EA031393B1 - Композиции и способы модулирования экспрессии hbv и ttr - Google Patents
Композиции и способы модулирования экспрессии hbv и ttr Download PDFInfo
- Publication number
- EA031393B1 EA031393B1 EA201592093A EA201592093A EA031393B1 EA 031393 B1 EA031393 B1 EA 031393B1 EA 201592093 A EA201592093 A EA 201592093A EA 201592093 A EA201592093 A EA 201592093A EA 031393 B1 EA031393 B1 EA 031393B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- compound according
- modified oligonucleotide
- nucleoside
- sugar
- modified
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 83
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 508
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 422
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 358
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 claims description 198
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 163
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 claims description 153
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 138
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 121
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 79
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 60
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 claims description 51
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 33
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 31
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 claims description 28
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 102100020870 La-related protein 6 Human genes 0.000 claims description 25
- 108050008265 La-related protein 6 Proteins 0.000 claims description 25
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 20
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 15
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 15
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical group CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 12
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 claims description 12
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 12
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 8
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 4
- 208000036066 Hemophagocytic Lymphohistiocytosis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032672 Histiocytosis haematophagic Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 208000014752 hemophagocytic syndrome Diseases 0.000 claims description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 claims description 3
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 claims description 3
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 claims description 3
- 150000008266 deoxy sugars Chemical class 0.000 claims 2
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 99
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 abstract description 5
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 300
- 241000764238 Isis Species 0.000 description 152
- 238000005417 image-selected in vivo spectroscopy Methods 0.000 description 151
- 238000012739 integrated shape imaging system Methods 0.000 description 151
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 146
- ABEXEQSGABRUHS-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecyl 16-methylheptadecanoate Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC(C)C ABEXEQSGABRUHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 145
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 138
- -1 but not limited to Chemical class 0.000 description 137
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 131
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 127
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 127
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 113
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 104
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 100
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 66
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 65
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 59
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 56
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 55
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 52
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 52
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 49
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 47
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 46
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 44
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 43
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 42
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 42
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 40
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 37
- 102000007584 Prealbumin Human genes 0.000 description 36
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 description 36
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 36
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 36
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 36
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 33
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 32
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 30
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 26
- 108010056301 Apolipoprotein C-III Proteins 0.000 description 25
- 102000030169 Apolipoprotein C-III Human genes 0.000 description 25
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 25
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 25
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 25
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 25
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 25
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 24
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 24
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 24
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 24
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 23
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 22
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 22
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 22
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 22
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 22
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 21
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 21
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 21
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 21
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 101000793223 Homo sapiens Apolipoprotein C-III Proteins 0.000 description 20
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 20
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 20
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 20
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 19
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 19
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 19
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 17
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 17
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 17
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 17
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 17
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 17
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 16
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 16
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 16
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 15
- 238000011160 research Methods 0.000 description 15
- 235000021092 sugar substitutes Nutrition 0.000 description 15
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 15
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 14
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 14
- 201000007905 transthyretin amyloidosis Diseases 0.000 description 14
- 125000000738 acetamido group Chemical group [H]C([H])([H])C(=O)N([H])[*] 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 13
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 13
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 description 12
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 12
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 12
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 description 12
- 101150006308 botA gene Proteins 0.000 description 12
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 12
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 12
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- 101100150273 Caenorhabditis elegans srb-1 gene Proteins 0.000 description 11
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 11
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 11
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 11
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 11
- 150000003254 radicals Chemical group 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 11
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 11
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 208000034846 Familial Amyloid Neuropathies Diseases 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 10
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 10
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 10
- 229940107161 cholesterol Drugs 0.000 description 10
- 125000003843 furanosyl group Chemical group 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 10
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229960003082 galactose Drugs 0.000 description 9
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 9
- 125000002950 monocyclic group Chemical group 0.000 description 9
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 9
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 9
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 8
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 8
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 8
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 206010019889 Hereditary neuropathic amyloidosis Diseases 0.000 description 7
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 7
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 125000002723 alicyclic group Chemical group 0.000 description 7
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 7
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 7
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 7
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 7
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 7
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 7
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 7
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 7
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 6
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 6
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 6
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 6
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 6
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 6
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 6
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 6
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 6
- 230000007112 pro inflammatory response Effects 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 6
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 5
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 5
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 5
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 5
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 5
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 5
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 5
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 5
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 5
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 5
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N tert‐butyl hydroperoxide Chemical compound CC(C)(C)OO CIHOLLKRGTVIJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 125000006710 (C2-C12) alkenyl group Chemical group 0.000 description 4
- 125000006711 (C2-C12) alkynyl group Chemical group 0.000 description 4
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KLEGMTRDCCDFJK-XDQSQZFTSA-N 1-[(2R,4S,5R)-4-[[(2R,3S,5R)-3-[[(2R,3S,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[(2R,3S,5R)-3-[[(2R,3S,5R)-3-[[(2R,3S,5R)-3-[[(2R,3S,5R)-3-[[(2R,3S,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-3-hydroxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphinothioyl]oxy-5-[[[(2R,3S,5R)-2-[[[(2R,3S,5R)-2-[[[(2R,3R,4R,5R)-2-[[[(2R,3R,4R,5R)-2-[[[(2R,3R,4R,5R)-2-[[[(2R,3R,4R,5R)-5-(4-amino-5-methyl-2-oxopyrimidin-1-yl)-2-[[hydroxy-[(2R,3R,4R,5R)-2-(hydroxymethyl)-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxyphosphinothioyl]oxymethyl]-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-3-yl]oxy-sulfanylphosphoryl]oxymethyl]-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]-4-(2-methoxyethoxy)-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-4-(2-methoxyethoxy)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]-5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-3-yl]oxy-hydroxyphosphinothioyl]oxymethyl]oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound COCCO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]2[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]3[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]4[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]5[C@@H](COP(O)(=S)O[C@H]6C[C@@H](O[C@@H]6COP(O)(=S)O[C@H]6C[C@@H](O[C@@H]6COP(O)(=S)O[C@H]6C[C@@H](O[C@@H]6COP(O)(=S)O[C@H]6C[C@@H](O[C@@H]6COP(O)(=S)O[C@H]6C[C@@H](O[C@@H]6COP(O)(=S)O[C@H]6C[C@@H](O[C@@H]6COP(O)(=S)O[C@H]6C[C@@H](O[C@@H]6COP(O)(=S)O[C@H]6C[C@@H](O[C@@H]6COP(O)(=S)O[C@H]6C[C@@H](O[C@@H]6COP(O)(=S)O[C@H]6C[C@@H](O[C@@H]6COP(O)(=S)O[C@@H]6[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]7[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]8[C@@H](COP(S)(=O)O[C@@H]9[C@@H](COP(O)(=S)O[C@@H]%10[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]%10OCCOC)n%10cc(C)c(=O)[nH]c%10=O)O[C@H]([C@@H]9OCCOC)n9cc(C)c(N)nc9=O)O[C@H]([C@@H]8OCCOC)n8cc(C)c(=O)[nH]c8=O)O[C@H]([C@@H]7OCCOC)n7cc(C)c(=O)[nH]c7=O)O[C@H]([C@@H]6OCCOC)n6cnc7c6nc(N)[nH]c7=O)n6cnc7c6nc(N)[nH]c7=O)n6cc(C)c(=O)[nH]c6=O)n6cc(C)c(=O)[nH]c6=O)n6cnc7c(N)ncnc67)n6cc(C)c(N)nc6=O)n6cnc7c(N)ncnc67)n6cc(C)c(=O)[nH]c6=O)n6cnc7c6nc(N)[nH]c7=O)n6cnc7c(N)ncnc67)n6cnc7c(N)ncnc67)O[C@H]([C@@H]5OCCOC)n5cnc6c(N)ncnc56)O[C@H]([C@@H]4OCCOC)n4cc(C)c(=O)[nH]c4=O)O[C@H]([C@@H]3OCCOC)n3cc(C)c(N)nc3=O)O[C@H]([C@@H]2OCCOC)n2cc(C)c(N)nc2=O)O[C@H]1n1cc(C)c(N)nc1=O KLEGMTRDCCDFJK-XDQSQZFTSA-N 0.000 description 4
- OLXZPDWKRNYJJZ-UHFFFAOYSA-N 5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-ol Chemical group C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 OLXZPDWKRNYJJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 7-deaza-adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1C=CN2 PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 4
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 4
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 4
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 4
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- QOVYHDHLFPKQQG-NDEPHWFRSA-N N[C@@H](CCC(=O)N1CCC(CC1)NC1=C2C=CC=CC2=NC(NCC2=CN(CCCNCCCNC3CCCCC3)N=N2)=N1)C(O)=O Chemical compound N[C@@H](CCC(=O)N1CCC(CC1)NC1=C2C=CC=CC2=NC(NCC2=CN(CCCNCCCNC3CCCCC3)N=N2)=N1)C(O)=O QOVYHDHLFPKQQG-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 4
- JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N dichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)Cl JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 4
- 150000008195 galaktosides Chemical class 0.000 description 4
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical class CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 description 4
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 4
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolane-2,4-diol Chemical compound COCCO[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N 0.000 description 3
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 3
- 102000001049 Amyloid Human genes 0.000 description 3
- 108010094108 Amyloid Proteins 0.000 description 3
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 3
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 101100298998 Caenorhabditis elegans pbs-3 gene Proteins 0.000 description 3
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 3
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 3
- DHXVGJBLRPWPCS-UHFFFAOYSA-N Tetrahydropyran Chemical compound C1CCOCC1 DHXVGJBLRPWPCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 3
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 3
- XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N asunaprevir Chemical compound O=C([C@@H]1C[C@H](CN1C(=O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(C)(C)C)OC1=NC=C(C2=CC=C(Cl)C=C21)OC)N[C@]1(C(=O)NS(=O)(=O)C2CC2)C[C@H]1C=C XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001719 carbohydrate derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 210000002987 choroid plexus Anatomy 0.000 description 3
- 229940125961 compound 24 Drugs 0.000 description 3
- 229940126545 compound 53 Drugs 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 150000002243 furanoses Chemical group 0.000 description 3
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 3
- 125000004446 heteroarylalkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YCJZWBZJSYLMPB-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloropyrimidin-4-yl)-2,5-dimethyl-1-phenylimidazole-4-carboxamide Chemical compound CC=1N(C=2C=CC=CC=2)C(C)=NC=1C(=O)NC1=CC=NC(Cl)=N1 YCJZWBZJSYLMPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 3
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 3
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 3
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 3
- 208000027121 wild type ATTR amyloidosis Diseases 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 2-[[4-(2,2-difluoropropoxy)pyrimidin-5-yl]methylamino]-4-[[(1R,4S)-4-hydroxy-3,3-dimethylcyclohexyl]amino]pyrimidine-5-carbonitrile Chemical compound FC(COC1=NC=NC=C1CNC1=NC=C(C(=N1)N[C@H]1CC([C@H](CC1)O)(C)C)C#N)(C)F FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 0.000 description 2
- VVCMGAUPZIKYTH-VGHSCWAPSA-N 2-acetyloxybenzoic acid;[(2s,3r)-4-(dimethylamino)-3-methyl-1,2-diphenylbutan-2-yl] propanoate;1,3,7-trimethylpurine-2,6-dione Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O.CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C.C([C@](OC(=O)CC)([C@H](C)CN(C)C)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VVCMGAUPZIKYTH-VGHSCWAPSA-N 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 2
- FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 2-amino-7-methyl-1,7-dihydro-6H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC(O)=C2N(C)C=NC2=N1 FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ICSNLGPSRYBMBD-UHFFFAOYSA-N 2-aminopyridine Chemical compound NC1=CC=CC=N1 ICSNLGPSRYBMBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- PDBUTMYDZLUVCP-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydro-1,4-benzoxazin-2-one Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)CNC2=C1 PDBUTMYDZLUVCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 3-[(1r)-1-[(2r,6s)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]ethyl]-n-[6-methyl-3-(1h-pyrazol-4-yl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-yl]-1,2-thiazol-5-amine Chemical compound N1([C@H](C)C2=NSC(NC=3C4=NC=C(N4C=C(C)N=3)C3=CNN=C3)=C2)C[C@H](C)O[C@H](C)C1 QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 0.000 description 2
- ASFAFOSQXBRFMV-LJQANCHMSA-N 3-n-(2-benzyl-1,3-dihydroxypropan-2-yl)-1-n-[(1r)-1-(4-fluorophenyl)ethyl]-5-[methyl(methylsulfonyl)amino]benzene-1,3-dicarboxamide Chemical compound N([C@H](C)C=1C=CC(F)=CC=1)C(=O)C(C=1)=CC(N(C)S(C)(=O)=O)=CC=1C(=O)NC(CO)(CO)CC1=CC=CC=C1 ASFAFOSQXBRFMV-LJQANCHMSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DQAZPZIYEOGZAF-UHFFFAOYSA-N 4-ethyl-n-[4-(3-ethynylanilino)-7-methoxyquinazolin-6-yl]piperazine-1-carboxamide Chemical compound C1CN(CC)CCN1C(=O)NC(C(=CC1=NC=N2)OC)=CC1=C2NC1=CC=CC(C#C)=C1 DQAZPZIYEOGZAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 4-sulfanylidene-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound SC=1C=CNC(=O)N=1 OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 5-(hydroxymethyl)cytosine Chemical compound NC=1NC(=O)N=CC=1CO RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCGHYQLFMPXSDU-UHFFFAOYSA-N 7-methyladenine Chemical compound C1=NC(N)=C2N(C)C=NC2=N1 HCGHYQLFMPXSDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 9H-carbazole Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N Butadiene Chemical compound C=CC=C KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JQUCWIWWWKZNCS-LESHARBVSA-N C(C1=CC=CC=C1)(=O)NC=1SC[C@H]2[C@@](N1)(CO[C@H](C2)C)C=2SC=C(N2)NC(=O)C2=NC=C(C=C2)OC(F)F Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)(=O)NC=1SC[C@H]2[C@@](N1)(CO[C@H](C2)C)C=2SC=C(N2)NC(=O)C2=NC=C(C=C2)OC(F)F JQUCWIWWWKZNCS-LESHARBVSA-N 0.000 description 2
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 2
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003601 C2-C6 alkynyl group Chemical group 0.000 description 2
- 206010007509 Cardiac amyloidosis Diseases 0.000 description 2
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N N-[(2R,3S)-2-(4-chlorophenyl)-1-(1,4-dimethyl-2-oxoquinolin-7-yl)-6-oxopiperidin-3-yl]-2-methylpropane-1-sulfonamide Chemical compound CC(C)CS(=O)(=O)N[C@H]1CCC(=O)N([C@@H]1c1ccc(Cl)cc1)c1ccc2c(C)cc(=O)n(C)c2c1 LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N Pyridoxal Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013381 RNA quantification Methods 0.000 description 2
- GMBQZIIUCVWOCD-WWASVFFGSA-N Sarsapogenine Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC[C@H]3[C@@H]2C1)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@H](C)CO1 GMBQZIIUCVWOCD-WWASVFFGSA-N 0.000 description 2
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 2
- LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N [(1s,3r,4ar,7s,8s,8as)-3-hydroxy-8-[2-[(4r)-4-hydroxy-6-oxooxan-2-yl]ethyl]-7-methyl-1,2,3,4,4a,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl] (2s)-2-methylbutanoate Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=C[C@H]2C[C@@H](O)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)CC1C[C@@H](O)CC(=O)O1 LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N 0.000 description 2
- LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N [(2r,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[[(3s,5s,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]-4,5-disulfo Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1C[C@@H]2CC[C@H]3[C@@H]4CC[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H]1O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]1OS(O)(=O)=O LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N 0.000 description 2
- SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N [[(2R,3S,4R,5S)-5-(2,6-dioxo-3H-pyridin-3-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [[[(2R,3S,4S,5R,6R)-4-fluoro-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@H]2O[C@H]([C@H](O)[C@@H]2O)C2C=CC(=O)NC2=O)[C@H](O)[C@@H](F)[C@@H]1O SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N adamantane Chemical compound C1C(C2)CC3CC1CC2C3 ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 2
- KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N benzyl n-[(2r)-1-[(2s,4r)-2-[[(2s)-6-amino-1-(1,3-benzoxazol-2-yl)-1,1-dihydroxyhexan-2-yl]carbamoyl]-4-[(4-methylphenyl)methoxy]pyrrolidin-1-yl]-1-oxo-4-phenylbutan-2-yl]carbamate Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CO[C@H]1CN(C(=O)[C@@H](CCC=2C=CC=CC=2)NC(=O)OCC=2C=CC=CC=2)[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)(O)C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C1 KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N 0.000 description 2
- MSFSPUZXLOGKHJ-KTZFPWNASA-N beta-muramic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)O[C@@H]1[C@@H](N)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O MSFSPUZXLOGKHJ-KTZFPWNASA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 2
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 2
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 2
- 229940125833 compound 23 Drugs 0.000 description 2
- 229940125846 compound 25 Drugs 0.000 description 2
- 229940127204 compound 29 Drugs 0.000 description 2
- 229940127113 compound 57 Drugs 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 229960005215 dichloroacetic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 229960000980 entecavir Drugs 0.000 description 2
- YXPVEXCTPGULBZ-WQYNNSOESA-N entecavir hydrate Chemical compound O.C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)C1=C YXPVEXCTPGULBZ-WQYNNSOESA-N 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 2
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 2
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000002183 isoquinolinyl group Chemical group C1(=NC=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 2
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 2
- YGBMCLDVRUGXOV-UHFFFAOYSA-N n-[6-[6-chloro-5-[(4-fluorophenyl)sulfonylamino]pyridin-3-yl]-1,3-benzothiazol-2-yl]acetamide Chemical compound C1=C2SC(NC(=O)C)=NC2=CC=C1C(C=1)=CN=C(Cl)C=1NS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C=C1 YGBMCLDVRUGXOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 2
- QTNLALDFXILRQO-UHFFFAOYSA-N nonadecane-1,2,3-triol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)CO QTNLALDFXILRQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 2
- 125000002811 oleoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 2
- 150000008298 phosphoramidates Chemical class 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 2
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 2
- 125000002943 quinolinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000008664 renal activity Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-CSMHCCOUSA-N telbivudine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- 229960004556 tenofovir Drugs 0.000 description 2
- VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N tenofovir disoproxil fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 150000003527 tetrahydropyrans Chemical class 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 2
- FTVLMFQEYACZNP-UHFFFAOYSA-N trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate Chemical compound C[Si](C)(C)OS(=O)(=O)C(F)(F)F FTVLMFQEYACZNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007817 turbidimetric assay Methods 0.000 description 2
- XUARCIYIVXVTAE-ZAPOICBTSA-N uvaol Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(CO)CC[C@@H](C)[C@H](C)[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C XUARCIYIVXVTAE-ZAPOICBTSA-N 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 2
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 2
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 2
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 2
- NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N (+)-Neomenthol Chemical group CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@@H]1O NOOLISFMXDJSKH-UTLUCORTSA-N 0.000 description 1
- DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N (+)-borneol Chemical group C1C[C@@]2(C)[C@@H](O)C[C@@H]1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N (+)-propylene glycol Chemical group C[C@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- REPVLJRCJUVQFA-UHFFFAOYSA-N (-)-isopinocampheol Chemical group C1C(O)C(C)C2C(C)(C)C1C2 REPVLJRCJUVQFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N (1R,3R)-3-[[3-bromo-1-[4-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)phenyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-6-yl]amino]-N,1-dimethylcyclopentane-1-carboxamide Chemical compound BrC1=NN(C2=NC(=NC=C21)N[C@H]1C[C@@](CC1)(C(=O)NC)C)C1=CC=C(C=C1)C=1SC(=NN=1)C ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N 0.000 description 1
- AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N (1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-6-[(3-chlorophenyl)methyl]-12,19-difluoro-11-hydroxy-8-(2-hydroxyacetyl)-9,13-dimethyl-6-azapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosa-14,17-dien-16-one Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2[C@H]3[C@]([C@]4(C=CC(=O)C=C4[C@@H](F)C3)C)(F)[C@@H](O)C[C@@]2([C@@]1(C1)C(=O)CO)C)N1CC1=CC=CC(Cl)=C1 AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N 0.000 description 1
- ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N (1r,2r,4r)-2-(4-bromophenyl)-n-[(4-chlorophenyl)-(2-fluoropyridin-4-yl)methyl]-4-morpholin-4-ylcyclohexane-1-carboxamide Chemical compound C1=NC(F)=CC(C(NC(=O)[C@H]2[C@@H](C[C@@H](CC2)N2CCOCC2)C=2C=CC(Br)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1 ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N 0.000 description 1
- SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N (1s,2s,3s,5r)-1-(carboxymethyl)-3,5-bis[(4-phenoxyphenyl)methyl-propylcarbamoyl]cyclopentane-1,2-dicarboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H]1[C@@H]([C@](CC(O)=O)([C@H](C(=O)N(CCC)CC=2C=CC(OC=3C=CC=CC=3)=CC=2)C1)C(O)=O)C(O)=O)N(CCC)CC(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N 0.000 description 1
- HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N (3r,4r)-3-azaniumyl-5-[[(2s,3r)-1-[(2s)-2,3-dicarboxypyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxo-4-sulfanylpentane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC[C@@H](N)[C@@H](S)C(=O)N[C@@H]([C@H](C)CC)C(=O)N1CCC(C(O)=O)[C@H]1C(O)=O HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N 0.000 description 1
- OBSLWIKITOYASJ-YDEIVXIUSA-N (3r,4r,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxane-2,4,5-triol Chemical compound CN[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OBSLWIKITOYASJ-YDEIVXIUSA-N 0.000 description 1
- 125000004400 (C1-C12) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N (z)-3-[3-[3,5-bis(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-1-yl]-n'-pyrazin-2-ylprop-2-enehydrazide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC(C(F)(F)F)=CC(C2=NN(\C=C/C(=O)NNC=3N=CC=NC=3)C=N2)=C1 DEVSOMFAQLZNKR-RJRFIUFISA-N 0.000 description 1
- FYADHXFMURLYQI-UHFFFAOYSA-N 1,2,4-triazine Chemical class C1=CN=NC=N1 FYADHXFMURLYQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 1,3-propanediol Chemical group OCCCO YPFDHNVEDLHUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035437 1,3-propanediol Drugs 0.000 description 1
- PISWNSOQFZRVJK-XLPZGREQSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methyl-2-sulfanylidenepyrimidin-4-one Chemical compound S=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 PISWNSOQFZRVJK-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 1-[(3s,4s)-4-[8-(2-chloro-4-pyrimidin-2-yloxyphenyl)-7-fluoro-2-methylimidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-3-fluoropiperidin-1-yl]-2-hydroxyethanone Chemical compound CC1=NC2=CN=C3C=C(F)C(C=4C(=CC(OC=5N=CC=CN=5)=CC=4)Cl)=CC3=C2N1[C@H]1CCN(C(=O)CO)C[C@@H]1F WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 0.000 description 1
- UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 1-[6-[2-[3-[3-[3-[2-[2-[3-[[2-[2-[[(2r)-1-[[2-[[(2r)-1-[3-[2-[2-[3-[[2-(2-amino-2-oxoethoxy)acetyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl]sulfanyl-1-oxopropan-2-yl Chemical compound O=C1C(SCCC(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(=O)N[C@@H](CSC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CO)C(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(N)=O)CC(=O)N1CCNC(=O)CCCCCN\1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2CC/1=C/C=C/C=C/C1=[N+](CC)C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C1 UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 0.000 description 1
- 125000004972 1-butynyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C#C* 0.000 description 1
- BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 1-hexanamine Chemical compound CCCCCCN BMVXCPBXGZKUPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MZMNEDXVUJLQAF-UHFFFAOYSA-N 1-o-tert-butyl 2-o-methyl 4-hydroxypyrrolidine-1,2-dicarboxylate Chemical compound COC(=O)C1CC(O)CN1C(=O)OC(C)(C)C MZMNEDXVUJLQAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000530 1-propynyl group Chemical group [H]C([H])([H])C#C* 0.000 description 1
- WJFKNYWRSNBZNX-UHFFFAOYSA-N 10H-phenothiazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3SC2=C1 WJFKNYWRSNBZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 10H-phenoxazine Chemical compound C1=CC=C2NC3=CC=CC=C3OC2=C1 TZMSYXZUNZXBOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 1
- HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 1H-benzimidazole Chemical compound C1=CC=C2NC=NC2=C1 HYZJCKYKOHLVJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 1H-indene Natural products C1=CC=C2CC=CC2=C1 YBYIRNPNPLQARY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHUHBFMZVCOEOV-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazo[4,5-c]pyridin-4-amine Chemical compound NC1=NC=CC2=C1N=CN2 UHUHBFMZVCOEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XGDRLCRGKUCBQL-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-4,5-dicarbonitrile Chemical compound N#CC=1N=CNC=1C#N XGDRLCRGKUCBQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 2-(1-adamantyl)-n-[2-[2-(2-hydroxyethylamino)ethylamino]quinolin-5-yl]acetamide Chemical compound C1C(C2)CC(C3)CC2CC13CC(=O)NC1=CC=CC2=NC(NCCNCCO)=CC=C21 FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSHACTSJHMKXTE-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminopropyl)-7h-purin-6-amine Chemical compound CC(N)CC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 QSHACTSJHMKXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VCUXVXLUOHDHKK-UHFFFAOYSA-N 2-(2-aminopyrimidin-4-yl)-4-(2-chloro-4-methoxyphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide Chemical compound ClC1=CC(OC)=CC=C1C1=C(C(N)=O)SC(C=2N=C(N)N=CC=2)=N1 VCUXVXLUOHDHKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(2-cyclopropylethoxy)-9-(2-hydroxy-2-methylpropyl)-1h-phenanthro[9,10-d]imidazol-2-yl]-5-fluorobenzene-1,3-dicarbonitrile Chemical compound C1=C2C3=CC(CC(C)(O)C)=CC=C3C=3NC(C=4C(=CC(F)=CC=4C#N)C#N)=NC=3C2=CC=C1OCCC1CC1 PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- JRYMOPZHXMVHTA-DAGMQNCNSA-N 2-amino-7-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-one Chemical compound C1=CC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O JRYMOPZHXMVHTA-DAGMQNCNSA-N 0.000 description 1
- YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 2-amino-9-[(1S,6R,8R,9S,10R,15R,17R,18R)-8-(6-aminopurin-9-yl)-9,18-difluoro-3,12-dihydroxy-3,12-bis(sulfanylidene)-2,4,7,11,13,16-hexaoxa-3lambda5,12lambda5-diphosphatricyclo[13.2.1.06,10]octadecan-17-yl]-1H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC2=C(N=CN2[C@@H]2O[C@@H]3COP(S)(=O)O[C@@H]4[C@@H](COP(S)(=O)O[C@@H]2[C@@H]3F)O[C@H]([C@H]4F)N2C=NC3=C2N=CN=C3N)C(=O)N1 YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 0.000 description 1
- NJDPBWLDVFCXNP-UHFFFAOYSA-N 2-cyanoethyl dihydrogen phosphate Chemical group OP(O)(=O)OCCC#N NJDPBWLDVFCXNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-6-[6-methoxy-4-[(3-phenylmethoxyphenyl)methoxy]-1-benzofuran-2-yl]imidazo[2,1-b][1,3,4]thiadiazole Chemical compound N1=C2SC(OC)=NN2C=C1C(OC1=CC(OC)=C2)=CC1=C2OCC(C=1)=CC=CC=1OCC1=CC=CC=C1 LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004200 2-methoxyethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- CFIBTBBTJWHPQV-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-n-(6-oxo-3,7-dihydropurin-2-yl)propanamide Chemical compound N1C(NC(=O)C(C)C)=NC(=O)C2=C1N=CN2 CFIBTBBTJWHPQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000094 2-phenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- DFRAKBCRUYUFNT-UHFFFAOYSA-N 3,8-dicyclohexyl-2,4,7,9-tetrahydro-[1,3]oxazino[5,6-h][1,3]benzoxazine Chemical compound C1CCCCC1N1CC(C=CC2=C3OCN(C2)C2CCCCC2)=C3OC1 DFRAKBCRUYUFNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 4-[[(1s)-2-[(e)-3-[3-chloro-2-fluoro-6-(tetrazol-1-yl)phenyl]prop-2-enoyl]-5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-3,4-dihydro-1h-isoquinoline-1-carbonyl]amino]benzoic acid Chemical compound O=C1CN(C)CCN1C1=CC=CC2=C1CCN(C(=O)\C=C\C=1C(=CC=C(Cl)C=1F)N1N=NN=C1)[C@@H]2C(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- PHOJOSOUIAQEDH-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxypentanoic acid Chemical compound OCCCCC(O)=O PHOJOSOUIAQEDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-sulfanylidene-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound CC1=CNC(=S)NC1=O ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)NC1=O UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RSIWALKZYXPAGW-NSHDSACASA-N 6-(3-fluorophenyl)-3-methyl-7-[(1s)-1-(7h-purin-6-ylamino)ethyl]-[1,3]thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one Chemical compound C=1([C@@H](NC=2C=3N=CNC=3N=CN=2)C)N=C2SC=C(C)N2C(=O)C=1C1=CC=CC(F)=C1 RSIWALKZYXPAGW-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1h-pyrimidine-2-thione Chemical compound NC1=CC=NC(S)=N1 DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 6-amino-5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)N=C1N QNNARSZPGNJZIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GDUANFXPOZTYKS-UHFFFAOYSA-N 6-bromo-8-[(2,6-difluoro-4-methoxybenzoyl)amino]-4-oxochromene-2-carboxylic acid Chemical compound FC1=CC(OC)=CC(F)=C1C(=O)NC1=CC(Br)=CC2=C1OC(C(O)=O)=CC2=O GDUANFXPOZTYKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJBMMMJOXRZENQ-UHFFFAOYSA-N 6H-pyrrolo[2,3-f]quinoline Chemical compound c1cc2ccc3[nH]cccc3c2n1 NJBMMMJOXRZENQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 7-deazaguanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1CC=N2 LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRYKDUPGBWLLHO-UHFFFAOYSA-N 8-azaadenine Chemical compound NC1=NC=NC2=NNN=C12 HRYKDUPGBWLLHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 241001556567 Acanthamoeba polyphaga mimivirus Species 0.000 description 1
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 208000003808 Amyloid Neuropathies Diseases 0.000 description 1
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- 108010027070 Apolipoproteins C Proteins 0.000 description 1
- 102000018655 Apolipoproteins C Human genes 0.000 description 1
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101100220616 Caenorhabditis elegans chk-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940126657 Compound 17 Drugs 0.000 description 1
- 229940127007 Compound 39 Drugs 0.000 description 1
- XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N Cyanide Chemical compound N#[C-] XFXPMWWXUTWYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 125000000824 D-ribofuranosyl group Chemical group [H]OC([H])([H])[C@@]1([H])OC([H])(*)[C@]([H])(O[H])[C@]1([H])O[H] 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N DL-menthol Chemical group CC(C)C1CCC(C)CC1O NOOLISFMXDJSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036462 Delta-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100220202 Drosophila melanogaster Cds gene Proteins 0.000 description 1
- 102100024827 Dynamin-1-like protein Human genes 0.000 description 1
- 108700011636 Dystransthyretinemic Euthyroidal Hyperthyroxinemia Proteins 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000736355 Euthyroides Species 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 101000897480 Homo sapiens C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000928537 Homo sapiens Delta-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000909218 Homo sapiens Dynamin-1-like protein Proteins 0.000 description 1
- 101001033233 Homo sapiens Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 101001076408 Homo sapiens Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000772194 Homo sapiens Transthyretin Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 206010022004 Influenza like illness Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N N-Pentanol Chemical compound CCCCCO AMQJEAYHLZJPGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSTPHDDSCGGHJD-PPRREVKSSA-N N-[(2R,3R,4S,5S)-6-hydroxy-4,5-dimethoxy-2-methyloxan-3-yl]formamide Chemical compound CO[C@@H]1C(O)O[C@H](C)[C@@H](NC=O)[C@@H]1OC OSTPHDDSCGGHJD-PPRREVKSSA-N 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 102000014160 PTEN Phosphohydrolase Human genes 0.000 description 1
- 108010011536 PTEN Phosphohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010038910 Retinitis Diseases 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 108091005487 SCARB1 Proteins 0.000 description 1
- 102100037118 Scavenger receptor class B member 1 Human genes 0.000 description 1
- 241001479493 Sousa Species 0.000 description 1
- 101000874347 Streptococcus agalactiae IgA FC receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- RTMWIZOXNKJHRE-UHFFFAOYSA-N Tigogenin Natural products CC1COC2CC(C)(OC12)C3CCC4C5CCC6CC(O)CCC6(C)C5CCC34C RTMWIZOXNKJHRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029290 Transthyretin Human genes 0.000 description 1
- DWCSNWXARWMZTG-UHFFFAOYSA-N Trigonegenin A Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CCC(O)C=C4CCC3C2C2)C)C2OC11CCC(C)CO1 DWCSNWXARWMZTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N Valeric acid Natural products CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- OVPIZHVSWNOZMN-IBEHDNSVSA-N [(2r,3r,4r,5r,6s)-5-acetamido-3,4,6-triacetyloxyoxan-2-yl]methyl acetate Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](OC(C)=O)O[C@H](COC(C)=O)[C@H](OC(C)=O)[C@@H]1OC(C)=O OVPIZHVSWNOZMN-IBEHDNSVSA-N 0.000 description 1
- PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N [(3r,4ar,5s,6s,6as,10s,10ar,10bs)-3-ethenyl-10,10b-dihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1-oxo-6-(2-pyridin-2-ylethylcarbamoyloxy)-5,6,6a,8,9,10-hexahydro-2h-benzo[f]chromen-5-yl] acetate Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(O[C@](C)(CC(=O)[C@]2(O)[C@@]2(C)[C@@H](O)CCC(C)(C)[C@@H]21)C=C)C)OC(=O)C)C(=O)NCCC1=CC=CC=N1 PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XVIYCJDWYLJQBG-UHFFFAOYSA-N acetic acid;adamantane Chemical compound CC(O)=O.C1C(C2)CC3CC1CC2C3 XVIYCJDWYLJQBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 229960001997 adefovir Drugs 0.000 description 1
- WOZSCQDILHKSGG-UHFFFAOYSA-N adefovir depivoxil Chemical compound N1=CN=C2N(CCOCP(=O)(OCOC(=O)C(C)(C)C)OCOC(=O)C(C)(C)C)C=NC2=C1N WOZSCQDILHKSGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005600 alkyl phosphonate group Chemical group 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N alpha-acetylene Natural products C#C HSFWRNGVRCDJHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000002344 aminooxy group Chemical group [H]N([H])O[*] 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 229960003473 androstanolone Drugs 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003529 anticholesteremic agent Substances 0.000 description 1
- 229940127226 anticholesterol agent Drugs 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- CKDOCTFBFTVPSN-UHFFFAOYSA-N borneol Chemical group C1CC2(C)C(C)CC1C2(C)C CKDOCTFBFTVPSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940116229 borneol Drugs 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004369 butenyl group Chemical group C(=CCC)* 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001369 canonical nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000001951 carbamoylamino group Chemical group C(N)(=O)N* 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000013626 chemical specie Substances 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 235000021310 complex sugar Nutrition 0.000 description 1
- 229940126543 compound 14 Drugs 0.000 description 1
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 1
- 229940127573 compound 38 Drugs 0.000 description 1
- 229940126540 compound 41 Drugs 0.000 description 1
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 125000000596 cyclohexenyl group Chemical group C1(=CCCCC1)* 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 125000002704 decyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- PPJXIHLNYDVTDI-UHFFFAOYSA-N dicloralurea Chemical compound ClC(Cl)(Cl)C(O)NC(=O)NC(O)C(Cl)(Cl)Cl PPJXIHLNYDVTDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001993 dienes Chemical class 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- RJBIAAZJODIFHR-UHFFFAOYSA-N dihydroxy-imino-sulfanyl-$l^{5}-phosphane Chemical compound NP(O)(O)=S RJBIAAZJODIFHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQLVFSAGQJTQCK-VKROHFNGSA-N diosgenin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)CC[C@H](O)CC4=CC[C@H]3[C@@H]2C1)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 WQLVFSAGQJTQCK-VKROHFNGSA-N 0.000 description 1
- WQLVFSAGQJTQCK-UHFFFAOYSA-N diosgenin Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CCC(O)CC4=CCC3C2C2)C)C2OC11CCC(C)CO1 WQLVFSAGQJTQCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N disiloxane Chemical class [SiH3]O[SiH3] KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 1
- DTGKSKDOIYIVQL-UHFFFAOYSA-N dl-isoborneol Chemical group C1CC2(C)C(O)CC1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000000021 endosomolytic effect Effects 0.000 description 1
- GWNFQAKCJYEJEW-UHFFFAOYSA-N ethyl 3-[8-[[4-methyl-5-[(3-methyl-4-oxophthalazin-1-yl)methyl]-1,2,4-triazol-3-yl]sulfanyl]octanoylamino]benzoate Chemical compound CCOC(=O)C1=CC(NC(=O)CCCCCCCSC2=NN=C(CC3=NN(C)C(=O)C4=CC=CC=C34)N2C)=CC=C1 GWNFQAKCJYEJEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- XCWFZHPEARLXJI-UHFFFAOYSA-N fomivirsen Chemical compound C1C(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC(CO)C1OP(O)(=S)OCC1OC(N(C)C(=O)\N=C(\N)C=C)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CC1OP(O)(=S)OCC1OC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)CC1OP(O)(=S)OCC(C(C1)OP(S)(=O)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP(O)(=S)OCC2C(CC(O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)OC1N1C=C(C)C(=O)NC1=O XCWFZHPEARLXJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001447 fomivirsen Drugs 0.000 description 1
- DLKYYJFLRUUGHJ-SSJCJZGYSA-A fomivirsen sodium Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP([S-])(=O)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP([O-])(=S)O[C@@H]2[C@H](O[C@H](C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)CO)[C@@H](OP([O-])(=S)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OP([O-])(=S)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)OP([O-])(=S)OC[C@@H]2[C@H](C[C@@H](O2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)O)C1 DLKYYJFLRUUGHJ-SSJCJZGYSA-A 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- OFMXGFHWLZPCFL-SVRPQWSVSA-N friedelin Chemical compound C([C@H]1[C@]2(C)CC[C@@]34C)C(C)(C)CC[C@]1(C)CC[C@]2(C)[C@H]4CC[C@@]1(C)[C@H]3CCC(=O)[C@@H]1C OFMXGFHWLZPCFL-SVRPQWSVSA-N 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002541 furyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 230000000574 ganglionic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000001553 hepatotropic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 102000052611 human IL6 Human genes 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- 125000002349 hydroxyamino group Chemical group [H]ON([H])[*] 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 201000003968 hyperthyroxinemia Diseases 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 125000003392 indanyl group Chemical group C1(CCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 125000003454 indenyl group Chemical group C1(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000004189 ion pair high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N lamivudine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1O[C@@H](CO)SC1 JTEGQNOMFQHVDC-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- 229960001627 lamivudine Drugs 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N lnp023 Chemical compound C1([C@H]2N(CC=3C=4C=CNC=4C(C)=CC=3OC)CC[C@@H](C2)OCC)=CC=C(C(O)=O)C=C1 RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229940041290 mannose Drugs 0.000 description 1
- 125000002960 margaryl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000010120 metabolic dysregulation Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 150000002780 morpholines Chemical class 0.000 description 1
- 101150018041 msd1 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- XBDUZBHKKUFFRH-UHFFFAOYSA-N n-(2-oxo-1h-pyrimidin-6-yl)benzamide Chemical compound OC1=NC=CC(NC(=O)C=2C=CC=CC=2)=N1 XBDUZBHKKUFFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FMKLITBCOZWOEX-UHFFFAOYSA-N n-(5-methyl-2-oxo-1h-pyrimidin-6-yl)benzamide Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1NC(=O)C1=CC=CC=C1 FMKLITBCOZWOEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N nazartinib Chemical compound C1N(C(=O)/C=C/CN(C)C)CCCC[C@H]1N1C2=C(Cl)C=CC=C2N=C1NC(=O)C1=CC=NC(C)=C1 IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N ombitasvir Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NC1=CC=C([C@H]2N([C@@H](CC2)C=2C=CC(NC(=O)[C@H]3N(CCC3)C(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)C)=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)C(C)(C)C)C=C1 PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 125000001715 oxadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002971 oxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- HUPQYPMULVBQDL-UHFFFAOYSA-N pentanoic acid Chemical compound CCCCC(O)=O.CCCCC(O)=O HUPQYPMULVBQDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229950000688 phenothiazine Drugs 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M phosphonate Chemical compound [O-]P(=O)=O UEZVMMHDMIWARA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N phosphoramidic acid Chemical compound NP(O)(O)=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005543 phthalimide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 229940068886 polyethylene glycol 300 Drugs 0.000 description 1
- 229920000166 polytrimethylene carbonate Chemical group 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 208000022256 primary systemic amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 125000004368 propenyl group Chemical group C(=CC)* 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- IGFXRKMLLMBKSA-UHFFFAOYSA-N purine Chemical compound N1=C[N]C2=NC=NC2=C1 IGFXRKMLLMBKSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003373 pyrazinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003226 pyrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N pyridin-2-ol Chemical compound OC1=CC=CC=N1 UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003581 pyridoxal Drugs 0.000 description 1
- 235000008164 pyridoxal Nutrition 0.000 description 1
- 239000011674 pyridoxal Substances 0.000 description 1
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- VTGOHKSTWXHQJK-UHFFFAOYSA-N pyrimidin-2-ol Chemical compound OC1=NC=CC=N1 VTGOHKSTWXHQJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000714 pyrimidinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000168 pyrrolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 description 1
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011607 retinol Substances 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 125000000475 sulfinyl group Chemical group [*:2]S([*:1])=O 0.000 description 1
- 125000005864 sulfonamidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006277 sulfonation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004962 sulfoxyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229960005311 telbivudine Drugs 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC[14C](O)=O TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N 0.000 description 1
- 125000001712 tetrahydronaphthyl group Chemical group C1(CCCC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 1
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 125000001113 thiadiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000335 thiazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005309 thioalkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 125000000876 trifluoromethoxy group Chemical group FC(F)(F)O* 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- SYFNOXYZEIYOSE-UHFFFAOYSA-N uvaol Natural products CC1CCC2(O)CCC3(C)C(=CCC4(C)C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC34C)C2C1C SYFNOXYZEIYOSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
- C12Y301/03048—Protein-tyrosine-phosphatase (3.1.3.48)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
- C12N2310/113—Antisense targeting other non-coding nucleic acids, e.g. antagomirs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
- C12N2310/315—Phosphorothioates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/322—2'-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
- C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/334—Modified C
- C12N2310/3341—5-Methylcytosine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3511—Conjugate intercalating or cleaving agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3513—Protein; Peptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
- C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Liquid Crystal Substances (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
В изобретении предложены олигомерные соединения с конъюгированными группами. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерные соединения конъюгированы с N-ацетилгалактозамином.
Description
Настоящее изобретение зарегистрировано вместе с перечнем последовательностей в электронном формате. Перечень последовательностей представлен в виде файла под названием BIOL0248WOSEQ_ST25.txt, созданного 1 мая 2014 г., размером 16 Кб. Информация о перечне последовательностей в электронном формате в полном объеме включена в настоящий документ посредством ссылки.
Уровень техники
Принцип, лежащий в основе антисмысловой технологии, заключается в том, что антисмысловое соединение гибридизуется с целевой нуклеиновой кислотой и модулирует количество, активность и/или функцию целевой нуклеиновой кислоты. Например, в некоторых случаях антисмысловые соединения приводят к изменению транскрипции или трансляции мишени. Такое модулирование экспрессии может быть достигнуто, например, разрушением целевой мРНК или ингибированием по механизму замещения. Пример модулирования целевой функции РНК за счет разрушения представляет собой разрушение за счет РНКазы H целевой РНК при гибридизации с ДНК-подобным антисмысловым соединением. Другой пример модулирования генной экспрессии за счет направленного разрушения представляет собой РНКинтерференция (РНКи). РНКи относится к антисмысловому сайленсингу гена по механизму, в котором применяется РНК-индуцируемый комплекс сайленсинга (RISC). Дополнительный пример модулирования целевой функции РНК представляет собой механизм замещения, такой как использует в естественных условиях микроРНК. МикроРНК представляют собой небольшие некодирующие РНК, которые регулируют экспрессию РНК, кодирующих белки. Связывание антисмыслового соединения с микроРНК препятствует связыванию микроРНК с ее матричными РНК мишенями и, следовательно, затрудняет функцию микроРНК. МикроРНК-миметики могут усиливать естественную функцию микроРНК. Некоторые антисмысловые соединения изменяют сплайсинг пре-мРНК. Независимо от конкретного механизма, специфичность в отношении последовательностей делает антисмысловые соединения перспективными в качестве средств для подтверждения наличия цели и функционализации генов, а также в качестве терапевтических средств для селективного модулирования экспрессии генов, участвующих в патогенезе заболеваний.
Антисмысловая технология представляет собой эффективный способ модулирования экспрессии одного или более специфических генных продуктов и, следовательно, может быть признана исключительно подходящей в ряде терапевтических, диагностических и исследовательских применений. Химически модифицированные нуклеозиды могут быть внедрены в антисмысловые соединения для усиления одного или более свойств, таких как устойчивость к нуклеазе, фармакокинетика или аффинность к целевой нуклеиновой кислоте. В 1998 г. антисмысловое соединение Vitravene® (фомивирсен; разработанный компанией Isis Pharmaceuticals Inc., Карлсбад, штат Калифорния) стал первым антисмысловым лекарством, получившим разрешение на продажу от Администрации США по пищевым продуктам и лекарственным веществам (FDA), и в настоящее время представляет собой средство для лечения вызванного цитомегалогенвирусом (CMV) ретинита у пациентов со СПИДом.
Новые химические модификации обладают улучшенной активностью и эффективностью антисмысловых соединений, раскрывая потенциал для пероральной доставки, а также для усовершенствования подкожного введения, снижения возможных побочных эффектов, и приводят к улучшению удобства для пациента. Химические модификации, усиливающие активность антисмысловых соединений, позволяют осуществлять введение более низких доз, что снижает возможность токсичности, а также уменьшает общую стоимость лечения. Модификации, увеличивающие устойчивость к разрушению, приводят к более медленному выведению из организма, обеспечивая возможность менее частого введения доз. Различные типы химических модификаций могут быть комбинированы в одном соединении для дальнейшей оптимизации эффективности соединения.
Сущность изобретения
В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены конъюгированные антисмысловые соединения. В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены конъюгированные антисмысловые соединения, содержащие антисмысловый олигонуклеотид, комплементарный транскрипту нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены способы, включающие контакт клетки с конъюгированным антисмысловым соединением, содержащим антисмысловый олигонуклеотид, комплементарный транскрипту нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены способы, включающие контакт клетки с конъюгированным антисмысловым соединением, содержащим антисмысловый олигонуклеотид, и уменьшение количества или активности транскрипта нуклеиновой кислоты в клетке.
Ранее был описан асиалогликопротеиновый рецептор (ASGP-R); см., например, Park et al., PNAS, том 102, № 47, с. 17125-17129 (2005). Такие рецепторы экспрессируются на клетках печени, в частности гепатоцитах. Кроме того, было показано, что соединения, содержащие кластеры трех Nацетилгалактозаминовых (GalNAc) лигандов, способны связываться с ASGP-R, приводя к захвату указанного соединения в клетку; см., например, Khorev et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry, 16, 9, c. 5216-5231 (май, 2008). Соответственно конъюгаты, содержащие такие кластеры GalNAc, применяли для
- 1 031393 облегчения захвата некоторых соединений в клетки печени, в частности гепатоциты. Например, было показано, что некоторые GalNAc-содержащие конъюгаты увеличивают активность дуплексных миРНК соединений в клетках печени in vivo. В таких случаях GalNAc-содержащий конъюгат, как правило, прикрепляется к смысловой спирали дуплекса миРНК. Поскольку смысловая спираль отбрасывается перед окончательной гибридизацией антисмысловой спирали с целевой нуклеиновой кислотой, то маловероятно, что такой конъюгат будет влиять на активность. Как правило, конъюгат присоединяется к З'-концу смысловой спирали миРНК; см., например, патент США 8106022. Некоторые конъюгирующие группы, описанные в настоящем документе, более активны и/или синтезируются легче, чем конъюгирующие группы, описанные ранее.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения конъюгаты присоединяются к одноцепочечным антисмысловым соединениям, включая, но не ограничиваясь ими, антисмысловые соединения на основе РНКазы H и антисмысловые соединения, которые изменяют сплайсинг целевой нуклеиновой кислоты пре-мРНК. В таких вариантах реализации изобретения конъюгат должен оставаться присоединенным к антисмысловому соединению достаточно долго для обеспечения преимущества (улучшенного захвата в клетки), но затем он должен либо расщепляться, либо иным образом не препятствовать последующим стадиям, необходимым для активности, таким как гибридизация с целевой нуклеиновой кислотой и взаимодействие с РНКазой H или ферментами, связанными со сплайсингом или модулированием сплайсинга. Такой баланс свойств более важен при подготовке одноцепочечных антисмысловых соединений, чем соединений миРНК, где конъюгат может быть просто присоединен к смысловой спирали. В настоящем документе описаны одноцепочечные антисмысловые соединения, обладающие улучшенной активностью в клетках печени in vivo, по сравнению с таким же антисмысловым соединением, не имеющим конъюгата. Учитывая необходимый баланс свойств для этих соединений, такая улучшенная активность является неожиданной.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы по настоящему документу содержат расщепляемый фрагмент. Как было отмечено, не ограничиваясь каким-либо механизмом, логично, что конъюгат должен сохраняться у соединения достаточно долго для обеспечения усиления захвата, но после этого желательно, чтобы некоторая его часть или, в идеале, весь конъюгат расщеплялся, выделяя исходное соединение (например, антисмысловое соединение) в его наиболее активной форме. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой расщепляемый нуклеозид. Такие варианты реализации изобретения используют эндогенные нуклеазы в клетке за счет присоединения остальной части конъюгата (кластера) к антисмысловому олигонуклеотиду через нуклеозид при помощи одной или более расщепляемых связей, таких как фосфодиэфирные связи. В некоторых вариантах реализации изобретения кластер связан с расщепляемым нуклеозидом через фосфодиэфирную связь. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый нуклеозид присоединен к антисмысловому олигонуклеотиду (антисмысловому соединению) фосфодиэфирной связью. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующая группа может содержать два или три расщепляемых нуклеозида. В таких вариантах реализации изобретения указанные расщепляемые нуклеозиды связаны друг с другом, с антисмысловым соединением и/или с кластером посредством расщепляемых связей (таких как фосфодиэфирная связь). Некоторые конъюгаты по настоящему документу не содержат расщепляемый нуклеозид, а вместо этого содержат расщепляемую связь. Показано, что достаточное расщепление конъюгата из олигонуклеотида обеспечивается, по меньшей мере, за счет одной связи, которая легко поддается расщеплению в клетке (расщепляемая связь).
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения представляют собой пролекарства. Такие пролекарства вводят животному, и они в конечном итоге метаболизируются до более активной формы. Например, конъюгированные антисмысловые соединения расщепляются с удалением всего или части конъюгата, приводя к активной (или более активной) форме антисмыслового соединения, не содержащего всего или части конъюгата.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгаты присоединены на 5'-конце олигонуклеотида. Некоторые такие 5'-конъюгаты расщепляются более эффективно, чем аналоги, имеющие такую же конъюгирующую группу, присоединенную на 3'-конце.
В некоторых вариантах реализации изобретения улучшенная активность может коррелировать с улучшенным расщеплением. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды, содержащие конъюгат на 5'-конце, обладают более высокой эффективностью, чем олигонуклеотиды, содержащие конъюгат на 3'-конце (см., например, примеры 56, 81, 83 и 84). Кроме того, 5'-присоединение обеспечивает более простой синтез олигонуклеотида. Как правило, олигонуклеотиды синтезируют на твердой подложке в направлении от 3' к 5'. Для получения 3'-конъюгированного олигонуклеотида, как правило присоединяют предварительно конъюгированный 3'-нуклеозид к твердой подложке, а затем обычным путем создают олигонуклеотид. Однако присоединение такого конъюгированного нуклеозида к твердой подложке усложняет синтез. Кроме того, применяя такой подход, конъюгат затем присутствует в ходе всего синтеза олигонуклеотида и может разрушаться во время последующих стадий или может ограничивать типы реакций и реагентов, которые можно применять. Применяя структуры и методики, описанные в настоящем документе для 5'-конъюгированных олигонуклеотидов, можно синтезировать
- 2 031393 олигонуклеотид при помощи стандартных автоматизированных методик и внедрять конъюгат вместе с последним (5'-крайний) нуклеозидом или после отделения олигонуклеотида от твердой подложки.
С учетом известного уровня техники и настоящего описания, специалисты в данной области техники могут легко получить любые из конъюгатов и конъюгированных олигонуклеотидов, описанных в настоящем документе. Кроме того, синтез некоторых таких конъюгатов и конъюгированных олигонуклеотидов, описанных в настоящем документе, проще и/или требует меньше стадий и, следовательно, менее дорогой, чем синтез ранее описанных конъюгатов, что дает преимущество при производстве. Например, синтез некоторых конъюгирующих групп состоит из меньшего количество синтетических стадий, что приводит к увеличению выхода по сравнению с ранее описанными группами конъюгата. Конъюгирующие группы, такие как GalNAc3-10 в примере 46 и GalNAc3-7 в примере 48, гораздо проще, чем ранее описанные конъюгаты, такие как описаны в публикациях U.S. 8106022 или U.S. 7262177, для которых необходима сборка большего количества химических промежуточных соединений. Соответственно эти и другие конъюгаты, описанные в настоящем документе, обладают преимуществом по сравнению с ранее описанными соединениями для применения с любым олигонуклеотидом, включая одноцепочечные олигонуклеотиды и любую спираль двухцепочечных олигонуклеотидов (например, миРНК).
Точно так же в настоящем документе описаны конъюгирующие группы, имеющие ровно один или два лиганда GalNAc. Как показано, такие конъюгированные группы усиливают активность антисмысловых соединений. Такие соединения гораздо проще получить, чем конъюгаты, содержащие три лиганда GalNAc. Конъюгирующие группы, содержащие один или два лиганда GalNAc, могут быть присоединены к любым антисмысловым соединениям, включая одноцепочечные олигонуклеотиды и любую спираль двухцепочечных олигонуклеотидов (например, миРНК).
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгаты, описанные в настоящем документе, существенно не изменяют некоторые показатели переносимости. Например, в настоящем документе показано, что конъюгированные антисмысловые соединения являются не более иммуногенными, чем не конъюгированные исходные соединения. Поскольку активность улучшается, то варианты реализации, в которых переносимость остается такой же (или, в действительности, если даже переносимость ухудшается лишь незначительно по сравнению с приростом активности), обладают улучшенными характеристиками для терапии.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгация позволяет изменять антисмысловые соединения так, чтобы они обладали менее выраженными последствиями в отсутствие конъюгации. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения замена одной или более тиофосфатных связей полностью тиофосфатного антисмыслового соединения на фосфодиэфирные связи приводит к улучшению некоторых показателей переносимости. Например, в некоторых случаях такие антисмысловые соединения, имеющие один или более фосфодиэфиров, являются менее иммуногенными, чем такие же соединения, в которых каждая связь представляет собой тиофосфат. Однако в некоторых случаях, как показано в примере 26, такое же замещение одной или более тиофсофатных связей на фосфодиэфирные связи приводит также к снижению клеточного захвата и/или к снижению активности. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения, описанные в настоящем документе, допускают такое изменение связей с небольшим снижением или без снижения захвата и активности по сравнению с конъюгированным полностью тиофосфатным аналогом. В действительности, в некоторых вариантах реализации, например, в примерах 44, 57, 59 и 86, олигонуклеотиды, содержащие конъюгат и по меньшей мере одну фосфодиэфирную межнуклеозидную связь, фактически демонстрируют повышенную активность in vivo даже по сравнению с полностью тиофосфатным аналогом, также содержащим такой же конъюгат. Более того, поскольку конъюгация приводит к значительному увеличению захвата/активности, то небольшое снижение такого существенного прироста может быть приемлемым для достижения улучшенной переносимости. Соответственно в некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения содержат по меньшей мере одну фосфодиэфирную связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгация антисмысловых соединений по настоящему документу приводит к улучшенной доставке, захвату и активности в гепатоцитах. Следовательно, в ткань печени доставляется большее количество соединения. Однако в некоторых вариантах реализации изобретения такая улучшенная доставка сама по себе не объясняет общего увеличения активности. В некоторых таких вариантах реализации изобретения большее количество соединения поступает в гепатоциты. В некоторых вариантах реализации изобретения даже такой улучшенный захват гепатоцитов сам по себе не объясняет общего увеличения активности. В таких вариантах реализации изобретения увеличивается продуктивный захват конъюгированного соединения. Например, как показано в примере 102, некоторые варианты реализации GalNAc-содержащих конъюгатов увеличивают обогащение антисмысловых олигонуклеотидов в гепатоцитах по сравнению с не паренхимальными клетками. Такое обогащение преимущественно для олигонуклеотидов, которые нацелены на гены, экспрессируемые в гепатоцитах.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения по настоящему документу приводят к уменьшению воздействия на почки. Например, как показано в приме
- 3 031393 ре 20, концентрации антисмысловых олигонуклеотидов, содержащих некоторые варианты реализации GalNAc-содержащих конъюгатов, в почках ниже, чем концентрации антисмысловых олигонуклеотидов, не имеющих GalNAc-содержащего конъюгата. Это имеет несколько благоприятных терапевтических эффектов. Для терапевтических показаний, в которых не требуется проявление активности в почках, воздействие на почки подвергает их риску токсичности без соответствующей пользы. Более того, высокая концентрация в почках обычно приводит к выводу соединения с мочой, обеспечивая более быстрое выведение. Соответственно для внепочечных мишеней накопление в почках является нежелательным.
В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены конъюгированные антисмысловые соединения, представленные формулой
q где А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид;
В представляет собой расщепляемый фрагмент;
С представляет собой линкер конъюгата;
D представляет собой группу ветвления;
каждый Е представляет собой связку;
каждый F представляет собой лиганд и q представляет собой целое число от 1 до 5.
На приведенной выше схеме и в аналогичных схемах в настоящем документе группа ветвления D разветвляется такое количество раз, которое необходимо для соответствия количеству групп (E-F), указанному количеством q. Так, если q = 1, то формула представляет собой
А----В----С----D----Е---F если q = 2, то формула представляет собой
если q = 4, то формула представляет собой
Е---F
Е--F если q = 5, то формула представляет собой
- 4 031393 антисмысловые соВ некоторых вариантах реализации изобретения приведены конъюгированные единения, имеющие структуру
антисмысловые соВ некоторых вариантах реализации изобретения приведены конъюгированные единения, имеющие структуру
антисмысловые соВ некоторых вариантах реализации изобретения приведены конъюгированные единения, имеющие структуру
- 5 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения приведены конъюгированные антисмысловые соединения, имеющие структуру
В вариантах реализации, имеющих более одной конкретной переменной (например, более одного m или n), если не указано иное, каждая такая конкретная переменная выбрана независимо. Следовательно, для структуры, имеющей более одного n, каждый n выбран независимо, так что они могут быть или не быть одинаковыми между собой.
Подробное описание изобретения
Следует понимать, что и приведенное выше общее описание и следующее подробное описание являются лишь иллюстративными и пояснительными, и они не ограничивают настоящее описание. В на стоящем документе использование единственного числа включает множественное число, если специально не указано иное. При использовании в настоящем документе, термин или означает и/или, если не указано иное. Кроме того, использование термина включая, а также других форм, таких как включает и включенный, не является ограничивающим. Также такие термины как элемент или компонент охватывают как элементы и компоненты, содержащие одну единицу, так и элементы и компоненты, которые содержат более одной субъединицы, если специально не указано иное.
Названия разделов, используемые в настоящем документе, предназначены лишь для организационных целей, и их не следует толковать как ограничение описанного объекта изобретения. Все документы или части документов, цитируемые в настоящей заявке, включая, но не ограничиваясь ими, патенты, патентные заявки, статьи, книги и монографии, в явной форме включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме для всех целей.
А. Определения.
При отсутствии конкретных определений номенклатура, используемая в связи с ними, а также в связи с приемами и методиками аналитической химии, синтетической органической химии, а также медицинской и фармацевтической химии, описанная в настоящем документе, является общеизвестной и общепринятой в данной области техники. Для химического синтеза и химического анализа могут быть использованы стандартные методики. Некоторые такие методики и приемы приведены, например, в публикациях Carbohydrate Modifications in Antisense Research под ред. Sangvi и Cook, American Chemical Society, федеральный округ Вашингтон, 1994 г.; Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Истон, штат Пенсильвания, 21-е изд., 2005 г. и Antisense Drug Technology, Principles, Strategies, and Applications под ред. Stanley Т. Crooke, CRC Press, Бока-Ратон, штат Флорида; а также в книге Sambrook et al., Molecular Cloning, A laboratory Manual, 2-е изд., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 г., которые включены в настоящий документ посредством ссылки для всех целей. Если это допустимо, все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, а также другие данные, упоминаемые в тексте настоящего описания, включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
Если не указано иное, следующие термины имеют следующие значения.
При использовании в настоящем документе нуклеозид означает соединение, содержащее фрагмент азотистые основания и сахарный фрагмент. Нуклеозиды включают, но не ограничиваются ими, природные нуклеозиды (которые находятся в ДНК и РНК) и модифицированные нуклеозиды. Нуклеозиды могут быть связаны с фосфатным фрагментом.
При использовании в настоящем документе химическая модификация означает химическое отличие в соединении по сравнению с природным аналогом. Химические модификации олигонуклеотидов включают нуклеозидные модификации (включая модификации сахарного фрагмента и модификации азотистые основания) и модификации межнуклеозидных связей. В отношении олигонуклеотида химическая модификация включает не только отличия в последовательности азотистых оснований.
При использовании в настоящем документе фуранозил означает структуру, содержащую 5 членное кольцо, содержащее четыре атома углерода и один атом кислорода.
- 6 031393
При использовании в настоящем документе природный сахарный фрагмент означает рибофуранозил, встречающийся в природной РНК, или дезоксирибофуранозил, встречающийся в природной ДНК.
При использовании в настоящем документе сахарный фрагмент означает природный сахарный фрагмент или модифицированный сахарный фрагмент нуклеозида.
При использовании в настоящем документе модифицированный сахарный фрагмент означает замещенный сахарный фрагмент или заменитель сахара.
При использовании в настоящем документе замещенный сахарный фрагмент означает фуранозил, который не является природным сахарным фрагментом. Замещенные сахарные фрагменты включают, но не ограничиваются ими, фуранозилы, содержащие заместители в 2'-положении, З'-положении, 5'положении и/или 4'-положении. Некоторые замещенные сахарные фрагменты представляют собой бициклические сахарные фрагменты.
При использовании в настоящем документе 2'-замещенный сахарный фрагмент означает фуранозил, содержащий заместитель в 2'-положении, отличный от H или OH. Если не указано иное, то 2'замещенный сахарный фрагмент не является бициклическим сахарным фрагментом (т.е. 2'-заместитель 2'-замещенного сахарного фрагмента не образует мостик с другим атомом радикала фуранозного кольца).
При использовании в настоящем документе MOE означает -OCH2CH2OCH3.
При использовании в настоящем документе 2'-F нуклеозид относится к нуклеозиду, содержащему сахар, который содержит фтор в 2'-положении. Если не указано иное, то фтор в 2'-F нуклеозиде находится в рибо-положении (заменяя OH природной рибозы).
При использовании в настоящем документе термин заменитель сахара означает структуру, которая не содержит фуранозила и способна заменять природный сахарный фрагмент нуклеозида, так что образующиеся нуклеозидные субъединицы могут связываться вместе и/или связываться с другими нуклеозидами с образованием олигомерного соединения, которое может гибридизоваться с комплементарным олигомерным соединением. Такие струтуры включают кольца, содержащие другое количество атомов, чем фуранозил (например, 4, 6 или 7-членные кольца); замену кислорода фуранозила некислородным атомом (например, углеродом, серой или азотом); или одновременное изменение количество атомов и замену кислорода. Такие структуры также могут содержать замещения, соответствующие замещениям, описанным для замещенных сахарных фрагментов (например, 6-членные карбоциклические бициклические заменители сахара, необязательно содержащие дополнительные заместители). Заменители сахара включают также более сложные сахарные заместители (например, некольцевые системы пептидной нуклеиновой кислоты). Заменители сахара включают, без ограничения, морфолино, циклогексенилы и циклогекситолы.
При использовании в настоящем документе бициклический сахарный фрагмент означает модифицированный сахарный фрагмент, содержащий 4-7-членное кольцо (включая, но не ограничиваясь фуранозилом), содержащее мостик, связывающий два атома 4-7-членного кольца с образованием второго кольца, что приводит к получению бициклической структуры. В некоторых вариантах реализации изобретения 4-7-членное кольцо представляет собой сахарное кольцо. В некоторых вариантах реализации изобретения 4-7-членное кольцо представляет собой фуранозил. В некоторых таких вариантах реализации изобретения мостик соединяет 2'-углерод и 4'-углерод фуранозила.
При использовании в настоящем документе, нуклеотид означает нуклеозид, дополнительно содержащий фосфатную связывающую группу. При использовании в настоящем документе, связанные нуклеозиды могут быть или не быть связаны фосфатными связями и, следовательно, включают, но не ограничиваются ими, связанные нуклеотиды. При использовании в настоящем документе, связанные нуклеозиды представляют собой нуклеозиды, которые связаны в непрерывную последовательность (т.е. между связанными нуклеозидами нет дополнительных нуклеозидов).
При использовании в настоящем документе азотистое основание означает группу атомов, которая может быть связана с сахарным фрагментом с образованием нуклеозида, который может быть внедрен в олигонуклеотид, и при этом указанная группа атомов может связываться с комплементарным природным азотистым основанием другого олигонуклеотида или нуклеиновой кислоты. Азотистые основания могут быть природными или могут быть модифицированными.
При использовании в настоящем документе термины немодифицированное азотистое основание или природное азотистое основание означают природные гетероциклические азотистые основания РНК или ДНК: пуриновые основания аденин (A) и гуанин (G) и пиримидиновые основания тимин (T), цитозин (C) (включая 5-метил C) и урацил (U).
При использовании в настоящем документе модифицированное азотистое основание означает любое азотистое основание, которое не является природным азотистым основанием.
При использовании в настоящем документе модифицированный нуклеозид означает нуклеозид, содержащий по меньшей мере одну химическую модификацию по сравнению с природными нуклеозидами РНК или ДНК. Модифицированные нуклеозиды содержат модифицированный сахарный фрагмент и/или модифицированное азотистое основание.
При использовании в настоящем документе бициклический нуклеозид или BNA означает нук
- 7 031393 леозид, содержащий бициклический сахарный фрагмент.
При использовании в настоящем документе стерически затрудненный этил-нуклеозид или cEt означает нуклеозид, содержащий бициклический сахарный фрагмент, который содержит мостик 4'CH(CH3)-O-2'.
При использовании в настоящем документе нуклеозид закрытой нуклеиновой кислоты или LNA означает нуклеозид, содержащий бициклический сахарный фрагмент, который содержит мостик 4'-CH2O-2'.
При использовании в настоящем документе 2'-замещенный нуклеозид означает нуклеозид, содержащий заместитель в 2'-положении, отличный от H или OH. Если не указано иное, то 2'-замещенный нуклеозид не является бициклическим нуклеозидом.
При использовании в настоящем документе дезоксинуклеозид означает нуклеозид, содержащий 2'-H фуранозный сахарный фрагмент, находящийся в природных дезоксирибонуклеозидах (ДНК). В некоторых вариантах реализации изобретения 2'-дезоксинуклеозид может содержать модифицированное азотистое основание или может содержать азотистое основание РНК (например, урацил).
При использовании в настоящем документе олигонуклеотид означает соединение, содержащее множество связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит один или более немодифицированных рибонуклеозидов (РНК) и/или немодифицированных дезоксирибонуклеозидов (ДНА), и/или один или более модифицированных нуклеозидов.
При использовании в настоящем документе олигонуклеозид означает олигонуклеотид, в котором ни один из межнуклеозидных связей не содержит атом фосфора. При использовании в настоящем документе олигонуклеотиды включают олигонуклеозиды.
При использовании в настоящем документе модифицированный олигонуклеотид означает олигонуклеотид, содержащий по меньшей мере один модифицированный нуклеозид и/или по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь.
При использовании в настоящем документе связь или связывающая группа означает группу атомов, которая связывает вместе две или более других групп атомов.
При использовании в настоящем документе межнуклеозидная связь означает ковалентную связь между соседними нуклеозидами в олигонуклеотиде.
При использовании в настоящем документе природная межнуклеозидная связь означает фосфодиэфирную связь 3' с 5'.
При использовании в настоящем документе модифицированная межнуклеозидная связь означает любую межнуклеозидную связь, отличную от природной межнуклеозидной связи.
При использовании в настоящем документе концеваяй межнуклеозидная связь означает связь между последними двумя нуклеозидами олигонуклеотида или его определенной области.
При использовании в настоящем документе фосфорная связывающая группа означает связывающую группу, содержащую атом фосфора. Фосфорные связывающие группы включают, без ограничения, группы, имеющие формулу
Т
К.
I Rb=R_Rc Rd Yw где Ra и Rd, каждый независимо, представляют собой О, S, CH2, NH или NJ1, где J1 представляет собой C1-C6 алкил или замещенный C1-C6 алкил;
Rb представляет собой О или S;
Rc представляет собой OH, SH, C1-C6 алкил, замещенный C1-C6 алкил, C1-C6 алкокси, замещенный C1-C6 алкокси, амино или замещенный амино; и
J1 представляет собой Rb представляет собой О или S.
Фосфорные связывающие группы включают, без ограничения, фосфодиэфир, тиофосфат, дитиофосфат, фосфонат, фосфорамидат, фосфортиоамидат, тионоалкилфосфонат, фосфотриэфиры, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфат.
При использовании в настоящем документе, межнуклеозидная фосфорная связывающая группа означает фосфорную связывающую группу, которая напрямую связывает два нуклеозида.
При использовании в настоящем документе, не межнуклеозидная фосфорная связывающая группа означает фосфорную связывающую группу, которая не связывает напрямую два нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения не межнуклеозидная фосфорная связывающая группа связывает нуклеозид с группой, отличной от нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения не межнуклеозидная фосфорная связывающая группа связывает две группы, ни одна из которых не является нуклеозидом.
При использовании в настоящем документе, нейтральная связывающая группа означает связывающую группу, которая не имеет заряда. Нейтральные связывающие группы включают, без ограниче
- 8 031393 ния, фосфотриэфиры, метилфосфонаты, MMI (-CH2-N(CH3)-O-), амид-3 (-CH2-C(=O)-N(H)-), амид-4 (CH2-N(H)-C(=O)-), формацеталь (-O-CH2-O-) и тиоформацеталь (-S-CH2-O-). Дополнительные нейтральные связывающие группы включают неионные связи, содержащие силокасан (диалкилсилоксан), карбоновый сложный эфир, карбоксамид, сульфид, сульфоновый сложный эфир и амиды (см., например, Carbohydrate Modifications in Antisense Research; под ред. Y.S. Sanghvi и P.D. Cook, ACS Symposium, серия 580; г. 3 и 4 (c. 40-65)). Дополнительные нейтральные связывающие группы включают неионные связи, содержащие смешанные составные части N, О, S и CH2.
При использовании в настоящем документе межнуклеозидная нейтральная связывающая группа означает нейтральную связывающую группу, которая напрямую связывает два нуклеозида.
При использовании в настоящем документе не межнуклеозидная нейтральная связывающая группа означает нейтральную связывающую группу, которая не связывает напрямую два нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения не межнуклеозидная нейтральная связывающая группа связывает нуклеозид с группой, отличной от нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения не межнуклеозидная нейтральная связывающая группа связывает две группы, ни одна из которых не является нуклеозидом.
При использовании в настоящем документе олигомерное соединение означает полимерную структуру, содержащую две или более субструктур. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерное соединение содержит олигонуклеотид. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерное соединение содержит одну или более конъюгированных групп и/или концевых групп. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерное соединение состоит из олигонуклеотида. Олигомерные соединения включают также природные нуклеиновые кислоты. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерное соединение содержит скелет одной или более связанных мономерных субъединиц, при этом каждая связанная мономерная субъединица прямо или косвенно присоединена к гетероциклическому основному фрагменту. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерные соединения могут содержать также мономерные субъединицы, которые не связаны с гетероциклическим основным фрагментом, обеспечивая таким образом сайты с удаленными основаниями. В некоторых вариантах реализации изобретения связи, соединяющие мономерные субъединицы, сахарные фрагменты или заменители и гетероциклические основные фрагменты, могут быть независимо модифицированы. В некоторых вариантах реализации изобретения единица связь-сахар, которая может содержать или не содержать гетероциклическое основание, может быть замещена миметиком, таким как мономеры в пептидных нуклеиновых кислотах.
При использовании в настоящем документе концевая группа означает один или более атомов, присоединенных к любому или к обоим 3'- или 5'-концам олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации изобретения концевая группа представляет собой конъюгирующую группу. В некоторых вариантах реализации изобретения концевая группа содержит один или более нуклеозидов концевой группы.
При использовании в настоящем документе конъюгат или конъюгирующая группа означает атом или группу атомов, связанную с олигонуклеотидом или олигомерным соединением. Как правило, конъюгирующие группы модифицируют одно или более свойств соединения, к которому они присоединены, включая, но не ограничиваясь ими, свойства фармакодинамики, фармакокинетики, связывания, поглощения, клеточного распределения, клеточного захвата, заряда и/или выведения.
При использовании в настоящем документе линкер конъюгата или линкер в контексте конъюгирующие группы означает часть конъюгирующей группы, содержащую любой атом или группу атомов и ковалентно связывающую (1) олигонуклеотид с другой частью конъюгирующей группы или (2) две или более частей конъюгирующей группы.
Конъюгирующие группы показаны в настоящем документе как радикалы, обеспечивающие связь для образования ковалентного присоединения к олигомерному соединению, такому как антисмысловый олигонуклеотид. В некоторых вариантах реализации изобретения точка присоединения у олигомерного соединения представляет собой 3'-атом кислорода 3'-гидроксильной группы 3'-концевого нуклеозида олигомерного соединения. В некоторых вариантах реализации изобретения точка присоединения у олигомерного соединения представляет собой 5'-атом кислорода 5'-гидроксильной группы 5'-концевого нуклеозида олигомерного соединения. В некоторых вариантах реализации изобретения связь для образования присоединения к олигомерному соединению представляет собой расщепляемую связь. В некоторых таких вариантах реализации изобретения такая расщепляемая связь составляет весь или часть расщепляемого фрагмента.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы содержат расщепляемый фрагмент (например, расщепляемую связь или расщепляемый нуклеозид) и часть углеводного кластера, такую как часть кластера GalNAc. Такая часть углеводного кластера содержит: нацеливающий фрагмент и, необязательно, линкер конъюгата. В некоторых вариантах реализации изобретения часть углеводного кластера определяют по количеству и сущности лиганда. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения часть углеводного кластера содержит три группы GalNAc и обозначена GalNAc3. В некоторых вариантах реализации изобретения часть углеводного кластера содержит 4 группы GalNAc и обозначена GalNAc4. Конкретные части углеводных кластеров (имеющие конкретную связку, группы
- 9 031393 ветвления и линкера конъюгата) описаны в настоящем документе и обозначены римской цифром с последующим нижним индексом а. Соответственно GalNac3-1a относится к конкретной части углеводного кластера конъюгирующей группы, имеющей 3 группы GalNac и конкретно определенную связку, группы ветвления и линкера. Такой фрагмент углеводного кластера присоединен к олигомерному соединению через расщепляемый фрагмент, такой как расщепляемая связь или расщепляемый нуклеозид.
При использовании в настоящем документе расщепляемый фрагмент означает связь или группу, которая может быть расщеплена при физиологических условиях. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент расщепляется внутри клетки или во внутриклеточных отделах, таких как лизосома. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент расщепляется эндогенными ферментами, такими как нуклеазы. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент содержит группу атомов, имеющую один, два, три, четыре или более четырех расщепляемых связей.
При использовании в настоящем документе расщепляемая связь означает любую химическую связь, которая может быть расщеплена. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемая связь выбрана из: амида, полиамида, сложного эфира, эфира, одного или обоих сложных эфиров фосфодиэфира, фосфатного сложного эфира, карбамата, дисульфида или пептида.
При использовании в настоящем документе углеводный кластер означает соединение, имеющее один или более углеводных остатков, присоединенных к скелету или связывающей группе, (см., например, публикацию Maier et al., Synthesis of Antisense Oligonucleotides Conjugated to a Multivalent Carbohydrate Cluster for Cellular Targeting, Bioconjugate Chemistry, 2003, (14): 18-29, которая в полном объеме включена в настоящий документ посредством ссылки, или Rensen et al., Design and Synthesis of Novel NAcetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asiaglycoprotein Receptor, J. Med. Chem. 2004, (47): 5798-5808, где приведены примеры углеводных конъюгированных кластеров).
При использовании в настоящем документе производное углевода означает любое соединение, которое может быть синтезировано с применением углевода в качестве исходного материала или промежуточного соединения.
При использовании в настоящем документе углевод означает природный углевод, модифицированный углевод или производное углевода.
При использовании в настоящем документе защитная группа означает любое соединение или защитную группу, известную специалистам в данной области техники. Не ограничивающие примеры защитных групп представлены в публикации Protective Groups in Organic Chemistry, T.W. Greene, P.G.M. Wuts, ISBN 0-471-62301-6, John Wiley & Sons, Inc, Нью-Йорк, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки.
При использовании в настоящем документе одноцепочечное означает олигомерное соединение, которое не гибридизовано с его комплементом и которое не имеет достаточной самокомплементарности для образования устойчивого собственного дуплекса.
При использовании в настоящем документе двухцепочечное означает пару олигомерных соединений, которые гибридизованы друг с другом, или одно самокомплементарное олигомерное соединение, которое образует шпилечную структуру. В некоторых вариантах реализации изобретения двухцепочечное олигомерное соединение содержит первое и второе олигомерное соединение.
При использовании в настоящем документе антисмысловое соединение означает соединение, содержащее или состоящее из олигонуклеотида, по меньшей мере часть которого комплементарна целевой нуклеиновой кислоте, с которой возможна его гибридизация, что приводит к получению по меньшей мере одной антисмысловой активности.
При использовании в настоящем документе антисмысловая активность означает любое обнаруживаемое и/или измеримое изменение, обусловленное гибридизацией антисмыслового соединения с его целевой нуклеиновой кислотой. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловая активность включает модулирование количества или активности транскрипта целевой нуклеиновой кислоты (например, мРНК). В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловая активность включает модулирование сплайсинга пре-мРНК.
При использовании в настоящем документе антисмысловое соединение на основе РНКазы Н означает антисмысловое соединение, в котором по меньшей мере часть антисмысловой активности антисмыслового соединения обусловлена гибридизацией антисмыслового соединения с целевой нуклеиновой кислотой и последующим расщеплением целевой нуклеиновой кислоты под действием РНКазы Н.
При использовании в настоящем документе антисмысловое соединение на основе RISC означает антисмысловое соединение, в котором по меньшей мере часть антисмысловой активности антисмыслового соединения обусловлена РНК-индуцируемым комплексом сайленсинга (RISC).
При использовании в настоящем документе обнаружение или измерение означает, что выполнено испытание или анализ для обнаружения или измерения. Такое обнаружение и/или измерение может приводить к результату с нулевым значением. Следовательно, даже если испытание для обнаружения или измерения приводит к обнаружению отсутствия активности (нулевой активности), то стадия обна
- 10 031393 ружения или измерения активности была выполнена.
При использовании в настоящем документе обнаруживаемая и/или измеримая активность означает статистически значимую активность, которая не является нулевой.
При использовании в настоящем документе по существу не измененный означает небольшое или отсутствие изменения конкретного параметра, в частности, по сравнению с другим параметром, который изменился гораздо больше. В некоторых вариантах реализации изобретения параметр является по существу не измененным, если его изменение составило менее 5%. В некоторых вариантах реализации изобретения параметр является по существу не измененным, если его изменение составило менее двух раз, тогда как изменение другого параметра составило по меньшей мере десять раз. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловая активность представляет собой изменение количества целевой нуклеиновой кислоты. В некоторых таких вариантах реализации изобретения количество нецелевой нуклеиновой кислоты является по существу не измененным, если оно изменяется гораздо меньше, чем изменяется количество целевой нуклеиновой кислоты, но это изменение не обязательно должно быть нулевым.
При использовании в настоящем документе экспрессия означает процесс, посредством которого ген в конечном итоге преобразуется в белок. Экспрессия включает, но не ограничивается этим, транскрипцию, пост-транскрипционную модификацию (например, сплайсинг, полиаденилирование, добавление 5'-кэпа) и трансляцию.
При использовании в настоящем документе целевая нуклеиновая кислота означает молекулу нуклеиновой кислоты, с которой предполагается гибридизация антисмыслового соединения с получением желаемой антисмысловой активности. Антисмысловые олигонуклеотиды обладают достаточной комплементарностью их целевым нуклеиновым кислотам для обеспечения гибридизации при физиологических условиях.
При использовании в настоящем документе комплементарность азотистых оснований или комплементарность в отношении азотистых оснований означает азотистое основание, которое способно к спариванию оснований с другим азотистым основанием. Например, в ДНК аденин (A) комплементарен тимину (T). Например, в РНК аденин (A) комплементарен урацилу (U). В некоторых вариантах реализации изобретения комплементарное азотистое основание означает азотистое основание антисмыслового соединения, которое способно к спариванию оснований с азотистым основанием его целевой нуклеиновой кислоты. Например, если азотистое основание в определенном положении антисмыслового соединения способно к водородному связыванию с азотистым основанием в определенном положении целевой нуклеиновой кислоты, то это положение водородного связывания между олигонуклеотидом и целевой нуклеиновой кислотой считается комплементарным по этой паре азотистых оснований. Азотистые основания, содержащие определенные модификации, могут сохранять способность к спариванию с противоположным азотистым основанием и, следовательно, все еще могут обладать комплементарностью азотистых оснований.
При использовании в настоящем документе не комплементарные в отношении азотистых оснований означает пару азотистых оснований, которые не образуют водородные связи друг с другом.
При использовании в настоящем документе комплементарные в отношении олигомерных соединений (например, связанных нуклеозидов, олигонуклеотидов или нуклеиновых кислот) означает способность таких олигомерных соединений или их областей к гибридизации с другим олигомерным соединением или его областью за счет комплементарности азотистых оснований. Комплементарные олигомерные соединения не обязательно должны обладать комплементарностью азотистых оснований в каждом нуклеозиде. До не которой степени допустимы некоторые несоответствия. В некоторых вариантах реализации изобретения комплементарные олигомерные соединения или области комплементарны по 70% азотистых оснований (комплементарность 70%). В некоторых вариантах реализации изобретения комплементарные олигомерные соединения или области комплементарны на 80%. В некоторых вариантах реализации изобретения комплементарные олигомерные соединения или области комплементарны на 90%. В некоторых вариантах реализации изобретения комплементарные олигомерные соединения или области комплементарны на 95%. В некоторых вариантах реализации изобретения комплементарные олигомерные соединения или области комплементарны на 100%.
При использовании в настоящем документе несоответствие означает азотистое основание первого олигомерного соединения, которое не способно спариваться с азотистым основанием в соответствующем положении второго олигомерного соединения при выравнивании первого и второго олигомерного соединения. Любое или оба первое и второе олигомерные соединения могут быть олигонуклеотидами.
При использовании в настоящем документе гибридизация означает спаривание комплементарных олигомерных соединений (например, антисмыслового соединения и его целевой нуклеиновой кислоты). Не ограничиваясь конкретным механизмом, наиболее распространенный механизм спаривания включает водородное связывание, которое может представлять собой уотсон-криковское, хугстиновское или обратное хугстиновское водородное связывание между комплементарными азотистыми основаниями.
При использовании в настоящем документе специфически гибридизуется означает способность олигомерного соединения гибридизоваться с одним сайтом нуклеиновой кислоты с большей аффинно
- 11 031393 стью, чем оно гибридизуется с другим сайтом нуклеиновой кислоты.
При использовании в настоящем документе полностью комплементарный в отношении олигонуклеотида или его части означает, что каждое азотистое основание олигонуклеотида или его части способно к спариванию с азотистым основанием комплементарной нуклеиновой кислоты или ее непрерывной частью. Следовательно, полностью комплементарная область не содержит несоответствий или не гибридизованных азотистых оснований в обеих спиралях.
При использовании в настоящем документе процент комплементарности означает процент азотистых оснований олигомерного соединения, которые комплементарны равной по длине части целевой нуклеиновой кислоты. Процент комплементарности рассчитывают делением количества азотистых оснований олигомерного соединения, которые комплементарны азотистым основаниям в соответствующих положениях целевой нуклеиновой кислоты, на общую длину олигомерного соединения.
При использовании в настоящем документе процент идентичности означает количество азотистых оснований в первой нуклеиновой кислоте, которые относятся к тому же типу (независимо от химической модификации), что и азотистые основания в соответствующих положениях второй нуклеиновой кислоты, деленное на общее количество азотистых оснований в первой нуклеиновой кислоте.
При использовании в настоящем документе модулирование означает изменение количества или качества молекулы, функции или активности по сравнению с количеством или качеством молекулы, функции или активности до модулирования. Например, модулирование включает изменение, как увеличение (стимуляцию или индукцию), так и снижение (ингибирование или уменьшение) генной экспрессии. В качестве дополнительного примера, модулирование экспрессии может включать изменение выбора сайта сплайсинга при процессинге пре-мРНК, что приводит к изменению абсолютного или относительного количества определенного сплайс-варианта по сравнению с его количеством в отсутствие модулирования.
При использовании в настоящем документе химический мотив означает характерный участок химических модификаций в олигонуклеотиде или его области. Мотивы могут быть определены по модификациям в определенных нуклеозидах и/или в определенных связывающих группах олигонуклеотида.
При использовании в настоящем документе нуклеозидный мотив означает характерный участок нуклеозидных модификаций в олигонуклеотиде или его области. Связи такого олигонуклеотида могут быть модифицированными или немодифицированными. Если не указано иное, мотивы, описывающие в настоящем документе только нуклеозиды, представляют собой нуклеозидные мотивы. Следовательно, в таких случаях связи не ограничены.
При использовании в настоящем документе сахарный мотив означает характерный участок сахарных модификаций в олигонуклеотиде или его области.
При использовании в настоящем документе связывающий мотив означает характерный участок связывающих модификаций в олигонуклеотиде или его области. Нуклеозиды такого олигонуклеотида могут быть модифицированными или немодифицированными. Если не указано иное, мотивы, описывающие в настоящем документе только связи, представляют собой связывающие мотивы. Следовательно, в таких случаях нуклеозиды не ограничены.
При использовании в настоящем документе мотив модификации азотистых оснований означает характерный участок модификаций азотистых оснований вдоль олигонуклеотида. Если не указано иное, то мотив модификации азотистых основанц не зависит от последовательности азотистых оснований.
При использовании в настоящем документе мотив последовательности означает характерный участок азотистых оснований, расположенных вдоль олигонуклеотида или его части. Если не указано иное, то мотив последовательности не зависит от химических модификаций и, следовательно, может иметь любую комбинацию химических модификация, включая отсутствие химических модификаций.
При использовании в настоящем документе тип модификации в отношении нуклеозида или нуклеозида определенного типа означает химическую модификацию нуклеозида и включает модифицированные и немодифицированные нуклеозиды. Соответственно, если не указано иное, нуклеозид, имеющий модификацию первого типа может быть немодифицированным нуклеозидом.
