KR20160095003A - 폐 특이적 전달을 위한 수단 - Google Patents

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KR20160095003A
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사일런스 테라퓨틱스 게엠베하
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Abstract

본 발명은 지질 조성물을 포함하는 조성물에 관한 것이며, 상기 지질 조성물은 화학식 I의 양이온 지질(여기서, n은 1, 2, 3, 및 4 중 어느 하나이고, m은 1, 2 및 3 중 어느 하나이고, Y'는 음이온이며, R1 및 R2는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C12-C18 알킬 및 선형 C12-C18 알케닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된다); 스테롤 화합물(여기서, 상기 스테롤 화합물은 콜레스테롤 및 스티그마스테롤로 이루어진 그룹으로부터 선택된다); 및 페길화된 지질(여기서, 상기 페길화된 지질은 PEG 모이어티를 포함한다)로 이루어지며, 상기 페길화된 지질은 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민(여기서, R3 및 R4는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C13-C17 알킬이고, p는 15 내지 130의 임의의 정수이다); 화학식 III의 페길화된 세라마이드(여기서, R5는 선형 C7-C15 알킬이고, q는 15 내지 130의 임의의 정수이다); 및 화학식 IV의 페길화된 디아실글리세롤(여기서, R6 및 R7은 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C11-C17 알킬이고, r은 15 내지 130의 임의의 정수이다)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

