BR112021008449A2 - Métodos para entregar um ácido nucleico a uma célula, para entregar um ácido nucleico ao citosol de uma célula, composição, para tratar uma doença, para entregar um sirna ao fígado de um animal e para tratar uma infecção viral por hepatite b em um animal, kits, polímero desestabilizador de membrana, conjugados de ácido nucleico de fórmula (x), uso de um conjugado e composição farmacêutica - Google Patents

Métodos para entregar um ácido nucleico a uma célula, para entregar um ácido nucleico ao citosol de uma célula, composição, para tratar uma doença, para entregar um sirna ao fígado de um animal e para tratar uma infecção viral por hepatite b em um animal, kits, polímero desestabilizador de membrana, conjugados de ácido nucleico de fórmula (x), uso de um conjugado e composição farmacêutica Download PDF

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Abstract

métodos para entregar um ácido nucleico a uma célula, para entregar um ácido nucleico ao citosol de uma célula, composição, para tratar uma doença, para entregar um sirna ao fígado de um animal e para tratar uma infecção viral por hepatite b em um animal, kits, polímero desestabilizador de membrana, conjugados de ácido nucleico de fórmula (x), uso de um conjugado e composição farmacêutica. a invenção fornece métodos e composições para a entrega de um ácido nucleico a uma célula ou ao citosol da célula alvo. o método inclui colocar a célula em contato com 1) um polímero desestabilizador de membrana; e 2) um conjugado de ácido nucleico. o conjugado de ácido nucleico inclui um ligante de alvejamento ligado a um aglutinante opcional e a um ácido nucleico.

Description

“MÉTODOS PARA ENTREGAR UM ÁCIDO NUCLEICO A UMA CÉLULA, PARA ENTREGAR UM ÁCIDO NUCLEICO AO CITOSOL DE UMA CÉLULA, COMPOSIÇÃO, PARA TRATAR UMA DOENÇA, PARA ENTREGAR UM SIRNA AO FÍGADO DE UM ANIMAL E PARA TRATAR UMA INFECÇÃO VIRAL POR HEPATITE B EM UM ANIMAL, KITS, POLÍMERO DESESTABILIZADOR DE MEMBRANA, CONJUGADOS DE ÁCIDO NUCLEICO DE FÓRMULA (X), USO DE UM CONJUGADO E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA” REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[001] Este pedido de patente reivindica o benefício de prioridade do pedido US nº de série 62/755.196, depositado em 02 de novembro de 2018, pedido que é incorporado no presente documento a título de referência.
FUNDAMENTOS
[002] Os conjugados de ácido nucleico alvejados são sistemas de entrega de fármacos eficazes para ácidos nucleicos biologicamente ativos (consultar o documento WO2017/177326). Os fármacos com base em ácidos nucleicos, que incluem grandes moléculas de ácido nucleico, como, por exemplo, RNA mensageiro transcrito in vitro (mRNA), bem como polinucleotídeos menores que interagem com um RNA mensageiro ou um gene, devem ser entregues ao compartimento celular adequado para ser eficaz.
[003] Por exemplo, ácidos nucleicos de filamento duplo, como moléculas de RNA de filamento duplo (dsRNA), incluindo, por exemplo, siRNAs, sofrem com suas propriedades físico-químicas que os tornam impermeáveis às células. Mediante a entrega no compartimento adequado, os siRNAs bloqueiam a expressão gênica por meio de um mecanismo regulatório altamente conservado conhecido como interferência de RNA (RNAi). Normalmente, os siRNAs são grandes em tamanho com um peso molecular que está na faixa de 12-17 kDa e são altamente aniônicos devido à sua cadeia principal de fosfato com até 50 cargas negativas. Além disso, os dois filamentos complementares de RNA resultam em uma hélice rígida. Estas particularidades contribuem para as fracas propriedades "similares a fármacos" do siRNA. Quando administrado por via intravenosa, o siRNA é rapidamente excretado do corpo com uma meia-vida típica na faixa de apenas 10 minutos. Além disso, os siRNAs são rapidamente degradados por nucleases presentes no sangue e outros fluidos ou em tecidos, e foi demonstrado que estimulam fortes respostas imunológicas in vitro e in vivo.
Consultar, por exemplo, Robbins et al., Oligonucleotides 19:89-102, 2009. mRNA molecules suffer from similar issues of impermeability, fragility, and immunogenicity.
[004] Pela introdução de modificações químicas apropriadas, a estabilidade em relação às nucleases pode ser aumentada e, ao mesmo tempo, a estimulação imunológica pode ser suprimida. A conjugação de certos ligantes a siRNAs pode melhorar as características farmacocinéticas da molécula de RNA de filamento duplo. Foi demonstrado que certos conjugados de siRNA de pequenas moléculas são eficazes em uma infrarregulação específica de um gene expresso em hepatócitos de roedores. No entanto, para obter o efeito biológico desejado, uma grande dose é necessária. Consultar Soutschek et al, Nature 432: 173-178, 2004.
[005] Apesar dos esforços anteriores, são necessários métodos melhorados para a entrega de ácidos nucleicos nas células. Por exemplo, há necessidade de métodos que melhorem a potência, reduzam a dose necessária, e/ou reduzam a frequência de dosagem. Métodos e formulações que podem ser usados para entregar ácidos nucleicos subcutâneos também são necessários.
BREVE SUMÁRIO
[006] Em uma modalidade, a invenção fornece um método para a entrega de um ácido nucleico a uma célula que compreende o contato da célula com, 1) um polímero desestabilizador de membrana; e 2) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico.
[007] Em uma modalidade, a invenção fornece um método para entregar um ácido nucleico ao citosol de uma célula-alvo dentro de um indivíduo, em que o método compreende: administrar ao indivíduo (a) um polímero desestabilizador de membrana, e (b) um ácido nucleico conjugado da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico, em que o ácido nucleico é entregue ao citosol da célula- alvo.
[008] Em uma modalidade, a invenção fornece um método que compreende administrar a um animal, 1) um polímero desestabilizador de membrana; e 2) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico.
[009] Em uma modalidade, a invenção fornece uma composição que compreende: a) um carreador farmaceuticamente aceitável, b) um polímero desestabilizador de membrana; e c) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X)
em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico. Em uma modalidade, a composição é formulada para administração por injeção. Em uma modalidade, a composição é formulada para administração por injeção subcutânea.
[010] Em uma modalidade, a invenção fornece um método para o tratamento de uma doença caracterizada pela superexpressão de um polipeptídeo, em que compreende administrar a um animal que tem a doença uma quantidade terapeuticamente eficaz de (a) um polímero desestabilizador de membrana; e b) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um siRNA que alveja a expressão do polipeptídeo superexpresso.
[011] Em uma modalidade, a invenção fornece um método para entregar um siRNA ao fígado de um animal, em que compreende administrar ao animal (a) um polímero desestabilizador de membrana que compreende uma porção química de alvejamento (T5) selecionada para promover a entrega específica de hepatócitos do polímero; e b) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é o siRNA.
[012] Em uma modalidade, a invenção fornece um método para tratar uma infecção viral de hepatite B em um animal, em que compreende administrar ao animal (a) um polímero desestabilizador de membrana, que compreende uma porção química de alvejamento (T5) selecionada para promover a entrega específica de hepatócitos do polímero; e b) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento selecionado para promover a entrega específica de hepatócito do conjugado, B é um aglutinante opcional e C é um siRNA que é eficaz para tratar a infecção viral de hepatite B.
[013] Em uma modalidade, a invenção fornece um kit que compreende: 1) um polímero desestabilizador de membrana; 2) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico; e 3) instruções para entregar um ácido nucleico a uma célula que compreende contatar a célula com o conjugado de ácido nucleico e o polímero desestabilizador de membrana.
[014] Em uma modalidade, a invenção fornece um kit que compreende: 1) um polímero desestabilizador de membrana; 2) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico; e 3) instruções para entregar um ácido nucleico ao citosol de uma célula-alvo dentro de um indivíduo ao administrar o conjugado de ácido nucleico e o polímero desestabilizador de membrana ao indivíduo.
[015] Em uma modalidade, a invenção fornece um kit que compreende: 1) um polímero desestabilizador de membrana; 2) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C
(X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico; e 3) instruções para administrar o conjugado de ácido nucleico e o polímero desestabilizador de membrana a um animal.
[016] Em uma modalidade, a invenção fornece um polímero desestabilizador de membrana e um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico; para uso em terapia médica.
[017] Em uma modalidade, a invenção fornece um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico; para o tratamento profilático ou terapêutico de uma doença tratável com o ácido nucleico, em combinação com um polímero desestabilizador de membrana.
[018] Em uma modalidade a invenção fornece o uso de um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico; para preparar um medicamento para tratar uma doença tratável com o ácido nucleico, em combinação com um polímero desestabilizador de membrana.
[019] Em uma modalidade, a invenção fornece um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico, em que o conjugado de ácido nucleico está associado de forma não covalente a um polímero desestabilizador de membrana.
[020] Em uma modalidade, a invenção fornece um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico, em que o conjugado de ácido nucleico é parcial ou totalmente encapsulado por uma micela que compreende uma pluralidade de polímeros desestabilizadores de membrana.
[021] Em uma modalidade, a invenção fornece um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico, em que o conjugado de ácido nucleico é parcialmente encapsulado por uma micela que compreende uma pluralidade de polímeros desestabilizadores de membrana.
[022] Em uma modalidade, a invenção fornece um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico, em que o conjugado de ácido nucleico é totalmente encapsulado por uma micela que compreende uma pluralidade de polímeros desestabilizadores de membrana.
[023] Em certas modalidades, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um carreador farmaceuticamente aceitável e um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico, em que o conjugado de ácido nucleico é parcial ou totalmente encapsulado por uma micela que compreende uma pluralidade de polímeros desestabilizadores de membrana.
[024] Em uma modalidade, a invenção fornece compostos, composições e métodos que podem ser usados para alvejar a distribuição de ácidos nucleicos terapêuticos (por exemplo, para o fígado).
Especificamente, inclui o uso de uma micela de polímero como um intensificador de potência para uma plataforma de conjugado administrada por via subcutânea para a entrega alvejada de terapêutica de ácido nucleico ao fígado. As micelas de polímero normalmente permanecem intactas durante a entrega aos hepatócitos e exercem sua funcionalidade, por exemplo, quando administradas por via subcutânea. O silenciamento do gene é examinado medindo-se a inibição ou redução na expressão do gene alvo em relação ao controle do veículo. Resultados favoráveis foram obtidos em camundongos, onde a coadministração de um polímero desestabilizador de membrana e um conjugado de ácido nucleico aumentou a potência em cerca de 5 vezes; um início de ação mais rápido e uma duração de efeito mais longa também foram observados.
[025] Outros objetivos, características e vantagens da presente invenção se tornarão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada.
DESCRIÇÃO DETALHADA POLÍMEROS DESTABALIZANTES DE MEMBRANA
[026] Os polímeros desestabilizadores de membrana são relatados na Publicação do Pedido de Patente dos Estados Unidos Números: US2010/0160216, US2010/0210504, US2011/0143434, US2011/0123636, US2016/0250338, US2017/0239360, e US2016/0206750, e na Publicação de Pedido de Patente Internacional Números: WO2009/140427, WO2009/140429, WO2015/017519, e WO2016/118697. Além disso, as descrições da síntese de certos polímeros desestabilizadores de membrana específicos podem ser encontradas na seção suplementar de Prieve et al., Mol. Ther., 2018, 26, 3.
[027] Em uma modalidade, o polímero desestabilizador de membrana compreende três regiões distintas:
[028] Em primeiro lugar, o direcionamento de hepatócitos pode ser alcançado com uma porção química de alvejamento, como uma única unidade de monossacarídeo N-acetilgalactoseamina que interage com um dos três domínios trivalentes do receptor ASGPr que é altamente expresso na superfície dos hepatócitos. Esta unidade monossacarídica forma a “cabeça” da cadeia polimérica. A N-acetil galactose amina (GalNAc ou NAG) pode ser ligada ao segundo domínio funcional do polímero por meio de um espaçador de aminoácido PEG12 acoplado ao carbonotritioato de etila (ECT). Isso representa o “agente de transferência de cadeia” inicial ou CTA. As reações de polimerização subsequentes podem ocorrer no monossacarídeo totalmente desprotegido.
[029] A segunda região de "solubilização" ou hidrofílica é composta por metacrilato de polietilenoglicol 4-5 (PEGMA 4-5). O número 4 e 5 se refere ao número de repetições de etilenoglicol no monômero) e metacrilato de hidroxietil (HMA). Normalmente em uma proporção em torno de 75/25
PEGMA/HMA. A polimerização pode ocorrer usando transferência reversível de cadeia de adição-fragmentação (RAFT) que permite o controle sobre o peso molecular gerado e polidispersidade durante uma polimerização de radical livre iniciada com uma azobisisobutironitrila (AIBN). A reação pode prosseguir em um tempo fixo em uma determinada concentração e temperatura para produzir um polímero hidrofílico em torno de 4 kDa coberto com uma funcionalidade tritiocarbonato terminal que permite polimerização adicional.
[030] A terceira região do polímero fornece a funcionalidade de liberação endossômica. Também pode ser sintetizado usando polimerização RAFT, no entanto, neste caso, as unidades monoméricas na reação são acrilato de dimetilaminoetila (DMAEA), metacrilato de butila (BMA) e ácido propilacrílico (PAA) (tipicamente em razões de cerca de 33%/55%/12%). Esta segunda etapa de polimerização estende o polímero em cerca de outros 5 kDa. Após a polimerização, o grupo final do polímero (tritiocarbonato) pode ser removido por redução induzida por radical e o polímero final caracterizado por 1H NMR, HPLC e GPC (para determinar MW e polidispersidade)
[031] A combinação das duas regiões poliméricas ajuda a maximizar a eficácia. Em pH fisiológico ou neutro, o polímero é tipicamente neutro. Além disso, em pH neutro, a segunda região de liberação endossômica exibe um caráter hidrofóbico. Em conjugação com o domínio hidrofílico, se o polímero estiver acima da concentração micelar crítica (CMC) em meio aquoso, pequenas estruturas micelares se formarão espontaneamente. Estes demonstraram ter atividade desestabilizadora da membrana responsiva ao pH em ensaios de hemólise de glóbulos vermelhos: abaixo do CMC, a hemólise cai precipitadamente. Durante a endocitose e subsequente diminuição do pH, o polímero pode tornar-se carregado positivamente e, consequentemente, promover a liberação endossômica.
[032] Em uma modalidade, o polímero desestabilizador de membrana é um polímero da fórmula (XX):
T5-L-[PEGMAm-M2n]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w (XX)
em que:
PEGMA é resíduo de metacrilato de polietilenoglicol com 2 a 20 unidades de etileno glicol; M2 é um resíduo de metacrilato selecionado a partir do grupo que consiste em um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato;
um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato ramificado;
um resíduo de metacrilato de colesterila; um resíduo (C4-C18)alquil-metacrilato substituído por um ou mais átomos de flúor; e um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato ramificado substituído por um ou mais átomos de flúor;
BMA é resíduo de metacrilato de butila;
PAA é um resíduo de ácido propil acrílico;
DMAEMA é um resíduo de metacrilato de dimetilaminoetila;
m e n são, cada um, uma fração molar maior que 0, em que m é maior que n e m+n=1;
q é uma fração molar de 0,2 a 0,75;
r é uma fração molar de 0,05 a 0,6;
s é uma fração molar de 0,2 a 0,75;
q + r + s = 1;
v é 1 a 25 kDa;
w é 1 a 25 kDa;
T5 é uma porção química de alvejamento (por exemplo, um peptídeo, polímero ou sacarídeo); e
L está ausente ou é uma porção química de ligação.
Em uma modalidade, M2 é selecionado a partir do grupo que consiste em:
resíduo de metacrilato de 2,2,3,3,4,4,4-heptafluorobutila,
resíduo de metacrilato de 3,3,4,4,5,6,6,6-octafluoro-
5(trifluorometil)hexila,
resíduo de 2-metilacrilato de 2,2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-
pentadecafluorooctila,
resíduo de metacrilato de 3,3,4,4,5,5,6,6,6-nonafluorohexila,
resíduo de metacrilato de 3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8- tridecafluorooctila,
resíduo de metacrilato de 1,1,1-trifluoro-2-(trifluorometil)-2-hidroxi-
4-metil-5-pentila, resíduo de metacrilato de 2-[(1',1',1'-trifluoro-2'-(trifluorometil)-
2'-hidroxi)propil]-3-norbornila,
resíduo de metacrilato de 2-etilhexila,
resíduo de metacrilato de butila,
resíduo de metacrilato de hexila,
resíduo de metacrilato de octila,
resíduo de metacrilato de n-decila,
resíduo de metacrilato de laurila,
resíduo de metacrilato de miristila,
resíduo de metacrilato de estearila,
resíduo de metacrilato de colesterila,
resíduo de metacrilato de éter fenílico de etilenoglicol,
resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster 2-feniletílico,
resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster 2-[[(I,I-
dimetiletoxi)carbonil]amino]etílico,
resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster 2-(lH-imidazol-l-
il)etílico,
resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster ciclohexílico, resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster 2-[bis(I- metiletil)amino]etílico, resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster 3-metilbutílico, resíduo de metacrilato de neopentila, resíduo de metacrilato de terc-butila, resíduo de metacrilato de 3,3,5-trimetil ciclohexila, resíduo de metacrilato de 2-hidroxipropila, resíduo de metacrilato de 5-nonila, resíduo de metacrilato de 2-butil-l-octila, resíduo de metacrilato de 2-hexil-l-decila, e resíduo de metacrilato de 2-(terc-butil amino)etila.
[033] A porção química de alvejamento T5 é uma porção que pode ser, por exemplo, um peptídeo, polímero ou sacarídeo. A porção química de alvejamento T5 em certas modalidades alveja a entrega a um local no corpo, por exemplo, alveja a entrega a um órgão específico ou tipo de célula. Em certas modalidades, T5 é um peptídeo. Em certas modalidades, T5 é um polímero. Em certas modalidades, T5 é um sacarídeo.
[034] Em uma modalidade, o polímero desestabilizador de membrana é um polímero da fórmula (XXI): (XXI).
[035] Em algumas modalidades, px é um número inteiro de cerca de 2 a cerca de 50, por exemplo, de cerca de 2 a cerca de 20, por exemplo, de 4 a 12 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40,
41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50). Em algumas modalidades, px é um número inteiro de cerca de 8 a cerca de 16 (por exemplo, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16). Em algumas modalidades, px é cerca de 12. Em algumas modalidades, py é um número inteiro de cerca de 2 a cerca de 20 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20). Em algumas modalidades, py é um número inteiro de cerca de 2 a cerca de 10 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10). Em algumas modalidades, py é um número inteiro de cerca de 4 a cerca de 5 (por exemplo, 4 ou 5).
[036] Em um polímero da fórmula (X), deve ser entendido que a representação do bloco de polímero: designa um bloco de polímero com os dois grupos de monômeros aeb: distribuído por todo o bloco, em que cerca de 75,5 por cento em peso do bloco é o grupo monomérico a e cerca de 24,5 por cento em peso do bloco é o grupo monômero b. A representação do bloco de polímero:
não designa um bloco de polímero compreendendo um bloco de homo-polímero do grupo monomérico a e um homo-polímero b de bloqueio do grupo monomérico b. O mesmo é verdade para a representação do bloco de polímero: , que tem três unidades monoméricas distribuídas por todo o bloco, em aproximadamente as relações de peso total mostradas.
CONJUGADOS DE ÁCIDO NUCLEICO ALVO
[037] Os termos "alcóxi", "alquilamino" e “alquiltio”, são usados em seu sentido convencional, e se referem àqueles grupos alquila fixados ao restante da molécula através de um átomo de oxigênio (“oxi”), um grupo amino (“amino”) ou grupo tio, e incluem ainda variantes mono e poli-halogenadas dos mesmos.
[038] Conforme usado no presente documento, o termo "alquila", por si só ou como parte de outro substituinte, significa, a menos que indicado de outro modo, um radical de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada, tendo o número de átomos de carbono designado (isto é, C1-8 significa de um a oito carbonos). Exemplos de grupos alquila incluem metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, sec-butila, n-pentila, n-hexila, n-heptila, n-octila e similares. O termo "alquenila" se refere a um radical alquil insaturado tendo uma ou mais ligações duplas. De forma semelhante, o termo "alquinila” se refere a um radical alquila insaturado que tem uma ou mais ligações triplas. Os exemplos desses grupos alquila insaturados incluem vinila, 2-propenila, crotila, 2- isopentenila, 2-(butadienil), 2,4-pentadienila, 3-(1,4-pentadienil), etinila, 1- e 3- propinila, 3-butinila, e os homólogos superiores e isômeros.
[039] O termo "animal" inclui espécies de mamíferos, como humano, camundongo, rato, cachorro, gato, hamster, porquinho-da-índia, coelho, gado e semelhantes.
[040] O termo "arila”, conforme utilizado no presente documento, se refere a um único anel aromático todo de carbono ou um sistema de múltiplos anéis condensados todo de carbono em que pelo menos um dos anéis é aromático. Por exemplo, em certas modalidades, um grupo arila tem 6 a 20 átomos de carbono, 6 a 14 átomos de carbono, 6 a 12 átomos de carbono ou 6 a 10 átomos de carbono. Arila inclui um radical fenila. Arila também inclui múltiplos sistemas de anel de carbono condensado (por exemplo, sistemas de anel compreendendo 2, 3 ou 4 anéis) tendo cerca de 9 a 20 átomos de carbono em que pelo menos um anel é aromático e em que os outros anéis podem ser aromáticos ou não aromáticos (por exemplo, cicloalquila). Os anéis do sistema de múltiplos anéis condensados podem ser conectados uns aos outros por meio de ligações fundidas, espiro e em ponte quando permitido pelos requisitos de valência. Deve ser entendido que o ponto de fixação de um sistema de múltiplos anéis condensados, conforme definido acima, pode estar em qualquer posição do sistema de anéis, incluindo uma porção aromática ou carbociclo do anel.
Exemplos não limitantes de grupos arila incluem, sem limitação, fenila, indenila,
indanila, naftila, 1,2,3,4-tetra-hidronaftila, antracenila e similares.
[041] O termo "cicloalquila" se refere a um anel de carbono saturado ou parcialmente insaturado (não aromático) com 3 a 8 átomos de carbono (isto é, (C3-C8)carbociclo). O termo também inclui múltiplos sistemas de anéis de carbono saturados e condensados (por exemplo, sistemas de anéis compreendendo 2, 3 ou 4 anéis carbocíclicos). Por conseguinte, carbociclo inclui carbociclos multicíclicos, tais como carbociclos bicíclicos (por exemplo, carbociclos bicíclicos com cerca de 3 a 15 átomos de carbono, cerca de 6 a 15 átomos de carbono, ou 6 a 12 átomos de carbono, como biciclo[3.1.0]hexano e biciclo[2.1.1]hexano), e carbociclos policíclicos (por exemplo, carbociclos tricíclicos e tetracíclicos com até cerca de 20 átomos de carbono). Os anéis do sistema de múltiplos anéis condensados podem ser conectados uns aos outros por meio de ligações fundidas, espiro e em ponte quando permitido pelos requisitos de valência. Por exemplo, carbocilos multicíclicos podem ser conectados uns aos outros através de um único átomo de carbono para formar uma conexão espiro (por exemplo, espiropentano, espiro[4,5]decano, etc), através de dois átomos de carbono adjacentes para formar uma conexão fundida (por exemplo, carbociclos como decahidronaftaleno, norsabinano, norcarano) ou através de dois átomos de carbono não adjacentes para formar uma conexão em ponte (por exemplo, norbornano, biciclo[2.2.2]octano, etc). Exemplos não limitadores de grupos cicloalquila incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, biciclo[2.2.1]heptano, pinano e adamantano.
[042] O termo "gene" se refere a umasequência de ácidos nucleicos (por exemplo, DNA ou RNA) que compreende sequências de codificação de comprimento parcial ou inteiro necessárias para a produção de um polipeptídeo ou polipeptídeo precursor.
[043] "Produto gênico", conforme usado no presente documento, se refere a um produto de um gene, como um transcrito de RNA ou um polipeptídeo.
[044] Os termos "halo" ou "halogênio", por si só ou como parte de outro substituinte, significam, a menos que indicado em contrário, um átomo de flúor, cloro, bromo ou iodo.
[045] O termo "heteroarila”, conforme utilizado no presente documento, se refere a um único anel aromático que tem pelo menos um átomo diferente de carbono no anel, em que o átomo é selecionado do grupo que consiste em oxigênio, nitrogênio e enxofre; "Heteroarila” também inclui múltiplos sistemas de anéis condensados que têm pelo menos um tal anel aromático, cujos múltiplos sistemas de anéis condensados são descritos abaixo. Assim, "heteroarila” inclui anéis aromáticos únicos de cerca de 1 a 6 átomos de carbono e cerca de 1-4 heteroátomos selecionados a partir do grupo que consiste em oxigênio, nitrogênio e enxofre. Os átomos de enxofre e nitrogênio também podem estar presentes em uma forma oxidada, desde que o anel seja aromático.
Os sistemas de anel de heteroarila exemplificativos incluem, sem limitação, piridila, pirimidinila, oxazolila e furila. "Heteroarila” também inclui múltiplos sistemas de anéis condensados (por exemplo, sistemas de anéis compreendendo 2, 3 ou 4 anéis) em que um grupo heteroarila, conforme definido acima, é condensado com um ou mais anéis selecionados de cicloalquila, arila, heterociclo e heteroarila. Deve ser entendido que o ponto de ligação para um sistema de múltiplos anéis condensados heteroarila ou heteroarila pode estar em qualquer átomo adequado do sistema de múltiplos anéis condensados heteroarila ou heteroarila incluindo um átomo de carbono e um heteroátomo (por exemplo, um nitrogênio). Os exemplos de grupos heteroarils incluem, sem limitação, piridinila, piridazinila, pirazinila, quinoxalila, indolizinila, benzo[b]tienila, quinazolinila, purinila, indolila, quinolinila, pirimidinila, pirrolila, pirazolila, oxazolila, tiazolila, tienila, isoxazolila, oxatiadiazolila, isotiazolila, tetrazolila, imidazolila, triazolila, furanila, benzofurila e indolila.
[046] O termo "heterociclo" se refere a um único anel saturado ou parcialmente insaturado que tem pelo menos um átomo diferente de carbono no anel, em que o átomo é selecionado a partir do grupo que consiste em oxigênio, nitrogênio e enxofre; o termo também inclui múltiplos sistemas de anéis condensados que têm pelo menos um tal anel saturado ou parcialmente insaturado, cujos múltiplos sistemas de anéis condensados são descritos mais detalhadamente abaixo. Assim, o termo inclui anéis saturados ou parcialmente insaturados (por exemplo, anéis de 3, 4, 5, 6 ou 7 membros) de cerca de 1 a 6 átomos de carbono e de cerca de 1 a 3 heteroátomos selecionados a partir do grupo que consiste em oxigênio, nitrogênio e enxofre no anel. Os átomos de enxofre e nitrogênio também podem estar presentes em suas formas oxidadas.
Heterociclos exemplificativos incluem, sem limitação, azetidinila, tetrahidrofuranila e piperidinila. O termo "heterociclo" também inclui múltiplos sistemas de anéis condensados (por exemplo, sistemas de anéis compreendendo 2, 3 ou 4 anéis) em que um único anel heterociclo (como definido acima) pode ser condensado com um ou mais grupos selecionados a partir de cicloalquila, arila e heterociclo para formar o sistema de múltiplos anéis condensados. Os anéis do sistema de múltiplos anéis condensados podem ser conectados uns aos outros por meio de ligações fundidas, espiro e em ponte quando permitido pelos requisitos de valência. Deve ser entendido que os anéis individuais do sistema de múltiplos anéis condensados podem ser conectados em qualquer ordem um em relação ao outro. Também deve ser entendido que o ponto de ligação de um sistema de múltiplos anéis condensados (como definido acima para um heterociclo) pode estar em qualquer posição do sistema de múltiplos anéis condensados incluindo uma porção de heterociclo, arila e carbociclo do anel. Em uma modalidade, o termo heterociclo inclui um heterociclo de 3-15 membros. Em uma modalidade, o termo heterociclo inclui um heterociclo de 3-10 membros. Em uma modalidade, o termo heterociclo inclui um heterociclo de 3-8 membros. Em uma modalidade, o termo heterociclo inclui um heterociclo de 3-7 membros. Em uma modalidade, o termo heterociclo inclui um heterociclo de 3-6 membros. Em uma modalidade, o termo heterociclo inclui um heterociclo de 4-6 membros. Em uma modalidade, o termo heterociclo inclui um heterociclo monocíclico ou bicíclico de 3-10 membros compreendendo 1 a 4 heteroátomos.
Em uma modalidade, o termo heterociclo inclui um heterociclo monocíclico ou bicíclico de 3-8 membros compreendendo 1 a 3 heteroátomos. Em uma modalidade, o termo heterociclo inclui um heterociclo monocíclico de 3-6 membros compreendendo 1 a 2 heteroátomos. Em uma modalidade, o termo heterociclo inclui um heterociclo monocíclico de 4-6 membros compreendendo 1 a 2 heteroátomos. Os heterociclos exemplificativos incluem, sem limitação aziridinila, azetidinila, pirrolidinila, piperidinila, homopiperidinila, morfolinila, tiomorfolinila, piperazinila, tetrahidrofuranila, di-hidrooxazolila, tetrahidropiranila, tetrahidrotiopiranila, 1,2,3,4-tetrahidroquinolila, benzoxazinila, di-hidrooxazolila, cromanila, 1,2-di-hidropiridinila, 2,3-di-hidrobenzofuranila, 1,3-benzodioxolila, 1,4-benzodioxanila, espiro[ciclopropano-1,1'-isoindolinil]-3'-ona, isoindolinil-1- ona, 2-oxa-6-azaspiro[3.3]heptanil, imidazolidin-2-ona imidazolidina, pirazolidina, butirolactama, valerolactama, imidazolidinona, hidantoína, dioxolano, ftalimida e 1,4-dioxano.
[047] O termo "sacarídeo" inclui monossacarídeos, dissacarídeos e trissacarídeos, todos os quais podem ser opcionalmente substituídos. O termo inclui glicose, sacarose, frutose, galactose e ribose, bem como açúcares desoxi como desoxirribose e amino açúcar como galactosamina. Os derivados de sacarídeo podem ser convenientemente preparados conforme descrito na Publicação de Pedidos de Patente Internacional Números WO 96/34005 e 97/03995. Um sacarídeo pode ser convenientemente ligado ao restante de um composto da fórmula I através de uma ligação de éter, uma ligação de tioéter (por exemplo, um S-glicosídeo), um nitrogênio de amina (por exemplo, um N-
glicosídeo) ou uma ligação de carbono-carbono (por exemplo, um C-glicosídeo).
Em uma modalidade, o sacarídeo pode ser convenientemente ligado ao restante de um composto da fórmula I através de uma ligação de éter.
[048] O termo "RNA interferente pequeno" ou "siRNA", conforme utilizado no presente documento, se refere a um RNA de filamento duplo (isto é, RNA duplex) que tem capacidade para reduzir ou inibir a expressão de um gene ou sequência alvo (por exemplo, mediando a degradação ou inibindo a tradução de mRNAs que são complementares à sequência de siRNA) quando o siRNA está na mesma célula que o gene ou sequência alvo. O siRNA pode ter identidade substancial ou completa com o gene ou sequência alvo, ou pode compreender uma região de incompatibilidade (ou seja, um motivo de incompatibilidade). Em certas modalidades, os siRNAs podem ter cerca de 19- 25 nucleotídeos (duplex) de comprimento e, de preferência, cerca de 20-24, 21- 22 ou 21-23 nucleotídeos (duplex) de comprimento. Os duplexes de siRNA podem compreender saliências 3‘ de cerca de 1 a cerca de 4 nucleotídeos ou cerca de 2 a cerca de 3 nucleotídeos e terminais de fosfato 5'. Exemplos de siRNA incluem, sem limitação, uma molécula polinucleotídica de filamento duplo montada a partir de duas moléculas de filamento separadas, em que um filamento é o filamento sentido e a outra é o filamento antissentido complementar.
[049] Em certas modalidades, a saliência 5' e/ou 3’ em uma ou ambas os filamentos do siRNA compreendem 1-4 (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) nucleotídeos de desoxitimidina modificados e/ou não modificados (t ou dT), 1-4 (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) modificados (por exemplo, 2'OMe) e/ou ribonucleotídeos de uridina (U) não modificados, e/ou 1-4 (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) modificado (por exemplo, 2'OMe) e/ou ribonucleotídeos não modificados ou desoxirribonucleotídeos tendo complementaridade com a sequência alvo (por exemplo, saliência 3’ no filamento antissentido) ou o filamento complementar dos mesmos (por exemplo, saliência 3' no filamento sentido).
[050] De preferência, os siRNAs são sintetizados quimicamente.
O siRNA também pode ser gerado por clivagem de dsRNA mais longo (por exemplo, dsRNA maior que cerca de 25 nucleotídeos de comprimento) com a RNase III ou Dicer de E. coli Estas enzimas processam o dsRNA em siRNA biologicamente ativo (consultar, por exemplo, Yang et al., Proc. Natl. Acad. Sci.
EUA, 99:9942-9947 (2002); Calegari et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 99:14236 (2002); Byrom et al., Ambion TechNotes, 10(1):4-6 (2003); Kawasaki et al., Nucleic Acids Res., 31:981-987 (2003); Knight et al., Ciência, 293:2269-2271 (2001); e Robertson et al., J. Biol. Chem., 243:82 (1968)). De preferência, o dsRNA tem pelo menos 50 nucleotídeos a cerca de 100, 200, 300, 400 ou 500 nucleotídeos de comprimento. Um dsRNA pode ter até 1000, 1500, 2000, 5000 nucleotídeos de comprimento ou mais. O dsRNA pode codificar para um transcrito de gene inteiro ou um transcrito de gene parcial. Em certos casos, o siRNA pode ser codificado por um plasmídeo (por exemplo, transcrito como sequências que se dobram automaticamente em duplexes com loops em gancho).
[051] A frase "inibir a expressão de um gene alvo" se refere à capacidade de um siRNA da invenção para silenciar, reduzir ou inibir a expressão de um gene alvo. Para examinar a extensão do silenciamento do gene, uma amostra de teste (por exemplo, uma amostra biológica de um organismo de interesse que expressa o gene alvo ou uma amostra de células em cultura que expressa o gene alvo) é contatada com um siRNA que silencia, reduz ou inibe a expressão do gene alvo. A expressão do gene alvo na amostra de teste é comparada à expressão do gene alvo em uma amostra de controle (por exemplo, uma amostra biológica de um organismo de interesse expressando o gene alvo ou uma amostra de células em cultura expressando o gene alvo) que é não contatado com o siRNA. As amostras de controle (por exemplo, amostras que expressam o gene alvo) podem receber um valor de 100%. Em modalidades particulares, silenciamento, inibição ou redução da expressão de um gene alvo é alcançado quando o valor da amostra de teste em relação à amostra de controle (por exemplo, apenas tampão, uma sequência de siRNA que alveja um gene diferente, uma sequência de siRNA embaralhada, etc.) é cerca de 100%, 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% ou 0%. Os ensaios adequados incluem, sem limitação, o exame dos níveis de proteína ou mRNA usando técnicas conhecidas pelos versados na técnica, tais como, por exemplo, dot blots, Northern blots, hibridização in situ, ELISA, imunoprecipitação, função enzimática, bem como fenotípica ensaios conhecidos dos especialistas na técnica.
[052] Uma "quantidade eficaz" ou "quantidade terapeuticamente eficaz" de um ácido nucleico terapêutico, como siRNA, é uma quantidade suficiente para produzir o efeito desejado, por exemplo, uma inibição da expressão de uma sequência alvo em comparação com o nível de expressão normal detectado na ausência de um siRNA. Em modalidades particulares, a inibição da expressão de um gene alvo ou sequência alvo é alcançada quando o valor obtido com um siRNA em relação à amostra de controle (por exemplo, apenas tampão, uma sequência de siRNA que alveja um gene diferente, uma sequência de siRNA embaralhada, etc.) é cerca de 100%, 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% ou 0%. Os ensaios adequados para medir a expressão de um gene alvo ou sequência alvo incluem, sem limitação, examinação dos níveis de proteína ou mRNA usando-se as técnicas conhecidas por aquelas pessoas versadas na técnica, como, por exemplo, dot blots,
Northern blots, hibridização in situ, ELISA, imunoprecipitação, função enzimática, bem como ensaios fenotípicos conhecidos por aqueles versados na técnica.
[053] O termo "ácido nucleico", conforme utilizado no presente documento, se refere a um polímero que contém pelo menos dois nucleotídeos (isto é, desoxirribonucleotídeos ou ribonucleotídeos) na forma de filamento simples ou duplo e inclui DNA e RNA. “Nucleotídeos” contêm um açúcar desoxirribose (DNA) ou ribose (RNA), uma base e um grupo fosfato. Os nucleotídeos estão ligados entre si através dos grupos fosfato. "Bases" incluem purinas e pirimidinas, que incluem ainda compostos naturais de adenina, timina, guanina, citosina, uracila, inosina e análogos naturais e derivados sintéticos de purinas e pirimidinas, que incluem, sem limitação, modificações que colocam novos grupos reativos, tais como, mas não limitados a, aminas, álcoois, tióis, carboxilatos e alquilhalogenetos. O termo engloba os ácidos nucleicos contendo análogos de nucleotídeos conhecidos ou resíduos da cadeia principal ou ligações modificadas, os quais são sintéticos, de ocorrência natural e de ocorrência não natural, que têm propriedades de ligação similares ao ácido nucleico de referência e que são metabolizados de um modo similar aos nucleotídeos de referência. Exemplos desses análogos incluem, sem limitação, fosforotioatos, fosforamiditas, fosfonatos de metila, fosfonatos quiral-metila, ribonucleotídeos de 2'-O-metila e ácidos nucleico peptídicos (PNAs). Além disso, os ácidos nucleicos podem incluir uma ou mais frações UNA.
[054] Conforme usado no presente documento, o termo "grupo protetor" se refere a um substituinte que é comumente empregado para bloquear ou proteger um grupo funcional ou um composto específico. Por exemplo, um "grupo protetor de amino" é um substituinte ligado a um grupo amino que bloqueia ou protege a funcionalidade amino no composto. Grupos protetores de amino adequados incluem acetila, trifluoroacetila, t-butoxicarbonila (BOC),
benziloxicarbonila (CBZ) e 9-fluorenilmetilenoxicarbonila (Fmoc). De forma semelhante, um "grupo protetor de hidróxi" se refere a um substituinte de um grupo hidróxi que bloqueia ou protege a funcionalidade hidróxi. Grupos protetores adequados incluem acetila, silila e 2,2-dimetóxi propeno. Um "grupo protetor de carbóxi" se refere a um substituinte do grupo carbóxi que bloqueia ou protege a funcionalidade carbóxi. Grupos protetores de carbóxi comuns incluem fenilsulfoniletila, cianoetila, 2-(trimetilsilil)etila, 2-(trimetilsilil)etoximetila, 2-(p- toluenossulfonil)etila, 2-(p-nitrofenilsulfenil)etila, 2-(difenilfosfino)-etila, nitroetila e similares. Para uma descrição geral dos grupos protetores e seu uso, consultar P.G.M. Wuts e T.W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis 4a edição, Wiley-Interscience, Nova York, 2006.
[055] O termo "grupo de ativação sintética" se refere a um grupo que pode ser ligado a um átomo para ativar esse átomo para permitir que ele forme uma ligação covalente com outro grupo reativo. Entende-se que a natureza do grupo de ativação sintético pode depender do átomo que ele está ativando. Por exemplo, quando o grupo de ativação sintético está ligado a um átomo de oxigênio, o grupo de ativação sintético é um grupo que irá ativar esse átomo de oxigênio para formar uma ligação (por exemplo, uma ligação éster, carbamato ou éter) com outro grupo reativo. Esses grupos de ativação sintética são conhecidos. Exemplos de grupos de ativação sintéticos que podem ser ligados a um átomo de oxigênio incluem, sem limitação, acetato, succinato, triflato e mesilato. Quando o grupo de ativação sintético está ligado a um átomo de oxigênio de um ácido carboxílico, o grupo de ativação sintético pode ser um grupo derivável de um reagente de acoplamento conhecido (por exemplo, um reagente de acoplamento de amida conhecido). Esses reagentes de acoplamento são conhecidos. Exemplos de tais reagentes de acoplamento incluem, sem limitação, N,N'-Diciclohexilcarbodimida (DCC), hidroxibenzotriazol (HOBt), N-(3-Dimetilaminopropil)-N'-etilcarbonato (EDC), hexafluorofosfato de
(Benzotriazol-1-iloxi)tris (dimetilamino)fosfônio (BOP), hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfônio (PyBOP), Hexafluorofosfato 3-óxido de (1-[Bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridínio(HATU), solução de anidrido propilfosfônico (T3P) ou hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il- N,N,N',N'-tetrametilurônio (HBTU).
ÁCIDOS NUCLEICOS
[056] O termo "ácido nucleico" inclui qualquer oligonucleotídeo ou polinucleotídeo, com fragmentos contendo até 60 nucleotídeos geralmente denominados oligonucleotídeos e fragmentos mais longos denominados polinucleotídeos. Um desoxirribooligonucleotídeo consiste em um açúcar de 5 carbonos chamado desoxirribose unido covalentemente ao fosfato nos carbonos 5 'e 3' desse açúcar para formar um polímero alternado não ramificado. O DNA pode estar na forma de, por exemplo, moléculas antissentido, DNA de plasmídeo, DNA pré-condensado, um produto de PCR, vetores, cassetes de expressão, sequências quiméricas, DNA cromossômico ou derivados e combinações desses grupos. Um ribooligonucleotídeo consiste em uma estrutura de repetição semelhante em que o açúcar de 5 carbonos é a ribose. O RNA pode estar na forma, por exemplo, de pequeno RNA interferente (siRNA), substrato Dicer dsRNA, pequeno hairpin RNA (shRNA), RNA interferente assimétrico (aiRNA), microRNA (miRNA), mRNA, tRNA, rRNA, tRNA, RNA viral (vRNA), RNA de autoamplificação (sa-RNA), e suas combinações. Por conseguinte, no contexto desta invenção, os termos "polinucleotídeo" e "oligonucleotídeo" referem-se a um polímero ou oligômero de nucleotídeo ou monômeros de nucleosídeo consistindo em bases de ocorrência natural, açúcares e ligações intersacar (estrutura) Os termos "polinucleotídeo" e "oligonucleotídeo" também incluem polímeros ou oligômeros compreendendo monômeros de ocorrência não natural, ou porções dos mesmos, que funcionam de forma semelhante. Esses oligonucleotídeos modificados ou substituídos são frequentemente preferidos em relação às formas nativas por causa de propriedades como, por exemplo, absorção celular aumentada, imunogenicidade reduzida e estabilidade aumentada na presença de nucleases.
[057] Exceto onde indicado em contrário, uma sequência de ácido nucleico específica abrange também implicitamente variantes modificadas de forma conservadora da mesma (por exemplo, substituições de códons degenerados), alelos, ortólogos, SNPs e sequências complementares, assim como a sequência indicada explicitamente. Especificamente, substituições de códon degenerado podem ser atingidas ao se gerar sequências em que a terceira posição de um ou mais códons selecionados (ou todos) é substituída por resíduos de base mistas e/ou desoxi-inosina (Batzer et al., Nucleic Acid Res., 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem., 260:2605-2608 (1985); Rossolini et al., Mol. Cell. Probes, 8:91-98 (1994)).
[058] Conforme descrito no presente documento, certas modalidades da invenção fornecem métodos e composições para a entrega de um ácido nucleico a uma célula. Em certas modalidades, o ácido nucleico é um ácido nucleico descrito no presente documento. Por exemplo, os ácidos nucleicos usados aqui podem ser DNA ou RNA de filamento simples, ou DNA ou RNA de filamento duplo, ou híbridos de DNA-RNA. Exemplos de RNA de filamento duplo são descritos no presente documento e incluem, por exemplo, siRNA e outros agentes de RNAi, como aiRNA e pré-miRNA. Os ácidos nucleicos de filamento simples incluem, por exemplo, oligonucleotídeos antissentido, ribozimas, miRNA maduro e oligonucleotídeos formadores de triplex.
[059] Em certas modalidades, o ácido nucleico é um oligonucleotídeo. Em modalidades particulares, o oligonucleotídeo varia de cerca de 10 a cerca de 100 nucleotídeos de comprimento. Em várias modalidades relacionadas, os oligonucleotídeos, tanto de filamento simples, duplo e triplo, podem variar em comprimento de cerca de 10 a cerca de 60 nucleotídeos, de cerca de 15 a cerca de 60 nucleotídeos, de cerca de 20 a cerca de 50 nucleotídeos, de cerca de 15 a cerca de 30 nucleotídeos, ou de cerca de 20 a cerca de 30 nucleotídeos de comprimento.
[060] Em certas modalidades, o ácido nucleico é selecionado do grupo que consiste em pequeno RNA de interferência (siRNA), dsRNA de substrato Dicer, pequeno RNA em gancho (shRNA), RNA de interferência assimétrico (aiRNA), microRNA (miRNA), tRNA, rRNA, tRNA, RNA viral (vRNA), RNA de autoamplificação (sa-RNA) e suas combinações.
[061] Em certas modalidades, o ácido nucleico é um composto antissentido. Em algumas modalidades, o ácido nucleico isolado é uma molécula de miRNA. Em certas modalidades, um ácido nucleico alvo é um siRNA. SiRNA adequado, bem como método e intermediários úteis para a sua preparação são relatados na Publicação de Pedido de Patente Internacional Número WO2016/054421.
GENE ALVO
[062] Em certas modalidades, o ácido nucleico (por exemplo, siRNA) pode ser usado para regular negativamente ou silenciar a tradução (ou seja, expressão) de um gene de interesse. Os genes de interesse incluem, sem limitação, genes associados à infecção viral e sobrevivência, genes associados a doenças e distúrbios metabólicos (por exemplo, doenças e distúrbios hepáticos), genes associados a tumorigênese e transformação celular (por exemplo, câncer), genes angiogênicos, genes imunomoduladores, tais como aqueles associados a respostas inflamatórias e autoimunes, genes de receptores de ligantes e genes associados a distúrbios neurodegenerativos. Em certas modalidades, o gene de interesse é expresso em hepatócitos.
[063] Os genes associados à infecção viral e à sobrevivência incluem aqueles expressos por um vírus para se ligar, entrar e se replicar em uma célula. De particular interesse são as sequências virais associadas a doenças virais crônicas. As sequências virais de particular interesse incluem sequências de Filovírus, como o vírus Ebola e o vírus Marburg (consultar, por exemplo, Geisbert et al., J. Infect. Dis., 193:1650-1657 (2006)); Arenavírus, como vírus Lassa, vírus Junin, vírus Machupo, vírus Guanarito e vírus Sabia (Buchmeier et al., Arenaviridae: os vírus e sua replicação, In: FIELDS VIROLOGY, Knipe et al. (Eds.), 4ª ed., Lippincott-Raven, Filadélfia, (2001)); Vírus da gripe, como os vírus Influenza A, B e C, (consultar, por exemplo, Steinhauer et al., Annu Rev Genet., 36:305-332 (2002); e Neumann et al., J Gen Virol., 83:2635-2662 (2002)); Vírus da hepatite (consultar, por exemplo, Hamasaki et al., FEBS Lett., 543:51 (2003); Yokota et al., EMBO Rep., 4:602 (2003); Schlomai et al., Hepatology, 37:764 (2003); Wilson et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. EUA, 100:2783 (2003); Kapadia et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 100:2014 (2003); e FIELDS VIROLOGY, Knipe et al. (eds.), 4ª ed., Lippincott- Raven, Philadelphia (2001)); Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) (Banerjea et al., Mol. Ther., 8:62 (2003); Song et al., J. Virol., 77:7174 (2003); Stephenson, JAMA, 289:1494 (2003); Qin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 100:183 (2003)); Vírus de herpes (Jia et al., J. Virol., 77:3301 (2003)); e Vírus do Papiloma Humano (HPV) (Hall et al., J. Virol., 77:6066 (2003); Jiang et al., Oncogene, 21:6041 (2002)).
