KR20210120988A - 치료 방법 - Google Patents

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KR20210120988A
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compound
group
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alkoxy
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KR1020217016674A
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제임스 헤이스
리차드 제이. 홀랜드
아담 저지
키유 몽 람
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제네반트 사이언시즈 게엠베하
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Abstract

본 발명은 세포 또는 표적 세포의 사이토졸에 핵산을 전달하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 상기 방법은 상기 세포를 1) 막-불안정화 중합체; 및 2) 핵산 접합체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 상기 핵산 접합체는 선택적 링커에 결합된 표적화 리간드 및 핵산을 포함한다.

Description

치료 방법
관련 출원(들)에 대한 상호참조
본 특허 출원은 2018년 11월 2일자로 출원된 미국 특허 출원 일련번호 62/755,196의 우선권의 유익을 주장하며, 이 기초 출원은 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
표적화된 핵산 접합체는 생물학적 활성 핵산에 대한 효과적인 약물 전달 시스템이다(WO2017/177326 참조). 예컨대, 커다란 핵산 분자, 예컨대, 시험관내 전사된 메신저 RNA(mRNA)뿐만 아니라 메신저 RNA 또는 유전자와 상호작용하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 핵산에 기반한 약물은 효과적이 되도록 적절한 세포 구획으로 전달되어야 한다.
예를 들어, 이중 가닥 핵산, 예컨대, siRNA를 비롯한 이중 가닥 RNA 분자(dsRNA)는, 이들을 세포에 불투과성이 되게 하는 이들의 물리-화학적 특성을 겪는다. 적절한 구획 내로의 전달 시, siRNA는 RNA 간섭(RNAi)으로 알려진 고도로 보존된 조절 기전을 통해서 유전자 발현을 차단한다. 전형적으로, siRNA는 12 내지 17 kDa의 범위의 분자량을 갖는 크기가 크며, 최대 50개의 음전하를 가진 이들의 인산염 골격으로 인해 고도로 음이온성이다. 또한, 2개의 상보적인 RNA 가닥은 단단한 나선을 초래한다. 이들 특성은 siRNA의 불량한 "약물-유사" 특성에 기여한다. siRNA는, 정맥내 투여되는 경우, 단지 10분의 범위의 전형적인 반감기로 체내로부터 빠르게 배설된다. 게다가, siRNA는 혈액 및 기타 체액에 또는 조직에 존재하는 뉴클레아제에 의해 신속하게 분해되고, 시험관내 및 생체내에서 강력한 면역 반응을 자극시키는 것으로 제시된 바 있다. 예컨대, 문헌[Robbins et al., Oligonucleotides 19:89-102, 2009]을 참조한다. mRNA 분자는 불투과성, 취약성 및 면역원성의 유사한 문제를 겪는다.
적절한 화학적 변형의 도입으로 인해, 뉴클레아제를 향한 안정성은 증가될 수 있고 동시에 면역 자극이 억제될 수 있다. siRNA에 대한 소정의 리간드의 접합은 이중 가닥 RNA 분자의 약동학적 특징을 개선시킬 수 있다. 소정의 소분자 siRNA 접합체는 설치류의 간세포에서 발현된 유전자의 특정 하향조절에서 효과적임이 입증되었다. 그러나, 목적하는 생물학적 효과를 유도하기 위하여, 대용량이 필요로 된다. 문헌[Soutschek et al, Nature 432: 173-178, 2004]을 참조한다.
이전의 노력에도 불구하고, 세포에 핵산을 전달하기 위한 개선된 방법이 필요로 된다. 예를 들어, 역가를 개선시키고, 필요로 되는 용량을 저감시키고 그리고/또는 투여 빈도를 저감시키는 방법이 필요하다. 핵산을 피하에 전달하는데 사용될 수 있는 방법 및 제형이 또한 필요하다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 핵산을 세포에 전달하는 방법을 제공하되, 해당 방법은 세포를 1)　막-불안정화 중합체(membrane-destabilizing polymer); 및 2) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체와 접촉시키는 단계를 포함한다:
Figure pct00001
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 대상체 내 표적 세포의 사이토솔에 핵산을 전달하는 방법을 제공하되, 해당 방법은 대상체에게 (a) 막-불안정화 중합체 및 (b) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 투여하는 단계를 포함한다:
Figure pct00002
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이고, 여기서 핵산은 표적 세포의 사이토솔에 전달된다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 동물에게 1) 막-불안정화 중합체; 및 2) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다:
Figure pct00003
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 a) 약제학적으로 허용 가능한 담체, b) 막-불안정화 중합체; 및 c) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 포함하는 조성물을 제공한다:
Figure pct00004
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이다. 일 실시형태에 있어서 조성물은 주사에 의한 투여용으로 제형화된다. 일 실시형태에 있어서 조성물은 피하 주사에 의한 투여용으로 제형화된다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 펩타이드의 과발현을 특징으로 하는 질환을 치료하는 방법을 제공하되, 해당 방법은 질환을 가진 동물에게 치료적 유효량의 (a) 막-불안정화 중합체; 및 b) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 투여하는 단계를 포함한다:
Figure pct00005
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 과발현된 폴리펩타이드의 발현을 표적으로 하는 siRNA이다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 동물의 간에 siRNA를 전달하는 방법을 제공하되, 해당 방법은 동물에게 (a) 중합체의 간세포-특이적 전달을 촉진시키기 위하여 선택된 표적화 모이어티(T5)를 포함하는 막-불안정화 중합체; 및 b) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 투여하는 단계를 포함한다:
Figure pct00006
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 siRNA이다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 동물에서 B형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 방법을 제공하되, 해당 방법은 동물에게 (a) 중합체의 간세포-특이적 전달을 촉진시키기 위하여 선택된 표적화 모이어티(T5)를 포함하는 막-불안정화 중합체 및 (b) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 투여하는 단계를 포함한다:
Figure pct00007
식 중, A는 접합체의 간세포-특이적 전달을 촉진시키기 위하여 선택된 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 B형 간염 바이러스 감염을 치료하는데 효과적인 siRNA이다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 1) 막-불안정화 중합체; 2) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체; 및 3) 세포를 핵산 접합체 및 막-불안정화 중합체를 세포와 접촉시키는 것을 포함하는 세포에 핵산을 전달하기 위한 설명서를 포함하는 키트를 제공한다:
Figure pct00008
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 1) 막-불안정화 중합체; 2) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체; 및 3) 대상체에게 핵산 접합체 및 막-불안정화 중합체를 투여함으로써 대상체 내의 표적 세포의 사이토솔에 핵산을 전달하기 위한 설명서를 포함하는 키트를 제공한다:
Figure pct00009
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 1) 막-불안정화 중합체; 2) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체 및 3) 동물에게 핵산 접합체 및 막-불안정화 중합체를 동물에게 투여하기 위한 설명서를 포함하는 키트를 제공한다:
Figure pct00010
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 의학 요법에서 사용하기 위한, 막-불안정화 중합체 및 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 제공한다:
Figure pct00011
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은, 막-불안정화 중합체와 조합하여, 핵산과 치료 가능한 질환의 예방적 또는 치료적 치료를 위한, 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 제공한다:
Figure pct00012
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은, 막-불안정화 중합체와 조합하여, 핵산과 치료 가능한 질환을 치료하기 위한, 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체의 용도를 제공한다:
Figure pct00013
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은, 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 제공한다:
Figure pct00014
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이고, 핵산 접합체는 막-불안정화 중합체와 비공유 회합된다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 제공한다:
Figure pct00015
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이고, 핵산 접합체는 복수의 막-불안정화 중합체를 포함하는 마이셀에 의해 부분적으로 또는 완전히 캡슐화된다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 제공한다:
Figure pct00016
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이고, 핵산 접합체는 복수의 막-불안정화 중합체를 포함하는 마이셀에 의해 부분적으로 캡슐화된다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 제공한다:
Figure pct00017
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이고, 핵산 접합체는 복수의 막-불안정화 중합체를 포함하는 마이셀에 의해 완전히 캡슐화된다.
일 실시형태에 있어서 본 발명은 약제학적으로 허용 가능한 담체, 및 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다:
Figure pct00018
식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이고, 핵산 접합체는 복수의 막-불안정화 중합체를 포함하는 마이셀에 의해 부분적으로 또는 완전히 캡슐화된다.
일 실시형태에 있어서, 본 발명은 치료용 핵산의 (예컨대, 간으로의) 전달을 표적화하는데 사용될 수 있는 화합물, 조성물 및 방법을 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 핵산 치료제의 간으로의 표적화된 전달을 위한 피하-투여 접합체 플랫폼에 대한 역가 증강제로서로서의 중합체 마이셀의 사용을 포함한다. 중합체 마이셀은 전형적으로 간세포로 전달되는 동안 온전히 유지되고, 예를 들어, 피하 투여 시, 그의 기능을 발휘한다. 유전자 침묵은 비히클 대조군에 비해서 표적 유전자의 발현의 저해 또는 저감을 측정함으로써 조사된다. 마우스에서 유리한 결과가 얻어졌는데, 여기서 막-불안정화 중합체와 핵산 접합체의 공동-투여는 역가를 약 5배만큼 증대시켰고, 더 신속한 작용 개시 및 더 긴 효과 지속 기간도 보였다.
본 발명의 기타 목적, 특성 및 이점은 이하의 상세한 설명 및 도면으로부터 당업자에게 명백해질 것이다.
막 불안정화 중합체
막 불안정화 중합체는 미국 특허 출원 공개 번호 US2010/0160216, US2010/0210504, US2011/0143434, US2011/0123636, US2016/0250338, US2017/0239360 및 US2016/0206750, 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO2009/140427, WO2009/140429, WO2015/017519 및 WO2016/118697에 기록되어 있다. 또한, 소정의 특정 막-불안정화 중합체의 합성에 대한 설명은 문헌[Prieve et al., Mol. Ther., 2018, 26, 3]의 보충 부문에서 발견할 수 있다.
일 실시형태에 있어서, 막 불안정화 중합체는 뚜렷이 다른 3개의 영역을 포함한다:
첫 번째로, 간세포 표적화는 간세포의 표면 상에 고도로 발현되는 ASGPr 수용체의 3개의 3가 도메인 중 하나와 상호작용하는 단일 N-아세틸갈락토스아민 단당류 단위와 같은 표적화 모이어티를 통해 달성될 수 있다. 이러한 단당류 단위는 중합체 사슬의 "헤드"를 형성한다. N-아세틸 갈락토스 아민(GalNAc 또는 NAG)은 에틸 카보노트라이티오에이트(ECT)에 커플링된 PEG12 아미노산 스페이서를 통해서 중합체의 제2 기능 도메인에 부착될 수 있다. 이것은 출발하는 "사슬이동제(chain transfer agent)" 또는 CTA를 나타낸다. 후속의 중합 반응은 완전 탈보호된 단당류 상에서 일어날 수 있다.
두 번째 "가용성" 또는 친수성 영역은 폴리에틸렌글리콜 메타크릴레이트 4-5(PEGMA 4-5)(번호 4 및 5는 단량체 내 에틸렌 글리콜 반복부의 수를 지칭함) 및 하이드록시에틸 메타크릴레이트(HMA)로 통상 75/25 PEGMA/HMA 부근의 비로 구성된다. 중합은 아조비스아이소부티로나이트릴(AIBN)로 개시된 자유-라디칼 중합 동안 생성된 분자량 및 다분산성에 대해서 제어를 허용하는 가역적 첨가-분절 사슬 이동(RAFT)을 이용해서 일어날 수 있다. 이 반응은 소정의 농도 및 온도에서 고정된 시간에 진행되어, 추가의 중합을 허용하는 말단 트라이티오카보네이트 작용기로 캐핑된 4kDa 부근의 친수성 중합체를 생성할 수 있다.
중합체의 세 번째 영역은 엔도솜 방출 작용기를 제공한다. 이것은 또한 RAFT 중합을 이용해서 합성될 수 있지만, 이 경우에, 반응에서의 단량체 단위는 (전형적으로 약 33%/55%/12%의 비로) 다이메틸아미노에틸 아크릴레이트(DMAEA), 부틸 메틸아크릴레이트(BMA) 및 프로필아크릴산(PAA)이다. 이 두 번째 중합 단계는 또 다른 5kDa 정도로 중합체를 연장시킨다. 중합 후에, 중합체 말단기(트라이티오카보네이트)는 라디칼 유도 반응에 의해 제거될 수 있고, 최종 중합체는 (MW 및 다분산성을 결정하기 위하여) 1H NMR, HPLC 및 GPC에 의해 특성규명되었다.
두 중합체 영역의 조합은 효능을 최대화시키는 것을 돕는다. 생리적 또는 중성 pH에서, 중합체는 전형적으로 중성이다. 또한 중성 pH에서, 제2 엔도솜 방출 영역은 소수성 특성을 나타낸다. 친수성 도메인을 가진 접합에서, 중합체가 수성 매체에서 임계 마이셀 농도(CMC)보다 높다면, 작은 마이셀 구조가 자발적으로 형성될 것이다. 이들은 적혈구 세포 용혈작용 검정에서 pH 반응성 막 불안정화 활성도를 갖는 것으로 나타났으며: CMC 미만에서, 용혈작용은 급격히 떨어진다. 세포내섭취 및 후속의 pH 감소 동안, 중합체는 양전하로 될 수 있고 결과적으로 엔도솜 방출을 촉진시킬 수 있다.
일 실시형태에 있어서, 막-불안정화 중합체는 하기 화학식 (XX)의 중합체이다:
Figure pct00019
식 중,
PEGMA는 2 내지 20개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는 폴리에틸렌글리콜 메타크릴레이트 잔기이고;
M2는
(C4-C18)알킬-메타크릴레이트 잔기;
(C4-C18)분지쇄 알킬- 메타크릴레이트 잔기;
콜레스테릴 메타크릴레이트 잔기;
1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 (C4-C18)알킬-메타크릴레이트 잔기; 및
1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 (C4-C18)분지쇄 알킬-메타크릴레이트 잔기
로 이루어진 군으로부터 선택된 메타크릴레이트 잔기이고;
BMA는 부틸 메타크릴레이트 잔기이고;
PAA는 프로필 아크릴산 잔기이고;
DMAEMA는 다이메틸아미노에틸 메타크릴레이트 잔기이고;
m 및 n은 각각 0 초과의 몰분율이되, 여기서 m은 n보다 크고, m+n은 1이고;
q는 0.2 내지 0.75의 몰분율이고;
r은 0.05 내지 0.6의 몰분율이고;
s는 0.2 내지 0.75의 몰분율이고;
q+r+s는 1이고;
v는 1 내지 25 kDa이고;
w는 1 내지 25 kDa이고;
T5는 표적화 모이어티(예컨대, 펩타이드, 중합체 또는 당류)이고; 그리고
L은 존재하지 않거나 또는 연결 모이어티이다.
일 실시형태에 있어서, M2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
2,2,3,3,4,4,4-헵타플루오로부틸 메타크릴레이트 잔기,
3,3,4,4,5,6,6,6-옥타플루오로-5(트라이플루오로메틸)헥실 메타크릴레이트 잔기,
2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-펜타데카플루오로옥틸 2-메틸아크릴레이트 잔기,
3,3,4,4,5,5,6,6,6-노나플루오로헥실 메타크릴레이트 잔기,
3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-트라이데카플루오로옥틸 메타크릴레이트 잔기,
1,1,1-트라이플루오로-2-(트라이플루오로메틸)-2-하이드록시-4-메틸-5-펜틸 메타크릴레이트 잔기, 2-[(1',1',1'-트라이플루오로-2'-(트라이플루오로메틸)-2'-하이드록시)프로필]-3-노보닐 메타크릴레이트 잔기,
2-에틸헥실 메타크릴레이트 잔기,
부틸 메타크릴레이트 잔기,
헥실 메타크릴레이트 잔기,
옥틸 메타크릴레이트 잔기,
n-데실 메타크릴레이트 잔기,
라우릴 메타크릴레이트 잔기,
미리스틸 메타크릴레이트 잔기,
스테아릴 메타크릴레이트 잔기,
콜레스테릴 메타크릴레이트 잔기,
에틸렌 글리콜 페닐 에터 메타크릴레이트 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 2-페닐에틸 에스터 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 2-[[(1,1-다이메틸에톡시)카보닐]아미노]에틸 에스터 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 2-(lH-이미다졸-1-일)에틸 에스터 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 사이클로헥실 에스터 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 2-[비스(1-메틸에틸)아미노]에틸 에스터 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 3-메틸부틸 에스터 잔기,
네오펜틸 메타크릴레이트 잔기,
tert-부틸 메타크릴레이트 잔기,
3,3,5-트라이메틸 사이클로헥실 메타크릴레이트 잔기,
2-하이드록시프로필 메타크릴레이트 잔기,
5-노닐 메타크릴레이트 잔기,
2-부틸-1-옥틸 메타크릴레이트 잔기,
2-헥실-1-데실 메타크릴레이트 잔기, 및
2-(tert-부틸 아미노)에틸 메타크릴레이트 잔기.
표적화 모이어티 T5는, 예컨대, 펩타이드, 중합체 또는 당류일 수 있는 모이어티이다. 표적화 모이어티 T5는, 소정의 실시형태에 있어서 체내 위치로의 전달을 표적화하고, 예컨대, 특정 장기 또는 세포 유형으로의 전달을 표적화한다. 소정의 실시형태에 있어서, T5는 펩타이드이다. 소정의 실시형태에 있어서, T5는 중합체이다. 소정의 실시형태에 있어서, T5는 당류이다.
일 실시형태에 있어서, 막-불안정화 중합체는 화학식 (XXI)의 중합체이다:
Figure pct00020
.
몇몇 실시형태에 있어서, px는 약 2 내지 약 50, 예컨대, 약 2 내지 약 20, 예컨대, 4 내지 12(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 또는 50)의 정수이다. 몇몇 실시형태에 있어서, px는 약 8 내지 약 16(예컨대, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16)의 정수이다. 몇몇 실시형태에 있어서, px는 약 12이다. 몇몇 실시형태에 있어서, py는 약 2 내지 약 20(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이다. 몇몇 실시형태에 있어서, py는 약 2 내지 약 10(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10)의 정수이다. 몇몇 실시형태에 있어서, py는 약 4 내지 약 5(예컨대, 4 또는 5)의 정수이다.
화학식 (X)의 중합체에서, 중합체 블록의 표시:
Figure pct00021
는 해당 블록을 통해서 분배된 2개의 단량체 기 a 및 b:
Figure pct00022
를 갖는 중합체 블록을 나타내는 것으로 이해되어야 하며, 여기서 블록의 약 75.5 중량 퍼센트가 단량체 기 a이고, 블록의 약 24.5 중량 퍼센트가 단량체 기 b이다. 중합체 블록:
Figure pct00023
의 표시는 단량체 기 a의 하나의 단독-중합체 블록 및 단량체 기 b의 하나의 단독-중합체 블록을 나타내지 않는다. 이것은 대략 표시된 총 중량비로 블록 전체를 통해서 분포된 3개의 단량체 단위를 갖는 중합체 블록:
Figure pct00024
의 표시에 대해서도 마찬가지이다.
표적화된 핵산 접합체
용어 "알콕시" 및 "알킬티오"는 이들의 통상의 의미로 사용되고, 산소 원자("옥시") 또는 티오기를 통해서 분자의 나머지에 부착된 알킬기를 지칭하며, 이의 모노- 및 폴리-할로겐화 변이체를 또한 포함한다.
용어 "알킬"은, 그 자체로 또는 다른 치환체의 일부로서, 달리 기술되지 않는 한, 지정된 탄소 원자의 수를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 의미한다(즉, C1-8은 1 내지 8개의 탄소를 의미한다). 알킬기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소-프로필, n-부틸, t-부틸, 아이소-부틸, sec-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸 등을 포함한다. 용어 "알켄일"은 1개 이상의 이중 결합을 갖는 불포화 알킬 라디칼을 지칭한다. 마찬가지로, 용어 "알킨일"은 1개 이상의 삼중 결합을 갖는 불포화 알킬 라디칼을 지칭한다. 이러한 불포화 알킬기의 예는 비닐, 2-프로펜일, 크로틸, 2-아이소프로펜일, 2-(부타다이엔일), 2,4-펜타다이엔일, 3-(1,4-펜타다이엔일), 에틴일, 1- 및 3-프로핀일, 3-부틴일, 및 더 고차의 동족체 및 이성질체를 포함한다.
용어 "동물"은 포유동물종, 예컨대, 인간, 마우스, 래트, 개, 고양이, 햄스터, 기니피그, 토끼, 가축 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "아릴"은, 단일의 모든 탄소 방향족 고리계 또는 적어도 하나의 고리가 방향족인 다중 축합된 모든 탄소고리계를 지칭한다. 예를 들어, 소정의 실시형태에 있어서, 아릴기는 6 내지 20개의 탄소 원자, 6 내지 14개의 탄소 원자, 6 내지 12개의 탄소 원자, 또는 6 내지 10개의 탄소 원자를 갖는다. 아릴은 페닐 라디칼을 포함한다. 아릴은 또한 약 9 내지 20개의 탄소 원자를 갖되 적어도 하나의 고리가 방향족이고 다른 고리는 방향족일 수 있거나 또는 방향족이 아닐 수 있는(예컨대, 사이클로알킬) 다중 축합된 탄소고리계(예컨대, 2, 3 또는 4개의 고리를 포함하는 고리계)를 포함한다. 다중 축합된 고리계 중의 고리는 원자가 요건(valency requirement)에 의해 허용되는 경우 접합, 스피로 및 가교를 통해서 서로 연결될 수 있다. 위에서 정의된 바와 같은 다중 축합된 고리계의 부착점은 고리의 방향족 또는 탄소환 부분을 포함하는 고리계의 임의의 부분에 있을 수 있음이 이해되어야 한다. 아릴기의 비제한적인 예는 페닐, 인덴일, 인단일, 나프틸, 1, 2, 3, 4-테트라하이드로나프틸, 안트라센일 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
용어 "사이클로알킬"은 3 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 포화 또는 부분 불포화된(비-방향족) 모든 탄소 고리(즉, (C3-C8)탄소환)를 지칭한다. 해당 용어는 또한 다중 축합된, 포화된 모든 탄소고리계(예컨대, 2, 3 또는 4개의 탄소환식 고리를 포함하는 고리계)를 포함한다. 따라서, 탄소환은 다환식 탄소환, 예컨대, 이환식 탄소환(예컨대, 바이사이클로[3.1.0]헥산 및 바이사이클로[2.1.1]헥산과 같은 약 3 내지 15개의 탄소 원자, 약 6 내지 15개의 탄소 원자, 또는 6 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 이환식 탄소환), 및 다환식 탄소환(예컨대, 최대 약 20개의 탄소 원자를 갖는 삼환식 및 사환식 탄소환)을 포함한다. 다중 축합된 고리계 중의 고리는 원자가 요건에 의해 허용되는 경우 접합, 스피로 및 가교를 통해서 서로 연결될 수 있다. 예를 들어, 다환식 탄소환은 단일 탄소 원자를 통해서 서로 연결되어 스피로 연결(예컨대, 스피로펜탄, 스피로[4,5]데칸 등)을 형성하거나, 두 개의 인접한 탄소 원자를 통해서 서로 연결되어 접합된 연결(예컨대, 데카하이드로나프탈렌, 노르사비난, 노르카란과 같은 탄소환)을 형성하거나 또는 2개의 비인접 탄소 원자를 통해서 서로 연결되어 가교된 연결(예컨대, 노보난, 바이사이클로[2.2.2]옥탄, 등)을 형성할 수 있다. 사이클로알킬의 비제한적인 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 바이사이클로[2.2.1]헵탄, 피난(pinane) 및 아다만탄을 포함한다.
용어 "유전자"는 폴리펩타이드 또는 전구체 폴리펩타이드의 생산에 필요한 부분 길이 또는 전장 코딩 서열을 포함하는 핵산(예컨대, DNA 또는 RNA) 서열을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "유전자 산물"은, RNA 전사체 또는 폴리펩타이드와 같은 유전자의 산물을 지칭한다.
용어 "할로" 또는 "할로겐"은, 달리 기술되지 않는 한, 플루오린, 염소, 브로민 또는 요오드 원자를 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "헤테로아릴"은, 고리 내 탄소 이외의 적어도 하나의 원자를 갖되, 해당 원자는 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택되는 단일 방향족 고리를 지칭하고; "헤테로아릴"은 또한 적어도 하나의 이러한 방향족 고리를 갖는 다중 축합된 고리계를 포함하며, 이러한 다중 축합된 고리계는 이하에 더욱 설명된다. 따라서, "헤테로아릴"은 약 1 내지 6개의 탄소 원자 및 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 약 1 내지 4개의 헤테로원자를 갖는 단일의 방향족 고리를 지칭한다. 황 및 질소 원자는 또한 고리가 방향족인 전제 하에 산화된 형태로 존재할 수 있다. 예시적인 헤테로아릴 고리계는 피리딜, 피리미딘일, 옥사졸릴 및 퓨릴을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. "헤테로아릴"는 또한 위에서 정의된 바와 같은 헤테로아릴기가 사이클로알킬, 아릴, 헤테로사이클 및 헤테로아릴로부터 선택된 1개 이상의 고리로 축합된 다중 축합된 고리계(예컨대, 2, 3 또는 4개의 고리를 포함하는 고리계)를 포함한다. 헤테로아릴 또는 헤테로아릴 다중 축합된 고리계에 대한 부착점은 탄소 원자 및 헤테로원자(예컨대, 질소)를 포함하는 헤테로아릴 또는 헤테로아릴 다중 축합된 고리계의 임의의 적합한 원자에 있을 수 있음이 이해되어야 한다. 예시적인 헤테로아릴은 피리딜, 피롤릴, 피라진일, 피리미딘일, 피리다진일, 피라졸릴, 티엔일, 인돌릴, 이미다졸릴, 트라이아졸릴, 테트라졸릴, 옥사졸릴, 아이소옥사졸릴, 티아졸릴, 퓨릴, 옥사다이아졸릴, 티아다이아졸릴, 퀴놀릴, 아이소퀴놀릴, 벤조티아졸릴, 벤즈옥사졸릴, 인다졸릴, 퀴녹살릴 및 퀴나졸릴을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
용어 "헤테로사이클"은 고리 내에 탄소 이외의 적어도 하나의 원자를 갖는 단일 포화 또는 부분 불포화 고리를 지칭하며, 여기서 상기 원자는 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 상기 용어는 또한 적어도 하나의 이러한 포화 또는 부분 불포화 고리를 갖는 다중 축합된 고리계를 포함하며, 이러한 다중 축합된 고리계는 이하에 더욱 설명된다. 따라서, 상기 용어는 약 1 내지 6개의 탄소 원자 및 고리 내에 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택된 약 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 단일의 포화 또는 부분 불포화 고리(예컨대, 3, 4, 5, 6 또는 7-원 고리)를 포함한다. 황 및 질소 원자는 또한 이들의 산화된 형태로 존재할 수 있다. 예시적인 헤테로사이클은 아제티딘일, 테트라하이드로퓨란일 및 피페리딘일을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 용어 "헤테로사이클"은 또한 다중 축합된 고리계(예컨대, 2, 3 또는 4개의 고리를 포함하는 고리계)를 포함하며, 이때 (위에서 정의된 바와 같은) 단일 헤테로사이클 고리가 사이클로알킬, 아릴 및 헤테로사이클로부터 선택된 1개 이상의 원자로 축합되어 다중 축합된 고리계를 형성할 수 있다. 다중 축합된 고리계 중의 고리는 원자가 요건에 의해 허용되는 경우 접합, 스피로 및 가교를 통해서 서로 연결될 수 있다. 다중 축합된 고리계 중의 개별적인 고리는 서로에 대해서 임의의 순서로 연결될 수 있음이 이해되어야 한다. 또한 (헤테로사이클에 대해서 위에서 정의된 바와 같은) 다중 축합된 고리계의 부착점은 고리의 헤테로사이클, 아릴 및 탄소환 부분을 포함하는 다중 축합된 고리계의 임의의 위치에 있을 수 있는 것이 이해되어야 한다. 일 실시형태에 있어서 용어 헤테로사이클은 3-15원 헤테로사이클을 포함한다. 일 실시형태에 있어서 용어 헤테로사이클은 3-10원 헤테로사이클을 포함한다. 일 실시형태에 있어서 용어 헤테로사이클은 3-8원 헤테로사이클을 포함한다. 일 실시형태에 있어서 용어 헤테로사이클은 3-7원 헤테로사이클을 포함한다. 일 실시형태에 있어서 용어 헤테로사이클은 3-6원 헤테로사이클을 포함한다. 일 실시형태에 있어서 용어 헤테로사이클은 4-6원 헤테로사이클을 포함한다. 일 실시형태에 있어서 용어 헤테로사이클은 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함하는 3-10원 단환식 또는 이환식 헤테로사이클을 포함한다. 일 실시형태에 있어서 용어 헤테로사이클은 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하는 3-8원 단환식 또는 이환식 헤테로사이클 헤테로사이클을 포함한다. 일 실시형태에 있어서 용어 헤테로사이클은 1 내지 2개의 헤테로원자를 포함하는 3-6원 단환식 헤테로사이클을 포함한다. 일 실시형태에 있어서 용어 헤테로사이클은 1 내지 2개의 헤테로원자를 포함하는 4-6원 단환식 헤테로사이클을 포함한다. 예시적인 헤테로사이클은 아지리딘일, 아제티딘일, 피롤리딘일, 피페리딘일, 호모피페리딘일, 모르폴린일, 티오모르폴린일, 피페라진일, 테트라하이드로퓨란일, 다이하이드로옥사졸릴, 테트라하이드로피란일, 테트라하이드로티오피란일, 1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀릴, 벤즈옥사진일, 다이하이드로옥사졸릴, 크로만일, 1,2-다이하이드로피리딘일, 2,3-다이하이드로벤조퓨란일, 1,3-벤조다이옥솔릴, 1,4-벤조다이옥산일, 스피로[사이클로프로판-1,1'-아이소인돌린일]-3'-온, 아이소인돌린일-1-온, 2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄일, 이미다졸리딘-2-온 이미다졸리딘, 피라졸리딘, 부티로락탐, 발레로락탐, 이미다졸리디논, 히단티온, 다이옥솔란, 프탈이미드 및 1,4-다이옥산을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
용어 "당류"는 단당류, 이당류 및 삼당류를 포함하고, 이들은 모두 선택적으로 치환될 수 있다. 해당 용어는 글루코스, 수크로스, 프럭토스, 갈락토스 및 리보스뿐만 아니라, 데옥시 당, 예컨대, 데옥시리보스 및 아미노 당, 예컨대, 갈락토사민을 포함한다. 당류 유도체는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 96/34005 및 97/03995에 기재된 바와 같이 편리하게 제조될 수 있다. 당류는 에터 결합, 티오에터 결합(예컨대, S-글리코사이드), 아민 질소(예컨대, N-글리코사이드), 또는 탄소-탄소 결합(예컨대, C-글리코사이드)을 통해서 화학식 I의 화합물의 나머지 부분에 편리하게 연결될 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 당류는 에터 결합을 통해서 화학식 I의 화합물의 나머지 부분에 편리하게 연결될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "소간섭 RNA" 또는 "siRNA"는, siRNA가 표적 유전자 또는 서열과 동일한 세포에 있을 때, (예컨대, siRNA 서열과 상보적인 mRNA의 번역의 저하 또는 저해를 매개함으로써) 표적 유전자 또는 서열의 발현을 저감 또는 저해 가능한 이중 가닥 RNA(즉, 듀플렉스 RNA)를 지칭한다. siRNA는 표적 유전자 또는 서열과 실질적으로 또는 완전한 동일성을 가질 수 있거나, 또는 미스매치의 영역(즉, 미스매치 모티프)을 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에 있어서, siRNA는 약 19 내지 25개(듀플렉스) 뉴클레오타이드 길이일 수 있고, 바람직하게는 약 20 내지 24, 21 내지 22 또는 21 내지 23개(듀플렉스) 뉴클레오타이드 길이이다. siRNA 듀플렉스는 약 1 내지 약 4개의 뉴클레오타이드 또는 약 2 내지 약 3개의 뉴클레오타이드의 3' 오버행(overhang) 및 5' 포스페이트 말단을 포함할 수 있다. siRNA의 예는, 제한 없이, 2개의 별도의 가닥 분자로부터 조립된 이중 가닥 폴리뉴클레오타이드 분자를 포함하되, 여기서 하나의 가닥은 센스 가닥이고 다른 하나는 상보적 안티센스 가닥이다.
소정의 실시형태에 있어서, siRNA의 하나 또는 두 가닥 상의 5' 및/또는 3' 오버행은 1 내지 4(예컨대, 1, 2, 3 또는 4)개의 변형된 및/또는 비변형 데옥시티미딘(t 또는 dT) 뉴클레오타이드, 1 내지 4(예컨대, 1, 2, 3, 또는 4)개의 변형된(예컨대, 2'OMe) 및/또는 비변형 유리딘(U) 리보뉴클레오타이드, 및/또는 1-4(예컨대, 1, 2, 3, 또는 4)개의 변형된(예컨대, 2'OMe) 및/또는 비변형 리보뉴클레오타이드, 또는 표적 서열(예컨대, 안티센스 가닥 내 3'오버행) 또는 이의 상보성 가닥(예컨대, 센스 가닥 내 3' 오버행)과 상보성을 갖는 데옥시리보뉴클레오타이드를 포함한다.
바람직하게는, siRNA는 화학적으로 합성된다. siRNA는 또한 이.콜라이(E. coli) RNase III 또는 다이서(Dicer)를 이용해서 더 긴 dsRNA(예컨대, 약 25개 초과의 뉴클레오타이드 길이의 dsRNA)의 절단에 의해 생성될 수 있다. 이들 효소는 dsRNA를 생물학적 활성 siRNA로 처리한다(예컨대, 문헌[Yang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99:9942-9947 (2002); Calegari et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99:14236 (2002); Byrom et al., Ambion TechNotes, 10(1):4-6 (2003); Kawasaki et al., Nucleic Acids Res., 31:981-987 (2003); Knight et al., Science, 293:2269-2271 (2001); 및 Robertson et al., J. Biol. Chem., 243:82 (1968)] 참조). 바람직하게는, dsRNA는 적어도 50개 뉴클레오타이드 내지 약 100, 200, 300, 400 또는 500개 뉴클레오타이드 길이이다. dsRNA는 1000, 1500, 2000, 5000개 정도로 긴 뉴클레오타이드 길이 또는 그보다 길 수 있다. dsRNA는 전체 유전자 전사체 또는 부분 유전자 전사체를 인코딩할 수 있다. 소정의 경우에, siRNA는 플라스미드(예컨대, 헤어핀 루프를 이용해서 듀플렉스로 자동적으로 접힌 서열로서 전사됨)에 의해 인코딩될 수 있다.
어구 "표적 유전자의 발현 저해"는 표적 유전자의 발현을 침묵, 저감 또는 저해하는 본 발명의 siRNA의 능력을 지칭한다. 유전자 침묵의 정도를 조사하기 위하여, 시험 샘플(예컨대, 표적 유전자를 발현하는 배양액 중 세포의 샘플 또는 표적 유전자를 발현하는 관심 유기체로부터의 생물학적 샘플)을 표적 유전자의 발현을 침묵, 저감 또는 저해하는 siRNA와 접촉시킨다. 시험 샘플 내 표적 유전자의 발현은 siRNA와 접촉하지 않는 대조 샘플(예컨대, 표적 유전자를 발현하는 관심 유기체의 생물학적 샘플 또는 표적 유전자를 발현하는 배양액 중 세포의 샘플)에서의 표적 유전자의 발현과 비교된다. 대조 샘플(예컨대, 표적 유전자를 발현하는 샘플)에는 100%의 값이 배정될 수 있다. 특정 실시형태에 있어서, 표적 유전자의 발현의 침묵, 저해 또는 저감은, 대조 샘플(예컨대, 완충액 단독, 상이한 유전자를 표적화하는 siRNA 서열, 스크램블링된 siRNA 서열 등)에 대한 시험 샘플의 값이 약 100%, 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 0%인 경우에 달성된다. 적합한 검정은, 제한 없이, 당업자에게 공지된 기술, 예컨대, 도트 블롯(dot blot), 노던 블롯(Northern blot), 인시투 혼성화(in situ hybridization), ELISA, 면역침강, 효소 기능뿐만 아니라, 당업자에게 공지된 표현형 검정을 이용한 단백질 또는 mRNA 수준의 조사를 포함한다.
치료용 핵산, 예컨대, siRNA의 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 목적하는 효과, 예컨대, 부재 시에 검출된 정상 발현 수준과 비교할 때 표적 서열의 발현의 저해를 생성하는데 충분한 양이다. 특정 실시형태에 있어서, 표적 유전자 또는 표적 서열의 발현의 저해는 대조군(예컨대, 완충액 단독, 상이한 유전자를 표적화하는 siRNA 서열, 스크램블링된 siRNA 서열 등)에 대한 siRNA에서 얻어진 값이 약 100%, 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 94%, 93%, 92%, 91%, 90%, 89%, 88%, 87%, 86%, 85%, 84%, 83%, 82%, 81%, 80%, 79%, 78%, 77%, 76%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55%, 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 또는 0%인 경우에 달성된다. 표적 유전자 또는 표적 서열의 발현을 측정하기 위한 적합한 검정은, 당업자에게 공지된 기술, 예컨대, 도트 블롯, 노던 블롯, 인시투 혼성화, ELISA, 면역침강, 효소 기능뿐만 아니라, 당업자에게 공지된 표현형 검정을 이용한 단백질 또는 mRNA 수준의 조사를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "핵산"은 단일- 또는 이중 가닥 형태의 적어도 2개의 뉴클레오타이드(즉, 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드)를 함유하는 중합체를 지칭하고 DNA 및 RNA를 포함한다. "뉴클레오타이드"는 당 데옥시리보스(DNA) 또는 리보스(RNA), 염기 및 포스페이트기를 함유한다. 뉴클레오타이드는 포스페이트기를 통해서 연결된다. "염기"는 퓨린 및 피리미딘을 포함하고, 이는 천연 화합물인 아데닌, 티민, 구아닌, 사이토신, 유라실, 이노신, 및 퓨린 및 피리미딘의 천연 유사체 및 합성 유도체를 더 포함하고, 이들은 새로운 반응성 기, 예컨대, 제한 없이, 아민, 알코올, 티올, 카복실레이트 및 알킬 할라이드를 대신하는 변형을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 핵산은 공지된 뉴클레오타이드 유사체 또는 변형된 골격 잔기 및 링키지를 함유하는 핵산을 포함하며, 이는 합성, 천연 유래 및 비천연 유래이고, 참조 핵산과 유사한 결합 특성을 갖는다. 이러한 유사체 및/또는 변형 잔기의 예는, 포스포로티오에이트, 포스포르아미데이트, 메틸 포스포네이트, 카이럴-메틸 포스포네이트, 2'-O-메틸 리보뉴클레오타이드, 및 펩타이드-핵산(PNA)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 추가로, 핵산은 하나 이상의 UNA 모이어티를 포함할 수 있다.
용어 "보호기"는 화합물 상의 특정 작용기를 차단 또는보호하는데 통상 이용되는 치환체를 지칭한다. 예를 들어, "아미노-보호기"는 화합물 내 아미노 작용기를 차단 또는 보호하는 아미노기에 부착된 치환체이다. 적합한 아미노-보호기는 아세틸, 트라이플루오로아세틸, t-부톡시카보닐(BOC), 벤질옥시카보닐(CBZ) 및 9-플루오레닐메틸렌옥시카보닐(Fmoc)을 포함한다. 마찬가지로, "하이드록시-보호기"는 하이드록시 작용기를 차단 또는 보호하는 하이드록시기의 치환체를 지칭한다. 적합한 보호기는 아세틸, 실릴 및 2,2-다이메톡시 프로펜을 포함한다. "카복시-보호기"는 카복시 작용기를 차단 또는 보호하는 카복시기의 치환체를 지칭한다. 통상의 카복시-보호기는 페닐설포닐에틸, 사이아노에틸, 2-(트라이메틸실릴)에틸, 2-(트라이메틸실릴)에톡시메틸, 2-(p-톨루엔설포닐)에틸, 2-(p-나이트로페닐설페닐)에틸, 2-(다이페닐포스피노)-에틸, 나이트로에틸 등을 포함한다. 보호기 및 이들의 용도의 일반적인 설명에 대해서는, 문헌[P.G.M. Wuts and T.W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis 4th edition, Wiley-Interscience, New York, 2006]을 참조한다.
용어 "합성적 활성기"는, 다른 반응성 기와 공유 결합을 형성할 수 있도록 원자에 부착되어 그 원자를 활성화시킬 수 있는 기를 지칭한다. 합성적 활성기의 속성은 활성화되는 원자에 따라 좌우될 수 있는 것이 이해된다. 예를 들어, 합성적 활성기가 산소 원자에 부착된 경우, 합성적 활성기는 그 산소 원자를 활성화시켜 다른 반응성 기와 결합(예컨대, 에스터, 카바메이트, 또는 에터 결합)을 형성하는 기이다. 이러한 합성적 활성기는 공지되어 있다. 산소 원자에 부착될 수 있는 합성적 활성기의 예는 아세테이트, 석시네이트, 트라이플레이트 및 메실레이트를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 합성적 활성기가 카복실산의 산소 원자에 부착되는 경우, 합성적 활성기는 공지된 커플링 시약(예컨대, 공지된 아마이드 커플링 시약)으로부터 유래 가능한 기일 수 있다. 이러한 커플링 시약은 공지되어 있다. 이러한 커플링 시약의 예는, N,N'-다이사이클로헥실카보다이이미드 (DCC), 하이드록시벤조트라이아졸(HOBt), N-(3-다이메틸아미노프로필)-N'-에틸카보네이트(EDC), (벤조트라이아졸-1-일옥시)트리스(다이메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP), 벤조트라이아졸-1-일-옥시트라이피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBOP), (1-[비스(다이메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트라이아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트(HATU), 프로필포스폰산 무수물 용액(T3P) 또는 O-벤조트라이아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
핵산
용어 "핵산"은 일반적으로 올리고뉴클레오타이드라 불리는 최대 60개의 뉴클레오타이드를 함유하는 단편 및 폴리뉴클레오타이드라 불리는 보다 긴 단편을 갖는, 임의의 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 데옥시리보올리고뉴클레오타이드는 교호 비분지 중합체를 형성하기 위하여 5' 및 3' 탄소에서 포스페이트에 공유 연결된 데옥시리보스라 불리는 5-탄소 당으로 이루어진다. DNA는, 예컨대, 안티센스 분자, 플라스미드 DNA, 사전-축합된 DNA, PCR 산물, 벡터, 발현 카세트, 키메라 서열, 염색체 DNA, 또는 이들 기의 유도체 및 조합의 형태일 수 있다. 리보올리고뉴클레오타이드는 5-탄소 당이 리보스인 유사한 반복 구조로 이루어진다. RNA는, 예를 들어, 소간섭 RNA(siRNA), 다이서-기질(Dicer-substrate) dsRNA, 작은 헤어핀 RNA(shRNA), 비대칭 간섭 RNA(aiRNA), 마이크로RNA(miRNA), mRNA, tRNA, rRNA, tRNA, 바이러스 RNA(vRNA), 자가-증폭 RNA(sa-RNA), 및 이들의 조합의 형태일 수 있다. 따라서, 본 발명의 맥락에서, 용어 "폴리뉴클레오타이드" 및 "올리고뉴클레오타이드"는 천연-유래 염기, 당 및 당간(intersugar) (골격) 링키지로 이루어진 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오사이드 단량체의 중합체 또는 올리고머를 지칭한다. 용어 "폴리뉴클레오타이드" 및 "올리고뉴클레오타이드"는 또한 비-천연 유래 단량체 또는 마찬가지로 기능하는 이의 부분을 포함하는 중합체 또는 올리고머를 포함한다. 이러한 변형된 또는 치환된 올리고뉴클레오타이드는, 예를 들어, 뉴클레아제의 존재 하에 증대된 세포 흡수, 저감된 면역원성 및 증가된 안정성과 같은 특성 때문에 종종 천연 형태에 비해서 바람직하다.
달리 나타내지 않는 한, 특정 핵산 서열은 또한 이의 보존적으로 변형된 변이체(예컨대, 축퇴 코돈 치환), 대립유전자, 오쏘로그, SNP, 및 상보적 서열뿐만 아니라 명백하게 표시된 서열을 함축적으로 포함한다. 구체적으로, 축퇴 코돈 치환은 하나 이상의 선택된(또는 모든) 코돈의 세 번째 위치가 혼합된-염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환된 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다(Batzer et al., Nucleic Acid Res., 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem., 260:2605-2608 (1985); Rossolini et al., Mol. Cell. Probes, 8:91-98 (1994)).
본 명세서에 기재된 바와 같이, 본 발명의 소정의 실시형태는 세포에 핵산을 전달하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 소정의 실시형태에 있어서, 핵산은 본 명세서에 기재된 핵산이다. 예를 들어, 본 명세서에서 이용되는 핵산은 단일-가닥 DNA 또는 RNA, 또는 이중 가닥 DNA 또는 RNA, 또는 DNA-RNA 하이브리드일 수 있다. 이중 가닥 RNA의 예가 본 명세서에 기재되어 있고, 예컨대, siRNA 및 기타 RNAi 제제, 예컨대, aiRNA 및 pre-miRNA를 포함한다. 단일 가닥 핵산은, 예컨대, 안티센스 올리고뉴클레오타이드, 리보자임, 성숙 miRNA, 및 트리플렉스-형성 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.
소정의 실시형태에 있어서, 핵산은 올리고뉴클레오타이드이다. 특정 실시형태에 있어서, 올리고뉴클레오타이드는 약 10 내지 약 100개의 뉴클레오타이드 길이의 범위이다. 각종 관련된 실시형태에 있어서, 두 단일-가닥, 이중 가닥 및 삼중-가닥 올리고뉴클레오타이드는, 길이가 약 10 내지 약 60개의 뉴클레오타이드, 약 15 내지 약 60 뉴클레오타이드, 약 20 내지 약 50 뉴클레오타이드, 약 15 내지 약 30 뉴클레오타이드, 또는 약 20 내지 약 30개의 뉴클레오타이드 길이의 범위일 수 있다.
소정의 실시형태에 있어서, 핵산은 소간섭 RNA(siRNA), 다이서-기질 dsRNA, 작은 헤어핀 RNA(shRNA), 비대칭 간섭 RNA(aiRNA), 마이크로RNA(miRNA), tRNA, rRNA, tRNA, 바이러스 RNA(vRNA), 자가-증폭 RNA(sa-RNA), 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 실시형태에 있어서, 핵산은 안티센스 분자이다. 소정의 실시형태에 있어서, 핵산은 miRNA 분자이다. 소정의 실시형태에 있어서, 핵산은 siRNA이다. 적합한 siRNA뿐만 아니라, 이들의 제조에 유용한 방법 및 중간체는 국제 특허 출원 공개 번호 WO2016/054421에 보고되어 있다.
표적 유전자
소정의 실시형태에 있어서, 핵산(예컨대, siRNA)은 관심 유전자의 번역(즉, 발현)을 하항 조절 또는 침묵시키는데 사용될 수 있다. 관심 유전자는 바이러스 감염 및 생존과 연관된 유전자, 대사 질환 및 장애(예컨대, 간 질환 및 장애)와 연관된 유전자, 종양 형성 및 세포 형질전환(예컨대 암)과 연관된 유전자, 혈관형성 유전자, 면역조절 유전자, 예컨대, 염증성 및 자가면역 반응과 연관된 것들, 리간드 수용체 유전자 및 신경퇴행성 장애와 연관된 유전자를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 소정의 실시형태에 있어서, 관심 유전자는 간세포에서 발현된다.
바이러스 감염 및 생존과 연관된 유전자는 세포에서 결합, 유입 및 복제하기 위하여 바이러스에 의해 발현된 것들을 포함한다. 특히 관심있는 것은 만성 바이러스 질환과 연관된 바이러스 서열이다. 특정 관심 바이러스 서열은 필로바이러스(Filovirus), 예컨대, 에볼라 바이러스 및 마르부르그 바이러스(Marburg virus)(예컨대, 문헌[Geisbert et al., J. Infect. Dis., 193:1650-1657 (2006)] 참조); 아레나바이러스, 예컨대, 라사 바이러스(Lassa virus), 후닌 바이러스(Junin virus), 마츄포 바이러스(Machupo virus), 구아나리토 바이러스(Guanarito virus) 및 사비아 바이러스(Sabia virus)(Buchmeier et al., Arenaviridae: the viruses and their replication, In: FIELDS VIROLOGY, Knipe et al. (eds.), 4th ed., Lippincott-Raven, Philadelphia, (2001)); 인플루엔자 바이러스, 예컨대, A형, B형 및 C형 인플루엔자 바이러스(예컨대, 문헌[Steinhauer et al., Annu Rev Genet., 36:305-332 (2002); 및 Neumann et al., J Gen Virol., 83:2635-2662 (2002)] 참조); 간염 바이러스(예컨대, 문헌[Hamasaki et al., FEBS Lett., 543:51 (2003); Yokota et al., EMBO Rep., 4:602 (2003); Schlomai et al., Hepatology, 37:764 (2003); Wilson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100:2783 (2003); Kapadia et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100:2014 (2003); 및 FIELDS VIROLOGY, Knipe et al. (eds.), 4th ed., Lippincott-Raven, Philadelphia (2001)] 참조); 인간 면역결핍 바이러스(HIV)(Banerjea et al., Mol. Ther., 8:62 (2003); Song et al., J. Virol., 77:7174 (2003); Stephenson, JAMA, 289:1494 (2003); Qin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100:183 (2003)); 헤르페스 바이러스(Jia et al., J. Virol., 77:3301 (2003)); 및 인간 유두종 바이러스(HPV)(Hall et al., J. Virol., 77:6066 (2003); Jiang et al., Oncogene, 21:6041 (2002))의 서열을 포함한다.
침묵될 수 있는 예시적인 필로바이러스 핵산 서열은, 핵산 서열 인코딩 구조적 단백질(예컨대, VP30, VP35, 핵단백질(NP), 중합효소 단백질(L-pol)) 및 막-연관 단백질(예컨대, VP40, 당단백질(GP), VP24)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 에볼라 바이러스용의 완전 게놈 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 NC-002549; AY769362; NC-006432; NC-004161; AY729654; AY354458; AY142960; AB050936; AF522874; AF499101; AF272001; 및 AF086833에 제시되어 있다. 에볼라 바이러스 VP24 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 U77385 및 AY058897에 제시되어 있다. 에볼라 바이러스 L-pol 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 X67110에 제시되어 있다. 에볼라 바이러스 VP40 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 AY058896에 제시되어 있다. 에볼라 바이러스 NP 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 AY058895에 제시되어 있다. 에볼라 바이러스 GP 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 AY058898; 문헌[Sanchez et al., Virus Res., 29:215-240 (1993); Will et al., J. Virol., 67:1203-1210 (1993); Volchkov et al., FEBS Lett., 305:181-184 (1992)]; 및 미국 특허 제6,713,069호에 제시되어 있다. 추가의 에볼라 바이러스 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 L11365 및 X61274에 제시되어 있다. 마르부르그 바이러스용의 완전 게놈 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 NC-001608; AY430365; AY430366; 및 AY358025에 제시되어 있다. 마르부르그 바이러스 GP 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 AF005734; AF005733; 및 AF005732에 제시되어 있다. 마르부르그 바이러스 VP35 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 AF005731 및 AF005730에 제시되어 있다. 추가의 마르부르그 바이러스 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 X64406; Z29337; AF005735; 및 Z12132에 제시되어 있다. 에볼라 바이러스 및 마르부르그 바이러스 핵산 서열을 표적화하는 siRNA 분자의 비제한적인 예는 미국 특허 공개 제20070135370에 기재된 것을 포함하며, 이들의 개시내용은 모든 목적을 위하여 이들의 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
침묵될 수 있는 예시적인 인플루엔자 핵산 서열은 핵단백질(NP), 매트릭스 단백질(M1 및 M2), 비구조적 단백질(NS1 및 NS2), RNA 중합효소(PA, PB1, PB2), 뉴라미니다제(NA) 및 혈구응집소(HA)를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 인플루엔자 A NP 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 NC-004522; AY818138; AB166863; AB188817; AB189046; AB189054; AB189062; AY646169; AY646177; AY651486; AY651493; AY651494; AY651495; AY651496; AY651497; AY651498; AY651499; AY651500; AY651501; AY651502; AY651503; AY651504; AY651505; AY651506; AY651507; AY651509; AY651528; AY770996; AY790308; AY818138; 및 AY818140에 제시되어 있다. 인플루엔자 A PA 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 AY818132; AY790280; AY646171; AY818132; AY818133; AY646179; AY818134; AY551934; AY651613; AY651610; AY651620; AY651617; AY651600; AY651611; AY651606; AY651618; AY651608; AY651607; AY651605; AY651609; AY651615; AY651616; AY651640; AY651614; AY651612; AY651621; AY651619; AY770995; 및 AY724786에 제시되어 있다. 인플루엔자 바이러스 핵산 서열을 표적화하는 siRNA 분자의 비제한적인 예는 미국 특허 공개 제20070218122호에 기재된 것들을 포함하며, 이의 개시내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문이 본 명세서에 원용된다.
침묵될 수 있는 예시적인 간염 바이러스 핵산 서열은, 전사 및 번역(예컨대, En1, En2, X, P)과 연루되는 핵산 서열 및 구조 단백질(예컨대, 코어 단백질, 예컨대, C 및 C-관련 단백질, S, M, 및/또는 L 단백질, 또는 이의 단편을 포함하는 캡시드 및 외피 단백질)을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다(예컨대, 문헌[FIELDS VIROLOGY, 상기 참조] 참조). 침묵될 수 있는 예시적인 C형 간염 바이러스(HCV) 핵산 서열은 5'-비번역 영역(5'-UTR), 3'-비번역 영역(3'URT), 폴리단백질 번역 개시 코돈 영역, 내부 리보솜 도입 부위(IRES) 서열 및/또는 코어 단백질, E1 단백질, E2 단백질, p7 단백질, NS2 단백질, NS3 프로테아제/헬리카제, NS4A 단백질, NS4B 단백질, NS5A 단백질 및/또는 NS5B RNA-의존적 RNA 중합효소를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. HCV 게놈 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 NC-004102(HCV 유전자형 1a), AJ238799(HCV 유전자형 1b), NC-009823(HCV 유전자형 2), NC-009824(HCV 유전자형 3), NC-009825(HCV 유전자형 4), NC-009826(HCV 유전자형 5) 및 NC-009827(HCV 유전자형 6)에 제시되어 있다. A형 간염 바이러스 핵산 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 NC-001489에 제시되어 있고; B형 간염 바이러스 핵산 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 NC-003977에 제시되어 있고; D형 간염 바이러스 핵산 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 NC-001653에 제시되어 있고; E형 간염 바이러스 핵산 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 NC-001434에 제시되어 있고; 그리고 G형 간염 바이러스 핵산 서열은, 예컨대, Genbank 수탁 번호 NC-001710에 제시되어 있다. 바이러스 감염 및 생존과 연관된 유전자를 인코딩하는 서열의 침묵은 바이러스 상태를 치료하는데 사용되는 통상의 제제의 투여와 조합하여 편리하게 사용될 수 있다. 간염 바이러스 핵산 서열을 표적화하는 siRNA 분자의 비제한적인 예는 미국 특허 공개 제20060281175호, 제20050058982호 및 제20070149470호; 미국 특허 제7,348,314호; 및 2009년 5월 20일자로 출원된 미국 가출원 제61/162,127호에 기재된 것들을 포함하며, 이의 개시내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문이 본 명세서에 원용된다.