Description

폐 특이적 전달을 위한 수단{Means for lung specific delivery}
본 발명은 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 지질 조성물을 포함하는 조성물; 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약물의 제조를 위한 지질 조성물을 포함하는 조성물의 용도; 지질 조성물을 포함하는 조성물을 포함하는 약제학적 조성물; 전달제로서 지질 조성물을 포함하는 조성물의 용도; 지질 조성물을 포함하는 조성물을 포함하는 키트; 생물학적 활성 화합물 또는 약제학적 활성 화합물을 세포로 또는 세포의 막을 거쳐 전달하기 위한 방법으로서, 상기 방법이 상기 세포 또는 상기 세포의 막과 지질 조성물을 포함하는 조성물과 접촉시킴을 포함하는 방법; 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 방법으로서, 상기 방법이 지질 조성물을 포함하는 유효량의 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하는 방법에 관한 것이다.
분자 의학 뿐만 아니라 분자 생물학 둘 다는 생물학적 활성 화합물의 세포로의 도입에 크게 의존한다. 상기 생물학적 활성 화합물은 무엇보다 전형적으로 각각 펩타이드 및 단백질 뿐만 아니라 DNA, RNA를 포함한다. 극복해야만 하는 장벽은 전형적으로 음전하 외부 표면을 갖는 지질 이중층이다. 당업계에서, 세포막을 침투하여 생물학적 활성 화합물을 도입하기 위한 다수의 기술이 개발되었다. 일부 방법은 연구 목적을 위해 고안되었지만 의학 분야에서 사용될 수 없고 보다 특히 약물 전달을 위해 적합하지 않다. 예를 들어, 당업계에 공지된 전기천공 및 탄도 방법은 적어도 단지 생물학적 활성 화합물의 국소적 전달을 가능하게 한다. 상기 지질 이중층 뿐만 아니라 세포막은 또한 수송체 시스템을 포함한다. 따라서, 세포막을 거쳐 생물학적 활성 화합물을 전달하기 위해 상기 종류의 수송체 시스템을 사용하기 위한 노력이 착수되었다. 그러나, 상기 수송체 시스템의 특이성 또는 교차-반응성으로 인해, 이들의 사용은 일반적으로 적용될 수 있는 방법이 아니다.
생물학적 활성 화합물을 세포로 전달하기 위한 당업계에 기재된 보다 일반적으로 적용될 수 있는 방법은 바이러스 벡터의 사용이다. 그러나, 바이러스 벡터는 유전자를 일부 세포 유형에 전달하기 위해서만 사용될 수 있고 이들은 화학적으로 합성된 분자를 세포로 도입하기 위해 사용될 수 없다.
또 다른 방법은 소위 리포좀의 사용이었다(문헌참조: Bangham, J. Mol. Biol. 13, 238-252). 리포좀은 물 중에서 양친매성 지질의 연합시 생성되는 소포체이다. 리포좀은 전형적으로 동심원적으로 배열된 인지질의 이중층을 포함한다. 층 수에 따라 리포좀은 소형 단일라멜라 소포체, 다중라멜라 소포체 및 대형 다중라멜라 소포체로서 분류될 수 있다. 리포좀은 이들이 친수성 화합물을 수성 중간 층으로 혼입시키기 때문에 효과적인 전달 제제인 것으로 입증된 반면, 소수성 화합물은 지질층으로 혼입된다. 지질 제형의 조성 및 이의 제조 방법 둘 다는 생성되는 지질 응집체의 구조 및 크기에 이어서 리포좀에 영향을 미치는 것으로 당업계에 널리 공지되어 있다. 리포좀은 또한 양이온 지질을 혼입하는 것으로 공지되어 있다.
양이온 지질은 리포좀의 성분이 되는 것 뿐만 아니라 이들이 생중합체의 세포 전달을 위해 사용될 수 있으므로 상당히 매력적인 것으로 주의를 끌어왔다. 양이온 지질을 사용하여, 임의의 음이온 화합물이 정전기 상호작용으로 인해 정량적 방식으로 필수적으로 캡슐화될 수 있다. 추가로, 양이온 지질은 세포막 수송을 개시하는 음전하 세포막과 상호작용하는 것으로 사료된다. 예를 들어, 생물학적 활성 화합물과 함께 양이온 지질을 함유하는 리포좀 제형의 사용 또는 양이온 지질의 사용은 통상적으로 혈청의 부재하에 모든 세포 유형에서가 아니라 일부 세포로 플라스미드를 전달할 수 있는 제한된 용도를 가져 체험적 방법을 필요로 한다.
지질과 이들에 의해 수송될 생물학적 활성 화합물의 전하 및/또는 질량 비는 상이한 유형의 상기 생물학적 활성 화합물의 전달에서 중요한 인자인 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, 5,000 내지 10,000 염기의 크기를 포함하는 플라스미드 전달을 위해 적합한 지질 제형은 일반적으로 약 10 내지 약 50개 염기를 전형적으로 포함하는 siRNA 분자, 합성 리보자임 또는 안티센스 분자와 같은 올리고뉴클레오타이드의 전달을 위해 효과적이지 않은 것으로 밝혀졌다. 추가로, 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 리보자임에 대한 최적의 전달 조건은 최근에 심지어 동일한 세포 유형에서도 상이한 것으로 지적되었다.
미국 특허 제6,395,713호는 양이온 지질이 친지성 그룹, 링커 및 헤드 그룹으로 이루어진 양이온 지질 기반 조성물 및 생물학적 활성 화합물을 세포로 전달하기 위한 상기 조성물의 용도를 기재하고 있다.
국제 특허 출원 제WO 2005/105152호는 또 다른 양이온 지질 기반 조성물을 기재하고 있고 이는 특히 siRNA 분자와 같은 기능성 핵산 분자의 전달에 효과적인 것으로 입증되었다.
치료될 질환 및 전달될 약물에 의존하여 상기 약물을 특정 기관 또는 특정 세포 유형으로 전달할 필요가 있다. 하나의 상기 특이적 기관은 폐이고 하나의 상기 특이적 세포 유형은 폐 내피 세포이다. 폐 및 폐 내피 세포의 표적화는 예를 들어, 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐암, 폐 전이, 폐 고혈압 및 폐동맥 고혈압과 같은 질환의 치료를 위한 약물의 전달에 유리하다.
현재의 문제점을 기반으로 한 본 발명은 제제, 바람직하게는 치료학적 활성제, 보다 바람직하게는 약물을 폐로 전달할 수 있는 수단을 제공하는 것이다. 추가로 문제점을 기반으로 한 본 발명은 제제, 바람직하게는 치료학적 활성제, 보다 바람직하게는 약물을 폐 조직으로 전달할 수 있는 수단을 제공하는 것이다. 여전히 추가의 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 제제, 바람직하게는 치료학적 활성제, 보다 바람직하게는 약물을 폐 내피 세포로 전달할 수 있는 수단을 제공하는 것이다. 또 다른 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 폐 질환, 바람직하게는 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐암, 폐 전이, 폐 고혈압 및 폐동맥 고혈압을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 폐 질환의 치료를 위한 수단을 제공하는 것이다.
또 다른 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 폐 질환, 바람직하게는 급성 폐 질환, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐암, 폐 전이, 폐 고혈압 및 폐동맥 고혈압을 포함하는 그룹으로부터 선택된 폐 질환의 치료를 위한 수단을 제공하는 것이다.
또 다른 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 약제학적 조성물을 제공하는 것이다. 바람직할 수 있는 약제는 제제, 바람직하게는 치료학적 활성제, 보다 바람직하게는 약물을 폐로 전달하기 위해 적합하다. 추가의 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 제제, 바람직하게는 활성제, 보다 바람직하게는 약물을 폐 조직으로 전달하기 위해 적합한 약제학적 조성물을 제공하는 것이다. 여전히 추가의 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 제제, 바람직하게는 치료학적 활성제, 보다 바람직하게는 약물을 폐 내피 세포로 전달하기 위해 적합한 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 폐 질환, 바람직하게는 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐암, 폐 전이, 폐 고혈압 및 폐동맥 고혈압의 치료에 적합하거나 치료에 사용하기 위한 약물의 제조에 사용될 수 있는 수단을 제공하는 것이다.
또 다른 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 질환 치료를 위한 방법 및/또는 예방을 위한 방법을 제공하는 것이고, 상기 방법은 치료학적 또는 약제학적 활성제, 바람직하게는 약물을 포함하는 유효량의 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함한다. 추가의 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 폐 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 방법을 제공하는 것이고, 여기서, 상기 방법은 치료학적 또는 약제학적 활성제, 바람직하게는 약물을 포함하는 유효량의 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함한다. 여전히 추가의 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 질환, 바람직하게는 폐 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 방법을 제공하는 것이고, 여기서, 상기 치료는 치료학적 또는 약제학적 활성제를 폐, 바람직하게는 폐내피 세포로 전달함을 포함한다.
또 다른 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 전달제를 제공하는 것이다. 바람직하게, 상기 전달제는 생물학적 활성제, 치료학적 활성제 및/또는 약제학적 활성제를 세포로 또는 세포막을 거쳐 전달할 수 있고, 바람직하게 상기 세포는 폐 내피 세포이다.
또 다른 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 생물학적 활성제, 치료학적 활성제 및/또는 약제학적 활성제를 세포로 또는 세포막을 거쳐 전달하기 위한 방법을 제공하는 것이고, 바람직하게 상기 세포는 폐 내피 세포이다.
또 다른 문제점을 기반으로 하는 본 발명은 키트를 제공하는 것이다. 바람직하게, 상기 키트는 (a) 질환, 바람직하게는 폐 질환의 치료 및/또는 예방용 방법에 사용하고 (b) 생물학적 활성제, 치료학적 활성제 및/또는 약제학적 활성제를 세포로 또는 세포막을 거쳐 전달하는 방법에 사용(바람직하게 상기 세포는 폐 내피 세포이다)하고/하거나, (c) 약물, 바람직하게는, 바람직하게는 질환, 보다 바람직하게는 폐 질환 및 가장 바람직하게는 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐암, 폐 전이, 폐 고혈압 및 폐동맥 고혈압을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 폐 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약물의 제조에 사용하기 위해 적합하다.
이들 및 다른 문제점은 첨부된 종속항의 주요 요지에 의해 해결된다. 바람직한 양태는 첨부된 종속항으로부터 취해질 수 있다. 이들 및 다른 문제점은 또한 하기의 양태에 의해 해결된다.
양태 1: 지질 조성물을 포함하는 조성물로서, 상기 지질 조성물이
하기 화학식 I:
Figure pct00001
의 양이온 지질(여기서, n은 1, 2, 3, 및 4 중 어느 하나이고, m은 1, 2 및 3 중 어느 하나이고, Y-는 음이온이고, R1 및 R2는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C12-C18 알킬 및 선형 C12-C18 알케닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된다);
스테롤 화합물(여기서, 상기 스테롤 화합물은 콜레스테롤 및 스티그마스테롤로 이루어진 그룹으로부터 선택된다); 및
페길화된(PEGylated) 지질(여기서, 상기 페길화된 지질은 PEG 모이어티를 포함한다)을 포함하고, 상기 페길화된 지질은
하기 화학식 II:
Figure pct00002
의 페길화된 포스포에탄올아민(여기서, R3 및 R4는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C13-C17 알킬이고, p는 15 내지 130의 임의의 정수이다);
하기 화학식 III:
Figure pct00003
의 페길화된 세라마이드(여기서, R5는 선형 C7-C15 알킬이고, q는 15 내지 130의 임의의 정수이다); 및
하기 화학식 IV:
Figure pct00004
의 페길화된 디아실글리세롤(여기서, R6 및 R7은 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C11-C17 알킬이고, r은 15 내지 130의 임의의 정수이다)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 지질 조성물을 포함하는 조성물.
양태 2: 양태 1에 있어서, R1 및 R2가 서로 상이한, 조성물.
양태 3: 양태 1에 있어서, R1 및 R2가 동일한, 조성물.
양태 4: 양태 1 내지 양태 3 중 어느 한 양태에 있어서, R1 및 R2가 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 C12 알킬, C14 알킬, C16 알킬, C18 알킬, C12 알케닐, C14 알케닐, C16 알케닐 및 C18 알케닐로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 5: 양태 4에 있어서, C12 알케닐, C14 알케닐, C16 알케닐 및 C18 알케닐 각각이 1개 또는 2개의 이중 결합을 포함하는, 조성물.
양태 6: 양태 5에 있어서, C18 알케닐이 C9와 C10 사이에 1개의 이중 결합을 갖는 C18 알케닐, 바람직하게는 시스-9-옥타데실인, 조성물.
양태 7: 양태 1 내지 양태 6 중 어느 한 양태에 있어서, R1 및 R2가 상이하고, R1이 팔미틸이고, R2가 올레일인, 조성물.
양태 8: 양태 1 내지 양태 6 중 어느 한 양태에 있어서, R1 및 R2가 상이하고, R1이 라우릴이고, R2가 미리스틸인, 조성물.
양태 9: 양태 1 내지 양태 8 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 양이온 지질이 하기 화학식 Ia:
Figure pct00005
의 화합물인, 조성물.
양태 10: 양태 1 내지 양태 9 중 어느 한 양태에 있어서, Y-가 할로겐화물, 아세테이트 및 트리플루오로아세테이트를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 11: 양태 10에 있어서, Y-가 Cl-인, 조성물.
양태 12: 양태 1 내지 양태 11 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 양이온 지질이 하기 화학식 Ib:
Figure pct00006
의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드인, 조성물.
양태 13: 양태 1 내지 양태 11 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 양이온 지질이 하기 화학식 Ic:
Figure pct00007
의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드인, 조성물.
양태 14: 양태 1 내지 양태 11 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 양이온 지질이 하기 화학식 Id:
Figure pct00008
의 ε-아르기닐-리신-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드인, 조성물.
양태 15: 양태 1 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤인, 조성물.
양태 16: 양태 12 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 14에 있어서, 상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤인, 조성물.
양태 17: 양태 1 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 스테롤 화합물이 스티그마스테린인, 조성물.
양태 18: 양태 12 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 14에 있어서, 상기 스테롤 화합물이 스티그마스테린인, 조성물.
양태 19: 양태 1 내지 양태 18 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 12 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 더욱 바람직하게는 양태 16 및 양태 18 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 페길화된 지질의 PEG 모이어티가 약 800 내지 약 5000 Da의 분자량을 갖는, 조성물.
양태 20: 양태 19에 있어서, 상기 페길화된 지질의 PEG 모이어티의 분자량이 약 800 Da인, 조성물.
양태 21: 양태 19에 있어서, 상기 페길화된 지질의 PEG 모이어티의 분자량이 약 2000 Da인, 조성물.
양태 22: 양태 19에 있어서, 상기 페길화된 지질의 PEG 모이어티의 분자량이 약 5000 Da인, 조성물.
양태 23: 양태 1 내지 양태 22 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 19 내지 양태 22 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 페길화된 지질이 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이고, 여기서, R3 및 R4는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C13-C17 알킬이고, p는 18, 19 또는 20의 임의의 정수, 또는 44, 45 또는 46의 임의의 정수, 또는 113, 114 또는 115의 임의의 정수인, 조성물.
양태 24: 양태 23에 있어서, R3 및 R4가 동일한, 조성물.
양태 25: 양태 23에 있어서, R3 및 R4가 상이한, 조성물.
양태 26: 양태 23 및 양태 25 중 어느 한 양태에 있어서, R3 및 R4가 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 C13 알킬, C15 알킬 및 C17 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 27: 양태 1 내지 양태 26 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 12 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 더욱 바람직하게는 양태 14 및 양태 16 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이 하기 화학식 IIa:
Figure pct00009
인, 조성물.
양태 28: 양태 1 내지 양태 26 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 12 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 더욱 바람직하게는 양태 16 및 양태 18 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이 하기 화학식 IIIb:
Figure pct00010
인, 조성물.
양태 29: 양태 1 내지 양태 22 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 19 내지 양태 22 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 페길화된 지질이 화학식 III의 페길화된 세라미드이고, 여기서, R5는 선형 C7-C15 알킬이고, q는 18, 19 또는 20의 임의의 정수, 또는 44, 45 또는 46의 임의의 정수, 또는 113, 114 또는 115의 임의의 정수인, 조성물.
양태 30: 양태 29에 있어서, R5가 선형 C7 알킬인, 조성물.
양태 31: 양태 30에 있어서, R5가 선형 C15 알킬인, 조성물.
양태 32: 양태 1 내지 양태 22 및 양태 29 내지 양태 31 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 12 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 더욱 바람직하게는 양태 16 및 양태 18 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학식 III의 페길화된 세라마이드가 하기 화학식 IIIa:
Figure pct00011
인, 조성물.
양태 33: 양태 1 내지 양태 22 및 양태 29 내지 양태 31 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 12 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 더욱 바람직하게는 양태 16 및 양태 18 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학식 III의 페길화된 세라마이드가 하기 화학식 IIIb:
Figure pct00012
인, 조성물.
양태 34: 양태 1 내지 양태 22 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 19 내지 양태 22 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 페길화된 지질이 하기 화학식 IV:
Figure pct00013
의 페길화된 디아실글리세롤이고, 여기서, R6 및 R7은 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C11-C17 알킬이고, r은 18, 19 또는 20의 임의의 정수, 또는 44, 45 또는 46의 임의의 정수, 또는 113, 114 또는 115의 임의의 정수인, 조성물.
양태 35: 양태 34에 있어서, R6 및 R7이 동일한, 조성물.
양태 36: 양태 34에 있어서, R6 및 R7이 상이한, 조성물.
양태 37: 양태 34 내지 양태 36 중 어느 한 양태에 있어서, R6 및 R7이 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C17 알킬, 선형 C15 알킬 및 선형 C13 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 38: 양태 1 내지 양태 22 및 양태 34 내지 양태 37 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 12 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 더욱 바람직하게는 양태 16 및 양태 18 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학식 IV의 페길화된 디아실글리세롤이 하기 화학식 IVa:
Figure pct00014
인, 조성물.
양태 39: 양태 1 내지 양태 22 및 양태 34 내지 양태 36 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 12 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 더욱 바람직하게는 양태 16 및 양태 18 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학식 IV의 페길화된 디아실글리세롤이 하기 화학식 IVb:
Figure pct00015
인, 조성물.
양태 40: 양태 1 내지 양태 22 및 양태 34 내지 양태 36 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 12 내지 양태 14 중 어느 한 양태에 있어서, 더욱 바람직하게는 양태 16 및 양태 18 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학식 IV의 페길화된 디아실글리세롤이 하기 화학식 IVc:
Figure pct00016
인, 조성물.
양태 41: 양태 1 내지 양태 40 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학식 I의 양이온 지질이,
β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00017
β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00018
및
ε-아르기닐-리신-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00019
로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤 및 스티그마스테린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
상기 페길화된 지질이 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이고, 상기 페길화된 포스포에탄올아민이
1,2-디스테아로일-sn-글리세로-S-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
Figure pct00020
1,2-디스테아로일-sn-글리세로-S-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-5000] (암모늄 염)
Figure pct00021
으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물
양태 42: 양태 1 내지 양태 40 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학식 I의 양이온 지질이
β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00022
β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00023
및
ε-아르기닐-리신-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00024
로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤 및 스티그마스테린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
상기 페길화된 지질이 화학식 III의 페길화된 세라마이드이고, 상기 페길화된 세라마이드가
N-옥타노일-스핀고신-1-{석시닐[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)2000]}
Figure pct00025
및 N-팔미토일-스핀고신-1-{석시닐[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)2000]}
Figure pct00026
로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 43: 양태 1 내지 양태 40 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학식 I의 양이온 지질이
β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00027
β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00028
및
ε-아르기닐-리신-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00029
로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤 및 스티그마스테린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
상기 페길화된 지질이 화학식 IV의 페길화된 디아실글리세롤이고, 상기 페길화된 디아실글리세롤이
1,2-디스테아로일-sn-글리세롤[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)2000]