[064] As sequências de ácido nucleico de filovírus exemplificativas que podem ser silenciadas incluem, sem limitação, sequências de ácido nucleico que codificam proteínas estruturais (por exemplo, VP30, VP35, nucleoproteína (NP), proteína polimerase (L-pol)) e proteínas associadas à membrana (por exemplo, VP40, glicoproteína (GP), VP24). As sequências completas do genoma para o vírus Ebola são apresentadas, por exemplo, nos números de acesso do Genbank NC-002549; AY769362; NC-006432; NC- 004161; AY729654; AY354458; AY142960; AB050936; AF522874; AF499101; AF272001; e AF086833. As sequências de VP24 do vírus Ebola são apresentadas, por exemplo, nos números de acesso do Genbank U77385 e AY058897. As sequências de L-pol do vírus Ebola são apresentadas, por exemplo, no número de acesso do Genbank X67110. As sequências de VP40 do vírus Ebola são apresentadas, por exemplo, no número de acesso Genbank AY058896. As sequências de NP do vírus Ebola são apresentadas, por exemplo, no número de acesso Genbank AY058895. As sequências de GP do vírus Ebola são apresentadas, por exemplo, no número de acesso do Genbank AY058898; Sanchez et al., Virus Res., 29:215-240 (1993); Will et al., J. Virol., 67:1203-1210 (1993); Volchkov et al., FEBS Lett., 305:181-184 (1992); e Pat. No. U.S.
6.713.069. As sequências adicionais do vírus Ebola são apresentadas, por exemplo, nos números de acesso do Genbank L11365 e X61274. As sequências completas do genoma para o vírus Marburg são apresentadas, por exemplo, nos Genbank Accession Nos. NC-001608; AY430365; AY430366; e AY358025. As sequências GP do vírus de Marburg são apresentadas, por exemplo, nos números de acesso do Genbank AF005734; AF005733; e AF005732. As sequências de VP35 do vírus Marburg são apresentadas, por exemplo, nos números de acesso do Genbank AF005731 e AF005730. Sequências adicionais do vírus de Marburg são apresentadas, por exemplo, nos números de acesso do Genbank X64406; Z29337; AF005735; e Z12132. Os exemplos não limitativos de moléculas de siRNA que alvejam sequências de ácido nucleico do vírus Ebola e do vírus Marburg incluem aquelas descritas na Publicação de Patente sob no U.S. 20070135370, cuja divulgação é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade para todos os fins.
[065] As sequências de ácido nucleico do vírus Influenza exemplificativas que podem ser silenciadas incluem, sem limitação, sequências de ácido nucleico que codificam nucleoproteína (NP), proteínas de matriz (M1 e M2), proteínas não estruturais (NS1 e NS2), RNA polimerase (PA, PB1, PB2), neuraminidase (NA) e hemaglutinina (HA). As sequências de Influenza A NP são apresentadas, por exemplo, nos números de acesso do Genbank NC -004522; AY818138; AB166863; AB188817; AB189046; AB189054; AB189062; AY646169; AY646177; AY651486; AY651493; AY651494; AY651495; AY651496; AY651497; AY651498; AY651499; AY651500; AY651501; AY651502; AY651503; AY651504; AY651505; AY651506; AY651507; AY651509; AY651528; AY770996; AY790308; AY818138; e AY818140. As sequências de Influenza A PA são apresentadas, por exemplo, nos números de acesso do Genbank AY818132; AY790280; AY646171; AY818132; AY818133; AY646179; AY818134; AY551934; AY651613; AY651610; AY651620; AY651617; AY651600; AY651611; AY651606; AY651618; AY651608; AY651607; AY651605; AY651609; AY651615; AY651616; AY651640; AY651614; AY651612; AY651621; AY651619; AY770995; e AY724786.
Exemplos não limitativos de moléculas de siRNA que alvejam sequências de ácido nucleico do vírus Ebola e do vírus Marburg incluem aquelas descritas na Publicação de Patente sob No. U.S. 20070218122, cuja divulgação é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade para todos os fins.
[066] Sequências de ácido nucleico do vírus da hepatite exemplificativos que podem ser silenciadas incluem, mas não estão limitadas a, sequências de ácido nucleico envolvidas na transcrição e tradução (por exemplo, En1, En2, X, P) e sequências de ácido nucleico que codificam proteínas estruturais (por exemplo, proteínas do núcleo, incluindo Proteínas relacionadas a C e C, proteínas do capsídeo e envelope, incluindo S, M, e/ou Proteínas L, ou seus fragmentos) (consultar, por exemplo, FIELDS VIROLOGY, supra).
Sequências exemplificativos de ácido nucleico do vírus da hepatite C (HCV) que podem ser silenciadas incluem, mas não estão limitadas a, a região 5 'não traduzida (5'-UTR), a região 3' não traduzida (3' -UTR), a poliproteína região do códon de iniciação da tradução, a sequência do local de entrada do ribossomo interno (IRES), e/ou sequências de ácido nucleico que codificam a proteína central, a proteína E1, a proteína E2, a proteína p7, a proteína NS2, a NS3 protease/helicase, a proteína NS4A, a proteína NS4B, a proteína NS5A, e/ou a polimerase de RNA dependente de RNA NS5B. As sequências do genoma do HCV são apresentadas, por exemplo, nos números de acesso do Genbank NC- 004102 (genótipo 1a do HCV), AJ238799 (genótipo 1b do HCV), NC -009823 (genótipo 2 do HCV), NC-009824 (genótipo 3 do HCV), NC-009825 (genótipo 4 do HCV), NC-009826 (genótipo 5 do HCV) e NC-009827 (genótipo 6 do HCV).
As sequências de ácido nucleico do vírus da hepatite A são apresentadas, por exemplo, em Genbank No. de Acesso NC-001489; As sequências de ácido nucleico do vírus da hepatite B são apresentadas, por exemplo, em Genbank No.
de Acesso NC-003977; A sequência de ácidos nucleicos do vírus da hepatite D é apresentada, por exemplo, em Genbank No. de Acesso NC -001653; As sequências de ácido nucleico do vírus da hepatite E são apresentadas, por exemplo, em Genbank No. de Acesso NC-001434; e as sequências de ácido nucleico do vírus da hepatite G são apresentadas, por exemplo, no Genbank No.
de Acesso NC-001710. O silenciamento de sequências que codificam genes associados à infecção viral e à sobrevivência pode ser convenientemente usado em combinação com a administração de agentes convencionais usados para tratar a condição viral. Exemplos não limitativos de moléculas de siRNA que alvejam as sequências de ácido nucleico do vírus da hepatite incluem aquelas descritas nas Publicações de Patentes dos EUA Nos. 20060281175, 20050058982 e 20070149470; US Pat. No. 7.348.314; e US Pedido Provisório No. 61/162,127, depositado em 20 de março de 2009, cujas divulgações são aqui incorporadas por referência em sua totalidade para todos os fins.
[067] Genes associados a doenças e distúrbios metabólicos (por exemplo, distúrbios em que o fígado é o alvo e doenças e distúrbios hepáticos) incluem, por exemplo, genes expressos em dislipidemia (por exemplo,
receptores X do fígado, como LXRα e LXRβ (Genbank No. de Acesso NM- 007121), receptores farnesoide X (FXR) (Genbank No. de Acesso NM-005123), proteína de ligação do elemento regulador de esterol (SREBP), protease de sítio 1 (SIP), 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima-A redutase ( HMG coenzima-A redutase), apolipoproteína B (ApoB) (Genbank No. de Acesso NM-000384), apolipoproteína CIII (ApoC3) (Genbank No. de Acesso NM-000040 e NG-008949 REGIÃO: 5001.8164) e apolipoproteína E (ApoE) (Nº de Acesso do Genbank NM-000041 e NG-007084 REGIÃO: 5001.8612)); e diabetes (por exemplo, glicose 6-fosfatase) (ver, por exemplo, Forman et al., Cell, 81:687 (1995); Seol et ai., Mol. Endocrinol., 9:72 (1995), Zavacki et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 94:7909 (1997); Sakai et al., Cell, 85:1037-1046 (1996); Duncan et al., J. Biol.
Chem., 272:12778-12785 (1997); Willy et al., Genes Dev., 9:1033-1045 (1995); Lehmann et al., J. Biol. Chem., 272:3137-3140 (1997); Janowski et al., Nature, 383:728-731 (1996); e Peet et al., Cell, 93:693-704 (1998)). Um versado na técnica entenderá que os genes associados a doenças e distúrbios metabólicos (por exemplo, doenças e distúrbios em que o fígado é um alvo e doenças e distúrbios do fígado) incluem genes que são expressos no próprio fígado, bem como genes expressos em outros órgãos e tecidos. O silenciamento de sequências que codificam genes associados a doenças e distúrbios metabólicos pode ser convenientemente usado em combinação com a administração de agentes convencionais usados para tratar a doença ou distúrbio. Exemplos não limitativos de moléculas de siRNA que alvejam o gene ApoB incluem aqueles descritos na Publicação de Patente sob no U.S. 20060134189, cuja divulgação é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade para todos os fins. Exemplos não limitativos de moléculas de siRNA direcionadas ao gene ApoC3 incluem aqueles descritos no Pedido Provisório sob no U.S.
61/147.235, depositado em 26 de janeiro de 2009, cuja divulgação é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade para todos os fins.
[068] Exemplos de sequências de genes associadas com tumorigênese e transformação celular (por exemplo, câncer ou outra neoplasia) incluem cinesinas mitóticas como Eg5 (KSP, KIF11; Genbank No. de Acesso NM-004523); serine/threonine quinases tais como polo-like quinase 1 (PLK-1) (Genbank No. de Acesso NM-005030; Barr et al., Nat. Rev. Mol. Cell. Biol., 5:429- 440 (2004)); tirosina quinases tais como WEE1 (N.os de Acesso Genbank NM - 003390 e NM-001143976); inibidores da apoptose, tais como XIAP (Genbank No.
de Acesso NM-001167); Subunidades do sinalossomo COP9, tais como CSN1, CSN2, CSN3, CSN4, CSN5 (JAB1; Genbank No. de Acesso NM-006837); CSN6, CSN7A, CSN7B e CSN8; ubiquitina ligases tais como COP1 (RFWD2; Nº de Acesso Genbank NM-022457 e NM-001001740); e histona desacetilases tais como HDAC1, HDAC2 (Genbank No. de Acesso NM-001527), HDAC3, HDAC4, HDAC5, HDAC6, HDAC7, HDAC8, HDAC9, etc. Exemplos não limitativos de moléculas de siRNA alvejadas aos genes Eg5 e XIAP incluem aqueles descritos no pedido de patente sob no de série U.S. 11/807.872, depositado em 29 de maior de 2007, cuja divulgação é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade para todos os fins. Os exemplos não limitativos de moléculas de siRNA que alvejam o gene PLK-1 incluem aqueles descritos nas Publicações de Patente sob no U.S. 20050107316 e 20070265438; e o pedido de patente sob no de série U.S. 12/343.342, depositado em 23 de dezembro de 2008, cujas divulgações são incorporadas no presente documento a título de referência em sua totalidade para todos os fins. Exemplos não limitativos de moléculas de siRNA direcionadas ao gene CSN5 incluem aqueles descritos no Pedido Provisório sob no U.S. 61/045.251, depositado em 15 de abril de 2008, cuja divulgação é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade para todos os fins.
[069] Exemplos adicionais de sequências gênicas associadas à tumorigênese e transformação celular incluem sequências de translocação, como genes de fusão MLL, BCR-ABL (Wilda et al., Oncogene, 21:5716 (2002); Scherr et al., Blood, 101:1566 (2003)), TEL-AML1, EWS-FLI1, TLS-FUS, PAX3- FKHR, BCL-2, AML1-ETO e AML1-MTG8 (Heidenreich et al., Blood, 101:3157 (2003)); sequências superexpressas, como genes de resistência a múltiplas drogas (Nieth et al., FEBS Lett., 545:144 (2003); Wu et al, Cancer Res. 63:1515 (2003)), ciclinas (Li et al., Cancer Res., 63:3593 (2003); Zou et al., Genes Dev., 16:2923 (2002)), beta-catenina (Verma et al., Clin Cancer Res., 9:1291 (2003)), genes da telomerase (Kosciolek et al., Mol Cancer Ther., 2:209 (2003)), c-MYC, N-MYC, BCL-2, receptores de fator de crescimento (por exemplo, EGFR/ErbB1 (Nº de acesso do Genbank NM-005228, NM-201282, NM-201283 e NM-201284; ver também, Nagy et al. Exp. Cell Res., 285:39-49 (2003), ErbB2/HER-2 (N.os de Acesso do Genbank NM-004448 e NM-001005862), ErbB3 (N.os de Acesso do Genbank NM-001982 e NM-001005915) e ErbB4 (N.os de Acesso do Genbank NM-005235 e NM-001042599); e sequências mutadas, como RAS (revisado em Tuschl e Borkhardt, Mol. Interventions, 2:158 (2002)). Exemplos não limitativos de moléculas de siRNA que alvejam o gene EGFR incluem aqueles descritos no pedido de patente sob no de série U.S. 11/807.872, depositado em 29 de maior de 2007, cuja divulgação é incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade para todos os fins.
[070] O silenciamento de sequências que codificam enzimas de reparo de DNA encontra uso em combinação com a administração de agentes quimioterápicos (Collis et al., Cancer Res., 63:1550 (2003)). Os genes que codificam proteínas associadas à migração tumoral também são sequências alvo de interesse, por exemplo, integrinas, selectinas e metaloproteinases. Os exemplos anteriores não são exclusivos. Os versados na técnica entenderão que qualquer sequência de gene total ou parcial que facilite ou promova a tumorigênese ou a transformação celular, o crescimento do tumor ou a migração do tumor pode ser incluída como uma sequência modelo.
[071] Genes angiogênicos são capazes de promover a formação de novos vasos. De particular interesse é o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) (Reich et al., Mol. Vis., 9:210 (2003)) ou VEGFR. As sequências de siRNA que têm como alvo VEGFR são apresentadas em, por exemplo, GB 2396864; Publicação de Patente US Nº 20040142895; e CA 2456444, cujas divulgações são aqui incorporadas por referência em sua totalidade para todos os fins.
[072] Genes anti-angiogênicos são capazes de inibir a neovascularização. Esses genes são particularmente úteis para o tratamento de cânceres nos quais a angiogênese desempenha um papel no desenvolvimento patológico da doença. Exemplos de genes anti-angiogênicos incluem, sem limitação, endostatina (consultar, por exemplo, Patente US 6.174.861), angiostatina (consultar, por exemplo, Patente US 5.639.725) e VEGFR2 (consultar, por exemplo, Decaussin et al., J. Pathol., 188: 369-377 (1999)), cujas divulgações são aqui incorporadas por referência na sua totalidade para todos os efeitos.
[073] Genes imunomoduladores são genes que modulam uma ou mais respostas imunológicas. Exemplos de genes imunomoduladores incluem, sem limitação, citocinas, tais como fatores de crescimento (por exemplo, TGF-α, TGF-β, EGF, FGF, IGF, NGF, PDGF, CGF, GM-CSF, SCF, etc.), interleucinas (por exemplo, IL-2, IL-4, IL-12 (Hill et al., J. Immunol., 171:691 (2003)), IL-15, IL- 18, IL-20, etc.), interferons (por exemplo, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, etc.) e TNF. Os genes do ligante Fas e Fas também são sequências alvo imunomoduladoras de interesse (Song et al., Nat. Med., 9:347 (2003)). Genes que codificam moléculas de sinalização secundária em células hematopoiéticas e linfoides também estão incluídos na presente invenção, por exemplo, quinases da família Tec, tais como tirosina quinase de Bruton (Btk) (Heinonen et al., FEBS Lett., 527:274 (2002)).
[074] Ligantes de receptores celulares incluem ligantes que são capazes de se ligar a receptores de superfície celular (por exemplo, receptor de insulina, receptor de EPO, receptores acoplados à proteína G, receptores com atividade de tirosina quinase, receptores de citocina, receptores de fator de crescimento, etc.), para modular (por exemplo, inibir, ativar, etc.) a via fisiológica na qual o receptor está envolvido (por exemplo, modulação do nível de glicose, desenvolvimento de células sanguíneas, mitogênese, etc.). Exemplos de ligantes do receptor celular incluem, sem limitação, citocinas, fatores de crescimento, interleucinas, interferons, eritropoietina (EPO), insulina, glucagon, ligantes do receptor acoplado à proteína G, etc. Modelos que codificam para uma expansão de repetições de trinucleotídeos (por exemplo, Repetições CAG) encontram uso no silenciamento de sequências patogênicas em distúrbios neurodegenerativos causados pela expansão de repetições de trinucleotídeos, como atrofia muscular espinobulbular e doença de Huntington (Caplen et al., Hum. Mol. Genet., 11:175 (2002)).
[075] Determinados outros genes alvo, que podem ser alvejados por um ácido nucleico (por exemplo, por siRNA) para infrarregular ou silenciar a expressão do gene, incluem, sem limitação, Actina, Alfa 2, Músculo Liso, Aorta (ACTA2), Álcool desidrogenase 1A (ADH1A), Álcool desidrogenase 4 (ADH4), Álcool desidrogenase 6 (ADH6), Afamina (AFM), Angiotensinogen (AGT), Serina-piruvato aminotransferase (AGXT), Alfa-2-HS-glicoproteína (AHSG), família Aldo-ceto redutase 1 membro C4 (AKR1C4), Albumina sérica (ALB), precursor de alfa-1-microglobulina/bikunina (AMBP), proteínas relacionada a angiopoietina 3 (ANGPTL3), P-componente amiloide sérico (APCS), Apolipoproteína A-II (APOA2), Apolipoproteína B-100 (APOB), Apolipoproteína C3 (APOC3), Apolipoproteína C-IV (APOC4), Apolipoproteína F (APOF), Beta-2- glicoproteína 1 (APOH), Aquaporin-9 (AQP9), Ácido biliar-CoA:aminoácido N- aciltransferase (BAAT), C4b-cadeia beta de proteína de ligação (C4BPB),
proteína não caracterizada putativa codicada por LINC01554 (C5orf27), Fator de complemento 3 (C3), Fator de Complemento 5 (C5), Componente de complemento C6 (C6), Componente de complemento C8 alfa chain (C8A),
Componente de complemento C8 beta chain (C8B), Componente de complemento C8 cadeia gama (C8G), Componente de complemento C9 (C9),
Ativador de Transcrição de Ligação de Calmodulina 1 (CAMTA1), CD38 (CD38),
Fator de Complemento B (CFB), proteína relacionada a Fator de Complemento
H 1 (CFHR1), proteína relacionada a Fator de Complemento H 2 (CFHR2),
proteína relacionada a Fator de Complemento H 3 (CFHR3), receptor de canabinoide 1 (CNR1), ceruloplasmina (CP), carboxipeptidase B2 (CPB2), Fator de crescimento de tecido conectivo (CTGF), quimiocina de motivo C-X-C 2
(CXCL2), Citocromo P450 1A2 (CYP1A2), Citocromo P450 2A6 (CYP2A6),
Citocromo P450 2C8 (CYP2C8), Citocromo P450 2C9 (CYP2C9), Citocromo
P450 Família 2 Subfamília D Membro 6 (CYP2D6), Citocromo P450 2E1
(CYP2E1), Filoquinona omega-hidroxilase CYP4F2 (CYP4F2), 7-alfa-
hidroxicolest-4-en-3-ona 12-alfa-hidroxilase (CYP8B1), Dipeptidil peptidase 4
(DPP4), fator de coagulação 12 (F12), fator de coagulação II (trombina) (F2),
fator de coagulação IX (F9), cadeia alfa de fibrinogênio (FGA), cadeia beta de fibrinogênio (FGB), cadeia gama de fibrinogênio (FGG), fibrinogênio similar 1
(FGL1), flavina que contém monooxigenase 3 (FMO3), flavina que contém monooxigenase 5 (FMO5), componente específico de grupo (proteína de ligação de vitamina D) (GC), receptor de hormônio de crescimento (GHR), glicina N-
metiltransferase (GNMT), proteína de ligação de hialuronano 2 (HABP2),
peptídeo de antimicrobiano de hepcidina (HAMP), hidroxiácido oxidase (glicolato oxidase) 1 (HAO1), ativador HGF (HGFAC), proteína relacionada a haptoglobina;
haptoglobin (HPR), hemopexina (HPX), glicoproteína rica em histidina (HRG),
hidroxisteroide (11-beta) desidrogenase 1 (HSD11B1), hidroxisteroide (17-beta)
desidrogenase 13 (HSD17B13), cadeia pesada de inibidor de Inter-alfa-tripsina
H1 (ITIH1), cadeia pesada de inibidor de Inter-alfa-tripsina H2 (ITIH2), cadeia pesada de inibidor de Inter-alfa-tripsina H3 (ITIH3), cadeia pesada de inibidor de Inter-alfa-tripsina H4 (ITIH4), Prekallikreína (KLKB1), Lactato desidrogenase A (LDHA), peptídeo antimicrobiano expresso no fígado 2 (LEAP2), quemotaxina derivada de célula de leucótico 2 (LECT2), Lipoproteína (a) (LPA), lectina serina peptidase 2 de ligação de manan (MASP2), isoforma de S-adenosilmetionina sintase tipo-1 (MAT1A), NADPH Oxidase 4 (NOX4), Poli [ADP-ribose] polimerase 1 (PARP1), paraoxonase 1 (PON1), paraoxonase 3 (PON3), proteína C dependente de Vitamina K(PROC), Retinol desidrogenase 16 (RDH16), amiloide sérica A4, constitutiva (SAA4), desidratase serina (SDS), Serpina Família A Membro 1 (SERPINA1), Serpina A11 (SERPINA11), Kallistatin (SERPINA4), globulina de ligação de corticosteroide(SERPINA6), Antitrombina-III (SERPINC1), cofator de Heparina 2 (SERPIND1), Serpina Família H Membro 1 (SERPINH1), Carreador de Soluto Família 5 Membro 2 (SLC5A2), Co- transportador de ácido biliar/sódio (SLC10A1), carreador de Soluto família 13 membro 5 (SLC13A5), Carreador de soluto família 22 membro 1 (SLC22A1), Carreador de soluto família 25 membro 47 (SLC25A47), Carreador de soluto família 2, membro transportador de glicose facilitado 2 (SLC2A2), Transportador de aminoácido neutro acoplado a sódio 4 (SLC38A4), membro da família de transportador de ânion orgânico de carreador soluto 1B1 (SLCO1B1), Esfingomielina Fosfodiesterase 1 (SMPD1), Sal biliar sulfotransferase (SULT2A1), tirosina aminotransferase (TAT), triptofan 2,3-dioxigenase (TD2), UDP glucuronosiltransferase 2 família, polipeptídeo B10 (UGT2B10), UDP glucuronosiltransferase 2 família, polipeptídeo B15 (UGT2B15), UDP glucuronosiltransferase 2 família, polipeptídeo B4 (UGT2B4) e vitronectina (VTN).
[076] Além de sua utilidade em silenciar a expressão de qualquer um dos genes descritos acima para fins terapêuticos, certos ácidos nucleicos
(por exemplo, siRNA) aqui descritos também são úteis em aplicações de pesquisa e desenvolvimento, bem como em aplicações de diagnóstico, profilático, prognóstico, clínico, e outras aplicações de saúde. Como um exemplo não limitativo, certos ácidos nucleicos (por exemplo, siRNA) podem ser usados em estudos de validação de alvos alvejados a testar se um gene de interesse tem potencial para ser um alvo terapêutico. Certos ácidos nucleicos (por exemplo, siRNA) também podem ser usados em estudos de identificação de alvos que visam descobrir genes como potenciais alvos terapêuticos.
G ERANDO MOLÉCULAS DE S IRNA
[077] O siRNA pode ser fornecido em várias formas, incluindo, por exemplo, como um ou mais duplexes isolados de RNA interferente pequeno (siRNA), como RNA de filamento duplo mais longo (dsRNA) ou como siRNA ou dsRNA transcrito de um cassete transcricional em um plasmídeo de DNA. Em algumas modalidades, o siRNA pode ser produzido enzimaticamente ou por partial/total síntese orgânica e ribonucleotídeos modificados podem ser introduzidos por síntese enzimática ou orgânica in vitro. Em certos casos, cada filamento é preparado quimicamente. Os métodos de síntese de moléculas de RNA são conhecidos na técnica, por exemplo, os métodos de síntese química conforme descritos em Verma e Eckstein (1998) ou conforme descrito no presente documento.
[078] Métodos para isolar RNA, sintetizar RNA, hibridizar ácidos nucleicos, fazer e rastrear bibliotecas de cDNA e realizar PCR são bem conhecidos na técnica (consultar, por exemplo, Gubler e Hoffman, Gene, 25:263-269 (1983); Sambrook et al., Supra; Ausubel et al., Supra), assim como os métodos de PCR (consultar Patentes US Nos. 4.683.195 e
4.683.202; Protocolos de PCR: A Guide to Methods e Applications (Innis et al., Eds, 1990)). Bibliotecas de expressão também são bem conhecidas pelos versados na técnica. Textos básicos adicionais que revelam os métodos gerais de utilização nesta invenção incluem Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (2ª ed. 1989); Kriegler, Gene Transfer e Expression: A Laboratory Manual (1990); e Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds., 1994). Todos os conteúdos dessas patentes estão incorporados por referência no presente documento em sua totalidade para todos os propósitos.
[079] Normalmente, os siRNAs são sintetizados quimicamente.
Os oligonucleotídeos que compreendem as moléculas de siRNA da invenção podem ser sintetizados usando qualquer uma de uma variedade de técnicas conhecidas na técnica, tais como aquelas descritas em Usman et al., J. Am.
Chem. Soc., 109:7845 (1987); Scaringe et al., Nucl. Acids Res., 18:5433 (1990); Wincott et al., Nucl. Acids Res., 23:2677-2684 (1995); e Wincott et al., Methods Mol. Bio., 74:59 (1997). A síntese de oligonucleotídeos faz uso de grupos comuns de acoplamento e de proteção de ácido nucleico, tais como dimetoxitritil na extremidade 5' e fosforamiditas na extremidade 3'.
Como um exemplo não limitativo, sínteses em pequena escala podem ser conduzidas em um sintetizador Applied Biosystems usando um protocolo de escala de 0.2 µmol. Alternativamente, as sínteses na 0.2 µmol podem ser realizadas em um sintetizador de placa de 96 poços da Protogene (Palo Alto, CA). No entanto, uma escala maior ou menor de síntese também está dentro do escopo desta invenção. Reagentes adequados para a síntese de oligonucleotídeos, métodos para desproteção de RNA e métodos para purificação de RNA são conhecidos pelos versados na técnica.
[080] As moléculas de siRNA podem ser montadas a partir de dois oligonucleotídeos distintos, em que um oligonucleotídeo compreende o filamento sentido e o outro compreende o filamento antissentido do siRNA.
Por exemplo, cada filamento pode ser sintetizado separadamente e unido por hibridização ou ligação após a síntese e/ou desproteção.
GRUPO DE LIGAÇÃO
[081] Os conjugados da invenção podem incluir um ou mais grupos de ligação (por exemplo, L3 ou L4). A estrutura de cada grupo de ligação pode variar, desde que o conjugado funcione conforme descrito no presente documento. Por exemplo, a estrutura de cada grupo de ligação varia em comprimento e composição de átomos, e cada grupo de ligação pode ser ramificado, não ramificado, cíclico ou uma combinação dos mesmos. O grupo de ligação também pode modular as propriedades de solubilidade, estabilidade ou agregação do conjugado.
[082] Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende cerca de 3-1000 átomos. Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende cerca de 3-500 átomos. Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende cerca de 3-200 átomos. Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende cerca de 3-50 átomos. Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende cerca de 10-1000 átomos. Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende cerca de 10-500 átomos. Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende cerca de 10-200 átomos. Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende cerca de 10-50 átomos.
[083] Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende átomos selecionados de H, C, N, S e O.
[084] Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende átomos selecionados a partir de H, C, N, S e O.
[085] Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, tendo de cerca de 1 a 1000 (ou 1-750, 1-500, 1-250, 1-100, 1-50, 1- 25, 1-10, 1-5, 5-1000, 5-750, 5-500, 5-250, 5-100, 5-50, 5-25, 5-10 ou 2-5 átomos de carbono), em que um ou mais dos átomos de carbono são opcionalmente substituídos independentemente por -O-, -S, -N (Ra)-, heterociclo de 3-7 membros, heteroarila ou carbociclo de 5-6 membros e em que cada cadeia, de 3-7 membros heterociclo, heteroarila com 5-6 membros ou carbociclo está opcionalmente e independentemente substituído por um ou mais (por exemplo 1, 2, 3, 4, 5 ou mais) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alquila, (C1- C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoo, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, -N (Ra)2, hidróxi, oxo (=O), carboxila, arila, arilóxi, heteroarila, heteroarilóxi e, em que cada Ré, independentemente, H ou (C1-C6)alquila. Em uma modalidade, o aglutinante compreende uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, tendo de cerca de 1 a 1000 (ou 1-750, 1-500, 1-250, 1- 100, 1-50, 1-25, 1-10, 1-5, 5-1000, 5-750, 5-500, 5-250, 5-100, 5-50, 5-25, 5-10 ou 2-5 átomos de carbono) em que um ou mais dos átomos de carbono é opcionalmente substituído, independentemente, por -O-, -S, -N(Ra)-, em que cada Ra, independentemente, H ou (C1-C6)alquila.
[086] Em uma modalidade, cada grupo de ligação compreende um polietilenoglicol. Em uma modalidade, o grupo de ligação compreende um polietilenoglicol ligado ao restante do conjugado alvejado por um grupo carbonila.
Em uma modalidade, o polietilenoglicol compreende cerca de 1 a cerca de 500 ou cerca de 5 a cerca de 500 ou cerca de 3 a cerca de 100 unidades de repetição (por exemplo, -CH2CH2O-) (Greenwald, RB, et al., Poli (etilenoglicol) Pró- fármacos: Farmacocinética e Farmacodinâmica Alterada, Capítulo, 2.3.1., 283- 338; Filpula, D., et al., Releasable PEGylation of protein with custom linkers, Advanced Drug Delivery, 60, 2008, 29-49; Zhao, H., et al., Drug Conjugates with Poly (Ethylene Glycol), Drug Delivery in Oncology, 2012, 627-656).
MODALIDADES
[087] Em uma modalidade, A é um ligante de alvejamento que se liga especificamente a uma molécula na superfície da célula-alvo.
[088] Em uma modalidade, o conjugado de ácido nucleico e o polímero desestabilizador de membrana são administrados separadamente.
[089] Em uma modalidade, o polímero desestabilizador de membrana é administrado após a administração do conjugado de ácido nucleico.
[090] Em uma modalidade, o conjugado de ácido nucleico e o polímero desestabilizador de membrana são administrados juntos em uma única composição.
[091] Em uma modaidade, o ligante de alvejamento e T5 são diferentes e (i) se ligam especificamente à mesma molécula de superfície celular ou (ii) se ligam especificamente a uma molécula de superfície celular diferente na célula-alvo.
[092] Em uma modalidade, o ligante de alvejamento e o T5 são os mesmos e cada um se liga especificamente à mesma molécula de superfície celular.
[093] Em uma modalidade, a célula é uma célula secretora, um condrócito, uma célula epitelial, uma célula nervosa, uma célula muscular, uma célula sanguínea, uma célula endotelial, um pericito, um fibroblasto, uma célula glial ou uma célula dendrítica.
[094] Em uma modalidade, a célula é uma célula cancerosa, uma célula imune, uma célula infectada por bactérias, uma célula infectada por vírus ou uma célula com uma atividade metabólica anormal.
[095] Em uma modalidade, o ligante de alvejamento se liga especificamente a uma molécula de superfície celular selecionada a partir do grupo que consiste em receptor de transferrina do tipo 1, receptor de transferrina do tipo 2, o receptor de EGF, HER2/Neu, um receptor de VEGF, um receptor de PDGF, uma integrina, um receptor de NGF, CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD33, CD43, CD38, CD56, CD69, o receptor de asialoglicoproteína (ASGPR), antígeno de membrana específico para próstata (PSMA), um receptor de folato e um receptor sigma.
[096] Em uma modalidade, o ligante de alvejamento compreende uma porção química de alvejamento de molécula pequena.
[097] Em uma modalidade, a porção química de alvejamento de molécula pequena é um açúcar, uma vitamina, um bifosfonato ou um análogo deste.
[098] Em uma modalidade, o açúcar é selecionado de lactose, galactose, N-acetil galactosamina (NAG), manose e manose-6-fosfato (M6P).
[099] Em uma modalidade, a vitamina é folato.
[100] Em algumas modalidades, o ligante de alvejamento compreende uma proteína.
[101] Em uma modalidade, a proteína é um anticorpo, um aptâmero de peptídeo ou uma proteína derivada de um ligante natural da molécula de superfície celular.
[102] Em algumas modalidades, o ligante de silenciamento compreende um peptídeo.
[103] Em uma modalidade, o peptídeo é um peptídeo de ligação a integrina, um peptídeo de ligação a LOX-1 e um peptídeo de fator de crescimento epidérmico (EGF), um peptídeo de neurotensina, um peptídeo NL4 ou um peptídeo de laminina YIGSR.
[104] Em uma modalidade, a célula é um hepatócito.
[105] Em uma modalidade, o ligante de alvejamento se liga especificamente ao receptor de asialoglicoproteína (ASGPR).
[106] Em uma modalidade, o ligante de alvejamento compreende um resíduo de N-acetilgalactosamina (NAG).
[107] Em uma modalidade, o polímero desestabilizador de membrana compreende três regiões: um monossacarídeo, uma região hidrofílica compreendendo metacrilato de polietilenoglicol 4-5 (PEGMA 4-5) e metacrilato de hidroxietil (HMA); e uma região que fornece liberação endossômica
[108] Em uma modalidade, o polímero desestabilizador de membrana é um polímero da fórmula (XX): T5-L-[PEGMAm-M2n]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w (XX) em que: PEGMA é resíduo de metacrilato de polietilenoglicol com 2 a 20 unidades de etileno glicol; M2 é um resíduo de metacrilato selecionado a partir do grupo que consiste em um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato; um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato ramificado; um resíduo de metacrilato de colesterila; um resíduo (C4-C18)alquil-metacrilato substituído por um ou mais átomos de flúor; e um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato ramificado substituído por um ou mais átomos de flúor; BMA é resíduo de metacrilato de butila; PAA é um resíduo de ácido propil acrílico; DMAEMA é um resíduo de metacrilato de dimetilaminoetila; m e n são, cada um, uma fração molar maior que 0, em que m é maior que n e m+n=1; q é uma fração molar de 0,2 a 0,75; r é uma fração molar de 0,05 a 0,6; s é uma fração molar de 0,2 a 0,75; q + r + s = 1; v é 1 a 25 kDa; w é 1 a 25 kDa;
T5 é uma porção química de alvejamento (por exemplo, um peptídeo, polímero ou sacarídeo); e L está ausente ou é uma porção química de ligação.
[109] Em uma modalidade, M2 é selecionado a partir do grupo que consiste em: resíduo de metacrilato de 2,2,3,3,4,4,4-heptafluorobutila, resíduo de metacrilato de 3,3,4,4,5,6,6,6-octafluoro- 5(trifluorometil)hexila, resíduo metilacrilato de 2-2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8- pentadecafluorooctila, resíduo de metacrilato de 3,3,4,4,5,5,6,6,6-nonafluorohexila, resíduo de metacrilato de 3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8- tridecafluorooctila, resíduo de metacrilato de 1,1,1-trifluoro-2-(trifluorometil)-2-hidroxi- 4-metil-5-pentila, resíduo de metacrilato de 2-[(1',1',1'-trifluoro-2'-(trifluorometil)- 2'-hidroxi)propil]-3-norbornila, resíduo de metacrilato de 2-etilhexila, resíduo de metacrilato de butila, resíduo de metacrilato de hexila, resíduo de metacrilato de octila, resíduo de metacrilato de n-decila, resíduo de metacrilato de laurila, resíduo de metacrilato de miristila, resíduo de metacrilato de estearila, resíduo de metacrilato de colesterila, resíduo de metacrilato de éter fenílico de etilenoglicol, resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster 2-feniletílico, resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster 2-[[(1,1-
dimetiletoxi)carbonil]amino]etílico, resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster 2-(1-imidazol-l- il)etílico, resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster ciclohexílico, resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster 2- [bis(1metiletil)amino]etílico, resíduo de ácido 2-propenoico, 2-metil-, éster 3-metilbutílico, resíduo de metacrilato de neopentila, resíduo de metacrilato de terc-butila, resíduo de metacrilato de 3,3,5-trimetil ciclohexila, resíduo de metacrilato de 2-hidroxipropila, resíduo de metacrilato de 5-nonila, resíduo de metacrilato de 2-butil-l-octila, resíduo de metacrilato de 2-hexil-l-decila, e resíduo de metacrilato de 2-(terc-butil amino)etila.
[110] Em uma modalidade, o PEGMA tem 4-5 unidades de etilenoglicol ou 7-8 unidades de etilenoglicol.
[111] Em uma modalidade, T1 e L estão presentes e T1 compreende um resíduo de N-acetilgalactosamina (NAG).
[112] Em uma modalidade, L compreende uma porção de polietilenoglicol (PEG) com 2-20 unidades de etilenoglicol.
[113] Em uma modalidade, o polímero desestabilizador de membrana é um polímero da fórmula (XXI): (XXI),
[114] em que px é um número inteiro de cerca de 2 a cerca de 50, por exemplo, de cerca de 2 a cerca de 20, por exemplo, de 4 a 12 (por exemplo,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50). Em algumas modalidades, px é um número inteiro de cerca de 8 a cerca de 16 (por exemplo, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou 16). Em algumas modalidades, px é cerca de 12. Em algumas modalidades, py é um número inteiro de cerca de 2 a cerca de 20 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20). Em algumas modalidades, py é um número inteiro de cerca de 2 a cerca de 10 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10). Em algumas modalidades, py é um número inteiro de cerca de 4 a cerca de 5 (por exemplo, 4 ou 5).
[115] Em uma modalidade, o composto da Fórmula (X) é um composto da Fórmula (I): (I) em que: R1 é o ligante de alvejamento; L1 está ausente ou é um grupo de ligação; L2 está ausente ou é um grupo de ligação; R2 é o ácido nucleico; o anel A está ausente, uma cicloalquila de 3-20 membros, uma arila de 5-20 membros, uma heteroarila de 5-20 membros ou uma heterocicloalquila de 3-20 membros; cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 alquil-ORB, C1-10 alquila, C2- 10 alquenila e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquila, C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo, hidróxi e C1-3 alcóxi; RB é hidrogênio, um grupo protetor, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que está ligado a um suporte sólido; e n é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; ou um sal do mesmo.
Em uma encarnação, R1 é o ligante de alvejamento; L1 está ausente ou é um grupo de ligação; L2 está ausente ou é um grupo de ligação; R2 é o ácido nucleico; o anel A está ausente, uma cicloalquila de 3-20 membros, uma arila de 5-20 membros, uma heteroarila de 5-20 membros ou uma heterocicloalquila de 3-20 membros; cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 alquil-ORB e C1-8 alquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo, hidróxi e C1-3 alcóxi; RB é hidrogênio, um grupo protetor, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que está ligado a um suporte sólido; e n é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.
[116] Em uma modalidade, R1 é –C (H)(3-p)(L3-sacarídeo)p, em que cada L3 representa, independentemente, um grupo de ligação; p é 1, 2, ou 3; e sacarídeo é um monossacarídeo ou dissacarídeo.
[117] Em uma modalidade, o sacarídeo é:
em que: X é NR3e Y é selecionado a partir de -(C=O)R4, -SO2R5, e - (C=O)NR6R7; ou X é -(C=O)- e Y é NR8R9; R3 é hidrogênio ou (C1-C4)alquila; R4, R5, R6, R7, R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C 1-C8) alquila, (C1- C8) haloalquila, (C1-C8) alcóxi e (C3-C6) cicloalquil que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C1-C4) alquila, (C1-C4) haloalquila, (C1-C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi; R10 é -OH, -NR8R9 ou - F; e R11 é -OH, -NR8R9, -F ou heterociclo de 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, (C1-C4) alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1-C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi.
[118] Em uma modalidade, o sacarídeo é selecionada a partir do grupo que consiste em:
[119] Em uma modalidade, o sacarídeo é:
[120] Em uma modalidade, cada L3 é, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 0 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[121] Em uma modalidade, cada L3 é, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1- C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[122] Em uma modalidade, L3 é:
.
[123] Em uma modalidade, R1 é: .
[124] Em uma modalidade, R1 é: em que: G é –NH- ou –O-; RC é hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)haloalquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C6)alcanoila, (C3-C20)cicloalquila, (C3-C20)heterociclo, arila, heteroarila, monossacarídeo, dissacarídeo ou trissacarídeo; e em que a cicloalquila, heterociclo, arila, heteroarila e sacarídeo são opcionalmente substituídos por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, carboxila, hidroxila, amino, (C1-C4)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1- C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi.
[125] Em uma modalidade, RC é:
.
[126] Em uma modalidade, R1 é: .
[127] Em uma modalidade, RC é: .
[128] Em uma modalidade, G é –NH-.
[129] Em uma modalidade, R1 é: .
[130] Em uma modalidade, R1 é:
[131] em que cada RD é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C6)alquila, (C9-C20)alquilsilila, (RW)3Si- , (C2-C6)alquenila, tetrahidropiranila, (C1-C6)alcanoíla, benzoíla, aril(C1- C3)alquila, TMTr (Trimetoxitritila), DMTr (Dimetoxitritila), MMTr (Monometoxitritila) e Tr (Tritila); e cadaRW é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em (C1-C4)alquila e arila.
[132] Em uma modalidade, L1 e L2 são, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1- C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[133] Em uma modalidade, L1 and L2 são, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1- C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[134] Em uma modalidade, L1 and L2 são, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 14 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1- C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[135] Em uma modalidade, L1 está conectado a R1 por meio de - NH-, -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O)-, -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH-, ou –NH-(SO2)-.
[136] Em uma modalidade, L2 está conectado a R2 por meio de - O-.
[137] Em uma modalidade, L1 é selecionado a partir do grupo que consiste em: .
[138] Em uma modalidade, L2 é –CH2-O- ou –CH2-CH2-O-.
[139] Em uma encarnação, (:)
[140] Em uma modalidade, o composto da Fórmula I é um composto da Fórmula Ia (Ia), em que: cada D é independente selecionado a partir do grupo que consiste em e -N=; ou um sal do mesmo.
[141] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em:
em que:
Q1 é hidrogênio e Q2 é R2; ou Q1 é R2 e Q2 é hidrogênio; e
Z é –L1-R1.
[142] Em uma modalidade, o composto da Fórmula (I) é um composto da Fórmula (Ib): (Ib) em que: cada D é independente selecionado a partir do grupo que consiste em e -N=; e cada m é, independentemente, 1 ou 2;
[143] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em: em que: Q1 é hidrogênio e Q2 é R2; ou Q1 é R2 e Q2 é hidrogênio; e Z é –L1-R1.
[144] Em uma modalidade, o composto da Fórmula (I) é um composto da Fórmula (Ic): (Ic)
em que: E é –O- ou -CH2-; n é um número inteiro selecionado a partir do grupo que consiste em 0, 1, 2, 3, e 4; e n1 e n2 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em 0, 1, 2 e 3.
[145] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em: em que: Z é –L1-R1.
[146] Em uma modalidade, -AL2-R2 é: em que: Q1 é hidrogênio e Q2 é R2; ou Q1 é R2 e Q2 é hidrogênio; e cada m, n e p é, independentemente, 0, 1, 2, 3 ou 4.
[147] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em:
[148] Em uma modalidade, R1 é selecionado a partir do grupo que consiste em: em que:
[149] RS é ;
[150] n é 2, 3 ou 4; e
[151] x é 1 ou 2.
[152] Em uma modalidade, L1 é selecionado a partir do grupo que consiste em:
[153] Em uma modalidade, A está ausente, é fenila, pirrolidinila ou ciclopentila.
[154] Em uma modalidade, L2 é C1-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidróxi.
[155] Em uma modalidade, L2 é –CH2O-, -CH2CH2O-, ou - CH(OH)CH2O-.
[156] Em uma modalidade, cada RA é, independentemente, hidróxi ou C1-8 alquila que é opcionalmente substituída por hidroxila.
[157] Em algumas modalidades, cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidróxi, metila e -CH2OH.
[158] Em uma modalidade, o composto da Fórmula (I) é um composto da Fórmula (Ig): (Ig) em que: B é –N- ou -CH-; L2 é C1-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidroxila ou halo; e t é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7.
[159] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em: ; em que Q é –L1-R1; e R’ é C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila.
[160] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em:
; em que Q é –L1-R1
[161] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em:
e .
[162] Em uma modalidade, o composto da Fórmula (I) é um composto da Fórmula (Id):
(Id)
em que:
R1d é selecionado a partir de:
e
Xd é C2-10 alquileno;
nd é 0 ou 1;
R2d é um ácido nucleico; e
R3d é H.
[163] Em uma modalidade, R1d é: .
[164] Em uma modalidade, R1d é: .
[165] Em uma modalidade, Xd é C8alquileno.
[166] Em uma modalidade, nd é 0.
[167] Em uma modalidade, R3d é H.
[168] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em:
[169] Em uma modalidade, o composto da Fórmula (I) é um composto da Fórmula (Ig):
(Ig) em que: B é –N- ou -CH-; L2 é C1-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidroxila ou halo; e n é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7.
[170] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em: ; em que: Q é –L1-R1; e R’ é C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidróxi.
[171] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em:
; em que: Q é –L1-R1.
[172] Em uma modalidade, o composto da Fórmula (X) é um composto da Fórmula (XX): (XX) em que: R1 é um ligante de alvejamento; L1 está ausente ou é um grupo de ligação; L2 está ausente ou é um grupo de ligação; R2 é um ácido nucleico; B é divalente e é selecionado a partir do grupo que consiste em:
em que: cada R’ é, independentemente, C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila; a valência marcada com * é fixada a L1 ou é fixada a R1 se L1 estiver ausente; e a valência marcada com ** é fixada a L2 ou é fixada a R2 se L2 estiver ausente.
[173] Em uma modalidade, R1 compreende 2-8 sacarídeos.
[174] Em uma modalidade, R1 compreende 2-4 sacarídeos.
[175] Em uma modalidade, R1 compreende 3-8 sacarídeos.
[176] Em uma modalidade, R1 compreende 3-6 sacarídeos.
[177] Em uma modalidade, R1 compreende 3-4 sacarídeos.
[178] Em uma modalidade, R1 compreende 2 sacarídeos.
[179] Em uma modalidade, R1 compreende 3 sacarídeos.
[180] Em uma modalidade, R1 compreende 4 sacarídeos.
[181] Em uma modalidade, R1 tem a seguinte fórmula:
em que: B1 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e está ligado covalentemente a L1, T1 e T2.
B2 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e é covalentemente ligado a T1, T3 e T4; B3 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e é covalentemente ligado a T2, T5 e T6; T1 está ausente ou é um grupo de ligação; T2 está ausente ou é um grupo de ligação; T3 está ausente ou é um grupo de ligação; T4 está ausente ou é um grupo de ligação; T5 está ausente ou é um grupo de ligação; e T6 está ausente ou é um grupo de ligação.
[182] Em uma modalidade, cada sacarídeo é independentemente é selecionado a partir de: em que: X é NR3e Y é selecionado a partir de -(C=O)R4, -SO2R5, e -
(C=O)NR6R7; ou X é -(C=O)- e Y é NR8R9; R3 é hidrogênio ou (C1-C4)alquila; R4, R5, R6, R7, R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C 1-C8) alquila, (C1- C8) haloalquila, (C1-C8) alcóxi e (C3-C6) cicloalquil que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C1-C4) alquila, (C1-C4) haloalquila, (C1-C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi; R10 é -OH, -NR8R9 ou - F; e R11 é -OH, -NR8R9, -F ou heterociclo com 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, (C1-C4)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1-C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi.
[183] Em uma modalidade, cada sacarídeo é selecionado a partir do grupo que consiste em:
[184] Em uma modalidade, cada sacarídeo é, independentemente:
[185] Em uma modalidade, um dentre T1 e T2 está ausente.
[186] Em uma modalidade, tanto o T1 quanto T2 estão ausentes.
[187] Em uma modalidade, cada um dentre T1, T2, T3, T4, T5 e T6 é, independentemente, ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou não saturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)- , -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3- C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[188] Em uma modalidade, cada um dentre T1, T2, T3, T4, T5 e T6 é, independentemente, ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou não saturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)- , -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3- C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[189] Em uma modalidade, cada um dentre T1,T2,T3,T4,T5,e T6 é independentemente ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificado ou não ramificado, saturado ou insaturado, tendo de 1 a 50 átomos de carbono, ou um sal do mesmo, em que um ou mais dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por –O- ou -NRX-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6) alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituído por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados de halo, hidróxi e oxo (=O).
[190] Em uma modalidade, cada um dentre T1, T2, T3, T4, T5 e T6 é, independentemente, ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou não saturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O- e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados a partir de halo, hidróxi e oxo (=O).
[191] Em uma modalidade, cada um dentre T1, T2, T3, T4, T5 e T6 é, independentemente, ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou não saturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O- e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados a partir de halo, hidróxi e oxo (=O).