При использовании в настоящем документе по-разному модифицированные означает химические модификации или химические заместители, которые отличны друг от друга, включая их отсутствие или модификации. Так, например, MOE нуклеозид и немодифицированный нуклеозид ДНК являются поразному модифицированными, даже несмотря на то, что нуклеозид ДНК является немодифицированным. Точно так же ДНК и РНК являются по-разному модифицированными, даже несмотря на то, что оба представляют собой природные немодифицированные нуклеозиды. Нуклеозиды, которые являются одинаковыми, но содержат различные азотистые основания, не являются по-разному модифицированными. Например, нуклеозид, содержащий 2'-OMe модифицированный сахар и немодифицированное адениновое нуклооснование, и нуклеозид, содержащий 2'-OMe модифицированный сахар и немодифицированное тиминовое азотистое основание, не являются по-разному модифицированными.
При использовании в настоящем документе модификации одного типа относится к модификациям, которые являются одинаковыми друг относительно друга, включая отсутствие модификаций. Так, например, два немодифицированных нуклеозида ДНК имеют модификацию одного типа, даже несмот
- 12 031393 ря на то, что нуклеозид ДНК является немодифицированным. Такие нуклеозиды, имеющие модификацию одного типа, могут содержать различные азотистые основания.
При использовании в настоящем документе отдельные области означает части олигонуклеотида, в которых химические модификации или мотив химических модификаций любой из соседних частей содержит по меньшей мере одно отличие для обеспечения возможности различать области друг от друга.
При использовании в настоящем документе фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель означает любое вещество, подходящее для применения при введении животному. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель представляет собой стерильный солевой раствор.
В некоторых вариантах реализации изобретения такой стерильный солевой раствор представляет собой солевой раствор фармацевтической марки.
При использовании в настоящем документе термин метаболическое расстройство означает заболевание или патологическое состояние, которое характеризуется, прежде всего, дисрегуляцией метаболизма - сложного набора химических реакций, связанных с расщеплением пищи с выработкой энергии.
При использовании в настоящем документе термин сердечно-сосудистое расстройство означает заболевание или патологическое состояние, которое характеризуется, прежде всего, ухудшенной функцией сердца или кровеносных сосудов.
При использовании в настоящем документе термин моно- или полициклическая кольцевая система включает все кольцевые системы, выбранные из одиночных или полициклических радикальных кольцевых систем, в которых указанные кольца конденсированы или связаны, и включает одиночные или смешанные кольцевые системы, индивидуально выбранные из алифатических, алициклических, арильных, гетероарильных, аралкильных, арилалкильных, гетероциклических, гетероарильных, гетероароматических и гетероарилалкильных. Такие моно- и полициклические структуры могут содержать кольца, каждое из которых имеет одинаковую степень насыщенности, или каждое независимо имеет переменные степени насыщенности, включая полностью насыщенные, частично насыщенные или полностью ненасыщенные. Каждое кольцо может содержать кольцевые атомы, выбранные из С, N, О и S с образованием гетероциклических колец, а также колец, содержащих только кольцевые атомы С, которые могут быть представлены в смешанном мотиве, как, например, в бензимидазоле, в котором одно кольцо имеет только кольцевые атомы углерода, а конденсированное кольцо имеет два атома азота. Моно- или полициклическая кольцевая система может быть дополнительно замещена группами заместителей, как, например, фталимид, который имеет две группы =O, присоединенные к одному из колец. Моно- или полициклические кольцевые системы могут быть присоединены к исходным молекулам при помощи различных способов, таких как непосредственно через кольцевой атом, путем конденсации через несколько кольцевых атомов, через группу заместителя или через бифункциональный связывающий фрагмент.
При использовании в настоящем документе пролекарство означает неактивную или менее активную форму соединения, которая при введении субъекту метаболизируется с образованием активного или более активного соединения (например, лекарства).
При использовании в настоящем документе заместитель и группа заместителя означает атом или группу, которая вытесняет атом или группу указанного исходного соединения. Например, заместитель модифицированного нуклеозида представляет собой любой атом или группу, которая отлична от атома или группы, находящейся в природном нуклеозиде (например, модифицированный 2'-заместитель представляет собой любой атом или группу в 2'-положении нуклеозида, отличную от H или OH). Группы заместителей могут быть защищенными или не защищенными. В некоторых вариантах реализации изобретения соединения настоящего описания имеют заместители в одном или более чем в одном положении исходного соединения. Заместители также могут быть дополнительно замещены другими группами заместителей и могут быть присоединены напрямую или через связывающую группу, такую как алкильная или углеводородная группа, к исходному соединению.
Точно так же при использовании в настоящем документе заместитель в отношении химической функциональной группы означает атом или группу атомов, которая отлична от атома или группы атомов, обычно содержащихся в указанной функциональной группе. В некоторых вариантах реализации изобретения заместитель вытесняет атом водорода функциональной группы (например, в некоторых вариантах реализации изобретения заместитель замещенной метильной группы представляет собой атом или группу, отличную от водорода, которая вытесняет один или более атомов водорода незамещенной метильной группы). Если не указано иное, группы, которые могут быть использованы в качестве заместителей, включают, без ограничения, галоген, гидроксил, алкил, алкенил, алкинил, ацил (-C(O)Raa), карбоксил (-C(O)O-Raa), алифатические группы, алициклические группы, алкокси, замещенный окси (-O-Raa), арил, аралкил, гетероциклический радикал, гетероарил, гетероарилалкил, амино (-N(Rbb)(Rcc)), имино (=NRbb), амидо (-C(O)N(Rbb)(Rcc) или -N(Rbb)C(O)Raa), азидо (-N3), нитро (-NO2), циано (-CN), карбамидо (-OC(O)N(Rbb)(Rcc) или -N(Rbb)C(O)ORaa), уреидо (-N(Rbb)C(O)-N(Rbb)(Rcc)), тиоуреидо (-N(Rbb)C(S)N(Rbb)(Rcc)), гуанидинил (-N(Rbb)C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc)), амидинил (-C(=NRbb)N(Rbb)(Rcc) или -N(Rbb)C(=NRbb)(Raa)), тиол (-SRbb), сульфинил (-S(O)Rbb), сульфонил (-S(O)2Rbb) и сульфонамидил (-S(O)2N(Rbb)(Rcc) или -N(Rbb)S-(O)2Rbb). Где каждый Raa, Rbb и Rcc независимо представляет собой Н, не
- 13 031393 обязательно связанную химическую функциональную группу или дополнительную группу заместителя, при этом предпочтительный перечень включает, без ограничения, алкил, алкенил, алкинил, алифатические, алококси, ацил, арил, аралкил, гетероарил, алициклические, гетероциклические и гетероарилалкил. Выбранные заместители с соединениями, описанными в настоящем документе, находятся в рекурсивной степени.
При использовании в настоящем документе алкил, используемый в настоящем документе, означает насыщенный прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода. Примеры алкильных групп включают, без ограничения, метил, этил, пропил, бутил, изопропил, н-гексил, октил, децил, додецил и т.п. Алкильные группы обычно содержат от 1 до около 24 атомов углерода, более часто от 1 до около 12 атомов углерода (C1-C12 алкил), при этом более предпочтительно от 1 до около 6 атомов углерода.
При использовании в настоящем документе алкенил означает прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода и имеющий по меньшей мере одну двойную углерод-углеродную связь. Примеры алкенильных групп включают, без ограничения, этенил, пропенил, бутенил, 1-метил-2-бутен-1-ил, диены, такие как 1,3-бутадиен и т.п. Алкенильные группы обычно содержат от 2 до около 24 атомов углерода, более часто от 2 до около 12 атомов углерода, при этом более предпочтительно от 2 до около 6 атомов углерода. Алкенильные группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать одну или более дополнительных групп заместителей.
При использовании в настоящем документе алкинил означает прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода и имеющий по меньшей мере одну тройную углерод-углеродную связь. Примеры алкинильных групп включают, без ограничения, этинил, 1-пропинил, 1-бутинил и т.п. Алкинильные группы обычно содержат от 2 до около 24 атомов углерода, более часто от 2 до около 12 атомов углерода, при этом более предпочтительно от 2 до около 6 атомов углерода. Алкинильные группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать одну или более дополнительных групп заместителей.
При использовании в настоящем документе ацил означает радикал, образованный за счет удаления гидроксильной группы от органической кислоты, и имеет общую формулу -С(О)-Х, где X обычно является алифатическим, алициклическим или ароматическим. Примеры включают алифатические карбонилы, ароматические карбонилы, алифатические сульфонилы, ароматические сульфинилы, алифатические сульфинилы, ароматические фосфаты, алифатические фосфаты и т.п. Ацильные группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
При использовании в настоящем документе алициклическая означает циклическую кольцевую систему, в которой кольцо является алифатическим. Кольцевая система может содержать одно или более колец, при этом по меньшей мере одно кольцо является алифатическим. Предпочтительные алициклические системы включают кольца, имеющие от около 5 до около 9 атомов углерода в кольце. Алициклические группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
При использовании в настоящем документе алифатический означает прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий до двадцати четырех атомов углерода, в котором насыщенность между любыми двумя атомами углерода представляет собой одинарную, двойную или тройную связь. Алифатическая группа предпочтительно содержит от 1 до около 24 атомов углерода, более часто от 1 до около 12 атомов углерода, при этом более предпочтительно от 1 до около 6 атомов углерода. Прямая или разветвленная цепь алифатической группы может быть прервана одним или более гетероатомами, которые включают азот, кислород, серу и фосфор. Такие алифатические группы, прерванные гетероатомами, включают, без ограничения, полиалкокси, такие как полиалкиленгликоли, полиамины и полиимины. Алифатические группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
При использовании в настоящем документе алкокси означает радикал, образованный между алкильной группой и атомом кислорода, при этом атом кислорода применяется для присоединения алкокси-группы к исходной молекуле. Примеры алкокси-групп включают, без ограничения, метокси, этокси, пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, н-пентокси, неопентокси, н-гексокси и т.п. Алкокси-группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
При использовании в настоящем документе, аминоалкил означает аминозамещенный С1-С12 алкильный радикал. Алкильная часть указанного радикала образует ковалентную связь с исходной молекулой. Аминогруппа может быть расположена в любом положении, и аминоалкильная группа может быть замещена дополнительной группой заместителя в алкильной и/или аминочасти.
При использовании в настоящем документе аралкил и арилалкил означает ароматическую группу, которая ковалентно связана с С1-С12 алкильным радикалом. Часть алкильного радикала образовавшейся аралкильной (или арилалкильной) группы образует ковалентную связь с исходной молекулой. Примеры включают, без ограничения, бензил, фенетил и т.п. Аралкильные группы, используемые в на- 14 031393 стоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей, присоединенные к алкильной, арильной или к обеим группам, которые образуют указанную радикальную группу.
При использовании в настоящем документе арил и ароматический означает радикалы моно- или полициклической карбоциклической кольцевой системы, имеющие одно или более ароматических колец. Примеры арильных групп включают, без ограничения, фенил, нафтил, тетрагидронафтил, инданил, инденил и т.п. Предпочтительные арильные кольцевые системы имеют от около 5 до около 20 атомов углерода в одном или более кольцах. Арильные группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
При использовании в настоящем документе галоген и галоген означает атом, выбранный из фтора, хлора, брома и йода.
При использовании в настоящем документе гетероарил и гетероароматический означает радикал, содержащий моно- или полициклическое ароматическое кольцо, кольцевую систему или конденсированную кольцевую систему, в котором по меньшей мере одно из колец является ароматическим и содержит один или более гетероатомов. Гетероарил включает также конденсированные кольцевые системы, включая системы, в которых одно или более из конденсированных колец не содержат гетероатомов. Гетероарильные группы, как правило, содержат один кольцевой атом, выбранный из серы, азота или кислорода. Примеры гетероарильных групп включают, без ограничения, пиридинил, пиразинил, пиримидинил, пирролил, пиразолил, имидазолил, тиазолил, оксазолил, изооксазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, тиофенил, фуранил, хинолинил, изохинолинил, бензимидазолил, бензоксазолил, хиноксалинил и т. п. Гетероарильные радикалы могут быть присоединены к исходной молекуле напрямую или через связывающий фрагмент, такой как алифатическая группа или гетероатом. Гетероарильные группы, используемые в настоящем документе, могут необязательно содержать дополнительные группы заместителей.
При использовзании в настоящем документе конъюгированное соединение означает любые атомы, группы атомов или группу связанных атомов, подходящую для применения в качестве конъюгирующей группы. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные соединения могут обладать или влиять на одно или более свойств, включая, но не ограничиваясь этим, свойства фармакодинамики, фармакокинетики, связывания, адсорбции, клеточного распределения, клеточного захвата, заряда и/или выведения.
При использовании в настоящем документе, если не указано или немодифицировано иным образом, двухцепочечные относится к двум отдельным олигомерным соединениям, которые гибридизованы друг с другом. Такие двухцепочечные соединения могут иметь один или более не гибридизованных нуклеозидов у одного или обоих концов одной или обеих спиралей (выступы) и/или один или более внутреннийх не гибридизованных нуклеозидов (несоответствий), при условии, что существует достаточная комплементарность для сохранения гибридизации при физиологически релевантных условиях.
В. Некоторые соединения.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения приведены конъюгированные антисмысловые соединения, содержащие антисмысловые олигонуклеотиды и конъюгат.
а. Некоторые антисмысловые олигонуклеотиды.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения приведены антисмысловые олигонуклеотиды. Такие антисмысловые олигонуклеотиды содержат связанные нуклеозиды, и каждый нуклеозид содержит сахарный фрагмент и азотистое основание. Структура таких антисмысловых олигонуклеотидов может быть рассмотрена с точки зрения химических особенностей (например, модификаций и характерных участков модификаций) и последовательности азотистых оснований (например, последовательность антисмыслового олигонуклеотида, сущность и последовательность целевой нуклеиновой кислоты).
i. Некоторые химические особенности.
В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид содержит одну или более модификаций. В некоторых таких вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды содержат один или более модифицированных нуклеозидов и/или модифицированных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные нуклеозиды содержат модифицированный сахарный фрагмент и/или модифицированное азотистое основание.
1. Некоторые сахарные фрагменты.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединения настоящего описания содержат один или более модифицированных нуклеозидов, содержащих модифицированный сахарный фрагмент. Такие соединения, содержащие один или более модифицированных по сахару нуклеозидов, могут обладать желаемыми свойствами, такими как улучшенная стабильность к нуклеазе или увеличенная связывающая аффинность к целевой нуклеиновой кислоте, по сравнению с олигонуклеотидом, содержащим только нуклеозиды, которые содержат природные сахарные фрагменты. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные сахарные фрагменты представляют собой замещенные сахарные фрагменты. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные сахарные фрагменты представляют собой заменители сахара. Такие заменители сахара могут содержать одно или более замещений, соответствующих замещениям замещенных сахарных фрагментов.
В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные сахарные фрагменты пред
- 15 031393 ставляют собой замещенные сахарные фрагменты, содержащие один или более немостиковых сахарных заместителей, включая, но не ограничиваясь этим, заместители в 2' и/или 5'-положениях. Примеры заместителей сахара, подходящих для 2'-положения, включают, но не ограничиваются ими: 2'-F, 2'-OCH3 (OMe или О-метил) и 2'-O(CH2)2OCH3 (MOE). В некоторых вариантах реализации изобретения заместитель сахара в 2'-положении выбран из аллила, амино, азидо, тио, О-аллила, O-Q-C10 алкила, О-CiC10 замещенного алкила; OCF3, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) и О-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), где каждый Rm и Rn независимо представляет собой H или замещенный или незамещенный C1-C10 алкил. Примеры заместителей сахара в 5'-положении включают, но не ограничиваются ими: 5'-метил (R или S), 5'винил и 5'-метокси. В некоторых вариантах реализации изобретения замещенные сахара содержат более одного немостикового сахарного заместителя, например 2'Ж-5'-метилсахарные фрагменты (см., например, Международную заявку РСТ WO2008/101157, где приведены дополнительные 5',2'-бис-замещенные сахарные фрагменты и нуклеозиды).
Нуклеозиды, содержащие 2'-замещенные сахарные фрагменты, упоминаются как 2'-замещенные нуклеозиды. В некоторых вариантах реализации изобретения 2'-замещенный нуклеозид содержит 2'группу заместителя, выбранную из галогена, аллила, амино, азидо, SH, CN, OCN, CF3, OCF3, О, S или N(Rm)-алкила; О, S или N(Rm)-алкенила; О, S или N(Rm)-алкинила; О-алкиленил^-алкила, алкинила, алкарила, аралкила, О-алкарила, О-аралкила, O(CH2)2SCH3,O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) или O-CH2-C(=O)N(Rm)(Rn), где каждый Rm и Rn независимо представляет собой Н, аминозащитную группу или замещенный или незамещенный C1-C10 алкил. Эти 2'-группы заместителей могут быть дополнительно замещены одной или более группами заместителей, независимо выбранными из гидроксила, амино, алкокси, карбокси, бензила, фенила, нитро (NO2), тиола, тиоалкокси (S-алкила), галогена, алкила, арила, алкенила и алкинила.
В некоторых вариантах реализации изобретения 2'-замещенный нуклеозид содержит 2'-группу заместителя, выбранную из F, NH2, N3, OCF3, O-CH3, O(CH2)3NH2, CH2-CH=CH2, О-CH2-CH=CH2, OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2 и N-замещенного ацетамида (O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), где каждый Rm и Rn независимо представляет собой Н, аминозащитную группу или замещенный или незамещенный C1-C10 алкил.
В некоторых вариантах реализации изобретения 2'-замещенный нуклеозид содержит сахарный фрагмент, содержащий 2'-группу заместителя, выбранную из F, OCF3; О-CH;,. OCH2CH2OCH3, O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(CH3)2, -O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2 и О-CH2-C(=O)-N(H)CHз.
В некоторых вариантах реализации изобретения 2'-замещенный нуклеозид содержит сахарный фрагмент, содержащий 2'-группу заместителя, выбранную из F, О-CH;, и OCH2CH2OCH3.
Некоторые модифицированные сахарные фрагменты содержат мостиковый сахарный заместитель, который образует второе кольцо, что приводит к получению бициклического сахарного фрагмента. В некоторых таких вариантах реализации изобретения бициклический сахарный фрагмент содержит мостик между 4' и 2' атомами фуранозного кольца. Примеры таких 4'-2' сахарных заместителей включают, но не ограничиваются ими: -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- или -C(RaRb)-O-N(R)-; 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' (cEt) и 4'-CH(CH2OCH3)-O-2', и его аналоги (см., например, патент США 7399845, выданный 15 июля 2008 г.); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' и его аналоги (см., например, WO2009/006478, опубликованный 8 января 2009 г.); 4'CH2-N(OCH3)-2' и его аналоги (см., например, WO2008/150729, опубликованный 11 декабря 2008 г.); 4'CH2-O-N(CH3)-2' (см., например, US2004/0171570, опубликованный 2 сентября 2004 г.); 4'-CH2-O-N(R)-2' и 4'-CH2-N(R)-O-2'-, где каждый R независимо представляет собой Н, защитную группу или C1-C12 алкил; 4'-CH2-N(R)-O-2', где R представляет собой Н, C1-C12 алкил или защитную группу (см., например, патент США 7427672, выданный 23 сентября 2008 г.); 4^¾^^)^¾)^ (см., например, Chattopadhyaya, et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134) и 4'-CH2-C(=CH2)-2' и его аналоги (см. опубликованную Международную заявку РСТ WO2008/154401, опубликованную 8 декабря 2008 г.).
В некоторых вариантах реализации изобретения такие мостики 4'-2' независимо содержат от 1 до 4 связанных групп, независимо выбранных из -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)X- и -N(Ra)-;
где x равен 0, 1 или 2;
n равен 1, 2, 3 или 4;
каждый Ra и Rb независимо представляет собой Н, защитную группу, гидроксил, C1-C12 алкил, замещенный C1-C12 алкил, C2-C12 алкенил, замещенный C2-C12 алкенил, C2-C12 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, C5-C20 арил, замещенный C5-C20 арил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, гетероарил, замещенный гетероарил, Ся-C- алициклический радикал, замещенный Ся-Cалициклический радикал, галоген, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, CN, сульфонил (S(=O)2-J1) или сульфоксил (S(=O)-J1); и каждый J1 и J2 независимо представляет собой Н, C1-C12 алкил, замещенный C1-C12 алкил, C2-C12 алкенил, замещенный C2-C12 алкенил, C2-C12 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, Сз-C^ арил, замещенный C5-C20 арил, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, C1-C12 аминоалкил, замещенный C1-C12 аминоалкил или защитную группу.
- 16 031393
Нуклеозиды, содержащие бициклические сахарные фрагменты, упоминаются как бициклические нуклеозиды или BNA. Бициклические нуклеозиды включают, но не ограничиваются ими, (A) a-Lметиленокси (4'-CH2-O-2') BNA, (В) β-ϋ-метиленокси (4'-CH2-O-2') BNA (также упоминаемый как закрытая нуклеиновая кислота или LNA), (C) этиленокси (4'-(CH2)2-O-2') BNA, (D) аминоокси (4'-CH2-O-N(R)2') BNA, (E) оксиамино (4'-CH2-N(R)-O-2') BNA, (F) метил(метиленокси) (4'-CH(CH3)-O-2') BNA (также упоминаемый как стерически затрудненный этил или cEt), (G) метилен-тио (4'-CH2-S-2') BNA, (Н) метилен-амино (4'-CH2-N(R)-2') BNA, (I) метил-карбоциклический (4'-CH2-CH(CH3)-2') BNA и (J) пропиленкарбоциклический (4'-(CH2)3-2') BNA, как показано ниже.
где Вх представляет собой фрагмент азотистого основания, а R независимо представляет собой Н, защитную группу или C1-C12 алкил.
В данной области техники известны дополнительные бициклические сахарные фрагменты, например Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc, 129(26) 8362-8379 (4 июля 2007 г.); Elayadi et al., Curr. Opinion Inverts. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol, 2001, 8, 1-7; Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; патенты США № 7053207, 6268490, 6770748, 6794499, 7034133, 6525191, 6670461 и 7399845; WO2004/106356, WO1994/14226, WO2005/021570 и WO2007/134181; публикации патентов США № US2004/0171570, US2007/0287831 и US2008/0039618; патенты США с серийными номерами 12/129154, 60/989574, 61/026995, 61/026998, 61/056564, 61/086231, 61/097787 и 61/099844 и Международные заявки РСТ № PCT/US2008/064591, PCT/US2008/066154 и PCT/US2008/068922.
В некоторых вариантах реализации изобретения бициклические сахарные фрагменты и нуклеозиды, содержащие такие бициклические сахарные фрагменты, дополнительно определяют по изомерной конфигурации. Например, нуклеозид, содержащий мостик 4'-2'-метилен-окси, может быть в a-L конфигурации или в β-D конфигурации. Ранее a-L-метиленокси (4'-CH2-O-2') бициклические нуклеозиды были внедрены в антисмысловые олигонуклеотиды, которые обладают антисмысловой активностью (Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 27, 6365-6372).
В некоторых вариантах реализации изобретения замещенные сахарные фрагменты содержат один или более немостиковых сахарных заместителей и один или более мостиковых сахарных заместителей (например, 5'-замещенные и 4'-2'-мостиковые сахара), (см., например, Международную заявку РСТ WO2007/134181, опубликованную 11/22/07, в которой LNA замещена, например, 5'-метильной или 5'виниловой группой).
В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные сахарные фрагменты представляют собой заменители сахара. В некоторых таких вариантах реализации изобретения атом кислорода природного сахара является замещенным, например, атомом серы, углерода или азота. В некоторых таких вариантах реализации изобретения такой модифицированный сахарный фрагмент содержит также мостиковые и/или немостиковые заместители, как описано выше. Например, некоторые заменители сахара содержат 4'-атом серы и замещение в 2'-положении (см., например, опубликованную патентную заявку США US2005/0130923, опубликованную 16 июня 2005 г.) и/или 5'-положении. В качестве допол
- 17 031393 нительного примера были описаны карбоциклические бициклические нуклеозиды, имеющие мостик 4'-2' (см., например, Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 и Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 77, 7731-7740).
В некоторых вариантах реализации изобретения заменители сахара содержат кольца, имеющие не 5 атомов. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения заменитель сахара содержит морфолино. Морфолиносоединения и их применение в олигомерных соединениях было описано в многочисленных патентах и опубликованных статьях (см., например: Braasch et al., Biochemistry, 2002, 41, 45034510; и патенты США 5698685; 5166315; 5185444 и 5034506). При использовании в настоящем документе термин морфолино означает заменитель сахара, имеющий следующую структуру:
N
В некоторых вариантах реализации изобретения морфолино могут быть модифицированными, например, добавлением или изменением различных групп заместителей в представленной выше структуре морфолино. Такие заменители сахара упомянуты в настоящем документе как модифицированные морфолино.
В качестве другого примера в некоторых вариантах реализации изобретения заменитель сахара содержит шестичленный тетрагидропиран. Такие тетрагидропираны могут быть дополнительно модифицированы или замещены. Нуклеозиды, содержащие такие модифицированные тетрагидропираны, включают, но не ограничиваются ими, гекситоловую нуклеиновую кислоту (HNA), анитоловую нуклеиновую кислоту (ANA), манитоловую нуклеиновую кислоту (MNA) (см. Leumann, C.J. Bioorg. & Med. Chem. (2002) 10:841-854), фтор-HNA (F-HNA) и соединения, имеющие формулу VI
Т3·
VI где независимо для каждого из указанного по меньшей мере одного тетрагидропиранового нуклеозидного аналога формулы VI:
Вх представляет собой фрагмент азотистого основания;
T3 и Т4, каждый независимо, представляют собой межнуклеозидную связывающую группу, связывающую тетрагидропирановый нуклеозидный аналог с антисмысловым соединением, или один из T3 и Т4 представляет собой межнуклеозидную связывающую группу, связывающую тетрагидропирановый нуклеозидный аналог с антисмысловым соединением, а другой из T3 и Т4 представляет собой Н, гидроксилзащитную группу, связанную конъюгирующую группу или 5'- или 3'-концевую группу;
q1, q2, q3, q4, q5, q6 и q7, каждый независимо, представляют собой Н, C1-C6 алкил, замещенный C1-C6 алкил, C2-C6 алкенил, замещенный C2-C6 алкенил, C2-C6 алкинил или замещенный C2-C6 алкинил; и каждый из R1 и R2 независимо выбран из водорода, галогена, замещенного или незамещенного алкокси, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJJ2 и CN, где Х представляет собой О, S или NJ1 и каждый J1, J2 и J3 независимо представляет собой H или C1-C6 алкил.
В некоторых вариантах реализации изобретения приведены модифицированные ТНР нуклеозиды формулы VI, в которых каждый qb q2, q3, q4, q5, q6 и q7 представляет собой Н. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один из qb q2, q3, q4, q5, q6 и q7 отличен от Н. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один из qb q2, q3, q4, q5, q6 и q7 представляет собой метил. В некоторых вариантах реализации изобретения приведены ТНР нуклеозиды формулы VI, в которых один из R1 и R2 представляет собой F. В некоторых вариантах реализации изобретения R1 представляет собой фтор, a R2 представляет собой Н, R1 представляет собой метокси, a R2 представляет собой Н, и Ri представляет собой метоксиэтокси, a R2 представляет собой Н.
В данной области техники известны также многие другие бициклические и трициклические кольцевые системы заменителей сахара, которые могут быть использованы для модификации нуклеозидов для внедрения в антисмысловые соединеия (см., например, обзорную статью Leumann, J.C, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002, 10, 841-854).
Без ограничения, приведены также комбинации модификаций, такие как 2М-5'-метилзамещенные нуклеозиды (см. Международную заявку РСТ WO2008/101157, опубликованную 8/21/08, где описаны другие 5',2'-бис-замещенные нуклеозиды) и замена атома кислорода рибозильного кольца на S и дополнительное замещение в 2'-положении (см. опубликованную заявку на патент США US2005-0130923, опубликованную 16 июня 2005 г.) или, альтернативно, 5'-замещение бициклической нуклеиновой кислоты (см. Международную заявку РСТ WO2007/134181, опубликованную 11/22/07, в которой 4'-CH2-O-2'
- 18 031393 бициклический нуклеозид дополнительно замещен в 5'-положении 5'-метильной или 5'-виниловой группой). Был описан также синтез и получение карбоциклических бициклических нуклеозидов вместе с их олигомеризацией и биохимическими исследованиями (см., например, Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc. 2007, 129(26), 8362-8379).
В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены олигонуклеотиды, содержащие модифицированные нуклеозиды. Такие модифицированные нуклеотиды могут содержать модифицированные сахара, модифицированные азотистые основания и/или модифицированные связи. Конкретные модификации выбирают так, чтобы полученные олигонуклеотиды обладали желаемыми характеристиками. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат один или более РНК-подобных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат один или более ДНК-подобных нуклеотидов.
2. Некоторые модификации азотистых оснований.
В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды настоящего описания содержат одно или более немодифицированных азотистых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды настоящего описания содержат одно или более модифицированных азотистых оснований.
В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные азотистые основания выбраны из универсальных оснований, гидрофобных оснований, смещанных оснований, увеличенных в размере оснований и фторированных оснований, описанных в настоящем документе. 5-Замещенные пиримидины, 6-азапиримидины и N-2-, N-6- и O-6-замещенные пурины, включая 2-аминопропиладенин, 5пропинилурацил; 5-пропинилцитозин; 5-гидроксиметил-цитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-пропил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галогенурацил и цитозин, 5-пропинил (-
C.=C-CH3) урацил и цитозин и другие алкинильные производные пиримидиновых оснований, 6азоурацил, цитозин и тимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-галоген, 8-амино, 8-тиол, 8тиоалкил, 8-гидроксил и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген, в частности 5-бром, 5трифторметил и другие 5-замещенные урацилы и цитозины, 7-метилгуанин и 7-метиладенин, 2-Б-аденин, 2-аминоаденин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин и 7-деазааденин, 2-деазагуанин и 3деазааденин, универсальные основания, гидрофобные основания, смешанные основания, увеличенные в размере основания и фторированные основания, описаны в настоящем документе. Допонительные модифицированные азотистые основания включают трициклические пиримидины, такие как феноксазина цитидин ([5,4-b][1,4]бензоксазин-2(3H)-он), фенотиазина цитидин (1H-пиримидо[5,4-b][1,4]бензотиазин2(3Щ-он), так называемые G-clamp, такие как замещенный феноксазина цитидин (например, 9-(2аминоэтокси)-Н-пиримидо[5,4-b][1,4]бензоксазин-2(3H)-он), карбазола цитидин (2Н-пиримидо[4,5Ь]индол-2-он), пиридоиндола цитидин (Н-пиридо[3',2':4,5]пирроло[2,3^]пиримидин-2-он). Модифицированные азотистые основания также могут включать азотистые основания, в которых пуриновое или пиримидиновое основание заменено другими гетероциклами, например 7-деаза-аденин, 7-деазагуанозин, 2-аминопиридин и 2-пиридон. Дополнительные азотистые основания включают азотистые основания, описанные в патенте США № 3687808, описанные в публикации The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering, Kroschwitz, J.I., ред., John Wiley & Sons, 1990, 858-859; описанные авторами Englisch et al., Angewandte Chemie, Международное издание, 1991, 30, 613; и описанные в публикации Sanghvi, Y.S., глава 15, Antisense Research and Applications, Crooke, S.T. и Lebleu, В., ред., CRC Press, 1993, 273-288.
Иллюстративные патенты США, в которых описано получение некоторых из вышеупомянутых модифицированных азотистых оснований, а также других модифицированных азотистых оснований, включают, без ограничения, U.S. 3687808; 4845205; 5130302; 5134066; 5175273; 5367066; 5432272; 5457187; 5459255; 5484908; 5502177; 5525711; 5552540; 5587469; 5594121; 5596091; 5614617; 5645985; 5681941; 5750692; 5763588; 5830653 и 6005096, некоторые из которых находятся на рассмотрении одновременно с настоящей заявкой и каждый из которых включен в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
3. Некоторые межнуклеозидные связи.
В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены олигонуклеотиды, содержащие связанные нуклеозиды. В таких вариантах реализации изобретения нуклеозиды могут быть связаны вместе при помощи любой межнуклеозидной связи. Два основных класса межнуклеозидных связывающих групп определяются по наличию или отсутствию атома фосфора. Иллюстративные фосфорсодержащие межнуклеозидные связи включают, но не ограничиваются мими, фосфодиэфиры (РО), фосфотриэфиры, метилфосфонаты, фосфорамидаты и тиофосфаты (PS). Иллюстративные не содержащие фосфора межнуклеозидные связывающие группы включают, но не ограничиваются ими, метиленметилимино (-CH2-N(CH3)-O-CH2-), тиодиэфир (-O-C(O)-S-), тионокарбамат (-O-C(O)(NH)-S-); силоксан (-O-Si(H)2-O); и N.N'-диметилгидразин (-CH2-N(CH3)-N(CH3)-). Модифицированные связи, в сравнении с природными фосфодиэфирными связями, могут быть использованы для изменения, обычно увеличения устойчивости олигонуклеотида к нуклеазе. В некоторых вариантах реализации изобретения межнуклеозидные связи, имеющие хиральный атом, могут быть получены в виде рацемической смеси или в виде отдельных
- 19 031393 энантиомеров. Иллюстративные хиральные связи включают, но не ограничиваются ими, алкилфосфонаты и тиофосфаты. Способы получения фосфорсодержащих и не содержащих фосфора межнуклеозидных связей хорошо известны специалистам в данной области техники.
Олигонуклеотиды, описанные в настоящем документе, содержат один или более асимметричных центров и, следовательно, могут образовывать энантиомеры, диастереомеры и другие стереоизомерные конфигурации, которые в соответствии с абсолютной стереохимией могут быть определены как (R) или (S), или, как для аномеров сахара, или как (D) или (L), как для аминокислот и т.д. В антисмысловые соединения, представленные в настоящем документе, включены все такие возможные изомеры, а также их рацемические и оптически чистые формы.
Нейтральные связывающие линкеры включают, без ограничения, фосфотриэфиры, метилфосфонаты, MMI (3'-CH2-N(CH3)-O-5'), амид-3 (3'-CH2-C(=O)-N(H)-5'), амид-4 (3'-CH2-N(H)-C(=O)-5'), формацеталь (3'-O-CH2-O-5') и тиоформацеталь (3'-S-CH2-O-5'). Дополнительные нейтральные межнуклеозидные связи включают неионные связи, содержащие силокасан (диалкилсилоксан), карбоновый сложный эфир, карбоксамид, сульфид, сульфоновый сложный эфир и амиды (см., например, Carbohydrate Modifications in Antisense Research] Y.S. Sanghvi и P.D. Cook, ред., ACS Symposium Series 580; главы 3 и 4, 40-65). Дополнительные нейтральные межнуклеозидные связи включают неионные связи, содержащие смешанные составные части N, О, S и CH2.
4. Некоторые мотивы.
В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды содержат один или более модифицированных нуклеозидов (например, нуклеозид, содержащий модифицированный сахар и/или модифицированное азотистое основание) и/или один или более модифицированных межнуклеозидных связей. Характерный участок таких модификаций в олигонуклеотиде упоминается в настоящем документе как мотив. В некоторых вариантах реализации изобретения мотивы сахара, азотистые основания и линкера не зависят друг от друга.
а. Некоторые сахарные мотивы.
В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат один или более типов модифицированных сахарных фрагментов и/или природных сахарных фрагментов, расположенных вдоль олигонуклеотида или его области определенным образом или в виде мотива сахарной модификации. Такие мотивы могут содержать любые сахарные модификации, рассмотренные в настоящем документе и/или другие известные модификации сахара.
В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат или состоят из области, имеющей сахарный мотив гэпмера, который содержит две внешних области или крыла и центральную или внутреннюю область, или гэп. Эти три области сахарного мотива гэпмера (5'-крыло, гэп и 3'крыло) образуют непрерывную последовательность азотистых оснований, в которой по меньшей мере некоторые из сахарных фрагментов нуклеозидов в каждом крыле отличаются по меньшей мере от некоторых сахарных фрагментов нуклеозидов в гэпе. В частности, по меньшей мере, те сахарные фрагменты нуклеозидов каждого крыла, которые расположены ближе всего к гэпу (3'-ближайший нуклеозид 5'крыла и 5'-ближайший нуклеозид 3'-крыла), отличаются от сахарного фрагмента соседних нуклеозидов в гэпе, определяя таким образом границу между крыльями и гэпом. В некоторых вариантах реализации изобретения сахарные фрагменты в гэпе являются одинаковыми между собой. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит один или более нуклеозидов, имеющих сахарный фрагмент, который отличается от сахарного фрагмента одного или более других нуклеозидов в гэпе. В некоторых вариантах реализации изобретения сахарные мотивы двух крыльев являются одинаковыми между собой (симметричный сахарный гэпмер). В некоторых вариантах реализации изобретения сахарные мотивы 5'крыла отличаются от сахарного мотива 3'-крыла (асимметричный сахарный гэпмер).
i. Некоторые 5'-крылья.
В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 1-8 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 1-7 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 1-6 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 1-5 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 2-5 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 3-5 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 4 или 5 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 1-4 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 1-3 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 1 или 2 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 2-4 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 2 или 3 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 3 или 4 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 1 нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 2 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера
- 20 031393 состоит из 3 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 4 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 5 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера состоит из 6 связанных нуклеозидов.
В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере два бициклических нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'крыло гэпмера содержит по меньшей мере три бициклических нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере четыре бициклических нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один LNA нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид 5'-крыла гэпмера представляет собой бициклический нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид 5'-крыла гэпмера представляет собой стерически затрудненный этил-нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид 5'-крыла гэпмера представляет собой LNA нуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один не бициклический модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'крыло гэпмера содержит по меньшей мере один 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один 2'-MOE нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один 2'-ОМе нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид 5'-крыла гэпмера представляет собой не бициклический модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид 5'-крыла гэпмера представляет собой 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид 5'-крыла гэпмера представляет собой 2'-MOE нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид 5'-крыла гэпмера представляет собой 2'-OMe нуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид 5'-крыла гэпмера представляет собой 2'-дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один рибонуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид 5'-крыла гэпмера представляет собой рибонуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения один, более одного или каждый из нуклеозидов 5'-крыла представляет собой РНКподобный нуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид и по меньшей мере один не бициклический модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид и по меньшей мере один 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид и по меньшей мере один 2'-MOE нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид и по меньшей мере один 2'-OMe нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид и по меньшей мере один не бициклический модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид и по меньшей мере один 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид и по меньшей мере один 2'-MOE нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид и по меньшей мере один 2'-ОМе нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения 5'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид.
ii. Некоторые З'-крылья.
В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 1-8 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 1-7 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 1-6 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 1-5 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 2-5 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из З-5 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 4 или 5 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 1-4
- 21 031393 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 1-3 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 1 или 2 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 2-4 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 2 или 3 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из З или 4 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 1 нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 2 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из З связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 4 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 5 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера состоит из 6 связанных нуклеозидов.
В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один LNA нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид З'-крыла гэпмера представляет собой бициклический нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид З'-крыла гэпмера представляет собой стерически затрудненный этил-нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид З'-крыла гэпмера представляет собой LNA нуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один не бициклический модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'крыло гэпмера содержит по меньшей мере два не бициклических модифицированных нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере три не бициклических модифицированных нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере четыре не бициклических модифицированных нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один 2'-MOE нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один 2'-OMe нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид З'-крыла гэпмера представляет собой не бициклический модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид З'-крыла гэпмера представляет собой 2'замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид З'-крыла гэпмера представляет собой 2'-MOE нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид З'-крыла гэпмера представляет собой 2'-OMe нуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид З'-крыла гэпмера представляет собой 2'-дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один рибонуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид З'-крыла гэпмера представляет собой рибонуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения один, более одного или каждый из нуклеозидов 5'-крыла представляет собой РНКподобный нуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид и по меньшей мере один не бициклический модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид и по меньшей мере один 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид и по меньшей мере один 2'-MOE нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид и по меньшей мере один 2'-ОМе нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид и по меньшей мере один не бициклический модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид и по меньшей мере один 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид и по меньшей мере один 2'-MOE нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид и по меньшей мере один 2'-ОМе нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один
- 22 031393
LNA нуклеозид и по меньшей мере один не бициклический модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один LNA нуклеозид и по меньшей мере один 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'крыло гэпмера содержит по меньшей мере один LNA нуклеозид и по меньшей мере один 2'-MOE нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один LNA нуклеозид и по меньшей мере один 2'-OMe нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один LNA нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид, по меньшей мере один не бициклический модифицированный нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид, по меньшей мере один не бициклический модифицированный нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один LNA нуклеозид, по меньшей мере один не бициклический модифицированный нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид, по меньшей мере один 2'-замещенный нуклеозид и по меньшей мере один 2'дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид, по меньшей мере один 2'-замещенный нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'крыло гэпмера содержит по меньшей мере один LNA нуклеозид, по меньшей мере один 2'-замещенный нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид, по меньшей мере один 2'-MOE нуклеозид и по меньшей мере один 2'дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид, по меньшей мере один 2'-MOE нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один LNA нуклеозид, по меньшей мере один 2'-MOE нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид.
В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один бициклический нуклеозид, по меньшей мере один 2'-ОМе нуклеозид и по меньшей мере один 2'дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один стерически затрудненный этил-нуклеозид, по меньшей мере один 2'-ОМе нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения З'-крыло гэпмера содержит по меньшей мере один LNA нуклеозид, по меньшей мере один 2'-ОМе нуклеозид и по меньшей мере один 2'-дезоксинуклеозид.
iii. Некоторые центральные области (гэпы).
В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 6-20 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 6-15 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 6-12 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 6-10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 6-9 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 6-8 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 6 или 7 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 7-10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 7-9 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 7 или 8 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 8-10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 8 или 9 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 6 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 7 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 8 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 9 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 11 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп гэпмера состоит из 12 связанных нуклеозидов.
В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид гэпа гэпмера представляет собой 2'-дезоксинуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит один или более модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый нуклеозид гэпа гэпмера представляет собой 2'-дезоксинуклеозид или представляет собой модифицированный ДНК-подобный нуклеозид. В таких вариантах реализации изобретения ДНК-подобный означает, что
- 23 031393 нуклеозид имеет такие же характеристики, что и ДНК, то есть что дуплекс, содержащий гэпмер и молекулу РНК может активировать РНКазу Н. Например, было показано, что при некоторых условиях 2'(ara)-F поддерживает активацию РНКазы H и, следовательно, является ДНК-подобным. В некоторых вариантах реализации изобретения один или более нуклеозидов гэпа гэпмера не представляет собой 2'дезоксинуклеозид и не является ДНК-подобным. В некоторых таких вариантах реализации изобретения гэпмер тем не менее поддерживает активацию РНКазы H (например, за счет количества или положения не-ДНК нуклеозидов).
В некоторых вариантах реализации изобретения гэпы содержат участок немодифицированного 2'дезоксинуклеозида, прерванный одним или более модифицированными нуклеозидами, что приводит к образованию трех субрайонов (двух участков одного или более 2'-дезоксинуклеозидов и участка одного или более прерывающих модифицированных нуклеозидов). В некоторых вариантах реализации изобретения ни один участок немодифицированных 2'-дезоксинуклеозидов не длиннее 5, 6 или 7 нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения такие короткие участки образуются за счет применения коротких гэп-областей. В некоторых вариантах реализации изобретения короткие участки образуются за счет прерывания более длинной области гэп.
В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит один или более модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит один или более модифицированных нуклеозидов, выбранных из cEt, FHNA, LNA и 2-тиотимидина. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит один модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит 5'-замещенный сахарный фрагмент, выбранный из 5'-Me и 5'-(R)-Me. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит два модифицированных нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит три модифицированных нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит четыре модифицированных нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит два или более модифицированных нуклеозидов, и каждый модифицированный нуклеозид является таким же. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит два или более модифицированных нуклеозидов, и каждый модифицированный нуклеозид является другим.
В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит одну или более модифицированных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит одну или более метилфосфонатных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит две или более модифицированных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит одну или более модифицированных связей и один или более модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит одну модифицированную связь и один модифицированный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации изобретения гэп содержит две модифицированных связи и два или более модифицированных нуклеозидов.
b. Некоторые мотивы межнуклеозидных связей.
В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат модифицированные межнуклеозидные связи, расположенные вдоль олигонуклеотида или его области определенным образом или в виде мотива модифицированной межнуклеозидной связи. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат область, имеющую мотив чередующихся межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды по настоящему описанию содержат область одинаково модифицированных межнуклеозидных связей. В некоторых таких вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит область, которая равномерно связана тиофосфатными межнуклеозидными связями. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид равномерно связан тиофосфатными межнулеозидными связями. В некоторых вариантах реализации изобретения каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида выбран из фосфодиэфира и тиофосфата. В некоторых вариантах реализации изобретения каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида выбран из фосфодиэфира и тиофосфата, и по меньшей мере одна межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфат.
В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 6 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 7 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 8 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 9 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 10 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 11 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 12 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 13 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере 14 тиофосфатных межнуклеозидных связей.
В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок по меньшей мере из 6 смежных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах
- 24 031393 реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок по меньшей мере из 7 смежных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок по меньшей мере из 8 смежных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок по меньшей мере из 9 смежных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок по меньшей мере из 10 смежных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит по меньшей мере один блок по меньшей мере из 12 смежных тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых таких вариантах реализации изобретения по меньшей мере один такой блок расположен на 3'-конце олигонуклеотида. В некоторых таких вариантах реализации изобретения по меньшей мере один такой блок расположен в пределах 3 нуклеозидов 3'конца олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит менее 15 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит менее 14 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит менее 13 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит менее 12 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит менее 11 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит менее 10 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит менее 9 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит менее 8 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит менее 7 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит менее 6 тиофосфатных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит менее 5 тиофосфатных межнуклеозидных связей.
с. Некоторые мотивы модификаций азотистых оснований.
В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат химические модификации азотистых оснований, расположенные вдоль олигонуклеотида или его области определенным образом или в виде мотива модификации азотистых оснований. В некоторых таких вариантах реализации изобретения модификации азотистых оснований расположены в разорванном мотиве. В некоторых вариантах реализации изобретения модификации азотистых оснований расположены в чередующемся мотиве. В некоторых вариантах реализации изобретения каждое азотистое основание является модифицированным. В некоторых вариантах реализации изобретения ни одно из азотистых оснований не является химически модифицированным.
В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат блок модифицированных азотистых оснований. В некоторых таких вариантах реализации изобретения блок находится на 3'конце олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации изобретения блок находится в пределах 3 нуклеотидов З'-конца олигонуклеотида. В некоторых таких вариантах реализации изобретения блок находится на 5'-конце олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации изобретения блок находится в пределах 3 нуклеотидов 5'-конца олигонуклеотида.
В некоторых вариантах реализации изобретения модификации азотистых оснований зависят от природного основания в конкретном положении олигонуклеотида. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения каждый пурин или каждый пиримидин в олигонуклеотиде является модифицированным. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированным является каждый аденин. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированным является каждый гуанин. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированным является каждый тимин. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированным является каждый цитозин. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированным является каждый урацил.
В некоторых вариантах реализации изобретения некоторые, все или никакие из цитозиновых фрагментов в олигонуклеотиде не представляют собой 5-метилцитозиновые фрагменты. В настоящем документе 5-метилцитозин не является модифицированным азотистым основанием. Соответственно, если не указано иное, то немодифицированные азотистые основания включают как цитозиновые остатки, содержащие 5-метил, так и те, которые не содержат 5-метил. В некоторых вариантах реализации изобретения оговорено состояние метилирования всех или некоторых цитозиновых азотистых оснований.
В некоторых вариантах реализации изобретения химические модификации азотистых оснований включают присоединение некоторых конъюгирующих групп к азотистым основаниям. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый пурин или каждый пиримидин в олигонуклеотиде может быть необязательно модифицирован так, чтобы он содержал конъюгирующую группу.
- 25 031393
d. Некоторые общие длины.
В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены олигонуклеотиды любого из различных диапазонов длин. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат от X до Y связанных нуклеозидов, где X представляет собой наименьшее количество нуклеозидов в диапазоне, a Y представляет собой наибольшее количество нуклеозидов в диапазоне. В некоторых таких вариантах реализации изобретения каждый X и Y независимо выбран из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 и 50; при условии, что X<Y. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид может состоять из 8-9, 8-10, 8-11, 8-12, 8-13, 8-14, 8-15, 8-16, 8-17, 8-18, 8-19, 8-20, 8-21, 8-22, 823, 8-24, 8-25, 8-26, 8-27, 8-28, 8-29, 8-30, 9-10, 9-11, 9-12, 9-13, 9-14, 9-15, 9-16, 9-17, 9-18, 9-19, 9-20, 921, 9-22, 9-23, 9-24, 9-25, 9-26, 9-27, 9-28, 9-29, 9-30, 10-11, 10-12, 10-13, 10-14, 10-15, 10-16, 10-17, 10-18,
10- 19, 10-20, 10-21, 10-22, 10-23, 10-24, 10-25, 10-26, 10-27, 10-28, 10-29, 10-30, 11-12, 11-13, 11-14, 11-15,
11- 16, 11-17, 11-18, 11-19, 11-20, 11-21, 11-22, 11-23, 11-24, 11-25, 11-26, 11-27, 11-28, 11-29, 11-30, 12-13,
12- 14, 12-15, 12-16, 12-17, 12-18, 12-19, 12-20, 12-21, 12-22, 12-23, 12-24, 12-25, 12-26, 12-27, 12-28, 12-29,
12-30, 13-14, 13-15, 13-16, 13-17, 13-18, 13-19, 13-20, 13-21, 13-22, 13-23, 13-24, 13-25, 13-26, 13-27, 1328,13-29, 13-30, 14-15, 14-16, 14-17, 14-18, 14-19, 14-20, 14-21, 14-22, 14-23, 14-24, 14-25, 14-26, 14-27, 1428, 14-29, 14-30, 15-16, 15-17, 15-18, 15-19, 15-20, 15-21, 15-22, 15-23, 15-24, 15-25, 15-26, 15-27, 15-28, 1529, 15-30, 16-17, 16-18, 16-19, 16-20, 16-21, 16-22, 16-23, 16-24, 16-25, 16-26, 16-27, 16-28, 16-29, 16-30, 1718, 17-19, 17-20, 17-21, 17-22, 17-23, 17-24, 17-25, 17-26, 17-27, 17-28, 17-29, 17-30, 18-19, 18-20, 18-21, 1822, 18-23, 18-24, 18-25, 18-26, 18-27, 18-28, 18-29, 18-30, 19-20, 19-21, 19-22, 19-23, 19-24, 19-25, 19-26, 1929, 19-28, 19-29, 19-30, 20-21, 20-22, 20-23, 20-24, 20-25, 20-26, 20-27, 20-28, 20-29, 20-30, 21-22, 21-23, 2124, 21-25, 21-26, 21-27, 21-28, 21-29, 21-30, 22-23, 22-24, 22-25, 22-26, 22-27, 22-28, 22-29, 22-30, 23-24, 2325, 23-26, 23-27, 23-28, 23-29, 23-30, 24-25, 24-26, 24-27, 24-28, 24-29, 24-30, 25-26, 25-27, 25-28, 25-29, 2530, 26-27, 26-28, 26-29, 26-30, 27-28, 27-29, 27-30, 28-29, 28-30 или 29-30 связанных нуклеозидов. В тех вариантах реализации, в которых количество нуклеозидов в олигонуклеотиде соединения является ограниченным, либо до диапазона, либо до определенного числа, то соединение может, тем не менее, дополнительно содержать другие дополнительные заместители. Например, олигонуклеотид, содержащий 8-30 нуклеозидов, исключает олигонуклеотиды, имеющие 31 нуклеозид, но, если не указано иное, такой олигонуклеотид может дополнительно содержать, например, одну или более конъюгирующих групп, концевых групп или других заместителей.
Более того, если олигонуклеотид описан общим диапазоном длины и областями, имеющими определенную длину, и если сумма указанных длин областей меньше, чем верхняя граница диапазона общей длины, то олигонуклеотид может иметь дополнительные нуклеозиды, помимо тех, которые находятся в указанных областях, при условии, что общее количество нуклеозидов не превышает верхнюю границу диапазона общей длины.
5. Некоторые химические мотивы антисмысловых олигонуклеотидов.
В некоторых вариантах реализации изобретения химические структурные особенности антисмысловых олигонуклеотидов описываются их сахарным мотивом, мотивом межнуклеозидной связи, мотивом модификации азотистые основания и общей длиной. В некоторых вариантах реализации изобретения такие параметры не зависят друг от друга. Так, каждая межнуклеозидная связь олигонуклеотида, имеющий сахарный мотив гэпмера, может быть модифицированным или немодифицированным и может повторять или не повторять характер модификации сахарных модификаций гэпмера. Следовательно, межнуклеозидные связи в областях крыльев сахара-гэпмера могут быть одинаковыми или отличными друг от друга и могут быть одинаковыми или отличными от межнуклеозидных связей области гэп. Точно так же такие сахар-гэпмерные олигонуклеотиды могут содержать одно или более модифицированных азотистых оснований, независимо от характера сахарных модификаций гэпмера. Специалистам в данной области техники понятно, что такие мотивы могут быть комбинированы с получением множества олигонуклеотидов.
В некоторых вариантах реализации изобретения выбор межнуклеозидной связи и модификации нуклеозида не зависят друг от друга.
i. Некоторые последовательности и мишени.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения приведены антисмысловые олигонуклеотиды, имеющие последовательность, комплементарную целевой нуклеиновой кислоте. Такие антисмысловые соединения могут гибридизоваться с целевой нуклеиновой кислотой с получением по меньшей мере одной антисмысловой активности. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения специфически гибридизуются с одной или более целевыми нуклеиновыми кислотами. В некоторых вариантах реализации изобретения специфически гибридизующееся антисмысловое соединение имеет последовательность азотистых оснований, содержащую область с достаточной комплементарностью целевой нуклеиновой кислоте для обеспечения возможности гибридизации и получению антисмысловой активности, и недостаточной комплементарностью любой нецелевой нуклеиновой кислоте для предотвращения или снижения неспецифической гибридизации с последовательностями нецелевых нуклеиновых кислот в условиях, в которых необходима специфическая гибридизация (напри
- 26 031393 мер, в физиологических условиях для in vivo или терапевтических применений и в условиях выполнения анализов - в случае in vitro анализов). В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды являются селективными между мишенью и не мишенью, даже если мишень и не мишень содержат целевую последовательность. В таких вариантах реализации изобретения селективность может быть результатом относительной доступности целевой области одной молекулы нуклеиновой кислоты по сравнению с другой.
В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены антисмысловые соединения, содержащие олигонуклеотиды, которые полностью комплементарны целевой нуклеиновой кислоте по всей длине олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды на 99% комплементарны целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды на 95% комплементарны целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации изобретения такие олигонуклеотиды на 90% комплементарны целевой нуклеиновой кислоте.
В некоторых вариантах реализации изобретения такие олигонуклеотиды на 85% комплементарны целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации изобретения такие олигонуклеотиды на 80% комплементарны целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловое соединение содержит область, которая полностью комплементарна целевой нуклеиновой кислоте, и по меньшей мере на 80% комплементарно целевой нуклеиновой кислоте по всей длине олигонуклеотида. В некоторых таких вариантах реализации изобретения область полной комплементарности имеет от 6 до 14 нуклеозидов в длину.
В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды содержат область гибридизации и концевую область. В некоторых таких вариантах реализации изобретения область гибридизации состоит из 12-30 связанных нуклеозидов и полностью комплементарна целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации изобретения область гибридизации содержит одно несоответствие в сравнении с целевой нуклеиновой кислотой. В некоторых вариантах реализации изобретения область гибридизации содержит два несоответствия в сравнении с целевой нуклеиновой кислотой. В некоторых вариантах реализации изобретения область гибридизации содержит три несоответствия в сравнении с целевой нуклеиновой кислотой. В некоторых вариантах реализации изобретения концевая область состоит из 1-4 концевых нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения концевые нуклеозиды находятся на 3'-конце. В некоторых вариантах реализации изобретения один или более концевых нуклеозидов не комплементарны целевой нуклеиновой кислоте.
Антисмысловые механизмы включают любой механизм, затрагивающий гибридизацию олигонуклеотида с целевой нуклеиновой кислотой, при этом гибридизация приводит к биологическому эффекту. В некоторых вариантах реализации изобретения такая гибридизация приводит либо к разрушению, либо к применению целевой нуклеиновой кислоты с сопутствующим подавлением или стимулированием клеточного механизма, затрагивающего, например, трансляцию, транскрипцию или сплайсинг целевой нуклеиновой кислоты.
Один из типов антисмыслового механизма, затрагивающий разрушение целевой РНК представляет собой антисмысл, опосредованный РНКазой Н. РНКаза H представляет собой клеточную эндонуклеазу, которая расщепляет спираль РНК дуплекса РНК:ДНК. В данной области техники известно, что одноцепочечные антисмысловые соединения, которые являются ДНК-подобными, вызывают активность РНКазы H в клетках млекопитающих. Следовательно, активация РНКазы H приводит к расщеплению РНК-мишени, посредством этого в значительной степени усиливая эффективность подавления генной экспрессии, опосредованного ДНК-подобным олигонуклеотидом.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующая группа содержит расщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующая группа содержит одну или более расщепляемых связей. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующая группа содержит линкер. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер содержит фрагмент, связывающий белки. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующая группа содержит фрагмент, нацеливающий на клетку (упоминаемый также как группа, нацеливающая на клетку). В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит группу ветвления. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит одну или более связок. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент, нацеливающий на клетку, содержит углевод или углеводный кластер.
ii. Некоторые расщепляемые фрагменты.
В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой расщепляемую связь. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент содержит расщепляемую связь. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующая группа содержит расщепляемый фрагмент. В некоторых таких вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент присоединяется к антисмысловому олигонуклеотиду. В некоторых таких вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент присоединяется непосредственно к фрагменту, нацеливающему на клетку. В некоторых таких вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент присоединяется к линкеру конъюгата. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент содер- 27 031393 жит фосфат или фосфодиэфир. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой расщепляемый нуклеозид или нуклеозидный аналог. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозид или нуклеозидный аналог содержит необязательно защищенное гетероциклическое основание, выбранное из пурина, замещенного пурина, пиримидина или замещенного пиримидина. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой нуклеозид, содержащий необязательно защищенное гетероциклическое основание, выбранное из урацила, тимина, цитозина, 4-№-бензоилцитозина, 5-метилцитозина, 4-№-бензоил-5-метилцитозина, аденина, 6-Nбензоиладенина, гуанина и 2-№-изобутирилгуанина. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой 2'-дезоксинуклеозид, который присоединен к 3'-положению антисмыслового олигонуклеотида фосфодиэфирной связью и присоединен к линкеру фосфодиэфирной или тиофосфатной связью. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой 2'-дезоксиаденозин, который присоединен к 3'-положению антисмыслового олигонуклеотида фосфодиэфирной связью и присоединен к линкеру фосфодиэфирной или тиофосфатной связью. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой 2'дезоксиаденозин, который присоединен к 3'-положению антисмыслового олигонуклеотида фосфодиэфирной связью и присоединен к линкеру фосфодиэфирной связью.
В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент присоединен к 3'положению антисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент присоединен к 5'-положению антисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент присоединен к 2'-положению антисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент присоединен к антисмысловому олигонуклеотиду фосфодиэфирной связью. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент присоединен к указанному линкеру либо фосфодиэфирной, либо тиофосфатной связью. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент присоединен к указанному линкеру фосфодиэфирной связью. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующая группа не содержит расщепляемый фрагмент.
В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент расщепляется после введения указанного комплекса в организм животного только после его поглощения целевой клеткой. Внутри клетки расщепляемый фрагмент расщепляется, высвобождая таким образом активный антисмысловый олигонуклеотид. Не ограничиваясь теорией, предполагается, что расщепляемый фрагмент расщепляется под действием одной или более нуклеаз внутри клетки. В некоторых вариантах реализации изобретения одна или более нуклеаз расщепляют фосфодиэфирную связь между расщепляемым фрагментом и линкером. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент имеет структуру, выбранную из следующих:
где каждый из Вх, Bx1, Bx2 и Вх3 независимо представляет собой гетероциклический основной фрагмент. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент имеет структуру, выбранную из следующих:
- 28 031393 iii. Некоторые линкеры.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы содержат линкер. В некоторых таких вариантах реализации изобретения линкер ковалентно связан с расщепляемым фрагментом. В некоторых таких вариантах реализации изобретения линкер ковалентно связан с антисмысловым олигонуклеотидом. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер ковалентно связан с фрагментом, нацеливающим на клетку. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер дополнительно содержит ковалентное присоединение к твердой подложке. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер дополнительно содержит ковалентное присоединение к белковому связывающему фрагменту. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер дополнительно содержит ковалентное присоединение к твердой подложке и дополнительно содержит ковалентное присоединение к белковому связывающему фрагменту. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер содержит несколько положений для присоединения связанных лигандов. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер содержит несколько положений для присоединения связанных лигандов и не присоединен к группе ветвления. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер дополнительно содержит одну или более расщепляемых связей. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующая группа не содержит линкер.
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер содержит по меньшей мере одну линейную группу, содержащую группы, выбранные из алкильных, амидных, дисульфидных, полиэтиленгликолевых, тиоэфирных (-S-) и гидроксиламино (-O-N(H)-) групп. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа содержит группы, выбранные из алкильных, амидных и простых эфирных групп. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа содержит группы, выбранные из алкильных и простых эфирных групп. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа содержит по меньшей мере одну фосфорную связывающую группу. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа содержит по меньшей мере одну фосфодиэфирную группу. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа содержит по меньшей мере одну нейтральную связывающую группу. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа ковалентно присоединена к фрагменту, нацеливающему на клетку, и к расщепляемому фрагменту. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа ковалентно присоединена к фрагменту, нацеливающему на клетку, и к антисмысловому олигонуклеотиду. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа ковалентно присоединена к фрагменту, нацеливающему на клетку, к расщепляемому фрагменту и к твердой подложке. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа ковалентно присоединена к фрагменту, нацеливающему на клетку, к расщепляемому фрагменту, к твердой подложке и к белковому связывающему фрагменту. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа содержит одну или более расщепляемых связей.
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер содержит линейную группу, ковалентно присоединенную к группе скелета. В некоторых вариантах реализации изобретения скелет содержит разветвленную алифатическую группу, которая содержит группы, выбранные из алкильных, амидных, дисульфидных, полиэтиленгликолевых, простых эфирных, тиоэфирных и гидроксиламиногрупп. В некоторых вариантах реализации изобретения скелет содержит разветвленную алифатическую группу, которая содержит группы, выбранные из алкильных, амидных и простых эфирных групп. В некоторых вариантах реализации изобретения скелет содержит по меньшей мере одну моно- или полициклическую кольцевую систему. В некоторых вариантах реализации изобретения скелет содержит по меньшей мере две моноили полициклические кольцевые системы. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа ковалентно присоединена к группе скелета, а группа скелета ковалентно присоединена к расщепляемому фрагменту и линкеру. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа ковалентно присоединена к группе скелета, а группа скелета ковалентно присоединена к расщепляемому фрагменту, линкеру и твердой подложке. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа ковалентно присоединена к группе скелета, а группа скелета ковалентно присоединена к расщепляемому фрагменту, линкеру и белковому связывающему фрагменту. В некоторых вариантах реализации изобретения линейная группа ковалентно присоединена к группе скелета, а группа скелета ковалентно присоединена к расщепляемому фрагменту, линкеру, белковому связывающему фрагменту и твердой подложке. В некоторых вариантах реализации изобретения группа скелета содержит одну или более расщепляемых связей.
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер содержит фрагмент, связывающий белки. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент, связывающий белки, представляет собой липид, такой как, например, включая, но не ограничиваясь ими, холестерин, холевая кислота, адамантануксусная кислота, 1-пирен-масляная кислота, дигидротестостерон, 1,3-бис-O(гексадецил)глицерин, геранилоксигексиловая группа, гексадецилглицерин, борнеол, ментол, 1,3-пропандиол, гептадециловая группа, пальмитиновая кислота, миристиновая кислота, O3-(олеоил) литохолевая кислота, О3(олеоил)холеновая кислота, диметокситритил или феноксазин, витамин (например, фолат, витамин А, витамин Е, биотин, пиридоксаль), пептид, углевод (например, моносахарид, дисахарид, трисахарид, тетрасахарид, олигосахарид, полисахарид), эндосомолитический компонент, стероид (например, уваол, ге
- 29 031393 цигенин, диосгенин), терпен (например, тритерпен, например, сарсасапогенин, фриделин, литохолевая кислота, дериватизованная эпифриделанолом) или катионный липид. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент, связывающий белки, представляет собой насыщенную или ненасыщенную жирную кислоту с длиной цепи от С16 до С22, холестерин, холевую кислоту, витамин Е, адамантан или 1пентафторпропил.
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
н н Н | I. „Ή7 | ί—ΝΗ 1 0 - А |
0 | 1 θ Λ 1 f y^O-P-OH : . И δ ί—ΝΗ | |
Г 0 ^iC^oT'0 х0Н у4· | Α ς η 1. , | I. 0 ζΧ-°ν |
где каждый n независимо равен от 1 до 20 и p равен от 1 до 6.
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
где каждый n независимо равен от 1 до 20.
- 30 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
где n равен от 1 до 20.
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
Ώ Н о н
θ Η θ □ о
где каждый L независимо представляет собой фосфорную связывающую группу или нейтральную связывающую группу и каждый n независимо равен от 1 до 20.
- 31 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
- 32 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
где n равен от 1 до 20.
- 33 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из: он он
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер конъюгата имеет структуру
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер конъюгата имеет структуру
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации изобретения линкер имеет структуру, выбранную из:
где каждый n независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7.
iv. Некоторые фрагменты, нацеливающие на клетку.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы содержат фрагменты, нацеливающие на клетку. Некоторые такие фрагменты, нацеливающие на клетку, увеличивают клеточный захват антисмысловых соединений. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагменты, нацеливающие на клетку, содержат группу ветвления, одну или более связок и один или более лигандов. В некоторых вариантах реализации изобретения фрагменты, нацеливающие на клетку, содержат группу ветвления, одну или более связок, один или более лигандов и одну или более расщепляемых связей.
1. Некоторые группы ветвления.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы содержат нацеливающий фрагмент, содержащий группу ветвления и по меньшей мере два связанных лиганда. В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления присоединяет линкер конъюгата. В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления присоединяет расщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления присоединяет антисмысловый олигонуклеотид. В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления ковалентно присоединена к линкеру и каждому из связанных лигандов. В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления содержит разветвленную алифатическую группу, которая содержит группы, выбранные из алкильных, амидных, дисульфидных, полиэтиленгликолевых, простых эфирных, тиоэфирных и гидроксиламино-групп. В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления содержит группы, выбранные из алкильных, амидных и простых эфирных групп. В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления содержит группы, выбранные из алкильных и простых эфирных групп. В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления содержит моно- или полициклическую кольцевую систему. В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления содержит одну или более расщепляемых связей. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующая группа не содержит группу ветвления.
- 34 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
где каждый n независимо равен от 1 до 20; j равен от 1 до 3 и m равен от 2 до 6.
В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
где каждый n независимо равен от 1 до 20; и m равен от 2 до 6.
- 35 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
где каждый A1 независимо представляет собой О, S, С^ или NH и каждый n независимо равен от 1 до 20.
В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
Т
A-ι ) А| ‘А1 А|
Τη Ап ΐ Th A, j где каждый A1 независимо представляет собой О, S, С^ или NH и каждый n независимо равен от 1 до 20.
В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
’|г Л
Ti где A1 представляет собой О, S, С^ или NH и каждый n независимо равен от 1 до 20.
В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
- 36 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах реализации изобретения группа ветвления имеет структуру, выбранную из:
К γ-
2. Некоторые связки.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы содержат одну или более связок, ковалентно присоединенных к группе ветвления. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы содержат одну или более связок, ковалентно присоединенных к связывающей группе. В некоторых вариантах реализации изобретения каждая связка представляет собой линейную алифатическую группу, содержащую одну или более групп, выбранных из алкильных, простых эфирных, тиоэфирных, дисульфидных, амидных и полиэтиленгликолевых групп в любой комбинации. В некоторых вариантах реализации изобретения каждая связка представляет собой линейную алифатическую группу, содержащую одну или более групп, выбранных из алкильных, замещенных алкильных, простых эфирных, тиоэфирных, дисульфидных, амидных, фосфодиэфирных и полиэтиленгликолевых групп в любой комбинации. В некоторых вариантах реализации изобретения каждая связка представляет собой линейную алифатическую группу, содержащую одну или более групп, выбранных из алкильных, простых эфирных и амидных групп в любой комбинации. В некоторых вариантах реализации изобретения каждая связка представляет собой линейную алифатическую группу, содержащую одну или более групп, выбранных из алкильных, замещенных алкильных, фосфодиэфирных, простых эфирных и амидных групп в любой комбинации. В некоторых вариантах реализации изобретения каждая связка представляет собой линейную алифатическую группу, содержащую одну или более групп, выбранных из алкила и фосфодиэфира в любой комбинации. В некоторых вариантах реализации изобретения каждая связка содержит по меньшей мере одну фосфорную связывающую группу или нейтральную связывающую груп пу.
В некоторых вариантах реализации изобретения связка содержит одну или более расщепляемых связей. В некоторых вариантах реализации изобретения связка присоединена к группе ветвления через амидную или простую эфирную группу. В некоторых вариантах реализации изобретения связка присоединена к группе ветвления через фосфордиэфирную группу. В некоторых вариантах реализации изобретения связка присоединена к группе ветвления через фосфорную связывающую группу или через нейтральную связывающую группу. В некоторых вариантах реализации изобретения связка присоединена к группе ветвления через простую эфирную группу. В некоторых вариантах реализации изобретения связка присоединена к лиганду либо через амидную, либо через простую эфирную группу. В некоторых вариантах реализации изобретения связка присоединена к лиганду через простую эфирную группу. В некоторых вариантах реализации изобретения связка присоединена к лиганду либо через амидную, либо через простую эфирную группу. В некоторых вариантах реализации изобретения связка присоединена к лиганду через простую эфирную группу.
В некоторых вариантах реализации изобретения каждая связка имеет длину от около 8 до около 20 атомов в цепи между лигандом и группой ветвления. В некоторых вариантах реализации изобретения каждая связка имеет длину от около 10 до около 18 атомов в цепи между лигандом и группой ветвления. В некоторых вариантах реализации изобретения каждая связка имеет длину около 13 атомов в цепи.
В некоторых вариантах реализации изобретения связка имеет структуру, выбранную из:
- 37 031393 где каждый n независимо равен от 1 до 20 и каждый p равен от 1 до около 6.
В некоторых вариантах реализации изобретения связка имеет структуру, выбранную из: Он
II О · : N у Г
- N О ' ' II ’ но н„ у о ; о о ; N ;ио .
В некоторых вариантах реализации изобретения связка имеет структуру, выбранную из:
где каждый n независимо равен от 1 до 20.
В некоторых вариантах реализации изобретения связка имеет структуру, выбранную из:
где L представляет собой либо фосфорную связывающую группу, либо нейтральную связывающую группу;
Z1 представляет собой C(=O)O-R2;
Z2 представляет собой Н, C1-C6 алкил или замещенный C1-C6 алкил;
R2 представляет собой Н, C1-C6 алкил или замещенный C1-C6 алкил и каждый m1 независимо равен от 0 до 20, при этом по меньшей мере один m1 больше 0 для каждой связки.
В некоторых вариантах реализации изобретения связка имеет структуру, выбранную из:
о о
В некоторых вариантах реализации изобретения связка имеет структуру, выбранную из:
где Z2 представляет собой H или CH3 и каждый m1 независимо равен от 0 до 20, при этом по меньшей мере один m1 больше 0 для каждой связки.
В некоторых вариантах реализации изобретения связка имеет структуру, выбранную из:
или
где каждый n независимо равен 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7.
В некоторых вариантах реализации изобретения связка содержит фосфорную связывающую группу. В некоторых вариантах реализации изобретения связка не содержит ни одной амидной связи. В некоторых вариантах реализации изобретения связка содержит фосфорную связывающую группу и не содержит ни одной амидной связи.
3. Некоторые лиганды.
В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены лиганды, при этом каждый лиганд ковалентно присоединен к связке. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый лиганд выбран так, чтобы он обладал аффинностью по меньшей мере к одному типу рецептора на клеткемишени. В некоторых вариантах реализации изобретения лиганды выбраны так, чтобы они обладали аффинностью по меньшей мере к одному типу рецептора на поверхности клетки печени млекопитающего. В некоторых вариантах реализации изобретения лиганды выбраны так, чтобы они обладали аффинностью к печеночному асиалогликопротеиновому рецептору (ASGP-R). В некоторых вариантах реализации изобретения каждый лиганд представляет собой углевод. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый лиганд независимо выбран из галактозы, N-ацетилгалактозамина, маннозы, глюкозы, глюкозамина и фукозы. В некоторых вариантах реализации изобретения каждый лиганд представляет собой Nацетилгалактозамин (GalNAc). В некоторых вариантах реализации изобретения нацеливающий фрагмент содержит 2-6 лигандов. В некоторых вариантах реализации изобретения нацеливающий фрагмент содержит 3 лиганда. В некоторых вариантах реализации изобретения нацеливающий фрагмент содержит 3 N-ацетилгалактозаминовых лиганда.
- 38 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения лиганд представляет собой углевод, углеводное производное, модифицированный углевод, поливалентный углеводный кластер, полисахарид, модифицированный полисахарид или полисахаридное производное. В некоторых вариантах реализации изобретения лиганд представляет собой аминосахар или тиосахар. Например, аминосахара могут быть выбраны из любого количества соединений, известных в данной области техники, например глюкозамина, сиаловой кислоты, tt-D-галактозамина, N-ацетилгалактозамина, 2-ацетамидо-2-дезокси-П-галактопиранозы (GalNAc), 2-амино-3-O-[(R)-1-карбоксиэтил]-2-дезокси-β-D-глюкопиранозы (β-мурамовой кислоты), 2дезокси-2-метиламино^-глюкопиранозы, 4,6-дидезокси-4-формамидо-2,3-ди-O-метил-D-маннопиранозы, 2-дезокси-2-сульфоамино^-глюкопиранозы и №сульфо^-глюкозамина, и N-гликолоил-анейраминовой кислоты. Например, тиосахара могут быть выбраны из группы, состоящей из 5-тио-[‘)-1)глюкопиранозы, метил 2,3,4-три-O-ацетил-1-тио-6-O-триΊил-tt-D-глюкопиранозида, 4-ΊΉΘ-βΟгалактопиранозы и этил 3,4,6,7-тетра-O-ацетил-2-дезокси-1,5-дитио-tt-D-глюкогептопиранозида.
В некоторых вариантах реализации изобретения GalNac или Gal-NAc относится к 2(ацетиламино)-2-дезокси^-галактопиранозе, обычно упоминаемой в литературе как Nацетилгалактозамин. В некоторых вариантах реализации изобретения N-ацетилгалактозамин относится к 2-(ацетиламино)-2-дезокси^-галактопиранозе. В некоторых вариантах реализации изобретения GalNac или Gal-NAc относится к 2-(ацетиламино)-2-дезокси^-галактопиранозе. В некоторых вариантах реализации изобретения GalNac или Gal-NAc относится к 2-(ацетиламино)-2-дезокси^галактопиранозе, которая включает и β-форму: 2-(ацетиламино)-2-дезокси^^-галактопиранозу и ttформу: 2-(ацетиламино)-2-дезокси^-галактопиранозу. В некоторых вариантах реализации изобретения обе формы, β-форма: 2-(ацетиламино)-2-дезокси^^-галактопираноза и tt-форма: 2-(ацетиламино)-2дезокси^-галактопираноза, могут быть применены взаимозаменяемо. Соответственно в структурах, в которых изображена одна форма, подразумевается, что эти структуры включают также и другую форму. Например, если показана структура для tt-формы: 2-(ацетиламино)-2-дезокси^-галактопиранозы, то подразумевается, что эта структура включает также и другую форму. В некоторых предпочтительных вариантах реализации изобретения β-форма 2-(ацетиламино)-2-дезокси^-галактопиранозы является предпочтительным вариантом реализации.
2-(Ацетиламино)-2-дезокси^-галактопирапоза
2-(Ацетиламино)-2-дезокси^^-галактопираноза
2-(Ацетиламино)-2-дезокси^^-галактопираноза
В некоторых вариантах один или более лигандов имеют структуру, выбранную из:
он
НО ---..-О
НО— 1 он
R1 I ‘
0-0 е - - -о— где каждый R1 выбран из OH и NHCOOH.
- 39 031393
В некоторых вариантах один или более лигандов имеют структуру, выбранную из:
В некоторых вариантах один или более лигандов имеют структуру, выбранную из:
ноон
HoAv—уЛ/
NHAc В некоторых вариантах один или более лигандов имеют структуру, выбранную из:
ноон о
ΗθΑ^--γΛ/ \у
NHAc
i. Некоторые конъюгаты.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы содержат структурные особенности, представленные выше. В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюги рующие группы имеют следующую структуру:
где каждый n независимо равен от 1 до 20.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
где каждый n независимо равен от 1 до 20;
Z представляет собой H или связанную твердую подложку;
- 40 031393
Q представляет собой антисмысловое соединение;
X представляет собой О или S и
Вх представляет собой гетероциклический основной фрагмент.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
ноон
NHAc .
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
НООН
NHAc .
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
- 41 031393
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгаты не содержат пирролидин.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
- 42 031393
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
NHAc .
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
AcHN
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
AcHN
- 43 031393
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
AcHN
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы имеют следующую структуру:
- 44 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из шести-одиннадцати последовательно связанных атомов.
В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из десяти последовательно связанных атомов.
В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из четырех-одиннадцати последовательно связанных атомов, и при этом указанная связка содержит только одну амидную связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где Y и Z независимо выбраны из C1-C12 замещенной или незамещенной алкильной, алкенильной или алкинильной группы или группы, содержащей эфир, кетон, амид, сложный эфир, карбамат, амин, пиперидин, фосфат, фосфодиэфир, тиофосфат, триазол, пирролидин, дисульфид или тиоэфир.
- 45 031393
В некоторых таких вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
где Y и Z независимо выбраны из C1-C12 замещенной или незамещенной алкильной группы или группы, содержащей ровно один эфир или ровно два эфира, амид, амин, пиперидин, фосфат, фосфодиэфир или тиофосфат.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
НООН
AcHN N^z-0 норн он | ч
Η0^γ2^°-γ'ΝΛ+0^ΑΝΛ АСНноон 'Ζ'Ύ0
AcHN где Y и Z независимо выбраны из C1-C12 замещенной или незамещенной алкильной группы.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
AcHN где m и n независимо выбраны из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 и 12.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
AcHN где m равен 4, 5, 6, 7 или 8 и n равен 1, 2, 3 или 4.
В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
AcHN где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из четырех-тринадцати последовательно связанных атомов и при этом X не содержит эфирную группу.
- 46 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
AcHN где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из восьми последовательно связанных атомов и при этом X не содержит эфирную группу.
В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
AcHN где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из четырех-тринадцати последовательно связанных атомов и при этом указанная связка содержит только одну амидную связь, а X не содержит эфирную группу.
В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
AcHN где X представляет собой замещенную или незамещенную связку из четырех-тринадцати последовательно связанных атомов и при этом указанная связка состоит из амидной связи и замещенной или незамещенной C2-C11 алкильной группы.
В некоторых вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
AcHN где Y выбран из C1-C12 замещенной или незамещенной алкильной, алкенильной или алкинильной группы или группы, содержащей эфир, кетон, амид, сложный эфир, карбамат, амин, пиперидин, фосфат, фосфодиэфир, тиофосфат, триазол, пирролидин, дисульфид или тиоэфир.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
AcHN
- 47 031393 где Y выбран из C1-C12 замещенной или незамещенной алкильной группы или группы, содержащей эфир, амин, пиперидин, фосфат, фосфодиэфир или тиофосфат.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
AcHN норн
НО
AcHN где Y выбран из C1-C12 замещенной или незамещенной алкильной группы.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
AcHN где n равен 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения фрагмент конъюгирующей группы, нацеливающий на клетку, имеет следующую структуру:
ноон
AcHN где n равен 4, 5, 6, 7 или 8.
b. Некоторые конъюгированные антисмысловые соединения.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгаты связаны с нуклеозидом антисмыслового олигонуклеотида в 2'-, 3'- или 5'-положении нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
где А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид;
В представляет собой расщепляемый фрагмент;
С представляет собой линкер конъюгата;
D представляет собой группу ветвления;
каждый Е представляет собой связку; каждый F представляет собой лиганд и q представляет собой целое число от 1 до 5.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
где А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид; С представляет собой линкер конъюгата;
D представляет собой группу ветвления;
- 48 031393 каждый Е представляет собой связку;
каждый F представляет собой лиганд и q представляет собой целое число от 1 до 5.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения линкер конъюгата содержит по меньшей мере одну расщепляемую связь.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения группа ветвления содержит по меньшей мере одну расщепляемую связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения каждая связка содержит по меньшей мере одну расщепляемую связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгаты связаны с нуклеозидом антисмыслового олигонуклеотида в 2'-, 3'- или 5'-положении нуклеозида.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
где А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид;
В представляет собой расщепляемый фрагмент;
С представляет собой линкер конъюгата;
каждый Е представляет собой связку;
каждый F представляет собой лиганд и q представляет собой целое число от 1 до 5.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгаты связаны с нуклеозидом антисмыслового олигонуклеотида в 2'-, 3'- или 5'-положении нуклеозида. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
где А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид;
С представляет собой линкер конъюгата;
каждый Е представляет собой связку;
каждый F представляет собой лиганд и q представляет собой целое число от 1 до 5.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
где А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид;
В представляет собой расщепляемый фрагмент;
D представляет собой группу ветвления;
каждый Е представляет собой связку;
каждый F представляет собой лиганд и q представляет собой целое число от 1 до 5.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение имеет следующую структуру:
где А представляет собой антисмысловый олигонуклеотид;
D представляет собой группу ветвления;
каждый Е представляет собой связку;
каждый F представляет собой лиганд и q представляет собой целое число от 1 до 5.
В некоторых таких вариантах реализации изобретения линкер конъюгата содержит по меньшей мере одну расщепляемую связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения каждая связка содержит по меньшей мере одну расщепляемую связь.
- 49 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
Нацеливающий фрагмент
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение имеет структуру, выбранную из следующих:
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение име-
Иллюстративные патенты Соединенных Штатов Америки, публикации патентных заявок Соединенных Штатов Америки и публикации международных патентных заявок, в которых описано получение некоторых из указанных выше конъюгатов, конъюгированных антисмысловых соединений, связок, линкеров, групп ветвления, лигандов, расщепляемых фрагментов, а также других модификаций, включают, без ограничения, US 5994517, US 6300319, US 6660720, US 6906182, US 7262177, US 7491805, US 8106022, US 7723509, US 2006/0148740, US 2011/0123520, WO2013/033230 и WO2012/037254, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
Иллюстративные публикации, в которых описано получение некоторых из указанных выше конъюгатов, конъюгированных антисмысловых соединений, связок, линкеров, групп ветвления, лигандов, расщепляемых фрагментов, а также других модификаций, включают, без ограничения, BIESSEN et al., The Cholesterol Derivative of a Triantennary Galactoside with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor: a Potent Cholesterol Lowering Agent J. Med. Chem. (1995) 38:1846-1852, BIESSEN et al., Synthesis of Cluster Galactosides with High Affinity for the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor J. Med. Chem. (1995) 38:1538-1546, LEE et al., New and more efficient multivalent glyco-ligands for asialoglycoprotein receptor of mammalian hepatocytes Bioorganic & Medicinal Chemistry (2011) 19:2494-2500, RENSEN et al., Determination of the Upper Size Limit for Uptake and Processing of Ligands by the Asialoglycoprotein Receptor on
- 50 031393
Hepatocytes in Vitro and in Vivo, J. Biol. Chem. (2001) 276(40):37577-37584, RENSEN et al., Design and Synthesis of Novel N-Acetylgalactosamine-Terminated Glycolipids for Targeting of Lipoproteins to the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor, J. Med. Chem. (2004) 47:5798-5808, SLIEDREGT et al., Design and Synthesis of Novel Amphiphilic Dendritic Galactosides for Selective Targeting of Liposomes to the Hepatic Asialoglycoprotein Receptor, J. Med. Chem. (1999) 42:609-618 и Valentijn et al., Solid-phase synthesis of lysine-based cluster galactosides with high affinity for the Asialoglycoprotein Receptor, Tetrahedron, 1997, 53(2), 759-770, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения содержат олигонуклеотид на основе РНКазы H (такой как гэпмер) или сплайс-модулирующий олигонуклеотид (такой как полностью модифицированный олигонуклеотид) и любую конъюгирующую группу, содержащую по меньшей мере одну, две или три группы GalNAc. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение содержит любую конъюгирующую группу, приведенную в следующих ссылках: Lee, Carbohydr Res, 1978, 67, 509-514; Connolly et al., J Biol Chem, 1982, 257, 939-945; Pavia et al., Int J Pep Protein Res, 1983, 22, 539-548; Lee et al., Biochem, 1984, 23, 4255-4261; Lee et al., Glycoconjugate J, 1987, 4, 317-328; Toyokuni et al., Tetrahedron Lett, 1990, 31, 2673-2676; Biessen et al., J Med Chem, 1995, 38, 1538-1546; Valentijn et al., Tetrahedron, 1997, 53, 759-770; Kim et al., Tetrahedron Lett, 1997, 38, 3487-3490; Lee et al., Bioconjug Chem, 1997, 8, 762-765; Kato et al., Glycobiol, 2001, 11, 821-829; Rensen et al., J Biol Chem, 2001, 276, 37577-37584; Lee et al., Methods Enzymol, 2003, 362, 38-43; Westerlind et al., Glycoconj J, 2004, 21, 227-241; Lee et al., Bioorg Med Chem Lett, 2006, 16(19), 5132-5135; Maierhofer et al., Bioorg Med Chem, 2007, 15, 7661-7676; Khorev et al., Bioorg Med Chem, 2008, 16, 52165231; Lee et al., Bioorg Med Chem, 2011, 19, 2494-2500; Kornilova et al., Analyt Biochem, 2012, 425, 43-46; Pujol et al., Angew Chemie Int Ed Engl, 2012, 51, 7445-7448; Biessen et al., J Med Chem, 1995, 38, 1846-1852; Sliedregt et al., J Med Chem, 1999, 42, 609-618; Rensen et al., J Med Chem, 2004, 47, 5798-5808; Rensen et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2006, 26, 169-175; van Rossenberg et al., Gene Ther, 2004, 11, 457-464; Sato et al., J Am Chem Soc, 2004, 126, 14013-14022; Lee et al., J Org Chem, 2012, 77, 7564-7571; Biessen et al., FASEB J, 2000, 14, 1784-1792; Rajur et al., Bioconjug Chem, 1997, 8, 935-940; Duff et al., Methods Enzymol, 2000, 313, 297-321; Maier et al., Bioconjug Chem, 2003, 14, 18-29; Jayaprakash et al., Org Lett, 2010, 12, 5410-5413; Manoharan, Antisense Nucleic Acid Drug Dev, 2002, 12, 103-128; Merwin et al., Bioconjug Chem, 1994, 5, 612-620; Tomiya et al., Bioorg Med Chem, 2013, 21, 5275-5281; Международные заявки WO1998/013381; WO2011/038356; WO1997/046098; WO2008/098788; WO2004/101619; WO2012/037254; WO2011/120053; WO2011/100131; WO2011/163121; WO2012/177947; WO2013/033230; WO2013/075035; WO2012/083185; WO2012/083046; WO2009/082607; WO2009/134487; WO2010/144740; WO2010/148013; WO1997/020563; WO2010/088537; WO2002/043771; WO2010/129709; WO2012/068187; WO2009/126933; WO2004/024757; WO2010/054406; WO2012/089352; WO2012/089602; WO2013/166121; WO2013/165816; патенты США 4751219; 8552163; 6908903; 7262177; 5994517; 6300319; 8106022; 7491805; 7491805; 7582744; 8137695; 6383812; 6525031; 6660720; 7723509; 8541548; 8344125; 8313772; 8349308; 8450467; 8501930; 8158601; 7262177; 6906182; 6620916; 8435491; 8404862; 7851615; опубликованные заявки на патент США US2011/0097264; US2011/0097265; US2013/0004427; US2005/0164235; US2006/0148740; US2008/0281044; US2010/0240730; US2003/0119724; US2006/0183886; US2008/0206869; US2011/0269814; US2009/0286973; US2011/0207799; US2012/0136042; US2012/0165393; US2008/0281041; US2009/0203135; US2012/0035115; US2012/0095075; US2012/0101148; US2012/0128760; US2012/0157509; US2012/0230938; US2013/0109817; US2013/0121954; US2013/0178512; US2013/0236968; US2011/0123520; US2003/0077829; US2008/0108801; и US2009/0203132; каждая из которых включена посредством ссылки в полном объеме.
