGAGCATGGGCACAGACACTGAGGTGCTGTTGTCCACCCAGAACTCATGGAGCCCAGTCAGCTGGGAGAAGCCTCTCATCTTCCCTTGGAAGTGAACGTAGGTGTTGAAAAATAGGGTGCTGTCCGTGCTGACCCCCTCTAGTGGCAAGTTCATCTTCCACCCTGTCACAGCCTGCACAAACCTGTTGATTTTCTGGGCAGCAAGAACTGGGTCAGTGGATAAGTCCAGAGAGCGAGGGAAGATGGCGGGGGTGAAGGGACCCAAGCTCTCAACAAATGGCTGTTTTAGGCGCAAGCCTGGGGCAGTGAAGAGGCCCACCACGGTGGACTGTAGCAGGGGTGTCTGGCTGCTGCTTCCACCCTGGGTGACCAGCAAGCCCTGAACAGCCTGCAGGGCAGTGAGGACCTTATGTCCGTCCAGCCGGGAGGTGCAGTCTCCCTCCTTCACAGGGACGCCCAGCAGCACCTGCAACTGGCTGGCCGTGGGATCCAACGATCCAAGGTAGAAAGAGACCAGGGTGCCAAAGAGGGCCGGTGGAGAGAGGACGGCCCCACTGGCTACACCTCTTGCCTCACTCAGCATCTTGTACATGCGGAAACCCATGAAGTTGGCAATCATCGCGACCTGGGCAGCTCGCTGCCGATCCTCAGCCTCTAGCTTCTCAGTGGCCAGCACGAGCTTATCTCGCAGGGTCTTCTCATCCACGGGGGAGGTCTTGGCCTGAATGGGCACAGGCTCAAAGGTTGGCTCTGGGAGCGTCTCCACACTGGGGTTCTCCAGCTGGGCGCAGGTGCTCTTGCTGTAGTAGAGGAGATGAAAGGGGTGGATGTATACGCGGTCCCCAGCTGTCAGGCTGACCCAGGTCAGGATGCAGAAGATGGTGGCCTTCAGGCCTGCCCCCGTGGGAGTCATCACGGATCTGTGGACTTGCTTCTGTGTGTCCTTTAGCTCCAGCCCAGACAAGCACAGCTATCCCCTGGTGAACCAAGCAGCCTTATTTATACTCGAGGGGGTGAAGATGGATCTATTCCCAGGCTACTCTGTACAGAGGCTGGGGGAGGACCCAGGTCGGGGGACCATGGGAATCCAGGCTTAGCCAAGATGGAGCAAGG
SEQUENCE LISTING <110> ALNYLAM PHARMACEUTICALS, INC. <120> METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING AN ANGIOTENSINOGEN- (AGT-) ASSOCIATED DISORDER <130> 121301-16720 <140> PCT/US2022/035523 <141> 2022-06-29 <150> 63/276,808 <151> 2021-11-08 <150> 63/216,758 <151> 2021-06-30 <160> 16 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 2587 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atcccatgag cgggcagcag ggtcagaagt ggcccccgtg ttgcctaagc aagactctcc 60 cctgccctct gccctctgca cctccggcct gcatgtccct gtggcctctt gggggtacat 120 ctcccggggc tgggtcagaa ggcctgggtg gttggcctca ggctgtcaca cacctaggga 180 gatgctcccg tttctgggaa ccttggcccc gactcctgca aacttcggta aatgtgtaac 240 tcgaccctgc accggctcac tctgttcagc agtgaaactc tgcatcgatc actaagactt 300 cctggaagag gtcccagcgt gagtgtcgct tctggcatct gtccttctgg ccagcctgtg 360 gtctggccaa gtgatgtaac cctcctctcc agcctgtgca caggcagcct gggaacagct 420 ccatccccac ccctcagcta taaatagggc atcgtgaccc ggccggggga agaagctgcc 480 gttgttctgg gtactacagc agaagggtat gcggaagcga gcaccccagt ctgagatggc 540 tcctgccggt 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gatgagcagc agagcctcct gggatgtggg tttgtttgga 1680 tactggggtg acagccagaa gctggcactc tgcacaggac tgccactctg gaagaaattt 1740 ggaccaaaaa actgtttgtg acaccaaaaa gcaccccccc ttttttttat ttgaggacag 1800 aaattgggtt ttaacattaa aatgcacatt atccccttaa aaaaaaaaaa aaaaaa 1856 <210> 6 <211> 1856 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 6 tttttttttt ttttttttaa ggggataatg tgcattttaa tgttaaaacc caatttctgt 60 cctcaaataa aaaaaagggg gggtgctttt tggtgtcaca aacagttttt tggtccaaat 120 ttcttccaga gtggcagtcc tgtgcagagt gccagcttct ggctgtcacc ccagtatcca 180 aacaaaccca catcccagga ggctctgctg ctcatcattt attctcggtc agcgcagtct 240 ccaaggagac ggcctctgcc gcgctacaag gcgtgatggg gagccagggg tgacagcact 300 gagttttgcc cagaacggtt ctccgacacc ggccttgtct ccatggctag gcacaaggcc 360 tcacaccaca ctctgggggt tattcactct gcccagaaag tgcagcgtgc ctgagtcctg 420 ctcgtagatg gcgaacagga aggggctgct cagggtcaca tccagtgcct ccggtgagcc 480 aggctgctgg acagacgtgg tcggctgttc ctcctctcct gctttgagtt cgaggaggat 540 gctattgaga acctctccca ctcgggggtt ggtgtcacca atgttgttca gatttgcctc 600 cgcacccaaa agggtgggca gcttgtcctc agccagcagg tcctgcagat tgtaggatcc 660 tcggatttcc agctggggca gagtcaggcg gatggcccga ggaggcgggt tctctatcca 720 agtcaggagg tcgttccgga agatgagggc ctccaccctg tcgagatctg aggtgcagtg 780 gggctggatg agcagcaggg tggctctctc acctaggggc acgcacgtca cggagaagtt 840 gttctgggtg tcactccagt gctggaagtt gccagtgccg gagatcatgg gcacagacac 900 cgagatgctg ttgtccaccc agaattcatg gactccaggc agctgagaga aacctctcat 960 cgttccttgg aagtgaacgt aggtgttgaa aagtagggtg ctgtctgtac tgaccccctc 1020 cagtggcaag ttcatcttcc accctgtcac agcctttatg aacctgttga ttttctcagt 1080 ggcaagaact gggtcagtgg ataaatccag agagcgtggg aagagggcag gggtaaagag 1140 agccaggctc tgaacaaatg agtgctttag acgaaagcct ggagcagtga agagccccac 1200 cacaatggac tgtagcaggg gtgtctggct gctgctccca ccctgggtga ccagcaagcc 1260 ctgaatggcc cgcagggcag cgaggacctt gtgtccatct agtcgggagg tgcagtctcc 1320 ctccttcaca gggacatcca gcagcgtctg cagctggctg gccgtgggat ctaaggatcc 1380 aaggtagaaa gagaccaggg tgccaaagag agctggtggt gagaggatgg ccccactggc 1440 cccacttcct gcctcattca gcatcttgta catgcggaag cccacgaagt tggcgatcat 1500 tgcgacctgg gcagcccgct tccggtcctc atcctctagc ttctcggcgg ccagcacgag 1560 ctgatcatgc agggtcttct cattcacagg ggaggtcttg gcctgaatgg gcacaggctc 1620 gaacgttgac tctgggagtg tctccacact ggggttctcc agctgggcgc aggtgctctt 1680 gttgtggtaa aggagatgga aggggtggat gtatacgcgg tccccagccg tcaggctgac 1740 ccaggtcaag atgcagaaga tggtggcctt caggcctgcc cccgtgggag tcatctccga 1800 tctgtgcatt tgcttctgtg tatccttcag cgccaaccta gacaagcaca gctatc 1856 <210> 7 <211> 1958 <212> DNA <213> Rattus norvegicus <400> 7 ccttgctcca tcttggctaa gcctggattc ccatggtccc ccgacctggg tcctccccca 60 gcctctgtac agagtagcct gggaatagat ccatcttcac cccctcgagt ataaataagg 120 