[192] Em uma modalidade, pelo menos um de T3, T4, T5e T6 é: em que: n = 1, 2, 3.
[193] Em uma modalidade, cada um de T3, T4, T5e T6 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em: em que: n = 1, 2, 3.
[194] Em uma modalidade, pelo menos um dentre T1 e T2 é glicina.
[195] Em uma modalidade, cada um dentre T1 e T2 é glicina.
[196] Em uma modalidade, B1 é um grupo trivalente compreendendo 1 a 15 átomos e está covalentemente ligado a L 1, T1e T2.
[197] Em uma modalidade, B1 é um grupo trivalente compreendendo 1 a 10 átomos e está covalentemente ligado a L1, T1e T2.
[198] Em uma modalidade, B1 compreende uma (C1-C6) alquila.
[199] Em uma modalidade, B1 compreende uma C3-8 cicloalquila.
[200] Em uma modalidade, B1 compreende um grupo silila.
[201] Em uma modalidade, B1 compreende um D- ou L- aminoácido.
[202] Em uma modalidade, B1 compreende um sacarídeo.
[203] Em uma modalidade, B1 compreende um grupo fosfato.
[204] Em uma modalidade, B1 compreende um grupo fosfato.
[205] Em uma modalidade, B1 compreende uma arila.
[206] Em uma modalidade, B1 compreende um anel de fenila.
[207] Em uma modalidade, B1 compreende um anel de fenila.
[208] Em uma modalidade, B1 é CH.
[209] Em uma modalidade, B1 compreende uma heteroarila.
[210] Em uma modalidade, B1 é selecionado a partir de:
[211] Em uma modalidade, B2 é um grupo trivalente compreendendo 1 a 15 átomos e está covalentemente ligado a T 2, T5 e T6.
[212] Em uma modalidade, B2 é um grupo trivalente compreendendo 1 a 10 átomos e está covalentemente ligado a T 2, T5 e T6.
[213] Em uma modalidade, B2 compreende uma (C1-C6) alquila.
[214] Em uma modalidade, B2 compreende uma C3-8 cicloalquila.
[215] Em uma modalidade, B2 compreende um grupo silila.
[216] Em uma modalidade, B2 compreende um D- ou L- aminoácido.
[217] Em uma modalidade, B2 compreende um sacarídeo.
[218] Em uma modalidade, B2 compreende um grupo fosfato.
[219] Em uma modalidade, B2 compreende um grupo fosfato.
[220] Em uma modalidade, B2 compreende uma arila.
[221] Em uma modalidade, B2 compreende um anel de fenila.
[222] Em uma modalidade, B2 compreende um anel de fenila.
[223] Em uma modalidade, B2 é CH.
[224] Em uma modalidade, B2 compreende uma heteroarila.
[225] Em uma modalidade, B2 é selecionado a partir do grupo que consiste em: .
[226] Em uma modalidade, B3 é um grupo trivalente compreendendo 1 a 15 átomos e está covalentemente ligado a L 1, T1e T2.
[227] Em uma modalidade, B3 é um grupo trivalente compreendendo 1 a 10 átomos e está covalentemente ligado a L 1, T1e T2.
[228] Em uma modalidade, B3 compreende uma (C1-C6) alquila.
[229] Em uma modalidade, B3 compreende uma C3-8 cicloalquila.
[230] Em uma modalidade, B3 compreende um grupo silila.
[231] Em uma modalidade, B3 compreende um D- ou L- aminoácido.
[232] Em uma modalidade, B3 compreende um sacarídeo.
[233] Em uma modalidade, B3 compreende um grupo fosfato.
[234] Em uma modalidade, B3 compreende um grupo fosfato.
[235] Em uma modalidade, B3 compreende uma arila.
[236] Em uma modalidade, B3 compreende um anel de fenila.
[237] Em uma modalidade, B3 compreende um anel de fenila.
[238] Em uma modalidade, B3 é CH.
[239] Em uma modalidade, B3 compreende uma heteroarila.
[240] Em uma modalidade, B3 é selecionado a partir do grupo que consiste em:
[241] Em uma modalidade, B3 é selecionado a partir do grupo que consiste em: ou um sal do mesmo.
[242] Em uma modalidade, L1 e L2 são, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou não saturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1- C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[243] Em uma modalidade, L1 é selecionado a partir do grupo que consiste em: ou um sal do mesmo.
[244] Em uma modalidade, L1 está conectado a B1 por meio de uma ligação selecionada a partir do grupo que consiste em: -O-, -S-, -(C=O)-, - (C=O)-NH-, -NH-(C=O), -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH-, ou –NH-(SO2)-.
[245] Em uma modalidade, L1 é selecionado a partir do grupo que consiste em:
[246] Em uma modalidade, L2 está conectado a R2 por meio de - O-.
[247] Em uma modalidade, L2 é C1-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidróxi.
[248] Em uma modalidade, L2 está conectado a R2 por meio de - O-.
[249] Em uma modalidade, L2 está ausente.
[250] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em:
e .
[251] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
.
[252] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
[253] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto, .
[254] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto, .
[255] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
[256] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto, .
[257] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
.
[258] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto, .
[259] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
.
[260] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
[261] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
.
[262] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
[263] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
[264] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto, .
[265] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
em que: L1 está ausente ou é um grupo de ligação; L2 está ausente ou é um grupo de ligação; R2 é um ácido nucleico; o anel A está ausente, uma cicloalquila de 3-20 membros, uma arila de 5-20 membros, uma heteroarila de 5-20 membros ou uma heterocicloalquila de 3-20 membros; cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 alquil-ORB, C1-10 alquila, C2- 10 alquenila e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquila, C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo, hidróxi e C1-3 alcóxi; RB é hidrogênio, um grupo protetor, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e n é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.
[266] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
em que: L2 está ausente ou é um grupo de ligação; R2 é um ácido nucleico; o anel A está ausente, uma cicloalquila de 3-20 membros, uma arila de 5-20 membros, uma heteroarila de 5-20 membros ou uma heterocicloalquila de 3-20 membros; cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 alquil-ORB, C1-10 alquila, C2- 10 alquenila e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquila, C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo, hidróxi e C1-3 alcóxi; RB é hidrogênio, um grupo protetor, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e n é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; ou um sal do mesmo.
[267] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
ou um sal do mesmo, em que R2 é um ácido nucleico.
[268] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
[269] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto,
.
[270] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é o composto da fórmula Ia: em que: R1c é um sacarídeo; L1c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, tendo de 0 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX-ou -S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6) alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados de oxo (=O) e halo; Bc é uma arila de 5-10 membros ou uma heteroarila de 5-10 membros, em que arila de 5-10 membros ou heteroarila de 5-10 membros é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidróxi, ciano, trifluorometila, trifluorometóxi, (C1-C6)alquila, (C1-C6)alcóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C3-C6)cicloalquila, e (C3-C6)cicloalquil(C1- C6)alquila L2c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 0 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais substituídos selecionados a partir de oxo (=O) e halo; R2c é um sacarídeo; L3c está ausente ou é um grupo de ligação; Ac é uma cicloalquila com 3 a 20 membros, uma arila com 5 a 20 membros, uma heteroarila com 5 a 20 membros ou uma heterocicloalquila com 3 a 20 membros; cada RAc é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 alquil-ORa, C1-10 alquila, C2- 10 alquenila e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquila, C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por Ac ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo, hidróxi e C1-3 alcóxi; nc é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; L4c está ausente ou é um grupo de ligação; R3c é um ácido nucleico; Rac é hidrogênio; e L5c é um grupo de ligação; ou um sal do mesmo.
[271] Em uma modalidade, Bc é um arila de 5-10 membros.
[272] Em uma modalidade, Bc é naftila ou fenila.
[273] Em uma modalidade, Bc é fenila.
[274] Em uma modalidade, o grupo: é: .
[275] Em uma modalidade, Bc é uma heteroarila de 5-10 membros.
[276] Em uma modalidade, Bc é piridila, pirimidila, quinolila, isoquinolila, imidazolila, tiazolila, oxadiazolila ou oxazolila.
[277] Em uma modalidade, o grupo: é: .
[278] Em uma modalidade, o grupo: é: .
[279] Em uma modalidade, L1c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, não ramificada e saturada, que tem de 0 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)- , -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais substituídos selecionados a partir de oxo (=O) e halo.
[280] Em uma modalidade, L1c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, não ramificada, saturada, tendo de 0 a 12 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por –O-, -NRX-C(=O)-, ou -C(=O)- NRX-, em que R eX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila.
[281] Em uma modalidade, L1c é: –C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, –C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, –C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, ou –C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-.
[282] Em uma modalidade, L2c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, não ramificada e saturada, que tem de 0 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)- , -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais substituídos selecionados a partir de oxo (=O) e halo.
[283] Em uma modalidade, L2c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, não ramificada, saturada, tendo de 0 a 12 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituído por –O-, -NRX-C(=O)-, ou -C(=O)- NRX-, em que R eX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila.
[284] Em uma modalidade, L2c é: –C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, –C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, –C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, ou –C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-.
[285] Em uma modalidade, R1c é: em que: X é NR20 e Y é selecionado a partir de –(C=O)R21, -SO2R22, e – (C=O)NR23R24; ou X é –(C=O)- e Y é NR25R26; ou X é –NR37R38 e Y está ausente R20 é hidrogênio ou (C1-C4)alquila; R21, R22, R23, R24, R25 e R26 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C 1-C8)alquila, (C1- C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C 1- C4)alquila e (C1-C4)alcóxi; R27 é –OH, -NR25R26 ou –F; R28 é –OH, -NR25R26 ou –F; R29 é –OH, -NR25R26, -F, -N3, -NR35R36, ou heterociclo com 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, (C1-C4)alquila, arila e (C1-C4)alcóxi, em que qualquer (C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, e em que qualquer arila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
hidroxila, nitro, ciano, amino, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoila, (C1-
C8)alcoxicarbonila, (C1-C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-
C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoila, (C1-C8)alcoxicarbonila, (C1-
C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
(C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi;
cada R35 e R36 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo e (C1-C4)alcóxi; ou R35 e R36 tomados juntos com o nitrogênio aos quais os mesmos são fixados formam um anel de heteroarila com 5 a 6 membros, em que o anel de heteroarila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, arila e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer arila e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos R39;
cada R37 e R38 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoila, (C1-
C8)alcoxicarbonila, (C1-C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-
C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoila, (C1-C8)alcoxicarbonila, (C1-
C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
(C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi; ou R37 e R38 tomados juntos com o nitrogênio aos quais os mesmos são fixados formam um heterociclo com 5 a 8 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino,
oxo (=O), (C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi, em que qualquer (C1-C4)alquila e (C1- C4)alcóxi é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo; e cada R39 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo.
[286] Em uma modalidade, R1c é:
[287] Em uma modalidade, R1c é:
[288] Em uma modalidade, R1c é:
[289] Em uma modalidade, R1c é:
[290] Em uma modalidade, R2c é: em que: X é NR20 e Y é selecionado a partir de –(C=O)R21, -SO2R22, e - (C=O)NR23R24; ou X é-(C=O)- e Y é NR25R26; ou X é -NR37R38 e Y está ausente R20 é hidrogênio ou (C1-C4)alquila; R21, R22, R23, R24, R25 e R26 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C 1-C8)alquila, (C1- C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e
(C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C 1-
C4)alquila e (C1-C4)alcóxi;
R27 é -OH, -NR25R26 ou -F;
R28 é -OH, -NR25R26 ou -F;
R29 é –OH, -NR25R26, -F, -N3, -NR35R36, ou heterociclo com 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
hidroxila, carboxila, amino, (C1-C4)alquila, arila e (C1-C4)alcóxi, em que qualquer (C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
e em que qualquer arila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
hidroxila, nitro, ciano, amino, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoila, (C1-
C8)alcoxicarbonila, (C1-C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-
C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoila, (C1-C8)alcoxicarbonila, (C1-
C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
(C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi;
cada R35 e R36 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila,
em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo e (C1-C4)alcóxi; ou R35 e R36 tomados juntos com o nitrogênio aos quais os mesmos são fixados formam um anel de heteroarila com 5 a 6 membros, em que o anel de heteroarila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, arila e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer arila e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos R39; cada R37 e R38 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoila, (C1- C8)alcoxicarbonila, (C1-C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1- C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoila, (C1-C8)alcoxicarbonila, (C1- C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi; ou R37 e R38 tomados juntos com o nitrogênio aos quais os mesmos são fixados formam um heterociclo com 5 a 8 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, oxo (=O), (C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi, em que qualquer (C1-C4)alquila e (C1- C4)alcóxi é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo; e cada R39 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo.
[291] Em uma modalidade, R2c é:
[292] Em uma modalidade, R2c é:
[293] Em uma modalidade, R2c é:
[294] Em uma modalidade, R2c é:
[295] Em uma modalidade, L3c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 0 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de
(C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[296] Em uma modalidade, L3c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[297] Em uma modalidade, L3c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 30 átomos de carbono, em que um ou mais dos átomos de carbono são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais halo ou oxo(=O).
[298] Em uma modalidade, L3c é:
[299] Em uma modalidade, L3c está conectado a B por meio de - NH-, -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O)-, -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH-, ou –NH-(SO2)-.
[300] Em uma modalidade, L4c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 0 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de
(C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[301] Em uma modalidade, L4c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3, ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
[302] Em uma modalidade, L4c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 30 átomos de carbono, em que um ou mais dos átomos de carbono são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais halo ou oxo(=O).
[303] Em uma modalidade, o grupo A é: é selecionado do grupo que consiste em: ;
em que cada R’ é, independentemente, C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila.
[304] Em uma modalidade, o grupo A é:
[305] é selecionado do grupo que consiste em: em que: cada R’ é, independentemente, C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila; a valência marcada com * é fixada a L3c; e a valência marcada com ** é fixada a R3c.
[306] Em uma modalidade, o grupo:
é: .
[307] Em uma modalidade, L4c é conectado a R3c através de -O-.
[308] Em uma modalidade, R3c está fixado ao restante do conjugado através do oxigênio de um fosfato da molécula de ácido nucleico.
[309] Em uma modalidade, R3c está fixado ao restante do conjugado através do oxigênio de um fofato na extremidade 5’ de um filamento sentido ou antissentido.
[310] Em uma modalidade, R3c está fixado ao restante do conjugado através do oxigênio de um fofato na extremidade 3’ de um filamento sentido ou antissentido.
[311] Em uma modalidade, R3c está fixado ao restante do conjugado através do oxigênio de um fofato na extremidade 3’ de um filamento sentido.
[312] Em uma modalidade, o composto da fórmula (I) é selecionado a partir do grupo que consiste em:
e
[313] Em uma modalidade, o conjugado de ácido nucleico alvejado é um conjugado de ácido nucleico alvejado conforme descrito nos documentos WO2015/006740, WO2016/028649, US8.106.022B2, US8.450.467B2, US8.828.956B2, WO2016/149020, WO2017/156012, WO2018/044350, WO2016/100401, WO2018/039364, WO2018/044350, WO2017/174657, WO2018/185210, WO2018/185252, WO2018/185253, US9.943.604B2 ou US9,714,421B2
[314] A invenção será descrita em maiores detalhes a título de exemplos específicos. Os seguintes exemplos são oferecidos para propósitos de ilustração e não se destinam a limitar a invenção de maneira alguma. Aqueles versados na técnica prontamente reconhecerão uma variedade de parâmetros não críticos os quais podem ser mudados ou modificados para render essencialmente os mesmos resultados.
EXEMPLOS
[315] Os polímeros desestabilizadores de membrana podem ser preparados usando materiais de partida e métodos sintéticos que são semelhantes aos descritos na Publicação de Pedido de Patente Internacional Números WO2015/017519 e WO2016/118697.
[316] Os conjugados de ácido nucleico alvejados podem ser preparados conforme descrito na Publicação do Pedido de Patente Internacional Número WO2017/177326 e conforme descrito abaixo. EXEMPLO 1. SÍNTESE DO CONJUGADO 1 ESQUEMA 1.
ESQUEMA 2.
ESQUEMA 3.
ESQUEMA 4.
ESQUEMA 5.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 4-METILBENZENOSSULFONATO DE 2-(2-(2-(2- HIDROXIETOXI)ETOXI)ETOXI)ETILA 3
[317] Uma solução de tetraetilenoglicol (934 g, 4,8 mol) em THF (175 ml) e NaOH aquoso (5M, 145 ml) foi resfriada (0 °C) e tratada com cloreto de p-toluenossulfonila (91,4 g, 480 mmol) dissolvido em THF (605 ml) e, então, agitada por duas horas (0 °C). A mistura de reação foi diluída com água (3 l)e extraída (3x 500 ml) com CH2Cl2. Os extratos combinados foram lavados com água e salmoura, em seguida, secos (MgSO4), filtrados e concentrados para proporcionar 4-metilbenzenossulfonato de 2-(2-(2-(2-hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etila 3 (140 g, 84%) como um óleo amarelo pálido. Rf (0,57, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2-(2-AZIDOETOXI)ETOXI)ETOXI)ETAN-1-OL 4
[318] Uma solução de 3 (140 g, 403 mmol) em DMF (880 ml) foi tratada com azida de sódio (131 g, 2,02 mol) e aquecida (45 °C) de um dia para o outro. A maior parte do DMF foi removida sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 (500 ml) e lavado (3x 500 ml) com salmoura e, então, seco (MgSO4), filtrado e concentrado. O resíduo foi passado através de um leito curto de sílica (5% de MeOH-CH2Cl2) e concentrado para render 2-(2-(2-(2- azidoetoxi)etoxi)etoxi)etan-1-ol 4 (65g, 74%) como um óleo amarelo. Rf (0,56, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE GALACTOSAMINA PERACETILADA 6
[319] Cloridrato de D-Galactosamina 5 (250 g, 1,16 mol) em piridina (1,5 l) foi tratado com anidrido acético (1,25 l, 13,2 mol) ao longo de 45 minutos. Após agitação de um dia para o outro, a mistura de reação foi dividida em três porções de 1 l. Cada porção de 1 l foi vertida em 3 l de água gelada e misturada por uma hora. Após a mistura, os sólidos foram filtrados, combinados, congelados sobre nitrogênio líquido e, em seguida, liofilizados por cinco dias para render galactosamina peracetilada 6 (369,4 g, 82%) como um sólido branco.
Rf (0,58, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (3AR,5R,6R,7R,7AR)-5-(ACETOXIMETIL)- 2-METIL-3A,6,7,7A-TETRAHIDRO-5H-PIRANO[3,2-D]OXAZOL-6,7-DIILA 7
[320] Uma solução de galactosamina per-acetilada 6 (8,45 g, 21,7 mmol) em CHCl3 (320 ml) foi tratada em gotas com TMSOTf (4,32 ml, 23,9 mmol). Após agitação (1,5 hr, 40 °C), a reação foi arrefecida bruscamente pela adição de trietilamina (5 ml) e concentrada até a secura para proporcionar o composto 7 como um vidro amarelo pálido (7,2 g, Quant.). O produto foi utilizado sem purificação adicional. Rf (0,59, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2R,3R,4R,5R,6R)-5-ACETAMIDO-2- (ACETOXIMETIL)-6-(2-(2-(2-(2-AZIDOETOXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)TETRAHIDRO-2H- PIRAN-3,4-DIILA 8
[321] Composto 7 (7,2 g, 21,7 mmol) e 2-(2-(2-(2- azidoetoxi)etoxi)etoxi)etan-1-ol 4 (2,65 g, 15,2 mmol) foram azeotropados (3x) a partir de tolueno (150 ml) para remover vestígios de água. O material seco foi dissolvido em 1,2-dicloroetano (150 ml), resfriado (~5°C) e tratado com TMSOTf
(784 μl, 4,34 mmol). Após agitação de um dia para o outro, a reação foi arrefecida bruscamente pela adição de trietilamina (5 ml) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia (1% → 5% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 8 (7,12 g, 85%) como um óleo marrom. Rf (0,3, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-ACETAMIDO-4,5- DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRANO-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETAN-1-AMÍNIO 2,2,2-TRIFLUOROACETATO 9
[322] Uma solução da azida 8 (7,12 g, 13 mmol) em EtOAc (150 ml) e ácido trifluoroacético (2 ml) foi tratada com paládio sobre carvão (1,5 g, 10% p/p de base úmida). A mistura de reação foi, então, purgada com hidrogênio e agitada vigorosamente de um dia para o outro. Após purga com nitrogênio, a mistura foi filtrada através de Celite, enxaguando com MeOH. O filtrado foi concentrado e purificado por meio de cromatografia (5% → 10% → 20% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 9 (5,8 g, 72%) como um óleo marrom. Rf (0,34, 15% de MeOH-CH2Cl2). ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE 4-(((BENZILOXI)CARBONIL)AMINO)-4-(3-(TERC-BUTOXI)-3- OXOPROPIL)HEPTANODIOATO DE DI-TERC-BUTILA 11
[323] A uma solução de 4-amino-4-(3-(terc-butoxi)-3- oxopropil)heptanodioato de di-terc-butila 10 (13,5 g, 33 mmol), 25% de Na2CO3 (aq) (150 ml) e diclorometano (300 ml) adicionou-se lentamente cloroformato de benzila (14 ml, 98 mmol). A solução foi agitada vigorosamente de um dia para o outro (16h) à temperatura ambiente. Mediante conclusão, diclorometano adicional (100 ml) foi adicionado e a camada de diclorometano foi separada. A camada aquosa foi extraída com diclorometano (2 x 100 ml). As frações orgânicas extraídas foram combinadas, secas com sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas à secura. O produto 11 foi isolado como um óleo incolor que não exigiu purificação adicional (15,8 g, 88%). Rf = 0,7 (1:1 AcOEt/hexano).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE 4-(((BENZILOXI)CARBONIL)AMINO)-4-(2- CARBOXIETIL)HEPTANODIOICO ÁCIDO 12
12.
[324] Uma solução de 11 (15,6 g, 28,8 mmol) em ácido fórmico (50 ml) foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. A solução foi concentrada até a secura e dissolvida em acetato de etila (~25 ml). Mediante repouso, o produto cristalizou como um sólido incolor. O sólido foi filtrado, lavado com acetato de etila e seco ao ar para proporcionar 12 como um sólido incolor (10,2 g, 93%). Rf (0,1, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 13
13.
[325] Uma solução de 12 (79 3 mg, 2,08 mmol) e 9 (5,8 g, 9,36 mmol) em DMF (50 ml) foi tratada com BOP (3,67 g, 8,32 mmol) e, então, N,N- diisopropiletilamina (4,31 ml, 25 mmol). Após a agitação de um dia para o outro a mistura foi concentrada até a secura e submetida à cromatografia (1% → 2% → 5% → 10% → 15% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 13 (5,71 g [bruto],
>100% - continha subprodutos de acoplamento que não afetaram a próxima etapa). Rf (0,45, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 1
14.
[326] Composto 13 (5,7 g) foi dissolvido em MeOH (150 ml) e TFA (1,5 ml) e tratado com paládio em carvão (1 g, 10% p/p de base úmida). A mistura de reação foi, então, purgada com hidrogênio e agitada vigorosamente de um dia para o outro. Após purga com nitrogênio, a mistura foi filtrada através de Celite, enxaguando com MeOH. O filtrado foi concentrado e purificado por meio de cromatografia (5% → 10% → 20% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 14 como um óleo marrom (2,15 g, 56% como um ao longo de duas etapas). Rf (0,32, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 11. PREPARAÇÃO DE (5-AMINO-1,3-FENILENO)DIMETANOL 15
[327] Uma solução de 5-aminoisoftalato de dimetila (20,0 g, 96 mmol) em THF (350 ml) foi adicionada, em gotas, a uma mistura de refluxo de 3,75 eq de LiAlH4 (13,6 g, 358 mmol) em THF (440 ml) ao longo de uma hora. A mistura foi agitada ao refluxo por mais duas horas, em seguida, resfriada até a temperatura ambiente e arrefecida bruscamente pela adição cuidadosa de MeOH (27 ml) e água (40 ml). Após agitar a mistura arrefecida bruscamente durante duas horas, a mesma foi filtrada e concentrada até a secura. O resíduo foi recristalizado (2X) a partir de EtOAc para fornecer 15 como cristais amarelo- amarromzado (10,2 g, 70 %).
ETAPA 12. PREPARAÇÃO DE 10-((3,5-BIS(HIDROXIMETIL)FENIL)AMINO)-10- OXODECANOATO DE METILA 16
[328] Uma solução de sebacato de metila (3,8 g, 17 mmol), 15 (2,5 g, 17 mmol) e EEDQ (8,1 g, 33 mmol) em 2:1 diclorometano/metanol (200 ml) foi agitado à temperatura ambiente por 2 horas. Mediante conclusão, a solução foi concentrada até a secura. O sólido obtido foi triturado com diclorometano (50 ml) e filtrado. O sólido foi enxaguado com diclorometano frio e seco ao ar para proporcionar 16 como um sólido incolor (4,3 g, 72%). Rf = 0,33 (EtOAc).
ETAPA 13. PREPARAÇÃO DE 10-((3-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5- (HIDROXIMETIL)FENIL)AMINO)-10-OXODECANOATO DE METILA 17
[329] A uma solução de 16 (4,3 g, 12 mmol) em piridina (50 ml) foi adicionado 4,4'-(cloro(fenil)metileno)bis(metoxibenzeno) (4,1 g, 12 mmol). A solução foi agitada sob nitrogênio de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante conclusão, a solução foi concentrada até a secura e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (0,5% → 0,75% → 1% → 1,5% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 17 como um sólido amarelo (2,9 g, 35%). Rf (0,6, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 14. PREPARAÇÃO DE 10-((3-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5- (HIDROXIMETIL)FENIL)AMINO)-10-OXODECANOATO DE METILA 18
[330] A uma solução de 17 (2,9 g, 4,3 mmol) em THF (60 ml) foi adicionada água (15 ml) e hidróxido de lítio (112 mg, 4,7 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Mediante conclusão, a solução foi concentrada para remover o THF. A solução aquosa restante foi congelada rapidamente em nitrogênio líquido e liofilizada de um dia para o outro para produzir um sólido incolor (2,9 g, quant.). Rf (0,3, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 15. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 19
[331] A uma solução 14 (454 mg, 0,67 mmol), 18 (1,25 g, 0,67 mmol) e HBTU (381 mg, 1,0 mmol) em DMF anidro (25 ml) adicionou-se N,N- diisopropiletilamina (0,35 ml, 2,0 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Mediante conclusão, a solução foi vertida em acetato de etila (250 ml) e lavada com salmoura (3 x 200 ml). A camada de acetato de etila foi seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura. A purificação por cromatografia em coluna (5% → 7,5% → 10% → 15% MeOH em CH2Cl2) proporcionou 19 como uma espuma laranja pálida (1,5 g, 94%). Rf (0,25, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 16. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 20
[332] Uma solução do composto 19 (1,5 g, 0,6 mmol), anidrido succínico (120 mg, 1,2 mmol), DMAP (220 mg, 1,8 mmol) e trimetilamina (250 µl, 1,8 mmol) em CH 2Cl2 anidro (50 ml) foi agitado de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante conclusão, a solução foi concentrada até a secura e filtrada através de um pequeno tampão de sílica (100% CH 2Cl2 → 15% de MeOH em CH 2Cl2) para proporcionar o produto 20 como uma espuma bege claro (1,1 g, 70%). Massa m/z (ES-TOF MS) 727,7 [M + 3H - DMTr]+ , 1091,1 [M + 2H - DMTr]. RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3) δ 8,92 (br s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,49-7,47 (m, 3H), 7,41 (br s, 1H), 7,38-7,34 (m, 5H), 7,32-7,26 (m, 4H), 7,24-7,08 (br s, 3H), 7,08 (s, 1H), 6,90-6,80 (m, 7H), 5,31 (d, 3H, J = 2,7 Hz), 5,12 (s, 2H), 5,06 (dd, 3H, J = 11,2, 3,2 Hz), 4,78 (d, 3H, J = 8,5 Hz), 4,24-4,08 (m, 12H), 3,95-3,88 (m, 7H), 3,85-3,76 (m, 4H), 3,78 (s, 6H), 3,68-3,56 (m, 34H), 3,54-3,44 (m, 8H), 3,41-3,33 (m, 6H), 2,70- 2,60 (m, 4H), 2,52-2,30 (m, 30H), 2,24-2,16 (m, 8H), 2,14 (s, 9H), 2,04 (s, 9H), 2,02-1,96 (m, 6H), 1,98 (s, 9H), 1,96 (s, 9H), 1,74-1,52 (m, 4H), 1,36- 1,24 (m, 12H).
ETAPA 17. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 1
[333] O succinato 20 foi carregado em 1000Å LCAA (aminoalquil de cadeia longa) CPG (vidro de poro de controle) usando química de acoplamento de amida padrão. Uma solução de diisopropilcarbodiimida (52,6 µmol), N-hidroxissuccinimida (0,3 mg, 2,6 µmol) e piridina (10 µl) em acetonitrila anidra (0,3 ml) foi adicionada a 20 (20,6 mg, 8 µmol) em diclorometano anidro
(0,2 ml) Esta mistura foi adicionada a LCAA CPG (183 mg). A suspensão foi misturada gentilmente de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante o desaparecimento de 20 (HPLC), a mistura de reação foi filtrada e o CPG foi lavado com 1 ml de cada diclorometano, acetonitrila, uma solução de 5% de anidrido acético/5% de N-metilimidazol/5% de piridina em THF, depois THF, acetonitrila e diclorometano. O CPG foi então seco de um dia para o outro sob alto vácuo. O carregamento foi determinado pelo ensaio DMTr padrão por UV/Vis (504 nm) para ser 25 µmol/g. O suporte sólido de CPG carregado com GalNAc resultante foi empregado na síntese automática de oligonucleotídeos usando procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeos seguida de remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concorrente) proporcionou o conjugado GalNAc-oligonucleotídeo 1.
EXEMPLO 2: SÍNTESE DO CONJUGADO 34 ESQUEMA 6.
ESQUEMA 7.
ESQUEMA 8.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 4-(((BENZILOXI)CARBONIL)AMINO)-4-(3-(TERC-BUTOXI)-3- OXOPROPIL)HEPTANODIOATO DE DI-TERC-BUTILA 21
[334] Uma solução de 4-amino-4-(3-(terc-butoxi)-3- oxopropil)heptanodioato de di-terc-butila (25 g, 60 mmol) e Z-glicina (18,9 g, 90,2 mmol) em CH2Cl2 (300 ml) foi tratada sucessivamente com EDC (23 g, 120 mmol), diisopropiletilamina (32 ml, 180 mmol) e DMAP (cat. 17 mg). Após agitação (16h), a mistura de reação foi vertida em NaHCO3 (Sat. Aq.), extraído com CH2Cl2, lavada com salmoura, seca (MgSO4), filtrada e concentrada para proporcionar 4-(2-(((benziloxi)carbonil)amino)acetamido)-4-(3-(terc-butoxi)-3- oxopropil)heptanodioato de di-terc-butila 21 como um sólido amorfo e foi usado sem processamento adicional (36 g, quant.). Rf (0,85, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 4-(2-(((BENZILOXI)CARBONIL)AMINO)ACETAMIDO)- 4-(2-CARBOXIETIL)HEPTANODIOICO 22
[335] Uma solução de 4-(2- (((benziloxi)carbonil)amino)acetamido)-4-(3-(terc-butoxi)-3- oxopropil)heptanodioato de di-terc-butila 21 (59,3 mmol, 36g) foi agitada em ácido fórmico puro (150 ml) por 72 horas. Mediante conclusão, o ácido fórmico foi removido sob pressão reduzida e o sólido bruto foi seco de um dia para o outro em alto vácuo para render 22 como um sólido incolor (15,9 g, 61%). Rf (0,15, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 23
[336] Uma solução de 22 (6,2 g, 14,1 mmol) e 2,2,2- trifluoroacetato de 2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-diacetoxi-6- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etan-1-amínio (35 g, 56,5 mmol) em DMF (250 ml) foi tratada com BOP (25 g, 56,5 mmol) depois N,N- diisopropiletilamina (29 ml, 170 mmol). Após agitação de um dia para o outro, a mistura foi concentrada até a secura e submetida a cromatografia (100% de CH2Cl2 a 15% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar o composto 23 (24,6 g, 89%).
Rf (0,55, 15% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 24
[337] O composto 23 (24,6 g) foi dissolvido em MeOH (200 ml) e TFA (1,5 ml) e purgado com nitrogênio. Paládio sobre carvão (1 g, 10% p/p de base úmida) foi adicionado e, em seguida, a mistura de reação foi purgada com hidrogênio e agitada vigorosamente de um dia para o outro. Mediante conclusão, a reação foi purgada com nitrogênio, filtrada através de Celite e enxaguada com MeOH. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (gradiente: 5% → 10% → 20% de MeOH-CH2Cl2)para proporiconar 24 como um óleo viscoso marrom pálido (23 g). Rf (0,32, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE (5-AMINO-1,3-FENILENO)DIMETANOL 26
[338] Uma suspensão de hidreto de alumínio e lítio (13,6 g, 358 mmol) em tetrahidrofurano anidro (450 ml) foi levada ao refluxo sob uma atmosfera de nitrogênio e tratada, em gotas, com uma solução de dimetil-5- aminoisoftalto 25 (20 g, 96 mmol) em tetrahidrofurano anidro (350 ml). Após a adição ter concluído a mistura foi aquecida ao refluxo por 2 horas adicionais.
Mediante conclusão, a solução foi resfriada à temperatura ambiente e arrefecida bruscamente pela adição lenta de MeOH (27 ml), em seguida, água (40 ml). Após agitação durante 2 horas, a mistura foi filtrada, concentrada e recristalizada de EtOAc para render (5-amino-1,3-fenileno)dimetanol 26 como cristais esbranquiçados (10,2 g, 70%). Rf 0,5 (15% MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 3,5-BIS(HIDROXIMETIL)BENZONITRILA 27
[339] Uma solução de 26 (5 g, 33 mmol) em ácido clorídrico 2N (100 ml) foi resfriada até 0 ⁰C e tratada com uma solução fria de nitrito de sódio (3,53 g, 36 mmol) em água (50 ml). A mistura de reação foi mantida a uma temperatura ≤ 5⁰C por 30 min, em seguida, tratada com uma solução de cianeto de cobre(I) (3,19 g, 35,6 mmol) e cianeto de sódio (3,53 g, 72 mmol) em água (50 ml) em uma única porção. Após agitação de um dia para o outro à temperatura ambiente, a mistura foi filtrada, extraída com diclorometano (3 x 100 ml), concentrada e usada sem purificação adicional. O diol, 3,5- bis(hidroximetil)benzonitrila 27 foi obtida como um sólido amarelo (2,19 g, 41%).
Rf 0,75 (15% MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE 3-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5- (HIDROXIMETIL)BENZONITRILA 28
[340] Uma solução de 3,5-bis(hidroximetil)benzonitrila 27 (538 mg, 3,3 mmol) em piridina (14 ml) foi tratada com cloreto de 4,4′-Dimetoxitritila (1,17 g, 3,46 mmol) e agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente.
Uma vez concluída, a mistura foi concentrada e dispersa em éter dietílico (25 ml), filtrada e concentrada. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (gradiente: 10% a 50% de EtOAc-Hexano) para render o 28 como um sólido amarelo (725 mg, 47%). Rf = 0.5 (1:1 AcOEt/hexano).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE (3-(AMINOMETIL)-5-((BIS(4- METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)FENIL)METANOL 29
[341] Uma solução de 28 (100 mg, 0,22 mmol) em metil tetrahidrofurano (5 ml) foi resfriada até 0 ⁰C e tratada lentamente com hidreto de alumínio e lítio (0,64 mmol = 0,28 ml de uma solução 2,3 M em MeTHF).
Após agitação durante uma hora, a reação foi arrefecida bruscamente pela adição de metanol (1 ml), em seguida, água (0,3 ml) e agitada por 30 min. A mistura foi filtrada e concentrada, para render (3-(aminometil)-5-((bis(4- metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)fenil)metanol 29 (78 mg, 77%). Rf 0,15 (10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE 10-((3-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5- (HIDROXIMETIL)BENZIL)AMINO)-10-OXODECANOATO DE METILA 30
[342] Uma solução de (3-(aminometil)-5-((bis(4- metoxifenil)(fenil)metoxi)-metil)fenil)metanol 29 (78 mg, 0,17 mmol) e sebacato de monometila (38 mg, 0,17 mmol) em diclorometano (5 ml) foram tratados sucessivamente com EDC (48 mg, 0,25 mmol), DMAP (cat., 5 mg) e diisopropiletilamina (57 μl, 0,33 mmol). Após agitação (3,5 h) a mistura de reação foi vertida em solução saturada de bicarbonato de sódio (50 ml). A solução de bicarbonato de sódio foi extraída com diclorometano (3 x 50 ml), lavada com salmoura (50 ml), seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada à secura.
O material em bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (gradiente: 2% a 5% de MeOH-CH2Cl2) para proporcionar 10-((3-((bis(4- metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5-(hidroximetil)benzil)amino)-10-oxodecanoato de metila 30 como um óleo amarelo (57 mg, 53%). Rf 0,45 (10% de MeOH- CH2Cl2).
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DE 10-((3-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5- (HIDROXIMETIL)FENIL)AMINO)-10-OXODECANOATO DE METILA 31
[343] O composto 30 (188 mg, 0,28 mmol) foi dissolvido em tetrahidrofurano (5 ml) e tratado com uma solução de LiOH (7 mg, 0,30 mmol) em água (1 ml). Mediante conclusão, o tetrahidrofurano foi removido em vácuo e a mistura aquosa restante foi congelada e liofilizada para proporcionar lítio 10-((3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5- (hidroximetil)benzil)amino)-10-oxodecanoato 31 como um sólido incolor (180 mg, 99%). Rf 0,45 (10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 11. P REPARAÇÃO DOS COMPOSTOS 32, 33 E 34
[344] Os compostos 32, 33 e 34 foram preparados de acordo com o mesmo procedimento usado para sintetizar os compostos 19, 20e 1,
respectivamente.
EXEMPLO 3. SÍNTESE DO CONJUGADO 36 ETAPA 1. P REPARAÇÃO DO CONJUGADO 36
[345] O conjugado 36 foi preparado usando procedimentos idênticos aos usados para sintetizar o composto 34 e todos os intermediários correspondentes. A única exceção sendo a síntese do composto 6, onde o anidrido propanoico foi usado no lugar do anidrido acético.
E XEMPLO 4. S ÍNTESE DO CONJUGADO 42 E SQUEMA 9.
ESQUEMA 10.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 37
[346] Uma solução de ácido 18β-glicirretínico (2,5 g, 5,3 mmol), (3-aminopropil)carbamato de terc-butila (1,1 g, 6,4 mmol) e HBTU (3,0 g, 8,0 mmol) em N,N-dimetilformamida (20 ml) foi adicionada diisopropiletilamina (2,75 ml, 15,9 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Mediante conclusão, a solução foi concentrada em vácuo até a secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (gradiente: 2% para 5% de MeOH/CH2Cl2) para proporcionar o produto como um sólido incolor (2,1 g, 63%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 38
[347] A uma solução de 37 (2,1 g, 3,3 mmol) e trietilamina (3,5 ml, 10 mmol) em diclorometano (25 ml) foi adicionado anidrido acético (850 µl, 5,3 mmol) e DMAP (5 mg). A solução foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Mediante conclusão, a solução foi concentrada até a secura e dissolvida em acetato de etila (100 ml), lavada com água (100 ml), seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura para gerar uma espuma marrom pálida (1,9 g, 85%).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 39
[348] A uma solução de 38 (1,5 g, 2,3 mmol) em dioxano anidro (25 ml) foi adicionado cloreto de hidrogênio 2 M em dioxano (25 ml). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente, em seguida, concentrada em vácuo até a secura para proporcionar um sólido castanho claro (1,3 g, 96%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS 40, 41 E 42
[349] Os compostos 40, 41 e 42 foram preparados de acordo com o mesmo procedimento usado para sintetizar os compostos 19, 20 e 1 respectivamente.
EXEMPLO 5. SÍNTESE DO CONJUGADO 43 ESQUEMA 11.
ESQUEMA 12.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 11-(2,6-BIS(HIDROXIMETIL)-4- METILFENOXI)UNDECANOATO DE METILA 44
[350] A uma solução de 2,6-bis(hidroximetil)-p-cresol (2,7 g, 16,3 mmol), 11-bromoundecanoato de metila (5,0 g, 17,9 mmol) e carbonato de potássio (4,5 g, 32,6 mmol) em acetona (100 ml) foi refluxada durante 16 horas.
Mediante conclusão, a solução foi concentrada em vácuo até a secura, suspensa em acetato de etila (150 ml) e lavada com água (2 x 100 ml) e salmoura (100 ml). A camada de acetato de etila foi seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo até a secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (gradiente 100% de Hex → 50% de EtOAc/Hex) para proporcionar 11-(2,6-bis(hidroximetil)-4-metilfenoxi)undecanoato de metila 44 como um óleo incolor (1,6 g, 27%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 11-(2-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-6- (HIDROXIMETIL)-4-METILFENOXI)UNDECANOATO DE METILA 45
[351] A uma solução de 11-(2,6-bis(hidroximetil)-4- metilfenoxi)undecanoato de metila 44 (1,5 g, 4,1 mmol) em piridina anidra (20 ml) foi adicionado cloreto de 4,4′-Dimetoxitritila (1,4 g, 4,1 mmol). A solução foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Mediante conclusão, a solução foi concentrada em vácuo até a secura e purificada por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (0,5 a 1% de MeOH em CH2Cl2) para proporcionar 11-(2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-6-(hidroximetil)-4- metilfenoxi)undecanoato de metila 45 como um sólido amarelo pálido (1,1 g, 40%).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 11-(2-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-6- (HIDROXIMETIL)-4-METILFENOXI)UNDECANOATO DE LÍTIO 46
[352] Para uma solução de 11-(2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)- 6-(hidroximetil)-4-metilfenoxi)undecanoato de metila 45 (1,1 g, 1,7 mmol) em tetrahidrofurano anidro (40 ml) e água (10 ml) foi adicionado hidróxido de lítio (44 mg, 1,8 mmol). A solução foi concentrada em vácuo para remover todo o tetrahidrofurano. A solução aquosa restante foi congelada rapidamente em nitrogênio líquido, em seguida, liofilizada de um dia para o outro para proporcionar 11-(2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-6-(hidroximetil)-4- metilfenoxi)undecanoato de lítio 46 como um sólido rosa pálido (1,1 g, 94%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 47
[353] Uma solução de 10 (1,33 g, 0,66 mmol), 46 (0,5 g, 0,73 mmol), HBTU (400 mg, 1 mmol) em N,N-dimetilformamida (25 ml) foi adicionada diisopropiletilamina (0,35 ml, 2 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro (18 h) à temperatura ambiente. Mediante conclusão, o solvente foi removido em vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (gradiente: 100% CH2Cl2- 5% - 10% - 15% de MeOH em CH2Cl2) para fornecer 47 como um sólido incolor (710 mg, 41%).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 48
[354] Para uma solução de 47 (0,71 g, 0,3 mmol), trietilamina (0,4 ml, 3,0 mmol) e poliestireno-DMAP (3 mmol/g de carregamento, 200 mg, 0,6 mmol) em diclorometano (15 ml) foi adicionado anidrido succínico (60 mg, 0,6 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e após conclusão filtrada e concentrada em vácuo até a secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (gradiente 5% a 20% de MeOH em CH2Cl2) para proporcionar 48 como um sólido amarelo pálido (570 mg, 70%).
RMN de 1H (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7,91 (m, 1H), 7,86-7,76 (m, 6H), 7,45-7,40 (m, 2H), 7,36-7,14 (m, 10H), 7,10 (s, 1H), 6,91 (d, J = 8,9 Hz, 4H), 5,21 (d, J = 3,3 Hz, 3H), 5,01 (s, 2H), 4,97 (dd, J = 11,2, 3,4 Hz, 3H), 4,56 (d, J = 8,5 Hz, 3H), 4,06-3,98 (m, 11H), 3,93-3,84 (m, 3H), 3,81-3,72 (m, 3H), 3,74 (s, 6H), 3,65-3,46
(m, 38H), 3,40 -3,35 (m, 6H), 3,20-3,16 (m, 6H), 2,56-2,44 (m, 4H), 2,33 (s, 3H), 2,15-2,08 (m, 2H), 2,10 (s, 9H), 2,04-1,96 (m, 6H), 1,89 (s, 9H), 1,82-1,76 (m, 4H), 1,77 (s, 9H), 1,54-1,34 (m, 4H), 1,28-1,10 (m, 12H), ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 49
[355] Para uma solução de 48 (100 mg, 40 µmol), N-hidroxissuccinimida (30 mg/ml soln em acetonitrila, 50 µl, 13 µmol), N,N'-diisopropilcarbodiimida (40 µl, 264 µmol) e piridina (50 µl) em diclorometano (2 ml) e acetonitrila (3 ml) foi adicionado 1000 Å lcaa CPG (principal síntese, 920 mg). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente em um sacudidor orbital. A análise por TLC da solução de reação mostrou apenas consumo parcial do éster N-hidroxissuccínico ativado, então CPG adicional (500 mg) foi adicionado. A solução foi agitada novamente de um dia para o outro. Mediante conclusão, o CPG foi filtrado e lavado com diclorometano (25 ml), acetonitrila (25 ml) e tetrahidrofurano (25 ml). Os resíduos de amina que não reagiram no CPG foram acetilados (terminados) pela adição de uma solução 1:1 de anidrido acético em acetonitrila (3 ml) e 10% de N-metilimidazol/10% de piridina em tetrahidrofurano (3 ml). A suspensão foi deixada por 2 horas, em seguida, filtrada e enxaguada com partes iguais de tetrahidrofurano (25 ml), acetonitrila (25 ml) e diclorometano (25 ml). O CPG 49 carregado foi seco sob alto vácuo de um dia para o outro. A eficiência de carregamento de ligante foi determinada como sendo 22 µmole/g usando um ensaio de carga DMT padrão (3% de ácido tricloroacético em CH2Cl2, UV-VIS, A504).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 43
[356] O suporte sólido de CPG carregado com GalNAc 49 resultante foi empregado na síntese automática de oligonucleotídeos usando procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeos seguida de remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concorrente) proporcionou o conjugado GalNAc-oligonucleotídeo 43.
EXEMPLO 6. SÍNTESE DO CONJUGADO 50 ESQUEMA 13.
ESQUEMA 14.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 2-((2-((TERC-BUTILDIMETILSILIL)OXI)ETIL)AMINO)ETAN-1- OL 51
[357] Uma solução de etanolamina (77 ml, 1,25 mol) e (2- bromoetoxi)-terc-butildimetilsilano (15 g, 62,7 mmol) em acetonitrila anidro (200 ml) foi submetida a refluxo durante 3 horas. Mediante conclusão, a reação foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com água (400 ml) e extraída com acetato de etila (3 x 150 ml). Os extratos de acetato de etila combinados foram secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados em vácuo até a secura.