С. Некоторые применения и особенности.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения демонстрируют эффективное снижение целевой РНК in vivo. В некоторых вариантах реализации изобретения неконъюгированные антисмысловые соединения накапливаются в почках. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения накапливаются в печени. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения являются хорошо переносимыми. Такие свойства делают конъюгированные антисмысловые соединения особенно пригодными для ингибирования многих целевых РНК, включая, но не ограничиваясь ими, те, которые участвуют в метаболических, сердечно-сосудистых и других заболеваниях, расстройства или патологических состояниях. Таким образом, в настоящем документе приведены способы лечения таких заболеваний, расстройств или патологических состояний приведением тканей печени в контакт с конъюгированными антисмысловыми соединениями, нацеленными на РНК, связанные с такими заболеваниями, расстройствами или патологическими состояниями. Следовательно, приведены также способы улучшения любых из множества метаболических, сердечно-сосудистых и других заболеваний, расстройств или патологических состояний при помощи конъюгированных антисмысловых соединений настоящего изобретения.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения являются более эффективными, чем неконъюгированные аналоги при определенной концентрации в ткани. Не ограничиваясь какой-либо теорией или механизмом, в некоторых вариантах реализации изобретения
- 51 031393 конъюгат может обеспечивать возможность более эффективного вхождения конъюгированного антисмыслового соединения в клетку или возможность более продуктивного вхождения в клетку. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения могут демонстрировать более значительное снижение мишени по сравнению с неконъюгированным аналогом, при этом и конъюгированное антисмысловое соединение и его неконъюгированный аналог находятся в ткани в одинаковых концентрациях. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения могут демонстрировать более значительное снижение мишени по сравнению с их неконъюгированными аналогами, при этом и конъюгированное антисмысловое соединение, и его неконъюгированный аналог находятся в печени в одинаковых концентрациях.
Ранее был рассмотрен продуктивный и непродуктивный захват олигонуклеотидов (см., например, Geary, R.S., E. Wancewicz, et al. (2009). Effect of Dose and Plasma Concentration on Liver Uptake and Pharmacologic Activity of a 2'-Methoxyethyl Modified Chimeric Antisense Oligonucleotide Targeting PTEN, Biochem. Pharmacol., 78(3): 284-91 и Koller, E., T.M. Vincent, et al. (2011) Mechanisms of single-stranded phosphorothioate modified antisense oligonucleotide accumulation in hepatocytes, Nucleic Acids Res., 39(11): 4795-807). Конъюгирующие группы, описанные в настоящем документе, могут улучшать продуктивный захват.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы, описанные в настоящем документе, могут дополнительно усиливать эффективность за счет увеличения аффинности конъюгированного антисмыслового соединения к конкретному типу клетки или ткани. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы, описанные в настоящем документе, могут дополнительно усиливать эффективность за счет увеличения распознавания конъюгированного антисмыслового соединения одним или более рецепторами клеточной поверхности. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы, описанные в настоящем документе, могут дополнительно усиливать эффективность за счет облегчения эндоцитоза конъюгированного антисмыслового соединения.
В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент может дополнительно усиливать эффективность за счет обеспечения возможности расщепления конъюгата из антисмыслового олигонуклеотида после попадания конъюгированного антисмыслового соединения в клетку. Соответственно в некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения могут быть введены в более низких дозах, чем необходимы для неконъюгированных антисмысловых олигонуклеотидов.
Ранее в антисмысловые олигонуклеотиды уже были внедрены тиофосфатные связи. Такие тиофосфатные связи являются устойчивыми к нуклеазам и за счет этого улучшают стабильность олигонуклеотида. Кроме того, тиофосфатные связи связывают также некоторые белки, что приводит к накоплению антисмыслового олигонуклеотида в печени. Олигонуклеотиды с меньшим количеством тиофосфатных связей меньше накапливаются в печени и больше - в почках (см., например, Geary, R., Pharmacokinetic Properties of 2'-O-(2-Methoxyethyl)-Modified Oligonucleotide Analogs in Rats, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, т. 296, № 3, 890-897 и Pharmacological Properties of 2'-O-Methoxyethyl Modified Oligonucleotides in Antisense a Drug Technology, глава 10, Crooke, S.T., ред., 2008). В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды с меньшим количеством тиофсофатных межнуклеозидных связей и с большим количеством фосфодиэфирных межнуклеозидных связей меньше накапливаются в печени и больше - в почках. При лечении заболеваний печени это нежелательно по нескольким причинам: (1) меньше лекарства попадает в центр желаемого действия (печень); (2) лекарство выводится с мочой; (3) почки подвергаются воздействию относительно высокой концентрации лекарства, что может приводить к токсичности в почках. Следовательно, для заболеваний печени тиофсофатные связи обеспечивают важное преимущество.
Однако в некоторых вариантах реализации изобретения введение олигонуклеотидов, равномерно связанных тиофсофатными межнуклеозидными связями, вызывает одну или более провоспалительных реакций (см., например, J Lab Clin Med. 1996 Sep;128(3):329-38, Amplification of antibody production by phosphorothioate oligodeoxynucleotides, Branda et al.; и см. также, например: Toxicologic Properties in Antisense a Drug Technology, глава 12, с. 342-351, Crooke, S.T., ред., 2008). В некоторых вариантах реализации изобретения введение олигонуклеотидов, в которых большая часть межнуклеозидных связей содержит тиофосфатные межнуклеозидные связи, вызывает одну или более провоспалительных реакций.
В некоторых вариантах реализации изобретения степень провоспалительного эффекта может зависеть от нескольких переменных (например, модификация скелета, нецелевое действие, модификации азотистых оснований и/или модификации нуклеозида), см., например: Toxicologic Properties in Antisense a Drug Technology, глава 12, с. 342-351, Crooke, S.T., ред., 2008). В некоторых вариантах реализации изобретения степень провоспалительного эффекта может быть ослаблена за счет подбора одной или более переменных. Например, степень провоспалительного эффекта данного олигонуклеотида может быть ослаблена за счет замены любого количества тиофосфатных межнуклеозидных связей на фосфодиэфирные межнуклеозидные связи с уменьшением посредством этого общего количества тиофосфатных межнуклеозидных связей.
В некоторых вариантах реализации изобретения может быть желательно снизить количество тио
- 52 031393 фосфатных связей, если это может быть выполнено без потери стабильности и без сдвига распределения из печени в почки. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения количество тиофосфатных связей может быть уменьшено за счет замены тиофосфатных связей на фосфодиэфирные связи. В таком варианте реализации изобретения антисмысловое соединение, имеющее меньшее количество тиофосфатных связей и большее количество фосфодиэфирных связей, может вызывать меньшее количество провоспалительных реакций или не вызывать провоспалительных реакций. Хотя антисмысловое соединение, имеющее меньшее количество тиофосфатных связей и большее количество фосфодиэфирных связей, может вызывать меньшее количество провоспалительных реакций, антисмысловое соединение, имеющее меньшее количество тиофосфатных связей и большее количество фосфодиэфирных связей, может не накапливаться в печени и может быть менее эффективным в такой же или аналогичной дозе по сравнению с антисмысловым соединением, имеющим большее количество тиофосфатных связей. Поэтому в некоторых вариантах реализации изобретения желательно разработать антисмысловое соединение, которое имеет множество фосфодиэфирных связей и множество тиофосфатных связей, но которое при этом обладает также стабильностью и хорошим распределением в печени.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения больше накапливаются в печени и меньше - в почках, чем неконъюгированные аналоги, даже если некоторые тиофосфатные связи заменены менее провоспалительными фосфодиэфирными межнуклеозидными связями. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения больше накапливаются в печени и не так сильно выводятся с мочой, как их неконъюгированные аналоги, даже если некоторые тиофосфатные связи заменены менее провоспалительными фосфодиэфирными межнуклеозидными связями. В некоторых вариантах реализации изобретения применение конъюгата обеспечивает возможность разрабатывать более эффективные и лучше переносимые антисмысловые лекарства. Действительно, в некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения имеют более широкий терапевтический индекс, чем неконъюгированные аналоги. Это позволяет вводить конъюгированное антисмысловое соединение в более высокой абсолютной дозе благодаря меньшему риску провоспалительной реакции и меньшему риску токсичности для почек. Такая более высокая доза дает возможность вводить дозу реже, поскольку ожидается такой же коэффициент очищения (метаболизм).
Кроме того, поскольку соединение является более эффективным, как описано выше, то можно допускать снижение концентрации перед введением следующей дозы без потери терапевтической активности, что обеспечивает еще более продолжительные периоды между введениями доз.
В некоторых вариантах реализации изобретения сохраняется необходимость во внедрении некоторого количества тиофосфатных связей. Например, концевые связи легко подвергаются действию экзонуклеаз, и поэтому в некоторых вариантах реализации изобретения эти связи представляют собой тиофосфатные или другие модифицированные связи. Межнуклеозидные связи, соединяющие два дезоксинуклеозида, легко подвергаются действию эндонуклеаз, и поэтому в некоторых вариантах реализации изобретения эти связи представляют собой тиофосфатные или другие модифицированные связи. Межнуклеозидные связи между модифицированным нуклеозидом и дезоксинуклеозидом, где дезоксинуклеозид расположен на 5'-стороне связывающего дезоксинуклеозида, легко подвергаются действию эндонуклеаз, и поэтому в некоторых вариантах реализации изобретения эти связи представляют собой тиофосфатные или другие модифицированные связи. Межнуклеозидные связи между двумя модифицированными нуклеозидами определенных типов и между дезоксинуклеозидом и модифицированным нуклеозидом определенного типа, где модифицированный нуклеозид расположен на 5'-стороне линкера, являются достаточно устойчивыми к нуклеазному расщеплению, поэтому связь может быть фосфодиэфиром.
В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид конъюгированного антисмыслового соединения содержит менее 16 тиофосфатных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид конъюгированного антисмыслового соединения содержит менее 15 тиофосфатных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид конъюгированного антисмыслового соединения содержит менее 14 тиофосфатных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид конъюгированного антисмыслового соединения содержит менее 13 тиофосфатных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид конъюгированного антисмыслового соединения содержит менее 12 тиофосфатных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид конъюгированного антисмыслового соединения содержит менее 11 тиофосфатных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид конъюгированного антисмыслового соединения содержит менее 10 тиофосфатных связей.
В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид конъюгированного антисмыслового соединения содержит менее 9 тиофосфатных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловый олигонуклеотид конъюгированного антисмыслового соединения содержит менее 8 тиофосфатных связей.
В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, содержащие одну или более конъюгирующих групп, описанных в настоящем документе, обладают повышенной активностью
- 53 031393 и/или эффективностью, и/или переносимостью по сравнению с исходным антисмысловым соединением, не имеющим такой одной или нескольких конъюгирующих групп. Соответственно в некоторых вариантах реализации изобретения присоединение таких конъюгирующих групп к олигонуклеотиду является желательным. Такие конъюгирующие группы могут быть присоединены у 5'- и/или 3'-конца олигонуклеотида. В некоторых случаях синтетически желательно присоединение на 5'-конце. Как правило, олигонуклеотиды синтезируют присоединением 3'-концевого нуклеозида к твердой подложке с последующим связыванием нуклеозидов от 3' к 5' при помощи методик, общеизвестных в данной области техники. Соответственно, если конъюгирующая группа необходима на 3'-конце, то можно (1) присоединить конъюгирующую группу к 3'-концевому нуклеозиду и присоединить этот конъюгированный нуклеозид к твердой подложке для последующего получения олигонуклеотида или (2) присоединить конъюгирующую группу к 3'-концевому нуклеозиду готового олигонуклеотида после синтеза. Ни один из этих подходов не является особенно эффективным, и поэтому оба они затратны. В частности, присоединение конъюгированного нуклеозида к твердой подложке, хотя и приведено в настоящем документе в разделе Примеры, не является эффективным способом. В некоторых вариантах реализации изобретения присоединение конъюгирующей группы к 5'-концевому нуклеозиду синтетически проще, чем присоединение к 3'концу. Можно присоединить неконъюгированный 3'-концевой нуклеозид к твердой подложке и получить олигонуклеотид по стандартным и хорошо описанным реакциям. Затем нужно лишь присоединить 5'нуклеозид, имеющий конъюгирующую группу, на последней стадии связывания. В некоторых вариантах реализации изобретения это более эффективно, чем присоединение конъюгированного нуклеозида непосредственно к твердой подложке, как это обычно делают для получения 3'-конъюгированного олигонуклеотида. В представленных в настоящем документе примерах показано присоединение к 5'-концу. Кроме того, некоторые конъюгирующие группы имеют синтетические преимущества. Например, некоторые конъюгирующие группы, содержащие фосфорные связывающие группы, получают синтетически проще и более эффективно, чем другие конъюгирующие группы, включая конъюгирующие группы, описанные ранее (например, WO/2012/037254).
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения вводят субъекту. В таких вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, содержащие одну или более конъюгирующих групп, описанных в настоящем документе, обладают повышенной активностью и/или эффективностью, и/или переносимостью по сравнению с исходным антисмысловым соединением, не имеющим такой одной или нескольких конъюгирующих групп. Не ограничиваясь механизмом, предполагается, что конъюгирующая группа способствует распределению, доставке и/или поглощению в целевой клетке или ткани. В некоторых вариантах реализации после попадания в целевую клетку или ткань желательно, чтобы вся или часть конъюгирующей группы расщеплялась с высвобождением активного олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации изобретения не обязательно, чтобы из олигонуклеотида расщеплялась вся конъюгирующая группа. Например, в примере 20а конъюгированный олигонуклеотид вводили мышам и обнаруживали множество различных химических частиц, каждая из которых содержала различные части конъюгирующей группы, оставшиеся на олигонуклеотиде (табл. 10а). Это конъюгированное антисмысловое соединение показало хорошую эффективность (табл. 10). Так, в некоторых вариантах реализации изобретения такой метаболитный профиль многократного частичного расщепления конъюгирующей группы не влияет на активность/эффективность. Тем не менее, в некоторых вариантах реализации изобретения желательно, чтобы пролекарство (конъюгированный олигонуклеотид) давало одно активное соединение. В некоторых случаях, при обнаружении многочисленных форм активного соединения, может быть необходимо определить относительные количества и действие для каждой из них. В некоторых вариантах реализации при необходимости регуляционного тестирования (например, FDA США или другого органа), желательно иметь одну (или преимущественно одну) активную частицу. В некоторых таких вариантах реализации изобретения желательно, чтобы такая одна активная частица представляла собой антисмысловый олигонуклеотид, не содержащий никаких частей конъюгирующей группы. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгирующие группы на 5'-конце более вероятно приводят к полному метаболизму конъюгирующей группы. Не ограничиваясь механизмом, может быть, что эндогенные ферменты, отвечающие за метаболизм на 5'-конце (например, 5'-нуклеазы), более активны/эффективны, чем 3'-аналоги. В некоторых вариантах реализации изобретения определенные конъюгирующие группы более подвержены метаболизму до одной активной частицы. В некоторых вариантах реализации изобретения некоторые конъюгирующие группы более подвержены метаболизму до олигонуклеотида.
D. Антисенс.
В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерные соединения настоящего изобретения представляют собой антисмысловые соединения. В таких вариантах реализации изобретения олигомерное соединение комплементарно целевой нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая нуклеиновая кислота представляет собой РНК. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая нуклеиновая кислота представляет собой некодирующую РНК. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая нуклеиновая кислота кодирует белок. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая нуклеиновая кислота выбрана из мРНК, пре-мРНК, микроРНК, некодирующей
- 54 031393
РНК, включая малую некодирующую РНК, и промотор-нацеливаемой РНК. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерные соединения, по меньшей мере, частично комплементарны более чем одной целевой нуклеиновой кислоте. Например, олигомерные соединения настоящего изобретения могут представлять собой миметики микроРНК, которые обычно связываются с несколькими мишенями.
В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения содержат часть, имеющую последовательность азотистых оснований, которая по меньшей мере на 70% комплементарна последовательности азотистых оснований целевой нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения содержат часть, имеющую последовательность азотистых оснований, которая по меньшей мере на 80% комплементарна последовательности азотистых оснований целевой нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения содержат часть, имеющую последовательность азотистых оснований, которая по меньшей мере на 90% комплементарна последовательности азотистых оснований целевой нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения содержат часть, имеющую последовательность азотистых оснований, которая по меньшей мере на 95% комплементарна последовательности азотистых оснований целевой нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения содержат часть, имеющую последовательность азотистых оснований, которая по меньшей мере на 98% комплементарна последовательности азотистых оснований целевой нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения содержат часть, имеющую последовательность азотистых оснований, которая на 100% комплементарна последовательности азотистых оснований целевой нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения по меньшей мере на 70, 80, 90, 95, 98 или 100% комплементарны последовательности азотистых оснований целевой нуклеиновой кислоты по всей длине антисмыслового соединения.
Антисмысловые механизмы включают любой механизм, затрагивающий гибридизацию олигомерного соединения с целевой нуклеиновой кислотой, при этом гибридизация приводит к биологическому эффекту. В некоторых вариантах реализации изобретения такая гибридизация приводит либо к разрушению, либо к применению целевой нуклеиновой кислоты с сопутствующим подавлением или стимулированием клеточного механизма, затрагивающего, например, трансляцию, транскрипцию или полиаденилированией целевой нуклеиновой кислоты или нуклеиновой кислоты, с которой целевая кислота может взаимодействовать иным образом.
Один из типов антисмыслового механизма, затрагивающий разрушение целевой РНК, представляет собой антисмысл, опосредованный РНКазой Н. РНКаза H представляет собой клеточную эндонуклеазу, которая расщепляет спираль РНК дуплекса РНК: ДНК. В данной области техники известно, что одноцепочечные антисмысловые соединения, которые являются ДНК-подобными, вызывают активность РНКазы H в клетках млекопитающих. Следовательно, активация РНКазы H приводит к расщеплению РНК-мишени, посредством этого в значительной степени усиливая эффективность подавления генной экспрессии, опосредованного ДНК-подобным олигонуклеотидом.
Антисмысловые механизмы включают также, без ограничения, РНКи механизмы, в которых применяется путь RISC. Такие РНКи механизмы включают, без ограничения, миРНК, оцРНК и микроРНК механизмы. Такие механизмы включают создание миметика микроРНК и/или анти-микро РНК.
Антисмысловые механизмы включают также, без ограничения, механизмы, которые гибридизуют или имитируют некодирующую РНК, отличную от микроРНК или мРНК. Такие некодирующие РНК включают, но не ограничиваются ими, промотор-нацеленную РНК и малую и длинную РНК, которая влияет на транскрипцию или трансляцию одной или более нуклеиновых кислот.
В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды, содержащие описанные в настоящем документе конъюгаты, представляют собой РНКи соединения. В некоторых вариантах реализации изобретения олигомерные олигонуклеотиды, содержащие описанные в настоящем документе конъюгаты, представляют собой оцРНК соединения. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды, содержащие описанные в настоящем документе конъюгаты, спарены со вторым олигомерным соединением с образованием миРНК. В некоторых таких вариантах реализации изобретения второе олигомерное соединение также содержит конъюгат. В некоторых вариантах реализации изобретения второе олигомерное соединение представляет собой любую модифицированную или немодифицированную нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды, содержащие описанные в настоящем документе конъюгаты, представляют собой антисмысловую цепь в миРНК соединении. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотиды, содержащие описанные в настоящем документе конъюгаты, представляют собой смысловую цепь в миРНК соединении. В тех вариантах реализации, в которых конъюгированное олигомерное соединение представляет собой двухцепочечную миРНК, конъюгат может находиться на смысловой цепи, антисмысловой цепи или и на смысловой цепи, и на антисмысловой цепи.
D. Целевые нуклеиновые кислоты, области и сегменты.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения нацелены на любую нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах реализации изобретения целевая нук
- 55 031393 леиновая кислота кодирует белок-мишень, который является клинически значимым. В таких вариантах реализации изобретения модулирование целевой нуклеиновой кислоты приводит к благоприятному клиническому эффекту. Некоторые целевые нуклеиновые кислоты включают, но не ограничиваются ими, целевые нуклеиновые кислоты, представленные в табл. 1.
Таблица 1
Некоторые целевые нуклеиновые кислоты
Мишень | Виды | Номер доступа GENBANK® | SEQ ID NO |
HBV | Человек | U95551.1 | 1 |
Транстиретин (TTR) | Человек | NM 000371.3 | 2 |
Процесс таргетинга обычно включает определение по меньшей мере одной целевой области, сегмента или сайта в целевой нуклеиновой кислоте для антисмыслового взаимодействия с возникновением в результате такого желаемого эффекта.
В некоторых вариантах реализации изобретения целевая область представляет собой структурно определенную область нуклеиновой кислоты. Например, в некоторых таких вариантах реализации изобретения целевая область может охватывать 3' UTR, 5' UTR, экзон, интрон, кодирующую область, область инициации трансляции, область терминации трансляции или другую определенную область или целевой сегмент нуклеиновой кислоты.
В некоторых вариантах реализации изобретения целевой сегмент представляет собой часть целевой области по меньшей мере из около 8 азотистых оснований, на которую нацелено конъюгированное антисмысловое соединение. Целевые сегменты могут содержать последовательности ДНК или РНК, которые содержат по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований от 5'-конца одного из целевых сегментов (остальные азотистые основания тянутся друг за другом из той же ДНК или РНК, начинаясь сразу перед 5'-концом целевого сегмента и продолжаясь до момента, когда ДНК или РНК будет содержать от около 8 до около 30 азотистых оснований). Целевые сегменты представлены также последовательностми ДНК или РНК, которые содержат по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований от З'-конца одного из целевых сегментов (остальные азотистые основания тянутся друг за другом из той же ДНК или РНК, начинаясь сразу после З'-конца целевого сегмента и продолжаясь до момента, когда ДНК или РНК будет содержать от около 8 до около З0 азотистых оснований). Целевые сегменты также могут быть представлены последовательностями ДНК или РНК, которые содержат по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований из внутренней части последовательности целевого сегмента, и могут тянуться в любом или в обоих направлениях до момента, когда конъюгированное антисмысловое соединение будет содержать от около 8 до около З0 азотистых оснований.
В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, нацеленные на нуклеиновые кислоты, перечисленные в табл. 1, могут быть модифицированы так, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения могут иметь модифицированный сахарный фрагмент, немодифицированный сахарный фрагмент или смесь модифицированных и немодифицированных сахарных фрагментов, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения могут иметь модифицированная межнуклеозидная связь, немодифицированная межнуклеозидная связь или смесь модифицированных и немодифицированных межнуклеозидных связей, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения могут иметь модифицированное азотистое основание, немодифицированное азотистое основание или смесь модифицированных и немодифицированных азотистых оснований, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения могут иметь мотив, описанный в настоящем документе.
В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, нацеленные на нуклеиновые кислоты, перечисленные в табл. 1, могут быть конъюгированы так, как описано в настоящем документе.
1. Гепатит В (HBV).
Гепатит В представляет собой вирусное заболевание, передающееся парентерально через зараженный материал, такой как кровь и продукты крови, загрязненные иглы, половым путем и вертикально от инфицированной или несущей вирус матери к ее потомству. По оценкам Всемирной организации изобретения здравоохранения, во всем мире инфицировано более 2 млрд людей, при этом ежегодно происходит около 4 млн острых случаев, 1 млн смертей в год и З50-400 млн хронических носителей (Всемирная организация здравоохранения: Geographic Prevalence of Hepatitis В Prevalence, 2004. http://www.who.int/vaccines-surveillance/graphics/htmls/hepbprev.htm).
Вирус HBV представляет собой двухцепочечный гепатотропный вирус, который инфицирует только людей и человекоподобных приматов. Вирусная репликация происходит преимущественно в печени и, в меньшей степени, в почках, поджелудочной железе, костном мозге и селезенке (Hepatitis В virus biol
- 56 031393 ogy. Microbiol Mol Biol Rev. 64: 2000; 51-68). Вирусные и иммунные маркеры могут быть обнаружены в крови и являются характеристическими профилями антигенов-антител, развивающимися с течением времени. Первый обнаруживаемый вирусный маркер представляет собой HBsAg, за ним следует антиген е гепатита В (HBeAg) и ДНК HBV. В инкубационном периоде титры могут быть высокими, но уровни ДНК и HBeAg HBV начинают резко снижаться в начале заболевания и могут не быть обнаруживаемыми на пике клинической болезни (Hepatitis В virus infection-natural history and clinical consequences. N Engl J Med. 350: 2004; 1118-1129). HBeAg представляет собой вирусный маркер, обнаруживаемый в крови, который коррелирует с активной вирусной репликацией и, следовательно, высокой вирусной нагрузкой и инфективностью (Hepatitis В е antigen-the dangerous end game of hepatitis B. N Engl J Med. 347: 2002; 208210). Наличие анти-HBsAb и анти-HBcAb (IgG) указывает на выздоровление и иммунитет у ранее инфицированного индивидуума.
В настоящее время терапии для хронической инфекции HBV, рекомендованные Американской ассоциацией по изучению заболеваний печени (AASLD) и Европейской ассоциацией по изучению печени (EASL), включают интерферон-альфа (INFa), пегилированный интерферон-альфа-2а (Peg-IFN2a), энтекавир и тенофовир. Терапии нуклеозидами и азотистыми основаниями, энтекавир и тенофовир, являются успешными для снижения вирусной нагрузки, но скорости сероконверсии HBeAg и снижения HBsAg даже ниже, чем скорости, достижимые при помощи IFNa терапии. Применяют также другие аналогичные терапии, включая ламивудин (3TC), телбивудин (LdT) и адефовир, но терапевтическая эффективность терапий с нуклеозидами/азотистыми основаниями в целом ограничена появлением резистентности.
Следовательно, в данной области техники существует необходимость в открытии и разработке новых противовирусных терапий. Кроме того, существует необходимость в новых анти-HBV терапиях, способных увеличивать скорости сероконверсии HBeAg и HBsAg. В недавних клинических исследованиях была обнаружена корреляция между сероконверсией и снижением HBeAg (Fried et al (2008) Hepatology 47:428), и снижением HBsAg (Moucari et al (2009) Hepatology 49:1151). Снижение уровней антигенов может обеспечивать возможность иммунологического контроля инфекции HBV, поскольку предполагается, что высокие уровни антигенов вызывают иммунологическую толерантность. Существующие нуклеозидные терапии для HBV могут значительно снижать уровни HBV в сыворотке, но мало влияют на уровни HBeAg и HBsAg.
Антисмысловые соединения, нацеленные на HBV, были описаны ранее в WO2011/047312, WO2012/145674 и WO2012/145697, полное содержание каждого из которых включено в настоящий документ посредством ссылки. Запланированы клинические исследования для оценки влияния антисмысловых соединения, нацеленных на HBV, на пациентов. Однако все еще существует необходимость в обеспечении пациентов дополнительными и более эффективными возможностями лечения.
Некоторые конъюгированные антисмысловые соединения, нацеленные на нуклеиновую кислоту HBV.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения нацелены на нуклеиновую кислоту HBV, имеющую последовательность с номером доступа GENBANK® U95551.1, которая включена в настоящий документ как SEQ ID NO: 1. В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95 или на 100% комплементарно SEQ ID NO: 1.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 3.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 4.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 5. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 5.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 6.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, на
- 57 031393 целенное на SEQ ID NO: 1, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 7. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 7.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 8.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 9. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 9.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 10. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 10.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 11. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 11.
Таблица 2
Антисмысловые соединения, нацеленные на HBV SEQ ID NO: 1
ISIS № | СайтMiiiiieii ь инициа ции | Последовательность (5’-3’) | Мотив | SEQ ID NO |
505358 | 1583 | GCAGAGGTGAAGCGAAGTG | eeeeeddddddddddeeeee | 3 |
С | ||||
509934 | 1780 | CCAATTTATGCCTACAGCCT | eeeeeddddddddddeeeee | 4 |
510100 | 411 | GGCATAGCAGCAGGATG | eeeddddddddddeeee | 5 |
552023 | 1266 | AGGAGTTCCGCAGTATGGAT | eeeeeeddddddddddeeee | 6 |
552024 | 1577 | GTGAAGCGAAGTGCACACG G | eeeeeeddddddddddeeee | 7 |
552032 | 1585 | GTGCAGAGGTGAAGCGAAG Т | eeeeeeddddddddddeeee | 8 |
552859 | 1583 | AGGTGAAGCGAAGTGC | ekkddddddddddkke | 9 |
552925 | 1264 | TCCGCAGTATGGATCG | ekddddddddddkeke | 10 |
577119 | 1780 | AATTTATGCCTACAGCCT | kdkdkddddddddeeeee | 11 |
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 505358 и конъюгирующей группы. ISIS 505358 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Ges mCes Aes Ges Aes Gds Gds Tds Gds Ads Ads Gds mCds Gds Ads Aes Ges Tes Ges mCe, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
- 58 031393
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 509934 и конъюгирующей группы. ISIS 509934 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: mCes mCes Aes Aes Tes Tds Tds Ads Tds Gds mCds mCds Tds Ads mCds Aes Ges mCes mCes Те, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 510100 и конъюгирующей группы. ISIS 510100 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Ges Ges mCes Ads Tds Ads Gds mCds Ads Gds mCds Ads Gds Ges Aes Tes Ge, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 552023 и конъюгирующей группы. ISIS 552023 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Aes Ges Ges Aes Ges Tes Tds mCds mCds Gds mCds Ads Gds Tds Ads Tds Ges Ges Aes Те, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 552024 и конъюгирующей группы. ISIS 552024 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Ges Tes Ges Aes Aes Ges mCds Gds Ads Ads Gds Tds Gds mCds Ads mCds Aes mCes Ges Ge, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 552032 и конъюгирующей группы. ISIS 552032 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Ges Tes Ges mCes Aes Ges Ads Gds Gds Tds Gds Ads Ads Gds mCds Gds Aes Aes Ges Те, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 552859 и конъюгирующей группы. ISIS 552859 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Aes Gks Gks Tds Gds Ads Ads Gds mCds Gds Ads Ads Gds Tks Gks mCe, где
A = аденин,
- 59 031393 mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
Т = тимин, e = 2'-О-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, k = cEt-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 552925 и конъюгирующей группы. ISIS 552925 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Tes mCks mCds Gds mCds Ads Gds Tds Ads Tds Gds Gds Aks Tes mCks Ge, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-О-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, k = cEt-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь, s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 577119 и конъюгирующей группы. ISIS 577119 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Aks Ads Tks Tds Tks Ads Tds Gds mCds mCds Tds Ads mCds Aes Ges mCes mCes Те, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-О-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, k = cEt-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение, имеющее следующую химическую структуру, содержит или состоит из ISIS 505358 с 5'-Х, где X представляет собой конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе:
- 60 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 712408, имеющего следующую химическую структуру:
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 695324, имеющего следующую химическую структуру:
- 61 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из SEQ ID NO:
3, 5'-GalNAc и химических модификаций и представлено следующей химической структурой:
где любой R1 представляет собой -OCH2CH2OCH3 (MOE), a R2 представляет собой Н или R1 и R2 вместе образуют мостик, при этом R1 представляет собой -O-, a R2 представляет собой -CH2-, -CH(CH3)или -CH2CH2-, и R1 и R2 напрямую связаны так, что образующийся мостик выбран из -O-CH2-, -OCH(CH3)- и -O-CH2CH2-;
и для каждой пары из R3 и R4 у одного кольца, независимо для каждого кольца: любой R3 выбран из H и -OCH2CH2OCH3, a R4 представляет собой Н или R3 и R4 вместе образуют мостик, при этом R3 представляет собой -O-, a R4 представляет собой -CH2-, -CH(CH3)- или -CH2CH2- и R3 и R4 напрямую связаны так, что образующийся мостик выбран из -O-CH2-, -O-CH(CH3)- и -O-CH2CH2-;
и R5 выбран из H и -CH3;
a Z выбран из S- и О-.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит антисмысловый олигонуклеотид, описанный в публикации WO2012/145697, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO 5-310, 321-802, 804-1272, 1288-1350, 1364-1372, 1375, 1376 и 1379, описанных в WO2012/145697, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит антисмысловый олигонуклеотид, описанный в публикации WO 2011/047312, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO 14-22, описанных в WO 2011/047312, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит антисмысловый олигонуклеотид, описанный в публикации WO 2012/145674, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO 18-35, описанных в WO 2012/145674. В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит двухцепочечный олигонуклеотид, описанный в публикации WO 2013/159109, полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит двухцепочечный олигонуклеотид, в котором одна спираль имеет последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO 30-125, описанных в WO 2013/159109. Последовательности азотистых оснований всех вышеупомянутых ссылочных SEQ ID NO включены в настоящий документ посредством ссылки.
Терапевтические показания для HBV.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения приведены способы применения конъюгированного антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту HBV, для модулирования экспрессии HBV у субъекта. В некоторых вариантах реализации изобретения экспрессия HBV снижена.
- 62 031393
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения приведены способы применения конъюгированного антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту HBV, в фармацевтической композиции для лечения субъекта. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект страдает патологическим состоянием, связанным с HBV. В некоторых вариантах реализации изобретения патологическое состояние, связанное с HBV, включает, но не ограничивается ими, хроническую HBV инфекцию, воспаление, фиброз, цирроз, рак печени, сывороточный гепатит, разлитие желчи, рак печени, воспаление печени, фиброз печени, цирроз печени, печеночную недостаточность, диффузное гепатоцеллюлярное воспалительное заболевание, гемофагоцитарный синдром, сывороточный гепатит и HBV виремию. В некоторых вариантах реализации изобретения патологическое состояние, связанное с hBV, может характеризоваться симптомами, которые могут включать любой или все из следующих признаков: гриппоподобное заболевание, слабость, боль, головная боль, лихорадка, потеря аппетита, диарея, разлитие желчи, тошнота и рвота, боль в области печени, стул глинистого или серого цвета, общий зуд и моча темного цвета, в сочетании с положительным тестом на наличие вируса гепатита В, вирусного антигена гепатита В или положительным тестом на наличие антитела, специфичного к вирусному антигену гепатита В. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект имеет риск патологического состояния, связанного с HBV. Сюда входят субъекты, имеющие один или более факторов риска для развития патологического состояния, связанного с HBV, включая половой контакт с индивидуумом, инифицированным вирусом гепатита В, проживание в одном доме с индивидуумом с пожизненной инфекцией вируса гепатита В, воздействие крови человека, инфицированного вирусом гепатита В, инъекция запрещенных веществ субъектом с гемофилией и посещение мест распространения гепатита В. В некоторых вариантах реализации изобретения у субъекта идентифицирована необходимость лечения патологического состояния, связанного с HBV.
В некоторых вариантах реализации изобретения предложен способ снижения уровней ДНК HBV и/или антигенов HBV у животного, инфицированного HBV, включающий введение указанному животному конъюгированного антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту HBV. В некоторых вариантах рализации изобретения антиген представляет собой HBsAG или HBeAG. В некоторых вариантах реализации изобретения количество антигена HBV может быть существенно снижено, что приводит к сероконверсии.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения приведены способы применения конъюгированного антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту HBV, для производства лекарственного средства.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложено конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на нуклеиновую кислоту HBV, или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии.
В некоторых вариантах реализации изобретения предложено конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на нуклеиновую кислоту HBV, для применения при лечении патологическг состояния, связанного с HBV. Патологическое состояние, связанное с HBV, включает, но не ограничивается ими, хроническую HBV инфекцию, воспаление, фиброз, цирроз, рак печени, сывороточный гепатит, разлитие желчи, рак печени, воспаление печени, фиброз печени, цирроз печени, печеночную недостаточность, диффузное гепатоцеллюлярное воспалительное заболевание, гемофагоцитарный синдром, сывороточный гепатит и HBV виремию.
В некоторых вариантах реализации изобретения предложено конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на нуклеиновую кислоту HBV, для применения для снижения уровней ДНК HBV и/или антигена HBV у животного инфицированного HBV, включающего введение указанному животному конъюгированного антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту HBV. В некоторых вариантах рализации изобретения антиген представляет собой HBsAG или HBeAG. В некоторых вариантах реализации изобретения количество антигена HBV может быть существенно снижено, что приводит к сероконверсии.
Следует понимать, что любое из описанных в настоящем документе соединений можно применять в вышеупомянутых способах и применениях. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на нуклеиновую кислоту HBV, в вышеупомянутых способах и применениях может включать, но не органичиваясь ими, конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, которое содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 3-11; конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 1, которое содержит последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 3-11; соединение, содержащее или состоящее из ISIS 505358, ISIS 509934, ISIS 510100, ISIS 552023, ISIS 552024, ISIS 552032, ISIS 552859, ISIS 552925 или ISIS 577119 и конъюгирующей группы; соединение, содержащее антисмысловый олигонуклеотид, описанный в публикации WO2012/145697, полное описание которой включено в настоящий документ посредством ссылки, и конъюгирующую группу; соединение, содержащее антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO 5-310, 321-802, 804-1272, 1288-1350, 1364-1372, 1375, 1376 и 1379, описанных в WO2012/145697, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе; соедине
- 63 031393 ние, содержащее антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO 14-22, описанных в WO2011/047312, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе; соединение, содержащее антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO 18-35, описанных в WO2012/145674; или соединение, содержащее двухцепочечный олигонуклеотид, в котором одна спираль имеет последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO 30-125, описанных в WO2013/159109.
2. Транстиретин (TTR).
TTR (также известный как преальбумин, гипертироксинемия, диспреальбуминемическая, тироксин; старческий системный амилоидоз, амилоидная полиневропатия, амилоидоз I, PALB; дистранстиретинемическая, HST2651; ТВ РА; диспреальбуминемическая эутиреоидная гипертироксинемия) представляет собой белок сыворотки/плазмы и спинномозговой жидкости, отвечающий за транспорт тироксина и ретинола (Sakaki et al., Mol Biol Med. 1989, 6:161-8). Структурно TTR представляет собой гомотетрамер; точечные мутации и неправильное скручивание белка приводит к отложению амилоидных фибрилл и сопровождается такими расстройствами как старческий системный амилоидоз (SSA), семейная амилоидная полиневропатия (FAP) и семейная амилоидная кардиопатия (FAC).
TTR синтезируется, в основном, печенью и хориоидным сплетением головного мозга, а также, в меньшей степени, сетчаткой глаза у людей (Palha, Clin Chem Lab Med, 2002, 40, 1292-1300). Транстиретин, которые синтезирован в печени, секретируется в кровь, тогда как транстиретин из хориоидного сплетения предназначен для спинномозговой жидкости (CSF). Синтез транстиретина в хориоидном сплетении составляет около 20% от общего локального синтеза белка и целых 25% от общего белка CSF (Dickson et al., J Biol Chem, 1986, 261, 3475-3478).
Благодаря возможности выполнения генетических и иммуногистохимических диагностических тестов, были обнаружены пациенты с TTR амилоидозом во многих народах мира. Недавние исследования показали, что TTR амилоидоз представляет собой не редкое эндемическое заболевание, как считалось ранее, и может поражать не менее 25% взрослого населения (Tanskanen et al., Ann Med. 2008;40(3):232-9).
На биохимическом уровне TTR был определено как основной белковый компонент в амилоидных отложениях пациентов с FAP (Costa et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1978, 75:4499-4503), а позже было обнаружено, что замена метионина на валин в положении 30 этого белка представляет собой наиболее распространенный молекулярный дефект, вызывающий это заболевание (Saraiva et al., J. Clin. Invest. 1984, 74:104-119). При FAP происходит повсеместное системное внеклеточное отложение скоплений TTR, и амилоидные фибриллы возникают по всей соединительной ткани, особенно в периферической нервной системе (Sousa and Saraiva, Prog. Neurobiol. 2003, 71:385-400). После отложения TTR происходит аксонная дегенерация, берущая начало в немиелинизированных и миелинизированных волокнах малого диаметра, что в конечном итоге приводит к потере нейронов в ганглионарных центрах.
Антисмысловые соединения, нацеленные на TTR, были описаны ранее в US2005/0244869, WO2010/017509 и WO2011/139917, полное содержание каждого из которых включено в настоящий документ посредством ссылки. Антисмысловое олигоазотистое основание, нацеленное на TTR, ISIS-TTRRx, в настоящее время проходит 2/3 фазу клинических испытаний для исследования его эффективности при лечении субъектов, страдающих семейной амилоидной полиневропатией. Однако все еще существует необходимость в обеспечении пациентов дополнительными и более эффективными возможностями лечения.
Некоторые конъюгированные антисмысловые соединения, нацеленные на нуклеиновую кислоту TTR.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированные антисмысловые соединения нацелены на нуклеиновую кислоту TTR, имеющую последовательность с номером доступа GENBANK® NM_000371.3, которая включена в настоящий документ как SEQ ID NO: 2. В некоторых таких вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95 или на 100% комплементарно SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 12-19. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 12-19.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 12.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID
- 64 031393
NO: 13.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 14. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 14.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 15. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 15.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 16, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 78. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 16, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 78.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 17. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 17.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 18. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 18.
В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований последовательности SEQ ID NO: 19. В некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, содержит последовательность азотистых оснований SEQ ID NO: 19.
Таблица 3
Антисмысловые соединения, нацеленные на TTR SEQ ID NO: 2
ISIS № | Сайтмишень инициации | Последовательность (5’-3’) | Мотив | SEQID NO |
420915 | 508 | TCTTGGTTACATGAAATC СС | eeeeeddddddddddeee ее | 12 |
304299 | 507 | CTTGGTTACATGAAATCC СА | eeeeeddddddddddeee ее | 13 |
420921 | 515 | GGAATACTCTTGGTTACA TG | eeeeeddddddddddeee ее | 14 |
420922 | 516 | TGGAATACTCTTGGTTAC АТ | eeeeeddddddddddeee ее | 15 |
420950 | 580 | TTTTATTGTCTCTGCCTGG А | eeeeeddddddddddeee ее | 16 |
420955 | 585 | GAATGTTTTATTGTCTCTG С | eeeeeddddddddddeee ее | 17 |
420957 | 587 | AGGAATGTTTTATTGTCT СТ | eeeeeddddddddddeee ее | 18 |
420959 | 589 | ACAGGAATGTTTTATTGT СТ | eeeeeddddddddddeee ее | 19 |
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 420915 и конъюгирующей группы. ISIS 420915 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Tes mCes Tes Tes Ges Gds Tds Tds Ads mCds Ads Tds Gds Ads Ads Aes Tes mCes mCes mCe, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
- 65 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 304299 и конъюгирующей группы. ISIS 304299 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: mCes Tes Tes Ges Ges Tds Tds Ads mCds Ads Tds Gds Ads Ads Ads Tes mCes mCes mCes Ae, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 420921 и конъюгирующей группы. ISIS 420921 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Ges Ges Aes Aes Tes Ads mCds Tds mCds Tds Tds Gds Gds Tds Tds Aes mCes Aes Tes Ge, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
Т = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 420922 и конъюгирующей группы. ISIS 420922 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Tes Ges Ges Aes Aes Tds Ads mCds Tds mCds Tds Tds Gds Gds Tds Tes Aes mCes Aes Те, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 420950 и конъюгирующей группы. ISIS 420950 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Tes Tes Tes Tes Aes Tds Tds Gds Tds mCds Tds mCds Tds Gds mCds mCes Tes Ges Ges Ae, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 420955 и конъюгирующей группы. ISIS 420955 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Ges Aes Aes Tes Ges Tds Tds Tds Tds Ads Tds Tds Gds Tds mCds Tes mCes Tes Ges mCe, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 420957 и конъюгирующей группы. ISIS 420957 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Aes Ges Ges Aes Aes Tds Gds Tds Tds Tds Tds Ads Tds Tds Gds Tes mCes Tes mCes Те, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид,
- 66 031393 d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 420959 и конъюгирующей группы. ISIS 420959 представляет собой модифицированный олигонуклеотид, имеющий формулу: Aes mCes Aes Ges Ges Ads Ads Tds Gds Tds Tds Tds Tds Ads Tds Tes Ges Tes mCes Те, где
A = аденин, mC = 5'-метилцитозин,
G = гуанин,
T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение, имеющее следующую химическую структуру, содержит или состоит из ISIS 420915 с 5'-Х, где X представляет собой конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе:
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 682877, имеющего следующую химическую структуру:
- 67 031393
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из ISIS 682884, имеющего следующую химическую структуру:
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит или состоит из SEQ ID NO: 12, 5'-GalNAc и химических модификаций и представлено следующей химической структурой:
где любой R1 представляет собой -OCH2CH2OCH3 (MOE), a R2 представляет собой Н или R1 и R2 вместе образуют мостик, при этом R1 представляет собой -O-, a R2 представляет собой -CH2-, -CH(CH3)или -CH2CH2-, и R1 и R2 напрямую связаны так, что образующийся мостик выбран из -O-CH2-, -OCH(CH3)- и -O-CH2CH2-;
и для каждой пары из R3 и R4 у одного кольца, независимо для каждого кольца: любой R3 выбран из H и -OCH2CH2OCH3, a R4 представляет собой Н или R3 и R4 вместе образуют мостик, при этом R3 представляет собой -O-, a R4 представляет собой -CH2-, -CH(CH3)- или -CH2CH2- и R3 и R4 напрямую связаны так, что образующийся мостик выбран из -O-CH2-, -O-CH(CH3)- и -O-CH2CH2-;
R5 выбран из H и -CH3;
a Z выбран из S- и О-.
В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит антисмысловый олигонуклеотид, описанный в публикации WO2011/139917 или US 8101743, полное содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки, и конъюгирующую группу. В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO 8-160, 170-177, описанных в WO2011/139917, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых основа
- 68 031393 ний любой из SEQ ID NO 12-89, описанных в US 8 101 743, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований, комплементарную предпочтительному целевому сегменту любой из SEQ ID NO 90-133, описанных в US 8101743, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе. Последовательности азотистых оснований всех вышеупомянутых справочных SEQ ID NO включены в настоящий документ посредством ссылки.
Терапевтические показания для TTR.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения приведены способы применения конъюгированного антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту TTR, для модулирования экспрессии TTR у субъекта. В некоторых вариантах реализации изобретения экспрессия TTR снижена.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения приведены способы применения конъюгированного антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту TTR, в фармацевтической композиции для лечения субъекта. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект страдает заболеванием, расстройством или патологическим состоянием, связанным с транстиретином, или его симптомом. В некоторых вариантах реализации изобретения заболевание, расстройство или патологическое состояние, связанное с транстиретином, представляет собой транстиретиновый амилоидоз. Амилоидоз, связанный с транстиретином или транстиретиновый амилоидоз, или транстиретиновое амилоидное заболевание, при использовании в настоящем документе, представляет собой любую патологию или заболевание, связанное с дисфункцией или дисрегуляцией транстиретина, которая приводит к образованию содержащих транстиретин амилоидных фибрилл. Транстиретиновый амилоидоз включает, но не ограничивается ими, наследственный TTR амилоидоз, лептоменингеальный амилоидоз, семейную амилоидную полиневропатию (FAP), семейную амилоидную кардиомиопатию, семейный окулолептоменингеальный амилоидоз, старческий амилоидоз сердца или старческий системный амилоидоз.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения приведены способы применения конъюгированного антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту TTR, для производства лекарственного средства.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложено конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на нуклеиновую кислоту TTR, или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии.
В некоторых вариантах реализации изобретения предложено конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на нуклеиновую кислоту TTR, для применения при лечении заболевания, расстройства, патологического состояния или его симптома, связанного с транстиретином. В некоторых вариантах реализации изобретения заболевание, расстройство или патологическое состояние, связанное с транстиретином, представляет собой транстиретиновый амилоидоз.
Следует понимать, что любое из описанных в настоящем документе соединений можно применять в вышеупомянутых способах и применениях. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на нуклеиновую кислоту TTR, в вышеупомянутых способах и применениях может включать, но не органичиваясь ими, конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, которое содержит по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 12-19; конъюгированное антисмысловое соединение, нацеленное на SEQ ID NO: 2, которое содержит последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 1219; соединение, содержащее или состоящее из ISIS 420915, ISIS 304299, ISIS 420921, ISIS 420922, ISIS 420950, ISIS 420955, ISIS 420957 или ISIS 420959 и конъюгирующей группы; соединение, содержащее антисмысловый олигонуклеотид, описанный в WO2011/139917 или US 8101743, полное содержание каждой из которых включено в настоящий документ посредством ссылки, и конъюгирующую группу; соединение, содержащее антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO 8-160, 170-177, описанных в WO2011/139917, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе; антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO 12-89, описанных в US 8101743, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе; или соединение, содержащее антисмысловый олигонуклеотид, имеющий последовательность азотистых оснований, комплементарную предпочтительному целевому сегменту любой из SEQ ID NO 90-133, описанных в US 8101743, и конъюгирующую группу, описанную в настоящем документе. Последовательности азотистых оснований всех вышеупомянутых справочных SEQ ID NO включены в настоящий документ посредством ссылки.
Е. Некоторые фармацевтические композиции.
В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены фармацевтические композиции, содержащие одно или более антисмысловых соединений. В некоторых вариантах реализации изобретения такая фармацевтическая композиция содержит подходящий фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит стерильный солевой раствор и одно или более антисмысловых соединений. В некоторых вариантах реализации изобретения такая фармацевтическая композиция состоит из стерильного солевого
- 69 031393 раствора и одного или более антисмысловых соединений. В некоторых вариантах реализации изобретения стерильный солевой раствор представляет собой солевой раствор фармацевтической марки. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит одно или более антисмысловых соединений и стерильную воду. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция состоит из одного или более антисмысловых соединений и стерильной воды. В некоторых вариантах реализации изобретения стерильный солевой раствор представляет собой воду фармацевтической марки. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит одно или более антисмысловых соединений и фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция состоит из одного или более антисмысловых соединений и фосфатно-солевого буферного раствора (PBS). В некоторых вариантах реализации изобретения стерильный солевой раствор представляет собой PBS фармацевтической марки.
В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения могут быть смешаны с фармацевтически приемлемыми активными и/или инертными веществами для получения фармацевтических композиций или составов. Композиции и способы составления фармацевтических композиций зависят от множества критериев, включая, но не ограничиваясь этим, способ введения, тяжесть заболевания или дозу, подлежащую введению.
Фармацевтические композиции, содержащие антисмысловые соединения, охватывают любые фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры или соли таких сложных эфиров. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтические композиции, содержащие антисмысловые соединения, содержат один или более олигонуклеотидов, которые при введении млекопитающему, включая человека, могут обеспечивать (прямо или косвенно) его биологически активный метаболит или остаток. Соответственно, например, настоящее описание относится также к фармацевтически приемлемым солям антисмысловых соединений, пролекарствам, фармацевтически приемлемым солям таких пролекарств и к другим биоэквивалентам. Подходящие фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничиваются ими, соли натрия и калия.
Пролекарство может включать внедрение дополнительных нуклеозидов у одного или обоих концов олигонуклеотида, которые расщепляются в организме под действием эндогенных нуклеаз с образованием активного антисмыслового олигонуклеотида.
В многочисленных способах в терапиях с нуклеиновыми кислотами были применены липидные фрагменты. В некоторых таких способах нуклеиновую кислоту вводят в предварительно сформированные липосомы или липоплексы, полученные из смесей катионных липидов и нейтральных липидов. В некоторых способах получают ДНК комплексы с моно- или поликатионными липидами без участия нейтрального липида. В некоторых вариантах реализации изобретения липидный фрагмент выбиран для улучшения распределения фармацевтического агента в определенной клетке или ткани. В некоторых вариантах реализации изобретения липидный фрагмент выбиран для улучшения распределения фармацевтического агента в жировой ткани. В некоторых вариантах реализации изобретения липидный фрагмент выбиран для улучшения распределения фармацевтического агента в мышечной ткани.
В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтические композиции, представленные в настоящем документе, содержат один или более модифицированных олигонуклеотидов и одно или более вспомогательных веществ. В некоторых таких вариантах реализации изобретения вспомогательные вещества выбраны из воды, солевых растворов, спирта, полиэтиленгликолей, желатина, лактозы, амилазы, стеарата магния, талька, кремниевой кислоты, вязкого парафина, гидроксиметилцеллюлозы и поливинилпирролидона.
В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция, представленная в настоящем документе, содержит систему доставки. Примеры систем доставки включают, но не ограничиваются ими, липосомы и эмульсии. Некоторые системы доставки подходят для получения некоторых фармацевтических композиций, включая композиции, содержащие гидрофобные соединения. В некоторых вариантах реализации изобретения применяют некоторые органические растворители, такие как диметилсульфоксид.
В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция, представленная в настоящем документе, содержит одну или более тканеспецифичных молекул доставки, предназначенных для доставки одного или более фармацевтических агентов настоящего описания в определенную ткань или типы клеток. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтические композиции включают липосомы, покрытые тканеспецифичным антителом.
В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция, представленная в настоящем документе, содержит систему совместного растворителя. Некоторые такие системы совместных растворителей содержат, например, бензиловый спирт, неполярное поверхностно-активное вещество, смешиваемый с водой органический полимер и водную фазу. В некоторых вариантах реализации изобретения такие системы совместных растворителей применяют для гидрофобных соединений. Не ограничивающий пример такой системы совместных растворителей представляет собой система совместных растворителей VPD, которая представляет собой раствор абсолютного этанола, содержащего 3% мас./об. бензилового спирта, 8% мас./об. неполярного поверхностно-активного вещества Polysorbate 80™
- 70 031393 и 65% мас./об. полиэтиленгликоля 300. Пропорции таких систем совместных растворителей могут существенно варьироваться без значителного изменения их характеристик растворимости и токсичности. Кроме того, может варьироваться сущность компонентов совместных растворителей: например, вместо Polysorbate 80™ могут быть применены другие поверхностно-активные вещества; может варьироваться размер фракции полиэтиленгликоля; вместо полиэтиленгликоля могут быть применены другие биосовместимые полимеры, например поливинилпирролидон; и вместо декстрозы могут быть применены другие сахара или полисахариды.
В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическую композицию, представленную в настоящем документе, получают для перорального введения. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтические композиции получают для буккального введения.
В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическую композицию получают для введения инъекцией (например, внутривенной, подкожной, внутримышечной и т.д.). В некоторых таких вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция содержит носитель и составлена в водном растворе, таком как вода или физиологически совместимые буферы, такие как раствор Хэнкса, раствор Рингера или физиологический солевой буфер. В некоторых вариантах реализации изобретения включены другие ингредиенты (например, ингредиенты, улучшающие растворимость или служащие консервантами). В некоторых вариантах реализации изобретения суспензии для инъекций получают при помощи подходящих жидких носителей, суспендирующих агентов и т.п. Некоторые фармацевтические композиции для инъекций представлены в форме разовой дозы, например в ампулах, или в многодозовых контейнерах. Некоторые фармацевтические композиции для инъекций представляют собой суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных жидких носителях, и они могут содержать вспомогательные агенты, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Некоторые растворители, подходящие для применения в фармацевтических композициях для инъекций, включают, но не ограничиваются ими, липофильные растворители и жирные масла, такие как кунжутное масло, синтетические сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, и липосомы. Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, сорбит или декстран. Такие суспензии могут также необязательно содержать подходящие стабилизаторы или агенты, которые увеличивают растворимость фармацевтических агентов с обеспечением возможности получения высококонцентрированных растворов.
В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическую композицию получают для трансмукозального введения. В некоторых таких вариантах реализации изобретения в составе применяют пенетранты, соответствующие барьеру, через который необходимо проникнуть. Такие пенетранты общеизвестны в данной области техники.
В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтическая композиция, представленная в настоящем документе, содержит олигонуклеотид в терапевтически эффективном количестве. В некоторых вариантах реализации изобретения терапевтически эффективное количество является достаточным для предотвращения, облегчения или облегчения симптомов заболевания или для увеличения продолжительности жизни субъекта, подлежащего лечению. Определение терапевтически эффективного количества находится в пределах возможностей специалистов в данной области техники.
В некоторых вариантах реализации изобретения один или более модифицированных олигонуклеотидов, представленных в настоящем документе, составляют в виде пролекарства. В некоторых вариантах реализации изобретения при введении in vivo пролекарство химически превращается в биологически, фармацевтически или терапевтически более активную форму олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации изобретения пролекарства пригодны благодаря тому, что их проще вводить, чем соответствующую активную форму. Например, в некоторых случаях пролекарство может быть более биодоступным (например, при пероральном введении), чем соответствующая активная форма. В некоторых случаях пролекарство может обладать улучшенной растворимостью по сравнению с соответствующей активной формой. В некоторых вариантах реализации изобретения пролекарства менее растворимы в воде, чем соответствующая активная форма. В некоторых случаях такие пролекарства обладают превосходной передачей через клеточные мембраны, при этом растворимость в воде ухудшает их подвижность. В некоторых вариантах реализации изобретения пролекарство представляет собой сложный эфир. В некоторых таких вариантах реализации изобретения сложный эфир при введении метаболически гидролизуется до карбоновой кислоты. В некоторых случаях соединение, содержащее карбоновую кислоту, представляет собой соответствующую активную форму. В некоторых вариантах реализации изобретения пролекарство содержит короткий пептид (полиаминокислоту), связанный с кислотной группой. В некоторых таких вариантах реализации изобретения пептид расщепляется при введении с образованием соответствующей активной формы.
В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены композиции и способы снижения количества или активности целевой нуклеиновой кислоты в клетке. В некоторых вариантах реализации изобретения клетка находится в организме животного. В некоторых вариантах реализации изобретения животное представляет собой млекопитающее. В некоторых вариантах реализации изобретения жи
- 71 031393 вотное представляет собой грызуна. В некоторых вариантах реализации изобретения животное представляет собой примата. В некоторых вариантах реализации изобретения животное представляет собой примата, не являющегося человеком. В некоторых вариантах реализации изобретения животное представляет собой человека.
В некоторых вариантах реализации настоящего описания приведены способы введения животному фармацевтической композиции, содержащей олигонуклеотид настоящего описания. Подходящие способы введения включают, но не ограничиваются ими, пероральный, ректальный, трансмукозальный, интестинальный, энтеральный, местный, суппозитории, через ингаляции, интратекальный, интрацеребровентрикулярный, внутрибрюшинный, интраназальный, интраокулярный, внутриопухолевый и парентеральный (например, внутривенный, внутримышечный, интрамедуллярный и подкожный). В некоторых вариантах реализации изобретения вводят фармацевтические интратекальные средства для достижения местного, а не системного воздействия. Например, фармацевтические композиции могут быть введены инъекцией непосредственно в область желаемого эффекта (например, в печень).
Неограничивающее описание и включение посредством ссылки.
Несмотря на то что некоторые соединения, композиции и способы, описанные в настоящем документе, были подробно описаны в соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, следующие примеры служат лишь для иллюстрации соединений, описанных в настоящем документе, и их не следует считать их ограничением. Каждая из ссылок, номера доступа GenBank и подобные ссылки, упоминаемые в настоящей заявке, включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
Некоторые соединения, композиции и способы в настоящем документе описаны как содержащие точно или содержащие только определенное количество конкретных элементов или характеристик. Такие описания использованы для обозначения того, что, хотя соединение, композиция или способ может включать другие дополнительные элементы, количество конкретного элемента или характеристики представляет собой определенное число. Например, конъюгат, содержащий ровно один GalNAc представляет собой конъюгат, который содержит один и ровно один GalNAc, хотя он может содержать другие элементы, помимо указанного одного GalNAc.
Несмотря на то что перечень последовательностей, сопровождающий этот файл, указывает каждую последовательность либо как РНК, либо как ДНА, по необходимости, в действительности эти последовательности могут быть модифицированы любой комбинацией химических модификаций. Специалистам в данной области техники понятно, что такое обозначение как РНК или ДНК для описания модифицированных олигонуклеотидов, является в некоторых случаях произвольным. Например, олигонуклеотид, содержащий нуклеозид, содержащий 2'-OH сахарный фрагмент и тиминовое основание, может быть описан как ДНК, имеющая модифицированный сахар (2'-OH вместо природного 2'-H в ДНК) или как РНК, имеющая модифицированное основание (тимин (метилированный урацил) вместо природного урацила в РНК).
Соответственно последовательности нуклеиновых кислот, представленные в настоящем документе, включая, но не ограничиваясь ими, последовательности в перечне последовательностей, предназначены для охвата нуклеиновых кислот, содержащих любую комбинацию природных или модифицированных РНК и/или ДНК, включая, но не ограничиваясь ими, такие нуклеиновые кислоты, которые содержат модифицированные азотистые основания. В качестве дополнительного примера и без ограничения, олигонуклеотид, содержащий последовательность азотистых оснований ATCGATCG, охватывает любые олигонуклеотиды, имеющие такую последовательность азотистых оснований, модифицированных или немодифицированных, включая, но не ограничиваясь ими, такие соединения, которые содержат РНК основания, такие как те, которые имеют последовательность AUCGAUCG, и те, которые имеют некоторые ДНК основания и некоторые РНК основания, такие как AUCGATCG, а также олигонуклеотиды, имеющие другие модифицированные основания, такие как ATmeCGAUCG, где meC означает цитозиновое основание, содержащее метиловую группу в 5-положении.
Примеры
Следующие примеры иллюстрируют некоторые варианты реализации настоящего описания и не являются ограничивающими. Более того, если приведены конкретные варианты реализации, авторы изобретения подразумевают общее применение указанных конкретных вариантов реализации. Например, описание олигонуклеотида, содержащего конкретный мотив, дает обоснованное основание для дополнительных олигонуклеотидов, содержащих такой же или похожий мотив. И, например, если конкретная высокоаффинная модификация возникает в определенном положении, то в этом же положении считаются подходящими другие высокоаффинные модификации, если не указано иное.
- 72 031393
Пример 1. Общий способ получения фосфорамидитов соединений 1, 1а и 2
° ^B\- | () >Bx | ° ^Bx DMTO Λ / |
DMTO \ . | DMTO \ / | |
OMe | 1·, | |
О | О О | 0 О |
vc P - o M(/Pr)2 | NC P - О N(/Pr)2 | NC - Ρ W Ο N(/Pr)2 |
1 | la | 2 |
Вх представляет собой гетероциклическое основание. Соединения 1, 1а и 2 получили по методикам, общеизвестным в данной области техники, описанным в данном описании (см. Seth et al., Bioorg. Med. Chem., 2011, 21(4), 1122-1125, J. Org. Chem., 2010, 75(5), 1569-1581, Nucleic Acids Symposium Series, 2008, 52(1), 553-554); и см. также опубликованные Международные заявки РСТ (WO2011/115818, WO2010/077578, WO2010/036698, WO2009/143369, WO2009/006478 и WO2007/090071) и патент США 7569686).
Пример 2. Получение соединения 7
АсООАс
АсООАс АсО - OAc AcHN 3 | TMSOTf, 50 °C | t AcO-Λ^. | -O | 0 x но '-'c | J 5 |
CICH2CH2CI (93%) | N% 4 | /-1 TMSOTf, ДХЭ \ (66 %) | |||
АсООАс А...о o AcO A— AcHN | О 1’ li il 6 0 | H2/Pd | AcO OAc V°. о . . AcO- A-— AcHN 7 | .. ΌΗ | |
MeOH (95%) | II о |
Соединение 3 (2-ацетамидо-1,3,4,6-тетра-O-ацетил-2-дезокси-β-D-галактопираноза или галактозамина пентаацетат) имеется в продаже. Соединение 5 получили по опубликованным методикам (Weber et al., J. Med. Chem., 1991, 34, 2692).
Пример 3. Получение соединения 11
Соединения 8 и 9 имеются в продаже.
Пример 4. Получение соединения 18 ЕЮ-О о о
--NH2 0 ЕЮ 11 оензил^лорформизт.
диоксан. MazCO2 (86%;
нгм
ЕЮ, ; О
1Н
HBTU. DIEA. ДМФА (69%;
ВО оо 0 о ЕЮ О^
-^о н н , н Н о о о
Η н υ
LiOH. Н;О ди оксан (91%;
CFtCOOH
95% ' η2ν.
АсООАс
А с НН
ΎΗ HBTU. DIEA. HOBt дна164%:
H2N'
Соединение 11 получили по способам, описанным в примере 3. Соединение 14 имеется в продаже. Соединение 17 получили по такому же способу, как описан в публикации Rensen et al., J. Med. Chem., 2004, 47, 5798-5808.
- 73 031393
Пример 5. Получение соединения 23 н
N
1. TBDMSCI. ДМФ4. имидазол. коглн.т-ра (95 о о 1 H.CO-'S^OH 21
HBTU. DIEA
ДЬ Σ- -.nil· Τ-Πδ:·;:
. DI.1 : Li. Г. Г.
комн. т-ра 176%:
2. LiOH. диоксан (97%)
ОН
Соединения 19 и 21 имеются в продаже.
Пример 6. Получение соединения 24
Соединения 18 и 23 получили так, как описано в способах в примерах 4 и 5. Пример 7. Получение соединения 25
Соединение 24 получили по способам, представленным в примере 6.
Пример 8. Получение соединения 26
- 74 031393
Соединение 24 получили по способам, представленным в примере 6.
Пример 9. Общее получение конъюгированных ASO, содержащих GalNAc3-1 на 3'-конце, соединения 29
фосфорамидптный строительный блок ]
3. Копирование фосфорамидитные строительные Олоки
3. Копирование
4. гидрид ксантана
5. Et3N/CH3CN(l:l)
6. Водный NH3 (расщепление) фосфорамидитный строительный блок ]
3. Копирование
4. t-BuOOH где защищенный GalNAc3-1 имеет структуру
Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-1 (GalNAc3-1a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных конъюгирующих групп. При этом GalNAc3-1a имеет формулу
- 75 031393
AcHN
Твердую подложку, связывающую защищенный GalNAc3-1, соединение 25, получили по способам, представленным в примере 7. Олигомерное соединение 29, содержащее GalNAc3-1 на 3'-конце, получили по стандартным методика в автоматическом синтезаторе ДНК/РНК (см. Dupouy et al., Angew. Chem. Int. ред., 2006, 45, 3623-3627). Фосфорамидитные строительные блоки, соединения 1 и 1а, получили по способам, представленным в примере 1. Изображенные фосфорамидиты являются иллюстративными и не предназначены для ограничения, поскольку могут быть применены другие фосфорамидитные строительные блоки для получения олигомерных соединений, имеющих желаемую последовательность и состав. Порядок и количество фосфорамидитов, добавляемых к твердой подложке, может быть подобрано для получения разорванных олигомерных соединений, описанных в настоящем документе. Такие разорванные олигомерные соединения могут иметь желаемый состав и последовательность оснований, продиктованную любой данной мишенью.
Пример 10. Общее получение конъюгированных ASO, содержащих GalNAc3-1 на 5'-конце, соединения 34
1.DCA, ДлЛ1 фосфор ампдитные фосфорашцшт 1 фосфорамидпт26
э. лгЬ. комн, i-pa (расщепление ί
1. Кзппровзни. IАс-О. л j»ll. пиртлюпн!
2. t-BuOOH
ПНС1Е.ШД11Н
PADS IL-ш t-БпООН
j. РСА.ДХМ
Unylinker™ 30 имеется в продаже. Олигомерное соединение 34, содержащее кластер GalNAc3-1 на 5'-конце, получили по стандартным способам в автоматическом синтезаторе ДНК/РНК (см. Dupouy et al., Angew. Chem. Int. Ed, 2006, 45, 3623-3627). Фосфорамидитные строительные блоки, соединения 1 и 1a, получили по способам, представленным в примере 1. Изображенные фосфорамидиты являются иллюстративными и не предназначены для ограничения, поскольку могут быть применены другие фосфорамидитные строительные блоки для получения олигомерного соединения, имеющего желаемую последовательность и состав. Порядок и количество фосфорамидитов, добавляемых к твердой подложке, может быть подобрано для получения разорванных олигомерных соединений, описанных в настоящем документе. Такие разорванные олигомерные соединения могут иметь желаемый состав и последовательность
- 76 031393 оснований, продиктованную любой данной мишенью.
Пример 11. Получение соединения 39
ie нети ДМФА EtHi-Prh
Соединение 13
ДМФА
Соединение 23
AcHN
Соединения 4, 13 и 23 получили по способам, описанным в примерах 2, 4 и 5. Соединение 35 получили по таким же способам, как описаны в публикации Rouchaud et al., Em. J. Org. Chem., 2011, 12, 23462353.
Пример 12. Получение соединения 40
AcO OAc )Н ^,0 DMT
Янтарный ангидрид DMAP ДХЭ
2. ДМФА HBTU EtTJi-Prlz PS-SS
AcHN
Соединение 38 получили по способам, представленным в примере 11.
- 77 031393
Пример 13. Получение соединения 44
AcHN
Соединения 23 и 36 получили по способам, представленным в примерах 5 и 11. Соединение 41 получили по таким же способам, как описаны в публикации WO2009082607.
Пример 14. Получение соединения 45
- 78 031393
Соединение 43 получили по способам, представленным в примере 13.
Пример 15. Получение соединения 47
Соединение 46 имеется в продаже.
Пример 16. Получение соединения 53
Соединения 48 и 49 имеются в продаже. Соединения 17 и 47 получили так, как описано в способах в примерах 4 и 15.
Пример 17. Получение соединения 54
Соединение 53 получили по способам, представленным в примере 16.
- 79 031393
Пример 18. Получение соединения 55
Соединение 53 получили по способам, представленным в примере 16.
Пример 19. Общий способ получения конъюгированных ASO, содержащих GalNAc3-1 в 3'положении, при помощи твердофазных методик (получение ISIS 647535, 647536 и 651900).
Если не указано иное, все реагенты и растворы, применяемые для синтеза олигомерных соединений, приобретены у коммерческих поставщиков. Стандартные фосфорамидитные строительные блоки и твердую подложку применили для внедрения нуклеозидных остатков, которые включают, например, остатки Т, A, G и mC. 0,1 М раствор фосфорамидита в безводном ацетонитриле применили для P-D-2'дезоксирибонуклеозида и 2'-MOE.
Синтез антисмысловых олигонуклеотидов (ASO) выполнили на синтезаторе ABI 394 (в масштабе 12 мкмоль) или на синтезаторе АКТА Oligopilot производства GE Healthcare Bioscience (в масштабе 40-200 мкмоль) по способу фосфорамидитного связывания на твердой подложке VIMAD, наполненной GalNAc3-1 (110 мкмоль/г, Guzaev et al., 2003), упакованной в колонку. Для стадии связывания фосфорамидиты вводили в 4-кратном избытке по сравнению с загрузкой на твердой подложке, а конденсацию фосфорамидита выполняли в течение 10 мин. Все остальные стадии выполняли по протоколам, предоставленным производителем. Для удаления диметокситритильной (DMT) группы с 5'-гидроксильной группы нуклеотида применили 6% раствор дихлоруксусной кислоты в толуоле. На стадии связывания в качестве активатора применили 4,5-дицианоимидазол (0,7 М) в безводном CH3CN. Тиофосфатные связи внедряли сульфированием при помощи 0,1 М раствора гидрида ксантана в 1:1 смеси пиридина/CH^N в течение 3 мин времени контакта. В качестве окислительного агента для обеспечения фосфодиэфирных межнуклеозидных связей применили 20% раствор трет-бутилгидропероксида в CH3CN, содержащий 6% воды, в течение 12 мин времени контакта.
После сборки желаемой последовательности цианоэтил-фосфатные защитные группы снимали при помощи 1:1 (об./об.) смеси триэтиламина и ацетонитрила в течение 45 мин времени контакта. Связанные с твердой подложкой ASO суспендировали в водном растворе аммиака (28-30 мас.%) и нагревали при 55°C в течение 6 ч.
Затем отфильтровывали не связанные ASO и выпаривали аммиак кипячением. Остаток очищали жидкостной хроматографией высокого давления на сильной анионообменной колонке (GE Healthcare Bioscience, Source 30Q, 30 мкм, 2,54x8 см, А = 100 мМ ацетата аммония в 30% водном CH3CN, В = 1,5 М NaBr в А, 0-40% В за 60 мин, скорость потока 14 мл мин-1, λ = 260 нм). Остаток обессоливали при помощи ВЭЖХ на обращенно-фазовой колонке с получением желаемых ASO с выделенным выходом 15З0% относительно первоначальной загрузки на твердую подложку. ASO характеризовали при помощи ион-парной ВЭЖХ, совмещенной с МС-анализом на системе Agilent 1100 MSD.
Антисмысловые олигонуклеотиды, не содержащие конъюгат, синтезировали по стандартным способам синтеза олигонуклеотидов, общеизвестным в данной области техники.
Применяя эти способы, получили три отдельных антисмысловых соединения, нацеленных на АроС
III. Как показано ниже в табл. 4, каждое из трех антисмысловых соединений, нацеленных на АроС III, имеет одну и ту же последовательность азотистых оснований. ISIS З04801 представляет собой 5-10-5 MOE гэпмер, содержащий только тиофосфатные связи; ISIS 6475З5 является таким же, как ISIS З04801, за исключением того, что он содержит GalNAc3-1, конъюгированный у его З'-конца; и ISIS 647536 является таким же, как ISIS 6475З5, за исключением того, что некоторые межнуклеозидные связи этого соединения представляют собой фосфодиэфирные связи. Как дополнительно показано в табл. 4, были син
- 80 031393 тезированы два отдельных антисмысловых соединения, нацеленных на SRB-1. ISIS 440762 представляет собой 2-10-2 cEt гэпмер, содержащий только тиофосфатные межнуклеозидные связи; ISIS 651900 является таким же, как ISIS 440762, за исключением того, что он содержит GalNAc3-1 у его 3'-конца.
Таблица 4 Модифицированные ASO, нацеленные на АроС III и SRB-1
ASO | Последовательность (от 5’ к 3’) | Мише нь | Расчета ая масса | Наблюдае мая масса | SE Q ID No. |
ISIS 3048 01 | AesGes CesTesTes CdsTdsTdsGdsTds Cds CdsAdsGds Cds TesTesTesAesTe | АроС III | 7165,4 | 7164,4 | 20 |
ISIS 6475 35 | AesGes CesTesTes CdsTdsTdsGdsTds Cds CdsAdsGds CdsTesTes Tes AesTeo Ad0’-GalNAc3-1 a | АроС III | 9239,5 | 9237,8 | 21 |
ISIS 6475 36 | AesGeo CeoTeoTeo Сд5Тд5Тд5Од5Тд5 Cds CdSAdSGdS CdsTeoTe oTesAesTeoAdo’- GalNAc3-la | АроС III | 9142,9 | 9140,8 | 21 |
ISIS 4407 62 | TksmCksAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTksmCk | SRB-1 | 4647,0 | 4646,4 | 22 |
ISIS 6519 00 | TksmCksAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTksmCk0Ad0’GalNAc3-la | SRB-1 | 6721,1 | 6719,4 | 23 |
Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает 3-D-2'дезоксирибонуклеозид; k означает 6'-(S)-CH3 бициклический нуклеозид (например, cEt); s означает тиофосфатные межнуклеозидные связи (PS); о означает фосфодиэфирные межнуклеозидные связи (РО); и о' означает -O-r^OXOH)-. Верхний индекс m означает 5-метилцитозины. GalNAc3-1 означает конъюгирующую группу, имеющую структуру, изображенную ранее в примере 9. Следует отметить, что GalNAc3-1 содержит расщепляемый аденозин, который связывает ASO с остальной частью конъюгата, который обозначен как GalNAc3-1a. Номенклатура, используемая в представленной выше таблице, показывает полную последовательность азотистых оснований, включая аденозин, который является частью конъюгата. Следовательно, в представленной выше таблице последовательности также могут быть перечислены с окончанием GalNAc3-1, без Ado. Такое условное применение нижнего индекса а для обозначения части конъюгирующей группы, не содержащей расщепляемого нуклеозида или расщепляемого фрагмента, применяется во всех представленных примерах. Эта часть конъюгирующей группы, не содержащая расщепляемого фрагмента, упоминается в настоящем документе как кластер или кластер конъюгата либо кластер GalNAc3. В некоторых случаях конъюгирующая группа для удобства описана путем отдельного представления ее кластера и ее расщепляемого фрагмента.
Пример 20. Дозозависимое антисмысловое ингибирование человеческого АроС III у huApoC III трансгенных мышей.
ISIS 304801 и ISIS 647535, каждый из которых нацелен на человеческий АроС III и описан выше, отдельно испытывали и оценивали в дозозависимом исследовании на их способность ингибировать человеческий АроС III у трансгенных мышей с человеческим АроС III.
Лечение.
Трансгенных мышей с человеческим ApoC III выдерживали при 12-часовом цикле освещения/темноты и обеспечивали свободный доступ к пище Teklad lab. До начала эксперимента животных акклиматизировали по меньшей мере в течение 7 дней в исследовательской лаборатории. Приготовили ASO в PBS и стерилизовали фильтрованием через фильтр 0,2 мкм. ASO растворили в 0,9% PBS для инъекций.
Трансгенным мышам с человеческим АроС III один раз в неделю в течение двух неделю внутрибрюшинно вводили инъекции ISIS 304801 или 647535 при 0,08, 0,25, 0,75, 2,25 или 6,75 мкмоль/кг или PBS в качестве контрольного образца. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Через 48 ч после введения последней дозы каждую мышь обескровили и умертвили, и собрали ткани.
Анализ мРНК АроС III.
Уровни мРНК АроС III в печени мышей определили при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc. Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни мРНК АроС III определяли относительно общей РНК (при помощи Ribogreen), затем нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК АроС III для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному PBS, и обозначены как % PBS. Ниже в табл. 5 представлена также полумаксимальная эффективная доза (ED50) для каждого ASO.
Показано, что оба антисмысловых соединения снижают РНК АроС III по сравнению с контрольным образцом, обработанным PBS. Кроме того, антисмысловое соединение, конъюгированное с GalNAc3-1 (ISIS 647535), было значительно более эффективным, чем антисмысловое соединение, не содержащее конъюгат GalNAc3-1 (ISIS 304801).
- 81 031393
Таблица 5
Влияние ASO лечения на уровни мРНК АроС III у трансгенных мышей с , человеческим АроС III .
ASO | Доза (мкмоль/кг) | % PBS | ED50 (мкмоль/кг) | 3’-конъюгат | Межнуклеозидная связь/длина | SEQ ID NO. |
PBS | 0 | 100 | - | - | - | |
ISIS 304801 | 0,08 | 95 | 0,77 | Нет | PS/20 | 20 |
0,75 | 42 | |||||
2,25 | 32 | |||||
6,75 | 19 | |||||
ISIS 647535 | 0,08 | 50 | 0,074 | GalNAc3-l | PS/20 | 21 |
0,75 | 15 | |||||
2,25 | 17 | |||||
6,75 | 8 |
Анализ белка АроС III (турбидиметрический анализ).
Анализ белка АроС III в плазме выполнили по способам, описанным в работе Graham et al., Circulation Research, до печати, опубликованной онлайн 29 марта 2013 г.
Около 100 мкл плазмы, выделенной из мышей, анализировали без разбавления, применяя клинический анализатор Olympus и имеющийся в продаже турбидиметрический аналитический набор АроС III (Kamiya, кат. № KAI-006, Kamiya Biomedical, Сиэтл, штат Вашингтон). Протокол анализа выполняли по описанию поставщика.
Как показано ниже в табл. 6, оба антисмысловых соединения снижают белок АроС III по сравнению с PBS контрольным образцом. Кроме того, антисмысловое соединение, конъюгированное с GalNAc3-1 (ISIS 647535), было значительно более эффективным, чем антисмысловое соединение, не содержащее конъюгат GalNAc3-1 (ISIS 304801).
Таблица 6
Влияние ASO лечения на уровни белка АроС III в плазме у трансгенных мышей с человеческим АроС III
ASO | Доза (мкмоль/кг) | % PBS | ED50 (мкмоль/кг) | 3’конъюгат | Межнуклеозидная связь/длина | SEQ ID NO |
PBS | 0 | 100 | - | - | - | |
ISIS 304801 | 0,08 | 86 | 0,73 | Нет | PS/20 | 20 |
0,75 | 51 | |||||
2,25 | 23 | |||||
6,75 | 13 | |||||
ISIS 647535 | 0,08 | 72 | 0,19 | GalNAc3-l | PS/20 | 21 |
0,75 | 14 | |||||
2,25 | 12 | |||||
6,75 | 11 |
Триглицериды и холестерин плазмы выделили по способу Bligh и Dyer (Bligh, E.G. and Dyer, W.J. Can. J. Biochem. Physiol. 37: 911-917, 1959) (Bligh, E and Dyer, W, Can J Biochem Physiol, 37, 911-917, 1959) (Bligh, E. and Dyer, W., Can J Biochem Physiol, 37, 911-917, 1959) и измерили при помощи клинического анализатора Beckmann Coulter и имеющихся в продаже реагентов.
Уровни триглицеридов измерили относительно мышей, инъецированных PBS, и выразили как % PBS. Результаты представлены в табл. 7. Показано, что оба антисмысловых соединения снижают уровни триглицеридов. Кроме того, антисмысловое соединение, конъюгированное с GalNAc3-1 (ISIS 647535), было значительно более эффективным, чем антисмысловое соединение, не содержащее конъюгат GalNAc3-1 (ISIS 304801).
- 82 031393
Таблица 7
Влияние ASO лечения на уровни триглицеридов у трансгенных мышей
ASO | Доза (мкмоль/кг) | % PBS | ed50 (мкмоль/кг) | 3’конъюгат | Межну кл еоз и д ная связь/длина | SEQ ID NO. |
PBS | 0 | 100 | - | - | - | |
ISIS 304801 | 0,08 | 87 | 0,63 | Нет | PS/20 | 20 |
0,75 | 46 | |||||
2,25 | 21 | |||||
6,75 | 12 | |||||
ISIS 647535 | 0,08 | 65 | 0,13 | GalNAcs- | PS/20 | 21 |
0,75 | 9 | |||||
2,25 | 8 | |||||
6,75 | 9 |
Образцы плазмы анализировали при помощи ВЭЖХ для определения количества общего холестерина и различных фракций холестерина (HDL и LDL). Результаты представлены в табл. 8 и 9. Показано, что оба антисмысловых соединения снижают общие уровни холестерина; оба снижают LDL и оба повышают HDL. Кроме того, антисмысловое соединение, конъюгированное с GalNAc3-1 (ISIS 647535), было значительно более эффективным, чем антисмысловое соединение, не содержащее конъюгат GalNAc3-1 (ISIS 304801). Увеличение уровней HDL и снижение уровней LDL представляет собой благоприятный сердечно-сосудистый эффект антисмыслового ингибирования АроС III.
Таблица 8
Влияние ASO лечения на уровни общего холестерина у трансгенных мышей
ASO | Доза (мкмоль/кг) | Общий холестерин (мг/дл) | 3’конъюгат | Межнуклеозидная связь/длина | SEQ ID NO. |
PBS | 0 | 257 | - | - | |
ISIS 304801 | 0,08 | 226 | Нет | PS/20 | 20 |
0,75 | 164 | ||||
2,25 | 110 | ||||
6,75 | 82 | ||||
ISIS 647535 | 0,08 | 230 | GalNAc3- | PS/20 | 21 |
0,75 | 82 | ||||
2,25 | 86 | ||||
6,75 | 99 |
Таблица 9
Влияние ASO лечения на уровни HDL и LDL холестерина у трансгенных мышей
ASO | Доза (мкмоль/кг) | HDL (мг/дл) | LDL (мг/дл) | 3’конъюгат | Межнуклеозидная связь/длина | SEQ ID NO. |
PBS | 0 | 17 | 28 | - | - | |
ISIS 304801 | 0,08 | 17 | 23 | Нет | PS/20 | 32 |
0,75 | 27 | 12 | ||||
2,25 | 50 | 4 | ||||
6,75 | 45 | 2 | ||||
ISIS 647535 | 0,08 | 21 | 21 | GalNAc3- | PS/20 | 111 |
0,75 | 44 | 2 | ||||
2,25 | 50 | 2 | ||||
6,75 | 58 | 2 |
Фармакокинетический анализ (ФК).
Оценили также ФК ASO. Образцы печени и почек измельчили и экстрагировали по стандартным протоколам. Образцы анализировали на MSD1 при помощи ИП-ВЭЖХ-МС. Определили содержание (мкг/г) в ткани ISIS 304801 и 647535 полной длины, и результаты представлены в табл. 10. Показано, что концентрации в печени антисмысловых соединений полной длины были схожими для двух антисмысловых соединений. Следовательно, даже несмотря на то, что GalNA^-1-конъюгированное антисмысловое
- 83 031393 соединение является более активным в печени (как показано по данным РНК и белка, представленным выше), его содержание в печени не намного выше. Действительно, рассчитанное значение EC50 (представленное в табл. 10) подтверждает, что наблюдаемое увеличение эффективности конъюгированного соединения не может быть приписано исключительно повышенному накоплению. Такой результат позволяет предположить, что конъюгат улучшает эффективность по другому механизму, чем простое накопление в печени, возможно за счет увеличения продуктивного захвата антисмыслового соединения в клетки.
Эти результаты показывают также, что концентрация GalNAcз-1-конъюгированного антисмыслово го соединения в почках ниже, чем концентрация антисмыслового соединения, не содержащего конъюгата GalNAc. Это имеет несколько благоприятных терапевтических эффектов. Для терапевтических показаний, в которых не требуется проявление активности в почках, воздействие на почки подвергает их риску токсичности без соответствующей пользы. Более того, высокая концентрация в почках обычно приводит к выводу соединения с мочой, обеспечивая более быстрое выведение. Соответственно для внепочечных мишеней накопление в почках является нежелательным. Эти данные позволяют предположить, что конъюгирование с GalNAc3-1 снижает накопление в почках.
Таблица 10 ФК анализ ASO лечения у трансгенных мышей
ASO | Доза (мкмоль/кг) | Печень (мкг/г) | Почки (мкг/г) | ЕС50 в печени (мкг/г) | 3’конъюгат | Межнуклеозидная связь/длина | SEQ ID NO. |
ISIS 304801 | ОД | 5,2 | 2Д | 53 | Нет | PS/20 | 20 |
0,8 | 62,8 | 119,6 | |||||
2,3 | 142,3 | 191,5 | |||||
6,8 | 202,3 | 337,7 | |||||
ISIS 647535 | ОД | 3,8 | 0,7 | 3,8 | GalNAc31 | PS/20 | 21 |
0,8 | 72,7 | 34,3 | |||||
2,3 | 106,8 | 111,4 | |||||
6,8 | 237,2 | 179,3 |
Идентифицировали также метаболиты ISIS 647535 и подтвердили их массы при помощи массспектрометрического анализа высокого разрешения. Сайты расщепления и структуры наблюдаемых метаболитов представлены ниже. Относительный % от общей длины ASO рассчитали по стандартным приемам, а результаты представлены в табл. 10а. Основной метаболит ISIS 647535 представляет собой ASO полной длины без всего конъюгата (то есть ISIS 304801), который образуется в результате расщепления по сайту расщепления А, представленному ниже. Кроме того, наблюдали также дополнительные метаболиты, образующиеся из других сайтов расщепления. Эти результаты позволяют предположить, что может быть пригодным также внедрение других расщепляемых связей, таких как сложные эфиры, пептиды, дисульфиды, фосфорамидаты или ацил-гидразоны, между сахаром GalNAc3-1 и ASO, которые могут расщепляться под действием ферментов внутри клетки или которые могут расщепляться в восстановительной среде цитозоля, или которые лабильны в кислотном pH внутри эндосом и лизосом.