ctgcttggtt caccagggga tagctgtgct tgtctgggct ggagctaaag gacacacaga 180 agcaagtcca cagatccgtg atgactccca cgggggcagg cctgaaggcc accatcttct 240 gcatcctgac ctgggtcagc ctgacagctg gggaccgcgt atacatccac ccctttcatc 300 tcctctacta cagcaagagc acctgcgccc agctggagaa ccccagtgtg gagacgctcc 360 cagagccaac ctttgagcct gtgcccattc aggccaagac ctcccccgtg gatgagaaga 420 ccctgcgaga taagctcgtg ctggccactg agaagctaga ggctgaggat cggcagcgag 480 ctgcccaggt cgcgatgatt gccaacttca tgggtttccg catgtacaag atgctgagtg 540 aggcaagagg tgtagccagt ggggccgtcc tctctccacc ggccctcttt ggcaccctgg 600 tctctttcta ccttggatcg ttggatccca cggccagcca gttgcaggtg ctgctgggcg 660 tccctgtgaa ggagggagac tgcacctccc ggctggacgg acataaggtc ctcactgccc 720 tgcaggctgt tcagggcttg ctggtcaccc agggtggaag cagcagccag acacccctgc 780 tacagtccac cgtggtgggc ctcttcactg ccccaggctt gcgcctaaaa cagccatttg 840 ttgagagctt gggtcccttc acccccgcca tcttccctcg ctctctggac ttatccactg 900 acccagttct tgctgcccag aaaatcaaca ggtttgtgca ggctgtgaca gggtggaaga 960 tgaacttgcc actagagggg gtcagcacgg acagcaccct atttttcaac acctacgttc 1020 acttccaagg gaagatgaga ggcttctccc agctgactgg gctccatgag ttctgggtgg 1080 acaacagcac ctcagtgtct gtgcccatgc tctcgggcac tggcaacttc cagcactgga 1140 gtgacgccca gaacaacttc tccgtgacac gcgtgcccct gggtgagagt gtcaccctgc 1200 tgctgatcca gccccagtgc gcctcagatc tcgacagggt ggaggtcctc gtcttccagc 1260 acgacttcct gacttggata aagaacccgc ctcctcgggc catccgtctg accctgccgc 1320 agctggaaat tcggggatcc tacaacctgc aggacctgct ggctcaggcc aagctgtcta 1380 cccttttggg tgctgaggca aatctgggca agatgggtga caccaacccc cgagtgggag 1440 aggttctcaa cagcatcctc cttgaactcc aagcaggcga ggaggagcag cccacagagt 1500 ctgcccagca gcctggctca cccgaggtgc tggacgtgac cctgagcagt ccgttcctgt 1560 tcgccatcta cgagcgggac tcaggtgcgc tgcactttct gggcagagtg gataaccccc 1620 aaaatgtggt gtgatgcctc ctgtgtagcc atggagacaa ggccagcgtc agagagctat 1680 cctgggcaaa aatcagtgcc ttcacccctg gcttcccgtc actccttcca gcaaggcaga 1740 ggccgtctcc ttggagatgg cgctaactga gaataaatga tgagcagcag cctcctgggg 1800 tgtgggtttg tttggacact ggggtgagag ccaggagctg gcactctgta taggaggact 1860 gccatcctgg aaaaaaaaaa tggaccaaac aactgtttgt gaaataaaaa aaaaaaaatt 1920 ccctttttat ttgaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaa 1958 <210> 8 <211> 1958 <212> DNA <213> Rattus norvegicus <400> 8 tttttttttt tttttttttt tttttcaaat aaaaagggaa tttttttttt tttatttcac 60 aaacagttgt ttggtccatt ttttttttcc aggatggcag tcctcctata cagagtgcca 120 gctcctggct ctcaccccag tgtccaaaca aacccacacc ccaggaggct gctgctcatc 180 atttattctc agttagcgcc atctccaagg agacggcctc tgccttgctg gaaggagtga 240 cgggaagcca ggggtgaagg cactgatttt tgcccaggat agctctctga cgctggcctt 300 gtctccatgg ctacacagga ggcatcacac cacattttgg gggttatcca ctctgcccag 360 aaagtgcagc gcacctgagt cccgctcgta gatggcgaac aggaacggac tgctcagggt 420 cacgtccagc acctcgggtg agccaggctg ctgggcagac tctgtgggct gctcctcctc 480 gcctgcttgg agttcaagga ggatgctgtt gagaacctct cccactcggg ggttggtgtc 540 acccatcttg cccagatttg cctcagcacc caaaagggta gacagcttgg cctgagccag 600 caggtcctgc aggttgtagg atccccgaat ttccagctgc ggcagggtca gacggatggc 660 ccgaggaggc gggttcttta tccaagtcag gaagtcgtgc tggaagacga ggacctccac 720 cctgtcgaga tctgaggcgc actggggctg gatcagcagc agggtgacac tctcacccag 780 gggcacgcgt gtcacggaga agttgttctg ggcgtcactc cagtgctgga agttgccagt 840 gcccgagagc atgggcacag acactgaggt gctgttgtcc acccagaact catggagccc 900 agtcagctgg gagaagcctc tcatcttccc ttggaagtga acgtaggtgt tgaaaaatag 960 ggtgctgtcc gtgctgaccc cctctagtgg caagttcatc ttccaccctg tcacagcctg 1020 cacaaacctg ttgattttct gggcagcaag aactgggtca gtggataagt ccagagagcg 1080 agggaagatg gcgggggtga agggacccaa gctctcaaca aatggctgtt ttaggcgcaa 1140 gcctggggca gtgaagaggc ccaccacggt ggactgtagc aggggtgtct ggctgctgct 1200 tccaccctgg gtgaccagca agccctgaac agcctgcagg gcagtgagga ccttatgtcc 1260 gtccagccgg gaggtgcagt ctccctcctt cacagggacg cccagcagca cctgcaactg 1320 gctggccgtg ggatccaacg atccaaggta gaaagagacc agggtgccaa agagggccgg 1380 tggagagagg acggccccac tggctacacc tcttgcctca ctcagcatct tgtacatgcg 1440 gaaacccatg aagttggcaa tcatcgcgac ctgggcagct cgctgccgat cctcagcctc 1500 tagcttctca gtggccagca cgagcttatc tcgcagggtc ttctcatcca cgggggaggt 1560 cttggcctga atgggcacag gctcaaaggt tggctctggg agcgtctcca cactggggtt 1620 ctccagctgg gcgcaggtgc tcttgctgta gtagaggaga tgaaaggggt ggatgtatac 1680 gcggtcccca gctgtcaggc tgacccaggt caggatgcag aagatggtgg ccttcaggcc 1740 tgcccccgtg ggagtcatca cggatctgtg gacttgcttc tgtgtgtcct ttagctccag 1800 cccagacaag cacagctatc ccctggtgaa ccaagcagcc ttatttatac tcgagggggt 1860 gaagatggat ctattcccag gctactctgt acagaggctg ggggaggacc caggtcgggg 1920 gaccatggga atccaggctt agccaagatg gagcaagg 1958 <210> 9 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 9 uguacucuca uuguggauga cga 23 <210> 10 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 10 gucauccaca augagaguac a 21 <210> 11 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic oligonucleotide <400> 11 uguactcuca uuguggauga cga 23 <210> 12 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <400> 12 gucauccaca augagaguac a 21 <210> 13 <211> 16 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Description of Unknown: RFGF peptide sequence <400> 13 Ala Ala Val Ala Leu Leu Pro Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Ala Pro 1 5 10 15 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Description of Unknown: RFGF analogue peptide sequence <400> 14 Ala Ala Leu Leu Pro Val Leu Leu Ala Ala Pro 1 5 10 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus 1 <400> 15 Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Pro Pro Gln 1 5 10 <210> 16 <211> 16 <212> PRT <213> Drosophila sp. <400> 16 Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys 1 5 10 15

