BR112019021359A2 - moléculas, composições, compostos, métodos para administrar um sirna, para preparar um composto e para tratar uma infecção, composto ou sal, conjugado de galnac e uso de um composto - Google Patents

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Abstract

trata-se de certos ácidos nucleicos (por exemplo, moléculas de sirna de fita dupla), assim como conjugados que compreendem uma porção química-alvo, um sirna de fita dupla, e grupos ligantes opcionais. certas modalidades também fornecem métodos sintéticos úteis para preparar os conjugados. os conjugados são úteis para alvejar sirna de fita dupla terapêutico ao fígado e tratar doenças de fígado incluindo hepatite (por exemplo, hepatite b e hepatite d).

Description

“MOLÉCULAS, COMPOSIÇÕES, COMPOSTOS, MÉTODOS PARA ADMINISTRAR UM SIRNA, PARA PREPARAR UM COMPOSTO E PARA TRATAR UMA INFECÇÃO, COMPOSTO OU SAL, CONJUGADO DE GALNAC E USO DE UM COMPOSTO”
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS [001] Este pedido de patente reivindica o benefício de prioridade do Pedido U.S. de n° de série 62/525.071, depositado em 26 de junho de 2017 e do Pedido U.S. de n° de série 62/484.247, depositado em 11 de abril de 2017, cujos pedidos são incorporados ao presente documento, a título de referência.
FUNDAMENTOS [002] Várias doenças são específicas do fígado, por exemplo, Hepatite B e esteato-hepatite não alcoólica (NASH). Consequentemente, seria benéfico ter composições terapêuticas que possam ser direcionadas principalmente ao fígado, rim, coração, pâncreas ou outros órgãos em indivíduos.
[003] Os ácidos nucleicos, que incluem siRNA são úteis como agentes terapêuticos.
[004] Atualmente, há uma necessidade por composições e métodos que podem ser usados para administrar (por exemplo, alvejar) ácidos nucleicos terapêuticos, como siRNA de fita dupla, em indivíduos vivos.
BREVE SUMÁRIO [005] A invenção fornece moléculas de ácido nucleico (por exemplo, moléculas de siRNA de fita dupla terapêutico), assim como compostos, composições e métodos que podem ser usados para alvejar tais ácidos nucleicos (por exemplo, ao fígado).
[006] Consequentemente, num aspecto, esta invenção fornece uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada do grupo que consiste em siRNA 1 (SEQ ID NO:1 e 2), 2 (SEQ ID NO:3 e 4), 3 (SEQ ID NO:5 e 6), 4 (SEQ
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ID N0:7 e 8), 5 (SEQ ID N0:9 e 10), 6 (SEQ ID NO:11 e 12), 7 (SEQ ID NO:13 e 14), 8 (SEQ ID NO:15 e 16), 9 (SEQ ID NO:17 e 18), 10 (SEQ ID NO:19 e 20), (SEQ ID NO:21 e 22), 12 (SEQ ID NO:23 e 24), 13 (SEQ ID NO:25 e
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[007]
Outro aspecto desta invenção fornece um composto de fórmula I [008] em que:
[009] [010] [011] [012]
Figure BR112019021359A2_D0001
R1 é um ligante de direcionamento;
L1 está ausente ou é um grupo de ligação;
L2 está ausente ou é um grupo de ligação;
R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada do siRNA de fita dupla da Tabela 1;
[013] o anel A é ausente, uma cicloalquila de 3 a 20 membros, uma arila de 5 a 20 membros, uma heteroarila de 5 a 20 membros ou uma heterocicloalquila de 3 a 20 membros;
[014] cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -Ci-2alquil-ORB, C1-10alquil C2-10
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3/217 alquenila, e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquil C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi e Ci-salcóxi;
[015] RB é hidrogênio, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e [016] néO, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10;
[017] ou um sal do mesmo.
[018] Outro aspecto da invenção fornece conjugados de GaINAc que compreendem um dos siRNAs descritos no presente documento, cujos conjugados não são limitados a conjugados que compreendem os liganteaglutinantes divulgados no presente documento. Por exemplo, um aspecto da invenção fornece um conjugado de GaINAc de Fórmula X:
A-B-C (X) [019] em que A é um ligante de direcionamento;
[020] B é um aglutinante opcional; e [021] C é uma molécula de siRNA descrita no presente documento.
[022] O siRNA de fita dupla terapêutico descrito no presente documento, assim como compostos e composições que compreendem tal siRNA, podem ser usados para tratar vírus da Hepatite B e vírus da Hepatite B/vírus da Hepatite D.
[023] A invenção também fornece intermediários sintéticos e métodos divulgados no presente documento que são úteis para preparar compostos da fórmula I.
[024] Outros objetivos, recursos e vantagens da presente invenção serão evidentes a um versado na técnica a partir da descrição
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4/217 detalhada e das Figuras a seguir.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [025] Figura 1: Ilustra um composto intermediário da fórmula le, em que um ligante/aglutinante de direcionamento é ligado a um suporte de fase sólida, e em que Pg1 é a DMTr de grupo protetor.
[026] Figura 2: Ilustra um composto representativo de fórmula Id, em que um ligante de direcionamento é ligado a um suporte de fase sólida, com um ácido nucleico covalentemente ligado.
[027] Figura 3: Ilustra um composto representativo da fórmula Id, em que um conjugado de ligante de direcionamento e ácido nucleico foi clivado a partir de um suporte de fase sólida e desprotegido para fornecer o composto da fórmula I.
[028] No pedido, incluindo Figuras, Exemplos e Esquemas, deve ser entendido que um oligonucleotídeo pode ser uma molécula de siRNA de fita dupla, conforme descrito na Tabela 1.
DESCRIÇÃO DETALHADA [029] Conforme usado no presente documento, os termos a seguir têm os significados atribuídos aos mesmos a menos que seja especificado o contrário.
[030] O termo “conjugado” conforme usado no presente documento inclui compostos de fórmula (I) que compreendem um oligonucleotídeo (por exemplo, uma molécula de siRNA) ligada a um ligante de direcionamento. Desse modo, os termos composto e conjugado podem ser usados no presente documento de modo intercambiável.
[031] O termo “RNA de interferência pequeno” ou “siRNA”, conforme usado no presente documento, se refere ao RNA de fita dupla (isto é, RNA duplex) que tem capacidade para reduzir ou inibir a expressão de um gene ou sequência-alvo (por exemplo, mediando-se a degradação ou inibindo a
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5/217 tradução de mRNAs que são complementares à sequência de siRNA) quando o siRNA estiver na mesma célula que o gene ou a sequência-alvo. O siRNA pode ter identidade substancial ou completa com o gene ou sequência-alvo, ou pode compreender uma região de disparidade (isto é, um motivo de disparidade). Em certas modalidades, os siRNAs podem ter cerca de 19 a 25 nucleotídeos (duplex) de comprimento, e têm, de preferência, cerca de 20 a 24, 21 a 22 ou 21 a 23 nucleotídeos de comprimento. Os siRNAs duplex podem compreender saliências de 3’ de cerca de 1 a cerca de 4 nucleotídeos ou cerca de 2 a cerca de 3 nucleotídeos e terminais de fosfato de 5’. Exemplos de siRNA incluem, sem limitação, uma molécula de polinucleotídeo de fita dupla reunida a partir de duas moléculas de filamento separado, em que um filamento é o filamento de senso e o outro é o filamento de antissenso complementar.
[032] Em certas modalidades, a saliência de 5’ e/ou 3’ numa ou ambas as fitas do siRNA compreende 1 a 4 (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) nucleotídeos de desoxitimidina (t ou dT) modificada e/ou não modificada, 1 a 4 (por exemplo, 1,2, 3 ou 4) ribonucleotídeos de uridina modificados (por exemplo, 2’OMe) e/ou não modificados (II), e/ou 1 a 4 (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) ribonucleotídeos ou desoxirribonucleotídeos modificados (por exemplo, 2’0Me) e/ou não modificados que têm complementaridade com a sequência-alvo (por exemplo, saliência de 3’ na fita antissenso) ou a fita complementar da mesma (por exemplo, saliência 3’ na fita senso).
[033] De preferência, os siRNAs são quimicamente sintetizados. O siRNA também pode ser gerado por meio de divagem de dsRNA mais longo (por exemplo, dsRNA maior que cerca de 25 nucleotídeos de comprimento) com a E. coli RNase III ou Dicer. Estas enzimas processam o dsRNA para o siRNA biologicamente ativo (consultar, por exemplo, Yang et aí, Proc. Natl. Acad. Sei. EUA, 99:9942-9947 (2002); Calegari et aí, Proc. Natl. Acad. Sei. EUA, 99:14236 (2002); Byrom et aí, Ambion TechNotes, 10(1):4-6 (2003); Kawasaki et aí,
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Nucleic Acids Res., 31:981-987 (2003); Knight et al., Science, 293:2269-2271 (2001); e Robertson et al., J. Biol. Chem., 243:82 (1968)). De preferência, o dsRNA tem pelo menos 50 nucleotídeos a cerca de 100, 200, 300, 400 ou 500 nucleotídeos de comprimento. Um dsRNA pode ser tão longo quanto 1000,1500, 2000, 5000 nucleotídeos de comprimento, ou mais longo. O dsRNA pode codificar toda uma transcrição de gene ou uma transcrição de gene parcial. Em certos casos, o siRNA pode ser codificado por um plasmídeo (por exemplo, transcrito como sequências que se dobram automaticamente em duplexes com alças em formato de grampo).
[034] A expressão “inibir a expressão de um gene-alvo” se refere à capacidade de um siRNA da invenção para silenciar, reduzir ou inibir a expressão de um gene-alvo. Para examinar a extensão do silenciamento de gene, uma amostra de teste (por exemplo, uma amostra biológica de um organismo de interesse que expressa o gene-alvo ou uma amostra de células na cultura que expressa o gene-alvo) é colocada em contato com um siRNA que silencia, reduz ou inibe a expressão do gene-alvo. A expressão do gene-alvo na amostra de teste é comparada à expressão do gene-alvo numa amostra de controle (por exemplo, uma amostra biológica de um organismo de interesse que expressa o gene-alvo ou uma amostra de células na cultura que expressa o gene-alvo) que não é colocado em contato com o siRNA. As amostras de controle (por exemplo, amostras que expressam o gene-alvo) podem ser atribuídas com um valor de 100%. Em modalidades específicas, o silenciamento, a inibição ou a redução de expressão de um gene-alvo é obtido quando o valor da amostra de teste em relação à amostra de controle (por exemplo, tampão apenas, uma sequência de siRNA que direciona um gene diferente, uma sequência de siRNA embaralhada, etc.) é cerca de 100%, 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%,
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35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% ou 0%. Os ensaios incluem, sem limitação, a exam inação de proteína ou níveis de mRNA usando técnicas conhecidas por aqueles versados na arte, como, por exemplo, dot blots, Northern blots, hibridização in situ, ELISA, imunoprecipitação, função enzimática, assim como ensaios fenotípicos conhecidos por aqueles versados na arte.
[035] O termo “grupo de ativação sintético” se refere a um grupo que pode ser fixado a um átomo para ativar aquele átomo para permitir que o mesmo forme uma ligação covalente com um outro grupo reativo. Compreendese que a natureza do grupo de ativação sintético pode depender do átomo que o mesmo está ativando. Por exemplo, quando o grupo de ativação sintética é fixado a um átomo de oxigênio, o grupo de ativação sintética é um grupo que ativará este átomo de oxigênio para formar uma ligação (por exemplo, uma ligação de éster, carbamato ou éter) com um outro grupo reativo. Tais grupos de ativação sintética são conhecidos. Exemplos de grupos de ativação sintética que podem ser fixados a um átomo de oxigênio incluem, mas sem limitação, acetato, succinato, triflato e mesilato. Quando o grupo de ativação sintética for fixado a um átomo de oxigênio de um ácido carboxílico, o grupo de ativação sintética pode ser um grupo que é derivável de um reagente de acoplamento conhecido (por exemplo, um reagente de acoplamento de amida conhecido). Tais reagentes de acoplamento são conhecidos. Exemplos de tais reagentes de acoplamento incluem, mas sem limitação, Ν,Ν’-diciclo-hexilcarbodimida (DCC), hidroxibenzotriazol (HOBt), N-(3-dimetilaminopropil)-N’-etilcarbonato (EDC), (benzothazol-1-iloxi)tris(dimetilamino)fosfônio hexafluorofosfato (BOP), benzothazol-1-il-oxitripirrolidinofosfônio hexafluorofosfato (PyBOP) ou Obenzothazol-1-il-N,N,N’,N’-tetrametilurônio hexafluorofosfato (HBTll).
[036] Uma “quantidade eficaz” ou “quantidade terapeuticamente eficaz” de um ácido nucleico terapêutico, como siRNA, é uma quantidade suficiente para produzir o efeito desejado, por exemplo, uma inibição de
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8/217 expressão de uma sequência-alvo em comparação com o nível de expressão normal detectado na ausência de um siRNA. Em modalidades particulares, a inibição de expressão de um gene-alvo ou sequência-alvo é alcançada quando o valor obtido com um siRNA em relação ao controle (por exemplo, apenas tampão, uma sequência de siRNA que direciona um gene diferente, uma sequência de siRNA embaralhada, etc.) é cerca de 100%, 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% ou 0%. Os ensaios adequados para medir a expressão de um gene-alvo ou sequência-alvo incluem, mas sem limitação, a exam inação de proteína ou níveis de mRNA usando técnicas conhecidas por aqueles versados na arte, como, por exemplo, dot blots, Northern blots, hibridização in situ, ELISA, imunoprecipitação, função enzimática, assim como ensaios fenotípicos conhecidos por aqueles versados na arte.
[037] O termo “ácido nucleico” conforme usado no presente documento se refere a um polímero que contém pelo menos dois nucleotídeos (por exemplo, desoxirribonucleotídeos ou ribonucleotídeos) em qualquer forma de fita única ou dupla e inclui DNA e RNA. “Nucleotídeos” contêm uma desoxirribose (DNA) ou hbose (RNA) de açúcar, uma base e um grupo fosfato. Os nucleotídeos são ligados juntos através dos grupos fosfato. “Bases” incluem purinas e pirimidinas, que incluem adicionalmente compostos naturais adenina, timina, guanina, citosina, uracila, inosina e análogos naturais, e derivados sintéticos de purinas e pirimidinas, que incluem, mas sem limitação, modificações que originam novos grupos reativos como, mas sem limitação, aminas, álcoois, tióis, carboxilatos e haletos de alquila. Os ácidos nucleicos incluem ácidos nucleicos que contêm análogos de nucleotídeo conhecidos ou resíduos ou aglutinações de cadeia principal modificados, que são sintéticos, de ocorrência natural e de ocorrência não natural, e que têm propriedades de
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9/217 ligação semelhantes àquelas do ácido nucleico de referência. Exemplos de tais análogos e/ou resíduos modificados incluem, sem limitação, fosforotioatos, fosforamidatos, fosfonatos de metila, fosfonatos de metila quiral, hbonucleotídeos de 2’-0-metila e peptídeo-ácidos nucleicos (PNAs). Adicionalmente, os ácidos nucleicos podem incluir uma ou mais porções químicas de UNA.
[038] O termo “ácido nucleico” inclui qualquer oligonucleotídeo ou polinucleotídeo, com fragmentos que contêm até 60 nucleotídeos geralmente denominados oligonucleotídeos, e fragmentos mais longos denominados polinucleotídeos. Um desoxirribo-oligonucleotídeo consiste num açúcar com 5 carbonos chamado de desoxirribose unido covalentemente ao fosfato nos carbonos 5’ e 3’ de seu açúcar para formar um polímero alternante, não ramificado. O DNA pode estar na forma de, por exemplo, moléculas antissenso, DNA de plasmídeo, DNA pré-condensado, um produto de PCR, vetores, cassetes de expressão, sequências quiméhcas, DNA cromossômicos ou derivados e combinações destes grupos. Um ribo-oligonucleotídeo consiste numa estrutura de repetição similar em que o açúcar com 5 carbonos é ribose. O RNA pode estar na forma, por exemplo, de RNA de interferência pequeno (siRNA), dsRNA de substrato de Dicer, RNA de formato de grampo pequeno (shRNA), RNA de interferência assimétrico (aiRNA), microRNA (miRNA), mRNA, tRNA, rRNA, tRNA, RNA viral (vRNA) e combinações dos mesmos. Consequentemente, no contexto desta invenção, os termos “polinucleotídeo” e “oligonucleotídeo” se referem a um polímero ou oligômero de nucleotídeo ou monômeros de nucleosídeo que consistem em bases de ocorrência natural, açúcares e aglutinações (de cadeia principal) interaçúcares. Os termos “polinucleotídeo” e “oligonucleotídeo” também incluem polímeros ou oligômeros que compreendem monômeros de ocorrência não natural, ou porções dos mesmos, que funcionam de modo semelhante. Tais oligonucleotídeos
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10/217 modificados ou substituídos são, frequentemente, preferenciais nas formas nativas devido às propriedades como, por exemplo, absorção celular intensificada, imunogenicidade reduzida e estabilidade aumentada na presença de nucleases.
[039] A menos que indicado de outro modo, uma sequência de ácido nucleico particular também abrange implicitamente variantes modificadas de modo conservative da mesma (por exemplo, substituições de códon degenerado), alelos, ortólogos, SNPs e sequências complementares, assim como a sequência explicitamente indicada. Especificamente, as substituições de códon degenerado podem ser alcançadas gerando-se sequências nas quais a terceira posição de um ou mais códons selecionados (ou todos) é substituída por uma base misturada e/ou resíduos de desoxi-inosina (Batzer et al., Nucleic Acid Res., 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem., 260:2605-2608 (1985); Rossolini etal., Mol. Cell. Probes, 8:91-98 (1994)).
[040] O termo “gene” se refere a uma sequência de ácidos nucleicos (por exemplo, DNA ou RNA) que compreende sequências de codificação de comprimento parcial ou de comprimento total necessárias para a produção de urn polipeptideo ou polipeptideo de precursor.
[041 ] “Produto de gene”, conforme usado no presente documento, se refere a um produto de um gene como uma transcrição de RNA ou um polipeptideo.
[042] Conforme usado no presente documento, o termo “alquila”, em si ou como parte de outro substituinte, significa, a menos que declarado de outro modo, um radical de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada, que tem o número de átomos de carbono designado (isto e, Ci-8 significa um a oito carbonos). Exemplos de grupos alquila incluem metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, iso-butila, sec-butila, n-pentila, n-hexila, n-heptila, noctila, e semelhantes. O termo “alquenila” se refere a um radical alquila
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11/217 insaturado que tem uma ou mais ligações duplas. De modo similar, o termo “alquinila” se refere a um radical alquila insaturado que tem uma ou mais ligações triplas. Exemplos de tais grupos alquila insaturados incluem vinila, 2-propenila, crotila, 2-isopentenila, 2-(butadienila), 2,4-pentadienila, 3-(1,4-pentadienila), etinila, 1- e 3-propinila, 3-butinila, e os homólogos e isômeros superiores.
[043] O termo “alquileno” em si ou como parte de outro substituinte significa um radical divalente derivado de um alcano (incluindo alcanos lineares e ramificados), conforme exemplificado por -CH2CH2CH2CH2- e -CH(CH3)CH2CH2-.
[044] O termo “cicloalquila”, “carbocíclico” ou “carbociclo” se refere ao sistema de anel de hidrocarboneto que tem 3 a 20 de número geral de átomos de anel (por exemplo, cicloalquila de 3 a 20 membros é uma cicloalquila com 3 a 20 átomos de anel, ou C3-20 cicloalquila é uma cicloalquila com 3 a 20 átomos de anel de carbono) e para uma cicloalquila de 3 a 5 membros completamente saturada ou que tem no máximo uma dupla ligação entre vértices de anel e para uma cicloalquila de 6 membros ou maior completamente saturada ou que tem no máximo duas ligações duplas entre vértices de anel. Conforme usado no presente documento, “cicloalquila”, “carbocíclico”, ou “carbociclo” também é destinado se referir ao sistema de anel de hidrocarboneto bicíclico, policíclico e espirocíclico, como, por exemplo, biciclo[2.2.1]heptano, pinano, biciclo[2.2.2]octano, adamantano, norboreno, C5-12 alcano espirocíclico, etc. Conforme usado no presente documento, os termos, “alquenila”, “alquinila”, “cicloalquila”, “carbociclo” e “carbocíclico” são destinados a incluir variantes mono e poli-halogenados dos mesmos.
[045] O termo “heterocicloalquila”, “heterocíclico” ou “heterociclo” se refere a um radical de sistema de anel saturado ou parcialmente insaturado que tem, em geral, de 3 a 20 átomos de anel (por exemplo, heterocicloalquila de 3 a 20 membros é um radical heterocicloalquila com 3 a 20 átomos de anel, uma
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C2-19 heterocicloalquila é uma heterocicloalquila que tem 3 a 10 átomos de anel com entre 2 a 19 átomos de anel sendo carbono) que contém de um a dez heteroátomos selecionados de N, O e S, em que os átomos de nitrogênio e enxofre são opcionalmente oxidados, átomo de nitrogênio (ou átomos de nitrogênio) é opcionalmente quaternizado, como átomos de anel. A menos que declarado de outro modo, um anel “heterocicloalquila”, “heterocíclico” ou “heterociclo” pode ser um sistema de anel monocíclico, um bicíclico, espirocíclico ou policíclico. Os exemplos não limitantes de anéis “heterocicloalquila”, “heterocíclico” ou “heterociclo” incluem pirrolidina, piperidina, N-metilpiperidina, imidazolidina, pirazolidina, butirolactama, valerolactama, imidazolidinona, hidantoína, dioxolano, ftalimida, piperidina, pihmidina-2,4(1 H,3H)-diona, 1,4dioxano, morfolina, tiomorfolina, tiomorfolina-S-óxido, tiomorfolina-S,S-óxido, piperazina, pirano, piridona, 3-pirrolina, tiopirano, pirona, tetra-hidrofurano, tetrahidrotiofeno, quinuclidina, tropano, 2-azaspiro[3.3]heptano, (1R,5S)-3azabiciclo[3.2.1]octano, (1s,4s)-2-azabiciclo[2.2.2]octano, (1 R,4R)-2-oxa-5azabiciclo[2.2.2]octano e semelhantes. Um grupo “heterocicloalquila”, “heterocíclico” ou “heterociclo” pode ser fixado ao restante da molécula através de um ou mais carbonos de anel ou heteroátomos. Uma “heterocicloalquila”, “heterocíclico” ou “heterociclo” pode incluir variantes mono e poli-halogenadas dos mesmos.
[046] Os termos “alcóxi”, e “alquiltio”, são usados em seu sentido convencional, e se referem àqueles grupos alquila fixados ao restante da molécula por meio de um átomo de oxigênio (“oxi”) ou grupo tio, e incluem adicionalmente variantes mono e poli-halogenadas dos mesmos.
[047] Os termos “halo” ou “halogênio”, por si próprios ou como parte de outro substituinte, significam, a menos que declarado de outro modo, um átomo de flúor, cloro, bromo ou iodo. O termo “(halo)alquila” significa incluir tanto um substituinte “alquila” quanto um substituinte “haloalquila”.
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Adicionalmente, o termo “haloalquila” é destinado a incluir mono-haloalquila e poli-haloalquila. Por exemplo, o termo “C1-4 haloalquila” é destinado a incluir trifluorometila, 2,2,2-trifluoroetila, 4-clorobutila, 3-bromopropila, difluorometila e semelhantes.
[048] O termo “arila” significa um grupo aromático carbocíclico que tem 6 a 14 átomos de carbono, fundido ou não a um ou mais grupos. Exemplos de grupos arila incluem fenila, naftila, bifenila e semelhantes a menos que seja definido o contrário.
[049] O termo “heteroarila” se refere um anel arila (ou anéis arila) que contém de um a cinco heteroátomos selecionados de N, O e S, em que os átomos de nitrogênio e enxofre são opcionalmente oxidados, e o átomo de nitrogênio (ou átomos de nitrogênio) é opcionalmente quaternizado. Um grupo heteroarila pode ser fixado ao restante da molécula através de um heteroátomo. Exemplos de grupos heteroarila incluem piridila, piridazinila, pirazinila, pirim indinila, triazinila, quinolinila, quinoxalinila, quinazolinila, cinolinila, ftalaziniila, benzotriazinila, purinila, benzimidazolila, benzopirazolila, benzothazolila, benzisoxazolila, isobenzofuhla, isoindolila, indolizinila, benzotriazinila, tienopiridinila, tienopirim idinila, pirazolopirimidinila, imidazopihdinas, benzotiaxolila, benzofuranila, benzotienila, indolila, quinolila, isoquinolila, isotiazolila, pirazolila, indazolila, pteridinila, imidazolila, triazolila, tetrazolila, oxazolila, isoxazolila, tiadiazolila, pirrolila, tiazolila, furila, tienila e semelhantes.
[050] O termo sacarídeo inclui monossacarídeos, dissacarídeos e thssacarídeos. O termo inclui glicose, sacarose, frutose, galactose e ribose, assim como desóxi açúcares, como desoxirribose e amino açúcar, como galactosamina. Os derivados de sacarídeo podem ser, convenientemente, preparados conforme descrito na Publicação de Pedidos de Patente Internacional Números WO 96/34005 e 97/03995. Um sacarídeo pode ser
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14/217 convenientemente ligado ao restante de um composto da fórmula I através de uma ligação de éter, uma ligação de tioéter (por exemplo, um S-glicosídeo), um nitrogênio de amina (por exemplo, um /V-glicosídeo), ou uma ligação de carbonocarbono (por exemplo, um C-glicosídeo). Numa modalidade, o sacarídeo pode ser convenientemente ligado ao restante de um composto da fórmula I através de uma ligação de éter. Numa modalidade, o termo sacarídeo inclui um grupo da fórmula:
Figure BR112019021359A2_D0002
[051] em que:
[052] X é NR3, e Y é selecionado de -(C=O)R4, -SO2R5 e -(C=O)NR6R7; ou X é -(C=O)- e Y é NR8R9;
[053] R3 é hidrogênio ou (Ci-C4)alquila;
[054] R4, R5, R6, R7, R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, (Ci-Cs)alquila, (C-iC8)haloalquila, (Ci-Cs)alc0xi e (C3-C6)cicloalquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, (Ci-C4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (C1C4)haloalcóxi;
[055] R10 é -OH, -NR8R9 ou - F; e [056] R11 é -OH, -NR8R9, -F ou heterociclo de 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, (CiC4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (Ci-C4)haloalcóxi. Numa outra modalidade, o sacarídeo pode ser selecionado do grupo que consiste em:
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Figure BR112019021359A2_D0003
[057] Numa outra modalidade, o sacarídeo pode ser:
Figure BR112019021359A2_D0004
[058] /V-acetilgalactosamina (GaINAc) GalPro.
[059] O termo “animal” inclui espécie de mamífero, como um ser humano, camundongo, rato, cachorro, gato, hamster, porquinho da índia, coelho, gado e semelhantes.
[060] O termo “lipídio” se refere a um grupo de compostos orgânicos que incluem, mas sem limitação, ésteres de ácidos graxos e são caracterizados por serem insolúveis em água, mas solúveis em muitos solventes orgânicos. Os mesmos são usualmente divididos em três classes: (1) “lipídios simples”, os quais incluem gorduras e óleos, assim como ceras; (2) “lipídios de composto”, os quais incluem fosfolipídios e glicolipídios; e (3) “lipídios derivados”, como esteroides.
[061] O termo “partícula de lipídio” inclui uma formulação de lipídio que pode ser usada para administrar um ácido nucleico terapêutico (por exemplo, siRNA) a um sítio alvo de interesse (por exemplo, célula, tecido, órgão e semelhantes). Em modalidades preferenciais, a partícula de lipídio da invenção é uma partícula de ácido nucleico-lipídio, que é tipicamente formada de um lipídio catiônico, um lipídio não catiônico (por exemplo, um fosfolipídio), um lipídio
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16/217 conjugado que impede a agregação da partícula (por exemplo, um PEG-lipídio), e opcionalmente colesterol. Tipicamente, o ácido nucleico terapêutico (por exemplo, siRNA) pode ser encapsulado na porção de lipídio da partícula, assim protegendo a mesma de degradação enzimática.
[062] O termo “núcleo denso de elétron”, quando usado para descrever uma partícula de lipídio da presente invenção, se refere à aparência escura da porção interior de uma partícula de lipídio quando visualizada com o uso de microscopia eletrônica de criotransmissão (“cryoTEM”). Algumas partículas de lipídio da presente invenção têm um núcleo denso de elétron e não têm uma estrutura de bicamada de lipídio. Algumas partículas de lipídio da presente invenção têm um núcleo denso de elétron, não têm uma estrutura de bicamada de lipídio, e têm uma estrutura de fase hexagonal ou cúbica inversa. Embora não se deseje se atrelar à teoria, considera-se que a embalagem de lipídio de não bicamada fornece uma rede tridimensional de cilindros de lipídio com água e ácido nucleico no interior, isto é, essencialmente, uma gotícula de lipídio impenetrada com canais aquosos que contêm o ácido nucleico.
[063] Conforme usado no presente documento, o termo “SNALP” se refere a uma partícula de ácido nucleico-lipídio estável. Uma SNALP é uma partícula feita de lipídios (por exemplo, um lipídio catiônico, um lipídio não catiônico, e um lipídio conjugado que impede a agregação da partícula), em que o ácido nucleico (por exemplo, siRNA) é completamente encapsulado no lipídio. Em certos casos, SNALP são extremamente úteis para aplicações sistemáticas, visto que podem exibir vidas úteis de circulação que seguem injeção intravenosa (i.v.), as mesmas podem se acumular em sítios distais (por exemplo, sítios fisicamente separados do sítio de administração), e as mesmas podem mediar a expressão de siRNA nestes sítios distais. O ácido nucleico pode ser complexado com um agente de condensação e encapsulado numa SNALP conforme estabelecido na Publicação PCT n° WO 00/03683, cuja divulgação é incorporada
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17/217 ao presente documento a título de referência, em sua totalidade, com todos os propósitos.
[064] As partículas de lipídio da invenção (por exemplo, SNALP) têm tipicamente um diâmetro médio de cerca de 30 nm a cerca de 150 nm, de cerca de 40 nm a cerca de 150 nm, de cerca de 50 nm a cerca de 150 nm, de cerca de 60 nm a cerca de 130 nm, de cerca de 70 nm a cerca de 110 nm, de cerca de 70 nm a cerca de 100 nm, de cerca de 80 nm a cerca de 100 nm, de cerca de 90 nm a cerca de 100 nm, de cerca de 70 a cerca de 90 nm, de cerca de 80 nm a cerca de 90 nm, de cerca de 70 nm a cerca de 80 nm, ou cerca de 30 nm, 35 nm, 40 nm, 45 nm, 50 nm, 55 nm, 60 nm, 65 nm, 70 nm, 75 nm, 80 nm, 85 nm, 90 nm, 95 nm, 100 nm, 105 nm, 110 nm, 115 nm, 120 nm, 125 nm, 130 nm, 135 nm, 140 nm, 145 nm ou 150 nm, e são substancialmente não tóxicos. Além disto, ácidos nucleicos, quando presentes nas partículas de lipídio da presente invenção, são resistentes em solução aquosa à degradação com uma nuclease. As partículas de ácido nucleico-lipídio e seu método para preparação são divulgados, por exemplo, nas Publicações de Patente U.S. n° 20040142025 e 20070042031, cujas divulgações são incorporadas ao presente documento a título de referência, em sua totalidade, com todos os propósitos.
[065] Conforme usado no presente documento, “lipídio encapsulado” pode referir a uma partícula de lipídio que fornece um ácido nucleico terapêutico, como um siRNA com encapsulação completa, encapsulação parcial, ou ambos. Numa modalidade preferencial, o ácido nucleico (por exemplo, siRNA) é completamente encapsulado na partícula de lipídio (por exemplo, para formar uma SNALP ou outra partícula de ácido nucleico-lipídio).
[066] O termo “conjugado de lipídio” se refere a um lipídio conjugado que inibe a agregação de partículas de lipídio. Tais conjugados de lipídio incluem, mas sem limitação, conjugados de PEG-lipídio, como, por
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18/217 exemplo, PEG acoplada a dialquiloxipropilas (por exemplo, conjugados de PEGDAA), PEG acoplado a diacilgliceróis (por exemplo, conjugados de PEG-DAG), PEG acoplado a colesterol, PEG acoplado a fosfatidiletanolaminas, e PEG conjugado com ceramidas (consultar, por exemplo, Patente U.S. n° 5.885.613), lipídios PEG catiônicos, conjugados de polioxazolina (POZ)-lipídio, oligômeros de poliamida (por exemplo, conjugados de ATTA-lipídio), e misturas dos mesmos. Os exemplos adicionais de conjugados de POZ-lipídio são descritos na Publicação PCT n° WO 2010/006282. PEG ou POZ podem ser conjugados diretamente com o lipídio ou podem ser ligados ao lipídio por meio de uma porção química aglutinante. Qualquer porção química de aglutinante adequada para acoplamento do PEG ou do POZ a um lipídio pode ser usada incluindo, por exemplo, porções químicas de aglutinante que não contêm éster e porções químicas de aglutinante que contêm éster. Em certas modalidades preferenciais, as porções químicas ligantes que não contêm éster, como amidas ou carbamatos, são usadas. As divulgações de cada um dos documentos de patente acima são incorporadas ao presente documento a título de referência, em sua totalidade, com todos os propósitos.
[067] O termo “lipídio antipático” se refere, em parte, a qualquer material adequado em que a porção hidrofóbica do material de lipídio se orienta numa fase hidrofóbica, enquanto a porção hidrofílica se orienta em direção à fase aquosa. As características hidrofílicas derivam da presença de grupos polares ou carregados, como grupos carboidratos, fosfato, carboxílico, sulfato, amino, sulfidrila, nitro, hidroxila, e outros semelhantes. A hidrofobicidade pode ser conferida pela inclusão de grupos apoiares que incluem, mas sem limitação, grupos hidrocarboneto alifático saturado e insaturado de cadeia longa e tais grupos substituídos por um ou mais grupos aromáticos, cicloalifáticos ou heterocíclicos. Os exemplos de compostos antipáticos incluem, mas sem limitação, fosfolipídios, aminolipídios e esfingolipídios.
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19/217 [068] Os exemplos representativos de fosfolipídios incluem, mas sem limitação, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol, ácido fosfatídico, palmitoiloleoil fosfatidilcolina, lisofosfatidilcolina, lisofosfatidiletanolamina, dipalmitoilfosfatidilcolina, dioleoilfosfatidilcolina, distearoilfosfatidilcolina e dilinoleoilfosfatidilcolina. Outros compostos que não têm fósforo, como esfingolipídio, famílias de glicoesfingolipídio, diacilgliceróis, e β-aciloxiácidos também estão no grupo designado como lipídios anfipáticos. Adicionalmente, os lipídios anfipáticos descritos acima podem ser misturados com outros lipídios incluindo triglicerídeos e esteróis.
[069] O termo “lipídio neutro” se refere a qualquer um dentre várias espécies de lipídio que existem numa forma zwitteriônica não carregada ou neutra num pH selecionado. Em pH fisiológico, tais lipídios incluem, por exemplo, diacilfosfatidilcolina, diacilfosfatidiletanolamina, ceramida, esfingomielina, cefalina, colesterol, cerebrosídeos e diacilgliceróis.
[070] O termo “lipídio não catiônico” se refere a qualquer lipídio anfipático, assim como qualquer outro lipídio neutro ou lipídio aniônico.
[071] O termo “lipídio aniônico” se refere a qualquer lipídio que é negativamente carregado em pH fisiológico. Estes lipídios incluem, mas sem limitação, fosfatidilgliceróis, cardiolipinas, diacilfosfatidilserinas, ácidos diacilfosfatídicos, N-dodecanoil fosfatidiletanolaminas, N-succinil fosfatidiletanolaminas, N-glutarilfosfatidiletanolaminas, lisilfosfatidilgliceróis, palmitoiloleiolfosfatidilglicerol (POPG) e outros grupos de modificação aniônica unidos a lipídios neutros.
[072] O termo “lipídio hidrofóbico” se refere a compostos que têm grupos apoiares que incluem, mas sem limitação, grupos de hidrocarboneto alifático saturado e insaturado de cadeia longa, e tais grupos opcionalmente substituídos por um ou mais grupos aromáticos, cicloalifáticos ou heterocíclicos.
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Os exemplos adequados incluem, mas sem limitação, diacilglicerol, dialquilglicerol, N-N-dialquilamino, 1,2-diaciloxi-3-aminopropano e 1,2-dialquil-3aminopropano.
[073] Os termos “lipídio catiônico” e “amino lipídio” são usados de modo intercambiável no presente documento para incluir aqueles lipídios e sais do mesmo que tem uma, duas, três ou mais cadeias de ácido graxo ou alquila graxa e um grupo de cabeça de amino de pH titulável (por exemplo, um grupo de cabeça de alquilamino ou dialquilamino). O lipídio catiônico é tipicamente protonado (isto é, positivamente carregado) num pH abaixo do pKa do lipídio catiônico e é substancialmente neutro num pH acima do pKa. Os lipídios catiônicos da invenção também podem ser denominados lipídios catiônicos tituláveis. Em algumas modalidades, os lipídios catiônicos compreendem: um grupo de cabeça de amina terciária protonável (por exemplo, pH titulável); cadeias de Cie alquila, em que cada cadeia alquila tem independentemente 0 a 3 (por exemplo, 0, 1,2, ou 3) ligações duplas; e ligações éter, éster ou cetal entre o grupo de cabeça e cadeias alquila. Tais lipídios catiônicos incluem, mas sem limitação, DSDMA, DODMA, DLinDMA, DLenDMA, γ-DLenDMA, DLin-K-DMA, DLin-K-C2-DMA (também conhecido como DLin-C2K-DMA, XTC2 e C2K), DLinK-C3-DMA, DLin-K-C4-DMA, DLen-C2K-DMA, Y-DLen-C2K-DMA, DLin-M-C2DMA (também conhecido como MC2), DLin-M-C3-DMA (também conhecido como MC3) e (DLin-MP-DMA) (também conhecido como 1-B11).
[074] O termo “alquilamino” inclui um grupo de fórmula -N(H)R, em que R é uma alquila conforme definido no presente documento.
[075] O termo “dialquilamino” inclui um grupo de fórmula -NR2, em que cada R é independentemente uma alquila conforme definido no presente documento.
[076] O termo “sais” inclui qualquer complexo aniônico e catiônico, como o complexo formado entre um lipídio catiônico e um ou mais ânions. Os
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21/217 exemplos não limitantes de ânions incluem ânions inorgânicos e orgânicos, por exemplo, hidreto, fluoreto, cloreto, brometo, iodeto, oxalato (por exemplo, hemioxalato), fosfato, fosfonato, hidrogenofosfato, di-hidrogenofosfato, óxido, carbonato, bicarbonate, nitrato, nitrite, nitreto, bissulfito, sulfeto, sulfito, bissulfato, sulfato, tiossulfato, hidrogenossulfato, borato, formato, acetato, benzoate, citrato, tartarato, lactate, acrilato, poliacrilato, fumarate, maleate, itaconato, glicolato, gluconate, malate, mandelate, tiglato, ascorbate, salicilato, polimetacrilato, perclorato, clorato, clorito, hipoclorito, bromato, hipobromito, iodato, um alquilsulfonato, um arilsulfonato, arsenate, arsenite, cromato, dicromato, cianeto, cianato, tiocianato, hidróxido, peróxido, permanganate e misturas dos mesmos. Em modalidades particulares, os sais dos lipídios catiônicos divulgados no presente documento são sais cristalinos.
[077] O termo “acila” inclui qualquer alquila, alquenila ou alquinila, em que o carbono no ponto de ligação é substituído por um grupo oxo, conforme definido abaixo. O seguinte é de exemplos não limitantes de grupos acila: C(=O)alquila, -C(=O)alquenila e -C(=O)alquinila.
[078] O termo “fusogênico” se refere à capacidade de uma partícula de lipídio, como um SNALP, para se fundir com as membranas de uma célula. As membranas podem ser a membrana ou membranas de plasma que circundam organelas, por exemplo, endossomo, núcleo, etc.
[079] Conforme usado no presente documento, o termo “solução aquosa” se refere a uma composição que compreende por inteiro, ou em parte, água.
[080] Conforme usado no presente documento, o termo “solução de lipídio orgânico” se refere a uma composição que compreende por inteiro, ou em parte, um solvente orgânico que tem um lipídio.