Таблица 10а
Наблюдаемые метаболиты полной длины ISIS 647535
Метаболит | ASO | Сайт расщепления | Относительный % |
1 | ISIS 304801 | А | 36,1 |
2 | ISIS 304801 +dA | В | 10,5 |
3 | ISIS 647535 минус [3 GalNAc] | С | 16Д |
4 | ISIS 647535 минус [3 GalNAc + 1 связка 5-гидрокси-пентановой | D | 17,6 |
5 | кислоты] ISIS 647535 минус [2 GalNAc + 2 связки 5-гидрокси- | D | 9,9 |
6 | пентановой кислоты] ISIS 647535 минус [3 GalNAc + 3 связки 5-гидроксипентановой кислоты] | D | 9,8 |
- 84 031393
Пример 21. Антисмысловое ингибирование человеческого АроС III у трансгенных мышей с АроС III в исследовании одного введения.
ISIS 304801, 647535 и 647536, каждый из которых нацелен на человеческий АроС III и описан в табл. 4, дополнительно оценивали в исследовании однократного введения на их способность ингибировать человеческий АроС III у трансгенных мышей с человеческим АроС III.
Лечение.
Трансгенных мышей с человеческим ApoC III выдерживали при 12-часовом цикле освещения/темноты и обеспечивали свободный доступ к пище Teklad lab. До начала эксперимента животных акклиматизировали по меньшей мере в течение 7 дней в исследовательской лаборатории. Приготовили ASO в PBS и стерилизовали фильтрованием через фильтр 0,2 мкм. ASO растворили в 0,9% PBS для инъекций.
Трансгенным мышам с человеческим АроС III внутрибрюшинно ввели однократную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 304801, 647535 или 647536 (описанных выше), или PBS в качестве контрольного образца. Экспериментальная группа состояла из 3 животных, а контрольная группа состояла из 4 животных. Перед лечением, а также после последней дозы у каждой мыши брали кровь и анализировали образцы плазмы. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения.
- 85 031393
Образцы собрали и анализировали для определения уровней мРНК АроС III и белка в печени; триглицеридов в плазме; и холестерина, включая фракции HDL и LDL, которые анализировали так, как описано выше (пример 20). Данные этих анализов представлены ниже в табл. 11-15. Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, применяя стандартные протоколы. Уровни ALT и AST показали, что антисмысловые соединения хорошо переносятся при всех введенных дозах.
Эти результаты демонстрируют усиление эффективности антисмысловых соединений, содержащих конъюгат GalNAc3-1 на 3'-конце (ISIS 647535 и 647536), по сравнению с антисмысловым соединением, не содаржащим конъюгат GalNAc3-1 (ISIS 304801). Кроме того, ISIS 647536, который содержит конъюгат GalNAc3-1 и несколько фосфодиэфирных связей, был таким же эффективным, как ISIS 647535, который содержит тот же конъюгат, и все межнуклеозидные связи в этом ASO являются тиофосфатными.
Таблица 11
Влияние ASO лечения на уровни мРНК АроС III у трансгенных мышей с человеческим АроС III
ASO | Доза (мг/кг) | %PBS | ED so (мг/кг) | 3’конъюгат | Межнуклеози дная связь/длина | SEQ ID NO. |
PBS | 0 | 99 | - | - | - | |
1 | 104 | |||||
ISIS 304801 | 3 10 | 92 71 | 13,2 | Нет | PS/20 | 20 |
30 | 40 | |||||
0,3 | 98 | |||||
ISIS 647535 | 1 3 | 70 33 | 1,9 | GalNAc31 | PS/20 | 21 |
10 | 20 | |||||
0,3 | 103 | |||||
ISIS | 1 | 60 | 1,7 | GalNAc3- | PS/PO/20 | 21 |
647536 | 3 | 31 | 1 | |||
10 | 21 |
Таблица 12
Влияние ASO лечения на уровни белка АроС III в плазме у трансгенных мышей с человеческим АроС III
ASO | Доза (мг/кг) | % PBS | ED50 (мг/кг) | 3’конъюгат | Межнуклеозидная связь/длина | SEQ ID NO. |
PBS | 0 | 99 | - | - | - | |
ISIS 304801 | 1 | 104 | 23,2 | Нет | PS/20 | 20 |
3 | 92 | |||||
10 | 71 | |||||
30 | 40 | |||||
ISIS 647535 | θ,3 | 98 | 2,1 | GalNAc31 | PS/20 | 21 |
1 | 70 | |||||
3 | 33 | |||||
10 | 20 | |||||
ISIS 647536 | о,з | 103 | 1,8 | GalNAc31 | PS/PO/20 | 21 |
1 | 60 | |||||
3 | 31 | |||||
10 | 21 |
- 86 031393
Таблица 13
Влияние ASO лечения на уровни общего холестерина у трансгенных мышей
ASO | Доза (мг/кг) | % PBS | 3’конъюгат | Межнуклеозидная связь/длина | SEQ Ш NO. |
PBS | 0 | 96 | - | - | |
ISIS 304801 | 1 | 104 | Нет | PS/20 | 20 |
3 | 96 | ||||
10 | 86 | ||||
30 | 72 | ||||
ISIS | о,з | 93 | GalNAc3-l | PS/20 | 21 |
647535 | 1 | 85 | |||
3 | 61 | ||||
10 | 53 | ||||
ISIS 647536 | 0,3 | 115 | GalNAc3-l | PS/PO/20 | 21 |
1 | 79 | ||||
3 | 51 | ||||
10 | 54 |
- 87 031393
Таблица 15
Влияние ASO лечения на уровни HDL и LDL холестерина у трансгенных мышей
ASO | Доза (мг/кг) | HDL % PBS | LDL % PBS | 3’конъюгат | Межнуклеозидная связь/длина | SEQ ID NO. |
PBS | 0 | 131 | 90 | - | - | |
ISIS 304801 | 1 | 130 | 72 | Нет | PS/20 | 20 |
3 | 186 | 79 | ||||
10 | 226 | 63 | ||||
30 | 240 | 46 | ||||
ISIS 647535 | о,з | 98 | 86 | GalNAc31 | PS/20 | 21 |
1 | 214 | 67 | ||||
3 | 212 | 39 | ||||
10 | 218 | 35 | ||||
ISIS 647536 | о,з | 143 | 89 | GalNAc31 | PS/PO/20 | 21 |
1 | 187 | 56 | ||||
3 | 213 | 33 | ||||
10 | 221 | 34 |
Эти результаты подтверждают, что конъюгат GalNAc3-1 улучшает эффективность антисмыслового соединения. Эти результаты показывают также равную эффективность GalNAc3-1-конъюгированных антисмысловых соединений, в которых антисмысловые олигонуклеотиды имеют смешанные связи (ISIS 647536, который имеет шесть фосфодиэфирных связей), и полностью тиофосфатной версии того же антисмыслового соединения (ISIS 647535).
Тиофосфатные связи обеспечивают несколько свойств антисмысловых соединений. Например, они устойчивы к нуклеазному расщеплению и связываются с белками, что приводит к накоплению соединения в печени, а не в почках/моче. Эти свойства являются желательными, особенно при лечении показаний в печени. Однако тиофосфатные связи связаны также с воспалительной реакцией. Соответственно уменьшение количества тиофосфатных связей в соединении предположительно снижает риск воспаления, но снижает также концентрацию соединения в печени, повышает концентрацию в почках и моче, снижает стабильность в присутствии нуклеаз и уменьшает общую эффективность. Представленные результаты демонстрируют, что GalNAc3-1-конъюгированное антисмысловое соединение, в котором некоторые тиофосфатные связи заменены фосфодиэфирными связями, настолько же эффективно против мишени в печени, как и аналог, содержащий только тиофосфатные связи. Такие соединения предположительно являются менее провоспалительными (см. пример 24, в котором описан эксперимент, демонстрирующий, что уменьшение тиофосфатов (PS) приводит к снижению воспалительного действия).
Пример 22. Влияние модифицированного GalNA^-1-конъюгированного ASO, нацеленного на SRB1, in vivo.
ISIS 440762 и 651900, каждый из которых нацелен на SRB-1 и описан в табл. 4, оценили в дозозависимом исследовании на их способность ингибировать SRB-1 у Balb/c мышей.
Лечение.
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 440762, 651900 или PBS в качестве контрольного образца. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 48 ч после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни мРНК SRB-1 определяли относительно общей РНК (при помощи Ribogreen), затем нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному PBS, и обозначены как % PBS.
Как показано в табл. 16, оба антисмысловых соединения снижают уровни мРНК SRB-1. Кроме того, антисмысловое соединение, содержащее конъюгат GalNAc3-1 (ISIS 651900), было значительно более эффективным, чем антисмысловое соединение, не содержащее конъюгат GalNAc3-1 (ISIS 440762). Эти результаты демонстрируют, что преимущество эффективности конъюгатов GalNAc3-1 наблюдается при применении антисмысловых олигонуклеотидов, комплементарных различным мишеням и имеющих раз
- 88 031393 личные химически модифицированные нуклеозиды, в этом случае модифицированные нуклеозиды содержат стерически затрудненные этил-сахарные фрагменты (бициклический сахарный фрагмент).
Таблица 16 Влияние ASO лечения на уровни мРНК SRB-1 у . мышей Balb/c
ASO | Доза (мг/кг) | Пече нь % PBS | ed50 (мг/кг) | 3’конъюгат | Межнуклео зидная связь/длина | SEQ Ш NO. | |
PBS | 0 | 100 | __ | ||||
ISIS 440762 | 0,7 | 85 | 2,2 | Нет | PS/14 | 22 | |
2 | 55 | ||||||
7 | 12 | ||||||
20 | 3 | ||||||
ISIS 651900 | 0,07 | 98 | о,з | GalNAc3-l | PS/14 | 23 | |
0,2 | 63 | ||||||
0,7 | 20 | ||||||
2 | 6 | ||||||
7 | 5 |
Пример 23. Протокол анализа человеческих мононуклеарных клеток периферической крови (hPBMC).
Анализ hPBMC выполнили при помощи пробирочного способа BD Vautainer CPT.
Получили образец цельной крови, полученной от доноров-добровольцев, давших информированное согласие в Медицинской клинике США (Faraday & El Camino Real, Карлсбад), и собрали его в 4-15 пробирки BD Vacutainer CPT по 8 мл (VWR, кат. № BD362753). Приблизительный исходный общий объем цельной крови в пробирках СРТ для каждого донора записали в формуляре анализа РВМС.
Перед центрифугированием образец крови незамедлительно повторно перемешали, осторожно переворачивая пробирки 8-10 раз. Пробирки СРТ центрифугировали при комнатной температуре (18-25°C) в горизонтальном (с избыточной поворачиваемостью) роторе в течение 30 мин с фактором разделения (RCF) 1500-1800 с затормаживанием (2700 об/мин Beckman Allegra 6R). Клетки сняли с лейкоцитарной поверхности раздела (между слоями фиколла и полимерного геля); перенесли в стерильную 50-мл коническую пробирку и сгруппировали по 5 СРТ пробирок/50 мл коническая пробирка/донор. Затем клетки дважды промыли PBS (без Ca++, Mg++; GIB CO). Пробирки пополнили до 50 мл и перемешали, переворачивая несколько раз. Затем образец центрифугировали при 330xg в течение 15 мин при комнатной температуре (1215 об/мин в Beckman Allegra 6R) и аспирировали максимальное количество надосадочной жидкости, не нарушая осадок. Клеточный осадок сняли, осторожно поворачивая пробирку, и повторно суспендировали клетки в RPMI+10% FBS+пенициллин/стрептомицин (~1/10 мл исходного объема цельной крови). Пипеткой взяли 600 мкл образца и поместили во флакон с пробой (Beckman Coulter), содержащий 600 мкл реагента VersaLyse (Beckman Coulter, кат. № А09777), и осторожно перемешивали на вортексе в течение 10-15 с. Образец оставили инкубироваться в течение 10 мин при комнатной температуре и снова перемешали перед подсчетом. Суспензию клеток считывали на анализаторе жизнеспособности клеток Vicell XR (Beckman Coulter), используя клетки типа РВМС (сохранили фактор разбавления 1:11 с другими параметрами). Записали количество живых клеток/мл и жизнеспособность. Клеточную суспензию разбавили до 1x107 живых РВМС/мл в RPMI+ 10% FBS+пенициллин/стрептомицин.
Клетки поместили на планшет при 5x10 в 50 мкл/лунку 96-луночного тканевого культурального планшета (Falcon Microtest). 50 мкл/лунку 2x концентрации олигомеров/контроля, разбавленных в RPMI+10% FBS+пенициллин/стрептомицин, добавили в соответствии с экспериментальной матрицей (в целом 100 мкл/лунку). Планшеты поместили на шейкер и оставили перемешиваться приблизительно на 1 мин. После инкубации в течеие 24 ч при 37°C, 5% CO2 планшеты центрифугировали при 400xg в течение 10 мин, затем удалили надосадочную жидкость для анализа цитокинов MSD (то есть человеческих IL-6, IL-10, IL-8 и MCP-1).
Пример 24. Оценка провоспалительных эффектов в анализе hPBMC для GalNAc3-1конъюгированных ASO.
Антисмысловые олигонуклеотиды (ASO), перечисленные в табл. 17, оценили на провоспалительное действие в анализе hPBMC, используя протокол, описанный в примере 23. ISIS 353512 представляет собой внутренний стандарт, который, как известно, обладает высоким ответом на высвобождение IL-6 в этом анализе. hPBMC выделили из свежых образцов, полученных от доноров-добровольцев, и обработали ASO в концентрациях 0, 0,0128, 0,064, 0,32, 1,6, 8, 40 и 200 мкМ. Через 24 ч обработки измерили уровни цитокинов.
Уровни IL-6 применили в качестве первичного показания. EC50 и Emax рассчитали по стандартным способам. Результаты выразили как среднее отношение Emax/EC50 для двух доноров и обозначили как
- 89 031393
Emax/EC50. Более низкое соотношение означает относительное снижение провоспалительного ответа, а более высокое соотношение означает относительное увеличение провоспалительного ответа.
В отношении исследуемых соединений, наименее провоспалительным соединением было ASO, соединенное при помощи PS/PO (ISIS 616468). GalNAcз-1-конъюгированное ASO, ISIS 647535, было немного менее провоспалительным, чем его неконъюгированный аналог, ISIS 304801. Эти результаты показывают, что внедрение нескольких РО связей снижает провоспалительную реакцию, а добавление конъюгата GalNAc3-1 не делает соединение более провоспалительным, и может снижать провоспалительную реакцию. Соответственно можно ожидать, что антисмысловое соединение, содержащее смешанные PS/PO связи и конъюгат GalNAc3-1, может вызывать более слабые провоспалительные реакции по сравнению с антисмысловым соединением, связанным только посредством PS, с конъюгатом GalNAc3-1 или без него. Эти результаты показывают, что GalNAcs-1-конъюгированные антисмысловые соединения, в частности соединения, имеющие меньшее содержание PS, являются менее провоспалительными.
В целом, эти результаты позволяют предположить, что GalNAcs-1-конъюгированное соединение, в частности соединение со сниженным содержанием PS, может быть введено в более высокой дозе, чем аналогичное полностью PS антисмысловое соединение без конъюгата GalNAc3-1. Поскольку не ожидается, что период полувыведения для этих соединений будет существенно различаться, то такое введение в более высокой дозе обусловит менее частое введение доз. В действительности, такое введение может быть еще более редким, поскольку GalNAcs-1-конъюгированные соединения являются более эффективными (см. примеры 20-22), а повторное введение дозы необходимо только при снижении концентрации соединения ниже желаемого уровня, при этом такой желаемый уровень обусловлен эффективностью.
Таблица 17
Модифицированные ASO
ASO | Последовательность (от 5’ к 3’) | Мишень | SEQ ID NO. |
ISIS 104838 | Ges mCesTesGesAesTdsTdsAdsGdsAdsGds AdsGdsAdsGdsGesTes mCesmCesmCe | TNF | 24 |
ISIS 353512 | -les Ces Ces Cds Ads 1 ds 1 ds 1 ds CdsAdsCrds GdsAdsGdsAds Cds CdsTesGesGe | CRP | 25 |
ISIS 304801 | A /—5 rp rp ΠΙρΆ rp rp p'X rp A-esVres V-cs 1 es -1 es Ms1 ds 1 ds^Jds1 ds mCdsmCdsAdsGdsmCds TesTesTesAesTe | ApoC III | 20 |
ISIS 647535 | Aesvres Ces 1 es 1 es Cds 1 ds 1 ds^Jds 1 ds mCdsmCdsAdsGdsmCdsTesTesTesAesTe0Ad0’-GalNAc3-la | ApoC III | 21 |
ISIS 616468 | AesVTeo СесДесДео 4s 1 ds 1 ds^Jds 1 ds mCdsmCdsAdsGdsmCdsTeoTeoTesAesTe | ApoC III | 20 |
Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает 3-D-2'дезоксирибонуклеозид; k означает 6'-(S)-CH3 бициклический нуклеозид (например, cEt); s означает тиофосфатные межнуклеозидные связи (PS); о означает фосфодиэфирные межнуклеозидные связи (РО) и о' означает -O^^XO^-. Верхний индекс m означает 5-метилцитозины. Ado,-GalNAc3-1a означает конъюгат, имеющий структуру GalNAc3-1, представленную в примере 9, присоединенный к 3'-концу указанного антисмыслового олигонуклеотида.
Таблица 18
Провоспалительное действие ASO, нацеленных на АроС III, в анализе hPBMC
ASO | ec50 | Ещах | Emax/EC5o | 3’конъюгат | Межнуклеозидная связь/длина | SEQ ID No. |
(mkM) | (mkM) | |||||
ISIS 353512 (с высоким ответом) | 0,01 | 265,9 | 26,590 | Нет | PS/20 | 25 |
ISIS 304801 | 0,07 | 106,55 | 1,522 | Нет | PS/20 | 20 |
ISIS 647535 | 0,12 | 138 | 1,150 | GalNAc31 | PS/20 | 21 |
ISIS 616468 | 0,32 | 71,52 | 224 | Нет | PS/PO/20 | 20 |
- 90 031393
Пример 25. Влияние модифицированного GalNA^-1-конъюгированного ASO, нацеленного на человеческий АроС III, in vitro.
ISIS 304801 и 647535, описанные выше, испытали in vitro. Первичные гепатоцитарные клетки трансгенных мышей при плотности 25000 клеток на лунку обработали концентрациями 0,03, 0,08, 0,24, 0,74, 2,22, 6,67 и 20 мкМ модифицированных олигонуклеотидов. После обработки в течение около 16 ч из клеток выделили РНК и измерили уровни мРНК при помощи количественной ПЦР в реальном времени, а уровни мРНК hApoC III скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, измеренным при помощи RIBOGREEN.
IC50 рассчитали по стандартным способам, а результаты представлены в табл. 19. Показано, что наблюдали сравнимую эффективность в клетках, обработанных ISIS 647535, по сравнению с контрольным образцом, ISIS З04801.
Таблица 19 Модифицированные ASO, нацеленные на человеческие АроС III, в первичных гепатоцитах
ASO | 1С50(мкМ) | 3’-конъюгат | Межнуклеозидная связь/длина | SEQ ID NO. |
ISIS | 0,44 | Нет | PS/20 | 20 |
304801 | ||||
ISIS 647535 | 0,31 | GalNAc3-l | PS/20 | 21 |
В этом эксперименте in vitro не наблюдали такого большого преимущества эффективности конъюгирования с GalNAc3-1, как наблюдали in vivo. Последующие эксперименты свободного захвата в первичных гепатоцитах in vitro не показали повышенной эффективности олигонуклеотидов, содержащих различные конъюгаты GalNAc, по сравнению с олигонуклеотидами, не содержащими конъюгаты GalNAc (см. примеры 60, 82 и 92).
Пример 26. Влияние связей PO/PS на кативность ASO в отношении АроС III.
Трансгенным мышам с человеческим АроС III внутрибрюшинной инъекцией вводили 25 мг/кг ISIS 304801 или ISIS 616468 (оба описаны выше) или PBS в качестве контрольного образца, один раз в неделю в течение двух недель. Экспериментальная группа состояла из 3 животных, а контрольная группа состояла из 4 животных. Перед лечением, а также после последней дозы у каждой мыши брали кровь и анализировали образцы плазмы. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения.
Образцы собрали и анализировали для определения уровней белка АроС III в печени, как описано выше (пример 20). Данные этих анализов представлены ниже в табл. 20.
Эти результаты демонстрируют снижение эффективности антисмысловых соединений с PO/PS (ISIS 616468) в крыльях по сравнению с соединениями, содержащими только PS (ISIS 304801).
Таблица 20
Влияние ASO лечения на уровни белка АроС III у трансгенных мышей . с человеческим АроС III
ASO | Доза (мг/кг) | % PBS | 3’конъюгат | Межнуклеози дная связь/длина | SEQ ID NO. |
PBS | 0 | 99 | __ | ||
ISIS 304801 | 25 мг/кг/нед. в течение 2 нед. | 24 | Нет | Полностью PS | 20 |
ISIS 616468 | 25 мг/кг/нед. в течение 2 нед. | 40 | Нет | 14 PS/6 РО | 20 |
- 91 031393
Пример 27. Соединение 56
DMTO' υ
Соединение 56 имеется в продаже у компании Glen Research или может быть получено по опубликованным методикам, описанным авторами Shchepinov et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 44474454.
Пример 28. Получение соединения 60
Соединение 4 получили по способам, описанным в примере 2. Соединение 57 имеется в продаже. Соединение 60 подтвердили структурным анализом.
Соединение 57 является иллюстративным, и его не следует считать ограничивающим, поскольку могут быть применены другие монозащищенные замещенные или незамещенные алкилдиолы, включая, но не ограничиваясь ими, те, которые представлены в данном описании, для получения фосфорамидитов, имеющих желаемый состав.
Пример 29. Получение соединения 63
1. ВпС1
1. КОН 3ΙΌ
3.. HCLMeOH
4. ХаНСО;
1. DiXCLpvr
2. ?dC,K; '
5. Ιποφοсформирование
S3
Соединения 61 и 62 получили по таким же способам, как описаны авторами Tober et al., Em. J. Org. Chem., 2013, 3, 566-577 и Jiang et al., Tetrahedron, 2007, 63(19), 3982-3988.
Альтернативно, соединение 63 получили по таким же способам, как описаны в научной и патентной литературе авторами Kim et al., Synlett, 2003, 12, 1838-1840 и Kim et al. в опубликованной Международной заявке РСТ WO2004063208.
Пример 30. Получение соединения 63 b он /
63а ОН
1. ЭМТСГруг
2. ТБ Аг ’
3. Тио фо с формирование
ODMT
СХ
Соединение 63 а получили по таким же способам, как описаны авторами Hanessian et al., Canadian Journal of Chemistry, 1996, 74(9), 1731-1737.
Пример 31. Получение соединения 63 d
HO—ν θ-η :. D2.2TC1. рут ΗΟ--γ^.Υ·-^ρ·ο^-^·οΒη :· ?ίί:·ΕНО—/ /
D3.2TO.
χγγ вс
3. И10фосфоршшСоединение 63 с получили по таким же способам, cal Letters, 1998, 9(5), 451-453.
Пример 32. Получение соединения 67 как описаны авторами Chen et al., Chinese Chemi-
Соединение 64 получили по способам, представленным в примере 2. Соединение 65 получили по таким же способам, как описаны авторами Or et al., в опубликованной Международной заявке РСТ WO2009003009. Защитные группы, применяемые для соединения 65, являются иллюстративными, и их не следует считать ограничением, поскольку могут быть применены другие защитные группы, включая,
- 92 031393 но не ограничиваясь ими, те, которые представлены в данном описании. Пример 33. Получение соединения 70
Соединение 64 получили по способам, описанным в примере 2. Соединение 68 имеется в продаже. Защитная группа, примененная для соединения 68, является иллюстративной, и ее не следует считать ограничением, поскольку могут быть применены другие защитные группы, включая, но не ограничиваясь ими, те, которые представлены в данном описании.
Пример 34. Получение соединения 75 а
NC
NC^
NC
1. IBDMSC1. pvr
2. ?dC:K; '
3. CF; CO 2 Et. Me OH
4. ТЕАЗНЕ.ТГФ
5. ТиофосфортшпроЕание
F3C
а
N(ffr)2 CN °C.
н
Ίί cYcF3
Соединение 75 получили по опубликованным методикам, описанным авторами Shchepinov et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4447-4454.
Пример 35. Получение соединения 79
Соединение 76 получили по опубликованным Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4447-4454.
Пример 36. Получение соединения 79а но-^^о
OB® методикам, описанным авторами Shchepinov et al.,
3. Тпофосфоритпрованпе
79a
Соединение 77 получили по способам, представленным в примере 35.
- 93 031393
Пример 37. Общий способ получения конъюгированного олигомерного соединения 82, содержащего фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 на 5'-конце, на твердой подложке (способ I)
где GalNAc3-2 имеет структуру
Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-2 (GalNAc3-2a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных конъюгирующих групп. При этом GalNAc3-2a имеет формулу
VIMAD-связанное олигомерное соединение 79b получили по стандартным способам в автоматическом синтезаторе ДНК/РНК (см. Dupouy et al., Angew. Chem. Int. Ed., 2006, 45, 3623-3627). Фосфорами
- 94 031393 дитные соединения 56 и 60 получили так, как описано в способах в примерах 27 и 28 соответственно. Изображенные фософорамидиты являются иллюстративными, и их не следует считать ограничением, поскольку могут быть применены другие фосфорамидитные строительные блоки, включая, но не огра ничиваясь ими, те, которые представлены в данном описании, для получения олигомерного соединения, содержащего фосфодиэфир-связанную конъюгирующую группу на 5'-конце. Порядок и количество фосфорамидитов, добавляемых к твердой подложке, может быть подобрано для получения олигомерных соединений, описанных в настоящем документе, которые имеют любую желаемую последовательность и состав.
Пример 38. Альтернативный способ получения олигомерного соединения 82, содержащего фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 на 5'-конце (способ II)
t-BuOOH
ΝΗ·; 55 с
VIMAD-связанное олигомерное соединение 79b получили по стандартным способам в автоматическом синтезаторе ДНК/РНК (см. Dupouy et al., Angew. Chem. Int. Ed., 2006, 45, 3623-3627). GalNAc3-2кластерный фосфорамидит, соединение 79, получили по способам, представленным в примере 35. Альтернативный способ обеспечивает возможность одностадийной установки фосфодиэфир-связанного GalNAc3-2 конъюгата на олигомерное соединение на последней стадии синтеза. Изображенные фософорамидиты являются иллюстративными, и их не следует считать ограничением, поскольку могут быть применены другие фосфорамидитные строительные блоки, включая, но не ограничиваясь ими, те, которые представлены в данном описании, для получения олигомерных соединений, содержащих фосфодиэфирный конъюгат на 5'-конце. Порядок и количество фосфорамидитов, добавляемых к твердой подложке, может быть подобрано для получения олигомерных соединений, описанных в настоящем документе, которые имеют любую желаемую последовательность и состав.
- 95 031393
Пример 39. Общий способ получения олигомерного соединения 83h, содержащего конъюгат GalNAc3-3 на 5'-конце (GalNAc3-1, модифицированный для 5'-концевого присоединения), на твердой подложке
Соединение 18 получили по способам, описанным в
примере 4. Соединения 83а и 83b имеются в продаже. Олигомерное соединение 83 е, содержащее связанный через фосфодиэфир гексиламин, получили по стандартным способам синтеза олигонуклеотидов. В результате обработки защищенного олигомерного соединения водным раствором аммиака получили 5'-GalNAc3-3 конъюгированное олигомерное соединение (83h), где GalNAc3-3 имеет структуру
- 96 031393
Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-3 (GalNAc3-3a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных конъюгирующих групп, при этом GalNAc3-3a имеет формулу
NHAc
Пример 40. Общий способ получения олигомерного соединения 89, содержащего фосфодиэфирсвязанный конъюгат GalNAc3-4 на 3'-конце, на твердой подложке
- 97 031393 где GalNAc3-4 имеет структуру
где CN представляет собой расщепляемый фрагмент. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой
Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-4 (GalNAc3-4a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных конъюгирующих групп, при этом GalNAc3-4a имеет формулу
Защищенное соединение 30 на функционализированной твердой подложке Unylinker имеется в продаже. Соединение 84 получили по таким же способам, как описаны в литературе (см. Shchepinov et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4447-4454; Shchepinov et al., Nucleic Acids Research, 1999, 27, 3035-3041; и Hornet et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25, 4842-4849).
Фосфорамидитные строительные блоки, соединения 60 и 79а, получили по способам, представленным в примерах 28 и 36. Изображенные фосфорамидиты являются иллюстративными и не предназначены для ограничения, поскольку могут быть применены другие фосфорамидитные строительные блоки для получения олигомерного соединения, имеющего фосфодиэфир-связанный конъюгат на 3'-конце, которое имеет желаемую последовательность и состав. Порядок и количество фосфорамидитов, добавляемых к твердой подложке, может быть подобрано для получения олигомерных соединений, описанных в настоящем документе, которые имеют любую желаемую последовательность и состав.
Пример 41. Общий способ получения ASO, содержащих фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 (см. пример 37, Вх представляет собой аденин) в 5'-положении, по твердофазному способу (получение ISIS 661134).
Если не указано иное, все реагенты и растворы, примененные для синтеза олигомерных соединений, приобретены у коммерческих поставщиков. Стандартные фосфорамидитные строительные блоки и твердую подложку применили для внедрения нуклеозидных остатков, которые включают, например, остатки Т, A, G и mC. Фосфорамидитные соединения 56 и 60 применили для синтеза фосфодиэфирсвязанного конъюгата GalNAc3-2 на 5'-конце. 0,1 М раствор фосфорамидита в безводном ацетонитриле применили для 3^-2'-дезоксирибонуклеозида и 2'-MOE.
Синтез антисмысловых олигонуклеотидов (ASO) выполнили на синтезаторе ABI 394 (в масштабе 12 мкмоль) или на синтезаторе АКТА Oligopilot производства GE Healthcare Bioscience (в масштабе 40-200 мкмоль) по способу фосфорамидитного связывания на твердой подложке VIMAD (110 мкмоль/г, Guzaev et al., 2003), упакованной в колонку. Для стадии связывания фосфорамидиты вводили в 4-кратном избытке по сравнению с первоначальной загрузкой на твердой подложке, а связывание фосфорамидита выполняли в течение 10 мин. Все остальные стадии выполняли по протоколам, предоставленным производителем. Для удаления диметокситритильных (DMT) групп с 5'-гидроксильных групп нуклеотида применили
- 98 031393
6% раствор дихлоруксусной кислоты в толуоле. На стадии связывания в качестве активатора применили 4,5-дицианоимидазол (0,7 М) в безводном CH3CN. Тиофосфатные связи внедряли сульфированием при помощи 0,1 М раствора гидрида ксантана в 1:1 смеси пиридина/CH^N в течение 3 мин времени контакта. В качестве окислительного агента для обеспечения фосфодиэфирных межнуклеозидных связей применили 20% раствор трет-бутилгидропероксида в CH3CN, содержащий 6% воды, в течение 12 мин времени контакта.
После сборки желаемой последовательности цианоэтил-фосфатные защитные группы снимали при помощи 20% диэтиламина в толуоле (об./об.) в течение 45 мин времени контакта. Связанные с твердой подложкой ASO суспендировали в водном растворе аммиака (28-30 мас.%) и нагревали при 55°C в течение 6 ч.
Затем отфильтровывали не связанные ASO и выпаривали аммиак кипячением. Остаток очищали жидкостной хроматографией высокого давления на сильной анионообменной колонке (GE Healthcare Bioscience, Source 30Q, 30 мкм, 2,54x8 см, А = 100 мМ ацетата аммония в 30% водном CH3CN, В = 1,5 М NaBr в А, 0-40% В за 60 мин, скорость потока 14 мл мин-1, λ = 260 нм). Остаток обессоливали при помощи ВЭЖХ на обращенно-фазовой колонке с получением желаемых ASO с выделенным выходом 1530% относительно первоначальной загрузки на твердую подложку. ASO характеризовали при помощи ион-парной ВЭЖХ, совмещенной с МС-анализом на системе Agilent 1100 MSD.
Таблица 21
ASO, содержащие фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 в 5'-положении, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Расчетная масса | Наблюдаемая масса | SEQ ID NO. |
661134 | GalNAc3-2aоAd0Tks CksAdSGdsTds CdsAdsTds Gds Ads mCdsTdsTksmCk | 6482,2 | 6481,6 | 26 |
Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-ϋ-2'дезоксирибонуклеозид; k означает 6'-(S)-CH3 бициклический нуклеозид (например, cEt); s означает тиофосфатные межнуклеозидные связи (PS); о означает фосфодиэфирные межнуклеозидные связи (РО) и о' означает -O^^OKOR)-. Верхний индекс m означает 5-метилцитозины. Структура GalNAc3-2a представлена в примере З7.
Пример 42. Общий способ получения ASO, содержащих конъюгат GalNAc3-3 в 5'-положении, по твердофазным методикам (получение ISIS 661166).
Синтез ISIS 661166 выполнили по таким же способам, как представлены в примерах 39 и 41.
ISIS 661166 представляет собой 5-10-5 MOE гэпмер, в котором 5'-положение содержит конъюгат GalNAc3-3. Это ASO характеризовали при помощи ион-парной ВЭЖХ, совмещенной с МС-анализом на системе Agilent 1100 MSD.
Таблица 21 а
ASO, содержащее конъюгат GalNAc3-3 в 5'-положении через гексиламино-фосфодиэфирную связь, нацеленное на Malat-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Конъюгат | Расчетная масса | Наблюдаемая масса | SEQ ID NO. |
661166 | 5 ’ -GalNAc3-3a.O’mCesGesGesTesGes mCdsAdsAdsGdsGds mCdsTdsTdsAdsGds GesAesAes TesTe | 5’GalNAc3-3 | 8992,16 | 8990,51 | 27 |
Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-ϋ-2'дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатные межнуклеозидные связи (PS); о означает фосфодиэфирные межнуклеозидные связи (РО) и о' означает -O-R(=O)(OH)-. Верхний индекс m означает 5метилцитозины. Структура 5'-GalNAc3-3a представлена в примере 39.
Пример 43. Дозозависимое исследование фосфодиэфир-связанного GalNAc3-2 (см. примеры 37 и 41, Вх представляет собой аденин) на 5'-конце, нацеленного на SRB-1, in vivo.
ISIS 661134 (см. пример 41), содержащий фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 на 5'-конце, испытывали в дозозависимом исследовании на антисмысловое ингибирование SRB-1 у мышей. Неконъюгированные ISIS 440762 и 651900 (конъюгат GalNAc3-1 у З'-коца, см. пример 9) включены в исследование для сравнения и описаны ранее в табл. 4.
Лечение.
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 440762, 651900, 661134 или PBS в качестве контрольного образца. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мы
- 99 031393 шей умертвили через 72 ч после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни мРНК SRB-1 определяли относительно общей РНК (при помощи Ribogreen), затем нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному PBS, и обозначены как % PBS. ED50 измеряли по таким же способам, как описаны ранее, и они представлены ниже.
Как показано в табл. 22, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB1 дозозависимым образом. Действительно, антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 на 5'-конце (ISIS 661134) или конъюгат GalNAc3-1, связанный на 3'конце (ISIS 651900), демонстрируют значительное улучшение эффективности по сравнению с неконъюгированным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 440762). Кроме того, ISIS 661134, который содержит фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 на 5'-конце, был настолько же эффективным, как ISIS 651900, который содержит конъюгат GalNAc3-1 на 3'-конце.
Таблица 22
ASO, содержащие GalNAc3-1 или GalNAc3-2, нацеленные на SRB-1
Структуры 3' GalNAc3-1 и 5' GalNAc3-2 описаны ранее в примерах 9 и 37.
Фармакокинетический анализ (ФК).
ФК для ASO из группы высокой дозы (7 мг/кг) исследовали и оценили таким же образом, как описано в примере 20. Образцы печени измельчили и экстрагировали по стандартным протоколам. Идентифицировали метаболиты полной длины 661134 (5' GalNAc3-2) и ISIS 651900 (3' GalNAc3-1) и подтвердили их массы при помощи масс-спектрометрического анализа высокого разрешения. Результаты показали, что основной метаболит, обнаруженный для ASO, содержащего фосфодиэфир-связанный конъюгат GalNAc3-2 на 5'-конце (ISIS 661134), представлял собой ISIS 440762 (данные не показаны). Не наблюдали никаких дополнительных метаболитов в обнаруживаемом количестве. В отличие от него, для ASO, содержащего конъюгат GalNAc3-1 на 3'-конце (ISIS 651900), наблюдали дополнительные метаболиты, аналогичные тем, которые описаны ранее в табл. 10а. Эти результаты позволяют предположить, что наличие фосфодиэфир-связанного конъюгата GalNAc3-1 или GalNAc3-2 может улучшать ФК профиль ASO без ухудшения их эффективности.
Пример 44. Влияние PO/PS связей на антисмысловое ингибирование ASO, содержащих конъюгат GalNAc3-1 (см. пример 9) на 3'-конце, нацеленных на SRB-1.
ISIS 655861 и 655862, содержащие конъюгат GalNAc3-1 на 3'-конце, каждый из которых нацелен на SRB-1, испытали в исследовании однократного введения на их способность ингибировать SRB-1 у мышей. Исходное неконъюгированное соединение, ISIS 353382, включили в исследование для сравнения.
Эти ASO представляют собой 5-10-5 MOE гэпмеры, в которых гэп-область содержит десять 2'дезоксирибонуклеозидов, и каждая область крыльев содержит пять 2'-MOE модифицированных нуклеозидов. Эти ASO получили по таким же способам, как показаны ранее в примере 19, и они описаны ниже в табл. 23.
- 100 031393
Таблица 23
Модифицированные ASO, содержащие конъюгат GalNAc3-1 на 3'-конце, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Химизм | SE Q ID NO. |
353382 (исходное ) | Ges CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdSTdsGdSAdS CdsTdsTes Ces CesTesTe | Только PS, без конъюгата | 28 |
655861 | Ges CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTes Ces CesTesTeoA(io -GalNAc3-la | Только PS с конъюгато м GalNAca- | 29 |
655862 | GesmCeoTeoTeomCeo AdsGdsT ds mCds AdST dSGdS AdS mCdsT dsT eomCeomCesT esT eo Ado'-GalNAc3-l a | Смешанные PS/PO с конъюгато м GalNAca- | 29 |
Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-Ώ-2'дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатные межнуклеозидные связи (PS); о означает фосфодиэфирные межнуклеозидные связи (РО) и о' означает -O-R(=O)(OH)-. Верхний индекс m означает 5метилцитозины. Структура GalNAc3-1 представлена в примере 9.
Лечение.
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 353382, 655861, 655862 или PBS в качестве контрольного образца. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Перед лечением, а также после последней дозы у каждой мыши брали кровь и анализировали образцы плазмы. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни мРНК SRB-1 определяли относительно общей РНК (при помощи Ribogreen), затем нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному PBS, и обозначены как % PBS. ED50 измеряли по таким же способам, как описаны ранее, и они представлены ниже.
Как показано в табл. 24, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB1 дозозависимым образом по сравнению с контрольным образцом, обработанным PBS. Действительно, антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc3-1 на 3'-конце (ISIS 655861 и 655862), демонстрируют значительное усиление эффективности по сравнению с неконъюгированным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 353382). Кроме того, ISIS 655862 со смешанными PS/PO связями демонстрирует усиление эффективности по сравнению с соединением, содержащим только PS (ISIS 655861).
Таблица 24
Влияние PO/PS связей на антисмысловое ингибирование ASO, содержащих конъюгат GalNAc3-1 на 3'-конце, нацеленных на SRB-1
ISIS № | Доза (мг/кг) | Уровни мРНК SRB1 (%PBS) | ED50 (мг/кг) | Химизм | SEQ ID NO. |
PBS | 0 | 100 | __ | __ | |
353382 (исходное) | 3 | 76,65 | 10,4 | Только PS, без конъюгата | 28 |
10 | 52,40 | ||||
30 | 24,95 | ||||
655861 | 0,5 | 81,22 | 2,2 | Только PS с конъюгатом GalNAc3-l | 29 |
1,5 | 63,51 | ||||
5 | 24,61 | ||||
15 | 14,80 | ||||
655862 | 0,5 | 69,57 | 1,3 | Смешанные PS/PO с конъюгатом | 29 |
1,5 | 45,78 |
5 | 19,70 | GalNAc3-l | |||
15 | 12,90 |
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, применяя стандартные протоколы. Оценили также массу органов. Результаты показывают, что не наблюдали какоголибо увеличения уровней трансаминазы (табл. 25) или массы органов (данные не показаны) у мышей,
- 101 031393 обработанных ASO, по сравнению с PBS контролем. Кроме того, ASO со смешанными PS/PO связями (ISIS 655862) демонстрирует схожие уровни трансаминазы по сравнению с соединением, содержащим только PS (ISIS 655861).
Таблица 25
Влияние PO/PS связей на уровни трансаминазы ASO, содержащих конъюгат GalNAc3-1 на 3'-конце, нацеленных на SRB-1
ISIS № | Доза (мг/кг) | ALT (ед./л) | AST (ед./л) | Химизм | SEQ ID NO. |
PBS | 0 | 28,5 | 65 | __ | |
353382 (исходное) | 3 | 50,25 | 89 | Только PS, без конъюгата | 28 |
10 | 27,5 | 79,3 | |||
30 | 27,3 | 97 | |||
655861 | 0,5 | 28 | 55,7 | Только PS с GalNAc3-l | 29 |
1,5 | 30 | 78 | |||
5 | 29 | 63,5 | |||
15 | 28,8 | 67,8 | |||
655862 | 0,5 | 50 | 75,5 | Смешанные PS/PO с GalNAc3-l | 29 |
1,5 | 21,7 | 58,5 | |||
5 | 29,3 | 69 | |||
15 | 22 | 61 |
Пример 45. Получение PFP эфира соединения 110а
- 102 031393
Соединение 4 (9,5 г, 28,8 ммоль) обработали по отдельности соединением 103а или 103b (38 ммоль) и TMSOTf (0,5 экв.) и молекулярными ситами в дихлорметане (200 мл) и перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем органический слой отфильтровали через целит, затем промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили под пониженным давлением. Полученное маслянистое вещество очистили силикагелевой хроматографией (2^10% метанол/дихлорметан) с получением соединений 104а и 104b с выходом >80%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 104а и 104b обработали в тех же условиях, что и соединения 100a-d (пример 47), с получением соединений 105а и 105b с выходом >90%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 105а и 105b по отдельности обработали соединением 90 при тех же условиях, что и соединения 901a-d, с получением соединений 106а (80%) и 106b (20%). Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 106а и 106b обработали в тех же условиях, что и соединения 96a-d (пример 47), с получением соединения 107а (60%) и 107b (20%). Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 107а и 107b обработали в тех же условиях, что и соединения 97a-d (пример 47), с получением соединений 108а и 108b с выходом 40-60%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 108а (60%) и 108b (40%) обработали в тех же условиях, что и соединения 100a-d (пример 47), с получением соединений 109а и 109b с выходом >80%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединение 109а обработали в тех же условиях, что и соединения 101a-d (пример 47), с получением соединения 110а с выходом 30-60%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой. Альтернативно, соединение 110b может быть получено таким же образом, исходя из соединения 109b.
Пример 46. Общий способ конъюгирования с PFP эфирами (олигонуклеотид 111); получение ISIS 666881 (GalNAc3-10).
Синтезировали и очистили 5'-гексиламино-модифицированный олигонуклеотид по стандартным способам твердофазного получения олигонуклеотидов. 5'-Гексиламино-модифицированный олигонуклеотид растворили в 0,1 М растворе тетрабората натрия, pH 8,5 (200 мкл) и добавили 3 экв. выбранного PFP-эстерифицированного кластера GalNAc3, растворенного в ДМСО (50 мкл). Если при добавлении раствора ASO эфир PFP выпадал в осадок, то добавляли ДМСО до перехода всего эфира PFP в раствор. Реакция была завершена через около 16 ч перемешивания при комнатной температуре. Полученный раствор разбавили водой до 12 мл, а затем центрифугировали при 3000 об/мин в центробежном фильтре с отсечением по массе 3000 Да. Этот прием повторили два раза для удаления низкомолекулярных примесей. Затем раствор лиофилизировали досуха и повторно растворили в концентрированном водном растворе аммиака, и перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 ч, затем концентрировали in vacuo для удаления большей части аммиака. Конъюгированный олигонуклеотид очистили и обессолили при помощи ОФ-ВЭЖХ, и лиофилизировали с получением GalNAc3 конъюгированного олигонуклеотида.
- 103 031393
Олигонуклеотид 111 конъюгирован с GalNAc3-10. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-10 (GalNAc3-10a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-, как показано ниже в олигонуклеотиде (ISIS 666881), синтезированном с GalNAc3-10. Структура GalNAc3-10 (GalNAc3-10a-CM-) представлена ниже
AcHN
По указанному общему способу получили ISIS 666881. Синтезировали и очистили 5'-гексиламиномодифицированный олигонуклеотид, ISIS 660254, по стандартным способам твердофазного получения олигонуклеотидов. ISIS 660254 (40 мг, 5,2 мкмоль) растворили в 0,1 М растворе тетрабората натрия, pH 8,5 (200 мкл) и добавили 3 эквивалента PFP эфира (соединения 110а), растворенного в ДМСО (50 мкл). Эфир PFP выпал в осадок при добавлении раствора ASO, поэтому потребовалось добавление дополниетльного количества ДМСО (600 мкл) для полного растворения PFP эфира.
Реакция была завершена через 16 ч перемешивания при комнатной температуре. Раствор разбавили водой до общего объема 12 мл, а затем центрифугировали при 3000 об/мин в центробежном фильтре с отсечением по массе 3000 Да. Этот прием повторили два раза для удаления низкомолекулярных примесей. Раствор лиофилизировали досуха и повторно растворили в концентрированном водном растворе аммиака, перемешивая при комнатной температуре в течение 2,5 ч, затем концентрировали in vacuo для удаления большей части аммиака. Конъюгированный олигонуклеотид очистили и обессолили при помощи ОФ-ВЭЖХ, и лиофилизировали с получением ISIS 666881 с выходом 90 мас.% (42 мг, 4,7 мкмоль).
GalNAc3-10-конъюгированный олигонуклеотид
ASO | Последовательность (от 5’ к 3’) | 5’-rpynna | SSEQ ID No. |
ISIS 660254 | NH2(CH2)6-oAdoGes mCesTesTesmCesAdsGdsTds Ιϊΐζ-ι Δ Т Δ ΠΙ/·' Τ Т mz-i Шр у т Ws-^ds1 ds'-Jds^ds ^ds^ds^es ^es ^es^es^e | Гексиламин | 30 |
ISIS 666881 | GalNAc3-10a-O’AdoGes mCeSTesTesmCesAdsGdsTds lllz^ Λ T Α Π1ζ~^ τ T 111/^ ΙΪ1ζ~ι τ τ GdsAds 1 dsfJds^ds Gdsldsfes ^es ^es^esfe | GalNAcs-10 | 30 |
Заглавные буквы указывают азотистое основание для каждого нуклеозида, а mC означает 5метилцитозин. Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-D2'-дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатную межнуклеозидную связь (PS); о означает фосфодиэфирную межнуклеозидную связь (РО) и о' означает -O-R^OXOH)-. Конъюгирующие группы выделены жирным шрифтом.
- 104 031393
Пример 47. Получение олигонуклеотида 102, содержащего GalNAc3-8
- 105 031393
Трехкислотное соединение 90 (4 г, 14,43 ммоль) растворили в ДМФА (120 мл) и N,Nдиизопропилэтиламине (12,35 мл, 72 ммоль). По каплям добавили пентафторфенила трифторацетат (8,9 мл, 52 ммоль) в атмосфере аргона и оставили реакционную смесь перемешиваться при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавили Вос-диамин 91а или 91b (68,87 ммоль) вместе с N,Nдиизопропилэтиламином (12,35 мл, 72 ммоль) и оставили реакционную смесь перемешиваться при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем упарили ДМФА на >75% под пониженным давлением, а затем растворили смесь в дихлорметане. Органический слой промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили под пониженным давлением до маслянистого остатка. Полученное маслянистое вещество очистили силикагелевой хроматографией (2^ 10% метанол/дихлорметан) с получением соединений 92а и 92b с приблизительным выходом 80%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединение 92а или 92b (6,7 ммоль) обрабатывали 20 мл дихлорметана и 20 мл трифторуксусной кислоты при комнатной температуре в течение 16 ч. Полученный раствор выпарили, а затем растворили в метаноле и обрабатывали смолой DOWEX-OH в течение 30 мин. Полученный раствор отфильтровали и упарили до маслянистого вещества под пониженным давлением с получением 85-90% выхода соединений 93а и 93b.
Соединения 7 или 64 (9,6 ммоль) обрабатывали HBTU (3,7 г, 9,6 ммоль) и N,Nдиизопропилэтиламином (5 мл) в ДМФА (20 мл) в течение 15 мин. К смеси добавили либо соединение 93а, либо 93b (3 ммоль) и оставили перемешиваться при комнатной температуре на 16 ч. Затем упарили ДМФА на >75% под пониженным давлением, а затем растворили смесь в дихлорметане. Органический слой промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили под пониженным давлением до маслянистого остатка. Полученное маслянистое вещество очистили силикагелевой хроматографией (5^20% метанол/дихлорметан) с получением соединений 96a-d с выходом 20-40%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 96a-d (0,75 ммоль) по отдельности гидрировали на никеле Ренея в течение 3 ч в этаноле (75 мл). Затем катализатор удалили фильтрованием через целит, а этанол удалили под пониженным давлением с получением соединений 97a-d с выходом 80-90%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединение 23 (0,32 г, 0,53 ммоль) обрабатывали HBTU (0,2 г, 0,53 ммоль) и N,Nдиизопропилэтиламином (0,19 мл, 1,14 ммоль) в ДМФА (30 мл) в течение 15 мин. К смеси по отдельности добавили соединения 97a-d (0,38 ммоль) и оставили перемешиваться при комнатной температуре на 16 ч. Затем упарили ДМФА на >75% под пониженным давлением, а затем растворили смесь в дихлорметане. Органический слой промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили под пониженным давлением до маслянистого остатка. Полученное маслянистое вещество очистили силикагелевой хроматографией (2^20% метанол/дихлорметан) с получением соединений 98a-d с выходом 3040%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединение 99 (0,17 г, 0,76 ммоль) обрабатывали HBTU (0,29 г, 0,76 ммоль) и N,Nдиизопропилэтиламином (0,35 мл, 2,0 ммоль) в ДМФА (50 мл) в течение 15 мин. К смеси по отдельности добавили соединения 97a-d (0,51 ммоль) и оставили перемешиваться при комнатной температуре на 16 ч. Затем упарили ДМФА на >75% под пониженным давлением, а затем растворили смесь в дихлорметане. Органический слой промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили под пониженным давлением до маслянистого остатка. Полученное маслянистое вещество очистили силикагелевой хроматографией (5^20% метанол/дихлорметан) с получением соединений 100a-d с выходом 40-60%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 100a-d (0,16 ммоль) по отдельности гидрировали на 10% Pd(OH)2/C в течение 3 ч в метаноле/этилацетате (1:1, 50 мл). Затем катализатор удалили фильтрованием через целит, а органические растворители удалили под пониженным давлением с получением соединений 101a-d с выходом 80-90%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
Соединения 101a-d (0,15 ммоль) по отдельности растворили в ДМФА (15 мл) и пиридине (0,016 мл, 0,2 ммоль). По каплям добавили пентафторфенила трифторацетат (0,034 мл, 0,2 ммоль) в атмосфере аргона и оставили реакционную смесь перемешиваться при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем упарили ДМФА на >75% под пониженным давлением, а затем растворили смесь в дихлорметане. Органический слой промыли бикарбонатом натрия, водой и насыщенным солевым раствором. Затем отделили органический слой и высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и упарили под пониженным давлением до маслянистого остатка. Полученное маслянистое вещество очистили силикагелевой хроматографией (2^5% метанол/дихлорметан) с получением соединений 102a-d с приблизительным выходом 80%. Данные ЖХМС и протонного ЯМР согласовались с указанной структурой.
- 106 031393
Олигомерное соединение 102, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-8, получили по общим способам, представленным в примере 46. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-8 (GalNAc3-8a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В предпочтительном варианте реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-.
Структура GalNAc3-8 (GalNAc3-8a-CM-) представлена ниже
НО
AcHN но
AcHN ноон w4 н Ц й
AcHN
Пример 48. Получение олигонуклеотида 119, содержащего GalNAc3-7
А сО О А с
АсО Од-С
РсНОН.у’С . EtOAc
-СИ;
114
- 107 031393
Соединение 112 синтезировали по способу, описанному в литературе (J. Med. Chem. 2004, 47, 57985808).
Соединение 112 (5 г, 8,6 ммоль) растворили в 1:1 смеси метанола/этилацетата (22 мл/22 мл). Добавили гидроксид палладия-на-углероде (0,5 г). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 12 ч. Реакционную смесь отфильтровали через слой целита и промыли этот слой 1:1 смесью метанола/этилацетата. Фильтрат и промывочные растворы объединили и концентрировали досуха с получением соединения 105а (количественно). Структуру подтвердили по ЖХМС.
Соединение 113 (1,25 г, 2,7 ммоль), HBTU (3,2 г, 8,4 ммоль) и DIEA (2,8 мл, 16,2 ммоль) растворили в безводном ДМФА (17 мл) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 5 мин. К этой смеси добавили раствор соединения 105а (3,77 г, 8,4 ммоль) в безводном ДМФА (20 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Растворитель удалили под пониженным давлением с получением маслянистого вещества. Остаток растворили в CH2Cl2 (100 мл) и промыли насыщенным водным раствором NaHCO3 (100 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Органическую фазу отделили, высушили (Na2SO4), отфильтровали и выпарили. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали от 10 до 20% MeOH в дихлорметане с получением соединения 114 (1,45 г, 30%). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и 1H ЯМР.
Соединение 114 (1,43 г, 0,8 ммоль) растворили в 1:1 смеси метанола/этилацетата (4 мл/4 мл). Добавили палладий-на-углероде (влажный, 0,14 г). Реакционную смесь продували водородом и перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 12 ч. Реакционную смесь отфильтровали через слой целита. Слой целита промыли метанолом/этилацетатом (1:1). Фильтрат и промывочные растворы объединили и выпарили под пониженным давлением с получением соединения 115 (количественно). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и 1H ЯМР.
Соединение 83а (0,17 г, 0,75 ммоль), HBTU (0,31 г, 0,83 ммоль) и DIEA (0,26 мл, 1,5 ммоль) растворили в безводном ДМФА (5 мл) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 5 мин. К этой смеси добавили раствор соединения 115 (1,22 г, 0,75 ммоль) в безводном ДМФА и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 6 ч. Растворитель удалили под пониженным давлением, а остаток растворили в CH2Cl2. Органический слой промыли насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором, высушили над безводным Na2SO4, и отфильтровали. Органический слой концентрировали досуха, а полученный остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали от 3 до 15% MeOH в дихлорметане с получением соединения 116 (0,84 г, 61%). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и 1H ЯМР.
- 108 031393
Соединение 116 (0,74 г, 0,4 ммоль) растворили в 1:1 смеси метанола/этилацетата (5 мл/5 мл). Добавили палладий-на-углероде (влажный, 0,074 г). Реакционную смесь продували водородом и перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 12 ч. Реакционную смесь отфильтровали через слой целита. Слой целита промыли метанолом/этилацетатом (1:1). Фильтрат и промывочные растворы объединили и выпарили под пониженным давлением с получением соединения 117 (0,73 г, 98%). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и 1Н ЯМР.
Соединение 117 (0,63 г, 0,36 ммоль) растворили в безводном ДМФА (3 мл). К этому раствору добавили ^^диизопропилэтиламин (70 мкл, 0,4 ммоль) и пентафторфенила трифторацетат (72 мкл, 0,42 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч и вылили в насыщенный водный раствор NaHCO3. Смесь экстрагировали дихлорметаном, промыли насыщенным солевым раствором и высушили над безводным Na2SO4. Дихлорметановый раствор концентрировали досуха, очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали от 5 до 10% MeOH в дихлорметане с получением соединения 118 (0,51 г, 79%). Структуру подтвердили по ЖХМС и 1H, а также 1H и 19F ЯМР.
о /_________II ( 3uGC )-3-Р-С-ОН:,-НН:
Ан
118
AcHN
Олигомерное соединение 119, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-7, получили по общим способам, представленным в примере 46. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-7 (GalNAc3-7a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-.
Структура GalNAc3-7 (GalNAc3-7a-CM-) представлена ниже
- 109 031393
Пример 49. Получение олигонуклеотида 132, содержащего GalNAc3-5
120 шгБос о
121 нети. tea.
Д М ФА
78%
LiOH Н2О НГ<Вос МеОН. ТГФ
122
Соединение 120 (14,01 г, 40 ммоль) и HBTU (14,06 г, 37 ммоль) растворили в безводном ДМФА (80 мл). Добавили триэтиламин (11,2 мл, 80,35 ммоль) и перемешивали в течение 5 мин. Реакционную смесь охладили на ледяной бане и добавили раствор соединения 121 (10 г, ммоль) в безводном ДМФА (20 мл). Добавили дополнительное количество триэтиламина (4,5 мл, 32,28 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение 18 ч в атмосфере аргона. Реакцию контролировали по ТСХ (этилацетат: гексан; 1:1; Rf = 0,47). Растворитель удалили под пониженным давлением. Остаток растворили в EtOAc (300 мл) и промыли 1 М раствором NaHSO4 (3x150 мл), насыщенным водным раствором NaHCO3 (3x150 мл) и насыщенным солевым раствором (2x100 мл). Органический слой высушили при помощи Na2SO4. Высушивающий агент удалили фильтрованием, а органический слой концентрировали на ротационном испарителе. Неочищенную смесь очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали при помощи 35-50% EtOAc в гексане с получением соедиения 122 (15,50 г, 78,13%). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и 1H ЯМР. Масса m/z 589,3 [M+H]+.
К охлажденному раствору соединения 122 (7,75 г, 13,16 ммоль), растворенного в метаноле (15 мл), добавили раствор LiOH (92,15 ммоль) в воде (20 мл) и ТГФ (10 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин и контролировали по ТСХ (EtOAc: гексан; 1:1). Реакционную смесь концентрировали до половины объема под пониженным давлением. Оставшийся раствор охладили на ледяной бане и нейтрализовали добавлением концентрированной HCl. Реакционную смесь разбавили, экстрагировали EtOAc (120 мл) и промыли насыщенным солевым раствором (100 мл). При стоянии в течение ночи образовалась и осветлилась эмульсия.
Органический слой отделили, высушили (Na2SO4), отфильтровали и выпарили с получением соединения 123 (8,42 г). Избыточную массу вероятно обусловливает остаточная соль. ЖХМС согласовался со структурой. Продукт применили без какой-либо дополнительной очистки. Мол. масса, расчетная: 574,36% мол. масса, найденная: 575,3 [M+H]+.
Соединение 126 синтезировали по способу, описанному в литературе (J. Am. Chem. Soc. 2011, 733, 958-963).
123
126
Вос
HOBt. DIEA..
F;Bop Вос ДМФА сн2а2
127
HATU. HOAt. DIEA ДМФА
12В
АсО OAc
NH
- 110 031393
131
Соединение 123 (7,419 г, 12,91 ммоль), HOBt (3,49 г, 25,82 ммоль) и соединение 126 (6,33 г, 16,14 ммоль) растворили в ДМФА (40 мл), а полученную реакционную смесь охладили на ледяной бане. К этой смеси добавили ^Адиизопропилэтиламин (4,42 мл, 25,82 ммоль), РуВор (8,7 г, 16,7 ммоль), затем связывающий агент Вор (1,17 г, 2,66 ммоль) в атмосфере аргона. Ледяную баню убрали, а раствор оставили нагреваться до комнатной температуры. Реакция завершилась через 1 ч, что определили по ТСХ (ДХМ:MeOH:АА; 89:10:1). Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворили в EtOAc (200 мл) и промыли 1 М раствором NaHSO4 (3x100 тмл), насыщенным водным раствором NaHCO3 (3x100 мл) и насыщенным солевым раствором (2x100 мл). Органическую фазу отделили, высушили (Na2SO4), отфильтровали и концентрировали. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией с градиентом от 50% гексанов в EtOAc до 100% EtOAc с получением соединения 127 (9,4 г) в виде белого пенистого вещества. ЖХМС и 1H ЯМР согласовались со структурой. Масса m/z 778,4 [M+H]+.
Трифторуксусную кислоту (12 мл) добавили к раствору соединения 127 (1,57 г, 2,02 ммоль) в дихлорметане (12 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь выпарили совместно с толуолом (30 мл) под пониженным давлением досуха. Полученный остаток два раза совместно выпарили с ацетонитрилом (30 мл) и толуолом (40 мл) с получением соединения 128 (1,67 г) в виде трифторацетатной соли и применили его на следующей стадии без дополнительной очистки. ЖХМС и 1H ЯМР согласовались со структурой. Масса m/z 478,2 [M+H]+.
Соединение 7 (0,43 г, 0,963 ммоль), HATU (0,35 г, 0,91 ммоль) и HOAt (0,035 г, 0,26 ммоль) смешали вместе и высушивали в течение 4 ч над Р2О5 под пониженным давлением в круглодонной колбе, а затем растворили в безводном ДМФА (1 мл) и перемешивали в течение 5 мин. К этой смеси добавили раствор соединения 128 (0,20 г, 0,26 ммоль) в безводном ДМФА (0,2 мл) и добавили N,Nдиизопропилэтиламин (0,2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере аргона. Реакция завершилась через 30 мин, что определили по ЖХМС и ТСХ (7% MeOH/ДХМ). Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворили в ДХМ (30 мл) и промыли 1 М раствором NaHSO4 (3x20 мл), насыщенным водным раствором NaHCO3 (3x20 мл) и насыщенным солевым раствором (3x20 мл). Органическую фазу отделили, высушили над Na2SO4, отфильтровали и концентрировали. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией, применив 515% MeOH в дихлорметане, с получением соединения 129 (96,6 мг). ЖХМС и 1H ЯМР согласовались со структурой. Масса m/z 883,4 [М+2Н]+.
Соединение 129 (0,09 г, 0,051 ммоль) растворили в метаноле (5 мл) в 20-мл сцинтилляционной пробирке. К нему добавили небольшое количество 10% Pd/C (0,015 мг) и продували реакционный сосуд газообразным H2. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере H2 в течение 18 ч. Реакционную смесь отфильтровали через слой целита, а слой целита промыли метанолом. Фильтрат и промывочные растворы слили вместе и концентрировали под пониженным давлением с получением соединения 130 (0,08 г). ЖХМС и 1H ЯМР согласовались со структурой. Продукт применили без дополнительной очистки. Масса m/z 838,3 [М+2Н].
В 10-мл мерную круглодонную колбу добавили соединение 130 (75,8 мг, 0,046 ммоль), 0,37 М раствор пиридина в ДМФА (200 мкл) и установили мешалку. К этому раствору по каплям добавили 0,7 М раствор пентафторфенила трифторацетата в ДМФА (100 мкл) при перемешивании. Реакция завершилась через 1 ч, что определили по ЖХМС. Растворитель удалили под пониженным давлением, а остаток растворили в CHCl3 (~10 мл). Органический слой обработали NaHSO4 (1 M, 10 мл), насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл) и насыщенным солевым раствором (10 мл), каждый по три раза. Органиче- 111 031393 скую фазу отделили и высушили над Na2SO4, отфильтровали и концентрировали с получением соединения 131 (77,7 мг). ЖХМС согласовался со структурой. Применили без дополнительной очистки. Масса m/z 921,3 [М+2Н]+.
но ОН
132
Олигомерное соединение 132, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-5, получили по общим способам, представленным в примере 46. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-5 (GalNAc3-5a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-.
Структура GalNAc3-5 (GalNAc3-5a-CM-) представлена ниже
Пример 50. Получение олигонуклеотида 144, содержащего GalNAc4-11
TBTU DIEA DfJTO
-СП смола · IF.1AD ’
OMTO: Fmoc '—I g о
133
-ОН
-с;О кэ пирование
Kaiser отрицательный
Fmoc ’—/ о о
134 pip DBU Д1.14(2:296;
ОМ TO Η
A
135
HBTU. DIEA. ДМФА pip ОВи:Д1.1ФKaiser попочптельный
2. DeJe-LestFirioc'-OH 1138
H-TU EIE- ДМФKaiser: отрицательный
NH-Fmoc
Ο
A A
Е-. пщраэин'ДМ ТКакег пслс штельный
2. F..wc-L<5iF™c;:-OHiW,
H-TIJ DIE- Д1,11*Kaieer отрицательный
ДА™ ' \
HN
Fmoc
141
- 112 031393
Синтез соединения 134.
В колбу Меррифилда добавили аминометиловую смолу VIMAD (2,5 г, 450 мкмоль/г), которую промыли ацетонитрилом, диметилформамидом, дихлорметаном и ацетонитрилом. Смолу оставили набухать в ацетонитриле (4 мл). Соединение 133 предварительно активировали в 100-мл круглодонной колбе путем добавления 20 (1,0 ммоль, 0,747 г), TBTU (1,0 ммоль, 0,321 г), ацетонитрила (5 мл) и DIEA (3,0 ммоль, 0,5 мл). Этот раствор оставили перемешиваться на 5 мин, а затем добавили в колбу Меррифилда при встряхивании. Суспензию оставили встряхиваться на 3 ч. Реакционную смесь слили, а смолу промыли ацетонитрилом, ДМФА и ДХМ. Заполнение новой смолы количественно определили по измерению абсорбции DMT катиона при 500 нм (коэффициент экстинкции = 76000) в ДХМ, которое составило 238 мкмоль/г. Смолу кэпировали трехкратным суспендированием в растворе уксусного ангидрида в течение 10 мин.
Соединение 141, связанное с твердой подложкой, синтезировали многократным повторением способов твердофазного синтеза пептидов при помощи Fmoc. Взяли небольшое количество твердой подложки и суспендировали в водном растворе аммиака (28-30 мас.%) в течение 6 ч. Расщепленное соединение анализировали по ЖХ-МС и наблюдали, что масса согласуется со структурой. Масса m/z 1063,8 [М+2Н]+.
Соединение 142, связанное с твердой подложкой, синтезировали по способам твердофазного синтеза пептидов.
Ас О О Ас
144
Соединение 143, связанное с твердой подложкой, синтезировали при помощи стандартного твердофазного синтеза на ДНК синтезаторе.
Соединение 143, связанное с твердой подложкой, суспендировали в водном аммиаке (28-30 мас.%) и нагревали при 55°C в течение 16 ч. Раствор охладили, а твердую подложку отфильтровали. Фильтрат концентрировали, а остаток растворили в воде и очистили при помощи ВЭЖХ на сильной анионообменной колонке. Фракции, содержащие соединение 144 полной длины, слили вместе и обессолили. Полу- 113 031393 ченное GalNAc4-11-конъюгированное олигомерное соединение анализировали при помощи ЖХ-МС и наблюдали, что масса согласуется со структурой.
Кластерная часть GalNAc4 конъюгирующей группы GalNAc4-11 (GalNAc4-11a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-AdP(=O)(OH)-.
Структура GalNAc4-11 (GalNAc4-11a-CM) представлена ниже но он
Пример 51. Получение олигонуклеотида 155, содержащего GalNAc3-6
145 вгСЧн
2М NaOH
ОН
146
60).
Соединение 146 синтезировали так, как описано в литературе (Analytical Biochemistry 1995, 229, 54-
Hz PdiOHl, -'С
BOAc.WeOH
H2. PdiOHlz/C EtuA&'fvteuH
149
Соединение 4 (15 г, 45,55 ммоль) и соединение 35b (14,3 грамм, 57 ммоль) растворили в CH2Cl2 (200 мл). Добавили активированные молекулярные сита (4 А, 2 г, порошкообразные) и оставили реакционную смесь перемешиваться в течение 30 мин в атмосфере азота. Добавили TMS-OTf (4,1 мл, 22,77 ммоль) и оставили реакционную смесь перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции смесь погасили, вылив в насыщенный водный раствор NaHCO3 (500 мл) с дробленым льдом (~150 г). Органический слой отделили, промыли насыщенным солевым раствором, высушили над MgSCU, отфильтровали и концентрировали до оранжевого маслянистого вещества под пониженным давлением. Неочищенный материал очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали 2-10% MeOH в CH2Cl2 с получением соединения 112 (16,53 г, 63%). Данные ЖХМС и 1Н ЯМР согласо вались с предполагаемым соединением.
Соединение 112 (4,27 г, 7,35 ммоль) растворили в 1:1 MeOH/EtOAc (40 мл). Реакционную смесь очистили пропусканием потока аргона через раствор в течение 15 мин. Добавили катализатор Перлмана (гидроксид палладия-на-углероде, 400 мг) и пропускали через раствор газообразный водород в течение 30 мин. После завершения (ТСХ, 10% MeOH в CH2Cl2, и ЖХМС) катализатор удалили фильтрованием через слой целита. Фильтрат концентрировали на ротационном испарителе и быстро высушили под высоким вакуумом с получением соединения 105а (3,28 г). Данные ЖХМС и 1H ЯМР согласовались с же
- 114 031393 лаемым продуктом.
Соединение 147 (2,31 г, 11 ммоль) растворили в безводном ДМФА (100 мл). Добавили N,Nдиизопропилэтиламин (DIEA, 3,9 мл, 22 ммоль), затем HBTU (4 г, 10,5 ммоль). Реакционную смесь оставили перемешиваться в течение ~15 мин в атмосфере азота. К этой смеси добавили раствор соединения 105а (3,3 г, 7,4 ммоль) в сухом ДМФА и перемешивали в течение 2 ч в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавили EtOAc и промыли насыщенным водным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу отделили, высушили (MgSO4), отфильтровали и концентрировали до оранжевого сиропообразного вещества. Неочищенный материал очистили колоночной хроматографией с 2-5% MeOH в CH2Cl2 с получением соединения 148 (3,44 г, 73%). Данные ЖХМС и 1H ЯМР согласова лись с предполагаемым продуктом.
Соединение 148 (3,3 г, 5,2 ммоль) растворили в 1:1 MeOH/EtOAc (75 мл). Реакционную смесь очистили пропусканием потока аргона через раствор в течение 15 мин. Добавили катализатор Перлмана (гидроксид палладия-на-углероде (350 мг). Через раствор продували газообразный водород в течение 30 мин. После завершения (ТСХ, 10% MeOH в ДХМ, и ЖХМС) катализатор удалили фильтрованием через слой целита. Фильтрат концентрировали на ротационном испарителе и быстро высушили под высоким вакуумом с получением соединения 149 (2,6 г). Данные ЖХМС согласовались с желаемым продуктом. Остаток растворили в сухом ДМФА (10 мл) и сразу применили на следующей стадии.
АсО °Ас о9 н
АсООАс AJ VО °·^Ο
AcHN 3 Η
АсО OAc о jlu
MH Ac на
14G -------------------HBTU DIEA. ДМФА
PdfOHjYC Н2
МеОН EtOAc
AcO OAc
V\_--0 _ О H
Ac Λ----.. JL iToo
AcHN 3 H
AcO OAcо
NHAc ήη2
151
Соединение 146 (0,68 г, 1,73 ммоль) растворили в сухом ДМФА (20 мл). К нему добавили DIEA (450 мкл, 2,6 ммоль, 1,5 экв.) и HBTU (1,96 г, 0,52 ммоль). Реакционную смесь оставили перемешиваться в течение 15 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. Добавили раствор соединения 149 (2,6 г) в безводном ДМФА (10 мл). pH реакционной смеси довели до pH 9-10 добавлением DIEA (при необходимости). Реакционную смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 2 ч. После завершения реакции смесь разбавили EtOAc (100 мл) и промыли насыщенным водным раствором NaHCO3, затем насыщенным солевым раствором. Органическую фазу отделили, высушили над MgSO4, отфильтровали и концентрировали. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали 2-10% MeOH в CH2Cl2 с получением соединения 150 (0,62 г, 20%). Данные ЖХМС и 1H ЯМР согласовались с желаемым продуктом.
Соединение 150 (0,62 г) растворили в 1:1 MeOH/EtOAc (5 л). Реакционную смесь очистили пропусканием потока аргона через раствор в течение 15 мин. Добавили катализатор Перлмана (гидроксид палладия-на-углероде (60 мг). Через раствор продували газообразный водород в течение 30 мин. После завершения (ТСХ, 10% MeOH в ДХМ и ЖХМС) катализатор удалили фильтрованием (тефлоновый фильтр с переходной канюлей шприца, 0,45 мкм). Фильтрат концентрировали на ротационном испарителе и быстро высушили под высоким вакуумом с получением соединения 151 (0,57 г). Данные ЖХМС согласовались с желаемым продуктом. Продукт растворили в 4 мл сухого ДМФА и сразу применили на следующей стадии.
- 115 031393
PdiCiH-'C Н;
МеОН. ЕЮ Ас
PFP-ТФК. DIEA
ДМ ФА
АсО ОАс .АсО О Ас AcHfl 3 N \^О 00
AcHN 3 Н
АсО ОАсо
МНАс
154
Соединение 83а (0,11 г, 0,33 ммоль) растворили в безводном ДМФА (5 мл) и добавили N,Nдиизопропилэтиламин (75 мкл, 1 ммоль) и PFP-ТФК (90 мкл, 0,76 ммоль). При соприкосновении реакционная смесь стала пурпурной и постепенно изменила цвет на оранжевый в течение следующих 30 мин. Ход реакции контролировали по ТСХ и ЖХМС. После завершения (образования эфира PFP) добавили раствор соединения 151 (0,57 г, 0,33 ммоль) в ДМФА. pH реакционной смеси довели до pH 9-10 добавлением ^^диизопропилэтиламина (при необходимости). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение ~30 мин. После завершения реакции большую часть растворителя удалили под пониженным давлением. Остаток разбавили CH2Cl2 и промыли насыщенным водным раствором NaHCO3, затем насыщенным солевым раствором. Органическую фазу отделили, высушили над MgSO4, отфильтровали и концентрировали до оранжевого сиропообразного вещества. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией (2-10% MeOH в CH2Cl2) с получением соединения 152 (0,35 г, 55%). Данные ЖХМС и 1H ЯМР согласовались с желаемым продуктом.
Соединение 152 (0,35 г, 0,182 ммоль) растворили в 1:1 MeOH/EtOAc (10 мл). Реакционную смесь очистили пропусканием потока аргона через раствор в течение 15 мин. Добавили катализатор Перлмана (гидроксид палладия-на-углероде (35 мг). Через раствор продували газообразный водород в течение 30 мин. После завершения (ТСХ, 10% МеОН в ДХМ, и ЖХМС) катализатор удалили фильтрованием (тефлоновый фильтр с переходной канюлей шприца, 0,45 мкм). Фильтрат концентрировали на ротационном испарителе и быстро высушили под высоким вакуумом с получением соединения 153 (0,33 г, количественно). Данные ЖХМС согласовались с желаемым продуктом.
Соединение 153 (0,33 г, 0,18 ммоль) растворили в безводном ДМФА (5 мл) при перемешивании в атмосфере азота. К нему добавили ^^диизопропилэтиламин (65 мкл, 0,37 ммоль) и PFP-ТФК (35 мкл, 0,28 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение ~30 мин. При соприкосновении реакционная смесь стала пурпурной и постепенно изменила цвет на оранжевый. pH реакционной смеси поддерживали при pH 9-10 добавлением дополнительного количества ^^диизопропилэтиламина. Ход реакции контролировали по ТСХ и ЖХМС. После завершения реакции большую часть растворителя удалили под пониженным давлением. Остаток разбавили CH2Cl2 (50 мл) и промыли насыщенным водным раствором NaHCO3, затем насыщенным солевым раствором. Органический слой отделили, высушили над MgSO4, отфильтровали и концентрировали до оранжевого сиропообразного вещества. Остаток очистили колоночной хроматографией и элюировали 2-10% MeOH в CH2Cl2 с получением соединения 154 (0,29 г, 79%). Данные ЖХМС и 1H ЯМР согласовались с желаемым продуктом.
83е з____s μ НО ОН о Н nu ACHN Н ΗΝ П
Боратный о, фар. „и С О Н0“н ОН γΗ Н
- Рн ЗЕ комн т-ра ноУ^^0'>СИЛ^И-1Г^1Аг11тГ^-~-гН^-О-(АН-{2Б?) водн аммиак гамн т-ра ^rHrlj Н □ I 4 о О --- ----- но он Л Ъ н о
AcHN Н
Олигомерное соединение 155, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-6, получили по об
155
- 116 031393 щим способам, представленным в примере 46. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-6 (GalNAc3-6a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-.
Структура GalNAc3-6 (GalNAc3-6a-CM-) представлена ниже
AcHN .
Пример 52. Получение олигонуклеотида 160, содержащего GalNAc3-9
Соединение 156 синтезировали по способу, описанному в литературе (J. Med. Chem. 2004, 47, 57985808).
Соединение 156 (18,60 г, 29,28 ммоль) растворили в метаноле (200 мл). Добавили палладий-науглероде (6,15 г, загрузка 10 мас.% (в пересчете на сухое вещество), матрица из порошкообразного углерода, влажный). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 18 ч. Реакционную смесь отфильтровали через слой целита и тщательно промыли слой целита метанолом. Объединенный фильтрат промыли и концентрировали досуха. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали 5-10% метанола в дихлорметане с получением соединения 157 (14,26 г, 89%). Масса m/z 544,1 [M-H]-.
Соединение 157 (5 г, 9,17 ммоль) растворили в безводном ДМФА (30 мл). Добавили HBTU (3,65 г, 9,61 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (13,73 мл, 78,81 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 5 мин. К нему добавили раствор соединения 47 (2,96 г, 7,04 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 ч. Реакционную смесь вылили в насыщенный водный раствор NaHCO3. Смесь экстрагировали этилацетатом, а органический слой промыли насыщенным солевым раствором и высушили (Na2SO4), отфильтровали и выпарили. Полученный остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали 50% этилацетатом в гексане с получением соединения 158 (8,25 г, 73,3%). Структуру подтвердили анализом МС и 1H ЯМР.
Соединение 158 (7,2 г, 7,61 ммоль) высушили над Р2О5 под пониженным давлением. Высушенное соединение растворили в безводном ДМФА (50 мл). К нему добавили 1Н-тетразол (0,43 г, 6,09 ммоль) и N-метилимидазол (0,3 мл, 3,81 ммоль), и цианоэтил-№,Н№,№-тетраизопропил-фосфородиамидит (3,65 мл, 11,50 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавили этилацетатом (200 мл). Реакционную смесь промыли насыщенным раствором NaHCO3 и насыщенным солевым раствором. Органическую фазу отделили, высушили (Na2SO4), отфильтровали и выпарили. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией и элюировали 50-90% этилацетатом в гексане с получением соединения 159 (7,82 г, 80,5%). Структуру подтвердили анализом ЖХМС и 31Р ЯМР.
- 117 031393
Олигомерное соединение 160, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-9, получили по стандартным способам синтеза олигонуклеотидов. Три единицы соединения 159 связали с твердой подложкой, затем с фосфорамидитами нуклеотидов. В результате обработки защищенного олигомерного соединения водным аммиаком получили соединение 160. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-9 (GalNAc3-9a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-. Структура GalNAc3-9 (GalNAc3-9a-CM) пред ставлена ниже
Пример 53. Альтернативный способ получения соединения 18 (GalNAc3-1a и GalNAc3-3a)
Выполнили реакцию лактона 161 с диаминопропаном (3-5 экв.) или моно-Вос-защищинным диаминопропаном (1 экв.) с получением спирта 162а или 162b. При применении для описанной выше реакции незащищенного пропандиамина, избыток диамина удалили выпариванием под высоким вакуумом, а свободную аминогруппу в 162а защитили при помощи CbzCl с получением 162b в виде белого твердого вещества после очистки колоночной хроматографией. Спирт 162b затем взаимодействовал с соединением 4 в присутствии TMSOTf с получением 163а, которое преобразовали в 163b путем снятия Cbz группы при помощи каталитического гидрирования. Пентафторфениловый (PFP) эфир 164 получили взаимодействием трехкислотного соединения 113 (см. пример 48) с PFP-ТФК (3,5 экв.) и пиридином (3,5 экв.) в ДМФА (от 0,1 до 0,5 М). Триэфир 164 непосредственно взаимодействовал с амином 163b (3-4 экв.) и DIPEA (3-4
- 118 031393 экв.) с получением соединения 18. Представленный выше способ значительно облегчает очистку промежуточных соединений и минимизирует образование побочных продуктов, которые образуются при применении способа, описанного в примере 4.
Пример 54. Альтернативный способ получения соединения 18 (GalNAc3-1a и GalNAc3-3a)
OPFP
1. 1.6-гександиол или 1 5-пентандиол TMSOTf + соединение 4
2. TEMPO
PFP-ΤΦΚ руг
Три-PFP эфир 164 получили из кислоты 113 по способу, приведенному выше в примере 53, выполнили реакцию этого эфира с моно-Вос-защищенным диамином с получением 165 практически с количественным выходом. Boc группы сняли хлористо-водородной кислотой или трифторуксусной кислотой с получением триамина, который взаимодействовал с активированной кислотой PFP 166 в присутствии подходящего основания, такого как DIPEA, с получением соединения 18.
PFP-защищенную кислоту Gal-NAc 166 получили из соответствующей кислоты обработкой PFPТФК (1-1,2 экв.) и пиридином (1-1,2 экв.) в ДМФА. Кислоту-предшественник, в свою очередь, получили из соответствующего спирта окислением с применением TEMPO (0,2 экв.) и BAIB в ацетонитриле и воде. Спирт-предшественник получили из сахарного промежуточного соединения 4 взаимодействием с 1,6гександиолом (или 1,5-гександиолом или другим диолом для других значений п) (2-4 экв.) и TMSOTf, применив условия, описанные ранее в примере 47.
Пример 55. Дозозависимое исследование олигонуклеотидов, содержащих либо 3'-, либо 5'конъюгирующую группу (сравнение GalNAc3-1, 3, 8 и 9), нацеленных на SRB-1, in vivo.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Неконъюгированный ISIS 353382 включили в качестве стандарта. Каждая из различных конъюгирующих групп GalNAc3 была присоединена либо к 3'-, либо к 5'-концу соответствующего олигонуклеотида при помощи фосфодиэфир-связанного 2'-дезоксиаденозинового нуклеозида (расщепляемый фрагмент).
Таблица 26
Модифицированные ASO, нацеленные на SRB-1
ASO | Последовательность (от 5’ к 3’) | Мотив | Конъюгат | SEQ ID NO. |
ISIS 353382 (исходное) | Ges mCeSTesTesmCeSAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTes mCeSmCesTesTe | 5/10/5 | нет | 28 |
ISIS 655861 | GesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTes mCesmCesTesTe0A(|0>-GalNAc3-la | 5/10/5 | GalNAc3-l | 29 |
ISIS 664078 | Ges mCesTesTesmCesAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds mCdsTdsTesmCesmCesTesTeoA(lo>-GalNAc39a | 5/10/5 | GalNAc3-9 | 29 |
ISIS 661161 | GalNAc3-3a-„.A(l„ Ges mCeSTesTesmCeSAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTes mCeSmCesTesTe | 5/10/5 | GalNAc3-3 | 30 |
ISIS 665001 | GalNAc3-8a-„.A(l„ Ges mCesTesT esmCes AdsG dsT ds mCds AdsT dsGds AdsmCdsT dsTes mCeSmCesTesTe | 5/10/5 | GalNAc3-8 | 30 |
Заглавные буквы указывают азотистое основание для каждого нуклеозида, а mC означает 5метилцитозин. Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-D2'-дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатную межнуклеозидную связь (PS); о означает фосфодиэфирную межнуклеозидную связь (РО) и о' означает -O-F(=O)(OH)-. Конъюгирующие группы выделены жирным шрифтом.
- 119 031393
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9. Структура GalNAc3-9 показана ранее в примере 52. Структура GalNAc3-3 показана ранее в примере 39. Структура GalNAc3-8 показана ранее в примере 47.
Лечение.
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 353382, 655861, 664078, 661161, 665001 или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в табл. 27, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB1 дозозависимым образом. Действительно, антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие фосфодиэфир-связанные конъюгаты GalNAc3-1 и GalNAc3-9 на 3'-конце (ISIS 655861 и ISIS 664078), а также конъюгаты GalNAc3-3 и GalNAc3-8, связанные на 5'-конце (ISIS 661161 и ISIS 665001), демонстрируют существенное улучшение эффективности по сравнению с неконъюгированным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 353382). Кроме того, ISIS 664078, содержащий конъюгат GalNAc3-9 на 3'-конце, был, по существу, настолько же эффективным, как ISIS 655861, который содержит конъюгат GalNAc3-1 на 3'конце. 5'-Конъюгированные антисмысловые олигонуклеотиды, ISIS 661161 и ISIS 665001, содержащие GalNAc3-3 или GalNAc3-9 соответственно, обладают повышенной эффективностью по сравнению с 3'конъюгированными антисмысловыми соединениями (ISIS 655861 и ISIS 664078).
Таблица 27 ASO, содержащие . GalNAc3-1, 3, 8 или 9, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК SRB1 (% от солевого раствора) | Конъюгат |
Солевой раствор | Н.д. | 100 | |
353382 | 3 | 88 | нет |
10 | 68 | ||
30 | 36 | ||
655861 | 0,5 | 98 | GalNac3 -1 (3 ) |
1,5 | 76 | ||
5 | 31 | ||
15 | 20 | ||
664078 | 0,5 | 88 | GalNac3-9 (3 ) |
1,5 | 85 | ||
5 | 46 | ||
15 | 20 | ||
661161 | 0,5 | 92 | GalNac3-3 (5 ) |
1,5 | 59 | ||
5 | 19 | ||
15 | И | ||
665001 | 0,5 | 100 | GalNac3-8 (5 ) |
1,5 | 73 | ||
5 | 29 | ||
15 | 13 |
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, применяя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором. Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в таблице.
Таблица 28
ISIS № | Доза мг/кг | ALT | AST | Общий билирубин | АМК | Конъюгат |
Солевой раствор | 24 | 59 | ο,ι | 37,52 | ||
353382 | 3 | 21 | 66 | 0,2 | 34,65 | нет |
10 | 22 | 54 | 0,2 | 34,2 | ||
30 | 22 | 49 | 0,2 | 33,72 |
- 120 031393
655861 | 0,5 | 25 | 62 | 0,2 | 30,65 | GalNac3-l (3 ) |
1,5 | 23 | 48 | 0,2 | 30,97 | ||
5 | 28 | 49 | 0,1 | 32,92 | ||
15 | 40 | 97 | 0,1 | 31,62 | ||
664078 | 0,5 | 40 | 74 | 0,1 | 35,3 | GalNac3-9 (3 ) |
1,5 | 47 | 104 | 0,1 | 32,75 | ||
5 | 20 | 43 | 0,1 | 30,62 | ||
15 | 38 | 92 | 0,1 | 26,2 | ||
661161 | 0,5 | 101 | 162 | 0,1 | 34,17 | GalNac3-3 (5 ) |
1,5 г | 42 | 100 | 0,1 | 33,37 | ||
5 г | 23 | 99 | 0,1 | 34,97 | ||
15 | 53 | 83 | 0,1 | 34,8 | ||
665001 | 0,5 | 28 | 54 | 0,1 | 31,32 | GalNac3-8 (5 ) |
1,5 | 42 | 75 | 0,1 | 32,32 | ||
5 | 24 | 42 | 0,1 | 31,85 | ||
15 | 32 | 67 | 0,1 | 31, |
Пример 56. Дозозависимое исследование олигонуклеотидов, содержащих либо 3'-, либо 5'конъюгирующую группу (сравнение GalNAc3-1, 2, 3, 5, 6, 7 и 10), нацеленных на SRB-1, in vivo.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Неконъюгированный ISIS 353382 включили в качестве стандарта. Каждая из различных конъюгирующих групп GalNAc3 была присоединена к 5'-концу соответствующего олигонуклеотида фосфодиэфир-связанным 2'-дезоксиаденозиновым нуклеозидом (расщепляемый фрагмент), за исключением ISIS 655861, в котором конъюгирующая группа GalNAc3 присоединена к 3'-концу.
