JP6667453B2 - 成長ホルモン受容体発現を調節するための組成物及び方法 - Google Patents

成長ホルモン受容体発現を調節するための組成物及び方法 Download PDF

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Description

配列表
本願は、電子形式の配列表とともに出願されている。この配列表は、２０１５年４月２７日に作成されたサイズ１．２９ＭＢのＢＩＯＬ０２５３ＷＯＳＥＱ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名称のファイルとして提供される。この配列表の電子形式の情報は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本実施形態は、成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）を標的とするアンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドを使用して過剰な成長ホルモンと関連する疾患を処置し、防止し、または改善するための方法、化合物、及び組成物を提供する。
成長ホルモンは、下垂体で生成されて血流に分泌され、そこで多くの細胞型で成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）と結合し、インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）の生成に起因する。ＩＧＦ−１は、主に肝臓で生成するが脂肪組織および腎臓でも生成して血流に分泌される。先端巨大症および巨人症のような幾つかの疾患は、血漿及び／または組織における成長ホルモンレベルの上昇及び／またはＩＧＦ-Ｉレベルの上昇と関連する。
成長ホルモンの過剰産生は、先端巨大症または巨人症のような疾患をもたらす場合がある。先端巨大症と巨人症は過剰な成長ホルモンと関連し、下垂体腫瘍に起因することが多く、世界中で１００万人あたり４０〜５０人が冒され、米国及び欧州のそれぞれに約１５０００人の患者がいて、年間発病率は１００万人あたり約４〜５人である。先端巨大症及び巨人症は、初期は手と足の異常成長及び顔貌の骨変化で特徴付けられる。成長関連の帰結の多くは高レベルの血清ＩＧＦ−１によって媒介される。
本明細書で提供する実施形態は、過剰な成長ホルモンと関連する疾患を処置し、防止し、または改善するための、方法、化合物及び組成物に関する。本明細書で提供する幾つかの実施形態は、成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）を標的とするアンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドに関する。幾つかの実施形態は、成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）を標的とするアンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドによる先端巨大症の処置、防止または改善に関する。
前記一般的な説明及び以下の詳細な説明はどちらも例示的かつ説明的であるにすぎず、本願に係る発明を限定するものではないと理解すべきである。本明細書において、単数形の使用は、別段の明示がある場合を除き、複数形を含む。本明細書において「または（ｏｒ）」の使用は、別段の言明がある場合を除き、「及び／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味する。さらに、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、ならびに「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定的ではない。また、「要素」または「成分」などの用語は、別段の明示がある場合を除き、１つのユニットを含む要素及び成分と２つ以上のサブユニットを含む要素及び成分をどちらも包含する。
本明細書において使用する見出しには構成上の目的しかなく、記載される主題を限定するものと解釈してはならない。本願において引用する文書または文書の一部は、すべて、例えば限定するわけではないが特許、特許出願、記事、書籍、及び論文を含めて、その文書のうちの本明細書において論じる部分も、その全体も、参照により明確に組み込まれる。
特別な定義が与えられない限り、本明細書に記載する分析化学、合成有機化学、ならびに医化学及び製薬化学に関連して用いられる術語、ならびにそれらの手順及び技法は、周知であり、当技術分野で一般に使用されるものである。化学合成及び化学分析には、標準的技法を使用することができる。そのような技法及び手順のうち特定のものは、例えば「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」Ｓａｎｇｖｉ及びＣｏｏｋ編，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，ワシントンＤ．Ｃ．，１９９４、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，ペンシルベニア州イーストン，第２１版，２００５、及び「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」Ｓｔａｎｌｅｙ Ｔ．Ｃｒｏｏｋｅ編，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，フロリダ州ボカラトン、ならびにＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８９に見いだすことができ、これらは、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。許容される場合、本開示の全体を通して言及する特許、出願、公開された出願、及び他の出版物、ならびに他のデータはすべて、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
別段の表示がある場合を除き、以下の用語は、以下の意味を有する。
「２’−Ｆヌクレオシド」とは、２’位にフッ素を含む糖を含むヌクレオシドを指す。別段の表示がある場合を除き、２’−Ｆヌクレオシドにおけるフッ素は（天然リボースのＯＨを置き換える）リボ位に存在する。
「２’−Ｏ−メトキシエチル」（２’−ＭＯＥ及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３ともいう）は、フラノース環の２’位にあるＯ−メトキシエチル修飾を指す。２’−Ｏ−メトキシエチル修飾糖は、修飾糖である。
「２’−ＭＯＥヌクレオシド」（２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドともいう）は、２’−ＭＯＥ修飾糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「２’−置換ヌクレオシド」とは、２’位にＨまたはＯＨ以外の置換基を含むヌクレオシドを意味する。別段の表示がある場合を除き、２’置換ヌクレオシドは二環式ヌクレオシドではない。
「２’−置換糖部分」とは、２’位にＨまたはＯＨ以外の置換基を含むフラノシルを意味する。別段の表示がある場合を除き、２’−置換糖部分は二環式糖部分ではない（すなわち２’−置換糖部分の２’−置換基はフラノシル環の別の原子と橋を形成しない）。
「３’標的部位」とは、ある特定アンチセンス化合物の最も３’側のヌクレオチドに相補的な標的核酸のヌクレオチドを指す。
「５’標的部位」とは、ある特定アンチセンス化合物の最も５’側のヌクレオチドに相補的な標的核酸のヌクレオチドを指す。
「５−メチルシトシン」とは、５位に取り付けられたメチル基で修飾されたシトシンを意味する。５−メチルシトシンは修飾核酸塩基である。
「約」とは、ある値の±１０％以内を意味する。例えば、「ＧＨＲの少なくとも約７０％阻害を達成する化合物」と言明した場合、それは、ＧＨＲレベルが６０％〜８０％の範囲内で阻害されることを含意する。
「投与」または「投与すること」とは、ここに提供するアンチセンス化合物を、意図したその機能を果たすように対象に導入する経路を指す。使用することができる投与経路の一例として、非経口投与、例えば皮下、静脈内、または筋肉内への注射または注入が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書にいう「アルキル」とは、最大２４個の炭素原子を含有する飽和直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味する。アルキル基の例として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、ｎ−ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキル基は、典型的には、１〜約２４個の炭素原子、より典型的には、１〜約１２個の炭素原子（Ｃ１〜Ｃ１２アルキル）を含み、１〜約６個の炭素原子がより好ましい。
本明細書にいう「アルケニル」とは、最大２４個の炭素原子を含有し、かつ少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖炭化水素鎖ラジカルを意味する。アルケニル基の例として、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イル、１，３−ブタジエンなどのジエンなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルケニル基は、典型的には、２〜約２４個の炭素原子、より典型的には、２〜約１２個の炭素原子を含み、２〜約６個の炭素原子がより好ましい。本明細書にいうアルケニル基は、場合によっては、１つ以上のさらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「アルキニル」とは、最大２４個の炭素原子を含有し、かつ少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味する。アルキニル基の例として、エチニル、１−プロピニル、１−ブチニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アルキニル基は、典型的には、２〜約２４個の炭素原子、より典型的には、２〜約１２個の炭素原子を含み、２〜約６個の炭素原子がより好ましい。本明細書にいうアルキニル基は、場合によっては、１つ以上のさらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「アシル」とは、有機酸からヒドロキシル基を除去することによって形成されるラジカルを意味し、一般式−Ｃ（Ｏ）−Ｘを有し、式中、Ｘは、典型的には、脂肪族、脂環式、または芳香族である。例として、脂肪族カルボニル、芳香族カルボニル、脂肪族スルホニル、芳香族スルフィニル、脂肪族スルフィニル、芳香族ホスフェート、脂肪族ホスフェートなどが挙げられる。本明細書にいうアシル基は、さらなる置換基を場合によっては含みうる。
本明細書にいう「脂環式」とは、環式環系を意味し、前記環は、脂肪族である。前記環系は、１つ以上の環を含むことができ、少なくとも１つの環は脂肪族である。好ましい脂環式基は、環内に約５〜約９個の炭素原子を有する環を含む。本明細書にいう脂環式基は、場合によっては、さらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「脂肪族」とは、最大２４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐鎖炭化水素ラジカルを意味し、任意の２つの炭素原子の間の飽和度は、一重、二重、または三重結合である。脂肪族基は、好ましくは、１〜約２４個の炭素原子、より典型的には、１〜約１２個の炭素原子を含有し、１〜約６個の炭素原子がより好ましい。脂肪族基の直鎖または分岐鎖は、窒素、酸素、硫黄、及びリンを含む１つ以上のヘテロ原子で中断されていてもよい。ヘテロ原子によって中断されているそのような脂肪族基には、ポリアルコキシ、例えば、ポリアルキレングリコール、ポリアミン、及びポリイミンが含まれるが、これらに限定されない。本明細書にいう脂肪族基は、場合によっては、さらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「アルコキシ」とは、アルキル基と酸素原子とで形成されるラジカルを意味し、アルコキシ基は前記酸素原子を使って親分子に取り付けられる。アルコキシ基の例として、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ネオペントキシ、ｎ−ヘキソキシなどが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書にいうアルコキシ基は、場合によっては、さらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「アミノアルキル」とは、アミノ置換されたＣ１〜Ｃ１２アルキルラジカルを意味する。前記ラジカルのアルキル部分は、親分子と共有結合を形成する。アミノ基は、任意の位置に位置することができ、アミノアルキル基は、アルキル部分及び／またはアミノ部分を、さらなる置換基で置換することができる。
本明細書にいう「アラルキル」及び「アリールアルキル」とは、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルラジカルに共有結合で連結されている芳香族基を意味する。結果として生じるアラルキル（またはアリールアルキル）基のアルキルラジカル部分は、親分子と共有結合を形成する。例として、ベンジル、フェネチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書にいうアラルキル基は、場合によっては、当該ラジカル基を形成するアルキル基、アリール基、またはそれら両方の基に取り付けられたさらなる置換基を含みうる。
本明細書にいう「アリール」及び「芳香族」とは、１つ以上の芳香族環を有する単環式または多環式炭素環式環系ラジカルを意味する。アリール基の例として、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。好ましいアリール環系は、１つ以上の環内に約５〜約２０個の炭素原子を有する。本明細書にいうアリール基は、場合によっては、さらなる置換基を含みうる。
「改善」とは、関連する疾患、障害、または状態の少なくとも１つの指標、徴候、または症状の軽減を指す。特定の実施形態では、改善は、状態または疾患の１つ以上の指標の進行の遅延または減速を包含する。指標の重症度は、当業者に知られている主観的尺度または客観的尺度によって決定することができる。
「動物」とは、ヒトまたはヒト以外の動物を指し、これには、例えばマウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、及び非ヒト霊長類（サル及びチンパンジーを含むが、これらに限定されない）が含まれるが、これらに限定されない。
「アンチセンス活性」とは、アンチセンス化合物によるその標的核酸へのハイブリダイゼーションに起因する任意の検出可能な活性または測定可能な活性を意味する。特定の実施形態では、アンチセンス活性が、標的核酸またはそのような標的核酸がコードするタンパク質の量または発現の減少である。
「アンチセンス化合物」とは、水素結合によって標的核酸へのハイブリダイゼーションを起こすことができるオリゴマー化合物を意味する。アンチセンス化合物の例として、一本鎖化合物及び二本鎖化合物、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及び占有に基づく（ｏｃｕｐａｎｃｙ−ｂａｓｅｄ）化合物が挙げられる。
「アンチセンス阻害」とは、アンチセンス化合物が存在しない場合の標的核酸レベルとの比較で、標的核酸に相補的なアンチセンス化合物の存在下での標的核酸レベルの低減を意味する。
「アンチセンス機序」とは、化合物と標的核酸とのハイブリダイゼーションを伴うすべての機序をいう。前記ハイブリダイゼーションの結果または効果は、標的の分解または標的の占有であり、これに付随して、例えば転写またはスプライシングに関わる細胞機構の停止が起こる。
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、標的核酸の対応する領域または対応するセグメントへのハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。
「塩基相補性」とは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基が標的核酸中の対応する核酸塩基と正確な塩基対合（すなわちハイブリダイゼーション）を起こす能力を指し、これは、対応する核酸塩基間のワトソン−クリック型、フーグスティーン型または逆フーグスティーン型水素結合によって媒介される。
「二環式糖部分」とは、４〜７員環の２つの原子をつないで第２の環を形成することで二環式構造をもたらす橋を含む４〜７員環（フラノシルを含むが、これに限定されない）を含む修飾糖部分を意味する。特定の実施形態では、前記４〜７員環が糖環である。特定の実施形態では、前記４〜７員環がフラノシルである。特定のそのような実施形態では、前記橋が、フラノシルの２’−炭素と４’−炭素とをつなぐ。
「二環式核酸」または「ＢＮＡ」または「ＢＮＡヌクレオシド」とは、糖環の２つの炭素原子をつなぎ、それによって二環式環系を形成する橋を含む糖部分を有するヌクレオシドを意味する。特定の実施形態では前記橋が糖環の４’炭素と２’炭素をつなぐ。
「キャップ構造」または「末端キャップ部分」とは、アンチセンス化合物のどちらかの末端に組み込まれた化学修飾を意味する。
「炭水化物」とは、天然に存在する炭水化物、修飾炭水化物、または炭水化物誘導体を意味する。
「炭水化物クラスター」とは、足場基またはリンカー基に取り付けられた１つ以上の炭水化物残基を有する化合物を意味する（例えば、炭水化物共役クラスターの例として、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｍａｉｅｒ ｅｔ ａｌ．「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｔｏ ａ Ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｌｕｓｔｅｒ ｆｏｒ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ」Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，（１４）：１８−２９、またはＲｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，「Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ−Ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，（４７）：５７９８−５８０８を参照のこと）。
「炭水化物誘導体」とは、出発物質または中間体として炭水化物を用いて合成されうる任意の化合物を意味する。
「ｃＥｔ」または「拘束エチル」とは、４’−炭素と２’−炭素とをつなぐ橋を含む二環式糖部分を意味し、この橋は４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’という式を有する。
「拘束エチルヌクレオシド」（ｃＥｔヌクレオシドも）は、４’−ＣＨ（ＣＨ３)−Ｏ−２’橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「化学的に特異的な領域」は、同じアンチセンス化合物の他の領域よりある程度化学的に異なるアンチセンス化合物の領域を指す。例えば、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾がないヌクレオチドを有する領域とは化学的に異なる。
「化学修飾」とは、天然に存在する対応物と比較した場合の化合物の化学的相違を意味する。オリゴヌクレオチドの化学修飾は、ヌクレオシド修飾（糖部分修飾及び核酸塩基修飾を含む）ならびにヌクレオシド間連結部修飾を含む。オリゴヌクレオチドの場合、核酸塩基配列だけの相違は、化学修飾には含まれない。
「キメラアンチセンス化合物」は、少なくとも２つの化学的に異なる領域を有し、各位置が複数のサブユニットを有するアンチセンス化合物を意味する。
「切断可能な結合」とは、開裂されうる任意の化学結合を意味する。特定の実施形態では、切断可能な結合は、アミド、ポリアミド、エステル、エーテル、ホスホジエステルの一方もしくは両方のエステル、リン酸エステル、カルバメート、ジスルフィド、またはペプチドのなかから選択される。
「切断可能部分」とは、生理学的条件下で開裂されうる結合または基を意味する。特定の実施形態では、切断可能部分が、細胞の内部またはリソソームなどの細胞内コンパートメントの内部で切断される。特定の実施形態では、切断可能部分が、ヌクレアーゼなどの内在性酵素によって切断される。特定の実施形態では、切断可能部分が、１個、２個、３個、４個、または５個以上の切断可能な結合を有する原子団を含む。
「同時投与」は、個体への２つまたはそれ以上の医薬品の投与を意味する。２つまたはそれ以上の医薬品は、単一の医薬組成物または分離した医薬組成物の状態でもよい。２つまたはそれ以上の医薬品のそれぞれが同じまたは異なる投与経路で投与されてもよい。同時投与は、並行（ｐａｒａｌｌｅｌ）投与または連続投与を包含する。
「相補性」とは、第一核酸と第二核酸の核酸塩基の間で対を形成する能力を意味する。
「Ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」、「Ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」は、記載された工程または要素あるいは工程群または要素群を包含するが、あらゆる他の工程または要素あるいは工程群または要素群の排除ではないことを意味することが理解されるであろう。
「共役体」または「共役基」とは、オリゴヌクレオチドまたはオリゴマー化合物に結合される原子または原子団を意味する。概して、共役基は、それらが取り付けられた化合物の１つ以上の特性、例えば限定するわけではないが、薬力学的特性、薬物動態学的特性、結合特性、吸収特性、細胞分布特性、細胞取り込み特性、電荷特性、及び／またはクリアランス特性などを修飾する。
共役基に関連して「共役リンカー」または「リンカー」とは、任意の原子または原子団を含む共役基の一部分であって、（１）オリゴヌクレオチドを共役基の別の部分と共有結合で連結するか、または（２）共役基の２つ以上の部分を共有結合で連結するものを意味する。
共役基は、本明細書においてはラジカルとして示され、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴマー化合物への共有結合を形成するための結合を提供する。特定の実施形態では、オリゴマー化合物における結合点が、オリゴマー化合物の３’末端ヌクレオシドの３’−ヒドロキシル基の３’−酸素原子である。特定の実施形態では、オリゴマー化合物における結合点が、オリゴマー化合物の５’末端ヌクレオシドの５’−ヒドロキシル基の５’−酸素原子である。特定の実施形態では、オリゴマー化合物への結合を形成するための結合は、切断可能な結合である。特定のそのような実施形態において、そのような切断可能な結合は、切断可能部分のすべてまたは一部を構成する。
特定の実施形態では、共役基が、切断可能部分（例えば、切断可能な結合または切断可能なヌクレオシド）と、ＧａｌＮＡｃクラスター部分などの炭水化物クラスター部分とを含む。そのような炭水化物クラスター部分は、標的部分と、場合によっては、共役リンカーとを含む。ある特定の実施形態では、炭水化物クラスター部分が、リガンドの数及びその実体によって特定される。例えば、ある特定の実施形態では、炭水化物クラスター部分が３個のＧａｌＮＡｃ基を含み、「ＧａｌＮＡｃ３」と表記される。ある特定の実施形態では、炭水化物クラスター部分が４個のＧａｌＮＡｃ基を含み、「ＧａｌＮＡｃ４」と表記される。具体的な炭水化物クラスター部分（具体的なテザー基、分岐基、及び共役リンカー基を有するもの）を、本明細書では、ローマ数字と、それに続く下付き文字「ａ」で説明し、表記する。したがって、「ＧａｌＮａｃ３−１ａ」とは、３個のＧａｌＮａｃ基、ならびに具体的に特定されたテザー基、分岐基、及び連結基を有する共役基の具体的炭水化物クラスター部分を指す。そのような炭水化物クラスター断片は、切断可能な結合または切断可能なヌクレオシドなどの切断可能部分を介してオリゴマー化合物に取り付けられる。
「共役化合物」とは、共役基としての使用に好適な任意の原子、原子団、または連結された原子団を意味する。ある特定の実施形態では、共役化合物は、１つ以上の特性、例えば限定するわけではないが、薬力学的特性、薬物動態学的特性、結合特性、吸収特性、細胞分布特性、細胞取り込み特性、電荷特性、及び／またはクリアランス特性などを有しうるか、または付与しうる。
「連続する核酸塩基」とは、互いに直接隣り合っている核酸塩基を意味する。
「拘束エチルヌクレオシド」または「ｃＥｔ」とは、４’−ＣＨ（ＣＨ３)−Ｏ−２’橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「デオキシヌクレオシド」とは、天然に存在するデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）に見られる２’−Ｈフラノシル糖部分を含むヌクレオシドを意味する。特定の実施形態において、２’−デオキシヌクレオシドは修飾核酸塩基を含むか、またはＲＮＡ核酸塩基（例えばウラシル）を含みうる。
「設計」または「設計された」とは、選ばれた核酸分子と特異的にハイブリダイズするオリゴマー化合物を設計するプロセスを指す。
「異なる修飾がなされた」とは、修飾の不在を含めて、互いに異なる化学修飾または化学置換基を意味する。したがって、例えば、ＭＯＥヌクレオシドと無修飾ＤＮＡヌクレオシドは、ＤＮＡヌクレオシドが修飾されていなくても、「異なる修飾がなされている」という。同様に、ＤＮＡとＲＮＡは、たとえそのどちらもが天然に存在する無修飾ヌクレオシドであったとしても、「異なる修飾がなされている」という。異なる核酸塩基を含んでいる点以外は同じであるヌクレオシドは、異なる修飾がなされているとは言わない。例えば、２’−ＯＭｅ修飾糖及び無修飾アデニン核酸塩基を含むヌクレオシドと、２’−ＯＭｅ修飾糖及び無修飾チミン核酸塩基を含むヌクレオシドとは、異なる修飾がなされているとは言わない。
「希釈剤」とは、医薬活性を欠くが、医薬的に必要または望ましい組成物中の原料を意味する。例えば、注入される薬物では希釈剤は液体、例えば食塩水でもよい。
「投与量」とは、単回投与または一定期間で供給される医薬品の規定された量を意味する。特定の実施形態では、ある投与量を、1つ、２つまたは３つ以上のボーラス、錠剤または注射で投与してもよい。例えば、皮下投与が望ましい特定の実施形態では、適正な投与量は単回の注射で対応するのが容易でない容量を必要とするため、望ましい投与量を達成するように２回以上の注射を使用して実施してもよい。特定の実施形態では、医薬品は長時間にわたって、または連続的に点滴によって投与される。投与量は、時間、週または月あたりの医薬品の量として記述されてもよい。
「二本鎖」とは、互いにハイブリダイズしている２つの別個のオリゴマー化合物を指す。そのような二本鎖化合物は、生理的に関連する条件下でハイブリダイゼーションを維持するのに十分な相補性が存在するのであれば、一方もしくは両方の鎖の一方もしくは両方の末端に１つ以上のハイブリダイズしていないヌクレオシド（オーバーハング）及び／または１つ以上のハイブリダイズしていない内部ヌクレオシド（ミスマッチ）を有しうる。
「下流」とは、核酸の３’末端またはＣ末端に対する相対方向を意味する。
「有効量」とは、医薬剤を必要とする個体において所望の生理学的結果をもたらすのに十分な前記活性医薬剤の量を意味する。有効量は、処置される個体の健康状態及び身体状態、処置される個体の分類群、組成物の製剤、個体の医学的状態の評価、及び他の関連因子に依存して個体間で変動しうる。
ある活性を調節、あるいはある状態を処置または防止する状況下での「有効量」とは、効果の調節に有効な、またはその状態の治療または予防または改善に有効な量の医薬剤を、単回投与または連続投与の一部として、そのような調節、処置または防止を必要とする対象に対して投与することを意味する。有効量は、処置される個体の健康状態及び身体状態、処置される個体の分類群、組成物の調剤、個体の医学的状態の評価、及び他の関連因子に依存して個体間で変動しうる。
「効力」とは、所望の効果を生じさせる能力を意味する。
「本質的に変化がない」とは、具体的には、格段に変化する別のパラメーターに比して特定のパラメーターでほとんど変化がないか全くないことを意味する。特定の実施形態では、パラメーターが５％未満しか変化しない場合は本質的に変化がない。特定の実施形態では、別のパラメーターが少なくとも１０倍変化するのに対し、あるパラメーターの変化が２倍未満ならば本質的に変化がない。例えば、特定の実施形態では、アンチセンス活性は標的核酸の量の変化である。特定のそのような実施形態において、ある非標的核酸の量の変化が標的核酸の変化よりはるかに少ないならば非標的核酸の量は本質的に変化しないが、変化はゼロである必要はない。
「発現」とは、遺伝子によって最終的にタンパク質が得られる過程を意味する。発現は、これらに限定されないが、転写、転写後修飾（例えば、スプライシング、ポリアデニル化、５’−キャップ付加）及び翻訳が挙げられる。
「完全に相補的」または「１００％相補的」とは、第１核酸の各核酸塩基が第２核酸中に相補的核酸塩基を有することを意味する。特定の実施形態では、第１核酸がアンチセンス化合物であり、標的核酸が第２核酸である。
「フラノシル」とは、４つの炭素原子と１つの酸素原子とを含む５員環を含む構造を意味する。
「ギャップマー」とは、キメラアンチセンス化合物であって、ＲＮａｓｅ Ｈ切断を支持する複数のヌクレオシドを有する内側領域が、１つ以上のヌクレオシドを有する外側領域の間に配置されており、内側領域を構成するヌクレオシドが、外側領域を構成する１または複数のヌクレオシドと化学的に異なっているものを意味する。前記内側領域を「ギャップ」と呼び、前記外側領域を「ウイング」と呼ぶことができる。
「成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）」とは、ＧＨＲの任意の核酸またはタンパク質を意味する。「ＧＨＲ核酸」とは、ＧＨＲをコードする任意の核酸を意味する。例えば、特定の実施形態において、ＧＨＲ核酸としては、ＧＨＲをコードするＤＮＡ配列、ＧＨＲをコードするＤＮＡ（イントロンおよびエクソンを含むゲノムＤＮＡを含む）から転写されるＲＮＡ配列が挙げられ、非タンパク質コード（すなわち、非コード）ＲＮＡ配列及びＧＨＲをコードするｍＲＮＡ配列を含む。「ＧＨＲ ｍＲＮＡ」とは、ＧＨＲタンパク質をコードするｍＲＮＡを意味する。
「ＧＨＲ特異的阻害剤」は、ＧＨＲ ＲＮＡ及び／またはＧＨＲタンパク質発現または活性を分子レベルで特異的に阻害することができる任意の薬剤を指す。例えば、ＧＨＲ特異的阻害剤として、核酸（アンチセンス化合物を含む）、ペプチド、抗体、低分子、及びＧＨＲ ＲＮＡ及び／またはＧＨＲタンパク質の発現を阻害することが可能なその他の薬剤が挙げられる。
「ハロ」及び「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素、及びヨウ素から選択される原子を意味する。
「ヘテロアリール」及び「ヘテロ芳香族」とは、単環式もしくは多環式芳香族環、環系、または縮合環系を含むラジカルであって、前記環のうちの少なくとも１つが芳香族であり、かつ１つ以上のヘテロ原子を含むものを意味する。ヘテロアリールは、縮合環のうちの１つ以上がヘテロ原子を含有していない系を含む縮合環系も包含するものとする。ヘテロアリール基は、典型的には、硫黄、窒素、または酸素から選択される１つの環原子を含む。ヘテロアリール基の例として、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールラジカルは、親分子に直接取り付けるか、または脂肪族基もしくはヘテロ原子などの連結部分を介して取り付けることができる。本明細書にいうヘテロアリール基は、場合によっては、さらなる置換基を含みうる。
「ハイブリダイゼーション」とは、相補的核酸分子のアニーリングを意味する。特定の実施形態では、相補的核酸分子に、アンチセンス化合物と核酸標的が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、相補的核酸分子に、アンチセンスオリゴヌクレオチドと核酸標的が含まれるが、これらに限定されない。
「ある疾患、障害及び／または状態を有するか、またはそれらを有するリスクがある動物を同定する」とは、前記疾患、障害及び／または状態と診断された動物を同定すること、あるいは前記疾患、障害及び／または状態を発症する素因を有する動物を同定することを意味する。そのような同定は、個体の病歴を評価することや標準的な臨床検査または臨床評価を含む任意の方法によって達成することができる。
「直接隣り合っている」とは、直接隣り合っている要素の間に介在する要素が存在しないことを意味する。
「個体」とは、処置または治療のために選ばれたヒトまたはヒト以外の動物を意味する。
「発現または活性を阻害する」とは、発現または活性の低減、遮断を指し、必ずしも発現または活性の完全な排除を示すわけではない。
「ヌクレオシド間連結部」とは、ヌクレオシド間の化学結合を指す。
「ヌクレオシド間中性連結基」とは、２つのヌクレオシドを直接連結する中性連結基を意味する。
「ヌクレオシド間リン連結基」とは、２つのヌクレオシドを直接連結するリン連結基を意味する。
「延長された」アンチセンスオリゴヌクレオチドは、本明細書に開示するアンチセンスオリゴヌクレオチドとの比較で、１つ以上の追加ヌクレオシドを有するものである。
「連結部モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその一領域における連結部修飾のパターンを意味する。そのようなオリゴヌクレオチドのヌクレオシドは修飾されていても無修飾でもよい。別段の表示がある場合を除き、連結部の説明しかない本明細書におけるモチーフは、連結部モチーフであるものとする。したがって、そのような事例では、ヌクレオシドは限定されない。
「連結されたデオキシヌクレオシド」とは、デオキシリボースで置換された核酸塩基（Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ、Ｕ）が、リン酸エステルで連結されてヌクレオチドを形成するものを意味する。
「連結されたヌクレオシド」とは、ヌクレオシド間連結部によって一つに連結された隣り合うヌクレオシドを意味する。
「ロックド核酸ヌクレオシド」または「ＬＮＡ」「ロックド核酸」または「ＬＮＡ」または「ＬＮＡヌクレオシド」とは、ヌクレオシド糖ユニットの４’及び２’位置の間に２つの炭素原子をつなぎ、二環式糖を形成する橋を有する核酸モノマーを意味する。そのような二環式糖の例として、これらに限定されないが、下記に表したように、Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’)ＬＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ(４’−ＣＨ２−Ｏ−２’)ＬＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’)ＬＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’)ＬＮＡ及び（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’)ＬＮＡが挙げられる。
明細書で使用するとき、ＬＮＡ化合物は、これらに限定されないが、糖の４’および２’位の間に少なくとも１つの橋を有する化合物であって、各橋が相互に独立して、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−、−Ｃ（Ｒ１）＝Ｃ（Ｒ２）−、−Ｃ（Ｒ１）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲ１）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒ１）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−及び−Ｎ（Ｒ１）−（式中、ｘは０、１または２、ｎは１、２、３または４、Ｒ１とＲ２はそれぞれ、独立してＨ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）、及びＪ１とＪ２はそれぞれ、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキルまたは保護基）から独立して選択される１個、または２〜４個の連結された基を含む化合物が挙げられる。
ＬＮＡの定義内に包含される４’−２’架橋基の例として、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒ１）（Ｒ２）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ１Ｒ２）−Ｎ（Ｒ１）−Ｏ−または−Ｃ（Ｒ１Ｒ２）−Ｏ−Ｎ（Ｒ１）−の式が挙げられるが、これらの１つに限定されない。更に、ＬＮＡの定義内に包含される他の架橋基は、４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ１）−２’および４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ１）−Ｏ−２’橋があり、Ｒ１とＲ２はそれぞれ独立そしてＨ、保護基またはＣ１−Ｃ１２アルキルである。
また、発明に従ったＬＮＡの定義内には、リボシル糖環の２’−ヒドロキシル基が糖環の４’炭素原子につながり、メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）橋が形成されて二環式糖部分を形成するＬＡＮも含まれる。また、前記橋は、２’酸素原子と４’炭素原子をつなぐメチレン（−ＣＨ２−）基の場合もあり、それに対しては、用語メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’)ＬＮＡが使用される。更に、当該位置にエチレン架橋基を有する二環式糖部分の場合では、用語エチレンオキシ（４’−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−２’)ＬＮＡが使用される。明細書で使用するメチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’)ＬＮＡの異性体、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’)もＬＮＡ定義内に包含される。
「代謝異常」とは、主に、食品の分解によるエネルギーの産生に関連する一連の複雑な化学反応である代謝の異常調節で特徴付けられる疾患または症状を意味する。
「ミスマッチ」または「非相補的核酸塩基」とは、第１核酸の核酸塩基が第２核酸または標的核酸の対応する核酸塩基と対合できない場合を指す。
「修飾炭水化物」とは、天然に存在する炭水化物に比べて１つ以上の化学的修飾を有した任意の炭水化物を意味する。
「修飾ヌクレオシド間連結部」とは、天然に存在するヌクレオシド間結合（すなわちホスホジエステルヌクレオシド間結合）からの置換または何らかの改変を指す。
「修飾核酸塩基」とは、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、またはウラシル以外の任意の核酸塩基を意味する。「無修飾核酸塩基」とは、プリン塩基のアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、ピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を意味する。
「修飾ヌクレオシド」とは、修飾糖部分及び／または修飾核酸塩基を独立して有するヌクレオシドを意味する。
「修飾ヌクレオチド」とは、修飾糖部分、修飾ヌクレオチド間連結部、または修飾核酸塩基を独立して有するヌクレオチドを意味する。
「修飾オリゴヌクレオチド」とは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結部、修飾糖、及び／または修飾核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドを意味する。
「修飾糖」とは、天然糖部分からの置換及び／または何らかの改変を意味する。「修飾糖部分」とは、置換糖部分または糖代理を意味する。
「調節する」とは、細胞、組織、器官または生物における特徴を変化させまたは調整することを指す。例えば、ＧＨＲ ｍＲＮＡを調節することは、細胞、組織、器官、または生物におけるＧＨＲ ｍＲＮＡ及び／またはＧＨＲタンパク質のレベルを増加または減少させることを意味しうる。「調節因子」は、細胞、組織、器官または生物における変化をもたらす。例えば、ＧＨＲアンチセンス化合物は、細胞、組織、器官または生物におけるＧＨＲ ｍＲＮＡ及び／またはＧＨＲタンパク質の量を減少させる調節因子であることができる。
「ＭＯＥ」とは、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３を意味する。
「モノマー」とはオリゴマーの一単位を指す。モノマーとしては、天然に存在するものか修飾体かを問わず、ヌクレオシド及びヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。
「単環式または多環式の環系」は、単環式、または環が縮合されもしくは連結された多環式のラジカル環系から選択されるすべての環系を包含するものとし、脂肪族、脂環式、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アリールアルキル、複素環式、ヘテロアリール、ヘテロ芳香族、及びヘテロアリールアルキルから個別に選択される単一の環系及び混成環系を包含することが意図されている。そのような単環式及び多環式の構造は、それぞれが同一のレベルの飽和を有する環を含有するか、またはそれぞれが独立して、完全飽和、部分飽和、もしくは完全不飽和を含むさまざまな飽和度を有する環を含有することができる。各環は、例えば一方の環が炭素環原子のみを有し、縮合している環が２つの窒素原子を有するベンズイミダゾールなどの混合モチーフに存在するＣ環原子だけを含む環のみならずヘテロ環を生成するためにＣ、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される環原子を含むことができる。単環式または多環式の環系は、例えば一方の環に結合した２個の＝Ｏ基を有するフタルイミドのような置換基で更に置換することができる。単環式または多環式の環系は、環原子を介して直接的に結合する、複数の環原子を介して縮合する、または二機能性連結部分を介して結合する等の種々の方法で親分子に結合し得る。
「モチーフ」とは、アンチセンス化合物における無修飾ヌクレオシドと修飾ヌクレオシドのパターンを意味する。
「天然糖部分」とは、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）に見いだされる糖部分を意味する。「天然に存在する糖部分」とは、天然に存在するＲＮＡに見出されるようなリボフラノシルまたは天然に存在するＤＮＡに見出されるデオキシリボフラノシルを意味する。
「天然に存在するヌクレオシド間連結部」とは、３’→５’ホスホジエステル連結部を意味する。
「中性連結基」とは、荷電していない連結基を意味する。中性連結基には、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ＭＭＩ（−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−Ｏ−）、アミド−３（−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−）、アミド−４（−ＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−）、ホルムアセタール（−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−）、及びチオホルムアセタール（−Ｓ−ＣＨ２−Ｏ−）などがあるが、これらに限定されない。さらに、中性連結基には、シロキサン（ジアルキルシロキサン）、カルボン酸エステル、カルボキサミド、硫化物、スルホン酸エステル、及びアミドを含む非イオン性連結部も含まれる（例えば「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」Ｙ．Ｓ．Ｓａｎｇｈｖｉ及びＰ．Ｄ．Ｃｏｏｋ編，ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ５８０；Ｃｈａｐｔｅｒ ３及び４（ｐｐ．４０−６５）を参照されたい）。さらに、中性連結基には、混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＣＨ２成分パーツを含む非イオン性連結部も含まれる。
「非相補的核酸塩基」とは、互いに水素結合を形成せず、他のいかなる形でもハイブリダイゼーションを支持することのない、一対の核酸塩基を指す。
「非ヌクレオシド間中性連結基」とは、２つのヌクレオシドを直接連結しない中性連結基を意味する。特定の実施形態では、非ヌクレオシド間中性連結基が、ヌクレオシドをヌクレオシド以外の基に連結する。特定の実施形態では、非ヌクレオシド間中性連結基は、どちらもヌクレオシドではない２つの基を連結する。
「非ヌクレオシド間リン連結基」とは、２つのヌクレオシドを直接連結しないリン連結基を意味する。特定の実施形態では、非ヌクレオシド間リン連結基がヌクレオシドをヌクレオシド以外の基に連結する。特定の実施形態では、非ヌクレオシド間リン連結基が、どちらもヌクレオシドではない２つの基を連結する。
「核酸」とは、モノマー型ヌクレオチドで構成された分子を指す。核酸には、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸、及び二本鎖核酸などがあるが、これらに限定されない。
「核酸塩基」とは、もう一つの核酸の塩基と対合することができる複素環式部分を意味する。
「核酸塩基相補性」または核酸塩基に関する場合での「相補性」とは、もう一つの核酸塩基と塩基対合することができる核酸塩基を指す。例えばＤＮＡでは、アデニン（Ａ）がチミン（Ｔ）と相補的である。例えばＲＮＡでは、アデニン（Ａ）がウラシル（Ｕ）と相補的である。特定の実施形態では、相補的核酸塩基とは、その標的核酸の核酸塩基と塩基対合することができるアンチセンス化合物の核酸塩基を意味する。例えば、あるアンチセンス化合物の特定の位置にある核酸塩基が標的核酸の特定の位置にある核酸塩基と水素結合することができるなら、前記オリゴヌクレオチドと前記標的核酸の間の水素結合の位置は、それら核酸塩基対において相補的であるとみなされる。特定の修飾を含む核酸塩基は、一方の核酸塩基と塩基対を形成する能力を維持する場合があり、その結果、まだ核酸塩基相補性能がある。
「核酸塩基修飾モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドに沿った核酸塩基への修飾のパターンを意味する。別段の表示がある場合を除き、核酸塩基修飾モチーフは、核酸塩基配列に依存しない。
「核酸塩基配列」とは、連続する核酸塩基の順序を意味し、糖、連結部、及び／または核酸塩基修飾には依存しない。
「ヌクレオシド」とは、核酸塩基部分および糖部分を含む化合物を意味する。ヌクレオシドには、天然に存在するヌクレオシド（ＤＮＡとＲＮＡで見出されるように）及び修飾ヌクレオシドが挙げられるが、これらに限定されない。ヌクレオシドは、リン酸部分と連結する場合がある。
「ヌクレオシド模倣物」には、例えばモルホリノ、シクロヘキセニル、シクロヘキシル、テトラヒドロピラニル、ビシクロまたはトリシクロ糖模倣物、例えば非フラノース糖単位を有するヌクレオシド模倣物などといった、オリゴマー化合物の１つ以上の位置において糖または糖及び塩基を置き換えるため（連結部は必ずしも置き換えられない）に使用される構造が含まれる。ヌクレオチド模倣物には、例えばペプチド核酸またはモルホリノ（−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−または他の非ホスホジエステル連結部によって連結されたモルホリノ）などといった、オリゴマー化合物の１つ以上の位置においてヌクレオシド及び連結部を置き換えるために使用される構造が含まれる。糖代用物は、わずかに広い意味を持つ用語であるヌクレオシド模倣物と一部重複するが、糖単位（フラノース環）のみの置き換えを示すものとする。ここに提供するテトラヒドロピラニル環は、フラノース糖基がテトラヒドロピラニル環系で置き換えられた糖代用物の一例を例示するものである。「模倣物」とは、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間連結部の代わりに使用される基を指す。一般的には、模倣物は、糖または糖−ヌクレオシド間連結部の組み合わせの代わりに使用され、核酸塩基は、選ばれたターゲットへのハイブリダイゼーションのために維持される。
「ヌクレオシドモチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその一領域におけるヌクレオシド修飾のパターンを意味する。そのようなオリゴヌクレオチドの連結部は修飾されていても無修飾であってもよい。別段の表示がある場合を除き、ヌクレオシドの説明しかない本明細書におけるモチーフは、ヌクレオシドモチーフであるものとする。したがって、そのような事例では、連結部は限定されない。
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分にリン酸基が共有結合で連結されているヌクレオシドを意味する。
「オフターゲット効果」とは、意図した標的核酸以外の遺伝子のＲＮＡまたはタンパク質発現の調節と関連する不必要または有害な生物的効果を指す。
「オリゴマー化合物」とは、２つまたはそれ以上の下部構造を含む高分子構造を意味する。特定の実施形態では、オリゴマー化合物はオリゴヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、オリゴマー化合物は１つ以上の共役基及び／または末端基を含む。特定の実施形態では、オリゴマー化合物はオリゴヌクレオチドからなる。また、オリゴマー化合物は、天然に存在する核酸も含む。特定の実施形態では、オリゴマー化合物は、１つ以上の連結された単量体サブユニット骨格を含み、各連結された単量体サブユニットが複素環塩基部分と直接的または間接的に結合する。特定の実施形態では、オリゴマー化合物が複素環塩基と連結しない単量体サブユニットを有することで脱塩基部位が提供される場合がある。特定の実施形態では、単量体サブユニットと結合する連結部、糖部分または糖代用物及び複素環塩基部分は独立して修飾されうる。特定の実施形態では、連結部糖単位（複素環塩基を含または不含でもよい）がペプチド核酸中の単量体のような模倣物で置換されうる。
「オリゴヌクレオシド」とは、ヌクレオシド間連結部がリン原子を含有しないオリゴヌクレオチドを意味する。
「オリゴヌクレオチド」とは、連結されたヌクレオシドのポリマーを意味し、ヌクレオシドのそれぞれは互いに依存することなく修飾されていても無修飾でもよい。
「非経口投与」とは、注射または注入による投与を意味する。非経口投与には、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または頭蓋内投与、例えば髄腔内投与もしくは脳室内投与が含まれる。
「ペプチド」とは、アミド結合による少なくとも２つのアミノ酸の連結で形成される分子を意味する。限定されることはないが、明細書で使用するとき、ペプチドはポリペプチド及びタンパク質を指す。
「医薬品」とは、個体へ投与した場合に治療的有用性を提供する物質を意味する。例えば、特定の実施形態においてＧＨＲを標的とする共役アンチセンスオリゴヌクレオチドは医薬品である。
「医薬組成物」とは、個体への投与に適した物質の混合物を意味する。例えば医薬組成物は１つ以上の活性医薬剤と滅菌水溶液とを含みうる。
「薬剤的に許容される塩」とは、アンチセンス化合物の生理学的かつ薬剤的に許容される塩、すなわち、親オリゴヌクレオチドの望ましい生物学的活性を保持しており、しかも望ましくない毒性効果をそこに付与しない塩を意味する。
「リン連結基」とは、リン原子を含む連結基を意味する。リン連結基には、以下の式を有する基が含まれるが、これに限定されない：
式中、
Ｒａ及びＲｄはそれぞれ、独立して、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、ＮＨ、またはＮＪ１であり、Ｊ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒｂは、ＯまたはＳであり、
Ｒｃは、ＯＨ、ＳＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、アミノ、または置換アミノであり、
Ｊ１は、Ｒｂは、ＯまたはＳである。
リン連結基には、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホネート、ホスホラミデート、ホスホロチオアミデート、チオノアルキルホスホネート、ホスホトリエステル、チオノアルキルホスホトリエステル、及びボラノホスフェートが含まれるが、これらに限定されない。
「リン連結部」とは、リン酸ジエステル結合が１個の非架橋酸素原子を硫黄原子に置き換えることによって修飾されるヌクレオシド間の連結部を意味する。ホスホロチオエート連結部は修飾ヌクレオシド間連結部である
「一部分（ｐｏｒｔｉｏｎ）」とは、核酸の、所定の数の連続する（すなわち連結された）核酸塩基を意味する。特定の実施形態では、一部分が、標的核酸の、所定の数の連続する核酸塩基である。特定の実施形態では、一部分が、アンチセンス化合物の、所定の数の連続する核酸塩基である。
「防止」とは、数分から無限までのある期間にわたって、疾患、障害、または状態の発症、発生または進行を遅延させまたは未然に防ぐことを指す。防止は、疾患、障害、または状態が発生するリスクを低減することも意味する。
「プロドラッグ」とは、不活性な形態または活性が低い形態の化合物であって、対象に投与した場合に、代謝されることで活性なまたはより活性な化合物（例えば薬物）を形成するものを意味する。
「予防有効量」とは、動物に予防的利益または防止的利益を与える医薬品の量を指す。
「保護基」とは、当業者に知られている任意の化合物または保護基を意味する。保護基の非限定的な例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，ＩＳＢＮ０−４７１−６２３０１−６，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ，ニューヨーク、に見いだすことができる。
「領域」は、少なくとも１つの同定可能な構造、機能、または特徴を有する標的核酸の一部分と定義される。
「リボヌクレオチド」とは、ヌクレオチドの糖部分の２’位にヒドロキシを有するヌクレオチドを意味する。リボヌクレオチドは、任意の種々の置換基によって修飾しうる。
「ＲＩＳＣベースのアンチセンス化合物」とは、当該アンチセンス化合物のアンチセンス活性の少なくとも一部がＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に起因するアンチセンス化合物を意味する。
「ＲＮａｓｅ Ｈベースのアンチセンス化合物」とは、当該アンチセンス化合物のアンチセンス活性の少なくとも一部が、標的核酸へのアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションと、それに続くＲＮａｓｅ Ｈによる標的核酸の切断に起因する、アンチセンス化合物を意味する。
「塩」とは、アンチセンス化合物の生理学的かつ薬剤的に許容される塩、すなわち、親オリゴヌクレオチドの望ましい生物学的活性を保持しており、しかも望ましくない毒性効果をそこに付与しない塩を意味する。
「セグメント」は、標的核酸内の領域のより小さい部分または下位部分と定義される。
「別個の領域」とは、オリゴヌクレオチドの複数の部分であって、任意の隣接する部分の化学修飾または化学修飾のモチーフが、当該別個の領域を互いに区別することを可能にする少なくとも１つの相違点を含むものを意味する。
「配列モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその一部分に沿って配置された核酸塩基のパターンを意味する。別段の表示がある場合を除き、配列モチーフは化学修飾には依存しないので、化学修飾なしを含めて、化学修飾の任意の組み合わせを有しうる。
「副作用」とは、所望の効果以外の治療に起因する生理学的疾患及び／または症状を意味する。特定の実施形態において、副作用は注射部位反応、肝臓機能検査異常、腎臓機能検査異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、ミオパシー、及び倦怠感を挙げることができる。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの増加は、肝毒性または肝臓機能異常を示しうる。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性または肝臓機能異常を示しうる。
「一本鎖」とは、その配列にハイブリダイズされず、かつ安定な自己二本鎖を形成するのに十分な自己相補性が欠くオリゴマー化合物を意味する。
本明細書にいう「部位」は、標的核酸内のユニークな核酸塩基位置と定義される。
「進行を減速する」とは、該疾患の発達の減少を意味する。
「特異的にハイブリダイズ可能」とは、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸との間に、特異的結合が望まれる条件下で、すなわちインビボアッセイや治療的処置の場合は生理的条件下で、所望の効果を誘導すると共に非標的核酸には最小限の効果しか呈さないかまたは効果を全く呈さないような、十分な相補度を有するアンチセンス化合物を指す。
「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」または「ストリンジェントな条件」とは、オリゴマー化合物がそのターゲット配列にはハイブリダイズするが、他の配列にはごくわずかな数の配列にしかハイブリダイズしないような条件を指す。
「対象」とは、処置または治療のために選択されたヒトまたはヒト以外の動物を意味する。
「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」及び「置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ ｇｒｏｕｐ）」とは、指名された親化合物の原子または基を置換する原子または基を意味する。例えば、修飾ヌクレオシドの置換基は、天然に存在するヌクレオシドに見られる原子または基とは異なる任意の原子または基である（例えば修飾２’−置換基はヌクレオシドの２’位にあるＨまたはＯＨ以外の任意の原子または基である）。置換基は、保護されていても保護されていなくてもよい。特定の実施形態では、本開示の化合物は、親化合物の１つの位置または２つ以上の位置に置換基を有する。置換基は、他の置換基でさらに置換されていてもよく、親化合物に直接結合またはアルキル基もしくはヒドロカルビル基などの連結基を介して結合してもよい。
同様に、本明細書において使用する場合、化学官能基に関して「置換基」とは、指名された官能基に通常存在する原子または原子団とは異なる原子または原子団を意味する。特定の実施形態では、置換基が官能基の水素原子を置き換える（例えば特定の実施形態では、置換メチル基の置換基は、無置換メチル基の水素原子のうちの１つを置き換える水素以外の原子または基である）。別段の表示がある場合を除き、置換基としての使用に適する基には、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル（−Ｃ（Ｏ）Ｒａａ）、カルボキシル（−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒａａ）、脂肪族基、脂環式基、アルコキシ、置換オキシ（−Ｏ−Ｒａａ）、アリール、アラルキル、複素環式ラジカル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アミノ（−Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、イミノ（＝ＮＲｂｂ）、アミド（−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒａａ）、アジド（−Ｎ３）、ニトロ（−ＮＯ２）、シアノ（−ＣＮ）、カルバミド（−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａａ）、ウレイド（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、チオウレイド（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒｂｂ）−（Ｒｃｃ））、グアニジニル（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、アミジニル（−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（＝ＮＲｂｂ）（Ｒａａ））、チオール（−ＳＲｂｂ）、スルフィニル（−Ｓ（Ｏ）Ｒｂｂ）、スルホニル（−Ｓ（Ｏ）２Ｒｂｂ）、及びスルホンアミジル（−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｓ−（Ｏ）２Ｒｂｂ）が含まれるが、これらに限定されない。式中、各Ｒａａ、Ｒｂｂ、及びＲｃｃは、独立して、Ｈ、場合によっては連結された化学官能基、またはさらなる置換基であり、好ましいものとしては、アルキル、アルケニル、アルキニル、脂肪族、アルコキシ、アシル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、脂環式、複素環式、及びヘテロアリールアルキルが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載した化合物内で選択される置換基は、再帰的に（ｔｏ ａ ｒｅｃｕｒｓｉｖｅ ｄｅｇｒｅｅ）存在する。
「置換糖部分」とは、天然に存在する糖部分ではないフラノシルを意味する。置換糖部分には、２’位、３’位、５’位及び／または４’位に置換基を含むフラノシルなどがあるが、これらに限定されない。特定の置換糖部分は二環式糖部分である。
「糖部分」とは、ヌクレオシドの天然に存在する糖部分または修飾糖部分を意味する。
「糖モチーフ」とは、オリゴヌクレオチドまたはその一領域における糖修飾のパターンを意味する。
「糖代用物」とは、フラノシルを含まない構造であって、しかも、結果として生じるヌクレオシドサブユニットを一つに連結しかつ／または他のヌクレオシドに連結することで相補的なオリゴマー化合物にハイブリダイズすることができるオリゴマー化合物を形成することができるように、ヌクレオシドの天然に存在する糖部分を置き換えることができる構造を意味する。そのような構造には、フラノシルとは異なる数の原子を含むか（例えば４、６、または７員環）、または非酸素原子（例えば炭素、硫黄、もしくは窒素）によるフラノシルの酸素の置き換え、または原子数の変化と酸素の置き換えとの両方が含まれる。そのような構造は、置換糖部分（例えば場合によってはさらなる置換基を含む６員炭素環式二環式糖代用物）について記載したものに対応する置換も含みうる。糖代用物は、さらに複雑な糖の代替物（例えばペプチド核酸の非環系）も包含する。糖代用物には、モルホリノ、シクロヘキセニル及びシクロヘキシトールなどがあるが、これらに限定されない。
「標的」とは、調節することが望まれるタンパク質を指す。
「標的遺伝子」とは、標的をコードする遺伝子を指す。
「ターゲティング（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ）」または「ターゲットとされる（ｔａｒｇｅｔｅｄ）」とは、標的核酸に特異的にハイブリダイズして所望の効果を誘導することになるアンチセンス化合物を設計及び選択するプロセスを意味する。
「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」、「標的ＲＮＡ転写産物」及び「核酸標的」は、いずれも、アンチセンス化合物の標的となりうる核酸を意味する。「標的核酸」とは、アンチセンス化合物が、核酸分子にハイブリダイズして所望のアンチセンス活性をもたらすことが意図される、その核酸分子を意味する。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的核酸と生理的条件下でハイブリダイズを可能にするのに十分な相補性を有している。
「標的領域」とは、標的核酸のうち、１つ以上のアンチセンス化合物の標的となる部分を意味する。
「標的セグメント」とは、標的核酸のうち、アンチセンス化合物が標的とするヌクレオチドの配列を意味する。「５’標的部位」とは、標的セグメントの最も５’側のヌクレオチドを指す。「３’標的部位」とは、標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを指す。
「末端基」とは、オリゴヌクレオチドの３’末端もしくは５’末端のいずれか、またはそれらの両方に結合した１つ以上の原子を意味する。特定の実施形態では、末端基が共役基である。特定の実施形態では、末端基が１つ以上の末端基ヌクレオシドを含む。
「末端ヌクレオシド間連結部」とは、オリゴヌクレオチドまたはその所定の領域の最後の２つのヌクレオシド間の連結部を意味する。
「治療有効量」とは、個体に治療的利益を与える医薬剤の量を意味する。
「同一タイプの修飾」とは、無修飾を含めて、相互に同じ修飾を指す。したがって、例えば、２つの非修飾ＤＮＡヌクレオシドは、ＤＮＡヌクレオシドが修飾されていなくても「同一タイプの修飾」を有している。そのような同一タイプの修飾を有するヌクレオシドは異なる核酸塩基を含んでもよい。
「処置する」とは、動物における疾患、障害、または状態の改変または改善を達成するために、前記動物に医薬組成物を投与することを指す。特定の実施形態では、１つ以上の医薬組成物を前記動物に投与することができる。
ヌクレオシドに関しての「修飾のタイプ」またはヌクレオシドの「タイプ」とは、ヌクレオシドの化学的修飾を意味し、修飾及び非修飾ヌクレオシドを含む。従って、他に明示がない限り、「最初の修飾タイプをもつヌクレオシド」は非修飾ヌクレオシドでもよい。
「無修飾」核酸塩基または「天然に存在する核酸塩基」とは、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然に存在する複素環の核酸塩基、プリン塩基のアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）とピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５−メチルＣを含む）及びウラシル（Ｕ）を意味する。
「無修飾ヌクレオチド」とは、天然に存在する核酸塩基、糖部分及びヌクレオシド間連結部で構成されるヌクレオシドを意味する。特定の実施形態では、無修飾ヌクレオチドがＲＮＡヌクレオチド（すなわちβ−Ｄ−リボヌクレオシド）またはＤＮＡヌクレオチド（すなわちβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド）である。
「上流」とは、核酸の５’端またはＮ末端に向かっての相対方向を意味する。
「ウイングセグメント」とは、阻害活性の上昇、標的核酸に対する結合親和性の増大または、インビボヌクレアーゼによる分解耐性等のオリゴヌクレオチド特性を付与するように修飾された複数のヌクレオシドを意味する。
特定の実施形態
特定の実施形態は、成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）発現を阻害するための方法、化合物及び組成物を提供する。