Figure pct00030
1,2-디팔미토일-sn-글리세롤[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)2000]
Figure pct00031
로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 44: 양태 1 내지 양태 43 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 41 내지 양태 43 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 양이온 지질이
β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00032
이고,
상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤이고,
상기 페길화된 지질이 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이고, 상기 페길화된 포스포에탄올아민이
1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
Figure pct00033
인, 조성물.
양태 45: 양태 1 내지 양태 44 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 41 내지 양태 44 중 어느 한 양태에 있어서 그리고 바람직하게는 양태 44에 있어서, 상기 지질 조성물에서, 상기 양이온 지질 조성물의 함량이 약 65mol% 내지 약 75mol%이고, 상기 스테롤 화합물의 함량이 약 24mol% 내지 약 34mol%이고, 상기 페길화된 지질의 함량이 약 0.5mol% 내지 약 1.5mol%이고, 여기서, 상기 지질 조성물에 대한 양이온 지질, 스테롤 화합물 및 페길화된 지질의 함량은 100mol%인, 조성물.
양태 46: 양태 45에 있어서, 상기 지질 조성물에서, 상기 양이온 지질의 함량이 약 70mol%이고, 상기 스테롤 화합물의 함량이 약 29mol%이고, 상기 페길화된 지질의 함량이 약 1mol%인, 조성물.
양태 47: 양태 1 내지 양태 46 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 지질 조성물이 다음과 같은, 조성물:
70mol%의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00034
29mol%의 콜레스테롤 및
1mol%의 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
Figure pct00035
양태 48: 양태 1 내지 양태 47 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 조성물이 담체를 포함하고, 바람직하게는 상기 담체가 약제학적으로 허용되는 담체인, 조성물.
양태 49: 양태 48에 있어서, 상기 담체가 물, 수용액, 바람직하게는 등장성 수용액, 염 용액, 바람직하게는 등장성 염 용액, 완충액, 바람직하게는 등장성 완충액, 및 수혼화성 용매를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 50: 양태 49에 있어서, 상기 담체가 수혼화성 용매이고, 상기 수혼화성 용매가 에탄올 및 3급 부탄올로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 51: 양태 48 내지 양태 50 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 담체가 슈크로스 수용액, 바람직하게는 270mM 슈크로스 수용액인, 조성물.
양태 52: 양태 1 내지 양태 51 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 지질 조성물이
70mol%의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00036
29mol%의 콜레스테롤 및
1mol%의 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이고, 상기 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이
1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
Figure pct00037
이고,
상기 조성물은 270mM 슈크로스 수용액을 포함하는, 조성물.
양태 53: 양태 48 내지 양태 52 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 지질 조성물이 상기 담체 중에서 입자를 형성하는, 조성물.
양태 54: 양태 53에 있어서, 상기 입자가 DLS 측정에 따라 약 30nm 내지 약 150nm의 Z-평균 크기를 갖는, 조성물.
양태 55: 양태 54에 있어서, 상기 입자가 DLS 측정에 따라 약 50nm 내지 약 100nm의 Z-평균 크기를 갖는, 조성물.
양태 56: 양태 53 내지 양태 55 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 입자의 DLS 측정에 따른 Z-평균 크기가, 동적 광 산란법에 의한 측정시 약 60 내지 80nm인, 조성물.
양태 57: 양태 1 내지 양태 56 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 48 내지 양태 56 중 어느 한 양태에 있어서, 20℃의 온도에서 그리고 270mM 슈크로스 용액 중에서 측정된 상기 조성물이, 약 + 25 내지 약 + 80mV, 바람직하게는 약 + 30mV 내지 약 + 60mV, 더욱 바람직하게는 약 + 46mV의 제타 전위를 갖는, 조성물.
양태 58: 양태 1 내지 양태 57 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 41 내지 양태 57 중 어느 한 양태에 있어서 그리고 더욱 바람직하게는 양태 47 및 양태 52 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 조성물이 화학적 화합물을 추가로 포함하고, 상기 화학적 화합물이 생물학적 활성제 또는 약제학적 활성제인, 조성물.
양태 59: 양태 1 내지 양태 57 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 41 내지 양태 57 중 어느 한 양태에 있어서 그리고 더욱 바람직하게는 양태 47 및 양태 52 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 조성물이 화학적 화합물을 추가로 포함하고, 상기 화학적 화합물이 지질 조성물에 의해 세포 내로 및/또는 세포로 전달될 수 있는, 조성물.
양태 60: 양태 59에 있어서, 상기 세포가 포유동물의 세포이고, 바람직하게는 상기 포유동물이 인간, 마우스, 래트, 토끼, 햄스터, 기니아 피그, 원숭이, 개, 고양이, 돼지, 양, 염소, 소 및 말을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 61: 양태 59 내지 양태 60 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 세포가 폐 내피 세포, 바람직하게는 상기 세포가 인간의 폐 내피 세포인, 조성물.
양태 62: 양태 58 내지 양태 61 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학적 화합물이 올리고뉴클레오타이드, 폴리뉴클레오타이드, 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질 및 소분자를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 63: 양태 62에 있어서, 상기 화학적 화합물이 핵산이고, 상기 핵산이 RNA, DNA, PNA 및 LNA를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 64: 양태 62에 있어서, 상기 핵산이 기능성 핵산이고, 바람직하게는 상기 기능성 핵산이 siRNA, 마이크로RNA, siNA, RNA 간섭 매개 핵산, 안티센스 핵산, 리보자임, 압타머, 스피겔머(spiegelmer) 및 mRNA를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 65: 양태 62에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드가 siRNA, 마이크로RNA, siNA, RNA 간섭 매개 핵산, 안티센스 핵산, 리보자임, 압타머, 스피겔머 및 mRNA를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 66: 양태 62에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가 siRNA, 마이크로RNA, siNA, RNA 간섭 매개 핵산, 안티센스 핵산, 리보자임, 압타머 및 스피겔머를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 67: 양태 62 및 양태 66 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가 상기 지질 조성물과 복합체를 형성하는, 조성물.
양태 68: 양태 1 내지 양태 67 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 41 내지 양태 47 및 양태 53 내지 양태 56 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 조성물이 siRNA 분자를 포함하는, 조성물.
양태 69: 양태 68에 있어서, 상기 siRNA 분자가 표적화 ANG2인, 조성물.
양태 70: 양태 70에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열 중 하나 또는 둘 다를 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
양태 71: 양태 70에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열을 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
양태 72: 양태 62에 있어서, 상기 화학적 화합물이 단백질이고, 상기 단백질이 항체, 사이토카인 및 안티칼린을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 73: 양태 1 내지 양태 72 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 지질 조성물이
70mol%의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00038
29mol%의 콜레스테롤 및
1mol%의 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
Figure pct00039
이고,
상기 조성물은 바람직하게는 담체로서 270mM 슈크로스 수용액을 포함하고;
상기 조성물은 화학적 화합물을 포함하고, 상기 화학적 화합물은 siRNA, 마이크로RNA, siNA 및 RNA 간섭 매개 화합물을 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 바람직하게는 상기 화학적 화합물은 (a) 생물학적 또는 약제학적 활성제이고/이거나 (b) 상기 지질 조성물에 의해 세포 내로 및/또는 세포로, 더욱 바람직하게는 포유동물의 폐 내피 세포로 전달될 수 있는, 조성물.
양태 74: 양태 1 내지 양태 73 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 58 내지 양태 73 중 어느 한 양태에 있어서 그리고 더욱 바람직하게는 양태 73에 있어서, 상기 화학적 화합물이 기능성 핵산이고, 하전된 지질 질소 원자 대 핵산 골격 포스페이트 간의 비 (N/P 비)가 약 3 내지 12, 바람직하게는 약 5 내지 10이고, 더욱 바람직하게는 약 8 내지 9이고, 가장 바람직하게는 약 8.4인, 조성물.
양태 75: 양태 73 및 양태 74 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 조성물이 siRNA 분자를 포함하는, 조성물.
양태 76: 양태 75에 있어서, 상기 siRNA 분자가 표적화 ANG2인, 조성물.
양태 77: 양태 76에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열 중 하나 또는 둘 다를 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
양태 78: 양태 77에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열을 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
양태 79: 양태 73 내지 양태 78 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 78에 있어서, 상기 조성물이 0.28mg/ml의 siRNA 및 2.4 mg/m의 총 지질을 포함하는, 조성물.
양태 80: 양태 1 내지 양태 79 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 지질 조성물이
70mol%의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
Figure pct00040
29mol%의 콜레스테롤 및
1mol%의 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
Figure pct00041
이고,
상기 조성물은 바람직하게는 담체로서 270mM 슈크로스 수용액을 포함하고;
상기 조성물은 화학적 화합물을 포함하고, 상기 화학적 화합물은 siRNA, 마이크로RNA, 및 siRNA를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 바람직하게는 상기 화학적 화합물은 (a) 생물학적 또는 약제학적 활성제이고/이거나 (b) 상기 지질 조성물에 의해 세포 내로 및/또는 세포로, 더욱 바람직하게는 포유동물의 폐 내피 세포로 전달될 수 있고;
상기 하전된 지질 질소 원자 대 상기 핵산 골격 포스페이트 간의 비 (N/P 비)가 약 8 내지 9, 바람직하게는 약 8.4인, 조성물.
양태 81: 양태 80에 있어서, 상기 조성물이 siRNA 분자를 포함하는, 조성물.
양태 82: 양태 81에 있어서, 상기 siRNA 분자가 표적화 ANG2인, 조성물.
양태 83: 양태 82에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열 중 하나 또는 둘 다를 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
양태 84: 양태 83에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열을 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
양태 85: 양태 80 내지 양태 84 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 84에 있어서, 상기 조성물이 0.28mg/ml의 siRNA 및 2.4 mg/m의 총 지질을 포함하는, 조성물.
양태 86: 양태 1 내지 양태 85 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 58 내지 양태 85 중 어느 한 양태에 있어서 그리고 바람직하게는 양태 73 내지 양태 85 중 어느 한 양태에 있어서, 대상체의 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한 방법에 사용하기 위한 조성물.
양태 87: 양태 86에 있어서, 상기 방법이 유효량의 조성물, 바람직하게는 치료학적 유효량의 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하는, 조성물.
양태 88: 양태 86 내지 양태 87 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 조성물이 상기 화학적 화합물을 대상체의 세포 내로 전달하는, 조성물.
양태 89: 양태 88에 있어서, 상기 세포가 폐 내피 세포인, 조성물.
양태 90: 양태 89에 있어서, 상기 화학적 화합물이 폐 내피 세포에 치료 효과를 제공하고, 바람직하게는 상기 화학적 화합물이 상기 세포 내의 표적 분자를 표적화하고, 더욱 바람직하게는 억제하고 그 결과 치료 효과를 달성하는, 조성물.
양태 91: 양태 90에 있어서, 상기 표적 분자가 질환의 바탕이 되는 병리학적 메카니즘에 관여하는, 조성물.
양태 92: 양태 86 내지 양태 91 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 질환이 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐암, 폐 전이, 폐 고혈압 및 폐동맥 고혈압을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 93: 양태 86 내지 양태 92 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 대상체가 인간, 마우스, 래트, 토끼, 햄스터, 기니아 피그, 원숭이, 개, 고양이, 돼지, 양, 염소, 소 및 말을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
양태 94: 양태 86 내지 양태 93 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 조성물이 정맥내 투여 수단에 의해 또는 흡입 수단에 의해 대상체에게 투여되는, 조성물.
양태 95: 양태 1 내지 양태 85 중 어느 한 양태에 있어서, 바람직하게는 양태 58 내지 양태 85 중 어느 한 양태에 있어서 그리고 더욱 바람직하게는 양태 73 내지 양태 85 중 어느 한 양태에 있어서, 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한, 용도.
양태 96: 양태 95에 있어서, 상기 질환이, 질환의 바탕이 되는 병리학적 메카니즘에 관여하는 표적 분자가 폐 내피 세포에 존재하고 상기 표적 분자의 억제가 치료 효과를 제공하는 질환인, 용도.
양태 97: 양태 95 내지 양태 96 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 조성물의 상기 화학적 화합물이 상기 세포 내의 표적 분자를 표적화하고 더욱 바람직하게는 억제하고 그 결과 치료 효과를 달성하는, 용도.
양태 98: 양태 95 내지 양태 97 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 질환이 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐암, 폐 전이, 폐 고혈압 및 폐동맥 고혈압을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 용도.
양태 99: 양태 95 내지 양태 98 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 약제가 정맥내 투여용인, 용도.
양태 100: 양태 1 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물, 바람직하게는 양태 58 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물 그리고 더욱 바람직하게는 양태 73 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
양태 101: 양태 100에 있어서, 양태 1 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물, 바람직하게는 양태 58 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물 그리고 가장 바람직하게는 양태 73 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물의 화학적 조성물이 약제학적 활성제인, 약제학적 조성물.
양태 102: 양태 100 내지 양태 101 중 어느 한 양태에 있어서, 양태 1 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물, 바람직하게 양태 57 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물 및 더욱 바람직하게는 양태 73 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물의 담체가 약제학적으로 허용되는 담체인, 약제학적 조성물.
양태 103: 양태 100 내지 양태 102 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 약제학적 조성물이, 양태 95 내지 양태 99 중 어느 한 양태에서와 같이 정의된 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 것인, 약제학적 조성물.
양태 104: 양태 1 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물, 바람직하게는 양태 58 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물 그리고 더욱 바람직하게는 양태 73 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물의 전달제로서의 용도.
양태 105: 양태 104에 있어서, 상기 전달제가 생물학적 활성 또는 약제학적 활성 화합물을 세포 내로, 바람직하게는 포유동물 세포 내로 그리고 더욱 바람직하게는 인간 세포 내로 전달하는, 용도.
양태 106: 양태 105에 있어서, 상기 세포가 폐 내피 세포, 바람직하게는 인간의 폐 내피 세포인, 용도.
양태 107: 양태 104 내지 양태 106 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 화학적 조성물의 화학적 화합물이 상기 생물학적 활성제 또는 상기 약제학적 활성제인, 용도.
양태 108: 양태 1 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물, 바람직하게는 양태 58 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물 그리고 더욱 바람직하게는 양태 73 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물 및 사용 지침서를 포함하는 키트.
양태 109: 생물학적 활성 화합물 또는 약제학적 활성 화합물을 세포 내로 또는 세포막을 거쳐 전달하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 상기 세포 또는 상기 세포막을 양태 1 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물, 바람직하게는 양태 58 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물 및 더욱 바람직하게는 양태 73 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물, 및 상기 생물학적 활성 화합물 또는 약제학적 활성 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
양태 110: 양태 109에 있어서, 상기 방법이 상기 생물학적 활성 화합물 또는 상기 약제학적 활성 화합물을 상기 세포에서 및/또는 상기 세포막을 지나 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
양태 111: 양태 109 내지 양태 110 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 생물학적 활성 화합물 또는 상기 약제학적 활성 화합물이 양태 58 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물의 화학적 화합물인, 방법.
양태 112: 질환의 치료 및/또는 예방 방법으로서, 상기 방법이 유효량의 양태 1 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물, 바람직하게는 양태 58 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물 그리고 더욱 바람직하게는 양태 73 내지 양태 85 중 어느 한 양태의 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하는, 방법.
양태 113: 양태 112에 있어서, 상기 조성물이 상기 화학적 화합물을 대상체의 세포 내로 전달하는, 방법.
양태 114: 양태 113에 있어서, 상기 세포가 폐 내피 세포인, 방법.
양태 115: 양태 114에 있어서, 상기 화학적 화합물이 폐 내피 세포에서 치료 효과를 제공하고, 바람직하게는 상기 화학적 화합물이 상기 세포 내의 표적 분자를 표적화하고, 더욱 바람직하게는 억제하고 그 결과 치료 효과를 달성하는, 방법.
양태 116: 양태 115에 있어서, 상기 표적 분자가 질환의 바탕이 되는 병리학적 메카니즘에 관여하는, 방법.
양태 117: 양태 112 내지 양태 116 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 질환이 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐암, 폐 전이, 폐 고혈압 및 폐동맥 고혈압을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 방법.
양태 118: 양태 112 내지 양태 117 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 대상체가 인간, 마우스, 래트, 토끼, 햄스터, 기니아 피그, 원숭이, 개, 고양이, 돼지, 양, 염소, 소 및 말을 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 바람직하게는 상기 대상체가 인간인, 방법.
양태 119: 약제의 제조 방법으로서, 상기 방법이 양태 1 내지 양태 85 중 어느 한 양태에 따른 조성물을 약제학적 활성제로 제형화함을 포함하는, 방법.
양태 120: 양태 119에 있어서, 상기 약제가 양태 1 내지 양태 119 중 어느 한 양태에 기재된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 것인, 방법.
양태 121: 양태 119 내지 양태 120 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 약제학적 활성제가 폐 질환의 치료에 적합한 화합물인, 방법.
양태 122: 양태 1 내지 양태 68 중 어느 한 양태에 있어서, 상기 siRNA가 표 1에 나타낸 표적을 표적화하는, 조성물. 바람직한 양태에서, 표적은
PKN3이고, 보다 바람직하게 siRNA는 서열번호 3의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥 및/또는 서열번호 4의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥을 포함하고, 상기 핵산 가닥의 뉴클레오타이드는 표 1에 지적된 바와 같이 변형되거나 변형되지 않거나 상이하게 변형되고;
CD31이고, 보다 바람직하게 siRNA는 서열번호 11의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥 및/또는 서열번호 12의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥을 포함하고, 상기 핵산 가닥의 뉴클레오타이드는 표 1에 지적된 바와 같이 변형되거나 변형되지 않거나 상이하게 변형되고;
Tie2이고, 보다 바람직하게 siRNA는 서열번호 9의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥 및/또는 서열번호 10의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥을 포함하고, 상기 핵산 가닥의 뉴클레오타이드는 표 1에 지적된 바와 같이 변형되거나 변형되지 않거나 상이하게 변형되고;
KDR/VEGFR2이고, 보다 바람직하게 siRNA는 서열번호 13의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥 및/또는 서열번호 14의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥을 포함하고, 상기 핵산 가닥의 뉴클레오타이드는 표 1에 지적된 바와 같이 변형되거나 변형되지 않거나 상이하게 변형되고;