대사 질환 및 장애(예컨대, 간이 표적인 장애, 그리고 간 질환 및 장애)와 연관된 유전자는, 예를 들어, 이상지질혈증에서 발현되는 유전자(예컨대, 간 X 수용체, 예컨대, LXRα 및 LXRβ(Genbank 수탁 번호 NM-007121), 파네소이드 X 수용체(FXR)(Genbank 수탁 번호 NM-005123), 스테롤-조절 요소 결합 단백질(SREBP), 부위-1 프로테아제(SIP), 3-하이드록시-3-메틸글루타릴 보조효소-A 환원효소(HMG 보조효소-A 환원효소), 아포리포단백질 B(ApoB)(Genbank 수탁 번호 NM-000384), 아포리포단백질 CIII(ApoC3)(Genbank 수탁 번호 NM-000040 및 NG-008949 영역: 5001.8164), 및 아포리포단백질 E(ApoE)(Genbank 수탁 번호 NM-000041 및 NG-007084 영역: 5001.8612)); 및 당뇨병(예컨대, 글루코스 6-포스파타제)(예컨대, 문헌[Forman et al., Cell, 81:687 (1995); Seol et al., Mol. Endocrinol., 9:72 (1995), Zavacki et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:7909 (1997); Sakai et al., Cell, 85:1037-1046 (1996); Duncan et al., J. Biol. Chem., 272:12778-12785 (1997); Willy et al., Genes Dev., 9:1033-1045 (1995); Lehmann et al., J. Biol. Chem., 272:3137-3140 (1997); Janowski et al., Nature, 383:728-731 (1996); 및 Peet et al., Cell, 93:693-704 (1998)] 참조)을 포함한다. 당업자라면 대사 질환 및 장애(예컨대, 간이 표적인 질환 및 장애, 그리고 간 질환 및 장애)와 연관된 유전자가 간 자체에서 발현되는 유전자뿐만 아니라 기타 장기 및 조직에서 발현되는 유전자를 포함하는 것을 인식할 것이다. 대사 질환 및 장애와 연관된 유전자를 인코딩하는 서열의 침묵은 질환 또는 장애를 치료하는데 사용되는 통상의 제제의 투여와 함께 편리하게 사용될 수 있다. ApoB 유전자를 표적화하는 siRNA 분자의 비제한적인 예는 미국 특허 공개 제20060134189호에 기재된 것들을 포함하며, 이의 개시내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문이 본 명세서에 원용된다. ApoC3 유전자를 표적화하는 siRNA 분자의 비제한적인 예는 2009년 1월 26일자로 출원된 미국 가출원 제61/147,235호에 기재된 것들을 포함하며, 이의 개시내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문이 본 명세서에 원용된다.
종양형성 및 세포 형질전환(예컨대, 암 및 기타 신생물)과 연관된 유전자 서열의 예는 유사분열 키네신, 예컨대, Eg5(KSP, KIF11; Genbank 수탁 번호 NM-004523); 세린/트레오닌 키나제, 예컨대, 폴로-유사 키나제 1(PLK-1)(Genbank 수탁 번호 NM-005030; Barr et al., Nat. Rev. Mol. Cell. Biol., 5:429-440 (2004)); 티로신 키나제, 예컨대, WEE1(Genbank 수탁 번호 NM-003390 및 NM-001143976); 아포토시스의 저해제 예컨대, XIAP(Genbank 수탁 번호 NM-001167); COP9 시그날로솜(signalosome) 소단위, 예컨대, CSN1, CSN2, CSN3, CSN4, CSN5(JAB1; Genbank 수탁 번호 NM-006837); CSN6, CSN7A, CSN7B 및 CSN8; 유비퀴틴 리가제, 예컨대, COP1(RFWD2; Genbank 수탁 번호 NM-022457 및 NM-001001740); 및 히스톤 탈아세틸화효소, 예컨대, HDAC1, HDAC2(Genbank 수탁 번호 NM-001527), HDAC3, HDAC4, HDAC5, HDAC6, HDAC7, HDAC8, HDAC9 등을 포함한다. Eg5 및 XIAP 유전자를 표적화하는 siRNA 분자의 비제한적인 예는 2007년 5월 29일자로 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 11/807,872에 기재된 것들을 포함하며, 이의 개시내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문이 본 명세서에 원용된다. PLK-1 유전자를 표적화하는 siRNA 분자의 비제한적인 예는, 미국 특허 공개 제20050107316호 및 제20070265438호에 개시된 것들; 및 2008년 12월 23일자로 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 12/343,342에 기재된 것들을 포함하며, 이의 개시내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문이 본 명세서에 원용된다. CSN5 유전자를 표적화하는 siRNA 분자의 비제한적인 예는 2008년 4월 15일자로 출원된 미국 가출원 제61/045,251호에 기재된 것들을 포함하며, 이의 개시내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문이 본 명세서에 원용된다.
종양형성 및 세포 형질전환과 연관된 유전자 서열의 추가의 예는, 전좌 서열, 예컨대, MLL 융합 유전자, BCR-ABL(Wilda et al., Oncogene, 21:5716 (2002); Scherr et al., Blood, 101:1566 (2003)), TEL-AML1, EWS-FLI1, TLS-FUS, PAX3-FKHR, BCL-2, AML1-ETO 및 AML1-MTG8(Heidenreich et al., Blood, 101:3157 (2003)); 과발현된 서열, 예컨대, 다제내성 유전자(Nieth et al., FEBS Lett., 545:144 (2003); Wu et al, Cancer Res. 63:1515 (2003)), 사이클린(Li et al., Cancer Res., 63:3593 (2003); Zou et al., Genes Dev., 16:2923 (2002)), 베타-카테닌(Verma et al., Clin Cancer Res., 9:1291 (2003)), 텔로머라제 유전자(Kosciolek et al., Mol Cancer Ther., 2:209 (2003)), c-MYC, N-MYC, BCL-2, 성장인자 수용체(예컨대, EGFR/ErbB1(Genbank 수탁 번호 NM-005228, NM-201282, NM-201283 및 NM-201284; 또한 문헌[Nagy et al. Exp. Cell Res., 285:39-49 (2003)] 참조, ErbB2/HER-2(Genbank 수탁 번호 NM-004448 및 NM-001005862), ErbB3(Genbank 수탁 번호 NM-001982 및 NM-001005915), 및 ErbB4(Genbank 수탁 번호 NM-005235 및 NM-001042599); 및 돌연변이된 서열, 예컨대, RAS(문헌[Tuschl and Borkhardt, Mol. Interventions, 2:158 (2002)]에서 검토됨)를 포함한다. EGFR 유전자를 표적화하는 siRNA 분자의 비제한적인 예는 2007년 5월 29일자로 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 11/807,872에 기재된 것들을 포함하며, 이의 개시내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문이 본 명세서에 원용된다.
DNA 수선 효소를 인코딩하는 서열의 침묵은 화학요법제의 투여와 조합한 사용을 발견한다(Collis et al., Cancer Res., 63:1550 (2003)). 종양 이동과 연관된 단백질을 인코딩하는 유전자는 또한 관심 표적 서열, 예를 들어, 인테그린, 셀렉틴 및 금속단백질분해효소(metalloproteinase)이다. 상기 예는 배타적이지 않다. 당업자라면 종양형성 또는 세포 형질전환, 종양 성장 또는 종양 이동을 용이하게 하거나 또는 촉진하는 임의의 전체 또는 부분 유전자 서열이 주형 서열로서 포함될 수 있음을 이해할 것이다.
혈관형성 유전자는 새로운 용기의 형성을 촉진시키는 것이 가능하다. 특히 관심 있는 것은 혈관내피 성장인자(VEGF)(Reich et al., Mol. Vis., 9:210 (2003)) 또는 VEGFR이다. VEGFR을 표적화하는 siRNA 서열은, 예컨대, GB 2396864; 미국 특허 공개 제20040142895호; 및 CA 2456444에 제시되어 있으며, 이의 개시내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문이 본 명세서에 원용된다.
항-혈관형성 유전자는 신행혈관을 저해하는 것이 가능하다. 이들 유전자는 혈관형성이 질환의 병적 전개에서 역할하는 이러한 암을 치료하는데 특히 유용하다. 항-혈관형성 유전자의 예는, 엔도스타틴(예컨대, 미국 특허 제6,174,861호 참조), 앤지오스타틴(angiostatin)(예컨대, 미국 특허 제5,639,725호 참조) 및 VEGFR2(예컨대, 문헌[Decaussin et al., J. Pathol., 188: 369-377 (1999)] 참조)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않으며, 이들의 개시내용은 모든 목적을 위해 이들의 전문이 본 명세서에 원용된다.
면역조절 유전자는 하나 이상의 면역 반응을 조절하는 유전자이다. 면역조절 유전자의 예는, 사이토카인, 예컨대, 성장인자(예컨대, TGF-α, TGF-β, EGF, FGF, IGF, NGF, PDGF, CGF, GM-CSF, SCF 등), 인터류킨(예컨대, IL-2, IL-4, IL-12(Hill et al., J. Immunol., 171:691 (2003)), IL-15, IL-18, IL-20 등), 인터페론(예컨대, IFN-α, IFN-β, IFN-γ 등) 및 TNF를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. Fas 및 Fas 리간드 유전자는 또한 관심 면역조절 표적 서열이다(Song et al., Nat. Med., 9:347 (2003)). 조혈 및 림프 세포에서의 2차 신호전달 분자를 인코딩하는 유전자, 예를 들어, Tec 패밀리 키나제, 예컨대, 브루톤 티로신 키나제(Btk)(Heinonen et al., FEBS Lett., 527:274 (2002))는 본 발명에 포함된다.
세포 수용체 리간드는, 수용체가 연루되는 생리적 경로(예컨대, 글루코스 수준 조절, 혈액 세포 발달, 세포분열 등)를 조절(예컨대, 저해, 활성화 등)하기 위하여, 세포 표면 수용체(예컨대, 인슐린 수용체, EPO 수용체, G-단백질 결합 수용체, 티로신 키나제 활성을 갖는 수용체, 사이토카인 수용체, 성장인자 수용체 등)에 결합할 수 있는 리간드를 포함한다. 세포 수용체 리간드의 예는, 사이토카인, 성장인자, 인터류킨, 인터페론, 에리트로포이에틴(EPO), 인슐린, 글루카곤, G-단백질 결합 수용체 리간드 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 트라이뉴클레오타이드 반복부(예컨대, CAG 반복부)의 확장을 코딩하는 주형은, 트라이뉴클레오타이드 반복부, 예컨대, 척수구근 근위축증 및 헌팅턴병에 의해 초래되는 신경퇴행성 장애에서 병원체 서열을 침묵시키는데 있어서의 용도를 발견하고 있다(Caplen et al., Hum. Mol. Genet., 11:175 (2002)).
유전자의 발현을 하향조절하거나 또는 침묵시키기 위하여 핵산에 의해(예컨대, siRNA에 의해) 표적화될 수 있는 소정의 다른 표적 유전자는, 액틴, 알파 2, 평활근, 대동맥(ACTA2), 알코올 탈수소효소1A(ADH1A), 알코올 탈수소효소4(ADH4), 알코올 탈수소효소6(ADH6), 아파민(Afamin)(AFM), 안지오텐시노겐(Angiotensinogen)(AGT), 세린-피루베이트 아미노전이효소(AGXT), 알파-2-HS-당단백질(AHSG), 알도-케토 환원효소 패밀리 1 구성원 C4(AKR1C4), 혈청 알부민(ALB), 알파-1-마이크로글로불린/비쿠닌(bikunin) 전구체(AMBP), 안지오포이에틴-관련 단백질 3(ANGPTL3), 혈청 아밀로이드 P-성분(APCS), 아포리포단백질 A-II(APOA2), 아포리포단백질 B-100(APOB), 아포리포단백질 C3(APOC3), 아포리포단백질 C-IV(APOC4), 아포리포단백질 F(APOF), 베타-2-당단백질 1(APOH), 아쿠아포린-9(AQP9), 담즙산-CoA:아미노산 N-아실전이효소(BAAT), C4b-결합 단백질 베타쇄(C4BPB), LINC01554에 의해 인코딩된 추정적 비특성화 단백질(putative uncharacterized protein)(C5orf27), 보체 인자 3(C3), 보체 인자 5(C5), 보체 성분 C6(C6), 보체 성분 C8 알파쇄(C8A), 보체 성분 C8 베타쇄(C8B), 보체 성분 C8 감마쇄(C8G), 보체 성분 C9(C9), 칼모듈린 결합 전사 활성제 1(CAMTA1), CD38(CD38), 보체 인자 B(CFB), 보체 인자 H-관련 단백질 1(CFHR1), 보체 인자 H-관련 단백질 2(CFHR2), 보체 인자 H-관련 단백질 3(CFHR3), 칸나비노이드 수용체 1(CNR1), 세룰로플라스민(세룰로플라스민)(CP), 카복시펩티다제 B2(CPB2), 결합 조직 성장인자(CTGF), C-X-C 모티프 케모카인 2(CXCL2), 사이토크롬 P450 1A2(CYP1A2), 사이토크롬 P450 2A6(CYP2A6), 사이토크롬 P450 2C8(CYP2C8), 사이토크롬 P450 2C9(CYP2C9), 사이토크롬 P450 패밀리 2 서브패밀리 D 구성원 6(CYP2D6), 사이토크롬 P450 2E1(CYP2E1), 필로퀴논 오메가-하이드록시화효소 CYP4F2(CYP4F2), 7-알파-하이드록시콜레스트-4-엔-3-온 12-알파-하이드록시화효소(CYP8B1), 다이펩티딜 펩티다제 4(DPP4), 응고 인자 12(F12), 응고 인자 II(트롬빈)(F2), 응고 인자 IX(F9), 피브리노겐 알파쇄(FGA), 피브리노겐 베타쇄(FGB), 피브리노겐 감마쇄(FGG), 피브리노겐-유사 1(FGL1), 플라빈 함유 모노옥시게나제 3(FMO3), 플라빈 함유 모노옥시게나제 5(FMO5), 군-특이적 성분(비타민 D 결합 단백질)(GC), 성장 호르몬 수용체(GHR), 글리신 N-메틸전이효소(GNMT), 히알루로난 결합 단백질 2(HABP2), 헵시딘 항균성 펩타이드(HAMP), 하이드록시산 옥시다제(글리콜레이트 옥시다제) 1(HAO1), HGF 활성제(HGFAC), 헵토글로빈-관련 단백질; 헵토글로빈(HPR), 헤모펙신(HPX), 히스티딘-rich 당단백질(HRG), 하이드록시스테로이드(11-베타) 탈수소효소1(HSD11B1), 하이드록시스테로이드(17-베타) 탈수소효소13(HSD17B13), 인터-알파-트립신 저해제 중쇄 H1(ITIH1), 인터-알파-트립신 저해제 중쇄 H2(ITIH2), 인터-알파-트립신 저해제 중쇄 H3(ITIH3), 인터-알파-트립신 저해제 중쇄 H4(ITIH4), 프리칼리크레인(KLKB1), 락테이트 탈수소효소A(LDHA), 간 발현 항균성 펩타이드 2(LEAP2), 백혈구 세포-유래 케모탁신 2(LECT2), 리포단백질 (a)(LPA), 만난-결합 렉틴 세린 펩티다제 2(MASP2), S-아데노실메티오닌 합성효소 아이소폼 유형-1(MAT1A), NADPH 옥시다제 4(NOX4), 폴리[ADP-리보스] 중합효소 1(PARP1), 파라옥소나제 1(PON1), 파라옥소나제 3(PON3), 비타민 K-의존적 단백질 C(PROC), 레티놀 탈수소효소16(RDH16), 혈청 아밀로이드 A4, 구성적(SAA4), 세린 탈수효소(SDS), 세르핀 패밀리 A 구성원 1(세르핀A1), 세르핀 A11(세르핀A11), 칼리스타틴(세르핀A4), 코르티코스테로이드-결합 글로불린(세르핀A6), 항트롬빈-III(세르핀C1), 헤파린 보인자 2(세르핀D1), 세르핀 패밀리 H 구성원 1(세르핀H1), 용질 운반체 패밀리 5 구성원 2(SLC5A2), 나트륨/담즙산 공동수송체(SLC10A1), 용질 운반체 패밀리 13 구성원 5(SLC13A5), 용질 운반체 패밀리 22 구성원 1(SLC22A1), 용질 운반체 패밀리 25 구성원 47(SLC25A47), 용질 운반체 패밀리 2, 촉진된 글루코스 수송체 구성원 2(SLC2A2), 나트륨-결합 중성 아미노산 수송체 4(SLC38A4), 용질 운반체 유기 음이온 수송체 패밀리 구성원 1B1(SLCO1B1), 스핑고미엘린 포스포다이에스테라제 1(SMPD1), 담즙산 설포전이효소(SULT2A1), 티로신 아미노전이효소(TAT), 트립토판 2,3-다이옥시게나제(TDO2), UDP 글루쿠로노실전이효소 2 패밀리, 폴리펩타이드 B10(UGT2B10), UDP 글루쿠로노실전이효소 2 패밀리, 폴리펩타이드 B15(UGT2B15), UDP 글루쿠로노실전이효소 2 패밀리, 폴리펩타이드 B4(UGT2B4) 및 비트로넥틴(VTN)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
치료 목적을 위하여 위에서 기재된 유전자 중 어느 것인가의 발현을 침묵시킴에 있어서의 이의 유용성에 부가해서, 본 명세서에 기재된 소정의 핵산(예컨대, siRNA)이 또한 연구 및 개발 응용뿐만 아니라 진단적, 예방적, 예후, 임상 및 기타 보건 응용에 유용하다. 비-제한적인 예로서, 소정의 핵산(예컨대, siRNA)은 관심 유전자가 치료용 표적이 되는 잠재성을 갖는지를 시험하는 것을 겨냥하는 표적 검증 연구에서 사용될 수 있다. 소정의 핵산(예컨대, siRNA)은 또한 잠재적인 치료용 표적으로서의 유전자를 발견함을 목적으로 하는 표적 식별 연구에서 사용될 수 있다.
siRNA 분자의 생성
siRNA는, 예컨대, 하나 이상의 단리된 소간섭 RNA(siRNA) 듀플렉스로서, 더 긴 이중 가닥 RNA(dsRNA)로서, 또는 DNA 플라스미드에서 전사 카세트로부터 전사된 siRNA 또는 dsRNA로서를 비롯하여 몇 가지 형태로 제공될 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, siRNA는 효소에 의해 또는 부분/전체 유기 합성에 의해 생산될 수 있고, 변형된 리보뉴클레오타이드는 시험관내 효소 또는 유기 합성에 의해 도입될 수 있다. 소정의 경우에, 각각의 가닥은 화학적으로 제조된다. RNA 분자를 합성하는 방법, 예컨대, 문헌[Verma and Eckstein (1998)]에 기재된 바와 같은 또는 본 명세서에 기재된 바와 같은 화학 합성 방법은, 당업계에 잘 알려져 있다.
RNA를 단리시키는 방법, RNA를 합성하는 방법, 핵산을 혼성화시키는 방법, cDNA 라이브러리를 제조하고 스크리닝하는 방법, 및 PCR을 수행하는 방법은, PCR 방법과 같이(예컨대, 미국 특허 제4,683,195호 및 제4,683,202호; PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis et al., eds, 1990)), 당업계에 잘 알려져 있다(예컨대, 문헌[Gubler and Hoffman, Gene, 25:263-269 (1983); Sambrook et al., 상기 참조; Ausubel et al., 상기 참조] 참조). 발현 라이브러리는 또한 당업자에게 잘 알려져 있다. 본 발명에서의 일반적인 사용 방법을 개시하는 추가의 기본적인 교재는 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (2nd ed. 1989); Kriegler, Gene Transfer and Expression: A Laboratory Manual (1990); 및 Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds., 1994)]을 포함한다. 이들 문헌의 개시내용은 모든 목적을 위하여 이들의 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
전형적으로, siRNA는 화학적으로 합성된다. 본 발명의 siRNA 분자를 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 문헌[Usman et al., J. Am. Chem. Soc., 109:7845 (1987); Scaringe et al., Nucl. Acids Res., 18:5433 (1990); Wincott et al., Nucl. Acids Res., 23:2677-2684 (1995); 및 Wincott et al., Methods Mol. Bio., 74:59 (1997)]에 기재된 것들과 같은 당업계에 공지된 다양한 기술 중 어느 것인가를 사용해서 합성될 수 있다. 올리고뉴클레오타이드의 합성은 5'-말단에서의 다이메톡시트라이틸 및 3'-말단에서의 포스포르아미다이트와 같은 통상의 핵산 보호 및 커플링기를 사용한다. 비제한적인 예로서, 소규모 합성이 0.2 μ㏖ 규모 프로토콜을 이용해서 Applied Biosystems 합성기에서 수행될 수 있다. 대안적으로, 0.2 μ㏖ 규모에서의 합성은 Protogene(캘리포니아주 팰로앨토 소재)로부터의 96-웰 플레이트 합성기 상에서 수행될 수 있다. 그러나, 보다 크거나 작은 규모의 합성도 또한 본 발명의 범위 내이다. 올리고뉴클레오타이드 합성을 위한 적합한 시약, RNA 탈보호 방법 및 RNA 정제 방법은 당업자에게 공지되어 있다.
siRNA 분자는 2개의 별도의 올리고뉴클레오타이드로부터 조립될 수 있는데, 여기서 하나의 올리고뉴클레오타이드는 siRNA의 센스 가닥을 포함하고 다른 하나는 안티센스 가닥을 포함한다. 예를 들어, 각 가닥은 개별적으로 합성되고, 합성 및/또는 탈보호 후의 혼성화 또는 결찰에 의해 함께 접합될 수 있다.
연결기
본 발명의 접합체는 1개 이상의 연결기(예컨대, L3 또는 L4)를 포함할 수 있다. 각각의 연결기의 구조는, 접합체가 본 명세서에 기재된 바와 같이 기능한다는 전제 하에, 다양할 수 있다. 예를 들어, 각각의 연결기의 구조는 길이 및 원자 조성물을 달리하고, 각각의 연결기는 분지식, 비분지식, 환식 또는 이들의 조합일 수 있다. 연결기는 또한 접합체의 용해도, 안정성 또는 응집 특성을 조절할 수 있다.
일 실시형태에 있어서 각각의 연결기는 약 3 내지 1000개의 원자를 포함한다. 일 실시형태에 있어서 각각의 연결기는 약 3 내지 500개의 원자를 포함한다. 일 실시형태에 있어서 각각의 연결기는 약 3 내지 200개의 원자를 포함한다. 일 실시형태에 있어서 각각의 연결기는 약 3 내지 50개의 원자를 포함한다. 일 실시형태에 있어서 각각의 연결기는 약 10 내지 1000개의 원자를 포함한다. 일 실시형태에 있어서 각각의 연결기는 약 10 내지 500개의 원자를 포함한다. 일 실시형태에 있어서 각각의 연결기는 약 10 내지 200개의 원자를 포함한다. 일 실시형태에 있어서 각각의 연결기는 약 10 내지 50개의 원자를 포함한다.
일 실시형태에 있어서 각각의 연결기는 H, C, N, S 및 O로부터 선택된 원자를 포함한다.
일 실시형태에 있어서 각각의 연결기는 H, C, N, S, P 및 O로부터 선택된 원자를 포함한다.
일 실시형태에 있어서 각각의 연결기는 약 1 내지 1000(또는 1 내지 750, 1 내지 500, 1 내지 250, 1 내지 100, 1 내지 50, 1 내지 25, 1 내지 10, 1 내지 5, 5 내지 1000, 5 내지 750, 5 내지 500, 5 내지 250, 5 내지 100, 5 내지 50, 5 내지 25, 5 내지 10 또는 2 내지 5개)의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬을 포함하되, 탄소 원자 중 하나 이상은 독립적으로 -O-, -S, -N(Ra)-, 3-7원 헤테로사이클, 5-6-원 헤테로아릴 또는 탄소환에 의해 선택적으로 대체되고, 각 사슬, 3-7원 헤테로사이클, 5-6-원 헤테로아릴 또는 탄소환은 (C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, -N(Ra)2, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3, 4, 5개 이상)의 치환체로 선택적으로 그리고 독립적으로 치환되고, 각각의 Ra는 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬이다. 일 실시형태에 있어서, 링커는 약 1 내지 1000개(또는 1 내지 750, 1 내지 500, 1 내지 250, 1 내지 100, 1 내지 50, 1 내지 25, 1 내지 10, 1 내지 5, 5 내지 1000, 5 내지 750, 5 내지 500, 5 내지 250, 5 내지 100, 5 내지 50, 5 내지 25, 5 내지 10 또는 2 내지 5개)의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬을 포함하되, 탄소 원자의 1개 이상은 독립적으로 -O-, -S, -N(Ra)-에 의해 선택적으로 대체되고, 여기서 각각의 Ra는 독립적으로 H 또는 (C1-C6)알킬이다.
일 실시형태에 있어서, 각 연결기는 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일 실시형태에 있어서, 연결기는 카보닐기에 의해 표적화된 접합체의 나머지 부분에 연결된 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 일 실시형태에 있어서, 폴리에틸렌 글리콜은 약 1 내지 약 500 또는 약 5 내지 약 500 또는 약 3 내지 약 100개의 반복(예컨대, -CH2CH2O-) 단위를 포함한다(Greenwald, R.B., et al., Poly (ethylene glycol) Prodrugs: Altered Pharmacokinetics and Pharmacodynamics, Chapter, 2.3.1., 283-338; Filpula, D., et al., Releasable PEGylation of proteins with customized linkers, Advanced Drug Delivery, 60, 2008, 29-49; Zhao, H., et al., Drug Conjugates with Poly(Ethylene Glycol), Drug Delivery in Oncology, 2012, 627-656).
실시형태
일 실시형태에 있어서, A는 표적 세포의 표면 상의 분자에 특이적으로 결합하는 표적화 리간드이다.
일 실시형태에 있어서, 핵산 접합체 및 막-불안정화 중합체는 개별적으로 투여된다.
일 실시형태에 있어서, 막-불안정화 중합체는 핵산 접합체의 투여 후에 투여된다.
일 실시형태에 있어서, 핵산 접합체 및 막-불안정화 중합체는 단일 조성물 내에서 함께 투여된다.
일 실시형태에 있어서, 표적화 리간드 및 T5는 상이하고, (i) 표적 세포 상의 동일한 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하거나 또는 (ii) 상이한 세포 표면 분자에 특이적으로 결합한다.
일 실시형태에 있어서, 표적화 리간드 및 T5는 동일하고 각각 세포 표면 분자에 특이적으로 결합한다.
일 실시형태에 있어서, 세포는 분비세포, 연골세포, 상피세포, 신경세포, 근육세포, 혈액 세포, 내피세포, 주피세포(pericyte), 섬유아세포, 교질 세포, 또는 수지상 세포이다.
일 실시형태에 있어서, 세포는 암세포, 면역세포, 박테리아-감염 세포, 바이러스-감염 세포, 또는 비정상 대사 활성도를 갖는 세포이다.
일 실시형태에 있어서, 표적화 리간드는 트랜스페린 수용체 1형, 트랜스페린 수용체 2형, EGF 수용체, HER2/Neu, VEGF 수용체, PDGF 수용체, 인테그린, NGF 수용체, CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD33, CD43, CD38, CD56, CD69, 아시알로당단백질 수용체(ASGPR), 전립선-특이적 막 항원(PSMA), 폴레이트 수용체 및 시그마 수용체로 이루어진 군으로부터 선택된 세포 표면 분자에 특이적으로 결합된다.
일 실시형태에 있어서, 표적화 리간드는 소분자 표적화 모이어티를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 소분자 표적화 모이어티는 당, 비타민, 비스포스포네이트, 또는 이들의 유사체이다.
일 실시형태에 있어서, 당은 락토스, 갈락토스, N-아세틸 갈락토사민(NAG), 만노스 및 만노스-6-포스페이트(M6P)로부터 선택된다.
일 실시형태에 있어서, 비타민은 폴레이트이다.
일 실시형태에 있어서, 표적화 리간드는 단백질을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 단백질은 항체, 펩타이드 압타머, 또는 세포 표면 분자의 천연 리간드로부터 유래된 단백질이다.
일 실시형태에 있어서, 표적화 리간드는 펩타이드를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 펩타이드는 인테그린-결합 펩타이드, LOX-1-결합 펩타이드, 및 상피세포성장인자(EGF) 펩타이드, 뉴로텐신 펩타이드, NL4 펩타이드 또는 YIGSR 라미닌 펩타이드이다.
일 실시형태에 있어서, 세포는 간세포이다.
일 실시형태에 있어서, 표적화 리간드는 아시알로당단백질 수용체(ASGPR)에 특이적으로 결합한다.
일 실시형태에 있어서, 표적화 리간드는 N-아세틸갈락토사민(NAG) 잔기를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 막 불안정화 중합체는 하기 3개의 영역을 포함한다:
단당류,
폴리에틸렌글리콜 메타크릴레이트 4-5(PEGMA 4-5) 및 하이드록시에틸 메타크릴레이트(HMA)를 포함하는 친수성 영역; 및
엔도솜 방출을 제공하는 영역.
일 실시형태에 있어서, 막 불안정화 중합체는 하기 화학식 (XX)의 중합체이다:
Figure pct00025
식 중,
PEGMA는 2 내지 20개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는 폴리에틸렌글리콜 메타크릴레이트 잔기이고;
M2는
(C4-C18)알킬-메타크릴레이트 잔기;
(C4-C18) 분지쇄 알킬- 메타크릴레이트 잔기;
콜레스테릴 메타크릴레이트 잔기;
1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 (C4-C18)알킬-메타크릴레이트 잔기; 및
1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 (C4-C18)분지쇄 알킬-메타크릴레이트 잔기
로 이루어진 군으로부터 선택된 메타크릴레이트 잔기이고;
BMA는 부틸 메타크릴레이트 잔기이고;
PAA는 프로필 아크릴산 잔기이고;
DMAEMA는 다이메틸아미노에틸 메타크릴레이트 잔기이고;
m 및 n은 각각 0 초과의 몰분율이되, 여기서 m은 n보다 크고, m+n은 1이고;
q는 0.2 내지 0.75의 몰분율이고;
r은 0.05 내지 0.6의 몰분율이고;
s는 0.2 내지 0.75의 몰분율이고;
q+r+s는 1이고;
v는 1 내지 25 kDa이고;
w는 1 내지 25 kDa이고;
T5는 표적화 모이어티(예컨대, 펩타이드, 중합체 또는 당류)이고; 그리고;
L은 존재하지 않거나 또는 연결 모이어티이다.
일 실시형태에 있어서, M2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
2,2,3,3,4,4,4-헵타플루오로부틸 메타크릴레이트 잔기,
3,3,4,4,5,6,6,6-옥타플루오로-5(트라이플루오로메틸)헥실 메타크릴레이트 잔기,
2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-펜타데카플루오로옥틸 2-메틸아크릴레이트 잔기,
3,3,4,4,5,5,6,6,6-노나플루오로헥실 메타크릴레이트 잔기,
3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-트라이데카플루오로옥틸 메타크릴레이트 잔기,
1,1,1-트라이플루오로-2-(트라이플루오로메틸)-2-하이드록시-4-메틸-5-펜틸 메타크릴레이트 잔기, 2-[(1',1',1'-트라이플루오로-2'-(트라이플루오로메틸)-2'-하이드록시)프로필]-3-노보닐 메타크릴레이트 잔기,
2-에틸헥실 메타크릴레이트 잔기,
부틸 메타크릴레이트 잔기,
헥실 메타크릴레이트 잔기,
옥틸 메타크릴레이트 잔기,
n-데실 메타크릴레이트 잔기,
라우릴 메타크릴레이트 잔기,
미리스틸 메타크릴레이트 잔기,
스테아릴 메타크릴레이트 잔기,
콜레스테릴 메타크릴레이트 잔기,
에틸렌 글리콜 페닐 에터 메타크릴레이트 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 2-페닐에틸 에스터 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 2-[[(1,1-다이메틸에톡시)카보닐]아미노]에틸 에스터 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 2-(1H-이미다졸-1-일)에틸 에스터 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 사이클로헥실 에스터 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 2-[비스(1-메틸에틸)아미노]에틸 에스터 잔기,
2-프로펜산, 2-메틸-, 3-메틸부틸 에스터 잔기,
네오펜틸 메타크릴레이트 잔기,
tert-부틸 메타크릴레이트 잔기,
3,3,5-트라이메틸 사이클로헥실 메타크릴레이트 잔기,
2-하이드록시프로필 메타크릴레이트 잔기,
5-노닐 메타크릴레이트 잔기,
2-부틸-1-옥틸 메타크릴레이트 잔기,
2-헥실-1-데실 메타크릴레이트 잔기, 및
2-(tert-부틸 아미노)에틸 메타크릴레이트 잔기.
일 실시형태에 있어서, PEGMA는 4 내지 5개의 에틸렌 글리콜 단위 또는 7 내지 8개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는다.
일 실시형태에 있어서, Tl 및 L은 존재하고, Tl은 N-아세틸갈락토사민(NAG) 잔기를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, L은 2 내지 20개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 막 불안정화 중합체는 하기 화학식 (XXI)의 중합체이다:
Figure pct00026
,
식 중, px는 약 2 내지 약 50, 예컨대, 약 2 내지 약 20, 예컨대, 4 내지 12(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 또는 50)의 정수이다. 몇몇 실시형태에 있어서, px는 약 8 내지 약 16(예컨대, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16)의 정수이다. 몇몇 실시형태에 있어서, px는 약 12이다. 몇몇 실시형태에 있어서, py는 약 2 내지 약 20(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20)의 정수이다. 몇몇 실시형태에 있어서, py는 약 2 내지 약 10(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10)의 정수이다. 몇몇 실시형태에 있어서, py는 약 4 내지 약 5(예컨대, 4 또는 5)의 정수이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염이다:
Figure pct00027
식 중,
R1은 표적화 리간드이고;
L1은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
L2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
R2는 핵산이고;
고리 A는 존재하지 않거나, 3-20원 사이클로알킬, 5-20원 아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 3-20원 헤테로사이클로알킬이고;
각각의 RA는 독립적으로 수소, 하이드록시, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 알킬-ORB, C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일로 이루어진 군으로부터 선택되되; 여기서 C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일은 할로, 하이드록시 및 C1-3 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
RB는 수소, 보호기, 고체 지지체에 대한 공유 결합, 또는 고체 지지체에 결합된 연결기에 대한 결합이고; 그리고
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다.
일 실시형태에 있어서,
R1은 표적화 리간드이고;
L1은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
L2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
R2는 핵산이고;
고리 A는 존재하지 않거나, 3-20원 사이클로알킬, 5-20원 아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 3-20원 헤테로사이클로알킬이고;
각각의 RA는 독립적으로 수소, 하이드록시, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 알킬-ORB, 및 할로, 하이드록시 및 C1-3 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되는 C1-8 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
RB는 수소, 보호기, 고체 지지체에 대한 공유 결합, 또는 고체 지지체에 결합된 연결기에 대한 결합이고; 그리고
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다.
일 실시형태에 있어서, R1은 -C(H)(3-p)(L3-당류)p이되,
여기서 각각의 L3은 독립적으로 연결기이고;
p는 1, 2 또는 3이고; 그리고
당류는 단당류 또는 이당류이다.
일 실시형태에 있어서, 당류는
Figure pct00028
이되,
식 중,
X는 NR3이고, Y는 -(C=O)R4, -SO2R5 및 -(C=O)NR6R7이거나; 또는 X는 -(C=O)-이고 Y는 NR8R9이고;
R3은 수소 또는 (C1-C4)알킬이고;
R4, R5, R6, R7, R8 및 R9는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)할로알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬(이것은 할로, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R10은 -OH, -NR8R9 또는 -F이고; 그리고
R11은 -OH, -NR8R9, -F, 또는 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5원 헤테로사이클이다.
일 실시형태에 있어서, 당류는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00029
일 실시형태에 있어서, 당류는
Figure pct00030
이다.
일 실시형태에 있어서, 각각의 L3은 독립적으로 0 내지 50개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- 또는 -S-로 선택적으로 치환되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은 (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, 각각의 L3은 독립적으로 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L3은
Figure pct00031
이다.
일 실시형태에 있어서, R1은
Figure pct00032
이다.
일 실시형태에 있어서, R1은
Figure pct00033
이다:
식 중,
G는 -NH- 또는 -O-이고;
RC는 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)할로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C6)알카노일 (C3-C20)사이클로알킬, (C3-C20)헤테로사이클, 아릴, 헤테로아릴, 단당류, 이당류 또는 삼당류이고; 상기 사이클로알킬, 헤테로사이클, 아릴, 헤테로아릴 및 당류는 할로, 카복실, 하이드록실, 아미노, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, RC는
Figure pct00034
이다.
일 실시형태에 있어서, R1은
Figure pct00035
이다.
일 실시형태에 있어서, RC는
Figure pct00036
이다.
일 실시형태에 있어서, G는 -NH-이다.
일 실시형태에 있어서, R1은
Figure pct00037
이다.
일 실시형태에 있어서, R1은 하기이다:
Figure pct00038
Figure pct00039
또는
Figure pct00040
식 중, 각각의 RD는 독립적으로 수소, (C1-C6)알킬, (C9-C20)알킬실릴, (RW)3Si-, (C2-C6)알켄일, 테트라하이드로피란일, (C1-C6)알카노일 벤조일, 아릴(C1-C3)알킬, TMTr(트라이메톡시트라이틸), DMTr(다이메톡시트라이틸), MMTr(모노메톡시트라이틸) 및 Tr(트라이틸)로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
각각의 RW는 독립적으로 (C1-C4)알킬 및 아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시형태에 있어서, L1 및 L2는 독립적으로 1 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이고, 여기서 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- 또는 S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L1 및 L2는 독립적으로 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 여기서 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L1 및 L2는 독립적으로 1 내지 14개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 여기서 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L1은 -NH-, -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O)-, -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH- 또는 -NH-(SO2)-를 통해서 R1에 연결된다.
일 실시형태에 있어서, L2는 -O-를 통해서 R2에 연결된다.
일 실시형태에 있어서, L1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00041
일 실시형태에 있어서, L2는 -CH2-O- 또는 -CH2-CH2-O-이다.
일 실시형태에 있어서,
화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 염이다:
Figure pct00042
식 중,
각각의 D는 독립적으로
Figure pct00043
및 -N=로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00044
Figure pct00045
식 중,
Q1은 수소이고 Q2는 R2이거나; 또는 Q1은 R2이고 Q2는 수소이고; 그리고
Z는 -L1-R1이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (Ib)의 화합물이다:
Figure pct00046
식 중,
각각의 D는 독립적으로
Figure pct00047
및 -N=으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
각각의 m은 독립적으로 1 또는 2이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00048
및
Figure pct00049
식 중,
Q1은 수소이고 Q2는 R2이거나; 또는 Q1은 R2이고 Q2는 수소이고; 그리고
Z는 -L1-R1이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (Ic)의 화합물이다:
Figure pct00050
식 중,
E는 -O- 또는 -CH2-이고;
n은 0, 1, 2, 3 및 4로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
n1 및 n2는 각각 독립적으로 0, 1, 2 및 3으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00051
Figure pct00052
및
Figure pct00053
식 중, Z는 -L1-R1이다.
일 실시형태에 있어서, -A-L2-R2는 하기이다:
Figure pct00054
또는
Figure pct00055
식 중,
Q1은 수소이고 Q2는 R2이거나; 또는 Q1은 R2이고 Q2는 수소이고; 그리고
각각의 q는 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4 또는 5이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00056
Figure pct00057
및
Figure pct00058
.
일 실시형태에 있어서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00059
Figure pct00060
식 중,
RS는
Figure pct00061
이고;
n은 2, 3 또는 4이고; 그리고
x는 1 또는 2이다.
일 실시형태에 있어서, L1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00062
Figure pct00063
및
Figure pct00064
.
일 실시형태에 있어서, A는 부존재(absent), 페닐, 피롤리딘일, 또는 사이클로펜틸이다.
일 실시형태에 있어서, L2는 하이드록시로 선택적으로 치환된 C1-4 알킬렌-O-이다.
일 실시형태에 있어서, L2는 -CH2O-, -CH2CH2O- 또는 -CH(OH)CH2O-이다.
일 실시형태에 있어서, 각각의 RA는 독립적으로 하이드록시, 또는 하이드록시로 선택적으로 치환된 C1-8 알킬이다.
일 실시형태에 있어서, 각각의 RA는 독립적으로 하이드록시, 메틸 및 -CH2OH로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물 화학식 (Ig)이다:
Figure pct00065
식 중,
B는 -N- 또는 -CH-이고;
L2는 하이드록실 또는 할로로 선택적으로 치환된 C1-4 알킬렌-O-이고; 그리고
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00066
Figure pct00067
및
Figure pct00068
식 중, Q는 -L1-R1이고; 그리고
R'은 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일이되; 여기서 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일은 할로 또는 하이드록실로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00069
Figure pct00070
및
Figure pct00071
식 중, Q는 -L1-R1이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00072
Figure pct00073
Figure pct00074
Figure pct00075
Figure pct00076
Figure pct00077
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
Figure pct00082
및
Figure pct00083
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물 화학식 (Id)이다:
Figure pct00084
식 중,
R1d는
Figure pct00085
및
Figure pct00086
로부터 선택되고;
Xd는 C2-10 알킬렌이고;
nd는 0 또는 1이고;
R2d는 핵산이고; 그리고
R3d는 H이다.
일 실시형태에 있어서, R1d는
Figure pct00087
이다.
일 실시형태에 있어서, R1d는
Figure pct00088
이다.
일 실시형태에 있어서, Xd는 C8알킬렌이다.
일 실시형태에 있어서, nd는 0이다.
일 실시형태에 있어서, R3d는 H이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00089
및
Figure pct00090
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (Ig)의 화합물이다:
Figure pct00091
식 중,
B는 -N- 또는 -CH-이고;
L2는 하이드록실 또는 할로로 선택적으로 치환된 C1-4 알킬렌-O-이고; 그리고
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00092
Figure pct00093
및
Figure pct00094
식 중,
Q는 -L1-R1이고; 그리고
R'은 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일이되; 여기서 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일은 할로 또는 하이드록실로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
및
Figure pct00098
식 중, Q는 -L1-R1이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (XX)의 화합물이다:
Figure pct00099
식 중,
R1은 표적화 리간드이고;
L1은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
L2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
R2는 핵산이고;
B는 2가이고, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
Figure pct00100
Figure pct00101
식 중,
각각의 R'은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일이되; C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일은 할로 또는 하이드록실로 선택적으로 치환되고;
*로 표시된 원자가(valence)는 L1에 부착되거나, 또는 L1이 존재하지 않는 경우에는 R1에 부착되고; 그리고
**로 표시된 원자가는 L2에 부착되거나, 또는 L2가 존재하지 않는 경우에는 R2에 부착된다.
일 실시형태에 있어서, R1은 2 내지 8개의 당류를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, R1은 2 내지 4개의 당류를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, R1은 3 내지 8개의 당류를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, R1은 3 내지 6개의 당류를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, R1은 3 내지 4개의 당류를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, R1은 2개의 당류를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, R1은 3개의 당류를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, R1은 4개의 당류를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, R1은 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00102
식 중,
B1은 약 1 내지 약 20개의 원자를 포함하는 3가기이고, L1, T1 및 T2에 공유 결합되고;
B2는 약 1 내지 약 20개의 원자를 포함하는 3가기이고, T1, T3 및 T4에 공유 결합되고;
B3은 약 1 내지 약 20개의 원자를 포함하는 3가기이고, T2, T5 및 T6에 공유 결합되고;
T1은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
T2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
T3은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
T4는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
T5는 존재하지 않거나 또는 연결기이고; 그리고
T6은 존재하지 않거나 또는 연결기이다.
일 실시형태에 있어서, 각각의 당류는 독립적으로 하기로부터 선택된다:
Figure pct00103
식 중,
X는 NR3이고, Y는 -(C=O)R4, -SO2R5 및 -(C=O)NR6R7이거나; 또는 X는 -(C=O)-이고 Y는 NR8R9이고;
R3은 수소 또는 (C1-C4)알킬이고;
R4, R5, R6, R7, R8 및 R9는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)할로알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬(이것은 할로, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R10은 -OH, -NR8R9 또는 -F이고; 그리고
R11은 -OH, -NR8R9, -F, 또는 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5원 헤테로사이클이다.
일 실시형태에 있어서, 각각의 당류는 독립적으로 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00104
Figure pct00105
및
Figure pct00106
.
일 실시형태에 있어서, 각각의 당류는 독립적으로
Figure pct00107
또는
Figure pct00108
이다.
일 실시형태에 있어서, T1 및 T2 중 적어도 하나는 존재하지 않는다.
일 실시형태에 있어서, T1 및 T2는 둘 다 존재하지 않는다.
일 실시형태에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 존재하지 않건, 또는 1 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이고, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 존재하지 않거나 또는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 존재하지 않거나 또는 1 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬, 또는 이의 염이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상은 -O- 또는 -NRX-, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬로 선택적으로 대체되고, 탄화수소 사슬은, 할로, 하이드록시 및 옥소(=O)로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 존재하지 않거나 또는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-로 선택적으로 대체되고, 탄화수소 사슬은, 할로, 하이드록시 및 옥소(=O)로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 존재하지 않거나 또는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-로 선택적으로 대체되고, 탄화수소 사슬은, 할로, 하이드록시 및 옥소(=O)로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, T3, T4, T5 및 T6 중 적어도 하나는 하기이다:
Figure pct00109
식 중,
n = 1, 2, 3.
일 실시형태에 있어서, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00110
식 중,
n = 1, 2, 3.
일 실시형태에 있어서, T1 및 T2 중 적어도 하나는 글리신이다.
일 실시형태에 있어서, T1 및 T2의 각각은 글리신이다.
일 실시형태에 있어서, B1은 1 내지 15개의 원자를 포함하는 3가기이고 L1, T1 및 T2에 공유 결합된다.
일 실시형태에 있어서, B1은 1 내지 10개의 원자를 포함하는 3가기이고 L1, T1 및 T2에 공유 결합된다.
일 실시형태에 있어서, B1은 (C1-C6)알킬을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B1은 C3-8 사이클로알킬을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B1은 실릴기를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B1은a D- 또는 L-아미노산.
일 실시형태에 있어서, B1은 당류를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B1은 포스페이트기를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B1은 포스포네이트기를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B1은 아릴을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B1은 페닐 고리를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B1은 페닐 고리이다.
일 실시형태에 있어서, B1은 CH이다.
일 실시형태에 있어서, B1은 헤테로아릴을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B1은
Figure pct00111
및
Figure pct00112
로부터 선택된다.
일 실시형태에 있어서, B2는 1 내지 15개의 원자를 포함하는 3가기이고 T2, T5 및 T6에 공유 결합된다.
일 실시형태에 있어서, B2는 1 내지 10개의 원자를 포함하는 3가기이고 T2, T5 및 T6에 공유 결합된다.
일 실시형태에 있어서, B2는 (C1-C6)알킬을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B2는 C3-8 사이클로알킬을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B2는 실릴기를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B2는 D- 또는 L-아미노산을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B2는 당류를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B2는 포스페이트기를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B2는 포스포네이트기를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B2는 아릴을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B2는 페닐 고리를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B2는 페닐 고리이다.
일 실시형태에 있어서, B2는 CH이다.
일 실시형태에 있어서, B2는 헤테로아릴을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00113
및
Figure pct00114
.
일 실시형태에 있어서, B3은 1 내지 15개의 원자를 포함하는 3가기이고 L1, T1 및 T2에 공유 결합된다.
일 실시형태에 있어서, B3은 1 내지 10개의 원자를 포함하는 3가기이고 L1, T1 및 T2에 공유 결합된다.
일 실시형태에 있어서, B3은 (C1-C6)알킬을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B3은 C3-8 사이클로알킬을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B3은 실릴기를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B3은 D- 또는 L-아미노산을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B3은 당류를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B3은 포스페이트기를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B3은 포스포네이트기를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B3은 아릴을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B3은 페닐 고리를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B3은 페닐 고리이다.
일 실시형태에 있어서, B3은 CH이다.
일 실시형태에 있어서, B3은 헤테로아릴을 포함한다.
일 실시형태에 있어서, B3은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00115
및
Figure pct00116
.
일 실시형태에 있어서, B3은 하기로 이루어진 군 또는 이의 염으로부터 선택된다:
Figure pct00117
및
Figure pct00118
.
일 실시형태에 있어서, L1 및 L2는 독립적으로 1 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이고, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L1은 하기로 이루어진 군 또는 이의 염으로부터 선택된다:
Figure pct00119
및
Figure pct00120
.
일 실시형태에 있어서, L1은 -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O), -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH- 또는 -NH-(SO2)-로 이루어진 군으로부터 선택된 링키지를 통해서 B1에 연결된다.
일 실시형태에 있어서, L1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00121
Figure pct00122
및
Figure pct00123
.
일 실시형태에 있어서, L2는 -O-를 통해서 R2에 연결된다.
일 실시형태에 있어서, L2는 하이드록시로 선택적으로 치환된 C1-4 알킬렌-O-이다.
일 실시형태에 있어서, L2는 -O-를 통해서 R2에 연결된다.
일 실시형태에 있어서, L2는 존재하지 않는다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00124
Figure pct00125
Figure pct00126
Figure pct00127
Figure pct00128
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00129
Figure pct00130
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00131
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00132
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00133
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00134
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00135
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00136
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00137
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00138
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00139
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00140
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00141
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00142
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00143
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00144
식 중,
L1은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
L2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
R2는 핵산이고;
고리 A는 존재하지 않거나, 3-20원 사이클로알킬, 5-20원 아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 3-20원 헤테로사이클로알킬이고;
각각의 RA는 독립적으로 수소, 하이드록시, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 알킬-ORB, C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일로 이루어진 군으로부터 선택되되; C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일은 할로, 하이드록시 및 C1-3 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
RB는 수소, 보호기, 고체 지지체에 대한 공유 결합, 또는 고체 지지체에 결합된 연결기에 대한 결합이고; 그리고
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물 또는 이의 염이다:
Figure pct00145
식 중,
L2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
R2는 핵산이고;
고리 A는 존재하지 않거나, 3-20원 사이클로알킬, 5-20원 아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 3-20원 헤테로사이클로알킬이고;
각각의 RA는 독립적으로 수소, 하이드록시, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 알킬-ORB, C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일로 이루어진 군으로부터 선택되되; C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일은 할로, 하이드록시 및 C1-3 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
RB는 수소, 보호기, 고체 지지체에 대한 공유 결합, 또는 고체 지지체에 결합된 연결기에 대한 결합이고; 그리고
n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물 또는 이의 염이다:
Figure pct00146
식 중, R2는 핵산이다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 화합물이다,
Figure pct00147
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물이다:
Figure pct00148
.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기 화합물 또는 이의 염이다:
Figure pct00149
식 중,
R1c는 당류이고;
L1c는 0 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은 옥소(=O) 및 할로로부터 선택된 1개 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고;
Bc는 5-10원 아릴 또는 5-10원 헤테로아릴이되, 5-10원 아릴 또는 5-10원 헤테로아릴은 할로, 하이드록시, 사이아노, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메톡시, (C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알카노일옥시, (C3-C6)사이클로알킬 및 (C3-C6)사이클로알킬(C1-C6)알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
L2c는 0 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은 옥소(=O) 및 할로로부터 선택된 1개 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고;
R2c는 당류이고;
L3c는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
Ac는 3-20원 사이클로알킬, 5-20원 아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 3-20원 헤테로사이클로알킬이고;
각각의 RAc는 독립적으로 수소, 하이드록시, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 알킬-ORa, C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일로 이루어진 군으로부터 선택되되; C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일은 할로, 하이드록시 및 C1-3 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
nc는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
L4c는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
R3c는 핵산이고;
Rac는 수소이고; 그리고
L5c는 연결기이다.
일 실시형태에 있어서, Bc는 5-10원 아릴이다.
일 실시형태에 있어서, Bc는 나프틸 또는 페닐이다.
일 실시형태에 있어서, Bc는 페닐이다.
일 실시형태에 있어서, 기
Figure pct00150
는
Figure pct00151
이다.
일 실시형태에 있어서, Bc는 5-10원 헤테로아릴이다.
일 실시형태에 있어서, Bc는 피리딜, 피리미딜, 퀴놀릴, 아이소퀴놀릴, 이미다졸릴, 티아졸릴, 옥사다이아졸릴 또는 옥사졸릴이다.
일 실시형태에 있어서, 기
Figure pct00152
는
Figure pct00153
이다.
일 실시형태에 있어서, 기
Figure pct00154
는
Figure pct00155
이다.
일 실시형태에 있어서, L1c는 0 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 2가, 비분지식, 포화 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은 옥소(=O) 및 할로로부터 선택된 1개 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L1c는 0 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 2가, 비분지식, 포화 탄화수소 사슬이되, 여기서 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX-C(=O)- 또는 -C(=O)-NRX-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이다.
일 실시형태에 있어서, L1c는,
-C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-,
-C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-,
-C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2- 또는
-C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-이다.
일 실시형태에 있어서, L2c는 0 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 2가, 비분지식, 포화 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은 옥소(=O) 및 할로로부터 선택된 1개 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L2c는 0 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 2가, 비분지식, 포화 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX-C(=O)- 또는 -C(=O)-NRX-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이다.
일 실시형태에 있어서, L2c는
-C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-,
-C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-,
-C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-, 또는
-C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-이다.
일 실시형태에 있어서, R1c는
Figure pct00156
이되,
식 중,
X는 NR20이고 Y는 -(C=O)R21, -SO2R22 및 -(C=O)NR23R24로부터 선택되거나; 또는 X는 -(C=O)-이고 Y는 NR25R26이거나; 또는 X는 -NR37R38이고 Y는 존재하지 않고;
R20은 수소 또는 (C1-C4)알킬이고;
R21, R22, R23, R24, R25 및 R26은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
R27은 -OH, -NR25R26 또는 -F이고;
R28은 -OH, -NR25R26 또는 -F이고;
R29는 -OH, -NR25R26, -F, -N3, -NR35R36, 또는 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, (C1-C4)알킬, 아릴 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5원 헤테로사이클이되, 여기서 임의의 (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시는 할로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고, 임의의 아릴은 할로, 하이드록실, 나이트로, 사이아노, 아미노, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시, 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
각각의 R35 및 R36은 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되거나; 또는 R35와 R36은 이들이 부착되는 질소와 함께 취해져서 5-6원 헤테로아릴 고리를 형성하고, 헤테로아릴 고리는 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, 아릴 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고, 임의의 아릴, 및 (C3-C6)사이클로알킬은 1개 이상의 R39기로 선택적으로 치환되고;
각각의 R37 및 R38은 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되거나; 또는 R37과 R38은 이들이 부착되는 질소와 함께 취해져서, 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, 옥소(=O), (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5-8원 헤테로사이클을 형성하고, 임의의 (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시는 할로로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고; 그리고
각각의 R39는 독립적으로 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, R1c는
Figure pct00157
Figure pct00158
및
Figure pct00159
이다.
일 실시형태에 있어서, R1c는
Figure pct00160
또는
Figure pct00161
이다.
일 실시형태에 있어서, R1c는
Figure pct00162
또는
Figure pct00163
이다.
일 실시형태에 있어서, R1c는
Figure pct00164
또는
Figure pct00165
이다.
일 실시형태에 있어서, R2c는 하기이다:
Figure pct00166
식 중,
X는 NR20이고 Y는 -(C=O)R21, -SO2R22 및 -(C=O)NR23R24로부터 선택되거나; 또는 X는 -(C=O)-이고 Y는 NR25R26이거나; 또는 X는 -NR37R38이고 Y는 존재하지 않고;
R20은 수소 또는 (C1-C4)알킬이고;
R21, R22, R23, R24, R25 및 R26은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
R27은 -OH, -NR25R26 또는 -F이고;
R28은 -OH, -NR25R26 또는 -F이고;
R29는 -OH, -NR25R26, -F, -N3, -NR35R36, 또는 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, (C1-C4)알킬, 아릴 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5원 헤테로사이클이고, 임의의 (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시는 할로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고, 임의의 아릴은 할로, 하이드록실, 나이트로, 사이아노, 아미노, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
각각의 R35 및 R36은 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 여기서 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되거나; 또는 R35와 R36은 이들이 부착되는 질소와 함께 취해져서 5-6원 헤테로아릴 고리를 형성하고, 헤테로아릴 고리는 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, 아릴 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고, 임의의 아릴, 및 (C3-C6)사이클로알킬은 1개 이상의 R39기로 선택적으로 치환되고;
각각의 R37과 R38은 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되거나; 또는 R37과 R38은 이들이 부착되는 질소와 함께 취해져서, 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, 옥소(=O), (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5-8원 헤테로사이클을 형성하고, 임의의 (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시는 할로로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고; 그리고
각각의 R39는 독립적으로 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, R2c는
Figure pct00167
Figure pct00168
및
Figure pct00169
이다.
일 실시형태에 있어서, R2c는
Figure pct00170
또는
Figure pct00171
이다.
일 실시형태에 있어서, R2c는
Figure pct00172
또는
Figure pct00173
이다.
일 실시형태에 있어서, R2c는
Figure pct00174
또는
Figure pct00175
이다.
일 실시형태에 있어서, L3c는 0 내지 50개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L3c는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L3c는 1 내지 30개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄소 원자들 중 1개 이상이 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬이 1개 이상의 할로 또는 옥소(=O)로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L3c는
Figure pct00176
또는
Figure pct00177
일 실시형태에 있어서, L3c는 -NH-, -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O)-, -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH- 또는 -NH-(SO2)-를 통해서 B에 연결된다.
일 실시형태에 있어서, L4c는 0 내지 50개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L4c는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, L4c는 1 내지 30개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄소 원자들 중 1개 이상이 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 탄화수소 사슬은 1개 이상의 할로 또는 옥소(=O)로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, 기
Figure pct00178
는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00179
또는
Figure pct00180
식 중,
각각의 R'은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일이고; 여기서 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일은 할로 또는 하이드록실로 선택적으로 치환된다.
일 실시형태에 있어서, 기
Figure pct00181
는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00182
Figure pct00183
식 중,
각각의 R'은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일이되; C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일은 할로 또는 하이드록실로 선택적으로 치환되고;
*로 표시된 원자가는 L3c에 부착되고; 그리고
**로 표시된 원자가는 R3c에 부착된다.
일 실시형태에 있어서, 기
Figure pct00184
는
Figure pct00185
이다.
일 실시형태에 있어서, L4c는 -O-를 통해서 R3c에 연결된다.
일 실시형태에 있어서, R3c는 핵산 분자의 포스페이트 중의 산소를 통해서 접합체의 나머지에 부착된다.
일 실시형태에 있어서, R3c는 센스 또는 안티센스 가닥의 5'-말단에서 포스페이트 중의 산소를 통해서 접합체의 나머지에 부착된다.
일 실시형태에 있어서, R3c는 센스 또는 안티센스 가닥의 3'-말단에서 포스페이트 중의 산소를 통해서 접합체의 나머지에 부착된다.
일 실시형태에 있어서, R3c는 센스 가닥의 3'-말단에서 포스페이트 중의 산소를 통해서 접합체의 나머지에 부착된다.
일 실시형태에 있어서, 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
Figure pct00186
Figure pct00187
Figure pct00188
Figure pct00189
Figure pct00190
Figure pct00191
Figure pct00192
Figure pct00193
Figure pct00194
Figure pct00195
Figure pct00196
및
Figure pct00197
.
일 실시형태에 있어서, 표적화된 핵산 접합체는 WO2015/006740, WO2016/028649, US8,106,022B2, US8,450,467B2, US8,828,956B2, WO2016/149020, WO2017/156012, WO2018/044350, WO2016/100401, WO2018/039364, WO2018/044350, WO2017/174657, WO2018/185210, WO2018/185252, WO2018/185253, US9,943,604B2, 또는 US9,714,421B2에 기재된 바와 같은 표적화된 핵산 접합체이다.
본 발명은 구체적인 실시예에 의해서 더욱 상세히 설명될 것이다. 이하의 실시예는 예시의 목적으로 제공되지만, 어떠한 방식으로도 본 발명을 제한하려는 것은 아니다. 당업자라면 본질적으로 동일한 결과를 수득하기 위하여 변화 또는 수정될 수 있는 다양한 비임계적 파라미터를 용이하게 인식할 것이다.
실시예
막 불안정화 중합체는 국제 특허 출원 공개 번호 WO2015/017519 및 WO2016/118697에 기재된 것들과 마찬가지인 출발 물질 및 합성 방법을 이용해서 제조될 수 있다.
표적화된 핵산 접합체는 국제 특허 출원 공개 번호 WO2017/177326에 기재된 바와 같이 그리고 이하에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
실시예 1. 접합체 1의 합성
반응식 1.
Figure pct00198
반응식 2.
Figure pct00199
반응식 3.
Figure pct00200
반응식 4.
Figure pct00201
반응식 5.
Figure pct00202
Figure pct00203
Figure pct00204
단계 1. 2-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)에틸 4-메틸벤젠설포네이트 3의 제조
Figure pct00205
THF(175㎖) 및 수성 NaOH(5M, 145㎖) 중 테트라에틸렌 글리콜(934g, 4.8 ㏖)의 용액을 냉각시키고(0℃), THF(605㎖)에 용해된 p-톨루엔설포닐 클로라이드(91.4g, 480 m㏖)로 처리하고, 이어서 2시간 동안(0℃) 교반하였다. 이 반응 혼합물을 물(3ℓ)로 희석시키고, CH2Cl2(3×500㎖)로 추출하였다. 합한 추출물을 물 및 염수로 세척하고, 이어서 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켜 2-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)에틸 4-메틸벤젠설포네이트 3(140g, 84%)을 담황색 오일로서 제공하였다. Rf (0.57, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 2. 2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-올 4의 제조
Figure pct00206
DMF(880㎖) 중 3(140g, 403 m㏖)의 용액을 아자이드화나트륨(131g, 2.02 ㏖)으로 처리하고, (45℃에서) 하룻밤 가열하였다. 대부분의 DMF를 감압하에 제거하고, 잔사를 CH2Cl2(500㎖)에 용해시키고, 염수(3×500㎖)로 세척하고, 이어서, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 짧은 실리카 층(5% MeOH-CH2Cl2)을 통과시키고 농축시켜, 2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-올 4(65g, 74%)를 황색 오일로서 수득하였다. Rf (0.56, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 3. 퍼아세틸화 갈락토사민 6의 제조
Figure pct00207
피리딘(1.5ℓ) 중 D-갈락토사민 하이드로클로라이드 5(250　g, 1.16 ㏖)를 아세트산 무수물(1.25ℓ, 13.2 ㏖)로 45분에 걸쳐서 처리하였다. 하룻밤 교반 후, 이 반응 혼합물을 3개의 1ℓ 부분으로 나누었다. 각각의 1ℓ 부분을 3ℓ의 냉각수에 붓고, 1시간 동안 혼합하였다. 혼합 후, 고체를 여과제거하고, 합하여 액체 질소 상에서 냉동시키고, 이어서 5일 동안 동결건조시켜 퍼아세틸화 갈락토사민 6(369.4g, 82%)을 백색 고체로서 수득하였다. Rf (0.58, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 4. (3aR,5R,6R,7R,7aR)-5-(아세톡시메틸)-2-메틸-3a,6,7,7a-테트라하이드로-5H-피라노[3,2-d]옥사졸-6,7-다이일 다이아세테이트 7의 제조
Figure pct00208
CHCl3(320㎖) 중 퍼-아세틸화 갈락토사민 6(8.45g, 21.7 m㏖)의 용액을 TMSOTf(4.32㎖, 23.9 m㏖)로 적가 처리하였다. 교반 후(1.5시간, 40℃), 반응물을 트라이에틸아민(5㎖)의 첨가에 의해 반응중지시키고 건조상태로 농축시켜 화합물 7을 담황색 유리로서 제공하였다(7.2g, 정량적). 생성물은 추가의 정제 없이 사용하였다. Rf (0.59, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 5. (2R,3R,4R,5R,6R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 8의 제조
Figure pct00209
화합물 7(7.2g, 21.7 m㏖) 및 2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-올 4(2.65g, 15.2 m㏖)를 톨루엔(150㎖)으로부터 공비 혼합하여(3×) 미량의 물을 제공하였다. 건조된 물질을 1,2-다이클로로에탄(150㎖)에 용해시키고, 냉각시키고(대략 5℃에서), TMSOTf(784㎕, 4.34 m㏖)로 처리하였다. 하룻밤 교반 후, 반응물을 트라이에틸아민(5㎖)의 첨가에 의해 반응중지시키고, 농축시켰다. 잔사를 크로마토그래피(1% → 5% MeOH-CH2Cl2)에 의해 정제시켜 8(7.12g, 85%)을 갈색 오일로서 제공하였다. Rf (0.3, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 6. 2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-아미늄 2,2,2-트라이플루오로아세테이트 9의 제조
Figure pct00210
EtOAc(150㎖) 및 트라이플루오로아세트산(2㎖) 중 아자이드 8(7.12g, 13 m㏖)의 용액을 숯 상의 팔라듐(1.5g, 10% w/w 습윤 기준)으로 처리하였다. 이어서, 이 반응 혼합물을 수소로 퍼지(purge)시키고, 하룻밤 격렬하게 교반하였다. 질소로 퍼지 후, 이 혼합물을 셀라이트를 통해서 여과시키고 MeOH로 헹구었다. 여과액을 농축시키고, 크로마토그래피(5% → 10% → 20% MeOH-CH2Cl2)를 통해서 정제시켜 9(5.8g, 72%)를 갈색 오일로서 제공하였다. Rf (0.34, 15% MeOH-CH2Cl2).
단계 7. 다이-tert-부틸 4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)-4-(3-(tert-부톡시(-3-옥소프로필)헵탄다이오에이트 11의 제조
Figure pct00211
25% Na2CO3(수성)(150㎖) 및 다이클로로메탄(300㎖) 중 다이-tert-부틸 4-아미노-4-(3-(tert-부톡시(-3-옥소프로필)헵탄다이오에이트 10(13.5g, 33 m㏖)의 용액에 벤질 클로로폼에이트(14㎖, 98 m㏖)를 서서히 첨가하였다. 용액을 실온에서 하룻밤(16시간) 격렬하게 교반하였다. 완료 시, 추가의 다이클로로메탄(100㎖)을 첨가하고, 다이클로로메탄층을 분리시켰다. 수성층을 다이클로로메탄(2×100㎖)으로 추출하였다. 합한 다이클로로메탄 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켰다. 생성물 11을 무색 오일로서 단리시켰으며, 이것은 추가의 정제를 필요로 하지 않았다(15.8g, 88%). Rf (0.7, 1:1 EtOAc-헥산).
단계 8. 4-(((벤질옥시)카보닐)아미노)-4-(2-카복시에틸)헵탄다이오산 12의 제조
Figure pct00212
폼산(50㎖) 중 11(15.6g, 28.8 m㏖)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이 용액을 건조 상태로 농축시키고, 에틸 아세테이트(~25㎖)에 용해시켰다. 정치 시, 생성물을 무색 고체로서 결정화시켰다. 고체를 여과시키고, 에틸 아세테이트로 세척하고, 공기 건조시켜 12를 무색 고체로서 제공하였다(10.2g, 93%). Rf (0.1, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 9. 화합물 13의 제조
Figure pct00213
DMF(50㎖) 중 12(793㎎, 2.08 m㏖) 및 9(5.8g, 9.36 m㏖)의 용액을 BOP(3.67g, 8.32 m㏖)에 이어서 N,N-다이아이소프로필에틸아민(4.31㎖, 25 m㏖)으로 처리하였다. 하룻밤 교반 후, 혼합물을 건조 상태로 농축시키고, 크로마토그래피(1% → 2% → 5% → 10% → 15% MeOH-CH2Cl2)에 적용하여 13(5.71g [조질물], >100% - 다음 단계에 영향을 미치지 않는 커플링 부산물 함유)을 제공하였다. Rf (0.45, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 10. 화합물 14의 제조
Figure pct00214
화합물 13(5.7g)을 MeOH(150㎖) 및 TFA(1.5㎖)에 용해시키고, 숯 상의 팔라듐(1g, 10% w/w 습윤 기준)으로 처리하였다. 이어서, 이 반응 혼합물을 수소로 퍼지시키고, 하룻밤 격렬하게 교반하였다. 질소로 퍼지 후, 이 혼합물을 셀라이트를 통해서 여과시키고 MeOH로 헹구었다. 여과액을 농축시키고, 크로마토그래피(5% → 10% → 20% MeOH-CH2Cl2)를 통해서 정제시켜 14를 갈색 오일로서 제공하였다(2.15g, 2개 단계에 걸쳐서 56%). Rf (0.32, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 11. (5-아미노-1,3-페닐렌)다이메탄올 15의 제조
Figure pct00215
THF(350㎖) 중 다이메틸 5-아미노아이소프탈레이트(20.0g, 96 m㏖)의 용액을 THF(440㎖) 중 3.75 eq LiAlH4(13.6g, 358 m㏖)의 환류 혼합물에 1시간에 걸쳐서 적가하였다. 이 혼합물을 더욱 2시간 동안 환류 하에 교반하고, 이어서 실온까지 냉각시키고, MeOH(27㎖)에 이어서 물(40㎖)의 조심스러운 첨가에 의해 반응중지시켰다. 반응 중지된 혼합물을 2시간 동안 교반 후, 여과시키고 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 EtOAc로부터 재결정(2회)시켜 15를 황갈색 결정으로서 제공하였다(10.2g, 70%).
단계 12. 메틸 10-((3,5-비스(하이드록시메틸)페닐)아미노)-10-옥소데카노에이트 16의 제조
Figure pct00216
2:1 다이클로로메탄/메탄올(200㎖) 중 메틸 세바케이트(3.8g, 17 m㏖), 15(2.5g, 17 m㏖) 및 EEDQ(8.1g, 33 m㏖)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 완료 시, 용액을 건조 상태로 농축시켰다. 얻어진 고체를 다이클로로메탄(50㎖)과 배산(triturate)시키고, 여과시켰다. 얻어진 고체를 냉 다이클로로메탄으로 헹구고 공기 건조시켜 16을 무색 고체로서 제공하였다(4.3g, 72%). Rf (0.33, EtOAc).
단계 13. 메틸 10-((3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-(하이드록시메틸)페닐)아미노)-10-옥소데카노에이트 17의 제조
Figure pct00217
피리딘(50㎖) 중 16(4.3g, 12 m㏖)의 용액에 4,4'-(클로로(페닐)메틸렌)비스(메톡시벤젠)(4.1g, 12 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 질소 하에 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 용액을 건조 상태로 농축시키고, 잔사를 칼럼 크로마토그래피(0.5% → 0.75% → 1% → 1.5% MeOH-CH2Cl2)에 의해 정제시켜 17을 황색 고체로서 제공하였다(2.9g, 35%). Rf (0.6, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 14. 리튬 10-((3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-(하이드록시메틸)페닐)아미노)-10-옥소데카노에이트 18의 제조
Figure pct00218
THF(60㎖) 중 17(2.9g, 4.3 m㏖)의 용액에 물(15㎖) 및 수산화리튬(112㎎, 4.7 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 용액을 농축시켜 THF를 제거하였다. 나머지 수성 용액을 액체 질소 위에서 급속 냉동시키고, 하룻밤 동결건조시켜 무색 고체(2.9g, 정량적)를 제공하였다. Rf (0.3, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 15. 화합물 19의 제조
Figure pct00219
무수 DMF(25㎖) 중 14(454㎎, 0.67 m㏖), 18(1.25g, 0.67 m㏖) 및 HBTU(381㎎, 1.0 m㏖)의 용액에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.35㎖, 2.0 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 이 용액을 에틸 아세테이트(250㎖)에 붓고, 염수(3×200㎖)로 세척하였다. 에틸 아세테이트 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피(CH2Cl2 중 5% → 7.5% → 10% → 15% MeOH)에 의한 정제에 의해 19를 연한 오렌지색 발포물로서 제공하였다(1.5g, 94%). Rf (0.25, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 16. 화합물 20의 제조
Figure pct00220
무수 CH2Cl2(50㎖) 중 화합물 19(1.5g, 0.6 m㏖), 석신산 무수물(120㎎, 1.2 m㏖), DMAP(220㎎, 1.8 m㏖) 및 트라이메틸아민(250㎕, 1.8 m㏖)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 이 용액을 건조 상태로 농축시키고, 실리카의 짧은 플러그(100% CH2Cl2 → CH2Cl2 중 15% MeOH)를 통해 여과시켜 생성물 20을 밝은 베이지색 발포물로서 제공하였다(1.1g, 70%). 질량 m/z (ES-TOF MS) 727.7 [M + 3H - DMTr]+, 1091.1 [M + 2H - DMTr]. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.92 (br s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.49-7.47 (m, 3H), 7.41 (br s, 1H), 7.38-7.34 (m, 5H), 7.32-7.26 (m, 4H), 7.24-7.08 (br s, 3H), 7.08 (s, 1H), 6.90-6.80 (m, 7H), 5.31 (d, 3H, J = 2.7Hz), 5.12 (s, 2H), 5.06 (dd, 3H, J = 11.2, 3.2 Hz), 4.78 (d, 3H, J = 8.5 Hz), 4.24-4.08 (m, 12H), 3.95-3.88 (m, 7H), 3.85-3.76 (m, 4H), 3.78 (s, 6H), 3.68-3.56 (m, 34H), 3.54-3.44 (m, 8H), 3.41-3.33 (m, 6H), 2.70-2.60 (m, 4H), 2.52-2.30 (m, 30H), 2.24-2.16 (m, 8H), 2.14 (s, 9H), 2.04 (s, 9H), 2.02-1.96 (m, 6H), 1.98 (s, 9H), 1.96 (s, 9H), 1.74-1.52 (m, 4H), 1.36-1.24 (m, 12H).
단계 17. 접합체 1의 제조
Figure pct00221
석시네이트 20을 표준 아마이드 커플링 화학을 이용하여 1000Å LCAA (장쇄 아미노알킬) CPG(대조 기공 유리(control pore glass)) 상에 로딩하였다. 무수 아세토나이트릴(0.3㎖) 중 다이아이소프로필카보다이이미드(52.6 μ㏖), N-하이드록시 석신이미드(0.3㎎, 2.6 μ㏖) 및 피리딘(10㎕)의 용액을 무수 다이클로로메탄(0.2㎖) 중 20(20.6㎎, 8 μ㏖)에 첨가하였다. 이 혼합물을 LCAA CPG(183㎎)에 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 하룻밤 온화하게 혼합하였다. 20이 사라지면(HPLC), 이 반응 혼합물을 여과시키고, CPG를 1㎖의 각각의 다이클로로메탄, 아세토나이트릴, THF 중 5% 아세트산 무수물/5% N-메틸이미다졸/5% 피리딘의 용액, 이어서 THF, 아세토나이트릴 및 다이클로로메탄으로 세척하였다. 이어서, CPG를 고진공 하에 하룻밤 건조시켰다. 로딩은 UV/Vis(504㎚)에 의한 표준 DMTr 검정에 의해 25 μ㏖/g인 것으로 결정되었다. 얻어진 GalNAc 로딩된 CPG 고체 지지체를 표준 절차를 이용하는 자동 올리고뉴클레오타이드 합성에 이용하였다. 뉴클레오타이드 탈보호에 이어서 (동시 갈락토사민 아세테이트 탈보호와 함께) 고체 지지체로부터 제거하여 GalNAc-올리고뉴클레오타이드 접합체 1을 대표적인 예로서 제공하였다.
실시예 2: 접합체 34의 합성
반응식 6.
Figure pct00222
반응식 7.
Figure pct00223
반응식 8.
Figure pct00224
단계 1. 다이-tert-부틸 4-(2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)아세트아미도)-4-(3-(tert-부톡시(-3-옥소프로필)헵탄다이오에이트 21의 제조
Figure pct00225
CH2Cl2(300㎖) 중 다이-tert-부틸 4-아미노-4-(3-(tert-부톡시(-3-옥소프로필)헵탄다이오에이트(25g, 60 m㏖) 및 Z-글리신(18.9g, 90.2 m㏖)의 용액을 EDC(23g, 120 m㏖), 다이아이소프로필에틸아민(32㎖, 180 m㏖) 및 DMAP(Cat. 17㎎)로 차례로 처리하였다. 교반(16시간) 후, 이 반응 혼합물을 NaHCO3(포화 수성)에 붓고, CH2Cl2로 추출하고, 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켜 다이-tert-부틸 4-(2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)아세트아미도)-4-(3-(tert-부톡시(-3-옥소프로필)헵탄다이오에이트 21을 비정질 고체로서 제공하였으며, 추가의 처리 없이 사용하였다(36g, 정량적). Rf (0.85, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 2. 4-(2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)아세트아미도)-4-(2-카복시에틸)헵탄다이오산 22의 제조
Figure pct00226
다이-tert-부틸 4-(2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)아세트아미도)-4-(3-(tert-부톡시(-3-옥소프로필)헵탄다이오에이트 21(59.3mmol, 36g)의 용액을 순수한 폼산(150㎖)에서 72시간 동안 교반하였다, 완료 시, 폼산을 감압 하에 제거하고, 조질의 고체를 고진공 하에 하룻밤 건조시켜 22를 무색 고체로서 수득하였다(15.9g, 61%). Rf (0.15, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 3. 화합물 23의 제조
Figure pct00227
DMF(250㎖) 중 22(6.2g, 14.1 m㏖) 및 2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-아미늄 2,2,2-트라이플루오로아세테이트(35g, 56.5 m㏖)의 용액을 BOP(25g, 56.5 m㏖)에 이어서, N,N-다이아이소프로필에틸아민(29㎖, 170 m㏖)으로 처리하였다. 하룻밤 교반 후, 혼합물을 건조 상태로 농축시키고, 크로마토그래피(100% CH2Cl2 내지 15% MeOH-CH2Cl2)에 적용하여 화합물 23(24.6g, 89%)을 제공하였다. Rf (0.55, 15% MeOH-CH2Cl2).
단계 4. 화합물 24의 제조
Figure pct00228
화합물 23(24.6g)을 MeOH(200㎖) 및 TFA(1.5㎖)에 용해시키고, 질소로 퍼지시켰다. 숯 상의 팔라듐(1g, 10% w/w 습윤 기준)을 첨가하고, 이어서, 이 반응 혼합물을 수소로 퍼지시키고, 하룻밤 격렬하게 교반하였다. 완료 시, 반응물을 질소로 퍼지시키고, 셀라이트를 통해서 여과시키고, MeOH로 헹구었다. 여과액을 농축시키고, 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 5% → 10% → 20% MeOH-CH2Cl2)에 의해 정제시켜 24를 담갈색 점성 오일로서 제공하였다(23g). Rf (0.32, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 5. (5-아미노-1,3-페닐렌)다이메탄올 26의 제조
Figure pct00229
무수 테트라하이드로퓨란(450㎖) 중 리튬 알루미늄 하이드록사이드(13.6g, 358 m㏖)의 현탁액을 질소 분위기 하에 환류시키고, 무수 테트라하이드로퓨란(350㎖) 중 다이메틸-5-아미노아이소프탈레이트 25(20g, 96 m㏖)의 용액으로 적가 처리하였다. 첨가가 완료된 후에, 혼합물을 추가로 2시간 동안 가열 환류시켰다. 완료 시, 이 용액을 실온까지 냉각시키고, MeOH(27㎖)에 이어서, 물(40㎖)을 서서히 첨가하여 반응중지시켰다. 2시간 동안 교반 후, 혼합물을 여과시키고, 농축시키고, EtOAc로부터 재결정시켜 (5-아미노-1,3-페닐렌)다이메탄올 26을 회백색 결정으로서 수득하였다(10.2g, 70%). Rf 0.5 (15% MeOH-CH2Cl2).
단계 6. 3,5-비스(하이드록시메틸)벤조나이트릴 27의 제조
Figure pct00230
2N 염산(100㎖) 중 26(5g, 33 m㏖)의 용액을 0℃까지 냉각시키고, 물(50㎖) 중 질산나트륨(3.53g, 36m㏖)의 냉각 용액으로 처리하였다. 이 반응 혼합물을 5℃ 이하의 온도에서 30분 동안 유지시키고, 이어서 물(50㎖) 중 사이안화구리(I)(3.19g, 35.6m㏖) 및 사이안화나트륨(3.53g, 72m㏖)의 용액으로 단일 부분으로 처리하였다. 하룻밤 교반 후, 실온에서 혼합물을 여과시키고, 다이클로로메탄(3×100㎖)으로 추출하고, 농축시키고, 추가의 정제 없이 사용하였다. 다이올, 3,5-비스(하이드록시메틸)벤조나이트릴 27을 황색 고체로서 얻었다(2.19g, 41%). Rf 0.75 (15% MeOH-CH2Cl2).
단계 7. 3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-(하이드록시메틸)벤조나이트릴 28의 제조
Figure pct00231
피리딘(14㎖) 중 3,5-비스(하이드록시메틸)벤조나이트릴 27(538㎎, 3.3 m㏖)의 용액을 4,4'-다이메톡시트라이틸 클로라이드(1.17g, 3.46 m㏖)로 처리하고, 실온에서 하룻밤 교반하였다. 일단 완료되면, 혼합물을 농축시키고, 다이에틸에터(25㎖)에 분산시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 생성물을 실리카겔 60의 칼럼 크로마토그래피(구배: 10% 내지 50% EtOAc-헥산)에 의해 정제시켜 28을 황색 고체로서 수득하였다(725㎎, 47%). Rf 0.5 (1:1 EtOAc-헥산).
단계 8. (3-(아미노메틸)-5-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)페닐)메탄올 29의 제조
Figure pct00232
메틸 테트라하이드로퓨란(5㎖) 중 28(100㎎, 0.22 m㏖)의 용액을 0℃까지 냉각시키고, 리튬 알루미늄 하이드록사이드(0.64 m㏖ = 0.28㎖의 MeTHF 중 2.3M 용액)로 서서히 처리하였다. 1시간 동안 교반 후, 반응물을 메탄올(1㎖)에 이어서 물(0.3㎖)의 첨가에 의해 반응중지시키고 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과시키고 농축시켜 (3-(아미노메틸)-5-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)페닐)메탄올 29(78㎎, 77%)를 수득하였다. Rf 0.15 (10% MeOH-CH2Cl2).
단계 9. 메틸 10-((3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-(하이드록시메틸)벤질)아미노)-10-옥소데카노에이트 30의 제조
Figure pct00233
다이클로로메탄(5㎖) 중 (3-(아미노메틸)-5-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)-메틸)페닐)메탄올 29(78㎎, 0.17 m㏖) 및 모노메틸 세바케이트(38㎎, 0.17 m㏖)의 용액을 EDC(48㎎, 0.25 m㏖), DMAP(cat., 5㎎) 및 다이아이소프로필에틸아민(57㎕, 0.33 m㏖)로 차례로 처리하였다. 교반 후(3.5시간), 이 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액(50㎖)에 부었다. 중탄산나트륨 용액을 다이클로로메탄(3×50㎖)으로 추출하고, 염수(50㎖)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켰다. 조질의 물질을 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 2% 내지 5% MeOH-CH2Cl2)에 의해 정제시켜 메틸 10-((3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-(하이드록시메틸)벤질)아미노)-10-옥소데카노에이트 30을 황색 오일(57㎎, 53%)로서 제공하였다. Rf 0.45 (10% MeOH-CH2Cl2).
단계 10. 리튬 10-((3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-(하이드록시메틸)벤질)아미노)-10-옥소데카노에이트 31의 제조
Figure pct00234
화합물 30(188㎎, 0.28 m㏖)을 테트라하이드로퓨란(5㎖)에 용해시키고, 물(1㎖) 중 LiOH(7㎎, 0.30 m㏖)의 용액으로 처리하였다. 완료 시, 테트라하이드로퓨란을 진공 중 제거하고, 나머지 수성 혼합물을 냉동시키고, 동결건조시켜 리튬 10-((3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-(하이드록시메틸)벤질)아미노)-10-옥소데카노에이트 31을 무색 고체로서 제공하였다(180㎎, 99%). Rf 0.45 (10% MeOH-CH2Cl2).
단계 11. 화합물 32, 33 및 34의 제조
화합물 32, 33 및 34는 각각 화합물 19, 20 및 1을 합성하는데 사용된 동일한 절차에 따라서 제조하였다.
실시예 3. 접합체 36의 합성
Figure pct00235
단계 1. 접합체 36의 제조
접합체 36은 화합물 34 및 모든 대응하는 물질을 합성하는데 사용된 것과 동일한 절차를 이용해서 제조하였다. 유일한 예외는 화합물 6의 합성에서 프로피온산 무수물이 아세트산 무수물 대신에 사용된 점이다.
실시예 4. 접합체 42의 합성
반응식 9.
Figure pct00236
반응식 10.
Figure pct00237
Figure pct00238
단계 1. 화합물 37의 제조
Figure pct00239
N,N-다이메틸폼아마이드(20㎖) 중 18β-글리시레틴산(2.5g, 5.3 m㏖), tert-부틸 (3-아미노프로필)카바메이트(1.1g, 6.4 m㏖) 및 HBTU(3.0g, 8.0 m㏖)의 용액에 다이아이소프로필에틸아민(2.75㎖, 15.9 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 이 용액을 진공 중 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 2% 내지 5% MeOH/CH2Cl2)에 의해 정제시켜 생성물을 무색 고체로서 제공하였다(2.1g, 63%).
단계 2. 화합물 38의 제조
Figure pct00240
다이클로로메탄(25㎖) 중 37(2.1g, 3.3 m㏖) 및 트라이에틸아민(3.5㎖, 10 m㏖)의 용액에 아세트산 무수물(850㎕, 5.3 m㏖) 및 DMAP(5㎎)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 이 용액을 건조 상태로 농축시키고, 에틸 아세테이트(100㎖)에 용해시키고, 물(100㎖)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켜, 담갈색 발포물(1.9g, 85%)을 제공하였다.
단계 3. 화합물 39의 제조
Figure pct00241
무수 다이옥산(25㎖) 중 38(1.5g, 2.3 m㏖)의 용액에 다이옥산 중 2M 염화수소(25㎖)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하고, 이어서 진공 중 건조 상태로 농축시켜 연갈색 고체(1.3g, 96%)를 제공하였다.
단계 4. 화합물 40, 41 및 42의 제조
화합물 40, 41 및 42는 각각 화합물 19, 20 및 1을 합성하는데 사용된 동일한 절차에 따라서 제조하였다.
실시예 5. 접합체 43의 합성
반응식 11.
Figure pct00242
반응식 12.
Figure pct00243
단계 1. 메틸 11-(2,6-비스(하이드록시메틸)-4-메틸페녹시(운데카노에이트 44의 제조
Figure pct00244
아세톤(100㎖) 중 2,6-비스(하이드록시메틸)-p-크레졸(2.7g, 16.3 m㏖), 메틸 11-브로모운데카노에이트(5.0g, 17.9 m㏖) 및 탄산칼륨(4.5g, 32.6 m㏖)의 용액을 16시간 동안 환류시켰다. 완료 시, 용액을 진공 중 건조 상태로 농축시키고, 에틸 아세테이트(150㎖)에 현탁시키고, 물(2×100㎖) 및 염수(100㎖)로 세척하였다. 에틸 아세테이트 층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배 100% Hex → 50% EtOAc/Hex)에 의해 정제시켜 메틸 11-(2,6-비스(하이드록시메틸)-4-메틸페녹시)운데카노에이트 44를 무색 오일로서 제공하였다(1.6g, 27%).
단계 2. 메틸 11-(2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-6-(하이드록시메틸)-4-메틸페녹시(운데카노에이트 45의 제조
Figure pct00245
무수 피리딘(20㎖) 중 메틸 11-(2,6-비스(하이드록시메틸)-4-메틸페녹시(운데카노에이트 44(1.5g, 4.1 m㏖)의 용액에 4,4'-다이메톡시트라이틸 클로라이드(1.4g, 4.1 m㏖)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 용액을 진공 중 건조 상태로 농축시키고, 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(CH2Cl2 중 0.5 내지 1% MeOH)에 의해 정제시켜 메틸 11-(2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-6-(하이드록시메틸)-4-메틸페녹시(운데카노에이트 45를 담황색 고체로서 제공하였다(1.1g, 40%).
단계 3. 리튬 11-(2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-6-(하이드록시메틸)-4-메틸페녹시(운데카노에이트 46의 제조
Figure pct00246
무수 테트라하이드로퓨란(40㎖) 및 물(10㎖) 중 메틸 11-(2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-6-(하이드록시메틸)-4-메틸페녹시(운데카노에이트 45(1.1g, 1.7 m㏖)의 용액에 수산화리튬(44㎎, 1.8 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 진공 중 농축시켜 모든 테트라하이드로퓨란을 제거하였다. 나머지 수성 용액을 액체 질소 위에서 급속 냉동시키고, 이어서 하룻밤 동결건조시켜 리튬 11-(2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-6-(하이드록시메틸)-4-메틸페녹시(운데카노에이트 46을 연한 분홍색 고체로서 제공하였다(1.1g, 94%).
단계 4. 화합물 47의 제조
N,N-다이메틸폼아마이드(25㎖) 중 10(1.33g, 0.66 m㏖), 46(0.5g, 0.73 m㏖), HBTU(400㎎, 1 m㏖)의 용액에 다이아이소프로필에틸아민(0.35㎖, 2 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 하룻밤(18시간) 실온에서 교반하였다. 완료 시, 용매를 진공 중 제거하고, 잔사를 실리카겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 100% CH2Cl2 - CH2Cl2 중 5% - 10% - 15% MeOH)에 의해 정제시켜 47을 무색 고체로서 제공하였다(710㎎, 41%).
단계 5. 화합물 48의 제조
다이클로로메탄(15㎖) 중 47(0.71g, 0.3 m㏖), 트라이에틸아민(0.4㎖, 3.0 m㏖) 및 폴리스타이렌-DMAP(3 m㏖/g 로딩, 200㎎, 0.6 m㏖)의 용액에 석신산 무수물(60㎎, 0.6 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하고, 완결 시 여과시키고, 진공 하에 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배 CH2Cl2 중 5% 내지 20% MeOH)에 의해 정제시켜 48을 담황색 고체로서 제공하였다(570㎎, 70%). 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 7.91 (m, 1H), 7.86-7.76 (m, 6H), 7.45-7.40 (m, 2H), 7.36-7.14 (m, 10H), 7.10 (s, 1H), 6.91 (d, J = 8.9 Hz, 4H), 5.21 (d, J = 3.3 Hz, 3H), 5.01 (s, 2H), 4.97 (dd, J = 11.2, 3.4 Hz, 3H), 4.56 (d, J = 8.5 Hz, 3H), 4.06-3.98 (m, 11H), 3.93-3.84 (m, 3H), 3.81-3.72 (m, 3H), 3.74 (s, 6H), 3.65-3.46 (m, 38H), 3.40-3.35 (m, 6H), 3.20-3.16 (m, 6H), 2.56-2.44 (m, 4H), 2.33 (s, 3H), 2.15-2.08 (m, 2H), 2.10 (s, 9H), 2.04-1.96 (m, 6H), 1.89 (s, 9H), 1.82-1.76 (m, 4H), 1.77 (s, 9H), 1.54-1.34 (m, 4H), 1.28-1.10 (m, 12H),
단계 6. 화합물 49의 제조
다이클로로메탄(2㎖) 및 아세토나이트릴(3㎖) 중 48(100㎎, 40 μ㏖), N-하이드록시석신이미드(30 ㎎/㎖ 아세토나이트릴 중 용액, 50㎕, 13 μ㏖), N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드(40㎕, 264 μ㏖) 및 피리딘(50㎕)의 용액에 1000 Å lcaa CPG(프라임 합성, 920㎎)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 하룻밤 오비탈 셰이커(orbital shaker)에서 교반하였다. 반응 용액의 TLC 분석은, 활성화된 N-하이드록시석신산 에스터의 단지 부분적인 소비를 나타내었으므로, 추가의 CPG(500㎎)를 첨가하였다. 이 용액을 재차 하룻밤 교반하였다. 완료 시, CPG를 여과시키고, 다이클로로메탄(25㎖), 아세토나이트릴(25㎖) 및 테트라하이드로퓨란(25㎖)으로 세척하였다. CPG 상의 미반응 아민 잔기를 아세토나이트릴(3㎖) 중 아세트산 무수물 및 테트라하이드로퓨란(3㎖) 중 10% N-메틸이미다졸/10% 피리딘의 1:1 용액을 첨가함으로써 아세틸화(캐핑)하였다. 현탁액을 2시간 동안 정치시키고, 이어서 여과시키고, 동등한 부분의 테트라하이드로퓨란(25㎖), 아세토나이트릴(25㎖) 및 다이클로로메탄(25㎖)으로 헹구었다. 로딩된 CPG 49를 고진공 하에 하룻밤 건조시켰다. 리간드 로딩 효율은 표준 DMT 로딩 검정(CH2Cl2 중 3% 트라이클로로아세트산, UV-VIS, A504)을 이용해서 22 μ㏖/g인 것으로 결정되었다.
단계 7. 접합체 43의 제조
얻어진 GalNAc 로딩된 CPG 고체 지지체 49를 표준 절차를 이용하는 자동 올리고뉴클레오타이드 합성에 이용하였다. 뉴클레오타이드 탈보호에 이은 고체 지지체로부터의 제거(동시 갈락토사민 아세테이트 탈보호와 함께)에 의해 GalNAc-올리고뉴클레오타이드 접합체 43을 제공하였다.
실시예 6. 접합체 50의 합성
반응식 13.
Figure pct00247
반응식 14.
Figure pct00248
Figure pct00249
단계 1. 2-((2-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)에틸)아미노)에탄-1-올 51의 제조
Figure pct00250
무수 아세토나이트릴(200㎖) 중 에탄올아민(77㎖, 1.25 ㏖) 및 (2-브로모에톡시)-tert-부틸 다이메틸실란(15g, 62.7 m㏖)의 용액을 3시간 동안 환류시켰다. 완료 시 반응물을 실온까지 냉각시키고, 물(400㎖)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(3×150㎖)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 먼저 50% 에틸 아세테이트/헥산을, 이어서 50% MeOH/EtOAc를 이용하는 실리카의 패드를 통한 여과에 의해 정제시켜 51을 담황색 오일로서 제공하였다(14g, 100%).
단계 2. 2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)-N-(2-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)에틸)에탄-1-아민 52의 제조
Figure pct00251
무수 다이클로로메탄(250㎖) 중 2-((2-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)에틸)아미노)에탄-1-올 51(14g, 64 m㏖) 및 트라이에틸아민(17.5㎖, 128 m㏖)의 용액에 4,4'-다이메톡시트라이틸 클로라이드(24g, 70 m㏖)를 첨가하였다. 이어서, 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하고 나서, 진공 중 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트(300㎖)에 용해시키고, 물(250㎖) 및 염수(250㎖)로 세척하였다. 에틸 아세테이트를 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 건조 상태로 농축시켰다. 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(CH2Cl2 중 1% 내지 5% MeOH)에 의해 정제시켜 52를 담황색 점성 오일로서 제공하였다(13g, 39%).
단계 3. 메틸 10-((2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)에틸)(2-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)에틸)아미노)-10-옥소데카노에이트 53의 제조
