JP2019535839A - 治療剤の送達のためのエクソソーム - Google Patents

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Abstract

本発明は、薬物送達ビヒクルとしてのエクソソーム、このようなエクソソーム内に封入された治療剤を含む組成物、このようなエクソソームおよびその組成物を生産する方法、ならびにこのようなエクソソームおよび組成物を特定の患者組織または器官に送達する方法を提供する。本発明はまた、疾患、障害または状態、例えば癌、炎症性疾患、感染性疾患、アレルギー性疾患または自己免疫疾患を処置する方法であって、それを必要とする患者に、提供される治療薬を負荷したエクソソームまたはその医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１６年１１月２９日に出願された米国仮出願第６２／４２７，５３１号、２０１７年９月１８日に出願された同第６２／５５９，９２１号、および２０１７年９月１８日に出願された同第６２／５５９，９６７号の米国特許法第１１９条（ｅ）のもとの利益を主張し、これら全ての内容全体が、参照によって本明細書内に組み込まれる。
技術分野
本発明は、部分的には、治療剤、例えば生物製剤、例えばタンパク質、核酸または他の薬剤を負荷（例えば、封入）することができ、いくつかの実施形態では、それらの安定性もしくは他の特性を改善することができ、および／またはそれらを患者の組織もしくは器官に送達することができる微小胞、例えばエクソソームに関する。本発明はまた、このような微小胞を使用する組成物および方法に関する。
発明の背景
近年、疾患を処置、診断およびモニタリングするための生物製剤および関連治療剤の多大な開発が見られる。しかしながら、ペイロードをパッケージングし、安定化し、目的の部位に送達するために適切なビヒクルを生成するという課題は依然として未対処である。多くの治療薬は、それらの固有の不安定性およびインビボにおける能動的クリアランス機構による分解に悩まされている。これらのペイロードを経口送達する場合、不十分なインビボ安定性は特に問題である。消化管の過酷な条件（胃の酸性条件、胃腸管中の摂取成分を分解するプロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼおよびヌクレアーゼの作用と相まった蠕動運動を含む）は、多くの生物製剤の経口送達を特に困難にする。この課題の規模は、静脈内（ＩＶ）投与、経皮投与および皮下投与を含む非経口手段による送達に限定される生物製剤の数によって証明される。生物製剤および関連治療剤のための一般的な経口送達ビヒクルは、ヘルスケアに大きな影響を与えるだろう。
最近の努力は、生物製剤をポリマー系マトリックス、リポソームマトリックスまたは生分解性および侵食性マトリックスにパッケージングして、生物製剤が封入されたナノ粒子を得ることに焦点が当てられている。それらの有利な封入特性にもかかわらず、毒性または不十分な放出特性により、このようなナノ粒子の広範な使用は達成されていない。加えて、現在のナノ粒子合成技術は、それらの能力が製造目的の規模に限定されている。したがって、有効な非毒性の拡張可能な送達プラットフォームの開発は依然として、満たされていない要求である。
ごく最近まで細胞のゴミ容器として考えられていたエクソソーム（微小胞の一種）は、生物学的メッセージの伝達および生理学的恒常性の維持において重要な役割を果たすことが公知の実体として明らかになってきた。この生物学的情報伝達手段は、多くの生物にわたって保存されていると思われ、核酸、タンパク質および低分子を含む様々な生体分子の輸送を含む。
免疫発達に重要な様々なｍｉＲＮＡを含有することが公知の経口摂取されるミルクは、エクソソームでこれらのｍｉＲＮＡを保護および送達する。したがって、ミルクエクソソームは、これらの複雑な生体分子の完全性を維持しながら、重要なメッセージを母親から乳児に伝達する進化的に保存された胃腸特権（ＧＩ特権）手段である。実際、他のタイプのエクソソームと比較した場合、ミルクエクソソームは、酸性ｐＨおよび他の高ストレスまたは分解条件で好ましい安定性プロファイルを有することが観察されている（例えば、Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ．２０１２；８（１）：１１８−２３．Ｅｐｕｂ ２０１１ Ｎｏｖ ２９を参照のこと）。加えて、循環中のウシｍｉＲＮＡレベルは、様々な量のミルクの消費後に用量依存的に増加することが観察されている（例えば、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１５；１０（３）：ｅ０１２１１２３を参照のこと）。
まとめると、利用可能なデータは、ヒトがミルクのインタクトな核酸内容物を吸収する能力を有することを示唆している。ミルクエクソソームはｍｉＲＮＡ種を封入することが公知であるので（例えば、Ｊ Ｎｕｔｒ．２０１４ Ｏｃｔ；１４４（１０）：１４９５−５００を参照のこと）、適切なミルクエクソソームは、様々な治療剤の経口送達を可能にするであろう。この仮説と一致して、不十分な経口利用可能性の低分子がミルクエクソソームにパッケージングされ、齧歯類モデルにおいて経口送達されている（例えば、Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ ２０１６ Ｆｅｂ １；３７１（１）：４８−６１を参照のこと）。
本発明は、ミルク由来エクソソームを利用して、以前は経口投与可能ではなかったか、または他の送達課題、例えば不十分なバイオアベイラビリティ、貯蔵不安定性、代謝、オフターゲット毒性もしくはインビボにおける分解に悩まされていた治療薬のための適切な送達ビヒクルに関する緊急の必要性を満たす。
Ｉｎｔ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｓｃｉ．２０１２；８（１）：１１８−２３．Ｅｐｕｂ ２０１１ Ｎｏｖ ２９ ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１５；１０（３）：ｅ０１２１１２３ Ｊ Ｎｕｔｒ．２０１４ Ｏｃｔ；１４４（１０）：１４９５−５００ Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ ２０１６ Ｆｅｂ １；３７１（１）：４８−６１
一態様では、本発明は、治療剤、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、ｉＲＮＡおよびアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび核酸の類似体、抗体、ホルモンならびに他のペプチドおよびタンパク質のビヒクルとしてのミルク由来エクソソームなどの微小胞を提供する。いくつかの実施形態では、治療剤は、疎水基、例えばステロール、ステロイドまたは脂質にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、疎水基は、エクソソームへの治療剤の負荷および／または標的組織もしくは器官への治療剤の送達を容易にする。微小胞は、本明細書に開示される様々な異なる方法によって治療剤が負荷され得る。一態様では、本発明は、治療剤を負荷したエクソソーム（「治療薬を負荷したエクソソーム」）およびそれを含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、提供されるエクソソームは、疾患の診断、予防、処置、予後予測またはモニタリングのために、それを必要とする患者への有効量の治療剤の送達のために有用である。このような治療薬を負荷したエクソソームおよびその使用方法は、本明細書に詳細に記載される。
図１は、初乳および生乳から単離されたエクソソームのミルクエクソソーム直径の分布曲線を示す。
図２は、ミルクエクソソームのＣｒｙｏ−ＴＥＭ画像を示す。
図３は、単離されたミルクエクソソームがＣＤ８１（古典的エクソソームテトラスパニン）を含有することを実証する結果を示す。
図４は、１４日間の安定性研究の結果を示す。４℃で保存したサンプルについて、タンパク質濃度を毎日測定した（上のグラフ）。１４日目に、それぞれ室温、４℃、−２０℃および−８０℃で保存したサンプルについても、タンパク質濃度を測定した（下のグラフ）。結果は、試験したすべての温度において、生乳（「ＰＴ生」データ）および初乳（「ＰＴ初乳」データ）の両方のミルクエクソソームが少なくとも１４日間安定であることを示している。
図５は、１４日間の安定性研究の結果を示す。４℃で保存したサンプルについて、粒径を毎日測定した（上のグラフ）。１４日目に、それぞれ室温、４℃、−２０℃および−８０℃で保存したサンプルについても、粒径を測定した（下のグラフ）。結果は、試験したすべての温度において、生乳（「ＰＴ生」データ）および初乳（「ＰＴ初乳」データ）の両方のミルクエクソソームが少なくとも１４日間安定であることを示している。
図６は、貯蔵期間および腸安定性研究（１４日間、４℃）の結果を示す。上の棒グラフに示されているように、試験した２つの各サンプルは、研究中にそれらの粒径を維持した。腸安定性研究（ｐＨ２．５ ＳＧＦ、疑似胃液およびｐＨ７ ＳＩＦ、疑似腸液）の結果は、下の棒グラフに示されている。 図６は、貯蔵期間および腸安定性研究（１４日間、４℃）の結果を示す。上の棒グラフに示されているように、試験した２つの各サンプルは、研究中にそれらの粒径を維持した。腸安定性研究（ｐＨ２．５ ＳＧＦ、疑似胃液およびｐＨ７ ＳＩＦ、疑似腸液）の結果は、下の棒グラフに示されている。
図７は、負荷のための最適なｓｉＲＮＡ対エクソソーム比を決定するための実験の結果を示す。図の上部は、ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ ｓｔａｉｎで染色したＲＮＡのＰＡＧＥゲルを示す。図の下部は、ＲＮＡフルオロフォアのＰＡＧＥを示す。 図７は、負荷のための最適なｓｉＲＮＡ対エクソソーム比を決定するための実験の結果を示す。図の上部は、ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ ｓｔａｉｎで染色したＲＮＡのＰＡＧＥゲルを示す。図の下部は、ＲＮＡフルオロフォアのＰＡＧＥを示す。
図８は、負荷のための最適なｓｉＲＮＡ対エクソソーム比を決定するための実験の結果を示す。図の上部は、５００：１、４００：１、３００：１および２５０：１の比でＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ ｓｔａｉｎで染色したＲＮＡのＰＡＧＥゲルを示す。図の下部は、ＲＮＡフルオロフォアのＰＡＧＥを示す。エクソソームに負荷したｓｉＲＮＡの量は、エクソソームの数と共に増加した。
図９は、負荷のための最適なｓｉＲＮＡ対エクソソーム比を決定するための実験のＰＡＧＥ結果を示す。
図１０は、コレステロールコンジュゲートＧＦＰ ｓｉＲＮＡがエクソソームの外膜と会合するか、およびそうであれば、それらがＭＢＣＤによって可溶化され得る（すなわち、エクソソームから分離し得る）かを決定するための実験の図的表示を示す。この図は、ＭＢＣＤがｃｈｓｉＲＮＡ（コレステロールｓｉＲＮＡ）を実際に可溶化することを示すＰＡＧＥ結果を含む。 図１０は、コレステロールコンジュゲートＧＦＰ ｓｉＲＮＡがエクソソームの外膜と会合するか、およびそうであれば、それらがＭＢＣＤによって可溶化され得る（すなわち、エクソソームから分離し得る）かを決定するための実験の図的表示を示す。この図は、ＭＢＣＤがｃｈｓｉＲＮＡ（コレステロールｓｉＲＮＡ）を実際に可溶化することを示すＰＡＧＥ結果を含む。
図１１は、表面上対エクソソーム内へのｓｉＲＮＡ負荷の程度を決定するための色素クエンチ実験の漫画を示す。排他的に表面を負荷したｓｉＲＮＡは、ＭＶ２＋色素によって完全にクエンチされる。内部のｓｉＲＮＡはクエンチされないので、より多くの色素の逐次添加によりクエンチしない蛍光シグナルが生じるであろう（すなわち、プラトー効果）。 図１１は、表面上対エクソソーム内へのｓｉＲＮＡ負荷の程度を決定するための色素クエンチ実験の漫画を示す。排他的に表面を負荷したｓｉＲＮＡは、ＭＶ２＋色素によって完全にクエンチされる。内部のｓｉＲＮＡはクエンチされないので、より多くの色素の逐次添加によりクエンチしない蛍光シグナルが生じるであろう（すなわち、プラトー効果）。
図１２は、ＤＹ６７７ ｓｉＲＮＡおよびコレステロールコンジュゲートｓｉＲＮＡ（Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ）の封入効率結果を示す。Ｃｈ−ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡよりも効率的に封入される。
図１３は、凍結融解サイクルによる負荷後にミルクエクソソームに負荷したｓｉＲＮＡに対するＳｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ実験の結果を示す。初乳／ｓｉＲＮＡのサンプルでは、蛍光の直線的な減少が観察された。しかしながら、この傾きは、ＰＢＳ中またはエクソソーム中のｓｉＲＮＡのものと比較してより低かった。プラトーの欠如は、ｓｉＲＮＡが封入されていないが初乳と相互作用しており、クエンチャーにとってあまり利用可能ではないことを示唆している。ＰＢＳでは、ＣｈｓｉＲＮＡは完全にクエンチされる。エクソソーム５００／１と混合したｃｈｓｉＲＮＡ、１２回の凍結融解サイクルに供したｃｈｓｉＲＮＡ−エクソソーム、および初乳と混合して４×１秒間のサイクルで超音波処理したｃｈｓｉＲＮＡのサンプルでは、クエンチ不可能な画分が認められる。 図１３は、凍結融解サイクルによる負荷後にミルクエクソソームに負荷したｓｉＲＮＡに対するＳｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ実験の結果を示す。初乳／ｓｉＲＮＡのサンプルでは、蛍光の直線的な減少が観察された。しかしながら、この傾きは、ＰＢＳ中またはエクソソーム中のｓｉＲＮＡのものと比較してより低かった。プラトーの欠如は、ｓｉＲＮＡが封入されていないが初乳と相互作用しており、クエンチャーにとってあまり利用可能ではないことを示唆している。ＰＢＳでは、ＣｈｓｉＲＮＡは完全にクエンチされる。エクソソーム５００／１と混合したｃｈｓｉＲＮＡ、１２回の凍結融解サイクルに供したｃｈｓｉＲＮＡ−エクソソーム、および初乳と混合して４×１秒間のサイクルで超音波処理したｃｈｓｉＲＮＡのサンプルでは、クエンチ不可能な画分が認められる。
図１４は、凍結融解サイクルによる負荷後にミルクエクソソームに負荷したｓｉＲＮＡに対するＳｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ実験の結果を示す。エクソソーム５００／１と混合したｃｈｓｉＲＮＡ、１２回の凍結融解サイクルに供したｃｈｓｉＲＮＡ−エクソソーム、および初乳と混合して４×１秒間のサイクルで超音波処理したｃｈｓｉＲＮＡのサンプルでは、クエンチ不可能な画分が認められた。エクソソームへのｓｉＲＮＡの封入率を計算し、棒グラフの形態で示す。 図１４は、凍結融解サイクルによる負荷後にミルクエクソソームに負荷したｓｉＲＮＡに対するＳｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ実験の結果を示す。エクソソーム５００／１と混合したｃｈｓｉＲＮＡ、１２回の凍結融解サイクルに供したｃｈｓｉＲＮＡ−エクソソーム、および初乳と混合して４×１秒間のサイクルで超音波処理したｃｈｓｉＲＮＡのサンプルでは、クエンチ不可能な画分が認められた。エクソソームへのｓｉＲＮＡの封入率を計算し、棒グラフの形態で示す。
図１５は、混合または凍結融解サイクルによってｓｉＲＮＡまたはｃｈｓｉＲＮＡを負荷したエクソソームからのＰＡＧＥ結果を示す。
図１６は、混合または凍結融解サイクルによってｓｉＲＮＡまたはｃｈｓｉＲＮＡを負荷したエクソソームからのＰＡＧＥ結果を示す。
図１７は、異なるｓｉＲＮＡ／エクソソーム比において、混合または超音波処理による負荷後にミルクエクソソームに負荷したｓｉＲＮＡに対するＳｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ実験の結果を示す。 図１７は、異なるｓｉＲＮＡ／エクソソーム比において、混合または超音波処理による負荷後にミルクエクソソームに負荷したｓｉＲＮＡに対するＳｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ実験の結果を示す。
図１８は、異なるｓｉＲＮＡ／エクソソーム比において、混合または超音波処理による負荷後にミルクエクソソームに負荷したｓｉＲＮＡに対するＳｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ実験の結果を示す。
図１９は、異なるｓｉＲＮＡ／エクソソーム比において、混合または超音波処理によってｓｉＲＮＡまたはｃｈｓｉＲＮＡを負荷したエクソソームからのＰＡＧＥ結果を示す。
図２０は、異なるｓｉＲＮＡ／エクソソーム比において、混合または超音波処理によってｓｉＲＮＡまたはｃｈｓｉＲＮＡを負荷したエクソソームからのＰＡＧＥ結果を示す。
図２１は、３．８ｍＭメチルベータシクロデキストリンおよび１％ＴｒｉｔｏｎＸによってエクソソームに負荷したＣｈｓｉＲＮＡのコレステロール可溶化からの蛍光測定を示す。 図２１は、３．８ｍＭメチルベータシクロデキストリンおよび１％ＴｒｉｔｏｎＸによってエクソソームに負荷したＣｈｓｉＲＮＡのコレステロール可溶化からの蛍光測定を示す。
図２２は、３．８ｍＭメチルベータシクロデキストリンおよび１％ＴｒｉｔｏｎＸによってエクソソームに負荷したＣｈｓｉＲＮＡのコレステロール可溶化からの蛍光測定を示す。
図２３は、３．８ｍＭメチルベータシクロデキストリンおよび１％ＴｒｉｔｏｎＸによってエクソソームに負荷したＣｈｓｉＲＮＡのコレステロール可溶化からのＰＡＧＥ結果を示す。
図２４は、３．８ｍＭメチルベータシクロデキストリンおよび１％ＴｒｉｔｏｎＸによってエクソソームに負荷したＣｈｓｉＲＮＡのコレステロール可溶化からのＰＡＧＥ結果を示す。
図２５は、エクソソームへのＣｈｓｉＲＮＡ負荷に対する超音波処理対混合の効率を比較したＰＡＧＥ結果を示す。
図２６は、エクソソームへのＣｈｓｉＲＮＡ負荷に対する超音波処理対混合の効率を比較したＰＡＧＥ結果を示す。
図２７Ａは、超遠心分離後のＣｈｓｉＲＮＡ負荷エクソソーム上清、ペレットおよびストック溶液の相対蛍光強度を示す。図２７Ｂは、Ｓｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ結果および計算ＣｈｓｉＲＮＡ負荷計算を示す。 図２７Ａは、超遠心分離後のＣｈｓｉＲＮＡ負荷エクソソーム上清、ペレットおよびストック溶液の相対蛍光強度を示す。図２７Ｂは、Ｓｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ結果および計算ＣｈｓｉＲＮＡ負荷計算を示す。
図２８Ａは、ＣｈｓｉＲＮＡのサイズ排除クロマトグラフィー精製を示す。図２８Ｂは、ＣｈｓｉＲＮＡを負荷したエクソソームのサイズ排除クロマトグラフィー精製を示す。遊離ｃｈｓｉＲＮＡは約１．２ｍＬ（各画分２００μＬである）になるので、これらの条件下では、ｃｈｓｉＲＮＡ／ｅｘｏおよび遊離ｃｈｓｉＲＮＡは共溶出するように見える。Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ−５００ＨＲは、より良好な分離を提供し得る。
発明の詳細な説明
１．本発明の特定の態様の一般的な説明
治療薬を負荷したエクソソーム
微小胞は、約３０〜１０００ｎｍのサイズの脂質の小さな集合体の形態である天然に存在する粒子である。それらは、インビトロ培養モデルにおける多くのタイプの細胞および生細胞によって産生されるだけではなく、細菌、植物および動物においても同様に見られ、様々な果物、野菜および体液（血液、尿およびミルクを含む）において見られ得る。
微小胞は、アポトーシス小体の放出、細胞の細胞質膜からの直接的な微小胞の出芽、および多小胞体からのエキソサイトーシスを含む様々なプロセスによって形成される。例えば、エクソソームは、典型的には、多小胞体と原形質膜との融合後に細胞のエンドソーム膜区画から分泌される。多小胞体（ＭＶＢ）は、エンドソーム膜から内側に出芽し、続いて、小胞が管腔に切り取られることによって形成される。次いで、ＭＶＢ中に存在する内部小胞は、エクソソームとして細胞外液中に放出される。
微小胞は、細胞からの望ましくない分子、タンパク質および他の物質の排除、ならびに細胞間連絡の媒介などの目的に役立つ。細胞質タンパク質および原形質膜タンパク質もまた、それらの形成中に微小胞に組み込まれ、微小胞表面上に提示されるだけではなく、それらの中に封入された核酸またはタンパク質を有する微小胞が生じ得る。微小胞、特にミルク由来エクソソームは、微小胞が治療剤の有効なナノ粒子担体として機能することを可能にする粒径分布および脂質二重層機能特性を有する。本発明のいくつかの実施形態では、提供される微小胞、例えばミルク由来エクソソームは、表面結合タンパク質、細胞質タンパク質もしくは膜貫通タンパク質、核酸または糖タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、このようなタンパク質、核酸または糖タンパク質は、増強したインビボ安定性または標的組織もしくは器官への選択的送達などの有利な特性をミルク由来エクソソームに提供する。
本明細書で使用される場合、「微小胞」および「エクソソーム」という用語は、「微小胞」、「リポソーム」、「エクソソーム」、「エクソソーム様粒子」、「エクソソーム様小胞」、「乳脂肪球皮膜」、「ナノベクター」、「アーキソーム」、「ラクトソーム」、「細胞外小胞」、「アルゴソーム」、「アポトーシス小体」、「エピジジモソーム」、「エクソソーム様小胞」、「微粒子」、「プロミニノソーム（ｐｒｏｍｉｎｉｎｏｓｏｍｅ）」、「プロスタソーム」、「デキソソーム」、「テキソソーム」および「オンコソーム」という用語ならびに前述のそれぞれの文法的変化形と互換的に本明細書で使用される。
いくつかの実施形態では、エクソソームは、約２０ｎｍ〜約２００ｎｍの直径である。いくつかの実施形態では、エクソソームは、約３０ｎｍ〜約１９０ｎｍまたは約２５ｎｍ〜約１８０ｎｍのサイズである。いくつかの実施形態では、エクソソームは、約３０ｎｍ〜約１７０ｎｍのサイズである。いくつかの実施形態では、エクソソームは、約４０ｎｍ〜約１６０ｎｍのサイズである。いくつかの実施形態では、エクソソームは、約５０ｎｍ〜約１５０または約６０〜約１４０ｎｍ、約７０〜約１３０、約８０〜約１２０または約９０〜約１１０ｎｍの直径である。いくつかの実施形態では、エクソソームは、約２０、２５、３０、３５、５０、７５、１００、１１０、１２５または１５０ｎｍの直径である。いくつかの実施形態では、ミルクから単離または誘導されたエクソソーム組成物または複数のエクソソーム中の平均エクソソームサイズは、約２０、約２５、約３０、約３５、約５０、約７５、約１００、約１１０、約１２５もしくは約１５０ｎｍ；または約２０〜約２００、約２５〜約２５０、約３０〜約１８０、約４０〜約１７０、約５０〜約１６０、約５０ｎｍ〜約１５０、約６０〜約１４０ｎｍ、約７０〜約１３０、約８０〜約１２０もしくは約９０〜約１１０ｎｍの平均直径である。
初乳を含むミルクは、大量の微小胞の実現可能な供給源であるだけではなく、ミルク由来の微小胞（「ミルク由来エクソソーム」または「ミルク由来微小胞」）は、多数の治療剤の有効な送達ビヒクルとして有用であり、それらを安定化および保護しながら治療剤の生物学的活性（バイオアベイラビリティを含む）を保持する方法で使用され得る。いくつかの実施形態では、ミルク由来エクソソームは、生物学的治療剤などの封入治療剤を輸送し、患者の消化管を通過した後に治療剤を放出する。いくつかの実施形態では、ミルク由来エクソソームは治療剤を封入し、その後、例えば患者の肝臓において初回通過代謝を回避するような方法で放出する。
本明細書で使用される場合、「ミルク」という用語は、栄養を子供に提供するために成熟雌性哺乳動物（限定されないが、哺乳動物が出産した後を含む）の乳腺によって産生されるタンパク質、脂肪、ラクトースおよびビタミンおよびミネラルを含有する不透明な液体を指す。いくつかの実施形態では、「ミルク」という用語は、初乳（これは、分娩直後に哺乳動物の乳腺によって分泌される液体であって、抗体およびミネラルが豊富な液体である）をさらに含む。
「ミルク由来」または「初乳由来」という用語は、ミルクまたは初乳由来の微小胞の文脈で使用される場合、そのネイティブな環境から単離されたかまたは他の方法で操作された微小胞であって、したがって、天然の産物ではない微小胞を指す。これに関して、「ミルク由来エクソソーム」および「初乳由来エクソソーム」という用語は、本明細書では、ミルクまたは初乳から単離されたエクソソームに関して、それぞれ「ミルクエクソソーム」または「初乳エクソソーム」という語句と互換的に使用される。加えて、いくつかの実施形態では、「ミルク由来」という用語は、本開示の主題の特定の実施形態を説明するために「ミルクから単離された」という用語と互換的に使用される。
本発明の特定の態様は、様々な治療剤を封入するために使用され得、本明細書で以下に記載される様々な疾患の処置において有用なエクソソーム、例えばミルク由来エクソソームおよびその組成物を含む。本発明のいくつかの実施形態では、微小胞によって封入された１つまたはそれを超える治療剤を含む微小胞またはその組成物が提供される。いくつかの実施形態では、微小胞によって封入された治療剤は、生物学的治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、本発明は、治療剤を負荷したエクソソーム（therapeuticagent-loaded exosome）（「治療薬を負荷したエクソソーム（therapeutic-loadedexosome）」）を提供する。本明細書で使用される場合、「治療薬を負荷したエクソソーム」に関する「負荷した」という用語は、エクソソームの内側に封入された；エクソソームの脂質膜と会合したもしくはその中に部分的に包埋された（すなわち、エクソソームの内部の内側に部分的に突出した）；脂質膜および関連成分の外側部分と会合もしくは結合した（すなわち、エクソソームの外側に部分的に突出したまたは完全に外側にある）；またはエクソソームの脂質膜内に全体的に配置された（すなわち、脂質膜内に全体的に含まれる）１つまたはそれを超える治療剤を有するエクソソームを指す。したがって、いくつかの実施形態では、治療剤は、エクソソームの内側に封入されている。いくつかの実施形態では、治療剤は、エクソソームの脂質膜と会合しているかまたはその中に部分的に包埋されている（すなわち、エクソソームの内部の内側に部分的に突出している）。いくつかの実施形態では、治療剤は、脂質膜の外側部分と会合または結合している（すなわち、エクソソームの外側に部分的に突出している）。いくつかの実施形態では、治療剤は、エクソソームの脂質膜内に全体的に配置されている（すなわち、脂質膜内に全体的に含まれる）。いくつかの実施形態では、エクソソームは、単一治療剤が負荷されている。いくつかの実施形態では、エクソソームは、２個の（またはそれを超える）異なる治療剤が負荷されている。いくつかの実施形態では、エクソソームは、２個もしくはそれを超える分子もしくはコピーの単一治療剤または２個の（またはそれを超える）異なる治療剤が負荷されている。いくつかの実施形態では、エクソソームは、３個もしくはそれを超える分子もしくはコピーの単一治療剤または２個の（またはそれを超える）異なる治療剤が負荷されている。いくつかの実施形態では、エクソソームは、２〜５個の分子もしくはコピーの単一治療剤または２個の（またはそれを超える）異なる治療剤が負荷されている。いくつかの実施形態では、エクソソームまたはその医薬組成物は、１〜４，０００個、１０〜４，０００個、５０〜３，５００個、１００〜３，０００個、２００〜２，５００個、３００〜１，５００個、５００〜１，２００個、７５０〜１，０００個、１〜２，０００個、１〜１，０００個、１〜５００個、１０〜４００個、５０〜３００個、１〜２５０個、１〜１００個、２〜５０個、２〜２５個、２〜１５個、２〜１０個、３〜５０個、３〜２５個、３〜２５個、３〜１０個、４〜５０個、４〜２５個、４〜１５個、４〜１０個、５〜５０個、５〜２５個、５〜１５個もしくは５〜１０個の分子もしくはコピーの単一治療剤または２個の（またはそれを超える）異なる治療剤が負荷されている。
いくつかの実施形態では、エクソソームは、微小胞、リポソーム、エクソソーム、エクソソーム様粒子もしくは小胞、乳脂肪球皮膜、ナノベクター、アーキオソーム、ラクトソーム、細胞外小胞、アルゴソーム、アポトーシス小体、エピジジモソーム、エクソソーム様小胞、微粒子、プロミニノソーム（ｐｒｏｍｉｎｉｎｏｓｏｍｅ）、プロスタソーム、デキソソーム、テキソソームまたはオンコソームから選択される。いくつかの実施形態では、エクソソームは、ミルク由来エクソソームである。いくつかの実施形態では、ミルク由来エクソソームは、ウシ、ヒト、バッファロー、ヤギ、ヒツジ、ラクダ、ロバ、ウマ、トナカイ、ムースまたはヤク由来のミルクまたは初乳に由来する（例えば、単離または操作される）。いくつかの実施形態では、ミルクは、ウシに由来する。
いくつかの実施形態では、本発明は、疾患、障害または状態の処置を必要とする患者における疾患、障害または状態を処置する方法であって、前記患者に、提供される治療薬を負荷したエクソソームを投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、疾患、障害または状態は、その中に負荷された治療剤の投与によって処置されるかまたは処置可能なものから選択される。このような疾患、障害および状態ならびに関連治療剤は、以下に詳細に記載される。
本明細書で使用される場合、「生物製剤」という用語は、「生物学的治療剤」という用語と互換的に使用される。当業者は、このような生物製剤が本明細書に記載されるものを含むことを認識するであろう。
一態様では、本発明は、治療薬を負荷したエクソソームであって、前記治療薬が生物学的治療剤である治療薬を負荷したエクソソームを提供する。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、アレルゲン、アジュバント、抗原または免疫原から選択される。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、抗体、ホルモン、因子、補因子、代謝酵素、免疫調節酵素、インターフェロン、インターロイキン、胃腸管酵素、止血に関与する酵素もしくは因子、成長調節酵素、ワクチン、抗血栓溶解薬、毒素または抗毒素から選択される。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、オリゴヌクレオチド治療剤、例えば一本鎖または二本鎖オリゴヌクレオチド治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド治療剤は、一本鎖もしくは二本鎖ＤＮＡ、ｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｎｃＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノオリゴヌクレオチドまたはそれらの類似体もしくはコンジュゲートから選択される。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、診断用またはイメージング用生物学的薬剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、自己免疫抗原である。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、食物アレルゲンである。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、以下の表１に記載されているもののいずれかから選択される。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、以下の表２に記載されているもののいずれかから選択される。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、以下の表３に記載されているもののいずれかから選択される抗原である。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、以下の表４に記載されているもののいずれかから選択される。
いくつかの実施形態では、エクソソームは、微小胞、リポソーム、エクソソーム、エクソソーム様粒子、エクソソーム様小胞、乳脂肪球皮膜、ナノベクター、アーキオソーム、ラクトソーム、細胞外小胞、アルゴソーム、アポトーシス小体、エピジジモソーム、エクソソーム様小胞、微粒子、プロミニノソーム（ｐｒｏｍｉｎｉｎｏｓｏｍｅ）、プロスタソーム、デキソソーム、テキソソームまたはオンコソームから選択される。
いくつかの実施形態では、エクソソームは、ミルク由来エクソソームである。
いくつかの実施形態では、エクソソームは、約３０〜約２２０ｎｍの直径、約４０〜約１７５、約５０〜約１５０、約３０〜約１５０または約３０〜約１２０ｎｍの直径である。
一態様では、本発明は、本明細書に記載される治療薬を負荷したエクソソームと、薬学的に許容され得るアジュバント、ビヒクルまたは担体とを含む医薬組成物を提供する。
一態様では、本発明は、疾患、障害または状態の処置を必要とする患者における疾患、障害または状態を処置する方法であって、前記患者に、本明細書に記載される治療薬を負荷したエクソソームを投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、エクソソームは、微小胞、リポソーム、エクソソーム、エクソソーム様粒子、エクソソーム様小胞、乳脂肪球皮膜、ナノベクター、アーキオソーム、ラクトソーム、細胞外小胞、アルゴソーム、アポトーシス小体、エピジジモソーム、エクソソーム様小胞、微粒子、プロミニノソーム（ｐｒｏｍｉｎｉｎｏｓｏｍｅ）、プロスタソーム、デキソソーム、テキソソームまたはオンコソームから選択される。いくつかの実施形態では、エクソソームは、ミルク由来エクソソームである。
いくつかの実施形態では、治療薬は、以下の表１に記載されているもののいずれかから選択される生物学的治療剤である。
いくつかの実施形態では、治療薬は、以下の表２、３または４に記載されているもののいずれかから選択される生物学的治療剤である。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、以下の表５に記載されているもののいずれかから選択される標的をモジュレートする。
いくつかの実施形態では、疾患、障害または状態は、過剰増殖性障害、ウイルスもしくは微生物感染、自己免疫疾患、アレルギー状態、炎症性疾患、障害もしくは状態、心血管疾患、代謝性疾患または神経変性疾患から選択される。
いくつかの実施形態では、疾患、障害または状態は、以下の表１、２、３、４または５に記載されているものから選択される。
いくつかの実施形態では、治療薬を負荷したエクソソームは、さらなる治療剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、治療薬を負荷したエクソソームは、経口、静脈内、皮下、鼻腔内、吸入、筋肉内、眼内、腹腔内、気管内、経皮、口腔、舌下、直腸、局所、局所注射または外科的移植経路によって投与される。いくつかの実施形態では、治療薬を負荷したエクソソームは、経口経路によって投与される。
治療剤、疎水性修飾および例示的な関連疾患
本発明によれば、様々な治療剤は、エクソソームの内側に負荷または封入されている。いくつかの実施形態では、担体としてエクソソームを使用することによって、本発明は、例えば腸における薬剤の破壊を最小化すること、もしくは肝臓初回通過効果を最小化すること；または標的組織への治療剤送達を改善すること；またはインビボにおける薬剤の溶解性および安定性を含む治療剤の溶解性および安定性を増加させることによって、治療剤の望ましい特性を増強する（例えば、経口バイオアベイラビリティの改善）。一態様では、治療剤は疎水基を含むか、またはそれを含むように化学修飾されている。適切な疎水基としては、ステロール、ステロイド、脂質、リン脂質または合成もしくは天然疎水性ポリマーが挙げられる。理論に縛られるものではないが、治療剤の疎水性修飾（例えば、脂質、ステロールまたはステロイドタグ化）は、より高い負荷効率が可能になるように、エクソソーム中またはエクソソーム上へのその負荷を容易にすると考えられる。
一態様では、本発明は、治療薬を負荷したミルクエクソソームであって、前記治療薬が生物学的治療剤であり、前記治療薬が、ミルクエクソソーム中に天然に存在しないものである治療薬を負荷したミルクエクソソームを提供する。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、抗体、ホルモン、因子、補因子、代謝酵素、免疫調節酵素、インターフェロン、インターロイキン、胃腸管酵素、止血に関与する酵素もしくは因子、成長調節酵素、ワクチン、抗血栓溶解薬、毒素または抗毒素から選択される。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、ペプチドである。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、タンパク質である。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、核酸である。
いくつかの実施形態では、核酸は、一本鎖もしくは二本鎖ＤＮＡ、ｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍＲＮＡ、非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノオリゴヌクレオチドまたはそれらの類似体もしくはコンジュゲートから選択される。
いくつかの実施形態では、核酸は、約３０〜約２００ヌクレオチド（ｎｔ）長のｎｃＲＮＡまたは約２００〜約８００ｎｔ長の長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）である。
いくつかの実施形態では、ｌｎｃＲＮＡは、長鎖遺伝子間非コードＲＮＡ（ｌｉｎｃＲＮＡ）、プレ転写産物、プレｍｉＲＮＡ、プレｍＲＮＡ、競合内因性ＲＮＡ（ｃｅＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）、偽遺伝子、ｒＲＮＡまたはｔＲＮＡである。
いくつかの実施形態では、ｎｃＲＮＡは、ｐｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）、一次ｍｉＲＮＡ（プリｍｉＲＮＡ）または未成熟ｍｉＲＮＡ（プレｍｉＲＮＡ）から選択される。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、表１、表２、表３または表４のいずれかに記載されているもののいずれかから選択される。
いくつかの実施形態では、ミルクエクソソームは、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、バッファロー、ヤクまたはヒトのミルクまたは初乳に由来する。
別の態様では、本発明は、治療薬を負荷したエクソソームであって、前記治療薬が、疎水基にコンジュゲートされた生物学的治療剤である治療薬を負荷したエクソソームを提供する。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、抗体、ホルモン、因子、補因子、代謝酵素、免疫調節酵素、インターフェロン、インターロイキン、胃腸管酵素、止血に関与する酵素もしくは因子、成長調節酵素、ワクチン、抗血栓溶解薬、毒素または抗毒素から選択される。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、ペプチドである。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、タンパク質である。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、核酸である。
いくつかの実施形態では、核酸は、一本鎖もしくは二本鎖ＤＮＡ、ｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｎｃＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノオリゴヌクレオチドまたはそれらの類似体もしくはコンジュゲートから選択される。
いくつかの実施形態では、核酸は、約３０〜約２００ヌクレオチド（ｎｔ）長の非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）または約２００〜約８００ｎｔ長の長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）である。
いくつかの実施形態では、ｌｎｃＲＮＡは、長鎖遺伝子間非コードＲＮＡ（ｌｉｎｃＲＮＡ）、プレ転写産物、プレｍｉＲＮＡ、プレｍＲＮＡ、競合内因性ＲＮＡ（ｃｅＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）、偽遺伝子、ｒＲＮＡまたはｔＲＮＡである。
いくつかの実施形態では、ｎｃＲＮＡは、ｐｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）、一次ｍｉＲＮＡ（プリｍｉＲＮＡ）または未成熟ｍｉＲＮＡ（プレｍｉＲＮＡ）から選択される。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、表１、表２、表３または表４のいずれかに記載されているもののいずれかから選択される。
いくつかの実施形態では、疎水基は、脂質、ステロール、ステロイド、テルペン、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジンから選択される。
いくつかの実施形態では、ミルクエクソソームは、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、バッファロー、ヤクまたはヒトのミルクまたは初乳に由来する。
別の態様では、本発明は、開示される治療薬を負荷したミルクエクソソームと、薬学的に許容され得るアジュバント、ビヒクルまたは担体とを含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本発明は、疾患、障害または状態の処置を必要とする患者における疾患、障害または状態を処置する方法であって、前記患者に、開示される治療薬を負荷したミルクエクソソームまたはその薬学的に許容され得る組成物を投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、疾患、障害または状態は、過剰増殖性障害、ウイルスもしくは微生物感染、自己免疫疾患、アレルギー状態、炎症性疾患、心血管疾患、代謝性疾患または神経変性疾患から選択される。
いくつかの実施形態では、疾患、障害または状態は、表１、２、３、４または５に記載されているものから選択される。
いくつかの実施形態では、治療薬を負荷したミルクエクソソームは、経口投与される。
いくつかの実施形態では、前記方法は、患者にさらなる治療剤を投与することをさらに含む。
いくつかの実施形態では、疎水基を含むかまたはそれにコンジュゲートされた治療剤は、ｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、ホルモン、タンパク質、例えば抗体または本明細書に記載される他のもの、ペプチド模倣物または低分子から選択される。いくつかの実施形態では、治療剤は、脂質またはステロイドまたは他の疎水基、例えば本明細書で以下に詳細に記載されているものを含むように修飾されたｓｉＲＮＡである。いくつかの実施形態では、疎水基は、脂肪酸またはステロールまたはステロイド、例えばコレステロールである。
いくつかの実施形態では、治療剤は、テルペン、例えばネロリドール、ファルネソール、リモネン、リナロール、ゲラニオール、カルボン、フェンコンまたはメントール；脂質、例えばパルミチン酸またはミリスチン酸；コレステロール；オレイル；レチニル；コレステリル残基；コール酸；アダマンタン酢酸；１−ピレン酪酸；ジヒドロテストステロン；１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール；ゲラニルオキシヘキシル基；ヘキサデシルグリセロール；ボルネオール；１，３−プロパンジオール；ヘプタデシル基；Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸；Ｏ３−（オレオイル）コレン酸；ジメトキシトリチル；またはフェノキサジンから選択される疎水基を含むか、またはそれらを含むように修飾される。いくつかの実施形態では、疎水基は、コレステロールである。いくつかの実施形態では、疎水基は、脂溶性ビタミンである。いくつかの実施形態では、疎水基は、葉酸；コレステロール；炭水化物；ビタミンＡ；ビタミンＥ；またはビタミンＫから選択される。
他の疎水基としては、例えば、ステロイド（例えば、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン）、テルペン（例えば、トリテルペン、例えばサルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール（ｅｐｉｆｒｉｅｄｅｌａｎｏｌ）誘導体化リトコール酸）、ビタミン（例えば、葉酸、ビタミンＡ、ビオチン、ピリドキサール）、炭水化物、タンパク質およびタンパク質結合剤、ならびに親油性分子、例えばコレステロールのチオ類似体、コール酸、コラン酸、リトコール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、グリセロール（例えば、エステル（例えば、モノ、ビスまたはトリス脂肪酸エステル、例えばＣ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９またはＣ２０脂肪酸）およびそれらのエーテル、例えばＣ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９またはＣ２０アルキル；例えば、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、１，３−ビス−Ｏ（オクタデシル）グリセロール）、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ステアリン酸（例えば、ジステアリン酸グリセリル（ｇｙｃｅｒｙｌ ｄｉｓｔｅａｒａｔｅ））、オレイン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジン）およびペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、フォスフェート、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射性標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ナプロキセン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン−イミダゾールコンジュゲート、テトラアザマクロサイクルのＥｕ３＋錯体）、ジニトロフェニル、ＨＲＰまたはＡＰが挙げられる。
いくつかの実施形態では、疎水基は、ステロール、ステロイド、ホパノイド、ヒドロキシステロイド、セコステロイド、または親油特性を有するそれらの類似体である。
いくつかの実施形態では、疎水基は、ステロール、例えばフィトステロール、ミコステロールまたは動物ステロールである。例示的な動物ステロールとしては、コレステロールおよび２４Ｓ−ヒドロキシコレステロールが挙げられる；例示的な植物ステロールとしては、エルゴステロール（ミコステロール）、カンペステロール、シトステロールおよびスチグマステロールが挙げられる。いくつかの実施形態では、ステロールは、エルゴステロール、７−デヒドロコレステロール、コレステロール、２４Ｓ−ヒドロキシコレステロール、ラノステロール、シクロアルテノール、フコステロール、サリンゴステロール（ｓａｒｉｎｇｏｓｔｅｒｏｌ）、カンペステロール、β−シトステロール、シトスタノール、コプロスタノール、アベナステロールまたはスチグマステロールから選択される。ステロールは、遊離ステロールとして見られ得、アシル化され得（ステロールエステル）、アルキル化され得（ステリルアルキルエーテル）、硫酸化され得（ステロール硫酸）、またはそれ自体アシル化され得る（アシル化ステロールグリコシド）グリコシド部分に連結され得る（ステリルグリコシド）。
いくつかの実施形態では、疎水基は、ステロイドである。いくつかの実施形態では、ステロイドは、ジヒドロテストステロン、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン、プロゲステロンまたはコルチゾールから選択される。
疎水性部分は、任意の化学的に実行可能な位置において、例えば核酸分子の５’および／または３’末端上（または、それが二重鎖である場合には、核酸分子の一方または両方の鎖）において治療剤にコンジュゲートされ得る。特定の実施形態では、疎水性部分は、二本鎖分子における３’末端、より具体的にはセンス鎖の３’末端にのみコンジュゲートされる。疎水性部分は、核酸分子に直接的に、またはリンカーを介してコンジュゲートされ得る。疎水性部分は、アダマンタン、コレステロール、ステロイド、長鎖脂肪酸、脂質、リン脂質、糖脂質およびそれらの誘導体からなる群より選択され得る。
例えば、ステロールは、利用可能な−ＯＨ基において治療薬にコンジュゲートされ得る。例示的なステロールは、以下に示されている一般骨格：
を有する。
さらなる例として、エルゴステロールは、以下の構造：
を有する。
コレステロールは、以下の構造：
を有する。
したがって、いくつかの実施形態では、ステロールまたはステロイドの遊離−ＯＨ基は、治療薬をステロールまたはステロイドにコンジュゲートするために使用される。
いくつかの実施形態では、疎水基は、脂質、例えば脂肪酸、ホスファチド、リン脂質またはそれらの類似体（例えば、ホスファチジルコリン、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、セファリンまたはホスファチジルセリンまたはそれらの類似体もしくは一部、例えばそれらの部分的に加水分解された一部）である。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、短鎖、中鎖または長鎖脂肪酸である。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、飽和脂肪酸である。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、不飽和脂肪酸である。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、一価不飽和脂肪酸である。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、多価不飽和脂肪酸、例えばω−３（オメガ−３）またはω−６（オメガ−６）脂肪酸である。いくつかの実施形態では、脂質、例えば脂肪酸は、Ｃ２−Ｃ６０鎖を有する。いくつかの実施形態では、脂質、例えば脂肪酸は、Ｃ２−Ｃ２８鎖を有する。いくつかの実施形態では、脂質、例えば脂肪酸は、Ｃ２−Ｃ４０鎖を有する。いくつかの実施形態では、脂質、例えば脂肪酸は、Ｃ２−Ｃ１２またはＣ４−Ｃ１２鎖を有する。いくつかの実施形態では、脂質、例えば脂肪酸は、Ｃ４−Ｃ４０鎖を有する。いくつかの実施形態では、脂質、例えば脂肪酸は、Ｃ４−Ｃ４０、Ｃ２−Ｃ３８、Ｃ２−Ｃ３６、Ｃ２−Ｃ３４、Ｃ２−Ｃ３２、Ｃ２−Ｃ３０、Ｃ４−Ｃ３０、Ｃ２−Ｃ２８、Ｃ４−Ｃ２８、Ｃ２−Ｃ２６、Ｃ４−Ｃ２６、Ｃ２−Ｃ２４、Ｃ４−Ｃ２４、Ｃ６−Ｃ２４、Ｃ８−Ｃ２４、Ｃ１０−Ｃ２４、Ｃ２−Ｃ２２、Ｃ４−Ｃ２２、Ｃ６−Ｃ２２、Ｃ８−Ｃ２２、Ｃ１０−Ｃ２２、Ｃ２−Ｃ２０、Ｃ４−Ｃ２０、Ｃ６−Ｃ２０、Ｃ８−Ｃ２０、Ｃ１０−Ｃ２０、Ｃ２−Ｃ１８、Ｃ４−Ｃ１８、Ｃ６−Ｃ１８、Ｃ８−Ｃ１８、Ｃ１０−Ｃ１８、Ｃ１２−Ｃ１８、Ｃ１４−Ｃ１８、Ｃ１６−Ｃ１８、Ｃ２−Ｃ１６、Ｃ４−Ｃ１６、Ｃ６−Ｃ１６、Ｃ８−Ｃ１６、Ｃ１０−Ｃ１６、Ｃ１２−Ｃ１６、Ｃ１４−Ｃ１６、Ｃ２−Ｃ１５、Ｃ４−Ｃ１５、Ｃ６−Ｃ１５、Ｃ８−Ｃ１５、Ｃ９−Ｃ１５、Ｃ１０−Ｃ１５、Ｃ１１−Ｃ１５、Ｃ１２−Ｃ１５、Ｃ１３−Ｃ１５、Ｃ２−Ｃ１４、Ｃ４−Ｃ１４、Ｃ６−Ｃ１４、Ｃ８−Ｃ１４、Ｃ９−Ｃ１４、Ｃ１０−Ｃ１４、Ｃ１１−Ｃ１４、Ｃ１２−Ｃ１４、Ｃ２−Ｃ１３、Ｃ４−Ｃ１３、Ｃ６−Ｃ１３、Ｃ７−Ｃ１３、Ｃ８−Ｃ１３、Ｃ９−Ｃ１３、Ｃ１０−Ｃ１３、Ｃ１０−Ｃ１３、Ｃ１１−Ｃ１３、Ｃ２−Ｃ１２、Ｃ４−Ｃ１２、Ｃ６−Ｃ１２、Ｃ７−Ｃ１２、Ｃ８−Ｃ１２、Ｃ９−Ｃ１２、Ｃ１０−Ｃ１２、Ｃ２−Ｃ１１、Ｃ４−Ｃ１１、Ｃ６−Ｃ１１、Ｃ７−Ｃ１１、Ｃ８−Ｃ１１、Ｃ９−Ｃ１１、Ｃ２−Ｃ１０、Ｃ４−Ｃ１０、Ｃ２−Ｃ９、Ｃ４−Ｃ９、Ｃ２−Ｃ８、Ｃ４−Ｃ８、Ｃ２−Ｃ７、Ｃ４−Ｃ７、Ｃ２−Ｃ６またはＣ４−Ｃ６鎖を有する。いくつかの実施形態では、脂質、例えば脂肪酸は、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、Ｃ２１、Ｃ２２、Ｃ２３、Ｃ２４、Ｃ２５、Ｃ２６、Ｃ２７、Ｃ２８、Ｃ２９、Ｃ３０、Ｃ３１、Ｃ３２、Ｃ３３、Ｃ３４、Ｃ３５、Ｃ３６、Ｃ３７、Ｃ３８、Ｃ３９、Ｃ４０、Ｃ４１、Ｃ４２、Ｃ４３、Ｃ４４、Ｃ４５、Ｃ４６、Ｃ４７、Ｃ４８、Ｃ４９、Ｃ５０、Ｃ５１、Ｃ５２、Ｃ５３、Ｃ５４、Ｃ５５、Ｃ５６、Ｃ５７、Ｃ５８、Ｃ５９またはＣ６０鎖を有する。いくつかの実施形態では、治療剤は２つの脂肪酸を含み、これらはそれぞれ、上記範囲または数の炭素原子のいずれか１つを有する鎖を有する脂肪酸から独立して選択される。いくつかの実施形態では、脂肪酸の１つは独立して、Ｃ６−Ｃ２１鎖を有する脂肪酸であり、１つは独立して、Ｃ１２−Ｃ３６鎖を有する脂肪酸である。いくつかの実施形態では、各脂肪酸は独立して、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個または１７個の炭素原子の鎖を有する。
いくつかの実施形態では、治療剤は、２つの脂質を含む。いくつかの実施形態では、２つの脂質、例えば脂肪酸は、全体で６〜８０個の炭素原子を有する（６〜８０の等価炭素数（ＥＣＮ））。いくつかの実施形態では、脂質、例えば脂肪酸は、６〜８０、８〜８０、１０〜８０、１２〜８０、１４〜８０、１６〜８０、１８〜８０、２０〜８０、２２〜８０、２４〜８０、２６〜８０、２８〜８０、３０〜８０、４〜７６、６〜７６、８〜７６、１０〜７６、１２〜７６、１４〜７６、１６〜７６、１８〜７６、２０〜７６、２２〜７６、２４〜７６、２６〜７６、２８〜７６、３０〜７６、６〜７２、８〜７２、１０〜７２、１２〜７２、１４〜７２、１６〜７２、１８〜７２、２０〜７２、２２〜７２、２４〜７２、２６〜７２、２８〜７２、３０〜７２、６〜６８、８〜６８、１０〜６８、１２〜６８、１４〜６８、１６〜６８、１８〜６８、２０〜６８、２２〜６８、２４〜６８、２６〜６８、２８〜６８、３０〜６８、６〜６４、８〜６４、１０〜６４、１２〜６４、１４〜６４、１６〜６４、１８〜６４、２０〜６４、２２〜６４、２４〜６４、２６〜６４、２８〜６４、３０〜６４、６〜６０、８〜６０、１０〜６０、１２〜５６、１４〜５６、１６〜５６、１８〜５６、２０〜５６、２２〜５６、２４〜５６、２６〜５６、２８〜５６、３０〜５６、６〜５２、８〜５２、１０〜５２、１２〜５２、１４〜５２、１６〜５２、１８〜５２、２０〜５２、２２〜５２、２４〜５２、２６〜５２、２８〜５２、３０〜５２、６〜４８、８〜４８、１０〜４８、１２〜４８、１４〜４８、１６〜４８、１８〜４８、２０〜４８、２２〜４８、２４〜４８、２６〜４８、２８〜４８、３０〜４８、６〜４４、８〜４４、１０〜４４、１２〜４４、１４〜４４、１６〜４４、１８〜４４、２０〜４４、２２〜４４、２４〜４４、２６〜４４、２８〜４４、３０〜４４、６〜４０、８〜４０、１０〜４０、１２〜４０、１４〜４０、１６〜４０、１８〜４０、２０〜４０、２２〜４０、２４〜４０、２６〜４０、２８〜４０、３０〜４０、６〜３６、８〜３６、１０〜３６、１２〜３６、１４〜３６、１６〜３６、１８〜３６、２０〜３６、２２〜３６、２４〜３６、２６〜３６、２８〜３６、３０〜３６、６〜３２、８〜３２、１０〜３２、１２〜３２、１４〜３２、１６〜３２、１８〜３２、２０〜３２、２２〜３２、２４〜３２、２６〜３２、２８〜３２または３０〜３２のＥＣＮを有する。
適切な脂肪酸としては、飽和直鎖脂肪酸、飽和分枝脂肪酸、不飽和脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸およびポリカルボン酸が挙げられる。いくつかの実施形態では、このような脂肪酸は、最大３２個の炭素原子を有する。
有用な飽和直鎖脂肪酸の例としては、偶数個の炭素原子を有するもの、例えば酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、ヘキサコサン酸、オクタコサン酸、トリアコンタン酸およびｎ−ドトリアコンタン酸、ならびに奇数個の炭素原子を有するもの、例えばプロピオン酸、ｎ−吉草酸、エナント酸、ペラルゴン酸、ヘンデカン酸、トリデカン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカン酸、ヘネイコサン酸、トリコサン酸、ペンタコサン酸およびヘプタコサン酸が挙げられる。
適切な飽和分枝脂肪酸の例としては、イソ酪酸、イソカプロン酸、イソカプリル酸、イソカプリン酸、イソラウリン酸、１１−メチルドデカン酸、イソミリスチン酸、１３−メチル−テトラデカン酸、イソパルミチン酸、１５−メチル−ヘキサデカン酸、イソステアリン酸、１７−メチルオクタデカン酸、イソアラキン酸、１９−メチル−エイコサン酸、α−エチル−ヘキサン酸、α−ヘキシルデカン酸、α−ヘプチルウンデカン酸、２−デシルテトラデカン酸、２−ウンデシルテトラデカン酸、２−デシルペンタデカン酸、２−ウンデシルペンタデカン酸およびＦｉｎｅ ｏｘｏｃｏｌ １８００ ａｃｉｄ（Ｎｉｓｓａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．の製品）が挙げられる。適切な飽和奇数炭素分枝脂肪酸としては、イソブチル基で終わるアンテイソ脂肪酸、例えば６−メチル−オクタン酸、８−メチル−デカン酸、１０−メチル−ドデカン酸、１２−メチル−テトラデカン酸、１４−メチル−ヘキサデカン酸、１６−メチル−オクタデカン酸、１８−メチル−エイコサン酸、２０−メチル−ドコサン酸、２２−メチル−テトラコサン酸、２４−メチル−ヘキサコサン酸および２６−メチル−オクタコサン酸が挙げられる。
適切な不飽和脂肪酸の例としては、４−デセン酸、カプロレイン酸、４−ドデセン酸、５−ドデセン酸、ラウロレイン酸、４−テトラデセン酸、５−テトラデセン酸、９−テトラデセン酸、パルミトレイン酸、６−オクタデセン酸、オレイン酸、９−オクタデセン酸、１１−オクタデセン酸、９−エイコセン酸、シス−１１−エイコセン酸、セトレイン酸、１３−ドコセン酸、１５−テトラコセン酸、１７−ヘキサコセン酸、６，９，１２，１５−ヘキサデカテトラエン酸、リノール酸、リノレン酸、α−エレオステアリン酸、β−エレオステアリン酸、プニカ酸、６，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸、パリナリン酸、５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸、７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。
適切なヒドロキシ脂肪酸の例としては、α−ヒドロキシラウリン酸、α−ヒドロキシミリスチン酸、α−ヒドロキシパルミチン酸、α−ヒドロキシステアリン酸、ω−ヒドロキシラウリン酸、α−ヒドロキシアラキン酸、９−ヒドロキシ−１２−オクタデセン酸、リシノール酸、α−ヒドロキシベヘン酸、９−ヒドロキシ−トランス−１０，１２−オクタデカジエン酸、カモレン酸、イプロリン酸、９，１０−ジヒドロキシステアリン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸などが挙げられる。
適切なポリカルボン酸の例としては、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸、Ｄ，Ｌ−リンゴ酸などが挙げられる。
いくつかの実施形態では、各脂肪酸は、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデシル酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、ノナデシル酸、アラキジン酸、ヘネイコシル酸、ベヘン酸、トリコシル酸、リグノセリン酸、ペンタコシル酸、セロチン酸、ヘプタコシル酸、モンタン酸、ノナコシル酸、メリシン酸、ヘナトリアコンチル酸、ラセロイン酸（Ｌａｃｃｅｒｏｉｃ ａｃｉｄ）、プシリン酸（Ｐｓｙｌｌｉｃ ａｃｉｄ）、ゲディン酸（ｇｅｄｄｉｃ ａｃｉｄ）、セロプラスチン酸（ｃｅｒｏｐｌａｓｔｉｃ ａｃｉｄ）、ヘキサトリアコンチル酸、ヘプタトリアコンタン酸またはオクタトリアコンタン酸から独立して選択される。
いくつかの実施形態では、各脂肪酸は、α−リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、リノール酸、ガンマ−リノール酸、ジホモ−ガンマ−リノール酸、アラキドン酸、ドコサテトラエン酸、パルミトレイン酸、バクセン酸、パウリン酸、オレイン酸、エライジン酸、ゴンドイン酸、エルカ酸（ｅｕｒｃｉｃ ａｃｉｄ）、ネルボン酸、ミード酸、アドレン酸、ボセオペンタエン酸（ｂｏｓｓｅｏｐｅｎｔａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）、オズボンド酸、イワシ酸、ニシン酸、ドコサヘキサエン酸またはテトラコサノールペンタエン酸、または別の一価不飽和もしくは多価不飽和脂肪酸から独立して選択される。
いくつかの実施形態では、脂肪酸の一方または両方は、必須脂肪酸である。特定の必須脂肪酸の有益な健康効果を考慮して、開示される治療薬を負荷したエクソソームの治療利益は、このような脂肪酸を治療剤に含めることによって増加され得る。いくつかの実施形態では、必須脂肪酸は、リノレン酸、ガンマ−リノレン酸、ジホモ−ガンマ−リノレン酸、アラキドン酸、アドレン酸、ドコサペンタエン酸ｎ−６酸、アルファ−リノレン酸、ステアリドン酸、２０：４ｎ−３酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸ｎ−３酸またはドコサヘキサエン酸からなる群より選択されるｎ−６またはｎ−３必須脂肪酸である。
いくつかの実施形態では、各脂肪酸は、オール−シス−７，１０，１３−ヘキサデカトリエン酸、α−リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、テトラコサペンタエン酸、テトラコサヘキサエン酸またはリポ酸から独立して選択される。他の実施形態では、脂肪酸は、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸またはリポ酸から選択される。脂肪酸の他の例としては、オール−シス−７，１０，１３−ヘキサデカトリエン酸、α−リノレン酸（ＡＬＡまたはオール−シス−９，１２，１５−オクタデカトリエン酸）、ステアリドン酸（ＳＴＤまたはオール−シス−６，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸）、エイコサトリエン酸（ＥＴＥまたはオール−シス−１１，１４，１７−エイコサトリエン酸）、エイコサテトラエン酸（ＥＴＡまたはオール−シス−８，１１，１４，１７−エイコサテトラエン酸）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ、クルパノドン酸またはオールシス７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡまたはオール−シス−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸）、テトラコサペンタエン酸（オール−シス−９，１２，１５，１８，２１−ドコサヘキサエン酸）またはテトラコサヘキサエン酸（ナイシン酸またはオール−シス−６，９，１２，１５，１８，２１−テトラコセン酸）が挙げられる。いくつかの実施形態では、脂肪酸は、中鎖脂肪酸、例えばリポ酸である。
脂肪酸鎖は、それらの鎖長が大きく異なり、鎖長にしたがって（例えば、短いものから非常に長いものとして）分類され得る。
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）は、約５個またはそれ未満の炭素の鎖を有する脂肪酸（例えば、酪酸）である。いくつかの実施形態では、各脂肪酸は独立して、ＳＣＦＡである。いくつかの実施形態では、脂肪酸の１つは独立して、ＳＣＦＡである。
中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）としては、中鎖トリグリセリドを形成し得る約６〜１２個の炭素の鎖を有する脂肪酸が挙げられる。いくつかの実施形態では、各脂肪酸は独立して、ＭＣＦＡである。いくつかの実施形態では、脂肪酸の１つは独立して、ＭＣＦＡである。
長鎖脂肪酸（ＬＣＦＡ）としては、１３〜２１個の炭素の鎖を有する脂肪酸が挙げられる。いくつかの実施形態では、各脂肪酸は独立して、ＬＣＦＡである。いくつかの実施形態では、脂肪酸の１つは独立して、ＬＣＦＡである。
超長鎖脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）としては、２２個またはそれを超える炭素、例えば２２〜６０個、２２〜５０個または２２〜４０個の炭素の鎖を有する脂肪酸が挙げられる。いくつかの実施形態では、各脂肪酸は独立して、ＶＬＣＦＡである。いくつかの実施形態では、脂肪酸の１つは独立して、ＶＬＣＦＡである。
いくつかの実施形態では、脂肪酸の１つは独立してＭＣＦＡであり、１つは独立してＬＣＦＡである。
特定の実施形態では、治療剤が負荷された提供されるエクソソームは、治療剤の経口送達に有用である。
他の実施形態では、治療剤は、疾患の診断および予後予測ならびに処置に対する反応の測定に使用され得る。別の実施形態では、治療薬を負荷したエクソソーム（例えば、治療薬を負荷したミルク由来エクソソーム）の投与後、特定の細胞型による処理またはそれとの相互作用は、診断もしくは予後予測または処置に対する反応の測定を提供するための当技術分野で公知の手段によって評価され得るマーカーをもたらす。
様々な治療剤は、本発明による微小胞内への封入に適合性である。いくつかの実施形態では、治療剤は、生物製剤である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｎｃＲＮＡまたは他のオリゴヌクレオチド治療薬から選択される。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ホルモン（例えば、ある組織によって産生され、血流によって別の組織に運搬されて生理学的活性、例えば成長または代謝を生じさせる成長ホルモン、副甲状腺ホルモンまたはインスリンまたは別の物質、例えばペプチドまたはステロイド）；インターフェロン（例えば、ウイルス感染および他の刺激に応答して細胞によって通常産生されるタンパク質）；インターロイキン（例えば、サイトカインタンパク質、例えば他の免疫細胞の分裂および分化の誘導に関与するものなど；成長因子（例えば、ビタミンＢ１２などの物質または成長、例えば細胞成長を促進するインターロイキン）；モノクローナル抗体（ｍＡｂ）；ポリペプチド、例えば１０個またはそれを超える５０個未満のアミノ酸を含有するペプチド；タンパク質、例えば５０個またはそれを超えるアミノ酸を含有するタンパク質、または約１０ｋＤ〜約３０ｋＤ、もしくは約３０ｋＤ〜約１５０もしくは約３００ｋＤの質量を有するタンパク質；ワクチン；診断薬；抗血栓溶解薬；毒素；または抗毒素から選択される。
いくつかの実施形態では、生物学的治療剤は、ミルク由来微小胞中に天然に存在しないものである（すなわち、生物製剤は、その天然環境においてミルク由来微小胞に見られるかまたはそれと会合している内因性タンパク質、栄養素、ビタミン、他の低分子または核酸の中にはない）。いくつかの実施形態では、治療剤は、ミルク由来微小胞中に天然に存在するものであり、ミルク由来微小胞は、それを必要とする患者への治療剤の送達のために単離、操作もしくは最適化されるか、または治療剤の量は、ミルク微小胞の所定のサンプル中に天然に存在する量と比べて濃縮される。ミルク由来微小胞中に天然に見られる天然に存在するタンパク質および他の薬剤の例としては、ＣＤ６３、トランスフェリン受容体、シアル酸、ムチン、Ｔｓｇ１０１（腫瘍感受性遺伝子１０１）、Ａｌｉｘ、アネキシンＩＩ、ＥＦｌａ（翻訳伸長因子１ａ）、ＣＤ８２（分化クラスタ８２）、セラミド、スフィンゴミエリン、脂質ラフトマーカーおよびＰＲＮＰ（ＰＲｉｏＮタンパク質）が挙げられる。
多くの治療剤が、本発明による微小胞への負荷のために適切である。
より具体的には、本発明は、本明細書に記載されるエクソソームに負荷され、それによって送達され得る以下の脂質修飾二本鎖ＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、加国特許出願公開第２５８１６５１号または米国特許第８，１３８，１６１号（これらはそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものの１つである。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、修飾リボヌクレオチドを含むｓｉＲＮＡ分子であり、前記ｓｉＲＮＡは、（ａ）その３’末端において２塩基デオキシヌクレオチド「ＴＴ」配列を含み、（ｂ）ＲＮａｓｅに対して耐性であり、（ｃ）ウイルス複製を阻害することができる。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、２’修飾される。いくつかの実施形態では、２’修飾は、フルオロ−、メチル−、メトキシエチル−およびプロピル−修飾からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、フルオロ修飾は、２’−フルオロ修飾または２’，２’−フルオロ修飾である。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡの少なくとも１つのピリミジンは修飾され、前記ピリミジンは、シトシン、シトシンの誘導体、ウラシルまたはウラシルの誘導体である。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ中のすべてのピリミジンは修飾される。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡの両方の鎖は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含有する。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡは、約１０〜約３０個のリボヌクレオチドからなる。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、約１９〜約２３個のリボヌクレオチドからなる。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡ５、ｓｉＲＮＡＣ１、ｓｉＲＮＡＣ２、ｓｉＲＮＡ５Ｂ１、ｓｉＲＮＡ５Ｂ２またはｓｉＲＮＡ５Ｂ４のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、少なくとも１つの受容体結合リガンドに連結される。いくつかの実施形態では、受容体結合リガンドは、ｓｉＲＮＡ分子の５’末端または３’末端に付着される。いくつかの実施形態では、受容体結合リガンドは、前記ｓｉＲＮＡ分子の複数の末端に付着される。いくつかの実施形態では、受容体結合リガンドは、コレステロール、ＨＢＶ表面抗原および低密度リポタンパク質からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、受容体結合リガンドは、コレステロールである。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、少なくとも１つのリボヌクレオチドの２’位において修飾を含み、少なくとも１つのリボヌクレオチドの２’位のこの修飾は、前記ｓｉＲＮＡを分解に対して耐性にする。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリボヌクレオチドの２’位の修飾は、２’−フルオロ修飾または２’，２’−フルオロ修飾である。
実施形態では、本発明は、標的細胞におけるＲＮＡ干渉を媒介する二本鎖（ｄｓＲＮＡ）分子であって、ｄｓＲＮＡ中のピリミジンの１つまたはそれよりも多くが２’−フッ素を含むように修飾されている二本鎖（ｄｓＲＮＡ）分子を提供する。
実施形態では、本発明は、標的細胞におけるＲＮＡ干渉を媒介する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）であって、ｓｉＲＮＡ中のピリミジンの１つまたはそれよりも多くが２’−フッ素を含むように修飾されている小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を提供する。
実施形態では、第１および第２の実施形態のｄｓＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ分子中のピリミジンはすべて、２’−フッ素を含むように修飾される。
実施形態では、第３の実施形態の２’−フッ素ｄｓＲＮＡまたはｓｉＲＮＡは、ｄｓＲＮＡまたはｓｉＲＮＡの３’末端において２塩基デオキシヌクレオチド「ＴＴ」配列を含むようにさらに修飾される。
実施形態では、ｓｉＲＮＡを調製する方法であって、
（ａ）ｓｉＲＮＡを設計するためのＨＣＶゲノム中の標的ヌクレオチド配列を同定する工程；および
（ｂ）２’−フッ素を含むように修飾されたｓｉＲＮＡ中の少なくとも１つのピリミジンを含有するｓｉＲＮＡを生産する工程
を含む方法が提供される。
実施形態では、ｓｉＲＮＡを調製する方法であって、
（ａ）ｓｉＲＮＡを設計するためのＨＣＶゲノム中の標的ヌクレオチド配列を同定する工程；および
（ｂ）ｓｉＲＮＡ中のピリミジンのすべてが２’−フッ素を含むように修飾されているｓｉＲＮＡを生産する工程
を含む方法が提供される。
実施形態では、ｓｉＲＮＡを調製する方法であって、
（ａ）ｓｉＲＮＡを設計するためのＨＣＶゲノム中の標的ヌクレオチド配列を同定する工程；および
（ｂ）ｓｉＲＮＡ中のピリミジンのすべてが２’−フッ素を含むように修飾されており、２’−フッ素ｓｉＲＮＡが、ｄｓＲＮＡまたはｓｉＲＮＡの３’末端において２塩基デオキシヌクレオチド「ＴＴ」配列を含むようにさらに修飾されているｓｉＲＮＡを生産する工程
を含む方法が提供される。
実施形態では、ＨＣＶの複製を阻害する約１０〜約３０個のヌクレオチドのｄｓＲＮＡ分子であって、２’−フッ素を含むように修飾されたｓｉＲＮＡ中の少なくとも１つのピリミジンを含有するｄｓＲＮＡ分子が提供される。
実施形態では、ＨＣＶの複製を阻害する約１０〜約３０個のヌクレオチドのｄｓＲＮＡ分子であって、ｄｓＲＮＡ中のピリミジンのすべてが２’−フッ素を含むように修飾されているｄｓＲＮＡ分子が提供される。
実施形態では、ＨＣＶの複製を阻害する約１０〜約３０個のヌクレオチドのｄｓＲＮＡ分子であって、ｄｓＲＮＡ中のピリミジンのすべてが２’−フッ素を含むように修飾されており、２’−フッ素ｄｓＲＮＡが、ｄｓＲＮＡの３’末端において２塩基デオキシヌクレオチド「ＴＴ」配列を含むようにさらに修飾されているｄｓＲＮＡ分子が提供される。
いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、約１０〜約３０ヌクレオチド長であり、標的細胞におけるＲＮＡ干渉を媒介する。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ分子は、ヌクレアーゼ分解に対する増加した安定性を付与するが、標的核酸に結合する能力を保持するように化学修飾される。
本発明の修飾ｓｉＲＮＡは修飾リボヌクレオチドを含み、ＲＮＡｓｅ分解などの酵素的分解に対して耐性であるが、特定のウイルス標的ＲＮＡまたはＤＮＡ配列を含む細胞においてウイルス複製を阻害する能力をなお保持する。修飾ｓｉＲＮＡが標的配列に結合し、酵素的分解に対して耐性である限り、ｓｉＲＮＡは、分子の任意の位置において修飾され得る。ｓｉＲＮＡにおける修飾は、ヌクレオチド塩基、すなわちプリンもしくはピリミジン、リボースまたはリン酸におけるものであり得る。好ましくは、修飾は、ｓｉＲＮＡにおける少なくとも１つのリボースの２’位において起こる。
より具体的には、ｓｉＲＮＡは、少なくとも１つのピリミジン、少なくとも１つのプリンまたはそれらの組み合わせにおいて修飾される。しかしながら、一般に、ｓｉＲＮＡのすべてのピリミジン（シトシンまたはウラシル）、またはすべてのプリン（アデノシンまたはグアニン）、またはすべてのピリミジンおよびすべてのプリンの組み合わせが修飾される。いくつかの実施形態では、ピリミジンは修飾され、これらのピリミジンは、シトシン、シトシン誘導体、ウラシル、ウラシル誘導体またはそれらの組み合わせである。ｓｉＲＮＡのいずれか一方または両方の鎖におけるリボヌクレオチドが修飾され得る。
ＲＮＡに見られるピリミジン塩基を含有するリボヌクレオチド（シチジンおよびウリジン）は、塩基、リボースもしくはリン酸のＲＮＡ分解または崩壊を阻害する任意の分子を付加することにより化学修飾され得る。前記のように、リボースの２’位は、好ましい修飾部位である。２’修飾ｓｉＲＮＡは、アンチセンスまたはリボザイムなどの非修飾ｓｉＲＮＡまたは一本鎖ＲＮＡと比べて、より長い血清半減期を有し、分解に対して耐性である。２’−修飾ピリミジンリボヌクレオチドは、当技術分野で公知の多数の異なる方法により形成され得る。
１つの特定の化学修飾は、ｓｉＲＮＡのリボヌクレオチドへのハロゲン化物化学基由来の分子の付加である。いくつかの実施形態では、ハロゲン化物はフッ素である。フッ素のほかに、メチル−、メトキシエチル−およびプロピル−などの他の化学部分が修飾として付加され得る。特定の実施形態では、フルオロ修飾は、２’−フルオロ−修飾または２’，２’−フルオロ−修飾を含む。
したがって、本発明の好ましい実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ピリミジンリボヌクレオチドの２’炭素へのフッ素の付加により修飾される。ｓｉＲＮＡは、完全にまたは部分的にフッ化され得る。例えば、シトシンリボヌクレオチドのみがフッ化され得る。あるいは、ウラシルリボヌクレオチドのみがフッ化され得る。いくつかの実施形態では、ウラシルおよびシトシンの両方がフッ化される。ｓｉＲＮＡのセンスかまたはアンチセンスかのいずれかの１つの鎖のみが、フッ化され得る。ｓｉＲＮＡの部分的な２’フッ化でさえも、ヌクレオチド鎖分解性分解からの保護を与える。重要なことには、２’フッ化ｓｉＲＮＡは、細胞に対して毒性ではない。
ｓｉＲＮＡは、多数の方法において、例えば化学合成、Ｔ７ポリメラーゼ転写によって、またはＤｉｃｅｒ酵素を用いた２つの前記方法の１つにより調製される長鎖二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を処理することによって調製され得る。Ｄｉｃｅｒ酵素は、約５００塩基対〜約１０００塩基対のサイズのｄｓＲＮＡから、約２１塩基対〜約２３塩基対長のｄｓＲＮＡの混合集団を作り出す。予想外のことに、Ｄｉｃｅｒは、２’フルオロ−修飾ｄｓＲＮＡなどのｄｓＲＮＡの修飾鎖を有効に切断し得る。この方法の開発前、Ｄｉｃｅｒは、修飾ｓｉＲＮＡを切断することができないと以前は考えられていた。ｓｉＲＮＡを調製するＤｉｃｅｒ方法は、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）から入手可能なＤｉｃｅｒ ｓｉＲＮＡ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔを使用して実施され得る。
本発明は、特に、ウイルスにおける核酸配列を標的にする修飾ｓｉＲＮＡを作製する方法であって、（ａ）少なくとも１つの鎖において少なくとも１つの修飾リボヌクレオチドを含有する修飾二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）断片を調製すること、および（ｂ）組換えヒトＤｉｃｅｒで前記修飾ｄｓＲＮＡ断片を切断して、１つを超える修飾ｓｉＲＮＡをもたらすことを含む方法を含む。前記方法は、（ｃ）修飾ｓｉＲＮＡを単離することをさらに含み得る。
ｓｉＲＮＡを作製する方法において、ｄｓＲＮＡ断片は、化学合成によりまたはインビトロ翻訳において調製され得る。一実施形態では、修飾ｓｉＲＮＡは、修飾が前記ｓｉＲＮＡの少なくとも１つのリボヌクレオチドの２’位にある２’修飾ｓｉＲＮＡである。修飾は、フルオロ−、メチル−、メトキシエチル−およびプロピル−修飾からなる群より選択される。好ましくは、フルオロ−修飾は、２’−フルオロ−修飾または２’，２’−フルオロ−修飾である。ｓｉＲＮＡのピリミジン、プリンまたはそれらの組み合わせが修飾される。いくつかの実施形態では、シトシン、シトシンの誘導体、ウラシル、ウラシルの誘導体またはそれらの組み合わせなどのピリミジンが修飾される。ｓｉＲＮＡの一方または両方の鎖は、１つまたはそれを超える修飾リボヌクレオチドを含有し得る。
いくつかの実施形態では、ウイルスを不活性化する方法は、前記ｓｉＲＮＡの少なくとも１つのリボヌクレオチドの２’位において修飾されたｓｉＲＮＡを利用する。ｓｉＲＮＡは、フルオロ−、メチル−、メトキシエチル−およびプロピル−からなる群より選択される化学基で修飾され得る。フルオロ修飾は、２’−フルオロ修飾または２’，２’−フルオロ修飾を含む。修飾は、ｓｉＲＮＡのピリミジン、プリンまたはそれらの組み合わせにおけるものであり得る。いくつかの実施形態では、シトシン、シトシンの誘導体、ウラシル、ウラシルの誘導体またはそれらの組み合わせなどのピリミジンは修飾される。一実施形態では、ｓｉＲＮＡの一方の鎖は、少なくとも１つの修飾リボヌクレオチドを含有するが、別の実施形態では、ｓｉＲＮＡの両方の鎖は、少なくとも１つの修飾リボヌクレオチドを含有する。
処置方法において有用なｓｉＲＮＡはまた、ｓｉＲＮＡへの少なくとも１つの、しかし好ましくは１つを超える受容体結合リガンドの付着により修飾され得る。このようなリガンドは、肝臓、胃腸管、気道、頸または皮膚などの患者の全身、器官、組織または細胞における標的ウイルスへのｓｉＲＮＡの送達を引き起こすために有用である。
好ましい実施形態では、受容体結合リガンドは、ｓｉＲＮＡ分子の５’末端または３’末端のいずれかに付着される。受容体結合リガンドは、５’末端および３’末端の任意の組み合わせを含む１つまたはそれを超えるｓｉＲＮＡ末端に付着され得る。したがって、受容体結合リガンドがｓｉＲＮＡ分子の末端のみに付着される場合、１〜４つの範囲で、このようなリガンドは付着され得る。
ｓｉＲＮＡを特に全身、器官、組織または細胞におけるウイルスにターゲティングするための適切なリガンドの選択が行われ得る。例えば、ｓｉＲＮＡを肝実質細胞にターゲティングするために、コレステロールは、ｓｉＲＮＡ分子の５’末端および３’末端の任意の組み合わせを含む１つまたはそれを超える末端に付着され得る。得られるコレステロール−ｓｉＲＮＡは、肝臓における肝実質細胞に送達され、それにより、ｓｉＲＮＡをこの標的位置に送達するための手段を提供する。ｓｉＲＮＡを肝臓にターゲティングするために有用な他のリガンドは、ＨＢＶ表面抗原および低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を含む。
修飾ｓｉＲＮＡは、化学合成により調製され得る。一実施形態では、ｓｉＲＮＡ二重鎖、例えばＧＬ２内の各ＣおよびＵは、２’−Ｆ−Ｕおよび２’−Ｆ−Ｃで置換され得る。２’−Ｆ−Ｕおよび２’−Ｆ−Ｃを含む３’末端オーバーハングを有するｓｉＲＮＡを生産するために、ユニバーサルサポートが使用され得る。サポートからオリゴを選択的に切断することにより、実践者は、オーバーハングの残基が修飾ヌクレオチドを確実に含むようにし得る。あるいは、３’末端オーバーハングを含むヌクレオチドは、非修飾ｄＴｄＴであり得る。
２’−Ｆ ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、標準１μｍｏｌベータ−シアノエチルホスホラミダイトＲＮＡ化学プロトコールを使用して、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ８９０９または８９０５ ＤＮＡ／ＲＮＡ合成機で合成され得る。ＲＮＡホスホラミダイトモノマーおよびＰａｃ−Ａ、２’−Ｆ−Ａｃ−Ｃ、ｉＰｒ−Ｐａｃ−Ｇ、２’−Ｆ−ＵおよびＵ−ＲＮＡ ＣＰＧのカラムは、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，Ｖａ．）から入手され得る。（それぞれｃａｔａｌｏｇ ｎｏｓ．１０−３０００−０５，１０−３４１５−０２，１０−３０２１−０５，１０−３４３０−０２および２０−３４３０−４１Ｅを参照のこと）。Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ硫化試薬（ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．４０４０３６−１０）は、３’ＣＰＧとその後の塩基との間に単一のホスホロチオエート骨格を得るための酸化剤として使用され得る。カップリングを得るために、標準ＲＮＡ １μｍｏｌプロトコールの酸化工程は、標準チオエート１μｍｏｌプロトコールで置き換えられ得る。コレステリル−ＴＥＧホスホラミダイト（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．１０−１９７５−９０）およびコレステリル−ＴＥＧ ＣＰＧ（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．２０−２９７５−４１Ｅ）は、オリゴリボヌクレオチドの１つまたはそれよりも多くの５’または３’末端上に組み込まれ得る。合成後、２’−Ｆ ＲＮＡは切断され、１：１水酸化アンモニウム／メチルアミンで脱保護され、シリル基は、標準プロトコールを使用してトリエチルアミントリヒドロフルオリドで除去される。例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｌｅｎｒｅｓ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｆｉｌｅｓ／ｔｅｃｈｎｉｃａｌ／ｔｂ＿ｒｎａｄｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．ｐｄｆを参照のこと。次いで、オリゴリボヌクレオチドは、滅菌水を用いてＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＮＡＰ ２５，ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．１７−０８２５２−０２）で脱塩され、標準ゲル電気泳動プロトコールを使用して精製される。修飾ｓｉＲＮＡはまた、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ（Ｌａｆａｙｅｔｔｅ，Ｃｏｌｏ．）などの業者から入手され得る。
あるいは、修飾ｓｉＲＮＡは、Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）から購入されるＤｕｒａｓｃｒｉｂｅ Ｔ７転写キットを使用して転写により調製され得る。
２つの例示的な修飾ｓｉＲＮＡは、以下に提供されている。
本発明はまた、本明細書に記載されるエクソソームに負荷され、それによって送達され得る以下の脂質修飾二本鎖ＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、欧州特許出願公開第２２６４１６７号または米国特許第９，０４０，４９２号（これらのそれぞれの全体は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものの１つである。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、標的遺伝子における標的配列に相補的なヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、センス鎖に相補的なヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖とを含む二本鎖脂質修飾ＲＮＡであり、二本鎖ＲＮＡは、標的遺伝子の発現を抑制することができ、センス鎖は、５’末端から１〜６番目のヌクレオチドの少なくとも１つに直接的に、またはリンカーを介して結合した二本鎖脂質を有する。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、センス鎖の５’末端側において平滑末端化され、センス鎖の３’末端側において平滑末端化されるか、またはダングリング末端を有する。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、センス鎖の５’末端側および３’末端側の両方においてダングリング末端を有する二本鎖脂質修飾ＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、２１〜２７個のヌクレオチドからなるセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、センス鎖の５’末端側および３’末端側の両方において平滑末端化され、センス鎖およびアンチセンス鎖はそれぞれ、２７個のヌクレオチドからなる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、センス鎖の５’末端側および３’末端側の両方において平滑末端化され、センス鎖およびアンチセンス鎖はそれぞれ、２３個のヌクレオチドからなる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、センス鎖の５’末端側において平滑末端化され、センス鎖は２５個のヌクレオチドからなり、アンチセンス鎖は２３個のヌクレオチドからなる。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖はそれぞれ、２１個のヌクレオチドからなる。
いくつかの実施形態では、二本鎖脂質の２つの疎水基は同じまたは異なるものであり、それぞれ、６〜５０個の炭素原子を有する飽和または不飽和脂肪酸残基である。いくつかの実施形態では、二本鎖脂質は、グリセロリン脂質、グリセロ糖脂質、ジアシルグリセロールまたはセラミドである。いくつかの実施形態では、二本鎖脂質は、グリセロリン脂質である。いくつかの実施形態では、二本鎖脂質は、ホスファチジルエタノールアミンである。いくつかの実施形態では、二本鎖脂質は、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、１−パルミトイル−２−オレイル−ホスファチジルエタノールアミンまたはジオレオイルホスファチジルエタノールアミンの少なくとも１つである。
いくつかの実施形態では、脂質は、式（Ｌ−２７）
（式中、ｎ３およびｎ４は、同じまたは異なるものであり、それぞれ１〜２０の整数を表す）によって表されるリンカーを介して、センス鎖の５’末端から１〜６番目のヌクレオチドの少なくとも１つに結合される。
本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡは、センス鎖の５’末端側において二本鎖脂質で修飾される。この構造的特徴に基づいて、二本鎖脂質修飾ＲＮＡは、有意に増加したＲＮＡ干渉効果を有する。特に、本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡは、特定の部位に結合した二本鎖脂質を有するので、ＤｉｃｅｒプロセシングまたはＲＩＳＣと複合体を形成するＲＮＡの能力を損なわずに、顕著に増強したヌクレアーゼ耐性およびＲＮＡ干渉効果が提供され、その医薬用途への応用に大きく貢献する。
本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡは、センス鎖に相補的なヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖を含む。
本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡが、アンチセンス鎖においてダングリング末端を有しない場合、アンチセンス鎖は、センス鎖の「標的配列に相補的なヌクレオチド配列」の一部または全部に相補的なヌクレオチド配列からなる。ダングリング末端がアンチセンス鎖の５’末端および／または３’末端に存在する場合、アンチセンス鎖は、センス鎖の「標的配列に相補的なヌクレオチド配列」の一部または全部に相補的なヌクレオチド配列と、センス鎖の相補的ヌクレオチド配列の５’末端および／または３’末端に連結されたダングリング末端ヌクレオチド配列とからなる。
ＲＮＡ干渉効果がもたらされ得る限り、本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡにおけるアンチセンス鎖を構成するヌクレオチドの数は特に限定されず、二本鎖ＲＮＡの所望の構造などに応じて適切に選択され得る。ヌクレオチドの数は、典型的には、２１〜２７個、好ましくは２１、２３、２５または２７個、より好ましくは２１、２３または２７個である。ダングリング末端がアンチセンス鎖に存在しない場合、アンチセンス鎖を構成するヌクレオチドの数は、本明細書で使用される場合、標的配列のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を構成するヌクレオチドの総数を指す。ダングリング末端がアンチセンス鎖に存在する場合、アンチセンス鎖を構成するヌクレオチドの数は、ダングリング末端を構成するヌクレオチドの数と、標的配列のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を構成するヌクレオチドの数との総和を指す。
本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖を構成するヌクレオチドは、主にリボヌクレオチドである。酵素分解に対する耐性を増強するために、ＲＮＡは、様々な化学修飾ヌクレオチド、例えば２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、２’−Ｆ修飾ヌクレオチド、ＬＮＡ（ロックド核酸）ヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドをさらに含み得る。特に、本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡがダングリング末端を有する場合、センス鎖および／またはアンチセンス鎖のダングリング末端は、デオキシリボヌクレオチドから構成され得る。このような化学修飾ヌクレオチドの例としては、リン酸骨格修飾ヌクレオチド、例えばホスホロチオエート修飾ＤＮＡ／ＲＮＡおよびボラノフォスフェート修飾ＤＮＡ／ＲＮＡ；２’修飾ヌクレオチド、例えば２’−ＯＭｅ修飾ＲＮＡおよび２’−Ｆ修飾ＲＮＡ；ヌクレオチドの糖分子の架橋によって得られる修飾ヌクレオチド、例えばＬＮＡ（ロックド核酸）およびＥＮＡ（２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸）；異なる骨格を有する修飾ヌクレオチド、例えばＰＮＡ（ペプチド核酸）およびモリフォリンヌクレオチド；塩基修飾ヌクレオチド、例えば５−フルオロウリジンまたは５−プロピルウリジンなどが挙げられる。
センス鎖およびアンチセンス鎖が二本鎖にハイブリダイズする限り、本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡの構造は特に限定されない。例えば、以下の構造が好ましい：構造１．二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側において平滑末端化され（すなわち、平滑末端を有し）、センス鎖の３’末端側において平滑末端化されるか、またはダングリング末端（一本鎖領域または突出部）を有する（Ａ）；および構造２．二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側および３’末端側の両方においてダングリング末端を有する（Ｂ）。上記構造（Ａ）または（Ｂ）に基づいて、二本鎖脂質修飾ＲＮＡは、二本鎖脂質で修飾されてもそのＲＮＡ干渉効果を維持し得、顕著に増強した細胞取り込み効率も有する。本明細書で使用される場合、「センス鎖の３’末端側においてダングリング末端を有する」構造は、以下の場合の両方を含む：センス鎖の３’末端領域がダングリング末端を形成する場合；および、アンチセンス鎖の５’末端領域がダングリング末端を形成する場合。本明細書で使用される場合、「センス鎖の５’末端側においてダングリング末端を有する」構造は、以下の場合の両方を含む：センス鎖の５’末端領域がダングリング末端を形成する場合；および、アンチセンス鎖の３’末端領域がダングリング末端を形成する場合。
特に優れたＲＮＡ干渉効果を提供するために、例えば、上記構造（Ａ）および（Ｂ）の中で、本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡの二本鎖ＲＮＡの以下の構造が特に好ましい：二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側および３’末端側の両方において平滑末端化され、センス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ２７個のヌクレオチドからなる構造（Ａ−１）；二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側および３’末端側の両方において平滑末端化され、センス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ２３個のヌクレオチドからなる構造（Ａ−２）；二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側において平滑末端化され、センス鎖が２５個のヌクレオチドからなり、アンチセンス鎖が２３個のヌクレオチドからなる構造（Ａ−３）；および、二本鎖ＲＮＡがセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方の３’末端において２ヌクレオチドのダングリング末端を有し、センス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ２１個のヌクレオチドからなる構造（Ｂ−１）。
より具体的には、構造（Ａ−１）および構造（Ａ−２）では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、末端においていかなるダングリング末端も形成せずにハイブリダイズする。構造（Ａ−３）では、二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側において平滑末端化され、センス鎖の３’末端から１および２番目のヌクレオチドがダングリング末端を形成するように、センス鎖およびアンチセンス鎖はハイブリダイズする。構造（Ｂ−１）では、センス鎖の３’末端から１および２番目のヌクレオチドがダングリング末端を形成し、アンチセンス鎖の３’末端から１および２番目のヌクレオチドがダングリング末端を形成するように、センス鎖の５’末端から１〜１９番目のヌクレオチドと、アンチセンス鎖の３’末端から３〜２１番目のヌクレオチドとはハイブリダイズする。
本発明によって提供される二本鎖脂質修飾ＲＮＡの一実施形態によれば、脂質は、センス鎖の５’末端から１〜６番目のヌクレオチドの少なくとも１つに結合している。いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡは、センス鎖の５’末端領域以外のいかなる位置に結合した置換基も有しない。より具体的には、いくつかの実施形態では、センス鎖の５’末端領域以外の位置およびアンチセンス鎖は置換基を有さず、ヌクレオチドのみからなる。センス鎖の５’末端領域のみへの脂質の結合は細胞取り込み効率を増強し、ＲＮＡ干渉効果も顕著に増加させ得る。より具体的には、本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡのいくつかの実施形態では、二本鎖ＲＮＡの構造、二本鎖ＲＮＡを修飾するための二本鎖脂質の使用、および二本鎖脂質の結合部位は、一体不可分に関係する構造的特徴である。これらの構造的特徴に基づいて、本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡは、優れた細胞取り込み効率およびヌクレアーゼ耐性を有し、顕著に増加したＲＮＡ干渉効果をもたらし得る。
本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡのいくつかの実施形態では、脂質が２つの疎水基を有する限り、センス鎖に結合した二本鎖脂質は特に限定されない。二本鎖脂質の例としては、Ｃ６−５０飽和脂肪酸残基およびＣ６−５０不飽和脂肪酸残基からなる群より選択される少なくとも２つの疎水基を有する脂質が挙げられる。飽和脂肪酸残基および不飽和脂肪酸残基はそれぞれ、好ましくは、８〜３０個の炭素原子、より好ましくは１０〜２４個の炭素原子を有する。より具体的には、脂質の疎水基の例としては、脂肪酸残基、例えばカプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、エルカ酸、ガドレイン酸、リノール酸、リノレン酸およびアラキドン酸が挙げられる。いくつかの実施形態では、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸およびオレイン酸より選択される少なくとも１つの脂肪酸残基は、本発明における二本鎖脂質の２つの疎水基として使用され得る。
本発明において使用され得る二本鎖脂質の例としては、グリセロリン脂質、グリセロ糖脂質、ジアシルグリセロール、セラミドなどが挙げられる。ヌクレアーゼ耐性、細胞取り込み効率およびＲＮＡ干渉効果をさらに増強するために、好ましくは、グリセロリン脂質が使用され得る。
本発明において使用され得るグリセロリン脂質は特に限定されない。使用可能なグリセロリン脂質の例としては、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸およびホスファチジルイノシトールなどが挙げられる。
本発明において使用され得るリン脂質の例としては、ホスファチジルエタノールアミン、例えばジラウロイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン、１−パルミトイル−２−オレイルホスファチジルエタノールアミン、１−オレイル−２−パルミトイル−ホスファチジルエタノールアミン、ジエルコイルホスファチジルエタノールアミン；ホスファチジルグリセロール、例えばジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルホスファチジルグリセロール、１−パルミトイル−２−オレイル−ホスファチジルグリセロール、１−オレイル−２−パルミトイル−ホスファチジルグリセロール、およびジエルコイルホスファチジルグリセロール；ホスファチジルセリン、例えばジラウロイルホスファチジルセリン、ジミリストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、ジステアロイルホスファチジルセリン、ジオレイルホスファチジルセリン、１−パルミトイル−２−オレイル−ホスファチジルセリン、１−オレイル−２−パルミトイル−ホスファチジルセリン、およびジエルコイルホスファチジルセリン；ホスファチジン酸、例えばジラウロイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジステアロイルホスファチジン酸、ジオレイルホスファチジン酸、１−パルミトイル−２−オレイル−ホスファチジン酸、１−オレイル−２−パルミトイル−ホスファチジン酸、ジエルコイルホスファチジン酸；ホスファチジルイノシトール、例えばジラウロイルホスファチジルイノシトール、ジミリストイルホスファチジルイノシトール、ジパルミトイルホスファチジルイノシトール、ジステアロイルホスファチジルイノシトール、ジオレイルホスファチジルイノシトール、１−パルミトイル−２−オレイル−ホスファチジルイノシトール、１−オレイル−２−パルミトイル−ホスファチジルイノシトール、およびジエルコイルホスファチジルイノシトールが挙げられる。より顕著なヌクレアーゼ耐性、細胞取り込み効率およびより顕著なＲＮＡ干渉効果を提供するために、ホスファチジルエタノールアミンが使用され得る。より好ましくは、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、１−パルミトイル−２−オレイル−ホスファチジルエタノールアミンおよびジオレイルホスファチジルエタノールアミンが使用され得る。
本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡにおけるセンス鎖への二本鎖脂質の結合様式は、特に限定されない。脂質およびセンス鎖は直接的に、またはリンカー（連結領域）を介して結合し得る。脂質をセンス鎖に結合させるために使用されるリンカーは、核酸を含まない。
使用され得るリンカーは、それを介して脂質およびセンス鎖が連結される限り、特に限定されない。使用可能なリンカーの例としては、以下の構造のものが挙げられる：
式（Ｌ−４）〜（Ｌ−２１）では、ｎ１は、１〜４０、好ましくは２〜２０、より好ましくは２〜１２の整数である。
式（Ｌ−２２）〜（Ｌ−２４）では、ｎ２は、１〜２０、好ましくは１〜１０、より好ましくは１〜６の整数である。
式（Ｌ−２５）〜（Ｌ−２７）では、ｎ３およびｎ４は同じものまたは異なるものであり得、１〜２０、好ましくは１〜１０、より好ましくは１〜６の整数である。
一本鎖ＤＮＡは、式（Ｌ−１）〜（Ｌ−２７）のリンカーの左側または右側のいずれに結合し得る。好ましくは、二本鎖脂質はリンカーの左側に結合し、二本鎖ＲＮＡのセンス鎖の５’末端領域はその右側に結合する。
二本鎖脂質およびリンカーの結合部位は、二本鎖脂質およびリンカーの種類に応じて適切に選択され得る。二本鎖脂質の疎水基以外の任意の位置は、化学結合によってリンカーに連結され得る。例えば、ホスファチジルエタノールアミンを使用する場合、連結は、ホスファチジルエタノールアミンのアミノ基とリンカーとの間にアミド結合などを形成することによって行われ得る。ホスファチジルグリセロールを使用する場合、連結は、グリセロール残基の水酸基とリンカーとの間にエステル結合およびエーテル結合などを形成することによって行われ得る。ホスファチジルセリンを使用する場合、連結は、セリン残基のアミノ基またはカルボキシル基とリンカーとの間にアミド結合またはエステル結合などを形成することによって行われ得る。ホスファチジン酸を使用する場合、連結は、リン酸残基とリンカーとの間にリン酸エステル結合などを形成することによって行われ得る。ホスファチジルイノシトールを使用する場合、連結は、イノシトール残基の水酸基とリンカーとの間にエステル結合、エーテル結合などを形成することによって行われ得る。
リンカーは、連結すべき脂質の種類に応じて適切に選択され得る。例えば、二本鎖脂質がアミノ基含有リン脂質（例えば、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルセリン）またはヒドロキシル含有リン脂質（例えば、ホスファチジルグリセロールまたはホスファチジルイノシトール）である場合、好ましくは、式（Ｌ−６）、（Ｌ−７）、（Ｌ−９）、（Ｌ−１０）、（Ｌ−１８）、（Ｌ−２６）および（Ｌ−２７）のリンカーが使用される。
上記例のリンカーに加えて、他のリンカー、例えばＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート、Ｎ−４−マレイミド酪酸、Ｓ−（２−ピリジルジチオ）システアミン、ヨードアセトキシスクシンイミド、Ｎ−（４−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミド、Ｎ−［５−（３’−マレイミドプロピルアミド）−１−カルボキシペンチル］イミノ二酢酸、Ｎ−（５−アミノペンチル）−イミノ二酢酸および類似の二官能性リンカー（２つの官能基を含有するリンカー）も使用可能である。
二本鎖脂質または二本鎖脂質を連結するために使用されるリンカーのいずれかが結合したセンス鎖のヌクレオチドは、それが、センス鎖の５’末端から１〜６番目のヌクレオチドの少なくとも１つである限り、特に限定されない。５’末端から１〜４番目のヌクレオチドの少なくとも１つが好ましい。５’末端から１番目および／または２番目のヌクレオチドはさらに好ましい。５’末端のヌクレオチド（５’末端から１番目のヌクレオチド）は特に好ましい。
二本鎖脂質または脂質を連結するために使用されるリンカーが結合したセンス鎖の結合部位は特に限定されない。二本鎖脂質または二本鎖脂質を連結するために使用されるリンカーは、好ましくは、センス鎖の特定のヌクレオチドのリン酸部分の水酸基の水素原子を脂質またはリンカーで置換することによって、センス鎖に結合する。
本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡに結合した二本鎖脂質の数は特に限定されない。例えば、１〜３個の二本鎖脂質、好ましくは１または２個の二本鎖脂質、より好ましくは１個の二本鎖脂質が結合し得る。
いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡは、少なくとも１つの二本鎖脂質が結合した上記センス鎖と、上記アンチセンス鎖とをそれぞれ合成し、公知の方法にしたがってセンス鎖およびアンチセンス鎖をハイブリダイズさせることにより生産され得る。公知の方法はまた、二本鎖脂質が連結したセンス鎖を生産するために使用され得る。
あるいは、本発明の二本鎖脂質修飾ＲＮＡはまた、公知の方法にしたがって上記センス鎖およびアンチセンス鎖を合成し、センス鎖およびアンチセンス鎖を二本鎖ＲＮＡにハイブリダイズさせ、次いで、公知の合成技術によって二本鎖脂質を二本鎖ＲＮＡのセンス鎖の５’末端に連結することによって生産され得る。
より具体的には、いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるエクソソームに負荷され、それによって送達され得る以下の複合体、配列および修飾ＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、米国特許第９，３２０，８１４号（これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている複合体またはＲＮＡ配列または修飾ＲＮＡ配列を含む。
いくつかの実施形態では、複合体は、ａ）疎水性部分に連結した短い核酸分子であって、約５０個未満のヌクレオチドを含み、ｓｉＲＮＡ分子であり、前記疎水性部分がコレステロールである短い核酸分子と、ｂ）少なくとも１つのカチオン性荷電ポリマーセグメントおよび少なくとも１つの親水性ポリマーセグメントからなる線状ブロックコポリマーであって、前記カチオン性荷電ポリマーセグメントが約３０〜約５０個のリジンからなり、前記親水性ポリマーセグメントがポリ（エチレンオキシド）を含む線状ブロックコポリマーとを含む。
いくつかの実施形態では、複合体は、約３０個のリジンからなるカチオン性荷電ポリマーセグメントを含む。いくつかの実施形態では、複合体は、ｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖の３’末端に連結した疎水性部分を含む。いくつかの実施形態では、疎水性部分は、核酸分子に直接的に連結しているか、またはリンカーを介して連結している。
いくつかの実施形態では、複合体は、少なくとも１つの治療剤または検出可能な薬剤を含む。
いくつかの実施形態では、複合体は、ａ）疎水性部分に連結した短い核酸分子であって、約５０個未満のヌクレオチドを含み、ｓｉＲＮＡ分子であり、前記疎水性部分がコレステロールである短い核酸分子と、ｂ）少なくとも１つのカチオン性荷電ポリマーセグメント、少なくとも１つの親水性ポリマーセグメントおよびターゲティングリガンドからなる線状ブロックコポリマーであって、前記カチオン性荷電ポリマーセグメントが約３０〜約５０個のリジンからなり、前記親水性ポリマーセグメントがポリ（エチレンオキシド）を含む線状ブロックコポリマーとを含む。