Claims (123)

  1. 대상체에서 안지오텐시노겐(AGT) 유전자의 발현을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고,
    상기 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고;
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 적어도 하나의 변형 뉴클레오티드를 포함하고;
    상기 뉴클레오티드에 대한 변형 중 적어도 하나는 열 불안정화 뉴클레오티드 변형이며, 이에 의해 상기 대상체에서 AGT 유전자의 발현을 억제하는, 방법.
  2. 안지오텐시노겐(AGT) 발현의 감소가 이득이 되는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고,
    상기 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고;
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 적어도 하나의 변형 뉴클레오티드를 포함하고;
    상기 뉴클레오티드에 대한 변형 중 적어도 하나는 열 불안정화 뉴클레오티드 변형이며, 이에 의해 AGT 발현의 감소가 이득이 되는 상기 대상체를 치료하는, 방법.
  3. 안지오텐시노겐(AGT) 관련 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고,
    상기 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고;
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 적어도 하나의 변형 뉴클레오티드를 포함하고;
    상기 뉴클레오티드에 대한 변형 중 적어도 하나는 열 불안정화 뉴클레오티드 변형이며, 이에 의해 AGT 관련 장애를 갖는 대상체를 치료하는, 방법.
  4. 대상체에서 혈압 수준을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고,
    상기 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고;
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 적어도 하나의 변형 뉴클레오티드를 포함하고;
    상기 뉴클레오티드에 대한 변형 중 적어도 하나는 열 불안정화 뉴클레오티드 변형이며, 이에 의해 상기 대상체에서 혈압 수준을 감소시키는, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고정 투여량은 월 1회의 간격으로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고정 투여량은 6개월마다 1회의 간격으로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고정 투여량은 6개월마다 1회의 간격으로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 50mg 내지 약 200mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 200mg 내지 약 400mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 400mg 내지 약 800mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  11. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 100mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  12. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 200mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  13. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 300mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  14. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 400mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  15. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 500mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  16. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 600mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  17. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 700mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  18. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 800mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  19. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 150mg의 고정 투여량을 약 6개월마다 1회 투여받는, 방법.
  20. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 300mg의 고정 투여량을 약 6개월마다 1회 투여받는, 방법.
  21. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 300mg의 고정 투여량을 약 3개월마다 1회 투여받는, 방법.
  22. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 600mg의 고정 투여량을 약 6개월마다 1회 투여받는, 방법.
  23. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 800mg의 고정 투여량을 약 3개월마다 1회 투여받는, 방법.
  24. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 800mg의 고정 투여량을 약 6개월마다 1회 투여받는, 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염이 상기 대상체에게 피하 또는 정맥내 투여되는, 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 피하 투여는 피하 주사인, 방법.
  27. 제25항에 있어서, 상기 정맥내 투여는 정맥내 주사인, 방법.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 방법.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 21개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)의 적어도 22개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 방법.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)를 포함하고, 상기 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)를 포함하는, 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(서열번호 9)로 이루어지고, 상기 센스 가닥은 뉴클레오티드 서열 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(서열번호 10)로 이루어지는, 방법.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드인, 방법.
  34. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥의 실질적으로 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드인, 방법.
  35. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 센스 가닥의 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드인, 방법.