CDH5/VE-캐드헤린이고, 보다 바람직하게 siRNA는 서열번호 15의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥 및/또는 서열번호 16의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥을 포함하고, 상기 핵산 가닥의 뉴클레오타이드는 표 1에 지적된 바와 같이 변형되거나 변형되지 않거나 상이하게 변형되고;
BMPR2이고, 보다 바람직하게 siRNA는 서열번호 17의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥 및/또는 서열번호 18의 뉴클레오타이드 서열을 갖는 핵산 가닥을 포함하고, 상기 핵산 가닥의 뉴클레오타이드는 표 1에 지적된 바와 같이 변형되거나 변형되지 않거나 상이하게 변형되고;
양이온 지질이 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드인 본 발명의 각각 및 임의의 측면의 각각 및 임의의 양태에서, 상기 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드가 바람직하게 β-L-아르기닐-2,3-L-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드라는 것은 본 발명의 범위 내에 있다.
양이온 지질이 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-라우릴-N-미리스틸-아미드인 본 발명의 각각 및 임의의 측면의 각각 및 임의의 양태에서, 상기 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-라우릴-N-미리스틸-아미드가 바람직하게 β-L-아르기닐-2,3-L-디아미노 프로피온산-N-라우릴-N-미리스틸 아미드라는 것은 본 발명의 범위 내에 있다.
양이온 지질이 ε-아르기닐-라이신-N-라우릴-N-미리스틸-아미드인 본 발명의 각각 및 임의의 측면의 각각 및 임의의 양태에서, 상기 ε-아르기닐-라이신-N-라우릴-N-미리스틸-아미드가 바람직하게 ε-L-아르기닐-L-라이신-N-라우릴-N-미리스틸-아미드라는 것은 본 발명의 범위 내에 있다.
본 발명의 발명자들은 놀랍게도, 지질 조성물을 포함하는 조성물이 숙주 유기체, 예를 들어, 포유동물의 폐 및 폐 조직에 누적되고 이를 어드레스함에 이어서 상기 지질 조성물과 관련된 제제, 예를 들어, 핵산을 상기 기관 및 조직으로 전달하고i보다 특이적으로 상기 숙주 유기체의 폐 내피 세포로 전달하기 위해 적합함을 밝혀냈고, 상기 지질 조성물은 하기 화학식 I:
Figure pct00042
의 양이온 지질(여기서, n은 1, 2, 3, 및 4 중 어느 하나이고, m은 1, 2 및 3 중 어느 하나이고, Y-는 음이온이고, R1 및 R2는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C12-C18 알킬 및 선형 C12-C18 알케닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된다);
스테롤 화합물(여기서, 상기 스테롤 화합물은 콜레스테롤 및 스티그마스테롤로 이루어진 그룹으로부터 선택된다); 및
페길화된(PEGylated) 지질(여기서, 상기 페길화된 지질은 PEG 모이어티를 포함하고, 상기 페길화된 지질은 하기 화학식 II:
Figure pct00043
의 페길화된 포스포에탄올아민(여기서, R3 및 R4는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C13-C17 알킬이고, p는 15 내지 130의 임의의 정수이다);
하기 화학식 III:
Figure pct00044
의 페길화된 세라마이드(여기서, R5는 선형 C7-C15 알킬이고, q는 15 내지 130의 임의의 정수이다); 및
하기 화학식 IV:
Figure pct00045
의 페길화된 디아실글리세롤(여기서, R6 및 R7은 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C11-C17 알킬이고, r은 15 내지 130의 임의의 정수이다)로 이루어진다. 바람직하게, 상기 핵산은 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, siRNA이지만 이에 제한되지 않는다.
상기 발견은 이것이 일반적으로 폐에서 siRNA의 단지 일시적 누적과 함께 간 조직에서 만연된 유전자 녹다운을 보여주는 양이온 지질 나노-복합체의 전형적 전신 거동과 대조적이어서 놀라운 것이다(문헌참조: Polach, KJ et al. (2012), Mol Ther 20: 91-100; Schroeder, A et al. (2010), J Intern Med 267: 9-21; Tao, W et al. (2010), Mol Ther 18: 1657- 1666). 임의의 이론에 국한되는 것 없이, 본 발명자들은 페길화된 지질의 PEG 잔기가 입체적 반발력을 통해 옵소닌 단백질의 흡착을 반발시킬 수 있는 나노입자 주변에 친수성 보호층을 형성하여 양이온 전달 시스템의 정맥내 투여시 관찰된 전신 독성을 유발하는 면역글로불린 및 피브로넥틴과 같은 혈액 혈청 옵소닌에 의한 리포플렉스의 결합 및 급속한 분해를 회피하는 지질 조성물에 의해 형성된 리포플렉스 나노입자의 표면상에 존재함을 추정한다. 추가로, 양이온 지질은 각각 정전기 상호작용 및 엔트로피 효과로 인한 음전하 RNA의 리포플렉스로의 활성 로딩을 가능하게 하는 것으로 나타났다. 이것은 올리고뉴클레오타이드를 농축시키고 이들을 분해로부터 보호하고 세포에 의한 흡수 및 엔도좀 방출을 촉진시킨다. 본 발명의 지질 조성물의 스테롤 화합물은 융합생성력을 상실하는 것 없이 리포플렉스 안정성을 유지시키고 따라서 리포플렉스의 라멜라성, 혈장 약리역학 및 생분포에 영향을 미치는것으로 추정된다.
본원에 제공된 실험적 증거 관점에서, 본 발명의 지질 조성물을 포함하는 조성물이 폐 질환 및 약제학적 활성제 및/또는 치료학적 활성제를 폐로, 폐 조직으로 및/또는 폐 내피 세포로 표적화시킴에 의해 표적화될 수 있는 질환을 치료하기 위해 적합함을 입증한다. 상기 질환은 폐 전이 뿐만 아니라 폐암을 포함하고(문헌참조: 예를 들어, Steeg, PS (2006), Nat Med 12: 895-904)) 폐암의 경우에 표적 분자는 CD31, Ras, myc, Hif-la, VEGF-R2, -Rl, R-3, PKN3, miR221, miR145이다. 본 발명의 지질 조성물을 포함하는 조성물과 함께 관찰된 낮고 온-타임 용량투여가 또한 이것이 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS)/급성 폐 손상(ALI), 부종 및 패혈증을 유도하는 염증 및 증가된 혈관 침투능을 특징으로 하는 생명 위협 증후군과 같이 정맥내 약물 투여와 함께 병원에 허가를 요구하는 급성 감염의 치료에 유용한 제제의 전달을 위한 비히클이 되게한다(van der Heijden, M et al. (2009), Expert Opin Ther Targets 13: 39-53; David, S et al. (2012), Crit Care Med 40: 3034-3041; and Hotchkiss, RS et al. (2003), N Engl J Med 348: 138-150). 각각 ARDS/ALI와 함께 약제학적 활성제 또는 치료학적 활성제에 의해 표적화될 수 있는 특정 표적 분자는 ANG2이다. 또한 "안지오텐신-2"로서 언급되는 ANG2는 내피 유도된 Tie2 길항제이고 혈관 불안정화 인자로서 패혈증 사망율 및 치사율에 기여한다(문헌참조: Fiedler, U., and H.G. Augustin. 2006, Trends Immunol. 27:552-8). siRNA, 안티센스 분자, 안타고미르(antagomir) (예를 들어, 문헌(참조: Piva et al. 2013, INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY 43: 985-994, Ganguli et al., 2011, Bioinformation 7(1): 41-43 (2011), and Costa et al.2013, Pharmaceuticals, 6, 1195-1220)에 기재된) 및/또는 마이크로 RNA 모사체(예를 들어, 문헌(참조: described, for example, in Henry et al., 2011, Pharmaceutical research 12, 3030-3042; and Ling, H., et al. (2013), Nat Rev Drug Discov 12(1 1):847-865)에 기재된)와 같은 합성 핵산을 사용하는 지질 조성물에 의한 선택적 표적 유전자 억제는 따라서 급성 생명 위협 폐 질환을 포함하는 폐 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 전략이다.
본 발명의 추가의 측면은 지질 조성물로서, 상기 지질 조성물은
하기 화학식 I:
Figure pct00046
의 양이온 지질(여기서, n은 1, 2, 3, 및 4 중 어느 하나이고, m은 1, 2 및 3 중 어느 하나이고, Y-는 음이온이고, R1 및 R2는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C12-C18 알킬 및 선형 C12-C18 알케닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된다);
스테롤 화합물(여기서, 상기 스테롤 화합물은 콜레스테롤 및 스티그마스테롤로 이루어진 그룹으로부터 선택된다); 및
페길화된(PEGylated) 지질(여기서, 상기 페길화된 지질은 PEG 모이어티를 포함하고, 상기 페길화된 지질은 하기 화학식 II:
Figure pct00047
의 페길화된 포스포에탄올아민(여기서, R3 및 R4는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C13-C17 알킬이고, p는 15 내지 130의 임의의 정수이다);
하기 화학식 III:
Figure pct00048
의 페길화된 세라마이드(여기서, R5는 선형 C7-C15 알킬이고, q는 15 내지 130의 임의의 정수이다); 및
하기 화학식 IV:
Figure pct00049
의 페길화된 디아실글리세롤(여기서, R6 및 R7은 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C11-C17 알킬이고, r은 15 내지 130의 임의의 정수이다)로 이루어진다.
본 발명의 추가의 측면은, 본 발명의 지질 조성물, 본 발명의 약제 또는 본 발명의 전달 비히클의 제조시 하기 화학식 I:
하기 화학식 I:
Figure pct00050
의 양이온 지질(여기서, n은 1, 2, 3, 및 4 중 어느 하나이고, m은 1, 2 및 3 중 어느 하나이고, Y-는 음이온이고, R1 및 R2는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C12-C18 알킬 및 선형 C12-C18 알케닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된다)의 용도에 있다.
본 발명의 추가의 측면은, 본 발명의 지질 조성물, 본 발명의 약제 또는 본 발명의 전달 비히클의 제조시 콜레스테롤 및 스티그마스테롤로 이루어진 그룹으로부터 선택된 스테롤 화합물의 용이다.
본 발명의 더 추가의 측면은, 본 발명의 지질 조성물, 본 발명의 약제 또는 본 발명의 전달 비히클의 제조시 하기 화학식 II:
Figure pct00051
의 페길화된 포스포에탄올아민(여기서, R3 및 R4는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C13-C17 알킬이고, p는 15 내지 130의 임의의 정수이다);
하기 화학식 III:
Figure pct00052
의 페길화된 세라마이드(여기서, R5는s 선형 C7-C15 알킬이고, q는 15 내지 130의 임의의 정수이다);
하기 화학식 IV:
Figure pct00053
의 페길화된 디아실글리세롤(여기서, R6 및 R7은 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C11-C17 알킬이고, r은 15 내지 130의 임의의 정수이다)의 용도이다.
반대로 지적되지 않는 경우, 본 발명의 조성물은 본 발명의 지질 조성물을 포함하는 조성물이다. 본 발명의 지질 조성물의 임의의 양태가 또한 본 발명의 지질 조성물의 양태라는 것은 본 발명의 범위 내에 있다. 본원에서 바람직하게 사용된 바와 같이, 전달제 또는 전달 비히클은 본 발명의 지질 조성물을 포함하는 조성물이다. 또한 본원에서 바람직하게 사용된 바와 같은 전달제 또는 전달 비히클은 본 발명의 조성물이다. 본원에 바람직하게 사용된 바와 같은 전달제 또는 전달 비히클은 화합물을 구조체로 전달하기 위해 적합한 조성물과 같은 제제 또는 비히클이고; 바람직하게 상기 구조체는 기관, 조직 또는 세포이고; 보다 바람직하게 상기 구조체는 기관, 조직 또는 세포이다. 바람직한 양태에서, 상기 화합물은 치료학적 활성제, 생물학적 활성제 또는 약제학적 활성제이다.
본원에서 바람직하게 사용된 바와 같은 치료학적 활성제는 숙주 유기체에서 치료학적 또는 치료학적으로 유익한 효과를 유발하기 위해 적합한 화합물이다.
본원에 바람직하게 사용된 바와 같은 생물학적 활성제는 숙주 유기체에서 생물학적 효과를 유발하기 위해 적합한 화합물이다.
본원에 바람직하게 사용된 바와 같은 약제학적 활성제는 숙주 유기체에서 약제학적 또는 약제학적으로 유익한 효과를 유발하기 위해 적합한 화합물이다.
반대로 지적되지 않는 경우 치료학적 활성제의 임의의 양태는 또한 생물학적 활성제 및 약제학적 활성제의 양태이고 그 반대일 수 있는 것으로 인지된다.
본 발명과 관련하여, 치료요법은 또한 예방을 포함한다. 이에 따라, 치료학적 활성제는 하나의 양태에서 또한 질환의 예방에 활성인 제제이다. 또 다른 양태에서, 치료학적 활성제는 질환의 예방에 활성이 아니다.
본원에 바람직하게 사용된 바와 같은 알킬은 하나의 수소가 소실된 알칸 치환체이고, 이에 의해 알칸은 단지 수소 및 탄소원자로 이루어지고, 모든 결합은 단일 결합이고 탄소 원자는 환형 구조에서 연결되어 있지 않고 대신 개방 쇄를 형성하고; 알칸의 일반 화학식은 CnH2n+2이다.
본원에서 바람직하게 사용된 바와 같은 알케닐은 하나의 수소가 소실된 알켄 치환체이고 알켄은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 불포화 화학적 화합물이다.
본원에 바람직하게 사용된 바와 같은 PEG는 폴리에틸렌 글리콜이다.
본원에 사용된 바와 같은 n은 1 내지 4의 임의의 정수이고, 이것은 n이 1, 2, 3 및 4일 수 있음을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같은 m은 1 내지 3의 임의의 정수이고, 이는 m이 1, 2 및 3일 수 있음을 의미한다.
본 발명의 조성물의 양이온 지질 및 이의 제조 방법은 예를 들어, 국제 특허 출원 제WO 2005/105152호에 기재되어 있다.
본 발명의 조성물의 양이온 지질은 양이온 지질들인 것으로 이해되어야만 한다. 보다 바람직하게, 상기 지질에 존재하는 임의의 NH 또는 NH2 그룹은 양성자 형태로 존재한다. 전형적으로, 상기 지질의 임의의 양전하는 음이온 존재에 의해 보상된다. 상기 음이온은 1가 또는 다가 음이온일 수 있다. 바람직한 음이온은 할로겐화물, 아세테이트 및 트리플루오로아세테이트이다. 본원에 사용된 바와 같은 할로겐화물은 바람직하게 클로라이드, 플루오라이드, 요오다이드 및 브로마이드이다. 가장 바람직한 것은 클로라이드이다. 양이온 지질과 세포로 전달될 치료학적 또는 약제학적 또는 생물학적 활성 화합물의 회합시 할라이드 음이온은 바람직하게 1개 또는 여러 음전하를 나타내는 상기 활성 화합물에 의해 대체되지만 생물학적 활성 화합물의 전체 전하는 필연적으로 음전하가 아닌 것으로 인지되어야 한다. 이러한 고려 사항은 본 발명의 조성물의 다른 화합물에도 균등하게 적용될 수 있다. 상기 화합물이 음이온 화합물이거나 하나 또는 여러 음전하를 갖는 경우에, 상기 음전하는 양이온 존재에 의해 보상될 수 있다. 상기 양이온은 1가 또는 다가 음이온일 수 있다. 바람직한 양이온은 암모늄, 나트륨 또는 칼륨이다.
화학식 I에 따른 임의의 화합물은 적어도 2개의 비대칭 C 원자를 포함하는 것으로 인지되어야 한다. 상기 화합물의 임의의 가능한 부분입체이성체, 즉, 특히 R-R; S-S; R-S 및 S-R 부분입체이성체가 본원에 기재된 것은 본 발명의 범위 내에 있다. 본 발명의 조성물의 스테롤 화합물은 합성일 수 있거나 양털 또는 식물과 같은 천연 공급원으로부터 수득될 수 있다.
본 발명의 조성물의 페길화된 지질은 제조원(예를 들어, NOF Corporation, Japan; Avanti Polar Lipids, US; or Cordon Pharma, Switzerland)으로부터 가용하다.
본 발명의 지질 조성물 및 본 발명의 조성물의 Z-평균 크기를 결정하기 위한 방법은 당업자에게 공지되어 있고 실시예 부분에 기재된 바와 같이, 동적 광 산란법(Dynamic Light Scattering), DLS를 포함하거나, 예를 들어, 제조원(Zetasizer Nano Series User Manuel, Malvern Instruments Ltd., UK)으로부터 취득할 수 있다.
본 발명의 지질 조성물 및 본 발명의 조성물의 제타 전위를 결정하기 위한 방법은 당업자에게 공지되어 있고 실시예 부분에 기재거나 예를 들어, 제조원( Zetasizer Nano Series User Manuel, Malvern Instruments Ltd., UK)으로부터 취득할 수 있는 전기영동 광 산란을 포함한다.
본 발명의 조성물 및 본 발명의 지질 조성물은 하나의 양태에서 담체를 포함할 수 있다. 상기 담체는 바람직하게 액체 담체이다. 바람직한 액체 담체는 수성 담체 및 비-수성 담체이다. 바람직한 수성 담체는 물, 수성 염 용액, 수성 완충 시스템이고/이거나, 보다 바람직하게, 상기 완충 시스템 및/또는 수성 염 용액은 생리학적 완충 강도 및 생리학적 염 농도(들)를 갖는다. 바람직한 비-수성 담체는 용매, 바람직하게는 유기 용매, 예를 들어, 에탄올, 3급-부탄올이다. 임의의 이론에 국한되는 것 없이 원칙적으로 임의의 수혼화성 유기 용매가 사용될 수 있다. 따라서 상기 조성물, 보다 특히 상기 지질 조성물은 리포좀으로서 존재하거나 리포좀을 형성할 수 있고, 전체 음전하 화합물, 바람직하게, 본 발명의 지질 조성물 및/또는 본 발명의 조성물에 의해 전달될 화합물과 접촉되는 경우, 본 발명의 지질 조성물 및/또는 본 발명의 조성물은 리포플렉스, 즉, 핵산과 같은 다가 음이온이 양이온 지질 또는 다른 지질 성분 뿐만 아니라 적어도 하나의 양이온 지질 성분을 함유하는 지질 시스템과 상호작용하는 경우 반대 이온 및 물의 정전기 상호작용 및 엔트로피 효과에 의해 형성되는 복합체를 형성한다.
추가의 양태에서, 본 발명의 지질 조성물 및/또는 본 발명의 조성물은 동결건조된 조성물로서 존재한다. 그와 같이 동결건조된 조성물은 실온에서 조성물의 효과적인 장기 저장을 가능하게 한다.
본 발명의 지질 조성물 및/또는 본 발명의 조성물이 화학적 화합물을 포함하고 상기 화학적 화합물이 생물학적 활성제, 치료학적 활성제 및/또는 약제학적 활성제인 것은 본 발명의 범위 내에 있다. 이러한 종류의 제제는 또한 본원에서 "활성제"로서 언급된다.
바람직하게, 임의의 상기 활성제는 음전하 분자이다. 용어 음전하 분자는 본 발명에 따른 양이온 지질의 양전하 그룹과 이온쌍을 형성할 수 있는 적어도 하나 이상의 음전하 그룹을 갖는 분자를 포함함을 의미하지만 본 발명자는 임의의 이론에 국한되고 싶지 않다. 원칙적으로, 링커 잔기에서의 양전하는 또한 상기와 같은 지질 또는 양이온 지질과 음전하 분자, 즉 생물학적 활성 화합물 간에 형성된 임의의 복합체의 전체 구조상에 일부 효과를 가질 수 있다. 이 뿐만 아니라, 미국 특허 제6,395,713호에 기재된 양이온 지질과 비교하여 본 발명에 따른 지질로 도입된 추가의 양전하는 문헌[참조: Xu Y, Szoka FC Jr.; Biochemistry; 1996 May 07, 35 (18): 5616-23]에 교시된 바와 같은 상기 지질의 증가된 독성에 기여해야 한다. 당업자가 상기 선행 기술 분야의 문헌으로부터 예상했던 것과는 대조적으로, 본 발명에 따른 화합물은 특히 본원에 기재된 다양한 목적을 위해 적합하고 특히 임의의 증가된 독성이 없다.
바람직하게 본원에 사용된 바와 같은 펩타이드는 서로 공유적으로 결합된, 바람직하게는 펩타이드 결합을 통해 결합된 적어도 2개의 아미노산으로 이루어진 임의의 중합체이다. 보다 바람직하게, 펩타이드는 2 내지 10개의 아미노산으로 이루어진다. 펩타이드의 특히 바람직한 양태는 심지어 보다 바람직하게 약 10 내지 약 100개의 아미노산을 포함하는 올리고펩타이드이다. 본원에서 바람직하게는 사용되는 단백질은 서로 공유적으로 결합된 다수의 아미노산으로 이루어진 중합체이다. 바람직하게, 상기 단백질은 약 적어도 100개의 아미노산 또는 아미노산 잔기들을 포함한다.
상기 양이온 지질 및 본 발명에 따른 조성물과 연계하여 사용될 수 있는 바람직한 단백질은 임의의 항체, 바람직하게 임의의 모노클로날 항체이다.
특히 바람직한 생물학적 활성 화합물, 즉, 본 발명에 따른 조성물과 연계하여 사용되는 약제학적 활성 화합물 및 상기 추가의 성분들은 핵산이다. 상기 핵산은 DNA, RNA, PNA 또는 이의 임의의 혼합물일 수 있다. 보다 바람직하게, 핵산은 기능성 핵산이다. 본원에서 바람직하게 사용되는 기능성 핵산은 각각 펩타이드 및 단백질을 암호화하는 핵산이 아닌 핵산이다. 바람직한 기능성 핵산은 모두 당업계에 공지되어 있는 siRNA, siNA, RNAi, 안티센스-핵산, 리보자임, 압타머 및 스피겔머이다.
siRNA는 예를 들어, 국제 특허 출원 제PCT/EP03/08666호에 기재된 바와 같은 소형 간섭 RNA이다. 이들 분자는 전형적으로 서로 쌍을 형성하는, 즉, 전형적으로 왓슨-클릭 염기 쌍에 의해 매개되는 필수적으로 서로 상보적인 15 내지 25개, 바람직하게는 18 내지 23개 뉴클레오타이드 쌍을 포함하는 이중 가닥 RNA 구조로 이루어진다. 이중 가닥 RNA 분자 중 하나의 가닥은 필수적으로 표적 핵산, 바람직하게는 mRNA에 상보적이고 반면, 상기 이중 가닥 RNA 분자의 제2 가닥은 필수적으로 상기 표적 핵산의 스트레치에 동일하다. 상기 siRNA 분자는 각각 다수의 추가의 올리고뉴클레오타이드에 의해, 필수적으로 서로 염기쌍을 형성할 필요가 없는 추가의 올리고뉴클레오타이드에 의해 측면 및 각각의 스트레치상에서 플랭킹될 수 있다.
RNAi는 필수적으로 siRNA와 동일한 디자인을 갖지만 상기 분자는 siRNA와 비교하여 상당히 길다. RNAi 분자는 전형적으로 각각 50개 이상의 뉴클레오타이드 및 염기쌍을 포함한다. siRNA 및 RNAi와 동일한 작용 방식을 기반으로 활성인 추가 부류의 기능성 핵산은 siNA이다. siNA는 예를 들어, 국제 특허 출원 제PCT/EP03/074654호에 기재되어 있다. 보다 특히, siNA는 siRNA에 상응하고, 상기 siRNA 분자는 임의의 리보뉴클레오타이드를 포함하지 않는다.
본원에서 바람직하게 사용된 바와 같은 안티센스 핵산은 표적 RNA, 바람직하게 mRNA와 염기 상보성을 기반으로 하이브리드화하여 RNaseH를 활성화시키는 올리고뉴클레오타이드이다. RNaseH는 포스포디에스테르 및 포스포티오에이트 커플링된 DNA 둘 다에 의해 활성화된다. 그러나, 포스포디에스테르-커플링된 DNA는 포스포티오에이트-커플링된 DNA를 제외하고는 세포 뉴클레아제에 의해 신속하게 분해된다. 따라서, 안티센스 폴리뉴클레오타이드는 DNA-RNA 하이브리드 복합체로서만 효과적이다. 안티센스 핵산의 바람직한 길이는 16 내지 23개 범위의 뉴클레오타이드이다. 이러한 종류의 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 대한 예는 무엇보다 미국 특허 제5,849,902호 및 미국 특허 제5,989,912호에 기재되어 있다.
기능성 핵산의 추가의 그룹은 기본적으로 2개의 잔기를 포함하는 RNA로 바람직하게 이루어진 촉매적 활성 핵산인 리보자임이다. 제1 잔기는 촉매 활성을 보여주는 반면, 제2 잔기는 표적 핵산과 특이적으로 상호작용하는데 관여한다. 전형적으로 2개의 하이브리드화 가닥 상에 염기의 필수 상보적 스트레치의 하이브리드화 및 왓슨-크릭 염기쌍 형성에 의한 상기 표적 핵산과 상기 리보자임의 잔기 간의 상호작용시, 촉매적 활성 잔기는 활성이 될 수 있고 이는 리보자임의 촉매 활성이 포스포디에스테라제 활성인 경우에 분자내 또는 분자간에 표적 핵산을 절단함을 의미한다. 리보자임, 용도 및 디자인 원리는 당업자에게 공지되어 있고 예를 들어, 문헌(참조: Doherty and Doudna (Annu. Ref. Biophys. Biomolstruct. 2000; 30: 457-75)에 기재되어 있다.
여전히, 기능성 핵산의 추가의 그룹은 마이크로RNA이다. 마이크로RNA는 소형 비-암호화 RNA 분자이다. 완전히 가공된 성숙한 miRNA는 전형적으로 약 22개 뉴클레오타이드의 길이를 갖는다. 마이크로RNA는 유전자 발현의 전사 및 전사 후 조절 기능을 한다. 진핵세포 핵 DNA에 의해 암호화된 miRNA는 mRNA 분자 내에서 상보적 서열과 염기 쌍 형성을 통해 기능하고 일반적으로 해독 억제 또는 표적 분해, 및/또는 마이크로 RNA 모사체를 통해 유전자 사일런싱을 유도한다(문헌참조: 예를 들어, Anand, S. (2013), Vase Cell 5(1): 2; Kasinski, A. L. and F. J. Slack (2011), Nat Rev Cancer 11(12): 849-864; Liu, D., et al. (2011), Int J Dev Biol 55(4-5): 419-429; Staszel, T., et al. (2011), Pol Arch Med Wewn 121(10): 361-366; Urbich, C, et al. (2008), Cardiovasc Res 79(4): 581-588; Costa, P. M. and M. C. Pedroso de Lima (2013), Pharmaceuticals (Basel) 6(10): 1195-1220; and Henry, J. C, et al. (2011), Pharm Res 28(12): 3030-3042).
기능성 핵산의 또 다른 그룹은 예를 들어, 문헌[참조: Costa, P. M. and M. C. Pedroso de Lima (2013), Pharmaceuticals (Basel) 6(10): 1195-1220; Piva, R., et al. (2013), Int J Oncol 43(4): 985-994; Ganguli, S., et al. (2011), Bioinformation 7(1): 41-43; and Ling, H., et al. (2013), Nat Rev Drug Discov 12(11): 847-865]에 기재되어 있는 안타고미르이다.
기능성 핵산의 여전히 추가의 그룹은 압타머이다. 압타머는 단일 가닥 또는 이중 가닥이고 표적 분자와 특이적으로 상호작용하는 D-핵산이다. 압타머의 제조 또는 선택은 예를 들어, 유럽 특허 제EP 0 533 838호에 기재되어 있다. RNAi, siRNA, siNA, 안티센스-뉴클레오타이드 및 리보자임과는 대조적으로, 압타머는 임의의 표적 mRNA를 분해하지 않지만 단백질과 같은 표적 화합물의 2차 및 3차 구조와 특이적으로 상호작용한다. 표적과의 상호작용시, 상기 표적은 전형적으로 생물학적 활성에서 변화를 보여준다. 압타머의 길이는 전형적으로 적게는 15개 내지 많게는 80개 범위의 뉴클레오타이드이고 바람직하게는 약 20개 내지 약 50개 범위의 뉴클레오타이드이다.