いくつかの実施形態では、複合体は、疎水性部分に（直接的にまたはリンカーを介して）連結した少なくとも１つの短い鎖核酸分子と、カチオン性荷電ポリマーセグメントおよび親水性ポリマーセグメントを含む少なくとも１つのブロックコポリマーとを含む。短い核酸分子は、阻害性核酸分子、例えばアンチセンス分子、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＤｓｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡであり得る。特定の実施形態では、疎水性部分は、コレステロールである。特定の実施形態では、親水性ポリマーセグメントはポリ（エチレンオキシド）を含み、カチオン性荷電ポリマーセグメントはポリリジンを含む。本発明のポリプレックスは、少なくとも１つの他の生物活性剤、例えば治療剤をさらに含み得る。
Ｉ．ポリプレックス
いくつかの実施形態では、複合体は、少なくとも１つのブロックコポリマーおよび少なくとも１つの核酸分子を含む。ブロックコポリマーは、少なくとも１つのカチオン性荷電ポリマーセグメントおよび少なくとも１つの親水性ポリマーセグメントを含む。特定の実施形態では、ブロックコポリマーは、構造Ａ−ＢまたはＢ−Ａを有する。典型的には、ブロックコポリマーはまた、２つのブロックのみを含むが、それは、２つを超えるブロックを含み得る。例えば、ブロックコポリマーは、構造Ａ−Ｂ−Ａ（Ｂは、カチオン性荷電ポリマーセグメントである）を有し得る。特定の実施形態では、ブロックコポリマーのセグメントは、約５〜約５００個の反復単位、約１０〜約３００個の反復単位、約１０〜約２５０個の反復単位、約１０〜約２００個の反復単位、約１０〜約１５０個の反復単位または約１０〜約１００個の反復単位を含む。
カチオン性荷電ポリマーセグメントは、限定されないが、第一級、第二級および第三級アミン（これらはそれぞれ部分的または完全に四級化されて、第四級アンモニウム塩を形成し得る）を含む１つまたは複数のモノマーから誘導される単位を含むポリマーおよびコポリマーおよびそれらの塩を含み得る。これらのモノマーの例としては、限定されないが、カチオン性アミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、アルキレンイミン（例えば、エチレンイミン、プロピレンイミン、ブチレンイミン、ペンチレンイミン、ヘキシレンイミンなど）、スペルミン、ビニルモノマー（例えば、ビニルカプロラクタム、ビニルピリジンなど）、アクリレートおよびメタクリレート（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチルアクリレート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチルメタクリレート、ｔ−ブチルアミノエチルメタクリレート、アクリルオキシエチルトリメチルアンモニウムハライド、アクリルオキシエチル−ジメチルベンジルアンモニウムハライド、メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムハライドなど）、アリルモノマー（例えば、ジメチルジアリルアンモニウム（ａｍｍｏｎｉａｍ）クロリド）および脂肪族、複素環式または芳香族イオネンが挙げられる。特定の実施形態では、カチオン性ポリマーセグメントは、カチオン性アミノ酸、特にポリリジンを含む。特定の実施形態では、ブロックコポリマーのカチオン性ポリマーセグメントは、約５〜約１００個の反復単位、約１０〜約７５個の反復単位、約１０〜約５０個の反復単位、約２０〜約５０個の反復単位、約２０〜約４０個の反復単位または約３０個の反復単位を含む。
親水性ポリマーセグメントの例としては、限定されないが、ポリエーテルグリコール、ポリ（エチレンオキシド）、メトキシ−ポリ（エチレングリコール）、エチレンオキシドとプロピレンオキシドとのコポリマー、多糖、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルトリアゾール、ポリビニルピリジンのＮ−オキシド、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、ポリオルトエステル、ポリグリセロール、ポリアクリルアミド、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリンおよびそれらのコポリマーまたは誘導体が挙げられる。特定の実施形態では、親水性ポリマーセグメントは、ポリ（エチレンオキシド）を含む。
本発明のポリプレックスの核酸分子は、短い核酸分子、例えば、短い阻害性核酸分子（例えば、標的核酸と特異的にハイブリダイズし（例えば、それと相補的であり）、それにより、その発現を阻害する核酸分子；阻害性核酸分子としては、アンチセンス、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＤｓｉＲＮＡ（Ｄｉｃｅｒ ｓｉＲＮＡ／Ｄｉｃｅｒ基質ＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ（マイクロＲＮＡ）などが挙げられる）であり得る。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であり得る。核酸分子は、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは混合物であり得る。特定の実施形態では、核酸分子は、約１００個未満のヌクレオチド、特に約５０個未満のヌクレオチドまたは約３０個未満のヌクレオチドを含む。核酸分子は、プローブであり得る。核酸分子は、（例えば、診断方法または検出方法のために）１つまたはそれを超える検出可能な標識に（直接的にまたはリンカーを介して）コンジュゲートされ得る。核酸分子はまた、少なくとも１つのヌクレオチド類似体を含み得る。例えば、ヌクレオチド類似体は、ヌクレアーゼに対する安定性および／または耐性を増加させ得る。例えば、核酸分子は、限定されないが、ロックド核酸（ＬＮＡ）塩基、リン酸修飾を有するヌクレオチド（例えば、ホスホロチオエート、モルホリノなど）、修飾糖を有するヌクレオチド（例えば、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド）およびヌクレオチド模倣物（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）など）を含み得る。
本ポリプレックスの核酸分子はまた、少なくとも１つの疎水性部分にコンジュゲートされる。疎水性部分は、核酸分子のいずれかまたは両方の鎖の５’および／または３’末端において核酸分子にコンジュゲートされ得る。特定の実施形態では、疎水性部分は、二本鎖分子における３’末端、より具体的にはセンス鎖の３’末端にのみコンジュゲートされる。疎水性部分は、核酸分子に直接的に、またはリンカーを介してコンジュゲートされ得る。疎水性部分は、アダマンタン、コレステロール、ステロイド、長鎖脂肪酸、脂質、リン脂質、糖脂質およびそれらの誘導体からなる群より選択され得る。疎水性部分は、低分子であり得る。特定の実施形態では、ポリプレックスの核酸分子は、核酸分子のセンス鎖の３’末端においてコレステロールにコンジュゲートされる。
一般に、リンカーは、共有結合、または２つの化合物を（例えば、疎水性部分を核酸分子に）共有結合的に結合させる原子鎖を含む化学的部分である。リンカーは、化合物の任意の合成的に実行可能な位置に連結され得る。例示的なリンカーは、少なくとも１つの必要に応じて置換されている飽和もしくは不飽和；直鎖状、分枝状もしくは環状アルキル基、または必要に応じて置換されているアリール基を含み得る。特定の実施形態では、リンカーは、０個（すなわち、結合）〜約５００個の原子、約１個〜約１００個の原子、または約１個〜約５０個の原子を含有し得る。リンカーはまた、ポリペプチド（例えば、約１〜約５個）であり得る。リンカーは非分解性であり得、共有結合、または生理学的環境または条件下で実質的に切断または全く切断され得ない任意の他の化学構造であり得る。
本発明のポリプレックスはまた、ターゲティングリガンドにコンジュゲートされ得る。ターゲティングリガンドは、特定のタイプの組織または細胞型に特異的に結合する化合物である。特定の実施形態では、ターゲティングリガンドは、細胞表面マーカー／受容体のリガンドである。ターゲティングリガンドは、標的組織または細胞型上で優先的または排他的に発現される細胞表面マーカー（例えば、炭水化物のタンパク質）に選択的に結合する任意の分子であり得る（例えば、低分子量アンタゴニスト（例えば、１００Ｄａ未満、特に５００Ｄａ未満）、抗体またはその断片、アプタマー、ペプチド、低分子など）。ターゲティングリガンドは、ポリプレックスに直接的に、またはリンカーを介して連結され得る。特定の実施形態では、ターゲティングリガンドは、（例えば、末端において）ブロックコポリマーの親水性セグメントに連結される。
本発明のポリプレックスは、少なくとも１つのブロックコポリマーを少なくとも核酸分子と接触させることによって合成され得る。ブロックコポリマーのカチオン性荷電セグメントおよびアニオン性荷電核酸分子の反対電荷は、ブロックコポリマーの親水性セグメントの存在と一緒に、水溶液におけるポリプレックスの自己集合を可能にする。特定の実施形態では、核酸分子およびブロックコポリマーは、中和／電気陽性ポリプレックスを生成するモルＮ／Ｐ比で形成される。特定の実施形態では、Ｎ／Ｐ比は、約１〜約５である。複合体形成後、ポリプレックスは、当技術分野で公知の方法（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、遠心濾過など）によって、非複合成分から精製され得る。得られたポリプレックスは、典型的には、約２００ｎｍ未満、特に約１００ｎｍ未満の直径を有する。
ポリマー
カルバメート結合を介して８ｋＤａ ＰＥＧと架橋した生分解性ＰＥＩ（ジスルフィド結合を介して２ｋＤａ ＰＥＩから形成された２８ｋＤａ ＰＥＩ）からなる生分解性ナノゲルであるＢＤＮＧ（（Ｋｏｈｌｉら、（２００７）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．，１２１：１９−２７）では「ＮＧ（ＰＥＧｓｓ）」と命名されている）と、２ｋＤａ分枝状ＰＥＩ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）からなるカチオン性ブロックおよび１０ｋＤａ ＰＥＧ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）からなる非イオン性親水性ブロックを有するポリエチレンイミン−ｇ−ポリ（エチレン）グリコールグラフトコポリマーであるＰＥＩ−ＰＥＧ（Ｖｉｎｏｇｒａｄｏｖら、（１９９８）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．，９：８０５−１２）とは、上記実施形態において用いられ得る。１０（ＰＬＬ１０）または５０（ＰＬＬ５０）ポリ−Ｌ−リジン基からなるカチオン性ブロックおよび５ｋＤａ ＰＥＧからなる非イオン性親水性ブロックを有するメトキシ−ポリ（エチレングリコール）−ｂ−ポリ（Ｌ−リジンヒドロクロリド）ブロックコポリマーであるＰＬＬ１０−ＰＥＧおよびＰＬＬ５０−ＰＥＧも使用され得る。それらは、例えば、Ａｌａｍａｎｄａ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，Ａｌａ．）から購入され得る。
より具体的には、いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載されるエクソソームに負荷され、それによって送達され得る以下の脂質修飾二本鎖ＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、脂質修飾ＲＮＡは、米国特許出願公開第２０１０／０２９８４１１号（これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているものの１つである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ＶＥＧＦターゲティング核酸、例えば米国特許出願公開第２０１０／０２９８４１１号（例えば、その中の図８および実施例２）に記載されているものである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、以下の項目の１つから選択される。
項目１．標的遺伝子中の標的配列に相補的なヌクレオチド配列を有するセンス鎖と、前記センス鎖に相補的なヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖とを含む脂質修飾二本鎖ＲＮＡであって、前記標的遺伝子の発現を阻害することができ、前記センス鎖が、５’末端から１〜６番目のヌクレオチドの少なくとも１つに直接的にまたはリンカーを介して連結された脂質を有する、脂質修飾二本鎖ＲＮＡ。
項目２．前記センス鎖の５’末端側において平滑末端化されており、前記センス鎖の３’末端側において平滑末端化されているか、またはダングリング末端を有する、項目１に記載の脂質修飾二本鎖ＲＮＡ。
項目３．前記センス鎖の５’末端側および３’末端側の両方においてダングリング末端を有する、項目１に記載の脂質修飾二本鎖ＲＮＡ。
項目４．前記センス鎖が２１〜２７個のヌクレオチドからなる、項目１〜３のいずれか一項に記載の脂質修飾二本鎖ＲＮＡ。
項目５．前記センス鎖の５’末端側および３’末端側の両方において平滑末端化されており、前記センス鎖および前記アンチセンス鎖がそれぞれ２７個のヌクレオチドからなる、項目２に記載の脂質修飾二本鎖ＲＮＡ。
項目６．前記センス鎖の５’末端側および３’末端側の両方において平滑末端化されており、前記センス鎖および前記アンチセンス鎖がそれぞれ２３個のヌクレオチドからなる、項目２に記載の脂質修飾二本鎖ＲＮＡ。
項目７．前記センス鎖の５’末端側において平滑末端化されており、前記センス鎖が２５個のヌクレオチドからなり、前記アンチセンス鎖が２３個のヌクレオチドからなる、項目２に記載の脂質修飾二本鎖ＲＮＡ。
項目８．前記センス鎖および前記アンチセンス鎖がそれぞれ２１個のヌクレオチドからなる、項目３に記載の脂質修飾二本鎖ＲＮＡ。
項目９．前記脂質が、６〜５０個の炭素原子を有する脂肪酸である、項目１〜８のいずれか一項に記載の脂質修飾二本鎖ＲＮＡ。
項目１０．前記脂質が、ラウリン酸、ステアリン酸、ミリスチン酸またはパルミチン酸である、項目１〜９のいずれか一項に記載の脂質修飾二本鎖ＲＮＡ。
項目１１．前記脂質が、前記センス鎖の５’末端から１〜６番目のヌクレオチドの少なくとも１つにリンカーを介して連結されており、前記リンカーが、構造式−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１−（Ｌ−４）によって表され、式中、ｎ１は１〜４０の整数である、項目１〜１０のいずれか一項に記載の脂質修飾二本鎖ＲＮＡ。
本発明の脂質修飾二本鎖ＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖を構成するヌクレオチドは、基本的にリボヌクレオチドである。酵素分解に対する耐性を増強するために、ＲＮＡは、様々な化学修飾ヌクレオチド、例えば２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドまたは２’−Ｆ修飾ヌクレオチド、ＬＮＡ（ロックド核酸）ヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドなどを含有し得る。特に、本発明の脂質修飾二本鎖ＲＮＡがダングリング末端を有する場合、センス鎖および／またはアンチセンスＲＮＡのダングリング末端は、デオキシリボヌクレオチドから構成され得る。このような化学修飾ヌクレオチドの例としては、リン酸骨格修飾ヌクレオチド、例えばホスホロチオエート修飾ＤＮＡ／ＲＮＡおよびボラノフォスフェート修飾ＤＮＡ／ＲＮＡ；２’修飾ヌクレオチド、例えば２’−ＯＭｅ修飾ＲＮＡおよび２’−Ｆ修飾ＲＮＡ；ヌクレオチドの糖分子の架橋によって得られる修飾ヌクレオチド、例えばＬＮＡ（ロックド核酸）およびＥＮＡ（２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン架橋核酸）；異なる骨格を有する修飾ヌクレオチド、例えばＰＮＡ（ペプチド核酸）およびモリフォリンヌクレオチド；塩基修飾ヌクレオチド、例えば５−フルオロウリジンおよび５−プロピルウリジンなどが挙げられる。
センス鎖およびアンチセンス鎖が二本鎖にハイブリダイズする限り、本発明の脂質修飾二本鎖ＲＮＡは構造的に特に限定されない、例えば、脂質修飾二本鎖ＲＮＡは、好ましくは、以下の構造を有する：二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側において平滑末端化され（すなわち、平滑末端を有し）、センス鎖の３’末端側において平滑末端化されるか、またはダングリング末端（一本鎖領域）を有する構造（Ａ）；二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側および３’末端側においてダングリング末端を有する構造（Ｂ）。二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の３’末端側においてダングリング末端を有する構造は、センス鎖の３’末端領域がダングリング末端を形成する場合、および、アンチセンス鎖の５’末端領域がダングリング末端を形成する場合を含む。二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側においてダングリング末端を有する構造は、センス鎖の５’末端領域がダングリング末端を形成する場合、および、アンチセンス鎖の３’末端領域がダングリング末端を形成する場合を含む。
さらに増強したＲＮＡ干渉効果を達成するためには、本発明の脂質修飾二本鎖ＲＮＡを形成するために使用され得る二本鎖ＲＮＡの中で、以下に示されている構造（Ａ−１）〜（Ａ−３）を有する二本鎖ＲＮＡは、上記構造（Ａ）を有するものの中でも特に好ましく、以下に示されている構造（Ｂ−１）の二本鎖ＲＮＡは、上記構造（Ｂ）を有するものの中でも特に好ましい。二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側および３’末端側の両方において平滑末端化され、センス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ２７個のヌクレオチドからなる構造（Ａ−１）；二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側および３’末端側の両方において平滑末端化され、センス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ２３個のヌクレオチドからなる構造（Ａ−２）；二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端側において平滑末端化され、センス鎖が２５個のヌクレオチドからなり、アンチセンス鎖が２３個のヌクレオチドからなる構造（Ａ−３）；および、二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の３’末端およびアンチセンス鎖の３’末端の両方においてそれぞれ２つヌクレオチドからなるダングリング末端を有し、センス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ２１個のヌクレオチドからなる構造（Ｂ−１）。
より具体的には、構造（Ａ−１）および構造（Ａ−２）では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、末端においていかなるダングリング末端も形成せずにハイブリダイズする。構造（Ａ−３）では、二本鎖ＲＮＡがセンス鎖の５’末端において平滑末端化され、センス鎖の３’末端から１および２番目のヌクレオチドがダングリング末端を形成するように、センス鎖およびアンチセンス鎖はハイブリダイズする。構造（Ｂ−１）は、センス鎖の３’末端から１および２番目のヌクレオチドと、アンチセンス鎖の３’末端から１および２番目のヌクレオチドとがそれぞれダングリング末端を形成するように、センス鎖の５’末端から１〜１９番目のヌクレオチドと、アンチセンス鎖の３’末端から３〜２１番目のヌクレオチドとはハイブリダイズするものである。
いくつかの実施形態では、本発明の脂質修飾二本鎖ＲＮＡは、センス鎖の５’末端から１〜６番目のヌクレオチドの少なくとも１つに連結された少なくとも１つの脂質を有する。いくつかの実施形態では、本発明の脂質修飾二本鎖ＲＮＡは、センス鎖の５’末端領域以外のいかなる位置においても置換基を有しない。より具体的には、センス鎖の５’末端領域以外のいかなる領域およびアンチセンス鎖においても、置換基は存在せず、これらの領域は、ヌクレオチドからなる。センス鎖の５’末端領域のみへの脂質の連結は細胞取り込み効率を増強し、改善されたＲＮＡ干渉効果を提供し得る。
本発明の脂質修飾二本鎖ＲＮＡのセンス鎖に連結される脂質は特に限定されず、その例としては、単純脂質（脂肪酸と様々なアルコールとのエステル）；複合脂質、例えばリン脂質および糖脂質；誘導脂質、例えば脂肪酸、高級アルコール、脂溶性ビタミン、ステロイドおよび炭化水素が挙げられる。細胞取り込み効率およびＲＮＡ干渉効果を増強するために、使用される脂質は、いくつかの実施形態では誘導脂質、いくつかの実施形態では６〜５０個の炭素原子を有する脂肪酸、いくつかの実施形態では１０〜２２個の炭素原子を有する脂肪酸、いくつかの実施形態では１２〜１８個の炭素原子を有する脂肪酸、いくつかの実施形態ではラウリン酸、ステアリン酸、ミリスチン酸およびパルミチン酸、他の実施形態ではパルミチン酸である。
本発明の脂質修飾二本鎖ＲＮＡを形成するために脂質をセンス鎖に連結する様式は特に限定されない。脂質は直接的に、またはリンカーを介してセンス鎖に連結され得る。本発明では、脂質をセンス鎖に連結するリンカーは、核酸からなるリンカーではない。リンカーは、それを介して脂質およびセンス鎖が連結され得る限り、特に限定されない。例えば、以下の構造を有するリンカーがリンカーとして使用され得る：
−Ｏ−ＣＯ−Ｏ− （Ｌ−１）
−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ− （Ｌ−２）
−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ− （Ｌ−３）
−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１− （Ｌ−４）
−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ１− （Ｌ−５）
−ＣＯ−（ＣＨ２）ｎ１−ＣＯ− （Ｌ−６）
−ＣＯ−（ＣＨ２）ｎ１−ＮＨ− （Ｌ−７）
−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１−ＮＨ− （Ｌ−８）
−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１−ＮＨ−ＣＯ− （Ｌ−９）
−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１−ＮＨ−ＣＯ− （Ｌ−１０）
−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１−ＮＨ−Ｃ−（＝Ｓ）− （Ｌ−１１）
−ＣＯ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ１−Ｏ−ＣＯ− （Ｌ−１２）
−Ｃ（＝Ｓ）−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ１−Ｏ−ＣＯ− （Ｌ−１３）
−Ｃ（＝Ｓ）−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ１−Ｏ−Ｃ−（＝Ｓ）− （Ｌ−１４）
−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１−Ｏ−ＣＯ− （Ｌ−１５）
−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１−Ｏ−ＣＯ− （Ｌ−１６）
−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１−Ｏ−Ｃ−（＝Ｓ）− （Ｌ−１７）
−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１−Ｏ−ＣＯ− （Ｌ−１８）
−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１−ＣＯ− （Ｌ−１９）
−Ｃ（＝Ｓ）−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ１−ＮＨ−ＣＯ− （Ｌ−２０）
−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ１−Ｏ−Ｃ−（＝Ｓ）− （Ｌ−２１）
−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ２−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）− （Ｌ−２２）
−ＮＨ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ２−ＣＨ２− （Ｌ−２３）
上記式（Ｌ−４）〜（Ｌ−２１）では、ｎ１は、１〜４０の整数、いくつかの実施形態では２〜２０の整数、いくつかの実施形態では２〜１２の整数である。
上記式（Ｌ−２２）および（Ｌ−２３）では、ｎ２は、１〜２０の整数、いくつかの実施形態では１〜１０の整数、いくつかの実施形態では１〜６の整数である。
式（Ｌ−４）〜（Ｌ−２３）のリンカーは、左側または右側のいずれにおいてセンス鎖を連結し得る。いくつかの実施形態では、センス鎖（または核酸コンジュゲートの核酸）の特定の部位は、式（Ｌ−４）〜（Ｌ−２３）のリンカーの右側に連結され、脂質は、それらの左側に連結される。
リンカーへの脂質の連結部位は、使用される脂質およびリンカーの種類に応じて適切に選択され得る。例えば、脂質として脂肪酸を使用する場合、それは、エステル結合、アミド結合、または脂肪酸のカルボキシル基とリンカーとの間に形成される同様の結合を介して連結され得る。より具体的には、脂質として脂肪酸を使用する場合、脂質は、好ましくは、脂肪酸のカルボキシル基の−ＯＨをリンカーで置換することによって連結される。
リンカーは、連結すべき脂質の種類に応じて適切に選択される。脂質として脂肪酸を使用する場合、好ましくは、式（Ｌ−４）によって表されるリンカーが使用される。
上記リンカーに加えて、他のリンカーも使用可能である。その例としては、二官能性リンカー（２つの官能基を含有するリンカー）、例えばＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート、Ｎ−４−マレイミド酪酸、Ｓ−（２−ピリジルジチオ）システアミン、ヨードアセトキシスクシンイミド、Ｎ−（４−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミド、Ｎ−［５−（３’−マレイミドプロピルアミド）−１−カルボキシペンチル］イミノ二酢酸、Ｎ−（５−アミノペンチル）−イミノ二酢酸などが挙げられる。センス鎖では、脂質にまたは脂質を連結するために使用されるリンカーに連結されたヌクレオチドは、それが、センス鎖の５’末端から１〜６番目のヌクレオチドの少なくとも１つ、好ましくは５’末端から１〜４番目のヌクレオチドの少なくとも１つ、より好ましくは５’末端から１番目および／または２番目のヌクレオチド、特に好ましくは５’末端のヌクレオチド（５’末端から１番目のヌクレオチド）である限り、特に限定されない。
脂質へのまたは脂質を連結するために使用されるリンカーへのセンス鎖の連結部位は特に限定されない。それは、好ましくは、センス鎖の特定のヌクレオチドのリン酸部分の水酸基の水素原子の置換によって連結される。
本発明の脂質修飾二本鎖ＲＮＡに連結された脂質の数は特に限定されない。例えば、１〜３個の脂質、好ましくは１または２個の脂質、より好ましくは１個の脂質が連結され得る。
本発明の脂質修飾二本鎖ＲＮＡは、少なくとも１つの脂質が連結したセンス鎖と、アンチセンス鎖とをそれぞれ合成し、公知の方法にしたがってセンス鎖およびアンチセンス鎖をハイブリダイズさせることにより生産され得る。脂質が連結したセンス鎖はまた、公知の合成方法にしたがって生産され得る。
より具体的には、一態様では、本発明は、本明細書に記載されるエクソソームに負荷され、それによって送達される化学修飾一本鎖または二本鎖ＲＮＡを提供する。いくつかの実施形態では、化学修飾ＲＮＡは、米国特許第７，５８２，７４４号、米国特許第９，４５３，２２２号、米国特許第８，９５７，２２３号、米国特許第８，０１７，７６３号または米国特許第８，４０４，８６２号（これらのそれぞれの全体は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものの１つである。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、米国特許第７，５８２，７４４号（この全体は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている修飾糖ヌクレオシドモノマーまたはＬＣＭ（リガンドコンジュゲートモノマー）を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、約１２〜２３ヌクレオチドのマイクロＲＮＡ標的配列に十分に相補的な１２〜２３ヌクレオチド長からなるヌクレオチド配列を含む単離されたオリゴヌクレオチド剤であって、前記オリゴヌクレオチド剤の前記ヌクレオチド配列が、前記マイクロＲＮＡ標的配列との完全な相補性と１または２ヌクレオチド以下が異なり、構造（Ｉ）
（５’）ＱｘＱｚ１（Ｑｙ）ｎＱｚ２Ｑｚ３Ｑｚ４Ｑ−Ｌ（３’）
（Ｉ）
（式中、
Ｑは２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオシドであり；ｘ、ｚ１、ｚ２、ｚ３およびｚ４はすべて、
であり、
ＡおよびＢの一方はＳであり、他方はＯであり；
ｎ＝６−１７；
Ｌは、
であり、
ここで、
ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり；
Ｒ１、Ｒ３およびＲ９はそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＲｂであり、ただし、Ｒ１、Ｒ３またはＲ９の少なくとも１個はＯＨであり、Ｒ１、Ｒ３またはＲ９の少なくとも１個は−ＣＨ２ＯＲｂであり；
Ｒ７は、ＮＲｃＲｄまたはＮＨＣ（Ｏ）Ｒｄで置換されているＣ１−Ｃ２０アルキルであり；
Ｒｃは、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒｄは、炭水化物ラジカル；またはステロールもしくはステロイドラジカルであり、これは、少なくとも１個の炭水化物ラジカルに必要に応じてテザーされており；ならびに
Ｒｂは、
であり、
ＥおよびＦの一方はＳであり、他方はＯである）を有する単離されたオリゴヌクレオチド剤を提供する。
いくつかの実施形態では、Ｒｄはコレステロールである。いくつかの実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ２ＯＲｂである。いくつかの実施形態では、Ｒ９はＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ１およびＲ９はトランスである。いくつかの実施形態では、Ｒ３はＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ１およびＲ３はトランスである。いくつかの実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ２ＯＲｂである。いくつかの実施形態では、Ｒ１はＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ１およびＲ３はトランスである。いくつかの実施形態では、Ｒ９はＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ３およびＲ９はトランスである。いくつかの実施形態では、Ｒ９は−ＣＨ２ＯＲｂである。いくつかの実施形態では、Ｒ１はＯＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ１およびＲ９はトランスである。いくつかの実施形態では、ＸはＮＣ（Ｏ）Ｒ７である。いくつかの実施形態では、Ｒ７は−ＣＨ２（ＣＨ２）３ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）Ｒｄである。いくつかの実施形態では、Ｒ１はＣＨ２ＯＲｂであり；Ｒ９はＯＨであり；Ｒ１およびＲ９はトランスであり；ＸはＮＣ（Ｏ）Ｒ７であり；Ｒ７はＣＨ２（ＣＨ２）３ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）Ｒｄであり、Ｒｄはステロールまたはステロイドラジカルである。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤のヌクレオチド配列は、米国特許第７，５８２，７４４号の配列番号９６である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、米国特許第７，５８２，７４４号の配列番号９６の連続する１２ヌクレオチドまたはそれを超える配列と１または２ヌクレオチド以下が異なる配列からなる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤のヌクレオチド配列は、米国特許第７，５８２，７４４号の配列番号１０１である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤のヌクレオチド配列は、米国特許第７，５８２，７４４号の配列番号１０２である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤のヌクレオチド配列は、米国特許第７，５８２，７４４号の配列番号１０３である。
一態様では、本発明は、好ましくは式（Ｉ）の構造：
（式中、
ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７、ＮＲ７またはＣＨ２であり；
ＹはＮＲ８、Ｏ、Ｓ、ＣＲ９Ｒ１０であるか、または存在せず；
ＺはＣＲ１１Ｒ１２であるか、または存在せず；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＲａ、ＯＲｂ、（ＣＨ２）ｎＯＲａまたは（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり、ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１０の少なくとも１個はＯＲａまたはＯＲｂであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１０の少なくとも１個は（ＣＨ２）ｎＯＲａまたは（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり（ＳＲＭＳが末端である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１０の１個はＲａを含み、１個はＲｂを含み；ＳＲＭＳＳが内部である場合、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１０の２個はそれぞれＲｂを含む）；さらにただし、好ましくは、ＯＲａは（ＣＨ２）ｎＯＲｂと共にのみ存在し得、（ＣＨ２）ｎＯＲａはＯＲｂと共にのみ存在し得；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立して、Ｈ、１〜３個のＲ１３で必要に応じて置換されているＣ１−Ｃ６アルキル、もしくはＣ（Ｏ）ＮＨＲ７であるか；またはＲ５およびＲ１１は一緒に、Ｒ１４で必要に応じて置換されているＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり；
Ｒ７はリガンドであり得、例えばＲ７はＲｄであり得るか、またはＲ７は、例えばテザー部分を介して担体に間接的にテザーされているリガンド、例えばＮＲｃＲｄで置換されているＣ１−Ｃ２０アルキル；もしくはＮＨＣ（Ｏ）Ｒｄで置換されているＣ１−Ｃ２０アルキルであり得；
Ｒ８はＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１３はヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはハロであり；
Ｒ１４はＮＲｃＲ７であり；
Ｒａは：
であり、
Ｒｂは：
であり、
ＡおよびＣはそれぞれ独立してＯまたはＳであり；
ＢはＯＨ、Ｏ−、または
であり、
ＲｃはＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
ＲｄはＨまたはリガンド、例えば親油性リガンド、例えばコレステロールであり；ならびに
ｎは１〜４である）を有する少なくとも１つのサブユニットを含むオリゴヌクレオチド剤を特徴とする。
実施形態は、以下の特徴の１つまたはそれよりも多くを含み得る：Ｒ１はＣＨ２ＯＲａであり得、Ｒ３はＯＲｂであり得る；またはＲ１はＣＨ２ＯＲａであり得、Ｒ９はＯＲｂであり得る；またはＲ１はＣＨ２ＯＲａであり得、Ｒ２はＯＲｂであり得る。
Ｒ１はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ３はＯＲｂであり得る；またはＲ１はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ９はＯＲｂであり得る；またはＲ１はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ２はＯＲｂであり得る；またはＲ１はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ３はＯＲａであり得る；またはＲ１はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ９はＯＲａであり得る；またはＲ１はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ２はＯＲａであり得る。
Ｒ１はＯＲａであり得、Ｒ３はＣＨ２ＯＲｂであり得る；またはＲ１はＯＲａであり得、Ｒ９はＣＨ２ＯＲｂであり得る；またはＲ１はＯＲａであり得、Ｒ２はＣＨ２ＯＲｂであり得る。
Ｒ１はＯＲｂであり得、Ｒ３はＣＨ２ＯＲｂであり得る；またはＲ１はＯＲｂであり得、Ｒ９はＣＨ２ＯＲｂであり得る；またはＲ１はＯＲｂであり得、Ｒ２はＣＨ２ＯＲｂであり得る；またはＲ１はＯＲｂであり得、Ｒ３はＣＨ２ＯＲａであり得る；またはＲ１はＯＲｂであり得、Ｒ９はＣＨ２ＯＲａであり得る；またはＲ１はＯＲｂであり得、Ｒ２はＣＨ２ＯＲａであり得る。
Ｒ３はＣＨ２ＯＲａであり得、Ｒ９はＯＲｂであり得る；またはＲ３はＣＨ２ＯＲａであり得、Ｒ４はＯＲｂであり得る。
Ｒ３はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ９はＯＲｂであり得る；またはＲ３はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ４はＯＲｂであり得る；またはＲ３はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ９はＯＲａであり得る；またはＲ３はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ４はＯＲａであり得る。
Ｒ３はＯＲｂであり得、Ｒ９はＣＨ２ＯＲａであり得る；またはＲ３はＯＲｂであり得、Ｒ４はＣＨ２ＯＲａであり得る；またはＲ３はＯＲｂであり得、Ｒ９はＣＨ２ＯＲｂであり得る；またはＲ３はＯＲｂであり得、Ｒ４はＣＨ２ＯＲｂであり得る。
Ｒ３はＯＲａであり得、Ｒ９はＣＨ２ＯＲｂであり得る；またはＲ３はＯＲａであり得、Ｒ４はＣＨ２ＯＲｂであり得る。
Ｒ９はＣＨ２ＯＲａであり得、Ｒ１０はＯＲｂであり得る。
Ｒ９はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ１０はＯＲｂであり得る；またはＲ９はＣＨ２ＯＲｂであり得、Ｒ１０はＯＲａであり得る。
好ましい実施形態では、リボースは、ピロリン骨格または４−ヒドロキシプロリン由来骨格で置き換えられ、ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり、ＹはＣＲ９Ｒ１０であり、Ｚは存在しない。
Ｒ１およびＲ３はシスであり得るか、またはＲ１およびＲ３はトランスであり得る。
ｎは１であり得る。
ＡはＯまたはＳであり得る。
Ｒ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ３はＯＲｂであり得る；またはＲ１は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得、Ｒ３はＯＲｂであり得る。
Ｒ７は、（ＣＨ２）５ＮＨＲｄまたは（ＣＨ２）５ＮＨＲｄであり得る。Ｒｄは、葉酸ラジカル；コレステロールラジカル；炭水化物ラジカル；ビタミンＡラジカル；ビタミンＥラジカル；ビタミンＫラジカルから選択され得る。いくつかの実施形態では、Ｒｄは、コレステロールラジカルである。
Ｒ１はＯＲｂであり得、Ｒ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る；またはＲ１はＯＲｂであり得、Ｒ３は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得る；またはＲ１はＯＲａであり得、Ｒ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る；またはＲ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ９はＯＲａであり得る。
Ｒ１およびＲ９はシスであり得るか、またはＲ１およびＲ９はトランスであり得る。
Ｒ１はＯＲａであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る；またはＲ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ９はＯＲｂであり得る；またはＲ１は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得、Ｒ９はＯＲｂであり得る；またはＲ１はＯＲｂであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る；またはＲ１はＯＲｂであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得る。
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ９はＯＲａであり得る；またはＲ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ９はＯＲｂであり得る；またはＲ３は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得、Ｒ９はＯＲｂであり得る；またはＲ３はＯＲａであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得；Ｒ３はＯＲｂであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る；またはＲ３はＯＲｂであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得る。
Ｒ３およびＲ９はシスであり得るか、またはＲ３およびＲ９はトランスであり得る。
他の実施形態では、リボースはピペリジン骨格で置き換えられ、ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり、ＹはＣＲ９Ｒ１０であり、ＺはＣＲ１１Ｒ１２である。
Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ１０はＯＲａであり得る。
ｎは１または２であり得る。
Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ１０はＯＲｂであり得る；またはＲ９は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得、Ｒ１０はＯＲｂであり得る。
ＡはＯまたはＳであり得る。
Ｒ７は（ＣＨ２）５ＮＨＲｄまたは（ＣＨ２）５ＮＨＲｄであり得る。Ｒｄは、葉酸ラジカル；コレステロールラジカル；炭水化物ラジカル；ビタミンＡラジカル；ビタミンＥラジカル；ビタミンＫラジカルから選択され得る。いくつかの実施形態では、Ｒｄは、コレステロールラジカルである。
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ４はＯＲａであり得る；またはＲ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ４はＯＲｂであり得る；または
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得、Ｒ４はＯＲｂであり得る。
Ｒ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ２はＯＲａであり得る；またはＲ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ２はＯＲｂであり得る；またはＲ１は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得、Ｒ２はＯＲｂであり得る。
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ９はＯＲａであり得る。
Ｒ３およびＲ９はシスであり得るか、またはＲ３およびＲ９はトランスであり得る。
Ｒ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ９はＯＲｂであり得る；またはＲ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ９はＯＲａであり得る；またはＲ３は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得、Ｒ９はＯＲｂであり得る。
Ｒ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ３はＯＲａであり得る。
Ｒ１およびＲ３はシスであり得るか、またはＲ１およびＲ３はトランスであり得る。
Ｒ３はＯＲａであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る。
Ｒ１はＯＲａであり得、Ｒ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る。
他の好ましい実施形態では、リボースはピペラジン骨格で置き換えられ、ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり、ＹはＮＲ８であり、ＺはＣＲ１１Ｒ１２である。
Ｒ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ３はＯＲａであり得る。
Ｒ１およびＲ３はシスであり得るか、またはＲ１およびＲ３はトランスであり得る。
ｎは１であり得る。
Ｒ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ３はＯＲｂであり得る；またはＲ１は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得、Ｒ３はＯＲｂであり得る。
ＡはＯまたはＳであり得る。
Ｒ７は（ＣＨ２）５ＮＨＲｄまたは（ＣＨ２）５ＮＨＲｄであり得る。Ｒｄは、葉酸ラジカル；コレステロールラジカル；炭水化物ラジカル；ビタミンＡラジカル；ビタミンＥラジカル；ビタミンＫラジカルの群から選択され得る。いくつかの実施形態では、Ｒｄは、コレステロールラジカルである。
Ｒ８はＣＨ３であり得る。
Ｒ１はＯＲａであり得、Ｒ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る。
他の実施形態では、リボースはモルホリノ骨格で置き換えられ、ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり、ＹはＯであり、ＺはＣＲ１１Ｒ１２である。
Ｒ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ３はＯＲａであり得る。
Ｒ１およびＲ３はシスであり得るか、またはＲ１およびＲ３はトランスであり得る。
ｎは１であり得る。
Ｒ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ３はＯＲｂであり得る；または（ｏｆ）Ｒ１は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得、Ｒ３はＯＲｂであり得る。
ＡはＯまたはＳであり得る。
Ｒ７は（ＣＨ２）５ＮＨＲｄまたは（ＣＨ２）５ＮＨＲｄであり得る。Ｒｄは、葉酸ラジカル；コレステロールラジカル；炭水化物ラジカル；ビタミンＡラジカル；ビタミンＥラジカル；ビタミンＫラジカルの群から選択され得る。いくつかの実施形態では、Ｒｄは、コレステロールラジカルである。
Ｒ８はＣＨ３であり得る。
Ｒ１はＯＲａであり得、Ｒ３は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る。
他の実施形態では、リボースはデカリン骨格で置き換えられ、ＸはＣＨ２であり；ＹはＣＲ９Ｒ１０であり；ＺはＣＲ１１Ｒ１２であり；Ｒ５およびＲ１１は一緒にＣ６シクロアルキルである。
Ｒ６はＣ（Ｏ）ＮＨＲ７であり得る。
Ｒ１２は水素であり得る。
Ｒ６およびＲ１２はトランスであり得る。
Ｒ３はＯＲａであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る。
Ｒ３およびＲ９はシスであり得るか、またはＲ３およびＲ９はトランスであり得る。
ｎは１または２であり得る。
Ｒ３はＯＲｂであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る；またはＲ３はＯＲｂであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得る。
ＡはＯまたはＳであり得る。
Ｒ７は（ＣＨ２）５ＮＨＲｄまたは（ＣＨ２）５ＮＨＲｄであり得る。Ｒｄは、葉酸ラジカル；コレステロールラジカル；炭水化物ラジカル；ビタミンＡラジカル；ビタミンＥラジカル；ビタミンＫラジカルから選択され得る。いくつかの実施形態では、Ｒｄは、コレステロールラジカルである。
他の実施形態では、リボースはデカリン／インダン骨格で置き換えられ、例えば、ＸはＣＨ２であり；ＹはＣＲ９Ｒ１０であり；ＺはＣＲ１１Ｒ１２であり；Ｒ５およびＲ１１は一緒にＣ５シクロアルキルである。
Ｒ６はＣＨ３であり得る。
Ｒ１２は水素であり得る。
Ｒ６およびＲ１２はトランスであり得る。
Ｒ３はＯＲａであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得る。
Ｒ３およびＲ９はシスであり得るか、またはＲ３およびＲ９はトランスであり得る。
ｎは１または２であり得る。
Ｒ３はＯＲｂであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得る；またはＲ３はＯＲｂであり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲａであり得る。
ＡはＯまたはＳであり得る。
Ｒ１４はＮ（ＣＨ３）Ｒ７であり得る。Ｒ７は（ＣＨ２）５ＮＨＲｄまたは（ＣＨ２）ｎＮＨＲｄであり得る。Ｒｄは、葉酸ラジカル；コレステロールラジカル；炭水化物ラジカル；ビタミンＡラジカル；ビタミンＥラジカル；ビタミンＫラジカルの群から選択され得る。好ましくは、Ｒｄは、コレステロールラジカルである。
別の態様では、本発明は、式（ＩＩ）の構造：
（式中、
ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり；
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、ＯＲａ、ＯＲｂ、（ＣＨ２）ｎＯＲａまたは（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり、ただし、Ｒ１およびＲ２の一方はＯＲａまたはＯＲｂであり、他方は（ＣＨ２）ｎＯＲａまたは（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり（ＳＲＭＳが末端である場合、Ｒ１またはＲ２の１個はＲａを含み、１個はＲｂを含み；ＳＲＭＳＳが内部である場合、Ｒ１およびＲ２は両方ともそれぞれＲｂを含む）；さらにただし、いくつかの実施形態では、ＯＲａは（ＣＨ２）ｎＯＲｂと共にのみ存在し得、（ＣＨ２）ｎＯＲａはＯＲｂと共にのみ存在し得；
Ｒ７は、ＮＲｃＲｄで置換されているＣ１−Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ８はＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１３はヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはハロであり；
Ｒ１４はＮＲｃＲ７であり；
Ｒａは：
であり、
Ｒｂは：
であり、
ＡおよびＣはそれぞれ独立してＯまたはＳであり；
ＢはＯＨ、Ｏ−、または
であり；
ＲｃはＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
ＲｄはＨまたはリガンドであり；ならびに
ｎは１〜４である）を有する少なくとも１つのサブユニットを含むオリゴヌクレオチド剤を特徴とする。
コンジュゲートのオリゴヌクレオチド剤は実質的に一本鎖であり、約１２〜約２９個のサブユニット、好ましくは約１５〜約２５個のサブユニットからなる。実質的に一本鎖のオリゴヌクレオチド剤は、二重ではない少なくとも６０％、７０％、８０％または９０％またはそれを超えるヌクレオチドを含む。
実施形態は、上記特徴の１つまたはそれよりも多くを含み得る。
さらなる態様では、本発明は、式（Ｉ）または式（ＩＩ）を含む少なくとも１つのサブユニットを有するオリゴヌクレオチド剤を特徴とする。
一態様では、本発明は、式（Ｉ）および／または式（ＩＩ）を含む少なくとも２つのサブユニットを有するオリゴヌクレオチド剤を特徴とする。
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）および／または式（ＩＩ）を含む少なくとも１つのサブユニットを有する本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド剤を作製する方法を提供する。さらなる態様では、本発明は、標的遺伝子の発現をモジュレートする方法を提供する。前記方法は、式（Ｉ）および／または式（ＩＩ）を含む少なくとも１つのサブユニットを有する本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド剤を被験体に投与することを含む。
本明細書に記載されるＳＲＭＳまたはテザーは、本明細書に記載される任意のオリゴヌクレオチド剤に組み込まれ得る。オリゴヌクレオチド剤は、本明細書に記載されるＳＲＭＳの１つまたはそれよりも多くを含み得る。ＳＲＭＳは、オリゴヌクレオチド剤における１つまたはそれを超える部位に導入され得る。ＳＲＭＳは、オリゴヌクレオチドの３’または５’末端またはその近く（１、２または３位置内）に配置され得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの５’末端またはその近く（１、２、または３位置内）においてＳＲＭＳを有しないことが好ましい。ＳＲＭＳは内部にあり得、好ましくは、標的への結合に重要ではない領域に配置されるであろう。
実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、３’末端（または１、２または３位置内）においてＳＲＭＳを有し得る。
別の実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、内部位置においてＳＲＭＳを有し得る。他の実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、ＳＲＭＳを３’末端においてＳＲＭＳを有し得、内部位置においてＳＲＭＳを有し得る。
本明細書に記載される糖、塩基または骨格への他の修飾は、オリゴヌクレオチド剤に組み込まれ得る。
オリゴヌクレオチド剤は、本明細書に記載されるアーキテクチャまたは構造を取り得る。
オリゴヌクレオチド剤は、本明細書に記載される遺伝子のいずれかを含む広範な遺伝子のいずれかをターゲティングするように選択され得る。
好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、本明細書に記載されるアーキテクチャ（アーキテクチャは、全長の１つまたはそれよりも多くを指す）を有する。本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド剤のＳＲＭＳ含有塩基に加えて、ヌクレアーゼ耐性モノマー（ＮＲＭ）を含み得る。
別の態様では、本発明は、例えばオリゴヌクレオチド剤のＳＲＭＳへのコンジュゲーションにより親油性部分、例えばコレステロールがコンジュゲートされるオリゴヌクレオチド剤を特徴とする。いくつかの実施形態では、親油性部分は、細胞へのオリゴヌクレオチド剤の侵入を増強する。いくつかの実施形態では、細胞は、生物、組織または細胞株、例えば初代細胞株、不死化細胞株または本明細書に開示される細胞株のいずれかの種類の一部である。したがって、コンジュゲートオリゴヌクレオチド剤は、生物、例えば哺乳動物、例えばヒトの標的遺伝子の発現を阻害するために、または細胞株もしくは生物外の細胞における標的遺伝子の発現を阻害するために使用され得る。
親油性部分（疎水基）は、例えば脂質、コレステロール、オレイル、レチニル、コレステリル残基、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジンからなる群より選択され得る。いくつかの実施形態では、親油性部分はコレステロールである。いくつかの実施形態では、親油性部分は、葉酸；コレステロール；炭水化物；ビタミンＡ；ビタミンＥ；またはビタミンＫから選択される。
オリゴヌクレオチド剤は、それに組み込まれた式（Ｉ）または式（ＩＩ）を有する少なくとも１つのサブユニットを有し得る。オリゴヌクレオチド剤は、本明細書に記載される特徴のいずれかの１つまたはそれよりも多くを有し得る。例えば、サブユニットが式（Ｉ）のものである場合、Ｒｄはコレステロールであり得；ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり得、ＹはＣＲ９Ｒ１０であり得、Ｚは存在しなくてもよく、Ｒ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ３はＯＲａであり得；ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり得、ＹはＣＲ９Ｒ１０であり得、ＺはＣＲ１１Ｒ１２であり得、Ｒ９は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ１０はＯＲａであり得；ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり得、ＹはＮＲ８であり得、ＺはＣＲ１１Ｒ１２であり得、Ｒ１は（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり得、Ｒ３はＯＲａであり得；ＸはＣＨ２であり得；ＹはＣＲ９Ｒ１０であり得；ＺはＣＲ１１Ｒ１２であり得、ここで、Ｒ６はＣ（Ｏ）ＮＨＲ７であり得るか；またはＸはＣＨ２であり得；ＹはＣＲ９Ｒ１０であり得；ＺはＣＲ１１Ｒ１２であり得、ここで、Ｒ１１またはＲ１２はＣ（Ｏ）ＮＨＲ７であり得るか、またはＲ５およびＲ１１は共に、Ｎ（ＣＨ３）Ｒ７で置換されているＣ５またはＣ６シクロアルキルであり得る。
例示的な一本鎖オリゴヌクレオチド剤は、以下のポリペプチド：血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）；アポリプロテイン（Ａｐｏｌｉｐｒｏｔｅｉｎ）Ｂ（ＡｐｏＢ）；ルシフェラーゼ（ｌｕｃ）；アンドロゲン受容体（ＡＲ）；血液凝固第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩ）；低酸素誘導因子１−アルファサブユニット（Ｈｉｆ−１α）；胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）；ラミンＡ／Ｃおよび緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードするＲＮＡをターゲティングし得る。例示的な一本鎖オリゴヌクレオチド剤は、以下の表１Ａに示されている。さらなる適切なｍｉＲＮＡ標的は、例えば、Ｊｏｈｎら、ＰＬｏＳ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２：１８６２−１８７９，２００４（ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ＰＬｏＳ ３：１３２８，２００５）およびＴｈｅ ｍｉｃｒｏＲＮＡ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ−Ｊｏｎｅｓ Ｓ．，ＮＡＲ ３２：Ｄ１０９−Ｄ１１１，２００４）に記載されている。
例示的であるが非限定的なリガンドコンジュゲートモノマーサブユニットを含有するオリゴヌクレオチド剤、例えばコンジュゲートオリゴヌクレオチド剤は、以下の式（ＩＩ）および米国特許第７，５８２，７４４号（これは、参照により本明細書に組み込まれる）の図１のスキームに示されている。担体（いくつかの実施形態では「リンカー」とも称される）は環式または非環式部分であり得、２つの「骨格結合点」（例えば、ヒドロキシル基）およびリガンドを含む。リガンドは、担体に直接的に結合（例えば、コンジュゲート）され得るか、または介在テザー（例えば、１つもしくはそれを超える原子の非環式鎖；または核酸塩基、例えば１つもしくはそれを超える化学修飾を必要に応じて有する天然に存在する核酸塩基、例えば異常塩基；もしくはユニバーサル塩基）により担体に間接的に結合（例えば、コンジュゲート）され得る。したがって、担体はまた、それぞれリガンドおよびテザー／テザーリガンドに対する「リガンドまたはテザー結合点」を含む。
リガンドコンジュゲートモノマーサブユニットは、ＲＮＡ分子の５’または３’末端サブユニットであり得る（すなわち、２つの「Ｗ」基の一方はヒドロキシル基であり、他方の「Ｗ」基は２つまたはそれを超える非修飾または修飾リボヌクレオチドの鎖であり得る）。あるいは、リガンドコンジュゲートモノマーサブユニットは内部位置を占有し、両方の「Ｗ」基は、１つまたはそれを超える非修飾または修飾リボヌクレオチドであり得る。１つを超えるリガンドコンジュゲートモノマーサブユニットは、ＲＮＡ分子、例えばオリゴヌクレオチド剤中に存在し得る。テザーリガンドコンジュゲートモノマーサブユニット、例えば親油性部分、例えばコレステロールが担体にテザーされるものを含めるための例示的な位置は、３’末端、５’末端または内部位置である。
式（ＩＩ）の修飾ＲＮＡ分子は、当技術分野で公知であり例えば米国特許第７，５８２，７４４号（これは、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているオリゴヌクレオチド合成方法を使用して得られ得る。いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の修飾ＲＮＡ分子は、例えばホスホラミダイトまたはＨ−ホスホネートカップリング戦略を利用して、対応するモノマー化合物の１つまたはそれよりも多く（例えば、Ａ、ＢおよびＣのセクションならびに米国特許第７，５８２，７４４号（これは、参照により本明細書に組み込まれる）の図１のスキームを参照のこと）を成長鎖に組み込むことにより調製され得る。
モノマー、例えばリガンドコンジュゲートモノマーは、一般に、担体分子（以下のＡおよび米国特許第７，５８２，７４４号（これは、参照により本明細書に組み込まれる）の図１を参照のこと）に連結された２つの異なって官能化されたヒドロキシル基（ＯＦＧ１およびＯＦＧ２）と、リガンド／テザー結合点とを含む。本明細書で使用される場合、「官能化ヒドロキシル基」という用語は、ヒドロキシルプロトンが別の置換基で置き換えられていることを意味する。以下の代表的な構造ＢおよびＣならびに米国特許第７，５８２，７４４号（これは、参照により本明細書に組み込まれる）の図１に示されているように、担体上の１つのヒドロキシル基（ＯＦＧ１）は、保護基（ＰＧ）で官能化される。他のヒドロキシル基（ＯＦＧ２）は、（１）Ｂのように、直接的に、もしくはリンカーＬを通じて間接的に、液相もしくは固相合成支持体試薬（実線の円）で官能化され得るか、または（２）Ｃのように、リン含有部分、例えばホスホラミダイトで官能化され得る。テザー結合点は、モノマーが成長鎖に組み込まれる時点において、水素原子、適切な保護基、テザー、またはテザーリガンドに接続され得る（以下のＡにおける変数「Ｒ」を参照のこと）。したがって、テザーリガンドは、モノマーが成長鎖に組み込まれる時点においてモノマーに結合され得るが、結合される必要はない。いくつかの実施形態では、テザー、リガンドまたはテザーリガンドは、「前駆体」リガンドコンジュゲートモノマーサブユニットが鎖に組み込まれた後に「前駆体」リガンドコンジュゲートモノマーサブユニットに連結され得る。以下で（および本明細書の他の箇所で）使用される波線は接続を指し、部分と結合点との間の直接的な結合、または部分と結合点との間に介在するテザー分子を表し得る。直接的なテザーは、部分が結合点に直接的に結合されることを意味する。間接的なテザーは、結合点と部分との間に介在するテザー分子があることを意味する。
（ＯＦＧ１）保護基は、例えばＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｄ．Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９１）から所望により選択され得る。保護基は、好ましくは、アミダイト合成条件、貯蔵条件およびオリゴヌクレオチド合成条件下で安定である。ヒドロキシル基−ＯＨは求核基（すなわち、ルイス塩基）であり、酸素を通して求電子剤（すなわち、ルイス酸）と反応する。水素が保護基、例えばトリアリールメチル基またはトリアルキルシリル基で置き換えられているヒドロキシル基は、置換反応において求核剤として本質的に非反応性である。したがって、保護ヒドロキシル基は、例えばオリゴヌクレオチド合成時に構造Ｃにより例示される化合物のホモカップリングの防止において有用である。いくつかの実施形態では、好ましい保護基はジメトキシトリチル基である。他の実施形態では、好ましい保護基は、以下の式：
を有するシリコンベースの保護基である。
Ｘ５’、Ｘ５’’およびＸ５’’’は、置換または非置換アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、アルコキシ、シクロアルコキシ、アラルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシまたはシロキシから選択され得る（すなわち、Ｒ３ＳｉＯ−、３つの「Ｒ」基は、上記基の任意の組み合わせであり得る）。Ｘ５’、Ｘ５’’およびＸ５’’’はすべて、同じものまたは異なるものであり得る；Ｘ５’、Ｘ５’’、Ｘ５’’’の２つが同一であり、３番目が異なるものである組み合わせも企図される。特定の実施形態では、Ｘ５’、Ｘ５’’およびＸ５’’’は、少なくとも１つのアルコキシまたはシロキシ基を含み、米国特許第７，５８２，７４４号（これは、参照により本明細書に組み込まれる）の図２Ａに列挙されている基のいずれか１つであり得、好ましい組み合わせは、Ｘ５’、Ｘ５’’＝トリメチルシロキシおよびＸ５’’’＝１，３−（トリフェニルメトキシ）−２−プロポキシまたはシクロドデシルオキシを含む。
Ｘ５’、Ｘ５’’およびＸ５’’’の他の好ましい組み合わせは、以下に示されている脱保護および安定性基準を満たすＯＦＧ１基をもたらすものを含む。この基は、好ましくは、アミダイト合成条件、貯蔵条件およびオリゴヌクレオチド合成条件下で安定である。例えば支持体結合オリゴヌクレオチドからのシリル基の迅速な除去（すなわち、１分未満）は、合成時間を減少させ、それにより、試薬への成長オリゴヌクレオチド鎖の曝露時間を減少させ得るので望ましい。例えば発色団シリル置換基の添加から脱保護中にシリル保護基が視認可能である場合、オリゴヌクレオチド合成は改善され得る。
シリル保護基の選択は、安定性および容易な除去という本質的特性の競合的要求、ならびにそれらの競合的目標をバランスする必要性により複雑化され得る。安定性を増加させるほとんどの置換基はまた、シリル基の除去に必要な反応時間を増加させ、基を除去する困難性のレベルを潜在的に増加させる。
ＯＦＧ１シリコン含有保護基へのアルコキシおよびシロキシ置換基の付加は、シリルエーテル結合のフッ化物切断に対する保護基の感受性を増加させる。置換基の立体的かさ高の増加は安定性を保存するが、同じ程度にフッ化物不安定性を減少させない。シリル基の置換基の適切なバランスは、シリルエーテルを実行可能なヌクレオシド保護基にする。
ＯＦＧ１シリコン含有保護基候補は、候補ＯＦＧ１基を担持する好ましい担体のテトラヒドロフラン溶液を５モル当量のテトラヒドロフランに室温で曝露することにより試験され得る。反応時間は、薄層クロマトグラフィーによって出発物質の消失をモニタリングすることにより決定され得る。
ＢにおけるＯＦＧ２が、可溶性または不溶性支持体試薬に接続されたリンカー、例えば比較的長い有機リンカーを含む場合、ＯＦＧ１が脱保護され、求電子基（例えば、アミダイト基）を含有する別のヌクレオシドまたはモノマーを有する求核剤として自由に作用すると、溶液または固相合成技術を用いて、天然および／または修飾リボヌクレオチドの鎖を作製し得る。あるいは、天然または修飾リボヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド鎖は、ＯＦＧ２におけるアミダイト基またはＨ−ホスホン酸基を介してモノマーＣにカップリングされ得る。この操作に続いて、ＯＦＧ１は非ブロック化され得、復元された求核ヒドロキシル基は、求電子基を含有する別のヌクレオシドまたはモノマーと反応し得る。Ｒ’は、置換または非置換アルキルまたはアルケニルであり得る。いくつかの実施形態では、Ｒ’は、メチル、アリルまたは２−シアノエチルである。Ｒ’’は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基、例えば、３つまたはそれを超える炭素を含有する分枝基、例えばイソプロピルであり得る。
ＢにおけるＯＦＧ２は、リンカーで官能化されたヒドロキシルであり得、そしてこれは、他のリンカー末端において液相または固相合成支持体試薬を含有する。この支持体試薬は、本明細書に記載されるモノマーを支持し得る支持体媒体であり得る。モノマーは、支持体が配置される溶媒におけるモノマー（および成長鎖）の可溶化を可能にするリンカーＬを介して不溶性支持体に結合され得る。可溶化されているが固定化されたモノマーは、周囲の溶媒中で試薬と反応し得る；未反応試薬および可溶性副産物は、モノマーまたはモノマー誘導生成物が結合した固体支持体から容易に洗い流され得る。あるいは、モノマーは、可溶性支持体部分、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に結合され得、液相合成技術を使用して鎖を作製し得る。リンカーおよび支持体媒体の選択は、当業者の範囲内である。一般に、リンカーは、−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑＳ−（式中、ｑは０、１、２、３または４であり得、リンカーは、好ましくはオキサリル、スクシニルまたはチオグリコリルである）であり得る。ガラスはフッ化物により分解されて、完全長生成物の量が有意に減少するので、標準対照多孔質ガラス固相合成支持体は、フッ化物不安定な５’シリル保護基と併せて使用され得ない。フッ化物安定なポリスチレンベースの支持体またはＰＥＧが好ましい。
リガンド／テザー結合点は、２価、３価、４価、５価または６価原子であり得る。いくつかの実施形態では、リガンド／テザー結合点は、炭素、酸素、窒素または硫黄原子であり得る。例えば、リガンド／テザー結合点前駆体官能基は、求核ヘテロ原子、例えば−ＳＨ、−ＮＨ２、第２級アミノ、ＯＮＨ２またはＮＨ２ＮＨ２を有し得る。別の例として、リガンド／テザー結合点前駆体官能基は、オレフィン、例えば−ＣＨ＝ＣＨ２またはＤｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒジエンまたは求ジエンであり得、前駆体官能基は、例えば遷移金属触媒による炭素−炭素（例えば、オレフィン・メタセシス）プロセスまたは付加環化（例えば、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ）を使用して、リガンド、テザーまたはテザーリガンドに結合され得る。さらなる例として、リガンド／テザー結合点前駆体官能基は、求電子部分、例えばアルデヒドであり得る。担体が環式担体である場合、リガンド／テザー結合点は、環内原子（すなわち、環式部分、例えば、窒素原子の構成原子）または環外原子（すなわち、環式部分中の構成原子に結合された原子または原子群）であり得る。
担体は、ＯＦＧ１、ＯＦＧ２およびリガンドに対する結合点を含有する任意の有機分子であり得る。特定の実施形態では、担体は環状分子であり、ヘテロ原子（例えば、Ｏ、ＮまたはＳ）を含有し得る。例えば、担体分子は、アリール（例えば、ベンゼン、ビフェニルなど）、シクロアルキル（例えば、シクロヘキサン、シスまたはトランスデカリンなど）またはヘテロシクリル（ピペラジン、ピロリジンなど）を含み得る。他の実施形態では、担体は、例えばセリノールベースの非環式部分であり得る。上記の環系はいずれも、ＯＦＧ１、ＯＦＧ２およびリガンドに加えて置換基を含み得る。
糖ベースのモノマー
いくつかの実施形態では、担体分子は酸素含有複素環である。いくつかの実施形態では、担体は、構造ＬＣＭ−Ｉで示されているリボース糖である。この実施形態では、リガンドコンジュゲートモノマーは、ヌクレオシドである。
「Ｂ」は、核酸塩基、例えば１つまたはそれを超える化学修飾を必要に応じて有する天然に存在する核酸塩基、例えば異常塩基；またはユニバーサル塩基を表す。
本明細書で使用される場合、「異常」核酸塩基は、以下のいずれか１つを含み得る：
２−メチルアデニニル（ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｉｎｙｌ）、Ｎ６−メチルアデニニル、２−メチルチオ−Ｎ６−メチルアデニニル、Ｎ６−イソペンテニルアデニニル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニニル、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデニニル、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデニニル、Ｎ６−グリシニルカルバモイルアデニニル、Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデニニル、２−メチルチオ−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデニニル、Ｎ６−メチル−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデニニル、Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデニニル、２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデニニル、
Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデニニル、３−メチルシトシニル、５−メチルシトシニル、２−チオシトシニル、５−ホルミルシトシニル、
Ｎ４−メチルシトシニル、５−ヒドロキシメチルシトシニル、１−メチルグアニニル、Ｎ２−メチルグアニニル、７−メチルグアニニル、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアニニル、Ｎ２，７−ジメチルグアニニル、Ｎ２，Ｎ２，７−トリメチルグアニニル、１−メチルグアニニル、７−シアノ−７−デアザグアニニル、７−アミノメチル−７−デアザグアニニル、プソイドウラシリル、ジヒドロウラシリル、５−メチルウラシリル、１−メチルプソイドウラシリル、２−チオウラシリル、４−チオウラシリル、２−チオチミニル、５−メチル−２−チオウラシリル、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウラシリル、５−ヒドロキシウラシリル、５−メトキシウラシリル、ウラシリル５−オキシ酢酸、ウラシリル５−オキシ酢酸メチルエステル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシリル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシリルメチルエステル、５−メトキシカルボニルメチルウラシリル、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウラシリル、５−アミノメチル−２−チオウラシリル、５−メチルアミノメチルウラシリル、５−メチルアミノメチル−２−チオウラシリル、５−メチルアミノメチル−２−セレノウラシリル、５−カルバモイルメチルウラシリル、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシリル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシリル、３−メチルウラシリル、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイドウラシリル、５−カルボキシメチルウラシリル、５−メチルジヒドロウラシリル、３−メチルプソイドウラシリル、
ユニバーサル塩基は、天然ＤＮＡ／ＲＮＡ塩基のそれぞれと塩基対を形成して、それらの間で比較的小さな違いを示し得る。一般に、ユニバーサル塩基は、スタッキング相互作用を介して、例えば二重鎖ＲＮＡまたはＲＮＡ類似分子を安定化し得る非水素結合、疎水性、芳香族部分である。ユニバーサル塩基はまた、水素結合置換基を含み得る。
本明細書で使用される場合、「ユニバーサル塩基」は、アントラセン、ピレンまたは以下のいずれか１つを含み得る：
いくつかの実施形態では、Ｂは、リガンドを担体に接続するテザーの一部を形成し得る。例えば、テザーは、Ｂ−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−（ＣＨ２）５−ＮＨＣ（Ｏ）−リガンドであり得る。好ましい実施形態では、二重結合はトランスであり、リガンドは、（例えば、Ｄ環側鎖またはＣ−３ヒドロキシルを通じて結合された）置換または非置換コレステロリルラジカル；少なくとも１つの立体中心と、アラルキル基のアリール部分における少なくとも１つの置換基とを有するアラルキル部分；または核酸塩基である。いくつかの実施形態では、上記テザーのＢは、ウラシリルまたはユニバーサル塩基、例えばさらなる置換基、例えば１つまたはそれを超えるフルオロ基を必要に応じて有するアリール部分、例えばフェニルである。Ｂは、任意の原子においてテザーの残り部分で置換されていてもよい。
Ｘ２は、２’−ＯＨの代わりに「オキシ」または「デオキシ」置換基を含み得るか、またはリガンドもしくはテザーリガンドであり得る。
「オキシ」置換基の例としては、アルコキシまたはアリールオキシ（ＯＲ、例えばＲ＝Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、糖または保護基）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ；例えばメチレン架橋により２’ヒドロキシルが同じリボース糖の４’炭素に接続された「ロックド」核酸（ＬＮＡ）；Ｏ−ＰＲＯＴＥＣＴＥＤ ＡＭＩＮＥ（ＡＭＩＮＥ＝ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノまたはジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノ）およびアミノアルコキシ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＰＲＯＴＥＣＴＥＤ ＡＭＩＮＥ、（例えば、ＡＭＩＮＥ＝ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノまたはジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノ）およびオルトエステルが挙げられる。アミン保護基は、ホルミル、アミド、ベンジル、アリルなどを含み得る。
いくつかの実施形態では、オルトエステルは一般式Ｊを有する。基Ｒ３１およびＲ３２は同じものまたは異なるものであり得、米国特許第７，５８２，７４４号（これは、参照により本明細書に組み込まれる）の図２Ｂに列挙されている基の任意の組み合わせであり得る。例示的なオルトエステルは、構造Ｋとして以下に示されている「ＡＣＥ」基である。
「デオキシ」置換基としては、水素（すなわち、デオキシリボース糖）；ハロ（例えば、フルオロ）；保護アミノ（例えば、ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノまたはすべてのアミノが保護されたアミノ酸）；完全保護ポリアミノ（例えば、ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｎＣＨ２ＣＨ２−ＡＭＩＮＥ（式中、ＡＭＩＮＥ＝ＮＨ２）；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノまたはジヘテロアリールアミノおよびすべてのアミノ基は保護されている）、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ（Ｒ＝アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたは糖類）、シアノ；アルキル−チオ−アルキル；チオアルコキシ；および例えば保護アミノ官能基で必要に応じて置換されていてもよいアルキル、シクロアルキル、アリール、アルケニルおよびアルキニルが挙げられる。好ましい置換基は、２’−メトキシエチル、２’−ＯＣＨ３、２’−Ｏ−アリル、２’−Ｃ−アリルおよび２’−フルオロである。
Ｘ３は、ＯＦＧ２について上記に記載されているとおりである。
ＰＧは、トリアリールメチル基（例えば、ジメトキシトリチル基）またはＳｉ（Ｘ５’）（Ｘ５’’）（Ｘ５’’’）であり得、（Ｘ５’）、（Ｘ５’’）および（Ｘ５’’’）は、他の箇所に記載されているとおりである。
糖置換ベースのモノマー
環式糖置換ベースのモノマー、例えば糖置換ベースのリガンドコンジュゲートモノマーは、本明細書では糖置換モノマーサブユニット（ＳＲＭＳ）モノマー化合物とも称される。好ましい担体は、以下に提供されている一般式（ＬＣＭ−２）を有する。（その構造では、好ましい骨格結合点は、Ｒ１もしくはＲ２；Ｒ３もしくはＲ４；またはＹがＣＲ９Ｒ１０である場合にはＲ９およびＲ１０から選択され得る（２つの位置は、２つの骨格結合点、例えばＲ１およびＲ４またはＲ４およびＲ９を与えるように選択される）。好ましいテザー結合点は、Ｒ７；ＸがＣＨ２である場合にはＲ５またはＲ６を含む。担体は、鎖に組み込まれ得る実体として以下に記載されている。したがって、構造はまた、結合点の１つ（末端位置の場合）または２つ（内部位置の場合）、例えばＲ１もしくはＲ２；Ｒ３もしくはＲ４；またはＲ９もしくはＲ１０（ＹがＣＲ９Ｒ１０の場合）がホスフェートまたは修飾ホスフェート、例えば硫黄含有骨格に接続された状況を包含すると理解され、例えば例えば、上記Ｒ基の１つは−ＣＨ２−であり得、ここで、一方の結合は担体に接続され、一方は骨格原子、例えば連結酸素または中心リン原子に接続される。
（式中、
ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７、ＮＲ７またはＣＨ２であり；
ＹはＮＲ８、Ｏ、Ｓ、ＣＲ９Ｒ１０であり；
ＺはＣＲ１１Ｒ１２であるか、または存在せず；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＲａまたは（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり、ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ９およびＲ１０の少なくとも２つはＯＲａおよび／または（ＣＨ２）ｎＯＲｂであり；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立して、リガンド、Ｈ、１〜３個のＲ１３で必要に応じて置換されているＣ１−Ｃ６アルキルもしくはＣ（Ｏ）ＮＨＲ７であるか；またはＲ５およびＲ１１は共に、Ｒ１４で必要に応じて置換されているＣ３−Ｃ８シクロアルキルであり；
Ｒ７はリガンドであり得、例えばＲ７はＲｄであり得るか、またはＲ７は、例えばテザー部分、例えばＮＲｃＲｄで置換されているＣ１−Ｃ２０アルキル；もしくはＮＨＣ（Ｏ）Ｒｄで置換されているＣ１−Ｃ２０アルキルを介して担体に間接的にテザーされたリガンドであり得；
Ｒ８はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１３はヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはハロであり；
Ｒ１４はＮＲｃＲ７であり；
Ｒ１５は、シアノで必要に応じて置換されているＣ１−Ｃ６アルキル基またはＣ２−Ｃ６アルケニルであり；
Ｒ１６はＣ１−Ｃ１０アルキルであり；
Ｒ１７は液相または固相支持体試薬であり；
Ｌは−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑＳ−であり；
Ｒａは保護基、例えばＣＡｒ３；（例えば、ジメトキシトリチル基）またはＳｉ（Ｘ５’）（Ｘ５’’）（Ｘ５’’’）であり、（Ｘ５’）、（Ｘ５’’）および（Ｘ５’’’）は他の箇所に記載されているとおりであり；
ＲｂはＰ（Ｏ）（Ｏ−）Ｈ、Ｐ（ＯＲ１５）Ｎ（Ｒ１６）２またはＬ−Ｒ１７であり；
ＲｃはＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
ＲｄはＨまたはリガンドであり；
各Ａｒは独立して、Ｃ１−Ｃ４アルコキシで必要に応じて置換されているＣ６−Ｃ１０アリールであり；
ｎは１〜４であり；ｑは０〜４である）
例示的な担体としては、例えばＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７もしくはＮＲ７であり、ＹはＣＲ９Ｒ１０であり、Ｚは存在しないか；またはＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７もしくはＮＲ７であり、ＹはＣＲ９Ｒ１０であり、ＺはＣＲ１１Ｒ１２であるか；またはＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７もしくはＮＲ７であり、ＹはＮＲ８であり、ＺはＣＲ１１Ｒ１２であるか；またはＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７もしくはＮＲ７であり、ＹはＯであり、ＺはＣＲ１１Ｒ１２であるか；またはＸはＣＨ２であり；ＹはＣＲ９Ｒ１０であり；ＺはＣＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ５およびＲ１１は共にＣ６シクロアルキル（Ｈ、ｚ＝２）を形成するもの、またはインダン環系、例えばＸはＣＨ２であり；ＹはＣＲ９Ｒ１０であり；ＺはＣＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ５およびＲ１１は共にＣ５シクロアルキル（Ｈ、ｚ＝１）を形成するものが挙げられる。
特定の実施形態では、担体は、ピロリン環系または４−ヒドロキシプロリン環系をベースとするものであり得、例えば、ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり、ＹはＣＲ９Ｒ１０であり、Ｚは存在しない（Ｄ）。ＯＦＧ１は、好ましくは、５員環における炭素の１つに接続した第１級炭素、例えば環外アルキレン
基、例えばメチレン基に結合している（Ｄにおける−ＣＨ２ＯＦＧ１）。ＯＦＧ２は、好ましくは、５員環における炭素の１つに直接的に結合している（Ｄにおける−ＯＦＧ２）。ピロリンベースの担体では、−ＣＨ２ＯＦＧ１はＣ−２に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−３に結合し得るか；または−ＣＨ２ＯＦＧ１はＣ−３に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−４に結合し得る。いくつかの実施形態では、ＣＨ２ＯＦＧ１およびＯＦＧ２は、上記で参照されている炭素の１つにジェミナルに置換され得る。３−ヒドロキシプロリンベースの担体では、−ＣＨ２ＯＦＧ１はＣ−２に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−４に結合し得る。したがって、ピロリン−および４−ヒドロキシプロリンベースのモノマーは、結合回転がその特定の結合について制限された結合（例えば、炭素−炭素結合）を含有し得る（例えば、環の存在による制限）。したがって、ＣＨ２ＯＦＧ１およびＯＦＧ２は、上記で示されている対のいずれにおいても、互いにシスまたはトランスであり得る。したがって、すべてのシス／トランス異性体が明示的に含まれる。モノマーはまた、１つまたはそれを超える不斉中心を含有し得るので、ラセミ体およびラセミ混合物、単一のエナンチオマー、個々のジアステレオマーならびにジアステレオマー混合物として存在し得る。すべてのこのような異性体型のモノマーが明示的に含まれる（例えば、ＣＨ２ＯＦＧ１およびＯＦＧ２を有する中心は両方とも、Ｒ配置を有し得るか；または両方ともＳ配置を有し得るか；または一方の中心はＲ配置を有し得、他方の中心はＳ配置を有し得る（逆もまた同様である））。テザー結合点は、好ましくは窒素である。担体Ｄの好ましい例としては、以下のものが挙げられる：
特定の実施形態では、担体は、ピペリジン環系（Ｅ）（例えば、ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり、ＹはＣＲ９Ｒ１０であり、ＺはＣＲ１１Ｒ１２である）をベースとするものであり得る。ＯＦＧ１は、好ましくは、６員環における炭素の１つに接続した第１級炭素、例えば環外アルキレン基、例えばメチレン基（ｎ＝１）またはエチレン基（ｎ＝２）に結合した
である［Ｅにおける−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１］。
ＯＦＧ２は、好ましくは、６員環の炭素の１つに直接的に結合している（Ｅにおける−ＯＦＧ２）。−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１およびＯＦＧ２は、環上でジェミナルに配置され得る（すなわち、両基は、例えば、Ｃ−２、Ｃ−３またはＣ−４において同じ炭素に結合し得る）。あるいは、−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１およびＯＦＧ２は、環上で近接して配置され得る（すなわち、両基は隣接環炭素原子に結合し得、例えば、−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１はＣ−２に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−３に結合し得る；−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１はＣ−３に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−２に結合し得る；−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１はＣ−３に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−４に結合し得る；または−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１はＣ−４に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−３に結合し得る）。したがって、ピペリジンベースのモノマーは、結合回転がその特定の結合について制限された結合（例えば、炭素−炭素結合）を含有し得る（例えば、環の存在による制限）。したがって、−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１およびＯＦＧ２は、上記で示されている対のいずれにおいても、互いにシスまたはトランスであり得る。したがって、すべてのシス／トランス異性体が明示的に含まれる。モノマーはまた、１つまたはそれを超える不斉中心を含有し得るので、ラセミ体およびラセミ混合物、単一のエナンチオマー、個々のジアステレオマーならびにジアステレオマー混合物として存在し得る。すべてのこのような異性体型のモノマーが明示的に含まれる（例えば、ＣＨ２ＯＦＧ１およびＯＦＧ２を有する中心は両方とも、Ｒ配置を有し得るか；または両方ともＳ配置を有し得るか；または一方の中心はＲ配置を有し得、他方の中心はＳ配置を有し得る（逆もまた同様である））。テザー結合点は、好ましくは、窒素である。
特定の実施形態では、担体は、ピペラジン環系（Ｆ）（例えば、ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり、ＹはＮＲ８であり、ＺはＣＲ１１Ｒ１２である）またはモルホリン環系（Ｇ）（例えば、ＸはＮ（ＣＯ）Ｒ７またはＮＲ７であり、ＹはＯであり、ＺはＣＲ１１Ｒ１２である）をベースとするものであり得る。ＯＦＧ１は、好ましくは、６員環における炭素の１つに接続した第１級炭素、例えば環外アルキレン基、例えばメチレン基に結合した
である（ＦまたはＧにおける−ＣＨ２ＯＦＧ１）。ＯＦＧ２は、好ましくは、６員環における炭素の１つに直接的に結合している（ＦまたはＧにおける−ＯＦＧ２）。ＦおよびＧの両方について、−ＣＨ２ＯＦＧ１はＣ−２に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−３に結合し得る；または逆もまた同様である。特定の実施形態では、ＣＨ２ＯＦＧ１およびＯＦＧ２は、上記炭素の１つにジェミナルに置換され得る。したがって、ピペラジンベースのモノマーおよびモルホリンベースのモノマーは、結合回転がその特定の結合について制限された結合（例えば、炭素−炭素結合）を含有し得る（例えば、環の存在による制限）。したがって、ＣＨ２ＯＦＧ１およびＯＦＧ２は、上記で示されている対のいずれにおいても、互いにシスまたはトランスであり得る。したがって、すべてのシス／トランス異性体が明示的に含まれる。モノマーはまた、１つまたはそれを超える不斉中心を含有し得るので、ラセミ体およびラセミ混合物、単一のエナンチオマー、個々のジアステレオマーならびにジアステレオマー混合物として存在し得る。すべてのこのような異性体型のモノマーが明示的に含まれる（例えば、ＣＨ２ＯＦＧ１およびＯＦＧ２を有する中心は両方とも、Ｒ配置を有し得るか；または両方ともＳ配置を有し得るか；または一方の中心はＲ配置を有し得、他方の中心はＳ配置を有し得る（逆もまた同様である））。Ｒ’’’は、例えば、Ｃ１−Ｃ６アルキル、好ましくは、ＣＨ３であり得る。テザー結合点は、好ましくは、ＦおよびＧの両方において窒素である。
特定の実施形態では、担体は、デカリン環系（例えば、ＸはＣＨ２であり；ＹはＣＲ９Ｒ１０であり；ＺはＣＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ５およびＲ１１は一緒にＣ６シクロアルキルを形成する（Ｈ、ｚ＝２））またはインダン環系（例えば、ＸはＣＨ２であり；ＹはＣＲ９Ｒ１０であり；ＺはＣＲ１１Ｒ１２であり、Ｒ５およびＲ１１は一緒にＣ５シクロアルキルを形成する（Ｈ、ｚ＝１））をベースとするものであり得る。ＯＦＧ１は、好ましくは、Ｃ−２、Ｃ−３、Ｃ−４またはＣ−５の１つに接続した第１級炭素
例えば、環外メチレン基（ｎ＝１）またはエチレン基（ｎ＝２）に結合している［Ｈにおける−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１］。ＯＦＧ２は、好ましくは、Ｃ−２、Ｃ−３、Ｃ−４またはＣ−５の１つのに直接的に結合している（Ｈにおける−ＯＦＧ２）。−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１およびＯＦＧ２は、環上でジェミナルに配置され得る（すなわち、両基は、例えば、Ｃ−２、Ｃ−３、Ｃ−４またはＣ−５において同じ炭素に結合し得る）。あるいは、−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１およびＯＦＧ２は、環上で近接して配置され得る（すなわち、両基は隣接環炭素原子に結合し得、例えば、−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１はＣ−２に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−３に結合し得る；−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１はＣ−３に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−２に結合し得る；−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１はＣ−３に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−４に結合し得る；または−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１はＣ−４に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−３に結合し得る；−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１はＣ−４に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−５に結合し得る；または−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１はＣ−５に結合し得、ＯＦＧ２はＣ−４に結合し得る）。したがって、デカリンまたはインダンベースのモノマーは、結合回転がその特定の結合について制限された結合（例えば、炭素−炭素結合）を含有し得る（例えば、環の存在による制限）。したがって、−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１およびＯＦＧ２は、上記で示されている対のいずれにおいても、互いにシスまたはトランスであり得る。したがって、すべてのシス／トランス異性体が明示的に含まれる。モノマーはまた、１つまたはそれを超える不斉中心を含有し得るので、ラセミ体およびラセミ混合物、単一のエナンチオマー、個々のジアステレオマーならびにジアステレオマー混合物として存在し得る。すべてのこのような異性体型のモノマーが明示的に含まれる（例えば、ＣＨ２ＯＦＧ１およびＯＦＧ２を有する中心は両方とも、Ｒ配置を有し得るか；または両方ともＳ配置を有し得るか；または一方の中心はＲ配置を有し得、他方の中心はＳ配置を有し得る（逆もまた同様である））。好ましい実施形態では、Ｃ−１およびＣ−６における置換基は、互いにトランスある。テザー結合点は、好ましくは、Ｃ−６またはＣ−７である。
他の担体は、３−ヒドロキシプロリンをベースとするものを含み得る（Ｊ）。したがって、−（ＣＨ２）ｎＯＦＧ１およびＯＦＧ２は、互いにシスまたはトランスであり得る。したがって、すべてのシス／トランス異性体が明示的に含まれる。モノマーはまた、１つまたはそれを超える不斉中心を含有し得るので、
ラセミ体およびラセミ混合物、単一のエナンチオマー、個々のジアステレオマーならびにジアステレオマー混合物として存在し得る。すべてのこのような異性体型のモノマーが明示的に含まれる（例えば、ＣＨ２ＯＦＧ１およびＯＦＧ２を有する中心は両方とも、Ｒ配置を有し得るか；または両方ともＳ配置を有し得るか；または一方の中心はＲ配置を有し得、他方の中心はＳ配置を有し得る（逆もまた同様である））。テザー結合点は、好ましくは窒素である。
代表的な環式糖置換ベースの担体は、米国特許第７，５８２，７４４号（これは、参照により本明細書に組み込まれる）の図３に示されている。
糖置換ベースのモノマー（非環式）
非環式糖置換ベースのモノマー、例えば糖置換ベースのリガンドコンジュゲートモノマーは、本明細書では糖置換モノマーサブユニット（ＳＲＭＳ）モノマー化合物とも称される。好ましい非環式担体は、以下の式ＬＣＭ−３またはＬＣＭ−４を有し得る。
いくつかの実施形態では、ｘ、ｙおよびｚはそれぞれ互いに独立して、０、１、２または３であり得る。式ＬＣＭ−３では、ｙおよびｚが異なる場合、第３級炭素は、Ｒ配置またはＳ配置のいずれかであり得る。好ましい実施形態では、式ＬＣＭ−３では、ｘは０であり、ｙおよびｚはそれぞれ１であり（例えば、セリノールに基づく）、式ＬＣＭ−３では、ｙおよびｚはそれぞれ１である。以下の式ＬＣＭ−３またはＬＣＭ−４はそれぞれ、例えば、ヒドロキシ、アルコキシ、ペルハロアルキルで必要に応じて置換されていてもよい。
テザー
特定の実施形態では、部分、例えばリガンドは、介在テザーの仲介を介して担体に間接的に接続され得る。テザーは、テザー結合点（ＴＡＰ）において担体に接続され、好ましくは少なくとも１つの窒素原子を有する任意のＣ１−Ｃ１００炭素含有部分（例えば、Ｃ１−Ｃ７５、Ｃ１−Ｃ５０、Ｃ１−Ｃ２０、Ｃ１−Ｃ１０、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９またはＣ１０）を含み得る。好ましい実施形態では、窒素原子は、リガンドのための接続点として機能し得るテザー上に末端アミノまたはアミド（ＮＨＣ（Ｏ）−）基の一部を形成する。好ましいテザー（下線）としては、ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎＮＨ−；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨ−；ＴＡＰ−ＮＲ’’’’（ＣＨ２）ｎＮＨ−、ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−；ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−；ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−；ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎ−；またはＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−（式中、ｎは、１〜２０（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）であり、Ｒ’’’’はＣ１−Ｃ６アルキルである。好ましくは、ｎは、５、６または１１である）が挙げられる。他の実施形態では、窒素は、末端オキシアミノ基、例えば−ＯＮＨ２またはヒドラジノ基、−ＮＨＮＨ２の一部を形成し得る。テザーは、例えばヒドロキシ、アルコキシ、ペルハロアルキルで必要に応じて置換されていてもよく、および／または１つもしくはそれを超えるさらなるヘテロ原子、例えばＮ、ＯまたはＳが必要に応じて挿入されていてもよい。好ましいテザーリガンドとしては、例えばＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎＮＨ（リガンド）；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨ（リガンド）；ＴＡＰ−ＮＲ’’’’（ＣＨ２）ｎＮＨ（リガンド）；ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎＯＮＨ（リガンド）、ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＯＮＨ（リガンド）；ＴＡＰ−ＮＲ’’’’（ＣＨ２）ｎＯＮＨ（リガンド）；ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎＮＨＮＨ２（リガンド）；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＮＨＮＨ２（リガンド）；ＴＡＰ−ＮＲ’’’’（ＣＨ２）ｎＮＨＮＨ２（リガンド）；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）（リガンド）；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）Ｏ（リガンド）；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ（リガンド）；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）（リガンド）；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ（リガンド）；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ（リガンド）；ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）（リガンド）；ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）（リガンド）；ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）Ｏ（リガンド）；ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎ（リガンド）；またはＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）（リガンド）が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、アミノ末端テザー（例えば、ＮＨ２、ＯＮＨ２、ＮＨ２ＮＨ２）は、リガンドとイミノ結合（すなわち、Ｃ＝Ｎ）を形成し得る。いくつかの実施形態では、アミノ末端テザー（例えば、ＮＨ２、ＯＮＨ２、ＮＨ２ＮＨ２）は、例えばＣ（Ｏ）ＣＦ３でアシル化され得る。
いくつかの実施形態では、テザーは、メルカプト基（すなわち、ＳＨ）またはオレフィン（例えば、ＣＨ＝ＣＨ２）で終了し得る。例えば、テザーは、ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＨ、ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＳＨ、ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨ＝ＣＨ２）またはＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎ（ＣＨ＝ＣＨ２）（式中、ｎは、他の箇所に記載されているとおりであり得る）であり得る。特定の実施形態では、オレフィンは、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒジエンまたはジエノフィルであり得る。テザーは、例えばヒドロキシ、アルコキシ、ペルハロアルキルで必要に応じて置換されていてもよく、および／または１つもしくはそれを超えるさらなるヘテロ原子、例えばＮ、ＯまたはＳが必要に応じて挿入されていてもよい。二重結合は、シスもしくはトランスまたはＥもしくはＺであり得る。
他の実施形態では、テザーは、好ましくはテザーの末端位置において求電子部分を含み得る。好ましい求電子部分としては、例えばアルデヒド、ハロゲン化アルキル、メシレート、トシレート、ノシレートまたはブロシレートまたは活性カルボン酸エステル、例えばＮＨＳエステルまたはペンタフルオロフェニルエステルが挙げられる。好ましいテザー（下線）としては、ＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎＣＨＯ、ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＨＯもしくはＴＡＰ−ＮＲ’’’’（ＣＨ２）ｎＣＨＯ（式中、ｎは１〜６であり、Ｒ’’’’はＣ１−Ｃ６アルキルである）；またはＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＯＮＨＳ、ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＯＮＨＳもしくはＴＡＰ−ＮＲ’’’’（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＯＮＨＳ（式中、ｎは１〜６であり、Ｒ’’’’はＣ１−Ｃ６アルキルである）；またはＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＯＣ６Ｆ５、ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＯＣ６Ｆ５もしくはＴＡＰ−ＮＲ’’’’（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＯＣ６Ｆ５（式中、ｎは１〜１１であり、Ｒ’’’’はＣ１−Ｃ６アルキルである）；または−（ＣＨ２）ｎＣＨ２ＬＧ、ＴＡＰ−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＨ２ＬＧもしくはＴＡＰ−ＮＲ’’’’（ＣＨ２）ｎＣＨ２ＬＧ（式中、ｎは他の箇所に記載されているとおりであり、Ｒ’’’’はＣ１−Ｃ６アルキルである）（ＬＧは離脱基、例えばハロゲン化物、メシレート、トシレート、ノシレート、ブロシレートであり得る）が挙げられる。テザーは、リガンドの求核基、例えばチオール、アミノ基をテザー上の求電子基とカップリングすることにより行われ得る。
他の実施形態では、前記リガンドコンジュゲートモノマーまたはリガンドコンジュゲートモノマーが、テザーの末端位置においてフタルイミド基（Ｋ）を含むことが望ましい場合がある。
他の実施形態では、他の保護アミノ基は、テザーの末端位置、例えばａｌｌｏｃ、モノメトキシトリチル（ＭＭＴ）、トリフルオロアセチル、Ｆｍｏｃまたはアリールスルホニルにあり得る（例えば、アリール部分は、オルト−ニトロフェニルまたはオルト、パラ−ジニトロフェニルであり得る）。
本明細書に記載されるテザーはいずれも、１つまたはそれを超えるさらなる連結基、例えば−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＳ−、−（ＣＨ２）ｎ−または−（ＣＨ＝ＣＨ）−をさらに含み得る。
テザーリガンド
多種多様な実体が、オリゴヌクレオチド剤に、例えばリガンドコンジュゲートモノマーの担体にテザーされ得る。例は、リガンドコンジュゲートモノマーとの関連で以下に記載されているが、好ましい実施形態の１つに過ぎない。実体は、他の地点においてオリゴヌクレオチド剤にカップリングされ得る。
オリゴヌクレオチド剤（例えば、ｍｉＲＮＡをターゲティングするオリゴヌクレオチド剤）にテザーされたリガンドは、前記薬剤に対する有利な効果を有し得る。例えば、リガンドは、安定性、標的核酸とのハイブリダイゼーション熱力学、特定の組織または細胞型に対するターゲティングまたは例えばエンドサイトーシス依存性もしくは非依存性機構による細胞透過性を改善し得る。リガンドおよび関連修飾はまた、配列特異性を増加させ、その結果として、オフサイトターゲティングを減少させ得る。