  36. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥의 모든 뉴클레오티드는 변형 뉴클레오티드인, 방법.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 변형 중 적어도 하나는 데옥시-뉴클레오티드, 3'-말단 데옥시-티민(dT) 뉴클레오티드, 2'-O-메틸 변형 뉴클레오티드, 2'-플루오로 변형 뉴클레오티드, 2'-데옥시-변형 뉴클레오티드, 잠김 뉴클레오티드, 잠김 해제된 뉴클레오티드, 입체적으로 제한된 뉴클레오티드, 구속된 에틸 뉴클레오티드, 무염기성 뉴클레오티드, 2'-아미노-변형 뉴클레오티드, 2'-O-알릴-변형 뉴클레오티드, 2'-C-알킬-변형 뉴클레오티드, 2'-하이드록실-변형 뉴클레오티드, 2'-메톡시에틸 변형 뉴클레오티드, 2'-O-알킬-변형 뉴클레오티드, 모르폴리노 뉴클레오티드, 포스포라미데이트, 뉴클레오티드를 포함하는 비-천연 염기, 테트라하이드로피란 변형 뉴클레오티드, 1,5-안하이드로헥시톨 변형 뉴클레오티드, 시클로헥세닐 변형 뉴클레오티드, 포스포로티오에이트기를 포함하는 *j3함하는 뉴클레오티드, 5'-포스페이트 모방체를 포함하는 뉴클레오티드, 열 불안정화 뉴클레오티드, 글리콜 변형 뉴클레오티드(GNA), 및 2-O-(N-메틸아세트아미드) 변형 뉴클레오티드; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 변형 중 적어도 하나는 데옥시-뉴클레오티드, 2'-O-메틸 변형 뉴클레오티드, 2'-플루오로 변형 뉴클레오티드, 2'-데옥시-변형 뉴클레오티드, 글리콜 변형 뉴클레오티드(GNA), 및 2-O-(N-메틸아세트아미드) 변형 뉴클레오티드; 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 이중 가닥 영역은 길이가 19~23개 뉴클레오티드쌍, 길이가 19~21개 뉴클레오티드쌍, 길이가 21~23개 뉴클레오티드쌍, 또는 길이가 21개 뉴클레오티드쌍인, 방법.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 가닥은 독립적으로 길이가 19~23개 뉴클레오티드, 길이가 19~25개 뉴클레오티드 길이, 또는 길이가 21~23개 뉴클레오티드인, 방법.
  41. 제40항에 있어서, 상기 센스 가닥은 길이가 21개 뉴클레오티드이고, 상기 안티센스 가닥은 길이가 23개 뉴클레오티드인, 방법.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 가닥은 적어도 1개 뉴클레오티드의 3' 오버행 또는 적어도 2개 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함하는, 방법.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 적어도 하나의 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합을 추가로 포함하는, 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합이 한 가닥의 3'-말단에 존재하는, 방법.
  45. 제44항에 있어서, 상기 가닥은 상기 안티센스 가닥인, 방법.
  46. 제44항에 있어서, 상기 가닥은 상기 센스 가닥인, 방법.
  47. 제43항에 있어서, 상기 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합이 한 가닥의 5'-말단에 존재하는, 방법.
  48. 제47항에 있어서, 상기 가닥은 상기 안티센스 가닥인, 방법.
  49. 제47항에 있어서, 상기 가닥은 상기 센스 가닥인, 방법.
  50. 제43항에 있어서, 상기 포스포로티오에이트 또는 메틸포스포네이트 뉴클레오티드 간 결합이 한 가닥의 5'-말단 및 3'-말단 둘 모두에 존재하는, 방법.
  51. 제50항에 있어서, 상기 가닥은 상기 안티센스 가닥인, 방법.
  52. 대상체에서 안지오텐시노겐(AGT) 유전자의 발현을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고,
    상기 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고;
    여기서 a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이며, 이에 의해 상기 대상체에서 AGT 유전자의 발현을 억제하는, 방법.
  53. AGT 발현의 감소가 이득이 되는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고,
    상기 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고;
    여기서 a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이며, 이에 의해 AGT 발현의 감소가 이득이 되는 상기 대상체를 치료하는, 방법.
  54. AGT 관련 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고,
    상기 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고;
    여기서 a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이며, 이에 의해 AGT 관련 장애를 갖는 상기 대상체를 치료하는, 방법.
  55. 대상체에서 혈압 수준을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 50mg 내지 약 800mg의 고정 투여량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고,
    상기 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고;
    여기서 a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이며, 이에 의해 상기 대상체에서 혈압 수준을 감소시키는, 방법.
  56. 제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고정 투여량은 월 1회의 간격으로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
  57. 제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고정 투여량은 3개월마다 1회의 간격으로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
  58. 제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고정 투여량은 6개월의 간격으로 상기 대상체에게 투여되는, 방법.
  59. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 50mg 내지 약 200mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  60. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 200mg 내지 약 400mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  61. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 400mg 내지 약 800mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  62. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 100mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  63. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 200mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  64. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 300mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  65. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 400mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  66. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 500mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  67. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 600mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  68. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 700mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  69. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 800mg의 고정 투여량을 투여받는, 방법.
  70. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 150mg의 고정 투여량을 약 6개월마다 1회 투여받는, 방법.
  71. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 300mg의 고정 투여량을 약 6개월마다 1회 투여받는, 방법.
  72. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 300mg의 고정 투여량을 약 3개월마다 1회 투여받는, 방법.
  73. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 600mg의 고정 투여량을 약 6개월마다 1회 투여받는, 방법.
  74. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 800mg의 고정 투여량을 약 3개월마다 1회 투여받는, 방법.
  75. 제52항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 약 800mg의 고정 투여량을 약 6개월마다 1회 투여받는, 방법.
  76. 제52항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염이 상기 대상체에게 피하 또는 정맥내 투여되는, 방법.
  77. 제76항에 있어서, 상기 피하 투여는 피하 주사인, 방법.
  78. 제77항에 있어서, 상기 정맥내 투여는 정맥내 주사인, 방법.
  79. 제52항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 방법.
  80. 제52항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 21개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 방법.
  81. 제52항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 22개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 20개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 방법.
  82. 제52항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)를 포함하고, 상기 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)를 포함하는, 방법.
  83. 제52항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)로 이루어지고, 상기 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)로 이루어지는, 방법.
  84. 제52항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 리간드를 추가로 포함하는, 방법.
  85. 제84항에 있어서, 상기 리간드는 상기 센스 가닥의 3' 말단에 접합되는, 방법.
  86. 제84항 또는 제85항에 있어서, 상기 리간드는 N-아세틸갈락토사민(GalNAc) 유도체인, 방법.
  87. 제86항에 있어서, 상기 GalNAc 유도체는 1가, 2가 또는 3가 분지형 링커를 통해 부착된 하나 이상의 GalNAc 유도체를 포함하는, 방법.
  88. 제86항에 있어서, 상기 리간드는 다음인, 방법
  89. 제88항에 있어서, 상기 센스 가닥의 3' 말단이 다음 개략도에 도시한 바와 같이 상기 리간드에 접합되고
    , 여기서 X는 O 또는 S이거나, X는 O인, 방법.
  90. 제1항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
  91. 제90항에 있어서, 상기 대상체는 적어도 130mmHg의 수축기 혈압 또는 적어도 80mmHg의 확장기 혈압을 갖는, 방법.
  92. 제90항에 있어서, 상기 대상체는 적어도 140mmHg의 수축기 혈압 또는 적어도 80mmHg의 확장기 혈압을 갖는, 방법.
  93. 제1항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 염감도에 민감한 군의 일부이거나, 과체중이거나, 비만이거나, 임신 중이거나, 임신할 계획이거나, 2형 당뇨병을 앓고 있거나, 1형 당뇨병을 앓고 있거나, 신장 기능이 감소된, 방법.