Таблица 29 Модифицированные ASO, нацеленные на SRB-1
ASO | Последовательность (от 5’ к 3’) | Мотив | Конъюгат | SEQ ID NO. |
ISIS 353382 (исходное) | Ges mCeSTesTesmCeSAdsGdsTds mCdsAdSTdsGdsAdSmCdsTdsTes mCeSmCesTesTe | 5/10/5 | Без конъюгата | 28 |
ISIS 655861 | GesmCesTeSTesmCesAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTes mCesmCeSTesTe0A(|0,GalNAc3-la | 5/10/5 | GalNAc3-l | 29 |
ISIS 664507 | GalNAc3-2a-0,A(|0GeS mCesTesTesmCesAdsGdsTds mCds AdsT dsGds AdsmCdsTdsT esmCesmCesT esT e | 5/10/5 | GalNAc3-2 | 30 |
ISIS 661161 | GalNAc3-3a-B,AdB GeS mCesTesTesmCesAdSGdsTds mCdsAdSTdsGdsAdS mCdsTdsTesmCesmCesTesTe | 5/10/5 | GalNAc3-3 | 30 |
ISIS 666224 | GalNAc3-5a-B>Ad0Ges mCesTesTesmCeSAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTes mCesmCesTesTe | 5/10/5 | GalNAc3-5 | 30 |
ISIS 666961 | GalNAc3-6a-B,Ad0Ges mCesTesTesmCeSAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTes mCesmCesTesTe | 5/10/5 | GalNAc3-6 | 30 |
ISIS 666981 | GalNAc3-7a-B>A(1BGes mCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTes mCesmCesTesTe | 5/10/5 | GalNAc3-7 | 30 |
ISIS 666881 | GalNAc3-10a-B>A(|BGes mCeSTesTesmCesAdsGdsTds mCds AdsT dsGds AdsmCdsTdsT es mCesmCesT esT e | 5/10/5 | GalNAc3-10 | 30 |
Заглавные буквы указывают азотистое основание для каждого нуклеозида, а mC означает 5метилцитозин. Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-D2'-дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатную межнуклеозидную связь(PS); о означает фосфодиэфирную межнуклеозидную связь(РО) и о' означает -O^^OKOR)-. Конъюгирующие группы выделены жирным шрифтом.
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9. Структура GalNAc3-2a показана ранее в примере
37. Структура GalNAc3-3a показана ранее в примере 39. Структура GalNAc3-5a показана ранее в примере 49. Структура GalNAc3-6a показана ранее в примере 51. Структура GalNAc3-7a показана ранее в примере 48. Структура GalNAc3-10a показана ранее в примере 46.
Лечение.
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 353382, 655861, 664507, 661161, 666224, 666961, 666981, 666881 или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в табл. 30, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB1 дозозависимым образом. Действительно, конъюгированные антисмысловые олигонуклеотиды демонстрируют значительное усиление эффективности по сравнению с неконъюгированным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 353382). 5'-Конъюгированные антисмысловые олигонуклеотиды демонстрируют небольшое усиление эффективности по сравнению с 3'-конъюгированным антисмысловым олигонуклеотидом.
- 121 031393
Таблица 30
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК SRB1 (% от солевого раствора) | Конъюгат |
Солевой раствор | Н.д. | 100,0 | |
353382 | 3 | 96,0 | нет |
10 | 73,1 | ||
30 | 36,1 | ||
655861 | 0,5 | 99,4 | GalNac3-l (3 ) |
1,5 | 81,2 | ||
5 | 33,9 | ||
15 | 15,2 | ||
664507 | 0,5 | 102,0 | GalNac3-2 (5 ) |
1,5 | 73,2 | ||
5 | 31,3 | ||
15 | 10,8 | ||
661161 | 0,5 | 90,7 | GalNac3-3 (5 ) |
1,5 | 67,6 | ||
5 | 24,3 | ||
15 | И,5 | ||
666224 | 0,5 | 96,1 | GalNac3-5 (5 ) |
1,5 | 61,6 | ||
5 | 25,6 | ||
15 | И,7 | ||
666961 | 0,5 | 85,5 | GalNAc3-6 (5 ) |
1,5 | 56,3 | ||
5 | 34,2 | ||
15 | 13,1 | ||
666981 | 0,5 | 84,7 | GalNAc3-7 (5') |
1,5 | 59,9 | ||
5 | 24,9 | ||
15 | 8,5 | ||
666881 | 0,5 | 100,0 | GalNAc3-10 (5 ) |
1,5 | 65,8 | ||
5 | 26,0 | ||
15 | 13,0 |
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, применяя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором. Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в табл. 31.
- 122 031393
Таблица 31
Пример 57. Исследование продолжительности действия олигонуклеотидов, содержащих 3'конъюгирующую группу, нацеленных на АроС III, in vivo.
Мышам однократно ввели инъекцию дозы, указанной ниже, и в течение 42 дней наблюдали уровни АроС-III и триглицеридов в плазме (TG в плазме). Исследование выполнили, используя в каждой группе 3 трансгенных мышей, которые экспрессируют человеческий АРОС-III.
Таблица 32
Модифицированные ASO, нацеленные на АроС III
ASO | Последовательность (от 5’ к 3’) | Связи | SEQ ID NO. |
ISIS 304801 | Aesvres Ceslesles Cdslds^dsErdslds mCdsmCdsAdsGdsmCdsTesTesTesAesTe | PS | 20 |
ISIS 647535 | AesGes CesTesTes CdsTdsTdsGdsTds Cds Cds AdsGds CdsTesTesTesAesTeoAd0’-GalNAc3la | PS | 21 |
ISIS 647536 | AesGeo CeoTeoTeo CdsTdsTdsGdsTds Cds Cds AdsGds CdsTeoTeoTesAesTeoAdO’-GalNAc3la | PO/PS | 21 |
Заглавные буквы указывают азотистое основание для каждого нуклеозида, а mC означает 5метилцитозин. Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-D2'-дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатную межнуклеозидную связь(Р8); о означает фосфодиэфирную межнуклеозидную связь(РО) и о' означает -O-₽(=O)(OH)-. Конъюгирующие группы выделены жирным шрифтом.
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9.
- 123 031393
Таблица 33 мРНК АроС III (% от солевого раствора на 1-й день) и уровни TG в плазме (% от солевого раствора на 1-й день)
ASO | Доза | Мишень | 3-й день | 7-й день | 14-й день | 35-й день | 42-й день |
Солевой раствор | 0 мг/кг | АроС-Ш | 98 | 100 | 100 | 95 | 116 |
ISIS 304801 | 30 мг/кг | АроС-Ш | 28 | 30 | 41 | 65 | 74 |
ISIS 647535 | 10 мг/кг | АроС-Ш | 16 | 19 | 25 | 74 | 94 |
ISIS 647536 | 10 мг/кг | АроС-Ш | 18 | 16 | 17 | 35 | 51 |
Солевой раствор | 0 мг/кг | TG в плазме | 121 | 130 | 123 | 105 | 109 |
ISIS 304801 | 30 мг/кг | TG в плазме | 34 | 37 | 50 | 69 | 69 |
ISIS 647535 | 10 мг/кг | TG в плазме | 18 | 14 | 24 | 18 | 71 |
ISIS 647536 | 10 мг/кг | TG в плазме | 21 | 19 | 15 | 32 | 35 |
Как можно видеть в представленной выше таблице, продолжительность действия увеличивается при добавлении 3'-конъюгирующей группы по сравнению с неконъюгированным олигонуклеотидом. Дополнительное увеличение продолжительности действия наблюдали для смешанного конъюгированного PO/PS олигонуклеотида 647536 по сравнению с конъюгированным олигонуклеотидом 647535, содержащим только PS.
Пример 58. Дозозависимое исследование олигонуклеотидов, содержащих З'-конъюгирующую группу (сравнение GalNAc3-1 и GalNAc4-11), нацеленных на SRB-1, in vivo.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Неконъюгированный ISIS 440762 включили в качестве неконъюгированного стандарта. Каждая из конъюгирующих групп была присоединена к 3'-концу соответствующего олигонуклеотида при помощи расщепляемого фрагмента фосфодиэфир-связанного 2'дезоксиаденозинового нуклеозида.
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9. Структура GalNAc3-11a показана ранее в примере 50.
Лечение.
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 440762, 651900, 663748 или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в табл. 34, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB1 дозозависимым образом. Антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие фосфодиэфир-связанные конъюгаты GalNAc3-1 и GalNAc4-11 на З'-конце (ISIS 651900 и ISIS 663748), демонстрируют значительное усиление эффективности по сравнению с неконъюгированным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 440762). Эти два конъюгированных олигонуклеотида, GalNAc3-1 и GalNAc4-11, были одинаково эффективными.
Таблица 34 Модифицированные ASO, нацеленные на SRB-1
ASO | Последовательность (от 5’ к 3’) | Доза, мг/кг | % от контроля с солевым раствором | SEQ ID NO. |
Солевой раствор | 100 | |||
ISIS 440762 | Tks mCksAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds гр гр ΙΠζ-5 Cdsldslks Ck | 0,6 | 73,45 | 22 |
2 | 59,66 | |||
6 | 23,50 | |||
ISIS 651900 | TksmCksAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTks CkoAdo-GalNAc3-la | 0,2 | 62,75 | 23 |
0,6 | 29,14 | |||
2 | 8,61 | |||
6 | 5,62 | |||
ISIS 663748 | TksmCkSAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds mCdsTdsTksmCkoAdo-GalNAc4-lla | 0,2 | 63,99 | 23 |
0,6 | 33,53 | |||
2 | 7,58 | |||
6 | 5,52 |
Заглавные буквы указывают азотистое основание для каждого нуклеозида, а mC означает 5метилцитозин. Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; k означает 6'-(S)- 124 031393
CH3 бициклический нуклеозид; d означает р^-2'-дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатные межнуклеозидные связи (PS); о означает фосфодиэфирные межнуклеозидные связи (РО) и о' означает -O^^OXOH)-. Конъюгирующие группы выделены жирным шрифтом.
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, применяя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором. Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в табл. 35.
Таблица 35
ISIS № | Доза мг/кг | ALT | AST | Общий билирубин | АМК | Конъюгат |
Солевой раствор | 30 | 76 | 0,2 | 40 | ||
440762 | 0,60 | 32 | 70 | 0,1 | 35 | нет |
О | 26 | 57 | 0,1 | 35 | ||
6 | 31 | 48 | 0,1 | 39 | ||
651900 | 0,2 | 32 | 115 | 0,2 | 39 | GalNac3-l (3 ) |
0,6 | 33 | 61 | 0,1 | 35 | ||
2 | 30 | 50 | 0,1 | 37 | ||
6 | 34 | 52 | 0,1 | 36 | ||
663748 | 0,2 | 28 | 56 | 0,2 | 36 | GalNac4-ll (3') |
0,6 | 34 | 60 | 0,1 | 35 | ||
2 | 44 | 62 | 0,1 | 36 | ||
6 | 38 | 71 | 0,1 | 33 |
Пример 59. Действие GalNAc3-1-конъюгировaнных ASO, нацеленных на FXI, in vivo.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в исследовании действия многократных нарастающих доз на антисмысловое ингибирование FXI у мышей. ISIS 404071 включили в качестве неконъюгированного стандарта. Каждая из конъюгирующих групп была присоединена к 3'-концу соответствующего олигонуклеотида при помощи расщепляемого фрагмента фосфодиэфир-связанного 2'дезоксиаденозинового нуклеозида.
Таблица 36 Модифицированные ASO, нацеленные на FXI
ASO | Последовательность (от 5’ к 3’) | Связи | SEQ ID NO. |
ISIS 404071 | TesGesGesTesAesAdsTds mCdsmCdsAds mCds TdsTdsTds CdsAesGesAesGeSGe | PS | 31 |
ISIS 656172 | TeSGesGesTesAesAdsTdS mCdSmCdSAds mCdS TdsTdsTds CdsAesGesAesGesGeoAdo’GalNAc3-la | PS | 32 |
ISIS 656173 | TesGeoGeoTeoAeoAdsTds Cds CdsAds Cds TdsTdsTdsmCdsAeoGeoAesGesGeoAdo’GalNAc3-la | PO/PS | 32 |
Заглавные буквы указывают азотистое основание для каждого нуклеозида, а mC означает 5метилцитозин. Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-D2'-дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатную межнуклеозидную связь(Р8); о означает фосфодиэфирную межнуклеозидную связь(РО) и о' означает -O^^OXOH)-. Конъюгирующие группы выделены жирным шрифтом.
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9.
Лечение.
Шестинедельным самцам мышей Balb/c (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) дважды в неделю в течение 3 недель вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 404071, 656172, 656173 или PBS в качестве контрольного образца. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных.
Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения для определения уровней мРНК FXI в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Измерили также уровни белка FXI в плазме при помощи твердофазного иммуноферментного анализа. Уровни мРНК FXI определяли относительно общей РНК (при помощи RIBOGREEN®), затем нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК FXI для каждой экспериментальной группы. Данные нормализовали к контрольному образцу, обработанному PBS, и обозначили как % PBS. ED50S измеряли по таким же способам, как описаны ранее, и они представлены ниже.
- 125 031393
Таблица 37 мРНК фактора XI (% от солевого раствора)
ASO | Доза, мг/кг | % от контрольного образца | Конъюгат | Связи |
Солевой раствор | 100 | нет | ||
ISIS 404071 | 3 | 92 | нет | PS |
10 | 40 | |||
30 | 15 | |||
ISIS 656172 | 0,7 | 74 | GalNAc3-l | PS |
2 | 33 | |||
6 | 9 | |||
ISIS 656173 | 0,7 | 49 | GalNAc3-l | PO/PS |
2 | 22 | |||
6 | 1 |
Как показано в табл. 37, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК FXI дозозависимым образом. Олигонуклеотиды, содержащие конъюгирующую группу 3'-GalNAc3-1, демонстрируют значительное усиление эффективности по сравнению с неконъюгированным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 404071). Между эти двумя конъюгированными олигонуклеотидами дополнительное усиление эффективности было обеспечено за счет замены некоторых PS связей на РО (ISIS 656173).
Как показано в табл. 37а, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни белка FXI дозозависимым образом. Олигонуклеотиды, содержащие конъюгирующую группу 3'-GalNAc3-1, демонстрируют значительное усиление эффективности по сравнению с неконъюгированным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 404071). Между эти двумя конъюгированными олигонуклеотидами дополнительное усиление эффективности было обеспечено за счет замены некоторых PS связей на РО (ISIS 656173).
Таблица 37а
Белок фактора XI (% от солевого раствора)
ASO | Доза, мг/кг | Белок (% от контрольного образца) | Конъюгат | Связи |
Солевой раствор | 100 | нет | ||
ISIS 404071 | 3 | 127 | нет | PS |
10 | 32 | |||
30 | 3 | |||
ISIS 656172 | 0,7 | 70 | GalNAc3-l | PS |
2 | 23 | |||
6 | 1 | |||
ISIS 656173 | 0,7 | 45 | GalNAc3-l | PO/PS |
2 | 6 | |||
6 | 0 |
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, применяя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин, общий альбумин, CRE и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором. Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в таблице.
Таблица 38
ISIS № | Доза мг/кг | ALT | AST | Общий альбумин | Общий билирубин | CRE | АМК | Конъюгат |
Солевой раствор | 71,8 | 84,0 | 3,1 | 0,2 | 0,2 | 22,9 | ||
404071 | 3 | 152,8 | 176,0 | 3,1 | о,з | 0,2 | 23,0 | нет |
10 | 73,3 | 121,5 | 3,0 | 0,2 | 0,2 | 21,4 | ||
30 | 82,5 | 92,3 | 3,0 | 0,2 | 0,2 | 23,0 | ||
656172 | 0,7 | 62,5 | 111,5 | 3,1 | 0,2 | 0,2 | 23,8 | GalNac3-l (3') |
2 | 33,0 | 51,8 | 2,9 | 0,2 | 0,2 | 22,0 | ||
6 | 65,0 | 71,5 | 3,2 | 0,2 | 0,2 | 23,9 | ||
656173 | 0,7 | 54,8 | 90,5 | 3,0 | 0,2 | 0,2 | 24,9 | GalNac3-l (3') |
2 | 85,8 | 71,5 | 3,2 | 0,2 | 0,2 | 21,0 | ||
6 | 114,0 | 101,8 | 3,3 | 0,2 | 0,2 | 22,7 |
Пример 60. Действие конъюгированных ASO, нацеленных на SRB-1, in vitro.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в исследовании действия многократных нарастающих доз на антисмысловое ингибирование SRB-1 в первичных гепатоцитах мышей. ISIS 353382 включили в качестве неконъюгированного стандарта. Каждая из конъюгирующих групп была присоединена к 3' или 5'-концу соответствующего олигонуклеотида при помощи расщепляемого фрагмента фосфодиэфир-связанного 2'-дезоксиаденозинового нуклеозида.
- 126 031393
Таблица 39
Модифицированные ASO, нацеленные на SRB-1
ASO | Последовательность (от 5’ к 3’) | Моти в | Конъюг ат | SE Q ID NO. |
ISIS 35338 2 | Ges CesTesTes CesAdsG(isTds CdsAdSTdSGdsAdS CdsTdsTes Ces CesT esTe | 5/10/5 | нет | 28 |
ISIS 65586 1 | Ges CesTesTes CesAdSGdSTdS CdsAdgTdsGdsAds CdsTdSTes Ces CesT esTe0Ad0’-GalNAc3-la | 5/10/5 | GalNAc3 -1 | 29 |
ISIS 65586 2 | Ges CeoTeoTeo CeoAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds mCdsTdsTeomCeomCesTesTeoAdo.-GalNAc3-la | 5/10/5 | GalNAc3 -1 | 29 |
ISIS 66116 1 | GalNAc3-3a.0’Ad0Ges mCesTesTesmCesAdSGds Tds CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTes Ces CesTesTe | 5/10/5 | GalNAc3 -3 | 30 |
ISIS 66500 1 | GalNAc3-8a.0>Ad0GesmCesTesTesmCesAdsGds rp Шрч A T А И1рч т-1 t-1 rp rp -Ids C-ds-^ds 1 ds'Jds-^ds Czds1 ds1 es '--cs Czes-les-le | 5/10/5 | GalNAc3 -8 | 30 |
ISIS 66407 8 | Ges CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTes Ces CesT esTeOAdo-GalNAc3-9a | 5/10/5 | GalNAc3 -9 | 29 |
ISIS 66696 1 | GalNAC3-6a-0’Ad0Ges CesTesTes CesAdsGds Tds CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTes Ces CesTesTe | 5/10/5 | GalNAc3 -6 | 30 |
ISIS 66450 7 | GalNAc3-2a-0’Ad0GesmCesTesTesmCesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTgs Ces CesTggTg | 5/10/5 | GalNAc3 -2 | 30 |
ISIS 66688 1 | GalN Ac3-10a-o’Ad0GeS mCeST esT eSmCeS AdsGdsT ds CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTes Ces CeSTeSTe | 5/10/5 | GalNAc3 -10 | 30 |
ISIS 66622 4 | GalNAc3-5a-0’Ad0GesmCesTesTesmCesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTgs Ces CesTggTg | 5/10/5 | GalNAc3 -5 | 30 |
ISIS 66698 1 | GalNAC3-7a-0,Ad0GesmCesTesTesmCesAdsGdsTds Шрч A T Λ'' А Й1р-1 rp rp Шрч ΙΪΙρΊ гр гр C-ds-^ds 1 ds'Jds-^ds Czds1 ds1 es '--cs Czes-les-le | 5/10/5 | GalNAc3 -7 | 30 |
Заглавные буквы указывают азотистое основание для каждого нуклеозида, а mC означает 5метилцитозин. Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-D2'-дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатную межнуклеозидную связь(1Ф); о означает фосфодиэфирную межнуклеозидную связь(РО) и о' означает -O-Р(=O)(OH)-. Конъюгирующие группы выделены жирным шрифтом.
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9. Структура GalNAc3-3a показана ранее в примере 39. Структура GalNAc3-8a показана ранее в примере 47. Структура GalNAc3-9a показана ранее в примере 52. Структура GalNAc3-6a показана ранее в примере 51. Структура GalNAc3-2a показана ранее в примере 37. Структура GalNAc3-10a показана ранее в примере 46. Структура GalNAc3-5a показана ранее в примере 49. Структура GalNAc3-7a показана ранее в примере 48.
Лечение.
Олигонуклеотиды, перечисленные выше, испытывали in vitro в первичных гепатоцитарных клетках мышей, помещенных на планшеты при плотности 25000 клеток на лунку и обработанных 0,03, 0,08, 0,24, 0,74, 2,22, 6,67 или 20 нМ модифицированного олигонуклеотида. После обработки в течение около 16 ч из клеток выделили РНК и измерили уровни мРНК при помощи количественной ПНР в реальном времени, а уровни мРНК SRB-1 III скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, измеренным при помощи RIBOGREEN®.
IC50 рассчитали по стандартным способам, а результаты представлены в табл. 40. Результаты показывают, что при условиях свободного поглощения, в которых не применяли никакие реагенты или электроимпульсные приемы для искусственного ускорения входа олигонуклеотидов в клетки, олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были существенно более эффективными в гепатоцитах, чем исходный олигонуклеотид (ISIS 353382), который не содержит конъюгат GalNAc.
Таблица 40
ASO | ICso(hM) | Межнуклеозидные связи | Конъюгат | SEQ ID NO. |
ISIS 353382 | 190a | PS | нет | 28 |
ISIS 655861 | lla | PS | GalNAc3-l | 29 |
ISIS 655862 | 3 | PO/PS | GalNAc3-l | 29 |
- 127 031393
ISIS 661161 | 15a | PS | GalNAc3-3 | 30 |
ISIS 665001 | 20 | PS | GalNAc3-8 | 30 |
ISIS 664078 | 55 | PS | GalNAc3-9 | 29 |
ISIS 666961 | 22a | PS | GalNAc3-6 | 30 |
ISIS 664507 | 30 | PS | GalNAc3-2 | 30 |
ISIS 666881 | 30 | PS | GalNAc3-10 | 30 |
ISIS 666224 | 30a | PS | GalNAc3-5 | 30 |
ISIS 666981 | 40 | PS | GalNAc3-7 | 30 |
а Среднее для нескольких повторов.
Пример 61. Получение олигомерного соединения 175, содержащего GalNAc3-12 АсСЧ ОАс .^θ-^VoAc Н%с
PfpO' B“-N—^NH; H 91a
166 B0C'NH
О nA.
Η
167
ТЧЖ _______ h2n
ДХМ
О nA.
H Ac% OAc op '-а^-.Доас
HN
Ac ноос
Н >
ΟΒΖ^Ν СОон
169 СООН
HBTU DIEA Д 1.1 TA
168
170
Η
Ν
HN' о
N'^·
H
Pd(0H;-/C. Η;
MeOH/EtOAc ηςν
171
AcO OAc Л4^У-ОАс HN-Wc
HN'
- 128 031393
- 129 031393
Соединение 169 имеется в продаже. Соединение 172 получили добавлением бензил(перфторфенил)глутарата к соединению 171. Бензил(перфторфенил)глутарат получили добавлением PFP-ТФК и DIEA к 5-(бензилокси)-5-оксопентановой кислоте в ДМФА. Олигомерное соединение 175, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-12, получили из соединения 174 по общим способам, представленным в примере 46. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-12 (GalNAc3-12a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-. Структура GalNAc3-12 (GalNAc3-12a-CM-) представлена ниже
- 130 031393
Пример 62. Получение олигомерного соединения 180, содержащего GalNAc3-13
Соединение 176 получили по общему способу, представленному в примере 2. Олигомерное соединение 180, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-13, получили из соединения 177 по общим способам, представленным в примере 49. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc313 (GalNAc3-13a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения раз
- 131 031393 личных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-. Структура GalNAc3-13 (GalNAc3-13a-CM-) пред ставлена ниже
Пример 63. Получение олигомерного соединения 188, содержащего GalNAc3-14
Соединения 181 и 185 имеются в
продаже. Олигомерное соединение 188, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-14, получили из соединения 187 по общим способам, представленным в примере 46. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-14 (GalNAc3-14a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)A^^OXOH)-. Структура GalNAc3-14 (GalNAc3-14a-CM-) представлена ниже
- 132 031393
AcHN
Пример 64. Получение олигомерного соединения 197, содержащего GalNAc3-15
Соединение 189 имеется в продаже. Соединение 195 получили по общему способу, представленному в примере 31. Олигомерное соединение 197, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-15, получили из соединений 194 и 195, применив стандартные способы синтеза олигонуклеотидов. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-15 (GalNAc3-15a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-. Структура GalNAc3-15 (GalNAc3-15a-CM-) представлена ниже:
- 133 031393
NHAc
Пример 65. Дозозависимое исследование олигонуклеотидов, содержащих 5'-конъюгирующую группу (сравнение GalNAc3-3, 12, 13, 14 и 15), нацеленных на SRB-1, in vivo.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Неконъюгированный ISIS 353382 включили в качестве стандарта. Каждая из конъюгирующих групп GalNAc3 была присоединена к 5'-концу соответствующего олигонуклеотида при помощи расщепляемого фрагмента фосфодиэфир-связанного 2'-дезоксиаденозинового нуклеозида.
Таблица 41
Модифицированные ASO, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Конъюгат | SEQ ID NO. |
35338 2 | Ges CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTes Ces CesT esTe | нет | 28 |
66116 1 | GalNAc3-3ao’AdOGes CesTesTes CesAdSGdSTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds T mc mc T T les Ges Veslesle | GalNAc3-3 | 30 |
67114 4 | GalNAc3-12am m m m o’AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds m m Tes Ces CesTesTe | GalNAc3-12 | 30 |
67006 1 | GaINAc3-13ao’AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds T Ύ Ύ T T les Ces Ceslesle | GalNAc3-13 | 30 |
67126 1 | GalNAc3-14ao’AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds m m Tes Ces CesTesTe | GalNAc3-14 | 30 |
67126 2 | GalNAc3-15ao’AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds m m Tes Ces CesTesTe | GalNAc3-15 | 30 |
Заглавные буквы указывают азотистое основание для каждого нуклеозида, а mC означает 5метилцитозин. Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-D2'-дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатную межнуклеозидную связь(1А); о означает фосфодиэфирную межнуклеозидную связь(РО) и о' означает -O-R(=O)(OH)-. Конъюгирующие группы выделены жирным шрифтом.
Структура GalNAc3-3a показана ранее в примере 39. Структура GalNAc3-12a показана ранее в примере 61. Структура GalNAc3-13a показана ранее в примере 62. Структура GalNAc3-14a показана ранее в примере 63. Структура GalNAc3-15a показана ранее в примере 64.
Лечение.
Шести-восьминедельным мышам C57bl6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) один или два раза ввели подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 353382, 661161, 671144, 670061, 671261, 671262 или солевого раствора. Мыши, которым вводили дозу два раза, вторую дозу вводили через три дня после первой дозы. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в табл. 42, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB1 дозозависимым образом. Не наблюдали значительной разницы нокдауна мишени между животными, получавшими одну дозу, и животными, получавшими две дозы (см. ISIS 353382 в дозах 30 и 2x15 мг/кг; и ISIS 661161 в дозах 5 и 2x2,5 мг/кг). Антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие фосфодиэфирсвязанные конъюгаты GalNAc3-3, 12, 13, 14 и 15, демонстрируют существенное усиление эффективности по сравнению с неконъюгированным антисмысловым олигонуклеотидом (ISIS 335382).
- 134 031393 мРНК SRB-1 (% от солевого раствора)
Таблица 42
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК SRB-1 (% от солевого раствора) | ED50 (мг/кг) | Конъюгат |
Солевой раствор | н.д. | 100,0 | н.д. | н.д. |
353382 | 3 | 85,0 | 22,4 | нет |
10 | 69,2 | |||
30 | 34,2 | |||
2x15 | 36,0 | |||
661161 | 0,5 | 87,4 | 2,2 | GalNAc3-3 |
1,5 | 59,0 | |||
5 | 25,6 | |||
2x2,5 | 27,5 | |||
15 | 17,4 | |||
671144 | 0,5 | 101,2 | 3,4 | GalNAc3-12 |
1,5 | 76,1 | |||
5 | 32,0 | |||
15 | 17,6 | |||
670061 | 0,5 | 94,8 | 2,1 | GalNAc3-13 |
1,5 | 57,8 | |||
5 | 20,7 | |||
15 | 13,3 | |||
671261 | 0,5 | 110,7 | 4,1 | GalNAc3-14 |
1,5 | 81,9 | |||
5 | 39,8 | |||
15 | 14,1 | |||
671262 | 0,5 | 109,4 | 9,8 | GalNAc3-15 |
1,5 | 99,5 | |||
5 | 69,2 | |||
15 | 36,1 |
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, применяя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором (данные не показаны). Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в табл. 43.
Таблица 43
ISIS № | Доза (мг/кг) | ALT (ед./л) | AST (ед ./л) | Общий билирубин | АМК (мг/дл) | Конъюгат |
(мг/дл) | ||||||
Солевой раствор | н.д. | 28 | 60 | 0,1 | 39 | н.д. |
353382 | 3 | 30 | 77 | 0,2 | 36 | нет |
10 | 25 | 78 | 0,2 | 36 | ||
30 | 28 | 62 | 0,2 | 35 | ||
2х 15 | 22 | 59 | 0,2 | 33 | ||
661161 | 0,5 | 39 | 72 | 0,2 | 34 | GalNAc3-3 |
1,5 | 26 | 50 | 0,2 | 33 | ||
5 | 41 | 80 | 0,2 | 32 | ||
2x2,5 | 24 | 72 | 0,2 | 28 | ||
15 | 32 | 69 | 0,2 | 36 | ||
671144 | 0,5 | 25 | 39 | 0,2 | 34 | GalNAc312 |
1,5 | 26 | 55 | 0,2 | 28 | ||
5 | 48 | 82 | 0,2 | 34 | ||
15 | 23 | 46 | 0,2 | 32 | ||
670061 | 0,5 | 27 | 53 | 0,2 | 33 | GalNAc313 |
1,5 | 24 | 45 | 0,2 | 35 | ||
5 | 23 | 58 | ОД | 34 | ||
15 | 24 | 72 | ОД | 31 | ||
671261 | 0,5 | 69 | 99 | ОД | 33 | GalNAcs14 |
1,5 | 34 | 62 | о,1 | 33 | ||
5 | 43 | 73 | 0,1 | 32 | ||
15 | 32 | 53 | 0,2 | 30 | ||
671262 | 0,5 | 24 | 51 | 0,2 | 29 | GalNAc315 |
1,5 | 32 | 62 | ОД | 31 | ||
5 | 30 | 76 | 0,2 | 32 | ||
15 | 31 | 64 | 0,1 | 32 |
Пример 66. Влияние различных расщепляемых фрагментов на антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на SRB-1, содержащих кластер 5'-GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Каждая из конъюгирующих групп GalNAc3 была присоединена к 5'концу соответствующего олигонуклеотида при помощи фосфодиэфир-связанного нуклеозида (расщепляемый фрагмент (СМ)).
- 135 031393
Таблица 44
Модифицированные ASO, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID NO. |
66116 1 | GalNAc3-3a-0’Ad0Ge/nCeJeTesmCesAdsGdTds mCdAds TdsGdsAds CdsTdsTes Ces CesTesTe | GalNAc3-3a | Ad | 30 |
67069 9 | GalNAc3-3a- | GalNAc3-3a | Td | 33 |
o’TdoGes CeoTeoTeo CeoAdsGdsTds CdsAdsTds д у у τ τ clsSs Ss1ds1eo So 4s es e | ||||
67070 0 | GalNAc3-3a O’AeoGes CeoTeoTgo CeoAdsGdsTds CdsAdsTds GdsAds CdsTdsTeo Ceo CesTesTe | GalNAc3-3a | Ae | 30 |
67070 1 | GalNAc3-3ao’TeoGes CeoT oT o CeoAdsGdsTds CdsAdsTds GdsAdsmCdsTdsTomCeomCeTesT | GalNAc3-3a | Te | 33 |
67116 5 | GalNAc3-13ao’AdoGes CeoT oT o CeoAdsGdsTds CdsAdsTds GdsAdsmCdsTdsTomCeomCeTeTe | GalNAc3-13a | Ad | 30 |
Заглавные буквы указывают азотистое основание для каждого нуклеозида, а mC означает 5метилцитозин. Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-D2'-дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатную межнуклеозидную связь^); о означает фосфодиэфирную межнуклеозидную связь(РО) и о' означает -OT^OXOH)-. Конъюгирующие группы выделены жирным шрифтом.
Структура GalNAc3-3a показана ранее в примере 39. Структура GalNAc3-13a показана ранее в примере 62.
Лечение.
Шести-восьминедельным мышам C57bl6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, соединения ISIS 661161, 670699, 670700, 670701, 671165 или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в табл. 45, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB1 дозозависимым образом. Все антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие различные расщепляемые фрагменты, демонстрируют одинаковую эффективность.
Таблица 45 мРНК SRB-1 (% от солевого раствора)
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК SRB-1 (% от солевого раствора) | Кластер GalNAc3 | CM |
Солевой раствор | н.д. | 100,0 | н.д. | н.д. |
661161 | 0,5 | 87,8 | GalNAc3-3a | Ad |
1,5 | 61,3 | |||
5 | 33,8 | |||
15 | 14,0 | |||
670699 | 0,5 | 89,4 | GalNAc3-3a | Td |
1,5 | 59,4 | |||
5 | 31,3 | |||
15 | 17,1 | |||
670700 | 0,5 | 79,0 | GalNAc3-3a | Ae |
1,5 | 63,3 | |||
5 | 32,8 | |||
15 | 17,9 | |||
670701 | 0,5 | 79,1 | GalNAc3-3a | Te |
1,5 | 59,2 | |||
5 | 35,8 | |||
15 | 17,7 | |||
671165 | 0,5 | 76,4 | GalNAc3-13a | Ad |
1,5 | 43,2 | |||
5 | 22,6 | |||
15 | 10,0 |
- 136 031393
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, применяя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором (данные не показаны). Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в табл. 46.
Таблица 46
ISIS № | Доза (мг/кг) | ALT (ед./л) | AST (ед./л) | Общий билируб ин (мг/дл) | АМК (мг/дл) | Кластер GalNAc3 | CM |
Солевой раствор | н.д. | 24 | 64 | 0,2 | 31 | Н.д. | н.д. |
661161 | 0,5 | 25 | 64 | 0,2 | 31 | GalNAc3-3a | Ad |
1,5 | 24 | 50 | 0,2 | 32 | |||
5 | 26 | 55 | 0,2 | 28 | |||
15 | 27 | 52 | 0,2 | 31 | |||
670699 | 0,5 | 42 | 83 | 0,2 | 31 | GalNAc3-3a | Td |
1,5 | 33 | 58 | 0,2 | 32 | |||
5 | 26 | 70 | 0,2 | 29 | |||
15 | 25 | 67 | 0,2 | 29 | |||
670700 | 0,5 | 40 | 74 | 0,2 | 27 | GalNAc3-3a | Ae |
1,5 | 23 | 62 | 0,2 | 27 | |||
5 | 24 | 49 | 0,2 | 29 | |||
15 | 25 | 87 | 0,1 | 25 | |||
670701 | 0,5 | 30 | 77 | 0,2 | 27 | GalNAc3-3a | Te |
1,5 | 22 | 55 | 0,2 | 30 | |||
5 | 81 | 101 | 0,2 | 25 | |||
15 | 31 | 82 | 0,2 | 24 | |||
671165 | 0,5 | 44 | 84 | 0,2 | 26 | GalNAc313a | Ad |
1,5 | 47 | 71 | 0,1 | 24 | |||
5 | 33 | 91 | 0,2 | 26 | |||
15 | 33 | 56 | 0,2 | 29 |
Пример 67. Получение олигомерного соединения 199, содержащего GalNAc3-16
AcHN
1. Янтарный ангвдрид
DL1AP. ДХЭ
2. ДИ ФА. HBTU. DIEA PS-SS
АсО ОАс
н н 'Νγγ-·Νγ·0
но он
AcHN
Олигомерное соединение 199, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-16, получили по общим способам, представленным в примерах 7 и 9. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-16 (GalNAc3-16a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-. Структура GalNAc3-16 (GalNAc3-16a-CM-)
- 137 031393 представлена ниже
AcHN
Пример 68. Получение олигомерного соединения 200, содержащего GalNAc3-17
Олигомерное соединение 200, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-17, получили по общим способам, представленным в примере 46. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-17 (GalNAc3-17a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-. Структура GalNAc3-17 (GalNAc3-17a-CM-) представлена ниже:
Пример 69. Получение олигомерного соединения 201, содержащего GalNAc3-18.
Олигомерное соединение 201, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-18, получили по общим способам, представленным в примере 46. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-18 (GalNAc3-18a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-. Структура GalNAc3-18 (GalNAc3-18a-CM-) представлена ниже:
- 138 031393
Пример 70. Получение олигомерного соединения 204, содержащего GalNAc3-19
Олигомерное соединение 204, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-19, получили из соединения 64 по общим способам, представленным в примере 52. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-19 (GalNAc3-19a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-. Структура GalNAc3-19 (GalNAc3-19a-CM-) представлена ниже
- 139 031393
Пример 71. Получение олигомерного соединения 210, содержащего GalNAc3-20
Соединение 205 получили добавлением PFP-ТФК и DIEA к 6-(2,2,2-трифторацетамидо)гексановой кислоте в ацетонитриле, которую получили добавлением трифторуксусного ангидрида к 6аминогексановой кислоте. Реакционную смесь нагрели до 80°C, затем охладили до комнатной температуры. Олигомерное соединение 210, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-20, получили из соединения 208 по общим способам, представленным в примере 52. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-20 (GalNAc3-20a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-Р(=O)(OH)-. Структура GalNAc3-20 (GalNAc3-20a-CM-) представлена ниже
- 140 031393
Пример 72. Получение олигомерного соединения 215, содержащего GalNAc3-21
Соединение 211 имеется в продаже. Олигомерное соединение 215, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-21, получили из соединения 213 по общим способам, представленным в примере 52. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-21 (GalNAc3-21a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad₽(=O)(OH)-. Структура GalNAc3-21 (GalNAc3-21a-CM-) представлена ниже
- 141 031393
Пример 73. Получение олигомерного соединения 221, содержащего GalNAc3-22
F
211
ОН
216 s
он
ΌΗ
DMT-CI пиридин
217
DIEA ACN
KZCO3
MeOH ΗΣΟ
HaN
218
N'^·· s
OH
ODMTr
AcO x0,Ac
AcOVyk
NHAc
166
ODMTr
Тиофосфорилирование
219 s
он
OAc
Ac0X>~
I'lHAc
220 NC—
ДНК синтезатор водн NH?
О
ННАс
221
О
Ч СМ ]—[ Oligo ]
F
Соединение 220 получили из соединения 219, применив тетразолид диизопропиламмония. Олигомерное соединение 221, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-21, получили из соединения 220 по общему способу, представленному в примере 52. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-22 (GalNAc3-22a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой -P(=O)(OH)-Ad-P(=O)(OH)-. Структура GalNAc3-22 (GalNAc3-22a-CM-) представлена ниже
Пример 74. Влияние различных расщепляемых фрагментов на антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на SRB-1, содержащих конъюгат 5'-GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей. Каждая из конъюгирующих групп GalNAc3 была присоединена к 5' концу соответствующего олигонуклеотида.
- 142 031393
Таблица 47
Модифицированные ASO, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | C M | SEQ ID NO. |
35338 2 | Ges CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAds TdsGdsAds CdsTdsTes mcesmcesTesTe | Н.Д. | Н.Д | 28 |
66116 1 | GalNAc3-3a-0,Ad0Ges mCesTsTsmCeAdsGdsTds mCdAdsTds GdsAdsmCdsTdsTes mCesmCesTsT | GalNAc3-3a | Ad | 30 |
66690 4 | GaINAc3-3a-0,Ges mCesT sTesmCeAdsGdsTds mCdsAdsTds GdsAdsmCdsTdsTes mCesmCesT Te | GalNAc3-3a | PO | 28 |
67544 1 | GalNAc3-17a-0Ad0Ges mCesTsTesmCesAdsGdsTds mCdAdsTds GdsAds CdsTdsTes Y YLsT | GalNAc3-17a | Ad | 30 |
67544 2 | GalNAc3-18a-0Ad0Ges mCesTesTesmCesAdsGdsTdsmCdsAdsTds GdsAdsmCdsTdsTes mCesmCesT Te | GalNAc3-18a | Ad | 30 |
Во всех таблицах заглавные буквы указывают азотистое основание для каждого нуклеозида, а mC означает 5-метилцитозин. Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает ЗЮ-2'-дезоксирибонуклеозид; s означает тиофосфатную межнуклеозидную связь(1^); о означает фосфодиэфирную межнуклеозидную связь(РО) и о' означает -O-Р(=O)(OH)-. Конъюгирующие группы выделены жирным шрифтом.
Структура GalNAc3-3a показана ранее в примере 39. Структура GalNAc3-17a показана ранее в примере 68, а структура GalNAc3-18a показана ранее в примере 69.
Лечение.
Шести-восьминедельным мышам C57bl6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, олигонуклеотида, перечисленного в табл. 47, или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в табл. 48, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB1 дозозависимым образом. Антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, демонстрируют равные эффективности и являются значительно более эффективными, чем исходный олигонуклеотид, не имеющий конъюгата GalNAc.
Таблица 48 мРНК SRB-1 (% от солевого раствора)
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК SRB-1 (% от солевого раствора) | Кластер GalNAc3 | CM |
Солевой раствор | н.д. | 100,0 | Н.д. | н.д. |
353382 | 3 | 79,38 | Н.д. | Н.д. |
10 | 68,67 | |||
30 | 40,70 | |||
661161 | 0,5 | 79,18 | GalNAc3-3a | Ad |
1,5 | 75,96 | |||
5 | 30,53 | |||
15 | 12,52 | |||
666904 | 0,5 | 91,30 | GalNAc3-3a | PO |
1,5 | 57,88 | |||
5 | 21,22 | |||
15 | 16,49 | |||
675441 | 0,5 | 76,71 | GalNAc3-17a | Ad |
1,5 | 63,63 | |||
5 | 29,57 | |||
15 | 13,49 | |||
675442 | 0,5 | 95,03 | GalNAc3-18a | Ad |
1,5 | 60,06 | |||
5 | 31,04 | |||
15 | 19,40 |
Уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартат-аминотрансферазы (AST) в сыворотке измеряли относительно мышей, инъецированных солевым раствором, применяя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором (данные не показаны). Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в табл. 49.
- 143 031393
Таблица 49
ISIS № | Доза (мг/кг) | ALT (ед ./л) | AST (ед./л) | Общий билируб ин (мг/дл) | АМК (мг/дл) | Кластер GalNAc3 | CM |
Солевой раствор | н.д. | 26 | 59 | 0,16 | 42 | н.д. | н.д. |
353382 | 3 | 23 | 58 | 0,18 | 39 | н.д. | Н.д. |
10 | 28 | 58 | 0,16 | 43 | |||
30 | 20 | 48 | 0,12 | 34 | |||
661161 | 0,5 | 30 | 47 | 0,13 | 35 | GalNAc3-3a | Ad |
1,5 | 23 | 53 | 0,14 | 37 | |||
5 | 26 | 48 | 0,15 | 39 | |||
15 | 32 | 57 | 0,15 | 42 | |||
666904 | 0,5 | 24 | 73 | 0,13 | 36 | GalNAc3-3a | РО |
1,5 | 21 | 48 | 0,12 | 32 | |||
5 | 19 | 49 | 0,14 | 33 | |||
15 | 20 | 52 | 0,15 | 26 | |||
675441 | 0,5 | 42 | 148 | 0,21 | 36 | GalNAc317а | Ad |
1,5 | 60 | 95 | 0,16 | 34 | |||
5 | 27 | 75 | 0,14 | 37 | |||
15 | 24 | 61 | 0,14 | 36 | |||
675442 | 0,5 | 26 | 65 | 0,15 | 37 | GalNAc318а | Ad |
1,5 | 25 | 64 | 0,15 | 43 | |||
5 | 27 | 69 | 0,15 | 37 | |||
15 | 30 | 84 | 0,14 | 37 |
Пример 75. Фармакокинетический анализ олигонуклеотидов, содержащих 5'-конъюгирующую группу.
ФК ASO, представленных выше в табл. 41, 44 и 47, оценили с применением образцов печени, которые получили после выполнения способов лечения, описанных в примерах 65, 66 и 74. Образцы печени измельчили и экстрагировали по стандартным протоколам, и анализировали при помощи ИП-ВЭЖХ-МС вместе с внутренним стандартом. Суммарный уровень (мкг/г) всех метаболитов в ткани измерили интегрированием соответствующих УФ-пиков, а уровни в ткани ASO полной длины, не содержащих конъюгата (исходное, в данном случае Isis № 353382), измерили с применением подходящих ионэкстракционных хроматограмм (EIC).
Таблица 50
ФК анализ в печени
ISIS № | Доза (мг/кг) | Общий уровень в печени по УФ (мкг/г) | Уровень исходного ASO в печени по EIC (мкг/г) | Кластер GalNAc3 | CM |
353382 | 3 | 8,9 | 8,6 | н.д. | н.д. |
10 | 22,4 | 21,0 | |||
30 | 54,2 | 44,2 | |||
661161 | 5 | 32,4 | 20,7 | GalNAc3-3a | Ad |
15 | 63,2 | 44,1 | |||
671144 | 5 | 20,5 | 19,2 | GalNAc3-12a | Ad |
15 | 48,6 | 41,5 | |||
670061 | 5 | 31,6 | 28,0 | GalNAc3-13a | Ad |
15 | 67,6 | 55,5 | |||
671261 | 5 | 19,8 | 16,8 | GalNAc3-14a | Ad |
15 | 64,7 | 49,1 | |||
671262 | 5 | 18,5 | 7,4 | GalNAc3-15a | Ad |
15 | 52,3 | 24,2 | |||
670699 | 5 | 16,4 | 10,4 | GalNAc3-3a | Td |
15 | 31,5 | 22,5 | |||
670700 | 5 | 19,3 | 10,9 | GalNAc3-3a | Ae |
15 | 38,1 | 20,0 | |||
670701 | 5 | 21,8 | 8,8 | GalNAc3-3a | Te |
15 | 35,2 | 16,1 | |||
671165 | 5 | 27,1 | 26,5 | GalNAc3-13a | Ad |
15 | 48,3 | 44,3 | |||
666904 | 5 | 30,8 | 24,0 | GalNAc3-3a | PO |
15 | 52,6 | 37,6 | |||
675441 | 5 | 25,4 | 19,0 | GalNAc3-17a | Ad |
15 | 54,2 | 42,1 | |||
675442 | 5 | 22,2 | 20,7 | GalNAc3-18a | Ad |
15 | 39,6 | 29,0 |
Результаты, представленные выше в табл. 50, демонстрируют, что наблюдали более высокие уровни в печени олигонуклеотидов, содержащих конъюгирующую группу GalNAc3, чем исходного олигонуклеотида, не содержащего конъюгирующую группу GalNAc3 (ISIS 353382) через 72 ч после введения олигонуклеотида, особенно с учетом введения различных доз для олигонуклеотидов с группой конъюгата
- 144 031393
GalNAc3 и без нее. Кроме того, через 72 ч 40-98% каждого олигонуклеотида, содержащего конъюгирующую группу GalNAc3, было метаболизировано до исходного соединения, что указывает на то, что конъюгирующие группы GalNAc3 расщепляются в указанных олигонуклеотидах.
Пример 76. Получение олигомерного соединения 230, содержащего GalNAc3-23
1: Восстановление
2: Связывание с дв.л кислотным соединением
3: Pd/c
4; PFP-ΤΦΚ
Рс
ΗΣ ЕЮ-с МеОН
Соединение 222 имеется в продаже. 44,48 мл (0,33 моль) соединения 222 обрабатывали тозилхлоридом (25,39 г, 0,13 моль) в пиридине (500 мл) в течение 16 ч. Затем реакционную смесь выпарили до маслянистого вещества, растворили в EtOAc и промыли водой, насыщенным раствором NaHCO3, насыщенным солевым раствором и высушили над Na2SO4. Этилацетат концентрировали досуха и очистили колоночной хроматографией, элюировали EtOAc в гексанах (1:1), затем 10% метанола в CH2Cl2 с получением соединения 223 в виде бесцветного маслянистого вещества. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. 10 г (32,86 ммоль) 1-тозилтриэтиленгликоля (соединение 223) обрабатывали азидом натрия (10,68 г, 164,28 ммоль) в ДМСО (100 мл) при комнатной температуре в течение 17 ч. Затем реакционную смесь вылили в воду и экстрагировали EtOAc. Органический слой три раза промыли водой и высушили над Na2SO4. Органический слой концентрировали досуха с получением 5,3 г соединения 224 (92%). Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. 1-Азидотриэтиленгликоль (соединение 224, 5,53 г, 23,69 ммоль) и соединение 4 (6 г, 18,22 ммоль) обработали 4 А молекулярными ситами (5 г) и TMSOTf (1,65 мл, 9,11 ммоль) в дихлорметане (100 мл) под инертной атмосферой. Через
- 145 031393 ч реакционную смесь отфильтровали для удаления сит, а органический слой промыли насыщенным раствором NaHCO3, водой, насыщенным солевым раствором и высушили над Na2SO4. Органический слой концентрировали досуха и очистили колоночной хроматографией, элюировали градиентом от 2 до 4% метанола в дихлорметане с получением соединения 225. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались со структурой. Соединение 225 (11,9 г, 23,59 ммоль) гидрировали в EtOAc/метаноле (4:1, 250 мл) на катализаторе Перлмана. Через 8 ч катализатор удалили фильтрованием, а растворители удалили досуха с получением соединения 226. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались со структурой.
Для получения соединения 227 раствор нитрометантриспропионовой кислоты (4,17 г, 15,04 ммоль) и основание Хюнига (10,3 мл, 60,17 ммоль) в ДМФА (100 мл) по каплям обработали пентафтортрифторацетатом (9,05 мл, 52,65 ммоль). Через 30 мин реакционную смесь вылили в ледяную воду и экстрагировали EtOAc. Органический слой промыли водой, насыщенным солевым раствором и высушили над Na2SO4. Органический слой концентрировали досуха, а затем перекристаллизовали из гептана с получением соединения 227 в виде белого твердого вещества. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. Соединение 227 (1,5 г, 1,93 ммоль) и соединение 226 (3,7 г, 7,74 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в ацетонитриле (15 мл) в течение 2 ч. Затем реакционную смесь выпарили досуха и очистили колоночной хроматографией, элюируя градиентом от 2 до 10% метанола в дихлорметане, с получением соединения 228. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались со структурой. Соединение 228 (1,7 г, 1,02 ммоль) обработали никелем Ренея (около 2 г, влажный) в этаноле (100 мл) в атмосфере водорода. Через 12 ч катализатор удалили фильтрованием, а органический слой выпарили до твердого вещества, которое применили непосредственно на следующей стадии. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. Это твердое вещество (0,87 г, 0,53 ммоль) обработали бензилглутаровой кислотой (0,18 г, 0,8 ммоль), HBTU (0,3 г, 0,8 ммоль) и DIEA (273,7 мкл, 1,6 ммоль) в ДМФА (5 мл). Через 16 ч ДМФА удалили под пониженным давлением при 65°C до маслянистого вещества, и это маслянистое вещество растворили в дихлорметане. Органический слой промыли насыщенным раствором NaHCO3, насыщенным солевым раствором и высушили над Na2SO4. После выпаривания органического слоя соединение очистили колоночной хроматографией и элюировали градиентом от 2 до 20% метанола в дихлорметане с получением связанного продукта. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. С бензилового эфира сняли защиту на катализаторе Перлмана в атмосфере водорода в течение 1 ч. Затем катализатор удалили фильтрованием, а растворители удалили досуха с получением кислоты. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой. Эту кислоту (486 мг, 0,27 ммоль) растворили в сухом ДМФА (3 мл). Добавили пиридин (53,61 мкл, 0,66 ммоль) и продули реакционную смесь аргоном. К реакционной смеси медленно добавили пентафтортрифторацетат (46,39 мкл, 0,4 ммоль). Цвет реакционной смеси изменился с бледно-желтого на винный, и появился легкий дымок, который улетучился с потоком аргона. Реакционную смесь оставили перемешиваться при комнатной температуре на 1 ч (завершение реакции подтвердили по ЖХМС). Растворитель удалили под пониженным давлением (ротационный испаритель) при 70°C. Остаток разбавили ДХМ и промыли 1н. NaHSO4, насыщенным солевым раствором, насыщенным раствором бикарбоната натрия и снова насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над Na2SO4, отфильтровали и концентрировали досуха с получением 225 мг соединения 229 в виде хрупкой желтой пены. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались с указанной структурой.
Олигомерное соединение 230, содержащее конъюгирующую группу GalNAc3-23, получили из соединения 229 по общим способам, представленным в примере 46. Кластерная часть GalNAc3 конъюгирующей группы GalNAc3-23 (GalNAc3-23a) может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом для получения различных конъюгирующих групп. Структура GalNAc3-23 (GalNAc3-23a-CM) представлена ниже
NHAc
Пример 77. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на SRB-1, содержащих конъюгат GalNAc3
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей.
- 146 031393
Таблица 51
Модифицированные ASO, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAci | CM | SEQ ID NO |
66116 1 | GalNAc3-3ao’A(ioGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTds GdsAds CdsTdsTes Ces CesTesTe | GalNAc3-3a | Ad | 30 |
66690 4 | GalNAe3-3a-0,Ges mCesTesTesmCesAdsGdsTds mCdAdTds GdsAdsmCdSTdsTes mCesmCesTeTe | GalNAc3-3a | PO | 28 |
67350 2 | GalNAc3-10ao’AdoGes CeoTeoTeo i0AdsGdsTds CdsAdsTds GdsAds is^sio io ^es^es^e | GalNAc3-10a | Ad | 30 |
67784 4 | GalNAc3-9ao’AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTds GdsAds CdsTdsTes Ces CesTesTe | GalNAc3-9a | Ad | 30 |
67784 3 | GalNAc3-23ao’AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTds GdsAds CdsTdsTes Ces CesTesTe | GalNAc3-23a | Ad | 30 |
65586 1 | GesmCesT sTesmqsAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAdsmCdSTdsT s is is^es^eoAdo’-GalNAc3-la | GalNAc3-la | Ad | 29 |
67784 1 | Ges isTesTes isAdsGdsis ^dsAds^dsGdsAds ^ds^ds^e m m s is Ges^eskoAdo’-GalNAC3-19a | GalNAc3-19a | Ad | 29 |
67784 2 | Ges isisis isAdsGdsis ^dsAds^ds GdsAdsmisTdsTesmis misTesTeoAdo,-GalNAC3-20a | GalNAc3-20a | Ad | 29 |
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9, GalNAc3-3a показана в примере 39, GalNAc3-9a показана в примере 52, GalNAc3-10a показана в примере 46, GalNAc3-19a показана в примере 70, GalNAc3-20a показана в примере 71 и GalNAc3-23a показана в примере 76.
Лечение.
Шести-восьминедельным мышам C57bl6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, олигонуклеотида, перечисленного в табл. 51, или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в табл. 52, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB1 дозозависимым образом.
- 147 031393
Таблица 52 мРНК SRB-1 (% от солевого, раствора)
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК SRB-1 (% от солевого раствора) | Кластер GalNAc3 | CM |
Солевой раствор | н.д. | 100,0 | н.д. | н.д. |
661161 | 0,5 | 89,18 | GalNAc3-3a | Ad |
1,5 | 77,02 | |||
5 | 29,10 | |||
15 | 12,64 | |||
666904 | 0,5 | 93,11 | GalNAc3-3a | PO |
1,5 | 55,85 | |||
5 | 21,29 | |||
15 | 13,43 | |||
673502 | 0,5 | 77,75 | GalNAc3-10a | Ad |
1,5 | 41,05 | |||
5 | 19,27 | |||
15 | 14,41 | |||
677844 | 0,5 | 87,65 | GalNAc3-9a | Ad |
1,5 | 93,04 | |||
5 | 40,77 | |||
15 | 16,95 | |||
677843 | 0,5 | 102,28 | GalNAc3-23a | Ad |
1,5 | 70,51 | |||
5 | 30,68 | |||
15 | 13,26 | |||
655861 | 0,5 | 79,72 | GalNAc3-la | Ad |
1,5 | 55,48 | |||
5 | 26,99 | |||
15 | 17,58 | |||
677841 | 0,5 | 67,43 | GalNAc3-19a | Ad |
1,5 | 45,13 | |||
5 | 27,02 | |||
15 | 12,41 | |||
677842 | 0,5 | 64,13 | GalNAc3-20a | Ad |
1,5 | 53,56 | |||
5 | 20,47 | |||
15 | 10,23 |
Измерили также уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартатаминотрансферазы (AST) в сыворотке, применяя стандартные протоколы. Оценили также общий билирубин и азот мочевины крови (АМК). Проверили изменение массы тела, которое существенно не отличалось от группы с солевым раствором (данные не показаны). Значения ALT, AST, общего билирубина и АМК представлены ниже в табл. 53.
- 148 031393
Таблица 53
ISIS № | Доза (мг/кг) | ALT (ед./л) | AST (ед./л) | Общий билируб ин (мг/дл) | АМК (мг/дл) | Кластер GalNAc3 | CM |
Солевой раствор | н.д. | 21 | 45 | 0,13 | 34 | н.д. | н.д. |
661161 | 0,5 | 28 | 51 | 0,14 | 39 | GalNAc3-3a | Ad |
1,5 | 23 | 42 | 0,13 | 39 | |||
5 | 22 | 59 | 0,13 | 37 | |||
15 | 21 | 56 | 0,15 | 35 | |||
666904 | 0,5 | 24 | 56 | 0,14 | 37 | GalNAc3-3a | PO |
1,5 | 26 | 68 | 0,15 | 35 | |||
5 | 23 | 77 | 0,14 | 34 | |||
15 | 24 | 60 | 0,13 | 35 | |||
673502 | 0,5 | 24 | 59 | 0,16 | 34 | GalNAcs10а | Ad |
1,5 | 20 | 46 | 0,17 | 32 | |||
5 | 24 | 45 | 0,12 | 31 | |||
15 | 24 | 47 | 0,13 | 34 | |||
677844 | 0,5 | 25 | 61 | 0,14 | 37 | GalNAc3-9a | Ad |
1,5 | 23 | 64 | 0,17 | 33 | |||
5 | 25 | 58 | 0,13 | 35 | |||
15 | 22 | 65 | 0,14 | 34 | |||
677843 | 0,5 | 53 | 53 | 0,13 | 35 | GalNAc323a | Ad |
1,5 | 25 | 54 | 0,13 | 34 | |||
5 | 21 | 60 | 0,15 | 34 | |||
15 | 22 | 43 | 0,12 | 38 | |||
655861 | 0,5 | 21 | 48 | 0,15 | 33 | GalNAc3-la | Ad |
1,5 | 28 | 54 | 0,12 | 35 | |||
5 | 22 | 60 | 0,13 | 36 | |||
15 | 21 | 55 | 0,17 | 30 | |||
677841 | 0,5 | 32 | 54 | 0,13 | 34 | GalNAc319a | Ad |
1,5 | 24 | 56 | 0,14 | 34 | |||
5 | 23 | 92 | 0,18 | 31 | |||
15 | 24 | 58 | 0,15 | 31 | |||
677842 | 0,5 | 23 | 61 | 0,15 | 35 | GalNAc320a | Ad |
1,5 | 24 | 57 | 0,14 | 34 | |||
5 | 41 | 62 | 0,15 | 35 | |||
15 | 24 | 37 | 0,14 | 32 |
Пример 78. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на ангиотензиноген, содержащих конъюгат GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования ангиотензиногена (AGT) у нормотензивных мышей Спрага-Доули.
Таблица 54
Модифицированные ASO, нацеленные на AGT
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID NO. |
55266 8 | Π1ζ~5 Α Π1ζ~5 гр f—y А гр гр гр гр гр f—y А EesAes CeslesCresAdsldslds-Lds-lds-ldsErds Eds Eds EdsA esGes GesAesTe | н.д. | н.д. | 34 |
66950 9 | CesAes CesTesGesAdsTdsTdsTdsTdsTdsGds Cds Cds CdsA esGes GesAesTeoA(io’-GalNAc3-la | GalNAc3-la | Ad | 35 |
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9.
Лечение.
Шестинедельным самцам крыс Спрага-Доули один раз в неделю вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, в целом три дозы олигонуклеотида, перечисленного в табл. 54, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Крыс умертвили через 72 ч после последней дозы. Уровни мРНК AGT в печени измерили при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни белка AGT в плазме измерили при помощи твердофазного иммуноферментного анализа для определения общего ангиотензиногена (кат. № JP27412, IBL International, Торонто, штат Онтарио) с разбавлением плазмы 1:20000. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент от уровней мРНК AGT в печени или от уровней белка AGT в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу с PBS.
Как показано в табл. 55, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК AGT в печени и уровни белка в плазме дозозависимым образом, и олигонуклеотид, содержащий конъюгат
- 149 031393
GalNAc, был значительно более эффективным, чем исходный олигонуклеотид, не содержащий конъюгата GalNAc.
Таблица 55
Уровни мРНК AGT в. печени и белка в плазме
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК AGT в печени (% PBS) | Белок AGT в плазме (% PBS) | Кластер GalNAc3 | СМ |
PBS | н.д. | 100 | 100 | н.д. | н.д. |
552668 | 3 | 95 | 122 | н.д. | Н.д. |
10 | 85 | 97 | |||
30 | 46 | 79 | |||
90 | 8 | И | |||
669509 | о,з | 95 | 70 | GalNAc3-la | Ad |
1 | 95 | 129 | |||
О 3 | 62 | 97 | |||
10 | 9 | 23 |
Измерили также уровни трансаминазы в печени, аланин-аминотрансферазы (ALT) и аспартатаминотрансферазы (AST) в плазме, а также массу тела в момент умерщвления, применяя стандартные протоколы. Результаты представлены ниже в табл. 56.
Таблица 56
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в табл. 57, испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
Таблица 57
Модифицированные ASO, нацеленные . на АРОС-III
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID NO. |
30480 1 | А /—ι П1/-1 гр гр Ш/-1 Т Т Р Т Hl/' П1/-1 а Ш/-1 τ' AesVJes Cesses les ^dsldslds^dslds 4s GdsAdsCrds Wsl esTes TesAesTe | н.д. | н.Д. | 20 |
64753 | А 111/-1 rp rp lll/^i rp rp z-i rp lll/^i Hl/—i Д /—i Ш/-1 -p AesCres Ceslesles Cdsldslds^dslds Ws Casl | GalNAc3-la | Ad | 21 |
5 | esTes TesAesTeoAdo’-GalNAc3-la | |||
66308 3 | GalNAc3-3aA A Z' 111/-1 rp rp tllz-1 rp rp z-1 rp til/—1 o’AdOAesCres Ceslesles Cds 1 ds 1 dsGls 1 ds Gds CdsAdsGds CdsTesTes TesAesTe | GalNAc3-3a | Ad | 36 |
67444 9 | GalNAc3-7aA A Hl/-i T T Ш/-1 rp rp rp Illyi о’АцоAesvres Ccs 1 es 1 es Cds 1 ds * ds^Jds -I ds Uds mCdsAdsGdsmCdSTesTesTesAesTe | GalNAc3-7a | Ad | 36 |
67445 0 | GalNAc3-10ao’AdoAesGes CesTesTes CdsTdsTdsGdsTds Cds mCdSAdsGdsmCdSTesTesTesAesTe | GalNAc3-10a | Ad | 36 |
67445 1 | GalNAc3-13aa A Hlyi T Τ' Hlyi T T /^ T Hlyi o’A(ioAesCres Ceslesles Cds 1 ds 1 dAJds 1 ds Ws mCdsAdsGdsmCdsTesTesTesAesTe | GalNAc3-13a | Ad | 36 |
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9, GalNAc3-3a показана в примере 39, GalNAc3-7a показана в примере 48, GalNAc3-10a показана в примере 46 и GalNAc3-13a показана в примере 62.
Лечение.
Шести-восьминедельным трансгенным мышам, экспрессирующим человеческий АРОС-III, ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в табл. 57, или PBS. Каждая экс
- 150 031393 периментальная группа состояла из 3 животных. Образцы крови брали до введения дозы для определения исходного значения, а также через 72 ч, 1, 2, 3, 4, 5 и 6 недель после введения дозы. Уровни триглицеридов и белка АРОС-III в плазме измерили так, как описано в примере 20. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент от уровней триглицеридов и АРОС-III в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованным и исходным значениям, и они демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгирующую группу GalNAc, обладают более продолжительным действием, чем исходный олигонуклеотид, не содержащий конъюгирующую группу (ISIS 304801) даже несмотря на то, что доза исходного соединения была в три раза выше, чем доза олигонуклеотидов, содержащих конъюгирующую группу GalNAc.
Таблица 58
Уровни триглицеридов и белка АРОС-III в плазме трансгенных мышей
ISIS № | Доза (мг/кг) | Временные точки(дни после | Триглицериды (% от исходного | Белок АРОС-Ш (% от | Кластер GalNAc3 | CM |
введения дозы) | значения) | исходного значения) | ||||
PBS | н.д. | 3 | 97 | 102 | н.д. | н.д. |
7 | 101 | 98 | ||||
14 | 108 | 98 | ||||
21 | 107 | 107 | ||||
28 | 94 | 91 | ||||
35 | 88 | 90 | ||||
42 | 91 | 105 | ||||
304801 | 30 | 3 | 40 | 34 | н.д. | Н.Д. |
7 | 41 | 37 | ||||
14 | 50 | 57 | ||||
21 | 50 | 50 | ||||
28 | 57 | 73 | ||||
35 | 68 | 70 | ||||
42 | 75 | 93 | ||||
647535 | 10 | 3 | 36 | 37 | GalNAcs-la | Ad |
7 | 39 | 47 | ||||
14 | 40 | 45 | ||||
21 | 41 | 41 | ||||
28 | 42 | 62 | ||||
35 | 69 | 69 | ||||
42 | 85 | 102 | ||||
663083 | 10 | 3 | 24 | 18 | GalNAc3-3a | Ad |
7 | 28 | 23 | ||||
14 | 25 | 27 | ||||
21 | 28 | 28 | ||||
28 | 37 | 44 | ||||
35 | 55 | 57 | ||||
42 | 60 | 78 | ||||
674449 | 10 | 3 | 29 | 26 | GalNAc3-7a | Ad |
7 | 32 | 31 | ||||
14 | 38 | 41 | ||||
21 | 44 | 44 | ||||
28 | 53 | 63 | ||||
35 | 69 | 77 | ||||
42 | 78 | 99 | ||||
674450 | 10 | 3 | 33 | 30 | GalNAc310a | Ad |
7 | 35 | 34 | ||||
14 | 31 | 34 | ||||
21 | 44 | 44 | ||||
28 | 56 | 61 | ||||
35 | 68 | 70 | ||||
42 | 83 | 95 | ||||
674451 | 10 | 3 | 35 | 33 | GalNAc313a | Ad |
7 | 24 | 32 | ||||
14 | 40 | 34 | ||||
21 | 48 | 48 | ||||
28 | 54 | 67 | ||||
35 | 65 | 75 | ||||
42 | 74 | 97 |
Пример 80. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на альфа-1 антитрипсин (А1АТ), содержащих конъюгат GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в табл. 59, испытали в исследовании дозозависимого инги
- 151 031393 бирования A1AT у мышей.
Таблица 59
Модифицированные ASO, нацеленные на А1АТ
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID NO. |
476366 | Aes Ces Ces CesAesAdsTdsTds CdsAdsGdsAdsAdsGdsGdsAesAgS GCSGCSAC | Н.Д. | Н.Д. | 37 |
656326 | Aes mCesmCesmCesAesAdsTdsTdsmCdsAdsGdsAdsAdsGdsGdsAesAes GesGes Aeo Ad0’-GalNAc3-1 a | GalNAcsla | Ad | 38 |
678381 | GalNAc3-3aoAdoAes mCesmCesmCesAesAdsTdsTdsmCdsAdsGdsAds AdsGdsGds Aes Aes GesGesAg | GalNAc33a | Ad | 39 |
678382 | GalNAc3-7ao’AdoAes Ces Ces CesAesAdsTdsTds CdsAdsGdsAds AdsGdsGdsAesAgS GgSGgSAe | GalNAc37a | Ad | 39 |
678383 | GalNAc3-10a-o’AdoAeS mCeSmCeSmCeSAgSAdsTdsTdsmCdsAdsGds ^ds^dsG(JsG(jsAcs^cs GesGesAe | GalNAc310a | Ad | 39 |
678384 | GalNAc3-13a-0’Ad0AeS mCeS mCeSmCesAeSAdsTdsTds mCdsAdsGds AdsAdsGdsGdsAesAgS GgSGgSAe | GalNAc313a | Ad | 39 |
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9, GalNAc3-3a показана в примере 39, GalNAc3-7a показана в примере 48, GalNAc3-10a показана в примере 46 и GalNAc3-13a показана в примере 62.
Лечение.
Шестинедельным самцам мышей C57BL/6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) один раз в неделю вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, в целом три дозы олигонуклеотида, перечисленного в табл. 59, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения. Уровни мРНК A1AT в печени определили при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RTBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни белка А1АТ в плазме определили при помощи твердофазного иммуноферментного анализа для определения мышиного альфа 1антитрипсина (кат. № 41-A1AMS-E01, Alpco, Салем, штат Нью-Гэмпшир). Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК А1 АТ в печени и белка в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу с PBS.
Как показано в табл. 60, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК А1 АТ в печени и уровни белка А1 АТ в плазме дозозависимым образом. Олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были значительно более эффективными, чем исходное соединение (ISIS 476366).
Таблица 60
Уровни мРНК А1АТ в печени и белка в плазме
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК Al АТ в печени (% PBS) | Белок Al АТ в плазме (% PBS) | Кластер GalNAc3 | CM |
PBS | н.д. | 100 | 100 | н.д. | н.д. |
476366 | 5 | 86 | 78 | н.д. | Н.Д. |
15 | 73 | 61 | |||
45 | 30 | 38 | |||
656326 | 0,6 | 99 | 90 | GalNAc3-la | Ad |
2 | 61 | 70 | |||
6 | 15 | 30 | |||
18 | 6 | 10 | |||
678381 | 0,6 | 105 | 90 | GalNAc3-3a | Ad |
2 | 53 | 60 | |||
6 | 16 | 20 | |||
18 | 7 | 13 | |||
678382 | 0,6 | 90 | 79 | GalNAc3-7a | Ad |
2 | 49 | 57 | |||
6 | 21 | 27 | |||
18 | 8 | И | |||
678383 | 0,6 | 94 | 84 | GalNAc3-10a | Ad |
2 | 44 | 53 | |||
6 | 13 | 24 | |||
18 | 6 | 10 | |||
678384 | 0,6 | 106 | 91 | GalNAc3-13a | Ad |
2 | 65 | 59 | |||
6 | 26 | 31 | |||
18 | И | 15 |
Во время умерщвления измерили уровни трансаминазы в печени и АМК в плазме по стандартным протоколам. Измерили также массы тела и массы органов. Результаты представлены ниже в табл. 61.
- 152 031393
Масса тела представлена как % относительно исходного значения. Массы органов представлены как % от массы тела относительно контрольной группы с PBS.
Таблица 61
ISIS № | Доза (мг/кг) | ALT (ед./ л) | AST (ед./ л) | АМК (мг/дл) | Масса тела(% от исходного значения) | Масса печени (% отн. массы тела) | Масса почек (% отн. массы тела) | Масса селезенки (% отн. массы тела) |
PBS | н.д. | 25 | 51 | 37 | 119 | 100 | 100 | 100 |
47636 6 | 5 | 34 | 68 | 35 | 116 | 91 | 98 | 106 |
15 | 37 | 74 | 30 | 122 | 92 | 101 | 128 | |
45 | 30 | 47 | 31 | 118 | 99 | 108 | 123 | |
65632 6 | 0,6 | 29 | 57 | 40 | 123 | 100 | 103 | 119 |
2 | 36 | 75 | 39 | 114 | 98 | 111 | 106 | |
6 | 32 | 67 | 39 | 125 | 99 | 97 | 122 | |
18 | 46 | 77 | 36 | 116 | 102 | 109 | 101 | |
67838 1 | 0,6 | 26 | 57 | 32 | 117 | 93 | 109 | 110 |
2 | 26 | 52 | 33 | 121 | 96 | 106 | 125 | |
6 | 40 | 78 | 32 | 124 | 92 | 106 | 126 | |
18 | 31 | 54 | 28 | 118 | 94 | 103 | 120 | |
67838 2 | 0,6 | 26 | 42 | 35 | 114 | 100 | 103 | 103 |
2 | 25 | 50 | 31 | 117 | 91 | 104 | 117 | |
6 | 30 | 79 | 29 | 117 | 89 | 102 | 107 | |
18 | 65 | 112 | 31 | 120 | 89 | 104 | ИЗ | |
67838 3 | 0,6 | 30 | 67 | 38 | 121 | 91 | 100 | 123 |
2 | 33 | 53 | 33 | 118 | 98 | 102 | 121 | |
6 | 32 | 63 | 32 | 117 | 97 | 105 | 105 | |
18 | 36 | 68 | 31 | 118 | 99 | 103 | 108 | |
67838 4 | 0,6 | 36 | 63 | 31 | 118 | 98 | 103 | 98 |
2 | 32 | 61 | 32 | 119 | 93 | 102 | 114 | |
6 | 34 | 69 | 34 | 122 | 100 | 100 | 96 | |
18 | 28 | 54 | 30 | 117 | 98 | 101 | 104 |
Пример 81. Продолжительность действия in vivo олигонуклеотидов, нацеленных на А1АТ, содержащих кластер GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 59, испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
Лечение.
Шестинедельным самцам мышей C57BL/6 ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в табл. 59, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Образцы крови брали за день до введения дозы для определения исходного значения, а также на 5, 12, 19 и 25 день после введения дозы. Уровни белка А1АТ в плазме измерили при помощи твердофазного иммуноферментного анализа (см. пример 80). Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней белка А1 АТ в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были более эффективными и имели более продолжительное действие, чем исходное соединение без конъюгата GalNAc (ISIS 476366). Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие 5'-GalNAc конъюгат (ISIS 678381, 678382, 678383 и 678384), были, в целом, еще более эффективными с еще более продолжительным действием, чем олигонуклеотид, содержащий 3'-GalNAc конъюгат (ISIS 656326).
- 153 031393
Таблица 62
Уровни белка А1АТ в плазме мышей
ISIS № | Доза (мг/кг) | Временные точки(дни после введения дозы) | А1АТ (% от исходного значения) | Кластер GalNAc3 | CM |
PBS | н.д. | 5 | 93 | н.д. | н.д. |
12 | 93 | ||||
19 | 90 | ||||
25 | 97 | ||||
476366 | 100 | 5 | 38 | н.д. | Н.Д. |
12 | 46 | ||||
19 | 62 | ||||
25 | 77 | ||||
656326 | 18 | 5 | 33 | GalNAc3-la | Ad |
12 | 36 | ||||
19 | 51 | ||||
25 | 72 | ||||
678381 | 18 | 5 | 21 | GalNAc3-3a | Ad |
12 | 21 | ||||
19 | 35 | ||||
25 | 48 | ||||
678382 | 18 | 5 | 21 | GalNAc3-7a | Ad |
12 | 21 | ||||
19 | 39 | ||||
25 | 60 | ||||
678383 | 18 | 5 | 24 | GalNAc310a | Ad |
12 | 21 | ||||
19 | 45 | ||||
25 | 73 | ||||
678384 | 18 | 5 | 29 | GalNAc313a | Ad |
12 | 34 | ||||
19 | 57 | ||||
25 | 76 |
Пример 82. Антисмысловое ингибирование in vitro под действием олигонуклеотидов, нацеленных на SRB-1, содержащих конъюгат GalNAc3.
Первичные гепатоциты печени мышей высеивали в 96-луночные планшеты при 15000 клеток на лунку за 2 ч до обработки. Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 63, добавили в концентрации 2, 10, 50 или 250 нМ в среде Уильяма Е, и инкубировали клетки в течение ночи при 37°C в 5% CO2. Клетки лизировали через 16 ч после добавления олигонуклеотида, а общую РНК очистили при помощи RNease 3000 BioRobot (Qiagen). Уровни мРНК SRB-1 определили при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Значения IC50 определили при помощи программы Prism 4 (GraphPad). Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие множество различных конъюгирующих групп GalNAc и множество различных расщепляемых фрагментов, являются значительно более эффективными в in vitro эксперименте свободного поглощения, чем исходные олигонуклеотиды, не содержащие конъюгирующую группу GalNAc (ISIS 353382 и 666841).
Таблица 63
Ингибирование экспрессии SRB-1 in vitro
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Свя ЗИ | Кластер GalNAc | CM | IC5O (нМ) | SEQ ID NO. |
35338 2 | Ges CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds m mm CdsTdsTes Ces CesTesTe | PS | н.д. | н.д. | 250 | 28 |
65586 1 | Ges CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdSTdSGdsAds mCdsTdsTesmCesmCesTesTeoAdo,-GalNAc3-la | PS | GalNAc 3-la | Ad | 40 | 29 |
66116 1 | GalNAc3-3a-O’AdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds Tes Ces CesTesTe | PS | GalNAc з-За | Ad | 40 | 30 |
- 154 031393
66116 2 | m m GalNAc3-3a-o’A(ioGes СеоТеоТео CeoAdSGdsTds m m m m CdsAdsTdsGdsAds CdsTds Teo Ceo CesTesTe | РО/ PS | GalNAc 3-3a | Ad | 8 | 30 |
66407 8 | GesmCesTesTesmCesAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds mCdsTdsTesmCesmCesTesTeoAdo,-GalNAc3-9a | PS | GalNAc з-9а | Ad | 20 | 29 |
66500 1 | GalNAc3-8a-O’AdOGes CesTesTes CesAdSGdsTds ΙΪ1ζ~ι л Τ' Λ ΙΪ1/~ι Т Т Hl/'' Ш/'ч т-’ гр GdsAds 1 dskJdsAds Cds-ldsles Ges Ceslesle | PS | GalNAc з-8а | Ad | 70 | 30 |
66622 4 | GalNAc3-5a-O’AdOGes CesTesTes CesAdSGdsTds 111/^ Λ T Л”5 Л ΙΪ1ζ-ι T T lllz-^ rp rp GdsAds J- dsGrdsAds Gds-Lds-*-es Ges Cesles-Le | PS | GalNAc 3-5a | Ad | 80 | 30 |
66684 1 | mm m Ges СеоТеоТео CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds m mm CdsTds Teo Ceo CesTesTe | РО/ PS | Н.Д. | Н.Д. | >250 | 28 |
66688 1 | GalNAC3-10a-o’AdoGesmCesTesTeSmCesAdsGdsTds πυ л t л”' л mp rp rp m^ m#^ rp rp GdsAdsidsGrdsAds Gdsids^es Ges Ceslesle | PS | GalNAc з-Юа | Ad | 30 | 30 |
66690 4 | GalNAc3-3a-0’Ges CesTesTes CesAdsGdsTds Cds AdsTdsGdsAds CdsTds Tes Ces CesTesTe | PS | GalNAc 3-3a | PO | 9 | 28 |
66692 4 | GalNAc3-3a-o’TdoGes CesTesTes CesAdsGdsTds l-dsrtds1 ds*JdsYs ^ds 1 ds -les C'es Yslesle | PS | GalNAc 3-3a | Td | 15 | 33 |
66696 1 | GalNAc3-6a-0’Ad0Ges CesTesTes CesAdsGdsTds m^ a t a mz~> rp rp m<i mp rp rp GdsAds 1 dsGrdsAds Gdsidsles Ges Geslesle | PS | GalNAc з-6а | Ad | 150 | 30 |
66698 1 | GalNAc3-7a-0,Ad0GesmCesTesTesmCesAdsGdsTds mz-i л t л”' л mp rp rp m^ m#^ rp rp GdsAds 1 dsGrdsAds Gds-lds^es Ges Ceslesle | PS | GalNAc 3-7a | Ad | 20 | 30 |
67006 1 | GalNAc3-13a-O’AdoGes CesTesTes CesAdSGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds Tes Ces CesTesTe | PS | GalNAc з-13а | Ad | 30 | 30 |
67069 9 | GalNAc3-3a-o,TdoGes mCeoToTomCeoAdsGdTds mCdsAdsTds GdAdsmCdsTdsTeomCeomCesTesTe | РО/ PS | GalNAc 3-3a | Td | 15 | 33 |
67070 0 | GaINAc3-3a-o,AeoG^CeoTeoTs mC^AdsGdTds CdsAdsTdsGdsAds ^ds^ds^eo Ceo CesTesT | РО/ PS | GalNAc з-За | Ae | 30 | 30 |
67070 1 | GalNAc3-3a-oTeoGes mCeoToTomCeoAdsGdTds “CdsAdsTds GdsAdsmCdsTdSTeomCeomCesTesTe | РО/ PS | GalNAc 3-3a | Te | 25 | 33 |
67114 4 | GalNAc3-12a-0’Ad0Ges CesTesTes CesAdsGdsTds m m m m l-ds-%sIdsCJds^ds Wslds les Vs C-cs 1 Cs1 c | PS | GalNAc 3-12a | Ad | 40 | 30 |
67116 5 | GalNAc3-13ao’AdoGes CeoTeoTeo CeoAdsGdsTds CdsAdsTds GdsAdsmCdsTdsTeomcJCesT T | РО/ PS | GalNAc з-13а | Ad | 8 | 30 |
67126 1 | m m GalNAc3-14a-0’Ad0Ges CesTesTes CesAdsGdsTds m m m m CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTes Ces CesTesTe | PS | GalNAc з-14а | Ad | >250 | 30 |
67126 2 | m m GalNAc3-15a-0’Ad0Ges CesTesTes CesAdsGdsTds m m m m C-dsAds 1 dsCJdsAds C-ds 1 ds les cs CcS 1 Cs1 c | PS | GalNAc 3-15a | Ad | >250 | 30 |
67350 1 | m m GalNAc3-7a-0’Ad0Ges СеоТеоТео CeoAdsGdsTds m m m m CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTeo Ceo CesTesTe | РО/ PS | GalNAc 3-7a | Ad | 30 | 30 |
67350 2 | GalNAc3-10ao’AdoGes СеоТеоТео CeoAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTds Teo Ceo CesTesTe | РО/ PS | GalNAc З-Юа | Ad | 8 | 30 |
67544 1 | m m GalNAC3-17a-0’Ad0Ges CesTesTes CesAdsGdsTds | PS | GalNAc з-17а | Ad | 30 | 30 |
m m m m CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTes Ces CesTesTe | ||||||
67544 2 | GalNAc3-18a-0’Ad0Ges CesTesTes CesAdsGdsTds m m m m CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTes Ces CesTesTe | PS | GalNAc 3-18a | Ad | 20 | 30 |
67784 1 | GesmCesTesTeSmCesAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds mCdsTdsTesmCesmCesTesTe0Ad0,-GalNAc3-19a | PS | GalNAc 3-19a | Ad | 40 | 29 |
67784 2 | Ges CesTesTes CesAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds mCdsTdsTesmCesmCesTesTeOAdo,-GalNAc3-20a | PS | GalNAc 3-20a | Ad | 30 | 29 |
67784 3 | GalNAc3-23a-0’Ad0Ges CesTesTes CesAdsGdsTds m m m m CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsTes Ces CesTesTe | PS | GalNAc 3-23a | Ad | 40 | 30 |
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9, GalNAc3-3a показана в примере 39, GalNAc3-5a показана в примере 49, GalNAc3-6a показана в примере 51, GalNAc3-7a показана в примере 48, GalNAc3-8a показана в примере 47, GalNAc3-9a показана в примере 52, GalNAc3-10a показана в примере 46, GalNAc312a показана в примере 61, GalNAc3-13a показана в примере 62, GalNAc3-14a показана в примере 63, GalNAc3-15a показана в примере 64, GalNAc3-17a показана в примере 68, GalNAc3-18a показана в примере 69, GalNAc3-19a показана в примере 70, GalNAc3-20a показана в примере 71 и GalNAc3-23a показана в примере 76.
- 155 031393
Пример 83. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на фактор XI, содержащих кластер GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в табл. 64, испытали в исследовании дозозависимого ингибирования фактора XI у мышей.
Таблица 64 Модифицированные олигонуклеотиды, нацеленные на фактор XI
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc | CM | SEQ ID NO. |
40407 1 | TesGesGesTesAesAdsTds mCdsmCdsAds mCdsTdsTdsTdsmCdsAesG es AesGesGe | Н.Д. | Н.Д. | 31 |
65617 3 | TesGeoGeoTeoAeoAdsTds mCdsmCdsAds mCdsTdsTdsTdsmCdsAeo Geo AesGesGeoAdoi-GalNAc3-la | GalNAc3-la | Ad | 32 |
66308 6 | GalNAc3-3a oAdoTesGeoGeoTeoAeoAdsTds mCdsmCdsAds mCdsTds TdsTds CdsAeoGeoAesGesGe | GalNAc3-3a | Ad | 40 |
67834 7 | GalNAc3-7ao’AdoTesGeoGeoTeoAeOAdsTds Cds CdsAds CdsTds TdsTds mCdsAeoGeoAesGesGe | GalNAc3-7a | Ad | 40 |
67834 8 | GalNAc3-10ao’AdoTesGeoGeoTeoAeoAdsTds Cds CdsAds Cds TdsTdsTds CdsAeoGeoAesGesGe | GalNAc310a | Ad | 40 |
67834 9 | GalNAc3-13ao’AdoTesGeoGeoTeoAeoAdsTds Cds CdsAds Cds | GalNAc313a | Ad | 40 |
TdsTdsTds CdsAeoGeoAesGesGe |
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9, GalNAc3-3a показана в примере 39, GalNAc3-7a показана в примере 48, GalNAc3-10a показана в примере 46 и GalNAc3-13a показана в примере 62.
Лечение.
Шести-восьминедельным мышам один раз в неделю вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, в целом три дозы олигонуклеотида, перечисленного ниже, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последней дозы. Уровни мРНК фактора XI в печени измерили при помощи ПЦР в реальном времени и нормализовали к циклофилину по стандартным протоколам. Измерили также трансаминазы в печени, АМК и билирубин. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент для каждой экспериментальной группы, нормализованный к контролю с PBS.
Как показано в табл. 65, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК фактора XI в печени дозозависимым образом. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были более эффективными, чем исходное соединение без конъюгата GalNAc (ISIS 404071). Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие 5'-GalNAc конъюгат (ISIS 663086, 678347, 678348 и 678349), были еще более эффективными, чем олигонуклеотид, содержащий 3'-GalNAc конъюгат (ISIS 656173).