O resíduo foi purificado por filtração através de um bloco de sílica primeiro com 50% de acetate de etila/hexanos então 50% de MeOH/EtOAc para produzir 51 como um óleo amarelo pálido (14 g, 100%). ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 2-(BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)-N-(2-((TERC- BUTILDIMETILSILIL)OXI)ETIL)ETAN-1-AMINA 52
[358] A uma solução de 2-((2-((terc- butildimetilsilil)oxi)etil)amino)etan-1-ol 51 (14 g, 64 mmol) e trietilamina (17,5 ml, 128 mmol) em diclorometano anidro (250 ml) foi adicionado cloreto de 4,4'- dimetoxitritila (24 g, 70 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e, então, concentrada em vácuo até a secura. O resíduo foi diluído em acetato de etila (300 ml) e lavado com água (250 ml) e salmoura (250 ml). O acetato de etila foi seco em sulfato de magnésio, filtrado e concentrado em vácuo até a secura. Purificação por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (1% a 5% de MeOH em CH2Cl2) proporcionou 52 como um óleo viscoso amarelo pálido (13 g, 39%).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 10-((2-(BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)ETIL)(2- ((TERC-BUTILDIMETILSILIL)OXI)ETIL)AMINO)-10-OXODECANOATO DE METILA 53
[359] Uma solução de 2-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)-N-(2- ((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)etan-1-amina 52 (5,4 g, 10,3 mmol), sebacato de monometila (2,2 g, 10,3 g), HBTU (4,9 g, 12,9 mmol), DIPEA (5,3 ml, 30,9 mmol) em N,N-dimetilformamida (100 ml) foi agitada por 3 horas à temperatura ambiente. Mediante conclusão, a solução foi vertida em água (400 ml) e extraída com acetato de etila (1 x 500 ml). O extrato de acetato de etila foi lavado com salmoura (2 x 250 ml), seco em sulfato de magnésio, filtrado e concentrado em vácuo até a secura. A purificação por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (10% a 25% de acetato de etila em hexanos) proporcionou 53 como um óleo amarelo viscoso (6,5 g, 87%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 10-((2-(BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)ETIL)(2- HIDROXIETIL)AMINO)-10-OXODECANOATO DE METILA 54
[360] A uma solução de 10-((2-(bis(4- metoxifenil)(fenil)metoxi)etil)(2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etil)amino)-10- oxodecanoato de metila 53 (2,0 g, 2,8 mmol) e trietilamina (1 ml) em tetrahidrofurano anidro (20 ml) foi adicionado TBAF (1 M em THF, 3,4 ml, 3,3 mmol). A solução foi agitada por 6 h, mas apenas conversão parcial observada por TLC (5% de MeOH em CH2Cl2). Adicionou-se mais 1,7 ml de TBAF e a solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante conclusão, a solução foi concentrada em vácuo e purificada por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (10% a 50% de EtOAc em hexanos, em seguida, 100% de EtOAc) para fornecer 54 como um óleo incolor viscoso (0,5 g, 29%).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 10-((2-(BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)ETIL)(2- HIDROXIETIL)AMINO)-10-OXODECANOATO DE LÍTIO 55
[361] Para uma solução de 10-((2-(bis(4- metoxifenil)(fenil)metoxi)etil)(2-hidroxietil)amino)-10-oxodecanoato de metila 54
(0,5 g, 0,83 mmol) em THF (40 ml) foi adicionada água (10 ml) e hidróxido de lítio (24 mg, 1,0 mmol). A solução foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e, então, concentrada em vácuo para remover THF. A solução aquosa restante foi congelada rapidamente em nitrogênio líquido e liofilizada para fornecer 55 como um sólido incolor (485 mg, 95%).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS 56, 57, 58 E 50
[362] Os compostos 56, 57, 58 e 50 foram preparados usando procedimentos idênticos aos usados para sintetizar os compostos 47, 48, 49 e 43, respectivamente. EXEMPLO 7. SÍNTESE DO CONJUGADO 59 ESQUEMA 15.
ESQUEMA 16.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE (2R,5R)-5-HIDROXIPIPERIDINA-2-CARBOXILATO DE METILA 61
[363] Ácido (2R,5R)-5-hidroxipiperidina-2-carboxílico 60 (3,5 g, 24,1 mmol) foi agitado em MeOH (50 ml). HCl (g) foi borbulhado através da solução durante 2 minutos e a reação foi agitada ao refluxo durante 1,5 h. A reação foi concentrada em vácuo para gerar (2R,5R)-5-hidroxipiperidina-2- carboxilato de metila 61 em rendimento quantitativo que foi usado sem purificação adicional.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE (2R,5R)-5-HIDROXIPIPERIDINA-1,2-DICARBOXILATO DE 1- (TERC-BUTIL) 2-METILA 62
[364] (2R,5R)-5-hidroxipiperidina-2-carboxilato de metila 61 (24,1 mmol) e TEA (7,2 ml, 53,02 mmol) foram agitados em DCM (100 ml) à temperatura ambiente. Di-terc-butil-di-carbonato (5,7 g, 26,5 mmol) foi adicionado em porções e a reação foi agitada por 2 h. A reação foi diluída com DCM (100 ml) e lavada, sequencialmente, com HCl 1 M (2 x 75 ml)NaHCO3 saturado (2 x 75 ml),H 2O(2 x 75 ml) e solução saturada de NaCl (2 x75 ml). Os orgânicos foram separados, secos (Na 2SO 4) e concentrados em vácuo para gerar (2R,5R)-5-hidroxipiperidina-1,2-dicarboxilato de 1- (terc-butil) 2-metila 62 (5,53 g, 88%) que foi usado sem purificação adicional. ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (2R,5R)-5-HIDROXI-2-(HIDROXIMETIL)PIPERIDINA-1- CARBOXILATO DE TERC-BUTILA 63
[365] Ácido (2R,5R)-1-(terc-butoxicarbonil)-5- hidroxipiperidina-2-carboxílico 62 (5,53 g, 21,4 mmol) foi agitado em THF a 0 °C. LiBH 4 (solução 3,0 M em THF) (8,9 ml, 27,7 mmol) foi adicionado em gotas ao longo de 1 h. A mistura de reação foi aquecida à temperatura ambiente e agitada por 4 hora. A reação foi arrefecida bruscamente com NaOH 1M, THF removido em vácuo e o aquoso extraído exaustivamente com EtOAc (10 x 100 ml). Os orgânicos combinados foram lavados com H2O (50 ml), solução saturada de NaCl (2 x 50 ml), secos (Na 2SO 4) e concentrados em vácuo para gerar (2R,5R)-5-hidroxi-2- (hidroximetil)piperidina-1-carboxilato de terc-butila 63 (2,4 g, 49,0 %) que foi usado sem purificação adicional.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE (3R,6R)-6-(HIDROXIMETIL)PIPERIDIN-3-OL 64
[366] (2R,5R)-5-hidroxi-2-(hidroximetil)piperidina-1-carboxilato de terc- butila 63 (2,4 g, 10,4 mmol) foi agitado em Et2O à temperatura ambiente. HCl (g) foi borbulhado durante 45 segundos e a reação foi agitada à TA durante 45 minutos. A reação foi concentrada em vácuo e seca sob hi-vac para proporcionar (3R,6R)-6-(hidroximetil)piperidin-3-ol 64. O produto foi utilizado sem purificação adicional.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 2,2,2-TRIFLUORO-1-((2R,5R)-5-HIDROXI-2- (HIDROXIMETIL)PIPERIDIN-1-IL)ETAN-1-ONA 65
[367] (3R,6R)-6-(hidroximetil)piperidin-3-ol 64 bruto da reação anterior foi agitado em MeCN (50 ml) com TEA (3,5 ml, 25,2 mmol) à temperatura ambiente. Trifluoroacetato de etila (3 ml, 25,2 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 h, então, concentrada em vácuo para gerar 2,2,2-trifluoro-1-((2R,5R)-5-hidroxi-2- (hidroximetil)piperidin-1-il)etan-1-ona 65. O produto foi utilizado sem purificação adicional.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 1-((2R,5R)-2-((BIS(4- METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-5-HIDROXIPIPERIDIN-1-IL)-2,2,2- TRIFLUOROETANO-1-ONA 66
[368] 2,2,2-trifluoro-1-((2R,5R)-5-hidroxi-2- (hidroximetil)piperidin-1-il)etan-1-ona 65 em bruto da reação anterior foi agitada em DCM com TEA (50 ml) à TA. Cloreto de 4,4'-dimetoxitritila
(DMTrCl) (3,87 g, 11,44 mmol) foi adicionado em uma porção e a reação foi agitada à TA durante 3 horas. A reação foi diluída com DCM (50 ml) e lavada, sequencialmente, com NaHCO 3 saturado (2 x 75 ml),H 2O(2 x 75 ml) e solução saturada de NaCl (2 x 75 ml). Os orgânicos foram separados, secos (Na2SO4), concentrados em vácuo e purificados por cromatografia em coluna (100% de hexanos - 60% de EtOAc/Hexanos) (0,1% de TEA) para gerar 1- ((2R,5R)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5-hidroxipiperidin-1-il)- 2,2,2-trifluoroetano-1-ona 66 (3,14 g, 57%) ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE (3R,6R)-6-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)- PIPERIDIN-3-OL 67
[369] 1-((2R,5R)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5- hidroxipiperidin-1-il)-2,2,2-trifluoroetan-1-ona 66 (3,14 g, 6,0 mmol) foi agitada em MeOH (50 ml) à TA. KOH (672 mg, 12 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada à TA durante 16 horas. KOH adicional (300 mg, 6 mmol) foi adicionado e a agitação continuou por mais 24 h. A reação foi concentrada sob vácuo, tomado em DCM (150 ml), lavou-se com H2O (4 x 50 ml), secou-se (Na 2SO 4)e concentrou-se em vácuo para gerar (3R,6R)-6- ((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)piperidin-3-ol 67 (2,34 g, 90%) que foi usado sem purificação adicional.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE 12-((2R,5R)-2-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)- METOXI)METIL)-5-HIDROXIPIPERIDIN-1-IL)-12-OXODODECANOATO DE METILA 68
[370] (3R,6R)-6-((Bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)piperidin-3- ol 67 (2,34 g, 5,34 mmol) foi agitado em DCM (75 ml) à temperatura ambiente.
Trietilamina (2,2 ml, 16,2 mmol), HATU (3,5 g, 9,2 mmol) e ácido 12-metoxi-12- oxododecanoico (1,32 g, 5,4 mmol) foram adicionados e a reação foi agitada à TA durante 3 h. O precipitado sólido resultante foi removido por filtração, o filtrado concentrado em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna (2,5% de MeOH/DCM, 0,1% de TEA) para gerar 12-((2R,5R)-2-((bis(4- metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5-hidroxipiperidin-1-il)-12-oxododecanoato de metila 68 em rendimento quantitativo .
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE 12-((2R,5R)-2-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)- METOXI)METIL)-5-HIDROXIPIPERIDIN-1-IL)-12-OXODODECANOATO DE METILA 69
[371] 12-((2R,5R)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5- hidroxipiperidin-1-il)-12-oxododecanoato de metila 68 (5,4 mmol) e LiOH (140 mg, 5,94 mmol) foram agitados em THF:H 2O (1:1, 100 ml) à temperatura ambiente por 48 h. O THF foi removido em vácuo, o aquoso congelado e liofilizado para gerar 12-((2R,5R)-2-((bis(4- metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-5-hidroxipiperidin-1-il)-12-oxododecanoato de lítio 69 (3,2 g, 91 %). Que foi usado em reações subsequentes sem purificação adicional.
ETAPA 10. P REPARAÇÃO DOS COMPOSTOS 70, 71, 72 E 59
[372] Os compostos 70, 71, 72 e 59 foram preparados usando procedimentos idênticos aos usados para sintetizar os compostos 47, 48, 49 e 43, respectivamente.
EXEMPLO 8. SÍNTESE DO CONJUGADO 142 ESQUEMA 17.
ESQUEMA 18.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 3,4,5-TRIACETOXIBENZOICO 73
[373] A uma solução de ácido gálico (20 g) em piridina (50 ml) e anidrido acético (50 ml). A solução foi então agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e então, vertido em água gelada (1 l). A solução foi tornada ácida com ácido clorídrico concentrado em que precipitou um sólido incolor. O sólido foi coletado por filtração e lavado com água (5 x 100 ml). O sólido úmido foi congelado em nitrogênio líquido e liofilizado para proporcionar ácido 3,4,5-triacetoxibenzoico (26 g, 75%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE TRIACETATO DE 5-((2-((2-OXO-2-FENIL-1Λ2- ETIL)AMINO)ETIL)CARBAMOIL)BENZENO-1,2,3-TRIILA 74
[374] Para uma solução de ácido 3,4,5-triacetoxibenzoico (10 g, 33,8 mmol), cloridrato de N-carbobenzoxi-1,2-diaminoetano (5,3 g, 33,8 mmol) e HBTU (13,5 g, 35,5 mmol) em DMF (200 ml) foi adicionado DIPEA (17,5 ml, 101 mmol). A solução foi agitada por 16 horas e, então, diluída com acetato de etila (250 ml), lavada com salmoura (3 x 200 ml), seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo até a secura. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (Gradiente 1% a 5% de MeOH em DCM) para proporcionar triacetato de 5-((2-((2-Oxo-2-fenil-1λ2- etil)amino)etil)carbamoil)benzeno-1,2,3-triil como um sólido esbranquiçado (5,5 g).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 3,4,5-TRI-HIDROXI-N-(2-((2-OXO-2-FENIL-1Λ2- ETIL)AMINO)ETIL)BENZAMIDA 75
[375] Uma solução de triacetato de 5-((2-((2-Oxo-2-fenil-1λ2- etil)amino)etil)carbamoil)benzeno-1,2,3-triila (5 g, 1,1 mmol) em 1:1 MeOH/CH2Cl2 (100 ml) foi agitado durante 3 dias à temperatura ambiente.
Mediante conclusão, o solvente foi removido para proporcionar 3,4,5-Triidroxi-N- (2-((2-oxo-2-fenil-1λ2-etil)amino)etil)benzamida como um sólido incolor (4 g, quantitativo) ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 2,2',2''-((5-((2-((2-OXO-2-FENIL-1Λ2- ETIL)AMINO)ETIL)CARBAMOIL)BENZENO-1,2, 3-TRIIL)TRIS(OXI))TRIACETATO DE TRIMETILA 76
[376] Uma solução de 3,4,5-Trihidroxi-N-(2-((2-oxo-2-fenil-1λ2- etil)amino)etil)benzamida (4 g, 11,6 mmol), bromoacetato de metila (7,7 g, 46,4 mmol) e carbonato de potássio (9,6 g, 69,4 mmol) em DMF (100 ml) foi agitada de um dia para o outro a 60 °C. Mediante conclusão, a solução foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com acetato de etila (200 ml), lavada com água (200 ml), salmoura (3 x 100 ml), seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo até a secura. O produto em bruto foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica (Gradiente 2% a 10% de MeOH em DCM) para proporcionar 2,2',2''-((5-((2-((2-oxo-2-fenil-1λ2- etil)amino)etil)carbamoil)benzeno-1,2,3-triil)tris(oxi))-triacetato de trimetila como um sólido bege (5 g, 79%) ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 2,2',2''-((5-((2-((2-OXO-2-FENIL-1Λ2- ETIL)AMINO)ETIL)-CARBAMOIL)BENZENO-1,2,3-TRIIL)TRIS(OXI))TRIACÉTICO 77
[377] Uma solução de 2,2',2''-((5-((2-((2-oxo-2-fenil-1λ2- etil)amino)etil)-carbamoil)benzeno-1,2,3 -triil)tris(oxi))triacetato de trimetila (5 g, 9,2 mmol) e NaOH 1 M (30 ml) em metanol (100 ml) foi agitado durante 2 horas à temperatura ambiente. Mediante conclusão, a reação foi concentrada para remover o metanol e diluída com água (75 ml). A mistura foi resfriada até 0 °C, acidificada com HCl 2 M e extraída com acetato de etila (5 x 150 ml). Os extratos de acetato de etila combinados foram secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados em vácuo até a secura para proporcionar ácido 2,2',2''-((5-((2-((2-
Oxo-2-fenil-1λ2-) etil)amino)etil)carbamoil)benzeno-1,2,3-triil)tris(oxi))triacético como um sólido incolor (2,3 g, 50%).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 78
[378] O composto 78 foi preparado a partir dos compostos 9 (2,75 g, 4,3 mmol) e 77 (0,5 g, 0,96 mmol) usando um procedimento idêntico ao utilizado para o composto 13. Rendimento: 600 mg.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 79
[379] O composto 79 foi preparado a partir dos compostos 78 (0,6 g) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 14. Rendimento: 500 mg.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 140
[380] O composto 140 foi preparado a partir do composto 79 (500 mg, 0,25 mmol) e do composto 18 (175 mg, 0,25 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 19. Rendimento: 250 mg, 44%.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 141
[381] O composto 141 foi preparado a partir do composto 140 (250 mg, 0,11 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 20.
Rendimento: 200 mg.
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DE CONJUGADO 142
[382] O conjugado 1 42 foi preparado a partir do composto 141 (200 mg) e 1000A lcaa CPG (1,8 g) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1. Rendimento: 1,9 g, 22 µmol/g Carregando CPG. O suporte sólido de CPG carregado com GalNAc resultante foi empregado na síntese automática de oligonucleotídeos usando procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeos seguida de remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concorrente) proporcionou o conjugado GalNAc- oligonucleotídeo 142.
EXEMPLO 9. SÍNTESE DO CONJUGADO 145 ESQUEMA 19.
ESQUEMA 20.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-BENZIL-3A,6A-DIMETILTETRAHIDRO-1H-FURO[3,4- C]PIRROL-1,3(3AH)-DIONA RACÊMICA (CIS) 123
[383] Para uma solução resfriada (0 °C) de 3,4-dimetilfuran-2,5- diona (3 g, 24 mmol) e N-benzil-1-metoxi-N-((trimetilsilil)metil)metanamina (7 g, 29,8 mmol) em diclorometano (75 ml) foi adicionado lentamente ácido trifluoroacético (75 µl). Agite de um dia para o outro, permitindo que a solução aqueça lentamente para a temperatura ambiente enquanto o banho de gelo derrete. A mistura de reação foi concentrada até a secura, dissolvida em acetato de etila (100 ml), lavada com bicarbonato de sódio saturado (2 x 100 ml), seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura. A purificação por cromatografia em coluna em gel de sílica (gradiente: 20% de acetato de etila em hexanos a 100% de acetato de etila) proporcionou 5-Benzil-3a,6a- dimetiltetrahidro-1H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona racêmica (cis) como um óleo amarelo (3,5 g, 56%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 1-BENZIL-3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-DIIL)DIMETANOL RACÊMICO (CIS) 124
[384] A uma solução resfriada (0 °C) de (3aR,6aS)-5-Benzil-3a,6a- dimetiltetrahidro-1H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona (3,5 g, 13,4 mmol) em éter dietílico anidro (50 ml) foram adicionados lentamente péletes de hidreto de alumínio e lítio (1,5 g, 40 mmol) em três porções. O banho de gelo foi agitado de um dia para o outro e aquecendo à temperatura ambiente à medida que o banho de gelo derretia. Mediante conclusão, a reação foi resfriada até 0 °C e arrefecida bruscamente muito lentamente com 1,5 ml de NaOH 5M seguido por 1,5 ml de água. Agite por 30 minutos, em seguida, adicione sulfato de magnésio e filtre. O filtrado foi concentrado para proporcionar 1-Benzil-3,4-dimetilpirrolidina-3,4- diil)dimetanol racêmico (cis) como um óleo incolor (2,7 g).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-DIIL)DIMETANOL RACÊMICO (CIS) 125
[385] A uma solução de ((3R,4S)-1-Benzil-3,4-dimetilpirrolidina- 3,4-diil)dimetanol (10 g, 40 mmol) em metanol (10 ml) foi adicionado 10% de paládio em carvão ativado úmido (1 g). A reação foi agitada vigorosamente sob uma atmosfera de hidrogênio por 16 horas. Mediante conclusão, a solução foi filtrada através de Celite e concentrada até a secura para proporcionar 3,4- Dimetilpirrolidina-3,4-diil)dimetanol racêmico (cis) como um sólido incolor (5,5 g, 86%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 10-(3,4-BIS(HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)- 10-OXODECANOATO DE METILA RACÊMICO (CIS) 126
[386] O composto 126 foi preparado a partir do composto 125 (1,3 g, 8,2 mmol) e sebacato de monometila (1,8 g, 8,2 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 17. Rendimento: 1,8 g, 61%.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL-)(FENIL)METOXI)-METIL)-4- (HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA RACÊMICO (CIS) 127
[387] O composto 127 foi preparado a partir do composto 126 (1,8 g, 5,0 mmol) e cloreto de 4,4′-Dimetoxitritila (1,7 g, 5,0 mmol) usando um procedimento idêntico ao utilizado para o composto 18. Rendimento: 1,4 g, 42%.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL-)(FENIL)METOXI)-METIL)-4- (HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA RACÊMICO (CIS) 128
[388] A uma solução do composto 127 (3,0 g, 4,6 mmol) em THF (50 ml) e água (50 ml) foi adicionado hidróxido de lítio (121 mg, 5,0 mmol). A solução foi agitada por 4 horas à temperatura ambiente e, então, concentrada para remover o THF. A solução aquosa restante foi liofilizada de um dia para o outro para produzir um sólido rosa pálido (2,9 g, quantitativo).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 143
[389] O composto 143 foi preparado a partir do composto 128 (270 mg, 0,42 mmol) e do composto 14 (800 mg, 0,42 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 19. Rendimento: 900 mg, 87%.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 144
[390] O composto 144 foi preparado a partir do composto 143 (500 mg, 0,2 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 20.
Rendimento: 200 mg.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 145
[391] O conjugado 145 foi preparado a partir do composto 144 (200 mg) e 1000A lcaa CPG (1,8 g) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1. Rendimento: 1,9 g, carregamento de 20 µmol/g de CPG. O suporte sólido de CPG carregado com GalNAc resultante foi empregado na síntese automática de oligonucleotídeos usando procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeos seguida de remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concorrente) proporcionou o conjugado GalNAc-oligonucleotídeo 145.
EXEMPLO 10. SÍNTESE DO CONJUGADO 150 ESQUEMA 21.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 146-1
[392] A uma solução de éster monometílico de ácido dodecanodioico (12,2 g, 50,0 mmol) em diclorometano (300 ml) foi adicionado N- hidroxisuccinimida (6,10g, 53,0 mmol) e cloridrato de 1-etil-3-(3-
dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC) (10,52 g, 55,0 mmol). A mistura turva foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente e a reação se tornou uma solução límpida. TLC mostrou que a reação foi concluída. Os orgânicos foram lavados com NH4Cl saturado (300 ml) e salmoura (100 ml). A camada orgânica foi separada, seca sobre MgSO4 e concentrada até a secura até dodecanodioato de 1-(2,5-dioxopirrolidin-1-il) 12-metila puro 146-1 como um sólido branco (16,7 g, 97,8%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE CICLOPENT-3-EN-1-ILMETANOL 146-2
[393] A uma suspensão de hidreto de alumínio e lítio (15,2 g, 0,40 mol) em éter anidro (1 l) a 0 °C sob nitrogênio, foi adicionada a solução de ciclopent-3-enocarboxilato de metila (50 g, 0,40 mol) em éter (300 ml) em gotas ao longo de 5 horas. A solução foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. TLC indicou a conclusão da reação. A reação foi resfriada novamente até 0 °C. Uma solução saturada de Na2SO4 (32 ml) foi adicionada em gotas para arrefecer bruscamente a reação. Após a adição estar completa, a mistura foi agitada por outras 3 horas e foi filtrada através de um bloco de celite.
A evaporação do solvente proporcionou ciclopent-3- enilmetanol 146-2 (37,3 g, 95 %) como um líquido incolor.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (6-OXABICICLO[3.1.0]HEXAN-3-IL)METANOL 146-3
[394] A uma solução de ciclopent-3- enilmetanol 146-2 (4,0 g, 41 mmol) em diclorometano (150 ml) a 0 °C foi adicionado ácido 3-cloroperbenzoico (10 g, 45 mmol, 77% de pureza) por porção. A reação foi agitada de um dia para o outro. Foi adicionado diclorometano (150 ml). Os orgânicos foram lavados com tiossulfato de sódio (12 g em 10 ml de água), seguido por NaHCO3 saturado (40 ml). Isto foi repetido até todo o ácido 3-cloroperbenzoico remanescente ter sido lavado. O orgânico foi seco sobre MgSO4. A evaporação do solvente gerou uma mistura de cis- e trans-6-oxabiciclo[3.1.0]hexan-3-ilmetanol 146-3 (2,6 g, 57 %) como um óleo amarelo. GC-MS: m/z 114 (5) (M+), 95 (15), 88 (100), 81 (15).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 2-AMINO-4-(HIDROXIMETIL) CICLOPENTAN-1-OL 146-4
[395] A uma solução de 6-oxabiciclo[3.1.0]hexan-3-ilmetanol 146-3 (2,0 g, 17,6 mmol) em metanol (20 ml) a 0 °C foi purgado com gás amônia por 10 min.
A reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. TLC indicou a não conclusão da reação. O metanol foi removido e o NH 3 .H2O (50 ml) foi adicionado e este foi agitado à temperatura ambiente durante uma semana. TLC confirmou a conclusão da reação. A água foi removida azeotropicamente com etanol para proporcionar 2-amino-4-(hidroximetil)ciclopentanol 146-4 (2,1 g, 91%) como um óleo amarelo. ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 12-(2-HIDROXI-4-(HIDROXIMETIL) CICLOPENTILAMINO)-12- OXODODECANOATO DE METILA 146-5
[396] O composto 146-5 foi preparado a partir de 2-amino-4- (hidroximetil)ciclopentanol 146-4 e dodecanodioato de 1-(2,5-dioxopirrolidin-1-il) 12-metila 146-1, usando o mesmo procedimento descrito na síntese de 12-(2- (terc-butoxicarbonilamino)etilamino)-12-oxododecanoato (3-2). 12-(2-hidroxi-4- (hidroximetil) ciclopentilamino)-12-oxododecanoato de metila 146-5 foi obtido em 87,4% de rendimento como um sólido esbranquiçado.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 147
[397] O composto 147 foi preparado quantitativamente a partir do composto 146 (1,4 g, 2,33 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 18.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 148
[398] O composto 148 foi preparado a partir do composto 147 (150 mg, 0,23 mmol) e do composto 14 (431 mg, 0,23 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 19. Rendimento: 460mg, 84%.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 149
[399] O composto 149 foi preparado a partir do composto 148 (460mg, 0,19mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto
20. Rendimento: 436mg, 91%.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 150
[400] O composto 150 foi preparado a partir do composto 1 49 (436 mg) e 1000A lcaa CPG (2,62 g) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1. Rendimento: 2,7g, 21,3µmol/g Carregando CPG. O suporte sólido de CPG carregado com GalNAc resultante foi empregado na síntese automática de oligonucleotídeos usando procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeos seguida de remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concorrente) proporcionou o conjugado GalNAc- oligonucleotídeo 150.
EXEMPLO 11. SÍNTESE DE CONJUGADOS 153, 158, 163, 168 E 173 ESQUEMA 22.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE (2S,4R)-4-HIDROXIPIRROLIDINA-1,2-DICARBOXILATO DE 1-(TERC-BUTIL) 2-METILA (133)
[401] (2S,4R)-4-hidroxipirrolidina-2-carboxilato de metila (25,9 g,
46 mmol), anidrido de BOC (65,9 g, 302,5 mmol) e TEA (42 ml, 302,5 mmol) foram agitados em DCM à TA por 16 h. Os orgânicos foram lavados sequencialmente com HCl 1 M (x2), NaHCO3 saturada (x2), H2O e salmoura, secos e concentrados em vácuo, para gerar (2S,4R)-4-hidroxipirrolidina-1,2- dicarboxilato de 1-(terc-butil) 2-metila (133) (58,1g, 85%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE (4R)-4-HIDROXI-2-METILPIRROLIDINA-1,2-DICARBOXILATO DE 1-(TERC-BUTIL) 2-METILA (134)
[402] (2S,4R)-4-hidroxipirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-(terc- butil) 2-metila (133) (5g, 20,4 mmol) e MeI (12 g, 84,5 mmol) foram agitados em THF anidro a -40 °C. LDA (solução 2,0 M em THF) (37,5 ml, 75 mmol) foi adicionado em gotas. A reação foi deixada aquecer até à temperatura ambiente e agitada por 4 h, em seguida, arrefecida bruscamente com NH 4Cl saturado. A reação foi extraída com EtOAc, lavada com H2O e salmoura, seca (Na2SO4)e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna de EtOAc//hexanos 50:50 para gerar (4R)-4-hidroxi-2-metilpirrolidina-1,2- dicarboxilato de 1-(terc-butil) 2-metila (134) como uma mistura racêmica (3,6 g, 68%) ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (2S,4R)-4-HIDROXI-2-(HIDROXIMETIL)-2- METILPIRROLIDINA-1-CARBOXILATO DE TERC-BUTILA (135A)
[403] (4R)-4-hidroxi-2-metilpirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-(terc- butil) 2-metila (134) (19 g, 73,5 mmol) foi agitada em THF anidro sob atmosfera de N2. Solução de LiBH4 (48 ml, 96 mmol) foi adicionada em gotas e a reação foi agitada à TA durante 48 h. A reação foi arrefecida bruscamente com NaOH 1M, o THF removido em vácuo e o resíduo extraído com EtOAc (4 x 100 ml). Os orgânicos combinados foram lavados com H2O, salmoura, secaram (Na2SO4) e foram concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (5% de MeOH/DCM) para gerar (2S,4R)-4-hidroxi-2-(hidroximetil)-2- metilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butila (135a) como o produto principal (8g,
47%). Estrutura atribuída de acordo com referências da literatura.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE CLORIDRATO DE (3R, 5S)-5-(HIDROXIMETIL)-5- METILPIRROLIDIN-3-OL (136)
[404] terc-Butil (2S,4R)-4-hidroxi-2-(hidroximetil)-2- metilpirrolidina-1-carboxilato (135a) (8g, 34,6 mmol) foi agitado em EtOAc à TA e HCl gasoso aplicado por aproximadamente dois minutos. A reação foi agitada por uma hora, em seguida, concentrada em vácuo e seca sob alto vácuo para gerar cloridrato de (3R, 5S)-5-(hidroximetil)-5-metilpirrolidin-3-ol (136) de forma quantitativa. ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 12-((2S,4R)-4-HIDROXI-2-(HIDROXIMETIL)-2- METILPIRROLIDIN-1-IL)-12-OXODODECANOATO DE METILA (137)
[405] Cloridrato de (3R, 5S)-5-(Hidroximetil)-5-metilpirrolidin-3-ol (136) (7,9 g, 47,4 mmol), ácido 12-metoxi-12-oxododecanoico (11,5 g, 47,4 mmol), HBTU (36 g, 76 mmol) e TEA 20 ml, 142,2 mmol) foram agitados em DCM à TA durante 16 h. O precipitado foi removido por filtração e os orgânicos lavados com HCl 1 M (x2), NaHCO3 saturado (x2), H2O e salmoura. Após a secagem, os orgânicos foram concentrados em vácuo e purificados por cromatografia em coluna (5% de MeOH/DCM) para gerar 12-((2S,4R)-4-hidroxi- 2-(hidroximetil)-2-metilpirrolidin-1-il)-12-oxododecanoato de metila (137) (3,1 g, 18,3 %).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 12-((2S,4R)-2-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)- METIL)-4-HIDROXI-2-METILPIRROLIDIN-1-IL)-12-OXODODECANOATO DE METILA (138)
[406] 12-((2S,4R)-4-hidroxi-2-(hidroximetil)-2-metilpirrolidin-1-il)- 12-oxododecanoato de metila (137) (3,1 g, 9,0 mmol), DMTr-Cl (2,8 g, 8,2 mmol) e TEA (1,1 ml, 8,2 mmol) foram agitados em DC< à TA por 16 h. A reação foi concentrada em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna (5% de MeOH/DCM, 0,1% de TEA) para gerar 12-((2S,4R)-2-((bis(4- metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-hidroxi-2-metilpirrolidin-1-il)-12-
oxododecanoato de metila (138) (2,7 g, 45,5 mmol).
ESQUEMA 23 ETAPA 7. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 154-1
[407] A uma solução de N-(2-hidroxietil)ftalimida (4,80 g, 25,0 mmol) e cloreto de 4,4'-dimetoxitritila (8,8 g, 26,0 mmol) em diclorometano (200 ml) a 0 °C sob nitrogênio, foi adicionada trietilamina (10,4 ml, 74,6 mmol) em gotas. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 3 h. TLC indicou a conclusão da reação. A camada orgânica foi lavada com salmoura (100 ml), seca sobre MgSO4 e concentrada até a secura. Este foi usado diretamente para a próxima reação sem purificação.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 154-2
[408] 2-(2-(Bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)etil)isoindolina-1,3- diona (154-1) obtida acima e monohidrato de hidrazina (3,6 ml, 74 mmol) em etanol (100 ml) foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. TLC indicou a conclusão da reação. O precipitado foi filtrado. O filtrado foi evaporado.
O resíduo foi tomado por acetato de etila (100 ml). A solução orgânica foi lavada com 10% de NaOH, água e salmoura e seca sobre MgSO 4. A evaporação do solvente proporcionou 2- (bis (4-metoxifenil) (fenil) metoxi) etanamina (154-2) como um líquido amarelo (8,11 g, 89,3% de rendimento em duas etapas). Este foi usado para a reação seguinte sem purificação.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 154-3
[409] A uma solução de L-treonina (1,19g, 10,0 mmol) e NaHCO3 (2,3g, 27 mmol) em água (20 ml) e dioxano (10 ml), foi adicionado 1-(2,5- dioxopirrolidina-1-il)dodecanodioato de 12-metila 146-1 (3,1 g, 9,1 mmol) em dioxano (10 ml) em gotas. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. 4N HCl (10 ml) foi adicionado. O precipitado foi coletado por filtração e lavado com água (3 x 10 ml). O sólido foi seco sobre P 2O5 em um dessecador para proporcionar ácido (2S,3R)-3-hidroxi-2-(12-metoxi-12- oxododecanamido) butanoico 154-3 como um sólido esbranquiçado (2,84 g, 82,2%). LC-MS (ESI): m/z: 346 (100), (M + H+).
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 154
[410] ácido (2S,3R)-3-hidroxi-2-(12-metoxi-12- oxododecanamido)butanoico 154-3 (2,47g, 7,15 mmol), 2-(bis(4- metoxifenil)(fenil)metoxi)etanamina 154-2 (2,60g, 7,15 mmol), EDC (1,64g, 8,58 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) (1,16g, 8,58 mmol) e TEA (2,4 ml, 17,2 mmol) foram agitados em diclorometano (72 ml) à temperatura ambiente por 2 h. Água (30 ml) foi adicionada. A camada orgânica foi separada e lavada com salmoura (2 x 30 ml). A evaporação do solvente seguida por cromatografia em coluna (30% de acetato de etila/hexanos -50% de acetato de etila/hexanos) proporcionou 12-((2S,3R)-1-(2-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)etilamino)-3- hidroxi-1-oxobutan-2-ilamino)-12-oxododecanoato de metila 154 como um semissólido amarelo ceroso (2,60g, 52,6%). RMN de 1H (400 MHz, acetona-d6, ppm): δ 7,51 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 7,45-7,49 (m, 2H), 7,28-7,36 (m, 6H), 7,21 (tt, J = 7,2, 1,2 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,88 (dt, J = 8,9, 2,5 Hz, 4H), 4,39 (dd, J = 8,2, 3,0 Hz, 1H), 4,20-4,27 (m, 1H), 3,78 (s, 6H), 3,60 (s, 1H), 3,35-3,52 (m, 2H), 3,07-3,16 (m, 2H), 2,23-2,37 (m, 4H), 1,53-1,65 (m, 4H), 1,23-1,36 (m, 12H), 1,10 (d, J = 6,4 Hz, 3H).
ESQUEMA 24 ETAPA 11. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 164-1
[411] A uma suspensão de t-butóxido de potássio (14,6 g, 130 mol) em THF (120 ml)/éter (360 ml) foi adicionado brometo de metiltrifenilfosfônio (46,6 g, 130 mmol). A mistura foi submetida ao refluxo por 2 h e, em seguida, resfriada até 0 °C. 2-formilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butila (13,0 g, 65,2 mmol) em éter (50 ml) foi adicionado em gotas. A mistura de reação foi agitada a 0 °C e então arrefecida bruscamente pela adição de água (250 ml). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com éter (250 ml). O extrato combinado foi seco sobre MgSO4. A evaporação do solvente, seguida pela purificação por cromatografia em coluna (5% de acetato de etila/hexanos) gerou 3-vinilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butila 164-1 (11,5 g, 89,4%) como um líquido incolor. GC-MS: m/z: 197 (2) (M+), 141 (40), 124 (30), 57 (100).
ETAPA 12. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 164-2
[412] A uma mistura de t-BuOH (140 ml) e água (70 ml), foi carregado AD-mix-β (47,4 g) e metanossulfonamida (2,89 g, 30,4 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 30 min e foi então resfriada até 0 °C. 3-vinilpirrolidina-1-carboxilato de terc-butila 164-1 (6,00 g, 30,4 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro.
A mistura de reação foi resfriada até 0 °C. Tiossulfato de sódio penta-hidratado
(96 g, 387 mmol) foi adicionado e a temperatura foi deixada aquecer para a temperatura ambiente. Água (700 ml) foi adicionada a e mistura foi extraída com acetato de etila (500 ml). O extrato foi lavado com água (2 x 50 ml) e salmoura (50 ml), e sobre MgSO4. A evaporação do solvente, seguida por cromatografia em coluna (2% de metanol/diclorometano - 7% de metanol/diclorometano) gerou 3-(1,2-di-hidroxietil)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butila 164-2 (5,4 g, 77%) como um óleo marrom claro.
ETAPA 13. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 164-3
[413] A uma solução de 3-(1,2-dihidroxietil) pirrolidina-1- carboxilato de terc-butila 164-2 (3,1 g, 13,4 mmol) em etanol (10 ml) foi adicionado HCl 3N (30 ml, 90 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. TLC indicou a conclusão da reação. O etanol foi evaporado. Tolueno foi adicionado e evaporado. Isso foi repetido três vezes para gerar cloridrato de 1-(pirrolidin-3-il)etano-1,2-diol 164-3 (2,0 g, 89%) como um óleo marrom. LC-MS (ESI): m/z: 132 (100), (M + H+, amina livre).
ETAPA 14. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 164-4
[414] A uma solução de cloridrato de 1-(pirrolidin-3-il)etano-1,2- diol 164-2 (2,0g, 12 mmol) em água (30 ml) foi adicionado NaHCO3 (3,7g, 44 mmol) por porção. Dioxano (20 ml) foi então adicionado. À solução acima foi adicionado dodecanodioato de 1-(2,5-dioxopirrolidin-1-il)12-metila 146-1 (3,7 g, 11 mmol) em dioxano (30 ml). A mistura da reação foi agitada de um dia para o outro. A camada orgânica foi extraída com acetato de etila (3 x 100 ml). O extrato combinado foi lavado com HCl 0,5 N (50 ml) e salmoura (50 ml) e seco sobre MgSO4.
ETAPA 15. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 164
[415] Esta substância foi preparada a partir de 12-(3-(1,2- dihidroxietil) pirrolidin-1-il)-12-oxododecanoato de metila 164-4 e cloreto de 4,4-
dimetoxitritila (1 eq) usando o mesmo procedimento descrito na síntese de 2-(2- (bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)etil)isoindolina-1,3-diona 138. O produto foi purificado por cromatografia em coluna (1,5% de metanol/diclorometano). 12-(3- (2-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)-1-hidroxietil) pirrolidin-1-il)-12- oxododecanoato de metila 164 foi obtido em 51% de rendimento como um óleo amarelo. RMN de 1H (400 MHz, acetona-d6, ppm): δ 7,49-7,54 (m, 2H), 7,35- 7,40 (m, 4H), 7,28-7,34 (m, 2H), 7,19-7,25 (m, 1H), 6,86 -6,91 (m, 4H), 4,11-4,20 (m, 1H), 3,79 (s, 6H), 3,68-3,77 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,29-3,59 (m, 3H), 3,06 - 3,20 (m, 3H), 2,33-2,55 (m, 1H), 2,29 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,19 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,65-2,0 (m, 2H), 1,51-1,62 (m, 4H), 1,26-1,35 (m, 12H).
ESQUEMA 25 ETAPA 16. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 170-1
[416] A uma solução de 2-aminoetilcarbamato de terc-butila (2,88g, 18,0 mmol) e trietilamina (2,98g, 29,4 mmol) em diclorometano (100 ml), foi adicionado dodecanodioato de 1-(2,5-dioxopirrolidin-1-il)12-metila (146-1) (5,09 g, 14,9 mmol) em diclorometano (50 ml) em gotas à temperatura ambiente.
A mistura de reação foi agitada de um dia para o outro e TLC indicou a conclusão da reação. 100 ml de salmoura foram adicionados e a camada orgânica foi separada. A camada orgânica foi separada, lavada com HCl 0,5 N (150 ml), salmoura (2 x 100 ml) e seca sobre MgSO4. A evaporação do solvente gerou 12-
(2-(terc-butoxicarbonilamino)etilamino)-12-oxododecanoato de metila 170-1 (5,85 g 100%) como um sólido branco.
ETAPA 17. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 170-2
[417] A uma solução de 12-(2-(terc- butoxicarbonilamino)etilamino)-12-oxododecanoato 170-1 (5,55 g, 14,4 mmol) em metanol (100 ml) a 0 °C, foi adicionado cloreto de tionila (3,3 ml, 45,5 mmol) em gotas. A reação foi então agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. TLC indicou a conclusão da reação. O solvente e os orgânicos voláteis foram evaporados. O resíduo foi então co-evaporado com heptanos duas vezes para gerar cloridrato de 12-(2-aminoetilamino)-12-oxododecanoato de metila 170-2 quantitativamente como um sólido branco. LC-MS (ESI): m/z: 287 (100), (M + H+, amina livre).
ETAPA 18. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 170-3
[418] (S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxilato de (-)-Metila (5,01g, 31,2 mmol) e LiOH.H2O(2,55 g, 60,8 mmol) em THF (50 ml) e água (50 ml) foi agitada de um dia para o outro. TLC indicou a conclusão da reação. O THF foi evaporado e o aquoso foi acidificado com HCl 1N para pH = 1. Isso foi extraído com acetato de etila (5 x 50 ml). O extrato combinado foi seco sobre MgSO4. A evaporação do solvente gerou ácido (S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4- carboxílico 170-3 (2,93g, 64,3%) como um líquido amarelo claro.
ETAPA 19. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 170-4
[419] O composto 170-4 foi sintetizado a partir do ácido (S)-2,2- dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxílico 170-3 e N-hidroxissuccinimida com rendimento de 86%, usando o mesmo procedimento descrito na síntese de dodecanodioato de 1-(2,5-dioxopirrolidin-1-il) 12-metila 146-1. (S)-2,5- Dioxopirrolidin-1-il 2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxilato 170-4 foi obtido em 86% de rendimento como um sólido branco.
ETAPA 20. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 170-5
[420] A uma suspensão de cloridrato de 12-(2-aminoetilamino)- 12-oxododecanoato 170-2 (14,4 mmol) e (S)-2,5-dioxopirrolidin-1-il 2,2-dimetil- 1,3-dioxolano-4-carboxilato 170-4 (3,80 g, 15,6 mmol) em diclorometano (100 ml) foi adicionado trietilamina (6 ml, 43,0 mmol) em diclorometano (25 ml) ao longo de 4 horas a 0 °C. A mistura de reação foi então agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. LC-MS indicou que o material de partida 170-2 foi completamente convertido. A camada orgânica foi lavada com salmoura (50 ml), HCl 1 N (50 ml), salmoura (50 ml), seca sobre MgSO4 e concentrada até a secura para proporcionar 12-(2-(2,2- dimetil-1,3-dioxolano-4-carboxamido)etilamino)- 12-oxododecanoato de (S)-metila 170-5 (5,93g, 99,3%) como um sólido branco.
ETAPA 21. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 170-6
[421] A uma solução de 12-(2-(2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4- carboxamido)etilamino)-12-oxododecanoato de (S)-metila 170-5 (5,93g, 14,3 mmol) foi adicionado um gota de ácido sulfúrico concentrado. Esse foi submetido ao refluxo durante 6 h e, então, resfriado até a temperatura ambiente. O sólido foi coletado através de filtração e lavado duas vezes com metano frio. O sólido foi seco ao ar (3,32 g). A segunda safra (0,42 g) foi obtida a partir do líquido-mãe para gerar 12-(2-(2,3-dihidroxipropanamido)etilamino)-12-oxododecanoato de (S)-metila 170-6 (3,74 g no total, 69,4%) como um cristal branco. LC-MS (ESI): m/z : 375 (100), (M + H+) RMN de 1 H (400 MHz, DMSO-d6, ppm): δ 7,79 (br, 2H), 5,49 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,66 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 3,83-3,88 (m, 1H), 3,55- 3,61 (m, 4H), 3,41-3,47 (m, 1H), 3,05-3,15 (m, 4H), 2,29 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,03 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,42-1,52 (m, 4H), 1,18-1,29 (m, 12H).
ETAPA 22. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 170
[422] A uma solução de 12-(2-(2,3-di- hidroxipropanamido)etilamino)-12-oxododecanoato de (S)-metila 170-6 (2,99 g, 7,99 mmol) em piridina seca (57,5 ml) sob nitrogênio, foi adicionado cloreto de
4,4'-dimetoxitritila (2,84 g, 8,38 mmol) em uma porção. A reação foi agitada à temperatura ambiente por dois dias. Metanol (5 ml) foi adicionado para arrefecer bruscamente a reação. A piridina foi evaporada. Tolueno foi adicionado e, então, evaporado. Este processo foi repetido três vezes. Adicionou-se água (100 ml) e essa foi extraída com acetato de etila (5 x 250 ml). Os extratos foram combinados e secos sobre MgSO4. A evaporação do solvente, seguida por cromatografia em coluna (1% de metanol/diclorometano-3% de metanol/diclorometano) gerou 12- (2-(3-(bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)-2-hidroxipropanamido)-etilamino)-12- oxododecanoato de (S)-metila 170 (1,70 g, 31,4%) como um óleo viscoso. RNM de 1H (400 MHz, acetona-d6, ppm): δ 7,64-7,70 (br, 1H), 7,47-7,51 (m, 2H), 7,33- 7,37 (m, 4H), 7,26-7,32 (m, 2H), 7,20 (dt, J = 7,3, 2,1 Hz, 1H), 7,11 (br, 1H), 6,86 (d, J = 8,7 Hz, 4H), 4,84 (br, 1H), 4,21 (dd, J = 5,1, 3,8 Hz, 1H), 3,78 (s, 6H), 3,60 (s, 1H), 3,25-3,42 (m, 6H), 2,28 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,48-1,62 (m, 4H), 1,21-1,34 (m, 12H).
ESQUEMA 26.
ETAPA 23. PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS 139, 155, 160, 165 E 170
[423] Os compostos 139, 155, 160, 165 e 170 foram preparados a partir dos compostos 138, 154, 159, 164 e 169 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 18.
[424] Etapa 24. Preparação de conjugados 153, 158, 163, 168 e 173
[425] Os conjugados 153, 158, 163, 168 e 173 foram preparados a partir do composto 139, 154, 159, 164 e 1 69 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 12. SÍNTESE DO CONJUGADO 176 ESQUEMA 27.
ESQUEMA 28.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 12-AMINODODECANOATO DE METILA 132
[426] Ácido 12-aminoundecanoico (131) (10 g, 4,64 mmol) foi agitado em MeOH à temperatura ambiente. Foi adicionado cloreto de acetila (856 µl, 12 mmol) em gotas e a reação foi agitada por 1,5 h. O solvente foi removido em vácuo, o resíduo recolhido em MTBE e arrefecido no frigorífico de um dia para o outro. O precipitado resultante foi recolhido por filtração, lavado com MTBE gelado e seco sob alto vácuo para proporcionar 12-aminododecanoato de metila 132.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 12-(12-(10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL)- (FENIL)METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10- OXODECANAMIDO)DODECANAMIDO)DODECANOATO DE METILA RACÊMICO (CIS) 129
[427] 10-(3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4- (hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1-il)-10-oxodecanoato de lítio racêmico (cis) (128) (2g, 3,1 mmol), de 12-aminododecanoato de metila (132) (778 mg, 3,1 mmol), HBTU (1,2 g, 3,1 mmol) e TEA (1,4 ml, 10 mmol) foram agitados em DCM à TA O/N. O precipitado foi removido por filtração, o filtrado concentrado em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna (5% de MeOH, DCM). TLC mostrou dois pontos de execução próximos com massa idêntica que foram designados como isômeros geométricos e agrupados para gerar 12-(12-(10- ((3R,4S)-3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-(hidroximetil)-3,4- dimetilpirrolidin-1-il)-10-oxodecanamido)dodecanamido)dodecanoato de metila (129) de forma quantitativa.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 12-(12-(10-(-3-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)- METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANAMIDO)- DODECANAMIDO)DODECANOATO DE LÍTIO RACÊMICO (CIS) 130
[428] 12-(12-(10-(3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4- (hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1-il)-10- oxodecanamido)dodecanamido)dodecanoato de metila racêmico (cis) (129) (3,1 mmol) foi agitado em THF:H2O (50:50) com LiOH (88 mg, 3,7 mmol) à temperatura ambiente O/N. A reação foi confirmada por TLC e o THF removido em vácuo. A solução aquosa foi congelada em N2 líquido e liofilizada por 48 horas para gerar 12-(12-(10-(3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)-metoxi)metil)- (hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1-il)-10-oxodecanamido)- dodecanamido)dodecanoato de lítio racêmico (cis) 130 quantitativamente.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 176
[429] O conjugado 176 foi preparado a partir dos compostos 24 e
130 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 13. SÍNTESE DO CONJUGADO 179 ESQUEMA 29.
ESQUEMA 30.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 80
[430] Composto 24 (2 g, 0,86 mmol), ácido N-carbobenzoxi-L- glutâmico (120 mg, 0,43 mmol), HBTU (326 mg, 0,86 mmol) e TEA (353 µl, 2,6 mmol) foram agitados em DCM à TA O/N. A mistura foi concentrada em vácuo e purificada por cromatografia em coluna para gerar o composto 80 (2,88 g, 83%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 81
[431] O composto 81 foi preparado de compostos 80 (670 mg, 0,17 mmol) usando-se um procedimento idêntico àquele usado para o composto
14. O composto foi usado em bruto nas reações subsequentes e o rendimento considerado quantitativo.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO179
[432] O conjugado 179 foi preparado a partir dos compostos 18 e 81 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 14. SÍNTESE DO CONJUGADO 182 ESQUEMA 31.