  94. 제2항 또는 제53항에 있어서, AGT 발현의 감소가 이득이 되는 상기 장애는 AGT 관련 장애인, 방법.
  95. 제3항, 제54항 또는 제94항에 있어서, 상기 AGT 관련 장애는 고혈압(high blood pressure), 고혈압(hypertension), 경계성 고혈압, 원발성 고혈압, 이차성 고혈압, 단독 수축기 또는 확장기 고혈압, 임신 관련 고혈압, 당뇨병성 고혈압, 저항성 고혈압, 불응성 고혈압, 발작성 고혈압, 신혈관성 고혈압, Goldblatt 고혈압, 안구 고혈압, 녹내장, 폐동맥 고혈압, 문맥 고혈압, 전신 정맥 고혈압, 수축기 고혈압, 불안정 고혈압; 경증 내지 중등증 고혈압; 고혈압성 심장 질환, 고혈압성 신장병증, 죽상동맥경화증, 동맥경화증, 혈관병증, 당뇨병성 신장병증, 당뇨병성 망막병증, 만성 심부전, 심근병증, 당뇨병성 심장 근병증, 야간 저혈압, 사구체경화증, 대동맥 협착, 대동맥류, 심실 섬유증, 심부전, 심근경색, 협심증, 뇌졸중, 신장 질환, 신부전, 전신 경화증, 자궁내 성장 제한(IUGR), 태아 성장 제한, 비만, 간 지방증/지방간, 비알코올성 지방간염(NASH), 비알코올성 지방간 질환(NAFLD); 포도당 불내성, 2형 당뇨병, 및 대사 증후군으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  96. 제4항 또는 제55항에 있어서, 상기 혈압은 수축기 혈압 및/또는 확장기 혈압을 포함하는, 방법.
  97. 제1항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 AGT 발현을 적어도 30%, 40% 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95%만큼 감소시키는, 방법.
  98. 제97항에 있어서, 상기 대상체의 혈액 또는 혈청 샘플 내 AGT 단백질 수준이 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%만큼 감소되는, 방법.
  99. 제1항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 수축기 혈압 및/또는 확장기 혈압을 감소시키는, 방법.
  100. 제99항에 있어서, 상기 수축기 혈압 및/또는 확장기 혈압이 적어도 4mmHg, 5mmHg, 6mmHg, 7mmHg, 8mmHg, 9mmHg 또는 10mmHg만큼 감소되는, 방법.
  101. 제1항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 고혈압 치료를 위한 추가 치료제를 상기 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  102. 제101항에 있어서, 상기 추가 치료제는 이뇨제, 안지오텐신 전환 효소(ACE) 억제제, 안지오텐신 II 수용체 길항제, 베타-차단제, 혈관확장제, 칼슘 채널 차단제, 알도스테론 길항제, 알파2-작용제, 레닌 억제제, 알파-차단제, 말초 작용 아드레날린제, 선택적 D1 수용체 부분 작용제, 비선택적 알파-아드레날린 길항제, 합성 스테로이드성 항미네랄코르티코이드제; CCB, 티아지드 이뇨제, 및/또는 티아지드-유사 이뇨제; 전술한 것 중 임의의 조합; 및 제제의 조합으로서 제형화된 고혈압 치료제로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  103. 제101항에 있어서, 상기 추가 치료제는 안지오텐신 II 수용체 길항제를 포함하는, 방법.
  104. 제103항에 있어서, 상기 안지오텐신 II 수용체 길항제는 로사르탄, 발사르탄, 올메사르탄, 에프로사르탄, 이르베사르탄 및 아질사르탄으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  105. 제101항에 있어서, 상기 추가 치료제는 고혈압 치료제를 포함하는, 방법.
  106. 제105항에 있어서, 상기 고혈압 치료제는 올메사르탄, 암로디핀 및 인다파미드로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  107. 제1항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 RNAi 제제 또는 이의 염은 약제학적 조성물로 투여되는, 방법.
  108. 제107항에 있어서, 상기 RNAi 제제 또는 이의 염은 완충되지 않은 용액 중에 존재하는, 방법.
  109. 제108항에 있어서, 상기 완충되지 않은 용액은 식염수 또는 물인, 방법.
  110. 제109항에 있어서, 상기 RNAi 제제 또는 이의 염은 완충 용액 중에 존재하는, 방법.
  111. 제110항에 있어서, 상기 완충 용액은 아세테이트, 시트레이트, 프롤라민, 카보네이트 또는 포스페이트, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 방법.
  112. 제111항에 있어서, 상기 완충 용액은 인산염 완충 식염수(PBS)인, 방법.
  113. 경증 내지 중등증 고혈압을 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 이중 가닥 리보핵산(RNAi) 제제 또는 이의 염의 약 150mg의 고정 투여량을 6개월마다, 약 300mg의 고정 투여량을 6개월마다, 약 300mg의 고정 투여량을 3개월마다, 약 600mg의 고정 투여량을 6개월마다, 약 800mg의 고정 투여량을 3개월마다, 또는 약 800mg의 고정 투여량을 6개월마다 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되,
    상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염은 이중 가닥 영역을 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하고,
    상기 안티센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(서열번호 11)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 센스 가닥은 변형 뉴클레오티드 서열 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(서열번호 12)의 적어도 19개 연속 뉴클레오티드를 포함하는 변형 뉴클레오티드 서열을 포함하고;
    여기서 a는 2'-O-메틸아데노신-3'-포스페이트이고, c는 2'-O-메틸시티딘-3'-포스페이트이고, g는 2'-O-메틸구아노신-3'-포스페이트이고, u는 2'-O-메틸우리딘-3'-포스페이트이고, Af는 2'-플루오로아데노신-3'-포스페이트이고, Cf는 2'-플루오로시티딘-3'-포스페이트이고, Gf는 2'-플루오로구아노신-3'-포스페이트이고, Uf는 2'-플루오로우리딘-3'-포스페이트이고, (Tgn)은 티미딘-글리콜 핵산(GNA) S-이성질체이고, s는 포스포로티오에이트 결합이며, 이에 의해 경증 내지 중등증 고혈압을 갖는 대상체를 치료하는, 방법.
  114. 제113항에 있어서, 상기 대상체에서 혈장 레닌, 알도스테론, AngI, 및/또는 AngII의 수준을 측정하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  115. 제113항에 있어서, 상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염의 투여 전에, 상기 대상체는 항고혈압제의 투여를 중단하는, 방법.
  116. 제115항에 있어서, 상기 대상체는 상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염의 투여 전 적어도 2주 또는 4주 동안 항고혈압제의 투여를 중단하는, 방법.
  117. 제113항에 있어서, 상기 대상체는 안지오텐신 전환 효소 억제제, 안지오텐신 II 수용체 차단제, 레닌 억제제, 칼슘 채널 차단제, 티아지드 이뇨제 및/또는 티아지드-유사 이뇨제로 이루어진 군으로부터 선택된 항고혈압제로 이전에 치료받은 적이 있는, 방.