特定の実施形態は、ＧＨＲ核酸を標的とするアンチセンス化合物を提供する。特定の実施形態では、ＧＨＲ核酸がＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿０００１６３．４（配列番号１として本明細書に組み込まれる）、ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６（配列番号２として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号Ｘ０６５６２．１（配列番号３として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＤＲ００６３９５．１（配列番号４として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＤＢ０５２０４８.１（配列番号５として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＦ２３０８００．１（配列番号６として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＡ３９８２６０．１の相補鎖（配列番号７として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＢＣ１３６４９６．１（配列番号８として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２３９９．２（配列番号９として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４００．２（配列番号１０として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０１.３（配列番号１１として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０２．２（配列番号１２として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０３．２（配列番号１３として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０４.２（配列番号１４として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０５．２（配列番号１５として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０６．２（配列番号１６として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４６０．１（配列番号１７として本明細書に組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４６１．１（配列番号１８として本明細書に組み込まれる）、またはＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４６２．１（配列番号１９として本明細書に組み込まれる）に示される配列を有する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号２０〜２２９５の任意の核酸塩基配列の少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号２０〜２２９５の任意の核酸塩基配列の少なくとも９個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号２０〜２２９５の任意の核酸塩基配列の少なくとも１０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号２０〜２２９５の任意の核酸塩基配列の少なくとも１１個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号２０〜２２９５の任意の核酸塩基配列の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号２０〜２２９５の任意の核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは配列番号２０〜２２９５の任意の１つの核酸塩基配列からなる。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオチド３０〜５１、６３〜８２、１０３〜１１８、１４３〜１５９、１６４〜１９７、２０６〜２５９、３６１〜３８８、５５４〜５８５、６２５〜７００、７３６〜７７６、８６２〜８８７、９２３〜９７３、９７８〜９９６、１１２７〜１１４２、１１７０〜１１９５、１３１７〜１３４７、１３６０〜１３８３、１４１８〜１４４９、１４９２〜１５０７、１５２４〜１５４８、１５９７〜１６３４、１６４１〜１６６０、１６８３〜１６９８、１７４４〜１７６８、１８２７〜１８６０、１９４９〜２００２、２０７２〜２０９２、２０９５〜２１１０、２３０６〜２３２１、２６６５〜２６８３、２６８５〜２７１９、２７３９〜２７７０、２８５９〜２８８０、２９４１〜２９６０、２９６３〜２９７８、３０３７〜３０５２、３２０５〜３２５２、３３０６〜３３３２、３３７１〜３３８６、３５１８〜３５４２、３９７５〜３９９０、４０４１〜４０８７、４４１８〜４４４６、４５２８〜４５４６、７２３１〜７２４６、７５７０〜７５８５、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１１８０８、１２２１４〜１２２２９、１２４７４〜１２４８９、１２９０５〜１２９２０、１３４００〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４５４０〜１４５５５、１５２６４〜１５２７９、１５８４９〜１５８６４、１６５３０〜１６５４５、１７３７７〜１７３９２、１７５８１〜１７５９６、１７９４３〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８６５１、１９２５６〜１９２７１、１９８１４〜１９８２９、２０３６５〜２０３８０、２０９７９〜２０９９４、２１５６６〜２１５８１、２２１５０〜２２１６５、２２８０３〜２２８１８、２９０４９〜２９０６４、２９５５４〜２９５６９、３０２４５〜３０２６０、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３０９３０、３１４６８〜３１４８３、３２３６６〜３２３８１、３２８９７〜３２９１２、３３１８７〜３３２０２、３３７８０〜３３７９５、３４４０７〜３４４２２、３４８４６〜３４８６１、３５６６９〜３５６８４、３６３１２〜３６３２７、３６８１２〜３６８２７、３７５０４〜３７５１９、３８８４１〜３８８５６、４０２５０〜４０２６５、４０７０６〜４０７２１、４０９２２〜４０９３７、４１４２４〜４１４３９、４１９９９〜４２０１４、４２４８１〜４２４９６、４２７００〜４２７１５、４３２９１〜４３３０６、４３５００〜４３５１５、４３９４７〜４３９６２、４４４４８〜４４４６３、４５１６２〜４５１７７、４６０１０〜４６０２５、４６４７６〜４６４９１、４７４４７〜４７４６２、４７７５２〜４７７６７、４８００１〜４８０１６、４８４２３〜４８４３８、５０１９５〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５１１０４〜５１１１９、５１７５６〜５１７７１、５２０１５〜５２０３０、５２２３０〜５２２４５、５２５８８〜５２６０３、５３５３２〜５３５４７、または５４６４５〜５４６６０内で相補的な１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１に対して少なくとも９０％相補的である。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１の核酸塩基３０〜５１、６３〜８２、１０３〜１１８、１４３〜１５９、１６４〜１９７、２０６〜２５９、３６１〜３８８、５５４〜５８５、６２５〜７００、７３６〜７７６、８６２〜８８７、９２３〜９７３、９７８〜９９６、１１２７〜１１４２、１１７０〜１１９５、１３１７〜１３４７、１３６０〜１３８３、１４１８〜１４４９、１４９２〜１５０７、１５２４〜１５４８、１５９７〜１６３４、１６４１〜１６６０、１６８３〜１６９８、１７４４〜１７６８、１８２７〜１８６０、１９４９〜２００２、２０７２〜２０９２、２０９５〜２１１０、２３０６〜２３２１、２６６５〜２６８３、２６８５〜２７１９、２７３９〜２７７０、２８５９〜２８８０、２９４１〜２９６０、２９６３〜２９７８、３０３７〜３０５２、３２０５〜３２５２、３３０６〜３３３２、３３７１〜３３８６、３５１８〜３５４２、３９７５〜３９９０、４０４１〜４０８７、４４１８〜４４４６、４５２８〜４５４６、７２３１〜７２４６、７５７０〜７５８５、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１１８０８、１２２１４〜１２２２９、１２４７４〜１２４８９、１２９０５〜１２９２０、１３４００〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４５４０〜１４５５５、１５２６４〜１５２７９、１５８４９〜１５８６４、１６５３０〜１６５４５、１７３７７〜１７３９２、１７５８１〜１７５９６、１７９４３〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８６５１、１９２５６〜１９２７１、１９８１４〜１９８２９、２０３６５〜２０３８０、２０９７９〜２０９９４、２１５６６〜２１５８１、２２１５０〜２２１６５、２２８０３〜２２８１８、２９０４９〜２９０６４、２９５５４〜２９５６９、３０２４５〜３０２６０、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３０９３０、３１４６８〜３１４８３、３２３６６〜３２３８１、３２８９７〜３２９１２、３３１８７〜３３２０２、３３７８０〜３３７９５、３４４０７〜３４４２２、３４８４６〜３４８６１、３５６６９〜３５６８４、３６３１２〜３６３２７、３６８１２〜３６８２７、３７５０４〜３７５１９、３８８４１〜３８８５６、４０２５０〜４０２６５、４０７０６〜４０７２１、４０９２２〜４０９３７、４１４２４〜４１４３９、４１９９９〜４２０１４、４２４８１〜４２４９６、４２７００〜４２７１５、４３２９１〜４３３０６、４３５００〜４３５１５、４３９４７〜４３９６２、４４４４８〜４４４６３、４５１６２〜４５１７７、４６０１０〜４６０２５、４６４７６〜４６４９１、４７４４７〜４７４６２、４７７５２〜４７７６７、４８００１〜４８０１６、４８４２３〜４８４３８、５０１９５〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５１１０４〜５１１１９、５１７５６〜５１７７１、５２０１５〜５２０３０、５２２３０〜５２２４５、５２５８８〜５２６０３、５３５３２〜５３５４７、または５４６４５〜５４６６０のうちの長さが等しい部分に１００％相補的な少なくとも８個の連続する核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列は、配列番号１に対して相補的である。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド２５７１〜２５８６、２８６７〜３０５９、３０９７〜３１１６、３３４１〜３６９５、４０２４〜４０３９、４４４６〜４８９４、５３９２〜５８１７、６１２８〜６２６５、６４９９〜６８９０、７２３１〜７２４６、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１０６６０〜１０６７９、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１２２２９、１２４６９〜１２９２０、１３３５１〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４３６１〜１４５５５、１４９６５〜１５２７９、１５８４９〜１６００１、１６２５３〜１６２７２、１６４４７〜１６５４５、１７１３０〜１７１４９、１７３７７〜１７６６９、１７９２７〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８７７３、１９６６１〜１９９１８、２０２８８〜２０４７０、２０９７９〜２０９９４、２１２１５〜２１６０６、２１８２０〜２１８３７、２２１５０〜２２１６５、２２５１８〜２２５３６、２２８０３〜２２８１８、２６４９４〜２６５２２、２９０４９〜２９０６９、２９３２３〜２９４８９、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３１１９１、３１４６８〜３１４８３、３２３６３〜３２３８２、３２８２７〜３３２０２、３３６３５〜３３７９５、３４１３８〜３４１５７、３４４０７〜３４４２２、３４８４５〜３４８６４、３５４６６〜３５４８５、３５６６９〜３５６８４、３６０２３〜３６０４２、３６２６６〜３６３２７、３６７２１〜３６８２７、３７０３２〜３７１３０、３７２７６〜３７２９５、３７５０４〜３７６７５、３８０９４〜３８１１８、３８８４１〜３８８５６、３９７１６〜４０５３８、４０７０６〜４０９３７、４１１６４〜４１１８３、４１３４２〜４１４３９、４２１４１〜４２１６４、４２７００〜４２７６０、４３１７３〜４３５３７、４３７６５〜４６０２５、４６４７６〜４６５３２、４８４２３〜４８４３８、５００７２〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５０７１９〜５１２３４、５１７４７〜５１７９７、５２０１５〜５２１４３、５２２３０〜５２２４５、５２５７３〜５２６５２、５３４６６〜５４６６０、５４８８６〜５４９０１、６３７５１〜６４６６２、６４８８２〜６５０９９、６５３６３〜６５３７８、６５６００〜６５６１５、６５９８８〜６６１８３、６６５６６〜６６５８１、６６９７８〜６７０８０、６７２５１〜６７２７０、６７６６２〜６７９２９、６８７２７〜６８７４２、６９２０３〜６９２４２、６９５６５〜６９６２０、６９８８９〜７０１４５、７０３５２〜７０５８４、７０９２５〜７１０７１、７１３１４〜７１３２９、７１６１７〜７１７６９、７２１０７〜７２２４１、７２５８４〜７２６７０、７３０６１〜７３０７６、７３３５０〜７３３６９、７３６８９〜７３７２３、７４１０７〜７４１３１、７４３１７〜７４５５７、７４９４７〜７５００９、７５１９２〜７５２０７、７５９７９〜７６０６６、７６４１０〜７７０９５、７７２９２〜７７３０７、７７６３８〜７７８６９、７８１２２〜７８３２６、７９００６〜７９０２１、７９４７８〜７９５０５、８０２７７〜８０２９２、８０５７５〜８０９３９、８１２０７〜８１２２２、８１５２４〜８１５４３、８１７６１〜８１７７６、８２２３３〜８２２４８、８２７３８〜８３１９８、８３３３０〜８３４１６、８３８８４〜８４０６３、８４３８１〜８５９６４、８６２２０〜８６３９２、８６５５４〜８６６５５、８６９０１〜８６９２０、８７１８１〜８７２６２、８８０６３〜８８０８２、８８２９３〜８８３０８、８８６０５〜８８９６７、８９１６０〜８９１７５、８９９４０〜９０２５５、９０４７３〜９０５２８、９１０７３〜９１０８８、９１２７３〜９１２９２、９１６４７〜９１６６２、９１９３０〜９２１２６、９２３５６〜９２３７１、９３１９０〜９３４４３、９３７６２〜９４１１１、９４３７４〜９４３８９、９４５８１〜９４６５３、９４８３９〜９４８５８、９５２９２〜９５５８３、９５８２９〜９５８４４、９６１３７〜９６５０３、９６７９３〜９７０１３、９７５３９〜９７５５４、９７８００〜９７８８９、９８１３２〜９８１５１、９８６２４〜９８６７２、９８８１０〜９９１１５、９９２５８〜９９２７３、９９４７８〜９９５０３、９９７９１〜９９８５８、１００２８１〜１００３００、１００４０６〜１００４２１、１００７４２〜１００８２８、１０１０８０〜１０１１０３、１０１２４２〜１０１３２０、１０１７８８〜１０１９０６、１０２５４９〜１０２５６８、１０３５６６〜１０３６２５、１０４０６７〜１０４０８６、１０４２７７〜１０４８５８、１０５２５５〜１０５２７４、１０６１４７〜１０６３６４、１０６６３２〜１０６６４７、１０６９６４〜１０７７３５、１０８５１４〜１０８７８８、１０９３３６〜１０９５０５、１０９８４９〜１０９８６４、１１０４０３〜１１０４４２、１１０７０１〜１１０９７４、１１１２０３〜１１１３２２、１１２０３０〜１１２０４９、１１２４９９〜１１２５１４、１１２８４２〜１１２８６１、１１３０２８〜１１３０５６、１１３６４６〜１１３６６５、１１３８９６〜１１３９１１、１１４４４６〜１１４４６５、１１５０８７〜１１５１０６、１１９２６９〜１１９２８４、１１９６５９〜１１９７０３、１２０３７６〜１２０４９７、１２０７３８〜１２０８４５、１２１２０９〜１２１２２８、１２１８２３〜１２２０１３、１２２１８０〜１２２１９９、１２２５８８〜１２２７７０、１２３０３１〜１２３０５０、１２３１５２〜１２３１６７、１２３６７１〜１２４０５５、１２４４１３〜１２４６０８、１２５１７８〜１２５１９７、１２５５３３〜１２５６１６、１２６３５７〜１２６４３４、１２６７３６〜１２６７５１、１２６９９８〜１２７２３６、１２７４５４〜１２７６８２、１２８４６７〜１２８４８２、１２８８１３〜１２９１１１、１２９９７６〜１３００１３、１３０３０８〜１３０３２３、１３１０３６〜１３１０５６、１３１２８６〜１３１３０５、１３１６７６〜１３１６９１、１３２１７１〜１３２５１７、１３３１６８〜１３３２４１、１３３５２２〜１３３８７７、１３４０８６〜１３４１０１、１３４２４０〜１３４２５９、１３４４４１〜１３４６１７、１３５０１５〜１３５０３０、１３５４３１〜１３５５１９、１３５８１８〜１３５８７４、１３６１１１〜１３６１３０、１３６２８２〜１３６５９５、１３６９９６〜１３７１５２、１３７３７２〜１３７３８７、１３７７５０〜１３７７６５、１３８０４８〜１３８０６７、１３８７８２〜１３９８４０、１４０３４３〜１４０３５８、１４０５９３〜１４０７０１、１４１１１６〜１４１１３１、１４１５９１〜１４１７１９、１４２１１３〜１４２３４２、１４３０２１〜１４３０４８、１４３１８５〜１４３４８６、１４３８３６〜１４４１０９、１４４５５８〜１４４６５０、１４４９９０〜１４５０７８、１４５４２８〜１４５５２５、１４５９３７〜１４５９５２、１４６２３５〜１４６３８６、１４７０２８〜１４７０４３、１４７２５９〜１４７２８４、１４７６７１〜１４７６８６、１４８０５９〜１４８１５４、１４８５６４〜１４８５７９、１４８９０４〜１４９０８４、１４９４９１〜１４９５０６、１４９７８７〜１４９８７７、１５０２３６〜１５０２５１、１５０５８８〜１５１１３９、１５１３７３〜１５１６５９、１５２２０１〜１５２３８８、１５２５４９〜１５２７７１、１５３００１〜１５３０２６、１５３３４９〜１５３３６４、１５３８３１〜１５４１１２、１５４１７１〜１５４１８６、１５４５０２〜１５４５２１、１５４７２４〜１５４８２８、１５５２８３〜１５５３０４、１５５５９１〜１５５６１６、１５５８８９〜１５５９９２、１５６２３３〜１５６６１２、１５６８４７〜１５６９０７、１５７１９８〜１５７２２３、１５７３３０〜１５７３４９、１５７５５２〜１５７５６７、１５７９２７〜１５８０２９、１５８５４２〜１５８６３１、１５９２１６〜１５９２６７、１５９５３９〜１５９７９３、１６０３５２〜１６０４２９、１６０８１２〜１６０８２７、１６１２４８〜１６１２６７、１６１４６１〜１６１６０７、１６１８２１〜１６１９６９、１６２０６４〜１６２０８３、１６２１３２〜１６２１４７、１６２５３１〜１６２７７０、１６３０１９〜１６３５５７、１６４８３９〜１６５０５９、１６５４１９〜１６５５７５、１６５８５６〜１６５８７５、１６６２４１〜１６６４５０、１６６８３７〜１６６８５２、１６７１０７〜１６７１２２、１６８００４〜１６８０１９、１６８７６０〜１６８８２３、１６９０６２〜１６９０９２、１６９１３４〜１６９１５３、１６９６０１〜１６９７１１、１７００８１〜１７０２９１、１７０４０７〜１７０４２６、１７０７０３〜１７０８１４、１７１０２１〜１７１０３６、１７１２０７〜１７１２２６、１７１４３１〜１７１５６８、１７１９２６〜１７１９４５、１７２４４７〜１７２４６２、１７２７３３〜１７２９５６、１７３０４５〜１７３７５６、１７４１２２〜１７４８８５、１７５０１４〜１７７８３０、１７８８９５〜１８０５３９、１８１５１４〜１８７６４４、１８７８５７〜１８９９０４、１９０１０９〜１９４１５９、１９４４２５〜１９５７２３、１９６５３６〜１９６８７３、１９７３２６〜１９７９６１、１９８１４５〜１９８１７０、１９８３０７〜１９８３８１、１９８７１５〜１９９００７、１９９５０６〜１９９５６３、１９９８１６〜１９９８３８、２００２４９〜２００６３５、２０１２５８〜２０１８６１、２０２０７９〜２０２０９４、２０２３８２〜２０２７１７、 ２０３０９８〜２０３９３４、２０４１８１〜２０４７４０、２０５５４９〜２０５９１５、２０６４１２〜２０６７６４、２０７５１０〜２０７５３２、２０９９９９〜２１００１４、２１０１８９〜２１０２９６、２１０５０２〜２１０５８３、２１０９２０〜２１１４１８、２１１８３６〜２１２２２３、２１２６０６〜２１２８１６、２１３０２５〜２１３０４４、２１３４２５〜２１３４４０、２１３８２５〜２１３９３３、２１４４７９〜２１４４９８、２１４６２２〜２１４６４７、２１４８８４〜２１４９５１、２１５４４６〜２１５５０８、２１５９３２〜２１５９５１、２１６１９２〜２１７５９５、２１８１３２〜２１８２４８、２１８５２６〜２１８５４１、２１８７３４〜２１２１９０３７、２１９３４２〜２１９６３３、２１９８８６〜２２０７０５、２２１０４４〜２２１０５９、２２１４８３〜２２１６０７、２２１９４７〜２２１９６２、２２２５６９〜２２２５８４、２２２９１４〜２２２９９８、２２３４３６〜２２３４５１、２２３９４８〜２２４１２２、２２４４０９〜２２４４３０、２２４７１７〜２２４７６９、２２５１３３〜２２５１４８、２２５４３６〜２２５７６１、２２６７８５〜２２６８９８、２２７０２５〜２２７０４０、２２７２１８〜２２７２５１、２２７４８５〜２２７５００、２２７９１４〜２２８８３７、２２９１７４〜２２９１８９、２２９４２３〜２２９４３８、２２９６１５〜２２９６４０、２３００４２〜２３００５７、２３０３１３〜２３０５９５、２３１２１８〜２３１３４５、２３１８１７〜２３２０３７、２３２０８８〜２３２４０８、２３２８２３〜２３２８４８、２３２８８４〜２３２８９９、２３３２１０〜２３３２２５、２３３６２３〜２３３６４６、２３４４４７〜２３４４６６、２３４８７６〜２３４９１８、２３５２５８〜２３５３２８、２３５７７０〜２３５７８５、２３６０７１〜２３６２１３、２３６６８４〜２３７１９６、２３７５８５〜２３７６９８、２３７９４９〜２３７５５７、２４４８７３〜２４４８９７、２４５３１９〜２４５３３４、２４５７０１〜２４５７８０、２４６１５２〜２４６５２３、２４６９３６〜２４７０３１、２４７２０３〜２４７２４０、２４７４３１〜２４７４５０、２４７
６４４〜２４７６５９、２４８２２３〜２４８３６３、２４８６９４〜２４８７６２、２４９４９４〜２４９５０９、２５０００１〜２５００２０、２５０６９３〜２５０７０８、２５１２１４〜２５１２３３、２５１６０１〜２５１６３７、２５１９５０〜２５２０６０、２５２６６５〜２５２６８０、２５２８３８〜２５２８６３、２５３１４０〜２５３１６６、２５３５９４〜２５３８１９、２５４０３６〜２５４０８３、２５４２４６〜２５４３４５、２５４６４１〜２５４６６０、２５４９０５〜２５４９２０、２５５３９７〜２５５４２２、２５５６１８〜２５５６３３、２５５９９２〜２５６７０４、２５７０１８〜２５７０９２、２５７３１７〜２５７３３２、２５７８１８〜２５９３０５、２５９５００〜２５９５１５、２６１２９４〜２６１６５６、２６２０２１〜２６２０３６、２６２４５３〜２６２７７９、２６３３３８〜２６６５１８、２６６８６１〜２６７１３１、２６７３７５〜２６８０５１、２６８３６６〜２６９４４７、２７００３８〜２７１８５０、２７１９５０〜２７１９６９、２７２６３１〜２７４１４５、２７４２０５〜２７５７４７、２７５８０８〜２７６６３６、２７６９３２〜２７７０６４、２７７３９１〜２７８３８０、２７８９３２〜２７９０６３、２７９３０３〜２８１００１、２８１５８７〜２８１６１０、２８２２２９〜２８３６６８、２９００３５〜２９０４７４、２９０９２４〜２９２５５０、２９２８６０〜２９４４０８、２９５４７５〜２９７０１２、２９７５８７〜２９８１１５、２９８１６１〜２９８４１８、２９８４８９〜２９８７３８、２９９０８２〜２９９１８７、２９９２７６〜２９９６６９、２９９７２３〜２９９７４９、２９９７８８〜３００５０４、または３００８３５〜３０１２９５内で相補的な１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、該修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２に対して少なくとも９０％相補的である。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２の核酸塩基２５７１〜２５８６、２８６７〜３０５９、３０９７〜３１１６、３３４１〜３６９５、４０２４〜４０３９、４４４６〜４８９４、５３９２〜５８１７、６１２８〜６２６５、６４９９〜６８９０、７２３１〜７２４６、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１０６６０〜１０６７９、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１２２２９、１２４６９〜１２９２０、１３３５１〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４３６１〜１４５５５、１４９６５〜１５２７９、１５８４９〜１６００１、１６２５３〜１６２７２、１６４４７〜１６５４５、１７１３０〜１７１４９、１７３７７〜１７６６９、１７９２７〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８７７３、１９６６１〜１９９１８、２０２８８〜２０４７０、２０９７９〜２０９９４、２１２１５〜２１６０６、２１８２０〜２１８３７、２２１５０〜２２１６５、２２５１８〜２２５３６、２２８０３〜２２８１８、２６４９４〜２６５２２、２９０４９〜２９０６９、２９３２３〜２９４８９、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３１１９１、３１４６８〜３１４８３、３２３６３〜３２３８２、３２８２７〜３３２０２、３３６３５〜３３７９５、３４１３８〜３４１５７、３４４０７〜３４４２２、３４８４５〜３４８６４、３５４６６〜３５４８５、３５６６９〜３５６８４、３６０２３〜３６０４２、３６２６６〜３６３２７、３６７２１〜３６８２７、３７０３２〜３７１３０、３７２７６〜３７２９５、３７５０４〜３７６７５、３８０９４〜３８１１８、３８８４１〜３８８５６、３９７１６〜４０５３８、４０７０６〜４０９３７、４１１６４〜４１１８３、４１３４２〜４１４３９、４２１４１〜４２１６４、４２７００〜４２７６０、４３１７３〜４３５３７、４３７６５〜４６０２５、４６４７６〜４６５３２、４８４２３〜４８４３８、５００７２〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５０７１９〜５１２３４、５１７４７〜５１７９７、５２０１５〜５２１４３、５２２３０〜５２２４５、５２５７３〜５２６５２、５３４６６〜５４６６０、５４８８６〜５４９０１、６３７５１〜６４６６２、６４８８２〜６５０９９、６５３６３〜６５３７８、６５６００〜６５６１５、６５９８８〜６６１８３、６６５６６〜６６５８１、６６９７８〜６７０８０、６７２５１〜６７２７０、６７６６２〜６７９２９、６８７２７〜６８７４２、６９２０３〜６９２４２、６９５６５〜６９６２０、６９８８９〜７０１４５、７０３５２〜７０５８４、７０９２５〜７１０７１、７１３１４〜７１３２９、７１６１７〜７１７６９、７２１０７〜７２２４１、７２５８４〜７２６７０、７３０６１〜７３０７６、７３３５０〜７３３６９、７３６８９〜７３７２３、７４１０７〜７４１３１、７４３１７〜７４５５７、７４９４７〜７５００９、７５１９２〜７５２０７、７５９７９〜７６０６６、７６４１０〜７７０９５、７７２９２〜７７３０７、７７６３８〜７７８６９、７８１２２〜７８３２６、７９００６〜７９０２１、７９４７８〜７９５０５、８０２７７〜８０２９２、８０５７５〜８０９３９、８１２０７〜８１２２２、８１５２４〜８１５４３、８１７６１〜８１７７６、８２２３３〜８２２４８、８２７３８〜８３１９８、８３３３０〜８３４１６、８３８８４〜８４０６３、８４３８１〜８５９６４、８６２２０〜８６３９２、８６５５４〜８６６５５、８６９０１〜８６９２０、８７１８１〜８７２６２、８８０６３〜８８０８２、８８２９３〜８８３０８、８８６０５〜８８９６７、８９１６０〜８９１７５、８９９４０〜９０２５５、９０４７３〜９０５２８、９１０７３〜９１０８８、９１２７３〜９１２９２、９１６４７〜９１６６２、９１９３０〜９２１２６、９２３５６〜９２３７１、９３１９０〜９３４４３、９３７６２〜９４１１１、９４３７４〜９４３８９、９４５８１〜９４６５３、９４８３９〜９４８５８、９５２９２〜９５５８３、９５８２９〜９５８４４、９６１３７〜９６５０３、９６７９３〜９７０１３、９７５３９〜９７５５４、９７８００〜９７８８９、９８１３２〜９８１５１、９８６２４〜９８６７２、９８８１０〜９９１１５、９９２５８〜９９２７３、９９４７８〜９９５０３、９９７９１〜９９８５８、１００２８１〜１００３００、１００４０６〜１００４２１、１００７４２〜１００８２８、１０１０８０〜１０１１０３、１０１２４２〜１０１３２０、１０１７８８〜１０１９０６、１０２５４９〜１０２５６８、１０３５６６〜１０３６２５、１０４０６７〜１０４０８６、１０４２７７〜１０４８５８、１０５２５５〜１０５２７４、１０６１４７〜１０６３６４、１０６６３２〜１０６６４７、１０６９６４〜１０７７３５、１０８５１４〜１０８７８８、１０９３３６〜１０９５０５、１０９８４９〜１０９８６４、１１０４０３〜１１０４４２、１１０７０１〜１１０９７４、１１１２０３〜１１１３２２、１１２０３０〜１１２０４９、１１２４９９〜１１２５１４、１１２８４２〜１１２８６１、１１３０２８〜１１３０５６、１１３６４６〜１１３６６５、１１３８９６〜１１３９１１、１１４４４６〜１１４４６５、１１５０８７〜１１５１０６、１１９２６９〜１１９２８４、１１９６５９〜１１９７０３、１２０３７６〜１２０４９７、１２０７３８〜１２０８４５、１２１２０９〜１２１２２８、１２１８２３〜１２２０１３、１２２１８０〜１２２１９９、１２２５８８〜１２２７７０、１２３０３１〜１２３０５０、１２３１５２〜１２３１６７、１２３６７１〜１２４０５５、１２４４１３〜１２４６０８、１２５１７８〜１２５１９７、１２５５３３〜１２５６１６、１２６３５７〜１２６４３４、１２６７３６〜１２６７５１、１２６９９８〜１２７２３６、１２７４５４〜１２７６８２、１２８４６７〜１２８４８２、１２８８１３〜１２９１１１、１２９９７６〜１３００１３、１３０３０８〜１３０３２３、１３１０３６〜１３１０５６、１３１２８６〜１３１３０５、１３１６７６〜１３１６９１、１３２１７１〜１３２５１７、１３３１６８〜１３３２４１、１３３５２２〜１３３８７７、１３４０８６〜１３４１０１、１３４２４０〜１３４２５９、１３４４４１〜１３４６１７、１３５０１５〜１３５０３０、１３５４３１〜１３５５１９、１３５８１８〜１３５８７４、１３６１１１〜１３６１３０、１３６２８２〜１３６５９５、１３６９９６〜１３７１５２、１３７３７２〜１３７３８７、１３７７５０〜１３７７６５、１３８０４８〜１３８０６７、１３８７８２〜１３９８４０、１４０３４３〜１４０３５８、１４０５９３〜１４０７０１、１４１１１６〜１４１１３１、１４１５９１〜１４１７１９、１４２１１３〜１４２３４２、１４３０２１〜１４３０４８、１４３１８５〜１４３４８６、１４３８３６〜１４４１０９、１４４５５８〜１４４６５０、１４４９９０〜１４５０７８、１４５４２８〜１４５５２５、１４５９３７〜１４５９５２、１４６２３５〜１４６３８６、１４７０２８〜１４７０４３、１４７２５９〜１４７２８４、１４７６７１〜１４７６８６、１４８０５９〜１４８１５４、１４８５６４〜１４８５７９、１４８９０４〜１４９０８４、１４９４９１〜１４９５０６、１４９７８７〜１４９８７７、１５０２３６〜１５０２５１、１５０５８８〜１５１１３９、１５１３７３〜１５１６５９、１５２２０１〜１５２３８８、１５２５４９〜１５２７７１、１５３００１〜１５３０２６、１５３３４９〜１５３３６４、１５３８３１〜１５４１１２、１５４１７１〜１５４１８６、１５４５０２〜１５４５２１、１５４７２４〜１５４８２８、１５５２８３〜１５５３０４、１５５５９１〜１５５６１６、１５５８８９〜１５５９９２、１５６２３３〜１５６６１２、１５６８４７〜１５６９０７、１５７１９８〜１５７２２３、１５７３３０〜１５７３４９、１５７５５２〜１５７５６７、１５７９２７〜１５８０２９、１５８５４２〜１５８６３１、１５９２１６〜１５９２６７、１５９５３９〜１５９７９３、１６０３５２〜１６０４２９、１６０８１２〜１６０８２７、１６１２４８〜１６１２６７、１６１４６１〜１６１６０７、１６１８２１〜１６１９６９、１６２０６４〜１６２０８３、１６２１３２〜１６２１４７、１６２５３１〜１６２７７０、１６３０１９〜１６３５５７、１６４８３９〜１６５０５９、１６５４１９〜１６５５７５、１６５８５６〜１６５８７５、１６６２４１〜１６６４５０、１６６８３７〜１６６８５２、１６７１０７〜１６７１２２、１６８００４〜１６８０１９、１６８７６０〜１６８８２３、１６９０６２〜１６９０９２、１６９１３４〜１６９１５３、１６９６０１〜１６９７１１、１７００８１〜１７０２９１、１７０４０７〜１７０４２６、１７０７０３〜１７０８１４、１７１０２１〜１７１０３６、１７１２０７〜１７１２２６、１７１４３１〜１７１５６８、１７１９２６〜１７１９４５、１７２４４７〜１７２４６２、１７２７３３〜１７２９５６、１７３０４５〜１７３７５６、１７４１２２〜１７４８８５、１７５０１４〜１７７８３０、１７８８９５〜１８０５３９、１８１５１４〜１８７６４４、１８７８５７〜１８９９０４、１９０１０９〜１９４１５９、１９４４２５〜１９５７２３、１９６５３６〜１９６８７３、１９７３２６〜１９７９６１、１９８１４５〜１９８１７０、１９８３０７〜１９８３８１、１９８７１５〜１９９００７、１９９５０６〜１９９５６３、１９９８１６〜１９９８３８、２００２４９〜２００６３５、２０１２５８〜２０１８６１、２０２０７９〜２０２０９４、２０２３８２〜２０２７１７、２０３０９８〜２０３９３４、２０４１８１〜２０４７４０、２０５５４９〜２０５９１５、２０６４１２〜２０６７６４、２０７５１０〜２０７５３２、２０９９９９〜２１００１４、２１０１８９〜２１０２９６、２１０５０２〜２１０５８３、２１０９２０〜２１１４１８、２１１８３６〜２１２２２３、２１２６０６〜２１２８１６、２１３０２５〜２１３０４４、２１３４２５〜２１３４４０、２１３８２５〜２１３９３３、２１４４７９〜２１４４９８、２１４６２２〜２１４６４７、２１４８８４〜２１４９５１、２１５４４６〜２１５５０８、２１５９３２〜２１５９５１、２１６１９２〜２１７５９５、２１８１３２〜２１８２４８、２１８５２６〜２１８５４１、２１８７３４〜２１２１９０３７、２１９３４２〜２１９６３３、２１９８８６〜２２０７０５、２２１０４４〜２２１０５９、２２１４８３〜２２１６０７、２２１９４７〜２２１９６２、２２２５６９〜２２２５８４、２２２９１４〜２２２９９８、２２３４３６〜２２３４５１、２２３９４８〜２２４１２２、２２４４０９〜２２４４３０、２２４７１７〜２２４７６９、２２５１３３〜２２５１４８、２２５４３６〜２２５７６１、２２６７８５〜２２６８９８、２２７０２５〜２２７０４０、２２７２１８〜２２７２５１、２２７４８５〜２２７５００、２２７９１４〜２２８８３７、２２９１７４〜２２９１８９、２２９４２３〜２２９４３８、２２９６１５〜２２９６４０、２３００４２〜２３００５７、２３０３１３〜２３０５９５、２３１２１８〜２３１３４５、２３１８１７〜２３２０３７、２３２０８８〜２３２４０８、２３２８２３〜２３２８４８、２３２８８４〜２３２８９９、２３３２１０〜２３３２２５、２３３６２３〜２３３６４６、２３４４４７〜２３４４６６、２３４８７６〜２３４９１８、２３５２５８〜２３５３２８、２３５７７０〜２３５７８５、２３６０７１〜２３６２１３、２３６６８４〜２３７１９６、２３７５８５〜２３７６９８、２３７９４９〜２３７５５７、２４４８７３〜２４４８９７、２４５３１９〜２４５３３４、２４５７０１〜２４５７８０、２４６１５２〜２４６５２３、２４６９３６〜２４７０３１、２４７２０３〜２４７２４０、２４７４３１〜２４７４５０、２４７６４４
〜２４７６５９、２４８２２３〜２４８３６３、２４８６９４〜２４８７６２、２４９４９４〜２４９５０９、２５０００１〜２５００２０、２５０６９３〜２５０７０８、２５１２１４〜２５１２３３、２５１６０１〜２５１６３７、２５１９５０〜２５２０６０、２５２６６５〜２５２６８０、２５２８３８〜２５２８６３、２５３１４０〜２５３１６６、２５３５９４〜２５３８１９、２５４０３６〜２５４０８３、２５４２４６〜２５４３４５、２５４６４１〜２５４６６０、２５４９０５〜２５４９２０、２５５３９７〜２５５４２２、２５５６１８〜２５５６３３、２５５９９２〜２５６７０４、２５７０１８〜２５７０９２、２５７３１７〜２５７３３２、２５７８１８〜２５９３０５、２５９５００〜２５９５１５、２６１２９４〜２６１６５６、２６２０２１〜２６２０３６、２６２４５３〜２６２７７９、２６３３３８〜２６６５１８、２６６８６１〜２６７１３１、２６７３７５〜２６８０５１、２６８３６６〜２６９４４７、２７００３８〜２７１８５０、２７１９５０〜２７１９６９、２７２６３１〜２７４１４５、２７４２０５〜２７５７４７、２７５８０８〜２７６６３６、２７６９３２〜２７７０６４、２７７３９１〜２７８３８０、２７８９３２〜２７９０６３、２７９３０３〜２８１００１、２８１５８７〜２８１６１０、２８２２２９〜２８３６６８、２９００３５〜２９０４７４、２９０９２４〜２９２５５０、２９２８６０〜２９４４０８、２９５４７５〜２９７０１２、２９７５８７〜２９８１１５、２９８１６１〜２９８４１８、２９８４８９〜２９８７３８、２９９０８２〜２９９１８７、２９９２７６〜２９９６６９、２９９７２３〜２９９７４９、２９９７８８〜３００５０４、または３００８３５〜３０１２９５のうちの長さが等しい部分に１００％相補的な少なくとも８個の連続する核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号２に対して相補的である。特定の態様では、化合物が配列番号２のヌクレオチド１５５５９４〜１５５６１３、７２１０７〜７２１２６、１５３９２１〜１５３９４０、１５９２５２〜１５９２６７、２１３４２５〜２１３４４０、１５３００４〜１５３０１９、１５５５９７〜１５５６１２、２４８２３３〜２４８２４８内で相補的な１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは、１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号２０〜２２９５の任意の１つの核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する。
特定の実施形態は、修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物を提供し、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２０〜２２９５の任意の１つの核酸塩基配列からなる。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸を標的とし、かつ下記の配列番号１のヌクレオチド領域：３０〜５１、６３〜８２、１０３〜１１８、１４３〜１５９、１６４〜１９７、２０６〜２５９、３６１〜３８８、５５４〜５８５、６２５〜７００、７３６〜７７６、８６２〜８８７、９２３〜９７３、９７８〜９９６、１１２７〜１１４２、１１７０〜１１９５、１３１７〜１３４７、１３６０〜１３８３、１４１８〜１４４９、１４９２〜１５０７、１５２４〜１５４８、１５９７〜１６３４、１６４１〜１６６０、１６８３〜１６９８、１７４４〜１７６８、１８２７〜１８６０、１９４９〜２００２、２０７２〜２０９２、２０９５〜２１１０、２３０６〜２３２１、２６６５〜２６８３、２６８５〜２７１９、２７３９〜２７７０、２８５９〜２８８０、２９４１〜２９６０、２９６３〜２９７８、３０３７〜３０５２、３２０５〜３２５２、３３０６〜３３３２、３３７１〜３３８６、３５１８〜３５４２、３９７５〜３９９０、４０４１〜４０８７、４４１８〜４４４６、４５２８〜４５４６、７２３１〜７２４６、７５７０〜７５８５、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１１８０８、１２２１４〜１２２２９、１２４７４〜１２４８９、１２９０５〜１２９２０、１３４００〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４５４０〜１４５５５、１５２６４〜１５２７９、１５８４９〜１５８６４、１６５３０〜１６５４５、１７３７７〜１７３９２、１７５８１〜１７５９６、１７９４３〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８６５１、１９２５６〜１９２７１、１９８１４〜１９８２９、２０３６５〜２０３８０、２０９７９〜２０９９４、２１５６６〜２１５８１、２２１５０〜２２１６５、２２８０３〜２２８１８、２９０４９〜２９０６４、２９５５４〜２９５６９、３０２４５〜３０２６０、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３０９３０、３１４６８〜３１４８３、３２３６６〜３２３８１、３２８９７〜３２９１２、３３１８７〜３３２０２、３３７８０〜３３７９５、３４４０７〜３４４２２、３４８４６〜３４８６１、３５６６９〜３５６８４、３６３１２〜３６３２７、３６８１２〜３６８２７、３７５０４〜３７５１９、３８８４１〜３８８５６、４０２５０〜４０２６５、４０７０６〜４０７２１、４０９２２〜４０９３７、４１４２４〜４１４３９、４１９９９〜４２０１４、４２４８１〜４２４９６、４２７００〜４２７１５、４３２９１〜４３３０６、４３５００〜４３５１５、４３９４７〜４３９６２、４４４４８〜４４４６３、４５１６２〜４５１７７、４６０１０〜４６０２５、４６４７６〜４６４９１、４７４４７〜４７４６２、４７７５２〜４７７６７、４８００１〜４８０１６、４８４２３〜４８４３８、５０１９５〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５１１０４〜５１１１９、５１７５６〜５１７７１、５２０１５〜５２０３０、５２２３０〜５２２４５、５２５８８〜５２６０３、５３５３２〜５３５４７、または５４６４５〜５４６６０内で相補的である。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸を標的とし、かつ下記の配列番号１のヌクレオチド領域：３０〜５１、６３〜８２、１０３〜１１８、１４３〜１５９、１６４〜１９７、２０６〜２５９、３６１〜３８８、５５４〜５８５、６２５〜７００、７３６〜７７６、８６２〜８８７、９２３〜９７３、９７８〜９９６、１１２７〜１１４２、１１７０〜１１９５、１３１７〜１３４７、１３６０〜１３８３、１４１８〜１４４９、１４９２〜１５０７、１５２４〜１５４８、１５９７〜１６３４、１６４１〜１６６０、１６８３〜１６９８、１７４４〜１７６８、１８２７〜１８６０、１９４９〜２００２、２０７２〜２０９２、２０９５〜２１１０、２３０６〜２３２１、２６６５〜２６８３、２６８５〜２７１９、２７３９〜２７７０、２８５９〜２８８０、２９４１〜２９６０、２９６３〜２９７８、３０３７〜３０５２、３２０５〜３２５２、３３０６〜３３３２、３３７１〜３３８６、３５１８〜３５４２、３９７５〜３９９０、４０４１〜４０８７、４４１８〜４４４６、４５２８〜４５４６、７２３１〜７２４６、７５７０〜７５８５、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１１８０８、１２２１４〜１２２２９、１２４７４〜１２４８９、１２９０５〜１２９２０、１３４００〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４５４０〜１４５５５、１５２６４〜１５２７９、１５８４９〜１５８６４、１６５３０〜１６５４５、１７３７７〜１７３９２、１７５８１〜１７５９６、１７９４３〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８６５１、１９２５６〜１９２７１、１９８１４〜１９８２９、２０３６５〜２０３８０、２０９７９〜２０９９４、２１５６６〜２１５８１、２２１５０〜２２１６５、２２８０３〜２２８１８、２９０４９〜２９０６４、２９５５４〜２９５６９、３０２４５〜３０２６０、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３０９３０、３１４６８〜３１４８３、３２３６６〜３２３８１、３２８９７〜３２９１２、３３１８７〜３３２０２、３３７８０〜３３７９５、３４４０７〜３４４２２、３４８４６〜３４８６１、３５６６９〜３５６８４、３６３１２〜３６３２７、３６８１２〜３６８２７、３７５０４〜３７５１９、３８８４１〜３８８５６、４０２５０〜４０２６５、４０７０６〜４０７２１、４０９２２〜４０９３７、４１４２４〜４１４３９、４１９９９〜４２０１４、４２４８１〜４２４９６、４２７００〜４２７１５、４３２９１〜４３３０６、４３５００〜４３５１５、４３９４７〜４３９６２、４４４４８〜４４４６３、４５１６２〜４５１７７、４６０１０〜４６０２５、４６４７６〜４６４９１、４７４４７〜４７４６２、４７７５２〜４７７６７、４８００１〜４８０１６、４８４２３〜４８４３８、５０１９５〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５１１０４〜５１１１９、５１７５６〜５１７７１、５２０１５〜５２０３０、５２２３０〜５２２４５、５２５８８〜５２６０３、５３５３２〜５３５４７、または５４６４５〜５４６６０を標的とする。
特定の実施形態において、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸の領域を標的とする。特定の実施形態では、ＧＨＲ核酸の領域を標的とするそのような化合物またはオリゴヌクレオチドは、前記領域の長さが等しい部分に相補的な連続する核酸塩基部分を有する。例えば前記部分は、ここに列挙した領域の長さが等しい部分に相補的な、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の連続する核酸塩基部分でありうる。特定の実施形態では、そのような化合物またはオリゴヌクレオチドは、下記の配列番号１のヌクレオチド領域：３０〜５１、６３〜８２、１０３〜１１８、１４３〜１５９、１６４〜１９７、２０６〜２５９、３６１〜３８８、５５４〜５８５、６２５〜７００、７３６〜７７６、８６２〜８８７、９２３〜９７３、９７８〜９９６、１１２７〜１１４２、１１７０〜１１９５、１３１７〜１３４７、１３６０〜１３８３、１４１８〜１４４９、１４９２〜１５０７、１５２４〜１５４８、１５９７〜１６３４、１６４１〜１６６０、１６８３〜１６９８、１７４４〜１７６８、１８２７〜１８６０、１９４９〜２００２、２０７２〜２０９２、２０９５〜２１１０、２３０６〜２３２１、２６６５〜２６８３、２６８５〜２７１９、２７３９〜２７７０、２８５９〜２８８０、２９４１〜２９６０、２９６３〜２９７８、３０３７〜３０５２、３２０５〜３２５２、３３０６〜３３３２、３３７１〜３３８６、３５１８〜３５４２、３９７５〜３９９０、４０４１〜４０８７、４４１８〜４４４６、４５２８〜４５４６、７２３１〜７２４６、７５７０〜７５８５、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１１８０８、１２２１４〜１２２２９、１２４７４〜１２４８９、１２９０５〜１２９２０、１３４００〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４５４０〜１４５５５、１５２６４〜１５２７９、１５８４９〜１５８６４、１６５３０〜１６５４５、１７３７７〜１７３９２、１７５８１〜１７５９６、１７９４３〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８６５１、１９２５６〜１９２７１、１９８１４〜１９８２９、２０３６５〜２０３８０、２０９７９〜２０９９４、２１５６６〜２１５８１、２２１５０〜２２１６５、２２８０３〜２２８１８、２９０４９〜２９０６４、２９５５４〜２９５６９、３０２４５〜３０２６０、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３０９３０、３１４６８〜３１４８３、３２３６６〜３２３８１、３２８９７〜３２９１２、３３１８７〜３３２０２、３３７８０〜３３７９５、３４４０７〜３４４２２、３４８４６〜３４８６１、３５６６９〜３５６８４、３６３１２〜３６３２７、３６８１２〜３６８２７、３７５０４〜３７５１９、３８８４１〜３８８５６、４０２５０〜４０２６５、４０７０６〜４０７２１、４０９２２〜４０９３７、４１４２４〜４１４３９、４１９９９〜４２０１４、４２４８１〜４２４９６、４２７００〜４２７１５、４３２９１〜４３３０６、４３５００〜４３５１５、４３９４７〜４３９６２、４４４４８〜４４４６３、４５１６２〜４５１７７、４６０１０〜４６０２５、４６４７６〜４６４９１、４７４４７〜４７４６２、４７７５２〜４７７６７、４８００１〜４８０１６、４８４２３〜４８４３８、５０１９５〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５１１０４〜５１１１９、５１７５６〜５１７７１、５２０１５〜５２０３０、５２２３０〜５２２４５、５２５８８〜５２６０３、５３５３２〜５３５４７、または５４６４５〜５４６６０を標的とする。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸を標的とし、下記の配列番号２のヌクレオチド領域：２５７１〜２５８６、２８６７〜３０５９、３０９７〜３１１６、３３４１〜３６９５、４０２４〜４０３９、４４４６〜４８９４、５３９２〜５８１７、６１２８〜６２６５、６４９９〜６８９０、７２３１〜７２４６、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１０６６０〜１０６７９、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１２２２９、１２４６９〜１２９２０、１３３５１〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４３６１〜１４５５５、１４９６５〜１５２７９、１５８４９〜１６００１、１６２５３〜１６２７２、１６４４７〜１６５４５、１７１３０〜１７１４９、１７３７７〜１７６６９、１７９２７〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８７７３、１９６６１〜１９９１８、２０２８８〜２０４７０、２０９７９〜２０９９４、２１２１５〜２１６０６、２１８２０〜２１８３７、２２１５０〜２２１６５、２２５１８〜２２５３６、２２８０３〜２２８１８、２６４９４〜２６５２２、２９０４９〜２９０６９、２９３２３〜２９４８９、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３１１９１、３１４６８〜３１４８３、３２３６３〜３２３８２、３２８２７〜３３２０２、３３６３５〜３３７９５、３４１３８〜３４１５７、３４４０７〜３４４２２、３４８４５〜３４８６４、３５４６６〜３５４８５、３５６６９〜３５６８４、３６０２３〜３６０４２、３６２６６〜３６３２７、３６７２１〜３６８２７、３７０３２〜３７１３０、３７２７６〜３７２９５、３７５０４〜３７６７５、３８０９４〜３８１１８、３８８４１〜３８８５６、３９７１６〜４０５３８、４０７０６〜４０９３７、４１１６４〜４１１８３、４１３４２〜４１４３９、４２１４１〜４２１６４、４２７００〜４２７６０、４３１７３〜４３５３７、４３７６５〜４６０２５、４６４７６〜４６５３２、４８４２３〜４８４３８、５００７２〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５０７１９〜５１２３４、５１７４７〜５１７９７、５２０１５〜５２１４３、５２２３０〜５２２４５、５２５７３〜５２６５２、５３４６６〜５４６６０、５４８８６〜５４９０１、６３７５１〜６４６６２、６４８８２〜６５０９９、６５３６３〜６５３７８、６５６００〜６５６１５、６５９８８〜６６１８３、６６５６６〜６６５８１、６６９７８〜６７０８０、６７２５１〜６７２７０、６７６６２〜６７９２９、６８７２７〜６８７４２、６９２０３〜６９２４２、６９５６５〜６９６２０、６９８８９〜７０１４５、７０３５２〜７０５８４、７０９２５〜７１０７１、７１３１４〜７１３２９、７１６１７〜７１７６９、７２１０７〜７２２４１、７２５８４〜７２６７０、７３０６１〜７３０７６、７３３５０〜７３３６９、７３６８９〜７３７２３、７４１０７〜７４１３１、７４３１７〜７４５５７、７４９４７〜７５００９、７５１９２〜７５２０７、７５９７９〜７６０６６、７６４１０〜７７０９５、７７２９２〜７７３０７、７７６３８〜７７８６９、７８１２２〜７８３２６、７９００６〜７９０２１、７９４７８〜７９５０５、８０２７７〜８０２９２、８０５７５〜８０９３９、８１２０７〜８１２２２、８１５２４〜８１５４３、８１７６１〜８１７７６、８２２３３〜８２２４８、８２７３８〜８３１９８、８３３３０〜８３４１６、８３８８４〜８４０６３、８４３８１〜８５９６４、８６２２０〜８６３９２、８６５５４〜８６６５５、８６９０１〜８６９２０、８７１８１〜８７２６２、８８０６３〜８８０８２、８８２９３〜８８３０８、８８６０５〜８８９６７、８９１６０〜８９１７５、８９９４０〜９０２５５、９０４７３〜９０５２８、９１０７３〜９１０８８、９１２７３〜９１２９２、９１６４７〜９１６６２、９１９３０〜９２１２６、９２３５６〜９２３７１、９３１９０〜９３４４３、９３７６２〜９４１１１、９４３７４〜９４３８９、９４５８１〜９４６５３、９４８３９〜９４８５８、９５２９２〜９５５８３、９５８２９〜９５８４４、９６１３７〜９６５０３、９６７９３〜９７０１３、９７５３９〜９７５５４、９７８００〜９７８８９、９８１３２〜９８１５１、９８６２４〜９８６７２、９８８１０〜９９１１５、９９２５８〜９９２７３、９９４７８〜９９５０３、９９７９１〜９９８５８、１００２８１〜１００３００、１００４０６〜１００４２１、１００７４２〜１００８２８、１０１０８０〜１０１１０３、１０１２４２〜１０１３２０、１０１７８８〜１０１９０６、１０２５４９〜１０２５６８、１０３５６６〜１０３６２５、１０４０６７〜１０４０８６、１０４２７７〜１０４８５８、１０５２５５〜１０５２７４、１０６１４７〜１０６３６４、１０６６３２〜１０６６４７、１０６９６４〜１０７７３５、１０８５１４〜１０８７８８、１０９３３６〜１０９５０５、１０９８４９〜１０９８６４、１１０４０３〜１１０４４２、１１０７０１〜１１０９７４、１１１２０３〜１１１３２２、１１２０３０〜１１２０４９、１１２４９９〜１１２５１４、１１２８４２〜１１２８６１、１１３０２８〜１１３０５６、１１３６４６〜１１３６６５、１１３８９６〜１１３９１１、１１４４４６〜１１４４６５、１１５０８７〜１１５１０６、１１９２６９〜１１９２８４、１１９６５９〜１１９７０３、１２０３７６〜１２０４９７、１２０７３８〜１２０８４５、１２１２０９〜１２１２２８、１２１８２３〜１２２０１３、１２２１８０〜１２２１９９、１２２５８８〜１２２７７０、１２３０３１〜１２３０５０、１２３１５２〜１２３１６７、１２３６７１〜１２４０５５、１２４４１３〜１２４６０８、１２５１７８〜１２５１９７、１２５５３３〜１２５６１６、１２６３５７〜１２６４３４、１２６７３６〜１２６７５１、１２６９９８〜１２７２３６、１２７４５４〜１２７６８２、１２８４６７〜１２８４８２、１２８８１３〜１２９１１１、１２９９７６〜１３００１３、１３０３０８〜１３０３２３、１３１０３６〜１３１０５６、１３１２８６〜１３１３０５、１３１６７６〜１３１６９１、１３２１７１〜１３２５１７、１３３１６８〜１３３２４１、１３３５２２〜１３３８７７、１３４０８６〜１３４１０１、１３４２４０〜１３４２５９、１３４４４１〜１３４６１７、１３５０１５〜１３５０３０、１３５４３１〜１３５５１９、１３５８１８〜１３５８７４、１３６１１１〜１３６１３０、１３６２８２〜１３６５９５、１３６９９６〜１３７１５２、１３７３７２〜１３７３８７、１３７７５０〜１３７７６５、１３８０４８〜１３８０６７、１３８７８２〜１３９８４０、１４０３４３〜１４０３５８、１４０５９３〜１４０７０１、１４１１１６〜１４１１３１、１４１５９１〜１４１７１９、１４２１１３〜１４２３４２、１４３０２１〜１４３０４８、１４３１８５〜１４３４８６、１４３８３６〜１４４１０９、１４４５５８〜１４４６５０、１４４９９０〜１４５０７８、１４５４２８〜１４５５２５、１４５９３７〜１４５９５２、１４６２３５〜１４６３８６、１４７０２８〜１４７０４３、１４７２５９〜１４７２８４、１４７６７１〜１４７６８６、１４８０５９〜１４８１５４、１４８５６４〜１４８５７９、１４８９０４〜１４９０８４、１４９４９１〜１４９５０６、１４９７８７〜１４９８７７、１５０２３６〜１５０２５１、１５０５８８〜１５１１３９、１５１３７３〜１５１６５９、１５２２０１〜１５２３８８、１５２５４９〜１５２７７１、１５３００１〜１５３０２６、１５３３４９〜１５３３６４、１５３８３１〜１５４１１２、１５４１７１〜１５４１８６、１５４５０２〜１５４５２１、１５４７２４〜１５４８２８、１５５２８３〜１５５３０４、１５５５９１〜１５５６１６、１５５８８９〜１５５９９２、１５６２３３〜１５６６１２、１５６８４７〜１５６９０７、１５７１９８〜１５７２２３、１５７３３０〜１５７３４９、１５７５５２〜１５７５６７、１５７９２７〜１５８０２９、１５８５４２〜１５８６３１、１５９２１６〜１５９２６７、１５９５３９〜１５９７９３、１６０３５２〜１６０４２９、１６０８１２〜１６０８２７、１６１２４８〜１６１２６７、１６１４６１〜１６１６０７、１６１８２１〜１６１９６９、１６２０６４〜１６２０８３、１６２１３２〜１６２１４７、１６２５３１〜１６２７７０、１６３０１９〜１６３５５７、１６４８３９〜１６５０５９、１６５４１９〜１６５５７５、１６５８５６〜１６５８７５、１６６２４１〜１６６４５０、１６６８３７〜１６６８５２、１６７１０７〜１６７１２２、１６８００４〜１６８０１９、１６８７６０〜１６８８２３、１６９０６２〜１６９０９２、１６９１３４〜１６９１５３、１６９６０１〜１６９７１１、１７００８１〜１７０２９１、１７０４０７〜１７０４２６、１７０７０３〜１７０８１４、１７１０２１〜１７１０３６、１７１２０７〜１７１２２６、１７１４３１〜１７１５６８、１７１９２６〜１７１９４５、１７２４４７〜１７２４６２、１７２７３３〜１７２９５６、１７３０４５〜１７３７５６、１７４１２２〜１７４８８５、１７５０１４〜１７７８３０、１７８８９５〜１８０５３９、１８１５１４〜１８７６４４、１８７８５７〜１８９９０４、１９０１０９〜１９４１５９、１９４４２５〜１９５７２３、１９６５３６〜１９６８７３、１９７３２６〜１９７９６１、１９８１４５〜１９８１７０、１９８３０７〜１９８３８１、１９８７１５〜１９９００７、１９９５０６〜１９９５６３、１９９８１６〜１９９８３８、２００２４９〜２００６３５、２０１２５８〜２０１８６１、２０２０７９〜２０２０９４、２０２３８２〜２０２７１７、２０３０９８〜２０３９３４、２０４１８１〜２０４７４０、２０５５４９〜２０５９１５、２０６４１２〜２０６７６４、２０７５１０〜２０７５３２、２０９９９９〜２１００１４、２１０１８９〜２１０２９６、２１０５０２〜２１０５８３、２１０９２０〜２１１４１８、２１１８３６〜２１２２２３、２１２６０６〜２１２８１６、２１３０２５〜２１３０４４、２１３４２５〜２１３４４０、２１３８２５〜２１３９３３、２１４４７９〜２１４４９８、２１４６２２〜２１４６４７、２１４８８４〜２１４９５１、２１５４４６〜２１５５０８、２１５９３２〜２１５９５１、２１６１９２〜２１７５９５、２１８１３２〜２１８２４８、２１８５２６〜２１８５４１、２１８７３４〜２１２１９０３７、２１９３４２〜２１９６３３、２１９８８６〜２２０７０５、２２１０４４〜２２１０５９、２２１４８３〜２２１６０７、２２１９４７〜２２１９６２、２２２５６９〜２２２５８４、２２２９１４〜２２２９９８、２２３４３６〜２２３４５１、２２３９４８〜２２４１２２、２２４４０９〜２２４４３０、２２４７１７〜２２４７６９、２２５１３３〜２２５１４８、２２５４３６〜２２５７６１、２２６７８５〜２２６８９８、２２７０２５〜２２７０４０、２２７２１８〜２２７２５１、２２７４８５〜２２７５００、２２７９１４〜２２８８３７、２２９１７４〜２２９１８９、２２９４２３〜２２９４３８、２２９６１５〜２２９６４０、２３００４２〜２３００５７、２３０３１３〜２３０５９５、２３１２１８〜２３１３４５、２３１８１７〜２３２０３７、２３２０８８〜２３２４０８、２３２８２３〜２３２８４８、２３２８８４〜２３２８９９、２３３２１０〜２３３２２５、２３３６２３〜２３３６４６、２３４４４７〜２３４４６６、２３４８７６〜２３４９１８、２３５２５８〜２３５３２８、２３５７７０〜２３５７８５、２３６０７１〜２３６２１３、２３６６８４〜２３７１９６、２３７５８５〜２３７６９８、２３７９４９〜２３７５５７、２４４８７３〜２４４８９７、２４５３１９〜２４５３３４、２４５７０１〜２４５７８０、２４６１５２〜２４６５２３、２４６９３６
〜２４７０３１、２４７２０３〜２４７２４０、２４７４３１〜２４７４５０、２４７６４４〜２４７６５９、２４８２２３〜２４８３６３、２４８６９４〜２４８７６２、２４９４９４〜２４９５０９、２５０００１〜２５００２０、２５０６９３〜２５０７０８、２５１２１４〜２５１２３３、２５１６０１〜２５１６３７、２５１９５０〜２５２０６０、２５２６６５〜２５２６８０、２５２８３８〜２５２８６３、２５３１４０〜２５３１６６、２５３５９４〜２５３８１９、２５４０３６〜２５４０８３、２５４２４６〜２５４３４５、２５４６４１〜２５４６６０、２５４９０５〜２５４９２０、２５５３９７〜２５５４２２、２５５６１８〜２５５６３３、２５５９９２〜２５６７０４、２５７０１８〜２５７０９２、２５７３１７〜２５７３３２、２５７８１８〜２５９３０５、２５９５００〜２５９５１５、２６１２９４〜２６１６５６、２６２０２１〜２６２０３６、２６２４５３〜２６２７７９、２６３３３８〜２６６５１８、２６６８６１〜２６７１３１、２６７３７５〜２６８０５１、２６８３６６〜２６９４４７、２７００３８〜２７１８５０、２７１９５０〜２７１９６９、２７２６３１〜２７４１４５、２７４２０５〜２７５７４７、２７５８０８〜２７６６３６、２７６９３２〜２７７０６４、２７７３９１〜２７８３８０、２７８９３２〜２７９０６３、２７９３０３〜２８１００１、２８１５８７〜２８１６１０、２８２２２９〜２８３６６８、２９００３５〜２９０４７４、２９０９２４〜２９２５５０、２９２８６０〜２９４４０８、２９５４７５〜２９７０１２、２９７５８７〜２９８１１５、２９８１６１〜２９８４１８、２９８４８９〜２９８７３８、２９９０８２〜２９９１８７、２９９２７６〜２９９６６９、２９９７２３〜２９９７４９、２９９７８８〜３００５０４、または３００８３５〜３０１２９５内で相補的である。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸を標的とし、かつ下記の配列番号２のヌクレオチド領域：２５７１〜２５８６、２８６７〜３０５９、３０９７〜３１１６、３３４１〜３６９５、４０２４〜４０３９、４４４６〜４８９４、５３９２〜５８１７、６１２８〜６２６５、６４９９〜６８９０、７２３１〜７２４６、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１０６６０〜１０６７９、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１２２２９、１２４６９〜１２９２０、１３３５１〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４３６１〜１４５５５、１４９６５〜１５２７９、１５８４９〜１６００１、１６２５３〜１６２７２、１６４４７〜１６５４５、１７１３０〜１７１４９、１７３７７〜１７６６９、１７９２７〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８７７３、１９６６１〜１９９１８、２０２８８〜２０４７０、２０９７９〜２０９９４、２１２１５〜２１６０６、２１８２０〜２１８３７、２２１５０〜２２１６５、２２５１８〜２２５３６、２２８０３〜２２８１８、２６４９４〜２６５２２、２９０４９〜２９０６９、２９３２３〜２９４８９、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３１１９１、３１４６８〜３１４８３、３２３６３〜３２３８２、３２８２７〜３３２０２、３３６３５〜３３７９５、３４１３８〜３４１５７、３４４０７〜３４４２２、３４８４５〜３４８６４、３５４６６〜３５４８５、３５６６９〜３５６８４、３６０２３〜３６０４２、３６２６６〜３６３２７、３６７２１〜３６８２７、３７０３２〜３７１３０、３７２７６〜３７２９５、３７５０４〜３７６７５、３８０９４〜３８１１８、３８８４１〜３８８５６、３９７１６〜４０５３８、４０７０６〜４０９３７、４１１６４〜４１１８３、４１３４２〜４１４３９、４２１４１〜４２１６４、４２７００〜４２７６０、４３１７３〜４３５３７、４３７６５〜４６０２５、４６４７６〜４６５３２、４８４２３〜４８４３８、５００７２〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５０７１９〜５１２３４、５１７４７〜５１７９７、５２０１５〜５２１４３、５２２３０〜５２２４５、５２５７３〜５２６５２、５３４６６〜５４６６０、５４８８６〜５４９０１、６３７５１〜６４６６２、６４８８２〜６５０９９、６５３６３〜６５３７８、６５６００〜６５６１５、６５９８８〜６６１８３、６６５６６〜６６５８１、６６９７８〜６７０８０、６７２５１〜６７２７０、６７６６２〜６７９２９、６８７２７〜６８７４２、６９２０３〜６９２４２、６９５６５〜６９６２０、６９８８９〜７０１４５、７０３５２〜７０５８４、７０９２５〜７１０７１、７１３１４〜７１３２９、７１６１７〜７１７６９、７２１０７〜７２２４１、７２５８４〜７２６７０、７３０６１〜７３０７６、７３３５０〜７３３６９、７３６８９〜７３７２３、７４１０７〜７４１３１、７４３１７〜７４５５７、７４９４７〜７５００９、７５１９２〜７５２０７、７５９７９〜７６０６６、７６４１０〜７７０９５、７７２９２〜７７３０７、７７６３８〜７７８６９、７８１２２〜７８３２６、７９００６〜７９０２１、７９４７８〜７９５０５、８０２７７〜８０２９２、８０５７５〜８０９３９、８１２０７〜８１２２２、８１５２４〜８１５４３、８１７６１〜８１７７６、８２２３３〜８２２４８、８２７３８〜８３１９８、８３３３０〜８３４１６、８３８８４〜８４０６３、８４３８１〜８５９６４、８６２２０〜８６３９２、８６５５４〜８６６５５、８６９０１〜８６９２０、８７１８１〜８７２６２、８８０６３〜８８０８２、８８２９３〜８８３０８、８８６０５〜８８９６７、８９１６０〜８９１７５、８９９４０〜９０２５５、９０４７３〜９０５２８、９１０７３〜９１０８８、９１２７３〜９１２９２、９１６４７〜９１６６２、９１９３０〜９２１２６、９２３５６〜９２３７１、９３１９０〜９３４４３、９３７６２〜９４１１１、９４３７４〜９４３８９、９４５８１〜９４６５３、９４８３９〜９４８５８、９５２９２〜９５５８３、９５８２９〜９５８４４、９６１３７〜９６５０３、９６７９３〜９７０１３、９７５３９〜９７５５４、９７８００〜９７８８９、９８１３２〜９８１５１、９８６２４〜９８６７２、９８８１０〜９９１１５、９９２５８〜９９２７３、９９４７８〜９９５０３、９９７９１〜９９８５８、１００２８１〜１００３００、１００４０６〜１００４２１、１００７４２〜１００８２８、１０１０８０〜１０１１０３、１０１２４２〜１０１３２０、１０１７８８〜１０１９０６、１０２５４９〜１０２５６８、１０３５６６〜１０３６２５、１０４０６７〜１０４０８６、１０４２７７〜１０４８５８、１０５２５５〜１０５２７４、１０６１４７〜１０６３６４、１０６６３２〜１０６６４７、１０６９６４〜１０７７３５、１０８５１４〜１０８７８８、１０９３３６〜１０９５０５、１０９８４９〜１０９８６４、１１０４０３〜１１０４４２、１１０７０１〜１１０９７４、１１１２０３〜１１１３２２、１１２０３０〜１１２０４９、１１２４９９〜１１２５１４、１１２８４２〜１１２８６１、１１３０２８〜１１３０５６、１１３６４６〜１１３６６５、１１３８９６〜１１３９１１、１１４４４６〜１１４４６５、１１５０８７〜１１５１０６、１１９２６９〜１１９２８４、１１９６５９〜１１９７０３、１２０３７６〜１２０４９７、１２０７３８〜１２０８４５、１２１２０９〜１２１２２８、１２１８２３〜１２２０１３、１２２１８０〜１２２１９９、１２２５８８〜１２２７７０、１２３０３１〜１２３０５０、１２３１５２〜１２３１６７、１２３６７１〜１２４０５５、１２４４１３〜１２４６０８、１２５１７８〜１２５１９７、１２５５３３〜１２５６１６、１２６３５７〜１２６４３４、１２６７３６〜１２６７５１、１２６９９８〜１２７２３６、１２７４５４〜１２７６８２、１２８４６７〜１２８４８２、１２８８１３〜１２９１１１、１２９９７６〜１３００１３、１３０３０８〜１３０３２３、１３１０３６〜１３１０５６、１３１２８６〜１３１３０５、１３１６７６〜１３１６９１、１３２１７１〜１３２５１７、１３３１６８〜１３３２４１、１３３５２２〜１３３８７７、１３４０８６〜１３４１０１、１３４２４０〜１３４２５９、１３４４４１〜１３４６１７、１３５０１５〜１３５０３０、１３５４３１〜１３５５１９、１３５８１８〜１３５８７４、１３６１１１〜１３６１３０、１３６２８２〜１３６５９５、１３６９９６〜１３７１５２、１３７３７２〜１３７３８７、１３７７５０〜１３７７６５、１３８０４８〜１３８０６７、１３８７８２〜１３９８４０、１４０３４３〜１４０３５８、１４０５９３〜１４０７０１、１４１１１６〜１４１１３１、１４１５９１〜１４１７１９、１４２１１３〜１４２３４２、１４３０２１〜１４３０４８、１４３１８５〜１４３４８６、１４３８３６〜１４４１０９、１４４５５８〜１４４６５０、１４４９９０〜１４５０７８、１４５４２８〜１４５５２５、１４５９３７〜１４５９５２、１４６２３５〜１４６３８６、１４７０２８〜１４７０４３、１４７２５９〜１４７２８４、１４７６７１〜１４７６８６、１４８０５９〜１４８１５４、１４８５６４〜１４８５７９、１４８９０４〜１４９０８４、１４９４９１〜１４９５０６、１４９７８７〜１４９８７７、１５０２３６〜１５０２５１、１５０５８８〜１５１１３９、１５１３７３〜１５１６５９、１５２２０１〜１５２３８８、１５２５４９〜１５２７７１、１５３００１〜１５３０２６、１５３３４９〜１５３３６４、１５３８３１〜１５４１１２、１５４１７１〜１５４１８６、１５４５０２〜１５４５２１、１５４７２４〜１５４８２８、１５５２８３〜１５５３０４、１５５５９１〜１５５６１６、１５５８８９〜１５５９９２、１５６２３３〜１５６６１２、１５６８４７〜１５６９０７、１５７１９８〜１５７２２３、１５７３３０〜１５７３４９、１５７５５２〜１５７５６７、１５７９２７〜１５８０２９、１５８５４２〜１５８６３１、１５９２１６〜１５９２６７、１５９５３９〜１５９７９３、１６０３５２〜１６０４２９、１６０８１２〜１６０８２７、１６１２４８〜１６１２６７、１６１４６１〜１６１６０７、１６１８２１〜１６１９６９、１６２０６４〜１６２０８３、１６２１３２〜１６２１４７、１６２５３１〜１６２７７０、１６３０１９〜１６３５５７、１６４８３９〜１６５０５９、１６５４１９〜１６５５７５、１６５８５６〜１６５８７５、１６６２４１〜１６６４５０、１６６８３７〜１６６８５２、１６７１０７〜１６７１２２、１６８００４〜１６８０１９、１６８７６０〜１６８８２３、１６９０６２〜１６９０９２、１６９１３４〜１６９１５３、１６９６０１〜１６９７１１、１７００８１〜１７０２９１、１７０４０７〜１７０４２６、１７０７０３〜１７０８１４、１７１０２１〜１７１０３６、１７１２０７〜１７１２２６、１７１４３１〜１７１５６８、１７１９２６〜１７１９４５、１７２４４７〜１７２４６２、１７２７３３〜１７２９５６、１７３０４５〜１７３７５６、１７４１２２〜１７４８８５、１７５０１４〜１７７８３０、１７８８９５〜１８０５３９、１８１５１４〜１８７６４４、１８７８５７〜１８９９０４、１９０１０９〜１９４１５９、１９４４２５〜１９５７２３、１９６５３６〜１９６８７３、１９７３２６〜１９７９６１、１９８１４５〜１９８１７０、１９８３０７〜１９８３８１、１９８７１５〜１９９００７、１９９５０６〜１９９５６３、１９９８１６〜１９９８３８、２００２４９〜２００６３５、２０１２５８〜２０１８６１、２０２０７９〜２０２０９４、２０２３８２〜２０２７１７、２０３０９８〜２０３９３４、２０４１８１〜２０４７４０、２０５５４９〜２０５９１５、２０６４１２〜２０６７６４、２０７５１０〜２０７５３２、２０９９９９〜２１００１４、２１０１８９〜２１０２９６、２１０５０２〜２１０５８３、２１０９２０〜２１１４１８、２１１８３６〜２１２２２３、２１２６０６〜２１２８１６、２１３０２５〜２１３０４４、２１３４２５〜２１３４４０、２１３８２５〜２１３９３３、２１４４７９〜２１４４９８、２１４６２２〜２１４６４７、２１４８８４〜２１４９５１、２１５４４６〜２１５５０８、２１５９３２〜２１５９５１、２１６１９２〜２１７５９５、２１８１３２〜２１８２４８、２１８５２６〜２１８５４１、２１８７３４〜２１２１９０３７、２１９３４２〜２１９６３３、２１９８８６〜２２０７０５、２２１０４４〜２２１０５９、２２１４８３〜２２１６０７、２２１９４７〜２２１９６２、２２２５６９〜２２２５８４、２２２９１４〜２２２９９８、２２３４３６〜２２３４５１、２２３９４８〜２２４１２２、２２４４０９〜２２４４３０、２２４７１７〜２２４７６９、２２５１３３〜２２５１４８、２２５４３６〜２２５７６１、２２６７８５〜２２６８９８、２２７０２５〜２２７０４０、２２７２１８〜２２７２５１、２２７４８５〜２２７５００、２２７９１４〜２２８８３７、２２９１７４〜２２９１８９、２２９４２３〜２２９４３８、２２９６１５〜２２９６４０、２３００４２〜２３００５７、２３０３１３〜２３０５９５、２３１２１８〜２３１３４５、２３１８１７〜２３２０３７、２３２０８８〜２３２４０８、２３２８２３〜２３２８４８、２３２８８４〜２３２８９９、２３３２１０〜２３３２２５、２３３６２３〜２３３６４６、２３４４４７〜２３４４６６、２３４８７６〜２３４９１８、２３５２５８〜２３５３２８、２３５７７０〜２３５７８５、２３６０７１〜２３６２１３、２３６６８４〜２３７１９６、２３７５８５〜２３７６９８、２３７９４９〜２３７５５７、２４４８７３〜２４４８９７、２４５３１９〜２４５３３４、２４５７０１〜２４５７８０、２４６１５２〜２４６５２３、２４６９