ESQUEMA 32.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 93
[433] O composto 93 foi preparado a partir de ácido (2-oxo-2-fenil- 1λ2-etil)-D-glutâmico (2,25 g, 8,1 mmol) e 9 (13 g, 21 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 89. Rendimento: 11,2 g.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 94
[434] O composto 94 foi preparado a partir do composto 93 (11,1 g) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 90. Rendimento: 10,2 g.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 182
[435] O conjugado 182 foi preparado a partir dos compostos 18 e 94 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 15. SÍNTESE DE CONJUGADOS 185 E 188 ESQUEMA 33.
ESQUEMA 34.
ESQUEMA 35.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 4-METILBENZENOSSULFONATO DE 14-HIDROXI-3,6,9,12- TETRAOXATETRADECILA 82
[436] Uma solução de pentaetilenoglicol (35g, 147mmol), TEA (41 ml, 294mmol) e trimetilamina-HCl (1,4 g, 14,7 mmol) em CH2Cl2 (600 ml) foi tratada com cloreto de tosila (29,4 g, 154 mmol). Após agitação (18 h) a mistura de reação foi lavada com H2O-salmoura (1:1), seca (MgSO4), filtrada, concentrada e submetida a cromatografia para render 82 (24,6 g, 43%) como um óleo amarelo pálido. Rf 0,8 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 2. 14-AZIDO-3,6,9,12-TETRAOXATETRADECAN-1-OL 83
[437] 14-azido-3,6,9,12-tetraoxatetradecan-1-ol (83) foi preparado a partir de 82 (24,6g, 62,7mmol) e azida de sódio (7,13g, 110mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 4 Rendimento: 14,8g, 90%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 84
[438] Uma solução de GalNAc 6 (12,2 g, 31,4 mmol) e HO-PEG- N3 83 (9,2 g, 35 mmol) em 1,2-dicloroetano (150 ml) foi tratada com Sc (OTf)3 (771mg, 1,6 mmol). Após agitação (85 °C, 2 h), a reação foi resfriada (TA), arrefecida bruscamente pela adição de TEA (40 ml) e concentrada. O material em bruto foi submetido a cromatografia para render 84 (11,16 g, 60%) como uma espuma amarela pálida. Rf 0,7 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 85
[439] Uma solução de 84 (11,16g, 18,8mmol) e Pd/C (1,1 g, 10% - suporte úmido) em EtOAc (120 ml) foi tratada com TFA (4,32 ml, 56,5 mmol) e purgada com H2. Após agitar vigorosamente (4,5 h) a reação foi purgada com N2,filtrada através de Celite e concentrada. O material em bruto foi submetido a cromatografia para render 85 (5,77 g, 45%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 95
[440] O composto 95 foi preparado a partir do ácido (2-oxo-2-fenil- 1λ2-etil)-D-glutâmico (1,04 g, 3,7 mmol) e o composto 94 (10,2 g) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 91. Rendimento: 7,2 g.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 96
[441] O composto 96 foi preparado a partir do composto 95 (11,1 g) usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 92.
Rendimento: 6,5 g.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 97
[442] O composto 97 foi preparado a partir de ácido (2-oxo-2-fenil- 1λ2-etil)-D-glutâmico (2g, 7,1mmol) e 85 (12,1g, 17,8mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 89. Rendimento: 10 g, quantitativo.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 98
[443] O composto 98 foi preparado a partir do composto 97 (10g, 7,2 mmol) usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 90.
Rendimento: 3,5g, 36%.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 99
[444] Composto 99 foi preparado quantitativamente a partir do ácido (2-oxo-2-fenil-1λ2-etil)-D-glutâmico (350 mg, 1,25 mmol) e composto 98 (2,86 mg, 2,5 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para composto
91.
ETAPA 10. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 100
[445] O composto 100 foi preparado quantitativamente a partir do composto 99 (3,2 g, 1,25 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 92.
ETAPA 11. PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS 185 E 188
[446] Os conjugados 185 e 188 foram preparados a partir dos compostos 18 e 96 ou 18 e 1 00 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 16. SÍNTESE DE CONJUGADOS 191, 194, 197 E 200 ESQUEMA 36 ESQUEMA 37.
ESQUEMA 38.
ETAPA 1. P REPARAÇÃO DE 2-(2-(2-AZIDOETOXI ) ETOXI )ETAN -1-OL 86
[447] A uma solução de 2-(2-(2-cloroetoxi) etoxi)etan-1-ol (13 g, 77 mmol) em água (200 ml) é adicionada azida de sódio (10 g, 154 mmol).
A reação foi aquecida para 100 ° C por 48 horas. A reação é resfriada até a temperatura ambiente e vertida em um funil de separação de 1 l e extraída com diclorometano (3 x 200 ml). Os extratos de diclorometano combinados são secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados até a secura para proporcionar 2-(2-(2-azidoetoxi) etoxi)etan-1-ol como um óleo incolor (11,7 g).
ETAPA 2. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 87
[448] O composto 87 é preparado a partir de 86 (4,95g, 28,3mmol) e 6 (10g, 25,7mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 84. Rendimento: 10g, 77%.
ETAPA 3. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 88
[449] O composto 88 é preparado a partir de 87 (10g,
19,8mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 85.
Rendimento: 7,63g, 65%.
ETAPA 4. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 89
[450] Uma solução de 88 (2g, 3,38mmol) e ácido Z-glutâmico (427mg, 1,52mmol) em CH 2Cl2 (50 ml) é tratada com HBTU (1,41 g, 3,7mmol) e base de Hünig (1,77 ml, 10,1 mmol). Após agitação (18h), a mistura é concentrada e submetida a cromatografia para render 89 (871 mg, 48%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH 3OH-CH2Cl2).
ETAPA 5. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 90
[451] Uma solução de 89 (870mg, 0,72mmol) e Pd/C (90mg, 10% - suporte úmido) em EtOAc (10 ml) é tratada com TFA (84 μl, 1,1 mmol) e purgada com H 2. Após agitar vigorosamente (2 h) a reação é purgada com N2, filtrada através de Celite e concentrada. O material em bruto é usado sem processamento adicional e rendeu 90 (850 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,25 (10% de CH 3OH-CH2Cl2).
ETAPA 6. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 91
[452] Uma solução de 90 (850mg, 0,72mmol) e ácido Z- glutâmico (91mg, 0,32mmol) em CH 2Cl2 (10mL) é tratada com HBTU (300mg, 0,79mmol) e base de Hünig (502μL, 2,9mmol). Após agitação (1,5 h), a mistura é diluída com CH 2Cl2 e lavada com NaHCO 3 (Sat. Aq.), seca (MgSO 4), filtrada e concentrada. O material em bruto é submetido a cromatografia para render 91 (590 mg, 76%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH 3OH-CH2Cl2).
ETAPA 7. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 92
[453] Uma solução de 91 (590 mg, 0,25 mmol) e Pd/C (100 mg, 10% - suporte úmido) em CH 3OH (30 ml) é tratado com TFA (29 μl, 0,37 mmol) e purgado com H 2. Após agitação (3 h), a mistura é purgada com N 2 e, em seguida, filtrada através de Celite e concentrada. O material em bruto é usado sem processamento adicional e rendeu 92 (600mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH 3OH-CH2Cl2).
ETAPA 8. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 101
[454] O composto 101 é preparado a partir de ácido (R)-2-((2- oxo-2-fenil-112-etil)amino)hexanodioico (2,51g, 8,6 mmol) e 9 (11g, 17,2 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 89.
Rendimento: 4,2 g, 37%.
ETAPA 9. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 102
[455] O composto 102 é preparado a partir do composto 101 (4,2 g, 3,2 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 90. Rendimento: 2,1 g, 47%.
ETAPA 10. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 103
[456] O composto 103 é preparado a partir de ácido (R)-2-((2- oxo-2-fenil-1l2-etil)amino)hexanodioico (265 mg, 0,9 mmol) e composto 102 (2,1 g, 1,8 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 91. Rendimento: (560 mg, 24 %).
ETAPA 11. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 104
[457] O composto 104 é preparado quantitativamente a partir do composto 103 (560 mg) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 92. O composto é usado sem purificação.
ETAPA 12. P REPARAÇÃO DE CONJUGADOS 191, 194 E 197
[458] Os conjugados 191, 194 e 197 são preparados a partir do composto 128 e 92, 96 e 1 00 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 16A. SÍNTESE DE CONJUGADOS 191A ESQUEMA 36A
ESQUEMA 37A.
ESQUEMA 38A.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2-AZIDOETOXI) ETOXI)ETAN-1-OL 86A
[459] A uma solução de 2-(2-(2-cloroetoxi) etoxi)etan-1-ol (13 g, 77 mmol) em água (200 ml) é adicionada azida de sódio (10 g, 154 mmol). A reação foi aquecida para 100 °C por 48 horas. A reação é resfriada até a temperatura ambiente e vertida em um funil de separação de 1 l e extraída com diclorometano (3 x 200 ml). Os extratos de diclorometano combinados são secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados até a secura para proporcionar 2-(2-(2-azidoetoxi) etoxi)etan-1-ol como um óleo incolor (11,7 g).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 87A
[460] O composto 87a foi preparado a partir de 86a (4,95g, 28,3mmol) e 6a (10g, 25,7mmol) usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 84. Rendimento: 10g, 77%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 88A
[461] O composto 88a foi preparado a partir de 87a (10 g, 19,8 mmol) usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 85.
Rendimento: 7,63g, 65%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 89A
[462] Uma solução de 88a (2g, 3,38mmol) e ácido Z—-glutâmico (427mg, 1,52mmol) em CH2Cl2 (50 ml) é tratada com HBTU (1,41 g, 3,7mmol) e base de Hünig (1,77 ml, 10,1 mmol). Após agitação (18h), a mistura é concentrada e submetida a cromatografia para render 89a (871 mg, 48%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 90A
[463] Uma solução de 89a (870mg, 0,72mmol) e Pd/C (90mg, 10% - suporte úmido) em EtOAc (10 ml) é tratada com TFA (84 μl, 1,1 mmol) e purgada com H2. Após agitar vigorosamente (4,5 h) a reação foi purgada com N2, filtrada através de Celite e concentrada. O material em bruto é usado sem processamento adicional e rendeu 90a (850 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,25 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 91A
[464] Uma solução de 90a (850mg, 0,72mmol) e ácido Z- glutâmico (91mg, 0,32mmol) em CH2Cl2 (10 ml) é tratada com HBTU (300 mg, 0,79 mmol) e base de Hünig (502 μl, 2,9 mmol). Após agitação (1,5 h), a mistura é diluída com CH2Cl2 e lavada com NaHCO3 (Sat. Aq.), seca (MgSO4), filtrada e concentrada. O material em bruto foi submetido a cromatografia para render 91a (590 mg, 76%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 92A
[465] Uma solução de 91 (590 mg, 0,25 mmol) e Pd/C (100 mg, 10% - suporte úmido) em CH3OH (30 ml) é tratada com TFA (29 μl, 0,37 mmol) e purgada com H2. Após agitação (3 h), a mistura é purgada com N2 e, então, filtrada através de Celite e concentrada. O material em bruto foi usado sem processamento adicional e rendeu 92a (600 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 191A,
[466] O conjugado 191a foi preparado a partir do composto 128 e do composto 92a usando um procedimento idêntico ao usado para o composto
1.
EXEMPLO 16B. SÍNTESE DOS CONJUGADOS 191B ESQUEMA 36B
ESQUEMA 37B
ESQUEMA 38B
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2-AZIDOETOXI) ETOXI)ETAN-1-OL 86
[467] A uma solução de 2-(2-(2-cloroetoxi) etoxi)etan-1-ol (13 g, 77 mmol) em água (200 ml) é adicionada azida de sódio (10 g, 154 mmol). A reação foi aquecida para 100 °C por 48 horas. A reação é resfriada até a temperatura ambiente e vertida em um funil de separação de 1 l e extraída com diclorometano (3 x 200 ml). Os extratos de diclorometano combinados são secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados até à secura para proporcionar 2-(2-(2-azidoetoxi) etoxi)etan-1-ol como um óleo incolor (11,7 g).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 87B
[468] O composto 87a foi preparado a partir de 86b (4,95 g, 28,3 mmol) e 6b (10 g, 25,7 mmol) usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 84. Rendimento: 10g, 77%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 88B
[469] O composto 88a é preparado a partir de 87b (10 g, 19,8 mmol) usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 85.
Rendimento: 7,63g, 65%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 89B
[470] Uma solução de 88b (2 g, 3,38 mmol) e ácido Z-glutâmico racêmico (427 mg, 1,52 mmol) em CH2Cl2 (50 ml) é tratada com HBTU (1,41 g, 3,7mmol) e base de Hünig (1,77 ml, 10,1 mmol). Após agitação (18h), a mistura foi concentrada e submetida a cromatografia para render 89b (871 mg, 48%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 90B
[471] Uma solução de 89b (870 mg, 0,72 mmol) e Pd/C (90 mg, 10% - suporte úmido) em EtOAc (10 ml) é tratada com TFA (84 μl, 1,1 mmol) e purgada com H2. Após agitar vigorosamente (2 h) a reação é purgada com N 2, filtrada através de Celite e concentrada. O material em bruto é usado sem processamento adicional e rendeu 90b (850 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,25 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 91B
[472] Uma solução de 90b (850 mg, 0,72 mmol) e ácido Z- glutâmico (91 mg, 0,32 mmol) em CH2Cl2 (10 ml) é tratada com HBTU (300 mg, 0,79 mmol) e base de Hünig (502 μl, 2,9 mmol). Após agitação (1,5 h), a mistura é diluída com CH2Cl2 e lavada com NaHCO3 (Sat. Aq.), seca (MgSO4), filtrada e concentrada. O material em bruto é submetido a cromatografia para render 91b (590 mg, 76%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 92B
[473] Uma solução de 91b (590 mg, 0,25 mmol) e Pd/C (100 mg, 10% - suporte úmido) em CH3OH (30 ml) é tratada com TFA (29 μl, 0,37 mmol) e purgada com H2. Após agitação (3 h), a mistura é purgada com N2 e, em seguida, filtrada através de Celite e concentrada. O material em bruto é usado sem processamento adicional e rendeu 92b (600 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 191B
[474] O conjugado 191bé preparado a partir do composto 128 e do composto 92b usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 16C. SÍNTESE DOS CONJUGADOS 191C ESQUEMA 36C
ESQUEMA 37C.
ESQUEMA 38C.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2-AZIDOETOXI)ETOXI)ETAN-1-OL 86C
[475] A uma solução de 2-(2-(2-cloroetoxi) etoxi)etan-1-ol (13 g, 77 mmol) em água (200 ml) é adicionada azida de sódio (10 g, 154 mmol). A reação foi aquecida para 100 °C por 48 horas. A reação é resfriada até a temperatura ambiente e vertida em um funil de separação de 1 l e extraída com diclorometano (3 x 200 ml). Os extratos de diclorometano combinados são secos em sulfato de magnésio, filtrados e concentrados até à secura para proporcionar 2-(2-(2-azidoetoxi) etoxi)etan-1-ol como um óleo incolor (11,7 g).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 87C
[476] O composto 87c é preparado a partir de 86c (4,95 g, 28,3 mmol) e 6c (10 g, 25,7 mmol) usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 84. Rendimento: 10g, 77%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 88C
[477] O composto 88c é preparado a partir de 87c (10g, 19,8mmol) usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 85.
Rendimento: 7,63g, 65%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 89C
[478] Uma solução de 88c (2 g, 3,38 mmol) e ácido Z-glutâmico racêmico (427 mg, 1,52 mmol) em CH2Cl2 (50 ml) é tratada com HBTU (1,41 g, 3,7mmol) e base de Hünig (1,77 ml, 10,1 mmol). Após agitação (18h), a mistura foi concentrada e submetida a cromatografia para render 89c (871 mg, 48%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 90C
[479] Uma solução de 89c (870 mg, 0,72 mmol) e Pd/C (90 mg, 10% - suporte úmido) em EtOAc (10 ml) é tratada com TFA (84 μl, 1,1 mmol) e purgada com H2. Após agitar vigorosamente (2 h) a reação é purgada com N 2, filtrada através de Celite e concentrada. O material em bruto é usado sem processamento adicional e rendeu 90c (850 mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,25 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 91C
[480] Uma solução de 90c (850 mg, 0,72 mmol) e ácido Z- glutâmico (91 mg, 0,32 mmol) em CH2Cl2 (10 ml) é tratada com HBTU (300 mg, 0,79 mmol) e base de Hünig (502 μl, 2,9 mmol). Após agitação (1,5 h), a mistura é diluída com CH2Cl2 e lavada com NaHCO3 (Sat. Aq.), seca (MgSO4), filtrada e concentrada. O material em bruto é submetido a cromatografia para render 91c (590 mg, 76%) como uma espuma incolor. Rf 0,5 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 92C
[481] Uma solução de 91c (590 mg, 0,25 mmol) e Pd/C (100 mg, 10% - suporte úmido) em CH3OH (30 ml) é tratada com TFA (29 μl, 0,37 mmol) e purgada com H2. Após agitação (3 h), a mistura é purgada com N2 e, em seguida, filtrada através de Celite e concentrada. O material em bruto é usado sem processamento adicional e rendeu 92c (600mg, quantitativo) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 191C
[482] O conjugado 191cé preparado a partir do composto 128 e do composto 92c usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 17. SÍNTESE DE CONJUGADOS 203 E 206 ESQUEMA 39.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 69B
[483] O composto 69b foi preparado a partir do ácido (2S,4R)-4- hidroxipirrolidina-2-carboxílico usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 69.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS 203 E 206
[484] Os conjugados 203 e 206 foram preparados a partir do composto 96 e 1 00 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto
1.
EXEMPLO 18. SÍNTESE DO CONJUGADO 209 ESQUEMA 40.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 209
[485] O conjugado 209 foi preparado a partir dos compostos 96 e 160 usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 1. EXEMPLO 18A. SÍNTESE DO CONJUGADO 209A ESQUEMA 40A.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 209A
[486] O conjugado 209a é preparado a partir dos compostos 96a e 160 usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 19. SÍNTESE DE CONJUGADOS 212 E 215 ESQUEMA 41.
ESQUEMA 42.
ETAPA 1. P REPARAÇÃO DE 5-(2-((2-OXO-2-FENIL -1 Λ2-ETIL)AMINO )ACETAMIDO )- ISOFTALATO DE DIMETILA 105
[487] Uma solução de 5-aminoisoftalato de dimetila (5 g, 24 mmol), Z-Gly-OH (5 g, 24 mmol), EDC (5 g, 26,3 mmol), HOBt (3,6 g, 26,3 mmol), NMM (2,9 ml, 26,3 mmol) em DMF (50 ml) foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante conclusão, a mistura de reação foi diluída com acetato de etila (250 ml) e lavada com cada 1M HCl (2 x 100 ml), bicarbonato de sódio saturado (1 x 100 ml) e salmoura (2 x 100 ml).
Secar em sulfato de magnésio, filtrar e concentrar até a secura para proporcionar 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1λ2-etil)amino)acetamido) isoftalato de dimetila como um sólido incolor (7,2 g, 79%).
ETAPA 2. P REPARAÇÃO DE ÁCIDO 5-(2-((2-OXO-2-FENIL -1 Λ2- ETIL) AMINO )ACETAMIDO ) ISOFTÁLICO 106
[488] A uma solução de 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1λ2- etil)amino)acetamido)isoftalato de metila (7,2 g) em metanol (25 ml) e THF (25 ml) foi adicionado NaOH 1M (25 ml). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e, então, concentrada para remover THF e MeOH.
A solução aquosa restante foi diluída com água (75 ml), resfriada em um banho de água com gelo e acidificada a pH = 1 com HCl 6M. A suspensão foi filtrada e o sólido foi lavado com água (3 x 100 ml). O sólido foi liofilizado para proporcionar ácido 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1λ 2-etil)amino)acetamido)- isoftálico (6,9 g, quantitativo).
ETAPA 3. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 107
[489] O composto 107 foi preparado a partir de ácido 5-(2-((2- oxo-2-fenil-1λ2-etil)amino)acetamido) isoftálico 106 (200 mg, 0,54 mmol) e 94 (1,7 g, 1,3 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 95. Rendimento: 600 mg.
ETAPA 4. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 108
[490] O composto 108 foi preparado a partir do composto 107 (600 mg) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 96.
Rendimento: 650 mg, quantitativo.
ETAPA 5. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 109
[491] O composto 109 foi preparado a partir de ácido 5-(2-((2- oxo-2-fenil-1λ2-etil)amino)acetamido) isoftálico 106 (180 mg, 0,48 mmol) e 98 (1,5 g, 1,1 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 99. Rendimento: 900 mg.
ETAPA 6. P REPARAÇÃO DO COMPOSTO 110
[492] O composto 110 foi preparado a partir do composto 109 (900 mg) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 100.
Rendimento: 920 mg, quantitativo.
ETAPA 7. P REPARAÇÃO DE CONJUGADOS 212 E 215
[493] Os conjugados 212 e 215 foram preparados a partir do composto 128 e 108 ou 110 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 19A. SÍNTESE DE CONJUGADOS 212A E 215A ESQUEMA 41A.
ESQUEMA 42A.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1Λ2-ETIL)AMINO)ACETAMIDO)- ISOFTALATO DE DIMETILA 105A
[494] Uma solução de 5-aminoisoftalato de dimetila (5 g, 24 mmol), Z-Gly-OH (5 g, 24 mmol), EDC (5 g, 26,3 mmol), HOBt (3,6 g, 26,3 mmol), NMM (2,9 ml, 26,3 mmol) em DMF (50 ml) foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante conclusão, a mistura de reação é diluída com acetato de etila (250 ml) e lavada com cada um dentre HCl 1M (2 x 100 ml), bicarbonato de sódio saturado (1 x 100 ml) e salmoura (2 x 100 ml). Secar em sulfato de magnésio, filtrar e concentrar até a secura para proporcionar 5-(2-((2- oxo-2-fenil-1λ2-etil)amino)acetamido) isoftalato de dimetila como um sólido incolor (7,2 g, 79%). ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1Λ2- ETIL)AMINO)ACETAMIDO)ISOFTÁLICO 106A
[495] A uma solução de 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1λ2- etil)amino)acetamido)isoftalato de metila (7,2 g) em metanol (25 ml) e THF (25 ml) foi adicionado NaOH 1M (25 ml). A solução é agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e, então, concentrada para remover THF e MeOH.
A solução aquosa restante é diluída com água (75 ml), resfriada em um banho de água com gelo e acidificada a pH = 1 com HCl 6M. A suspensão é filtrada e o sólido lavado com água (3 x 100 ml). O sólido foi liofilizado pa ra proporcionar ácido 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1λ 2-etil)amino)acetamido)-isoftálico (6,9 g, quantitativo).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 107A
[496] O composto 107a é preparado a partir de ácido 5-(2-((2-oxo- 2-fenil-1λ2-etil)amino)acetamido) isoftálico 106a (200 mg, 0,54 mmol) e 94a (1,7 g, 1,3 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 95.
Rendimento: 600 mg.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 108A
[497] O composto 108a é preparado a partir do composto 107a (600 mg) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 96a. Rendimento: 650 mg, quantitativo. ETAPA 5. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 109A
[498] O composto 109a é preparado a partir de ácido 5-(2-((2-oxo- 2-fenil- 1λ 2-etil)amino)acetamido) isoftálico 106a (180 mg, 0,48 mmol) e 98a (1,5 g, 1,1 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 99.
Rendimento: 900 mg.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 110A
[499] O composto 110a é preparado a partir do composto 109 (900 mg) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 100.
Rendimento: 920 mg, quantitativo.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DOS CONJUGADOS 212A E 215A
[500] Os conjugados 212a e 215a são preparados a partir do composto 128 e 108a ou 110a usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 20. SÍNTESE DE CONJUGADOS 218 E 221 ESQUEMA 43.
ESQUEMA 44.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 111
[501] O composto 111 foi preparado a partir de ácido 4-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)ftálico (1,13g, 3,84mmol) e 88 (5 g, 8,44 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 89. Rendimento: 2,21g, 49%.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 112
[502] Uma solução de 111 (2,21 g, 1,87 mmol) em CH2Cl2 (40 ml) foi tratada lentamente com TFA (5 ml). Após agitação (2h), a mistura foi concentrada e submetida a cromatografia para render 112 (1,08g, 47%) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 113
[503] O composto 113 foi preparado a partir do composto 112 (1,08g, 0,88mmol) e ácido (2-oxo-2-fenil-1λ2-etil)-D-glutâmico (112 mg, 0,39mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 91.
Rendimento: 600mg, 62%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 114
[504] O composto 114 foi preparado a partir do composto 113 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 92.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 115
[505] O composto 115 foi preparado a partir de ácido 4-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)ftálico (3,94g, 13,3mmol) e 9 (18,2g, 29,4mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 93. Rendimento: 9,02g, 53%.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 116
[506] O composto 116 foi preparado a partir do composto 115 (8 g, 6,3 mmol) using um procedimento idêntico ao usado para o composto 112.
Rendimento: 3,23g, 39%.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 117
[507] O composto 117 foi preparado a partir do composto 116 (3,23 g, 2,45 mmol) e ácido (2-oxo-2-fenil-1λ2-etil)-D-glutâmico (192 mg, 1,1 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 95.
Rendimento: 2,22g, 34%.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 118
[508] O composto 118 foi preparado a partir do composto 117 (2,22g, 0,84mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto
96. Rendimento: 2,02g, 91%.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE CONJUGADOS 218 E 221
[509] Os conjugados 218 e 221 foram preparados a partir dos compostos 128 e 114 ou 118 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 20A. SÍNTESE DE CONJUGADOS 218A E 221A ESQUEMA 43A.
ESQUEMA 44A.
ETAPA 1.PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 111A
[510] O composto 111a é preparado a partir de ácido 4-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)ftálico (1,13 g, 3,84 mmol) e 88 (5g, 8,44 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 89. Rendimento: 2,21g, 49%.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 112A
[511] Uma solução de 111a (2,21 g, 1,87 mmol) em CH2Cl2 (40 ml) é tratada lentamente com TFA (5 ml). Após agitação (2h), a mistura é concentrada e submetida a cromatografia para render 112a (1,08g, 47%) como uma espuma incolor. Rf 0,1 (10% de CH3OH-CH2Cl2).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 113A
[512] O composto 113a é preparado a partir do composto 112a (1,08g, 0,88mmol) e ácido (2-oxo-2-fenil-1λ2-etil)-D-glutâmico (112 mg, 0,39mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 91.
Rendimento: 600 mg, 62%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 114A
[513] O composto 114a é preparado a partir do composto 113a usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 92.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 115A
[514] O composto 115a é preparado a partir de ácido 4-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)ftálico (3,94g, 13,3mmol) e 9 (18,2g, 29,4mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 93. Rendimento: 9,02g, 53%.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 116A
[515] O composto 116a é preparado a partir do composto 115a (8 g, 6,3 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 11a.
Rendimento: 3,23g, 39%.
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 117A
[516] O composto 117a é preparado a partir do composto 116a (3,23g, 2,45mmol) e ácido (2-oxo-2-fenil-1λ2-etil)glutâmico (192mg, 1,1mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 95. Rendimento: 2,22g, 34%.
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 118A
[517] O composto 118a é preparado a partir do composto 117a (2,22g, 0,84mmol) usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 96. Rendimento: 2,02g, 91%.
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DOS CONJUGADOS 218A E 221A
[518] Os conjugados 218a e 221a são preparados a partir dos compostos 128 e 114a ou 118a usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 21. SÍNTESE DO CONJUGADO 224 ESQUEMA 45.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS 224
[519] O conjugado 224 foi preparado a partir dos compostos 96 e 130 usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 21A. SÍNTESE DO CONJUGADO 224B ESQUEMA 45A.
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS 224B
[520] O conjugado 224b é preparado a partir dos compostos 96b e 130 usando-se um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 22 SÍNTESE DO CONJUGADO 231 ESQUEMA 46
ESQUEMA 47
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 225
[521] O composto 225 foi preparado a partir de ácido 5-(2- aminoacetamido)isoftálico 106 (560 mg, 1,5 mmol) e 9 (2,24 g, 3,6 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para 89. Rendimento de 1,6g, 80%.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 226
[522] O composto 226 foi preparado da mesma maneira que o 14.
Rendimento 1,22g, 78%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 227
[523] O composto 227 foi preparado da mesma maneira que 89, a partir de ácido Z-glutâmico (108 mg, 0,38 mmol) e 226 (1,22 g, 0,92 mmol).
Rendimento 471mg, 45%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 228
[524] O Composto 228 foi preparado da mesma maneira que 14.
Rendimento 460 mg, Quant.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 229
[525] O composto 229 foi preparado a partir de 228 (460 mg, 0,17 mmol) e 128 (125 mg, 0,19 mmol) da mesma maneira que 89. Rendimento 365mg, 66%.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 231
[526] O conjugado 231 foi preparado usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXAMPLE 22A SÍNTESE DO CONJUGADO 231A ESQUEMA 46A ESQUEMA 47A
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 225A
[527] O composto 225a é preparado a partir de ácido 5-(2- aminoacetamido) isoftálico 106 (560 mg, 1,5 mmol) e 9 (2,24 g, 3,6 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para 89. Rendimento 1,6g, 80%.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 226A
[528] O Composto 226a é preparado da mesma maneira que 14.
Rendimento 1,22g, 78%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 227A
[529] O composto 227a é preparado da mesma maneira que 89, a partir de ácido Z-glutâmico (108 mg, 0,38 mmol) e 226a (1,22 g, 0,92 mmol).
Rendimento 471mg, 45%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 228A
[530] O Composto 228a é preparado da mesma maneira que 14.
Rendimento 460mg, Quant.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 229A
[531] O composto 229a é preparado a partir de 228a (460 mg, 0,17 mmol) e 128 (125 mg, 0,19 mmol) da mesma maneira que 89. Rendimento 365mg, 66%.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 231A
[532] O conjugado 231a é preparado usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 22B SÍNTESE DO CONJUGADO 231B ESQUEMA 46B ESQUEMA 47B
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 225B
[533] O composto 225b é preparado a partir de ácido 5-(2- aminoacetamido) isoftálico 106 (560 mg, 1,5 mmol) e 9 (2,24 g, 3,6 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para 89. Rendimento 1,6g, 80%.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 226B
[534] O Composto 226b é preparado da mesma maneira que 14.
Rendimento 1,22g, 78%.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 227B
[535] O composto 227b é preparado da mesma maneira que 89, a partir de ácido Z-glutâmico (108 mg, 0,38 mmol) e 226b (1,22 g, 0,92 mmol).
Rendimento 471mg, 45%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 228B
[536] O Composto 228b é preparado da mesma maneira que 14.
Rendimento 460 mg, Quant.
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 229B
[537] O composto 229b é preparado a partir de 228b (460 mg, 0,17 mmol) e 128 (125 mg, 0,19 mmol) da mesma maneira que 89. Rendimento 365mg, 66%.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 231B
[538] O conjugado 231b é preparado usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 1.
EXEMPLO 23. SÍNTESE DO CONJUGADO 233 ESQUEMA 48 ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 232
[539] O composto 232 foi preparado a partir do composto 24 (650 mg, 0,33 mmol) e do composto 69b (175 mg, 0,33 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 19. Rendimento: 380 mg, 47%.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 233
[540] O composto 233 foi preparado a partir do composto 232 usando procedimentos idênticos aos usados para o composto 1.
EXEMPLO 24. SÍNTESE DO CONJUGADO 235 ESQUEMA 49
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 234
[541] O composto 234 foi preparado a partir do composto 24 (1,1 g, 0,55 mmol) e do composto 18 (175 mg, 0,33 mmol) usando um procedimento idêntico ao usado para o composto 19. Rendimento: 685 mg, 51%.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 235
[542] O composto 235 foi preparado a partir do composto 234 usando procedimentos idênticos aos usados para o composto 1.
EXEMPLO 25 SÍNTESE DO CONJUGADO 320 ESQUEMA 50 PREPARAÇÃO DO AGLUTINANTE ATIVADO ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-BENZIL-3A,6A-DIMETILTETRAHIDRO-1H-FURO[3,4- C]PIRROL-1,3(3AH)-DIONA RACÊMICA (CIS) 301
[543] A uma solução resfriada (0 °C) de 3,4-dimetilfuran-2,5-diona
(3 g, 24 mmol) e N-benzil-1-metoxi-N-((trimetilsilil)metil)metanamina (7 g, 29,8 mmol) em diclorometano (75 ml) foi adicionado lentamente ácido trifluoroacético (75 µl). Agite de um dia para o outro, permitindo que a solução aqueça lentamente para a temperatura ambiente enquanto o banho de gelo derrete. A mistura de reação foi concentrada até a secura, dissolvida em acetato de etila (100 ml), lavada com bicarbonato de sódio saturado (2 x 100 ml), seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura. A purificação por cromatografia em coluna em gel de sílica (gradiente: 20% de acetato de etila em hexanos a 100% de acetato de etila) proporcionou (3aR,6aS)-5-Benzil-3a,6a- dimetiltetrahidro-1H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona como um óleo amarelo (3,5 g, 56%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 1-BENZIL-3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-DIIL)DIMETANOL RACÊMICO (CIS) 302
[544] A uma solução resfriada (0 °C) de (3aR,6aS)-5-Benzil-3a,6a- dimetiltetrahidro-1H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona (3,5 g, 13,4 mmol) em éter dietílico anidro (50 ml) foram adicionados lentamente péletes de hidreto de alumínio e lítio (1,5 g, 40 mmol) em três porções. O banho de gelo foi agitado de um dia para o outro e aquecendo à temperatura ambiente à medida que o banho de gelo derretia. Mediante conclusão, a reação foi resfriada até 0 °C e arrefecida bruscamente muito lentamente com 1,5 ml de NaOH 5M seguido por 1,5 ml de água. Agitar por 30 minutos, em seguida, adicionar sulfato de magnésio e filtar.
O filtrado foi concentrado para proporcionar ((3R,4S)-1-Benzil-3,4- dimetilpirrolidina-3,4-diil)dimetanol como um óleo incolor (2,7 g).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-DIIL)DIMETANOL RACÊMICO (CIS) 303
[545] A uma solução de ((3R,4S)-1-Benzil-3,4-dimetilpirrolidina- 3,4-diil)dimetanol (10 g, 40 mmol) em metanol (10 ml) foi adicionado 10% de paládio em carvão ativado úmido (1 g). A reação foi agitada vigorosamente sob uma atmosfera de hidrogênio por 16 horas. Mediante conclusão, a solução foi filtrada através de Celite e concentrada até a secura para proporcionar ((3R,4S)- 3,4-Dimetilpirrolidina-3,4-diil)dimetanol como um sólido incolor (5,5 g, 86%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 10-(3,4-BIS(HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)- 10-OXODECANOATO DE METILA RACÊMICO (CIS) 304
[546] Uma solução de 3 (1,3 g, 8,2 mmol) e sebacato de monometila (1,8 g, 8,2 mmol) em CH2Cl2 (100 ml) foi tratada com HBTU (3,41 g, 9,02 mmol) e base de Hunig (5,71 ml, 32,8 mmol) . Após agitação de um dia para o outro, a mistura foi lavada com NaHCO3 (sat. Aq.), água e salmoura, em seguida seca(MgSO4),filtrada e concentrada. O material em bruto foi submetido a cromatografia (gradiente: 0% de CH3OH-CH2Cl2 a 20%) para render 4 (1,8g, 61%).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL-)(FENIL)METOXI)-METIL)-4- (HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA RACÊMICO (CIS) 305
[547] Uma solução de 304 (1,8 g, 5,0 mmol) e cloreto de 4,4'- Dimetoxitritila (1,7 g, 5,0 mmol) em piridina (180 ml) foi agitada de um dia para o outro. A piridina foi então removida sob pressão reduzida e o material em bruto foi submetido a cromatografia (gradiente: 0% CH3OH-CH2Cl2 para 10%) para render 5 (1,4 g, 42%) como um óleo amarelo.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL-)(FENIL)METOXI)METIL)-4- (HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE LÍTIO RACÊMICO (CIS) 306
[548] A uma solução do composto 305 (3,0 g, 4,6 mmol) em THF (50 ml) e água (50 ml) foi adicionado hidróxido de lítio (121 mg, 5,0 mmol). A solução foi agitada por 4 horas à temperatura ambiente e, então, concentrada para remover o THF. A solução aquosa restante foi liofilizada de um dia para o outro para proporcionar um sólido rosa pálido (2,9 g, quantitativo). O composto
306 foi preparado como uma mistura de dois cis-diastereômeros.
ESQUEMA 51 SÍNTESE DE GALACTOSAMINA PERACETILADA 307
[549] Cloridrato de D-galactosamina (250 g, 1,16 mol) em piridina (1,5 l) foi tratada com anidrido acético (1,25 l, 13,2 mol) ao longo de 45 minutos.
Após agitação de um dia para o outro, a mistura de reação foi dividida em três porções de 1 l. Cada porção de 1 l foi vertida em 3 l de água gelada e misturada por uma hora. Após a mistura, os sólidos foram filtrados, combinados, congelados sobre nitrogênio líquido e, em seguida, liofilizados por cinco dias para render galactosamina peracetilada 7 (369,4 g, 82%) como um sólido branco.
Rf (0,58, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ESQUEMA 52 SÍNTESE DE MONÔMERO GALNAC ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 309
[550] Uma solução de 2-[2-(2-cloroetoxi)]etanol 308 (100 g, 593 mmol) em água (1 l) foi tratada com NaN3 (77g, 1,19mol) e aquecida (90 ⁰C).
Após agitação (72 horas), a solução foi arrefecida (TA) e extraída (4x) com CH2Cl2. Os orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos (MgSO4),filtrados, concentrados e utilizados sem processamento adicional.
Composto 9 (88,9g, 86%) foi obtido como um óleo amarelo pálido.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 310
[551] Uma solução de 7 (2,76g, 7,1mmol) e 309 (1,37g, 7,8mmol) em 1,2-dicloroetano (40 ml) foi tratada com Sc (OTf)3 (174mg, 0,36mmol) e aquecida (85 ⁰C) . Após agitação (2 horas), a mistura foi resfriada (TA) e arrefecida bruscamente pela adição de TEA (4 ml) e concentrada. O material em bruto foi submetido a cromatografia para render 310 (3,03g, 85%) como uma espuma amarela pálida.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 311
[552] Uma solução de 310 (3,02g, 5,99 mmol) e Pd/C (300 mg, 10% de carregamento de Pd - suporte úmido) em EtOAc (30 ml) foi tratado com TFA (576 μl, 7,5 mmol). A mistura de reação foi purgada com gás hidrogênio (45 min), em seguida, purgada com gás nitrogênio (10 min), em seguida, filtrada através de celite. O filtrado foi concentrado e, em seguida, submetido a cromatografia para render 311 (2,67 g, 75%) como uma espuma marrom.
ESQUEMA 53 SÍNTESE DE NÚCLEO AROMÁTICO ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1Λ2-ETIL)AMINO)ACETAMIDO)- ISOFTALATO DE DIMETILA 312
[553] Uma solução de 5-aminoisoftalato de dimetila (5 g, 24 mmol), Z-Gly-OH (5 g, 24 mmol), EDC (5 g, 26,3 mmol), HOBt (3,6 g, 26,3 mmol), NMM (2,9 ml, 26,3 mmol) em DMF (50 ml) foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante conclusão, a mistura de reação foi diluída com acetato de etila (250 ml) e lavada com cada 1M HCl (2 x 100 ml), bicarbonato de sódio saturado (1 x 100 ml) e salmoura (2 x 100 ml). Secar em sulfato de magnésio, filtrar e concentrar até a secura para proporcionar 5-(2-((2-oxo-2-fenil- 1λ2-etil)amino)acetamido) isoftalato de dimetila como um sólido incolor (7,2 g, 79%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1Λ2- ETIL)AMINO)ACETAMIDO)ISOFTÁLICO 313
[554] A uma solução de 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1λ2- etil)amino)acetamido)isoftalato de metila (7,2 g) em metanol (25 ml) e THF (25 ml) foi adicionado NaOH 1M (25 ml). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e, então, concentrada para remover THF e MeOH. A solução aquosa restante foi diluída com água (75 ml), resfriada em um banho de água com gelo e acidificada a pH = 1 com HCl 6M. A suspensão foi filtrada e o sólido foi lavado com água (3 x 100 ml). O sólido foi liofilizado para proporcionar ácido 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1λ2-etil)amino)acetamido)-isoftálico (6,9 g, quantitativo).
ESQUEMA 54: PREPARAÇÃO DE TETRÂMERO ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 314
[555] Uma solução de 313 (2,09 g, 5,6 mmol) e 311 (8,34 g, 14,07 mmol) em CH2Cl2 (150 ml) foi tratada com HBTU (6,4 g, 16,9 mmol) e base de Hunig (7,35 ml, 42,2 mmol). Após agitação (de um dia para o outro) a mistura de reação foi vertida em NaHCO3 (sat. Aq.), em seguida, lavada com água e salmoura, seca(MgSO4),filtrada e concentrada. O material em bruto foi submetido a cromatografia (gradiente 1-12% de CH3OH-CH2Cl2) para produzir 6 (3,97 g, 55%) como uma espuma amarela pálida.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 315
[556] O composto 314 (3,92 g, 3,07 mmol), Pd/C (400 mg, carregamento de 10% - suporte úmido) e ácido trifluoroacético (308 μl, 4 mmol) foi purgado com H2. Após agitação sob H2 (de um dia para o outro), a mistura foi purgada com N2 (15-20 min), em seguida, filtrada através de celite e concentrada. O material em bruto foi submetido a cromatografia para produzir 7 (3,36 g, 86%) como uma espuma de cor branca a creme.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 316
[557] O composto 316 foi preparado da mesma maneira que 314, a partir de ácido Z-glutâmico (306mg, 1,09mmol) e 315 (3,3g, 2,6mmol).
Rendimento 1,66g, 60%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 317
[558] O Composto 317 foi preparado da mesma maneira que 315.
Yield 1,65g, Quant.
ESQUEMA 55 PREPARAÇÃO DE CONJUGADO COMPLETO
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 318
[559] Uma solução de 317 (1,91 g, 0,75 mmol) em CH2Cl2 (100 ml) foi tratada primeiro com base de Hunig (392 μl, 2,25 mmol) e, então, 6 (uma mistura de dois cis-diastereômeros, 509 mg, 0,79 mmol) seguido por HBTU (356 mg, 0,94 mmol). Após agitação (de um dia para o outro) a mistura de reação foi vertida em NaHCO3 (sat. Aq.), em seguida, lavada com água e salmoura, seca(MgSO4),filtrada e concentrada. O material em bruto foi submetido a cromatografia para render 318 (1,19 g, 52%) como uma espuma branca. ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 319
[560] Uma solução de 318 (1,19g, 0,39mmol) em 1,2 dicloroetano (100mL) foi tratada com TEA (542μL, 3,9mmol), DMAP (238mg, 1,95mmol) e anidrido succínico (195mg, 1,95mmol) e aquecido (85⁰C). Após agitação (2,5 horas), a solução foi removida do calor e tratada com CH3OH (10 ml) e deixada a agitar (1 hora). Após agitação, a mistura de reação foi vertida em NaHCO 3 (sat.
Aq.), em seguida, lavada com salmoura, seca (MgSO4),filtrada e concentrada. O resíduo obtido foi utilizado sem processamento adicional. Produção = 1,4 g, Quant.
ETAPA 3 PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 320
[561] O succinato 319 foi carregado em 1000Å LCAA
(aminoalquila de cadeia longa) CPG (vidro de poro de controle) usando química de acoplamento de amida padrão. Uma solução de diisopropilcarbodiimida (52,6 µmol), N-hidroxissuccinimida (0,3 mg, 2,6 µmol) e piridina (10 µl) em acetonitrila anidra (0,3 ml) foi adicionada a 319 (20,6 mg, 8 µmol) em diclorometano anidro (0,2 ml) Esta mistura foi adicionada a LCAA CPG (183 mg). A suspensão foi misturada gentilmente de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante o desaparecimento de 319 (HPLC), a mistura de reação foi filtrada e o CPG foi lavado com 1 ml de cada diclorometano, acetonitrila, uma solução de 5% de anidrido acético/5% de N-metilimidazol/5% de piridina em THF, depois THF, acetonitrila e diclorometano. O CPG foi então seco de um dia para o outro sob alto vácuo. O carregamento foi determinado pelo ensaio DMTr padrão por UV/Vis (504 nm) para ser 19 µmol/g. O suporte sólido de CPG carregado com GalNAc resultante foi empregado na síntese automática de oligonucleotídeos usando procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeos seguida de remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concorrente) proporcionou o conjugado GalNAc-oligonucleotídeo 320.
EXEMPLO 26 SÍNTESE DO CONJUGADO 520 ESQUEMA 56 PREPARAÇÃO DO AGLUTINANTE ATIVADO
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-BENZIL-3A,6A-DIMETILTETRAHIDRO-1H-FURO[3,4- C]PIRROL-1,3(3AH)-DIONA RACÊMICA (CIS) 301
[562] A uma solução resfriada (0 ° C) de 3,4-dimetilfuran-2,5- diona (3 g, 24 mmol) e N-benzil-1-metoxi-N-((trimetilsilil)metil)metanamina (7 g, 29,8 mmol) em diclorometano (75 ml) foi adicionado lentamente ácido trifluoroacético (75 µl). Agite de um dia para o outro, permitindo que a solução aqueça lentamente para a temperatura ambiente enquanto o banho de gelo derrete. A mistura de reação foi concentrada até a secura, dissolvida em acetato de etila (100 ml), lavada com bicarbonato de sódio saturado (2 x 100 ml), seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura.
A purificação por cromatografia em coluna em gel de sílica (gradiente: 20% de acetato de etila em hexanos a 100% de acetato de etila) proporcionou (3aR,6aS)-5-Benzil-3a,6a-dimetiltetrahidro-1H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)- diona como um óleo amarelo (3,5 g, 56%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 1-BENZIL-3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-DIIL)DIMETANOL RACÊMICO (CIS) 302
[563] A uma solução resfriada (0 ° C) de (3aR,6aS)-5-Benzil- 3a,6a-dimetiltetrahidro-1H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona (3,5 g, 13,4 mmol) em éter dietílico anidro (50 ml) foram adicionados lentamente péletes de hidreto de alumínio e lítio (1,5 g, 40 mmol) em três porções. O banho de gelo foi agitado de um dia para o outro e aquecendo à temperatura ambiente à medida que o banho de gelo derretia. Mediante conclusão, a reação foi resfriada até 0 °C e arrefecida bruscamente muito lentamente com 1,5 ml de NaOH 5M seguido por 1,5 ml de água. Agitar por 30 minutos, em seguida, adicionar sulfato de magnésio e filtar. O filtrado foi concentrado para proporcionar ((3R,4S)-1-Benzil-3,4-dimetilpirrolidina-3,4-diil)dimetanol como um óleo incolor (2,7 g).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-DIIL)DIMETANOL RACÊMICO (CIS) 303
[564] A uma solução de ((3R,4S)-1-Benzil-3,4-dimetilpirrolidina- 3,4-diil)dimetanol (10 g, 40 mmol) em metanol (10 ml) foi adicionado 10% de paládio em carvão ativado úmido (1 g). A reação foi agitada vigorosamente sob uma atmosfera de hidrogênio por 16 horas. Mediante conclusão, a solução foi filtrada através de Celite e concentrada até a secura para proporcionar ((3R,4S)-3,4-Dimetilpirrolidina-3,4-diil)dimetanol como um sólido incolor (5,5 g, 86%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 10-(3,4-BIS(HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)- 10-OXODECANOATO DE METILA RACÊMICO (CIS) 304
[565] Uma solução de 3 (1,3 g, 8,2 mmol) e sebacato de monometila (1,8 g, 8,2 mmol) em CH2Cl2 (100 ml) foi tratada com HBTU (3,41 g, 9,02 mmol) e base de Hunig (5,71 ml, 32,8 mmol) . Após agitação de um dia para o outro, a mistura foi lavada com NaHCO3 (sat. Aq.), água e salmoura, em seguida seca(MgSO4),filtrada e concentrada. O material em bruto foi submetido a cromatografia (gradiente: 0% de CH3OH-CH2Cl2 a 20%) para render 4 (1,8g, 61%).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL-)(FENIL)METOXI)-METIL)-4- (HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA RACÊMICO (CIS) 305
[566] Uma solução de 304 (1,8 g, 5,0 mmol) e cloreto de 4,4'- Dimetoxitritila (1,7 g, 5,0 mmol) em piridina (180 ml) foi agitada de um dia para o outro. A piridina foi então removida sob pressão reduzida e o material em bruto foi submetido a cromatografia (gradiente: 0% CH3OH-CH2Cl2 para 10%) para render 5 (1,4 g, 42%) como um óleo amarelo.