기능성 핵산의 또 다른 그룹은 예를 들어, 국제 특허 출원 WO 98/08856에 기재된 바와 같은 스피겔머이다. 스피겔머는 압타머와 유사한 분자이다. 그러나, 스피겔머는 압타머와는 대조적으로 완전히 또는 대부분 D-뉴클레오타이드 보다는 차라리 L-뉴클레오타이드로 이루어진다. 다른 한편, 특히, 스피겔머의 가능한 길이와 관련하여 압타머와 연계하여 명시된 바와 같이 스피겔머에 동일하게 적용된다. 본 발명의 추가의 측면은 본 발명의 지질 조성물 또는 본 발명의 조성물을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적 활성 화합물 및 임의로 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 바람직하게 본 발명에 따른 조성물과 연계하여 본원에 정의된 바와 같은 담체 그룹으로부터 선택될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 임의의 조성물이 원칙적으로 또한 이의 성분들 및 이의 임의의 조합이 약제학적으로 허용되는 경우, 약제학적 조성물로서 사용된다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다. 약제학적 조성물은 약제학적 활성 화합물을 포함한다. 상기 약제학적 활성 화합물은 바람직하게 임의의 생물학적 활성 화합물, 보다 바람직하게 본원에 기재된 바와 같은 임의의 생물학적 활성 화합물인 본 발명에 따른 조성물의 추가의 화합물 또는 활성제와 동일할 수 있다. 추가의 성분, 약제학적 활성 화합물 및/또는 생물학적 활성 화합물은 바람직하게 펩타이드, 단백질, 단백질, 올리고뉴클레오타이드, 폴리뉴클레오타이드 및 핵산을 포함하는 그룹으로부터 선택된다.
조성물, 특히 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 다양한 투여 형태로 사용될 수 있고, 국소 투여 및 전신 투여가 특히 바람직하다. 근육내, 경피, 피하, 정맥내 및 폐내 투여를 포함하는 그룹으로부터 선택되는 투여 경로가 보다 더 바람직하다. 본원에서 바람직하게 사용된 바와 같이, 국소 투여는 각각의 조성물이 각각 상기 조성물 및 생물학적 활성 화합물이 투여되어야 하는 세포, 조직 및 기관과 인접한 공간적 관계로 투여됨을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같은 전신 투여는 국소 투여와는 상이한 투여를 의미하고 보다 바람직하게는 각각 혈액 및 이의 액체 성분과 같은 체액으로의 투여이고, 이로써 상기 체액은 조성물을 각각 상기 조성물 및 생물학적 활성 화합물이 전달되어야 하는 세포, 조직 및 기관으로 수송한다.
바람직하게 본원에 사용된 바와 같은 숙주 유기체 또는 대상체는 포유동물이고, 바람직하게 포유동물은 인간, 마우스, 래트, 토끼, 햄스터, 기니아 피그, 원숭이, 개, 고양이, 돼지, 양, 염소, 소 및 말을 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 보다 바람직하게 숙주 유기체 또는 대상체는 인간이다.
본 발명에 따른 조성물을 사용하여 제조될 수 있는 임의의 약물은 각각 대상체의 치료 및 예방을 위한 것이다. 바람직하게 상기 대상체는 포유동물이고 보다 더 바람직하게 상기 포유동물은 인간, 마우스, 래트, 토끼, 햄스터, 기니아 피그, 원숭이, 개, 고양이, 돼지, 양, 염소, 소 및 말을 포함하는 그룹으로부터 선택된다. 추가의 측면에서, 본 발명에 따른 조성물 및/또는 본 발명의 지질 조성물은 전달제로서, 보다 바람직하게는 형질감염제로서 사용될 수 있다.
바람직하게 본원에 사용된 바와 같은 전달제는 화합물, 보다 바람직하게 약제학적 활성 화합물과 같은 생물학적 활성 화합물을 막, 바람직하게는 세포막을 걸쳐 전달하고 보다 바람직하게는 상기 화합물을 본원에서 이전에 기재된 바와 같이 세포로 전달하기 위해 적합하다. 바람직하게, 상기 세포는 폐 내피 세포, 본원에 정의된 바와 같은 숙주 유기체의 내피 세포이다.
여전히 추가의 측면에서, 본 발명은 보다 특히, 세포에 생물학적 활성 화합물을 전달하고, 보다 특히 세포를 생물학적 활성 화합물로 형질감염시키기 위한 방법에 관한 것이다. 제1 단계에서, 단계의 순서는 필수적으로 제한되지 않고 상기 세포 및 상기 막 및 세포가 제공된다. 제2 단계에서, 약제학적 활성 화합물과 같은 생물학적 활성 화합물 뿐만 아니라 본 발명에 따른 화합물이 제공된다. 상기 반응물은 각각 세포 및 막과 접촉될 수 있고 본 발명에 따른 화합물 및 조성물의 생물리적 특성으로 인해, 생물학적 활성 화합물은 막의 한쪽 측면으로부터 다른 측면으로 전달되거나 막이 세포를 형성하는 경우, 세포 외부로부터 세포내로 전달된다. 각각 세포 및 막에 접촉시키기 전에 본 발명의 생물학적 활성 화합물 및 조성물 및/또는 본 발명의 지질 조성물이 접촉되어, 이 즉시 바람직하게 복합체가 형성되고 상기 복합체가 각각 세포 및 막과 접촉되는 것은 본 발명의 범위 내에 있다.
본 발명의 추가의 측면에서, 각각 생물학적 활성 화합물 및 약제학적 활성 화합물을 전달하기 위한 방법은 각각 세포 및 막을 제공하고, 본 발명에 따른 조성물 및/또는 본 발명의 지질 조성물을 제공하고 각각 조성물 및 세포 및 막 둘 다와 접촉시키는 단계를 포함한다. 상기 조성물은 각각 세포 및 막과 접촉 전 또는 접촉 동안에 형성될 수 있다는 것은 본 발명의 범위 내에 있다.
본원에 기재된 바와 같은 생물학적 활성 화합물을 전달하기 위한 임의의 방법의 하나의 양태에서, 상기 방법은 추가의 단계, 바람직하게 생물학적 활성 화합물이 전달되는지를 검출하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 검출 반응은 상기 방법에 따라 전달되는 생물학적 활성 화합물의 종류에 강하게 의존하고 당업자에게 용이하게 자명하다. 상기 방법이 본원에 기재된 바와 같은 임의의 세포, 조직, 기관 및 유기체에 대해 수행되는 것은 본 발명의 범위 내에 있다.
추가의 측면에서, 본 발명은 약물의 제조 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 본 발명의 조성물 및/또는 본 발명의 지질 조성물과 함께 치료학적 활성제 또는 약제학적 활성제를 제형화함을 포함한다. 상기 제형화를 수행하는 방법에 대한 세부사항은 당업자에게 공지되어 있고 또한 본원 기재의 실시예 부분으로부터 취할 수 있다.
본 발명은 하기의 도면, 및 본 발명의 추가의 특징, 양태 및 이점이 이로써 취해질 수 있는 실시예에 의해 추가로 설명된다.
도 1은 상이한 리포플렉스 제형을 사용한 전신 적용 1시간 후에 생체내 siRNA를 보여주는 다이아그램이고; siRNA 농도는 조직의 그램 당 % 초기 투여량 [%ID/g]으로 지적되고;
도 2a는 DACC에 의해 형성되는 리포플렉스의 siRNA 및 상기 siRNA 분자의 기본 디자인 뿐만 아니라 DACC를 형성하는 화학적 화합물, 이들의 화학적 구조 및 %로 표현되는 이들의 몰비를 보여주고; 상기 siRNA 분자는 평활 말단화하고 양쪽 가닥상의 환은 2-O-메틸 변형된 뉴클레오타이드를 지적하고;
도 2b는 Z-평균 크기로서 DACC/siRNA 리포플렉스의 입자 크기 분포를 보여주는 다이아그램이고;
도 2c는 DACC/siRNA 리포플렉스의 제타 전위를 보여주는 다이아그램이고;
도 2d는 DACC/siRNA 리포플렉스의 전자 현미경 사진이고;
도 3a는 DACC/siRNA 리포플렉스의 투여시 1, 6 및 24시간째에 다양한 기관에서 % ID/g으로 표현되는 siRNA 농도를 보여주는 다이아그램이고;
도 3b는 DACC/siRNACy3의 전신 i.v. 투여한지 1시간 후 폐에서 Cy3-표지된 siRNA의 세포 분포를 설명하는 포르말린 고정된 파라핀 매립된 폐 조직 절편의 일련의 공초점 현미경 이미지이고; 상부 좌측 이미지는 백색으로 염색되는 siRNA-Cy3을 보여주고, 상기 상부 우측 이미지 및 하부 이미지는 적색으로 염색되는 siRNACy3 및 녹색으로 염색되는 핵의 클로즈업 사진을 보여주고, 스케일 막대가 지적되고;
도 3c는 심장, 간, 비장 및 신장의 포르말린 고정된 파라핀 매립 절편의 일련의 공초점 현미경이고 DACC/siRNACy3의 전신 i.v, 투여한지 1시간 후 상기 기관에서 Cy3-표지된 siRNA의 세포 분포를 설명하고; 상부 패널은 낮은 배율의 백색으로 나타내고 하부 패널은 적색의 클로즈업 사진이고, 스케일 막대를 나타내고;
도 4a는 Tie-2의 억제를 위한 DACC/siRNATie -2 리포플렉스를 사용한 형질감염 후 마우스 내피 세포주, MS-1의 웨스턴 블롯 분석 결과를 보여주고;
도 4b 내지 4e는 정량적 역전사효소-PCR 분석에 의해 결정된 바와 같이 DACC/siRNATie-2 리포플렉스를 사용한 치료시 폐(도 4b), 심장(도 4c), 간(도 4d) 및 신장(도 4e) 세포에서 PTEN mRNA의 억제에 상대적인 Tie-2 mRNA의 억제를 보여주는 다이아그램이고;
도 5a는 DACC/siRNATie -2 리포플렉스, DACC/siRNACD31 리포플렉스 및 270mM 슈크로스 용액을 사용한 볼러스 주사에 의해 처리된 마우스의 폐 세포에서 액틴 mRNA의 억제에 상대적인 Tie-2 mRNA의 억제를 보여주는 다이아그램이고, 이로써 투여되는 리포플렉스의 양은 각각 3.0mg/kg, 1.5mg/kg 및 0.75mg/kg이고;
도 5b는 DACC/siRNATie -2 리포플렉스 및 5% 글루코스 용액의 주입에 의해 처리된 마우스의 폐 세포에서 액틴 mRNA의 억제에 상대적인 Tie-2 mRNA의 억제를 보여주는 다이아그램이고, 이로써 투여되는 리포플렉스의 양은 각각 0.3mg/kg, 1.0mg/kg, 3.0 mg/kg. 6.0 mg/kg 및 12 mg/kg이고;
도 6a는 3일 p.t., 7일 p.t., 및 21일 p.t.에서 DACC/siRNATie -2 리포플렉스, 대조군 리포플렉스 또는 슈크로스로 처리된 마우스의 폐 세포에서 액틴 mRNA의 억제에 상대적인 Tie-2 mRNA의 억제를 보여주는 다이아그램이고;
도 6b는 PTEN이 로딩 대조군으로서 사용되고 DACC/siRNATie -2 리포플렉스 또는 슈크로스 용액의 단일 용량 투여 후 3일 및 21일째에 수거된 마우스의 폐 조직의 웨스턴 블롯 분석 결과를 보여주고;
도 7a 내지 7d는 DACC/siRNAVEGFR2 리포플렉스(도 7a), DACC/siRNAVE - 캐드헤린 리포플렉스(도 7b), DACC/siRNABMPR2 리포플렉스(도 7c) 및 DACC/siRNACD31 리포플렉스(도 7d)로 처리된 마우스의 폐 내피에서 PTEN mRNA의 억제에 상대적인 다양한 표적 유전자(도 7a: VEGFR2; 도 7b: VE-캐드헤린; 도 7c: BMPR2; 및 도 7d: CD31)의 억제를 보여주는 다이아그램이고, 이로써, 각각의 경우에, 270mM 슈크로스 및 DACC/siRNA대조군은 동물의 대조군 그룹에 투여하고;
도 8a는 폐 전이 마우스 모델의 실험적 셋-업 및 DACC/siRNACD31을 사용한 처리 계획을 나타내고;
도 8b는 도 8a에 보여지는 처리 계획 동안에 15일까지 상대적인 체중을 설명하는 다이아그램이고;
도 8c는 도 8a의 도식에 도시된 바와 같이 실험적 폐 전이 마우스 모델에서 DACC/siRNACD31, DACC/siRNA루시퍼라제 또는 대조군으로서 270mM 슈크로스로 처리된 세포 챌린지 후 70일의 기간 동안 정의된 종점 포인트 기준에 의해 마우스의 생존을 나타내는 케플란-마이어 다이아그램이고;
도 8d는 DACC/siRNACD31 리포플렉스, 대조군 리포플렉스 또는 슈크로스로 처리된 마우스의 폐 조직에서 CD34 mRNA의 억제에 상대적인 CD31 mRNA의 억제를 보여주는 다이아그램이고;
도 9a는 LPS 처리 및 DACC/siRNA를 사용하는 처리 계획에 의한 염증 반응의 유도를 위한 실험적 셋업을 나타내고;
도 9b는 LPS (0.5mg/kg) 또는 식염수(0.9% NaCl)로 챌린지 6시간 후 마우스의 폐에서 액틴 mRNA의 발현에 상대적인 ANGPT2 mRNA의 억제를 보여주는 다이아그램이고;
도 10a는 에스. 뉴모니애(S. pneumoniae) 감염된 폐 마우스 모델에 대한 실험적 셋업 및 DACC/siRNAANGPT2를 사용한 처리 계획을 나타내고;
도 10b는 도 10a의 계획에 도시된 바와 같이 DACC/siRNAANGPT2 및 앰피실린, DACC/siRNA루시퍼라제 및 앰피실린 또는 슈크로스 및 앰피실린 또는 슈크로스 및 비히클(식염수)로 처리된 에스. 뉴모니아로 챌린지 후 10일의 기간 동안 마우스의 생존을 나타내는 케플란-마이어 다이아그램이고;
도 11은 END1 또는 가용성 VEGF 수용체 1(sFltl)을 표적화하는 상이한 siRNA 분자를 사용하는 마우스에서 EDN1 발현의 감소를 결정하기 위한 실험적 셋업 및 상이한 전달 시스템을 명시하는 개요이고;
도 12는 도 5에서 도시된 실험적 셋업에 따라 처리된 마우스 기원의 폐 조직의 총 용해물에서 EDN1 mRNA 발현을 보여주는 막대 다이아그램이고, EDN1 mRNA 발현은 PTEN mRNA에 상대적으로 표준화된다.
실시예 1: 재료 및 방법
달리 지적되지 않는 경우 하기에 기재된 재료 및 방법은 실시예 전반에 걸쳐 사용되었다.
짧은 간섭 RNA
실시예 2 내지 9에 대한 실험 대상체에서 사용된 siRNA 분자 (AtuRNAi)는 표 1에 열거한다. 상기 실시예 2 내지 9에 사용된 siRNA 분자 (AtuRNAi)는 양쪽 가닥상에 교호하는 2'-O-메틸 변형에 의해 안정화된 평활 19량체 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오타이드이고 실시예 10 및 11에 대한 실험 대상체에서 사용된 siRNA 분자는 표 2에 열거한다. 상기 실시예 10 및 11에 사용된 siRNA 분자는 양쪽 가닥상에 교호하는 2'-O-메틸 변형에 의해 안정화된 평활 19량체 이중 가닥 RNA 올리고뉴클레오타이드이고 루시퍼라제를 표적화하는 대조군 siRNA 분자는 양쪽 가닥 상에 교호하는 2'-O-메틸 변형에 의해 안정화된 23량체 이중 가닥의 RNA 올리고뉴클레오타이드이다. 상기 변형은 이전에 문헌[참조: Santel A et al. (Santel, A et al. (2006). Gene Ther 13: 1222-1234) and Czauderna, F. et al. (Czauderna, F. et al. (2003), Nucleic Acids Res 31: 2705-2716)]에 기재되었고, 바이오스프링(BioSpring)(문헌참조: Frraannkfurt a.M., Germany)에 의해 합성되었다. 뉴클레오타이드의 2'-0-메틸 변형은 상응하는 대문자에 의해 나타낸 상기와 같이 변형된 뉴클레오타이드에 의해 본 명세서 및 청구항 전반에 걸쳐 지적되는 반면, 비-변형된 뉴클레오타이드는 상응하는 소문자로 나타낸다.
Figure pct00054
Figure pct00055
siRNA 리포플렉스의 제조 및 특징 분석
아투플렉스(Atuplex)는 다음을 함유하는 지질 조성물이다:
a) 50mol%의 β-(L-아르기닐)-2,3-L-디아미노프로피온산-N-팔미틸-N-올레일- 아미드 트리-하이드로클로라이드);
b) 49mol%의 1,2-디피타노일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(DPhyPE); 및
c) 1mol%의 N-(카보닐-메톡시폴리에틸렌글리콜-2000)-1,2-디스테아로일-sn- 글리세로-3-포스포에탄올아민 나트륨 염.
DACC9는 다음을 함유하는 지질 조성물이다:
a) 하기 식:
Figure pct00056
의 70mol%의 β-(L-아르기닐)-2,3-L-디아미노프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리-하이드로클로라이드,
b) 29mol%의 콜레스테롤; 및
c) 하기 식:
Figure pct00057
의 1mol%의 mPEG-2000-DSPE
(여기서, 전하 비[지질/포스페이트 올리고]는 8.4이다).
DACC10은 하기를 함유하는 지질 조성물이다:
a) 하기 식:
Figure pct00058
의 70mol%의 β-(L-아르기닐)-2,3-L-디아미노프로피온산-N-팔미틸-N-올레일- 아미드 트리-하이드로클로라이드,
b) 29mol%의 콜레스테롤; 및
c) 하기 식:
Figure pct00059
의 1mol%의 mPEG-2000-세라미드-C8.
(여기서, 전하 비[지질/포스페이트 올리고]는 8.4이다).
70:29:1의 몰비로 양이온 지질 AtuFECTOl (β-L-아르기닐-2,3-L-디아미노프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드; Silence Therapeutics AG, Berlin, Germany), 콜레스테롤(Sigma Aldrich) 및 mPEG2000-DSPE (1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올 아민-N [메톡시 (폴리에틸렌 글리콜)-2000]); Avanti Polar Lipids Inc., Alabaster, AL, USA)로 구성된 DACC9으로서 또한 언급되는 양이온 리포좀은 270mM 멸균 슈크로스 용액과 함께 지질 필름 재수화(문헌참조: Santel, A et al. (2006). Gene Ther 13: 1222-1234)에 의해 제조하였다. 상기 DACC10 지질 조성물로 구성된 양이온 리포좀은 유사한 방식으로 제조하였다. 수득한 리포좀 스톡 용액은 각각 5mg/ml 또는 9mg/ml까지의 총 지질 농도(예를 들어, 주입 연구를 위해)를 가졌다. siRNA 리포플렉스의 형성은 270mM 슈크로스에서 동등한 용적의 리포좀 분산액 및 siRNA 용액을 혼합함에 의해 발생한다. 상기 목적을 위해, 2개의 농도는 최종 리포플렉스 형성이 대략 8.4의 핵산 골격 포스페이트 대 하전된 지질 질소 원자 간의 전하 비(N/P 비)에 상응하는 ca. 6.8의 최종 지질/siRNA 비[m/m]를 특징으로 하는 방식으로 조정하였다. 리포좀 및 리포플렉스의 입자 크기(Z-평균 크기, 강도 분포) 및 제타 전위는 제타사이저 나노-ZS(Zetasizer Nano-ZS)(제조원: Malvern Instruments, Worcestershire, UK)를 사용하는 동적 광 산란법에 의해 결정하였다. 여기서, 상응하는 분산제 성질은 270mM 슈크로스로 조정하였다. 음성 염색 투과전자현미경(nsTEM)은 비로노바(Vironova AB)(제조원: Stockholm, Sweden)에 의해 수행하였다.
DACC를 참조로 하는 경우, 이것은 상기 참조가 DACC9 및 DACC10 둘 다를 언급한다.
생체내 siRNA 분포 및 RNAi
8주령 C57Bl/6j (Harlan) 수컷 및 암컷은 생체내 연구를 위해 사용하였다. 상기 연구에서 모든 동물 실험은 승인된 프로토콜에 따라 및 기관[Landesamt fur Arbeits-, Gesundheitsschutz und technische Sicherheit Berlin, Germany (No. G0264/99)]의 지침에 따라 수행하였다. 등장성 siRNA 리포플렉스 제형은 지정된 용량에서 볼러스 꼬리 정맥 주사를 통해 정맥내 투여하였다. siRNA-Cy3 생분포 연구를 위해, 마우스에 단일 용량의 DACC9siRNA-Cy3 (2.8mg siRNA/kg 체중)을 투여하였다. 1시간 주사 후, 마우스는 경추 탈골에 의해 희생시키고 조직은 이전에 기재된 바와 같이 파라핀 매립을 위해 가공하였다(문헌참조: Santel, A et al. (2006). Gene Ther 13: 1222-1234)). 4㎛의 절편을 절단하고 로티클리어(Roticlear)(Roth, A538.5)를 사용하여 탈파라핀하고 등급화된 에탄올 세척을 통해 재수화시키고 시톡스 그린 염료(Sytox Green dye)(Molecular probes)로 대비염색시켰다. 형광 취득은 제이스 LSM510 메타 공초점 현미경(Zeiss LSM510 Meta confocal microscope)을 사용하여 분석하였다. 이미지를 기록하고 제이스 LSM5 소프트웨어에 의해 프로세싱하였다. 상이한 기관에서 siRNA 분포의 정량적 분석을 위해, 마우스에 PKN3 siRNA으로 제형화된 단일 용량의 리포플렉스를 투여하였다. 상이한 조직에서 PKN3 siRNA의 농도는 변형된 포획 프로브 샌드위치 하이브리드화 검정에 의해 결정하였다(문헌참조: Aleku, M, et al. (2008). Cancer Res 68: 9788-9798). 표적 mRNA 녹다운 분석을 위해, 조직은 마우스를 희생시킨 즉시 절개하고 액체 질소에서 즉시 순간 동결시켰다. 대략적으로, 20mg의 조직은 텅스텐 카바이드 비드(Qiagen)를 사용하여 믹서 밀 MM 301(Mixer Mill MM 301) (Retsch GmbH, Haan, Germany)에서 파쇄시켰다. 총 RNA는 인비조브 스핀 조직 RNA 미니 키트(Invisorb Spin Tissue RNA Mini Kit) (Invitek, Berlin, Germany)를 사용하여 용해물로부터 분리하였다. 조직에 의존하여, 25 내지 100ng의 총 RNA는 제조원(BioTez GmBH, Berlin, Germany)으로부터 수득된 앰플리콘 세트(표 3에 열거된)를 사용한 정량적 TaqMan RT-PCR을 위해 사용하였다: TaqMan RT-PCR 반응은 각각 300 및 100nM 농도의 프라이머 및 프로브와 함께 이전에 기재된 바와 같이 RT-PCR에 대한 표준 프로토콜을 사용한 ABI PRISM 7700 서열 검출기(소프트웨어: 서열 검출 시스템 vl.6.3 (ABI)) 또는 StepOnePlus™ 실시간 PCR 시스템 (ABI)과 함께 수행하였다(문헌참조: Santel, A et al. (2006). Gene Ther 13: 1222-1234)). TaqMan 데이터는 비교 CT 방법을 사용함에 의해 계산하였다. 표적 단백질 발현은 이전에 기재된 바와 같이 전체 조직 용해물의 웨스턴 블롯팅에 의해 평가하였다(문헌참조: Santel, A et al. (2006). Gene Ther 13: 1222-1234)). 순간 동결 조직은 믹서 밀 MM 301(Retsch GmbH, Haan, Germany)에서 파쇄시키고, 단백질은 라이퍼-용해 완충액 중에서 추출하였다. 동등한 양의 단백질을 하기의 항체를 사용한 면역블롯 분석을 위해 로딩하였다: 토끼 항-PTEN (Ab-2, 네오마커, Fremont, CA, USA) 및 마우스 항-Tie2 (clone Ab33, Upstate 05-584).
Figure pct00060
Figure pct00061
주입 연구
주입 연구를 위해, 경정맥 카테터화된 마우스(Harlan)에 최고 용량 (12mg siRNA/kg 체중; 40ml/kg 체중)의 DACC9/리포플렉스의 단일 1시간 주입을 수행하였다. 용량 적정을 위해, DACC9 리포플렉스 스톡 용액은 5% 글루코스 용액 중에 희석시켜 투여 용량을 일정하게 유지시켰다.
마우스 내피 세포주, MS1의 형질감염
마우스 내피 세포주 MS1(ATCC CRL-2279)는 기탁기관[American type cell culture collection (ATCC)]으로부터 수득하였고 공급업자의 추천에 따라 배양하였다. 세포는 6웰 플레이트에 씨딩하고 이전에 기재된 바와 같이 DACC9/siRNATie-2로 형질감염시켰다(문헌참조: Santel, A et al. (2006). Gene Ther 13: 1222-1234)). 간략하게, 세포 씨딩 12시간 후 10% 혈청 함유 매질에 희석된 상이한 양의 DACC9/siRNA 제형을 세포에 첨가하여 10 내지 160nM siRNA 범위의 형질감염 농도를 성취하였다. 형질감염 시킨지 3일 후 세포를 용해시켰다. 단백질은 SDS-PAGE로 분리하고 이전에 기재된 바와 같이 면역블롯팅하였다(문헌참조: Santel, A et al. (2006). Gene Ther 13: 1222-1234)).
실험 폐 전이 마우스 모델
루이스(Lewis) 폐 암종 (LLC) 세포는 10% FCS 및 4mM 글루타민이 보충된 RPMI 배지에서 배양하였다. 세포는 트립신으로 분해시키고 후속적으로 세포 배양 배지 및 PBS에서 세척하였다. 200㎕의 PBS 중 250 000 세포를 8주령 수컷 BDF1 마우스 (Harlan)의 꼬리 정맥으로 주사하였다. 마우스는 종양 세포 챌린지 5일 전에 개시하여 격일로 등장성 슈크로스 또는 DACC9 리포플렉스로 11회 처리하였다. 마우스는 체중 전개 및 발병 징후에 대해 매일 모니터링하였다. 정의된 종점 기준(스코어>=4)에 도달하는 경우, 동물을 경출 탈골에 의해 희생시켰다. 종점 기준은 발병의 징후였다(악액질, 쇠약함, 거동 어려움 또는 식이 어려움, 화합물 독성(등을 구부리는 경련), 3일 연속 체중 15% 감소 또는 1일동안 28% 체중 소실 및 스코어 >=4).
스트렙토코커스 뉴모니아 감염된 폐 모델
상기 연구는 기관(Eurofin/Panlabs (Ricerca, study B09784, adapted from model 608100))에 의해 수행하였다: 체중이 20 내지 22g인 수컷 특이적 병원체 부재 ICR 마우스는 DACC9 리포플렉스(2.8mg siRNA/kg 체중)를 또는 비히클 대조군으로서 슈크로스를 꼬리 정맥 주사하여 처리하였다. 24시간 후, 모든 마우스를 급성 폐렴을 유도하기 위해 LD 90-100 용량 (0.02ml, 7-9 x 106 CFU)의 스트렙토코커스 뉴모니아(ATCC 6301)로 기관내 감염시켰다. 감염시킨지 2시간 후에 단일 준최적 용량의 앰피실린(3 mg/kg)을 정맥내 경로로 주사하였다. 마우스의 생존은 감염 후 10일까지 모니터링한다. 앰피실린으로 처리되지 않은 마우스는 에스. 뉴모니아로 감염 후 3일 이내에 사망하였다. 생존에서 단지 적당한 증가가 단일 용량의 앰피실린에 의해 관찰되었다. 앰피실린에 추가로 DACC9/Angpt2 siRNA 전처리는 마우스의 생존을 상당히 증진시킨다. >50%의 동물 생존은 시험 물질의 상당한 활성을 지적한다.
통계학적 분석
데이터는 평균 ± SEM으로 나타낸다.
실시예 2: DACC의 폐 특이성
상이한 리포플렉스 제형은 기관을 선택하기 위해 siRNA 카고를 전달하는 이들 각각의 능력을 조사하기 위해 생체내에서 평가하였다. siRNA 생분포 패턴을 조사하기 위해 사용되는 모든 리포플렉스는 양이온 지질 AtuFECTOl 및 siRNAPKN"3과 함께 제형화하였지만 상이한 비의 상이한 공-지질 및/또는 PEG-지질을 함유하였다. 리포플렉스는 꼬리-정맥 주사를 통해 정맥내 투여하였고 siRNA 농도는 siRNA 특이적 정량 ELISA 기반 포획-프로브 검정을 사용한 전신 적용 1시간 후 간, 신장, 폐, 심장 및 비장 조직 샘플에서 결정하였다. 상기 결과는 도 1에 나타낸다.
다양한 리포플렉스의 조성은 표 4에 요약한다.
Figure pct00062
각각의 조직으로 전달되는 siRNA의 농도는 사용되는 리포플렉스 시스템에 의존하여 다양한 반면, DACC9 리포플렉스 시스템은 폐로의 가장 효율적인 siRNA 전달을 나타냈다(도 1, 검정 막대). 추가로, 리포플렉스 제형 안정성과 기능성 기관 취득간의 역 상관관계, 즉, 이들이 응집하는 경향이 있는데도 불구하고 가장 안정한 제형은 또한 폐 내피의 혈관 베드에 최소로 포집되지만 후속적 분해를 위해 간 및 비장에서 직접 누적하는 것으로 밝혀졌다. 그러나, siRNA의 표적 조직으로의 전달 및 세포 취득은 상이한 양이온 지질 기반 시스템에 대해 이전에 문헌[참조: Heyes et al. (Heyes, J, Palmer, L, Bremner, K, and MacLachlan, I (2005). J Control Release 107: 276-287)]에 의해 입증된 바와 같은 활성에 관여하는 유일한 인자가 아니고, 이는 siRNA가 율속 단계인 세포내이입 대신, 엔도좀 방출 및 RISC 로딩과 같은 유전자 사일런싱의 효율에 대한 최대 효과를 갖는 세포에 의해 내재화되면 일어나는 반응들임을 시사한다.
실시예 3: DACC/siRNA 리포플렉스의 지질 조성 및 물리화학적 특성 분석
때때로 본원에서 또한 DACC9 리포플렉스로 언급되는 DACC9 리포플렉스는 양전하 지질 시스템 AtuFECTOl(P-L-아르기닐-2,3-L-디아미노프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드), 콜레스테롤 및 mPEG2000-DSPE (1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올 아민-N[메톡시 (폴리에틸렌 글리콜)-2000])로 구성되고 이들의 몰비는 함께 70:29:1이고 평활 말단 siRNA 듀플렉스는 270mM 슈크로스 용액 중에 양쪽 가닥 상에 교호하는 2'-O-메틸 변형에 의해 화학적으로 안정화되어 있다(문헌참조: Santel, A, et al. (2006), Gene Ther 13: 1222- 1234; Aleku, M, et al. (2008), Cancer Res 68: 9788-9798). 리포플렉스의 siRNA 분자의 기본 디자인 뿐만 아니라 DACC9의 화학적 화합물, 이들의 화학적 구조 및 %로 표현되는 이들의 몰비는 도 2a에 나타낸다. siRNA 분자와 관련하여, 이들이 평활 말단이고 환형이 2-O-메틸 변형된 뉴클레오타이드임이 주지되어야 한다.
수득한 DACC9 리포플렉스 입자는 크기 및 제타 전위에 관하여 특성 분석된다. Z-평균 크기는 도 2b에 나타낸 결과와 함께 270mM 슈크로스 용액 중에서 동적 광 산란법에 의해 결정된 바와 같이 약 70nm에 달하였고 270mM 슈크로스에서 측정된 제타 전위는 도 2c로부터 알 수 있는 바와 같이 40 내지 50mV이었다.