  118. 제113항에 있어서, 상기 대상체는 상기 이중 가닥 RNAi 제제 또는 이의 염을 투여하기 적어도 4주 전에 ABPM에 의한 주간 평균 수축기 혈압(SBP)이 ≥135mmHg 및 ≤160mmHg인, 방법.
  119. 제113항에 있어서, 상기 대상체는 이차 고혈압 또는 기립성 저혈압이 없는, 방법.
  120. 제113항에 있어서, 상기 대상체에서 혈압을 결정하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  121. 제120항에 있어서, 상기 대상체에서 6개월차의 혈압 감소, 시간에 따른 혈압 변화, 및/또는 주간 평균 혈압 및 야간 평균 혈압의 변화가 결정되는, 방법.
  122. 제1항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 혈압이 표준 치료 항고혈압제에 의해 적절히 조절되지 않는 대상체를 선택하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  123. 제1항 내지 제122항 중 어느 한 항의 방법을 수행하기 위한 키트로서,
    a) RNAi 제제 또는 이의 염, 및
    b) 사용 지침, 및
    c) 선택적으로, 상기 RNAi 제제 또는 이의 염을 대상체에게 투여하기 위한 수단을 포함하는, 키트.
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Family Cites Families (189)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4469863A (en) 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5023243A (en) 1981-10-23 1991-06-11 Molecular Biosystems, Inc. Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same
US4476301A (en) 1982-04-29 1984-10-09 Centre National De La Recherche Scientifique Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon
JPS5927900A (ja) 1982-08-09 1984-02-14 Wakunaga Seiyaku Kk 固定化オリゴヌクレオチド
FR2540122B1 (fr) 1983-01-27 1985-11-29 Centre Nat Rech Scient Nouveaux composes comportant une sequence d'oligonucleotide liee a un agent d'intercalation, leur procede de synthese et leur application
US4605735A (en) 1983-02-14 1986-08-12 Wakunaga Seiyaku Kabushiki Kaisha Oligonucleotide derivatives
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4824941A (en) 1983-03-10 1989-04-25 Julian Gordon Specific antibody to the native form of 2'5'-oligonucleotides, the method of preparation and the use as reagents in immunoassays or for binding 2'5'-oligonucleotides in biological systems
US4587044A (en) 1983-09-01 1986-05-06 The Johns Hopkins University Linkage of proteins to nucleic acids
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US5550111A (en) 1984-07-11 1996-08-27 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof
US5430136A (en) 1984-10-16 1995-07-04 Chiron Corporation Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
US5258506A (en) 1984-10-16 1993-11-02 Chiron Corporation Photolabile reagents for incorporation into oligonucleotide chains
US4828979A (en) 1984-11-08 1989-05-09 Life Technologies, Inc. Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5235033A (en) 1985-03-15 1993-08-10 Anti-Gene Development Group Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5405938A (en) 1989-12-20 1995-04-11 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US4762779A (en) 1985-06-13 1988-08-09 Amgen Inc. Compositions and methods for functionalizing nucleic acids
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
US5317098A (en) 1986-03-17 1994-05-31 Hiroaki Shizuya Non-radioisotope tagging of fragments
JPS638396A (ja) 1986-06-30 1988-01-14 Wakunaga Pharmaceut Co Ltd ポリ標識化オリゴヌクレオチド誘導体
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US5276019A (en) 1987-03-25 1994-01-04 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
US4904582A (en) 1987-06-11 1990-02-27 Synthetic Genetics Novel amphiphilic nucleic acid conjugates
JP2828642B2 (ja) 1987-06-24 1998-11-25 ハワード フローレイ インスティテュト オブ イクスペリメンタル フィジオロジー アンド メディシン ヌクレオシド誘導体
US5585481A (en) 1987-09-21 1996-12-17 Gen-Probe Incorporated Linking reagents for nucleotide probes
US5188897A (en) 1987-10-22 1993-02-23 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates
US4924624A (en) 1987-10-22 1990-05-15 Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof
US5525465A (en) 1987-10-28 1996-06-11 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same
DE3738460A1 (de) 1987-11-12 1989-05-24 Max Planck Gesellschaft Modifizierte oligonukleotide
US5082830A (en) 1988-02-26 1992-01-21 Enzo Biochem, Inc. End labeled nucleotide probe
JPH03503894A (ja) 1988-03-25 1991-08-29 ユニバーシィティ　オブ　バージニア　アランミ　パテンツ　ファウンデイション オリゴヌクレオチド　ｎ‐アルキルホスホラミデート
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5109124A (en) 1988-06-01 1992-04-28 Biogen, Inc. Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine
US5216141A (en) 1988-06-06 1993-06-01 Benner Steven A Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5262536A (en) 1988-09-15 1993-11-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company Reagents for the preparation of 5'-tagged oligonucleotides
US5512439A (en) 1988-11-21 1996-04-30 Dynal As Oligonucleotide-linked magnetic particles and uses thereof
US5457183A (en) 1989-03-06 1995-10-10 Board Of Regents, The University Of Texas System Hydroxylated texaphyrins
US5599923A (en) 1989-03-06 1997-02-04 Board Of Regents, University Of Tx Texaphyrin metal complexes having improved functionalization
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
US4958013A (en) 1989-06-06 1990-09-18 Northwestern University Cholesteryl modified oligonucleotides
US5451463A (en) 1989-08-28 1995-09-19 Clontech Laboratories, Inc. Non-nucleoside 1,3-diol reagents for labeling synthetic oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5436146A (en) 1989-09-07 1995-07-25 The Trustees Of Princeton University Helper-free stocks of recombinant adeno-associated virus vectors
US5254469A (en) 1989-09-12 1993-10-19 Eastman Kodak Company Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures
US5399676A (en) 1989-10-23 1995-03-21 Gilead Sciences Oligonucleotides with inverted polarity
US5264564A (en) 1989-10-24 1993-11-23 Gilead Sciences Oligonucleotide analogs with novel linkages
US5292873A (en) 1989-11-29 1994-03-08 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acids labeled with naphthoquinone probe
US5177198A (en) 1989-11-30 1993-01-05 University Of N.C. At Chapel Hill Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates
CA2029273A1 (en) 1989-12-04 1991-06-05 Christine L. Brakel Modified nucleotide compounds
US5486603A (en) 1990-01-08 1996-01-23 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide having enhanced binding affinity
US7037646B1 (en) 1990-01-11 2006-05-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5852188A (en) 1990-01-11 1998-12-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having chiral phosphorus linkages
US5587361A (en) 1991-10-15 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US6783931B1 (en) 1990-01-11 2004-08-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Amine-derivatized nucleosides and oligonucleosides
US5578718A (en) 1990-01-11 1996-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Thiol-derivatized nucleosides
WO1991013080A1 (en) 1990-02-20 1991-09-05 Gilead Sciences, Inc. Pseudonucleosides and pseudonucleotides and their polymers
US5214136A (en) 1990-02-20 1993-05-25 Gilead Sciences, Inc. Anthraquinone-derivatives oligonucleotides