[081] “Sítio distai”, conforme usado no presente documento, se refere a um sítio fisicamente separado, o qual não é limitado a um leito capilar
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22/217 adjacente, mas inclui sítios amplamente distribuídos ao longo de um organismo.
[082] “Estável em soro” em relação a partículas de ácido nucleicolipídio, como SNALP, significa que a partícula não é significativamente degradada após a exposição a um ensaio de soro ou nuclease que degradaria significativamente o DNA ou RNA livre. Os ensaios adequados incluem, por exemplo, um ensaio de soro padrão, um ensaio de DNAse, ou um ensaio de RNAse.
[083] “Administração sistemática”, conforme usado no presente documento, se refere à administração de partículas de lipídio que leva a uma biodistribuição ampla de um agente ativo, como um siRNA num organismo. Algumas técnicas de administração podem levar à administração sistêmica de certos agentes, mas não outras. A administração sistêmica significa que uma quantidade útil, preferencialmente terapêutica, de um agente é exposta à maioria das partes do corpo. Para obter a biodistribuição ampla geralmente se necessita de uma vida útil sanguínea tal que o agente não seja rapidamente degradado ou limpo (como por órgãos de primeira passagem (fígado, pulmão, etc.) ou por ligação de célula não específica rápida) antes de alcançar um sítio de doença distai ao sítio de administração. A administração sistêmica de partículas de lipídio pode ser por quaisquer meios conhecidos na técnica incluindo, por exemplo, intravenoso, subcutâneo e intraperitoneal. Numa modalidade preferencial, a administração sistêmica de partículas de lipídio é por administração intravenosa.
[084] “Administração local”, conforme usado no presente documento, se refere à administração de um agente ativo, como um siRNA diretamente a um sítio alvo num organismo. Por exemplo, um agente pode ser localmente administrado por injeção direta num sítio de doença, outro sítio alvo, ou um órgão alvo, como o fígado, coração, pâncreas, rim e semelhantes.
[085] Quando usado no presente documento para descrever a razão de lipídio:siRNA, o termo “lipídio” se refere ao lipídio total na partícula.
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23/217 [086] Será observado por aqueles versados na técnica que os compostos da invenção que têm um centro quiral podem existir e ser isolados em formas opticamente ativas e racêmicas. Alguns compostos podem exibir polimorfismo. Deve ser entendido que a presente invenção abrange qualquer forma racêmica, opticamente ativa, polimórfica ou estereoisomérica ou misturas dos mesmos, de um composto da invenção, o qual possui as propriedades úteis descritas no presente documento, sendo bem conhecido na técnica como preparar formas opticamente ativas (por exemplo, por resolução da forma racêmica por técnicas de recristalização, por síntese de materiais iniciais opticamente ativos, por síntese quiral, ou por separação cromatográfica com o uso de uma fase estacionária quiral.
[087] Quando uma ligação numa fórmula de composto no presente documento for desenhada de maneira não estereoquímica (por exemplo, plana), o átomo ao qual a ligação é fixada inclui todas as possibilidades estereoquímicas. A menos que observado de outro modo, quando uma ligação numa fórmula de composto no presente documento é desenhada de maneira estereoquímica definida (por exemplo, negrito, neghto-cunha, tracejada ou tracejada-cunha), deve ser entendido que o átomo ao qual a ligação estereoquímica é fixada é enriquecido no estereoisômero absoluto representado. Numa modalidade, o composto pode ser pelo menos 51% do estereoisômero absoluto representado. Em outra modalidade, o composto pode ser pelo menos 60% do estereoisômero absoluto representado. Em outra modalidade, o composto pode ser pelo menos 80% do estereoisômero absoluto representado. Em outra modalidade, o composto pode ser pelo menos 90% do estereoisômero absoluto representado. Em outra modalidade, o composto pode ser pelo menos 95% do estereoisômero absoluto representado. Em outra modalidade, o composto pode ser pelo menos 99% do estereoisômero absoluto representado.
[088] A menos que declarado de outro modo no presente
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24/217 documento, o termo “cerca de”, quando usado em conexão com um valor ou faixa de valores, significa mais ou menos 5% do valor ou faixa de valores declarados.
GERAR MOLÉCULAS DE siRNA [089] O siRNA pode ser fornecido em diversas formas incluindo, por exemplo, como um ou mais duplexes de RNA de interferência pequeno (siRNA) isolados, como RNA de fita dupla mais longo (dsRNA), ou como siRNA ou dsRNA transcrito a partir de um cassete de transcrição num DNA plasm ideo. Em algumas modalidades, o siRNA pode ser produzido enzimaticamente ou por meio de síntese orgânica parcial/total, e os ribonucleotídeos modificados podem ser introduzidos por meio de síntese enzimática ou orgânica in vitro. Em certos casos, cada fita é preparada quimicamente. Os métodos de síntese de moléculas de RNA são conhecidos na técnica, por exemplo, os métodos de síntese química conforme descritos em Verma e Eckstein (1998) ou conforme descrito no presente documento.
[090] Os métodos para isolar RNA, sintetizar RNA, hibridizar ácidos nucleicos, produzir e thar bibliotecas de cDNA e realizar PCR são bem conhecidos na técnica (consulte, por exemplo, Gubler e Hoffman, Gene, 25:263269 (1983); Sambrook et aí, supra', Ausubel etal., supra), como são os métodos de PCR (consulte, Patente US n° 4.683.195 e n° 4.683.202; PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis et al., eds., 1990)). As bibliotecas de expressão também são bem conhecidas por aqueles versados na técnica. Os textos básicos adicionais que divulgam os métodos gerais de uso nesta invenção incluem Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (2a ed. 1989); Kriegler, Gene Transfer and Expression: A Laboratory Manual (1990); e Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel etal., eds., 1994). As divulgações destas referências são incorporadas no presente documento a título de referência em sua totalidade para todos os propósitos.
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25/217 [091] Tipicamente, siRNA são quimicamente sintetizados. Os oligonucleotídeos que compreendem as moléculas de siRNA da invenção podem ser sintetizados usando qualquer uma dentre uma variedade de técnicas conhecidas na arte, como aqueles descritos em Usman etal., J. Am. Chem. Soc., 109:7845 (1987); Scaringe et al., Nucl. Acids Res., 18:5433 (1990); Wincott et al., Nucl. Acids Res., 23:2677-2684 (1995); e Wincott et al., Methods Mol. Bio., 74:59 (1997). A síntese de oligonucleotídeos faz uso de grupos protetores e de acoplamento de ácido nucleico comuns, como dimetoxitritila na extremidade 5’ e fosforamiditos na extremidade 3’. Como exemplo não limitante, sínteses de pequena escala podem ser conduzidas num sintetizador de Applied Biosystems com o uso de um protocolo de escala de 0,2 pmol. Alternativamente, as sínteses na escala de 0,2 pmol podem ser realizadas num sintetizador de placa de 96 poços de Protogene (Paio Alto, CA). No entanto, uma escala maior ou menor de síntese também está dentro do escopo desta invenção. Os reagentes adequados para síntese de oligonucleotídeo, métodos para desproteção de RNA e métodos para purificação de RNA são conhecidos por aqueles versados na técnica.
[092] As moléculas de siRNA podem ser unidas a partir de dois oligonucleotídeos distintos, em que um oligonucleotídeo compreende a fita senso e o outro compreende a fita antissenso do siRNA. Por exemplo, cada fita pode ser sintetizada separadamente e unida por meio de hibhdização ou ligação após síntese e/ou desproteção.
MODALIDADES DA INVENÇÃO [093] A Tabela 1 no Exemplo 25 descreve uma série de duplexes de siRNA quimicamente modificados (fitas senso e antissenso mostradas) que alvejam o vírus da Hepatite B (abreviado como “HBV”). Conforme descrito no presente documento, um composto da invenção pode compreender tal siRNA (isto é, siRNA 1 a 37).
[094] Consequentemente, um aspecto da invenção é uma
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26/217 molécula de ácido nucleico selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ
ID NO:23, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ
ID NO:33, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, SEQ
ID NO:43, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:51, SEQ
ID NO:53, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ
ID NO:63, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:71 e SEQ ID NO:73.
[095] Outro aspecto desta invenção é uma molécula de ácido nucleico selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NQ:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NQ:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID
NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NQ:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID
NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NQ:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID
NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NQ:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID
NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NQ:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID
NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NQ:70, SEQ ID NO:72 e SEQ ID NO:74.
[096] Um aspecto da invenção é uma composição que compreende uma molécula de ácido nucleico descrita no presente documento, ou uma combinação dos mesmos.
[097] Um aspecto da invenção fornece uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada do grupo que consiste em siRNA 1 (SEQ ID NO:1 e 2), 2 (SEQ ID NO:3 e 4), 3 (SEQ ID NO:5 e 6), 4 (SEQ ID NO:7 e 8), 5 (SEQ ID NO:9 e 10), 6 (SEQ ID NO:11 e 12), 7 (SEQ ID NO:13 e 14), 8 (SEQ ID NO:15 e 16), 9 (SEQ ID NO:17 e 18), 10 (SEQ ID NO:19 e20), 11 (SEQ ID NO:21 e22), 12 (SEQ ID NO:23 e 24), 13 (SEQ ID NO:25 e 26), 14 (SEQ ID NO:27 e 28), 15 (SEQ ID NQ:29e30), 16 (SEQ ID NO:31 e32), 17 (SEQ ID NO:33 e 34), 18 (SEQ ID NO:35
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27/217 e36), 19 (SEQ ID NO:37e38), 20 (SEQ ID NO:39 e 40), 21 (SEQ ID NO:41 e42), 22 (SEQ ID NO:43 e 44), 23 (SEQ ID NO:45 e 46), 24 (SEQ ID NO:47 e 48), 25 (SEQ ID NO:49 e 50), 26 (SEQ ID NO:51 e 52), 27 (SEQ ID NO:53 e 54), 28 (SEQ ID NO:55 e 56), 29 (SEQ ID NO:57 e 58), 30 (SEQ ID NO:59 e 60), 31 (SEQ ID NO:61 e 62), 32 (SEQ ID NO:63 e 64), 33 (SEQ ID NO:65 e 66), 34 (SEQ ID NO:67 e 68), 35 (SEQ ID NO:69 e 70), 36 (SEQ ID NO:71 e 72) e 37 (SEQ ID NO:73 e 74).
[098] Outro aspecto da invenção fornece uma composição que compreende uma molécula de siRNA de fita dupla descrita no presente documento.
[099] Numa modalidade, a composição é uma composição farmacêutica que compreende um carreador farmaceuticamente aceitável.
[0100] Um aspecto da invenção é um composto de fórmula I, conforme definido no Sumário da Invenção, ou um sal do mesmo.
[0101] Numa modalidade do composto de fórmula I, R1 é um ligante de direcionamento;
[0102] L1 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0103] L2 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0104] R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada do siRNA de fita dupla da Tabela 1;
[0105] o anel A é ausente, uma cicloalquila de 3 a 20 membros, uma arila de 5 a 20 membros, uma heteroarila de 5 a 20 membros ou uma heterocicloalquila de 3 a 20 membros;
[0106] cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -Ci-2alquil-ORBe Ci-e alquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi e Ci-salcóxi;
[0107]RB é hidrogênio, um grupo de proteção, uma ligação
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28/217 covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e [0108] néO, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.
[0109] Numa modalidade, R1 é -C(H)(3-P)(L3-sacarídeo)P, em que cada L3 é independentemente um grupo de ligação; p é 1, 2 ou 3; e sacarídeo é um monossacarídeo ou dissacarídeo.
[0110] Numa modalidade, o sacarídeo é:
Figure BR112019021359A2_D0005
[0111] em que:
[0112]X é NR3, e Y é selecionado de -(C=O)R4, -SO2R5 e -(C=O)NR6R7; ou X é -(0=0)- e Y é NR8R9;
[0113] R3 é hidrogênio ou (Ci-C4)alquila;
[0114] R4, R5, R6, R7, R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, (Ci-Cejalquila, (C1Cejhaloalquila, (Ci-Csjalcóxi e (Cs-Cejcicloalquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, (Ci-C4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (Ci-C4)haloalcóxi;
[0115] R10 é -OH, -NR8R9 ou - F; e [0116] R11 é -OH, -NR8R9, -F ou heterociclo de 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, (C1C4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (Ci-C4)haloalcóxi;
ou um sal do mesmo.
Numa modalidade, o sacarídeo é selecionado do grupo que consiste em:
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Figure BR112019021359A2_D0006
[0117] e sais do mesmo.
[0118] Numa modalidade, o sacarídeo é:
Figure BR112019021359A2_D0007
[0119] /V-Acetilgalactosamina (GaINAc) GaIPro [0120] Numa modalidade, cada L3 é, independentemente, a cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 0 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituídos por-O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (Ci-Ce)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (Cs-Cejcicloalquila, (Ci-Ce)alcanoíla, (Ci-C6)alcanoilóxi, (Ci-C6)alcoxicarbonila, (Ci-Ce)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[0121] Numa modalidade, cada L3 é, independentemente, a cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituídos por-O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e
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30/217 em que Rx é hidrogênio ou (Ci-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (Cs-Cejcicloalquila, (Ci-Ce)alcanoíla, (Ci-C6)alcanoilóxi, (Ci-C6)alcoxicarbonila, (Ci-Ce)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroahla e heteroarilóxi.
[0122] Numa modalidade L3 é:
Figure BR112019021359A2_D0008
[0123] ou um sal do mesmo.
[0124] Numa modalidade, R1 é:
Figure BR112019021359A2_D0009
[0125] ou um sal do mesmo.
[0126] Numa modalidade,
R1 é:
Figure BR112019021359A2_D0010
Figure BR112019021359A2_D0011
[0127] em que G é -NH- ou -O-;
[0128] Rc é hidrogênio, (Ci-Cs)alquila, (Ci-Csjhaloalquila, (C-iCsjalcóxi, (Ci-Ce)alcanoíla, (C3-C2o)cicloalquila, (C3-C2o)heterociclo, arila,
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31/217 heteroarila, monossacarídeo, dissacarídeo ou trissacarídeo; e em que a cicloalquila, heterociclo, ari, heteroarila e sacarídeo são opcionalmente substituídos por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, carboxila, hidroxila, amino, (Ci-C4)alquila, (C-iC4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (Ci-C4)haloalcóxi;
[0129] ou um sal do mesmo.
[0130] Numa modalidade, Rc é:
Figure BR112019021359A2_D0012
OH [0131] Numa modalidade, R1 é:
Figure BR112019021359A2_D0013
[0132] Numa modalidade, Rc é:
o
Figure BR112019021359A2_D0014
[0133] Numa modalidade, G é -NH-.
[0134] Numa modalidade, R1 é:
Figure BR112019021359A2_D0015
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32/217 [0135] Numa modalidade, R1 é:
Figure BR112019021359A2_D0016
Figure BR112019021359A2_D0017
[0136] em que cada RD é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, (Ci-Ce)alquila, (Cg-Czojalquilsilila, (Rw)sSi-, (C2-Ce)alquenila, tetra-hidropiranila, (Ci-Ce)alcanoíla, benzoíla, aril(CiCs)alquila, TMTr (Trimetoxitritila), DMTr (Dimetoxitritila), MMTr (Monometoxitritila) e Tr (Tritila); e [0137] cada Rw é independentemente selecionado do grupo que consiste em (Ci-C4)alquila e arila.
[0138] Numa modalidade, os grupos de ligação L1 e L2 são independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituídos por-O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (Ci-Ce)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (C3Cejcicloalquila, (Ci-Ce)alcanoíla, (C-i-Cejalcanoilóxi, (C-i-Cejalcoxicarbonila, (Ci-Ce)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
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33/217 [0139] Numa modalidade, L1 e L2 são independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituídos por-O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (Ci-Ce)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (C3-C6)cicloalquila, (C-iC6)alcanoíla, (Ci-C6)alcanoilóxi, (Ci-C6)alcoxicarbonila, (Ci-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[0140] Numa modalidade, L1 e L2 são independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 14 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituídos por-O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (Ci-Ce)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (C3-C6)cicloalquila, (C-iCe)alcanoíla, (Ci-C6)alcanoilóxi, (Ci-C6)alcoxicarbonila, (Ci-Ce)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[0141] Numa modalidade, L1 é conectado a R1 através de -NH, -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O)-, -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH- ou NH-(SO2)-.
[0142] Numa modalidade, L2 é conectado a R2 através de -O-.
[0143] Numa modalidade, L1 é selecionado do grupo que consiste em:
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34/217
Figure BR112019021359A2_D0018
Figure BR112019021359A2_D0019
Figure BR112019021359A2_D0020
[0144] Numa modalidade, L1 é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0021
Figure BR112019021359A2_D0022
Figure BR112019021359A2_D0023
[0145] e sais do mesmo.
[0146] Numa modalidade, L2 é -CH2-O- ou -CH2-CH2-O-.
[0147] Numa modalidade, um composto de fórmula I tem a seguinte fórmula Ia:
Figure BR112019021359A2_D0024
L2—R2 (Ia) [0148] em que:
[0149] cada D é independentemente selecionado do grupo que ra consiste em
-C= e_N=;
[0150] ou um sal do mesmo.
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35/217 [0151] Numa modalidade, um composto de fórmula Ia é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0025
Figure BR112019021359A2_D0026
Figure BR112019021359A2_D0027
Figure BR112019021359A2_D0028
[0152] em que:
[0153] Q1 é hidrogênio e Q2 é R2; ou Q1 é R2 e Q2 é hidrogênio;
[0154]Z é -L1-R1;
[0155] e sais do mesmo.
[0156] Numa modalidade, um composto de fórmula I tem a seguinte fórmula Ib:
D-^D
R1—L1^ L2—R2 (Ib) [0157] em que:
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36/217 [0158] cada D é independentemente selecionado do grupo que ra l_ consiste em —C— θ -N=;
[0159] cada m é independentemente 1 ou 2; ou um sal do mesmo.
[0160] Numa modalidade, um composto de fórmula Ib é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0029
[0161] em que:
[0162] Q1 é hidrogênio e Q2 é R2; ou Q1 é R2 e Q2 é hidrogênio;
[0163]Z é -L1-R1;
[0164]e sais do mesmo.
[0165] Numa modalidade, um composto de fórmula I tem a seguinte fórmula (Ic):
(RA)n
Figure BR112019021359A2_D0030
R1 (Ic) [0166] em que E é -O- ou -CH2-;
[0167] n é selecionado do grupo que consiste em 0, 1,2, 3, e 4; e [0168] n1 e n2 são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em 0, 1, 2 e 3;
[0169] ou um sal do mesmo.
[0170] Em certas modalidades, um composto da fórmula (Ic) é
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37/217 selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0031
[0171] em queZé-L1-R1;
[0172]e sais do mesmo.
[0173] Numa modalidade, a porção química -A-L2-R2 é:
Figure BR112019021359A2_D0032
[0174] em que:
[0175] Q1 é hidrogênio e Q2 é R2; ou Q1 é R2 e Q2 é hidrogênio; e [0176] cada q é independentemente 0, 1, 2, 3, 4 ou 5;
[0177] ou um sal do mesmo.
[0178] Numa modalidade, um composto de fórmula (I) é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0033
Figure BR112019021359A2_D0034
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38/217
Figure BR112019021359A2_D0035
Figure BR112019021359A2_D0036
[0179] e sais do mesmo.
[0180] Numa modalidade, R1 é selecionado do grupo que consiste
Figure BR112019021359A2_D0037
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 45/292
39/217
Figure BR112019021359A2_D0038
[0182] n é 2, 3 ou 4;
[0183]xé 1 ou 2.
[0184] Numa modalidade, L1 é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0039
Figure BR112019021359A2_D0040
[0185] Numa modalidade, L1 é selecionado do grupo que consiste em:
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40/217
O H ' * 9 9
•Q O G G Ο Ω
' ¥ o A Λ ¥ - * Λ T Ή C : 9 Ϊ
0 9 9 H Λ •õ 0 9 e 9 9 9 :ί H ' ’iC ' ' ” 'IS
[0186] Numa modalidade, A é ausente, fenila, pirrolidinila ou
ciclopentila.
[0187] Numa modalidade, L2 é Ci-4 alquileno-O- que é
opcionalmente substituído por hidróxi.
[0188] Numa modalidade, L2 é -CH2O-, -CH2CH2O- ou -
CH(OH)CH2O-.
[0189] Numa modalidade, cada RA é independentemente hidróxi ou Ci-8alquila que é opcionalmente substituída por hidroxila.
[0190] Numa modalidade, cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidróxi, metila e -CH2OH.
[0191 ] Numa modalidade, um composto de fórmula I tem a seguinte fórmula (Ig):
(RA)n
Figure BR112019021359A2_D0041
R1 (ig) [0192] em que B é -N- ou -CH-;
[0193] L1 está ausente ou é -NH-;
[0194]L2 é C1-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidroxila ou halo;
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41/217 [0195] n é Ο, 1 ou 2;
[0196] ou um sal do mesmo.
[0197] Numa modalidade, um composto de fórmula I tem a seguinte fórmula (Ig):
(RA)n
Figure BR112019021359A2_D0042
L1
R1 (ig) [0198] em que B é -N- ou -CH-;
[0199] L1 está ausente ou é -NH-;
[0200] L2 é Ci-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidroxila ou halo;
[0201] néO, 1,2, 3, 4, 5, 6 ou 7;
[0202] ou um sal do mesmo.
[0203] Numa modalidade, um composto de fórmula I tem a seguinte fórmula (Ig):
(RA)n
Figure BR112019021359A2_D0043
L1
R1 (ig) [0204] em que B é -N- ou -CH-;
[0205] L1 está ausente ou é -NH-;
[0206] L2 é Ci-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidroxila ou halo;
[0207] néO, 1,2, 3 ou 4;
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42/217 [0208] ou um sal do mesmo.
[0209] Numa modalidade, um composto de fórmula lg é selecionado do grupo que consiste em:
R2—O
Figure BR112019021359A2_D0044
Figure BR112019021359A2_D0045
I
R' [0210] em que R’ é C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila é opcionalmente substituída por halo ou hidroxila;
[0211 ] e sais do mesmo.
[0212] Numa modalidade, um composto de fórmula I é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0046
Figure BR112019021359A2_D0047
Figure BR112019021359A2_D0048
[0213] e sais do mesmo.
[0214] Numa modalidade, o composto de fórmula I ou o sal do
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 49/292
43/217 mesmo é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0049
Figure BR112019021359A2_D0050
Figure BR112019021359A2_D0051
Figure BR112019021359A2_D0052
Figure BR112019021359A2_D0053
Figure BR112019021359A2_D0054
Figure BR112019021359A2_D0055
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 50/292
44/217
Figure BR112019021359A2_D0056
Figure BR112019021359A2_D0057
Figure BR112019021359A2_D0058
200, η = 3, χ = 2
Figure BR112019021359A2_D0059
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 51/292
45/217
Figure BR112019021359A2_D0060
Figure BR112019021359A2_D0061
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 52/292
46/217
Figure BR112019021359A2_D0062
Figure BR112019021359A2_D0063
Figure BR112019021359A2_D0064
Figure BR112019021359A2_D0065
[0215] Numa modalidade, o composto de fórmula I ou o sal do mesmo é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0066
Figure BR112019021359A2_D0067
Figure BR112019021359A2_D0068
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 53/292
47/217
Figure BR112019021359A2_D0069
Figure BR112019021359A2_D0070
Figure BR112019021359A2_D0071
Figure BR112019021359A2_D0072
Figure BR112019021359A2_D0073
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 54/292
48/217
Figure BR112019021359A2_D0074
Figure BR112019021359A2_D0075
Figure BR112019021359A2_D0076
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 55/292
49/217
Figure BR112019021359A2_D0077
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50/217
Figure BR112019021359A2_D0078
[0216] ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a Tabela 1.
[0217] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
Figure BR112019021359A2_D0079
Figure BR112019021359A2_D0080
[0218] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0219] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 57/292
51/217
Figure BR112019021359A2_D0081
[0220] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0221] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
Figure BR112019021359A2_D0082
[0222] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0223] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 58/292
52/217
Figure BR112019021359A2_D0083
[0224] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que
R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0225] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
Figure BR112019021359A2_D0084
[0226] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0227] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 59/292
53/217
Figure BR112019021359A2_D0085
[0228]ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0229]Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
Figure BR112019021359A2_D0086
[0230]ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0231]Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 60/292
54/217
Figure BR112019021359A2_D0087
...Nh fi - 2
Figure BR112019021359A2_D0088
[0232] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0233] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
Figure BR112019021359A2_D0089
NH
Figure BR112019021359A2_D0090
[0234] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0235] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 61/292
55/217
Figure BR112019021359A2_D0091
[0236]ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0237]Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
OH OH
Figure BR112019021359A2_D0092
[0238]ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0239]Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 62/292
56/217
Figure BR112019021359A2_D0093
[0240]ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
[0241]Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
OH oh
Figure BR112019021359A2_D0094
Figure BR112019021359A2_D0095
[0242]ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla (por exemplo, uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1).
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 63/292
57/217 [0243] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
§ S']
Figure BR112019021359A2_D0096
Figure BR112019021359A2_D0097
[0244] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0245] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
as ísss i::· \&4S e ss;
Figure BR112019021359A2_D0098
hits so-tíss-enso. sKtrefrsisdsds: Ξ·'
Figure BR112019021359A2_D0099
Figure BR112019021359A2_D0100
Figure BR112019021359A2_D0101
[0246] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 64/292
58/217 [0247] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
:·Γ<:Ίλ 3 (δκώ Itó 5 e :?;
Figure BR112019021359A2_D0102
Figure BR112019021359A2_D0103
Fits «JifiissnsL·, 5':
Figure BR112019021359A2_D0104
[0248] ou urn sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0249] Numa modalidade, o composto de fórmula I é: s;RNA (RFC: Ό NG, 4¾ e j
Λ.
Figure BR112019021359A2_D0105
Fits sfl-fj-sserreE·. ·£'
OH OH
Figure BR112019021359A2_D0106
Figure BR112019021359A2_D0107
[0250] ou urn sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 65/292
59/217 [0251] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
aRNA3(SE<WNO:5 8«} .-Fita senso extremidade 3'
O-P
Fita antissanso, esdrerrada*
Figure BR112019021359A2_D0108
'—OH [0252] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0253] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
siRNA 25 (SEQ © NO:49 e 5«) — — — í-itasenso extremidades1 \\\\
I 1 OP-O' Fita antissenso.. extremidade 5’ 4.
Figure BR112019021359A2_D0109
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 66/292
60/217 [0254] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0255] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
siRNA 3 (SEQ ID N0:5 e 6)
Figure BR112019021359A2_D0110
[0256] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0257] Numa modalidade, o composto de fórmula I é:
siRNA 25 (SEQ © NO: 4S e 50)
Figure BR112019021359A2_D0111
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 67/292
61/217 [0258] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0259] Numa modalidade, a invenção fornece um composto de
Figure BR112019021359A2_D0112
[0261] L1 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0262] L2 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0263] R2 é um ácido nucleico;
[0264] o anel A é ausente, uma cicloalquila de 3 a 20 membros, uma arila de 5 a 20 membros, uma heteroarila de 5 a 20 membros ou uma heterocicloalquila de 3 a 20 membros;
[0265] cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -Ci-2alquil-ORB, C1-10alquil C2-10 alquenila, e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquil C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi, e Ci-salcóxi;
[0266] RB é hidrogênio, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 68/292
62/217 ligado a um suporte sólido; e [0267] néO, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10;
[0268] ou um sal do mesmo.
[0269] Numa modalidade, a invenção fornece um composto de fórmula:
Figure BR112019021359A2_D0113
[0270] em que:
[0271] L2 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0272] R2 é um ácido nucleico;
[0273] o anel A é ausente, uma cicloalquila de 3 a 20 membros, uma arila de 5 a 20 membros, uma heteroarila de 5 a 20 membros ou uma heterocicloalquila de 3 a 20 membros;
[0274] cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -Ci-2alquil-ORB, C1-10alquil C2-10 alquenila, e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquil C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi, e Ci-salcóxi;
[0275] RB é hidrogênio, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 69/292
63/217 ligado a um suporte sólido; e [0276] néO, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10;
[0277] ou um sal do mesmo.
[0278] Numa modalidade, a invenção fornece um composto de fórmula:
OH OH
Figure BR112019021359A2_D0114
Figure BR112019021359A2_D0115
[0279] em que:
[0280] L1 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0281] L2 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0282] R2 é um ácido nucleico;
Figure BR112019021359A2_D0116
[0283] B é bivalente e é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0117
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 70/292
64/217
Figure BR112019021359A2_D0118
Figure BR112019021359A2_D0119
[0284] em que:
[0285] cada R’ é independentemente C1-9alquila, C2-9alquenila ou C29 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila é opcionalmente substituída por halo ou hidroxila;
[0286] a valência marcada com * é fixada a L1 ou é fixada a R1 se L1 for ausente; e [0287] a valência marcada com ** é fixada a L2 ou é fixada a R2 se L2 for ausente;
[0288] ou um sal do mesmo.
[0289] Numa modalidade, L1 e L2 são independentemente uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada divalente, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados de (C1C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroahlóxi.
[0290] Numa modalidade, L1 é selecionado do grupo que consiste em:
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 71/292
65/217
Figure BR112019021359A2_D0120
[0291] ou um sal do mesmo.
[0292] Numa modalidade, L1 é conectado a B1 através de uma ligação selecionada do grupo que consiste em: -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH(C=O), -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH- ou -NH-(SO2)-.
[0293] Numa modalidade, L1 é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0121
Figure BR112019021359A2_D0122
Figure BR112019021359A2_D0123
[0294] Numa modalidade, L2 é conectado a R2 através de -O-.
[0295] Numa modalidade, L2 é Ci-4alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidróxi.
[0296] Numa modalidade, L2 é ausente.
[0297] Numa modalidade, a invenção fornece um composto,
OH OH
Figure BR112019021359A2_D0124
Figure BR112019021359A2_D0125
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 72/292
66/217 [0298] ou um sal do mesmo, em que R2 é um ácido nucleico.
[0299] Um aspecto desta invenção é a composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula I, e um carreadorfarmaceuticamente aceitável.
[0300] Outro aspecto desta invenção é um método para administrar um siRNA de fita dupla ao fígado de um animal que compreende administrar um composto de fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao animal.
[0301] Outro aspecto desta invenção é a método para tratar uma doença ou distúrbio (por exemplo, uma doença de fígado ou uma infecção viral, como uma infecção viral de hepatite B) num animal que compreende administrar um composto de fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ao animal.
[0302] Certas modalidades da invenção fornecem um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso em terapia médica.
[0303] Certas modalidades da invenção fornecem um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para o tratamento profilático terapêutico de uma doença ou distúrbio (por exemplo, uma doença de fígado ou uma infecção viral, como uma infecção de vírus da hepatite B) num animal.
[0304] Certas modalidades da invenção fornecem o uso de um composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para preparar um medicamento para tratar uma doença ou distúrbio (por exemplo, uma doença de fígado ou uma infecção viral, como uma infecção de vírus da hepatite B) num animal.
[0305] Em certas modalidades, o animal é um mamífero, como um ser humano (por exemplo, um paciente infectado com HBV).
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 73/292
67/217 fórmula (Id):
[0306] Numa modalidade, um composto de fórmula I tem a seguinte
Figure BR112019021359A2_D0126
(Id) [0307] em que:
[0308] R1d é selecionado de:
Figure BR112019021359A2_D0127
[0309] e
Figure BR112019021359A2_D0128
Figure BR112019021359A2_D0129
Figure BR112019021359A2_D0130
[0310]Xd é C2-ioalquileno;
[0311]ndé0ou 1;
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68/217 [0312] R2d é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada do siRNA de fita dupla da Tabela 1; e [0313] R3d é H, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido.
[0314] Numa modalidade, R3d inclui um grupo de ligação que une o restante do composto da fórmula Id a um suporte sólido. A natureza do grupo de ligação não é crítica visto que o composto é um intermediário adequado para preparar um composto de fórmula Id, em que R2d é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada do siRNA de fita dupla da Tabela 1.
[0315] Numa modalidade, o aglutinante em R3d tem um peso molecular de cerca de 20 daltons a cerca de 1000 daltons.
[0316] Numa modalidade, o aglutinante em R3d tem um peso molecular de cerca de 20 daltons a cerca de 500 daltons.
[0317] Numa modalidade, o aglutinante em R3d separa o suporte sólido do restante do composto de fórmula I por cerca de 5 angstroms a cerca de 40 angstroms, inclusive, de comprimento.
[0318] Numa modalidade, o ligante em R3d é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 2 a 15 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2,3 ou 4) dos átomos de carbono são opcionalmente substituídos por (-O-) ou (-N(H)), e em que a cadeia é opcionalmente substituída em carbono por um ou mais (por exemplo 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (C3Cejcicloalquila, (Ci-Ce)alcanoíla, (C-i-Cejalcanoilóxi, (C-i-Cejalcoxicarbonila, (C-iCe)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=O), carbóxi, ahla, arilóxi, heteroahla e heteroarilóxi.
[0319] Numa modalidade, o ligante em R3d é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada,
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 75/292
69/217 que tem de 2 a 10 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3 ou 4) dos átomos de carbono são opcionalmente substituídos por (-O-) ou (-N(H)), e em que a cadeia é opcionalmente substituída em carbono por um ou mais (por exemplo 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (C3C6)cicloalquila, (Ci-Ce)alcanoíla, (Ci-C6)alcanoilóxi, (Ci-C6)alcoxicarbonila, (C-iCe)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[0320] Numa modalidade, o aglutinante em R3d é C(=O)CH2CH2C(=O)N(H)-.
[0321] Numa modalidade, R1d é:
Figure BR112019021359A2_D0131
[0322] Numa modalidade, R1d é:
Figure BR112019021359A2_D0132
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 76/292
70/217 [0323] Numa modalidade, Xd é Cealquileno.
[0324] Numa modalidade, nd é 0.
[0325] Numa modalidade, R2d é um siRNA.
[0326] Numa modalidade, R3d é H.
[0327] Em outra modalidade, um composto de (Id) ou o sal do mesmo é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0133
Figure BR112019021359A2_D0134
Figure BR112019021359A2_D0135
[0328] e sais do mesmo.
[0329] Um aspecto desta invenção é uma composição farmacêutica que compreende um composto da fórmula (Id), e um carreador
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 77/292
71/217 farmaceuticamente aceitável.
[0330] Um aspecto desta invenção é um método para administrar um siRNA de fita dupla ao fígado de um animal que compreende administrar um composto de fórmula (Id) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao animal.
[0331] Outro aspecto desta invenção é a método para tratar uma doença ou distúrbio (por exemplo, uma infecção viral, como uma infecção viral de hepatite B) num animal que compreende administrar um composto de fórmula (Id) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo ao animal.
[0332] Certas modalidades da invenção fornecem um composto de fórmula (Id) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para uso em terapia médica.
[0333] Certas modalidades da invenção fornecem um composto de fórmula (Id) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para o tratamento profilático terapêutico de uma doença ou distúrbio (por exemplo, uma infecção viral, como uma infecção de vírus da hepatite B) num animal.
[0334] Certas modalidades da invenção fornecem o uso de um composto de fórmula (Id) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo para preparar um medicamento para tratar uma doença ou distúrbio (por exemplo, uma infecção viral, como uma infecção de vírus da hepatite B) num animal.
[0335] Em certas modalidades, o animal é um mamífero, como um ser humano (por exemplo, um paciente infectado com HBV).
[0336] A invenção também fornece intermediários sintéticos e métodos divulgados no presente documento que são úteis para preparar compostos da fórmula (Id). Por exemplo, a invenção inclui um composto intermediário da fórmula le:
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72/217
Figure BR112019021359A2_D0136
[0337] ou um sal do mesmo, em que:
[0338] R1d é selecionado de:
Figure BR112019021359A2_D0137
Figure BR112019021359A2_D0138
Figure BR112019021359A2_D0139
[0339] e
Figure BR112019021359A2_D0140
NH
Figure BR112019021359A2_D0141
[0340] Xd é C2-8alquileno;
[0341]ndé0ou 1;
[0342] Pg1 é H ou um grupo de proteção adequado; e [0343] R3d é H, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um
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73/217 suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido. A Figura 1 ilustra um composto intermediário representativo da fórmula (le), em que um ligante/aglutinante de direcionamento é ligado a um suporte de fase sólida, e em que Pg1 é a DMTr de grupo protetor.
[0344] Numa modalidade, Pg1 é TMTr (Trimetoxitritil), DMTr (Dimetoxitritil), MMTr (Monometoxitritil) ou Tr (Tritil).
[0345] A invenção também fornece um método para preparar um composto de fórmula (Id) conforme descrito no presente documento que compreende submeter um composto da fórmula correspondente (le):
Figure BR112019021359A2_D0142
(Ιθ) [0346] em que:
[0347] Xd é C2-8alquileno;
[0348] nd é 0 ou 1;
[0349] Pg1 é H; e [0350] R3d é uma ligação covalente a um suporte sólido ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido, a condições de síntese de ácido nucleico de fase sólida para fornecer um composto correspondente de fórmula Id em que R2d é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1.
[0351] Numa modalidade, o método compreende adicionalmente remover o composto do suporte sólido para fornecer o composto correspondente da fórmula Id em que R3d é H.
[0352] Numa modalidade, o composto não é um composto de fórmula Id:
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74/217
Figure BR112019021359A2_D0143
(Id) [0353] ou um sal do mesmo, em que:
Figure BR112019021359A2_D0144
[0354] R1d é selecionado de:
Figure BR112019021359A2_D0145
Figure BR112019021359A2_D0146
Figure BR112019021359A2_D0147
[0356] Xd é C2-ioalquileno;
[0357] Nd é 0 ou 1;
[0358] R2d é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1; e
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 81/292
75/217 [0359] R3d é H, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido.
[0360] Numa modalidade, o composto não é um composto de fórmula le:
Figure BR112019021359A2_D0148
(le) [0361] ou um sal do mesmo, em que:
[0362] R1d é selecionado de:
Figure BR112019021359A2_D0149
Figure BR112019021359A2_D0150
Figure BR112019021359A2_D0151
[0363] e
Figure BR112019021359A2_D0152
NH
Figure BR112019021359A2_D0153
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 82/292
76/217 [0364] Xd é C2-8alquileno;
[0365] nd é 0 ou 1;
[0366] Pg1 é H ou um grupo de proteção adequado; e [0367] R3d é H, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido.
[0368] Numa modalidade, R3d é H.
[0369] Numa modalidade, R3d é uma ligação covalente a um suporte sólido.
[0370] Numa modalidade, R3d é uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido, em que o grupo de ligação é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 2 a 15 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3 ou 4) dos átomos de carbono são opcionalmente substituídos por (-O-) ou (-N(H)), e em que a cadeia é opcionalmente substituída em carbono por um ou mais (por exemplo 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (CsCejcicloalquila, (Ci-Ce)alcanoíla, (C-i-Cejalcanoilóxi, (C-i-Cejalcoxicarbonila, (C-iCe)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[0371] Numa modalidade, R3d é uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido, em que o grupo de ligação é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 2 a 10 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2,3 ou 4) dos átomos de carbono são opcionalmente substituídos por (-O-) ou (-N(H)), e em que a cadeia é opcionalmente substituída em carbono por um ou mais (por exemplo 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (CsCejcicloalquila, (Ci-Ce)alcanoíla, (C-i-Cejalcanoilóxi, (C-i-Cejalcoxicarbonila, (C-iCejalquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi,
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 83/292
77/217 heteroarila e heteroarilóxi.
[0372] Numa modalidade, R3d é uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido, em que o grupo de ligação é C(=O)CH2CH2C(=O)N(H)-.
[0373] Numa modalidade, a invenção fornece um composto de fórmula (I):
Figure BR112019021359A2_D0154
[0374] em que:
[0375] R1 é H ou um grupo de ativação sintética;
[0376] L1 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0377] L2 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0378] R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1;
[0379] o anel A é ausente, uma cicloalquila de 3 a 20 membros, uma arila de 5 a 20 membros, uma heteroarila de 5 a 20 membros ou uma heterocicloalquila de 3 a 20 membros;
[0380] cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -Ci-2alquil-ORB, C1-10alquil C2-io alquenila, e C2-w alquinila; em que a C1-10 alquil C2-io alquenila e C2-io alquinila são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi, e Ci-salcóxi;
[0381 ]RB é hidrogênio, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e [0382] néO, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10;
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 84/292
78/217 [0383] ou um sal do mesmo.