Figure pct00252
N,N-다이메틸폼아마이드(100㎖) 중 2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)-N-(2-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)에틸)에탄-1-아민 52(5.4g, 10.3 m㏖), 모노메틸 세바케이트(2.2g, 10.3g), HBTU(4.9g, 12.9 m㏖), DIPEA(5.3㎖, 30.9 m㏖)의 용액을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 완료 시, 이 용액을 물(400㎖)에 붓고, 에틸 아세테이트(1×500㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 추출물을 염수(2×250㎖)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 건조 상태로 농축시켰다. 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(헥산 중 10% 내지 25% 에틸 아세테이트)에 의해 정제시켜 53을 점성 황색 오일로서 제공하였다(6.5g, 87%).
단계 4. 메틸 10-((2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)에틸)(2-하이드록시에틸)아미노)-10-옥소데카노에이트 54의 제조
Figure pct00253
무수 테트라하이드로퓨란(20㎖) 중 메틸 10-((2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)에틸)(2-((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)에틸)아미노)-10-옥소데카노에이트 53(2.0g, 2.8 m㏖) 및 트라이에틸아민(1㎖)의 용액에 TBAF(THF 중 1M, 3.4㎖, 3.3 m㏖)를 첨가하였다. 이 용액을 6시간 동안 교반하였지만, 단지 부분적인 전환이 TLC(CH2Cl2 중 5% MeOH)에 의해 관찰되었다. 추가의 1.7㎖ TBAF를 첨가하고, 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 이 용액을 진공 중 농축시키고 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(헥산 중 10% 내지 50% EtOAc, 이어서 100% EtOAc)에 의해 정제시켜 54를 점성 무색 오일로서 제공하였다(0.5g, 29%).
단계 5. 리튬 10-((2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)에틸)(2-하이드록시에틸)아미노)-10-옥소데카노에이트 55의 제조
Figure pct00254
THF(40㎖) 중 메틸 10-((2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)에틸)(2-하이드록시에틸)아미노)-10-옥소데카노에이트 54(0.5g, 0.83 m㏖)의 용액에 물(10㎖) 및 수산화리튬(24㎎, 1.0 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하고, 이어서 진공 중 농축시켜 THF를 제거하였다. 나머지 수성 용액을 액체 질소 위에서 급속 냉동시키고, 동결건조시켜 55를 무색 고체로서 제공하였다(485㎎, 95%).
단계 6. 화합물 56, 57, 58 및 50의 제조
화합물 56, 57, 58 및 50은 각각 화합물 47, 48, 49 및 43을 합성하는데 사용된 것과 동일한 절차를 이용해서 제조하였다.
실시예 7. 접합체 59의 합성
반응식 15.
Figure pct00255
반응식 16.
Figure pct00256
단계 1. 메틸 (2R,5R)-5-하이드록시피페리딘-2-카복실레이트 61의 제조
Figure pct00257
(2R,5R)-5-하이드록시피페리딘-2-카복실산 60(3.5g, 24.1 m㏖)을 MeOH(50㎖)에서 교반하였다. HCl(g)을 용액을 통해 2분 동안 버블링시키고, 이 반응물을 1.5시간 동안 환류 하에 교반하였다. 이 반응물을 진공 중 농축시켜 메틸 (2R,5R)-5-하이드록시피페리딘-2-카복실레이트 61을 정량적 수율로 제공하였으며, 이것은 추가의 정제 없이 사용되었다.
단계 2. 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R,5R)-5-하이드록시피페리딘-1,2-다이카복실레이트 62의 제조
Figure pct00258
메틸 (2R,5R)-5-하이드록시피페리딘-2-카복실레이트 61(24.1 m㏖) 및 TEA(7.2㎖, 53.02 m㏖)를 DCM(100㎖)에서 실온(RT)에서 교반하였다. 다이-tert-부틸-다이-카보네이트(5.7g, 26.5 m㏖)를 나누어서 첨가하고, 이 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 DCM(100㎖)으로 희석시키고, 1M HCl(2×75㎖), 포화 NaHCO3(2×75㎖), H2O(2×75㎖) 및 포화 NaCl 용액(2×75㎖)으로 차례로 세척하였다. 유기물을 분리시키고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켜 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2R,5R)-5-하이드록시피페리딘-1,2-다이카복실레이트 62(5.53g, 88%)를 제공하였으며, 이것은 추가의 정제 없이 사용되었다.
단계 3. tert-부틸 (2R,5R)-5-하이드록시-2-(하이드록시메틸)피페리딘-1-카복실레이트 63의 제조
Figure pct00259
(2R,5R)-1-(tert-부톡시카보닐)-5-하이드록시피페리딘-2-카복실산 62(5.53g, 21.4 m㏖)를 THF에서 0℃에서 교반하였다. LiBH4(THF 중 3.0M 용액)(8.9㎖, 27.7 m㏖)를 1시간에 걸쳐서 적가하였다. 이 반응물을 실온까지 가온시키고, 16시간 동안 계속해서 교반하였다. 반응물을 1M NaOH로 반응중지시키고, THF를 진공 중 제거하고, 수성층을 EtOAc(10×100㎖)로 배타적으로 추출하였다. 합한 유기물을 H2O(50㎖), 포화 NaCl 용액(2×50㎖)으로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켜 tert-부틸 (2R,5R)-5-하이드록시-2-(하이드록시메틸)피페리딘-1-카복실레이트 63(2.4g, 49.0%)을 제공하였으며, 이것은 추가의 정제 없이 사용되었다.
단계 4. (3R,6R)-6-(하이드록시메틸)피페리딘-3-올 64의 제조
Figure pct00260
tert-부틸 (2R,5R)-5-하이드록시-2-(하이드록시메틸)피페리딘-1-카복실레이트 63(2.4g, 10.4 m㏖)을 Et2O에서 실온에서 교반하였다. HCl(g)을 45초 동안 버블링시키고, 이 반응물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 이 반응물을 진공 중 농축시키고, 고진공 하에 건조시켜, (3R,6R)-6-(하이드록시메틸)피페리딘-3-올 64를 제공하였다. 생성물은 추가의 정제 없이 사용하였다.
단계 5. 2,2,2-트라이플루오로-1-((2R,5R)-5-하이드록시-2-(하이드록시메틸)피페리딘-1-일)에탄-1-온 65의 제조
Figure pct00261
이전의 반응으로부터의 조질의 (3R,6R)-6-(하이드록시메틸)피페리딘-3-올 64를 TEA(3.5㎖, 25.2 m㏖)와 함께 MeCN(50㎖)에서 실온에서 교반하였다. 에틸 트라이플루오로아세테이트(3㎖, 25.2 m㏖)를 첨가하고, 이 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 이어서 진공 중 농축시켜 2,2,2-트라이플루오로-1-((2R,5R)-5-하이드록시-2-(하이드록시메틸)피페리딘-1-일)에탄-1-온 65를 제공하였다. 생성물은 추가의 정제 없이 사용하였다.
단계 6. 1-((2R,5R)-2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-하이드록시피페리딘-1-일)-2,2,2-트라이플루오로에탄-1-온 66의 제조
Figure pct00262
이전의 반응으로부터의 조질의 2,2,2-트라이플루오로-1-((2R,5R)-5-하이드록시-2-(하이드록시메틸)피페리딘-1-일)에탄-1-온 65를 TEA와 함께 DCM(50㎖)에서 실온에서 교반하였다. 4,4'-다이메톡시트라이틸 클로라이드(DMTrCl)(3.87g, 11.44 m㏖)를 한번에 첨가하고, 이 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 DCM(50㎖)으로 희석시키고, 포화 NaHCO3(2×75㎖), H2O(2×75㎖) 및 포화 NaCl 용액(2×75㎖)으로 차례로 세척하였다. 유기물을 분리시키고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(100% 헥산 - 60% EtOAc/헥산)(0.1% TEA)에 의해 정제시켜 1-((2R,5R)-2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-하이드록시피페리딘-1-일)-2,2,2-트라이플루오로에탄-1-온 66(3.14g, 57%)을 제공하였다.
단계 7. (3R,6R)-6-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)- 피페리딘-3-올 67의 제조
Figure pct00263
1-((2R,5R)-2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-하이드록시피페리딘-1-일)-2,2,2-트라이플루오로에탄-1-온 66(3.14g, 6.0 m㏖)을 MeOH(50㎖)에서 실온에서 교반하였다. KOH(672㎎, 12 m㏖)를 첨가하고, 이 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 추가의 KOH(300㎎, 6 m㏖)를 첨가하고, 추가로 24시간 동안 계속 교반하였다. 이 반응물을 진공 중 농축시키고, DCM(150㎖)에 장입하고, H2O(4×50㎖)로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켜 (3R,6R)-6-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)피페리딘-3-올 67(2.34g, 90%)을 제공하였으며, 이것은 추가의 정제 없이 사용되었다.
단계 8. 메틸 12-((2R,5R)-2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)-메톡시)메틸)-5-하이드록시피페리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트 68의 제조
Figure pct00264
(3R,6R)-6-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)피페리딘-3-올 67(2.34g, 5.34 m㏖)을 DCM(75㎖)에서 실온에서 교반하였다. 트라이에틸아민(2.2㎖, 16.2 m㏖), HATU(3.5g, 9.2 m㏖) 및 12-메톡시-12-옥소도데칸산(1.32g, 5.4 m㏖)을 첨가하고, 이 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 얻어진 고체 석출물을 여과에 의해 제거하고, 여과액을 진공 중 농축시키고, 잔사를 칼럼 크로마토그래피(2.5%MeOH/DCM, 0.1% TEA)에 의해 정제시켜 메틸 12-((2R,5R)-2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-하이드록시피페리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트 68을 정량적 수율로 제공하였다.
단계 9. 리튬 12-((2R,5R)-2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)-메틸)-5-하이드록시피페리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트 69의 제조
Figure pct00265
메틸 12-((2R,5R)-2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-하이드록시피페리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트 68(5.4 m㏖) 및 LiOH(140㎎, 5.94 m㏖) THF:H2O(1:1, 100㎖)에서 실온에서 48시간 동안 교반하였다. THF를 진공 중 제거하고, 수성층을 냉동시키고 동결건조시켜 리튬 12-((2R,5R)-2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-5-하이드록시피페리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트 69(3.2g, 91%)를 제공하였다. 이것은 추가의 정제 없이 후속의 반응에서 사용되었다.
단계 10. 화합물 70, 71, 72 및 59의 제조
화합물 70, 71, 72 및 59는 각각 화합물 47, 48, 49 및 43을 합성하는데 사용된 것과 동일한 절차를 이용해서 제조하였다.
실시예 8. 접합체 142의 합성
반응식 17.
Figure pct00266
반응식 18.
Figure pct00267
단계 1. 3,4,5-트라이아세톡시벤조산 73의 제조
피리딘(50㎖) 및 아세트산 무수물(50㎖) 중 갈산(20g)의 용액에. 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하고, 이어서 얼음물(1ℓ)에 부었다. 이 용액을 진한 염산으로 산성으로 만들었으며 이때 무색 고체가 석출되었다. 고체를 여과를 통해서 수집하고 물(5×100㎖)로 세척하였다. 습윤 고체를 액체 질소 상에서 냉동시키고, 냉동 건조시켜 3,4,5-트라이아세톡시벤조산(26g, 75%)을 제공하였다.
단계 2. 5-((2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)에틸)카바모일)벤젠-1,2,3-트라이틸 트라이아세테이트 74의 제조
DMF(200㎖) 중 3,4,5-트라이아세톡시벤조산(10g, 33.8 m㏖), N-카보벤족시-1,2-다이아미노에탄 하이드로클로라이드(5.3g, 33.8 m㏖) 및 HBTU(13.5g, 35.5 m㏖)의 용액에 DIPEA(17.5㎖, 101 m㏖)를 첨가하였다. 이 용액을 16시간 동안 교반하고, 이어서 에틸 아세테이트(250㎖)로 희석시키고, 염수(3×200㎖)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 건조 상태로 농축시켰다. 조질의 생성물을 실리카겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배 DCM 중 1% 내지 5% MeOH)에 의해 정제시켜 5-((2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)에틸)카바모일)벤젠-1,2,3-트라이틸 트라이아세테이트를 회백색 고체로서 제공하였다(5.5g).
단계 3. 3,4,5-트라이하이드록시-N-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)에틸)벤즈아마이드 75의 제조
1:1 MeOH/CH2Cl2(100㎖) 중 5-((2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)에틸)카바모일)벤젠-1,2,3-트라이틸 트라이아세테이트(5g, 1.1 m㏖)의 용액을 3일 동안 실온에서 교반하였다. 완료 시, 용매를 제거하여 3,4,5-트라이하이드록시-N-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)에틸)벤즈아마이드를 무색 고체(4g, 정량적)로서 제공하였다.
단계 4. 트라이메틸 2,2',2''-((5-((2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)에틸)카바모일)벤젠-1,2,3-트라이틸)트리스(옥시))트라이아세테이트 76의 제조
DMF(100㎖) 중 3,4,5-트라이하이드록시-N-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)에틸)벤즈아마이드(4g, 11.6 m㏖), 메틸 브로모아세테이트(7.7g, 46.4 m㏖) 및 탄산칼륨(9.6g, 69.4 m㏖)의 용액을 60℃에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 용액을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트(200㎖)로 희석시키고, 물(200㎖), 염수(3×100㎖)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 건조 상태로 농축시켰다. 조질의 생성물을 실리카겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배 DCM 중 2% 내지 10% MeOH)에 의해 정제시켜 트라이메틸 2,2',2''-((5-((2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)에틸)카바모일)벤젠-1,2,3-트라이틸)트리스(옥시))-트라이아세테이트를 베이지색 고체로서 제공하였다(5g, 79%)
단계 5. 2,2',2''-((5-((2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)에틸)-카바모일)벤젠-1,2,3-트라이틸)트리스(옥시))트라이아세트산 77의 제조
메탄올(100㎖) 중 트라이메틸 2,2',2''-((5-((2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)에틸)-카바모일)벤젠-1,2,3-트라이틸)트리스(옥시))트라이아세테이트(5g, 9.2 m㏖) 및 1M NaOH(30㎖)의 용액을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 완료 시 반응물을 농축시켜 메탄올을 제거하고, 물(75㎖)로 희석시켰다. 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 2M HCl로 산성화시키고, 에틸 아세테이트(5×150㎖)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 진공 중 건조 상태로 농축시켜, 2,2',2''-((5-((2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)에틸)카바모일)벤젠-1,2,3-트라이틸)트리스(옥시))트라이아세트산을 무색 고체로서 제공하였다(2.3g, 50%).
단계 6. 화합물 78의 제조
화합물 78은 화합물 13에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 9(2.75g, 4.3 m㏖) 및 77(0.5g, 0.96 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 600㎎.
단계 7. 화합물 79의 제조
화합물 79는 화합물 14에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 78(0.6g)로부터 제조하였다. 수득량: 500㎎.
단계 8. 화합물 140의 제조
화합물 140은 화합물 19에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 79(500㎎, 0.25 m㏖) 및 화합물 18(175㎎, 0.25 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 250㎎, 44%.
단계 9. 화합물 141의 제조
화합물 141은 화합물 20에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서화합물 140(250㎎, 0.11 m㏖)으로부터 제조하였다. 수득량: 200㎎.
단계 10. 접합체 142의 제조
접합체 142는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 141(200㎎) 및 1000A lcaa CPG(1.8g)로부터 제조하였다. 수득량: 1.9g, 22μ㏖/g CPG 로딩. 얻어진 GalNAc 로딩된 CPG 고체 지지체를 표준 절차를 이용하는 자동 올리고뉴클레오타이드 합성에 이용하였다. 뉴클레오타이드 탈보호에 이은 고체 지지체로부터의 제거(동시 갈락토사민 아세테이트 탈보호와 함께)에 의해 GalNAc-올리고뉴클레오타이드 접합체 142를 제공하였다.
실시예 9. 접합체 145의 합성
반응식 19.
Figure pct00268
반응식 20.
Figure pct00269
단계 1. 라세미 (시스) 5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온 123의 제조
다이클로로메탄(75㎖) 중 3,4-다이메틸퓨란-2,5-다이온(3g, 24 m㏖) 및 N-벤질-1-메톡시-N-((트라이메틸실릴)메틸)메탄아민(7g, 29.8 m㏖)의 냉각된 용액(0℃)에 트라이플루오로아세트산(75㎕)을 서서히 첨가하였다. 이 용액을 하룻밤 교반하여 빙욕이 녹음에 따라서 실온까지 서서히 가온시켰다. 이 반응 혼합물을 건조 상태로 농축시키고, 에틸 아세테이트(100㎖)에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨(2×100㎖)으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켰다. 실리카겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 헥산 중 20% 에틸 아세테이트 내지 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제시켜 라세미 (시스) 5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온을 황색 오일로서 제공하였다(3.5g, 56%).
단계 2. 라세미 (시스) 1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올 124의 제조
무수 다이에틸에터(50㎖) 중 (3aR,6aS)-5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온(3.5g, 13.4 m㏖)의 냉각된(0℃) 용액에 리튬 알루미늄 하이드록사이드 펠릿(1.5g, 40 m㏖)을 세 부분에 걸쳐서 서서히 첨가하였다. 이 용액을 하룻밤 교반하여 빙욕이 녹음에 따라서 실온까지 서서히 가온시켰다. 완료 시, 반응물을 0℃까지 냉각시키고, 1.5㎖의 5M NaOH에 이어서 1.5㎖의 물로 매우 서서히 반응중지시켰다. 30분 동안 교반하고, 이어서 황산마그네슘을 첨가하고 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 라세미 (시스) 1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올을 무색 오일로서 제공하였다(2.7g).
단계 3. 라세미 (시스) 3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올 125의 제조
메탄올(10㎖) 중 ((3R,4S)-1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올(10g, 40 m㏖)의 용액에 습윤 활성탄 상의 10% 팔라듐(1g)을 첨가하였다. 이 용액을 수소 분위기 하에 16시간 동안 격렬하게 교반하였다. 완료 시, 용액을 셀라이트를 통해서 여과시키고, 건조상태로 농축시켜 라세미 (시스) 3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올을 무색 고체로서 제공하였다(5.5g, 86%).
단계 4. 라세미 (시스) 메틸 10-(3,4-비스(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 126의 제조
화합물 126은 화합물 17에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 125(1.3g, 8.2 m㏖) 및 모노메틸 세바케이트(1.8g, 8.2 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 1.8g, 61%.
단계 5. 라세미 (시스) 메틸 10-(3-((비스(4-메톡시페닐-)(페닐)메톡시)-메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 127의 제조
화합물 127은 화합물 18에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 126(1.8g, 5.0 m㏖) 및 4,4'-다이메톡시트라이틸 클로라이드(1.7g, 5.0 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 1.4g, 42%.
단계 6. 라세미 (시스) 리튬 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)-(페닐)메톡시)-메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 128의 제조
THF(50㎖) 및 물(50㎖) 중 화합물 127(3.0g, 4.6 m㏖)의 용액에 수산화리튬(121㎎, 5.0 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켜 THF를 제거하였다. 나머지 수성 용액을 하룻밤 냉동 건조시켜 연한 분홍색 고체(2.9g, 정량적)를 제공하였다.
단계 7. 화합물 143의 제조
화합물 143은 화합물 19에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 128(270㎎, 0.42 m㏖) 및 화합물 14(800㎎, 0.42 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 900㎎, 87%.
단계 8. 화합물 144의 제조
화합물 144는 화합물 20에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 143(500㎎, 0.2 m㏖)으로부터 제조하였다. 수득량: 200㎎.
단계 9. 접합체 145의 제조
접합체 145는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 144(200㎎) 및 1000A lcaa CPG(1.8g)로부터 제조하였다. 수득량: 1.9g, 20 μ㏖/g CPG 로딩. 얻어진 GalNAc 로딩된 CPG 고체 지지체를 표준 절차를 이용하는 자동 올리고뉴클레오타이드 합성에 이용하였다. 뉴클레오타이드 탈보호에 이은 고체 지지체로부터의 제거(동시 갈락토사민 아세테이트 탈보호와 함께)에 의해 GalNAc-올리고뉴클레오타이드 접합체 145를 제공하였다.
실시예 10. 접합체 150의 합성
반응식 21.
Figure pct00270
단계 1. 146-1의 제조
다이클로로메탄(300㎖) 중 도데칸이산(도데칸dioic acid)의 모노메틸 에스터(12.2g, 50.0 m㏖)의 용액에 N-하이드록시석신이미드(6.10g, 53.0 m㏖) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카보다이이미드 하이드로클로라이드(EDC)(10.52g, 55.0 m㏖)를 첨가하였다. 탁한 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하고, 반응물은 맑은 용액으로 되었다. TLC는 반응이 완성된 것을 나타내었다. 유기물을 포화 NH4Cl(300㎖) 및 염수(100㎖)로 세척하였다. 유기층을 분리시키고, MgSO4 위에서 건조시키, 건조상태로 농축시켜 순수한 1-(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일) 12-메틸 도데칸다이오에이트 146-1을 백색 고체로서 제공하였다(16.7g, 97.8%).
단계 2. 사이클로펜트-3-엔-1-일메탄올 146-2의 제조
0℃에서 질소 하에 무수 에터(1ℓ) 중 리튬 알루미늄 하이드록사이드(15.2g, 0.40 ㏖)의 현탁액에, 에터(300㎖) 중 메틸 사이클로펜트-3-엔카복실레이트(50g, 0.40 ㏖)의 용액을 5시간에 걸쳐서 적가하였다. 현탁액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. TLC는 반응의 완결을 나타내었다. 이 반응물을 0℃까지 재냉각시켰다. Na2SO4의 포화 용액(32㎖)을 적가시켜 반응을 중지시켰다. 첨가가 완료된 후에, 이 혼합물을 더욱 3시간 동안 교반하고, 셀라이트의 패드를 통해서 여과시켰다. 용매의 증발은 사이클로펜트-3-엔일메탄올 146-2(37.3g, 95%)를 무색 액체로서 제공하였다.
단계 3. (6-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-3-일)메탄올 146-3의 제조
0℃에서 다이클로로메탄(150㎖) 중 사이클로펜트-3-엔일메탄올 146-2 (4.0g, 41 m㏖)의 용액에 3-클로로퍼벤조산(10g, 45 m㏖, 77% 순도)을 나누어서 첨가하였다. 이 반응물을 하룻밤 교반하였다. 다이클로로메탄(150㎖)을 첨가하였다. 유기물을 티오황산나트륨(10㎖ 물 중 12g)에 이어서, 포화 NaHCO3(40㎖)로 세척하였다. 나머지 3-클로로퍼벤조산이 모두 씻겨 없어질 때까지 이것을 반복하였다. 유기물을 MgSO4 위에서 건조시켰다. 용매의 증발은 시스- 및 트랜스- 6-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-3-일메탄올 146-3의 혼합물(2.6g, 57%)을 황색 오일로서 제공한다. GC-MS: m/z 114 (5) (M+), 95 (15), 88 (100), 81 (15).
단계 4. 2-아미노-4-(하이드록시메틸)사이클로펜탄-1-올 146-4의 제조
0℃에서 메탄올(20㎖) 중 6-옥사바이사이클로[3.1.0]헥산-3-일메탄올 146-3(2.0g, 17.6 m㏖)의 용액에 암모니아 가스를 10분 동안 퍼지시켰다. 이 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. TLC는 반응의 불완전을 나타내었다. 메탄올을 제거하고, NH3 .H2O(50㎖)를 첨가하고, 이것을 실온에서 1주일에 걸쳐서 교반하였다. TLC는 반응의 완결을 확인해주었다. 물을 에탄올과의 공비혼합에 의해 제거하여 2-아미노-4-(하이드록시메틸)사이클로펜탄올 146-4(2.1g, 91%)를 황색 오일로서 제공하였다.
단계 5. 메틸 12-(2-하이드록시-4-(하이드록시메틸)사이클로펜틸아미노)-12-옥소도데카노에이트 146-5의 제조
화합물 146-5는 12-(2-(tert-부톡시카보닐아미노)에틸아미노)-12-옥소도데카노에이트(3-2)의 합성에 기재된 바와 같은 절차를 이용해서 2-아미노-4-(하이드록시메틸)사이클로펜탄올 146-4 및 1-(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일) 12-메틸 도데칸다이오에이트 146-1로부터 제조하였다. 메틸 12-(2-하이드록시-4-(하이드록시메틸)사이클로펜틸아미노)-12-옥소도데카노에이트 146-5를 회백색 고체로서 87.4% 수율로 얻었다.
단계 6. 화합물 147의 제조
화합물 147은 화합물 18에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 146(1.4g, 2.33m㏖)으로부터 제조하였다.
단계 7. 화합물 148의 제조
화합물 148은 화합물 19에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 147(150㎎, 0.23m㏖) 및 화합물 14(431㎎, 0.23m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 460㎎, 84%.
단계 8. 화합물 149의 제조
화합물 149는 화합물 20에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 148(460㎎, 0.19m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 436㎎, 91%.
단계 9. 접합체 150의 제조
화합물 150은 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 149(436mg) 및 1000A lcaa CPG(2.62g)로부터 제조하였다. 수득량: 2.7g, 21.3μ㏖/g CPG 로딩. 얻어진 GalNAc 로딩된 CPG 고체 지지체를 표준 절차를 이용하는 자동 올리고뉴클레오타이드 합성에 이용하였다. 뉴클레오타이드 탈보호에 이은 고체 지지체로부터의 제거(동시 갈락토사민 아세테이트 탈보호와 함께)에 의해 GalNAc-올리고뉴클레오타이드 접합체 150을 제공하였다.
실시예 11. 접합체 153, 158, 163, 168 및 173의 합성
반응식 22.
Figure pct00271
단계 1. 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4R)-4-하이드록시피롤리딘-1,2-다이카복실레이트(133)의 제조
메틸 (2S,4R)-4-하이드록시피롤리딘-2-카복실레이트(25.9g, 46 m㏖), BOC 무수물(65.9g, 302.5 m㏖) 및 TEA(42㎖, 302.5 m㏖)를 DCM 중에서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 유기물을 1M HCl(×2), 포화 NaHCO3(×2), H2O 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고, 진공 중 농축시켜 1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4R)-4-하이드록시피롤리딘-1,2-다이카복실레이트(133)(58.1g, 85%)를 제공하였다.
단계 2. 1-(tert-부틸) 2-메틸 (4R)-4-하이드록시-2-메틸피롤리딘-1,2-다이카복실레이트(134)의 제조
1-(tert-부틸) 2-메틸 (2S,4R)-4-하이드록시피롤리딘-1,2-다이카복실레이트(133)(5g, 20.4 m㏖) 및 MeI(12g, 84.5 m㏖)를 -40℃에서 무수 THF에서 교반하였다. LDA(THF 중 2.0M 용액)(37.5㎖, 75 m㏖)를 적가하였다. 이 반응물을 실온까지 가온시키고, 4시간 동안 교반하고 나서 포화 NH4Cl로 반응중지시켰다. 이 반응물을 EtOAc로 추출하고, H2O 및 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피 50:50 EtOAc//헥산에 의해 정제시켜 1-(tert-부틸) 2-메틸 (4R)-4-하이드록시-2-메틸피롤리딘-1,2-다이카복실레이트(134)를 라세미 혼합물로서 제공하였다(3.6g, 68%)
단계 3. tert-부틸 (2S,4R)-4-하이드록시-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카복실레이트(135a)의 제조
1-(tert-부틸) 2-메틸 (4R)-4-하이드록시-2-메틸피롤리딘-1,2-다이카복실레이트(134)(19g, 73.5 m㏖)를 무수 THF에서 N2 하에 교반하였다. LiBH4 용액(48㎖, 96 m㏖)을 적가하고, 이 반응물을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 1M NaOH로 반응중지시키고, THF를 진공 중 제거하고, 잔사를 EtOAc(4×100㎖)로 추출하였다. 유기물을 H2O 및 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(5% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 tert-부틸 (2S,4R)-4-하이드록시-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카복실레이트(135a)를 주된 생성물로서 제공하였다(8g, 47%). 구조는 참조 문헌에 따라서 배정되었다.
단계 4. (3R,5S)-5-(하이드록시메틸)-5-메틸피롤리딘-3-올 하이드로클로라이드(136)의 제조
tert-부틸 (2S,4R)-4-하이드록시-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-카복실레이트(135a)(8g, 34.6 m㏖)를 EtOAc에서 실온에서 교반하고, 기체 HCl을 대략 2분 동안 적용하였다. 이 반응물을 1시간 동안 교반하고, 이어서 진공 중 농축시키고, 고진공 하에 건조시켜 (3R,5S)-5-(하이드록시메틸)-5-메틸피롤리딘-3-올 하이드로클로라이드(136)를 정량적인 방식으로 제공하였다.
단계 5. 메틸 12-((2S,4R)-4-하이드록시-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트(137)의 제조
(3R,5S)-5-(하이드록시메틸)-5-메틸피롤리딘-3-올 하이드로클로라이드(136)(7.9g, 47.4 m㏖), 12-메톡시-12-옥소도데칸산(11.5g, 47.4 m㏖), HBTU(36g, 76 m㏖) 및 TEA(20㎖, 142.2 m㏖)를 DCM에서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 석출물을 여과에 의해 제거하고, 유기물을 1M HCl(×2), 포화 NaHCO3(×2), H2O 및 염수로로 세척하였다. 건조 후, 유기물을 진공 중 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피(5%MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 메틸 12-((2S,4R)-4-하이드록시-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트(137)(3.1g, 18.3%)를 제공하였다.
단계 6. 메틸 12-((2S,4R)-2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)-메틸)-4-하이드록시-2-메틸피롤리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트(138)의 제조
메틸 12-((2S,4R)-4-하이드록시-2-(하이드록시메틸)-2-메틸피롤리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트(137)(3.1g, 9.0 m㏖), DMTr-Cl(2.8g, 8.2 m㏖) 및 TEA(1.1㎖, 8.2 m㏖)를 DCM에서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 진공 중 농축시키고, 잔사를 칼럼 크로마토그래피(5% MeOH/DCM, 0.1% TEA)에 의해 정제시켜 메틸 12-((2S,4R)-2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-하이드록시-2-메틸피롤리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트(138)(2.7g, 45.5 m㏖)를 제공하였다.
반응식 23
Figure pct00272
단계 7. 화합물 154-1의 제조
0℃에서 질소 하에 다이클로로메탄(200㎖) 중 N-(2-하이드록시에틸)프탈이미드(4.80g, 25.0 m㏖) 및 4,4'-다이메톡시트라이틸 클로라이드(8.8g, 26.0 m㏖)의 용액에 트라이에틸아민(10.4㎖, 74.6 m㏖)을 적가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. TLC는 반응의 완결을 나타내었다. 유기층을 염수(100㎖)로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 건조 상태로 농축시켰다. 이것은 추가의 정제 없이 다음 반응에 그대로 사용하였다.
단계 8. 화합물 154-2의 제조
에탄올(100㎖) 중 위에서 얻어진 2-(2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)에틸)아이소인돌린-1,3-다이온(154-1) 및 하이드라진 일수화물(3.6㎖, 74 m㏖)을 실온에서 하룻밤 교반하였다. TLC는 반응의 완결을 나타내었다. 석출물을 여과 제거하였다. 여과액을 증발시켰다. 잔사를 에틸 아세테이트(100㎖)에 장입하였다. 유기 용액을 10% NaOH, 물 및 염수로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시켰다. 용매의 증발에 의해 2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)에탄아민(154-2)을 황색 액체로서 제공하였다(8.11g, 2개 단계에 걸쳐 89.3% 수율). 이것은 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다.
단계 9. 화합물 154-3의 제조
물(20㎖) 및 다이옥산(10㎖) 중 L-트레오닌(1.19g, 10.0 m㏖) 및 NaHCO3(2.3g, 27 m㏖)의 용액에, 다이옥산(10㎖) 중 1-(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일) 12-메틸 도데칸다이오에이트 146-1(3.1g, 9.1 m㏖)을 적가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 4N HCl(10㎖)을 첨가하였다. 석출물을 여과에 의해 수집하고, 물(3×10㎖)로 세척하였다. 고체를 데시케이터에서 P2O5 위에서 건조시켜 (2S,3R)-3-하이드록시-2-(12-메톡시-12-옥소도데칸아미도)부탄산 154-3을 회백색 고체로서 제공하였다(2.84g, 82.2%). LC-MS(ESI): m/z: 346 (100), (M + H+).
단계 10. 화합물 154의 제조
(2S,3R)-3-하이드록시-2-(12-메톡시-12-옥소도데칸아미도)부탄산 154-3(2.47g, 7.15 m㏖), 2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)에탄아민 154-2(2.60g, 7.15 m㏖), EDC(1.64g, 8.58 m㏖), 1-하이드록시벤조트라이아졸(HOBt)(1.16g, 8.58 m㏖) 및 TEA(2.4㎖, 17.2 m㏖)를 다이클로로메탄(72㎖)에서 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 물(30㎖)을 첨가하였다. 유기층을 분리시키고, 염수(2×30㎖)로 세척하였다. 용매의 증발에 이어서 칼럼 크로마토그래피(30% 에틸 아세테이트/헥산 -50% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 메틸 12-((2S,3R)-1-(2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)에틸아미노)-3-하이드록시-1-옥소부탄-2-일아미노)-12-옥소도데카노에이트 154를 왁스상 황색 반고체로서 제공하였다(2.60g, 52.6%). 1HNMR (400MHz, 아세톤-d6, ppm): δ 7.51 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 7.45-7.49 (m, 2H), 7.28-7.36 (m, 6H), 7.21 (tt, J = 7.2, 1.2 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.88 (dt, J = 8.9, 2.5 Hz, 4H), 4.39 (dd, J = 8.2, 3.0 Hz, 1H), 4.20-4.27 (m, 1H), 3.78 (s, 6H), 3.60 (s, 1H), 3.35-3.52 (m, 2H), 3.07-3.16 (m, 2H), 2.23-2.37 (m, 4H), 1.53-1.65 (m, 4H), 1.23-1.36 (m, 12H), 1.10 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
반응식 24
Figure pct00273
단계 11. 화합물 164-1의 제조
THF(120㎖)/에터(360㎖) 중 칼륨 t-부톡사이드(14.6g, 130 ㏖)의 현탁액에 메틸트라이페닐포스포늄 브로마이드(46.6 g,130 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 환류시키고, 이어서 0℃까지 냉각시켰다. 에터(50㎖) 중 tert-부틸 2-폼일피롤리딘-1-카복실레이트(13.0g, 65.2 m㏖)를 적가하였다. 이 반응 혼합물을 0℃에서 교반하고, 이어서 물(250㎖)의 첨가에 의해 반응중지시켰다. 유기층을 분리시키고, 수성상을 에터(250㎖)로 추출하였다. 합한 추출물을 MgSO4 위에서 건조시켰다. 용매의 증발에 이어서, 칼럼 크로마토그래피 정제(5% 에틸 아세테이트/헥산)에 의해 tert-부틸 3-비닐피롤리딘-1-카복실레이트 164-1(11.5g, 89.4%)을 무색 액체로서 제공하였다. GC-MS: m/z: 197 (2) (M+), 141 (40), 124 (30), 57 (100).
단계 12. 화합물 164-2의 제조
t-BuOH(140㎖)와 물(70㎖)의 혼합물에, AD-mix-β(47.4g) 및 메탄설폰아마이드(2.89g, 30.4 m㏖)를 주입하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 0℃까지 냉각시켰다. tert-부틸 3-비닐피롤리딘-1-카복실레이트 164-1(6.00g, 30.4 m㏖)을 첨가하였다. 이 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 이 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시켰다. 티오황산나트륨 오수화물(96g, 387 m㏖)을 첨가하고, 온도를 실온까지 가온시켰다. 물(700㎖)을 첨가하고, 이 혼합물을 에틸 아세테이트(500㎖)로 추출하였다. 추출물을 물(2×50㎖) 및 염수(50㎖)로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시켰다. 용매의 증발에 이어서, 칼럼 크로마토그래피(2% 메탄올/다이클로로메탄 - 7% 메탄올/다이클로로메탄)에 의해 tert-부틸 3-(1,2-다이하이드록시에틸)피롤리딘-1-카복실레이트 164-2(5.4g, 77%)를 연갈색 오일로서 제공하였다.
단계 13. 화합물 164-3의 제조
에탄올(10㎖) 중 tert-부틸 3-(1,2-다이하이드록시에틸)피롤리딘-1-카복실레이트 164-2(3.1g, 13.4 m㏖)의 용액에 3N HCl(30㎖, 90 m㏖)을 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. TLC는 반응의 완결을 나타내었다. 에탄올을 증발시켰다. 톨루엔을 첨가하고, 증발시켰다. 이것을 3회 반복하여 1-(피롤리딘-3-일)에탄-1,2-다이올 하이드로클로라이드 164-3(2.0g, 89%)을 갈색 오일로서 제공하였다. LC-MS(ESI): m/z: 132 (100), (M + H+, 유리 아민).
단계 14 화합물 164-4의 제조
물(30㎖) 중 1-(피롤리딘-3-일)에탄-1,2-다이올 하이드로클로라이드 164-2(2.0g, 12 m㏖)의 용액에 NaHCO3(3.7g, 44 m㏖)를 나누어서 첨가하였다. 이어서, 다이옥산(20㎖)을 첨가하였다. 상기 용액에 다이옥산(30㎖) 중 1-(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일) 12-메틸 도데칸다이오에이트 146-1(3.7g, 11 m㏖)을 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 이것을 에틸 아세테이트(3×100㎖)로 추출하였다. 합한 추출물을 0.5N HCl(50㎖) 및 염수(50㎖)로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시켰다.
단계 15. 화합물 164의 제조
이 물질은 2-(2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)에틸)아이소인돌린-1,3-다이온 138의 합성에 기재된 바와 같은 절차를 이용해서 메틸 12-(3-(1,2-다이하이드록시에틸)피롤리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트 164-4 및 4,4-다이메톡시트라이틸 클로라이드(1 eq)로부터 제조하였다. 생성물을 칼럼 크로마토그래피(1.5% 메탄올/다이클로로메탄)에 의해 정제시켰다. 메틸 12-(3-(2-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)-1-하이드록시에틸)피롤리딘-1-일)-12-옥소도데카노에이트 164를 황색 오일로서 51% 수율로 얻었다. 1HNMR (400MHz, 아세톤-d6, ppm): δ 7.49-7.54 (m, 2H), 7.35-7.40 (m, 4H), 7.28-7.34 (m, 2H), 7.19-7.25 (m, 1H), 6.86-6.91 (m, 4H), 4.11-4.20 (m, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.68-3.77 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.29-3.59 (m, 3H), 3.06-3.20 (m, 3H), 2.33-2.55 (m, 1H), 2.29 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.19 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.65-2.0 (m, 2H), 1.51-1.62 (m, 4H), 1.26-1.35 (m, 12H).
반응식 25
Figure pct00274
단계 16. 화합물 170-1의 제조
다이클로로메탄(100㎖) 중 tert-부틸 2-아미노에틸카바메이트(2.88g, 18.0 m㏖) 및 트라이에틸아민(2.98g, 29.4 m㏖)의 용액에, 다이클로로메탄(50㎖) 중 1-(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일) 12-메틸 도데칸다이오에이트(146-1)(5.09g, 14.9 m㏖)를 실온에서 적가하였다. 이 반응 혼합물을 하룻밤 교반하고, TLC는 반응의 완결을 나타내었다. 100㎖ 염수를 첨가하고, 유기층을 분리시켰다. 유기층을 0.5N HCl(150㎖), 염수(2×100㎖)로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시켰다. 용매의 증발에 의해 순수한 메틸 12-(2-(tert-부톡시카보닐아미노)에틸아미노)-12-옥소도데카노에이트 170-1(5.85g 100%)을 백색 고체로서 제공하였다.
단계 17. 화합물 170-2의 제조
0℃에서 메탄올(100㎖) 중 12-(2-(tert-부톡시카보닐아미노)에틸아미노)-12-옥소도데카노에이트 170-1(5.55g, 14.4 m㏖)의 용액에, 티오닐 클로라이드(3.3㎖, 45.5 m㏖)를 적가하였다. 이어서, 이 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. TLC는 반응의 완결을 나타내었다. 용매 및 휘발성 유기물을 증발시켰다. 이어서, 잔사를 헵탄과 2회 공증발시켜 메틸 12-(2-아미노에틸아미노)-12-옥소도데카노에이트 하이드로클로라이드 170-2를 정량적으로 백색 고체로서 제공하였다. LC-MS(ESI): m/z: 287 (100), (M + H+, 유리 아민).
단계 18. 화합물 170-3의 제조
THF(50㎖) 및 물(50㎖) 중 (-)-메틸 (S)-2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-카복실레이트(5.01g, 31.2 m㏖) 및 LiOH.H2O(2.55g, 60.8 m㏖)를 하룻밤 교반하였다. TLC는 반응의 완결을 나타내었다. THF를 증발시키고, 수성상을 1N HCl로 pH = 1로 산성화시켰다. 이것을 에틸 아세테이트(5×50㎖)로 추출하였다. 합한 추출물을 MgSO4 위에서 건조시켰다. 용매의 증발에 의해 (S)-2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-카복실산 170-3(2.93g, 64.3%)을 연황색 액체로서 제공하였다.
단계 19. 화합물 170-4의 제조
화합물 170-4는 1-(2,5-다이옥소피롤리딘-1-일) 12-메틸 도데칸다이오에이트 146-1의 합성에 기재된 바와 같은 절차를 이용해서 (S)-2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-카복실산 170-3 및 N-하이드록시석신이미드로부터 86% 수율로 합성하였다. (S)-2,5-다이옥소피롤리딘-1-일 2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-카복실레이트 170-4를 백색 고체로서 86% 수율로 얻었다.
단계 20. 화합물 170-5의 제조
다이클로로메탄(100㎖) 중 메틸 12-(2-아미노에틸아미노)-12-옥소도데카노에이트 하이드로클로라이드 170-2(14.4 m㏖) 및 (S)-2,5-다이옥소피롤리딘-1-일 2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-카복실레이트 170-4(3.80g, 15.6 m㏖)의 현탁액에 다이클로로메탄(25㎖) 중 트라이에틸아민(6㎖, 43.0 m㏖)을 4시간에 걸쳐서 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 이 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. LC-MS는 출발 물질 170-2가 완전히 전환된 것을 나타내었다. 유기층을 염수(50㎖), 1N HCl(50㎖), 염수(50㎖)로 세척하고, MgSO4 위에서 건조시키고, 건조상태로 농축시켜 (S)-메틸 12-(2-(2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-카복스아미도)에틸아미노)-12-옥소도데카노에이트 170-5(5.93g, 99.3%)를 백색 고체로서 제공하였다.
단계 21. 화합물 170-6의 제조
(S)-메틸 12-(2-(2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-카복스아미도)에틸아미노)-12-옥소도데카노에이트 170-5(5.93g, 14.3 m㏖)의 용액에 진한 황산 1 점적을 첨가하였다. 이것을 6시간 동안 환류시키고, 이어서 실온까지 냉각시켰다. 고체를 여과를 통해서 수집하고, 냉 메탄올로 2회 세척하였다. 얻어진 고체를 공기 중에서 건조시켰다(3.32g). 모액으로부터 두 번째 수확물(0.42g)을 얻어 (S)-메틸 12-(2-(2,3-다이하이드록시프로파노아미도)에틸아미노)-12-옥소도데카노에이트 170-6(총 3.74g, 69.4%)을 백색 결정으로서 제공하였다. LC-MS(ESI): m/z: 375 (100), (M + H+). 1HNMR (400MHz, DMSO-d6, ppm): δ 7.79 (br, 2H), 5.49 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.66 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 3.83-3.88 (m, 1H), 3.55-3.61 (m, 4H), 3.41-3.47 (m, 1H), 3.05-3.15 (m, 4H), 2.29 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.03 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.42-1.52 (m, 4H), 1.18-1.29 (m, 12H).
단계 22. 화합물 170의 제조
질소 하에 건조 피리딘(57.5㎖) 중 (S)-메틸 12-(2-(2,3-다이하이드록시프로파노아미도)에틸아미노)-12-옥소도데카노에이트 170-6(2.99g, 7.99 m㏖)의 용액에 4,4'-다이메톡시트라이틸 클로라이드(2.84g, 8.38 m㏖)를 한번에 첨가하였다. 이 반응물을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 메탄올(5㎖)을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 피리딘을 증발시켰다. 톨루엔을 첨가하고, 이어서 증발시켰다. 이것을 3회 반복하였다. 물(100㎖)을 첨가하고, 이것을 에틸 아세테이트(5×250㎖)로 추출하였다. 추출물울 합하여 MgSO4 위에서 건조시켰다. 용매의 증발에 이어서, 칼럼 크로마토그래피(1%메탄올/다이클로로메탄-3% 메탄올/다이클로로메탄)에 의해 (S)-메틸 12-(2-(3-(비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)-2-하이드록시프로파노아미도)-에틸아미노)-12-옥소도데카노에이트 170(1.70g, 31.4%)을 점성 오일로서 제공하였다. 1HNMR (400MHz, 아세톤-d6, ppm): δ 7.64-7.70 (br, 1H), 7.47-7.51 (m, 2H), 7.33-7.37 (m, 4H), 7.26-7.32 (m, 2H), 7.20 (dt, J = 7.3, 2.1 Hz, 1H), 7.11 (br, 1H), 6.86 (d, J = 8.7 Hz, 4H), 4.84 (br, 1H), 4.21 (dd, J = 5.1, 3.8 Hz, 1H), 3.78 (s, 6H), 3.60 (s, 1H), 3.25-3.42 (m, 6H), 2.28 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.48-1.62 (m, 4H), 1.21-1.34 (m, 12H).
반응식 26.
Figure pct00275
Figure pct00276
단계 23. 화합물 139, 155, 160, 165 및 170의 제조
화합물 139, 155, 160, 165 및 170은 화합물 18에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 138, 154, 159, 164 및 169로부터 제조하였다.
단계 24. 접합체 153, 158, 163, 168 및 173의 제조
접합체 153, 158, 163, 168 및 173은 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 139, 154, 159, 164 및 169로부터 제조하였다.
실시예 12. 접합체 176의 합성
반응식 27.
Figure pct00277
Figure pct00278
반응식 28.
Figure pct00279
단계. 1. 메틸 12-아미노도데카노에이트 132의 제조
12-아미노운데칸산(131)(10g, 4.64 m㏖)을 MeOH에서 실온에서 교반하였다. 아세틸 클로라이드(856㎕, 12 m㏖)를 적가하고, 이 반응물을 1.5시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 중 제거하고, 잔사를 MTBE에 장입하고, 냉장고에서 하룻밤 냉각시켰다. 얻어진 석출물을 여과에 의해 수집하고, 빙랭 MTBE로 세척하고, 고진공 하에 건조시켜 메틸 12-아미노도데카노에이트 132를 제공하였다.
단계 2. 라세미 (시스) 메틸 12-(12-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)-(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)도데칸아미도)도데카노에이트 129의 제조
리튬 라세미 (시스) 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트(128)(2g, 3.1 m㏖), 메틸 12-아미노도데카노에이트(132)(778㎎, 3.1 m㏖), HBTU(1.2g, 3.1 m㏖) 및 TEA(1.4㎖, 10 m㏖)를 DCM에서 실온에서 하룻밤 교반하였다. 석출물을 여과에 의해 제거하고, 여과액을 진공 중 농축시키고, 잔사를 칼럼 크로마토그래피(5% MeOH, DCM)에 의해 정제시켰다. TLC는, 기하학적 이성질체로서 배정되고 메틸 12-(12-(10-((3R,4S)-3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)도데칸아미도)도데카노에이트(129)를 정량적인 방식으로 제공하도록 함께 풀링된 동일한 질량으로 2개의 가까이 있는 스팟(close running spot)을 나타내었다.
단계 3. 라세미 (시스) 리튬 12-(12-(10-(-3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)-메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)-도데칸아미도)도데카노에이트 130의 제조
라세미 (시스) 메틸 12-(12-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)도데칸아미도)도데카노에이트(129)(3.1 m㏖)를 LiOH(88㎎, 3.7 m㏖)와 함께 THF:H2O(50:50)에서 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응은 TLC에 의해 확인하고 THF를 진공 중 제거하였다. 수성 용액을 액체 N2에서 냉동시키고, 48시간 동안 동결건조시켜 라세미 (시스) 리튬 12-(12-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)-메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)-도데칸아미도)도데카노에이트 130을 정량적으로 제공하였다.
단계 4. 접합체 176의 제조
접합체 176은 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 24 및 130으로부터 제조하였다.
실시예 13. 접합체 179의 합성
반응식 29.
Figure pct00280
반응식 30.
Figure pct00281
단계 1. 화합물 80의 제조
화합물 24(2g, 0.86 m㏖), N-카보벤족시-L-글루탐산(120㎎, 0.43 m㏖), HBTU(326㎎, 0.86 m㏖) 및 TEA(353㎕, 2.6 m㏖)를 DCM 중에서 실온에서 하룻밤(O/N) 교반하였다. 이 혼합물을 진공 중 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제시켜 화합물 80(2.88g, 83%)을 제공하였다.
단계 2. 화합물 81의 제조
화합물 81은 화합물 14에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 80(670㎎, 0.17 m㏖)으로부터 제조하였다. 이 화합물을 후속의 반응에서 조질물로 사용하였고, 수율을 정량적으로 취하였다.
단계 3. 접합체179의 제조
접합체 179는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 18 및 81로부터 제조하였다.
실시예 14. 접합체 182의 합성
반응식 31.
Figure pct00282
반응식 32.
Figure pct00283
Figure pct00284
단계 1. 화합물 93의 제조
화합물 93은 화합물 89에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 (2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)-D-글루탐산(2.25g, 8.1 m㏖) 및 9(13g, 21 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 11.2g.
단계 2. 화합물 94의 제조
화합물 94는 화합물 90에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 93(11.1g)으로부터 제조하였다. 수득량: 10.2g.
단계 3. 접합체 182의 제조