３６〜２４７０３１、２４７２０３〜２４７２４０、２４７４３１〜２４７４５０、２４７６４４〜２４７６５９、２４８２２３〜２４８３６３、２４８６９４〜２４８７６２、２４９４９４〜２４９５０９、２５０００１〜２５００２０、２５０６９３〜２５０７０８、２５１２１４〜２５１２３３、２５１６０１〜２５１６３７、２５１９５０〜２５２０６０、２５２６６５〜２５２６８０、２５２８３８〜２５２８６３、２５３１４０〜２５３１６６、２５３５９４〜２５３８１９、２５４０３６〜２５４０８３、２５４２４６〜２５４３４５、２５４６４１〜２５４６６０、２５４９０５〜２５４９２０、２５５３９７〜２５５４２２、２５５６１８〜２５５６３３、２５５９９２〜２５６７０４、２５７０１８〜２５７０９２、２５７３１７〜２５７３３２、２５７８１８〜２５９３０５、２５９５００〜２５９５１５、２６１２９４〜２６１６５６、２６２０２１〜２６２０３６、２６２４５３〜２６２７７９、２６３３３８〜２６６５１８、２６６８６１〜２６７１３１、２６７３７５〜２６８０５１、２６８３６６〜２６９４４７、２７００３８〜２７１８５０、２７１９５０〜２７１９６９、２７２６３１〜２７４１４５、２７４２０５〜２７５７４７、２７５８０８〜２７６６３６、２７６９３２〜２７７０６４、２７７３９１〜２７８３８０、２７８９３２〜２７９０６３、２７９３０３〜２８１００１、２８１５８７〜２８１６１０、２８２２２９〜２８３６６８、２９００３５〜２９０４７４、２９０９２４〜２９２５５０、２９２８６０〜２９４４０８、２９５４７５〜２９７０１２、２９７５８７〜２９８１１５、２９８１６１〜２９８４１８、２９８４８９〜２９８７３８、２９９０８２〜２９９１８７、２９９２７６〜２９９６６９、２９９７２３〜２９９７４９、２９９７８８〜３００５０４、または３００８３５〜３０１２９５を標的とする。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは、成長ホルモン受容体核酸の領域を標的とする。特定の実施形態では、ＧＨＲ核酸の領域を標的とするそのような化合物またはオリゴヌクレオチドは、前記領域の長さが等しい核酸塩基部分に相補的な連続する核酸塩基部分を有する。例えば、前記部分は、ここに列挙した領域の長さが等しい部分に相補的な、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の連続する核酸塩基部分でありうる。特定の実施形態では、そのような化合物またはオリゴヌクレオチドは、下記の配列番号２のヌクレオチド領域：２５７１〜２５８６、２８６７〜３０５９、３０９７〜３１１６、３３４１〜３６９５、４０２４〜４０３９、４４４６〜４８９４、５３９２〜５８１７、６１２８〜６２６５、６４９９〜６８９０、７２３１〜７２４６、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１０６６０〜１０６７９、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１２２２９、１２４６９〜１２９２０、１３３５１〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４３６１〜１４５５５、１４９６５〜１５２７９、１５８４９〜１６００１、１６２５３〜１６２７２、１６４４７〜１６５４５、１７１３０〜１７１４９、１７３７７〜１７６６９、１７９２７〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８７７３、１９６６１〜１９９１８、２０２８８〜２０４７０、２０９７９〜２０９９４、２１２１５〜２１６０６、２１８２０〜２１８３７、２２１５０〜２２１６５、２２５１８〜２２５３６、２２８０３〜２２８１８、２６４９４〜２６５２２、２９０４９〜２９０６９、２９３２３〜２９４８９、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３１１９１、３１４６８〜３１４８３、３２３６３〜３２３８２、３２８２７〜３３２０２、３３６３５〜３３７９５、３４１３８〜３４１５７、３４４０７〜３４４２２、３４８４５〜３４８６４、３５４６６〜３５４８５、３５６６９〜３５６８４、３６０２３〜３６０４２、３６２６６〜３６３２７、３６７２１〜３６８２７、３７０３２〜３７１３０、３７２７６〜３７２９５、３７５０４〜３７６７５、３８０９４〜３８１１８、３８８４１〜３８８５６、３９７１６〜４０５３８、４０７０６〜４０９３７、４１１６４〜４１１８３、４１３４２〜４１４３９、４２１４１〜４２１６４、４２７００〜４２７６０、４３１７３〜４３５３７、４３７６５〜４６０２５、４６４７６〜４６５３２、４８４２３〜４８４３８、５００７２〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５０７１９〜５１２３４、５１７４７〜５１７９７、５２０１５〜５２１４３、５２２３０〜５２２４５、５２５７３〜５２６５２、５３４６６〜５４６６０、５４８８６〜５４９０１、６３７５１〜６４６６２、６４８８２〜６５０９９、６５３６３〜６５３７８、６５６００〜６５６１５、６５９８８〜６６１８３、６６５６６〜６６５８１、６６９７８〜６７０８０、６７２５１〜６７２７０、６７６６２〜６７９２９、６８７２７〜６８７４２、６９２０３〜６９２４２、６９５６５〜６９６２０、６９８８９〜７０１４５、７０３５２〜７０５８４、７０９２５〜７１０７１、７１３１４〜７１３２９、７１６１７〜７１７６９、７２１０７〜７２２４１、７２５８４〜７２６７０、７３０６１〜７３０７６、７３３５０〜７３３６９、７３６８９〜７３７２３、７４１０７〜７４１３１、７４３１７〜７４５５７、７４９４７〜７５００９、７５１９２〜７５２０７、７５９７９〜７６０６６、７６４１０〜７７０９５、７７２９２〜７７３０７、７７６３８〜７７８６９、７８１２２〜７８３２６、７９００６〜７９０２１、７９４７８〜７９５０５、８０２７７〜８０２９２、８０５７５〜８０９３９、８１２０７〜８１２２２、８１５２４〜８１５４３、８１７６１〜８１７７６、８２２３３〜８２２４８、８２７３８〜８３１９８、８３３３０〜８３４１６、８３８８４〜８４０６３、８４３８１〜８５９６４、８６２２０〜８６３９２、８６５５４〜８６６５５、８６９０１〜８６９２０、８７１８１〜８７２６２、８８０６３〜８８０８２、８８２９３〜８８３０８、８８６０５〜８８９６７、８９１６０〜８９１７５、８９９４０〜９０２５５、９０４７３〜９０５２８、９１０７３〜９１０８８、９１２７３〜９１２９２、９１６４７〜９１６６２、９１９３０〜９２１２６、９２３５６〜９２３７１、９３１９０〜９３４４３、９３７６２〜９４１１１、９４３７４〜９４３８９、９４５８１〜９４６５３、９４８３９〜９４８５８、９５２９２〜９５５８３、９５８２９〜９５８４４、９６１３７〜９６５０３、９６７９３〜９７０１３、９７５３９〜９７５５４、９７８００〜９７８８９、９８１３２〜９８１５１、９８６２４〜９８６７２、９８８１０〜９９１１５、９９２５８〜９９２７３、９９４７８〜９９５０３、９９７９１〜９９８５８、１００２８１〜１００３００、１００４０６〜１００４２１、１００７４２〜１００８２８、１０１０８０〜１０１１０３、１０１２４２〜１０１３２０、１０１７８８〜１０１９０６、１０２５４９〜１０２５６８、１０３５６６〜１０３６２５、１０４０６７〜１０４０８６、１０４２７７〜１０４８５８、１０５２５５〜１０５２７４、１０６１４７〜１０６３６４、１０６６３２〜１０６６４７、１０６９６４〜１０７７３５、１０８５１４〜１０８７８８、１０９３３６〜１０９５０５、１０９８４９〜１０９８６４、１１０４０３〜１１０４４２、１１０７０１〜１１０９７４、１１１２０３〜１１１３２２、１１２０３０〜１１２０４９、１１２４９９〜１１２５１４、１１２８４２〜１１２８６１、１１３０２８〜１１３０５６、１１３６４６〜１１３６６５、１１３８９６〜１１３９１１、１１４４４６〜１１４４６５、１１５０８７〜１１５１０６、１１９２６９〜１１９２８４、１１９６５９〜１１９７０３、１２０３７６〜１２０４９７、１２０７３８〜１２０８４５、１２１２０９〜１２１２２８、１２１８２３〜１２２０１３、１２２１８０〜１２２１９９、１２２５８８〜１２２７７０、１２３０３１〜１２３０５０、１２３１５２〜１２３１６７、１２３６７１〜１２４０５５、１２４４１３〜１２４６０８、１２５１７８〜１２５１９７、１２５５３３〜１２５６１６、１２６３５７〜１２６４３４、１２６７３６〜１２６７５１、１２６９９８〜１２７２３６、１２７４５４〜１２７６８２、１２８４６７〜１２８４８２、１２８８１３〜１２９１１１、１２９９７６〜１３００１３、１３０３０８〜１３０３２３、１３１０３６〜１３１０５６、１３１２８６〜１３１３０５、１３１６７６〜１３１６９１、１３２１７１〜１３２５１７、１３３１６８〜１３３２４１、１３３５２２〜１３３８７７、１３４０８６〜１３４１０１、１３４２４０〜１３４２５９、１３４４４１〜１３４６１７、１３５０１５〜１３５０３０、１３５４３１〜１３５５１９、１３５８１８〜１３５８７４、１３６１１１〜１３６１３０、１３６２８２〜１３６５９５、１３６９９６〜１３７１５２、１３７３７２〜１３７３８７、１３７７５０〜１３７７６５、１３８０４８〜１３８０６７、１３８７８２〜１３９８４０、１４０３４３〜１４０３５８、１４０５９３〜１４０７０１、１４１１１６〜１４１１３１、１４１５９１〜１４１７１９、１４２１１３〜１４２３４２、１４３０２１〜１４３０４８、１４３１８５〜１４３４８６、１４３８３６〜１４４１０９、１４４５５８〜１４４６５０、１４４９９０〜１４５０７８、１４５４２８〜１４５５２５、１４５９３７〜１４５９５２、１４６２３５〜１４６３８６、１４７０２８〜１４７０４３、１４７２５９〜１４７２８４、１４７６７１〜１４７６８６、１４８０５９〜１４８１５４、１４８５６４〜１４８５７９、１４８９０４〜１４９０８４、１４９４９１〜１４９５０６、１４９７８７〜１４９８７７、１５０２３６〜１５０２５１、１５０５８８〜１５１１３９、１５１３７３〜１５１６５９、１５２２０１〜１５２３８８、１５２５４９〜１５２７７１、１５３００１〜１５３０２６、１５３３４９〜１５３３６４、１５３８３１〜１５４１１２、１５４１７１〜１５４１８６、１５４５０２〜１５４５２１、１５４７２４〜１５４８２８、１５５２８３〜１５５３０４、１５５５９１〜１５５６１６、１５５８８９〜１５５９９２、１５６２３３〜１５６６１２、１５６８４７〜１５６９０７、１５７１９８〜１５７２２３、１５７３３０〜１５７３４９、１５７５５２〜１５７５６７、１５７９２７〜１５８０２９、１５８５４２〜１５８６３１、１５９２１６〜１５９２６７、１５９５３９〜１５９７９３、１６０３５２〜１６０４２９、１６０８１２〜１６０８２７、１６１２４８〜１６１２６７、１６１４６１〜１６１６０７、１６１８２１〜１６１９６９、１６２０６４〜１６２０８３、１６２１３２〜１６２１４７、１６２５３１〜１６２７７０、１６３０１９〜１６３５５７、１６４８３９〜１６５０５９、１６５４１９〜１６５５７５、１６５８５６〜１６５８７５、１６６２４１〜１６６４５０、１６６８３７〜１６６８５２、１６７１０７〜１６７１２２、１６８００４〜１６８０１９、１６８７６０〜１６８８２３、１６９０６２〜１６９０９２、１６９１３４〜１６９１５３、１６９６０１〜１６９７１１、１７００８１〜１７０２９１、１７０４０７〜１７０４２６、１７０７０３〜１７０８１４、１７１０２１〜１７１０３６、１７１２０７〜１７１２２６、１７１４３１〜１７１５６８、１７１９２６〜１７１９４５、１７２４４７〜１７２４６２、１７２７３３〜１７２９５６、１７３０４５〜１７３７５６、１７４１２２〜１７４８８５、１７５０１４〜１７７８３０、１７８８９５〜１８０５３９、１８１５１４〜１８７６４４、１８７８５７〜１８９９０４、１９０１０９〜１９４１５９、１９４４２５〜１９５７２３、１９６５３６〜１９６８７３、１９７３２６〜１９７９６１、１９８１４５〜１９８１７０、１９８３０７〜１９８３８１、１９８７１５〜１９９００７、１９９５０６〜１９９５６３、１９９８１６〜１９９８３８、２００２４９〜２００６３５、２０１２５８〜２０１８６１、２０２０７９〜２０２０９４、２０２３８２〜２０２７１７、２０３０９８〜２０３９３４、２０４１８１〜２０４７４０、２０５５４９〜２０５９１５、２０６４１２〜２０６７６４、２０７５１０〜２０７５３２、２０９９９９〜２１００１４、２１０１８９〜２１０２９６、２１０５０２〜２１０５８３、２１０９２０〜２１１４１８、２１１８３６〜２１２２２３、２１２６０６〜２１２８１６、２１３０２５〜２１３０４４、２１３４２５〜２１３４４０、２１３８２５〜２１３９３３、２１４４７９〜２１４４９８、２１４６２２〜２１４６４７、２１４８８４〜２１４９５１、２１５４４６〜２１５５０８、２１５９３２〜２１５９５１、２１６１９２〜２１７５９５、２１８１３２〜２１８２４８、２１８５２６〜２１８５４１、２１８７３４〜２１２１９０３７、２１９３４２〜２１９６３３、２１９８８６〜２２０７０５、２２１０４４〜２２１０５９、２２１４８３〜２２１６０７、２２１９４７〜２２１９６２、２２２５６９〜２２２５８４、２２２９１４〜２２２９９８、２２３４３６〜２２３４５１、２２３９４８〜２２４１２２、２２４４０９〜２２４４３０、２２４７１７〜２２４７６９、２２５１３３〜２２５１４８、２２５４３６〜２２５７６１、２２６７８５〜２２６８９８、２２７０２５〜２２７０４０、２２７２１８〜２２７２５１、２２７４８５〜２２７５００、２２７９１４〜２２８８３７、２２９１７４〜２２９１８９、２２９４２３〜２２９４３８、２２９６１５〜２２９６４０、２３００４２〜２３００５７、２３０３１３〜２３０５９５、２３１２１８〜２３１３４５、２３１８１７〜２３２０３７、２３２０８８〜２３２４０８、２３２８２３〜２３２８４８、２３２８８４〜２３２８９９、
２３３２１０〜２３３２２５、２３３６２３〜２３３６４６、２３４４４７〜２３４４６６、２３４８７６〜２３４９１８、２３５２５８〜２３５３２８、２３５７７０〜２３５７８５、２３６０７１〜２３６２１３、２３６６８４〜２３７１９６、２３７５８５〜２３７６９８、２３７９４９〜２３７５５７、２４４８７３〜２４４８９７、２４５３１９〜２４５３３４、２４５７０１〜２４５７８０、２４６１５２〜２４６５２３、２４６９３６〜２４７０３１、２４７２０３〜２４７２４０、２４７４３１〜２４７４５０、２４７６４４〜２４７６５９、２４８２２３〜２４８３６３、２４８６９４〜２４８７６２、２４９４９４〜２４９５０９、２５０００１〜２５００２０、２５０６９３〜２５０７０８、２５１２１４〜２５１２３３、２５１６０１〜２５１６３７、２５１９５０〜２５２０６０、２５２６６５〜２５２６８０、２５２８３８〜２５２８６３、２５３１４０〜２５３１６６、２５３５９４〜２５３８１９、２５４０３６〜２５４０８３、２５４２４６〜２５４３４５、２５４６４１〜２５４６６０、２５４９０５〜２５４９２０、２５５３９７〜２５５４２２、２５５６１８〜２５５６３３、２５５９９２〜２５６７０４、２５７０１８〜２５７０９２、２５７３１７〜２５７３３２、２５７８１８〜２５９３０５、２５９５００〜２５９５１５、２６１２９４〜２６１６５６、２６２０２１〜２６２０３６、２６２４５３〜２６２７７９、２６３３３８〜２６６５１８、２６６８６１〜２６７１３１、２６７３７５〜２６８０５１、２６８３６６〜２６９４４７、２７００３８〜２７１８５０、２７１９５０〜２７１９６９、２７２６３１〜２７４１４５、２７４２０５〜２７５７４７、２７５８０８〜２７６６３６、２７６９３２〜２７７０６４、２７７３９１〜２７８３８０、２７８９３２〜２７９０６３、２７９３０３〜２８１００１、２８１５８７〜２８１６１０、２８２２２９〜２８３６６８、２９００３５〜２９０４７４、２９０９２４〜２９２５５０、２９２８６０〜２９４４０８、２９５４７５〜２９７０１２、２９７５８７〜２９８１１５、２９８１６１〜２９８４１８、２９８４８９〜２９８７３８、２９９０８２〜２９９１８７、２９９２７６〜２９９６６９、２９９７２３〜２９９７４９、２９９７８８〜３００５０４、または３００８３５〜３０１２９５を標的とする
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸のイントロン１を標的とするように標的化させる。特定の態様では、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは、配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）の核酸塩基配列を有する成長ホルモン受容体核酸のヌクレオチド３０５８〜１４４９６５(イントロン１)内を標的とする。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸のイントロン２を標的とする。特定の態様では、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは、配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）の核酸塩基配列を有する成長ホルモン受容体核酸のヌクレオチド１４５０４７〜２０８１３９(イントロン２)内を標的とする。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸のイントロン３を標的とする。特定の態様では、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは、配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）の核酸塩基配列を有する成長ホルモン受容体核酸のヌクレオチド２０８２０６〜２６７９９１(イントロン３)内を標的とする。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸のイントロン４を標的とする。特定の態様では、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは、配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）の核酸塩基配列を有する成長ホルモン受容体核酸のヌクレオチド２６８１２２〜２７４０１８(イントロン４)内を標的とする。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸のイントロン５を標的とする。特定の態様では、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは、配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）の核酸塩基配列を有する成長ホルモン受容体核酸のヌクレオチド２７４１９２〜２７８９２５(イントロン５)内を標的とする。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸のイントロン６を標的とする。特定の態様では、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは、配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）の核酸塩基配列を有する成長ホルモン受容体核酸のヌクレオチド２７９１０５〜２９０３０８(イントロン６)内を標的とする。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸のイントロン７を標的とする。特定の態様では、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは、配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）の核酸塩基配列を有する成長ホルモン受容体核酸のヌクレオチド２９０４７５〜２９２５３０(イントロン７)内を標的とする。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸のイントロン８を標的とする。特定の態様では、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは、配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）の核酸塩基配列を有する成長ホルモン受容体核酸のヌクレオチド２９２６２２〜２９７１５３(イントロン８)内を標的とする。
特定の実施形態では、化合物は、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドと共役基を含み、前記アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは成長ホルモン受容体核酸のイントロン９を標的とする。特定の態様では、アンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドは、配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）の核酸塩基配列を有する成長ホルモン受容体核酸のヌクレオチド２９７２２４〜２９７５５４(イントロン９)内を標的とする。
特定の実施形態では、任意の前述の化合物またはオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結部、少なくとも１つの修飾糖、及び／または少なくとも１つの修飾核酸塩基を含む。
特定の実施形態では、任意の前述の化合物またはオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾糖を含む。特定の態様では、少なくとも１つの修飾糖は２’−Ｏ−メトキシエチル基を含む。特定の態様では、少なくとも１つの修飾糖が二環式糖、例えば４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’基、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’基、または４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’基である。
特定の態様では、前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結部、例えばホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。
特定の実施形態では、任意の前述の化合物またはオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾核酸塩基、例えば、５−メチルシトシンを含む。
特定の実施形態では、任意の前述の化合物またはオリゴヌクレオチドが、
連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、かつ
連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメンを含み、
前記ギャップセグメントが、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置され、かつ各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが修飾糖を含む。
特定の実施形態は、配列番号９１８、４７９、７０３、１８００、１９０４、２１２２、２１２７、または２１９４に記載された配列を含む核酸塩基配列を有する１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
特定の態様では、修飾オリゴヌクレオチドが配列番号９１８、４７９または７０３に記載された配列を含む核酸塩基配列を有し、前記修飾オリゴヌクレオチドが、
１０個の連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、かつ
５個の連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントを含み、
前記ギャップセグメントは、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置されており、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２'−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、かつ各シトシンは５−メチルシトシンである。
特定の態様では、修飾オリゴヌクレオチドは配列番号１８００、１９０４、２１２２、２１２７、または２１９４に記載された配列を含む核酸塩基配列を有し、前記修飾オリゴヌクレオチドはＭＯＥ糖修飾、(Ｓ)−ｃＥｔ糖修飾またはデオキシ修飾のいずれかを有するヌクレオシドからなり、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、各シトシンは５−メチルシトシンである。
特定の実施形態では、化合物が、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドが、２０個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号９１８、４７９または７０３に記載された配列を含む核酸塩基配列を有し、前記修飾オリゴヌクレオチドが、
１０個の連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結されたヌクレオシドからなる５'ウイングセグメント、かつ
５個の連結されたヌクレオシドからなる３'ウイングセグメントを含み、
前記ギャップセグメントは、前記５'ウイングセグメントと前記３'ウイングセグメントの間に配置されており、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２'−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、かつ各シトシンは５−メチルシトシンである。
特定の実施形態では、化合物が、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドが、１６個の連結されたヌクレオシドからなり、配列番号１８００、１９０４、２１２２、２１２７、または２１９４に記載された配列を含む核酸塩基配列を有し、前記修飾オリゴヌクレオチドが、ＭＯＥ糖修飾、(Ｓ)−ｃＥｔ糖修飾またはデオキシ修飾のいずれかを有するヌクレオシドからなり、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、かつ各シトシンは５−メチルシトシンである。
特定の実施形態では、化合物が、ＧＨＲを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドと共役基を含む。例えば、特定の実施形態では、化合物がＩＳＩＳ５３２４０１と共役基を含む。
任意の前述の実施形態において、化合物またはオリゴヌクレオチドが、成長ホルモン受容体をコードする核酸に、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的でありうる。
任意の前述の実施形態において、成長ホルモン受容体をコードする核酸が、配列番号１〜１９の任意の１つのヌクレオチド配列を含みうる。
任意の前述の実施形態において、化合物またはオリゴヌクレオチドが一本鎖でありうる。
任意の前述の実施形態において、化合物またはオリゴヌクレオチドが二本鎖でありうる。
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシド間連結部が修飾ヌクレオシド間連結部である。
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートヌクレオシド間連結部である。
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１、２、３、４、５、６または７つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部が、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部及びホスホロチオエートヌクレオシド間連結部から選択される。
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部である。
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオシドが修飾核酸塩基を含む。
特定の実施形態では、修飾ヌクレオ塩基が５−メチルシトシンである。
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１つの修飾糖を含む。
特定の実施形態では、修飾糖が２’修飾糖、ＢＮＡまたはＴＨＰである。
特定の実施形態では、修飾糖が、２’−Ｏ−メトキシエチル、２’−Ｏ−メチル、拘束エチル、ＬＮＡまたは３’−フルオロ−ＨＮＡのいずれかである。
特定の実施形態では、化合物が、少なくとも１つの、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、拘束エチルヌクレオシド、ＬＮＡヌクレオシドまたは３’−フルオロ−ＨＮＡヌクレオシドを含む。
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが、
１０個の連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメント、かつ
５個の連結されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントを含み、
前記ギャップセグメントが、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントの間に配置され、かつ各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが修飾糖を含む。
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが２０個の連結されたヌクレオシドからなる。
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが１９個の連結されたヌクレオシドからなる。
特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが１８個の連結されたヌクレオシドからなる。
特定の実施形態は、以下の式：ｍＣｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅｓ ｍＣｅｓ ｍＣｅｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ａｄｓ Ａｄｓ Ｔｅｓ Ａｅｓ Ｇｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅ、
［式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５'−メチルシトシン、
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン、
ｅ＝２'−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシド、
ｄ＝２'−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部］に従った共役基及び修飾オリゴヌクレオチドとからなる化合物を提供する。
特定の実施形態では、化合物が、５’端上ＧａｌＮＡｃと共役したＧＨＲを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを含む。例えば特定の実施形態では、化合物が、５’端上のＧａｌＮＡｃと共役したＩＳＩＳ ５３２４０１を含む。更なる実施形態では、化合物が、５’−Ｘが付いたＩＳＩＳ ５３２４０１を含むか、またはそれから構成される以下の化学構造を有し、Ｘは本明細書に述べるようなＧａｌＮＡｃを含む共役基である。
［式中、ＸはＧａｌＮＡｃを含む共役基である。］
特定の実施形態では、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＧＨＲを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを含み、前記オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部である。更なる実施形態では、化合物が、５’−Ｘが付いたＩＳＩＳ ７１９２２３を含むか、またはそれから構成される以下の化学構造を有し、Ｘは本明細書に述べるようなＧａｌＮＡｃを含む共役基である。
特定の実施形態では、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＧＨＲを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを含み、前記オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部またはホスホジエステル連結部である。更なる実施形態では、化合物が、５’−Ｘが付いたＩＳＩＳ ７１９２２４を含むか、またはそれから構成される以下の化学構造を有し、Ｘは本明細書に述べるようなＧａｌＮＡｃを含む共役基である。
特定の実施形態では、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＧＨＲを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを含み、前記オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部またはホスホジエステル連結部である。更なる実施形態では、化合物が、５’−Ｘが付いたＩＳＩＳ ７６６７２０を含むか、またはそれから構成される以下の化学構造を有し、Ｘは本明細書に述べるようなＧａｌＮＡｃを含む共役基である。
特定の実施形態では、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＧＨＲを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを含む。更なるそのような実施形態では、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＩＳＩＳ ５３２４０１の配列を含み、次の化学構造で表される。
［式中、Ｒ１は−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３（ＭＯＥ）であり、かつＲ２がＨであるか、またはＲ１とＲ２とが一緒に橋を形成し、その場合、Ｒ１は−Ｏ−であり、Ｒ２は−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、または−ＣＨ２ＣＨ２−であって、Ｒ１とＲ２は、生じた橋が−Ｏ−ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）−、及び−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−から選択されるように直接結合し、また、同じ環上のＲ３とＲ４の各ペアについては、環ごとに独立して、Ｒ３がＨ及び−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択され、かつＲ４がＨであるか、またはＲ３とＲ４とが一緒に橋を形成し、その場合、Ｒ３は−Ｏ−、かつＲ４は−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、または−ＣＨ２ＣＨ２−であって、Ｒ３とＲ４は、生じた橋が−Ｏ−ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）−、及び−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−から選択されるように直接結合し、また、Ｒ５はＨ及び−ＣＨ３から選択され、
ＺはＳ−及びＯ−から選択される］。
特定の実施形態では、化合物が、ＷＯ２００４／０７８９２２に開示された任意の配列番号の核酸塩基配列を有したアンチセンスオリゴヌクレオチドと本明細書に記載した共役基を含む。前述の文献配列番号の全部の核酸塩基配列が参照することにより本明細書に組み入れられたものとする。例えば、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＷＯ２００４／０７８９２２に開示のオリゴヌクレオチドを含み、かつオリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部であり、かつ次の化学構造を有する。
例えば、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＷＯ２００４／０７８９２２に開示のオリゴヌクレオチドを含み、かつオリゴヌクレオチド化合物の各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部またはホスホジエステル連結部であり、かつ次の化学構造を有する。
特定の実施形態は、任意の前述の実施形態の化合物またはそれらの塩、及び少なくとも１つの薬剤的に許容される担体または希釈剤を含む組成物を提供する。特定の態様では、組成物が、約４０センチポイズ(ｃＰ)未満、約３０センチポイズ（ｃＰ）未満、約２０センチポイズ（ｃＰ）未満、約１５センチポイズ（ｃＰ）未満または約１０センチポイズ（ｃＰ）未満の粘度を有する。特定の態様において、任意の前述の粘度を有する組成物は、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１７５ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２２５ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２７５ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬの濃度で明細書に提供される化合物を含む。特定の態様において、任意の前述の粘度及び／または化合物濃度を有する組成物は、室温、あるいは約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、約２５℃、約２６℃、約２７℃、約２８℃、約２９℃、または約３０℃の温度を有する。
特定の実施形態は、任意の前述の実施形態の治療的有効量の化合物または組成物をヒトに投与し、それによって、過剰な成長ホルモンと関連する疾患を治療することを含むヒトでの過剰な成長ホルモンと関連する疾患の治療方法を提供する。特定の態様では、過剰な成長ホルモンと関連する前記疾患は先端巨大症である。特定の態様では、治療はＩＧＦ−１レベルを減少させる。
特定の実施形態は、任意の前述の実施形態の治療的有効量の化合物または組成物をヒトに投与し、それによって、過剰な成長ホルモンと関連する疾患を予防することを含むヒトでの過剰な成長ホルモンと関連する疾患の予防方法を提供する。特定の態様では、過剰な成長ホルモンと関連する前記疾患は先端巨大症である。
特定の実施形態は、任意の前述の実施形態の治療的有効量の化合物または組成物をヒトに投与し、それによって、ヒトでのＧＨＲレベルを低減させることを含むヒトでの成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）レベルを低減させる方法を提供する。特定の態様では、ヒトが過剰な成長ホルモンと関連する疾患を有する。特定の態様では、過剰な成長ホルモンと関連する疾患は先端巨大症である。
特定の態様では、前述の方法は化合物または組成物及び第２薬剤を同時投与することを含む。特定の態様では、化合物または組成物及び第２薬剤が同時に投与される。
アンチセンス化合物
オリゴマー化合物として、これらに限定されないが、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模倣物、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡが挙げられる。オリゴマー化合物は、標的核酸への「アンチセンス」であってもよく、これはオリゴマー化合物が水素結合によって標的核酸へのハイブリダイゼーションを起こすことができることを意味する。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、５’→３’方向に記載した場合に、そのアンチセンス化合物が標的とする標的核酸の標的セグメントの逆相補鎖を含む核酸塩基配列を有する。特定のそのような実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、５’→３’方向に記載した場合に、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドが標的とする標的核酸の標的セグメントの逆相補鎖を含む核酸塩基配列を有する。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１０〜３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１２〜３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１２〜２２サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１４〜３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１４〜２０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１５〜３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１５〜２０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１６〜３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１６〜２０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１７〜３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１７〜２０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１８〜３０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１８〜２１サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１８〜２０サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、２０〜３０サブユニット長である。換言すれば、そのようなアンチセンス化合物は、個々に１２〜３０個の連結されたサブユニット、１４〜３０個の連結されたサブユニット、１４〜２０個のサブユニット、１５〜３０個のサブユニット、１５〜２０個のサブユニット、１６〜３０個のサブユニット、１６〜２０個のサブユニット、１７〜３０個のサブユニット、１７〜２０個のサブユニット、１８〜３０個のサブユニット、１８〜２０個のサブユニット、１８〜２１個のサブユニット、２０〜３０個のサブユニット、または１２〜２２個の連結されたサブユニットである。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１４サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１６サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１７サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１８サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、１９サブユニット長である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、２０サブユニット長である。他の実施形態では、アンチセンス化合物が、８〜８０、1２〜５０、１３〜３０、１３〜５０、１４〜３０、１４〜５０、１５〜３０、１５〜５０、１６〜３０、１６〜５０、１７〜３０、１７〜５０、１８〜２２、１８〜２４、１８〜３０、１８〜５０、１９〜２２、１９〜３０、１９〜５０、または２０〜３０個の連結されたサブユニットである。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、長さ８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または８０個の連結されたサブユニットあるいは上記値の任意の２つで定義される範囲である。いくつかの実施形態では、アンチセンス化合物がアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、かつ連結されたサブユニットがヌクレオチドである。
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドが短縮または切断されていてもよい。例えば、単一のサブユニットを５’端から欠失させるか（５’切断）、あるいは３’端から欠失させること（３’切断）ができる。ＧＨＲ核酸を標的とする短縮型または切断型アンチセンス化合物は、アンチセンス化合物の５’端から２つのサブユニットが欠失しているか、あるいは３’端から２つのサブユニットが欠失していてもよい。あるいは、欠失したヌクレオシドは、アンチセンス化合物全体に分散していてもよい（例えば、１つのアンチセンス化合物が５’端から欠失した1つのヌクレオチドと３’端から欠失したが１つのヌクレオシドを有する）。
延長されたアンチセンス化合物中に単一の追加サブユニットが存在する場合、前記追加サブユニットはアンチセンス化合物の５’端にあっても、３’端にあってもよい。２つ以上のサブユニットが存在する場合、追加されたサブユニットは互いに隣り合っていてもよい（例えば２つのサブユニットがアンチセンス化合物の５’端に付加されているか（５’付加）、あるいは３’端に付加されている（３’付加）アンチセンス化合物）。あるいは、付加されたサブユニットは、アンチセンス化合物全体に分散していてもよい（例えば、１つのアンチセンス化合物が５’端に付加された１つのサブユニットと３’端に付加された１つのサブユニットを有する）。
活性を排除することなく、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス化合物の長さを増加しもしくは減少させ、かつ／またはミスマッチ塩基を導入することができる。例えばＷｏｏｌｆら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７３０５−７３０９，１９９２）では、１３〜２５核酸塩基長の一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、標的ＲＮＡの切断を誘導するその能力について、卵母細胞注入モデルで試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドの末端近くに８個または１１個のミスマッチ塩基を含む２５核酸塩基長のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミスマッチを含まないアンチセンスオリゴヌクレオチドほどではなかったものの、標的ｍＲＮＡの特異的切断を指示することができた。また、標的特異的切断が、１３核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチド（１つまたは３つのミスマッチを持つものを含む）を使って達成された。
Ｇａｕｔｓｃｈｉら（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９３：４６３−４７１，Ｍａｒｃｈ ２００１）は、ｂｃｌ−２ ｍＲＮＡに対して１００％の相補性を有し、かつｂｃｌ−ｘＬ ｍＲＮＡに対して３つのミスマッチを有するオリゴヌクレオチドが、インビトロ及びインビボでｂｃｌ−２とｂｃｌ−ｘＬの発現をどちらも低減できることを実証した。さらにまた、このオリゴヌクレオチドはインビボで強力な抗腫瘍活性も示した。
ＭａｈｅｒとＤｏｌｎｉｃｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１６：３３４１−３３５８，１９８８）は、一連のタンデム１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチド、ならびにそれぞれ２つまたは３つの前記タンデムアンチオリゴヌクレオチドの配列で構成される２８核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチド及び４２核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ヒトＤＨＦＲの翻訳を停止させるその能力について、ウサギ網状赤血球アッセイで試験した。３つの１４核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドのそれぞれは単独で、２８核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは４２核酸塩基アンチセンスオリゴヌクレオチドよりもレベルは低かったものの、翻訳を阻害することができた。
特定のアンチセンス化合物モチーフ及び機序
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、強化された阻害活性、標的核酸に対する増加した結合アフィニティ、またはインビボヌクレアーゼによる分解に対する耐性などといった性質が前記アンチセンス化合物に付与されるようなパターンまたはモチーフで配置された化学修飾サブユニットを有する。
キメラアンチセンス化合物は、典型的には、ヌクレアーゼ分解に対する増加した耐性、増加した細胞取り込み、標的核酸に対する増加した結合アフィニティ、及び／または増加した阻害活性が付与されるように修飾された少なくとも１つの領域を含有する。キメラアンチセンス化合物の第２の領域は、例えばＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼＲＮａｓｅ Ｈの基質として役立つなどといった、もう一つの望ましい性質を付与しうる。
アンチセンス活性は、アンチセンス化合物（例えばオリゴヌクレオチド）と標的核酸とのハイブリダイゼーションが関与し、そのハイブリダイゼーションが最終的に生物学的活性をもたらす機序であれば、どの機序に起因するものであってもよい。特定の実施形態では、標的核酸の量及び／または活性が調節される。特定の実施形態では、標的核酸の量及び／または活性が低減する。特定の実施形態では、標的核酸へのアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションが、最終的に、標的核酸分解をもたらす。特定の実施形態では、標的核酸へのアンチセンス化合物のハイブリダイゼーションが、標的核酸分解をもたらさない。特定のそのような実施形態では、標的核酸とハイブリダイズしたアンチセンス化合物の存在（占有）が、アンチセンス活性の調節をもたらす。特定の実施形態では、ある特定の化学モチーフまたは化学修飾のパターンを有するアンチセンス化合物が、１つ以上の機序を活用するのに、特に適している。特定の実施形態では、２つ以上の機序によって、かつ／またはまだ解明されていない機序によって、アンチセンス化合物が機能する。したがって、本明細書に記載するアンチセンス化合物は、ある特定の機序に限定されるものではない。
アンチセンス機序には、ＲＮａｓｅ Ｈによるアンチセンス；ＲＮＡｉ機序（これはＲＩＳＣ経路を利用するもので、ｓｉＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ及びマイクロＲＮＡ機序がこれに含まれるが、これらに限定されない）；及び占有に基づく機序などがあるが、これらに限定されない。特定のアンチセンス化合物は、２つ以上のそのような機序によって、かつ／またはさらに他の機序によって、作用しうる。
ＲＮａｓｅ Ｈによるアンチセンス
特定の実施形態では、アンチセンス活性が、少なくとも部分的には、ＲＮａｓｅ Ｈによる標的ＲＮＡの分解に起因する。ＲＮａｓｅ Ｈは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼである。「ＤＮＡ様」の一本鎖アンチセンス化合物は哺乳動物細胞においてＲＮａｓｅ Ｈ活性を引き出すことが、当技術分野では知られている。したがって、ＤＮＡヌクレオシドまたはＤＮＡ様ヌクレオシドの少なくとも一部分を含むアンチセンス化合物は、ＲＮａｓｅ Ｈを活性化して、標的核酸の切断をもたらしうる。特定の実施形態では、ＲＮａｓｅ Ｈを利用するアンチセンス化合物が、１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む。特定の実施形態では、そのようなアンチセンス化合物が、１〜８個の修飾ヌクレオシドのブロックを少なくとも１つは含む。特定のそのような実施形態では、前記修飾ヌクレオシドがＲＮａｓｅ Ｈ活性を支持しない。特定の実施形態では、そのようなアンチセンス化合物が、本明細書に記載するギャップマーである。特定のそのような実施形態では、前記ギャップマーのギャップがＤＮＡヌクレオシドを含む。特定のそのような実施形態では、前記ギャップマーのギャップがＤＮＡ様ヌクレオシドを含む。特定のそのような実施形態では、前記ギャップマーのギャップがＤＮＡヌクレオシドとＤＮＡ様ヌクレオシドを含む。
ギャップマーモチーフを有する特定のアンチセンス化合物は、キメラアンチセンス化合物とみなされる。ギャップマーでは、ＲＮａｓｅＨ切断を支持する複数のヌクレオチドを有する内側領域が、内側領域のヌクレオシドとは化学的に異なる複数のヌクレオチドを有する外側領域の間に配置されている。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ギャップセグメントは一般にエンドヌクレアーゼ切断の基質として役立ち、一方、ウイングセグメントは修飾ヌクレオシドを含む。特定の実施形態では、ギャップマーの領域が、個々の異なる領域を構成する糖部分のタイプによって区別される。ギャップマーの領域を区別するために使用される糖部分のタイプとして、いくつかの実施形態では、β−Ｄ−リボヌクレオシド、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−修飾ヌクレオシド（そのような２’−修飾ヌクレオシドとして、例えば２’−ＭＯＥや２’−Ｏ−ＣＨ３などを挙げることができる）、及び二環式糖修飾ヌクレオシド（そのような二環式糖修飾ヌクレオシドとして拘束エチルを有するものを挙げることができる）が挙げられる。特定の実施形態では、ウイング中のヌクレオシドがいくつかの修飾糖部分、例えば２’−ＭＯＥや、拘束エチルまたはＬＮＡなどの二環式糖部分を含む。特定の実施形態では、ウイングがいくつかの修飾糖部分と無修飾糖部分を含む。特定の実施形態では、ウイングが、２’−ＭＯＥヌクレオシド、拘束エチルヌクレオシドやＬＮＡヌクレオシドなどの二環式糖部分、及び２’−デオキシヌクレオシドのさまざまな組み合わせを含みうる。
異なる領域は、それぞれ一様な糖部分を含むか、異なった糖部分を含むか、または交互に並んだ糖部分を含みうる。ウイング−ギャップ−ウイングモチーフは、しばしば「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記載されるが、この場合、「Ｘ」は５’−ウイングの長さを表し、「Ｙ」はギャップの長さを表し、「Ｚ」は３’−ウイングの長さを表す。「Ｘ」と「Ｚ」は、一様な糖部分を含むか、異なった糖部分を含むか、または交互に並んだ糖部分を含みうる。特定の実施形態では、「Ｘ」と「Ｙ」が、１つ以上の２’−デオキシヌクレオシドを含みうる。「Ｙ」は２’−デオキシヌクレオシドを含みうる。本明細書において、「Ｘ−Ｙ−Ｚ」と記述されるギャップマーは、ギャップが５’−ウイング及び３’−ウイングのそれぞれと直接隣り合って配置されるような構成を有する。したがって、５’−ウイングとギャップの間にも、ギャップと３’−ウイングの間にも、介在ヌクレオチドは存在しない。本明細書に記載するアンチセンス化合物はいずれもギャップマーモチーフを有することができる。特定の実施形態では、「Ｘ」と「Ｚ」が同じであり、別の実施形態では、それらが異なる。特定の実施形態では、「Ｙ」が８〜１５ヌクレオシドである。Ｘ、Ｙ、またはＺは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０個またはそれ以上の任意のヌクレオシドでありうる。
特定の実施形態において、ＧＨＲ核酸を標的とするアンチセンス化合物は、ギャップが６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個の連結されたヌクレオシドからなるギャップマーモチーフを有する。
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、以下の式Ａによって記述される糖モチーフを有する：（Ｊ）ｍ−（Ｂ）ｎ−（Ｊ）ｐ−（Ｂ）ｒ−（Ａ）ｔ−（Ｄ）ｇ−（Ａ）ｖ−（Ｂ）ｗ−（Ｊ）ｘ−（Ｂ）ｙ−（Ｊ）ｚ
［式中、
各Ａは独立して２’置換ヌクレオシドであり、
各Ｂは独立して二環式ヌクレオシドであり、
各Ｊは独立して２’−置換ヌクレオシドまたは２’−デオキシヌクレオシドであり、
各Ｄは２’−デオキシヌクレオシドであり、
ｍは０〜４であり、ｎは０〜２であり、ｐは０〜２であり、ｒは０〜２であり、ｔは０〜２であり、ｖは０〜２であり、ｗは０〜４であり、ｘは０〜２であり、ｙは０〜２であり、ｚは０〜４であり、ｇは６〜１４である；
ただし、
ｍ、ｎ、及びｒのうちの少なくとも１つは０ではなく、
ｗ及びｙのうちの少なくとも１つは０ではなく、
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ、及びｔの和は２〜５であり、かつ
ｖ、ｗ、ｘ、ｙ、及びｚの和は２〜５であるものとする。
ＲＮＡｉ化合物
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が干渉ＲＮＡ化合物（ＲＮＡｉ）であり、これには、二本鎖ＲＮＡ化合物（短鎖干渉ＲＮＡまたはｓｉＲＮＡともいう）と一本鎖ＲＮＡｉ化合物（すなわちｓｓＲＮＡ）が含まれる。そのような化合物は、少なくとも部分的には、ＲＩＳＣ経路によって作動して、標的核酸を分解しかつ／または隔離する（したがってマイクロＲＮＡ／マイクロＲＮＡ模倣化合物を含む）。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、それらをそのような機序に特に適したものにする修飾を含む。
ｉ．ｓｓＲＮＡ化合物
特定の実施形態において、アンチセンス化合物（一本鎖ＲＮＡｉ化合物（ｓｓＲＮＡ）としての使用に特に適したものを含む）は、修飾５’末端を含む。特定のそのような実施形態では、前記５’末端が修飾ホスフェート部分を含む。特定の実施形態では、そのような修飾ホスフェートが安定化されている（例えば無修飾５’−ホスフェートと比較して分解／切断に対して耐性である）。特定の実施形態では、そのような５’末端ヌクレオシドが５’−リン部分を安定化する。当技術分野では、いくつかの修飾５’末端ヌクレオシドを、例えばＷＯ／２０１１／１３９７０２などに見いだすことができる。
特定の実施形態では、ｓｓＲＮＡ化合物の５’−ヌクレオシドが式ＩＩｃを有する：
式中、
Ｔ１は、保護されていてもよいリン部分であり、
Ｔ２は、式ＩＩｃの化合物をオリゴマー化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、
Ａは式：
の一つを有し；
Ｑ１及びＱ２は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたはＮ（Ｒ３）（Ｒ４）であり、
Ｑ３は、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｒ５）またはＣ（Ｒ６）（Ｒ７）であり、
各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルコキシであり、
Ｍ３は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１４、Ｃ（Ｒ１５）（Ｒ１６）、Ｃ（Ｒ１５）（Ｒ１６）Ｃ（Ｒ１７）（Ｒ１８）、Ｃ（Ｒ１５）＝Ｃ（Ｒ１７）、ＯＣ（Ｒ１５）（Ｒ１６）またはＯＣ（Ｒ１５）（Ｂｘ２）であり、
Ｒ１４は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｂｘ１は複素環式塩基部分であるか；または
Ｂｘ２が存在する場合には、Ｂｘ２が複素環式塩基部分であり、かつＢｘ１がＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｊ４、Ｊ５、Ｊ６及びＪ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであるか、または
Ｊ４が、Ｊ５またはＪ７の一方と共に、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１９、Ｃ（Ｒ２０）（Ｒ２１）、Ｃ（Ｒ２０）＝Ｃ（Ｒ２１）、Ｃ［＝Ｃ（Ｒ２０）（Ｒ２１）］及びＣ（＝Ｏ）から選択される１〜３個の連結されたビラジカル基を含む橋を形成し、かつＪ５、Ｊ６及びＪ７の残り２つが、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、
各Ｒ１９、Ｒ２０及びＲ２１は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、
Ｇは、Ｈ、ＯＨ、ハロゲンまたはＯ−［Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）］ｎ−［（Ｃ＝Ｏ）ｍ−Ｘ１］ｊ−Ｚであり、
各Ｒ８及びＲ９は、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｘ１は、Ｏ、ＳまたはＮ（Ｅ１）であり、
Ｚは、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたはＮ（Ｅ２）（Ｅ３）であり、
Ｅ１、Ｅ２及びＥ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、
ｎは、１〜約６であり、
ｍは、０または１であり、
ｊは、０または１であり、
各置換基は、ハロゲン、ＯＪ１、Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）、＝ＮＪ１、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＮ、ＯＣ（＝Ｘ２）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ２）Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）及びＣ（＝Ｘ２）Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）から独立して選択される１つ以上に置換されていてもよい置換基を含み、
Ｘ２は、Ｏ、ＳまたはＮＪ３であり、
各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
ｊが１である場合、ＺはハロゲンでもＮ（Ｅ２）（Ｅ３）でもなく、かつ
前記オリゴマー化合物は８〜４０個のモノマー型サブユニットを含み、標的核酸の少なくとも一部分にハイブリダイズ可能である。
特定の実施形態では、Ｍ３が、Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、ＯＣＨ２またはＯＣ（Ｈ）（Ｂｘ２）である。特定の実施形態では、Ｍ３がＯである。
特定の実施形態では、Ｊ４、Ｊ５、Ｊ６及びＪ７がそれぞれＨである。特定の実施形態では、Ｊ４が、Ｊ５またはＪ７の一方と共に橋を形成する。
特定の実施形態では、Ａが、式：
の一方を有し、
式中、
Ｑ１及びＱ２は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたは置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシである。特定の実施形態では、Ｑ１及びＱ２が、それぞれＨである。特定の実施形態では、Ｑ１及びＱ２が、それぞれ独立して、Ｈまたはハロゲンである。特定の実施形態では、Ｑ１及びＱ２がＨであり、Ｑ１及びＱ２の他方がＦ、ＣＨ３またはＯＣＨ３である。
特定の実施形態では、Ｔ１が式：
を有し、
式中、
Ｒａ及びＲｃは、それぞれ独立して、保護ヒドロキシル、保護チオール、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、保護アミノまたは置換アミノであり、かつ
Ｒｂは、ＯまたはＳである。特定の実施形態では、ＲｂがＯであり、Ｒａ及びＲｃが、それぞれ独立して、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３またはＣＨ（ＣＨ３）２である。
特定の実施形態では、Ｇが、ハロゲン、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２Ｆ、ＯＣＨＦ２、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｆ、ＯＣＨ２ＣＨＦ２、ＯＣＨ２ＣＦ３、ＯＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＦ３、Ｏ（ＣＨ２）３−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＮ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ１２）−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）またはＯ（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒ１２）−Ｃ（＝ＮＲ１３）［Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）］であり、式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。特定の実施形態では、Ｇが、ハロゲン、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＦ３、ＯＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−（ＣＨ２）２−Ｎ（ＣＨ３）２またはＯＣＨ２−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。特定の実施形態では、Ｇが、Ｆ、ＯＣＨ３またはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３である。特定の実施形態では、ＧがＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３である。
特定の実施形態では、前記５’末端ヌクレオシドが式ＩＩｅ：
を有する。
特定の実施形態において、アンチセンス化合物（ｓｓＲＮＡに特に適したものを含む）は、オリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って、所定のパターンまたは糖修飾モチーフで配置された、１タイプ以上の修飾糖部分及び／または天然に存在する糖部分を含む。そのようなモチーフは、本明細書で論じる糖修飾及び／または他の既知の糖修飾をどれでも含みうる。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、一様な糖修飾を有する領域を含むか、または一様な糖修飾を有する領域からなる。特定のそのような実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドが、同じＲＮＡ様糖修飾を含む。特定の実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドが２’−Ｆヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドが２’−ＯＭＥｅヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドが２’−ＭＯＥヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドがｃＥｔヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記領域の各ヌクレオシドがＬＮＡヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記一様な領域が、前記オリゴヌクレオチドの全部または本質的に全部を構成する。特定の実施形態では、前記領域が１〜４個の末端ヌクレオシドを除くオリゴヌクレオシド全体を構成する。
特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、糖修飾が交互に並んだ１つ以上の領域を含み、前記ヌクレオシドは、第１タイプの糖修飾を有するヌクレオチドと、第２タイプの糖修飾を有するヌクレオチドとの間で交互する。特定の実施形態では、両タイプのヌクレオシドがＲＮＡ様ヌクレオシドである。特定の実施形態では、交互に並ぶヌクレオシドが、２’−ＯＭｅ、２’−Ｆ、２’−ＭＯＥ、ＬＮＡ、及びｃＥｔから選択される。特定の実施形態では、交互修飾が、２’−Ｆ及び２’−ＯＭｅである。そのような領域は連続していてもよいし、異なる修飾がなされたヌクレオシドまたは共役ヌクレオシドによって中断されていてもよい。
特定の実施形態では、交互修飾の交互領域が、それぞれ単一のヌクレオシドからなる（すなわち、パターンは（ＡＢ）ｘＡｙであり、ここでＡは第１タイプの糖修飾を有するヌクレオシドであり、Ｂは第２タイプの糖修飾を有するヌクレオシドである。また、ｘは１〜２０であり、ｙは０または１である）。特定の実施形態では、交互モチーフで交互に並ぶ１つ以上の領域が、あるタイプのヌクレオシドを２つ以上含む。例えばオリゴヌクレオチドは、以下のヌクレオシドモチーフのいずれかの領域を１つ以上含みうる：
ＡＡＢＢＡＡ、
ＡＢＢＡＢＢ、
ＡＡＢＡＡＢ
ＡＢＢＡＢＡＡＢＢ、
ＡＢＡＢＡＡ、
ＡＡＢＡＢＡＢ、
ＡＢＡＢＡＡ、
ＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ、
ＢＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ、または
ＡＢＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ
［式中、Ａは第１タイプのヌクレオシドであり、Ｂは第２タイプのヌクレオシドである］。特定の実施形態では、Ａ及びＢは、それぞれ２’−Ｆ、２’−ＯＭｅ、ＢＮＡ、及びＭＯＥから選択される。
特定の実施形態では、そのような交互モチーフを有するオリゴヌクレオチドが、修飾５’末端ヌクレオシド、例えば式ＩＩｃまたは式ＩＩｅに示すものも含む。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、２−２−３モチーフを有する領域を含む。そのような領域は、以下のモチーフを含む：
−（Ａ）２−（Ｂ）ｘ−（Ａ）２−（Ｃ）ｙ−（Ａ）３−
式中、Ａは第１タイプの修飾ヌクレオシドであり、
Ｂ及びＣは、Ａとは異なる修飾がなされたヌクレオシドであるが、ＢとＣとは互いに同じ修飾を有しても異なる修飾を有してもよく、
ｘ及びｙは１〜１５である。
特定の実施形態では、Ａが２’−ＯＭｅ修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態では、Ｂ及びＣがどちらも２’−Ｆ修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態では、Ａが２’−ＯＭｅ修飾ヌクレオシドであり、かつＢとＣがどちらも２’−Ｆ修飾ヌクレオシドである。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオシドが、以下の糖モチーフを有する：
５’−（Ｑ）−（ＡＢ）ｘＡｙ−（Ｄ）ｚ
式中、
Ｑは、安定化されたホスフェート部分を含むヌクレオシドであり、特定の実施形態では、Ｑが、式ＩＩｃまたは式ＩＩｅを有するヌクレオシドであり、
Ａは、第１タイプの修飾ヌクレオシドであり、
Ｂは、第２タイプの修飾ヌクレオシドであり、
Ｄは、Ｄと隣り合うヌクレオシドとは異なる修飾を含む修飾ヌクレオシドである。したがって、もしｙが０であれば、Ｄには、Ｂとは異なる修飾がなされていなければならず、ｙが１であれば、Ｄには、Ａとは異なる修飾がなされていなくてはならない。特定の実施形態では、Ｄが、ＡともＢとも異なる。
Ｘは５〜１５であり、
Ｙは０または１であり、
Ｚは０〜４である。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオシドが、以下の糖モチーフを有する：
５’−（Ｑ）−（Ａ）ｘ−（Ｄ）ｚ
式中、
Ｑは、安定化されたホスフェート部分を含むヌクレオシドであり、特定の実施形態では、Ｑが、式ＩＩｃまたは式ＩＩｅを有するヌクレオシドであり、
Ａは、第１タイプの修飾ヌクレオシドであり、
Ｄは、Ａとは異なる修飾を含む修飾ヌクレオシドであり、
Ｘは１１〜３０であり、
Ｚは０〜４である。
特定の実施形態では、上記モチーフ中のＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤが、２’−ＯＭｅ、２’−Ｆ、２’−ＭＯＥ、ＬＮＡ、及びｃＥｔから選択される。特定の実施形態では、Ｄが末端ヌクレオシドを表す。特定の実施形態では、そのような末端ヌクレオシドが、標的核酸にハイブリダイズするようには設計されていない（ただし偶然ハイブリダイズするものは多少あるかもしれない）。特定の実施形態では、各Ｄヌクレオシドの核酸塩基が、標的核酸の対応する位置にある核酸塩基の実体には関わりなく、アデニンである。特定の実施形態では、各Ｄヌクレオシドの核酸塩基がチミンである。