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL-)(FENIL)METOXI)METIL)-4- (HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE LÍTIO RACÊMICO (CIS) 306
[567] A uma solução do composto 305 (3,0 g, 4,6 mmol) em THF (50 ml) e água (50 ml) foi adicionado hidróxido de lítio (121 mg, 5,0 mmol). A solução foi agitada por 4 horas à temperatura ambiente e, então, concentrada para remover o THF. A solução aquosa restante foi liofilizada de um dia para o outro para proporcionar um sólido rosa pálido (2,9 g, quantitativo). O composto 306 foi preparado como uma mistura de dois cis-diastereômeros.
ESQUEMA 57 SÍNTESE DE GALACTOSAMINA PERACETILADA 507
[568] Cloridrato de galactosamina (250 g, 1,16 mol) em piridina (1,5 l) é tratada com anidrido acético (1,25 l, 13,2 mol) ao longo de 45 minutos.
Após agitação de um dia para o outro, a mistura de reação é dividida em três porções de 1 l. Cada porção de 1 l é vertida em 3 l de água gelada e misturada por uma hora. Após a mistura, os sólidos são filtrados, combinados, congelados sobre nitrogênio líquido e, em seguida, liofilizados por cinco dias para render galactosamina peracetilada 507 (369,4 g, 82%) como um sólido branco. Rf (0,58, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ESQUEMA 58 SÍNTESE DE MONÔMERO GALNAC
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 509
[569] Uma solução de 2-[2-(2-cloroetoxi)]etanol 508 (100 g, 593 mmol) em água (1 l) é tratada com NaN3 (77g, 1,19mol) e aquecida (90 ⁰C). Após agitação (72 horas), a solução é arrefecida (TA) e extraída (4x) com CH2Cl2. Os orgânicos combinados são lavados com salmoura, secos (MgSO 4),filtrados, concentrados e utilizados sem processamento adicional. O composto 509 (88,9 g, 86%) é obtido como um óleo amarelo pálido.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 510
[570] Uma solução de 507 (2,76 g, 7,1 mmol) e 509 (1,37 g, 7,8 mmol) em 1,2-dicloroetano (40 ml) é tratada com Sc (OTf)3 (174 mg, 0,36 mmol) e aquecida (85 ⁰C). Após agitação (2 horas), a mistura é resfriada (TA) e arrefecida bruscamente pela adição de TEA (4 ml) e concentrada. O material em bruto é submetido a cromatografia para render 510 (3,03 g, 85%) como uma espuma amarela pálida.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 511
[571] Uma solução de 510 (3,02g, 5,99mmol) e Pd/C (300 mg, 10% de carregamento de Pd - suporte úmido) em EtOAc (30 ml) é tratado com TFA (576 μl, 7,5 mmol). A mistura de reação é purgada com gás hidrogênio (45 min), em seguida, purgada com gás nitrogênio (10 min), em seguida, filtrada através de celite. O filtrado é concentrado e, em seguida, submetido a cromatografia para render 511 (2,67 g, 75%) como uma espuma marrom.
ESQUEMA 59 SÍNTESE DE NÚCLEO AROMÁTICO
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1Λ2-ETIL)AMINO)ACETAMIDO)- ISOFTALATO DE DIMETILA 312
[572] Uma solução de 5-aminoisoftalato de dimetila (5 g, 24 mmol), Z-Gly-OH (5 g, 24 mmol), EDC (5 g, 26,3 mmol), HOBt (3,6 g, 26,3 mmol), NMM (2,9 ml, 26,3 mmol) em DMF (50 ml) foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Mediante conclusão, a mistura de reação foi diluída com acetato de etila (250 ml) e lavada com cada 1M HCl (2 x 100 ml), bicarbonato de sódio saturado (1 x 100 ml) e salmoura (2 x 100 ml). Secar em sulfato de magnésio, filtrar e concentrar até a secura para proporcionar 5-(2-((2-oxo-2-fenil- 1λ2-etil)amino)acetamido) isoftalato de dimetila como um sólido incolor (7,2 g, 79%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 5-(2-((2-OXO-2-FENIL-1Λ2- ETIL)AMINO)ACETAMIDO)ISOFTÁLICO 313
[573] A uma solução de 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1λ2- etil)amino)acetamido)isoftalato de metila (7,2 g) em metanol (25 ml) e THF (25 ml) foi adicionado NaOH 1M (25 ml). A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e, então, concentrada para remover THF e MeOH. A solução aquosa restante foi diluída com água (75 ml), resfriada em um banho de água com gelo e acidificada a pH = 1 com HCl 6M. A suspensão foi filtrada e o sólido foi lavado com água (3 x 100 ml). O sólido foi liofilizado para proporcionar ácido 5-(2-((2-oxo-2-fenil-1λ2-etil)amino)acetamido)-isoftálico (6,9 g, quantitativo).
ESQUEMA 60: PREPARAÇÃO DE TETRÂMERO
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 514
[574] Uma solução de 313 (2,09 g, 5,6 mmol) e 511 (8,34 g, 14,07 mmol) em CH2Cl2 (150 ml) é tratada com HBTU (6,4 g, 16,9 mmol) e base de Hunig (7,35 ml, 42,2 mmol). Após agitação (de um dia para o outro) a mistura de reação foi vertida em NaHCO3 (sat. Aq.), em seguida, lavada com água e salmoura, seca (MgSO4), filtrada e concentrada. O material em bruto é submetido a cromatografia (gradiente 1-12% de CH3OH-CH2Cl2) para render 6 (3,97 g, 55%) como uma espuma amarela pálida.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 515
[575] O composto 514 (3,92 g, 3,07 mmol), Pd/C (400 mg, carregamento de 10% - suporte úmido) e ácido trifluoroacético (308 μl, 4 mmol) é purgado com H2. Após agitação sob H2 (de um dia para o outro), a mistura é purgada com N2 (15-20 min), em seguida, filtrada através de celite e concentrada. O material em bruto é submetido a cromatografia para produzir 7 (3,36 g, 86%) como uma espuma de cor branca a creme.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 516
[576] O composto 516 é preparado da mesma maneira que 514, a partir de ácido Z-glutâmico (306 mg, 1,09 mmol) e 515 (3,3g, 2,6 mmol).
Rendimento 1,66g, 60%.
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 517
[577] O Composto 517 é preparado da mesma maneira que 515.
Rendimento 1,65g, Quant.
ESQUEMA 61 PREPARAÇÃO DE CONJUGADO COMPLETO ETAPA 1. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 518
[578] Uma solução de 517 (1,91 g, 0,75 mmol) em CH2Cl2 (100 ml) é tratada primeiro com base de Hunig (392 μl, 2,25 mmol) e, então, 306 (uma mistura de dois cis-diastereômeros, 509 mg, 0,79 mmol) seguido por HBTU (356 mg, 0,94 mmol). Após agitação (de um dia para o outro) a mistura de reação foi vertida em NaHCO3 (sat. Aq.), em seguida, lavada com água e salmoura, seca(MgSO4),filtrada e concentrada. O material em bruto é submetido a cromatografia para render 518 (1,19 g, 52%) como uma espuma branca.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 519
[579] Uma solução de 518 (1,19g, 0,39mmol) em 1,2 dicloroetano
(100 ml) é tratada com TEA (542 μl, 3,9mmol), DMAP (238mg, 1,95mmol) e anidrido succínico (195 mg, 1,95mmol) e aquecida (85 ⁰C). Após agitação (2,5 horas), a solução é removida do calor e tratada com CH3OH (10 ml) e deixada a agitar (1 hora). Após agitação, a mistura de reação é vertida em NaHCO 3 (sat.
Aq.), em seguida, lavada com salmoura, seca (MgSO4),filtrada e concentrada. O resíduo obtido é utilizado sem processamento adicional. Rendimento = 1,4 g, Quant.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DO CONJUGADO 520
[580] O succinato 519 é carregado em 1000Å LCAA (aminoalquila de cadeia longa) CPG (vidro de poro de controle) usando química de acoplamento de amida padrão. Uma solução de diisopropilcarbodiimida (52,6 µmol), N-hidroxissuccinimida (0,3 mg, 2,6 µmol) e piridina (10 µl) em acetonitrila anidra (0,3 ml) é adicionada a 519 (20,6 mg, 8 µmol) em diclorometano anidro (0,2 ml) Essa mistura foi adicionada a LCAA CPG (183 mg). A suspensão foi misturada gentilmente de um dia para o outro à temperatura ambiente. Após o desaparecimento de 519 (HPLC), a mistura de reação é filtrada e o CPG é lavado com 1 ml de cada diclorometano, acetonitrila, uma solução de 5% anidrido acético/5% N-metilimidazol/5% piridina em THF, depois THF, acetonitrila e diclorometano. O CPG foi então seco de um dia para o outro sob alto vácuo. O carregamento foi determinado pelo ensaio DMTr padrão por UV/Vis (504 nm) para ser 19 µmol/g. O suporte sólido de CPG carregado com GalNAc resultante é empregue na síntese automática de oligonucleotídeos usando procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeos seguida de remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concorrente) proporciona o conjugado GalNAc-oligonucleotídeo 520 como um exemplo representativo.
EXEMPLO 27 SÍNTESE DE CONJUGADOS DE ÁCIDO NUCLEICO DIRECIONADO
[581] Os seguintes Esquemas 101-122 ilustram a preparação de compostos intermediários que podem ser usados para preparar conjugados da fórmula I. Os compostos intermediários e os processos sintéticos ilustrados nos Esquemas 1-22 são modalidades da presente invenção.
ESQUEMA 101 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 606 ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE (3AR,6AS)-5-BENZIL-3A,6A-DIMETILTETRAHIDRO-1H- FURO[3,4-C]PIRROL-1,3(3AH)-DIONA 601
[582] Para uma solução resfriada (0 °C) de 3,4-dimetilfuran-2,5- diona (40 g, 317 mmol) e N-benzil-1-metoxi-N-((trimetilsilil)metil)metanamina (94,1 g, 396,5 mmol) em DCM (600 ml) foi adicionado lentamente ácido trifluoroacético (732 µl). Agitar de um dia para o outro permitindo que a solução aqueça lentamente para a TA. A mistura de reação foi concentrada até a secura, dissolvida em EtOAc (500 ml), lavada com bicarbonato de sódio saturado (2 x 500 ml), seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura. A purificação por cromatografia em coluna em gel de sílica (gradiente: 20% de acetato de etila em hexanos a 100% de acetato de etila) proporcionou (3aR,6aS)- 5-Benzil-3a,6a-dimetiltetrahidro-1H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona como um óleo amarelo (53,7 g, 65%). Rf = 0,85 (40% de EtOAc/hexano).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ((3R,4S)-3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-DIIL)DIMETANOL 602
[583] A uma solução resfriada (0 °C) de (3aR, 6aS)-5-Benzil-
3a,6a-dimetiltetrahidro-1H-furo[3,4-c]pirrol-1,3(3aH)-diona (53,7 g, 205,7 mmol) em éter dietílico anidro (750 ml) foram adicionados lentamente péletes de hidreto de alumínio e lítio (17,6 g, 463 mmol) em porções ao longo de uma tarde. O banho de gelo foi agitado de um dia para o outro e aquecendo à temperatura ambiente à medida que o banho de gelo derretia. Mediante conclusão, a reação foi resfriada até 0 °C e arrefecida bruscamente muito lentamente com 25 ml de NaOH 5M seguido por 12 ml de água. Agitar por 30 minutos, em seguida, adicionar sulfato de magnésio e filtar. O filtrado foi concentrado para proporcionar ((3R,4S)-1-Benzil-3,4-dimetilpirrolidina-3,4-diil)dimetanol como um óleo incolor (33,6 g, 65%). Rf 0,25 10% de CH3OH-CH2Cl2 ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE ((3R,4S)-3,4-DIMETILPIRROLIDINA-3,4-DIIL)DIMETANOL 603
[584] A uma solução de ((3R,4S)-1-Benzil-3,4-dimetilpirrolidina- 3,4-diil)dimetanol (40,1 g, 161 mmol) em metanol (300 ml) foi adicionado 10% de paládio em carvão ativado úmido (4 g). A reação foi agitada vigorosamente sob uma atmosfera de hidrogênio por 16 horas. Mediante conclusão, a solução foi filtrada através de Celite e concentrada até a secura para proporcionar ((3R,4S)- 3,4-Dimetilpirrolidina-3,4-diil)dimetanol como um sólido incolor (24 g, 94%). Rf 0,05 10% de CH3OH-CH2Cl2 ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 10-((3R,4S)-3,4-BIS(HIDROXIMETIL)-3,4- DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA 604
[585] Uma solução de 3 (24 g, 151 mmol) e sebacato de monometila (34,2 g, 159 mmol) em CH2Cl2 (1 l) foi tratada com HBTU (62,9 g, 166 mmol) e base de Hunig (105 ml, 604 mmol)) Após agitação de um dia para o outro, a mistura foi lavada com NaHCO3 (sat. Aq.), água e salmoura, em seguida seca(MgSO4),filtrada e concentrada. O material em bruto foi submetido a cromatografia (gradiente: 0% de CH3OH-CH2Cl2 a 20%) para render 604 (41,5 g, 77%). Rf 0,55 10% de CH3OH-CH2Cl2
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL-)(FENIL)METOXI)-METIL)-4- (HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA RACÊMICO (CIS) 605
[586] Uma solução de 604 (41,5 g, 116 mmol) e cloreto de 4,4'- Dimetoxitritila (38,8 g, 116 mmol) em piridina (400 ml) foi agitada de um dia para o outro. A piridina foi então removida sob pressão reduzida e o material em bruto foi submetido a cromatografia (gradiente: 0% CH3OH-CH2Cl2 para 10%) para render 605 (29,5 g, 39%) como um óleo amarelo. Rf 0,5 5% de CH3OH-CH2Cl2 ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE 10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL-)(FENIL)METOXI)-METIL)-4- (HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANOATO DE METILA RACÊMICO (CIS) 606
[587] A uma solução do composto 605 (29,5 g, 45 mmol) em THF (250 ml) e água (250 ml) foi adicionado hidróxido de lítio (1,19 g, 50 mmol). A solução foi agitada por 18 horas à temperatura ambiente e, então, concentrada para remover o THF. A solução aquosa restante foi seca por congelamento de um dia para o outro para proporcionar 606 como um sólido roxo pálido (28,5 g, 98%). Rf 0,56 10% de CH3OH-CH2Cl2 ESQUEMA 102 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 610
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 12-AMINODODECANOATO DE METILA 608
[588] Ácido 12-aminoundecanoico 607 (10 g, 4,64 mmol) foi agitado em MeOH à TA. Foi adicionado cloreto de acetila (856 µl, 12 mmol) em gotas e a reação foi agitada por 1,5 h. O solvente foi removido em vácuo, o resíduo recolhido em MTBE e arrefecido no frigorífico de um dia para o outro. O precipitado resultante foi recolhido por filtração, lavado com MTBE gelado e seco sob alto vácuo para proporcionar 12-aminododecanoato de metila 608.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 12-(10-(3-((BIS(4- METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)- 10-OXODECANAMIDO)DODECANOATO DE METILA 609
[589] 10-(3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4- (hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1-il)-10-oxodecanoato de lítio (606) (2 g, 3,1 mmol), 12-aminododecanoato de metila (608) (778 mg, 3,1 mmol), HBTU (1,2 g, 3,1 mmol) e TEA (1,4 ml, 10 mmol) foram agitados em DCM à TA O/N. O precipitado foi removido por filtração, o filtrado concentrado em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia em coluna (5% de MeOH, DCM). TLC mostrou dois pontos de execução próximos com massa idêntica que foram designados como isômeros geométricos e agrupados para gerar 12-(10-((3R,4S) 3-((bis(4- metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-(hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1-il)-10- oxodecanamido)dodecanamido)dodecanoato de metila (609) de forma quantitativa.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 12-(10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL-)(FENIL)METOXI)-- METIL)- 4-(HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANAMIDO)-DODECANOATO DE LÍTIO 610
[590] 12-(10-(3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4- (hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1-il)-10-oxodecanamido)dodecanoato de metila (609 3,1 mmol) foi agitado em THF:H2O (50:50) com LiOH (88 mg, 3,7 mmol) à TA O/N. A reação foi confirmada por TLC e o THF removido em vácuo.
A solução aquosa foi congelada em N2 líquido e liofilizada por 48 horas para gerar 12-(10-(3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-(hidroximetil)-3,4- dimetilpirrolidin-1-il)-10-oxodecanamido)dodecanoato de lítio 610 quantitativamente.
ESQUEMA 103 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 613 ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 4-METILBENZENOSSULFONATO DE 2-(2-(2-(2- HIDROXIETOXI)ETOXI)ETOXI)ETILA 612
[591] Uma solução de tetraetilenoglicol (611)(934 g, 4,8 mol) em THF (175 ml) e NaOH aquoso (5M, 145 ml) foi resfriada (0 °C) e tratada com cloreto de p-toluenossulfonila (91,4 g, 480 mmol) dissolvido em THF (605 ml) e, então, agitada por duas horas (0 °C). A mistura de reação foi diluída com água (3 l)e extraída (3x 500ml) com CH2Cl2. Os extratos combinados foram lavados com água e salmoura, em seguida, secos (MgSO4), filtrados e concentrados para proporcionar 4-metilbenzenossulfonato de 2-(2-(2-(2-hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etila (612 )(140 g, 84%) como um óleo amarelo pálido. Rf (0,57, 10% de MeOH- CH2Cl2).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2-(2-AZIDOETOXI)ETOXI)ETOXI)ETAN-1-OL 613
[592] Uma solução de 612 (140 g, 403 mmol) em DMF (880 ml) foi tratada com azida de sódio (131 g, 2,02 mol) e aquecida (45 °C) de um dia para o outro. A maior parte do DMF foi removida sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 (500 ml) e lavado (3x 500 ml) com salmoura e, então, seco (MgSO4), filtrado e concentrado. O resíduo foi passado através de um leito curto de sílica (5% de MeOH-CH2Cl2) e concentrado para render 2-(2-
(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etoxi)etan-1-ol 613 (65g, 74%) como um óleo amarelo. Rf (0,56, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ESQUEMA 104 PREPARAÇÃO DOS COMPOSTOS 619A-619C ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE (3R,4R,5R,6R)-6-(HIDROXIMETIL)-3-(((E)-4- METOXIBENZILIDENO)AMINO)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2,4,5-TRIOL 616
[593] D-Galactosamina HCl (614) (9 g, 41,7 mmol) foi agitada em solução de NaOH 1 M à TA. Anisaldeído (51 ml, 420 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada vigorosamente até solidificação. A reação sólida foi mantida a 4 °C por 16 h. Água gelada (200 ml) foi adicionada e o sólido resultante foi coletado por filtração e foi feita a lavagem com EtOH/Et2O gelado (1:1). O sólido foi seco até um peso constante para gerar (3R,4R,5R,6R)-6-(hidroximetil)-3- (((E)-4-metoxibenzilideno)amino)tetrahidro-2H-piran-2,4, 5-triol (616) (9,81 g, 78%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE TRIACETATO DE (3R,4R,5R,6R)-6-(ACETOXIMETIL)-3- (((E)-4-METOXIBENZILIDENO)AMINO)TETRAHIDRO -2H-PIRAN-2,4,5-TRIILA 617
[594] (3R,4R,5R,6R)-6-(Hidroximetil)-3-(((E)-4- metoxibenzilideno)amino)tetrahidro-2H-piran-2,4,5-triol (616) (9,81 g, 30 mmol) foi agitada em piridina a 0 °C. Anidrido acético (34 ml) seguido por DMAP (100 mg, cat) foi adicionado e a reação foi agitada por 16 h permitindo o aquecimento para a temperatura ambiente lentamente. A solução resultante foi vertida sobre gelo picado e mantida a 4 °C durante 16 h. A reação foi extraída com EtOAc (x 3) e os orgânicos combinados foram lavados com H2O e salmoura, seca (Na2SO4)e concentrada em vácuo para gerar triacetato de (3R,4R,5R,6R)-6- (acetoximetil)-3-(((E)-4-metoxibenzilideno)amino)tetrahidro-2H-piran-2,4,5-triila (617) (6,0 g, 43 %).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE CLORIDRATO DE TRIACETATO DE (3R,4R,5R,6R)-6- (ACETOXIMETIL)-3-AMINOTETRAHIDRO-2H-PIRAN-2,4,5-TRIILA 618
[595] triacetato de (3R,4R,5R,6R)-6-(Acetoximetil)-3-(((E)-4- metoxibenzilideno)amino)tetrahidro-2H-piran-2,4,5-triila (617) (6,0 g, 43 %) foi aquecido ao refluxo em acetona (300 ml). Adicionou-se HCl (aq) (5N, 3,0 ml) e agitou-se a mistura de reação durante 15 minutos. Após resfriamento, foi adicionadoEt2O (400 ml) e a reação foi mantida a 4 °C durante 16 h. O sólido resultante foi coletado por filtração, lavando duas vezes com Et 2O gelado. O sólido foi seco até um peso constante para gerar cloridrato de triacetato de (3R,4R,5R,6R)-6-(acetoximetil)-3-aminotetrahidro-2H-pirano-2,4,5-triila (618) (4,17 g, 84,4%).
ETAPA 4A. PREPARAÇÃO DE TRIACETATO DE (3R,4R,5R,6R)-6-(ACETOXIMETIL)-3- (2,2,2-TRIFLUOROACETAMIDO)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2,4,5-TRIILA 619A
[596] Cloridrato de triacetato de (3R,4R,5R,6R)-6-(acetoximetil)- 3-aminotetrahidro-2H-piran-2,4,5-triila (618) (13,5 g, 35,2 mmol) e TEA (7,83 g, 77,4 mmol) foram agitados em DCM à TA. TFAA (8,13 g, 38,7 mmol) em DCM foi adicionado em gotas e a reação foi agitada por 1 h. A mistura da reação foi diluída com DCM, lavada sequencialmente com HCl 1M, NaHCO3 saturado, água e salmoura, seca (Na2SO4) e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (5% de MeOH/DCM) para gerar triacetato de (3R,4R,5R,6R)-6-(acetoximetil)-3-(2,2,2- trifluoroacetamido)tetrahidro-2H-piran-2,4,5-triila (619a) (9,64 g, 61,8%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 4B. PREPARAÇÃO DE TRIACETATO DE (3R,4R,5R,6R)-6-(ACETOXIMETIL)-3- PROPIONAMIDOTETRAHIDRO-2H-PIRAN-2,4,5-TRIILA 619B
[597] Este composto foi preparado de forma análoga ao triacetato de (3R,4R,5R,6R)-6-(acetoximetil)-3-(2,2,2-trifluoroacetamido)tetrahidro-2H- piran-2,4,5-triila (619a) usando anidrido propiônico em vez de TFAA para gerar triacetato de (3R,4R,5R,6R)-6-(acetoximetil)-3-propionamidotetrahidro-2H-piran- 2,4,5-triila (619b) (1,2 g, 85,3%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 4C. PREPARAÇÃO DE TRIACETATO DE (3R,4R,5R,6R)-6-(ACETOXIMETIL)-3- (2,2,2-TRIFLUOROACETAMIDO)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2,4,5-TRIILA 619C
[598] Cloridrato de triacetato de (3R,4R,5R,6R)-6-(acetoximetil)- 3-aminotetrahidro-2H-piran-2,4,5-triila (618) (15,34 g, 39,98 mmol), ácido 2,2- difluoropropiônico (4,4 g, 39,98 mmol), HATU (24,37 g, 64 mmol) e TEA (12,14 g, 120 mmol) foram agitados em DMF à TA durante 16 h. O resíduo foi particionado entre EtOAc e água. Os orgânicos foram separados, lavados sequencialmente com HCl 1 M, NaHCO3 saturado, água e salmoura, secos (Na2SO4) e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (3% de MeOH/DCM) para gerar triacetato de (3R,4R,5R,6R)- 6-(acetoximetil)-3-(2,2,2-trifluoroacetamido)tetrahidro-2H-piran-2,4,5-triila (619c) (15,8 g, 90%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ESQUEMA 105 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 624 ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE (2-(2-(2-HIDROXIETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMATO DE BENZILA 622
[599] Uma solução do aminoálcool (620) (313,6 g, 2,1 mol) em THF (3,5 l) foi tratada, em porções, com N-(Benziloxicarboniloxi) succinimida (621) (550 g, 2,21 mol). Uma vez que a reação foi concluída (18 h), o THF foi removido sob pressão reduzida e o resíduo dissolvido em CH2Cl2 (2,5 L), então lavado com um volume igual de HCl (1 M), NaHCO3 (Sat. Aq.), H2O e salmoura.O extrato orgânico foi seco (MgSO4), filtrado e concentrado.O material em bruto (600 g) foi submetido a cromatografia (4 kg de sílica; 1-12% de CH3OH-CH2Cl2) para produzir HO-Trig-NHZ (622) (468 g, 78%) como um óleo viscoso amarelo límpido.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2R,3R,4R,5R)-5-ACETAMIDO-2- (ACETOXIMETIL)-6-((3-OXO-1-FENIL-2,7,10-TRIOXA-4-AZADODECAN-12- IL)OXI)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 623
[600] Uma mistura heterogênea de pentaacetato de galactosamina (715,2g, 1,84mol) e HO-Trig-NHZ (622) (400 g, 1,41mol) em 1,2 dicloroetano (10 l) foi tratada com 5% em mol de Sc (OTf)3 (34,6 g, 70,5 mmol) e aquecida (85 ˚C). Após agitação (5,5 h), a solução tornou-se límpida e homogênea, a reação foi resfriada e lavada com NaHCO3 (Sat. Aq.), HCl (1 M), H2O e salmoura.Os extratos orgânicos foram secos (MgSO 4), filtrados e concentrados.O material em bruto (900g) foi tratado com EtOAc (900ml) que gerou uma mistura heterogênea leitosa que foi filtrada através de uma frita rugosa removendo assim o pentaacetato residual.O filtrado foi concentrado e o material em bruto foi submetido a cromatografia (5 kg de sílica; 0-10% de CH3OH-EtOAc) para produzir o produto de glicosilação (623) (751 g, 87%) como uma espuma marrom clara.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2R,3R,4R,5R)-5-ACETAMIDO-2- (ACETOXIMETIL)-6-(2-(2-(2-((2,2,2-TRIFLUOROACETIL)-L4-AZANOIL) ETOXI)ETOXI)ETOXI)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 6 24
[601] Uma solução de Gal-trig-NHZ (623) (750 g, 1,22 mol), TFA (103,8 ml, 1,35 mol) e Pd/C (10% - suporte úmido, 75g) foi purgada com H2.Após agitação vigorosa (4,5 h) a mistura de reação foi purgada com N 2 (30 min), em seguida, filtrada através de Celite e concentrada.A espuma marrom resultante (712g, 99%) foi usada na próxima etapa sem processamento adicional.
ESQUEMA 106 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 634
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2-(2-AMINOETOXI)ETOXI)ETOXI)ETAN-1-OL 625
[602] 2-(2-(2-(2-Azidoetoxi)etoxi)etoxi)etan-1-ol (613) (70,0 g, 318 mmol) foi agitado em MeOH à temperatura ambiente. A reação foi hidrogenada sobre 10% de PD-C (7 g) durante 16 h. A reação foi filtrada através de celite e concentrada em vácuo para gerar 2-(2-(2-(2-aminoetoxi)etoxi)etoxi)etan-1-ol (625) (61,4 g, 100%) que foi usado sem purificação adicional. Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE (2-(2-(2-HIDROXIETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMATO DE BENZILA 627
[603] 2-(2-(2-(2-Aminoetoxi)etoxi)etoxi)etan-1-ol (625)(61,4 g, 318 mmol) foi agitado em H2O(500 ml) com Na2CO3 (50,51 g, 476 mmol) a 5 °C.
Cloroformato de benzila (626) (65,0 g, 381 mmol) em THF (480 ml) foi adicionado em gotas e a reação foi agitada por 16 h permitindo o aquecimento para a temperatura ambiente. O THF foi removido em vácuo e a camada aquosa extraída com EtOAc (x 3). Os orgânicos combinados foram secos (Na 2SO4), concentrados em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia flash automatizada (5% de MeOH/DCM) para gerar (2-(2-(2-(2- hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamato de benzila (627) (23,6 g, 22,7%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (1,1-BIS(4-METOXIFENIL)-1-FENIL-2,5,8,11- TETRAOXATRIDECAN-13-IL)CARBAMATO DE BENZILA 628
[604] (2-(2-(2-(2-Hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamato (627) (23,6 g, 72,1 mmol) e TEA (7,7 g, 75,7 mmol) foram agitados em DCM à TA.
DMTr-Cl (25,65 g, 75,7 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada à TA durante 2 h. A reação foi lavada sequencialmente com NaHCO3 saturado, seca sobre Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (50% de EtOAc/Hex) para gerar (1,1-bis(4- metoxifenil)-1-fenil-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)carbamato (v28) (25,5g, 56,2%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE (1,1-BIS(4-METOXIFENIL)-1-FENIL-2,5,8,11- TETRAOXATRIDECAN-13-IL)CARBAMATO DE BENZILA 629
[605] (1,1-Bis (4-metoxifenil)-1-fenil-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13- il)carbamato (628) (25,5 g, 40,5 mmol) e MeI (46,0 g, 324 mmol) foram agitados em THF seco a 0 °C. NaH (60% de dispersão em óleo mineral) (2,92 g, 121,5 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada a 0 °C, em seguida, à TA durante 1 h. A reação foi particionada entre EtOAc e H2O. Os orgânicos foram separados, secos (Na2SO4)e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (50% de EtOAc/Hex) para gerar (1,1-bis(4- metoxifenil)-1-fenil-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13-il)carbamato (v629) (26,06 g, 100%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE (2-(2-(2-HIDROXIETOXI)ETOXI)ETIL)(METIL)CARBAMATO DE BENZILA 630
[606] (1,1-bis(4-metoxifenil)-1-fenil-2,5,8,11-tetraoxatridecan-13- il)(metil)carbamato de benzila (629) (26,06 g, 40,5 mmol) foi agitado em DCM à TA. TFA (5,1 g, 44,5 mmol) foi adicionado e agitado durante 1 h. 2 equivalentes adicionais de TFA foram adicionados e a reação foi agitada por 16 h. A reação foi concentrada em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia flash automatizada (5% de MeOH/DCM) para gerar (2-(2-(2-(2- hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etil)(metil)carbamato de benzila (630) (6,76 g, 48,9%).
Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2R,3R,4R,5R)-5-ACETAMIDO-2- (ACETOXIMETIL)-6-((4-METIL-3-OXO-1-FENIL-2,7,10,13-TETRAOXA -4- AZAPENTADECAN-15-IL)OXI)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 631
[607] (2-(2-(2-(2-Hidroxietoxi)etoxi)etoxi)etil)(metil)carbamato (630) (6,76 g, 19,8 mmol), triacetato de (3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-6- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2,4,5-triila (7,71 g, 19,8 mmol) e Sc (III) OTf (0,49 g, 1,0 mmol) foram aquecidos ao refluxo em DCE durante 2 h. Após resfriamento, a reação foi arrefecida bruscament com TEA e lavada sequencialmente com HCl 1M, NaHCO3, água e salmoura, seca (Na2SO4) e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada para gerar diacetato de (2R,3R,4R,5R)-5-acetamido-2- (acetoximetil)-6-((4-metil-3-oxo-1-fenil-2,7,10,13-tetraoxa-4-azapentadecan-15- il)oxi)tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (631) (9,37g, 70,6%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2R,3R,4R,5R)-5-ACETAMIDO-2- (ACETOXIMETIL)-6-((1,1,1-TRIFLUORO-3-METIL-2-OXO-6,9,12-TRIOXA-314- AZATETRADECAN-14-IL)OXI)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 632
[608] diacetato de (2R,3R,4R,5R)-5-Acetamido-2-(acetoximetil)- 6-((4-metil-3-oxo-1-fenil-2,7,10,13-tetraoxa-4-azapentadecan-15- il)oxi)tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (631) (9,37 g, 14,0 mmol) e TFA (1,76 g, 15,4 mmol) foram agitados em MeOH à TA. A reação foi hidrogenada sobre 10% de Pd-C (1 g) durante aprox. 2 h. A reação foi filtrada através de celite e concentrada em vácuo para gerar diacetato de (2R,3R,4R,5R)-5-acetamido-2-(acetoximetil)- 6-((1,1,1-trifluoro-3-metil-2-oxo-6,9,12-trioxa-3l4-azatetradecan-14- il)oxi)tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (632) (9,0 g, 98,9 %). O produto foi utilizado sem purificação adicional. Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE TETRAACETATO DE (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((4- NITRO-1,2-FENILENO)BIS(2-METIL-1-OXO-5',8',11'-TRIOXA-2'-AZATRIDECANO-1,13- DIIL))BIS(OXI))BIS(5-ACETAMIDO-2-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-6, 3,4- TRIIL) 634
[609] diacetato de (2R,3R,4R,5R)-5-Acetamido-2-(acetoximetil)- 6-((1,1,1-trifluoro-3-metil-2-oxo-6,9,12-trioxa-3l4-azatetradecan-14- il)oxi)tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (32) (4,5 g, 6,93 mmol), ácido 4-nitroftálico (33) (0,73 g, 3,46 mmol), HATU (8,45 g, 22,18 mmol) e TEA (4,21 g, 41,6 mmol) foram agitados em DCM à TA durante 16 h. A mistura da reação foi diluída com DCM e lavada sequencialmente com HCl 1M, NaHCO3 saturado, água e salmoura, seca (Na2SO4) e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash automatizada (10% MeOH/DCM) para gerar tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((4-nitro-1,2-fenileno)bis(2-metil- 1-oxo-5',8',11'-trioxa-2'-azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6,3, 4-triil) (634) (5,0 g, 57,4 %). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ESQUEMA 107 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 643
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2R,3R,4R,5R)-5-ACETAMIDO-2- (ACETOXIMETIL)-6-((3-OXO-1-FENIL-2,7,10,13-TETRAOXA-4-AZAPENTADECAN-15- IL)OXI)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA
[610] diacetato de (2R,3R,4R,5R)-5-Acetamido-2-(acetoximetil)- 6-((1,1,1-trifluoro-2-oxo-6,9,12-trioxa-3l4-azatetradecan-14-il)oxi)tetrahidro-2H- piran-3,4-diila (45,0 g, 70,8 mmol) e Na2CO3 (11,3 g, 106 mmol) foram agitados em THF/H2O (50:50) à TA. Cloroformato de benzila (626) (14,5 g, 85 mmol) foi adicionado em gotas e a reação foi agitada por 16 h. O THF foi removido em vácuo e a camada aquosa extraída com EtOAc (x 3). Os orgânicos foram lavados sequencialmente com HCl 1 M, NaHCO3 saturado, água e salmoura, secos (Na2SO4) e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada para gerar diacetato de (2R,3R,4R,5R)-5-acetamido-2- (acetoximetil)-6-((3-metil-3-oxo-1-fenil-2,7,10,13-tetraoxa-4-azapentadecan-15- il)oxi)tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (635) (25,12 g, 54%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-ACETAMIDO-4,5- DIHIDROXI-6-(HIDROXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRANO-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMATO DE BENZILA 636
[611] diacetato de (2R,3R,4R,5R)-5-Acetamido-2-(acetoximetil)- 6-((3-oxo-1-fenil-2,7,10,13-tetraoxa-4-azapentadecan-15-il)oxi)tetrahidro-2H- piran-3,4-diila (635) (25,12 g, 38,3 mmol) foi agitado em solução de amônia 7 N em MeOH em um vaso de reação hermeticamente fechado à TA por 16 h. A reação foi deixada evaporar a 50 °C para remover a amônia e o restante concentrado em vácuo para gerar (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5- di-hidroxi-6-(hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-2- il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamato de benzila (636) (20,3 g, 100%) que foi usado em reações subsequentes sem purificação adicional. Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE (2-(2-(2-(2-(((3AR,4R,7R,7AR)-7-ACETAMIDO-4- (HIDROXIMETIL)-2,2-DIMETILTETRAHIDRO-4H-[1,3]DIOXOLO[4,5-C]PIRAN-6-IL)OXI)- ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL) CARBAMATO DE BENZILA 637
[612] (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-dihidroxi-6- (hidroximetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil) carbamato de benzila (636) (20,3 g, 38,3 mmol) foi agitado em DMF (200 ml) à TA. 2,2-Dimetoxi propano (274 g, 1,6 mol) e pTsOH (cat) foram adicionados e a reação aquecida a 65 °C durante 16 h. A reação foi resfriada até a TA, TEA (20 ml) adicionado e agitado durante 30 min. O solvente foi removido em vácuo, o resíduo tomado em MeOH/H2O (10:1) e a reação foi refluxada por 1 h. A reação foi concentrada em vácuo (azeotropia com tolueno (x 2) e o resíduo purificado por cromatografia flash automatizada (10% de MeOH/DCM) para gerar (2-(2-(2-(2- (((3aR,4R,7R,7aR)-7-acetamido-4-(hidroxil-metil)-2,2-dimetiltetrahidro-4H- [1,3]dioxolo[4,5-c]piran-6-il)oxi)etoxi)etoxi)-etoxi)etil)carbamato de benzila (637) (24,9 g, 100%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE 4-METILBENZENOSSULFONATO DE ((3AR,4R,7R,7AR)-7- ACETAMIDO-2,2-DIMETIL-6-((3-OXO-1-FENIL-2,7,10,13-TETRAOXA-4- AZAPENTADECAN-15-IL)OXI)TETRAHIDRO-4H-[1,3]DIOXOLO[4,5-C]PIRAN-4-IL)METILA 638
[613] (2-(2-(2-(2-(((3aR,4R,7R,7aR)-7-acetamido-4-(hidroximetil)- 2,2-dimetil-tetrahidro-4H-[1,3]dioxolo[4,5-c]piran-6- il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamato de benzila (637) (25,5 g, 44,8 mmol) e TEA (9,97 g, 98,5 mmol) foram agitados em DCM a 0 °C. Cloreto de p-tolueno- sulfonila (18,8 g, 98,5 mmol) em DCM foi adicionado e a reação foi agitada por 16 h permitindo o aquecimento para a TA. A mistura da reação foi diluída com DCM, lavada sequencialmente com HCl 1M, NaHCO3 saturado, água e salmoura, seca (Na2SO4) e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (5% de MeOH/DCM) para gerar 4-
metilbenzenossulfonato de ((3aR,4R,7R,7aR)-7-acetamido-2,2-dimetil-6-((3- oxo-1-fenil-2,7,10,13-tetraoxa-4-azapentadecan-15-il)oxi)tetrahidro-4H- [1,3]dioxolo[4,5-c]piran-4-il)metila (638) (25,5 g, 78,8%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE (2-(2-(2-(2-(((3AS,4R,7R,7AR)-7-ACETAMIDO-4- (AZIDOMETIL)-2,2-DIMETILTETRAHIDRO-4H-[1,3]DIOXOLO[4,5-C]PIRAN-6- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)-ETIL)CARBAMATO DE BENZILA 639
[614] 4-metilbenzenossulfonato de ((3aR,4R,7R,7aR)-7- acetamido-2,2-dimetil-6-((3-oxo-1-fenil-2,7,10,13-tetraoxa-4-azapentadecan-15- il)oxi)tetrahidro-4H-[1,3]dioxolo[4,5-c]piran-4-il)metila (638) (25,0 g, 34,5 mmol) e NaN3 (28,7 g, 434,6 mmol) foram aquecidos em DMSO/H2O (200 ml/20 ml) a 100 °C durante 12 h. A reação foi resfriada e particionada entre EtOAc e NaHCO3 saturado. A fase aquosa foi extraída adicionalmente outras duas vezes e os orgânicos combinados lavados com NaHCO3 saturado,água e salmoura, seca (Na2SO4)e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (5% de MeOH/DCM) para gerar (2-(2-(2-(2- (((3aS,4R,7R,7aR)-7-acetamido-4-(azidometil)-2,2-dimetiltetrahidro-4H- [1,3]dioxolo[4,5-c]piran-6-il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamato de benzila (639) (16,1 g, 78,2%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE (2-(2-(2-(2-(((3AS,4R,7R,7AR)-7-ACETAMIDO-4-((4-(3- METOXIFENIL)-1H-1,2,3-TRIAZOL-1-IL)METIL)-2,2-DIMETILTETRAHIDRO-4H- [1,3]DIOXOLO[4,5-C]PIRAN-6-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMATO DE BENZILA 640
[615] (2-(2-(2-(2-(((3aS,4R,7R,7aR)-7-acetamido-4-(azidometil)- 2,2-dimetiltetrahidro-4H-[1,3]dioxolo[4,5-c]piran-6- il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamato de benzila (39) (16,1 g, 27,0 mmol) foi agitado em MeOH (200 ml) à TA. 1-etinil-3-metoxibenzeno (4,28 g, 32,4 mmol), tris (benziltriazolilmetil)amina (0,72 g, 1,35 mmol), CuSO4 (0,07 g, 0,27 mmol em 1 ml de H2O)e ascorbato de sódio (0,53 g, 2,7 mmol em 5 ml de H 2O)foram adicionados sequencialmente e a reação agitada à TA durante 16 h. O solvente foi removido em vácuo, o resíduo tomado em DCM (200 ml) e lavado com água.
A camada aquosa foi novamente extraída com DCM e as fases orgânicas combinadas lavadas com salmoura e secas (Na2SO4). A reação foi concentrada em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia flash automatizada (10 % de MeOH/EtOAc) para gerar (2-(2-(2-(2-(((3aS,4R,7R,7aR)-7-acetamido-4-((4-(3- metoxifenil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-2,2-dimetiltetrahidro-4H-[1,3]dioxolo[4,5- c]piran-6-il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamato de benzila (640) (15,0 g, 76,4%).
Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-ACETAMIDO-4,5- DIHIDROXI-6-((4-(3-METOXIFENIL))-1H-1,2,3-TRIAZOL-1-IL)METIL)TETRAHIDRO-2H- PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMATO DE BENZILA 641
[616] (2-(2-(2-(2-(((3aS,4R,7R,7aR)-7-acetamido-4-((4-(3- metoxifenil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-2,2-dimetiltetrahidro-4H-[1,3]dioxolo[4,5- c]piran-6-il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamato de benzila (640)(15,0 g, 20,6 mmol) foi agitada em MeCN (200 ml) e 1,84% de H2SO4 (180 ml) à TA durante 96 h. A reação foi extraída com EtOAc (3 × 250 ml), lavada com NaHCO3saturado, água e salmoura, seca (Na2SO4) e concentrada em vácuo para gerar (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-dihidroxi-6-((4-(3- metoxifenil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)tetrahidro-2H-piran-2- il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi) etil)-carbamato de benzila (641) (11,0 g, 16,0 mmol), o produto foi usado em bruto nas reações subsequentes. Produto confirmado por
MS (ESI +ve).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2R,3S,4R,5R)-5-ACETAMIDO-2-((4-(3- METOXIFENIL)-1H-1,2,3-TRIAZOL-1-IL)METIL)-6-((3-OXO-1-FENIL-2,7,10,13- TETRAOXA-4-AZAPENTADECAN-15-IL)OXI)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 642
[617] (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-dihidroxi-6- ((4-(3-metoxifenil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)tetrahidro-2H-piran-2- il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)-etil)carbamato de benzila (641) (11,0g, 16,0 mmol) foi agitado em piridina (200 ml) à temperatura ambiente. Foi adicionado anidrido acético (16,3 g, 160 mmol) e a reação foi agitada por 16 h à TA seguido de 50 °C durante 3 h. A reação foi vertida sobre água e extraída três vezes com DCM (250 ml). Os orgânicos combinados foram lavados com NaHCO3 saturado (×2), HCl 1N (×2), água e salmoura, secos (Na2SO4) e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (5% de MeOH/DCM) para gerar diacetato de (2R,3S,4R,5R)-5-acetamido-2-((4-(3-metoxifenil)-1H- 1,2,3-triazol-1-il)metil)-6-((3 -oxo-1-fenil-2,7,10,13-tetraoxa-4-azapentadecan- 15-il)oxi)tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (642) (10,7 g, 86,7 %). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2R,3S,4R,5R)-5-ACETAMIDO-2-((4-(3- METOXIFENIL)-1H-1,2,3-TRIAZOL-1-IL)METIL)-6-((1,1,1-TRIFLUORO-2-OXO-6,9,12- TRIOXA-314-AZATETRADECAN-14-IL)OXI)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 643
[618] diacetato de (2R,3S,4R,5R)-5-Acetamido-2-((4-(3- metoxifenil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-6-((3-oxo -1-fenil-2,7,10,13-tetraoxa-4- azapentadecan-15-il)oxi)tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (642) (9,06 g, 11,74 mmol) e TFA (1,47 g, 12,91 mmol) foram agitados em MeOH à TA. A reação foi hidrogenada sobre 10% de Pd-C durante 1 h. A reação foi filtrada através de celite e concentrada em vácuo para gerar diacetato de (2R,3S,4R,5R)-5- acetamido-2-((4-(3-metoxifenil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-6-((1,1,1-trifluoro-2- oxo-6,9,12-trioxa-314-azatetradecan-14-il)oxi)tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (643) (8,8g, 99,7%) que foi usado em reações subsequentes sem purificação. Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ESQUEMA 108 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 654
ETAPA 1. P REPARAÇÃO DE GALACTOSAMINA PERACETILADA 644
[619] Cloridrato de D-galactosamina (614) (250 g, 1,16 mol) em piridina (1,5 l) foi tratado com anidrido acético (1,25 l, 13,2 mol) ao longo de 45 minutos. Após agitação de um dia para o outro, a mistura de reação foi dividida em três porções de 1 l. Cada porção de 1 l foi vertida em 3 l de água gelada e misturada por uma hora. Após a mistura, os sólidos foram filtrados, combinados, congelados sobre nitrogênio líquido e, em seguida, liofilizados por cinco dias para render galactosamina peracetilada (644)(369,4 g, 82%) como um sólido branco. Rf (0,58, 10% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2R,3R,4R,5R,6R)-5-ACETAMIDO-2- (ACETOXIMETIL)-6-(2-(2-(2-(2-AZIDOETOXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)TETRAHIDRO-2H- PIRAN-3,4-DIILA 645
[620] Galactosamina peracetilada (644) (25g, 64,21 mmol) foi aquecida com triflato de escândio (1,58 g, 3,21 mmol) em DCE seco a 90 °C durante 3 horas. A reação foi resfriada à TA, arrefecida bruscamente com 5 ml de TEA e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna automatizada (2-10% de MeOH/DCM) para gerar diacetato de (2R,3R,4R,5R)-5-acetamido-2-(acetoximetil)-6-(2-(2-(2-(2-azidoetoxi) etoxi)etoxi)etoxi)tetrahidro-2H-piran- 3,4-diila (645) (27 g, 76,5%). Produto confirmado por MS.