DACC9 리포플렉스 입자의 전자 현미경은 도 2d에 나타낸 바와 같이 대부분 원형 정렬로 주로 라멜라 구조임을 밝혔다. 슈크로스의 첨가는 동결, 건조 및 재수화 단계 동안에 제형을 안정하게 하여 이로써 동결건조된 생성물로서 효과적인 장기 저장을 보장할 수 있다(데이터는 나타내지 않음). 유사한 결과는 DACC10 지질 조성물 및 270mM 슈크로스 용액 중에서 양쪽 가닥상에 교호하는 2'-O-메틸 변형에 의해 화학적으로 안정화된 평활 말단 siRNA 듀플렉스로 구성되는 DACC10 리포플렉스에 대해 수득하였다(문헌참조: Santel, A, et al. (2006), Gene Ther 13: 1222-1234; Aleku, M, et al. (2008), Cancer Res 68: 9788-9798).
실시예 4: DACC에 의한 siRNA의 폐 내피로의 1차 전달
DACC9 리포플렉스의 전신 적용에 의한 siRNA 전달의 조직 분포 및 역학을 보다 상세하게 특성 분석하기 위해, 마우스는 단일 용량의 DACC9 (2.8mg siRNA/kg 체중)로 처리하고 상이한 기관 기원의 다수의 조직 샘플은 각각의 siRNA 농도를 결정하기 위해 DACC9 리포플렉스 제형의 투여 후 1, 6 및 24시간 째에 수거하였다. 상기 결과는 도 3a에 나타낸다.
도 3a로부터 알 수 있는 바와 같이, 최고 siRNA 농도 [약 40% ID/g 조직]는 1시간 시점에서 폐 조직, 이어서 비장, 간 및 덜 드문 정도로는 신장 및 심장에서 밝혔다. 조사된 모든 조직에서 siRNA 농도는 시간 경과에 따라 감소하고, 초기 용량 1% 미만의 수준은 혈액, 뇌, 전립선 또는 골격근에서 측정하였다.
주로 표적화된 조직내 siRNA 분포를 조사하기 위해, 마우스는 시아닌 염료(Cy3) 표지된 siRNA로 제형화된 DACC9 리포플렉스로 처리하였다. 조직에서 Cy3-표지된 siRNA는 이어서 포르말린 고정화된 파라핀 매립된 조직 절편의 공초점 현미경에 의해 가시화하였다. 폐, 간, 신장 및 심장에서 siRNA 분포 패턴은 도 3b 내지 c에서 취할 수 있는 바와 같이 혈관 염색 패턴을 상기시켰다.
조사된 모든 기관으로부터, 폐는 siRNA-Cy3에 의해 가장 강하게 염색되었고, 여기서, siRNA 염색은 폐 혈관계에서 균일하게 분포되어 있다. 클로즈업 사진상에서, 폐에서 siRNA 유래된 염색은 미세하게 점으로 표시되고 세포 핵 주변에 집중되어 있으며, 상기 관찰은 siRNA의 세포내 취득을 지적한다(도 3b). 심장에서, 명백한 Cy3 염색은 모세관을 따라 발견되었고, 근섬유는 siRNA-Cy3 시그날이 없었다(도 3c). 간에서 시누소이드(sinusoidal) 내피 세포 층은 약간의 siRNA-Cy3 염색 패턴을 보여주었고(도 3c), 간 시누소이드내 개별 세포는 Cy3으로 강하게 염색되었다. 타원형 핵(도 3c, 화살표 참조)은 외래 미립자 물질의 제거에 관여하는 쿠퍼(Kupffer) 세포를 나타내고, 따라서, 여기서 발견되는 리포플렉스는 또한 식세포작용에 의해 취득될 수 있다(문헌참조: Whitehead, KA et al. (2009), Nat Rev Drug Discov 8: 129-138). 이들의 대형, 규칙적 및 원형 핵에 의해 구별될 수 있는 간세포는 siRNA-Cy3 염색이 없다. 비장에서 siRNA-Cy3 염색은 백색속질의 가장자리 존에서 현저하였고, 백색속질의 중심은 CY3- 염색이 없는 상태로 유지되었다(도 3c). 혈액으로부터 리포플렉스 제거에 관여하는 것으로 공지된 단핵구 및 대식세포는 상기 영역으로 격리되기 때문에, 각각의 대식세포에 의한 리포플렉스의 제거는 상기 영역에 관찰된 증진된 siRNA-Cy3 염색 패턴을 설명할 수 있다. 명백한 Cy3 시그날은 또한 신장의 소관모세혈관에서 검출되었다(도 3c, 화살표). 관형 세포의 염색은 확산이고 Cy3-siRNA가 관의 루멘으로 누적되는 경향이 있고 이는 신장에 의한 유리된 siRNA의 분비를 지적한다. 종합하여, DACC9 전달 시스템에 의한 siRNA 분포의 정량적 및 정성적 분석은 siRNA 취득이 주로 폐에서 일어나고 명백한 siRNA-Cy3 유래된 시그날이 또한 간 및 비장의 식세포 뿐만 아니라 심장, 간 및 신장의 미세혈관에서 검출되었다.
실시예 5: 폐 혈관계에서 DACC9에 의한 표적 유전자 발현의 억제
DACC9에 의해 전달된 siRNA가 기능적으로 활성이고 혈관 베드에서 표적 유전자 발현의 억제를 위해 사용될 수 있는지를 시험하기 위해, 표적 유전자 Tie-2에 특이적인 siRNA와 DACC 제형을 제조하였다. Tie-2 발현은 내피 세포에 고도로 특이적이고 만흥ㄴ 기관에서 상기 세포 유형에 대한 공통된 마커이다(문헌참조: van der Heijden, M et al., Expert Opin Ther Targets 13: 39-53). RNAi activity of DACC/siRNATie-2의 RNAi 활성은 먼저 시험관내 시험되었다. 인간 제대 정맥 내피 세포(HUVEC)는 DACC9/siRNATie -2로 형질감염시키고, Tie-2 단백질 발현은 72시간 후 면역 블롯팅에 의해 세포 용해물에서 평가하였다. 상기 결과는 도 4a에 나타낸다.
Tie-2 발현은 160 및 80nm siRNA의 용량에서 DACC9/siRNATie -2에 의해 상당히 감소하였고, 보다 드문 정도로는 40nm siRNA의 용량에서 상당히 감소하였고(도 4a), 이는 DACC9이 기능적으로 siRNA를 세포로 전달할 수 있고 RNAi를 매개할 수 있음을 확인시켰다. 이들 농도가 siRNA IC50을 반영하지 않는 것으로 주지되어야만 하는데 그 이유는 DACC9이 세포 배양 형질감염 실험을 위해 최적화되지 않고 보다 낮은 농도가 후자에 사용될 수 있기 때문이다.
DACC9이 생체내 혈관 내피에서 유전자 사일런싱을 할 수 있는지를 조사하기 위해, 마우스에 꼬리 정맥 주사에 의해 연일 3개의 DACC9 리포플렉스 용량(3x2.8 mg/kg)을 투여하였다. 폐, 심장, 간 및 신장 조직은 마지막 처리 24시간 후 수거하였다. 총 mRNA는 전체 조직 용해물로부터 제조하고 표적 mRNA 수준은 정량 RT-PCR에 의해 평가하였다. 상기 결과는 도 4b-e에 나타낸다. Tie-2 mRNA 수준은 DACC9/siRNA대조군 또는 슈크로스 용액으로의 대조군 처리와 비교하여 DACC9/siRNATie -2로 전신 처리된 마우스의 폐 조직에서 80% 이상 감소하였다(도 4b). 상당한 Tie-2의 녹다운은 DACC9/siRNATie -2 제형의 반복적인 투여 후에도 간, 신장 및 심장 조직에서 관찰되지 않았고(도 4c-e), 이것은 상기 폐가 DACC9/siRNATie -2에 의해 기능적으로 표적화된 1차 기관임을 지적한다.
실시예 6: 표적 유전자 발현의 DACC/siRNA 투여 반응
마우스에서 DACC9 리포플렉스에 의한 표적 유전자 억제에 대한 투여 요건을 추가로 조사하기 위해, DACC9/siRNATie -2 또는 DACC9siRNACD311의 단일 용량의 3.0, 1.5 및 0.75mg의 siRNA/kg 체중은 정맥내 꼬리-정맥 볼러스 주사에 의해 투여하였다. 폐 조직은 RNA 분석을 위해 주사 후 24시간째에 수거하였다. Tie-2 표적 유전자 발현의 억제를 위한 결과는 도 5a에 나타낸다.
놀랍게도, 볼러스 처리에 의해 주사된 이미 단일 용량의 DACC9/siRNATie -2 (3.0mg siRNA/kg)은 도 4b에 대해 기재된 바와 같은 반복적인 투여(3 x 2.8mg siRNA/kg) 후 수득된 것들과 유사하게 Tie-2 mRNA의 수준을 감소시키기에 충분하였다(도 5a와 4b를 비교한다). 1.5mg의 siRNA/kg은 또한 Tie-2 발현을 감소시키는데 효과적이었지만 더 드물게는 0.75mg의 siRNA/kg은 Tie-2 수준에 상당한 영향을 미치지 않았다. 지금까지 기재된 모든 DACC9 적용은 볼러스 주사에 의해 수행되지만 주입을 통한 적용은 인간에서 리포플렉스 전달의 바람직한 방식이기 때문에, 상이한 용량의 DACC9/siRNATie -2는 1시간 주입에 의해 마우스의 경정맥으로 투여하였다. 주입 방식에 의한 상기 투여 (상기 주입은 약 1시간 기간 동안 적용한다)는 임상 세팅에서 전제 조건이다. 상기 결과는 도 5b에 나타낸다.
DACC9/siRNATie -2 주입 후 표적 유전자 사일런싱은 3 mg siRNA/kg 체중에서 볼러스 주사에 의한 것과 비교할만 하다. 폐 조직에서 Tie-2 mRNA 수준은 대략 80%까지 감소하였다. 상기 적용 방식은 볼러스 주사와 비교하ㅕ 보다 큰 용량의 DACC9 리포플렉스의 사용을 가능하게 하기 때문에, 투여된 용량은 각각 6mg의 siRA/kg 및/또는 12mg의 siRNA/kg으로 증가시켰다. 리포플렉스 농도의 증가는 95% 이상에도 불구하고 Tie-2 발현 수준을 감소시키는 것으로 나타났다(도 5b). 그럼에도 불구하고 모든 동물은 최고 용량 (12mg/kg)에서도 DACC9/siRNATie -2의 주입 처리에 내성이었다(도 5b).
상기 데이터를 기준으로 단일 용량을 사용한 폐에서 Tie-2 발현의 억제를 위한 약 1.5mg의 siRNA/kg의 마우스에서 EC50 이지만 보다 높은 용량의 3mg/kg (볼러스) 및 6 mg/kg (주입)까지 또한 내성이었다. 그러나, 보다 높은 단일 용량의 siRNA 리포플렉스는 체중 전개에 바람직하지 못한 효과를 나타냈고 12mg siRNA/kg 의 용량 수준에서 10% 이상 강하(3 및 1mg siRNA/kg의 용량에서 무시할만한 체중 손실과 비교하여(데이터는 나타내지 않음))를 보여준다. 임상 관점으로부터, 관찰된 낮고 1회 투여 용량은 후속적 독성 프로파일링을 위해 바람직하다.
실시예 7: 표적 억제의 지속기간 및 DACC에 의해 매개된 RNAi-매개된 녹다운의 입증
DACC9 리포플렉스에 의한 표적 유전자 억제의 지속기간을 평가하기 위해, 마우스는 단일 용량(2.8mg/kg)의 DACC9/siRNATie -2 또는 DACC9/siRNAANGPT2로 처리하고 코호트는 처리 후(p.t.) 3, 7, 14 및 21일째에 희생시켰다. 각각의 폐 조직에서 Tie-2 표적 mRNA 수준은 정량적 RT-PCR에 의해 정량하였다. 상기 결과는 도 6a에 나타낸다.
DACC9/siRNATie -2 처리 그룹에서 Tie-2 발현의 가장 현저한 감소는 리포플렉스를 사용하여 3일 p.t.에서 관찰되었다(DACC9 대조군 그룹과 비교하여 80% 이상의 Tie-2 감소). 그럼에도 불구하고, Tie-2 mRNA 수준은 여전히 슈크로스 또는 대조군 DACC9 리포플렉스로 처리된 대조군 그룹과 비교하여 21일 후 50% 이상 (도 6a)까지 감소하였다. 명백하게, 단일 용량의 DACC9 리포플렉스(2.8mg siRNA/kg)는 60 내지 90 %까지 표적 유전자 Tie-2의 mRNA 수준을 감소시키는 것으로 나타났고(도 6a), 상기 사일런싱 효과는 3주까지 동안 지속한다.
Tie-2 mRNA에서의 감소가 Tie-2 단백질의 상응하는 감소를 유도함을 확인하기 위해, 폐 조직 파쇄물은 각각 DACC9 리포플렉스 또는 비히클 대조군으로서 슈크로스를 사용한 처리 후 3일 및 21일째에 마우스로부터 제조하였다. Tie-2 단백질은 도 6a에 나타낸 바와 같이 웨스턴 블롯팅에 의해 검출하였다. Tie-2 단백질 수준의 가장 현저한 감소는 처리 후 3일째에 나타났고 이는 Tie-2 mRNA 수준의 각각의 감소에 상응하고, 시간 경과에 따라 점진적으로 감소하는 것으로 나타났다. 그러나, Tie-2 단백질 발현의 큰 감소는 여전히 처리 후 21일째에 관찰되었다. 추가로, Tie-2 mRNA 수준은 21일 후 70% 이상 감소된 상태로 유지된다.
실시예 8: DACC/siRNA에 의한 폐 내피에서 추가의 표적 유전자의 억제
DACC9 전달 시스템이 또한 Tie-2 뿐만 아니라 폐 내피에서 발현되는 다른 유전자를 억제할 수 있는지를 확인하기 위해, DACC9 리포플렉스는 이의 발현이 내피 세포로 크게 제한되는 다른 유전자 표적에 대한 특이적 siRNA와 함께 제조하였다: VEGFR2 수용체, VE-캐드헤린, BMPR2 및 실시예 1에 지적된 바와 같이 각각의 siRNA의 서열을 갖는 CD31 유전자. DACC9/siRNAVEGFR2, DACC9/siRNAVE - 캐드헤린, DACC9/siRNABMPR-2, 또는 DACC9/siRNACD31의 단일 주사(2.8mg siRNA/kg)를 사용한 마우스의 처리는 도 7에 나타낸 바와 같이 60 내지 90%까지 각각의 표적 유전자의 mRNA 수준을 감소시켰다. 따라서, mRNA 수준의 관찰된 감소는 DACC9 리포플렉스가 siRNA를 기능적으로 혈관 내피로 전달하여 상기 조직 유형에서 표적 특이적 유전자 사일런싱을 가능하게 할 수 있음을 입증한다. 추가로, 단순히 DACC9 리포플렉스의 단일 적용은 폐 혈관계에서 각각의 표적 유전자의 발현을 하향 조절하기에 충분하였다.
실시예 9: DACC/siRNACD31 처리는 실험적 폐 전이 마우스 모델에서 생존을 증가시킨다
CD31/Pecam1은 이종형 세포 상호작용 뿐만 아니라 동종형에 대해 요구되는 세포 표면 단백질이다. 혈관형성, 혈관 침투성 및 전이와 같은 종양형성의 다중 공정에 관여한다(문헌참조: Cao, G et al. (2009), Am J Pathol 175: 903-915; DeLisser, H et al. (2010), Proc Natl Acad Sci USA 107: 18616-18621). 또한 이전의 연구에서 RNA 간섭에 의한 CD31의 표적화가 피하 이종이식체 종양 모델 및 동종이식 전립선 암 모델에서 종양 성장의 감소를 유도하는 것으로 입증되었다(문헌참조: Santel, A et al. (2006), Gene Ther 13: 1360-1370).
본 연구에서, DACC9/siRNACD31가 폐 암의 치료에서 치료학적으로 사용될 수 있는지를 조사하였다. 상기 목적을 위해, DACC9/siRNACD31를 사용한 치료가 실험 폐 전이 마우스 모델에서 치료학적 이득을 갖는지를 시험하였다(문헌참조: Santel, A et al. (2010), Clin Cancer Res 16: 5469-5480.). 상기 모델에서, 루이스 폐 암종 세포(LL)는 동일계 BDF1 마우스에 정맥내로 적용하여 폐에서 종양 세포의 군집화 및 폐 전이의 후속적 과성장을 유도한다. DACC9/siRNACD31, 대조군 리포플렉스 DACC9/siRNA루시퍼라제, 및 비히클 대조군으로서 슈크로스를 제조하고 LL 종양 세포 i.v. 주사 5일 전에 마우스에 주사하였다. 볼러스 주사(2.8mg/kg)에 의한 치료는 15일까지 격일로 반복하였다(도 8a).
체중은 연속적으로 모니터링하였다. 치료 기간 동안에 DACC9 리포플렉스 적용으로 인한 체중의 감소는 도 8b에서 알 수 있는 바와 같이 관찰되지 않았다.
동물의 생존은 종양 세포 챌린지 후 70일까지 동안 정의된 종점 기준에 의해 모니터링하였다. 상기 결과는 도 8c에 나타낸다. DACC9/siRNACD31을 투여받은 동물의 생존은 슈크로스(p < 0.006, 로그-랭크 시험) 또는 DACC9/siRNA루시퍼라제 (p < 0.001)를 투여받은 대조군 치료 그룹과 비교하여 상당히 증진되었다. 등장성 슈크로스 용액 또는 루시퍼라제 대조군 리포플렉스로 처리된 동물은 불량한 생존을 보여주었다: 슈크로스 대조군 그룹에서, 30일 지난 어떠한 동물도 생존하지 못했고, DACC9/siRNA루시퍼라제 대조군 그룹 중 단지 2개의 동물은 70일까지 생존하였다. 대조적으로, DACC9/siRNACD31을 투여받은 8마리의 동물 중 7마리는 70일까지 생존하였다. CD31 발현은 별도의 코호트에서 종양 세포 챌린지 후 16일째에 치료 단계의 완료 후 평가하였다(도 8a). DACC9/siRNA루시퍼라제, 또는 비히클 대조군으로서 슈크로스로 처리된 동물과 비교하여, DACC9/siRNACD31로 처리된 동물의 폐에서 CD31 발현은 대략 80%까지 감소하였고(도 8d) 이는 CD31 발현이 치료학적 세팅에서 DACC9 리포플렉스에 의해 표적화될 수 있음을 확인시켜준다.
실시예 10: DACC/siRNAANG -2에 의한 마우스에서 LPS에 의한 ANG2의 유도 예방
C57BL6 마우스는 지정된 용량의 DACC9 리포플렉스 또는 슈크로스 용액으로 정맥내 처리하였다. 48시간 후, 마우스에 LPS (0.5mg/kg, i.v.) 또는 식염수 (0.9% NaCl)를 챌린지하였다. 폐 조직은 LPS 처리 후 6시간째에 수거하고 RNA 분리를 위해 프로세싱하였다(문헌참조: 도 9a). 폐 조직 샘플에서 ANGPT2 mRNA 수준은 qRT-PCR에 의해 결정하였다. 액틴 mRNA 수준은 정상표준으로서 사용하였다. 사용되는 재료 및 방법과 관련된 실험의 다른 측면은 실시예 1에 따라 수행하였다.
상기 결과는 도 9b에 나타낸다. 도 9b로부터 알 수 있는 바와 같이, 슈크로스 처리 그룹 LPS는 폐 조직에서 ANGPT2 mRNA 수준의 상승을 유도하였다. DACC9/ANGPT2 siRNA 처리는 용량 의존적 방식으로 ANGPT2 유도를 감소시켰다.
실시예 11: DACC/siRNA 처리는 에스. 뉴모니아 감염된 폐 모델(마우스)에서 생존을 증가시킨다
20 내지 22g의 무게를 갖는 수컷 특이적 병원체 부재 ICR 마우스는 꼬리 정맥 주사에 의해 DACC9 리포플렉스(2.8mg siRNA/kg 체중) 또는 리포플렉스에 대한 비히클 대조군으로 슈크로스로 처리하였다. 24시간 후, 모든 마우스에 급성 뉴모니아를 유도하기 위해 LD 90-100 용량(0.02ml, 7-9 x 106 CFU)으로 스트렙토코커스 뉴모니아(ATCC 6301)를 기관내 감염시켰다. 감염 2시간 후, 단일의 준최적 용량의 앰피실린, "AMP", (3mg/kg) 또는 0.9% NaCl을 정맥내 경로로 투여하였다. 마우스의 생존은 감염 후 10일까지 모니터링한다(도 10a를 참조한다). 사용된 재료 및 방법과 관련된 실험의 다른 측면은 실시예 1에 따라 수행하였다. 상기 결과는 도 10b에 나타낸다.
도 10b로부터 알 수 있는 바와 같이, 앰피실린을 사용한 처리 없이는 마우스는 에스. 뉴모니아로 감염 후 3일 이내에 사망하였다. 생존에서 단지 적당한 증가는 단일 용량의 앰피실린에 의해 관찰되었다. 앰피실린 처리에 추가로 DACC9/Angpt2 siRNA (DACC9/siRNAAngpt2) 전처리는 마우스의 생존을 상당히 증진시킨다. >50%의 동물의 생존은 시험 물질의 상당한 활성을 지적한다.
실시예 12: 마우스에서 EDN-1 발현의 감소
상기 동물의 연구 목적은 엔도텔린 1 암호화 유전자 EDN1을 표적화하기 위한 상이한 전달 시스템을 평가하는 것이다. 마우스에 대한 실험적 셋업 및 처리 계획은 도 11에 명시되어 있다.
마우스는 DACC9, DACC10로 제형화된 EDN1-hmr2로서 언급되는 EDN1-표적화 siRNA(서로 100% 상보적인 2개의 별도의 가닥으로 이루어진(여기서 각각의 가닥은 19개 뉴클레오타이드로 이루어진다)) 단일 용량으로 처리하거나 볼러스 적용에 의해 Atuplex와 제형화된 EDNl-hmr2 siRNA의 3개 용량으로 처리하였다. 대조군 리포플렉스는 sFLTl-hm4로서 언급되는 가용성 VEGE 수용체 1(sFltl)를 암호화하는 유전자를 표적화하는 siRNA를 함유하였다. 표적 유전자 발현은 처리 48시간 후 폐 조직에서 분석하였다.
상기 결과는 도 12에 나타낸다. 상기 도 12로부터, siRNA를 폐 조직으로 전달하기 위해, DACC9 또는 DACC10으로 제형화된 siRNA가 Atuplex로 제형화된 siRNA 보다 더 강력하다는 것은 명백하다.
본원에 언급된 모든 참조문헌은 참조를 위해 본원에 인용된다.
본 명세서, 청구항 및/또는 도면에 기재된 본 발명의 특징은 별도로 및 이의 임의의 조합으로 다양한 형태로 본 발명을 실현하기 위한 물질일 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Silence Therapeutics GmbH <120> Means for lung specific delivery <130> A 19061 PCT <150> EP 13 005 672.4 <151> 2013-12-05 <160> 45 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 1 aguuggaagg accacaugc 19 <210> 2 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 2 gcaugugguc cuuccaacu 19 <210> 3 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 3 uuguccagga aguccucaag ucu 23 <210> 4 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 4 agacuugagg acuuccugga caa 23 <210> 5 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 5 aucuugcuga aauucugaua cug 23 <210> 6 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 6 caguaucaga auuucagcaa gau 23 <210> 7 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 7 ucgaaguauu ccgcguacgu gau 23 <210> 8 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 8 aucacguacg cggaauacuu cga 23 <210> 9 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 9 auaucugggc aaaugaugg 19 <210> 10 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 10 ccaucauuug cccagauau 19 <210> 11 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 11 uuccguucua gaguaucug 19 <210> 12 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 12 cagauacucu agaacggaa 19 <210> 13 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 13 acaaauucau uucucuugcc ccg 23 <210> 14 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 14 cggggcaaga gaaaugaauu ugu 23 <210> 15 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 15 gaauucacag uugcuucaa 19 <210> 16 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 16 uugaagcaac ugugaauuc 19 <210> 17 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 17 auugauugua uucaucuugg caa 23 <210> 18 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 18 uugccaagau gaauacaauc aau 23 <210> 19 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 19 atgagacagt gctggaggga ga 22 <210> 20 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 20 agcatcctgt ttaaggacac caa 23 <210> 21 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 21 agccttatga gagaccatca tttgcccag 29 <210> 22 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 22 gggaacgaga gccacagaga c 21 <210> 23 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 23 cattaaggga gccttccgtt c 21 <210> 24 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 24 cggaaggtcg accctaatct catggaaa 28 <210> 25 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 25 tcaatggaga aacagagcca ca 22 <210> 26 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 26 gaatccatag gcgagatcaa gg 22 <210> 27 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 27 tggtctctct ggttgtgaat gtcccacc 28 <210> 28 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 28 ccgtctggct cattctgtga 20 <210> 29 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 29 gggagattgc gggtttataa tg 22 <210> 30 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 30 tggcttatct tcacacagaa ttaccacgag g 31 <210> 31 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 31 gaacgaggac agcaacttca cc 22 <210> 32 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 32 ctcccgatta aactgcccat ac 22 <210> 33 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 33 tcataaacaa ccatgacaac accgccaa 28 <210> 34 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 34 caccgccaaa tttaactgca ga 22 <210> 35 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 35 aagggtttga taagttctag ctgt 24 <210> 36 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 36 tgcacagtat ccttttgaag accataaccc a 31 <210> 37 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 37 gtttgagacc ttcaacaccc ca 22 <210> 38 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 38 gaccagaggc atacagggac a 21 <210> 39 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 39 ccatgtacgt agccatccag gctgtg 26 <210> 40 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 40 gaggctgatg ctggtgctag t 21 <210> 41 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 41 cagcaaacac tcaggcctaa cc 22 <210> 42 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 42 ctgctccctg cttctagccc agtctga 27 <210> 43 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 43 caaaggattc ggacaatgac aa 22 <210> 44 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 44 cattcaagtt ggaaggacca c 21 <210> 45 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Synthetic <400> 45 tcccagatgc tctcaggagg ctggtggt 28