特定の実施形態において、アンチセンス化合物（ｓｓＲＮＡとしての使用に特に適したものを含む）は、オリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って、所定のパターンまたは修飾ヌクレオシド間連結部モチーフで配置された修飾ヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、交互ヌクレオシド間連結部モチーフを有する領域を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、一様な修飾ヌクレオシド間連結部の領域を含む。特定のそのような実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部によって一様に連結された領域を含む。特定の実施形態では、前記オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部によって一様に連結されている。特定の実施形態では、前記オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部が、ホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択される。特定の実施形態では、前記オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択され、かつ少なくとも１つのヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートである。
特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも６つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも８つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個のホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも６つの連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも８つの連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態において、前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１２個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定のそのような実施形態では、少なくとも１つのそのようなブロックが、前記オリゴヌクレオチドの３’端に位置する。特定のそのような実施形態では、少なくとも１つのそのようなブロックが、前記オリゴヌクレオチドの３’端から３ヌクレオシド以内に位置する。
本明細書に記載するさまざまな糖モチーフのいずれかを有するオリゴヌクレオチドは、任意の連結部モチーフを有しうる。例えばオリゴヌクレオチド（例えば上述のものが挙げられるが、それらに限定されない）は、以下の非限定的な表から選択される連結部モチーフを有しうる。
ｉｉ．ｓｉＲＮＡ化合物
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が二本鎖ＲＮＡｉ化合物（ｓｉＲＮＡ）である。そのような実施形態では、一方の鎖または両方の鎖が、ｓｓＲＮＡについて上述した任意の修飾モチーフを含みうる。特定の実施形態において、ｓｓＲＮＡ化合物は無修飾ＲＮＡでありうる。特定の実施形態において、ｓｉＲＮＡ化合物は無修飾ＲＮＡヌクレオシドと修飾ヌクレオシド間連結部とを含みうる。
いくつかの実施形態は、二本鎖組成物であって、各鎖が１つ以上の修飾ヌクレオシドまたは無修飾ヌクレオシドの場所によって定義されるモチーフを含む、前記二本鎖組成物に関する。特定の実施形態では、完全にハイブリダイズするかまたは少なくとも部分的にハイブリダイズして二重鎖領域を形成する第１オリゴマー化合物と第２オリゴマー化合物とを含む組成物であって、核酸標的に相補的で核酸標的にハイブリダイズする領域をさらに含む、前記組成物が提供される。そのような組成物が、核酸標的に対する完全な相補性または部分的相補性を有するアンチセンス鎖である第１オリゴマー化合物と、第１オリゴマー化合物に対して相補的な１つ以上の領域を有し第１オリゴマー化合物と共に少なくとも１つの二重鎖領域を形成する第２オリゴマー化合物とを含むことは、適切である。
いくつかの実施形態の組成物は、核酸標的にハイブリダイズしてその正常な機能を失わせることにより、遺伝子発現を調節する。いくつかの実施形態では、標的核酸がＧＨＲである。特定の実施形態では、標的としたＧＨＲの分解が、本発明の組成物によって形成される活性化ＲＩＳＣ複合体によって助長される。
いくつかの実施形態は、二本鎖組成物であって、一方の鎖が、例えばＲＩＳＣ（または切断）複合体への反対鎖の優先ローディングに影響を及ぼすのに役立つ、前記二本鎖組成物に向けられる。これらの組成物は、選ばれた核酸分子を標的にし、１つ以上の遺伝子の発現を調節するのに有用である。いくつかの実施形態では、本発明の組成物が、標的ＲＮＡの一部分にハイブリダイズすることで、前記標的ＲＮＡの正常な機能を失わせる。
特定の実施形態は、二本鎖組成物であって、両方の鎖がヘミマー（ｈｅｍｉｍｅｒ）モチーフ、完全修飾モチーフ、位置修飾モチーフまたは交互モチーフを含む、前記二本鎖組成物に向けられる。本発明の組成物の各鎖は、例えばｓｉＲＮＡ経路において、ある特定の役割を果たすように、修飾することができる。各鎖に異なるモチーフを使用するか、各鎖に異なる化学修飾を持つ同じモチーフを使用することにより、アンチセンス鎖をＲＩＳＣ複合体に誘導すると同時に、センス鎖の組込みを阻害することができる。このモデルでは、各鎖を、その特定の役割が強化されるように、独立して修飾することができる。アンチセンス鎖は、ＲＩＳＣの一領域におけるその役割を強化するために、５’端を修飾することができ、一方、３’端には、ＲＩＳＣの異なる領域におけるその役割を強化するために、異なる修飾を加えることができる。
二本鎖オリゴヌクレオチド分子は、自己相補的なセンス領域とアンチセンス領域とを含み、前記アンチセンス領域は、標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、前記センス領域は標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を有する、二本鎖ポリヌクレオチド分子であることができる。二本鎖オリゴヌクレオチド分子は、一方の鎖がセンス鎖であり、他方がアンチセンス鎖である、２つの別個のオリゴヌクレオチドから組み立てることができ、前記アンチセンス鎖及びセンス鎖は自己相補的である（すなわち各鎖は、他方の鎖のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列であって、例えばアンチセンス鎖とセンス鎖は二重鎖構造または二本鎖構造を形成し、例えば前記二本鎖領域は約１５〜約３０、例えば約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０塩基対である。また、アンチセンス鎖は標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス鎖は標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を含む（例えば、二本鎖オリゴヌクレオチド分子のうちの約１５〜約２５ヌクレオチドまたはそれ以上が、標的核酸またはその一部分に相補的である）。あるいは、前記二本鎖オリゴヌクレオチドは単一のオリゴヌクレオチドから組み立てられ、この場合、ｓｉＲＮＡの自己相補的なセンス領域及びアンチセンス領域は、核酸系リンカーまたは非核酸系リンカーを利用して連結されている。
前記二本鎖オリゴヌクレオチドは、二重鎖、非対称二重鎖、ヘアピンまたは非対称ヘアピン二次構造を持ち、自己相補的センス領域とアンチセンス領域とを有する、ポリヌクレオチドであって、前記アンチセンス領域が、別個の標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、前記センス領域が前記標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を有するものであることができる。前記二本鎖オリゴヌクレオチドは、２つ以上のループ構造と、自己相補的なセンス領域及びアンチセンス領域を含むステムとを有する環状一本鎖ポリヌクレオチドであって、前記アンチセンス領域は標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、かつ前記センス領域は前記標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を有するものであることができ、前記環状ポリヌクレオチドは、インビボまたはインビトロでプロセシングを受けて、ＲＮＡｉを媒介する能力を有する活性なｓｉＲＮＡ分子を生成させることができる。
特定の実施形態では、前記二本鎖オリゴヌクレオチドが、別個のセンス配列またはセンス領域及びアンチセンス配列またはアンチセンス領域を含み、前記センス領域とアンチセンス領域は、当技術分野に知られているヌクレオチド連結分子または非ヌクレオチド連結分子によって共有結合的に連結されているか、あるいはイオン相互作用、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、及び／またはスタッキング相互作用によって非共有結合的に連結されている。特定の実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドが、標的遺伝子のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含む。もう一つの実施形態では、前記二本鎖オリゴヌクレオチドが、標的遺伝子のヌクレオチド配列と、前記標的遺伝子の発現阻害を引き起こすような形で相互作用する。
本明細書にいう二本鎖オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡだけを含有する分子に限定される必要はなく、さらに化学修飾ヌクレオチド及び非ヌクレオチドも包含する。特定の実施形態において、短鎖干渉核酸分子は２’−ヒドロキシ（２’−ＯＨ）含有ヌクレオチドを欠く。特定の実施形態において、短鎖干渉核酸は、場合によっては、リボヌクレオチド（例えば２’−ＯＨ基を有するヌクレオチド）を一切含まない。しかし、ＲＮＡｉを支持するために分子内にリボヌクレオチドの存在を必要としないそのような二本鎖オリゴヌクレオチドには、２’−ＯＨ基を持つ１つまたは複数のヌクレオチドを含有する１つまたは複数のリンカーを取り付けておくか、２’−ＯＨ基を持つ１つまたは複数のヌクレオチドを含有する他の基、部分、または鎖を取り付けまたは会合させておくことができる。場合により、二本鎖オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド位置の約５、１０、２０、３０、４０、または５０％に、リボヌクレオチドを含むことができる。本明細書において使用する用語ｓｉＲＮＡは、配列特異的ＲＮＡｉを媒介する能力を有する核酸分子を記載するために使用される他の用語、例えば短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、短鎖干渉オリゴヌクレオチド、短鎖干渉核酸、短鎖干渉修飾オリゴヌクレオチド、化学修飾ｓｉＲＮＡ、転写後遺伝子サイレンシングＲＮＡ（ｐｔｇｓＲＮＡ）その他と等価であるものとする。加えて、本明細書において使用する用語ＲＮＡｉは、配列特異的ＲＮＡ干渉を記述するために使用される他の用語、例えば転写後遺伝子サイレンシング、翻訳阻害、またはエピジェネティクスなどと等価であるものとする。例えば、二本鎖オリゴヌクレオチドは、転写後レベルと転写前レベルのどちらでも、遺伝子をエピジェネティックにサイレンシングするために使用することができる。非限定的な一例において、本発明のｓｉＲＮＡ分子による遺伝子発現のエピジェネティックな調整は、遺伝子発現を改変するためのクロマチン構造またはメチル化パターンのｓｉＲＮＡ媒介修飾に起因しうる（例えばＶｅｒｄｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６７２−６７６；Ｐａｌ−Ｂｈａｄｒａ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６６９−６７２；Ａｌｌｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８１８−１８１９；Ｖｏｌｐｅ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８３３−１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２１５−２２１８；及びＨａｌｌ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２３２−２２３７を参照されたい）。
ここに提供するいくつかの実施形態の化合物及び組成物は、例えば自己相補的配列を持つ一本のＲＮＡ鎖が二本鎖コンフォメーションをとる能力を持つ「ヘアピン」またはステム−ループ二本鎖ＲＮＡエフェクター分子や、２本の別個のＲＮＡ鎖を含む二重鎖ｄｓＲＮＡエフェクター分子などといったｄｓＲＮＡ媒介遺伝子サイレンシング機序またはＲＮＡｉ機序によって、ＧＨＲを標的にすることができると考えられる。さまざまな実施形態において、ｄｓＲＮＡはもっぱらリボヌクレオチドからなるか、またはリボヌクレオチドとデオキシリボヌクレオチドの混合物からなる（例えば２０００年４月１９日に出願されたＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日に出願された米国出願第６０／１３０，３７７号などに開示されているＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッド）。ｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡエフェクター分子は、前記分子の一セグメントが前記分子のもう一つのセグメントにあるヌクレオチドと塩基対を形成するように自己相補性領域を持つ単一の分子でありうる。さまざまな実施形態において、単一の分子からなるｄｓＲＮＡは、もっぱらリボヌクレオチドからなるか、またはデオキシリボヌクレオチドの領域に相補的なリボヌクレオチドの領域を含む。あるいは、ｄｓＲＮＡは、互いに相補性領域を有する２つの異なる鎖を含みうる。
さまざまな実施形態では、両方の鎖がもっぱらリボヌクレオチドからなるか、一方の鎖がもっぱらリボヌクレオチドからなり、かつ一方の鎖がもっぱらデオキシリボヌクレオチドからなるか、または一方もしくは両方の鎖がリボヌクレオチドとデオキシリボヌクレオチドの混合物を含有する。特定の実施形態では、相補性領域が、互いに、及び標的核酸配列に対して、少なくとも７０、８０、９０、９５、９８、または１００％相補的である。特定の実施形態では、二本鎖コンフォメーションで存在するｄｓＲＮＡの領域が、少なくとも１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、５０、７５、１００、２００、５００、１０００、２０００または５０００ヌクレオチドを含むか、ｄｓＲＮＡに表現されているｃＤＮＡまたは他の標的核酸配列中のヌクレオチドのすべてを含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡが、一本鎖端などの一本鎖領域を一切含有しないか、またはｄｓＲＮＡがヘアピンである。別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが１つ以上の一本鎖領域またはオーバーハングを有する。特定の実施形態では、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドが、アンチセンス鎖またはアンチセンス領域である（例えば標的核酸に対して少なくとも７０、８０、９０、９５、９８、または１００％の相補性を有する）ＤＮＡ鎖またはＤＮＡ領域と、センス鎖またはセンス領域である（例えば標的核酸に対して少なくとも７０、８０、９０、９５、９８、または１００％の同一性を有する）ＲＮＡ鎖またはＲＮＡ領域とを含むか、またはその逆である。
さまざまな実施形態では、前記ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドが、酵素法または化学合成法、例えば本明細書に記載するもの、または２０００年４月１９日に出願されたＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日に出願された米国出願第６０／１３０，３７７号に記載されているものを使って、インビトロで作製される。別の実施形態では、インビトロで合成されたＤＮＡ鎖が、細胞への前記ＤＮＡ鎖の形質転換に先だって、またはその後に、またはそれと並行して、インビボまたはインビトロで作製されたＲＮＡ鎖と複合体を形成する。さらに別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが、センス領域とアンチセンス領域とを含有する単一の環状核酸であるか、またはｄｓＲＮＡが、環状核酸と第二の環状核酸または線状核酸とを含む（例えば２０００年４月１９日に出願されたＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日に出願された米国出願第６０／１３０，３７７号を参照されたい）。例示的環状核酸として、ヌクレオチドの遊離５’ホスホリル基がもう一つのヌクレオチドの２’ヒドロキシル基に輪を描いて元に戻るように連結された状態になる、投げ縄（ｌａｒｉａｔ）構造が挙げられる。
別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが、糖の２’位にハロゲン（フッ素基など）を含有するか、アルコキシ基（メトキシ基など）を含有する修飾ヌクレオチドを１つ以上含有する。このハロゲンまたはアルコキシ基は、対応する２’位が水素またはヒドロキシル基を含有する対応するｄｓＲＮＡと比較して、ｄｓＲＮＡのインビトロまたはインビボでの半減期を増加させる。さらに別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが、隣接するヌクレオチド間に天然に存在するホスホジエステル連結部以外の連結部を１つ以上含む。そのような連結部の例として、ホスホルアミド、ホスホロチオエート、及びホスホロジチオエート連結部が挙げられる。ｄｓＲＮＡは、米国特許第６，６７３，６６１号に教示されているような化学修飾核酸分子であってもよい。別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが、例えば２０００年４月１９日に出願されたＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日に出願された米国出願第６０／１３０，３７７号に開示されているように、１本または２本のキャップ鎖を含有する。
別の実施形態では、ｄｓＲＮＡが、ＷＯ００／６３３６４に開示されている少なくとも部分的なｄｓＲＮＡ分子のいずれかであることも、米国仮特許出願第６０／３９９，９９８号及び米国仮特許出願第６０／４１９，５３２号ならびにＷＯ２００４／０３５７６５として２００４年４月２９日に公開されたＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３３４６６に記載のｄｓＲＮＡ分子のいずれかであることもでき、これらの文献の教示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。ｄｓＲＮＡはいずれも、本明細書に記載する方法を使って、または標準的方法、例えばＷＯ００／６３３６４に記載の方法を使って、インビトロまたはインビボで発現させることができる。
占有
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ＲＮａｓｅ Ｈによる標的核酸の切断をもたらすとも、ＲＩＳＣ経路による切断または隔離をもたらすとも予想されない。特定のそのような実施形態では、アンチセンス活性が占有に起因しうる。この場合は、ハイブリダイズしたアンチセンス化合物の存在が、標的核酸の活性を妨害する。特定のそのような実施形態では、アンチセンス化合物が、一様に修飾されていてもよいし、修飾物が混在し、かつ／または修飾ヌクレオシドと無修飾ヌクレオシドとが混在していてもよい。
標的核酸、標的領域及びヌクレオチド配列
本明細書で提供する化合物によって標的となり得る成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）をコードするヌクレオチド配列として、これらに限定されるものではないが、以下のＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿０００１６３．４（本明細書には配列番号１として組み込まれる）、ヌクレオチド４２４１１００１〜４２７１４０００が切り出されたＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６（本明細書には配列番号２として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号Ｘ０６５６２．１（本明細書には配列番号３として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＤＲ００６３９５．１（本明細書には配列番号４として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＤＢ０５２０４８．１（本明細書には配列番号５として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＦ２３０８００．１（本明細書には配列番号６として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＡ３９８２６０．１の相補鎖（本明細書には配列番号７として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＢＣ１３６４９６．１（本明細書には配列番号８として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２３９９．２（本明細書には配列番号９として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４００．２（本明細書には配列番号１０として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０１．３（本明細書には配列番号１１として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０２．２（本明細書には配列番号１２として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０３．２（本明細書には配列番号１３として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０４．２（本明細書には配列番号１４として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０５．２（本明細書には配列番号１５として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４０６．２（本明細書には配列番号１６として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４６０．１（本明細書には配列番号１７として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４６１．１（本明細書には配列番号１８として組み込まれる）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００１２４２４６２．１（本明細書には配列番号１９として組み込まれる）、またはヌクレオチド４４１００００〜４７２００００が切り出されたＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＷ＿００１１２０９５８．１（本明細書には配列番号２３３２として組み込まれる）が挙げられる。
ハイブリダイゼーション
いくつかの実施形態では、本明細書に開示するアンチセンス化合物とＧＨＲ核酸との間でハイブリダイゼーションが起こる。最もよくあるハイブリダイゼーションの機序は、核酸分子の相補的核酸塩基間での水素結合形成（例えばワトソン−クリック型、フーグスティーン型または逆フーグスティーン型水素結合形成）を必要とする。
ハイブリダイゼーションは、さまざまな条件下で起こりうる。ストリンジェントな条件は配列依存的であり、ハイブリダイズさせようとする核酸分子の性質及び組成によって決まる。
ある配列が標的核酸に特異的にハイブリダイズすることができるかどうかを決定する方法は、当技術分野では周知である。特定の実施形態において、ここに提供するアンチセンス化合物は、ＧＨＲ核酸と特異的にハイブリダイズすることができる。
相補性
アンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が、所望の効果（例えばＧＨＲ核酸などの標的核酸のアンチセンス阻害）が生じるような形で、標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合することができるのであれば、そのアンチセンス化合物と標的核酸とは互いに相補的である。
アンチセンス化合物が依然として標的核酸に特異的にハイブリダイズできるのであれば、アンチセンス化合物とＧＨＲ核酸の間の非相補的核酸塩基は許容されうる。さらにまた、アンチセンス化合物は、介在セグメントまたは隣接セグメントがハイブリダイゼーション事象に関与しないような形で、ＧＨＲ核酸の１つ以上のセグメントにハイブリダイズしてもよい（例えばループ構造、ミスマッチ、またはヘアピン構造）。
特定の実施形態において、ここに提供するアンチセンス化合物またはその指定部分は、ＧＨＲ核酸、その標的領域、標的セグメント、または指定部分に対して、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相同であるか、または少なくとも７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％相同である。標的核酸に対するアンチセンス化合物の相補性パーセントは、常法を使って決定することができる。
例えば、アンチセンス化合物の２０核酸塩基中１８核酸塩基が標的領域に相補的であり、それゆえに特異的にハイブリダイズするであろうアンチセンス化合物は、９０パーセントの相補性に相当するであろう。この例では、残りの非相補的核酸塩基は一かたまりになって存在してもよいし、相補的核酸塩基の間に点在していてもよく、互いに連続している必要も、相補的核酸塩基と連続している必要もない。したがって、標的核酸と完全に相補的な２つの領域に挟まれた４つの非相補的核酸塩基を有する１８核酸塩基長のアンチセンス化合物は、標的核酸に対して７７．８％の総相補性を有し、したがって本発明の範囲に包含されるであろう。標的核酸の一領域に対するアンチセンス化合物の相補性パーセントは、当技術分野において知られているＢＬＡＳＴプログラム（ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ）及びＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３ ４１０；Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｍａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９ ６５６）を使って、ルーチンに決定することができる。相同性パーセント、配列同一性パーセントまたは配列相補性パーセントは、例えばＳｍｉｔｈとＷａｔｅｒｍａｎのアルゴリズム（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，１９８１，２，４８２ ４８９）を使用するＧａｐプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，ウィスコンシン州マディソン、ユニバーシティ・リサーチ・パーク）により、デフォルト設定を使って決定することができる。
特定の実施形態では、ここに提供するアンチセンス化合物またはその指定部分が、標的核酸またはその指定部分に完全に相補的（すなわち１００％相補的）である。例えばアンチセンス化合物は、ＧＨＲ核酸、またはその標的領域、または標的セグメントもしくは標的配列に完全に相補的でありうる。本明細書にいう「完全に相補的」とは、アンチセンス化合物の各核酸塩基が、標的核酸の対応する核酸塩基と正確に塩基対合する能力を有することを意味する。例えば２０核酸塩基アンチセンス化合物は、そのアンチセンス化合物に完全に相補的な対応する２０核酸塩基部分が標的核酸中に存在するのであれば、４００核酸塩基長の標的配列に対して完全に相補的である。第１及び／または第２核酸の指定部分に関して完全に相補的という表現を使用することもできる。例えば３０核酸塩基アンチセンス化合物の２０核酸塩基部分は、４００核酸塩基長の標的配列に対して「完全に相補的」であることができる。３０核酸塩基オリゴヌクレオチドの２０核酸塩基部分は、標的配列が対応する２０核酸塩基部分（その各核酸塩基がアンチセンス化合物の前記２０核酸塩基部分に相補的であるもの）を有するのであれば、標的配列に対して完全に相補的である。同時に、前記３０核酸塩基アンチセンス化合物全体は、前記アンチセンス化合物の残りの１０核酸塩基も標的配列に相補的であるかどうかに依存して、標的配列に対して完全に相補的である場合も、そうでない場合もある。
非相補的核酸塩基の場所はアンチセンス化合物の５’端または３’端であることができる。あるいは、１つまたは複数の非相補的核酸塩基が、アンチセンス化合物の内部位置にあってもよい。２つ以上の非相補的核酸塩基が存在する場合、それらは連続して（すなわち連結されて）いてもよいし、不連続であってもよい。一実施形態では、非相補的核酸塩基が、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウイングセグメント中にある。
特定の実施形態において、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基長のアンチセンス化合物または１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０核酸塩基長までのアンチセンス化合物が、ＧＨＲ核酸またはその指定部分などの標的核酸との比較で含む非相補的核酸塩基は、４つ以下、３つ以下、２つ以下、または１つ以下である。
特定の実施形態において、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０核酸塩基長のアンチセンス化合物または１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０核酸塩基長までのアンチセンス化合物が、ＧＨＲ核酸またはその指定部分などの標的核酸との比較で含む非相補的核酸塩基は、６つ以下、５つ以下、４つ以下、３つ以下、２つ以下、または１つ以下である。
ここに提供するアンチセンス化合物には、標的核酸の一部分に相補的なものも含まれる。ここでいう「一部分」とは、標的核酸の一領域または一セグメント内の所定の数の連続する（すなわち連結された）核酸塩基を指す。「一部分」は、アンチセンス化合物の、所定の数の連続する核酸塩基も意味しうる。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも８核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも９核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１０核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１１核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１２核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１３核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１４核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、ある標的セグメントの少なくとも１５核酸塩基部分に相補的である。ある標的セグメントの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０核酸塩基部分もしくはそれ以上の核酸塩基部分、またはこれらの値のうちの任意の２つによって画定される範囲に相補的な、アンチセンス化合物も考えられる。
同一性
ここに提供するアンチセンス化合物は、ある特定ヌクレオチド配列、配列番号、もしくは具体的Ｉｓｉｓ番号によって表される化合物、またはその一部分に対して、所定の同一性パーセントも有しうる。本明細書にいうアンチセンス化合物は、それが同じ核酸塩基対合能を有するのであれば、本明細書に開示する配列と同一である。例えば、ウラシルとチミジンはどちらもアデニンと対合するので、開示したＤＮＡ配列中のチミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡは、前記ＤＮＡ配列と同一であるとみなされるであろう。本明細書に記載するアンチセンス化合物の短縮型及び延長型、ならびにここに提供するアンチセンス化合物と比較して非同一塩基を有する化合物も考えられる。非同一塩基は互いに隣り合っていてもよいし、アンチセンス化合物全体に散在していてもよい。アンチセンス化合物のパーセント同一性は、比較対象である配列との比較で同一塩基対合を有する塩基の数に従って計算される。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物またはその一部分が、本明細書に開示するアンチセンス化合物、配列番号、またはその一部分の１つ以上と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一である。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物の一部分を、標的核酸のうちの長さが等しい部分と比較する。特定の実施形態では、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５核酸塩基部分を、標的核酸のうちの長さが等しい部分と比較する。
特定の実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドの一部を、標的核酸のうちの長さが等しい部分と比較する。特定の実施形態では、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５核酸塩基部分を、標的核酸のうちの長さが等しい部分と比較する。
修飾
ヌクレオシドは塩基−糖の組み合わせである。ヌクレオシドの核酸塩基（塩基ともいう）部分は、通常、複素環式塩基部分である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合で連結されたリン酸基をさらに含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むヌクレオシドの場合は、リン酸基を、糖の２’、３’または５’ヒドロキシル部分に連結することができる。オリゴヌクレオチドは、互いに隣り合うヌクレオシドを共有結合で連結して、線状ポリマー状のオリゴヌクレオチドを形成させることによって形成される。オリゴヌクレオチド構造内では、リン酸基は、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間連結部を形成していると、一般に言われる。
アンチセンス化合物の修飾には、ヌクレオシド間連結部、糖部分、または核酸塩基の置換または改変が包含される。修飾アンチセンス化合物は、例えば強化された細胞取り込み、核酸標的に対する強化されたアフィニティ、ヌクレアーゼの存在下での増加した安定性、増加した阻害活性などといった望ましい性質ゆえに、ネイティブ型より好ましいことが多い。
化学修飾ヌクレオシドは、短縮型または切断型アンチオリゴヌクレオチドの、その標的核酸に対する結合アフィニティを増加させるために使用することもできる。結果として、そのような化学修飾ヌクレオシドを有する短いアンチセンス化合物で、匹敵する結果を得ることができる場合が多い。
修飾ヌクレオシド間連結部
ＲＮＡ及びＤＮＡの天然に存在するヌクレオシド間連結部は、３’→５’ホスホジエステル連結部である。１つ以上の修飾（すなわち天然に存在しない）ヌクレオシド間連結部を有するアンチセンス化合物は、例えば強化された細胞取り込み、核酸標的に対する強化されたアフィニティ、及びヌクレアーゼの存在下での増加した安定性などといった望ましい性質ゆえに、天然に存在するヌクレオシド間連結部を有するアンチセンス化合物よりも選択されることが多い。
修飾ヌクレオシド間連結部を有するオリゴヌクレオチドには、リン原子が保たれているヌクレオシド間連結部と、リン原子を有さないヌクレオシド間連結部とが含まれる。代表的なリン含有ヌクレオシド間連結部には、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホラミデート、及びホスホロチオエートが含まれるが、これらに限定されない。リン含有連結部及び非リン含有連結部を調製する方法は周知である。
特定の実施形態では、ＧＨＲ核酸を標的とするアンチセンス化合物が、１つ以上の修飾ヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部である。特定の実施形態では、アンチセンス化合物の各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートヌクレオシド間連結部である。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、前記オリゴヌクレオチドまたはその一領域に沿って、所定のパターンまたは修飾ヌクレオシド間連結部モチーフで配置された修飾ヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態では、ヌクレオシド間連結部が、ギャップモチーフ（ｇａｐｐｅｄ ｍｏｔｉｆ）で配置される。そのような実施形態では、２つのウイング領域のそれぞれにあるヌクレオシド間連結部が、ギャップ領域中のヌクレオシド間連結部とは異なる。特定の実施形態では、ウイング中のヌクレオシド間連結部はホスホジエステルであり、ギャップ中のヌクレオシド間連結部はホスホロチオエートである。ヌクレオシドモチーフは独立して選択されるので、ギャップヌクレオシド間連結部モチーフを有するオリゴヌクレオチドは、ギャップヌクレオシドモチーフを有しても有さなくてもよく、ギャップヌクレオシドモチーフを有する場合、ウイング長とギャップ長は同じであっても同じでなくてもよい。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、交互ヌクレオシド間連結部モチーフを有する領域を含む。特定の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドが、一様に修飾されたヌクレオシド間連結部の一領域を含む。特定のそのような実施形態では、オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部によって一様に連結された領域を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエートによって一様に連結されている。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部が、ホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択される。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択され、少なくとも１つのヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートである。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、少なくとも６つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも８つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも１０個のホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含む。 特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも６つの連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも８つの連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも１０個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが少なくとも１２個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のブロックを少なくとも１つは含む。特定のそのような実施形態では、少なくとも１つの上述のブロックが、オリゴヌクレオチドの３’端に位置する。特定のそのような実施形態では、少なくとも１つの上述のブロックがオリゴヌクレオチドの３’端から３ヌクレオシド以内に位置する。
特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、１つ以上のメチルホスホネート連結部を含む。特定の実施形態では、ギャップマーヌクレオシドモチーフを有するオリゴヌクレオチドが、１つまたは２つのメチルホスホネート連結部を除くすべてがホスホロチオエート連結部である連結部モチーフを含む。特定の実施形態では、１つのメチルホスホネート連結部が、ギャップマーヌクレオシドモチーフを有するオリゴヌクレオチドの中央のギャップ中にある。
特定の実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部とホスホジエステルヌクレオシド間連結部の数を、ヌクレアーゼ耐性が維持されるように定めることが望ましい。特定の実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部の数と位置及びホスホジエステルヌクレオシド間連結部の数と位置を、ヌクレアーゼ耐性が維持されるように定めることが望ましい。特定の実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を減少させ、かつホスホジエステルヌクレオシド間連結部の数を増加させることができる。特定の実施形態では、ヌクレアーゼ耐性を維持したまま、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部の数を減少させ、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部を増加させることができる。特定の実施形態では、ヌクレアーゼ耐性を保ったまま、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部の数を減少させることが望ましい。特定の実施形態では、ヌクレアーゼ耐性を保ったまま、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部の数を増加させることが望ましい。
修飾糖部分
アンチセンス化合物は、場合によっては、糖基が修飾されているヌクレオシドを１つ以上含有しうる。そのような糖修飾ヌクレオシドは、強化されたヌクレアーゼ安定性、増加した結合アフィニティ、または他の何らかの有益な生物学的性質を、アンチセンス化合物に付与しうる。特定の実施形態では、ヌクレオシドが化学修飾リボフラノース環部分を含む。化学修飾リボフラノース環の例には、置換基の付加（５’置換基、２’置換基、非ジェミナル環原子の架橋による二環式核酸（ＢＮＡ）の形成、Ｓ、Ｎ（Ｒ）、またはＣ（Ｒ１）（Ｒ２）（Ｒ、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは保護基である）によるリボシル環酸素原子の置き換え、及びそれらの組み合わせなどがあるが、これらに限定されない。化学修飾糖の例としては、２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（開示されている他の５’、２’−ビス置換ヌクレオシドについては、ＰＣＴ国際出願ＷＯ２００８／１０１１５７（公開日２００８年８月２１日）を参照されたい）、またはＳによるリボシル環酸素原子の置き換えと２’位におけるさらなる置換（米国特許出願公開ＵＳ２００５−０１３０９２３（公開日２００５年６月１６日）参照）、あるいはＢＮＡの５’−置換（ＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１（公開日２００７年１１月２２日）参照、この場合はＬＮＡが例えば５’−メチル基または５’−ビニル基で置換されている）などがある。
修飾糖部分を有するヌクレオシドの例には、５’−ビニル、５’−メチル（ＲまたはＳ）、４’−Ｓ、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３、２’−ＯＣＨ２ＣＨ３、２’−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｆ及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含むヌクレオシドがあるが、これらに限定されない。２’位の置換基は、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２Ｆ、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、及びＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｌ）−（ＣＨ２）２−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択することもできる（ここで、各Ｒ１、Ｒｍ及びＲｎは、独立して、Ｈまたは置換もしくは無置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルである）。
本明細書にいう「二環式ヌクレオシド」とは、二環式糖部分を含む修飾ヌクレオシドを指す。二環式ヌクレオシドの例には、４’リボシル環原子と２’リボシル環原子の間に橋を含むヌクレオシドなどがあるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ここに提供するアンチセンス化合物が、４’→２’橋を含む二環式ヌクレオシドを１つ以上含む。そのような４’→２’架橋二環式ヌクレオシドの例として、次式の一つが挙げられるが、これらに限定されない：４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）、４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（拘束エチルまたはｃＥｔともいう）及び４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’（及びその類似体、２００８年７月１５日発行の米国特許第７，３９９，８４５号参照）、４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’（及びその類似体、国際出願公開ＷＯ２００９／００６４７８（公開日２００９年１月８日）参照）；４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’（及びその類似体、国際出願公開ＷＯ／２００８／１５０７２９（公開日２００８年１２月１１日）参照）、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（米国特許出願公開ＵＳ２００４−０１７１５７０（公開日２００４年９月２日）参照）、４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（式中、Ｒは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、または保護基である）（２００８年９月２３日発行の米国特許７，４２７，６７２号参照）、４’−ＣＨ２−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４参照）、及び４’−ＣＨ２−Ｃ−（＝ＣＨ２）−２’（及びその類似体、国際出願公開ＷＯ２００８／１５４４０１（公開日２００８年１２月８日）参照）。
公表された文献には二環式ヌクレオシドに関する他の報告文も見いだすことができる（例えばＳｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５−４５６；Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３−５６３８；Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２；Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６）８３６２−８３７９；Ｅｌａｙａｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８−５６１；Ｂｒａａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８，１−７；及びＯｒｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，３，２３９−２４３；米国特許第６，２６８，４９０号；同第６，５２５，１９１号；同第６，６７０，４６１号；同第６，７７０，７４８号；同第６，７９４，４９９号；同第７，０３４，１３３号；同第７，０５３，２０７号；同第７，３９９，８４５号；同第７，５４７，６８４号；及び同第７，６９６，３４５号；米国特許出願公開番号ＵＳ２００８−００３９６１８；同ＵＳ２００９−００１２２８１；米国特許出願第６１／０２６，９９５号及び同第６１／０９７，７８７号；ＰＣＴ国際出願公開ＷＯ１９９９／０１４２２６；同ＷＯ２００４／１０６３５６；同ＷＯ２００５／０２１５７０；同ＷＯ２００７／１３４１８１；同ＷＯ２００８／１５０７２９；同ＷＯ２００８／１５４４０１；同ＷＯ２００９／００６４７８；同ＷＯ２０１０／０３６６９８；同ＷＯ２０１１／０１７５２１；同ＷＯ２００９／０６７６４７；同ＷＯ２００９／１００３２０参照。前述の二環式ヌクレオシドのそれぞれは、例えばα−Ｌ−リボフラノースとβ−Ｄ−リボフラノースなど、１つ以上の立体化学的糖配置を有するものを調製することができる（１９９９年３月２５日にＷＯ９９／１４２２６として公開されたＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３を参照されたい）。
特定の実施形態では、限定するわけではないが、ＢＮＡヌクレオシドの二環式糖部分として、ペントフラノシル糖部分の４’位と２’位の間に少なくとも１つの橋を有する化合物が挙げられ、その橋は、独立して、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−、及び−Ｎ（Ｒａ）−から独立して選択される１つの基または２〜４つの連結された基を含み、
式中、
ｘは、０、１、または２であり、
ｎは、１、２、３、または４であり、
各Ｒａ及びＲｂは、独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり、かつ
各Ｊ１及びＪ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換Ｃ５−Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキルまたは保護基である。
特定の実施形態では、二環式糖部分の橋が−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−または−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−である。特定の実施形態では、前記橋が、４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’及び４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−であり、式中、各Ｒは、独立して、Ｈ、保護基またはＣ１−Ｃ１２アルキルである。
特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドが、さらに異性立体配置によって定義される。例えば、４’−２’メチレン−オキシ橋を含むヌクレオシドは、α−Ｌ立体配置またはβ−Ｄ立体配置をとりうる。α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡは、以前に、アンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれており、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドはアンチセンス活性を示した（Ｆｒｉｅｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５−６３７２）。
特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドとして、以下に図示する（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、及び（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ、（Ｊ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡ、及び（Ｋ）ビニルＢＮＡが挙げられるが、これらに限定されない：
式中、Ｂｘは塩基部分であり、かつＲは、独立して、Ｈ、保護基、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたはＣ１−Ｃ１２アルコキシである。
特定の実施形態では、式Ｉ：
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
−Ｑａ−Ｑｂ−Ｑｃ−は、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒｃ）−、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−または−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−ＣＨ２であり、
Ｒｃは、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたはアミノ保護基であり、かつ
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けである］
を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
特定の実施形態では、式ＩＩ：
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けであり、
Ｚａは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオールまたは置換チオである］
を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
一実施形態では、前記置換基のそれぞれが、独立して、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪｃ、ＮＪｃＪｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊｃ、及びＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄから独立して選択される置換基で一置換または多置換されており、式中、各Ｊｃ、Ｊｄ及びＪｅは、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、かつＸは、ＯまたはＮＪｃである。
特定の実施形態では、式ＩＩＩ：
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けであり、
Ｚｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）−）である］を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
特定の実施形態では、式ＩＶ：
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けであり、
Ｒｄは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、
各ｑａ、ｑｂ、ｑｃ及びｑｄは、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシル、置換Ｃ１−Ｃ６アルコキシル、アシル、置換アシル、Ｃ１−Ｃ６アミノアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アミノアルキルである］
を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
特定の実施形態では、式Ｖ：
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けであり、
ｑａ、ｑｂ、ｑｅ及びｑｆは、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）−ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであるか、または
ｑｅ及びｑｆが全体として＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、
ｑｇ及びｑｈは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである］
を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡモノマーであるアデニン、シトシン、グアニン、５−メチル−シトシン、チミン及びウラシルの合成及び調製は、それらのオリゴマー化及び核酸認識特性と共に、既に記述されている（Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０）。ＢＮＡとその調製はＷＯ９８／３９３５２及びＷＯ９９／１４２２６にも記述されている。
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ及び２’−チオ−ＢＮＡの類似体も既に調製されている（Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２）。核酸ポリメラーゼの基質としてのオリゴデオキシリボヌクレオチド二重鎖を構成するロックドヌクレオシド類似体の調製も既に記述されている（Ｗｅｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＷＯ９９／１４２２６）。さらにまた、コンフォメーションが制限された新規高アフィニティオリゴヌクレオチド類似体である２’−アミノ−ＢＮＡの合成も、当技術分野では既に記述されている（Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９）。加えて、２’−アミノ−及び２’−メチルアミノ−ＢＮＡも調製されており、相補的なＲＮＡ鎖及び相補的ＤＮＡ鎖とのそれらの二重鎖の熱安定性が、以前に報告されている。
特定の実施形態では、式ＶＩ：
［式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、共役基、反応性リン基、リン部分または支持媒体への共有結合による取り付けであり、
各ｑｉ、ｑｊ、ｑｋ及びｑｌは、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシル、置換Ｃ１−Ｃ１２アルコキシル、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）−ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり、かつ
ｑｉとｑｊまたはｑｌとｑｋは、全体として、＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、式中、ｑｇ及びｑｈは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１２アルキルである］
を有する二環式ヌクレオシドが提供される。
４’−（ＣＨ２）３−２’橋を有する炭素環式二環式ヌクレオシド及びアルケニル類似体橋４’−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−２’は既に記述されている（Ｆｒｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９−４４４３及びＡｌｂａｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１−７７４０）。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成及び調製も、それらのオリゴマー化及び生化学的研究と共に記述されている（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６），８３６２−８３７９）。
本明細書にいう「４’−２’二環式ヌクレオシド」または「４’→２’二環式ヌクレオシド」とは、フラノース環の２つの炭素原子をつなぐ橋を含むフラノース環を含み、前記橋が糖環の２’炭素原子と４’炭素原子をつなぐ、二環式ヌクレオシドを指す。
本明細書にいう「単環式ヌクレオシド」とは、二環式糖部分ではない修飾糖部分を含むヌクレオシドである。特定の実施形態では、ヌクレオシドの糖部分または糖部分類似体が、どの位置で修飾または置換されていてもよい。
本明細書にいう「２’−修飾糖」とは、２’位が修飾されたフラノシル糖を意味する。特定の実施形態では、そのような修飾が、ハライド、例えば限定するわけではないが、置換及び無置換アルコキシ、置換及び無置換チオアルキル、置換及び無置換アミノアルキル、置換及び無置換アルキル、置換及び無置換アリル、及び置換及び無置換アルキニルから選択される置換基を含む。特定の実施形態では、２’修飾が、限定するわけではないが、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＦ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２などといった置換基（式中、ｎ及びｍは１〜約１０である）から選択される。他の２’−置換基は、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリール、アラルキル、Ｏ−アルカリールまたはＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリ−アルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、アンチセンス化合物の薬物動態特性を改良するための基または薬力学的性質を改良するための基、及び類似する性質を有する他の置換基から選択することもできる。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドが２’−ＭＯＥ側鎖を含む（Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２，１１９４４−１２０００）。そのような２’−ＭＯＥ置換は、無修飾ヌクレオシド及び他の修飾ヌクレオシド、例えば２’−Ｏ−メチル、Ｏ−プロピル、及びＯ−アミノプロピルと比較して、改良された結合アフィニティを有すると記述されている。２’−ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドは、インビボ用途に有望な特徴を持つ遺伝子発現のアンチセンス阻害剤であることも示されている（Ｍａｒｔｉｎ，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６−５０４；Ａｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｉｍｉａ，１９９６，５０，１６８−１７６；Ａｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９９６，２４，６３０−６３７；及びＡｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，９１７−９２６）。
本明細書にいう「修飾テトラヒドロピランヌクレオシド」または「修飾ＴＨＰヌクレオシド」とは、通常のヌクレオシド中のペントフラノシル残基の代わりに六員テトラヒドロピラン「糖」（糖代用物）が使用されているヌクレオシドを意味する。修飾ＴＨＰヌクレオシドには、当技術分野においてヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アニトール（ａｎｉｔｏｌ）核酸（ＡＮＡ）、マニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）核酸（ＭＮＡ）（Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１−８５４）またはフルオロＨＮＡ（Ｆ−ＨＮＡ）と呼ばれ、以下に図解するようにテトラヒドロピラン環系を有するものが含まれるが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、式ＶＩＩ：
を有する糖代用物が選択され、
式中、前記少なくとも１つの式ＶＩＩのテトラヒドロピランヌクレオシド類似体のそれぞれについて、独立して、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であるか、またはＴａ及びＴｂのうちの一方がテトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、Ｔａ及びＴｂのうちの他方がＨ、ヒドロキシル保護基、連結された共役基または５’もしくは３’末端基であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルであり、かつＲ１及びＲ２のそれぞれは、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、置換または無置換アルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２及びＣＮであり、ＸはＯ、ＳまたはＮＪ１であり、かつ各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立して、ＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７がそれぞれＨである、式ＶＩＩの修飾ＴＨＰヌクレオシドが提供される。特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７のうちの少なくとも１つがＨ以外である。特定の実施形態では、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７のうちの少なくとも１つがメチルである。特定の実施形態では、Ｒ１及びＲ２のうちの一方がフルオロである、式ＶＩＩのＴＨＰヌクレオシドが提供される。特定の実施形態では、Ｒ１がフルオロ、かつＲ２がＨであり、Ｒ１がメトキシ、かつＲ２がＨであり、そしてＲ１がメトキシエトキシ、かつＲ２がＨである。
特定の実施形態では、糖代用物が、６つ以上の原子及び２つ以上のヘテロ原子を有する環を含む。例えばモルホリノ糖部分を含むヌクレオシド、及びオリゴマー化合物におけるそれらの使用が、報告されている（例えばＢｒａａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４１，４５０３−４５１０；及び米国特許第５，６９８，６８５号；同第５，１６６，３１５号；同第５，１８５，４４４号；及び同第５，０３４，５０６号を参照されたい）。本明細書において使用する用語「モルホリノ」とは、以下の式を有する糖代用物を意味する：
特定の実施形態では、例えば上記モルホリノ構造にさまざまな置換基を付加するか、上記モルホリノ構造のさまざまな置換基を改変することによって、モルホリノが修飾されていてもよい。そのような糖代用物を本明細書では「修飾モルホリノ」という。
修飾の組み合わせ、例えば限定するわけではないが、２’−Ｆ−５’−メチル置換ヌクレオシド（開示されている他の５’，２’−ビス置換ヌクレオシドについてはＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００８／１０１１５７号（公開日２００８年８月２１日）参照）、及びＳによるリボシル環酸素原子の置き換えと２’位におけるさらなる置換（米国特許出願公開ＵＳ２００５−０１３０９２３（公開日２００５年６月１６日）参照）、あるいは二環式核酸の５’−置換（ＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１（公開日２００７年１１月２２日）参照、この場合は４’−ＣＨ２−Ｏ−２’二環式ヌクレオシドの５’位が５’−メチル基または５’−ビニル基でさらに置換されている）なども提供される。炭素環式二環式ヌクレオシドの合成及び調製も、それらのオリゴマー化及び生化学的試験と共に記載されている（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００７，１２９（２６），８３６２−８３７９を参照のこと）。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、天然に存在するヌクレオシド中のペントフラノシル残基の代わりに六員シクロヘキセニルを有するヌクレオシドである修飾シクロヘキセニルヌクレオシドを１つ以上含む。修飾シクロヘキセニルヌクレオシドとして、当技術分野に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない（例えば同一譲受人によるＰＣＴ出願公開ＷＯ２０１０／０３６６９６（公開日２０１０年４月１０日）、Ｒｏｂｅｙｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００８，１３０（６），１９７９−１９８４；Ｈｏｒｖａｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００７，４８，３６２１−３６２３；Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（３０），９３４０−９３４８；Ｇｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ， Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，２００５，２４（５−７），９９３−９９８；Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５，３３（８），２４５２−２４６３；Ｒｏｂｅｙｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ，Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｆ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００５，Ｆ６１（６），５８５−５８６；Ｇｕ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００４，６０（９），２１１１−２１２３；Ｇｕ ｅｔ ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，２００３，１３（６），４７９−４８９；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００３，６８，４４９９−４５０５；Ｖｅｒｂｅｕｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００１，２９（２４），４９４１−４９４７；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００１，６６，８４７８−８２；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，２００１，２０（４−７），７８５−７８８；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．，２０００，１２２，８５９５−８６０２；ＰＣＴ出願公開ＷＯ０６／０４７８４２；及びＰＣＴ出願公開ＷＯ０１／０４９６８７を参照されたい；また、各文献の本文は、参照によりそのまま本明細書に組み込まれる）。特定の修飾シクロヘキセニルヌクレオシドは、式Ｘを有する。