접합체 182는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 18 및 94로부터 제조하였다.
실시예 15. 접합체 185 및 188의 합성
반응식 33.
Figure pct00285
반응식 34.
Figure pct00286
반응식 35.
Figure pct00287
Figure pct00288
단계 1. 14-하이드록시-3,6,9,12-테트라옥사테트라데실 4-메틸벤젠설포네이트　82의 제조
CH2Cl2(600㎖) 중 펜타에틸렌 글리콜(35g, 147m㏖), TEA(41㎖, 294m㏖) 및 트라이메틸아민-HCl(1.4g, 14.7m㏖)의 용액을 토실 클로라이드(29.4g, 154m㏖)로 처리하였다. 교반 후(18시간) 이 반응 혼합물을 H2O-염수(1:1)로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시키고, 크로마토그래피에 적용시켜 82(24.6g, 43%)를 담황색 오일로서 수득하였다. Rf 0.8 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 2. 14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-올 83
14-아지도-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-올(83)은 화합물 4에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 82(24.6g, 62.7m㏖) 및 아자이드화나트륨(7.13g, 110m㏖)으로부터 제조하였다. 수득량: 14.8g, 90%.
단계 3. 화합물 84의 제조
1,2-다이클로로에탄(150㎖) 중 GalNAc 6(12.2g, 31.4m㏖) 및 HO-PEG-N3 83(9.2g, 35m㏖)의 용액에 Sc(OTf)3(771㎎, 1.6m㏖)로 처리하였다. 교반 후(85℃, 2시간), 반응물을 냉각시키고(실온), TEA(40㎖)의 첨가에 의해 반응중지시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용하여 84(11.16g, 60%)를 담황색 발포물로서 수득하였다. Rf 0.7 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 4. 화합물 85의 제조
EtOAc(120㎖) 중 84(11.16g, 18.8m㏖) 및 Pd/C(1.1g, 10% - 습윤 지지체)의 용액을 TFA(4.32㎖, 56.5m㏖)로 처리하고, H2로 퍼지시켰다. 격렬하게 교반 후(4.5시간), 이 반응물을 N2로 퍼지시키고, 셀라이트를 통해서 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용시켜 85(5.77g, 45%)를 무색 발포물로서 수득하였다. Rf 0.5 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 5. 화합물 95의 제조
화합물 95는 화합물 91에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 (2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)-D-글루탐산(1.04g, 3.7 m㏖) 및 화합물 94(10.2g)로부터 제조하였다. 수득량: 7.2g.
단계 6. 화합물 96의 제조
화합물 96은 화합물 92에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 95(11.1g)로부터 제조하였다. 수득량: 6.5g.
단계 7. 화합물 97의 제조
화합물 97은 화합물 89에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 (2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)-D-글루탐산(2g, 7.1m㏖) 및 85(12.1g, 17.8m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 10g, 정량적.
단계 8. 화합물 98의 제조
화합물 98은 화합물 90에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 97(10g, 7.2m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 3.5g, 36%.
단계 9. 화합물 99의 제조
화합물 99는 화합물 91에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 (2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)-D-글루탐산(350㎎, 1.25 m㏖) 및 화합물 98(2.86㎎, 2.5m㏖)로부터 정량적으로 제조하였다.
단계 10. 화합물 100의 제조
화합물 100은 화합물 92에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 99(3.2g, 1.25 m㏖)로부터 정량적으로 제조하였다.
단계 11. 접합체 185 및 188의 제조
접합체 185 및 188은 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 18 및 96 또는 18 및 100으로부터 제조하였다.
실시예 16. 접합체 191, 194, 197 및 200의 합성
반응식 36
Figure pct00289
반응식 37.
Figure pct00290
반응식 38.
Figure pct00291
단계 1. 2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에탄-1-올 86의 제조
물(200㎖) 중 2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)에탄-1-올(13g, 77 m㏖)의 용액에 아자이드화나트륨(10g, 154 m㏖)을 첨가한다. 이 반응물을 100℃까지 18시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각시키고, 1ℓ 분별깔때기에 붓고, 다이클로로메탄(3×200㎖)으로 추출한다. 합한 다이클로로메탄 추출물을 황산마그네슘 위에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켜, 2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에탄-1-올을 무색 오일로서 제공하였다(11.7g).
단계 2. 화합물 87의 제조
화합물 87은 화합물 84에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 86(4.95g, 28.3m㏖) 및 6(10g, 25.7m㏖)으로부터 제조하였다. 수득량: 10g, 77%.
단계 3. 화합물 88의 제조
화합물 88은 화합물 85에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 87(10g, 19.8m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 7.63g, 65%.
단계 4. 화합물 89의 제조
CH2Cl2(50㎖) 중 88(2g, 3.38m㏖) 및 Z-글루탐산(427㎎, 1.52m㏖)의 용액을 HBTU(1.41g, 3.7m㏖) 및 후니그의 염기(1.77㎖, 10.1m㏖)로 처리한다. 교반 후(18시간), 이 혼합물을 농축시키고 크로마토그래피에 적용시켜 89(871㎎, 48%)를 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.5 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 5. 화합물 90의 제조
EtOAc(10㎖) 중 89(870㎎, 0.72m㏖) 및 Pd/C(90㎎, 10% - 습윤 지지체)의 용액을 TFA(84㎕, 1.1m㏖)로 처리하고, H2로 퍼지시킨다. 격렬하게 교반 후(2시간), 이 반응물을 N2로 퍼지시키고, 셀라이트를 통해서 여과시키고 농축시킨다. 조질의 물질을 추가의 처리 없이 사용하여 90(850㎎, 정량적)을 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.25 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 6. 화합물 91의 제조
CH2Cl2 (10㎖) 중 90(850㎎, 0.72m㏖) 및 Z-글루탐산(91㎎, 0.32m㏖)의 용액을 HBTU(300㎎, 0.79m㏖) 및 후니그의 염기(502㎕, 2.9m㏖)로 처리한다. 교반 후(1.5시간), 이 혼합물을 CH2Cl2로 희석시키고, NaHCO3(포화 수성)로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용하여 91(590㎎, 76%)을 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.5 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 7. 화합물 92의 제조
CH3OH(30㎖) 중 91(590㎎, 0.25m㏖) 및 Pd/C(100㎎, 10% - 습윤 지지체)의 용액을 TFA(29㎕, 0.37m㏖)로 처리하고 H2로 퍼지시킨다. 교반 후(3시간), 이 혼합물을 N2로 퍼지시키고, 이어서 셀라이트를 통해 여과시키고 농축시킨다. 조질의 물질을 추가의 처리 없이 사용하여 92(600㎎, 정량적)를 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.1 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 8. 화합물 101의 제조
화합물 101은 화합물 89에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 (R)-2-((2-옥소-2-페닐-1l2-에틸)아미노)헥산이산(2.51g, 8.6 m㏖) 및 9(11g, 17.2 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 4.2g, 37%.
단계 9. 화합물 102의 제조
화합물 102는 화합물 90에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 101(4.2g, 3.2 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 2.1g, 47%.
단계 10. 화합물 103의 제조
화합물 103은 화합물 91에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 (R)-2-((2-옥소-2-페닐-1l2-에틸)아미노)헥산이산(265㎎, 0.9 m㏖) 및 화합물 102(2.1g, 1.8 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: (560㎎, 24%).
단계 11. 화합물 104의 제조
화합물 104는 화합물 92에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 103(560㎎)으로부터 제조하였다. 이 화합물은 정제 없이 사용된다.
단계 12. 접합체 191, 194 및 197의 제조
접합체 191, 194 및 197은 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 128 및 92, 96 및 100으로부터 제조하였다.
실시예 16a. 접합체 191a의 합성
반응식 36a
Figure pct00292
반응식 37a.
Figure pct00293
반응식 38a.
Figure pct00294
Figure pct00295
단계 1. 2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에탄-1-올 86a의 제조
물(200㎖) 중 2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)에탄-1-올(13g, 77 m㏖)의 용액에 아자이드화나트륨 (10g, 154 m㏖)을 첨가하였다. 이 반응물을 100℃까지 18시간 동안 가열하였다. 이 반응물을 실온까지 냉각시키고, 1ℓ 분별깔때기에 붓고 다이클로로메탄(3×200㎖)으로 추출하였다. 합한 다이클로로메탄 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켜, 2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에탄-1-올을 무색 오일로서 제공하였다(11.7g).
단계 2. 화합물 87a의 제조
화합물 87a는 화합물 84에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 86a(4.95g, 28.3m㏖) 및 6a(10g, 25.7m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 10g, 77%.
단계 3. 화합물 88a의 제조
화합물 88a는 화합물 85에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 87a(10g, 19.8m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 7.63g, 65%.
단계 4. 화합물 89a의 제조
CH2Cl2(50㎖) 중 88a(2g, 3.38m㏖) 및 Z―L-글루탐산(427㎎, 1.52m㏖)의 용액을 HBTU(1.41g, 3.7m㏖) 및 후니그의 염기(1.77㎖, 10.1m㏖). 교반 후(18h), 이 혼합물을 농축시키고, 크로마토그래피에 적용시켜 89a(871㎎, 48%)를 무색 발포물로서 수득하였다. Rf 0.5 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 5. 화합물 90a의 제조
EtOAc(10㎖) 중 89a(870㎎, 0.72m㏖) 및 Pd/C(90㎎, 10% - 습윤 지지체)의 용액을 TFA(84㎕, 1.1m㏖)로 처리하고, H2로 퍼지시켰다. 격렬하게 교반 후(2시간), 이 반응물을 N2로 퍼지시키고, 셀라이트를 통해서 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 추가의 처리 없이 사용하여 90a(850㎎, 정량적)를 무색 발포물로서 수득하였다. Rf 0.25 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 6. 화합물 91a의 제조
CH2Cl2(10㎖) 중 90a(850㎎, 0.72m㏖) 및 Z-글루탐산(91㎎, 0.32m㏖)의 용액을 HBTU(300㎎, 0.79m㏖) 및 후니그의 염기(502㎕, 2.9m㏖)로 처리하였다. 교반 후(1.5시간), 이 혼합물을 CH2Cl2로 희석시키고, NaHCO3(포화 수성)로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용시켜 91a(590㎎, 76%)를 무색 발포물로서 수득하였다. Rf 0.5 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 7. 화합물 92a의 제조
CH3OH(30㎖) 중 91a(590㎎, 0.25m㏖) 및 Pd/C(100㎎, 10% - 습윤 지지체)의 용액을 TFA(29㎕, 0.37m㏖)로 처리하고 H2로 퍼지시켰다. 교반 후(3h), 이 혼합물을 N2로 퍼지시키고, 이어서 셀라이트를 통해서 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 추가의 처리 없이 사용하여 92a(600㎎, 정량적)를 무색 발포물로서 수득하였다. Rf 0.1 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 8. 접합체 191a의 제조
접합체 191a는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 128 및 화합물 92a로부터 제조하였다.
실시예 16b. 접합체 191b의 합성
반응식 36b
Figure pct00296
반응식 37b.
Figure pct00297
반응식 38b.
Figure pct00298
Figure pct00299
단계 1. 2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에탄-1-올 86b의 제조
물(200㎖) 중 2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)에탄-1-올(13g, 77 m㏖)의 용액에 아자이드화나트륨(10g, 154 m㏖)을 첨가한다. 이 반응물을 100℃까지 18시간 동안 가열하였다. 이 반응물을 실온까지 냉각시키고, 1ℓ 분별깔때기에 붓고 다이클로로메탄(3×200㎖)으로 추출하였다. 합한 다이클로로메탄 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켜, 2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에탄-1-올을 무색 오일로서 제공하였다(11.7g).
단계 2. 화합물 87b의 제조
화합물 87a는 화합물 84에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 86b(4.95g, 28.3m㏖) 및 6b(10g, 25.7m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 10g, 77%.
단계 3. 화합물 88b의 제조
화합물 88a는 화합물 85에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 87b(10g, 19.8m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 7.63g, 65%.
단계 4. 화합물 89b의 제조
CH2Cl2(50㎖) 중 88b(2g, 3.38m㏖) 및 라세미 Z-글루탐산(427㎎, 1.52m㏖)의 용액을 HBTU(1.41g, 3.7m㏖) 및 후니그의 염기(1.77㎖, 10.1m㏖)로 처리한다. 교반 후(18시간), 이 혼합물을 농축시키고, 크로마토그래피에 적용시켜, 89b(871㎎, 48%)를 무색 발포물로서 수득하였다. Rf 0.5 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 5. 화합물 90b의 제조
EtOAc(10㎖) 중 89b(870㎎, 0.72m㏖) 및 Pd/C(90㎎, 10% - 습윤 지지체)의 용액을 TFA(84㎕, 1.1m㏖)로 처리하고, H2로 퍼지시킨다. 격렬하게 교반 후(2시간), 이 반응물을 N2로 퍼지시키고, 셀라이드를 통해서 여과시키고, 농축시킨다. 조질의 물질을 추가의 처리 없이 사용하여 90b(850㎎, 정량적)를 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.25 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 6. 화합물 91b의 제조
CH2Cl2(10㎖) 중 90b(850㎎, 0.72m㏖) 및 Z-글루탐산(91㎎, 0.32m㏖)의 용액을 HBTU(300㎎, 0.79m㏖) 및 후니그의 염기(502㎕, 2.9m㏖)로 처리한다. 교반 후(1.5시간), 이 혼합물을 CH2Cl2로 희석시키고, NaHCO3(포화 수성)로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용하여 91b(590㎎, 76%)를 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.5 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 7. 화합물 92b의 제조
CH3OH(30㎖) 중 91b(590㎎, 0.25m㏖) 및 Pd/C(100㎎, 10% - 습윤 지지체)의 용액을 TFA(29㎕, 0.37m㏖)로 처리하고, H2로 퍼지시킨다. 교반 후(3h), 이 혼합물을 N2로 퍼지시키고, 이어서 셀라이트를 통해서 여과시키고, 농축시킨다. 조질의 물질을 추가의 처리 없이 사용하여 92b(600㎎, 정량적)를 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.1 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 8. 접합체 191b의 제조
접합체 191b는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 128 및 화합물 92b로부터 제조하였다.
실시예 16c. 접합체 191c의 합성
반응식 36c
Figure pct00300
반응식 37c.
Figure pct00301
반응식 38c.
Figure pct00302
단계 1. 2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에탄-1-올 86c의 제조
물(200㎖) 중 2-(2-(2-클로로에톡시)에톡시)에탄-1-올(13g, 77 m㏖)의 용액에 아자이드화나트륨(10g, 154 m㏖)을 첨가한다. 이 반응물을 18시간 동안 100℃까지 가열하였다. 이 반응물을 실온까지 냉각시키고, 1ℓ 분별깔때기에 붓고, 다이클로로메탄(3×200㎖)으로 추출하였다. 합한 다이클로로메탄 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켜, 2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에탄-1-올을 무색 오일로서 제공하였다(11.7g).
단계 2. 화합물 87c의 제조
화합물 87c는 화합물 84에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 86c(4.95g, 28.3m㏖) 및 6c(10g, 25.7m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 10g, 77%.
단계 3. 화합물 88c의 제조
화합물 88c는 화합물 85에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 87c(10g, 19.8m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 7.63g, 65%.
단계 4. 화합물 89c의 제조
CH2Cl2(50㎖) 중 88c(2g, 3.38m㏖) 및 라세미 Z-글루탐산(427㎎, 1.52m㏖)의 용액을 HBTU(1.41g, 3.7m㏖) 및 후니그의 염기(1.77㎖, 10.1m㏖)로 처리하였다. 교반 후(18h) 혼합물을 농축시키고 크로마토그래피에 적용시켜 89c(871㎎, 48%)를 수득하였다. 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.5 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 5. 화합물 90c의 제조
EtOAc(10㎖) 중 89c (870㎎, 0.72m㏖) 및 Pd/C(90㎎, 10% - 습윤 지지체)의 용액을 TFA(84㎕, 1.1m㏖)로 처리하고, H2로 퍼지시킨다. 격렬하게 교반 후(2시간), 이 반응물을 N2로 퍼지시키고, 셀라이드를 통해서 여과시키고, 농축시킨다. 조질의 물질을 추가의 처리 없이 사용하여 90c(850㎎, 정량적)를 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.25 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 6. 화합물 91c의 제조
CH2Cl2 (10㎖) 중 90c(850㎎, 0.72m㏖) 및 Z-글루탐산(91㎎, 0.32m㏖)의 용액을 HBTU(300㎎, 0.79m㏖) 및 후니그의 염기(502㎕, 2.9m㏖)로 처리한다. 교반 후(1.5h) 이 혼합물을 CH2Cl2로 희석시키고, NaHCO3(포화 수성)로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시킨다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용하여 91c(590㎎, 76%)를 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.5 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 7. 화합물 92c의 제조
CH3OH(30㎖) 중 91c (590㎎, 0.25m㏖) 및 Pd/C(100㎎, 10% - 습윤 지지체)의 용액을 TFA(29㎕, 0.37m㏖)로 처리하고, H2로 퍼지시킨다. 교반 후(3h), 이 혼합물을 N2로 퍼지시키고, 이어서 셀라이트를 통해서 여과시키고, 농축시킨다. 조질의 물질을 추가의 처리 없이 사용하여 92c(600㎎, 정량적)를 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.1 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 8. 접합체 191c의 제조
접합체 191c는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 128 및 화합물 92c로부터 제조하였다.
실시예 17. 접합체 203 및 206의 합성
반응식 39.
Figure pct00303
단계 1. 화합물 69b의 제조
화합물 69b는 화합물 69에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 (2S,4R)-4-하이드록시피롤리딘-2-카복실산으로부터 제조하였다.
단계 2. 접합체 203 및 206의 제조
접합체 203 및 206은 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 96 및 100으로부터 제조하였다.
실시예 18. 접합체 209의 합성
반응식 40.
Figure pct00304
단계 1. 접합체 209의 제조
접합체 209는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 96 및 160으로부터 제조하였다.
실시예 18a. 접합체 209a의 합성
반응식 40a.
Figure pct00305
Figure pct00306
단계 1. 접합체 209a의 제조
접합체 209a는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 96a 및 160으로부터 제조하였다.
실시예 19. 접합체 212 및 215의 합성
반응식 41.
Figure pct00307
반응식 42.
Figure pct00308
단계 1. 다이메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)아세트아미도)-아이소프탈레이트 105의 제조
DMF(50㎖) 중 다이메틸 5-아미노아이소프탈레이트(5g, 24 m㏖), Z-Gly-OH(5g, 24 m㏖), EDC(5g, 26.3 m㏖), HOBt(3.6g, 26.3 m㏖), NMM(2.9㎖, 26.3 m㏖)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 이 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(250㎖)로 희석시키고, 각각 1M HCl(2×100㎖), 포화 중탄산나트륨(1×100㎖) 및 염수(2×100㎖)로 세척하였다. 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 건조 상태로 농축시켜 다이메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈레이트를 무색 고체로서 제공하였다(7.2g, 79%).
단계 2. 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈산 106의 제조
메탄올(25㎖) 및 THF(25㎖) 중 메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈레이트(7.2g)의 용액에 1M NaOH(25㎖)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켜 THF 및 MeOH를 제거하였다. 나머지 수성 용액을 물(75㎖)로 희석시키고, 빙수욕 상에서 냉각시키고, 6M HCl로 pH = 1로 산성화시켰다. 고체를 여과시키고, 물(3×100㎖)로 세척하였다. 고체를 냉동 건조시켜 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)-아이소프탈산(6.9g, 정량적)을 제공하였다.
단계 3. 화합물 107의 제조
화합물 107은 화합물 95에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈산 106(200㎎, 0.54 m㏖) 및 94(1.7g, 1.3 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 600㎎.
단계 4. 화합물 108의 제조
화합물 108은 화합물 96에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 107(600㎎)로부터 제조하였다. 수득량: 650㎎, 정량적.
단계 5. 화합물 109의 제조
화합물 109는 화합물 99에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈산 106(180㎎, 0.48 m㏖) 및 98(1.5g, 1.1 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 900㎎.
단계 6. 화합물 110의 제조
화합물 110은 화합물 100에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 109(900㎎)로부터 제조하였다. 수득량: 920㎎, 정량적.
단계 7. 접합체 212 및 215의 제조
접합체 212 및 215는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 128 및 108 또는 110으로부터 제조하였다.
실시예 19a. 접합체 212a 및 215a의 합성
반응식 41a.
Figure pct00309
반응식 42a.
Figure pct00310
단계 1. 다이메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)아세트아미도)-아이소프탈레이트 105a의 제조
DMF(50㎖) 중 다이메틸 5-아미노아이소프탈레이트(5g, 24 m㏖), Z-Gly-OH(5g, 24 m㏖), EDC(5g, 26.3 m㏖), HOBt(3.6g, 26.3 m㏖), NMM(2.9㎖, 26.3 m㏖)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반한다. 완료 시, 이 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(250㎖)로 희석시키고, 각각 1M HCl(2×100㎖), 포화 중탄산나트륨(1×100㎖) 및 염수(2×100㎖)로 세척한다. 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 건조 상태로 농축시켜, 다이메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈레이트를 무색 고체로서 제공한다(7.2g, 79%).
단계 2. 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈산 106a의 제조
메탄올(25㎖) 및 THF(25㎖) 중 메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈레이트(7.2g)의 용액에 1M NaOH(25㎖)를 첨가한다. 이 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켜 THF 및 MeOH를 제거한다. 나머지 수성 용액을 물(75㎖)로 희석시키고, 빙수욕 상에서 냉각시키고 6M HCl로 pH = 1로 산성화시킨다. 고체를 여과시키고, 물(3×100㎖)로 세척한다. 고체를 냉동 건조시켜, 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)-아이소프탈산(6.9g, 정량적)을 제공한다.
단계 3. 화합물 107a의 제조
화합물 107a는 화합물 95에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈산 106a(200㎎, 0.54 m㏖) 및 94a(1.7g, 1.3 m㏖)로부터 제조한다. 수득량: 600㎎.
단계 4. 화합물 108a의 제조
화합물 108a는 화합물 96a에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 107a(600㎎)로부터 제조한다. 수득량: 650㎎, 정량적.
단계 5. 화합물 109a의 제조
화합물 109a는 화합물 99에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈산 106a(180㎎, 0.48 m㏖) 및 98a(1.5g, 1.1 m㏖)로부터 제조한다. 수득량: 900㎎.
단계 6. 화합물 110a의 제조
화합물 110a는 화합물 100에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 109(900㎎)로부터 제조한다. 수득량: 920㎎, 정량적.
단계 7. 접합체 212a 및 215a의 제조
접합체 212a 및 215a는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 128 및 108a 또는 110a로부터 제조한다.
실시예 20. 접합체 218 및 221의 합성
반응식 43.
Figure pct00311
반응식 44.
Figure pct00312
Figure pct00313
단계 1. 화합물 111의 제조
화합물 111은 화합물 89에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 4-(((tert-부톡시카보닐)아미노)메틸)프탈산(1.13g, 3.84m㏖) 및 88(5g, 8.44m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 2.21g, 49%.
단계 2. 화합물 112의 제조
CH2Cl2(40㎖) 중 111(2.21g, 1.87m㏖)의 용액을 TFA(5㎖)로 서서히 처리하였다. 교반 후(2시간), 이 혼합물을 농축시키고, 크로마토그래피에 적용시켜 112(1.08g, 47%)를 무색 발포물로서 수득하였다. Rf 0.1 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 3. 화합물 113의 제조
화합물 113은 화합물 91에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 112(1.08g, 0.88m㏖) 및 (2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)-D-글루탐산(112㎎, 0.39m㏖)으로부터 제조하였다. 수득량: 600㎎, 62%.
단계 4. 화합물 114의 제조
화합물 114는 화합물 92에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 113으로부터 제조하였다.
단계 5. 화합물 115의 제조
화합물 115는 화합물 93에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 4-(((tert-부톡시카보닐)아미노)메틸)프탈산(3.94g, 13.3m㏖) 및 9(18.2g, 29.4m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 9.02g, 53%.
단계 6. 화합물 116의 제조
화합물 116은 화합물 112에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 115(8g, 6.3m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 3.23g, 39%.
단계 7. 화합물 117의 제조
화합물 117은 화합물 95에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 116(3.23g, 2.45m㏖) 및 (2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)-D-글루탐산(192㎎, 1.1m㏖)으로부터 제조하였다. 수득량: 2.22g, 34%.
단계 8. 화합물 118의 제조
화합물 118은 화합물 96에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 117(2.22g, 0.84m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 2.02g, 91%.
단계 9. 접합체 218 및 221의 제조
접합체 218 및 221은 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 128 및 114 또는 118로부터 제조하였다.
실시예 20a. 접합체 218a 및 221a의 합성
반응식 43a.
Figure pct00314
Figure pct00315
반응식 44a.
Figure pct00316
단계 1. 화합물 111a의 제조
화합물 111a는 화합물 89에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 4-(((tert-부톡시카보닐)아미노)메틸)프탈산(1.13g, 3.84m㏖) 및 88(5g, 8.44m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 2.21g, 49%.
단계 2. 화합물 112a의 제조
CH2Cl2(40㎖) 중 111a(2.21g, 1.87m㏖)의 용액을 TFA(5㎖)로 서서히 처리한다. 교반 후(2시간) 이 혼합물을 농축시키고 크로마토그래피에 적용시켜 112a(1.08g, 47%)를 무색 발포물로서 수득한다. Rf 0.1 (10% CH3OH-CH2Cl2).
단계 3. 화합물 113a의 제조
화합물 113a는 화합물 91에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 112a(1.08g, 0.88m㏖) 및 (2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)-D-글루탐산(112㎎, 0.39m㏖)으로부터 제조하였다. 수득량: 600㎎, 62%.
단계 4. 화합물 114a의 제조
화합물 114a는 화합물 92에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 113a로부터 제조하였다.
단계 5. 화합물 115a의 제조
화합물 115a는 화합물 93에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 4-(((tert-부톡시카보닐)아미노)메틸)프탈산(3.94g, 13.3m㏖) 및 9(18.2g, 29.4m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 9.02g, 53%.
단계 6. 화합물 116a의 제조
화합물 116a는 화합물 11a에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 115a(8g, 6.3m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 3.23g, 39%.
단계 7. 화합물 117a의 제조
화합물 117a는 화합물 95에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 116a(3.23g, 2.45m㏖) 및 (2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)글루탐산(192㎎, 1.1m㏖)으로부터 제조하였다. 수득량: 2.22g, 34%.
단계 8. 화합물 118a의 제조
화합물 118a는 화합물 96에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 117a(2.22g, 0.84m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 2.02g, 91%.
단계 9. 접합체 218a 및 221a의 제조
접합체 218a 및 221a은 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 128 및 114a 또는 118a로부터 제조하였다.
실시예 21. 접합체 224의 합성
반응식 45.
Figure pct00317
단계 1. 화합물 224의 제조
접합체 224는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 96 및 130으로부터 제조하였다.
실시예 21a. 접합체 224b의 합성
반응식 45a.
Figure pct00318
Figure pct00319
단계 1. 화합물 224b의 제조
접합체 224b는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 96b 및 130으로부터 제조하였다.
실시예 22 접합체 231의 합성
반응식 46
Figure pct00320
반응식 47
Figure pct00321
Figure pct00322
단계 1 화합물 225의 제조
화합물 225는 89에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 5-(2-아미노아세트아미도)아이소프탈산 106(560㎎, 1.5m㏖) 및 9(2.24g, 3.6m㏖)로부터 제조하였다. 수득량 1.6g, 80%.
단계 2 화합물 226의 제조
화합물 226은 14에서와 동일한 방식으로 제조한다. 수득량 1.22g, 78%.
단계 3 화합물 227의 제조
화합물 227는, Z-글루탐산(108㎎, 0.38m㏖) 및 226(1.22g, 0.92m㏖)으로부터, 89에서와 동일한 방식으로 제조한다. 수득량 471㎎, 45%.
단계 4 화합물 228의 제조
화합물 228은 14에서와 동일한 방식으로 제조하였다. 수득량 460㎎, 정량적.
단계 5 화합물 229의 제조
화합물 229는 89에서와 동일한 방식으로 228(460㎎, 0.17m㏖) 및 128(125㎎, 0.19m㏖)로부터 제조하였다. 수득량 365㎎, 66%.
단계 6 화합물 231의 제조
접합체 231은 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 제조하였다.
실시예 22a 접합체 231a의 합성
반응식 46a
Figure pct00323
반응식 47a
Figure pct00324
Figure pct00325
단계 1 화합물 225a의 제조
화합물 225a는 89에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 5-(2-아미노아세트아미도)아이소프탈산 106(560㎎, 1.5m㏖) 및 9(2.24g, 3.6m㏖)로부터 제조한다. 수득량 1.6g, 80%.
단계 2 화합물 226a의 제조
화합물 226a는 14에서와 동일한 방식으로 제조한다. 수득량 1.22g, 78%.
단계 3 화합물 227a의 제조
화합물 227a는 89에서와 동일한 방식으로 Z-글루탐산(108㎎, 0.38m㏖) 및 226a(1.22g, 0.92m㏖)로부터 제조한다. 수득량 471㎎, 45%.
단계 4 화합물 228a의 제조
화합물 228a는 14에서와 동일한 방식으로 제조한다. 수득량 460㎎, 정량적.
단계 5 화합물 229a의 제조
화합물 229a는 89에서와 동일한 방식으로 228a(460㎎, 0.17m㏖) 및 128(125㎎, 0.19m㏖)로부터 제조한다. 수득량 365㎎, 66%.
단계 6 화합물 231a의 제조
접합체 231a는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 제조한다.
실시예 22b 접합체 231b의 합성
반응식 46b
Figure pct00326
반응식 47b
Figure pct00327
Figure pct00328
단계 1 화합물 225b의 제조
화합물 225b는 89에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 5-(2-아미노아세트아미도)아이소프탈산 106(560㎎, 1.5m㏖) 및 9(2.24g, 3.6m㏖)로부터 제조하였다. 수득량 1.6g, 80%.
단계 2 화합물 226b의 제조
화합물 226b는 14에서와 동일한 방식으로 제조한다. 수득량 1.22g, 78%.
단계 3 화합물 227b의 제조
화합물 227b는 89에서와 동일한 방식으로 Z-글루탐산(108㎎, 0.38m㏖) 및 226b(1.22g, 0.92m㏖)로부터 제조한다. 수득량 471㎎, 45%.
단계 4 화합물 228b의 제조
화합물 228b는 14에서와 동일한 방식으로 제조한다. 수득량 460㎎, 정량적.
단계 5 화합물 229b의 제조
화합물 229b는 89에서와 동일한 방식으로 228b(460㎎, 0.17m㏖) 및 128(125㎎, 0.19m㏖)로부터 제조한다. 수득량 365㎎, 66%.
단계 6 화합물 231b의 제조
접합체 231b는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 제조한다.
실시예 23. 접합체 233의 합성
반응식 48
Figure pct00329
단계 1. 화합물 232의 제조
화합물 232는 화합물 19에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 24(650㎎, 0.33 m㏖) 및 화합물 69b(175㎎, 0.33 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 380㎎, 47%.
단계 2. 화합물 233의 제조
화합물 233은 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 232로부터 제조하였다.
실시예 24. 접합체 235의 합성
반응식 49
Figure pct00330
Figure pct00331
단계 1. 화합물 234의 제조
화합물 234는 화합물 19에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 24(1.1g, 0.55 m㏖) 및 화합물 18(175㎎, 0.33 m㏖)로부터 제조하였다. 수득량: 685㎎, 51%.
단계 2. 화합물 235의 제조
화합물 235는 화합물 1에 대해서 이용된 것과 동일한 절차를 이용해서 화합물 234로부터 제조하였다.
실시예 25 접합체 320의 합성
반응식 50 활성화 링커의 제조
Figure pct00332
단계 1. 라세미 (시스) 5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온 301의 제조
다이클로로메탄(75㎖) 중 3,4-다이메틸퓨란-2,5-다이온(3g, 24 m㏖) 및 N-벤질-1-메톡시-N-((트라이메틸실릴)메틸)메탄아민(7g, 29.8 m㏖)의 냉각된 용액(0℃)에 트라이플루오로아세트산(75㎕)을 서서히 첨가하였다. 이 용액을 하룻밤 교반하여 빙욕이 녹음에 따라서 실온까지 서서히 가온시켰다. 이 반응 혼합물을 건조 상태로 농축시키고, 에틸 아세테이트(100㎖)에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨(2×100㎖)으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켰다. 실리카겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 헥산 중 20% 에틸 아세테이트 내지 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제시켜 (3aR,6aS)-5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온을 황색 오일로서 제공하였다(3.5g, 56%).
단계 2. 라세미 (시스) (1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올 302의 제조
무수 다이에틸에터(50㎖) 중 (3aR,6aS)-5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온(3.5g, 13.4 m㏖)의 냉각된(0℃) 용액에 리튬 알루미늄 하이드록사이드 펠릿(1.5g, 40 m㏖)을 3부분에 걸쳐서 서서히 첨가하였다. 이 용액을 하룻밤 교반하여 빙욕이 녹음에 따라서 실온까지 서서히 가온시켰다. 완료 시, 반응물을 0℃까지 냉각시키고 1.5㎖의 5M NaOH에 이어서 1.5㎖의 물로 매우 서서히 반응중지시켰다. 30분 동안 교반하고 이어서 황산마그네슘을 첨가하고 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 ((3R,4S)-1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올을 무색 오일로서 제공하였다(2.7g).
단계 3. 라세미 (시스) (3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올 303의 제조
메탄올(10㎖) 중 ((3R,4S)-1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올(10g, 40 m㏖)의 용액에 습윤 활성탄 상의 10% 팔라듐(1g)을 첨가하였다. 이 용액을 수소 분위기 하에 16시간 동안 격렬하게 교반하였다. 완료 시, 용액을 셀라이트를 통해서 여과시키고, 건조상태로 농축시켜 ((3R,4S)-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올을 무색 고체로서 제공하였다(5.5g, 86%).
단계 4. 라세미 (시스) 메틸 10-(3,4-비스(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 304의 제조
CH2Cl2(100㎖) 중 3(1.3g, 8.2 m㏖) 및 모노메틸 세바케이트(1.8g, 8.2 m㏖)의 용액을 HBTU(3.41g, 9.02m㏖) 및 후니그의 염기(5.71㎖, 32.8m㏖)로 처리하였다. 하룻밤 교반 후, 이 혼합물을 NaHCO3(포화 수성), 물 및 염수로 세척하고, 이어서, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피(구배: 0% CH3OH-CH2Cl2 내지 20%)에 적용하여 4(1.8g, 61%)를 수득하였다.
단계 5. 라세미 (시스) 메틸 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)-메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 305의 제조
피리딘(180㎖) 중 304(1.8g, 5.0 m㏖) 및 4,4'-다이메톡시트라이틸 클로라이드(1.7g, 5.0 m㏖)의 용액을 하룻밤 교반하였다. 이어서, 피리딘을 감압 하에 제거하고, 조질의 물질을 크로마토그래피(구배: 0% CH3OH-CH2Cl2 내지 10%)에 적용시켜 5(1.4g, 42%)를 황색 오일로서 제공하였다.
단계 6. 라세미 (시스) 리튬 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)-(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 306의 제조
THF(50㎖) 및 물(50㎖) 중 화합물 305(3.0g, 4.6 m㏖)의 용액에 수산화리튬(121㎎, 5.0 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켜 THF를 제거하였다. 나머지 수성 용액을 하룻밤 냉동 건조시켜, 연한 분홍색 고체(2.9g, 정량적)를 제공하였다. 화합물 306을 2가지 시스-부분입체이성질체의 혼합물로서 제조하였다.
반응식 51 퍼아세틸화 갈락토사민 307의 합성
Figure pct00333
피리딘(1.5ℓ) 중 D-갈락토사민 하이드로클로라이드(250　g, 1.16 ㏖)를 아세트산 무수물(1.25ℓ, 13.2 ㏖)로 45분에 걸쳐서 처리하였다. 하룻밤 교반 후, 이 반응 혼합물을 3개의 1ℓ 부분으로 나누었다. 각각의 1ℓ 부분을 3ℓ의 빙수에 붓고, 1시간 동안 혼합하였다. 혼합 후, 고체를 여과 제거하고, 합하여 액체 질소 위에서 냉동시키고, 이어서 5일 동안 동결건조시켜 퍼아세틸화 갈락토사민 7(369.4g, 82%)을 백색 고체로서 수득하였다. Rf (0.58, 10% MeOH-CH2Cl2).
반응식 52 GalNAc 단량체의 합성
Figure pct00334
단계 1 화합물 309의 제조
물(1ℓ) 중 2-[2-(2-클로로에톡시)]에탄올 308(100g, 593m㏖)의 용액을 NaN3(77g, 1.19㏖)로 처리하고, 가열하였다(90℃). 교반 후(72시간) 이 용액을 냉각시키고(실온), CH2Cl2로 추출하였다(4×). 합한 유기물을 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시키고, 추가의 처리 없이 사용하였다. 화합물 9(88.9g, 86%)를 담황색 오일로서 얻었다.
단계 2 화합물 310의 제조
1,2-다이클로로에탄(40㎖) 중 7(2.76g, 7.1m㏖) 및 309(1.37g, 7.8m㏖)의 용액을 Sc(OTf)3(174㎎, 0.36m㏖)로 처리하고, 가열하였다(85℃). 교반 후(2시간), 이 혼합물을 냉각시키고(실온), TEA(4㎖)의 첨가에 의해 반응중지시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용하여 310(3.03g, 85%)을 담황색 발포물로서 수득하였다.
단계 3 화합물 311의 제조
EtOAc(30㎖) 중 310(3.02g, 5.99m㏖) 및 Pd/C(300㎎, 10% Pd 로딩 - 습윤 지지체)의 용액을 TFA(576㎕, 7.5m㏖)로 처리하였다. 이 반응 혼합물을 수소 가스(45분)로 퍼지시키고, 이어서 질소 가스(10분)로 퍼지시키고, 이어서 셀라이트를 통해서 여과시켰다. 여과액을 농축시키고, 이어서 크로마토그래피에 적용하여 311(2.67g, 75%)을 갈색 발포물로서 수득하였다.
반응식 53 방향족 코어의 합성
Figure pct00335
단계 1. 다이메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)아세트아미도)-아이소프탈레이트 312의 제조
DMF(50㎖) 중 다이메틸 5-아미노아이소프탈레이트(5g, 24 m㏖), Z-Gly-OH(5g, 24 m㏖), EDC(5g, 26.3 m㏖), HOBt(3.6g, 26.3 m㏖), NMM(2.9㎖, 26.3 m㏖)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 이 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(250㎖)로 희석시키고, 각각 1M HCl(2×100㎖), 포화 중탄산나트륨(1×100㎖) 및 염수(2×100㎖)로 세척한다. 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 건조 상태로 농축시켜, 다이메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)-아세트아미도)아이소프탈레이트를 무색 고체로서 제공한다(7.2g, 79%).
단계 2. 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈산　313의 제조
메탄올(25㎖) 및 THF(25㎖) 중 메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈레이트(7.2g)의 용액에 1M NaOH(25㎖)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켜 THF 및 MeOH를 제거하였다. 나머지 수성 용액을 물(75㎖)로 희석시키고, 빙수욕 상에서 냉각시키고 6M HCl로 pH = 1로 산성화시켰다. 고체를 여과시키고, 물(3×100㎖)로 세척하였다. 고체를 냉동 건조시켜 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)-아이소프탈산(6.9g, 정량적)을 제공하였다.
반응식 54: 사량체의 제조
Figure pct00336
단계 1 화합물 314의 제조
CH2Cl2(150㎖) 중 313(2.09g, 5.6m㏖) 및 311(8.34g, 14.07m㏖)의 용액을 HBTU(6.4g, 16.9m㏖) 및 후니그의 염기(7.35㎖, 42.2m㏖)로 처리하였다. 교반 후(하룻밤) 이 반응 혼합물을 NaHCO3(포화 수성)에 붓고, 이어서 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피(구배 1-12% CH3OH-CH2Cl2)에 적용시켜 6(3.97g, 55%)을 담황색 발포물로서 제공하였다.
단계 2 화합물 315의 제조
화합물 314(3.92g, 3.07m㏖), Pd/C(400㎎, 10% 로딩 - 습윤 지지체) 및 트라이플루오로아세트산(308㎕, 4m㏖)을 H2로 퍼지시켰다. H2 하에 교반 후(하룻밤), 이 혼합물을 N2로 퍼지시키고(15 내지 20분), 이어서 셀라이트를 통해서 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용시켜 7(3.36g, 86%)을 백색 내지 크림색 발포물로서 수득하였다.
단계 3 화합물 316의 제조
화합물 316은 Z-글루탐산(306㎎, 1.09m㏖) 및 315(3.3g, 2.6m㏖)로부터 314와 동일한 방식으로 제조하였다. 수득량 1.66g, 60%.
단계 4 화합물 317의 제조
화합물 317은 315와 동일한 방식으로 제조하였다. 수득량 1.65g, 정량적.
반응식 55 완전한 접합체의 제조
Figure pct00337
단계 1 화합물 318의 제조
CH2Cl2(100㎖) 중 317(1.91g, 0.75m㏖)의 용액을 먼저 후니그의 염기(392㎕, 2.25m㏖)로, 이어서 6(두 시스-부분입체이성질체의 혼합물, 509㎎, 0.79m㏖)으로 처리하고 나서 HBTU(356㎎, 0.94m㏖)로 처리하였다. 교반 후(하룻밤), 이 용액을 NaHCO3(포화 수성)에 붓고, 이어서 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용하여 318(1.19g, 52%)을 백색 발포물로서 수득하였다.
단계 2 화합물 319의 제조
1,2-다이클로로에탄(100㎖) 중 318(1.19g, 0.39m㏖)의 용액을 TEA(542㎕, 3.9m㏖), DMAP(238㎎, 1.95m㏖) 및 석신산 무수물(195㎎, 1.95m㏖)로 처리하고, 가열하였다(85℃). 교반 후(2.5시간), 이 용액을 열로부터 제거하고, CH3OH(10㎖)로 처리하고, 교반하였다(1시간). 교반 후 이 혼합물을 NaHCO3(포화 수성)에 붓고, 이어서 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 얻어진 잔사를 추가의 처리 없이 사용하였다. 수득량 = 1.4g, 정량적.
단계 3 접합체 320의 제조
석시네이트 319를 표준 아마이드 커플링 화학을 이용해서 1000Å LCAA(장쇄 아미노알킬) CPG(대조 기공 유리) 상에 로딩하였다. 무수 아세토나이트릴(0.3㎖) 중 다이아이소프로필카보다이이미드(52.6 μ㏖), N-하이드록시 석신이미드(0.3㎎, 2.6 μ㏖) 및 피리딘(10㎕)의 용액을 무수 다이클로로메탄(0.2㎖) 중 319(20.6㎎, 8 μ㏖)에 첨가하였다. 이 혼합물을 LCAA CPG(183㎎)에 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 하룻밤 온화하게 혼합하였다. 319가 사라지면(HPLC), 이 반응 혼합물을 여과시키고, CPG를, 1㎖의 각각의 다이클로로메탄, 아세토나이트릴, THF 중 5% 아세트산 무수물/5% N-메틸이미다졸/5% 피리딘의 용액, 이어서 THF, 아세토나이트릴 및 다이클로로메탄으로 세척하였다. 이어서, CPG를 고진공 하에 하룻밤 건조시켰다. 로딩은 UV/Vis(504㎚)에 의한 표준 DMTr 검정에 의해 19 μ㏖/g인 것으로 결정되었다. 얻어진 GalNAc 로딩된 CPG 고체 지지체를 표준 절차를 이용하는 자동 올리고뉴클레오타이드 합성에 이용하였다. 뉴클레오타이드 탈보호에 이은 고체 지지체로부터의 제거(동시 갈락토사민 아세테이트 탈보호와 함께)에 의해 GalNAc-올리고뉴클레오타이드 접합체 320을 제공하였다.
실시예 26 접합체 520의 합성
반응식 56 활성화 링커의 제조
Figure pct00338
단계 1. 라세미 (시스) 5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온 301의 제조
다이클로로메탄(75㎖) 중 3,4-다이메틸퓨란-2,5-다이온(3g, 24 m㏖) 및 N-벤질-1-메톡시-N-((트라이메틸실릴)메틸)메탄아민(7g, 29.8 m㏖)의 냉각된 용액(0℃)에 트라이플루오로아세트산(75㎕)을 서서히 첨가하였다. 하룻밤 교반하여 빙욕이 녹음에 따라서 용액을 서서히 실온으로 가온시켰다. 이 반응 혼합물을 건조 상태로 농축시키고, 에틸 아세테이트(100㎖)에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨(2×100㎖)으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켰다. 실리카겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 헥산 중 20% 에틸 아세테이트 내지 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제시켜 (3aR,6aS)-5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온을 황색 오일로서 제공하였다(3.5g, 56%).
단계 2. 라세미 (시스) (1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올 302의 제조
무수 다이에틸에터(50㎖) 중 (3aR,6aS)-5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온(3.5g, 13.4 m㏖)의 냉각된(0℃) 용액에 리튬 알루미늄 하이드록사이드 펠릿(1.5g, 40 m㏖)을 세 부분에 걸쳐서 서서히 첨가하였다. 이 용액을 하룻밤 교반하고 빙욕조가 녹음에 따라서 실온까지 가온시켰다. 완료 시, 이 반응물을 0℃까지 냉각시키고, 1.5㎖의 5M NaOH에 이어서 1.5㎖의 물로 매우 서서히 반응중지시켰다. 30분 동안 교반하고, 이어서 황산마그네슘을 첨가하고 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 ((3R,4S)-1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올을 무색 오일로서 제공하였다(2.7g).
단계 3. 라세미 (시스) (3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올 303의 제조
메탄올(10㎖) 중 ((3R,4S)-1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올(10g, 40 m㏖)의 용액에 습윤 활성탄 상의 10% 팔라듐(1g)을 첨가하였다. 이 용액을 수소 분위기 하에 16시간 동안 격렬하게 교반하였다. 완료 시, 용액을 셀라이트를 통해서 여과시키고, 건조상태로 농축시켜 ((3R,4S)-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올을 무색 고체로서 제공하였다(5.5g, 86%).
단계 4. 라세미 (시스) 메틸 10-(3,4-비스(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 304의 제조
CH2Cl2 (100㎖) 중 3(1.3g, 8.2 m㏖) 및 모노메틸 세바케이트(1.8g, 8.2 m㏖)의 용액을 HBTU(3.41g, 9.02m㏖) 및 후니그의 염기(5.71㎖, 32.8m㏖)로 처리하였다. 하룻밤 교반 후, 이 혼합물을 NaHCO3(포화 수성), 물 및 염수로 세척하고, 이어서, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피(구배: 0% CH3OH-CH2Cl2 내지 20%)에 적용시켜 4(1.8g, 61%)를 수득하였다.