テザーリガンドは、インターカレーターとして機能し得る１つまたはそれを超える修飾塩基または糖を含み得る。これらは、好ましくは内部領域、例えばｍｉＲＮＡ／標的二重鎖のバルジに位置する。インターカレーターは、芳香族、例えば多環芳香族または複素環芳香族化合物であり得る。多環式インターカレーターはスタッキング能力を有し得、２、３または４個の縮合環を有する系を含み得る。本明細書に記載されるユニバーサル塩基は、リガンドに含められ得る。
一実施形態では、リガンドは、標的核酸の切断により標的遺伝子阻害に寄与する脱離基を含み得る。脱離基は、例えばブレオマイシン（例えば、ブレオマイシン−Ａ５、ブレオマイシン−Ａ２またはブレオマイシン−Ｂ２）、ピレン、フェナントロリン（例えば、Ｏ−フェナントロリン）、ポリアミン、トリペプチド（例えば、ｌｙｓ−ｔｙｒ−ｌｙｓトリペプチド）または金属イオンキレート基であり得る。金属イオンキレート基は、例えばＬｕ（ＩＩＩ）またはＥＵ（ＩＩＩ）大環状錯体、Ｚｎ（ＩＩ）２，９−ジメチルフェナントロリン誘導体、Ｃｕ（ＩＩ）テルピリジンまたはアクリジン（これらは、Ｌｕ（ＩＩＩ）などの遊離金属イオンによるバルジ部位における標的ＲＮＡの選択的切断を促進し得る）を含み得る。いくつかの実施形態では、例えばバルジ領域における標的ＲＮＡの切断を促進するために、ペプチドリガンドがｍｉＲＮＡにテザーされ得る。例えば、標的ＲＮＡ切断を促進するために、１，８−ジメチル−１，３，６，８，１０，１３−ヘキサアザシクロテトラデカン（シクラム）が（例えば、アミノ酸誘導体により）ペプチドにコンジュゲートされ得る。
テザーリガンドは、アミノグリコシドリガンド（これにより、オリゴヌクレオチド剤は、改善されたハイブリダイゼーション特性、または改善された配列特異性を有し得る）であり得る。例示的なアミノグリコシドとしては、グリコシル化ポリリシン、ガラクトシル化ポリリシン、ネオマイシンＢ、トブラマイシン、カナマイシンＡおよびアミノグリコシドのアクリジンコンジュゲート、例えばＮｅｏ−Ｎ−アクリジン、Ｎｅｏ−Ｓ−アクリジン、Ｎｅｏ−Ｃ−アクリジン、Ｔｏｂｒａ−Ｎ−アクリジンおよびＫａｎａＡ−Ｎ−アクリジンが挙げられる。アクリジン類似体の使用は、配列特異性を増加させ得る。例えば、ネオマイシンＢは、ＤＮＡと比較して高いＲＮＡ親和性を有するが、配列特異性が低い。アクリジン類似体であるｎｅｏ−Ｓ−アクリジンは、ＨＩＶ Ｒｅｖ応答エレメント（ＲＲＥ）に対する増加した親和性を有する。いくつかの実施形態では、アミノグリコシドリガンドのグアニジン類似体（グアニジノグリコシド）は、オリゴヌクレオチド剤にテザーされる。グアニジノグリコシドでは、アミノ酸のアミン基がグアニジン基に交換されている。グアニジン類似体の結合は、オリゴヌクレオチド剤、例えばｍｉＲＮＡまたはプレｍｉＲＮＡをターゲティングするオリゴヌクレオチド剤の細胞透過性を増強し得る。
テザーリガンドは、ポリアルギニンペプチド、ペプトイドまたはペプチド模倣物（これらは、オリゴヌクレオチド剤の細胞取り込みを増強し得る）であり得る。
好ましい部分は、好ましくは共有結合的に、直接的または介在テザーを介して間接的にリガンドコンジュゲート担体にカップリングされるリガンドである。好ましい実施形態では、リガンドは、介在テザーを介して担体に結合される。上述のように、モノマーが成長鎖に組み込まれる場合、リガンドまたはテザーリガンドはモノマー上に存在し得る。いくつかの実施形態では、リガンドは、「前駆体」であるリガンドコンジュゲートモノマーが成長鎖に組み込まれた後に、「前駆体」であるリガンドコンジュゲートモノマーサブユニットに組み込まれ得る。例えば、アミノ末端テザー、例えばＴＡＰ−（ＣＨ２）ｎＮＨ２を有するモノマーは、成長オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれ得る。その後の操作では、すなわち、鎖への前駆体モノマーの組み込み後、求電子基、例えばペンタフルオロフェニルエステルまたはアルデヒド基を有するリガンドは、続いて、リガンドの求電子基を前駆体モノマーサブユニットテザーの末端求核基にカップリングすることにより前駆体モノマーサブユニットに結合され得る。
好ましい実施形態では、リガンドは、それが組み込まれたオリゴヌクレオチド剤の分布、ターゲティングまたは寿命を変化させる。好ましい実施形態では、リガンドは、例えば、リガンドなどの種が非存在の場合と比較して、選択された標的、例えば分子、細胞または細胞型、コンパートメント、例えば細胞内または器官内コンパートメント、組織、器官または身体の領域に対する増強した親和性を提供する。
好ましいリガンドは、輸送、ハイブリダイゼーションおよび特異性の特性を改善し得、得られる天然もしくは修飾オリゴヌクレオチド、または本明細書に記載されるモノマーの任意の組み合わせおよび／または天然もしくは修飾リボヌクレオチドを含む高分子のヌクレアーゼ耐性も改善し得る。
リガンドは、一般に、例えば取り込みを増強するための治療用修飾剤、例えば分布をモニタリングするための診断用化合物またはレポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性付与部分および天然または異常核酸塩基を含み得る。一般的な例としては、脂質親和体、脂質、ステロール、ステロイド（例えば、ウバオール、ヘコゲニン、ジオスゲニン）、テルペン（例えば、トリテルペン、例えば、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン（例えば、葉酸、ビタミンＡ、ビオチン、ピリドキサール）、炭水化物、タンパク質、タンパク結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン剤、ペプチド、ポリアミンおよびペプチド模倣物が挙げられる。
リガンドは、天然に存在する物質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）またはグロブリン）、炭水化物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリンまたはヒアルロン酸）、アミノ酸または脂質を含み得る。リガンドはまた、組換えまたは合成分子、例えば合成高分子、例えば、合成ポリアミノ酸であり得る。ポリアミノ酸の例としては、ポリリシン（ＰＬＬ）、ポリＬ−アスパラギン酸、ポリＬ−グルタミン酸、スチレン無水マレイン酸共ポリマー、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）コポリマー、ジビニルエーテル無水マレイン酸共ポリマー、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド共ポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２−エチルアクリル酸）、Ｎ−イソプロピルアクリルアミドポリマーまたはポリホスファジンが挙げられる。ポリアミンの例としては、ポリエチレンイミン、ポリリシン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、擬ペプチドポリアミン、ペプチド模倣（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの第４級塩またはアルファヘリックスペプチドが挙げられる。
リガンドはまた、ターゲティング基、例えば細胞または組織ターゲティング剤、例えば指定の細胞型、例えば腎細胞に結合するレクチン、糖タンパク質、脂質またはタンパク質、例えば抗体を含み得る。ターゲティング基は、甲状腺刺激ホルモン、メラノトロピン、レクチン、糖タンパク質、サーファクタント・タンパク質Ａ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチル−グルコサミン、多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタミン酸塩、ポリアスパラギン酸塩、脂質、コレステロール、ステロール、ステロイド、胆汁酸、葉酸塩、ビタミンＢ１２、ビオチンまたはＲＧＤペプチドもしくはＲＧＤペプチド模倣物であり得る。
リガンドの他の例としては、色素、挿入剤（例えば、アクリジンおよび置換アクリジン）、架橋剤（例えば、プソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サップフィリン）、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン、フェナントロリン、ピレン）、ｌｙｓ−ｔｙｒ−ｌｙｓトリペプチド、アミノグリコシド、グアニジウム・アミノグリコシド、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性分子、例えばコレステロール（およびそのチオ類似体）、コール酸、コラン酸、リトコール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、グリセロール（例えば、エステル（例えば、モノ、ビスまたはトリス脂肪酸エステル、例えばＣ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９またはＣ２０脂肪酸）およびそのエーテル、例えばＣ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９またはＣ２０アルキル、例えば１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、１，３−ビス−Ｏ（オクタデシル）グリセロール）、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ステアリン酸（例えば、ジステアリン酸グリセリル（ｇｙｃｅｒｙｌ ｄｉｓｔｅａｒａｔｅ））、オレイン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジン）およびペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化薬、ホスフェート、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射性標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ナプロキセン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾール・クラスタ、アクリジン−イミダゾールコンジュゲート、テトラアザマクロサイクルのＥｕ３＋錯体）、ジニトロフェニル、ＨＲＰまたはＡＰが挙げられる。
リガンドは、タンパク質、例えば糖タンパクまたはペプチド、例えばコリガンドまたは抗体、例えば指定の細胞型、例えば癌細胞、内皮細胞または骨細胞に結合する抗体に対する特異的親和性を有する分子であり得る。リガンドはまた、ホルモンおよびホルモン受容体を含み得る。それらはまた、非ペプチド種、例えば脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチル−グルコサミン多価マンノースまたは多価フコースを含み得る。リガンドは、例えばリポ多糖、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼの活性化剤またはＮＦ−κＢの活性化剤であり得る。
リガンドは、例えば細胞骨格を破壊することにより、例えば細胞の微小管、微小繊維および／または中間径繊維を破壊することにより、細胞へのオリゴヌクレオチド剤の取り込みを増加させ得る物質、例えば薬物であり得る。薬物は、例えばタキソン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、サイトカラシン、ノコダゾール、ジャプラキノリド、ラトランクリンＡ、ファロイジン、スウィンホライドＡ、インダノシンまたはミオセルビンであり得る。
リガンドは、例えば炎症反応を活性化することにより、細胞へのオリゴヌクレオチド剤の取り込みを増加させ得る。このような効果を有する例示的なリガンドとしては、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦアルファ）、インターロイキン−１ベータまたはガンマインターフェロンが挙げられる。
一態様では、リガンドは、脂質または脂質ベースの分子である。このような脂質または脂質ベースの分子は、好ましくは血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に結合する。ＨＳＡ結合リガンドは、標的組織、例えば身体の非腎標的組織へのコンジュゲートの分配を可能にする。例えば、標的組織は、肝臓の実質細胞を含む肝臓であり得る。ＨＳＡに結合し得る他の分子もまた、リガンドとして使用され得る。例えば、ネプロキシンまたはアスピリンが使用され得る。脂質または脂質ベースのリガンドは、（ａ）コンジュゲートの分解に対する耐性を増加させ得、（ｂ）標的細胞もしくは細胞膜へのターゲティングもしくは輸送を増加させ得、および／または（ｃ）血清タンパク質、例えばＨＳＡへの結合を調整するために使用され得る。
脂質ベースのリガンドは、標的組織へのコンジュゲートの結合をモジュレート、例えば制御するために使用され得る。例えば、ＨＳＡにより強く結合する脂質または脂質ベースのリガンドは、腎臓にターゲティングされる可能性が低いので、身体から取り除かれる可能性が低い。ＨＳＡにより強く結合しない脂質または脂質ベースのリガンドは、コンジュゲートを腎臓にターゲティングするために使用され得る。
実施形態では、脂質ベースのリガンドはＨＳＡに結合する。脂質ベースのリガンドは、コンジュゲートが好ましくは非腎組織に分配されるような十分な親和性でＨＳＡに結合し得る。しかしながら、親和性は、ＨＳＡリガンド結合が反転され得ないほど強くないことが好ましい。
別の好ましい実施形態では、脂質ベースのリガンドは、コンジュゲートが腎臓に分配されるように、ＨＳＡに弱く結合するかまたは全く結合しない。腎細胞をターゲティングする他の部分もまた、脂質ベースのリガンドの代わりにまたはそれに加えて使用され得る。
別の態様では、リガンドは、標的細胞、例えば増殖細胞により取り込まれる部分、例えばビタミンである。これらは、例えば悪性または非悪性タイプの例えば癌細胞の望ましくない細胞増殖を特徴とする障害を処置するために特に有用である。例示的なビタミンとしては、ビタミンＡ、ＥおよびＫが挙げられる。他の例示的なビタミンとしては、ビタミンＢ、例えば葉酸、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、ピリドキサールまたは癌細胞により取り込まれる他のビタミンもしくは栄養素が挙げられる。また、ＨＳＡおよび低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）が含まれる。
別の態様では、リガンドは、細胞透過剤、好ましくはヘリックス細胞透過剤である。好ましくは、薬剤は両親媒性である。例示的な薬剤は、ペプチド、例えばｔａｔまたはアンテナペディアである。薬剤がペプチドである場合、それは、ペプチジル模倣物、インバートマー、非ペプチドまたは擬ペプチド結合およびＤ−アミノ酸の使用を含めて修飾され得る。ヘリックス薬剤は、好ましくは親油性相および疎油性相を有する好ましくはアルファヘリックス薬剤である。
増殖細胞において豊富なマーカーをターゲティングするペプチドが使用され得る。例えば、ペプチドおよびペプチド模倣物を含むＲＧＤは、癌細胞、特にαｖβ３インテグリンを示す細胞をターゲティングし得る。したがって、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤを含有する環状ペプチド、Ｄ−アミノ酸を含むＲＧＤペプチド、および合成ＲＧＤ模倣物を使用し得る。ＲＧＤに加えて、αｖ−β３インテグリンリガンドをターゲティングする他の部分を使用し得る。一般に、このようなリガンドは、増殖細胞および血管新生を制御するために使用され得る。この種類の好ましいコンジュゲートは、ＰＥＣＡＭ−１、ＶＥＧＦまたは他の癌遺伝子、例えば本明細書に記載される癌遺伝子をターゲティングするオリゴヌクレオチド剤を含む。
本発明のオリゴヌクレオチド剤は、肝臓にターゲティングされる場合に特に有用である。例えば、本発明において特徴的な一本鎖オリゴヌクレオチド剤は、肝臓において豊富なｍｉＲＮＡをターゲティングし、オリゴヌクレオチド剤は、肝臓への増強された送達のためのリガンドを含み得る。オリゴヌクレオチド剤は、肝臓をターゲティングするリガンドにより誘導体化されたモノマーの組み込みにより肝臓にターゲティングされ得る。例えば、肝臓ターゲティング剤は、親油性部分であり得る。好ましい親油性部分としては、脂質、コレステロール、オレイル、レチニルまたはコレステリル残基が挙げられる。肝臓ターゲティング剤として機能し得る他の親油性部分としては、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジンが挙げられる。
オリゴヌクレオチド剤はまた、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、例えばラクトシル化ＬＤＬとの会合により肝臓にターゲティングされ得る。糖残基と複合体形成した高分子担体はまた、オリゴヌクレオチド剤を肝臓にターゲティングするように機能し得る。
糖、例えばガラクトースおよび／またはその類似体を組み込んだターゲティング剤は、特に有用である。これらの薬剤は、特に肝臓の実質細胞をターゲティングする。例えば、ターゲティング部分は、互いから約１５オングストローム離れて、１つを超えるまたは好ましくは２つもしくは３つのガラクトース部分を含み得る。あるいは、ターゲティング部分は、ラクトース（例えば、３つのラクトース部分）（これは、ガラクトースにカップリングされたグルコースである）であり得る。ターゲティング部分はまた、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−Ａｃ−グルコサミンであり得る。マンノースまたはマンノース−６−ホスフェートターゲティング部分は、マクロファージターゲティングに使用され得る。
リガンドは、ペプチドまたはペプチド模倣物であり得る。ペプチド模倣物（本明細書ではオリゴペプチド模倣物とも称される）は、天然ペプチドに類似の所定の３次元構造にフォールディングすることができる分子である。オリゴヌクレオチド剤へのペプチドおよびペプチド模倣物の結合は、例えば細胞認識および吸収を増強することにより、ｉＲＮＡの薬物動態分布に影響を及ぼし得る。ペプチドまたはペプチド模倣物部分は、約５〜５０アミノ酸長、例えば約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０アミノ酸長であり得る（例えば、以下の表Ａを参照のこと）。以下の配列番号は、米国特許第７，５８２，７４４号（これは、参照により本明細書に組み込まれる）から取られたものである。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤（以下の式ＯＴ−Ｉ〜ＯＴ−ＩＶでは「ＮＡ」、例えばＲＮＡ、ＤＮＡ、キメラＲＮＡ−ＤＮＡ、ＤＮＡ−ＲＮＡ、ＲＮＡ−ＤＮＡ−ＲＮＡまたはＤＮＡ−ＲＮＡ−ＤＮＡと称される）は、リガンド（Ｌ）の結合のための１つまたはそれを超える化学結合を有するリガンドを含む部分をオリゴヌクレオチドまたは核酸にコンジュゲートすることによって化学修飾され得る。オリゴヌクレオチド剤のリガンドは、テザーおよびリンカーの一方または両方によってカップリングされ得る。以下の図では、例示的な化学結合は、Ｘ、ＹおよびＺとして表されている。これらは、テザーまたはリンカーの一部であり得る。
リガンドは、３’末端、５’末端および内部位置の一方または両方に結合され得る。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、式ＯＴ−Ｉを有する１つまたはそれを超える部分をコンジュゲートすることによって化学修飾され得る。以下の表Ｂは、様々なコンジュゲートを示す。
例示的なリガンドは表Ｃに列挙されており、本明細書の他の箇所で議論される。表Ｃに示されている例示的なリガンド（Ｌ）は、特定の実施形態において使用するために適切である。
例示的なＸ、ＹおよびＺ部分は、表Ｄに示されている。Ｘ、ＹおよびＺ部分は、互いに独立して選択され得る。
例示的なテザーは、表Ｅに示されている。
オリゴヌクレオチド剤の構造
ＮＡＴ（「核酸ターゲティング」）であるオリゴヌクレオチド剤は、標的遺伝子に十分に相補的な領域を含み、オリゴヌクレオチド剤が標的核酸と二重鎖を形成するように、ヌクレオチドに関して十分に長いものである。オリゴヌクレオチド剤は、標的分子の機能をモジュレートし得る。例えば、標的分子がｍＲＮＡまたはプレｍＲＮＡである場合、ＮＡＴは遺伝子発現を阻害し得る；標的がｍｉＲＮＡである場合、ＮＡＴはｍｉＲＮＡ機能を阻害するので、特定のｍｉＲＮＡによってターゲティングされるｍＲＮＡの発現をアップレギュレートする；標的が、スプライシングに影響を与えるプレｍＲＮＡの領域である場合、ＮＡＴはスプライス部位の選択を変化させ得るので、ｍＲＮＡ配列を変化させ得る；ＮＡＴがｍｉＲＮＡとして機能する場合、標的ｍＲＮＡの発現が阻害される。明確性のために、ヌクレオチドまたはリボヌクレオチドという用語は、本明細書では、オリゴヌクレオチド剤の１つまたはそれを超えるモノマーサブユニットに関して使用されることもある。本明細書の「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」という用語の使用はまた、修飾ＲＮＡまたはヌクレオチド代替物の場合、修飾ヌクレオチドまたは１つもしくはそれを超える位置における代替置換部分を指すと理解されよう。
ＮＡＴオリゴヌクレオチド剤は、標的ＲＮＡと少なくとも部分的に相補的であり、いくつかの実施形態では完全に相補的な領域であるかまたはそれを含む。オリゴヌクレオチド剤と標的との間に完全な相補性がある必要はないが、対応は、オリゴヌクレオチド剤またはその切断産物が標的遺伝子発現をモジュレート（例えば、阻害）することができるように十分でなければならない。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、以下の特性の１つまたはそれよりも多くを有するであろう：
（１）それは、以下に記載されている式１、２、３または４である。
（２）それは、１つもしくはそれを超えるリン酸基またはリン酸基の１つもしくはそれを超える類似体を含む５’修飾を有する。
（３）それは、非常に多数の塩基、具体的には塩基対に対する修飾にもかかわらず、標的ＲＮＡの活性のモジュレーションを可能にするために十分な熱力学的安定性の相同標的ＲＮＡと二重鎖構造を形成する。
（４）それは、非常に多数のまたはすべてのヌクレオシドに対する修飾にもかかわらず、「ＲＮＡ様」特性を依然として有する。すなわち、それは、非排他的または部分的であっても、リボヌクレオチドベースの内容物のＲＮＡ分子の全体的な構造的、化学的および物理的特性を有する。例えば、ヌクレオチド糖はすべて、２’ヒドロキシルの代わりに、例えば２’ＯＭｅ，２’フルオロを含有し得る。このデオキシリボヌクレオチド含有剤は依然として、ＲＮＡ様特性を示すと予想され得る。理論に縛られるものではないが、電気的陰性フッ素は、リボースのＣ２’位に結合されると、軸方向の配向を好む。そして、フッ素のこの空間選好性により、糖はＣ３’エンドパッカー（ｅｎｄｏ ｐｕｃｋｅｒ）を採用し得る。これは、ＲＮＡ分子で観察されるのと同じパッキング様式であり、ＲＮＡに特徴的なＡ−ファミリータイプヘリックスを生じさせる。さらに、フッ素は良好な水素結合受容体であるので、それは、ＲＮＡ構造を安定化することが公知の水分子との同じ水素結合相互作用に関与し得る。（一般に、２’糖位置における修飾部分は、デオキシリボヌクレオチドの２’−Ｈ部分よりもリボヌクレオチドの２’−ＯＨ部分に特徴的な水素結合に入ることができることが好ましい。好ましいオリゴヌクレオチド剤は、その糖の全部または少なくとも５０、７５、８０、８５、９０もしくは９５％においてＣ３’エンドパッカーを示し；ＲＮＡに特徴的なＡ−ファミリータイプヘリックスを生じさせ得るために十分な量のその糖でＣ３’エンドパッカーを示し；Ｃ３’エンドパッカー構造ではない２０個以下、１０個、５個、４個、３個、２個または１個の糖を有する。
特定の実施形態では、Ｃ３’エンド糖パッカーを有する２’修飾としては、以下のものが挙げられる：
２’−ＯＨ、２’−Ｏ−Ｍｅ、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−アミノプロピル、２’−Ｆ、２’−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨＭｅ、２’−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（Ｍｅ）２、ＬＮＡ
（５）修飾の性質にかかわらず、オリゴヌクレオチド剤がデオキシヌクレオチドまたは修飾デオキシヌクレオチドを含有し得る場合であっても、いくつかの実施形態では、ＤＮＡ分子、分子中のヌクレオチドの５０％超、６０％もしくは７０％がデオキシリボヌクレオチドである任意の分子、または２’位置のデオキシである修飾デオキシリボヌクレオチドは、オリゴヌクレオチド剤の定義から除外されることが有利である。
特定の実施形態では、Ｃ２’エンド糖パッカーを有する２’修飾としては、以下のものが挙げられる：
２’−Ｈ、２’−Ｍｅ、２’−Ｓ−Ｍｅ、２’−エチニル、２’−アラ−Ｆ。
糖修飾としては、Ｌ−糖および２’−５’結合糖も挙げられ得る。
本明細書で使用される場合、「特異的にハイブリダイズ可能」および「相補的」は、標的ＲＮＡに結合するＮＡＴオリゴヌクレオチド剤の場合、安定な特異的結合が本発明の化合物と標的ＲＮＡ分子との間で起こるように、十分な程度の相補性を示すために使用される用語である。特異的結合は、特異的結合が望まれる条件下（すなわち、インビボアッセイもしくは治療処置の場合には生理学的条件下、またはインビトロアッセイの場合には、アッセイが実施される条件下）における非標的配列との相補性の十分な欠如を必要とする。標的配列と非標的配列との間の単一のミスマッチは、ｍＲＮＡのｓｉＲＮＡターゲティングのための識別を提供するために十分であることが示されている（Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐら、Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２００２，２：２４３）。
一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤が、標的ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質の産生を阻害するように、ＮＡＴオリゴヌクレオチド剤は標的ＲＮＡに「十分に相補的」である。標的ＲＮＡは、例えば、被験体に内因性のプレｍＲＮＡ、ｍＲＮＡまたはｍｉＲＮＡであり得る。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、標的ＲＮＡに「完全に相補的」（ＳＲＭＳを含有するサブユニットを除く）であり、例えば、標的ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチド剤はアニーリングして、完全な相補性の領域においてワトソン・クリック塩基対のみから作られたハイブリッドを形成し得る。「十分に相補的」な標的ＲＮＡは、標的ＲＮＡに完全に相補的な（例えば、少なくとも７ヌクレオチドの）領域を含み得る。また、いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、単一ヌクレオチドの差異を特異的に識別する。この場合、単一のヌクレオチドが異なる領域において完全な相補性が見られる場合、オリゴヌクレオチド剤は遺伝子発現をダウンレギュレートするに過ぎない。
さもなければ、本明細書で議論されるオリゴヌクレオチド剤は、非修飾ＲＮＡおよびＤＮＡ、ならびに例えば有効性を改善するように修飾されているＲＮＡおよびＤＮＡ、ならびにヌクレオシド代替物のポリマーを含む。非修飾ＲＮＡは、核酸の成分（すなわち、糖、塩基およびリン酸部分）が、天然に存在する（好ましくは、人体において天然に存在する）ものと同じまたは本質的に同じである分子を指す。この技術は、天然に存在するが珍しいまたは異常なＲＮＡを修飾ＲＮＡとして参照しており、例えばＬｉｍｂａｃｈら、（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９４，２２：２１８３−２１９６）を参照のこと。多くの場合、修飾ＲＮＡと称されるこのような珍しいまたは異常なＲＮＡは、典型的には、転写後修飾の結果であり、本明細書で使用される場合、「非修飾ＲＮＡ」という用語の範囲内である。本明細書で使用される場合、「修飾ＲＮＡ」は、核酸の成分（すなわち、糖、塩基およびリン酸部分）の１つまたはそれを超えるものが、天然に存在するものと異なる（好ましくは、人体において存在するものと異なる）分子を指す。それらは「修飾ＲＮＡ」と称されるが、当然のことながら、修飾により、それらは、厳密に言えばＲＮＡではない分子を含むであろう。ヌクレオシド代替物は、ハイブリダイゼーションがリボリン酸骨格、例えばリボリン酸骨格の非荷電模倣物に見られるものと実質的に同様であるように、塩基が正確な空間的関係で存在することを可能にする非リボリン酸構築物でリボリン酸骨格が置き換えられている分子である。上記例はすべて、本明細書で議論される。
核酸はサブユニットのポリマーまたはモノマーであるので、下記修飾、例えば塩基もしくはリン酸部分またはリン酸部分の非連結Ｏの修飾の多くは、核酸内において繰り返される位置において存在する。いくつかの場合では、修飾は、核酸における対象位置のすべてにおいて存在するが、多くの場合、実際にはほとんどの場合において存在しない。一例として、修飾は、３’または５’末端位置においてのみ存在し得、末端領域、例えば末端ヌクレオチドの位置または鎖の最後の２、３、４、５もしくは１０ヌクレオチドにおいてのみ存在し得る。リガンドは、３’末端、５’末端もしくは内部位置、またはこれらの位置の組み合わせに結合され得る。例えば、リガンドは、３’末端および５’末端；３’末端および１つもしくはそれを超える内部位置；５’末端および１つもしくはそれを超える内部位置；または３’末端、５’末端および１つもしくはそれを超える内部位置にあり得る。例えば、非連結Ｏ位置におけるホスホロチオエート修飾は、末端の一方もしくは両方においてのみ存在し得るか、または末端領域、例えば末端ヌクレオチドの位置もしくはオリゴヌクレオチドの最後の２、３、４、５もしくは１０ヌクレオチドにおいてのみ存在し得る。５’末端はリン酸化され得る。
修飾およびヌクレオチド代替物は、以下で議論される。
上記式１に示されている骨格は、リボ核酸の一部を表す。この基本成分は、リボース糖、塩基、末端リン酸およびリン酸ヌクレオチド間リンカーである。塩基が、天然に存在する塩基、例えばアデニン、ウラシル、グアニンまたはシトシンであり、糖が（示されている）非修飾２’ヒドロキシルリボース糖であり、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺがすべてＯである場合、式１は、天然に存在する非修飾オリゴリボヌクレオチドを表す。
非修飾オリゴリボヌクレオチドは、いくつかの用途においてあまり最適ではない可能性があり、例えば、非修飾オリゴリボヌクレオチドは、例えば細胞ヌクレアーゼによって分解される傾向がある。ヌクレアーゼは、核酸リン酸ジエステル結合を加水分解し得る。しかしながら、上記ＲＮＡ成分の１つまたはそれよりも多くに対する化学修飾は、改善された特性を付与し得、例えば、オリゴリボヌクレオチドをヌクレアーゼに対してより安定にし得る。リガンドまたは他の部分をオリゴヌクレオチド剤に結合するためのテザー点を提供するという点においても、非修飾オリゴリボヌクレオチドはあまり最適ではない可能性がある。
修飾核酸およびヌクレオチド代替物は、以下の１つまたはそれよりも多くを含み得る：
（ｉ）非連結（ＸおよびＹ）リン酸酸素の一方もしくは両方および／または連結（ＷおよびＺ）リン酸酸素の１つもしくはそれよりも多くの改変、例えば置き換え（リン酸が末端位置にある場合、位置ＷまたはＺの一方は、天然に存在するリボ核酸中のさらなる要素にリン酸を連結しない。しかしながら、特に注記がない場合を除いて、用語の簡潔性のために、核酸の５’末端の位置Ｗおよび核酸の３’末端の末端位置Ｚは、本明細書で使用される場合、「リン酸酸素を連結する」という用語の範囲内である）；
（ｉｉ）リボース糖の成分の、例えばリボース糖の２’ヒドロキシルの改変、例えば置き換え、または例えば本明細書に記載されるリボース以外の構造によるリボース糖の大規模な置き換え；
（ｉｉｉ）「脱リン酸」リンカーによるリン酸部分（括弧Ｉ）の大規模な置き換え；
（ｉｖ）天然に存在する塩基の修飾または置き換え；
（ｖ）リボース−リン酸骨格（括弧ＩＩ）の置き換えまたは修飾；
（ｖｉ）ＲＮＡの３’末端または５’末端の修飾、例えば末端リン酸基の除去、修飾もしくは置き換え、またはＲＮＡの３’末端もしくは５’末端のいずれかへの、部分、例えば蛍光標識部分のコンジュゲーション。
この文脈で使用される場合、置き換え、修飾、改変などの用語は、いかなるプロセス限定も示すものではなく、例えば、修飾は、参照リボ核酸または天然に存在するリボ核酸で開始し、修飾リボ核酸をもたらすようにそれを修飾しなければならないことを意味するものではなく、むしろ修飾は、天然に存在する分子との差異を示すに過ぎない。
いくつかの化学的実体の実際の電子構造は、１つの標準形（すなわち、ルイス構造）のみによって適切に表され得ないと理解される。理論に縛られるものではないが、その代わりに、実際の構造は、共鳴形式または共鳴構造として総称して公知の２つまたはそれを超える標準形のいくつかのハイブリッドまたは加重平均であり得る。共鳴構造は化学的実体ではなく、紙上においてのみ存在する。それらは、特定の化学的実体のための結合電子および非結合電子の配置または「局在化」という点においてのみ互いに異なる。一方の共鳴構造は、他方よりも大きくハイブリッドに寄与することが可能である。したがって、本発明の実施形態の文書および図による説明は、特定の種に関する優勢な共鳴構造として当技術分野が認識するものの観点からなされている。例えば、任意のホスホロアミデート（窒素による非連結酸素の置き換え）は、上記図におけるＸ＝ＯおよびＹ＝Ｎによって表される。
さらなる例示的なオリゴヌクレオチド剤
一態様では、開示されるオリゴヌクレオチド剤は、以下の構造を有する（以下の式２を参照のこと）：
上記式２に関して、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して、Ｈ、（すなわち、非塩基ヌクレオチド）、アデニン、グアニン、シトシンおよびウラシル、イノシン、チミン、キサンチン、ハイポキサンチン、ヌブラリン、ツベルシジン、イソグアニシン、２−アミノアデニン、６−メチルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、２−プロピルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニルウラシルおよびシトシン、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、５−ハロウラシル、５−（２−アミノプロピル）ウラシル、５−アミノアリルウラシル、８−ハロ、アミノ、チオール、チオアルキル、ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−トリフルオロメチルならびに他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニン、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンおよびＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリン、例えば２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシン、ジヒドロウラシル、３−デアザ−５−アザシトシン、２−アミノプリン、５−アルキルウラシル、７−アルキルグアニン、５−アルキルシトシン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデニン、２，６−ジアミノプリン、５−アミノ−アリル−ウラシル、Ｎ３−メチルウラシル、置換１，２，４−トリアゾール、２−ピリジノン、５−ニトロインドール、３−ニトロピロール、５−メトキシウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸、５−メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メチル−２−チオウラシル、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウラシル、５−メチルアミノメチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３カルボキシプロピル）ウラシル、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ４−アセチルシトシン、２−チオシトシン、Ｎ６−メチルアデニン、Ｎ６−イソペンチルアデニン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、Ｎ−メチルグアニンまたはＯ−アルキル化塩基である。
Ｒ４、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して、ＯＲ８、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２ＯＲ８；Ｏ（ＣＨ２）ｎＲ９；Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ９、Ｈ；ハロ；ＮＨ２；ＮＨＲ８；Ｎ（Ｒ８）２；ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｍＣＨ２ＣＨ２ＮＨＲ９；ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ８；シアノ；メルカプト、ＳＲ８；アルキル−チオ−アルキル；アルキル、アラルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、アルキニル（これらはそれぞれ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、ニトロ、ハロアルキル、アルキル、アルカリル、アリール、アラルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ、アシルアミノ、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アミノアルキル、アルコキシカルボニル、カルボキシ、ヒドロキシアルキル、アルカンスルホニル、アルカンスルホンアミド、アレーンスルホンアミド、アラルキルスルホンアミド、アルキルカルボニル、アシルオキシ、シアノまたはウレイドで必要に応じて置換されていてもよい）であるか；またはＲ４、Ｒ５もしくはＲ６はＲ７と共に結合して、糖２’炭素と４’炭素との間に［−Ｏ−ＣＨ２−］共有結合架橋を形成する。
；Ｈ；ＯＨ；ＯＣＨ３；Ｗ１；非塩基ヌクレオチドであるか；または存在しない。（いくつかの実施形態では、Ａ１は、特にアンチセンス鎖に関して、５’−１リン酸（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｏ−５’）、５’−２リン酸（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’）、５’−３リン酸（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｏ−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’）、５’−グアノシン・キャップ（７−メチル化または非メチル化）（７ｍ−Ｇ−Ｏ−５’−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’）、５’−アデノシン・キャップ（Ａｐｐｐ）および任意の修飾または非修飾ヌクレオチド・キャップ構造（Ｎ−Ｏ−５’−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−（ＨＯ）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−Ｐ（ＨＯ）（Ｏ）−Ｏ−５’）、５’−モノチオリン酸（ホスホロチオエート；（ＨＯ）２（Ｓ）Ｐ−Ｏ−５’）、５’−モノジチオリン酸（ホスホロジチオエート；（ＨＯ）（ＨＳ）（Ｓ）Ｐ−Ｏ−５’）、５’−ホスホロチオール酸（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−Ｓ−５’）；酸素／硫黄置換１リン酸、２リン酸および３リン酸（例えば、５’−α−チオ３リン酸、５’−γ−チオ３リン酸など）、５’−ホスホルアミデート（（ＨＯ）２（Ｏ）Ｐ−ＮＨ−５’、（ＨＯ）（ＮＨ２）（Ｏ）Ｐ−Ｏ−５’）、５’−アルキルホスホネート（Ｒ＝アルキル＝メチル、エチル、イソプロピル、プロピルなど、例えば、ＲＰ（ＯＨ）（Ｏ）−Ｏ−５’−、（ＯＨ）２（Ｏ）Ｐ−５’−ＣＨ２−）、５’−アルキルエーテルホスホネート（Ｒ＝アルキルエーテル＝メトキシメチル（ＭｅＯＣＨ２−）、エトキシメチルなど、例えば、ＲＰ（ＯＨ）（Ｏ）−Ｏ−５’−））の任意のさらなる組み合わせから選択される。
；Ｈ；Ｚ４；反転ヌクレオチド；非塩基ヌクレオチドであるか；または存在しない。
Ｗ１はＯＨ、（ＣＨ２）ｎＲ１０、（ＣＨ２）ｎＮＨＲ１０、（ＣＨ２）ｎＯＲ１０、（ＣＨ２）ｎＳＲ１０；Ｏ（ＣＨ２）ｎＲ１０；Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ１０、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ１０、Ｏ（ＣＨ２）ｎＳＲ１０；Ｏ（ＣＨ２）ｎＳＳ（ＣＨ２）ｎＯＲ１０、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＯＲ１０、ＮＨ（ＣＨ２）ｎＲ１０；ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲ１０；ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＲ１０、ＮＨ（ＣＨ２）ｎＳＲ１０；Ｓ（ＣＨ２）ｎＲ１０、Ｓ（ＣＨ２）ｎＮＲ１０、Ｓ（ＣＨ２）ｎＯＲ１０、Ｓ（ＣＨ２）ｎＳＲ１０ Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２ＯＲ１０；Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２ＮＨＲ１０、ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｍＣＨ２ＣＨ２ＮＨＲ１０；Ｑ−Ｒ１０、Ｏ−Ｑ−Ｒ１０Ｎ−Ｑ−Ｒ１０、Ｓ−Ｑ−Ｒ１０または−Ｏ−である。Ｗ４はＯ、ＣＨ２、ＮＨまたはＳである。
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４はそれぞれ独立して、ＯまたはＳである。
Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３およびＹ４はそれぞれ独立して、ＯＨ、Ｏ−、ＯＲ８、Ｓ、Ｓｅ、ＢＨ３−、Ｈ、ＮＨＲ９、Ｎ（Ｒ９）２アルキル、シクロアルキル、アラルキル、アリールまたはヘテロアリール（これらはそれぞれ、必要に応じて置換されていてもよい）である。
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３はそれぞれ独立して、Ｏ、ＣＨ２、ＮＨまたはＳである。Ｚ４はＯＨ、（ＣＨ２）ｎＲ１０、（ＣＨ２）ｎＮＨＲ１０、（ＣＨ２）ｎＯＲ１０、（ＣＨ２）ｎＳＲ１０；Ｏ（ＣＨ２）ｎＲ１０；Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ１０、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＲ１０、Ｏ（ＣＨ２）ｎＳＲ１０、Ｏ（ＣＨ２）ｎＳＳ（ＣＨ２）ｎＯＲ１０、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）ＯＲ１０；ＮＨ（ＣＨ２）ｎＲ１０；ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮＲ１０；ＮＨ（ＣＨ２）ｎＯＲ１０、ＮＨ（ＣＨ２）ｎＳＲ１０；Ｓ（ＣＨ２）ｎＲ１０、Ｓ（ＣＨ２）ｎＮＲ１０、Ｓ（ＣＨ２）ｎＯＲ１０、Ｓ（ＣＨ２）ｎＳＲ１０ Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２ＯＲ１０、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２ＮＨＲ１０、ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｍＣＨ２ＣＨ２ＮＨＲ１０；Ｑ−Ｒ１０、Ｏ−Ｑ−Ｒ１０Ｎ−Ｑ−Ｒ１０、Ｓ−Ｑ−Ｒ１０である。
Ｘは５〜１００であり、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド剤の長さに適合するように選択される。
Ｒ７はＨであるか；またはＲ４、Ｒ５もしくはＲ６と共に結合して、糖２’炭素と４’炭素との間に［−Ｏ−ＣＨ２−］共有結合架橋を形成する。
Ｒ８はアルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アミノ酸または糖である；Ｒ９はＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノまたはアミノ酸である；Ｒ１０はＨ；フルオロフォア（ピレン、ＴＡＭＲＡ、フルオレセイン、Ｃｙ３またはＣｙ５色素）；硫黄、シリコン、ホウ素またはエステル保護基；挿入剤（例えば、アクリジン）、架橋リンカー（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン、（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サフィリン）、多環芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性担体（コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミ酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リソコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コラン酸、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジン）およびペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ−４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ；アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール；放射性標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾール、ヒスタミン、イミダゾール・クラスタ、アクリジン−イミダゾールコンジュゲート、テトラアザマクロサイクルのＥｕ３＋混成物）；またはオリゴヌクレオチド剤である。Ｍは０〜１，０００，０００であり、ｎは０〜２０である。Ｑは非塩基糖、アミド、カルボキシ、オキシアミン、オキシイミン、チオエーテル、ジスルフィド、チオ尿素、スルホンアミドまたはモルホリノ、ビオチンまたはフルオレセイン試薬からなる群より選択されるスペーサーである。
リン酸基全体が置き換えられている例示的なオリゴヌクレオチド剤は、以下の構造を有する（以下の式３を参照のこと）：
式３に関して、Ａ１０〜Ａ４０はＬ−Ｇ−Ｌである；Ａ１０および／またはＡ４０は存在しなくてもよく、Ｌはリンカーである（式中、Ｌの一方または両方は存在してもよいしまたは存在しなくてもよく、ＣＨ２（ＣＨ２）ｇ；Ｎ（ＣＨ２）ｇ；Ｏ（ＣＨ２）ｇ；Ｓ（ＣＨ２）ｇからなる群より選択される）。Ｇはシロキサン、炭酸、カルボキシメチル、カルバメート、アミド、チオエーテル、エチレンオキシドリンカー、スルホン酸塩、スルホンアミド、チオホルムアセタール、ホルムアセタール、オキシム、メチレンイミノ、メチレンメチルイミノ、メチレンヒドラゾ、メチレンジメチルヒドラゾおよびメチレンオキシメチルイミノからなる群より選択される官能基である。
Ｒ１０、Ｒ２０およびＲ３０はそれぞれ独立して、Ｈ、（すなわち、非塩基ヌクレオチド）、アデニン、グアニン、シトシンおよびウラシル、イノシン、チミン、キサンチン、ハイポキサンチン、ヌブラリン、ツベルシジン、イソグアニシン、２−アミノアデニン、６−メチルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、２−プロピルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニルウラシルおよびシトシン、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、５−ハロウラシル、５−（２−アミノプロピル）ウラシル、５−アミノアリルウラシル、８−ハロ、アミノ、チオール、チオアルキル、ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−トリフルオロメチルならびに他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニン、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンおよびＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリン、例えば２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシン、ジヒドロウラシル、３−デアザ−５−アザシトシン、２−アミノプリン、５−アルキルウラシル、７−アルキルグアニン、５−アルキルシトシン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデニン、２，６−ジアミノプリン、５−アミノ−アリル−ウラシル、Ｎ３−メチルウラシル置換１，２，４−トリアゾール、２−ピリジノン、５−ニトロインドール、３−ニトロピロール、５−メトキシウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸、５−メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メチル−２−チオウラシル、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウラシル、５−メチルアミノメチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３カルボキシプロピル）ウラシル、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ４−アセチルシトシン、２−チオシトシン、Ｎ６−メチルアデニン、Ｎ６−イソペンチルアデニン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、Ｎ−メチルグアニンまたはＯ−アルキル化塩基である。
Ｒ４０、Ｒ５０およびＲ６０はそれぞれ独立して、ＯＲ８、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２ＯＲ８；Ｏ（ＣＨ２）ｎＲ９；Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ９、Ｈ；ハロ；ＮＨ２；ＮＨＲ８；Ｎ（Ｒ８）２；ＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｍＣＨ２ＣＨ２Ｒ９；ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ８；シアノ；メルカプト、ＳＲ７；アルキル−チオ−アルキル；アルキル、アラルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、アルキニル（これらはそれぞれ、ハロ、ヒドロキシ、オキソ、ニトロ、ハロアルキル、アルキル、アルカリル、アリール、アラルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ、アシルアミノ、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アミノアルキル、アルコキシカルボニル、カルボキシ、ヒドロキシアルキル、アルカンスルホニル、アルカンスルホンアミド、アレーンスルホンアミド、アラルキルスルホンアミド、アルキルカルボニル、アシルオキシ、シアノおよびウレイド基で必要に応じて置換されていてもよい）であるか；またはＲ４０、Ｒ５０もしくはＲ６０はＲ７０と共に結合して、糖２’炭素と４’炭素との間に［−Ｏ−ＣＨ２−］共有結合架橋を形成する。
Ｘは５〜１００であるか、または本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド剤の長さに適合するように選択される。
Ｒ７０はＨであるか；またはＲ４０、Ｒ５０もしくはＲ６０と共に結合して、糖２’炭素と４’炭素との間に［−Ｏ−ＣＨ２−］共有結合架橋を形成する。
Ｒ８はアルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アミノ酸または糖であり；Ｒ９はＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノまたはアミノ酸である。Ｍは０〜１，０００，０００であり、ｎは０〜２０であり、ｇは０〜２である。
別の態様では、特定の開示されるヌクレオシド代替物は、以下の構造を有する（以下の式４を参照のこと）：
ＳＬＲ１００−（Ｍ−ＳＬＲ２００）ｘ−Ｍ−ＳＬＲ３００ 式４
Ｓはモフィリノ、シクロブチル、ピロリジンおよびペプチド核酸からなる群より選択されるヌクレオシド代替物である。Ｌはリンカーであり、ＣＨ２（ＣＨ２）ｇ；Ｎ（ＣＨ２）ｇ；Ｏ（ＣＨ２）ｇ；Ｓ（ＣＨ２）ｇ；−Ｃ（Ｏ）（ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択されるか、または存在しなくてもよい。Ｍはアミド結合；スルホンアミド；スルフィン酸；リン酸基；本明細書に記載される修飾リン酸基であるか；または存在しなくてもよい。
Ｒ１００、Ｒ２００およびＲ３００はそれぞれ独立して、Ｈ、（すなわち、非塩基ヌクレオチド）、アデニン、グアニン、シトシンおよびウラシル、イノシン、チミン、キサンチン、ハイポキサンチン、ヌブラリン、ツベルシジン、イソグアニシン、２−アミノアデニン、６−メチルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、２−プロピルならびにアデニンおよびグアニンの他のアルキル誘導体、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニルウラシルおよびシトシン、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、５−ハロウラシル、５−（２−アミノプロピル）ウラシル、５−アミノアリルウラシル、８−ハロ、アミノ、チオール、チオアルキル、ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−トリフルオロメチルならびに他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニン、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンおよびＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリン、例えば２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシン、ジヒドロウラシル、３−デアザ−５−アザシトシン、２−アミノプリン、５−アルキルウラシル、７−アルキルグアニン、５−アルキルシトシン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデニン、２，６−ジアミノプリン、５−アミノ−アリル−ウラシル、Ｎ３−メチルウラシル置換１，２，４−トリアゾール、２−ピリジノン、５−ニトロインドール、３−ニトロピロール、５−メトキシウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸、５−メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メチル−２−チオウラシル、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウラシル、５−メチルアミノメチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３カルボキシプロピル）ウラシル、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ４−アセチルシトシン、２−チオシトシン、Ｎ６−メチルアデニン、Ｎ６−イソペンチルアデニン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、Ｎ−メチルグアニンまたはＯ−アルキル化塩基である。
Ｘは５〜１００であるか、または本明細書に記載されるオリゴヌクレオチド剤の長さに適合するように選択される；ｇは０〜２である。
ヌクレアーゼ耐性モノマー
本明細書に記載されるモノマーおよび方法は、ヌクレアーゼ耐性モノマー（ＮＲＭ）を組み込んだオリゴヌクレオチド剤を調製するために使用され得る。
オリゴヌクレオチド剤は、例えば被験体の体内に見られるヌクレアーゼ、例えばエンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼによる分解を阻害するように修飾されたモノマーを含み得る。これらのモノマーは、本明細書ではＮＲＭまたはヌクレアーゼ耐性促進モノマーまたは修飾と称される。多くの場合、これらの修飾は、オリゴヌクレオチド剤の他の特性、例えばタンパク質、例えば輸送タンパク質、例えば血清アルブミンまたはＲＩＳＣ（ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体）のメンバーと相互作用する能力、または互いに二重鎖を形成するかまたは別の配列、例えば標的分子と二重鎖を形成する第１および第２の配列の能力もモジュレートする。
理論に縛られるものではないが、オリゴヌクレオチド剤における糖、塩基および／またはリン酸骨格の修飾は、エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼ耐性を増強し得、輸送タンパク質およびＲＩＳＣ複合体の機能成分の１つまたはそれよりも多くとの相互作用を増強し得ると考えられる。好ましい修飾は、エキソヌクレアーゼおよびエンドヌクレアーゼ耐性を増加させ、したがってＲＩＳＣ複合体との相互作用前のオリゴヌクレオチド剤の半減期を延長するが、同時に、オリゴヌクレオチド剤をＲＩＳＣ複合体のエンドヌクレアーゼ活性に対して耐性にしないものである。やはり、理論に縛られるものではないが、オリゴヌクレオチド剤の３’および／もしくは５’末端またはその近くにおける修飾の配置は、上記に示されている好ましいヌクレアーゼ耐性基準を満たす薬剤をもたらし得ると考えられる。
上記に示されている好ましいヌクレアーゼ耐性基準を満たすオリゴヌクレオチド剤を生産するために有用であり得る修飾は、糖、塩基および／またはリン酸骨格の以下の化学的および／または立体化学的修飾の１つまたはそれよりも多くを含み得る。
（ｉ）キラル（ＳＰ）チオエート。したがって、いくつかの実施形態では、ＮＲＭは、非架橋位置、例えばＳｐまたはＲｐにおいて、位置Ｘ（これは、酸素によって通常占有される位置である）にヘテロ原子を含有する修飾リン酸基の純粋なキラル型が豊富であるかまたはそれを有するヌクレオチドダイマーを含む。Ｘにおける原子は、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲ２またはＢＲ３あり得る。ＸがＳである場合、豊富なまたはキラル的に純粋なＳｐ結合が好ましい。「豊富」は、好ましい形態の少なくとも７０、８０、９０、９５または９９％を意味する。このようなＮＲＭは、以下でより詳細に議論される；
（ｉｉ）リン酸または修飾リン酸骨格部分の糖、塩基および／またはリン原子への１つまたはそれを超えるカチオン基の結合。したがって、好ましいＮＲＭは、カチオン基において誘導体化された末端位置においてモノマーを含む。オリゴヌクレオチド剤の５’末端は末端−ＯＨまたはリン酸基を有するはずであるので、このＮＲＭは、好ましくは、オリゴヌクレオチド剤の５’末端において使用されない。基は、例えば他の鎖の相補的塩基との相互作用面から離れた、Ｈ結合形成およびハイブリダイゼーションの干渉を最小化する塩基の位置、例えばピリミジンの５’位置またはプリンの７位置に結合されるべきである。これらは、以下でより詳細に議論される；
（ｉｉｉ）末端の非リン酸結合。したがって、このタイプのＮＲＭは、非リン酸結合、例えばリン酸結合よりも大きな切断耐性を付与する４個の原子の結合を含む。例としては、３’ＣＨ２−ＮＣＨ３−Ｏ−ＣＨ２−５’および３’ＣＨ２−ＮＨ−（Ｏ＝）−ＣＨ２−５’が挙げられる；
（ｉｖ）３’架橋チオリン酸および５’架橋チオリン酸。したがって、好ましいＮＲＭは、これらの構造を含み得る；
（ｖ）Ｌ−ＲＮＡ、２’−５’結合、反転結合、ａ−ヌクレオシド。したがって、他のＮＲＭは、ＬヌクレオシドおよびＬ−ヌクレオシド由来のダイマーヌクレオチド；２’−５’リン酸、非リン酸および修飾リン酸結合（例えば、チオリン酸、ホスホルアミドエートおよびリン酸ホウ素）；反転結合、例えば、３’−３’または５’−５’結合を含むダイマー；糖の１’位にα結合を有するモノマー、例えば、α結合を有する本明細書に記載される構造を含む；
（ｖｉ）コンジュゲート基。したがって、ＮＲＭは、例えば、ターゲティング部分または本明細書に記載されるコンジュゲートされたリガンド、例えば糖、塩基または骨格を介して例えばモノマーとコンジュゲートされたリガンドを含み得る；
（ｖｉ）非塩基性結合。したがって、ＮＲＭは、非塩基モノマー、例えば、本明細書に記載されるような非塩基モノマー（例えば、無核酸塩基モノマー）；本明細書に記載される芳香族モノマーまたはヘテロ環またはポリヘテロ環芳香族モノマーを含み得る；ならびに
（ｖｉｉ）５’−ホスホネートおよび５’リン酸プロドラッグ。したがって、ＮＲＭは、例えば末端位置、例えば５’位置において、リン酸基の１つまたはそれを超える原子が保護基で誘導体化されたモノマーを含み、１つまたは複数の保護基は、被験体の体内の成分、例えばカルボキシエステラーゼ、または被験体の体内に存在する酵素の作用の結果として除去される。例えば、カルボキシエステラーゼが保護分子を切断してチオエートアニオンが産生され、これが、リン酸のＯに隣接する炭素を攻撃し、脱保護リン酸が産生されるリン酸プロドラッグ。
１つまたはそれを超える異なるＮＲＭ修飾は、オリゴヌクレオチド剤にまたはオリゴヌクレオチド剤の配列に導入され得る。ＮＲＭ修飾は、配列またはオリゴヌクレオチド剤において１回を超えて使用され得る。いくつかのＮＲＭはハイブリダイゼーションを妨害するので、組み込まれる総数は、許容され得るレベルのオリゴヌクレオチド剤／標的ＲＮＡ二重鎖形成が維持されるようなものであるべきである。
キラルＳＰチオエート
修飾は、非連結（ＸおよびＹ）リン酸酸素の一方もしくは両方および／または連結（ＷおよびＺ）リン酸酸素の１つもしくはそれよりも多くの改変、例えば置き換えを含み得る。以下の式Ｘは、２つの糖／糖代替物塩基部分であるＳＢ１およびＳＢ２を連結するリン酸部分を表す。
特定の実施形態では、リン酸骨格部分（ＸおよびＹ）における非連結リン酸酸素の１つは、以下：Ｓ、Ｓｅ、ＢＲ３（Ｒは水素、アルキル、アリールなど）、Ｃ（すなわち、アルキル基、アリール基など）、Ｈ、ＮＲ２（Ｒは水素、アルキル、アリールなど）またはＯＲ（Ｒはアルキルまたはアリール）のいずれか１つで置き換えられ得る。非修飾リン酸基におけるリン原子はアキラルである。しかしながら、上記原子または原子群の１つによる非連結酸素の１つの置き換えは、リン原子をキラルにする；換言すれば、このように修飾されたリン酸基のリン原子は立体中心である。立体中心リン原子は、「Ｒ」配置（本明細書ではＲＰ）または「Ｓ」配置（本明細書ではＳＰ）のいずれかを有し得る。したがって、立体中心リン原子の集団の６０％がＲＰ配置を有する場合、立体中心リン原子の集団の残りの４０％はＳＰ配置を有する。
いくつかの実施形態では、リン酸非連結酸素が別の原子または原子群で置き換えられているリン酸基を有するオリゴヌクレオチド剤は、これらの原子の少なくとも約５０％（例えば、これらの原子の少なくとも約６０％、これらの原子の少なくとも約７０％、これらの原子の少なくとも約８０％、これらの原子の少なくとも約９０％、これらの原子の少なくとも約９５％、これらの原子の少なくとも約９８％、これらの原子の少なくとも約９９％）がＳＰ配置を有する立体中心リン原子の集団を含有し得る。あるいは、リン酸非連結酸素が別の原子または原子群で置き換えられているリン酸基を有するオリゴヌクレオチド剤は、これらの原子の少なくとも約５０％（例えば、これらの原子の少なくとも約６０％、これらの原子の少なくとも約７０％、これらの原子の少なくとも約８０％、これらの原子の少なくとも約９０％、これらの原子の少なくとも約９５％、これらの原子の少なくとも約９８％、これらの原子の少なくとも約９９％）がＲＰ配置を有する立体中心リン原子の集団を含有し得る。他の実施形態では、立体中心リン原子の集団はＳＰ配置を有し得、ＲＰ配置を有する立体中心リン原子を実質的に含み得ない。さらに他の実施形態では、立体中心リン原子の集団はＲＰ配置を有し得、ＳＰ配置を有する立体中心リン原子を実質的に含み得ない。本明細書で使用される場合、「ＲＰ配置を有する立体中心リン原子を実質的に含まない」という語句は、当技術分野で公知の従来の方法（キラルＨＰＬＣ、キラルシフト試薬を使用した１Ｈ ＮＭＲ分析など）によって、ＲＰ配置を有する立体中心リン原子を含有する部分が検出され得ないことを意味する。本明細書で使用される場合、「ＳＰ配置を有する立体中心リン原子を実質的に含まない」という語句は、当技術分野で公知の従来の方法（キラルＨＰＬＣ、キラルシフト試薬を使用した１Ｈ ＮＭＲ分析など）によって、ＳＰ配置を有する立体中心リン原子を含む部分が検出され得ないことを意味する。
いくつかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチド剤は、ホスホロチオエート基、すなわち、リン酸非連結酸素が硫黄原子で置き換えられているリン酸基を含有する。実施形態では、ホスホロチオエート立体中心リン原子の集団はＳＰ配置を有し得、ＲＰ配置を有する立体中心リン原子を実質的に含み得ない。
ホスホロチオエートは、ダイマー、例えば式Ｘ−１およびＸ−２を使用して、オリゴヌクレオチド剤に組み込まれ得る。前者は、ホスホロチオエート
を鎖の３’末端に導入するために使用され得るが、後者は、５’末端または鎖のいずれかの末端から例えば１、２、３、４、５もしくは６ヌクレオチドの位置にこの修飾を導入するために使用され得る。上記式では、Ｙは２−シアノエトキシであり得、ＷおよびＺはＯであり得、Ｒ２’は、例えばＣ−３内部配置を糖（例えば、ＯＨ、Ｆ、ＯＣＨ３）に付与し得る置換基であり得、ＤＭＴはジメトキシトリチルであり、「ＢＡＳＥ」は天然塩基、異常塩基またはユニバーサル塩基であり得る。
Ｘ−１およびＸ−２は、ＲＰ配置のみ（すなわち、ＳＰ配置を実質的に含まない）またはＳＰ配置のみ（すなわち、ＲＰ配置を実質的に含まない）を本質的に有する立体中心リン原子の集団を有するホスホロチオエート含有ダイマーをもたらし得るキラル試薬または配向基を使用して調製され得る。あるいは、原子の約５０％がＲＰ配置を有し、原子の約５０％がＳＰ配置を有する立体中心リン原子の集団を有するダイマーが調製され得る。ＲＰ配置を有する立体中心リン原子を有するダイマーは、例えば、酵素分解および／または従来のクロマトグラフィー技術を使用して同定され、ＳＰ配置を有する立体中心リン原子を有するダイマーから分離され得る。
カチオン基
修飾はまた、糖、塩基および／またはリン酸のリン原子もしくは修飾リン酸骨格部分への１つまたはそれを超えるカチオン基の結合を含み得る。カチオン基は、天然塩基、異常塩基またはユニバーサル塩基における置換可能な任意の原子に結合され得る。好ましい位置は、ハイブリダイゼーションを妨害しない位置、すなわち、塩基対合に必要な水素結合相互作用を妨害しないものである。カチオン基は、例えば糖のＣ２’位置または環状もしくは非環状糖代替物の類似位置を介して結合され得る。カチオン基は、例えば例えばＯ−ＡＭＩＮＥ（ＡＭＩＮＥ＝ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノまたはジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノ）由来のプロトン化アミノ基；アミノアルコキシ、例えば、Ｏ（ＣＨ２）ｎＡＭＩＮＥ、（例えば、ＡＭＩＮＥ＝ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノまたはジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノ）；アミノ（例えば、ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノまたはアミノ酸）；またはＮＨ（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ）ｎＣＨ２ＣＨ２−ＡＭＩＮＥ（ＡＭＩＮＥ＝ＮＨ２；アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノまたはジヘテロアリールアミノ）を含み得る。
非リン酸結合
修飾はまた、鎖の５’および／または３’末端における非リン酸結合の組み込みを含み得る。リン酸基を置き換え得る非リン酸結合の例としては、メチルホスホネート、ヒドロキシルアミノ、シロキサン、炭酸塩、カルボキシメチル、カルバメート、アミド、チオエーテル、エチレンオキシドリンカー、スルホン酸塩、スルホンアミド、チオホルムアセタール、ホルムアセタール、オキシム、メチレンイミノ、メチレンメチルイミノ、メチレンヒドラゾ、メチレンジメチルヒドラゾおよびメチレンオキシメチルイミノが挙げられる。いくつかの実施形態では、置換基は、メチルホスホネートおよびヒドロキシルアミノ基から選択される。
３’架橋チオリン酸および５’架橋チオリン酸；固定された−ＲＮＡ、２’−５’結合、反転結合、α−ヌクレオシド；コンジュゲート基；非塩基性結合；および５’−ホスホネートおよび５’−リン酸プロドラッグもまた、オリゴヌクレオチド剤に含められ得る結合である。
上記式Ｘに関して、修飾は、リン酸骨格部分（ＷおよびＺ）の架橋および連結リン酸酸素の一方の置き換えを含み得る。ＸまたはＹの一方のみを変化させる場合と異なり、ホスホロジチオエートにおけるリン酸中心は、立体中心リン原子を含有するオリゴヌクレオチド剤の形成を排除するアキラルである。
修飾はまた、第１の糖の２’位置および第２の糖の５’位置を介して、リン酸または修飾リン酸基によって２つの糖を連結することを含み得る。第１および第２の糖の両方がそれぞれ各３’位置を介して連結された反転結合も企図される。修飾ＲＮＡはまた、Ｃ−１’において核酸塩基を欠く「非塩基」糖を含み得る。糖基はまた、リボースにおける対応する炭素の立体化学配置とは反対の立体化学配置を有する１つまたはそれを超える炭素を含有し得る。したがって、修飾オリゴヌクレオチド剤は、糖として例えばアラビノースを含有するヌクレオチドを含み得る。この修飾の別のサブセットでは、天然塩基、異常塩基またはユニバーサル塩基は、α配置を有し得る。修飾はまた、Ｌ−ＲＮＡを含み得る。
修飾はまた、５’−ホスホネート、例えばＰ（Ｏ）（Ｏ−）２−Ｘ−Ｃ５’−糖（Ｘ＝ＣＨ２、ＣＦ２、ＣＨＦ）および５’−リン酸プロドラッグ、例えばＰ（Ｏ）［ＯＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（Ｏ）Ｒ］２ＣＨ２Ｃ５’−糖を含み得る。後者の場合、プロドラッグ基は、最初にカルボキシエステラーゼとの反応により分解され得る。分子内ＳＮ２置換による残りのエチルチオラート基はエピスルフィドとして出発して、非誘導体化リン酸基を与え得る。
修飾はまた、好ましくはコンジュゲーションに利用可能な任意のアミノ基を介してオリゴヌクレオチド剤に結合された本明細書の他の箇所に記載されるコンジュゲート基の付加を含み得る。
ヌクレアーゼ耐性修飾は、末端においてのみ配置され得る一部のものおよび任意の位置において可能な他のものを含む。一般に、これらの修飾はハイブリダイゼーションを阻害し得るので、末端領域においてのみそれらを使用することが好ましく、配列の切断部位または切断領域においてそれらを使用しないことが好ましい。
エンドヌクレアーゼ切断を妨害または阻害する修飾は、ＲＩＳＣ媒介性切断に供されるオリゴヌクレオチド剤の領域、例えば切断部位または切断領域に挿入されるべきではない。本明細書で使用される場合、「切断部位」は、標的またはそれにハイブリダイズするオリゴヌクレオチド剤鎖の切断部位のいずれかの側にあるヌクレオチドを指す。「切断領域」は、いずれかの方向における切断部位の１、２または３ヌクレオチドのヌクレオチドを意味する。）
このような修飾は、末端領域、例えば末端位置、または末端の２、３、４もしくは５位置に導入され得る。
オリゴヌクレオチド剤は、以下のものを含み得る：
３’末端または３’末端から１、２、３、４、５もしくは６位置以内におけるＮＭＲ修飾；
５’末端または５’末端から１、２、３、４、５もしくは６位置以内におけるＮＭＲ修飾（５’末端ＮＲＭ修飾は優先的にその末端にあるのではなく、むしろオリゴヌクレオチド剤の５’末端から１、２、３、４、５または６位置離れている）；
３’末端または３’末端から１、２、３、４、５もしくは６位置以内におけるＮＭＲ修飾であって、５’末端または５’末端から１、２、３、４、５もしくは６位置以内においてＮＭＲ修飾を有するＮＭＲ修飾；
切断部位または切断領域におけるＮＲＭ修飾；
切断部位または切断領域におけるＮＲＭ修飾、３’末端または３’末端から１、２、３、４、５もしくは６位置以内におけるＮＲＭ修飾の１つまたはそれよりも多く、５’末端または５’末端から１、２、３、４、５もしくは６位置以内におけるＮＲＭ修飾、あるいは３’および５’末端の両方または３’および５’末端の両方から１、２、３、４、５もしくは６位置以内におけるＮＲＭ修飾（５’末端ＮＲＭ修飾は優先的にその末端にあるのではなく、むしろオリゴヌクレオチド剤の５’末端から１、２、３、４、５または６位置離れている）。
リボース模倣物
本明細書に記載されるモノマーおよび方法は、リボース模倣物を組み込んだオリゴヌクレオチド剤を調製するために使用され得る。
したがって、本発明の態様は、第２級ヒドロキシル基を含むオリゴヌクレオチド剤であって、有効性を増加させ、および／またはヌクレアーゼ耐性をオリゴヌクレオチド剤に付与し得るオリゴヌクレオチド剤を特徴とする。ヌクレアーゼ、例えば細胞ヌクレアーゼは、核酸リン酸ジエステル結合を加水分解し、核酸の部分的または完全な分解をもたらし得る。第２級ヒドロキシ基は、修飾を欠くオリゴヌクレオチド剤と比べてオリゴヌクレオチド剤をヌクレアーゼ低分解性にすることによって、ヌクレアーゼ耐性をオリゴヌクレオチド剤に付与する。理論に縛られるものではないが、オリゴヌクレオチド剤における第２級ヒドロキシル基の存在は、３’リボースヒドロキシル基の構造模倣物として作用し、それにより、それを低分解性にし得ると考えられる。
第２級ヒドロキシル基は、２つの他の炭素および水素で置換されている炭素原子に結合された「ＯＨ」ラジカルを指す。上記のようにヌクレアーゼ耐性を付与する第２級ヒドロキシル基は、任意の非環式炭素含有基の一部であり得る。ヒドロキシルはまた、任意の環式炭素含有基の一部であり得、好ましくは、以下の条件の１つまたはそれよりも多くが満たされる。（１）ヒドロキシル基と末端リン酸基との間にリボース部分が存在しないか、または（２）ヒドロキシル基は、塩基にカップリングされた糖部分上にない。ヒドロキシル基は、オリゴヌクレオチド剤の末端リン酸基リンから少なくとも２個の結合において（例えば、少なくとも３個の結合離れて、少なくとも４個の結合離れて、少なくとも５個の結合離れて、少なくとも６個の結合離れて、少なくとも７個の結合離れて、少なくとも８個の結合離れて、少なくとも９個の結合離れて、少なくとも１０個の結合離れてなど）離れて位置する。好ましい実施形態では、末端リン酸基リンと第２級ヒドロキシル基との間に５個の介在結合がある。
末端リン酸基リンと第２級ヒドロキシル基との間に５個の介在結合を有する特定の例示的なオリゴヌクレオチド剤送達モジュールは、以下の構造を有する（以下の式Ｙを参照のこと）：
式Ｙに関して、Ａは、本明細書に記載される任意のオリゴヌクレオチド剤を含むオリゴヌクレオチド剤である。オリゴヌクレオチド剤は、リン酸基の「Ｗ」に直接的または間接的（例えば、スペーサーまたはリンカーを介して）に接続され得る。これらのスペーサーまたはリンカーは、例えば−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎＮ−、−（ＣＨ２）ｎＯ−、−（ＣＨ２）ｎＳ−、Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＨ（例えば、ｎ＝３または６）、非塩基糖、アミド、カルボキシ、アミン、オキシアミン、オキシイミン、チオエーテル、ジスルフィド、チオ尿素、スルホンアミドまたはモルホリノ、あるいはビオチンおよびフルオレセイン試薬を含み得る。
オリゴヌクレオチド剤は、非修飾（例えば、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺはＯである）または修飾末端リン酸基を有し得る。修飾リン酸基では、ＷおよびＺは独立して、ＮＨ、ＯまたはＳであり得；ＸおよびＹは独立して、Ｓ、Ｓｅ、ＢＨ３−、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリール、Ｈ、Ｏ、Ｏ−、アルコキシまたはアミノ（アルキルアミノ、アリールアミノなどを含む）であり得る。いくつかの実施形態では、Ｗ、ＸおよびＺはＯであり、ＹはＳである。
Ｒ１およびＲ３はそれぞれ独立して水素であるか；またはヒドロキシル、アミノ、ハロ、リン酸もしくは硫酸で必要に応じて置換されているＣ１−Ｃ１００アルキルであり、および／またはＮ、Ｏ、Ｓ、アルケニルもしくはアルキニルが必要に応じて挿入され得る。
Ｒ２は水素であるか；ヒドロキシル、アミノ、ハロ、リン酸もしくは硫酸で必要に応じて置換されているＣ１−Ｃ１００アルキルであり、および／またはＮ、Ｏ、Ｓ、アルケニルもしくはアルキニルが必要に応じて挿入され得るか；またはｎが１である場合、Ｒ２はＲ４またはＲ６と一緒になって、５〜１２個の原子の環を形成し得る。
Ｒ４は水素であるか；ヒドロキシル、アミノ、ハロ、リン酸もしくは硫酸で必要に応じて置換されているＣ１−Ｃ１００アルキルであり、および／またはＮ、Ｏ、Ｓ、アルケニルもしくはアルキニルが必要に応じて挿入され得るか；またはｎが１である場合、Ｒ４はＲ２またはＲ５と一緒になって、５〜１２個の原子の環を形成し得る。
Ｒ５は水素であるか、ヒドロキシル、アミノ、ハロ、リン酸もしくは硫酸で必要に応じて置換されているＣ１−Ｃ１００アルキルであり、および／またはＮ、Ｏ、Ｓ、アルケニルもしくはアルキニルが必要に応じて挿入され得るか；またはｎが１である場合、Ｒ５はＲ４と一緒になって、５〜１２個の原子の環を形成し得る。
Ｒ６は水素であるか、ヒドロキシル、アミノ、ハロ、リン酸もしくは硫酸で必要に応じて置換されているＣ１−Ｃ１００アルキルであり、および／またはＮ、Ｏ、Ｓ、アルケニルもしくはアルキニルが必要に応じて挿入され得るか；またはｎが１である場合、Ｒ６はＲ２と一緒になって、６〜１０個の原子の環を形成し得る。
Ｒ７は水素、Ｃ１−Ｃ１００アルキルまたはＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｑＣ（Ｏ）ＮＨＲ９であり；Ｔは水素または官能基であり；ｎおよびｑはそれぞれ独立して１〜１００である。Ｒ８はＣ１−Ｃ１０アルキルまたはＣ６−Ｃ１０アリールである。Ｒ９は水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ６−Ｃ１０アリールまたは固体支持剤である。
好ましい実施形態は、オリゴヌクレオチド剤送達モジュールの以下のサブセットの１つまたはそれよりも多くを含み得る。
オリゴヌクレオチド剤送達モジュールの１サブセットでは、Ａは直接的に、またはオリゴヌクレオチド剤の末端３’もしくは５’リボース糖炭素を介して間接的に連結され得る。
オリゴヌクレオチド剤送達モジュールの別のサブセットでは、Ｘ、ＷおよびＺはＯであり、ＹはＳである。
オリゴヌクレオチド剤送達モジュールのさらに別のサブセットでは、ｎは１であり、Ｒ２およびＲ６は一緒になって、６個の原子を含有する環を形成し、Ｒ４およびＲ５は一緒になって、６個の原子を含有する環を形成する。いくつかの実施形態では、環系はトランス−デカリンである。例えば、このサブセットのオリゴヌクレオチド剤送達モジュールは、式（Ｙ−１）：
の化合物を含み得る。
官能基は、例えばターゲティング基（例えば、ステロイドまたは糖質）、レポーター基（例えば、フルオロフォア）または標識基（同位体で標識された部分）であり得る。ターゲティング基は、タンパク質結合剤、内皮細胞ターゲティング基（例えば、ＲＧＤペプチドおよび模倣物）、癌細胞ターゲティング基（例えば、葉酸ビタミンＢ１２、ビオチン）、骨細胞ターゲティング基（例えば、ビスホスホネート、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸）、（例えば、マクロファージ試験のための）多価マンノース、ラクトース、ガラクトース、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、モノクローナル抗体、糖タンパク質、レクチン、メラノトロピンまたは甲状腺刺激ホルモンをさらに含み得る。
当業者によって認識されるように、本明細書の式の化合物を合成する方法は当業者には明白であろう。合成化合物は反応混合物から分離され、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィーまたは再結晶化などの方法によってさらに精製され得る。加えて、様々な合成工程を代替順序または順番で実施して、所望の化合物を得ることができる。本明細書に記載される化合物の合成において有用な合成化学変形および保護基法（保護および脱保護）は当技術分野で公知であり、例えばＲ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｄ．Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９１）；Ｌ．Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９４）；およびＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９５）、ならびにそれらの次の版に記載されているものを含む。
いくつかの実施形態では、開示されている治療剤、例えば、ｉＲＮＡは、低分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）分子またはグアニジウム基にコンジュゲートされ得、別の実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、ＲＧＤペプチド、ペプチド類似体またはペプチド模倣物またはそれらの誘導体にコンジュゲートされ得る。ＲＧＤペプチド、ペプチド類似体またはペプチド模倣物にコンジュゲートされたオリゴヌクレオチドは、αｖβ３インテグリンに結合し得る。
合成インテグリン阻害剤
参考文献：Ｓｕｌｙｏｋ，Ｇ．Ａ．Ｇ．；Ｇｉｂｓｏｎ，Ｃ．；Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｓ．Ｌ．；Ｈoeｌｚｅｍａｎｎ，Ｇ．；Ｗｉｅｓｎｅｒ，Ｍ．；Ｋｅｓｓｌｅｒ Ｈ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，４４，１９３８−１９５０．
いくつかの実施形態では、被験体に投与されるオリゴヌクレオチド剤の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれよりも多くは、腎臓に上手くターゲティングされる。いくつかの実施形態では、被験体に投与されるオリゴヌクレオチド剤の３０〜９０％、４０〜８０％または５０〜７０％、５０〜８０％または５０〜９０％は、腎臓に上手くターゲティングされる。
上記実施形態のいずれにおいても、オリゴヌクレオチド剤／コンジュゲートは、安定化修飾などのさらなる修飾を有し得る。例えば、リンカー分子は、タンパク質、ＰＥＧまたはＲＧＤペプチドをオリゴヌクレオチド剤にテザーし得る。例示的なリンカーは以下に記載されており、アミノリンカー（例えば、アミノオキシリンカー）、チオールリンカー、カルボキシルリンカー、アルデヒドリンカー、ハロアセチルリンカーなどを含み得る。
別の態様では、本発明は、コンジュゲートオリゴヌクレオチド剤を特徴とする。コンジュゲートは、リガンドまたは治療剤にカップリング、例えば連結されたオリゴヌクレオチド剤を含む。オリゴヌクレオチド剤は、リンカー（例えば、ペプチドリンカーまたは本明細書に記載される他のリンカー）によって、リガンドまたは治療剤に必要に応じてカップリングされる。リガンドは、例えば体内におけるオリゴヌクレオチド剤の分布に影響を及ぼすように、および／またはオリゴヌクレオチド剤を特定の組織もしくは細胞にターゲティングするように機能し得る。
リガンドは、オリゴヌクレオチド剤の末端、好ましくはオリゴヌクレオチド剤の３’末端に配置され得る。リガンドはまた、オリゴヌクレオチド剤の５’末端または中間に配置され得る。いくつかの実施形態では、１つを超えるリガンドは、オリゴヌクレオチド剤にカップリングされ得る。例えば、リガンドは、オリゴヌクレオチド剤の３’末端にカップリングされ得る；リガンドは、オリゴヌクレオチド剤の末端、例えば３’末端および中間にカップリングされ得る；リガンドは、オリゴヌクレオチド剤の３’末端および５’にカップリングされ得る；リガンドは、オリゴヌクレオチド剤の３’末端、５’末端および１つまたはそれを超える内部位置にカップリングされ得る。
いくつかの実施形態では、コンジュゲートオリゴヌクレオチド剤のリガンドは、脂質または脂質ベースの分子である。このような脂質または脂質ベースの分子は、好ましくは、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に結合する。ＨＳＡ結合リガンドは、標的組織、例えば体の非腎標組織へのコンジュゲートの分配を可能にする。例えば、標的組織は、限定されないが、肝臓の実質細胞を含む肝臓であり得る。ＨＳＡに結合し得る他の分子もまた、リガンドとして使用され得る。例えば、ネプロキシンまたはアスピリンが使用し得る。脂質または脂質ベースのリガンドは、（ａ）コンジュゲートの分解耐性を増加させ得、（ｂ）標的細胞もしくは細胞膜へのターゲティングまたは輸送を増加させ得、ならびに／または（ｃ）血清タンパク質、例えばＨＳＡへの結合を調整するために使用され得る。
脂質ベースのリガンドは、標的組織へのコンジュゲートの結合をモジュレート、例えば制御するために使用され得る。例えば、ＨＳＡにより強く結合する脂質または脂質ベースのリガンドは、腎臓にターゲティングされる可能性が低いので、身体から取り除かれる可能性が低い。ＨＳＡにより強く結合しない脂質または脂質ベースのリガンドは、コンジュゲートを腎臓にターゲティングするために使用され得る。
好ましい実施形態では、脂質ベースのリガンドはＨＳＡに結合する。好ましくは、それは、コンジュゲートが好ましくは非腎組織に分配されるような十分な親和性でＨＳＡに結合する。しかしながら、親和性は、ＨＳＡリガンド結合が反転され得ないほど強くないことが好ましい。
別の好ましい実施形態では、脂質ベースのリガンドは、コンジュゲートが好ましくは腎臓に分配されるように、ＨＳＡに弱く結合するかまたは全く結合しない。腎細胞をターゲティングする他の部分もまた、脂質ベースのリガンドの代わりにまたはそれに加えて使用され得る。
好ましい実施形態では、脂質または脂質ベースのリガンドは、ホスホロチオエートである。この実施形態では、ホスホロチオエートにおける硫黄の数は、血清タンパク質、例えばＨＳＡへの結合を妨害するほど過度に優勢ではないことが好ましい。
別の実施形態では、リガンドは、ペプチドまたはペプトイドである。ペプトイド、特に、アンテナペディアまたはｔａｔなどの両親媒性種が好ましい。
別の実施形態では、リガンドは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはその誘導体である。ＰＥＧは、例えば薬剤が循環中で保持されることを可能にし得る。ＰＥＧは本質的に両親媒性であり、オリゴヌクレオチド剤の３’末端にカップリングされる場合には特に、安定性を促進し得る。
別の実施形態では、リガンドは、荷電基または部分、例えばポリアミンまたはカチオン基または部分である。このタイプのテザー部分は、例えばその電荷、例えばその負電荷により、細胞へのオリゴヌクレオチド剤の侵入の耐性を克服するのに役立ち得る。好ましくは、これらは３’末端でコンジュゲートされるが、それらはまた、オリゴヌクレオチド分子の５’末端または中間にあり得る。例示的なポリアミンとしては、ポリアルギニン、ポリリシン、ポリヒスチジン、ポリプレプロジンまたはポリモルホリノ、ポリオルニチンが挙げられる。
別の実施形態では、リガンドは、標的細胞、例えば増殖細胞により取り込まれるビタミンまたは他の部分である。これらは、例えば悪性または非悪性タイプの、例えば癌細胞の望ましくない細胞増殖を特徴とする障害を処置するために特に有用である。例示的なビタミンは、ビタミンＢ、例えば葉酸、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、ピリドキサールまたは癌細胞により取り込まれる他のビタミンもしくは栄養素である。また、ＨＳＡおよび低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）が含まれる。
別の実施形態では、リガンドは、細胞透過剤、好ましくはヘリックス細胞透過剤である。好ましくは、薬剤は両親媒性である。例示的な薬剤は、ペプチド、例えばｔａｔまたはアンテナペディアである。薬剤がペプチドである場合、それは、ペプチジル模倣物、インバートマー、非ペプチドまたは擬ペプチド結合およびＤ−アミノ酸の使用を含めて修飾され得る。ヘリックス薬剤は、好ましくは親油性相および疎油性相を有する好ましくはアルファヘリックス薬剤である。
リガンドは、ターゲティング剤であり得る。ターゲティング剤は、糖、ペプチド、例えばＲＧＤ含有ペプチドであり得る。
別の有用なターゲティング剤は、糖、例えばガラクトースおよび／またはそれらの類似体を組み込んだものである。これらは、肝臓、特に肝臓の実質細胞をターゲティングするので有用である。好ましい実施形態では、ターゲティング剤は１つを超える、好ましくは２または３個のガラクトース部分を含む。好ましくは、ターゲティング剤は、例えば互いに約１５Å離れた３個のガラクトース部分を含む。ターゲティング剤は、ラクトースであり得る。ラクトースは、ガラクトースにカップリングされたグルコースである。好ましくは、ターゲティング剤は、３個のラクトースを含む。ターゲティング剤はまた、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−Ａｃ−グルコサミンであり得る。マンノースまたはマンノース−６−リン酸ターゲティング剤は、マクロファージターゲティングに使用され得る。
増殖細胞において豊富なマーカーをターゲティングするペプチドが使用され得る。例えば、ペプチドおよびペプチド模倣物を含むＲＧＤは、癌細胞、特にαｖβ３インテグリンを示す細胞をターゲティングし得る。したがって、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤを含有する環状ペプチド、Ｄ−アミノ酸を含むＲＧＤペプチド、および合成ＲＧＤ模倣物を使用し得る。ＲＧＤに加えて、αｖ−β３インテグリンリガンドをターゲティングする他の部分を使用し得る。一般に、このようなリガンドは、増殖細胞および血管新生を制御するために使用され得る。この種類の好ましいコンジュゲートは、ＰＥＣＡＭ−１、ＶＥＧＦまたは他の癌遺伝子、例えば本明細書に記載される癌遺伝子をターゲティングするオリゴヌクレオチド剤を含む。
一実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、ターゲティング剤、例えば本明細書に記載されるターゲティング剤に連結、例えば直接的に連結、例えば共有結合的または非共有結合的に連結される。これは、「コンジュゲート」アプローチと称される。別の実施形態では、ターゲティング剤（例えば、同じターゲティング剤）は、オリゴヌクレオチド剤と単に混合される。これは、「複合」アプローチと称される。複合アプローチでは、オリゴヌクレオチド剤は、例えばターゲティング基の有無にかかわらず、例えば本明細書に記載される糖またはＲＧＤ構築物の有無にかかわらず、例えばカチオン性分子、例えばカチオン性脂質と混合され得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、例えばターゲティング基の有無にかかわらず、ポリマーベースの系と混合される。他の実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、ナノ粒子と混合される。
本発明において使用するための例示的な治療剤、それらの機能および臨床用途の例は、以下の表１に提供されている。
本発明の治療薬を負荷したエクソソームへの封入に有用な例示的な治療剤は、上記表１に提供されている。したがって、特定の実施形態では、本発明は、治療薬を負荷したエクソソームであって、治療剤が、上記表１に記載されているもののいずれかから選択される治療薬を負荷したエクソソームを提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、治療薬を負荷したエクソソームであって、治療剤が、以下で本明細書に記載されるものから選択される治療薬を負荷したエクソソームを提供する。
いくつかの実施形態では、治療剤は、インクレチン模倣物またはインクレチンの誘導体（例えば、ヒトインクレチン）、例えばリラグルチド（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）、Ｓａｘｅｎｄａ（登録商標））、セマグルチド、エクセナチド（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標）、Ｂｙｄｕｒｅｏｎ（登録商標））またはデュラグルチド（Ｔｒｕｌｉｃｉｔｙ（登録商標））；またはオクトレオチド、カルシトニン（サケカルシトニンを含む）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、テリパラチド（組換え型のＰＴＨ）インスリン、ＧＬＰ−１のペプチドアゴニスト、例えばエクセナチド、リラグルチド、リキシセナチド、アルビグルチドおよび／またはデュラグルチド、ＧＬＰ−１／ＧＩＰコアゴニスト、ＧＬＰ−２アゴニストまたはペプチドＧＰＣＲアゴニストである。
一態様では、本発明の治療薬を負荷したエクソソームは、癌、自己免疫障害、肝障害、遺伝子療法、免疫腫瘍学ならびに本明細書に詳細に記載される他の疾患、障害および状態の文脈における診断薬、予後予測薬または治療薬として有用である。
別の態様では、本発明の治療薬を負荷したエクソソームは、過剰増殖性障害、ウイルス感染もしくは微生物感染、自己免疫疾患、アレルギー状態、炎症性疾患、障害もしくは状態、心血管疾患、代謝性疾患または神経変性疾患の処置、予防または改善において有用である。
いくつかの実施形態では、治療剤は、アレルゲン、アジュバント、抗原または免疫原である。いくつかの実施形態では、アレルゲン、抗原または免疫原は、所望の免疫反応を誘発して、アレルゲン耐性を増加させるか、またはアレルギー反応もしくは免疫反応、例えばアナフィラキシー、気管支炎症、気道狭窄もしくは喘息の可能性を減少させる。いくつかの実施形態では、アレルゲン、抗原または免疫原は、所望の免疫反応を誘発して、ウイルス耐性もしくは病原性耐性を増加させるか、または抗癌免疫反応を誘発する。いくつかの実施形態では、アレルゲンまたは抗原は、所望の免疫反応を誘発して、アレルギー性疾患または自己免疫疾患を処置する。いくつかの実施形態では、治療剤は、免疫学的耐性を増加させて自己免疫疾患を処置するか、または自己免疫反応を減少させて自己免疫疾患を処置する。
本明細書で使用される場合、「アジュバント」という用語は、機構、例えば抗原曝露部位へのプロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）のリクルート；遅延／持続放出（デポー生成）による抗原送達の増加；サイトカイン産生による免疫モジュレーション（Ｔｈ１またはＴｈ２応答の選択）；Ｔ細胞反応の誘導（ペプチド−ＭＨＣ複合体の長期曝露（シグナル１）およびＡＰＣ表面上のＴ細胞活性化共刺激物質の発現の刺激（シグナル２））およびターゲティング（例えば、レクチン受容体をＡＰＣ上にターゲティングする炭水化物アジュバント））などによって、（例えば、ワクチン、自己免疫または癌の状況において）免疫反応を増強する任意の物質を指す。
いくつかの実施形態では、アレルゲンは、食物、動物（例えば、ペット、例えばイヌ、ネコまたはウサギ）または環境アレルゲン（例えば、埃、花粉またはカビ）から選択される。いくつかの実施形態では、アレルゲンは、アワビ（ａｂａｌｏｎｅ）、アワビ（ｐｅｒｌｅｍｏｅｎ）、アセロラ、アラスカポロック、アーモンド、アニシード、リンゴ、アプリコット、アボカド、バナナ、オオムギ、ピーマン、ブラジルナッツ、ソバ、キャベツ、カモミール、コイ、ニンジン、カゼイン、カシュー、トウゴマ、セロリ、セレリアック、チェリー、クリ、ヒヨコ豆、ガルバンゾ、ベンガルグラム、ココア、ココナッツ、タラ、綿実、クアゼットゥ、ズッキーニ、カニ、ナツメヤシ、タマゴ（例えば、鶏卵）イチジク、魚、亜麻、亜麻仁、カエル、ガーデンプラム、ニンニク、グルテン、ブドウ、ヘーゼルナッツ、キウイフルーツ（チャイニーズ・グーズベリー）、豆、レンティル、レタス、ロブスター、ルピナス（ｌｕｐｉｎ）またはルピナス（ｌｕｐｉｎｅ）、ライチ、サバ、トウモロコシ（コーン）、マンゴー、メロン、ミルク（例えば、ウシ）、軟体動物、マスタード、オート麦、牡蠣、モモ、ピーナッツ（または他のグランドナッツもしくはモンキーナッツ）、ナシ、ピーカン、柿、ピスタチオ、松果、パイナップル、ザクロ、ポピーシード、ジャガイモ、カボチャ、米、ライ、サーモン、ゴマ、甲殻類（例えば、甲殻類動物、ブラックタイガーシュリンプ、ブラウンシュリンプ、グリージーバックシュリンプ、インドエビ、ネプチューンローズシュリンプ、シロエビ）、カタツムリ、大豆（ｓｏｙ）、大豆（ｓｏｙｂｅａｎ）（大豆（ｓｏｙａ））、イカ、イチゴ、二酸化硫黄（亜硫酸塩）、ヒマワリ種子、トマト、木の実、ツナ、カブ、クルミまたは小麦（例えば、製パン用小麦、パスタ小麦、カムット、スペル）から選択される。
いくつかの実施形態では、アレルゲンは、アレルギー誘発性タンパク質、ペプチド、オリゴ糖もしくは多糖、毒素、毒液、核酸または他のアレルゲン、例えばｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｌｌｅｒｇｅｎｏｎｌｉｎｅ．ｏｒｇ／ｄａｔａｂａｓｅｂｒｏｗｓｅ．ｓｈｔｍｌに列挙されているものから選択される。いくつかの実施形態では、アレルゲンは、空中真菌、ダニもしくは昆虫アレルゲン、植物アレルゲン、毒液もしくは唾液アレルゲン、動物アレルゲン、接触アレルゲン、寄生虫性アレルゲンまたは細菌性気道アレルゲンから選択される。
いくつかの実施形態では、治療剤は、自己免疫抗原である。いくつかの実施形態では、自己免疫抗原は、以下の表２に列挙されている疾患、障害または状態に対する抗原から選択される。いくつかの実施形態では、抗原は、以下の表２に列挙されているものから選択される。
いくつかの実施形態では、自己免疫抗原は、自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、糖尿病、インスリン依存性エリテマトーデス（全身）、多発性硬化症、乾癬、膵炎、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、自己免疫性脳脊髄炎、実験的グレーブス病、サルコイドーシス、強皮症、原発性胆汁性肝硬変、慢性リンパ性甲状腺炎、リンパ球減少症、セリアック病、心筋炎、シャーガス病、重症筋無力症、糸球体腎炎、ＩＧＡ、再生不良性貧血、ループス腎炎、ハンマン・リッチ症候群、肝炎、慢性活動性皮膚筋炎、糸球体腎炎、膜性皮膚粘膜リンパ節症候群、類天疱瘡、水疱性ベーチェット症候群、脊椎炎、強直性肝炎、自己免疫性クッシング症候群、ギラン・バレー症候群、胆管炎、硬化性抗リン脂質症候群、白斑、甲状腺中毒症、ウェゲナー肉芽腫症、特発性紫斑病、レイノー血小板減少症、自己免疫性溶血性貧血、クリオグロブリン血症、混合性結合組織病、側頭動脈炎、尋常性天疱瘡、アジソン病、リウマチ熱、悪性貧血、円形脱毛症、エリテマトーデス、円板状ナルコレプシー、高安動脈炎、自己免疫性神経炎、実験的結節性多発動脈炎、リウマチ性多発性筋痛、疱疹状皮膚炎、自己免疫性心筋炎、メニエール病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、ランバート・イートン筋無力症候群、硬化性萎縮性苔癬、チャーグ・ストラウス症候群、紅斑症、ライター病、抗糸球体基底膜疾患、自己免疫性多腺性内分泌疾患、フェルティ症候群、グッドパスチャー症候群、無酸症、自己免疫性リンパ増殖性多発神経根ニューロパチー、ブドウ膜・髄膜・脳炎症候群、多発性軟骨炎、再発性アトピー性アレルギー、特発性血小板減少症、スティフ・パーソン症候群、自己免疫性多腺性内分泌障害・カンジダ症・外胚葉性ジストロフィー、表皮剥離、後天性表皮水疱症、自己免疫性精巣炎、眼前庭聴覚症候群（Ｏｃｕｌｏｖｅｓｔｉｂｕｌｏａｕｄｉｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、眼炎、交感神経脊髄炎、シルダーの横断性汎発性脳硬化症、視神経脊髄炎、スティル病、成人発症自己免疫性卵巣炎、ムーレン潰瘍、自己免疫症候群ＩＩ型、多腺性自己免疫性下垂体炎、水晶体起因性ブドウ膜炎、落葉状天疱瘡、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、Ｂ型インスリン抵抗性、自己免疫性萎縮性胃炎、ループス肝炎、自己免疫性聴覚消失、急性出血性白質脳炎、自己免疫性副甲状腺機能低下症または橋本甲状腺症を処置、予防または改善する。いくつかの実施形態では、自己免疫抗原は、自己免疫疾患、例えばアジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、アミロイドーシス、強直性脊椎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、軸索神経ニューロパチー（ＡＭＡＮ）、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、キャッスルマン病（ＣＤ）、セリアック病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＤＰ）、慢性再発性多発性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、チャーグ・ストラウス瘢痕性類天疱瘡／良性粘膜類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、先天性心ブロック、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、デビック病（視神経脊髄炎）、円板状ループス、ドレスラー症候群、子宮内膜症、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、好酸球性筋膜炎、結節性紅斑、本態性混合性クリオグロブリン血症、エバンス症候群、線維筋痛症、線維化性肺胞炎、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎）、巨細胞性心筋炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、多発性血管炎を伴う肉芽腫症、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）、妊娠性疱疹もしくは妊娠性類天疱瘡（ＰＧ）、低ガンマグロブリン血症、ＩｇＡ腎症、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、封入体筋炎（ＩＢＭ）、間質性膀胱炎（ＩＣ）、若年性関節炎、若年糖尿病（１型糖尿病）、若年性筋炎（ＪＭ）、川崎病、ランバート・イートン症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、木質性結膜炎、線形ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ループス、慢性ライム病、メニエール病、顕微鏡的多発性血管炎（ＭＰＡ）、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、ムーレン潰瘍、ムッハ・ハーベルマン病、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、好中球減少症、眼瘢痕性類天疱瘡、視神経炎、回帰性リウマチ（ＰＲ）、ＰＡＮＤＡＳ（連鎖球菌に関連する小児性自己免疫性神経精神障害）、傍腫瘍性小脳変性症（ＰＣＤ）、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンバーグ症候群、扁平炎（末梢ブドウ膜炎）、パーソネージ・ターナー症候群、天疱瘡、末梢性ニューロパチー、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血（ＰＡ）、ＰＯＥＭＳ症候群（ポリニューロパチー、臓器肥大、内分泌障害、単クローン性ガンマグロブリン血症、皮膚変化）、結節性多発性動脈炎、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切除後症候群、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン性皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、真性赤血球形成不全（ＰＲＣＡ）、壊疽性膿皮症、レイノー現象、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、ライター症候群、再発性多発性軟骨炎、レストレスレッグ症候群（ＲＬＳ）、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ（ＲＡ）、サルコイドーシス、シュミット症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、精子および精巣自己免疫、スティフ・パーソン症候群（ＳＰＳ）、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スサック症候群、交感性眼炎（ＳＯ）、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、トロサ・ハント症候群（ＴＨＳ）、横断性脊髄炎、１型糖尿病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、未分化結合組織病（ＵＣＴＤ）、ブドウ膜炎、血管炎、白斑またはウェゲナー肉芽腫症（現在は、多発性血管炎を伴う肉芽腫症（ＧＰＡ）と称される）を処置、予防または改善する。
いくつかの実施形態では、抗原は、脳反応性抗原である。例示的な脳反応性抗原は、以下の表３に記載されている。
いくつかの実施形態では、治療剤または疾患は、以下の表４に列挙されているものから選択される。
いくつかの実施形態では、本発明は、免疫反応をモジュレートする方法であって、それを必要とする患者に、有効量の治療薬を負荷したエクソソームを投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、患者は、過剰増殖性の疾患、障害または状態、例えば癌を患っている。いくつかの実施形態では、患者は、自己免疫疾患、障害または状態を患っている。いくつかの実施形態では、インビボにおける治療剤の標的は、以下の表５に列挙されているものの１つである。いくつかの実施形態では、治療薬を負荷したエクソソームは、表５に列挙されている化合物またはその薬学的に許容され得る塩と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、エクソソームに負荷された治療剤および表５の同時投与化合物は、表５の標的をモジュレートする。
表５において使用される略語：ＡＭＰＣＰ、アデノシン５’−（α，β−メチレン）ジホスフェート；ＡＲＧ、アルギナーゼ；ＣＯＸ２、シクロオキシゲナーゼ２；ＣＳＦ、コロニー刺激因子；ＣＴＬ、細胞傷害性Ｔリンパ球；ＤＣ、樹状細胞；ＨＩＦ１α、低酸素誘導因子１α；ＩＤＯ、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ；ＩＦＮ、インターフェロン；ＩＬ、インターロイキン；ｉＮＯＳ、誘導型一酸化窒素合成酵素；ＭＤＳＣ、骨髄由来サプレッサー細胞；ＭＯＡ、作用機構；ＭＳＰ、マクロファージ刺激タンパク質；ＮＫ、ナチュラルキラー；ＰＤＥ５、５型ホスホジエステラーゼ；ＰＧＥ２、プロスタグランジンＥ２；ＰＭＮＣ、末梢単核細胞；ＲＯＳ、活性酸素種；ＴＡＦ、腫瘍関連線維芽細胞；ＴＡＭ、腫瘍関連マクロファージ；ＴＣＲ、Ｔ細胞受容体；ＴＤＯ、トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ；ＴＨ、Ｔヘルパー；ＴＧＦβ、形質転換成長因子β；ＴＬＲ、Ｔｏｌｌ様受容体；ＴＭＥ、腫瘍微小環境；ＴＮＦ、腫瘍壊死因子；ＴＲｅｇ、調節性Ｔ；ＴＳＰ１、トロンボスポンジン１。＊癌免疫療法のために提案されている低分子薬物標的が列挙されている。‡いくつかの例では、提供されている臨床開発状況は、非免疫腫瘍学適応症に関するものである。これらの場合では、文献は、先天性免疫機能へのその影響を考慮して、臨床的検討を支援する。§科学文献は、ｍＡｂを使用してＣＸＣＲ２拮抗作用を説明する一方、いくつかの低分子ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２アンタゴニストが臨床試験に到達しており、原則として同様の有効性を示すことができた。
非コードＲＮＡ治療剤
ｎｃＲＮＡおよびｌｎｃＲＮＡ
改善されたバイオインフォマティクスと組み合わせた次世代シークエンシング技術の広範な応用は、量および多様性の観点の両方においてトランスクリプトームの複雑性を明らかにするために役立っている。ヒトでは、ゲノムの７０〜９０％が転写されるが、実際には約２％がタンパク質をコードするに過ぎない。したがって、体は、長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）と称される巨大なクラスの非翻訳転写産物を産生し、これは、過去１０年間で多くの注目を集めている。最近の研究では、ｌｎｃＲＮＡは、多数の細胞内シグナル伝達経路に関与し、分子機構の広範な選択を介して遺伝子発現を能動的に調節するという事実が明らかになった。
ヒトおよび他の哺乳動物ゲノムは、何万もの長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）を広く転写する。公的研究コンソーシアムＧｅｎＣｏｄｅによって作成されたデータの最新版（バージョン＃２７）は、約２８，０００の転写産物をもたらすヒトゲノム中の１６，０００弱のｌｎｃＲＮＡをカタログ化する；他のデータベースを含めると、４０，０００超のｌｎｃＲＮＡが公知である。