式中、前記少なくとも１つの式Ｘのシクロヘキセニルヌクレオシド類似体のそれぞれについて、独立して、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔ３及びＴ４は、それぞれ独立して、シクロヘキセニルヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であるか、またはＴ３及びＴ４のうちの一方がテトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に連結するヌクレオシド間連結基であり、かつＴ３及びＴ４のうちの他方がＨ、ヒドロキシル保護基、連結された共役基、または５’末端基もしくは３’末端基であり、かつ
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、ｑ７、ｑ８及びｑ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２−Ｃ６アルキニルまたは他の糖置換基である。
本明細書にいう「２’−修飾」または「２’−置換」は、２’位にＨまたはＯＨ以外の置換基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。２’−修飾ヌクレオシドには、糖環の２つの炭素原子をつなぐ橋が糖環の２’炭素ともう一つの炭素とをつないでいる二環式ヌクレオシド；及び非架橋２’置換基、例えばアリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、−ＯＣＦ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、またはＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）［式中、各Ｒｍ及びＲｎは、独立して、Ｈまたは置換または無置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルである］を有するヌクレオシドなどがあるが、これらに限定されない。２’−修飾ヌクレオシドは、例えば糖の他の位置及び／または核酸塩基に、他の修飾をさらに含んでもよい。
本明細書にいう「２’−Ｆ」とは、糖環の２’位にフルオロ基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
本明細書にいう「２’−ＯＭｅ」または「２’−ＯＣＨ３」または「２’−Ｏ−メチル」とは、それぞれ、糖環の２’位に−ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
本明細書にいう「ＭＯＥ」または「２’−ＭＯＥ」または「２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３」または「２’−Ｏ−メトキシエチル」とは、それぞれ、糖環の２’位に−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
本明細書にいう「オリゴヌクレオチド」とは、複数の連結されたヌクレオシドを含む化合物を指す。特定の実施形態では、前記複数のヌクレオシドのうちの１つ以上が修飾されている。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドが、１つ以上のリボヌクレオシド（ＲＮＡ）及び／またはデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）を含む。
アンチセンス化合物に組み込むためのヌクレオシドの修飾に使用することができるビシクロ糖代用環系及びトリシクロ糖代用環系は、当技術分野では、他にも多数知られている（例えば総説Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１−８５４を参照されたい）。そのような環系には、活性を強化するために、さまざまな追加の置換を行うことができる。
修飾糖の調製方法は当業者にはよく知られている。そのような修飾糖の調製を教示する代表的米国特許の一部には、例えば限定するわけではないが、Ｕ．Ｓ．４，９８１，９５７；Ｕ．Ｓ．５，１１８，８００；Ｕ．Ｓ．５，３１９，０８０；Ｕ．Ｓ．５，３５９，０４４；Ｕ．Ｓ．５，３９３，８７８；Ｕ．Ｓ．５，４４６，１３７；Ｕ．Ｓ．５，４６６，７８６；Ｕ．Ｓ．５，５１４，７８５；Ｕ．Ｓ．５，５１９，１３４；Ｕ．Ｓ．５，５６７，８１１；Ｕ．Ｓ．５，５７６，４２７；Ｕ．Ｓ．５，５９１，７２２；Ｕ．Ｓ．５，５９７，９０９；Ｕ．Ｓ．５，６１０，３００；Ｕ．Ｓ．５，６２７，０５３；Ｕ．Ｓ．５，６３９，８７３；Ｕ．Ｓ．５，６４６，２６５；Ｕ．Ｓ．５，６７０，６３３；Ｕ．Ｓ．５，７００，９２０；Ｕ．Ｓ．５，７９２，８４７及びＵ．Ｓ．６，６００，０３２ならびに２００５年１２月２２日にＷＯ２００５／１２１３７１として公開された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１９２１９（出願日２００５年６月２日）などがあり、これらはそれぞれ参照により本明細書にそのまま組み込まれる。
修飾糖部分を有するヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分（天然、修飾またはそれらの組み合わせ）は、適当な核酸標的とのハイブリダイゼーションのために維持される。
特定の実施形態では、アンチセンス化合物が、修飾糖部分を有する１つ以上のヌクレオシドを含む。特定の実施形態では、修飾糖部分が２’−ＭＯＥである。特定の実施形態では、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドがギャップマーモチーフで配置される。特定の実施形態では、修飾糖部分が、（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）架橋基を有する二環式ヌクレオシドである。特定の実施形態では、前記（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）修飾ヌクレオシドが、ギャップマーモチーフのウイング全体にわたって配置される。
修飾核酸塩基
核酸塩基（または塩基）の修飾または置換は、天然に存在する無修飾核酸塩基または合成無修飾核酸塩基とは構造上識別できるが、機能的には天然に存在する無修飾核酸塩基または合成無修飾核酸塩基と交換可能である。天然核酸塩基と修飾核酸塩基はどちらも水素結合に参加する能力を有する。そのような核酸塩基修飾は、ヌクレアーゼ安定性、結合アフィニティまたは他の何らかの有益な生物学的性質をアンチセンス化合物に付与することができる。修飾核酸塩基には、例えば５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）などの合成及び天然核酸塩基が含まれる。５−メチルシトシン置換などの特定の核酸塩基置換は、標的核酸に対するアンチセンス化合物の結合アフィニティを増加させるのに特に有用である。例えば５−メチルシトシン置換は、核酸二重鎖安定性を０．６〜１．２℃増加させることが示されている（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．、Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．及びＬｅｂｌｅｕ，Ｂ．編「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，ボカラトン，１９９３，ｐｐ．２７６−２７８）。
他の修飾核酸塩基として、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６−メチル誘導体及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２−プロピル誘導体及び他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン及び２−チオシトシン、５−ハロウラシル及びシトシン、５−プロピニル（−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３）ウラシル及びシトシンならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシン及びチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルならびに他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルならびに他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メチルグアニン及び７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニン及び８−アザアデニン、７−デアザグアニン及び７−デアザアデニンならびに３−デアザグアニン及び３−デアザアデニンが挙げられる。
複素環式塩基部分として、プリン塩基またはピリミジン塩基が他の複素環、例えば７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン及び２−ピリドンで置き換えられているものも挙げることができる。アンチセンス化合物の結合アフィニティを増加させるのにとりわけ有用な核酸塩基として、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンならびにＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリン、例えば２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル及び５−プロピニルシトシンが挙げられる。
特定の実施形態では、ＧＨＲ核酸を標的とするアンチセンス化合物が、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態では、ＧＨＲ核酸を標的とする短縮型またはギャップ拡幅型アンチセンスオリゴヌクレオチドが１つ以上の修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態では、修飾核酸塩基が５−メチルシトシンである。特定の実施形態では、各シトシンが５−メチルシトシンである。
共役アンチセンス化合物
特定の実施形態において、本開示は、共役アンチセンス化合物を提供する。特定の実施形態において、本開示は、核酸転写産物に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物を提供する。特定の実施形態において、本開示は、細胞を、核酸転写産物に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物と接触させることを含む方法を提供する。特定の実施形態において、本開示は、細胞を、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む共役アンチセンス化合物と接触させること、及び細胞内の核酸転写産物の量または活性を低減させることを含む方法を提供する。
アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰ−Ｒ）は以前に記載されている。例えばＰａｒｋ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ｖｏｌ．１０２，Ｎｏ．４７，ｐｐ．１７１２５−１７１２９（２００５）を参照されたい。これらの受容体は、肝臓細胞、特に肝細胞上で発現する。さらに、３つのＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）リガンドのクラスターを含む化合物は、ＡＳＧＰ−Ｒに結合して細胞内への当該化合物の取り込みをもたらす能力を有することが示されている。例えばＫｈｏｒｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１６，９，ｐｐ．５２１６−５２３１（Ｍａｙ ２００８）を参照されたい。したがって、そのようなＧａｌＮＡｃクラスターを含む共役体が、肝臓細胞、具体的には肝細胞への特定化合物の取り込みを促進するために使用されている。例えば、特定のＧａｌＮＡｃ含有共役体は、インビボで肝臓細胞における二重鎖ｓｉＲＮＡ化合物の活性を増加させることが示されている。これらの例では、ＧａｌＮＡｃ含有共役体は、典型的には、ｓｉＲＮＡ位二重鎖のセンス鎖に取り付けられる。センス鎖はアンチセンス鎖が最終的に標的核酸とハイブリダイズする前に処分されてしまうため、共役体が活性を妨害する懸念はほとんどない。典型的には、共役体は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の３’端に取り付けられる。例えば米国特許第８，１０６，０２２号を参照されたい。本明細書に記載する特定の共役基は、今までに記載された共役基よりも活性が高く、かつ／または合成が容易である。
本発明の特定の実施形態において、共役体は、一本鎖アンチセンス化合物、例えば限定するわけではないが、ＲＮａｓｅ Ｈベースのアンチセンス化合物や、プレｍＲＮＡ標的核酸のスプライシングを改変するアンチセンス化合物に、取り付けられる。そのような実施形態では、共役体は、利益（細胞内への取り込みの改良）をもたらすのに十分な時間、アンチセンス化合物に取り付けられた状態にあるべきだが、その後は、切断されるか、または他の何らかの形で、活性に必要な後続ステップ、例えば標的核酸へのハイブリダイゼーション及びＲＮａｓｅ Ｈまたはスプライシングもしくはスプライシング調節に関連する酵素との相互作用などを妨害しないようにすべきである。この性質のバランスは、共役体を単にセンス鎖に取り付けるだけでよいｓｉＲＮＡ化合物の場合よりも、一本鎖アンチセンス化合物の場合に、より一層重要である。本明細書には、共役体を欠く同じアンチセンス化合物と比較して、インビボで肝臓細胞における力価が改良されている共役一本鎖アンチセンス化合物を開示する。これらの化合物に要求される性質のバランスを考えると、そのような力価の改良は驚くべきことである。
特定の実施形態において、本明細書における共役基は、切断可能部分を含む。機序に束縛されることは望まないが、上述のように、共役体が取り込みの強化をもたらすのに十分な時間、化合物上に残っているべきであることは必然だが、その後は、共役体の何らかの部分、理想的には共役体の全部が切断されて、親化合物（例えばアンチセンス化合物）をその最も活性な形態で放出することが望ましい。特定の実施形態では、切断可能部分が切断可能なヌクレオシドである。そのような実施形態では、共役体の残りの部分（クラスター）を、１つ以上の切断可能な結合、例えばホスホジエステル連結部のものによって、ヌクレオシドを介してアンチセンスオリゴヌクレオチドに取り付けることにより、細胞中の内在性ヌクレアーゼを利用する。特定の実施形態では、クラスターがホスホジエステル連結部を介して切断可能なヌクレオシドに結合される。特定の実施形態では、切断可能なヌクレオシドが、ホスホジエステル連結部によってアンチセンスオリゴヌクレオチド（アンチセンス化合物）に取り付けられる。特定の実施形態では、共役基が、２つまたは３つの切断可能なヌクレオシドを含みうる。そのような実施形態では、上述の切断可能なヌクレオシドが、切断可能な結合（ホスホジエステル連結部のもの）によって、互いに、アンチセンス化合物に、かつ／またはクラスターに連結される。本明細書における特定の共役体は、切断可能なヌクレオシドを含まず、代わりに切断可能な結合を含む。オリゴヌクレオチドからの共役体の十分な切離は、細胞内で切断を受けやすい少なくとも１つの結合（切断可能な結合）によってもたらされることを示す。
特定の実施形態では、共役アンチセンス化合物がプロドラッグである。そのようなプロドラッグは、動物に投与され、最終的には、より活性な形態に代謝される。例えば共役アンチセンス化合物は切断されることで、共役体の全部または一部を除去し、共役体の全部または一部を欠く活性な（またはより活性な）形態のアンチセンス化合物をもたらす。
特定の実施形態では、共役体がオリゴヌクレオチドの５’端に取り付けられる。特定のそのような５’共役体は、同様の共役基が３’端に取り付けられている対応物よりも効率よく切断される。特定の実施形態では、活性の改良が切断の改良と相関しうる。特定の実施形態では、５’端に共役体を含むオリゴヌクレオチドの有効性が、３’端に共役体を含むオリゴヌクレオチドの有効性よりも高い（例えば実施例５６、８１、８３、及び８４を参照のこと）。さらに、５’への取り付けの方が、簡単なオリゴヌクレオチド合成が可能である。オリゴヌクレオチドは、典型的には、３’--５’方向に固体支持体上で合成される。３’共役オリゴヌクレオチドを作製するには、典型的には、事前に共役基を結合しておいた３’ヌクレオシドを固体支持体に取り付けてから、オリゴヌクレオチドを通常どおりに構築する。しかし、その共役ヌクレオシドを固体支持体に取り付ける操作は、合成を複雑にする。さらに、このアプローチを使用した場合、共役体は、オリゴヌクレオチドの合成の間ずっと存在することになり、後続のステップ中に分解されてしまうか、使用できる反応と試薬の種類を制限することになりうる。５’共役オリゴヌクレオチドについて本明細書に記載する構造及び技法を用いることにより、標準的な自動化された技法を使ってオリゴヌクレオチドを合成し、最後（最も５’側）のヌクレオシドと共に共役体を導入するか、またはオリゴヌクレオチドを固体支持体から切り離してから共役体を導入することができる。
当分野の技術水準及び本開示を考慮すれば、当業者は、本明細書の共役体及び共役オリゴヌクレオチドをどれでも容易に作製することができる。さらに、本明細書に開示する特定のそのような共役体及び共役オリゴヌクレオチドの合成は、これまでに開示されていた共役体の合成よりも容易であり、かつ／または必要とするステップ数が少なく、それゆえに安価に行うことができるので、それらは製造上の利点になる。例えば、特定の共役基の合成は、これまでに記載された共役基と比較して、より少ない合成ステップからなり、収率の増加をもたらす。実施例４６のＧａｌＮＡｃ３−１０及び実施例４８のＧａｌＮＡｃ３−７などの共役基は、既述の共役体、例えば、より多くの化学中間体の組み立てを必要とするＵ．Ｓ．８，１０６，０２２またはＵ．Ｓ．７，２６２，１７７に記載されているものよりも、はるかに簡単である。したがって、本明細書に記載するこれらの共役体及び他の共役体には、一本鎖オリゴヌクレオチドや二本鎖オリゴヌクレオチド（例えばｓｉＲＮＡ）のどちらかの鎖などといった任意のオリゴヌクレオチドと一緒に使用する際に、既述の化合物に優る利点がある。
同様に、ＧａｌＮＡｃリガンドを１つまたは２つしか持たない共役基も、本明細書に開示する。ここに示すように、そのような共役基は、アンチセンス化合物の活性を改良する。そのような化合物は、３つのＧａｌＮＡｃリガンドを含む共役体よりも、調製がはるかに容易である。１つまたは２つのＧａｌＮＡｃリガンドを含む共役基は、一本鎖オリゴヌクレオチドや二本鎖オリゴヌクレオチド（例えばｓｉＲＮＡ）のどちらかの鎖などといった任意のアンチセンス化合物に取り付けることができる。
特定の実施形態では、本明細書の共役体が、耐容性の特定尺度を、実質的に変化させない。例えば、共役アンチセンス化合物の免疫原性は非共役親化合物より高くないことを、本明細書において示す。力価が改良されるので、耐容性が同じままである実施形態は（あるいは実際には力価の増加分と比較して耐容性が少しだけ悪化したとしても）、治療に関して改良された性質を有する。
特定の実施形態では、共役により、共役がなければ結果があまり思わしくないような方法で、アンチセンス化合物を改変することが可能になる。例えば、特定の実施形態では、全ホスホロチオエートアンチセンス化合物の１つ以上のホスホロチオエート連結部を、ホスホジエステル連結基で置き換えることにより、一部の耐容性尺度の改良が起こる。例えば、特定の事例では、１つ以上のホスホジエステルを有するそのようなアンチセンス化合物は、各連結部がホスホロチオエートである同じ化合物よりも、免疫原性が低い。しかし、特定の事例では、実施例２６に示すように、１つ以上のホスホロチオエート連結部をホスホジエステル連結部で置き換えると、細胞取り込みの低減及び／または力価の損失も起こる。特定の実施形態において、本明細書に記載する共役アンチセンス化合物は、共役全ホスホロチオエート対応物と比較して、取り込み及び力価をほとんどまたは全く失うことなく、そのような連結部の改変を許容する。事実、特定の実施形態では、例えば実施例４４、５７、５９、及び８６では、共役体と少なくとも１つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部とを含むオリゴヌクレオチドが、同様に同じ共役体を含む全ホスホロチオエート対応物と比較した場合でさえ、実際に、インビボで力価の増加を呈する。さらに、共役が取り込み／力価の実質的な増加をもたらすので、その実質的な増加分が少し失われても、耐容性の改良を達成するという目的には、許容できる。したがって、特定の実施形態では、共役アンチセンス化合物が、少なくとも１つのホスホジエステル連結部を含む。
特定の実施形態では、本明細書におけるアンチセンス化合物の共役が、肝細胞における送達、取り込み、及び活性の増加をもたらす。したがって、より多くの化合物が肝臓組織に送達される。しかし、特定の実施形態では、そのような送達の増加だけでは、活性の増加全体を説明できない。特定のそのような実施形態では、より多くの化合物が肝細胞に進入する。特定の実施形態では、そのような肝細胞取り込みの増加でも、活性の増加全体を説明することができない。そのような実施形態では、共役化合物の生産的取り込みが増加する。例えば、実施例１０２に示すように、ＧａｌＮＡｃ含有共役体の特定実施形態は、非実質細胞との対比で肝細胞におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃縮を増加させる。この濃縮は、肝細胞中で発現する遺伝子を標的とするオリゴヌクレオチドにとって有益である。
特定の実施形態では、本明細書における共役アンチセンス化合物が、腎臓曝露の低減をもたらす。例えば、実施例２０に示すように、ＧａｌＮＡｃ含有共役体の特定実施形態を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、腎臓では、ＧａｌＮＡｃ含有共役体を欠くアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度より低い。これは、いくつかの有益な治療的意味を有する。腎臓における活性が求められていない治療的適応の場合、腎臓への曝露には、腎毒性のリスクがあり、それに見合う利益がない。さらに、腎臓における高濃度は、典型的には、尿への化合物の損失をもたらし、その結果、クリアランスが速くなる。したがって、標的が腎臓でない場合、腎臓内での蓄積は望ましくない。
特定の実施形態において、本開示は、式：
［式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される共役アンチセンス化合物を提供する。
本明細書における上記の図及び同様の図において、分岐基「Ｄ」は、「ｑ」で示される数の（Ｅ−Ｆ）基に対応するのに必要な数だけ分岐している。したがって、ｑ＝１の場合、前記の式は、
であり、ｑ＝２の場合、前記の式は、
であり、ｑ＝３の場合、前記の式は
であり、ｑ＝４の場合、前記の式は
であり、ｑ＝５の場合、前記の式は
である。
特定の実施形態では、次の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
特定の実施形態では、次の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
特定の実施形態では、次の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
特定の実施形態では、次の構造を有する共役アンチセンス化合物が提供される。
本開示は、非限定的な以下の番号付き実施形態を提供する。
実施形態１．テザーが、
［式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である］から選択される構造を有する、実施形態１１７９〜１１８２のいずれかの共役アンチセンス化合物。
実施形態２．テザーが、構造：
を有する、実施形態１１７９〜１１８２のいずれかの共役アンチセンス化合物。
実施形態３．リンカーが
から選択される構造を有する、実施形態１１７９〜１１８２または１６８８〜１６８９のいずれかの共役アンチセンス化合物。
実施形態４．リンカーが
［式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である］から選択される構造を有する、実施形態１１７９〜１１８２または１６８８〜１６８９のいずれかの共役アンチセンス化合物。
実施形態５．リンカーが構造：
を有する、実施形態１１７９〜１１８２または１６８８〜１６８９のいずれかの共役アンチセンス化合物。
ある特定変数を２つ以上（例えば２つ以上の「ｍ」または２つ以上の「ｎ」を）有する実施形態では、別段の表示がある場合を除き、そのような特定変数のそれぞれは、独立して選択される。したがって、２つ以上のｎを有する構造の場合、各ｎは独立して選択されるため、それらは互いに同一である場合も、同一でない場合もありうる。
ｉ．特定の切断可能部分
特定の実施形態において、切断可能部分は、切断可能な結合である。特定の実施形態において、切断可能部分は、切断可能な結合を含む。特定の実施形態において、共役基は、切断可能部分を含む。特定のそのような実施形態において、切断可能部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに結合する。特定のそのような実施形態において、切断可能部分は、細胞ターゲティング部分に直接結合する。特定のそのような実施形態において、切断可能部分は、共役リンカーに結合する。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスフェートまたはホスホジエステルを含む。特定の実施形態において、切断可能部分は、切断可能なヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体である。特定の実施形態において、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体は、プリン、置換プリン、ピリミジン、または置換ピリミジンから選択される場合によっては保護された複素環式塩基を含む。特定の実施形態において、切断可能部分は、ウラシル、チミン、シトシン、４−Ｎ−ベンゾイルシトシン、５−メチルシトシン、４−Ｎ−ベンゾイル−５−メチルシトシン、アデニン、６−Ｎ−ベンゾイルアデニン、グアニン、及び２−Ｎ−イソブチリルグアニンから選択される、場合によっては保護された複素環式塩基を含むヌクレオシドである。特定の実施形態では、切断可能部分が、ホスホジエステル連結部によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に取り付けられ、かつホスホジエステルまたはホスホロチオエート連結部によってリンカーに取り付けられた２’−デオキシヌクレオシドである。特定の実施形態では、切断可能部分が、ホスホジエステル連結部によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に取り付けられ、かつホスホジエステルまたはホスホロチオエート連結部によってリンカーに取り付けられた２’−デオキシアデノシンである。特定の実施形態では、切断可能部分が、ホスホジエステル連結部によってアンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に取り付けられ、かつホスホジエステル連結部によってリンカーに取り付けられた２’−デオキシアデノシンである。
特定の実施形態において、切断可能部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの３’位に取り付けられる。特定の実施形態において、切断可能部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの５’位に取り付けられる。特定の実施形態において、切断可能部分は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの２’位に取り付けられる。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステル連結部によってアンチセンスオリゴヌクレオチドに取り付けられる。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステル連結部またはホスホロチオエート連結部のいずれかによってリンカーに取り付けられる。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステル連結部によってリンカーに取り付けられる。特定の実施形態において、共役基は、切断可能部分を含まない。
特定の実施形態において、切断可能部分は、複合体が動物に投与された後に、標的細胞によって内部に取り込まれて初めて切断される。細胞内で切断可能部分が切断され、それによって活性アンチセンスオリゴヌクレオチドが放出される。理論に束縛されることは望まないが、切断可能部分は細胞内で１つ以上のヌクレアーゼによって切断されると考えられる。特定の実施形態では、１つ以上のヌクレアーゼが切断可能部分とリンカーとの間のホスホジエステル連結部を切断する。特定の実施形態において、切断可能部分は、以下：
のなかから選択される構造を有する。
式中、Ｂｘ、Ｂｘ１、Ｂｘ２、及びＢｘ３のそれぞれは、独立して複素環式塩基部分である。特定の実施形態において、切断可能部分は、以下：
のなかから選択される構造を有する。
ｉｉ．特定のリンカー
特定の実施形態において、共役基は、リンカーを含む。特定のそのような実施形態において、リンカーは、切断可能部分に共有結合される。特定のそのような実施形態において、リンカーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドに共有結合される。特定の実施形態において、リンカーは、細胞ターゲティング部分に共有結合される。特定の実施形態において、リンカーは、固体支持体への共有結合をさらに含む。特定の実施形態において、リンカーは、タンパク質結合部分への共有結合をさらに含む。特定の実施形態において、リンカーは、固体支持体への共有結合をさらに含み、タンパク質結合部分への共有結合もさらに含む。特定の実施形態において、リンカーは、係留される（ｔｅｔｈｅｒｅｄ）リガンドを取り付けるための位置を複数含んでいる。特定の実施形態において、リンカーは、係留されるリガンドを取り付けるための位置を複数含み、分岐基には取り付けられない。特定の実施形態において、リンカーは、１つ以上の切断可能な結合をさらに含む。特定の実施形態において、共役基は、リンカーを含まない。
特定の実施形態において、リンカーは、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル（−Ｓ−）、及びヒドロキシルアミノ（−Ｏ−Ｎ（Ｈ）−）基から選択される基を含む線状基を少なくとも１つは含む。特定の実施形態において、前記線状基は、アルキル、アミド、及びエーテル基から選択される基を含む。特定の実施形態において、前記線状基は、アルキル及びエーテル基から選択される基を含む。特定の実施形態において、前記線状基は、少なくとも１つのリン連結基を含む。特定の実施形態において、前記線状基は、少なくとも１つのホスホジエステル基を含む。特定の実施形態において、前記線状基は、少なくとも１つの中性連結基を含む。特定の実施形態において、前記線状基は、細胞ターゲティング部分及び切断可能部分に共有結合される。特定の実施形態において、前記線状基は、細胞ターゲティング部分及びアンチセンスオリゴヌクレオチドに共有結合される。特定の実施形態において、前記線状基は、細胞ターゲティング部分、切断可能部分、及び固体支持体に共有結合される。特定の実施形態において、前記線状基は、細胞ターゲティング部分、切断可能部分、固体支持体、及びタンパク質結合部分に共有結合される。特定の実施形態において、前記線状基は、１つ以上の切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、リンカーは、足場基に共有結合された線状基を含む。特定の実施形態において、前記足場は、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル、及びヒドロキシルアミノ基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。特定の実施形態において、前記足場は、アルキル、アミド、及びエーテル基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。特定の実施形態において、前記足場は、少なくとも１つの単環式または多環式環系を含む。特定の実施形態において、前記足場は、少なくとも２つの単環式または多環式環系を含む。特定の実施形態では、線状基が足場基に共有結合され、足場基は切断可能部分及びリンカーに共有結合される。特定の実施形態では、線状基が足場基に共有結合され、足場基は、切断可能部分、リンカー、及び固体支持体に共有結合される。特定の実施形態では、線状基が足場基に共有結合され、足場基は、切断可能部分、リンカー、及びタンパク質結合部分に共有結合される。特定の実施形態では、線状基が足場基に共有結合され、足場基は、切断可能部分、リンカー、タンパク質結合部分、及び固体支持体に共有結合される。特定の実施形態において、前記足場基は１つ以上の切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、リンカーは、タンパク質結合部分を含む。特定の実施形態において、タンパク質結合部分は脂質、例えば限定するわけではないが、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）、ビタミン（例えば葉酸塩、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビオチン、ピリドキサール）、ペプチド、炭水化物（例えば単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、多糖）、エンドソーム溶解成分、ステロイド（例えばウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン）、テルペン（例えばトリテルペン、例えば、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸）、またはカチオン性脂質を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態において、タンパク質結合部分は、Ｃ１６〜Ｃ２２長鎖飽和もしくは不飽和脂肪酸、コレステロール、コール酸、ビタミンＥ、アダマンタン、または１−ペンタフルオロプロピルである。
特定の実施形態において、リンカーは、
のなかから選択される構造を有し、
式中、各ｎは、独立して、１〜２０であり、ｐは、１〜６である。
特定の実施形態において、リンカーは、
のなかから選択される構造を有し、
式中、各ｎは、独立して、１〜２０である
特定の実施形態において、リンカーは、
のなかから選択される構造を有し、式中、ｎは、１〜２０である。
特定の実施形態において、リンカーは、
。
以下のなかから選択される構造を有し、
式中、各Ｌは、独立して、リン連結基または中性連結基であり、かつ
各ｎは、独立して、１〜２０である。
実施形態において、リンカーは、

のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、リンカーは、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、リンカーは、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、リンカーは、
以下のなかから選択される構造を有し、
式中、ｎは、１〜２０である。
特定の実施形態において、リンカーは、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、リンカーは、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、リンカーは、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、共役リンカーは構造：
を有する。
特定の実施形態において、共役リンカーは構造：
を有する。
特定の実施形態において、リンカーは、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、リンカーは、
のなかから選択される構造を有し、
式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である。
ｉｉｉ．特定の細胞ターゲティング部分
特定の実施形態において、共役基は、細胞ターゲティング部分を含む。特定のそのような細胞ターゲティング部分は、アンチセンス化合物の細胞取り込みを増加させる。特定の実施形態において、細胞ターゲティング部分は、分岐基、１つ以上のテザー、及び１つ以上のリガンドを含む。特定の実施形態において、細胞ターゲティング部分は、分岐基、１つ以上のテザー、１つ以上のリガンド、及び１つ以上の切断可能な結合を含む。
１．特定の分岐基
特定の実施形態において、共役基は、分岐基及び少なくとも２つのテザーリガンドを含むターゲティング部分を含む。特定の実施形態において、分岐基は、共役リンカーを結合する。特定の実施形態において、分岐基は、切断可能部分を結合する。特定の実施形態において、分岐基は、アンチセンスオリゴヌクレオチドを結合する。特定の実施形態において、分岐基は、リンカー及びテザーリガンドのそれぞれに共有結合される。特定の実施形態において、分岐基は、アルキル、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル及びヒドロキシルアミノ基から選択される基を含む分岐状脂肪族基を含む。特定の実施形態において、分岐基は、アルキル、アミド、及びエーテル基から選択される基を含む。特定の実施形態において、分岐基は、アルキル及びエーテル基から選択される基を含む。特定の実施形態において、分岐基は、単環式または多環式環系を含む。特定の実施形態において、分岐基は、１つ以上の切断可能な結合を含む。特定の実施形態において、共役基は、分岐基を含まない。
特定の実施形態において、分岐基は、

のなかから選択される構造を有し、式中、各ｎは、独立して、１〜２０であり、
ｊは、１〜３であり、
ｍは、２〜６である。
特定の実施形態において、分岐基は、
のなかから選択される構造を有し、
各ｎは、独立して、１〜２０であり、
ｍは、２〜６である。
特定の実施形態において、分岐基は、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、分岐基は、
のなかから選択される構造を有し、
式中、各Ａ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝ＯまたはＮＨであり、かつ
各ｎは、独立して、１〜２０である
特定の実施形態において、分岐基は、
のなかから選択される構造を有し、
式中、各Ａ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝ＯまたはＮＨであり、かつ
各ｎは、独立して、１〜２０である。
特定の実施形態において、分岐基は、
のなかから選択される構造を有し、
式中、各Ａ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝Ｏ、またはＮＨであり、
各ｎは、独立して、１〜２０である
特定の実施形態において、分岐基は、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、分岐基は、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、分岐基は、
のなかから選択される構造を有する。
２．特定のテザー
特定の実施形態において、共役基は、分岐基に共有結合される１つ以上のテザーを含む。特定の実施形態において、共役基は、連結基に共有結合される１つ以上のテザーを含む。特定の実施形態において、各テザーは、アルキル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、アミド、及びポリエチレングリコール基から選択される１つ以上の基を任意の組み合わせで含む線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、アルキル、置換アルキル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、アミド、ホスホジエステル及びポリエチレングリコール基から選択される１つ以上の基を任意の組み合わせで含む線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、アルキル、エーテル、及びアミド基から選択される１つ以上の基を任意の組み合わせで含む線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、アルキル、置換アルキル、ホスホジエステル、エーテル、及びアミド基から選択される１つ以上の基を任意の組み合わせで含む線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、アルキル及びホスホジエステルから選択される１つ以上の基を任意の組み合わせで含む線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも１つのリン連結基または中性連結基を含む。
特定の実施形態において、テザーは、１つ以上の切断可能な結合を含む。特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、テザーは、ホスホジエステル基を介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、テザーは、リン連結基または中性連結基を介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介してリガンドに結合される。特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介してリガンドに結合される。特定の実施形態において、テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介してリガンドに結合される。特定の実施形態において、テザーは、エーテル基を介してリガンドに結合される。
特定の実施形態において、各テザーは、リガンドと分岐基との間に約８〜約２０原子の鎖長を含む。特定の実施形態において、各テザー基は、リガンドと分岐基との間に約１０〜約１８原子の鎖長を含む。特定の実施形態において、各テザー基は、約１３原子の鎖長を含む。
特定の実施形態において、テザーは、
のなかから選択される構造を有し、
式中、各ｎは、独立して、１〜２０であり、かつ
各ｐは１〜約６である
特定の実施形態において、テザーは、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、テザーは、
のなかから選択される構造を有し、式中、各ｎは、独立して、１〜２０である
特定の実施形態において、テザーは、
のなかから選択される構造を有し、
式中、Ｌは、リン連結基または中性連結基のいずれかであり、
Ｚ１は、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ２であり、
Ｚ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１〜Ｃ６アルキであり、
各ｍ１は、独立して、０〜２０であり、各テザーにつき少なくとも１つのｍ１は０より大きい。
特定の実施形態において、テザーは、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、テザーは、
のなかから選択される構造を有し、
式中、Ｚ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
各ｍ１は、独立して、０〜２０であり、各テザーにつき少なくとも１つのｍ１は０より大きい。
特定の実施形態において、テザーは、
のなかから選択される構造を有し、式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である。
特定の実施形態において、テザーは、リン連結基を含む。特定の実施形態において、テザーは、いかなるアミド結合も含まない。特定の実施形態において、テザーは、リン連結基を含み、いかなるアミド結合も含まない。
３．特定のリガンド
特定の実施形態において、本開示は、各リガンドがテザーに共有結合されるリガンドを提供する。特定の実施形態において、各リガンドは、標的細胞において少なくとも１種類の受容体に対する親和性を有するように選択される。特定の実施形態において、哺乳類肝臓細胞の表面において少なくとも１種類の受容体に対する親和性を有するリガンドが選択される。特定の実施形態において、肝アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰ−Ｒ）に対する親和性を有するリガンドが選択される。特定の実施形態において、各リガンドは、炭水化物である。特定の実施形態において、各リガンドは、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトースアミン、マンノース、グルコース、グルコサミン、及びフコースから独立して選択される。特定の実施形態において、各リガンドは、Ｎ−アセチルガラクトースアミン（ＧａｌＮＡｃ）である。特定の実施形態において、ターゲティング部分は２〜６個のリガンドを含む。特定の実施形態において、ターゲティング部分は３個のリガンドを含む。特定の実施形態において、ターゲティング部分は３個のＮ−アセチルガラクトサミンリガンドを含む。
特定の実施形態において、リガンドは、炭水化物、炭水化物誘導体、修飾炭水化物、多価炭水化物クラスター、多糖、修飾多糖、または多糖誘導体である。特定の実施形態において、リガンドは、アミノ糖またはチオ糖である。例えばアミノ糖は、当技術分野で知られている多くの化合物、例えばグルコサミン、シアル酸、α−Ｄ−ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、２−アセトアミド−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノース（ＧａｌＮＡｃ）、２−アミノ−３−Ｏ−［（Ｒ）−１−カルボキシエチル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース（β−ムラミン酸）、２−デオキシ−２−メチルアミノ−Ｌ−グルコピラノース、４，６−ジデオキシ−４−ホルムアミド−２，３−ジ−Ｏ−メチル−Ｄ−マンノピラノース、２−デオキシ−２−スルホアミノ−Ｄ−グルコピラノース、及びＮ−スルホ−Ｄ−グルコサミン、及びＮ−グリコロイル−α−ノイラミン酸から選択されうる。例えば、チオ糖は、５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース、メチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−チオ−６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−グルコピラノシド、４−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノース、及びエチル３，４，６，７−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−１，５−ジチオ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏ−ヘプトピラノシドからなる群から選択されうる。
特定の実施形態において、「ＧａｌＮａｃ」または「Ｇａｌ−ＮＡｃ」は、文献内で一般にＮ−アセチルガラクトサミンと称される２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースを指す。特定の実施形態において、「Ｎ−アセチルガラクトサミン」は、２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースを指す。特定の実施形態において、「ＧａｌＮａｃ」または「Ｇａｌ−ＮＡｃ」は、２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースを指す。特定の実施形態において、「ＧａｌＮａｃ」または「Ｇａｌ−ＮＡｃ」は、β型：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノースとα型：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースの両方を含む、２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースを指す。特定の実施形態において、β型：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノースとα型：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースはどちらも可換的に使用されうる。したがって一方の型が図示される構造において、これらの構造は、他方の型も同様に含むものとする。例えばα型：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースの構造が示される場合、この構造は他方の型も同様に含むものとする。特定の好ましい実施形態では、β型：２−（アセチルアミノ）−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノースが好ましい実施形態である。
特定の実施形態において、１つ以上のリガンドは、
のなかから選択される構造を有し、
式中、各Ｒ１はＯＨ及びＮＨＣＯＯＨから選択される。
特定の実施形態において、１つ以上のリガンドは、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、１つ以上のリガンドは、
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、１つ以上のリガンドは、
のなかから選択される構造を有する。
ｉ．特定の共役体
特定の実施形態において、共役基は、上述の構造的特徴を含む。特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有し、式中、各ｎは、独立して、１〜２０である
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有し、式中、
各ｎは、独立して、１〜２０であり、
は、Ｚは、Ｈまたは結合固体支持体であり、
Ｑは、アンチセンス化合物であり、
Ｘは、ＯまたはＳであり、
Ｂｘは、複素環式塩基部分である。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定の実施形態において、共役体はピロリジンを含まない。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：

を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：

を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定のそのような実施形態において、共役基は以下の構造：
を有する。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｘは、６〜１１個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーである。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｘは、１０個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーである。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｘは、４〜１１個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーであり、前記テザーは、厳密に１個のアミド結合を含む。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｙ及びＺは、Ｃ１〜Ｃ１２置換もしくは無置換アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル基、またはエーテル、ケトン、アミド、エステル、カルバメート、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、トリアゾール、ピロリジン、ジスルフィド、もしくはチオエーテルを含む基から独立して選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｙ及びＺは、Ｃ１〜Ｃ１２置換もしくは無置換アルキル基、または厳密に１個のエーテルもしくは厳密に２個のエーテル、アミド、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、またはホスホロチオエートを含む基から独立して選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｙ及びＺは、Ｃ１〜Ｃ１２置換または無置換アルキル基から独立して選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、ｍ及びｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、及び１２から独立して選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、ｍは、４、５、６、７、または８であり、ｎは、１、２、３、または４である。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｘは、４〜１３個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーであり、Ｘは、エーテル基を含まない。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｘは、８個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーであり、Ｘは、エーテル基を含まない。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：

を有し、
式中、Ｘは、４〜１３個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーであり、前記テザーは、厳密に１個のアミド結合を含み、Ｘはエーテル基を含まない。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｘは、４〜１３個の連続して結合された原子の置換テザーまたは無置換テザーであり、前記テザーは、アミド結合及び置換または無置換Ｃ２〜Ｃ１１アルキル基からなる。
特定の実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｙは、Ｃ１〜Ｃ１２置換もしくは無置換アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル基、またはエーテル、ケトン、アミド、エステル、カルバメート、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、トリアゾール、ピロリジン、ジスルフィド、もしくはチオエーテルを含む基から選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｙは、Ｃ１〜Ｃ１２置換もしくは無置換アルキル基、またはエーテル、アミン、ピペリジン、ホスフェート、ホスホジエステル、もしくはホスホロチオエートを含む基から選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、Ｙは、Ｃ１〜Ｃ１２置換または無置換アルキル基から選択される。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２である。
特定のそのような実施形態において、共役基の細胞ターゲティング部分は以下の構造：
を有し、
式中、ｎは、４、５、６、７、または８である。
特定の実施形態において、共役体はピロリジンを含まない。
ａ 特定の共役アンチセンス化合物
特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの２’、３’、または５’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造：
を有し、
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり
ｑは１と５の間の整数である
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造：
を有し、
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり
ｑは１と５の間の整数である
特定のそのような実施形態において、共役リンカーは、少なくとも１つの切断可能な結合を含む。
特定のそのような実施形態において、分岐基は、少なくとも１つの切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも１つの切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの２’、３’、または５’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造：
を有し、
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、Ｃは前記共役リンカーであり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり
ｑは１と５の間の整数である。
特定の実施形態において、共役体は、ヌクレオシドの２’、３’、または５’位でアンチセンスオリゴヌクレオチドのヌクレオシドに結合される。特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造：
を有し、
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり
ｑは１と５の間の整数である。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造：
を有し、
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、Ｃは前記共役リンカーであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり
ｑは１と５の間の整数である。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下の構造：
を有し、
式中、
Ａは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり
ｑは１と５の間の整数である。
特定のそのような実施形態において、共役リンカーは、少なくとも１つの切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも１つの切断可能な結合を含む。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下：
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下：
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は以下：
のなかから選択される構造を有する。
特定の実施形態では、共役アンチセンス化合物が、以下の構造を有する。特定の実施形態では、化合物が、５’端上のＧａｌＮＡｃと共役したＧＨＲを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを含む。例えば、特定の実施形態では、化合物が、５’端上のＧａｌＮＡｃと共役したＩＳＩＳ ５３２４０１を含む。更なる実施形態では、化合物が、５’−Ｘが付いたＩＳＩＳ ５３２４０１を含むか、または５’−Ｘが付いたＩＳＩＳ ５３２４０１から構成される以下の化学構造を有し、Ｘは本明細書に記載するＧａｌＮＡｃを含む共役基である：
［式中、ＸはＧａｌＮＡｃを含む共役基である。］
特定の実施形態では、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＧＨＲを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを含み、前記オリゴヌクレオチドコム（ｃｏｍ）の各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部である。更なる実施形態では、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＩＳＩＳ ５３２４０１の配列を含み、前記オリゴヌクレオチドコム（ｃｏｍ）の各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部である。そのような実施形態において、化学構造は、以下の通りである。
特定の実施形態では、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＧＨＲを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを含み、前記オリゴヌクレオチドコム（ｃｏｍ）の各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部またはホスホジエステル連結部である。更なる実施形態では、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＩＳＩＳ ５３２４０１の配列を含み、前記オリゴヌクレオチドコム（ｃｏｍ）の各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエート連結部またはホスホジエステル連結部である。そのような実施形態において、化学構造は、以下の通りである。
特定の実施形態では、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＧＨＲを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを含む。更なるそのような実施形態では、化合物が、ＧａｌＮＡｃと共役したＩＳＩＳ ５３２４０１の配列を含み、次の化学構造で表される。
［式中、Ｒ１は−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３（ＭＯＥ）であり、かつＲ２がＨであるか、またはＲ１とＲ２とが一緒に橋を形成し、その場合、Ｒ１は−Ｏ−であり、Ｒ２は−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、または−ＣＨ２ＣＨ２−であって、Ｒ１とＲ２は、生じた橋が−Ｏ−ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）−、及び−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−から選択されるように直接結合する。
また、同じ環上のＲ３とＲ４の各ペアについては、環ごとに独立して、Ｒ３がＨ及び−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択され、かつＲ４がＨであるか、またはＲ３とＲ４とが一緒に橋を形成し、その場合、Ｒ３は−Ｏ−、かつＲ４は−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、または−ＣＨ２ＣＨ２−であって、Ｒ３とＲ４は、生じた橋が−Ｏ−ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）−、及び−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−から選択されるように直接結合する。
Ｒ５はＨ及び−ＣＨ３から選択され、
ＺはＳ−及びＯ−から選択される］。
上述の共役体、共役アンチセンス化合物、テザー、リンカー、分岐基、リガンド、切断可能部分、ならびに他の修飾のいくつかの調製を教示する代表的な米国特許、米国特許出願公開、及び国際特許出願公開には、ＵＳ５，９９４，５１７、ＵＳ６，３００，３１９、ＵＳ６，６６０，７２０、ＵＳ６，９０６，１８２、ＵＳ７，２６２，１７７、ＵＳ７，４９１，８０５、ＵＳ８，１０６，０２２、ＵＳ７，７２３，５０９、ＵＳ２００６／０１４８７４０、ＵＳ２０１１／０１２３５２０号、ＷＯ２０１３／０３３２３０、及びＷＯ２０１２／０３７２５４が含まれるが、これらに限定されず、これらの文献のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