Claims (121)

  1. 지질 조성물을 포함하는 조성물로서, 상기 지질 조성물이
    하기 화학식 I:
    Figure pct00063

    의 양이온 지질(여기서, n은 1, 2, 3, 및 4 중 어느 하나이고, m은 1, 2 및 3 중 어느 하나이고, Y-는 음이온이고, R1 및 R2는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C12-C18 알킬 및 선형 C12-C18 알케닐로 이루어진 그룹으로부터 선택된다);
    스테롤 화합물(여기서, 상기 스테롤 화합물은 콜레스테롤 및 스티그마스테롤로 이루어진 그룹으로부터 선택된다); 및
    페길화된(PEGylated) 지질(여기서, 상기 페길화된 지질은 PEG 모이어티를 포함한다)을 포함하고, 상기 페길화된 지질은
    하기 화학식 II:
    Figure pct00064

    의 페길화된 포스포에탄올아민(여기서, R3 및 R4는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C13-C17 알킬이고, p는 15 내지 130의 임의의 정수이다);
    하기 화학식 III:
    Figure pct00065

    의 페길화된 세라마이드(여기서, R5는 선형 C7-C15 알킬이고, q는 15 내지 130의 임의의 정수이다); 및
    하기 화학식 IV:
    Figure pct00066

    의 페길화된 디아실글리세롤(여기서, R6 및 R7은 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C11-C17 알킬이고, r은 15 내지 130의 임의의 정수이다)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 지질 조성물을 포함하는 조성물.
  2. 제1항에 있어서, R1 및 R2가 서로 상이한, 조성물.
  3. 제1항에 있어서, R1 및 R2가 동일한, 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R1 및 R2가 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 C12 알킬, C14 알킬, C16 알킬, C18 알킬, C12 알케닐, C14 알케닐, C16 알케닐 및 C18 알케닐로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  5. 제4항에 있어서, C12 알케닐, C14 알케닐, C16 알케닐 및 C18 알케닐 각각이 1개 또는 2개의 이중 결합을 포함하는, 조성물.
  6. 제5항에 있어서, C18 알케닐이 C9와 C10 사이에 1개의 이중 결합을 갖는 C18 알케닐, 바람직하게는 시스-9-옥타데실인, 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R1 및 R2가 상이하고, R1이 팔미틸이고, R2가 올레일인, 조성물.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R1 및 R2가 상이하고, R1이 라우릴이고, R2가 미리스틸인, 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 양이온 지질이 하기 화학식 Ia:
    Figure pct00067

    의 화합물인, 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, Y-가 할로겐화물, 아세테이트 및 트리플루오로아세테이트를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  11. 제10항에 있어서, Y-가 Cl-인, 조성물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 양이온 지질이 하기 화학식 Ib:
    Figure pct00068

    의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드인, 조성물.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 양이온 지질이 하기 화학식 Ic:
    Figure pct00069

    의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드인, 조성물.
  14. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 양이온 지질이 하기 화학식 Id:
    Figure pct00070

    의 ε-아르기닐-리신-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드인, 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤인, 조성물.
  16. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제14항에 있어서, 상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤인, 조성물.
  17. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 스테롤 화합물이 스티그마스테린인, 조성물.
  18. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제14항에 있어서, 상기 스테롤 화합물이 스티그마스테린인, 조성물.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 더욱 바람직하게는 제16항 및 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 페길화된 지질의 PEG 모이어티가 약 800 내지 약 5000 Da의 분자량을 갖는, 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 페길화된 지질의 PEG 모이어티의 분자량이 약 800 Da인, 조성물.
  21. 제19항에 있어서, 상기 페길화된 지질의 PEG 모이어티의 분자량이 약 2000 Da인, 조성물.
  22. 제19항에 있어서, 상기 페길화된 지질의 PEG 모이어티의 분자량이 약 5000 Da인, 조성물.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 페길화된 지질이 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이고, 여기서, R3 및 R4는 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C13-C17 알킬이고, p는 18, 19 또는 20의 임의의 정수, 또는 44, 45 또는 46의 임의의 정수, 또는 113, 114 또는 115의 임의의 정수인, 조성물.
  24. 제23항에 있어서, R3 및 R4가 동일한, 조성물.
  25. 제23항에 있어서, R3 및 R4가 상이한, 조성물.
  26. 제23항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서, R3 및 R4가 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 C13 알킬, C15 알킬 및 C17 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 더욱 바람직하게는 제14항 및 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이 하기 화학식 IIa:
    Figure pct00071

    인, 조성물.
  28. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 더욱 바람직하게는 제16항 및 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이 하기 화학식 IIIb:
    Figure pct00072