これらのｍＲＮＡ様転写産物は、ほぼすべての遺伝子調節レベルにおいて、および胚発生のような生物学的プロセスにおいて、制御的役割を果たすことが見出されている。また、正常な生理学的プロセスおよび癌を含む複数の疾患状態では、異常に発現されたｌｎｃＲＮＡが重要な役割を果たすことを示唆する証拠が増えている。ｌｎｃＲＮＡは、長鎖オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を欠く２００ヌクレオチド超の（例えば、約２００〜約１２００ｎｔ、約２５００ｎｔまたはそれを超える）転写産物として一般に定義されるグループである。「非コードＲＮＡ」（ｎｃＲＮＡ）という用語は、ｌｎｃＲＮＡおよび例えば約２００ｎｔ未満、例えば約３０〜２００ｎｔのより短い転写産物を含む。いくつかのｌｎｃＲＮＡ、例えばｇａｄｄ７４およびｌｎｃＲＮＡ−ＲｏＲ５は、細胞周期調節因子、例えばサイクリン、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）、ＣＤＫ阻害剤およびｐ５３をモジュレートするので、細胞周期進行に対するフレキシビリティおよびロバスト性のさらなる層を提供する。加えて、いくつかのｌｎｃＲＮＡは、セントロメアサテライトＲＮＡ（これは、動原体形成に必須であるので、ヒトおよびハエにおける有糸分裂中の染色体分離に重要である）などの有糸分裂プロセスに関連する。別の核内ｌｎｃＲＮＡであるＭＡ−ｌｉｎｃ１は、シスで機能してその隣接遺伝子Ｐｕｒα（細胞増殖の調節因子）の発現を抑制することによって、Ｍ期の終了を調節する。細胞周期の脱調節は癌の発生および成長と密接に関連するので、細胞周期調節ｌｎｃＲＮＡは発癌特性を有し得る。
したがって、いくつかの実施形態では、例えば目的の特定の組織または器官へのｎｃＲＮＡの送達は、異常なＲＮＡ発現レベルを修正するか、または疾患を引き起こすｌｎｃＲＮＡのレベルをモジュレートする。したがって、いくつかの実施形態では、本発明は、治療薬を負荷したエクソソームであって、治療薬が非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）である治療薬を負荷したエクソソームを提供する。いくつかの実施形態では、ｎｃＲＮＡは、約２００ヌクレオチド（ｎｔ）長またはそれを超える長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、治療薬は、約２５ｎｔまたは約３０ｎｔ〜約２００ｎｔ長のｎｃＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ｌｎｃＲＮＡは、約２００ｎｔ〜約１，２００ｎｔ長である。いくつかの実施形態では、ｌｎｃＲＮＡは、約２００ｎｔ〜約１，１００、約１，０００、約９００、約８００、約７００、約６００、約５００、約４００または約３００ｎｔ長である。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）
いくつかの実施形態では、治療薬は、ｍｉＲＮＡである。当業者によって認識されるように、ｍｉＲＮＡは、それらの生物学的に活性な形態で約１７〜約２５ヌクレオチド塩基（ｎｔ）長の低分子非コードＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ｍｉＲＮＡは、約１７〜約２５、約１７〜約２４、約１７〜約２３、約１７〜約２２、約１７〜約２１、約１７〜約２０、約１７〜約１９、約１８〜約２５、約１８〜約２４、約１８〜約２３、約１８〜約２２、約１８〜約２１、約１８〜約２０、約１９〜約２５、約１９〜約２４、約１９〜約２３、約１９〜約２２、約１９〜約２１、約２０〜約２５、約２０〜約２４、約２０〜約２３、約２０〜約２２、約２１〜約２５、約２１〜約２４、約２１〜約２３、約２２〜約２５、約２２〜約２４または約２２ｎｔ長である。ｍｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡ翻訳を減少させることによって、転写後的に遺伝子発現を調節する。ｍｉＲＮＡは、負の調節因子として機能すると考えられる。一般に、３つの形態のｍｉＲＮＡがある：一次ｍｉＲＮＡ（プリｍｉＲＮＡ）、未成熟ｍｉＲＮＡ（プレｍｉＲＮＡ）および成熟ｍｉＲＮＡ。一次ｍｉＲＮＡは、約数百塩基〜１ｋｂ超のステムループ構造転写産物として発現される。プリｍｉＲＮＡ転写産物は、Ｄｒｏｓｈａ（これは、ステムループの基部付近のステムの両方の鎖を切断するＲＮａｓｅＩＩエンドヌクレアーゼである）によって核内で切断される。Ｄｒｏｓｈａは互い違いの切断でＲＮＡ二重鎖を切断し、５’リン酸および３’末端の２ｎｔのオーバーハングが残る。切断産物である未成熟ｍｉＲＮＡ（プレｍｉＲＮＡ）は約６０〜約１１０ｎｔ長であり、折り畳まれてヘアピン構造が形成される。プレｍｉＲＮＡは、Ｒａｎ−ＧＴＰおよびエクスポーチン−５によって、核から細胞質に輸送される。プレｍｉＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒと称される別のＲＮａｓｅＩＩエンドヌクレアーゼによって、細胞質内でさらにプロセシングされる。Ｄｉｃｅｒは５’リン酸および３’オーバーハングを認識し、ステム−ループ接合部でループを切断して、ｍｉＲＮＡ二重鎖を形成する。ｍｉＲＮＡ二重鎖は、ＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に結合し、アンチセンス鎖が優先的に分解され、センス鎖成熟ｍｉＲＮＡがＲＩＳＣをその標的部位に誘導する。それは、約１７〜約２５ｎｔ長の生物学的に活性な形態のｍｉＲＮＡである成熟ｍｉＲＮＡである。いくつかの実施形態では、本開示の主題の微小胞によって封入されるｍｉＲＮＡは、ｍｉＲ−１５５（これは、Ｔ細胞およびＢ細胞成熟ならびに先天性免疫反応の調節因子として作用することが公知である）またはｍｉＲ−２２３（これは、好中球増殖および活性化の調節因子として公知である）から選択される。他の非天然ｍｉＲＮＡ、例えばｉＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ）または天然もしくは非天然オリゴヌクレオチドは、ミルク由来エクソソーム中に存在し得、この用語が本明細書で使用される場合、封入治療剤を表し得る。
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）
いくつかの実施形態では、治療剤は、ｓｉＲＮＡである。低分子干渉ＲＮＡまたはサイレンシングＲＮＡとも称される小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、（ｍｉＲＮＡと同様の長さの）２０〜２５塩基対長の二本鎖ＲＮＡ分子のクラスである。ｓｉＲＮＡは、一般に、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路を介してそれらの生物学的効果を発揮する。ｓｉＲＮＡは、一般に、リボヌクレアーゼＤｉｃｅｒによるより長鎖前駆体ＲＮＡの酵素的開裂によって産生される２ヌクレオチドのオーバーハングを有する。ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路を介した破壊のためにそれらのＲＮＡをターゲティングすることによって、特定の遺伝子の発現を制限し得る。それは、転写後にｍＲＮＡを分解して翻訳を妨げることによって、相補的ヌクレオチド配列を有する特定の遺伝子の発現を妨害する。ｓｉＲＮＡはまた、ＲＮＡｉ関連経路において抗ウイルス機構として作用し得るか、またはゲノムのクロマチン構造の形成において役割を果たし得る。
治療剤はまた、ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、または本明細書に記載される他の核酸およびそれらの類似体から選択され得る。
一態様では、本発明は、治療薬を負荷したミルクエクソソームであって、治療剤が核酸であり、治療剤が、ミルクエクソソームが由来するミルク中に天然に存在しない治療薬を負荷したミルクエクソソームを提供する。
いくつかの実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡである。
いくつかの実施形態では、核酸は、アンチセンスＲＮＡである。
いくつかの実施形態では、核酸は、約３０〜約２００ヌクレオチド（ｎｔ）長の非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）または約２００〜約８００ｎｔ長の長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）である。
いくつかの実施形態では、ｌｎｃＲＮＡは、長鎖遺伝子間非コードＲＮＡ（ｌｉｎｃＲＮＡ）、プレ転写産物、プレｍｉＲＮＡ、プレｍＲＮＡ、競合内因性ＲＮＡ（ｃｅＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）、偽遺伝子、ｒＲＮＡまたはｔＲＮＡである。
いくつかの実施形態では、ｎｃＲＮＡは、ｐｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）、一次ｍｉＲＮＡ（プリｍｉＲＮＡ）または未成熟ｍｉＲＮＡ（プレｍｉＲＮＡ）から選択される。
いくつかの実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡまたは低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）である。
いくつかの実施形態では、治療薬は、疎水基にコンジュゲートされた核酸である。
いくつかの実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、約３０〜約２００ヌクレオチド（ｎｔ）長の非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）または約２００〜約８００ｎｔ長の長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）から選択される。
いくつかの実施形態では、ミルクエクソソームは、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、バッファロー、ヤクまたはヒトのミルクまたは初乳に由来する。
２．定義
本明細書で使用される用語は、当業者によって十分に理解されていると考えられるが、本開示の主題の説明を容易にするために、定義を本明細書に示す。
特に定義がない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および科学用語は、本開示の主題が属する分野の当業者に通常理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または均等の任意の方法、デバイスおよび材料は、本開示の主題の実施または試験において使用され得るが、代表的な方法、デバイスおよび材料がここに記載されている。
特許請求の範囲を含む本出願で使用する場合、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」という用語は、「１またはそれを超える」を意味する。したがって、例えば、「細胞」への言及は、複数のこのような細胞を含む、など。
特に指示がない限り、本明細書および特許請求の範囲で使用される成分、特性、例えば反応条件などの量を表すすべての数は、すべての場合において、「約」という用語によって修飾されていると理解すべきである。したがって、特に反対の指示がない限り、本明細書および特許請求の範囲に記載されている数的パラメータは、本発明の範囲内において得ることが求められる特性に応じて変動し得る近似値である。
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、質量、重量、時間、容量、濃度またはパーセンテージの値または量に言及する場合、以下の変動は開示される方法を実施するために適切であるので、指定量から、いくつかの実施形態では±２０％、いくつかの実施形態では±１０％、いくつかの実施形態では±５％、いくつかの実施形態では±１％、いくつかの実施形態では±０．５％、いくつかの実施形態では±０．１％の変動を包含することを意味する。
本明細書で使用される場合、範囲は、「約」ある特定の値または「約」ある値〜「約」別の特定の値として表し得る。本明細書に開示される多数の値があり、本明細書では、値それ自体に加えて各値も「約」その特定の値として開示されることも理解される。例えば、値「１０」が開示される場合、「約１０」も開示されている。２つの特定の単位間の各単位も開示されていることも理解される。例えば、「１０〜１５」の範囲が開示される場合、１１、１２、１３および１４も開示されている。
本明細書で使用される場合、「処置」、「処置する」および「処置すること」という用語は、本明細書に記載されるように、疾患または障害または１つもしくはそれを超えるそれらの症候を回復させ、軽減し、その発症を遅延させ、またはその進行を阻害することを指す。いくつかの実施形態では、処置は、１つまたはそれを超える症候が現れた後に投与され得る。他の実施形態では、処置は、症候の非存在下で投与され得る。例えば、処置は、（例えば、症候歴を考慮して、および／または遺伝的もしくは他の感受性因子を考慮して）症候の発症前に感受性個体に投与され得る。処置はまた、例えば、再発を予防しまたは遅延させるために、症候が解消した後に継続され得る。
本明細書で使用される場合、「癌」という用語は、白血病、癌腫、黒色腫および肉腫を含む、動物に見られるすべてのタイプの癌または新生物または悪性腫瘍を指す。「白血病」は、血液生成器官の進行性の悪性疾患を広く意味し、一般には、血液および骨髄におけるリンパ球およびその前駆体の歪められた増殖および発生により特徴付けられる。白血病疾患としては、例えば、急性非リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、非白血性白血病、白血球性白血病（ｌｅｕｋｏｃｙｔｈｅｍｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、好塩基性白血病、芽細胞白血病、ウシ白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚白血病、胎生細胞性白血病、好酸球性白血病、グロス白血病、ヘアリーセル白血病、血芽球性白血病、血球始原細胞白血病、組織球白血病、幹細胞白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ芽球性白血病、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ肉腫細胞性白血病、肥満細胞性白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄性白血病、骨髄顆粒球性白血病、骨髄単球性白血病、ネーゲリ白血病、形質細胞性白血病（ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、形質細胞性白血病（ｐｌａｓｍａｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、前骨髄球性白血病、リーダー細胞性白血病、シリング白血病、幹細胞白血病、亜白血性白血病および未分化細胞白血病が挙げられる。
「癌腫」という用語は、周囲組織へ浸潤し転移を生じる傾向がある上皮細胞からなる悪性の新成長物を指す。例示的な癌腫としては、例えば、小葉癌腫（ａｃｉｎａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、小葉癌腫（ａｃｉｎｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺嚢癌腫、腺様嚢胞癌腫、腺癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｄｅｎｏｍａｔｏｓｕｍ）、副腎皮質の癌腫、肺胞腺癌腫、肺胞細胞癌腫、基底細胞癌腫（ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底細胞癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、類基底細胞癌腫、基底有棘細胞癌腫、細気管支肺胞癌腫、細気管支癌腫、気管支原性癌腫、脳状癌腫、胆管細胞性癌腫、絨毛癌腫、膠様癌腫、コメド癌腫、体癌腫（ｃｏｒｐｕｓ ｃａｎｃｅｒ）、篩状癌腫、鎧状癌腫、皮膚癌腫、円筒状癌腫、円柱細胞癌腫、腺管癌腫、硬性癌腫（ｃａｎｃｅｒ ｄｕｒｕｍ）、胎児性癌腫、脳様癌腫、類表皮癌腫、上皮腺癌腫、外方増殖性癌腫、潰瘍癌腫、線維癌腫、ゼラチン状癌腫、膠状癌腫、巨細胞癌腫、腺癌腫（ｇｌａｎｄｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、顆粒膜細胞癌腫、毛母体癌腫、血性癌腫、肝細胞癌腫、ヒュルトレ細胞癌腫、硝子様癌腫、副腎様癌腫、乳児型胎児性癌腫、上皮内癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ）、表皮内癌腫（ｉｎｔｒａｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、上皮内癌腫（ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、Ｋｒｏｍｐｅｃｈｅｒ癌腫、Ｋｕｌｃｈｉｔｚｋｙ細胞癌腫、大細胞癌腫、レンズ状癌腫（ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、レンズ状癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｅ）、脂肪腫性癌腫、リンパ上皮癌腫、髄様癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｅｄｕｌｌａｒｅ）、髄様癌腫（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、黒色癌腫、軟癌腫、粘液性癌腫（ｍｕｃｉｎｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液性癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｕｃｉｐａｒｕｍ）、粘液細胞癌腫、粘液性類表皮癌腫、粘液癌腫、粘液性癌腫（ｍｕｃｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液腫様癌腫、鼻咽頭癌腫、えん麦細胞癌腫、骨化性癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｓｓｉｆｉｃａｎｓ）、類骨癌腫、乳頭癌腫、門脈周囲癌腫、前浸潤癌腫（ｐｒｅｉｎｖａｓｉｖｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、有棘細胞癌腫、粥状癌腫、腎臓の腎細胞癌腫、予備細胞癌腫（ｒｅｓｅｒｖｅ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肉腫様癌腫、シュナイダー癌腫、硬性癌腫、陰嚢癌腫、印環細胞癌腫、単純癌腫、小細胞癌腫、ソラノイド癌腫、回転楕円面細胞癌腫、紡錘細胞癌腫、海綿様癌腫、扁平上皮癌腫、扁平上皮細胞癌腫、ストリング癌腫、毛細血管拡張性癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｔｉｃｕｍ）、毛細血管拡張性癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔｏｄｅｓ）、移行上皮癌腫、結節癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、結節癌腫（ｔｕｂｅｒｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、疣状癌腫および絨毛癌腫が挙げられる。
「肉腫」という用語は、一般に、胚性結合組織などの物質からなる腫瘍をいい、一般に、線維性物質または均一な物質中に埋め込まれた密にパックされた細胞から構成される。肉腫としては、例えば、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、Ａｂｅｍｅｔｈｙ肉腫、脂肪肉腫（ａｄｉｐｏｓｅ ｓａｒｃｏｍａ）、脂肪肉腫（ｌｉｐｏｓａｒｃｏｍａ）、胞状軟部肉腫、エナメル上皮肉腫、ブドウ状肉腫、緑色腫肉腫、絨毛癌腫、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫（Ｗｉｌｎｓ’ ｔｕｍｏｒ ｓａｒｃｏｍａ）、子宮内膜肉腫、間質性肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパ―細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉肉腫、傍骨性肉腫、細網肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫、滑膜肉腫および毛細血管拡張性肉腫が挙げられる。
「黒色腫」という用語は、皮膚および他の器官のメラニン細胞系から生じる腫瘍を意味することとする。黒色腫としては、例えば、末端部黒子黒色腫、メラニン欠乏性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング‐パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子黒色腫、悪性黒色腫、結節性黒色腫、爪下黒色腫および表在拡大型黒色腫が挙げられる。
さらなる癌としては、例えば、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、乳癌、卵巣癌、肺癌、横紋筋肉腫、原発性血小板増加症、原発性マクログロブリン血症、小細胞肺腫瘍、原発性脳腫瘍、胃癌、結腸癌、悪性膵島細胞腫（ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｉｎｓｕｌａｎｏｍａ）、悪性カルチノイド、前癌性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、神経芽細胞腫、食道癌、泌尿生殖器癌、悪性高カルシウム血症、子宮頸癌、子宮内膜癌および副腎皮質癌が挙げられる。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌、子宮癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌および膵臓癌からなる群より選択される。
３．使用、製剤化および投与
薬学的に許容され得る組成物
別の実施形態によれば、本発明は、本発明の治療薬を負荷したエクソソームと、薬学的に許容され得る担体、アジュバントまたはビヒクルとを含む組成物を提供する。治療薬を負荷したエクソソーム内に封入された治療剤の量は、それを必要とする患者における関連疾患、障害または状態を処置するために有効な量である。特定の実施形態では、本発明の組成物は、このような組成物を必要とする患者への投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、患者への経口投与のために製剤化される。
本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、動物、例えば哺乳動物、例えばヒトを意味する。
「薬学的に許容され得る担体、アジュバントまたはビヒクル」という用語は、それを使用して製剤化される治療薬を負荷したエクソソームの薬理学的活性を無効にしない非毒性担体、アジュバントまたはビヒクルを指す。本発明の組成物で使用され得る薬学的に許容され得る担体、アジュバントまたはビヒクルとしては、限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばフォスフェート、グリシン、ソルビン酸もしくはソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が含まれる。
本発明の組成物は、経口、非経口、吸入噴霧、局所、経直腸、経鼻、口腔、経膣または埋め込み式リザーバーにより投与され得る。本明細書で用いる「非経口」という用語には、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝臓内、病巣内および頭蓋内への注射または注入技術が含まれる。組成物は、経口、腹腔内または静脈内で投与することが好ましい。本発明の組成物の滅菌注射剤の形態は、水性または油性の懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して、当技術分野で公知の技術にしたがって製剤化され得る。滅菌注射用製剤はまた、非毒性の非経口的に許容され得る希釈剤もしくは溶媒中の滅菌注射液剤または懸濁剤、例えば１，３−ブタンジオール中の液剤であり得る。使用され得る許容され得るビヒクルおよび溶媒には、水、リンガー溶液および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌固定油は、溶媒または懸濁化媒体として慣用的に使用される。
いくつかの実施形態では、治療薬を負荷したエクソソームまたはその医薬組成物は、経口、静脈内、皮下、鼻腔内、吸入、筋肉内、眼内、腹腔内、気管内、経皮、口腔、舌下、直腸、局所、局所注射または外科的な埋め込み経路によって投与される。いくつかの実施形態では、投与経路は経口である。
いくつかの実施形態では、治療薬を負荷したエクソソームの治療的、診断的および予後的属性は、非経口的手段によって達成される。送達後にミルク由来エクソソームを使用して封入治療剤の全身分布を達成することは、このアプローチの主な目的であるが、ターゲティングリガンド（例えば、抗体、ペプチド、アプタマーなど：例えば、Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ａ．Ｄら、Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ ２０１３；１９（３５）：６３１５−６３２９を参照のこと）を使用して、目的の部位への選択的送達を達成することも可能である。
治療薬を負荷したエクソソームの送達を補助するために、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の無刺激性固定油を用いることができる。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、注射剤の製剤化に有用であり、オリーブ油またはヒマシ油などの天然の薬学的に許容され得る油（特にそのポリオキシエチル化されたタイプのもの）も同様に有用である。これらの油状液剤または懸濁剤は、カルボキシメチルセルロースまたは乳剤および懸濁剤を含む薬学的に許容され得る剤形の調製で通常用いられる同様の分散剤などの長鎖アルコール希釈剤または分散剤も含み得る。Ｔｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓなどの他の通常使用される界面活性剤、および、薬学的に許容され得る固体、液体または他の剤形の生産において通常使用される他の乳化剤またはバイオアベイラビリティ増進剤を製剤化のために使用され得る。
本発明の薬学的に許容され得る組成物は、限定されないが、カプセル剤、錠剤、水性の懸濁剤または液剤を含む経口的に許容され得る任意の剤形で経口投与され得る。経口使用のための錠剤の場合、通常使用される担体には、ラクトースまたはトウモロコシでんぷんが含まれる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑剤も通常添加される。カプセルの形態での経口投与に有用な希釈剤には、ラクトースまたは乾燥トウモロコシでんぷんが含まれる。経口使用のために水性懸濁剤が必要な場合、活性成分を、乳化剤および懸濁化剤と混合する。望むなら、特定の甘味剤、香味剤または着色剤も加えることができる。
あるいは、本発明の薬学的に許容され得る組成物は、直腸投与のための坐剤の形態で投与され得る。これらは、その薬剤を、室温で固体であるが直腸温度で液体であり、したがって直腸内で溶融して薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と混合することによって調製され得る。このような材料には、ココアバター、蜜ろうおよびポリエチレングリコールが含まれる。
本発明の薬学的に許容され得る組成物は、特に、処置の標的が、眼、皮膚または下部腸管の疾患などの局所適用により容易に到達できる領域または器官を含む場合、局所で投与することもできる。適切な局所製剤物は、これらの領域または器官のそれぞれを目的として容易に調製される。
下部腸管のための局所適用は、直腸坐剤製剤化（上記を参照のこと）または適切なかん腸製剤で実施され得る。局所用経皮パッチも使用され得る。
局所適用のために、提供される薬学的に許容され得る組成物は、１つまたはそれを超える担体中に懸濁または溶解させた活性成分を含む適切な軟膏剤で製剤化され得る。本発明の治療薬を負荷したエクソソームの局所投与のための担体としては、限定されないが、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ろうおよび水が含まれる。あるいは、提供される薬学的に許容され得る組成物は、１つまたはそれを超える薬学的に許容され得る担体中に懸濁または溶解させた活性成分を含む適切なローション剤またはクリーム剤で製剤化され得る。適切な担体としては、限定されないが、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられる。
眼科用の場合、提供される薬学的に許容され得る組成物は、塩化ベンジルアルコニウムなどの保存剤を使用してかまたは用いずに、等張性のｐＨ調節滅菌食塩水中の微粉末懸濁剤として、または、好ましくは等張性のｐＨ調節滅菌食塩水中の液剤として製剤化され得る。あるいは、眼における使用のために、薬学的に許容され得る組成物を、ワセリンなどの軟膏剤で製剤化され得る。
本発明の薬学的に許容され得る組成物は、鼻エアロゾルまたは吸入により投与することもできる。このような組成物は、医薬製剤化技術分野で周知の技術によって調製され、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティを促進させる吸収促進剤、フルオロカーボンおよび／または他の慣用的な可溶化剤または分散剤を使用して、生理食塩水中の液剤として調製され得る。
最も好ましくは、本発明の薬学的に許容され得る組成物は、経口投与のために製剤化される。このような製剤は、食物と共にまたは食物なしで投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明の薬学的に許容され得る組成物は、食物なしで投与される。他の実施形態では、本発明の薬学的に許容され得る組成物は、食物と共に投与される。
担体材料と混合して単一剤形の組成物を得ることができる本発明の治療薬を負荷したエクソソームの量は、処置される宿主、具体的な投与方式および当業者に公知の他の要因によって変動する。好ましくは、提供される組成物は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲の治療剤の投与量が、これらの組成物を受け入れる患者に投与され得るように製剤化されるべきである。
特定の任意の患者に対する具体的な投薬および処置レジメンは、使用する具体的な治療薬を負荷したエクソソームの活性、年齢、体重、全体的な健康、性別、食事、投与時間、排出速度、薬物の組み合わせ、ならびに担当医の判断および処置されている具体的な疾患の重篤度を含む様々な因子に依存することも理解すべきである。組成物中の本発明の治療薬を負荷したエクソソームの量は、組成物中の具体的な治療薬を負荷したエクソソームにも依存する。
治療薬を負荷したエクソソームおよびその薬学的に許容され得る組成物の使用
治療薬を負荷したエクソソームと、薬学的に許容され得る賦形剤、希釈剤または担体とを含む薬学的に許容され得る組成物は、様々な疾患、障害または状態を処置するために有用である。このような疾患、障害または状態としては、本明細書に記載されるものが挙げられる。
一態様では、本開示のエクソソームは、生物学的治療剤のための薬物送達ビヒクルとして有用であり、生物学的治療剤は、ミルク由来エクソソームなどのエクソソーム内に封入される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患または状態、例えば肺、眼、肝臓またはウイルス性の疾患または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２００９／０７３８０９号、国際公開第２００６／０２０７６８号または国際公開第２００６／０７８２７８号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＴＴＲ媒介性疾患または状態、例えばアミロイドーシスの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、ＴＴＲ媒介性疾患または状態は、老人性全身性アミロイドーシス（ＳＳＡ）（老人性心臓アミロイドーシス（ＳＣＡ）とも称される）、ＴＴＲアミロイドーシス（ＡＴＴＲ（アミロイドーシス−トランスサイレチン型）とも称される）、軟髄膜／ＣＮＳ（中枢神経系）アミロイドーシス、ＴＴＲ関連眼アミロイドーシスまたは全身性家族性アミロイドーシスから選択される。いくつかの実施形態では、生物製剤は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１５／０４２５６４号、国際公開第２０１１／０５６８８３号、国際公開第２０１６／０３３３２６号、国際公開第２０１０／０４８２２８号、国際公開第２０１１／１２３４６８号または国際公開第２０１４／０２２７３９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、血友病の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１３／１６３４３０号、国際公開第２０１５／１７５５１０号または国際公開第２０１２／１７７９４９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、補体媒介性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１４／１６０１２９号、国際公開第２００４／０８０４０６号、国際公開第２００９／０８２６０７号または国際公開第２００４／０９１５１５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ポルフィリン症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１３／１５５２０４号、国際公開第２０１６／０６１４８７号または国際公開第２００８／１３１４１９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。例えば、国際公開第２００８／１３１４１９号には、ＲＮＡｉ剤の糖コンジュゲートが開示されており、その送達および／または特性は、開示されているエクソソームへの封入によって増強され得る。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、原発性高シュウ酸尿症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１６／０５７８９３号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ベータサラセミアの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１６／０８５８５２号、国際公開第２０１２／１３５２４６号または国際公開第２００８／０３６９３３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、アルファ−１抗トリプシン欠乏症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１３／０１３０１７号、国際公開第２０１３／０１３０１９号、国際公開第２０１２／１７８０３３号または国際公開第２０１４／１９０１３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、高コレステロール血症または高脂血症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１２／０５８６９３号、国際公開第２０１１／０３８０３１号、国際公開第２０１１／０２８９３８号、国際公開第２０１０／１４８０１３号、国際公開第２０１１／０５３９９４号、国際公開第２００７／１３４１６１号、国際公開第２００９／１３４４８７号、国際公開第２０１５／１２３２６４号、国際公開第２０１１／０２９０１６号、国際公開第２００９／１２９４６５号または国際公開第２００９／１１１６５８号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、慢性肝感染症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１４／０１４８４９７号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、医薬品として、および所定の遺伝子の発現を阻害するための方法において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０００／０４４８９５号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第８，２７３，８６８号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、ＨＣＶまたはＤ型肝炎ウイルス（ＨＤＶ）感染症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、例えば、少なくとも２つの異なるＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターを含む修飾ＨＢＶターゲティングオリゴヌクレオチドまたは発現構築物であり、各プロモーターは、ＲＮＡエフェクター分子をコードする核酸配列に作動可能に連結された。いくつかの実施形態では、生物製剤は、被験体における遺伝子の発現を検出する方法または過敏症反応を軽減する方法において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、標的配列と相同な配列を含む部分二本鎖ＲＮＡ分子である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、完全二本鎖ＲＮＡである。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３５２，０４８号、米国特許出願公開第２０１５／０１１９４４５号、米国特許第８，３５０，０２１号、欧州特許出願公開第１８３３９６７号、欧州特許出願公開第２３１６９４２号、米国特許出願公開第２０１２／００２８３４８号、米国特許第７，９８５，５８１号、欧州特許出願公開第２１６９０７２号、欧州特許出願公開第１７８４４９２号、米国特許出願公開第２０１６／０１２２７５９号、欧州特許出願公開第２９９４１６７号、国際公開第２０１４／１８２６６１号、米国特許出願公開第２０１４／０２７５２１１号、欧州特許出願公開第２７２３８６５号、国際公開第２０１２／１７７９０６号、欧州特許出願公開第１１７１５８６号、欧州特許出願公開第１１７１５８６号、欧州特許出願公開第１５９７３５１号、欧州特許出願公開第１５９７３５１号、国際公開第２０１６／０７７３２１号または国際公開第２０１６／０７７３４９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、一本鎖ＲＮＡウイルス、例えばＨＣＶの複製のモジュレートにおいて有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、二本鎖ＲＮＡ媒介性遺伝子サイレンシング（ＲＮＡｉ）を介してウイルス複製をモジュレートするための方法および組成物において有用であり、抗ウイルス方法および組成物は、一本鎖ＲＮＡウイルスの逆鎖複製中間体を優先的にターゲティングする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡエフェクター分子および１つまたはそれを超えるエフェクター相補体を含む。いくつかの実施形態では、生物製剤は、被験体の組織における遺伝子の活性についてアッセイするための方法、およびＲＮＡｉコンピテントシステムにおける選択ｄｓＲＮＡエフェクター分子による標的ヌクレオチド配列のｄｓＲＮＡ媒介性サイレンシングまたは阻害を評価するための方法において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，１９８，９２７号、米国特許出願公開第２０１０／０２６７８０５号、欧州特許出願公開第２３２５３１４号、欧州特許出願公開第１７９７１８５号、欧州特許出願公開第２７７２５４１号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５９３号、米国特許第８，９８７，２２７号、米国特許第８，６１４，１９８号、米国特許出願公開第２０１４／０１４１５１２号、米国特許出願公開第２０１０／０３２４１１７号、欧州特許出願公開第２１７３９００号、米国特許出願公開第２０１２／００２８３４８号、米国特許第７，９８５，５８１号、欧州特許出願公開第２１６９０７２号、欧州特許出願公開第１７８４４９２号、米国特許出願公開第２０１６／０１２２７５９号、欧州特許出願公開第２９９４１６７号、国際公開第２０１４／１８２６６１号、米国特許出願公開第２０１４／０２７５２１１号、欧州特許出願公開第２７２３８６５号、国際公開第２０１２／１７７９０６号、米国特許出願公開第２０１２／００４６４７８号、欧州特許出願公開第２０６８８８６号、国際公開第２００８／０４２９７３号、欧州特許出願公開第１５９７３５１号または欧州特許出願公開第１５９７３５１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、末端肥大症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、成長ホルモン受容体および／またはインスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２４９２２８２号、欧州特許出願公開第１６６４２６７号または欧州特許出願公開第３０１７０４４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、アルポート症候群の処置、予防または改善において有用である。特定の実施形態では、生物製剤は、翻訳抑制要素阻害剤を含む。特定の実施形態では、翻訳抑制要素阻害剤は、ｕＯＲＦ阻害剤である。特定の実施形態では、ｕＯＲＦ阻害剤は、アンチセンス化合物である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１６／０７７８３７号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、神経変性疾患、例えばＡＬＳ、ケネディ病または脊髄性筋萎縮症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、Ｃ９０ＲＦ７２アンチセンス転写産物特異的阻害剤を用いて動物におけるＣ９０ＲＦ７２アンチセンス転写産物の発現を減少させ、またはスーパーオキシドジスムターゼ１の発現を変化させるのに有用である。このような方法は、神経変性疾患の処置、予防または改善を必要とする個体における神経変性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第３０５８０６９号、米国特許出願公開第２０１６／０２３７４３２号、米国特許出願公開第２０１６／０２５１６５５号、欧州特許出願公開第３０５５４１４号、欧州特許出願公開第２９０６６９７号、欧州特許出願公開第２９０６６９６号、欧州特許出願公開第２７４２０５６号、欧州特許出願公開第２５３４２４８号、欧州特許出願公開第２２７００２４号または国際公開第２０１６／１１２１３２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているアンチセンス化合物、ｉＲＮＡ、オリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第３０５８０６８号、米国特許出願公開第２０１６／０２３０１７２号、欧州特許出願公開第２５２７４４２号、欧州特許出願公開第２０２１４７２号、欧州特許出願公開第２４５８００６号、欧州特許出願公開第２３６３４８２号、欧州特許出願公開第２３６３４８１号、欧州特許出願公開第２９５１３０４号、欧州特許出願公開第２９４３２２５号、欧州特許出願公開第２９０６２５８号、欧州特許出願公開第２９０６２５６号、欧州特許出願公開第２９０６２５５号、欧州特許出願公開第２７４２１３６号、欧州特許出願公開第２７４２１３５号、国際公開第２０１６／０７７８３７号、国際公開第２０１６／０４４８４０号または国際公開第２０１６／０４０７４８号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているアンチセンス化合物、ｉＲＮＡ、オリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、アンドロゲン受容体媒介性疾患の処置、予防または改善において有用である。特定の実施形態では、アンドロゲン受容体媒介性疾患はケネディ病であり、被験体は、ケネディ病に関連するアンドロゲン受容体（ＡＲ）遺伝子の突然変異、例えばＣＡＧトリヌクレオチドリピートの拡大を有する。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＡＲにターゲティングされるアンチセンス化合物である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、キネシン（ｋｉｎｓｅｓｉｎ）様１をターゲティングする。いくつかの実施形態では、疾患は、癌または過剰増殖性障害、例えば前立腺癌（例えば、去勢抵抗性前立腺癌）または乳癌、卵巣癌、胃癌および膀胱癌である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、動物における核内保持ＲＮＡ（ｎｒＲＮＡ）もしくはピルビン酸キナーゼＭ転写産物の発現を減少させるか、または動物における核内保持ＲＮＡもしくはピルビン酸キナーゼＭ転写産物に関連する疾患もしくは障害の症候の処置、改善、遅延もしくは軽減において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、転移関連肺腺癌転写産物−１（ＭＡＬＡＴ−１）ＲＮＡおよび／またはタンパク質の発現を減少させる。いくつかの実施形態では、ＭＡＬＡＴ−１発現の減少は、癌、例えば結腸癌、腸癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、肝臓癌および／または前立腺癌を処置する。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２９９１６６１号、欧州特許出願公開第２９０６２２５号、欧州特許出願公開第２９０６２２６号、欧州特許出願公開第２７９４８８０号、欧州特許出願公開第２２５３７０６号、国際公開第２０１６／０６１２６３号または欧州特許出願公開第２５９５６６４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡ、オリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、例えばＢ細胞リンパ腫または肝細胞癌腫の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、シグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ３）ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を阻害する。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２９２０３０８号または欧州特許出願公開第２６９７２４３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡ、オリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ユビキチンタンパク質リガーゼＥ３Ａ（ＵＢＥ３Ａ）の内因性アンチセンス転写産物であるＵＢＥ３Ａ−ＡＴＳの阻害において、したがって、ＵＢＥ３Ａ−ＡＴＳに関連する疾患または障害の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、細胞および動物における父性ＵＢＥ３Ａの発現を誘導する。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２８６４４７９号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡ、オリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、神経変性疾患、例えばＡＬＳ、ケネディ病、ハンチントン病または脊髄性筋萎縮症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、一塩基多型（ＳＮＰ）を含有する遺伝子の対立遺伝子変異体の発現を選択的に減少させるアンチセンス化合物である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、心筋症、慢性閉塞性肺疾患または肝疾患の処置において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２７５１２６９号、欧州特許出願公開第２９９１６６１号、欧州特許出願公開第２９５１３０４号、欧州特許出願公開第２９０６２５６号、欧州特許出願公開第２９０６２２５号、欧州特許出願公開第２９０６２５５号、欧州特許出願公開第２９０６２２６号、欧州特許出願公開第２８１２３４２号、欧州特許出願公開第２７４２１３６号、欧州特許出願公開第２７４２１３５号、欧州特許出願公開第２７４２０５６号、欧州特許出願公開第２５９５６６４号、欧州特許出願公開第２５３４２４８号または国際公開第２０１６／０４４８４０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡ、オリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、血栓塞栓性合併症または他の疾患状態の処置、予防または改善において有用である。例示的な血栓塞栓性合併症または他の疾患状態としては、血栓症、塞栓症および血栓塞栓症、例えば深部静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞、脳卒中、癌、関節リウマチおよび線維症が挙げられる。例示的な疾患としてはさらに、凝固障害が挙げられる。いくつかの実施形態では、生物製剤は、第１１因子、第ＶＩＩ因子、プレカリクレインまたはカリクレインを減少させるアンチセンス化合物である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２３７９０８４号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡ、オリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３２２，０２１号、欧州特許出願公開第２７２６１５３号、欧州特許出願公開第３０３８６２７号、欧州特許出願公開第３０００８８４号、欧州特許出願公開第２２２７５４５号または欧州特許出願公開第２８１２４３３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡ、オリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、炎症性疾患、心血管疾患または代謝性疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。例示的な疾患、障害および状態としては、フレドリクソンＩ型脂質異常症、ＦＣＳおよびＬＰＬＤ；ならびに膵炎、心血管疾患および代謝障害が挙げられる。いくつかの実施形態では、生物製剤は、フレドリクソンＩ型脂質異常症、ＦＣＳまたはＬＰＬＤを有する患者におけるＨＤＬレベルを増加させ、ならびに／またはＴＧ対ＨＤＬの比率を改善し、血漿脂質および血漿グルコースを減少させる。いくつかの実施形態では、生物製剤は、アポリポタンパク質ＣＩＩＩ（ＡｐｏＣＩＩＩ）を減少させて、ＡｐｏＣＩＩＩに関連する疾患、障害または状態を処置、予防または改善する。いくつかの実施形態では、生物製剤は、アポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）またはＡＧＰＡＴ５をターゲティングする。いくつかの実施形態では、アポリポタンパク質Ｂ（ＡｐｏＢ）をターゲティングする生物製剤としては、ミポメルセンおよびＡｐｏＢをターゲティングする他のアンチセンス化合物が挙げられる。例示的な生物製剤としては、コンジュゲートオリゴマー化合物、例えば高親和性ヌクレオチド修飾を含む短いアンチセンス化合物、または他のｉＲＮＡもしくはオリゴヌクレオチドもしくはその類似体、例えば欧州特許出願公開第２０１５７５８号、欧州特許出願公開第２４５８００６号、欧州特許出願公開第２９９１６５６号、欧州特許出願公開第２９５６１７６号、欧州特許出願公開第２７０１７１３号、欧州特許出願公開第２５２１５５６号、欧州特許出願公開第２４０８７９６号または国際公開第２０１６／０７７７０４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているものが挙げられる。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、炎症性疾患、心血管疾患および／または代謝性疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。例示的な疾患、障害および状態としては、糖尿病、部分リポジストロフィー、膵炎、心血管疾患、代謝障害、インスリン抵抗性、アテローム性動脈硬化症、脂質異常症、冠状動脈性心臓病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）または高脂肪酸血症（ｈｙｐｅｒｆａｔｔｙａｃｉｄｅｍｉａ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＧＣＧＲ、ＰＴＰ１Ｂ、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＧＰＡＴ５、ＤＧＡＴ２、線維芽細胞成長因子受容体４（ＦＧＦＲ４）、Ａｐｏ（Ａ）もしくはＬｐ（Ａ）またはグルココルチコイド受容体ｍＲＮＡおよびタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４０４，１１４号、欧州特許出願公開第２７５８５３３号、米国特許第９，４０４，１１３号、欧州特許出願公開第２６９７２４４号、米国特許出願公開第２０１６／０１９４３４９号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２９７４号、欧州特許出願公開第３０１１０２６号、欧州特許出願公開第２２１５１０２号、欧州特許出願公開第１６７０８９６号、欧州特許出願公開第２０２１４７２号、欧州特許出願公開第２５２７４４２号、欧州特許出願公開第２５０５６４９号、欧州特許出願公開第２５０５６４８号、欧州特許出願公開第２５０５６４７号、欧州特許出願公開第２３６３４８２号、欧州特許出願公開第２３６３４８１号、欧州特許出願公開第３０１１０２８号、欧州特許出願公開第２９９２０９７号、欧州特許出願公開第２９９１６６１号、欧州特許出願公開第２９９２００９号、欧州特許出願公開第２８５５５００号、欧州特許出願公開第２７７１４６３号、欧州特許出願公開第２７２１１５６号、欧州特許出願公開第２３６３４８０号、国際公開第２０１６／１３８３５５号または国際公開第２０１６／０７７８３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、トランスサイレチンアミロイドーシス、例えば軟髄膜アミロイドーシス、家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）および家族性アミロイド心臓病（ＦＡＣ）の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、トランスサイレチンｍＲＮＡの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０２５２３６７号、米国特許出願公開第２０１４／０２５６７９７号、米国特許出願公開第２０１１／０２３７６４６号、欧州特許出願公開第２３２３６６７号または国際公開第２０１０／０１７５０９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／００７６０３０号、米国特許第９，１８１，５４９号、米国特許第９，１４５，５５８号、米国特許第９，１２７，２７６号、米国特許出願公開第２０１６／００１７３２３号、米国特許出願公開第２０１５／０１７６００７号、米国特許出願公開第２０１５／０１２６７１８号、米国特許出願公開第２０１４／０３４３１２３号、国際公開第２０１４／１７９６２７号、国際公開第２０１４／１７９６２７号、国際公開第２０１４／１７９６２０号、米国特許出願公開第２０１５／０２５２３６７号、米国特許第９，０６１，０４４号、米国特許第８，６９７，８６０号、米国特許出願公開第２０１４／０２５６７９７号、欧州特許出願公開第２５６３９２０号、国際公開第２０１１／１３９９１７号、米国特許出願公開第２０１１／０２３７６４６号、欧州特許出願公開第２３２３６６７号、国際公開第２０１０／０１７５０９号、国際公開第２０１５／１７９６９３号または国際公開第２０１５／１８８１９４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、心血管疾患、代謝性疾患、フレドリクソンＩ型脂質異常症、家族性カイロミクロン血症症候群またはリポタンパク質リパーゼ欠乏症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＡＮＧＰＴＬ３またはＡｐｏＣＩＩＩ ｍＲＮＡおよびタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３８２，５４０号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５９４号、国際公開第２０１５／１６８５８９号、米国特許出願公開第２０１６／００９０５９５号、米国特許第９，１６３，２３９号、米国特許出願公開第２０１５／０１２６７１９号、国際公開第２０１４／１７９６２６号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２９７４号、国際公開第２０１４／２０５４４９号、米国特許出願公開第２０１５／０３７６６１４号、欧州特許出願公開第２９５６１７６号、国際公開第２０１４／１２７２６８号または国際公開第２０１５／１００３９４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、高コレステロール血症、もしくはＬＤＬレベルの上昇に関連する別の疾患もしくは状態の処置、予防もしくは改善において、または主な有害心血管事象、例えば家族性高コレステロール血症のリスクがある疾患もしくは状態を有する被験体における主な有害心血管事象の処置、予防もしくは管理において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＡｐｏＢ ｍＲＮＡおよびタンパク質の発現を減少させる。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第１７９９８５９号、米国特許第７，９１９，４７２号、米国特許出願公開第２０１１／０２０７７９７号、欧州特許出願公開第２３９７５６３号、欧州特許出願公開第１７９９８５９号、国際公開第２００６／０３４３４８号、米国特許出願公開第２００９／０３２６０４０号、欧州特許出願公開第１７８６４７２号、国際公開第２００６／０２０６７６号、欧州特許出願公開第２０１５７５８号、欧州特許出願公開第２４５８００６号、国際公開第２０１６／０３３４２４号または国際公開第２００８／１１８８８３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、高コレステロール血症、例えば家族性高コレステロール血症の処置、予防もしくは改善において、またはＨＤＬもしくはＬＤＬ−Ｃレベルのモジュレートにおいて有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍＲＮＡおよび対応するタンパク質、例えばアンジオポエチン様３、ＡｐｏＣＩＩＩ、ＤＧＡＴ２、ＡｐｏＢ、ＰＴＰ１Ｂ、ＧＣＣＲ、ＳＧＬＴ２、ＧＣＧＲ、ＰＣＳＫ９、ＣＲＰ、ＲＢＰ４、ＪｕｎＮ末端キナーゼ１（ＪＮＫ１））タンパク質、ミクロソームトリグリセリド転移タンパク質、テトラトリコペプチドリピートドメイン３９アイソフォーム（ＴＴＣ３９）、ＥＩＦ２Ｃ１またはＣＲＥＢの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３８２，５４０号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５９４号、国際公開第２０１５／１６８５８９号、米国特許出願公開第２０１６／００１７３２３号、米国特許第９，１８１，５４９号、米国特許第９，１２７，２７６号、米国特許出願公開第２０１５／０１２６７１８号、米国特許出願公開第２０１４／０３４３１２３号、国際公開第２０１４／１７９６２０号、米国特許出願公開第２０１６／００６０６２５号、米国特許第９，１５７，０８２号、米国特許出願公開第２０１４／０１２８４５３号、欧州特許出願公開第２７０１７１３号、国際公開第２０１２／１４９４９５号、米国特許出願公開第２０１５／０３４４８７９号、米国特許第９，０４５，７５４号、米国特許第８，９６９，３１６号、米国特許第８，６７３，８７１号、米国特許第８，５８６，５５４号、米国特許第８，３７２，９６７号、米国特許第８，３６２，２３２号、米国特許第８，１８８，０５９号、米国特許第８，１４３，２３０号、米国特許出願公開第２０１５／００５７３２９号、米国特許出願公開第２０１３／０１６５４９６号、米国特許出願公開第２０１２／０２０８８６４号、米国特許出願公開第２０１１／００６５７７５号、米国特許出願公開第２００９／０３１８５３２号、米国特許出願公開第２００９／０３２６０４２号、米国特許出願公開第２００９／０３２６０４１号、米国特許出願公開第２００９／０３０６１８０号、米国特許出願公開第２００９／０３０６１７９号、欧州特許出願公開第２０１５７５８号、欧州特許出願公開第２０１９６９２号、欧州特許出願公開第２０２３９３９号、欧州特許出願公開第２０２１４７２号、欧州特許出願公開第２０２３９４０号、欧州特許出願公開第２５２７４４２号、欧州特許出願公開第２５０５６５０号、欧州特許出願公開第２５０５６４９号、欧州特許出願公開第２５０５６４８号、欧州特許出願公開第２５０５６４７号、欧州特許出願公開第２５０５６４６号、欧州特許出願公開第２４５８００６号、欧州特許出願公開第２３９７５５１号、欧州特許出願公開第２３６３４８２号、欧州特許出願公開第２３６３４８１号、欧州特許出願公開第２０２１４７２号、欧州特許出願公開第２０１５７５８号、欧州特許出願公開第２０１９６９２号、欧州特許出願公開第２０２３９３９号、国際公開第２００７／１３４０１４号、国際公開第２００７／１３１２３７号、国際公開第２００７／１４６５１１号、国際公開第２００７／１４３３１７号、国際公開第２００７／１３６９８８号、国際公開第２００７／１３１２３８号、国際公開第２００７／１３６９８９号、米国特許出願公開第２０１５／０１６７００５号、米国特許第８，９１２，１６０号、米国特許第８，６６４，１９０号、米国特許第８，０９３，２２２号、米国特許第８，０８４，４３７号、米国特許出願公開第２０１４／０１９４４９２号、米国特許出願公開第２０１２／００７７８６５号、米国特許出願公開第２０１０／０１４４８３４号、欧州特許出願公開第２４５５４７１号、欧州特許出願公開第２４５３０１６号、欧州特許出願公開第２１０２３４０号、国際公開第２００９／１４８６０５号、国際公開第２００８／０６６７７６号、米国特許第８，５４１，３８８号、米国特許出願公開第２０１１／０１２３５２１号、欧州特許出願公開第２２９１２００号、国際公開第２００９／１４３３９０号、米国特許出願公開第２０１２／０２１４７３６号、米国特許第８，１０１，５８５号、欧州特許出願公開第２０５７２８４号、国際公開第２００８／０１７０８１号、米国特許第７，９１９，４７２号、米国特許出願公開第２０１１／０２０７７９７号、欧州特許出願公開第２３９７５６３号、欧州特許出願公開第１７９９８５９号、国際公開第２００６／０３４３４８号、米国特許第７，８０３，９３０号、米国特許出願公開第２００５／０００９０８８号、欧州特許出願公開第１５６９６９５号、国際公開第２００４／０４４１８１号、国際公開第２００３／０９７６６２号、米国特許出願公開第２００５／０１８１３７６号、米国特許第６，７６７，７３９号、国際公開第２００３／０１８６００号、米国特許出願公開第２０１６／００９０５９８号、米国特許出願公開第２０１５／０３７６６１４号、欧州特許出願公開第２９５６１７６号、国際公開第２０１４／１２７２６８号、米国特許出願公開第２０１２／０２７０９２９号、欧州特許出願公開第２４８０６６７号、国際公開第２０１１／０３８２８８号、米国特許出願公開第２００９／０３２６０４０号、欧州特許出願公開第１７８６４７２号、国際公開第２００６／０２０６７６号、米国特許出願公開第２００３／０２３２４４２号、米国特許出願公開第２００３／０１０５０４２号、国際公開第２００３／０４０３２１号、欧州特許出願公開第２２９４２１３号、国際公開第２００９／１４３４６３号、国際公開第２００９／１４３３９１号、国際公開第２０１６／０３３４２４号、国際公開第２０１５／１７９６９３号、国際公開第２０１５／１８８１９４号、国際公開第２０１５／１６４６９３号、国際公開第２０１５／０６１２４６号、国際公開第２０１０／０８０９５３号または国際公開第２００８／１１８８８３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、熱ショックタンパク質に関連する疾患および状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、糖尿病、肥満症、メタボリックシンドロームＸ、高血糖症または高脂血症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、（ｉ）動物における血中グルコースレベルの減少、（ｉｉ）グルココルチコイド受容体に関連する疾患もしくは状態を有する動物の処置、（ｉｉｉ）動物における血中脂質レベルの減少、または（ｉｖ）動物における体脂肪量の減少において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、グルココルチコイド受容体の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２３６３４８０号または国際公開第２０１６／０７７８３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、ｕＯＲＦ含有遺伝子、例えば国際公開第２０１６／０７７８３７号の表１および２に開示されているものに関連する。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、炎症性状態、例えば遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）またはプレカリクレイン関連状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患または状態、例えば浮腫または血管透過性もしくは漏出を処置、予防または改善する。いくつかの実施形態では、生物製剤は、カリクレイン（ＫＬＫＢ１）またはプレカリクレイン（ＰＫＫ）発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３１５，８１１号、欧州特許出願公開第２７１７９２３号、欧州特許出願公開第３０３８６２７号または国際公開第２０１６／０７７８３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、神経変性疾患、例えばトランスサイレチンアミロイドーシス、家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）、家族性アミロイド心臓病（ＦＡＣ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、皮質基底核（ｃｏｒｔｉｃａｌｂａｓａｌ）変性症候群（ＣＢＤ）、非定型パーキンソン症候群、オリーブ橋小脳変性症（ｏｌｉｖｏｐｏｎｔｏｃｅｒｅｌｌａｒ）（ＯＰＣＤ）、タウオパチー、アルツハイマー病、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、ＦＴＤＰ−１７、進行性核上性脳性麻痺（ＰＳＰ）、慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）、大脳皮質基底核神経節変性症（ＣＢＤ）、てんかん、ドラベ症候群、脊髄小脳失調、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症またはハンチントン病の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、リピートＲＮＡに関連する。いくつかの実施形態では、生物製剤は、神経変性疾患、例えばアトロフィン１（ＤＲＰＬＡ）、ハンチントン病、ハンチントン病様２（ＨＤＬ２）、脊髄性および延髄性筋萎縮、ケネディ病、脊髄小脳失調１、脊髄小脳失調１２、脊髄小脳失調１７、ハンチントン病様４（ＨＤＬ４）、脊髄小脳失調２、脊髄小脳失調３、マカド・ジョセフ病、脊髄小脳失調６または脊髄小脳失調７；または筋緊張性ジストロフィー（ＤＭ１）または脊髄小脳失調８；または脆弱Ｘ症候群、アタキシン３またはフリードライヒ運動失調症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、アルツハイマー病、クロイツフェルトヤコブ病、致命性家族性不眠症、アレクサンダー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、歯状核赤核および淡蒼球ルイ体萎縮症ＤＲＰＡ、脊髄小脳失調、捻転ジストニア、心筋症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肝疾患、肝細胞癌腫、全身性エリテマトーデス、高コレステロール血症、乳癌、喘息、１型糖尿病、関節リウマチ、グレーブス病、ＳＬＥ、脊髄性および延髄性筋萎縮、ケネディ病、進行性小児後嚢下白内障、コレステロール胆石症、アテローム性動脈硬化症、心血管疾患、原発性高カルシウム尿症、α−サラセミア、強迫性障害、不安症、合併うつ病、先天性視覚障害、高血圧、メタボリックシンドローム、前立腺癌、先天性筋無力症候群、末梢動脈疾患、心房細動、散発性褐色細胞腫、先天性奇形、マチャドジョセフ病、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ハンチントン病または網膜色素変性症（ＲＰ）疾患、例えば常染色体優性網膜色素変性症（ＡｄＲＰ）病の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＡＩＡＴＤ関連肝疾患または肺疾患、例えばＡＩＡＴＤ関連肺疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、プリオン病または立体構造神経変性障害の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、筋緊張症の処置、予防もしくは改善において、またはスプライセオパシーもしくは例えば１型筋緊張性ジストロフィーもしくは顔面肩甲上腕筋ジストロフィーの軽減において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、黄斑変性症、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、湿性ＡＭＤ、乾性ＡＭＤまたは地図状萎縮の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、トランスサイレチン、アポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（ＡｐｏＣＩＩＩ）、アルファ−１−抗トリプシン（ＡＩＡＴ）、補体因子Ｂ、タウ、ＡＴＸＮ−３プレｍＲＮＡ、ＡＴＮ−１、ヒトＰｒｐ、ＳＭＮ２、Ｃ９０ＲＦ７２、ＤＭＰＫ、アルファ−シヌクレイン、ＤＵＸ４またはハンチンチンｍＲＮＡおよびタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＥＳＴ発現を減少させることによってＤＭＮ１、ＢＤＮＦおよびシナプシン１発現を増加させて、ハンチントン病を処置、予防または改善する。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４２８，７５０号、米国特許第９，４０９，９３４号、米国特許第９，４０４，１１４号、欧州特許出願公開第２７５８５３３号、米国特許第９，４０４，１１３号、欧州特許出願公開第２６９７２４４号、米国特許第９，４０３，８６５号、欧州特許出願公開第２８８５３１２号、米国特許第９，３９９，７７４号、欧州特許出願公開第２５６３９２０号、米国特許出願公開第２０１６／０２３７４３４号、米国特許第９，３６５，８４８号、欧州特許出願公開第２４４１４４９号、欧州特許出願公開第３００２００７号、欧州特許出願公開第２４２８２２７号、米国特許第９，３５３，３７２号、欧州特許出願公開第２１６１０３８号、欧州特許出願公開第２４２２８１９号、国際公開第２００７／０８９５８４号、米国特許第９，３５３，３７１号、米国特許出願公開第２０１６／０１８６１８５号、米国特許第９，３２１，７９９号、欧州特許出願公開第２６０１２０４号、米国特許第９，３４０，７８４号、米国特許第９，３２２，０２１号、欧州特許出願公開第２７２６１５３号、米国特許第９，３１５，８１１号、欧州特許出願公開第２７１７９２３号、米国特許第９，２７３，３１５号、米国特許第８，９０６，８７３号、欧州特許出願公開第２４７５６７５号、国際公開第２０１１／０３２０４５号、米国特許第９，２９０，５３４号、米国特許出願公開第２０１５／０２９２０１５号、米国特許第９，００６，１９８号、米国特許出願公開第２０１３／００４６００８号、欧州特許出願公開第２５３４２６２号、国際公開第２０１１／０９７６４４号、米国特許第８，９５７，０４０号、米国特許出願公開第２０１３／００４６００７号、欧州特許出願公開第２５３４２４８号、国際公開第２０１１／０９７６４３号、米国特許出願公開第２０１６／０２４４４７７号、欧州特許出願公開第３０５８０６９号、米国特許出願公開第２０１６／０２３７４３２号、欧州特許出願公開第３０５８０６８号、米国特許出願公開第２０１６／０２３０１７２号、米国特許出願公開第２０１６／０２５１６５５号、米国特許出願公開第２０１６／０２２２３８９号、欧州特許出願公開第３０４３８２７号、米国特許出願公開第２０１６／０１９４６３８号、米国特許出願公開第２０１６／０１９４６３７号、米国特許出願公開第２０１６／０１８６１７５号、米国特許出願公開第２０１６／０１９４３４９号、米国特許出願公開第２０１６／０１８６１７４号、米国特許出願公開第２０１６／０１４５６１７号、欧州特許出願公開第３０２２２１７号、米国特許出願公開第２０１６／０１５９８４６号、欧州特許出願公開第３０２７６１７号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２９７４号、欧州特許出願公開第３０１１０２６号、欧州特許出願公開第２９５１３０４号、米国特許出願公開第２０１５／０３７６６２５号、国際公開第２０１４／１２１２８７号、欧州特許出願公開第２９０６２５６号、米国特許出願公開第２０１５／０２７５２０８号、国際公開第２０１４／０５９３５６号、米国特許出願公開第２０１３／００５９９０２号、欧州特許出願公開第２５３６７３８号、国際公開第２０１１／０９７６４１号、米国特許出願公開第２０１１／０２６９８１８号、国際公開第２０１０／０１９２７０号、欧州特許出願公開第２６２５１８６号、欧州特許出願公開第１９３７３１２号、欧州特許出願公開第２６０６０５７号、欧州特許出願公開第２７５１２６９号、国際公開第２０１３／０３３２２３号、欧州特許出願公開第２５８０２２８号、欧州特許出願公開第２２１５１０２号、欧州特許出願公開第２４９２２８２号、欧州特許出願公開第１６６４２６７号、欧州特許出願公開第２１２５８５２号、欧州特許出願公開第２６７３３６１号、欧州特許出願公開第２７４２１３６号、欧州特許出願公開第２７４２１３５号、欧州特許出願公開第２７４２０５６号、国際公開第２０１３／０２２９９０号、国際公開第２０１３／０２２９８４号、欧州特許出願公開第１７３０３０９号、欧州特許出願公開第２３３１１４１号、欧州特許出願公開第２１７３３５８号、欧州特許出願公開第２４６２１５３号、欧州特許出願公開第１９８４４９９号、欧州特許出願公開第２５４８５６０号、欧州特許出願公開第２６４４７００号、欧州特許出願公開第２３６５０９４号、欧州特許出願公開第２２４６４４３号、欧州特許出願公開第２９５７５６８号、欧州特許出願公開第１５６０８４０号、欧州特許出願公開第２３６１９２３号、欧州特許出願公開第１６７０８９６号、欧州特許出願公開第２４１００５３号、欧州特許出願公開第２０９２０６５号、欧州特許出願公開第２４１００５４号、欧州特許出願公開第２０１５７５８号、欧州特許出願公開第２０２１４７２号、欧州特許出願公開第２５２７４４２号、欧州特許出願公開第２５０５６４９号、欧州特許出願公開第２５０５６４８号、
欧州特許出願公開第２５０５６４７号、欧州特許出願公開第２４５８００６号、欧州特許出願公開第２３６３４８２号、欧州特許出願公開第２３６３４８１号、欧州特許出願公開第２３３２９５１号、欧州特許出願公開第３０５５４１４号、欧州特許出願公開第２９５１１９１号、欧州特許出願公開第２９０６２５８号、欧州特許出願公開第２９０６２５５号、欧州特許出願公開第２９４３２２５号、欧州特許出願公開第３０３８６２７号、欧州特許出願公開第３０３０６５８号、欧州特許出願公開第３０３１９２０号、欧州特許出願公開第２５９５６６３号、欧州特許出願公開第２５９５６６４号、国際公開第２０１２／０１２４６７号、欧州特許出願公開第２９０６２２５号、欧州特許出願公開第３０１７０４４号、欧州特許出願公開第３０１１０２８号、欧州特許出願公開第２９０６２２６号、欧州特許出願公開第２９２０３０８号、欧州特許出願公開第２９０６６９７号、欧州特許出願公開第２９０６６９９号、欧州特許出願公開第２９０６６９６号、欧州特許出願公開第２８６４４７９号、欧州特許出願公開第２８５２６０６号、欧州特許出願公開第２９９２０９７号、欧州特許出願公開第２９９１６６１号、欧州特許出願公開第２９９２０９８号、欧州特許出願公開第２９９２００９号、欧州特許出願公開第２９９１６５６号、欧州特許出願公開第２８７７５７９号、欧州特許出願公開第３０００８８４号、欧州特許出願公開第２２２７５４５号、欧州特許出願公開第２９５６１７６号、欧州特許出願公開第２９７１１４２号、欧州特許出願公開第２８５５５００号、欧州特許出願公開第２８５００９２号、欧州特許出願公開第２８３１２３２号、欧州特許出願公開第２８３９００６号、欧州特許出願公開第２８１２３４２号、欧州特許出願公開第２７９４８８０号、欧州特許出願公開第２７７１４６３号、欧州特許出願公開第２８１２４３３号、欧州特許出願公開第２８０２６７４号、欧州特許出願公開第２７７６５６４号、欧州特許出願公開第２７５１２７０号、欧州特許出願公開第２６９７２４３号、欧州特許出願公開第２６９９５８３号、欧州特許出願公開第２７０１７１３号、欧州特許出願公開第２７２１１５６号、欧州特許出願公開第２６４０８５３号、欧州特許出願公開第２５８２３９７号、欧州特許出願公開第２５２１５５６号、欧州特許出願公開第２４４２８１６号、欧州特許出願公開第２４４７２７４号、欧州特許出願公開第２３５８３９７号、欧州特許出願公開第２３９９５８８号、欧州特許出願公開第２３６０１６６号、欧州特許出願公開第２４０８７９６号、欧州特許出願公開第２３７９０８４号、欧州特許出願公開第２３６３４８０号、欧州特許出願公開第２３２７７０９号、欧州特許出願公開第２３３４３１９号、欧州特許出願公開第２２８２７４４号、欧州特許出願公開第２２７２９５８号、欧州特許出願公開第２２７００２４号、欧州特許出願公開第２２５３７０６号、欧州特許出願公開第２２２２８５１号、欧州特許出願公開第２２１９６８０号、欧州特許出願公開第１９５７５０７号、欧州特許出願公開第１８２７４５９号、欧州特許出願公開第１４２７２８９号、欧州特許出願公開第１１５９２８２号、国際公開第２０１６／１３８３５５号、国際公開第２０１６／１３８３５３号、国際公開第２０１６／１３８０１７号、国際公開第２０１６／１３７９２３号、国際公開第２０１６／１１２１３２号、国際公開第２０１６／１１５４９０号、国際公開第２０１６／０７７７０４号、国際公開第２０１６／０７７５４０号、国際公開第２０１６／０８６１０４号、国際公開第２０１６／０７７８３７号、国際公開第２０１６／０６１２６３号、国際公開第２０１６／０４４８４０号、国際公開第２０１６／０４４８２８号、国際公開第２０１５／１６８５３２号、国際公開第２０１６／０４０７４８号、国際公開第２０１１／０９７６１４号、国際公開第２０１１／０３１９９８号、米国特許第９，０５７，０６６号、米国特許第８，９５２，１４５号、米国特許第８，４１５，４６５号、米国特許第７，９５１，９３４号、米国特許出願公開第２０１６／００５３２５６号、米国特許出願公開第２０１５／０３０７８７７号、米国特許出願公開第２０１３／０２８１６８４号、米国特許出願公開第２０１３／０１８９７８２号、米国特許出願公開第２０１１／０３０６６５２号、米国特許出願公開第２０１０／００６９４７２号、欧州特許出願公開第１９９１６７７号、国際公開第２００７／０８９６１１号、米国特許第９，３２１，７９９号、米国特許出願公開第２０１５／０１５９１５５号、米国特許出願公開第２０１５／０３２９８５９号、米国特許第８，６６９，１０２号、米国特許第６，９６９，７６３号、欧州特許出願公開第１２４８７９１号、米国特許第６，３０３，３７４号、国際公開第２００１／０５３３１０号、国際公開第２００２／０２０８４０号、米国特許第６，２５８，６０１号、米国特許出願公開第２０１６／０１３８０１４号、国際公開第２０１４／０５９３４１号、国際公開第２０１５／０１７６７５号、米国特許出願公開第２０１５／００５１３８９号、米国特許出願公開第２０１４／０３２３７０７号、米国特許出願公開第２０１４／０３０９２７９号、米国特許出願公開第２０１４／０３０３２３５号、国際公開第２０１３／０２２９６７号、国際公開第２０１３／０２２９６６号、米国特許出願公開第２０１５／００１８５４０号、国際公開第２０１３／０３３２３０号、米国特許出願公開第２０１４／０３１６１２１号、米国特許出願公開第２０１３／０２２５６５９号、欧州特許出願公開第１０８３９８０号、米国特許出願公開第２００５／０２３９７３７号、国際公開第２００４／０４３３９４号、米国特許出願公開第２００４／００９２４６５号、国際公開第２００４／０４８５２２号、米国特許出願公開第２００４／０１０２３９４号、米国特許出願公開第２００４／００９６８３４号、欧州特許出願公開第１４３６４３０号、米国特許出願公開第２００３／００８７８５４号、国際公開第２００３／０２３００４号、国際公開第２０１５／１６８１７２号または国際公開第２０１４／０３６３０１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、エンハンサーＲＮＡ（ｅＲＮＡ）のモジュレートにおいて有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２８５２６０６号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＡＧＴのモジュレートにおいて、およびＲＡＳ経路関連疾患、障害または状態のモジュレートにおいて有用である。ＲＡＳ関連疾患、例えば高血圧または臓器損傷は、ＡＧＴにターゲティングされるアンチセンス化合物の投与によって処置、改善または予防され得る；いくつかの実施形態では、これらは、平均寿命の短縮、高血圧、慢性腎疾患、脳卒中、心疾患、血管の動脈瘤、末梢動脈疾患および臓器損傷を含む。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２８７７５７９号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＣＤ４０に関連する疾患の処置、予防または改善において有用である。ＣＤ４０にターゲティングされるアンチセンス化合物の投与によって改善され得る疾患状態の例としては、過剰増殖性障害、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植片拒絶、喘息、気道過敏症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）および特定の形態の関節炎が挙げられる。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２２２２８５１号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、潰瘍性大腸炎の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第１８２７４５９号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、拡大リピート含有ＲＮＡに関連する疾患、例えばアタキシン３、アトロフィン１、脆弱Ｘ症候群、フリードライヒ運動失調症、ハンチントン病、ハンチントン病様２、筋緊張性ジストロフィー、脊髄性および延髄性筋萎縮症ならびに脊髄小脳失調の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、疾患は、筋緊張性ジストロフィー、例えば１型筋緊張性ジストロフィーである。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＤＭＰＫ ｍＲＮＡおよびタンパク質、またはｎｒＲＮＡ、またはＡＴＸＮ−３プレｍＲＮＡもしくはＡＴＮ−１ ｍＲＮＡの発現を減少させる。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２７５１２６９号、欧州特許出願公開第３０３０６５８号、欧州特許出願公開第３０３１９２０号、欧州特許出願公開第２５９５６６３号、欧州特許出願公開第２５９５６６４号、米国特許出願公開第２０１６／０１５９８４６号、欧州特許出願公開第３０２７６１７号、欧州特許出願公開第２９０６２５８号、欧州特許出願公開第２９０６６９７号、欧州特許出願公開第２９０６６９６号、欧州特許出願公開第２７５１２７０号または国際公開第２０１６／０７７８３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、例えばＩ型、ＩＩ型またはＩＩＩ型ＳＭＡの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、家族性自律神経失調症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＳＭＮ２遺伝子のスプライシングをモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、Ｇｅｍｉｎ遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＥＩＦ２Ｃ２および／またはＤＤＸ３６の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＩＫＢＫＡＰ遺伝子のスプライシングをモジュレートする。特定の実施形態では、ＩＫＢＫＡＰ遺伝子は、不十分なスプライシングおよび切断型ＩＫＡＰタンパク質をもたらす突然変異を含む。いくつかの実施形態では、生物製剤は、フィブリラリンの発現をモジュレートするか；またはホスホジエステラーゼ４Ｄの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第８，９８０，８５３号、米国特許出願公開第２０１６／０００２６２７号、欧州特許出願公開第２９４３２２５号、国際公開第２０１４／１１０２９１号、米国特許出願公開第２０１４／０３５７５５８号、国際公開第２０１２／１７８１４６号、米国特許出願公開第２０１３／０１０９０９１号、欧州特許出願公開第２６４４７００号、欧州特許出願公開第２５４８５６０号、欧州特許出願公開第１９１０３９５号、国際公開第２００７／００２３９０号、国際公開第２００５／００１０３１号、欧州特許出願公開第１６３１６５９号、国際公開第２０１５／１６１１７０号、国際公開第２０１０／１２０８２０号、欧州特許出願公開第２４４２８１６号、国際公開第２０１０／１４８２４９号、米国特許出願公開第２０１５／０３５３９２９号、米国特許第８，９４６，１８３号、米国特許第８，３６１，９７７号、米国特許出願公開第２０１０／０２１６２３８号、米国特許第８，４０９，８５６号、米国特許第７，７５９，４７９号、米国特許出願公開第２０１１／０１０５５８６号、米国特許第７，７０９，４５３号、米国特許出願公開第２０１５／０２８４７２５号、欧州特許出願公開第２９０６２２５号、国際公開第２０１４／０５９３６４号、米国特許出願公開第２０１５／０２７５２０５号、欧州特許出願公開第２８３１２３２号、欧州特許出願公開第２８３１２３１号、国際公開第２０１３／１４８２６０号、国際公開第２０１３／１４８２８３号、米国特許出願公開第２０１５／００２５２３１号、欧州特許出願公開第２８０２６７４号、国際公開第２０１３／１０６７７０号、米国特許出願公開第２００４／０１０２４０３号、米国特許出願公開第２００３／０２２０２７３号または国際公開第２０１１／０３１９９８号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、回腸嚢炎の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＩＣＡＭ−１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第８，９４６，１７８号、米国特許第８，０８４，４３２号、米国特許出願公開第２０１２／０２７０９２０号、米国特許出願公開第２００４／０１６２２５９号、国際公開第２００４／０７１４５３号、米国特許出願公開第２００９／０２７５６３１号、欧州特許出願公開第１８２７４５９号、国際公開第２００６／０６０６４９号または国際公開第２０１５／１８８１９４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、例えば前立腺、結腸またはヘパトーマの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、亜鉛と共にアルファ２−ＨＳ糖タンパク質を過給し、前記糖タンパク質を癌細胞に投与することによって、癌細胞におけるアポトーシスを誘導する方法において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、フェツインまたはＭｅｌｏｔｈｒｉａ ｉｎｄｉｃａ Ｌｏｕの抽出物を含む。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第７，２３８，６６２号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、肝炎ウイルス感染、例えばＡ型肝炎、Ｂ型肝炎またはＣ型肝炎の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、肝炎ウイルスタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０３６１４３２号、米国特許第９，１３９，８３３号、米国特許出願公開第２０１５／０３７６６２１号、米国特許第９，０８４，８０８号、欧州特許出願公開第２７２６６１３号、米国特許出願公開第２０１３／０００５７９３号、国際公開第２０１３／００３５２０号、欧州特許出願公開第２６５１４２０号または国際公開第２０１２／０８３１８５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、副腎白質ジストロフィーおよび／または副腎脊髄ニューロパチーの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ヘモグロビン症、例えばサラセミア、鎌状赤血球症、副腎白質ジストロフィーまたは副腎脊髄ニューロパチーの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，０６１，０３１号、米国特許第８，８５８，９２８号、米国特許出願公開第２０１５／００６４１５０号、米国特許出願公開第２０１５／００３７２９６号、米国特許出願公開第２０１３／０００４４７１号、欧州特許出願公開第２７１７９２２号、国際公開第２０１２／１７０９１１号、米国特許出願公開第２０１５／０２１６９０３号、国際公開第２０１４／０２６１１０号、米国特許出願公開第２０１４／０２３４２７８号、欧州特許出願公開第２７６０９９４号、国際公開第２０１３／０４９６１５号、米国特許出願公開第２０１４／０１９９２７９号、欧州特許出願公開第２６６１４８９号、国際公開第２０１２／０９４１９３号、国際公開第２０１４／０１５３１８号、国際公開第２０１２／１７０４３１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているレトロウイルスベクター、ｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＥＰＡＳ１関連疾患、例えば癌、転移、星状細胞腫、膀胱癌、乳癌、軟骨肉腫、結腸直腸癌腫、胃癌腫、膠芽腫、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌腫、肺腺癌腫、神経芽細胞腫、非小細胞肺癌、黒色腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、直腸癌、腎臓癌、明細胞腎細胞癌腫（およびこのおよび他の癌の転移）、歯肉炎、乾癬、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、子癇前症（ｐｒｅｅｍｃｌａｍｐｓｉａ）、炎症、慢性炎症、血管新生疾患または関節リウマチの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＥＰＡＳ１（ＨＩＦ−２アルファ）の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／００１００８９号または欧州特許出願公開第２９６１８４３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、Ｂ細胞関連状態または癌、例えば多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）もしくは非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）または全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、特発性血小板減少性紫斑病、重症筋無力症または自己免疫性溶血性貧血の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、養子Ｔ細胞療法において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１６／０９４３０４号、国際公開第２０１６／０１４７８９号、国際公開第２０１５／１８８１１９号、国際公開第２０１５／１６４７３９号、国際公開第２０１５／１６４７５９