上述の共役体、共役アンチセンス化合物、テザー、リンカー、分岐基、リガンド、切断可能部分、ならびに他の修飾のいくつかの調製を教示する代表的な出版物には、ＢＩＥＳＳＥＮ ｅｔ ａｌ．「Ｔｈｅ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ｏｆ ａ Ｔｒｉａｎｔｅｎｎａｒｙ Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ ｗｉｔｈ Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ａ Ｐｏｔｅｎｔ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｌｏｗｅｒｉｎｇ Ａｇｅｎｔ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）３８：１８４６−１８５２、ＢＩＥＳＳＥＮ ｅｔ ａｌ．「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｃｌｕｓｔｅｒ Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ ｗｉｔｈ Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）３８：１５３８−１５４６、ＬＥＥ ｅｔ ａｌ．「Ｎｅｗ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ ｇｌｙｃｏ−ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｏｆ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ」Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１１）１９：２４９４−２５００、ＲＥＮＳＥＮ ｅｔ ａｌ．「Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｐｐｅｒ Ｓｉｚｅ Ｌｉｍｉｔ ｆｏｒ Ｕｐｔａｋｅ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｔｈｅ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｏｎ Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ Ｖｉｖｏ」Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）２７６（４０）：３７５７７−３７５８４、ＲＥＮＳＥＮ ｅｔ ａｌ．「Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ−Ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００４）４７：５７９８−５８０８、ＳＬＩＥＤＲＥＧＴ ｅｔ ａｌ．「Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅｓ ｆｏｒ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９９）４２：６０９−６１８、及びＶａｌｅｎｔｉｊｎ ｅｔ ａｌ．「Ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｌｙｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄ Ｃｌｕｓｔｅｒ ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９７，５３（２），７５９−７７０が含まれるが、これらに限定されず、これらの文献のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、ＲＮａｓｅ Ｈベースのオリゴヌクレオチド（ギャップマーなど）またはスプライス調節オリゴヌクレオチド（完全修飾オリゴヌクレオチドなど）、及び少なくとも１つ、２つ、または３つのＧａｌＮＡｃ基を含む任意の共役基を含む。特定の実施形態において、共役アンチセンス化合物は、以下の参考文献：Ｌｅｅ，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ，１９７８，６７，５０９−５１４、Ｃｏｎｎｏｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，１９８２，２５７，９３９−９４５、Ｐａｖｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｐ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ，１９８３，２２，５３９−５４８、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９８４，２３，４２５５−４２６１、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ，１９８７，４，３１７−３２８、Ｔｏｙｏｋｕｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ，１９９０，３１，２６７３−２６７６、Ｂｉｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，１９９５，３８，１５３８−１５４６、Ｖａｌｅｎｔｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９７，５３，７５９−７７０、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ，１９９７，３８，３４８７−３４９０、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ，１９９７，８，７６２−７６５、Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌ，２００１，１１，８２１−８２９、Ｒｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００１，２７６，３７５７７−３７５８４、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，２００３，３６２，３８−４３、Ｗｅｓｔｅｒｌｉｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ，２００４，２１，２２７−２４１、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ，２００６，１６（１９），５１３２−５１３５、Ｍａｉｅｒｈｏｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２００７，１５，７６６１−７６７６、Ｋｈｏｒｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２００８，１６，５２１６−５２３１、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２０１１，１９，２４９４−２５００、Ｋｏｒｎｉｌｏｖａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌｙｔ Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１２，４２５，４３−４６、Ｐｕｊｏｌ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ，２０１２，５１，７４４５−７４４８、Ｂｉｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，１９９５，３８，１８４６−１８５２、Ｓｌｉｅｄｒｅｇｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，１９９９，４２，６０９−６１８、Ｒｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２００４，４７，５７９８−５８０８、Ｒｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ，２００６，２６，１６９−１７５、ｖａｎ Ｒｏｓｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ，２００４，１１，４５７−４６４、Ｓａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ，２００４，１２６，１４０１３−１４０２２、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ，２０１２，７７，７５６４−７５７１、Ｂｉｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ，２０００，１４，１７８４−１７９２、Ｒａｊｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ，１９９７，８，９３５−９４０、Ｄｕｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，２０００，３１３，２９７−３２１、Ｍａｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ，２００３，１４，１８−２９、Ｊａｙａｐｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．，Ｏｒｇ Ｌｅｔｔ，２０１０，１２，５４１０−５４１３、Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ，２００２，１２，１０３−１２８、Ｍｅｒｗｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ，１９９４，５，６１２−６２０、Ｔｏｍｉｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２０１３，２１，５２７５−５２８１、国際出願ＷＯ１９９８／０１３３８１；ＷＯ２０１１／０３８３５６；ＷＯ１９９７／０４６０９８；ＷＯ２００８／０９８７８８；ＷＯ２００４／１０１６１９；ＷＯ２０１２／０３７２５４；ＷＯ２０１１／１２００５３；ＷＯ２０１１／１００１３１；ＷＯ２０１１／１６３１２１；ＷＯ２０１２／１７７９４７；ＷＯ２０１３／０３３２３０；ＷＯ２０１３／０７５０３５；ＷＯ２０１２／０８３１８５；ＷＯ２０１２／０８３０４６；ＷＯ２００９／０８２６０７；ＷＯ２００９／１３４４８７；ＷＯ２０１０／１４４７４０；ＷＯ２０１０／１４８０１３；ＷＯ１９９７／０２０５６３；ＷＯ２０１０／０８８５３７；ＷＯ２００２／０４３７７１；ＷＯ２０１０／１２９７０９；ＷＯ２０１２／０６８１８７；ＷＯ２００９／１２６９３３；ＷＯ２００４／０２４７５７；ＷＯ２０１０／０５４４０６；ＷＯ２０１２／０８９３５２；ＷＯ２０１２／０８９６０２；ＷＯ２０１３／１６６１２１；ＷＯ２０１３／１６５８１６；米国特許４，７５１，２１９；８，５５２，１６３；６，９０８，９０３；７，２６２，１７７；５，９９４，５１７；６，３００，３１９；８，１０６，０２２；７，４９１，８０５；７，４９１，８０５；７，５８２，７４４；８，１３７，６９５；６，３８３，８１２；６，５２５，０３１；６，６６０，７２０；７，７２３，５０９；８，５４１，５４８；８，３４４，１２５；８，３１３，７７２；８，３４９，３０８；８，４５０，４６７；８，５０１，９３０；８，１５８，６０１；７，２６２，１７７；６，９０６，１８２；６，６２０，９１６；８，４３５，４９１；８，４０４，８６２；７，８５１，６１５；米国特許出願公開ＵＳ２０１１／００９７２６４；ＵＳ２０１１／００９７２６５；ＵＳ２０１３／０００４４２７；ＵＳ２００５／０１６４２３５；ＵＳ２００６／０１４８７４０；ＵＳ２００８／０２８１０４４；ＵＳ２０１０／０２４０７３０；ＵＳ２００３／０１１９７２４；ＵＳ２００６／０１８３８８６；ＵＳ２００８／０２０６８６９；ＵＳ２０１１／０２６９８１４；ＵＳ２００９／０２８６９７３；ＵＳ２０１１／０２０７７９９；ＵＳ２０１２／０１３６０４２；ＵＳ２０１２／０１６５３９３；ＵＳ２００８／０２８１０４１；ＵＳ２００９／０２０３１３５；ＵＳ２０１２／００３５１１５；ＵＳ２０１２／００９５０７５；ＵＳ２０１２／０１０１１４８；ＵＳ２０１２／０１２８７６０；ＵＳ２０１２／０１５７５０９；ＵＳ２０１２／０２３０９３８；ＵＳ２０１３／０１０９８１７；ＵＳ２０１３／０１２１９５４；ＵＳ２０１３／０１７８５１２；ＵＳ２０１３／０２３６９６８；ＵＳ２０１１／０１２３５２０；ＵＳ２００３／００７７８２９；ＵＳ２００８／０１０８８０１；及びＵＳ２００９／０２０３１３２のうちのいずれかにおいて見いだされる任意の共役基を含み、これらの文献のそれぞれは参照によりその全体が組み込まれる。
アンチセンスオリゴヌクレオチドのインビトロ試験
本明細書には、細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置するための方法を記載する。この方法には、他のアンチセンス化合物による処置のために、適宜変更を加えることができる。
細胞は、細胞が培養中で約６０〜８０％コンフルエントに達した時に、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理することができる。
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するためによく使用される試薬の一つに、カチオン性脂質トランスフェクション試薬ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）がある。アンチセンスオリゴヌクレオチドをＯＰＴＩ−ＭＥＭ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮと混合することで、所望の最終アンチセンスオリゴヌクレオチド濃度と、１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２〜１２μｇ／ｍＬの範囲に及びうるＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ濃度にする。
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用されるもう一つの試薬は、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）である。アンチセンスオリゴヌクレオチドをＯＰＴＩ−ＭＥＭ１還元血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）中でＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥと混合することで、所望のアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度と、１００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドあたり２〜１２μｇ／ｍＬの範囲に及びうるＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮ濃度にする。
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用されるもう一つの技法に、エレクトロポレーションがある。
培養細胞にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために使用されるさらにもう一つの技法に、細胞によるオリゴヌクレオチド自由取り込みがある。
細胞は、常法により、アンチセンスオリゴヌクレオチドで処理される。細胞はアンチセンスオリゴヌクレオチド処理の１６〜２４時間後に収集することができ、その時点で、標的核酸のＲＮＡレベルまたはタンパク質レベルが、当技術分野に知られておりかつ本明細書に記載する方法によって測定される。一般に、複数の複製試料で処理を行う場合は、複製試料処理の平均としてデータを表す。
使用するアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、細胞株ごとに異なる。ある特定細胞株に関して最適なアンチセンスオリゴヌクレオチド濃度を決定するための方法は、当技術分野では周知である。ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥによるトランスフェクションの場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、典型的には、１ｎＭ〜３００ｎＭの範囲の濃度で使用される。エレクトロポレーションによるトランスフェクションの場合は、それより高い６２５ｎＭから２０，０００ｎＭまでの範囲の濃度で、アンチセンスオリゴヌクレオチドが使用される。
ＲＮＡ単離
ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡに関して行うことができる。ＲＮＡ単離の方法は当技術分野ではよく知られている。ＲＮＡは当技術分野において周知の方法を使って、例えばＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カリフォルニア州カールズバッド）を製造者が推奨するプロトコルに従って使用することによって、調製される。
特定の適応
明細書に提供する特定の実施形態は、ＧＨＲを標的とするアンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドのようなＧＨＲ特異的阻害剤を投与することによって、対象における過剰な成長ホルモンと関連する疾患を治療し、予防し、または改善する方法に関する。特定の態様では、過剰な成長ホルモンと関連する疾患は先端巨大症である。特定の態様では、過剰な成長ホルモンと関連する疾患はは巨人症である。
特定の実施形態は、ＧＨＲを標的とするアンチセンス化合物またはオリゴヌクレオチドのようなＧＨＲ特異的阻害剤を投与することによって、対象の先端巨大症を治療し、予防し、または改善する方法を提供する。先端巨大症は、過剰な成長ホルモン（ＧＨ）と関連する疾患である。９０パーセント以上の先端巨大症患者では、過剰な成長ホルモンを産生して周囲の脳組織を圧迫するアデノーマと呼ばれる下垂体の良性腫瘍が成長ホルモン過剰産生の原因である。アデノーマの拡大が頭痛及び、しばしば先端巨大症を伴う視力障害を引き起こす。いくつかの例では、先端巨大症が、膵臓、肺または副腎の腫瘍に起因しており、これがＧＨを産生し、あるいは下垂体を刺激してＧＨを作る成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）を産生し、過剰なＧＨをもたらす。
先端巨大症は、ほとんどが一般に中年の成人を冒し、重度の外観変形、合併症及び早死をもたらす。病因と緩徐な進行に起因して、先端巨大症は、外側形体の変化が顔の変化のように顕著になるまで診断が確定できない。先端巨大症は、しばしば巨人症と関連する。
先端巨大症の特徴として、手、足、鼻、唇及び耳の肥大を生じる軟組織膨潤、皮膚の全体的肥厚、内部器官（例えば、心臓、腎臓）の軟組織膨潤、低温及び発話遅延を生じる声帯膨潤、頭蓋骨の膨張、しばしば眼の膨張を伴う目立った眉突出、目立った下顎突出、舌の拡大、歯と歯の隙間形成、及び手根管症候群が挙げられる。特定の実施形態では、先端巨大症のこれらの特徴の任意の１つまたは組み合わせを、明細書に提供したＧＨＲを標的とする化合物または組成物を投与することによって治療し、予防し、または改善することができる。
非限定的開示と参照による引用
明細書に記載した特定の化合物、組成物及び方法が特定の実施形態に従って具体性をもって説明されているが、以下の実施例は明細書に記載した化合物の単なる説明にかなうものであり、それを限定することは意図されていない。本出願で列挙された各参考文献は、その全てが参照によって本願に組み入れられたものとする。
明細書に含まれる例で各配列番号に規定された配列は、糖部分、ヌクレオシド間連結部または核酸塩基への任意の修飾から独立していることを理解されたい。従って、配列番号によって定義されたアンチセンス化合物は、糖部分、ヌクレオシド間連結部または核酸塩基への１つ以上の修飾を非依存的に含む場合がある。Ｉｓｉｓ番号（Ｉｓｉｓ Ｎｏ）に記載されたアンチセンス化合物は核酸塩基配列及びモチーフの組み合わせを示す。
以下の実施例は、本開示の特定の実施形態を例証するものであり、限定するものではない。さらに、具体的実施形態を記載する場合、本発明者らは、それらの具体的実施形態の一般的応用を企図している。例えば、ある特定モチーフを有するオリゴヌクレオチドの開示は、そのモチーフまたは同様のモチーフを有する他のオリゴヌクレオチドの合理的裏付けになる。同様に、例えば、ある特定高親和性修飾がある特定位置に見られる場合は、別段の表示がある場合を除き、同じ位置での他の高親和性修飾も好適であるとみなされる。
実施例１：ホスホラミダイト（化合物１、１ａ、及び２）の調製のための一般的方法
化合物１、１ａ、及び２を、本明細書に記載する当技術分野で周知の手順どおりに調製した（Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，２１（４），１１２２−１１２５，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１０，７５（５），１５６９−１５８１，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ，２００８，５２（１），５５３−５５４）、ならびに公開されたＰＣＴ国際出願（国際公開第ＷＯ２０１１／１１５８１８号、同第ＷＯ２０１０／０７７５７８号、同第ＷＯ２０１０／０３６６９８号、同第ＷＯ２００９／１４３３６９号、同第ＷＯ２００９／００６４７８、及び同第ＷＯ２００７／０９００７１号）、ならびに米国特許第７，５６９，６８６号も参照のこと）。
実施例２：化合物７の調製
化合物３（２−アセトアミド−１，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄガラクトピラノースまたはガラクトサミンペンタアセテート）は、市販のものである。化合物５を公開された手順（Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，３４，２６９２）に従って調製した。
実施例３：化合物１１の調製
化合物８及び９は、市販のものである。
実施例４：化合物１８の調製
化合物１１を実施例３に例証される手順どおりに調製した。化合物１４は、市販のものである。化合物１７を、Ｒｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００４，４７，５７９８−５８０８）によって報告された同様の手順を用いて調製した。
実施例５：化合物２３の調製
化合物１９及び２１は、市販のものである。
実施例６：化合物２４の調製
化合物１８及び２３を実施例４及び５に例証される手順どおりに調製した。
実施例７：化合物２５の調製
化合物２４を実施例６に例証される手順どおりに調製した。
実施例８：化合物２６の調製
化合物２４を実施例６に例証される手順どおりに調製する。
実施例９：３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１を含む共役ＡＳＯ（化合物２９）の一般的調製
保護されたＧａｌＮＡｃ３−１は以下の構造を有する。
共役基ＧａｌＮＡｃ３−１（ＧａｌＮＡｃ３−１ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ３−１ａは、以下の式を有する。
固体支持体に結合された保護ＧａｌＮＡｃ３−１（化合物２５）を実施例７に例証される手順どおりに調製した。３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１を含むオリゴマー化合物２９を、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準的手順を用いて調製した（Ｄｕｐｏｕｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００６，４５，３６２３−３６２７を参照のこと）。ホスホラミダイト構築ブロック（化合物１及び１ａ）を実施例１に例証される手順どおりに調製した。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて既定の配列及び組成を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定する意図はない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序及び量を調整して、本明細書に記載するギャップトオリゴマー化合物を調製することができる。そのようなギャップトオリゴマー化合物は、任意の所与の標的によって指示される既定の組成及び塩基配列を有しうる。
実施例１０：５’末端にＧａｌＮＡｃ３−１を含む共役ＡＳＯ（化合物３４）の一般的調製
Ｕｎｙｌｉｎｋｅｒ（商標）３０は、市販のものである。５’末端にＧａｌＮＡｃ３−１クラスターを含むオリゴマー化合物３４を、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準的手順を用いて調製する（Ｄｕｐｏｕｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００６，４５，３６２３−３６２７を参照のこと）。ホスホラミダイト構築ブロック（化合物１及び１ａ）を実施例１に例証される手順どおりに調製した。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて既定の配列及び組成を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定する意図はない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序及び量を調整して、本明細書に記載するギャップトオリゴマー化合物を調製することができる。そのようなギャップトオリゴマー化合物は、任意の所与の標的によって決まる既定の組成及び塩基配列を有しうる。
実施例１１：化合物３９の調製
化合物４、１３、及び２３を実施例２、４、及び５に例証される手順どおりに調製した。化合物３５をＲｏｕｃｈａｕｄ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１１，１２，２３４６−２３５３に公開された同様の手順を用いて調製する。
実施例１２：化合物４０の調製
化合物３８を実施例１１に例証される手順どおりに調製する。
実施例１３：化合物４４の調製
化合物２３及び３６を実施例５及び１１に例証される手順どおりに調製する。化合物４１を、国際公開第ＷＯ２００９０８２６０７号に公開された同様の手順を用いて調製する。
実施例１４：化合物４５の調製
化合物４３を実施例１３に例証される手順どおりに調製する。
実施例１５：化合物４７の調製
化合物４６は、市販のものである。
実施例１６：化合物５３の調製
化合物４８及び４９は、市販のものである。化合物１７及び４７を実施例４及び１５に例証される手順どおりに調製する。
実施例１７：化合物５４の調製
化合物５３を実施例１６に例証される手順どおりに調製する。
実施例１８：化合物５５の調製
化合物５３を実施例１６に例証される手順どおりに調製する。
実施例１９：固相技法による３’位にＧａｌＮＡｃ３−１を含む共役ＡＳＯの調製のための一般的方法（ＩＳＩＳ６４７５３５、６４７５３６、及び６５１９００の調製）
別段の明示がある場合を除き、オリゴマー化合物の合成に用いるすべての試薬及び溶液を商業的供給源から購入する。標準のホスホラミダイト構築ブロック及び固体支持体を、例えば、Ｔ、Ａ、Ｇ、及びｍＣ残基を含む、ヌクレオシド残基の組み込みのために用いる。無水アセトニトリル中のホスホラミダイトの０．１Ｍ溶液をb−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシド及び２’−ＭＯＥに用いた。
カラムに充填したＧａｌＮＡｃ３−１負荷ＶＩＭＡＤ固体支持体（１１０μｍｏｌ／ｇ、Ｇｕｚａｅｖ ｅｔ ａｌ．，２００３）でのホスホラミダイトカップリング法により、ＡＳＯ合成を、ＡＢＩ ３９４合成装置（１〜２μｍｏｌの規模）またはＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＡＫＴＡオリゴパイロット合成装置（４０〜２００μｍｏｌの規模）で実行した。このカップリングステップでは、固体支持体の負荷量に対して４倍量のホスホラミダイトを送達し、ホスホラミダイト縮合を１０分間行った。他のすべてのステップは、製造業者から提供された標準のプロトコルに従った。トルエン中の６％ジクロロ酢酸溶液を用いて、ヌクレオチドの５’−ヒドロキシル基からジメチルトリチル（ＤＭＴ）基を除去した。カップリングステップ中、無水ＣＨ３ＣＮ中の４，５−ジシアノイミダゾール（０．７Ｍ）を活性化剤として用いた。ホスホロチオエート連結部を、３分間の接触時間で、１：１のピリジン／ＣＨ３ＣＮ中のキサンタンヒドリドの０．１Ｍ溶液による硫化によって導入した。６％の水を含有するＣＨ３ＣＮ中の２０％のｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドの溶液を酸化剤として用いて、１２分間の接触時間で、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部を得た。
所望の配列が構築された後、シアノエチルホスフェート保護基を、４５分間の接触時間で、トリエチルアミンとアセトニトリルの１：１（ｖ／ｖ）の混合物を用いて脱保護した。固体支持体に結合されたＡＳＯをアンモニア水（２８〜３０重量％）中に懸濁し、５５℃で６時間加熱した。
その後、非結合型ＡＳＯを濾過し、アンモニアを沸去した。残渣を強アニオン交換カラムでの高圧液体クロマトグラフィーによって精製した（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｏｕｒｃｅ ３０Ｑ、３０μｍ、２．５４×８ｃｍ、Ａ＝３０％ＣＨ３ＣＮ水溶液中１００ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ＝Ａ中１．５Ｍ ＮａＢｒ、６０分後０〜４０％のＢ、流量１４ｍＬ／分−１、λ＝２６０ｎｍ）。残渣を逆相カラムでのＨＰＬＣにより脱塩して、固体支持体への初期負荷量に基づいて１５〜３０％の単離収率で所望のＡＳＯを得た。ＡＳＯを、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＭＳＤシステムを用いたイオン対ＨＰＬＣ／ＭＳ分析によって特徴付けた。
当技術分野で周知の標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて共役体を含まないアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成した。
これらの方法を用いて、ＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とする３個の別個のアンチセンス化合物を調製した。以下の表１７に要約されるように、ＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とする３個のアンチセンス化合物のそれぞれは、同一の核酸塩基配列を有し、ＩＳＩＳ ３０４８０１は、すべてがホスホロチオエート連結部である５−１０−５ＭＯＥギャップマーであり、ＩＳＩＳ ６４７５３５は、ＧａｌＮＡｃ３−１をその３’末端で共役させたことを除いて、ＩＳＩＳ ３０４８０１と同一であり、ＩＳＩＳ ６４７５３６は、その化合物の特定のヌクレオシド間連結部がホスホジエステル連結部であることを除いて、ＩＳＩＳ ６４７５３５と同一であった。表１７にさらに要約されるように、ＳＲＢ−１を標的とする２つの別個のアンチセンス化合物を合成した。ＩＳＩＳ ４４０７６２は、すべてがホスホロチオエートヌクレオシド間連結部である２−１０−２ ｃＥｔギャップマーであり、ＩＳＩＳ ６５１９００は、その３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１を含めたことを除いて、ＩＳＩＳ ４４０７６２と同一であった。
下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’−（Ｓ）−ＣＨ３二環式ヌクレオシド（例えば、ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。「ＧａｌＮＡｃ３−１」は、先の実施例９に示された構造を有する共役基を示す。ＧａｌＮＡｃ３−１が、ＡＳＯを共役体の残りの部分に連結させる切断可能なアデノシンを含み、「ＧａｌＮＡｃ３−１ａ」と指定されることに留意されたい。上述の表ではこの命名法を用いて、共役体の一部であるアデノシンを含む全核酸塩基配列を示す。したがって、上述の表において、「Ａｄｏ」を省略して「ＧａｌＮＡｃ３−１」で終了する配列を列記することもできる。下付き文字「ａ」を用いて切断可能なヌクレオシドまたは切断可能部分を欠く共役基の部分を示すこの慣例をこれらの実施形態の全体を通して用いる。切断可能部分を欠く共役基のこの部分は、本明細書において「クラスター」または「共役クラスター」または「ＧａｌＮＡｃ３クラスター」と称される。特定の事例において、これは、そのクラスター及びその切断可能部分を別々に提供することによって共役基を説明するのに好都合である。
実施例２０：ｈｕＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩの用量依存的アンチセンス阻害
それぞれヒトＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とし、かつ上に記載されるＩＳＩＳ ３０４８０１及びＩＳＩＳ ６４７５３５を別々に試験し、用量依存的試験において、ヒトＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩを阻害するそれらの能力について評価した。
処理
ヒトＡｐｏＣＩＩＩトランスジェニックマウスを１２時間の明暗周期で維持し、Ｔｅｋｌａｄ実験食餌を不断給餌した。実験開始前に動物を研究施設で少なくとも７日間順化させた。ＡＳＯをＰＢＳ中に調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過して滅菌した。注入のためにＡＳＯを０．９％ＰＢＳ中に溶解した。
ヒトＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスに、ＩＳＩＳ ３０４８０１もしくは６４７５３５を、０．０８、０．２５、０．７５、２．２５、もしくは６．７５μｍｏｌ／ｋｇで、または対照としてＰＢＳを、週１回２週間、腹腔内に注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終用量の投与から４８時間後に血液を各マウスから採取し、マウスを屠殺し、組織を収集した。
ＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡ分析
標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いてマウスの肝臓におけるＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルを決定した。ＰＢＳ処理対照に対して標準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡとの比較で相対的に決定した。以下の結果は、ＰＢＳ処理対照に対して標準化された各処理群のＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示され、「％ＰＢＳ」で表示される。各ＡＳＯの半数効果濃度（ＥＤ５０）も以下の表１８に示される。
例証されるように、ＰＢＳ対照と比較して、両方のアンチセンス化合物がＡｐｏＣ ＩＩＩ ＲＮＡを減少させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりもはるかに強力であった。
ＡｐｏＣ ＩＩＩタンパク質分析（比濁アッセイ）
２０１３年３月２９日の出版前にオンラインで公開されたＧｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）によって報告された手順を用いて、血漿ＡｐｏＣ ＩＩＩタンパク質分析を行った。
マウスから単離した約１００μＬの血漿を、希釈することなく、Ｏｌｙｍｐｕｓ臨床分析器及び市販の比濁ＡｐｏＣ ＩＩＩアッセイ（Ｋａｍｉｙａ、カタログ番号ＫＡＩ−００６、Ｋａｍｉｙａ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）を用いて分析した。アッセイプロトコルを供給業者が説明するとおりに実行した。
以下の表１９に示されるように、ＰＢＳ対照と比較して、両方のアンチセンス化合物がＡｐｏＣ ＩＩＩタンパク質を減少させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりもはるかに強力であった。
血漿トリグリセリド及びコレステロールを、Ｂｌｉｇｈ ａｎｄ Ｄｙｅｒの方法（Ｂｌｉｇｈ，Ｅ．Ｇ．ａｎｄ Ｄｙｅｒ，Ｗ．Ｊ．Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３７：９１１−９１７、１９５９）（Ｂｌｉｇｈ，Ｅ ａｎｄ Ｄｙｅｒ，Ｗ，Ｃａｎ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈｙｓｉｏｌ，３７，９１１−９１７，１９５９）（Ｂｌｉｇｈ，Ｅ ａｎｄ Ｄｙｅｒ，Ｗ，Ｃａｎ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈｙｓｉｏｌ，３７，９１１−９１７，１９５９）を用いて抽出し、Ｂｅｃｋｍａｎｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ臨床分析器及び市販の試薬を用いて測定した。
トリグリセリドレベルを、ＰＢＳを注入したマウスとの比較で相対的に測定し、「％ＰＢＳ」で表示する。結果が表２０に提示される。例証されるように、両方のアンチセンス化合物がトリグリセリドレベルを低下させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりも実質的にはるかに強力であった。
血漿試料をＨＰＬＣによって分析して、総コレステロールの量及びコレステロールの異なる画分（ＨＤＬ及びＬＤＬ）の量を決定した。結果が表２１及び２２に提示される。例証されるように、両方のアンチセンス化合物が総コレステロールレベルを低下させ、ＬＤＬを低下させ、ＨＤＬを上昇させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１に共役されるアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６４７５３５）は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりも実質的にはるかに強力であった。ＨＤＬレベルの増加及びＬＤＬレベルの減少は、ＡｐｏＣ ＩＩＩのアンチセンス阻害の心臓血管の有益な影響である。
薬物動態分析（ＰＫ）
ＡＳＯのＰＫも評価した。肝臓及び腎臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出した。試料をＩＰ−ＨＰＬＣ−ＭＳを利用するＭＳＤ１で分析した。全長ＩＳＩＳ ３０４８０１及び６４７５３５の組織レベル（μｇ／ｇ）を測定し、結果が表２３に提供される。例証されるように、総全長アンチセンス化合物の肝臓濃度は、これら２つのアンチセンス化合物と同様であった。したがって、ＧａｌＮＡｃ３−１共役アンチセンス化合物が肝臓でより活性であるが（上のＲＮＡ及びタンパク質データによって実証されるように）、肝臓内で著しく高い濃度では存在しない。実際には、計算されたＥＣ５０（表２３に提供される）は、共役化合物の力価の観察された増加が蓄積の増加に完全に起因するわけではないことを裏付ける。この結果は、共役体が、肝臓蓄積単独以外の機構によって、おそらくアンチセンス化合物の細胞への生産的な取り込みを改善することによって、力価を改善したことを示唆する。
結果は、腎臓におけるＧａｌＮＡｃ３−１共役アンチセンス化合物の濃度が、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠くアンチセンス化合物の濃度よりも低いことも示す。これは、いくつかの有益な治療的意味を有する。腎臓における活性が要求されない治療的指標において、腎臓への曝露は、腎毒性の危険性を有し、それに見合う利益がない。さらに、腎臓における高濃度は、典型的には、尿への化合物の損失をもたらし、より迅速なクリアランスをもたらす。したがって、非腎臓標的の場合、腎臓蓄積は望ましくない。これらのデータは、ＧａｌＮＡｃ３−１共役が腎臓蓄積を減少させることを示唆する。
ＩＳＩＳ ６４７５３５の代謝物も特定し、それらの質量を高分解能質量分析によって確認した。観察された代謝物の切断部位及び構造が以下に示される。標準的手順を用いて全長ＡＳＯの相対％を計算し、結果が表２３ａに提示される。ＩＳＩＳ ６４７５３５の主な代謝物は、全共役体を欠く全長ＡＳＯ（すなわち、ＩＳＩＳ ３０４８０１）であり、これは、以下に示される切断部位Ａでの切断に由来する。さらに、他の切断部位に由来するさらなる代謝物も観察された。これらの結果は、細胞内の酵素によって切断されうるか、またはサイトゾルの還元環境下で切断されうるか、またはエンドソーム及びリソソーム内の酸性ｐＨに対して不安定な、ＧａｌＮＡｃ３−１糖とＡＳＯとの間のエステル、ペプチド、ジスルフィド、ホスホラミデート、またはアシルヒドラゾンなどの他の切断可能な結合の導入も有用でありうることを示唆する。
実施例２１：単回投与試験におけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩのアンチセンス阻害
それぞれヒトＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とし、かつ表１７に記載されるＩＳＩＳ ３０４８０１、６４７５３５、及び６４７５３６を、単回投与試験において、ヒトＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスにおけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩを阻害するそれらの能力についてさらに評価した。
処理
ヒトＡｐｏＣＩＩＩトランスジェニックマウスを１２時間の明暗周期に維持し、Ｔｅｋｌａｄ実験食餌を不断給餌した。実験開始前に動物を研究施設で少なくとも７日間順化させた。ＡＳＯをＰＢＳ中に調製し、０．２ミクロンのフィルターを通して濾過滅菌した。注入のためにＡＳＯを０．９％ＰＢＳ中に溶解した。
ヒトＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスに、ＩＳＩＳ ３０４８０１、６４７５３５、もしくは６４７５３６（上述のもの）、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、腹腔内注入した。処理群は、３匹の動物からなり、対照群は、４匹の動物からなった。治療前及び最終用量後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。
試料を収集し、分析して、肝臓におけるＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡ及びタンパク質レベル、血漿トリグリセリド、ならびにＨＤＬ及びＬＤＬ画分を含むコレステロールを決定し、上述（実施例２０）のように評価した。これらの分析からのデータは、以下の表２４〜２８に提示される。血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。ＡＬＴ及びＡＳＴレベルは、アンチセンス化合物がすべての投与量で良好な耐性であったことを示した。
これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）と比較して、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体を含むアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６４７５３５及び６４７５３６）の力価の改善を示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体及びいくつかのホスホジエステル連結部を含むＩＳＩＳ ６４７５３６は、同一の共役体を含むＩＳＩＳ ６４７５３５と同程度に強力であり、ＡＳＯ内のすべてのヌクレオシド間連結部は、ホスホロチオエート連結部である。
これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体がアンチセンス化合物の力価を改善することを裏付ける。これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役アンチセンス化合物の同等の力価も示し、これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、混成連結部（６個のホスホジエステル連結部を有するＩＳＩＳ ６４７５３６）及び同一のアンチセンス化合物の完全なホスホロチオエートバージョン（ＩＳＩＳ ６４７５３５）を有する。
ホスホロチオエート連結部は、アンチセンス化合物にいくつかの特性を提供する。例えば、これらは、ヌクレアーゼ消化に抵抗し、タンパク質に結合し、腎臓／尿ではなく肝臓における化合物の蓄積をもたらす。これらは、肝臓における徴候を治療する際に特に望ましい特性である。しかしながら、ホスホロチオエート連結部は、炎症性応答とも関連している。したがって、化合物におけるホスホロチオエート連結部の数を減少させることにより、炎症の危険性の減少が見込まれるが、肝臓中の化合物の濃度も低下させ、腎臓及び尿中の濃度を増加させ、ヌクレアーゼの存在下で安定性を低下させ、全体の力価を低下させる。これらの結果は、特定のホスホロチオエート連結部がホスホジエステル連結部に置換されたＧａｌＮＡｃ３−１共役アンチセンス化合物が、肝臓における標的に対して、完全なホスホロチオエート連結部を有する対応物と同程度に強力であることを示す。そのような化合物は、より炎症誘発性が低いと見込まれる（ＰＳの減少が炎症性効果の減少をもたらすことを示す実験を説明する実施例２４を参照のこと）。
実施例２２：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とするＧａｌＮＡｃ３−１共役修飾ＡＳＯの影響
それぞれＳＲＢ−１を標的とし、かつ表１７に記載されるＩＳＩＳ ４４０７６２及び６５１９００を、用量依存的試験において、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＳＲＢ−１を阻害するそれらの能力について評価した。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ４４０７６２、６５１９００、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の４８時間後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを決定した。ＰＢＳ処理対照に対して標準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡとの比較で相対的に決定した。以下の結果は、ＰＢＳ処理対照に対して標準化された各処理群のＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示され、「％ＰＢＳ」で表示される。
表２９に例証されるように、両方のアンチセンス化合物がＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体（ＩＳＩＳ ６５１９００）を含むアンチセンス化合物は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠くアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ４４０７６２）よりもはるかに強力であった。これらの結果は、異なる標的に相補的であり、かつ異なる化学修飾ヌクレオシドを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体の力価利益が観察されることを実証し、この事例において、修飾ヌクレオシドは、拘束エチル糖部分（二環式糖部分）を含む。
実施例２３：ヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）アッセイプロトコル
ＢＤ Ｖａｕｔａｉｎｅｒ ＣＰＴチューブ法を用いてｈＰＢＭＣアッセイを実行した。ＵＳ ＨｅａｌｔｈＷｏｒｋｓ ｃｌｉｎｉｃ（Ｆａｒａｄａｙ ＆ Ｅｌ Ｃａｍｉｎｏ Ｒｅａｌ，Ｃａｒｌｓｂａｄ）においてインフォームドコンセントを得た志願ドナー由来の全血試料を得て、４〜１５個のＢＤ Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ ＣＰＴ８ｍＬチューブ（ＶＷＲカタログ番号ＢＤ３６２７５３）内に収集した。ＰＢＭＣアッセイデータシートを用いて、各ドナーのＣＰＴチューブ内の開始合計全血量の近似値を記録した。
遠心分離の直前に、チューブを８〜１０回、穏やかに反転させることによって、血液試料を再度混合した。ＣＰＴチューブを、水平（スイングアウト）ローター内で、室温（１８〜２５℃）で３０分間、ブレーキオフで１５００〜１８００ＲＣＦで遠心分離した（２７００ＲＰＭ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ａｌｌｅｇｒａ ６Ｒ）。細胞を（Ｆｉｃｏｌｌとポリマーゲル層との間の）バフィーコート界面から回収し、５０ｍＬの滅菌円錐チューブに移し、最大５個のＣＰＴチューブ／５０ｍＬの円錐チューブ／ドナーをプールした。その後、細胞をＰＢＳ（Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋を含まない；ＧＩＢＣＯ）で２回洗浄した。チューブを最大５０ｍＬまで満たし、数回反転させて混合した。その後、試料を、室温で１５分間、３３０×ｇで遠心分離し（１２１５ＲＰＭ、Ｂｅｃｋｍａｎ Ａｌｌｅｇｒａ ６Ｒ）、ペレットを乱すことなくできるだけ多くの上澄みを吸引した。チューブを穏やかに回転させて細胞ペレットを取り除き、細胞をＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ（約１ｍＬ／１０ｍＬの開始全血量）中に再懸濁した。６０μＬの試料を、６００μＬのＶｅｒｓａＬｙｓｅ試薬（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、カタログ番号Ａ０９７７７）を有する試料バイアル（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）にピペット注入し、１０〜１５秒間穏やかにボルテックスした。試料を室温で１０分間インキュベートし、計数前に再度混合した。ＰＢＭＣ細胞型を用いたＶｉｃｅｌｌ ＸＲ細胞生存率分析器（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）で細胞懸濁液を計数した（１：１１の希釈係数を他のパラメータと共に保存した）。生細胞／ｍＬ及び生存率を記録した。細胞懸濁液をＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ中で１×１０７生ＰＢＭＣ／ｍＬに希釈した。
細胞を９６ウェル組織培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ）の５０μＬ／ウェル中に５×１０５でプレーティングした。ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ中で希釈した２倍濃度のオリゴ／対照の５０μＬ／ウェルを実験テンプレートに従って添加した（合計１００μＬ／ウェル）。プレートを振盪器に設置し、約１分間混合させた。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、プレートを４００×ｇで１０分間遠心分離し、その後、ＭＳＤサイトカインアッセイ（すなわち、ヒトＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、及びＭＣＰ−１）のために上澄みを除去した。
実施例２４：ｈＰＢＭＣアッセイにおけるＧａｌＮＡｃ３−１共役ＡＳＯの炎症誘発作用の評価
表３０に列記されるアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を、実施例２３に記載されるプロトコルを用いたｈＰＢＭＣアッセイにおいて炎症誘発作用について評価した。ＩＳＩＳ ３５３５１２は、このアッセイにおいてＩＬ−６放出に関する高レスポンダーとして知られる内部標準物である。ｈＰＢＭＣを新鮮な志願ドナーから単離し、０、０．０１２８、０．０６４、０．３２、１．６、８、４０、及び２００μｍ濃度のＡＳＯで処理した。処理から２４時間後、サイトカインレベルを測定した。
ＩＬ−６のレベルを一次読み出しとして用いた。標準的手順を用いてＥＣ５０及びＥｍａｘを計算した。結果が２つのドナー由来のＥｍａｘ／ＥＣ５０の平均比率として表され、「Ｅｍａｘ／ＥＣ５０」で表示される。より低い比率は、炎症誘発応答の相対的減少を示し、より高い比率は、炎症誘発応答の相対的増加を示す。
試験化合物に関して、炎症誘発性が最も低い化合物は、ＰＳ／ＰＯ連結ＡＳＯ（ＩＳＩＳ ６１６４６８）であった。ＧａｌＮＡｃ３−１共役ＡＳＯ（ＩＳＩＳ ６４７５３５）は、その非共役対応物（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりもわずかに炎症誘発性が低かった。これらの結果は、いくつかのＰＯ連結部の組み込みが炎症誘発反応を減少させ、ＧａｌＮＡｃ３−１共役体の添加が化合物の炎症誘発性を高めず、炎症誘発応答を減少させうることを示す。したがって、混成ＰＳ／ＰＯ連結部及びＧａｌＮＡｃ３−１共役体の両方を含むアンチセンス化合物が、完全ＰＳ連結アンチセンス化合物（ＧａｌＮＡｃ３−１共役体の有無にかかわらず）と比較して、より低い炎症誘発応答をもたらすことが予想されるであろう。これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役アンチセンス化合物、特に減少したＰＳ含有量を有するものの炎症誘発性がより低いことを示す。
総合して、これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ３−１共役化合物、特にＰＳ含有量を減らしたものを、対応物であるＧａｌＮＡｃ３−１共役体を欠く完全ＰＳアンチセンス化合物よりも高い用量で投与することができることを示唆する。これらの化合物の半減期が実質的に異なることが予想されないため、そのようなより高い投与量は、結果として低頻度の投薬につながる。実際には、ＧａｌＮＡｃ３−１共役化合物の方が、力価が高く（実施例２０〜２２を参照のこと）、再投薬は化合物の濃度が所望のレベル未満に低下した時に必要になるが、その所望のレベルは力価に基づくことから、そのような投与の頻度はさらに低くなるだろう。
下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’−（Ｓ）−ＣＨ３二環式ヌクレオシド（例えば、ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。「Ａｄｏ’−ＧａｌＮＡｃ３−１ａ」は、示されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドの３’末端に結合される、実施例９に示される構造ＧａｌＮＡｃ３−１を有する共役体を示す。
実施例２５：生体外におけるヒトＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とするＧａｌＮＡｃ３−１共役修飾ＡＳＯの影響
上述のＩＳＩＳ ３０４８０１及び６４７５３５を生体外で試験した。トランスジェニックマウス由来の２５，０００細胞／ウェルの密度の初代肝細胞を、０．０３，０．０８、０．２４、０．７４、２．２２、６．６７、及び２０μｍ濃度の修飾オリゴヌクレオチドで処理した。約１６時間の処理期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定し、ｈＡｐｏＣ ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルをＲＩＢＯＧＲＥＥＮで測定された全ＲＮＡ含有量に従って調整した。
標準的方法を用いてＩＣ５０を計算し、結果が表３２に提示される。例証されるように、対照ＩＳＩＳ ３０４８０１と比較して、同程度の力価がＩＳＩＳ ６４７５３５で処理した細胞において観察された。
この実験において、生体内で観察されるＧａｌＮＡｃ３−１共役の大きな力価利益は、生体外では観察されなかった。生体外での初代肝細胞におけるその後の自由取り込み実験は、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠くオリゴヌクレオチドと比較して、さまざまなＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドの力価の増加を示した（実施例６０、８２、及び９２を参照のこと）。
実施例２６：ＡｐｏＣ ＩＩＩ ＡＳＯ活性へのＰＯ／ＰＳ連結部の影響
ヒトＡｐｏＣ ＩＩＩトランスジェニックマウスに、ＩＳＩＳ ３０４８０１もしくはＩＳＩＳ ６１６４６８（両方ともに上述のもの）またはＰＢＳ処理対照を、２５ｍｇ／ｋｇで週１回２週間、腹腔内注入した。処理群は、３匹の動物からなり、対照群は、４匹の動物からなった。治療前及び最終服用後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。
試料を収集し、分析して、上述のように肝臓におけるＡｐｏＣ ＩＩＩタンパク質レベルを決定した（実施例２０）。これらの分析からのデータが以下の表３３に提示される。
これらの結果は、完全ＰＳ（ＩＳＩＳ ３０４８０１）と比較して、ウイングにＰＯ／ＰＳを有するアンチセンス化合物（ＩＳＩＳ ６１６４６８）の力価の減少を示す。
実施例２７：化合物５６
化合物５６は、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈから市販されているか、またはＳｈｃｈｅｐｉｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７−４４５４によって報告された公開された手順に従って調製することができる。
実施例２８：化合物６０の調製
化合物４を実施例２に例証される手順どおりに調製した。化合物５７は、市販のものである。化合物６０を構造分析で確認した。
他の単保護された置換または無置換アルキルジオール、例えば限定するわけではないが、本明細書に提示されるものを用いて既定の組成を有するホスホラミダイトを調製することができるため、化合物５７は、代表的なものであり、限定する意図はない。
実施例２９：化合物６３の調製
化合物６１及び６２を、Ｔｏｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１３，３，５６６−５７７、及びＪｉａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００７，６３（１９），３９８２−３９８８によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
あるいは、化合物６３を、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．の科学文献及び特許文献（Ｓｙｎｌｅｔｔ，２００３，１２，１８３８−１８４０、及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．の公開されたＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００４０６３２０８号）に報告される手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例３０：化合物６３ｂの調製
化合物６３ａを、Ｈａｎｅｓｓｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９６，７４（９），１７３１−１７３７によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例３１：化合物６３ｄの調製
化合物６３ｄを、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９８，９（５），４５１−４５３によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。
実施例３２：化合物６７の調製
実施例２に例証される手順どおりに化合物６４を調製した。化合物６５を、Ｏｒ ｅｔ ａｌ．の公開されたＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００９００３００９号によって報告された手順と同様の手順を用いて調製する。他の保護基、例えば限定するわけではないが、本明細書に提示されるものを用いることができるため、化合物６５に用いた保護基は、代表的なものであり、限定する意図はない。
実施例３３：化合物７０の調製
実施例２に例証される手順どおりに化合物６４を調製した。化合物６８は、市販のものである。他の保護基、例えば限定するわけではないが、本明細書に提示されるものを用いることができるため、化合物６８に用いた保護基は、代表的なものであり、限定する意図はない。
実施例３４：化合物７５ａの調製
化合物７５をＳｈｃｈｅｐｉｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７−４４５４によって報告された公開された手順に従って調製する。
実施例３５：化合物７９の調製
化合物７６をＳｈｃｈｅｐｉｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７−４４５４によって報告された公開された手順に従って調製した。
実施例３６：化合物７９ａの調製
化合物７７を実施例３５に例証される手順どおりに調製する。
実施例３７：固体支持体による５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を含む共役オリゴマー化合物８２の調製のための一般的方法（方法Ｉ）
ＧａｌＮＡｃ３−２が、以下の構造を有する：
共役基ＧａｌＮＡｃ３−２（ＧａｌＮＡｃ３−２ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ３−２ａは、以下の式を有する：
ＶＩＭＡＤ結合オリゴマー化合物７９ｂを、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準的手順を用いて調製した（Ｄｕｐｏｕｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００６，４５，３６２３−３６２７を参照のこと）。ホスホラミダイト化合物５６及び６０を、それぞれ、実施例２７及び２８にそれぞれ例証される手順どおりに調製した。他のホスホラミダイト構築ブロック、例えば限定するわけではないが、本明細書に提示されるものを用いて、５’末端にホスホジエステル連結共役基を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定する意図はない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序及び量を調整して、任意の既定の配列及び組成を有する本明細書に記載するオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例３８：５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を含むオリゴマー化合物８２の調製のための代替方法（方法ＩＩ）
ＶＩＭＡＤ結合オリゴマー化合物７９ｂを、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成における標準的手順を用いて調製した（Ｄｕｐｏｕｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００６，４５，３６２３−３６２７を参照のこと）。ＧａｌＮＡｃ３−２クラスターホスホラミダイト（化合物７９）を実施例３５に例証される手順どおりに調製した。この代替方法は、合成の最終ステップでのホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−２共役体のオリゴマー化合物への一段階導入を可能にする。他のホスホラミダイト構築ブロック、例えば限定するわけではないが、本明細書に提示されるものを用いて５’末端にホスホジエステル共役体を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定する意図はない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序及び量を調整して、任意の既定の配列及び組成を有する本明細書に記載するオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例３９：固体支持体による５’末端にＧａｌＮＡｃ３−３共役体（５’末端結合のためにＧａｌＮＡｃ３−１修飾されたもの）を含むオリゴマー化合物８３ｈの調製のための一般的方法
化合物１８を実施例４に例証される手順どおりに調製した。化合物８３ａ及び８３ｂは、市販のものである。ホスホジエステル連結ヘキシルアミンを含むオリゴマー化合物８３ｅを標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて調製した。保護されたオリゴマー化合物をアンモニア水で処理することにより、５’−ＧａｌＮＡｃ３−３共役オリゴマー化合物（８３ｈ）を提供した。
ＧａｌＮＡｃ３−３が、以下の構造を有する：
共役基ＧａｌＮＡｃ３−３（ＧａｌＮＡｃ３−３ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、以下の式を有する：
実施例４０：固体支持体による３’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−４共役体を含むオリゴマー化合物８９の調製のための一般的方法
ＧａｌＮＡｃ３−４が、以下の構造を有する：
式中、ＣＭは、切断可能部分である。特定の実施形態において、切断可能部分は、以下のものである：
共役基ＧａｌＮＡｃ３−４（ＧａｌＮＡｃ３−４ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ３−４ａは、以下の式を有する：
保護されたＵｎｙｌｉｎｋｅｒ機能化固体支持体化合物３０は、市販のものである。化合物８４を、文献に報告される手順と同様の手順を用いて調製する（Ｓｈｃｈｅｐｉｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４４７−４４５４、Ｓｈｃｈｅｐｉｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９９，２７，３０３５−３０４１、及びＨｏｒｎｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５，４８４２−４８４９を参照のこと）。
ホスホラミダイト構築ブロック（化合物６０及び７９ａ）を実施例２８及び３６に例証される手順どおりに調製する。他のホスホラミダイト構築ブロックを用いて、既定の配列及び組成を有する３’末端にホスホジエステル連結共役体を有するオリゴマー化合物を調製することができるため、例証されるホスホラミダイトは、代表的なものであり、限定する意図はない。固体支持体に添加されるホスホラミダイトの順序及び量を調整して、任意の既定の配列及び組成を有する本明細書に記載するオリゴマー化合物を調製することができる。
実施例４１：固相技法による５’位にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−２（Ｂｘがアデニンである実施例３７を参照のこと）共役体を含むＡＳＯの調製のための一般的方法（ＩＳＩＳ ６６１１３４の調製）
別段の明示がある場合を除き、オリゴマー化合物の合成に用いるすべての試薬及び溶液を商業的供給源から購入する。標準のホスホラミダイト構築ブロック及び固体支持体を、例えば、Ｔ、Ａ、Ｇ、及びｍＣ残基を含む、ヌクレオシド残基の組み込みのために用いる。ホスホラミダイト化合物５６及び６０を用いて、５’末端のホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を合成した。無水アセトニトリル中のホスホラミダイトの０．１Ｍ溶液をb−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシド及び２’−ＭＯＥに用いた。
カラムに充填されたＶＩＭＡＤ固体支持体（１１０μｍｏｌ／ｇ、Ｇｕｚａｅｖ ｅｔ ａｌ．，２００３）でのホスホラミダイトカップリング法により、ＡＳＯ合成を、ＡＢＩ ３９４合成装置（１〜２μｍｏｌの規模）またはＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＡＫＴＡオリゴパイロット合成装置（４０〜２００μｍｏｌの規模）で実行した。このカップリングステップについて、固体支持体の初期負荷量に対して４倍過剰のホスホラミダイトを送達し、ホスホラミダイトカップリングを１０分間行った。すべての他のステップは、製造業者から提供された標準のプロトコルに従った。トルエン中の６％ジクロロ酢酸溶液を用いて、ヌクレオチドの５’−ヒドロキシル基からジメトキシトリチル（ＤＭＴ）基を除去した。カップリングステップ中、無水ＣＨ３ＣＮ中の４，５−ジシアノイミダゾール（０．７Ｍ）を活性化剤として用いた。ホスホロチオエート連結部を、３分間の接触時間で、１：１のピリジン／ＣＨ３ＣＮ中のキサンタンヒドリドの０．１Ｍ溶液による硫化によって導入した。６％の水を含有するＣＨ３ＣＮ中の２０％のｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドの溶液を酸化剤として用いて、１２分間の接触時間で、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部を提供した。
所望の配列が構築された後、シアノエチルホスフェート保護基を、４５分間の接触時間で、トルエン中の２０％ジエチルアミン（ｖ／ｖ）を用いて脱保護した。固体支持体に結合されたＡＳＯをアンモニア水（２８〜３０重量％）中に懸濁し、５５℃で６時間加熱した。
その後、非結合型ＡＳＯを濾過し、アンモニアを沸去した。残渣を強アニオン交換カラムでの高圧液体クロマトグラフィーによって精製した（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓｏｕｒｃｅ ３０Ｑ、３０μｍ、２．５４×８ｃｍ、Ａ＝３０％ＣＨ３ＣＮ水溶液中１００ｍＭ酢酸アンモニウム、Ｂ＝Ａ中１．５Ｍ ＮａＢｒ、６０分後０〜４０％のＢ、流量１４ｍＬ／分、λ＝２６０ｎｍ）。残渣を逆相カラムでのＨＰＬＣにより脱塩して、固体支持体への初期負荷量に基づいて１５〜３０％の単離収率で所望のＡＳＯを得た。ＡＳＯを、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＭＳＤシステムを用いたイオン対ＨＰＬＣ／ＭＳ分析によって特徴付けた。
下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’−（Ｓ）−ＣＨ３二環式ヌクレオシド（例えば、ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。ＧａｌＮＡｃ３−２ａの構造が実施例３７に示される。
実施例４２：固相技法による５’位にＧａｌＮＡｃ３−３共役体を含むＡＳＯの調製のための一般的方法（ＩＳＩＳ ６６１１６６の調製）
ＩＳＩＳ ６６１１６６の合成を、実施例３９及び４１に例証される手順と同様の手順を用いて実行した。
ＩＳＩＳ ６６１１６６は、５’位がＧａｌＮＡｃ３−３共役体を含む５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ＡＳＯを、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ＭＳＤシステムを用いたイオン対ＨＰＬＣ／ＭＳ分析によって特徴付けた。
下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。「５’−ＧａｌＮＡｃ３−３ａ」の構造が実施例３９に示される。
実施例４３：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とする５’末端でのホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−２の用量依存的試験（Ｂｘがアデニンである実施例３７及び４１を参照のこと）
５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を含むＩＳＩＳ ６６１１３４（実施例４１を参照のこと）を、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ ４４０７６２及び６５１９００（３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体、実施例９を参照のこと）を比較のために試験に含め、先の表１７に記載する。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ４４０７６２、６５１９００、６６１１３４、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを標準プロトコルに従って決定した。ＰＢＳ処理対照に対して標準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡとの比較で相対的に決定した。以下の結果は、ＰＢＳ処理対照に対して標準化された各処理群のＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示され、「％ＰＢＳ」で表示される。前記方法と同様の方法を用いてＥＤ５０を測定し、以下に提示する。
表３５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−２共役体（ＩＳＩＳ ６６１１３４）または３’末端に連結されたＧａｌＮＡｃ３−１共役体（ＩＳＩＳ ６５１９００）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ４４０７６２）と比較して、力価の大幅な改善を示した。さらに、５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を含むＩＳＩＳ ６６１１３４は、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体を含むＩＳＩＳ ６５１９００と比較して、等効力であった。
３’ＧａｌＮＡｃ３−１及び５’ＧａｌＮＡｃ３−２の構造は、先の実施例９及び３７に記載されている。
薬物動態分析（ＰＫ）
高用量群（７ｍｇ／ｋｇ）でのＡＳＯのＰＫを調べ、実施例２０に例証される方法と同一の方法で評価した。肝臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出した。６６１１３４（５’ＧａｌＮＡｃ３−２）及びＩＳＩＳ ６５１９００（３’ＧａｌＮＡｃ３−１）の全長代謝物を特定し、これらの質量を高分解能質量分析によって確認した。結果は、５’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−２共役体を含むＡＳＯ（ＩＳＩＳ ６６１１３４）に対して検出された主な代謝物が、ＩＳＩＳ ４４０７６２であったことを示した（データ示されず）。検出可能なレベルでさらなる代謝物は観察されなかった。その対応物とは異なり、先の表２３ａに報告された代謝物と同様のさらなる代謝物が、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体を有するＡＳＯ（ＩＳＩＳ ６５１９００）で観察された。これらの結果は、ホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−１またはＧａｌＮＡｃ３−２共役体を有することで、それらの力価を損なうことなくＡＳＯのＰＫプロファイルを改善しうることを示唆する。
実施例４４：ＳＲＢ−１を標的とする３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体（実施例９を参照のこと）を含むＡＳＯのアンチセンス阻害へのＰＯ／ＰＳ連結部の影響
それぞれＳＲＢ−１を標的とする、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体を含むＩＳＩＳ ６５５８６１及び６５５８６２を、単回投与試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１を阻害するそれらの能力について試験した。親非共役化合物ＩＳＩＳ ３５３３８２を比較のために試験に含めた。
ＡＳＯは５−１０−５ＭＯＥギャップマーであり、ギャップ領域は、１０個の２’−デオキシリボヌクレオシドを含み、各ウイング領域は、５個の２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを含む。ＡＳＯを先の実施例１９に例証される方法と同様の方法を用いて調製し、以下の表３６に示す。