단계 5. 라세미 (시스) 메틸 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)-메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 305의 제조
피리딘(180㎖) 중 304(1.8g, 5.0 m㏖) 및 4,4'-다이메톡시트라이틸 클로라이드(1.7g, 5.0 m㏖)의 용액을 하룻밤 교반하였다. 이어서, 피리딘을 감압 하에 제거하고, 조질의 물질을 크로마토그래피(구배: 0% CH3OH-CH2Cl2 내지 10%)에 적용시켜 5(1.4g, 42%)를 황색 오일로서 수득하였다.
단계 6. 라세미 (시스) 리튬 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)-(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 306의 제조
THF(50㎖) 및 물(50㎖) 중 화합물 305(3.0g, 4.6 m㏖)의 용액에 수산화리튬(121㎎, 5.0 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켜 THF를 제거하였다. 나머지 수성 용액을 하룻밤 냉동 건조시켜 연한 분홍색 고체(2.9g, 정량적)를 제공하였다. 화합물 306을 2가지 시스-부분입체이성질체의 혼합물로서 제조하였다.
반응식 57 퍼아세틸화 갈락토사민 507의 합성
Figure pct00339
피리딘(1.5ℓ) 중 갈락토사민 하이드로클로라이드(250g, 1.16 ㏖)를 아세트산 무수물(1.25ℓ, 13.2 ㏖)로 45분에 걸쳐서 처리한다. 하룻밤 교반 후, 이 반응 혼합물을 3개의 1ℓ 부분으로 나눈다. 각각의 1ℓ 부분을 3ℓ의 얼음물에 붓고, 1시간 동안 혼합한다. 혼합 후, 고체를 여과 제거하고, 합하여, 액체 질소 위에서 냉동시키고, 이어서 5일 동안 동결건조시켜 퍼아세틸화 갈락토사민 507(369.4g, 82%)을 백색 고체로서 수득한다. Rf (0.58, 10% MeOH-CH2Cl2).
반응식 58 GalNAc 단량체의 합성
Figure pct00340
단계 1 화합물 509의 제조
물(1ℓ) 중 2-[2-(2-클로로에톡시)]에탄올 508(100g, 593m㏖)의 용액을 NaN3(77g, 1.19㏖)로 처리하고, 가열하였다(90℃). 교반 후(72시간), 이 용액을 냉각시키고(실온), CH2Cl2로 추출하였다(4×). 합한 유기물을 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시키고, 추가의 처리 없이 사용되었다. 화합물 509(88.9g, 86%)는 담황색 오일로서 얻어진다.
단계 2 화합물 510의 제조
1,2-다이클로로에탄(40㎖) 중 507(2.76g, 7.1m㏖) 및 509(1.37g, 7.8m㏖)의 용액에 Sc(OTf)3(174㎎, 0.36m㏖)로 처리하고, 가열한다(85℃). 교반 후(2시간), 이 혼합물을 냉각시키고(실온), TEA(4㎖)의 첨가에 의해 반응중지시키고, 농축시킨다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용하여 510(3.03g, 85%)을 담황색 발포물로서 수득한다.
단계 3 화합물 511의 제조
EtOAc(30㎖) 중 510(3.02g, 5.99m㏖) 및 Pd/C(300㎎, 10% Pd 로딩 - 습윤 지지체)의 용액을 TFA(576㎕, 7.5m㏖)로 처리한다. 이 반응 혼합물을 수소 가스(45분)로 퍼지시키고, 이어서 질소 가스(10분)로 퍼지시키고, 이어서 셀라이트를 통해서 여과시킨다. 여과액을 농축시키고 이어서 크로마토그래피에 적용시켜 511(2.67g, 75%)을 갈색 발포물로서 수득한다.
반응식 59 방향족 코어의 합성
Figure pct00341
단계 1. 다이메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)아세트아미도)-아이소프탈레이트 312의 제조
DMF(50㎖) 중 다이메틸 5-아미노아이소프탈레이트(5g, 24 m㏖), Z-Gly-OH(5g, 24 m㏖), EDC(5g, 26.3 m㏖), HOBt(3.6g, 26.3 m㏖), NMM(2.9㎖, 26.3 m㏖)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 이 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(250㎖)로 희석시키고, 각각 1M HCl(2×100㎖), 포화 중탄산나트륨(1×100㎖) 및 염수(2×100㎖)로 세척하였다. 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 건조 상태로 농축시켜, 다이메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)-아세트아미도)아이소프탈레이트를 무색 고체로서 제공하였다(7.2g, 79%).
단계 2. 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ 2 -에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈산　313의 제조
메탄올(25㎖) 및 THF(25㎖) 중 메틸 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)아이소프탈레이트(7.2g)의 용액에 1M NaOH(25㎖)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 농축시켜, THF 및 MeOH를 제거하였다. 나머지 수성 용액을 물(75㎖)로 희석시키고, 빙수욕 상에서 냉각시키고 6M HCl로 pH = 1로 산성화시켰다. 고체를 여과시키고, 물(3×100㎖)로 세척하였다. 고체를 냉동 건조시켜 5-(2-((2-옥소-2-페닐-1λ2-에틸)아미노)아세트아미도)-아이소프탈산(6.9g, 정량적)을 제공하였다.
반응식 60: 사량체의 제조
Figure pct00342
단계 1 화합물 514의 제조
CH2Cl2(150㎖) 중 313(2.09g, 5.6m㏖) 및 511(8.34g, 14.07m㏖)의 용액을 HBTU(6.4g, 16.9m㏖) 및 후니그의 염기(7.35㎖, 42.2m㏖)로 처리하였다. 교반 후(하룻밤), 이 반응 혼합물을 NaHCO3(포화 수성)에 붓고, 이어서 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피(구배 1-12% CH3OH-CH2Cl2)에 적용하여 6(3.97g, 55%)을 담황색 발포물로서 수득하였다.
단계 2 화합물 515의 제조
화합물 514(3.92g, 3.07m㏖), Pd/C(400㎎, 10% 로딩 - 습윤 지지체) 및 트라이플루오로아세트산(308㎕, 4m㏖)을 H2로 퍼지시킨다. H2 하에 교반 후(하룻밤), 이 혼합물을 N2로 퍼지시키고(15 내지 20분), 이어서 셀라이트를 통해서 여과시키고, 농축시킨다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용시켜 7(3.36g, 86%)을 백색 내지 크림색 발포물로서 수득한다.
단계 3 화합물 516의 제조
화합물 516은 Z-글루탐산(306㎎, 1.09m㏖) 및 515(3.3g, 2.6m㏖)로부터 514와 동일한 방식으로 제조한다. 수득량 1.66g, 60%.
단계 4 화합물 517의 제조
화합물 517은 515와 동일한 방식으로 제조한다. 수득량 1.65g, 정량적.
반응식 61 완전한 접합체의 제조
Figure pct00343
Figure pct00344
단계 1 화합물 518의 제조
CH2Cl2(100㎖) 중 517 (1.91g, 0.75m㏖)의 용액을 먼저 후니그의 염기(392㎕, 2.25m㏖)로 이어서 306(2가지 시스-부분입체이성질체의 혼합물, 509㎎, 0.79m㏖)으로, 그 후 HBTU(356㎎, 0.94m㏖)로 처리한다. 교반 후(하룻밤) 이 용액을 NaHCO3(포화 수성)에 붓고, 이어서 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피에 적용하여 518(1.19g, 52%)을 백색 발포물로서 수득한다.
단계 2 화합물 519의 제조
1,2 다이클로로에탄(100㎖) 중 518(1.19g, 0.39m㏖)의 용액을 TEA(542㎕, 3.9m㏖), DMAP(238㎎, 1.95m㏖) 및 석신산 무수물(195㎎, 1.95m㏖)로 처리하고, 가열한다(85℃). 교반 후(2.5시간), 이 용액을 가열로부터 제거하고, CH3OH(10㎖)로 처리하고, 교반한다(1시간). 교반 후, 이 혼합물을 NaHCO3(포화 수성)에 붓고, 이어서 염수로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시킨다. 얻어진 잔사는 추가의 처리 없이 사용한다. 수득량 = 1.4g, 정량적.
단계 3 접합체 520의 제조
석시네이트 519를 표준 아마이드 커플링 화학을 이용해서 1000Å LCAA (장쇄 아미노알킬) CPG(대조 기공 유리)에 로딩한다. 무수 아세토나이트릴(0.3㎖) 중 다이아이소프로필카보다이이미드(52.6 μ㏖), N-하이드록시 석신이미드(0.3㎎, 2.6 μ㏖) 및 피리딘(10㎕)의 용액을 무수 다이클로로메탄(0.2㎖) 중 519 (20.6㎎, 8 μ㏖)에 첨가한다. 이 혼합물을 LCAA CPG(183㎎)에 첨가한다. 이 현탁액을 실온에서 하룻밤 온화하고 혼합한다. 519가 사라지면(HPLC), 이 반응 혼합물을 여과하고, CPG를 각각 1㎖의 다이클로로메탄, 아세토나이트릴, THF 중 5% 아세트산 무수물/5% N-메틸이미다졸/5% 피리딘의 용액, 이어서 THF, 아세토나이트릴 및 다이클로로메탄으로 세척한다. 이어서, CPG를 고진공하에 하룻밤 건조시킨다. 로딩은 UV/Vis(504㎚)에 의한 표준 DMTr 검정에 의해 19 μ㏖/g인 것으로 결정하였다. 얻어진 GalNAc 로딩된 CPG 고체 지지체를 표준 절차를 이용하는 자동 올리고뉴클레오타이드 합성에 이용한다. 뉴클레오타이드 탈보호에 이어서 고체 지지체로부터의 제거(동시 갈락토사민 아세테이트 탈보호와 함께)하여 GalNAc-올리고뉴클레오타이드 접합체　520을 제공한다.
실시예 27 표적화된 핵산 접합체의 합성
이하의 반응식 101 내지 122는 화학식 I의 접합체를 제조하는데 사용될 수 있는 중간체 화합물의 제조를 예시한다. 반응식 1 내지 22에 예시된 중간체 화합물 및 합성 과정은 본 발명의 실시형태이다.
반응식 101 화합물 606의 제조
Figure pct00345
단계 1. (3aR,6aS)-5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온 601의 제조
DCM(600㎖) 중 3,4-다이메틸퓨란-2,5-다이온(40g, 317 m㏖) 및 N-벤질-1-메톡시-N-((트라이메틸실릴)메틸)메탄아민(94.1g, 396.5 m㏖)의 냉각된 용액(0℃)에 트라이플루오로아세트산(732㎕)을 서서히 첨가하였다. 이 용액을 하룻밤 교반하여 실온까지 서서히 가온시켰다. 이 반응 혼합물을 건조 상태로 농축시키고, EtOAc(500㎖)에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨(2×500㎖)으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켰다. 실리카겔 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 헥산 중 20% 에틸 아세테이트 내지 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제시켜 (3aR,6aS)-5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온을 황색 오일로서 제공하였다(53.7g, 65%). Rf 0.85 40% EtOAc-헥산
단계 2. ((3R,4S)-1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올 602의 제조
무수 다이에틸에터(750㎖) 중 (3aR,6aS)-5-벤질-3a,6a-다이메틸테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-c]피롤-1,3(3aH)-다이온(53.7g, 205.7 m㏖)의 냉각된(0℃) 용액에 리튬 알루미늄 하이드록사이드 펠릿(17.6g, 463 m㏖)을 오후에 걸쳐서 나누어서 서서히 첨가하였다. 이 용액을 하룻밤 교반하면서 빙수욕이 녹음에 따라서 실온까지 가온시켰다. 완료 시, 반응물을 0℃까지 냉각시키고 25㎖의 5M NaOH에 이어서 12㎖의 물로 매우 서서히 반응중지시켰다. 이어서 30분 동안 교반하고, 황산마그네슘을 첨가하고, 여과시켰다. 여과액을 농축시켜 ((3R,4S)-1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올을 무색 오일로서 제공하였다(33.6g, 65%). Rf 0.25 10% CH3OH-CH2Cl2
단계 3. ((3R,4S)-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올 603의 제조
메탄올(300㎖) 중 ((3R,4S)-1-벤질-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올(40.1g, 161 m㏖)의 용액에 습윤 활성탄 상의 10% 팔라듐(4g)을 첨가하였다. 이 용액을 수소 분위기 하에 16시간 동안 격렬하게 교반하였다. 완료 시, 용액을 셀라이트를 통해서 여과시키고, 건조상태로 농축시켜 ((3R,4S)-3,4-다이메틸피롤리딘-3,4-다이일)다이메탄올을 무색 고체로서 제공하였다(24g, 94%). Rf 0.05 10% CH3OH-CH2Cl2
단계 4. 메틸 10-((3R,4S)-3,4-비스(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 604의 제조
CH2Cl2(1ℓ) 중 3(24g, 151 m㏖) 및 모노메틸 세바케이트(34.2g, 159 m㏖)의 용액을 HBTU(62.9g, 166 m㏖) 및 후니그의 염기(105㎖, 604 m㏖)로 처리하였다. 하룻밤 교반 후, 이 혼합물을 NaHCO3(포화 수성), 물 및 염수로 세척하고, 이어서, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질을 크로마토그래피(구배: 0% CH3OH-CH2Cl2 내지 20%)에 적용시켜 604(41.5g, 77%)를 수득하였다. Rf 0.55 10% CH3OH-CH2Cl2
단계 5. 메틸 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 605의 제조
피리딘(400㎖) 중 604(41.5g, 116 m㏖) 및 4,4'-다이메톡시트라이틸 클로라이드(38.8g, 116 m㏖)의 용액을 하룻밤 교반하였다. 이어서, 피리딘을 감압 하에 제거하고, 조질의 물질을 크로마토그래피(구배: 0% CH3OH-CH2Cl2 내지 10%)에 적용하여 605(29.5g, 39%)를 황색 오일로서 수득하였다. Rf 0.5 5% CH3OH-CH2Cl2
단계 6. 리튬 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트 606의 제조
THF(250㎖) 및 물(250㎖) 중 화합물 605(29.5g, 45 m㏖)의 용액에 수산화리튬(1.19g, 50 m㏖)을 첨가하였다. 이 용액을 18시간 동안 실온에서 교반하고, 이어서 농축시켜 THF를 제거하였다. 나머지 수성 용액을 하룻밤 냉동 건조시켜 606을 담자색 고체로서 제공하였다(28.5g, 98%). Rf 0.56 10% CH3OH-CH2Cl2
반응식 102 화합물 610의 제조
Figure pct00346
단계. 1. 메틸 12-아미노도데카노에이트 608의 제조
12-아미노운데칸산 607(10g, 4.64 m㏖)을 MeOH에서 실온에서 교반하였다. 아세틸 클로라이드(856㎕, 12 m㏖)를 적가하고, 이 반응물을 1.5시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 중 제거하고, 잔사를 MTBE에 장입하고, 냉장고에서 하룻밤 냉각시켰다. 얻어진 석출물을 여과에 의해 수집하고, 빙랭 MTBE로 세척하고, 고진공 하에 건조시켜 메틸 12-아미노도데카노에이트 608을 제공하였다.
단계 2. 메틸 12-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)도데카노에이트 609의 제조
리튬 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트(606)(2g, 3.1 m㏖), 메틸 12-아미노도데카노에이트(608)(778㎎, 3.1 m㏖), HBTU(1.2g, 3.1 m㏖) 및 TEA(1.4㎖, 10 m㏖)를 DCM 중에서 실온에서 하룻밤 교반하였다. 석출물을 여과에 의해 제거하고, 여과액을 진공 중 농축시키고, 잔사를 칼럼 크로마토그래피(5% MeOH, DCM)에 의해 정제시켰다. TLC는, 기하학적 이성질체로서 배정되고 메틸 12-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)도데카노에이트(609)에 정량적인 방식으로 함께 풀링된 동일한 질량으로 2개의 가까이 있는 스팟을 나타내었다.
단계 3. 리튬 12-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)-메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)-도데카노에이트 610의 제조
메틸 12-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)도데카노에이트 609(3.1 m㏖)를 LiOH를 가진 THF:H2O(50:50)(88㎎, 3.7 m㏖)에서 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응을 TLC에 의해 확인하고, THF를 진공 중 제거하였다. 수성 용액을 액체 N2에서 냉동시키고, 48시간 동안 동결건조시켜, 리튬 12-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)도데카노에이트 610을 정량적으로 제공하였다.
반응식 103 화합물 613의 제조
Figure pct00347
단계 1. 2-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)에틸 4-메틸벤젠설포네이트 612의 제조
THF(175㎖) 및 수성 NaOH(5M, 145㎖) 중 테트라에틸렌 글리콜(611)(934g, 4.8 ㏖)의 용액을 냉각시키고(0℃), THF(605㎖)에 용해된 p-톨루엔설포닐 클로라이드(91.4g, 480 m㏖)로 처리하고, 이어서 2시간 동안(0℃) 교반하였다. 이 반응 혼합물을 물(3ℓ)로 희석시키고, CH2Cl2로 추출하였다(3×500㎖). 합한 추출물을 물 및 염수로 세척하고, 이어서 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켜 2-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)에틸 4-메틸벤젠설포네이트(612)(140g, 84%)를 담황색 오일로서 제공하였다. Rf (0.57, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 2. 2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-올 613의 제조
DMF(880㎖) 중 612(140g, 403 m㏖)의 용액을 아자이드화나트륨(131g, 2.02 ㏖)으로 처리하고 (45℃에서) 하룻밤 가열하였다. 대부분의 DMF를 감압하에 제거하고, 잔사를 CH2Cl2(500㎖)에 용해시키고, 염수로 세척하고(3×500㎖), 이어서, 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 짧은 실리카 층(5% MeOH-CH2Cl2)을 통과시키고, 농축시켜 2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-올 613(65g, 74%)을 황색 오일로서 수득하였다. Rf (0.56, 10% MeOH-CH2Cl2).
반응식 104 화합물 619a 내지 619c의 제조
Figure pct00348
단계 1. (3R,4R,5R,6R)-6-(하이드록시메틸)-3-(((E)-4-메톡시벤질리덴) 아미노)테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이올 616의 제조
D-갈락토사민 HCl(614)(9g, 41.7 m㏖)을 1M NaOH 용액에서 실온에서 교반하였다. 아니스알데하이드(51㎖, 420 m㏖)를 첨가하고, 이 반응물을 고형화될 때까지 격렬하게 교반하였다. 고체 반응물을 4℃에서 16시간 동안 유지시켰다. 빙랭수(200㎖)를 첨가하고, 얻어진 고체를 여과에 의해 수집하고, 빙랭 EtOH/Et2O(1:1)로 세척하였다. 고체를 일정 중량으로 건조시켜 (3R,4R,5R,6R)-6-(하이드록시메틸)-3-(((E)-4-메톡시벤질리덴)아미노)테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이올(616)(9.81g, 78%)을 제공하였다.
단계 2. (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-(((E)-4-메톡시벤질리덴)아미노) 테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트 617의 제조
(3R,4R,5R,6R)-6-(하이드록시메틸)-3-(((E)-4-메톡시벤질리덴)아미노)테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이올(616)(9.81g, 30 m㏖)을 피리딘 중에서 0℃에서 교반하였다. 아세트산 무수물(34㎖)을 첨가하고 나서 DMAP(100㎎, cat)를 첨가하고, 이 반응물을 16시간 동안 교반하여 실온까지 서서히 가온시켰다. 얻어진 용액을 분쇄된 얼음에 붓고 4℃에서 16시간 동안 유지시켰다. 이 반응물을 EtOAc(×3)로 추출하고, 합한 유기물을 H2O 및 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켜 (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-(((E)-4-메톡시벤질리덴)아미노)테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트(617)(6.0g, 43%)를 제공하였다.
단계 3. (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-아미노테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트 하이드로클로라이드 618의 제조
(3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-(((E)-4-메톡시벤질리덴)아미노)테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트(617)(6.0g, 43%)를 아세톤(300㎖)에서 환류 하에 가열하였다. HCl(수성)(5N, 3.0㎖)을 첨가하고, 이 반응물을 15분 동안 교반하였다. 냉각 후, Et2O(400㎖)를 첨가하고, 이 반응물을 4℃에서 16시간 동안 유지시켰다. 얻어진 고체를 여과에 의해 수집하고, 빙랭 Et2O로 2회 세척하였다. 고체를 일정 중량으로 건조시켜 (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-아미노테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트 하이드로클로라이드(618)(4.17g, 84.4%)를 제공하였다.
단계 4a. (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도) 테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트 619a의 제조
(3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-아미노테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트 하이드로클로라이드(618)(13.5g, 35.2 m㏖) 및 TEA(7.83g, 77.4 m㏖)를 DCM 중 실온에서교반하였다. DCM 중 TFAA(8.13g, 38.7 m㏖)를 적가하고, 이 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 DCM으로 희석시키고, 1M HCl, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(5% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트(619a)(9.64g, 61.8%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 4b. (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-프로피온아미도테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트 619b의 제조
이 화합물은 TFAA 대신에 프로피온산 무수물을 이용해서 (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트(619a)와 유사한 방식으로 제조하여 (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-프로피온아미도테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트(619b)(1.2g, 85.3%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 4c. (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-(2,2-다이플루오로프로파노아미도) 테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트 619c의 제조
(3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-아미노테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트 하이드로클로라이드(618)(15.34g, 39.98 m㏖), 2,2-다이플루오로프로피온산(4.4g, 39.98 m㏖), HATU(24.37g, 64 m㏖) 및 TEA(12.14g, 120 m㏖)를 DMF에서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 EtOAc와 물 간에 분배하였다. 유기물을 분리시키고, 1M HCl, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(3% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-(2,2-다이플루오로프로파노아미도)-테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트(619c)(15.8g, 90%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
반응식 105 화합물 624의 제조
Figure pct00349
단계 1. 벤질 (2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에틸)카바메이트 622의 제조
THF(3.5ℓ) 중 아미노 알코올(620)(313.6g, 2.1㏖)의 용액을 N-(벤질옥시카보닐옥시)석신이미드(621)(550g, 2.21㏖)로 부분 방식으로 처라하였다. 일단 반응이 완료되면(18시간) THF를 감압 하에 제거하고 잔사를 CH2Cl2(2.5ℓ)에 용해시키고, 이어서 동일 용적의 HCl(1M), NaHCO3(포화 수성), H2O 및 염수로 세척하였다. 유기 추출물을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질(600g)을 크로마토그래피(4kg 실리카; 1-12% CH3OH-CH2Cl2)에 적용시켜 HO-Trig-NHZ(622)(468g, 78%)를 투명한 황색 점성 오일로서 수득하였다.
단계 2. (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((3-옥소-1-페닐-2,7,10-트라이옥사-4-아자도데칸-12-일)옥시)트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 623의 제조
1,2-다이클로로에탄(10㎖) 중 갈락토사민 펜타아세테이트(715.2g, 1.84㏖) 및 HO-Trig-NHZ(622)(400g, 1.41㏖)의 이질 혼합물을 5㏖% Sc(OTf)3(34.6g, 70.5 m㏖)로 처리하고, 가열하였다(85℃). 교반 후(5.5시간), 용액은 투명하고 균질하게 되었으며, 반응물을 냉각시키고, NaHCO3(포화 수성), HCl(1M), H2O 및 염수로 세척하였다. 유기 추출물을 건조시키고(MgSO4), 여과시키고, 농축시켰다. 조질의 물질(900g)을 EtOAc(900㎖)로 처리하여 우윳빛 이질 혼합물을 제공하였으며, 이것을 조질의 프릿을 통해 여과시키고, 따라서 펜타아세테이트를 제거하였다. 여과액을 농축시키고, 조질의 물질을 크로마토그래피(5 kg 실리카; 0-10% CH3OH-EtOAc)에 적용하여 글리코실화 생성물(623)(751g, 87%)을 연갈색 발포물로서 수득하였다.
단계 3. (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-(2-(2-(2-((2,2,2-트라이플루오로아세틸)-l4-아잔일)에톡시)에톡시)에톡시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 624의 제조
Gal-trig-NHZ(623)(750g, 1.22 ㏖), TFA(103.8㎖, 1.35㏖) 및 Pd/C(10% - 습윤 지지체, 75g)의 용액을 H2로 퍼지시켰다. 격렬한 교반 후(4.5시간), 이 반응 혼합물을 N2로 퍼지시키고(30분), 이어서 셀라이트를 통해서 여과시키고, 농축시켰다. 얻어진 갈색 발포물(712g, 99%)을 추가의 처리 없이 다음 단계에서 사용하였다.
반응식 106 화합물 634의 제조
Figure pct00350
Figure pct00351
단계 1. 2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-올 625의 제조
2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-올(613)(70.0g, 318 m㏖)을 MeOH에서 실온에서 교반하였다. 이 반응물을 10% PD-C(7g) 위에서 16시간 동안 수소화시켰다. 이 반응물을 셀라이트를 통해서 여과시키고, 진공 중 농축시켜 2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-올(625)(61.4g, 100%)을 제공하였으며, 이것은 추가의 정제 없이 사용되었다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 2. 벤질 (2-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-카바메이트　627의 제조
2-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-올(625)(61.4g, 318 m㏖)을 Na2CO3(50.51g, 476 m㏖)와 함께 H2O(500㎖)에서 5℃에서 교반하였다. THF(480㎖) 중 벤질 클로로폼에이트(626)(65.0g, 381 m㏖)를 적가하고, 이 반응물을 16시간 동안 교반하여 실온으로 가온시켰다. THF를 진공 중 제거하고, 수성층을 EtOAc(×3)로 추출하였다. 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시키고, 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(5% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 벤질 (2-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(627)(23.6g, 22.7%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 3. 벤질 (1,1-비스(4-메톡시페닐)-1-페닐-2,5,8,11-테트라옥사트라이데칸-13-일)카바메이트 628의 제조
(2-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(627)(23.6g, 72.1 m㏖) 및 TEA(7.7g, 75.7 m㏖)를 DCM에서 실온에서 교반하였다. DMTr-Cl(25.65g, 75.7 m㏖)을 첨가하고, 이 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(50% EtOAc/Hex)에 의해 정제시켜 (1,1-비스(4-메톡시페닐)-1-페닐-2,5,8,11-테트라옥사트라이데칸-13-일)카바메이트(v28)(25.5g, 56.2%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 4. 벤질 (1,1-비스(4-메톡시페닐)-1-페닐-2,5,8,11-테트라옥사트라이데칸-13-일)(메틸)카바메이트 629의 제조
(1,1-비스(4-메톡시페닐)-1-페닐-2,5,8,11-테트라옥사트라이데칸-13-일)카바메이트(628)(25.5g, 40.5 m㏖) 및 MeI(46.0g, 324 m㏖)를 건조 THF를 0℃에서 교반하였다. NaH(광유중 60% 분산액)(2.92g, 121.5 m㏖)를 첨가하고, 이 반응물을 0℃에서, 이어서 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 EtOAc와 H2O 간에 분배하였다. 유기물을 분리시키고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(50% EtOAc/Hex)에 의해 정제시켜 벤질 (1,1-비스(4-메톡시페닐)-1-페닐-2,5,8,11-테트라옥사트라이데칸-13-일)(메틸)카바메이트(629)(26.06g, 100%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 5. 벤질 (2-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)에틸)(메틸)카바메이트 630의 제조
벤질 (1,1-비스(4-메톡시페닐)-1-페닐-2,5,8,11-테트라옥사트라이데칸-13-일)(메틸)카바메이트(629)(26.06g, 40.5 m㏖)를 DCM 중 실온에서 교반하였다. TFA(5.1g, 44.5 m㏖)를 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 추가의 2 당량의 TFA를 첨가하고, 이 반응물을 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 진공 중 농축시키고, 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(5%MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 벤질 (2-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)에틸)(메틸)카바메이트(630)(6.76g, 48.9%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 6. (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((4-메틸-3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 631의 제조
(2-(2-(2-(2-하이드록시에톡시)에톡시)에톡시)에틸)(메틸)카바메이트(630)(6.76g, 19.8 m㏖), (3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트(7.71　g, 19.8 m㏖) 및 Sc(III)OTf(0.49g, 1.0 m㏖)를 DCE 중 2시간 동안 환류하에 가열하였다. 냉각 후, 이 반응물을 TEA로 반응중지시키고, 1M HCl, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피에 의해 정제시켜 (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((4-메틸-3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(631)(9.37g, 70.6%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 7. (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((1,1,1-트라이플루오로-3-메틸-2-옥소-6,9,12-트라이옥사-3l4-아자테트라데칸-14-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 632의 제조
(2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((4-메틸-3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(631)(9.37g, 14.0 m㏖) 및 TFA(1.76g, 15.4 m㏖)를 MeOH에서 실온에서 교반하였다. 이 반응물을 10% Pd-C(1g) 위에서 대략 2시간 동안 수소화시켰다. 이 반응물을 셀라이트를 통해서 여과시키고, 진공 중 농축시켜 (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((1,1,1-트라이플루오로-3-메틸-2-옥소-6,9,12-트라이옥사-3l4-아자테트라데칸-14-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(632)(9.0g, 98.9%)를 제공하였다. 생성물은 정제 없이 사용되었다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 8. (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((4-나이트로-1,2-페닐렌)비스(2-메틸-1-옥소-5',8',11'-트라이옥사-2'-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트 634의 제조
(2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((1,1,1-트라이플루오로-3-메틸-2-옥소-6,9,12-트라이옥사-3l4-아자테트라데칸-14-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(32)(4.5g, 6.93 m㏖), 4-나이트로프탈산(33)(0.73g, 3.46 m㏖), HATU(8.45g, 22.18 m㏖) 및 TEA(4.21g, 41.6 m㏖)를 DCM 중 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 DCM으로 희석시키고, 1M HCl, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 칼럼 크로마토그래피(10% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((4-나이트로-1,2-페닐렌)비스(2-메틸-1-옥소-5',8',11'-트라이옥사-2'-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(634)(5.0g, 57.4%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
반응식 107 화합물 643의 제조
Figure pct00352
Figure pct00353
Figure pct00354
단계 1. (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트의 제조
(2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((1,1,1-트라이플루오로-2-옥소-6,9,12-트라이옥사-3l4-아자테트라데칸-14-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(45.0g, 70.8 m㏖) 및 Na2CO3(11.3g, 106 m㏖)를 THF/H2O(50:50)에서 실온에서 교반하였다. 벤질 클로로폼에이트(626)(14.5g, 85 m㏖)를 적가하고, 이 반응물을 16시간 동안 교반하였다. THF를 진공 중 제거하고, 수성층을 EtOAc(×3)로 추출하였다. 유기물을 1M HCl, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(5% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(635)(25.12g, 54%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 2. 벤질 (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이하이드록시-6-(하이드록시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트 636의 제조
(2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(635)(25.12g, 38.3 m㏖)를 기밀 밀봉된 반응 용기에서 MeOH 중 7N 암모니아 용액에서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 50℃에서 증발시켜 암모니아를 제거하고, 나머지를 진공 중 농축시켜 벤질 (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이하이드록시-6-(하이드록시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(636)(20.3g, 100%)를 제공하였으며, 이것은 추가의 정제 없이 후속 반응에 사용하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 3. 벤질 (2-(2-(2-(2-(((3aR,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-4-(하이드록시메틸)-2,2-다이메틸테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-6-일)옥시)-에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트 637의 제조
벤질 (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이하이드록시-6-(하이드록시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(636)(20.3g, 38.3 m㏖)를 DMF(200㎖)에서 실온에서 교반하였다. 2,2-다이메톡시 프로판(274g, 1.6 ㏖) 및 pTsOH(cat)를 첨가하고, 이 반응물을 65℃에서 16시간 동안 가열하였다. 이 반응물을 실온으로 냉각시키고, TEA(20㎖)를 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 용매를 진공 중 제거하고, 잔사를 MeOH/H2O(10:1)에 장입하고, 반응물을 1시간 동안 환류시켰다. 이 반응물을 진공 중 농축시키고(톨루엔(×2)과 공비혼합), 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(10% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 벤질 (2-(2-(2-(2-(((3aR,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-4-(하이드록실-메틸)-2,2-다이메틸테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-6-일)옥시)에톡시)에톡시)-에톡시)에틸)카바메이트(637)(24.9g, 100%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 4. ((3aR,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-2,2-다이메틸-6-((3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트 638의 제조
벤질 (2-(2-(2-(2-(((3aR,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-4-(하이드록시메틸)-2,2-다이메틸-테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-6-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(637)(25.5g, 44.8 m㏖) 및 TEA(9.97g, 98.5 m㏖)를 DCM에서 0℃에서 교반하였다. DCM 중 p-톨루엔-설포닐 클로라이드(18.8g, 98.5 m㏖)를 첨가하고, 이 반응물을 16시간 동안 교반하여 실온으로 가온시켰다. 이 반응물을 DCM으로 희석시키고, 1M HCl, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(5% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 ((3aR,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-2,2-다이메틸-6-((3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트(638)(25.5g, 78.8%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 5. 벤질 (2-(2-(2-(2-(((3aS,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-4-(아지도메틸)-2,2-다이메틸테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-6-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)-에틸)카바메이트 639의 제조
((3aR,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-2,2-다이메틸-6-((3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-4-일)메틸 4-메틸벤젠설포네이트(638)(25.0g, 34.5 m㏖) 및 NaN3(28.7g, 434.6 m㏖)를 DMSO/H2O(200㎖/20㎖)에서 100℃에서 12시간 동안 가열하였다. 이 반응물을 냉각시키고, EtOAc와 포화 NaHCO3 간에 분배시켰다. 수성상을 더욱 2회 추가로 추출하고, 합한 유기물을 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(5% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 벤질 (2-(2-(2-(2-(((3aS,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-4-(아지도메틸)-2,2-다이메틸테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-6-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(639)(16.1g, 78.2%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 6. 벤질 (2-(2-(2-(2-(((3aS,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-4-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)-2,2-다이메틸테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-6-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트 640의 제조
벤질 (2-(2-(2-(2-(((3aS,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-4-(아지도메틸)-2,2-다이메틸테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-6-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(39)(16.1g, 27.0 m㏖)를 MeOH(200㎖)에서 실온에서 교반하였다. 1-에틴일-3-메톡시벤젠(4.28g, 32.4 m㏖), 트리스(벤질트라이아졸릴메틸)아민(0.72g, 1.35 m㏖), CuSO4(0.07g, 1㎖ H2O 중 0.27 m㏖) 및 아스코르브산나트륨(0.53g, 5㎖ H2O 중 2.7 m㏖)을 차례로 첨가하고, 이 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 중 제거하고, 잔사를 DCM(200㎖)에 장입하고, 물로 세척하였다. 수성층을 DCM으로 도로 추출하고, 합한 유기물을 염수로 세척하고, 건조시켰다(Na2SO4). 이 반응물을 진공 중 농축시키고, 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(10%MeOH/EtOAc)에 의해 정제시켜 벤질 (2-(2-(2-(2-(((3aS,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-4-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)-2,2-다이메틸테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-6-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(640)(15.0g, 76.4%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 7. 벤질 (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이하이드록시-6-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트 641의 제조
벤질 (2-(2-(2-(2-(((3aS,4R,7R,7aR)-7-아세트아미도-4-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)-2,2-다이메틸테트라하이드로-4H-[1,3]다이옥솔로[4,5-c]피란-6-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바메이트(640)(15.0g, 20.6 m㏖)를 MeCN(200㎖) 및 1.84% H2SO4(180㎖)에서 실온에서 96시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 EtOAc(3×250㎖)로 추출하고, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켜 벤질 (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이하이드록시-6-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-카바메이트(641)(11.0g, 16.0m㏖)를 제공하였다. 생성물은 후속 반응에서 조질물로 사용되었다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 8. (2R,3S,4R,5R)-5-아세트아미도-2-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)-6-((3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 642의 제조
벤질 (2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이하이드록시-6-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)-에틸)카바메이트(641)(11.0g, 16.0 m㏖)를 피리딘(200㎖)에서 실온에서 교반하였다. 아세트산 무수물(16.3g, 160 m㏖)을 첨가하고, 이 반응물을 16시간 동안 실온에서 교반하고, 이어서 50℃ 3시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 물에 붓고, DCM(250㎖)으로 3회 추출하였다. 합한 유기물을 포화 NaHCO3(×2), 1N HCl(×2), 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(5% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (2R,3S,4R,5R)-5-아세트아미도-2-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)-6-((3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(642)(10.7g, 86.7%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 9. (2R,3S,4R,5R)-5-아세트아미도-2-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)-6-((1,1,1-트라이플루오로-2-옥소-6,9,12-트라이옥사-3l4-아자테트라데칸-14-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 643의 제조
(2R,3S,4R,5R)-5-아세트아미도-2-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)-6-((3-옥소-1-페닐-2,7,10,13-테트라옥사-4-아자펜타데칸-15-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(642)(9.06g, 11.74 m㏖) 및 TFA(1.47g, 12.91 m㏖)를 MeOH에서 실온에서 교반하였다. 이 반응물을 10% Pd-C 위에서 1시간 동안 수소화시켰다. 이 반응물을 셀라이트를 통해서 여과시키고, 진공 중 농축시켜 (2R,3S,4R,5R)-5-아세트아미도-2-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)-6-((1,1,1-트라이플루오로-2-옥소-6,9,12-트라이옥사-3l4-아자테트라데칸-14-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(643)(8.8g, 99.7%)를 제공하였으며, 이것을 정제 없이 후속 반응에 사용하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
반응식 108 화합물 654의 제조
Figure pct00355
Figure pct00356
단계 1. 퍼아세틸화 갈락토사민 644의 제조
피리딘(1.5ℓ) 중 D-갈락토사민 하이드로클로라이드(614)(250　g, 1.16 ㏖)를 아세트산 무수물(1.25ℓ, 13.2 ㏖)로 45분에 걸쳐서 처리하였다. 하룻밤 교반 후, 이 반응 혼합물을 3개의 1ℓ 부분으로 나누었다. 각각의 1ℓ 부분을 3ℓ의 얼음물에 붓고 1시간 동안 혼합하였다. 혼합 후, 고체를 여과 제거하고, 합하여 액체 질소 위에서 냉동시키고, 이어서 5일 동안 동결건조시켜 퍼아세틸화 갈락토사민(644)(369.4g, 82%)을 백색 고체로서 수득하였다. Rf (0.58, 10% MeOH-CH2Cl2).
단계 2. (2R,3R,4R,5R,6R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 645의 제조
퍼아세틸화 갈락토사민(644)(25g, 64.21 m㏖)을 건조 DCE 중 스칸듐 트라이플레이트(scandium triflate)(1.58g, 3.21 m㏖)와 90℃에서 3시간 동안 가열하였다. 이 반응물을 실온까지 냉각시키고, 5㎖의 TEA로 반응중지시키고, 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 칼럼 크로마토그래피(2-10% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(645)(27g, 76.5%)를 제공하였다. 생성물은 MS에 의해 확인하였다.
단계 3. 2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-아미늄 2,2,2-트라이플루오로아세테이트 646의 제조
EtOAc(150㎖) 및 트라이플루오로아세트산(2㎖) 중 아자이드 645(7.12g, 13 m㏖)의 용액을 숯 상의 팔라듐(1.5g, 10% w/w 습윤 기준)으로 처리하였다. 이어서, 이 반응 혼합물을 수소로 퍼지시키고, 하룻밤 격렬하게 교반하였다. 질소로 퍼지 후, 이 혼합물을 셀라이트를 통해서 여과시키고, MeOH로 헹구었다. 6Rf (0.34, 15% MeOH-CH2Cl2).
단계 4. (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-나이트로-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸) 테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트 648의 제조
(2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-((1,1,1-트라이플루오로-2-옥소-6,9,12-트라이옥사-3l4-아자테트라데칸-14-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(646)(13.25g, 20.84 m㏖), 5-나이트로아이소프탈산(647)(2.0g, 9.5 m㏖), HATU(12.3g, 32.21 m㏖) 및 TEA(5.75g, 59.0 m㏖)를 DCM에서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 DCM으로 희석시키고, 1M HCl, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, Na2SO4 위에서 건조시키고, 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(5% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-나이트로-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(648)(4.43g, 38.3%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 5. (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-아미노-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라 하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트 649의 제조
(2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-나이트로-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(648)(26.1g, 23.05 m㏖)를 MeOH에서 실온에서 교반하였다. 이 반응물을 10% Pd-C(2.6g) 위에서 실온에서 2시간 동안 수소화시켰다. 이 반응물을 셀라이트를 통해서 여과시키고, 진공 중 농축시켜 (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-아미노-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(649)(28.0g, 99.9%)를 제공하였으며, 이것은 추가의 정제 없이 후속 반응에 사용하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 6. (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-6-((1-(3-((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-5-아세톡시-6-(아세톡시메틸)-4-하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-(2-(((벤질옥시)카보닐)아미노) 아세트아미도)페닐)-1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-13-일)옥시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 651의 제조
(2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-아미노-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(649)(0.5g, 0.45 m㏖) 및 CBZ-gly(650)(0.09g, 0.45 m㏖)를 EtOAc에서 실온에서 교반하였다. T3P(EtOAc 중 50% 용액)(0.29g, 0.91 m㏖)를 첨가하고, 이 반응물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 추가의 T3P(0.3 eq)를 첨가하고, 이 반응물을 더욱 1시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 포화 NaHCO3 및 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시키고, 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(10% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-6-((1-(3-((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-5-아세톡시-6-(아세톡시메틸)-4-하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)-에톡시)에틸)카바모일)-5-(2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)아세트아미도)페닐)-1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-13-일)옥시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(651)(0.33g, 56.8%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 7. (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(2-((2,2,2-트라이플루오로아세틸)-l4-아잔일)아세트아미도)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스 (옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트 652의 제조