US5321131A (en) 1990-03-08 1994-06-14 Hybridon, Inc. Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling
US5470967A (en) 1990-04-10 1995-11-28 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages
DK0455905T3 (da) 1990-05-11 1998-12-07 Microprobe Corp Dipsticks til nukleinsyrehybridiseringsassays og fremgangsmåde til kovalent immobilisering af oligonukleotider
US5981276A (en) 1990-06-20 1999-11-09 Dana-Farber Cancer Institute Vectors containing HIV packaging sequences, packaging defective HIV vectors, and uses thereof
US5608046A (en) 1990-07-27 1997-03-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds
US5138045A (en) 1990-07-27 1992-08-11 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5614617A (en) 1990-07-27 1997-03-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5688941A (en) 1990-07-27 1997-11-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods of making conjugated 4' desmethyl nucleoside analog compounds
US5610289A (en) 1990-07-27 1997-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogues
US5218105A (en) 1990-07-27 1993-06-08 Isis Pharmaceuticals Polyamine conjugated oligonucleotides
US5677437A (en) 1990-07-27 1997-10-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5618704A (en) 1990-07-27 1997-04-08 Isis Pharmacueticals, Inc. Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling
US5541307A (en) 1990-07-27 1996-07-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof
US5489677A (en) 1990-07-27 1996-02-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms
US5602240A (en) 1990-07-27 1997-02-11 Ciba Geigy Ag. Backbone modified oligonucleotide analogs
US5623070A (en) 1990-07-27 1997-04-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Heteroatomic oligonucleoside linkages
US5245022A (en) 1990-08-03 1993-09-14 Sterling Drug, Inc. Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides
MY107332A (en) 1990-08-03 1995-11-30 Sterling Drug Inc Compounds and methods for inhibiting gene expression.
US5512667A (en) 1990-08-28 1996-04-30 Reed; Michael W. Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides
US5214134A (en) 1990-09-12 1993-05-25 Sterling Winthrop Inc. Process of linking nucleosides with a siloxane bridge
US5561225A (en) 1990-09-19 1996-10-01 Southern Research Institute Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages
US5596086A (en) 1990-09-20 1997-01-21 Gilead Sciences, Inc. Modified internucleoside linkages having one nitrogen and two carbon atoms
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
EP0556301B1 (en) 1990-11-08 2001-01-10 Hybridon, Inc. Incorporation of multiple reporter groups on synthetic oligonucleotides
GB9100304D0 (en) 1991-01-08 1991-02-20 Ici Plc Compound
US7015315B1 (en) 1991-12-24 2006-03-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligonucleotides
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
US5371241A (en) 1991-07-19 1994-12-06 Pharmacia P-L Biochemicals Inc. Fluorescein labelled phosphoramidites
US5571799A (en) 1991-08-12 1996-11-05 Basco, Ltd. (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
US5252479A (en) 1991-11-08 1993-10-12 Research Corporation Technologies, Inc. Safe vector for gene therapy
US6235887B1 (en) 1991-11-26 2001-05-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation directed by oligonucleotides containing modified pyrimidines
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
US6277603B1 (en) 1991-12-24 2001-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules
KR940703846A (ko) 1991-12-24 1994-12-12 비. 린네 파샬 갭(gap)이 형성된 2′ 변성된 올리고뉴클레오티드(gapped 2′ modifed oligonucleotides)
US5595726A (en) 1992-01-21 1997-01-21 Pharmacyclics, Inc. Chromophore probe for detection of nucleic acid
US5565552A (en) 1992-01-21 1996-10-15 Pharmacyclics, Inc. Method of expanded porphyrin-oligonucleotide conjugate synthesis
DE4203923A1 (de) 1992-02-11 1993-08-12 Henkel Kgaa Verfahren zur herstellung von polycarboxylaten auf polysaccharid-basis
US5633360A (en) 1992-04-14 1997-05-27 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
US5587308A (en) 1992-06-02 1996-12-24 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter
US5272250A (en) 1992-07-10 1993-12-21 Spielvogel Bernard F Boronated phosphoramidate compounds
EP0786522A2 (en) 1992-07-17 1997-07-30 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic RNA molecules for treatment of stenotic conditions
US6346614B1 (en) 1992-07-23 2002-02-12 Hybridon, Inc. Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
US5374525A (en) 1992-09-30 1994-12-20 University Of Utah Research Foundation Methods to determine predisposition to hypertension and association of variant angiotensinogen gene and hypertension
EP1024198A3 (en) 1992-12-03 2002-05-29 Genzyme Corporation Pseudo-adenoviral vectors for the gene therapy of haemophiliae
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5574142A (en) 1992-12-15 1996-11-12 Microprobe Corporation Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery
US5476925A (en) 1993-02-01 1995-12-19 Northwestern University Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups
GB9304618D0 (en) 1993-03-06 1993-04-21 Ciba Geigy Ag Chemical compounds
JPH08508491A (ja) 1993-03-31 1996-09-10 スターリング ウインスロップ インコーポレイティド ホスホジエステル結合をアミド結合に置き換えたオリゴヌクレオチド
US5955591A (en) 1993-05-12 1999-09-21 Imbach; Jean-Louis Phosphotriester oligonucleotides, amidites and method of preparation
US6015886A (en) 1993-05-24 2000-01-18 Chemgenes Corporation Oligonucleotide phosphate esters
US6294664B1 (en) 1993-07-29 2001-09-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of oligonucleotides
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
CA2176256A1 (en) 1993-11-16 1995-05-26 Lyle John Arnold, Jr. Synthetic oligomers having chirally pure phosphonate internucleosidyl linkages mixed with non-phosphonate internucleosidyl linkages
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5599922A (en) 1994-03-18 1997-02-04 Lynx Therapeutics, Inc. Oligonucleotide N3'-P5' phosphoramidates: hybridization and nuclease resistance properties
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5625050A (en) 1994-03-31 1997-04-29 Amgen Inc. Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics
US6054299A (en) 1994-04-29 2000-04-25 Conrad; Charles A. Stem-loop cloning vector and method
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US5597696A (en) 1994-07-18 1997-01-28 Becton Dickinson And Company Covalent cyanine dye oligonucleotide conjugates
US5580731A (en) 1994-08-25 1996-12-03 Chiron Corporation N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith
US6608035B1 (en) 1994-10-25 2003-08-19 Hybridon, Inc. Method of down-regulating gene expression