[0384] Numa modalidade, a invenção fornece um composto de fórmula (I):
Figure BR112019021359A2_D0155
[0385] em que:
[0386] R1 é um ligante de direcionamento;
[0387] L1 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0388] L2 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0389] R2 é H ou um grupo de ativação sintética;
[0390] o anel A é ausente, uma cicloalquila de 3 a 20 membros, uma arila de 5 a 20 membros, uma heteroarila de 5 a 20 membros ou uma heterocicloalquila de 3 a 20 membros;
[0391] cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -Ci-2alquil-ORB, C1-10alquil C2-10 alquenila, e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquil C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi, e Ci-salcóxi;
[0392] RB é hidrogênio, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e [0393] néO, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10;
[0394] ou um sal do mesmo.
[0395] Numa modalidade, a invenção fornece um composto da fórmula (Ig):
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79/217 (RA)n
Figure BR112019021359A2_D0156
L1
R1 (ig) [0396] em que:
[0397] B é -N- ou -CH-;
[0398] L2 é Ci-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidroxila ou halo; e [0399] néO, 1,2, 3, 4, 5, 6 ou 7;
[0400] ou um sal do mesmo.
[0401] Numa modalidade, a invenção fornece um composto selecionado do grupo que consiste em:
R2—O O-R2
Figure BR112019021359A2_D0157
Q
Figure BR112019021359A2_D0158
Q [0402] em que:
[0403] Q é-L1-R1; e [0404] R’ é Ci-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C19 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila é opcionalmente substituída por halo ou hidroxila;
[0405] e sais do mesmo.
[0406] Numa modalidade, a invenção fornece um composto
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 86/292
80/217 selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0159
[0407] em que: Q é -L1-R1; e sais dos mesmos.
[0408] Numa modalidade, a invenção fornece um composto da fórmula (Ig):
(RA)n
Figure BR112019021359A2_D0160
L1
R1 (ig) [0409] em que:
[0410] B é-N-ou -CH-;
[0411 ] L1 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0412] L2 é Ci-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidroxila ou halo;
[0413] néO, 1,2, 3, 4, 5, 6 ou 7;
[0414] R1 é H ou um grupo de ativação sintética; e [0415] R2 é H ou um grupo de ativação sintética;
[0416] ou um sal do mesmo.
[0417] Numa modalidade, a invenção fornece um composto
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 87/292
81/217
Figure BR112019021359A2_D0161
Figure BR112019021359A2_D0162
O-R2
HO
Figure BR112019021359A2_D0163
[0419] L1 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0420] R’ é Ci-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C19 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila é opcionalmente substituída por halo ou hidroxila;
[0421] R1 é H ou um grupo de ativação sintética; e [0422] R2 é H ou um grupo de ativação sintética;
[0423] ou um sal do mesmo.
[0424] Numa modalidade, a invenção fornece um composto selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0164
[0425] em que:
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 88/292
82/217 [0426] Q é-L1-R1;
[0427] L1 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0428] R1 é H ou um grupo de ativação sintética; e [0429] R2 é H ou um grupo de ativação sintética;
[0430] ou um sal do mesmo.
[0431] Numa modalidade, R1 é H ou um grupo de ativação sintética derivável de DCC, HOBt, EDC, BOP, PyBOP ou HBTU.
[0432] Numa modalidade, R2 é H, acetato, triflato, mesilato ou succinato.
[0433] Numa modalidade, R1 é um grupo de ativação sintética derivável de DCC, HOBt, EDC, BOP, PyBOP ou HBTU.
[0434] Numa modalidade, R2 é acetato, triflato, mesilato ou succinato.
[0435] Numa modalidade, L1 é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 5 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos -O-, NH-, -NH-C(=O)-, -C(=O)-NH- ou -S-.
[0436] Numa modalidade, a invenção fornece um composto de fórmula (XX):
Figure BR112019021359A2_D0165
(XX) [0437] em que:
[0438] R1 é um ligante de direcionamento;
[0439] L1 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0440] L2 está ausente ou é um grupo de ligação;
[0441] R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1;
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 89/292
83/217 [0442] B é bivalente e é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0166
Figure BR112019021359A2_D0167
Figure BR112019021359A2_D0168
Figure BR112019021359A2_D0169
Figure BR112019021359A2_D0170
[0443] em que:
[0444] cada R’ é independentemente C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila é opcionalmente substituída por halo ou hidroxila;
[0445] a valência marcada com * é fixada a L1 ou é fixada a R1 se L1 for ausente; e [0446] a valência marcada com ** é fixada a L2 ou é fixada a R2 se L2 for ausente;
[0447] ou um sal do mesmo.
[0448] Numa modalidade, R1 [0449] Numa modalidade, R1 [0450] Numa modalidade, R1 compreende 2 a 8 sacarídeos.
compreende 2 a 6 sacarídeos.
compreende 2 a 4 sacarídeos.
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84/217 [0451] Numa modalidade, R1 compreende 3 a 8 sacarídeos.
[0452] Numa modalidade, R1 compreende 3 a 6 sacarídeos.
[0453] Numa modalidade, R1 compreende 3 a 4 sacarídeos.
[0454] Numa modalidade, R1 compreende 3 sacarídeos.
[0455] Numa modalidade, R1 compreende 4 sacarídeos.
[0456] Numa modalidade, R1 tem a seguinte fórmula:
sacarídeo 3 sacarfdeo—
V \
/ sacarídeo-^ τ* ' I „τδ sacarídeo [0457] em que:
[0458] B1 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e é covalentemente ligada a L1, T1 e T2.
[0459] B2 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e é covalentemente ligado a T1, T3 e T4;
[0460] B3 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e é covalentemente ligado a T2, T5 e T6;
[0461 ]T1 é ausente ou um grupo de ligação;
[0462] T2 é ausente ou um grupo de ligação;
[0463] T3 é ausente ou um grupo de ligação;
[0464] T4 é ausente ou um grupo de ligação;
[0465] T5 é ausente ou um grupo de ligação; e [0466] T6 é ausente ou um grupo de ligação.
[0467] Numa modalidade, cada sacarídeo é independentemente selecionado de:
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85/217
Figure BR112019021359A2_D0171
[0468] em que:
[0469] X é NR3, e Y é selecionado de -(C=O)R4, -SO2R5 e -(C=O)NR6R7; ou X é -(C=O)- e Y é NR8R9;
[0470] R3 é hidrogênio ou (Ci-C4)alquila;
[0471 ] R4, R5, R6, R7, R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, (Ci-Cs)alquila, (C1Cs)haloalquila, (Ci-Cs)alc0xi e (Cs-Cejcicloalquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, (Ci-C4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (C1C4)haloalcóxi;
[0472] R10 é -OH, -NR8R9 ou - F; e [0473] R11 é -OH, -NR8R9, -F ou heterociclo de 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, (CiC4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (Ci-C4)haloalcóxi.
[0474] Numa modalidade, cada sacarídeo é independentemente selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0172
Figure BR112019021359A2_D0173
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 92/292
86/217 [0475] Numa modalidade, cada sacarídeo é independentemente:
HO JT-OH HO hoA > ou p o 4—{ os AA
Ç—NM b“| ÇNH AÇ [0476] Numa modalidade, um de T1 e T2 está ausente.
[0477] Numa modalidade, tanto T1 quanto T2 estão ausentes.
[0478] Numa modalidade, cada um de T1, T2, T3, T4, T5 e T6 é independentemente ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (C1-C6)alcóxi, (C3C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[0479] Numa modalidade, cada um de T1, T2, T3, T4, T5 e T6 é independentemente ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (C1-C6)alcóxi, (C3C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 93/292
87/217 [0480] Numa modalidade, cada um de T1, T2, T3, T4, T5 e T6 é independentemente ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, ou um sal do mesmo, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por -O- ou -NRX-, e em que Rx é hidrogênio ou (Ci-Ce)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1,2, 3 ou 4) substituintes selecionados dentre halo, hidróxi e oxo (=0).
[0481] Numa modalidade, cada um de T1, T2, T3, T4, T5 e T6 é independentemente ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1,2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por -O- e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1,2, 3 ou 4) substituintes selecionados dentre halo, hidróxi e oxo (=0).
[0482] Numa modalidade, cada um de T1, T2, T3, T4, T5 e T6 é independentemente ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto linear ou ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1,2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por -O- e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1,2, 3 ou 4) substituintes selecionados dentre halo, hidróxi e oxo (=0).
[0483] Numa modalidade, pelo menos um de T3, T4, T5 e T6 é:
H
Figure BR112019021359A2_D0174
[0484] em que:
[0485] n = 1,2, 3.
[0486] Numa modalidade, cada um de T3, T4, T5 e T6 é
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 94/292
88/217 independentemente selecionado do grupo que consiste em: H
Figure BR112019021359A2_D0175
[0487] em que:
[0488] n = 1,2, 3.
[0489] Numa modalidade, pelo menos um de T1 e T2 é glicina.
[0490] Numa modalidade, cada um de T1 e T2 é glicina.
[0491] Numa modalidade, B1 é um grupo trivalente que compreende de 1 a 15 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1 e T2.
[0492] Numa modalidade, B1 é um grupo trivalente que compreende de 1 a 10 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1 e T2.
[0493] Numa modalidade, B1 compreende uma (Ci-Ce)alquila.
[0494] Numa modalidade, B1 compreende uma C3-8 cicloalquila.
[0495] Numa modalidade, B1 compreende um grupo silila.
[0496] Numa modalidade, B1 compreende um D- ou L-aminoácido.
[0497] Numa modalidade, B1 compreende um sacarídeo.
[0498] Numa modalidade, B1 compreende um grupo fosfato.
[0499] Numa modalidade, B1 compreende um grupo fosfonato.
[0500] Numa modalidade, B1 compreende uma arila.
[0501] Numa modalidade, B1 compreende um anel de fenila.
[0502] Numa modalidade, B1 é um anel de fenila.
[0503] Numa modalidade, B1 é CH.
[0504] Numa modalidade, B1 compreende uma heteroarila.
[0505] Numa modalidade, B1 é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0176
[0506] Numa modalidade, B1 é selecionado do grupo que consiste
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89/217 em:
HN
NH [0507] Numa modalidade, B2 é um grupo trivalente que compreende de 1 a 15 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1 e T2.
[0508] Numa modalidade, B2 é um grupo trivalente que compreende de 1 a 10 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1 e T2.
[0509] Numa modalidade, B2 compreende uma (Ci-Ce)alquila.
[0510] Numa modalidade, B2 compreende uma Cs-scicloalquila.
[0511 ] Numa modalidade, B2 compreende um grupo silila.
[0512] Numa modalidade, B2 compreende um
D- ou L-aminoácido.
[0513] Numa modalidade, B2 compreende um sacarídeo.
[0514] Numa modalidade, B2 compreende um grupo fosfato.
[0515] Numa modalidade, B2 compreende um grupo fosfonato.
[0516] Numa modalidade, B2 compreende uma arila.
[0517] Numa modalidade, B2 compreende um anel de fenila.
[0518] Numa modalidade,
B2 é um anel de fenila.
em:
IMH em:
[0519] Numa modalidade, [0520] Numa modalidade, [0521] Numa modalidade, [0522] Numa modalidade,
B2é CH.
B2 compreende uma heteroarila.
B2 é selecionado do grupo que consiste
B2 é selecionado do grupo que consiste
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90/217
Figure BR112019021359A2_D0177
[0523] ou um sal do mesmo.
[0524] Numa modalidade, B3 é um grupo trivalente que compreende de 1 a 15 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1 e T2.
[0525] Numa modalidade, B3 é um grupo trivalente que compreende de 1 a 10 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1 e T2.
[0526] Numa modalidade, B3 compreende uma (Ci-Ce)alquila.
[0527] Numa modalidade, B3 compreende uma Cs-scicloalquila.
[0528] Numa modalidade, B3 compreende um grupo silila.
[0529] Numa modalidade, B3 compreende um D- ou L-aminoácido.
[0530] Numa modalidade, B3 compreende um sacarídeo.
[0531] Numa modalidade, B3 compreende um grupo fosfato.
[0532] Numa modalidade, B3 compreende um grupo fosfonato.
[0533] Numa modalidade, B3 compreende uma arila.
[0534] Numa modalidade, B3 compreende um anel de fenila.
[0535] Numa modalidade, B3 é um anel de fenila.
[0536] Numa modalidade, B3 é CH.
[0537] Numa modalidade, B3 compreende uma heteroarila.
[0538] Numa modalidade, B3 é selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0178
[0539] Numa modalidade, B3 é selecionado do grupo que consiste
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91/217 em:
Figure BR112019021359A2_D0179
[0540] ou um sal do mesmo.
[0541] Numa modalidade, L1 e L2 são independentemente uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada divalente, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[0542] Numa modalidade, L1 é selecionado do grupo que consiste em:
GO GO O Ô
O [0543] ou um sal do mesmo.
[0544] Numa modalidade, L1 é conectado a B1 através de uma ligação selecionada do grupo que consiste em: -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, NH-(C=O), -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH-ou -NH-(SO2)-.
[0545] Numa modalidade, L1 é selecionado do grupo que consiste em:
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92/217
Figure BR112019021359A2_D0180
[0546] Numa modalidade, L2 é conectado a R2 através de -O-.
[0547] Numa modalidade, L2 é C1-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidróxi.
[0548] Numa modalidade, L2 é conectado a R2 através de -O-.
[0549] Numa modalidade, L2 é ausente.
[0550] Numa modalidade, a invenção fornece um composto ou sal selecionado do grupo que consiste em:
Figure BR112019021359A2_D0181
Figure BR112019021359A2_D0182
200, n = 3, x = 2
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93/217
Figure BR112019021359A2_D0183
Figure BR112019021359A2_D0184
Figure BR112019021359A2_D0185
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94/217
Figure BR112019021359A2_D0186
[0551 ]e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a Tabela 1.
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95/217 [0552] Numa modalidade, a invenção fornece um composto de fórmula:
Figure BR112019021359A2_D0187
Figure BR112019021359A2_D0188
OH [0553] ou um sal do mesmo, em que R2 é um ácido nucleico.
[0554] Numa modalidade, a invenção fornece um composto de fórmula:
OH oh
Figure BR112019021359A2_D0189
[0555] ou um sal do mesmo, em que R2 é um ácido nucleico.
[0556] Numa modalidade, a molécula de ácido nucleico (por exemplo, siRNA) é fixada ao restante do composto através do oxigênio de um fosfato na extremidade 3’ da fita senso.
[0557] Numa modalidade, o composto ou sal é administrado de
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96/217 modo subcutâneo.
[0558] Quando um composto compreende um grupo da seguinte fórmula:
Η0χ R'\ R'
JWV I [0559] há quatro estereoisômeros possíveis no anel, dois c/s e dois trans. A menos que observado de outro modo, os compostos da invenção incluem todos os quatro estereoisômeros sobre tal anel. Numa modalidade, os dois grupos R’ estão numa conformação cis. Numa modalidade, os dois grupos R’ estão numa conformação trans.
[0560] Um aspecto da invenção é uma partícula de ácido nucleicolipídio que compreende:
[0561] (a) um ou mais moléculas de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla da Tabela 1;
[0562] (b) um lipídio catiônico; e [0563] (c) um lipídio não catiônico.
EXEMPLOS [0564] A presente invenção será descrita com mais detalhes a título de exemplos específicos. Os seguintes exemplos são oferecidos com propósitos de ilustração e não se destinam a limitar a invenção de maneira alguma. Os versados na técnica reconhecerão prontamente uma variedade de parâmetros não críticos que podem ser mudados ou modificados para produzir essencialmente os mesmos resultados. É entendido que, numa modalidade, o oligonucleotídeo é uma molécula de siRNA de fita dupla, conforme descrito na Tabela 1.
EXEMPLO 1. SÍNTESE DE CONJUGADO 1
ESQUEMA 1.
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97/217
HO
Figure BR112019021359A2_D0190
Ο
Figure BR112019021359A2_D0191
TsCI, NaOH
OH -------HO
Figure BR112019021359A2_D0192
Ο
Figure BR112019021359A2_D0193
OTs
NaN3
HO
Figure BR112019021359A2_D0194
Ο
Figure BR112019021359A2_D0195
THF/H2O
DMF, 45°C
N3
ESQUEMA 2
OH
HO I hoV^v°h nh2 hci
Ac2O / Pyr * ~OAc AcO I
AcOXR-VOAc
NHAc
TMSOTf
CHCI3 » ~ 0Ac
AcO I \k~-0
Ac0X-7~~A , Vo
TMSOTf
Figure BR112019021359A2_D0196
Figure BR112019021359A2_D0197
ESQUEMA 4.
Figure BR112019021359A2_D0198
Figure BR112019021359A2_D0199
Figure BR112019021359A2_D0200
ESQUEMA 5.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 104/292
98/217
Figure BR112019021359A2_D0201
HBTU DIPEA, u DMF
Figure BR112019021359A2_D0202
Figure BR112019021359A2_D0203
j tSSCÀ dê CPS dê
2i Sírrtêêê de csiígOnisdeotídecs .3 J Despyoteçáo
Figure BR112019021359A2_D0204
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2-(2-HIDROXIETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL
4-METILBENZENOSSULFONATO 3 [0565] Uma solução de tetraetileno glicol (934 g, 4,8 mol) em THF (175 ml) e NaOH aquoso (5 M, 145 ml) foi resfriada (0°C) e tratada com cloreto de p-toluenossulfonila (91,4 g, 480 mmol) dissolvido em THF (605 ml) e, então,
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 105/292
99/217 agitada por duas horas (0°C). A mistura de reação foi diluída com água (3 I) e extraída (3x 500 ml) com CH2CI2. Os extratos combinados foram lavados com água e salmoura, então, secados (MgSO4), filtrados e concentrados para proporcionar 4-metilbenzenossulfonato de 2-(2-(2-(2-hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etila 3 (140 g, 84%) como um óleo amarelo pálido. Rf (0,57, 10% de MeOH-ChhClz).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2-(2-AZIDOETOXI)ETOXI)ETOXI)ETAN1-OL4
HO-x^°'^X^O-XX^'O'^xN3 [0566] Uma solução de 3 (140 g, 403 mmol) em DMF (880 ml) foi tratada com azida de sódio (131 g, 2,02 mol) e aquecida (45°C) de um dia para o outro. Uma maioria do DMF foi removida sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em CH2CI2 (500 ml) e lavado (3 x 500 ml) com salmoura, então, secado (MgSO4), filtrado e concentrado. O resíduo foi passado através de um leito curto de silica (5% de MeOH-CFhClz) e concentrado para render 2-(2-(2-(2azidoetoxi)etoxi)etoxi)etan-1-ol 4 (65 g, 74%) como um óleo amarelo. Rf (0,56, 10% de MeOH-CH2CI2).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE GALACTOSAMINA PERACETILADA 6
AcO /0Ac
AcO O Ac
NHAc [0567] Clohdrato de D-galactosamina 5 (250 g, 1,16 mol) em pihdina (1,5 I) foi tratada com anidhdo acético (1,25 I, 13,2 mol) sobre 45 minutos. Após a agitação de um dia para o outro, a mistura de reação foi dividida em três porções de 1 I. Cada porção de 1 I foi vertida em 3 I de água gelada e misturada por uma hora. Após a mistura, os sólidos foram removidos por filtração, combinados, congelados sobre nitrogênio líquido e, então, liofilizados por cinco dias para render galactosamina peracetilada 6 (369,4 g, 82%) como um sólido branco. Rf (0,58, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (3AR,5R,6R,7R,7AR)-5Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 106/292
100/217 (ACETOXIMETIL)-2-METIL-3A,6,7,7A-TETRA-HIDRO-5H-PIRANO[3,2D]OXAZOL-6,7-DI-ILA 7
OAc AcO I
Ή-0
AcoV/-A NU [0568] Uma solução de galactosamina peracetilada 6 (8,45 g, 21,7 mmol) em CHCh (320 ml) foi tratada por gotejamento com TMSOTf (4,32 ml,
23,9 mmol). Após a agitação (1,5 h, 40°C), a reação foi bruscamente arrefecida pela adição de trietilamina (5 ml) e concentrada até a secura para proporcionar o composto 7 como um vidro amarelo pálido (7,2 g, Quant.). O produto foi usado sem purificação adicional. Rf (0,59, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2R,3R,4R,5R,6R)-5ACETAMIDO-2-(ACETOXIMETIL)-6-(2-(2-(2-(2AZIDOETOXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)TETRA-HIDRO-2H-PIRAN-3,4-DI-ILA 8
AcO /0Ac
Ά-0 „
AcO-\^-y-X---Ox^^Q.
NHAc n3
0' [0569] O composto 7 (7,2 g, 21,7 mmol) e 2-(2-(2-(2azidoetoxi)etoxi)etoxi)etan-1-ol 4 (2,65 g, 15,2 mmol) foram azeotropados (3x) de tolueno (150 ml) para remover traços de água. O material secado foi dissolvido em 1,2-dicloroetano (150 ml), resfriado (~5°C) e tratado com TMSOTf (784 pl, 4,34 mmol). Após a agitação de um dia para o outro, a reação foi bruscamente arrefecida pela adição de trietilamina (5 ml) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia (1% —> 5% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 8 (7,12 g, 85%) como um óleo marrom. Rf (0,3, 10% de MeOHCH2CI2).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 2,2,2-TRIFLUOROACETATO DE 2-(2-(2-(2 (((2R,3R,4R,5R,6R)-3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6 (ACETOXIMETIL)TETRA-HIDRO-2H-PIRAN-2Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 107/292
101/217
IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETAN-1 -AMÍNIO 9
AcO /0Ac O
VA—o + -JU
NHAc [0570] Uma solução da azida 8 (7,12 g, 13 mmol) em EtOAc (150 ml) e ácido trifluoroacético (2 ml) foi tratada com paládio em carvão (1,5 g, 10% em p/p com base úmida). A mistura de reação foi, então, purgada com hidrogênio e agitada vigorosamente de um dia para o outro. Após purga com nitrogênio, a mistura foi filtrada através de Celite, enxaguando com MeOH. O filtrado foi concentrado e purificado por meio de cromatografia (5% —> 10% —> 20% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 9 (5,8 g, 72%) como um óleo marrom. Rf (0,34, 15% de MeOH-CH2CI2).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE 4-(((BENZILOXI)CARBONIL)AMINO)-4-(3(TERC-BUTOXI)-3-OXOPROPIL)HEPTANODIOATO DE DI-TERC-BUTILA 11 o
Figure BR112019021359A2_D0205
[0571] A uma solução de 4-amino-4-(3-(terc-butoxi)-3oxopropil)heptanodioato de di-terc-butila 10 (13,5 g, 33 mmol), 25% de Na2CO3 (aq) (150 ml) e diclorometano (300 ml) foi adicionado lentamente clorofromato de benzila (14 ml, 98 mmol). A solução foi agitada vigorosamente de um dia para o outro (16 h) em temperatura ambiente. Mediante completação, o diclorometano adicional (100 ml) foi adicionado e a camada de diclorometano foi separada. A camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 100 ml). Os extratos de diclorometano combinados foram secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados até a secura. O produto 11 foi isolado como um óleo incolor que não necessitou de purificação adicional (15,8 g, 88%). Rf (0,7, 1:1 de EtOAcHexano).
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 108/292
102/217
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 4-(((BENZILOXI)CARBONIL)AMINO)-4(2-CARBOXIETIL)HEPTANODIOICO 12
Figure BR112019021359A2_D0206
[0572] Uma solução de 11 (15,6 g, 28,8 mmol) em ácido fórmico (50 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. A solução foi concentrada até a secura e dissolvida em acetato de etila (~25 ml). Mediante o repouso, o produto é cristalizado como um sólido incolor. O sólido foi filtrado, lavado com acetato de etila e ar secado para proporcionar 12 como um sólido incolor (10,2 g, 93%). Rf (0,1, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 13
Figure BR112019021359A2_D0207
[0573] Uma solução de 12 (793 mg, 2,08 mmol) e 9 (5,8 g, 9,36 mmol) em DMF (50 ml) foi tratada com BOP (3,67 g, 8,32 mmol) então A/,A/-diisopropiletilamina (4,31 ml, 25 mmol). Após a agitação de um dia para o outro, a mistura foi concentrada até a secura e submetida à cromatografia (1 % —> 2% —> 5% —> 10% —> 15% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 13 (5,71 g [bruto], >100% - conteve subprodutos de acoplamento que não afetaram a próxima etapa). Rf (0,45, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 14
Figure BR112019021359A2_D0208
3 14 [0574] O Composto 13 (5,7 g) foi dissolvido em MeOH (150 ml) e
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 109/292
103/217
TFA (1,5 ml) e tratado com paládio em carvão (1 g, 10% em p/p com base úmida). A mistura de reação foi, então, purgada com hidrogênio e agitada vigorosamente de um dia para o outro. Após purga com nitrogênio, a mistura foi filtrada através de Celite, enxaguando com MeOH. O filtrado foi concentrado e purificado por meio de cromatografia (5% —> 10% —> 20% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 14 como um óleo marrom (2,15 g, 56% por duas etapas). Rf (0,32, 10% de MeOH-CH2CI2).
ETAPA 11. PREPARAÇÃO DE (5-AMINO-1,3-FENILENO)DIMETANOL 15
Figure BR112019021359A2_D0209
[0575] Uma solução de 5-aminoisoftalato de dimetila (20,0 g, 96 mmol) em THF (350 ml) foi adicionada, por gotejamento, a uma mistura de refluxo de 3,75 eq de LiAlFU (13,6 g, 358 mmol) em THF (440 ml) por uma hora. A mistura foi agitada em refluxo por mais duas horas, então, resfriada até temperatura ambiente e bruscamente arrefecida pela adição cuidadosa de MeOH (27 ml), então, água (40 ml). Após agitação, a mistura bruscamente arrefecida por duas horas foi filtrada e concentrada até a secura. O resíduo foi recristalizado (2X) de EtOAc para proporcionar 15 como cristais amarelos castanhos (10,2 g, 70 %).
ETAPA 12. PREPARAÇÃO DE 10-((3,5-BIS(HIDROXIMETIL)FENIL)AMINO)1Q-OXODECANOATO DE METILA 16
Figure BR112019021359A2_D0210
[0576] Uma solução de sebacato de metila (3,8 g, 17 mmol), 15 (2,5 g, 17 mmol) e EEDQ (8,1 g, 33 mmol) in 2:1 diclorometano / metanol (200 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. Mediante completação, a solução foi concentrada até a secura. O sólido obtido foi triturado com diclorometano (50
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 110/292
104/217 ml) e filtrado. O sólido foi enxaguado com diclorometano frio e secado com ar para proporcionar 16 como um sólido incolor (4,3 g, 72%). Rf (0,33, EtOAc).
ETAPA 13. PREPARAÇÃO DE 10-((3-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5-(HIDROXIMETIL)FENIL)AMINO)-
10-OXODECANOATO DE METILA 17
Figure BR112019021359A2_D0211
[0577] A uma solução de 16 (4,3 g, 12 mmol) em piridina (50 ml) foi adicionado 4,4’-(cloro(fenil)metileno)bis(metoxibenzeno) (4,1 g, 12 mmol). A solução foi agitada sob nitrogênio de um dia para o outro em temperatura ambiente. Mediante conclusão, a solução foi concentrada até a secura e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (0,5% —> 0,75% —> 1 % —> 1,5% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 17 como um sólido amarelo (2,9 g, 35%). Rf (0,6, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 14. PREPARAÇÃO DE 10-((3-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5-(HIDROXIMETIL)FENIL)AMINO)10-OXODECANOATO DE LÍTIO 18
Figure BR112019021359A2_D0212
[0578] A uma solução de 17 (2,9 g, 4,3 mmol) em THF (60 ml) foi adicionada água (15 ml) e hidróxido de lítio (112 mg, 4,7 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante completação, a solução foi concentrada para remover o THF. A solução aquosa restante foi escoada congelada em nitrogênio líquido e liofilizada de um dia para o outro para proporcionar um sólido incolor (2,9 g, quant.). Rf (0,3, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 15. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 19
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105/217
Figure BR112019021359A2_D0213
[0579] A uma solução 14 (454 mg, 0,67 mmol), 18 (1,25 g, 0,67 mmol) e HBTU (381 mg, 1,0 mmol) em DMF anidro (25 ml) foi adicionada Λ/,Λ/di-isopropiletilamina (0,35 ml, 2,0 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante completação, a solução foi vertida em acetato de etila (250 ml) e lavada com salmoura (3 x 200 ml). A camada de acetato de etila foi secada em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura. A purificação por cromatografia de coluna (5% —> 7,5% —> 10% —> 15% de MeOH em CH2CI2) proporcionou 19 como uma espuma laranja pálida (1,5 g, 94%). Rf (0,25, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 16. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 20
Figure BR112019021359A2_D0214
[0580] Uma solução de composto 19 (1,5 g, 0,6 mmol), anidrido succínico (120 mg, 1,2 mmol), DMAP (220 mg, 1,8 mmol) e trimetilamina (250 pl,
1,8 mmol) em CH2CI2 anidro (50 ml) foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante completação, a solução foi concentrada até a secura e filtrada através de um tampão curto de silica (100% de CH2CI2 —> 15% de MeOH em CH2CI2) para proporcionar o produto 20 como uma espuma bege clara (1,1 g, 70%). Massa m/z (ES-TOF MS) 727,7 [Μ + 3H - DMTr]+, 1091,1 [M + 2H - DMTr], RMN de 1H (400 MHz, CDCI3) δ 8,92 (br s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,497,47 (m, 3H), 7,41 (brs, 1H), 7,38-7,34 (m, 5H), 7,32-7,26 (m, 4H), 7,24-7,08 (br s, 3H), 7,08 (s, 1H), 6,90-6,80 (m, 7H), 5,31 (d, 3H, J = 2,7Hz), 5,12 (s, 2H), 5,06 (dd, 3H, J = 11,2, 3,2 Hz), 4,78 (d, 3H, J = 8,5 Hz), 4,24-4,08 (m, 12H), 3,95-3,88
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 112/292
106/217 (m, 7H), 3,85-3,76 (m, 4H), 3,78 (s, 6H), 3,68-3,56 (m, 34H), 3,54-3,44 (m, 8H), 3,41-3,33 (m, 6H), 2,70-2,60 (m, 4H), 2,52-2,30 (m, 30H), 2,24-2,16 (m, 8H), 2,14 (s, 9H), 2,04 (s, 9H), 2,02-1,96 (m, 6H), 1,98 (s, 9H), 1,96 (s, 9H), 1,74-1,52 (m, 4H), 1,36-1,24 (m, 12H).
ETAPA 17. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 1
Figure BR112019021359A2_D0215
[0581 ] O succinato 20 foi carregado em 1000 A CPG (vidro de poro de controle) de LCAA (aminoalquila de cadeia longa) com o uso de química de acoplamento de amida padrão. Uma solução de di-isopropilcarbodi-imida (52,6 pmol), N-hidroxissuccinimida (0,3 mg, 2,6 pmol) e piridina (10 pl) em acetonitrila anidra (0,3 ml) foi adicionada a 20 (20,6 mg, 8 pmol) em diclorometano anidro (0,2 ml). Esta mistura foi adicionada a CPG de LCAA (183 mg). A suspensão foi suavemente misturada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante desaparecimento de 20 (HPLC), a mistura de reação foi filtrada e o CPG foi lavado com 1 ml de cada diclorometano, acetonitrila, uma solução de 5% de anidrido acético / 5% de N-metilimidazol / 5% de piridina em THF, então, THF, acetonitrila e diclorometano. O CPG foi, então, secado de um dia para o outro sob alto vácuo. O carregamento foi determinado por ensaio de DMTr padrão por UV/Vis (504 nm) para ser 25 pmol/g. O suporte sólido de CPG carregado por GaINAc resultante foi empregado em síntese de oligonucleotídeo automatizada com o uso de procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeo seguida por remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concomitante) proporcionou o conjugado de GaINAc-oligonucleotídeo 1 como um exemplo representativo.
EXEMPLO 2: SÍNTESE DE CONJUGADO 34
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 113/292
107/217
ESQUEMA 6.
Figure BR112019021359A2_D0216
Figure BR112019021359A2_D0217
Figure BR112019021359A2_D0218
Figure BR112019021359A2_D0219
Figure BR112019021359A2_D0220
.OLi
ESQUEMA 8.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 114/292
108/217
Figure BR112019021359A2_D0221
< F . · 13.1: .· [ 1¾ - H
J3, F s = DMTt .j'.
34.. p- « Ohg:^nu-d·Borneo |x2 ·' H
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 4-(2(((BENZILOXI)CARBONIL)AMINO)ACETAMIDO)-4-(3-(TERC-BUTOXI)-3OXOPROPIL)HEPTANODIOATO DE DI-TERC-BUTILA 21
Figure BR112019021359A2_D0222
[0582] Uma solução de 4-amino-4-(3-(terc-butoxi)-3oxopropil)heptanodioato de di-terc-butila (25 g, 60 mmol) e Z-glicina (18,9 g, 90,2 mmol,) em CH2CI2 (300 ml) foi tratada sucessivamente com EDC (23 g, 120 mmol), di-isopropiletilamina (32 ml, 180 mmol) e DMAP (Cat. 17 mg). Após a agitação (16 h), a mistura de reação foi vertida em NaHCOs (Sat. Aq.), extraída com CH2CI2, lavada com salmoura, secada (MgSO4), filtrada e concentrada para proporcionar 4-(2-(((benziloxi)carbonil)amino)acetamido)-4-(3-(terc-butoxi)-3 oxopropil)heptanodioato de di-terc-butila 21 como um sólido amorfo e foi usada
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 115/292
109/217 sem processamento adicional (36 g, quant.). Rf (0,85, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 4-(2 (((BENZILOXI)CARBONIL)AMINO)ACETAMIDO)-4-(2CARBOXIETIL)HEPTANODIOICO 22
HO
HO.
HO [0583] Uma solução de
4-(2(((benziloxi)carbonil)amino)acetamido)-4-(3-(terc-butoxi)-3oxopropil)heptanodioato de di-terc-butila 21 (59,3 mmol, 36 g) foi agitada em ácido fórmico puro (150 ml) por 72 horas. Mediante completação, o ácido fórmico foi removido sob pressão reduzida e o sólido bruto foi secado de um dia para o outro em alto vácuo para render 22 como um sólido incolor (15,9 g, 61%). Rf (0,15, 10% de MeOH-CH2CI2).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 23
AcO /0Ac
AcO [0584] Uma solução de 22 (6,2 g, 14,1 mmol) e 2,2,2 trifluoroacetato de 2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-diacetoxi-6(acetoximetil)tetra-hidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etan-1 -amínio (35 g, 56,5 mmol) em DMF (250 ml) foi tratada com BOP (25 g, 56,5 mmol), então, Λ/,Λ/di-isopropiletilamina (29 ml, 170 mmol). Após a agitação de um dia para o outro, a mistura foi concentrada até a secura e submetida à cromatografia (100% de CH2CI2 a 15% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar o composto 23 (24,6 g, 89%). Rf (0,55, 15% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 24
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 116/292
110/217
Figure BR112019021359A2_D0223
[0585] O Composto 23 (24,6 g) foi dissolvido em MeOH (200 ml) e TFA (1,5 ml) e purgado com nitrogênio. O paládio em carvão (1 g, 10% em p/p com base úmida) foi adicionado e, então, a mistura de reação foi purgada com hidrogênio e agitada vigorosamente de um dia para o outro. Mediante completação, a reação foi purgada com nitrogênio, filtrada através de Celite e enxaguada com MeOH. O filtrado foi concentrado e purificado por meio de cromatografia de coluna em gel de silica 60 (gradiente: 5% —> 10% —> 20% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 24 como um óleo viscoso marrom pálido (23 g). Rf (0,32, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE (5-AMINO-1,3-FENILENO)DIMETANOL 26
NH2 [0586] Uma suspensão de hidreto de lítio e alumínio (13,6 g, 358 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (450 ml) foi submetida ao refluxo sob uma atmosfera de nitrogênio e tratada, por gotejamento, com uma solução de dimetil5-aminoisoftalato 25 (20 g, 96 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (350 ml). Após a adição ser completa, a mistura foi aquecida para refluxo por 2 horas adicionais. Mediante completação, a solução foi resfriada para temperatura ambiente e bruscamente arrefecida pela adição lenta de MeOH (27 ml), então, água (40 ml). Após a agitação por 2 horas a mistura foi filtrada, concentrada e rechstalizada de EtOAc para render (5-amino-1,3-fenileno)dimetanol 26 como cristais esbranquiçados (10,2 g, 70%). Rf 0,5 (15% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 3,5-BIS(HIDROXIMETIL)BENZONITRILA 27
ΗΟ'^^ψ^ΟΗ ill
N
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 117/292
111/217 [0587] Uma solução de 26 (5 g, 33 mmol) em ácido clorídrico 2 N (100 ml) foi resfriada a 0°C e tratada com uma solução fria de nitrito de sódio (3,53 g, 36 mmol) em água (50 ml). A mistura de reação foi mantida numa temperatura < 5°C por 30 min, então, tratada com uma solução de cianeto de cobre (I) (3,19 g, 35,6 mmol) e cianeto de sódio (3,53 g, 72 mmol) em água (50 ml) numa única porção. Após agitação de um dia para o outro em temperatura ambiente, a mistura foi filtrada, extraída com diclorometano (3 x 100 ml), concentrada e usada sem purificação adicional. O diol, 3,5bis(hidroximetil)benzonitrila 27 foi obtido como um sólido amarelo (2,19 g, 41%). Rf 0,75 (15% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE 3-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5-(HIDROXIMETIL)BENZONITRILA 28
HO'
ODMTr
N [0588] Uma solução de 3,5-bis(hidroximetil)benzonitrila 27 (538 mg,
3,3 mmol) em piridina (14 ml) foi tratada com cloreto de 4,4’-dimetoxitritila (1,17 g, 3,46 mmol) e agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Uma vez completada, a mistura foi concentrada e dispersada em éter dietílico (25 ml), filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna de gel de silica 60 (gradiente: 10% a 50% de EtOAc-Hexano) para render o 28 como um sólido amarelo (725 mg, 47%). Rf 0,5 (1:1 EtOAc-hexano).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE (3-(AMINOMETIL)-5-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)FENIL)METANOL 29
HO Y V ODMTr [0589] Uma solução do 28 (100 mg, 0,22 mmol) em tetraPetição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 118/292
112/217 hidrofurano de metila (5 ml) foi resfriada a 0°C e tratada lentamente com hidreto de lítio e alumínio (0,64 mmol = 0,28 ml de uma solução 2,3 M em MeTHF). Após a agitação por uma hora, a reação foi bruscamente arrefecida pela adição de metanol (1 ml), então, água (0,3 ml) e agitada por 30 min. A mistura foi filtrada e concentrada, para render (3-(aminometil)-5-((bis(4metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)fenil)metanol 29 (78 mg, 77%). Rf 0,15 (10% de MeOH-CH2CI2).
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE 10-((3-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5-(HIDROXIMETIL)BENZIL)AMINO)10-OXODECANOATO DE METILA 30
Figure BR112019021359A2_D0224
[0590] Uma solução de (3-(aminometil)-5-((bis(4metoxifenil)(fenil)metoxi)-metil)fenil)metanol 29 (78 mg, 0,17 mmol) e sebacato de monometila (38 mg, 0,17 mmol,) em diclorometano (5 ml) foi tratada sucessivamente com EDC (48 mg, 0,25 mmol), DMAP (cat., 5 mg) e diisopropiletilamina (57 pl, 0,33 mmol). Após a agitação (3,5 h), a mistura de reação foi vertida em solução de bicarbonate de sódio saturada (50 ml). A solução de bicarbonate de sódio foi extraída com diclorometano (3 x 50 ml), lavada com salmoura (50 ml), seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna em gel de silica 60 (gradiente: 2% a 5% de MeOH-CH2CI2) para proporcionar 10-((3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5(hidroximetil)benzil)amino)-10-oxodecanoato de metila 30 como um óleo amarelo (57 mg, 53%). Rf 0,45 (10% de MeOH-CH2CI2).
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DE 10-((3-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5-(HIDROXIMETIL)BENZIL)AMINO)Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 119/292
113/217
10-OXODECANOATO DE LÍTIO 31
Figure BR112019021359A2_D0225
[0591 ] O Composto 30 (188 mg, 0,28 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano (5 ml) e tratada com a solução de LiOH (7 mg, 0,30 mmol) em água (1 ml). Mediante completação, o tetra-hidrofurano foi removido em vácuo e a mistura aquosa restante foi congelada e liofilizada para proporcionar 10-((3((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5-(hidroximetil)benzil)amino)-10oxodecanoato de lítio 31 como um sólido incolor (180 mg, 99%). Rf 0,45 (10% de MeOH-CH2CI2).