下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。「ＧａｌＮＡｃ３−１」の構造が実施例９に示される。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ３５３３８２、６５５８６１、６５５８６２、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。治療前及び最終服用後に血液を各マウスから採取し、血漿試料を分析した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを決定した。ＰＢＳ処理対照に対して標準化する前に（Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎを用いて）ＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡとの比較で相対的に決定した。以下の結果は、ＰＢＳ処理対照に対して標準化された各処理群のＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示され、「％ＰＢＳ」で表示される。前記方法と同様の方法を用いてＥＤ５０を測定し、以下に報告する。
表３７に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、ＰＢＳ処理対照と比較して、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５５８６１及び６５５８６２）は、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２）と比較して、力価の大幅な改善を示した。さらに、混成ＰＳ／ＰＯ連結部を有するＩＳＩＳ ６５５８６２は、完全ＰＳ（ＩＳＩＳ ６５５８６１）と比較して、力価の改善を示した。
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。臓器重量も評価した。結果は、ＰＢＳ対照と比較して、ＡＳＯで処理したマウスにおいて、トランスアミナーゼレベル（表３８）の増加も臓器重量（データ示されず）の増加も観察されなかったことを示した。さらに、混成ＰＳ／ＰＯ連結部を有するＡＳＯ（ＩＳＩＳ ６５５８６２）は、完全ＰＳ（ＩＳＩＳ ６５５８６１）と比較して、同様のトランスアミナーゼレベルを示した。
実施例４５：ＰＦＰエステル（化合物１１０ａ）の調製
化合物４（９．５ｇ、２８．８ｍｍｏｌｅ）を化合物１０３ａまたは１０３ｂ（３８ｍｍｏｌｅ）で個別に処理し、ジクロロメタン（２００ｍＬ）中のＴＭＳＯＴｆ（０．５当量）及びモレキュラーシーブで処理し、室温で１６時間撹拌した。この時点で、セライトを通して有機層を濾過し、その後、重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で還元した。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（２％-＞１０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、８０％超の収率で化合物１０４ａ及び１０４ｂを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０４ａ及び１０４ｂを化合物１００ａ〜ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、９０％超の収率で化合物１０５ａ及び１０５ｂを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０５ａ及び１０５ｂを、化合物９０１ａ〜ｄと同一の条件下、化合物９０で個別に処理して、化合物１０６ａ（８０％）及び１０６ｂ（２０％）を得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０６ａ及び１０６ｂを化合物９６ａ〜ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、１０７ａ（６０％）及び１０７ｂ（２０％）を得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０７ａ及び１０７ｂを化合物９７ａ〜ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、４０〜６０％の収率で化合物１０８ａ及び１０８ｂを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０８ａ（６０％）及び１０８ｂ（４０％）を化合物１００ａ〜ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、８０％超の収率で化合物１０９ａ及び１０９ｂを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０９ａを化合物１０１ａ〜ｄ（実施例４７）と同一の条件で処理して、３０〜６０％の収率で化合物１１０ａを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。あるいは、化合物１１０ｂを化合物１０９ｂから開始して同様の方法で調製することができる。
実施例４６：ＰＦＰエステル（オリゴヌクレオチド１１１）との共役のための一般的手順；ＩＳＩＳ ６６６８８１（ＧａｌＮＡｃ３−１０）の調製
標準の固相オリゴヌクレオチド手順を用いて５’−ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチドを合成し、精製した。５’−ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチドを０．１Ｍ四ホウ酸ナトリウム（ｐＨ８．５、２００μＬ）中に溶解し、ＤＭＳＯ（５０μＬ）中に溶解した３当量の選択されたＰＦＰエステル化ＧａｌＮＡｃ３クラスターを添加した。ＡＳＯ溶液への添加時にＰＦＰエステルが沈殿した場合、すべてのＰＦＰエステルが溶解した状態になるまでＤＭＳＯを添加した。室温で約１６時間混合した後、反応が完了した。結果として生じた溶液を水で希釈して１２ｍＬにし、その後、質量カットオフが３０００Ｄａのスピンフィルター中、３０００ｒｐｍで沈降させた。このプロセスを２回繰り返して、小分子不純物を除去した。その後、この溶液を凍結乾燥乾固させ、濃縮アンモニア水中に再溶解し、室温で２．５時間混合し、その後、真空内で濃縮して、アンモニアの大部分を除去した。共役オリゴヌクレオチドを精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって脱塩し、凍結乾燥させて、ＧａｌＮＡｃ３共役オリゴヌクレオチドを得た。
オリゴヌクレオチド１１１をＧａｌＮＡｃ３−１０と共役する。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１０（ＧａｌＮＡｃ３−１０ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、以下のＧａｌＮＡｃ３−１０で合成されたオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６６６８８１）に示される−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１０（ＧａｌＮＡｃ３−１０ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
この一般的手順に従って、ＩＳＩＳ ６６６８８１を調製した。標準の固相オリゴヌクレオチド手順を用いて５’−ヘキシルアミノ修飾オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６６０２５４）を合成し、精製した。ＩＳＩＳ ６６０２５４（４０ｍｇ、５．２μｍｏｌ）を０．１Ｍ四ホウ酸ナトリウム（ｐＨ８．５、２００μＬ）中に溶解し、ＤＭＳＯ（５０μＬ）中に溶解した３当量のＰＦＰエステル（化合物１１０ａ）を添加した。ＡＳＯ溶液への添加時にＰＦＰエステルが沈殿した場合、ＰＦＰエステルを完全に溶解するためにさらなるＤＭＳＯ（６００μＬ）が必要であった。室温で約１６時間混合した後、反応が完了した。この溶液を水で希釈して全体積１２ｍＬにし、質量カットオフが３０００Ｄａのスピンフィルター中、３０００ｒｐｍで沈降させた。このプロセスを２回繰り返して、小分子不純物を除去した。この溶液を凍結乾燥乾固させ、濃縮アンモニア水中に再溶解し、室温で２．５時間混合し、その後、真空内で濃縮して、アンモニアの大部分を除去した。共役オリゴヌクレオチドを精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって脱塩し、凍結乾燥させて、９０重量％の収率でＩＳＩＳ ６６６８８１（４２ｍｇ、４．７μｍｏｌ）を得た。
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
実施例４７：ＧａｌＮＡｃ３−８を含むオリゴヌクレオチド１０２の調製
三酸９０（４ｇ、１４．４３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１２０ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．３５ｍＬ、７２ｍｍｏｌｅ）中に溶解した。トリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル（８．９ｍＬ、５２ｍｍｏｌｅ）をアルゴン下で滴加し、反応物を室温で３０分間撹拌させた。Ｂｏｃ−ジアミン９１ａまたは９１ｂ（６８．８７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２．３５ｍＬ、７２ｍｍｏｌｅ）とともに添加し、反応物を室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超、減量し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で減量して、油状物とした。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→１０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、約８０％の収率で化合物９２ａ及び９２ｂを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物９２ａまたは９２ｂ（６．７ｍｍｏｌｅ）を２０ｍＬのジクロロメタン及び２０ｍＬのトリフルオロ酢酸で、室温で１６時間処理した。結果として生じた溶液を蒸発させ、その後、メタノール中に溶解し、ＤＯＷＥＸ−ＯＨ樹脂で３０分間処理した。結果として生じた溶液を濾過し、減圧下で減量して油状物とすることで、８５〜９０％の収率の化合物９３ａ及び９３ｂを得た。
化合物７または６４（９．６ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）中のＨＢＴＵ（３．７ｇ、９．６ｍｍｏｌｅ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５ｍＬ）で１５分間処理した。これに、化合物９３ａまたは９３ｂ（３ｍｍｏｌｅ）のいずれかを添加し、室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超、減量し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で減量して、油状物とした。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（５％→２０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、２０〜４０％の収率で化合物９６ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物９６ａ〜ｄ（０．７５ｍｍｏｌｅ）をラネーニッケル上で３時間、エタノール（７５ｍＬ）中で個別に水素化した。この時点で、セライトを通して触媒を濾去し、エタノールを減圧下で除去して、８０〜９０％の収率で化合物９７ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物２３（０．３２ｇ、０．５３ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）中のＨＢＴＵ（０．２ｇ、０．５３ｍｍｏｌｅ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１９ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌｅ）で１５分間処理した。これに、化合物９７ａ〜ｄ（０．３８ｍｍｏｌｅ）を個別に添加し、室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超、減量し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で減量して、油状物とした。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→２０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、３０〜４０％の収率で化合物９８ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物９９（０．１７ｇ、０．７６ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（５０ｍＬ）中のＨＢＴＵ（０．２９ｇ、０．７６ｍｍｏｌｅ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．３５ｍＬ、２．０ｍｍｏｌｅ）で１５分間処理した。これに、化合物９７ａ〜ｄ（０．５１ｍｍｏｌｅ）を個別に添加し、室温で１６時間撹拌させた。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超、減量し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で減量して、油状物とした。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（５％→２０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、４０〜６０％の収率で化合物１００ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１００ａ〜ｄ（０．１６ｍｍｏｌｅ）を、１０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ上で３時間、メタノール／酢酸エチル（１：１、５０ｍＬ）中で個別に水素化した。この時点で、セライトを通して触媒を濾去し、有機物を減圧下で除去して、８０〜９０％の収率で化合物１０１ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物１０１ａ〜ｄ（０．１５ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）及びピリジン（０．０１６ｍＬ、０．２ｍｍｏｌｅ）中に個別に溶解した。トリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル（０．０３４ｍＬ、０．２ｍｍｏｌｅ）をアルゴン下で滴加し、反応物を室温で３０分間撹拌させた。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→５％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、約８０％の収率で化合物１０２ａ〜ｄを得た。この時点で、ＤＭＦを減圧下で７５％超、減量し、その後、混合物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を重炭酸ナトリウム、水、及びブラインで洗浄した。その後、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で減量して、油状物とした。結果として生じた油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（２％→５％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、約８０％の収率で化合物１０２ａ〜ｄを得た。ＬＣＭＳ及びプロトンＮＭＲは、その構造と一致した。
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−８共役基を含むオリゴマー化合物１０２を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−８（ＧａｌＮＡｃ３−８ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。好ましい一実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。
ＧａｌＮＡｃ３−８（ＧａｌＮＡｃ３−８ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例４８：ＧａｌＮＡｃ３−７を含むオリゴヌクレオチド１１９の調製
文献（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，４７，５７９８−５８０８）に記載される手順に従って化合物１１２を合成した。
化合物１１２（５ｇ、８．６ｍｍｏｌ）を１：１メタノール／酢酸エチル（２２ｍＬ／２２ｍＬ）中に溶解した。炭素（０．５ｇ）上水酸化パラジウムを添加した。反応混合物を室温で１２時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、そのパッドを１：１メタノール／酢酸エチルで洗浄した。濾液と洗浄物を合わせ、濃縮乾固させて、化合物１０５ａ（定量的）を得た。この構造を、ＬＣＭＳによって確認した。
化合物１１３（１．２５ｇ、２．７ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（３．２ｇ、８．４ｍｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（２．８ｍＬ、１６．２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１７ｍＬ）中に溶解し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。これに、無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物１０５ａ（３．７７ｇ、８．４ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応物を室温で６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、油状物を得た。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）及びブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の１０〜２０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１４（１．４５ｇ、３０％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。
化合物１１４（１．４３ｇ、０．８ｍｍｏｌ）を１：１メタノール／酢酸エチル（４ｍＬ／４ｍＬ）中に溶解した。パラジウム炭素（湿性、０．１４ｇ）を添加した。反応混合物を水素でフラッシュし、室温で１２時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過した。このセライトパッドをメタノール／酢酸エチル（１：１）で洗浄した。濾液と洗浄物を一つに合わせ、減圧下で蒸発させて、化合物１１５（定量的）を得た。この構造を、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。
化合物８３ａ（０．１７ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．３１ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（０．２６ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。これに、無水ＤＭＦ中の化合物１１５（１．２２ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、反応物を室温で６時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２中に溶解した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過した。有機層を濃縮乾固させ、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の３〜１５％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１６（０．８４ｇ、６１％）を得た。この構造を、ＬＣ ＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。
化合物１１６（０．７４ｇ、０．４ｍｍｏｌ）を１：１メタノール／酢酸エチル（５ｍＬ／５ｍＬ）中に溶解した。パラジウム炭素（湿性、０．０７４ｇ）を添加した。反応混合物を水素でフラッシュし、室温で１２時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過した。このセライトパッドをメタノール／酢酸エチル（１：１）で洗浄した。濾液と洗浄物を一つに合わせ、減圧下で蒸発させて、化合物１１７（０．７３ｇ、９８％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。
化合物１１７（０．６３ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解した。この溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７０μＬ、０．４ｍｍｏｌ）及びトリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル（７２μＬ、０．４２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に注いだ。この混合物をジクロロメタンで抽出し、ブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。このジクロロメタン溶液を濃縮乾固させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ジクロロメタン中の５〜１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１８（０．５１ｇ、７９％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳと、１Ｈならびに１Ｈ及び１９Ｆ ＮＭＲによって確認した。
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−７共役基を含むオリゴマー化合物１１９を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−７（ＧａｌＮＡｃ３−７ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。
ＧａｌＮＡｃ３−７（ＧａｌＮＡｃ３−７ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例４９：ＧａｌＮＡｃ３−５を含むオリゴヌクレオチド１３２の調製
化合物１２０（１４．０１ｇ、４０ｍｍｏｌ）及びＨＢＴＵ（１４．０６ｇ、３７ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（８０ｍＬ）中に溶解した。トリエチルアミン（１１．２ｍＬ、８０．３５ｍｍｏｌ）を添加し、５分間撹拌した。反応混合物を氷浴中で冷却し、無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物１２１（１０ｇ、ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。さらなるトリエチルアミン（４．５ｍＬ、３２．２８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をアルゴン雰囲気下で１８時間撹拌した。ＴＬＣ（１：１の酢酸エチル：ヘキサン；Ｒｆ＝０．４７）によって反応を監視した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）中に取り込み、１Ｍ ＮａＨＳＯ４（３×１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×１５０ｍＬ）、及びブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。乾燥剤を濾去し、有機層を回転蒸発によって濃縮した。粗混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中の３５〜５０％ＥｔＯＡｃを用いて溶出して、化合物１２２（１５．５０ｇ、７８．１３％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。質量（ｍ／ｚ）５８９．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
水（２０ｍＬ）及びＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（９２．１５ｍｍｏｌ）の溶液を、メタノール（１５ｍＬ）中に溶解した化合物１２２の冷溶液（７．７５ｇ、１３．１６ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物を室温で４５分間撹拌し、ＴＬＣ（１：１のＥｔＯＡｃ：ヘキサン）によって監視した。反応混合物を減圧下で濃縮して、半分の体積にした。残りの溶液を氷浴中で冷却して、濃縮ＨＣｌを添加して中和した。反応混合物を希釈し、ＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で抽出し、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。エマルジョンが生じたが、一晩静置すると濁りがなくなった。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、化合物１２３（８．４２ｇ）を得た。質量が大きすぎる原因はおそらく残留塩である。ＬＣＭＳは、この構造と一致した。この生成物をさらに精製することなく使用した。Ｍ．Ｗ．計算値：５７４．３６、Ｍ．Ｗ．実測値：５７５．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
文献（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１１，１３３，９５８−９６３）に記載される手順に従って化合物１２６を合成した。
化合物１２３（７．４１９ｇ、１２．９１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．４９ｇ、２５．８２ｍｍｏｌ）、及び化合物１２６（６．３３ｇ、１６．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）中に溶解し、結果として生じた反応混合物を氷浴中で冷却した。これに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．４２ｍＬ、２５．８２ｍｍｏｌ）、ＰｙＢｏｐ（８．７ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）、続いて、Ｂｏｐカップリング試薬（１．１７ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で添加した。氷浴を除去し、溶液を室温まで温めた。１時間後に反応が完了したことを、ＴＬＣ（８９：１０：１のＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＡＡ）によって決定した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に溶解し、１Ｍ ＮａＨＳＯ４（３×１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×１００ｍＬ）、及びブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣を５０％ヘキサン／ＥｔＯＡＣ：１００％ＥｔＯＡｃの勾配でのシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、白色の泡状物として化合物１２７（９．４ｇ）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、その構造と一致した。質量（ｍ／ｚ）７７８．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
トリフルオロ酢酸（１２ｍＬ）をジクロロメタン（１２ｍＬ）中の化合物１２７（１．５７ｇ、２．０２ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下でトルエン（３０ｍＬ）と共蒸発乾固させた。得られた残渣をアセトニトリル（３０ｍＬ）及びトルエン（４０ｍＬ）と２回共蒸発させて、トリフルオロ酢酸塩として化合物１２８（１．６７ｇ）を得て、さらに精製することなく次のステップで使用した。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、その構造と一致した。質量（ｍ／ｚ）４７８．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
丸底フラスコ内で、化合物７（０．４３ｇ、０．９６３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．３５ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）、及びＨＯＡｔ（０．０３５ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を一つに合わせ、減圧下、Ｐ２Ｏ５上で４時間乾燥させ、その後、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。これに無水ＤＭＦ（０．２ｍＬ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ）中の化合物１２８（０．２０ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物をアルゴン雰囲気下、室温で撹拌した。３０分間後に反応が完了したことを、ＬＣＭＳ及びＴＬＣ（７％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって決定した。反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ）中に溶解し、１Ｍ ＮａＨＳＯ４（３×２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×２０ｍＬ）、及びブライン（３×２０ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をジクロロメタン中の５〜１５％ＭｅＯＨを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物１２９（９６．６ｍｇ）を得た。ＬＣ ＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、この構造と一致する。質量（ｍ／ｚ）８８３．４［Ｍ＋２Ｈ］＋。
２０ｍＬのシンチレーションバイアル内で化合物１２９（０．０９ｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）中に溶解した。これに、少量の１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０１５ｍｇ）を添加し、反応容器をＨ２ガスでフラッシュした。反応混合物を室温で１８時間、Ｈ２雰囲気下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、このセライトパッドをメタノールで洗浄した。濾液洗浄物を一つにプールし、減圧下で濃縮して、化合物１３０（０．０８ｇ）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、その構造と一致した。この生成物をさらに精製することなく使用した。質量（ｍ／ｚ）８３８．３［Ｍ＋２Ｈ］＋。
１０ｍＬの先の尖った丸底フラスコに、化合物１３０（７５．８ｍｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）、０．３７Ｍピリジン／ＤＭＦ（２００μＬ）、及び撹拌子を添加した。この溶液に、０．７Ｍトリフルオロ酢酸ペンタフルオロフェニル／ＤＭＦ（１００μＬ）を撹拌しながら滴加した。１時間後に反応が完了したことを、ＬＣ ＭＳによって決定した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をＣＨＣｌ３（約１０ｍＬ）中に溶解した。有機層をＮａＨＳＯ４（１Ｍ、１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）、及びブライン（１０ｍＬ）にそれぞれ３回分配した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮して、化合物１３１（７７．７ｍｇ）を得た。ＬＣＭＳは、この構造と一致した。さらに精製することなく使用した。質量（ｍ／ｚ）９２１．３［Ｍ＋２Ｈ］＋。
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−５共役基を含むオリゴマー化合物１３２を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−５（ＧａｌＮＡｃ３−５ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。
ＧａｌＮＡｃ３−５（ＧａｌＮＡｃ３−５ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例５０：ＧａｌＮＡｃ４−１１を含むオリゴヌクレオチド１４４の調製
化合物１３４の合成。Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄフラスコに、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、及びアセトニトリルで洗浄したアミノメチルＶＩＭＡＤ樹脂（２．５ｇ、４５０μｍｏｌ／ｇ）を添加した。この樹脂は、アセトニトリル（４ｍＬ）中で膨潤した。２０（１．０ｍｍｏｌ、０．７４７ｇ）、ＴＢＴＵ（１．０ｍｍｏｌ、０．３２１ｇ）、アセトニトリル（５ｍＬ）、及びＤＩＥＡ（３．０ｍｍｏｌ、０．５ｍＬ）を添加して、化合物１３３を１００ｍＬの丸底フラスコ内で事前に活性化した。この溶液を５分間撹拌させ、その後、振盪しながらＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄフラスコに添加した。懸濁液を３時間振盪させた。反応混合物を排出し、樹脂をアセトニトリル、ＤＭＦ、及びＤＣＭで洗浄した。ＤＣＭ中５００ｎｍ（消光係数＝７６０００）でＤＭＴカチオンの吸光度を測定することにより新たな樹脂負荷量を定量化し、２３８μｍｏｌ／ｇであると決定した。無水酢酸溶液中で１０分間３回懸濁することにより、この樹脂をキャップした。
反復Ｆｍｏｃベース固相ペプチド合成法を用いて、固体支持体に結合された化合物１４１を合成した。少量の固体支持体を回収し、アンモニア水（２８〜３０重量％）中に６時間懸濁した。切断された化合物をＬＣ−ＭＳによって分析した。観察された質量は、その構造と一致した。質量（ｍ／ｚ）１０６３．８［Ｍ＋２Ｈ］＋。
固相ペプチド合成法を用いて、固体支持体に結合された化合物１４２を合成した。
ＤＮＡ合成装置において標準の固相合成を用いて、固体支持体に結合された化合物１４３を合成した。
固体支持体に結合された化合物１４３をアンモニア水（２８−３０重量％）中に懸濁し、５５℃で１６時間加熱した。溶液を冷却し、固体支持体を濾過した。濾液を濃縮し、残渣を水中に溶解し、強アニオン交換カラム上でＨＰＬＣによって精製した。全長化合物１４４を含有する画分を一つにプールし、脱塩した。結果として生じたＧａｌＮＡｃ４−１１共役オリゴマー化合物をＬＣ−ＭＳによって分析し、観察された質量は、その構造と一致した。
共役基ＧａｌＮＡｃ４−１１（ＧａｌＮＡｃ４−１１ａ）のＧａｌＮＡｃ４クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。
ＧａｌＮＡｃ４−１１（ＧａｌＮＡｃ４−１１ａ−ＣＭ）の構造は、以下に示される：
実施例５１：ＧａｌＮＡｃ３−６を含むオリゴヌクレオチド１５５の調製
文献（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９５，２２９，５４−６０）に記載されるように、化合物１４６を合成した。
化合物４（１５ｇ、４５．５５ｍｍｏｌ）及び化合物３５ｂ（１４．３グラム、５７ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）中に溶解した。活性化モレキュラーシーブ（４Å、２ｇ、粉末）を添加し、反応物を窒素雰囲気下で３０分間撹拌させた。ＴＭＳ−ＯＴｆを添加し（４．１ｍＬ、２２．７７ｍｍｏｌ）、反応物を室温で一晩撹拌させた。完了した時点で、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５００ｍＬ）及び粉砕した氷（約１５０ｇ）を注いで反応物を反応停止処理した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮してオレンジ色の油状物を得た。粗物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２中の２〜１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１１２（１６．５３ｇ、６３％）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、予想した化合物と一致した。
化合物１１２（４．２７ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間バブリングして反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上の水酸化パラジウム、４００ｍｇ）を添加し、この溶液を通して水素ガスを３０分間バブリングした。完了した時点で（ＴＬＣ（ＣＨ２Ｃｌ２中の１０％ＭｅＯＨ）及びＬＣＭＳ）、セライトパッドを通して触媒を濾去した。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１０５ａ（３．２８ｇ）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
化合物１４７（２．３１ｇ、１１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）中に溶解した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、３．９ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）、続いて、ＨＢＴＵ（４ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素下で約１５分間撹拌させた。これに、乾燥ＤＭＦ中の化合物１０５ａ（３．３ｇ、７．４ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、窒素雰囲気下で２時間撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及びブラインで洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップ状物を得た。粗物質をカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中の２〜５％ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物１４８（３．４４ｇ、７３％）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、予想した生成物と一致した。
化合物１４８（３．３ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間バブリングして反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上の水酸化パラジウム）を添加した（３５０ｍｇ）。この溶液を通して水素ガスを３０分間バブリングした。完了した時点で（ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）及びＬＣＭＳ）、セライトパッドを通して触媒を濾去した。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１４９（２．６ｇ）を得た。ＬＣＭＳは、所望の生成物と一致した。残渣を乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、次のステップで即座に使用した。
化合物１４６（０．６８ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（２０ｍＬ）中に溶解した。これに、ＤＩＥＡ（４５０μＬ、２．６ｍｍｏｌ、１．５当量）及びＨＢＴＵ（１．９６ｇ、０．５．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１５分間、窒素下で撹拌させた。無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物１４９（２．６ｇ）の溶液を添加した。ＤＩＥＡを添加することにより（必要に応じて）、反応物のｐＨをｐＨ＝９〜１０に調整した。反応物を室温で２時間、窒素下で撹拌させた。完了した時点で、反応物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、続いて、ブラインで洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２中の２〜１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１５０（０．６２ｇ、２０％）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
化合物１５０（０．６２ｇ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（５Ｌ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間バブリングして反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上の水酸化パラジウム）を添加した（６０ｍｇ）。この溶液を通して水素ガスを３０分間バブリングした。完了した時点で（ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）及びＬＣＭＳ）、触媒を濾去した（シリンジチップＴｅｆｌｏｎフィルター、０．４５μｍ）。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１５１（０．５７ｇ）を得た。ＬＣＭＳは、所望の生成物と一致した。この生成物を４ｍＬの乾燥ＤＭＦ中に溶解し、次のステップで即座に使用した。
化合物８３ａ（０．１１ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７５μＬ、１ｍｍｏｌ）及びＰＦＰ−ＴＦＡ（９０μＬ、０．７６ｍｍｏｌ）を添加した。接触時に反応混合物は赤紫色になり、その後３０分間かけて徐々にオレンジ色になった。ＴＬＣ及びＬＣＭＳによって反応の進行を監視した。完了した時点で（ＰＦＰエステルの形成）、化合物１５１（０．５７ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液を添加した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加することにより（必要に応じて）、反応物のｐＨをｐＨ＝９〜１０に調整した。反応混合物を窒素下で約３０分間撹拌した。完了した時点で、溶媒の大部分を減圧下で除去した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、続いて、ブラインで洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップ状物を得た。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２中の２〜１０％ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物１５２（０．３５ｇ、５５％）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
化合物１５２（０．３５ｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）を１：１のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中に溶解した。この溶液を通してアルゴン流を１５分間バブリングして反応混合物をパージした。パールマン触媒（炭素上の水酸化パラジウム）を添加した（３５ｍｇ）。この溶液を通して水素ガスを３０分間バブリングした。完了した時点で（ＴＬＣ（ＤＣＭ中の１０％ＭｅＯＨ）及びＬＣＭＳ）、触媒を濾去した（シリンジチップＴｅｆｌｏｎフィルター、０．４５μｍ）。濾液を回転蒸発によって濃縮し、高真空下で短時間乾燥させて、化合物１５３（０．３３ｇ、定量的）を得た。ＬＣＭＳは、所望の生成物と一致した。
化合物１５３（０．３３ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を窒素下で撹拌しながら無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解した。これに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６５μＬ、０．３７ｍｍｏｌ）及びＰＦＰ−ＴＦＡ（３５μＬ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素下で約３０分間撹拌した。接触時に反応混合物は赤紫色になり、徐々にオレンジ色になった。さらにＮ，−ジイソプロピルエチルアミンを添加することにより、反応混合物のｐＨをｐＨ＝９〜１０で維持した。ＴＬＣ及びＬＣＭＳによって反応の進行を監視した。完了した時点で、溶媒の大部分を減圧下で除去した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄し、その後、ブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮してオレンジ色のシロップ状物を得た。残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＨ２Ｃｌ２中の２〜１０％ＭｅＯＨで溶出して、化合物１５４（０．２９ｇ、７９％）を得た。ＬＣＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲは、所望の生成物と一致した。
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−６共役基を含むオリゴマー化合物１５５を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−６（ＧａｌＮＡｃ３−６ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。
ＧａｌＮＡｃ３−６（ＧａｌＮＡｃ３−６ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例５２：ＧａｌＮＡｃ３−９を含むオリゴヌクレオチド１６０の調製
文献（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，４７，５７９８−５８０８）に記載される手順に従って化合物１５６を合成した。
化合物１５６（１８．６０ｇ、２９．２８ｍｍｏｌ）をメタノール（２００ｍＬ）中に溶解した。パラジウム炭素（６．１５ｇ、１０重量％、負荷量（乾燥ベース）、マトリックス炭素粉末、湿式）を添加した。反応混合物を室温で１８時間、水素下で撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、このセライトパッドをメタノールで完全に洗浄した。合わせた濾液を洗浄し、濃縮乾固させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の５〜１０％メタノールで溶出して、化合物１５７（１４．２６ｇ、８９％）を得た。質量（ｍ／ｚ）５４４．１［Ｍ−Ｈ］−。
化合物１５７（５ｇ、９．１７ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）中に溶解した。ＨＢＴＵ（３．６５ｇ、９．６１ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１３．７３ｍＬ、７８．８１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で５分間撹拌した。これに、化合物４７（２．９６ｇ、７．０４ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応物を室温で８時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に注いだ。この混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中の５０％酢酸エチルで溶出して、化合物１５８（８．２５ｇ、７３．３％）を得た。この構造を、ＭＳ及び１Ｈ ＮＭＲ分析によって確認した。
化合物１５８（７．２ｇ、７．６１ｍｍｏｌ）を減圧下でＰ２Ｏ５上で乾燥させた。乾燥させた化合物を無水ＤＭＦ（５０ｍＬ）中に溶解した。これに、１Ｈ−テトラゾール（０．４３ｇ、６．０９ｍｍｏｌ）及びＮ−メチルイミダゾール（０．３ｍＬ、３．８１ｍｍｏｌ）及び２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（３．６５ｍＬ、１１．５０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をアルゴン雰囲気下で４時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３及びブラインで洗浄した。有機相を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、ヘキサン中の５０〜９０％酢酸エチルで溶出して、化合物１５９（７．８２ｇ、８０．５％）を得た。この構造を、ＬＣＭＳ及び３１Ｐ ＮＭＲ分析によって確認した。
標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−９共役基を含むオリゴマー化合物１６０を調製した。３単位の化合物１５９を固体支持体に、続いてヌクレオチドホスホラミダイトにカップリングした。保護されたオリゴマー化合物をアンモニア水で処理して、化合物１６０を得た。共役基ＧａｌＮＡｃ３−９（ＧａｌＮＡｃ３−９ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−９（ＧａｌＮＡｃ３−９ａ−ＣＭ）の構造は、以下に示される：
実施例５３：化合物１８（ＧａｌＮＡｃ３−１ａ及びＧａｌＮＡｃ３−３ａ）の調製のための代替手順
ラクトン１６１をジアミノプロパン（３〜５当量）またはモノＢｏｃ保護ジアミノプロパン（１当量）と反応させて、アルコール１６２ａまたは１６２ｂを得た。非保護プロパンジアミンを上述の反応で用いた場合、過剰なジアミンを高真空下で蒸発させて除去し、ＣｂｚＣｌを用いて１６２ａ中の遊離アミノ基を保護して、カラムクロマトグラフィーによって精製した後に、白色の固体として１６２ｂを得た。アルコール１６２ｂをＴＭＳＯＴｆの存在下で化合物４とさらに反応させ１６３ａを得て、触媒水素化を用いてＣｂｚ基を除去することにより、これを１６３ｂに変換した。ペンタフルオロフェニル（ＰＦＰ）エステル１６４を、三酸１１３（実施例４８を参照のこと）をＤＭＦ（０．１〜０．５Ｍ）中のＰＦＰＴＦＡ（３．５当量）及びピリジン（３．５当量）と接触させることによって調製した。トリエステル１６４をアミン１６３ｂ（３〜４当量）及びＤＩＰＥＡ（３〜４当量）と直接反応させて、化合物１８を得た。上述の方法は、中間体精製を大幅に促進し、実施例４に記載される手順を用いて形成される副生成物の形成を最小限に抑える。
実施例５４：化合物１８（ＧａｌＮＡｃ３−１ａ及びＧａｌＮＡｃ３−３ａ）の調製のための代替手順
先の実施例５３に概説される手順を用いて酸１１３からトリＰＦＰエステル１６４を調製し、モノＢｏｃ保護ジアミンと反応させて、本質的に定量的な収率で１６５を得た。Ｂｏｃ基を塩酸またはトリフルオロ酢酸で除去して、トリアミンを得て、これをＤＩＰＥＡなどの好適な塩基の存在下でＰＦＰ活性化酸１６６と反応させて、化合物１８を得た。
ＤＭＦ中のＰＦＰＴＦＡ（１〜１．２当量）及びピリジン（１〜１．２当量）で処理することにより、ＰＦＰ保護Ｇａｌ−ＮＡｃ酸１６６を対応する酸から調製した。次いで、アセトニトリル及び水中のＴＥＭＰＯ（０．２当量）及びＢＡＩＢを用いて酸化することにより、前駆酸を対応するアルコールから調製した。先の実施例４７に記載される条件を用いて１，６−ヘキサンジオール（または１，５−ペンタンジオールもしくは他のｎ値の他のジオール）（２〜４当量）及びＴＭＳＯＴｆと反応させることにより、前駆アルコールを糖中間体４から調製した。
実施例５５：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とする３’−共役基または５’−共役基のいずれかを含むオリゴヌクレオチド（ＧａｌＮＡｃ３−１、３、８、及び９の比較）の用量依存的試験
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ ３５３３８２を標準物として含めた。さまざまなＧａｌＮＡｃ３共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’−デオキシアデノシンヌクレオシド（切断可能部分）によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端または５’末端のいずれかで結合された。
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−９の構造は、先の実施例５２に示される。ＧａｌＮＡｃ３−３の構造は、先の実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−８の構造は、先の実施例４７に示される。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ３５３３８２、６５５８６１、６６４０７８、６６１１６１、６６５００１、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを標準プロトコルに従って決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表４０に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、３’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−１及びＧａｌＮＡｃ３−９共役体（ＩＳＩＳ ６５５８６１及びＩＳＩＳ ６６４０７８）ならびに５’末端に連結されたＧａｌＮＡｃ３−３及びＧａｌＮＡｃ３−８共役体（ＩＳＩＳ ６６１１６１及びＩＳＩＳ ６６５００１）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２）と比較して、力価の大幅な改善を示した。さらに、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−９共役体を含むＩＳＩＳ ６６４０７８は、３’末端にＧａｌＮＡｃ３−１共役体を含むＩＳＩＳ ６５５８６１と比較して、本質的に等効力であった。それぞれ、ＧａｌＮＡｃ３−３またはＧａｌＮＡｃ３−９を含む５’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドＩＳＩＳ ６６１１６１及びＩＳＩＳ ６６５００１は、３’共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５５８６１及びＩＳＩＳ ６６４０７８）と比較して、力価を増加させた。
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表に示される。
実施例５６：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とする３’−共役基または５’−共役基のいずれかを含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験（ＧａｌＮＡｃ３−１、２、３、５、６、７、及び１０の比較）
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ ３５３３８２を標準物として含めた。３’末端にＧａｌＮＡｃ３共役基を結合させたＩＳＩＳ ６５５８６１を除いて、さまざまなＧａｌＮＡｃ３共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’−デオキシアデノシンヌクレオシド（切断可能部分）によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に取り付けられた。
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−２ａの構造は、先の実施例３７に示される。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−５ａの構造は、先の実施例４９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−６ａの構造は、先の実施例５１に示される。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、先の実施例４６に示される。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ３５３３８２、６５５８６１、６６４５０７、６６１１６１、６６６２２４、６６６９６１、６６６９８１、６６６８８１、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表４３に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。実際には、共役アンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２）と比較して、力価の大幅な改善を示した。５’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドは、３’共役アンチセンスオリゴヌクレオチドと比較して、力価のわずかな増加を示した。
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表４４に示される。
実施例５７：生体内におけるＡｐｏＣ ＩＩＩを標的とする３’−共役基を含むオリゴヌクレオチドの作用持続時間試験
マウスに以下に示される用量を１回注入し、ＡｐｏＣ−ＩＩＩ及び血漿トリグリセリド（血漿ＴＧ）レベルを４２日間にわたって監視した。各群におけるヒトＡＰＯＣ−ＩＩＩを発現する３匹のトランスジェニックマウスを用いて、この試験を実行した。
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示される。
上の表に見られるように、作用持続時間は、非共役オリゴヌクレオチドと比較して、３’−共役基の付加によって増加した。共役完全ＰＳオリゴヌクレオチド６４７５３５と比較して、共役混成ＰＯ／ＰＳオリゴヌクレオチド６４７５３６の作用持続時間がさらに増加した。
実施例５８：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とする３’−共役基を含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験（ＧａｌＮＡｃ３−１及びＧａｌＮＡｃ４−１１の比較）
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ ４４０７６２を非共役標準物として含めた。共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’−デオキシアデノシンヌクレオシド（切断可能部分）によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端に取り付けられた。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１１ａの構造は、先の実施例５０に示される。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ４４０７６２、６５１９００、６６３７４８、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表４７に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。３’末端にホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−１及びＧａｌＮＡｃ４−１１共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５１９００及びＩＳＩＳ ６６３７４８）は、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ４４０７６２）と比較して、力価の大幅な増加を示した。２つの共役オリゴヌクレオチド、すなわちＧａｌＮＡｃ３−１とＧａｌＮＡｃ４−１１は、等効力であった。
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’−（Ｓ）−ＣＨ３二環式ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表４８に示される。
実施例５９：生体内におけるＦＸＩを標的とするＧａｌＮＡｃ３−１共役ＡＳＯの影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、複数回投与試験においてマウスにおけるＦＸＩのアンチセンス阻害について試験した。ＩＳＩＳ ４０４０７１を非共役標準物として含めた。共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’−デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端に取り付けられた。
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示される。
処理
６週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ４０４０７１、６５６１７２、６５６１７３、またはＰＢＳ処理対照を、以下に示される投与量で週２回３週間、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを決定した。ＥＬＩＳＡを用いて血漿ＦＸＩタンパク質レベルも測定した。ＰＢＳ処理対照に対して標準化する前に（ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）を用いて）ＦＸＩ ｍＲＮＡレベルを全ＲＮＡとの比較で相対的に決定した。以下の結果は、各処理群のＦＸＩ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。データをＰＢＳ処理対照に対して標準化し、「％ＰＢＳ」で表示する。前記方法と同様の方法を用いてＥＤ５０を測定し、以下に提示する。
表５０に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＦＸＩ ｍＲＮＡレベルを低下させた。３’−ＧａｌＮＡｃ３−１共役基を含むオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ４０４０７１）と比較して、力価の大幅な増加を示した。これら２つの共役オリゴヌクレオチドの間では、ＰＳ連結部のうちのいくつかをＰＯ（ＩＳＩＳ ６５６１７３）と置き換えることによって、力価がさらに増加した。
表５０ａに例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＦＸＩタンパク質レベルを低下させた。３’−ＧａｌＮＡｃ３−１共役基を含むオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ４０４０７１）と比較して、力価の大幅な増加を示した。これら２つの共役オリゴヌクレオチドの間では、ＰＳ連結部のうちのいくつかをＰＯ（ＩＳＩＳ ６５６１７３）と置き換えることによって、力価がさらに増加した。
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総アルブミン、ＣＲＥ、及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表に示される。
実施例６０：生体外におけるＳＲＢ−１を標的とする共役ＡＳＯの影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、複数回投与試験において初代マウス肝細胞におけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。ＩＳＩＳ ３５３３８２を非共役標準物として含めた。共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’−デオキシアデノシンヌクレオシドの切断可能部分によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの３’末端または５’末端に取り付けられた。
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−８ａの構造は、先の実施例４７に示される。ＧａｌＮＡｃ３−９ａの構造は、先の実施例５２に示される。ＧａｌＮＡｃ３−６ａの構造は、先の実施例５１に示される。ＧａｌＮＡｃ３−２ａの構造は、先の実施例３７に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、先の実施例４６に示される。ＧａｌＮＡｃ３−５ａの構造は、先の実施例４９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示される。
処理
上に列記されるオリゴヌクレオチドを、２５，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングし、かつ０．０３、０．０８、０．２４、０．７４、２．２２、６．６７、または２０ｎＭの修飾オリゴヌクレオチドで処理した初代マウス肝細胞において生体外で試験した。約１６時間の処理期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定し、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定された総ＲＮＡ含有量に従ってＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを調整した。
標準的方法を用いてＩＣ５０を計算し、結果を表５３に提示する。結果は、オリゴヌクレオチドの細胞への進入を人工的に促進するために試薬も電気穿孔技法も用いない自由取り込み条件下で、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を含まない親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２）よりも肝細胞において著しく強力であったことを示す。
実施例６１：ＧａｌＮＡｃ３−１２を含むオリゴマー化合物１７５の調製
化合物１６９は、市販のものである。ベンジル（ペルフルオロフェニル）グルタレートを化合物１７１に添加することによって化合物１７２を調製した。ＰＦＰ−ＴＦＡ及びＤＩＥＡをＤＭＦ中の５−（ベンジルオキシ）−５−オキソペンタン酸に添加することによって、ベンジル（ペルフルオロフェニル）グルタレートを調製した。実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１２共役基を含むオリゴマー化合物１７５を化合物１７４から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１２（ＧａｌＮＡｃ３−１２ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１２（ＧａｌＮＡｃ３−１２ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例６２：ＧａｌＮＡｃ３−１３を含むオリゴマー化合物１８０の調製
実施例２に示される一般的手順を用いて、化合物１７６を調製した。実施例４９に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１３共役基を含むオリゴマー化合物１８０を化合物１７７から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１３（ＧａｌＮＡｃ３−１３ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１３（ＧａｌＮＡｃ３−１３ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例６３：ＧａｌＮＡｃ３−１４を含むオリゴマー化合物１８８の調製
化合物１８１及び１８５は、市販のものである。実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１４共役基を含むオリゴマー化合物１８８を化合物１８７から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１４（ＧａｌＮＡｃ３−１４ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１４（ＧａｌＮＡｃ３−１４ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：

実施例６４：ＧａｌＮＡｃ３−１５を含むオリゴマー化合物１９７の調製