欧州特許出願公開第３０２７２０４号、米国特許出願公開第２０１５／０２６６９７３号、国際公開第２０１５／０１７２１４号、国際公開第２０１５／１６４７４５号または国際公開第２０１５／１６４７３９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているＴ細胞組成物またはＣＡＲなどの治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、異常ヘモグロビン的状態、例えば造血系の疾患、障害および状態、例えばサラセミアおよび貧血、例えば鎌状赤血球貧血の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、細胞療法または遺伝子療法において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、造血幹細胞遺伝子療法による処置に適切な治療適応症の処置において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、細胞形質導入効率の増加において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／００２２８３９号、米国特許第９，０６８，１９９号、米国特許第７，９０１，６７１号、米国特許出願公開第２０１２／０００９１６１号、米国特許出願公開第２０１５／０２０３８６８号、国際公開第２０１３／０４３１９６号、米国特許出願公開第２０１５／０２１６９０３号、国際公開第２０１４／０２６１１０号、米国特許出願公開第２０１４／０２３４２７８号、欧州特許出願公開第２７６０９９４号、国際公開第２０１３／０４９６１５号、米国特許出願公開第２０１４／０１９９２７９号、欧州特許出願公開第２６６１４８９号、国際公開第２０１２／０９４１９３号、国際公開第２０１４／０１５３１８号または国際公開第２０１２／１７０４３１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているものから選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、異常ヘモグロビン的状態、例えばヘモグロビン鎌状赤血球症（ＳＣＤ）、鎌状赤血球貧血およびβサラセミアを含む異常ヘモグロビン症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、細胞療法または遺伝子療法において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、造血幹細胞遺伝子療法による処置に適切な治療適応症の処置において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、細胞形質導入効率の増加において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、グロビン遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／００２２８３９号、米国特許第９，０６８，１９９号、米国特許第７，９０１，６７１号、米国特許出願公開第２０１２／０００９１６１号、米国特許出願公開第２０１５／０２０３８６８号、国際公開第２０１３／０４３１９６号、米国特許出願公開第２０１５／０２１６９０３号、国際公開第２０１４／０２６１１０号、米国特許出願公開第２０１４／０２３４２７８号、欧州特許出願公開第２７６０９９４号、国際公開第２０１３／０４９６１５号、米国特許出願公開第２０１４／０１９９２７９号、欧州特許出願公開第２６６１４８９号、国際公開第２０１２／０９４１９３号、国際公開第２０１４／０１５３１８号または国際公開第２０１２／１７０４３１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているものから選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、心血管適応症、例えば心不全、急性心不全、慢性心不全、鬱血性心不全、急性非代償性心不全、心臓における異常体液貯留、心筋浮腫または呼吸困難の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、リバウンドを回避しながら、心血管症候群、腎臓症候群、肺症候群またはニューロン症候群の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ペプチド、例えばナトリウム利尿ペプチド、利尿ペプチドまたは血管拡張ペプチド；リラキシン；例えば、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、ネセリチド、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、デンドロアスピスナトリウム利尿ペプチド（ＤＮＰ）およびウロジラチンまたはその類似体から選択される。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウラリチドである。いくつかの実施形態では、生物製剤は、心筋細胞のニトロシル化を防止または最小化する。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２９４８１６５号、米国特許出願公開第２０１４／０２１３５２０号、米国特許出願公開第２０１４／０２１３５１９号、国際公開第２０１４／１１５０３３号、米国特許第９，３５８，２７１号、米国特許第９，０２３，７９４号、米国特許出願公開第２０１５／０２２４１７４号、米国特許出願公開第２０１４／０２８７９９９号、欧州特許出願公開第２５１０９４２号、欧州特許出願公開第２５１０９４２号、欧州特許出願公開第２９４８１６５号、米国特許出願公開第２０１４／０２１３５２０号、米国特許出願公開第２０１４／０２１３５１９号、国際公開第２０１４／１１５０３３号または欧州特許出願公開第２５４７３５６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているものから選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌疾患、感染性疾患、例えばＨＩＶ、アレルギーおよび自己免疫疾患、例えば関節リウマチもしくはアレルギー状態の処置、予防もしくは改善において有用であるか；またはそれは、免疫反応のモジュレートにおいて、もしくはワクチンとして有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、高分子担体カーゴ複合体、核酸、抗原、または米国特許第９，３１４，５３５号、米国特許第８，７０３，９０６号、米国特許出願公開第２０１４／０２９４８７７号、米国特許出願公開第２０１２／０２１９５７３号、米国特許出願公開第２０１１／００５３８２９号、欧州特許出願公開第２８１０６６１号、欧州特許出願公開第２３３１１３８号、国際公開第２０１１／０２６６４１号、米国特許第９，２２６，９５９号、米国特許出願公開第２０１２／００２１０４３号、欧州特許出願公開第２５４８９６０号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、国際公開第２００９／０９５２２６号、欧州特許出願公開第３０３５９５５号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２２７号、国際公開第２０１５／０２４６６６号、欧州特許出願公開第３０３５９５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６６８号、国際公開第２０１５／０２４６６４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６２６３号、米国特許出願公開第２０１５／００９３４１３号、欧州特許出願公開第２８１４９６２号、国際公開第２０１３／１２０６２８号、国際公開第２０１３／１２０４９９号、欧州特許出願公開第２６７８０３８号、米国特許出願公開第２０１３／０２５９８７９号、国際公開第２０１２／１１３５１３号、国際公開第２０１２／１１３４１３号、米国特許出願公開第２０１３／０２５１７４２号、欧州特許出願公開第２１９５０１５号、国際公開第２００９／０４６９７５号、米国特許出願公開第２０１３／０２０２６４５号、欧州特許出願公開第２１９７４８１号、国際公開第２００９／０４６９７４号、欧州特許出願公開第２７６２１６５号、米国特許出願公開第２０１１／０２５０２２５号、欧州特許出願公開第２３３１１２９号、国際公開第２０１０／０３７５３９号、国際公開第２０１０／０３７４０８号、国際公開第２０１１／１４４３５８号、欧州特許出願公開第２３８７９９９号、国際公開第２０１１／０６９５８７号、国際公開第２０１１／０６９５２８号、国際公開第２０１１／０６９５２９号、国際公開第２０１０／０８８９２７号、国際公開第２００３／０５９３８１号、米国特許第９，４４７，４３１号、米国特許第９，４２１，２５５号、米国特許第９，４３９，９５６号、米国特許第９，４３３，６７０号、米国特許第９，４３３，６６９号、米国特許第９，１５５，７８８号、米国特許第８，２１７，０１６号、米国特許出願公開第２０１６／００９５９１１号、米国特許出願公開第２０１６／００８９４２６号、米国特許出願公開第２０１６／００９５９１２号、米国特許出願公開第２０１６／００８９４２５号、米国特許出願公開第２０１６／００８９４２４号、米国特許出願公開第２０１６／００８２０９２号、米国特許出願公開第２０１５／００３０６３３号、米国特許出願公開第２０１１／０３１１４７２号、欧州特許出願公開第１４５８４１０号、欧州特許出願公開第２７６９７３３号、欧州特許出願公開第１９２５３１７号、欧州特許出願公開第１９０５８４４号、米国特許第９，４０２，８８７号、米国特許第９，３５２，０２８号、米国特許出願公開第２０１６／０２０６７５６号、米国特許第９，２３４，０１３号、欧州特許出願公開第２６０３５９０号、欧州特許出願公開第２７９６５５７号、国際公開第２０１２／０１９７８０号、国際公開第２０１２／０１９６３０号、米国特許出願公開第２０１６／０２５０３２１号、欧州特許出願公開第２９５５２３０号、米国特許第８，９６８，７４６号、米国特許出願公開第２０１５／０２５８２１４号、米国特許出願公開第２０１３／０１４２８１８号、欧州特許出願公開第２４４９１１３号、国際公開第２０１２／０１３３２６号、米国特許第８，３８３，３４０号、欧州特許出願公開第２０９２０６４号、国際公開第２００８／０７７５９２号、米国特許出願公開第２０１６／０２０６７１９号、米国特許出願公開第２０１６／０１３０３４５号、欧州特許出願公開第２９５８５８８号、国際公開第２０１４／１２７９１７号、米国特許出願公開第２０１６／０１８５８４０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９２号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９０号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２７０６号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１４５３４６号、米国特許出願公開第２０１３／０１９５８６７号、欧州特許出願公開第２１０１８２３号、国際公開第２００８／０８３９４９号、米国特許出願公開第２０１６／０１８４４０６号、米国特許出願公開第２０１４／００３７６６０号、米国特許出願公開第２０１０／０２０３０７６号、欧州特許出願公開第２４８４７７０号、欧州特許出願公開第２１８８３７９号、国際公開第２００９／０３０４８１号、国際公開第２００９／０３０２５４号、欧州特許出願公開第３０３５９６０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２０７号、国際公開第２０１５／０２４６６８号、欧州特許出願公開第３０３６３３０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１０号、国際公開第２０１５／０２４６６７号、欧州特許出願公開第３０３５９６１号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１１号、国際公開第２０１５／０２４６６５号、欧州特許出願公開第３０３５９５９号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６７８号、国際公開第２０１５／０２４６６９号、米国特許出願公開第２０１６／０１５１４７４号、米国特許出願公開第２０１３／０２９５０４３号、欧州特許出願公開第２６８０８８１号、国際公開第２０１２／１１６８１１号、国際公開第２０１２／１１６７１４号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６３０１号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６２５９号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６２５８号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６２４７号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６２４３号、米国特許出願公開第２０１６／０１２９１０５号、米国特許出願公開第２０１５／０１０４４７６号、米国特許出願公開第２０１１／０２６９９５０号、米国特許出願公開第２０１１／００７７２８７号、米国特許出願公開第２０１０／０２３９６０８号、欧州特許出願公開第２３０５６９９号、欧州特許出願公開第１８５７１２２号、欧州特許出願公開第１８００６９７号、欧州特許出願公開第１８３２６０３号、欧州特許出願公開第１６０４６８８号、欧州特許出願公開第１３９２３４１号、欧州特許出願公開第２８４２９６４号、欧州特許出願公開第１９０３０５４号、米国特許出願公開第２０１５／０３２０８４７号、欧州特許出願公開第２８１４９６１号、国際公開第２０１３／１２０６２７号、国際公開第２０１３／１２０５００号、米国特許出願公開第２０１５／０３０６２４９号、欧州特許出願公開第２８５４８５７号、国際公開第２０１３／１７４４０９号、米国特許出願公開第２０１５／０２１８５５４号、欧州特許出願公開第２８３１２４１号、国際公開第２０１３／１４３６９９号、米国特許出願公開第２０１５／０１８４１９５号、欧州特許出願公開第２８３１２３９号、国際公開第２０１３／１４３６９８号、米国特許出願公開第２０１５／０１６５００６号、欧州特許出願公開第２８１４９６４号、国際公開第２０１３／１２０６２６号、国際公開第２０１３／１２０４９８号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８２６４号、欧州特許出願公開第２８０９３５３号、国際公開第２０１３／１１３５０１号、国際公開第２０１３／１１３３２６号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８１８３号、欧州特許出願公開第２８０９３５４号、国際公開第２０１３／１１３５０２号、国際公開第２０１３／１１３３２５号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４９８号、欧州特許出願公開第２５１０１００号、国際公開第２０１１／０６９５８６号、米国特許出願公開第２０１５／００５７３４０号、欧州特許出願公開第２８１４９６３号、国際公開第２０１３／１２０６２９号、国際公開第２０１３／１２０４９７号、米国特許出願公開第２０１５／００５０３０２号、欧州特許出願公開第２８３１２４０号、国際公開第２０１３／１４３７００号、米国特許出願公開第２０１５／００３７３２６号、欧州特許出願公開第２８０９３５２号、欧州特許出願公開第２６２３１２１号、国際公開第２０１３１１３７３６号、欧州特許出願公開第２６８０８８０号、米国特許出願公開第２０１３０３３６９９８号、国際公開第２０１２／１１６７１５号、国際公開第２０１２／１１６８１０号、欧州特許出願公開第２６５８５６９号、米国特許出願公開第２０１３／０２８０２８３号、国際公開第２０１２／０８９３３８号、国際公開第２０１２／０８９２２５号、欧州特許出願公開第２２１６０２７号、米国特許出願公開第２０１３／０２７３００１号、米国特許出願公開第２０１０／０３０３８５１号、欧州特許出願公開第１６８５８４４号、欧州特許出願公開第１５２１５８５号、欧州特許出願公開第２２１６０２８号、欧州特許出願公開第１８０６１３９号、欧州特許出願公開第１７９７８８６号、国際公開第２００４／００４７４３号、米国特許出願公開第２０１２／０２１３８１８号、欧州特許出願公開第１９２８４９４号、国際公開第２００６／０２４５１８号、米国特許出願公開第２０１２／０００９２２１号、欧州特許出願公開第２２２３７００号、欧州特許出願公開第２２２９９５３号、欧州特許出願公開第１９３８８３３号、欧州特許出願公開第１６１５６６２号、国際公開第２００５／０１６３７６号、欧州特許出願公開第２７６２１６５号、米国特許出願公開第２０１０／００４７２６１号、欧州特許出願公開第２０８３８５１号、国際公開第２００８／０５２７７０号、米国特許出願公開第２００８／０１７１７１１号、欧州特許出願公開第１７６８７０３号、国際公開第２００６／００８１５４号、欧州特許出願公開第１３８３５５６号、国際公開第２０１６／１０７８７７号、国際公開第２０１６／０９７０６５号、国際公開第２０１６／０９１３９１号、国際公開第２０１５／１４９９４４号、国際公開第２０１５／１３５５５８号、国際公開第２０１５／１０１４１４号、国際公開第２０１５／１０１４１５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている他の生物製剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、非コードＲＮＡによって引き起こされるかまたはそれに関連する疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１０３および／もしくはｍｉＲ−１０７または別の低分子非コードＲＮＡの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，２６７，１３８号、米国特許出願公開第２０１５／００３７３０５号、欧州特許出願公開第１６４８９１４号または国際公開第２０１６／０２２７５３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲＮＡに関連する疾患または障害、例えばアルポート症候群、または癌、糖尿病性網膜症、心血管疾患、関節リウマチまたは乾癬の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＮＡ、例えばｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−３３、ｍｉＲ−１０３、ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−１５またはｍｉＲ−１６の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４７，４１３号、米国特許第９，４４７，４１２号、米国特許第９，３５９，６０９号、米国特許第９，０１２，４２３号、米国特許出願公開第２０１５／０２９９７０４号、米国特許出願公開第２０１４／０１００２６３号、欧州特許出願公開第２９０６６９８号、国際公開第２０１４／０５８８８１号、米国特許第９，２６７，１３８号、米国特許第９，１３９，８３２号、米国特許第８，９４６，１７９号、米国特許第８，８５９，５２１号、米国特許第８，８０９，２９４号、米国特許第８，７６５，７０１号、米国特許第８，６９７，６６３号、米国特許第８，５４６，３５０号、米国特許第８，４６６，１２０号、米国特許第８，１７８，５０６号、米国特許第８，１３３，８７６号、米国特許第８，１１０，５５８号、米国特許第８，１０６，０２５号、米国特許第７，７５９，３１９号、米国特許第７，６８３，０３６号、米国特許出願公開第２０１６／００１７３２９号、米国特許出願公開第２０１５／０３３７３０５号、米国特許出願公開第２０１５／０３３７３０４号、米国特許出願公開第２０１５／０２４７１４２号、米国特許出願公開第２０１５／００９４４６１号、米国特許出願公開第２０１４／０３３６３７０号、米国特許出願公開第２０１４／０３２９８８２号、米国特許出願公開第２０１４／０１２１３６５号、米国特許出願公開第２０１４／０１２１３６４号、米国特許出願公開第２０１４／００５７９６３号、米国特許出願公開第２０１２／０２８３３１９号、米国特許出願公開第２０１２／０１５７５１４号、米国特許出願公開第２０１２／０１２２２１６号、米国特許出願公開第２０１２／００３５２４８号、米国特許出願公開第２０１１／０２２４２７７号、米国特許出願公開第２０１０／０２６７８１３号、米国特許出願公開第２０１０／０２４９２１５号、米国特許出願公開第２００９／０３１７９０７号、米国特許出願公開第２００９／０２９８１７４号、米国特許出願公開第２００９／０２９１９０７号、米国特許出願公開第２００９／０２９１９０６号、米国特許出願公開第２００９／０２８６９６９号、米国特許出願公開第２００９／０２０３８９３号、欧州特許出願公開第１９３１７８０号、欧州特許出願公開第２５３０１５７号、欧州特許出願公開第２３３８９９２号、欧州特許出願公開第１９３１７８０号、欧州特許出願公開第１６４８９１４号、米国特許出願公開第２０１６／０２４４７５３号、米国特許第９，２６７，１３７号、米国特許第８，９６９，３１７号、米国特許出願公開第２０１５／０２１８５５８号、米国特許出願公開第２０１３／０２８９０９３号、欧州特許出願公開第２８４１５７９号、国際公開第２０１３／１６３２５８号、米国特許出願公開第２０１６／０１３８０１６号、米国特許第９，１８１，５４７号、米国特許第８，９１２，１６１号、米国特許出願公開第２０１４／０３２９８８７号、米国特許出願公開第２０１４／０１０７１８３号、米国特許出願公開第２０１２／０２７０９２８号、欧州特許出願公開第２７０２１５５号、国際公開第２０１２／１４８９５２号、米国特許出願公開第２０１６／００４６９４１号、米国特許第９，１５０，８５７号、米国特許第８，６８０，０６７号、米国特許第８，２１１，８６７号、米国特許出願公開第２０１４／０２０６８５４号、米国特許出願公開第２０１２／０２９５９６２号、米国特許出願公開第２０１１／０２５１１５０号、米国特許出願公開第２０１０／０２６７８１４号、欧州特許出願公開第２２１７２４８号、欧州特許出願公開第２９９２０９６号、米国特許出願公開第２０１５／００３１１３０号、国際公開第２０１４／１７９４４５号、欧州特許出願公開第３０６０６６４Ａ１号、国際公開第２０１５／０６１５３６号、国際公開第２０１２／０１２７１６号または国際公開第２０１１／１２６８４２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、線維症、癌またはアルポート症候群の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−２１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，２６７，１３７号、米国特許第８，９６９，３１７号、米国特許出願公開第２０１５／０２１８５５８号、米国特許出願公開第２０１３／０２８９０９３号、欧州特許出願公開第２８４１５７９号、国際公開第２０１３／１６３２５８号、欧州特許出願公開第２９０６６９８号、米国特許第９，０１２，４２３号、米国特許出願公開第２０１４／０１００２６３号、国際公開第２０１４／０５８８８１号、米国特許第８，６９７，６６３号、米国特許第８，４６６，１２０号、米国特許第８，１１０，５５８号、米国特許出願公開第２０１１／０２２４２７７号、米国特許出願公開第２０１０／０２６７８１３号、欧州特許出願公開第１６４８９１４号、米国特許出願公開第２０１４／０１０７１８３号、米国特許出願公開第２０１２／０２７０９２８号、欧州特許出願公開第２７０２１５５号、国際公開第２０１２／１４８９５２号、欧州特許出願公開第３０６０６６４号、国際公開第２０１５／０６１５３６号または国際公開第２０１１／１２６８４２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルス感染症、例えばＣ型肝炎、または疾患もしくは状態、例えば線維症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１２２、ｍｉＲ−２１４またはｍｉＲ−２１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０２５１６５７号、米国特許第９，３０９，５１３号、米国特許第９，１５７，０８３号、米国特許出願公開第２０１５／０１０５４４９号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００９０号、欧州特許出願公開第２９９２０９５号、国際公開第２０１４／１７９４４６号、米国特許出願公開第２０１６／０２４４７５３号、米国特許第９，２６７，１３７号、米国特許第８，９６９，３１７号、米国特許出願公開第２０１５／０２１８５５８号、米国特許出願公開第２０１３／０２８９０９３号、欧州特許出願公開第２８４１５７９号、国際公開第２０１３／１６３２５８号、米国特許出願公開第２０１６／０１３８０１６号、米国特許第９，１８１，５４７号、米国特許第８，９１２，１６１号、米国特許出願公開第２０１４／０３２９８８７号、米国特許出願公開第２０１４／０１０７１８３号、米国特許出願公開第２０１２／０２７０９２８号、欧州特許出願公開第２７０２１５５号、国際公開第２０１２／１４８９５２号、米国特許出願公開第２０１６／０１０８３９７号、米国特許第９，１８１，５４８号、米国特許第８，８１５，８２６号、米国特許出願公開第２０１５／００８０４５３号、米国特許出願公開第２０１３／０１８４２１７号、国際公開第２０１２／０１２７１６号、欧州特許出願公開第３０６０６６４号または国際公開第２０１５／０６１５３６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルス感染症、例えばＣ型肝炎ウイルス、肝疾患、例えば非アルコール性脂肪肝疾患、または他の疾患もしくは状態、例えば心血管疾患および代謝性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１２２の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０２５１６５７号、米国特許第９，３０９，５１３号、米国特許第９，１５７，０８３号、米国特許出願公開第２０１５／０１０５４４９号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００９０号、欧州特許出願公開第２９９２０９５号、国際公開第２０１４／１７９４４６号、米国特許第８，９６９，３１４号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４１号、欧州特許出願公開第２３３８９９１号または欧州特許出願公開第１９３１７８２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、心血管疾患または代謝性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１２２ａの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０２５１６５７号、米国特許第９，３０９，５１３号、米国特許出願公開第２０１５／０１０５４４９号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００９０号、欧州特許出願公開第２９９２０９５号、国際公開第２０１４／１７９４４６号または米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、アルポート症候群、肝臓癌および／または線維症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−２１および／またはｍｉＲ−２１４の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３５９，６０９号、米国特許第９，０１２，４２３号、米国特許出願公開第２０１５／０２９９７０４号、米国特許出願公開第２０１４／０１００２６３号、欧州特許出願公開第２９０６６９８号、国際公開第２０１４／０５８８８１号、米国特許出願公開第２０１６／０２４４７５３号、米国特許第９，２６７，１３７号、米国特許第８，９６９，３１７号、米国特許出願公開第２０１５／０２１８５５８号、米国特許出願公開第２０１３／０２８９０９３号、欧州特許出願公開第２８４１５７９号、国際公開第２０１３／１６３２５８号、米国特許出願公開第２０１６／０１０８３９７号、米国特許第９，１８１，５４８号、米国特許第８，８１５，８２６号、米国特許出願公開第２０１５／００８０４５３号、米国特許出願公開第２０１３／０１８４２１７号、国際公開第２０１２／０１２７１６号、欧州特許出願公開第３０６０６６４号または国際公開第２０１５／０６１５３６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＡＬＳの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＦＸＮ、ＳＭＮ１および／またはＳＭＮ２の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第３０５２６３２号、米国特許出願公開第２０１６／０２２２３９１号、国際公開第２０１５／０５１２８３号、欧州特許出願公開第３０３３４２４号、米国特許出願公開第２０１５／０２４７１４５号、米国特許出願公開第２０１５／０２４７１４４号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４７号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４６号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４５号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４４号、米国特許出願公開第２０１５／０２２５７１５号、米国特許出願公開第２０１５／００５０７３８号、国際公開第２０１５／０２３９７５号、米国特許出願公開第２０１５／０２５２３６４号、欧州特許出願公開第２８５０１８６号、国際公開第２０１３／１７３６３８号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８５８号、国際公開第２０１６／１３０９４３号、国際公開第２０１６／１３０９２９号、国際公開第２０１１／１１６１５２号、国際公開第２００７／０９２１８１号または国際公開第２００７／０８９６０７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＡＬＳの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＳＭＮ１、ＳＭＮ２、ＡＢＣＡ１、ＡＰＯＡ１、ＦＯＸＰ３および／またはＢＤＦＮの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第３０５２６３２号、米国特許出願公開第２０１６／０２２２３９１号、国際公開第２０１５／０５１２８３号、米国特許出願公開第２０１６／０１２２７６０号、欧州特許出願公開第３００４３５４号、国際公開第２０１４／１９７８２６号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８５号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８６号、米国特許出願公開第２０１５／０２４７１４１号、欧州特許出願公開第２８９５２００号、国際公開第２０１４／０４３５４４号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８７号、米国特許出願公開第２０１５／０２９９６９５号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８８号、欧州特許出願公開第２７５６０８０号、国際公開第２０１３／０４０４２９号、欧州特許出願公開第３０３３４２４号、米国特許出願公開第２０１５／０２４７１４５号、米国特許出願公開第２０１５／０２４７１４４号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４７号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４６号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４５号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４４号、米国特許出願公開第２０１５／０２２５７１５号、米国特許出願公開第２０１５／００５０７３８号、国際公開第２０１５／０２３９７５号、米国特許出願公開第２０１５／０２５２３６４号、米国特許出願公開第２０１５／０１９１７２２号、米国特許出願公開第２０１５／０２１８５６０号、米国特許出願公開第２０１５／０１５９１６１号、米国特許出願公開第２０１５／０１３３３６２号、米国特許出願公開第２０１５／０１３３５２９号、欧州特許出願公開第２８５０１８９号、欧州特許出願公開第２８５０１８６号、欧州特許出願公開第２８４９８０１号、欧州特許出願公開第２８４９８００号、国際公開第２０１３／１７３６５２号、国際公開第２０１３／１７３６４７号、国際公開第２０１３／１７３６３８号、国際公開第２０１３／１７３６０１号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８３６号、欧州特許出願公開第２８５０１８３号、国際公開第２０１３／１７３６３５号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１３２０号、欧州特許出願公開第２８５０１８４号、国際公開第２０１３／１７３６３７号、国際公開第２０１６／１３０９６３号、国際公開第２０１６／１３０９４３号または国際公開第２０１６／１３０９２９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は肝疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＴＨＲＢまたはＮＲ１Ｈ４の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８５号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８６号、欧州特許出願公開第２８９５２００号、国際公開第２０１４／０４３５４４号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８７号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８８号、欧州特許出願公開第２７５６０８０号、国際公開第２０１３／０４０４２９号または国際公開第２０１６／１３０９６３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、炎症性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＦＯＸＰ３の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０１２２７６０号、欧州特許出願公開第３００４３５４号、国際公開第２０１４／１９７８２６号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８５号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８６号、米国特許出願公開第２０１５／０２４７１４１号、欧州特許出願公開第２８９５２００号、国際公開第２０１４／０４３５４４号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８７号、米国特許出願公開第２０１５／０２９９６９５号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８８号、欧州特許出願公開第２７５６０８０号、国際公開第２０１３／０４０４２９号、欧州特許出願公開第３０３３４２４号、米国特許出願公開第２０１５／０２４７１４５号、米国特許出願公開第２０１５／０２４７１４４号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４７号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４６号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４５号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４４号、米国特許出願公開第２０１５／０２２５７１５号、米国特許出願公開第２０１５／００５０７３８号、国際公開第２０１５／０２３９７５号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８３６号、欧州特許出願公開第２８５０１８３号、国際公開第２０１３／１７３６３５号、米国特許出願公開第２０１５／０２１８５６０号、米国特許出願公開第２０１５／０１３３３６２号、欧州特許出願公開第２８５０１８９号、国際公開第２０１３／１７３６５２号、欧州特許出願公開第３０３３４２２号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８５８号、国際公開第２０１５／０２３９４１号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１３２０号、欧州特許出願公開第２８５０１８４号、国際公開第２０１３／１７３６３７号、国際公開第２０１６／１３０９４３号または国際公開第２０１６／１３０９２９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、フリードライヒ運動失調症またはヘテロクロマチン形成に関連する疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、フラタキシン（ＦＸＮ）の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０２０１０６４号、欧州特許出願公開第３０３３４２５号、国際公開第２０１５／０２３９３９号、米国特許出願公開第２０１６／０２０１０６３号、欧州特許出願公開第３０３３４２３号、国際公開第２０１５／０２３９３８号、欧州特許出願公開第３０３３４２４号、米国特許出願公開第２０１５／０２４７１４５号、米国特許出願公開第２０１５／０２４７１４４号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４７号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４６号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４５号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４４号、米国特許出願公開第２０１５／０２２５７１５号、米国特許出願公開第２０１５／００５０７３８号、国際公開第２０１５／０２３９７５号、欧州特許出願公開第３０３３１１４号、米国特許出願公開第２０１５／０２２５７２２号、国際公開第２０１５／０２３９３７号、欧州特許出願公開第３０３３４２２号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８５８号、国際公開第２０１５／０２３９４１号、国際公開第２０１６／１３０９６３号、国際公開第２０１６／１３０９４３号または国際公開第２０１６／１３０９２９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、微小血管障害、眼疾患、呼吸器状態、聴覚問題または視神経症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１ＬまたはＥＮＤＯ１８０の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，２２２，０８７号、米国特許第８，０１７，７６４号、米国特許第７，６２６，０１５号、米国特許出願公開第２０１３／０３０３５９０号、米国特許出願公開第２０１２／０１０８６４７号、米国特許出願公開第２０１０／０１６８２０４号、欧州特許出願公開第２０２６８４３号、国際公開第２００７／１４１７９６号、米国特許第９，０５６，９０３号、米国特許第８，０６７，５７０号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号、欧州特許出願公開第１９８４００３号、欧州特許出願公開第２８６２９２９号、米国特許第８，７７８，９０４号、欧州特許出願公開第２５１００９８号、欧州特許出願公開第２５１００９８号、国際公開第２０１１／０７２０９１号、米国特許第８，６４２，５７１号、米国特許第８，３０９，５３２号、米国特許第８，１６８，６０７号、米国特許第７，７４１，２９９号、米国特許出願公開第２０１３／００９５１１７号、米国特許出願公開第２０１１／０１１７１０２号、米国特許出願公開第２０１１／００２８５３２号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、欧州特許出願公開第２３１９９２５号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００６８号、米国特許第８，６１４，３１１号、米国特許出願公開第２０１３／０１３１１４３号、国際公開第２００９／０７４９９０号、米国特許第８，４４４，９８３号、米国特許出願公開第２０１５／０３５９９０５号、米国特許出願公開第２０１４／００７２５５２号、欧州特許出願公開第２４１１４１３号、国際公開第２０１０／１１１１９８号、米国特許出願公開第２０１３／０１９０３８７号、米国特許第８，４０４，６５４号、米国特許第７，８２５，０９９号、米国特許出願公開第２０１０／００２９７４６号、米国特許第８，３４４，１０４号、米国特許第８，０３４，５７５号、米国特許第７，７２３，０５２号、米国特許出願公開第２０１２／００３４５９９号、米国特許出願公開第２０１１／００４５４９９号、国際公開第２００８／０５４５３４号、国際公開第２００８／０５４５３４号、国際公開第２００８／００１３６１号、米国特許第８，０３４，９０２号、欧州特許出願公開第１８８５３９６号、米国特許第７，９７３，１５６号、米国特許第７，５２４，９３５号、米国特許出願公開第２００９／０２６４６３４号、欧州特許出願公開第１１１５７３３号、米国特許出願公開第２０１１／００９８３３７号、米国特許第７，８７２，１１９号、欧州特許出願公開第２１３７２０５号、国際公開第２００８／１０６１０２号、米国特許出願公開第２０１５／０２６７１９４号、欧州特許出願公開第２８９５６０７号、国際公開第２０１４／０４３２８９号、米国特許出願公開第２０１４／０３２３５４９号、欧州特許出願公開第２７７６５６５号、国際公開第２０１３／０７０８２１号、欧州特許出願公開第２２６８３１６号、国際公開第２００９／１１６０３７号、欧州特許出願公開第２１５２３１６号、国際公開第２００８／１３２７２３号、欧州特許出願公開第１９３３８８０号、欧州特許出願公開第１３５７８８１号、国際公開第２０１０／０８０４５２号または国際公開第２００８／１２６０８５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、微小血管障害、眼疾患、呼吸器状態、聴覚問題もしくは視神経症；または肝線維症、肺線維症、腹膜線維症および腎線維症を含む線維性疾患および障害；またはアルツハイマー病および筋萎縮性側索硬化症を含む神経変性障害、緑内障およびＩＯＮを含む眼疾患、急性腎不全、聴覚消失、急性呼吸窮迫症候群の処置、予防または改善において、ならびに臓器移植患者における虚血再灌流傷害の予防または処置において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１Ｌ、ＥＮＤＯ１８０、ＲｈｏＡ、ＴＰ５３、ＨＴＲＡ２、ＫＥＡＰ１、ＳＨＣ１−ＳＨＣ、ＺＮＨＩＴ１、ＬＧＡＬＳ３、ＨＩ９５、ｈｓｐ４７、ｎｒｆ２、ＮＯＸ４、ＮＯＸ１、ＮＯＸ２（ｇｐ９１ｐｈｏｘ、ＣＹＢＢ）、ＮＯＸ５、ＤＵＯＸ２、ＮＯＸＯ１、ＮＯＸＡ１、ＮＯＸＡ２（ｐ６７ｐｈｏｘ）、組織性メタロプロテイナーゼ阻害因子１または組織性メタロプロテイナーゼ阻害因子２（それぞれＴＩＭＰ１およびＴＩＭＰ２）の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＡＢＡＴ；ＡＤＲＢ１；ＡＤＲＢ３；ＡＲＨＧＥＦ９；ＡＲＲＢ１；ＡＴＰ１Ａ１；ＣＡＣＮＢ４；ＣＡＭＫ２Ａ；ＣＡＭＫ２Ｄ；ＣＢＬＮ１；ＣＤＨ２２；ＣＤＫ５Ｒ１；ＣＨＮ１；ＣＴＳＤ；ＤＤＮ；ＤＲＤ３；ＤＵＳＰ６；ＥＮＰＰ１；ＥＮＰＰ２；ＥＰＨＡ４；ＧＡＢＲＡ１；ＧＭＦＧ；ＧＰＭ６Ａ；ＧＰＮＭＢ；ＧＰＲ２３；ＨＡＰＬＮ４；ＩＧＦ２；ＩＧＦＢＰ２；ＫＣＮＡ１；ＫＩＦ５Ａ；ＭＡＰＫ１０；ＭＥＦ２Ｃ；ＮＡＰＢ；ＮＯＳ１；ＮＰＴＸ２；ＮＲＧＮ；ＮＴＳ；ＮＵＣＢ１；ＰＣＰ４；ＰＤＣＤ２；ＰＤＥ４Ｄ；ＰＥＮＫ；ＰＨＣＡ；ＰＪＡ２；ＰＬＰ１；ＰＭＣＨ；ＰＶＡＬＢ；ＱＤＰＲ；ＲＰＮ１；ＳＬＣ１７Ａ７；ＳＬＣ２８Ａ２；ＳＬＣ８Ａ１；ＳＮＡＰ９１；ＳＹＮ２；ＳＹＴ１；ＴＫＴ；ＴＰＴ１；ＵＧＴ８およびＶＩＰからなる群より選択される遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、核酸は、オリゴヌクレオチドまたはその類似体（例えば、低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）または低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ））である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４６，０６２号、米国特許第９，２２２，０８７号、米国特許第８，０１７，７６４号、米国特許第７，６２６，０１５号、米国特許出願公開第２０１３／０３０３５９０号、米国特許出願公開第２０１２／０１０８６４７号、米国特許出願公開第２０１０／０１６８２０４号、欧州特許出願公開第２０２６８４３号、国際公開第２００７／１４１７９６号、欧州特許出願公開第２３５０２７９号、米国特許第９，１２１，０２０号、米国特許第８，７６５，９３１号、米国特許出願公開第２０１５／０３６１４３０号、米国特許出願公開第２０１５／００５０３２８号、欧州特許出願公開第２３５０２７９号、国際公開第２０１０／０４８３５２号、米国特許出願公開第２０１６／０１０２３１３号、米国特許第９，０４５，７５５号、米国特許出願公開第２０１３／０１３７７５０号、欧州特許出願公開第２５８５５９４号、国際公開第２０１１／１６３４３６号、米国特許第９，０５６，９０３号、米国特許第８，０６７，５７０号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号、欧州特許出願公開第１９８４００３号、米国特許出願公開第２０１５／００６５５５９号、米国特許第８，９０１，０９７号、国際公開第２０１１／０５７１７１号、米国特許第８，７８５，４０８号、欧州特許出願公開第２１７０４０３号、国際公開第２００９／００１３５９号、米国特許出願公開第２０１５／０１５２４１２号、米国特許第８，７９６，２３９号、米国特許出願公開第２０１１／０１７８１５７号、欧州特許出願公開第２５０９９９１号、欧州特許出願公開第２５０４４３５号、国際公開第２０１１／０７２０８２号、国際公開第２０１１／０６６４７５号、欧州特許出願公開第２８６２９２９号、米国特許第８，７７８，９０４号、欧州特許出願公開第２５１００９８号、欧州特許出願公開第２５１００９８号、国際公開第２０１１／０７２０９１号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００６８号、米国特許第８，６１４，３１１号、米国特許出願公開第２０１３／０１３１１４３号、国際公開第２００９／０７４９９０号、欧州特許出願公開第２４１１４１３号、米国特許第８，４４４，９８３号、米国特許出願公開第２０１５／０３５９９０５号、米国特許出願公開第２０１４／００７２５５２号、欧州特許出願公開第２４１１４１３号、国際公開第２０１０／１１１１９８号、米国特許第８，４１０，０６９号、米国特許第７，８１２，００２号、米国特許出願公開第２０１１／０２３０５４３号、欧州特許出願公開第２１３６８４７号、国際公開第２００８／１１４２６２号、米国特許出願公開第２０１５／０３２９８６６号、米国特許第８，４０４，６５４号、米国特許第７，９１０，５６６号、米国特許第７，８２５，０９９号、米国特許出願公開第２０１３／０１９０３８７号、米国特許出願公開第２０１０／００２９７４６号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２０７６５２６号、国際公開第２００８／０５０３２９号、米国特許第８，２７８，２８７号、欧州特許出願公開第２２８５３８５号、国際公開第２００９／１４４７０４号、米国特許第８，１９８，２５８号、米国特許第７，９３９，６５２号、米国特許出願公開第２０１１／０２０１６７０号、欧州特許出願公開第１７５８９９８号、欧州特許出願公開第２３３０１１１号、欧州特許出願公開第１７５８９９８号、米国特許第８，０３４，９０２号、欧州特許出願公開第１８８５３９６号、米国特許出願公開第２０１１／００９８３３７号、米国特許第７，８７２，１１９号、欧州特許出願公開第２１３７２０５号、国際公開第２００８／１０６１０２号、米国特許出願公開第２０１５／０２５９６７６号、国際公開第２０１４／０４３２９１号、米国特許出願公開第２０１５／００１８４０４号、欧州特許出願公開第２７３９６３７号、国際公開第２０１３／０２００９７号、国際公開第２０１３／０２００９７号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５９１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、国際公開第２０１２／０７８５３６号、米国特許出願公開第２０１３／０２６７５７８号、米国特許出願公開第２０１２／０１３６０４４号、国際公開第２００８／１５２６３６号、米国特許出願公開第２０１３／００３００３４号、米国特許出願公開第２０１２／０１４２７５４号、国際公開第２０１２／０４４６２０号、米国特許出願公開第２００９／０２０２５６６号、欧州特許出願公開第１６２４７８８号、欧州特許出願公開第１９３３８８０号、国際公開第２０１２／１７０９５７号、国際公開第２０１０／０８０４５２号、国際公開第２０１０／０４６８８９号または国際公開第２００８／０２０４３５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌性疾患または過剰増殖性疾患もしくは障害、例えば肺癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、Ｎｒｆ２の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第８，４１０，０６９号、米国特許第７，８１２，００２号または米国特許出願公開第２０１１／０２３０５４３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、微小血管障害、眼疾患、聴力障害、神経変性疾患および障害、脊髄傷害、呼吸器状態またはＣＮＳ疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１またはヒトｐ５３遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４６，０６２号、欧州特許出願公開第１７９９２６９号、米国特許第９，３３４，４９９号、米国特許第９，００６，１９６号、米国特許第８，７６５，６９９号、米国特許第８，１４８，３４２号、米国特許第７，８４２，６７４号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４８７号、米国特許出願公開第２０１２／０１８４５９７号、米国特許出願公開第２００８／０２８７３８２号、欧州特許出願公開第１７９９２６９号、米国特許第９，２２２，０８７号、米国特許第８，０１７，７６４号、米国特許第７，６２６，０１５号、米国特許出願公開第２０１３／０３０３５９０号、米国特許出願公開第２０１２／０１０８６４７号、米国特許出願公開第２０１０／０１６８２０４号、欧州特許出願公開第２０２６８４３号、国際公開第２００７／１４１７９６号、欧州特許出願公開第２３５０２７９号、米国特許第９，１２１，０２０号、米国特許第８，７６５，９３１号、米国特許出願公開第２０１５／０３６１４３０号、米国特許出願公開第２０１５／００５０３２８号、欧州特許出願公開第２３５０２７９号、国際公開第２０１０／０４８３５２号、米国特許第９，０８９，５９１号、米国特許第８，４３１，６９２号、米国特許出願公開第２０１４／００６６４９３号、欧州特許出願公開第２２９３８００号、国際公開第２００９／１４７６８４号、米国特許第９，０５６，９０３号、米国特許第８，０６７，５７０号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号、欧州特許出願公開第１９８４００３号、米国特許出願公開第２０１５／００６５５５９号、米国特許第８，９０１，０９７号、国際公開第２０１１／０５７１７１号、米国特許出願公開第２０１５／０１５２４１２号、米国特許第８，７９６，２３９号、欧州特許出願公開第２５０４４３５号、国際公開第２０１１／０６６４７５号、欧州特許出願公開第２８６２９２９号、米国特許第８，７７８，９０４号、欧州特許出願公開第２５１００９８号、国際公開第２０１１／０７２０９１号、米国特許第８，６４２，５７１号、米国特許第８，３０９，５３２号、米国特許第８，１６８，６０７号、米国特許第７，７４１，２９９号、米国特許出願公開第２０１３／００９５１１７号、米国特許出願公開第２０１１／０１１７１０２号、米国特許出願公開第２０１１／００２８５３２号、欧州特許出願公開第２３１９９２５号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、米国特許第８，６１４，３０９号、米国特許出願公開第２０１３／０１２３３３４号、欧州特許出願公開第２２３１１６８号、国際公開第２００９／０４４３９２号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００６８号、米国特許第８，６１４，３１１号、米国特許出願公開第２０１３／０１３１１４３号、国際公開第２００９／０７４９９０号、米国特許出願公開第２０１５／０３２９８６６号、米国特許第８，４０４，６５４号、米国特許第７，９１０，５６６号、米国特許第７，８２５，０９９号、米国特許出願公開第２０１３／０１９０３８７号、米国特許出願公開第２０１１／０２５１２６０号、米国特許出願公開第２０１０／００２９７４６号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２０７６５２６号、国際公開第２００８／０５０３２９号、米国特許第８，３６２，２２９号、欧州特許出願公開第１９８９３０７号、国際公開第２００７／０９１２６９号、米国特許第８，３４４，１０４号、米国特許第８，０３４，５７５号、米国特許第７，７２３，０５２号、米国特許出願公開第２０１２／００３４５９９号、米国特許出願公開第２０１１／００４５４９９号、国際公開第２００８／０５４５３４号、国際公開第２００８／０５４５３４号、国際公開第２００８／００１３６１号、米国特許第７，９７３，１５６号、米国特許出願公開第２０１１／００９８３３７号、米国特許第７，８７２，１１９号、欧州特許出願公開第２１３７２０５号、国際公開第２００８／１０６１０２号、米国特許出願公開第２０１５／０２５９６７６号、国際公開第２０１４／０４３２９１号、米国特許出願公開第２０１５／０２６７１９４号、欧州特許出願公開第２８９５６０７号、国際公開第２０１４／０４３２８９号、米国特許出願公開第２０１４／０３２３５４９号、欧州特許出願公開第２７７６５６５号、国際公開第２０１３／０７０８２１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５９１号、国際公開第２０１２／０７８５３６号、欧州特許出願公開第２２６８３１６号、国際公開第２００９／１１６０３７号、欧州特許出願公開第２１５２３１６号または国際公開第２００８／１３２７２３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、微小血管障害、眼疾患、呼吸器状態および聴覚問題またはＣＮＳ疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１またはヒトｐ５３遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，０５６，９０３号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号、欧州特許出願公開第１９８４００３号、米国特許第８，６４２，５７１号、米国特許第８，３０９，５３２号、米国特許出願公開第２０１３／００９５１１７号、米国特許出願公開第２０１１／０１１７１０２号、欧州特許出願公開第２３１９９２５号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、米国特許第８，３４４，１０４号、米国特許第８，０３４，５７５号、米国特許第７，７２３，０５２号、米国特許出願公開第２０１２／００３４５９９号、米国特許出願公開第２０１１／００４５４９９号、国際公開第２００８／０５４５３４号、国際公開第２００８／００１３６１号、米国特許出願公開第２０１５／０２５９６７６号、国際公開第２０１４／０４３２９１号、米国特許出願公開第２０１４／０３２３５４９号、欧州特許出願公開第２７７６５６５号、国際公開第２０１３／０７０８２１号、欧州特許出願公開第２２６８３１６号、国際公開第２００９／１１６０３７号、欧州特許出願公開第２１５２３１６号、国際公開第２００８／１３２７２３号、欧州特許出願公開第２１３７２０５号、国際公開第２００８／１０６１０２号または欧州特許出願公開第１７９９２６９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性肺傷害、肺線維症（特発性）、ブレオマイシン誘発性肺線維症、人工呼吸器誘発性肺傷害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺気腫、肺移植後の閉塞性細気管支炎、および肺移植誘発性急性移植片機能不全の処置を含み、原発性移植片不全、虚血再灌流傷害、再灌流傷害、再灌流浮腫、同種移植片機能不全、肺再移植反応、肺移植後の閉塞性細気管支炎および／または原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）の進行の処置、予防または予防を含む、哺乳動物における肺疾患、障害および傷害の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＴＬＲ２またはＴＬＲ４の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０２１５２８４号、米国特許第９，２０５，１００号、米国特許出願公開第２０１４／０００５２５３号、欧州特許出願公開第２６８１３１４号、国際公開第２０１２／１１８９１０号、米国特許出願公開第２０１５／０１５２４１２号、米国特許第８，７９６，２３９号、欧州特許出願公開第２５０４４３５号、国際公開第２０１１／０６６４７５号、米国特許出願公開第２０１５／０２５９６７６号、国際公開第２０１４／０４３２９１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５９１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、国際公開第２０１２／０７８５３６号、欧州特許出願公開第２６８１３１５号、国際公開第２０１２／１１８９１１号または国際公開第２０１０／０８０４５２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｐ５３に関連する疾患、障害または状態、例えばＣＮＳの傷害もしくは障害、聴覚障害、聴覚消失および／もしくはバランス障害、または慢性腎疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１、ＨＥＳ１、ＨＥＳ５、ＨＥＹ１、ＨＥＹ２、ＩＤ１、ＩＤ２、ＩＤ３、ＣＤＫＮ１ＢまたはＮＯＴＣＨ１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４６，０６２号、米国特許第９，４３４，９４６号、米国特許出願公開第２０１５／０１２６５８６号、米国特許出願公開第２０１５／００１８４０４号、米国特許出願公開第２０１４／０３６４４８４号、欧州特許出願公開第２８０２６５７号、欧州特許出願公開第２７３９６３７号、国際公開第２０１３／０２００９７号、国際公開第２０１３／１０６４９４号、国際公開第２０１３／０２００９７号、欧州特許出願公開第１７９９２６９号、米国特許第９，３３４，４９９号、米国特許第９，００６，１９６号、米国特許第８，７６５，６９９号、米国特許第８，１４８，３４２号、米国特許第７，８４２，６７４号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４８７号、米国特許出願公開第２０１２／０１８４５９７号、米国特許出願公開第２００８／０２８７３８２号、欧州特許出願公開第１７９９２６９号、米国特許第９，２２２，０８７号、米国特許第８，０１７，７６４号、米国特許第７，６２６，０１５号、米国特許出願公開第２０１３／０３０３５９０号、米国特許出願公開第２０１２／０１０８６４７号、米国特許出願公開第２０１０／０１６８２０４号、欧州特許出願公開第２０２６８４３号、国際公開第２００７／１４１７９６号、欧州特許出願公開第２３５０２７９号、米国特許第９，１２１，０２０号、米国特許第８，７６５，９３１号、米国特許出願公開第２０１５／０３６１４３０号、米国特許出願公開第２０１５／００５０３２８号、欧州特許出願公開第２３５０２７９号、国際公開第２０１０／０４８３５２号、米国特許第９，０８９，５９１号、米国特許第８，４３１，６９２号、米国特許出願公開第２０１４／００６６４９３号、欧州特許出願公開第２２９３８００号、国際公開第２００／９１４７６８４号、米国特許第９，０５６，９０３号、米国特許第８，０６７，５７０号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号、欧州特許出願公開第１９８４００３号、米国特許出願公開第２０１５／００６５５５９号、米国特許第８，９０１，０９７号、国際公開第２０１１／０５７１７１号、米国特許第８，７８５，４０８号、欧州特許出願公開第２１７０４０３号、国際公開第２００９／００１３５９号、米国特許出願公開第２０１５／０１５２４１２号、米国特許第８，７９６，２３９号、欧州特許出願公開第２５０４４３５号、国際公開第２０１１／０６６４７５号、欧州特許出願公開第２８６２９２９号、米国特許第８，７７８，９０４号、欧州特許出願公開第２５１００９８号、国際公開第２０１１／０７２０９１号、米国特許出願公開第２０１４／０１４０９２２号、米国特許第８，６３７，４８２号、欧州特許出願公開第２４４０２１４号、国際公開第２０１０／１４４３３６号、米国特許第８，６４２，５７１号、米国特許第８，３０９，５３２号、米国特許第８，１６８，６０７号、米国特許第７，７４１，２９９号、米国特許出願公開第２０１３／００９５１１７号、米国特許出願公開第２０１１／０１１７１０２号、米国特許出願公開第２０１１／００２８５３２号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、欧州特許出願公開第２３１９９２５号、米国特許第８，６１４，３０９号、米国特許出願公開第２０１３／０１２３３３４号、欧州特許出願公開第２２３１１６８号、国際公開第２００９／０４４３９２号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００６８号、米国特許第８，６１４，３１１号、米国特許出願公開第２０１３／０１３１１４３号、国際公開第２００９／０７４９９０号、欧州特許出願公開第２４１１４１３号、米国特許第８，４４４，９８３号、米国特許出願公開第２０１５／０３５９９０５号、米国特許出願公開第２０１４／００７２５５２号、米国特許出願公開第２０１５／０３２９８６６号、米国特許第８，４０４，６５４号、米国特許第７，９１０，５６６号、米国特許第７，８２５，０９９号、米国特許出願公開第２０１３／０１９０３８７号、米国特許出願公開第２０１１／０２５１２６０号、米国特許出願公開第２０１０／００２９７４６号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２０７６５２６号、国際公開第２００８／０５０３２９号、米国特許第８，３６２，２２９号、欧州特許出願公開第１９８９３０７号、国際公開第２００７／０９１２６９号、米国特許第８，３４４，１０４号、米国特許第８，０３４，５７５号、米国特許第７，７２３，０５２号、米国特許出願公開第２０１２／００３４５９９号、米国特許出願公開第２０１１／００４５４９９号、国際公開第２００８／０５４５３４号、国際公開第２００８／０５４５３４号、国際公開第２００８／００１３６１号、米国特許第７，９７３，１５６号、米国特許第７，５２４，９３５号、米国特許出願公開第２００９／０２６４６３４号、欧州特許出願公開第１１１５７３３号、米国特許出願公開第２０１１／００９８３３７号、米国特許第７，８７２，１１９号、欧州特許出願公開第２１３７２０５号、国際公開第２００８／１０６１０２号、米国特許出願公開第２０１５／０２５９６７６号、国際公開第２０１４／０４３２９１号、米国特許出願公開第２０１５／０２０３８４５号、欧州特許出願公開第２８９５６０８号、国際公開第２０１４／０４３２９２号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５９１号、国際公開第２０１２／０７８５３６号、米国特許出願公開第２０１３／０２６７５７８号、米国特許出願公開第２０１２／０１３６０４４号、国際公開第２００８／１５２６３６号、欧州特許出願公開第２２６８３１６号、国際公開第２００９／１１６０３７号、欧州特許出願公開第２２４２８５４号、国際公開第２００９／０９０６３９号、欧州特許出願公開第２１５２３１６号、国際公開第２００８／１３２７２３号、欧州特許出願公開第１９３３８８０号、国際公開第２０１５／１８３８４２号、国際公開第２０１２／０４４６２０号、国際公開第２０１０／０８０４５２号、国際公開第２０１０／０４６８８９号、国際公開第２００８／１２６０８５号または国際公開第２００８／０２０４３５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｐ５３に関連する疾患、障害または状態、例えばＣＮＳの傷害もしくは障害、聴覚障害、聴覚消失、バランス障害、脱毛症または急性腎不全もしくは慢性腎疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１、ＴＰ５３、ＨＴＲＡ２、ＫＥＡＰ１、ＳＨＣ１−ＳＨＣ、ＺＮＨＩＴ１、ＬＧＡＬＳ３またはＨＩ９５の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第１７９９２６９号、米国特許第９，３３４，４９９号、米国特許第９，００６，１９６号、米国特許第８，７６５，６９９号、米国特許第７，８４２，６７４号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４８７号、米国特許出願公開第２０１２／０１８４５９７号、米国特許出願公開第２００８／０２８７３８２号、欧州特許出願公開第１７９９２６９号、米国特許第９，０８９，５９１号、米国特許出願公開第２０１４／００６６４９３号、米国特許第８，７８５，４０８号、米国特許第８，７７８，９０４号、米国特許出願公開第２０１４／０１４０９２２号、米国特許第８，６３７，４８２号、欧州特許出願公開第２４４０２１４号、国際公開第２０１０／１４４３３６号、米国特許出願公開第２０１３／０１９０３８７号、米国特許第８，４０４，６５４号、米国特許第７，９１０，５６６号、米国特許第７，８２５，０９９号、米国特許出願公開第２０１０／００２９７４６号、米国特許出願公開第２０１５／０２５９６７６号、国際公開第２０１４／０４３２９１号、米国特許出願公開第２０１５／０２０３８４５号、欧州特許出願公開第２８９５６０８号、国際公開第２０１４／０４３２９２号、欧州特許出願公開第２１５２３１６号、国際公開第２００８／１３２７２３号または国際公開第２０１５／１８３８４２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、化学物質誘発性耳毒性から生じる聴覚消失、音響外傷および老人難聴を含む耳障害ならびに微生物感染症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，０８９，５９１号、米国特許第８，４３１，６９２号、米国特許出願公開第２０１４／００６６４９３号、欧州特許出願公開第２２９３８００号または国際公開第２００９／１４７６８４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、眼疾患、障害または傷害の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＣＡＳＰ２またはＤＤＩＴ４の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３８２，５４２号、米国特許出願公開第２０１４／０３７１４３９号、欧州特許出願公開第２８００８１２号、国際公開第２０１３／１０３６３２号、欧州特許出願公開第２８６２９２９号、米国特許第８，７７８，９０４号、欧州特許出願公開第２５１００９８号、国際公開第２０１１／０７２０９１号、米国特許出願公開第２０１５／０２６７１９４号、欧州特許出願公開第２８９５６０７号または国際公開第２０１４／０４３２８９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、眼疾患、障害または傷害、例えば非動脈性前部虚血性視神経症（ＮＡＩＯＮ）の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＣＡＳＰ２の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３８２，５４２号、米国特許出願公開第２０１４／０３７１４３９号、欧州特許出願公開第２８００８１２号、国際公開第２０１３／１０３６３２号または米国特許第８，７７８，９０４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患、障害または状態、例えば虚血再灌流傷害、脱毛症、腎不全、緑内障、虚血性視神経症（ＩＯＮ）またはメニエール病の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＡＢＡＴ、ＡＤＲＢ１、ＡＤＲＢ３、ＡＲＨＧＥＦ９、ＡＲＲＢ１、ＡＴＰ１Ａ１、ＣＡＣＮＢ４、ＣＡＭＫ２Ａ、ＣＡＭＫ２Ｄ、ＣＢＬＮ１、ＣＤＨ２２、ＣＤＫ５Ｒ１、ＣＨＮ１、ＣＴＳＤ、ＤＤＮ、ＤＲＤ３、ＤＵＳＰ６、ＥＮＰＰ１、ＥＮＰＰ２、ＥＰＨＡ４、ＧＡＢＲＡ１、ＧＭＦＧ、ＧＰＭ６Ａ、ＧＰＮＭＢ、ＧＰＲ２３、ＨＡＰＬＮ４、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ２、ＫＣＮＡ１、ＫＩＦ５Ａ、ＭＡＰＫ１０、ＭＥＦ２Ｃ、ＮＡＰＢ、ＮＯＳ１、ＮＰＴＸ２、ＮＲＧＮ、ＮＴＳ、ＮＵＣＢ１、ＰＣＰ４、ＰＤＣＤ２、ＰＤＥ４Ｄ、ＰＥＮＫ、ＰＨＣＡ、ＰＪＡ２、ＰＬＰ１、ＰＭＣＨ、ＰＶＡＬＢ、ＱＤＰＲ、ＲＰＮ１、ＳＬＣ１７Ａ７、ＳＬＣ２８Ａ２、ＳＬＣ８Ａ１、ＳＮＡＰ９１、ＳＹＮ２、ＳＹＴ１、ＴＫＴ、ＴＰＴ１、ＵＧＴ８、ＶＩＰ、ＮＯＸ４、ＮＯＸ１、ＮＯＸ２（ｇｐ９１ｐｈｏｘ、ＣＹＢＢ）、ＮＯＸ５、ＤＵＯＸ２、ＮＯＸＯ１、ＮＯＸＡ１、ＮＯＸＡ２（ｐ６７ｐｈｏｘ）、ＳＯＸ９、ＡＳＰＰ１、ＣＴＳＤ、ＣＡＰＮＳ１、ＦＡＳまたはＦＡＳリガンドの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４６，０６２号、欧州特許出願公開第１７９９２６９号、米国特許第９，３３４，４９９号、米国特許第９，００６，１９６号、米国特許第８，７６５，６９９号、米国特許第８，１４８，３４２号、米国特許第７，８４２，６７４号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４８７号、米国特許出願公開第２０１２／０１８４５９７号、米国特許出願公開第２００８／０２８７３８２号、欧州特許出願公開第１７９９２６９号、米国特許第９，２２２，０８７号、米国特許第８，０１７，７６４号、米国特許第７，６２６，０１５号、米国特許出願公開第２０１３／０３０３５９０号、米国特許出願公開第２０１２／０１０８６４７号、米国特許出願公開第２０１０／０１６８２０４号、欧州特許出願公開第２０２６８４３号、国際公開第２００７／１４１７９６号、米国特許出願公開第２０１６／０１０２３１３号、米国特許第９，０４５，７５５号、米国特許出願公開第２０１３／０１３７７５０号、欧州特許出願公開第２５８５５９４号、国際公開第２０１１／１６３４３６号、米国特許第９，０５６，９０３号、米国特許第８，０６７，５７０号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号、欧州特許出願公開第１９８４００３号、米国特許第８，７８５，４０８号、欧州特許出願公開第２１７０４０３号、国際公開第２００９／００１３５９号、米国特許第８，６４２，５７１号、米国特許第８，３０９，５３２号、米国特許第８，１６８，６０７号、米国特許第７，７４１，２９９号、米国特許出願公開第２０１３／００９５１１７号、米国特許出願公開第２０１１／０１１７１０２号、米国特許出願公開第２０１１／００２８５３２号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、欧州特許出願公開第２３１９９２５号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００６８号、米国特許第８，６１４，３１１号、米国特許出願公開第２０１３／０１３１１４３号、国際公開第２００９／０７４９９０号、欧州特許出願公開第２４１１４１３号、米国特許第８，４４４，９８３号、米国特許出願公開第２０１５／０３５９９０５号、米国特許出願公開第２０１４／００７２５５２号、欧州特許出願公開第２４１１４１３号、国際公開第２０１０／１１１１９８号、米国特許第７，９７３，１５６号、米国特許第７，５２４，９３５号、米国特許出願公開第２００９／０２６４６３４号、欧州特許出願公開第１１１５７３３号、米国特許出願公開第２０１５／０３２９８６６号、米国特許第７，９１０，５６６号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２０７６５２６号、国際公開第２００８／０５０３２９号、米国特許出願公開第２０１１／００９８３３７号、米国特許第７，８７２，１１９号、欧州特許出願公開第２１３７２０５号、国際公開第２００８／１０６１０２号、米国特許出願公開第２０１５／０２５９６７６号、国際公開第２０１４／０４３２９１号、米国特許出願公開第２０１５／０２０３８４５号、欧州特許出願公開第２８９５６０８号、国際公開第２０１４／０４３２９２号、米国特許出願公開第２０１３／０２６７５７８号、米国特許出願公開第２０１２／０１３６０４４号、国際公開第２００８／１５２６３６号、米国特許出願公開第２０１３／００３００３４号、米国特許出願公開第２０１２／０１４２７５４号、国際公開第２０１２／０４４６２０号、欧州特許出願公開第２５０９９９１号、米国特許出願公開第２０１１／０１７８１５７号、国際公開第２０１１／０７２０８２号、欧州特許出願公開第２２６８３１６号、国際公開第２００９／１１６０３７号、欧州特許出願公開第２２４２８５４号、国際公開第２００９／０９０６３９号、欧州特許出願公開第１９３３８８０号、欧州特許出願公開第１７５３４６４号、国際公開第２０１２／１７０９５７号、国際公開第２０１０／０８０４５２号または国際公開第２００８／０２０４３５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、聴覚消失に関連する疾患、障害もしくは状態、または微小血管障害、眼疾患もしくは呼吸器状態、例えば耳鳴およびメニエール病の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１、ＲｈｏＡ、ＨＥＳ１、ＨＥＳ５、ＨＥＹ２、ＣＤＫＮ１ＢまたはＮＯＴＣＨ１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４３４，９４６号、米国特許出願公開第２０１５／０１２６５８６号、米国特許出願公開第２０１５／００１８４０４号、米国特許出願公開第２０１４／０３６４４８４号、欧州特許出願公開第２８０２６５７号、欧州特許出願公開第２７３９６３７号、国際公開第２０１３／０２００９７号、国際公開第２０１３／１０６４９４号、国際公開第２０１３／０２００９７号、米国特許第９，４２２，５６０号、米国特許出願公開第２０１５／００３１７４６号、欧州特許出願公開第２７７３７５８号、国際公開第２０１３／０６７０７６号、米国特許第９，２２２，０８７号、米国特許第８，０１７，７６４号、米国特許第７，６２６，０１５号、米国特許出願公開第２０１３／０３０３５９０号、米国特許出願公開第２０１２／０１０８６４７号、米国特許出願公開第２０１０／０１６８２０４号、欧州特許出願公開第２０２６８４３号、国際公開第２００７／１４１７９６号、米国特許出願公開第２０１６／０１０２３１３号、米国特許第９，０４５，７５５号、米国特許出願公開第２０１３／０１３７７５０号、欧州特許出願公開第２５８５５９４号、国際公開第２０１１／１６３４３６号、米国特許第９，０５６，９０３号、米国特許第８，０６７，５７０号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号、欧州特許出願公開第１９８４００３号、米国特許第８，７８５，４０８号、欧州特許出願公開第２１７０４０３号、国際公開第２００９／００１３５９号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００６８号、米国特許第８，６１４，３１１号、米国特許出願公開第２０１３／０１３１１４３号、国際公開第２００９／０７４９９０号、米国特許出願公開第２０１５／０３２９８６６号、米国特許第８，４０４，６５４号、米国特許第７，９１０，５６６号、米国特許第７，８２５，０９９号、米国特許出願公開第２０１３／０１９０３８７号、米国特許出願公開第２０１０／００２９７４６号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２０７６５２６号、国際公開第２００８／０５０３２９号、米国特許出願公開第２０１１／００９８３３７号、米国特許第７，８７２，１１９号、欧州特許出願公開第２１３７２０５号、国際公開第２００８／１０６１０２号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５９１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、国際公開第２０１２／０７８５３６号、米国特許出願公開第２０１３／０２６７５７８号、米国特許出願公開第２０１２／０１３６０４４号、国際公開第２００８／１５２６３６号、欧州特許出願公開第２２４２８５４号、国際公開第２００９／０９０６３９号または国際公開第２０１０／０８０４５２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、内耳疾患または疾患、障害もしくは状態、例えば聴覚消失、急性腎不全（ＡＲＦ）、移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）、緑内障、眼虚血性状態（非動脈性虚血性視神経症（ＮＡＩＯＮ）、前部虚血性視神経症、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、虚血性視神経症（ＩＯＮ）およびドライアイ症候群を含む）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）および他の急性の肺および呼吸器傷害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、原発性移植片不全、虚血再灌流傷害、再灌流傷害、再灌流浮腫、同種移植片機能不全、肺再移植反応および／または臓器移植、特に肺移植、臓器移植（肺、肝臓、心臓、膵臓および腎臓移植を含む）後の原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）、腎毒性および神経毒性、脊髄傷害、脳傷害、神経変性疾患もしくは状態、褥瘡、口腔粘膜炎、線維性障害、癌またはメニエール病の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲｈｏＡまたはカスパーゼ２、アポトーシス関連システインペプチダーゼ（ＣＡＳＰ２）遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４２２，５６０号、米国特許出願公開第２０１５／００３１７４６号、欧州特許出願公開第２７７３７５８号、国際公開第２０１３／０６７０７６号、米国特許第８，４０４，６５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１０２３１３号、米国特許出願公開第２０１３／０１３７７５０号、欧州特許出願公開第２５８５５９４号、国際公開第２０１１／１６３４３６号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５９１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号または国際公開第２０１２／０７８５３６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、微小血管障害、眼疾患および呼吸器状態または移植拒絶状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、米国特許第８，１６８，６０７号、米国特許第７，７４１，２９９号、米国特許出願公開第２０１１／０１１７１０２号、米国特許出願公開第２０１１／００２８５３２号、欧州特許出願公開第２３１９９２５号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、米国特許第８，０６７，５７０号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号または欧州特許出願公開第１９８４００３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、耳障害、例えば聴覚消失、バランス障害の処置、予防もしくは改善において、または内耳の耳（感覚）有毛細胞の代替、再生もしくは保護の促進において、または聴覚回復もしくは再生の達成において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、聴覚消失に関連する遺伝子、例えばｐ５３、ＨＥＳ１、ＨＥＳ５、ＨＥＹ２、ＣＤＫＮ１ＢまたはＮＯＴＣＨ１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４３４，９４６号、米国特許出願公開第２０１５／０１２６５８６号、米国特許出願公開第２０１５／００１８４０４号、米国特許出願公開第２０１４／０３６４４８４号、欧州特許出願公開第２８０２６５７号、欧州特許出願公開第２７３９６３７号、国際公開第２０１３／０２００９７号、国際公開第２０１３／１０６４９４号、米国特許第９，０８９，５９１号、米国特許第８，４３１，６９２号、米国特許出願公開第２０１４／００６６４９３号、欧州特許出願公開第２２９３８００号、国際公開第２００９／１４７６８４号、米国特許出願公開第２０１５／０１５２４１２号、米国特許第８，７９６，２３９号、欧州特許出願公開第２５０４４３５号、国際公開第２０１１／０６６４７５号、米国特許出願公開第２０１５／０２０３８４５号、欧州特許出願公開第２８９５６０８号または国際公開第２０１４／０４３２９２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、微小血管障害、眼疾患および呼吸器状態、例えば糖尿病性黄斑浮腫の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＶＥＧＦ阻害剤またはＶＥＧＦ受容体１阻害剤と必要に応じて組み合わせて、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、米国特許第８，１６８，６０７号、米国特許出願公開第２０１１／０１１７１０２号、米国特許出願公開第２０１１／００２８５３２号、欧州特許出願公開第２３１９９２５号または欧州特許出願公開第２４０２４４３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、微小血管障害、眼疾患および呼吸器状態、例えば糖尿病性黄斑変性症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＶＥＧＦ阻害剤またはＶＥＧＦ受容体１阻害剤と必要に応じて組み合わせて、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、米国特許第８，１６８，６０７号、米国特許第７，７４１，２９９号、米国特許出願公開第２０１１／０１１７１０２号、米国特許出願公開第２０１１／００２８５３２号、欧州特許出願公開第２３１９９２５号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、米国特許第８，０６７，５７０号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号または欧州特許出願公開第１９８４００３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、臓器における疾患、障害または状態、例えば臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）または虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｐ５３、ＲＴＰ８０１、ＴＰ５３、ＨＴＲＡ２、ＫＥＡＰ１、ＳＨＣ１−ＳＨＣ、ＺＮＨＩＴ１、ＬＧＡＬＳ３またはＨＩ９５の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４６，０６２号、米国特許第９，２４９，４１４号、米国特許第８，８５９，７５１号、米国特許出願公開第２０１５／０１５９１５４号、欧州特許出願公開第２５２１７８３号、国際公開第２０１１／０８４１９３号、国際公開第２０１１／０８５０５６号、米国特許第８，７８５，４０８号、欧州特許出願公開第２１７０４０３号、欧州特許出願公開第２１７０４０３号、国際公開第２００９／００１３５９号、米国特許出願公開第２０１５／０１５２４１２号、米国特許第８，７９６，２３９号、欧州特許出願公開第２５０４４３５号、国際公開第２０１１／０６６４７５号、米国特許第８，６１４，３０９号、米国特許出願公開第２０１３／０１２３３３４号、欧州特許出願公開第２２３１１６８号、国際公開第２００９／０４４３９２号、米国特許出願公開第２０１１／００９８３３７号、米国特許第７，８７２，１１９号、欧州特許出願公開第２１３７２０５号、国際公開第２００８／１０６１０２号、米国特許出願公開第２０１５／０３２９８６６号、米国特許出願公開第２０１１／０２５１２６０号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２０７６５２６号、国際公開第２００８／０５０３２９号、米国特許出願公開第２０１５／０２５９６７６号、国際公開第２０１４／０４３２９１号、米国特許出願公開第２０１５／０２０３８４５号、欧州特許出願公開第２８９５６０８号、国際公開第２０１４／０４３２９２号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５９１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、国際公開第２０１２／０７８５３６号、欧州特許出願公開第２２６８３１６号、国際公開第２００９／１１６０３７号、国際公開第２０１５／１８３８４２号または国際公開第２０１０／０８０４５２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、臓器における疾患、障害または状態、例えば臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）または虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｐ５３、ＲＴＰ８０１、ＴＰ５３、ＨＴＲＡ２、ＫＥＡＰ１、ＳＨＣ１−ＳＨＣ、ＺＮＨＩＴ１、ＬＧＡＬＳ３またはＨＩ９５の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第８，７８５，４０８号、欧州特許出願公開第２１７０４０３号、欧州特許出願公開第２１７０４０３号、国際公開第２００９／００１３５９号、米国特許出願公開第２０１５／０１５２４１２号、米国特許第８，７９６，２３９号、欧州特許出願公開第２５０４４３５号、国際公開第２０１１／０６６４７５号、米国特許出願公開第２０１５／０２０３８４５号、欧州特許出願公開第２８９５６０８号、国際公開第２０１４／０４３２９２号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５９１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、国際公開第２０１２／０７８５３６号または国際公開第２０１５／１８３８４２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性肺傷害、肺線維症（特発性）、ブレオマイシン誘発性肺線維症、人工呼吸器誘発性肺傷害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺気腫、肺移植後の閉塞性細気管支炎、および肺移植誘発性急性移植片機能不全またはＤＧＦの処置を含む、哺乳動物における肺疾患、障害および傷害の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１、ＴＬＲ２、ＴＰ５３、ＨＴＲＡ２、ＫＥＡＰ１、ＳＨＣ１−ＳＨＣ、ＺＮＨＩＴ１、ＬＧＡＬＳ３またはＨＩ９５の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４６，０６２号、米国特許第９，２４９，４１４号、米国特許第８，８５９，７５１号、米国特許出願公開第２０１５／０１５９１５４号、欧州特許出願公開第２５２１７８３号、国際公開第２０１１／０８４１９３号、国際公開第２０１１／０８５０５６号、米国特許出願公開第２０１６／０２１５２８４号、米国特許第９，２０５，１００号、米国特許出願公開第２０１４／０００５２５３号、欧州特許出願公開第２６８１３１４号、国際公開第２０１２／１１８９１０号、米国特許第９，２２２，０８７号、米国特許第８，０１７，７６４号、米国特許第７，６２６，０１５号、米国特許出願公開第２０１３／０３０３５９０号、米国特許出願公開第２０１２／０１０８６４７号、米国特許出願公開第２０１０／０１６８２０４号、欧州特許出願公開第２０２６８４３号、国際公開第２００７／１４１７９６号、米国特許第９，０５６，９０３号、米国特許第８，０６７，５７０号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号、欧州特許出願公開第１９８４００３号、米国特許第８，７８５，４０８号、欧州特許出願公開第２１７０４０３号、欧州特許出願公開第２１７０４０３号、国際公開第２００９／００１３５９号、米国特許出願公開第２０１５／０１５２４１２号、米国特許第８，７９６，２３９号、欧州特許出願公開第２５０４４３５号、国際公開第２０１１／０６６４７５号、米国特許第８，６４２，５７１号、米国特許第８，３０９，５３２号、米国特許第８，１６８，６０７号、米国特許第７，７４１，２９９号、米国特許出願公開第２０１３／００９５１１７号、米国特許出願公開第２０１１／０１１７１０２号、米国特許出願公開第２０１１／００２８５３２号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、欧州特許出願公開第２３１９９２５号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、米国特許第８，６１４，３０９号、米国特許出願公開第２０１３／０１２３３３４号、欧州特許出願公開第２２３１１６８号、国際公開第２００９／０４４３９２号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００６８号、米国特許第８，６１４，３１１号、米国特許出願公開第２０１３／０１３１１４３号、国際公開第２００９／０７４９９０号、米国特許第８，３６２，２２９号、欧州特許出願公開第１９８９３０７号、欧州特許出願公開第１９８９３０７号、国際公開第２００７／０９１２６９号、米国特許第８，３４４，１０４号、米国特許第８，０３４，５７５号、米国特許第７，７２３，０５２号、米国特許出願公開第２０１２／００３４５９９号、米国特許出願公開第２０１１／００４５４９９号、国際公開第２００８／０５４５３４号、国際公開第２００８／０５４５３４号、米国特許出願公開第２０１１／００９８３３７号、米国特許第７，８７２，１１９号、欧州特許出願公開第２１３７２０５号、国際公開第２００８／１０６１０２号、米国特許出願公開第２０１５／０３２９８６６号、米国特許出願公開第２０１１／０２５１２６０号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２０７６５２６号、国際公開第２００８／０５０３２９号、米国特許出願公開第２０１５／０２５９６７６号、国際公開第２０１４／０４３２９１号、米国特許出願公開第２０１５／０２６７１９４号、欧州特許出願公開第２８９５６０７号、国際公開第２０１４／０４３２８９号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５９１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、国際公開第２０１２／０７８５３６号、米国特許出願公開第２０１３／０２６７５７８号、米国特許出願公開第２０１２／０１３６０４４号、国際公開第２００８／１５２６３６号、欧州特許出願公開第２６８１３１５号、国際公開第２０１２／１１８９１１号、欧州特許出願公開第２２６８３１６号、国際公開第２００９／１１６０３７号、欧州特許出願公開第２２４２８５４号、国際公開第２００９／０９０６３９号、欧州特許出願公開第２１５２３１６号、国際公開第２００８／１３２７２３号、国際公開第２０１０／０８０４５２号、国際公開第２００８／１０４９７８号または国際公開第２００８／０２０４３５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、急性肺傷害、肺線維症（特発性）、ブレオマイシン誘発性肺線維症、人工呼吸器誘発性肺傷害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、肺気腫、肺移植後の閉塞性細気管支炎、および肺移植誘発性急性移植片機能不全またはＤＧＦの処置を含む、哺乳動物における肺疾患、障害および傷害の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１、ＴＬＲ２、ＴＰ５３、ＨＴＲＡ２、ＫＥＡＰ１、ＳＨＣ１−ＳＨＣ、ＺＮＨＩＴ１、ＬＧＡＬＳ３またはＨＩ９５の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０１５２４１２号、米国特許第８，７９６，２３９号、欧州特許出願公開第２５０４４３５号、国際公開第２０１１／０６６４７５号、米国特許第８，６４２，５７１号、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、欧州特許出願公開第２３１９９２５号、米国特許出願公開第２０１５／０２５９６７６号、国際公開第２０１４／０４３２９１号、欧州特許出願公開第２６８１３１４号、米国特許出願公開第２０１４／０００５２５３号、国際公開第２０１２／１１８９１０号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５９１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、国際公開第２０１２／０７８５３６号、米国特許出願公開第２０１３／０２６７５７８号、米国特許出願公開第２０１２／０１３６０４４号、国際公開第２００８／１５２６３６号、米国特許出願公開第２０１１／００９８３３７号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２０７６５２６号、国際公開第２００８／０５０３２９号、欧州特許出願公開第２２３１１６８号、国際公開第２００９／０４４３９２号、欧州特許出願公開第２２４２８５４号または国際公開第２００９／０９０６３９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、耳鳴、非動脈性前部虚血性視神経症（ＮＡＩＯＮ）およびメニエール病を含む内耳疾患および障害の処置、予防または改善において、ならびに内耳におけるニューロンに対する神経保護の増強において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｐ５３、ＲＴＰ８０１またはＣＡＳＰ２の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４６，０６２号、米国特許第９，４２２，５６０号、米国特許出願公開第２０１５／００３１７４６号、欧州特許出願公開第２７７３７５８号、国際公開第２０１３／０６７０７６号、米国特許第９，３８２，５４２号、米国特許出願公開第２０１４／０３７１４３９号、欧州特許出願公開第２８００８１２号、国際公開第２０１３／１０３６３２号、米国特許第９，３３４，４９９号、米国特許第９，００６，１９６号、米国特許第８，７６５，６９９号、米国特許第８，１４８，３４２号、米国特許第７，８４２，６７４号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４８７号、米国特許出願公開第２０１２／０１８４５９７号、米国特許出願公開第２００８／０２８７３８２号、欧州特許出願公開第１７９９２６９号、欧州特許出願公開第２３５０２７９号、米国特許第９，１２１，０２０号、米国特許第８，７６５，９３１号、米国特許出願公開第２０１５／０３６１４３０号、米国特許出願公開第２０１５／００５０３２８号、欧州特許出願公開第２３５０２７９号、国際公開第２０１０／０４８３５２号、米国特許第９，０８９，５９１号、米国特許出願公開第２０１４／００６６４９３号、米国特許第９，０５６，９０３号、米国特許第８，０６７，５７０号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号、欧州特許出願公開第１９８４００３号、米国特許出願公開第２０１５／００６５５５９号、米国特許第８，９０１，０９７号、国際公開第２０１１／０５７１７１号、米国特許出願公開第２０１５／０１５２４１２号、米国特許第８，７９６，２３９号、欧州特許出願公開第２５０４４３５号、国際公開第２０１１／０６６４７５号、欧州特許出願公開第２８６２９２９号、米国特許第８，７７８，９０４号、欧州特許出願公開第２５１００９８号、欧州特許出願公開第２５１００９８号、国際公開第２０１１／０７２０９１号、米国特許出願公開第２０１４／０１４０９２２号、米国特許第８，６３７，４８２号、欧州特許出願公開第２４４０２１４号、国際公開第２０１０／１４４３３６号、米国特許第８，６１４，３０９号、米国特許出願公開第２０１３／０１２３３３４号、欧州特許出願公開第２２３１１６８号、国際公開第２００９／０４４３９２号、米国特許出願公開第２０１５／０３２９８６６号、米国特許第８，４０４，６５４号、米国特許第７，９１０，５６６号、米国特許第７，８２５，０９９号、米国特許出願公開第２０１３／０１９０３８７号、米国特許出願公開第２０１１／０２５１２６０号、米国特許出願公開第２０１０／００２９７４６号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２３７１９５８号、欧州特許出願公開第２０７６５２６号、国際公開第２００８／０５０３２９号、米国特許出願公開第２０１１／００９８３３７号、米国特許第７，８７２，１１９号、欧州特許出願公開第２１３７２０５号、国際公開第２００８／１０６１０２号、米国特許出願公開第２０１５／０２５９６７６号、国際公開第２０１４／０４３２９１号、米国特許出願公開第２０１４／０３２３５４９号、欧州特許出願公開第２７７６５６５号、国際公開第２０１３／０７０８２１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、米国特許出願公開第２０１３／０３２４５９１号、欧州特許出願公開第２６４９１８１号、国際公開第２０１２／０７８５３６号、欧州特許出願公開第２１５２３１６号または国際公開第２００８／１３２７２３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患、障害または状態、例えば脱毛症または腎不全の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ヒトｐ５３遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第１７９９２６９号、米国特許第９，３３４，４９９号、米国特許第９，００６，１９６号、米国特許第８，７６５，６９９号、米国特許第８，１４８，３４２号、米国特許第７，８４２，６７４号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４８７号、米国特許出願公開第２０１２／０１８４５９７号、米国特許出願公開第２００８／０２８７３８２号、欧州特許出願公開第１７９９２６９号、米国特許出願公開第２０１３／０１９０３８７号、米国特許第８，４０４，６５４号、米国特許第７，９１０，５６６号、米国特許第７，８２５，０９９号、米国特許出願公開第２０１０／００２９７４６号、米国特許出願公開第２０１５／０２０３８４５号、欧州特許出願公開第２８９５６０８号または国際公開第２０１４／０４３２９２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、神経障害性疼痛、炎症、肺移植後の原発性移植片機能不全（ＰＧＤ）、脊髄傷害または異痛症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲｈｏＡの発現またはｔｏｌｌ様受容体経路をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０１０２３１３号、米国特許第９，０４５，７５５号、米国特許出願公開第２０１３／０１３７７５０号、欧州特許出願公開第２５８５５９４号、国際公開第２０１１／１６３４３６号、米国特許出願公開第２０１５／００６５５５９号、米国特許第８，９０１，０９７号、国際公開第２０１１／０５７１７１号、欧州特許出願公開第２６８１３１５号、国際公開第２０１２／１１８９１１号または国際公開第２００８／０２０４３５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｓｍａｄ７に関連する疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｓｍａｄ７の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０２１１００６号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患、障害または状態、例えば筋緊張性ジストロフィー、ハンチントン病またはＨＴＴの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ジストロフィン遺伝子、例えばＤＭＰＫの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０２１１００６号、欧州特許出願公開第２８７２１４７号または国際公開第２０１５／１０７４２５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ジストロフィン遺伝子、例えばＤＭＰＫに関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ジストロフィン遺伝子、例えばＤＭＰＫの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０１６６９９９号、欧州特許出願公開第２８７３６７４号または国際公開第２０１５／１０７４２５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患、障害または状態、例えば癌、悪性血液疾患（白血病）、炎症性疾患もしくは状態、アレルギー性疾患もしくは状態または増殖性疾患もしくは状態、乾癬、湿疹、皮膚炎、クローン病、喘息、ＣＯＰＤ、アレルギー性鼻炎および炎症性腸疾患、癌、増殖性疾患もしくは状態、炎症性疾患もしくは状態、アレルギー性疾患もしくは状態、感染性疾患もしくは状態、自己免疫性疾患もしくは状態、または移植／同種移植片拒絶、聴覚消失、難聴、耳鳴、運動およびバランス障害、またはＡＭＤの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＸＩＡＰ、チェックポイントキナーゼ（例えば、チェックポイントキナーゼ−１またはＣＨＫ−１）、ＨＩＦ−１、血管接着分子（例えば、ＶＣＡＭ−１）マトリックスメタロプロテイナーゼ（例えば、ＭＭＰ１３）、ＧＲＢ２関連結合タンパク質（ＧＡＢ２）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＳＴＡＴ３、間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１）、サイクリンキナーゼ、インターロイキン、ＢＣＬ２、ＡＤＡＭ３３、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＥＲＧ、ＥＷＳ−ＥＲＧ、ＴＥＬ−ＡＭＬ１、ＥＷＳ−ＦＬＩ１、ＴＬＳ−ＦＵＳ、ＰＡＸ３−ＦＫＨＲおよび／またはＡＭＬ１−ＥＴＯ、ｗｉｎｇｌｅｓｓ（ＷＮＴ）、ｃ−Ｆｏｓ、間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ−Ｉ）、網膜芽細胞腫（ＲＢ１）、ＨＤＡＣ、Ｂ７−Ｈ１、ＶＥＧＦ、初期成長反応（Ｅｇｒ−１）、胎盤成長因子（例えば、ＰＧＦ−１またはＰｌＧＦ−１、ＰＧＦ−２またはＰｌＧＦ−２および／またはＰＧＦ−３またはＰｌＧＦ−３）、ポリコーム群タンパク質ＥＺＨ２、アンジオポエチン、ｃ−Ｆｏｓ、ＴＧＦ−ベータおよび／またはＴＧＦ−ベータＲ、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰキナーゼ）、網膜芽細胞腫（ＲＢ１）、腫瘍壊死因子および／または腫瘍壊死因子受容体、ＲＡＳ、ミオスタチン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）および／または血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、血小板由来内皮細胞成長因子または受容体（ＥＣＧＦ１および／またはＥＣＧＦ１ｒ）遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，２６０，４７１号、欧州特許出願公開第２６３２４７２号、欧州特許出願公開第１９３１７８１号、米国特許第７，９１０，７２５号、米国特許第７，８９７，７５５号、米国特許第７，８９３，３０２号、米国特許第７，９１０，７２４号、米国特許第７，８９７，７５３号、米国特許第７，８９７，７５２号、米国特許第７，８５５，２８４号、米国特許第７，７９５，４２２号、米国特許第７，７００，７６０号、米国特許第７，６７８，８９７号、米国特許第７，６９１，４０５号、米国特許第７，６８３，１６５号、米国特許第７，６６７，０３０号、米国特許第７，６６７，０２９号、米国特許第７，６６２，９５２号、米国特許第７，６８３，１６６号、米国特許第７，６４１，９１５号、米国特許第７，５１７，８６４号、米国特許第７，５１４，０９９号、米国特許第７，４０４，９６９号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２９７３号、米国特許出願公開第２０１１／０１６０２８１号、米国特許出願公開第２０１０／０１８４８２４号、米国特許出願公開第２０１０／０１４４８５１号、米国特許出願公開第２０１０／００９９７４４号、米国特許出願公開第２０１０／０１３０５９２号、米国特許出願公開第２０１０／００９９７４３号、米国特許出願公開第２００９／０３０６１８２号、米国特許出願公開第２００９／０２９９０４５号、米国特許出願公開第２００９／０２４７６１３号、米国特許出願公開第２００９／０２５３７７３号、米国特許出願公開第２００９／０２５３７７４号、米国特許出願公開第２００９０１９２１０５号、米国特許出願公開第２００９／０１５６５３３号、米国特許出願公開第２００９／０１９２１０４号、米国特許出願公開第２００９／０１７６７２５号、米国特許出願公開第２００９／０１４９４０８号、米国特許出願公開第２００９／０１３７５１２号、米国特許出願公開第２００９／０１３７５１１号、米国特許出願公開第２００９／０１３７５０９号、米国特許出願公開第２００９／０１３７５０８号、米国特許出願公開第２００９／０１０５１７８号、米国特許出願公開第２００９／０１４３３２４号、米国特許出願公開第２００９／０１３７５１０号、米国特許出願公開第２００９／０１３７５０７号、米国特許出願公開第２００９／０１４３３２５号、米国特許出願公開第２００９／００９３４３８号、米国特許出願公開第２００９／００９９１１９号、米国特許出願公開第２００９／００９９１１６号、米国特許出願公開第２００９／００９３４３９号、米国特許出願公開第２００９／００９３４３７号、米国特許出願公開第２００９／００９３４３６号、米国特許出願公開第２００９／００９３４３５号、米国特許出願公開第２００９／００４８１９７号、米国特許出願公開第２００８／０２４９２９４号、米国特許出願公開第２００８／０１８８４３０号、米国特許出願公開第２００８／０１８８６７５号、米国特許出願公開第２００８／０１６１２５６号、米国特許出願公開第２００８／００２００５８号、米国特許出願公開第２００７／０２７０５７９号、米国特許出願公開第２００７／０１８５０４９号、米国特許出願公開第２００７／０１６０９８０号、米国特許出願公開第２００７／００９３４３７号、米国特許出願公開第２００７／００４２９８３号、米国特許出願公開第２００７／００３２４４１号、米国特許出願公開第２００６／０２４０５５４号、米国特許出願公開第２００６／０２１７３３２号、米国特許出願公開第２００６／０２１７３３１号、米国特許出願公開第２００６／０２１６７４７号、米国特許出願公開第２００６／０１４２２２５号、米国特許出願公開第２００５／０２８２１８８号、米国特許出願公開第２００６／００１９９１７号、米国特許出願公開第２００５／０２８８２４２号、米国特許出願公開第２００５／０２８７１２８号、米国特許出願公開第２００５／０２３９７３１号、米国特許出願公開第２００５／０２３３９９８号、米国特許出願公開第２００５／０２６１２１９号、米国特許出願公開第２００５／０２６６４２２号、米国特許出願公開第２００５／０２６７０５８号、米国特許出願公開第２００５／０２６０６２０号、米国特許出願公開第２００５／０２３３９９７号、米国特許出願公開第２００５／０２３３３４４号、米国特許出願公開第２００５／０２２７９３５号、米国特許出願公開第２００５／０１９６７６７号、米国特許出願公開第２００５／０１９６７８１号、米国特許出願公開第２００５／０２２２０６６号、米国特許出願公開第２００５／０２２７９３６号、米国特許出願公開第２００５／０２０３０４０号、米国特許出願公開第２００５／０１９６７６５号、米国特許出願公開第２００５／０１８７１７４号、米国特許出願公開第２００５／０１４３３３３号、米国特許出願公開第２００５／０１４８５３０号、