US5665557A (en) 1994-11-14 1997-09-09 Systemix, Inc. Method of purifying a population of cells enriched for hematopoietic stem cells populations of cells obtained thereby and methods of use thereof
US6166197A (en) 1995-03-06 2000-12-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds having pyrimidine nucleotide (S) with 2'and 5 substitutions
ATE327244T1 (de) 1995-03-06 2006-06-15 Isis Pharmaceuticals Inc Verfahren zur synthese von 2'-0-substituierten pyrimidinen und oligomere davon
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
WO1997014809A2 (en) 1995-10-16 1997-04-24 Dana-Farber Cancer Institute Novel expression vectors and methods of use
US6160109A (en) 1995-10-20 2000-12-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Preparation of phosphorothioate and boranophosphate oligomers
US5854033A (en) 1995-11-21 1998-12-29 Yale University Rolling circle replication reporter systems
US6444423B1 (en) 1996-06-07 2002-09-03 Molecular Dynamics, Inc. Nucleosides comprising polydentate ligands
US6172209B1 (en) 1997-02-14 2001-01-09 Isis Pharmaceuticals Inc. Aminooxy-modified oligonucleotides and methods for making same
US6576752B1 (en) 1997-02-14 2003-06-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Aminooxy functionalized oligomers
US6639062B2 (en) 1997-02-14 2003-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Aminooxy-modified nucleosidic compounds and oligomeric compounds prepared therefrom
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
DE69841002D1 (de) 1997-05-14 2009-09-03 Univ British Columbia Hochwirksame verkapselung von nukleinsäuren in lipidvesikeln
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
NZ503765A (en) 1997-09-12 2002-04-26 Exiqon As Bi-cyclic and tri-cyclic nucleotide analogues
US6528640B1 (en) 1997-11-05 2003-03-04 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Synthetic ribonucleic acids with RNAse activity
US6617438B1 (en) 1997-11-05 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. Oligoribonucleotides with enzymatic activity
US6320017B1 (en) 1997-12-23 2001-11-20 Inex Pharmaceuticals Corp. Polyamide oligomers
US7273933B1 (en) 1998-02-26 2007-09-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for synthesis of oligonucleotides
US7045610B2 (en) 1998-04-03 2006-05-16 Epoch Biosciences, Inc. Modified oligonucleotides for mismatch discrimination
US6531590B1 (en) 1998-04-24 2003-03-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. Processes for the synthesis of oligonucleotide compounds
US6867294B1 (en) 1998-07-14 2005-03-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages
BR9914773A (pt) 1998-10-09 2002-02-05 Ingene Inc Conjunto de elementos genéricos, método para a produção de dna de cordão único, transcrição de mrna, construção de ácido nucléico, transcrição de ssdna, vetor, sistema vetor, célula hospedeira, conjunto para a produção de uma sequência de ácido nucléico de cordão único, método para a produção in vivo ou in vitro de uma sequência de ácido nucléico de cordão único, transcrição de cdna de cordão único, ácido nucléico inibidor, molécula heteroduplex, e composição farmacêutica
AU6430599A (en) 1998-10-09 2000-05-01 Cytogenix, Inc. Enzymatic synthesis of ssdna
US6465628B1 (en) 1999-02-04 2002-10-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process for the synthesis of oligomeric compounds
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
CA2372085C (en) 1999-05-04 2009-10-27 Exiqon A/S L-ribo-lna analogues
US6593466B1 (en) 1999-07-07 2003-07-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Guanidinium functionalized nucleotides and precursors thereof
US6147200A (en) 1999-08-19 2000-11-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-O-acetamido modified monomers and oligomers
WO2001053307A1 (en) 2000-01-21 2001-07-26 Geron Corporation 2'-arabino-fluorooligonucleotide n3'→p5'phosphoramidates: their synthesis and use
EP1334109B1 (en) 2000-10-04 2006-05-10 Santaris Pharma A/S Improved synthesis of purine locked nucleic acid analogues
WO2005078097A2 (en) 2004-02-10 2005-08-25 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING MULTIFUNCTIONAL SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (Multifunctional siNA)
CA2489174C (en) 2002-07-10 2013-02-05 Thomas Tuschl Rna-interference by single-stranded rna molecules
US6878805B2 (en) 2002-08-16 2005-04-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Peptide-conjugated oligomeric compounds
AU2003291753B2 (en) 2002-11-05 2010-07-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
ATE555118T1 (de) 2003-08-28 2012-05-15 Takeshi Imanishi Neue synthetische nukleidsäuren vom typ mit quervernetzter n-o-bindung
US7427605B2 (en) 2005-03-31 2008-09-23 Calando Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof
EP1984381B1 (en) 2006-01-27 2010-09-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
WO2007091269A2 (en) 2006-02-08 2007-08-16 Quark Pharmaceuticals, Inc. NOVEL TANDEM siRNAS
ES2564303T3 (es) 2006-04-07 2016-03-21 Idera Pharmaceuticals, Inc. Compuestos de ARN inmunomodulador estabilizado (SIMRA) para TLR7 y TLR8
CA2688321A1 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
WO2008154401A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
ATE538127T1 (de) 2007-07-05 2012-01-15 Isis Pharmaceuticals Inc 6-disubstituierte bicyclische nukleinsäureanaloga
CN101795715A (zh) 2007-07-09 2010-08-04 艾德拉药物股份有限公司 稳定化免疫调控性rna(simra)化合物
CA2708173C (en) 2007-12-04 2016-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Targeting lipids
NZ588583A (en) 2008-04-15 2012-08-31 Protiva Biotherapeutics Inc Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
CA2764158A1 (en) 2009-06-01 2010-12-09 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Polynucleotides for multivalent rna interference, compositions and methods of use thereof
TR201811076T4 (tr) 2009-06-10 2018-08-27 Arbutus Biopharma Corp Geliştirilmiş lipit formulasyonu.
US8927513B2 (en) 2009-07-07 2015-01-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5′ phosphate mimics
WO2011005861A1 (en) 2009-07-07 2011-01-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide end caps
ES2538347T3 (es) 2009-08-27 2015-06-19 Idera Pharmaceuticals, Inc. Composiciones para inhibir expresión genética y usos de las mismas
ES2800065T3 (es) 2011-11-18 2020-12-23 Alnylam Pharmaceuticals Inc Agentes de iARN, composiciones y métodos de uso de los mismos para tratar enfermedades asociadas con transtiretina (TTR)
CN105378085B (zh) 2013-05-01 2019-02-15 Ionis制药公司 用于调节hbv和ttr表达的组合物和方法
CN117701562A (zh) 2017-09-14 2024-03-15 箭头药业股份有限公司 用于抑制血管生成素-样3(ANGPTL3)的表达的RNAi剂和组合物以及使用方法
KR20220115946A (ko) * 2019-11-13 2022-08-19 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 안지오텐시노겐 (agt) 관련 장애를 치료하기 위한 방법 및 조성물

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