ETAPA 11. PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS 32, 33, E 34 [0592] Os Compostos 32, 33 e 34 foram preparados de acordo com o mesmo procedimento usado para sintetizar compostos 19, 20, e 1, respectivamente.
EXEMPLO 3. SÍNTESE DE CONJUGADO 36
Figure BR112019021359A2_D0226
>:· I-1
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 36 [0593] O Conjugado 36 foi preparado com o uso de procedimentos idênticos conforme usado para sintetizar o composto 34 e todos os intermediários correspondentes. A única exceção é a síntese de composto 6 em que o anidrido propanoico foi usado em vez de anidrido acético.
EXEMPLO 4. SÍNTESE DE CONJUGADO 42
ESQUEMA 9.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 120/292
114/217
Figure BR112019021359A2_D0227
Figure BR112019021359A2_D0228
ESQUEMA 10.
Figure BR112019021359A2_D0229
R2 = H
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 37
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 121/292
115/217
HO
Figure BR112019021359A2_D0230
Ν NHBoc
Η [0594] Uma solução de ácido 18p-glicirretínico (2,5 g, 5,3 mmol), (3-aminopropil)carbamato de terc-butila (1,1 g, 6,4 mmol) e HBTU (3,0 g, 8,0 mmol) em A/,A/-dimetilformamida (20 ml) foi adicionada di-isopropiletilamina (2,75 ml, 15,9 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante completação, a solução foi concentrada em vácuo até a secura. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna em gel de silica 60 (gradiente: 2% a 5% de MeOH/CH2Cl2) para proporcionar o produto como um sólido incolor (2,1 g, 63%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 38
N NHBoc [0595] A uma solução de 37 (2,1 g, 3,3 mmol) e trietilamina (3,5 ml, mmol) em diclorometano (25 ml) foi adicionado anidrido acético (850 pl, 5,3 mmol) e DMAP (5 mg). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante completação, a solução foi concentrada até a secura e dissolvida em acetato de etila (100 ml), lavada com água (100 ml), secada em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura para proporcionar uma espuma marrom pálida (1,9 g, 85%).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 39 nh2 HCI [0596] A uma solução de 38 (1,5 g, 2,3 mmol) em dioxano anidro (25 ml) foi adicionado cloreto de hidrogênio 2 M em dioxano (25 ml). A solução
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116/217 foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente, então, concentrada em vácuo até a secura para proporcionar um sólido marrom claro (1,3 g, 96%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS 40, 41 E 42 [0597] Os Compostos 40, 41 e 42 foram preparados de acordo com o mesmo procedimento usado para sintetizar compostos 19, 20, e 1, respectivamente.
EXEMPLO 5. SÍNTESE DE CONJUGADO 43
ESQUEMA 11.
Figure BR112019021359A2_D0231
UOH
Figure BR112019021359A2_D0232
ESQUEMA 12.
Figure BR112019021359A2_D0233
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 11-(2,6-BIS(HIDROXIMETIL)-4Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 123/292
117/217
METILFENOXI)UNDECANOATO DE METILA 44
Figure BR112019021359A2_D0234
OH [0598] A uma solução de 2,6-bis(hidroximetil)-p-cresol (2,7 g, 16,3 mmol), 11-bromoundecanoato de metila (5,0 g, 17,9 mmol) e carbonato de potássio (4,5 g, 32,6 mmol) em acetona (100 ml) foram submetidos ao refluxo por 16 horas. Mediante completação, a solução foi concentrada em vácuo até a secura, suspensa em acetato de etila (150 ml) e lavada com água (2 x 100 ml) e salmoura (100 ml). A camada de acetato de etila foi secada em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo até a secura. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de silica 60 (gradiente 100% de Hex 50% de EtOAc/Hex) para proporcionar 11-(2,6-bis(hidroximetil)-4metilfenoxi)undecanoato de metila 44 como um óleo incolor (1,6 g, 27%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 11-(2-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-6-(HIDROXIMETIL)-4METILFENOXI)UNDECANOATO DE METILA 45
Figure BR112019021359A2_D0235
OH [0599] A uma solução de 11-(2,6-bis(hidroximetil)-4metilfenoxi)undecanoato de metila 44 (1,5 g, 4,1 mmol) em pihdina anidra (20 ml) foi adicionado cloreto de 4,4’-dimetoxitritila (1,4 g, 4,1 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante completação, a solução foi concentrada em vácuo até a secura e purificada por cromatografia de coluna em gel de silica 60 (0,5 a 1% de MeOH em CH2CI2) para proporcionar
11-(2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-6-(hidroximetil)-4metilfenoxi)undecanoato de metila 45 como um sólido amarelo pálido (1,1 g, 40%).
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 124/292
118/217
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 11-(2-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-6-(HIDROXIMETIL)-4METILFENOXI)UNDECANOATO DE LÍTIO 46
Figure BR112019021359A2_D0236
OH [0600] A uma solução de 11-(2-((bis(4metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-6-(hidroximetil)-4-metilfenoxi)undecanoato de metila 45 (1,1 g, 1,7 mmol) em tetra-hidrofurano anidro (40 ml) e água (10 ml) foi adicionado hidróxido de lítio (44 mg, 1,8 mmol). A solução foi concentrada em vácuo para remover todo o tetra-hidrofurano. A solução aquosa restante foi escoada congelada em nitrogênio líquido, então, liofilizada de um dia para o outro para proporcionar 11-(2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-6(hidroximetil)-4-metilfenoxi)undecanoato de lítio 46 como um sólido rosa pálido (1,1 g, 94%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 47 [0601] Uma solução de 10 (1,33 g, 0,66 mmol), 46 (0,5 g, 0,73 mmol), HBTU (400 mg, 1 mmol) em A/,A/-dimetilformamida (25 ml) foi adicionada di-isopropiletilamina (0,35 ml, 2 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro (18 horas) à temperatura ambiente. Mediante completação, o solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de silica (gradiente: 100% de CH2CI2 - 5% - 10% - 15% de MeOH em CH2CI2) para proporcionar 47 como um sólido incolor (710 mg, 41%).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 48 [0602] A uma solução de 47 (0,71 g, 0,3 mmol), thetilamina (0,4 ml,
3,0 mmol) e poliestireno-DMAP (3 mmol/g de carregamento, 200 mg, 0,6 mmol) em diclorometano (15 ml) foi adicionado anidrido succínico (60 mg, 0,6 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e, mediante
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 125/292
119/217 completação, filtrada e concentrada em vácuo até a secura. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em gel de silica 60 (gradiente de 5% a 20% de MeOH em CH2CI2) para proporcionar o 48 como um sólido amarelo pálido (570 mg, 70%). RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,91 (m, 1H), 7,867,76 (m, 6H), 7,45-7,40 (m, 2H), 7,36-7,14 (m, 10H), 7,10 (s, 1H), 6,91 (d, J = 8,9 Hz, 4H), 5,21 (d, J = 3,3 Hz, 3H), 5,01 (s, 2H), 4,97 (dd, J = 11,2, 3,4 Hz, 3H), 4,56 (d, J = 8,5 Hz, 3H), 4,06-3,98 (m, 11H), 3,93-3,84 (m, 3H), 3,81-3,72 (m, 3H), 3,74 (s, 6H), 3,65-3,46 (m, 38H), 3,40-3,35 (m, 6H), 3,20-3,16 (m, 6H), 2,56-
2,44 (m, 4H), 2,33 (s, 3H), 2,15-2,08 (m, 2H), 2,10 (s, 9H), 2,04-1,96 (m, 6H), 1,89 (s, 9H), 1,82-1,76 (m, 4H), 1,77 (s, 9H), 1,54-1,34 (m, 4H), 1,28-1,10 (m, 12H),
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 49 [0603] A uma solução de 48 (100 mg, 40 pmol), Nhidroxisuccinimida (30 mg/ml de soln em acetonitrila, 50 μΙ, 13 pmol), Λ/,Λ/’-diisopropilcarbodi-imida (40 μΙ, 264 pmol) e piridina (50 μΙ) em diclorometano (2 ml) e acetonitrila (3 ml) foram adicionados 1000 A de CPG de LCAA (prime síntese, 920 mg). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente num agitador orbital. A análise de TLC da solução de reação mostrou apenas consumo parcial do éster /V-Hidroxissuccínico ativado, então, CPG adicional (500 mg) foi adicionado. A solução foi agitada novamente de um dia para o outro. Mediante completação, o CPG foi filtrado e lavado com diclorometano (25 ml), acetonitrila (25 ml) e tetra-hidrofurano (25 ml). Os resíduos de amina não reagidos no CPG foram acetilados (capeados) adicionando-se uma solução de 1:1 de anidrido acético em acetonitrila (3 ml) e 10% de N-metilimidazol/10% de piridina em tetra-hidrofurano (3 ml). A suspensão foi deixada por 2 horas, então, filtrada e enxaguada com partes iguais de tetra-hidrofurano (25 ml), acetonitrila (25 ml) e diclorometano (25 ml). O CPG carregado 49 foi secado sob alto vácuo de um dia para o outro. A eficiência de
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120/217 carregamento de ligante foi determinada como 22 pmol/g com o uso de um ensaio de carregamento de DMT padrão (3% de ácido tricloroacético em CH2CI2, UV-VIS, A504).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 43 [0604] O suporte sólido de CPG carregado por GaINAc resultante 49 foi empregado em síntese de oligonucleotídeo automatizada com o uso de procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeo seguida por remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concomitante) proporcionou um conjugado de GaINAc-oligonucleotídeo 43.
EXEMPLO 6. SÍNTESE DE CONJUGADO 50
ESQUEMA 13.
Figure BR112019021359A2_D0237
0
Figure BR112019021359A2_D0238
Figure BR112019021359A2_D0239
ESQUEMA 14.
Figure BR112019021359A2_D0240
HBTU, DIPEA DMF
V
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121/217
Figure BR112019021359A2_D0241
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 2-((2-((TERCBUTILDIMETILSILIL)OXI)ETIL)AMINO)ETAN-1-OL 51
HOx/-xn/-xsX,OTBDMS
H [0605] Uma solução de etanolamina (77 ml, 1,25 mol) e (2bromoetoxi)-terc-butil dimetilsilano (15 g, 62,7 mmol) em acetonitrila anidra (200 ml) foi submetida ao refluxo por 3 horas. Mediante completação, a reação foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com água (400 ml) e extraída com acetato de etila (3 x 150 ml). Os extratos de acetato de etila combinados foram secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados à vácuo até a secura. O resíduo foi purificado por filtração através de um coxim de silica primeiro com 50% de acetato de etila/hexanos, então, 50% de MeOH/EtOAc para proporcionar 51 como um óleo amarelo pálido (14 g, 100%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 2-(BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)-N-(2((TERC-BUTILDIMETILSILIL)OXI)ETIL)ETAN-1 -AMINA 52
DMTrO^^N^^OTBDMS
H [0606] A uma solução de 2-((2-((tercbutildimetilsilil)oxi)etil)amino)etan-1-ol 51 (14 g, 64 mmol) e thetilamina (17,5 ml,
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 128/292
122/217
128 mmol) em diclorometano anidro (250 ml) foi adicionado cloreto de 4,4’dimetoxitritila (24 g, 70 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente, então, concentrada em vácuo até a secura. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila (300 ml) e lavado com água (250 ml) e salmoura (250 ml). O acetato de etila foi seco em sulfato de magnésio, filtrado e concentrado em vácuo até a secura. A purificação por cromatografia de coluna em gel de silica 60 (1% a 5% de MeOH em CH2CI2) proporcionou 52 como um óleo viscoso amarelo pálido (13 g, 39%).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 10-((2-(BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)ETIL)(2-((TERCBUTILDIMETILSILIL)OXI)ETIL)AMINO)-10-OXODECANOATO DE METILA 53
Figure BR112019021359A2_D0242
OTBDMS [0607] Uma solução de 2-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)-N-(2((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)etan-1 -amina 52 (5,4 g, 10,3 mmol), sebacato de monometila (2,2 g, 10,3 g), HBTU (4,9 g, 12,9 mmol), DIPEA (5,3 ml, 30,9 mmol) em A/,A/-dimetilformamida (100 ml) foi agitada por 3 horas à temperatura ambiente. Mediante completação, a solução foi vertida em água (400 ml) e extraída com acetato de etila (1 x 500 ml). O extrato de acetato de etila foi lavado com salmoura (2 x 250 ml), secado em sulfato de magnésio, filtrado e concentrado em vácuo até a secura. A purificação por cromatografia de coluna em gel de silica 60 (10% a 25% de acetato de etila em hexanos) proporcionou 53 como um óleo amarelo viscoso (6,5 g, 87%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 10-((2-(BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)ETIL)(2-HIDROXIETIL)AMINO)-10OXODECANOATO DE METILA 54
Figure BR112019021359A2_D0243
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 129/292
123/217 [0608] A uma solução de 10-((2-(bis(4metoxifenil)(fenil)metoxi)etil)(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)amino)-10oxodecanoato de metila 53 (2,0 g, 2,8 mmol) e trietilamina (1 ml) em tetrahidrofurano anidro (20 ml) foi adicionado TBAF (1 M em THF, 3,4 ml, 3,3 mmol). A solução foi agitada por 6 h, mas apenas conversão parcial foi observada por TLC (5% de MeOH em CH2CI2). Mais 1,7 ml de TBAF foi adicionado e a solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante completação, a solução foi concentrada em vácuo e purificada por cromatografia de coluna em gel de silica 60 (10% a 50% de EtOAc em hexanos, então, 100% de EtOAc) para proporcionar 54 como um óleo incolor viscoso (0,5 g, 29%).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 10-((2-(BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)ETIL)(2-HIDROXIETIL)AMINO)-10OXODECANOATO DE LÍTIO 55
Figure BR112019021359A2_D0244
[0609] A uma solução de 10-((2-(bis(4metoxifenil)(fenil)metoxi)etil)(2-hidroxietil)amino)-10-oxodecanoato de metila 54 (0,5 g, 0,83 mmol) em THF (40 ml) foram adicionados água (10 ml) e hidróxido de lítio (24 mg, 1,0 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente, então, concentrada em vácuo para remover o THF. A solução aquosa restante foi escoada congelada em nitrogênio líquido e liofilizada para proporcionar 55 como um sólido incolor (485 mg, 95%).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS 56, 57, 58 E 50 [0610] Os compostos 56, 57, 58 e 50 foram preparados com o uso dos procedimentos idênticos àqueles usados para sintetizar os compostos 47, 48, 49 e 43 respectivamente.
EXEMPLO 7. SÍNTESE DE CONJUGADO 59
ESQUEMA 15.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 130/292
124/217
Figure BR112019021359A2_D0245
Figure BR112019021359A2_D0246
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE (2R,5R)-5-HIDROXIPIPERIDINA-2CARBOXILATO DE METILA 61
Figure BR112019021359A2_D0247
[0611] Ácido (2R,5R)-5-hidroxipiperidina-2-carboxílico 60 (3,5 g,
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125/217
24,1 mmol) foi agitada em MeOH (50 ml). HCI (g) foi borbulhado através da solução por 2 min e a reação agitada em refluxo por 1,5 h. A reação foi concentrada em vácuo para gerar (2R,5R)-5-hidroxipiperidina-2-carboxilato de metila 61 em rendimento quantitativo que foi usado sem purificação adicional.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 1-(TERC-BUTIL) 2-METIL (2R,5R)-5HIDROXIPIPERIDINA-1,2-DICARBOXILATO 62
HO,,^ .o.
0Λ0 [0612] (2R,5R)-5-hidroxipiperidina-2-carboxilato de metila 61 (24,1 mmol) e TEA (7,2 ml, 53,02 mmol) foram agitados em DCM (100 ml) à RT. Diterc-butil-di-carbonato (5,7 g, 26,5 mmol) foi adicionado em porções e a reação foi agitada por 2 h. A reação foi diluída com DCM (100 ml) e lavada sequencialmente com HCI 1 M (2 x 75 ml), NaHCOs saturado (2 x 75 ml), H2O (2 x 75 ml) e solução de NaCI saturada (2 x 75 ml). Os orgânicos foram separados, secados (Na2SO4) e concentrados a vácuo para gerar 1 -(terc-butil) 2-metil (2R,5R)-5-hidroxipiperidina-1,2-dicarboxilato 62 (5,53 g, 88%) que foi usado sem purificação adicional.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (2R,5R)-5-HIDROXI-2(HIDROXIMETIL)PIPERIDINA-I-CARBOXILATO DE TERC-BUTILA 63 n>-oh
O O [0613] Ácido (2R,5R)-1 -(terc-Butoxicarbonil)-5-hidroxipiperidina-2carboxílico 62 (5,53 g, 21,4 mmol) foi agitada em THF a 0°C. L1BH4 (3,0 M solução em THF)(8,9 ml, 27,7 mmol) foi adicionado por gotejamento por 1 h. A reação foi deixada para aquecer à RT e a agitação continuou por 16 h. A reação foi arrefecida bruscamente com NaOH 1 Μ, o THF removido em vácuo e a água exaustivamente extraída com EtOAc (10 x 100 ml). Os produtos orgânicos
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 132/292
126/217 combinados foram lavados com H2O (50 ml), solução de NaCI saturada (2 x 50 ml), secados (Na2SO4) e concentrados em vácuo para gerar (2R,5R)-5-hidroxi
2-(hidroximetil)piperidina-1-carboxilato de terc-butila 63 (2,4 g, 49,0 %) que foi usado sem purificação adicional.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE (3R,6R)-6-(HIDROXIMETIL)PIPERIDIN-3-OL 64
ΗΟ,,/χ.
n>--oh
H [0614] (2R,5R)-5-hidroxi-2-(hidroximetil)piperidina-1-carboxilato de terc-butila 63 (2,4 g, 10,4 mmol) foi agitada em Et2Ü a RT. HCI (g) foi borbulhado por 45 s e a reação agitada à RT por 45 min. A reação foi concentrada a vácuo e secada sob alto vácuo para proporcionar (3R,6R)-6-(hidroximetil)piperidin-3-ol
64. O produto foi usado sem purificação adicional.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 2,2,2-TRIFLUORO-1-((2R,5R)-5-HIDROXI-2(HIDROXIMETIL)PIPERIDIN-1-IL)ETAN-1-ONA 65 [0615] (3R,6R)-6-(hidroximetil)piperidin-3-ol bruto 64 da reação anterior foi agitado em MeCN (50 ml) com TEA (3,5 ml, 25,2 mmol) à RT.
Trifluoroacetato de etila (3 ml, 25,2 mmol) foi adicionada e a reação agitada à RT por 16 h, então, concentrada em vácuo para gerar 2,2,2-trifluoro-1-((2R,5R)-5 hidroxi-2-(hidroximetil)piperidin-1-il)etan-1-ona 65. O produto foi usado sem purificação adicional.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 1-((2R,5R)-2-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5-HIDROXIPIPERIDIN-1-IL)-2,2,2TRIFLUOROETAN-1-ONA 66
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 133/292
127/217 [0616]2,2,2-thfluoro-1-((2R,5R)-5-hidroxi-2-(hidroximetil)pipehdin1-il)etan-1-ona bruta 65 da reação anterior foi agitada em DCM com TEA (50 ml) à RT. Cloreto de 4,4’-dimetoxitritila (DMTrCI) (3,87 g, 11,44 mmol) foi adicionado numa porção e a reação agitada à RT por 3 horas. A reação foi diluída com DCM (50 ml) e lavada sequencialmente com NaHCOs saturado (2 x 75 ml), H2O (2 x ml) e solução de NaCI saturada (2 x 75 ml). Os produtos orgânicos foram separados, secados (Na2SO4), concentrados em vácuo e purificados por cromatografia de coluna (100% de hexanos - 60% de EtOAc/Hexanos) (0,1 % de TEA) para gerar 1-((2R,5R)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5 hidroxipiperidin-1-il)-2,2,2-thfluoroetan-1-ona 66 (3,14 g, 57%)
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE (3R,6R)-6-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)- PIPERIDIN-3-OL 67 [0617] 1 -((2R,5R)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5hidroxipiperidin-1-il)-2,2,2-thfluoroetan-1-ona 66 (3,14 g, 6,0 mmol) foi agitada em MeOH (50 ml) à RT. KOH (672 mg, 12 mmol) foi adicionada e a reação agitada à RT por 16 horas. KOH adicional (300 mg, 6 mmol) foi adicionado e a agitação continuou por mais 24 h. A reação foi concentrada em vácuo, tomada em DCM (150 ml), lavada com H2O (4 x 50 ml), secada (Na2SO4) e concentrada em vácuo para gerar (3R,6R)-6-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)piperidin-
3-ol 67 (2,34 g, 90%) que foi usado sem purificação adicional.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE 12-((2R,5R)-2-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5-HIDROXIPIPERIDIN-1-IL)-12-OXODODECANOATO DE
METILA 68
HO,, .0.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 134/292
128/217 [0618] (3R,6R)-6-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)piperidin-3ol 67 (2,34 g, 5,34 mmol) foi agitada em DCM (75 ml) à RT. Trietilamina (2,2 ml,
16,2 mmol), HATII (3,5 g, 9,2 mmol) e ácido 12-metoxi-12-oxododecanoico (1,32 g, 5,4 mmol) foram adicionados e a reação agitada à RT por 3 h. O precipitado de sólido resultante foi removido por filtração, o filtrado concentrado em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia de coluna (2,5% de MeOH/DCM, 0,1% de TEA) para gerar 12-((2R,5R)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5hidroxipiperidin-1-il)-12-oxododecanoato de metila 68 em rendimento quantitativo.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE 12-((2R,5R)-2-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)-METIL)-5-HIDROXIPIPERIDIN-1-IL)-12OXODODECANOATO DE LÍTIO 69
ODMTr
LiO.
'0 [0619] 12-((2R,5R)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5hidroxipiperidin-1-il)-12-oxododecanoato de metila 68 (5,4 mmol) e LiOH (140 mg, 5,94 mmol) foram agitados em THF:H2O (1:1, 100 ml) à RT por 48 h. O THF foi removido em vácuo, o aquoso congelado e liofilizado para gerar 12-((2R,5R)
2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5-hidroxipiperidin-1-il)-12oxododecanoato de lítio 69 (3,2 g, 91 %). O que foi usado nas reações subsequentes sem purificação adicional.
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS 70, 71, 72, E 59 [0620] Os compostos 70, 71, 72 e 59 foram preparados com o uso dos procedimentos idênticos àqueles usados para sintetizar os compostos 47,
48, 49 e 43 respectivamente.
EXEMPLO 8. SÍNTESE DE CONJUGADO 142
ESQUEMA 17.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 135/292
129/217
Figure BR112019021359A2_D0248
Figure BR112019021359A2_D0249
Figure BR112019021359A2_D0250
Figure BR112019021359A2_D0251
Figure BR112019021359A2_D0252
ESQUEMA 18.
Figure BR112019021359A2_D0253
Figure BR112019021359A2_D0254
Tj €PG de lese 133Q Â ttt --------------·►
2? Síntese se sligsnsclestíaec·
3) Ssscíoteçâc·
Figure BR112019021359A2_D0255
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 3,4,5-TRIACETOXIBENZOICO 73
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 136/292
130/217 [0621] A uma solução de ácido gálico (20 g) em piridina (50 ml) e anidrido acético (50 ml). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente, então, vertida em água gelada (1 I). A solução foi tornada ácida com ácido clorídrico concentrado em que um sólido incolor é precipitado. O sólido foi coletado por meio de filtração e lavado com água (5 x 100 ml). O sólido úmido foi congelado em nitrogênio líquido e secado por congelamento para proporcionar ácido 3,4,5triacetoxibenzoico (26 g, 75%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE TRIACETATO DE 5-((2-((2-OXO-2-FENIL-1A2ETIL)AMINO)ETIL)CARBAMOIL)BENZENO-1,2,3-TRI-ILA 74 [0622] A uma solução de ácido 3,4,5-triacetoxibenzoico (10 g, 33,8 mmol), cloridrato de N-carbobenzoxi-1,2-diaminoetano (5,3 g, 33,8 mmol) e HBTU (13,5 g, 35,5 mmol) em DMF (200 ml) foi adicionado DIPEA (17,5 ml, 101 mmol). A solução foi agitada por 16 horas, então, diluída com acetato de etila (250 ml), lavada com salmoura (3 x 200 ml), secada em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada à vácuo até a secura. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna em gel de silica (Gradiente 1% a 5% de MeOH em DCM) para proporcionar thacetato de 5-((2-((2-oxo-2-fenil-1À2-etil)amino)etil)carbamoil)benzeno-1,2,3-th-ila como um sólido esbranquiçado (5,5 g).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 3,4,5-TRI-HIDROXI-N-(2-((2-OXO-2-FENIL-1AA2ETIL)AMINO)ETIL)BENZAMIDA 75 [0623] Uma solução de thacetato de 5-((2-((2-oxo-2-fenil-1À2etil)amino)etil)carbamoil)benzeno-1,2,3-th-ila(5g, 1,1 mmol) em 1:1 MeOH/CH2CI2 (100 ml) foi agitada por 3 dias à temperatura ambiente. Mediante completação, o solvente foi removido para proporcionar 3,4,5-tri-hidroxi-N-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2etil)amino)etil)benzamida como um sólido incolor (4 g, quantitativo).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 2,2’,2”-((5-((2-((2-OXO-2-FENIL-1AA2ETIL)AMINO)ETIL)CARBAMOIL)BENZENO-1,2,3-TRIIL)TRIS(OXI))TRIACETATO DE TRIMETILA 76
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 137/292
131/217 [0624] Uma solução de 3,4,5-tri-hidroxi-N-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2etil)amino)etil)benzamida (4 g, 11,6 mmol), bromoacetato de metila (7,7 g, 46,4 mmol) e carbonato de potássio (9,6 g, 69,4 mmol) em DMF (100 ml) foi agitada de um dia para o outro a 60°C. Mediante completação, a solução foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com acetato de etila (200 ml), lavado com água (200 ml), salmoura (3 x 100 ml), secado em sulfato de magnésio, filtrado e concentrado em vácuo até a secura. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna em gel de silica (Gradiente de 2% a 10% de MeOH em DCM) para proporcionar 2,2’,2”-((5-((2-((2-oxo-2-fenil-1À2-etil)amino)etil)carbamoil)benzeno-1,2,3-triil)tris(oxi))-triacetato de trimetila como um sólido bege (5 g, 79%)
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 2,2’,2”-((5-((2-((2-OXO-2-FENIL-1AA2ETIL)AMINO)ETIL)-CARBAMOIL)BENZENO-1,2,3-TRIIL)TRIS(OXI))TRIACÉTICO 77 [0625] Uma solução de 2,2’,2”-((5-((2-((2-oxo-2-fenil-1À2etil)amino)etil)-carbamoil)benzeno-1,2,3-tri-il)tris(oxi))triacetato de trimetila (5 g, 9,2 mmol) e NaOH 1 M (30 ml) em metanol (100 ml) foi agitada por 2 horas à temperatura ambiente. Mediante completação, a reação foi concentrada para remover o metanol e diluída com água (75 ml). A mistura foi resfriada a 0°C, acidificada com HCI 2 M e extraída com acetato de etila (5 x 150 ml). Os extratos de acetato de etila combinados foram secados em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados em vácuo até a secura para proporcionar ácido 2,2’,2”-((5-((2-((2-oxo2-fenil-1À2-etil)amino)etil)carbamoil)benzeno-1,2,3-tri-il)tris(oxi))triacético como um sólido incolor (2,3 g, 50%).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 78 [0626] O Composto 78 foi preparado dos compostos 9 (2,75 g, 4,3 mmol) e 77 (0,5 g, 0,96 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 13. Rendimento: 600 mg.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 79
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 138/292
132/217 [0627] O Composto 79 foi preparado dos compostos 78 (0,6 g) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 14. Rendimento: 500 mg.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 140 [0628] O Composto 140 foi preparado do 79 (500 mg, 0,25 mmol) e do composto 18 (175 mg, 0,25 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 19. Rendimento: 250 mg, 44%.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 141 [0629] O Composto 141 foi preparado do composto 140 (250 mg, 0,11 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 20. Rendimento: 200 mg.
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 142 [0630] O Conjugado 142 foi preparado do composto 141 (200 mg) e 1000A CPG de Icaa (1,8 g) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1. Rendimento: 1,9 g, 22jumol/g de carregamento de CPG. O suporte sólido carregado por GaINAc resultante foi empregado em síntese de oligonucleotídeo automatizada com o uso de procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeo seguida por remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concomitante) proporcionou o conjugado de GalNAcoligonucleotídeo 142.
EXEMPLO 9. SÍNTESE DE CONJUGADO 145 ESQUEMA 19.
Figure BR112019021359A2_D0256
Figure BR112019021359A2_D0257
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 139/292
133/217
Figure BR112019021359A2_D0258
ESQUEMA 20.
Figure BR112019021359A2_D0259
Figure BR112019021359A2_D0260
líti» ‘3·ΐ D-espíoteçâs;
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-BENZIL-3A,6A-DIMETILTETRA-HIDRO-1HFURO[3,4-C]PIRROL-1,3(3AH)-DIONA RACÊMICA (CIS) 123 [0631] A uma solução resfriada (0°C) de 3,4-dimetilfuran-2,5-diona (3 g, 24 mmol) e N-benzil-1-metoxi-N-((tnmetilsilil)metil)metanamina (7 g, 29,8 mmol) em diclorometano (75 ml) foi lentamente adicionado ácido trifluoroacético (75 μΙ). A agitação de um dia para o outro permitiu que a solução se aquecesse lentamente até temperatura ambiente como o banho de gelo derretido. A mistura de reação foi concentrada até a secura, dissolvida em acetato de etila (100 ml), lavada com bicarbonate de sódio saturado (2 x 100 ml), secada em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura. A purificação por cromatografia de coluna em gel de silica (gradiente: 20% de acetato de etila em hexanos a 100% de acetato de etila) proporcionou 5-benzil-3a,6a-dimetiltetra-hidro-1 Hfuro[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona racêmica (cis) como um óleo amarelo (3,5 g, 56%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 1-BENZIL-3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-DIIL)DIMETANOL RACÊMICO (CIS) 124 [0632] A uma solução resfriada (0°C) de (3aR,6aS)-5-benzil-3a,6adimetiltetra-hidro-1 H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona (3,5 g, 13,4 mmol) em éter dietílico anidro (50 ml) foi adicionado lentamente hidreto de lítio e péletes de alumínio (1,5 g, 40 mmol) por três porções. A solução foi agitada de um dia para o outro aquecendo até temperatura ambiente como o banho de água com gelo
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 140/292
134/217 derretido. Mediante completação, a reação foi resfriada a 0°C e arrefecida muito lentamente com 1,5 ml de NaOH 5 M seguido por 1,5 ml de água. Agitou-se por 30 minutos, então, adicionou-se sulfato de magnésio e filtro. O filtrado foi concentrado para proporcionar 1 -benzil-3,4-dimetilpirrolidina-3,4-di-il)dimetanol racêmico (cis) como um óleo incolor (2,7 g).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-DIIL)DIMETANOL RACÊMICO (CIS) 125 [0633] A uma solução de ((3R,4S)-1-benzil-3,4-dimetilpirrolidina-
3,4-di-il)dimetanol (10 g, 40 mmol) em metanol (10 ml) foi adicionado 10% de paládio em carvão ativado úmido (1 g). A solução foi agitada vigorosamente sob uma atmosfera de hidrogênio por 16 horas. Mediante completação, a solução foi filtrada através de Celite, e concentrada até a secura para proporcionar 3,4dimetilpirrolidina-3,4-di-il)dimetanol racêmico (cis) como um sólido incolor (5,5 g, 86%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 10-(3,4-BIS(HIDROXIMETIL)-3,4DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA (RACÊMICO) 126 [0634] O Composto 126 foi preparado do composto 125 (1,3 g, 8,2 mmol) e sebacato de monometila (1,8 g, 8,2 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 17. Rendimento: 1,8 g, 61%.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL-)(FENIL)METOXI)M ETI L)-4-(HI DROXIΜ ETI L)-3,4-DI Μ ETILPIRROLI Dl N-1 -I L)-10OXODECANOATO DE METILA (RACÊMICO) 127 [0635] O Composto 127 foi preparado do composto 126 (1,8 g, 5,0 mmol) e cloreto de 4,4’-dimetoxithtila (1,7 g, 5,0 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 18. Rendimento: 1,4 g, 42%.
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ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL)-(FENIL)METOXI)M ETI L)-4-( ΗI DROXIΜ ETI L)-3,4-DI Μ ETILPIRROLI Dl N-1 -I L)-10OXODECANOATO DE LÍTIO (RACÊMICO) 128 [0636] A uma solução de composto 127 (3,0 g, 4,6 mmol) em THF (50 ml) e água (50 ml) foi adicionado hidróxido de lítio (121 mg, 5,0 mmol). A solução foi agitada por 4 horas à temperatura ambiente, então, concentrada para remover o THF. A solução aquosa restante foi secada por congelamento de um dia para o outro para produzir um sólido rosa pálido (2,9 g, quantitativo).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 143 [0637] O Composto 143 foi preparado do 128 (270 mg, 0,42 mmol) e do composto 14 (800 mg, 0,42 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 19. Rendimento: 900 mg, 87%.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 144 [0638] O Composto 144 foi preparado do composto 143 (500 mg, 0,2 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 20. Rendimento: 200 mg.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 145 [0639] O Conjugado 145 foi preparado do composto 144 (200 mg) e 1000A de CPG de Icaa (1,8 g) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1. Rendimento: 1,9 g, 20jumol/g de carregamento de CPG. O suporte sólido de CPG carregado por GaINAc resultante foi empregado em síntese de oligonucleotídeo automatizada com o uso de procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeo seguida por remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concomitante) proporcionou o conjugado de GaINAc-oligonucleotídeo 145.
EXEMPLO 10. SÍNTESE DE CONJUGADO 150
ESQUEMA 21.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 142/292
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Figure BR112019021359A2_D0261
«4 1
Figure BR112019021359A2_D0262
MS-2 14S-3 -UíM
Figure BR112019021359A2_D0263
Figure BR112019021359A2_D0264
Figure BR112019021359A2_D0265
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 146-1 [0640] A uma solução de éster monometílico de ácido dodecanodioico (12,2 g, 50,0 mmol) em diclorometano (300 ml) foi adicionado Nhidroxissuccinimida (6,10 g, 53,0 mmol) e cloridrato de 1-etil-3-(3dimetilaminopropil)carbodi-imida (EDC) (10,52 g, 55,0 mmol). A mistura enevoada foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente e a reação se tomou uma solução clara. TLC indicou que a reação foi completada. Os orgânicos foram lavados com NhUCI saturado (300 ml) e salmoura (100 ml). A camada orgânica foi separada, secada com MgSO4 e concentrada até a secura para dodecanodioato de 1 -(2,5-dioxopirrolidin-1 -il) 12-metila puro 146-1 como um sólido branco (16,7 g, 97,8%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE CICLOPENT-3-EN-1-ILMETANOL 146-2 [0641] A uma suspensão de hidreto de lítio e alumínio (15,2 g, 0,40
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137/217 mol) em éter anidro (1 I) a 0°C sob nitrogênio, foi adicionada a solução de ciclopent-3-enecarboxilato de metila (50 g, 0,40 mol) em éter (300 ml) por gotejamento por 5 h. A suspensão foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. TLC indicou a completação da reação. A reação foi resfriada novamente a 0°C. A solução saturada de Na2SO4 (32 ml) foi adicionada por gotejamento para arrefecer bruscamente a reação. Após a adição ser completada, a mistura foi agitada por mais 3 h e foi filtrada através de um coxim de Celite. A evaporação de solvente proporcionou ciclopent-3-enilmetanol 146-2 (37,3 g, 95 %) como um líquido incolor.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (6-OXABICICLO[3,1,0]HEXAN-3-IL)METANOL 146-3 [0642] A uma solução de ciclopent-3-enilmetanol 146-2 (4,0 g, 41 mmol) em diclorometano (150 ml) a 0°C foi adicionado ácido 3-cloroperbenzoico (10 g, 45 mmol, 77% de pureza) por porção. A reação foi agitada de um dia para o outro. Diclorometano (150 ml) foi adicionado. Os produtos orgânicos foram lavados com tiossulfato de sódio (12 g em 10 ml de água), após NaHCOs saturado (40 ml). Isto foi repetido até que todo o ácido 3-cloroperbenzoico restante fosse lavado. O produto orgânico foi secado com MgSO4. A evaporação de solvente gerou uma mistura de c/s- e trans- 6-oxabiciclo[3,1,0]hexan-3ilmetanol 146-3 (2,6 g, 57 %) como um óleo amarelo. GC-MS: m/z 114 (5) (M+), 95 (15), 88 (100), 81 (15).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 2-AMINO-4-(HIDROXIMETIL)CICLOPENTAN-1OL 146-4 [0643] A uma solução de 6-oxabiciclo[3,1,0]hexan-3-ilmetanol 1463 (2,0 g, 17,6 mmol) em metanol (20 ml) a 0°C foi purgado gás de amônia por 10 min. A reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. TLC indicou a não completação da reação. Metanol foi removido e NH3 H2O (50 ml) foi adicionado e isto foi agitada à temperatura ambiente por uma semana. TLC
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138/217 confirmou a completação da reação. A água foi removida de modo azeotrópico com etanol para proporcionar 2-amino-4-(hidroximetil)ciclopentanol 146-4 (2,1 g, 91%) como um óleo amarelo.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 12-(2-HIDROXI-4(HIDROXIMETIL)CICLOPENTILAMINO)-12-OXODODECANOATO DE METILA 146-5 [0644] O Composto 146-5 foi preparado de 2-amino-4(hidroximetil)ciclopentanol 146-4 e dodecanodioato de 1 -(2,5-dioxopirrolidin-1 -il)
12-metila 146-1, com o uso do mesmo procedimento conforme descrito na síntese de 12-(2-(terc-butoxicarbonilamino)etilamino)-12-oxododecanoato (3-2). 12-(2-hidroxi-4-(hidroximetil)ciclopentilamino)-12-oxododecanoato de metila 146-5 foi obtido em 87,4% de rendimento como um sólido esbranquiçado.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 147 [0645] O Composto 147 foi preparado quantitativamente do composto 146 (1,4 g, 2,33 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 18.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 148 [0646] O Composto 148 foi preparado do 147 (150 mg, 0,23 mmol) e do composto 14 (431 mg, 0,23 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 19. Rendimento: 460 mg, 84%.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 149 [0647] O Composto 149 foi preparado do composto 148 (460 mg, 0,19 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 20. Rendimento: 436 mg, 91%.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 150 [0648] O Composto 150 foi preparado do composto 149 (436 mg) e 1000 A CPG de Icaa (2,62 g) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1. Rendimento: 2,7 g, 21,3jumol/g de carregamento de
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CPG. 0 suporte sólido de CPG carregado por GaINAc resultante foi empregado em síntese de oligonucleotídeo automatizada com o uso de procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeo seguida por remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concomitante) proporcionou o conjugado de GaINAc-oligonucleotídeo 150.