米国特許出願公開第２００５／０１８２００７号、米国特許出願公開第２００５／０１５３９１６号、米国特許出願公開第２００５／０１５３９１５号、米国特許出願公開第２００５／０１８２００９号、米国特許出願公開第２００５／０１８２００６号、米国特許出願公開第２００５／０１７６６６３号、米国特許出願公開第２００５／０１７６０２５号、米国特許出願公開第２００５／０１７６０２４号、米国特許出願公開第２００５／０１７１０３９号、米国特許出願公開第２００５／０１６４９６８号、米国特許出願公開第２００５／０１６４９６７号、米国特許出願公開第２００５／０１６４９６６号、米国特許出願公開第２００５／０１６４２２４号、米国特許出願公開第２００５／０１５９３８２号、米国特許出願公開第２００５／０１５９３８１号、米国特許出願公開第２００５／０１５９３８０号、米国特許出願公開第２００５／０１５８７３５号、米国特許出願公開第２００５／０１５３９１４号、米国特許出願公開第２００５／０１３０１８１号、米国特許出願公開第２００５／００７９６１０号、米国特許出願公開第２００５／００４８５２９号、米国特許出願公開第２００５／００３２７３３号、欧州特許出願公開第１６２７０６１号、欧州特許出願公開第１６６４２９９号、欧州特許出願公開第２１０４７４０号、欧州特許出願公開第１９３１７８１号、欧州特許出願公開第１９２２３００号、欧州特許出願公開第１８９１２１７号、欧州特許出願公開第１８４４１４７号、欧州特許出願公開第１８１７４１５号、欧州特許出願公開第１６８２６６１号、欧州特許出願公開第１６７５９５３号、欧州特許出願公開第１６６４２９９号、欧州特許出願公開第１６２７０６１号、欧州特許出願公開第１４２３４０６号、国際公開第２００８／１４７４３８号、国際公開第２００８／０３０２３９号、国際公開第２００７／０８６８８３号、国際公開第２００７／０８４８６５号、国際公開第２００７／０６７９８１号、国際公開第２００７／０８６８８１号、国際公開第２００７／０２２３６９号、国際公開第２００６／１２８１４１号、国際公開第２００６／０７８７９８号、国際公開第２００６／０６０５９８号、国際公開第２００５／０３５７５９号、国際公開第２００５／０２８６４９号、国際公開第２００５／０４４９８１号、国際公開第２００５／０４５０３９号、国際公開第２００５／０４０３７９号、国際公開第２００５／０４５０３２号、国際公開第２００５／０１９４５３号、国際公開第２００５／００７８５５号、国際公開第２００５／０１４８１１号、国際公開第２００４／１１１２３７号、国際公開第２００４／０９７０２０号、国際公開第２００３／０７４６５４号、米国特許出願公開第２０１６／０２７２９７５号、米国特許出願公開第２０１６／０２６４９６４号、米国特許出願公開第２０１５／０２９９６９６号、欧州特許出願公開第２８４４２６１号または米国特許出願公開第２００５／００４２６３２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または他の生物製剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）および糖尿病性網膜症を含む眼疾患または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第７，５１７，８６４号、米国特許出願公開第２００６／０２１７３３２号または国際公開第２００７／０６７６９８１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患、障害または状態、例えば癌、悪性血液疾患（白血病）、炎症性疾患もしくは状態、アレルギー性疾患もしくは状態、または増殖性疾患もしくは状態、乾癬、湿疹、皮膚炎、クローン病、喘息、ＣＯＰＤ、アレルギー性鼻炎および炎症性腸疾患、癌、増殖性疾患もしくは状態、炎症性疾患もしくは状態、アレルギー性疾患もしくは状態、感染性疾患もしくは状態、自己免疫性疾患もしくは状態、または移植／同種移植片拒絶、聴覚消失、難聴、耳鳴、運動およびバランス障害、またはＡＭＤの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＸＩＡＰ、チェックポイントキナーゼ（例えば、チェックポイントキナーゼ−１またはＣＨＫ−１）、ＨＩＦ−１、血管接着分子（例えば、ＶＣＡＭ−１）マトリックスメタロプロテイナーゼ（例えば、ＭＭＰ１３）、ＧＲＢ２関連結合タンパク質（ＧＡＢ２）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＳＴＡＴ３、間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１）、サイクリンキナーゼ、インターロイキン、ＢＣＬ２、ＡＤＡＭ３３、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ＥＲＧ、ＥＷＳ−ＥＲＧ、ＴＥＬ−ＡＭＬ１、ＥＷＳ−ＦＬＩ１、ＴＬＳ−ＦＵＳ、ＰＡＸ３−ＦＫＨＲおよび／またはＡＭＬ１−ＥＴＯ、ｗｉｎｇｌｅｓｓ（ＷＮＴ）、ｃ−Ｆｏｓ、間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ−Ｉ）、網膜芽細胞腫（ＲＢ１）、ＨＤＡＣ、Ｂ７−Ｈ１、ＶＥＧＦ、初期成長反応（Ｅｇｒ−１）、胎盤成長因子（例えば、ＰＧＦ−１またはＰｌＧＦ−１、ＰＧＦ−２またはＰｌＧＦ−２および／またはＰＧＦ−３またはＰｌＧＦ−３）、ポリコーム群タンパク質ＥＺＨ２、アンジオポエチン、ｃ−Ｆｏｓ、ＴＧＦ−ベータおよび／またはＴＧＦ−ベータＲ、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰキナーゼ）、網膜芽細胞腫（ＲＢ１）、腫瘍壊死因子および／または腫瘍壊死因子受容体、ＲＡＳ、ミオスタチン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）および／または血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦｒ）、血小板由来内皮細胞成長因子または受容体（ＥＣＧＦ１および／またはＥＣＧＦ１ｒ）遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，２６０，４７１号、欧州特許出願公開第２６３２４７２号、米国特許出願公開第２０１６／０２２２３８１号、米国特許第９，２４３，２４６号、欧州特許出願公開第２６０９１９８号、米国特許出願公開第２０１６／０２４４７６０号、米国特許第９，１８１，５５１号、米国特許第７，８９７，７５５号、米国特許第７，８９３，３０２号、米国特許第７，８９７，７５３号、米国特許第７，８５８，７６９号、米国特許第７，７９５，４２２号、米国特許第７，６７８，８９７号、米国特許第７，６９１，４０５号、米国特許第７，６８３，１６５号、米国特許第７，６４１，９１５号、米国特許第７，５１７，８６４号、米国特許第７，５１４，０９９号、米国特許第７，４０４，９６９号、米国特許第７，０３４，００９号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２９７３号、米国特許出願公開第２０１６／００５３２６９号、米国特許出願公開第２０１５／０２６７２００号、米国特許出願公開第２０１５／０１４８５３０号、米国特許出願公開第２０１４／０２８８１４８号、米国特許出願公開第２０１０／０１８４８２４号、米国特許出願公開第２０１０／０１４４８５１号、米国特許出願公開第２００９／０３０６１８２号、米国特許出願公開第２００９／０１９２１０５号、米国特許出願公開第２００９／０１５６５３３号、米国特許出願公開第２００９／０１９２１０４号、米国特許出願公開第２００９／０１７６７２５号、米国特許出願公開第２００９／０１７０１９７号、米国特許出願公開第２００９／０１３７５１１号、米国特許出願公開第２００９／０１３７５００号、米国特許出願公開第２００９／０１０５１７８号、米国特許出願公開第２００９／０１４３３２４号、米国特許出願公開第２００９／０１３７５０７号、米国特許出願公開第２００９／００９３４３８号、米国特許出願公開第２００９／００４８１９７号、米国特許出願公開第２００８／０２４９２９４号、米国特許出願公開第２００８／０１８８４３０号、米国特許出願公開第２００８／０１８８６７５号、米国特許出願公開第２００８／０１６１２５６号、米国特許出願公開第２００８／００２００５８号、米国特許出願公開第２００８／００３９４１２号、米国特許出願公開第２００８／００３９４１４号、米国特許出願公開第２００７／０２７０５７９号、米国特許出願公開第２００７／０１８５０４９号、米国特許出願公開第２００７／０１６０９８０号、米国特許出願公開第２００７／００９３４３７号、米国特許出願公開第２００７／００４２９８３号、米国特許出願公開第２００７／００４２０２９号、米国特許出願公開第２００７／００３２４４１号、米国特許出願公開第２００６／０２４０５５４号、米国特許出願公開第２００６／０２１７３３２号、米国特許出願公開第２００６／０２１７３３１号、米国特許出願公開第２００５／０２８２１８８号、米国特許出願公開第２００６／００１９９１７号、米国特許出願公開第２００５／０２３９７３１号、米国特許出願公開第２００５／０２３３９９８号、米国特許出願公開第２００５／０２６６４２２号、米国特許出願公開第２００５／０２６７０５８号、米国特許出願公開第２００５／０２３３３２９号、米国特許出願公開第２００５／０２２２０６６号、米国特許出願公開第２００５／０１８７１７４号、米国特許出願公開第２００５／０１４３３３３号、米国特許出願公開第２００５／０１５３９１５号、米国特許出願公開第２００５／０１７１０３９号、米国特許出願公開第２００５／０１６４９６７号、米国特許出願公開第２００５／０１５９３８０号、米国特許出願公開第２００５／００４８５２９号、米国特許出願公開第２００５／００３２７３３号、米国特許出願公開第２００５／００２０５２５号、米国特許出願公開第２００４／０２２０１２８号、欧州特許出願公開第１９３１７８１号、欧州特許出願公開第１６２７０６１号、欧州特許出願公開第１７１３９１５号、欧州特許出願公開第１６６４２９９号、欧州特許出願公開第２１０４７４０号、欧州特許出願公開第１９３１７８１号、欧州特許出願公開第１９２２３００号、欧州特許出願公開第１８９１２１７号、欧州特許出願公開第１７６７６３２号、欧州特許出願公開第１７１３９１５号、欧州特許出願公開第１６８２６６１号、欧州特許出願公開第１６６４２９９号、欧州特許出願公開第１６２７０６１号、欧州特許出願公開第１５２２５８３号、欧州特許出願公開第１５２２５８３号、欧州特許出願公開第１３９０３８５号、国際公開第２００８／１４７４３８号、国際公開第２００８／０３０２３９号、国際公開第２００７／０８６８８３号、国際公開第２００７／０６７９８１号、国際公開第２００７／０８６８８１号、国際公開第２００７／０２２３６９号、国際公開第２００６／１２８１４１号、国際公開第２００５／０７８０９７号、国際公開第２００５／０３５７５９号、国際公開第２００５／０２８６４９号、国際公開第２００５／０４４９８１号、国際公開第２００５／０４５０３９号、国際公開第２００５／０４５０３２号、国際公開第２００５／０１９４５３号、国際公開第２００５／０１４８１１号、米国特許出願公開第２０１５／０３７６６１３号、米国特許第９，０９６，８５０号、米国特許出願公開第２０１６／０２７２９７５号、米国特許出願公開第２０１６／０２６４９６４号、欧州特許出願公開第３０６８４０７号、米国特許出願公開第２０１６／０２５６５７０号、国際公開第２０１５／０７０１５８号、米国特許出願公開第２０１５／０２９９６９６号または欧州特許出願公開第２８４４２６１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または他の生物製剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）および糖尿病性網膜症を含む癌または眼疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＶＥＧＦおよび／またはＶＥＧＦＲの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第７，５１７，８６４号、米国特許出願公開第２００７／００４２０２９号、米国特許出願公開第２００６／０２１７３３２号または国際公開第２００７／０６７９８１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、膵臓癌、膠芽腫、前立腺癌、乳癌、肺癌、肝臓癌、結腸癌、膵臓癌および白血病、糖尿病、肥満症、心血管疾患および代謝性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＰＫＮ３またはＶＥＧＦの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０１３０５８７号、米国特許第９，２２２，０９２号、米国特許第８，９３３，２１５号、米国特許第８，３２４，３７０号、米国特許第７，８９３，２４５号、米国特許第７，４５２，９８７号、米国特許出願公開第２０１５／０１０５５４５号、米国特許出願公開第２０１３／０１０２７６９号、米国特許出願公開第２０１１／０１１８４５６号、米国特許出願公開第２００９／０１８６８４５号、欧州特許出願公開第１３８９６３７号、欧州特許出願公開第１５２７１７６号、欧州特許出願公開第２２５８８４７号、欧州特許出願公開第１８５７５４７号、欧州特許出願公開第１３８９６３７号、米国特許出願公開第２０１５／０３５９９０６号、米国特許第９，１２５，８２０号、米国特許第８，７３５，４５３号、米国特許第８，０１７，８０４号、米国特許出願公開第２０１４／０３２９８８５号、米国特許出願公開第２０１３／０１６５３８１号、米国特許出願公開第２０１２／００６５１３８号、米国特許出願公開第２０１１／０２９４８７１号、米国特許出願公開第２００８／０２７４１１６号、欧州特許出願公開第１７７１２０６号、米国特許出願公開第２０１５／０３６８６５０号、米国特許第９，１３３，５１５号、米国特許出願公開第２０１４／０１７９７５５号、欧州特許出願公開第２８４９７７１号、国際公開第２０１３／１７０９６０号、米国特許出願公開第２０１４／０２４９２０７号、米国特許第８，７２２，８７５号、米国特許出願公開第２０１１／０２１７３６７号、欧州特許出願公開第２３５０２７８号、国際公開第２０１０／０３４４８７号、欧州特許出願公開第２５４６３３７号、米国特許第８，２３２，２５６号、欧州特許出願公開第２０４９６５８号、国際公開第２００８／００９４７７号、米国特許出願公開第２００９／０２５２７８３号、欧州特許出願公開第２００７８９０号、欧州特許出願公開第２９９２８７５号、米国特許出願公開第２００９／００７４８５２号、欧州特許出願公開第２００７３５６号、欧州特許出願公開第１３２５９５５号または国際公開第２０１０／０９１８７８号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、悪性腫瘍、例えば癌腫、肉腫、造血器悪性腫瘍および胚細胞腫瘍、ウイルス感染症、微小血管障害、眼疾患および呼吸器状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１、ＶＥＧＦまたはＰＫＮ３の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第１７９１５６８号、米国特許第８，１６８，６０７号、米国特許第７，７４１，２９９号、米国特許出願公開第２０１１／０１１７１０２号、米国特許出願公開第２０１１／００２８５３２号、欧州特許出願公開第２３１９９２５号、米国特許出願公開第２０１２／０１５６２０８号、米国特許第８，０６７，５７０号、欧州特許出願公開第２４０２４４３号または欧州特許出願公開第１９８４００３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、子癇前症（ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ）、悪性腫瘍、例えば癌腫、肉腫、造血器悪性腫瘍および胚細胞腫瘍、ウイルス感染症、微小血管障害、眼疾患および呼吸器状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＴＰ８０１、ＶＥＧＦまたはＰＫＮ３の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０３５９９０６号、米国特許第９，１２５，８２０号、米国特許第８，７３５，４５３号、米国特許第８，０１７，８０４号、米国特許出願公開第２０１４／０３２９８８５号、米国特許出願公開第２０１３／０１６５３８１号、米国特許出願公開第２０１２／００６５１３８号、米国特許出願公開第２０１１／０２９４８７１号、米国特許出願公開第２００８／０２７４１１６号、欧州特許出願公開第１７７１２０６号、米国特許出願公開第２０１５／０３６８６５０号、米国特許第９，１３３，５１５号、米国特許出願公開第２０１４／０１７９７５５号、欧州特許出願公開第２８４９７７１号、国際公開第２０１３／１７０９６０号、米国特許出願公開第２０１４／０２４９２０７号、米国特許第８，７２２，８７５号、米国特許出願公開第２０１１／０２１７３６７号、欧州特許出願公開第２３５０２７８号、国際公開第２０１０／０３４４８７号、欧州特許出願公開第２５４６３３７号、米国特許第８，２３２，２５６号、欧州特許出願公開第２０４９６５８号、国際公開第２００８／００９４７７号、米国特許出願公開第２００９／０２５２７８３号、欧州特許出願公開第２００７８９０号、欧州特許出願公開第２９９２８７５号、米国特許出願公開第２００９／００７４８５２号、欧州特許出願公開第２００７３５６号、欧州特許出願公開第２００７３５６号、国際公開第２０１６／０８３６２３号または国際公開第２０１５／０８２０８０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌または子癇前症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＶＥＧＦまたはＰＫＮ３の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０３６８６５０号、米国特許第９，１３３，５１５号、米国特許出願公開第２０１４／０１７９７５５号、欧州特許出願公開第２８４９７７１号、国際公開第２０１３／１７０９６０号、欧州特許出願公開第２５４６３３７号、米国特許第８，２３２，２５６号、欧州特許出願公開第２０４９６５８号または国際公開第２００８／００９４７７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、例えば膵臓癌、子癇前症または心血管関連疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第８，７３５，４５３号、米国特許出願公開第２０１３／０１６５３８１号、米国特許出願公開第２０１２／００６５１３８号、米国特許出願公開第２００８／０２７４１１６号、欧州特許出願公開第１７７１２０６号、米国特許第８，２３２，２５６号、欧州特許出願公開第２０４９６５８号、国際公開第２００８／００９４７７号、米国特許出願公開第２０１４／０２４９２０７号、米国特許出願公開第２０１１／０２１７３６７号、欧州特許出願公開第２３５０２７８号、国際公開第２０１０／０３４４８７号、米国特許出願公開第２００９／０２５２７８３号、欧州特許出願公開第２００７８９０号、欧州特許出願公開第２９９２８７５号、米国特許出願公開第２００９／００７４８５２号、欧州特許出願公開第２００７３５６号、欧州特許出願公開第１３８９６３７号、欧州特許出願公開第１５２７１７６号、欧州特許出願公開第２２５８８４７号、欧州特許出願公開第１８５７５４７号、欧州特許出願公開第１３８９６３７号、欧州特許出願公開第１３２５９５５号または国際公開第２０１０／０９１８７８号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、増殖性またはＤＮＡウイルスウイルス性疾患の処置、予防または改善において有用であり、前記増殖性疾患は、癌腫、肉腫、造血器悪性腫瘍、胚細胞腫瘍、膀胱癌、黒色腫、乳癌、非ホジキンリンパ腫、結腸癌、直腸癌、膵臓癌、子宮内膜癌、前立腺癌、腎臓癌、腎細胞癌、非黒色腫皮膚癌、白血病、甲状腺癌、肺癌、神経線維腫症または血管増殖性疾患から選択され、ウイルス性疾患は、ベル麻痺、バーキットリンパ腫、水疱瘡、サイトメガロウイルス感染症、膿瘡、脳炎、単純ヘルペス、エプスタイン・バーウイルス感染症、紅斑感染症、突発性発疹、口唇ヘルペス、単純ヘルペス、帯状疱疹、耳帯状疱疹、感染性単核球症、伝染性軟属腫、ポリオーマウイルス感染症、天然痘、疣贅、感染性単核球症またはＥＢＶ関連悪性腫瘍から選択される。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＯＲＣ−１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１４／０２４９２０７号、米国特許第８，７２２，８７５号、米国特許出願公開第２０１１／０２１７３６７号、欧州特許出願公開第２３５０２７８号または国際公開第２０１０／０３４４８７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、過剰増殖性疾患、例えば乾癬、接触性皮膚炎、網膜症、子宮内膜症、子宮筋腫、機能不全性血管増殖、子宮内膜微小血管成長、炎症、関節炎、関節リウマチ、急性肺傷害（ＡＬＩ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、アテローム性動脈硬化症、遺伝性出血性毛細血管拡張症、海綿状血管腫、血管新生誘発性肥満症、移植動脈症、糖尿病性網膜症、炎症性腸疾患、歯周病、腹水、月経過多、肺高血圧症、肺炎、子癇前症、肺線維症、肺気腫、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、膵炎、敗血症、血栓症、虚血性心疾患、多発性硬化症、脳卒中、黄斑変性症、肝硬変、マラリアまたは全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＡＮＧ２の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１４／０３２８９０３号、米国特許第８，８２９，１７９号、米国特許出願公開第２０１２／００２２１３８号、欧州特許出願公開第２３９８９０３号、国際公開第２０１０／０９４４９１号または国際公開第２０１５／０８２０８０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、非アルコール性脂肪性肝炎の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−２１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０２４４７５３号、米国特許第９，２６７，１３７号、米国特許第８，９６９，３１７号、米国特許出願公開第２０１５／０２１８５５８号、米国特許出願公開第２０１３／０２８９０９３号、欧州特許出願公開第２８４１５７９号、国際公開第２０１３／１６３２５８号、米国特許出願公開第２０１６／０１３８０１６号、米国特許第９，１８１，５４７号、米国特許第８，９１２，１６１号、米国特許出願公開第２０１４／０３２９８８７号、米国特許出願公開第２０１４／０１０７１８３号、米国特許出願公開第２０１２／０２７０９２８号、欧州特許出願公開第２７０２１５５号、国際公開第２０１２／１４８９５２号、米国特許第９，１８１，５４８号、米国特許第８，８１５，８２６号、欧州特許出願公開第１９３１７８２号、米国特許第８，９６９，３１４号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４１号、欧州特許出願公開第１９３１７８２号、欧州特許出願公開第２３３８９９１号、欧州特許出願公開第１９３１７８２号、米国特許出願公開第２０１６／００４６９４０号、国際公開第２０１６／０２２７５３号、欧州特許出願公開第３０６０６６４号または国際公開第２０１５／０６１５３６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、線維症および線維増殖性状態、血清総コレステロールの上昇、血清ＬＤＬコレステロールの上昇または血清トリグリセリドの上昇を特徴とする心血管疾患または代謝性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−１０３、ｍｉＲ−１０７またはｍｉＲ−１２２の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０１０８３９７号、米国特許第９，１８１，５４８号、米国特許第８，８１５，８２６号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４１号、米国特許第８，９６９，３１４号、欧州特許出願公開第２３３８９９１号、欧州特許出願公開第１９３１７８２号、米国特許出願公開第２０１６／００４６９４０号、国際公開第２０１６／０２２７５３号、欧州特許出願公開第２８４１５７９号、米国特許出願公開第２０１３／０２８９０９３号、国際公開第２０１３／１６３２５８号、欧州特許出願公開第３０６０６６４号、国際公開第２０１５／０６１５３６号、欧州特許出願公開第２７０２１５５号または国際公開第２０１２／１４８９５２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、Ｃ型肝炎ウイルスおよび関連状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、線維症および線維増殖性状態、血清総コレステロールの上昇、血清ＬＤＬコレステロールの上昇もしくは血清トリグリセリドの上昇を特徴とする心血管疾患もしくは代謝性疾患、または肝臓癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−３４、ｐｒｉ−ｍｉＲ−１５、ｐｒｉ−ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１４、ｍｉＲ−１０３、ｍｉＲ−１０７またはｍｉＲ−１２２の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０２５１６５７号、米国特許第９，３０９，５１３号、米国特許第９，１５７，０８３号、米国特許出願公開第２０１５／０１０５４４９号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００９０号、欧州特許出願公開第２９９２０９５号、国際公開第２０１４／１７９４４６号、米国特許出願公開第２０１６／０１０８３９７号、米国特許第９，１８１，５４８号、米国特許第８，８１５，８２６号、米国特許出願公開第２０１５／００８０４５３号、米国特許出願公開第２０１３／０１８４２１７号、国際公開第２０１２／０１２７１６号、米国特許出願公開第２０１６／００４６９４１号、米国特許第９，１５０，８５７号、米国特許第８，６８０，０６７号、米国特許第８，２１１，８６７号、米国特許出願公開第２０１４／０２０６８５４号、米国特許出願公開第２０１２／０２９５９６２号、米国特許出願公開第２０１１／０２５１１５０号、米国特許出願公開第２０１０／０２６７８１４号、欧州特許出願公開第２２１７２４８号、米国特許出願公開第２０１５／０２３２８４１号、米国特許第８，９６９，３１４号、米国特許第８，４６６，１２０号、米国特許第７，７５９，３１９号、米国特許出願公開第２０１０／０２４９２１５号、欧州特許出願公開第２３３８９９１号、欧州特許出願公開第１９３１７８２号、米国特許出願公開第２０１５／００８７６０７号、米国特許第８，８４６，６３１号、国際公開第２０１１／０８８３０９号、米国特許第７，９９８，６７７号、米国特許出願公開第２００９／０２３６２２５号、米国特許出願公開第２０１６／００４６９４０号、国際公開第２０１６／０２２７５３号、欧州特許出願公開第２９９２０９６号、米国特許出願公開第２０１５／００３１１３０号または国際公開第２０１４／１７９４４５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、Ｃ型肝炎、または血清総コレステロールの上昇もしくは血清トリグリセリドの上昇を特徴とする心血管疾患もしくは代謝性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１２２またはｍｉＲ−１２２ａの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第１９３１７８２号、米国特許第７，６８３，０３６号、欧州特許出願公開第１９３１７８２号、米国特許出願公開第２０１６／０２５１６５７号、米国特許出願公開第２０１５／０１０５４４９号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００９０号、欧州特許出願公開第２９９２０９５号または国際公開第２０１４／１７９４４６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、低分子非コードＲＮＡに関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１０３またはｍｉＲ−１０７の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４７，４１３号、米国特許第９，４４７，４１２号、米国特許第９，２６７，１３８号、米国特許第９，１３９，８３２号、米国特許第８，９４６，１７９号、米国特許第８，８５９，５２１号、米国特許第８，８０９，２９４号、米国特許第８，７６５，７０１号、米国特許第８，６９７，６６３号、米国特許第８，５４６，３５０号、米国特許第８，１７８，５０６号、米国特許第８，１３３，８７６号、米国特許第８，１１０，５５８号、米国特許第８，１０６，０２５号、米国特許第７，６８３，０３６号、米国特許出願公開第２０１６／００１７３２９号、米国特許出願公開第２０１５／０３３７３０５号、米国特許出願公開第２０１５０３３７３０４号、米国特許出願公開第２０１５／００９４４６１号、米国特許出願公開第２０１４／０３３６３７０号、米国特許出願公開第２０１４０３２９８８２号、米国特許出願公開第２０１４／０１２１３６５号、米国特許出願公開第２０１４／０１２１３６４号、米国特許出願公開第２０１４／００５７９６３号、米国特許出願公開第２０１２／０２８３３１９号、米国特許出願公開第２０１２／０１５７５１４号、米国特許出願公開第２０１２／０１２２２１６号、米国特許出願公開第２０１２／００３５２４８号、米国特許出願公開第２０１１／０２２４２７７号、米国特許出願公開第２０１０／０２６７８１３号、米国特許出願公開第２００９／０３１７９０７号、米国特許出願公開第２００９／０２９８１７４号、米国特許出願公開第２００９／０２９１９０７号、米国特許出願公開第２００９／０２９１９０６号、米国特許出願公開第２００９／０２８６９６９号、欧州特許出願公開第２５３０１５７号、米国特許出願公開第２０１６／００４６９４０号または国際公開第２０１６／０２２７５３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、低分子非コードＲＮＡに関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１０３またはｍｉＲ−１０７の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，２６７，１３８号、米国特許出願公開第２０１５／０３３７３０５号、欧州特許出願公開第１６４８９１４号または国際公開第２０１６／０２２７５３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、低分子非コードＲＮＡに関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−３３、ｍｉＲ−１０３またはｍｉＲ−１０７の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４７，４１３号、米国特許第９，４４７，４１２号、米国特許第９，２６７，１３８号、米国特許第９，１３９，８３２号、米国特許第８，９４６，１７９号、米国特許第８，８５９，５２１号、米国特許第８，８０９，２９４号、米国特許第８，７６５，７０１号、米国特許第８，６９７，６６３号、米国特許第８，５４６，３５０号、米国特許第８，１７８，５０６号、米国特許第８，１３３，８７６号、米国特許第８，１１０，５５８号、米国特許第８，１０６，０２５号、米国特許第７，６８３，０３６号、米国特許出願公開第２０１６／００１７３２９号、米国特許出願公開第２０１５／０３３７３０５号、米国特許出願公開第２０１５／０３３７３０４号、米国特許出願公開第２０１５／００９４４６１号、米国特許出願公開第２０１４／０３３６３７０号、米国特許出願公開第２０１４／０３２９８８２号、米国特許出願公開第２０１４／０１２１３６５号、米国特許出願公開第２０１４／０１２１３６４号、米国特許出願公開第２０１４／００５７９６３号、米国特許出願公開第２０１２／０２８３３１９号、米国特許出願公開第２０１２／０１５７５１４号、米国特許出願公開第２０１２／０１２２２１６号、米国特許出願公開第２０１２／００３５２４８号、米国特許出願公開第２０１１／０２２４２７７号、米国特許出願公開第２０１０／０２６７８１３号、米国特許出願公開第２００９／０３１７９０７号、米国特許出願公開第２００９／０２９８１７４号、米国特許出願公開第２００９／０２９１９０７号、米国特許出願公開第２００９／０２９１９０６号、米国特許出願公開第２００９／０２８６９６９号、欧州特許出願公開第２５３０１５７号、欧州特許出願公開第１６４８９１４号、米国特許出願公開第２０１６／００４６９４０号または国際公開第２０１６／０２２７５３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、Ｂ細胞リンパ腫または肝細胞癌腫の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＳＴＡＴ３の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２９９１６６１号、欧州特許出願公開第２９２０３０８号または欧州特許出願公開第２６９７２４３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、代謝性疾患、例えば糖尿病またはその症候の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＰＴＰ１Ｂの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４０４，１１３号、欧州特許出願公開第２６９７２４４号または欧州特許出願公開第２９９２０９７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、代謝性疾患、例えば糖尿病またはその症候の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＰＴＰ１ＢまたはＤＧＡＴ１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４０４，１１３号、欧州特許出願公開第２６９７２４４号、欧州特許出願公開第２３６５０９４号、欧州特許出願公開第２２４６４４３号、欧州特許出願公開第１６７０８９６号、欧州特許出願公開第２５２７４４２号、欧州特許出願公開第２０２１４７２号、欧州特許出願公開第２５０５６４９号、欧州特許出願公開第２５０５６４８号、欧州特許出願公開第２５０５６４７号、欧州特許出願公開第２４５８００６号、欧州特許出願公開第２３６３４８２号、欧州特許出願公開第２３６３４８１号、欧州特許出願公開第２９９１６６１号または欧州特許出願公開第２９９２０９７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、低分子非コードＲＮＡに関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１２２の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第１９８４４９９号または欧州特許出願公開第２４４７２７４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌または黄斑変性症、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）、湿性ＡＭＤ、乾性ＡＭＤ、地図状萎縮または神経変性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）、ＧＨＲ、ａｐｏ（ａ）もしくはアポリポタンパク質Ｃ−ＩＩＩ（ＡｐｏＣＩＩＩ）、Ｃ９０ＲＦ７２またはアンドロゲン受容体（ＡＲ）の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４２８，７５０号、欧州特許出願公開第２２８２７４４号、米国特許第９，４０９，９３４号、米国特許第９，４０３，８６５号、欧州特許出願公開第２８８５３１２号、欧州特許出願公開第２６０１２０４号、米国特許第９，３２１，７９９号、米国特許出願公開第２０１６／０１８６１８５号、欧州特許出願公開第２６０１２０４号、米国特許第９，３４０，７８４号、米国特許出願公開第２０１６／０２２２３８９号、欧州特許出願公開第３０４３８２７号、米国特許出願公開第２０１６／０１９４６３８号、米国特許出願公開第２０１６／０１９４６３７号、米国特許出願公開第２０１６／０１９４３４９号、米国特許出願公開第２０１６／０１８６１７５号、米国特許出願公開第２０１６／０１８６１７４号、米国特許出願公開第２０１６／０１５９８４６号、欧州特許出願公開第３０２７６１７号、欧州特許出願公開第２６２５１８６号、欧州特許出願公開第２６２５１８６号、欧州特許出願公開第２６０６０５７号、欧州特許出願公開第２６０６０５７号、欧州特許出願公開第２７５１２６９号、欧州特許出願公開第２７５１２６９号、欧州特許出願公開第２５８０２２８号、欧州特許出願公開第２５８０２２８号、欧州特許出願公開第３０６７４２１号、欧州特許出願公開第２６７３３６１号、欧州特許出願公開第２７４２１３６号、欧州特許出願公開第２７４２１３５号、欧州特許出願公開第２７４２０５６号、欧州特許出願公開第２６７３３６１号、欧州特許出願公開第２４６２１５３号、欧州特許出願公開第１９８４４９９号、欧州特許出願公開第３０６６２１９号、欧州特許出願公開第３０１１０２８号、欧州特許出願公開第３０１７０４４号、欧州特許出願公開第２９９１６５６号、欧州特許出願公開第２９９１６６１号、欧州特許出願公開第２９９２０９７号、欧州特許出願公開第２９９２０９８号、欧州特許出願公開第２９９２００９号、欧州特許出願公開第２９５１３０４号、欧州特許出願公開第２９５６１７６号、欧州特許出願公開第２９０６２５８号、欧州特許出願公開第２９０６２５６号、欧州特許出願公開第２９０６２２５号、欧州特許出願公開第２９０６２５５号、欧州特許出願公開第２９０６２２６号、欧州特許出願公開第２９０６６９７号、欧州特許出願公開第２９０６６９９号、欧州特許出願公開第２９０６６９６号、欧州特許出願公開第２８６４４７９号、欧州特許出願公開第２８５００９２号、欧州特許出願公開第２８３１２３２号、欧州特許出願公開第２８５２６０６号、欧州特許出願公開第２８３９００６号、欧州特許出願公開第２７９４８８０号、欧州特許出願公開第２８１２３４２号、欧州特許出願公開第２７５１２７０号、欧州特許出願公開第２５８２３９７号、欧州特許出願公開第２４４７２７４号、欧州特許出願公開第２３５８３９７号、国際公開第２０１６／１３８３５３号、国際公開第２０１６／１３８０１７号、国際公開第２０１６／１３８３５５号、国際公開第２０１６／１１５４９０号、国際公開第２０１６／０７７７０４号、国際公開第２０１６／０７７５４０号、国際公開第２０１６／０８６１０４号、国際公開第２０１６／０７７８３７号、国際公開第２０１６／０４４８４０号または国際公開第２０１６／０４４８２８号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）に関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、標的ｍｉＲＮＡの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２５８２３９７号または国際公開第２０１６／１３８０１７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＨＢＶ関連の疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＨＢＶまたはトランスサイレチン（ＴＴＲ）の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２９９１６６１号、欧州特許出願公開第２９９２０９８号、欧州特許出願公開第２６９９５８３号または国際公開第２０１６／０７７８３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、代謝性疾患、例えば糖尿病またはその症候の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＤＧＡＴ２、ＡｐｏＢまたはＧＣＧＲの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４０４，１１４号、欧州特許出願公開第２７５８５３３号、欧州特許出願公開第１６７０８９６号、欧州特許出願公開第２０１５７５８号、欧州特許出願公開第２０２１４７２号、欧州特許出願公開第２５２７４４２号、欧州特許出願公開第２５０５６４９号、欧州特許出願公開第２５０５６４８号、欧州特許出願公開第２５０５６４７号、欧州特許出願公開第２４５８００６号、欧州特許出願公開第２３６３４８２号、欧州特許出願公開第２３６３４８１号、欧州特許出願公開第２９９１６６１号、欧州特許出願公開第２９９２０９７号、欧州特許出願公開第２８１２３４２号または欧州特許出願公開第２３２７７０９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、代謝性疾患もしくはその症候、または線維芽細胞成長因子受容体４（ＦＧＦＲ４）に関連する疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、線維芽細胞成長因子受容体４（ＦＧＦＲ４）の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２２１５１０２号、欧州特許出願公開第２９９１６６１号、欧州特許出願公開第２９９２０９７号または欧州特許出願公開第２７２１１５６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、代謝障害の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＳＯＤ１、ＡｐｏＢ、ＳＧＬＴ２、ＰＣＳＫ９、ＣＲＰ、ＧＣＣＲ、ＧＣＧＲ、ＤＧＡＴ２、ＰＴＰ１ＢまたはＰＴＥＮの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第１６７０８９６号、欧州特許出願公開第２５２７４４２号、欧州特許出願公開第２０２１４７２号、欧州特許出願公開第２５０５６４９号、欧州特許出願公開第２５０５６４８号、欧州特許出願公開第２５０５６４７号、欧州特許出願公開第２４５８００６号、欧州特許出願公開第２３６３４８２号または欧州特許出願公開第２３６３４８１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、微生物感染症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第１９５７５０７号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているアミノグリコシド化合物の類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、望ましくない血管新生を伴う疾患、例えば癌、眼疾患、関節炎または炎症性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦＲ−α、ＰＤＧＦＲ−β、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＲＡＦ−ａ、ＲＡＦ−ｃ、ＡＫＴ、ＲＡＳ、ＮＦｋＢ、ＨＩＦ、ｂＦＧＦ、ｂＦＧＦＲ、Ｈｅｒ−２、ｃ−Ｍｅｔ、ｃ−Ｍｙｃ、ＨＧＦ、ＥＧＦＲ−ＲＰ、ＴＲＡ１、ＭＦＧＥ８、ＴＮＦＳＦ１３、ＺＦＰ２３６、ＩＬＫ、ＨＩＦ−１またはＩＣＴＥ０３０の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１１／０１２４７１０号、米国特許第７，８９３，２４４号、米国特許第７，８９３，２４３号、米国特許第７，７８６，０９２号、米国特許第７，７２３，３１６号、米国特許第７，５３４，８７８号、米国特許出願公開第２００９／０２２７６５７号、欧州特許出願公開第１８７７０６５号、国際公開第２００６／１１０８１３号、米国特許第７，７８１，４１４号、米国特許出願公開第２０１０／０２０３０３６号、欧州特許出願公開第１６１５６７０号、国際公開第２００４／０８９２８４号、米国特許出願公開第２０１１／００４６０６７号、欧州特許出願公開第２１７０４０４号、米国特許出願公開第２０１１／００３８８４９号、欧州特許出願公開第２０６９４９８号、国際公開第２００８／０７６１２７号、米国特許出願公開第２０１１／００１５２４９号、欧州特許出願公開第２１７０３５１号、米国特許出願公開第２０１０／０２８００９７号、国際公開第２００９／０３９３００号、米国特許出願公開第２０１０／０２７９９１９号、国際公開第２００９／０３２９３０号、米国特許出願公開第２０１０／０２１０７１０号、欧州特許出願公開第２２０９８９５号、国際公開第２００９／０５１６５９号、米国特許出願公開第２０１０／００２８８４８号、欧州特許出願公開第１９６３５０８号、国際公開第２００７／０６４８４６号、米国特許出願公開第２００９／０２４７６０４号、欧州特許出願公開第１７１１５１０号、国際公開第２００５／０７６９９８号、米国特許出願公開第２００７／０２１９１１８号、欧州特許出願公開第１４４８５８６号、国際公開第２００３／０４０３９９号、米国特許出願公開第２００６／０２１１６３７号、欧州特許出願公開第１５４６１７３号、国際公開第２００４／０１３３１０号、欧州特許出願公開第１７１３８１９号、国際公開第２００５／０７６９９９号、欧州特許出願公開第１４５１５７２号または国際公開第２００３／０６３７６５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、望ましくない血管新生を伴う疾患、例えば癌、眼疾患、関節炎または炎症性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦＲ−α、ＰＤＧＦＲ−β、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＲＡＦ−ａ、ＲＡＦ−ｃ、ＡＫＴ、ＲＡＳ、ＮＦｋＢ、ＨＩＦ、ｂＦＧＦ、ｂＦＧＦＲ、Ｈｅｒ−２、ｃ−Ｍｅｔ、ｃ−Ｍｙｃ、ＨＧＦ、ＥＧＦＲ−ＲＰ、ＴＲＡ１、ＭＦＧＥ８、ＴＮＦＳＦ１３、ＺＦＰ２３６、ＩＬＫ、ＨＩＦ−１またはＩＣＴＥ０３０の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１１／０１２４７１０号、米国特許第７，８９３，２４４号、米国特許第７，８９３，２４３号、米国特許第７，７８６，０９２号、米国特許第７，７２３，３１６号、米国特許第７，５３４８７８号、米国特許出願公開第２００９／０２２７６５７号、欧州特許出願公開第１８７７０６５号、国際公開第２００６／１１０８１３号、米国特許出願公開第２００９／０２４７６０４号、欧州特許出願公開第１７１１５１０号、国際公開第２００５／０７６９９８号、米国特許出願公開第２００７／０２１９１１８号、欧州特許出願公開第１４４８５８６号、国際公開第２００３／０４０３９９号、米国特許出願公開第２００６／０２１１６３７号、欧州特許出願公開第１５４６１７３号、国際公開第２００４／０１３３１０号、欧州特許出願公開第１７１３８１９号または国際公開第２００５／０７６９９９号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＥＭＴ（上皮間葉転換）、扁平上皮癌、血管新生に関連する疾患、黒色腫または頭頸部癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲＮＡ−９６、ｍｉＲＮＡ−２０３、ｍｉＲＮＡ−１０ｂ、ｍｉＲＮＡ−１８ｂ、ｍｉＲＮＡ−１２９、ｍｉＲＮＡ−１２８、ｍｉＲＮＡ−１８４、ｍｉＲＮＡ−１９０ｂ、ｍｉＲＮＡ−３１５７、ｍｉＲＮＡ−１３３ａ、ｍｉＲＮＡ−２００ｃ、ｍｉＲＮＡ−６１０、ｍｉＲＮＡ−１８２、ｍｉＲＮＡ−１６、ｍｉＲＮＡ−９５、ｍｉＲＮＡ−１９３ａ、ｍｉＲＮＡ−４９７、ｍｉＲＮＡ−５０９、ｍｉＲＮＡ−７、ｍｉＲＮＡ−３１５７−５ｐ、ｍｉＲＮＡ−１０ｂ−３ｐ、ｍｉＲＮＡ−１２９−５ｐ、ｍｉＲＮＡ−９６−５ｐ、ｍｉＲＮＡ−２００ｃ−５ｐ、ｍｉＲＮＡ−１８２−３ｐ、ｍｉＲＮＡ−１６−５ｐ、ｍｉＲＮＡ−４９７−５ｐ、ｍｉＲＮＡ−５１８ｂ、ｍｉＲＮＡ−７−５ｐ、ｍｉＲＮＡ−３２３、ｍｉＲＮＡ−３４２、ｍｉＲＮＡ−３２６、ｍｉＲＮＡ−３７１、ｍｉＲＮＡ−３１５７またはｍｉＲＮＡ−３４５の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、Ｂ−ｒａｆおよび／またはＭＥＫ阻害剤、例えばベムラフェニブおよび／またはダブラフェニブおよび／またはトラメチニブおよび／またはセルメチニブと必要に応じて組み合わせて、米国特許第９，４４１，２２２号、米国特許出願公開第２０１４／０００５２５１号、欧州特許出願公開第２６６３６４１号、欧州特許出願公開第２４７４６１７号、国際公開第２０１２／０９６５７３号、米国特許出願公開第２０１６／００１７３３８号、米国特許第９，１６１，９４７号、米国特許出願公開第２０１３／００７２５４５号、欧州特許出願公開第２５４２６７８号、国際公開第２０１１／１０８９３０号、米国特許出願公開第２０１５／０２９７６２６号、欧州特許出願公開第２９１７３４８号、国際公開第２０１４／０７２３５７号、米国特許出願公開第２０１５／０２２５７１６号、欧州特許出願公開第２７９４８８１号、国際公開第２０１３／０９５１３２号、米国特許出願公開第２０１５／０１５２４９９号、欧州特許出願公開第２８７０２６３号、国際公開第２０１４／００７６２３号、欧州特許出願公開第２５９１１０６号、米国特許出願公開第２０１３／０１０９７４１号、国際公開第２０１２／００５５７２号、欧州特許出願公開第２６０７４８３号または国際公開第２０１５／１９４９５６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、炎症性状態、自己免疫疾患、感染性疾患、神経変性疾患または癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１２２ａの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／００２４５０８号、米国特許第９，１５７，９１９号、米国特許出願公開第２０１３／０２８１５１９号、米国特許第８，８９５，５２２号、欧州特許出願公開第１９４０４７２号、国際公開第２００７／０５００３４号、米国特許出願公開第２０１５／００９９７９９号、米国特許第８，８７７，７２４号、米国特許出願公開第２０１１／０３０１２２５号、欧州特許出願公開第２３４２３４１号、欧州特許出願公開第２８０６０２８号、欧州特許出願公開第２３４２３４１号、国際公開第２０１０／０５３４３０号、欧州特許出願公開第２２６９６２２号、米国特許第８，５９２，３９０号、米国特許第８，２５８，１０７号、欧州特許出願公開第２３８０５８４号、欧州特許出願公開第１９０１７５９号、欧州特許出願公開第２３８０５８４号、欧州特許出願公開第１９０１７５９号、国際公開第２００７／００４９７７号、欧州特許出願公開第２２２０４８９号、米国特許第８，５７４，８３４号、米国特許出願公開第２０１４／００３０７２３号、欧州特許出願公開第２２２０４８９号、国際公開第２００９／０７８７９３号、米国特許第８，５６９，２５７号、米国特許第８，１４８，３４１号、欧州特許出願公開第２１７９７３７号、欧州特許出願公開第１９０４０７７号、欧州特許出願公開第２１７９７３７号、欧州特許出願公開第１９０４０７７号、国際公開第２００７／００４９７９号、米国特許出願公開第２０１５／０００４１８７号、欧州特許出願公開第２７８２６０２号、欧州特許出願公開第２５９６８０６号、国際公開第２０１３／０７６２６２号、欧州特許出願公開第２３５０２８２号、国際公開第２０１０／０５３４３３号、欧州特許出願公開第２２８８７０２号または国際公開第２００９／１５４５６５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、炎症性状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＴＬＲ９、ＩＬ−１０または炎症バイオマーカーの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／００２４５０８号、米国特許第９，１５７，９１９号、米国特許出願公開第２０１３／０２８１５１９号、欧州特許出願公開第２６５５６２２号、欧州特許出願公開第２４６８８６６号、欧州特許出願公開第２４６８８６７号、国際公開第２０１２／０８４９９６号、国際公開第２０１２／０８４９９３号、国際公開第２０１２／０８４９９１号、米国特許第８，８９５，５２２号、欧州特許出願公開第１９４０４７２号、国際公開第２００７／０５００３４号、米国特許出願公開第２０１５／００９９７９９号、米国特許第８，８７７，７２４号、米国特許出願公開第２０１１／０３０１２２５号、欧州特許出願公開第２３４２３４１号、欧州特許出願公開第２８０６０２８号、欧州特許出願公開第２３４２３４１号、国際公開第２０１０／０５３４３０号、米国特許第８，５６９，２５７号、米国特許第８，１４８，３４１号、欧州特許出願公開第２１７９７３７号、欧州特許出願公開第１９０４０７７号、欧州特許出願公開第２１７９７３７号、欧州特許出願公開第１９０４０７７号、国際公開第２００７／００４９７９号、欧州特許出願公開第２３５０２８２号、国際公開第２０１０／０５３４３３号、欧州特許出願公開第２２８８７０２号または国際公開第２００９／１５４５６５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、炎症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、多形核細胞の特性および挙動の発現をモジュレートし、例えば、前記細胞の内皮接着および遊走を抑制し、この機構を通して、炎症部位への多形核細胞の動員および／または遊走を減少させる。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／００９９７９９号、米国特許第８，８７７，７２４号、米国特許出願公開第２０１１／０３０１２２５号、欧州特許出願公開第２３４２３４１号、欧州特許出願公開第２８０６０２８号、欧州特許出願公開第２３４２３４１号または国際公開第２０１０／０５３４３０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、サーファクタントタンパク質Ｂ欠乏症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、サーファクタントタンパク質Ｂまたはエリスロポエチンの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第８，５６７，４１０号、米国特許出願公開第２０１６／０１７７２９５号、米国特許出願公開第２０１５／０２９１６７８号、米国特許出願公開第２０１５／０２９０２８８号、米国特許出願公開第２０１５／０２５８１７４号または米国特許出願公開第２０１２／０１９５９３６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または他の治療薬から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、サーファクタントタンパク質Ｂ欠乏症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、サーファクタントタンパク質Ｂの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、磁性粒子を含有するエアロゾルから選択され、エアロゾルは、磁性粒子もしくは医薬活性剤、または米国特許第８，５６７，４１０号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている他の治療剤を含む。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍＲＮＡコードタンパク質に関連する疾患、例えば骨または肺疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１２２ａまたはサーファクタントタンパク質Ｂまたはエリスロポエチンの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第８，５６７，４１０号、米国特許出願公開第２０１６／０１７７２９５号、米国特許出願公開第２０１５／０２９１６７８号、米国特許出願公開第２０１５／０２９０２８８号、米国特許出願公開第２０１５／０２５８１７４号、米国特許出願公開第２０１２／０１９５９３６号、欧州特許出願公開第２４５９２３１号、欧州特許出願公開第２４５９２３１号、米国特許出願公開第２０１５／０１５７５６５号、欧州特許出願公開第２８５８６７９号、国際公開第２０１３／１８５０６９号、米国特許出願公開第２０１５／０１２６５８９号、欧州特許出願公開第２８５８６７７号、国際公開第２０１３／１８２６８３号、欧州特許出願公開第３０１３９６４号、国際公開第２０１４／２０７２３１号、国際公開第２０１６／０７５１５４号、国際公開第２０１６／００９０００号または国際公開第２０１５／１２８０３０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または他の治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患、障害または状態、例えばサーファクタントタンパク質Ｂ（ＳＰＢ）欠乏症、ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＡメンバー３（ＡＢＣＡ３）欠乏症、嚢胞性線維症、アルファ−１抗トリプシン（Ａ１ＡＴ）欠乏症、肺癌、サーファクタントタンパク質Ｃ（ＳＰＣ）欠乏症、肺胞タンパク症、サルコイドーシス、急性もしくは慢性気管支炎、肺気腫、マクロード症候群、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気管支喘息、気管支拡張症、塵肺症、石綿症、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、幼児呼吸窮迫症候群（ＩＲＤＳ）、肺水腫、肺好酸球増加症、レフラー肺炎、ハンマン・リッチ症候群、特発性肺線維症、間質性肺疾患、原発性繊毛ジスキネジア、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）およびＳＴＡＴ５ｂ欠乏症、凝固不能、血友病ＡおよびＢ、補体欠損、プロテインＣ欠乏症、血栓性血小板減少性紫斑病もしくは先天性ヘモクロマトーシス、ヘプシジン欠乏症、肺感染性疾患、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染、パラインフルエンザウイルス（ＰＩＶ）感染、インフルエンザウイルス感染、ライノウイルス感染、重症急性呼吸器症候群（コロナウイルス（ＳＡＲＳ−ＣｏＶ））感染、結核、緑膿菌感染、バークホルデリア・セパシア感染、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）感染またはインフルエンザ菌感染症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２４５９２３１号、米国特許出願公開第２０１５／０２９０２８８号、米国特許出願公開第２０１５／０２５８１７４号、米国特許出願公開第２０１５／０１５７５６５号、欧州特許出願公開第２８５８６７９号、国際公開第２０１３／１８５０６９号、米国特許出願公開第２０１５／０１２６５８９号、欧州特許出願公開第２８５８６７７号または国際公開第２０１３／１８２６８３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、乳酸デヒドロゲナーゼノックダウン処置可能な疾患または障害、例えばＰＨ１、ＰＨ２、ＰＨ３および特発性高シュウ酸尿症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、グリコール酸オキシダーゼ（ＨＡＯ１）または乳酸デヒドロゲナーゼの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０１８４１６０号、国際公開第２０１５／１００４３６号または国際公開第２０１６／０５７９３２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、乳酸デヒドロゲナーゼノックダウン処置可能な疾患または障害、例えばＰＨ１、ＰＨ２、ＰＨ３および特発性高シュウ酸尿症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、乳酸デヒドロゲナーゼの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１６／０５７９３２号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、乳酸デヒドロゲナーゼノックダウン処置可能な疾患または障害、例えばＰＨ１、ＰＨ２、ＰＨ３および特発性高シュウ酸尿症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、グリコール酸オキシダーゼ（ＨＡＯ１）または乳酸デヒドロゲナーゼの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０１８４１６０号、国際公開第２０１５１００４３６号または国際公開第２０１６／０５７９３２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、高シュウ酸尿症または乳酸デヒドロゲナーゼノックダウン処置可能な疾患もしくは障害、例えばＰＨ１、ＰＨ２、ＰＨ３および特発性高シュウ酸尿症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、グリコール酸オキシダーゼ（ＨＡＯ１）または乳酸デヒドロゲナーゼの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０１８４１６０号または国際公開第２０１５／１００４３６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、β−カテニン、ＥＧＦＲ、ＣＫＡＰ５、ＭＣＬ１、ＭＹＣまたはＨＩＦ−１αに関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、β−カテニン、ＥＧＦＲ、ＣＫＡＰ５、ＭＣＬ１、ＭＹＣまたはＨＩＦ−１αの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４２８，７５２号、米国特許第９，２４３，２４４号、米国特許第８，８１５，８２５号、米国特許出願公開第２０１６／０１８６１７６号、米国特許出願公開第２０１６／００５３２６３号、米国特許出願公開第２０１４／０２８８２９２号、米国特許出願公開第２０１３／０１０９７４０号、欧州特許出願公開第３０３７５３８号、欧州特許出願公開第２５９１１０５号、国際公開第２０１２／００６２４３号、米国特許第９，３６５，８５０号、米国特許出願公開第２０１５／０２４０２３４号、米国特許出願公開第２０１４／０１０７１７８号、欧州特許出願公開第２８９５６０９号、国際公開第２０１４／０４３３１１号、米国特許出願公開第２０１６／０１７７３０３号、米国特許第９，２０６，４２０号、米国特許出願公開第２０１３／０３０３５９３号、国際公開第２０１２／１００１７２号、米国特許出願公開第２０１６／００８３７２９号、米国特許第９，２１７，１４６号、米国特許出願公開第２０１４／０１７９７６５号、国際公開第２０１２／１７３９９４号、米国特許出願公開第２０１５／０１９７７５６号、米国特許第８，９２７，５１５号、米国特許出願公開第２０１３／０１３１１４９号、欧州特許出願公開第２５９１１０４号、国際公開第２０１２／００６２４１号、米国特許出願公開第２０１５／００３８５５５号、米国特許第８，９２７，７０５号、米国特許第８，５１３，２０７号、米国特許第８，３４９，８０９号、米国特許出願公開第２０１５／００３８５５４号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００７４号、米国特許出願公開第２０１４／０２２１４５４号、米国特許出願公開第２０１３／００９６２９０号、米国特許出願公開第２０１３／００４１０１０号、米国特許出願公開第２０１２／０２６３７３８号、米国特許出願公開第２０１２／００９５２００号、米国特許出願公開第２０１１／０１１１０５６号、米国特許出願公開第２０１１／００５９１８７号、米国特許出願公開第２０１１／０００３８８１号、米国特許出願公開第２０１０／０２４９２１４号、米国特許出願公開第２０１０／０１７３９７４号、米国特許出願公開第２０１０／０１７３９７３号、米国特許出願公開第２０１０／０１８４８４１号、欧州特許出願公開第２５１３３３４号、欧州特許出願公開第２４３７７５２号、欧州特許出願公開第２４３７７５１号、欧州特許出願公開第２３７９０８３号、欧州特許出願公開第２３４１９４３号、国際公開第２０１１／０７５１８８号、国際公開第２０１１／０７２２９２号、国際公開第２０１０／１４１７２６号、国際公開第２０１０／１４１７２４号、国際公開第２０１０／１４１９３３号、国際公開第２０１０／０８０１２９号、国際公開第２０１０／０９３７８８号、国際公開第２０１０／０３３２２５号、欧州特許出願公開第２９６８１４９号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８４２号、国際公開第２０１４／１５３１６３号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８３号、欧州特許出願公開第２９３１７４６号、国際公開第２０１４／０９３７４６号、米国特許出願公開第２０１５／００６５５５５号、国際公開第２０１３／１３８６６８号、米国特許出願公開第２０１４／０３７１２９３号、欧州特許出願公開第２７６８９５８号、国際公開第２０１３／０５９４９６号、米国特許出願公開第２０１４／０３１５９８３号、国際公開第２０１３／０６６７２１号、米国特許出願公開第２０１４／０１５５４６２号、国際公開第２０１２／１４５５８２号または国際公開第２０１６／１００４０１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＫＲＡＳ、ＭＹＣまたはアンドロゲン受容体（ＡＲ）に関連する疾患、障害または状態、例えば癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＫＲＡＳ、ＭＹＣまたはＡＲの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３６５，８５０号、米国特許出願公開第２０１５／０２４０２３４号、米国特許出願公開第２０１４／０１０７１７８号、欧州特許出願公開第２８９５６０９号、国際公開第２０１４／０４３３１１号、米国特許出願公開第２０１４／０３７１２９３号、欧州特許出願公開第２７６８９５８号または国際公開第２０１３／０５９４９６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＫＲＡＳ、ＥＧＦＲまたはアンドロゲン受容体（ＡＲ）に関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＫＲＡＳ、ＥＧＦＲまたはＡＲの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／００８３７２９号、米国特許第９，２１７，１４６号、米国特許出願公開第２０１４／０１７９７６５号、国際公開第２０１２／１７３９９４号、米国特許第９，２００，２８４号、米国特許第８，９２７，７０５号、米国特許第８，５１３，２０７号、米国特許第８，３７２，８１６号、米国特許第８，３４９，８０９号、米国特許出願公開第２０１５／００５７３３７号、米国特許出願公開第２０１５／００３８５５５号、米国特許出願公開第２０１５／００３８５５４号、米国特許出願公開第２０１４／０３５００７４号、米国特許出願公開第２０１４／０２２１４５４号、米国特許出願公開第２０１３／００９６２９０号、米国特許出願公開第２０１３／０１２３３４２号、米国特許出願公開第２０１３／００４１０１０号、米国特許出願公開第２０１２／００９５２００号、米国特許出願公開第２０１１／０１１１０５６号、米国特許出願公開第２０１１／００５９１８７号、米国特許出願公開第２０１１／００２１６０４号、米国特許出願公開第２０１１／０００３８８１号、米国特許出願公開第２０１０／０１７３９７４号、米国特許出願公開第２０１０／０１７３９７３号、米国特許出願公開第２０１０／０１８４８４１号、欧州特許出願公開第２７５６８４５号、欧州特許出願公開第２５１３３３４号、欧州特許出願公開第２４３７７５２号、欧州特許出願公開第２４３７７５１号、欧州特許出願公開第２４１４３７４号、欧州特許出願公開第２３７９０８３号、欧州特許出願公開第２３４１９４３号、国際公開第２０１１／０７５１８８号、国際公開第２０１１／０７２２９２号、国際公開第２０１０／１４１７２６号、国際公開第２０１０／１４１７２４号、国際公開第２０１０／１４１９３３号、国際公開第２０１０／１１５２０６号、国際公開第２０１０／１１５２０２号、国際公開第２０１０／０８０１２９号、国際公開第２０１０／０３３２２５号、米国特許出願公開第２０１５／０１９７７５６号、米国特許第８，９２７，５１５号、米国特許出願公開第２０１３／０１３１１４９号、欧州特許出願公開第２５９１１０４号、国際公開第２０１２／００６２４１号、欧州特許出願公開第２９６８１４９号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８４２号、国際公開第２０１４／１５３１６３号、米国特許出願公開第２０１４／０３７１２９３号、欧州特許出願公開第２７６８９５８号、国際公開第２０１３／０５９４９６号、米国特許出願公開第２０１４／０１５５４６２号、国際公開第２０１２／１４５５８２号、欧州特許出願公開第２８７３７３２号、米国特許出願公開第２０１４／００４４７５５号、国際公開第２０１６／１００４０１号または国際公開第２０１３／０３２６４３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＫＲＡＳまたはＥＧＦＲに関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＫＲＡＳまたはＥＧＦＲの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，２００，２８４号、米国特許第８，９２７，７０５号、米国特許第８，５１３，２０７号、米国特許第８，３７２，８１６号、米国特許第８，３４９，８０９号、米国特許出願公開第２０１５／００５７３３７号、米国特許出願公開第２０１４／０２２１４５４号、米国特許出願公開第２０１３／００９６２９０号、米国特許出願公開第２０１３／０１２３３４２号、米国特許出願公開第２０１１／００２１６０４号、米国特許出願公開第２０１１／０００３８８１号、米国特許出願公開第２０１０／０１７３９７４号、米国特許出願公開第２０１０／０１７３９７３号、米国特許出願公開第２０１０／０１８４８４１号、欧州特許出願公開第２７５６８４５号、欧州特許出願公開第２５１３３３４号、欧州特許出願公開第２４１４３７４号、欧州特許出願公開第２３７９０８３号、国際公開第２０１１／０７５１８８号、国際公開第２０１０／１１５２０６号、国際公開第２０１０／１１５２０２号、国際公開第２０１０／０８０１２９号、米国特許出願公開第２０１４／０３７１２９３号、欧州特許出願公開第２７６８９５８号、国際公開第２０１３／０５９４９６号、米国特許出願公開第２０１４／０１５５４６２号、国際公開第２０１２／１４５５８２号、欧州特許出願公開第２８７３７３２号または米国特許出願公開第２０１４／００４４７５５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、β−カテニン、ＴＴＲ、乳酸デヒドロゲナーゼ、ＭＥＴ、α−１抗トリプシン、ＭＣＬ１、ＭＹＣまたはＣＫＡＰ５に関連する疾患、障害または状態、例えば肝細胞癌腫の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、β−カテニン、ＴＴＲ、乳酸デヒドロゲナーゼ、ＭＥＴ、α−１抗トリプシン、ＭＣＬ１、ＭＹＣまたはＣＫＡＰ５の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４２８，７５２号、米国特許第９，２４３，２４４号、米国特許第８，８１５，８２５号、米国特許出願公開第２０１６／０１８６１７６号、米国特許出願公開第２０１６／００５３２６３号、米国特許出願公開第２０１４／０２８８２９２号、米国特許出願公開第２０１３／０１０９７４０号、欧州特許出願公開第３０３７５３８号、欧州特許出願公開第２５９１１０５号、国際公開第２０１２／００６２４３号、米国特許第９，３６５，８５０号、米国特許出願公開第２０１５／０２４０２３４号、米国特許出願公開第２０１４／０１０７１７８号、欧州特許出願公開第２８９５６０９号、国際公開第２０１４／０４３３１１号、欧州特許出願公開第２９６８１４９号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８４２号、国際公開第２０１４／１５３１６３号、米国特許出願公開第２０１５／０３１５５８３号、欧州特許出願公開第２９３１７４６号、国際公開第２０１４／０９３７４６号、米国特許出願公開第２０１５／００６５５５５号、国際公開第２０１３／１３８６６８号、欧州特許出願公開第３０１７０４７号、米国特許出願公開第２０１５／００１１６０７号、国際公開第２０１５／００３１１３号、米国特許出願公開第２０１４／０３７１２９３号、欧州特許出願公開第２７６８９５８号、国際公開第２０１３／０５９４９６号、米国特許出願公開第２０１４／０３１５９８３号、国際公開第２０１３／０６６７２１号、国際公開第２０１６／０５７９３２号、国際公開第２０１５／０８５１５８号または国際公開第２００９／１３１６６１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＭＹＣまたはα−１抗トリプシンに関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＭＹＣまたはα−１抗トリプシンの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３６５，８５０号、米国特許出願公開第２０１５／０２４０２３４号、米国特許出願公開第２０１４／０１０７１７８号、欧州特許出願公開第２８９５６０９号、国際公開第２０１４／０４３３１１号、欧州特許出願公開第３０１７０４７号、米国特許出願公開第２０１５／００１１６０７号、国際公開第２０１５／００３１１３号、米国特許出願公開第２０１４／０３７１２９３号、欧州特許出願公開第２７６８９５８号または国際公開第２０１３／０５９４９６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、β−カテニンまたは乳酸デヒドロゲナーゼに関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、β−カテニンまたは乳酸デヒドロゲナーゼの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４２８，７５２号、米国特許第９，２４３，２４４号、米国特許第８，８１５，８２５号、米国特許出願公開第２０１６／０１８６１７６号、米国特許出願公開第２０１６／００５３２６３号、米国特許出願公開第２０１４／０２８８２９２号、米国特許出願公開第２０１３／０１０９７４０号、欧州特許出願公開第３０３７５３８号、欧州特許出願公開第２５９１１０５号、国際公開第２０１２／００６２４３号、国際公開第２０１６／０５７９３２号または国際公開第２００９／１３１６６１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、グリコール酸オキシダーゼ（ＨＡＯ１）に関連する疾患、障害もしくは状態、または乳酸デヒドロゲナーゼのノックダウン処置可能な疾患もしくは障害の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＨＡＯ１またはラクターゼデヒドロゲナーゼの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０１８４１６０号、国際公開第２０１５／１００４３６号または国際公開第２０１６／０５７９３２号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、例えば肝臓癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−３４、ｍｉＲ−１２４またはｍｉＲ−２１５の発現をモジュレートするか、またはそれらから選択される。いくつかの実施形態では、生物製剤は、さらなる治療剤、例えばＥＧＦＲ−ＴＫＩ剤；またはさらなる治療剤、例えばソラフェニブと必要に応じて組み合わせて、米国特許第８，０７１，５６２号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６１８１号、国際公開第２０１５／１５３７５７号、米国特許出願公開第２０１５／０３４４８８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３１４８３３号、米国特許出願公開第２０１５／０２４６０７０号、国際公開第２０１５／１３１１１５号、欧州特許出願公開第２９６８５６７号、米国特許出願公開第２０１５／０２７２９８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２７４号、米国特許出願公開第２０１４／０３０９２７８号、国際公開第２０１４／１４３８５５号、米国特許出願公開第２０１０／０１７９２１３号、国際公開第２０１０／０５６７３７号、欧州特許出願公開第３０１３９７５号または国際公開第２０１４／２０９９７０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、例えば肝臓癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−３４、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１４７またはｍｉＲ−２１５の発現をモジュレートするか、またはそれらから選択される。いくつかの実施形態では、生物製剤は、さらなる治療剤、例えばＥＧＦＲ−ＴＫＩ剤；またはさらなる治療剤、例えばソラフェニブと必要に応じて組み合わせて、欧州特許出願公開第２９６８５６７号、米国特許出願公開第２０１５／０２７２９８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２７４号、米国特許出願公開第２０１４／０３０９２７８号、国際公開第２０１４／１４３８５５号、欧州特許出願公開第３０１３９７５号または国際公開第２０１４／２０９９７０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、例えば肝臓癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−３４またはｍｉＲ−２１５の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、さらなる治療剤、例えばＥＧＦＲ−ＴＫＩ剤；またはさらなる治療剤、例えばソラフェニブと必要に応じて組み合わせて、米国特許出願公開第２０１５／０３４４８８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３１４８３３号、米国特許出願公開第２０１５／０２４６０７０号、国際公開第２０１５／１３１１１５号、米国特許出願公開第２０１５／０２７２９８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２７４号、米国特許出願公開第２０１４／０３０９２７８号、米国特許出願公開第２０１０／０１７９２１３号または国際公開第２０１０／０５６７３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、例えば肝臓癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１０１、ｍｉＲ−３４またはｍｉＲ−２１５の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、さらなる治療剤、例えばＥＧＦＲ−ＴＫＩ剤；またはさらなる治療剤、例えばソラフェニブと必要に応じて組み合わせて、米国特許出願公開第２０１５／０３４４８８１号、米国特許出願公開第２０１０／０１７９２１３号、国際公開第２０１０／０５６７３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−３４の発現をモジュレートするか、またはｍｉＲ−３４模倣物（ｍｉＲ−３４ａまたはｍｉＲ−３４ｃ模倣物を含む）である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、さらなる治療剤、例えばＥＧＦＲ−ＴＫＩ剤；またはさらなる治療剤、例えばソラフェニブ；またはｃ−Ｍｅｔ阻害剤（例えば、チバンチニブ）と必要に応じて組み合わせて、米国特許第９，３７１，５２６号、米国特許第８，５８６，７２７号、米国特許出願公開第２０１６／００５３２６４号、米国特許出願公開第２０１４／０１０７１８２号、欧州特許出願公開第２６７０８５０号、国際公開第２０１２／１０６５９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１５１４０６号、国際公開第２０１６／０８１７７３号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６１８１号、国際公開第２０１５／１５３７５７号、米国特許出願公開第２０１５／０２４６０７０号、国際公開第２０１５／１３１１１５号、欧州特許出願公開第２９６８５６７号、米国特許出願公開第２０１５／０２７２９８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２７４号、米国特許出願公開第２０１４／０３０９２７８号、国際公開第２０１４／１４３８５５号、米国特許出願公開第２０１０／０１７９２１３号、国際公開第２０１０／０５６７３７号、欧州特許出願公開第３０１３９７５号、国際公開第２０１４／２０９９７０号または国際公開第２０１６／１６１１９６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−３４の発現をモジュレートするか、またはｍｉＲ−３４模倣物（ｍｉＲ−３４ａまたはｍｉＲ−３４ｃ模倣物を含む）である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、さらなる治療剤、例えばＥＧＦＲ−ＴＫＩ剤；またはさらなる治療剤、例えばソラフェニブ；またはｃ−Ｍｅｔ阻害剤（例えば、チバンチニブ）と必要に応じて組み合わせて、欧州特許出願公開第２９６８５６７号、米国特許出願公開第２０１５／０２７２９８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２７４号、米国特許出願公開第２０１４／０３０９２７８号、国際公開第２０１４／１４３８５５号、欧州特許出願公開第３０１３９７５号、国際公開第２０１４／２０９９７０号、国際公開第２０１６／１６１１９６号または国際公開第２０１６／０８１７７３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、心疾患、眼の血管疾患および炎症性疾患を含む血管疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１もしくはｍｉＲ−１２４の発現をモジュレートするか；またはｍｉＲ−７、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１もしくはｍｉＲ−１２４の模倣物である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、さらなる治療剤、例えばＥＧＦＲ−ＴＫＩ剤；またはさらなる治療剤、例えばソラフェニブと必要に応じて組み合わせて、米国特許出願公開第２０１６／０２２２３８５号、米国特許第９，３６５，８５２号、米国特許第８，２５８，１１１号、米国特許出願公開第２０１５／０３４４８８０号、米国特許第８，０７１，５６２号、米国特許出願公開第２０１５／０３４４８８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３１４８３３号、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２７４号、米国特許出願公開第２０１０／０１７９２１３号または国際公開第２０１０／０５６７３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、心疾患、眼の血管疾患および炎症性疾患を含む血管疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−７、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１もしくはｍｉＲ−１２４の発現をモジュレートするか；またはｍｉＲ−７、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１もしくはｍｉＲ−１２４の模倣物である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、さらなる治療剤、例えばＥＧＦＲ−ＴＫＩ剤；またはさらなる治療剤、例えばソラフェニブと必要に応じて組み合わせて、米国特許出願公開第２０１６／０２２２３８５号、米国特許出願公開第２０１０／０１７９２１３号または国際公開第２０１０／０５６７３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、例えば癌幹細胞をターゲティングすることによる癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−３４、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１４７、ｍｉＲ−２１５の発現をモジュレートするか、またはそれらの模倣物である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、さらなる治療剤、例えばＥＧＦＲ−ＴＫＩ剤；またはさらなる治療剤、例えばソラフェニブと必要に応じて組み合わせて、米国特許第８，０７１，５６２号、米国特許出願公開第２０１５／０３４４８８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３１４８３３号、欧州特許出願公開第２９６８５６７号、米国特許出願公開第２０１５／０２７２９８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２７４号、米国特許出願公開第２０１４／０３０９２７８号、国際公開第２０１４／１４３８５５号、米国特許出願公開第２０１０／０１７９２１３号または国際公開第２０１０／０５６７３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、心疾患、眼の血管疾患および炎症性疾患を含む血管疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−３４、ｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１４７、ｍｉＲ−２１５の発現をモジュレートするか、またはそれらの模倣物である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、さらなる治療剤、例えばＥＧＦＲ−ＴＫＩ剤；またはさらなる治療剤、例えばソラフェニブ；またはｃ−Ｍｅｔ阻害剤（例えば、チバンチニブ）と必要に応じて組み合わせて、米国特許出願公開第２０１６／０２２２３８５号、米国特許第９，３６５，８５２号、米国特許第８，２５８，１１１号、米国特許出願公開第２０１５／０３４４８８０号、米国特許第９，３７１，５２６号、米国特許第８，５８６，７２７号、米国特許出願公開第２０１６／００５３２６４号、米国特許出願公開第２０１４／０１０７１８２号、欧州特許出願公開第２６７０８５０号、国際公開第２０１２／１０６５９１号、米国特許出願公開第２０１６／００６０６２９号、米国特許第９，２２２，０８５号、欧州特許出願公開第２６７０８４９号、国際公開第２０１２／１０６５８６号、米国特許第８，９００，６２７号、欧州特許出願公開第２３０６９７８号、米国特許第８，０７１，５６２号、米国特許出願公開第２０１６／０１５１４０６号、国際公開第２０１６／０８１７７３号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６１８１号、国際公開第２０１５／１５３７５７号、米国特許出願公開第２０１５／０３４４８８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３１４８３３号、米国特許出願公開第２０１５／０２４６０７０号、国際公開第２０１５／１３１１１５号、欧州特許出願公開第２９６８５６７号、米国特許出願公開第２０１５／０２７２９８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２７４号、米国特許出願公開第２０１４／０３０９２７８号、国際公開第２０１４／１４３８５５号、米国特許出願公開第２０１０／０１７９２１３号、国際公開第２０１０／０５６７３７号、欧州特許出願公開第３０１３９７５号、国際公開第２０１４２０９９７０号または国際公開第２０１６／１６１１９６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−３４もしくはｍｉＲ−１２４、ｍｉＲ−１２６、ｍｉＲ−１４７、ｍｉＲ−２１５の発現をモジュレートするか、またはそれらの模倣物である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、さらなる治療剤、例えばｃ−Ｍｅｔ阻害剤（例えば、チバンチニブ）と必要に応じて組み合わせて、米国特許第９，３７１，５２６号、米国特許出願公開第２０１６／００５３２６４号、米国特許出願公開第２０１４／０１０７１８２号、欧州特許出願公開第２６７０８５０号、国際公開第２０１２／１０６５９１号、米国特許出願公開第２０１６／０２２２３８５号、米国特許第８，２５８，１１１号、米国特許第８，０７１，５６２号、米国特許出願公開第２０１６／０１５１４０６号、国際公開第２０１６／０８１７７３号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６１８１号、国際公開第２０１５／１５３７５７号、米国特許出願公開第２０１６／００６０６２９号、欧州特許出願公開第２６７０８４９号、国際公開第２０１２／１０６５８６号、米国特許出願公開第２０１５／０３４４８８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３１４８３３号、米国特許出願公開第２０１５／０２４６０７０号、国際公開第２０１５／１３１１１５号、欧州特許出願公開第２９６８５６７号、米国特許出願公開第２０１５／０２７２９８１号、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２７４号、米国特許出願公開第２０１４／０３０９２７８号、国際公開第２０１４／１４３８５５号、米国特許出願公開第２０１０／０１７９２１３号、国際公開第２０１０／０５６７３７号、欧州特許出願公開第３０１３９７５号、国際公開第２０１４／２０９９７０号または国際公開第２０１６／１６１１９６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、本態性高血圧症、二次性高血圧症、腎血管性高血圧症、抵抗性高血圧症、末梢動脈疾患、冠状動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、動脈瘤、狭心症、高血圧性心疾患、心不全、虚血、肺性心、肺高血圧症、肺動脈高血圧症、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、視神経症、脳血管疾患、脳卒中、高血圧性脳症、心筋梗塞、血管石灰化、高血圧性網膜症、高血圧性腎症、高血圧性腎硬化症、再狭窄または血栓症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−９２、ｍｉＲ−１３７もしくはｍｉＲ−１３８の発現をモジュレートするか、またはそれらの模倣物である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３８８，４０８号、米国特許出願公開第２０１３／０３４４１３５号、欧州特許出願公開第２８６４４８２号、国際公開第２０１３／１９２５７６号、国際公開第２０１６／１１８６１２号、米国特許出願公開第２０１６／０２０８２５８号または国際公開第２０１６／０６９７１７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、心臓障害の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１５５の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１４／００２４７００号、欧州特許出願公開第２６５２１４６号または国際公開第２０１２／０８３００４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、心臓の疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−９２またはｍｉＲ−９２ａの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３８８，４０８号、米国特許出願公開第２０１３／０３４４１３５号、欧州特許出願公開第２８６４４８２号、国際公開第２０１３／１９２５７６号、国際公開第２０１６／１１８６１２号、米国特許出願公開第２０１６／０２０８２５８号、米国特許出願公開第２０１４／００２４７００号、欧州特許出願公開第２６５２１４６号または国際公開第２０１２／０８３００４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、加齢性心筋症または組織線維性状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−２９の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３８８，４０８号、米国特許出願公開第２０１３／０３４４１３５号、欧州特許出願公開第２８６４４８２号、国際公開第２０１３／１９２５７６号、米国特許第９，３７６，６８１号、米国特許出願公開第２０１６／００６８８４２号、国際公開第２０１６／０４０３７３号、米国特許出願公開第２０１４／０１８７６０３号、米国特許第８，６４２，７５１号、米国特許出願公開第２０１２／０１８４５９６号、欧州特許出願公開第２６５２１５１号、国際公開第２０１２／０８３００５号、欧州特許出願公開第２９７０９６８号、米国特許出願公開第２０１６／００１００９０号、国際公開第２０１４／１４５３５６号、米国特許出願公開第２０１２／０２３８６１９号または国際公開第２０１５／１４２７３５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１５ファミリーＲＮＡに関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−１５ファミリーＲＮＡ、例えばｍｉＲ−１５ａ、ｍｉＲ−１５ｂ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−１９５、ｍｉＲ−４２４またはｍｉＲ−４９７の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３８８，４０８号、米国特許出願公開第２０１３／０３４４１３５号、欧州特許出願公開第２８６４４８２号、国際公開第２０１３／１９２５７６号、米国特許第９，１６３，２３５号、米国特許出願公開第２０１３／０３４５２８８号、欧州特許出願公開第２８６３９５６号、国際公開第２０１３／１９２４８６号、欧州特許出願公開第２９７０９６８号、米国特許出願公開第２０１６／００１００９０号、国際公開第２０１４／１４５３５６号、米国特許出願公開第２０１４／００６６４９１号、米国特許出願公開第２０１２／０１４８６６４号、欧州特許出願公開第２４４０５６６号または国際公開第２０１０／１４４４８５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、肥大型心筋症または心不全の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＭＹＨ７Ｂ、またはｍｉＲ−２０８ａ、ｍｉＲ−２０８ｂおよび／もしくはｍｉＲ−４９９を含むｍｉＲ−２０８ファミリーｍｉＲＮＡの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１４／０１８７６０３号、米国特許第８，６４２，７５１号、米国特許出願公開第２０１２／０１８４５９６号、欧州特許出願公開第２６５２１５１号、国際公開第２０１２／０８３００５号、国際公開第２０１６／０２２５３６号または米国特許出願公開第２０１６／００３２２８６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、細胞外マトリックス遺伝子の調節異常、例えば組織線維性状態、例えば皮膚線維症または肺線維症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−２９の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３７６，６８１号、米国特許出願公開第２０１６／００６８８４２号または国際公開第２０１６／０４０３７３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、原核生物における真核生物プロモーター駆動性遺伝子発現の調節に関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ｍｉＲ−２９の発現をモジュレートするか、または原核生物における真核生物プロモーター駆動性遺伝子発現を調節する。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０１１８７３４号、米国特許出願公開第２０１５／００６４７７１号、米国特許出願公開第２０１３／０２１０１２０号、欧州特許出願公開第２７４２１２７号または国際公開第２０１３／０２５２４８号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、家族性腺腫性ポリポーシスの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２３５６２３５号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているベクターまたは他の治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、細胞、例えば癌細胞に送達されると、ＲＡＳ、β−カテニン、１つまたはそれを超えるＨＰＶ癌遺伝子、ＡＰＣ、ＨＥＲ−２、ＭＤＲ−１、ＭＲＰ−２、ＦＡＴＰ４、ＳＧＬＵＴ−１、ＧＬＵＴ−２、ＧＬＵＴ−５、ＡＰＯＢＥＣ−１、ＭＴＰ、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１３ Ｒａ−１、ＩＬ−１８、ｐ３８／ＪＮＫ ＭＡＰキナーゼ、ｐ６５／ＮＦ−κＢ、ＣＣＬ２０（またはＭＩＰ−３α）、クローディン−２、キチナーゼ３様１、ＡＰＯＡ−ＩＶ、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０１８４１６７号、米国特許第９，０１２，２１３号または欧州特許出願公開第２３５６２３５号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているプラスミド、ベクターまたはｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＳＴＡＴ３に関連する疾患、障害または状態、例えば癌、例えばＢ細胞リンパ腫または肝細胞癌腫の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＳＴＡＴ３の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、欧州特許出願公開第２９９１６６１号、欧州特許出願公開第２９２０３０８号、欧州特許出願公開第２６９７２４３号、欧州特許出願公開第２５９５６６４号または国際公開第２０１６／０７７８３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルス感染、例えばＨＢＶまたはＨＣＶ感染の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルス遺伝子、例えばＨＢＶまたはＨＣＶ遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０３６１４３２号、米国特許第９，１３９，８３３号、米国特許出願公開第２０１５／０３７６６２１号、米国特許第９，０８４，８０８号、欧州特許出願公開第２７２６６１３号、米国特許出願公開第２０１３／０００５７９３号または国際公開第２０１３／００３５２０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルス感染、例えばＨＢＶまたはＨＣＶ感染の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルス遺伝子、例えばＨＢＶまたはＨＣＶ遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，１３９，８３３号、米国特許出願公開第２０１５／０３７６６２１号または米国特許第９，０８４，８０８号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＭＬＬまたはリボヌクレオチドレダクターゼＭ２（ＲＲＭ２）に関連する疾患、障害または状態の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＲＲＭ２またはＭＬＬ遺伝子の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１５／０１１３６７０号、米国特許第８，９４６，１７６号、欧州特許出願公開第２８５１４２６号、欧州特許出願公開第２６３０２４０号、国際公開第２０１２／０５２２５８号または国際公開第２０１２／０８２８９４号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患、障害または状態、例えば癌、転移、星状細胞腫、膀胱癌、乳癌、軟骨肉腫、結腸直腸癌腫、胃癌腫、膠芽腫、頭頸部扁平上皮癌、肝細胞癌腫、肺腺癌腫、神経芽細胞腫、非小細胞肺癌、黒色腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、直腸癌、腎臓癌、明細胞腎細胞癌腫（およびこのおよび他の癌の転移）、歯肉炎、乾癬、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、子癇前症、炎症、慢性炎症、血管新生疾患または関節リウマチの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＥＰＡＳ１の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／００１００８９号または欧州特許出願公開第２９６１８４３号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、高トリグリセリド血症（例えば、Ｖ型高トリグリセリド血症）、異常脂質代謝、異常コレステロール代謝、アテローム性動脈硬化症、高脂血症、２型糖尿病を含む糖尿病、肥満症、心血管疾患、および異常代謝などに関連する他の障害の中でも冠状動脈疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＡＰＯＣ３の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１６／０１１１２３号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、α１−抗トリプシン欠乏症および関連疾患、例えば慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌腫および劇症肝不全の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、α１−抗トリプシンの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、国際公開第２０１５／１９５６２８号（この開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、敗血症の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ＴＮＦαの発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２００２／０１８７２０８号、米国特許第６，３５２，７２９号または国際公開第２００２／０３６７３７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、例えば結腸癌、敗血症、酸化ストレスまたは代謝性疾患の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、アポトーシスを選択的にモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第８，２４７，３８０号、米国特許第７，４４５，７８４号、米国特許第７，２３８，６６２号、欧州特許出願公開第１１１９３６７号、米国特許第７，５２８，１０８号、欧州特許出願公開第１８７４７９６号、国際公開第２００６／１１６４１０号、米国特許出願公開第２００２／０１８７２０８号、米国特許第６，３５２，７２９号、国際公開第２００２／０３６７３７号、国際公開第２００１／０８４９３８号、米国特許第６，３１２，７３７号、欧州特許出願公開第２３２３６８２号、米国特許出願公開第２０１０／００２２４４２号、欧州特許出願公開第２３２３６８２号、国際公開第２０１０／０１１５３３号または国際公開第２００１／０８２８７１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている治療剤、例えば亜鉛負荷タンパク質から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌、例えば結腸癌の処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、アポトーシスを選択的にモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第８，２４７，３８０号、米国特許第７，４４５，７８４号、米国特許第７，２３８，６６２号、欧州特許出願公開第１１１９３６７号、国際公開第２００１／０８４９３８号、米国特許第６，３１２，７３７号、欧州特許出願公開第２３２３６８２号または国際公開第２００１／０８２８７１号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている治療剤、例えば亜鉛負荷タンパク質から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患、障害または状態、例えば感染性疾患、アレルギー状態、炎症性疾患、自己免疫疾患、または癌、例えば呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）またはインフルエンザの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、アジュバントまたはワクチンとして有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、適応免疫反応のモジュレートを必要とする患者における適応免疫反応をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４２１，２５５号、米国特許出願公開第２０１３／０２５９８７９号、欧州特許出願公開第２６７８０３８号、国際公開第２０１２／１１３５１３号、国際公開第２０１２／１１３４１３号、米国特許第９，４０２，８８７号、米国特許出願公開第２０１３／０２５１７４２号、欧州特許出願公開第２１９５０１５号、国際公開第２００９／０４６９７５号、国際公開第２００９／０４６７３９号、米国特許第９，３５２，０２８号、米国特許出願公開第２０１３／０２０２６４５号、欧州特許出願公開第２１９７４８１号、国際公開第２００９／０４６９７４号、国際公開第２００９／０４６７３８号、米国特許出願公開第２０１６／０２５０３２１号、米国特許第９，２２６，９５９号、米国特許出願公開第２０１２／００２１０４３号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２５４８９６０号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、国際公開第２００９／０９５２２６号、米国特許出願公開第２０１６／０２０６７１９号、米国特許出願公開第２０１６／０１３０３４５号、欧州特許出願公開第２９５８５８８号、国際公開第２０１４／１２７９１７号、米国特許出願公開第２０１６／０１８５８４０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９２号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９０号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２７０６号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１４５３４６号、米国特許出願公開第２０１３／０１９５８６７号、欧州特許出願公開第３０３５９５５号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２２７号、国際公開第２０１５／０２４６６６号、欧州特許出願公開第３０３５９６０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２０７号、国際公開第２０１５／０２４６６８号、欧州特許出願公開第３０３６３３０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１０号、国際公開第２０１５／０２４６６７号、欧州特許出願公開第３０３５９５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６６８号、国際公開第２０１５／０２４６６４号、欧州特許出願公開第３０３５９６１号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１１号、国際公開第２０１５／０２４６６５号、欧州特許出願公開第３０３５９５９号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６７８号、国際公開第２０１５／０２４６６９号、米国特許出願公開第２０１６／０１５１４７４号、米国特許出願公開第２０１３／０２９５０４３号、欧州特許出願公開第２６８０８８１号、国際公開第２０１２／１１６８１１号、国際公開第２０１２／１１６７１４号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８２６４号、欧州特許出願公開第２８０９３５３号、国際公開第２０１３／１１３５０１号、国際公開第２０１３／１１３３２６号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８１８３号、欧州特許出願公開第２８０９３５４号、国際公開第２０１３／１１３５０２号、国際公開第２０１３／１１３３２５号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４９８号、欧州特許出願公開第２５１０１００号、国際公開第２０１１／０６９５８６号、国際公開第２０１１／０６９５２９号、米国特許出願公開第２０１５／００９３４１３号、欧州特許出願公開第２８１４９６２号、国際公開第２０１３／１２０６２８号、国際公開第２０１３／１２０４９９号、欧州特許出願公開第２６８０８８０号、米国特許出願公開第２０１３／０３３６９９８号、国際公開第２０１２／１１６７１５号、国際公開第２０１２／１１６８１０号、欧州特許出願公開第２６５８５６９号、米国特許出願公開第２０１３／０２８０２８３号、国際公開第２０１２／０８９３３８号、国際公開第２０１２／０８９２２５号、欧州特許出願公開第２６５０３６８号、米国特許出願公開第２０１３／０１２１９８８号、米国特許出願公開第２００９／０３２４５８４号、欧州特許出願公開第２０４６９５４号、国際公開第２００８／０１４９７９号、欧州特許出願公開第２７６２１６５号、米国特許出願公開第２０１１／０２５０２２５号、欧州特許出願公開第２３３１１２９号、欧州特許出願公開第２３３１１２９号、国際公開第２０１０／０３７５３９号、国際公開第２０１０／０３７４０８号、米国特許出願公開第２０１１／００５３８２９号、欧州特許出願公開第１０８３２３２号、国際公開第２０１６／１０７８７７号、国際公開第２０１６／０９７０６５号、国際公開第２０１６／０９１３９１号、国際公開第２０１５／１４９９４４号、国際公開第２０１５／１３５５５８号、国際公開第２０１５／１０１４１４号、国際公開第２０１５／１０１４１５号または国際公開第２０１０／０８８９２７号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または抗体、抗原または他の治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、疾患、障害または状態、例えば感染性疾患、アレルギー状態、炎症性疾患、自己免疫疾患、または癌、例えば呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）またはインフルエンザの処置、予防または改善において有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、アジュバントまたはワクチンとして有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、適応免疫反応のモジュレートを必要とする患者における適応免疫反応をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，２２６，９５９号、米国特許出願公開第２０１２／００２１０４３号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２５４８９６０号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、国際公開第２００９／０９５２２６号、米国特許出願公開第２０１６／０１８５８４０号、欧州特許出願公開第３０３５９６０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２０７号、国際公開第２０１５／０２４６６８号、欧州特許出願公開第３０３５９５９号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６７８号、国際公開第２０１５／０２４６６９号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８２６４号、欧州特許出願公開第２８０９３５３号、国際公開第２０１３／１１３５０１号、国際公開第２０１３／１１３３２６号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８１８３号、欧州特許出願公開第２８０９３５４号、国際公開第２０１３／１１３５０２号、国際公開第２０１３／１１３３２５号、米国特許出願公開第２０１５／００９３４１３号、欧州特許出願公開第２８１４９６２号、国際公開第２０１３／１２０６２８号、国際公開第２０１３／１２０４９９号、欧州特許出願公開第２６５０３６８号、米国特許出願公開第２００９／０３２４５８４号、欧州特許出願公開第２０４６９５４号、国際公開第２００８／０１４９７９号、国際公開第２０１５／１４９９４４号、国際公開第２００９／０４６７３９号または国際公開第２００９／０４６７３８号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または抗体、抗原または他の治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、感染性疾患（例えば、ＲＳＶまたは狂犬病）もしくは癌、心血管疾患、感染性疾患、自己免疫疾患もしくは遺伝病の処置、予防もしくは改善において、または遺伝子療法において、またはアジュバントもしくは免疫刺激剤として有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルスＲＮＡまたはタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４７，４３１号、米国特許第９，４２１，２５５号、米国特許出願公開第２０１３／０２５９８７９号、欧州特許出願公開第２６７８０３８号、国際公開第２０１２／１１３５１３号、国際公開第２０１２／１１３４１３号、米国特許出願公開第２０１６／０２０６７５６号、米国特許第９，２３４，０１３号、欧州特許出願公開第２６０３５９０号、欧州特許出願公開第２７９６５５７号、欧州特許出願公開第２６０３５９０号、国際公開第２０１２／０１９７８０号、国際公開第２０１２／０１９６３０号、米国特許出願公開第２０１６／０２５０３２１号、米国特許第９，２２６，９５９号、米国特許出願公開第２０１２／００２１０４３号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２５４８９６０号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、国際公開第２００９／０９５２２６号、欧州特許出願公開第２９５５２３０号、米国特許第８，９６８，７４６号、米国特許出願公開第２０１５／０２５８２１４号、米国特許出願公開第２０１３／０１４２８１８号、欧州特許出願公開第２４４９１１３号、欧州特許出願公開第２４４９１１３号、欧州特許出願公開第２４４９１１３号、国際公開第２０１２／０１３３２６号、米国特許出願公開第２０１６／０２０６７１９号、米国特許出願公開第２０１６／０１３０３４５号、欧州特許出願公開第２９５８５８８号、国際公開第２０１４／１２７９１７号、米国特許出願公開第２０１６／０１８５８４０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９２号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９０号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２７０６号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１４５３４６号、米国特許出願公開第２０１３／０１９５８６７号、欧州特許出願公開第２１０１８２３号、国際公開第２００８／０８３９４９号、米国特許出願公開第２０１６／０１８４４０６号、米国特許出願公開第２０１４／００３７６６０号、米国特許出願公開第２０１０／０２０３０７６号、欧州特許出願公開第２４８４７７０号、欧州特許出願公開第２１８８３７９号、欧州特許出願公開第２４８４７７０号、欧州特許出願公開第２１８８３７９号、国際公開第２００９／０３０４８１号、国際公開第２００９／０３０２５４号、欧州特許出願公開第３０３５９６０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２０７号、国際公開第２０１５／０２４６６８号、欧州特許出願公開第３０３６３３０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１０号、国際公開第２０１５／０２４６６７号、欧州特許出願公開第３０３５９６１号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１１号、国際公開第２０１５／０２４６６５号、米国特許出願公開第２０１６／０１５１４７４号、米国特許出願公開第２０１３／０２９５０４３号、欧州特許出願公開第２６８０８８１号、国際公開第２０１２／１１６８１１号、国際公開第２０１２／１１６７１４号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８２６４号、欧州特許出願公開第２８０９３５３号、国際公開第２０１３／１１３５０１号、国際公開第２０１３／１１３３２６号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８１８３号、欧州特許出願公開第２８０９３５４号、国際公開第２０１３／１１３５０２号、国際公開第２０１３／１１３３２５号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４９８号、欧州特許出願公開第２５１０１００号、国際公開第２０１１／０６９５８６号、国際公開第２０１１／０６９５２９号、米国特許出願公開第２０１５／００５７３４０号、欧州特許出願公開第２８１４９６３号、国際公開第２０１３／１２０６２９号、国際公開第２０１３／１２０４９７号、米国特許出願公開第２０１５／００９３４１３号、欧州特許出願公開第２８１４９６２号、国際公開第２０１３／１２０６２８号、国際公開第２０１３／１２０４９９号、欧州特許出願公開第２６８０８８０号、米国特許出願公開第２０１３／０３３６９９８号、国際公開第２０１２／１１６７１５号、国際公開第２０１２／１１６８１０号、欧州特許出願公開第２６５０３６８号、米国特許出願公開第２０１３／０１２１９８８号、米国特許出願公開第２００９／０３２４５８４号、欧州特許出願公開第２０４６９５４号、国際公開第２００８／０１４９７９号、米国特許出願公開第２０１２／０２１３８１８号、欧州特許出願公開第２７６２１６５号、米国特許出願公開第２０１１／０２５０２２５号、欧州特許出願公開第２３３１１２９号、欧州特許出願公開第２３３１１２９号、国際公開第２０１０／０３７５３９号、国際公開第２０１０／０３７４０８号、米国特許出願公開第２０１１／００５３８２９号、米国特許出願公開第２０１０／００４７２６１号、欧州特許出願公開第２０８３８５１号、国際公開第２００８／０５２７７０号、米国特許出願公開第２００８／０１７１７１１号、米国特許出願公開第２００７／０２８０９２９号、国際公開第２０１６／１０７８７７号、国際公開第２０１６／０９１３９１号、国際公開第２０１５／１４９９４４号、国際公開第２０１５／１３５５５８号、国際公開第２０１５／１０１４１４号、国際公開第２０１５／１０１４１５号、国際公開第２０１１／０６９５８７号、国際公開第２０１１／０６９５２８号、国際公開第２０１０／０８８９２７号または国際公開第２００９／１２７２３０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または抗体、抗原または他の治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、感染性疾患（例えば、ＲＳＶまたは狂犬病）もしくは癌、心血管疾患、感染性疾患、自己免疫疾患もしくは遺伝病の処置、予防もしくは改善において、または遺伝子療法において、またはアジュバントもしくは免疫刺激剤として有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルスＲＮＡまたはタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９２号、米国特許出願公開第２０１３／０１９５８６７号、欧州特許出願公開第２１０１８２３号、国際公開第２００８／０８３９４９号、欧州特許出願公開第３０３５９６１号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１１号、国際公開第２０１５／０２４６６５号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８２６４号、欧州特許出願公開第２８０９３５３号、国際公開第２０１３／１１３５０１号、国際公開第２０１３／１１３３２６号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８１８３号、欧州特許出願公開第２８０９３５４号、国際公開第２０１３／１１３５０２号、国際公開第２０１３／１１３３２５号、米国特許出願公開第２０１５／００９３４１３号、欧州特許出願公開第２８１４９６２号、国際公開第２０１３／１２０６２８号、国際公開第２０１３／１２０４９９号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、米国特許出願公開第２０１２／００２１０４３号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２５４８９６０号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、国際公開第２００９／０９５２２６号、米国特許出願公開第２０１０／００４７２６１号、欧州特許出願公開第２０８３８５１号、国際公開第２００８／０５２７７０号、欧州特許出願公開第２６５０３６８号、米国特許出願公開第２００９／０３２４５８４号、欧州特許出願公開第２０４６９５４号、国際公開第２００８／０１４９７９号、米国特許出願公開第２００７／０２８０９２９号、国際公開第２０１５／１４９９４４号または国際公開第２００９／１２７２３０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または抗体、抗原または他の治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、感染性疾患（例えば、ＲＳＶまたは狂犬病）もしくは癌（例えば、前立腺癌）、心血管疾患、感染性疾患、自己免疫疾患もしくは遺伝病の処置、予防もしくは改善において有用であり、または遺伝子療法において、またはアジュバントもしくは免疫刺激剤として有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルスＲＮＡまたはタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４７，４３１号、米国特許第９，４２１，２５５号、米国特許出願公開第２０１３／０２５９８７９号、欧州特許出願公開第２６７８０３８号、国際公開第２０１２／１１３５１３号、国際公開第２０１２／１１３４１３号、米国特許第９，４３９，９５６号、米国特許第９，４３３，６７０号、米国特許第９，４３３，６６９号、米国特許第９，１５５，７８８号、米国特許第８，２１７，０１６号、米国特許出願公開第２０１６／００９５９１１号、米国特許出願公開第２０１６／００８９４２６号、米国特許出願公開第２０１６／００９５９１２号、米国特許出願公開第２０１６／００８９４２５号、米国特許出願公開第２０１６／００８９４２４号、米国特許出願公開第２０１６／００８２０９２号、米国特許出願公開第２０１５／００３０６３３号、米国特許出願公開第２０１１／０３１１４７２号、欧州特許出願公開第１４５８４１０号、欧州特許出願公開第２７６９７３３号、欧州特許出願公開第１９２５３１７号、欧州特許出願公開第１９０５８４４号、欧州特許出願公開第１４５８４１０号、国際公開第２００３／０５１４０１号、米国特許第９，４０２，８８７号、米国特許出願公開第２０１３／０２５１７４２号、欧州特許出願公開第２１９５０１５号、国際公開第２００９／０４６９７５号、国際公開第２００９／０４６７３９号、米国特許第９，３５２，０２８号、米国特許出願公開第２０１３／０２０２