Таблица 65
Уровни мРНК фактора XI в печени, трансаминазы в печени, АМК и билирубина
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК фактора XI(% от PBS) | ALT (ед./л ) | AST (ед./л ) | АМК (мг/дл) | Билиру бин (мг/дл) | Кластер GalNAc3 | SEQ ID NO. |
PBS | н.д. | 100 | 63 | 70 | 21 | 0,18 | н.д. | н.д. |
40407 1 | 3 | 65 | 41 | 58 | 21 | 0,15 | н.д. | 31 |
10 | 33 | 49 | 53 | 23 | 0,15 | |||
30 | 17 | 43 | 57 | 22 | 0,14 | |||
65617 3 | 0,7 | 43 | 90 | 89 | 21 | 0,16 | GalNAc3-la | 32 |
2 | 9 | 36 | 58 | 26 | 0,17 | |||
6 | 3 | 50 | 63 | 25 | 0,15 | |||
66308 6 | 0,7 | 33 | 91 | 169 | 25 | 0,16 | GalNAc3-3a | 40 |
2 | 7 | 38 | 55 | 21 | 0,16 | |||
6 | 1 | 34 | 40 | 23 | 0,14 | |||
67834 7 | 0,7 | 35 | 28 | 49 | 20 | 0,14 | GalNAc3-7a | 40 |
2 | 10 | 180 | 149 | 21 | 0,18 | |||
6 | 1 | 44 | 76 | 19 | 0,15 | |||
67834 | 0,7 | 39 | 43 | 54 | 21 | 0,16 | GalNAc3- | 40 |
8 | 2 | 5 | 38 | 55 | 22 | 0,17 | 10a | |
6 | 2 | 25 | 38 | 20 | 0,14 | |||
67834 9 | 0,7 | 34 | 39 | 46 | 20 | 0,16 | GalNAc313a | 40 |
2 | 8 | 43 | 63 | 21 | 0,14 | |||
6 | 2 | 28 | 41 | 20 | 0,14 |
- 156 031393
Пример 84. Продолжительность действия in vivo олигонуклеотидов, нацеленных на фактор XI, содержащих конъюгат GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 64, испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
Лечение.
Шести-восьминедельным мышам ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в табл. 64, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Образцы крови брали из хвостовой вены за день до введения дозы для определения исходного значения, а также на 3, 10 и 17 день после введения дозы. Уровни белка фактора XI в плазме определяли твердофазным иммуноферментным анализом, применяя иммобилизованные и биотинилированные детекторные антитела для фактора XI производства R & D Systems, Миннеаполис, штат Миннесота (кат. № AF2460 и № BAF2460 соответственно), а также реагент OptEIA, набор В (кат. № 550534, BD Biosciences, Сан-Хосе, штат Калифорния). Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней белка фактора XI в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были более эффективными и имели более продолжительное действие, чем исходное соединение без конъюгата GalNAc (ISIS 404071). Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие 5'-GalNAc конъюгат (ISIS 663086, 678347, 678348 и 678349), были еще более эффективными с еще более продолжительным действием, чем олигонуклеотид, содержащий 3'-GalNAc конъюгат (ISIS 656173).
Таблица 66
Уровни белка фактора XI в плазме мышей
ISIS № | Доза (мг/кг) | Временные точки(дни после введения дозы) | Фактор XI (% от исходного значения) | Кластер GalNAcs | CM | SEQ ID NO. |
PBS | н.д. | 3 | 123 | н.д. | н.д. | н.д. |
10 | 56 | |||||
17 | 100 | |||||
404071 | 30 | 3 | И | н.д. | Н.Д. | 31 |
10 | 47 | |||||
17 | 52 | |||||
656173 | 6 | 3 | 1 | GalNAcs-la | Ad | 32 |
10 | 3 | |||||
17 | 21 | |||||
663086 | 6 | 3 | 1 | GalNAc3-3a | Ad | 40 |
10 | 2 | |||||
17 | 9 | |||||
678347 | 6 | 3 | 1 | GalNAc3-7a | Ad | 40 |
10 | 1 | |||||
17 | 8 | |||||
678348 | 6 | 3 | 1 | GalNAc3-10a | Ad | 40 |
10 | 1 | |||||
17 | 6 | |||||
678349 | 6 | 3 | 1 | GalNAc3-13a | Ad | 40 |
10 | 1 | |||||
17 | 5 |
Пример 85. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на SRB-1, содержащих конъюгат GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 63, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей.
Лечение.
Шести-восьминедельным мышам C57BL/6 один раз в неделю вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, в целом три дозы олигонуклеотида, перечисленного в табл. 63, или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 48 ч после последнего введения для определения уровней мРНК SRB-1 в печени при помощи ГГЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 в печени для каждой экспериментальной группы, нормализованных к контрольному образцу, обработанному солевым раствором.
Как показано в табл. 67 и 68, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом.
- 157 031393
Таблица 67 мРНК SRB-1 в печени
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК SRB-1 (% от солевого раствора) | Кластер GalNAcs | CM |
Солевой раствор | н.д. | 100 | н.д. | н.д. |
655861 | ОД | 94 | GalNAc3-la | Ad |
о,з | 119 | |||
1 | 68 | |||
3 | 32 | |||
661161 | 0,1 | 120 | GalNAc3-3a | Ad |
0,3 | 107 | |||
1 | 68 | |||
3 | 26 | |||
666881 | 0,1 | 107 | GalNAc3-10a | Ad |
0,3 | 107 | |||
1 | 69 | |||
3 | 27 | |||
666981 | 0,1 | 120 | GalNAc3-7a | Ad |
0,3 | 103 | |||
1 | 54 | |||
3 | 21 | |||
670061 | 0,1 | 118 | GalNAc3-13a | Ad |
0,3 | 89 | |||
1 | 52 | |||
3 | 18 | |||
677842 | 0,1 | 119 | GalNAc3-20a | Ad |
0,3 | 96 | |||
1 | 65 | |||
3 | 23 |
Таблица 68 мРНК SRB-1 в печени
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК SRB-1 (% от солевого раствора) | Кластер GalNAc3 | CM |
661161 | ο,ι | 107 | GalNAc3-3a | Ad |
о,з | 95 | |||
1 | 53 | |||
3 | 18 | |||
677841 | 0,1 | 110 | GalNAc3-19a | Ad |
0,3 | 88 | |||
1 | 52 | |||
3 | 25 |
Измерили также уровни трансаминазы в печени, общего билирубина, АМК и массы тела по стандартным протоколам. Средние значения для каждой экспериментальной группы представлены ниже в табл. 69.
Таблица 69
ISIS № | Доза (мг/к г) | ALT (ед./ л) | AST (ед./л ) | Билиру бин (мг/дл) | АМК (мг/дл) | Масса тела (% от исходного значения) | Кластер GalNAc3 | CM |
Солевой раствор | Н.д. | 19 | 39 | 0,17 | 26 | 118 | н.д. | н.д. |
655861 | 0,1 | 25 | 47 | 0,17 | 27 | 114 | GalNAc3-la | Ad |
о,з | 29 | 56 | 0,15 | 27 | 118 | |||
1 | 20 | 32 | 0,14 | 24 | 112 | |||
3 | 27 | 54 | 0,14 | 24 | 115 | |||
661161 | ОД | 35 | 83 | 0,13 | 24 | ИЗ | GalNAc3-3a | Ad |
о,з | 42 | 61 | 0,15 | 23 | 117 | |||
1 | 34 | 60 | 0,18 | 22 | 116 | |||
3 | 29 | 52 | 0,13 | 25 | 117 | |||
666881 | 0,1 | 30 | 51 | 0,15 | 23 | 118 | GalNAc3-10a | Ad |
0,3 | 49 | 82 | 0,16 | 25 | 119 | |||
1 | 23 | 45 | 0,14 | 24 | 117 | |||
3 | 20 | 38 | 0,15 | 21 | 112 | |||
666981 | 0,1 | 21 | 41 | 0,14 | 22 | ИЗ | GalNAc3-7a | Ad |
0,3 | 29 | 49 | 0,16 | 24 | 112 | |||
1 | 19 | 34 | 0,15 | 22 | 111 | |||
3 | 77 | 78 | 0,18 | 25 | 115 | |||
670061 | 0,1 | 20 | 63 | 0,18 | 24 | 111 | GalNAc3-13a | Ad |
0,3 | 20 | 57 | 0,15 | 21 | 115 | |||
1 | 20 | 35 | 0,14 | 20 | 115 | |||
3 | 27 | 42 | 0,12 | 20 | 116 | |||
677842 | 0,1 | 20 | 38 | 0,17 | 24 | 114 | GalNAc3-20a | Ad |
0,3 | 31 | 46 | 0,17 | 21 | 117 | |||
1 | 22 | 34 | 0,15 | 21 | 119 | |||
3 | 41 | 57 | 0,14 | 23 | 118 |
- 158 031393
Пример 86. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на TTR, содержащих кластер GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в табл. 70, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования человеческого транстиретина (TTR) у трансгенных мышей, экспрессирующих человеческий TTR ген.
Лечение.
Восьминедельным TTR трансгенным мышам один раз в неделю в течение трех недель, в целом три дозы, вводили подкожную инъекцию олигонуклеотида и дозы, перечисленных в представленных ниже таблицах, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения. В течение эксперимента в различных временных точках брали образцы крови из хвостовой вены и измеряли уровни белка TTR в плазме, ALT и AST, которые представлены в табл. 72-74. После умерщвления животных измерили уровни ALT, AST и человеческого TTR в плазме, а также массы тела, массы органов и уровни мРНК человечкского TTR в печени. Уровни белка TTR измерили при помощи клинического анализатора (AU480, Beckman Coulter, штат Калифорния). ПЦР в реальном времени и реагент для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) применяли по стандартным протоколам для определения уровней мРНК человеческого TTR в печени. Результаты, показанные в табл. 71-74, представляют собой средние значения для каждой экспериментальной группы. Уровни мРНК представляют собой средние значения относительно среднего значения для PBS группы. Уровни белка в плазме представляют собой средние значения относительно среднего значения для PBS группы в исходном состоянии. Массы тела представляют собой среднее процентное изменение массы от исходного значения до умерщвления для каждой отдельной экспериментальной группы. Представленные массы органов нормализованы к массе тела животного, а затем представлена средняя нормализованная масса органов для каждой экспериментальной группы относительно средней нормализованной массы органов для PBS группы.
В табл. 71-74 BL означает исходное значения измерений, выполненных непосредственно перед введением первой дозы. Как показано в табл. 71 и 72, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни экспрессии TTR дозозависимым образом. Олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были более эффективными, чем исходное соединение без конъюгата GalNAc (ISIS 420915). Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc и смешанные PS/PO межнуклеозидные связи, были еще более эффективными, чем олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc и только PS связи.
Таблица 70
Олигонуклеотиды, нацеленные на человеческий TTR
Isis № | Последовательность от 5’ к 3’ | Связи | Кластер GalNAc | CM | SEQ ID NO. |
42091 5 | Tes CesTesTesGesGdsTdsldsAds CdsAdsTdsGdsAds Λ Δ Τ mC mC mC •rMs Aes i es v.cs v<Cs c | PS | Н.Д. | Н.Д. | 41 |
66026 1 | Tes CesTesTesGesGdsTdsTdsAds CdsAdsTdsGdsAds AdsAesTes mCesmCesmCeoAdo>-GalNAc3-la | PS | GalNAcs-la | Ad | 42 |
68288 3 | GalNAc3-3a. o’Tes CeoTeoTeoGeoGdsTdsTdsAds CdsAds TdsGdsAdsAdsAeoTeomCesmCesmCe | PS/PO | GalNAc3-3a | PO | 74 |
68288 4 | GalNAc3-7a. o’Tes CeOTeoTeoGeoGdsTdsTdsAds CdsAds TdsGdsAdsAdsAeoTeomCesmCesmCe | PS/PO | GalNAc3-7a | PO | 41 |
68288 5 | GalNAc3-10a. rp mp τ τ τ τ Λ nt/''5 o’1 es ±-co A eo1 co'Jco'Jds 1 ds 1 ds^Vls ±-ds AdsTdsGdsAdsAdsAeoTeo mCesmCesmCe | PS/PO | GalNAc310a | PO | 41 |
68288 6 | GalNAc3-13a. rp Π1ζ~5 rp rp rp rp д m Z~5 o’ A es Yeo A eo A eoOreoVrds A ds 1 ds Ads Cds AdsTdsGdsAdsAdsAeoTeo mCesmCesmCe | PS/PO | GalNAc313a | PO | 41 |
68405 7 | Tes CeoTeoTeoGeoGdsTdsTdsAds CdsAdsTdsGdsAd sAdsAeoTeo mCesmCesmCeoAdo,-GalNAc3-19a | PS/PO | GalNAc319a | Ad | 42 |
Легенда для табл. 72 представлена в примере 74. Структура GalNAc3-1 показана в примере 9. Структура GalNAc3-3a показана в примере 39. Структура GalNAc3-7a показана в примере 48. Структура GalNAc3-10a показана в примере 46. Структура GalNAc3-13a показана в примере 62. Структура GalNAc319a показана в примере 70.
- 159 031393
Таблица 71
Антисмысловое ингибирование человеческого TTR in vivo
Isis № | Доза (мг/кг) | мРНК TTR (% PBS) | Белок TTR в плазме (% РВ S) | Кластер GalNAc | СМ | SEQ ID NO. |
PBS | н.д. | 100 | 100 | н.д. | н.д. | |
420915 | 6 | 99 | 95 | н.д. | Н.д. | 41 |
20 | 48 | 65 | ||||
60 | 18 | 28 | ||||
660261 | 0,6 | ИЗ | 87 | GalNAc3-la | Аа | 42 |
2 | 40 | 56 | ||||
6 | 20 | 27 | ||||
20 | 9 | И |
Таблица 72
Антисмысловое ингибирование человеческого TTR in vivo
Isis № | Доза (мг/кг) | мРНК TTR (% PBS) | Белок TTR в плазме (% PBS при BL) | Кластер GalNAc | СМ | SEQ ID NO. | |||
BL | 3-й день | 10-й день | 17-й день (после умерщвления) | ||||||
PBS | н.д. | 100 | 100 | 96 | 90 | 114 | н.д. | н.д. | |
420915 | 6 | 74 | 106 | 86 | 76 | 83 | н.д. | Н.д. | 41 |
20 | 43 | 102 | 66 | 61 | 58 | ||||
60 | 24 | 92 | 43 | 29 | 32 | ||||
682883 | 0,6 | 60 | 88 | 73 | 63 | 68 | GalNAc3За | РО | 41 |
2 | 18 | 75 | 38 | 23 | 23 | ||||
6 | 10 | 80 | 35 | И | 9 | ||||
682884 | 0,6 | 56 | 88 | 78 | 63 | 67 | GalNAc37а | РО | 41 |
2 | 19 | 76 | 44 | 25 | 23 | ||||
6 | 15 | 82 | 35 | 21 | 24 | ||||
682885 | 0,6 | 60 | 92 | 77 | 68 | 76 | GalNAc310а | РО | 41 |
2 | 22 | 93 | 58 | 32 | 32 | ||||
6 | 17 | 85 | 37 | 25 | 20 | ||||
682886 | 0,6 | 57 | 91 | 70 | 64 | 69 | GalNAc313а | РО | 41 |
2 | 21 | 89 | 50 | 31 | 30 | ||||
6 | 18 | 102 | 41 | 24 | 27 | ||||
684057 | 0,6 | 53 | 80 | 69 | 56 | 62 | GalNAc319а | Ad | 42 |
2 | 21 | 92 | 55 | 34 | 30 | ||||
6 | И | 82 | 50 | 18 | 13 |
Таблица 73
Уровни трансаминазы, изменение массы тела и относительные массы органов
Isis № | До за (мг /кг) | ALT (ед./л) | AST (ед./л) | Мас са тела (% BL) | Печ ень (% PBS ) BL | Селе зенка (% PBS) 3 день | Поч ки (% PBS) 10 день | SE Q ID NO. 17 ден ь | ||||||
BL | 3 де нь | 10 де нь | 17 де нь | BL | 3 де нь | 10 де нь | Da У 17 | |||||||
PBS | н.д | 33 | 34 | 33 | 24 | 58 | 62 | 67 | 52 | 105 | 100 | 100 | 100 | Н.д. |
420915 | 6 | 34 | 33 | 27 | 21 | 64 | 59 | 73 | 47 | 115 | 99 | 89 | 91 | 41 |
20 | 34 | 30 | 28 | 19 | 64 | 54 | 56 | 42 | 111 | 97 | 83 | 89 | ||
60 | 34 | 35 | 31 | 24 | 61 | 58 | 71 | 58 | ИЗ | 102 | 98 | 95 | ||
660261 | 0,6 | 33 | 38 | 28 | 26 | 70 | 71 | 63 | 59 | 111 | 96 | 99 | 92 | 42 |
2 | 29 | 32 | 31 | 34 | 61 | 60 | 68 | 61 | 118 | 100 | 92 | 90 | ||
6 | 29 | 29 | 28 | 34 | 58 | 59 | 70 | 90 | 114 | 99 | 97 | 95 | ||
20 | 33 | 32 | 28 | 33 | 64 | 54 | 68 | 95 | 114 | 101 | 106 | 92 |
- 160 031393
Таблица 74
Уровни трансаминазы, изменение массы тела и относительные массы органов
Isis № | До за (мг /кг) | ALT (ед./л) | AST (ед ./л) | Мас са тела (% BL) | Печ ень (% PBS ) BL | Селе зенка (% PBS) 3 день | Поч КН (% PBS) 10 день | SE Q ID NO. 17 ден ь | ||||||
BL | 3 де нь | 10 де нь | 17 де нь | BL | 3 де нь | 10 де нь | Da У 17 | |||||||
PBS | Н.д | 32 | 34 | 37 | 41 | 62 | 78 | 76 | 77 | 104 | 100 | 100 | 100 | Н.д. |
420915 | 6 | 32 | 30 | 34 | 34 | 61 | 71 | 72 | 66 | 102 | 103 | 102 | 105 | 41 |
20 | 41 | 34 | 37 | 33 | 80 | 76 | 63 | 54 | 106 | 107 | 135 | 101 | ||
60 | 36 | 30 | 32 | 34 | 58 | 81 | 57 | 60 | 106 | 105 | 104 | 99 | ||
682883 | 0,6 | 32 | 35 | 38 | 40 | 53 | 81 | 74 | 76 | 104 | 101 | 112 | 95 | 41 |
2 | 38 | 39 | 42 | 43 | 71 | 84 | 70 | 77 | 107 | 98 | 116 | 99 | ||
6 | 35 | 35 | 41 | 38 | 62 | 79 | 10 3 | 65 | 105 | 103 | 143 | 97 | ||
682884 | 0,6 | 33 | 32 | 35 | 34 | 70 | 74 | 75 | 67 | 101 | 100 | 130 | 99 | 41 |
2 | 31 | 32 | 38 | 38 | 63 | 77 | 66 | 55 | 104 | 103 | 122 | 100 | ||
6 | 38 | 32 | 36 | 34 | 65 | 85 | 80 | 62 | 99 | 105 | 129 | 95 | ||
682885 | 0,6 | 39 | 26 | 37 | 35 | 63 | 63 | 77 | 59 | 100 | 109 | 109 | 112 | 41 |
2 | 30 | 26 | 38 | 40 | 54 | 56 | 71 | 72 | 102 | 98 | 111 | 102 | ||
6 | 27 | 27 | 34 | 35 | 46 | 52 | 56 | 64 | 102 | 98 | ИЗ | 96 | ||
682886 | 0,6 | 30 | 40 | 34 | 36 | 58 | 87 | 54 | 61 | 104 | 99 | 120 | 101 | 41 |
2 | 27 | 26 | 34 | 36 | 51 | 55 | 55 | 69 | 103 | 91 | 105 | 92 | ||
6 | 40 | 28 | 34 | 37 | 10 7 | 54 | 61 | 69 | 109 | 100 | 102 | 99 | ||
684057 | 0,6 | 35 | 26 | 33 | 39 | 56 | 51 | 51 | 69 | 104 | 99 | 110 | 102 | 42 |
2 | 33 | 32 | 31 | 40 | 54 | 57 | 56 | 87 | 103 | 100 | 112 | 97 | ||
6 | 39 | 33 | 35 | 40 | 67 | 52 | 55 | 92 | 98 | 104 | 121 | 108 |
Пример 87. Продолжительность действия in vivo однократных доз олигонуклеотидов, нацеленных на TTR, содержащих кластер GalNAc3.
ISIS № 420915 и 660261 (см. табл. 70) испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей. ISIS № 420915, 682883 и 682885 (см. табл. 70) также испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
Лечение.
Восьминедельным самцам трансгенных мышей, которые экспрессируют человеческий TTR, ввели однократную подкожную инъекцию 100 мг/кг ISIS № 420915 или 13,5 мг/кг ISIS № 660261. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Образцы крови из хвостовой вены брали до введения дозы для определения исходных показателей и на 3-, 7-, 10-, 17-, 24- и 39-й день после введения дозы. Уровни белка TTR в плазме измеряли так, как описано в примере 86. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней TTR в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням.
Таблица 75
Уровни белка TTR в плазме
ISIS № | Доза (мг/кг) | Временные точки(дни после введения дозы) | TTR (% от исходного значения) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID NO. |
420915 | 100 | 3 | 30 | н.д. | н.д. | 41 |
7 | 23 | |||||
10 | 35 | |||||
17 | 53 | |||||
24 | 75 | |||||
39 | 100 | |||||
660261 | 13,5 | 3 | 27 | GalNAc3la | Ad | 42 |
7 | 21 | |||||
10 | 22 | |||||
17 | 36 | |||||
24 | 48 | |||||
39 | 69 |
Лечение.
Восьминедельным самкам трансгенных мышей, которые экспрессируют человеческий TTR, ввели однократную подкожную инъекцию 100 мг/кг ISIS № 420915, 10,0 мг/кг ISIS № 682883 или 10,0 мг/кг ISIS № 682885. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Образцы крови из хвостовой вены брали до введения дозы для определения исходных показателей и на 3-, 7-, 10-, 17-, 24- и 39-й день
- 161 031393 после введения дозы. Уровни белка TTR в плазме измеряли так, как описано в примере 86. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней TTR в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням.
Таблица 76
Уровни белка TTR в плазме
ISIS № | Доза (мг/кг) | Временные точки (дни после введения дозы) | TTR (% от исходного значения) | Кластер GalNAc3 | СМ | SEQID NO. |
420915 | 100 | 3 | 48 | н.д. | н.д. | 41 |
7 | 48 | |||||
10 | 48 | |||||
17 | 66 | |||||
31 | 80 | |||||
682883 | 10,0 | 3 | 45 | GalNAc3-3a | РО | 41 |
7 | 37 | |||||
10 | 38 | |||||
17 | 42 | |||||
31 | 65 | |||||
682885 | 10,0 | 3 | 40 | GalNAc310а | РО | 41 |
7 | 33 | |||||
10 | 34 | |||||
17 | 40 | |||||
31 | 64 |
Результаты в табл. 75 и 76 демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, являются более эффективными и имеют более продолжительное действие, чем исходный олигонуклеотид без конъюгата (ISIS 420915).
Пример 88. Сплайсинг-модулирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на SMN, содержащих конъюгат GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 77, испытали на сплайсинг-модулирование человеческих генов выживаемости мотонейронов (SMN) у мышей.
Таблица 77
Модифицированные ASO, нацеленные на SMN
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID NO. |
38795 4 | л т т л Т Т Т А Т Л Л Т G 1,1 С exes г es1 es '--es'^es '-es1 651 es1 es ^-65^65^5-^65^65^5^65 es TesGes θε | н.д. | н.д. | 43 |
69981 9 | GalNAc3-7a* t t д T T T Τ' A T A A o’-^cs 1 es1 cs '--cs^cs '-es1 cs1 cs1 cs ’--cs^cs 1 es^cs^cs T esGes mCesT esGesGe | GalNAc37a | PO | 43 |
69982 1 | GalNAc3-7a. A T T A : ’Г T T T 'Τ' Δ T A i Cl) ι eo < С0лС() v i 1 co 1 co co-^co 1 co-^co ОШо ('eoTe^GesGe | GalNAc37a | PO | 43 |
70000 0 | A T T mG A mG T T T 111C ATA A T G niG 'es1 cs1 es x ci- Vs < es i 1 с?1 es ν j i TCSGCS GcoAdo’-GalNAc3-1 a | GalNAc3la | Ad | 44 |
70342 1 | X-ATTmCAmCTTTmCATAATGmCTGG | н.д. | н.д. | 43 |
70342 2 | GalNAc3-7b-X-ATTmCAmCTTTmCATAATGmCTGG | GalNAc37b | Н.Д. | 43 |
Структура GalNAc3-7a показана ранее в примере 48. X означает 5'-первичный амин, полученный компанией Gene Tools (Филомат, штат Орегон), a GalNAc3-7b означает структуру GalNAc3-7a, не содержащую часть -NH-C6-О связи, как показано ниже:
НООНо
ΗθΜγΜ°ΧΓ[Α
AcHN\
НООН о>00
AcHN(j ноон
AcHN
ISIS № 703421 и 703422 представляют собой морфолино-олигонуклеотиды, при этом каждый нуклеотид из двух олигонуклеотидов представляет собой морфолино-нуклеотид.
- 162 031393
Лечение.
Шестинедельным трансгенным мышам, экспрессирующим человеческий SMN, ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в табл. 78, или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 2 самцов и 2 самок. Мышей умертвили через 3 дня после введения дозы для определения уровней мРНК человеческого SMN в печени с экзоном 7 и без него, применив ПЦР в реальном времени по стандартным протоколам. Общую РНК измерили при помощи реагента Ribogreen. Уровни мРНК SMN нормализовали к общей мРНК, а затем нормализовали к средним значениям в группе, обработанной солевым раствором. Полученные средние отношения мРНК SMN, содержащей экзон 7, к мРНК SMN, не содержащей экзон 7, представлены в табл. 78. Результаты демонстрируют, что полностью модифицированные олигонуклеотиды, которые модулируют сплайсинг и содержат конъюгат GalNAc, являются значительно более эффективными для изменения сплайсинга в печени, чем исходные олигонуклеотиды, не содержащие конъюгат GalNAc. Кроме того, эта тенденция сохраняется для химизма многократных модификаций, включая 2'-MOE и морфолино-модифицированные олигонуклеотиды.
Таблица 78 Действие олигонуклеотидов, нацеленных на человеческий SMN, in vivo
ISIS № | Доза (мг/кг) | +экзон 7 / -экзон 7 | Кластер GalNAcx | СМ | SEQ ID NO. |
Солевой раствор | н.д. | 1,00 | н.д. | н.д. | Н.д. |
387954 | 32 | 1,65 | н.д. | Н.д. | 43 |
387954 | 288 | 5,00 | н.д. | Н.д. | 43 |
699819 | 32 | 7,84 | GalNAcx7а | РО | 43 |
699821 | 32 | 7,22 | GalNAc37а | РО | 43 |
700000 | 32 | 6,91 | GalNAc31а | Ad | 44 |
703421 | 32 | 1,27 | н.д. | н.д. | 43 |
703422 | 32 | 4,12 | GalNAc37Ь | Н.д. | 43 |
Пример 89. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на аполипопротеин А (Аро(а)), содержащих конъюгат GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в табл. 79, испытали в исследовании дозозависимого ингибирования Аро(а) у трансгенных мышей.
Таблица 79
Модифицированные ASO, нацеленные на Аро(а)
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID NO. |
494372 | гр z~5 ΙΠ/'Ά гр Щ/^5 Ш/^5 Τ Т Т 1Ώ/~1 les^Jes ^es^es ^es Ws^ds ds ds^Jds^Jds ds'-Ms ^ds rp rp rp rp ΙΪΙρΊ A ds A es^Jes A es A es | н.д. | н.д. | 53 |
681257 | GalNAc3-7a-O’TesGeomCeoTeomCeomCdsGdsTdsTdsGdsGds rp rp τ Τ T Ш/х 1 ds+rds '-'ds 1 ds 1 ecMeo1 es1 es c | GalNAc3-7a | PO | 53 |
Структура GalNAc3-7a показана в примере 48.
Лечение.
Восьминедельным самкам мышей C57BL/6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) один раз в неделю вводили подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, в целом шесть доз олигонуклеотида, перечисленного в табл. 79, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 3-4 животных. Образцы крови из хвостовой вены брали за день до введения первой дозы и еженедельно после введения каждой дозы для определения уровней белка Аро(а) в плазме. Мышей умертвили через два дня после последнего введения. Уровни мРНК Аро(а) в печени определили при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RTBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) по стандартным протоколам. Уровни белка Аро(а) в плазме определили при помощи твердофазного иммуноферментного анализа, и определили уровни трансаминазы в печени. Результаты анализа мРНК и белка в плазме в табл. 80 представлены как среднее процентное значение для экспериментальной группы относительно группы, обработанной PBS. Уровни белка в плазме дополнительно нормализовали к исходному значению (BL) для группы с PBS. Средние абсолютные уровни трансаминазы и массы тела (% относительно среднего исходного значения) представлены в табл. 81.
Как показано в табл. 80, лечение олигонуклеотидами снижает уровни мРНК Аро(а) в печени и уровни белка в плазме дозозависимым образом. Кроме того, олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc, был значительно более эффективным с более продолжительным действием, чем исходный олигонуклеотид, не содержащий конъюгат GalNAc. Как показано в табл. 81, представленные олигонуклео
- 163 031393 тиды не влияют на уровни трансаминазы и массы тела, что указывает на хорошую переносимость олигонуклеотидов.
Таблица 80
Уровни мРНК Аро(а) в печени и белка в плазме
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК Аро(а) (% PBS) | Белок Аро(а) в плазме (% PBS) | ||||||
BL | Неделя 1 | Неделя 2 | Неделя 3 | Неделя 4 | Неделя 5 | Неделя 6 | |||
PBS | н.д. | 100 | 100 | 120 | 119 | ИЗ | 88 | 121 | 97 |
494372 | 3 | 80 | 84 | 89 | 91 | 98 | 87 | 87 | 79 |
10 | 30 | 87 | 72 | 76 | 71 | 57 | 59 | 46 | |
30 | 5 | 92 | 54 | 28 | 10 | 7 | 9 | 7 | |
681257 | 0,3 | 75 | 79 | 76 | 89 | 98 | 71 | 94 | 78 |
1 | 19 | 79 | 88 | 66 | 60 | 54 | 32 | 24 | |
3 | 2 | 82 | 52 | 17 | 7 | 4 | 6 | 5 | |
10 | 2 | 79 | 17 | 6 | 3 | 2 | 4 | 5 |
Таблица 81
ISIS № | Доза (мг/кг) | ALT (ед ./л) | AST (ед./л) | Масса тела (% от исходного значения) |
PBS | н.д. | 37 | 54 | 103 |
494372 | 3 | 28 | 68 | 106 |
10 | 22 | 55 | 102 | |
30 | 19 | 48 | 103 | |
681257 | 0,3 | 30 | 80 | 104 |
1 | 26 | 47 | 105 | |
3 | 29 | 62 | 102 | |
10 | 21 | 52 | 107 |
Пример 90. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на TTR, содержащих кластер GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в табл. 82, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования человеческого транстиретина (TTR) у трансгенных мышей, экспрессирующих человеческий TTR ген.
Лечение.
TTR трансгенным мышам один раз в неделю в течение трех недель, в целом три дозы, вводили подкожную инъекцию олигонуклеотида и дозы, перечисленные в табл. 83, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Перед введением первой дозы взяли образец крови из хвостовой вены для определения уровней белка TTR в плазме в исходном состоянии (BL). Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения. Уровни белка TTR измерили при помощи клинического анализатора (AU480, Beckman Coulter, штат Калифорния). ПЦР в реальном времени и реагент для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc., Юджин, штат Орегон) применяли по стандартным протоколам для определения уровней мРНК человеческого TTR в печени. Результаты, показанные в табл. 83, представляют собой средние значения для каждой экспериментальной группы. Уровни мРНК представляют собой средние значения относительно среднего значения для PBS группы. Уровни белка в плазме представляют собой средние значения относительно среднего значения для PBS группы в исходном состоянии. BL означает исходное значения измерений, выполненных непосредственно перед введением первой дозы. Как показано в табл. 83, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни экспрессии TTR дозозависимым образом. Олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc, был более эффективным, чем исходное соединение без конъюгата GalNAc (ISIS 420915), а олигонуклеотиды, содержащие фосфодиэфирный или дезоксиаденозиновый расщепляемый фрагмент, демонстрировали значительное усиление эффективности по сравнению с исходным соединением, не содержащим конъюгат (см. ISIS № 682883 и 666943 по сравнению с 420915, а также см. примеры 86 и 87).
- 164 031393
Таблица 82
Олигонуклеотиды, нацеленные на человеческий TTR
Isis № | Последовательность от 5’ к 3’ | Связи | Кластер GalNAc | CM | SEQ ID NO. |
42091 5 | Tes CesTesTesGesGdsTdsTdsAds CdsAdsTdsGdsAds Aj А Т mO mC mC Ads Aes1 es ^es ^es | PS | Н.Д. | Н.Д. | 41 |
68288 3 | GalNAc3-3a. o’Tes CeoTeoTeoGeoGdsTdsTdsAds CdsAds TdsGdsAdsAdsAeoTeomCesmCesmCe | PS/PO | GalNAc3-3a | PO | 41 |
66694 3 | GalNAc3-3a. o’A(i0Tes CeoTeoTeoGeoGdsTdsTdsAds тСа5Аа5Та5Оа5Аа5Аа5АеоТеотСе5тСе5тСе | PS/PO | GalNAc3-3a | Ad | 45 |
68288 7 | GalNAc3-7a. o’AdoTes CeoTeoTeoGeoGdsTdsTdsAds mCdsAdsTdsGdsAdsAdsAeoTeomCesmCesmCe | PS/PO | GalNAc3-7a | Ad | 45 |
68288 8 | GalNAc3-10a. o’AdoTes CeoTeoTeoGeoGdsTdsTdsAds mCdsAdsTdsGdsAdsAdsAeoTeomCesmCesmCe | PS/PO | GalNAc310a | Ad | 45 |
68288 9 | GalNAc3-13a. o’AdoTes CeoTeoTeoGeoGdsTdsTdsAds mCdsAdsTdsGdsAdsAdsAeoTeomCesmCesmCe | PS/PO | GalNAc313a | Ad | 45 |
Легенда для табл. 82 представлена в примере 74. Структура GalNAc3-3a показана в примере 39. Структура GalNAc3-7a показана в примере 48. Структура GalNAc3-10a показана в примере 46. Структура GalNAc3-13a показана в примере 62.
Таблица 83
Антисмысловое ингибирование человеческого TTR in vivo
Isis № | Доза (мг/кг) | мРНК TTR (% PBS) | Белок TTR (% BL) | Кластер GalNAc | CM |
PBS | н.д. | 100 | 124 | н.д. | н.д. |
420915 | 6 | 69 | 114 | н.д. | Н.Д. |
20 | 71 | 86 | |||
60 | 21 | 36 | |||
682883 | 0,6 | 61 | 73 | GalNAc3-3a | PO |
2 | 23 | 36 | |||
6 | 18 | 23 | |||
666943 | 0,6 | 74 | 93 | GalNAc3-3a | Ad |
2 | 33 | 57 | |||
6 | 17 | 22 | |||
682887 | 0,6 | 60 | 97 | GalNAc3-7a | Ad |
2 | 36 | 49 | |||
6 | 12 | 19 | |||
682888 | 0,6 | 65 | 92 | GalNAc3-10a | Ad |
2 | 32 | 46 | |||
6 | 17 | 22 | |||
682889 | 0,6 | 72 | 74 | GalNAc3-13a | Ad |
2 | 38 | 45 | |||
6 | 16 | 18 |
Пример 91. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на фактор VII, содержащих конъюгат GalNAc3, у приматов, не являющихся человеком.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в табл. 84, испытали в нетерминальном исследовании повышения дозы на антисмысловое ингибирование фактора VII у обезьян.
Лечение.
Обезьянам, ранее не подверженным экспериментам, на 0-, 15- и 29-й дни вводили подкожные инъекции повышающихся доз олигонуклеотидов, перечисленных в табл. 84, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 самцов и 1 самки. Перед введением первой дозы и в различные временные точки после нее брали образцы крови для определения уровней белка фактора VII в плазме. Уровни белка фактора VII определяли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа. Результаты, показанные в табл. 85, представляют собой средние значения для каждой экспериментальной группы относительно среднего значения для группы PBS в исходном состоянии (BL), измерения выполнены непосредственно перед введением первой дозы. Как показано в табл. 85, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни экспрессии фактора VII дозозависимым образом, и олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc, был значительно более эффективным у обезьян, чем олигонуклеотид, не содержащий конъюгата GalNAc.
- 165 031393
Таблица 84
Олигонуклеотиды, нацеленные на фактор VII
Isis № | Последовательность от 5’ к 3’ | Связи | Кластер GalNAc | CM | SEQ ID NO. |
40793 5 | AesTesGesmCesAesTdsGdsGdsTdsGdsAdsTdsGdsmCd sTds TesmCeSTesGeSAe | PS | н.д. | н.д. | 46 |
68689 2 | GalNAc3-10a. o’AesTesGes CesAesTdsGdsGdsTdsGds AdsTdsGdsmCdsTds TesmCesTesGesAe | PS | GalNAc310a | PO | 46 |
Легенда для табл. 84 представлена в примере 74. Структура GalNAc3-10a показана в примере 46. Таблица 85
Уровни белка фактора VII в плазме
ISIS № | День |
407935 | 0 |
15 | |
22 | |
29 | |
36 | |
43 | |
686892 | 0 |
15 | |
22 | |
29 | |
36 | |
43 |
Доза (мг/кг) | Фактор VII (% BL) |
н.д. | 100 |
10 | 87 |
н.д. | 92 |
30 | 77 |
н.д. | 46 |
н.д. | 43 |
3 | 100 |
10 | 56 |
н.д. | 29 |
30 | 19 |
н.д. | 15 |
н.д. | И |
Пример 92. Антисмысловое ингибирование в первичных гепатоцитах под действием олигонуклеотидов, нацеленных на Аро-CIII, содержащих конъюгат GalNAc3.
Первичные мышиные гепатоциты высеивали в 96-луночные планшеты при 15000 клеток на лунку и добавляли олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 86, нацеленные на мышиный АроС-III в концентрации 0,46, 1,37, 4,12 или 12,35, 37,04, 111,11 либо 333,33 нМ, или 1,00 мкМ. После инкубации с олигонуклеотидами в течение 24 ч клеки лизировали и очистили общую РНК при помощи RNeasy (Qiagen). Уровни мРНК АроС-III определили при помощи ПЦР в реальном времени и реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN® (Molecular Probes, Inc.) по стандартным протоколам. Значения IC50 определили при помощи программы Prism 4 (GraphPad). Результаты демонстрируют, что независимо от того, является ли расщепляемый фрагмент фосфодиэфиром или фосфодиэфир-связанным дезоксиаденозином, олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были значительно более эффективными, чем исходный олигонуклеотид, не содержащий конъюгата.
Таблица 86
Ингибирование экспрессии мышиного АРОС-III в первичных гепатоцитах мышей
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | CM | IC50 (нМ) | SEQ ID NO. |
440670 | CesAesGes CesTesTdsTdsAdSTdsTdsAdSGdsGdsGdSAdS CesAesGes CesAe | Н.Д. | 13,20 | 47 |
661180 | mCesAesGesmCesTesTdsTdsAdsTdsTdsAdsGdsGdsGdsAds mCes AesGes CesAeo Ad0’-GalNAc3-la | Ad | 1,40 | 48 |
680771 | GalNAc3-3a.O’ CesAesGes CesTesTdsTdsAdsTdsTdsAdsGdsGdsGdsAds Ces AesGes CesAe | PO | 0,70 | 47 |
680772 | GalNAc3-7a.O’mCesAesGesmCesTesTdsTdsAdsTdsTdsAdsGdsGdsGdsAds mCes AesGes mCesAe | PO | 1,70 | 47 |
680773 | GalNAc3-10a.O’ CesAesGes CesTesTdsTdsAdsTdsTdsAdsGdsGdsGdsAds Ces AesGes CesAe | PO | 2,00 | 47 |
680774 | GalNAc3-13a.0,mCesAesGesmCesTesTdsTdsAdsTdsTdsAdsGdsGdsGdsAdsmCes AesGes CesAe | PO | 1,50 | 47 |
681272 | GalNAc3-3a.o,mCesAeoGeomCeoTeoTdsTdsAdsTdsTdsAdsGdsGdsGdsAdsmCeo AeoGesmCesAe | PO | < 0,46 | 47 |
681273 | GalNAc3-3a-0’Ad0 mCes AesGesmCeST esTdsT ds AdsT dsT ds AdsGdsGdsGds Ads mCesAesGesmCesAe | Ad | 1,10 | 49 |
683733 | mCesAesGesmCesTesTdsTdsAdsTdsTdsAdsGdsGdsGdsAdsmCes AesGesmCesAeoAdo,-GalNAc3-19a | Ad | 2,50 | 48 |
Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9, GalNAc3-3a показана в примере 39, GalNAc3-7a показана в примере 48, GalNAc3-10a показана в примере 46, и GalNAc3-13a показана в примере 62, и GalNAc3-19a показана в примере 70.
Пример 93. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на SRB-1, содержащих смешанные крылья и 5'-GalNAc3 конъюгат.
Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 87, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей.
- 166 031393
Таблица 87
Модифицированные ASO, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAcs | CM | SEQ ID NO. |
44909 3 | гр гр Шр Д гр Шр Д гр д Шр гр гр Шр Шр Iks Iks GksAdsCrds 1 ds Yds Ads 1 ds vrds Ads Yds Ids Iks Gks Gk | н.д. | н.д. | 50 |
69980 6 | GalNAc3-3a-O’TksTks CksAdsGdsTds Cds AdSTds GdsAds Cds гр гр Щ/^5 Ш/^5 IdsHs Gks Ck | GalNAcs3a | PO | 50 |
69980 7 | GalNAc3-7a-onksTksmCksAdsGdsTdsmCds AdsTds GdsAds mCds гр гр Ш/^5 Ш/^5 IdsHs Gks Ck | GalNAc37a | PO | 50 |
69980 9 | GalNAc3-7a-0> TksTks mCksAdsGdsTdsmCds AdsTds Gds д lllp rp rp ΙΪ1ρ-ι Illp-i C^ds Gds -Ids-les Gcs Ge | GalNAc37a | PO | 50 |
69981 1 | GalNAc3-7a-O’TesTes CesAdSGdsTds Cds AdsTds GdsAds Cds гр гр Шр Шр Ids Iks ^ks | GalNAc37a | PO | 50 |
69981 3 | GalNAc3-7a-0Лк5Та5 тСк5Аа5Оа5Та5тСа5 AdsTds GdSAds mCds гр гр Ш/^5 Ш/^5 Ids Iks Gds Gk | GalNAc37a | PO | 50 |
69981 5 | GalNAc3-7a-0nesTksmCksAdsGdsTdsmCds AdsTds GdSAds mCds гр гр Ш/^5 Ш/^5 Ids^ks ^ks | GalNAc37a | PO | 50 |
Структура GalNAc3-3a показана ранее в примере 39, а структура GalNAc3-7a показана ранее в примере 48. Нижние индексы: e означает 2'-MOE модифицированный нуклеозид; d означает β-D^'дезоксирибонуклеозид; k означает 6'-(S)-CH3 бициклический нуклеозид (cEt); s означает тиофосфатные межнуклеозидные связи (PS); о означает фосфодиэфирные межнуклеозидные связи (РО). Верхний индекс m означает 5-метилцитозины.
Лечение.
Шести-восьминедельным мышам C57bl6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию дозы, представленной ниже, олигонуклеотида, перечисленного в табл. 87, или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения. Уровни мРНК SRB-1 в печени измерили при помощи ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК SRB-1 нормализовали к уровням мРНК циклофилина по стандартным протоколам. Результаты, показанные ниже, представлены как средний процент уровней мРНК SRB-1 для каждой экспериментальной группы по сравнению с контрольной группой, обработанной солевым раствором. Как показано в табл. 88, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами снижает уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом, а гэпмерные олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc и имеющие крылья, которые представляют собой либо полностью cEt, либо смешанные сахарные модификации, были существенно более эффективными, чем исходный олигонуклеотид, не содержащий конъюгата и содержащий полностью cEt модифицированные крылья.
Измерили также массы тела, уровни трансаминазы в печени, общий билирубин и АМК, а средние значения для каждой экспериментальной группы представлены в табл. 88. Масса тела показана как средний процент массы тела относительно исходной массы тела (% BL), измеренный непосредственно перед введением дозы олигонуклеотида.
Таблица 88
Уровни мРНК SRB-1, ALT, AST, АМК и общего билирубина, а также массы тела
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК SRB1 (%PBS) | ALT (ед ./л) | AST (ед ./л) | Билирубин | АМК | Масса тела (% BL) |
PBS | н.д. | 100 | 31 | 84 | 0,15 | 28 | 102 |
449093 | 1 | 111 | 18 | 48 | 0,17 | 31 | 104 |
3 | 94 | 20 | 43 | 0,15 | 26 | 103 | |
10 | 36 | 19 | 50 | 0,12 | 29 | 104 | |
699806 | ОД | 114 | 23 | 58 | 0,13 | 26 | 107 |
о,з | 59 | 21 | 45 | 0,12 | 27 | 108 | |
1 | 25 | 30 | 61 | 0,12 | 30 | 104 | |
699807 | 0,1 | 121 | 19 | 41 | 0,14 | 25 | 100 |
0,3 | 73 | 23 | 56 | 0,13 | 26 | 105 | |
1 | 24 | 22 | 69 | 0,14 | 25 | 102 | |
699809 | 0,1 | 125 | 23 | 57 | 0,14 | 26 | 104 |
0,3 | 70 | 20 | 49 | 0,10 | 25 | 105 | |
1 | 33 | 34 | 62 | 0,17 | 25 | 107 | |
699811 | 0,1 | 123 | 48 | 77 | 0,14 | 24 | 106 |
0,3 | 94 | 20 | 45 | 0,13 | 25 | 101 | |
1 | 66 | 57 | 104 | 0,14 | 24 | 107 | |
699813 | 0,1 | 95 | 20 | 58 | 0,13 | 28 | 104 |
0,3 | 98 | 22 | 61 | 0,17 | 28 | 105 | |
1 | 49 | 19 | 47 | θ,ιι | 27 | 106 | |
699815 | 0,1 | 93 | 30 | 79 | 0,17 | 25 | 105 |
0,3 | 64 | 30 | 61 | 0,12 | 26 | 105 | |
1 | 24 | 18 | 41 | 0,14 | 25 | 106 |
- 167 031393
Пример 94. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на SRB-1, содержащих 2'-сахарные модификации и 5'-GalNAc3 конъюгат.
Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 89, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей.
Таблица 89
Модифицированные ASO, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID NO. |
35338 2 | ✓*-< 1Пр пр пр Щ/'Ч А /О гр Π1/-Ί А гр А 1Л/~1 гр гр Щ Ajes ^е51е81е5 CesAdsvrds 1 ds Ws Ads 1 ds^Jds Ads Ws A ds les Ш/'Ч rp ΓΤΊ ^es ^es J- es J- e | н.д. | н.д. | 28 |
70098 9 | GmsCmsUmsUmsCmsAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds CdsTdsUms CmsCmsUmsUm | н.д. | Н.Д. | 51 |
66690 4 | GalNAc3-3ao’Ges mCesTesTesmCeSAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAds ΙΠζ~1 гр гр Π1ζ~1 111/5 гр гр ^ds^ds^es ^es ^es^es^e | GalNAc33a | PO | 28 |
70099 1 | GalNAc3-7a-o’GmsCmsUmsUmsCmsAdsGdsTds CdsAdsTdsGds Ads CdsTdsUmsCmsCmsUmsUm | GalNAc37a | PO | 51 |
Нижний индекс m означает 2'-O-метил-модифицированный нуклеозид. Полная легенда к таблице представлена в примере 74. Структура GalNAc3-3a показана ранее в примере 39, а структура GalNAc3-7a показана ранее в примере 48.
Лечение.
Исследование выполнили по протоколу, описанному в примере 93. Результаты представлены ниже в табл. 90 и демонстрируют, что и 2'-MOE, и 2'-ОМе-модифицированные олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc, были значительно более эффективными, чем соответствующие исходные олигонуклеотиды, не содержащие конъюгата. Результаты измерений массы тела, трансаминазы в печени, общего билирубина и АМК демонстрируют, что эти соединения хорошо переносятся.
Таблица 90 мРНК SRB-1
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК SRB-1 (% PBS) |
PBS | н.д. | 100 |
353382 | 5 | 116 |
15 | 58 | |
45 | 27 | |
700989 | 5 | 120 |
15 | 92 | |
45 | 46 | |
666904 | 1 | 98 |
3 | 45 | |
10 | 17 | |
700991 | 1 | 118 |
3 | 63 | |
10 | 14 |
Пример 95. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на SRB-1, содержащих бициклические нуклеозиды и 5'-GalNAc3 конъюгат.
Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 91, испытали в дозозависимом исследовании антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей.
Таблица 91
Модифицированные ASO, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID No |
440762 | Tks mCksAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds mCdsTdsTksmCk | н.д. | н.д. | 22 |
666905 | GalNAc3-3a-O’Tks mCksAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds mCdsTdsTksmCk | GalNAc3-3a | PO | 22 |
699782 | GalNAc3-7a-O’Tks mCksAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds mCdsTdsTksmCk | GalNAc3-7a | PO | 22 |
699783 | GalNAc3-3a-O’Tls mCisAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTls mCi | GalNAc3-3a | PO | 22 |
653621 | Tls mClsAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTls mC10Ad0’-GalNAc3-la | GalNAc3-la | Ad | 23 |
439879 | Tgs mCgsAdsGdsTdsmCdsAdsTd GdsAds mCdsTdsTgsmCg | н.д. | н.д. | 22 |
699789 | GalNAc3-3a-O’TgS mCgSAdsGdsTdsmCdsAdsTd GdsAds mCdsTdsTgS mCg | GalNAc3-3a | PO | 22 |
Нижний индекс g означает фтор-HNA нуклеозид, нижний индекс 1 означает закрытый нуклеозид, содержащий мостик 2'-O-CH2-4'. Другие сокращения представлены в легенде таблицы примера 74. Структура GalNAc3-1a показана ранее в примере 9, структура GalNAc3-3a показана ранее в примере 39, а структура GalNAc3-7a показана ранее в примере 48.
Лечение.
Исследование выполнили по протоколу, описанному в примере 93. Результаты представлены ниже в табл. 92 и демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc и различные бициклические нуклеозидные модификации, были значительно более эффективными, чем исходный олигонуклеотид, не содержащий конъюгата и содержащий бициклические нуклеозидные модификации. Кроме того, олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc и фтор-HNA модификации, был существенно более эф
- 168 031393 фективным, чем исходное соединение, не содержащее конъюгата и содержащее фтор-HNA модификации. Результаты измерений массы тела, трансаминазы в печени, общего билирубина и АМК демонстрируют, что эти соединения хорошо переносятся.
Таблица 92
Уровни мРНК SRB-1, ALT, AST, АМК и общего билирубина, а также массы тела
ISIS № | Доза (мг/кг) | мРНК SRB-1 (% PBS) |
PBS | н.д. | 100 |
440762 | 1 | 104 |
3 | 65 | |
10 | 35 | |
666905 | 0,1 | 105 |
0,3 | 56 | |
1 | 18 | |
699782 | 0,1 | 93 |
0,3 | 63 | |
1 | 15 | |
699783 | 0,1 | 105 |
0,3 | 53 | |
1 | 12 | |
653621 | 0,1 | 109 |
0,3 | 82 | |
1 | 27 | |
439879 | 1 | 96 |
3 | 77 | |
10 | 37 | |
699789 | 0,1 | 82 |
0,3 | 69 | |
1 | 26 |
Пример 96. Связывание белка плазмы антисмысловыми олигонуклеотидами, содержащими конъюгирующую группу GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 57, нацеленные на АроС-III, и олигонуклеотиды в табл. 93, нацеленные на Аро(а), испытали в анализе ультрафильтрации для оценки связывания белка в плазме.
Таблица 93 Модифицированные олигонуклеотиды, нацеленные на Аро(а) ,
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAcs | CM | SEQ ID No |
494372 | гр 1Ι1ζ~ϊ гр Шр Шр гр гр р-5 z^ гр ζ^ ШрА Τ Τ' Τ' lesSs Gesles Ges Gds^Jds 1 ds 1 ds^Jds^Jds 1 ds^Jds 4s 1 ds 1 es^es 1 es rp mpr les Ge | н.д. | н.д. | 53 |
693401 | rp рч Юр гр Шр 1Др rp rp rp f~<. Шр rp rp rp lesSo Geoleo Geo GdsGdsldsldsGdsGdsldsGds GdsldsleoGreoles rp mpr les Ge | н.д. | н.д. | 53 |
681251 | GalNAc3-7a-O’TesGes CesTes Ces CdsGdsTdsTdsGdsGdsTdsGds Cds Τ Τ Λ”5 Τ T Шрч 1 ds 1 esSs 1 es 1 es Ge | GalNAcs7a | PO | 53 |
681257 | GalNAc3-7a-onesGeomCeoTeomCeomCdsGdsTdsTdsGdsGdsTdsGdsmCds TdsTeoGeoTesTes Ce | GalNAcs7a | PO | 53 |
Легенда таблицы представлена в примере 74. Структура GalNAc3-7a показана ранее в примере 48.
Элементы для ультрафильтрации Ultrafree-MC (номинальное ограничение молекулярной массы 30000, слабосвязывающая регенерированная целлюлозная мембрана, Millipore, Бедфорд, штат Массачусетс) предварительно кондиционировали с 300 мкл 0,5% Tween 80 и центрифугировали при 2000 г в течение 10 мин, затем с 300 мкл 300 мкг/мл раствора контрольного олигонуклеотида в H2O и центрифугировали при 2000 г в течение 16 мин. Для оценки неспецифического связывания с фильтрами каждого исследуемого олигонуклеотида из табл. 57 и 93, применяемых в испытаниях, 300 мкл 250 нг/мл раствора олигонуклеотида в in при pH 7,4 поместили в предварительно кондиционированные фильтры и центрифугировали при 2000 г в течение 16 мин. Нефильтрованные и фильтрованные образцы анализировали твердофазным иммуноферментным анализом для определения концентраций олигонуклеотидов. Для получения средней концентрации для каждого образца применяли три экземпляра. Среднюю концентрацию фильтрованного образца относительно нефильтрованного образца применяли для определения процента олигонуклеотида, прошедшего через фильтр без плазмы (% выделения).
Замороженные образцы цельной плазмы, собранные в К3-ЭДТК и полученные от здоровых, не принимающих лекарства людей-добровольцев, яванских макак и мышей CD-1, приобрели у компании Bioreclamation LLC (Вестбери, штат Нью-Йорк). Исследуемые олигонуклеотиды добавляли к 1,2 мл аликвотам плазмы в двух концентрациях (5 и 150 мкг/мл). Аликвоту (300 мкл) каждого маркированного образца плазмы поместили на предварительно кондиционированный фильтровальный элемент и инкубировали при 37°C в течение 30 мин, затем сразу выполнили центрифугирование при 2000 г в течение 16 мин. Аликвоты фильтрованных и нефильтрованных маркированных образцов плазмы анализировали твердофазным иммуноферментным анализом для определения концентрации олигонуклеотида в каждом образце. Применили три экземпляра каждой концентрации для определения среднего процента связанного и
- 169 031393 несвязанного олигонуклеотида в каждом образце. Среднюю концентрацию фильтрованного образца относительно концентрации нефильтрованного образца применили для определения процента олигонуклеотида в плазме, не связанного с белками плазмы (% несвязанного). Окончательные значения несвязанного олигонуклеотида корректировали на неспецифическое связывание путем деления % несвязанного на % выделения для каждого олигонуклеотида. Окончательные значения % связанного олигонуклеотида определили вычитанием окончательных значений % несвязанного из 100. Результаты показаны в табл. 94 для двух концентраций испытанного олигонуклеотида (5 и 150 мкг/мл) в плазме каждого вида. Результаты демонстрируют, что конъюгирующие группы GalNAc не оказывают существенного влияния на связывание белка плазмы. Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие только PS межнуклеозидные связи и смешанные PO/PS связи, - оба варианта связывают белки плазмы, при этом олигонуклеотиды, содержащие только PS связи, связывают белки плазмы в несколько большей степени, чем олигонуклеотиды, содержащие смешанные PO/PS связи.
Таблица 94
Процент модифицированного олигонуклеотида, связанного с белками плазмы
ISIS № | Плазма человека | Плазма обезьян | Плазма мышей | |||
5 мкг/мл | 150 мкг/мл | 5 мкг/мл | 150 мкг/мл | 5 мкг/мл | 150 мкг/мл | |
304801 | 99,2 | 98,0 | 99,8 | 99,5 | 98,1 | 97,2 |
663083 | 97,8 | 90,9 | 99,3 | 99,3 | 96,5 | 93,0 |
674450 | 96,2 | 97,0 | 98,6 | 94,4 | 94,6 | 89,3 |
494372 | 94,1 | 89,3 | 98,9 | 97,5 | 97,2 | 93,6 |
693401 | 93,6 | 89,9 | 96,7 | 92,0 | 94,6 | 90,2 |
681251 | 95,4 | 93,9 | 99,1 | 98,2 | 97,8 | 96,1 |
681257 | 93,4 | 90,5 | 97,6 | 93,7 | 95,6 | 92,7 |
Пример 97. Модифицированные олигонуклеотиды, нацеленные на TTR, содержащие конъюгирующую группу GalNAc3.
Олигонуклеотиды, представленные в табл. 95, содержащие конъюгат GalNAc, предназначены для воздействия на TTR.
Таблица 95
Модифицированные олигонуклеотиды, нацеленные на TTR
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID No |
666941 | GalNAc3-3a.0’A(i0 Tes Ces Tes Tes Ges Gds TdS TdS Ads mCds Ads Tds Gds Ads Ads Aes Tes mCesmCesmCe | GalNAc3-3 | Ad | 45 |
666942 | Tes Ceo Teo Teo Geo Gds Tds Tds Ads Cds Ads Tds Gds Ads Ads Aeo TeomCesmCeSmCeoAdo,-GalNAc3-3a | GalNAc3-l | Ad | 42 |
682876 | GalNAc3-3a.O’Tes mCes Tes Tes Ges Gds Tds Tds AdsmCds Ads Tds Gds Ads Ads Aes Tes Ces Ces Ce | GalNAc3-3 | PO | 41 |
682877 | GalNAc3-7a.O’Tes mCes Tes Tes Ges Gds Tds Tds AdsmCds Ads Tds Gds Ads Ads Aes Tes mCesmCesmCe | GalNAc3-7 | PO | 41 |
682878 | GalNAc3-10a.o’Tes mCeS Tes Tes Ges Gds Tds Tds AdsmCds Ads Tds Gds Ads Ads Aes TesmCesmCesmCe | GalNAc3-10 | PO | 41 |
682879 | GalNAc3-13a.O’Tes mCes Tes Tes Ges Gds Tds Tds AdsmCds Ads Tds Gds Ads Ads Aes TesmCesmCesmCe | GalNAc3-13 | PO | 41 |
682880 | GalNAc3-7a.oAdo Tes mCes Tes Tes Ges Gds Tds Tds | GalNAc3-7 | Ad | 45 |
Ads mCds Ads Tds Gds Ads Ads Aes TesmCesmCesmCe | ||||
682881 | GalNAc3-10a-O’Ado Tes Ces Tes Tes Ges Gds Tds Tds Ads Cds Ads Tds Gds Ads Ads Aes Tes Ces Ces Ce | GalNAc3-10 | Ad | 45 |
682882 | GalNAc3-13a.o’Ado Tes Ces Tes Tes Ges Gds Tds Tds Ads mCds Ads Tds Gds Ads Ads Aes Те5тСе5тСе5тСе | GalNAc3-13 | Ad | 45 |
684056 | Tes Ces Tes Tes Ges Gds Tds Tds Ads Cds Ads Tds Gds Ads Ads Aes TesmCesmCesmCeOAd<f-GalNAC3-19a | GalNAc3-19 | Ad | 42 |
Легенда для табл. 95 представлена в примере 74. Структура GalNAc3-1 показана в примере 9. Структура GalNAc3-3a показана в примере 39. Структура GalNAc3-7a показана в примере 48. Структура GalNAc3-10a показана в примере 46. Структура GalNAc3-13a показана в примере 62. Структура GalNAc319a показана в примере 70.
Пример 98. Оценка провоспалительного действия олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAc, в анализе hPMBC.
Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 96, исследовали на провоспалительное действие в анализе hPMBC, описанном в примерах 23 и 24 (см. табл. 17, 70, 82 и 95, где представлено описание олигонуклеотидов). ISIS 353512 обладает высоким ответом, и его применяли в качестве положительного контроля, а другие олигонуклеотиды описаны в табл. 70, 82 и 95. Результаты, представленные в табл. 96, получены с применением крови, полученной от одного донора-добровольца. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие смешанные PO/PS межнуклеозидные связи, вызывают значительно более слабые провоспалительные реакции по сравнению с теми же олигонуклеотидами, содержащими только PS связи. Кроме того, в этом анализе конъюгирующая группа GalNAc не оказывает существенного влияния.
- 170 031393
Таблица 96
ISIS № | Emax/ECso | Кластер GalNAc3 | Связи | CM |
353512 | 3630 | н.д. | PS | Н.Д. |
420915 | 802 | н.д. | PS | н.д. |
682881 | 1311 | GalNAc3-10 | PS | Ad |
682888 | 0,26 | GalNAc3-10 | PO/PS | Ad |
684057 | 1,03 | GalNAc3-19 | PO/PS | Ad |
Пример 99. Связывающие аффинности олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAc, в отношении асиалогликопротеинового рецептора.
Связывающие аффинности олигонуклеотидов, перечисленных в табл. 97 (см. табл. 63, в которой представлено описание олигонуклеотидов), в отношении асиалогликопротеинового рецептора испытали в анализе конкурентного связывания рецепторов. Конкурирующий лиганд, а1-кислый гликопротеин (AGP), инкубировали в 50 мМ ацетатно-натриевом буфере (pH 5) с 1 ед. нейраминидазы-агарозы в течение 16 ч при 37°C, а > 90% дезалилирование подтвердили анализом с сиаловой кислотой или эксклюзионной хроматографией (SEC). Для йодирования АГФ применили монохлорид йода по способу, описанному авторами Atsma et al. (см. J Lipid Res. январь 1991 г.; 32(1): 173-81). В этом способе дезалилированный а 1-кислый гликопротеин (de-AGP) добавляли к 10 мМ хлориду йода, Na125I и 1 М глицина в 0,25 М NaOH. После инкубации в течение 10 мин при комнатной температуре 125Емеченный de-AGP отделили от свободного 125I двукратным концентрированием смеси с применением спин-колонки с номинальным отсечением по молекулярной массе 3 кД. Белок испытали на эффективность мечения и чистоту на системе ВЭЖХ, оснащенной колонкой Agilent SEC-3 (7,8x300 мм) и счетчиком β-RAM. Конкуретные исследования с применением 125Емеченного de-AGP и ASO, содержащих различные GalNAc-кластеры, выполнили следующим образом. Человеческие клетки HepG2 (106 клеток/мл) поместили на 6-луночные планшеты в 2 мл соответствующей питательной среды. Применяли среду MEM с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS), 2 мМ L-глутамина и 10 мМ HEPES. Клетки выращивали в течение 16-20 ч при 37°C с 5 и 10% CO2 соответственно. Перед экспериментом клетки промыли средой без FBS. Клетки выращивали в течение 30 мин при 37°C с 1 мл конкурентной смеси, содержащей соответствующую питательную среду с 2% FBS, 10-8 М 125Емеченным de-AGP и ASO, содержащим GalNAc-кластер в концентрациях в диапазоне от 10-11 до 10-5 М. Неспецифическое связывание определили в присутствии 10-2 М GalNAc сахара. Клетки дважды промыли средой без FBS для удаления несвязанного 125Емеченного deAGP и конкурирующего GalNAc ASO. Клетки лизировали с применением буфера RLT производства компании Qiagen, содержащего 1% β-меркаптоэтанола. Лизаты перенесли в круглодонные аналитические пробирки после быстрого 10-минутного цикла замораживания/оттаивания, и анализировали на γсчетчике. Неспецифическое связывание вычли, а затем разделили импульсы белка 125I на значение импульсов при самой низкой концентрации GalNAc-ASO. Кривые ингибирования построили по уравнению моносайтового конкурентного связывания, применив алгоритм нелинейной регрессии для расчета связывающей аффиности (KD).
Результаты в табл. 97 были получены в экспериментах, выполненных в пять разных дней. Результаты для олигонуклеотидов, отмеченных верхним индексом а, представляют собой средние значения экспериментов, выполненных в два разных дня. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгирующую группу GalNAc на 5'-конце, связывают асиалогликопротеиновый рецептор человеческих клеток HepG2 с аффинностью, которая в 1,5-16 раз больше, чем для олигонуклеотидов, содержащих конъюгирующую группу GalNAc на 3'-конце.
Таблица 97
Результаты анализа связывания асиалогликопротеинового рецептора
ISIS № | Конъюгат GalNAc | Конец олигонуклеотида, к которому присоединен конъюгат GalNAc | Ко(нМ) |
661161a | GalNAc3-3 | 5’ | 3,7 |
6668813 | GalNAc3-10 | 5’ | 7,6 |
666981 | GalNAc3-7 | 5’ | 6,0 |
670061 | GalNAc3-13 | 5’ | 7,4 |
655861a | GalNAc3-l | J | 11,6 |
6778413 | GalNAc3-19 | 'У ’ э | 60,8 |
Пример 100. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, содержащих конъюгирующую группу GalNAc, нацеленных на Аро(а), in vivo.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в табл. 98а, испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
- 171 031393
Таблица 98а
Модифицированные ASO, нацеленные на АРО(а)
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID NO. |
68125 1 | GalNAc3-7a-onesGes mCesTesmCesmCdsGdsTdsTdsGdsGds Τ' ΙΪ1ζ~1 гр гр гр гр IdsGis Cds 1 ds i esCres 1 es 1 es Ce | GalNAc3-7a | PO | 53 |
68125 7 | GalNAc3-7a-o’TesGeomCeoTeomCeomCdsGdsTdsTdsGdsGds rp ΙΪ1ζ~1 rp rp rp rp ΙΪ1ζ~^ IdsCrds Cds -I ds 1 eoG;o les les Ce | GalNAc3-7a | PO | 53 |
Структура GalNAc3-7a показана в примере 48.
Лечение.
Каждой самке трансгенных мышей, экспрессирующих человеческий Аро(а), один раз в неделю, в целом 6 доз, вводили подкожную инъекцию олигонуклеотида и дозы, перечисленной в табл. 98b, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 3 животных. Образцы крови брали за день до введения дозы для определения исходных уровней белка Аро(а) в плазме, а также через 72 ч, 1 и 2 недели после введения первой дозы. Дополнительные пробы крови брали через 3, 4, 5 и 6 недель после введения первой дозы. Уровни белка Аро(а) в плазме измеряли при помощи твердофазного иммуноферментного анализа. Результаты в табл. 98b представлены как средний процент от уровней белка Аро(а) в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням (% BL). Результаты показывают, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгирующую группу GalNAc, демонстрируют эффективное снижение экспрессии Аро(а). Этот мощный эффект наблюдали для олигонуклеотида, содержащего только PS межнуклеозидные связи, и для олигонуклеотида, содержащего смешанные РО и PS связи.
Таблица 98b
Уровни белка Аро(а) в плазме
ISIS № | Доза (мг/кг) | Apo(a) через 72 часа (% BL) | Аро(а) через 1 неделю (% BL) | Аро(а) через 3 недели (% BL) |
PBS | н.д. | 116 | 104 | 107 |
681251 | о,з | 97 | 108 | 93 |
ι,ο | 85 | 77 | 57 | |
з,о | 54 | 49 | И | |
10,0 | 23 | 15 | 4 | |
681257 | о,з | 114 | 138 | 104 |
ι,ο | 91 | 98 | 54 | |
з,о | 69 | 40 | 6 | |
10,0 | 30 | 21 | 4 |
Пример 101. Антисмысловое ингибирование олигонуклеотидами, содержащими кластер GalNAc, связанный через стабильный фрагмент.
Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 99, испытали на ингибирование экспрессии мышиного АРОС-III in vivo. Мышам С57В1/6 ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в табл. 99, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Каждой мыши, обработанной соединением ISIS 440670, вели дозу 2, 6, 20 или 60 мг/кг. Каждой мыши, обработанной соединением ISIS 680772 или 696847, ввели 0,6, 2, 6 или 20 мг/кг. Конъюгирующая группа GalNAc в ISIS 696847 связана через стабильный фрагмент, тиофосфатную связь, вместо легко расщепляемого фосфодиэфир-содержащей связи. Животных умертвили через 72 ч после введения дозы. Уровни мРНК АРОС-III в печени измерили при помощи ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК АРОС-III нормализовали к уровням мРНК циклофилина по стандартным протоколам. Результаты представлены в табл. 99 как средний процент уровней мРНК АРОС-III для каждой экспериментальной группы по сравнению с контрольной группой, обработанной солевым раствором. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгирующую группу GalNAc, были существенно более эффективными, чем олигонуклеотид, не содержащий конъюгирующую группу. Кроме того, олигонуклеотид, содержащий конъюгирующую группу GalNAc, связанную с олигонуклеотидом через расщепляемый фрагмент (ISIS 680772), был еще более эффективным, чем олигонуклеотид, содержащий конъюгирующую группу GalNAc, связанную с олигонуклеотидом через стабильный фрагмент (ISIS 696847).
- 172 031393
Таблица 99
Модифицированные олигонуклеотиды, нацеленные на мышиный АРОС-III
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | C M | Доза (мг/кг) | мРНК АРОС-III (% PBS) | SEQ ID NO |
440670 | CesAesGes CesTesTdsTdsAdsTdsTdsAds GdsGdsGdsAds Ces AesGes CesAe | н.д | 2 | 92 | 47 |
6 | 86 | ||||
20 | 59 | ||||
60 | 37 | ||||
680772 | GalNAc3-7a.0,mCesAesGesmCesTesTdsTdsAds TdsTdsAdsGds GdsGdsAds mCes AesGesmCesAe | PO | 0,6 | 79 | 47 |
2 | 58 | ||||
6 | 31 | ||||
20 | 13 | ||||
696847 | GalNAc3-7a.sAcesAesGes mCesTesTdsTdsAdsTds TdsAdsGdsGdsGdsAds Ces AesGes CesAe | н.д (PS ) | 0,6 | 83 | 47 |
2 | 73 | ||||
6 | 40 | ||||
20 | 28 |
Структура GalNAc3-7a показана в примере 48.
Пример 102. Распределение в печени антисмысловых олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAc.
Оценили распределение в печени ISIS 353382 (см. табл. 23), который не содержит конъюгата GalNAc, и ISIS 655861 (см. табл. 23), который содержит конъюгат GalNAc. Самцам мышей balb/c ввели однократную подкожную инъекцию ISIS 353382 или 655861 в дозе, перечисленной в табл. 100. Каждая экспериментальная группа состояла из 3 животных, за исключением группы с дозой 18 мг/кг для ISIS 655861, которая состояла из 2 животных. Животных умертвили через 48 ч после введения дозы для определения распределения олигонуклеотидов в печени. Для измерения количества молекул антисмыслового олигонуклеотида на клетку, метку трис-бипиридина рутения(П) (MSD TAG, Meso Scale Discovery) конъюгировали с олигонуклеотидным образцом, применяемым для обнаружения антисмысловых олигонуклеотидов. Результаты, представленные в табл. 100, представляют собой средние концентрации олигонуклеотида для каждой экспериментальной группы в единицах измерения миллионов молекул олигонуклеотида на клетку. Результаты демонстрируют, что при равных дозах олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc, содержался в более высоких концентрациях в целом в печени и в гепатоцитах, чем олигонуклеотид, не содержащий конъюгата GalNAc. Кроме того, олигонуклеотид, содержащий конъюгат GalNAc, содержался в более низких концентрациях в непаренхиматозных клетках печени, чем олигонуклеотид, не содержащий конъюгата GalNAc. И тогда как концентрации ISIS 655861 в гепатоцитах и не паренхиматозных клетках печени были одинаковыми в расчете на однуклетку, содержание гепатоцитов в печени составляет около 80 об.%. Следовательно, основная часть олигонуклеотида ISIS 655861, содержащегося в печени, находилась в гепатоцитах, тогда как основная часть олигонуклеотида ISIS 353382, содержащегося в печени, находилась в непаренхиматозных клетках печени.
Таблица 100
ISIS № | Доза (мг/кг) | Концентрация в печени в целом (молекул*10Л60 на клетку) | Концентрация в гепатоцитах (молекул* 10Л60 на клетку) | Концентрация в непаренхиматозных клетках печени (молекул* 10Л60 на клетку) |
353382 | 3 | 9,7 | 1,2 | 37,2 |
10 | 17,3 | 4,5 | 34,0 | |
20 | 23,6 | 6,6 | 65,6 | |
30 | 29,1 | П,7 | 80,0 | |
60 | 73,4 | 14,8 | 98,0 | |
90 | 89,6 | 18,5 | 119,9 | |
655861 | 0.5 | 2,6 | 2,9 | 3,2 |
1 | 6,2 | 7,0 | 8,8 | |
3 | 19,1 | 25,1 | 28,5 | |
6 | 44,1 | 48,7 | 55,0 | |
18 | 76,6 | 82,3 | 77,1 |
Пример 103. Продолжительность действия in vivo олигонуклеотидов, нацеленных на АРОС-III, содержащих конъюгат GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в табл. 101, испытали в исследовании однократной дозы на продолжительность действия у мышей.
- 173 031393
Таблица 101
Модифицированные ASO, нацеленные на APOC-III
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAcs | CM | SEQ ID NO. |
30480 1 | Д гр гр Шрч Т Т Л'' Т 111р А Г' 111р гр 'Ws'Jcs C-cs 1 es-1 es ds 1 ds 1 ds'Jds-1 ds ds ^ds^-ds'Jds ds-1 es Tes TesAesTe | н.д. | н.д. | 20 |
66308 4 | GalNAc3-3a-0’Ad0AesGe0 CeoTeoTeo CdsTdsTdsGdsTds Cds mCdsAdsGdsmCdsTeoTeo TesAesTe | GalNAc3-3a | Ad | 36 |
67924 1 | Д Шрч rp rp Шрч T T Л'' T ГПрч Шрч а Р Шрч гр -^-esCTeo Geo-Leo-Leo Ws J-dsdsCrds-L ds Ws Gds-^-dsCrds Ws-Leo Teo TesAesTeoAdO’-GalNAc3-19a | GalNAcs19a | Ad | 21 |
Структура GalNAc3-3a показана в примере 39, a GalNAc3-19a показана в примере 70.
Лечение.
Самкам трансгенных мышей, экспрессирующим человеческий АРОС-III, ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида, перечисленного в табл. 101, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 3 животных. Образцы крови брали до введения дозы для определения исходных показателей и на 3-, 7-, 14-, 21-, 28-, 35- и 42-й день после введения дозы. Уровни триглицеридов и белка АРОС-III в плазме измеряли так, как описано в примере 20. Результаты в табл. 102 представлены как средний процент уровней триглицеридов и АРОС-III в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням. Сравнение результатов в табл. 58 примера 79 с результатами, представленными ниже в табл. 102, демонстрирует, что олигонуклеотиды, содержащие смесь фосфодиэфирных и тиофосфатных межнуклеозидных связей, обладают увеличенной продолжительностью действия, чем эквивалентные олигонуклеотиды, содержащие только тиофосфатные межнуклеозидные связи.
Таблица 102
Уровни триглицеридов и белка АРОС-III в плазме трансгенных мышей
ISIS № | Доза (мг/кг) | Временные точки (дни после введения | Триглицериды (% от исходного значения) | Белок АРОС-Ш (% от исходного значения) | Кластер GalNAcs | СМ |
дозы) | ||||||
PBS | н.д. | 3 | 96 | 101 | н.д. | н.д. |
7 | 88 | 98 | ||||
14 | 91 | 103 | ||||
21 | 69 | 92 | ||||
28 | 83 | 81 | ||||
35 | 65 | 86 | ||||
42 | 72 | 88 | ||||
304801 | 30 | 3 | 42 | 46 | н.д. | Н.д. |
7 | 42 | 51 | ||||
14 | 59 | 69 | ||||
21 | 67 | 81 | ||||
28 | 79 | 76 | ||||
35 | 72 | 95 | ||||
42 | 82 | 92 | ||||
663084 | 10 | 3 | 35 | 28 | GalNAcsЗа | Ad |
7 | 23 | 24 | ||||
14 | 23 | 26 | ||||
21 | 23 | 29 | ||||
28 | 30 | 22 | ||||
35 | 32 | 36 | ||||
42 | 37 | 47 | ||||
679241 | 10 | 3 | 38 | 30 | GalNAcs19а | Ad |
7 | 31 | 28 | ||||
14 | 30 | 22 | ||||
21 | 36 | 34 | ||||
28 | 48 | 34 | ||||
35 | 50 | 45 | ||||
42 | 72 | 64 |
- 174 031393
Пример 104. Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат 5'-GalNAc2
Соединение 120 имеется в продаже, а синтез соединения 126 описан в примере 49. Соединение 120 (1 г, 2,89 ммоль), HBTU (0,39 г, 2,89 ммоль) и HOBt (1,64 г, 4,33 ммоль) растворили в ДМФА (10 мл) и добавили Н^диизопропилэтиламин (1,75 мл, 10,1 ммоль). Примерно через 5 мин в реакционную смесь добавили бензиловый эфир аминогексановой кислоты (1,36 г, 3,46 ммоль). Через 3 ч реакционную смесь вылили в 100 мл 1 М раствора NaHSO4 и экстрагировали 2x50 мл этилацетата. Органические слои объединили и промыли 3x40 мл насыщенного раствора NaHCO3 и 2х насыщенным солевым раствором, высушили при помощи Na2SO4, отфильтровали и концентрировали. Продукт очистили силикагелевой колоночной хроматографией (ДХМ:ЕА: гексаны, 1:1:1) с получением соединения 231. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались со структурой. Соединение 231 (1,34 г, 2,438 ммоль) растворили в дихлорметане (10 мл) и добавили трифторуксусную кислоту (10 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением и выпарили вместе с толуолом (3x10 мл). Остаток высушили под пониженным давлением с получением соединения 232 в виде трифторацетатной соли. Синтез соединения 166 описан в примере 54. Соединение 166 (3,39 г, 5,40 ммоль) растворили в ДМФА (3 мл). Раствор соединения 232 (1,3 г, 2,25 ммоль) растворили в ДМФА (3 мл) и добавили Н^диизопропилэтиламин (1,55 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем вылили в воду (80 мл), а водный слой экстрагировали EtOAc (2x100 мл). Органическую фазу отделили и промыли насыщенным водным раствором NaHCO3 (3x80 мл), 1 М NaHSO4 (3x80 мл) и насыщенным солевым раствором (2x80 мл), затем высушили (Na2SO4), отфильтровали и концентрировали. Остаток очистили силикагелевой колоночной хроматографией с получением соединения 233. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались со структурой. Соединение 233 (0,59 г, 0,48 ммоль) растворили в метаноле (2,2 мл) и этилацетате (2,2 мл). Добавили палладий-на-углероде (10 мас.% Pd/C, влажный, 0,07 г) и перемешивали реакционную смесь в атмосфере водорода в течение 3 ч. Реакционную смесь отфильтровали через слой целита и концентрировали с получением карбоновой кислоты. Карбоновую кислоту (1,32 г, 1,15 ммоль, не содержащая кластера кислота) растворили в ДМФА (3,2 мл). К ней добавили добавили Н^диизопропилэтиламин (0,3 мл, 1,73 ммоль) и PFP-ТФК (0,30 мл, 1,73 ммоль). Через 30 мин перемешивания при комнатной температуре реакционную смесь вылили в воду (40 мл) и экстрагировали EtOAc (2x50 мл). Выполнили стандартную процедуру выделения продукта, как описано выше, с получением соединения 234. Данные ЖХМС и ЯМР согласовались со структурой. Олигонуклеотид 235 получили по общему способу, описанному в примере 46. Кластерная часть GalNAc2 (GalNAc2-24a) конъюгирующей группы GalNAc2-24 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащимся в олигонуклеотиде, с получением различных конъюгирующих групп. Структура GalNAc2-24 (GalNAc2-24a-CM) представлена ниже
- 175 031393
Пример 105. Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAc1-25
Синтез соединения 166 описан в примере 54. Олигонуклеотид 236 получили по общему способу, описанному в примере 46.
Альтернативно, олигонуклеотид 236 синтезировали по схеме, изображенной ниже, а соединение 238 применяли для получения олигонуклеотида 236 по способам, описанным в примере 10.
........ ОН
239
H2N
ОН
TEA,ацетонитрил тетразол, 1-металимидазол, ДМФА
О
-“-Ν
237 Н
2-цианоэталтетраизопропилфосфородиамидит
Кластерная часть GalNAc1 (GalNAc1-25a) конъюгирующей группы GalNAc1-25 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащемся в олигонуклеотиде, с получением различных конъюгирующих групп. Структура GalNAc1-25 (GalNAc1-25a-CM) представлена ниже
Пример 106. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, нацеленных на SRB-1, содержащих конъюгат 5'-GalNAc2 или 5'-GalNAc3.
Олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 103 и 104, испытали в дозозависимых исследованиях антисмыслового ингибирования SRB-1 у мышей.
Лечение.
Шестинедельным самцам мышей C57BL/6 (Jackson Laboratory, Бар-Харбор, штат Мэн) ввели однократную подкожную инъекцию 2, 7 или 20 мг/кг ISIS № 440762; или 0,2, 0,6, 2, 6 или 20 мг/кг ISIS № 686221, 686222 или 708561; или солевого раствора. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Мышей умертвили через 72 ч после последнего введения. Уровни мРНК SRB-1 в печени измерили при помощи ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК SRB-1 нормализовали к уровням мРНК циклофилина по стандартным протоколам. Антисмысловые олигонуклеотиды снижают уровни мРНК SRB-1 дозозависимым образом, а результаты ED50 представлены в табл. 103 и 104. Хотя в предыдущих исследованиях показано, что тривалентные GalNAc-конъюгированные олигонуклеотиды существенно более эффективны, чем двухвалентные GalNAc-конъюгированные олигонуклеотиды, которые, в свою очередь, существенно более эффективны, чем одновалентные GalNAc-конъюгированные олигонуклеотиды (см., например, Khorev et al., Bioorg. & Med. Chem., т. 16, 5216-5231 (2008)), обработка антисмысловыми олигонуклеотидами, содержащими одновалентные, двухвалентные и тривалентные кластеры GalNAc, приводит к снижению уровней мРНК SRB-1 с одинаковой эффективностью, как показано в табл. 103 и 104.
- 176 031393
Таблица 103
Модифицированные олигонуклеотиды, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc | ED50 (мг/кг) | SEQ ID No |
44076 2 | Tks mCksAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds mCdsTdsTksmCk | Н.Д. | 4,7 | 22 |
68622 1 | GalNAc2-24a-0’Ad0TkS CksAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds Π1/-Ί rp rp Π1/-Ί Gds Ids Iks Gk | GalNAc2 -24a | 0,39 | 26 |
68622 2 | GalNAc3-13a-O’AdoTks CksAdsGdsTds CdsAdsTdsGdsAds rp гр Gds Ids Iks Gk | GalNAc3 -13a | 0,41 | 26 |
Легенда к таблице представлена в примере 93. Структура GalNAc3-13a показана в примере 62, а структура GalNAc2-24a показана в примере 104.
Таблица 104
Модифицированные олигонуклеотиды, нацеленные на SRB-1
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc | ED50 (мг/кг) | SEQ ID No |
44076 2 | TksmCksAdsGdsTds mCdsAdsTdsGdsAdsmCdsTdsTksmCk | Н.Д. | 5 | 22 |
70856 1 | GalNAci-25a-O’TkS mCkSAdsGdsTdsmCdsAdsTdsGdsAds GdsldsIks Gk | GalNAd -25a | 0,4 | 22 |
Легенда к таблице представлена в примере 93. Структура GalNAc1-25a показана в примере 105.
Оценили также концентрации олигонуклеотидов, представленных в табл. 103 и 104, в печени, применив способы, описанные в примере 75. Результаты, показанные ниже в табл. 104а и 104b, представляют собой средние значения общего содержания антисмысловых олигонуклеотидов в тканях для каждой экспериментальной группы, измеренные по УФ, в единицах измерения мкг олигонуклеотида на 1 г ткани печени. Результаты демонстрируют, что олигонуклеотиды, содержащие конъюгирующую группу GalNAc, накапливаются в печени в существенно более высоких количествах, чем при той же дозе олигонуклеотида, не содержащего конъюгирующую группу GalNAc. Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие один, два или три лиганда GalNAc в своих соответствующих группах конъюгата, накапливаются в печени в равных количествах. Этот результат является неожиданным с учетом данных, представленных выше в литературном источнике Khorev et al., и он согласуется с данными активности, представленными выше в табл. 103 и 104.
Таблица 104а
Концентрации в печени олигонуклеотидов, содержащих конъюгирующую группу GalNAc2 или GalNAc3
ISIS № | Доза (мг/кг) | [Антисмысловый олигонуклеотид] (мкг/г) | Кластер GalNAc | CM |
440762 | 2 | 2,1 | н.д. | н.д. |
7 | 13,1 | |||
20 | 31,1 | |||
686221 | 0,2 | 0,9 | GalNAc2-24a | Ad |
0,6 | 2,7 | |||
2 | 12,0 | |||
6 | 26,5 | |||
686222 | 0,2 | 0,5 | GalNAc3-13a | Ad |
0,6 | 1,6 | |||
2 | И,6 | |||
6 | 19,8 |
Таблица 104b
Концентрации в печени олигонуклеотидов, содержащих конъюгирующую группу GalNAc1
ISIS № | Доза (мг/кг) | [Антисмысловый олигонуклеотид] (мкг/г) | Кластер GalNAc | СМ |
440762 | 2 | 2,3 | н.д. | н.д. |
7 | 8,9 | |||
20 | 23,7 | |||
708561 | 0,2 | 0,4 | GalNAcr25a | РО |
0,6 | 1,1 | |||
2 | 5,9 | |||
6 | 23,7 | |||
20 | 53,9 |
- 177 031393
Пример 107. Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAci-26 или GalNAci-27
Олигонуклеотид 239 синтезировали связыванием соединения 47 (см. пример 15) с кислотой 64 (см. пример 32), применяя HBTU и DIEA в ДМФА. Полученное амид-содержащее соединение тиофосфорилировали, затем присоединили к 5'-концу олигонуклеотида по способам, описанным в примере 10. Кластерная часть GalNAc1 (GalNAc1-26a) конъюгирующей группы GalNAc1-26 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащимся в олигонуклеотиде, с получением различных конъюгирующих групп. Структура GalNAc1-26 (GalNAc1-26a-CM) представлена ниже
Для присоединения конъюгирующей группы GalNAc1 к 3'-концу олигонуклеотида амид, образованный по реакции соединений 47 и 64, присоединили к твердой подложке по способам, описанным в примере 7. Затем выполнили синтез олигонуклеотида по способам, описанным в примере 9, с получением олигонуклеотида 240.
Кластерная часть GalNAc1 (GalNAc1-27a) конъюгирующей группы GalNAc1-27 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащемся в олигонуклеотиде, с получением различных конъюгирующих групп. Структура GalNAc1-27 (GalNAc1-27a-CM) представлена ниже
Пример 108. Антисмысловое ингибирование in vivo под действием олигонуклеотидов, содержащих конъюгирующую группу GalNAc, нацеленных на Аро(а), in vivo.
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в табл. 105, испытали в исследовании однократной дозы на мышах.