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE 2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-ACETAMIDO-4,5- DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRANO-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETAN-1-AMÍNIO 2,2,2-TRIFLUOROACETATO 646
[621] Uma solução da azida 645 (7,12 g, 13 mmol) em EtOAc (150 ml) e ácido trifluoroacético (2 ml) foi tratada com paládio sobre carvão (1,5 g, 10% p/p de base úmida). A mistura de reação foi, então, purgada com hidrogênio e agitada vigorosamente de um dia para o outro. Após purga com nitrogênio, a mistura foi filtrada através de Celite, enxaguando com MeOH. 6Rf (0,34, 15% de MeOH-CH2Cl2).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE TETRAACETATO DE (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5- NITRO-1,3-FENILENO)BIS(2-METIL- 1-OXO-5',8',11'-TRIOXA-2'-AZATRIDECANO-1,13- DIIL))BIS(OXI))BIS(5-ACETAMIDO-2-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-6, 3,4- TRIIL) 648
[622] diacetato de (2R,3R,4R,5R)-5-Acetamido-2-(acetoximetil)- 6-((1,1,1-trifluoro-2-oxo-6,9,12-trioxa-314-azatetradecan-14-il)oxi)tetrahidro-2H- piran-3,4-diila (646) (13,25 g, 20,84 mmol), ácido 5-nitroisoftálico (647) (2,0 g, 9,5 mmol), HATU (12,3 g, 32,21 mmol) e TEA (5,75 g, 59,0 mmol) foram agitados em DCM à TA durante 16 h. A mistura da reação foi diluída com DCM, lavada sequencialmente com HCl 1M, NaHCO3 saturado, água e salmoura, seca sobre Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash automatizada (5% de MeOH/DCM) para gerar tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((4-nitro-1,3-fenileno)bis(2-metil-1-oxo-5,8,11- trioxa-2-azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6,3, 4-triil) (648) (4,43 g, 38,3%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE TETRAACETATO DE (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5- AMINO-1,3-FENILENO)BIS(1-OXO-5,8,11-TRIOXA-2-AZATRIDECANO-1,13- DIIL))BIS(OXI))BIS(5-ACETAMIDO-2-(ACETOXIMETIL)TETRA HIDRO-2H-PIRAN-6,3,4- TRIIL) 649
[623] tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-Nitro- 1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa-2-azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5- acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6,3,4-triil) (648) (26,1 g, 23,05 mmol) foi agitado em MeOH à TA. A reação foi hidrogenada sobre 10% de Pd-C % (2,6 g) à TA durante 2 horas. A reação foi filtrada através de celite e concentrada em vácuo para gerar tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-amino-1,3- fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa- 2-azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H- piran-6, 3,4-triil) (649) (28,0 g, 99,9%) que foi usado em reações subsequentes sem purificação adicional. Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2R,3R,4R,5R)-5-ACETAMIDO-6-((1-(3- ((2-(2-(2-(2-((3R, 4R, 5R, 6R)-3-ACETAMIDO-5-ACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)-4- HIDROXITETRAHIDRO-2H-PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5-(2- ((((BENZILOXI)CARBONIL)AMINO)ACETAMIDO)FENIL)-1-OXO-5,8,11-TRIOXA-2- AZATRIDECAN-13-IL) OXI)-2-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 651
[624] tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-Amino-
1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa-2-azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5- acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6,3,4-triil) (649) (0,5 g, 0,45 mmol) e CBZ-gly (650) (0,09 g, 0,45 mmol) foram agitados em EtOAc à TA. T3P (50% de solução em EtOAc) (0,29 g, 0,91 mmol) foi adicionado e a reação agitada à TA O/N. T3P adicional (0,3 eq) adicionado e a reação agitada por mais 1 h. A reação foi lavada com NaHCO3 saturado e salmoura, seca (Na2SO4), concentrada em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia flash automatizada (10% de MeOH/DCM) para gerar diacetato de (2R,3R,4R,5R)-5- acetamido-6-((1-(3-((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R))- 3-acetamido-5-acetoxi-6- (acetoximetil)-4-hidroxitetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)- etoxi)etil)carbamoil)-5-(2-(((benziloxi)carbonil)amino)acetamido)fenil)-1-oxo- 5,8,11-trioxa-2-azatridecan-13-il) oxi)-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-3,4- diila (651) (0,33 g, 56,8%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE TETRAACETATO DE (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5- (2-((2,2,2-TRIFLUOROACETIL)- 14-AZANIL) ACETAMIDO)-1,3-FENILENO)BIS(1-OXO- 5,8,11-TRIOXA-2-AZATRIDECANO-1,13-DIIL))BIS(OXI))BIS(5-ACETAMIDO-2- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-6,3,4-TRIIL) 652
[625] diacetato de (2R,3R,4R,5R)-5-Acetamido-6-((1-(3-((2-(2-(2- (2-(((3R,4R,5R,6R))-3- acetamido-5-acetoxi-6-(acetoximetil)-4-hidroxitetrahidro- 2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamoil)-5-(2- (((benziloxi)carbonil)amino) acetamido)fenil)-1-oxo-5,8,11-trioxa-2-azatridecan- 13-il) oxi)-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (651) (3,3 g, 2,39 mmol) e TFA (0,29 g, 2,51 mmol) foram agitados em MeOH à TA. A reação foi hidrogenada sobre 10% de Pd-C (400 mg) durante duas h., filtrada através de celite e concentrada em vácuo para gerar tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(2-((2,2,2-trifluoroacetil)-l4-azanil)- acetamido)-1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa-2-azatridecano-1,13- diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6,3,4-triil) (652)
(3,21 g, 98,7%) que foi usado em reações subsequentes sem purificação adicional. Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE TETRAACETATO DE (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5- (2-(10-(3-((BIS(4))-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4- DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANAMIDO) ACETAMIDO)-1,3-FENILENO)BIS(1- OXO-5,8,11-TRIOXA-2-AZATRIDECANO-1,13-DIIL))BIS(OXI))BIS(5-ACETAMIDO-2- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-6,3,4-TRIIL) 653
[626] tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(2- ((2,2,2-Trifluoroacetil)-l4-azanil) acetamido)-1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa- 2-azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2-(acetoximetil) tetrahidro - 2H-piran-6,3,4-triil) (652) (1,0 g, 0,73 mmol), 10-(3-((bis(4- metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-(hidroximetil)-3,4-dimetil-pirrolidin-1-il)-10- oxodecanoato de lítio (606) (0,45 g, 0,73 mmol), HATU (0,47 g, 1,25 mmol) e TEA (0,22 g, 2,2 mmol) foram agitados em DCM à TA por 4 h. A mistura da reação foi diluída com DCM e lavada sequencialmente com NaHCO 3 saturado, água e salmoura, seca (Na2SO4) e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (5% de MeOH/DCM) para gerar tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(2-(10-(3-((bis(4- metoxi))fenil)(fenil)metoxi)metil)-4-(hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1-il)-10- oxodecanamido) acetamido)-1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa-2- azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H- piran-6,3,4-triil) (653) (1,02 g, 75,2 %). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 9. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 4-((1-(10-((2-((3,5-BIS((2-(2-(2-(2- )(((3R,4R,5R,6R)-)3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H- PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-2- OXOETIL)AMINO)-10-OXODECANOIL)-4-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)- 3,4-DIMETILPIRROLIDIN-3-IL)METOXI)-4-OXOBUTANOICO 654
[627] tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(2-(10-
(3-((Bis(4-metoxifenil)) (fenil)) metoxi)-metil)-4-(hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin- 1-il)-10-oxodecanamido) acetamido)-1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa -2- azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H- piran-6,3,4-triil) (653) (1,05 g, 0,57 mmol), anidrido succínico (0,28 g, 2,84 mmol), DMAP (0,35 g, 2,84 mmol) e TEA (0,58 g, 5,68 mmol) foram aquecidos em DCE seco a 60 °C durante 2 horas. Adicionou-se MeOH (5 ml) e a reação foi agitada por mais 30 minutos e, então, arrefecida e concentrada em vácuo. O resíduo foi retomado em DCM e lavado sequencialmente com NaHCO3 saturado (x 4), água e salmoura. Os orgânicos foram secos (Na2SO4) e concentrados em vácuo para gerar ácido 4-((1-(10-((2-((3,5-bis((2-(2-(2-(2)))-(((3R,4R,5R,6R)-3-acetamido- 4,5-diacetoxi-6-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2- il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamoil)fenil)amino)-2-oxoetil)amino)-10- oxodecanoil)-4-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dimetilpirrolidin-3-il) metoxi)-4-oxobutanoico (654) (1,1 g, 99,4%) que foi usado como um produto em bruto em reações subsequentes. Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ESQUEMA 109 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 656
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE TETRAACETATO DE (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5- 10-(3-((BIS(4))-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4- DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECANAMIDO) ACETAMIDO)-1,3-FENILENO)BIS(1- OXO-5,8,11-TRIOXA-2-AZATRIDECANO-1,13-DIIL))BIS(OXI))BIS(5-ACETAMIDO-2- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-6,3,4-TRIIL) 655
[628] tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5- Amino-1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa-2-azatridecano-1,13- diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6,3,4-triil) (649) (4 g, 3,36 mmol), 10-(3-((bis(4-metoxifenil)-(fenil) metoxi)metil)-4- (hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1-il)-10-oxodecanoato de lítio (6) (2,13 g, 3,36 mmol), TEA (1 ml, 6,7 mmol) e T3P (50% P/P de solução em EtOAc) (4,3 g, 6,72 mmol) foram agitados em DCM à TA durante 16 h. A reação foi lavada sequencialmente com NaHCO3 saturado, água e salmoura, seca (Na2SO4) e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (10% de MeOH/DCM) para gerar tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-10-(3-((bis(4- metoxi))fenil)(fenil)metoxi)metil)-4-(hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1-il)- 10-oxodecanamido) acetamido)-1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa-2- azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro- 2H-piran-6,3,4-triil) (655) (1,37 g, 22,5%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 4-((1-(10-((2-((3,5-BIS((2-(2-(2-(2-) (((3R,4R,5R,6R)-) 3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H- PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-2- OXOETIL)AMINO)-10-OXODECANOIL)-4-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)- 3,4-DIMETILPIRROLIDIN-3-IL) METOXI)-4-OXOBUTANOICO 656
[629] Esse composto foi preparado de maneira análoga a ácido 4- ((1-(10-((2-((3,5-bis((2-(2-(2-(2-)(((3R,4R,5R,6R)-)3-acetamido-4,5-diacetoxi-6- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2- il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamoil)fenil)amino)-2-oxoetil)amino)-10- oxodecanoil)-4-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dimetilpirrolidin-3- il)metoxi)-4-oxobutanoico (654) ESQUEMA 110 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 657 SÍNTESE DE ÁCIDO 3-((((1-(10-((3,5-BIS((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R))-3-ACETAMIDO- 4,5-DIHIDROXI-6-(HIDROXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-10-OXODECANOIL)-4- (HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-3-IL) METOXI)CARBONIL)OXI)PROPANOICO 657
[630] Esse composto foi preparado de maneira análoga a ácido 4- ((1-(10-((3,5-(2-(2-(2-(()(((3R,4R,5R,6R)-)3-acetamido-4,5-diacetoxi-6- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2-
il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamoil)fenil)amino)-10-oxodecanoil)-4-((bis(4-
metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4-dimetilpirrolidin-3-il)metoxi)-4-oxobutanoico
(654)
ESQUEMA 111 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 666
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE 5-(HIDROXIMETIL)ISOFTALATO DE DIMETILA 659
[631] Trimetil benzeno-1,3,5-tricarboxilato(658)(40 g, 159 mmol) e NaBH 4 foram agitados em THF à temperatura ambiente. MeOH (30 ml) em THF (120 ml) foi adicionado em gotas lentamente. Após a adição completa, a reação foi agitada a 0 ºC durante 30 min. Após o resfriamento, a reação foi arrefecida bruscamente com HCl 1M e extraída com EtOAc. Os orgânicos foram lavados sequencialmente com HCl 1 M, NaHCO 3, água e salmoura, secos (Na 2SO 4) e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (50/50 de EtOAc/hex) para gerar 5- (hidroximetil)isoftalato de dimetila (659) (20,5 g, 53,2%). RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3) δ 8,59 (s, 1H), 8,23 (s, 2H), 4,81 (s, 2H), 3,95 (s, 6H). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 2. P REPARAÇÃO DE 5-(CLOROMETIL )ISOFTALATO DE DIMETILA 660
[632] 5-(hidroximetil)isoftalato de dimetila (659) (20,5 g, 80,5%) foi submetida ao refluxo em SOCl 2 (11,1 g, 94 mmol) durante 1,5 h.
A reação foi resfriada, diluída com DCM e lavada sequencialmente com NaOH 0,1 M (x 2), água e salmoura, seca (Na 2SO4) e concentrada em vácuo.
O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (20% de EtOAc/Hex) para gerar 5-(clorometil)isoftalato de dimetila (660) (10,84 g, 53 %). RMN de 1H (400 MHz, CDCl 3) δ 8,65 (s, 1H), 8,27 (s, 2H), 4,66 (s, 2H), 3,97 (s, 6H). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 3. P REPARAÇÃO DE 5-(AZIDOMETIL)ISOFTALATO DE DIMETILA 661
[633] 5-(clorometil)isoftalato de dimetila (660) (10,84 g, 45 mmol) e NaN3 (18 g, 270 mmol) foram submetidos ao refluxo em acetona/água (3/1) por 16 h. A reação foi resfriada, concentrada em vácuo e o resíduo tomado em DCM. Os orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secos (Na 2SO 4) e concentrados em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (15% de EtOAc/Hex) para gerar 5 - (azidometil)isoftalato de dimetila (661) (9,84 g, 88%). RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) δ 8,66 (s, 2H), 8,2 (s, 2H), 4,49 (s, 2H), 3,97 (s, 2H). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 4. P REPARAÇÃO DE ÁCIDO 5-(AZIDOMETIL)ISOFTÁLICO 662
[634] 5-(azidometil)isoftalato de dimetila (661) (9,84 g, 39,5 mmol) e LiOH (2,1g, 87 mmol) foram agitados em THF/H 2O/MeOH à temperatura ambiente por 48 h. O solvente orgânico foi removido em vácuo e o resíduo acidificado com HCl 1M. O aquoso foi extraído com EtOAc (x 3) e os orgânicos combinados secos (Na 2SO4) e concentrados em vácuo para gerar ácido 5-(azidometil)isoftálico (662) (8,0 g, 91,6 %) que foi usado em reações subsequentes sem purificação adicional ETAPA 5. P REPARAÇÃO DE TETRAACETATO DE (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5- (AZIDOMETIL)-1,3-FENILENO )BIS (1-OXO-5,8,11-TRIOXA -2-AZATRIDECANO -1,13- DIIL)) BIS ( OXI )) BIS (5- ACETAMIDO -2-( ACETOXIMETIL )TETRAHIDRO -2H-PIRAN -6,3,4- TRIIL ) 663
[635] Ácido 5-(azidometil)isoftálico (662) (4,42 g, 20 mmol), 2- (2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-diacetoxi-6- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etan-1-amínio 2,2,2-trifluoroacetato (646) (25 g, 40 mmol), HATU (24,4 g, 64 mmol) e TEA (17 ml, 120 mmol) foram agitados em DCM à TA durante 16 h. A reação foi lavada sequencialmente com HCl 1M, NaHCO 3 saturado, água e salmoura, seca (Na 2SO4) e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna flash automatizada (7% de MeOH/DCM) para gerar tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((4-nitro-1,3-fenileno)bis(2- metil-1-oxo-5,8,11-trioxa-2'-azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-
2-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6,3, 4-triil) (663) (10,9 g, 44,5%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE TETRAACETATO DE (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5 ((2,2,2-TRIFLUOROACETIL)- 14-AZANIL)ACETAMIDO)-1,3-FENILENO)BIS(1-OXO- 5,8,11-TRIOXA-2-AZATRIDECANO-1,13-DIIL))BIS(OXI))BIS(5-ACETAMIDO-2- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-6,3,4-TRIIL) 664
[636] tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5-(Azidometil)-1,3- fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa-2-azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6,3,4-triil) (663) (10,9 g, 8,9 mmol) e TFA (0,68 ml, 8,9 mmol) foram agitados em MeOH à TA. A reação foi hidrogenada sobre 10% de Pd-C durante 1 h. A reação foi filtrada através de celite, concentrada em vácuo e o resíduo purificado por cromatografia flash automatizada (15% de MeOH/DCM) para gerar tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5-((((2,2,2-trifluoroacetil)-l4- azanoil)metil)-1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa-2-azatridecano-1,13- diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6, 3,4-triil) (664) (6,41 g, 54,7%). Produto confirmado por MS (ESI +ve). ETAPA 7. PREPARAÇÃO DE TETRAACETATO DE (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5 (10- (3-((BIS(4))-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN- 1-IL)-10-OXODECANAMIDO) ACETAMIDO)-1,3-FENILENO)BIS(1-OXO-5,8,11-TRIOXA-2- AZATRIDECANO-1,13-DIIL))BIS(OXI))BIS(5-ACETAMIDO-2-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H- PIRAN-6,3,4-TRIIL) 665
[637] tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5-((((2,2,2- Trifluoroacetil)-l4-azanoil)metil)-1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa-2-azatridecano- 1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6,3, 4-triil) (3,0g, 2,3 mmol), 10-(3-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-(hidroximetil)-3,4- dimetilpirrolidina-1-il)-10-oxodecanoato de lítio (665) (1,5 g, 2,3 mmol), HATU (1,4 g, 3,7 mmol) e TEA (1 ml, 7,0 mmol) foram agitados à TA O/N. A reação foi diluída com DCM, lavada com NaHCO3saturado, água e salmoura, seca (Na2SO4) e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash automatizada (5% de MeOH/DCM) para gerar tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5 (10-(3- ((bis(4-metoxi))fenil)(fenil)metoxi)metil)-4-(hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1-il)-10- oxodecanamido) acetamido)-1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa-2-azatridecano- 1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6,3,4-triil) (665) (1,8 g, 43,0%). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ETAPA 8. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 4-((1-(10-((2-((3,5-BIS((2-(2-(2-(2-)(((,4R,5R,6R)-)3- ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-2-OXOETIL)AMINO)-10- OXODECANOIL)-4-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-3- IL)METOXI)-4-OXOBUTANOICO 666
[638] Esse composto foi preparado de maneira análoga ao ácido 4- ((1-(10-((2-((3,5-bis((2-(2-(2-(2-)(((3R,4R,5R,6R)-)3-acetamido-4,5-diacetoxi-6- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etil)carbamoil)fenil)amino)- 2-oxoetil)amino)-10-oxodecanoil)-4-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3,4- dimetilpirrolidin-3-il)metoxi)-4-oxobutanoico (654). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ESQUEMA 112 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 667
SÍNTESE DE ÁCIDO 4-((1-(10-((2-((3,5-BIS((2-(2-(2-(2-((3R,4R,5R,6R)-4,5 - DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)-3-(2,2,2-TRIFLUOROACETAMIDO)TETRAHIDRO-2H- PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-2- OXOETIL)AMINO)-10-OXODECANOIL)-4-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)- 3,4-DIMETILPIRROLIDIN-3-IL) METOXI)-4-OXOBUTANOICO 667
[639] Este composto foi preparado de forma análoga a 654 (esquema 8), usando triacetato de (3R,4R,5R,6R)-6-(acetoximetil)-3-(2,2,2- trifluoroacetamido)tetrahidro-2H-piran-2, 4,5-triila em vez de galactosamina peracetilada (606). Produto confirmado por MS (ESI +ve). ESQUEMA 113 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 668 SÍNTESE DE ÁCIDO 4-((1-(10-((2-((3,5-BIS((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-4,5- DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)-3PROPRIONAMIDOTETRAHIDRO-2H-PIRAN-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-2-OXOETIL)AMINO)-10- OXODECANOIL)-4-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-3,4- DIMETILPIRROLIDIN-3-IL)METOXI)-4-OXOBUTANOICO 668
[640] Este composto foi preparado de forma análoga a 654 (esquema 8), usando triacetato de (3R,4R,5R,6R)-6-(acetoximetil)-3- propionamidotetrahidro-2H-piran-2, 4,5-triila em vez de galactosamina peracetilada (619b) ao invés de galactosamina peracetilada (644). Produto confirmado por MS (ESI +ve).
ESQUEMA 114 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 669 SÍNTESE DE ÁCIDO 4-((1-(10-((2-((3,5-BIS((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-4,5 - DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)-3-(2,2-DIFLUOROPROPANAMIDO)TETRAHIDRO- 2H-PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-2- OXOETIL)AMINO)-10-OXODECANOIL)-4-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)- 3,4-DIMETILPIRROLIDIN-3-IL) METOXI)-4-OXOBUTANOICO 669
[641] Este composto foi preparado de forma análoga a 654 (esquema 8), usando triacetato de (3R,4R,5R,6R)-6-(acetoximetil)-3-(2,2- difluoropropanamido)tetra-hidro-2H-piran-2,4,5-triila (619c) em vez de galactosamina peracetilada (644). Produto confirmado por MS (ESI +ve). ESQUEMA 115 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 670
SÍNTESE DE DE ÁCIDO 4-((1-(10-((2-((3,4-BIS((2-(2-(2-(2-) (((3R,4R,5R,6R)-)3- ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)(METIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-2-OXOETIL)AMINO)- 10-OXODECANOIL)-4-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-3,4- DIMETILPIRROLIDIN-3-IL) METOXI)-4-OXOBUTANOICO 670
[642] Este composto foi preparado de maneira análoga ao composto 654 (esquema 8) usando tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((4-nitro-1,2-fenileno)bis(2-metil-1-oxo-5',8',11'- trioxa-2'-azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-6,3,4-triil) (634) no lugar de tetraacetato de (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-nitro-1,3-fenileno)bis(1-oxo-5,8,11-trioxa-2- azatridecano-1,13-diil))bis(oxi))bis(5-acetamido-2-(acetoximetil)tetrahidro-2H- piran-6,3,4-triil) (648).
ESQUEMA 116 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 671 SÍNTESE DE ÁCIDO 4-((1-(10-((2-((3,5-BIS((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5S,6R)-3- ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6-((4-(3-METOXIFENIL)-1H-1,2,3-TRIAZOL-1- IL)METIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI) ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-2-OXOETIL)AMINO)-10-OXODECANOIL)- 4-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-3-IL)METOXI)-4-
OXOBUTANOICO 671
[643] Este composto foi preparado de maneira análoga ao composto 654 (esquema 8) usando diacetato de (2R,3S,4R,5R)-5-acetamido-2- ((4-(3-metoxifenil)-1H-1,2,3- triazol-1-il)metil)-6-((1,1,1-trifluoro-2-oxo-6,9,12- trioxa-314-azatetradecan-14-il)oxi)tetrahidro-2H-piran-3, 4-diila (643) no lugar de 2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-diacetoxi-6- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etan-1-amínio 2,2,2- trifluoroacetato (646).
ESQUEMA 117 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 672 SÍNTESE DE ÁCIDO 4-((4-(10-((2-((3,5-BIS((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-ACETAMIDO- 4,5-DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-2-OXOETIL)AMINO)-10- OXODECANOIL)-2-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-1,2- DIMETILCICLOPENTIL)METOXI)-4-OXOBUTANOICO 672
[644] Este composto foi preparado de maneira análoga ao composto 654 (esquema 8) usando (2R,3R,4R,5R)-5-acetamido-2- (acetoximetil)-6-(2-(2-(2-((2, 2,2-trifluoroacetil)-14-azanoil) etoxi)etoxi)etoxi)tetrahidro-2H-piran-3,4-diil diacetato (624) em vez de 2-(2-(2-(2- (((2R,3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-diacetoxi-6-(acetoximetil)tetrahidro-2H- piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)etoxi)etan-1-amínio 2,2,2-trifluoroacetato (646).
ESQUEMA 118 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 681
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 12-(BENZILOXI)-12-OXODODECANOICO 676
[645] A uma solução de ácido dodecanodioico (674) (21,0 g, 91,3 mmol) em DMF (200 ml) foi adicionado carbonato de potássio (10 g, 72,4 mmol) e brometo de benzil (675) (10 ml, 84,2 mmol). A solução foi agitada a 80 °C durante 4 horas, resfriada até 0 °C e então cuidadosamente acidificada com HCl 6M. Diluir com água (250 ml) e extrair com acetato de etila (500 ml). O extrato de acetato de etila foi lavado com salmoura (3 x 250 ml), seco em sulfato de magnésio, filtrado e concentrado até a secura. O sólido foi suspenso em diclorometano (200 ml) e filtrado. O filtrado, que agora estava enriquecido no produto, foi concentrado e, então, purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (Gradiente: 0 a 10% de metanol em DCM) para proporcionar ácido 12-(benziloxi)-12-oxododecanoico 6 (76) como um sólido incolor (13 g, 45 %).
Estrutura confirmada por espectroscopia de massa ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2S,3S,4S,5S)-5-ACETAMIDO-6-(2-(2-(2- (3-((2-(2-(2-) (((3R,4R,5R,6R))-3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5- (12-(BENZILOXI)-12-OXODODECANAMIDO)BENZAMIDO)ETOXI)ETOXI)ETOXI)-2- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 678
[646] Para uma solução de diacetato de (2S,3S,4S,5S)-5- acetamido-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-diacetoxi-6-
(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)-etoxi)etil)carbamoil)-5- aminobenzamido) etoxi)etoxi)etoxi)-2-(acetoximetil)-tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (677) (4,0 g, 3,6 mmol), ácido 12-(benziloxi)-12-oxododecanoico (676) (1,3 g, 4,1 mmol) e trietilamina (1,5 ml, 10,8 mmol) em diclorometano (75 ml) foi adicionado em gotas T3P (4,5 g, ~9 ml, 50% de solução em acetato de etila). A solução foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Mediante conclusão, a mistura de reação foi diluída com diclorometano e cuidadosamente arrefecida bruscamente com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (200 ml). A solução bifásica foi agitada vigorosamente durante 30 minutos. A camada de DCM foi separada e a fase aquosa foi extraída com diclorometano (1 x 100 ml).
As frações orgânicas extraídas foram combinadas, secas com sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (Gradiente: 0 - 10% de MeOH em DCM) para proporcionar o composto de titulação como um sólido incolor (1,5 g, 30%).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 12-((3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-ACETAMIDO- 4,5-DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5-((2-(2-(2-(((3S, 4S, 5S, 6S)-3-ACETAMIDO- 4,5-DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-12-OXODODECANOICO 679
[647] A uma solução de diacetato de (2S,3S,4S,5S)-5-acetamido- 6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-diacetoxi-6- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)-etil)carbamoil)-5-(12- (benziloxi)- 12-oxododecanamido) benzamido)etoxi)etoxi)-etoxi)-2- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (678) (1,5 g, 1,1 mmol) em metanol (25 ml) foi adicionado 10 % de paládio sobre carbono (base úmida, 150 mg, 10% p/p). A solução foi aspergida com gás hidrogênio lentamente durante 1 hora.
Mediante conclusão, a solução foi aspergida com nitrogênio, filtrada através de celite e concentrada em vácuo até a secura para proporcionar um sólido incolor (1,1 g, 79%).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2S,3S,4S,5S)-5-ACETAMIDO-6-(2-(2-(2- (3-((2-(2-(2-) (((3R,4R,5R,6R))-3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5- (12-(BENZILOXI)-12-OXODODECANAMIDO)BENZAMIDO)ETOXI)ETOXI)ETOXI)-2- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 681
[648] A uma solução de ácido 12-((3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3- acetamido-4,5-diacetoxi-6-(acetoximetil)tetrahidro-2H -piran-2- il)oxi)etoxi)etoxi)etil)carbamoil)-5-((2-(2-(2-(((3S, 4S, 5S, 6S)-3-acetamido-4,5- diacetoxi-6-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2- il)oxi)etoxi)etoxi)etil)carbamoil)fenil)amino)-12-oxododecanoico (679) (0,6 g, 0,46 mmol) e trietilamina (125 µl, 0,92 mmol) em diclorometano (50 ml) foi adicionado trifluoroacetato de pentafluorofenila (680) (150 mg, 1,1 mmol). A solução foi agitada por 30 minutos à temperatura ambiente e, então, concentrada em vácuo até a secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em gel de sílica 60 (gradiente: 0 a 10% de metanol em diclorometano) para proporcionar o composto de titulação como um sólido incolor (475 mg, 70%).
Massa (ESI+) m/z 741,0 (M+2H). RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,12 (s, 1H), 8,52 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 8,14 (d, J = 1,4 Hz, 2H), 7,91 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 5,21 (d, J = 3,4 Hz, 2H), 4,97 (dd, J = 11,2, 3,4 Hz, 2H), 4,54 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,06 - 3,99 (m, 7H), 3,88 (dt, J = 11,2, 8,8 Hz, 2H), 3,77 (ddd, J = 11,1, 5,6, 3,9 Hz, 2H), 3,62- 3,46 (m, 22H), 3,46 - 3,38 (m, 5H), 2,77 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,31 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,10 (s, 7H), 1,99 (s, 7H), 1,89 (s, 7H), 1,77 (s, 7H), 1,69 - 1,54 (m, 4H), 1,40 -1,20 (m, 14H)) Massa (ESI+) m/z 741,0 (M+2H).
ESQUEMA 119 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 690
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 12-((TERC- BUTOXICARBONIL)AMINO)DODECANOICO 684
[649] Uma solução de ácido 12-aminododecanoico (682) (5,0 g, 23,3 mmol), descarbonato de di-terc-butila (683) (6,1 g, 27,9 mmol) e trietilamina (6,3 ml, 46,6 mmol) em metanol (75 ml) foi aquecido a 60 °C durante 3 h, em seguida, à temperatura ambiente de um dia para o outro. Após a conclusão, a solução foi concentrada in vacuo até a secura e usada na próxima etapa sem purificação adicional.
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE 12-((TERC-BUTOXICARBONIL)AMINO)DODECANOATO DE BENZILA 685
[650] Uma solução de ácido 12-((terc- butoxicarbonil)amino)dodecanoico bruto (684) (9,0 g, 3,0 mmol), álcool benzílico (685) (3,1 g, 30,0 mmol), cloridrato de EDC (6,9 g, 36,0 mmol) e trietilamina (12 ml, 90,0 mmol) em diclorometano (100 ml) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Após a conclusão, a solução foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio (100 ml) e salmoura (100 ml). A solução de diclorometano foi seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada até a secura. A purificação por cromatografia em coluna em sílica gel 60 (Gradiente: 0 a 50% de acetato de etila em hexanos) proporcionou o composto de titulação como um sólido incolor (2,0 g, 21% em duas etapas).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE TRIFLUOROACETATO DE 12-(BENZILOXI)-12- OXODODECAN-1-AMÍNIO 687
[651] Uma solução de 12-((terc- butoxicarbonil)amino)dodecanoato de benzila (686) (2,0 g, 4,9 mmol), diclorometano (15 ml) e TFA (5 ml) foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada até a secura para proporcionar o produto como um óleo viscoso (2,1 g quantitativo).
ETAPA 4. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2S,3S,4S,5S)-5-ACETAMIDO-6-(2-(2-(2- (3-((2-(2-(2-) (((3R,4R,5R,6R))-3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5- (12-(BENZILOXI)-12-OXODODECANAMIDO)BENZAMIDO)ETOXI)ETOXI)ETOXI)-2- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 688
[652] Uma solução de ácido 12-((3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3- acetamido-4,5-diacetoxi-6-(acetoximetil)tetrahidro-2H- piran-2- il)oxi)etoxi)etoxi)etil)carbamoil)-5-((2-(2-(2-(((3S, 4S, 5S, 6S)-3-acetamido-4,5- diacetoxi -6-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)-
etil)carbamoil)fenil)amino)-12-oxododecanoico (688) (750 mg, 0,54 mmol), 12- (trifluoroacetato de benziloxi)-12-oxododecan-1-amínio (687) (225 mg, 0,54 mmol), HBTU (210 mg, 0,54 mmol) e diisopropiletilamina (0,3 ml, 1,62 mmol) em diclorometano (30 ml) foi agitado de um dia para o outro à temperatura ambiente.
A solução foi diluída com diclorometano (50 ml) e lavada com solução saturada de bicarbonato (100 ml). O diclorometano foi seco em sulfato de magnésio, filtrado e concentrado em vácuo até a secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica 60 (gradiente: 0 a 10% de metanol em diclorometano) para se obter o composto do título (688) como um sólido incolor (605 mg, 70%).
ETAPA 5. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 12-(12-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3- ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL) TETRAHIDRO -2H-PIRAN-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5-((2-(2-(2-(((3S, 4S, 5S, 6S)-3-ACETAMIDO- 4,5-DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-12-OXODODECANOICO 689
[653] A hidrogenação foi conduzida conforme descrito anteriormente para gerar (689) (350 mg, 55%) ETAPA 6. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2S,3S,4S,5S)-5-ACETAMIDO-6-(2-(2-(2- (3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2-IL)OXI)-ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5- (12-OXO-12-((12-OXO-12-(PERFLUOROPHENOXI)-DODECIL)AMINO) DODECANAMIDO)BENZAMIDO)ETOXI)ETOXI)ETOXI)-2-(ACETOXIMETIL)-TETRAHIDRO- 2H-PIRAN-3,4-DIILA 690
[654] A formação de éster de PFP foi conduzida conforme descrito anteriormente para gerar o produto necessário (690) (112 mg, 23%). RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,12 (s, 1H), 8,91 (s, 1H), 8,65 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 8,52 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,14 (t, J = 1,4 Hz, 2H), 7,91 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,68 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 5,21 (d, J = 3,4 Hz,
2H), 4,97 (dd, J = 11,2, 3,4 Hz, 2H), 4,54 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,07 - 3,96 (m, 6H), 3,88 (dt, J = 11,2, 8,9 Hz, 2H), 3,81- 3,74 (m, 2H), 3,64- 3,36 (m, 24H), 3,15 - 3,03 (m, 6H), 2,99 (q, J = 6,5 Hz, 2H), 2,76 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 2,31 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 2,10 (s, 6H), 1,99 (s, 7H), 1,89 (s, 7H), 1,76 (s, 6H), 1,70-1,53 (m, 3H), 1,47 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,40-1,10 (m, 29H). Massa (ESI+) m/z 839,7 (M+2H).
ESQUEMA 120 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 694
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2S,3S,4S,5S)-5-ACETAMIDO-6-(2-(2-(2- (3-((2-(2-(2-) (((3R,4R,5R,6R))-3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5-(2- (12-(BENZILOXI)-12-OXODODECANAMIDO)BENZAMIDO)ETOXI)ETOXI)ETOXI)-2- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 692
[655] Uma solução de ácido 2-((3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3- acetamido-4,5-diacetoxi-6-(acetoximetil)tetrahidro-2H- piran-2- il)oxi)etoxi)etoxi)etil)carbamoil)-5-((2-(2-(2-(((3S, 4S, 5S, 6S)-3-acetamido-4,5- diacetoxi -6-(acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)- etil)carbamoil)fenil)amino)-12-oxododecanoico (691) (1,0 g, 0,8 mmol), 12-
(trifluoroacetato de benziloxi)-12-oxododecan-1-amínio (676) (256 mg, 0,8 mmol), HBTU (341 mg, 0,9 mmol) e diisopropiletilamina (0,4 ml, 2,4 mmol) em diclorometano (20 ml) foi agitado de um dia para o outro à temperatura ambiente.
Mediante conclusão, a mistura de reação foi diluída com diclorometano (80 ml) e lavada com bicarbonato de sódio saturado (100 ml). A solução foi seca em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada em vácuo até a secura. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna sobre gel de sílica 60 (gradiente: 0 a 10% de metanol em diclorometano) para se obter o composto do título como um sólido incolor (0,8 g, 68%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE ÁCIDO 12-((3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-ACETAMIDO- 4,5-DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL) TETRAHIDRO -2H-PIRAN-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5-((2-(2-(2-(((3S, 4S, 5S, 6S)-3-ACETAMIDO- 4,5-DIACETOXI-6-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2- IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-12-OXODODECANOICO 693
[656] O composto 693 foi preparado usando condições semelhantes àquelas descritas no presente documento para uma conversão semelhante (450 mg, 60%).
ETAPA 3. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2S,3S,4S,5S)-5-ACETAMIDO-6-(2-(2-(2- (3-((2-(2-(2-) (((3R,4R,5R,6R))-3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5- (2-(12-OXO-12- (PERFLUOROFENOXI)DODECANAMIDO)ACETAMIDO)BENZAMIDO)ETOXI)ETOXI)ETOXI)- 2-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-3,4-DIILA 694
[657] O composto 694 foi preparado usando condições semelhantes àquelas descritas no presente documento para uma conversão semelhante (460 mg, 91%). Massa (ESI+) m/z 1537,8 (M+H).
ESQUEMA 121 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 695 SíNTESE DE TETRAACETATO DE (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((((((((5-(2-(10-(3 - ))-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-4-((((2-CIANOETOXI) (DIISOPROPILAMINO) FOSFANIL)-OXI)METIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10- OXODECANAMIDO) ACETAMIDO)-ISOFTALOIL)BIS(AZANEDIIL))BIS(ETANO-2,1- DIIL))BIS(OXI))BIS(ETANO-2,1-DIIL))BIS(OXI))- BIS (ETANO-2,1- DIIL))BIS(OXI))BIS(5-ACETAMIDO-2-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-6,3,4- TRIIL) 695
[658] Para uma solução de diacetato de (2S,3S,4S,5S)-5- acetamido-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-acetamido-4,5-diacetoxi-6- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-2-il)oxi)etoxi)etoxi)-etil)carbamoil)-5-(2-(10-(3- ((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-(hidroximetil)-3,4-dimetilpirrolidin-1-il)- 10-oxodecanamido) acetamido) benzamido)-etoxi)etoxi)etoxi)-2- (acetoximetil)tetrahidro-2H-piran-3,4-diila (672) (1,6 g, 0,9 mmol) e diisopropiletilamina (0,4 ml, 1,8 mmol) em diclorometano anidro (25 ml) foi adicionado 2-Cianoetil N,N-diisopropilclorofosforamidita (0,3 ml, 1,35 mmol). A solução foi agitada a temperatura ambiente por 75 minutos. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (gradiente: 0 a 10% de MeOH em DCM (0,1% de TEA)) para proporcionar o produto como um sólido incolor (1,1 g, 62%). RMN de 31P (400 MHz, DMSO-d6): δ 146,76 (s), 146,42 (s, 2 sinais sobrepostos), 146,34 (s). RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,20 (s, 1H),
8,54 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 8,17 - 8,09 (m, 3H), 7,94 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,39 - 7,26 (m, 4H), 7,26 - 7,17 (m, 6H), 6,91- 6,83 (m, 4H), 5,21 (d, J = 3,4 Hz, 2H), 4,97 (dd, J = 11,2, 3,4 Hz, 2H), 4,54 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,02 (s, 6H), 3,93 - 3,82 (m, 4H), 3,73 (s, 10H), 3,66 - 3,36 (m, 35H), 3,28 - 3,06 (m, 6H), 3,06 - 2,87 (m, 3H), 2,72- 2,63 (m, J = 11,5, 5,8 Hz, 2H), 2,10 (m, 12H), 1,99 (s, 6H), 1,89 (s, 6H), 1,77 (s, 6H), 1,47 (d, J = 7,2 Hz, 4H), 1,23 (dq, J = 13,9, 6,4 Hz, 18H), 1,17-1,04 (m, 10H), 0,98 (dt, J = 13,4, 5,9 Hz, 10H).
ESQUEMA 122 PREPARAÇÃO DO COMPOSTO 696
ETAPA 1. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2S,3S,4S,5S)-5-ACETAMIDO-6-(2-(2-(2- (3-((2-(2-(2-(((3R, 4R, 5R, 6R)-3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5-(2- (12-((10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4- DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECIL)AMINO)DODECANAMIDO) ACETAMIDO)BENZAMIDO)ETOXI)ETOXI)ETOXI)-2-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H- PIRAN-3,4-DIILA 6 95
[659] O composto 695 foi preparado usando condições semelhantes àquelas descritas no presente documento para uma conversão semelhante (1,9 g, 61%).
ETAPA 2. PREPARAÇÃO DE DIACETATO DE (2S,3S,4S,5S)-5-ACETAMIDO-6-(2-(2-(2- (3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETIL)CARBAMOIL)-5-(2- (12-((10-(3-((BIS(4-METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-4-(HIDROXIMETIL)-3,4- DIMETILPIRROLIDIN-1-IL)-10-OXODECIL)AMINO)DODECANAMIDO) ACETAMIDO)BENZAMIDO)ETOXI)ETOXI)ETOXI)-2-(ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H- PIRAN-3,4-DIILA 696
[660] O composto 96 foi preparado usando condições semelhantes às descritas no presente documento para uma conversão semelhante (1,35 g, 65%). RMN de 31P (400 MHz, DMSO-d6):  1 46,79 (s), 146,76 (s), 146,42 (s), 146,36 (s). RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,19 (s, 1H), 8,54 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 8,13 (dd, J = 6,1, 3,5 Hz, 3H), 7,94 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 7,71- 7,65 (m, 1H), 7,39 - 7,25 (m, 4H), 7,25 - 7,17 (m, 4H), 6,92- 6,83 (m, 4H), 5,21 (d, J = 3,4 Hz, 2H), 4,97 (dd, J = 11,2, 3,4 Hz, 2H), 4,54 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 4,07 - 3,97 (m, 6H), 3,94- 3,82 (m, 4H), 3,82- 3,74 (m, 2H), 3,73
(s, 6H), 3,62- 3,45 (m, 23H), 3,42 (m, 6H), 3,27 - 2,92 (m, 14H), 2,73 - 2,62 (m, 2H), 2,10 (s, 8H), 1,99 (s, 9H), 1,89 (s, 6H), 1,77 (s, 6H)), 1,52- 1,42 (m, 6H), 1,22 (d, J = 8,0 Hz, 24H), 1,17 (t, J = 7,3 Hz, 11H), 1,09 (dt, J = 6,7, 3,3 Hz, 9H), 1,03-0,92 (m, 9H).
ESQUEMA 123 SÍNTESE GERAL DE CONJUGADOS DA FÓRMULA I COM OLIGONUCLEOTÍDEO ACOPLADO NA EXTREMIDADE 3’ (COMPOSTO 673)
MÉTODO GERAL PARA SINTETIZAR LIGANTES DE ALVEJAMENTO DE ASGPR BIDENTADOS A PARTIR DE LIGANTES DE SUCCINATO EXEMPLIFICADOS PARA ÁCIDO 4- ((1-(10-((2-((3,5-BIS) ((2-(2-(2-(2-(3R, 4R, 5R, 6R)-3-ACETAMIDO-4,5-DIACETOXI-6- (ACETOXIMETIL)TETRAHIDRO-2H-PIRAN-2-IL)OXI)ETOXI)ETOXI)ETOXI)- ETIL)CARBAMOIL)FENIL)AMINO)-2-OXOETIL)AMINO)-10-OXODECANOIL)-4-((BIS(4- METOXIFENIL)(FENIL)METOXI)METIL)-3,4-DIMETILPIRROLIDIN-3-IL) METOXI)-4- OXOBUTANOICO 673
[661] O succinato foi carregado em 1000Å LCAA (aminoalquila de cadeia longa) CPG (vidro de poro de controle) usando química de acoplamento de amida padrão. LCAA CPG (2,0 g) foi suspenso em DCM (5 ml) e MeCN (7,6 ml). Diisopropilcarbodiimida (100 µl), N-hidroxi succinimida (110 µl, 30 µM/g), piridina (110 µl) e 656 (200 mg, 0,1 mmol) foram adicionados e a suspensão foi suavemente misturada durante 16 h à TA. O CPG foi recuperado por filtração, lavado com DCM (x 3) e MeCN (x 3) e seco sob alto vácuo. Uma solução de 5% de anidrido acético/5% de N-metilimidazol/5% piridina em THF foi adicionada e a suspensão agitada à TA durante 2 h. O CPG foi recuperado por filtração, lavado com DCM (x 3) e MeCN (x 3) e seco sob alto vácuo. O carregamento foi determinado em 31,3 µmol/g (Ensaio DMTr por UV/Vis 504 nm). O suporte sólido de CPG carregado com GalNAc resultante foi empregado na síntese automática de oligonucleotídeos usando procedimentos padrão. A desproteção de nucleotídeos seguida de remoção do suporte sólido (com desproteção de acetato de galactosamina concorrente) proporcionou o conjugado GalNAc- oligonucleotídeo 673.
EXEMPLOS 27A-27I
[662] Usando o procedimento geral ilustrado no Esquema 123, os seguintes conjugados (27a-27i) foram preparados, em que R3 é o siRNA de TTR modificado descrito na Tabela A abaixo.
EXEMPLO 27A
[663] MS (+VE) calculado: 8184,7; medido: 8184,2 EXEMPLO 27B
[664] MS (+VE) calculado: 8212,7; medido: 8211,9
EXEMPLO 27C
[665] MS (+VE) calculado: 8212,7; medido: 8212,8 EXEMPLO 27D
[666] MS (+VE) calculado: 8096,6; medido: 8097,0 EXEMPLO 27E
[667] MS (+VE) calculado: 8499,0; medido: 8498,7
EXEMPLO 27F
[668] MS (+VE) calculado: 8284,7; medido: 8283,8 EXEMPLO 27G
[669] MS (+VE) calculado: 7596,0; medido: 7596,8
EXEMPLO 27H
EXEMPLO 27I
[670] Esquema 124 e 125 Síntese Geral de Conjugados da Fórmula I com Oligonucleotídeo Acoplado na Extremidade 5’ (Composto 698)
[671] Ésteres de pentafluorofenil foram acoplados a um modificador C6 5'-amino com ligação de fosfato/fosforotioato no oligonucleotídeo de filamento sentido usando condições de acoplamento padrão. A clivagem e desproteção padrão proporcionaram o conjugado de filamento sentido desejado. Por exemplo, o éster pentafluorofenílico 681 foi usado para produzir o conjugado 698 abaixo (Esquema 124).
[672] Fosforamiditas foram acopladas à hidroxila 5’ do nucleotídeo terminal do filamento sentido usando química de acoplamento de fosforamidita padrão.
A clivagem e desproteção padrão proporcionaram o conjugado de filamento sentido desejado.
Por exemplo, fosforamidita 695 foi usada para produzir o conjugado 699 abaixo (Esquema 125).
EXEMPLOS 27J-27K
[673] Usando o procedimento geral ilustrado no Esquemas 124 e 125, os seguintes conjugados (27j-27k) foram preparados, em que R3 é o siRNA de TTR modificado descrito na Tabela A abaixo.
EXEMPLO 27J
[674] MS (+VE) calculado: 8056,7; medido: 8056,1 EXEMPLO 27K
[675] MS (+VE) calculado: 8254,0; medido: 8253,5 EXEMPLO 28 TESTE IN VIVO DE CONJUGADOS DE TTR SIRNA CO-ADMINISTRADOS
COM MICELA DE POLÍMERO
[676] O conjugado do Exemplo 27d, em que o símboloR 3 representa a TTR siRNA modificado descrito na Tabela 28-1 abaixo (o ligando) foi testado para actividade in vivo num modelo de ratinho de tipo selvagem de TTR knockdown. O Ligante é um possível tratamento para a doença órfã da amiloidose TTR (Transtiretina). A inclusão de um polímero desestabilizador de membrana da fórmula:
com o Ligante foi encontrado para aumentar a liberação endossômica do conjugado após a captação celular pelos hepatócitos. Naqueles que sofrem de amiloidose TTR, o dobramento incorreto e a agregação da proteína transtirretina são conhecidos por estarem associados à progressão da doença. Ao usar o Ligante combinado com o polímero desestabilizador de membrana, a quantidade de misfolded/aggregated a proteína no paciente pode ser reduzida com um possível resultado de travar a progressão da doença.
TABELA 28-1. DUPLEXES DE SIRNA DE TTR QUIMICAMENTE MODIFICADO Filamento sentido Filamento antissentido 5’ – 3’ 5’ -3’ AsasCaGuGuUCUuGcUcUaUaA nos saLLLum umLc agaUmacac gLLususu (ID SEQ NO:2) (SEQ IDNO:1) Nucleotídeos de 2'-O-Metila = minúsculas; nucleotídeos de 2'- Fluoro = MAIÚSCULAS; Aglutinante de fosforotioato = s; Não modificado =
MAIÚSCULAS
[677] Tanto a sequência de siRNA de TTR & modelo animal foram descritos por Nair et al. Geléia. Chem. Soc., 2014, 136 (49), pp 16958-16961.
Todos os procedimentos relacionados a animais foram conduzidos de acordo com procedimentos operacionais escritos, de acordo com as Diretrizes de Boas Práticas para Animais do Conselho Canadense de Cuidado de Animais (CCAC) e aprovadas pelo Comitê Institucional de Uso e Cuidado de Animais (IACUC) local.
[678] Tratamento: Três grupos de mulheres C57BL/6 ratos (n = 4) foram administrados um único 0,35 mg/kg dose do ligando combinada com 10 mg/kg, 20 mg/kg ou 30 mg/kg do polímero uma vez no Dia 0 (1 dose por animal) por meio de injeção subcutânea na região escapular. Como controles, dois grupos de animais foram administrados a 1,8 mg/kg ou 0,35 mg/kg dose de Ligante apenas (sem polímero). Os animais administrados apenas com veículo (PBS) serviram como controle negativo.
[679] Coleções :Todos os animais foram sangrados em pontos de tempo definidos após a administração do artigo de teste (Dias 2, 5, 7, 14 e 21) para determinar as reduções máximas nos níveis de TTR no plasma e a duração da atividade farmacológica.
[680] Análise: Os níveis de proteína TTR em amostras de plasma foram determinados usando o kit de ELISA Abnova Prealbumin (Mouse) (Cedar Lane, número de catálogo KA2070) de acordo com as instruções do fabricante.
Os valores da proteína plasmática TTR foram calculados para as amostras de plasma individuais e a média de cada grupo foi determinada. A partir dessas médias, os níveis de proteína TTR em relação ao controle (% em relação aos animais tratados com PBS).
[681] Resultados: Os dados experimentais são apresentados na Tabela 28-2. Valores representam % Níveis de proteína TTR (em relação ao controle de PBS) nos dias 2, 5, 7, 14, 21 e 28 pós-tratamento.
[682] Conclusão: Animais tratados com Ligante combinado com tão pouco quanto 10 mg/kg de polímero exibiu um aumento acentuado no knockdown do mRNA alvo em comparação com o Ligante sozinho. Além disso, o início da atividade foi mais rápido na presença do polímero e a duração do efeito foi dramaticamente estendida. Camundongos tratados com polímero sozinho no 30º mg/kg dose não mostrou uma redução na proteína TTR em relação ao PBS.