EXEMPLO 11. SÍNTESE DE CONJUGADOS 153,158,163,168 E 173
Figure BR112019021359A2_D0266
OH
Figure BR112019021359A2_D0267
136
OH
Figure BR112019021359A2_D0268
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE (2S,4R)-4-HIDROXIPIRROLIDINA-1,2DICARBOXILATO DE l-(TERC-BUTIL) 2-METILA (133) [0649] (2S,4R)-4-hidroxipirrolidina-2-carboxilato de metila (25,9 g, mmol), anidrido de BOC (65,9 g, 302,5 mmol) e TEA (42 ml, 302,5 mmol) foram agitados em DCM à RT por 16 h. Os produtos orgânicos foram lavados sequencialmente com HCI 1 M (x2), NaHCOs saturado (x2), H2O e salmoura, secados e concentrados em vácuo para gerar (2S,4R)-4-hidroxipirrolidina-1,2
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140/217 dicarboxilato de 1 -(terc-butil) 2-metila (133) (58,1 g, 85%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE (4R)-4-HIDROXI-2-METILPIRROLIDINA-1,2DICARBOXILATO DE 1-(TERC-BUTIL) 2-METILA (134) [0650] (2S,4R)-4-hidroxipirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-(terc-butil) 2-metila (133) (5 g, 20,4 mmol) e Mel (12 g, 84,5 mmol) foram agitados em THF anidro a -40°C. LDA (2,0 M solução em THF) (37,5 ml, 75 mmol) foi adicionado por gotejamento. A reação foi deixada para aquecer à RT e agitada por 4 h, então, bruscamente arrefecida com NH4CI saturado. A reação foi extraída com EtOAc, lavada com H2O e salmoura, secada (Na2SO4) e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna 50:50 EtOAc/Zhexanos para gerar (4R)-4-hidroxi-2-metilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-(terc-butil) 2-metila (134) como uma mistura racêmica (3,6 g, 68%)
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (2S,4R)-4-HIDROXI-2-(HIDROXIMETIL)-2METILPIRROLIDINA-1-CARBOXILATO DE TERC-BUTILA (135A) [0651] (4R)-4-hidroxi-2-metilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-(tercbutil) 2-metila (134) (19 g, 73,5 mmol) foi agitado em THF anidro sob N2. A solução de L1BH4 (48 ml, 96 mmol) foi adicionada por gotejamento e a reação foi agitada à RT por 48 h. A reação foi bruscamente arrefecida com NaOH 1 Μ, o THF foi removido em vácuo e o residual extraído com EtOAc (4 x 100 ml). Os produtos orgânicos foram lavados com H2O e salmoura, secados (Na2SO4) e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (5% de MeOH/DCM) para gerar (2S,4R)-4-hidroxi-2-(hidroximetil)-2metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butila (135a) como o produto principal (8 g, 47%). A estrutura atribuída de acordo com referências de literatura.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE CLORIDRATO DE (3R,5S)-5-(HIDROXIMETIL)-5METILPIRROLIDIN-3-OL (136) [0652] (2S,4R)-4-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpirrolidina-1carboxilato de terc-butila (135a) (8 g, 34,6 mmol) foi agitada em EtOAc à RT e
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HCI gasoso foi aplicado por aproximadamente dois minutos. A reação foi agitada por uma hora, então, concentrada em vácuo e secada sob alto vácuo para gerar cloridrato de (3R,5S)-5-(hidroximetil)-5-metilpirrolidin-3-ol (136) de maneira quantitativa.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 12-((2S,4R)-4-HIDROXI-2-(HIDROXIMETIL)-2METILPIRROLIDIN-1-IL)-12-OXODODECANOATO DE METILA (137) [0653] Cloridrato de (3R,5S)-5-(hidroximetil)-5-metilpirrolidin-3-ol (136) (7,9 g, 47,4 mmol), ácido 12-metoxi-12-oxododecanoico (11,5 g, 47,4 mmol), HBTU (36 g, 76 mmol) e TEA 20 ml, 142,2 mmol) foram agitados em DCM à RT por 16 h. O precipitado foi removido por filtração e os produtos orgânicos lavados com HCI 1 M (x2), NaHCOs saturado (x2), H2O e salmoura. Após a secagem, os produtos orgânicos foram concentrados em vácuo e purificados por cromatografia de coluna (5% de MeOH/DCM) para gerar 12((2S, 4R)-4-h idroxi-2-(h idroxim eti l)-2-m eti Ipirrol id in-1 -il)-12-oxododecanoato de metila (137) (3,1 g, 18,3%).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 12-((2S,4R)-2-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)-METIL)-4-HIDROXI-2-METILPIRROLIDIN-1 IL)-12-OXODODECANOATO DE METILA (138) [0654] 12-((2S,4R)-4-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpirrolidin-1 -il)12-oxododecanoato de metila (137) (3,1 g, 9,0 mmol), DMTr-CI (2,8 g, 8,2 mmol) e TEA (1,1 ml, 8,2 mmol) foram agitadas em DC< à RT por 16 h. A reação foi concentrada em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia de coluna (5% de MeOH/DCM, 0,1% de TEA) para gerar 12-((2S,4R)-2-((bis(4metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-hidroxi-2-metilpirrolidin-1-il)-12oxododecanoato de metila (138) (2,7 g, 45,5 mmol).
ESQUEMA 23
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Figure BR112019021359A2_D0269
,v nr.Stír *«&·»
Figure BR112019021359A2_D0270
água ÍS.i-li
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 154-1 [0655] A uma solução de A/-(2-hidroxietil)ftalimida (4,80 g, 25,0 mmol) e cloreto de 4,4’-dimetoxitritila (8,8 g, 26,0 mmol) em diclorometano (200 ml) a 0°C sob nitrogênio, foi adicionada trietilamina (10,4 ml, 74,6 mmol) por gotejamento. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 h. TLC indicou a completação da reação. A camada orgânica foi lavada com salmoura (100 ml), secada com MgSO4, e concentrada até a secura. Isto foi usado diretamente para a próxima reação sem purificação.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 154-2 [0656]2-(2-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)etil)isoindolina-1,3diona (154-1) obtida acima e mono-hidrato de hidrazina (3,6 ml, 74 mmol) em etanol (100 ml) foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. TLC indicou a completação da reação. O precipitado foi removido por filtração. O filtrado foi evaporado. O resíduo foi absorvido por acetato de etila (100 ml). A solução orgânica foi lavada com 10% de NaOH, água e salmoura, e secada com MgSO4. A evaporação de solvente proporcionou 2-(bis(4metoxifenil)(fenil)metoxi)etanamina (154-2) como um líquido amarelo (8,11 g, 89,3% de rendimento por duas etapas). Isto foi usado para a próxima reação sem purificação adicional.
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ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 154-3 [0657] A uma solução de L-treonina (1,19 g, 10,0 mmol) e NaHCOs (2,3 g, 27 mmol) em água (20 ml) e dioxano (10 ml), foi adicionado dodecanodioato de 1-(2,5-dioxopirrolidin-1-il) 12-metila 146-1 (3,1 g, 9,1 mmol) em dioxano (10 ml) por gotejamento. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. HCI 4 N (10 ml) foi adicionado. O precipitado foi coletado porfiltração e lavado com água (3x10 ml). O sólido foi secado com P20snum dessecador para proporcionar ácido (2S,3R)-3-hidroxi-2(12-metoxi-12-oxododecanamido)butanoico 154-3 como um sólido esbranquiçado (2,84 g, 82,2%). LC-MS (ESI): m/z: 346 (100), (M + H+).
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 154 [0658] Ácido (2S,3R)-3-hidroxi-2-(12-metoxi-12oxododecanamido)butanoico 154-3 (2,47 g, 7,15 mmol), 2-(bis(4metoxifenil)(fenil)metoxi)etanamina 154-2 (2,60 g, 7,15 mmol), EDC (1,64 g, 8,58 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) (1,16 g, 8,58 mmol) e TEA (2,4 ml, 17,2 mmol) foram agitados em diclorometano (72 ml) à temperatura ambiente por 2 h. Água (30 ml) foi adicionada. A camada orgânica foi separada e lavada com salmoura (2 x 30 ml). A evaporação de solvente seguida por cromatografia de coluna (30% de acetato de etila/hexanos -50% de acetato de etila/hexanos) proporcionou 12-((2S,3R)-1-(2-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)etilamino)-3hidroxi-1-oxobutan-2-ilamino)-12-oxododecanoato de metila 154 como um semissólido amarelo ceroso (2,60 g, 52,6%). RMN de 1H (400 MHz, acetona-d6, ppm): δ 7,51 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 7,45-7,49 (m, 2H), 7,28-7,36 (m, 6H), 7,21 (tt, J = 7,2, 1,2 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,88 (dt, J = 8,9, 2,5 Hz, 4H), 4,39 (dd, J = 8,2, 3,0 Hz, 1H), 4,20-4,27 (m, 1H), 3,78 (s, 6H), 3,60 (s, 1H), 3,35-3,52 (m, 2H), 3,07-3,16 (m, 2H), 2,23-2,37 (m, 4H), 1,53-1,65 (m, 4H), 1,23-1,36 (m, 12H), 1,10 (d, J = 6,4 Hz, 3H).
ESQUEMA 24
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Figure BR112019021359A2_D0271
HCI, EtOH HO
HO,
H hci
164-3
ETAPA 11. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 164-1 [0659] A uma suspensão de t-butóxido de potássio (14,6 g, 130 mol) em THF (120 ml)/éter (360 ml) foi adicionado brometo de metiltrifenilfosfônio (46,6 g, 130 mmol). A mistura foi submetida ao refluxo por 2 h e, então, resfriada a 0°C. 2-formilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butila (13,0 g, 65,2 mmol) em éter (50 ml) foi adicionada por gotejamento. A mistura de reação foi agitada a 0°C e, então, bruscamente arrefecida pela adição de água (250 ml). A camada orgânica foi separada e a água foi extraída com éter (250 ml). O extrato combinado foi secado com MgSO4. A evaporação de solvente, seguida por purificação de cromatografia de coluna (5% de acetato de etila/hexanos) gerou 3-viniIpirrolidina
1-carboxilato de terc-butila 164-1 (11,5 g, 89,4%) como um líquido incolor. GCMS: m/z: 197 (2) (M+), 141 (40), 124 (30), 57 (100).
ETAPA 12. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 164-2 [0660] A uma mistura de f-BuOH (140 ml) e água (70 ml), foram carregados AD-mix-β (47,4 g) e metanossulfonamida (2,89 g, 30,4 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 30 min e foi, então, resfriada a
0°C. 3-vinilpirrolidina-1 -carboxilato de terc-butila 164-1 (6,00 g, 30,4 mmol) foi adicionada. A reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro.
A mistura de reação foi resfriada a 0°C. Tiossulfato de sódio penta-hidratado (96 g, 387 mmol) foi adicionado e a permitiu-se que a temperatura aquecesse à temperatura ambiente. Água (700 ml) foi adicionada e a mistura foi extraída com
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145/217 acetato de etila (500 ml). O extrato foi lavado com água (2 x 50 ml) e salmoura (50 ml) e secado com MgSO4. A evaporação de solvente, seguida por cromatografia de coluna (2% metanol/diclorometano - 7% metanol/diclorometano) gerou 3-(1,2-di-hidroxietil)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butila 164-2 (5,4 g, 77%) como um óleo marrom claro.
ETAPA 13. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 164-3 [0661] A uma solução de 3-(1,2-di-hidroxietil)pirrolidina-1carboxilato de terc-butila 164-2 (3,1 g, 13,4 mmol) em etanol (10 ml) foi adicionado HCI 3 N (30 ml, 90 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. TLC indicou a completação da reação. Etanol foi evaporado. Tolueno foi adicionado e evaporado. Isto foi repetido três vezes para gerar cloridrato de 1 -(pirrolidin-3-il)etano-1,2-diol 164-3 (2,0 g, 89%) como um óleo marrom. LC-MS (ESI): m/z: 132 (100), (M + H+, amina livre).
ETAPA 14 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 164-4 [0662] A uma solução de cloridrato de 1-(pirrolidin-3-il)etano-1,2diol 164-2 (2,0 g, 12 mmol) em água (30 ml) foi adicionado NaHCOs (3,7 g, 44 mmol) por porção. Dioxano (20 ml) foi então adicionado. À solução acima, foi adicionado dodecanodioato de 1 -(2,5-dioxopirrolidin-1 -il) 12-metila 146-1 (3,7 g, 11 mmol) em dioxano (30 ml). A mistura de reação foi agitada de um dia para o outro. Isto foi extraído com acetato de etila (3 x 100 ml). O extrato combinado foi lavado com HCI 0,5 N (50 ml) e salmoura (50 ml) e secado com MgSO4.
ETAPA 15. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 164 [0663] Esta substância foi preparada de 12-(3-(1,2-dihidroxietil)pirrolidin-1-il)-12-oxododecanoato de metila 164-4 e cloreto de 4,4dimetoxitritila (1 eq) com o uso do mesmo procedimento conforme descrito na síntese de 2-(2-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)etil)isoindolina-1,3-diona 138. O produto foi purificado por meio de cromatografia de coluna (1,5% de
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146/217 metanol/diclorometano). 12-(3-(2-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)-1 hidroxietil)pirrolidin-1-il)-12-oxododecanoato de metila 164 foi obtido em 51% de rendimento como um óleo amarelo. RMN de 1H (400 MHz, acetona-d6, ppm): δ 7,49-7,54 (m, 2H), 7,35-7,40 (m, 4H), 7,28-7,34 (m, 2H), 7,19-7,25 (m, 1H), 6,866,91 (m, 4H), 4,11-4,20 (m, 1H), 3,79 (s, 6H), 3,68-3,77 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,29-3,59 (m, 3H), 3,06-3,20 (m, 3H), 2,33-2,55 (m, 1H), 2,29 (t, J = 7,4 Hz, 2H),
2,19 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,65-2,0 (m, 2H), 1,51-1,62 (m, 4H), 1,26-1,35 (m, 12H).
ESQUEMA 25
Figure BR112019021359A2_D0272
H2SO4-cat
MeOH
DMTCI
Figure BR112019021359A2_D0273
170-6
Py
Figure BR112019021359A2_D0274
170
ETAPA 16. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 170-1 [0664] A uma solução de 2-aminoetilcarbamato de terc-butila (2,88 g,
18,0 mmol) e trietilamina (2,98 g, 29,4 mmol) em diclorometano (100 ml), foi adicionado dodecanodioato de 1 -(2,5-dioxopirrolidin-1 -il) 12-metila (146-1) (5,09 g, 14,9 mmol) em diclorometano (50 ml) por gotejamento à temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada de um dia para o outro e TLC indicou a completação da reação. 100 ml de salmoura foram adicionados e a camada orgânica foi separada. A camada orgânica foi lavada com HCI 0,5 N (150 ml), salmoura (2 x 100 ml) e secada com MgSCU. A evaporação de solvente gerou 12-(2-(terc butoxicarbonilamino)etilamino)-12-oxododecanoato de metila puro 170-1 (5,85 g 100%) como um sólido branco.
ETAPA 17. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 170-2
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147/217 [0665] A uma solução de 12-(2-(terc-butoxicarbonilamino)etilamino)12-oxododecanoato 170-1 (5,55 g, 14,4 mmol) em metanol (100 ml) a 0°C, foi adicionado cloreto de tionila (3,3 ml, 45,5 mmol) por gotejamento. A reação foi então agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. TLC indicou a completação da reação. O solvente e produtos orgânicos voláteis foram evaporados. O resíduo foi, então, coevaporado com heptanos duas vezes para gerar cloridrato de 12-(2aminoetilamino)-12-oxododecanoato metila 170-2 quantitativamente como um sólido branco. LC-MS (ESI): m/z: 287 (100), (M + H+, amina livre).
ETAPA 18. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 170-3 [0666] (S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxilato de (-)-metila (5,01 g,
31,2 mmol) e L1OHH2O (2,55 g, 60,8 mmol) em THF (50 ml) e água (50 ml) foram agitados de um dia para o outro. TLC indicou a completação da reação. THF foi evaporado e a água foi acidificada com HC11 N a pH = 1. Isto foi extraído com acetato de etila (5 x 50 ml). O extrato combinado foi secado com MgSCU. A evaporação de solvente gerou ácido (S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxílico 170-3 (2,93 g, 64,3%) como um líquido amarelo claro.
ETAPA 19. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 170-4 [0667] O Composto 170-4 foi sintetizado de ácido (S)-2,2-dimetil-1,3dioxolano-4-carboxílico 170-3 e N-hidroxisuccinimida em 86% de rendimento, com o uso do mesmo procedimento conforme descrito na síntese de dodecanodioato de 1(2,5-dioxopirrolidin-1-il) 12-metila 146-1. (S)-2,5-dioxopirrolidin-1 -il 2,2-dimetil-1,3dioxolano-4-carboxilato 170-4 foi obtido em 86% de rendimento como um sólido branco.
ETAPA 20. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 170-5 [0668] A uma suspensão de cloridrato de 12-(2-aminoetilamino)-12oxododecanoato de metila 170-2 (14,4 mmol) e (S)-2,5-dioxopirrolidin-1 -il 2,2-dimetil1,3-dioxolano-4-carboxilato 170-4 (3,80 g, 15,6 mmol) em diclorometano (100 ml) foi adicionada trietilamina (6 ml, 43,0 mmol) em diclorometano (25 ml) por 4 h a 0°C. A
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148/217 mistura de reação foi então agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. LC-MS indicou que o material inicial 170-2 foi completamente convertido. A camada orgânica foi lavada com salmoura (50 ml), HC11 N (50 ml), salmoura (50 ml), secada com MgSCU e concentrada até a secura para proporcionar 12-(2-(2,2-dimetil-1,3dioxolano-4-carboxamido)etilamino)-12-oxododecanoato de (S)-metila 170-5 (5,93 g, 99,3%) como um sólido branco.
ETAPA 21. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 170-6 [0669] A uma solução de 12-(2-(2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4carboxamido)etilamino)-12-oxododecanoato de (S)-metila 170-5 (5,93 g, 14,3 mmol) foi adicionada uma gota de ácido sulfúrico concentrado. Isto foi submetido ao refluxo por 6 h e, então, resfriado à temperatura ambiente. O sólido foi coletado através de filtração e lavado duas vezes com metanol frio. O sólido foi secado no ar (3,32 g). A segunda parte (0,42 g) foi obtida do líquido-mãe para gerar 12-(2-(2,3-dihidroxipropanamido)etilamino)-12-oxododecanoato de (S)-metila 170-6 (3,74 g em total, 69,4%) como um cristal branco. LC-MS (ESI): m/z: 375 (100), (M + H+). RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6, ppm): δ 7,79 (br, 2H), 5,49 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,66 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 3,83-3,88 (m, 1H), 3,55-3,61 (m, 4H), 3,41-3,47 (m, 1H), 3,05-3,15 (m, 4H), 2,29 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,03 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,42-1,52 (m, 4H), 1,18-1,29 (m, 12H).
ETAPA 22. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 170 [0670] A uma solução de 12-(2-(2,3-di-hidroxipropanamido)etilamino)12-oxododecanoato de (S)-metila 170-6 (2,99 g, 7,99 mmol) em piridina seca (57,5 ml) sob nitrogênio, foi adicionado cloreto de 4,4’-dimetoxitritila (2,84 g, 8,38 mmol) numa porção. A reação foi agitada à temperatura ambiente por dois dias. Metanol (5 ml) foi adicionado para arrefecer bruscamente a reação. Piridina foi evaporada. Tolueno foi adicionado e, então, evaporado. Isto foi repetido três vezes. Água (100 ml) foi adicionada e isto foi extraído com acetato de etila (5 x 250 ml). Os extratos foram combinados e secados com MgSO4. Evaporação de solvente, seguida por
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149/217 cromatografia de coluna (1% de metanol/diclorometano-3% de metanol/diclorometano) gerou 12-(2-(3-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)-2hidroxipropanamido)-etilamino)-12-oxododecanoato de (S)-metila 170 (1,70 g, 31,4%) como um óleo viscoso. RMN de 1H (400 MHz, acetona-d6, ppm): δ 7,64-7,70 (br, 1H), 7,47-7,51 (m, 2H), 7,33-7,37 (m, 4H), 7,26-7,32 (m, 2H), 7,20 (dt, J = 7,3, 2,1 Hz, 1H), 7,11 (br, 1H), 6,86 (d, J = 8,7 Hz, 4H), 4,84 (br, 1H), 4,21 (dd, J = 5,1,3,8 Hz, 1H), 3,78 (s, 6H), 3,60 (s, 1H), 3,25-3,42 (m, 6H), 2,28 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,48-1,62 (m, 4H), 1,21-1,34 (m, 12H).
ESQUEMA 26.
Figure BR112019021359A2_D0275
Figure BR112019021359A2_D0276
Figure BR112019021359A2_D0277
ÍSiS
Figure BR112019021359A2_D0278
ETAPA 23. PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS 139,155,160,165 E 170 [0671] Os Compostos 139,155, 160, 165 e 170 foram preparados dos compostos 138,154,159,164 e 169 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 18.
ETAPA 24. PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS 153,158,163,168 E 173 [0672] Os Conjugados 153,158,163,168 e 173 foram preparados do
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150/217 composto 139,154, 159, 164 e 169 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 12. SÍNTESE DE CONJUGADO 176
ESQUEMA 27.
Figure BR112019021359A2_D0279
Figure BR112019021359A2_D0280
ESQUEMA 28.
Figure BR112019021359A2_D0281
10’55 Α :.χ· ·&;
Οí :·&κ£^χ:·5ΰ-
Figure BR112019021359A2_D0282
ETAPA. 1. PREPARAÇÃO DE 12-AMINODODECANOATO DE METILA 132 [0673] Ácido 12-aminoundecanoico (131) (10 g, 4,64 mmol) foi agitado em MeOH à RT. O cloreto de acetila (856 μ1,12 mmol) foi adicionado por gotejamento e a reação agitada por 1,5 h. O solvente foi removido em vácuo, o resíduo absorvido
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151/217 em MTBE e resfriado no congelador de um dia para o outro. 0 precipitado resultante foi coletado porfiltração, lavado com MTBE frio e secado sob vácuo para proporcionar 12-aminododecanoato de metila 132.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 12-(12-(10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10OXODECANAMIDO)DODECANAMIDO)DODECANOATO DE METILA RACÊMICO (CIS) 129 [0674] 10-(3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-(hidroximetil)-3,4dimetilpirrolidin-1-il)-10-oxodecanoato de lítio racêmico (cis) (128) (2 g, 3,1 mmol), de 12-aminododecanoato de metila (132) (778 mg, 3,1 mmol), HBTll (1,2 g, 3,1 mmol) e TEA (1,4 ml, 10 mmol) foram agitados em DCM à RT O/N. O precipitado foi removido por filtração, o filtrado foi concentrado em vácuo e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia de coluna (5% de MeOH, DCM). TLC mostrou duas manchas de teste próximas com massa idêntica que foram atribuídos como isômeros geométricos e agrupadas para gerar 12-(12-(10-((3R, 4S)-3-((bis(4metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-(hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1 -il)-10oxodecanamido)dodecanamido)dodecanoato de metila (129) de maneira quantitativa.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 12-(12-(10-(-3-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)-METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4Dl Μ ETILPIRROLI Dl N -1 -I L)-10-OXODECAN AM IDO)DODECANAMIDO)DODECANOATO DE LÍTIO RACÊMICO (CIS) 130 [0675] 12-(12-(10-(3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4(h idroxim eti l)-3,4-dimeti Ipirrol id in-1 -il)-10oxodecanamido)dodecanamido)dodecanoato de metila racêmico (cis) (129) (3,1 mmol) foi agitada em THF:H2O (50:50) com LiOH (88 mg, 3,7 mmol) à RT O/N. A reação foi confirmada por TLC e o THF removido em vácuo. A solução aquosa foi congelada em líquido N2 e liofilizada por 48 horas para gerar racêmico 12-(12-(10-(3Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 158/292
152/217 ((bis(4-metoxifenil)(fenil)-metoxi)metil)-4-(hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1 -il)-10oxodecanamido)-dodecanamido)dodecanoato de lítio racêmico (cis) 130 quantitativamente.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 176 [0676] O conjugado 176 foi preparado de compostos 24 e 130 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 13. SÍNTESE DE CONJUGADO 179
ESQUEMA 29.
Figure BR112019021359A2_D0283
Figure BR112019021359A2_D0284
NHCBz
HBTU
H2(g)) Pd-C
MeOH TFA
TFA
Figure BR112019021359A2_D0285
ESQUEMA 30.
+ -ϊδ
Figure BR112019021359A2_D0286
Figure BR112019021359A2_D0287
Figure BR112019021359A2_D0288
/ TFA
Figure BR112019021359A2_D0289
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153/217
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 80 [0677] O Composto 24 (2 g, 0,86 mmol), ácido N-carbobenzoxi-Lglutâmico (120 mg, 0,43 mmol), HBTll (326 mg, 0,86 mmol) e TEA (353 pl, 2,6 mmol) foram agitados em DCM à RT O/N. A mistura foi concentrada em vácuo e purificada por cromatografia de coluna para gerar o composto 80 (2,88 g, 83%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 81 [0678] O Composto 81 foi preparado dos compostos 80 (670 mg, 0,17 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 14. O composto foi usado bruto em reações subsequentes e o rendimento tomado como quantitativo.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 179 [0679] O conjugado 179 foi preparado de compostos 18 e 81 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 14. SÍNTESE DE CONJUGADO 182
ESQUEMA 31.
Figure BR112019021359A2_D0290
H2(g), Pd-C
OAc
Figure BR112019021359A2_D0291
HBTU
OAc
OAc
Figure BR112019021359A2_D0292
93, n = 3, x = 1
MeOH TFA
Figure BR112019021359A2_D0293
ESQUEMA 32.
HBTU
Figure BR112019021359A2_D0294
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154/217
Figure BR112019021359A2_D0295
Figure BR112019021359A2_D0296
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 93 [0680] O Composto 93 foi preparado de ácido (2-oxo-2-fenil-1À2etil)-D-glutâmico (2,25 g, 8,1 mmol) e 9 (13 g, 21 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 89. Rendimento: 11,2 g.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 94 [0681] O Composto 94 foi preparado do composto 93 (11,1 g) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 90. Rendimento: 10,2 g.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 182 [0682] O conjugado 182 foi preparado de compostos 18 e 94 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 15. SÍNTESE DE CONJUGADOS 185 E 188 ESQUEMA 33.
TsCI
HO^O^O^°^O^OH --HO^°^O^°^O^OTS
OAc
Figure BR112019021359A2_D0297
85, n = 4
ESQUEMA 34.
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155/217
Figure BR112019021359A2_D0298
Figure BR112019021359A2_D0299
H2(g), Pd-C
Figure BR112019021359A2_D0300
MeOH TFA
Figure BR112019021359A2_D0301
ESQUEMA 35.
Figure BR112019021359A2_D0302
Figure BR112019021359A2_D0303
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 4METILBENZENOSSULFONATO DE
14-HIDROXI-3,6,9,12Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 162/292
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TETRAOXATETRADECI LA 82 [0683]Uma solução de pentaetileno glicol (35 g, 147 mmol), TEA (41 ml, 294 mmol) e trimetilamina-HCI (1,4 g, 14,7 mmol) em CH2CI2 (600 ml) foi tratada com cloreto de tosila (29,4 g, 154 mmol). Após a agitação (18 h), a mistura de reação foi lavada com hbO-salmoura (1:1), secada (MgSO4), filtrada, concentrada e submetida à cromatografia para render 82 (24,6 g, 43%) como um óleo amarelo pálido. Rf 0,8 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 2. 14-AZIDO-3,6,9,12-TETRAOXATETRADECAN-1OL 83 [0684]14-azido-3,6,9,12-tetraoxatetradecan-1 -ol (83) foi preparado de 82 (24,6 g, 62,7 mmol) e azida de sódio (7,13 g, 110 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 4. Rendimento: 14,8 g, 90%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 84 [0685]Uma solução de GaINAc 6 (12,2 g, 31,4 mmol) e HOPEG-N3 83 (9,2 g, 35 mmol) em 1,2-dicloroetano (150 ml) foi tratada com Sc(OTf)3 (771 mg, 1,6 mmol). Após a agitação (85°C, 2 h), a reação foi resfriada (RT), bruscamente arrefecida pela adição de TEA (40 ml) e concentrada. O material bruto foi submetido à cromatografia para render 84 (11,16 g, 60%) como uma espuma amarela pálida. Rf 0,7 (10% de CH3OHCH2CI2).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 85 [0686]Uma solução de 84 (11,16 g, 18,8 mmol) e Pd/C (1,1 g, 10% - suporte sólido) em EtOAc (120 ml) foi tratada com TFA (4,32 ml, 56,5 mmol) e purgada com H2. Após agitação vigorosa (4,5 h), a reação foi purgada com N2, filtrada através de Celite e concentrada. O material bruto foi submetido à cromatografia para render 85 (5,77 g, 45%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2CI2).
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ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 95 [0687]O Composto 95 foi preparado a partir de ácido (2-oxo-2fenil-1À2-etil)-D-glutâmico (1,04 g, 3,7 mmol) e o composto 94 (10,2 g) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 91. Rendimento: 7,2 g.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 96 [0688]O Composto 96 foi preparado do composto 95 (11,1 g) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 92. Rendimento: 6,5 g.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 97 [0689]O Composto 97 foi preparado a partir de ácido (2-oxo-2fenil-1À2-etil)-D-glutâmico (2 g, 7,1 mmol) e 85 (12,1 g, 17,8 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 89. Rendimento: 10 g, quantitativo.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 98 [0690]0 Composto 98 foi preparado do composto 97 (10 g, 7,2 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 90. Rendimento: 3,5 g, 36%.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 99 [0691 ]O Composto 99 foi preparado quantitativamente de ácido (2-oxo-2-fenil-1À2-etil)-D-glutâmico (350 mg, 1,25 mmol) e o composto 98 (2,86 mg, 2,5 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 91.
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 100 [0692]O Composto 100 foi preparado quantitativamente do composto 99 (3,2 g, 1,25 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 92.
ETAPA 11. PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS 185 E 188
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 164/292
158/217 [0693]Os Conjugados 185 e 188 foram preparados de compostos 18 e 96 ou 18 e 100 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 16. SÍNTESE DE CONJUGADOS 191, 194, 197 E 200
ESQUEMA 36
ScOTf
NaN3
H2O
Figure BR112019021359A2_D0304
AcO,,
Γ
OAc
Figure BR112019021359A2_D0305
NHAc
OAc
OAc
H2(g). Pd-C
----------MeOH TFA
Figure BR112019021359A2_D0306
ESQUEMA 37.
OAc
Figure BR112019021359A2_D0307
89, n = 2, x = 1 101, n = 3, x = 2
Figure BR112019021359A2_D0308
90, n = 2, x = 1 102, n = 3, x = 2
Figure BR112019021359A2_D0309
ESQUEMA 38.
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159/217
Figure BR112019021359A2_D0310
Figure BR112019021359A2_D0311
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2AZIDOETOXI)ETOXI)ETAN-1-OL 86 [0694]A uma solução de 2-(2-(2-cloroetoxi)etoxi)etan-1-ol (13 g, 77 mmol) em água (200 ml) é adicionada azida de sódio (10 g, 154 mmol). A reação foi aquecida a 100°C por 18 horas. A reação é resfriada à temperatura ambiente e vertida num funil separatório 1 I e extraída com diclorometano (3 x 200 ml). Os extratos de diclorometano combinados são secados em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados até a secura para proporcionar 2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etan-1-ol, como um óleo incolor (11,7 g)·
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 87 [0695]O Composto 87 é preparado de 86 (4,95 g, 28,3 mmol) e 6 (10 g, 25,7 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 84. Rendimento: 10 g, 77%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 88 [0696]O Composto 88 é preparado de 87 (10 g, 19,8 mmol) com
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160/217 o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 85. Rendimento: 7,63 g, 65%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 89 [0697]Uma solução de 88 (2 g, 3,38 mmol) e ácido Z-glutâmico (427 mg, 1,52 mmol) em CH2CI2 (50 ml) é tratada com HBTU (1,41 g, 3,7 mmol) e base de Hünig (1,77 ml, 10,1 mmol). Após a agitação (18 h), a mistura é concentrada e submetida à cromatografia para render 89 (871 mg, 48%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 90 [0698]Uma solução de 89 (870 mg, 0,72 mmol) e Pd/C (90 mg, 10% - suporte úmido) em EtOAc (10 ml) é tratada com TFA (84 μΙ, 1,1 mmol) e purgada com H2. Após a agitação vigorosa (2 h), a reação é purgada com N2, filtrada através de Celite e concentrada. O material bruto é usado sem processamento adicional e rendeu 90 (850 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,25 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 91 [0699]Uma solução de 90 (850 mg, 0,72 mmol) e ácido Zglutâmico (91 mg, 0,32 mmol) em CH2Cl2(10 ml) é tratada com HBTU (300 mg, 0,79 mmol) e base de Hünig (502 μΙ, 2,9 mmol). Após a agitação (1,5 h), a mistura é diluída com CH2CI2 e lavada com NaHCOs (Sat. Aq.), secada (MgSO4), filtrada e concentrada. O material bruto é submetido à cromatografia para render 91 (590 mg, 76%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 92 [0700]Uma solução de 91 (590 mg, 0,25 mmol) e Pd/C (100 mg, 10% - suporte úmido) em CH3OH (30 ml) é tratada com TFA (29 μΙ, 0,37 mmol) e purgada com H2. Após a agitação (3 h), a mistura é purgada com N2, então, filtrada através de Celite e concentrada. O material bruto é usado
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 167/292
161/217 sem processamento adicional e rendeu 92 (600 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 101 [0701 ]O Composto 101 é preparado de ácido (R)-2-((2-oxo-2fenil-1 l2-etil)amino)hexanodioico (2,51 g, 8,6 mmol) e 9 (11 g, 17,2 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 89. Rendimento: 4,2 g, 37%.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 102 [0702]0 Composto 102 é preparado do composto 101 (4,2 g,
3,2 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 90. Rendimento: 2,1 g, 47%.
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 103 [0703]0 Composto 103 é preparado do ácido (R)-2-((2-oxo-2fenil-1 l2-etil)amino)hexanodioico (265 mg, 0,9 mmol) e composto 102 (2,1 g,
1,8 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 91. Rendimento: (560 mg, 24 %).
ETAPA 11. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 104 [0704]0 Composto 104 é preparado quantitativamente do composto 103 (560 mg) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 92. O composto é usado sem purificação.
ETAPA 12. PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS 191, 194, E 197 [0705]0s Conjugados 191, 194, e 197 são preparados dos compostos 128 e 92, 96, e 100 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 16A. SÍNTESE DE CONJUGADOS 191A
ESQUEMA 36A
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 168/292
162/217
HO
NaN3
H2O
Figure BR112019021359A2_D0312
AcO,,
I'’
OAc
Figure BR112019021359A2_D0313
NHAc
OAc
OAc
ScOTf
H2(g), Pd-C
87a ----------MeOH TFA
Figure BR112019021359A2_D0314
88a, n = 2
ESQUEMA 37A.
Figure BR112019021359A2_D0315
Figure BR112019021359A2_D0316
90a, n = 2, x = 1
Figure BR112019021359A2_D0317
ESQUEMA 38A.
Figure BR112019021359A2_D0318
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 169/292
163/217
Figure BR112019021359A2_D0319
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2AZIDOETOXI)ETOXI)ETAN-1-OL 86A [0706] A uma solução de 2-(2-(2-cloroetoxi)etoxi)etan-1-ol (13 g, 77 mmol) em água (200 ml) foi adicionada azida de sódio (10 g, 154 mmol). A reação foi aquecida a 100°C por 18 horas. A reação foi resfriada para temperatura ambiente e derramada num funil separador de 1 I e extraída com diclorometano (3 x 200 ml). Os extratos de diclorometano combinados foram secados em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados até a secura para produzir 2-(2-(2azidoetoxi)etoxi)etan-1-ol como um óleo incolor (11,7 g).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 87A [0707] O Composto 87a foi preparado de 86a (4,95 g, 28,3 mmol) e 6a (10 g, 25,7 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 84. Rendimento: 10 g, 77%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 88A [0708] O Composto 88a foi preparado de 87a (10 g, 19,8 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 85. Rendimento: 7,63 g, 65%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 89A [0709] Uma solução de 88a (2 g, 3,38 mmol) e ácido Z—Lglutâmico (427 mg, 1,52 mmol) em CH2CI2 (50 ml) foi tratada com HBTU (1,41 g,
3,7 mmol) e base de Hünig (1,77 ml, 10,1 mmol). Após a agitação (18 h), a mistura foi concentrada e submetida à cromatografia para render 89a (871 mg,
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 170/292
164/217
48%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 90A [0710] Uma solução de 89a (870 mg, 0,72 mmol) e Pd/C (90 mg, 10% - suporte úmido) em EtOAc (10 ml) foi tratada com TFA (84 pl, 1,1 mmol) e purgada com H2. Após a agitação vigorosa (2 h), a reação foi purgada com N2, filtrada através de Celite e concentrada. O material bruto foi usado sem processamento adicional e rendeu 90a (850 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,25 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 91A [0711] Uma solução de 90a (850 mg, 0,72 mmol) e ácido Zglutâmico (91 mg, 0,32 mmol) em CH2CI2 (10 ml) foi tratada com HBTU (300 mg, 0,79 mmol) e base de Hünig (502 pl, 2,9 mmol). Após a agitação (1,5 h), a mistura é diluída com CH2CI2 e lavada com NaHCOs (Sat. Aq.), secada (MgSO4), filtrada e concentrada. O material bruto foi submetido à cromatografia para render 91a (590 mg, 76%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 92A [0712] Uma solução de 91a (590 mg, 0,25 mmol) e Pd/C (100 mg, 10% - suporte úmido) em CH3OH (30 ml) foi tratada com TFA (29 μΙ, 0,37 mmol) e purgada com H2. Após a agitação (3 h) a mistura foi purgada com N2, então, filtrada através de Celite e concentrada. O material bruto foi usado sem processamento adicional e rendeu 92a (600 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 191 A, [0713] O Conjugado 191a foi preparado do composto 128 e composto 92a com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 16B. SÍNTESE DE CONJUGADOS 191B
ESQUEMA 36B
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 171/292
165/217
HO
NaN3
H2O
Figure BR112019021359A2_D0320
OAc
Figure BR112019021359A2_D0321
0Ac 6b
ScOTf
H2(g), Pd-C
87b ----------MeOH TFA
OAc
Figure BR112019021359A2_D0322
88b, n = 2
ESQUEMA 37B.
Figure BR112019021359A2_D0323
NHCBz HBTU
OAc
OAc
Figure BR112019021359A2_D0324
89b, n = 2, x = 1
Figure BR112019021359A2_D0325
90b, n = 2, x = 1
Figure BR112019021359A2_D0326
ESQUEMA 38B.
Figure BR112019021359A2_D0327
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 172/292
166/217
Figure BR112019021359A2_D0328
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2AZIDOETOXI)ETOXI)ETAN-1-OL 86B [0714] A uma solução de 2-(2-(2-cloroetoxi)etoxi)etan-1-ol (13 g, 77 mmol) em água (200 ml) é adicionada azida de sódio (10 g, 154 mmol). A reação foi aquecida a 100°C por 18 horas. A reação foi resfriada para temperatura ambiente e derramada num funil separador de 1 I e extraída com diclorometano (3 x 200 ml). Os extratos de diclorometano combinados foram secados em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados até a secura para produzir 2-(2-(2azidoetoxi)etoxi)etan-1-ol como um óleo incolor (11,7 g).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 87B [0715] O Composto 87a é preparado de 86b (4,95 g, 28,3 mmol) e 6b (10 g, 25,7 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 84. Rendimento: 10 g, 77%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 88B [0716] O Composto 88a é preparado de 87b (10 g, 19,8 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 85. Rendimento: 7,63 g, 65%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 89B [0717] Uma solução de 88b (2 g, 3,38 mmol) e ácido Z-glutâmico racêmico (427 mg, 1,52 mmol) em CH2Cl2(50 ml) é tratada com HBTU (1,41 g,
3,7 mmol) e base de Hünig (1,77 ml, 10,1 mmol). Após a agitação (18 h) a mistura foi concentrada e submetida à cromatografia para render 89b (871 mg, 48%)
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 173/292
167/217 como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 90B [0718] Uma solução de 89b (870 mg, 0,72 mmol) e Pd/C (90 mg, 10% - suporte úmido) em EtOAc (10 ml) é tratada com TFA (84 pl, 1,1 mmol) e purgada com H2. Após a agitação vigorosa (2 h), a reação é purgada com N2, filtrada através de Celite e concentrada. O material bruto é usado sem processamento adicional e rendeu 90b (850 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,25 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 91B [0719] Uma solução de 90b (850 mg, 0,72 mmol) e ácido Zglutâmico (91 mg, 0,32 mmol) em CH2Cl2(10 ml) é tratada com HBTU (300 mg, 0,79 mmol) e base de Hünig (502 pl, 2,9 mmol). Após a agitação (1,5 h), a mistura é diluída com CH2CI2 e lavada com NaHCOs (Sat. Aq.), secada (MgSO4), filtrada e concentrada. O material bruto é submetido à cromatografia para render 91b (590 mg, 76%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 92B [0720] Uma solução de 91b (590 mg, 0,25 mmol) e Pd/C (100 mg, 10% - suporte úmido) em CH3OH (30 ml) é tratada com TFA (29 μΙ, 0,37 mmol) e purgada com H2. Após a agitação (3 h), a mistura é purgada com N2, então, filtrada através de Celite e concentrada. O material bruto é usado sem processamento adicional e rendeu 92b (600 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 191B [0721] O Conjugado 191b é preparado do composto 128 e composto 92b com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 16C. SÍNTESE DE CONJUGADOS 191C
ESQUEMA 36C
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 174/292
168/217 HCy—0——Cl
NaN3
H2O
Figure BR112019021359A2_D0329
86c
Figure BR112019021359A2_D0330
OAc
Figure BR112019021359A2_D0331
88c,n = 2
ESQUEMA 37C.