Таблица 105
Модифицированные ASO, нацеленные на АРО(а)
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc3 | CM | SEQ ID NO. |
49437 2 | гр р4 П1р-4 гр 1Лр~1 1Лр~$ р4 гр гр р-4 р~' гр рт П1р4 Ms^Jes ^esJ-es Ms MsMs Ms MsMisMis MsMs Ms rp rp p4 rp rp lllp4 Ms esMs Ms Ms | н.д. | н.д. | 53 |
68125 1 | GalNAc3-7a-O’TesGes mCesTesmCesmCdsGdsTdsTdsGdsGds rp Hip rp rp ρτ rp rp 1ϊ1ρ4 MsMs 1 ds 1 esvres lesles | GalNAc3-7a | PO | 53 |
68125 5 | GalNAc3-3a-onesGeo mCeoTeomCeomCdsGdSTdsTdsGdsGds rp Z4 111^4 rp rp z-4 гр гр 1Пр4 ^dskJds MisMsMoMo Ms Ms M | GalNAc3-3a | PO | 53 |
68125 6 | GalNAc3-10a-O’TesGeomCeoTeoniCeomCdsGdsTdsTdsGdsGds rp p> Шр4 rp rp z-4 rp rp Щр MsMls Ms ds MoMo Ms Ms M | GalNAc3-10a | PO | 53 |
68125 7 | GalNAc3-7a-O’TesGeo CeoTeo Ceo CdsGdsTdsTdsGdsGds rp p4 Hip rp гр p4 гр rp lllp MsMs vds Ids MoMo Ms Ms M | GalNAc3-7a | PO | 53 |
68125 8 | GalNAc3-13a-onesGeomCeoTeomCeomCdSGdSTdSTdsGdsGdS rp рч nip rp rp p-4 rp rp П1р-4 MsMls MisMsMoMo Ms Ms M | GalNAc3-13a | PO | 53 |
68126 0 | rp p> nip rp Шр4 Шр4 p4 rp rp p4 p> MsMo MMo Mo MsMls Ms MsMlsMls T dsGds mCdsT dsT eoGeo T esT eSmCeo Ad0’-GalNAc3-19 | GalNAc3-19a | Ad | 52 |
Структура GalNAc3-7a показана в примере 48. Лечение.
Самцам трансгенных мышей, экспрессирующим человеческий Аро(а), ввели однократную подкожную инъекцию олигонуклеотида и дозы, перечисленных в табл. 106, или PBS. Каждая экспериментальная группа состояла из 4 животных. Образцы крови брали за день до введения дозы для определения исходных уровней белка Аро(а) в плазме, а также через 1 неделю после введения первой дозы. Образцы крови
- 178 031393 брали дополнительно еженедельно в течение около 8 недель. Уровни белка Аро(а) в плазме измеряли при помощи твердофазного иммуноферментного анализа. Результаты в табл. 106 представлены как средний процент от уровней белка Аро(а) в плазме для каждой экспериментальной группы, нормализованных к исходным уровням (% BL). Результаты показывают, что антисмысловые олигонуклеотиды снижают экспрессию белка Аро(а). Кроме того, олигонуклеотиды, содержащие конъюгирующую группу GalNAc, демонстрируют еще более эффективное снижение экспрессии Аро(а), чем олигонуклеотид, не содержащий конъюгирующую группу.
Таблица 106
У | ровни белка Аро(а) в плазме | |
ISIS № | Доза (мг/кг) | Аро(а) через 1 неделю (% BL) |
PBS | н.д. | 143 |
494372 | 50 | 58 |
681251 | 10 | 15 |
681255 | 10 | 14 |
681256 | 10 | 17 |
681257 | 10 | 24 |
681258 | 10 | 22 |
681260 | 10 | 26 |
Пример 109. Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAc1-28 или GalNAcr29
Олигонуклеотид 241 синтезировали по таким же способам, как описаны в примере 71, с получением фосфорамидитного промежуточного соединения, после чего выполнили приемы, описанные в примере 10, для синтеза олигонуклеотида. Кластерная часть GalNAc1 (GalNAc1-28a) конъюгирующей группы GalNAc1-28 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащемся в олигонуклеотиде, с получением различных конъюгирующих групп. Структура GalNAc1-28 (GalNAc1-28a-CM) представлена ниже
Для присоединения конъюгирующей группы GalNAc1 к 3'-концу олигонуклеотида применяли такие же способы, как описаны в примере 71, с получение гидроксильного промежуточного соединения, которое затем присоединили к твердой подложке по способам, описанным в примере 7. Затем выполнили синтез олигонуклеотида по способам, описанным в примере 9, с получением олигонуклеотида 242.
Кластерная часть GalNAc1 (GalNAc1-29a) конъюгирующей группы GalNAc1-29 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом, содержащемся в олигонуклеотиде, с получением различных конъюгирующих групп. Структура GalNAc1-29 (GalNAc1-29a-CM) представлена ниже
- 179 031393
Пример 110. Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAci-30
Олигонуклеотид 246, содержащий конъюгирующую группу GalNAc1-30, где Y выбран из О, S, замещенного или незамещенного C1-C10 алкила, амино, замещенного амино, азидо, алкенила или алкинила, синтезировали так, как показано выше. Кластерная часть GalNAc1 (GalNAc1-30a) конъюгирующей группы GalNAc1-30 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения Y представляет собой часть расщепляемого фрагмента. В некоторых вариантах реализации изобретения Y представляет собой часть стабильного фрагмента, а расщепляемый фрагмент находится в олигонуклеотиде. Структура GalNAc1-30a представлена ниже
Пример 111. Синтез олигонуклеотидов, содержащих конъюгат GalNAc2-31 или GalNAc2-32 }ОСЕ Связывание с 5 -концом АЗО им.ги 248
DMTrCI
Тиофосфорилирование
Снятие групп DMTr
Связывание амидита 245
Снятие защиты и очистка ASO при помощи способов очистки DMT-оп
DMTrO. /
DMTrOJ ^0lig°-O
249
Олигонуклеотид 250, содержащий конъюгирующую группу GalNAc2-31, где Y выбран из О, S, замещенного или незамещенного C1-C10 алкила, амино, замещенного амино, азидо, алкенила или алкинила, синтезировали так, как показано выше. Кластерная часть GalNAc2 (GalNAc2-31a) конъюгирующей группы GalNAc2-31 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения Y-содержащая группа, которая находится непосредственно возле 5'-конца олигонуклеотида, представляет собой часть расщепляемого фрагмента. В некоторых вариантах реализации изобретения Y-содержащая группа, которая находится непосредственно возле 5'-конца олигонуклеотида, представляет собой часть стабильного фрагмента, а расщепляемый фрагмент находится в олигонуклеотиде. Структура GalNAc2-31a представлена ниже
- 180 031393
Синтез олигонуклеотида, содержащего конъюгат GalNAc2-32, представлен ниже
DMTrCI
Алл ил бромид
OsO4 НаЮд
МаВН4 но^
247
DMTrO
Тио фосфорил и- DMTr0^ °рование
Связывание с 5 - концом ASO
Снятие групп DMTr
Связывание амидита 245 л 4 Снятие защиты и очистка ASO
Р—Ni.iPrj- ПрП помощи способов очистки СЕО DMT-on
251 он
Олигонуклеотид 252, содержащий конъюгирующую группу GalNAc2-32, где Y выбран из О, S, замещенного или незамещенного C1-C10 алкила, амино, замещенного амино, азидо, алкенила или алкинила, синтезировали так, как показано выше. Кластерная часть GalNAc2 (GalNAc2-32a) конъюгирующей группы GalNAc2-32 может быть комбинирована с любым расщепляемым фрагментом с получением различных конъюгирующих групп. В некоторых вариантах реализации изобретения Y-содержащая группа, которая находится непосредственно возле 5'-конца олигонуклеотида, представляет собой часть расщепляемого фрагмента. В некоторых вариантах реализации изобретения Y-содержащая группа, которая находится непосредственно возле 5'-конца олигонуклеотида, представляет собой часть стабильного фрагмента, а расщепляемый фрагмент находится в олигонуклеотиде. Структура GalNAc2-32a представлена ниже
Пример 112. Модифицированные олигонуклеотиды, содержащие конъюгат GalNAc1.
Олигонуклеотиды в табл. 107, нацеленные на SRB-1, были синтезированы с группой конъюгата GalNAc1 для дополнительной проверки эффективности олигонуклеотидов, содержащих конъюгирующие группы, которые содержат лиганд GalNAc.
Таблица 107
ISIS № | Последовательность (от 5’ к 3’) | Кластер GalNAc | CM | SEQ ID NO. |
711461 | GalNAci-25a4).Ad„ Ges mCes Tes TesmCes Ads Gds Tds mCds Aus Tds Gds AdsmCdi Tds TX'CX'Co, Tes Te | GalNAci25a | Ad | 30 |
711462 | GalNAc1-25a.O’Ges mCes Tes TesmCes Ads Gds Tds mCds Ads rp A Hl/-* T-1 T Шр Щр< гр гр -I ds rJds TVds Ezds 1 ds 1 es Ces Czes 1 es 1 e | GalNAci25a | PO | 28 |
711463 | GalNAci-25a.0’Ges mCe0 Teo TeomCeo Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds Ads mCds Tds TeomCeomCes Tes Te | GalNAci25a | PO | 28 |
711465 | GalNAci-26a4l-Ad<, Ges mCes Tes TesmCes Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds AdsmCdS Tds TesTesTes Tes Te | GalNAd26a | Ad | 30 |
711466 | GalNAci-26a.0’Ges mCes Tes TesmCes Ads Gds Tds mCds Ads rp Д 111/-4 T rp mp1 111/-4 rp rp ^ds^ds^ds ^ds ^ds les ^es ^es les le | GalNAci26a | PO | 28 |
711467 | GalNAc!^^ Ges mCeo Teo TeomCeo Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds Ads Cds Tds Teo Ceo Ces Tes Te | GalNAd26a | PO | 28 |
711468 | GalNAci-28a.o Ad0 Ges mCes Tes TesmCes Ads Gds Tds mCds | GalNAci- | Ad | 30 |
- 181 031393
Ads Tds Gds Ads mCds Tds Tes mCesmCes Tes Te | 28a | |||
711469 | GalNAci-28a.O’Ges mCes Tes TesmCes Ads Gds Tds mCds Ads Τ' л 111/-5 t Τ' ΙΪ1/—5 Ш/—5 t T IdsGrdsAds Cds Ids les Ges Ces les le | GalNAci28a | PO | 28 |
711470 | GalNAci-28a.0’Ges mCe0 Teo TeomCeo Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds AdsmCds Tds Teo mCeomCes Tes Te | GalNAci28a | PO | 28 |
713844 | Ges mCes Tes TesmCes Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds AdsmCds Tds Tes mCesmCes Tes Te0’.GalNAci-27a | GalNAci27a | PO | 28 |
713845 | Ges Ceo Teo Teo Ceo Ads Gds Tds Cds Ads Tds Gds Ads mCds Tds TeomCeomCes Tes Teo,.GalNAC1-27a | GalNAci27a | PO | 28 |
713846 | Ges Ceo Teo Teo Ceo Ads Gds Tds Cds Ads Tds Gds AdsmCds Tds TeomCeomCes Tes Teo Ado,.GalNAC1-27a | GalNAci27a | Ad | 29 |
713847 | GesmCes Tes Те5тСе5 Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds AdsmCds Tds TesmCesmCes Tes Teo’.GalN AC|-29a | GalNAci29a | PO | 28 |
713848 | Ges Ceo Teo Teo Ceo Ads Gds Tds Cds Ads Tds Gds Ads mcds Tds TeomCeomCes Tes Teo’.GalNAci-29a | GalNAci29a | PO | 28 |
713849 | GesmCes Tes Те5тСе5 Ads Gds Tds mCds Ads Tds Gds AdsmCds Tds TesmCesmCes Tes TeoAdo’.GalNAC1-29a | GalNAci29a | Ad | 29 |
713850 | Oes Ceo Teo Teo Ceo Ads Gds Tds Cds Ads Tds Gds AdsmCds Tds TeomCeomCes Tes TeoAdo’.GalNAC1-29a | GalNAcr 29a | Ad | 29 |
Пример 113. Модифицированные олигонуклеотиды, содержащие конъюгирующую группу GalNAc, нацеленные на вирус гепатита В (HBV).
Олигонуклеотиды, перечисленные ниже в табл. 108, предназначены для воздействия на HBV. В некоторых вариантах реализации изобретения расщепляемый фрагмент представляет собой фосфодиэфирную связь.
Таблица 108
Последовательность (от 5’ к 3’) | SEQ ID No. |
GalNAC3-3-GesmCesAesGesAesGdsGdsTdsGdsAdsAdsGdsmCdsGdsAdsAesGesTesGesmCe | 3 |
GalNAc3-3-Ges CeoAeoGeoAeoGdsGdsTdsGdsAdsAdsGds CdsGdsAdsAeoGeoTesGes Ce | 3 |
GalNAC3-7-GesmCesAesGesAesGdsGdsTdsGdsAdsAdsGdsmCdsGdsAdsAesGesTesGesmCe | 3 |
GalNAc3-7-GesmCeoAeoGeoAeoGdsGdsTdsGdsAdsAdsGdsmCdsGdsAdsAeoGeoTesGesmCe | 3 |
GalNAc3-10-GesmCesAesGesAesGdsGdsTdsGdsAdsAdsGdsmCdsGdsAdsAesGesTesGesmCe | 3 |
GalNAc3-10-Ges CeoAeoGeoAeoGdsGdsTdsGdsAdsAdsGds CdsGdsAdsAeoGeoTesGes Ce | 3 |
GalNAc3-13-Ges CesAesGesAesGdsGdsTdsGdsAdsAdsGds CdsGdsAdsAesGesTesGes Ce | 3 |
GalNAC3-13-GesmCeoAeoGeoAeoGdsGdsTdsGdsAdsAdsGdsmCdsGdsAdsAeoGeoTesGesmCe | 3 |
GesmCesAesGesAesGdsGdsTdsGdsAdsAdsGdsmCdsGdsAdsAesGesTesGesmCe-GalNAc3-19 | 3 |
GesmCeoAeoGeoAeoGdsGdsTdsGdsAdsAdsGdsmCdsGdsAdsAeoGeoTesGesmCe-GalNAC3-19 | 3 |
GalNAc3-24-Ges CesAesGesAesGdsGdsTdsGdsAdsAdsGds CdsGdsAdsAesGesTesGes Ce | 3 |
GalNAc3-24-Ges CeoAeoGeoAeoGdsGdsTdsGdsAdsAdsGds CdsGdsAdsAeoGeoTesGes Ce | 3 |
GalNAc3-25-GesmCesAesGesAesGdsGdsTdsGdsAdsAdsGdsmCdsGdsAdsAesGesTesGesmCe | 3 |
GalNAc3-25-GesmCeoAeoGeoAeoGdsGdsTdsGdsAdsAdsGdsmCdsGdsAdsAeoGeoTesGesmCe | 3 |
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> | АЙСИС ФАРМАСЬЮТИКАЛС, ИНК. |
<120> | КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ МОДУЛИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ HBV И TTR |
<130> | BIOL0248WO |
<150> <151> | 61/818442 2013-05-01 |
<150> <151> | 61/823826 2013-05-15 |
<150> <151> | 61/843887 2013-07-08 |
<150> <151> | 61/871673 2013-08-29 |
<150> <151> | 61/880790 2013-09-20 |
- 182 031393
<150> <151> | 61/976991 2014-04-08 |
<150> <151> | 61/986867 2014-04-30 |
<160> | 53 |
<170> PatentIn версии 3.5
<210> | 1 |
<211> | 3182 |
<212> | ДНК |
<213> | Вирус гепатита B |
<400> 1 aattccacaa | cctttcacca | aactctgcaa | gatcccagag | tgagaggcct | gtatttccct | 60 |
gctggtggct | ccagttcagg | agcagtaaac | cctgttccga | ctactgcctc | tcccttatcg | 120 |
tcaatcttct | cgaggattgg | ggaccctgcg | ctgaacatgg | agaacatcac | atcaggattc | 180 |
ctaggacccc | ttctcgtgtt | acaggcgggg | tttttcttgt | tgacaagaat | cctcacaata | 240 |
ccgcagagtc | tagactcgtg | gtggacttct | ctcaattttc | tagggggaac | taccgtgtgt | 300 |
cttggccaaa | attcgcagtc | cccaacctcc | aatcactcac | caacctcctg | tcctccaact | 360 |
tgtcctggtt | atcgctggat | gtgtctgcgg | cgttttatca | tcttcctctt | catcctgctg | 420 |
ctatgcctca | tcttcttgtt | ggttcttctg | gactatcaag | gtatgttgcc | cgtttgtcct | 480 |
ctaattccag | gatcctcaac | caccagcacg | ggaccatgcc | gaacctgcat | gactactgct | 540 |
caaggaacct | ctatgtatcc | ctcctgttgc | tgtaccaaac | cttcggacgg | aaattgcacc | 600 |
tgtattccca | tcccatcatc | ctgggctttc | ggaaaattcc | tatgggagtg | ggcctcagcc | 660 |
cgtttctcct | ggctcagttt | actagtgcca | tttgttcagt | ggttcgtagg | gctttccccc | 720 |
actgtttggc | tttcagttat | atggatgatg | tggtattggg | ggccaagtct | gtacagcatc | 780 |
ttgagtccct | ttttaccgct | gttaccaatt | ttcttttgtc | tttgggtata | catttaaacc | 840 |
ctaacaaaac | aaagagatgg | ggttactctc | tgaattttat | gggttatgtc | attggaagtt | 900 |
atgggtcctt | gccacaagaa | cacatcatac | aaaaaatcaa | agaatgtttt | agaaaacttc | 960 |
ctattaacag | gcctattgat | tggaaagtat | gtcaacgaat | tgtgggtctt | ttgggttttg | 1020 |
ctgccccatt | tacacaatgt | ggttatcctg | cgttaatgcc | cttgtatgca | tgtattcaat | 1080 |
ctaagcaggc | tttcactttc | tcgccaactt | acaaggcctt | tctgtgtaaa | caatacctga | 1140 |
acctttaccc | cgttgcccgg | caacggccag | gtctgtgcca | agtgtttgct | gacgcaaccc | 1200 |
ccactggctg | gggcttggtc | atgggccatc | agcgcgtgcg | tggaaccttt | tcggctcctc | 1260 |
tgccgatcca | tactgcggaa | ctcctagccg | cttgttttgc | tcgcagcagg | tctggagcaa | 1320 |
acattatcgg | gactgataac | tctgttgtcc | tctcccgcaa | atatacatcg | tatccatggc | 1380 |
tgctaggctg | tgctgccaac | tggatcctgc | gcgggacgtc | ctttgtttac | gtcccgtcgg | 1440 |
- 183 031393
cgctgaatcc | tgcggacgac | ccttctcggg | gtcgcttggg | actctctcgt | ccccttctcc | 1500 |
gtctgccgtt | ccgaccgacc | acggggcgca | cctctcttta | cgcggactcc | ccgtctgtgc | 1560 |
cttctcatct | gccggaccgt | gtgcacttcg | cttcacctct | gcacgtcgca | tggagaccac | 1620 |
cgtgaacgcc | caccgaatgt | tgcccaaggt | cttacataag | aggactcttg | gactctctgc | 1680 |
aatgtcaacg | accgaccttg | aggcatactt | caaagactgt | ttgtttaaag | actgggagga | 1740 |
gttgggggag | gagattagat | taaaggtctt | tgtactagga | ggctgtaggc | ataaattggt | 1800 |
ctgcgcacca | gcaccatgca | actttttcac | ctctgcctaa | tcatctcttg | ttcatgtcct | 1860 |
actgttcaag | cctccaagct | gtgccttggg | tggctttggg | gcatggacat | cgacccttat | 1920 |
aaagaatttg | gagctactgt | ggagttactc | tcgtttttgc | cttctgactt | ctttccttca | 1980 |
gtacgagatc | ttctagatac | cgcctcagct | ctgtatcggg | aagccttaga | gtctcctgag | 2040 |
cattgttcac | ctcaccatac | tgcactcagg | caagcaattc | tttgctgggg | ggaactaatg | 2100 |
actctagcta | cctgggtggg | tgttaatttg | gaagatccag | catctagaga | cctagtagtc | 2160 |
agttatgtca | acactaatat | gggcctaaag | ttcaggcaac | tcttgtggtt | tcacatttct | 2220 |
tgtctcactt | ttggaagaga | aaccgttata | gagtatttgg | tgtctttcgg | agtgtggatt | 2280 |
cgcactcctc | cagcttatag | accaccaaat | gcccctatcc | tatcaacact | tccggaaact | 2340 |
actgttgtta | gacgacgagg | caggtcccct | agaagaagaa | ctccctcgcc | tcgcagacga | 2400 |
aggtctcaat | cgccgcgtcg | cagaagatct | caatctcggg | aacctcaatg | ttagtattcc | 2460 |
ttggactcat | aaggtgggga | actttactgg | tctttattct | tctactgtac | ctgtctttaa | 2520 |
tcctcattgg | aaaacaccat | cttttcctaa | tatacattta | caccaagaca | ttatcaaaaa | 2580 |
atgtgaacag | tttgtaggcc | cacttacagt | taatgagaaa | agaagattgc | aattgattat | 2640 |
gcctgctagg | ttttatccaa | aggttaccaa | atatttacca | ttggataagg | gtattaaacc | 2700 |
ttattatcca | gaacatctag | ttaatcatta | cttccaaact | agacactatt | tacacactct | 2760 |
atggaaggcg | ggtatattat | ataagagaga | aacaacacat | agcgcctcat | tttgtgggtc | 2820 |
accatattct | tgggaacaag | atctacagca | tggggcagaa | tctttccacc | agcaatcctc | 2880 |
tgggattctt | tcccgaccac | cagttggatc | cagccttcag | agcaaacaca | gcaaatccag | 2940 |
attgggactt | caatcccaac | aaggacacct | ggccagacgc | caacaaggta | ggagctggag | 3000 |
cattcgggct | gggtttcacc | ccaccgcacg | gaggcctttt | ggggtggagc | cctcaggctc | 3060 |
agggcatact | acaaactttg | ccagcaaatc | cgcctcctgc | ctccaccaat | cgccagacag | 3120 |
gaaggcagcc | taccccgctg | tctccacctt | tgagaaacac | tcatcctcag | gccatgcagt | 3180 |
gg 3182 <210> 2
- 184 031393
<211> 938 <212> ДНК <213> Homo sapiens | ||||||
<400> 2 gttgactaag | tcaataatca | gaatcagcag | gtttgcagtc | agattggcag | ggataagcag | 60 |
cctagctcag | gagaagtgag | tataaaagcc | ccaggctggg | agcagccatc | acagaagtcc | 120 |
actcattctt | ggcaggatgg | cttctcatcg | tctgctcctc | ctctgccttg | ctggactggt | 180 |
atttgtgtct | gaggctggcc | ctacgggcac | cggtgaatcc | aagtgtcctc | tgatggtcaa | 240 |
agttctagat | gctgtccgag | gcagtcctgc | catcaatgtg | gccgtgcatg | tgttcagaaa | 300 |
ggctgctgat | gacacctggg | agccatttgc | ctctgggaaa | accagtgagt | ctggagagct | 360 |
gcatgggctc | acaactgagg | aggaatttgt | agaagggata | tacaaagtgg | aaatagacac | 420 |
caaatcttac | tggaaggcac | ttggcatctc | cccattccat | gagcatgcag | aggtggtatt | 480 |
cacagccaac | gactccggcc | cccgccgcta | caccattgcc | gccctgctga | gcccctactc | 540 |
ctattccacc | acggctgtcg | tcaccaatcc | caaggaatga | gggacttctc | ctccagtgga | 600 |
cctgaaggac | gagggatggg | atttcatgta | accaagagta | ttccattttt | actaaagcag | 660 |
tgttttcacc | tcatatgcta | tgttagaagt | ccaggcagag | acaataaaac | attcctgtga | 720 |
aaggcacttt | tcattccact | ttaacttgat | tttttaaatt | cccttattgt | cccttccaaa | 780 |
aaaaagagaa | tcaaaatttt | acaaagaatc | aaaggaattc | tagaaagtat | ctgggcagaa | 840 |
cgctaggaga | gatccaaatt | tccattgtct | tgcaagcaaa | gcacgtatta | aatatgatct | 900 |
gcagccatta | aaaagacaca | ttctgtaaaa | aaaaaaaa | 938 |
<210> | 3 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 3 | |
gcagaggtga agcgaagtgc | 20 |
<210> | 4 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 4 | |
ccaatttatg cctacagcct | 20 |
<210> 5
- 185 031393 <211> 17 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетический олигонуклеотид <400> 5 ggcatagcag caggatg
<210> | 6 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 6 | |
aggagttccg cagtatggat | 20 |
<210> | 7 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 7 | |
gtgaagcgaa gtgcacacgg | 20 |
<210> | 8 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 8 | |
gtgcagaggt gaagcgaagt | 20 |
<210> <211> <212> <213> | 9 16 ДНК Искусственная | последовательность | |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид | |
<400> | 9 | ||
aggtgaagcg aagtgc | 16 |
<210> <211> <212> <213> | 10 16 ДНК Искусственная последовательность |
- 186 031393
<220> <223> Синтетический олигонуклеотид | |
<400> 10 tccgcagtat ggatcg | 16 |
<210> <211> <212> <213> | 11 18 ДНК Искусственная | последовательность | |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид | |
<400> | 11 | ||
aatttatgcc tacagcct | 18 |
<210> | 12 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 12 | |
tcttggttac atgaaatccc | 20 |
<210> | 13 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 13 | |
cttggttaca tgaaatccca | 20 |
<210> | 14 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 14 | |
ggaatactct tggttacatg | 20 |
<210> <211> <212> <213> | 15 20 ДНК Искусственная | последовательность |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид |
- 187 031393 <400> 15 tggaatactc ttggttacat
<210> | 16 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 16 | |
ttttattgtc tctgcctgga | 20 |
<210> | 17 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 17 | |
gaatgtttta ttgtctctgc | 20 |
<210> | 18 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 18 | |
aggaatgttt tattgtctct | 20 |
<210> | 19 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 19 | |
acaggaatgt tttattgtct | 20 |
<210> 20 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический олигонуклеотид <400> 20 agcttcttgt ccagctttat 20
- 188 031393 <210> 21 <211> 21 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический олигонуклеотид <400> 21 agcttcttgt ccagctttat a 21
<210> <211> <212> <213> | 22 14 ДНК Искусственная | последовательность | |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид | |
<400> | 22 | ||
tcagtcatga cttc | 14 |
<210> <211> <212> <213> | 23 15 ДНК Искусственная | последовательность | |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид | |
<400> | 23 | ||
tcagtcatga cttca | 15 |
<210> | 24 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 24 | |
gctgattaga gagaggtccc | 20 |
<210> | 25 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 25 | |
tcccatttca ggagacctgg | 20 |
<210> 26
- 189 031393 <211> 15 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223>
Синтетический олигонуклеотид <400> 26 atcagtcatg acttc
<210> | 27 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 27 | |
cggtgcaagg cttaggaatt | 20 |
<210> | 28 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 28 | |
gcttcagtca tgacttcctt | 20 |
<210> | 29 | |
<211> | 21 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 29 | |
gcttcagtca tgacttcctt a | 21 |
<210> | 30 | |
<211> | 21 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 30 | |
agcttcagtc atgacttcct t | 21 |
<210> 31 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность
- 190 031393 <220>
<223> Синтетический олигонуклеотид <400> 31 tggtaatcca ctttcagagg 20
<210> <211> <212> <213> | 32 21 ДНК Искусственная | последовательность | |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид | |
<400> | 32 | ||
tggtaatcca ctttcagagg | a | 21 |
<210> | 33 | |
<211> | 21 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 33 | |
tgcttcagtc atgacttcct t | 21 |
<210> | 34 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 34 | |
cactgatttt tgcccaggat | 20 |
<210> | 35 | |
<211> | 21 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 35 | |
cactgatttt tgcccaggat a | 21 |
<210> <211> <212> <213> | 36 21 ДНК Искусственная | последовательность |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид |
- 191 031393 <400> 36 aagcttcttg tccagcttta t
<210> <211> <212> <213> | 37 20 ДНК Искусственная | последовательность |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид |
<400> 37 acccaattca gaaggaagga
<210> <211> <212> <213> | 38 21 ДНК Искусственная | последовательность |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид |
<400> 38 acccaattca gaaggaagga a <210> 39 <211> 21 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический олигонуклеотид <400> 39 aacccaattc agaaggaagg a
<210> <211> <212> <213> | 40 21 ДНК Искусственная | последовательность |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид |
<400> 40 atggtaatcc actttcagag g <210> 41 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический олигонуклеотид <400> 41 tcttggttac atgaaatccc 20
- 192 031393 <210> 42 <211> 21 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>
<223> Синтетический олигонуклеотид <400>42 tcttggttac atgaaatccc a21
<210> | 43 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 43 | |
attcactttc ataatgctgg | 20 |
<210> <211> <212> <213> | 44 21 ДНК Искусственная | последовательность |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид |
<400> 44 attcactttc ataatgctgg a
<210> | 45 | |
<211> | 21 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 45 | |
atcttggtta catgaaatcc c | 21 |
<210> | 46 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 46 | |
atgcatggtg atgcttctga | 20 |
<210>47
- 193 031393
<211> <212> <213> | 20 ДНК Искусственная | последовательность |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид |
<400> 47 cagctttatt agggacagca
<210> <211> <212> <213> | 48 21 ДНК Искусственная | последовательность |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид |
<400> 48 cagctttatt agggacagca a
<210> | 49 | |
<211> | 21 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 49 | |
acagctttat tagggacagc a | 21 |
<210> <211> <212> <213> | 50 16 ДНК Искусственная | последовательность | |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид | |
<400> | 50 | ||
ttcagtcatg acttcc | 16 |
<210> <211> <212> <213> | 51 18 ДНК Искусственная | последовательность |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид |
<220> <221> <222> | misc_feature (разные свойства) (1)..(4) |
<223> основания в указанных положениях представляют собой РНК <220>
<221> misc_feature (разные свойства)
- 194 031393 <222> (15)..(18) <223> основания в указанных положениях представляют собой РНК <400> 51 gcuucagtca tgactucc
<210> <211> <212> <213> | 52 21 ДНК Искусственная | последовательность | |
<220> <223> | Синтетический | олигонуклеотид | |
<400> | 52 | ||
tgctccgttg gtgcttgttc | a | 21 |
<210> | 53 | |
<211> | 20 | |
<212> | ДНК | |
<213> | Искусственная последовательность | |
<220> | ||
<223> | Синтетический олигонуклеотид | |
<400> | 53 | |
tgctccgttg gtgcttgttc | 20 |
Claims (42)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид и конъюгирующую группу, при этом модифицированный олигонуклеотид состоит из 12-30 связанных нуклеозидов и содержит последовательность азотистых оснований, включающую часть по меньшей мере из 8 смежных азотистых оснований, комплементарную равной по длине части SEQ ID NO: 1, при этом последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 80% комплементарна SEQ ID NO: 1 и при этом конъюгирующая группа содержитAcHN
- 2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере один модифицированный сахар.
- 3. Соединение по п.2, отличающееся тем, что модифицированный сахар представляет собой бициклический сахар.
- 4. Соединение по любому из пп.2 и 3, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный сахар содержит 2'-O-метоксиэтил, стерически затрудненный этил, 3-фтор-HNA или 4'-(CH2)n-O2' мостик, где n равно 1 или 2.
- 5. Соединение по п.2, отличающееся тем, что модифицированный сахар представляет собой 2'-Oметоксиэтил.
- 6. Соединение по любому из пп.1-5, отличающееся тем, что по меньшей мере один нуклеозид содержит модифицированное азотистое основание.
- 7. Соединение по п.6, отличающееся тем, что модифицированное азотистое основание представляет собой 5-метилцитозин.
- 8. Соединение по любому из пп.1-7, отличающееся тем, что конъюгирующая группа связана с модифицированным олигонуклеотидом на 5'-конце модифицированного олигонуклеотида.- 195 031393
- 9. Соединение по любому из пп.1-7, отличающееся тем, что конъюгирующая группа связана с модифицированным олигонуклеотидом на 3'-конце модифицированного олигонуклеотида.
- 10. Соединение по любому из пп.1-9, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь в модифицированном нуклеотиде выбрана из тиофосфатной межнуклеозидной связи и фосфодиэфирной межнуклеозидной связи.
- 11. Соединение по п.10, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 5 фосфодиэфирных межнуклеозидных связей.
- 12. Соединение по п.10, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере две тиофосфатные межнуклеозидные связи.
- 13. Соединение по любому из пп.1-12, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид является одноцепочечным.
- 14. Соединение по любому из пп.1-12, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид является двухцепочечным.
- 15. Соединение по любому из пп.1-14, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит сегмент гэпа, состоящий из связанных дезоксинуклеозидов;сегмент 5'-крыла, состоящий из связанных нуклеозидов; и сегмент 3'-крыла, состоящий из связанных нуклеозидов, при этом сегмент гэпа расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом 3'-крыла и каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит модифицированный сахар.
- 16. Соединение по п.15, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь в сегменте гэпа модифицированного олигонуклеотида представляет собой тиофосфатную связь.
- 17. Соединение по п.16, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид дополнительно содержит по меньшей мере одну тиофосфатную межнуклеозидную связь в каждом сегменте крыла.
- 18. Соединение по любому из пп.1-17, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 90% комплементарна SEQ ID NO: 1.
- 19. Соединение по любому из пп.1-17, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 95% комплементарна SEQ ID NO: 1.
- 20. Соединение по любому из пп.1-17, отличающееся тем, что последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 100% комплементарна SEQ ID NO: 1.
- 21. Соединение по любому из пп.1-20, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит последовательность азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 3-11.
- 22. Соединение по любому из пп.1-20, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из последовательности азотистых оснований любой из SEQ ID NO: 3-11.
- 23. Соединение по п.1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, состоящую из SEQ ID NO:3, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит сегмент гэпа, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов;сегмент 5'-крыла, состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и сегмент 3'-крыла, состоящий из пяти связанных нуклеозидов, при этом сегмент гэпа расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом 3'-крыла и каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтил-сахар, при этом каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.
- 24. Соединение по п.1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, состоящую из SEQ ID NO:4, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит сегмент гэпа, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов;сегмент 5'-крыла, состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и сегмент 3'-крыла, состоящий из пяти связанных нуклеозидов, при этом сегмент гэпа расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом 3'-крыла и каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтил-сахар, при этом каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.
- 25. Соединение по п.1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, состоящую из SEQ ID NO: 7, 6 или 8, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит сегмент гэпа, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;сегмент 5'-крыла, состоящий из 6 связанных нуклеозидов; и сегмент 3'-крыла, состоящий из 4 связанных нуклеозидов, при этом сегмент гэпа расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом 3'-крыла и каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтил-сахар, при этом каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.
- 26. Соединение по п.1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 17- 196 031393 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, состоящую из SEQ ID NO: 5, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит сегмент гэпа, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;сегмент 5'-крыла, состоящий из 3 связанных нуклеозидов; и сегмент 3'-крыла, состоящий из 4 связанных нуклеозидов, при этом сегмент гэпа расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом 3'-крыла и каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтил-сахар, при этом каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.
- 27. Соединение по п.1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, состоящую из SEQ ID NO:10, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит сегмент гэпа, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;сегмент 5'-крыла, состоящий из 2 связанных нуклеозидов; и сегмент 3'-крыла, состоящий из 4 связанных нуклеозидов, при этом сегмент гэпа расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом 3'-крыла; и 2 связанных нуклеозида сегмента 5'-крыла содержат 2'-O-метоксиэтил-сахар и стерически затрудненный этил-сахар в направлении от 5' к 3'; и 4 связанных нуклеозида сегмента 3'-крыла содержат стерически затрудненный этил-сахар, 2'-O-метоксиэтил-сахар, стерически затрудненный этил-сахар и 2'-O-метоксиэтил-сахар в направлении от 5' к 3'; при этом каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.
- 28. Соединение по п.1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, состоящую из SEQ ID NO: 9, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит сегмент гэпа, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;сегмент 5'-крыла, состоящий из 3 связанных нуклеозидов;сегмент 3'-крыла, состоящий из 3 связанных нуклеозидов, при этом сегмент гэпа расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом 3'-крыла; и 3 связанных нуклеозида сегмента 5'-крыла содержат 2'-O-метоксиэтил-сахар, стерически затрудненный этил-сахар и стерически затрудненный этил-сахар в направлении от 5' к 3'; и 3 связанных нуклеозида сегмента 3'крыла содержат стерически затрудненный этил-сахар, стерически затрудненный этил-сахар и 2'-Oметоксиэтил-сахар в направлении от 5' к 3'; при этом каждый цитозиновый остаток представляет собой 5метилцитозин.
- 29. Соединение по п.1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 18 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность азотистых оснований, состоящую из SEQ ID NO:11, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит сегмент гэпа, состоящий из 8 связанных дезоксинуклеозидов;сегмент 5'-крыла, состоящий из 5 связанных нуклеозидов; и сегмент 3'-крыла, состоящий из 5 связанных нуклеозидов, при этом сегмент гэпа расположен между сегментом 5'-крыла и сегментом 3'-крыла; и 5 связанных нуклеозидов сегмента 5'-крыла содержат стерически затрудненный этил-сахар, дезоксисахар, стерически затрудненный этил-сахар, дезоксисахар и стерически затрудненный этил-сахар в направлении от 5' к 3'; и каждый из 5 связанных нуклеозидов сегмента 3'-крыла содержит 2'-O-метоксиэтил-сахар; при этом каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.
- 30. Соединение по любому из пп.23-29, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь модифицированного олигонуклеотида выбрана из фосфодиэфирной межнуклеозидной связи и тиофосфатной межнуклеозидной связи.
- 31. Соединение по любому из пп.23-30, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь в сегменте гэпа модифицированного олигонуклеотида представляет собой тиофосфатную связь.
- 32. Соединение по п.31, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид дополнительно содержит по меньшей мере одну тиофосфатную межнуклеозидную связь в каждом сегменте крыла.
- 33. Соединение по любому из пп.30-32, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере две фосфодиэфирные межнуклеозидные связи.
- 34. Соединение по любому из пп.16-33, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит менее 14 тиофосфатных связей.
- 35. Соединение по любому из пп.16-33, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит менее 13 тиофосфатных связей.
- 36. Соединение по любому из пп.23-29, отличающееся тем, что каждая межнуклеозидная связь модифицированного олигонуклеотида представляет собой тиофосфатную связь.
- 37. Соединение по любому из пп.23-35, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид является одноцепочечным.
- 38. Соединение, содержащее следующую структуру:- 197 031393 или его фармацевтически приемлемая соль.
- 39. Композиция, способная лечить заболевание, расстройство или патологическое состояние, связанное с HBV, содержащая соединение по любому из пп.1-38 и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
- 40. Применение соединения по любому из пп.1-38 или композиции по п.39 для производства лекарственного средства для лечения заболевания, расстройства или патологического состояния, связанного с HBV, отличающееся тем, что заболевание, расстройство или патологическое состояние представляет собой разлитие желчи, воспаление печени, фиброз печени, воспаление, цирроз печени, печеночную недостаточность, рак печени, диффузное гепатоцеллюлярное воспалительное заболевание, гемофагоцитарный синдром, сывороточный гепатит, HBV виремию или трансплантацию, связанную с заболеванием печени.
- 41. Применение соединения по любому из пп.1-38 или композиции по п.39 для производства лекарственного средства для снижения уровней антигена HBV у субъекта, инфицированного HBV.
- 42. Применение по п.41, отличающееся тем, что антиген HBV представляет собой HBsAG или HBeAG.
Applications Claiming Priority (8)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361818442P | 2013-05-01 | 2013-05-01 | |
US201361823826P | 2013-05-15 | 2013-05-15 | |
US201361843887P | 2013-07-08 | 2013-07-08 | |
US201361871673P | 2013-08-29 | 2013-08-29 | |
US201361880790P | 2013-09-20 | 2013-09-20 | |
US201461976991P | 2014-04-08 | 2014-04-08 | |
US201461986867P | 2014-04-30 | 2014-04-30 | |
PCT/US2014/036463 WO2014179627A2 (en) | 2013-05-01 | 2014-05-01 | Compositions and methods for modulating hbv and ttr expression |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201592093A1 EA201592093A1 (ru) | 2016-06-30 |
EA031393B1 true EA031393B1 (ru) | 2018-12-28 |
Family
ID=51843959
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201592093A EA031393B1 (ru) | 2013-05-01 | 2014-05-01 | Композиции и способы модулирования экспрессии hbv и ttr |
EA201891479A EA036584B1 (ru) | 2013-05-01 | 2014-05-01 | Композиции и способы модулирования экспрессии hbv и ttr |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201891479A EA036584B1 (ru) | 2013-05-01 | 2014-05-01 | Композиции и способы модулирования экспрессии hbv и ttr |
Country Status (35)
Country | Link |
---|---|
US (24) | US9714421B2 (ru) |
EP (11) | EP2992098B1 (ru) |
JP (21) | JP6387084B2 (ru) |
KR (16) | KR20230113835A (ru) |
CN (11) | CN114058617A (ru) |
AU (19) | AU2014259756B2 (ru) |
BR (6) | BR112015027377B1 (ru) |
CA (5) | CA2921518A1 (ru) |
CL (2) | CL2015003217A1 (ru) |
CR (2) | CR20190269A (ru) |
CY (2) | CY1121879T1 (ru) |
DK (4) | DK2992098T3 (ru) |
DO (3) | DOP2015000268A (ru) |
EA (2) | EA031393B1 (ru) |
ES (4) | ES2730015T3 (ru) |
HK (5) | HK1221485A1 (ru) |
HR (2) | HRP20190987T1 (ru) |
HU (2) | HUE043697T2 (ru) |
IL (18) | IL284593B2 (ru) |
LT (2) | LT2992009T (ru) |
ME (1) | ME03390B (ru) |
MX (11) | MX2015015234A (ru) |
MY (2) | MY178929A (ru) |
NZ (6) | NZ728517A (ru) |
PE (2) | PE20152002A1 (ru) |
PH (3) | PH12015502493A1 (ru) |
PL (2) | PL2992098T3 (ru) |
PT (3) | PT2992009T (ru) |
RS (2) | RS58981B1 (ru) |
RU (8) | RU2699985C2 (ru) |
SG (5) | SG10201801813YA (ru) |
SI (2) | SI2992009T1 (ru) |
UA (2) | UA120287C2 (ru) |
WO (5) | WO2014179627A2 (ru) |
ZA (2) | ZA201507216B (ru) |
Families Citing this family (436)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3335715A3 (en) | 2008-10-15 | 2018-08-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of factor 11 expression |
CN102282155B (zh) | 2008-12-02 | 2017-06-09 | 日本波涛生命科学公司 | 磷原子修饰的核酸的合成方法 |
US9744183B2 (en) | 2009-07-06 | 2017-08-29 | Wave Life Sciences Ltd. | Nucleic acid prodrugs and methods of use thereof |
DK2620428T3 (da) | 2010-09-24 | 2019-07-01 | Wave Life Sciences Ltd | Asymmetrisk hjælpegruppe |
JP6126009B2 (ja) | 2010-11-17 | 2017-05-10 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | α−シヌクレイン発現の調節 |
DK2734208T3 (en) | 2011-07-19 | 2017-06-19 | Wave Life Sciences Ltd | PROCEDURES FOR SYNTHESIS OF FUNCTIONALIZED NUCLEIC ACIDS |
DK2751270T3 (en) | 2011-08-29 | 2018-10-29 | Ionis Pharmaceuticals Inc | OLIGOMER-CONJUGATE COMPLEXES AND THEIR USE |
AU2013202595B2 (en) | 2012-03-30 | 2016-04-21 | Biogen Ma Inc. | Methods for modulating Tau expression for reducing seizure and modifying a neurodegenerative syndrome |
EP3336189A1 (en) * | 2012-04-20 | 2018-06-20 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof |
US20160002624A1 (en) | 2012-05-17 | 2016-01-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide compositions |
US9574193B2 (en) | 2012-05-17 | 2017-02-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for modulating apolipoprotein (a) expression |
RU2748495C2 (ru) * | 2012-05-24 | 2021-05-26 | Ионис Фармасьютикалз, Инк. | Способы и композиции для модулирования экспрессии аполипопротеина (а) |
CN104684923B (zh) | 2012-07-13 | 2018-09-28 | 株式会社新日本科学 | 手性核酸佐剂 |
EP2872485B1 (en) | 2012-07-13 | 2020-12-16 | Wave Life Sciences Ltd. | Asymmetric auxiliary group |
RU2015104762A (ru) | 2012-07-13 | 2018-08-31 | Уэйв Лайф Сайенсес Лтд. | Хиральный контроль |
EP2920304B1 (en) * | 2012-11-15 | 2019-03-06 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotide conjugates |
EP2951305B1 (en) * | 2013-01-30 | 2018-08-15 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Lna oligonucleotide carbohydrate conjugates |
KR20200123263A (ko) * | 2013-02-14 | 2020-10-28 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | 지질단백질 리파제 결핍 (lpld) 모집단에서 아포지질단백질 c-iii (apociii) 발현의 조절 |
EP2992098B1 (en) | 2013-05-01 | 2019-03-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating hbv and ttr expression |
AU2014259954B2 (en) | 2013-05-01 | 2019-11-07 | Regulus Therapeutics Inc. | MicroRNA compounds and methods for modulating miR-122 |
CN105164261B (zh) | 2013-05-01 | 2022-03-18 | 莱古路斯治疗法股份有限公司 | 用于增强的细胞摄取的化合物和方法 |
SG10201908122XA (en) * | 2013-06-27 | 2019-10-30 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Antisense oligomers and conjugates targeting pcsk9 |
EP3019200B1 (en) * | 2013-07-11 | 2022-03-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide-ligand conjugates and process for their preparation |
JP6617702B2 (ja) | 2013-07-15 | 2019-12-11 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | Fty720のアザサイクリック拘束アナログ |
TWI657819B (zh) | 2013-07-19 | 2019-05-01 | 美商Ionis製藥公司 | 用於調節τ蛋白表現之組合物 |
US9943604B2 (en) | 2013-09-20 | 2018-04-17 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Targeted therapeutic nucleosides and their use |
EP3052626A1 (en) * | 2013-10-02 | 2016-08-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene |
US11162096B2 (en) | 2013-10-14 | 2021-11-02 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | Methods for modulating expression of C9ORF72 antisense transcript |
EP3060664B1 (en) | 2013-10-25 | 2021-07-07 | Sanofi | Microrna compounds and methods for modulating mir-21 activity |
MX2016005855A (es) * | 2013-11-14 | 2016-07-13 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Compuestos de conjugados antisentido de apolipoproteina b (apob). |
JP6482475B2 (ja) * | 2014-01-07 | 2019-03-13 | レナセラピューティクス株式会社 | アンチセンスオリゴヌクレオチド及び糖誘導体を含む二本鎖オリゴヌクレオチド |
WO2015108048A1 (ja) | 2014-01-15 | 2015-07-23 | 株式会社新日本科学 | 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤 |
US10322173B2 (en) | 2014-01-15 | 2019-06-18 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chiral nucleic acid adjuvant having anti-allergic activity, and anti-allergic agent |
JPWO2015108047A1 (ja) | 2014-01-15 | 2017-03-23 | 株式会社新日本科学 | 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤 |
PT3094728T (pt) | 2014-01-16 | 2022-05-19 | Wave Life Sciences Ltd | Desenho quiral |
JP6594902B2 (ja) | 2014-02-11 | 2019-10-23 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | ケトヘキソキナーゼ(KHK)iRNA組成物及びその使用方法 |
EP3978610A3 (en) | 2014-03-19 | 2022-08-24 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for modulating ataxin 2 expression |
US10006027B2 (en) | 2014-03-19 | 2018-06-26 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for modulating Ataxin 2 expression |
JP6622214B2 (ja) | 2014-04-01 | 2019-12-18 | バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドBiogen MA Inc. | Sod−1発現を調節するための組成物 |
BR122020024443B1 (pt) * | 2014-05-01 | 2022-02-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | Composto e composição farmacêutica para modulação da expressão de angptl3 |
DK3137091T3 (da) | 2014-05-01 | 2021-01-25 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Konjugater af modificerede antisense-oligonukleotider og anvendelse deraf til modulation af pkk-ekspression |
KR102369736B1 (ko) | 2014-05-01 | 2022-03-02 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | 보체 인자 b 발현을 조절하기 위한 조성물 및 방법 |
JP6667453B2 (ja) | 2014-05-01 | 2020-03-18 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | 成長ホルモン受容体発現を調節するための組成物及び方法 |
EP4223315A3 (en) * | 2014-05-01 | 2023-08-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Method for synthesis of reactive conjugate clusters |
GB201408623D0 (en) | 2014-05-15 | 2014-07-02 | Santaris Pharma As | Oligomers and oligomer conjugates |
AU2015264038B2 (en) | 2014-05-22 | 2021-02-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiotensinogen (AGT) iRNA compositions and methods of use thereof |
GB201410693D0 (en) | 2014-06-16 | 2014-07-30 | Univ Southampton | Splicing modulation |
US9487783B2 (en) | 2014-08-07 | 2016-11-08 | Regulus Therapeutics Inc. | Targeting microRNAs for metabolic disorders |
BR112017004056A2 (pt) | 2014-09-12 | 2017-12-05 | Biogen Ma Inc | composições e métodos para detecção da proteína smn em um indivíduo e tratamento de um indivíduo |
CN107109411B (zh) | 2014-10-03 | 2022-07-01 | 冷泉港实验室 | 核基因输出的定向增加 |
WO2016055601A1 (en) | 2014-10-10 | 2016-04-14 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Galnac phosphoramidites, nucleic acid conjugates thereof and their use |
WO2016061487A1 (en) * | 2014-10-17 | 2016-04-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotide agents targeting aminolevulinic acid synthase-1 (alas1) and uses thereof |
JOP20200092A1 (ar) | 2014-11-10 | 2017-06-16 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | تركيبات iRNA لفيروس الكبد B (HBV) وطرق لاستخدامها |
JP2017535552A (ja) | 2014-11-17 | 2017-11-30 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | アポリポタンパク質C3(APOC3)iRNA組成物およびその使用方法 |
JP2018504380A (ja) | 2014-12-18 | 2018-02-15 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッドAlnylam Pharmaceuticals, Inc. | Reversir(商標)化合物 |
WO2016112132A1 (en) | 2015-01-06 | 2016-07-14 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for modulating expression of c9orf72 antisense transcript |
US10538763B2 (en) | 2015-01-16 | 2020-01-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulation of DUX4 |
AU2016219263B2 (en) | 2015-02-13 | 2022-12-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Patatin-like phospholipase domain containing 3 (PNPLA3) iRNA compositions and methods of use thereof |
AU2016217825B2 (en) | 2015-02-15 | 2022-03-10 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Acyl-amino-LNA and/or hydrocarbyl-amino-LNA oligonucleotides |
US11129844B2 (en) | 2015-03-03 | 2021-09-28 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating MECP2 expression |
US10415038B2 (en) | 2015-04-03 | 2019-09-17 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating TMPRSS6 expression |
WO2016164746A1 (en) | 2015-04-08 | 2016-10-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the lect2 gene |
US10407678B2 (en) | 2015-04-16 | 2019-09-10 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for modulating expression of C9ORF72 antisense transcript |
WO2016172734A1 (en) | 2015-04-24 | 2016-10-27 | California Institute Of Technology | Reactivation of x chromosome genes |
WO2016205323A1 (en) | 2015-06-18 | 2016-12-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Polynucleotde agents targeting hydroxyacid oxidase (glycolate oxidase, hao1) and methods of use thereof |
WO2016209862A1 (en) | 2015-06-23 | 2016-12-29 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glucokinase (gck) irna compositions and methods of use thereof |
JP2018519811A (ja) | 2015-06-29 | 2018-07-26 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | 修飾crispr rna及び修飾単一crispr rnaならびにその使用 |
MY192997A (en) | 2015-07-10 | 2022-09-20 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Modulators of diacyglycerol acyltransferase 2 (dgat2) |
WO2017011286A1 (en) | 2015-07-10 | 2017-01-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Insulin-like growth factor binding protein, acid labile subunit (igfals) and insulin-like growth factor 1 (igf-1) irna compositions and methods of use thereof |
US20180193471A1 (en) * | 2015-07-16 | 2018-07-12 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | ß2GPI GENE EXPRESSION-SUPPRESSING NUCLEIC ACID CONJUGATE |
MA43072A (fr) | 2015-07-22 | 2018-05-30 | Wave Life Sciences Ltd | Compositions d'oligonucléotides et procédés associés |
CN107709342B (zh) | 2015-08-06 | 2021-09-03 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 制备乙酰半乳糖胺酸衍生物的方法 |
CN105111118B (zh) * | 2015-08-14 | 2017-04-12 | 天津小新医药科技有限公司 | L‑薄荷醇类p2y12受体拮抗剂、制备方法及其用途 |
CN105111119B (zh) * | 2015-08-14 | 2017-04-12 | 天津小新医药科技有限公司 | 一类卤代苯l‑薄荷醇类p2y12受体拮抗剂及其用途 |
US10633653B2 (en) | 2015-08-14 | 2020-04-28 | University Of Massachusetts | Bioactive conjugates for oligonucleotide delivery |
KR20180043819A (ko) | 2015-08-24 | 2018-04-30 | 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스 | Lna-g 방법 |
KR20180051550A (ko) | 2015-09-02 | 2018-05-16 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 프로그램된 세포사 1 리간드 1 (PD-L1) iRNA 조성물 및 그의 사용 방법 |
CA2999177A1 (en) | 2015-09-24 | 2017-03-30 | The Regents Of The University Of California | Synthetic sphingolipid-like molecules, drugs, methods of their synthesis and methods of treatment |
SG10201913209WA (en) | 2015-09-24 | 2020-02-27 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Modulators of kras expression |
US20180273948A1 (en) * | 2015-09-25 | 2018-09-27 | Tarveda Therapeutics, Inc. | RNAi CONJUGATES, PARTICLES AND FORMULATIONS THEREOF |
EP3353305A4 (en) * | 2015-09-25 | 2019-09-18 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds and their use |
EP3353306A4 (en) | 2015-09-25 | 2019-06-05 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | ANTISENSE CONJUGATED COMPOUNDS AND THEIR USE |
EP4285912A3 (en) | 2015-09-25 | 2024-07-10 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating ataxin 3 expression |
JOP20210043A1 (ar) | 2015-10-01 | 2017-06-16 | Arrowhead Pharmaceuticals Inc | تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa |
US10577388B2 (en) | 2015-10-02 | 2020-03-03 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotide conjugation process |
IL308174A (en) | 2015-10-09 | 2024-01-01 | Univ Southampton | Gene expression modulation and dysregulated protein expression scanning |
WO2017068087A1 (en) | 2015-10-22 | 2017-04-27 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotide detection method |
EP3394258B1 (en) | 2015-10-22 | 2021-09-22 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | In vitro toxicity screening assay |
BR122023026882A2 (pt) | 2015-11-06 | 2024-01-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | Uso de um composto oligomérico |
WO2017079745A1 (en) | 2015-11-06 | 2017-05-11 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds for use in therapy |
AR106683A1 (es) * | 2015-11-16 | 2018-02-07 | Hoffmann La Roche | FOSFORAMIDITA DE AGRUPACIÓN DE GalNAc |
WO2017096395A1 (en) | 2015-12-04 | 2017-06-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of treating breast cancer |
US11096956B2 (en) | 2015-12-14 | 2021-08-24 | Stoke Therapeutics, Inc. | Antisense oligomers and uses thereof |
EP3390636B1 (en) | 2015-12-14 | 2021-05-19 | Cold Spring Harbor Laboratory | Antisense oligomers for treatment of dravet syndrome |
CA3006599A1 (en) | 2016-01-05 | 2017-07-13 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing lrrk2 expression |
WO2017123696A1 (en) | 2016-01-12 | 2017-07-20 | Interleukin Genetics, Inc. | Methods for predicting response to treatment |
AU2017211461B2 (en) | 2016-01-26 | 2023-01-12 | Nissan Chemical Corporation | Single-stranded oligonucleotide |
KR20180103166A (ko) | 2016-01-29 | 2018-09-18 | 교와 핫꼬 기린 가부시키가이샤 | 핵산 복합체 |
EP3408391A4 (en) * | 2016-01-31 | 2019-08-28 | University of Massachusetts | BRANCHED OLIGONUCLEOTIDES |
EP3426261A4 (en) | 2016-03-07 | 2020-03-25 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | TARGETED LIGANDS FOR THERAPEUTIC CONNECTIONS |
AU2017229778A1 (en) | 2016-03-09 | 2018-08-16 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for inhibiting PMP22 expression |
RS61528B1 (sr) | 2016-03-14 | 2021-04-29 | Hoffmann La Roche | Oligonukleotidi za smanjenje ekspresije pd-l1 |
AU2017234678A1 (en) | 2016-03-16 | 2018-08-16 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modulating KEAP1 |
WO2017161168A1 (en) | 2016-03-16 | 2017-09-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of dyrk1b expression |
EP3228326A1 (en) * | 2016-04-05 | 2017-10-11 | Silence Therapeutics GmbH | Nucleic acid linked to a trivalent glycoconjugate |
MA45478A (fr) | 2016-04-11 | 2019-02-20 | Arbutus Biopharma Corp | Compositions de conjugués d'acides nucléiques ciblés |
CA3017532A1 (en) | 2016-04-13 | 2017-10-19 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing c9orf72 expression |
WO2017178656A1 (en) | 2016-04-14 | 2017-10-19 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | TRITYL-MONO-GalNAc COMPOUNDS AND THEIR USE |
MA45295A (fr) | 2016-04-19 | 2019-02-27 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composition d'arni de protéine de liaison de lipoprotéines haute densité (hdlbp/vigiline) et procédés pour les utiliser |
WO2017188898A1 (en) | 2016-04-29 | 2017-11-02 | Nanyang Technological University | G-quadruplex-containing antisense oligonucleotides |
MA45270A (fr) | 2016-05-04 | 2017-11-09 | Wave Life Sciences Ltd | Compositions d'oligonucléotides et procédés associés |
BR112018072362A2 (pt) | 2016-05-06 | 2019-02-19 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | oligonucleotídeos conjugados a uma unidade de ligando do receptor glp-1 e seus usos |
US11236339B2 (en) | 2016-06-17 | 2022-02-01 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of GYS1 expression |
MA45496A (fr) | 2016-06-17 | 2019-04-24 | Hoffmann La Roche | Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b |
US11105794B2 (en) | 2016-06-17 | 2021-08-31 | Hoffmann-La Roche Inc. | In vitro nephrotoxicity screening assay |
CN109312403B (zh) | 2016-06-17 | 2023-06-27 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 体外肾毒性筛选测定法 |
AU2017281497B2 (en) | 2016-06-22 | 2023-04-06 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Single-stranded RNA-editing oligonucleotides |
CN109415401B (zh) | 2016-06-30 | 2023-02-03 | 协和麒麟株式会社 | 核酸复合物 |
AU2017296195A1 (en) | 2016-07-11 | 2019-01-24 | Translate Bio Ma, Inc. | Nucleic acid conjugates and uses thereof |
US10781175B2 (en) | 2016-07-15 | 2020-09-22 | Am Chemicals Llc | Solid supports and phosphoramidite building blocks for oligonucleotide conjugates |
SG11201900238UA (en) | 2016-07-15 | 2019-02-27 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compounds and methods for modulation of smn2 |
CA3033368A1 (en) | 2016-08-12 | 2018-02-15 | University Of Massachusetts | Conjugated oligonucleotides |
JP2019532027A (ja) | 2016-08-17 | 2019-11-07 | ソルスティス バイオロジクス,リミティッド | ポリヌクレオチド構築物 |
AU2017320582B2 (en) | 2016-09-02 | 2023-11-16 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc | Targeting ligands |
JOP20190065A1 (ar) | 2016-09-29 | 2019-03-28 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مركبات وطرق لتقليل التعبير عن tau |
WO2018067900A1 (en) | 2016-10-06 | 2018-04-12 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Method of conjugating oligomeric compounds |
JP2019537427A (ja) | 2016-10-27 | 2019-12-26 | カリフォルニア インスティチュート オブ テクノロジー | X染色体の再活性化のためのhdac阻害剤組成物 |
JOP20190104A1 (ar) | 2016-11-10 | 2019-05-07 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مركبات وطرق لتقليل التعبير عن atxn3 |
JP2019533472A (ja) * | 2016-11-11 | 2019-11-21 | ヤンセン バイオファーマ インク. | Hbv cccdnaのオリゴヌクレオチド標的化戦略 |
TWI788312B (zh) | 2016-11-23 | 2023-01-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 絲胺酸蛋白酶抑制因子A1 iRNA組成物及其使用方法 |
JP2019535839A (ja) | 2016-11-29 | 2019-12-12 | ピュアテック ヘルス エルエルシー | 治療剤の送達のためのエクソソーム |
WO2018102745A1 (en) | 2016-12-02 | 2018-06-07 | Cold Spring Harbor Laboratory | Modulation of lnc05 expression |
CA3047076A1 (en) * | 2016-12-13 | 2018-06-21 | Am Sciences Inc | Pharmaceutical composition for preventing or treating hepatitis b |
KR20230166146A (ko) | 2016-12-16 | 2023-12-06 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 트랜스티레틴(TTR) iRNA 조성물을 사용하여 TTR-관련 질병을 치료하거나 예방하는 방법 |
CN108239644B (zh) * | 2016-12-23 | 2021-05-28 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 一种小干扰核酸和药物组合物及其用途 |
US10337070B2 (en) | 2017-01-12 | 2019-07-02 | Cardioforecast Ltd. | Methods and kits for treating cardiovascular disease |
US20200216845A1 (en) | 2017-01-13 | 2020-07-09 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides for modulating rela expression |
EP3568480A1 (en) | 2017-01-13 | 2019-11-20 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides for modulating nfkb2 expression |
WO2018130585A1 (en) | 2017-01-13 | 2018-07-19 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides for modulating relb expression |
WO2018130583A1 (en) | 2017-01-13 | 2018-07-19 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides for modulating nfkb1 expression |
WO2018130582A1 (en) | 2017-01-13 | 2018-07-19 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides for modulating rel expression |
CN110337495B (zh) | 2017-02-06 | 2024-03-29 | 日产化学株式会社 | 单链寡核苷酸 |
WO2018165564A1 (en) * | 2017-03-09 | 2018-09-13 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Morpholino modified oligomeric compounds |
EP3594346A4 (en) | 2017-03-10 | 2020-12-16 | National Center For Child Health And Development | ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE AND COMPOSITION FOR THE PREVENTION OR TREATMENT OF GLYCOGEN STORAGE DISEASE TYPE IA |
JOP20190215A1 (ar) | 2017-03-24 | 2019-09-19 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9 |
DK3607069T3 (da) * | 2017-04-05 | 2022-11-21 | Silence Therapeutics Gmbh | Produkter og sammensætninger |
EP3385272A1 (en) * | 2017-04-05 | 2018-10-10 | Silence Therapeutics GmbH | Further novel oligonucleotide-ligand conjugates |
CN118460536A (zh) | 2017-04-11 | 2024-08-09 | 阿布特斯生物制药公司 | 靶向组合物 |
SG11201909572QA (en) | 2017-04-18 | 2019-11-28 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (hbv) infection |
WO2018215049A1 (en) | 2017-05-23 | 2018-11-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Process for galnac oligonucleotide conjugates |
US11273222B2 (en) * | 2017-05-26 | 2022-03-15 | National Cerebral And Cardiovascular Center | Antisense nucleic acid targeting PCSK9 |
CN111050806A (zh) | 2017-06-02 | 2020-04-21 | 波涛生命科学有限公司 | 寡核苷酸组合物及其使用方法 |
WO2018223073A1 (en) * | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Wave Life Sciences Ltd. | Oligonucleotide compositions and methods of use thereof |
US11401519B2 (en) | 2017-06-07 | 2022-08-02 | University Of Massachusetts | Anti-ADAM33 oligonucleotides and related methods |
JP7406793B2 (ja) | 2017-06-23 | 2023-12-28 | ユニバーシティー オブ マサチューセッツ | 2テイル自己デリバリー型siRNAおよび関連方法 |
CA3069868A1 (en) | 2017-07-13 | 2019-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Lactate dehydrogenase a (ldha) irna compositions and methods of use thereof |
BR112020001430A2 (pt) | 2017-07-26 | 2020-07-28 | Nissan Chemical Corporation | oligonucleotídeo de fita simples |
WO2019027009A1 (ja) * | 2017-08-02 | 2019-02-07 | 協和発酵キリン株式会社 | 核酸複合体 |
WO2019027015A1 (ja) * | 2017-08-02 | 2019-02-07 | 協和発酵キリン株式会社 | 核酸複合体 |
WO2019030313A2 (en) | 2017-08-11 | 2019-02-14 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | OLIGONUCLEOTIDES FOR MODULATION OF UBE3C EXPRESSION |
CA3073213A1 (en) | 2017-08-17 | 2019-02-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Tunable reversir tm compounds |
AU2018318231A1 (en) | 2017-08-18 | 2020-02-13 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of the notch signaling pathway for treatment of respiratory disorders |
WO2019038228A1 (en) | 2017-08-22 | 2019-02-28 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | OLIGONUCLEOTIDES FOR MODULATION OF TOM1 EXPRESSION |
GB2599884B (en) | 2017-08-25 | 2022-08-31 | Stoke Therapeutics Inc | Antisense oligomers for treatment of conditions and diseases |
US10517889B2 (en) | 2017-09-08 | 2019-12-31 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of SMAD7 expression |
SG11202002149XA (en) * | 2017-09-14 | 2020-04-29 | Janssen Biopharma Inc | Galnac derivatives |
US20190098879A1 (en) | 2017-09-29 | 2019-04-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Non-Human Animals Comprising A Humanized TTR Locus And Methods Of Use |
WO2019067872A1 (en) | 2017-09-29 | 2019-04-04 | Intellia Therapeutics, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS FOR EDITING THE TTR GENE AND TREATING AMYLOID DOSE ATTR |
CN111226114A (zh) | 2017-10-13 | 2020-06-02 | 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 | 用部分立体限定的寡核苷酸子文库鉴定反义寡核苷酸改进的立体限定硫代磷酸酯寡核苷酸变体的方法 |
UA126931C2 (uk) | 2017-10-16 | 2023-02-22 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | МОЛЕКУЛИ НУКЛЕЇНОВИХ КИСЛОТ ДЛЯ ЗМЕНШЕННЯ РІВНЯ мРНК PAPD5 І PAPD7 ДЛЯ ЛІКУВАННЯ ІНФЕКЦІЙНОГО ГЕПАТИТУ B |
WO2019089922A1 (en) | 2017-11-01 | 2019-05-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof |
TWI809004B (zh) | 2017-11-09 | 2023-07-21 | 美商Ionis製藥公司 | 用於降低snca表現之化合物及方法 |
US20200385719A1 (en) | 2017-11-16 | 2020-12-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Kisspeptin 1 (kiss1) irna compositions and methods of use thereof |
WO2019100039A1 (en) | 2017-11-20 | 2019-05-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Serum amyloid p component (apcs) irna compositions and methods of use thereof |
JP7360716B2 (ja) * | 2017-12-01 | 2023-10-13 | スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド | 核酸、当該核酸を含む組成物および複合体ならびに調製方法と使用 |
CN111050807B (zh) * | 2017-12-01 | 2024-05-28 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途 |
CN110945131B (zh) * | 2017-12-01 | 2024-05-28 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途 |
CN118291456A (zh) | 2017-12-01 | 2024-07-05 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途 |
EP3719126A4 (en) * | 2017-12-01 | 2021-10-20 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | NUCLEIC ACID, COMPOSITION AND CONJUGATE CONTAINING NUCLEIC ACID, ASSOCIATED PREPARATION PROCESS AND USE |
US11414665B2 (en) | 2017-12-01 | 2022-08-16 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Nucleic acid, composition and conjugate comprising the same, and preparation method and use thereof |
WO2019105418A1 (zh) | 2017-12-01 | 2019-06-06 | 苏州瑞博生物技术有限公司 | 双链寡核苷酸、含双链寡核苷酸的组合物与缀合物及制备方法和用途 |
WO2019115416A2 (en) | 2017-12-11 | 2019-06-20 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides for modulating fndc3b expression |
WO2019115417A2 (en) | 2017-12-12 | 2019-06-20 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides for modulating rb1 expression |
US11725208B2 (en) | 2017-12-14 | 2023-08-15 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds and their use |
US20200308588A1 (en) | 2017-12-18 | 2020-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | High mobility group box-1 (hmgb1) irna compositions and methods of use thereof |
EP3729095A1 (en) | 2017-12-21 | 2020-10-28 | F. Hoffmann-La Roche AG | Companion diagnostic for htra1 rna antagonists |
WO2019126641A2 (en) | 2017-12-21 | 2019-06-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of frataxin expression |
EP4092117A1 (en) | 2017-12-22 | 2022-11-23 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Gapmer oligonucleotides comprising a phosphorodithioate internucleoside linkage |
JP7476102B2 (ja) | 2017-12-22 | 2024-04-30 | ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス | ホスホロジチオアートヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチド |
EP3728590A1 (en) | 2017-12-22 | 2020-10-28 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Novel thiophosphoramidites |
CN109957566B (zh) * | 2017-12-26 | 2023-08-25 | 广州市锐博生物科技有限公司 | 修饰的寡核苷酸和可用于合成修饰的寡核苷酸的化合物 |
AU2017444369B2 (en) * | 2017-12-26 | 2022-02-24 | Guangzhou Ribobio Co., Ltd. | Modified oligonucleotides and compound that can be used for synthesizing same |
AU2018394875B2 (en) * | 2017-12-29 | 2023-08-03 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Conjugates and preparation and use thereof |
EP3737758A1 (en) | 2018-01-10 | 2020-11-18 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides for modulating pias4 expression |
EP3737424A4 (en) * | 2018-01-10 | 2021-10-27 | Translate Bio MA, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS FOR FACILITATING THE DELIVERY OF SYNTHETIC NUCLEIC ACIDS TO CELLS |
US20220119811A1 (en) | 2018-01-12 | 2022-04-21 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Alpha-synuclein antisense oligonucleotides and uses thereof |
JP7455746B2 (ja) | 2018-01-12 | 2024-03-26 | ブリストル-マイヤーズ スクイブ カンパニー | アルファ-シヌクレインを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびその使用 |
EP3737760A1 (en) | 2018-01-12 | 2020-11-18 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides for modulating gsk3b expression |
PE20211749A1 (es) | 2018-01-12 | 2021-09-06 | Bristol Myers Squibb Co | Oligonucleotidos antisentido que actuan sobre alfa-sinucleina, y usos de estos |
MX2020007369A (es) | 2018-01-15 | 2020-10-28 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Moduladores de la expresion de dnm2. |
US20210095276A1 (en) | 2018-01-17 | 2021-04-01 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides for modulating erc1 expression |
JP2021511029A (ja) | 2018-01-18 | 2021-05-06 | ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス | Srebp1を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド |
WO2019145386A1 (en) | 2018-01-26 | 2019-08-01 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides for modulating csnk1d expression |
AU2019218987A1 (en) | 2018-02-12 | 2020-07-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modified compounds and uses thereof |
CA3090517A1 (en) | 2018-02-14 | 2019-08-22 | Deep Genomics Incorporated | Oligonucleotide therapy for wilson disease |
BR112020016347A2 (pt) | 2018-02-21 | 2021-01-12 | Bristol-Myers Squibb Company | Oligonucleotídeos antisense de camk2d e seus usos |
US11732260B2 (en) | 2018-03-02 | 2023-08-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for the modulation of amyloid-β precursor protein |
TWI840345B (zh) | 2018-03-02 | 2024-05-01 | 美商Ionis製藥公司 | Irf4表現之調節劑 |
US11958878B2 (en) | 2018-03-09 | 2024-04-16 | Daiichi Sankyo Company, Limited | Therapeutic agent for glycogen storage disease type IA |
US11661601B2 (en) | 2018-03-22 | 2023-05-30 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for modulating FMR1 expression |
CA3097544A1 (en) | 2018-04-05 | 2019-10-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Use of fubp1 inhibitors for treating hepatitis b virus infection |
JP7275164B2 (ja) | 2018-04-11 | 2023-05-17 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | Ezh2発現の調節因子 |
JP2021523227A (ja) | 2018-05-04 | 2021-09-02 | ストーク セラピューティクス,インク. | コレステリルエステル蓄積症の処置のための方法及び組成物 |
JP2021522808A (ja) | 2018-05-07 | 2021-09-02 | ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス | オリゴヌクレオチド治療剤の超並列発見方法 |
US12005120B2 (en) | 2018-05-08 | 2024-06-11 | Regulus Therapeutics Inc. | Galnac conjugated modified oligonucleotides as miR-122 inhibitor having HCV antiviral activity with reduced hyperbilirubinemia side-effect |
MX2020011913A (es) * | 2018-05-09 | 2021-01-29 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compuestos y metodos para la reduccion de la expresion de fxi. |
CR20200604A (es) | 2018-05-09 | 2021-02-09 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compuestos y métodos para reducir de la expresión de atxn3 |
FI3794122T3 (fi) | 2018-05-14 | 2023-11-07 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Angiotensinogeenin (AGT) IRNA-koostumuksia ja niiden käyttömenetelmä |
CA3103429A1 (en) | 2018-06-14 | 2019-12-19 | Don W. Cleveland | Compounds and methods for increasing stmn2 expression |
TWI833770B (zh) | 2018-06-27 | 2024-03-01 | 美商Ionis製藥公司 | 用於減少 lrrk2 表現之化合物及方法 |
MX2020013366A (es) | 2018-07-03 | 2021-03-09 | Hoffmann La Roche | Oligonucleotidos para modular la expresion de tau. |
WO2020007826A1 (en) | 2018-07-05 | 2020-01-09 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides targeting mbtps1 |
WO2020011745A2 (en) | 2018-07-11 | 2020-01-16 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides targeting cers6 |
WO2020011744A2 (en) | 2018-07-11 | 2020-01-16 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides targeting cers5 |
BR112021000538A2 (pt) | 2018-07-13 | 2021-04-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Oligonucleotídeos para modular a expressão de rtel1 |
AU2019310097A1 (en) | 2018-07-25 | 2021-02-04 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for reducing ATXN2 expression |
WO2020025563A1 (en) | 2018-07-31 | 2020-02-06 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides comprising a phosphorotrithioate internucleoside linkage |
JP2021532075A (ja) | 2018-07-31 | 2021-11-25 | ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス | ホスホロトリチオエートヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチド |
WO2020033748A1 (en) | 2018-08-08 | 2020-02-13 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Compositions and agents against nonalcoholic steatohepatitis |
SG11202101288TA (en) | 2018-08-10 | 2021-03-30 | Univ Massachusetts | Modified oligonucleotides targeting snps |
MX2021001056A (es) | 2018-08-13 | 2021-04-12 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones de agente de acido ribonucleico bicatenario (arnbc) de virus de la hepatitis b (vhb) y metodos de uso de las mismas. |
EP3842534A4 (en) | 2018-08-21 | 2022-07-06 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | NUCLEIC ACID, COMPOSITION AND CONJUGATE CONTAINING NUCLEIC ACID AND METHOD OF USE THEREOF |
EP3844274A1 (en) | 2018-08-28 | 2021-07-07 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Neoantigen engineering using splice modulating compounds |
WO2020060986A1 (en) | 2018-09-18 | 2020-03-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof |
TW202023573A (zh) | 2018-09-19 | 2020-07-01 | 美商Ionis製藥公司 | Pnpla3表現之調節劑 |
CN111655297A (zh) * | 2018-09-30 | 2020-09-11 | 苏州瑞博生物技术有限公司 | 一种siRNA缀合物及其制备方法和用途 |
WO2020077390A1 (en) * | 2018-10-18 | 2020-04-23 | Murdoch University | Antisense therapy for ptp1b related conditions |
US10913951B2 (en) | 2018-10-31 | 2021-02-09 | University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education | Silencing of HNF4A-P2 isoforms with siRNA to improve hepatocyte function in liver failure |
US20210395737A1 (en) | 2018-11-09 | 2021-12-23 | Novartis Ag | Method for reducing the risk of a cardiovascular event with conjugated antisense compounds targeting apo(a) |
TW202028222A (zh) | 2018-11-14 | 2020-08-01 | 美商Ionis製藥公司 | Foxp3表現之調節劑 |
EA202191342A1 (ru) | 2018-11-15 | 2021-08-10 | Айонис Фармасьютикалз, Инк. | Модуляторы экспрессии irf5 |
TWI841633B (zh) | 2018-11-21 | 2024-05-11 | 美商Ionis製藥公司 | 用於減少朊病毒表現之化合物及方法 |
EP3884051A2 (en) | 2018-11-23 | 2021-09-29 | Sanofi | Novel rna compositions and methods for inhibiting angptl8 |
WO2020111280A1 (ja) | 2018-11-30 | 2020-06-04 | 協和キリン株式会社 | 核酸複合体 |
JP2022515744A (ja) | 2018-12-20 | 2022-02-22 | プラクシス プレシジョン メディシンズ, インコーポレイテッド | Kcnt1関連障害の治療のための組成物及び方法 |
US20220062427A1 (en) * | 2018-12-28 | 2022-03-03 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Nucleic acid, composition and conjugate containing nucleic acid, preparation method therefor and use thereof |
GB201821269D0 (en) | 2018-12-28 | 2019-02-13 | Nippon Shinyaku Co Ltd | Myostatin signal inhibitor |
CN111377985B (zh) * | 2018-12-29 | 2023-11-10 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 化合物和缀合物及其制备方法和用途 |
CN113330117B (zh) * | 2019-01-18 | 2024-05-28 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 一种核酸、含有该核酸的组合物与缀合物及制备方法和用途 |
BR112021013369A2 (pt) | 2019-01-31 | 2021-09-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Moduladores de expressão de yap1 |
CN113474352A (zh) | 2019-02-20 | 2021-10-01 | 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 | 新型亚磷酰胺 |
TW202102516A (zh) | 2019-02-20 | 2021-01-16 | 丹麥商羅氏創新中心哥本哈根有限公司 | 膦醯基乙酸酯間隙子寡核苷酸 |
CN109799330B (zh) * | 2019-02-22 | 2021-03-02 | 华中科技大学同济医学院附属同济医院 | 神经氨酸及神经氨酸酶抑制剂在慢性心力衰竭中的应用 |
WO2020173845A1 (en) | 2019-02-26 | 2020-09-03 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotide formulation method |
US11279932B2 (en) | 2019-02-27 | 2022-03-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulators of MALAT1 expression |
EP3931323A4 (en) * | 2019-02-28 | 2023-04-05 | Deep Genomics Incorporated | LIGAND AGGREGATES AND METHODS OF USE AND PREPARATION |
JP7550165B2 (ja) | 2019-03-29 | 2024-09-12 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | Ube3a-atsを調節するための化合物及び方法 |
EP3947678A1 (en) | 2019-04-02 | 2022-02-09 | ProQR Therapeutics II B.V. | Antisense oligonucleotides for immunotherapy |
WO2020206115A2 (en) | 2019-04-03 | 2020-10-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Angptl2 antisense oligonucleotides and uses thereof |
WO2020233650A1 (zh) | 2019-05-22 | 2020-11-26 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途 |
WO2020233651A1 (zh) | 2019-05-22 | 2020-11-26 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途 |
CN118252843A (zh) | 2019-05-22 | 2024-06-28 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途 |
US20230313195A1 (en) | 2019-05-22 | 2023-10-05 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Nucleic acid, pharmaceutical composition, conjugate, preparation method, and use |
JP2022534069A (ja) | 2019-05-24 | 2022-07-27 | スーチョウ リボ ライフ サイエンス カンパニー、リミテッド | 核酸、薬物組成物及び複合体並びに調製方法と使用 |
EP3978609A4 (en) | 2019-05-24 | 2024-02-07 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | NUCLEIC ACID, PHARMACEUTICAL COMPOSITION, CONJUGATE, PROCESS OF PREPARATION AND USE |
US20220186221A1 (en) | 2019-05-24 | 2022-06-16 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Nucleic acid, pharmaceutical composition and conjugate, preparation method and use |
EP3976791A4 (en) | 2019-05-28 | 2023-10-11 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | COMPOUNDS AND METHODS FOR REDUCING FOOT EXPRESSION |
US11466274B2 (en) | 2019-05-31 | 2022-10-11 | Aligos Therapeutics, Inc. | Modified gapmer oligonucleotides and methods of use |
CA3137761A1 (en) | 2019-06-04 | 2020-12-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Non-human animals comprising a humanized ttr locus with a beta-slip mutation and methods of use |
EP3990465A1 (en) | 2019-06-25 | 2022-05-04 | Amgen Inc. | Purification methods for carbohydrate-linked oligonucleotides |
WO2021021673A1 (en) | 2019-07-26 | 2021-02-04 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating gfap |
WO2021022109A1 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | SERPIN FAMILY F MEMBER 2 (SERPINF2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
WO2021022108A2 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | CARBOXYPEPTIDASE B2 (CPB2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
JP2022547790A (ja) | 2019-08-09 | 2022-11-16 | ユニバーシティー オブ マサチューセッツ | Snpを標的とする化学修飾オリゴヌクレオチド |
EP4013870A1 (en) | 2019-08-13 | 2022-06-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Small ribosomal protein subunit 25 (rps25) irna agent compositions and methods of use thereof |
CN114555621A (zh) * | 2019-08-15 | 2022-05-27 | Ionis制药公司 | 键修饰的寡聚化合物及其用途 |
JP2022546040A (ja) | 2019-08-27 | 2022-11-02 | サノフイ | Pcsk9を阻害するための組成物および方法 |
EP4023659A4 (en) | 2019-08-29 | 2024-02-28 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | COMPOUND AND DRUG CONJUGATE, PRODUCTION METHOD AND USE THEREOF |
EP4022062A1 (en) | 2019-08-30 | 2022-07-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Neurofilament light chain (nfl) as a biomarker for transthyretin amyloidosis polyneuropathy |
WO2021046260A1 (en) | 2019-09-03 | 2021-03-11 | Arcturus Therapeutics, Inc. | Asialoglycoprotein receptor mediated delivery of therapeutically active conjugates |
US20220378920A1 (en) * | 2019-09-10 | 2022-12-01 | Daiichi Sankyo Company, Limited | CONJUGATE OF GalNAc-OLIGONUCLEOTIDE FOR DELIVERY TO LIVER AND MANUFACTURING METHOD THEREOF |
TW202126304A (zh) | 2019-09-20 | 2021-07-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 使用核心蛋白異位調節劑治療hbv感染之方法 |
EP4045062A1 (en) | 2019-10-14 | 2022-08-24 | Astrazeneca AB | Modulators of pnpla3 expression |
EP4045652A1 (en) | 2019-10-18 | 2022-08-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Solute carrier family member irna compositions and methods of use thereof |
JP2022553348A (ja) | 2019-10-22 | 2022-12-22 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 補体成分C3 iRNA組成物およびその使用方法 |
TW202132567A (zh) | 2019-11-01 | 2021-09-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 亨汀頓蛋白(HTT)iRNA劑組成物及其使用方法 |
BR112022009216A2 (pt) | 2019-11-13 | 2022-08-02 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Métodos e composições para tratar um distúrbio associado a angiotensinogênio (agt) |
EP4061945A1 (en) | 2019-11-22 | 2022-09-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ataxin3 (atxn3) rnai agent compositions and methods of use thereof |
CN112876534B (zh) * | 2019-11-29 | 2024-02-09 | 苏州瑞博生物技术股份有限公司 | 肝靶向化合物及缀合物 |
TW202140509A (zh) | 2019-12-13 | 2021-11-01 | 美商阿尼拉製藥公司 | 人類染色體9開讀框72(C9ORF72)iRNA劑組成物及其使用方法 |
TW202138559A (zh) | 2019-12-16 | 2021-10-16 | 美商阿尼拉製藥公司 | 含類PATATIN磷脂酶結構域3(PNPLA3)iRNA組成物及其使用方法 |
CN111041025B (zh) * | 2019-12-17 | 2021-06-18 | 深圳市瑞吉生物科技有限公司 | 基于结合N-乙酰半乳糖胺多肽的mRNA靶向分子及其制备方法 |
CN114901821A (zh) | 2019-12-19 | 2022-08-12 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | Sept9抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途 |
WO2021122993A1 (en) | 2019-12-19 | 2021-06-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Use of saraf inhibitors for treating hepatitis b virus infection |
JP2023506550A (ja) | 2019-12-19 | 2023-02-16 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ エージー. | B型肝炎ウイルス感染症を処置するためのsbds阻害剤の使用 |
CN114829599A (zh) | 2019-12-19 | 2022-07-29 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | Scamp3抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途 |
WO2021122921A1 (en) | 2019-12-19 | 2021-06-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Use of cops3 inhibitors for treating hepatitis b virus infection |
US20230044958A1 (en) | 2019-12-24 | 2023-02-09 | Hoffmann-La Roche Inc. | Method of treating virus infection using a tlr7 agonist |
TW202137987A (zh) | 2019-12-24 | 2021-10-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 用於治療hbv之靶向hbv的治療性寡核苷酸及tlr7促效劑之醫藥組合 |
JP2023509872A (ja) | 2019-12-24 | 2023-03-10 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | Hbvを標的とする抗ウイルス剤及び/又はhbvの処置のための免疫調節剤の医薬組合せ |
CN114929729A (zh) * | 2020-01-30 | 2022-08-19 | 卫材R&D管理有限公司 | 核酸复合体及包含该核酸复合体的医药组合物 |
MX2022009763A (es) | 2020-02-10 | 2022-09-09 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y metodos para silenciar la expresion del factor de crecimiento endotelial vascular a (vegf-a). |
WO2021167841A1 (en) | 2020-02-18 | 2021-08-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Apolipoprotein c3 (apoc3) irna compositions and methods of use thereof |
AU2021225957A1 (en) | 2020-02-28 | 2022-09-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating SMN2 |
WO2021178607A1 (en) | 2020-03-05 | 2021-09-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement component c3 irna compositions and methods of use thereof for treating or preventing complement component c3-associated diseases |
BR112022017822A2 (pt) | 2020-03-06 | 2022-11-08 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composições de irna de cetoexocinase (khk) e métodos de uso das mesmas |
CN115461460A (zh) | 2020-03-06 | 2022-12-09 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 用于抑制转甲状腺素蛋白(ttr)的表达的组合物和方法 |
WO2021188611A1 (en) | 2020-03-18 | 2021-09-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating subjects having a heterozygous alanine-glyoxylate aminotransferase gene (agxt) variant |
EP4126967A1 (en) | 2020-03-23 | 2023-02-08 | Amgen Inc. | Monoclonal antibodies to chemically-modified nucleic acids and uses thereof |
JP2023519274A (ja) | 2020-03-26 | 2023-05-10 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | コロナウイルスiRNA組成物およびその使用方法 |
CN115485381A (zh) * | 2020-03-26 | 2022-12-16 | 国立研究开发法人国立循环器病研究中心 | 以apoc3为靶点的反义核酸 |
AR121769A1 (es) | 2020-04-06 | 2022-07-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones y métodos para el silenciamiento de la expresión de myoc |
WO2021206922A1 (en) | 2020-04-07 | 2021-10-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transmembrane serine protease 2 (tmprss2) irna compositions and methods of use thereof |
WO2021206917A1 (en) | 2020-04-07 | 2021-10-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | ANGIOTENSIN-CONVERTING ENZYME 2 (ACE2) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
IL297130A (en) | 2020-04-07 | 2022-12-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Compositions and methods for silencing scn9a expression |
BR112022021813A2 (pt) | 2020-04-27 | 2023-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composições de agente de apolipoproteína e (apoe) irna e métodos de uso das mesmas |
CN111575279A (zh) * | 2020-04-27 | 2020-08-25 | 江苏为真生物医药技术股份有限公司 | 利用asgpr小分子配体特异性捕获肝细胞外囊泡或循环肿瘤细胞的方法 |
IL297680A (en) | 2020-04-30 | 2022-12-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | IRNA compounds complement factor b (cfb) and methods of using them |
MX2022013707A (es) | 2020-05-01 | 2022-12-07 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compuestos y metodos para modular atxn1. |
KR20230022409A (ko) | 2020-05-11 | 2023-02-15 | 스톡 테라퓨틱스, 인크. | 병태 및 질환의 치료를 위한 opa1 안티센스 올리고머 |
WO2021231675A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate synthetase (ass1) |
WO2021231691A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of retinoschisin 1 (rsi) |
EP4150076A1 (en) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2) |
WO2021231692A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of otoferlin (otof) |