６４５号、欧州特許出願公開第２１９７４８１号、国際公開第２００９／０４６９７４号、国際公開第２００９／０４６７３８号、米国特許出願公開第２０１６／０２０６７５６号、米国特許第９，２３４，０１３号、欧州特許出願公開第２６０３５９０号、欧州特許出願公開第２７９６５５７号、欧州特許出願公開第２６０３５９０号、国際公開第２０１２／０１９７８０号、国際公開第２０１２／０１９６３０号、米国特許出願公開第２０１６／０２５０３２１号、米国特許第９，２２６，９５９号、米国特許出願公開第２０１２／００２１０４３号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２５４８９６０号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、国際公開第２００９／０９５２２６号、欧州特許出願公開第２９５５２３０号、米国特許第８，９６８，７４６号、米国特許出願公開第２０１５／０２５８２１４号、米国特許出願公開第２０１３／０１４２８１８号、欧州特許出願公開第２４４９１１３号、欧州特許出願公開第２４４９１１３号、欧州特許出願公開第２４４９１１３号、国際公開第２０１２／０１３３２６号、米国特許出願公開第２０１６／０２０６７１９号、米国特許出願公開第２０１６／０１３０３４５号、欧州特許出願公開第２９５８５８８号、国際公開第２０１４／１２７９１７号、米国特許出願公開第２０１６／０１８５８４０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９２号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９０号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２７０６号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１４５３４６号、米国特許出願公開第２０１３／０１９５８６７号、欧州特許出願公開第２１０１８２３号、国際公開第２００８／０８３９４９号、米国特許出願公開第２０１６／０１８４４０６号、米国特許出願公開第２０１４／００３７６６０号、米国特許出願公開第２０１０／０２０３０７６号、欧州特許出願公開第２４８４７７０号、欧州特許出願公開第２１８８３７９号、欧州特許出願公開第２４８４７７０号、欧州特許出願公開第２１８８３７９号、国際公開第２００９／０３０４８１号、国際公開第２００９／０３０２５４号、欧州特許出願公開第３０３５９５５号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２２７号、国際公開第２０１５／０２４６６６号、欧州特許出願公開第３０３６３３０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１０号、国際公開第２０１５／０２４６６７号、欧州特許出願公開第３０３５９５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６６８号、国際公開第２０１５／０２４６６４号、米国特許出願公開第２０１６／０１５１４７４号、米国特許出願公開第２０１３／０２９５０４３号、欧州特許出願公開第２６８０８８１号、国際公開第２０１２／１１６８１１号、国際公開第２０１２／１１６７１４号、米国特許出願公開第２０１５／０３２０８４７号、欧州特許出願公開第２８１４９６１号、国際公開第２０１３／１２０６２７号、国際公開第２０１３／１２０５００号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８２６４号、欧州特許出願公開第２８０９３５３号、国際公開第２０１３／１１３５０１号、国際公開第２０１３／１１３３２６号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８１８３号、欧州特許出願公開第２８０９３５４号、国際公開第２０１３／１１３５０２号、国際公開第２０１３／１１３３２５号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４９８号、欧州特許出願公開第２５１０１００号、国際公開第２０１１／０６９５８６号、国際公開第２０１１／０６９５２９号、米国特許出願公開第２０１５／００５７３４０号、欧州特許出願公開第２８１４９６３号、国際公開第２０１３／１２０６２９号、国際公開第２０１３／１２０４９７号、欧州特許出願公開第２６８０８８０号、米国特許出願公開第２０１３／０３３６９９８号、国際公開第２０１２／１１６７１５号、国際公開第２０１２／１１６８１０号、欧州特許出願公開第２６５８５６９号、米国特許出願公開第２０１３／０２８０２８３号、国際公開第２０１２／０８９３３８号、国際公開第２０１２／０８９２２５号、欧州特許出願公開第２６５０３６８号、米国特許出願公開第２０１３／０１２１９８８号、米国特許出願公開第２００９／０３２４５８４号、欧州特許出願公開第２０４６９５４号、国際公開第２００８／０１４９７９号、欧州特許出願公開第２７６２１６５号、米国特許出願公開第２０１１／０２５０２２５号、欧州特許出願公開第２３３１１２９号、欧州特許出願公開第２３３１１２９号、国際公開第２０１０／０３７５３９号、国際公開第２０１０／０３７４０８号、米国特許出願公開第２０１１／００５３８２９号、米国特許出願公開第２０１０／００４７２６１号、欧州特許出願公開第２０８３８５１号、国際公開第２００８／０５２７７０号、米国特許出願公開第２００７／０２８０９２９号、国際公開第２０１６／１０７８７７号、国際公開第２０１６／０９１３９１号、国際公開第２０１５／１４９９４４号、国際公開第２０１５／１３５５５８号、国際公開第２０１５／１０１４１４号、国際公開第２０１５／１０１４１５号、国際公開第２０１１／０６９５８７号、国際公開第２０１１／０６９５２８号、国際公開第２０１０／０８８９２７号または国際公開第２００９／１２７２３０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または抗体、抗原または他の治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、感染性疾患（例えば、ＲＳＶまたは狂犬病）もしくは癌（例えば、前立腺癌）、心血管疾患、感染性疾患、自己免疫疾患もしくは遺伝病の処置、予防もしくは改善において、または遺伝子療法において、またはアジュバントもしくは免疫刺激剤として有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルスＲＮＡまたはタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４３３，６６９号、米国特許出願公開第２０１６／００９５９１１号、米国特許出願公開第２０１６／００８９４２４号、米国特許第９，４０２，８８７号、米国特許出願公開第２０１３／０２５１７４２号、欧州特許出願公開第２１９５０１５号、国際公開第２００９／０４６９７５号、国際公開第２００９／０４６７３９号、欧州特許出願公開第３０３６３３０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１０号、国際公開第２０１５／０２４６６７号、欧州特許出願公開第３０３５９５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６６８号、国際公開第２０１５／０２４６６４号、米国特許出願公開第２０１６／０１５１４７４号、米国特許出願公開第２０１３／０１９５８６７号、欧州特許出願公開第２１０１８２３号、国際公開第２００８／０８３９４９号、欧州特許出願公開第２６５０３６８号、米国特許出願公開第２０１３／０１２１９８８号、米国特許出願公開第２００９／０３２４５８４号、欧州特許出願公開第２０４６９５４号、国際公開第２００８／０１４９７９号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、米国特許出願公開第２０１２／００２１０４３号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２５４８９６０号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、国際公開第２００９／０９５２２６号、米国特許出願公開第２０１０／００４７２６１号、欧州特許出願公開第２０８３８５１号、国際公開第２００８／０５２７７０号、米国特許出願公開第２００７／０２８０９２９号、欧州特許出願公開第１８８１８４７号または国際公開第２００９／１２７２３０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または抗体、抗原または他の治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌（例えば、前立腺癌または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、心血管疾患、自己免疫疾患もしくは遺伝病の処置、予防もしくは改善において、または遺伝子療法において、またはアジュバントもしくは免疫刺激剤として有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルスＲＮＡまたはタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４７，４３１号、米国特許第９，３５２，０２８号、米国特許出願公開第２０１３／０２０２６４５号、欧州特許出願公開第２１９７４８１号、国際公開第２００９／０４６９７４号、国際公開第２００９／０４６７３８号、米国特許出願公開第２０１６／０２０６７１９号、米国特許出願公開第２０１６／０１３０３４５号、欧州特許出願公開第２９５８５８８号、国際公開第２０１４／１２７９１７号、米国特許出願公開第２０１６／０１８５８４０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９２号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９０号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２７０６号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１４５３４６号、米国特許出願公開第２０１３／０１９５８６７号、欧州特許出願公開第３０３５９５５号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２２７号、国際公開第２０１５／０２４６６６号、欧州特許出願公開第３０３６３３０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１０号、国際公開第２０１５／０２４６６７号、米国特許出願公開第２０１６／０１５１４７４号、米国特許出願公開第２０１３／０２９５０４３号、欧州特許出願公開第２６８０８８１号、国際公開第２０１２／１１６８１１号、国際公開第２０１２／１１６７１４号、米国特許出願公開第２０１５／０３２０８４７号、欧州特許出願公開第２８１４９６１号、国際公開第２０１３／１２０６２７号、国際公開第２０１３／１２０５００号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４９８号、欧州特許出願公開第２５１０１００号、国際公開第２０１１／０６９５８６号、国際公開第２０１１／０６９５２９号、米国特許出願公開第２０１５／００５７３４０号、欧州特許出願公開第２８１４９６３号、国際公開第２０１３／１２０６２９号、国際公開第２０１３／１２０４９７号、欧州特許出願公開第２６８０８８０号、米国特許出願公開第２０１３／０３３６９９８号、国際公開第２０１２／１１６７１５号、国際公開第２０１２／１１６８１０号、欧州特許出願公開第２７６２１６５号、米国特許出願公開第２０１１／０２５０２２５号、欧州特許出願公開第２３３１１２９号、欧州特許出願公開第２３３１１２９号、国際公開第２０１０／０３７５３９号、米国特許出願公開第２０１１／００５３８２９号、国際公開第２０１６／１０７８７７号、国際公開第２０１６／０９１３９１号、国際公開第２０１５／１３５５５８号、国際公開第２０１５／１０１４１４号、国際公開第２０１５／１０１４１５号、国際公開第２０１１／０６９５８７号または国際公開第２０１１／０６９５２８号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または抗体、抗原または他の治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、癌（例えば、前立腺癌または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、心血管疾患、自己免疫疾患もしくは遺伝病の処置、予防もしくは改善において、または遺伝子療法において、またはアジュバントもしくは免疫刺激剤として有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルスＲＮＡまたはタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，３５２，０２８号、米国特許出願公開第２０１３／０２０２６４５号、欧州特許出願公開第２１９７４８１号、国際公開第２００９／０４６９７４号、国際公開第２００９／０４６７３８号、欧州特許出願公開第３０３５９５５号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２２７号または国際公開第２０１５／０２４６６６号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または抗体、抗原または他の治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、感染性疾患（例えば、ＲＳＶまたは狂犬病）もしくは癌（例えば、前立腺癌または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、心血管疾患、自己免疫疾患もしくは遺伝病の処置、予防もしくは改善において、または遺伝子療法において、またはアジュバントもしくは免疫刺激剤として有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルスＲＮＡまたはタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許第９，４４７，４３１号、米国特許第９，４２１，２５５号、米国特許出願公開第２０１３／０２５９８７９号、欧州特許出願公開第２６７８０３８号、国際公開第２０１２／１１３５１３号、国際公開第２０１２／１１３４１３号、米国特許第９，４３９，９５６号、米国特許第９，４３３，６７０号、米国特許第９，４３３，６６９号、米国特許第９，１５５，７８８号、米国特許第８，２１７，０１６号、米国特許出願公開第２０１６／００９５９１１号、米国特許出願公開第２０１６／００８９４２６号、米国特許出願公開第２０１６／００９５９１２号、米国特許出願公開第２０１６／００８９４２５号、米国特許出願公開第２０１６／００８９４２４号、米国特許出願公開第２０１６／００８２０９２号、米国特許出願公開第２０１５／００３０６３３号、米国特許出願公開第２０１１／０３１１４７２号、欧州特許出願公開第１４５８４１０号、欧州特許出願公開第２７６９７３３号、欧州特許出願公開第１９２５３１７号、欧州特許出願公開第１９０５８４４号、欧州特許出願公開第１４５８４１０号、国際公開第２００３／０５１４０１号、米国特許出願公開第２０１６／０２０６７５６号、米国特許第９，２３４，０１３号、欧州特許出願公開第２６０３５９０号、欧州特許出願公開第２７９６５５７号、欧州特許出願公開第２６０３５９０号、国際公開第２０１２／０１９７８０号、国際公開第２０１２／０１９６３０号、米国特許出願公開第２０１６／０２５０３２１号、米国特許第９，２２６，９５９号、米国特許出願公開第２０１２／００２１０４３号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２５４８９６０号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、国際公開第２００９／０９５２２６号、欧州特許出願公開第２９５５２３０号、米国特許第８，９６８，７４６号、米国特許出願公開第２０１５／０２５８２１４号、米国特許出願公開第２０１３／０１４２８１８号、欧州特許出願公開第２４４９１１３号、欧州特許出願公開第２４４９１１３号、欧州特許出願公開第２４４９１１３号、国際公開第２０１２／０１３３２６号、欧州特許出願公開第３０６２７９８号、米国特許出願公開第２０１６／０２３５８６４号、国際公開第２０１５／０６２７３８号、米国特許出願公開第２０１６／０２０６７１９号、米国特許出願公開第２０１６／０１３０３４５号、欧州特許出願公開第２９５８５８８号、国際公開第２０１４／１２７９１７号、米国特許出願公開第２０１６／０１８５８４０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９２号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６９０号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２７０６号、米国特許出願公開第２０１６／０１５２６９１号、米国特許出願公開第２０１６／０１４５３４６号、米国特許出願公開第２０１３／０１９５８６７号、欧州特許出願公開第２１０１８２３号、国際公開第２００８／０８３９４９号、米国特許出願公開第２０１６／０１８４４０６号、米国特許出願公開第２０１４／００３７６６０号、米国特許出願公開第２０１０／０２０３０７６号、欧州特許出願公開第２４８４７７０号、欧州特許出願公開第２１８８３７９号、欧州特許出願公開第２４８４７７０号、欧州特許出願公開第２１８８３７９号、国際公開第２００９／０３０４８１号、国際公開第２００９／０３０２５４号、欧州特許出願公開第３０３５９５５号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２２７号、国際公開第２０１５／０２４６６６号、欧州特許出願公開第３０３５９６０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６８２０７号、国際公開第２０１５／０２４６６８号、欧州特許出願公開第３０３６３３０号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１０号、国際公開第２０１５／０２４６６７号、欧州特許出願公開第３０３５９５４号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６６８号、国際公開第２０１５／０２４６６４号、欧州特許出願公開第３０３５９６１号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６７１１号、国際公開第２０１５／０２４６６５号、欧州特許出願公開第３０３５９５９号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６７８号、国際公開第２０１５／０２４６６９号、米国特許出願公開第２０１６／０１５１４７４号、米国特許出願公開第２０１３／０２９５０４３号、欧州特許出願公開第２６８０８８１号、国際公開第２０１２／１１６８１１号、国際公開第２０１２／１１６７１４号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６３０１号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６２６３号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６２５９号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６２５８号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６２４７号、米国特許出願公開第２０１６／０１３６２４３号、米国特許出願公開第２０１６／０１２９１０５号、米国特許出願公開第２０１５／０１０４４７６号、米国特許出願公開第２０１１／０２６９９５０号、米国特許出願公開第２０１１／００７７２８７号、米国特許出願公開第２０１０／０２３９６０８号、欧州特許出願公開第２３０５６９９号、欧州特許出願公開第１８５７１２２号、欧州特許出願公開第１８００６９７号、欧州特許出願公開第１８３２６０３号、欧州特許出願公開第１６０４６８８号、欧州特許出願公開第１３９２３４１号、欧州特許出願公開第２８４２９６４号、欧州特許出願公開第２３０５６９９号、欧州特許出願公開第１９０３０５４号、欧州特許出願公開第１８５７１２２号、欧州特許出願公開第１８３２６０３号、欧州特許出願公開第１８００６９７号、欧州特許出願公開第１６０４６８８号、
欧州特許出願公開第１３９２３４１号、米国特許出願公開第２０１５／０２１８５５４号、欧州特許出願公開第２８３１２４１号、国際公開第２０１３／１４３６９９号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８２６４号、欧州特許出願公開第２８０９３５３号、国際公開第２０１３／１１３５０１号、国際公開第２０１３／１１３３２６号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８１８３号、欧州特許出願公開第２８０９３５４号、国際公開第２０１３／１１３５０２号、国際公開第２０１３／１１３３２５号、米国特許出願公開第２０１５／０１４１４９８号、欧州特許出願公開第２５１０１００号、国際公開第２０１１／０６９５８６号、国際公開第２０１１／０６９５２９号、米国特許出願公開第２０１５／００５７３４０号、欧州特許出願公開第２８１４９６３号、国際公開第２０１３／１２０６２９号、国際公開第２０１３／１２０４９７号、米国特許出願公開第２０１５／００９３４１３号、欧州特許出願公開第２８１４９６２号、国際公開第２０１３／１２０６２８号、国際公開第２０１３／１２０４９９号、米国特許出願公開第２０１５／００５０３０２号、欧州特許出願公開第２８３１２４０号、国際公開第２０１３／１４３７００号、欧州特許出願公開第２６８０８８０号、米国特許出願公開第２０１３／０３３６９９８号、国際公開第２０１２／１１６７１５号、国際公開第２０１２／１１６８１０号、欧州特許出願公開第２２１６０２７号、米国特許出願公開第２０１３／０２７３００１号、米国特許出願公開第２０１０／０３０３８５１号、欧州特許出願公開第１６８５８４４号、欧州特許出願公開第１６８５８４４号、欧州特許出願公開第１５２１５８５号、欧州特許出願公開第２２１６０２８号、欧州特許出願公開第２２１６０２７号（Ｐ２２１６０２７）、欧州特許出願公開第１８０６１３９号、欧州特許出願公開第１７９７８８６号、欧州特許出願公開第１６８５８４４号、欧州特許出願公開第１６８５８４４号、欧州特許出願公開第１５２１５８５号、国際公開第２００４／００４７４３号、欧州特許出願公開第２６５０３６８号、米国特許出願公開第２０１３／０１２１９８８号、米国特許出願公開第２００９／０３２４５８４号、欧州特許出願公開第２０４６９５４号、国際公開第２００８／０１４９７９号、米国特許出願公開第２０１２／０２１３８１８号、欧州特許出願公開第１９２８４９４号、国際公開第２００６／０２４５１８号、米国特許出願公開第２０１２／０００９２２１号、欧州特許出願公開第１６１５６６２号、欧州特許出願公開第２２２３７００号、欧州特許出願公開第２２２９９５３号、欧州特許出願公開第１９３８８３３号、欧州特許出願公開第１６１５６６２号、国際公開第２００５／０１６３７６号、欧州特許出願公開第２７６２１６５号、米国特許出願公開第２０１１／０２５０２２５号、欧州特許出願公開第２３３１１２９号、欧州特許出願公開第２３３１１２９号、国際公開第２０１０／０３７５３９号、国際公開第２０１０／０３７４０８号、米国特許出願公開第２０１１／００５３８２９号、米国特許出願公開第２０１０／００４７２６１号、欧州特許出願公開第２０８３８５１号、国際公開第２００８／０５２７７０号、欧州特許出願公開第１８８１８４７号、米国特許出願公開第２００８／０２６７８７３号、欧州特許出願公開第１８８１８４７号、国際公開第２００６／１２２８２８号、米国特許出願公開第２００８／０１７１７１１号、欧州特許出願公開第１７６８７０３号、国際公開第２００６／００８１５４号、米国特許出願公開第２００７／０２８０９２９号、国際公開第２００７／０９５９７６号、欧州特許出願公開第１６１９２５４号、欧州特許出願公開第１０８３２３２号、欧州特許出願公開第１８１８４０９号、欧州特許出願公開第１６１９２５４号、欧州特許出願公開第１５４１６９０号、欧州特許出願公開第１５４１６９０号、欧州特許出願公開第１０８３２３２号、国際公開第２０１６／１０７８７７号、国際公開第２０１６／０９７０６５号、国際公開第２０１６／０９１３９１号、国際公開第２０１５／１８８９３３号、国際公開第２０１５／１４９９４４号、国際公開第２０１５／１３５５５８号、国際公開第２０１５／１０１４１４号、国際公開第２０１５／１０１４１５号、国際公開第２０１１／０６９５８７号、国際公開第２０１１／０６９５２８号、国際公開第２０１０／０８８９２７号または国際公開第２００９／１２７２３０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または抗体、抗原または他の治療剤から選択される。
いくつかの実施形態では、生物製剤は、感染性疾患（例えば、ＲＳＶまたは狂犬病）もしくは癌（例えば、前立腺癌または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、心血管疾患、感染性疾患、自己免疫疾患もしくは遺伝病の処置、予防もしくは改善において、または遺伝子療法において、またはアジュバントもしくは免疫刺激剤として有用である。いくつかの実施形態では、生物製剤は、ウイルスＲＮＡまたはタンパク質の発現をモジュレートする。いくつかの実施形態では、生物製剤は、米国特許出願公開第２０１６／０１５２６９１号、米国特許出願公開第２０１３／０１９５８６７号、欧州特許出願公開第２１０１８２３号、国際公開第２００８／０８３９４９号、欧州特許出願公開第３０３５９５９号、米国特許出願公開第２０１６／０１６６６７８号、国際公開第２０１５／０２４６６９号、米国特許出願公開第２０１６／０１２９１０５号、米国特許出願公開第２０１０／０２３９６０８号、欧州特許出願公開第１８５７１２２号、欧州特許出願公開第１３９２３４１号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８２６４号、欧州特許出願公開第２８０９３５３号、国際公開第２０１３／１１３５０１号、国際公開第２０１３／１１３３２６号、米国特許出願公開第２０１５／０１１８１８３号、欧州特許出願公開第２８０９３５４号、国際公開第２０１３／１１３５０２号、国際公開第２０１３／１１３３２５号、米国特許出願公開第２０１５／００９３４１３号、欧州特許出願公開第２８１４９６２号、国際公開第２０１３／１２０６２８号、国際公開第２０１３／１２０４９９号、米国特許出願公開第２０１２／０２１３８１８号、欧州特許出願公開第１９２８４９４号、国際公開第２００６／０２４５１８号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、米国特許出願公開第２０１２／００２１０４３号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、欧州特許出願公開第２５４８９６０号、欧州特許出願公開第２１７６４０８号、国際公開第２００９／０９５２２６号、米国特許出願公開第２０１０／００４７２６１号、欧州特許出願公開第２０８３８５１号、国際公開第２００８／０５２７７０号、欧州特許出願公開第２６５０３６８号、米国特許出願公開第２００９／０３２４５８４号、欧州特許出願公開第２０４６９５４号、国際公開第２００８／０１４９７９号、米国特許出願公開第２００７／０２８０９２９号、国際公開第２００７／０９５９７６号、欧州特許出願公開第１７６８７０３号、国際公開第２００６／００８１５４号、国際公開第２０１５／１４９９４４号または国際公開第２００９／１２７２３０号（これらのそれぞれの開示は、参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｉＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドまたはその類似体または抗体、抗原または他の治療剤から選択される。
併用療法
提供される治療薬を負荷したエクソソームまたはその薬学的に許容され得る組成物は、それを必要とする患者に、１つまたはそれを超えるさらなる治療剤および／または治療プロセスと組み合わせて投与され得る。
本発明の治療薬を負荷したエクソソームは単独で、または１つまたはそれを超える他の治療化合物（可能な併用療法は一定の組み合わせの形態をとるか、または本発明の治療薬を負荷したエクソソームおよび１つまたはそれを超える他の治療化合物の投与は互いに独立して配置されもしくは与えられる）、もしくは一定の組み合わせおよび１つまたはそれを超える他の治療化合物の併用投与と組み合わせて投与され得る。さらにまたは加えて、本発明の治療薬を負荷したエクソソームは、特に、化学療法、放射線療法、免疫療法、光線療法、外科的介入またはこれらの組み合わせと組み合わせて腫瘍療法のために投与され得る。上記のように、長期療法は、他の処置戦略の文脈におけるアジュバント療法と同様に等しく可能である。他の可能な処置は、腫瘍退縮後の患者の状態を維持するための治療、またはさらに例えばリスクがある患者における化学予防的治療である。
このようなさらなる薬剤は、複数回投与レジメンの一部として、提供される治療薬を負荷したエクソソーム含有組成物とは別個に投与され得る。あるいは、これらの薬剤は、単一組成物中の本発明の治療薬を負荷したエクソソームと混合された単一剤形の一部であり得る。複数回投与レジメンの一部として投与される場合、２つの活性剤は、同時に、逐次にまたは互いに一定期間内に投与され得る。
本明細書で使用される場合、「組み合わせ」、「組み合わせられた」という用語および関連用語は、本発明による治療剤の同時投与または逐次投与を指す。例えば、本発明の治療薬を負荷したエクソソームは、別個の単位剤形で別の治療剤と同時にもしくは逐次に、または単一単位剤形で一緒に投与され得る。したがって、本発明は、本発明の治療薬を負荷したエクソソームと、さらなる治療剤と、薬学的に許容され得る担体、アジュバントまたはビヒクルとを含む単一単位剤形を提供する。いくつかの実施形態では、さらなる薬剤は、第１の治療剤と同じエクソソームに封入される。いくつかの実施形態では、さらなる薬剤は、第１の治療剤とは異なるエクソソームに封入される。いくつかの実施形態では、さらなる薬剤は、エクソソームに封入されない。いくつかの実施形態では、さらなる薬剤は、治療薬を負荷したエクソソームとは別個の組成物に製剤化される。
単一剤形を生産するために担体材料と組み合わされ得る（上記さらなる治療剤を含む組成物中の）開示される治療薬を負荷したエクソソームおよびさらなる治療剤の両方の量は、処置される患者および特定の投与様式に応じて変動するであろう。特定の実施形態では、本発明の組成物は、０．０１〜１００ｍｇ／体重ｋｇ／日の投与量の開示される治療薬を負荷したエクソソームが投与され得るように製剤化されるべきである。
さらなる治療剤を含む組成物では、そのさらなる治療剤および本発明の治療薬を負荷したエクソソームは相乗的に作用し得る。したがって、このような組成物中のさらなる治療剤の量は、その治療剤のみを利用する単独療法で必要とされるものよりも少ないであろう。このような組成物では、０．０１〜１，０００μｇ／体重ｋｇ／日の投与量のさらなる治療剤が投与され得る。
本発明の組成物中に存在するさらなる治療剤の量は、唯一の活性剤としてその治療剤を含む組成物で通常投与される量を超えない。好ましくは、本開示の組成物中のさらなる治療剤の量は、その治療剤を唯一の治療活性剤として含む組成物中に通常存在する量の約５０％〜１００％の範囲であろう。
本発明の治療薬を負荷したエクソソームと組み合わされ得る薬剤の例としては、限定されないが、アルツハイマー病の処置、例えばＡｒｉｃｅｐｔ（登録商標）およびＥｘｃｅｌｏｎ（登録商標）；ＨＩＶの処置、例えばリトナビル；パーキンソン病の処置、例えばＬ−ドーパ／カルビドパ、エンタカポン、ロピンロール、プラミペキソール、ブロモクリプチン、ペルゴリド、トリヘキサフェンジルおよびアマンタジン；多発性硬化症（ＭＳ）を処置するための薬剤、例えばベータインターフェロン（例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）およびＲｅｂｉｆ（登録商標））、Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標）およびミトキサントロン；喘息の処置、例えばアルブテロールおよびＳｉｎｇｕｌａｉｒ（登録商標）；統合失調症を処置するための薬剤、例えばジプレキサ、リスパダール、セロクエルおよびハロペリドール；抗炎症剤、例えばコルチコステロイド、ＴＮＦブロッカー、ＩＬ−１ ＲＡ、アザチオプリン、シクロホスファミドおよびスルファサラジン；免疫モジュレーターおよび免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、インターフェロン、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリンおよびスルファサラジン；神経栄養因子、例えばアセチルコリンエステラーゼ阻害剤、ＭＡＯ阻害剤、インターフェロン、抗痙攣薬、イオンチャンネルブロッカー、リルゾールおよび抗パーキンソン病剤；心血管疾患を処置するための薬剤、例えばベータブロッカー、ＡＣＥ阻害剤、利尿薬、硝酸塩、カルシウムチャネルブロッカーおよびスタチン；肝疾患を処置するための薬剤、例えばコルチコステロイド、コレスチラミン、インターフェロンおよび抗ウイルス剤；血液障害を処置するための薬剤、例えばコルチコステロイド、抗白血病剤および成長因子；薬物動態を延長または改善する薬剤、例えばシトクロムＰ４５０阻害剤（すなわち、代謝破壊の阻害剤）およびＣＹＰ３Ａ４阻害剤（例えば、ケトケノゾールおよびリトナビル）、ならびに免疫不全障害を処置するための薬剤、例えばガンマグロブリンが挙げられる。
特定の実施形態では、本発明の併用療法またはその薬学的に許容され得る組成物は、モノクローナル抗体またはｓｉＲＮＡ治療薬（これは、開示されるエクソソームに封入され得るしまたは封入されていなくてもよい）を含む。
別の実施形態では、本発明は、治療薬を負荷したエクソソームおよび１つまたはそれを超えるさらなる治療剤をそれを必要とする患者に投与することによって、炎症性疾患、障害または状態を処置する方法を提供する。このようなさらなる治療剤は、低分子または生物製剤であり得、例えば、アセトアミノフェン、非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤｓ）、例えばアスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（登録商標））およびセレコキシブ、コルヒチン（Ｃｏｌｃｒｙｓ（登録商標））、コルチコステロイド、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾンなど、プロベネシド、アロプリノール、フェブキソスタット（Ｕｌｏｒｉｃ（登録商標））、スルファサラジン（Ａｚｕｌｆｉｄｉｎｅ（登録商標））、抗マラリア薬、例えばヒドロキシクロロキン（Ｐｌａｑｕｅｎｉｌ（登録商標））およびクロロキン（Ａｒａｌｅｎ（登録商標））、メトトレキサート（Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標））、金塩、例えば金チオグルコース（Ｓｏｌｇａｎａｌ（登録商標））、金チオマレート（Ｍｙｏｃｈｒｙｓｉｎｅ（登録商標））およオーラノフィン（Ｒｉｄａｕｒａ（登録商標））、Ｄ−ペニシラミン（Ｄｅｐｅｎ（登録商標）またはＣｕｐｒｉｍｉｎｅ（登録商標））、アザチオプリン（Ｉｍｕｒａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、レフルノミド（Ａｒａｖａ（登録商標））および「抗ＴＮＦ」剤、例えばエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ（登録商標））、セルトリズマブペゴル（Ｃｉｍｚｉａ（登録商標））およびアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、「抗ＩＬ−１」剤、例えばアナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標））およびリロナセプト（Ａｒｃａｌｙｓｔ（登録商標））、カナキヌマブ（Ｉｌａｒｉｓ（登録商標））、抗Ｊａｋ阻害剤、例えばトファシチニブ、抗体、例えばリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、「抗Ｔ細胞」剤、例えばアバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標））、「抗ＩＬ−６」剤、例えばトシリズマブ（Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標））、ジクロフェナク、コルチゾン、ヒアルロン酸（Ｓｙｎｖｉｓｃ（登録商標）またはＨｙａｌｇａｎ（登録商標））、モノクローナル抗体、例えばタネズマブ、抗凝固薬、例えばヘパリン（Ｃａｌｃｉｎｐａｒｉｎｅ（登録商標）またはＬｉｑｕａｅｍｉｎ（登録商標））およびワルファリン（Ｃｏｕｍａｄｉｎ（登録商標））、止痢薬、例えばジフェノキシレート（Ｌｏｍｏｔｉｌ（登録商標））およびロペラミド（Ｉｍｏｄｉｕｍ（登録商標））、胆汁酸結合剤、例えばコレスチラミン、アロセトロン（Ｌｏｔｒｏｎｅｘ（登録商標））、ルビプロストン（Ａｍｉｔｉｚａ（登録商標））、下剤、例えばマグネシア乳、ポリエチレングリコール（ＭｉｒａＬａｘ（登録商標））、Ｄｕｌｃｏｌａｘ（登録商標）、Ｃｏｒｒｅｃｔｏｌ（登録商標）およびＳｅｎｏｋｏｔ（登録商標）、抗コリン作用薬または鎮痙薬、例えばジシクロミン（Ｂｅｎｔｙｌ（登録商標））、Ｓｉｎｇｕｌａｉｒ（登録商標）、ベータ−２アゴニスト、例えばアルブテロール（Ｖｅｎｔｏｌｉｎ（登録商標）ＨＦＡ、Ｐｒｏｖｅｎｔｉｌ（登録商標）ＨＦＡ）、レバルブテロール（Ｘｏｐｅｎｅｘ（登録商標））、メタプロテレノール（Ａｌｕｐｅｎｔ（登録商標））、酢酸ピルブテロール（Ｍａｘａｉｒ（登録商標））、硫酸テルブタリン（Ｂｒｅｔｈａｉｒｅ（登録商標））、キシナホ酸サルメテロール（Ｓｅｒｅｖｅｎｔ（登録商標））およびホルモテロール（Ｆｏｒａｄｉｌ（登録商標））、
抗コリン剤、例えば臭化イプラトロピウム（Ａｔｒｏｖｅｎｔ（登録商標））およびチオトロピウム（Ｓｐｉｒｉｖａ（登録商標））、吸入コルチコステロイド、例えばジプロピオン酸ベクロメタゾン（Ｂｅｃｌｏｖｅｎｔ（登録商標）、Ｑｖａｒ（登録商標）およびＶａｎｃｅｒｉｌ（登録商標））、トリアムシノロンアセトニド（Ａｚｍａｃｏｒｔ（登録商標））、モメタゾン（Ａｓｔｈｍａｎｅｘ（登録商標））、ブデソニド（Ｐｕｌｍｏｃｏｒｔ（登録商標））およびフルニソリド（Ａｅｒｏｂｉｄ（登録商標））、Ａｆｖｉａｒ（登録商標）、Ｓｙｍｂｉｃｏｒｔ（登録商標）、Ｄｕｌｅｒａ（登録商標）、クロモリンナトリウム（Ｉｎｔａｌ（登録商標））、メチルキサンチン、例えばテオフィリン（Ｔｈｅｏ−Ｄｕｒ（登録商標）、Ｔｈｅｏｌａｉｒ（登録商標）、Ｓｌｏ−ｂｉｄ（登録商標）、Ｕｎｉｐｈｙｌ（登録商標）、Ｔｈｅｏ−２４（登録商標））およびアミノフィリン、ＩｇＥ抗体、例えばオマリズマブ（Ｘｏｌａｉｒ（登録商標））、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、例えばジドブジン（Ｒｅｔｒｏｖｉｒ（登録商標））、アバカビル（Ｚｉａｇｅｎ（登録商標））、アバカビル／ラミブジン（Ｅｐｚｉｃｏｍ（登録商標））、アバカビル／ラミブジン／ジドブジン（Ｔｒｉｚｉｖｉｒ（登録商標））、ジダノシン（Ｖｉｄｅｘ（登録商標））、エムトリシタビン（Ｅｍｔｒｉｖａ（登録商標））、ラミブジン（Ｅｐｉｖｉｒ（登録商標））、ラミブジン／ジドブジン（Ｃｏｍｂｉｖｉｒ（登録商標））、スタブジン（Ｚｅｒｉｔ（登録商標））およびザルシタビン（Ｈｉｖｉｄ（登録商標））、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、例えばデラビルジン（Ｒｅｓｃｒｉｐｔｏｒ（登録商標））、エファビレンツ（Ｓｕｓｔｉｖａ（登録商標））、ネバイラピン（Ｖｉｒａｍｕｎｅ（登録商標））およびエトラビリン（Ｉｎｔｅｌｅｎｃｅ（登録商標））、ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、例えばテノホビル（Ｖｉｒｅａｄ（登録商標））、プロテアーゼ阻害剤、例えばアンプレナビル（Ａｇｅｎｅｒａｓｅ（登録商標））、アタザナビル（Ｒｅｙａｔａｚ（登録商標））、ダルナビル（Ｐｒｅｚｉｓｔａ（登録商標））、フォサンプレナビル（Ｌｅｘｉｖａ（登録商標））、インジナビル（Ｃｒｉｘｉｖａｎ（登録商標））、ロピナビルおよびリトナビル（Ｋａｌｅｔｒａ（登録商標））、ネルフィナビル（Ｖｉｒａｃｅｐｔ（登録商標））、リトナビル（Ｎｏｒｖｉｒ（登録商標））、サキナビル（Ｆｏｒｔｏｖａｓｅ（登録商標）またはＩｎｖｉｒａｓｅ（登録商標））およびチプラナビル（Ａｐｔｉｖｕｓ（登録商標））、侵入阻害剤、例えばエンフビルチド（Ｆｕｚｅｏｎ（登録商標））およびマラビロック（Ｓｅｌｚｅｎｔｒｙ（登録商標））、インテグラーゼ阻害剤、例えばラルテグラビル（Ｉｓｅｎｔｒｅｓｓ（登録商標））、ドキソルビシン（Ｈｙｄｒｏｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、およびデキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））とレナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））との組み合わせ、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
別の実施形態では、本発明は、痛風を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、例えばアスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（登録商標））およびセレコキシブ、コルヒチン（Ｃｏｌｃｒｙｓ（登録商標））、コルチコステロイド、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾンなど、プロベネシド、アロプリノールおよびフェブキソスタット（Ｕｌｏｒｉｃ（登録商標））から選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、関節リウマチを処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、例えばアスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（登録商標））およびセレコキシブ、コルチコステロイド、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾンなど、スルファサラジン（Ａｚｕｌｆｉｄｉｎｅ（登録商標））、抗マラリア薬、例えばヒドロキシクロロキン（Ｐｌａｑｕｅｎｉｌ（登録商標））およびクロロキン（Ａｒａｌｅｎ（登録商標））、メトトレキサート（Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標））、金塩、例えば金チオグルコース（Ｓｏｌｇａｎａｌ（登録商標））、金チオマレート（Ｍｙｏｃｈｒｙｓｉｎｅ（登録商標））およオーラノフィン（Ｒｉｄａｕｒａ（登録商標））、Ｄ−ペニシラミン（Ｄｅｐｅｎ（登録商標）またはＣｕｐｒｉｍｉｎｅ（登録商標））、アザチオプリン（Ｉｍｕｒａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、レフルノミド（Ａｒａｖａ（登録商標））および「抗ＴＮＦ」剤、例えばエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ（登録商標））、セルトリズマブペゴル（Ｃｉｍｚｉａ（登録商標））およびアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、「抗ＩＬ−１」剤、例えばアナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標））およびリロナセプト（Ａｒｃａｌｙｓｔ（登録商標））、抗体、例えばリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、「抗Ｔ細胞」剤、例えばアバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標））および「抗ＩＬ−６」剤、例えばトシリズマブ（Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標））から選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、変形性関節症を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、アセトアミノフェン、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、例えばアスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（登録商標））およびセレコキシブ、ジクロフェナク、コルチゾン、ヒアルロン酸（Ｓｙｎｖｉｓｃ（登録商標）またはＨｙａｌｇａｎ（登録商標））およびモノクローナル抗体、例えばタネズマブから選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ループスを処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、アセトアミノフェン、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、例えばアスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（登録商標））およびセレコキシブ、コルチコステロイド、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾンなど、抗マラリア薬、例えばヒドロキシクロロキン（Ｐｌａｑｕｅｎｉｌ（登録商標））およびクロロキン（Ａｒａｌｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、メトトレキサート（Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標））、アザチオプリン（Ｉｍｕｒａｎ（登録商標））および抗凝固薬、例えばヘパリン（Ｃａｌｃｉｎｐａｒｉｎｅ（登録商標）またはＬｉｑｕａｅｍｉｎ（登録商標））およびワルファリン（Ｃｏｕｍａｄｉｎ（登録商標））から選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、炎症性腸疾患を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、メサラミン（Ａｓａｃｏｌ（登録商標））、スルファサラジン（Ａｚｕｌｆｉｄｉｎｅ（登録商標））、止痢薬、例えばジフェノキシレート（Ｌｏｍｏｔｉｌ（登録商標））およびロペラミド（Ｉｍｏｄｉｕｍ（登録商標））、胆汁酸結合剤、例えばコレスチラミン、アロセトロン（Ｌｏｔｒｏｎｅｘ（登録商標））、ルビプロストン（Ａｍｉｔｉｚａ（登録商標））、下剤、例えばマグネシア乳、ポリエチレングリコール（ＭｉｒａＬａｘ（登録商標））、Ｄｕｌｃｏｌａｘ（登録商標）、Ｃｏｒｒｅｃｔｏｌ（登録商標）およびＳｅｎｏｋｏｔ（登録商標）および抗コリン作用薬または鎮痙薬、例えばジシクロミン（Ｂｅｎｔｙｌ（登録商標））、抗ＴＮＦ療法、ステロイドおよび抗生物質、例えばＦｌａｇｙｌまたはシプロフロキサシンから選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、喘息を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、Ｓｉｎｇｕｌａｉｒ（登録商標）、ベータ−２アゴニスト、例えばアルブテロール（Ｖｅｎｔｏｌｉｎ（登録商標）ＨＦＡ、Ｐｒｏｖｅｎｔｉｌ（登録商標）ＨＦＡ）、レバルブテロール（Ｘｏｐｅｎｅｘ（登録商標））、メタプロテレノール（Ａｌｕｐｅｎｔ（登録商標））、酢酸ピルブテロール（Ｍａｘａｉｒ（登録商標））、硫酸テルブタリン（Ｂｒｅｔｈａｉｒｅ（登録商標））、キシナホ酸サルメテロール（Ｓｅｒｅｖｅｎｔ（登録商標））およびホルモテロール（Ｆｏｒａｄｉｌ（登録商標））、抗コリン剤、例えば臭化イプラトロピウム（Ａｔｒｏｖｅｎｔ（登録商標））およびチオトロピウム（Ｓｐｉｒｉｖａ（登録商標））、吸入コルチコステロイド、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン（Ｂｅｃｌｏｖｅｎｔ（登録商標）、Ｑｖａｒ（登録商標）およびＶａｎｃｅｒｉｌ（登録商標））、トリアムシノロンアセトニド（Ａｚｍａｃｏｒｔ（登録商標））、モメタゾン（Ａｓｔｈｍａｎｅｘ（登録商標））、ブデソニド（Ｐｕｌｍｏｃｏｒｔ（登録商標））、フルニソリド（Ａｅｒｏｂｉｄ（登録商標））、Ａｆｖｉａｒ（登録商標）、Ｓｙｍｂｉｃｏｒｔ（登録商標）およびＤｕｌｅｒａ（登録商標）、クロモリンナトリウム（Ｉｎｔａｌ（登録商標））、メチルキサンチン、例えばテオフィリン（Ｔｈｅｏ−Ｄｕｒ（登録商標）、Ｔｈｅｏｌａｉｒ（登録商標）、Ｓｌｏ−ｂｉｄ（登録商標）、Ｕｎｉｐｈｙｌ（登録商標）、Ｔｈｅｏ−２４（登録商標））およびアミノフィリンおよびＩｇＥ抗体、例えばオマリズマブ（Ｘｏｌａｉｒ（登録商標））から選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＯＰＤを処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、ベータ−２アゴニスト、例えばアルブテロール（Ｖｅｎｔｏｌｉｎ（登録商標）ＨＦＡ、Ｐｒｏｖｅｎｔｉｌ（登録商標）ＨＦＡ）、レバルブテロール（Ｘｏｐｅｎｅｘ（登録商標））、メタプロテレノール（Ａｌｕｐｅｎｔ（登録商標））、酢酸ピルブテロール（Ｍａｘａｉｒ（登録商標））、硫酸テルブタリン（Ｂｒｅｔｈａｉｒｅ（登録商標））、キシナホ酸サルメテロール（Ｓｅｒｅｖｅｎｔ（登録商標））およびホルモテロール（Ｆｏｒａｄｉｌ（登録商標））、抗コリン剤、例えば臭化イプラトロピウム（Ａｔｒｏｖｅｎｔ（登録商標））およびチオトロピウム（Ｓｐｉｒｉｖａ（登録商標））、メチルキサンチン、例えばテオフィリン（Ｔｈｅｏ−Ｄｕｒ（登録商標）、Ｔｈｅｏｌａｉｒ（登録商標）、Ｓｌｏ−ｂｉｄ（登録商標）、Ｕｎｉｐｈｙｌ（登録商標）、Ｔｈｅｏ−２４（登録商標））およびアミノフィリン、吸入コルチコステロイド、例えばプレドニゾン、プレドニゾロン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン（Ｂｅｃｌｏｖｅｎｔ（登録商標）、Ｑｖａｒ（登録商標）およびＶａｎｃｅｒｉｌ（登録商標））、トリアムシノロンアセトニド（Ａｚｍａｃｏｒｔ（登録商標））、モメタゾン（Ａｓｔｈｍａｎｅｘ（登録商標））、ブデソニド（Ｐｕｌｍｏｃｏｒｔ（登録商標））、フルニソリド（Ａｅｒｏｂｉｄ（登録商標））、Ａｆｖｉａｒ（登録商標）、Ｓｙｍｂｉｃｏｒｔ（登録商標）およびＤｕｌｅｒａ（登録商標）およびそれらの組み合わせから選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、ＨＩＶを処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、例えばジドブジン（Ｒｅｔｒｏｖｉｒ（登録商標））、アバカビル（Ｚｉａｇｅｎ（登録商標））、アバカビル／ラミブジン（Ｅｐｚｉｃｏｍ（登録商標））、アバカビル／ラミブジン／ジドブジン（Ｔｒｉｚｉｖｉｒ（登録商標））、ジダノシン（Ｖｉｄｅｘ（登録商標））、エムトリシタビン（Ｅｍｔｒｉｖａ（登録商標））、ラミブジン（Ｅｐｉｖｉｒ（登録商標））、ラミブジン／ジドブジン（Ｃｏｍｂｉｖｉｒ（登録商標））、スタブジン（Ｚｅｒｉｔ（登録商標））およびザルシタビン（Ｈｉｖｉｄ（登録商標））、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、例えばデラビルジン（Ｒｅｓｃｒｉｐｔｏｒ（登録商標））、エファビレンツ（Ｓｕｓｔｉｖａ（登録商標））、ネバイラピン（Ｖｉｒａｍｕｎｅ（登録商標））およびエトラビリン（Ｉｎｔｅｌｅｎｃｅ（登録商標））、ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、例えばテノホビル（Ｖｉｒｅａｄ（登録商標））、プロテアーゼ阻害剤、例えばアンプレナビル（Ａｇｅｎｅｒａｓｅ（登録商標））、アタザナビル（Ｒｅｙａｔａｚ（登録商標））、ダルナビル（Ｐｒｅｚｉｓｔａ（登録商標））、フォサンプレナビル（Ｌｅｘｉｖａ（登録商標））、インジナビル（Ｃｒｉｘｉｖａｎ（登録商標））、ロピナビルおよびリトナビル（Ｋａｌｅｔｒａ（登録商標））、ネルフィナビル（Ｖｉｒａｃｅｐｔ（登録商標））、リトナビル（Ｎｏｒｖｉｒ（登録商標））、サキナビル（Ｆｏｒｔｏｖａｓｅ（登録商標）またはＩｎｖｉｒａｓｅ（登録商標））およびチプラナビル（Ａｐｔｉｖｕｓ（登録商標））、侵入阻害剤、例えばエンフビルチド（Ｆｕｚｅｏｎ（登録商標））およびマラビロック（Ｓｅｌｚｅｎｔｒｙ（登録商標））、インテグラーゼ阻害剤、例えばラルテグラビル（Ｉｓｅｎｔｒｅｓｓ（登録商標））およびそれらの組み合わせから選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、血液悪性腫瘍を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、ドキソルビシン（Ｈｙｄｒｏｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、プレドニゾン、ヘッジホッグシグナル伝達阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ／ｐａｎ−ＪＡＫ阻害剤、ＴＹＫ２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＳＹＫ阻害剤およびそれらの組み合わせから選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、固形腫瘍を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、ドキソルビシン（Ｈｙｄｒｏｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、プレドニゾン、ヘッジホッグシグナル伝達阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ／ｐａｎ−ＪＡＫ阻害剤、ＴＹＫ２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＳＹＫ阻害剤およびそれらの組み合わせから選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、血液悪性腫瘍を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、ヘッジホッグ（Ｈｈ）シグナル伝達経路阻害剤とを投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、血液悪性腫瘍は、ＤＬＢＣＬである。
別の実施形態では、本発明は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））、ドキソルビシン（Ｈｙｄｒｏｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、プレドニゾン、ヘッジホッグシグナル伝達阻害剤およびそれらの組み合わせから選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、多発性骨髄腫を処置する方法であって、それを必要とする患者に、レナリドマイド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））と組み合わせて、治療薬を負荷したエクソソームと、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））およびデキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ヘッジホッグシグナル伝達阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ／ｐａｎ−ＪＡＫ阻害剤、ＴＹＫ２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＳＹＫ阻害剤から選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標））、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ヘッジホッグシグナル伝達阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ／ｐａｎ−ＪＡＫ阻害剤、ＴＹＫ２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤およびＳＹＫ阻害剤から選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、アルツハイマー病を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、ドネペジル（Ａｒｉｃｅｐｔ（登録商標））、リバスチグミン（Ｅｘｃｅｌｏｎ（登録商標））、ガランタミン（Ｒａｚａｄｙｎｅ（登録商標））、タクリン（Ｃｏｇｎｅｘ（登録商標））およびメマンチン（Ｎａｍｅｎｄａ（登録商標））から選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、臓器移植拒絶または移植片対宿主病を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、ステロイド、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ヘッジホッグシグナル伝達阻害剤、Ｂｃｌ−２阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ＪＡＫ／ｐａｎ−ＪＡＫ阻害剤、ＴＹＫ２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤およびＳＹＫ阻害剤から選択される１つまたはそれを超えるさらなる治療剤とを投与することを含む方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、疾患の重症度を処置または軽減する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、ＢＴＫ阻害剤とを投与することを含み、前記疾患が、炎症性腸疾患、関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、血管炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、スティル病、若年性関節炎、糖尿病、重症筋無力症、橋本甲状腺炎、オード甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性甲状腺炎、シェーグレン症候群、多発性硬化症、全身性硬化症、ライム神経ボレリア症、ギラン・バレー症候群、急性播種性脳脊髄炎、アジソン病、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、強直性脊椎症、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性胃炎、悪性貧血、セリアック病、グッドパスチャー症候群、特発性血小板減少性紫斑病、視神経炎、強皮症、原発性胆汁性肝硬変、ライター症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎、温式自己免疫性溶血性貧血、ウェゲナー肉芽腫症、乾癬、全身性脱毛症、ベーチェット病、慢性疲労、自律神経障害、膜性糸球体腎症、子宮内膜症、間質性膀胱炎、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、神経筋緊張症、強皮症、外陰部痛、過剰増殖性疾患、移植臓器または組織の拒絶、後天性免疫不全症候群（ＨＩＶによって引き起こされるＡＩＤＳ）、１型糖尿病、移植片対宿主病、移植、輸血、アナフィラキシー、アレルギー（例えば、植物花粉、ラテックス、薬物、食物、虫毒、動物の毛、動物の鱗屑、イエダニまたはゴキブリの顎部に対するアレルギー）、Ｉ型過敏症、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎およびアトピー性皮膚炎、喘息、虫垂炎、アトピー性皮膚炎、喘息、アレルギー、眼瞼炎、細気管支炎、気管支炎、滑液包炎、子宮頸管炎、胆管炎、胆嚢炎、慢性移植片拒絶、大腸炎、結膜炎、クローン病、膀胱炎、涙腺炎、皮膚炎、皮膚筋炎、脳炎、心内膜炎、子宮内膜炎、腸炎、全腸炎、上顆炎、精巣上体炎、筋膜炎、線維症、胃炎、胃腸炎、ヘーノホ・シェーンライン紫斑病、肝炎、化膿性汗腺炎、免疫グロブリンＡ腎症、間質性肺疾患、喉頭炎、乳腺炎、髄膜炎、骨髄炎心筋炎、筋炎、腎炎、卵巣炎、精巣炎、骨炎、耳炎、膵炎、耳下腺炎、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、胸膜炎、静脈炎、肺臓炎、肺炎、多発性筋炎、直腸炎、前立腺炎、腎盂腎炎、鼻炎、卵管炎、副鼻腔炎、口内炎、滑膜炎、腱炎、扁桃炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、膣炎、血管炎または外陰炎、Ｂ細胞増殖性障害、例えばびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性リンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫／ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、脾臓辺縁帯リンパ腫、多発性骨髄腫（形質細胞性骨髄腫とも称される）、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、形質細胞腫、節外性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、結節性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大Ｂ細胞型リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病またはリンパ腫様肉芽腫症、乳癌、前立腺癌または肥満細胞の癌（例えば、肥満細胞腫、肥満細胞白血病、肥満細胞肉腫、全身性肥満細胞症）、骨癌、結腸直腸癌、膵臓癌、骨および関節の疾患、限定されないが、関節リウマチ、血清陰性脊椎関節症（強直性脊椎炎、乾癬性関節炎およびライター病を含む）、ベーチェット病、シェーグレン症候群、全身性硬化症、骨粗鬆症、骨癌、骨転移、血栓塞栓性障害（例えば、心筋梗塞、狭心症、血管形成術後の再閉塞、血管形成術後の再狭窄、大動脈冠動脈バイパス術後の再閉塞、大動脈冠動脈バイパス術後の再狭窄、脳卒中、一過性虚血、末梢動脈閉塞性障害、肺塞栓症、深部静脈血栓症）、炎症性骨盤疾患、尿道炎、日光皮膚炎、副鼻腔炎、肺炎、脳炎、髄膜炎、心筋炎、腎炎、骨髄炎、筋炎、肝炎、胃炎、腸炎、皮膚炎、歯肉炎、虫垂炎、膵炎、胆嚢炎（ｃｈｏｌｏｃｙｓｔｉｔｕｓ）、無ガンマグロブリン血症、乾癬、アレルギー、クローン病、過敏性腸症候群、潰瘍性大腸炎、シェーグレン病、組織移植片拒絶、移植臓器の超急性拒絶、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、多腺性自己免疫疾患（多腺性自己免疫症候群としても公知である）、自己免疫性脱毛症、悪性貧血、糸球体腎炎、皮膚筋炎、多発性硬化症、強皮症、血管炎、自己免疫性溶血性および血小板減少症状態、グッドパスチャー症候群、アテローム性動脈硬化症、アジソン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、糖尿病、敗血症性ショック、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節炎、変形性関節症、慢性特発性血小板減少性紫斑病、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重症筋無力症、橋本甲状腺炎、アトピー性皮膚炎、変性関節疾患、白斑、自己免疫性下垂体機能低下症、ギラン・バレー症候群、ベーチェット病、強皮症、菌状息肉症、急性炎症反応（例えば、急性呼吸窮迫症候群および虚血／再灌流傷害）およびグレーブス病から選択される方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本発明は、疾患の重症度を処置または軽減する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、Ｂｃｌ−２阻害剤とを投与することを含み、前記疾患が、炎症性疾患、自己免疫障害、増殖性障害、内分泌障害、神経障害または移植に関連する障害から選択される方法を提供する。いくつかの実施形態では、障害は、増殖性障害、ループスまたはループス腎炎である。いくつかの実施形態では、増殖性障害は、慢性リンパ性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ホジキン病、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、骨髄異形成症候群、リンパ腫、血液腫瘍または固形腫瘍である。
別の実施形態では、本発明は、疾患の重症度を処置または軽減する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、ＰＩ３Ｋ阻害剤とを投与することを含み、疾患は、癌、神経変性障害、血管新生障害、ウイルス性疾患、自己免疫疾患、炎症性障害、ホルモン関連疾患、臓器移植に関連する状態、免疫不全障害、破壊的骨障害、増殖性障害、感染性疾患、細胞死に関連する状態、トロンビン誘発性血小板凝集、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、肝疾患、Ｔ細胞活性化を伴う病的免疫状態、心血管障害およびＣＮＳ障害から選択される方法を提供する。
別の実施形態では、本発明は、疾患の重症度を処置または軽減する方法であって、それを必要とする患者に、治療薬を負荷したエクソソームと、ＰＩ３Ｋ阻害剤とを投与することを含み、疾患は、良性または悪性腫瘍、脳、腎臓（例えば、腎細胞癌腫（ＲＣＣ））、肝臓、副腎、膀胱、乳房、胃、胃腫瘍、卵巣、結腸、直腸、前立腺、膵臓、肺、膣、子宮内膜、子宮頸部、精巣、尿生殖路、食道、喉頭、皮膚、骨または甲状腺の癌腫または固形腫瘍、肉腫、膠芽腫、神経芽細胞腫、多発性骨髄腫または胃腸癌、特に結腸癌腫または結腸直腸腺腫または頭頸部の腫瘍、表皮過剰増殖、乾癬、前立腺肥大症、新生物、上皮性の新生物、腺腫、腺癌、角化棘細胞腫、類表皮癌腫、大細胞癌腫、非小細胞肺癌腫、リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）およびホジキンリンパ腫（ホジキンまたはホジキン病とも称される）を含む）、乳癌腫、濾胞癌腫、未分化癌腫、乳頭癌腫、精上皮腫、黒色腫または白血病、カウデン症候群、レルミット・デュクロ病（Ｌｈｅｒｍｉｔｔｅ−Ｄｕｄｏｓ ｄｉｓｅａｓｅ）およびバナヤン・ゾナナ症候群を含む疾患、またはＰＩ３Ｋ／ＰＫＢ経路が異常に活性化されている疾患、あらゆるタイプまたは起源の喘息、例えば内因性（非アレルギー性）喘息および外因性（アレルギー性）喘息の両方、軽度喘息、中等度喘息、重度喘息、気管支喘息、運動誘発性喘息、職業性喘息および細菌感染後に誘発される喘息、急性肺傷害（ＡＬＩ）、成人／急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、慢性閉塞性肺、気道または肺疾患（ＣＯＰＤ、ＣＯＡＤまたはＣＯＬＤ）、例えば慢性気管支炎またはそれに関連する呼吸困難、肺気腫、ならびに他の薬物療法、特に他の吸入薬物療法による気道過敏症の悪化、あらゆるタイプまたは起源の気管支炎、限定されないが、急性、アラキジン酸性、カタル性、クループ性、慢性または結核性気管支炎、あらゆるタイプまたは起源の塵肺（炎症性、一般職業性、肺の疾患、気道閉塞を頻繁に伴う、慢性または急性にかかわらず、および埃の反復の吸入によって引き起こさる）、例えばアルミニウム肺症、炭粉症、石綿症、石粉症、睫毛脱落症、鉄沈着症、珪肺症、タバコ症および綿肺症、ロフラー症候群、好酸球性、肺炎、寄生性（特に、後生動物）侵入（熱帯性好酸球増加症を含む）、気管支肺アスペルギルス症、結節性多発動脈炎（チャーグ・ストラウス症候群を含む）、薬物反応によって引き起こされる気道に影響を及ぼす好酸球性肉芽腫および好酸球関連障害、乾癬、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、多形性紅斑、疱疹状皮膚炎、強皮症、白斑、過敏性血管炎、蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、エリテマトーデス、天疱瘡、後天性表皮水疱症、結膜炎、乾性角結膜炎および春季カタル、鼻に影響を及ぼす疾患、例えばアレルギー性鼻炎、自己免疫反応が関与しているかまたは自己免疫成分もしくは病因を有する炎症性疾患、例えば自己免疫性血液障害（例えば、溶血性貧血、再生不良性貧血、真性赤血球貧血および特発性血小板減少症）、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、多発性軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、スティーブン・ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎およびクローン病）、内分泌眼症（ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ ｏｐｔｈａｌｍｏｐａｔｈｙ）、グレーブ病、サルコイドーシス、肺胞炎、慢性過敏性肺炎、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、ブドウ膜炎（前部および後部）、乾性角結膜炎および春季カタル、間質性肺線維症、乾癬性関節炎および糸球体腎炎（例えば、特発性ネフローゼ症候群または軽度変化型腎症（ｍｉｎａｌ ｃｈａｎｇｅ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ）を含むネフローゼ症候群にかかわらず）、再狭窄、心肥大、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、虚血性脳卒中および鬱血性心不全、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病および脳虚血および外傷によって引き起こされる神経変性疾患、グルタミン酸神経毒性および低酸素症から選択される方法を提供する。
本発明の治療薬を負荷したエクソソームはまた、抗増殖化合物と組み合わせて有利に使用され得る。このような抗増殖性化合物としては、限定されないが、アロマターゼ阻害剤；抗エストロゲン薬；トポイソメラーゼＩ阻害剤；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤；微小管活性化合物；アルキル化剤；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；細胞分化プロセスを誘導する化合物；シクロオキシゲナーゼ阻害剤；ＭＭＰ阻害剤；ｍＴＯＲ阻害剤；抗新生物代謝拮抗物質；白金化合物；タンパク質または脂質キナーゼ活性をターゲティングする／減少させる化合物、およびさらなる抗血管新生化合物；タンパク質または脂質ホスファターゼの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物；ゴナドレリンアゴニスト；抗アンドロゲン薬；メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；ビスホスホネート；生物学的反応修飾剤；抗増殖抗体；ヘパラナーゼ阻害剤；Ｒａｓ発癌性アイソフォームの阻害剤；テロメラーゼ阻害剤；プロテアソーム阻害剤；血液悪性腫瘍の処置において使用される化合物；Ｆｌｔ−３の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物；Ｈｓｐ９０阻害剤、例えばＣｏｎｆｏｒｍａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓの１７−ＡＡＧ（１７−アリルアミノゲルダナマイシン、ＮＳＣ３３０５０７）、１７−ＤＭＡＧ（１７−ジメチルアミノエチルアミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン、ＮＳＣ７０７５４５）、ＩＰＩ−５０４、ＣＮＦ１０１０、ＣＮＦ２０２４、ＣＮＦ１０１０；テモゾロマイド（Ｔｅｍｏｄａｌ（登録商標））；キネシン紡錘体タンパク質阻害剤、例えばＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅのＳＢ７１５９９２もしくはＳＢ７４３９２１、またはＣｏｍｂｉｎａｔｏＲｘのペンタミジン／クロルプロマジン；ＭＥＫ阻害剤、例えばＡｒｒａｙ ＢｉｏＰｈａｒｍａのＡＲＲＹ１４２８８６、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａのＡＺＤ６２４４、ＰｆｉｚｅｒのＰＤ１８１４６１およびロイコボリンが挙げられる。本明細書で使用される場合、「アロマターゼ阻害剤」という用語は、エストロゲン産生、例えばそれぞれエストロンおよびエストラジオールへの基質アンドロステンジオンおよびテストステロンの変換を阻害する化合物に関する。この用語は、限定されないが、ステロイド、特にアタメスタン、エキセメスタンおよびフォルメスタン、特に非ステロイド、特にアミノグルテチミド、ログレチミド、ピリドグルテチミド、トリロスタン、テストラクトン、ケトコナゾール、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールを含む。エキセメスタンは、Ａｒｏｍａｓｉｎ（商標）の商品名で販売されている。フォルメスタンは、Ｌｅｎｔａｒｏｎ（商標）の商品名で販売されている。ファドロゾールは、Ａｆｅｍａ（商標）の商品名で販売されている。アナストロゾールは、Ａｒｉｍｉｄｅｘ（商標）の商品名で販売されている。レトロゾールは、Ｆｅｍａｒａ（商標）またはＦｅｍａｒ（商標）の商品名で販売されている。アミノグルテチミドは、Ｏｒｉｍｅｔｅｎ（商標）の商品名で販売されている。アロマターゼ阻害剤である化学療法剤を含む本発明の組み合わせは、ホルモン受容体陽性腫瘍、例えば乳房腫瘍の処置において特に有用である。
本明細書で使用される場合、「抗エストロゲン薬」という用語は、エストロゲン受容体レベルでエストロゲンの効果をアンタゴナイズする化合物に関する。この用語は、限定されないが、タモキシフェン、フルベストラント、ラロキシフェンおよび塩酸ラロキシフェンを含む。タモキシフェンは、Ｎｏｌｖａｄｅｘ（商標）の商品名で販売されている。塩酸ラロキシフェンは、Ｅｖｉｓｔａ（商標）の商品名で販売されている。フルベストラントは、Ｆａｓｌｏｄｅｘ（商標）の商品名で投与され得る。抗エストロゲン薬である化学療法剤を含む本発明の組み合わせは、エストロゲン受容体陽性腫瘍、例えば乳房腫瘍の処置において特に有用である。
本明細書で使用される場合、「抗アンドロゲン薬」という用語は、アンドロゲンホルモンの生物学的効果を阻害することができる任意の物質に関し、限定されないが、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（商標））を含む。本明細書で使用される場合、「ゴナドレリンアゴニスト」という用語は、限定されないが、アバレリクス、ゴセレリンおよび酢酸ゴセレリンを含む。ゴセレリンは、Ｚｏｌａｄｅｘ（商標）の商品名で投与され得る。
本明細書で使用される場合、「トポイソメラーゼＩ阻害剤」という用語は、限定されないが、トポテカン、ギマテカン、イリノテカン、カンプトテシンおよびその類似体、９−ニトロカンプトテシンおよび高分子カンプトテシンコンジュゲートＰＮＵ−１６６１４８を含む。イリノテカンは、例えば、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（商標）の商標で販売されているような形態で投与され得る。Ｔｏｐｏｔｅｃａｎは、Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（商標）の商品名で販売されている。
本明細書で使用される場合、「トポイソメラーゼＩＩ阻害剤」という用語は、限定されないが、アントラサイクリン、例えばドキソルビシン（リポソーム製剤、例えばＣａｅｌｙｘ（商標）を含む）、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびネモルビシン、アントラキノンおよびミトキサントロンおよびロキソキサントロンおよびポドフィロトキシンエトポシドおよびテニポシドを含む。エトポシドは、Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（商標）の商品名で販売されている。テニポシドは、ＶＭ２６−Ｂｒｉｓｔｏｌの商品名で販売されており、ドキソルビシンは、Ａｃｒｉｂｌａｓｔｉｎ（商標）またはＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（商標）の商品名で販売されている。エピルビシンは、Ｆａｒｍｏｒｕｂｉｃｉｎ（商標）の商品名で販売されている。イダルビシンは、Ｚａｖｅｄｏｓ（商標）の商品名で販売されている。ミトキサントロンは、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎの商品名で販売されている。
「微小管活性剤」という用語は、限定されないが、タキサン、例えばパクリタキセルおよびドセタキセル；ビンカアルカロイド、例えばビンブラスチンまたは硫酸ビンブラスチン、ビンクリスチンまたは硫酸ビンクリスチンおよびビノレルビン；ディスコデルモライド；コヒチンおよびエポチロンおよびそれらの誘導体を含む微小管安定化化合物、微小管不安定化化合物および微小管重合阻害剤に関する。パクリタキセルは、Ｔａｘｏｌ（商標）の商品名で販売されている。ドセタキセルは、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（商標）の商品名で販売されている。硫酸ビンブラスチンは、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎ Ｒ．Ｐ（商標）の商品名で販売されている。硫酸ビンクリスチンは、Ｆａｒｍｉｓｔｉｎ（商標）の商品名で販売されている。
本明細書で使用される場合、「アルキル化剤」という用語は、限定されないが、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランまたはニトロソウレア（ＢＣＮＵまたはＧｌｉａｄｅｌ）を含む。シクロホスファミドは、Ｃｙｃｌｏｓｔｉｎ（商標）の商品名で販売されている。イホスファミドは、Ｈｏｌｏｘａｎ（商標）の商品名で販売されている。
「ヒストンデアセチラーゼ阻害剤」または「ＨＤＡＣ阻害剤」という用語は、ヒストンデアセチラーゼを阻害する化合物であって、抗増殖活性を有する化合物に関する。これは、限定されないが、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）を含む。
「抗新生物代謝拮抗物質」という用語は、限定されないが、５−フルオロウラシルまたは５−ＦＵ、カペシタビン、ゲムシタビン、ＤＮＡ脱メチル化化合物、例えば５−アザシチジンおよびデシタビン、メトトレキサートおよびエダトレキサート、ならびに葉酸アンタゴニスト、例えばペメトレキセドを含む。カペシタビンは、Ｘｅｌｏｄａ（商標）の商品名で販売されている。ゲムシタビンは、Ｇｅｍｚａｒ（商標）の商品名で販売されている。
本明細書で使用される場合、「プラチン化合物」という用語は、限定されないが、カルボプラチン、シスプラチン、シスプラチナムおよびオキサリプラチンを含む。カルボプラチンは、例えば、Ｃａｒｂｏｐｌａｔ（商標）の商標で販売されているような形態で投与され得る。オキサリプラチンは、例えば、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（商標）の商標で販売されているような形態で投与され得る。
本明細書で使用される場合、「タンパク質もしくは脂質キナーゼ活性；またはタンパク質もしくは脂質ホスファターゼ活性をターゲティングする／減少させる化合物；またはさらなる抗血管新生化合物」という用語は、限定されないが、プロテインチロシンキナーゼならびに／またはセリンおよび／もしくはトレオニンキナーゼ阻害剤または脂質キナーゼ阻害剤、例えばａ）血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えば、ＰＤＧＦＲの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、特に、ＰＤＧＦ受容体を阻害する化合物、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブ、ＳＵ１０１、ＳＵ６６６８およびＧＦＢ−１１１；ｂ）線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物；ｃ）インスリン様成長因子受容体Ｉ（ＩＧＦ−ＩＲ）の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えば、ＩＧＦ−ＩＲの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、特に、ＩＧＦ−Ｉ受容体のキナーゼ活性を阻害する化合物、またはＩＧＦ−Ｉ受容体もしくはその成長因子の細胞外ドメインをターゲティングする抗体；ｄ）Ｔｒｋ受容体チロシンキナーゼファミリーの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、またはエフリンＢ４阻害剤；ｅ）ＡｘＩ受容体チロシンキナーゼファミリーの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物；ｆ）Ｒｅｔ受容体チロシンキナーゼの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物；ｇ）Ｋｉｔ／ＳＣＦＲ受容体チロシンキナーゼの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えばイマチニブ；ｈ）ＰＤＧＦＲファミリーの一部であるｃ−Ｋｉｔ受容体チロシンキナーゼの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えば、ｃ−Ｋｉｔ受容体チロシンキナーゼファミリーの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、特に、ｃ−Ｋｉｔ受容体を阻害する化合物、例えばイマチニブ；ｉ）ｃ−Ａｂｌファミリーのメンバー、それらの遺伝子融合産物（例えば、ＢＣＲ−Ａｂｌキナーゼ）および突然変異体の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えば、ｃ−Ａｂｌファミリーのメンバーおよびそれらの遺伝子融合産物の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブまたはニロチニブ（ＡＭＮ１０７）；ＰＤ１８０９７０；ＡＧ９５７；ＮＳＣ ６８０４１０；ＰａｒｋｅＤａｖｉｓのＰＤ１７３９５５；またはダサチニブ（ＢＭＳ−３５４８２５）；ｊ）プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）およびセリン／トレオニンキナーゼのＲａｆファミリーのメンバー、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ／ｐａｎ−ＪＡＫ、ＦＡＫ、ＰＤＫ１、ＰＫＢ／Ａｋｔ、Ｒａｓ／ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ、ＳＹＫ、ＴＹＫ２、ＢＴＫおよびＴＥＣファミリーのメンバー、ならびに／またはサイクリン依存性キナーゼファミリー（ＣＤＫ）のメンバーの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えばスタウロスポリン誘導体、例えばミドスタウリン；さらなる化合物の例としては、ＵＣＮ−０１、サフィンゴール、ＢＡＹ ４３−９００６、ブリオスタチン１、ペリホシン；イルモホシン；ＲＯ ３１８２２０およびＲＯ ３２０４３２；ＧＯ ６９７６；ｌｓｉｓ ３５２１；ＬＹ３３３５３１／ＬＹ３７９１９６；イソキノリン化合物；ＦＴＩ；ＰＤ１８４３５２またはＱＡＮ６９７（ＰＩ３Ｋ阻害剤）またはＡＴ７５１９（ＣＤＫ阻害剤）；が挙げられる；ｋ）プロテイン−チロシンキナーゼ阻害剤の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えば、プロテイン−チロシンキナーゼ阻害剤の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物としては、メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標））またはチルホスチン、例えばチルホスチンＡ２３／ＲＧ−５０８１０；ＡＧ９９；チルホスチンＡＧ２１３；チルホスチンＡＧ１７４８；チルホスチンＡＧ４９０；チルホスチンＢ４４；チルホスチンＢ４４（＋）エナンチオマー；チルホスチンＡＧ５５５；ＡＧ４９４；チルホスチンＡＧ５５６、ＡＧ９５７およびアダプホスチン（４−｛［（２，５−ジヒドロキシフェニル）メチル］アミノ｝−安息香酸アダマンチルエステル；ＮＳＣ６８０４１０、アダホスチン）が挙げられる；ｌ）上皮成長因子ファミリーの受容体チロシンキナーゼ（ホモダイマーまたはヘテロダイマーとしてＥＧＦＲ１ ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４）およびそれらの突然変異体の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えば、上皮成長因子受容体ファミリーの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物は、特に、ＥＧＦ受容体チロシンキナーゼファミリーのメンバー、例えばＥＧＦ受容体、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４を阻害するか、またはＥＧＦもしくはＥＧＦ関連リガンド、ＣＰ ３５８７７４、ＺＤ １８３９、ＺＭ １０５１８０に結合する化合物、タンパク質または抗体；トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標））、イレッサ、タルセバ、ＯＳＩ−７７４、Ｃｌ−１０３３、ＥＫＢ−５６９、ＧＷ−２０１６、Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３またはＥ７．６．３および７Ｈ−ピロロ−［２，３−ｄ］ピリミジン誘導体である；ｍ）ｃ−Ｍｅｔ受容体の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えば、ｃ−Ｍｅｔの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、特に、ｃ−Ｍｅｔ受容体のキナーゼ活性を阻害する化合物、またはｃ−Ｍｅｔの細胞外ドメインをターゲティングするか、またはＨＧＦに結合する抗体、ｎ）１つまたはそれを超えるＪＡＫファミリーメンバー（ＪＡＫ１／ＪＡＫ２／ＪＡＫ３／ＴＹＫ２および／またはｐａｎ−ＪＡＫ）のキナーゼ活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えば限定されないが、ＰＲＴ−０６２０７０、ＳＢ−１５７８、バリシチニブ、パクリチニブ、モメロチニブ、ＶＸ−５０９、ＡＺＤ−１４８０、ＴＧ−１０１３４８、トファシチニブおよびルキソリチニブ；ｏ）ＰＩ３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）のキナーゼ活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えば限定されないが、ＡＴＵ−０２７、ＳＦ−１１２６、ＤＳ−７４２３、ＰＢＩ−０５２０４、ＧＳＫ−２１２６４５８、ＺＳＴＫ−４７４、ブパリシブ、ピクトレリシブ、ＰＦ−４６９１５０２、ＢＹＬ−７１９、ダクトリシブ、ＸＬ−１４７、ＸＬ−７６５およびイデラリシブ；ならびにｑ）ヘッジホッグタンパク質（Ｈｈ）または平滑化受容体（ＳＭＯ）経路のシグナル伝達効果をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えば限定されないが、シクロパミン、ビスモデギブ、イトラコナゾール、イリスモデギブおよびＩＰＩ−９２６（サリデギブ）を含む。
本明細書で使用される場合、「ＰＩ３Ｋ阻害剤」という用語は、限定されないが、ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼファミリーの１つまたはそれを超える酵素、例えば限定されないが、ＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋγ、ＰＩ３Ｋδ、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋ−Ｃ２α、ＰＩ３Ｋ−Ｃ２β、ＰＩ３Ｋ−Ｃ２γ、Ｖｐｓ３４、ｐ１１０−α、ｐ１１０−β、ｐ１１０−γ、ｐ１１０−δ、ｐ８５−α、ｐ８５−β、ｐ５５−γ、ｐ１５０、ｐ１０１およびｐ８７に対して阻害活性を有する化合物を含む。本発明において有用なＰＩ３Ｋ阻害剤の例としては、限定されないが、ＡＴＵ−０２７、ＳＦ−１１２６、ＤＳ−７４２３、ＰＢＩ−０５２０４、ＧＳＫ−２１２６４５８、ＺＳＴＫ−４７４、ブパリシブ、ピクトレリシブ、ＰＦ−４６９１５０２、ＢＹＬ−７１９、ダクトリシブ、ＸＬ−１４７、ＸＬ−７６５およびイデラリシブが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「Ｂｃｌ−２阻害剤」という用語は、限定されないが、Ｂ細胞リンパ腫２タンパク質（Ｂｃｌ−２）に対して阻害活性を有する化合物、例えば限定されないが、ＡＢＴ−１９９、ＡＢＴ−７３１、ＡＢＴ−７３７、アポゴシポール、Ａｓｃｅｎｔａのｐａｎ−Ｂｃｌ−２阻害剤、クルクミン（およびその類似体）、二重Ｂｃｌ−２／Ｂｃｌ−ｘＬ阻害剤（Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ゲナセンス（Ｇ３１３９）、ＨＡ１４−１（およびその類似体；国際公開第２００８１１８８０２号を参照のこと）、ナビトクラックス（およびその類似体、米国特許第７３９０７９９号を参照のこと）、ＮＨ−１（Ｓｈｅｎａｙｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、オバトクラックス（およびその類似体、国際公開第２００４／１０６３２８（これは、参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）、Ｓ−００１（Ｇｌｏｒｉａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＴＷシリーズ化合物（Ｕｎｉｖ．ｏｆ Ｍｉｃｈｉｇａｎ）およびベネトクラックスを含む。いくつかの実施形態では、Ｂｃｌ−２阻害剤は、低分子治療薬である。いくつかの実施形態では、Ｂｃｌ−２阻害剤は、ペプチド模倣物である。
本明細書で使用される場合、「ＢＴＫ阻害剤」という用語は、限定されないが、ブルトンチロシンキナーゼ（ＢＴＫ）に対して阻害活性を有する化合物、例えば限定されないが、ＡＶＬ−２９２およびイブルチニブを含む。
本明細書で使用される場合、「ＳＹＫ阻害剤」という用語は、限定されないが、脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）に対して阻害活性を有する化合物、例えば限定されないが、ＰＲＴ−０６２０７０、Ｒ−３４３、Ｒ−３３３、エクセレア、ＰＲＴ−０６２６０７およびホスタマチニブを含む。
ＢＴＫ阻害化合物、および本発明の化合物と組み合わせてこのような化合物によって処置可能な状態のさらなる例は、国際公開第２００８／０３９２１８号および国際公開第２０１１／０９０７６０（これらの全体は、参照により本明細書に組み込まれる）に見られ得る。
ＳＹＫ阻害化合物、および本発明の化合物と組み合わせてこのような化合物によって処置可能な状態のさらなる例は、国際公開第２００３／０６３７９４号、国際公開第２００５／００７６２３号および国際公開第２００６／０７８８４６（これらの全体は、参照により本明細書に組み込まれる）に見られ得る。
ＰＩ３Ｋ阻害化合物、および本発明の化合物と組み合わせてこのような化合物によって処置可能な状態のさらなる例は、国際公開第２００４／０１９９７３号、国際公開第２００４／０８９９２５号、国際公開第２００７／０１６１７６号、米国特許第８，１３８，３４７号、国際公開第２００２／０８８１１２号、国際公開第２００７／０８４７８６号、国際公開第２００７／１２９１６１号、国際公開第２００６／１２２８０６号、国際公開第２００５／１１３５５４号および国際公開第２００７／０４４７２９（これらの全体は、参照により本明細書に組み込まれる）に見られ得る。
ＪＡＫ阻害化合物、および本発明の化合物と組み合わせてこのような化合物によって処置可能な状態のさらなる例は、国際公開第２００９／１１４５１２号、国際公開第２００８／１０９９４３号、国際公開第２００７／０５３４５２号、国際公開第２０００／１４２２４６号および国際公開第２００７／０７０５１４（これらの全体は、参照により本明細書に組み込まれる）に見られ得る。
さらなる抗血管新生化合物としては、例えばタンパク質または脂質キナーゼ阻害とは無関係に、それらの活性のための別の機構を有する化合物、例えばサリドマイド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ（商標））およびＴＮＰ−４７０が挙げられる。
本発明の治療薬を負荷したエクソソームと組み合わせて使用するために有用なプロテアソーム阻害剤の例としては、限定されないが、ボルテゾミブ、ジスルフィラム、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、サリノスポラミドＡ、カルフィルゾミブ、ＯＮＸ−０９１２、ＣＥＰ−１８７７０およびＭＬＮ９７０８が挙げられる。
タンパク質または脂質ホスファターゼの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物は、例えば、ホスファターゼ１、ホスファターゼ２ＡまたはＣＤＣ２５の阻害剤、例えばオカダ酸またはその誘導体である。
細胞分化プロセスを誘導する化合物としては、限定されないが、レチノイン酸、α−、γ−もしくはδ−トコフェロール、またはα−、γ−もしくはδ−トコトリエノールが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「シクロオキシゲナーゼ阻害剤」という用語は、限定されないが、Ｃｏｘ−２阻害剤、５−アルキル置換２−アリールアミノフェニル酢酸およびその誘導体、例えばセレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（商標））、エトリコキシブ、バルデコキシブまたは５−アルキル−２−アリールアミノフェニル酢酸、例えば５−メチル−２−（２’−クロロ−６’−フルオロアニリノ）フェニル酢酸、ルミラコキシブを含む。
本明細書で使用される場合、「ビスホスホネート」という用語は、限定されないが、エトリドン酸、クロドロン酸、チルドロン酸、パミドロン酸、アレンドロン酸、イバンドロン酸、リセドロン酸およびゾレドロン酸を含む。エトリドン酸は、Ｄｉｄｒｏｎｅｌ（商標）の商品名で販売されている。クロドロン酸は、Ｂｏｎｅｆｏｓ（商標）の商品名で販売されている。チルドロン酸は、Ｓｋｅｌｉｄ（商標）の商品名で販売されている。パミドロン酸は、Ａｒｅｄｉａ（商標）の商品名で販売されている。アレンドロン酸は、Ｆｏｓａｍａｘ（商標）の商品名で販売されている。イバンドロン酸は、Ｂｏｎｄｒａｎａｔ（商標）の商品名で販売されている。リセドロン酸は、Ａｃｔｏｎｅｌ（商標）の商品名で販売されている。ゾレドロン酸は、Ｚｏｍｅｔａ（商標）の商品名で販売されている。「ｍＴＯＲ阻害剤」という用語は、哺乳動物ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）を阻害する化合物であって、抗増殖活性を有する化合物、例えばシロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（商標））、エベロリムス（Ｃｅｒｔｉｃａｎ（商標））、ＣＣＩ−７７９およびＡＢＴ５７８に関する。
本明細書で使用される場合、「ヘパラナーゼ阻害剤」という用語は、ヘパリン硫酸分解をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物を指す。この用語は、限定されないが、ＰＩ−８８を含む。本明細書で使用される場合、「生物学的反応修飾剤」という用語は、リンホカインまたはインターフェロンを指す。
本明細書で使用される場合、「Ｒａｓ発癌性アイソフォームの阻害剤」、例えばＨ−Ｒａｓ、Ｋ−ＲａｓまたはＮ−Ｒａｓは、Ｒａｓの発癌活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物；例えば、「ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤」、例えばＬ−７４４８３２、ＤＫ８Ｇ５５７またはＲ１１５７７７（Ｚａｒｎｅｓｔｒａ（商標））を指す。本明細書で使用される場合、「テロメラーゼ阻害剤」という用語は、テロメラーゼの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物を指す。テロメラーゼの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物は、特に、テロメラーゼ受容体を阻害する化合物、例えばテロメスタチンである。
本明細書で使用される場合、「メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤」という用語は、メチオニンアミノペプチダーゼの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物を指す。メチオニンアミノペプチダーゼの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物としては、限定されないが、ベンガミドまたはその誘導体が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「プロテアソーム阻害剤」という用語は、プロテアソームの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物を指す。プロテアソームの活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物としては、限定されないが、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（商標））およびＭＬＮ３４１が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤」または（「ＭＭＰ」阻害剤）という用語は、限定されないが、コラーゲンペプチド模倣物および非ペプチド模倣物阻害剤、テトラサイクリン誘導体、例えばヒドロキサメートペプチド模倣物阻害剤バチマスタットおよびその経口的に生体利用可能な類似体マリマスタット（ＢＢ−２５１６）、プリノマスタット（ＡＧ３３４０）、メタスタット（ＮＳＣ６８３５５１）ＢＭＳ−２７９２５１、ＢＡＹ １２−９５６６、ＴＡＡ２１１、ＭＭＩ２７０ＢまたはＡＡＪ９９６を含む。
本明細書で使用される場合、「血液悪性腫瘍の処置において使用される化合物」という用語は、限定されないが、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ受容体（Ｆｌｔ−３Ｒ）の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物であるＦＭＳ様チロシンキナーゼ阻害剤；インターフェロン、１−β−Ｄ−アラビノフランシルシトシン（ａｒａｂｉｎｏｆｕｒａｎｓｙｌｃｙｔｏｓｉｎｅ）（ａｒａ−ｃ）およびビスルファン；ならびに未分化リンパ腫キナーゼをターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物であるＡＬＫ阻害剤を含む。
ＦＭＳ様チロシンキナーゼ受容体（Ｆｌｔ−３Ｒ）の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物は、特に、Ｆｌｔ−３Ｒ受容体キナーゼファミリーのメンバーを阻害する化合物、タンパク質または抗体、例えばＰＫＣ４１２、ミドスタウリン、スタウロスポリン誘導体、ＳＵ１１２４８およびＭＬＮ５１８である。
本明細書で使用される場合、「ＨＳＰ９０阻害剤」という用語は、限定されないが、ＨＳＰ９０の固有ＡＴＰａｓｅ活性をターゲティングし、減少させまたは阻害し；ユビキチンプロテオソーム経路を介してＨＳＰ９０クライアントタンパク質を分解し、ターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物を含む。ＨＳＰ９０の固有ＡＴＰａｓｅ活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物は、特に、ＨＳＰ９０のＡＴＰａｓｅ活性を阻害する化合物、タンパク質または抗体、例えば１７−アリルアミノ、１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７ＡＡＧ）、ゲルダナマイシン誘導体；他のゲルダナマイシン関連化合物；ラジシコールおよびＨＤＡＣ阻害剤である。
本明細書で使用される場合、「抗増殖性抗体」という用語は、限定されないが、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））、トラスツズマブ−ＤＭ１、アービタックス、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＰＲＯ６４５５３（抗ＣＤ４０）および２Ｃ４抗体を含む。抗体は、それらが所望の生物学的活性を示す限り、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体、および抗体断片を意味する。
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の処置のために、本発明の治療薬を負荷したエクソソームは、標準的な白血病治療と組み合わせて、特にＡＭＬの処置において使用される治療と組み合わせて使用され得る。特に、本発明の治療薬を負荷したエクソソームは、例えば、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤および／またはＡＭＬの処置に有用な他の薬物、例えばダウノルビシン、アドリアマイシン、Ａｒａ−Ｃ、ＶＰ−１６、テニポシド、ミトキサントロン、イダルビシン、カルボプラチナおよびＰＫＣ４１２と組み合わせて投与され得る。
他の抗白血病化合物としては、例えば、デオキシシチジンの２’−アルファ−ヒドロキシリボース（アラビノシド）誘導体であるピリミジン類似体Ａｒａ−Ｃが挙げられる。ヒポキサンチンのプリン類似体、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）およびリン酸フルダラビンも挙げられる。ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤の活性をターゲティングし、減少させまたは阻害する化合物、例えば酪酸ナトリウムおよびスベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）は、ヒストンデアセチラーゼとして公知の酵素の活性を阻害する。具体的なＨＤＡＣ阻害剤としては、ＭＳ２７５、ＳＡＨＡ、ＦＫ２２８（以前はＦＲ９０１２２８）、トリコスタチンＡおよび米国特許第６，５５２，０６５号に開示されている化合物、例えば限定されないが、Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−［［［２−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）−エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミドまたはその薬学的に許容され得る塩、Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−［（２−ヒドロキシエチル）｛２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミドまたはその薬学的に許容され得る塩、特に乳酸塩が挙げられる。本明細書で使用される場合、ソマトスタチン受容体アンタゴニストは、ソマトスタチン受容体をターゲティングし、処置しまたは阻害する化合物、例えばオクトレオチドおよびＳＯＭ２３０を指す。腫瘍細胞損傷アプローチは、電離放射線などのアプローチを指す。上記および以下で言及される「電離放射線」という用語は、電磁波（例えば、Ｘ線およびガンマ線）または粒子（例えば、アルファ粒子およびベータ粒子）のいずれかとして生じる電離放射線を意味する。電離放射線は、限定されないが、放射線療法において提供され、当技術分野で公知である。Ｈｅｌｌｍａｎ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃａｎｃｅｒ，ｉｎ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｄｅｖｉｔａら、Ｅｄｓ．，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．１，ｐｐ．２４８−２７５（１９９３）を参照のこと。
ＥＤＧ結合剤およびリボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤も挙げられる。本明細書で使用される場合、「ＥＤＧ結合剤」という用語は、リンパ球再循環をモジュレートする免疫抑制剤のクラス、例えばＦＴＹ７２０を指す。「リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤」という用語は、ピリミジンまたはプリンヌクレオシド類似体、例えば限定されないが、フルダラビンおよび／またはシトシンアラビノシド（ａｒａ−Ｃ）、６−チオグアニン、５−フルオロウラシル、クラドリビン、６−メルカプトプリン（特に、ＡＬＬに対するａｒａ−Ｃとの組み合わせ）および／またはペントスタチンを指す。リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤は、特に、ヒドロキシウレアまたは２−ヒドロキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体である。
特に、ＶＥＧＦの化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体、例えば１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジンまたはその薬学的に許容され得る塩、１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジンサクシネート；Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（商標）；Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ（商標）；アントラニル酸アミド；ＺＤ４１９０；ＺＤ６４７４；ＳＵ５４１６；ＳＵ６６６８；ベバシズマブ；または抗ＶＥＧＦ抗体または抗ＶＥＧＦ受容体抗体、例えばｒｈｕＭＡｂおよびＲＨＵＦａｂ、ＶＥＧＦアプタマー、例えばマクゴン；ＦＬＴ−４阻害剤、ＦＬＴ−３阻害剤、ＶＥＧＦＲ−２ ＩｇＧ１抗体、アンジオザイム（ＲＰＩ４６１０）およびベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））も挙げられる。
本明細書で使用される場合、光線力学療法は、光増感化合物として公知の特定の化学物質を使用して癌を処置または予防する療法を指す。光線力学療法としては、化合物、例えばＶｉｓｕｄｙｎｅ（商標）およびポルフィマーナトリウムによる処置が挙げられる。
本明細書で使用される場合、血管新生抑制ステロイドは、血管新生を遮断または阻害する化合物、例えばアネコルタブ、トリアムシノロン、ヒドロコルチゾン、１１−α−エピヒドロコチゾール、コルテキソロン、１７α−ヒドロキシプロゲステロン、コルチコステロン、デスオキシコルチコステロン、テストステロン、エストロンおよびデキサメタゾンを指す。
他の化学療法化合物としては、限定されないが、植物アルカロイド、ホルモン化合物およびアンタゴニスト；生物学的反応修飾剤、好ましくはリンホカインもしくはインターフェロン；アンチセンスオリゴヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチド誘導体；ｓｈＲＮＡもしくはｓｉＲＮＡ；または種々の化合物または他のもしくは未知の作用機構を有する化合物が挙げられる。
本発明の治療薬を負荷したエクソソームはまた、特に閉塞性または炎症性気道疾患、例えば上述のものの処置において、他の原薬、例えば抗炎症原薬、気管支拡張原薬または抗ヒスタミン原薬と組み合わせて使用するための共治療化合物として、例えば、このような薬物の治療活性の増強剤として、またはこのような薬物の必要な投与量もしくは潜在的な副作用を減少させる手段として有用である。本発明の治療薬を負荷したエクソソームは、一定の医薬組成物中で他の原薬と混合され得るか、またはそれは、他の原薬の前に、それと同時にもしくはその後に別個に投与され得る。したがって、本発明は、上記本発明の治療薬を負荷したエクソソームと、抗炎症原薬、気管支拡張原薬、抗ヒスタミン原薬または抗鎮咳原薬との組み合わせを含み、前記本発明の治療薬を負荷したエクソソームおよび前記原薬は、同じまたは異なる医薬組成物である。
適切な抗炎症薬としては、ステロイド、特にグルココルチコステロイド、例えばブデソニド、ジプロピオン酸ベクラメタゾン、プロピオン酸フルチカゾン、シクレソニドまたはフロ酸モメタゾン；非ステロイド系グルココルチコイド受容体アゴニスト；ＬＴＢ４アンタゴニスト、例えばＬＹ２９３１１１、ＣＧＳ０２５０１９Ｃ、ＣＰ−１９５５４３、ＳＣ−５３２２８、ＢＩＩＬ ２８４、ＯＮＯ ４０５７、ＳＢ ２０９２４７；ＬＴＤ４アンタゴニスト、例えばモンテルカストおよびザフィルルカスト；ＰＤＥ４阻害剤、例えばシロミラスト（Ａｒｉｆｌｏ（登録商標）ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ロフルミラスト（Ｂｙｋ Ｇｕｌｄｅｎ）、Ｖ−１１２９４Ａ（Ｎａｐｐ）、ＢＡＹ１９−８００４（Ｂａｙｅｒ）、ＳＣＨ−３５１５９１（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、アロフィリン（Ａｌｍｉｒａｌｌ Ｐｒｏｄｅｓｆａｒｍａ）、ＰＤ１８９６５９／ＰＤ１６８７８７（Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）、ＡＷＤ−１２−２８１（Ａｓｔａ Ｍｅｄｉｃａ）、ＣＤＣ−８０１（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＳｅＩＣＩＤ（ＴＭ）ＣＣ−１０００４（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＶＭ５５４／ＵＭ５６５（Ｖｅｒｎａｌｉｓ）、Ｔ−４４０（Ｔａｎａｂｅ）、ＫＷ−４４９０（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ）；Ａ２ａアゴニスト；Ａ２ｂアンタゴニスト；およびベータ−２アドレナリン受容体アゴニスト、例えばアルブテロール（サルブタモール）、メタプロテレノール、テルブタリン、サルメテロール、フェノテロール、プロカテロール、特にホルモテロールおよびその薬学的に許容され得る塩が挙げられる。適切な気管支拡張薬としては、抗コリン薬または抗ムスカリン化合物、特に臭化イプラトロピウム、臭化オキシトロピウム、チオトロピウム塩およびＣＨＦ ４２２６（Ｃｈｉｅｓｉ）およびグリコピロレートが挙げられる。