(2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-6-((1-(3-((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-5-아세톡시-6-(아세톡시메틸)-4-하이드록시테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-(2-(((벤질옥시)카보닐)아미노)아세트아미도)페닐)-1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-13-일)옥시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(651)(3.3g, 2.39 m㏖) 및 TFA(0.29g, 2.51 m㏖)를 MeOH에서 실온에서 교반하였다. 이 반응물을 10% Pd-C(400㎎) 위에서 2시간 동안 수소화시키고, 셀라이트를 통해서 여과시키고, 진공 중 농축시켜 (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(2-((2,2,2-트라이플루오로아세틸)-l4-아잔일)-아세트아미도)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(652)(3.21g, 98.7%)를 제공하였으며, 이것은 추가의 정제 없이 후속 반응에 사용하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 8. (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(2-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)아세트아미도)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트 653의 제조
(2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(2-((2,2,2-트라이플루오로아세틸)-l4-아잔일)아세트아미도)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(652)(1.0g, 0.73 m㏖), 리튬 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸-피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트(606)(0.45g, 0.73 m㏖), HATU(0.47g, 1.25 m㏖) 및 TEA(0.22g, 2.2 m㏖)를 DCM에서 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 DCM으로 희석시키고, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(5% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(2-(10-(3-((비스(4-메톡시-페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)아세트아미도)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(653)(1.02g, 75.2%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 9. 4-((1-(10-((2-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산 654의 제조
(2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(2-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)-메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)아세트아미도)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(653)(1.05g, 0.57 m㏖), 석신산 무수물(0.28g, 2.84 m㏖), DMAP(0.35g, 2.84 m㏖) 및 TEA(0.58g, 5.68 m㏖)를 건조 DCE에서 60℃에서 2시간 동안 가열하였다. MeOH(5㎖)를 첨가하고, 이 반응물을 더욱 30분 동안 교반하고, 이어서 냉각시키고, 진공 중 농축시켰다. 잔사를 DCM에 장입하고, 포화 NaHCO3(×4), 물 및 염수로 차례로 세척하였다. 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켜 4-((1-(10-((2-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산(654)(1.1g, 99.4%)을 제공하였으며, 이것을 후속의 반응에서 조질의 생성물로서 사용하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
반응식 109 화합물 656의 제조
Figure pct00357
단계 1. (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(10-(3-((비스(4-메톡시-페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트 655의 제조
(2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-아미노-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(649)(4g, 3.36 m㏖), 리튬 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)-(페닐)메톡시) 메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트(6)(2.13g, 3.36 m㏖), TEA(1㎖, 6.7 m㏖) 및 T3P(EtOAc 중 50% W/W 용액)(4.3g, 6.72 m㏖)를 DCM에서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(10% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 2R,2'R,3R,3'R, 4R,4'R,5R,5'R)-(((5-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록실-메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(655)(1.37g, 22.5%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 2. 4-((1-(10-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시) 메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산 656의 제조
이 화합물은 4-((1-(10-((2-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산(654)과 유사한 방식으로 제조하였다.
반응식 110 화합물 657의 제조
Figure pct00358
3-((((1-(10-((3,5-비스((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이하이드록시-6-(하이드록시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일) 페닐)아미노)-10-옥소데카노일)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)카보닐)옥시)프로판산 657의 합성
이 화합물 4-((1-(10-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산(654)과 유사한 방식으로 제조하였다.
반응식 111 화합물 666의 제조
Figure pct00359
Figure pct00360
단계 1. 다이메틸 5-(하이드록시메틸)아이소프탈레이트 659의 제조
트라이메틸 벤젠-1,3,5-트라이카복실레이트(658)(40g, 159 m㏖) 및 NaBH4를 THF에서 실온에서 교반하였다. THF(120㎖) 중 MeOH(30㎖)를 서서히 적가하였다. 첨가 완료 후, 반응물을 30분 동안 환류시켰다. 냉각 후, 반응물을 1M HCl로 반응중지시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기물을 1M HCl, NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(50/50 EtOAc/hex)에 의해 정제시켜 다이메틸 5-(하이드록시메틸)아이소프탈레이트(659)(20.5g, 53.2%)를 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.59 (s, 1H), 8.23 (s, 2H), 4.81 (s, 2H), 3.95 (s, 6H). 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 2. 다이메틸 5-(클로로메틸)아이소프탈레이트 660의 제조
다이메틸 5-(하이드록시메틸)아이소프탈레이트(659)(20.5g, 80.5%)를 SOCl2(11.1g, 94 m㏖)에서 1.5시간 동안 환류시켰다. 이 반응물을 냉각시키고, DCM으로 희석시키고, 0.1M NaOH(×2), 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(20% EtOAc/Hex)에 의해 정제시켜 다이메틸 5-(클로로메틸)아이소프탈레이트(660)(10.84g, 53%)를 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65 (s, 1H), 8.27 (s, 2H), 4.66 (s, 2H), 3.97 (s, 6H). 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 3. 다이메틸 5-(아지도메틸)아이소프탈레이트 661의 제조
다이메틸 5-(클로로메틸)아이소프탈레이트(660)(10.84g, 45 m㏖) 및 NaN3(18g, 270 m㏖)를 아세톤/물(3/1)에서 16시간 동안 환류시켰다. 이 반응물을 냉각시키고, 진공 중 농축시키고, 잔사를 DCM에 장입하였다. 유기물을 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 플래시 크로마토그래피(15% EtOAc/Hex)에 의해 정제시켜 다이메틸 5-(아지도메틸)아이소프탈레이트(661)(9.84g, 88%)를 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.66 (s, 2H), 8.2 (s, 2H), 4.49 (s, 2H), 3.97 (s, 2H). 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 4. 5-(아지도메틸)아이소프탈산 662의 제조
다이메틸 5-(아지도메틸)아이소프탈레이트(661)(9.84g, 39.5 m㏖) 및 LiOH(2.1g, 87 m㏖)를 THF/H2O/MeOH에서 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 유기 용매를 진공 중 제거하고, 잔사를 1M HCl로 산성화시켰다. 수성상을 EtOAc(×3)로 추출하고, 합한 유기물을 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켜 5-(아지도메틸)아이소프탈산(662)(8.0g, 91.6%)을 제공하였으며, 이것은 추가의 정제 없이 후속 반응에 사용하였다.
단계 5. (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5-(아지도메틸)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸) 테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트 663의 제조
5-(아지도메틸)아이소프탈산(662)(4.42g, 20 m㏖), 2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-아미늄 2,2,2-트라이플루오로아세테이트(646)(25g, 40 m㏖), HATU(24.4g, 64 m㏖) 및 TEA(17㎖, 120 m㏖)를 DCM에서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 1M HCl, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 차례로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(7% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5-(아지도메틸)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(663)(10.9g, 44.5%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 6. (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5-(((2,2,2-트라이플루오로아세틸)-l4-아잔일)메틸)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트 664의 제조
(2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5-(아지도메틸)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(663)(10.9g, 8.9 m㏖) 및 TFA(0.68㎖, 8.9 m㏖)를 MeOH에서 실온에서 교반하였다. 이 반응물을 10% Pd-C 위에서 1시간 동안 수소화시켰다. 이 반응물을 셀라이트를 통해서 여과시키고, 진공 중 농축시키고, 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(15% MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5-(((2,2,2-트라이플루오로아세틸)-l4-아잔일)메틸)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(664)(6.41g, 54.7%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 7. (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5-((10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐) 메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도) 메틸)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트 665의 제조
(2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5-(((2,2,2-트라이플루오로아세틸)-l4-아잔일)메틸)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸) 테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(3.0g, 2.3 m㏖), 리튬 10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데카노에이트(665)(1.5g, 2.3 m㏖), HATU(1.4g, 3.7 m㏖) 및 TEA(1㎖, 7.0 m㏖)를 실온에서 하룻밤 교반하였다. 이 반응물을 DCM으로 희석시키고, 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공 중 농축시켰다. 잔사를 자동화 플래시 크로마토그래피(5%MeOH/DCM)에 의해 정제시켜 (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R)-(((5-((10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)메틸)-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(665)(1.8g, 43.0%)를 제공하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
단계 8. 4-((1-(10-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시 메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)-에톡시)에틸)카바모일)벤질) 아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산 666의 제조
이 화합물은 4-((1-(10-((2-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산(654)과 유사한 방식으로 제조하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
반응식 112 화합물 667의 제조
Figure pct00361
4-((1-(10-((2-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시 메틸)-3-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산 667의 합성
이 화합물은 퍼아세틸화 갈락토사민(606) 대신에 (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-(2,2,2-트라이플루오로아세트아미도)테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트를 사용해서 654(반응식 8)와 유사한 방식으로 제조하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
반응식 113 화합물 668의 제조
Figure pct00362
4-((1-(10-((2-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시 메틸)-3-프로피온아미도테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산 668의 합성
이 화합물은 퍼아세틸화 갈락토사민(644) 대신에 (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-프로피온아미도테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트(619b)를 사용해서 654(반응식 8)와 유사한 방식으로 제조하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
반응식 114 화합물 669의 제조
Figure pct00363
4-((1-(10-((2-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시 메틸)-3-(2,2-다이플루오로프로파노아미도)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)-에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시 페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산 669의 합성
이 화합물은 퍼아세틸화 갈락토사민(644) 대신에 (3R,4R,5R,6R)-6-(아세톡시메틸)-3-(2,2-다이플루오로프로파노아미도)테트라하이드로-2H-피란-2,4,5-트라이틸 트라이아세테이트(619c)를 사용해서 654(반응식 8)와 유사한 방식으로 제조하였다. 생성물은 MS(ESI +ve)에 의해 확인되었다.
반응식 115 화합물 670의 제조
Figure pct00364
4-((1-(10-((2-((3,4-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)(메틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산 670의 합성
이 화합물은 (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((5-나이트로-1,3-페닐렌)비스(1-옥소-5,8,11-트라이옥사-2-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸) 테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(648) 대신에 (2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-(((4-나이트로-1,2-페닐렌)비스(2-메틸-1-옥소-5',8',11'-트라이옥사-2'-아자트라이데칸-1,13-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트(634)를 사용해서 화합물 654(반응식 8)와 유사한 방식으로 제조하였다.
반응식 116 화합물 671의 제조
Figure pct00365
4-((1-(10-((2-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5S,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산 671의 합성
이 화합물은 2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸) 테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-아미늄 2,2,2-트라이플루오로아세테이트(646) 대신에 (2R,3S,4R,5R)-5-아세트아미도-2-((4-(3-메톡시페닐)-1H-1,2,3-트라이아졸-1-일)메틸)-6-((1,1,1-트라이플루오로-2-옥소-6,9,12-트라이옥사-3l4-아자테트라데칸-14-일)옥시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(643)를 사용해서 화합물 654(반응식 8)와 유사한 방식으로 제조하였다.
반응식 117. 화합물 672의 제조
Figure pct00366
4-((4-(10-((2-((3,5-비스((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐) 아미노)-2-옥소에틸)아미노)-10-옥소데카노일)-2-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시) 메틸)-1,2-다이메틸사이클로펜틸)메톡시)-4-옥소부탄산 672의 합성
이 화합물은 2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)에탄-1-아미늄 2,2,2-트라이플루오로아세테이트(646) 대신에 (2R,3R,4R,5R)-5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)-6-(2-(2-(2-((2,2,2-트라이플루오로아세틸)-l4-아잔일)에톡시)에톡시)에톡시)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(624)를 사용해서 화합물 654(반응식 8)와 유사한 방식으로 제조하였다.
반응식 118 화합물 681의 제조
Figure pct00367
Figure pct00368
Figure pct00369
단계 1. 12-(벤질옥시)-12-옥소도데칸산 676의 제조
DMF(200㎖) 중 도데칸이산(674)(21.0g, 91.3 m㏖)의 용액에 탄산칼륨(10g, 72.4 m㏖) 및 벤질 브로마이드(675)(10㎖, 84.2 m㏖)를 첨가하였다. 이 용액을 80℃에서 4시간 동안 교반하고, 0℃까지 냉각시키고, 이어서 6M HCl으로 주의해서 산성화시켰다. 물(250㎖)로 희석시키고, 에틸 아세테이트(500㎖)로 추출하였다. 에틸 아세테이트 추출물을 염수(3×250㎖)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켰다. 고체를 다이클로로메탄(200㎖)에 현탁시키고, 여과시켰다. 이제는 생성물이 풍부한 여과액을 농축시키고, 이어서 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: DCM 중 0 내지 10% 메탄올)에 의해 정제시켜 12-(벤질옥시)-12-옥소도데칸산 6(76)을 무색 고체로서 제공하였다(13g, 45%). 구조는 질량 분광법에 의해 확인하였다.
단계 2. (2S,3S,4S,5S)-5-아세트아미도-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-(12-(벤질옥시)-12-옥소도데칸아미도)벤즈아미도)에톡시)에톡시)에톡시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 678의 제조
다이클로로메탄(75㎖) 중 (2S,3S,4S,5S)-5-아세트아미도-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)-에톡시)에틸)카바모일)-5-아미노벤즈아미도)에톡시)에톡시)에톡시)-2-(아세톡시메틸)-테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(677)(4.0g, 3.6 m㏖), 12-(벤질옥시)-12-옥소도데칸산(676)(1.3g, 4.1 m㏖) 및 트라이에틸아민(1.5㎖, 10.8 m㏖)의 용액에 T3P(4.5g, ~9㎖, 에틸 아세테이트 중 50% 용액)를 적가하였다. 이 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 이 반응 혼합물을 다이클로로메탄으로 희석시키고, 중탄산나트륨의 포화 용액(200㎖)으로 주의해서 반응중지시켰다. 이상(biphasic) 용액을 30분 동안 격렬하게 교반하였다. DCM 층을 분리시키고, 수성상을 다이클로로메탄(1×100㎖)으로 추출하였다. 합한 추출물을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: DCM 중 0 - 10% MeOH)에 의해 정제시켜 표제의 화합물을 무색 고체로서 제공하였다(1.5g, 30%).
단계 3. 12-((3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시 메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-((2-(2-(2-(((3S,4S,5S,6S)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-12-옥소도데칸산 679의 제조
메탄올(25㎖) 중 (2S,3S,4S,5S)-5-아세트아미도-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)-에틸)카바모일)-5-(12-(벤질옥시)-12-옥소도데칸아미도)벤즈아미도)에톡시)에톡시)-에톡시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(678)(1.5g, 1.1 m㏖)의 용액에 탄소 상의 10% 팔라듐(습윤 기준, 150㎎, 10% wt/wt)을 첨가하였다. 이 용액에 1시간에 걸쳐서 서서히 수소 가스를 살포하였다. 완료 시, 이 용액에 질소를 살포하고, 셀라이트를 통해서 여과시키고, 진공 중 건조 상태로 농축시켜 무색 고체(1.1g, 79%)를 제공하였다.
단계 4. (2S,3S,4S,5S)-5-아세트아미도-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-(12-옥소-12-(퍼플루오로페녹시(도데칸아미도)벤즈아미도)에톡시)에톡시)에톡시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 681의 제조
다이클로로메탄(50㎖) 중 12-((3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-((2-(2-(2-(((3S,4S,5S,6S)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-12-옥소도데칸산(679)(0.6g, 0.46 m㏖) 및 트라이에틸아민(125㎕, 0.92 m㏖)의 용액에 펜타플루오로페닐 트라이플루오로아세테이트(680)(150㎎, 1.1 m㏖)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 진공 중 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 다이클로로메탄 중 0 내지 10% 메탄올)에 의해 정제시켜 표제의 화합물을 무색 고체로서 제공하였다(475㎎, 70%). 질량 (ESI+) m/z 741.0 (M+2H). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.12 (s, 1H), 8.52 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 8.14 (d, J = 1.4 Hz, 2H), 7.91 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 5.21 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 4.97 (dd, J = 11.2, 3.4 Hz, 2H), 4.54 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.06 - 3.99 (m, 7H), 3.88 (dt, J = 11.2, 8.8 Hz, 2H), 3.77 (ddd, J = 11.1, 5.6, 3.9 Hz, 2H), 3.62 - 3.46 (m, 22H), 3.46 - 3.38 (m, 5H), 2.77 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.10 (s, 7H), 1.99 (s, 7H), 1.89 (s, 7H), 1.77 (s, 7H), 1.69 - 1.54 (m, 4H), 1.40 -1.20 (m, 14H). 질량 (ESI+) m/z 741.0 (M+2H).
반응식 119 화합물 690의 제조
Figure pct00370
Figure pct00371
단계 1. 12-((tert-부톡시카보닐)아미노)도데칸산 684의 제조
메탄올(75㎖) 중 12-아미노도데칸산(682)(5.0g, 23.3 m㏖), 다이-tert-부틸 다이카보네이트(683)(6.1g, 27.9 m㏖) 및 트라이에틸아민(6.3㎖, 46.6 m㏖)의 용액을 60℃까지 3시간 동안, 이어서 실온에서 하룻밤 가열하였다. 완료 시, 이 용액을 진공 중 건조 상태로 농축시키고, 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 2. 벤질 12-((tert-부톡시카보닐)아미노)도데카노에이트 685의 제조
다이클로로메탄(100㎖) 중 조질의 12-((tert-부톡시카보닐)아미노)도데칸산(684)(9.0g, 30.0 m㏖), 벤질 알코올(685)(3.1g, 30.0 m㏖), EDC 하이드로클로라이드(6.9g, 36.0 m㏖) 및 트라이에틸아민(12㎖, 90.0 m㏖)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 이 용액을 포화 중탄산나트륨 용액(100㎖) 및 염수(100㎖)로 세척하였다. 다이클로로메탄 용액을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고 건조 상태로 농축시켰다. 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 헥산 중 0 내지 50% 에틸 아세테이트)에 의해 정제시켜 표제의 화합물을 무색 고체로서 제공하였다(2.0g, 2개 단계에 걸쳐서 21%).
단계 3. 12-(벤질옥시)-12-옥소도데칸-1-아미늄 트라이플루오로아세테이트 687의 제조
벤질 12-((tert-부톡시카보닐)아미노)도데카노에이트(686)(2.0g, 4.9 m㏖), 다이클로로메탄(15㎖) 및 TFA(5㎖)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 이 반응 혼합물을 건조상태로 농축시켜 생성물을 점성 오일로서 제공하였다(2.1g. 정량적).
단계 4. (2S,3S,4S,5S)-5-아세트아미도-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-(12-((12-(벤질옥시)-12-옥소도데실)아미노)-12-옥소도데칸아미도) 벤즈아미도)에톡시)에톡시)에톡시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 688의 제조
다이클로로메탄(30㎖) 중 12-((3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸) 테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-((2-(2-(2-(((3S,4S,5S,6S)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)-에틸)카바모일)페닐)아미노)-12-옥소도데칸산(688)(750㎎, 0.54 m㏖), 12-(벤질옥시)-12-옥소도데칸-1-아미늄 트라이플루오로아세테이트(687)(225㎎, 0.54 m㏖), HBTU(210㎎, 0.54 m㏖) 및 다이아이소프로필에틸아민(0.3㎖, 1.62 m㏖)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 이 용액을 다이클로로메탄(50㎖)으로 희석시키고, 포화 중탄산염 용액(100㎖)으로 세척하였다. 다이클로로메탄을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 다이클로로메탄 중 0 내지 10% 메탄올)에 의해 정제시켜 표제의 화합물(688)을 무색 고체로서 제공하였다(605㎎, 70%).
단계 5. 12-(12-((3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-((2-(2-(2-(((3S,4S,5S,6S)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-12-옥소도데칸아미도)도데칸산 689의 제조
수소화는 앞서 기재된 바와 같이 수행하여 (689)(350㎎, 55%)를 제공하였다.
단계 6. (2S,3S,4S,5S)-5-아세트아미도-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)-에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-(12-옥소-12-((12-옥소-12-(퍼플루오로페녹시)-도데실)아미노)도데칸아미도)벤즈아미도)에톡시)에톡시)에톡시)-2-(아세톡시메틸)-테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 690의 제조
PFP 에스터 형성을 앞서 기재된 바와 같이 수행하여 필요로 하는 생성물(690)(112㎎, 23%)을 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.12 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.65 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 8.52 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.14 (t, J = 1.4 Hz, 2H), 7.91 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.68 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.21 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 4.97 (dd, J = 11.2, 3.4 Hz, 2H), 4.54 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.07 - 3.96 (m, 6H), 3.88 (dt, J = 11.2, 8.9 Hz, 2H), 3.81 - 3.74 (m, 2H), 3.64 - 3.36 (m, 24H), 3.15 - 3.03 (m, 6H), 2.99 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 2.31 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 2.10 (s, 6H), 1.99 (s, 7H), 1.89 (s, 7H), 1.76 (s, 6H), 1.70 - 1.53 (m, 3H), 1.47 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.40 - 1.10 (m, 29H). 질량 (ESI+) m/z 839.7 (M+2H).
반응식 120 화합물 694의 제조
Figure pct00372
Figure pct00373
단계 1. (2S,3S,4S,5S)-5-아세트아미도-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-(2-(12-(벤질옥시)-12-옥소도데칸아미도)아세트아미도)벤즈아미도)에톡시)에톡시)에톡시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 692의 제조
다이클로로메탄(20㎖) 중 2-((3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-((2-(2-(2-(((3S,4S,5S,6S)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)-에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에탄-1-아미늄 트라이플루오로아세테이트(691)(1.0g, 0.8 m㏖), 12-(벤질옥시)-12-옥소도데칸산(676)(256㎎, 0.8 m㏖), HBTU(341㎎, 0.9 m㏖) 및 다이아이소프로필에틸아민(0.4㎖, 2.4 m㏖)의 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 완료 시, 이 반응 혼합물을 다이클로로메탄(80㎖)으로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨(100㎖)으로 세척하였다. 이 용액을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 60 상에서의 칼럼 크로마토그래피(구배: 다이클로로메탄 중 0 내지 10% 메탄올)에 의해 정제시켜 표제의 화합물을 무색 고체로서 제공하였다(0.8g, 68%).
단계 2. 12-((2-((3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-((2-(2-(2-(((3S,4S,5S,6S)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-12-옥소도데칸산 693의 제조
화합물 693은 유사한 전환에 대해서 본 명세서에 기재된 것과 유사한 조건을 이용해서 제조하였다(450㎎, 60%).
단계 3. (2S,3S,4S,5S)-5-아세트아미도-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)-에톡시)에틸)카바모일)-5-(2-(12-옥소-12-(퍼플루오로페녹시(도데칸아미도)아세트아미도) 벤즈아미도)에톡시)에톡시)에톡시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 694의 제조
화합물 694는 유사한 전환에 대해서 본 명세서에 기재된 것과 유사한 조건을 이용해서 제조하였다(460㎎, 91%). 질량 (ESI+) m/z 1537.8 (M+H).
반응식 121 화합물 695의 제조
Figure pct00374
(2R,2'R,3R,3'R,4R,4'R,5R,5'R)-((((((((5-(2-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-((((2-사이아노에톡시)(다이아이소프로필아미노)포스파닐)-옥시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)아세트아미도)-아이소프탈로일)비스(아잔다이일))비스 (에탄-2,1-다이일))비스(옥시))비스(에탄-2,1-다이일))비스(옥시))-비스(에탄-2,1-다이일))비스(옥시))비스(5-아세트아미도-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-6,3,4-트라이틸) 테트라아세테이트 695의 합성
무수 다이클로로메탄(25㎖) 중 (2S,3S,4S,5S)-5-아세트아미도-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)-에틸)카바모일)-5-(2-(10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데칸아미도)아세트아미도)벤즈아미도)-에톡시)에톡시)에톡시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트(672)(1.6g, 0.9 m㏖) 및 다이아이소프로필에틸아민(0.4㎖, 1.8 m㏖)의 용액에 2-사이아노에틸 N,N-다이아이소프로필클로로포스포르아미다이트(0.3㎖, 1.35 m㏖)를 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 75분 동안 교반하고, 이어서 건조 상태로 농축시켰다. 잔사를 칼럼 크로마토그래피(구배: DCM(0.1% TEA) 중 0 내지 10% MeOH)에 의해 정제시켜 생성물을 무색 고체로서 제공하였다(1.1g, 62%). 31P NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 146.76 (s), 146.42 (s, 2개의 중첩 신호), 146.34 (s). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.20 (s, 1H), 8.54 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 8.17 - 8.09 (m, 3H), 7.94 (s, 1H), 7.80 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.39 - 7.26 (m, 4H), 7.26 - 7.17 (m, 6H), 6.91 - 6.83 (m, 4H), 5.21 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 4.97 (dd, J = 11.2, 3.4 Hz, 2H), 4.54 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.02 (s, 6H), 3.93 - 3.82 (m, 4H), 3.73 (s, 10H), 3.66 - 3.36 (m, 35H), 3.28 - 3.06 (m, 6H), 3.06 - 2.87 (m, 3H), 2.72 - 2.63 (m, J = 11.5, 5.8 Hz, 2H), 2.10 (m, 12H), 1.99 (s, 6H), 1.89 (s, 6H), 1.77 (s, 6H), 1.47 (d, J = 7.2 Hz, 4H), 1.23 (dq, J = 13.9, 6.4 Hz, 18H), 1.17 - 1.04 (m, 10H), 0.98 (dt, J = 13.4, 5.9 Hz, 10H).
반응식 122 화합물 696의 제조
Figure pct00375
Figure pct00376
단계 1. (2S,3S,4S,5S)-5-아세트아미도-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에틸)카바모일)-5-(2-(12-((10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-4-(하이드록시메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데실)아미노)도데칸아미도)아세트아미도)벤즈아미도)에톡시)에톡시)에톡시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 695의 제조
화합물 695는 유사한 전환에 대해서 본 명세서에 기재된 것과 유사한 조건을 이용해서 제조하였다(1.9g, 61%).
단계 2: (2S,3S,4S,5S)-5-아세트아미도-6-(2-(2-(2-(3-((2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)-에톡시)에틸)카바모일)-5-(2-(12-((10-(3-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)-메틸)-4-((((2-사이아노에톡시)(다이아이소프로필아미노)포스파닐)옥시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-1-일)-10-옥소데실)아미노)도데칸아미도)아세트아미도)벤즈아미도)-에톡시)에톡시)에톡시)-2-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-3,4-다이일 다이아세테이트 696의 제조
화합물 696은 유사한 전환에 대해서 본 명세서에 기재된 것과 유사한 조건을 이용해서 제조하였다(1.35g, 65%). 31P NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ146.79 (s), 146.76 (s), 146.42 (s), 146.36 (s). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.19 (s, 1H), 8.54 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 8.13 (dd, J = 6.1, 3.5 Hz, 3H), 7.94 (s, 1H), 7.80 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.71 - 7.65 (m, 1H), 7.39 - 7.25 (m, 4H), 7.25 - 7.17 (m, 4H), 6.92 - 6.83 (m, 4H), 5.21 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 4.97 (dd, J = 11.2, 3.4 Hz, 2H), 4.54 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.07 - 3.97 (m, 6H), 3.94 - 3.82 (m, 4H), 3.82 - 3.74 (m, 2H), 3.73 (s, 6H), 3.62 - 3.45 (m, 23H), 3.42 (m, 6H), 3.27 - 2.92 (m, 14H), 2.73 - 2.62 (m, 2H), 2.10 (s, 8H), 1.99 (s, 9H), 1.89 (s, 6H), 1.77 (s, 6H), 1.52 - 1.42 (m, 6H), 1.22 (d, J = 8.0 Hz, 24H), 1.17 (t, J = 7.3 Hz, 11H), 1.09 (dt, J = 6.7, 3.3 Hz, 9H), 1.03 - 0.92 (m, 9H).
반응식 123 3' 말단에 커플링된 올리고뉴클레오타이드를 갖는 화학식 I의 접합체(화합물 673)의 일반적 합성
Figure pct00377
4-((1-(10-((2-((3,5-비스((2-(2-(2-(2-(((3R,4R,5R,6R)-3-아세트아미도-4,5-다이아세톡시-6-(아세톡시메틸)테트라하이드로-2H-피란-2-일)옥시)에톡시)에톡시)에톡시)-에틸)카바모일)페닐)아미노)-2-옥소에틸)아미노)-10-옥소데카노일)-4-((비스(4-메톡시페닐)(페닐)메톡시)메틸)-3,4-다이메틸피롤리딘-3-일)메톡시)-4-옥소부탄산 673에 대해서 예시된 석시네이트 리간드로부터 두자리 ASGPr 표적화 리간드를 합성하는 일반적 방법
석시네이트를 표준 아마이드 커플링 화학을 이용해서 1000Å LCAA(장쇄 아미노알킬) CPG(대조 기공 유리) 상에 로딩하였다. LCAA CPG(2.0g)를 DCM(5㎖) 및 MeCN(7.6㎖)에 현탁시켰다. 다이아이소프로필카보다이이미드(100㎕), N-하이드록시 석신이미드(110㎕, 30μM/g), 피리딘(110㎕) 및 656(200㎎, 0.1 m㏖)을 첨가하고, 이 현탁액을 실온에서 16시간 동안 온화하게 혼합하였다. CPG를 여과에 의해 회수하고, DCM(×3) 및 MeCN(×3)으로 세척하고, 고진공 하에 건조시켰다. THF 중 5% 아세트산 무수물/5% N-메틸이미다졸/5% 피리딘의 용액을 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. CPG를 여과에 의해 회수하고, DCM(×3) 및 MeCN(×3)으로 세척하고, 고진공 하에 건조시켰다. 로딩은 31.3 μ㏖/g인 것으로 결정되었다(UV/Vis 504㎚에 의한 DMTr 검정). 얻어진 GalNAc 로딩된 CPG 고체 지지체를 표준 절차를 이용하는 자동 올리고뉴클레오타이드 합성에 이용하였다. 뉴클레오타이드 탈보호에 이은 고체 지지체로부터의 제거(동시 갈락토사민 아세테이트 탈보호와 함께)에 의해 GalNAc-올리고뉴클레오타이드 접합체 673을 제공하였다.
실시예 27a 내지 27i
반응식 123에 예시된 일반적인 절차를 이용해서, 이하의 접합체 (27a 내지 27i)를 제조하였으며, 여기서 R3은 이하의 표 A에 기재된 변형된 TTR siRNA이다.
실시예 27a
Figure pct00378
MS (+VE) 계산치: 8184.7; 측정치: 8184.2
실시예 27b
Figure pct00379
MS (+VE) 계산치: 8212.7; 측정치: 8211.9
실시예 27c
Figure pct00380
MS (+VE) 계산치: 8212.7; 측정치: 8212.8
실시예 27d
Figure pct00381
MS (+VE) 계산치: 8096.6; 측정치: 8097.0
실시예 27e
Figure pct00382
MS (+VE) 계산치: 8499.0; 측정치: 8498.7
실시예 27f
Figure pct00383
MS (+VE) 계산치: 8284.7; 측정치: 8283.8
실시예 27g
Figure pct00384
MS (+VE) 계산치: 7596.0; 측정치:7596.8
실시예 27h
Figure pct00385
실시예 27i
Figure pct00386
반응식 124 및 125 5' 말단에서 커플링된 올리고뉴클레오타이드를 가진 화학식 I의 접합체(화합물 698)의 일반적 합성
펜타플루오로페닐 에스터를, 표준 커플링 조건을 이용해서 센스 가닥 올리고뉴클레오타이드 상에 포스페이트/포스포로티오에이트 연결부를 이용해서 C6 5'-아미노 수식자(modifier)에 커플링시켰다. 표준 절단 및 탈보호에 의해 목적하는 센스 가닥 접합체를 제공하였다. 예를 들어 펜타플루오로페닐 에스터 681를 이용해서 이하의 접합체 698을 제공하였다(반응식 124).
Figure pct00387
포스포르아미다이트를 표준 포스포르아미다이트 커플링 화학을 이용해서 센스 가닥 말단 뉴클레오타이드의 5' 하이드록실에 커플링하였다. 표준 절단 및 탈보호에 의해 목적하는 센스 가닥 접합체를 제공하였다. 예를 들어 포스포르아미다이트 695를 이용해서 이하의 접합체 699를 제공하였다(반응식 125).
Figure pct00388
실시예 27j 내지 27k
반응식 124 및 125에 예시된 일반적인 절차를 이용해서, 이하의 접합체 (27j-27k)를 제조하였으며, 여기서 R3은 이하의 표 A에 기재된 변형된 TTR siRNA이다.
실시예 27j
Figure pct00389
MS (+VE) 계산치: 8056.7; 측정치: 8056.1
실시예 27k
Figure pct00390
MS (+VE) 계산치: 8254.0; 측정치: 8253.5
실시예 28 중합체 마이셀과 공동 전달된 TTR siRNA 접합체의 생체내 시험
R3이 이하의 표 28-1에 기재된 변형된 TTR siRNA(리간드)인 실시예 27d의 접합체는 TTR 넉다운의 야생형 마우스 모델에서 시험관내 활성도에 대해서 시험되었다. 리간드는 TTR(트랜스티레틴) 아밀로이드증의 오펀(orphan) 질환에 대한 가능한 치료이다. 리간드를 갖는 화학식:
Figure pct00391
의 막-불안정화 중합체의 내포는 간세포에 의한 세포 흡수 후의 접합체의 엔도솜 방출을 증대시키는 것으로 판명되었다. TTR 아밀로이드증에 걸린 자에서, 트랜스티레틴 단백질의 미스폴딩 및 응집은 질환 진행과 연관되는 것으로 알려져 있다. 막-불안정화 중합체와 조합된 리간드를 이용함으로써, 환자에서 미스폴딩된/응집된 단백질의 양은 저감될 수 있어, 결과적으로 질환의 진행을 중지시키는 것을 가능하게 한다.
표 28-1. 화학적으로 변형된 TTR siRNA 듀플렉스
Figure pct00392
TTR siRNA 서열 및 동물 모델 둘 다는 문헌[Nair et al. J. Am. Chem. Soc., 2014, 136 (49), pp 16958-16961]에 기재되어 있었다. 모든 동물-관련 절차는 지역 동물실험윤리위원회(IACUC)에 의해 승인되고 우수 동물 실시에 대한 캐나다 동물 보호 위원회(CCAC) 지침에 따라서 기록된 작동 절차에 따라서 수행하였다.
처리: 암컷 C57BL/6 마우스(n = 4)의 3개 군에 견갑골 영역에 피하 주사를 통해서 제0일에 1회(동물당 1회 용량) 10 ㎎/㎏, 20 ㎎/㎏ 또는 30 ㎎/㎏의 중합체와 조합된 단일 0.35 ㎎/㎏ 용량의 리간드를 투여하였다. 대조군으로서, 2개 군의 동물에 1.8 ㎎/㎏ 또는 0.35 ㎎/㎏ 용량의 리간드 단독을 투여하였다. 비히클 단독(PBS)이 투여된 동물은 음성 대조군으로서 제공되었다.
수집: 모든 동물은 혈장 TTR 수준의 최대 저감 및 약리학적 활성도의 지속 기간을 결정하기 위하여 시험 물품 투여 후 정해진 시점(제2일, 제5일, 제7일, 제14일 및 제21일)에서 채혈하였다.
분석: 혈장 샘플 내 TTR 단백질 수준은 제조사의 지시에 따라서 Abnova Prealbumin (마우스) ELISA 키트(Cedar Lane, 카탈로그 번호 KA2070)를 이용해서 결정되었다. TTR 혈장 단백질 값은 개별 혈장 샘플에 대해서 계산되었고, 각 군의 평균치가 결정되었다. 이들 평균치로부터, 대조군에 대한 TTR 단백질 수준(PBS 처리된 동물에 대한%)이 결정되었다.
결과: 실험 데이터는 표 28-2에 제시된다. 값들은 처리 후 제2일, 제5일, 제7일, 제14일, 제21일 및 제28항에 (PBS 대조군에 대한) TTR 단백질 수준%를 나타낸다.
결론: 최소한 10 ㎎/㎏의 중합체와 조합된 리간드로 처리된 동물은 리간드 단독에 비해서 표적 mRNA의 넉다운의 현저한 증가를 나타내었다. 또한, 활성도의 개시는 중합체의 존재 하에 더욱 신속하였고, 효과의 지속 기간은 극적으로 연장되었다. 30 ㎎/㎏ 용량에서 중합체 단독으로 처리된 마우스는 PBS에 비해서 TTR 단백질의 저감을 나타내지 않았다.
각종 중합체량의 존재 또는 부존재에서 표 28-1로부터의 리간드의 단일 피하 투여 후 마우스에서의 혈장 TTR 단백질 수준.
TTR 단백질 데이터는 PBS 처리된 마우스 값의 퍼센트로서 표현되었다.
Figure pct00393
실시예 29. 막-불안정화 중합체와 피하로 공동 전달된 실시예 28로부터의 리간드의 용량 적정
실시예 28로부터의 리간드는 TTR 넉다운의 야생형 마우스 모델에서 시험관내 활성도에 대해서 시험되었다. 식:
Figure pct00394
의 중합체는 리간드와 공동 전달되었다.
처리: 암컷 C57BL/6 마우스(n = 3)가 (2.5 ㎎/㎏, 0.50 ㎎/㎏ 및 0.05 ㎎/㎏ 접합체로 투여된) 리간드 단독인 PBS, 및 중합체와 조합된 리간드(0.50 ㎎/㎏ 또는 0.05 ㎎/㎏로 투여된 접합체 및 0.3 ㎎/㎏, 1 ㎎/㎏, 3 ㎎/㎏, 10 ㎎/㎏ 또는 30 ㎎/㎏에서 투여된 중합체)로 피하로 단일 용량으로 처리되었다(사각형 영역).
수집: 모든 동물은 혈장 TTR 수준의 최대 저감 및 약리학적 활성도의 지속 기간을 결정하기 위하여 시험 물품 투여 후 정해진 시점(제1일, 제2일, 제6일, 제9일, 제14일 및 제21일)에서 채혈하였다.
분석: 혈장 샘플 내 TTR 단백질 수준은 제조사의 지시에 따라서 Abnova Prealbumin (마우스) ELISA 키트(Cedar Lane, 카탈로그 번호 KA2070)를 이용해서 결정되었다. TTR 혈장 단백질 값은 개별 혈장 샘플에 대해서 계산되었고, 각 군의 평균치가 결정되었다. 이들 평균치로부터, 대조군에 대한 TTR 단백질 수준(PBS 처리된 동물에 대한%)이 결정되었다.
결과: 실험 데이터는 표 29-1에 제시된다. 값들은 처리 후 제1일, 제2일, 제6일, 제9일, 제14일 및 제21일에 (PBS 대조군에 대한) TTR 단백질 수준%를 나타낸다.
결론: 10 ㎎/㎏ 이상의 중합체와 조합된 리간드로 처리된 동물은 리간드 단독으로 처리된 동물에 대해서 표적 mRNA의 넉다운의 현저한 증가를 나타내었다. 중합체의 적정은, 10 ㎎/㎏ 이상의 중합체 용량이 특히 더 낮은 접합체 용량(예컨대, 0.05 ㎎/㎏)에서 엔도솜 방출을 증대시킨 것을 입증하였다. 중합체 용량이 30 ㎎/㎏까지 증가된 경우, 유사한 TTR 넉다운은 0.05 ㎎/㎏ 내지 0.50 ㎎/㎏ 접합체 용량 사이에서 관찰되었다. 활성도의 신속한 개시 및 효과의 연장된 지속기간이 또한 관찰되었다.
각종 중합체량의 존재 또는 부존재에서 리간드의 단일 피하 투여 후 마우스에서의 혈장 TTR 단백질 수준.
TTR 단백질 데이터는 PBS 처리된 마우스값의 퍼센트로서 표현되었다.
Figure pct00395
모든 간행물, 특히 및 특허 문서는, 개별적으로 참조에 의해 원용되는 것처럼, 본 명세서에 참조에 의해 원용된다. 본 발명은 각종 구체적인 바람직한 실시형태 및 기술을 참조하여 설명되었다. 그러나, 본 발명의 정신과 범위 내에서 유지하면서 많은 변경 및 수정이 행해질 수 있음이 이해되어야 한다.
SEQUENCE LISTING <110> GENEVANT SCIENCES GMBH <120> THERAPEUTIC METHODS <130> 08750.001WO1 <140> PCT/US2019/059711 <141> 2019-11-04 <150> US 62/755,196 <151> 2018-11-02 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(1) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Phosphorothioate linker <220> <221> modified_base <222> (2)..(2) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> misc_feature <222> (2)..(3) <223> Phosphorothioate linker <220> <221> modified_base <222> (3)..(3) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (4)..(4) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (5)..(5) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (6)..(6) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (7)..(7) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (9)..(9) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (10)..(10) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (11)..(11) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (12)..(12) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (14)..(14) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (15)..(15) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (16)..(16) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (17)..(17) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (18)..(18) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (19)..(19) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (20)..(20) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (21)..(21) <223> 2'-Fluoro nucleotide <400> 1 aacaguguuc uugcucuaua a 21 <210> 2 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide <220> <221> modified_base <222> (1)..(1) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> misc_feature <222> (1)..(2) <223> Phosphorothioate linker <220> <221> modified_base <222> (2)..(2) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> misc_feature <222> (2)..(3) <223> Phosphorothioate linker <220> <221> modified_base <222> (3)..(3) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (4)..(4) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (5)..(5) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (6)..(6) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (7)..(7) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (8)..(8) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (9)..(9) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (10)..(10) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (11)..(11) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (12)..(12) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (13)..(13) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (14)..(14) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (15)..(15) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (16)..(16) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (17)..(17) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (18)..(18) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (19)..(19) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> modified_base <222> (20)..(20) <223> 2'-Fluoro nucleotide <220> <221> modified_base <222> (21)..(21) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> misc_feature <222> (21)..(22) <223> Phosphorothioate linker <220> <221> modified_base <222> (22)..(22) <223> 2'O-methyl nucleotide <220> <221> misc_feature <222> (22)..(23) <223> Phosphorothioate linker <220> <221> modified_base <222> (23)..(23) <223> 2'O-methyl nucleotide <400> 2 uuauagagca agaacacugu uuu 23