Figure BR112019021359A2_D0332
89c, n = 2, x = 1
Figure BR112019021359A2_D0333
90c, n =2, x= 1
Figure BR112019021359A2_D0334
ESQUEMA 38C.
Figure BR112019021359A2_D0335
Figure BR112019021359A2_D0336
Figure BR112019021359A2_D0337
Figure BR112019021359A2_D0338
Figure BR112019021359A2_D0339
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 175/292
169/217
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2AZIDOETOXI)ETOXI)ETAN-1-OL 86C [0722] A uma solução de 2-(2-(2-cloroetoxi)etoxi)etan-1-ol (13 g, 77 mmol) em água (200 ml) é adicionada azida de sódio (10 g, 154 mmol). A reação foi aquecida a 100°C por 18 horas. A reação foi resfriada para temperatura ambiente e derramada num funil separador de 1 I e extraída com diclorometano (3 x 200 ml). Os extratos de diclorometano combinados foram secados em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados até a secura para produzir 2-(2-(2azidoetoxi)etoxi)etan-1-ol como um óleo incolor (11,7 g).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 87C [0723] O Composto 87c é preparado de 86c (4,95 g, 28,3 mmol) e 6c (10 g, 25,7 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 84. Rendimento: 10 g, 77%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 88C [0724] O Composto 88c é preparado de 87c (10 g, 19,8 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 85. Rendimento: 7,63 g, 65%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 89C [0725] Uma solução de 88c (2 g, 3,38 mmol) e ácido Z-glutâmico racêmico (427 mg, 1,52 mmol) em CH2Cl2(50 ml) é tratada com HBTU (1,41 g,
3,7 mmol) e base de Hünig (1,77 ml, 10,1 mmol). Após a agitação (18 h) a mistura foi concentrada e submetida à cromatografia para render 89c (871 mg, 48%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 90C [0726] Uma solução de 89c (870 mg, 0,72 mmol) e Pd/C (90 mg, 10% - suporte úmido) em EtOAc (10 ml) é tratada com TFA (84 pl, 1,1 mmol) e purgada com H2. Após a agitação vigorosa (2 h), a reação é purgada com N2, filtrada através de Celite e concentrada. O material bruto é usado sem
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 176/292
170/217 processamento adicional e rendeu 90c (850 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,25 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 91C [0727] Uma solução de 90C (850 mg, 0,72 mmol) e ácido Zglutâmico (91 mg, 0,32 mmol) em CH2Cl2(10 ml) é tratada com HBTU (300 mg, 0,79 mmol) e base de Hünig (502 μΙ, 2,9 mmol). Após a agitação (1,5 h), a mistura é diluída com CH2CI2 e lavada com NaHCOs (Sat. Aq.), secada (MgSO4), filtrada e concentrada. O material bruto é submetido à cromatografia para render 91c (590 mg, 76%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2CI2).
Etapa 7. Preparação de composto 92c [0728] Uma solução de 91c (590 mg, 0,25 mmol) e Pd/C (100 mg, 10% - suporte úmido) em CH3OH (30 ml) é tratada com TFA (29 μΙ, 0,37 mmol) e purgada com H2. Após a agitação (3 h), a mistura é purgada com N2, então, filtrada através de Celite e concentrada. O material bruto é usado sem processamento adicional e rendeu 92c (600 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 191C [0729] O Conjugado 191c é preparado do composto 128 e composto 92c com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 17. SÍNTESE DE CONJUGADOS 203 E 206
ESQUEMA 39.
96,n = 3,x=1 +
100, n = 4, x = 1
Figure BR112019021359A2_D0340
69b
Figure BR112019021359A2_D0341
204, n = 4, x = 1 —OAc
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 177/292
171/217
Figure BR112019021359A2_D0342
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 69B [0730] O Composto 69b foi preparado de ácido (2S,4R)-4hidroxipirrolidina-2-carboxílico com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 69.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS 203 E 206 [0731] Os Conjugados 203 e 206 foram preparados do composto e 100 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1
EXEMPLO 18. SÍNTESE DE CONJUGADO 209
ESQUEMA 40.
Figure BR112019021359A2_D0343
Figure BR112019021359A2_D0344
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 178/292
172/217
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 209 [0732] O Conjugado 209 foi preparado do composto 96 e 160 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 18A. SÍNTESE DE CONJUGADO 209A
ESQUEMA 40A.
Figure BR112019021359A2_D0345
HBTU
160 ---------
Figure BR112019021359A2_D0346
Figure BR112019021359A2_D0347
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 209A [0733] O Conjugado 209a é preparado do composto 96a e 160 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 19. SÍNTESE DE CONJUGADOS 212 E 215
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 179/292
173/217
ESQUEMA 41.
Figure BR112019021359A2_D0348
:Ί><.
Ζ··ίΐίγ·Ο·ί
Η»
Figure BR112019021359A2_D0349
Figure BR112019021359A2_D0350
IS?
1ÍS3
Figure BR112019021359A2_D0351
Figure BR112019021359A2_D0352
ESQUEMA 42.
Figure BR112019021359A2_D0353
Figure BR112019021359A2_D0354
Figure BR112019021359A2_D0355
PREPARAÇÃO
ETAPA
1.
DE 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1À2ETIL)AMINO)ACETAMIDO)-ISOFTALATO DE DIMETILA 105 [0734] Uma solução de 5-aminoisoftalato de dimetila (5 g, 24 mmol), Z
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 180/292
174/217
Gly-OH (5 g, 24 mmol), EDC (5 g, 26,3 mmol), HOBt (3,6 g, 26,3 mmol), NMM (2,9 ml, 26,3 mmol) em DMF (50 ml) foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante completação, a mistura de reação foi diluída com acetato de etila (250 ml) e lavada com cada HC11 M (2 x 100 ml), bicarbonate de sódio saturado (1 x 100 ml) e salmoura (2 x 100 ml). Secar em sulfato de magnésio, filtrar e concentrar até a secura para proporcionar 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2etil)amino)acetamido)isoftalato de dimetila como um sólido incolor (7,2 g, 79%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1Ã2ETIL)AMINO)ACETAMIDO)ISOFTÁLICO 106 [0735] A uma solução de 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2etil)amino)acetamido)isoftalato de metila (7,2 g) em metanol (25 ml) e THF (25 ml) foi adicionado NaOH 1 M (25 ml). A solução foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas, então, concentrado para remover THF e MeOH. A solução aquosa restante foi diluída com água (75 ml), resfriada num banho de água gelada e acidificada a pH = 1 com HCI 6 Μ. O sólido foi filtrado e lavado com água (3 x 100 ml). O sólido foi secado por congelamento para proporcionar ácido 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2etil)amino)acetamido)-isoftálico (6,9 g, quantitativo).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 107 [0736] O Composto 107 foi preparado de ácido 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2etil)amino)acetamido)isoftálico 106 (200 mg, 0,54 mmol) e 94 (1,7 g, 1,3 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 95. Rendimento: 600 mg.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 108 [0737] O Composto 108 foi preparado do composto 107 (600 mg) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 96. Rendimento: 650 mg, quantitativo.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 109 [0738] O Composto 109 foi preparado de ácido 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 181/292
175/217 etil)amino)acetamido)isoftálico 106 (180 mg, 0,48 mmol) e 98 (1,5 g, 1,1 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 99. Rendimento: 900 mg.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 110 [0739] O Composto 110 foi preparado do composto 109 (900 mg) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 100. Rendimento: 920 mg, quantitativo.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS 212 E 215 [0740] Os Conjugados 212 e 215 foram preparados de composto 128 e 108 ou 110 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1
EXEMPLO 19A. SÍNTESE DE CONJUGADOS 212A E 215A
ESQUEMA 41 A.
Figure BR112019021359A2_D0356
Z-Gly-OH
EDC, HOBt NMM
Figure BR112019021359A2_D0357
Figure BR112019021359A2_D0358
105a 106a
Figure BR112019021359A2_D0359
107a
109a
H2(g). Pd-C
MeOH TFA
94a, n = 3, x = 1
98a, n = 4, x = 1
Figure BR112019021359A2_D0360
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176/217
ESQUEMA 42A.
Figure BR112019021359A2_D0361
Figure BR112019021359A2_D0362
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1À2ETIL)AMINO)ACETAMIDO)-ISOFTALATO DE DIMETILA 105A [0741] Uma solução de 5-aminoisoftalato de dimetila (5 g, 24 mmol), Z-Gly-OH (5 g, 24 mmol), EDC (5 g, 26,3 mmol), HOBt (3,6 g, 26,3 mmol), NMM (2,9 ml, 26,3 mmol) em DMF (50 ml) é agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante completação, a mistura de reação é diluída com acetato de etila (250 ml) e lavada com cada HCI 1 M (2 x 100 ml), bicarbonate de sódio saturado (1 x 100 ml) e salmoura (2 x 100 ml). Secar em sulfato de magnésio, filtrar e concentrar até a secura para proporcionar 5-(2-((2-oxo-2-fenil1À2-etil)amino)acetamido)isoftalato de dimetila como um sólido incolor (7,2 g, 79%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1À2ETIL)AMINO)ACETAMIDO)ISOFTÁLICO 106A [0742] A uma solução de 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2etil)amino)acetamido)isoftalato de metila (7,2 g) em metanol (25 ml) e THF (25 ml) é adicionado NaOH 1 M (25 ml). A solução é agitada à temperatura ambiente
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 183/292
177/217 por 2 horas, então, concentrado para remover THF e MeOH. A solução aquosa restante é diluída com água (75 ml), resfriada num banho de água gelada e acidificada a pH = 1 com HCI 6 Μ. O sólido é filtrado e lavado com água (3 x 100 ml). O sólido é secado por congelamento para produzir ácido 5-(2-((2-oxo-2-fenil1À2-etil)amino)acetamido)-isoftálico (6,9 g, quantitativo).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 107A [0743] O Composto 107a é preparado de ácido 5-(2-((2-oxo-2-fenil1À2-etil)amino)acetamido)isoftálico 106a (200 mg, 0,54 mmol) e 94a (1,7 g, 1,3 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto
95. Rendimento: 600 mg.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 108A [0744] O Composto 108a é preparado do composto 107a (600 mg) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 96a. Rendimento: 650 mg, quantitativo.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 109A [0745] O Composto 109a é preparado de ácido 5-(2-((2-oxo-2-fenil1À2-etil)amino)acetamido)isoftálico 106a (180 mg, 0,48 mmol) e 9a8 (1,5 g, 1,1 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 99. Rendimento: 900 mg.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 110A [0746] O Composto 110a é preparado do composto 109 (900 mg) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 100. Rendimento: 920 mg, quantitativo.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS 212A E 215A [0747] Os Conjugados 212a e 21a5 são preparados de composto 128 e 108a ou 110a com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 20. SÍNTESE DE CONJUGADOS 218 E 221
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 184/292
178/217
ESQUEMA 43.
Figure BR112019021359A2_D0363
TFA / DCM
Figure BR112019021359A2_D0364
Figure BR112019021359A2_D0365
HBTU
113, n = 2 H2(g)« Pd-C
117, n = 3 -----------121, n = 4 MeOH
TFA
Figure BR112019021359A2_D0366
Figure BR112019021359A2_D0367
Figure BR112019021359A2_D0368
ESQUEMA 44.
Figure BR112019021359A2_D0369
213.» ¢3
Figure BR112019021359A2_D0370
Figure BR112019021359A2_D0371
Figure BR112019021359A2_D0372
318. :S
SSÍ. -<=s
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 185/292
179/217
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 111 [0748] O Composto 111 foi preparado de ácido 4-(((tercbutoxicarbonil)amino)metil)ftálico (1,13 g, 3,84 mmol) e 88 (5 g, 8,44 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 89. Rendimento: 2,21 g, 49%.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 112 [0749] Uma solução de 111 (2,21 g, 1,87 mmol) em CH2CI2 (40 ml) foi lentamente tratada com TFA (5 ml). Após a agitação (2 h), a mistura foi concentrada e submetida à cromatografia para render 112 (1,08 g, 47%) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 113 [0750] O Composto 113 foi preparado do composto 112 (1,08 g, 0,88 mmol) e ácido (2-oxo-2-fenil-1À2-etil)-D-glutâmico (112 mg, 0,39 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 91. Rendimento: 600 mg, 62%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 114 [0751] O Composto 114 foi preparado do composto 113 com 0 uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 92.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 115 [0752] O Composto 115 foi preparado de ácido 4-(((tercbutoxicarbonil)amino)metil)ftálico (3,94 g, 13,3 mmol) e 9 (18,2 g, 29,4 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 93. Rendimento: 9,02 g, 53%.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 116 [0753] O Composto 116 foi preparado do composto 115 (8 g, 6,3 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 112. Rendimento: 3,23 g, 39%.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 117
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 186/292
180/217 [0754] O Composto 117 foi preparado do composto 116 (3,23 g,
2,45 mmol) e ácido (2-oxo-2-fenil-1À2-etil)-D-glutâmico (192 mg, 1,1 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 95. Rendimento: 2,22 g, 34%.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 118 [0755] O Composto 118 foi preparado do composto 117 (2,22 g, 0,84 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 96. Rendimento: 2,02 g, 91%.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS 218 E 221 [0756] Os Conjugados 218 e 221 foram preparados de compostos 128 e 114 ou 118 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 20A. SÍNTESE DE CONJUGADOS 218A E 221A
ESQUEMA 43A.
OAc
Figure BR112019021359A2_D0373
TFA/DCM
Figure BR112019021359A2_D0374
Figure BR112019021359A2_D0375
HBTU
113a, n = 2 H2(g). Pd-C
117a, n = 3-----------121a, n = 4 MeOH
TFA
Figure BR112019021359A2_D0376
Figure BR112019021359A2_D0377
Figure BR112019021359A2_D0378
ÕAc
OAc
,.J 'OAc
ESQUEMA 44A.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 187/292
181/217
Figure BR112019021359A2_D0379
í llíá, ή ·; ?
2$ Sa. Γι '· 2
Figure BR112019021359A2_D0380
Figure BR112019021359A2_D0381
Figure BR112019021359A2_D0382
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 111A [0757] O Composto 111a é preparado de ácido 4-(((tercbutoxicarbonil)amino)metil)ftálico (1,13 g, 3,84 mmol) e 88 (5 g, 8,44 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 89. Rendimento: 2,21 g, 49%.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 112A [0758] Uma solução de 111a (2,21 g, 1,87 mmol) em CH2CI2 (40 ml) é lentamente tratada com TFA (5 ml). Após a agitação (2 h), a mistura é concentrada e submetida à cromatografia para render 112a (1,08 g, 47%) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH3OH-CH2CI2).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 113A [0759] O Composto 113a foi preparado do composto 112a (1,08 g, 0,88 mmol) e ácido (2-oxo-2-fenil-1À2-etil)-D-glutâmico (112 mg, 0,39 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 91. Rendimento: 600 mg, 62%.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 188/292
182/217
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 114A [0760] O Composto 114a é preparado do composto 113a com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 92.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 115A [0761] O Composto 115a é preparado de ácido 4-(((tercbutoxicarbonil)amino)metil)ftálico (3,94 g, 13,3 mmol) e 9 (18,2 g, 29,4 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 93. Rendimento: 9,02 g, 53%.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 116A [0762] O Composto 116a é preparado do composto 115a (8 g, 6,3 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 11a. Rendimento: 3,23 g, 39%.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 117A [0763] O Composto 117a foi preparado do composto 116a (3,23 g,
2,45 mmol) e ácido (2-oxo-2-fenil-1À2-etil)glutâmico (192 mg, 1,1 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 95. Rendimento: 2,22 g, 34%.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 118A [0764] O Composto 118a é preparado do composto 117a (2,22 g, 0,84 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 96. Rendimento: 2,02 g, 91%.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS 218A E 221A [0765] Os Conjugados 218a e 22a1 são preparados dos compostos 128 e 114a ou 118a com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 21. SÍNTESE DE CONJUGADO 224
ESQUEMA 45.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 189/292
183/217
Figure BR112019021359A2_D0383
Figure BR112019021359A2_D0384
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS 224 [0766] O conjugado 224 foi preparado de compostos 96 e 130 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 21A. SÍNTESE DE CONJUGADO 224B
ESQUEMA 45A.
Figure BR112019021359A2_D0385
Figure BR112019021359A2_D0386
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 190/292
184/217
Figure BR112019021359A2_D0387
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE COMPOSTOS 224B [0767] O Conjugado 224b é preparado de compostos 96b e 130 com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 22 SÍNTESE DE CONJUGADO 231
ESQUEMA 46
OAc
Figure BR112019021359A2_D0388
Figure BR112019021359A2_D0389
Figure BR112019021359A2_D0390
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 191/292
185/217
Figure BR112019021359A2_D0391
TEA. DWiP DCM
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Figure BR112019021359A2_D0392
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ETAPA 1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 225 [0768] 0 Composto 225 foi preparado de ácido 5-(2aminoacetamido)isoftálico 106 (560 mg, 1,5 mmol) e 9 (2,24 g, 3,6 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para 89. Rendimento de 1,6 g,
80%.
ETAPA 2 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 226 [0769] O Composto 226 foi preparado da mesma maneira que 14. Rendimento de 1,22 g, 78%.
ETAPA 3 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 227 [0770] O Composto 227 foi preparado da mesma maneira que 89, de ácido Z-glutâmico (108 mg, 0,38 mmol) e 226 (1,22 g, 0,92 mmol). Rendimento de 471 mg, 45%.
ETAPA 4 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 228 [0771] O Composto 228 foi preparado da mesma maneira que 14. Rendimento de 460 mg, Quant.
ETAPA 5 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 229 [0772] O Composto 229 foi preparado de 228 (460 mg, 0,17 mmol) e 128 (125 mg, 0,19 mmol) da mesma maneira que 89. Rendimento de 365 mg,
66%.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 192/292
186/217
ETAPA 6 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 231 [0773] O Conjugado 231 foi preparado com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 22A SÍNTESE DE CONJUGADO 231A
ESQUEMA 46A
OAc
Figure BR112019021359A2_D0393
Figure BR112019021359A2_D0394
Site,
Figure BR112019021359A2_D0395
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 193/292
187/217
Figure BR112019021359A2_D0396
ETAPA 1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 225A [0774] O Composto 225a é preparado de ácido 5-(2aminoacetamido)isoftálico 106 (560 mg, 1,5 mmol) e 9 (2,24 g, 3,6 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para 89. Rendimento de 1,6 g, 80%.
ETAPA 2 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 226A [0775] O Composto 226a é preparado da mesma maneira que 14.
Rendimento de 1,22 g, 78%.
ETAPA 3 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 227A [0776] O Composto 227a é preparado da mesma maneira que 89, de ácido Z-glutâmico (108 mg, 0,38 mmol) e 226a (1,22 g, 0,92 mmol). Rendimento de 471 mg, 45%.
ETAPA 4 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 228A [0777] O Composto 228a é preparado da mesma maneira que 14. Rendimento de 460 mg, Quant.
ETAPA 5 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 229A [0778] O Composto 229a é preparado de 228a (460 mg, 0,17 mmol) e 128 (125 mg, 0,19 mmol) da mesma maneira que 89. Rendimento de 365 mg, 66%.
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 194/292
188/217
ETAPA 6 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 231A [0779] O Conjugado 231a é preparado com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 22B SÍNTESE DE CONJUGADO 231B
ESQUEMA 46B
Figure BR112019021359A2_D0397
Figure BR112019021359A2_D0398
ESQUEMA 47B
Figure BR112019021359A2_D0399
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 195/292
189/217
Figure BR112019021359A2_D0400
ETAPA 1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 225B [0780] O Composto 225b é preparado de ácido 5-(2aminoacetamido)isoftálico 106 (560 mg, 1,5 mmol) e 9 (2,24 g, 3,6 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para 89. Rendimento de 1,6 g, 80%.
ETAPA 2 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 226B [0781] O Composto 226b é preparado da mesma maneira que 14. Rendimento de 1,22 g, 78%.
ETAPA 3 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 227B [0782] O Composto 227b é preparado da mesma maneira que 89, de ácido Z-glutâmico (108 mg, 0,38 mmol) e 226b (1,22 g, 0,92 mmol). Rendimento de 471 mg, 45%.
ETAPA 4 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 228B [0783] O Composto 228b é preparado da mesma maneira que 14. Rendimento de 460 mg, Quant.
ETAPA 5 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 229B [0784] O Composto 229b é preparado de 228b (460 mg, 0,17 mmol) e 128 (125 mg, 0,19 mmol) da mesma maneira que 89. Rendimento de 365 mg, 66%.
ETAPA 6 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 231B
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 196/292
190/217 [0785] O Conjugado 231b é preparado com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 1.
EXEMPLO 23. SÍNTESE DE CONJUGADO 233
ESQUEMA 48
Figure BR112019021359A2_D0401
HBTU, DIPEA DMF
Figure BR112019021359A2_D0402
Figure BR112019021359A2_D0403
Figure BR112019021359A2_D0404
Figure BR112019021359A2_D0405
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 232 [0786] O Composto 232 foi preparado do 24 (650 mg, 0,33 mmol) e do composto 69b (175 mg, 0,33 mmol) com o uso de um procedimento idêntico
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191/217 àquele usado para o composto 19. Rendimento: 380 mg, 47%.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 233 [0787] O Composto 233 foi preparado do composto 232 com o uso de procedimentos idênticos àqueles usados para o composto 1.
EXEMPLO 24. SÍNTESE DE CONJUGADO 235
ESQUEMA 49
Figure BR112019021359A2_D0406
HBTU, DIPEA DMF
Figure BR112019021359A2_D0407
Figure BR112019021359A2_D0408
Figure BR112019021359A2_D0409
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ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 234 [0788] O Composto 234 foi preparado do composto 24 (1,1 g, 0,55 mmol) e composto 18 (175 mg, 0,33 mmol) com o uso de um procedimento idêntico àquele usado para o composto 19. Rendimento: 685 mg, 51%.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 235 [0789] O Composto 235 foi preparado do composto 234 com o uso de procedimentos idênticos àqueles usados para o composto 1.
EXEMPLO 25. TESTE IN VIVO DE CONJUGADOS DE SIRNA DE HBV [0790] A infecção de HBV crônica é uma doença mundial com dano progressivo ao fígado. Os tratamentos atuais disponíveis podem reduzir o DNA viral, mas têm pouco efeito nos antígenos virais que contribuem grandemente para a progressão de doença. Desse modo, os siRNAs para alvejar HBV para reduzir os antígenos virais foram projetados.
[0791] O siRNA de HBV quimicamente modificado descrito na Tabela 1 conjugado com ligantes de GaINAc foram testados para atividade in vivo num modelo de camundongo estabelecido de infecção de HBV. No modelo de camundongo AAV-HBV1,2 C57BL/6, a expressão de HBV estável e persistente é alcançada após a injeção de um vetor de vírus adenoassociado (AAV) que codifica uma sequência de comprimento sobregenômico de HBV que leva à expressão hepática de RNA de HBV e proteínas e a secreção de partículas virais e subvirais no sangue.
[0792] O construto de AAV-HBV1,2 usado nestes estudos teve base em detalhes fornecidos em Dion, S., et al., Journal of Virology, 2013, 87(10): 5554-5563. Todos os procedimentos relacionados a animais foram conduzidos de acordo com procedimentos operacionais escritos, de acordo com as Diretrizes sobre Práticas Animais Satisfatórias do Conselho Canadense sobre Cuidados de Animais (CCAC), e aprovados pelo Comitê para Uso e Cuidados
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Institucionais de Animais local (IACUC).
[0793] Cada animal foi inoculado com genomas de vetor 1E11 (VG) do vetor AAV-HBV1,2. Antes do tratamento, todos os animais foram submetidos à sangria de teste e os níveis séricos de HBsAg determinados para animais individuais para confirmar a expressão de HBV estabelecida.
[0794] Tratamento de siRNA: Os grupos de camundongos (tipicamente n = 5) foram administrados com uma dose de 3 mg/kg única de conjugado de siRNA de HBV uma vez no Dia 0 (1 dose por animal) por meio de injeção subcutânea na região escapular. Um grupo de animais administrados apenas com veículo (salino) serviu como controles.
[0795] Coletas: Todos os camundongos foram submetidos à sangria de teste no Dia 0, prior to tratamento, e em pontos no tempo definidos após a administração de artigo de teste (por exemplo, nos dias de estudo 7, 14, 21,28, 35, 42, 49, 56, 63 e 70) para determinar as reduções máximas nos níveis séricos de HBsAg e a duração de atividade farmacológica.
[0796] Análise: Os níveis de HBsAg em amostras de soro foram determinados com o uso do kit Biorad EIA GS HBsAg 3,0 (BioRad, n° de catálogo 32591) de acordo com as instruções do fabricante. O soro agrupado de cada grupo de tratamento foi usado para determinar os níveis de HBsAg médios de grupo em pontos no tempo individuais. Os dados foram analisados e expressados como níveis de HBsAg em relação à linha de base pré-tratamento (% em relação ao Dia 0).
[0797] Resultados: Os resultados do teste de cada um dos siRNAs de HBV quimicamente modificados descritos na Tabela 1 são apresentados na Tabela 2. Os valores representam a % de níveis de HBsAg (em relação à linha de base de Dia 0) nos Dias 7, 14, 21,28, 42, 49, 56 e 70 após o tratamento.
TABELA 1. DUPLEXES DE SIRNA DE HBV QUIMICAMENTE MODIFICADOS
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Número de siRNA SEQ ID NO de fita senso Fita senso 5’-3’ SEQ ID NO de fita antissenso Fita antissenso 5’-3’
1 SEQ ID NO:1 csgsugugCaCUUcg cuucaccu SEQ ID NO:2 asGsgugAaGCgaagUgC acacgsgsuUU
2 SEQ ID NO:3 usgsCaCUUcgcuuc accu SEQ ID NO:4 asGsgugAaGCgaagUgC acascsgU
3 SEQ ID NO:5 usgscaCUUcgcuuc accu SEQ ID NO:6 asGsgugaagcgaagUgÇa cascsgU
4 SEQ ID NO:7 usgscaCUUCgcuuc accu SEQ ID NO:8 asGsgugAagcgaagUgÇ acascsgU
5 SEQ ID NO:9 CscsGuGuGcACU ucGcuuCacc SEQ ID NQ:10 gsGsUgAaGcgAag uGcA cAcGgsusc
6 SEQ ID NO:11 cscsguguGcACUuc gcuucacc SEQ ID NO:12 gsGsugaAgCGaaguGcA cacggsusc
7 SEQ ID NO:13 cscsguGuGcAcUuc gcuucacc SEQ ID NO:14 gsGsugaAgCGaaguGcA cacggsusc
8 SEQ ID NO:15 cscsguguGcACUuc gcuuCacc SEQ ID NO:16 gsGsugaAgCgaaguGcA cacGgsusc
9 SEQ ID NO:17 cscsgugugcACUuc gcuucacc SEQ ID NO:18 gsGsugaagcgaaguGcAc acggsusc
10 SEQ ID NO:19 cscsguguGcacuucg cuucacc SEQ ID NQ:20 gsgsugaAgCGaagugcac acggsusc
11 SEQ ID NO:21 CscsGuGuGcACU ucGcuuCacc SEQ ID NO:22 gsGsUgAaGcgAag uGcA cAcGgsuscUU
12 SEQ ID NO:23 cscsguguGcACUuc gcuucacc SEQ ID NO:24 gsGsugaAgCGaaguGcA cacggsuscUU
13 SEQ ID NO:25 cscsguGuGcAcUuc gcuucacc SEQ ID NO:26 gsGsugaAgCGaaguGcA cacggsuscUU
14 SEQ ID NO:27 cscsguguGcACUuc gcuuCacc SEQ ID NO:28 gsGsugaAgCgaaguGcA cacGgsuscUU
15 SEQ ID NO:29 GsusGcACUucGcu uCacc SEQ ID NQ:30 gsGsUgAaGcgAag uGcA cAcsGsgU
16 SEQ ID NO:31 GsusGcACUucGcu uCacc SEQ ID NO:32 gsGsUgAaGcgAag uGcA cAcsGsg
17 SEQ ID NO:33 GsusGcACUucGcu uCacc SEQ ID NO:34 gsGsUgAaGcgAag uGcA csAscsGsg
18 SEQ ID NO:35 CscsGuGuGcACU ucGcuuCaca SEQ ID NO:36 usGsUgAaGcgAag uGcA cAcGgsusc
19 SEQ ID NO:37 CscsGuGuGcACU ucGcuuCaca SEQ ID NO:38 usGsUgAaGcgAag uGcA cAcGgsuscUU
20 SEQ ID NO:39 cscsguguGcACUuc gcuucaca SEQ ID NQ:40 usGsugaAgCGaaguGcA cacggsuscUU
21 SEQ ID NO:41 cscsguGuGcAcUuc SEQ ID NO:42 usGsugaAgCGaaguGcA
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Número de siRNA SEQ ID NO de fita senso Fita senso 5’-3’ SEQ ID NO de fita antissenso Fita antissenso 5’-3’
gcuucaca cacggsuscUU
22 SEQ ID NO:43 cscsguguGcACUuc gcuuCaca SEQ ID NO:44 usGsugaAgCgaaguGcA cacGgsuscUU
23 SEQ ID NO:45 cscsgugugcACUuc gcuucaca SEQ ID NO:46 usGsugaagcgaaguGcAc acggsuscUU
24 SEQ ID NO:47 gsusGcACUucgcuu caca SEQ ID NO:48 usGsugaAgCGaaguGcA cacsgsgU
25 SEQ ID NO:49 gsusgcACUucgcuu caca SEQ ID NO:50 usGsugaagcgaaguGcAc acsgsgU
26 SEQ ID NO:51 gsusGcaCUucgcuu caca SEQ ID NO:52 usGsugaagcgaaguGcAc acsgsgU
27 SEQ ID NO:53 GsusGcACUucGcu uCaca SEQ ID NO:54 usGsUg AaGcg Aag uGcA cAcsGsg
28 SEQ ID NO:55 uscsgcuuCaCCUcu gcacgucg SEQ ID NO:56 csGsacgUgCAgaggUgA agcgasasgUU
29 SEQ ID NO:57 uscsgcuuCaCCUcu gcacguca SEQ ID NO:58 usGsacgUgCAgaggUgA agcgasasgUU
30 SEQ ID NO:59 uscsgcUuCaCcUcu gcacguca SEQ ID NO:60 usGsacgUgCAgaggUgA agcgasasgUU
31 SEQ ID NO:61 ususCaCCUcugcac guca SEQ ID NO:62 usGsacgUgCAgaggUgA agcsgsaU
32 SEQ ID NO:63 ususcaCCUcugcac guca SEQ ID NO:64 usGsacgugcagaggUgAa gcsgsaU
33 SEQ ID NO:65 ususCaCCUcugcac guca SEQ ID NO:66 usGsacgUgcagaggUgA agcsgsaU
34 SEQ ID NO:67 ususuaCuAgUGCc aUuuguuca SEQ ID NO:68 usGs AaÇa Aa uGg ca Ç u A gUaAascsu
35 SEQ ID NO:69 ususuaCuAgUGCc aUuuguuca SEQ ID NO:70 usGs AaÇa Aa u Gg ca Ç u A gUaAascsuUU
36 SEQ ID NO:71 ususuacuAgUGCca uuuguuca SEQ ID NO:72 usGsaacAaAUggcaCuA guaaascsuUU
37 SEQ ID NO:73 ususuaCuAgUgCca uuuguuca SEQ ID NO:74 usGsaacAaAUggcaCuA guaaascsuUU
Nucleotídeos de 2’-0-metila = minúsculo; Nucleotídeos 2’-fluoro = MAIÚSCULO; Aglutinante fosforotioato = s; Não modificado = MAIÚSCULO
TABELA 2. NÍVEIS DE HBSAG DE SORO EM CAMUNDONGOS
APÓS A ADMINISTRAÇÃO SUBCUTÂNEA ÚNICA (3 mg/kg) DE siRNA
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CONJUGADO DE GaINAc DA TABELA 1.
Dados de HBsAg EXPRESSADOS COMO PORCENTAGEM DE
VALORES DE LINHA DE BASE (DIA 0)
Número de siRNA N° de Composto Ligante Dia 7 Dia 14 Dia 21 Dia 28 Dia 42 Dia 49 Dia 56 Dia 70
Solução Salina 95,7 118,6 101,0 111,4 115,3 112,2 106,5
1 145 3,1 1,0 22,8 1,3 3,2 7,3
2 145 1,3 0,5 0,4 0,7 3,4 6,5
5 235 12,7 7,0 9,6 21,3 59,7 74,6 98,8
5 233 16,6 8,2 11,0 12,6 24,4 32,2 60,3
5 145 4,3 1,2 1,7 2,4 11,9 24,5
6 233 20,1 10,4 10,9 13,5 30,8 46,0 67,5
7 233 20,7 12,4 10,5 13,6 24,9 46,2 77,0
8 233 18,1 10,5 11,5 12,1 26,0 37,6 64,9
9 145 10,0 2,7 2,0 3,6 6,8 17,0
10 145 16,7 16,7 16,0 16,7 74,4 97,3
11 233 20,5 14,8 16,0 23,9 65,2 80,2
12 233 18,4 11,6 12,2 14,1 23,6 67,1 72,6
12 145 5,1 1,1 1,2 1,0 2,2 4,5 8,2
13 233 20,7 10,1 11,6 13,2 21,1 39,9 72,3
14 233 16,5 8,0 11,0 11,8 28,8 48,0 90,0
15 145 6,3 3,5 8,4 11,4 89,7 83,1
16 145 4,0 3,4 9,7 14,8 85,1 88,9
17 145 2,4 0,6 0,7 1,1 6,3 15,1
18 233 2,5 1,0 1,3 2,6 11,2 24,5 55,6
19 233 1,9 0,8 1,5 2,6 6,5 12,9 23,4
19 145 1,7 0,6 0,7 1,4 3,8 7,3 15,0
19 200 1,8 0,9 1,4 2,2 5,4 10,2 27,5
19 197 2,0 0,8 1,4 2,1 3,1 8,4 14,2
19 194 2,8 1,8 2,2 4,0 10,7 26,0 37,3
20 145 2,7 0,5 0,7 1,0 4,7 9,3 11,3
20 215 3,4 1,5 1,7 1,7 1,9 4,5 6,2
20 194 1,4 0,5 0,3 0,7 1,2 3,0 6,0
20 197 3,4 0,6 1,0 1,3 2,1 4,9 8,2
20 212 3,2 0,8 1,0 1,9 2,4 4,9 7,5
20 191 3,3 1,4 1,4 2,1 1,9 1,2 3,4
21 215 2,5 1,1 1,9 2,6 3,8 7,8 9,8
22 233 2,5 2,0 3,1 6,1 12,2 30,4 61,9
23 215 1,6 0,3 0,3 0,3 0,4 1,0 1,7
24 197 1,9 0,4 0,4 0,4 0,8 1,7 3,2
25 197 2,1 2,2 0,9 0,5 0,9 2,0 2,2
27 145 0,3 0,3 1,6 7,4 71,1 100,1
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Número de siRNA N° de Composto Ligante Dia 7 Dia 14 Dia 21 Dia 28 Dia 42 Dia 49 Dia 56 Dia 70
28 145 11,4 6,7 7,1 9,6 20,8 27,1 36,7
29 145 2,9 1,7 2,1 3,3 7,9 21,4 18,2
30 145 10,0 3,8 3,5 5,9 13,7 19,0 28,8
34 233 13,2 7,4 8,9 16,8 55,2 60,5
35 233 11,6 8,5 14,0 19,5 58,4 82,0
36 145 11,3 8,5 11,6 12,5 36,6 49,7 64,7
37 145 27,8 21,6 25,9 31,1 49,9 43,3 64,5
[0798] A Tabela 2 identifica os números de composto (coluna 2) e o oligonucleotídeo correspondente (coluna 1) para os conjugados de siRNA de HBV que foram testados.
EXEMPLO 26 SÍNTESE DE CONJUGADO 320
ESQUEMA 50 PREPARAÇÃO DE AGLUTINANTE ATIVADO
Figure BR112019021359A2_D0410
Figure BR112019021359A2_D0411
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-BENZIL-3A,6A-DIMETILTETRAHIDRO-1H-FURO[3,4-C]PIRROL-1,3(3AH)-DIONA RACÊMICA (CIS) 301 [0799] A uma solução resfriada (0°C) de 3,4-dimetilfuran-2,5-diona (3 g, 24 mmol) e N-benzil-1-metoxi-N-((trimetilsilil)metil)metanamina (7 g, 29,8 mmol) em diclorometano (75 ml) foi lentamente adicionado ácido trifluoroacético (75 μΙ). A agitação de um dia para o outro permitiu que a solução se aquecesse lentamente até temperatura ambiente como o banho de gelo derretido. A mistura de reação foi concentrada até a secura, dissolvida em acetato de etila (100 ml), lavada com bicarbonate de sódio saturado (2 x 100 ml), secada em sulfato de
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198/217 magnésio, filtrada e concentrada até a secura. A purificação por cromatografia de coluna em gel de silica (gradiente: 20% de acetato de etila em hexanos para 100% de acetato de etila) proporcionou (3aR,6aS)-5-benzil-3a,6a-dimetiltetrahidro-1 H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona como um óleo amarelo (3,5 g, 56%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE (1-BENZIL-3,4DIMETILPIRROLIDINA-3,4-DI-IL)DIMETANOL RACÊMICO (CIS) 302 [0800] A uma solução resfriada (0°C) de (3aR,6aS)-5-benzil-3a,6adimetiltetra-hidro-1 H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona (3,5 g, 13,4 mmol) em éter dietílico anidro (50 ml) foi adicionado lentamente hidreto de lítio e péletes de alumínio (1,5 g, 40 mmol) por três porções. A solução foi agitada de um dia para o outro aquecendo até temperatura ambiente como o banho de água com gelo derretido. Mediante completação, a reação foi resfriada a 0°C e arrefecida muito lentamente com 1,5 ml de NaOH 5 M seguido por 1,5 ml de água. Agitou-se por 30 minutos, então, adicionou-se sulfato de magnésio e filtro. O filtrado foi concentrado para proporcionar ((3R,4S)-1 -benzil-3,4-dimetilpirrolidina-3,4-diil)dimetanol como um óleo incolor (2,7 g).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-diIL)DIMETANOL RACÊMICO (CIS) 303 [0801] A uma solução de ((3R,4S)-1 -benzil-3,4-dimetilpirrolidina-
3.4- di-il)dimetanol (10 g, 40 mmol) em metanol (10 ml) foi adicionado 10% de paládio em carvão ativado úmido (1 g). A solução foi agitada vigorosamente sob uma atmosfera de hidrogênio por 16 horas. Mediante completação a solução foi filtrada através de Celite, e concentrada até a secura para proporcionar ((3R,4S)-
3.4- dimetilpirrolidina-3,4-di-il)dimetanol como um sólido incolor (5,5 g, 86%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 10-(3,4-BIS(HIDROXIMETIL)-3,4DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA (RACÊMICO) 304 [0802] Uma solução de 3 (1,3 g, 8,2 mmol) e sebacato de
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199/217 monometila (1,8 g, 8,2 mmol) em CH2CI2 (100 ml) foi tratada com HBTII (3,41 g, 9,02 mmol) e base de Hünig (5,71 ml, 32,8 mmol). Após a agitação de urn dia para o outro a mistura foi lavada com NaHCOs (sat. aq.), água e salmoura, então, secada (MgSO4), filtrada e concentrada. O material bruto foi submetido à cromatografia (gradiente: 0% de CH3OH-CH2CI2 a 20%) para render 4 (1,8 g, 61%).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)-METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA (RACÊMICO) 305 [0803] Uma solução de 304 (1,8 g, 5,0 mmol) e cloreto de 4,4’dimetoxitritila (1,7 g, 5,0 mmol) em piridina (180 ml) foi agitada de um dia para o outro. A piridina foi, então, removida sob pressão reduzida e o material bruto foi submetido à cromatografia (gradiente: 0% de CH3OH-CH2CI2 para 10%) para render 5 (1,4 g, 42%) como um óleo amarelo.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)10-OXODECANOATO DE LÍTIO (RACÊMICO) 306 [0804] A uma solução de composto 305 (3,0 g, 4,6 mmol) em THF (50 ml) e água (50 ml) foi adicionado hidróxido de lítio (121 mg, 5,0 mmol). A solução foi agitada por 4 horas à temperatura ambiente, então, concentrada para remover o THF. A solução aquosa restante foi secada por congelamento de um dia para o outro para produzir um sólido rosa pálido (2,9 g, quantitativo). O Composto 306 foi preparado como uma mistura de dois diastereoisômeros c/s.