[683] Níveis de proteína TTR no plasma em camundongos após administração subcutânea única de Ligante da Tabela 28-1, na presença ou ausência de várias quantidades de polímero.
DADOS DA PROTEÍNA TTR EXPRESSOS COMO PORCENTAGEM DOS VALORES DE CAMUNDONGOS TRATADOS COM PBS. Dose Ligante mg/kg Dose de Polímero (mg/kg) Dia 2 Dia 5 Dia 7 Dia 14 Dia 21 Dia 28 1,8 0 28,2 13,9 14,2 29,5 46,7 65,6 0,35 0 59,0 49,1 49,8 66,4 87,0 94,7 0,35 10 14,4 7,6 7,8 16,0 41,6 54,1 0,35 20 6,9 2,5 2,3 2,6 4,7 11,4 0,35 30 9,8 3,0 2,7 3,4 7,8 12,8 0 30 84,6 110,3 102,6 97,3 89,3 84,5 EXEMPLO 29. TITULAÇÃO DA DOSE DO LIGANTE DO EXEMPLO 28 CO-ENTREGUE POR
VIA SUBCUTÂNEA COM UM POLÍMERO DESESTABILIZADOR DE MEMBRANA
[684] O ligante do Exemplo 28 foi testado quanto à atividade in vivo em um modelo de camundongo de tipo selvagem de knockdown de TTR.
Um polímero da fórmula: foi co-entregue com o ligante.
[685] Tratamento : Camundongos C57BL/6 Fêmea (n = 3) foram tratados como uma dose única por via subcutânea (região escapular) com PBS, Ligante sozinho (dosado a 2,5 mg/kg, 0,50 mg/kg, e 0,05 mg/kg de conjugado), e Ligante combinado com polímero (conjugado dosado a 0,50 mg/kg ou 0,05 mg/kg e polímero dosado a 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg, ou 30 mg/kg).
[686] Coleções :Todos os animais foram sangrados em pontos de tempo definidos após a administração do artigo de teste (dias 1, 2, 6, 9, 14 e 21) para determinar as reduções máximas nos níveis de TTR no plasma e a duração da atividade farmacológica.
[687] Análise: Os níveis de proteína TTR em amostras de plasma foram determinados usando o kit de ELISA Abnova Prealbumin (Mouse) (Cedar
Lane, número de catálogo KA2070) de acordo com as instruções do fabricante.
Os valores da proteína plasmática TTR foram calculados para as amostras de plasma individuais e a média de cada grupo foi determinada. A partir dessas médias, os níveis de proteína TTR em relação ao controle (% em relação aos animais tratados com PBS).
[688] Resultados: Os dados experimentais são apresentados na Tabela 29-1. Valores representam % de Níveis de proteína TTR (em relação ao controle de PBS) nos dias 1, 2, 6, 9, 14 e 21 pós-tratamento.
[689] Conclusão: Animais tratados com o ligante combinado com ≥10 mg/kg do polímero exibiu um aumento acentuado no knockdown do mRNA alvo em relação aos animais tratados apenas com Ligando. A titulação do polímero demonstrou que uma dose de polímero de 10 mg/kg ou maior liberação endossômica aumentada, especialmente em doses mais baixas de conjugado (por exemplo, 0,05 mg/kg). Quando a dose de polímero é aumentada para 30 mg/kg, knockdown TTR semelhante foi observado entre 0,05 mg/kg e 0,50 mg/kg doses conjugadas. Início rápido da atividade e duração prolongada do efeito também foram observados.
[690] Níveis de proteína TTR no plasma em camundongos após administração subcutânea única de Ligante, na presença ou ausência de várias quantidades de polímero.
DADOS DA PROTEÍNA TTR EXPRESSOS COMO PORCENTAGEM DOS VALORES DE CAMUNDONGOS TRATADOS COM PBS.
Dose de Dose Ligante mg/kg Polímero Dia 1 Dia 2 Dia 6 Dia 9 Dia 14 Dia 21 (mg/kg) 2,5 0 52,1 8,8 5,1 6,8 0,05 0 102,6 74,8 90,8 99,0
Dose de Dose Ligante mg/kg Polímero Dia 1 Dia 2 Dia 6 Dia 9 Dia 14 Dia 21 (mg/kg) 0,05 0,3 106,2 100,8 93,0 92,5 0,05 1 93,5 92,6 73,5 92,3 0,05 3 103,7 78,9 82,3 94,3 0,05 10 60,8 12,8 26,0 30,6 0,05 30 25,3 3,3 2,0 2,4 0,50 0 77,1 41,3 32,5 44,6 56,2 79,7 0,50 0,3 92,9 30,9 29,2 38,8 51,1 79,4 0,50 1 77,5 33,2 26,7 41,1 43,0 67,3 0,50 3 70,3 16,6 18,6 28,0 38,9 65,0 0,50 10 30,5 3,1 2,4 5,1 3,0 16,8 0,50 30 26,3 3,2 2,0 2,4 1,7 1,8
[691] Todas as publicações, patentes e documentos de patentes são incorporados a título referência no presente documento, como se fossem individualmente incorporados a título de referência. A invenção foi descrita com referência a várias modalidade e técnicas específicas e preferenciais. No entanto, deve ser entendido que muitas variações e modificações podem ser feitas enquanto se mantém abrangido no espírito e o escopo da invenção.

Claims (238)

REIVINDICAÇÕES
1. MÉTODO PARA ENTREGAR UM ÁCIDO NUCLEICO A UMA CÉLULA caracterizado por compreender colocar a célula em contato com 1) um polímero desestabilizador de membrana; e 2) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X): A-B-C (X) em que: A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico; em que o polímero desestabilizador de membrana é um polímero de fórmula (XX): T5-L-[PEGMAm-M2n]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w (XX) em que: PEGMA é resíduo de metacrilato de polietilenoglicol com 2 a 20 unidades de etilenoglicol; M2 é um resíduo de metacrilato selecionado a partir do grupo que consiste em um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato; um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato ramificado; um resíduo de metacrilato de colesterila; um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato substituído por um ou mais átomos de flúor; e um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato ramificado substituído por um ou mais átomos de flúor; BMA é resíduo de metacrilato de butila; PAA é resíduo de ácido propil-acrílico; DMAEMA é resíduo de metacrilato de dimetilaminoetila; m e n são, cada um, uma fração molar maior que 0, em que m é maior que n e m+n=1; q é uma fração molar de 0,2 a 0,75; r é uma fração molar de 0,05 a 0,6; s é uma fração molar de 0,2 a 0,75; q + r + s = 1; v é 1 a 25 kDa; W é 1 a 25 kDa; T5 é uma porção química de alvejamento; e L está ausente ou é uma porção química de ligação.
2. MÉTODO PARA ENTREGAR UM ÁCIDO NUCLEICO AO CITOSOL DE UMA CÉLULA alvo dentro de um animal, sendo que o método é caracterizado por compreender: administrar, ao animal, (a) um polímero desestabilizador de membrana e (b) um conjugado de ácido nucleico de Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico, em que o ácido nucleico é entregue ao citosol da célula alvo; em que o polímero desestabilizador de membrana é um polímero da fórmula (XX): T5-L-[PEGMAm-M2n]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w (XX) em que: PEGMA é resíduo de metacrilato de polietilenoglicol com 2 a 20 unidades de etilenoglicol; M2 é um resíduo de metacrilato selecionado a partir do grupo que consiste em um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato; um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato ramificado; um resíduo de metacrilato de colesterila; um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato substituído por um ou mais átomos de flúor; e um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato ramificado substituído por um ou mais átomos de flúor; BMA é resíduo de metacrilato de butila; PAA é resíduo de ácido propil-acrílico; DMAEMA é resíduo de metacrilato de dimetilaminoetila; m e n são, cada um, uma fração molar maior que 0, em que m é maior que n e m+n=1; q é uma fração molar de 0,2 a 0,75; r é uma fração molar de 0,05 a 0,6; s é uma fração molar de 0,2 a 0,75; q + r + s = 1; v é 1 a 25 kDa; W é 1 a 25 kDa; T5 é uma porção química de alvejamento; e L está ausente ou é uma porção química de ligação.
3. MÉTODO caracterizado por compreender administrar, a um animal, 1) um polímero desestabilizador de membrana; e 2) um conjugado de ácido nucleico de Fórmula (X): A-B-C (X) em que A é um ligante de alvejamento, B é um aglutinante opcional e C é um ácido nucleico;
em que o polímero desestabilizador de membrana é um polímero da fórmula (XX):
T5-L-[PEGMAm-M2n]v-[DMAEMAq-PAAr-BMAs]w (XX)
em que:
PEGMA é resíduo de metacrilato de polietilenoglicol com 2 a 20 unidades de etilenoglicol;
M2 é um resíduo de metacrilato selecionado a partir do grupo que consiste em um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato; um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato ramificado;
um resíduo de metacrilato de colesterila;
um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato substituído por um ou mais átomos de flúor; e um resíduo de (C4-C18)alquil-metacrilato ramificado substituído por um ou mais átomos de flúor;
BMA é resíduo de metacrilato de butila;
PAA é resíduo de ácido propil-acrílico;
DMAEMA é resíduo de metacrilato de dimetilaminoetila;
m e n são, cada um, uma fração molar maior que 0, em que m é maior que n e m+n=1;
q é uma fração molar de 0,2 a 0,75;
r é uma fração molar de 0,05 a 0,6;
s é uma fração molar de 0,2 a 0,75;
q + r + s = 1;
v é 1 a 25 kDa;
W é 1 a 25 kDa;
T5 é uma porção química de alvejamento; e
L está ausente ou é uma porção química de ligação.
4. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo A ser um ligante de alvejamento que se liga especificamente a uma molécula na superfície da célula alvo.
5. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo T5 se ligar especificamente a uma molécula na superfície da célula alvo.
6. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracterizado pelo conjugado de ácido nucleico e o polímero desestabilizador de membrana serem administrados separadamente.
7. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracterizado pelo polímero desestabilizador de membrana ser administrado após a administração do conjugado de ácido nucleico.
8. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracterizado pelo conjugado de ácido nucleico e o polímero desestabilizador de membrana serem administrados juntos em uma única composição.
9. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo ligante de alvejamento e T5 serem diferentes e (i) se ligam especificamente à mesma molécula de superfície celular ou (ii) se ligam especificamente a uma molécula de superfície celular diferente na célula alvo.
10. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo ligante de alvejamento e T5 serem iguais e cada um se liga especificamente à mesma molécula de superfície celular.
11. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2 e 4 a 10, caracterizado pela célula ser uma célula secretora, um condrócito, uma célula epitelial, uma célula de nervo, uma célula de músculo, uma célula sanguínea, uma célula endotelial, um pericito, um fibroblasto, uma célula da glia ou uma célula dendrítica.
12. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a
2 e 4 a 10, caracterizado pela célula ser uma célula cancerosa, uma célula imune, uma célula infectada por bactérias, uma célula infectada por vírus ou uma célula que tem uma atividade metabólica anormal.
13. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo ligante de alvejamento se ligar especificamente a uma molécula de superfície celular selecionada a partir do grupo que consiste em receptor de transferrina do tipo 1, receptor de transferrina do tipo 2, o receptor de EGF, HER2/Neu, um receptor de VEGF, um receptor de PDGF, uma integrina, um receptor de NGF, CD2, CD3, CD4, CDS, CD19, CD20, CD22, CD33, CD43, CD38, CD56, CD69, o receptor de asialoglicoproteína (ASGPR), antígeno de membrana específico de próstata (PSMA), um receptor de folato e um receptor sigma.
14. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 13, caracterizado pelo T5 se ligar especificamente a uma molécula de superfície celular selecionada a partir do grupo que consiste em receptor de transferrina do tipo 1, receptor de transferrina do tipo 2, o receptor de EGF, HER2/Neu, um receptor de VEGF, um receptor de PDGF, uma integrina, um receptor de NGF, CD2, CD3, CD4, CDS, CD19, CD20, CD22, CD33, CD43, CD38, CD56, CD69, o receptor de asialoglicoproteína (ASGPR), antígeno de membrana específico de próstata (PSMA), um receptor de folato e um receptor sigma.
15. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo ligante de alvejamento compreender uma porção química de alvejamento de molécula pequena.
16. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pela porção química de alvejamento de molécula pequena ser um açúcar, uma vitamina, um bifosfonato ou um análogo do mesmo.
17. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo açúcar ser selecionado de lactose, galactose, N-acetil galactosamina
(NAG), derivados de N-acetil galactosamina e manose-6-fosfato (M6P).
18. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pela vitamina ser folato.
19. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo ligante de alvejamento compreender uma proteína.
20. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pela proteína ser um anticorpo, um aptâmero de peptídeo ou uma proteína derivada de um ligante natural da molécula de superfície celular.
21. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo ligante de alvejamento compreender um peptídeo.
22. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo peptídeo ser um peptídeo de ligação de integrina, um peptídeo de ligação de LOX-1, e peptídeo de fator de crescimento epidérmico (EGF), um peptídeo de neurotensina, um peptídeo NL4 ou um peptídeo de laminina YIGSR.
23. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1 a 2 e 4 a 22, caracterizado pela célula ser um hepatócito.
24. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo ligante de alvejamento se ligar especificamente ao receptor de asialoglicoproteína (ASGPR).
25. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo ligante de alvejamento compreender um resíduo de N-acetilgalactosamina (NAG).
26. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo M2 ser selecionado a partir do grupo que consiste em: resíduo de metacrilato de 2,2,3,3,4,4,4-heptafluorobutila, resíduo de metacrilato de 3,3,4,4,5,6,6,6-octafluoro- 5(trifluorometil)hexila, resíduo de 2-metilacrilato de 2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-
pentadecafluoro-octila,
resíduo de metacrilato de 3,3,4,4,5,5,6,6,6-nonafluoro-hexila,
resíduo de metacrilato de 3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-tridecafluoro,
resíduo de metacrilato de 1,1,1-trifluoro-2-(trifluorometil)-2-hidroxi-
4-metil-5-pentila, resíduo de metacrilato de 2-[(1',1',1'-trifluoro-2'-(trifluorometil)-
2'-hidroxi)propil]-3-norbornila,
resíduo de metacrilato de 2-etil-hexila,
resíduo de metacrilato de butila,
resíduo de metacrilato de hexila, resíduo de metacrilato de octila,
resíduo de metacrilato de n-decila,
resíduo de metacrilato de laurila,
resíduo de metacrilato de miristila,
resíduo de metacrilato de estearila,
resíduo de metacrilato de colesterila,
resíduo de metacrilato de éter fenílico de etilenoglicol,
ácido 2-propenoico, 2-metil-, resíduo de éster 2-feniletílico,
ácido 2-propenoico, 2-metil-, resíduo de éster 2-[[(I,I-
dimetiletoxi)carbonil]amino]etílico,
ácido 2-propenoico, 2-metil-, resíduo de éster 2-(IH-imidazol-l-
il)etílico,
ácido 2-propenoico, 2-metil-, resíduo de éster ciclo-hexílico,
ácido 2-propenoico, 2-metil-, resíduo de éster 2-[bis(I-
metiletil)amino]etílico,
ácido 2-propenoico, 2-metil-, resíduo de éster 3-metilbutílico,
resíduo de metacrilato de neopentila,
resíduo de metacrilato de terc-butila,
resíduo de metacrilato de 3,3,5-trimetil ciclo-hexila,
resíduo de metacrilato de 2-hidroxipropila, resíduo de metacrilato de 5-nonila, resíduo de metacrilato de 2-butil-l-octila, resíduo de metacrilato de 2-hexil-l-decila, e resíduo de metacrilato de 2-(terc-butil amino)etila.
27. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo PEGMA ter 4 a 5 unidades de etilenoglicol ou 7 a 8 unidades de etilenoglicol.
28. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo L compreender uma porção química de polietilenoglicol (PEG) com 2 a 20 unidades de etilenoglicol.
29. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo polímero desestabilizador de membrana ser um polímero de fórmula (XXI): (XXI), em que px é um número inteiro de cerca de 2 a cerca de 50, por exemplo, de cerca de 2 a cerca de 20, por exemplo, de 4 a 12, por exemplo, de cerca de 8 a cerca de 16, por exemplo, px é de cerca de 12, e py é um número inteiro de cerca de 2 a cerca de 20, por exemplo, py é um número inteiro de cerca de 2 a cerca de 10, por exemplo, py é um número inteiro de cerca de 4 a cerca de 5 (por exemplo, 4 ou 5).
30. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula (I):
(I) em que: R1 é um ligante de alvejamento; L1 está ausente ou é um grupo de ligação; L2 está ausente ou é um grupo de ligação; R2 é o ácido nucleico; o anel A está ausente, é uma cicloalquila com 3 a 20 membros, uma arila com 5 a 20 membros, uma heteroarila com 5 a 20 membros ou uma heterocicloalquila com 3 a 20 membros; cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 alquil-ORB, C1-10 alquila, C2- 10 alquenila e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquila, C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo, hidróxi e C1-3 alcóxi; RB é hidrogênio, um grupo protetor, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e n é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; ou um sal do mesmo.
31. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado por: R1 é um ligante de alvejamento; L1 está ausente ou é um grupo de ligação; L2 está ausente ou é um grupo de ligação; R2 é o ácido nucleico;
o anel A está ausente, é uma cicloalquila com 3 a 20 membros, uma arila com 5 a 20 membros, uma heteroarila com 5 a 20 membros ou uma heterocicloalquila com 3 a 20 membros; cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 alquil-ORB e C1-8 alquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo, hidróxi e C1-3 alcóxi; RB é hidrogênio, um grupo protetor, uma ligação covalente a um suporte sólido ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e n é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.
32. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo composto de fórmula (I) ser um composto da fórmula (Ia): (Ia) em que: cada D é independente selecionado a partir do grupo que consiste em e -N=.
33. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo composto de fórmula (I) ser um composto da fórmula (Ib): (Ib) em que: cada D é independente selecionado a partir do grupo que consiste em e -N=; e cada m é, independentemente, 1 ou 2;
34. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo composto de fórmula (I) ser um composto da fórmula (Ic): (Ic) em que: E é –O- ou -CH2-; n é um número inteiro selecionado a partir do grupo que consiste em 0, 1, 2, 3 e 4; e n1 e n2 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em 0, 1, 2 e 3.
35. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo composto de fórmula (I) ser um composto da fórmula (Ig): (Ig) em que: G é –N- ou -CH-; L2 é C1-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidroxila ou halo; e n é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7.
36. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a
29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula
(XXX):
(XXX)
em que:
R1 é um ligante de alvejamento;
L1 está ausente ou é um grupo de ligação;
L2 está ausente ou é um grupo de ligação; R2 é um ácido nucleico;
B é divalente e é selecionado a partir do grupo que consiste em:
em que: cada R’ é, independentemente, C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila; a valência marcada com * é fixada a L1 ou é fixada R1 se L1 estiver ausente; e a valência marcada com ** é fixada a L2 ou é fixada R2 se L2 estiver ausente.
37. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo composto da fórmula (I) ser selecionado a partir do grupo que consiste em:
em que: Q1 é hidrogênio e Q2 é R2; ou Q1 é R2 e Q2 é hidrogênio; e Z é –I^-R1.
38. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo composto da fórmula (I) ser selecionado a partir do grupo que consiste em: em que: Q1 é hidrogênio e Q2 é R2; ou Q1 é R2 e Q2 é hidrogênio; e Z é –I^-R1.
39. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo composto da fórmula (I) ser selecionado a partir do grupo que consiste em:
em que: Z é –iA-R1.
40. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo composto da fórmula (I) ser selecionado a partir do grupo que consiste em: ; em que Q é –iA-R1; e R’ é C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila.
41. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo composto da fórmula (I) ser selecionado a partir do grupo que consiste em: ; em que Q é –I^-R1.
42. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 31, caracterizado pelo A está ausente, é fenila, pirrolidinila ou ciclopentila.
43. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 a 35, caracterizado por cada RA ser, independentemente, hidróxi ou C1-8 alquila que é opcionalmente substituída por hidroxila.
44. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 34 a 35, caracterizado por cada RA ser selecionado independentemente a partir do grupo que consiste em hidroxila, metila e -CH2OH.
45. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 44, caracterizado pelo L1 estar conectado a R1 por meio de -NH-, -O-, -S-, - (C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O)-, -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH- ou –NH-(SO2)-.
46. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 44, caracterizado pelo L1 ser selecionado a partir do grupo que consiste em:
47. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 44, caracterizado pelo L1 ser selecionado a partir do grupo que consiste em:
48. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 44, caracterizado pelo L1 ser selecionado a partir do grupo que consiste em: .
49. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 44, caracterizado pelo L1 estar conectado a B1 por meio de uma ligação selecionada a partir do grupo que consiste em: -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, - NH-(C=O), -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH- ou –NH-(SO2)-.
50. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 44, caracterizado pelo L1 ser selecionado a partir do grupo que consiste em:
51. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 50, caracterizado pelo L2 estar conectado a R2 por meio de -O-.
52. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 50, caracterizado pelo L2 ser C1-4 alquileno-O- que é opcionalmente substituído por hidróxi.
53. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 50, caracterizado pelo L2 ser –CH2O-, -CH2CH2O- ou -CH(OH)CH2O-.
54. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 50, caracterizado pelo L2 ser –CH2-O- ou –CH2-CH2-O-.
55. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 50, caracterizado pelo L2 estar ausente.
56. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 44, caracterizado pelo L1 e L2 serem, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-
C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
57. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 44, caracterizado pelo L1 e L2 serem, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1- C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
58. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 44, caracterizado pelo L1 e L2 serem, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 14 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1- C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
59. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo ligante de alvejamento R1 compreender 3 a 8 sacarídeos.
60. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo ligante de alvejamento R1 compreender 3 a 6 sacarídeos.
61. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo ligante de alvejamento R1 compreender 3 a 4 sacarídeos.
62. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo ligante de alvejamento R1 compreender 3 sacarídeos.
63. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo ligante de alvejamento R1 compreender 4 sacarídeos.
64. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo ligante de alvejamento R1 ter a seguinte fórmula: em que: B1 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e é covalentemente ligado a L1, T1 e T2.
B1 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e é covalentemente ligado a T1, T3 e T4; B1 é um grupo trivalente que compreende cerca de 1 a cerca de 20 átomos e é covalentemente ligado a T2, T5 e T6; T1 está ausente ou é um grupo de ligação; T2 está ausente ou é um grupo de ligação; T3 está ausente ou é um grupo de ligação; T4 está ausente ou é um grupo de ligação; T5 está ausente ou é um grupo de ligação; e T6 está ausente ou é um grupo de ligação.
65. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado por um dentre T1 e T2 estar ausente.
66. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado por tanto T1 quanto T2 estarem ausentes.
67. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado por cada um dentre T1, T2, T3, T4, T5 e T6 ser, independentemente, ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou não saturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1- C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
68. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado por cada um dentre T1, T2, T3, T4, T5 e T6 ser, independentemente, ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou não saturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1- C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo (=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
69. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado por cada um dentre T1, T2, T3, T4, T5 e T6 ser, independentemente, ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou não saturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por – O- ou -NRX-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de halo, hidróxi e oxo (=O).
70. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado por cada um dentre T1, T2, T3, T4, T5 e T6 ser, independentemente, ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou não saturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O- e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de halo, hidróxi e oxo (=O).
71. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado por cada um dentre T1, T2, T3, T4, T5 e T6 ser, independentemente, ausente ou uma cadeia de hidrocarboneto ramificada ou não ramificada, saturada ou não saturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O- e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de halo, hidróxi e oxo (=O).
72. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 66, caracterizado por pelo menos um dentre T3, T4, T5e T6 ser: em que: n = 1, 2, 3.
73. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 66, caracterizado por cada um dentre T3, T4, T5e T6 ser independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em: em que: n = 1, 2, 3.
74. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado por pelo menos um dentre T1 e T2 ser glicina.
75. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 64, caracterizado por cada um dentre T1 e T2 ser glicina.
76. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 ser um grupo trivalente compreendendo 1 a 15 átomos e está covalentemente ligado a L1, T1 e T2.
77. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 ser um grupo trivalente compreendendo 1 a 10 átomos e está covalentemente ligado a L1, T1e T2.
78. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 compreender uma (C1-C6)alquila.
79. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 compreender uma C3-8 cicloalquila.
80. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 compreender um grupo silila.
81. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 compreender um D- ou L-aminoácido.
82. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 compreender um sacarídeo.
83. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 compreender um grupo fosfato.
84. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 compreender um grupo fosfonato.
85. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 compreender uma arila.
86. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 compreender um anel de fenila.
87. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 ser um anel de fenila.
88. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 ser CH.
89. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 compreender uma heteroarila.
90. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 75, caracterizado pelo B1 ser:
91. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 ser um grupo trivalente compreendendo 1 a 15 átomos e está covalentemente ligado a T1, T3e T4.
92. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 ser um grupo trivalente compreendendo 1 a 10 átomos e está covalentemente ligado a T1, T3e T4.
93. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 compreender uma (C1-C6)alquila.
94. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 compreender uma C3-8 cicloalquila.
95. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 compreender um grupo silila.
96. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 compreender um D- ou L-aminoácido.
97. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 compreender um sacarídeo.
98. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 compreender um grupo fosfato.
99. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 compreender um grupo fosfonato.
100. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 compreender uma arila.
101. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 compreender um anel de fenila.
102. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 ser um anel de fenila.
103. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 ser CH.
104. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 compreender uma heteroarila.
105. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 90, caracterizado pelo B2 ser selecionado a partir do grupo que consiste em: .
106. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 ser um grupo trivalente compreendendo 1 a 15 átomos e está covalentemente ligado a T2, T5e T6.
107. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 ser um grupo trivalente compreendendo 1 a 10 átomos e está covalentemente ligado a T2, T5 e T6.
108. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 compreender uma (C1-C6)alquila.
109. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 compreender uma C3-8 cicloalquila.
110. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 compreender um grupo silila.
111. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 compreender um D- ou L-aminoácido.
112. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 compreender um sacarídeo.
113. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 compreender um grupo fosfato.
114. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 compreender um grupo fosfonato.
115. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 compreender uma arila.
116. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 compreender um anel de fenila.
117. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 ser um anel de fenila.
118. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 ser CH.
119. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 compreender uma heteroarila.
120. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 64 a 105, caracterizado pelo B3 ser selecionado a partir do grupo que consiste em: .
121. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo R1 ser: .
122. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo R1 ser: em que: G é –NH- ou –O-; RC é hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)haloalquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C6)alcanoíla, (C3-C20)cicloalquila, (C3-C20)heterociclo, arila, heteroarila, monossacarídeo, dissacarídeo ou trissacarídeo; e em que a cicloalquila, heterociclo, arila, heteroarila e sacarídeo são opcionalmente substituídos por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, carboxila, hidroxila, amino, (C1-C4)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1- C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi.
123. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 122, caracterizado pelo RC ser: .
124. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 122, caracterizado pelo RC ser:
125. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo R1 ser: .
126. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 122 a 125, caracterizado pelo G ser –NH-.
127. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo R1 ser: .
128. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo R1 ser:
em que cada RD é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C6)alquila, (C9-C20)alquilsilila, (RW)3Si-, (C2-C6)alquenila, tetra-hidropiranila, (C1-C6)alcanoíla, benzoíla, aril(C1- C3)alquila, TMTr (Trimetoxitritila), DMTr (Dimetoxitritila), MMTr (Monometoxitritila) e Tr (Tritila); e cada RW é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em (C1-C4)alquila e arila.
129. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo R1 ser selecionado a partir do grupo que consiste em: em que:
RS é ; n é 2, 3 ou 4; e x é 1 ou 2.
130. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 a 58, caracterizado pelo R1 ser –C (H)(3-p)(L3-sacarídeoa)p, em que cada L3 é, independentemente, um grupo de ligação; p é 1, 2 ou 3; e o sacarídeoa é um monossacarídeo ou dissacarídeo.
131. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 130, caracterizado por cada L3 ser, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 0 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, - NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1- C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais substituintes selecionados a partir de (C1-C6)alcóxi, (C3- C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1-C6)alcoxicarbonila, (C1- C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
132. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 130, caracterizado por cada L3 ser, independentemente, uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, - NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1- C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1-
C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
133. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 130, caracterizado pelo L3 ser: .
134. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 59 a 120, caracterizado por cada sacarídeo ser independentemente: em que: X é NR3, e Y é selecionado a partir de -(C=O)R4, -SO2R5, e - (C=O)NR6R7; ou X é -(C=O)- e Y é NR8R9; R3 é hidrogênio ou (C1-C4)alquila; R4, R5, R6, R7 , R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C 1-C8)alquila, (C1- C8)haloalquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C1-C4)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1-C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi; R10 é -OH, -NR8R9 ou – F; e R11 é -OH, -NR8R9, -F ou heterociclo com 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino,
(C1-C4)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1-C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi.
135. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 59 a 120, caracterizado por cada sacarídeo ser independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em:
136. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 59 a 120, caracterizado por cada sacarídeo ser independentemente:
137. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 136, caracterizado pelo T5 ser: em que: X é NR3, e Y é selecionado a partir de -(C=O)R4, -SO2R5 e - (C=O)NR6R7; ou X é -(C=O)- e Y é NR8R9; R3 é hidrogênio ou (C1-C4)alquila; R4, R5, R6, R7 , R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C 1-C8)alquila, (C1- C8)haloalquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C1-C4)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1-C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi; R10 é -OH, -NR8R9 ou – F; e R11 é -OH, -NR8R9, -F ou heterociclo com 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, (C1-C4)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1-C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi.
138. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 136, caracterizado pelo T5 ser selecionado a partir do grupo que consiste em: .
139. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 136, caracterizado pelo T5 ser:
140. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 130 a 133, caracterizado pelo sacarídeoa ser:
em que: X é NR3, e Y é selecionado a partir de -(C=O)R4, -SO2R5, e - (C=O)NR6R7; ou X é -(C=O)- e Y é NR8R9; R3 é hidrogênio ou (C1-C4)alquila; R4, R5, R6, R7 , R8 e R9 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C 1-C8)alquila, (C1- C8)haloalquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila que é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C1-C4)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1-C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi; R10 é -OH, -NR8R9 ou – F; e R11 é -OH, -NR8R9, -F ou heterociclo com 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, (C1-C4)alquila, (C1-C4)haloalquila, (C1-C4)alcóxi e (C1-C4)haloalcóxi.
141. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 130 a 133, caracterizado pelo sacarídeoa ser selecionado a partir do grupo que consiste em: .
142. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 130 a 133, caracterizado pelo sacarídeoa ser:
143. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo composto da fórmula (I) ser selecionado a partir do grupo que consiste em:
e .
144. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 30, , caracterizado pelo composto de fórmula (I) ser um composto da fórmula (Id): (Id) em que: R1d é selecionado a partir de: e
Xd é C2-10 alquileno; nd é 0 ou 1; R2d é um ácido nucleico; e R3d é H.
145. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 144, caracterizado pelo R1d ser: .
146. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 144, caracterizado pelo R1d ser: .
147. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 144 a 146, caracterizado pelo Xd ser C8alquileno.
148. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 144 a 146, caracterizado pelo nd ser 0.
149. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 144 a 148, caracterizado pelo R3d ser H.
150. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da fórmula (X) ser um composto da fórmula (I) que é selecionado a partir do grupo que consiste em:
.
151. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da fórmula (X) ser um composto da fórmula (I) que é selecionado a partir do grupo que consiste em:
.
152. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da fórmula (X) ser um composto da fórmula (I) que é selecionado a partir do grupo que consiste em:
e .
153. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da fórmula (I) que é:
154. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula (I): .
155. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula (I): .
156. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula (I):
157. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula (I): .
158. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula
(I): .
159. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula (I): .
160. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula
(I): .
161. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula (I): .
162. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula
(I):
163. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula (I): .
164. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula
(I): .
165. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula (I):
166. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula
(I): .
167. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula: em que: L1 está ausente ou é um grupo de ligação; L2 está ausente ou é um grupo de ligação; R2 é um ácido nucleico; o anel A está ausente, é uma cicloalquila com 3 a 20 membros, uma arila com 5 a 20 membros, uma heteroarila com 5 a 20 membros, ou uma heterocicloalquila com 3 a 20 membros;
cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 alquil-ORB, C1-10 alquila, C2- 10 alquenila e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquila, C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo, hidróxi e C1-3 alcóxi; RB é hidrogênio, um grupo protetor, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e n é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.
168. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula: em que: L2 está ausente ou é um grupo de ligação; R2 é um ácido nucleico; o anel A está ausente, é uma cicloalquila com 3 a 20 membros, uma arila com 5 a 20 membros, uma heteroarila com 5 a 20 membros, ou uma heterocicloalquila com 3 a 20 membros; cada RA é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 alquil-ORB, C1-10 alquila, C2- 10 alquenila e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquila, C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo, hidróxi e C1-3 alcóxi; RB é hidrogênio, um grupo protetor, uma ligação covalente a um suporte sólido, ou uma ligação a um grupo de ligação que é ligado a um suporte sólido; e n é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.
169. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula: .
170. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula:
.
171. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula: .
172. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da Fórmula (X) ser um composto da Fórmula: em que:
R1c é um sacarídeo;
L1c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 0 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto,
é opcionalmente substituída por um ou mais substituídos selecionados a partir de oxo (=O) e halo;
Bc é uma arila com 5 a 10 membros ou uma heteroarila com 5 a 10 membros, em que arila com 5 a 10 membros ou heteroarila com 5 a 10 membros é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidróxi, ciano,
trifluorometila, trifluorometóxi, (C1-C6)alquila, (C1-C6)alcóxi, (C1-
C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alcanoilóxi, (C3-C6)cicloalquila, e (C3-
C6)cicloalquil(C1-C6)alquila
L2c é uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 0 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou -S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto,
é opcionalmente substituída por um ou mais substituídos selecionados a partir de oxo (=O) e halo;
R2c é um sacarídeo;
L3c está ausente ou é um grupo de ligação;
Ac é uma cicloalquila com 3 a 20 membros, uma arila com 5 a 20 membros, uma heteroarila com 5 a 20 membros ou uma heterocicloalquila com
3 a 20 membros;
cada RAc é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, hidróxi, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 alquil-ORa, C1-10 alquila, C2- 10 alquenila e C2-10 alquinila; em que a C1-10 alquila, C2-10 alquenila e C2-10 alquinila são opcionalmente substituídas por Ac ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo, hidróxi e C1-3 alcóxi; nc é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; L4c está ausente ou é um grupo de ligação; R3c é um ácido nucleico; Rac é hidrogênio; e L5c é um grupo de ligação.
173. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo Bc ser uma arila com 5 a 10 membros.
174. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo Bc ser naftila ou fenila.
175. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo Bc ser fenila.
176. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo grupo: ser: .
177. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo Bc ser uma heteroarila com 5 a 10 membros.
178. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo Bc ser piridila, pirimidila, quinolila, isoquinolila, imidazolila, tiazolila, oxadiazolila ou oxazolila.
179. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo grupo: ser:
180. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo grupo: ser: .
181. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 180, caracterizado pelo L1c ser uma cadeia de hidrocarboneto divalente, não ramificada e saturada, que tem de 0 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, - C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais substituídos selecionados a partir de oxo (=O) e halo.
182. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 180, caracterizado pelo L1c ser uma cadeia de hidrocarboneto divalente, não ramificada e saturada, que tem de 0 a 12 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-C(=O)-, ou - C(=O)-NRX- , e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila.
183. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 180, caracterizado pelo L1c ser: –C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, –C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, –C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, ou –C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-.
184. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 183, caracterizado pelo L2c ser uma cadeia de hidrocarboneto divalente, não ramificada e saturada, que tem de 0 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, - C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto, é opcionalmente substituída por um ou mais substituídos selecionados a partir de oxo (=O) e halo.
185. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 183, caracterizado pelo L2c ser uma cadeia de hidrocarboneto divalente, não ramificada e saturada, que tem de 0 a 12 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-C(=O)-, ou - C(=O)-NRX- , e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila.
186. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 183, caracterizado pelo L2c ser: –C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, –C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, –C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, ou
–C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-.
187. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 186, caracterizado pelo R1c ser: em que: X é NR20 e Y é selecionado a partir de –(C=O)R21, -SO2R22, e – (C=O)NR23R24; ou X é –(C=O)- e Y é NR25R26; ou X é –NR37R38 e Y está ausente R20 é hidrogênio ou (C1-C4)alquila; R21, R22, R23, R24, R25 e R26 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C 1-C8)alquila, (C1- C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C 1- C4)alquila e (C1-C4)alcóxi; R27 é –OH, -NR25R26 ou –F; R28 é –OH, -NR25R26 ou –F; R29 é –OH, -NR25R26, -F, -N3, -NR35R36, ou heterociclo com 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, (C1-C4)alquila, arila e (C1-C4)alcóxi, em que qualquer (C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, e em que qualquer arila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, nitro, ciano, amino, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoíla, (C1- C8)alcoxicarbonila, (C1-C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-
C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoíla, (C1-C8)alcoxicarbonila, (C1-
C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
(C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi;
cada R35 e R36 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila,
em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo e (C1-C4)alcóxi; ou R35 e R36 tomados juntos com o nitrogênio aos quais os mesmos são fixados formam um anel de heteroarila com 5 a 6 membros, em que o anel de heteroarila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, arila e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer arila e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos R39;
cada R37 e R38 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoíla, (C1-
C8)alcoxicarbonila, (C1-C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-
C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoíla, (C1-C8)alcoxicarbonila, (C1-
C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
(C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi; ou R37 e R38 tomados juntos com o nitrogênio aos quais os mesmos são fixados formam um heterociclo com 5 a 8 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino,
oxo (=O), (C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi, em que qualquer (C1-C4)alquila e (C1-
C4)alcóxi é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo; e cada R39 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo.
188. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 186, caracterizado pelo R1c ser:
189. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 186, caracterizado pelo R1c ser: .
190. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 186, caracterizado pelo R1c ser:
191. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 186, caracterizado pelo R1c ser:
192. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 186, caracterizado pelo R2c ser: em que: X é NR20 e Y é selecionado a partir de –(C=O)R21, -SO2R22, e - (C=O)NR23R24; ou X é-(C=O)- e Y é NR25R26; ou X é -NR37R38 e Y está ausente R20 é hidrogênio ou (C1-C4)alquila; R21, R22, R23, R24, R25 e R26 são, cada um, independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C 1-C8)alquila, (C1- C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C 1-
C4)alquila e (C1-C4)alcóxi;
R27 é -OH, -NR25R26 ou -F;
R28 é -OH, -NR25R26 ou -F;
R29 é –OH, -NR25R26, -F, -N3, -NR35R36, ou heterociclo com 5 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
hidroxila, carboxila, amino, (C1-C4)alquila, arila e (C1-C4)alcóxi, em que qualquer
(C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
e em que qualquer arila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
hidroxila, nitro, ciano, amino, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoíla, (C1-
C8)alcoxicarbonila, (C1-C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-
C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoíla, (C1-C8)alcoxicarbonila, (C1-
C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo,
(C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi;
cada R35 e R36 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila,
em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo e (C1-C4)alcóxi; ou R35 e R36 tomados juntos com o nitrogênio aos quais os mesmos são fixados formam um anel de heteroarila com 5 a 6 membros, em que o anel de heteroarila é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, arila e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer arila e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos R39; cada R37 e R38 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em hidrogênio, (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoíla, (C1- C8)alcoxicarbonila, (C1-C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1- C8)alquila, (C1-C8)alcóxi, (C1-C8)alcanoíla, (C1-C8)alcoxicarbonila, (C1- C8)alcanoilóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, (C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi; ou R37 e R38 tomados juntos com o nitrogênio aos quais os mesmos são fixados formam um heterociclo com 5 a 8 membros que é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em halo, hidroxila, carboxila, amino, oxo (=O), (C1-C4)alquila e (C1-C4)alcóxi, em que qualquer (C1-C4)alquila e (C1- C4)alcóxi é opcionalmente substituído por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo; e cada R39 é independentemente selecionado a partir do grupo que consiste em (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila, em que qualquer (C1-C8)alquila, (C1-C8)alcóxi e (C3-C6)cicloalquila é opcionalmente substituída por um ou mais grupos independentemente selecionados a partir de halo.
193. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 186, caracterizado pelo R2c ser:
194. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
172 a 186, caracterizado pelo R2c ser: .
195. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 186, caracterizado pelo R2c ser:
196. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 186, caracterizado pelo R2c ser:
197. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 196, caracterizado pelo L3c ser uma cadeia de hidrocarboneto divalente,
ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, - NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1- C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1- C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
198. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 196, caracterizado pelo L3c ser uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, - NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1- C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1- C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
199. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 184 a 196, caracterizado pelo L3c ser uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 30 átomos de carbono, em que um ou mais dos átomos de carbono são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais halo ou oxo(=O).
200. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações
172 a 196, caracterizado pelo L3c ser:
201. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 196, caracterizado pelo L3c ser conectado a B por meio de -NH-, -O-, -S- , -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O)-, -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH-, ou –NH-(SO2)-.
202. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 201, caracterizado pelo L4c ser uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 0 a 50 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, -
NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1- C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1- C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
203. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 201, caracterizado pelo L4c ser uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 20 átomos de carbono, em que um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) dos átomos de carbono na cadeia de hidrocarboneto são opcionalmente substituídos por –O-, - NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1- C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4) substituintes selecionados a partir de (C1- C6)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, (C1-C6)alcanoíla, (C1-C6)alcanoilóxi, (C1- C6)alcoxicarbonila, (C1-C6)alquiltio, azido, ciano, nitro, halo, hidróxi, oxo(=O), carbóxi, arila, arilóxi, heteroarila e heteroarilóxi.
204. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 201, caracterizado pelo L4c ser uma cadeia de hidrocarboneto divalente, ramificada ou não ramificada, saturada ou insaturada, que tem de 1 a 30 átomos de carbono, em que um ou mais dos átomos de carbono são opcionalmente substituídos por –O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- ou –S-, e em que RX é hidrogênio ou (C1-C6)alquila, e em que a cadeia de hidrocarboneto é opcionalmente substituída por um ou mais halo ou oxo(=O).
205. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo grupo:
ser selecionado a partir do grupo que consiste em: em que cada R’ é, independentemente, C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila.
206. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo grupo: ser selecionado a partir do grupo que consiste em: em que: cada R’ é, independentemente, C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila; em que a C1-9 alquila, C2-9 alquenila ou C2-9 alquinila são opcionalmente substituídas por halo ou hidroxila; a valência marcada com * é fixada a L3c; e A valência marcada com ** é fixada a R3c.
207. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 172, caracterizado pelo grupo: ser: .
208. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 204, caracterizado pelo L4c estar ligado a R3c por meio de -O-.
209. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 204, caracterizado pelo R3c estar ligado ao restante do conjugado através do oxigênio de um fosfato da molécula de ácido nucleico.
210. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 204, caracterizado pelo R3c ser ligado ao restante do conjugado através do oxigênio de um fosfato na extremidade 5 'de uma fita senso ou antissenso.
211. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 204, caracterizado pelo R3c ser ligado ao restante do conjugado através do oxigênio de um fosfato na extremidade 3 'de uma fita senso ou antissenso.
212. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 172 a 204, caracterizado pelo R3c ser ligado ao restante do conjugado através do oxigênio de um fosfato na extremidade 3 'de uma fita senso.
213. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 29, caracterizado pelo composto da fórmula (X) ser selecionado a partir do grupo que consiste em:
214. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 213, caracterizado pelo ácido nucleico ser um siRNA.
215. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 214, caracterizado pelo siRNA estar ligado ao restante do composto de fórmula (X), através da extremidade 3’ de uma fita senso.
216. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 214, caracterizado pelo siRNA estar ligado ao restante do composto de fórmula (X), através da extremidade 5’ de uma fita senso.
217. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 214, caracterizado pelo siRNA estar ligado ao restante do composto de fórmula (X), através da extremidade 3’ de uma fita antissenso.
218. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 214, caracterizado pelo siRNA estar ligado ao restante do composto de fórmula (X), através da extremidade 5’ de uma fita antissenso.
219. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 214 a 218, caracterizado pelo siRNA estar ligado ao restante do composto de fórmula (X) através de um fosfato no siRNA.
220. COMPOSIÇÃO caracterizada por compreender: um conjugado de ácido nucleico de fórmula (X), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; um polímero desestabilizador de membrana , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29; e um carreador farmaceuticamente aceitável.
221. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 220, caracterizada por ser formulada para administração por injeção.
222. COMPOSIÇÃO, de acordo com a reivindicação 220, caracterizada por ser formulada para administração por injeção subcutânea.
223. MÉTODO PARA TRATAR UMA DOENÇA caracterizada pela superexpressão de um polipeptídeo, pelo fato de compreender a administração a um sujeito com a doença de uma quantidade terapeuticamente eficaz de (a) um conjugado de ácido nucleico de fórmula (X), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219, em que C é um resíduo de siRNA que alveja a expressão do polipeptídeo superexpresso, e (b) um polímero desestabilizador de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29.
224. MÉTODO PARA ENTREGAR UM SIRNA AO FÍGADO DE UM ANIMAL caracterizado por compreender a administração ao animal de um polímero desestabilizador de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29; e um conjugado de ácido nucleico de fórmula (X) , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; em que o ligante de alvejamento é selecionado para promover a entrega específica de hepatócitos do conjugado, e em que o ácido nucleico é o siRNA.
225. MÉTODO PARA TRATAR UMA INFECÇÃO VIRAL POR HEPATITE B EM UM ANIMAL caracterizado por compreender a administração ao animal de a) um conjugado de ácido nucleico de fórmula (X), conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; em que o ligante de alvejamento é selecionado para promover a entrega específica de hepatócito do conjugado, e em que o siRNA é útil para tratar a infecção viral por hepatite B; e b) um polímero desestabilizador de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29.
226. KIT caracterizado por compreender: 1) um polímero desestabilizador de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29; 2) um conjugado de ácido nucleico de Fórmula (X) , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; e 3) instruções para entregar um ácido nucleico a uma célula compreendendo o contato da célula com o conjugado de ácido nucleico e o polímero desestabilizador de membrana.
227. KIT caracterizado por compreender: 1) um polímero desestabilizador de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29; 2) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X) , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; e 3) instruções para entregar um ácido nucleico ao citosol de uma célula alvo dentro de um sujeito pela administração do conjugado de ácido nucleico e do polímero desestabilizador de membrana ao sujeito.
228. KIT, de acordo com a reivindicação 227, caracterizado pelo polímero desestabilizador de membrana ser um polímero, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29.
229. KIT caracterizado por compreender: 1) um polímero desestabilizador de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29; 2) um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X) , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; e 3) instruções para administrar o conjugado de ácido nucleico e o polímero desestabilizador de membrana a um animal.
230. POLÍMERO DESESTABILIZADOR DE MEMBRANA, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29; e um conjugado de ácido nucleico de Fórmula (X) , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; caracterizado por ser para uso em terapia médica.
231. CONJUGADO DE ÁCIDO NUCLEICO DE FÓRMULA (X), , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; caracterizado por ser para o tratamento profilático ou terapêutico de uma doença tratável com o ácido nucleico, em combinação com um polímero desestabilizador de membrana, , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29.
232. USO DE UM CONJUGADO de ácido nucleico da fórmula (X), como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; caracterizado por ser para preparar um medicamento para tratar uma doença tratável com o ácido nucleico, em combinação com um polímero desestabilizador de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29.
233. CONJUGADO DE ÁCIDO NUCLEICO DE FÓRMULA (X) , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; caracterizado por estar associado não covalentemente a um polímero desestabilizador de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29.
234. CONJUGADO DE ÁCIDO NUCLEICO DE FÓRMULA (X) , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; caracterizado por ser parcialmente ou totalmente encapsulado por uma micela que compreende uma pluralidade de polímeros desestabilizadores de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29.
235. CONJUGADO DE ÁCIDO NUCLEICO DE FÓRMULA (X) , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; caracterizado por ser parcialmente encapsulado por uma micela que compreende uma pluralidade de polímeros desestabilizadores de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29.
236. CONJUGADO DE ÁCIDO NUCLEICO DE FÓRMULA (X) , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; caracterizado por ser totalmente encapsulado por uma micela que compreende uma pluralidade de polímeros desestabilizadores de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29.
237. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA caracterizada por compreender um carreador farmaceuticamente aceitável e um conjugado de ácido nucleico da Fórmula (X) , como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 219; que é parcialmente ou totalmente encapsulada por uma micela que compreende uma pluralidade de polímeros desestabilizadores de membrana, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 26 a 29.
238. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 e 9 a 221, caracterizado pelo conjugado de ácido nucleico ser administrado após a administração do polímero desestabilizador de membrana.
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