Claims (238)

  1. 핵산을 세포에 전달하는 방법으로서, 상기 세포를 1) 막-불안정화 중합체(membrane-destabilizing polymer); 및 2) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법:
    Figure pct00396

    식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이고;
    상기 막-불안정화 중합체는 하기 화학식 (XX)의 중합체이다:
    Figure pct00397

    식 중,
    PEGMA는 2 내지 20개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는 폴리에틸렌글리콜 메타크릴레이트 잔기이고;
    M2는
    (C4-C18)알킬-메타크릴레이트 잔기;
    (C4-C18)분지쇄 알킬- 메타크릴레이트 잔기;
    콜레스테릴 메타크릴레이트 잔기;
    1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 (C4-C18)알킬-메타크릴레이트 잔기; 및
    1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 (C4-C18)분지쇄 알킬-메타크릴레이트 잔기
    로 이루어진 군으로부터 선택된 메타크릴레이트 잔기이고;
    BMA는 부틸 메타크릴레이트 잔기이고;
    PAA는 프로필 아크릴산 잔기이고;
    DMAEMA는 다이메틸아미노에틸 메타크릴레이트 잔기이고;
    m 및 n은 각각 0 초과의 몰분율이되, m은 n보다 크고, m+n은 1이고;
    q는 0.2 내지 0.75의 몰분율이고;
    r은 0.05 내지 0.6의 몰분율이고;
    s는 0.2 내지 0.75의 몰분율이고;
    q+r+s는 1이고;
    v는 1 내지 25 kDa이고;
    w는 1 내지 25 kDa이고;
    T5는 표적화 모이어티이고; 그리고
    L은 존재하지 않거나 또는 연결 모이어티이다.
  2. 동물 내 표적 세포의 사이토솔에 핵산을 전달하는 방법으로서, 상기 동물에게 (a) 막-불안정화 중합체 및 (b) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 방법:
    Figure pct00398

    식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이고, 상기 핵산은 상기 표적 세포의 상기 사이토솔에 전달되고;
    상기 막-불안정화 중합체는 하기 화학식 (XX)의 중합체이다:
    Figure pct00399

    식 중,
    PEGMA는 2 내지 20개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는 폴리에틸렌글리콜 메타크릴레이트 잔기이고;
    M2는
    (C4-C18)알킬-메타크릴레이트 잔기;
    (C4-C18)분지쇄 알킬- 메타크릴레이트 잔기;
    콜레스테릴 메타크릴레이트 잔기;
    1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 (C4-C18)알킬-메타크릴레이트 잔기; 및
    1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 (C4-C18)분지쇄 알킬-메타크릴레이트 잔기
    로 이루어진 군으로부터 선택된 메타크릴레이트 잔기이고;
    BMA는 부틸 메타크릴레이트 잔기이고;
    PAA는 프로필 아크릴산 잔기이고;
    DMAEMA는 다이메틸아미노에틸 메타크릴레이트 잔기이고;
    m 및 n은 각각 0 초과의 몰분율이되, m은 n보다 크고, m+n은 1이고;
    q는 0.2 내지 0.75의 몰분율이고;
    r은 0.05 내지 0.6의 몰분율이고;
    s는 0.2 내지 0.75의 몰분율이고;
    q+r+s는 1이고;
    v는 1 내지 25 kDa이고;
    w는 1 내지 25 kDa이고;
    T5는 표적화 모이어티이고; 그리고
    L은 존재하지 않거나 또는 연결 모이어티이다.
  3. 방법으로서, 동물에게 1)　막-불안정화 중합체; 및 2) 하기 화학식 (X)의 핵산 접합체를 투여하는 단계를 포함하는, 방법:
    Figure pct00400

    식 중, A는 표적화 리간드이고, B는 선택적 링커이고, C는 핵산이고;
    상기 막-불안정화 중합체는 하기 화학식 (XX)의 중합체이다:
    Figure pct00401

    식 중,
    PEGMA는 2 내지 20개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는 폴리에틸렌글리콜 메타크릴레이트 잔기이고;
    M2는
    (C4-C18)알킬-메타크릴레이트 잔기;
    (C4-C18)분지쇄 알킬- 메타크릴레이트 잔기;
    콜레스테릴 메타크릴레이트 잔기;
    1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 (C4-C18)알킬-메타크릴레이트 잔기; 및
    1개 이상의 플루오린 원자로 치환된 (C4-C18)분지쇄 알킬-메타크릴레이트 잔기
    로 이루어진 군으로부터 선택된 메타크릴레이트 잔기이고;
    BMA는 부틸 메타크릴레이트 잔기이고;
    PAA는 프로필 아크릴산 잔기이고;
    DMAEMA는 다이메틸아미노에틸 메타크릴레이트 잔기이고;
    m 및 n은 각각 0 초과의 몰분율이되, m은 n보다 크고, m+n은 1이고;
    q는 0.2 내지 0.75의 몰분율이고;
    r은 0.05 내지 0.6의 몰분율이고;
    s는 0.2 내지 0.75의 몰분율이고;
    q+r+s는 1이고;
    v는 1 내지 25 kDa이고;
    w는 1 내지 25 kDa이고;
    T5는 표적화 모이어티이고; 그리고
    L은 존재하지 않거나 또는 연결 모이어티이다.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, A는 상기 표적 세포의 표면 상의 분자에 특이적으로 결합하는 표적화 리간드인, 방법.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, T5는 상기 표적 세포의 표면 상의 분자에 특이적으로 결합하는, 방법.
  6. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 핵산 접합체 및 상기 막-불안정화 중합체는 개별적으로 투여되는, 방법.
  7. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 막-불안정화 중합체는 상기 핵산 접합체의 투여 후에 투여되는, 방법.
  8. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 핵산 접합체 및 상기 막-불안정화 중합체는 단일 조성물 내에서 함께 투여되는, 방법.
  9. 제5항에 있어서, 상기 표적화 리간드 및 T5는 상이하고 (i) 상기 표적 세포 상의 동일한 세포 표면 분자에 특이적으로 결합되거나 또는 (ii) 상이한 세포 표면 분자에 특이적으로 결합되는, 방법.
  10. 제5항에 있어서, 상기 표적화 리간드 및 T5는 동일하고 각각 동일한 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는, 방법.
  11. 제1항 내지 제2항 및 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 분비세포, 연골세포, 상피세포, 신경세포, 근육세포, 혈액 세포, 내피세포, 주피세포(pericyte), 섬유아세포, 교질 세포 또는 수지상 세포인, 방법.
  12. 제1항 내지 제2항 및 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 암세포, 면역세포, 박테리아-감염 세포, 바이러스-감염 세포 또는 비정상 대사 활성도를 갖는 세포인, 방법.
  13. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 리간드는 트랜스페린 수용체 1형, 트랜스페린 수용체 2형, EGF 수용체, HER2/Neu, VEGF 수용체, PDGF 수용체, 인테그린, NGF 수용체, CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD33, CD43, CD38, CD56, CD69, 아시알로당단백질 수용체(ASGPR), 전립선-특이적 막 항원(PSMA), 폴레이트 수용체 및 시그마 수용체로 이루어진 군으로부터 선택된 세포 표면 분자에 특이적으로 결합되는, 방법.
  14. 제5항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, T5는 트랜스페린 수용체 1형, 트랜스페린 수용체 2형, EGF 수용체, HER2/Neu, VEGF 수용체, PDGF 수용체, 인테그린, NGF 수용체, CD2, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD22, CD33, CD43, CD38, CD56, CD69, 아시알로당단백질 수용체(ASGPR), 전립선-특이적 막 항원(PSMA), 폴레이트 수용체 및 시그마 수용체로 이루어진 군으로부터 선택된 세포 표면 분자에 특이적으로 결합되는, 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 리간드는 소분자 표적화 모이어티를 포함하는, 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 소분자 표적화 모이어티는 당, 비타민, 비스포스포네이트, 또는 이들의 유사체인, 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 당은 락토스, 갈락토스, N-아세틸 갈락토사민(NAG), N-아세틸 갈락토사민 유도체 및 만노스-6-포스페이트(M6P)로부터 선택되는, 방법.
  18. 제16항에 있어서, 상기 비타민은 폴레이트인, 방법.
  19. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 리간드는 단백질을 포함하는, 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 단백질은 항체, 펩타이드 압타머(aptamer), 또는 상기 세포 표면 분자의 천연 리간드로부터 유래된 단백질인, 방법.
  21. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 리간드는 펩타이드를 포함하는, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 펩타이드는 인테그린-결합 펩타이드, LOX-1-결합 펩타이드, 및 상피세포성장인자(EGF) 펩타이드, 뉴로텐신 펩타이드, NL4 펩타이드 또는 YIGSR 라미닌 펩타이드인, 방법.
  23. 제1항 내지 제2항 및 제4항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포는 간세포인, 방법.
  24. 제23항에 있어서, 상기 표적화 리간드는 아시알로당단백질 수용체(ASGPR)에 특이적으로 결합되는, 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 표적화 리간드는 N-아세틸갈락토사민(NAG) 잔기를 포함하는, 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, M2는
    2,2,3,3,4,4,4-헵타플루오로부틸 메타크릴레이트 잔기,
    3,3,4,4,5,6,6,6-옥타플루오로-5(트라이플루오로메틸)헥실 메타크릴레이트 잔기,
    2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-펜타데카플루오로옥틸 2-메틸아크릴레이트 잔기,
    3,3,4,4,5,5,6,6,6-노나플루오로헥실 메타크릴레이트 잔기,
    3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-트라이데카플루오로옥틸 메타크릴레이트 잔기,
    1,1,1-트라이플루오로-2-(트라이플루오로메틸)-2-하이드록시-4-메틸-5-펜틸 메타크릴레이트 잔기, 2-[(1',1',1'-트라이플루오로-2'-(트라이플루오로메틸)-2'-하이드록시)프로필]-3-노보닐 메타크릴레이트 잔기,
    2-에틸헥실 메타크릴레이트 잔기,
    부틸 메타크릴레이트 잔기,
    옥틸 메타크릴레이트 잔기,
    헥실 메타크릴레이트 잔기,
    n-데실 메타크릴레이트 잔기,
    라우릴 메타크릴레이트 잔기,
    미리스틸 메타크릴레이트 잔기,
    스테아릴 메타크릴레이트 잔기,
    콜레스테릴 메타크릴레이트 잔기,
    에틸렌 글리콜 페닐 에터 메타크릴레이트 잔기,
    2-프로펜산, 2-메틸-, 2-페닐에틸 에스터 잔기,
    2-프로펜산, 2-메틸-, 2-[[(1,1-다이메틸에톡시)카보닐]아미노]에틸 에스터 잔기,
    2-프로펜산, 2-메틸-, 2-(1H-이미다졸-1-일)에틸 에스터 잔기,
    2-프로펜산, 2-메틸-, 사이클로헥실 에스터 잔기,
    2-프로펜산, 2-메틸-, 2-[비스(1-메틸에틸)아미노]에틸 에스터 잔기,
    2-프로펜산, 2-메틸-, 3-메틸부틸 에스터 잔기,
    네오펜틸 메타크릴레이트 잔기,
    tert-부틸 메타크릴레이트 잔기,
    3,3,5-트라이메틸 사이클로헥실 메타크릴레이트 잔기,
    2-하이드록시프로필 메타크릴레이트 잔기,
    5-노닐 메타크릴레이트 잔기,
    2-부틸-1-옥틸 메타크릴레이트 잔기,
    2-헥실-1-데실 메타크릴레이트 잔기, 및
    2-(tert-부틸 아미노)에틸 메타크릴레이트 잔기
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  27. 제26항에 있어서, PEGMA는 4 내지 5개의 에틸렌 글리콜 단위 또는 7 내지 8개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는, 방법.
  28. 제27항에 있어서, L은 2 내지 20개의 에틸렌 글리콜 단위를 갖는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 모이어티를 포함하는, 방법.
  29. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 막 불안정화 중합체는 하기 화학식 (XXI)의 중합체인, 방법:
    Figure pct00402

    식 중, px는 약 2 내지 약 50, 예컨대, 약 2 내지 약 20, 예컨대, 4 내지 12, 예컨대, 약 8 내지 약 16의 정수이고, 예컨대, px는 약 12이고, py는 약 2 내지 약 20의 정수이고, 예컨대, py는 약 2 내지 약 10의 정수이고, 예컨대, py는 약 4 내지 약 5(예컨대, 4 또는 5)의 정수이다.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염인, 방법:
    Figure pct00403

    식 중,
    R1은 표적화 리간드이고;
    L1은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    L2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    R2는 상기 핵산이고;
    고리 A는 존재하지 않거나, 3-20원 사이클로알킬, 5-20원 아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 3-20원 헤테로사이클로알킬이고;
    각각의 RA는 독립적으로 수소, 하이드록시, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 알킬-ORB, C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일로 이루어진 군으로부터 선택되고; 상기 C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일은 할로, 하이드록시 및 C1-3 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
    RB는 수소, 보호기, 고체 지지체에 대한 공유 결합, 또는 고체 지지체에 결합된 연결기에 대한 결합이고; 그리고
    n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다.
  31. 제30항에 있어서,
    R1은 표적화 리간드이고;
    L1은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    L2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    R2는 상기 핵산이고;
    상기 고리 A는 존재하지 않거나, 3-20원 사이클로알킬, 5-20원 아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 3-20원 헤테로사이클로알킬이고;
    각각의 RA는 독립적으로 수소, 하이드록시, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 알킬-ORB, 및 할로, 하이드록시 및 C1-3 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되는 C1-8 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    RB는 수소, 보호기, 고체 지지체에 대한 공유 결합, 또는 고체 지지체에 결합된 연결기에 대한 결합이고; 그리고
    n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10인, 방법.
  32. 제30항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (Ia)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00404

    식 중,
    각각의 D는 독립적으로
    Figure pct00405
    및 -N=로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  33. 제30항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (Ib)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00406

    식 중,
    각각의 D는 독립적으로
    Figure pct00407
    및 -N=으로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
    각각의 m은 독립적으로 1 또는 2이다.
  34. 제30항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (Ic)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00408

    식 중,
    E는 -O- 또는 -CH2-이고;
    n은 0, 1, 2, 3 및 4로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
    n1 및 n2는 각각 독립적으로 0, 1, 2 및 3으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  35. 제30항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (Ig)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00409

    식 중,
    G는 -N- 또는 -CH-이고;
    L2는 하이드록실 또는 할로로 선택적으로 치환된 C1-4 알킬렌-O-이고; 그리고
    n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7이다.
  36. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (XXX)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00410

    식 중,
    R1은 표적화 리간드이고;
    L1은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    L2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    R2는 핵산이고;
    B는 2가이고, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00411
    Figure pct00412
    Figure pct00413

    식 중,
    각각의 R'은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일이되; 상기 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일은 할로 또는 하이드록실로 선택적으로 치환되고;
    *로 표시된 원자가(valence)는 L1에 부착되거나, 또는 L1이 존재하지 않는 경우에는 R1에 부착되고; 그리고
    **로 표시된 원자가는 L2에 부착되거나, 또는 L2가 존재하지 않는 경우에는 R2에 부착된다.
  37. 제32항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00414
    Figure pct00415
    Figure pct00416

    식 중,
    Q1은 수소이고 Q2는 R2이거나; 또는 Q1은 R2이고 Q2는 수소이고; 그리고
    Z는 -L1-R1이다.
  38. 제33항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00417
    및
    Figure pct00418

    식 중,
    Q1은 수소이고 Q2는 R2이거나; 또는 Q1은 R2이고 Q2는 수소이고; 그리고
    Z는 -L1-R1이다.
  39. 제34항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00419

    Figure pct00420
    및
    Figure pct00421

    식 중, Z는 -L1-R1이다.
  40. 제30항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00422

    Figure pct00423
    및
    Figure pct00424

    식 중, Q는 -L1-R1이고; 그리고
    R'은 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일이되; 상기 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일은 할로 또는 하이드록실로 선택적으로 치환된다.
  41. 제30항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00425

    Figure pct00426

    Figure pct00427

    식 중, Q는 -L1-R1이다.
  42. 제30항 또는 제31항에 있어서, 상기 A는 부존재(absent), 페닐, 피롤리딘일, 또는 사이클로펜틸인, 방법.
  43. 제34항 또는 제35항에 있어서, 각각의 RA는 독립적으로 하이드록시, 또는 하이드록실로 선택적으로 치환되는 C1-8 알킬인, 방법.
  44. 제34항 또는 제35항에 있어서, 각각의 RA는 독립적으로 하이드록시, 메틸 및 -CH2OH로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  45. 제30항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 -NH-, -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O)-, -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH- 또는 -NH-(SO2)-를 통해서 R1에 연결되는, 방법.
  46. 제30항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, L1은
    Figure pct00428
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  47. 제30항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, L1은
    Figure pct00429
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  48. 제30항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, L1은
    Figure pct00430
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  49. 제30항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, L1은 -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O), -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH- 또는 -NH-(SO2)-로 이루어진 군으로부터 선택된 링키지를 통해서 B1에 연결되는, 방법.
  50. 제30항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, L1은
    Figure pct00431
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  51. 제30항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, L2는 -O-를 통해서 R2에 연결되는, 방법.
  52. 제30항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, L2는 하이드록시로 선택적으로 치환되는 C1-4 알킬렌-O-인, 방법.
  53. 제30항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, L2는 -CH2O-, -CH2CH2O- 또는 -CH(OH)CH2O-인, 방법.
  54. 제30항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, L2는 -CH2-O- 또는 -CH2-CH2-O-인, 방법.
  55. 제30항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, L2는 존재하지 않는, 방법.
  56. 제30항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, L1 및 L2는 독립적으로 1 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대, 1, 2, 3 또는 4)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  57. 제30항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, L1 및 L2는 독립적으로 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  58. 제30항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, L1 및 L2는 독립적으로 1 내지 14개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  59. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 리간드 R1은 3 내지 8개의 당류를 포함하는, 방법.
  60. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 리간드 R1은 3 내지 6개의 당류를 포함하는, 방법.
  61. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 리간드 R1은 3 내지 4개의 당류를 포함하는, 방법.
  62. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 리간드 R1은 3개의 당류를 포함하는, 방법.
  63. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 리간드 R1은 4개의 당류를 포함하는, 방법.
  64. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적화 리간드 R1은 하기 화학식을 갖는, 방법:
    Figure pct00432

    식 중,
    B1은 약 1 내지 약 20개의 원자를 포함하는 3가기이고, L1, T1 및 T2에 공유 결합되고;
    B2는 약 1 내지 약 20개의 원자를 포함하는 3가기이고, T1, T3 및 T4에 공유 결합되고;
    B3은 약 1 내지 약 20개의 원자를 포함하는 3가기이고, T2, T5 및 T6에 공유 결합되고;
    T1은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    T2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    T3은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    T4는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    T5는 존재하지 않거나 또는 연결기이고; 그리고
    T6은 존재하지 않거나 또는 연결기이다.
  65. 제64항에 있어서, T1 및 T2 중 하나는 존재하지 않는, 방법.
  66. 제64항에 있어서, T1과 T2는 둘 다 존재하지 않는, 방법.
  67. 제64항에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 존재하지 않거나 또는 1 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  68. 제64항에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 존재하지 않거나 또는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  69. 제64항에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 존재하지 않거나 또는 1 내지 50개의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상은 -O- 또는 -NRX-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은, 할로, 하이드록시 및 옥소(=O)로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  70. 제64항에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 존재하지 않거나 또는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-로 선택적으로 대체되고, 상기 탄화수소 사슬은, 할로, 하이드록시 및 옥소(=O)로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  71. 제64항에 있어서, T1, T2, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 존재하지 않거나 또는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-로 선택적으로 대체되고, 상기 탄화수소 사슬은, 할로, 하이드록시 및 옥소(=O)로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  72. 제64항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, T3, T4, T5 및 T6 중 적어도 하나는 하기인, 방법:
    Figure pct00433

    식 중,
    n = 1, 2, 3.
  73. 제64항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, T3, T4, T5 및 T6의 각각은 독립적으로 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00434

    식 중,
    n = 1, 2, 3.
  74. 제64항에 있어서, T1 및 T2 중 적어도 하나는 글리신인, 방법.
  75. 제64항에 있어서, T1 및 T2의 각각은 글리신인, 방법.
  76. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 1 내지 15개의 원자를 포함하는 3가기이고 L1, T1 및 T2에 공유 결합되는, 방법.
  77. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 1 내지 10개의 원자를 포함하는 3가기이고 L1, T1 및 T2에 공유 결합되는, 방법.
  78. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 (C1-C6)알킬을 포함하는, 방법.
  79. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 C3-8 사이클로알킬을 포함하는, 방법.
  80. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 실릴기를 포함하는, 방법.
  81. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 D- 또는 L-아미노산을 포함하는, 방법.
  82. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 당류를 포함하는, 방법.
  83. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 포스페이트기를 포함하는, 방법.
  84. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 포스포네이트기를 포함하는, 방법.
  85. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 아릴을 포함하는, 방법.
  86. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 페닐 고리를 포함하는, 방법.
  87. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 페닐 고리인, 방법.
  88. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 CH인, 방법.
  89. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은 헤테로아릴을 포함하는, 방법.
  90. 제64항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, B1은
    Figure pct00435
    및
    Figure pct00436
    인, 방법.
  91. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 1 내지 15개의 원자를 포함하는 3가기이고 T1, T3 및 T4에 공유 결합되는, 방법.
  92. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 1 내지 10개의 원자를 포함하는 3가기이고 T1, T3 및 T4에 공유 결합되는, 방법.
  93. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 (C1-C6)알킬을 포함하는, 방법.
  94. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 C3-8 사이클로알킬을 포함하는, 방법.
  95. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 실릴기를 포함하는, 방법.
  96. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 D- 또는 L-아미노산을 포함하는, 방법.
  97. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 당류를 포함하는, 방법.
  98. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 포스페이트기를 포함하는, 방법.
  99. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 포스포네이트기를 포함하는, 방법.
  100. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 아릴을 포함하는, 방법.
  101. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 페닐 고리를 포함하는, 방법.
  102. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 페닐 고리인, 방법.
  103. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 CH인, 방법.
  104. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는 헤테로아릴을 포함하는, 방법.
  105. 제64항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, B2는
    Figure pct00437
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  106. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 1 내지 15개의 원자를 포함하는 3가기이고 T2, T5 및 T6에 공유 결합되는, 방법.
  107. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 1 내지 10개의 원자를 포함하는 3가기이고 T2, T5 및 T6에 공유 결합되는, 방법.
  108. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 (C1-C6)알킬을 포함하는, 방법.
  109. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 C3-8 사이클로알킬을 포함하는, 방법.
  110. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 실릴기를 포함하는, 방법.
  111. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 D- 또는 L-아미노산을 포함하는, 방법.
  112. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 당류를 포함하는, 방법.
  113. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 포스페이트기를 포함하는, 방법.
  114. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 포스포네이트기를 포함하는, 방법.
  115. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 아릴을 포함하는, 방법.
  116. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 페닐 고리를 포함하는, 방법.
  117. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 페닐 고리를 포함하는, 방법.
  118. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 CH를 포함하는, 방법.
  119. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은 헤테로아릴을 포함하는, 방법.
  120. 제64항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, B3은
    Figure pct00438
    및
    Figure pct00439
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  121. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R1은
    Figure pct00440
    인, 방법.
  122. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 하기인, 방법:
    Figure pct00441

    식 중,
    G는 -NH- 또는 -O-이고;
    RC는 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)할로알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C6)알카노일 (C3-C20)사이클로알킬, (C3-C20)헤테로사이클, 아릴, 헤테로아릴, 단당류, 이당류 또는 삼당류이되; 상기 사이클로알킬, 헤테로사이클, 아릴, 헤테로아릴 및 당류는 할로, 카복실, 하이드록실, 아미노, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된다.
  123. 제122항에 있어서, RC는
    Figure pct00442
    인, 방법.
  124. 제122항에 있어서, RC는
    Figure pct00443
    인, 방법.
  125. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R1은
    Figure pct00444
    인, 방법.
  126. 제122항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, G는 -NH-인, 방법.
  127. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R1은
    Figure pct00445
    인, 방법.
  128. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 하기인, 방법:
    Figure pct00446
    Figure pct00447
    또는
    Figure pct00448

    식 중, 각각의 RD는 독립적으로 수소, (C1-C6)알킬, (C9-C20)알킬실릴, (RW)3Si-, (C2-C6)알켄일, 테트라하이드로피란일, (C1-C6)알카노일 벤조일, 아릴(C1-C3)알킬, TMTr(트라이메톡시트라이틸), DMTr(다이메톡시트라이틸), MMTr(모노메톡시트라이틸) 및 Tr(트라이틸)로 이루어진 군으로부터 선택되고; 그리고
    각각의 RW는 독립적으로 (C1-C4)알킬 및 아릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  129. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00449

    식 중,
    RS는
    Figure pct00450
    이고;
    n은 2, 3 또는 4이고; 그리고
    x는 1 또는 2이다.
  130. 제30항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 -C(H)(3-p)(L3-당류a)p이고,
    각각의 L3은 독립적으로 연결기이고; p는 1, 2 또는 3이고; 그리고 당류a는 단당류 또는 이당류인, 방법.
  131. 제130항에 있어서, 각각의 L3은 독립적으로 0 내지 50개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, 상기 RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은 (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  132. 제130항에 있어서, 각각의 L3은 독립적으로 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, 상기 RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  133. 제130항에 있어서, L3은
    Figure pct00451
    인, 방법.
  134. 제59항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 당류는 독립적으로
    Figure pct00452
    이되,
    식 중,
    X는 NR3이고, Y는 -(C=O)R4, -SO2R5 및 -(C=O)NR6R7이거나; 또는 X는 -(C=O)-이고 Y는 NR8R9이고;
    R3은 수소 또는 (C1-C4)알킬이고;
    R4, R5, R6, R7, R8 및 R9는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)할로알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 이는 할로, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
    R10은 -OH, -NR8R9 또는 -F이고; 그리고
    R11은 -OH, -NR8R9, -F 또는 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5원 헤테로사이클인, 방법.
  135. 제59항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 당류는 독립적으로
    Figure pct00453
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  136. 제59항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 당류는 독립적으로
    Figure pct00454
    또는
    Figure pct00455
    인, 방법.
  137. 제1항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, T5는
    Figure pct00456
    이되,
    식 중,
    X는 NR3이고, Y는 -(C=O)R4, -SO2R5 및 -(C=O)NR6R7이거나; 또는 X는 -(C=O)-이고 Y는 NR8R9이고;
    R3은 수소 또는 (C1-C4)알킬이고;
    R4, R5, R6, R7, R8 및 R9는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)할로알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬(할로, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R10은 -OH, -NR8R9 또는 -F이고; 그리고
    R11은 -OH, -NR8R9, -F, 또는 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5원 헤테로사이클인, 방법.
  138. 제1항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, T5는
    Figure pct00457
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  139. 제1항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, T5는
    Figure pct00458
    또는
    Figure pct00459
    인, 방법.
  140. 제130항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 당류a는
    Figure pct00460
    이되,
    식 중,
    X는 NR3이고, Y는 -(C=O)R4, -SO2R5 및 -(C=O)NR6R7이거나; 또는 X는 -(C=O)-이고 Y는 NR8R9이고;
    R3은 수소 또는 (C1-C4)알킬이고;
    R4, R5, R6, R7, R8 및 R9는 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)할로알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬(이것은 할로, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환됨)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R10은 -OH, -NR8R9 또는 -F이고; 그리고
    R11은 -OH; -NR8R9; -F; 또는 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, (C1-C4)알킬, (C1-C4)할로알킬, (C1-C4)알콕시 및 (C1-C4)할로알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되는 5원 헤테로사이클인, 방법.
  141. 제130항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 당류a는
    Figure pct00461
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  142. 제130항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 당류a는
    Figure pct00462
    또는
    Figure pct00463
    인, 방법.
  143. 제30항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은
    Figure pct00464

    Figure pct00465

    Figure pct00466

    Figure pct00467

    Figure pct00468
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  144. 제30항에 있어서, 상기 화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (Id)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00469

    식 중,
    R1d는
    Figure pct00470
    및
    Figure pct00471
    로부터 선택되고;
    Xd는 C2-10 알킬렌이고;
    nd는 0 또는 1이고;
    R2d는 핵산이고; 그리고
    R3d는 H이다.
  145. 제144항에 있어서, R1d는
    Figure pct00472
    인, 방법.
  146. 제144항에 있어서, R1d는
    Figure pct00473
    인, 방법.
  147. 제144항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, Xd는 C8알킬렌인, 방법.
  148. 제144항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, nd는 0인, 방법.
  149. 제144항 내지 제148항 중 어느 한 항에 있어서, R3d는 H인, 방법.
  150. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00474
    및
    Figure pct00475
    .
  151. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00476
    및
    Figure pct00477
    .
  152. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00478

    Figure pct00479

    Figure pct00480
    및
    Figure pct00481
    .
  153. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은
    Figure pct00482
    또는
    Figure pct00483
    인 화학식 (I)의 화합물인, 방법.
  154. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00484
  155. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00485
  156. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00486
    .
  157. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00487
    .
  158. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00488
    .
  159. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00489
    .
  160. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00490
    .
  161. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00491
    .
  162. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00492
    .
  163. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00493
    .
  164. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00494
    .
  165. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00495
    .
  166. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식 (I)의 화합물인, 방법:
    Figure pct00496
    .
  167. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식의 화합물인, 방법:
    Figure pct00497

    식 중,
    L1은 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    L2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    R2는 핵산이고;
    고리 A는 존재하지 않거나, 3-20원 사이클로알킬, 5-20원 아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 3-20원 헤테로사이클로알킬이고;
    각각의 RA는 독립적으로 수소, 하이드록시, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 알킬-ORB, C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일로 이루어진 군으로부터 선택되되; 상기 C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일은 할로, 하이드록시 및 C1-3 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
    RB는 수소, 보호기, 고체 지지체에 대한 공유 결합, 또는 고체 지지체에 결합된 연결기에 대한 결합이고; 그리고
    n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다.
  168. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식의 화합물인, 방법:
    Figure pct00498

    식 중,
    L2는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    R2는 핵산이고;
    상기 고리 A는 존재하지 않거나, 3-20원 사이클로알킬, 5-20원 아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 3-20원 헤테로사이클로알킬이고;
    각각의 RA는 독립적으로 수소, 하이드록시, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 알킬-ORB, C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일로 이루어진 군으로부터 선택되되; 상기 C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일은 할로, 하이드록시 및 C1-3 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
    RB는 수소, 보호기, 고체 지지체에 대한 공유 결합, 또는 고체 지지체에 결합된 연결기에 대한 결합이고; 그리고
    n은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다.
  169. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식의 화합물인, 방법:
    Figure pct00499
    .
  170. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식의 화합물인, 방법:
    Figure pct00500
    .
  171. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식의 화합물인, 방법:
    Figure pct00501
    .
  172. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은 하기 화학식의 화합물인, 방법:
    Figure pct00502

    식 중,
    R1c는 당류이고;
    L1c는 0 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상은 -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, 상기 RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은 옥소(=O) 및 할로로부터 선택된 1개 이상의 치환체로 선택적으로 치환되고;
    Bc는 5-10원 아릴 또는 5-10원 헤테로아릴이되, 5-10원 아릴 또는 5-10원 헤테로아릴은 할로, 하이드록시, 사이아노, 트라이플루오로메틸, 트라이플루오로메톡시, (C1-C6)알킬, (C1-C6)알콕시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알카노일옥시, (C3-C6)사이클로알킬 및 (C3-C6)사이클로알킬(C1-C6)알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
    L2c는 0 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상은 -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, 상기 RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은 옥소(=O) 및 할로로부터 선택된 1개 이상의 치환체로 선택적으로 치환된다;
    R2c는 당류이고;
    L3c는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    Ac는 3-20원 사이클로알킬, 5-20원 아릴, 5-20원 헤테로아릴 또는 3-20원 헤테로사이클로알킬이고;
    각각의 RAc는 독립적으로 수소, 하이드록시, CN, F, Cl, Br, I, -C1-2 알킬-ORa, C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일로 이루어진 군으로부터 선택되되; 상기 C1-10 알킬 C2-10 알켄일 및 C2-10 알킨일은 할로, 하이드록시 및 C1-3 알콕시로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
    nc는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이고;
    L4c는 존재하지 않거나 또는 연결기이고;
    R3c는 핵산이고;
    Rac는 수소이고; 그리고
    L5c는 연결기이다.
  173. 제172항에 있어서, Bc는 5-10원 아릴인, 방법.
  174. 제172항에 있어서, Bc는 나프틸 또는 페닐인, 방법.
  175. 제172항에 있어서, Bc는 페닐인, 방법.
  176. 제172항에 있어서, 기
    Figure pct00503
    는
    Figure pct00504
    인, 방법.
  177. 제172항에 있어서, Bc는 5-10원 헤테로아릴인, 방법.
  178. 제172항에 있어서, Bc는 피리딜, 피리미딜, 퀴놀릴, 아이소퀴놀릴, 이미다졸릴, 티아졸릴, 옥사다이아졸릴 또는 옥사졸릴인, 방법.
  179. 제172항에 있어서, 기
    Figure pct00505
    는
    Figure pct00506
    인, 방법.
  180. 제172항에 있어서, 기
    Figure pct00507
    는
    Figure pct00508
    인, 방법.
  181. 제172항 내지 제180항 중 어느 한 항에 있어서, L1c는 0 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 2가, 비분지식, 포화 탄화수소 사슬이되, 상긴 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, 상기 RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은 옥소(=O) 및 할로로부터 선택된 1개 이상의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  182. 제172항 내지 제180항 중 어느 한 항에 있어서, L1c는 0 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 2가, 비분지식, 포화 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX-C(=O)- 또는 -C(=O)-NRX-로 선택적으로 대체되고, 상기 RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬인, 방법.
  183. 제172항 내지 제180항 중 어느 한 항에 있어서, L1c는
    -C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-,
    -C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-,
    -C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2- 또는
    -C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-인, 방법.
  184. 제172항 내지 제183항 중 어느 한 항에 있어서, L2c는 0 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 2가, 비분지식, 포화 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX-, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX- 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, 상기 RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은 옥소(=O) 및 할로로부터 선택된 1개 이상의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  185. 제172항 내지 제183항 중 어느 한 항에 있어서, L2c는 0 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 2가, 비분지식, 포화 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX-C(=O)- 또는 -C(=O)-NRX-로 선택적으로 대체되고, 상기 RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬인, 방법.
  186. 제172항 내지 제183항 중 어느 한 항에 있어서, L2c는
    -C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-,
    -C(=O)N(H)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-,
    -C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2- 또는
    -C(=O)N(CH3)-CH2CH2OCH2CH2OCH2CH2OCH2CH2-인, 방법.
  187. 제172항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, R1c는
    Figure pct00509
    이되,
    식 중,
    X는 NR20이고 Y는 -(C=O)R21, -SO2R22 및 -(C=O)NR23R24로부터 선택되거나; 또는 X는 -(C=O)-이고 Y는 NR25R26이거나; 또는 X는 -NR37R38이고 Y는 존재하지 않고;
    R20은 수소 또는 (C1-C4)알킬이고;
    R21, R22, R23, R24, R25 및 R26은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
    R27은 -OH, -NR25R26 또는 -F이고;
    R28은 -OH, -NR25R26 또는 -F이고;
    R29는 -OH, -NR25R26, -F, -N3, -NR35R36, 또는 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, (C1-C4)알킬, 아릴 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5원 헤테로사이클이고, 임의의 (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시는 할로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고, 임의의 아릴은 할로, 하이드록실, 나이트로, 사이아노, 아미노, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R35 및 R36은 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되거나; 또는 R35와 R36은 이들이 부착되는 질소와 함께 취해져서 5-6원 헤테로아릴 고리를 형성하고, 헤테로아릴 고리는 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, 아릴 및 (C3-C6)사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고, 임의의 아릴, 및 (C3-C6)사이클로알킬은 1개 이상의 R39기로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R37 및 R38은 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되거나; 또는 R37과 R38은 이들이 부착되는 질소와 함께 취해져서, 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, 옥소(=O), (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5-8원 헤테로사이클을 형성하고, 임의의 (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시는 할로로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고; 그리고
    각각의 R39는 독립적으로 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된다.
  188. 제172항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, R1c는
    Figure pct00510
    인, 방법.
  189. 제172항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, R1c는
    Figure pct00511
    또는
    Figure pct00512
    인, 방법.
  190. 제172항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, R1c는
    Figure pct00513
    또는
    Figure pct00514
    인, 방법.
  191. 제172항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, R1c는
    Figure pct00515
    또는
    Figure pct00516
    인, 방법.
  192. 제172항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, R2c는
    Figure pct00517
    이되,
    식 중,
    X는 NR20이고 Y는 -(C=O)R21, -SO2R22 및 -(C=O)NR23R24로부터 선택되거나; 또는 X는 -(C=O)-이고 Y는 NR25R26이거나; 또는 X는 -NR37R38이고 Y는 존재하지 않고;
    R20은 수소 또는 (C1-C4)알킬이고;
    R21, R22, R23, R24, R25 및 R26은 각각 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
    R27은 -OH, -NR25R26 또는 -F이고;
    R28은 -OH, -NR25R26 또는 -F이고;
    R29는 -OH, -NR25R26, -F, -N3, -NR35R36, 또는 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, (C1-C4)알킬, 아릴 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5원 헤테로사이클이되, 임의의 (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시는 할로로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고, 임의의 아릴은 할로, 하이드록실, 나이트로, 사이아노, 아미노, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R35 및 R36은 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되거나; 또는 R35와 R36은 이들이 부착되는 질소와 함께 취해져서 5-6원 헤테로아릴 고리를 형성하고, 헤테로아릴 고리는 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, 아릴 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고, 임의의 아릴, 및 (C3-C6)사이클로알킬은 1개 이상의 R39기로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R37과 R38은 독립적으로 수소, (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시, (C1-C8)알카노일 (C1-C8)알콕시카보닐, (C1-C8)알카노일옥시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로, (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되거나; 또는 R37과 R38은 이들이 부착되는 질소와 함께 취해져서, 할로, 하이드록실, 카복실, 아미노, 옥소(=O), (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된 5-8원 헤테로사이클을 형성하고, 임의의 (C1-C4)알킬 및 (C1-C4)알콕시는 할로로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환되고; 그리고
    각각의 R39는 독립적으로 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되되, 임의의 (C1-C8)알킬, (C1-C8)알콕시 및 (C3-C6)사이클로알킬은 할로로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 기로 선택적으로 치환된다.
  193. 제172항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, R2c는
    Figure pct00518
    Figure pct00519
    및
    Figure pct00520
    인, 방법.
  194. 제172항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, R2c는
    Figure pct00521
    또는
    Figure pct00522
    인, 방법.
  195. 제172항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, R2c는
    Figure pct00523
    또는
    Figure pct00524
    인, 방법.
  196. 제172항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, R2c는
    Figure pct00525
    또는
    Figure pct00526
    인, 방법.
  197. 제172항 내지 제196항 중 어느 한 항에 있어서, L3c는 0 내지 50개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  198. 제172항 내지 제196항 중 어느 한 항에 있어서, L3c는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은, C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  199. 제184항 내지 제196항 중 어느 한 항에 있어서, L3c는 1 내지 30개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄소 원자들 중 1개 이상이 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은 1개 이상의 할로 또는 옥소(=O)로 선택적으로 치환되는, 방법.
  200. 제172항 내지 제196항 중 어느 한 항에 있어서, L3c는
    Figure pct00527
    또는
    Figure pct00528
    인, 방법.
  201. 제172항 내지 제196항 중 어느 한 항에 있어서, L3c는 -NH-, -O-, -S-, -(C=O)-, -(C=O)-NH-, -NH-(C=O)-, -(C=O)-O-, -NH-(C=O)-NH- 또는 -NH-(SO2)-를 통해서 B에 연결되는, 방법.
  202. 제172항 내지 제201항 중 어느 한 항에 있어서, L4c는 0 내지 50개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  203. 제172항 내지 제201항 중 어느 한 항에 있어서, L4c는 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는, 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 상기 탄화수소 사슬 내 탄소 원자들 중 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)은 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은, (C1-C6)알콕시, (C3-C6)사이클로알킬, (C1-C6)알카노일 (C1-C6)알카노일옥시, (C1-C6)알콕시카보닐, (C1-C6)알킬티오, 아지도, 사이아노, 나이트로, 할로, 하이드록시, 옥소(=O), 카복시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴 및 헤테로아릴옥시로부터 선택된 1개 이상(예컨대 1, 2, 3 또는 4개)의 치환체로 선택적으로 치환되는, 방법.
  204. 제172항 내지 제201항 중 어느 한 항에 있어서, L4c는 1 내지 30개의 탄소 원자를 갖는 2가, 분지식 또는 비분지식, 포화 또는 불포화, 탄화수소 사슬이되, 탄소 원자들 중 1개 이상이 -O-, -NRX, -NRX-C(=O)-, -C(=O)-NRX 또는 -S-로 선택적으로 대체되고, RX는 수소 또는 (C1-C6)알킬이고, 상기 탄화수소 사슬은 1개 이상의 할로 또는 옥소(=O)로 선택적으로 치환되는, 방법.
  205. 제172항에 있어서, 상기 기
    Figure pct00529
    는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법;
    Figure pct00530
    또는
    Figure pct00531

    식 중,
    각각의 R'은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일이되; 상기 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일은 할로 또는 하이드록실로 선택적으로 치환된다.
  206. 제172항에 있어서, 상기 기
    Figure pct00532
    는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    Figure pct00533

    식 중,
    각각의 R'은 독립적으로 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일이되; 상기 C1-9 알킬, C2-9 알켄일 또는 C2-9 알킨일은 할로 또는 하이드록실로 선택적으로 치환되고;
    *로 표시된 원자가는 L3c에 부착되고; 그리고
    **로 표시된 원자가는 R3c에 부착된다.
  207. 제172항에 있어서, 상기 기
    Figure pct00534
    는
    Figure pct00535
    인, 방법.
  208. 제172항 내지 제204항 중 어느 한 항에 있어서, L4c는 -O-를 통해서 R3c에 부착되는, 방법.
  209. 제172항 내지 제204항 중 어느 한 항에 있어서, R3c는 상기 핵산 분자의 포스페이트 중의 산소를 통해서 상기 접합체의 나머지에 부착되는, 방법.
  210. 제172항 내지 제204항 중 어느 한 항에 있어서, R3c는 센스 또는 안티센스 가닥의 5'-말단에서 포스페이트 중의 산소를 통해서 상기 접합체의 나머지에 부착되는, 방법.
  211. 제172항 내지 제204항 중 어느 한 항에 있어서, R3c는 센스 또는 안티센스 가닥의 3'-말단에서 포스페이트 중의 산소를 통해서 상기 접합체의 나머지에 부착되는, 방법.
  212. 제172항 내지 제204항 중 어느 한 항에 있어서, R3c는 센스 가닥의 3'-말단에서 포스페이트 중의 산소를 통해서 상기 접합체의 나머지에 부착되는, 방법.
  213. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 (X)의 화합물은,
    Figure pct00536

    Figure pct00537

    Figure pct00538

    Figure pct00539

    Figure pct00540

    Figure pct00541

    Figure pct00542

    Figure pct00543

    Figure pct00544

    Figure pct00545

    Figure pct00546

    및
    Figure pct00547

    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  214. 제1항 내지 제213항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산은 siRNA인, 방법.
  215. 제214항에 있어서, 상기 siRNA는 센스 가닥의 3'-말단을 통해서 상기 화학식 (X)의 화합물의 나머지에 연결되는, 방법.
  216. 제214항에 있어서, 상기 siRNA는 센스 가닥의 5'-말단을 통해서 상기 화학식 (X)의 화합물의 나머지에 연결되는, 방법.
  217. 제214항에 있어서, 상기 siRNA는 안티센스 가닥의 3'-말단을 통해서 상기 화학식 (X)의 화합물의 나머지에 연결되는, 방법.
  218. 제214항에 있어서, 상기 siRNA는 안티센스 가닥의 5'-말단을 통해서 상기 화학식 (X)의 화합물의 나머지에 연결되는, 방법.
  219. 제214항 내지 제218항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 siRNA는 상기 siRNA 상의 포스페이트를 통해서 상기 화학식 (X)의 화합물의 나머지에 연결되는, 방법.
  220. 조성물로서,
    제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체;
    제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 막-불안정화 중합체; 및
    약제학적으로 허용 가능한 담체
    를 포함하는, 조성물.
  221. 제220항에 있어서, 주사에 의한 투여용으로 제형화된, 조성물.
  222. 제220항에 있어서, 피하 주사에 의한 투여용으로 제형화된, 조성물.
  223. 펩타이드의 과발현을 특징으로 하는 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 질환을 가진 대상체에게 치료적 유효량의 (a) 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체 및 (b) 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 막-불안정화 중합체를 투여하는 단계를 포함하되, C는 과발현된 폴리펩타이드의 발현을 표적화하는 siRNA의 잔기인, 방법.
  224. 동물의 간에 siRNA를 전달하는 방법으로서, 상기 동물에게, 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 막-불안정화 중합체; 및 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체를 투여하는 단계를 포함하되; 표적화 리간드는 상기 접합체의 간세포-특이적 전달을 촉진시키기 위하여 선택되고, 그리고 상기 핵산은 siRNA인, 방법.
  225. 동물의 B형 간염 바이러스 감염을 치료하는 방법으로서, 상기 동물에게, a) 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체; 및 b) 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 막-불안정화 중합체를 투여하는 단계를 포함하되; 표적화 리간드가 상기 접합체의 간세포-특이적 전달을 촉진시키기 위하여 선택되고, 그리고 siRNA가 상기 B형 간염 바이러스 감염을 치료하는데 유용한, 방법.
  226. 키트로서, 1)　제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 막-불안정화 중합체; 2) 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체; 및 3) 세포를 상기 핵산 접합체 및 상기 막-불안정화 중합체와 접촉시키는 것을 포함하는, 핵산을 상기 세포에 전달하기 위한 설명서를 포함하는, 키트.
  227. 키트로서, 1) 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 막-불안정화 중합체; 2) 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체; 및 3) 상기 핵산 접합체 및 막-불안정화 중합체를 대상체에게 투여함으로써, 상기 대상체 내에서 표적 세포의 사이토솔에 핵산을 전달하기 위한 설명서를 포함하는, 키트.
  228. 제227항에 있어서, 상기 막-불안정화 중합체는 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 중합체인, 키트.
  229. 키트로서, 1)　제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 막-불안정화 중합체; 2) 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체; 및 3) 동물에 상기 핵산 접합체 및 상기 막-불안정화 중합체를 투여하기 위한 설명서를 포함하는, 키트.
  230. 의학 요법에 이용하기 의한, 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 막-불안정화 중합체; 및 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체.
  231. 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체로서, 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 막-불안정화 중합체와 조합하여, 상기 핵산으로 치료 가능한 질환의 예방적 또는 치료적 치료를 위한, 핵산 접합체.
  232. 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체의 용도로서, 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 막-불안정화 중합체와 조합하여, 상기 핵산으로 치료 가능한 질환을 치료하기 위한 약제를 제조하기 위한, 핵산 접합체의 용도.
  233. 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 막-불안정화 중합체와 비공유적으로 회합되는, 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체.
  234. 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 복수의 막-불안정화 중합체를 포함하는 마이셀에 의해 부분적으로 또는 완전히 캡슐화되는, 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체.
  235. 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 복수의 막-불안정화 중합체를 포함하는 마이셀에 의해 부분적으로 캡슐화되는, 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체.
  236. 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 복수의 막-불안정화 중합체를 포함하는 마이셀에 의해 완전히 캡슐화되는, 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체.
  237. 약제학적으로 허용 가능한 담체; 및 제1항 내지 제3항 및 제26항 내지 제29항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 복수의 막-불안정화 중합체를 포함하는 마이셀에 의해 부분적으로 또는 완전히 캡슐화되는, 제1항 내지 제219항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 화학식 (X)의 핵산 접합체를 포함하는 약제학적 조성물.
  238. 제1항 내지 제6항 및 제9항 내지 제221항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 접합체는 상기 막-불안정화 중합체의 투여 후에 투여되는, 방법.
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