    인, 조성물.
  29. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 페길화된 지질이 화학식 III의 페길화된 세라미드이고, 여기서, R5는 선형 C7-C15 알킬이고, q는 18, 19 또는 20의 임의의 정수, 또는 44, 45 또는 46의 임의의 정수, 또는 113, 114 또는 115의 임의의 정수인, 조성물.
  30. 제29항에 있어서, R5가 선형 C7 알킬인, 조성물.
  31. 제30항에 있어서, R5가 선형 C15 알킬인, 조성물.
  32. 제1항 내지 제22항 및 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 더욱 바람직하게는 제16항 및 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 III의 페길화된 세라마이드가 하기 화학식 IIIa:
    Figure pct00073

    인, 조성물.
  33. 제1항 내지 제22항 중 및 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 더욱 바람직하게는 제16항 및 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 III의 페길화된 세라마이드가 하기 화학식 IIIb:
    Figure pct00074

    인, 조성물.
  34. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제19항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 페길화된 지질이 화학식 IV의 페길화된 디아실글리세롤이고, 여기서, R6 및 R7은 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C11-C17 알킬이고, r은 18, 19 또는 20의 임의의 정수, 또는 44, 45 또는 46의 임의의 정수, 또는 113, 114 또는 115의 임의의 정수인, 조성물.
  35. 제34항에 있어서, R6 및 R7이 동일한, 조성물.
  36. 제34항에 있어서, R6 및 R7이 상이한, 조성물.
  37. 제34항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, R6 및 R7이 각각 개별적으로 그리고 독립적으로 선형 C17 알킬, 선형 C15 알킬 및 선형 C13 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  38. 제1항 내지 제22항 및 제34항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 더욱 바람직하게는 제16항 및 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 IV의 페길화된 디아실글리세롤이 하기 화학식 IVa:
    Figure pct00075

    인, 조성물.
  39. 제1항 내지 제22항 및 제34항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 더욱 바람직하게는 제16항 및 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 IV의 페길화된 디아실글리세롤이 하기 화학식 IVb:
    Figure pct00076

    인, 조성물.
  40. 제1항 내지 제22항 및 제34항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 더욱 바람직하게는 제16항 및 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 IV의 페길화된 디아실글리세롤이 하기 화학식 IVc:
    Figure pct00077

    인, 조성물.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 양이온 지질이,
    β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00078

    β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00079
    및
    ε-아르기닐-리신-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00080

    로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
    상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤 및 스티그마스테린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    상기 페길화된 지질이 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이고, 상기 페길화된 포스포에탄올아민이
    1,2-디스테아로일-sn-글리세로-S-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
    Figure pct00081

    1,2-디스테아로일-sn-글리세로-S-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-5000] (암모늄 염)
    Figure pct00082

    으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물
  42. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 양이온 지질이
    β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00083

    β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00084
    및
    ε-아르기닐-리신-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00085

    로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
    상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤 및 스티그마스테린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    상기 페길화된 지질이 화학식 III의 페길화된 세라마이드이고, 상기 페길화된 세라마이드가
    N-옥타노일-스핀고신-1-{석시닐[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)2000]}
    Figure pct00086
    및 N-팔미토일-스핀고신-1-{석시닐[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)2000]}
    Figure pct00087

    로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  43. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학식 I의 양이온 지질이
    β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00088

    β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00089
    및
    ε-아르기닐-리신-N-라우릴-N-미리스틸-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00090

    로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
    상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤 및 스티그마스테린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    상기 페길화된 지질이 화학식 IV의 페길화된 디아실글리세롤이고, 상기 페길화된 디아실글리세롤이
    1,2-디스테아로일-sn-글리세롤[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)2000]
    Figure pct00091

    1,2-디팔미토일-sn-글리세롤[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)2000]
    Figure pct00092

    로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 양이온 지질이
    β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00093
    이고,
    상기 스테롤 화합물이 콜레스테롤이고,
    상기 페길화된 지질이 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이고, 상기 페길화된 포스포에탄올아민이
    1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
    Figure pct00094
    인, 조성물.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제41항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서 그리고 바람직하게는 제44항에 있어서, 상기 지질 조성물에서, 상기 양이온 지질 조성물의 함량이 약 65mol% 내지 약 75mol%이고, 상기 스테롤 화합물의 함량이 약 24mol% 내지 약 34mol%이고, 상기 페길화된 지질의 함량이 약 0.5mol% 내지 약 1.5mol%이고, 여기서, 상기 지질 조성물에 대한 양이온 지질, 스테롤 화합물 및 페길화된 지질의 함량은 100mol%인, 조성물.
  46. 제45항에 있어서, 상기 지질 조성물에서, 상기 양이온 지질의 함량이 약 70mol%이고, 상기 스테롤 화합물의 함량이 약 29mol%이고, 상기 페길화된 지질의 함량이 약 1mol%인, 조성물.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 조성물이 다음과 같은, 조성물:
    70mol%의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00095

    29mol%의 콜레스테롤 및
    1mol%의 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
    Figure pct00096
  48. 제1항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 담체를 포함하고, 바람직하게는 상기 담체가 약제학적으로 허용되는 담체인, 조성물.
  49. 제48항에 있어서, 상기 담체가 물, 수용액, 바람직하게는 등장성 수용액, 염 용액, 바람직하게는 등장성 염 용액, 완충액, 바람직하게는 등장성 완충액, 및 수혼화성 용매를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  50. 제49항에 있어서, 상기 담체가 수혼화성 용매이고, 상기 수혼화성 용매가 에탄올 및 3급 부탄올로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  51. 제48항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 담체가 슈크로스 수용액, 바람직하게는 270mM 슈크로스 수용액인, 조성물.
  52. 제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 조성물이
    70mol%의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00097

    29mol%의 콜레스테롤 및
    1mol%의 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이고, 상기 화학식 II의 페길화된 포스포에탄올아민이
    1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
    Figure pct00098
    이고,
    상기 조성물은 270mM 슈크로스 수용액을 포함하는, 조성물.
  53. 제48항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 조성물이 상기 담체 중에서 입자를 형성하는, 조성물.
  54. 제53항에 있어서, 상기 입자가 DLS 측정에 따라 약 30nm 내지 약 150nm의 Z-평균 크기를 갖는, 조성물.
  55. 제54항에 있어서, 상기 입자가 DLS 측정에 따라 약 50nm 내지 약 100nm의 Z-평균 크기를 갖는, 조성물.
  56. 제53항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 입자의 DLS 측정에 따른 Z-평균 크기가, 동적 광 산란법에 의한 측정시 약 60 내지 80nm인, 조성물.
  57. 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제48항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 20℃의 온도에서 그리고 270mM 슈크로스 용액 중에서 측정된 상기 조성물이, 약 + 25 내지 약 + 80mV, 바람직하게는 약 + 30mV 내지 약 + 60mV, 더욱 바람직하게는 약 + 46mV의 제타 전위를 갖는, 조성물.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제41항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서 그리고 더욱 바람직하게는 제47항 및 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 화학적 화합물을 추가로 포함하고, 상기 화학적 화합물이 생물학적 활성제 또는 약제학적 활성제인, 조성물.
  59. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제41항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서 그리고 더욱 바람직하게는 제47항 및 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 화학적 화합물을 추가로 포함하고, 상기 화학적 화합물이 지질 조성물에 의해 세포 내로 및/또는 세포로 전달될 수 있는, 조성물.
  60. 제59항에 있어서, 상기 세포가 포유동물의 세포이고, 바람직하게는 상기 포유동물이 인간, 마우스, 래트, 토끼, 햄스터, 기니아 피그, 원숭이, 개, 고양이, 돼지, 양, 염소, 소 및 말을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  61. 제59항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포가 폐 내피 세포, 바람직하게는 상기 세포가 인간의 폐 내피 세포인, 조성물.
  62. 제58항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학적 화합물이 올리고뉴클레오타이드, 폴리뉴클레오타이드, 핵산, 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질 및 소분자를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  63. 제62항에 있어서, 상기 화학적 화합물이 핵산이고, 상기 핵산이 RNA, DNA, PNA 및 LNA를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  64. 제62항에 있어서, 상기 핵산이 기능성 핵산이고, 바람직하게는 상기 기능성 핵산이 siRNA, 마이크로RNA, siNA, RNA 간섭 매개 핵산, 안티센스 핵산, 리보자임, 압타머, 스피겔머(spiegelmer) 및 mRNA를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  65. 제62항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드가 siRNA, 마이크로RNA, siNA, RNA 간섭 매개 핵산, 안티센스 핵산, 리보자임, 압타머, 스피겔머 및 mRNA를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  66. 제62항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가 siRNA, 마이크로RNA, siNA, RNA 간섭 매개 핵산, 안티센스 핵산, 리보자임, 압타머 및 스피겔머를 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  67. 제62항 및 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가 상기 지질 조성물과 복합체를 형성하는, 조성물.
  68. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제41항 내지 제47항 및 제53 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 siRNA 분자를 포함하는, 조성물.
  69. 제68항에 있어서, 상기 siRNA 분자가 표적화 ANG2인, 조성물.
  70. 제70항에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열 중 하나 또는 둘 다를 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
    5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
    5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
  71. 제70항에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열을 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
    5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
    5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
  72. 제62항에 있어서, 상기 화학적 화합물이 단백질이고, 상기 단백질이 항체, 사이토카인 및 안티칼린을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  73. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 조성물이
    70mol%의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00099

    29mol%의 콜레스테롤 및
    1mol%의 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
    Figure pct00100
    이고,
    상기 조성물은 바람직하게는 담체로서 270mM 슈크로스 수용액을 포함하고;
    상기 조성물은 화학적 화합물을 포함하고, 상기 화학적 화합물은 siRNA, 마이크로RNA, siNA 및 RNA 간섭 매개 화합물을 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 바람직하게는 상기 화학적 화합물은 (a) 생물학적 또는 약제학적 활성제이고/이거나 (b) 상기 지질 조성물에 의해 세포 내로 및/또는 세포로, 더욱 바람직하게는 포유동물의 폐 내피 세포로 전달될 수 있는, 조성물.
  74. 제1항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제58항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서 그리고 더욱 바람직하게는 제73항에 있어서, 상기 화학적 화합물이 기능성 핵산이고, 하전된 지질 질소 원자 대 핵산 골격 포스페이트 간의 비 (N/P 비)가 약 3 내지 12, 바람직하게는 약 5 내지 10이고, 더욱 바람직하게는 약 8 내지 9이고, 가장 바람직하게는 약 8.4인, 조성물.
  75. 제73항 및 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 siRNA 분자를 포함하는, 조성물.
  76. 제75항에 있어서, 상기 siRNA 분자가 표적화 ANG2인, 조성물.
  77. 제76항에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열 중 하나 또는 둘 다를 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
    5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
    5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
  78. 제77항에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열을 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
    5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
    5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
  79. 제73항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제78항에 있어서, 상기 조성물이 0.28mg/ml의 siRNA 및 2.4 mg/m의 총 지질을 포함하는, 조성물.
  80. 제1항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지질 조성물이
    70mol%의 β-아르기닐-2,3-디아미노 프로피온산-N-팔미틸-N-올레일-아미드 트리하이드로클로라이드
    Figure pct00101

    29mol%의 콜레스테롤 및
    1mol%의 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-[메톡시(폴리에틸렌 글리콜)-2000] (암모늄 염)
    Figure pct00102
    이고,
    상기 조성물은 바람직하게는 담체로서 270mM 슈크로스 수용액을 포함하고;
    상기 조성물은 화학적 화합물을 포함하고, 상기 화학적 화합물은 siRNA, 마이크로RNA, 및 siRNA를 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 바람직하게는 상기 화학적 화합물은 (a) 생물학적 또는 약제학적 활성제이고/이거나 (b) 상기 지질 조성물에 의해 세포 내로 및/또는 세포로, 더욱 바람직하게는 포유동물의 폐 내피 세포로 전달될 수 있고;
    상기 하전된 지질 질소 원자 대 상기 핵산 골격 포스페이트 간의 비 (N/P 비)가 약 8 내지 9, 바람직하게는 약 8.4인, 조성물.
  81. 제80항에 있어서, 상기 조성물이 siRNA 분자를 포함하는, 조성물.
  82. 제81항에 있어서, 상기 siRNA 분자가 표적화 ANG2인, 조성물.
  83. 제82항에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열 중 하나 또는 둘 다를 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
    5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
    5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
  84. 제83항에 있어서, 상기 ANG2 표적화 siRNA 분자가 하기 2개의 서열을 포함하고, 바람직하게는 대문자로 나타낸 뉴클레오타이드가 2'-O-메틸인, 조성물.
    5'AgUuGgAaGgAcCaCaUgC 3' (서열번호 1) 및
    5'gCaUgUgGuCcUuCcAaCu 3' (서열번호 2)
  85. 제80항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제84항에 있어서, 상기 조성물이 0.28mg/ml의 siRNA 및 2.4 mg/m의 총 지질을 포함하는, 조성물.
  86. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제58항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서 그리고 바람직하게는 제73항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체의 질환을 치료 및/또는 예방하기 위한 방법에 사용하기 위한 조성물.
  87. 제86항에 있어서, 상기 방법이 유효량의 조성물, 바람직하게는 치료학적 유효량의 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하는, 조성물.
  88. 제86항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 상기 화학적 화합물을 대상체의 세포 내로 전달하는, 조성물.
  89. 제88항에 있어서, 상기 세포가 폐 내피 세포인, 조성물.
  90. 제89항에 있어서, 상기 화학적 화합물이 폐 내피 세포에 치료 효과를 제공하고, 바람직하게는 상기 화학적 화합물이 상기 세포 내의 표적 분자를 표적화하고, 더욱 바람직하게는 억제하고 그 결과 치료 효과를 달성하는, 조성물.
  91. 제90항에 있어서, 상기 표적 분자가 질환의 바탕이 되는 병리학적 메카니즘에 관여하는, 조성물.
  92. 제86항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환이 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐암, 폐 전이, 폐 고혈압 및 폐동맥 고혈압을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  93. 제86항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 인간, 마우스, 래트, 토끼, 햄스터, 기니아 피그, 원숭이, 개, 고양이, 돼지, 양, 염소, 소 및 말을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 조성물.
  94. 제86항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 정맥내 투여 수단에 의해 또는 흡입 수단에 의해 대상체에게 투여되는, 조성물.
  95. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 바람직하게는 제58항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서 그리고 더욱 바람직하게는 제73항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한, 용도.
  96. 제95항에 있어서, 상기 질환이, 질환의 바탕이 되는 병리학적 메카니즘에 관여하는 표적 분자가 폐 내피 세포에 존재하고 상기 표적 분자의 억제가 치료 효과를 제공하는 질환인, 용도.
  97. 제95항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물의 상기 화학적 화합물이 상기 세포 내의 표적 분자를 표적화하고 더욱 바람직하게는 억제하고 그 결과 치료 효과를 달성하는, 용도.
  98. 제95항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환이 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐암, 폐 전이, 폐 고혈압 및 폐동맥 고혈압을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 용도.
  99. 제95항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제가 정맥내 투여용인, 용도.
  100. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물, 바람직하게는 제58항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물 그리고 더욱 바람직하게는 제73항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  101. 제100항에 있어서, 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물, 바람직하게는 제58항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물 그리고 가장 바람직하게는 제73항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물의 화학적 조성물이 약제학적 활성제인, 약제학적 조성물.
  102. 제100항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물, 바람직하게 제57항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물 및 더욱 바람직하게는 제73항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물의 담체가 약제학적으로 허용되는 담체인, 약제학적 조성물.
  103. 제100항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이, 제95항 내지 제99항 중 어느 한 항에서와 같이 정의된 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 것인, 약제학적 조성물.
  104. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물, 바람직하게는 제58항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물 그리고 더욱 바람직하게는 제73항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물의 전달제로서의 용도.
  105. 제104항에 있어서, 상기 전달제가 생물학적 활성 또는 약제학적 활성 화합물을 세포 내로, 바람직하게는 포유동물 세포 내로 그리고 더욱 바람직하게는 인간 세포 내로 전달하는, 용도.
  106. 제105항에 있어서, 상기 세포가 폐 내피 세포, 바람직하게는 인간의 폐 내피 세포인, 용도.
  107. 제104항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화학적 조성물의 상기 화학적 화합물이 생물학적 활성제 또는 상기 약제학적 활성제인, 용도.
  108. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물, 바람직하게는 제58항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물 그리고 더욱 바람직하게는 제73항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물 및 사용 지침서를 포함하는 키트.
  109. 생물학적 활성 화합물 또는 약제학적 활성 화합물을 세포 내로 또는 세포막을 거쳐 전달하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 상기 세포 또는 상기 세포막을 제1항 내지 제85항 중 어느 한 한의 조성물, 바람직하게는 제58항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물 및 더욱 바람직하게는 제73항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물, 및 상기 생물학적 활성 화합물 또는 약제학적 활성 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  110. 제109항에 있어서, 상기 방법이 상기 생물학적 활성 화합물 또는 상기 약제학적 활성 화합물을 상기 세포에서 및/또는 상기 세포막을 지나 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  111. 제109항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 활성 화합물 또는 상기 약제학적 활성 화합물이 제58항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물의 화학적 화합물인, 방법.
  112. 질환의 치료 및/또는 예방 방법으로서, 상기 방법이 유효량의 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물, 바람직하게는 제58항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물 그리고 더욱 바람직하게는 제73항 내지 제85항 중 어느 한 항의 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함을 포함하는, 방법.
  113. 제112항에 있어서, 상기 조성물이 상기 화학적 화합물을 대상체의 세포 내로 전달하는, 방법.
  114. 제113항에 있어서, 상기 세포가 폐 내피 세포인, 방법.
  115. 제114항에 있어서, 상기 화학적 화합물이 폐 내피 세포에서 치료 효과를 제공하고, 바람직하게는 상기 화학적 화합물이 상기 세포 내의 표적 분자를 표적화하고, 더욱 바람직하게는 억제하고 그 결과 치료 효과를 달성하는, 방법.
  116. 제115항에 있어서, 상기 표적 분자가 질환의 바탕이 되는 병리학적 메카니즘에 관여하는, 방법.
  117. 제112항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환이 급성 폐 손상, 급성 호흡 곤란 증후군, 폐암, 폐 전이, 폐 고혈압 및 폐동맥 고혈압을 포함하는 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  118. 제112항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 인간, 마우스, 래트, 토끼, 햄스터, 기니아 피그, 원숭이, 개, 고양이, 돼지, 양, 염소, 소 및 말을 포함하는 그룹으로부터 선택되고, 바람직하게는 상기 대상체가 인간인, 방법.
  119. 약제의 제조 방법으로서, 상기 방법이 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 약제학적 활성제로 제형화함을 포함하는, 방법.
  120. 제119항에 있어서, 상기 약제가 제1항 내지 제119항 중 어느 한 항에 기재된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 것인, 방법.
  121. 제119항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 활성제가 폐 질환의 치료에 적합한 화합물인, 방법.
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