WO2021231673A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of leucine rich repeat kinase 2 (lrrk2) |
EP4150087A1 (en) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of gap junction protein beta 2 (gjb2) |
EP4150078A1 (en) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of argininosuccinate lyase (asl) |
EP4150077A1 (en) | 2020-05-15 | 2023-03-22 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for the adar-mediated editing of transmembrane channel-like protein 1 (tmc1) |
US11408000B2 (en) | 2020-06-03 | 2022-08-09 | Triplet Therapeutics, Inc. | Oligonucleotides for the treatment of nucleotide repeat expansion disorders associated with MSH3 activity |
WO2021252557A1 (en) | 2020-06-09 | 2021-12-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Rnai compositions and methods of use thereof for delivery by inhalation |
WO2021249484A1 (zh) * | 2020-06-10 | 2021-12-16 | 南京明德新药研发有限公司 | 缀合基团及其缀合物 |
EP4168546A1 (en) | 2020-06-18 | 2023-04-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Xanthine dehydrogenase (xdh) irna compositions and methods of use thereof |
AR122731A1 (es) | 2020-06-26 | 2022-10-05 | Hoffmann La Roche | Oligonucleótidos mejorados para modular la expresión de fubp1 |
TW202216996A (zh) | 2020-06-29 | 2022-05-01 | 美商Ionis製藥公司 | 調節plp1之化合物及方法 |
CN111744019B (zh) | 2020-07-01 | 2023-08-04 | 深圳瑞吉生物科技有限公司 | 基于甘露糖的mRNA靶向递送系统及其应用 |
AU2021305665A1 (en) | 2020-07-10 | 2023-02-23 | Centre National De La Recherche Scientifique | Methods and compositions for treating epilepsy |
CR20230126A (es) * | 2020-08-13 | 2023-05-03 | Amgen Inc | CONSTRUCCIONES DE iARN Y MÉTODOS PARA INHIBIR LA EXPRESIÓN DE MARC1 |
EP4200419A2 (en) | 2020-08-21 | 2023-06-28 | F. Hoffmann-La Roche AG | Use of a1cf inhibitors for treating hepatitis b virus infection |
WO2022066847A1 (en) | 2020-09-24 | 2022-03-31 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Dipeptidyl peptidase 4 (dpp4) irna compositions and methods of use thereof |
JP2023544413A (ja) | 2020-10-05 | 2023-10-23 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | Gタンパク質共役受容体75(GPR75)iRNA組成物およびその使用方法 |
WO2022079222A1 (en) | 2020-10-16 | 2022-04-21 | Sanofi | Novel rna compositions and methods for inhibiting angptl3 |
US20240035029A1 (en) | 2020-10-16 | 2024-02-01 | Sanofi | Rna compositions and methods for inhibiting lipoprotein(a) |
WO2022087329A1 (en) | 2020-10-23 | 2022-04-28 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Mucin 5b (muc5b) irna compositions and methods of use thereof |
WO2022103999A1 (en) | 2020-11-13 | 2022-05-19 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COAGULATION FACTOR V (F5) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
CA3201661A1 (en) | 2020-11-18 | 2022-05-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating angiotensinogen expression |
US20240002853A1 (en) | 2020-11-23 | 2024-01-04 | Alpha Anomeric Sas | Nucleic acid duplexes |
EP4259795A1 (en) | 2020-12-08 | 2023-10-18 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Coagulation factor x (f10) irna compositions and methods of use thereof |
GB2603454A (en) | 2020-12-09 | 2022-08-10 | Ucl Business Ltd | Novel therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders |
WO2022133278A2 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating factor xii |
JP2024500035A (ja) | 2020-12-23 | 2024-01-04 | アルゴノート アールエヌエー リミテッド | 心血管疾患の治療 |
EP4273245A1 (en) | 2020-12-29 | 2023-11-08 | Suzhou Ribo Life Science Co., Ltd. | Nucleic acid, pharmaceutical composition and sirna conjugate containing the nucleic acid, preparation method therefor, and use thereof |
WO2022150260A1 (en) | 2021-01-05 | 2022-07-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | COMPLEMENT COMPONENT 9 (C9) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF |
AU2022215065A1 (en) * | 2021-01-30 | 2023-07-27 | E-Therapeutics Plc | Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof |
CA3204340A1 (en) * | 2021-01-30 | 2022-08-04 | Ahmad Ali MORTAZAVI | Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof |
WO2022162157A1 (en) * | 2021-01-30 | 2022-08-04 | E-Therapeutics Plc | Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof |
WO2022162161A1 (en) * | 2021-01-30 | 2022-08-04 | E-Therapeutics Plc | Conjugated oligonucleotide compounds, methods of making and uses thereof |
TW202246500A (zh) | 2021-02-02 | 2022-12-01 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 用於抑制 rtel1 表現之增強型寡核苷酸 |
KR20230146048A (ko) | 2021-02-12 | 2023-10-18 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 1(sod1) irna 조성물 및 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 1- (sod1-) 관련 신경퇴행성 질환을 치료하거나 예방하기 위한 이의 사용 방법 |
WO2022175749A1 (en) * | 2021-02-18 | 2022-08-25 | Oneglobe Holdings Limited | Compositions for conjugating oligonucleotides and carbohydrates |
WO2022182864A1 (en) | 2021-02-25 | 2022-09-01 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Prion protein (prnp) irna compositions and methods and methods of use thereof |
EP4298218A1 (en) | 2021-02-26 | 2024-01-03 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Ketohexokinase (khk) irna compositions and methods of use thereof |
WO2022187435A1 (en) | 2021-03-04 | 2022-09-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof |
EP4305168A1 (en) | 2021-03-08 | 2024-01-17 | Les Laboratoires Servier | Antisense oligonucleotides for inhibiting alpha-synuclein expression |
WO2022189861A1 (en) | 2021-03-08 | 2022-09-15 | Tollys | Carbohydrate conjugates of tlr3 ligands and uses thereof |
EP4305169A1 (en) | 2021-03-12 | 2024-01-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glycogen synthase kinase 3 alpha (gsk3a) irna compositions and methods of use thereof |
MX2023011466A (es) | 2021-03-29 | 2024-02-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Composiciones de agentes de ácido ribonucleico de interferencia (arni) de huntingtina (htt) y métodos de uso de estas. |
WO2022212153A1 (en) | 2021-04-01 | 2022-10-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Proline dehydrogenase 2 (prodh2) irna compositions and methods of use thereof |
KR20230171431A (ko) | 2021-04-14 | 2023-12-20 | 다이서나 파마수이티컬, 인크. | Pnpla3 발현을 조절하기 위한 조성물 및 방법 |
EP4330392A1 (en) | 2021-04-26 | 2024-03-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Transmembrane protease, serine 6 (tmprss6) irna compositions and methods of use thereof |
EP4330396A1 (en) | 2021-04-29 | 2024-03-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Signal transducer and activator of transcription factor 6 (stat6) irna compositions and methods of use thereof |
WO2022232650A1 (en) * | 2021-04-30 | 2022-11-03 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for reducing agt expression |
EP4341401A1 (en) | 2021-05-18 | 2024-03-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Sodium-glucose cotransporter-2 (sglt2) irna compositions and methods of use thereof |
US20240263177A1 (en) | 2021-05-20 | 2024-08-08 | Korro Bio, Inc. | Methods and Compositions for Adar-Mediated Editing |
WO2022256283A2 (en) | 2021-06-01 | 2022-12-08 | Korro Bio, Inc. | Methods for restoring protein function using adar |
TW202317762A (zh) | 2021-06-02 | 2023-05-01 | 美商艾拉倫製藥股份有限公司 | 含有類PATATIN磷脂酶結構域3(PNPLA3)的iRNA組成物及其使用方法 |
KR20240017911A (ko) | 2021-06-04 | 2024-02-08 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 인간 염색체 9 개방 해독 프레임 72(C9orf72) iRNA 제제 조성물 및 이의 사용 방법 |
EP4351541A2 (en) | 2021-06-08 | 2024-04-17 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating or preventing stargardt's disease and/or retinal binding protein 4 (rbp4)-associated disorders |
BR112023026050A2 (pt) | 2021-06-18 | 2024-03-05 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Compostos e métodos para reduzir expressão de ifnar1 |
BR112023026862A2 (pt) | 2021-06-23 | 2024-03-05 | Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc | Compostos de oligonucleotídeos anti-flt1 otimizados para tratamento de pré-eclâmpsia e outros distúrbios angiogênicos |
JP2024523565A (ja) * | 2021-06-24 | 2024-06-28 | イーライ リリー アンド カンパニー | 新規rna治療法及びその使用 |
CN117858948A (zh) * | 2021-06-24 | 2024-04-09 | 伊莱利利公司 | 新的治疗剂递送部分及其用途 |
US20230194709A9 (en) | 2021-06-29 | 2023-06-22 | Seagate Technology Llc | Range information detection using coherent pulse sets with selected waveform characteristics |
EP4363574A1 (en) | 2021-06-29 | 2024-05-08 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for adar-mediated editing |
IL309296A (en) | 2021-06-30 | 2024-02-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Methods and compositions for the treatment of angiotensinogen-related disorder (AGT-) |
TW202317197A (zh) * | 2021-07-02 | 2023-05-01 | 大陸商上海拓界生物醫藥科技有限公司 | 一種核酸配體及其綴合物、其製備方法和用途 |
TW202317147A (zh) | 2021-07-08 | 2023-05-01 | 日商日本新藥股份有限公司 | 析出抑制劑 |
JPWO2023282344A1 (ru) | 2021-07-08 | 2023-01-12 | ||
EP4368186A1 (en) | 2021-07-08 | 2024-05-15 | Nippon Shinyaku Co., Ltd. | Nephrotoxicity reducing agent |
WO2023003805A1 (en) | 2021-07-19 | 2023-01-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating subjects having or at risk of developing a non-primary hyperoxaluria disease or disorder |
TW202325312A (zh) | 2021-07-23 | 2023-07-01 | 美商艾拉倫製藥股份有限公司 | β-鏈蛋白(CTNNB1)iRNA組成物及其使用方法 |
EP4377458A1 (en) | 2021-07-29 | 2024-06-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa reductase (hmgcr) irna compositions and methods of use thereof |
EP4380576A2 (en) * | 2021-08-03 | 2024-06-12 | Verve Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for targeted rna delivery |
CN117795074A (zh) | 2021-08-03 | 2024-03-29 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 转甲状腺素蛋白(TTR)iRNA组合物和其使用方法 |
JP2024531914A (ja) | 2021-08-04 | 2024-09-03 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | アンジオテンシノーゲン(agt)をサイレンシングするためのirna組成物および方法 |
AU2022328347A1 (en) | 2021-08-13 | 2024-02-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Factor xii (f12) irna compositions and methods of use thereof |
CA3229020A1 (en) | 2021-09-14 | 2023-03-23 | Stella Khan | Treatment of cardiovascular disease |
EP4401742A2 (en) | 2021-09-17 | 2024-07-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna compositions and methods for silencing complement component 3 (c3) |
AU2022348141A1 (en) * | 2021-09-18 | 2024-04-04 | Chengdu Xinzhenghe Pharmaceutical Technology Co. Ltd | Lpa inhibitor and use thereof |
CA3232420A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Inhibin subunit beta e (inhbe) modulator compositions and methods of use thereof |
KR20240082358A (ko) * | 2021-09-23 | 2024-06-10 | 상하이 아르고 바이오파마슈티칼 씨오., 엘티디. | 치료제의 표적화된 전달을 위한 디아민 스캐폴드를 갖는 다가 리간드 클러스터 |
MX2024004011A (es) | 2021-10-01 | 2024-07-01 | Adarx Pharmaceuticals Inc | Composiciones moduladoras de precalicreína y métodos de uso de estas. |
AU2022370009A1 (en) | 2021-10-22 | 2024-05-16 | Korro Bio, Inc. | Methods and compositions for disrupting nrf2-keap1 protein interaction by adar mediated rna editing |
EP4423273A1 (en) | 2021-10-29 | 2024-09-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Complement factor b (cfb) irna compositions and methods of use thereof |
EP4423272A2 (en) | 2021-10-29 | 2024-09-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Huntingtin (htt) irna agent compositions and methods of use thereof |
IL312635A (en) | 2021-11-11 | 2024-07-01 | Hoffmann La Roche | Pharmaceutical combinations for the treatment of HBV |
CA3241316A1 (en) * | 2021-12-03 | 2023-06-08 | Quralis Corporation | Gapmer antisense oligonucleotides with modified backbone chemistries |
GB202117758D0 (en) | 2021-12-09 | 2022-01-26 | Ucl Business Ltd | Therapeutics for the treatment of neurodegenerative disorders |
WO2023109945A1 (zh) * | 2021-12-16 | 2023-06-22 | 上海拓界生物医药科技有限公司 | 一种dsRNA、其制备方法及应用 |
CN118076738A (zh) * | 2021-12-16 | 2024-05-24 | 上海拓界生物医药科技有限公司 | 靶向LPA的siRNA及缀合物 |
WO2023111210A1 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination of oligonucleotides for modulating rtel1 and fubp1 |
WO2023138659A1 (zh) * | 2022-01-20 | 2023-07-27 | 上海拓界生物医药科技有限公司 | 一种dsRNA、其应用及制备方法 |
TW202345865A (zh) * | 2022-01-24 | 2023-12-01 | 大陸商上海舶望製藥有限公司 | 抑制LPA(Apo(a))蛋白表達的組合物和方法 |
WO2023141314A2 (en) | 2022-01-24 | 2023-07-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Heparin sulfate biosynthesis pathway enzyme irna agent compositions and methods of use thereof |
CN116917477B (zh) * | 2022-01-30 | 2024-04-09 | 大睿生物医药科技(上海)有限公司 | 含有n-乙酰半乳糖胺的靶向配体 |
US20240167040A1 (en) | 2022-02-21 | 2024-05-23 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antisense oligonucleotide |
CN114703184B (zh) * | 2022-03-11 | 2024-06-18 | 厦门甘宝利生物医药有限公司 | Lpa抑制剂及其用途 |
WO2023178144A2 (en) | 2022-03-16 | 2023-09-21 | Empirico Inc. | Galnac compositions for improving sirna bioavailability |
CN115028670B (zh) * | 2022-06-24 | 2023-07-28 | 四川大学华西医院 | 一种n-乙酰基-d-半乳糖胺三聚体前体的制备方法 |
WO2024001172A1 (en) * | 2022-06-27 | 2024-01-04 | Ractigen Therapeutics | Oligonucleotide modulators activating complement factor h expression |
WO2024013360A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Chemically modified oligonucleotides for adar-mediated rna editing |
WO2024013361A1 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Proqr Therapeutics Ii B.V. | Oligonucleotides for adar-mediated rna editing and use thereof |
CN116814621A (zh) * | 2022-08-05 | 2023-09-29 | 厦门甘宝利生物医药有限公司 | 一种抑制apoc3基因表达的rna抑制剂及其应用 |
WO2024039776A2 (en) | 2022-08-18 | 2024-02-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Universal non-targeting sirna compositions and methods of use thereof |
WO2024059165A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 17b-hydroxysteroid dehydrogenase type 13 (hsd17b13) irna compositions and methods of use thereof |
WO2024098061A2 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Genkardia Inc. | Oligonucleotide-based therapeutics targeting cyclin d2 for the treatment of heart failure |
WO2024108217A1 (en) | 2022-11-18 | 2024-05-23 | Genkardia Inc. | Methods and compositions for preventing, treating, or reversing cardiac diastolic dysfunction |
WO2024106539A1 (ja) * | 2022-11-18 | 2024-05-23 | 株式会社ボナック | リガンドコンジュゲート物質及びそれを含む核酸並びにその用途 |
WO2024112937A2 (en) * | 2022-11-23 | 2024-05-30 | Pretzel Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for treatment of cancer and metabolic disease |
WO2024114776A1 (zh) * | 2022-12-02 | 2024-06-06 | 上海舶望制药有限公司 | 双环脱碱基核酸类似物以及由它们制备的寡聚化合物 |
WO2024137729A1 (en) * | 2022-12-21 | 2024-06-27 | Eli Lilly And Company | NOVEL FAS RNAi THERAPEUTICS AND USES THEREOF |
WO2024149282A1 (en) * | 2023-01-10 | 2024-07-18 | Ausperbio Therapeutics Inc. | Modified multi-segmented antisense oligonucleotides for use |
WO2024168010A2 (en) | 2023-02-09 | 2024-08-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Reversir molecules and methods of use thereof |
WO2024175113A1 (zh) * | 2023-02-24 | 2024-08-29 | 南京明德新药研发有限公司 | 包含R和E的双链siRNA类似物及其缀合物 |
CN116925160B (zh) * | 2023-09-15 | 2023-12-08 | 天津全和诚科技有限责任公司 | 一种GalNAc含糖环中间体及其制备方法 |
CN117568313B (zh) * | 2024-01-15 | 2024-04-26 | 上海贝斯昂科生物科技有限公司 | 基因编辑组合物及其用途 |
CN118146284B (zh) * | 2024-05-08 | 2024-07-26 | 北京悦康科创医药科技股份有限公司 | 一种GalNAc化合物、其与寡核苷酸缀合物及制备方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009073809A2 (en) * | 2007-12-04 | 2009-06-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides |
WO2011139917A1 (en) * | 2010-04-29 | 2011-11-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of transthyretin expression |
US20120225927A1 (en) * | 2008-10-20 | 2012-09-06 | Dinah Wen-Yee Sah | Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin |
US20130035366A1 (en) * | 2011-04-21 | 2013-02-07 | Swayze Eric E | Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression |
Family Cites Families (375)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3687808A (en) | 1969-08-14 | 1972-08-29 | Univ Leland Stanford Junior | Synthetic polynucleotides |
US5132418A (en) | 1980-02-29 | 1992-07-21 | University Patents, Inc. | Process for preparing polynucleotides |
US4458066A (en) | 1980-02-29 | 1984-07-03 | University Patents, Inc. | Process for preparing polynucleotides |
US4500707A (en) | 1980-02-29 | 1985-02-19 | University Patents, Inc. | Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides |
US4469863A (en) | 1980-11-12 | 1984-09-04 | Ts O Paul O P | Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof |
US4668777A (en) | 1981-03-27 | 1987-05-26 | University Patents, Inc. | Phosphoramidite nucleoside compounds |
US4415732A (en) | 1981-03-27 | 1983-11-15 | University Patents, Inc. | Phosphoramidite compounds and processes |
US4973679A (en) | 1981-03-27 | 1990-11-27 | University Patents, Inc. | Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates |
US5023243A (en) | 1981-10-23 | 1991-06-11 | Molecular Biosystems, Inc. | Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same |
US4476301A (en) | 1982-04-29 | 1984-10-09 | Centre National De La Recherche Scientifique | Oligonucleotides, a process for preparing the same and their application as mediators of the action of interferon |
DE3329892A1 (de) | 1983-08-18 | 1985-03-07 | Köster, Hubert, Prof. Dr., 2000 Hamburg | Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden |
US5118800A (en) | 1983-12-20 | 1992-06-02 | California Institute Of Technology | Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide |
USRE34036E (en) | 1984-06-06 | 1992-08-18 | National Research Development Corporation | Data transmission using a transparent tone-in band system |
US5550111A (en) | 1984-07-11 | 1996-08-27 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Dual action 2',5'-oligoadenylate antiviral derivatives and uses thereof |
FR2567892B1 (fr) | 1984-07-19 | 1989-02-17 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux oligonucleotides, leur procede de preparation et leurs applications comme mediateurs dans le developpement des effets des interferons |
US5367066A (en) | 1984-10-16 | 1994-11-22 | Chiron Corporation | Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites |
FR2575751B1 (fr) | 1985-01-08 | 1987-04-03 | Pasteur Institut | Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques |
US4751219A (en) | 1985-02-05 | 1988-06-14 | Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek | Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides |
US5506337A (en) | 1985-03-15 | 1996-04-09 | Antivirals Inc. | Morpholino-subunit combinatorial library and method |
US5034506A (en) | 1985-03-15 | 1991-07-23 | Anti-Gene Development Group | Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages |
US5166315A (en) | 1989-12-20 | 1992-11-24 | Anti-Gene Development Group | Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids |
US5185444A (en) | 1985-03-15 | 1993-02-09 | Anti-Gene Deveopment Group | Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages |
US5235033A (en) | 1985-03-15 | 1993-08-10 | Anti-Gene Development Group | Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof |
US5405938A (en) | 1989-12-20 | 1995-04-11 | Anti-Gene Development Group | Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids |
DE3788914T2 (de) | 1986-09-08 | 1994-08-25 | Ajinomoto Kk | Verbindungen zur Spaltung von RNS an eine spezifische Position, Oligomere, verwendet bei der Herstellung dieser Verbindungen und Ausgangsprodukte für die Synthese dieser Oligomere. |
US5276019A (en) | 1987-03-25 | 1994-01-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
US5264423A (en) | 1987-03-25 | 1993-11-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products |
GB8712540D0 (en) * | 1987-05-28 | 1987-07-01 | Ucb Sa | Expression of human proapolipoprotein a-i |
WO1988010264A1 (en) | 1987-06-24 | 1988-12-29 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology | Nucleoside derivatives |
US4924624A (en) | 1987-10-22 | 1990-05-15 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | 2,',5'-phosphorothioate oligoadenylates and plant antiviral uses thereof |
US5188897A (en) | 1987-10-22 | 1993-02-23 | Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education | Encapsulated 2',5'-phosphorothioate oligoadenylates |
ATE151467T1 (de) | 1987-11-30 | 1997-04-15 | Univ Iowa Res Found | Durch modifikationen an der 3'-terminalen phosphodiesterbindung stabilisierte dna moleküle, ihre verwendung als nukleinsäuresonden sowie als therapeutische mittel zur hemmung der expression spezifischer zielgene |
US5403711A (en) | 1987-11-30 | 1995-04-04 | University Of Iowa Research Foundation | Nucleic acid hybridization and amplification method for detection of specific sequences in which a complementary labeled nucleic acid probe is cleaved |
WO1989009221A1 (en) | 1988-03-25 | 1989-10-05 | University Of Virginia Alumni Patents Foundation | Oligonucleotide n-alkylphosphoramidates |
US5278302A (en) | 1988-05-26 | 1994-01-11 | University Patents, Inc. | Polynucleotide phosphorodithioates |
US5216141A (en) | 1988-06-06 | 1993-06-01 | Benner Steven A | Oligonucleotide analogs containing sulfur linkages |
US5175273A (en) | 1988-07-01 | 1992-12-29 | Genentech, Inc. | Nucleic acid intercalating agents |
US5194599A (en) | 1988-09-23 | 1993-03-16 | Gilead Sciences, Inc. | Hydrogen phosphonodithioate compositions |
US5256775A (en) | 1989-06-05 | 1993-10-26 | Gilead Sciences, Inc. | Exonuclease-resistant oligonucleotides |
US5134066A (en) | 1989-08-29 | 1992-07-28 | Monsanto Company | Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs |
US5591722A (en) | 1989-09-15 | 1997-01-07 | Southern Research Institute | 2'-deoxy-4'-thioribonucleosides and their antiviral activity |
US5399676A (en) | 1989-10-23 | 1995-03-21 | Gilead Sciences | Oligonucleotides with inverted polarity |
US5721218A (en) | 1989-10-23 | 1998-02-24 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotides with inverted polarity |
EP0942000B1 (en) | 1989-10-24 | 2004-06-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-Modified oligonucleotides |
US5264564A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
US5264562A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
US5177198A (en) | 1989-11-30 | 1993-01-05 | University Of N.C. At Chapel Hill | Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates |
US5130302A (en) | 1989-12-20 | 1992-07-14 | Boron Bilogicals, Inc. | Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same |
US5859221A (en) | 1990-01-11 | 1999-01-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-modified oligonucleotides |
US5623065A (en) | 1990-08-13 | 1997-04-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped 2' modified oligonucleotides |
US5681941A (en) | 1990-01-11 | 1997-10-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted purines and oligonucleotide cross-linking |
US5670633A (en) | 1990-01-11 | 1997-09-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
US5459255A (en) | 1990-01-11 | 1995-10-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-2 substituted purines |
US5587361A (en) | 1991-10-15 | 1996-12-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US5587470A (en) | 1990-01-11 | 1996-12-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 3-deazapurines |
US6005087A (en) | 1995-06-06 | 1999-12-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-modified oligonucleotides |
US5646265A (en) | 1990-01-11 | 1997-07-08 | Isis Pharmceuticals, Inc. | Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites |
US7101993B1 (en) | 1990-01-11 | 2006-09-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides containing 2′-O-modified purines |
US5457191A (en) | 1990-01-11 | 1995-10-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 3-deazapurines |
US5149797A (en) | 1990-02-15 | 1992-09-22 | The Worcester Foundation For Experimental Biology | Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides |
US5220007A (en) | 1990-02-15 | 1993-06-15 | The Worcester Foundation For Experimental Biology | Method of site-specific alteration of RNA and production of encoded polypeptides |
US5321131A (en) | 1990-03-08 | 1994-06-14 | Hybridon, Inc. | Site-specific functionalization of oligodeoxynucleotides for non-radioactive labelling |
US5470967A (en) | 1990-04-10 | 1995-11-28 | The Dupont Merck Pharmaceutical Company | Oligonucleotide analogs with sulfamate linkages |
GB9009980D0 (en) | 1990-05-03 | 1990-06-27 | Amersham Int Plc | Phosphoramidite derivatives,their preparation and the use thereof in the incorporation of reporter groups on synthetic oligonucleotides |
ES2116977T3 (es) | 1990-05-11 | 1998-08-01 | Microprobe Corp | Soportes solidos para ensayos de hibridacion de acidos nucleicos y metodos para inmovilizar oligonucleotidos de modo covalente. |
US5608046A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds |
US5223618A (en) | 1990-08-13 | 1993-06-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 4'-desmethyl nucleoside analog compounds |
US5677437A (en) | 1990-07-27 | 1997-10-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
US5610289A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogues |
US5623070A (en) | 1990-07-27 | 1997-04-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
US5614617A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression |
US5618704A (en) | 1990-07-27 | 1997-04-08 | Isis Pharmacueticals, Inc. | Backbone-modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through radical coupling |
US5489677A (en) | 1990-07-27 | 1996-02-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms |
US5602240A (en) | 1990-07-27 | 1997-02-11 | Ciba Geigy Ag. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
US5386023A (en) | 1990-07-27 | 1995-01-31 | Isis Pharmaceuticals | Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling |
US5378825A (en) | 1990-07-27 | 1995-01-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
US5541307A (en) | 1990-07-27 | 1996-07-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof |
ES2083593T3 (es) | 1990-08-03 | 1996-04-16 | Sterling Winthrop Inc | Compuestos y metodos para inhibir la expresion de genes. |
US5177196A (en) | 1990-08-16 | 1993-01-05 | Microprobe Corporation | Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof |
US5214134A (en) | 1990-09-12 | 1993-05-25 | Sterling Winthrop Inc. | Process of linking nucleosides with a siloxane bridge |
US5561225A (en) | 1990-09-19 | 1996-10-01 | Southern Research Institute | Polynucleotide analogs containing sulfonate and sulfonamide internucleoside linkages |
WO1992005186A1 (en) | 1990-09-20 | 1992-04-02 | Gilead Sciences | Modified internucleoside linkages |
US5432272A (en) | 1990-10-09 | 1995-07-11 | Benner; Steven A. | Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases |
US6582908B2 (en) | 1990-12-06 | 2003-06-24 | Affymetrix, Inc. | Oligonucleotides |
US5948903A (en) | 1991-01-11 | 1999-09-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Synthesis of 3-deazapurines |
US5672697A (en) | 1991-02-08 | 1997-09-30 | Gilead Sciences, Inc. | Nucleoside 5'-methylene phosphonates |
US7015315B1 (en) | 1991-12-24 | 2006-03-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped oligonucleotides |
US5571799A (en) | 1991-08-12 | 1996-11-05 | Basco, Ltd. | (2'-5') oligoadenylate analogues useful as inhibitors of host-v5.-graft response |
ES2103918T3 (es) | 1991-10-17 | 1997-10-01 | Ciba Geigy Ag | Nucleosidos biciclicos, oligonucleotidos, procedimiento para su obtencion y productos intermedios. |
US5594121A (en) | 1991-11-07 | 1997-01-14 | Gilead Sciences, Inc. | Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines |
US5484908A (en) | 1991-11-26 | 1996-01-16 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines |
JP3739785B2 (ja) | 1991-11-26 | 2006-01-25 | アイシス ファーマシューティカルズ,インコーポレイティド | 修飾されたピリミジンを含有するオリゴマーを使用する増強された三重らせんおよび二重らせんの成形 |
TW393513B (en) | 1991-11-26 | 2000-06-11 | Isis Pharmaceuticals Inc | Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines |
US5792608A (en) | 1991-12-12 | 1998-08-11 | Gilead Sciences, Inc. | Nuclease stable and binding competent oligomers and methods for their use |
US5359044A (en) | 1991-12-13 | 1994-10-25 | Isis Pharmaceuticals | Cyclobutyl oligonucleotide surrogates |
US5700922A (en) | 1991-12-24 | 1997-12-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | PNA-DNA-PNA chimeric macromolecules |
AU669353B2 (en) * | 1991-12-24 | 1996-06-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped 2' modified oligonucleotides |
FR2687679B1 (fr) | 1992-02-05 | 1994-10-28 | Centre Nat Rech Scient | Oligothionucleotides. |
US5633360A (en) | 1992-04-14 | 1997-05-27 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation |
US5434257A (en) | 1992-06-01 | 1995-07-18 | Gilead Sciences, Inc. | Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages |
EP0577558A2 (de) | 1992-07-01 | 1994-01-05 | Ciba-Geigy Ag | Carbocyclische Nukleoside mit bicyclischen Ringen, Oligonukleotide daraus, Verfahren zu deren Herstellung, deren Verwendung und Zwischenproduckte |
US5652355A (en) | 1992-07-23 | 1997-07-29 | Worcester Foundation For Experimental Biology | Hybrid oligonucleotide phosphorothioates |
RU95104940A (ru) | 1992-07-27 | 1997-01-10 | Хайбрайдон | Способ введения в олигонуклеотид алкилфосфонотиоатной или арилфосфонотиоатной межнуклеотидной связи, способ получения олигонуклеотида, олигонуклеотиды, способ ингибирования генной экспрессии, способ лечения |
JPH08504559A (ja) | 1992-12-14 | 1996-05-14 | ハネウエル・インコーポレーテッド | 個別に制御される冗長巻線を有するモータシステム |
JPH08508714A (ja) | 1993-01-25 | 1996-09-17 | ハイブライドン インコーポレイテッド | オリゴヌクレオチド・アルキルホスホネートおよびアルキルホスホノチオエート |
US5476925A (en) | 1993-02-01 | 1995-12-19 | Northwestern University | Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups |
GB9304618D0 (en) | 1993-03-06 | 1993-04-21 | Ciba Geigy Ag | Chemical compounds |
GB9304620D0 (en) | 1993-03-06 | 1993-04-21 | Ciba Geigy Ag | Compounds |
DK0691968T3 (da) | 1993-03-30 | 1998-02-23 | Sanofi Sa | Acykliske nukleosid-analoge og oligonukleotidsekvenser indeholdende disse |
AU6412794A (en) | 1993-03-31 | 1994-10-24 | Sterling Winthrop Inc. | Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages |
US5502177A (en) | 1993-09-17 | 1996-03-26 | Gilead Sciences, Inc. | Pyrimidine derivatives for labeled binding partners |
US5801154A (en) | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
US5457187A (en) | 1993-12-08 | 1995-10-10 | Board Of Regents University Of Nebraska | Oligonucleotides containing 5-fluorouracil |
PT733059E (pt) | 1993-12-09 | 2001-03-30 | Univ Jefferson | Compostos e metodos para mutacoes dirigidas ao local em celulas eucarioticas |
US5446137B1 (en) | 1993-12-09 | 1998-10-06 | Behringwerke Ag | Oligonucleotides containing 4'-substituted nucleotides |
US5519134A (en) | 1994-01-11 | 1996-05-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrrolidine-containing monomers and oligomers |
US5728518A (en) | 1994-01-12 | 1998-03-17 | The Immune Response Corporation | Antiviral poly-and oligonucleotides |
US5596091A (en) | 1994-03-18 | 1997-01-21 | The Regents Of The University Of California | Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides |
US5627053A (en) | 1994-03-29 | 1997-05-06 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | 2'deoxy-2'-alkylnucleotide containing nucleic acid |
US5625050A (en) | 1994-03-31 | 1997-04-29 | Amgen Inc. | Modified oligonucleotides and intermediates useful in nucleic acid therapeutics |
US5646269A (en) | 1994-04-28 | 1997-07-08 | Gilead Sciences, Inc. | Method for oligonucleotide analog synthesis |
US5525711A (en) | 1994-05-18 | 1996-06-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes |
US5597909A (en) | 1994-08-25 | 1997-01-28 | Chiron Corporation | Polynucleotide reagents containing modified deoxyribose moieties, and associated methods of synthesis and use |
US5599706A (en) | 1994-09-23 | 1997-02-04 | Stinchcomb; Dan T. | Ribozymes targeted to apo(a) mRNA |
US5681940A (en) | 1994-11-02 | 1997-10-28 | Icn Pharmaceuticals | Sugar modified nucleosides and oligonucleotides |
US6172045B1 (en) | 1994-12-07 | 2001-01-09 | Neorx Corporation | Cluster clearing agents |
US6908903B1 (en) | 1994-12-07 | 2005-06-21 | Aletheon Pharmaceuticals, Inc. | Cluster clearing agents |
US5652356A (en) | 1995-08-17 | 1997-07-29 | Hybridon, Inc. | Inverted chimeric and hybrid oligonucleotides |
US20030119724A1 (en) | 1995-11-22 | 2003-06-26 | Ts`O Paul O.P. | Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules |
AU1039397A (en) | 1995-11-22 | 1997-06-27 | Johns Hopkins University, The | Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules |
US5998203A (en) | 1996-04-16 | 1999-12-07 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures |
WO2005121370A2 (en) | 2004-06-03 | 2005-12-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds that facilitate risc loading |
WO1998013381A1 (fr) | 1996-09-26 | 1998-04-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Proteines modifiees physiologiquement actives et compositions medicamenteuses les contenant |
US6770748B2 (en) | 1997-03-07 | 2004-08-03 | Takeshi Imanishi | Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue |
JP3756313B2 (ja) | 1997-03-07 | 2006-03-15 | 武 今西 | 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体 |
USRE44779E1 (en) | 1997-03-07 | 2014-02-25 | Santaris Pharma A/S | Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogues |
EP1557424A1 (en) | 1997-09-12 | 2005-07-27 | Exiqon A/S | Bi-cyclic nucleoside, nucleotide and oligonucleoide analogues |
US7572582B2 (en) | 1997-09-12 | 2009-08-11 | Exiqon A/S | Oligonucleotide analogues |
US6794499B2 (en) | 1997-09-12 | 2004-09-21 | Exiqon A/S | Oligonucleotide analogues |
US20040171564A1 (en) | 1997-11-20 | 2004-09-02 | Honkanen Richard E. | Antisense oligonucleotide modulation of human serine/threonine protein phosphatase gene expression |
US20030228597A1 (en) | 1998-04-13 | 2003-12-11 | Cowsert Lex M. | Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation |
US6300319B1 (en) | 1998-06-16 | 2001-10-09 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Targeted oligonucleotide conjugates |
US6043352A (en) | 1998-08-07 | 2000-03-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-O-Dimethylaminoethyloxyethyl-modified oligonucleotides |
NZ509986A (en) | 1998-08-19 | 2003-10-31 | Baxter Healthcare S | Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide and oligosaccharide protein conjugates as vaccines |
PL346645A1 (en) * | 1998-08-19 | 2002-02-25 | North American Vaccine | IMMUNOGENIC β-PROPIONAMIDO-LINKED POLYSACCHARIDE PROTEIN CONJUGATE USEFUL AS A VACCINE PRODUCED USING AN N-ACRYLOYLATED POLYSACCHARIDE |
US6166239A (en) | 1998-09-04 | 2000-12-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide protecting groups |
ID30093A (id) | 1999-02-12 | 2001-11-01 | Sankyo Co | Analog-analog nukleosida dan oligonukleotida baru |
US20030170249A1 (en) | 1999-02-19 | 2003-09-11 | Hakomori Sen-Itiroh | Vaccines directed to cancer-associated carbohydrate antigens |
US7084125B2 (en) | 1999-03-18 | 2006-08-01 | Exiqon A/S | Xylo-LNA analogues |
US6159694A (en) | 1999-04-08 | 2000-12-12 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of stat3 expression |
US7098192B2 (en) * | 1999-04-08 | 2006-08-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of STAT3 expression |
WO2000063364A2 (en) | 1999-04-21 | 2000-10-26 | American Home Products Corporation | Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences |
ES2283298T3 (es) | 1999-05-04 | 2007-11-01 | Santaris Pharma A/S | Analogos de l-ribo-lna. |
US6525191B1 (en) | 1999-05-11 | 2003-02-25 | Kanda S. Ramasamy | Conformationally constrained L-nucleosides |
US6383812B1 (en) | 1999-05-28 | 2002-05-07 | Academia Sinica | Anti liver disease drug R-YEEE and method of synthesizing branched galactose-terminal glycoproteins |
US8541548B2 (en) | 1999-06-07 | 2013-09-24 | Arrowhead Madison Inc. | Compounds and methods for reversible modification of biologically active molecules |
US20080281041A1 (en) | 1999-06-07 | 2008-11-13 | Rozema David B | Reversibly Masked Polymers |
US6656730B1 (en) | 1999-06-15 | 2003-12-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides conjugated to protein-binding drugs |
AU6605900A (en) | 1999-07-16 | 2001-02-05 | Hyseq, Inc. | Novel angiopoietin materials and methods |
JP4151751B2 (ja) | 1999-07-22 | 2008-09-17 | 第一三共株式会社 | 新規ビシクロヌクレオシド類縁体 |
DE19935303A1 (de) * | 1999-07-28 | 2001-02-08 | Aventis Pharma Gmbh | Oligonukleotide zur Inhibierung der Expression von humanem eg5 |
US20020082227A1 (en) | 1999-09-30 | 2002-06-27 | Scott Henry | Use of oligonucleotides for inhibition of complement activation |
US20050112118A1 (en) | 1999-12-02 | 2005-05-26 | Myriad Genetics, Incorporated | Compositions and methods for treating inflammatory disorders |
WO2001042499A1 (fr) | 1999-12-09 | 2001-06-14 | Sankyo Company, Limited | Procede d'essai d'agent curatif ou preventif de l'hyperlipemie |
AU2698301A (en) | 1999-12-30 | 2001-07-16 | K.U. Leuven Research And Development | Cyclohexene nucleic acids |
US7179796B2 (en) | 2000-01-18 | 2007-02-20 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of PTP1B expression |
US6602857B1 (en) | 2000-01-18 | 2003-08-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of PTP1B expression |
US6261840B1 (en) | 2000-01-18 | 2001-07-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of PTP1B expression |
US20020055479A1 (en) | 2000-01-18 | 2002-05-09 | Cowsert Lex M. | Antisense modulation of PTP1B expression |
US7491805B2 (en) | 2001-05-18 | 2009-02-17 | Sirna Therapeutics, Inc. | Conjugates and compositions for cellular delivery |
US7833992B2 (en) | 2001-05-18 | 2010-11-16 | Merck Sharpe & Dohme | Conjugates and compositions for cellular delivery |
US8202979B2 (en) | 2002-02-20 | 2012-06-19 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid |
WO2001060860A2 (en) | 2000-02-17 | 2001-08-23 | Millennium Predictive Medicine, Inc. | Genes differentially expressed in human prostate cancer and their use |
US7053199B2 (en) | 2000-08-29 | 2006-05-30 | Takeshi Imanishi | Nucleoside analogs and oligonucleotide derivatives containing these analogs |
US6426220B1 (en) | 2000-10-30 | 2002-07-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of calreticulin expression |
AU2002217980A1 (en) | 2000-12-01 | 2002-06-11 | Cell Works Inc. | Conjugates of glycosylated/galactosylated peptide |
WO2002087541A1 (en) | 2001-04-30 | 2002-11-07 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Lipid-based formulations for gene transfer |
IL159153A0 (en) | 2001-06-08 | 2004-06-01 | Sankyo Co | Methods for testing drugs for treating or preventing diseases such as hyperlipidemia |
JP2005504020A (ja) | 2001-07-03 | 2005-02-10 | アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド | ヌクレアーゼ耐性キメラオリゴヌクレオチド |
US20030158403A1 (en) | 2001-07-03 | 2003-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Nuclease resistant chimeric oligonucleotides |
US20030175906A1 (en) | 2001-07-03 | 2003-09-18 | Muthiah Manoharan | Nuclease resistant chimeric oligonucleotides |
US7425545B2 (en) | 2001-07-25 | 2008-09-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of C-reactive protein expression |
US6964950B2 (en) | 2001-07-25 | 2005-11-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of C-reactive protein expression |
US7259150B2 (en) | 2001-08-07 | 2007-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of apolipoprotein (a) expression |
US7227014B2 (en) * | 2001-08-07 | 2007-06-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of apolipoprotein (a) expression |
WO2003014397A1 (en) | 2001-08-09 | 2003-02-20 | Biomedlab Corporation | Probe for detection of enteric virus detection kit and method for enteric virus with the same |
US7060809B2 (en) | 2001-09-04 | 2006-06-13 | Exiqon A/S | LNA compositions and uses thereof |
US7439043B2 (en) | 2001-10-10 | 2008-10-21 | Neose Technologies, Inc. | Galactosyl nucleotide sugars |
NZ532852A (en) | 2001-11-16 | 2006-08-31 | Genentech Inc | Composition comprising and method of using angiopoietin-like protein 3 Angptl3 |
US20100240730A1 (en) | 2002-02-20 | 2010-09-23 | Merck Sharp And Dohme Corp. | RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA) |
EP1540004A4 (en) | 2002-07-31 | 2007-10-03 | Nucleonics Inc | DOUBLE-STRING RNA STRUCTURES AND CONSTRUCTS AND METHOD FOR THE PRODUCTION AND USE THEREOF |
WO2004014933A1 (en) | 2002-08-07 | 2004-02-19 | University Of Massachusetts | Compositions for rna interference and methods of use thereof |
WO2004024757A2 (en) | 2002-09-11 | 2004-03-25 | Santaris Pharma A/S | Modified pna molecules |
AU2003284323A1 (en) | 2002-10-18 | 2004-05-04 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Double-stranded rna structures and constructs, and methods for generating and using the same |
AU2003287502B2 (en) | 2002-11-05 | 2010-12-09 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation |
AU2003291753B2 (en) | 2002-11-05 | 2010-07-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation |
CA2505801A1 (en) | 2002-11-13 | 2004-05-27 | Rosanne Crooke | Antisense modulation of apolipoprotein b expression |
US20060009410A1 (en) | 2002-11-13 | 2006-01-12 | Crooke Rosanne M | Effects of apolipoprotein B inhibition on gene expression profiles in animals |
US7511131B2 (en) | 2002-11-13 | 2009-03-31 | Genzyme Corporation | Antisense modulation of apolipoprotein B expression |
DK2284266T3 (da) | 2002-11-14 | 2014-01-13 | Thermo Fisher Scient Biosciences Inc | sIRNA-MOLEKYLE MOD TP53 |
US6673661B1 (en) | 2002-12-20 | 2004-01-06 | Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. | Self-aligned method for forming dual gate thin film transistor (TFT) device |
EP2500440B1 (en) | 2002-12-20 | 2015-12-16 | Celera Corporation | Genetic polymorphisms associated with myocardial infarction, methods of detection and uses thereof |
US20070015927A1 (en) | 2003-01-09 | 2007-01-18 | Kim Byeang H | New phosphoramidite compounds |
WO2004072046A2 (en) | 2003-02-12 | 2004-08-26 | Carex S.A. | Quinoline derivatives and their use for modulation of lxr activity |
US7803781B2 (en) | 2003-02-28 | 2010-09-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of growth hormone receptor expression and insulin-like growth factor expression |
CA2518475C (en) | 2003-03-07 | 2014-12-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Irna agents comprising asymmetrical modifications |
AU2004227414A1 (en) * | 2003-04-03 | 2004-10-21 | Alnylam Pharmaceuticals | iRNA conjugates |
US7598227B2 (en) | 2003-04-16 | 2009-10-06 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Modulation of apolipoprotein C-III expression |
JP4597976B2 (ja) | 2003-04-17 | 2010-12-15 | アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 修飾iRNA剤 |
US7723509B2 (en) | 2003-04-17 | 2010-05-25 | Alnylam Pharmaceuticals | IRNA agents with biocleavable tethers |
US7851615B2 (en) | 2003-04-17 | 2010-12-14 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Lipophilic conjugated iRNA agents |
US7750142B2 (en) | 2003-04-28 | 2010-07-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of glucagon receptor expression |
US7399853B2 (en) | 2003-04-28 | 2008-07-15 | Isis Pharmaceuticals | Modulation of glucagon receptor expression |
JPWO2004101619A1 (ja) | 2003-05-15 | 2006-10-26 | 塩野義製薬株式会社 | 機能的糖ペプチドの合理的設計および合成 |
WO2004106356A1 (en) | 2003-05-27 | 2004-12-09 | Syddansk Universitet | Functionalized nucleotide derivatives |
ATE555118T1 (de) | 2003-08-28 | 2012-05-15 | Takeshi Imanishi | Neue synthetische nukleidsäuren vom typ mit quervernetzter n-o-bindung |
JP5379347B2 (ja) | 2003-09-18 | 2013-12-25 | アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | 4’−チオヌクレオシドおよびオリゴマー化合物 |
EP2256200A3 (en) | 2003-09-18 | 2012-07-18 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of eIF4E expression |
US8258105B2 (en) * | 2003-10-07 | 2012-09-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotides optimized for kidney targeting |
US7959919B2 (en) | 2003-11-19 | 2011-06-14 | Novelmed Therapeutics, Inc. | Method of inhibiting factor B-mediated complement activation |
WO2005065686A1 (en) | 2004-01-07 | 2005-07-21 | Adipogen Pharmaceuticals Pty Limited | Differentiation modulating agents and uses therefor |
US20050164271A1 (en) | 2004-01-20 | 2005-07-28 | Sanjay Bhanot | Modulation of glucocorticoid receptor expression |
WO2005075453A1 (ja) * | 2004-02-05 | 2005-08-18 | Japan Science And Technology Agency | リンカー化合物及びリガンド複合体、並びにそれらの製造方法 |
US20050244869A1 (en) | 2004-04-05 | 2005-11-03 | Brown-Driver Vickie L | Modulation of transthyretin expression |
JPWO2005097155A1 (ja) | 2004-04-08 | 2008-02-28 | タカラバイオ株式会社 | 神経突起伸長誘導剤 |
JPWO2005116204A1 (ja) | 2004-05-11 | 2008-06-19 | 株式会社アルファジェン | Rna干渉を生じさせるポリヌクレオチド、および、これを用いた遺伝子発現抑制方法 |
RU2380411C2 (ru) | 2004-07-20 | 2010-01-27 | Дженентек, Инк. | Способ ингибирования пролиферации гепатоцитов, способ ингибирования клеточной адгезии гепатоцитов и способ ингибирования биологической активности angptl4 в гепатоцитах или предшественниках гепатоцитов |
JP4947717B2 (ja) | 2004-07-20 | 2012-06-06 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | アンジオポエチン様4タンパク質のインヒビター、組み合わせ、およびそれらの使用 |
JP5192234B2 (ja) | 2004-08-10 | 2013-05-08 | アルナイラム ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 化学修飾オリゴヌクレオチド |
EP2409713B1 (en) | 2004-08-10 | 2015-07-22 | Genzyme Corporation | Oligonucleotides for use in modulating lipoprotein and cholesterol levels in humans |
WO2006031461A2 (en) | 2004-09-09 | 2006-03-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrrolidinyl groups for attaching conjugates to oligomeric compounds |
CA2582464A1 (en) | 2004-10-13 | 2006-04-27 | Sanjay Bhanot | Antisense modulation of ptp1b expression |
EP1812569A2 (en) | 2004-11-08 | 2007-08-01 | K.U. Leuven Research and Development | Modified nucleosides for rna interference |
US20060148740A1 (en) | 2005-01-05 | 2006-07-06 | Prosensa B.V. | Mannose-6-phosphate receptor mediated gene transfer into muscle cells |
WO2006078217A1 (en) | 2005-01-24 | 2006-07-27 | Avaris Ab | COMPLEX CONTAINING SiRNA, ShRNA OR ANTISENSE MOLECULE AND FUNCTIONAL ENTITY, FOR IMPROVED SPECIFICITY AND DELIVERY |
KR20080068019A (ko) * | 2005-09-15 | 2008-07-22 | 산타리스 팔마 에이/에스 | 아포지단백질-b100 발현 억제용 rna 길항제 화합물 |
EP1941040A1 (en) | 2005-09-19 | 2008-07-09 | Johnson & Johnson Pharmaceutical Research & Development L.L.C. | Modulation of glucocorticoid receptor expression |
EA200800869A1 (ru) | 2005-09-19 | 2008-10-30 | ДЖОНСОН ЭНД ДЖОНСОН ФАРМАСЬЮТИКАЛ РИСЕРЧ ЭНД ДИВЕЛОПМЕНТ, Эл. Эл. Си. | Модуляция экспрессии рецептора глюкагона |
EP2428227B1 (en) * | 2006-01-26 | 2016-06-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and their uses directed to Huntingtin |
US7569686B1 (en) | 2006-01-27 | 2009-08-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs |
AU2007211080B9 (en) | 2006-01-27 | 2012-05-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 6-modified bicyclic nucleic acid analogs |
AU2007257094B2 (en) | 2006-05-05 | 2012-10-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating expression of SGLT2 |
CN101553236A (zh) * | 2006-05-05 | 2009-10-07 | 埃西斯药品公司 | 调节gccr的表达的化合物和方法 |
US7666854B2 (en) | 2006-05-11 | 2010-02-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs |
US7547684B2 (en) | 2006-05-11 | 2009-06-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5′-modified bicyclic nucleic acid analogs |
US8101585B2 (en) | 2006-08-04 | 2012-01-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for the modulation of JNK proteins |
CN102614528B (zh) | 2006-08-18 | 2014-02-26 | 箭头研究公司 | 用于体内递送多核苷酸的多缀合物 |
US8658211B2 (en) | 2006-08-18 | 2014-02-25 | Arrowhead Madison Inc. | Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides |
JP5352462B2 (ja) | 2006-09-22 | 2013-11-27 | ダーマコン, インコーポレイテッド | 二本鎖オリゴヌクレオチド複合体、rna干渉による遺伝子サイレンシング方法、および医薬品組成物 |
DK2092065T4 (da) | 2006-10-18 | 2019-10-21 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Antisense-forbindelser |
US8093222B2 (en) | 2006-11-27 | 2012-01-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia |
MX2009005527A (es) | 2006-11-27 | 2009-06-08 | Isis Pharmaceuticals Inc | Metodos para el tratamiento de hipercolesterolemia. |
HUE033960T2 (en) | 2006-12-08 | 2018-01-29 | Lexicon Pharmaceuticals Inc | Monoclonal Antibodies to ANGPTL3 |
CA2839162A1 (en) * | 2006-12-20 | 2008-06-26 | Xoma Technology Ltd. | Methods for the treatment of il-1-.beta. related diseases |
US20100190837A1 (en) | 2007-02-15 | 2010-07-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5'-Substituted-2-F' Modified Nucleosides and Oligomeric Compounds Prepared Therefrom |
EP2604283A1 (en) | 2007-02-16 | 2013-06-19 | KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH | Receptor And Antigen Targeted Prodrug |
CA2678774A1 (en) | 2007-03-01 | 2008-09-04 | Advanced Vision Therapies, Inc. | Treatment of diseases characterized by inflammation |
EP2126085A2 (en) | 2007-03-02 | 2009-12-02 | MDRNA, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting myc gene expression and uses thereof |
AU2008242583B2 (en) | 2007-04-23 | 2013-10-10 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Glycoconjugates of RNA interference agents |
CA2688321A1 (en) | 2007-05-30 | 2008-12-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs |
DK2173760T4 (en) | 2007-06-08 | 2016-02-08 | Isis Pharmaceuticals Inc | Carbocyclic bicyclic nukleinsyreanaloge |
US20090004140A1 (en) | 2007-06-26 | 2009-01-01 | Yao-Ling Qiu | 4-substituted pyrrolidine as anti-infectives |
ES2376507T5 (es) | 2007-07-05 | 2015-08-31 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos 6-disustituidos |
AU2008286771B2 (en) | 2007-08-15 | 2013-08-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Tetrahydropyran nucleic acid analogs |
EP2192924B1 (en) * | 2007-08-20 | 2017-10-11 | Protalix Ltd. | Saccharide-containing protein conjugates and uses thereof |
NZ584827A (en) | 2007-10-01 | 2012-10-26 | Isis Pharmaceuticals Inc | Antisense modulation of fibroblast growth factor receptor 4 expression |
JP2011502514A (ja) | 2007-11-09 | 2011-01-27 | アイシス ファーマシューティカルズ インコーポレイティッド | 第7因子発現の調節 |
US8546556B2 (en) | 2007-11-21 | 2013-10-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc | Carbocyclic alpha-L-bicyclic nucleic acid analogs |
SG10202001748VA (en) | 2007-12-27 | 2020-04-29 | Stelic Institute Of Regenerative Medicine Stelic Institute & Co | Sugar chain-related gene and use thereof |
BRPI0907008A2 (pt) | 2008-01-31 | 2015-07-07 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Métodos otimizados para liberação de dsrna alvejando o gene pcsk9 |
WO2009100320A2 (en) | 2008-02-07 | 2009-08-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs |
US20110269814A1 (en) | 2008-03-26 | 2011-11-03 | Alnylam Pharamaceuticals, Inc. | 2'-f modified rna interference agents |
EP3604533A1 (en) | 2008-04-11 | 2020-02-05 | Arbutus Biopharma Corporation | Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components |
WO2009143369A2 (en) | 2008-05-22 | 2009-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Method of preparing nucleosides and analogs thereof without using chromatography |
WO2009148605A2 (en) | 2008-06-04 | 2009-12-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia |
EP2733222A1 (en) | 2008-07-09 | 2014-05-21 | Celera Corporation | Genetic polymorphisms associated with cardiovascular diseases, methods of detection and uses thereof |
EP2323667A4 (en) * | 2008-08-07 | 2012-07-25 | Isis Pharmaceuticals Inc | MODULATION OF TRANSTHYRETIN EXPRESSION BY TREATMENT OF CNS DISEASES |
EP3587434A1 (en) | 2008-09-23 | 2020-01-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with click components for conjugation with ligands |
EP2356129B1 (en) | 2008-09-24 | 2013-04-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides |
DK2361256T3 (da) | 2008-09-24 | 2013-07-01 | Isis Pharmaceuticals Inc | Cyclohexenyl-nukleinsyreanaloger |
EP3335715A3 (en) | 2008-10-15 | 2018-08-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of factor 11 expression |
US20120059045A1 (en) | 2008-10-24 | 2012-03-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods of using oligomeric compounds comprising 2'-substituted nucleosides |
WO2010048585A2 (en) | 2008-10-24 | 2010-04-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds and methods |
EP3808177A1 (en) | 2008-11-10 | 2021-04-21 | Arbutus Biopharma Corporation | Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics |
US9023820B2 (en) | 2009-01-26 | 2015-05-05 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for silencing apolipoprotein C-III expression |
CA3036963A1 (en) | 2009-01-29 | 2010-08-05 | Arbutus Biopharma Corporation | Lipid formulations comprising cationic lipid and a targeting lipid comprising n-acetyl galactosamine for delivery of nucleic acid |
CA2753975C (en) | 2009-03-02 | 2017-09-26 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid chemical modifications |
FR2943060B1 (fr) | 2009-03-13 | 2013-01-04 | Commissariat Energie Atomique | Agents chelatants d'ions metalliques, leurs procedes de preparation et leurs applications |
EP2419146A4 (en) | 2009-04-15 | 2013-11-27 | Isis Pharmaceuticals Inc | MODULATION OF INFLAMMATORY RESPONSES BY FACTOR XI |
EP2416760A4 (en) | 2009-05-05 | 2014-01-22 | Tekmira Pharmaceuticals Corp | LIPID COMPOSITIONS |
US9200276B2 (en) | 2009-06-01 | 2015-12-01 | Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. | Polynucleotides for multivalent RNA interference, compositions and methods of use thereof |
PL3431076T3 (pl) | 2009-06-10 | 2022-01-31 | Arbutus Biopharma Corporation | Ulepszona formulacja lipidowa |
KR20120050429A (ko) | 2009-06-15 | 2012-05-18 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | Pcsk9 유전자를 표적으로 하는 지질 제형된 dsrna |
BR112012000421A2 (pt) | 2009-07-06 | 2019-09-24 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | composições e métodos para intensificar a produção de um produto biológico. |
US8927513B2 (en) | 2009-07-07 | 2015-01-06 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 5′ phosphate mimics |
WO2011005861A1 (en) | 2009-07-07 | 2011-01-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide end caps |
US20120214862A1 (en) | 2009-07-16 | 2012-08-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of factor 7 expression |
WO2011017521A2 (en) | 2009-08-06 | 2011-02-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs |
US8901072B2 (en) * | 2009-08-12 | 2014-12-02 | The Medicines Company | Glycopeptide and lipoglycopeptide antibiotics with improved solubility |
WO2011038356A2 (en) | 2009-09-25 | 2011-03-31 | Johns Hopkins University | Novel liver-targeting agents and their synthesis |
WO2011047312A1 (en) | 2009-10-16 | 2011-04-21 | Glaxo Group Limited | Hbv antisense inhibitors |
TWI391144B (zh) | 2009-10-26 | 2013-04-01 | Iner Aec Executive Yuan | 一種定量肝殘餘功能的檢驗方法與其新穎肝受體造影檢驗藥劑 |
TWI388338B (zh) | 2009-10-26 | 2013-03-11 | Iner Aec Executive Yuan | 對聚合醣鏈進行放射標誌以作為肝受體造影劑之方法 |
EP2496238A4 (en) * | 2009-11-03 | 2013-10-02 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | FORMULATED LIPID COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING TRANSTHYRETIN EXPRESSION (TTR) |
WO2011072290A2 (en) | 2009-12-11 | 2011-06-16 | The Regents Of The University Of Michigan | Targeted dendrimer-drug conjugates |
WO2011085271A2 (en) | 2010-01-08 | 2011-07-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of angiopoietin-like 3 expression |
WO2011100131A2 (en) | 2010-01-28 | 2011-08-18 | Alnylam Pharmacuticals, Inc. | Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s) |
DK2539451T3 (da) * | 2010-02-24 | 2016-04-04 | Arrowhead Res Corp | Sammensætninger til målrettet tilførsel af siRNA |
WO2011115818A1 (en) | 2010-03-17 | 2011-09-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5'-substituted bicyclic nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
JP2013528665A (ja) | 2010-03-26 | 2013-07-11 | メルサナ セラピューティックス, インコーポレイテッド | ポリヌクレオチドの送達のための修飾ポリマー、その製造方法、およびその使用方法 |
US20130109817A1 (en) | 2010-03-26 | 2013-05-02 | Mersana Therapeutics, Inc. | Modified Polymers for Delivery of Polynucleotides, Method of Manufacture, and Methods of Use Thereof |
US9102938B2 (en) | 2010-04-01 | 2015-08-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 2′ and 5′ modified monomers and oligonucleotides |
US10913767B2 (en) | 2010-04-22 | 2021-02-09 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs |
WO2011133871A2 (en) | 2010-04-22 | 2011-10-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | 5'-end derivatives |
US9127033B2 (en) | 2010-04-28 | 2015-09-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 5′ modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom |
US8993738B2 (en) | 2010-04-28 | 2015-03-31 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modified nucleosides, analogs thereof and oligomeric compounds prepared therefrom |
US20130236968A1 (en) | 2010-06-21 | 2013-09-12 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery |
EP2616543A1 (en) * | 2010-09-15 | 2013-07-24 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | MODIFIED iRNA AGENTS |
WO2012067970A2 (en) | 2010-11-11 | 2012-05-24 | Ted M Dawson | Transcriptional repression leading to parkinson's disease |
WO2012068187A1 (en) | 2010-11-19 | 2012-05-24 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Poly(amide) polymers for the delivery of oligonucleotides |
JP2014504295A (ja) | 2010-12-17 | 2014-02-20 | アローヘッド リサーチ コーポレイション | siRNA用ガラクトースクラスター−薬物動態調節剤標的指向部分 |
US8501930B2 (en) | 2010-12-17 | 2013-08-06 | Arrowhead Madison Inc. | Peptide-based in vivo siRNA delivery system |
EP2658981B1 (en) | 2010-12-29 | 2016-09-28 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Small molecule conjugates for intracellular delivery of nucleic acids |
EP3067421B1 (en) | 2011-02-08 | 2018-10-10 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof |
CN107012144A (zh) | 2011-04-01 | 2017-08-04 | Ionis制药公司 | 信号转导及转录激活蛋白3(stat3)表达的调节 |
JP5951752B2 (ja) * | 2011-04-13 | 2016-07-13 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | Ptp1b発現のアンチセンス調節 |
TW201303013A (zh) | 2011-04-21 | 2013-01-16 | Isis Pharmaceuticals Inc | B型肝炎病毒(hbv)表現之調節 |
KR20190062511A (ko) | 2011-04-27 | 2019-06-05 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | 아포지방단백질 ciii (apociii) 발현의 조정 |
WO2012174154A1 (en) | 2011-06-13 | 2012-12-20 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of inflammatory responses by factor vii |
EP2721156B1 (en) | 2011-06-16 | 2016-12-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of fibroblast growth factor receptor 4 expression |
KR102540778B1 (ko) | 2011-06-21 | 2023-06-07 | 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 | 아포리포단백질 c-iii(apoc3) 유전자의 발현 억제를 위한 조성물 및 방법 |
EP2723758B1 (en) * | 2011-06-21 | 2018-06-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compostions and methods of use thereof |
WO2012177639A2 (en) | 2011-06-22 | 2012-12-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Bioprocessing and bioproduction using avian cell lines |
US20130017250A1 (en) * | 2011-07-15 | 2013-01-17 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods For High Density Lipoprotein Cholesterol Regulation |
US8932572B2 (en) | 2011-08-26 | 2015-01-13 | Arrowhead Madison Inc. | Poly(vinyl ester) polymers for in vivo nucleic acid delivery |
DK2751270T3 (en) | 2011-08-29 | 2018-10-29 | Ionis Pharmaceuticals Inc | OLIGOMER-CONJUGATE COMPLEXES AND THEIR USE |
CA2849273C (en) * | 2011-09-20 | 2020-07-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of gcgr expression |
AU2012328680A1 (en) | 2011-10-25 | 2014-05-01 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of GCCR expression |
DK3301177T3 (da) | 2011-11-18 | 2020-06-15 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Rnai-midler, sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf til behandling af transthyretin (ttr)-forbundne sygdomme |
JP2015507924A (ja) | 2012-02-08 | 2015-03-16 | アイシス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッド | 第vii因子の発現を調節するための方法と組成物 |
US9340784B2 (en) | 2012-03-19 | 2016-05-17 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for modulating alpha-1-antitrypsin expression |
WO2013142571A2 (en) | 2012-03-20 | 2013-09-26 | Cornell University | Assays for the identification of compounds that modulate lipid homeostasis |
US9133461B2 (en) | 2012-04-10 | 2015-09-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting expression of the ALAS1 gene |
WO2013159109A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression |
EP3336189A1 (en) | 2012-04-20 | 2018-06-20 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof |
TWI595885B (zh) | 2012-05-02 | 2017-08-21 | 喜納製藥公司 | 包含四galnac之新穎結合物及傳送寡核苷酸之方法 |
WO2013165816A2 (en) | 2012-05-02 | 2013-11-07 | Merck Sharp & Dohme Corp. | SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) COMPOSITIONS |
US20160002624A1 (en) | 2012-05-17 | 2016-01-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide compositions |
US9574193B2 (en) | 2012-05-17 | 2017-02-21 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for modulating apolipoprotein (a) expression |
RU2748495C2 (ru) | 2012-05-24 | 2021-05-26 | Ионис Фармасьютикалз, Инк. | Способы и композиции для модулирования экспрессии аполипопротеина (а) |
US20150322428A1 (en) | 2012-06-18 | 2015-11-12 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for improved cellular uptake of antisense compounds |
US10086081B2 (en) | 2012-08-06 | 2018-10-02 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate conjugated RNA agents and process for their preparation |
US9695418B2 (en) | 2012-10-11 | 2017-07-04 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleosides and uses thereof |
EP2920304B1 (en) | 2012-11-15 | 2019-03-06 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotide conjugates |
WO2014118272A1 (en) | 2013-01-30 | 2014-08-07 | Santaris Pharma A/S | Antimir-122 oligonucleotide carbohydrate conjugates |
EP2951305B1 (en) | 2013-01-30 | 2018-08-15 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Lna oligonucleotide carbohydrate conjugates |
EP2992098B1 (en) | 2013-05-01 | 2019-03-27 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulating hbv and ttr expression |
WO2014184973A1 (ja) | 2013-05-16 | 2014-11-20 | 大日本住友製薬株式会社 | 神経前駆細胞を用いた細胞治療における移植補助剤 |
EP3730619A1 (en) | 2013-06-21 | 2020-10-28 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for modulation of target nucleic acids |
SG10201908122XA (en) | 2013-06-27 | 2019-10-30 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Antisense oligomers and conjugates targeting pcsk9 |
MX2015017863A (es) | 2013-07-02 | 2016-11-30 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Moduladores de receptor de hormona de crecimiento. |
EP3019200B1 (en) | 2013-07-11 | 2022-03-23 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide-ligand conjugates and process for their preparation |
CN105744959B (zh) | 2013-09-13 | 2020-12-01 | Ionis制药公司 | 补体因子b的调节剂 |
US9943604B2 (en) | 2013-09-20 | 2018-04-17 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Targeted therapeutic nucleosides and their use |
MX2016005855A (es) | 2013-11-14 | 2016-07-13 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Compuestos de conjugados antisentido de apolipoproteina b (apob). |
US10150965B2 (en) | 2013-12-06 | 2018-12-11 | Dicerna Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (TTR) by double-stranded RNA |
KR102369736B1 (ko) | 2014-05-01 | 2022-03-02 | 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 | 보체 인자 b 발현을 조절하기 위한 조성물 및 방법 |
JP6667453B2 (ja) | 2014-05-01 | 2020-03-18 | アイオーニス ファーマシューティカルズ, インコーポレーテッドIonis Pharmaceuticals,Inc. | 成長ホルモン受容体発現を調節するための組成物及び方法 |
BR122020024443B1 (pt) | 2014-05-01 | 2022-02-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | Composto e composição farmacêutica para modulação da expressão de angptl3 |
EP4223315A3 (en) | 2014-05-01 | 2023-08-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Method for synthesis of reactive conjugate clusters |
DK3137091T3 (da) | 2014-05-01 | 2021-01-25 | Ionis Pharmaceuticals Inc | Konjugater af modificerede antisense-oligonukleotider og anvendelse deraf til modulation af pkk-ekspression |
WO2015179693A1 (en) | 2014-05-22 | 2015-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds and their use |
WO2015188194A1 (en) | 2014-06-06 | 2015-12-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for enhanced intestinal absorption of conjugated oligomeric compounds |
BR122023026882A2 (pt) * | 2015-11-06 | 2024-01-23 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | Uso de um composto oligomérico |
WO2017079745A1 (en) * | 2015-11-06 | 2017-05-11 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds for use in therapy |
-
2014
- 2014-05-01 EP EP14791344.6A patent/EP2992098B1/en active Active
- 2014-05-01 HU HUE14791344A patent/HUE043697T2/hu unknown
- 2014-05-01 PL PL14791344T patent/PL2992098T3/pl unknown
- 2014-05-01 RU RU2015151200A patent/RU2699985C2/ru active
- 2014-05-01 ME MEP-2019-157A patent/ME03390B/me unknown
- 2014-05-01 JP JP2016512053A patent/JP6387084B2/ja active Active
- 2014-05-01 SG SG10201801813YA patent/SG10201801813YA/en unknown
- 2014-05-01 NZ NZ728517A patent/NZ728517A/en unknown
- 2014-05-01 SG SG10201906382QA patent/SG10201906382QA/en unknown
- 2014-05-01 LT LTEP14791187.9T patent/LT2992009T/lt unknown
- 2014-05-01 WO PCT/US2014/036463 patent/WO2014179627A2/en active Application Filing
- 2014-05-01 DK DK14791344.6T patent/DK2992098T3/da active
- 2014-05-01 LT LTEP14791344.6T patent/LT2992098T/lt unknown
- 2014-05-01 RU RU2015151202A patent/RU2670614C9/ru active
- 2014-05-01 EP EP19217148.6A patent/EP3690049A1/en active Pending
- 2014-05-01 RU RU2015151199A patent/RU2697152C2/ru active
- 2014-05-01 RS RS20190682A patent/RS58981B1/sr unknown
- 2014-05-01 AU AU2014259756A patent/AU2014259756B2/en active Active
- 2014-05-01 KR KR1020237024621A patent/KR20230113835A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-05-01 MX MX2015015234A patent/MX2015015234A/es active IP Right Grant
- 2014-05-01 CN CN202111358415.2A patent/CN114058617A/zh active Pending
- 2014-05-01 MX MX2015015239A patent/MX2015015239A/es active IP Right Grant
- 2014-05-01 KR KR1020217003080A patent/KR20210014758A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-05-01 PE PE2015002330A patent/PE20152002A1/es unknown
- 2014-05-01 MX MX2015015220A patent/MX2015015220A/es unknown
- 2014-05-01 KR KR1020217039866A patent/KR102558571B1/ko active IP Right Grant
- 2014-05-01 CA CA2921518A patent/CA2921518A1/en not_active Abandoned
- 2014-05-01 CA CA2921162A patent/CA2921162A1/en active Pending
- 2014-05-01 CA CA2921509A patent/CA2921509A1/en active Pending
- 2014-05-01 KR KR1020217009333A patent/KR20210037752A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-05-01 EP EP19206748.6A patent/EP3633039A1/en not_active Withdrawn
- 2014-05-01 KR KR1020157033027A patent/KR101857707B1/ko active IP Right Grant
- 2014-05-01 ES ES14791344T patent/ES2730015T3/es active Active
- 2014-05-01 KR KR1020227045740A patent/KR20230006933A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-05-01 CN CN201480035633.4A patent/CN105378082B/zh active Active
- 2014-05-01 RS RS20201052A patent/RS60796B1/sr unknown
- 2014-05-01 PT PT147911879T patent/PT2992009T/pt unknown
- 2014-05-01 NZ NZ631537A patent/NZ631537A/en unknown
- 2014-05-01 CN CN201480035618.XA patent/CN105378085B/zh active Active
- 2014-05-01 KR KR1020187013079A patent/KR102138781B1/ko active IP Right Grant
- 2014-05-01 RU RU2015151204A patent/RU2686080C2/ru active
- 2014-05-01 ES ES14791557T patent/ES2778442T3/es active Active
- 2014-05-01 WO PCT/US2014/036466 patent/WO2014179629A2/en active Application Filing
- 2014-05-01 CA CA2921167A patent/CA2921167A1/en active Pending
- 2014-05-01 BR BR112015027377-7A patent/BR112015027377B1/pt active IP Right Grant
- 2014-05-01 EA EA201592093A patent/EA031393B1/ru unknown
- 2014-05-01 EP EP22181753.9A patent/EP4155403A1/en active Pending
- 2014-05-01 RU RU2015151203A patent/RU2650510C2/ru active
- 2014-05-01 RU RU2018112167A patent/RU2018112167A/ru not_active Application Discontinuation
- 2014-05-01 PT PT191649599T patent/PT3524680T/pt unknown
- 2014-05-01 PT PT14791344T patent/PT2992098T/pt unknown
- 2014-05-01 IL IL284593A patent/IL284593B2/en unknown
- 2014-05-01 JP JP2016512052A patent/JP6216444B2/ja active Active
- 2014-05-01 US US14/888,318 patent/US9714421B2/en active Active
- 2014-05-01 CN CN201910037432.2A patent/CN110066795A/zh active Pending
- 2014-05-01 DK DK14791187.9T patent/DK2992009T3/da active
- 2014-05-01 SG SG10201801507RA patent/SG10201801507RA/en unknown
- 2014-05-01 EP EP14791557.3A patent/EP2991656B1/en active Active
- 2014-05-01 KR KR1020207021245A patent/KR20200090966A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-05-01 NZ NZ753018A patent/NZ753018A/en unknown
- 2014-05-01 ES ES14791187T patent/ES2819213T3/es active Active
- 2014-05-01 EP EP14791863.5A patent/EP2992097B1/en active Active
- 2014-05-01 WO PCT/US2014/036452 patent/WO2014179620A1/en active Application Filing
- 2014-05-01 CN CN201480035625.XA patent/CN105377887B/zh active Active
- 2014-05-01 KR KR1020227025268A patent/KR102651423B1/ko active Application Filing
- 2014-05-01 EP EP19164959.9A patent/EP3524680B1/en active Active
- 2014-05-01 DK DK19164959.9T patent/DK3524680T3/da active
- 2014-05-01 KR KR1020157033031A patent/KR20160002977A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-05-01 KR KR1020247009422A patent/KR20240042220A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-05-01 BR BR112015027321A patent/BR112015027321A8/pt not_active Application Discontinuation
- 2014-05-01 KR KR1020157033028A patent/KR102315836B1/ko active IP Right Grant
- 2014-05-01 AU AU2014259750A patent/AU2014259750B2/en active Active
- 2014-05-01 BR BR112015027322A patent/BR112015027322A8/pt active Search and Examination
- 2014-05-01 MX MX2015015264A patent/MX2015015264A/es active IP Right Grant
- 2014-05-01 NZ NZ631552A patent/NZ631552A/en not_active IP Right Cessation
- 2014-05-01 WO PCT/US2014/036460 patent/WO2014179625A1/en active Application Filing
- 2014-05-01 UA UAA201708429A patent/UA120287C2/uk unknown
- 2014-05-01 PE PE2016001724A patent/PE20161430A1/es unknown
- 2014-05-01 KR KR1020157033029A patent/KR102424855B1/ko active IP Right Grant
- 2014-05-01 CA CA2921514A patent/CA2921514C/en active Active
- 2014-05-01 SG SG11201508870VA patent/SG11201508870VA/en unknown
- 2014-05-01 CN CN201910036892.3A patent/CN110042098B/zh active Active
- 2014-05-01 NZ NZ631512A patent/NZ631512A/en unknown
- 2014-05-01 SI SI201431660T patent/SI2992009T1/sl unknown
- 2014-05-01 US US14/267,842 patent/US9127276B2/en active Active
- 2014-05-01 KR KR1020217033430A patent/KR102482890B1/ko active IP Right Grant
- 2014-05-01 CN CN202010402246.7A patent/CN111593051A/zh active Pending
- 2014-05-01 BR BR112015027319A patent/BR112015027319A8/pt active Search and Examination
- 2014-05-01 CN CN201480035635.3A patent/CN108064162B/zh active Active
- 2014-05-01 KR KR1020197019617A patent/KR102212275B1/ko active IP Right Grant
- 2014-05-01 CN CN202011081520.1A patent/CN112921036A/zh active Pending
- 2014-05-01 HU HUE14791187A patent/HUE050394T2/hu unknown
- 2014-05-01 RU RU2019124314A patent/RU2019124314A/ru unknown
- 2014-05-01 JP JP2016512054A patent/JP6995478B2/ja active Active
- 2014-05-01 AU AU2014259757A patent/AU2014259757B2/en not_active Ceased
- 2014-05-01 BR BR112015027369-6A patent/BR112015027369B1/pt active IP Right Grant
- 2014-05-01 SI SI201431207T patent/SI2992098T1/sl unknown
- 2014-05-01 IL IL296543A patent/IL296543A/en unknown
- 2014-05-01 EP EP19160031.1A patent/EP3546579A1/en active Pending
- 2014-05-01 MY MYPI2015703904A patent/MY178929A/en unknown
- 2014-05-01 AU AU2014259759A patent/AU2014259759B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2014-05-01 AU AU2014259755A patent/AU2014259755B2/en active Active
- 2014-05-01 UA UAA201511840A patent/UA121017C2/uk unknown
- 2014-05-01 NZ NZ740338A patent/NZ740338A/en unknown
- 2014-05-01 EP EP14791187.9A patent/EP2992009B1/en active Active
- 2014-05-01 WO PCT/US2014/036462 patent/WO2014179626A2/en active Application Filing
- 2014-05-01 CR CR20190269A patent/CR20190269A/es unknown
- 2014-05-01 CN CN202110394825.6A patent/CN113293163A/zh active Pending
- 2014-05-01 ES ES19164959T patent/ES2885174T3/es active Active
- 2014-05-01 EA EA201891479A patent/EA036584B1/ru unknown
- 2014-05-01 JP JP2016512055A patent/JP6456362B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2014-05-01 KR KR1020157033025A patent/KR102235678B1/ko active IP Right Grant
- 2014-05-01 EP EP14792010.2A patent/EP2991661B1/en active Active
- 2014-05-01 RU RU2019110030A patent/RU2019110030A/ru unknown
- 2014-05-01 SG SG11201508800WA patent/SG11201508800WA/en unknown
- 2014-05-01 PL PL14791187T patent/PL2992009T3/pl unknown
- 2014-05-01 BR BR122018009831-7A patent/BR122018009831B1/pt active IP Right Grant
- 2014-05-01 DK DK14791557.3T patent/DK2991656T3/da active
- 2014-05-01 JP JP2016512051A patent/JP6769866B2/ja active Active
- 2014-05-01 MY MYPI2018000863A patent/MY198359A/en unknown
- 2014-05-01 MX MX2015015263A patent/MX2015015263A/es active IP Right Grant
- 2014-05-01 CN CN201480035624.5A patent/CN105392488B/zh active Active
- 2014-05-01 EP EP20205948.1A patent/EP3828275A1/en active Pending
- 2014-12-30 US US14/586,826 patent/US9163239B2/en active Active
- 2014-12-30 US US14/586,751 patent/US9181549B2/en active Active
- 2014-12-31 US US14/588,061 patent/US9181550B2/en active Active
-
2015
- 2015-02-27 US US14/633,491 patent/US9145558B2/en active Active
- 2015-06-19 US US14/744,539 patent/US20160017323A1/en not_active Abandoned
- 2015-08-10 US US14/822,493 patent/US9932580B2/en active Active
- 2015-08-28 US US14/839,521 patent/US9932581B2/en active Active
- 2015-08-28 US US14/839,580 patent/US9957504B2/en active Active
- 2015-09-29 ZA ZA2015/07216A patent/ZA201507216B/en unknown
- 2015-09-29 ZA ZA2015/07218A patent/ZA201507218B/en unknown
- 2015-10-15 IL IL242125A patent/IL242125B/en active IP Right Grant
- 2015-10-15 IL IL242132A patent/IL242132B/en active IP Right Grant
- 2015-10-15 IL IL242126A patent/IL242126B/en active IP Right Grant
- 2015-10-15 IL IL242124A patent/IL242124B/en active IP Right Grant
- 2015-10-28 DO DO2015000268A patent/DOP2015000268A/es unknown
- 2015-10-29 PH PH12015502493A patent/PH12015502493A1/en unknown
- 2015-10-30 MX MX2019010441A patent/MX2019010441A/es unknown
- 2015-10-30 MX MX2021008899A patent/MX2021008899A/es unknown
- 2015-10-30 MX MX2020004209A patent/MX2020004209A/es unknown
- 2015-10-30 MX MX2020002184A patent/MX2020002184A/es unknown
- 2015-10-30 MX MX2019010443A patent/MX2019010443A/es unknown
- 2015-10-30 CL CL2015003217A patent/CL2015003217A1/es unknown
- 2015-10-30 MX MX2021008901A patent/MX2021008901A/es unknown
- 2015-11-12 CR CR20150612A patent/CR20150612A/es unknown
-
2016
- 2016-08-10 HK HK16109538.2A patent/HK1221485A1/zh not_active IP Right Cessation
- 2016-08-10 HK HK16109533.7A patent/HK1221403A1/zh unknown
- 2016-08-10 HK HK16109539.1A patent/HK1221475A1/zh unknown
- 2016-08-10 HK HK16109541.7A patent/HK1221486A1/zh unknown
- 2016-08-10 HK HK16109545.3A patent/HK1221404A1/zh unknown
- 2016-09-07 CL CL2016002262A patent/CL2016002262A1/es unknown
- 2016-10-24 DO DO2016000287A patent/DOP2016000287A/es unknown
-
2017
- 2017-01-19 AU AU2017200365A patent/AU2017200365C1/en active Active
- 2017-02-13 AU AU2017200950A patent/AU2017200950B2/en active Active
- 2017-05-23 AU AU2017203436A patent/AU2017203436B2/en active Active
- 2017-06-09 US US15/618,365 patent/US20180002693A1/en not_active Abandoned
- 2017-08-25 US US15/687,306 patent/US10683499B2/en active Active
- 2017-09-22 JP JP2017182019A patent/JP6592486B2/ja active Active
-
2018
- 2018-02-07 US US15/891,156 patent/US10883104B2/en active Active
- 2018-02-07 US US15/891,118 patent/US10927372B2/en active Active
- 2018-02-14 US US15/896,379 patent/US20190055554A1/en not_active Abandoned
- 2018-08-07 JP JP2018148112A patent/JP6652602B2/ja active Active
- 2018-09-12 PH PH12018501963A patent/PH12018501963A1/en unknown
- 2018-09-20 IL IL261901A patent/IL261901B/en active IP Right Grant
- 2018-11-22 AU AU2018267625A patent/AU2018267625B2/en active Active
- 2018-12-18 JP JP2018236205A patent/JP6639629B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2018-12-19 IL IL263843A patent/IL263843B/en active IP Right Grant
- 2018-12-26 US US16/232,733 patent/US10844379B2/en active Active
-
2019
- 2019-01-14 IL IL264241A patent/IL264241B/en active IP Right Grant
- 2019-01-31 IL IL264580A patent/IL264580B/en active IP Right Grant
- 2019-02-07 AU AU2019200820A patent/AU2019200820B2/en active Active
- 2019-04-15 AU AU2019202598A patent/AU2019202598A1/en not_active Abandoned
- 2019-05-25 AU AU2019203674A patent/AU2019203674B2/en active Active
- 2019-05-29 PH PH12019501191A patent/PH12019501191A1/en unknown
- 2019-05-30 HR HRP20190987TT patent/HRP20190987T1/hr unknown
- 2019-06-26 CY CY20191100660T patent/CY1121879T1/el unknown
- 2019-07-03 AU AU2019204784A patent/AU2019204784C1/en active Active
- 2019-09-19 JP JP2019170394A patent/JP7429103B2/ja active Active
- 2019-11-06 IL IL270464A patent/IL270464B/en unknown
- 2019-11-22 JP JP2019211075A patent/JP2020039355A/ja active Pending
- 2019-11-22 JP JP2019211074A patent/JP6866459B2/ja active Active
- 2019-12-20 JP JP2019229981A patent/JP2020058370A/ja not_active Ceased
-
2020
- 2020-01-23 JP JP2020008836A patent/JP2020074787A/ja active Pending
- 2020-02-12 IL IL272617A patent/IL272617A/en unknown
- 2020-02-13 US US16/790,557 patent/US20220275365A9/en not_active Abandoned
- 2020-03-02 US US16/806,941 patent/US20200224198A1/en not_active Abandoned
- 2020-03-09 IL IL273184A patent/IL273184B/en unknown
- 2020-03-10 IL IL273205A patent/IL273205A/en unknown
- 2020-03-15 IL IL273312A patent/IL273312A/en unknown
- 2020-04-20 IL IL274064A patent/IL274064B/en active IP Right Grant
- 2020-06-24 US US16/910,727 patent/US20210130823A1/en not_active Abandoned
- 2020-07-22 AU AU2020207820A patent/AU2020207820A1/en not_active Withdrawn
- 2020-08-11 AU AU2020217347A patent/AU2020217347A1/en not_active Abandoned
- 2020-08-28 HR HRP20201378TT patent/HRP20201378T1/hr unknown
- 2020-09-14 AU AU2020233603A patent/AU2020233603A1/en not_active Abandoned
- 2020-09-22 CY CY20201100892T patent/CY1123369T1/el unknown
- 2020-09-23 JP JP2020158332A patent/JP7177127B2/ja active Active
- 2020-10-01 US US17/060,440 patent/US11851655B2/en active Active
- 2020-10-14 US US17/070,287 patent/US11299736B1/en active Active
- 2020-12-07 US US17/114,177 patent/US20210395734A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-02-17 JP JP2021023118A patent/JP2021074021A/ja not_active Withdrawn
- 2021-04-07 JP JP2021065088A patent/JP7339294B2/ja active Active
- 2021-05-17 DO DO2021000095A patent/DOP2021000095A/es unknown
- 2021-06-02 IL IL283660A patent/IL283660A/en unknown
- 2021-06-14 IL IL284000A patent/IL284000A/en unknown
- 2021-06-23 AU AU2021204244A patent/AU2021204244B2/en active Active
- 2021-11-05 JP JP2021181533A patent/JP2022017514A/ja active Pending
-
2022
- 2022-04-27 AU AU2022202770A patent/AU2022202770A1/en active Pending
- 2022-10-21 US US17/970,887 patent/US20230151365A1/en active Pending
- 2022-11-10 JP JP2022180094A patent/JP2023012548A/ja active Pending
-
2023
- 2023-06-07 JP JP2023093703A patent/JP2023113843A/ja active Pending
- 2023-07-11 US US18/350,195 patent/US20240247260A1/en active Pending
- 2023-10-23 JP JP2023181938A patent/JP2024010070A/ja active Pending
-
2024
- 2024-01-17 AU AU2024200296A patent/AU2024200296A1/en active Pending
- 2024-06-05 JP JP2024091116A patent/JP2024116224A/ja active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009073809A2 (en) * | 2007-12-04 | 2009-06-11 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides |
US20120225927A1 (en) * | 2008-10-20 | 2012-09-06 | Dinah Wen-Yee Sah | Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin |
WO2011139917A1 (en) * | 2010-04-29 | 2011-11-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of transthyretin expression |
US20130035366A1 (en) * | 2011-04-21 | 2013-02-07 | Swayze Eric E | Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
KUROSAWA et al. "Selective silencing of a mutant transthyretin allele by small interfering RNAs", Biochemical and Biophysical Research Communications, 25 November 2005 (25.11.2005), Vol. 337, Iss. 3, p. 1012-1018, entire document * |
MACHIDA et al. "Postmortem findings in a patient with cerebral amyloid angiopathy actively treated with corticosteroid", Amyloid, 21 April 2012 (21.04.2012), Vol. 19, p. 47-49, entire document * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2670614C9 (ru) | Композиции и способы модулирования экспрессии hbv и ttr | |
JP2022544587A (ja) | 結合修飾オリゴマー化合物及びその使用 | |
RU2782034C2 (ru) | Композиции и способы модулирования экспрессии hbv и ttr | |
RU2824214C1 (ru) | Композиции и способы модулирования экспрессии аполипопротеина (a) | |
CN110079524B (zh) | 用于调节hbv和ttr表达的组合物和方法 | |
EA046363B1 (ru) | Олигомерные соединения для модулирования экспрессии ttr |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC4A | Registration of transfer of a eurasian patent by assignment |