適切な抗ヒスタミン原薬としては、塩酸セチリジン、アセトアミノフェン、フマル酸クレマスチン、プロメタジン、ロラチジン、デスロラチジン、ジフェンヒドラミンおよび塩酸フェキソフェナジン、アクチバスチン、アステミゾール、アゼラスチン、エバスチン、エピナスチン、ミゾラスチンおよびテフェナジンが挙げられる。
本発明の治療薬を負荷したエクソソームと抗炎症薬との他の有用な組み合わせは、ケモカイン受容体のアンタゴニスト、例えばＣＣＲ−１、ＣＣＲ−２、ＣＣＲ−３、ＣＣＲ−４、ＣＣＲ−５、ＣＣＲ−６、ＣＣＲ−７、ＣＣＲ−８、ＣＣＲ−９およびＣＣＲ１０、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、特にＣＣＲ−５アンタゴニスト、例えばＳｃｈｅｒｉｎｇ−ＰｌｏｕｇｈのアンタゴニストＳＣ−３５１１２５、ＳＣＨ−５５７００およびＳＣＨ−Ｄ、ならびにＴａｋｅｄａのアンタゴニスト、例えばＮ−［［４−［［［６，７−ジヒドロ−２−（４−メチルフェニル）−５Ｈ−ベンゾ−シクロヘプテン−８−イル］カルボニル］アミノ］フェニル］−メチル］テトラヒドロ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２Ｈ−ピラン−４−アミニウムクロリド（ＴＡＫ−７７０）とのものである。
いくつかの実施形態では、さらなる治療剤は、アバカビル、アビラテロン、アセチルシステイン、アシクロビル、アデフォビルジピボキシル、アラトロフロキサシン、アルベンダゾール、アルブテロール、アレンドロン酸、アルトロパン、アミホスチン、アミノレブリン酸、アミオダロン（例えば、共溶媒フリー）、アミスルプリド、アミトリプチリン、アンプレナビル、アナストロゾール、アポモルヒネ、アプレミラスト、アルブタミン、アルガトロバン、三酸化ヒ素、アスピリン、アタザナビル／コビシスタット、アトルバスタチン、アビバクタム／セフタジジム、アザシチジン、アザチオプリン、アジスロマイシン、ベリノスタット、ベンダムスチン、ベキサロテン、ビアペネム、ビカルタミド、ボルテゾミブ、ボセンタン、ボスチニブ、ブロムフェナク、ブプレノルフィン、ブプロピオン、ブスルファン、Ｃ１エステラーゼ阻害剤、カフェイン、レボホリン酸カルシウム、カングレロル、カペシタビン、カプサイシン、カルフィルゾミブ、カルベジロール、セフェピム、セフタロリンフォサミル、セフタジジム、セフチブテン、セフトロザン／タゾバクタム、セレコキシブ、セルゴシビル、クロラムブシル、シドフォビル、シプロフロキサシン、クラドリビン、クラゾセンタン、クロファラビン、クロピドグレル、シクロホスファミド、シタラビン、ダナゾール、ダントロレン、ダサチニブ、ダウノルビシン、デシタビン、デフェリプロン、デラビルジン、デオキシコール酸、デオキシチミジン、デキサメタゾン、デクスメデトミジン、デクスラゾキサン、ジクロフェナク、ジダノシン、ジエチルカルバマジン、ドセタキセル、ドラセトロン、ドリペネム、ドキサプラム、ドキセルカルシフェロール、ドキソルビシン、ドキシサイクリン、エファビレンツ、エフラペグラスチム、エルビテグラビル、エムトリシタビン、エンタカポン、エパカドスタット、エピネフリン、エピチオスタノール、エポプロステノール、エルゴタミン、エリブリン、エソメプラゾール、エストラジオール、エストロゲン、エトノゲストレル、エゼチミブ、エゼチミブ／シンバスタチン、ファスディル、フェノルドパム、フェンタニル、カルボキシマルトース第二鉄、フィナステリド、フィンゴリモド、フロルベナジンＦ１８、フロルベタベンＦ１８、フロルベタピルＦ１８、フルダラビン、フッ素１８ ＡＶ １４５１、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルルピリダズＦ−１８、フルタフラノールＦ１８、フルメタモールＦ１８、ホメピゾール、ホスアプレピタント、ホスフェニトイン、ホスプロフォフォル、フルベストラント、フロセミド、ガドベン酸、ガドブトロール、ガドベルセタミド、ガドキセト酸二ナトリウム、ゲムシタビン、グリメピリド、グラニセトロン、グアデシタビン、ヒドロキシクロロキン、イバンドロン酸、イブプロフェン、イマチニブ、イミキモド、ヨベングアンＩ−１２３、イオフルパン１２３Ｉ、イオキシラン、イリノテカン、アイサブコナゾニウム、硝酸イソソルビド、イベルメクチン、イクサベピロン、ラベラロール、ラコサミド、ラミブジン、ラモトリジン、ランソプラゾール、ラパチニブ、Ｌ−ドーパ、レフルノミド、レテルモビル、レトロゾール、レベチラセタム、レボフロキサシン、レボチロキシン、リドカイン、リドカイン、リネゾリド、ロバプラチン、ロミタピド、ロピナビル、マラビロック、メロキシカム、メルファラン、メルカプトプリン、メロペネム、メスナ、メトトレキサート、メチルナルトレキソン、メチルフェニデート、メトプロロール、ミダゾラム、ミノサイクリンＩＶ、ミトキサントロン、モキシフロキサシン、ミコフェノール酸モフェチル、ナロキソン、ナルトレキソン、ナプロキセン、ネファゾドン、ネララビン、ネルフィナビル、ネビラピン、ニロチニブ、ニルタミド、ニトロソウレア、ノルトリプチリン、オメセタキシンメペスクシナート、オマダサイクリン、オメプラゾール、オピオイド、例えばコデイン、メペリジン、フェンタニル、モルヒネ、オキシコドン、ヒドロコドン、ヒドロモルフォンまたはメタドン、オキサリプラチン、オクスプレノロール、オキシブチニン、オキシメトロン、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、パロノセトロン、パントプラゾール、パラセタモール、ペメトレキセド、ペンタゾシン、ペントスタチン、フェニレフリン、ピルメノール、白金、プラゾマイシン、プレリキサホル、ポナチニブ、プララトレキサート、プレディゾン、プレドニゾロン、プロポフォール、プロプラノロール、キナプリル、ラジウム２２３塩化物、ラロキシフェン、ラルテグラビル、ラルチトレキセド、ラマトロバン、レガデノソン、レミフェンタニル、レミマゾラムベシレート、リルピビリン、リノテカン、リスペリドン、リトナビル、リバスチグミン、ロフェコキシブ、ロミデプシン、ロペグインターアルファ−２ｂ、ロチゴチン、サルブタモール、サルメテロール、サマリウム１５３レキシドロナム、サキナビル、セレギリン、セルトラリン、シルデナフィル、シンバスタチン、ソリブジン、スタブジン、スルファサラジン、六フッ化硫黄、スマトリプタン、スニチニブ、タクリン、タモキシフェン、テクネチウムＴｃ ９９ｍトロフォスタット、テジゾリド、テモゾロミド、テノホビル、テルビナフィン、テストステロンプロピオネート、チオテパ、チアネプチン、チゲサイクリン、チザニジン、トピラマート、トポテカン、トレミフェン、トレプロスチニル、トレチノイン、トリシリビン、ベラパミル、ベルテポルフィン、ビノレルビン、ビスモデジブ、ボグリボース、ザルシタビン、ジドブジン、ジロートン、ゾレドロン酸；またはそれらの薬学的に許容され得る塩から選択される。
コード番号、一般名または商品名によって特定された活性化合物の構造は、標準概論“Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ”の現行版から、またはデータベース、例えばＰａｔｅｎｔｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（例えば、ＩＭＳ Ｗｏｒｌｄ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）から採用され得る。
本発明の治療薬を負荷したエクソソームはまた、公知の治療プロセス、例えばホルモンまたは放射線の投与と組み合わせて使用され得る。特定の実施形態では、提供される治療薬を負荷したエクソソームは、特に、放射線療法に対して感度不良を示す腫瘍の処置のために放射線増感剤として使用される。
本発明の方法の治療薬を負荷したエクソソームおよび組成物は、疾患、障害または状態、例えば癌、自己免疫障害、増殖性障害、炎症性障害、神経変性障害もしくは神経学的障害、統合失調症、骨関連障害、肝疾患または心疾患の重症度を処置または軽減するために有効な任意の量および任意の投与経路を使用して投与され得る。必要とされる正確な量は、被験体の種、年齢および全身状態、感染の重症度、特定の薬剤、その投与様式などに応じて、被験体ごとに異なるであろう。本発明の治療薬を負荷したエクソソームは、好ましくは、投与の容易性および投与量の均一性のために単位剤形で製剤化される。本明細書で使用される場合、「単位剤形」という表現は、処置すべき患者に適切な薬剤の物理的に別個の単位を指す。しかしながら、本発明の治療薬を負荷したエクソソームおよび組成物の総１日使用量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されると理解されよう。任意の特定の患者または生物のための具体的な有効用量レベルは、処置されている障害および障害の重症度；用いられる特定の治療薬を負荷したエクソソームの活性；用いられる特定の組成物；患者の年齢、体重、一般健康、性別および食事；用いられる特定の治療薬を負荷したエクソソームまたは化合物の投与時間、投与経路および排泄速度；処置の継続期間；用いられる特定の治療薬を負荷したエクソソームまたは化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物、ならびに医学分野で周知の類似の要因を含む様々な要因に依存するであろう。本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
４．エクソソームを作製して治療剤を負荷する方法
ミルク由来エクソソームを含むエクソソームを作製する生産方法
一態様では、ミルクまたは初乳由来エクソソームは、一次供給源のミルク産生動物から採取され得る。いくつかの実施形態では、エクソソームは、ウシ、ヒト、バッファロー、ヤギ、ヒツジ、ラクダ、ロバ、ウマ、トナカイ、ムースまたはヤク由来のミルクまたは初乳に由来する（例えば、単離または操作される）。いくつかの実施形態では、ミルクは、ウシに由来する。いくつかの実施形態では、ミルクまたは初乳は、粉末形態である。いくつかの実施形態では、エクソソームを生産し、続いて、ミルク中に天然に存在するエクソソーム構造を再現するために適合された乳腺上皮細胞株から単離する。別の態様では、トランスジェニックウシまたは他のミルク産生哺乳動物（その特徴は、薬物送達、例えば経口薬物送達のための望ましい特性を有するエクソソームの生産について最適化されている）によって産生されるミルクから、適切なエクソソームを単離する。
エクソソームは天然に生産されるが、依然として体液または細胞培養物から採取する必要がある。これは、スケーラブルな生産の観点から重要な結果を有する。例えば、通常、非エクソソーム内容物は、エクソソームを含有する培地または混合物から除去されなければならない。
一態様では、エクソソームは、バッチ様プロセスで細胞株を使用して提供され、エクソソームは、細胞株培地から定期的に採取され得る。細胞株ベースの生産方法の課題は、ウシ胎仔血清（細胞を成長させるために使用される培地）中に存在するエクソソームからの混入の可能性である。別の態様では、この課題は、目的の細胞株に純粋に由来するエクソソームが培地から採取されるように、適切な無血清培地条件を使用して克服され得る。
一態様では、エクソソームは、ミルクまたは初乳溶液から単離または誘導される。バルク溶液からのエクソソームの分離は、慎重に実施されなければならない。いくつかの実施形態では、０．２ミクロンフィルタなどのフィルタは、溶液からより大きな破片を除去するために使用される。いくつかの実施形態では、（例えば、８０〜１２０ナノメートル範囲の）ミルクエクソソームの分離方法は、特定のエクソソーム特性、例えばサイズ、電荷、密度、形態、タンパク質含有量、脂質含有量、または固定化表面上の抗体（免疫単離）によって認識されるエピトープに基づく分離を含む。
いくつかの実施形態では、分離方法は、遠心分離工程を含む。いくつかの実施形態では、分離方法は、ＰＥＧ系体積排除ポリマーを含む。
いくつかの実施形態では、分離方法は、バルク溶液から所望のミルクエクソソームを分離するための超遠心分離を含む。いくつかの実施形態では、２０，０００×ｇで最大３０分間の初期スピン、続いて約１００，０００×ｇ〜約１２０，０００×ｇの範囲の約１〜約２時間の複数回スピンを伴う連続工程は、ミルク由来エクソソーム中に豊富なペレットまたは単離物を提供する。
いくつかの実施形態では、超遠心分離は、例えばリン酸緩衝食塩水または最適な溶液に再懸濁され得るミルク由来エクソソームを提供する。いくつかの実施形態では、エクソソームは、スクロース密度勾配への曝露時のそれらの属性を評価し、１．１３〜１．１９ｇ／ｍＬの範囲で画分を選別することによって、所望の特性についてさらに評価される。
他の実施形態では、本発明のエクソソームの単離は、異なるサイズの粒子を排除するフィルタの組み合わせを使用することを含み、例えば、０．４５μＭまたは０．２２μＭフィルタは、目的のものよりも大きな小胞または粒子を排除するために使用され得る。エクソソームまたは微小胞は、所望の微小胞について濃縮するために最終的にはビーズ（例えば、アガロース／セファロースビーズ、磁気ビーズ、または精製を容易にする他のビーズ）と組み合わせて、抗体、レクチン、または目的の微小胞に特異的に結合する他の分子を含むいくつかの手段によって精製され得る。目的の微小胞タイプに由来するマーカーもまた、微小胞を精製するために使用され得る。例えば、所定のバイオマーカー、例えば表面結合タンパク質を発現する微小胞は、他のタイプから所望の微小胞を区別するために無細胞流体から精製され得る。微小胞を精製するための他の技術としては、密度勾配遠心分離（例えば、スクロース勾配またはオプティプレップ勾配）および電荷分離が挙げられる。これら濃縮および精製技術はすべて、他の方法と組み合わされ得るか、またはそれ自体で使用され得る。微小胞を精製するためのさらなる方法は、市販の試薬、例えばＥｘｏＱｕｉｃｋ（商標）（Ｓｙｓｔｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）または全エクソソーム単離キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標）Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用した選択的沈殿によるものである。
適切なエクソソームはまた、人工的な生産手段によって例えばエクソソーム分泌細胞から誘導され、および／または当技術分野で公知のように操作され得る。
いくつかの実施形態では、エクソソームは、粒径を評価するためのナノ粒子追跡分析、サイズおよび構造を評価するための透過型電子顕微鏡法、エクソソームに関連する目的の種を追跡するための電子顕微鏡法の前におけるエクソソームもしくはそれらの内容物の免疫金標識、免疫ブロッティング、またはＢｒａｄｆｏｒｄ Ａｓｓａｙを使用したタンパク質含有量評価の１つまたは複数によってさらに特性評価され得る。
本発明に適合する微小胞内に治療剤を封入するための様々な方法が当技術分野で公知である。したがって、本発明は、開示される治療剤を微小胞、例えばミルク由来エクソソームに封入する方法を提供する。いくつかの実施形態では、前記方法は、微小胞をエレクトロポレーション、超音波処理、鹸化、押出、凍結／融解サイクルに曝露するか、または２つまたはそれを超える溶媒の混合物中で治療剤および微小胞を区分化して、微小胞への治療剤の封入を達成する工程を含む。
いくつかの実施形態では、微小胞の単離は、生（すなわち、非低温殺菌および／または非均一化ミルクまたは初乳）を高速で遠心分離して微小胞を単離することによって達成される。いくつかの実施形態では、ミルク由来微小胞は、１００ｍＬのミルク当たり約５０ｍｇ超（例えば、約３００ｍｇ超）の量の微小胞を提供する方法で単離される。いくつかの実施形態では、本発明は、ミルク由来微小胞を単離する方法であって、一定量のミルク（例えば、生乳または初乳）を提供する工程；および前記ミルクに対して遠心分離、例えば連続遠心分離を実施して、１００ｍＬのミルク当たり約５０ｍｇ超のミルク由来エクソソームを得る工程を含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、連続遠心分離は、１００ｍＬのミルク当たり３００ｍｇ超のミルク由来エクソソームをもたらす。いくつかの実施形態では、一連の連続遠心分離は、４℃、２０，０００×ｇで３０分間の第１の遠心分離、４℃、１００，０００×ｇで６０分間の第２の遠心分離、および４℃、１２０，０００×ｇで９０分間の第３の遠心分離を含む。いくつかの実施形態では、次いで、単離されたエクソソームを約５ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で保存して凝固を防止し、１つまたはそれを超える治療剤の封入のために、単離されたエクソソームを有効に使用することを可能にし得る。いくつかの実施形態では、単離されたエクソソームを０．２２μｍフィルタに通過させて、任意の凝固粒子および微生物、例えば細菌を除去する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される微小胞組成物は、単離時に微小胞内に存在することによって、または初期単離後に、治療剤として使用するためのｍｉＲＮＡを微小胞に負荷することによって、微小胞に負荷される１つまたはそれを超えるマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、微小胞に負荷されるｍｉＲＮＡは、微小胞の供給源に天然に存在しない。例えば、哺乳動物のミルクエクソソームは、天然状態の負荷ｍｉＲＮＡを含むことがあり、このようなｍｉＲＮＡは、単離時にエクソソームに負荷されたままである。このような天然に存在するｍｉＲＮＡは、微小胞に人工的に負荷される任意のｍｉＲＮＡ治療剤（または他のｉＲＮＡ、オリゴヌクレオチドまたは他の生物製剤）とは区別される。
微小胞への負荷、例えば封入は、例えばその内容物を放出させるための洗剤を用いて、治療薬を負荷したミルク由来微小胞の膜を破壊することによって確認され得る。含有量レベルは、例えば、タンパク質／ＲＮＡ／ＤＮＡ定量アッセイによって評価され得る。
いくつかの実施形態では、本開示のミルク由来エクソソームは、ストレス条件、または治療剤が不活性化、代謝もしくは分解される条件、例えば唾液、消化酵素、胃の酸性条件、蠕動運動および／または胃腸管中の摂取成分を分解する様々なプロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼおよびヌクレアーゼへの曝露に耐えながら、それらのカーゴを送達することができる。
例示
実施例１：ミルクからのエクソソームの単離
目的
このプロトコールの目的は、いくつかの遠心分離および超遠心分離工程を使用して、ミルクからエクソソームを単離するための手順を確立することである。
定義
ホエイ−可視脂肪の分離後に残存するミルクの流体部分
ＲＣＦ−相対遠心力
ＲＰＭ−毎分回転数
Ｋｆ−Ｋ係数
参考文献
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｒｅｓｅａｒｃｈｇａｔｅ．ｎｅｔ／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ／２８４２３４２９６＿Ｂｏｖｉｎｅ＿ｍｉｌｋ−ｄｅｒｉｖｅｄ＿ｅｘｏｓｏｍｅｓ＿ｆｏｒ＿ｄｒｕｇ＿ｄｅｌｉｖｅｒｙ
材料
ミルク
カルシウムおよびマグネシウム１Ｘを含まないリン酸緩衝生理食塩水（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｅｌｌｇｒｏ ＃２１−０４０−ＣＶ）
蒸留水
消耗品および器具
スクリューキャップを有する１Ｌボトル
スクリューキャップを有する５００ｍＬボトル
２９×１０４ｍｍポリカーボネート遠心チューブ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＃３７５００２）
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｅａｓｙｐｅｔ ３血清ピペット
２５ｍＬ血清ピペットチップ（ＶＷＲ ＃４１４００４−２６８）
１Ｌビーカー
ワットマン紙、サイズ１（Ｗｈａｔｍａｎ ＃１００１−１２５）
漏斗を有するＡｅｒｏｂｉｅ Ａｅｒｏｐｒｅｓｓ（Ａｅｒｏｂｉｅ）
２５×８９ｍｍ超透明超遠心チューブ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＃３４４０５８）
ＳＷ−３２Ｔｉローター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）
Ｏｐｔｉｍａ ＸＥ９０超遠心機（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０００μＬピペット
１０００μＬピペットチップ（ＴｉｐＯｎｅ ＃１１１１−２８２１）
Ｏｃｅｌｏｔオービタルロッカー（ＶＷＲ）
４℃冷蔵庫
手順
細胞残屑を除去する
２５ｍＬピペットチップ（ＶＷＲ ＃４１４００４−２６８）が取り付けられたＥａｓｙｐｅｔ３血清ピペット（ＶＷＲ）を使用して、４０ｍＬのミルクサンプルを２５×８９ｍｍ超透明超遠心チューブ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＃３４４０５８）に入れて充填する。Ｎ＝６本のチューブ。
注：チューブの上部から３ｍｍ以内までチューブに充填しなければならず、すべてのチューブを０．５ｇ以内にバランスしなければならない。
製造業者の指示にしたがって、ＳＷ−３２Ｔｉローター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）が取り付けられたＯｐｔｉｍａ ＸＥ９０超遠心機（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）にチューブを入れる。
サンプルを以下の設定で遠心分離する：
ホエイ流体を収集する
遠心機からサンプルを取り出し、ペレットを乱さないように注意しながら、すべてのサンプルを１Ｌビーカーに穏やかに注ぐ。
注：チューブから流体を注ぐために、チューブの上部に沈着した脂肪層に穴をあける必要があり得る。
１枚のワットマン紙を６４ｍｍ直径の円盤に切る。
円盤をＡｅｒｏｂｉｅ Ａｅｒｏｐｒｅｓｓのフィルタキャップに入れ、フィルタキャップを所定の位置に固定する。
Ａｅｒｏｐｒｅｓｓ漏斗を１Ｌビーカーに入れ、Ａｅｒｏｐｒｅｓｓ本体を漏斗に入れる。
［０９２０］から収集した流体をＡｅｒｏｐｒｅｓｓ本体に注ぐ。Ａｅｒｏｐｒｅｓｓプランジャーを追加し、すべての流体を濾過して１Ｌビーカーに収集するまで、プランジャーを穏やかに押し下げる。
大きな粒子を除去する
２５ｍＬピペットチップ（ＶＷＲ ＃４１４００４−２６８）が取り付られたＥａｓｙｐｅｔ３血清ピペット（ＶＷＲ）を使用して、３０ｍＬの濾過ホエイ流体を２５×８９ｍｍ超透明超遠心チューブ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＃３４４０５８）に充填する。適切に充填／バランスしたチューブに関する製造業者の指示を満たすために、必要に応じて、蒸留水を各チューブに添加する（約１０ｍＬ）。Ｎ＝６。
注：チューブの上部から３ｍｍ以内までチューブに充填しなければならず、すべてのチューブを０．５ｇ以内にバランスしなければならない。
製造業者の指示にしたがって、ＳＷ−３２Ｔｉローター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）が取り付けられたＯｐｔｉｍａ ＸＥ９０超遠心機（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）にチューブを入れる。
サンプルを以下の設定で遠心分離する：
エクソソーム画分を収集する
超遠心機からサンプルを取り出す。２５ｍＬピペットチップ（ＶＷＲ ＃４１４００４−２６８）が取り付られたＥａｓｙｐｅｔ３血清ピペット（ＶＷＲ）を使用して、サンプルの上部から３０ｍＬの上清を慎重に除去し、２５×８９ｍｍ超透明超遠心チューブ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＃３４４０５８）に入れる。適切に充填／バランスしたチューブに関する製造業者の指示を満たすために、必要に応じて、蒸留水を各チューブに添加する。Ｎ＝６。
製造業者の指示にしたがって、ＳＷ−３２Ｔｉローター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）が取り付けられたＯｐｔｉｍａ ＸＥ９０超遠心機（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）にチューブを入れる。
サンプルを以下の設定で遠心分離する：
エクソソームを洗浄する
超遠心機からサンプルを取り出す。
２５ｍＬピペットチップ（ＶＷＲ ＃４１４００４−２６８）が取り付られたＥａｓｙｐｅｔ３血清ピペット（ＶＷＲ）を使用して、ペレットを乱さないように注意しながら、サンプルの上部から３５ｍＬの上清を慎重に除去する。比較分析のために必要な場合には、上清を５００ｍＬスクリュートップボトルに入れ、４℃冷蔵庫に最大１週間入れ得る。
ペレットを再懸濁するために、１０００μｌピペットチップが取り付られたＥｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０００μｌピペット（ＴｉｐＯｎｅ ＃１１１１−２８２１）を使用して、遠心機中の残存流体を激しく上下に２０回ピペッティングする。
注：ペレットの完全性に応じて、この工程中にペレットを完全に再懸濁することは不可能であり得る。
２５ｍＬピペットチップ（ＶＷＲ ＃４１４００４−２６８）が取り付られたＥａｓｙｐｅｔ３血清ピペット（ＶＷＲ）を使用して、約３５ｍＬのＰＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｅｌｌｇｒｏ ＃２１−０４０−ＣＶ）を再懸濁エクソソームペレットの上部に添加した（またはしかしながら、チューブを充填するためにはかなり必要である）。十分なＰＢＳを添加して、適切に充填／バランスしたチューブに関する製造業者の指示を確実に満たす。Ｎ＝６。
製造業者の指示にしたがって、ＳＷ−３２Ｔｉローター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）が取り付けられたＯｐｔｉｍａ ＸＥ９０超遠心機（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）にチューブを入れる。
サンプルを以下の設定で遠心分離する：
超遠心機からサンプルを取り出し、合計３回の洗浄のために工程［０９３７］〜［０９４２］を繰り返す。
エクソソームの再懸濁
最後の洗浄が完了したら、超遠心機からサンプルを取り出す。
ペレットを乱さないように注意しながら、サンプルの上部から上清を慎重に除去する。比較分析のために必要な場合には、上清を１Ｌスクリュートップボトルに入れ、４℃冷蔵庫に最大１週間入れ得る。
１０００μｌピペットチップが取り付けられたＥｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １０００μｌピペット（ＴｉｐＯｎｅ ＃１１１１−２８２１）を使用して、１ｍＬのＰＢＳをサンプルに添加してペレットを覆い、激しく上下に２０回ピペッティングすることによってペレットを再懸濁する。
最終再懸濁エクソソームペレットを１５ｍＬコニカル遠心チューブ（ＶＷＲ＃ＴＣ１５００）にプールする。
注：再懸濁エクソソームの最終プール容量は６〜８ｍＬとすべきである。
遠心チューブを４℃冷蔵庫内のＯｃｅｌｏｔオービタルロッカー（ＶＷＲ）上に一晩、またはペレットが完全に溶解するまで置く。
滅菌
０．８／０．２ｕｍ Ｓｕｐｏｒ Ｍｅｍｂｒａｎｅ ｆｉｌｔｅｒ（Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃４６５８）を１０ｍＬルアーロックシリンジ（ＭｃＭａｓｔｅｒ Ｃａｒｒ ＃７５１０Ａ６５３）に取り付け、シリンジからピストンを取り外す。
再懸濁エクソソームをシリンジの開口部に注ぐ。
ピストンをシリンジに再び取り付け、プールエクソソーム懸濁液を濾過して１５ｍＬコニカル遠心チューブ（ＶＷＲ＃ＴＣ１５００）に入れる。
短期貯蔵の場合にはチューブを貯蔵用４℃冷蔵庫に最大１週間入れ、長期貯蔵の場合には−２０℃冷蔵庫に入れる。
結果：
実施例２：マイクロＢＣＡアッセイプロトコール
目的：
タンパク質含有溶液を分析し、その中に含まれる総タンパク質含有量を定量すること。このアッセイは、３．１２５〜２００μｇ／ｍＬのタンパク質濃度で正確である。
材料：
１×ＰＢＳバッファー（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：２１−０４０−ＣＶ，Ｌｏｔ ＃：３２５１６００５）
１０−２０μＬピペットチップ、ＲＮＡｓｅフリー（ＵＳＡ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１１１０−３８００）
２０−２００μＬピペットチップ、ＲＮＡｓｅフリー（ＵＳＡ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１１１１−０７０６）
１００−１０００μＬピペットチップ、ＲＮＡｓｅフリー（ＵＳＡ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１１１１−２８２１）
マイクロＢＣＡ分析キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：２３２３５，Ｌｏｔ ＃：ＰＪ２０３８２３Ｂ）
試薬ＢＣＡ−Ａ
試薬ＢＣＡ−Ｂ
試薬ＢＣＡ−Ｃ
ウシ血清アルブミン標準液（２ｍｇ／ｍＬ）
ポリスチレン試薬リザーバー（２）（ＶＷＲ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：８９０９４−６６６）
透明底９６ウェルプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：９２０５）
９６ウェルプレートシーリングテープ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１５０３６）
ＲＮＡｓｅフリー１．５ｍＬ遠心チューブ（Ａｍｂｉｏｎ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：ＡＭ１２４００，ｌｏｔ ＃：０２４７０００３）
５０ｍＬ遠心チューブ（ＶＷＲ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：８９０３９−６５６）
器具：
５４０−５９０ｎｍフィルタ付きプレートリーダー（Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００）
インキュベーティングマイクロプレートシェーカー（ＶＷＲ）
ピペット（各種）
ワーキング試薬：
使用すべきウェルの総数（標準ウェルおよびサンプルウェル）に１１０を掛けることによって、必要なワーキング試薬の量を計算する。これは、必要なワーキング試薬の量（μＬ）である。
１００−１０００μＬピペットを使用して、試薬ＢＣＡ−Ａ、ＢＣＡ−ＢおよびＢＣＡ−Ｃを２５：２４：１の比で混合して、所望の量またはワーキング試薬を得る。例えば、５ｍＬのワーキング試薬が必要である場合、２．５ｍＬのＢＣＡ−Ａ、２．４ｍＬのＢＣＡ−Ｂおよび０．１ｍＬのＢＣＡ−Ｃを５０ｍＬ遠心チューブに添加する。
遠心チューブ中で混合物を３〜５秒間ボルテックスし、混合の５時間以内に使用する。
方法：
マーカーを使用して、所望の実験のための９６ウェルプレート（標準曲線およびサンプル分析のためのウェルを含む）をマーキングする。ウェルプレートの例については、以下のサンプルレイアウトを参照のこと。
標準曲線の作成
プレートの下方に２倍連続希釈を実施して、標準曲線を作成する。
２０−２００μＬピペットを使用して、２０μＬの２μｇ／ｍＬウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）標準溶液をウェルＡ１、Ａ２およびＡ３に添加する。２０−２００μＬマルチチャンネルピペットを使用して、１８０μＬの１×ＰＢＳをこれら３つのウェルに添加し、上下に５回ピペッティングして混合する。２０−２００μＬマルチチャンネルピペットを使用して、１００μＬの１×ＰＢＳをプレートの下方に流して残りのウェルに添加する（Ｂ１〜Ｂ３からＨ１〜Ｈ３）。２０−２００μＬマルチチャンネルピペットを使用して、１００μＬの溶液をＡ１〜Ａ３からＢ１〜Ｂ３に移し、上下に５回ピペッティングして混合する。次のウェルプレートに対して継続し、ブランク（ＰＢＳのみ）としてウェルＨ１〜Ｈ３を残す。
注：最終標準ウェル（Ｇ１〜Ｇ３）から過剰な流体を除去して、１００μＬのみを確実に残すことを忘れないようにする。
サンプル調製
必要に応じて、分析すべきサンプルを希釈する。
必要量の正確なピペットを使用して、必要なサンプル量を１．５ｍＬ遠心チューブに添加する。
１００−１０００μＬピペットを使用して、遠心チューブに正しい希釈量の１×ＰＢＳを添加する。
遠心チューブに蓋をし、３〜５秒間ボルテックスする。
アッセイの実行
２０−２００μＬチップを有する２０−２００μＬピペットを使用して、１００μＬの各サンプルをマーキングしたサンプルウェルに３回反復で添加する。
２０−２００μＬマルチチャンネルピペットを使用して、試薬リザーバーから１００μＬのワーキング試薬をすべての標準曲線ウェルおよびサンプルウェルに添加する。
９６ウェルプレートシーリングテープでプレートを覆う。
マイクロプレートシェーカー中で、プレートを３７℃、１００ｒｐｍで２時間インキュベートする。
マイクロプレートシェーカーからプレートを取り出し、プレートリーダーを使用してプレートを５６２ｎｍで読み取る。
シーリングテープを除去する。
ラボコンピュータに設置されたｉ−ｃｏｎｔｒｏｌソフトウェアを使用してプレートリーダーを制御し、吸光度を測定する。
注：代わりのプレートリーダーを使用する場合、５４０〜５９０ｎｍの任意の利用可能なフィルタは許容され得るが、吸光度シグナルの減少をもたらし得る。
データ分析
プレートリーダーによって生成されたデータをＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにインポートする。
多項式回帰関数および標準曲線データを使用して、実験のための二次標準曲線を作成する。
データ補間機能を使用して、サンプルデータを標準曲線にフィッティングする。
１４日間の安定性研究の結果は、図４に示されている。４℃で保存したサンプルについて、タンパク質濃度を毎日測定した（上のグラフ）。１４日目に、それぞれ室温、４℃、−２０℃および−８０℃で保存したサンプルについても、タンパク質濃度を測定した（下のグラフ）。結果は、試験したすべての温度において、生乳（「ＰＴ生」データ）および初乳（「ＰＴ初乳」データ）の両方のミルクエクソソームが少なくとも１４日間安定であることを示している。
実施例３：粒子濃度およびサイズ測定
目標：粒子濃度を測定する複数の方法間の一致をチェックする。ＮＴＡ（ナノ粒子追跡分析）−ブラウン運動に基づく画像ベース検出。ＩＺＯＮ／ＴＲＰＳ（可変抵抗パルスセンシング）−粒子が小孔を通過する際の水置換に基づく抵抗測定。粒径を測定するために、動的光散乱（ＤＬＳ）も使用される。
ナノサイト追跡分析：
サンプル：
ＵＬ＿１３ＡＰＲ１７＿０１
ＵＬ＿２０ＡＰＲ１７＿０１
ＥＸＯ１−２５ＡＰＲ１７＿０１
ＥＸＯ１−２６ＡＰＲ１７＿０１
ＥＸＯ１−０９ＭＡＹ１７＿０１
ＥＸＯ１−１５ＭＡＹ１７＿０１
輸送のためのサンプルの調製：
１００−１０００μＬピペットを使用して、４５０μＬのＤＩ水を、キャップを有する４つの異なる１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに添加する。
５−５０μＬピペットを使用して、５０μＬのＵＬ＿１３ＡＰＲ１７＿０１を取り、４５０μＬのＤＩ水を充填した１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに入れる。３回反転させ、パラフィルムを１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブの上部に巻き付ける。
５−５０μＬピペットを使用して、５０μＬのＵＬ＿２０ＡＰＲ１７＿０１を取り、４５０μＬのＤＩ水を充填した１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに入れる。３回反転させ、パラフィルムを１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブの上部に巻き付ける。
５−５０μＬピペットを使用して、５０μＬのＥＸＯ１＿２５ＡＰＲ１７＿０１を取り、４５０μＬのＤＩ水を充填した１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに入れる。３回反転させ、パラフィルムを１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブの上部に巻き付ける。
５−５０μＬピペットを使用して、５０μＬのＥＸＯ１＿２６ＡＰＲ１７＿０１を取り、４５０μＬのＤＩ水を充填した１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに入れる。３回反転させ、パラフィルムを１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブの上部に巻き付ける。
１００−１０００μＬピペットを使用して、４５０μＬの１×ＰＢＳを、キャップを有する６つの異なる１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに添加する。
５−５０μＬピペットを使用して、５０μＬのＵＬ＿１３ＡＰＲ１７＿０１を取り、４５０μＬの１×ＰＢＳを充填した１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに入れる。３回反転させ、パラフィルムを１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブの上部に巻き付ける。
５−５０μＬピペットを使用して、５０μＬのＵＬ＿２０ＡＰＲ１７＿０１を取り、４５０μＬの１×ＰＢＳを充填した１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに入れる。３回反転させ、パラフィルムを１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブの上部に巻き付ける。
５−５０μＬピペットを使用して、５０μＬのＥＸＯ１＿２５ＡＰＲ１７＿０１を取り、４５０μＬの１×ＰＢＳを充填した１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに入れる。３回反転させ、パラフィルムを１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブの上部に巻き付ける。
５−５０μＬピペットを使用して、５０μＬのＥＸＯ１＿２６ＡＰＲ１７＿０１を取り、４５０μＬの１×ＰＢＳを充填した１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに入れる。３回反転させ、パラフィルムを１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブの上部に巻き付ける。
５−５０μＬピペットを使用して、５０μＬのＥＸＯ１＿０９ＭＡＹ１７＿０１を取り、４５０μＬの１×ＰＢＳを充填した１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに入れる。３回反転させ、パラフィルムを１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブの上部に巻き付ける。
５−５０μＬピペットを使用して、５０μＬのＥＸＯ１＿１５ＭＡＹ１７＿０１を取り、４５０μＬの１×ＰＢＳを充填した１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに入れる。３回反転させ、パラフィルムを１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブの上部に巻き付ける。
輸送のために、各サンプルをドライアイスでパックする。
ナノ粒子追跡分析（ＮＴＡ）は、粒子を含有する希釈水性懸濁液の可視化および分析のための技術である。粒子は、サンプルセルを通過するレーザービームの光を散乱させるので可視化される。ブラウン運動下では、１０００ｎｍ未満のサイズを有する粒子は、溶液中で自由に移動する。可視化された粒子の飛跡は、カメラによって記録される。粒子が移動した単位時間当たりの飛跡長はソフトウェアによって分析され、約１０〜１０００ｎｍの直径を有する粒子のサイズ、サイズ分布プロファイルおよび濃度の決定を可能にする。粒径は、ストークス・アインシュタイン方程式によって球相当の流体力学的半径に計算される。
Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ ＬＭ１０機器は、ＣＣＤカメラおよび６３８ｎｍレーザーを備える。
材料：
ａ．シリンジフィルタ０．２２μｍ，Ｍｉｌｌｅｘ−ＧＶ，ｌｏｔ Ｒ６ＭＡ０９８０９，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ
ｂ．パウダーフリー検査手袋，Ｐｕｒｐｌｅ Ｎｉｔｒｉｌｅ，ｌｏｔ ＳＹ３５５ＺＺＺ＿０４ＡＸ，Ｈａｌｙａｒｄ
ｃ．ＰＢＳ，１０×，ＵＳＰ滅菌，ｌｏｔ ０８６６Ｃ３２５，Ａｍｒｅｓｃｏ
ｄ．マイクロチューブ，１．５ｍＬ，ｌｏｔ ６０Ｕ４４１１，Ｓａｒｓｔｅｄｔ
ｅ．Ｖｏｒｔｅｘ Ｍａｘｉ−Ｍｉｘ １，ｔｙｐｅ １６７００，Ｔｈｅｒｍｏｌｙｎｅ
ｆ．細胞培養グレードの水，ｌｏｔ ３０８１６００５，Ｃｏｒｎｉｎｇ
機器の適格性確認：
１×ＰＢＳ溶液中で１００ｎｍポリスチレンビーズ標準を分析することによって、機器の適格性確認を実施した。モードサイズは許容基準を満たし、１０２．０ｎｍと測定された。
サンプル：
サンプル（合計１０個）を分析に供した。
サンプル調製：
サンプル調製および分析のすべての工程において、標準的な実験室用保護具（手袋、コート、ゴーグルおよびマスク）を使用して、ダスト粒子によるサンプルの汚染を防止した。分析日に０．２２μｍシリンジフィルタによってＰＢＳ溶液を濾過し、研究前にナノサイト分析によってその純度を確認した。ＰＢＳ純度評価は、サンプルブランクとして報告されている。
サンプルを−８０℃冷凍庫に入れた。分析時に、室温におけるインキュベーションによって各サンプルを解凍し、分析直前に調製した。ボルテックスで３０秒間振盪することによって、サンプル溶液をホモジナイズした。バッチのサンプルは異なる濃度を有するように見え、それに応じて希釈して、粒子１０８個／ｍＬの範囲内にフィッティングした。
１０μＬの元のサンプルをボルテックスで３０秒間振盪した後に９９０μＬのＰＢＳ１×に添加し、ボルテックスで３０秒間振盪することによって、１０００倍希釈を実施した。その後、１００μＬの希釈サンプルを９００μＬのＰＢＳ１×に添加して１００倍の最終希釈を達成し、ボルテックスシェーカーで３０秒間混合した。
１０μＬの元のサンプルをボルテックスで３０秒間振盪した後に９９０μＬのＰＢＳ１×に添加し、ボルテックスで３０秒間振盪することによって、２５０倍希釈を実施した。その後、４００μＬの希釈サンプルを６００μＬのＰＢＳ１×に添加して１００倍の最終希釈を達成し、ボルテックスシェーカーで３０秒間混合した。
１０μＬの元のサンプルをボルテックスで３０秒間振盪した後に９９０μＬのＰＢＳ１×に添加し、ボルテックスで３０秒間振盪することによって、１００倍希釈を実施した。
各サンプルについて、１５秒までに１０回反復の分析を実施した。分析後、各サンプルを−８０℃冷凍庫に戻した。
分析シーケンスおよび注意事項
ａ．サンプルブランク−研究前に、希釈に使用した１×ＰＢＳを分析した。粒子は６０秒以内に観察されず、溶液は、サンプル調製に使用するために適切に無菌であることが見出された。
ｂ．Ｅｘｏ１−Ｌｏｔ２５Ａｐｒ２０１７−０１を１０００倍希釈で分析した。
ｃ．Ｅｘｏ１＿Ｌｏｔ２６Ａｐｒ１７＿０１を１０００倍希釈で分析した。
ｄ．最初に、Ｅｘｏ１−Ｌｏｔ２６Ａｐｒ２０１７−０１＿ＰＢＳを１０００倍希釈で分析した。サンプル濃度は、所望の１０８濃度範囲よりも低いことが見出され、２５０倍のさらなる希釈物を調製および分析した。
ｅ．Ｅｘｏ１−Ｌｏｔ１５Ｍａｙ１７＿０１を調製し、１０００倍希釈で分析した。モードピークを１１５ｎｍで測定し、すべての複製において、２００ｎｍ粒子の存在が観察された。３００ｎｍのサイズを有する粒子は、１０回反復中３回で見出された。
ｆ．Ｅｘｏ１−Ｌｏｔ９Ｍａｙ１７−０１を１０００倍希釈で分析した。
ｇ．最初に、Ｅｘｏ１＿Ｌｏｔ２５Ａｐｒ１７＿０１ＰＢＳを調製し、１０００倍希釈で分析した。濃度は１０８未満であることが見出されたので、２５０倍のさらなる希釈物を調製および分析した。
結果は、以下の表７に示されている。サンプルＥＸＯ１−ＬＯＴ２６ＡＰＲ２０１７のサイズ分布グラフは、図１に示されている。
注：ここでおよび機器報告で報告されている濃度は、希釈係数を説明するものではない。元のサンプルにおける粒子濃度を達成するためには、報告されている濃度に希釈係数を掛けなければならない。
ＥＸＯＩＺＯＮ：
使用したサンプル：
サンプルの調製：
１．１×ＰＢＳで事前に１：１０希釈したエクソソームサンプル（ＥＸＯ１−ＬＯＴ２６ＡＰＲ２０１７）をＩＺＯＮランで使用した。
ｑＮａｎｏ（Ｉｚｏｎ）の概要：
ｑＮａｎｏ機器は、希釈水性粒子溶液の分析のための技術であるＴＲＰＳ（可変抵抗パルスセンシング）を使用する。粒子の濃度およびサイズは、既知のサイズの単一の細孔を有するナノ膜を通る圧力によって誘導される粒子移動中に測定される。電解質が充填された細孔に電圧を印加し、イオン電流が生じる。粒子が細孔を通過するにつれて、それらは電気抵抗を一時的に増加させ、粒子体積に正確に比例する抵抗パルスを作り出す。細孔を通過する各粒子の実際の測定は、サイズおよび濃度について正確に較正されている較正粒子を使用して達成される。粒子濃度は、指定のサイズ範囲の粒子数／ｍｌである。サイズ分布に基づく粒径および正確な数は、粒子ごとに実際の粒子から導き出される。電荷分布に基づく粒子電荷および数もまた、粒子ごとに実際の粒子から導き出される。粒子の流速は粒子濃度に比例するので、粒子数は、個々の粒径と同時に正確に得ることができる。
材料：
ａ．シリンジフィルタ０．２２μｍ，Ｍｉｌｌｅｘ−ＧＶ，ｌｏｔ Ｒ６ＭＡ０９８０９，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ
ｂ．パウダーフリー検査手袋，Ｐｕｒｐｌｅ Ｎｉｔｒｉｌｅ，ｌｏｔ ＳＹ３５５ＺＺＺ＿０４ＡＸ，Ｈａｌｙａｒｄ
ｃ．ＤＰＢＳ，１０ｘ，Ｌｏｔ ＤＰＢＳ，１０ｘ，ＵＳＰ滅菌，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｃｈｅｒ
ｄ．マイクロチューブ，１．５ｍＬ，ｌｏｔ ６０Ｕ４４１１，Ｓａｒｓｔｅｄｔ
ｅ．Ｖｏｒｔｅｘ Ｍａｘｉ−Ｍｉｘ １，ｔｙｐｅ １６７００，Ｔｈｅｒｍｏｌｙｎｅ
ｆ．細胞培養グレードの水，ｌｏｔ ３０８１６００５，Ｃｏｒｎｉｎｇ
ｇ．１５０ｎｍ ｑＮａｎｏ ｐｏｒｅ，ｌｏｔ ＮＰ１５０，ＩＺＯＮ
サンプル調製：
サンプル調製および分析のすべての工程において、標準的な実験室用保護具（手袋、コート、ゴーグルおよびマスク）を使用して、ダスト粒子によるサンプルの汚染を防止した。分析日に０．２２μｍシリンジフィルタによってＤＰＢＳ溶液を濾過し、研究前にナノサイト分析によってその純度を確認した。送達時に、サンプルを−８０℃冷凍庫に入れた。分析時に、室温におけるインキュベーションによってサンプルを解凍し、１０μＬの溶液をナノサイト分析に使用した。１５μＬのサンプルを１４８５μＬの濾過ＤＰＢＳ溶液と混合し、３分間ボルテックスし、ｑＮａｎｏによって分析した。
上記表では、Ｄ１０は、そのサイズ未満のすべての粒子の累積質量が集団の１０％に相当するサイズ（計算では１０４．１ｎｍ）を指す。Ｄ５０およびＤ９０は、上記に示されているサイズ未満のすべての粒子の累積質量がそれぞれ集団の５０％または９０％未満に相当する対応する計算サイズを指す。
１４日間の安定性研究の結果は、図５に示されている。４℃で保存したサンプルについて、粒径を毎日測定した（上のグラフ）。１４日目に、それぞれ室温、４℃、−２０℃および−８０℃で保存したサンプルについても、粒径を測定した（下のグラフ）。結果は、試験したすべての温度において、生乳（「ＰＴ生」データ）および初乳（「ＰＴ初乳」データ）の両方のミルクエクソソームが少なくとも１４日間安定であることを示している。
結論：
ＩＺＯＮおよびＮＴＡは、同様の粒子濃度測定をもたらす。ＮＴＡは、希釈直線性実験中の粒子濃度を報告するための信頼性のあるツールとして使用され得る。エクソソームは、様々な温度条件下で少なくとも１４日間安定であった。
ＤＬＳプロトコール：
目的：
実験サンプルに見られる微粒子のサイズを分析および定量すること。このデータを作成するために使用した器具は、１μｍのサイズまで正確である。
材料：
カバー付き３８４ウェルガラス底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ＢｉｏＯｎｅ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：８２０５１−５４６）
１×ＰＢＳバッファー（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：２１−０４０−ＣＶ，Ｌｏｔ ＃：３２５１６００５）
２０−２００μＬピペットチップ（ＵＳＡ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１１１１−０７０６）
１００−１０００μＬピペットチップ（ＵＳＡ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１１１１−２８２１）
キャップ付き１．５ｍＬプラスチック遠心チューブ（Ａｍｂｉｏｎ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：ＡＭ１２４００，ｌｏｔ ＃：０２４７０００３）
遠心チューブラック
ＤＬＳ対応プレートリーダー（Ｗｙａｔｔ ＤｙｎａＰｒｏ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ）およびＤＬＳソフトウェア。
方法：
サンプル調製：
測定を妨げるので、試験すべきサンプルがダストまたは他の混入物質を含まないことを確認する。
必要に応じて、試験すべきサンプルを希釈する。通常、ＰＢＳによる１：１０希釈が適切である。
２０−２００μＬピペットを使用して、４０μＬの各サンプルを３８４ウェルプレートに負荷する。プレートの左側（ウェル１）から開始し、右側（ウェル２４）に向かって移動する。その後の分析のためにどのウェルがどのサンプルを含有するかを書き留める。
実施例４：貯蔵期間および腸安定性短期研究
貯蔵期間および腸安定性研究（１４日間、４℃）の結果は、図６に示されている。上の棒グラフに示されているように、試験した２つの各サンプルは、研究中にそれらの粒径を維持した。腸安定性研究（ｐＨ２．５ ＳＧＦ、疑似胃液およびｐＨ７ ＳＩＦ、疑似腸液）の結果は、下の棒グラフに示されている。
実施例５：超音波処理によるエクソソームへのｓｉＲＮＡの負荷
目的：
超音波処理サイクル手順によってｓｉＲＮＡおよび／またはコレステロール−ｓｉＲＮＡをエクソソームに負荷すること。使用したｓｉＲＮＡは、ＧＦＰ ｓｉＲＮＡ（緑色蛍光タンパク質の発現をターゲティングおよびサイレンシングする公開された有効なｓｉＲＮＡ対照）である。機能試験は、ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルで有効なノックダウンを示す。
材料：
１０×ＰＢＳバッファー（Ｇｉｂｃｏ ＃７００１１−０４４）
１０−２００μＬピペットチップ、ＲＮＡｓｅフリー（ＵＳＡ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１１１０−３８００）
２０−２００μＬピペットチップ、ＲＮＡｓｅフリー（ＵＳＡ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１１１１−０７０６）
１００−１０００μＬピペットチップ、ＲＮＡｓｅフリー（ＵＳＡ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１１１１−２８２１）
ＧＦＰ ｓｉＲＮＡ（ＭＷ １３，９２５．３ｇ／ｍｏｌ）（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）：「ｓｉＲＮＡ」
ＧＦＰ ｓｉＲＮＡ、Ａｃｃｅｌｌ（ＭＷ １４，１９２．７ｇ／ｍｏｌ）（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）：「コレステロール−ｓｉＲＮＡ」
ＲＮＡｓｅフリー１．５ｍＬ遠心チューブ（Ａｍｂｉｏｎ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃ＡＭ１２４００）
初乳由来のエクソソーム
器具：
４℃冷蔵庫
Ｑｓｏｎｉｃａ Ｑ７００超音波処理器
Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｈｏｔプレート
ピペット（各種）
ビーカー（各種）
Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｌａｂｓ Ｍｉｃｒｏ Ｆｌｏａｔ−ａ−Ｌｙｚｅｒ，１００ｋＤ，２５０−５００μＬ（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｌａｂｓ ＃Ｆ２３５０７１）
１ｍＬシリンジ
バッファー：
ヌクレアーゼフリー水中の１×ＰＢＳ：
ヌクレアーゼフリー水を使用して１０×ＰＢＳを１：１０希釈し、初期サンプル調製に使用した
方法：
サンプル調製および超音波処理：
以下に示されているように、ピペットを使用して正確な量の試薬を１．５ｍＬ遠心チューブに添加することによって、「ｓｉＲＮＡエクソソーム」および「コレステロール−ｓｉＲＮＡエクソソーム」の両方の０．２５ｍＬバッチを調製した。ヌクレアーゼフリーＰＢＳを使用した。５００：１のｓｉＲＮＡ／エクソソーム比を両群に使用した。
注：０．２５ｍＬ最終体積算定根拠にしたがって、サンプルを調製した。しかしながら、さらなる２５０μＬのＰＢＳを各サンプルに添加して、サンプルの体積が超音波処理に確実に十分であるようにした。
サンプルをボルテックスして、確実に完全混合した。各サンプル群の５０μＬアリコートを取り出し（「超音波処理前」）、その後の分析のために４℃冷蔵庫に入れた。
出力２０％のＱｓｏｎｉｃａ Ｑ７００によって、サンプルを４秒間オン／２秒間オフの６サイクルで超音波処理し、続いて、氷上に２分間置き、次いで、さらに６サイクル超音波処理した。
各サンプル群の５０μＬアリコートを取り出し（「超音波処理後」、「透析前」）、その後の分析のために４℃冷蔵庫に入れた。
超音波処理サンプルから遊離ｓｉＲＮＡを除去するための透析：
製造業者の指示にしたがって、透析デバイス（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｌａｂｓ Ｍｉｃｒｏ Ｆｌｏａｔ−ａ−Ｌｙｚｅｒ，１００ｋＤ，２５０−５００μＬ（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｌａｂｓ ＃Ｆ２３５０７１））を調製した。
１ｍＬシリンジを使用して、残りの４００μＬの各サンプルを透析デバイスに負荷した。
室温のＰＢＳが充填された別個の２００ｍＬビーカーにデバイスを入れた。
ビーカーを撹拌プレート上に置いて流体を穏やかに撹拌し、それらをアルミホイルで覆った。
サンプルを放置して、透析を一晩実施した。
透析が完了したら、１ｍＬシリンジを使用してデバイスからサンプルを取り出し、別個の１．５ｍＬ遠心チューブに入れた（「超音波処理後、透析」）。
以下の表１１に示されているように、他の負荷方法も検討する。
実施例６：エクソソーム対ｓｉＲＮＡの最適負荷比の調査
目的：薬物負荷会合に必要な最小エクソソーム対ｓｉＲＮＡ比を決定すること。
器具：
Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心機５４３０
ＢｉｏＲａｄ Ｍｉｎｉ Ｐｒｏｔｅａｎ Ｔｅｔｒａ Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｒａｄ Ｐｏｗｅｒ Ｐａｃ Ｂａｓｉｃ
Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｈｏｔプレート
ＣｈｅｍｉＤｏｃ ２．０ ＭＰ
材料：
１０×トリス／ホウ酸／ＥＤＴＡ（ＴＢＥ）核酸電気泳動バッファーｐＨ８．３（Ｂｉｏｒａｄ ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．１６１−０７３３）
１０％Ｍｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ ＴＢＥ Ｇｅｌ，１０ウェル，３０μｌ（Ｂｉｏｒａｄ ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．４５６５０３３）
ゲルローディングバッファーＩＩ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．ＡＭ８５４６Ｇ）
ＴｉｐＯｎｅ、０．１−１０μｌピペットチップ（ＵＳＡ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．１１１１−３７００）
ＴｉｐＯｎｅ、１−２００μｌピペットチップ（ＵＳＡ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．１１１１−０７３６）
ＴｉｐＯｎｅ、１００−１０００μｌピペットチップ（ＵＳＡ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．１１１１−３７００）
ＲＮＡｓｅフリー微量遠心チューブ１．５ｍＬ（Ａｍｂｉｏｎ ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．ＡＭ１２４００ ｌｏｔ ｎｏ．０２４１７００３）
ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｇｅｌ Ｓｔａｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．Ｓ１１４９４）
ＧＦＰ ｓｉＲＮＡ（ＭＷ １３，９２５．３ｇ／ｍｏｌ）（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）
ＧＦＰ ｓｉＲＮＡ、Ａｃｃｅｌｌ（ＭＷ １４，１９２．７ｇ／ｍｏｌ）（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）
１０×ＰＢＳバッファー（Ｇｉｂｃｏ ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．７００１１−０４４ ｌｏｔ ｎｏ．１６９４２８０）
ヌクレアーゼフリー水、オートクレーブ処理、０．２μｍ濾過（Ａｍｂｉｏｎ ｃａｔａｌｏｇ ｎｏ．ＡＭ９９３９ ｌｏｔ ｎｏ．１７０２０８２）
ＥＸＯ１−ＬＯＴ２６ＡＰＲ２０１７
バッファー／溶液：
ヌクレアーゼフリー水中１×ＰＢＳバッファー
注：ヌクレアーゼフリー水で１×ＰＢＳバッファーを調製するために、ヌクレアーゼフリー水を使用して１０×ＰＢＳバッファーを１：１０希釈する。
ヌクレアーゼフリー水中１×ＰＢＳバッファー中の０．１ｎｍｏｌ／μｌのｓｉＲＮＡ。
注：ヌクレアーゼフリー水中１×ＰＢＳバッファー中の０．１ｎｍｏｌ／μｌのｓｉＲＮＡを調製するために、３００μｌのヌクレアーゼフリー水中１×ＰＢＳバッファーを３０ｎｍｏｌのＧＦＰ ｓｉＲＮＡ（ＭＷ １３，９２５．３ｇ／ｍｏｌ）（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）に添加する。
ヌクレアーゼフリー水中１×ＰＢＳバッファー中の０．１ｎｍｏｌ／μｌのｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡ。
注：ヌクレアーゼフリー水中１×ＰＢＳバッファー中の０．１ｎｍｏｌ／μｌのｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡを調製するために、３２０μｌのヌクレアーゼフリー水中１×ＰＢＳバッファーを３２ｎｍｏｌのＧＦＰｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡ（ＭＷ １４，１９２．７ｇ／ｍｏｌ）（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）に添加する。
ランニングバッファー：１×トリス／ホウ酸／ＥＤＴＡ（ＴＢＥ）核酸電気泳動バッファー
１３０ｍＭトリス、４５ｍＭホウ酸および２．５ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ８．３
注：１０×ストックＴＢＥバッファーから１×ＴＢＥランニングバッファーを調製するために、１００ｍＬのストックＴＢＥバッファーを９００ｍＬの脱イオン水と混合する。
ローディングバッファー：ゲルローディングバッファーＩＩ
９５％ホルムアミド、１８ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０２５％ＳＤＳ、０．０２５％キシレンシアノール、０．０２５％ブロモフェノールブルー
手順：
サンプル調製：
７つのＲＮａｓｅフリー微量遠心チューブを取り、それらを１〜７とラベリングする。
１μｌの０．１ｎｍｏｌ／μｌ ｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡをチューブ１〜４に添加する。
１μｌの０．１ｎｍｏｌ／μｌ ｓｉＲＮＡをチューブ６および７に添加する。
以下の量のＥＸＯ１−２６ＡＰＲ２０１７をチューブに添加する：
チューブ２−１７μｌ
チューブ３−６μｌ
チューブ４−１μｌ
チューブ５−１７μｌ
チューブ７−１７μｌ
以下の量のヌクレアーゼフリー水中１×ＰＢＳをチューブに添加する。
チューブ１−１９μｌ
チューブ２〜２μｌ
チューブ３−１３μｌ
チューブ４−１８μｌ
チューブ５−３μｌ
チューブ６−１９μｌ
チューブ７−２μｌ
サンプルを短時間ボルテックスし、サンプルをアルミホイルで覆い、次いで、それらを室温で９０分間インキュベートする。
ゲル電気泳動のためのサンプルの調製：
２０μｌのゲルローディングバッファーＩＩを各チューブに添加する。
簡潔に言えば、ゲルローディングバッファーＩＩを含むすべてのサンプルをボルテックスおよびスピンダウンしてから、すべてのチューブを９５℃水浴に５分間入れる。
熱変性後、遠心機でチューブをスピンダウンしてから、サンプルをゲルに負荷する。注：二次構造の形成を回避するために、サンプルをゲルに直ぐに負荷しなければならない。
ＰＡＧＥ：
Ｂｉｏｒａｄ Ｍｉｎｉ Ｐｒｏｔｅａｎ Ｔｅｔｒａ Ｃｅｌｌ電気泳動モジュールのための設定
電極集合体を取り、クランピングフレームを無菌平面上の開放位置にセットする。ゲルカセットの底からテープを除去し、（短いプレートを内側に向けて）ゲルカセットの一方をゲル支持体上に置く；ゲル支持体をクランプフレームアセンブリの底に成形する；２つの支持体がアセンブリの両側にある。注：ゲルは、クランピングフレームの中心から離れて傾いて３０°の角度で静止するであろう。また、最初のゲルを配置する場合、クランピングフレームのバランスが保たれ、転倒しないように注意する。クランプフレームの反対側（内側を向いた側）上のバッファーダムをゲル支持体上に置く。注：この時点では、ゲルカセットおよびバッファーダムは両方とも、クランピングフレームに対して傾斜している。片手を使用して、ゲルおよびバッファーダムの両方を互いに対して穏やかに引っ張り、クランピングフレームに組み込まれたグリーンガスケットに対してそれらがしっかりと直角に当たることを確認する。注：短いプレートがグリーンガスケットの上部のノッチの真下に位置することを確認する。片手を用いてゲルカセットおよびバッファーをグリーンガスケットに対して穏やかに押し込みながら（両方のゲルに一定の圧力を保持して、それらを所定の位置に保持しながら）、クランピングフレームのグリーンアームをゲル上にスライドさせて、それらを所定の位置に固定する。電極集合体をセルの背面位置に置いて、赤色（−）および黒色（＋）の電極ジャックがタンクの右上内側の赤色および黒色のマーキングと一致することを確認する。ゲルカセットの短いプレートの上部に対して、ランニングバッファー（１×ＴＢＥ）を電極集合体の内部チャンバーに充填する。ランニングバッファーがゲル中のウェルからわずかに溢れ出るようにする。
ゲルへのサンプルローディング
０．５−１０μｌピペットを使用して、１０μｌの各サンプルを添加し、それらをウェルに入れる。
ゲル電気泳動
十分なランニングバッファー（１×ＴＢＥ）を添加して、タンク上の２つのゲルをマーキングするラインに対してタンクを充填する。
蓋をＭｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ Ｔｅｔｒａタンクの上に置く。色分けされたバナナプラグおよびジャックを整列させ、次いで、蓋がタンクにしっかりと強固に固定されるまで、均等な圧力を使用して親指で蓋を押し込むことを確認する。注：蓋のジャックと電極集合体のバナナプラグとを合わせて正しい方向にする。
導線を適切な極性でＢｉｏｒａｄ Ｐｏｗｅｒ Ｐａｃ Ｂａｓｉｃ電源に挿入する。ゲルを３５Ｖで９０分間泳動する。
ゲル除去
電気泳動の完了後、電源をオフにして導線との接続を切る。タンクの蓋を取り外し、電極集合体を慎重に取り出す。ランニングバッファーを排出および廃棄する。注：バッファーをこぼすのを回避するために、常に、集合体のアームを開く前にバッファーを排出する。集合体のアームを開き、ゲルカセットを取り出す。ゲルカセットからゲルを取り出すために、ゲルカセットの両側のプラスチックシールを破すことによって、ゲルカセットの２つのプレートを穏やかに分離する。これは、側面からゲルカセットの２つのプレート間にピンセットまたはハサミを押し込むことによって行われ得る。注：ゲルカセットの２つのプレート間のプラスチックシールを破す間に、ゲルを破壊しないようにする。
ｓｉＲＮＡポリアクリルアミドゲルの蛍光イメージング：
ＣｈｅｍｉＤｏｃ ２．０ ＭＰへのドアを開き、イメージングプラットフォームを引き出す。
Ｃｈｅｍｉ／ＵＶ／ＳｔａｉｎＦｒｅｅトレイをイメージングプラットフォーム上に置き、それがイメージングプラットフォーム上の白色のノブと整列することを確認する。
小さなゲルガイドをＣｈｅｍｉ／ＵＶ／ＳｔａｉｎＦｒｅｅトレイ上に置き、次いで、ゲルを小さなゲルガイドの中央に置く。
イメージングプラットフォームをスライドさせてＣｈｅｍｉＤｏｃに戻し、ドアを閉じる。ドアを閉じたら、画面左上のカメラアイコンを選択する。
タッチスクリーン上でカメラを選択する
ＭＵＬＴＩを選択する。
ゲルのサイズ（小）を選択する。
アプリケーションを選択し、アプリケーションを核酸ゲルおよびＡｌｅｘ６４７（７００／５０）に設定する
露出を選択し、自動高速を選択する。
一番下の左隅でカメラを選択して画像を撮影する。
ポリアクリルアミドゲルのＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｇｅｌ Ｓｔａｉｎ：
ＣｈｅｍｉＤｏｃ ２．０ ＭＰからゲルを取り出し、ゲルを覆うために十分な量の１×ＴＢＥバッファー中１×ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｇｅｌ Ｓｔａｉｎを含む容器にゲルを入れ、次いで、撹拌しながら染色液中でゲルを４０分間インキュベートする。注：ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｇｅｌ Ｓｔａｉｎは感光性であるので、アルミホイルまたは箱でゲル容器を覆う。
ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｔａｉｎで染色したポリアクリルアミドゲルのイメージング
ＣｈｅｍｉＤｏｃ ２．０ ＭＰへのドアを開き、イメージングプラットフォームを引き出す。
Ｃｈｅｍｉ／ＵＶ／ＳｔａｉｎＦｒｅｅトレイをイメージングプラットフォーム上に置き、それがイメージングプラットフォーム上の白色のノブと整列することを確認する。
小さなゲルガイドをＣｈｅｍｉ／ＵＶ／ＳｔａｉｎＦｒｅｅトレイ上に置き、次いで、ゲルを小さなゲルガイドの中央に置く。
イメージングプラットフォームをスライドさせてＣｈｅｍｉＤｏｃに戻し、ドアを閉じる。ドアを閉じたら、画面左上のカメラアイコンを選択する。
タッチスクリーン上でカメラを選択し、シングルを選択し、ゲルのサイズ（小）を選択する。
アプリケーションを選択し、アプリケーションを核酸ゲルおよびＳＹＢＲ Ｇｏｌｄに設定する。
露出を選択し、自動高速を選択する。
一番下の左隅でカメラを選択して画像を撮影する。
結果：
図７は、負荷のための最適なｓｉＲＮＡ対エクソソーム比を決定するための実験の結果を示す。図の上部は、ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ ｓｔａｉｎで染色したＲＮＡのＰＡＧＥゲルを示す。図の下部は、ＲＮＡフルオロフォアのＰＡＧＥを示す。ＲＮＡフルオロフォアゲルのＰＡＧＥでは、ウェル１、３および４において遊離ｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡが見られ、ウェル６および７において遊離ｓｉＲＮＡが見られた。エクソソームレーンであるレーン５では、ＲＮＡは検出されなかった。
ＲＮＡフルオロフォアゲルのＰＡＧＥでは、ウェル２および３において、ウェルの出発点近くでｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡが検出された。それはまた、レーン２および３では遊離ｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡのバンドの密度が低いこと、ならびにＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ ｓｔａｉｎで染色したＲＮＡのＰＡＧＥ上の負荷エクソソームのエクソソーム領域（上の画像）では、その対照と比較してバンドが明確であることによっても裏付けられる。
興味深いことに、ＲＮＡフルオロフォアのＰＡＧＥでは、２つおよび１つの明確なバンドであるのと比較して、ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ ｓｔａｉｎで染色したＲＮＡのＰＡＧＥでは、ｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡは４つの明確なバンドとして現れ、ｓｉＲＮＡの場合には２つのバンドとして現れる。これは、ｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡおよびｓｉＲＮＡのフルオロフォアが二本鎖構造の片側に位置することに起因し得る。変性中、鎖が分離するので、フルオロフォアを含有するｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡおよびｓｉＲＮＡは、ＲＮＡフルオロフォアのＰＡＧＥ上に現れ、ｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡおよびｓｉＲＮＡのすべての鎖は、ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ ｓｔａｉｎによるＲＮＡ染色のＰＡＧＥ上に現れた。
ウェル６および７では、対照および薬物を負荷したサンプルにおいて、ｓｉＲＮＡバンド強度は比較的同じであった。これは、ｓｉＲＮＡがエクソソームと会合しなかったことを意味する。
結論：
ｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡおよびエクソソームの最適な薬物負荷比は、１個のエクソソーム粒子に対して５００個超のｓｉＲＮＡ分子（例えば、１個のエクソソーム粒子に対して５００〜１４００個のｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡ分子）である。ｓｉＲＮＡを負荷するために、より多くのエクソソーム粒子（＞１×１０１１個の粒子）が必要であると思われる。
さらなる比を調査し、結果を図８および９に示す。ゲルは、負荷されたｓｉＲＮＡの量がエクソソームの数と共に増加することを実証している。
実施例７：凍結融解サイクル
１．５ｍＬ Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ中で、５００／１ ｓｉＲＮＡ／エクソソームの２つの１２０μＬサンプルを調製した。サンプルは、以下のものを含有していた：
１）５５μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿１１ＪＵＬ２０１７＿０１；粒子１．０９Ｅ１３個／ストックｍＬ），５μＬのｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ，４．９８Ｅ−１０ｍｏｌ／μＬ）および６０μＬのＰＢＳ；
２）５５μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿１１ＪＵＬ２０１７＿０１；粒子１．０９Ｅ１３個／ストックｍＬ），７μＬのコレステロール−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ）および５８μＬのＰＢＳ。
ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７およびＣｈｏｌ−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７の吸光度スペクトルにより、コレステロール構築物が６６６ｎｍで１．４倍高い吸光度（ＤＹ６７７の励起波長）（これは、１．４倍高い色素濃度に対応する）を有することが示された。したがって、これを考慮して、ストック溶液の体積を調整した。
ｓｉＲＮＡ／エクソソームの２つのサンプルと接触する（ｃｏｎｔａｃｔｉｎｇ）２つのＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブを１２回の凍結融解サイクルに供した。それらが完全に凍結するまで（約３分間）、チューブをドライアイス上に保持した。続いて、チューブを３７℃の水浴に浸し、溶液が流体に変わるまで（約１分間）保持した。１１回目のサイクルの後、サンプルを−８０℃冷凍庫に入れ、使用前に２日間保持した。
Ｓｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ実験において、サンプルを使用した。
実施例８：凍結融解によって封入したｓｉＲＮＡ構築物のＳｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ
メチルビオロゲン（パラコート）は優れた電子受容体であるので、多くのフルオロフォアの蛍光の電子移動消光に関与し得る。ＭＶ２＋もまた、水溶性かつ脂質膜不透過性である。したがって、それは、脂質膜（リポソーム、エクソソーム）に封入された色素と相互作用しない水溶性の色素の発光をクエンチするであろう。
したがって、封入された色素の割合は、Ｓｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒ方程式：
を使用して計算され得る。
フルオロフォアがクエンチャーに完全に曝露されると、フルオロフォアの発光は、クエンチャー濃度の増加と共に直線的に減少する。クエンチ不可能な画分（封入された色素）がある場合、発光はプラトーに達するであろう。約１Ｍ濃度のクエンチャーを用いると、完全なクエンチが観察されるであろう。
材料：
１０×ＰＢＳバッファー（Ｇｉｂｃｏ ＃７００１１−０４４）
１０−２００μＬピペットチップ、ＲＮＡｓｅフリー（ＵＳＡ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１１１０−３８００）
２０−２００μＬピペットチップ、ＲＮＡｓｅフリー（ＵＳＡ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１１１１−０７０６）
１００−１０００μＬピペットチップ、ＲＮＡｓｅフリー（ＵＳＡ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃：１１１１−２８２１）
ＧＦＰ ｓｉＲＮＡ（ＭＷ １３，９２５．３ｇ／ｍｏｌ）（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）
ＧＦＰ ｓｉＲＮＡ、Ａｃｃｅｌｌ（ＭＷ １４，１９２．７ｇ／ｍｏｌ）（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）：「コレステロール−ｓｉＲＮＡ」
ＲＮＡｓｅフリー１．５ｍＬ遠心チューブ（Ａｍｂｉｏｎ，Ｃａｔａｌｏｇ ＃ＡＭ１２４００）
５％Ｍｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ ＴＢＥ Ｇｅｌ（ＢｉｏＲａｄ ＃４５６５０１３）
ＴＢＥゲルランニングバッファー
ゲルローディングバッファーＩＩ
ドライアイス
初乳由来エクソソームＥｘｏ１＿７ＡＵＧ２０１７＿０１
初乳粉末
メチルビオロゲン
器具：
Ｔｅｃａｎウェルプレートリーダー
Ｑｓｏｎｉｃａ Ｑ７００超音波処理器
ＢｉｏＲａｄ ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＭＰイメージングシステム
ＢｉｏＲａｄ Ｍｉｎｉ Ｐｒｏｔｅａｎ Ｔｅｔｒａ Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｒａｄ Ｐｏｗｅｒ Ｐａｃ Ｂａｓｉｃ
Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｈｏｔプレート
ピペット（各種）
ビーカー（各種）
バッファー：
ヌクレアーゼフリー水中１×ＰＢＳ
方法：
サンプル調製
以下のサンプルを調製した（総容量１２０μＬ）。ｓｉＲＮＡ／エクソソームの比は、５００／１で一定に保持した。
ｓｉＲＮＡ／ＰＢＳ：１１５μＬのＰＢＳ中の５μＬのｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（０．１ｎｍｏｌ）（０．００４ｎｍｏｌ）；
Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ／ＰＢＳ：１１３μＬのＰＢＳ中の７μＬのＣｈｏｌ−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（０．００４ｎｍｏｌ）；
ｓｉＲＮＡ／ｅｘｏ−０サイクル：５５μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿１１ＪＵＬ２０１７＿０１；粒子１．０９Ｅ１３個／ストックｍＬ）、５μＬのｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ，４．９８Ｅ−１０ｍｏｌ／μＬ）および６０μＬのＰＢＳ。暗所で、エクソソーム、ｓｉＲＮＡおよびＰＢＳを室温で９０分間インキュベートした。
Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ／ｅｘｏ−０サイクル：５５μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿１１ＪＵＬ２０１７＿０１；粒子１．０９Ｅ１３個／ストックｍＬ）、７μＬのコレステロール−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ）および５８μＬのＰＢＳ。暗所で、エクソソーム、ｓｉＲＮＡおよびＰＢＳを室温で９０分間インキュベートした。
ｓｉＲＮＡ／ｅｘｏ−１２サイクル：５５μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿１１ＪＵＬ２０１７＿０１；粒子１．０９Ｅ１３個／ストックｍＬ）、５μＬのｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ，４．９８Ｅ−１０ｍｏｌ／μＬ）および６０μＬのＰＢＳ。サンプルを１２回の凍結融解サイクルに供した。
Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ／ｅｘｏ−１２サイクル：５５μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿１１ＪＵＬ２０１７＿０１；粒子１．０９Ｅ１３個／ストックｍＬ）、７μＬのコレステロール−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ）および５８μＬのＰＢＳ。サンプルを１２回の凍結融解サイクルに供した。
ｓｉＲＮＡ／初乳：１．７ｍｇの初乳粉末を取り、５μＬのｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ）および１１５μＬのＰＢＳで水和する。懸濁液を１％振幅で４×１秒間のパルスに供する（全エネルギー２Ｊ）。サンプルを１５００ｃｆｍ、４℃で１分間で遠心分離する。
Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ／初乳：１．７ｍｇの初乳粉末を、７μＬのＣｈ−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ）および１１３μＬのＰＢＳで水和する。懸濁液を１％振幅で２×１秒間のパルスに供する（全エネルギー２Ｊ）。サンプルを１５００ｃｆｍ、４℃で１分間で遠心分離する。
エクソソームの凍結融解サイクル
１２０μＬの総サンプル容量について上記に示されている量で、エクソソーム、ｓｉＲＮＡ−Ｄｙ６７７またはｃｈｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７およびＰＢＳを混合した。次いで、サンプルを５秒間ボルテックスして、確実に完全混合した。サンプルをドライアイス上に４分間置くか、またはサンプルが完全に凍結するまで置いた。次いで、氷からサンプルを取り出し、室温の水浴中に３分間置くか、またはサンプルが完全に融解するまで置いた。このプロセスを１１回繰り返した。サンプルを−８０℃冷凍庫に入れて、１２回目のサイクルを行った。
クエンチ実験
各サンプルから８０μＬを取り、６００μＬに希釈した。溶液を２つに分けた。一方の３００μＬ溶液に、１８ｍｇのメチルビオロゲン（ＭＶ２＋）を０．２３３Ｍの最終濃度で添加した。以下の量／ウェルで、各サンプルを透明９６ウェルプレートに入れた：５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、０μＬ。５０μＬ／ウェルの全容量で、ウェルに、対応する量のＭＶストック溶液を添加した：０、５、１０、１５、２０、２５、３０、２５、４０、５０μＬ。３５回のフラッシュ、１２０回のゲイン、２０μ秒の積分時間、および１ウェル当たり複数回の読み取り（４×４）で、６６６ｎｍ（９ｎｍの帯域幅）の励起時に７００ｎｍ（２０ｎｍの帯域幅）でウェルプレートリーダーを使用して、発光を記録した。Ｓｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒ方程式：
にしたがって、データを分析した。
結果：
Ｉ０／Ｉ対［ＭＶ２＋］として、データをプロットした。結果は、図１３に示されている。ｓｉＲＮＡを含有するサンプルでは、蛍光の直線的な減少が観察された。これは、クエンチャーに対する色素の利用可能性、したがって封入およびエクソソームからの保護の欠如を示している。初乳／ｓｉＲＮＡのサンプルでは、蛍光の直線的な減少が観察された。しかしながら、この傾きは、ＰＢＳ中またはエクソソーム中のｓｉＲＮＡのものと比較してより低かった。プラトーの欠如は、ｓｉＲＮＡが封入されていないが初乳と相互作用しており、クエンチャーにとってあまり利用可能ではないことを示唆している。
ＰＢＳでは、ＣｈｓｉＲＮＡは完全にクエンチされる。エクソソーム５００／１と混合したｃｈｓｉＲＮＡ、１２回の凍結融解サイクルに供したｃｈｓｉＲＮＡ−エクソソーム、および初乳と混合して４×１秒間のサイクルで超音波処理したｃｈｓｉＲＮＡのサンプルでは、クエンチ不可能な画分が認められる。
ゲル電気泳動：
Ｍｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ（登録商標）電気泳動セルにおいて、５％ポリアクリルアミドＴＢＥゲルを使用した。ゲルを５０Ｖで１時間泳動した。ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ（１００００：１希釈）でｓｉＲＮＡを４０分間染色し、ＢｉｏＲａｄ ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＭＰ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを使用してイメージングした。
ゲル電気泳動のためのサンプル調製：
７．５μｌの各サンプルを新たなＲＮａｓｅフリー微量遠心チューブ、１ｍＬに移す。サンプルは、以下のとおりである：
ｓｉＲＮＡエクソソーム、超音波処理後、透析前
Ｃｈｏｌ．−ｓｉＲＮＡエクソソーム、超音波処理後、透析前
ｓｉＲＮＡエクソソーム、超音波処理後、透析
Ｃｈｏｌ．−ｓｉＲＮＡエクソソーム、超音波処理後、透析
ｓｉＲＮＡエクソソーム、超音波処理後、透析前
Ｃｈｏｌ．−ｓｉＲＮＡエクソソーム、超音波処理後、透析前
ｓｉＲＮＡエクソソーム、超音波処理後、透析
Ｃｈｏｌ．−ｓｉＲＮＡエクソソーム、超音波処理後、透析。
７．５μｌのゲルローディングバッファーＩＩを各ＲＮａｓｅフリー微量遠心チューブに添加する。簡潔に言えば、ゲルローディングバッファーＩＩを含むサンプル１〜４をボルテックスおよびスピンダウンしてから、すべてのチューブを９５℃水浴に５分間入れる。熱変性後、遠心機でサンプルを１０００ｇで１分間スピンダウンしてから、サンプルをゲルに負荷する。
ＰＡＧＥ分析
Ｂｉｏｒａｄ Ｍｉｎｉ Ｐｒｏｔｅａｎ Ｔｅｔｒａ Ｃｅｌｌ電気泳動モジュールのための設定
電極集合体を取り、クランピングフレームを無菌平面上の開放位置にセットする。ゲルカセットの底からテープを除去し、（短いプレートを内側に向けて）ゲルカセットの両方をゲル支持体上に置く；ゲル支持体をクランプフレームアセンブリの底に成形する；２つの支持体がアセンブリの両側にある。注：ゲルは、クランピングフレームの中心から離れて傾いて３０°の角度で静止するであろう。また、最初のゲルを配置する場合、クランピングフレームのバランスが保たれ、転倒しないように注意する。片手を使用して、ゲルの両方を互いに対して穏やかに引っ張り、クランピングフレームに組み込まれたグリーンガスケットに対してそれらがしっかりと直角に当たることを確認する。注：短いプレートがグリーンガスケットの上部のノッチの真下に位置することを確認する。
片手を用いてゲルカセットおよびバッファーをグリーンガスケットに対して穏やかに押し込みながら（両方のゲルに一定の圧力を保持して、それらを所定の位置に保持しながら）、クランピングフレームのグリーンアームをゲル上にスライドさせて、それらを所定の位置に固定する。
電極集合体をセルの背面位置に置いて、赤色（−）および黒色（＋）の電極ジャックがタンクの右上内側の赤色および黒色のマーキングと一致することを確認する。
ゲルカセットの短いプレートの上部に対して、ランニングバッファー（１×ＴＢＥ）を電極集合体の内部チャンバーに充填する。ランニングバッファーがゲル中のウェルからわずかに溢れ出るようにする。
ゲルへのサンプルローディング
０．５−１０μｌピペットを使用して、１０μｌの各サンプルを添加し、それらをウェルに入れる。
ゲル電気泳動
十分なランニングバッファー（１×ＴＢＥ）を添加して、タンク上の２つのゲルをマーキングするラインに対してタンクを充填する。蓋をＭｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ Ｔｅｔｒａタンクの上に置く。色分けされたバナナプラグおよびジャックを整列させ、次いで、蓋がタンクにしっかりと強固に固定されるまで、均等な圧力を使用して親指で蓋を押し込むことを確認する。注：蓋のジャックと電極集合体のバナナプラグとを合わせて正しい方向にする。
導線を適切な極性でＢｉｏｒａｄ Ｐｏｗｅｒ Ｐａｃ Ｂａｓｉｃ電源に挿入する。ゲルを５０Ｖで７５分間泳動する。
ゲル除去
電気泳動の完了後、電源をオフにして導線との接続を切る。タンクの蓋を取り外し、電極集合体を慎重に取り出す。ランニングバッファーを排出および廃棄する。注：バッファーをこぼすのを回避するために、常に、集合体のアームを開く前にバッファーを排出する。集合体のアームを開き、ゲルカセットを取り出す。
ゲルカセットからゲルを取り出すために、ゲルカセットの両側のプラスチックシールを破すことによって、ゲルカセットの２つのプレートを穏やかに分離する。これは、側面からゲルカセットの２つのプレート間にピンセットまたはハサミを押し込むことによって行われ得る。注：ゲルカセットの２つのプレート間のプラスチックシールを破す間に、ゲルを破壊しないようにする。
使用後、Ｍｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ Ｔｅｔｒａ ｃｅｌｌ電極集合体、クランピングフレームおよびミニタンクを蒸留水でリンスする。
ポリアクリルアミドゲルのＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｇｅｌ Ｓｔａｉｎ
ゲルを染色するために、ゲルを覆うために十分な量の１×ＴＢＥバッファー中１×ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｇｅｌ Ｓｔａｉｎを含む容器にゲルを入れ、暗所で撹拌しながら染色液中でゲルを４０分間インキュベートする。
イメージング
染色後、ＳＹＢＲ ＧｏｌｄおよびＡｌｅｘａ ６４７について、ＢｉｏＲａｄ ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＭＰ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍでゲルをイメージングした。結果は、図１５および図１６に示されている。
ｃｈｓｉＲＮＡによる超音波処理エクソソームのＳｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒクエンチ：
以下のサンプルを調製した（総容量１５０μＬ）。ｃｈｓｉＲＮＡの量を一定に保持し、ｃｈｓｉＲＮＡ／エクソソームの比を変化させた。サンプルを１％振幅で５×１秒間のサイクルで超音波処理するか、または超音波処理に供しなかった。
Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ／ｅｘｏ−２５０／１−０サイクル：１１０μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿７ＡＵＧ２０１７＿０１；粒子７．３６Ｅ１２個／ストックｍＬ）、５μＬのコレステロール−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ）および３５μＬのＰＢＳ。暗所で、混合物を氷上で９０分間インキュベートした。
Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ／ｅｘｏ−５００／１−０サイクル：５５μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿７ＡＵＧ２０１７＿０１；粒子７．３６Ｅ１２個／ストックｍＬ）、５μＬのコレステロール−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ）および９０μＬのＰＢＳ。暗所で、混合物を氷上で９０分間インキュベートした。
Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ／ｅｘｏ−１０００／１−０サイクル：２７．６μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿７ＡＵＧ２０１７＿０１；粒子７．３６Ｅ１２個／ストックｍＬ）、５μＬのコレステロール−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ）および１１７μＬのＰＢＳ。暗所で、混合物を氷上で９０分間インキュベートした。
Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ／ｅｘｏ−２５０／１−５サイクル：１１０μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿７ＡＵＧ２０１７＿０１；粒子７．３６Ｅ１２個／ストックｍＬ）、５μＬのコレステロール−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ）および３５μＬのＰＢＳ。混合物を１８Ｊの全エネルギー、１％振幅で５×１秒間のパルス（パルス間で２秒間の休止）で超音波処理した。暗所で、混合物を氷上で９０分間インキュベートした。
Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ／ｅｘｏ−５００／１−５サイクル：５５μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿７ＡＵＧ２０１７＿０１；粒子７．３６Ｅ１２個／ストックｍＬ）、５μＬのコレステロール−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ）および９０μＬのＰＢＳ。混合物を１８Ｊの全エネルギー、１％振幅で５×１秒間のパルス（パルス間で２秒間の休止）で超音波処理した。暗所で、混合物を氷上で９０分間インキュベートした。
Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ／ｅｘｏ−１０００／１−５サイクル：２７．６μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿７ＡＵＧ２０１７＿０１；粒子７．３６Ｅ１２個／ストックｍＬ）、５μＬのコレステロール−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ）および１１７μＬのＰＢＳ。混合物を１８Ｊの全エネルギー、１％振幅で５×１秒間のパルス（パルス間で２秒間の休止）で超音波処理した。暗所で、混合物を氷上で９０分間インキュベートした。
Ｃｈ−ｓｉＲＮＡ／Ｃｏｌｏｓｔｒｕｍ−１０サイクル：２ｍｇの初乳粉末を、５μＬのＣｈ−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ）および１４５μＬのＰＢＳで水和する。懸濁液を３０Ｊの全エネルギー、１％振幅で１０×１秒間の超音波処理パルス（パルス間で２秒間の休止）に供した。サンプルを１５００ｃｆｍ、４℃で１分間で遠心分離する。
各サンプルから１００μＬを取り、ＰＢＳで７００μＬに希釈した。溶液を２つに分けた。３２０μＬの溶液に、２０ｍｇのメチルビオロゲン（ＭＶ２＋）を０．２４３Ｍの最終濃度で添加した。以下の量／ウェルで、各サンプルを透明９６ウェルプレートに入れた：７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０、０μＬ。７０μＬ／ウェルの全容量で、ウェルに、対応する量のＭＶストック溶液を添加した：０、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０μＬ。３５回のフラッシュ、１２０回のゲイン、２０μ秒の積分時間、および１ウェル当たり複数回の読み取り（４×４）で、６６６ｎｍ（９ｎｍの帯域幅）の励起時に７００ｎｍ（２０ｎｍの帯域幅）で発光を記録した。Ｓｔｅｒｎ−Ｖｏｌｍｅｒ方程式：
にしたがって、データを分析した。
Ｉ０／Ｉ対［ＭＶ２＋］として、データをプロットした。図１７および図１８に示されているように、封入は、超音波処理および用いたｓｉＲＮＡ対エクソソーム比の両方によって影響を受ける。
ゲル電気泳動：
Ｍｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ（登録商標）電気泳動セルにおいて、５％ポリアクリルアミドＴＢＥゲルを使用した。氷浴中で、ゲルを１２０Ｖで２０分間泳動した。ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ（１００００：１希釈）でｓｉＲＮＡを４０分間染色し、ＳＹＢＲ ＧｏｌｄおよびＡｌｅｘａ ６４７について、ＢｉｏＲａｄ ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＭＰ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを使用してイメージングした。結果は、図１９および２０に示されている。
超遠心分離によるｃｈｏｌ ｓｉＲＮＡを負荷したエクソソームの精製：
８００μｌのｃｈｓｉＲＮＡ／エクソソームサンプルを５００／１の負荷比で調製した。２１μＬのｃｈｓｉＲＮＡ（０．１ｎｍｏｌ／μｌ）を３４０μＬのエクソソーム（７ＡＵＧ１７＿１）および６３９μＬのＰＢＳと混合した。エクソソーム濃度は、粒子２．５×１０１２個／ｍＬであった。
８００μｌのサンプルを個々の４．４ｍＬ Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ遠心チューブに移す。
１．２ｍＬのヌクレアーゼフリー水中１×ＰＢＳバッファーを各遠心チューブに添加する。遠心チューブをローター（ＳＷ６０Ｔｉ）に入れる。注：ローターは、適切な容量のさらなる遠心チューブとバランスしていた。
ローターをＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｎｔｅｒ Ｏｐｔｉｍａ ＸＥ９０ Ｕｌｔｒａｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅに入れる。サンプルを１３５，０００ＲＣＦ、４℃で１００分間遠心分離する。
遠心分離後、ローターから遠心チューブを取り出し、各遠心チューブから上清を除去する。
ペレットを８００μｌのヌクレアーゼフリー水中１×ＰＢＳバッファーに再懸濁する。
実施例９：３．８ｍＭメチルベータシクロデキストリンおよび１％ＴｒｉｔｏｎＸによるコレステロール可溶化
メチルベータシクロデキストリン（ＭＢＣＤ）は疎水性中心を有する水溶性高分子であり、その腔内でコレステロールにフィットして、コレステロールを水溶性にし得る。それは、細胞内の脂質膜からコレステロールを枯渇させるために使用される。説明については、図１０を参照のこと。
ＴｒｉｔｏｎＸは、界面活性剤として作用する分子であり、脂質膜に穴を作り出すことができる。
したがって、ＭＢＣＤは、エクソソームからｃｈｓｉＲＮＡを引き出す（可溶化する）はずであり、ＴｒｉｔｏｎＸは、脂質膜からｃｈｓｉＲＮＡを引き出さずにエクソソームを破裂させるはずである。
サンプル調製：
超遠心分離前のｃｈｓｉＲＮＡ／エクソソーム（５００／１）ストック溶液（８００μＬのｃｈｓｉＲＮＡ／エクソソームサンプル）を５００／１の負荷比で調製した。２１μＬのｃｈｓｉＲＮＡ（０．１ｎｍｏｌ／μｌ）を３４０μＬのエクソソーム（７ＡＵＧ１７＿１）および６３９μＬのＰＢＳと混合した。エクソソーム濃度は、粒子２．５×１０１２個／ｍＬであった。
超遠心分離後のｃｈｓｉＲＮＡ／エクソソーム（５００／１）再懸濁ペレット
超遠心分離からの上清
１％ＴｒｉｔｏｎＸを含有する超遠心分離後のｃｈｓｉＲＮＡ／エクソソーム（５００／１）再懸濁ペレット（以下のサンプル調製を参照のこと）
３．８ｍＭ ＭＢＣＤを含有する超遠心分離後のｃｈｓｉＲＮＡ／エクソソーム（５００／１）再懸濁ペレット（以下のサンプル調製を参照のこと）
超遠心分離前に５パルスで超音波処理したｃｈｓｉＲＮＡ／エクソソーム（５００／１）ストック溶液（３４０μＬのエクソソーム（Ｅｘｏ１＿７ＡＵＧ２０１７＿０１；粒子７．３６×１０１２個／ストックｍＬ）、２１μＬのコレステロール−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ，０．１μＭ）および６３９μＬのＰＢＳ。混合物を１８Ｊの全エネルギー、１％振幅で５×１秒間のパルス（パルス間で２秒間の休止）で超音波処理した。暗所で、混合物を氷上で９０分間インキュベートした）
（超音波処理ストックからの）超遠心分離後のｃｈｓｉＲＮＡ／エクソソーム（５００／１）再懸濁ペレット、（超音波処理ストックからの）超遠心分離からの上清
ｃｈｓｉＲＮＡ／初乳ストック（２１μＬのＣｈ−ｓｉＲＮＡ−ＤＹ６７７（ストック０．１ｎｍｏｌ／μＬ）および９７９μＬのＰＢＳで１３ｍｇ初乳粉末を水和させた。懸濁液を３０Ｊの全エネルギー、１％振幅で１０×１秒間の超音波処理パルス（パルス間で２秒間の休止）に供した。サンプルを１５００ｃｆｍ、４℃で１分間で遠心分離する）。
超遠心分離ｃｈｓｉＲＮＡ／ｅｘｏ（５００／１）ペレットからの９０μｌのサンプルを、１０μｌの３８．２ｍＭメチルベータ−シクロデキストリンＰＢＳ溶液または１０μｌのＰＢＳ中１０％ＴｒｉｔｏｎＸのいずれかと混合した。最終濃度は、３．８ｍＭ ＭＢＣＤおよび１％ＴｒｉｔｏｎＸであった。
６０μｌの各サンプルをブラックプラスチックウェルプレートに入れた。３５回のフラッシュ、１２０回のゲイン、２０μ秒の積分時間、および１ウェル当たり複数回の読み取り（４×４）で、６６６ｎｍ（９ｎｍの帯域幅）の励起時に７００ｎｍ（２０ｎｍの帯域幅）で発光を記録した。２ｎｍステップで、各サンプルの吸光度スペクトルを５５０〜７５０ｎｍで記録した。結果は、図２１〜２２に示されている。
ゲル電気泳動：
Ｍｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ（登録商標）電気泳動セルにおいて、５％ポリアクリルアミドＴＢＥゲルを使用した。ゲルを３５Ｖで９０分間泳動した。ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ（１００００：１希釈）でｃｈｓｉＲＮＡを４０分間染色し、ＳＹＢＲ ＧｏｌｄおよびＡｌｅｘａ ６４７について、ＢｉｏＲａｄ ＣｈｅｍｉＤｏｃ ＭＰ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍを使用してイメージングした。結果は、図２３〜２４に示されている。

Claims (29)

  1. 治療薬を負荷したミルクエクソソームであって、前記治療薬が生物学的治療剤であり、前記治療薬が、ミルクエクソソーム中に天然に存在しないものである、治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  2. 前記生物学的治療剤が、抗体、ホルモン、因子、補因子、代謝酵素、免疫調節酵素、インターフェロン、インターロイキン、胃腸管酵素、止血に関与する酵素もしくは因子、成長調節酵素、ワクチン、抗血栓溶解薬、毒素または抗毒素から選択される、請求項１に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  3. 前記生物学的治療剤がペプチドである、請求項１に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  4. 前記生物学的治療剤がタンパク質である、請求項３に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  5. 前記生物学的治療剤が核酸である、請求項１に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  6. 前記核酸が、一本鎖もしくは二本鎖ＤＮＡ、ｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍＲＮＡ、非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノオリゴヌクレオチドまたはそれらの類似体もしくはコンジュゲートから選択される、請求項５に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  7. 前記核酸が、約３０〜約２００ヌクレオチド（ｎｔ）長のｎｃＲＮＡまたは約２００〜約８００ｎｔ長の長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）である、請求項５に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  8. 前記ｌｎｃＲＮＡが、長鎖遺伝子間非コードＲＮＡ（ｌｉｎｃＲＮＡ）、プレ転写産物、プレｍｉＲＮＡ、プレｍＲＮＡ、競合内因性ＲＮＡ（ｃｅＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）、偽遺伝子、ｒＲＮＡまたはｔＲＮＡである、請求項７に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  9. 前記ｎｃＲＮＡが、ｐｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）、一次ｍｉＲＮＡ（プリｍｉＲＮＡ）または未成熟ｍｉＲＮＡ（プレｍｉＲＮＡ）から選択される、請求項７に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  10. 前記生物学的治療剤が、表１、表２、表３または表４のいずれかに記載されているもののいずれかから選択される、請求項１に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  11. ウシ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、バッファロー、ヤクまたはヒトのミルクまたは初乳に由来する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  12. 治療薬を負荷したミルクエクソソームであって、前記治療薬が、疎水基にコンジュゲートされた生物学的治療剤である、治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  13. 前記生物学的治療剤が、抗体、ホルモン、因子、補因子、代謝酵素、免疫調節酵素、インターフェロン、インターロイキン、胃腸管酵素、止血に関与する酵素もしくは因子、成長調節酵素、ワクチン、抗血栓溶解薬、毒素または抗毒素から選択される、請求項１２に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  14. 前記生物学的治療剤がペプチドである、請求項１２に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  15. 前記生物学的治療剤がタンパク質である、請求項１４に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  16. 前記生物学的治療剤が核酸である、請求項１２に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  17. 前記核酸が、一本鎖もしくは二本鎖ＤＮＡ、ｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｎｃＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ＬＮＡ、モルホリノオリゴヌクレオチドまたはそれらの類似体もしくはコンジュゲートから選択される、請求項１６に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  18. 前記核酸が、約３０〜約２００ヌクレオチド（ｎｔ）長の非コードＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）または約２００〜約８００ｎｔ長の長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）である、請求項１６に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  19. 前記ｌｎｃＲＮＡが、長鎖遺伝子間非コードＲＮＡ（ｌｉｎｃＲＮＡ）、プレ転写産物、プレｍｉＲＮＡ、プレｍＲＮＡ、競合内因性ＲＮＡ（ｃｅＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）、偽遺伝子、ｒＲＮＡまたはｔＲＮＡである、請求項１８に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  20. 前記ｎｃＲＮＡが、ｐｉｗｉ相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）、一次ｍｉＲＮＡ（プリｍｉＲＮＡ）または未成熟ｍｉＲＮＡ（プレｍｉＲＮＡ）から選択される、請求項１９に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  21. 前記生物学的治療剤が、表１、表２、表３または表４のいずれかに記載されているもののいずれかから選択される、請求項１２に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  22. 前記疎水基が、脂質、ステロール、ステロイド、テルペン、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチルまたはフェノキサジンから選択される、請求項１２〜２１のいずれか一項に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  23. ウシ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、バッファロー、ヤクまたはヒトのミルクまたは初乳に由来する、請求項１２〜２２のいずれか一項に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソーム。
  24. 請求項１〜２３のいずれか一項に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソームと、薬学的に許容され得るアジュバント、ビヒクルまたは担体とを含む、医薬組成物。
  25. 疾患、障害または状態の処置を必要とする患者における疾患、障害または状態を処置する方法であって、前記患者に、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の治療薬を負荷したミルクエクソソームまたはその薬学的に許容され得る組成物を投与することを含む、方法。
  26. 前記疾患、障害または状態が、過剰増殖性障害、ウイルスもしくは微生物感染、自己免疫疾患、アレルギー状態、炎症性疾患、心血管疾患、代謝性疾患または神経変性疾患から選択される、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記疾患、障害または状態が、表１、２、３、４または５に記載されているものから選択される、請求項２５または２６に記載の方法。
  28. 前記治療薬を負荷したミルクエクソソームが経口投与される、請求項２５〜２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. さらなる治療剤を前記患者に投与することをさらに含む、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載の方法。
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