ESQUEMA 51 SÍNTESE DE GALACTOSAMINA PERACETILADA 307
Figure BR112019021359A2_D0412
NHAc
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200/217 [0805] Cloridrato de D-galactosamina (250 g, 1,16 mol) em piridina (1,5 I) foi tratada com anidrido acético (1,25 I, 13,2 mol) por 45 minutos. Após a agitação de um dia para o outro, a mistura de reação foi dividida em três porções de 1 I. Cada porção de 1 I foi vertida em 3 I de água gelada e misturada por uma hora. Após a mistura, os sólidos foram removidos por filtração, combinados, congelados sobre nitrogênio líquido e, então, liofilizados por cinco dias para render galactosamina peracetilada 7 (369,4 g, 82%) como um sólido branco. Rf (0,58, 10% de MeOH-CH2CI2).
ESQUEMA 52 SÍNTESE DE MONÔMERO DE GALNAC
Figure BR112019021359A2_D0413
. ~0Ac AcO I
AcOV-Ãx0^
NHAc
307
OAc AcO I Ac0V=Ã^0 NHAc
310
Figure BR112019021359A2_D0414
o
Figure BR112019021359A2_D0415
n3
H2(g), Pd-C AcO ?AC —-TFA NHAc 2 TFA
EtOAc 311
ETAPA 1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 309 [0806] Uma solução de 2-[2-(2-cloroetoxi)]etanol 308 (100 g, 593 mmol) em água (1 I) foi tratada com NaNs (77 g, 1,19 mol) e aquecida (90°C). Após a agitação (72 horas) a solução foi resfriada (RT) e extraída (4x) com CH2CI2. Os produtos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secados (MgSO4), filtrados, concentrados e usados sem processamento adicional. O Composto 9 (88,9 g, 86%) foi obtido como um óleo amarelo pálido.
ETAPA 2 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 310 [0807] Uma solução de 7 (2,76 g, 7,1 mmol) e 309 (1,37 g, 7,8 mmol) em 1,2-dicloroetano (40 ml) foi tratada com Sc(OTf)s (174 mg, 0,36 mmol) e aquecida (85°C). Após a agitação (2 horas) a mistura foi resfriada (RT) e bruscamente arrefecida pela adição de TEA (4 ml) e concentrada. O material bruto foi submetido à cromatografia para render 310 (3,03 g, 85%) como uma espuma amarela pálida.
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201/217
ETAPA 3 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 311 [0808] Uma solução de 310 (3,02 g, 5,99 mmol) e Pd/C (300 mg, 10% de carregamento de Pd - suporte úmido) em EtOAc (30 ml) foi tratada com TFA (576 pl, 7,5 mmol). A mistura de reação foi purgada com gás de hidrogênio (45 min), então, purgada com gás de nitrogênio (10 min), então, filtrada através de celite. O filtrado foi concentrado e, então, submetido à cromatografia para render 311 (2,67 g, 75%) como uma espuma marrom.
ESQUEMA 53 SÍNTESE DE NÚCLEO AROMÁTICO
Figure BR112019021359A2_D0416
o o
312 313
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1À2ETIL)AMINO)ACETAMIDO)-ISOFTALATO DE DIMETILA 312 [0809] Uma solução de 5-aminoisoftalato de dimetila (5 g, 24 mmol), Z-Gly-OH (5 g, 24 mmol), EDC (5 g, 26,3 mmol), HOBt (3,6 g, 26,3 mmol), NMM (2,9 ml, 26,3 mmol) em DMF (50 ml) foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante completação, a mistura de reação foi diluída com acetato de etila (250 ml) e lavada com cada HCI 1 M (2 x 100 ml), bicarbonate de sódio saturado (1 x 100 ml) e salmoura (2 x 100 ml). Secar em sulfato de magnésio, filtrar e concentrar até a secura para proporcionar 5-(2-((2oxo-2-fenil-1À2-etil)amino)acetamido)isoftalato de dimetila como um sólido incolor (7,2 g, 79%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1Ã2ETIL)AMINO)ACETAMIDO)ISOFTÁLICO 313 [0810] A uma solução de 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2etil)amino)acetamido)isoftalato de metila (7,2 g) em metanol (25 ml) e THF (25 ml) foi adicionado NaOH 1 M (25 ml). A solução foi agitada à temperatura
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202/217 ambiente por 2 horas, então, concentrado para remover THF e MeOH. A solução aquosa restante foi diluída com água (75 ml), resfriada num banho de água gelada e acidificada a pH = 1 com HCI 6 Μ. O sólido foi filtrado e lavado com água (3 x 100 ml). O sólido foi secado por congelamento para proporcionar ácido
5-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2-etil)amino)acetamido)-isoftálico (6,9 g, quantitativo).
ESQUEMA 54: PREPARAÇÃO DE TETRÂMERO
OAc
Figure BR112019021359A2_D0417
h2, tfa
AcO/
Pd/C, EtOAc
OAc
NHAc
Figure BR112019021359A2_D0418
315, n = 2
Figure BR112019021359A2_D0419
H
OAc
Figure BR112019021359A2_D0420
Figure BR112019021359A2_D0421
NHCBz
HBTU
HhL /-x Y nh2-tfa o
Figure BR112019021359A2_D0422
Figure BR112019021359A2_D0423
ETAPA 1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 314 [0811] Uma solução de 313 (2,09 g, 5,6 mmol) e 311 (8,34 g, 14,07 mmol) em CH2CI2 (150 ml) foi tratada com HBTU (6,4 g, 16,9 mmol) e base de
Hünig (7,35 ml, 42,2 mmol). Após a agitação (de um dia para o outro), a mistura de reação foi vertida em NaHCO3(sat. aq.), então, lavada com água e salmoura, secada (MgSO4), filtrada e concentrada. O material bruto foi submetido à cromatografia (gradiente de 1 a 12% de CH3OH-CH2CI2) para render 6 (3,97 g,
55%) como uma espuma amarela pálida.
ETAPA 2 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 315 [0812] Composto 314 (3,92 g, 3,07 mmol), Pd/C (400 mg, 10% de carregamento - suporte úmido) e ácido thfluoroacético (308 pl, 4 mmol) foi
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203/217 purgada com H2. Após a agitação sob H2 (de um dia para o outro), a mistura foi purgada com N2 (15 a 20 min), então, filtrada através de celite e concentrada. O material bruto foi submetido à cromatografia para render 7 (3,36 g, 86%) como uma espuma colorida de branco para creme.
ETAPA 3 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 316 [0813] O Composto 316 foi preparado da mesma maneira que 314, de ácido Z-glutâmico (306 mg, 1,09 mmol) e 315 (3,3 g, 2,6 mmol). Rendimento de 1,66 g, 60%.
ETAPA 4 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 317 [0814] O Composto 317 foi preparado da mesma maneira que 315. Rendimento de 1,65 g, Quant.
ESQUEMA 55 PREPARAÇÃO DE CONJUGADO COMPLETO
Figure BR112019021359A2_D0424
Figure BR112019021359A2_D0425
Figure BR112019021359A2_D0426
ETAPA 1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 318
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204/217 [0815] Uma solução de 317 (1,91 g, 0,75 mmol) em CH2CI2 (100 ml) foi tratada primeiro com base de Hünig (392 μΙ, 2,25 mmol), então, 6 (uma mistura de dois c/s-diastereoisômeros, 509 mg, 0,79 mmol) seguida por HBTU (356 mg, 0,94 mmol). Após a agitação (de um dia para o outro), uma solução foi vertida em NaHCOs (sat. aq.), então, lavada com água e salmoura, secada (MgSO4), filtrada e concentrada. O material bruto foi submetido à cromatografia para render 318 (1,19 g, 52%) como uma espuma branca.
ETAPA 2 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 319 [0816] Uma solução de 318 (1,19 g, 0,39 mmol) em 1,2 dicloroetano (100 ml) foi tratada com TEA (542 μΙ, 3,9 mmol), DMAP (238 mg, 1,95 mmol) e anidrido succínico (195 mg, 1,95 mmol) e aquecida (85°C). Após a agitação (2,5 horas), a solução foi removida do calor e tratada com CH3OH (10 ml) e permitiuse que fosse agitada (1 hora). Após a agitação, a mistura foi vertida em NaHCOs (sat. aq.), então, lavada com salmoura, secada (MgSÜ4), filtrada e concentrada. O resíduo obtido foi usado sem processamento adicional. Rendimento = 1,4 g, Quant.
ETAPA 3 PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 320 [0817] O succinato 319 foi carregado em 10OOA CPG (vidro de poro de controle) de LCAA (aminoalquila de cadeia longa) com o uso de química de acoplamento de amida padrão. Uma solução de di-isopropilcarbodi-imida (52,6 pmol), N-hidroxissuccinimida (0,3 mg, 2,6 pmol) e pihdina (10 μΙ) em acetonitrila anidra (0,3 ml) foi adicionada a 319 (20,6 mg, 8 pmol) em diclorometano anidro (0,2 ml). Esta mistura foi adicionada a CPG de LCAA (183 mg). A suspensão foi suavemente misturada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante desaparecimento de 319 (HPLC), a mistura de reação foi filtrada e o CPG foi lavado com 1 ml de cada diclorometano, acetonitrila, uma solução de 5% de anidrido acético / 5% de N-metilimidazol / 5% de piridina em THF, então, THF, acetonitrila e diclorometano. O CPG foi, então, secado de um dia para o outro
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205/217 sob alto vácuo. O carregamento foi determinado por ensaio de DMTr padrão por UV/Vis (504 nm) para ser 19 pmol/g. O suporte sólido de CPG carregado por GaINAc resultante foi empregado em síntese de oligonucleotídeo automatizada com o uso de procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeo seguida por remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concomitante) proporcionou o conjugado de GaINAc-oligonucleotídeo 320.
EXEMPLO 27 SÍNTESE DE CONJUGADO 520
ESQUEMA 56 PREPARAÇÃO DE AGLUTINANTE ATIVADO
Figure BR112019021359A2_D0427
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-BENZIL-3A,6A-DIMETILTETRAHIDRO-1H-FURO[3,4-C]PIRROL-1,3(3AH)-DIONA RACÊMICA (CIS) 301 [0818] A uma solução resfriada (0°C) de 3,4-dimetilfuran-2,5-diona (3 g, 24 mmol) e N-benzil-1-metoxi-N-((trimetilsilil)metil)metanamina (7 g, 29,8 mmol) em diclorometano (75 ml) foi lentamente adicionado ácido trifluoroacético (75 μΙ). A agitação de um dia para o outro permitiu que a solução se aquecesse lentamente até temperatura ambiente como o banho de gelo derretido. A mistura de reação foi concentrada até a secura, dissolvida em acetato de etila (100 ml), lavada com bicarbonate de sódio saturado (2 x 100 ml), secada em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura. A purificação por cromatografia de coluna em gel de silica (gradiente: 20% de acetato de etila em hexanos para 100% de acetato de etila) proporcionou (3aR,6aS)-5-benzil-3a,6a-dimetiltetra
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206/217 hidro-1 H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona como um óleo amarelo (3,5 g, 56%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE (1-BENZIL-3,4DIMETILPIRROLIDINA-3,4-di-il)dimetanol racêmico (cis) 302 [0819] A uma solução resfriada (0°C) de (3aR,6aS)-5-benzil-3a,6adimetiltetra-hidro-1 H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona (3,5 g, 13,4 mmol) em éter dietílico anidro (50 ml) foi adicionado lentamente hidreto de lítio e péletes de alumínio (1,5 g, 40 mmol) por três porções. A solução foi agitada de um dia para o outro aquecendo até temperatura ambiente como o banho de água com gelo derretido. Mediante completação, a reação foi resfriada a 0°C e arrefecida muito lentamente com 1,5 ml de NaOH 5 M seguido por 1,5 ml de água. Agitou-se por 30 minutos, então, adicionou-se sulfato de magnésio e filtro. O filtrado foi concentrado para proporcionar ((3R,4S)-1-benzil-3,4-dimetilpirrolidina-3,4-diil)dimetanol como um óleo incolor (2,7 g).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-diil)dimetanol racêmico (cis) 303 [0820] A uma solução de ((3R,4S)-1-benzil-3,4-dimetilpirrolidina-
3.4- di-il)dimetanol (10 g, 40 mmol) em metanol (10 ml) foi adicionado 10% de paládio em carvão ativado úmido (1 g). A solução foi agitada vigorosamente sob uma atmosfera de hidrogênio por 16 horas. Mediante completação a solução foi filtrada através de Celite, e concentrada até a secura para proporcionar ((3R,4S)-
3.4- dimetilpirrolidina-3,4-di-il)dimetanol como um sólido incolor (5,5 g, 86%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 10-(3,4-BIS(HIDROXIMETIL)-3,4DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA (RACÊMICO) 304 [0821] Uma solução de 3 (1,3 g, 8,2 mmol) e sebacato de monometila (1,8 g, 8,2 mmol) em CH2CI2 (100 ml) foi tratada com HBTU (3,41 g, 9,02 mmol) e base de Hünig (5,71 ml, 32,8 mmol). Após a agitação de um dia para o outro a mistura foi lavada com NaHCOs (sat. aq.), água e salmoura, então,
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207/217 secada (MgSO4), filtrada e concentrada. O material bruto foi submetido à cromatografia (gradiente: 0% de CH3OH-CH2CI2 a 20%) para render 4 (1,8 g, 61%).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)-METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA (RACÊMICO) 305 [0822] Uma solução de 304 (1,8 g, 5,0 mmol) e cloreto de 4,4’dimetoxitritila (1,7 g, 5,0 mmol) em piridina (180 ml) foi agitada de um dia para 0 outro. A piridina foi, então, removida sob pressão reduzida e o material bruto foi submetido à cromatografia (gradiente: 0% de CH3OH-CH2CI2 para 10%) para render 5 (1,4 g, 42%) como um óleo amarelo.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)10-OXODECANOATO DE LÍTIO (RACÊMICO) 306 [0823] A uma solução de composto 305 (3,0 g, 4,6 mmol) em THF (50 ml) e água (50 ml) foi adicionado hidróxido de lítio (121 mg, 5,0 mmol). A solução foi agitada por 4 horas à temperatura ambiente, então, concentrada para remover o THF. A solução aquosa restante foi secada por congelamento de um dia para o outro para produzir um sólido rosa pálido (2,9 g, quantitativo). O Composto 306 foi preparado como uma mistura de dois diastereoisômeros c/s.
ESQUEMA 57 SÍNTESE DE GALACTOSAMINA PERACETILADA 507
AcO /0Ac
LV-o
AcO OAc
NHAc [0824] Clohdrato de galactosamina (250 g, 1,16 mol) em piridina (1,5 I) é tratada com anidrido acético (1,25 I, 13,2 mol) por 45 minutos. Após a agitação de um dia para o outro, a mistura de reação é dividida em três porções
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208/217 de 1 I. Cada porção de 1 I é vertida em 3 I de água gelada e misturada por uma hora. Após a mistura, os sólidos são removidos por filtração, combinados, congelados sobre nitrogênio líquido e, então, liofilizados por cinco dias para render galactosamina peracetilada 507 (369,4 g, 82%) como um sólido branco.
Rf (0,58, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ESQUEMA 58 SÍNTESE DE MONÔMERO DE GALNAC
Sc(OTf)3
------►
OAc AcO I Acoè¥-VOAc NHAc
507
508
NaN3 h2o z 3
509 « ~0Ac AcO I
AcOVY-V°'(^^o^\x' N3
NHAc ' '2
510
H2(g), Pd-C
TFA EtOAc
OAc
AcO I
Α«ο5=3^Ο^.ο^ΝΗ2
NHAc ' 2 TFA
511
ETAPA 1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 509 [0825] Uma solução de 2-[2-(2-cloroetoxi)]etanol 508 (100 g, 593 mmol) em água (1 I) é tratada com NaNs (77 g, 1,19 mol) e aquecida (90°C).
Após a agitação (72 horas) a solução é resfriada (RT) e extraída (4x) com
CH2CI2. Os produtos orgânicos combinados são lavados com salmoura, secados (MgSO4), filtrados, concentrados e usados sem processamento adicional. O
Composto 509 (88,9 g, 86%) é obtido como um óleo amarelo pálido.
ETAPA 2 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 510 [0826] Uma solução de 507 (2,76 g, 7,1 mmol) e 509 (1,37 g, 7,8 mmol) em 1,2-dicloroetano (40 ml) é tratada com Sc(OTf)s (174 mg, 0,36 mmol) e aquecida (85°C). Após a agitação (2 horas), a mistura é resfriada (RT) e bruscamente arrefecida pela adição de TEA (4 ml) e concentrada. O material bruto é submetido à cromatografia para render 510 (3,03 g, 85%) como uma espuma amarela pálida.
ETAPA 3 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 511 [0827] Uma solução de 510 (3,02 g, 5,99 mmol) e Pd/C (300 mg, 10% de carregamento de Pd - suporte úmido) em EtOAc (30 ml) é tratada com
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209/217
TFA (576 μΙ, 7,5 mmol). A mistura de reação é purgada com gás de hidrogênio (45 min), então, purgada com gás de nitrogênio (10 min), então, filtrada através de celite. O filtrado é concentrado e, então, submetido à cromatografia para render 511 (2,67 g, 75%) como uma espuma marrom.
ESQUEMA 59 SÍNTESE DE NÚCLEO AROMÁTICO
Figure BR112019021359A2_D0428
o o
312 313
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1À2ETIL)AMINO)ACETAMIDO)-ISOFTALATO DE DIMETILA 312 [0828] Uma solução de 5-aminoisoftalato de dimetila (5 g, 24 mmol), Z-Gly-OH (5 g, 24 mmol), EDC (5 g, 26,3 mmol), HOBt (3,6 g, 26,3 mmol), NMM (2,9 ml, 26,3 mmol) em DMF (50 ml) foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante completação, a mistura de reação foi diluída com acetato de etila (250 ml) e lavada com cada HCI 1 M (2 x 100 ml), bicarbonate de sódio saturado (1 x 100 ml) e salmoura (2 x 100 ml). Secar em sulfato de magnésio, filtrar e concentrar até a secura para proporcionar 5-(2-((2oxo-2-fenil-1À2-etil)amino)acetamido)isoftalato de dimetila como um sólido incolor (7,2 g, 79%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1Ã2ETIL)AMINO)ACETAMIDO)ISOFTÁLICO 313 [0829] A uma solução de 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2etil)amino)acetamido)isoftalato de metila (7,2 g) em metanol (25 ml) e THF (25 ml) foi adicionado NaOH 1 M (25 ml). A solução foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas, então, concentrado para remover THF e MeOH. A solução aquosa restante foi diluída com água (75 ml), resfriada num banho de água gelada e acidificada a pH = 1 com HCI 6 Μ. O sólido foi filtrado e lavado com
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210/217 água (3 x 100 ml). O sólido foi secado por congelamento para proporcionar ácido
5-(2-((2-oxo-2-fenil-1À2-etil)amino)acetamido)-isoftálico (6,9 g, quantitativo).
ESQUEMA 60: PREPARAÇÃO DE TETRÂMERO
Figure BR112019021359A2_D0429
O
OAc OAc
Figure BR112019021359A2_D0430
ETAPA 1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 514 [0830] Uma solução de 313 (2,09 g, 5,6 mmol) e 511 (8,34 g, 14,07 mmol) em CH2CI2 (150 ml) é tratada com HBTU (6,4 g, 16,9 mmol) e base de Hünig (7,35 ml, 42,2 mmol). Após a agitação (de um dia para o outro), a mistura de reação é vertida em NaHCO3(sat. aq.), então, lavada com água e salmoura, secada (MgSO4), filtrada e concentrada. O material bruto é submetido à cromatografia (gradiente de 1 a 12% de CH3OH-CH2CI2) para render 6 (3,97 g, 55%) como uma espuma amarela pálida.
ETAPA 2 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 515 [0831] O Composto 514 (3,92 g, 3,07 mmol), Pd/C (400 mg, 10% de carregamento - suporte úmido) e ácido trifluoroacético (308 pl, 4 mmol) é purgada com H2. Após a agitação sob H2 (de um dia para o outro), a mistura é purgada com N2 (15 a 20 min), então, filtrada através de celite e concentrada. O material bruto é submetido à cromatografia para render 7 (3,36 g, 86%) como
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211/217 uma espuma colorida de branco para creme.
ETAPA 3 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 516 [0832] O Composto 516 é preparado da mesma maneira que 514, de ácido Z-glutâmico (306 mg, 1,09 mmol) e 515 (3,3 g, 2,6 mmol). Rendimento de 1,66 g, 60%.
ETAPA 4 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 517 [0833] O Composto 517 é preparado da mesma maneira que 515.
Rendimento de 1,65 g, Quant.
ESQUEMA 61 PREPARAÇÃO DE CONJUGADO COMPLETO
Figure BR112019021359A2_D0431
ETAPA 1 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 518 [0834] Uma solução de 517 (1,91 g, 0,75 mmol) em CH2CI2 (100 ml)
Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 218/292
212/217 é tratada primeiro com base de Hünig (392 μΙ, 2,25 mmol), então, 306 (uma mistura de dois c/s-diastereoisômeros, 509 mg, 0,79 mmol) seguida por HBTll (356 mg, 0,94 mmol). Após a agitação (de um dia para o outro), uma solução foi vertida em NaHCOs (sat. aq.), então, lavada com água e salmoura, secada (MgSOR filtrada e concentrada. O material bruto é submetido à cromatografia para render 518 (1,19 g, 52%) como uma espuma branca.
ETAPA 2 PREPARAÇÃO DE COMPOSTO 519 [0835] Uma solução de 518 (1,19 g, 0,39 mmol) em 1,2 dicloroetano (100 ml) é tratada com TEA (542 μΙ, 3,9 mmol), DMAP (238 mg, 1,95 mmol) e anidrido succínico (195 mg, 1,95 mmol) e aquecida (85°C). Após a agitação (2,5 horas), a solução é removida do calor e tratada com CHsOH (10 ml) e permitiuse que fosse agitada (1 hora). Após a agitação, a mistura é vertida em NaHCOs (sat. aq.), então, lavada com salmoura, secada (MgSOR filtrada e concentrada. O resíduo obtido é usado sem processamento adicional. Rendimento = 1,4 g, Quant.
ETAPA 3 PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 520 [0836] O succinato 519 é carregado em 1000 A CPG (vidro de poro de controle) de LCAA (aminoalquila de cadeia longa) com o uso de química de acoplamento de amida padrão. Uma solução de di-isopropilcarbodi-imida (52,6 pmol), N-hidroxissuccinimida (0,3 mg, 2,6 pmol) e pihdina (10 μΙ) em acetonitrila anidra (0,3 ml) é adicionada a 519 (20,6 mg, 8 gmol) em diclorometano anidro (0,2 ml). Esta mistura é adicionada a CPG de LCAA (183 mg). A suspensão foi suavemente misturada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante desaparecimento de 519 (HPLC), a mistura de reação é filtrada e o CPG é lavado com 1 ml de cada diclorometano, acetonitrila, uma solução de 5% de anidrido acético / 5% de N-metilimidazol / 5% de pihdina em THF, então, THF, acetonitrila e diclorometano. O CPG é, então, secado de um dia para o outro sob alto vácuo. O carregamento foi determinado por ensaio de DMTr padrão por UV/Vis (504
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213/217 nm) para ser 19 pmol/g. O suporte sólido carregado por GaINAc resultante é empregado em síntese de oligonucleotídeo automatizada com o uso de procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeo seguida por remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concomitante) proporciona o conjugado de GaINAc-oligonucleotídeo 520.
EXEMPLO 28. TESTE IN VIVO DE CONJUGADOS DE SIRNA DE TTR [0837] Composto 320, em que R2 compreende o siRNA de TTR modificado descrito na Tabela 3, foi testado por atividade in vivo num modelo de tipo selvagem de knock-down de TTR. No presente exemplo, o Composto 320, em que R2 compreende o siRNA de TTR modificado, é demonstrado como um tratamento possível para a doença órfã de TTR (Transtirretina) amiloidose. Naqueles afligidos com esta doença, o desenovelamento e agregação da proteína Transtirretina é associado à progressão de doença. Usando-se siRNAconjugado de GaINAc, a quantidade de proteína desenovelada/agregada no paciente pode ser reduzida, com um resultado potencial de interromper a progressão da doença. Consequentemente, certas modalidades fornecem o composto 320, em que o R2 compreende o siRNA de TTR modificado, e usa do mesmo para tratar transtirretina amiloidose.
TABELA 3. DUPLEXES DE SIRNA DE TTR QUIMICAMENTE
MODIFICADOS
Número de siRNA SEQ ID NO de fita senso Fita senso 5’-3’ SEQ ID NO de fita antissenso Fita antissenso 5’-3’
40 SEQ ID NO:75 AsascacUGUucuu GCuCuauaA SEQ ID NO:76 usUsalJaGaGcAagaAc AcUgLIususu
[0838] Nucleotídeos de 2’-O-metila = minúsculo; Nucleotídeos 2’fluoro = MAIÚSCULO; Aglutinante fosforotioato = s; Não modificado =
MAIÚSCULO [0839] Tanto a sequência de siRNA de TTR quanto o modelo
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214/217 animal foram descritos por Nair et al., J. Am. Chem. Soc., 36(49), 16958-16961 (2014). Todos os procedimentos relacionados a animais foram conduzidos de acordo com procedimentos operacionais escritos, de acordo com as Diretrizes sobre Práticas Animais Satisfatórias do Conselho Canadense sobre Cuidados de Animais (CCAC), e aprovados pelo Comitê para Uso e Cuidados Institucionais de Animais local (IACUC).
[0840] Tratamento de siRNA: Os camundongos C57BL/6 fêmea (n = 4) foram administrados com uma dose de 2 mg/kg única de composto 320 (R2 compreende o siRNA de TTR modificado) uma vez no Dia 0 (1 dose por animal) por meio de injeção subcutânea na região escapular. Um grupo de animais administrados apenas com veículo (PBS) serviu como controles.
[0841] Coletas: Todos os animais foram submetidos à sangria de teste em pontos no tempo definidos após a administração de artigo de teste (dias 2, 4, 7, 9, 14 e 21) para determinar as reduções máximas em níveis de TTR de plasma e a duração de atividade farmacológica.
[0842] Análise: Os níveis de proteína TTR em amostras de plasma foram determinados com o uso do kit Abnova Prealbumin (Mouse) ELISA (Cedar Lane, número de catálogo KA2070) de acordo com as instruções do fabricante. Os valores de proteína de plasma de TTR foram calculados para as amostras de plasma individual e a média de cada grupo foi determinada. A partir destas médias, os níveis de proteína de TTR em relação ao controle (% relativa aos animais tratados com PBS) foram determinados.
[0843] Resultados: Os resultados do teste são apresentados na Tabela 4. Os valores representam % de níveis de proteína de TTR (em relação ao Controle de PBS) nos Dias 2, 4, 7, 9, 14 e 21 após o tratamento.
TABELA 4. NÍVEIS DE PROTEÍNA DE TTR DE PLASMA EM CAMUNDONGOS APÓS A ADMINISTRAÇÃO SUBCUTÂNEA ÚNICA (2 MG/KG) DE SIRNA CONJUGADO DE GALNAC DA TABELA 3. OS DADOS
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215/217
DE PROTEÍNA DE TTR EXPRESSADOS COMO PORCENTAGEM DE
VALORES DE CAMUNDONGO TRATADO COM PBS
Número de siRNA N° de Composto Ligante Dia 2 Dia 4 Dia 7 Dia 9 Dia 14 Dia 21
40 320 36,6 15,7 17,2 17,7 36,9 59,2
[0844] Conclusão: Os animais tratados com o Composto 320, em que R2 compreende o siRNA de TTR modificado descrito na Tabela 3, exibiu um knockdown marcado de mRNA-alvo e proteína com knockdown máximo de proteína de TTR que ocorre entre dias 4 e 9 após injeção subcutânea.
EXEMPLO. 29. TESTE IN VIVO DE CONJUGADOS DE SIRNA DE HBV [0845] siRNA de HBV quimicamente modificado descrito na Tabela 1 no Exemplo 25, conjugado com ligantes de GaINAc, foram testados para atividade in vivo num modelo de camundongo estabelecido de infecção de HBV. No modelo de camundongo AAV-HBV1,2 C57BL/6, a expressão de HBV estável e persistente é alcançada após a injeção de um vetor de vírus adenoassociado (AAV) que codifica uma sequência de comprimento sobregenômico de HBV que leva à expressão hepática de RNA de HBV e proteínas e a secreção de partículas virais e subvirais no sangue.
[0846] O construto AAV-HBV1,2 usado nestes estudos teve base em detalhes fornecidos em Dion et al., Journal of Virology, 87(10), 5554-5563 (2013). Todos os procedimentos relacionados a animais foram conduzidos de acordo com procedimentos operacionais escritos, de acordo com as Diretrizes sobre Práticas Animais Satisfatórias do Conselho Canadense sobre Cuidados de Animais (CCAC), e aprovados pelo Comitê para Uso e Cuidados Institucionais de Animais local (IACUC).
[0847] Cada animal foi inoculado com genomas de vetor 1E11 (VG) do vetor AAV-HBV1,2. Antes do tratamento, todos os animais foram submetidos
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216/217 à sangria de teste e os níveis séricos de HBsAg determinados para animais individuais para confirmar a expressão de HBV estabelecida.
[0848] Tratamento de siRNA: Os grupos de camundongos (tipicamente n = 5) foram administrados com uma dose de 3 mg/kg única de conjugado de siRNA de HBV uma vez no Dia 0 (1 dose por animal) por meio de injeção subcutânea na região escapular. Um grupo de animais administrados apenas com veículo (salino) serviu como controles.
[0849] Coletas: Todos os camundongos foram submetidos à sangria de teste no Dia 0, prior to tratamento, e em pontos no tempo definidos após a administração de artigo de teste (por exemplo, nos dias de estudo 7, 14, 21,28, 42, 56 e 70) para determinar as reduções máximas nos níveis séricos de HBsAg e a duração de atividade farmacológica.
[0850] Análise: Os níveis de HBsAg em amostras de soro foram determinados com o uso do kit Biorad EIA GS HBsAg 3,0 (BioRad, n° de catálogo 32591) de acordo com as instruções do fabricante. O soro agrupado de cada grupo de tratamento foi usado para determinar os níveis de HBsAg médios de grupo em pontos no tempo individuais. Os dados foram analisados e expressados como níveis de HBsAg em relação à linha de base pré-tratamento (% em relação ao Dia 0).
[0851] Resultados: Os resultados do teste de cada um dos siRNAs de HBV quimicamente modificados descritos na Tabela 1 são apresentados na Tabela 5. Os valores representam a % de níveis de HBsAg (em relação à linha de base de Dia 0) nos Dias 7, 14, 21,28, 42, 56 e 70 após o tratamento.
TABELA 5. NÍVEIS DE HBSAG DE SORO EM CAMUNDONGOS APÓS A ADMINISTRAÇÃO subcutânea única (3 mg/kg) DE siRNA conjugado de GaINAc DA TABELA 1 NO EXEMPLO 25. Dados de HBsAg EXPRESSADOS COMO PORCENTAGEM DE VALORES DE LINHA DE BASE (DIA 0)
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Número de siRNA N° de Composto Ligante Dia 7 Dia 14 Dia 21 Dia 28 Dia 42 Dia 56 Dia 70
2 194 7,0 4,1 4,2 5,6 10,1 17,2 29,5
3 194 5,8 2,4 1,8 2,3 4,6 10,6 12,9
3 191a 1,7 0,3 0,3 0,3 0,5 0,9 2,3
3 320 3,1 0,5 0,5 0,5 0,8 1,6 3,6
4 194 5,5 3,1 3,2 4,4 6,0 9,5 16,2
20 231 5,3 2,2 1,9 3,4 4,8 9,8 17,4
20 320 2,6 1,0 1,1 1,3 3,1 6,4
25 191a 1,9 0,2 0,2 0,3 0,5 1,1 1,8
25 320 1,1 0,1 0,3 0,4 1,4 2,9 3,5
26 194 10,4 3,2 2,7 3,0 4,0 6,3 12,3
31 194 13,3 7,0 8,0 11,7 17,7 25,6 36,7
32 194 13,7 5,7 8,2 11,6 16,6 25,0 46,5
33 194 14,4 8,0 10,8 14,4 24,3 41,8 65,2
[0852] Cada um dos 13 compostos testados causou a redução de antígeno de superfície de HBV de soro após uma dose única de tratamento administrado de modo subcutâneo, com efeito máximo obtido no Dia 14 ou 21. Os quatro compostos que mostram as maiores reduções foram o composto 191a, em que o oligonucleotídeo compreendeu siRNA 3 ou 25, e o composto 320, em que R2 compreendeu siRNA 3 ou 25. Estes quatro compostos foram notáveis por uma redução mais rápida (>97%) no primeiro ponto no tempo (Dia 7), maior redução máxima (>99%), e um efeito redutivo mais sustentado (ainda >97% no Dia 56, 8 semanas após o tratamento).

Claims (191)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. MOLÉCULA de ácido nucleico caracterizada pelo fato de que é selecionada do grupo que consiste na SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:23, SEQ ID
    NO:25, SEQ ID NO:27, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:33, SEQ ID
    NO:35, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:39, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:43, SEQ ID
    NO:45, SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:53, SEQ ID
    NO:55, SEQ ID NO:57, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:63, SEQ ID
    NO:65, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:69, SEQ ID NO:71 e SEQ ID NO:73.
  2. 2. MOLÉCULA de ácido nucleico caracterizada pelo fato de que é selecionada do grupo que consiste na SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NQ:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NQ:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID
    NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NQ:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID
    NO:36, SEQ ID NO:38, SEQ ID NQ:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID
    NO:46, SEQ ID NO:48, SEQ ID NQ:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54, SEQ ID
    NO:56, SEQ ID NO:58, SEQ ID NQ:60, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:64, SEQ ID
    NO:66, SEQ ID NO:68, SEQ ID NQ:70, SEQ ID NO:72 e SEQ ID NO:74.
  3. 3. COMPOSIÇÃO caracterizado pelo fato de que compreende uma molécula de ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 1, uma molécula de ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 2, ou uma combinação dos mesmos.
  4. 4. MOLÉCULA de siRNA de fita dupla caracterizada pelo fato de que é selecionada do grupo que consiste em siRNA 1 (SEQ ID NO:1 e 2), 2 (SEQ ID NO:3 e 4), 3 (SEQ ID NO:5 e 6), 4 (SEQ ID NO:7 e 8), 5 (SEQ ID NO:9 e 10), 6 (SEQ ID NO:11 e 12), 7 (SEQ ID NO:13 e 14), 8 (SEQ ID NO:15 e 16), 9 (SEQ IDNO:17e18), 10 (SEQ ID NO:19 e 20), 11 (SEQ ID NO:21 e 22), 12 (SEQ ID
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    2/66
    NO:23 e 24), 13 (SEQ ID
    NO:29 e 30), 16 (SEQ ID
    NO:35 e 36), 19 (SEQ ID
    NO:41 e 42), 22 (SEQ ID
    NO:47 e 48), 25 (SEQ ID
    NO:53 e 54), 28 (SEQ ID
    NO:59 e 60), 31 (SEQ ID
    NO:65 e 66), 34 (SEQ ID
    NO:25 e 26), 14 (SEQ
    NO:31 e 32), 17 (SEQ
    NO:37 e 38), 20 (SEQ
    NO:43 e 44), 23 (SEQ
    NO:49 e 50), 26 (SEQ
    NO:55 e 56), 29 (SEQ
    NO:61 e 62), 32 (SEQ
    NO:67 e 68), 35 (SEQ
    ID NO:27 e 28), 15 (SEQ ID
    ID NO:33 e 34), 18 (SEQ ID
    ID NO:39 e 40), 21 (SEQ ID
    ID NO:45 e 46), 24 (SEQ ID
    ID NO:51 e 52), 27 (SEQ ID
    ID NO:57 e 58), 30 (SEQ ID
    ID NO:63 e 64), 33 (SEQ ID
    ID NO:69 e 70), 36 (SEQ ID
    NO:71 e 72) e 37 (SEQ ID NO:73 e 74).
  5. 5. COMPOSIÇÃO caracterizada pelo fato de que compreende uma molécula de siRNA de fita dupla de acordo com a reivindicação 4.
  6. 6. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 3 ou 5, caracterizada pelo fato a composição é uma composição farmacêutica que compreende um carreadorfarmaceuticamente aceitável.
  7. 7. COMPOSTO da fórmula (I):
    Figure BR112019021359A2_C0001
    caracterizado pelo fato de que:
    R1 é um ligante de direcionamento;
    L1 é ausente ou um grupo de ligação;
    L2 é ausente ou um grupo de ligação;
    R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4;
    o anel A é ausente, uma cicloalquila de 3 a 20 membros, uma arila de 5 a 20 membros, uma heteroarila de 5 a 20 membros, ou uma heterocicloalquila de 3 a 20 membros;
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    3/66 cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -Ci-2alquil-ORB, C1-10alquil C2-ioalquenila, e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquil C2-10 alquenila, e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídos por um ou mais grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi, e Ci-salcóxi;
    RB é hidrogênio, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e néO, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10;
    ou um sal do mesmo.
  8. 8. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que:
    R1 é um ligante de direcionamento;
    L1 é ausente ou um grupo de ligação;
    L2 é ausente ou um grupo de ligação;
    R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4;
    o anel A é ausente, uma cicloalquila de 3 a 20 membros, uma arila de 5 a 20 membros, uma heteroarila de 5 a 20 membros, ou uma heterocicloalquila de 3 a 20 membros;
    cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 alquil-ORB e C1-8 alquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi, e Ci-salcóxi;
    RB é hidrogênio, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e néO, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10;
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    4/66 ou um sal do mesmo.
  9. 9. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que R1 é -C(H)(3-P)(L3-sacarídeo)P, em que cada L3 é independentemente um grupo de ligação;
    p é 1,2, ou 3; e sacarídeo é um monossacarídeo ou dissacarídeo ou um sal do mesmo.
  10. 10. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o sacarídeo é:
    r->10 rW
    Figure BR112019021359A2_C0002
    x' Y
    R11 em que:
    X é NR3, e Y é selecionado de -(C=O)R4, -SO2R5, e -(C=O)NR6R7;
    ouXé -(C=O)-eYé NR8R9;
    R3 é hidrogênio ou (Ci-C4)alquila;
    R4, R5, R6, R7 , R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, (Ci-Cs)alquila, (C-iCs)haloalquila, (Ci-Cs)alc0xi e (Cs-Cejcicloalquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, (Ci-C4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (C1C4)haloalcóxi;
    R10é-OH, -NR8R9 ou-F; e
    R11 é -OH, -NR8R9, -F ou heterociclo de 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, (C1C4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (Ci-C4)haloalcóxi;
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    5/66 ou um sal do mesmo.
  11. 11. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 9 ou 10, caracterizado pelo fato de que o sacarídeo é selecionado do grupo que consiste
    Figure BR112019021359A2_C0003
    Figure BR112019021359A2_C0004
    ou um sal do mesmo.
  12. 12. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    9 a 11, caracterizado pelo fato de que o sacarídeo é:
    Figure BR112019021359A2_C0005
    /V-acetilgalactosamina (GaINAc) GalPro ou um sal do mesmo.
  13. 13. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 12 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada L3 é, independentemente, a cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 0 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituídos por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (Ci-Ce)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (C3
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    6/66
    C6)cicloalquila, (Ci-C6)alcanoila, (Ci-C6)alcanoilóxi, (Ci-C6)alcoxicarbonila, (C-iC6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
  14. 14. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 13, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada L3 é independentemente uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada , saturada ou insaturada que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (Ci-Ce)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (CsC6)cicloalquila, (Ci-Ce)alcanoila, (Ci-C6)alcanoilóxi, (Ci-C6)alcoxicarbonila, (C-iCe)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
  15. 15. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9 a 14, caracterizado pelo fato de que L3 é:
    Figure BR112019021359A2_C0006
    ou um sal do mesmo.
  16. 16. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    8 a 15, caracterizado pelo fato de que R1 é:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 230/292
    7/66
    Figure BR112019021359A2_C0007
    ou um sal do mesmo.
  17. 17. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que R1 é:
    Figure BR112019021359A2_C0008
    em que:
    Figure BR112019021359A2_C0009
    G é -NH- ou -O-;
    Rc é hidrogênio, (Ci-Cs)alquila, (C-i-Cejhaloalquila, (Ci-Cs)alc0xi, (Ci-C6)alcanoíla, (C3-C2o)cicloalquila, (C3-C2o)heterociclo, arila, heteroahla, monossacarídeo, dissacarídeo ou thssacarídeo; e em que a cicloalquila, heterociclo, ari, heteroarila e sacarídeo são opcionalmente substituídos por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, carboxila, hidroxila, amino, (Ci-C4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (Ci-C4)haloalcóxi;
    ou um sal do mesmo.
  18. 18. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que Rc é:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 231/292
    8/66
    Figure BR112019021359A2_C0010
    ou um sal do mesmo.
  19. 19. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    8, 17 e 18, caracterizado pelo fato de que R1 é:
    Figure BR112019021359A2_C0011
    ou um sal do mesmo.
  20. 20. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 17 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que Rc é:
    o
    Figure BR112019021359A2_C0012
  21. 21. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    17 a 20 ou um sal do mesmo caracterizado pelo fato de que G é -NH-.
  22. 22. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    8, 17, 20 e 21 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1 é:
    Figure BR112019021359A2_C0013
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 232/292
    9/66
  23. 23. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8 ou urn sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1 é:
    Figure BR112019021359A2_C0014
    Figure BR112019021359A2_C0015
    em que cada RD é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, (Ci-Ce)alquila, (C9-C2o)alquilsilila, (Rw)sSi-, (C2Ce)alquenila, tetra-hidropiranila, (Ci-Ce)alcanoila, benzoila, ahl(Ci-C3)alquila, TMTr (Trimetoxitritila), DMTr (Dimetoxitritila), MMTr (Monometoxithtila), e Tr (Tritila); e cada Rw é independentemente selecionado do grupo que consiste em (Ci-C4)alquila e arila.
  24. 24. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 23 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 e L2 são independentemente uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (Ci-Ce)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (C3
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 233/292
    10/66
    Cejcicloalquila, (C-i-Cejalcanoila, (C-i-Cejalcanoilóxi, (Ci-Cejalcoxicarbonila, (C-iCejalquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
  25. 25. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 24 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 e L2 são independentemente uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (Ci-Ce)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (C3Cejcicloalquila, (Ci-Ce)alcanoila, (C-i-Cejalcanoilóxi, (C-i-Cejalcoxicarbonila, (C1Cejalquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
  26. 26. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 25 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 e L2 são, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 14 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)NRX- ou -S-, e em que Rxé hidrogênio ou (Ci-Ce)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (Cs-Cejcicloalquila, (C1Ce)alcanoila, (C-i-Cejalcanoilóxi, (C-i-Cejalcoxicarbonila, (Ci-Ce)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila, e heteroarilóxi.
  27. 27. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 234/292
    11/66
    8 a 26 ou um sal do mesmo caracterizado pelo fato de que L1 é conectado a R1 através de -NH-, O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O)-, -(C=O)-O-, -NH(C=O)-NH-, ou -NH-(SO2)-.
  28. 28. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    8 a 27 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L2 é conectado a R2 através de -O-.
  29. 29. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 28 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 é selecionado do grupo que consiste em:
    Ó O Cf
    X X .. .... ... .... Λ X J. ............ X ;
    v ... ¥ .. .. . V . γ .
    .'Λ
    Figure BR112019021359A2_C0016
    Figure BR112019021359A2_C0017
  30. 30. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 8 a 29 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L2 é -CH2-O- ou CH2-CH2-O-.
  31. 31. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que é um composto de fórmula (Ia):
    DxD ri-lHQ>
    dM\2-r2 (Ia) em que:
    cada D é independentemente selecionado do grupo que consiste ra em —C= θ -N=;
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 235/292
    12/66 ou um sal do mesmo.
  32. 32. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8 ou 31, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que
    Figure BR112019021359A2_C0018
    Figure BR112019021359A2_C0019
    em que:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 236/292
    13/66
    Q1 é hidrogênio e Q2 é R2; ou Q1 é R2 e Q2 é hidrogênio; e
    Zé-L1-R1;
    e sais do mesmo.
  33. 33. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é um composto de fórmula (Ib):
    Figure BR112019021359A2_C0020
    (Ib) em que:
    cada D é independentemente selecionado do grupo que consiste ra em —C= θ -N=; e cada m é independentemente 1 ou 2.
  34. 34. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8 ou 33, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0021
    em que:
    Q1 é hidrogênio e Q2 é R2; ou Q1 é R2 e Q2 é hidrogênio; e
    Zé-L1-R1;
    e sais do mesmo.
  35. 35. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é um composto de fórmula (Ic):
    (RA)n
    Figure BR112019021359A2_C0022
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 237/292
    14/66 (Ic) em que:
    E é -0- ou -CH2-;
    n é selecionado do grupo que consiste em 0, 1,2, 3, e 4; e n1 e n2 são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em 0, 1,2, e 3; ou um sal dos mesmos.
  36. 36. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8 ou 35, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0023
    Figure BR112019021359A2_C0024
    Figure BR112019021359A2_C0025
    Figure BR112019021359A2_C0026
    em que: Z é -L1-R1; e sais dos mesmos.
  37. 37. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que a porção química -A-L2-R2 é: „οα·
    Α,Α, ΑνΛ ou loal «X..V
    OQ em que:
    Q1 é hidrogênio e Q2 é R2; ou Q1 é R2 e Q2 é hidrogênio; e cada q é independentemente 0, 1,2, 3, 4 ou 5.
  38. 38. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 238/292
    15/66
    Figure BR112019021359A2_C0027
    Figure BR112019021359A2_C0028
    Figure BR112019021359A2_C0029
    NH
    Figure BR112019021359A2_C0030
    Figure BR112019021359A2_C0031
    e sais do mesmo.
  39. 39. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 7 ou urn sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1 é selecionado do grupo que consiste
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 239/292
    16/66 em:
    Figure BR112019021359A2_C0032
    Figure BR112019021359A2_C0033
    Figure BR112019021359A2_C0034
    Figure BR112019021359A2_C0035
    em que:
    Figure BR112019021359A2_C0036
    Figure BR112019021359A2_C0037
    n é 2, 3, ou 4; e x é 1 ou 2.
  40. 40. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 7 ou 39, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 é selecionado do grupo que consiste em:
    g o Ό o j H A N í H ' ' 1 ' H
    o
    Figure BR112019021359A2_C0038
    Y
    O
    Figure BR112019021359A2_C0039
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 240/292
    17/66
  41. 41. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    7, 39 e 40 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que A é ausente, fenila, pirrolidinila, ou ciclopentila.
  42. 42. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 e 39 a 41 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L2 é C1-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidróxi.
  43. 43. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 e 39 a 42 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L2 é -CH2O-, CH2CH2O-, ou -CH(OH)CH2O-.
  44. 44. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 e 39 a 43 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada RA é independentemente hidróxi ou C1-8 alquila que é opcionalmente substituído por hidroxila.
  45. 45. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 e 39 a 44 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidróxi, metila e CH2OH.
  46. 46. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 7 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é um composto de fórmula (Ig):
    (RA)n
    Figure BR112019021359A2_C0040
    L1
    R1 (ig) em que:
    B é -N- ou -CH-;
    L2 é C1-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidroxila
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 241/292
    18/66 ou halo; e n é 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, ou 7;
    ou um sal do mesmo.
  47. 47. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 7 ou 46, ou um sal do mesmo caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0041
    em que Q é -L1-R1; e
    R’ é Ci-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila;
    e sais dos mesmos.
  48. 48. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 7 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0042
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 242/292
    19/66 em que Q é -L1-R1; e sais dos mesmos.
  49. 49. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 7 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0043
    Figure BR112019021359A2_C0044
    Figure BR112019021359A2_C0045
    176
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 243/292
    20/66
    Figure BR112019021359A2_C0046
    Figure BR112019021359A2_C0047
    Figure BR112019021359A2_C0048
    200, η = 3, x = 2
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 244/292
    21/66
    Figure BR112019021359A2_C0049
    Figure BR112019021359A2_C0050
    Figure BR112019021359A2_C0051
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 245/292
    22/66
    Figure BR112019021359A2_C0052
    e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 246/292
    23/66
  50. 50. COMPOSIÇÃO farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende um composto conforme descrito, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
  51. 51. MÉTODO PARA ADMINISTRAR UM siRNA ao fígado de um animal caracterizado pelo fato de que compreende administrar um composto de fórmula I, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao animal.
  52. 52. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 8 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é a composto de fórmula (Id): R2d |_|
    R1d
    Figure BR112019021359A2_C0053
    n °'R3d (Id) em que:
    R1d é selecionado de:
    Figure BR112019021359A2_C0054
    e
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 247/292
    24/66
    Figure BR112019021359A2_C0055
    Figure BR112019021359A2_C0056
    Xd é C2-ioalquileno;
    nd é 0 ou 1;
    R2d é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla de acordo com a reivindicação 4; e
    R3d é H, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido ou um sal do mesmo.
  53. 53. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 52 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1d é:
    Figure BR112019021359A2_C0057
    Figure BR112019021359A2_C0058
    Figure BR112019021359A2_C0059
  54. 54. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 52 ou um sal do
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 248/292
    25/66 mesmo, caracterizado pelo fato de que R1d é:
    Figure BR112019021359A2_C0060
    Figure BR112019021359A2_C0061
    NH 0 \
  55. 55. COMPOSTO OU SAL, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 54, caracterizado pelo fato de que Xd é Cealquileno.
  56. 56. COMPOSTO OU SAL, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 54, caracterizado pelo fato de que nd é 0.
  57. 57. COMPOSTO OU SAL, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 56, caracterizado pelo fato de que R3d é H.
  58. 58. COMPOSTO OU SAL, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 56, caracterizado pelo fato de que R3d é uma ligação covalente a um suporte sólido.
  59. 59. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 56, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R3d é uma ligado a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido, em que o grupo de ligação é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 2 a 15 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono são opcionalmente substituídos por (-O-) ou (-N(H)-), e em que a cadeia é opcionalmente substituída em carbono por um ou mais (por exemplo 1,2,3, ou 4) substituintes selecionados de (Ci-Ce)alc0xi, (Cs-Cejcicloalquila, (Ci-Ce)alcanoila, (C-i-Cejalcanoilóxi, (Ci
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 249/292
    26/66
    Cejalcoxicarbonila, (Ci-Cejalquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
  60. 60. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 56, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R3d é uma ligado a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido, em que o grupo de ligação é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 2 a 10 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono são opcionalmente substituídos por (-O-) ou (-N(H)-), e em que a cadeia é opcionalmente substituída em carbono por um ou mais (por exemplo 1,2,3, ou 4) substituintes selecionados de (Ci-C6)alcóxi, (Cs-Cejcicloalquila, (Ci-Ce)alcanoila, (C-i-Cejalcanoilóxi, (C-iCejalcoxicarbonila, (Ci-Ce)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
  61. 61. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 56, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R3d é uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido, em que o grupo de ligação é -C(=O)CH2CH2C(=O)N(H)-.
  62. 62. COMPOSIÇÃO farmacêutica caracterizada pelo fato de que composto, conforme descrito em qualquer uma das reivindicações 52 a 61, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
  63. 63. MÉTODO PARA ADMINISTRAR UM siRNA ao fígado de um animal caracterizado pelo fato de que compreende administrar um composto de fórmula Id, conforme descrito em qualquer uma das reivindicações 52 a 61, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao animal.
  64. 64. MÉTODO PARA PREPARAR UM COMPOSTO de fórmula (Id), conforme descrito na reivindicação 48, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende submeter um composto correspondente de fórmula (le):
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 250/292
    27/66
    Figure BR112019021359A2_C0062
    (le) em que:
    Xd é C2-8alquileno;
    nd é 0 ou 1;
    Pg1 é H; e
    R3d é uma ligação covalente a um suporte sólido ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido, a condições de síntese de ácido nucleico de fase sólida para fornecer um composto correspondente de fórmula Id em que R2d é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  65. 65. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizada pelo fato de que compreende remover o composto do suporte sólido para fornecer o composto correspondente de fórmula Id em que R3d é H.
  66. 66. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 52 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0063
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 251/292
    28/66
    Figure BR112019021359A2_C0064
    e sais dos mesmos.
  67. 67. COMPOSTO de fórmula (I):
    Figure BR112019021359A2_C0065
    caracterizado pelo fato de que:
    R1 é H ou um grupo de ativação sintética;
    L1 é ausente ou um grupo de ligação;
    L2 é ausente ou um grupo de ligação;
    R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4;
    o anel A é ausente, uma cicloalquila de 3 a 20 membros, uma arila de 5 a 20 membros, uma heteroarila de 5 a 20 membros, ou uma heterocicloalquila de 3 a 20 membros;
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 252/292
    29/66 cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -Ci-2alquil-ORB, C1-10alquil C2-ioalquenila, e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquil C2-10 alquenila, e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídos por um ou mais grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi, e Ci-salcóxi;
    RB é hidrogênio, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e néO, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10;
    ou um sal do mesmo.
  68. 68. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 67, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é um composto de fórmula (Ig):
    (RA)n
    L2—R2
    L1
    R1 (ig) em que:
    B é -N- ou -CH-;
    L2 é Ci-4alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidroxila ou halo; e n é 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, ou 7;
    ou um sal do mesmo.
  69. 69. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 67 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 253/292
    30/66
    Figure BR112019021359A2_C0066
    Q
    Q
    Figure BR112019021359A2_C0067
    em que:
    Qé-L1-R1; e
    R’ é Ci-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila;
    e sais dos mesmos.
  70. 70. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 67 ou urn sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0068
    em que: Q é -L1-R1; e sais dos mesmos.
  71. 71. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    66 a 73 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1 é H ou um grupo de ativação sintética derivável de DCC, HOBt, EDC, BOP, PyBOP ou HBTU.
  72. 72. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 254/292
    31/66
    66 a 73, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R1 é um grupo de ativação sintético derivável de DCC, HOBt, EDC, BOP, PyBOP ou HBTll.
  73. 73. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 66 a 77 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 5 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos -O-, -NH-, -NH-C(=O)-, -C(=O)-NH- ou -S-.
  74. 74. COMPOSTO de fórmula (XX):
    R1—L1——L2—R2 (XX) caracterizado pelo fato de que:
    R1 é um ligante de direcionamento;
    L1 é ausente ou um grupo de ligação;
    L2 é ausente ou um grupo de ligação;
    R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada das moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4;
    B é divalente e é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0069
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 255/292
    32/66
    Figure BR112019021359A2_C0070
    Figure BR112019021359A2_C0071
    em que:
    cada R’ é independentemente C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila;
    a valência marcada com * é fixada a L1 ou é fixada a R1 se L1 for ausente; e a valência marcada com ** é fixada a L2 ou é fixada a R2 se L2 for ausente;
    ou um sal do mesmo.
  75. 75. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 74 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento R1 compreende 2 a 8 sacarídeos.
  76. 76. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 74 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento R1 compreende 2 a 4 sacarídeos.
  77. 77. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 74 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento R1 compreende 3 a 8 sacarídeos.
  78. 78. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 74 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento R1 compreende 3 a 6 sacarídeos.
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 256/292
    33/66
  79. 79. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 74 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento R1 compreende 3 a 4 sacarídeos.
  80. 80. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 74 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento R1 compreende 3 sacarídeos.
  81. 81. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 74 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que o ligante de direcionamento R1 compreende 4 sacarídeos.
  82. 82. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    7 a 8, 31 a 36, 38 a 39, 40 a 44, 46 a 48, 67 a 69, e 74 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que a porção química-alvo R1 tem a fórmula a seguir:
    sacarídeo-v 3 sacandeo.......
    1' >—|sac arfdeo sacandeo'’ em que:
    B1 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e é covalentemente ligada a L1, T1, e T2.
    B2 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e é covalentemente ligado a T1, T3, e T4;
    B3 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e é covalentemente ligado a T2, T5, e T6;
    T1 é ausente ou um grupo de ligação;
    T2 é ausente ou um grupo de ligação;
    T3 é ausente ou um grupo de ligação;
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    34/66
    T4 é ausente ou um grupo de ligação;
    T5 é ausente ou um grupo de ligação; e
    T6 é ausente ou um grupo de ligação.
  83. 83. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 82 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada sacarídeo é independentemente selecionado de:
    Figure BR112019021359A2_C0072
    em que:
    X é NR3, e Y é selecionado de (C=O)R4, -SO2R5, e (C=O)NR6R7; ou X é (C=O) e Y é NR8R9;
    R3 é hidrogênio ou (Ci-C4)alquila;
    R4, R5, R6, R7 , R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, (Ci-Cs)alquila, (C-iCs)haloalquila, (Ci-Cs)alc0xi e (Cs-Cejcicloalquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, (Ci-C4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (C1C4)haloalcóxi;
    R10é-OH, -NR8R9 ou-F; e
    R11 é -OH, -NR8R9, -F ou heterociclo de 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, (C1C4)alquila, (Ci-C4)haloalquila, (Ci-C4)alcóxi e (Ci-C4)haloalcóxi.
  84. 84. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 82 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada sacarídeo é independentemente selecionado do grupo que consiste em:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 258/292
    35/66
    Figure BR112019021359A2_C0073
  85. 85. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 82 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada sacarídeo é independentemente:
    Figure BR112019021359A2_C0074
    Figure BR112019021359A2_C0075
  86. 86. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    82 a 85, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que um de T1 e T2 é ausente.
  87. 87. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    82 a 85 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que tanto T1 quanto T2 são ausentes.
  88. 88. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    82 a 85 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada um de T1, T2, T3, T4, T5, e T6 é independentemente ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (C1 -C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados de (C1 -C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 259/292
    36/66
    C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila, e heteroarilóxi.
  89. 89. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 85 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada um de T1, T2, T3, T4, T5, e T6 é independentemente ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (C1 -C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados de (C1 -C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1C6)alcoxicarbonila, (C1 -Cejalquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila, e heteroarilóxi.
  90. 90. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82-85 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada um de T1, T2, T3, T4, T5, e T6 é independentemente ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, ou um sal do mesmo, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3, ou
    4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por -O- ou -NRX-, e em que Rx é hidrogênio ou (Ci-Ce)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo 1,2,3, ou 4) substituintes selecionados de halo, hidróxi, e oxo (=0).
  91. 91. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82-85 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada um de T1, T2, T3, T4, T5, e T6 é independentemente ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 260/292
    37/66 carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por -O- e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo 1,2,3, ou 4) substituintes selecionados de halo, hidróxi, e oxo (=0).
  92. 92. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    82-85 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada um de T1, T2,
    T3, T4, T5, e T6 é independentemente ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por -O- e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo 1,2,3, ou 4) substituintes selecionados de halo, hidróxi, e oxo (=0).
  93. 93. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    82 a 85 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que pelo menos um de em que: n = 1,2, 3.
  94. 94. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    82 a 85 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada um de T3, T4,
    o.
    T5, e T6 é independentemente selecionado do grupo que consiste em: H n
    em que: n = 1,2, 3.
  95. 95. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    82 a 85, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que pelo menos um de
    T1 e T2 é glicina.
  96. 96. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 261/292
    38/66
    82 a 85, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que cada um de T1 e T2 é glicina.
  97. 97. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 é um grupo trivalente que compreende 1 a 15 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1, e T2.
  98. 98. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 é um grupo trivalente que compreende 1 a 10 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1, e T2.
  99. 99. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 compreende uma (Ci-Ce)alquila
  100. 100. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 compreende uma Cs-scicloalquila.
  101. 101. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 compreende um grupo silila.
  102. 102. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 compreende um D- ou L-aminoácido.
  103. 103. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 compreende um sacarídeo.
  104. 104. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 compreende um grupo fosfato.
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 262/292
    39/66
  105. 105. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 compreende um grupo fosfonato.
  106. 106. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 compreende uma arila.
  107. 107. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 compreende um anel de fenila.
  108. 108. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 é um anel de fenila.
  109. 109. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 é CH.
  110. 110. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 compreende uma heteroarila.
  111. 111. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 96, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B1 é:
    Figure BR112019021359A2_C0076
    í.
  112. 112. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 é um grupo trivalente que compreende 1 a 15 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1, eT2
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 263/292
    40/66
  113. 113. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 é um grupo trivalente que compreende 1 a 10 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1, eT2.
  114. 114. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 compreende uma (Ci-Ce)alquila.
  115. 115. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 compreende uma Cs-scicloalquila.
  116. 116. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 compreende um grupo silila.
  117. 117. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 compreende um D- ou L-aminoácido.
  118. 118. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 compreende um sacarídeo.
  119. 119. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 compreende um grupo fosfato.
  120. 120. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 compreende um grupo fosfonato.
  121. 121. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 compreende uma arila.
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 264/292
    41/66
  122. 122. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 compreende um anel fenila.
  123. 123. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 é um anel fenila.
  124. 124. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 éCH.
  125. 125. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 compreende uma heteroarila.
  126. 126. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 111, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B2 é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0077
  127. 127. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 é um grupo trivalente que compreende 1 a 15 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1, eT2.
  128. 128. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 é um grupo trivalente que compreende 1 a 10 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1, eT2.
  129. 129. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 265/292
    42/66 reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 compreende uma (Ci-Ce)alquila.
  130. 130. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 compreende uma Cs-scicloalquila.
  131. 131. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 compreende um grupo silila.
  132. 132. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 compreende um D- ou L-aminoácido.
  133. 133. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 compreende um sacarídeo.
  134. 134. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 compreende um grupo fosfato.
  135. 135. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 compreende um grupo fosfonato.
  136. 136. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 compreende uma arila.
  137. 137. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 compreende um anel fenila.
  138. 138. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 266/292
    43/66 é um anel fenila.
  139. 139. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 éCH.
  140. 140. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 compreende uma heteroarila.
  141. 141. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 126, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que B3 é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0078
    ou um sal do mesmo.
  142. 142. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 146 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 e L2 são independentemente uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada divalente, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1,2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por -O-, -NRX-, -NRXC(—O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila, e heteroarilóxi.
  143. 143. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 267/292
    44/66 reivindicações 82 a 141 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0079
    ou um sal do mesmo.
  144. 144. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 141 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 é conectado a B1 através de uma ligação selecionada do grupo que consiste em: -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O), -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH-, ou -NH- (SO2)-.
  145. 145. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 87 a 141 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0080
    Figure BR112019021359A2_C0081
    Figure BR112019021359A2_C0082
  146. 146. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 145 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L2 é conectado a R2 através de -O-.
  147. 147. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 145 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L2 é Ci-4alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidróxi.
  148. 148. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 145 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L2 é conectado a R2 através de -O-.
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 268/292
    45/66
  149. 149. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 82 a 145, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L2 é ausente.
  150. 150. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 87 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0083
    Figure BR112019021359A2_C0084
    Figure BR112019021359A2_C0085
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 269/292
    46/66
    Figure BR112019021359A2_C0086
    Figure BR112019021359A2_C0087
    Figure BR112019021359A2_C0088
    Figure BR112019021359A2_C0089
    218, η = 2
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 270/292
    47/66
    Figure BR112019021359A2_C0090
    e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, em que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  151. 151. COMPOSTO,
    Figure BR112019021359A2_C0091
    Figure BR112019021359A2_C0092
    Figure BR112019021359A2_C0093
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 271/292
    48/66
    Figure BR112019021359A2_C0094
    ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  152. 152. CONJUGADO DE GaINAc de Fórmula X:
    A-B-C (X) caracterizado pelo fato de que A é um ligante de direcionamento;
    B é um ligante opcional; e
    C é uma molécula de siRNA, de acordo com a reivindicação 4.
  153. 153. COMPOSTO de fórmula:
    Figure BR112019021359A2_C0095
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 272/292
    49/66
  154. 154. COMPOSTO de fórmula:
    Figure BR112019021359A2_C0096
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  155. 155. COMPOSTO de fórmula:
    Figure BR112019021359A2_C0097
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  156. 156. COMPOSTO de fórmula:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 273/292
    50/66
    Figure BR112019021359A2_C0098
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
    Figure BR112019021359A2_C0099
    Figure BR112019021359A2_C0100
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  157. 158. COMPOSTO de fórmula:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 274/292
    51/66
    Figure BR112019021359A2_C0101
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  158. 159. COMPOSTO de fórmula:
    Figure BR112019021359A2_C0102
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  159. 160. COMPOSTO de fórmula:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 275/292
    52/66
    Figure BR112019021359A2_C0103
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
    Figure BR112019021359A2_C0104
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  160. 162. COMPOSTO de fórmula:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 276/292
    53/66
    Figure BR112019021359A2_C0105
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  161. 163. COMPOSTO de fórmula:
    OH GM
    Figure BR112019021359A2_C0106
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  162. 164. COMPOSTO de fórmula:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 277/292
    54/66
    Figure BR112019021359A2_C0107
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  163. 165. COMPOSTO de fórmula:
    Figure BR112019021359A2_C0108
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo com a reivindicação 4.
  164. 166. COMPOSTO caracterizado pela fórmula:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 278/292
    55/66
    Figure BR112019021359A2_C0109
    Figure BR112019021359A2_C0110
    Figure BR112019021359A2_C0111
    Figure BR112019021359A2_C0112
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
  165. 167. COMPOSTO caracterizado pela fórmula:
    s.i>F;Ã Z6 <í;· lí? NCFS s íf
    Figure BR112019021359A2_C0113
    Fits antiss&nso. SKtfsrnids&s: 5''
    Figure BR112019021359A2_C0114
    Figure BR112019021359A2_C0115
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 279/292
    56/66
  166. 168. COMPOSTO caracterizado pela fórmula:
    Figure BR112019021359A2_C0116
    Figure BR112019021359A2_C0117
    Fits sr.iíssensa.. sAtfSfni-dsdie 5·
    Figure BR112019021359A2_C0118
    Figure BR112019021359A2_C0119
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
  167. 169. COMPOSTO caracterizado pela fórmula:
    ΐί-ΐ^Α SSíSSG ίΩ : ;CSS> e SÍ}
    Figure BR112019021359A2_C0120
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
  168. 170. COMPOSTO caracterizado pela fórmula:
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 280/292
    57/66
    Figure BR112019021359A2_C0121
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
  169. 171. COMPOSTO caracterizado pela fórmula:
    siRNA 25 (SEQ«JNO:49 e 50}
    Λ
    Figure BR112019021359A2_C0122
    Fiía aníissenso, extremidade 5’
    Figure BR112019021359A2_C0123
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 281/292
    58/66
  170. 172. COMPOSTO caracterizado pela fórmula:
    siRNA S (SEÜ 1D NO:5 e 61
    Figure BR112019021359A2_C0124
    F:ia anttssenso. extremidade 5'
    Figure BR112019021359A2_C0125
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
  171. 173. COMPOSTO caracterizado pela fórmula:
    siRNA 25 (SEQ ÍD NC!:49 e 55}
    Figure BR112019021359A2_C0126
    Figure BR112019021359A2_C0127
    Figure BR112019021359A2_C0128
    ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 282/292
    59/66
    Figure BR112019021359A2_C0129
    (I) caracterizado pelo fato de que:
    L1 é ausente ou um grupo de ligação;
    L2 é ausente ou um grupo de ligação;
    R2 é um ácido nucleico;
    o anel A é ausente, uma cicloalquila de 3 a 20 membros, uma arila de 5 a 20 membros, uma heteroarila de 5 a 20 membros, ou uma heterocicloalquila de 3 a 20 membros;
    cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -Ci-2alquil-ORB, C1-10alquil C2-10alquenila, e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquil C2-10 alquenila, e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídos por um ou mais grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi, e Ci-salcóxi;
    RB é hidrogênio, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e néO, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10;
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 283/292
    60/66 ou um sal do mesmo.
  172. 175. COMPOSTO de fórmula (Ia):
    Figure BR112019021359A2_C0130
    caracterizado pelo fato de que:
    L2 é ausente ou um grupo de ligação;
    R2 é um ácido nucleico;
    o anel A é ausente, uma cicloalquila de 3 a 20 membros, uma arila de 5 a 20 membros, uma heteroarila de 5 a 20 membros, ou uma heterocicloalquila de 3 a 20 membros;
    cada RA é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -Ci-2alquil-ORB, C1-10alquil C2-10alquenila, e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquil C2-10 alquenila, e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídos por um ou mais grupos independentemente selecionados de halo, hidróxi, e Ci-salcóxi;
    RB é hidrogênio, um grupo de proteção, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e néO, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10;
    ou um sal do mesmo.
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 284/292
    61/66
  173. 176. COMPOSTO de fórmula (XX): OH
    HO,, 7 NHAc
    Figure BR112019021359A2_C0131
    OH
    AcHN,,/L»OH
    ΟΗ ο
    ο
    Η
    Figure BR112019021359A2_C0132
    ο
    ΟΗ
    OH
    HO,, 7 NHAc
    Figure BR112019021359A2_C0133
    ΟΗ ο Μ 2 Η
    Figure BR112019021359A2_C0134
    Η
    AcHN
    ^.NH
    NH Π
    O
    N--L1-<Yb~A—L2—R2
    OH
    Figure BR112019021359A2_C0135
    ΟΗ caracterizado pelo fato de que:
    L1 é ausente ou um grupo de ligação;
    L2 é ausente ou um grupo de ligação;
    R2 é um ácido nucleico;
    Figure BR112019021359A2_C0136
    B é divalente e é selecionado do grupo que consiste em:
    HO
    HO,
    Figure BR112019021359A2_C0137
    NH
    HO
    O
    H
    HO.
    N H
    N H
    O N
    OH H
    O ll -p—
    À H
    Figure BR112019021359A2_C0138
    HO oh o
    Figure BR112019021359A2_C0139
    Figure BR112019021359A2_C0140
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 285/292
    62/66
    Figure BR112019021359A2_C0141
    em que:
    cada R’ é independentemente C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila;
    a valência marcada com * é fixada a L1 ou é fixada a R1 se L1 for ausente; e a valência marcada com ** é fixada a L2 ou é fixada a R2 se L2 for ausente;
    ou um sal do mesmo.
  174. 177. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 175 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 e L2 são independentemente uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada divalente, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que Rx é hidrogênio ou (C1 -C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados de (C1C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=0), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila, e heteroarilóxi.
  175. 178. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 176 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 é selecionado do grupo que consiste em:
    Figure BR112019021359A2_C0142
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 286/292
    63/66 ou um sal do mesmo.
  176. 179. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 176, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L1 é conectado a B1 através de uma ligação selecionada do grupo que consiste em: -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, NH-(C=O), (C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH-, ou -NH-(SO2)-.
  177. 180. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 176, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que
    L1 é selecionado do grupo que consiste em:
    O
    34 l· I4
    W H
    U ,N
  178. 181. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação
    176 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L2 é conectado a R2 através de -O-.
  179. 182. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 176, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L2 é C1-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidróxi.
  180. 183. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 176, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que L2 é ausente.
  181. 184. COMPOSTO,
    Q!-l
    HO, Λ jNHA.C
    Ό
    NH ' O <
    ir ,N...
    KN
    K,
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 287/292
    64/66 ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é um ácido nucleico.
  182. 185. COMPOSTO,
    Figure BR112019021359A2_C0143
    ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é um ácido nucleico.
    Figure BR112019021359A2_C0144
    ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que R2 é um ácido nucleico.
  183. 187. COMPOSTO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 174 a 186, caracterizado pelo fato de que R2 é uma molécula de siRNA de fita dupla selecionada de moléculas de siRNA de fita dupla, de acordo
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 288/292
    65/66 com a reivindicação 4.
  184. 188. COMPOSIÇÃO farmacêutica caracterizada pelo fato de que composto, conforme descrito em qualquer uma das reivindicações 174 a 186, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
  185. 189. MÉTODO PARA ADMINISTRAR UM siRNA ao fígado de um animal caracterizado pelo fato de que compreende administrar um composto de fórmula I, de acordo com qualquer uma das reivindicações 174 a 186, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao animal.
  186. 190. MÉTODO PARA TRATAR UMA INFECÇÃO viral de hepatite B num animal caracterizado pelo fato de que compreende administrar uma quantidade eficaz de um composto de fórmula I ou Id, conforme descrito em qualquer uma das reivindicações 1 a 49, 52 a 61 ou 174 a 186, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao animal.
  187. 191. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 190, caracterizado pelo fato de que o composto de fórmula I ou Id, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, é administrado de modo subcutâneo.
  188. 192. COMPOSTO de fórmula I ou Id, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, 52 a 61 ou 174 a 186, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para uso em terapia médica.
  189. 193. COMPOSTO de fórmula I ou Id, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, 52 a 61 ou 174 a 186, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento profilático ou terapêutico de uma infecção de vírus da hepatite B num animal.
  190. 194. USO DE UM COMPOSTO de fórmula I ou Id, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 49, 52 a 61 ou 174 a 186, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para
    Petição 870190127883, de 04/12/2019, pág. 289/292
    66/66 preparar um medicamento para tratar uma infecção de vírus da hepatite B num animal.
  191. 195. MÉTODO, composto ou uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 190 a 194, caracterizado pelo fato de que o animal é um ser humano.
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MA45478A (fr) * 2016-04-11 2019-02-20 Arbutus Biopharma Corp Compositions de conjugués d'acides nucléiques ciblés
US11660347B2 (en) 2017-12-01 2023-05-30 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. Nucleic acid, composition and conjugate containing same, preparation method, and use thereof
WO2019105418A1 (zh) 2017-12-01 2019-06-06 苏州瑞博生物技术有限公司 双链寡核苷酸、含双链寡核苷酸的组合物与缀合物及制备方法和用途
CN116375774A (zh) 2017-12-29 2023-07-04 苏州瑞博生物技术股份有限公司 缀合物及其制备方法和用途
CN111655849B (zh) 2018-08-21 2024-05-10 苏州瑞博生物技术股份有限公司 一种核酸、含有该核酸的药物组合物和缀合物及其用途
US11896674B2 (en) 2018-09-30 2024-02-13 Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. SiRNA conjugate, preparation method therefor and use thereof
JP2022506517A (ja) * 2018-11-02 2022-01-17 アルブータス・バイオファーマー・コーポレイション 標的指向化二価結合体
MX2021005130A (es) * 2018-11-02 2021-11-04 Genevant Sciences Gmbh Metodos terapeuticos.
EP3941921A4 (en) * 2019-03-20 2023-05-03 Arbutus Biopharma Corporation THERAPEUTIC METHODS OF HEPATITIS B TREATMENT
CN113286888B (zh) * 2019-05-22 2023-12-22 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途
US20220305107A1 (en) 2019-06-18 2022-09-29 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company COMBINATION OF HEPATITIS B VIRUS (HBV) VACCINES AND HBV-TARGETING RNAi
JP2023505434A (ja) * 2019-12-06 2023-02-09 ジェネヴァント サイエンシズ ゲーエムベーハー 肝線維症を治療するためのコンジュゲート及び方法
BR112022012226A2 (pt) * 2019-12-20 2022-09-13 Arbutus Biopharma Corp Métodos, método para preparar uma forma cristalina, forma cristalina, compostos e sal
EP4240369A1 (en) * 2020-11-06 2023-09-13 Arbutus Biopharma Corporation Targeted conjugates comprising modified sirna
WO2023109935A1 (zh) * 2021-12-16 2023-06-22 上海拓界生物医药科技有限公司 一种dsRNA、其制备方法及应用
WO2023138664A1 (zh) * 2022-01-20 2023-07-27 上海金中锘美生物医药科技有限公司 靶向配体及其用途
CN116917477B (zh) * 2022-01-30 2024-04-09 大睿生物医药科技(上海)有限公司 含有n-乙酰半乳糖胺的靶向配体
WO2023178144A2 (en) * 2022-03-16 2023-09-21 Empirico Inc. Galnac compositions for improving sirna bioavailability

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5708163A (en) 1994-03-15 1998-01-13 Sloan-Kettering Institute Of Cancer Research Synthesis of the breast tumor-associated antigen defined by monoclonalantibody MBRL and uses thereof
US6303120B1 (en) 1994-03-15 2001-10-16 Memorial Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Synthesis of glycoconjugates of the lewis y epitope and uses thereof
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
JP2002520038A (ja) 1998-07-20 2002-07-09 アイネックス ファーマシューティカルズ コーポレイション リポソームカプセル化核酸複合体
US7833992B2 (en) 2001-05-18 2010-11-16 Merck Sharpe & Dohme Conjugates and compositions for cellular delivery
WO2003070918A2 (en) 2002-02-20 2003-08-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Rna interference by modified short interfering nucleic acid
US8258288B2 (en) 2002-02-20 2012-09-04 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of respiratory syncytial virus (RSV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9657294B2 (en) 2002-02-20 2017-05-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
DE60334618D1 (de) 2002-06-28 2010-12-02 Protiva Biotherapeutics Inc Verfahren und vorrichtung zur herstellung von liposomen
WO2005021751A1 (en) 2003-09-01 2005-03-10 Patrick Arbuthnot A self-processing rna expression cassette
WO2005026165A1 (en) 2003-09-12 2005-03-24 Warner-Lambert Company Llc Quinolone antibacterial agents
CA2616877C (en) 2005-07-27 2014-01-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for manufacturing liposomes
US8956825B2 (en) 2007-05-24 2015-02-17 The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs Intranuclear protein transduction through a nucleoside salvage pathway
CA2708171C (en) 2007-12-04 2018-02-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Folate conjugates
CA2930393C (en) 2007-12-04 2022-11-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides
WO2009143390A2 (en) 2008-05-22 2009-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for modulating expression of rbp4
CN101603042B (zh) * 2008-06-13 2013-05-01 厦门大学 可用于乙型肝炎病毒感染治疗的rna干扰靶点
WO2010006282A2 (en) 2008-07-10 2010-01-14 Serina Therapeutics, Inc. Polyoxazolines with inert terminating groups, polyoxazolines prepared from protected initiating groups and related compounds
EP2496238A4 (en) 2009-11-03 2013-10-02 Alnylam Pharmaceuticals Inc FORMULATED LIPID COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING TRANSTHYRETIN EXPRESSION (TTR)
ES2562817T3 (es) 2010-02-24 2016-03-08 Arrowhead Research Corporation Composiciones para el suministro dirigido de ARNip
JP2014504295A (ja) 2010-12-17 2014-02-20 アローヘッド リサーチ コーポレイション ｓｉＲＮＡ用ガラクトースクラスター−薬物動態調節剤標的指向部分
EP2751270B1 (en) 2011-08-29 2018-08-22 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Oligomer-conjugate complexes and their use
KR20220045091A (ko) * 2011-11-18 2022-04-12 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스티레틴（ＴＴＲ） 관련 질병을 치료하기 위한 ＲＮＡｉ 제제, 조성 및 그의 사용방법
EA201490993A1 (ru) 2011-11-18 2014-09-30 Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. МОДИФИЦИРОВАННЫЕ СРЕДСТВА РНКи
AU2014259759B2 (en) 2013-05-01 2020-06-18 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods
AU2014284152B2 (en) 2013-06-21 2020-01-23 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulation of target nucleic acids
PT3013959T (pt) 2013-06-27 2020-02-04 Roche Innovation Ct Copenhagen As Oligómeros antissentido e conjugados dirigidos para pcsk9
AR097738A1 (es) 2013-09-23 2016-04-13 Alnylam Pharmaceuticals Inc Métodos para tratar o prevenir enfermedades asociadas con la transtiretina (ttr)
WO2015168532A2 (en) 2014-05-01 2015-11-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating pkk expression
JP6626101B2 (ja) 2014-10-10 2019-12-25 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ＧａｌＮＡｃホスホラミダイト、その核酸結合体およびそれらの使用
JOP20200092A1 (ar) * 2014-11-10 2017-06-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها
MA45478A (fr) * 2016-04-11 2019-02-20 Arbutus Biopharma Corp Compositions de conjugués d'acides nucléiques ciblés
MA50278A (fr) * 2017-04-18 2020-02-26 Alnylam Pharmaceuticals Inc Méthodes pour le traitement de sujets atteints d'une infection par le virus de l'hépatite b (vhb)
US20220305107A1 (en) * 2019-06-18 2022-09-29 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company COMBINATION OF HEPATITIS B VIRUS (HBV) VACCINES AND HBV-TARGETING RNAi

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