化合物１８９は、市販のものである。実施例３１に示される一般的手順を用いて、化合物１９５を調製した。標準のオリゴヌクレオチド合成手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１５共役基を含むオリゴマー化合物１９７を化合物１９４及び１９５から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１５（ＧａｌＮＡｃ３−１５ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１５（ＧａｌＮＡｃ３−１５ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例６５：生体内におけるＳＲＢ−１を標的とする５’−共役基を含むオリゴヌクレオチドの用量依存的試験（ＧａｌＮＡｃ３−３、１２、１３、１４、及び１５の比較）
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。非共役ＩＳＩＳ ３５３３８２を標準物として含めた。ＧａｌＮＡｃ３共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結２’−デオキシアデノシンヌクレオシド（切断可能部分）によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に取り付けられた。
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１２ａの構造は、先の実施例６１に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、先の実施例６２に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１４ａの構造は、先の実施例６３に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１５ａの構造は、先の実施例６４に示される。
処理
６〜８週齢のＣ５７ｂｌ６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ３５３３８２、６６１１６１、６７１１４４、６７００６１、６７１２６１、６７１２６２、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回または２回、皮下注入した。２回投与されたマウスは、第１の投与の３日後に第２の投与を受けた。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを標準プロトコルに従って決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表５５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。単回用量を受けた動物と２回の用量を受けた動物との間で標的ノックダウンの著しい差は観察されなかった（ＩＳＩＳ ３５３３８２の投与量３０及び２×１５ｍｇ／ｋｇ、ならびにＩＳＩＳ ６６１１６１の投与量５及び２×２．５ｍｇ／ｋｇを参照のこと）。ホスホジエステル連結ＧａｌＮＡｃ３−３、１２、１３、１４、及び１５共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、非共役アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３３５３８２）と比較して、力価の大幅な増加を示した。
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な差は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表５６に示される。
実施例６６：５’−ＧａｌＮＡｃ３クラスターを含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害へのさまざまな切断可能部分の影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。ＧａｌＮＡｃ３共役基のそれぞれは、ホスホジエステル連結ヌクレオシド（切断可能部分（ＣＭ））によってそれぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に取り付けられた。
大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、先の実施例６２に示した。
処理
６〜８週齢のＣ５７ＢＬ６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、ＩＳＩＳ ６６１１６１、６７０６９９、６７０７００、６７０７０１、６７１１６５、または生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表５８に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。さまざまな切断可能部分を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドはすべて、同様の力価を示した。
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な差は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表５９に示される。
実施例６７：ＧａｌＮＡｃ３−１６を含むオリゴマー化合物１９９の調製
実施例７及び９に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１６共役基を含むオリゴマー化合物１９９を調製する。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１６（ＧａｌＮＡｃ３−１６ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１６（ＧａｌＮＡｃ３−１６ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例６８：ＧａｌＮＡｃ３−１７を含むオリゴマー化合物２００の調製
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１７共役基を含むオリゴマー化合物２００を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１７（ＧａｌＮＡｃ３−１７ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１７（ＧａｌＮＡｃ３−１７ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例６９：ＧａｌＮＡｃ３−１８を含むオリゴマー化合物２０１の調製
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１８共役基を含むオリゴマー化合物２０１を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１８（ＧａｌＮＡｃ３−１８ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１８（ＧａｌＮＡｃ３−１８ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例７０：ＧａｌＮＡｃ３−１９を含むオリゴマー化合物２０４の調製
実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−１９共役基を含むオリゴマー化合物２０４を化合物６４から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−１９（ＧａｌＮＡｃ３−１９ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−１９（ＧａｌＮＡｃ３−１９ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例７１：ＧａｌＮＡｃ３−２０を含むオリゴマー化合物２１０の調製
ＰＦＰ−ＴＦＡ及びＤＩＥＡを、トリフリン酸無水物を６−アミノヘキサン酸に添加することによって調製したアセトニトリル中の６−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）ヘキサン酸に添加することによって、化合物２０５を調製した。反応混合物を８０℃に加熱し、その後、室温まで下げた。実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−２０共役基を含むオリゴマー化合物２１０を化合物２０８から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−２０（ＧａｌＮＡｃ３−２０ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−２０（ＧａｌＮＡｃ３−２０ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例７２：ＧａｌＮＡｃ３−２１を含むオリゴマー化合物２１５の調製
化合物２１１は、市販のものである。実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−２１共役基を含むオリゴマー化合物２１５を化合物２１３から調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ３−２１（ＧａｌＮＡｃ３−２１ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−２１（ＧａｌＮＡｃ３−２１ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例７３：ＧａｌＮＡｃ３−２２を含むオリゴマー化合物２２１の調製
ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリドを用いて、化合物２２０を化合物２１９から調製した。実施例５２に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−２１共役基を含むオリゴマー化合物２２１を化合物２２０から調製する。共役基ＧａｌＮＡｃ３−２２（ＧａｌＮＡｃ３−２２ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、切断可能部分は、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ａｄ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−である。ＧａｌＮＡｃ３−２２（ＧａｌＮＡｃ３−２２ａ−ＣＭ−）の構造は、以下に示される：
実施例７４：５’−ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害へのさまざまな切断可能部分の影響
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。ＧａｌＮＡｃ３共役基のそれぞれは、それぞれのオリゴヌクレオチドの５’末端に取り付けられた。
すべての表において、大文字は、各ヌクレオシドの核酸塩基を示し、ｍＣは、５−メチルシトシンを示す。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示し、「ｏ’」は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−を示す。共役基は、太字で表示されている。
ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１７ａの構造は、先の実施例６８に示し、ＧａｌＮＡｃ３−１８ａの構造は、実施例６９に示した。
処理
６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、表６０に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表６１に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドは、同様の力価を示し、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
血清における肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）を、標準のプロトコルを用いて、生理食塩水を注入したマウスとの比較で相対的に測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表６２に示される。
実施例７５：５’−共役基を含むオリゴヌクレオチドの薬物動態分析
実施例６５、６６、及び７４に記載される処理手順に従って得た肝臓試料を用いて、上の表５４、５７、及び６０におけるＡＳＯのＰＫを評価した。肝臓試料を切り刻み、標準のプロトコルを用いて抽出し、内部標準とともにＩＰ−ＨＰＬＣ−ＭＳによって分析した。適切なＵＶピークを統合することによってすべての代謝物の合わせた組織レベル（μｇ／ｇ）を測定し、適切な抽出イオンクロマトグラム（ＥＩＣ）を用いて、共役体を欠く全長ＡＳＯ（この場合、ＩＳＩＳ番号３５３３８２の「親」）の組織レベルを測定した。
上の表６３における結果は、特にＧａｌＮＡｃ３共役基を有するオリゴヌクレオチドとＧａｌＮＡｃ３共役基を有しないオリゴヌクレオチドとの間の投薬の違いを考慮に入れた場合、オリゴヌクレオチド投与の７２時間後に、ＧａｌＮＡｃ３共役基を含むオリゴヌクレオチドの肝臓組織レベルが、ＧａｌＮＡｃ３共役基を含まない親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２）の肝臓組織レベルよりも高かったことを示す。さらに、７２時間までに、ＧａｌＮＡｃ３共役基を含む各オリゴヌクレオチドの４０〜９８％が親化合物に代謝され、ＧａｌＮＡｃ３共役基がオリゴヌクレオチドから切断されたことを示す。
実施例７６：ＧａｌＮＡｃ３−２３を含むオリゴマー化合物２３０の調製
化合物２２２は、市販のものである。４４．４８ｍＬ（０．３３ｍｏｌ）の化合物２２２をピリジン（５００ｍＬ）中の塩化トシル（２５．３９ｇ、０．１３ｍｏｌ）で１６時間処理した。その後、反応物を蒸発させて油状物とし、ＥｔＯＡｃ中に溶解し、水、飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。酢酸エチルを濃縮乾固させ、カラムクロマトグラフィーによって精製し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１）、続いて、ＣＨ２Ｃｌ２中の１０％メタノールで溶出して、無色の油状物として化合物２２３を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。１０ｇ（３２．８６ｍｍｏｌ）の１−トシルトリエチレングリコール（化合物２２３）を、ＤＭＳＯ（１００ｍＬ）中のアジ化ナトリウム（１０．６８ｇ、１６４．２８ｍｍｏｌ）で、室温で１７時間処理した。その後、反応混合物を水上に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で３回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させて、５．３ｇの化合物２２４（９２％）を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。１−アジドトリエチレングリコール（化合物２２４、５．５３ｇ、２３．６９ｍｍｏｌ）及び化合物４（６ｇ、１８．２２ｍｍｏｌ）を、４Ａモレキュラーシーブ（５ｇ）及びジクロロメタン（１００ｍＬ）中のＴＭＳＯＴｆ（１．６５ｍＬ、９．１１ｍｍｏｌ）で、不活性雰囲気下で処理した。１４時間後、反応物を濾過して前記モレキュラーシーブを除去し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させ、カラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の２〜４％メタノールの勾配で溶出して、化合物２２５を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２２５（１１．９ｇ、２３．５９ｍｍｏｌ）をパールマン触媒上で、ＥｔＯＡｃ／メタノール（４：１、２５０ｍＬ）中で水素化した。８時間後、触媒を濾去し、溶媒を除去乾固して、化合物２２６を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。
化合物２２７を生成するために、ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のニトロメタントリスプロピオン酸（４．１７ｇ、１５．０４ｍｍｏｌ）及びヒューニッヒ塩基（１０．３ｍＬ、６０．１７ｍｍｏｌ）の溶液をペンタフルオロトリフルオロアセテート（９．０５ｍＬ、５２．６５ｍｍｏｌ）で液滴処理した。３０分間後、反応物を氷水上に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を濃縮乾固させ、その後、ヘプタンから再結晶化して、白色の固体として化合物２２７を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２２７（１．５ｇ、１．９３ｍｍｏｌ）及び化合物２２６（３．７ｇ、７．７４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１５ｍＬ）中で、室温で２時間撹拌した。その後、反応物を蒸発乾固し、カラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の２〜１０％メタノールの勾配で溶出して、化合物２２８を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２２８（１．７ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）をエタノール（１００ｍＬ）中のラネーニッケル（約２ｇ、湿性）で、水素雰囲気下で処理した。１２時間後、触媒を濾去し、有機層を蒸発させて固体にし、これを次のステップで直接使用した。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。この固体（０．８７ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）中のベンジルグルタル酸（０．１８ｇ、０．８ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．３ｇ、０．８ｍｍｏｌ）、及びＤＩＥＡ（２７３．７μＬ、１．６ｍｍｏｌ）で処理した。１６時間後、ＤＭＦを減圧下で６５℃で除去して油状物とし、この油状物をジクロロメタン中に溶解した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。有機層を蒸発させた後、化合物をカラムクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の２〜２０％メタノールの勾配で溶出して、カップリング生成物を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。ベンジルエステルをパールマン触媒で、水素雰囲気下で１時間脱保護した。その後、この触媒を濾去し、溶媒を除去乾固して、酸を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。酸（４８６ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解した。ピリジン（５３．６１μＬ、０．６６ｍｍｏｌ）を添加し、反応物をアルゴンでパージした。ペンタフルオロトリフルオロアセテート（４６．３９μＬ、０．４ｍｍｏｌ）を反応混合物に緩徐に添加した。反応物の色が淡黄色からワイン色に変化し、少しの煙を発し、この煙をアルゴン流で吹き飛ばした。反応物を室温で１時間撹拌させた（反応の完了をＬＣＭＳによって確認した）。この溶媒を減圧下（回転蒸発）で７０℃で除去した。残渣をＤＣＭで希釈し、１Ｎ ＮａＨＳＯ４、ブライン、飽和重炭酸ナトリウム、及び再度ブラインで洗浄した。有機物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固させて、黄色の脆い泡状物として２２５ｍｇの化合物２２９を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。
実施例４６に例証される一般的手順を用いて、ＧａｌＮＡｃ３−２３共役基を含むオリゴマー化合物２３０を化合物２２９から調製した。ＧａｌＮＡｃ３−２３共役基（ＧａｌＮＡｃ３−２３ａ）のＧａｌＮＡｃ３クラスター部分を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ３−２３（ＧａｌＮＡｃ３−２３ａ−ＣＭ）の構造は、以下に示される：
実施例７７：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−９ａは、実施例５２に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１９ａは、実施例７０に示され、ＧａｌＮＡｃ３−２０ａは、実施例７１に示され、ＧａｌＮＡｃ３−２３ａは、実施例７６に示される。
処理
６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）のそれぞれに、表６４に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群のＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表６５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。
標準のプロトコルを用いて、血清中の肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）も測定した。総ビリルビン及びＢＵＮも評価した。体重の変化を評価したが、生理食塩水群との有意な変化は見られなかった（データ示されず）。ＡＬＴ、ＡＳＴ、総ビリルビン、及びＢＵＮ値が、以下の表６６に示される。
実施例７８：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むアンギオテンシノーゲンを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験において正常血圧のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおけるアンギオテンシノーゲン（ＡＧＴ）のアンチセンス阻害について試験した。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示した。
処理
６週齢の雄Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットのそれぞれに、表６７に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にラットを屠殺した。リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを決定した。全アンギオテンシノーゲンＥＬＩＳＡ（カタログ番号ＪＰ２７４１２、ＩＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，ＯＮ）を用いて、１：２０，０００で希釈したＡＧＴ血漿タンパク質レベルを測定した。以下の結果は、ＰＢＳ対照に対して標準化された各処理群の肝臓におけるＡＧＴ ｍＲＮＡレベルまたは血漿におけるＡＧＴタンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。
表６８に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるＡＧＴ ｍＲＮＡ及び血漿タンパク質レベルを低下させ、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
標準のプロトコルを用いて、屠殺時に血漿中の肝臓トランスアミナーゼレベル、すなわちアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、ならびに体重も測定した。結果が以下の表６９に示される。
実施例７９：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＡＰＯＣ−ＩＩＩを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
以下の表７０に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−７ａは、実施例４８に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１３ａは、実施例６２に示される。
処理
ヒトＡＰＯＣ−ＩＩＩを発現する６〜８週齢のトランスジェニックマウスのそれぞれに、表７０に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、３匹の動物からなった。投薬前に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後７２時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、及び６週間時点のレベルを決定した。実施例２０に記載されるように、血漿トリグリセリド及びＡＰＯＣ−ＩＩＩタンパク質レベルを測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の血漿トリグリセリド及びＡＰＯＣ−ＩＩＩレベルの平均パーセントとして提示され、親オリゴヌクレオチドの投与量がＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドの投与量の３倍であったとしても、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドが共役基を有しない親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３０４８０１）よりも長い作用持続時間を示したことを示す。
実施例８０：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むα−１抗トリプシン（Ａ１ＡＴ）を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表７２に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおけるＡ１ＡＴの用量依存的阻害試験において試験した。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−７ａは、実施例４８に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１３ａは、実施例６２に示される。
処理
６週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）のそれぞれに、表７２に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＡ１ＡＴ ｍＲＮＡレベルを決定した。マウスα１−抗トリプシンＥＬＩＳＡ（カタログ番号４１−Ａ１ＡＭＳ−Ｅ０１、Ａｌｐｃｏ，Ｓａｌｅｍ，ＮＨ）を用いて、Ａ１ＡＴ血漿タンパク質レベルを決定した。以下の結果は、ＰＢＳ対照に対して標準化された各処理群の肝臓におけるＡ１ＡＴ ｍＲＮＡ及び血漿タンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。
表７３に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるＡ１ＡＴ ｍＲＮＡ及びＡ１ＡＴ血漿タンパク質レベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、親（ＩＳＩＳ ４７６３６６）よりも著しく強力であった。
標準のプロトコルを用いて、屠殺時に血漿中の肝臓トランスアミナーゼ及びＢＵＮレベルを測定した。体重及び臓器重量も測定した。結果が以下の表７４に示される。体重は、ベースラインと比較した％として示される。臓器重量は、ＰＢＳ対照群と比較した体重の％として示される。
実施例８１：生体内におけるＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＡ１ＡＴを標的とするオリゴヌクレオチドの作用持続時間
表７２に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
６週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスのそれぞれに、表７２に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。投薬の前日に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後５、１２、１９、及び２５日時点のレベルを決定した。ＥＬＩＳＡを用いて血漿Ａ１ＡＴタンパク質レベルを測定した（実施例８０を参照のこと）。以下の結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の血漿Ａ１ＡＴタンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドがＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ ４７６３６６）よりも強力であり、かつより長い作用持続時間を有したことを示す。さらに、５’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６７８３８１、６７８３８２、６７８３８３、及び６７８３８４）は、概して、３’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５６３２６）よりもさらに強力であり、さらに長い作用持続時間を有した。
実施例８２：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体外におけるアンチセンス阻害
処理の２時間前に、初代マウス肝細胞を１５，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種した。表７６に列記されるオリゴヌクレオチドをウィリアムＥ培地に２、１０、５０、または２５０ｎＭで添加し、細胞を３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。オリゴヌクレオチド添加の１６時間後に細胞を溶解し、ＲＮｅａｓｅ ３０００ ＢｉｏＲｏｂｏｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて全ＲＮＡを精製した。リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、ＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを標準のプロトコルに従って決定した。Ｐｒｉｓｍ ４ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて、ＩＣ５０値を決定した。結果は、さまざまな異なるＧａｌＮＡｃ共役基及びさまざまな異なる切断可能部分を含むオリゴヌクレオチドが、生体外自由取り込み実験において、ＧａｌＮＡｃ共役基を欠く親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ３５３３８２及び６６６８４１）よりも著しく強力であることを示す。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−５ａは、実施例４９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−６ａは、実施例５１に示され、ＧａｌＮＡｃ３−７ａは、実施例４８に示され、ＧａｌＮＡｃ３−８ａは、実施例４７に示され、ＧａｌＮＡｃ３−９ａは、実施例５２に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１２ａは、実施例６１に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１３ａは、実施例６２に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１４ａは、実施例６３に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１５ａは、実施例６４に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１７ａは、実施例６８に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１８ａは、実施例６９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１９ａは、実施例７０に示され、ＧａｌＮＡｃ３−２０ａは、実施例７１に示され、ＧａｌＮＡｃ３−２３ａは、実施例７６に示される。
実施例８３：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含む、第ＸＩ因子を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表７７に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおける第ＸＩ因子の用量依存的阻害試験において試験した。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−７ａは、実施例４８に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１３ａは、実施例６２に示される。
処理
６〜８週齢のマウスのそれぞれに、以下に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて肝臓における第ＸＩ因子ｍＲＮＡレベルを測定し、標準のプロトコルに従ってシクロフィリンに対して標準化した。肝臓トランスアミナーゼ、ＢＵＮ、及びビリルビンも測定した。以下の結果は、ＰＢＳ対照に対して標準化された各処理群の平均パーセントとして提示される。
表７８に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓における第ＸＩ因子ｍＲＮＡを低下させた。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ ４０４０７１）よりも強力であったことを示す。さらに、５’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６６３０８６、６７８３４７、６７８３４８、及び６７８３４９）は、３’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５６１７３）よりもさらに強力であった。
実施例８４：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含む第ＸＩ因子を標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
表７７に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
６〜８週齢のマウスのそれぞれに、表７７に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。投薬の前日に尾採血によって血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後３、１０、及び１７日間時点のレベルを決定した。Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）の第ＸＩ因子捕捉及びビオチン化検出抗体（それぞれ、カタログ番号ＡＦ２４６０及びＢＡＦ２４６０）、ならびにＯｐｔＥＩＡ試薬セットＢ（カタログ番号５５０５３４、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて、第ＸＩ因子血漿タンパク質レベルをＥＬＩＳＡによって測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の第ＸＩ因子血漿タンパク質レベルの平均パーセントとして提示される。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ ４０４０７１）よりも強力であり、より長い作用持続時間を有したことを示す。さらに、５’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６６３０８６、６７８３４７、６７８３４８、及び６７８３４９）は、３’−ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６５６１７３）よりもさらに強力であり、さらに長い作用持続時間を有した。
実施例８５：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含む、ＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表７６に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した
処理
６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスのそれぞれに、表７６に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で週１回、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の４８時間後にマウスを屠殺して、リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、ＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを決定した。以下の結果は、生理食塩水（対照）に対して標準化された各処理群の肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。
表８０及び８１に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。
標準のプロトコルを用いて、肝臓トランスアミナーゼレベル、総ビリルビン、ＢＵＮ、及び体重も測定した。各処理群の平均値が以下の表８２に示される。
実施例８６：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含む、ＴＴＲを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表８３に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてヒトＴＴＲ遺伝子を発現するトランスジェニックマウスにおけるヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）のアンチセンス阻害について試験した。
処理
８週齢のＴＴＲトランスジェニックマウスのそれぞれに、以下の表に列記されるオリゴヌクレオチド及び投与量またはＰＢＳを、週１回３週間、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。この実験を通してさまざまな時点で尾採血を実行し、血漿ＴＴＲタンパク質、ＡＬＴ、及びＡＳＴレベルを測定し、表８４〜８７に報告した。動物を屠殺した後、血漿ＡＬＴ、ＡＳＴ、及びヒトＴＴＲレベルを測定し、体重、臓器重量、及び肝臓におおけるヒトＴＴＲ ｍＲＮＡレベルも測定した。臨床分析器（ＡＵ４８０、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＣＡ）を用いて、ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるヒトＴＴＲ ｍＲＮＡレベルを決定した。表８４〜８７に提示される結果は、各処理群の平均値である。ｍＲＮＡレベルは、ＰＢＳ群の平均と比較した平均値である。血漿タンパク質レベルは、ベースラインでのＰＢＳ群の平均値と比較した平均値である。体重は、個々の処理群それぞれを屠殺するまでのベースラインからの平均体重変化率である。示される臓器重量は、動物の体重に対して標準化されており、各処理群の平均標準化臓器重量は、ＰＢＳ群の平均標準化臓器重量との比較で提示される。
表８４〜８７において、「ＢＬ」は、第１の投与の直前に測定したベースラインを示す。表８４及び８５に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＴＴＲ発現レベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ ４２０９１５）よりも強力であった。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体及び混成ＰＳ／ＰＯヌクレオシド間連結部を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体及び完全ＰＳ連結部を含むオリゴヌクレオチドよりもさらに強力であった。
表８５の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３−１の構造は、実施例９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、実施例４６に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、実施例６２に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１９ａの構造は、実施例７０に示される。
実施例８７：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＴＴＲを標的とするオリゴヌクレオチドの単回投与による生体内における作用持続時間
ＩＳＩＳ番号４２０９１５及び６６０２６１（表８３を参照のこと）を、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。ＩＳＩＳ番号４２０９１５、６８２８８３、及び６８２８８５（表８３を参照のこと）も、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
処理
ヒトＴＴＲを発現する８週齢の雄トランスジェニックマウスのそれぞれに、１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号４２０９１５または１３．５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号６６０２６１を１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。投薬前に尾採血を実行して、ベースライン、ならびに投与後３、７、１０、１７、２４、及び３９日目のレベルを決定した。実施例８６に記載されるように、血漿ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の血漿ＴＴＲレベルの平均パーセントとして提示される。
処理
ヒトＴＴＲを発現する雌トランスジェニックマウスのそれぞれに、１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号４２０９１５、１０．０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号６８２８８３、または１０．０ｍｇ／ｋｇの６８２８８５を１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。投薬前に尾採血を実行して、ベースライン、ならびに投与後３、７、１０、１７、２４、及び３９日目のレベルを決定した。実施例８６に記載されるように、血漿ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。以下の結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の血漿ＴＴＲレベルの平均パーセントとして提示される。
表８８及び８９における結果は、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠く親オリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ４２０９１５）よりも強力であり、より長い作用持続時間を有することを示す。
実施例８８：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＭＮを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるスプライシング調節
表９０に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおけるヒト運動ニューロン生存（ＳＭＮ）のスプライシング調節について試験した。
ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示した。「Ｘ」は、Ｇｅｎｅ Ｔｏｏｌｓ（Ｐｈｉｌｏｍａｔｈ，ＯＲ）によって生成された５’一次アミンを示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ｂは、以下に示すように、リンカーの−ＮＨ−Ｃ６−Ｏ部分を欠くＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造を示す。
ＩＳＩＳ番号７０３４２１及び７０３４２２は、モルホリノオリゴヌクレオチドであり、これら２つのオリゴヌクレオチドの各ヌクレオチドは、モルホリノヌクレオチドである。
処理
ヒトＳＭＮを発現する６週齢のトランスジェニックマウスに、表９１に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を１回皮下注入した。各処理群は、２匹の雄及び２匹の雌からなった。投与の３日後にマウスを屠殺して、標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲを用いて、エクソン７を有する場合とエクソン７を有しない場合の肝臓におけるヒトＳＭＮ ｍＲＮＡレベルを決定した。Ｒｉｂｏｇｒｅｅｎ試薬を用いて総ＲＮＡを測定した。ＳＭＮ ｍＲＮＡレベルを総ｍＲＮＡに対して標準化し、さらに生理食塩水処理群の平均に対して標準化した。結果として生じたエクソン７を含むＳＭＮ ｍＲＮＡとエクソン７を欠くＳＭＮ ｍＲＮＡとの平均比が、表９１に示される。結果は、スプライシングを調節し、かつＧａｌＮＡｃ共役体を含む完全修飾オリゴヌクレオチドが、ＧｌａＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも肝臓におけるスプライシングの改変に著しく強力であることを示す。さらに、この傾向は、２’−ＭＯＥ及びモルホリノ修飾オリゴヌクレオチドを含む複数の修飾化学でも維持される。
実施例８９：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むアポリポタンパク質Ａ（Ａｐｏ（ａ））を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表９２に列記されるオリゴヌクレオチドを、トランスジェニックマウスにおけるＡｐｏ（ａ）の用量依存的阻害に関する試験で試験した。
ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示される。
処理
８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）のそれぞれに、表９２に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、以下に示される投与量で週１回、合計６回の投与で、皮下注入した。各処理群は、３〜４匹の動物からなった。第１の投与の前日に、かつ各投与後週１回、尾採血を実行して、血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルを決定した。最終投与の２日後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるＡｐｏ（ａ）ｍＲＮＡレベルを決定した。ＥＬＩＳＡを用いてＡｐｏ（ａ）血漿タンパク質レベルを決定し、肝臓トランスアミナーゼレベルを決定した。表９３におけるｍＲＮＡ及び血漿タンパク質の結果は、ＰＢＳ処理群と比較した処理群の平均パーセントとして提示される。血漿タンパク質レベルをさらにＰＢＳ群のベースライン（ＢＬ）値に対して標準化した。平均絶対トランスアミナーゼレベル及び体重（ベースライン平均と比較した％）が表９４に報告される。
表９３に例証されるように、オリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で肝臓におけるＡｐｏ（ａ）ｍＲＮＡ及び血漿タンパク質レベルを低下させた。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であり、より長い作用持続時間を有した。表９４に例証されるように、トランスアミナーゼレベル及び体重はオリゴヌクレオチドの影響を受けず、オリゴヌクレオチドが良好な耐容性を示したことを示す。
実施例９０：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＴＴＲを標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表９５に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてヒトＴＴＲ遺伝子を発現するトランスジェニックマウスにおけるヒトトランスサイレチン（ＴＴＲ）のアンチセンス阻害について試験した。
処理
ＴＴＲトランスジェニックマウスのそれぞれに、表９６に列記されるオリゴヌクレオチド及び投与量またはＰＢＳを、週１回３週間、合計３回の投与で、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。第１の投与の前に、尾採血を実行して、ベースライン（ＢＬ）での血漿ＴＴＲタンパク質レベルを決定した。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。臨床分析器（ＡＵ４８０、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，ＣＡ）を用いて、ＴＴＲタンパク質レベルを測定した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を用いて、肝臓におけるヒトＴＴＲ ｍＲＮＡレベルを決定した。表９６に提示される結果は、各処理群の平均値である。ｍＲＮＡレベルは、ＰＢＳ群の平均と比較した平均値である。血漿タンパク質レベルは、ベースラインでのＰＢＳ群の平均値と比較した平均値である。「ＢＬ」は、第１の投与の直前に測定したベースラインを示す。表９６に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＴＴＲ発現レベルを低下させた。ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ共役体を欠く親（ＩＳＩＳ ４２０９１５）よりも強力であり、ホスホジエステルまたはデオキシアデノシンの切断可能部分を含むオリゴヌクレオチドは、共役体を欠く親と比較して、力価の著しい改善を示した（ＩＳＩＳ番号６８２８８３及び６６６９４３対４２０９１５、ならびに実施例８６及び８７を参照のこと）。
表９５の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、実施例３９に示される。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、実施例４６に示される。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、実施例６２に示される。
実施例９１：非ヒト霊長類におけるＧａｌＮＡｃ３共役体を含む第ＶＩＩ因子を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表９７に列記されるオリゴヌクレオチドを、非終末用量増加試験（ｎｏｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ，ｄｏｓｅ ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ）においてサルにおける第ＶＩＩ因子のアンチセンス阻害について試験した。
処理
処置した（ｎｏｎ−ｎａｉｖｅ）サルのそれぞれに、増加用量の表９７に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、０、１５、及び２９日目に皮下注入した。各処理群は、４匹の雄及び１匹の雌からなった。第１の投与の前とその後のさまざまな時点で、血液採取を実行して、血漿第ＶＩＩ因子タンパク質レベルを決定した。ＥＬＩＳＡによって第ＶＩＩ因子タンパク質レベルを測定した。表９８に提示される結果は、第１の投与の直前に測定したベースライン（ＢＬ）でのＰＢＳ群の平均値と比較した各処理群の平均値である。表９８に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式で第ＶＩＩ因子の発現レベルを低下させ、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、サルにおいてＧａｌＮＡｃ共役体を欠くオリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
表９７の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、実施例４６に示される。
実施例９２：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＡｐｏ−ＣＩＩＩを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる初代肝細胞におけるアンチセンス阻害
初代マウス肝細胞を１５，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種し、マウスＡｐｏＣ−ＩＩＩを標的とする表９９に列記されるオリゴヌクレオチドを、０．４６、１．３７、４．１２、または１２．３５、３７．０４、１１１．１１、もしくは３３３．３３ｎＭまたは１．００μｍで添加した。オリゴヌクレオチドとともに２４時間インキュベートした後、細胞を溶解し、ＲＮｅａｓｙ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて全ＲＮＡを精製した。標準のプロトコルに従ってリアルタイムＰＣＲ及びＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量化試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．）を用いて、ＡｐｏＣ−ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルを決定した。Ｐｒｉｓｍ ４ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて、ＩＣ５０値を決定した。結果は、切断可能部分がホスホジエステルであるかホスホジエステル連結デオキシアデノシンであるかにかかわらず、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠く親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。
ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−３ａは、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−７ａは、実施例４８に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１０ａは、実施例４６に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１３ａは、実施例６２に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１９ａは、実施例７０に示される。
実施例９３：混成ウイング及び５’−ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表１００に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。
ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示される。下付き文字「ｅ」は、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオシドを示し、「ｄ」は、β−Ｄ−２’−デオキシリボヌクレオシドを示し、「ｋ」は、６’−（Ｓ）−ＣＨ３二環式ヌクレオシド（ｃＥｔ）を示し、「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部（ＰＳ）を示し、「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部（ＰＯ）を示す。上付き文字「ｍ」は、５−メチルシトシンを示す。
処理
６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、表１００に列記されるオリゴヌクレオチドまたは生理食塩水を、以下に示される投与量で１回、皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、ＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルをシクロフィリンｍＲＮＡレベルに対して標準化した。結果は、生理食塩水対照群と比較した各処理群のＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして提示される。表１０１に例証されるように、アンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させ、ＧａｌＮＡｃ共役体を含み、かつ完全ｃＥｔまたは混成糖修飾のいずれかのウイングを有するギャップマーオリゴヌクレオチドは、共役体を欠き、かつ完全ｃＥｔ修飾ウイングを含む親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であった。
体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、及びＢＵＮも測定し、各処理群の平均値が表１０１に示される。体重は、オリゴヌクレオチド投与の直前に測定したベースライン体重（％ＢＬ）と比較した平均体重率として示される。
実施例９４：２’−糖修飾及び５’−ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表１０２に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。
下付き文字「ｍ」は、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオシドを示す。完全な表の説明文については、実施例７４を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示した。
処理
実施例９３に記載されるプロトコルを用いて試験を完了した。結果が以下の表１０３に示され、ＧａｌＮＡｃ共役体を含む２’−ＭＯＥ修飾オリゴヌクレオチドと２’−ＯＭｅ修飾オリゴヌクレオチドとが両方ともに、共役体を欠くそれぞれの親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、及びＢＵＮの測定結果は、これらの化合物がすべて良好な耐容性を示したことを示す。
実施例９５：二環式ヌクレオシド及び５’−ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表１０４に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。
下付き文字「ｇ」は、フルオロ−ＨＮＡヌクレオシドを示し、下付き文字「ｌ」は、２’−Ｏ−ＣＨ２−４’橋を含むロックドヌクレオシドを示す。他の省略形については、実施例７４の表の説明文を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３−１ａの構造は、先の実施例９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、先の実施例３９に示し、ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示した。
処理
実施例９３に記載されるプロトコルを用いて試験を完了した。結果が以下の表１０５に示され、ＧａｌＮＡｃ共役体及びさまざまな二環式ヌクレオシド修飾を含むオリゴヌクレオチドが、共役体を欠くが二環式ヌクレオシド修飾を含む親オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体及びフルオロ−ＨＮＡ修飾を含むオリゴヌクレオチドは、共役体を欠くがフルオロ−ＨＮＡ修飾を含む親よりも著しく強力であった。体重、肝臓トランスアミナーゼ、総ビリルビン、及びＢＵＮの測定結果は、これらの化合物がすべて良好な耐容性を示したことを示す。
実施例９６：ＧａｌＮＡｃ３共役基を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの血漿タンパク質結合
ＡｐｏＣ−ＩＩＩを標的とする表７０に列記されるオリゴヌクレオチド及びＡｐｏ（ａ）を標的とする表１０６におけるオリゴヌクレオチドを限外濾過アッセイにおいて試験して、血漿タンパク質結合を評価した。
表の説明文については、実施例７４を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、先の実施例４８に示される。
Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−ＭＣ限外濾過ユニット（３０，０００ＮＭＷＬ、低結合再生セルロース膜、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を３００μＬの０．５％Ｔｗｅｅｎ ８０で事前に条件付け、２０００ｇで１０分間遠心分離し、その後、Ｈ２Ｏ中の３００μＬの３００μｇ／ｍＬ対照オリゴヌクレオチド溶液で事前に条件付け、２０００ｇで１６分間遠心分離した。これらの試験で用いる表７０及び１０６の各試験オリゴヌクレオチドのフィルターへの非特異的結合を評価するために、３００μＬのＨ２Ｏ中の２５０ｎｇ／ｍＬ溶液オリゴヌクレオチド（ｐＨ７．４）を事前に条件付けたフィルターに設置し、２０００ｇで１６分間遠心分離した。ＥＬＩＳＡアッセイによって濾過していない試料及び濾過した試料を分析して、オリゴヌクレオチド濃度を決定した。３つの複製物を用いて各試料の平均濃度を得た。濾過していない試料と比較した濾過した試料の平均濃度を用いて、血漿の不在下でフィルターによって回収されたオリゴヌクレオチドの割合（％回収）を決定する。
薬物を使用していない健常なヒト志願者、カニクイザル、及びＣＤ−１マウス由来のＫ３−ＥＤＴＡ中に収集された凍結全血漿試料をＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ ＬＬＣ（Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ）から購入した。試験オリゴヌクレオチドを、２つの濃度（５μｇ／ｍＬ及び１５０μｇ／ｍＬ）で血漿の１．２ｍＬの一定分量に添加した。各スパイクした血漿試料の一定分量（３００μＬ）を事前に条件付けられたフィルターユニット内に設置し、３７℃で３０分間インキュベートした直後に２０００ｇで１６分間遠心分離した。ＥＬＩＳＡによって、濾過してスパイクした血漿試料及び濾過していないスパイクした血漿試料の一定分量を分析して、各試料中のオリゴヌクレオチドの濃度を決定した。１つの濃度ごとに３つの複製物を用いて、各試料中の結合オリゴヌクレオチド及び非結合オリゴヌクレオチドの平均割合を決定した。濾過していない試料の濃度と比較した濾過した試料の平均濃度を用いて、血漿タンパク質に結合されていない血漿中のオリゴヌクレオチドの割合（％非結合）を決定する。各オリゴヌクレオチドの％非結合を％回収で割ることによって、最終非結合オリゴヌクレオチド値を非特異的結合に対して補正する。最終％非結合値を１００から差し引くことによって、最終％結合オリゴヌクレオチド値を決定する。各種の血漿において試験した２つの濃度のオリゴヌクレオチド（５μｇ／ｍＬ及び１５０μｇ／ｍＬ）の結果が表１０７に示される。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基が血漿タンパク質結合に大きな影響を与えないことを示す。さらに、完全ＰＳヌクレオシド間連結部を有するオリゴヌクレオチドも混成ＰＯ／ＰＳ連結部を有するオリゴヌクレオチドも血漿タンパク質に結合し、完全ＰＳ連結部を有するオリゴヌクレオチドは、混合ＰＯ／ＰＳ連結部を有するオリゴヌクレオチドよりも若干高い程度に血漿タンパク質に結合する。
実施例９７：ＧａｌＮＡｃ３共役基を含むＴＴＲを標的とする修飾オリゴヌクレオチド
ＧａｌＮＡｃ共役体を含む表１０８に示されるオリゴヌクレオチドを、ＴＴＲを標的とするように設計した。
表１０８の説明文を実施例７４で見つけることができる。ＧａｌＮＡｃ３−１の構造は、実施例９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、実施例３９に示した。ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８にした。ＧａｌＮＡｃ３−１０ａの構造は、実施例４６に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、実施例６２に示した。ＧａｌＮＡｃ３−１９ａの構造は、実施例７０に示した。
実施例９８：ｈＰＭＢＣアッセイにおけるＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドの炎症誘発作用の評価
表１０９に列記されるオリゴヌクレオチドを、実施例２３及び２４に記載されるようにｈＰＭＢＣアッセイにおいて炎症誘発作用について試験した（オリゴヌクレオチドの説明については、表３０、８３、９５、及び１０８を参照のこと）。ＩＳＩＳ ３５３５１２は、正の対照として用いられる高レスポンダーであり、他のオリゴヌクレオチドは、表８３、９５、及び１０８に記載されるものである。１人の志願ドナー由来の血液を用いて表１０９に示される結果を得た。結果は、混合ＰＯ／ＰＳヌクレオシド間連結部を含むオリゴヌクレオチドが、完全ＰＳ連結部を有する同一のオリゴヌクレオチドと比較して、著しく低い炎症誘発応答をもたらしたことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役基は、このアッセイにおいて大きく影響しなかった。
実施例９９：アシアロ糖タンパク質受容体に対するＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドの結合親和性
アシアロ糖タンパク質受容体に対する表１１０に列記されるオリゴヌクレオチド（オリゴヌクレオチドの説明については、表７６を参照のこと）の結合親和性を、競合的受容体結合アッセイにおいて試験した。競合相手のリガンドであるα１−酸性糖タンパク質（ＡＧＰ）を、５０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）中で１Ｕノイラミニダーゼ−アガロースとともに３７℃で１６時間インキュベートし、シアル酸アッセイまたはサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）のいずれかで９０％を超える脱シアル化を確認した。Ａｔｓｍａ ｅｔ ａｌ．（Ｊ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．１９９１ Ｊａｎ；３２（１）：１７３−８１を参照のこと）の手順に従って、一塩化ヨウ素を用いてＡＧＰをヨウ素化した。この方法において、脱シアル化α１−酸性糖タンパク質（ｄｅ−ＡＧＰ）を、１０ｍＭ塩化ヨウ素、Ｎａ１２５Ｉ、及び０．２５Ｍ ＮａＯＨ中の１Ｍグリシンに添加した。室温で１０分間インキュベートした後、３ＫＤＭＷＣＯスピンカラムを利用してこの混合物を２回濃縮することによって、１２５Ｉ標識ｄｅ−ＡＧＰを遊離１２５Ｉから分離した。このタンパク質を、Ａｇｉｌｅｎｔ ＳＥＣ−３カラム（７．８×３００ｍｍ）及びβ−ＲＡＭカウンタを装備したＨＰＬＣシステムにおいて標識効率及び純度について試験した。１２５Ｉ標識ｄｅ−ＡＧＰ及びＡＳＯを含有するさまざまなＧａｌＮＡｃクラスターを利用した競合実験を以下のとおりに実行した。ヒトＨｅｐＧ２細胞（１０６細胞／ｍＬ）を、２ｍＬの適切な成長培地中の６ウェルプレートにプレーティングした。１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、及び１０ｍＭ ＨＥＰＥＳを補充したＭＥＭ培地を用いた。細胞を、それぞれ、５％及び１０％ＣＯ２で、３７℃で１６〜２０時間インキュベートした。実験前に細胞をＦＢＳを有しない培地で洗浄した。細胞を、２％ＦＢＳを有する適切な成長培地を含有する１ｍＬの競合混合物、１０−８Ｍ １２５Ｉ標識ｄｅ−ＡＧＰ、及び１０−１１〜１０−５Ｍの範囲の濃度のＡＳＯを含有するＧａｌＮＡｃクラスターとともに、３７℃で３０分間インキュベートした。１０−２Ｍ ＧａｌＮＡｃ糖の存在下で非特異的結合を決定した。細胞をＦＢＳを有しない培地で２回洗浄して、非結合１２５Ｉ標識ｄｅ−ＡＧＰ及び競合相手であるＧａｌＮＡｃ ＡＳＯを除去した。１％β−メルカプトエタノールを含有するＱｉａｇｅｎのＲＬＴ緩衝液を用いて、細胞を溶解した。１０分間の短時間凍結／解凍サイクル後に溶解物を丸底アッセイチューブに移し、γ−カウンタでアッセイした。非特異的結合を差し引いた後に、１２５Ｉタンパク質カウントを最も低いＧａｌＮＡｃ−ＡＳＯ濃度カウントの値で割った。非線形回帰アルゴリズムを用いた単一部位競合結合等式に従って阻害曲線を当てはめて、結合親和性（ＫＤ）を計算した。
表１１０における結果を５つの異なる日に実行した実験から得た。上付き文字「ａ」の付いたオリゴヌクレオチドの結果は、２つの異なる日に実行した実験の平均である。結果は、５’末端にＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドがヒトＨｅｐＧ２細胞上のアシアロ糖タンパク質受容体に結合し、３’末端にＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドよりも１．５〜１６倍高い親和性を有することを示す。
実施例１００：生体内におけるＡｐｏ（ａ）を標的とするＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表１１１ａに列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示した。
処理
ヒトＡｐｏ（ａ）を発現する雌トランスジェニックマウスのそれぞれに、表１１１ｂに列記されるオリゴヌクレオチド及び投与量またはＰＢＳを、週１回、合計６回の投与で、皮下注入した。各処理群は、３匹の動物からなった。投薬の前日に血液を採取して、血漿中のＡｐｏ（ａ）タンパク質のベースラインレベル、ならびに第１の投与後７２時間、１週間、及び２週間時点のレベルを決定した。第１の投与後３週間、４週間、５週間、及び６週間時点でさらに血液を採取する。ＥＬＩＳＡを用いて血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルを測定した。表１１１ｂにおける結果は、ベースラインレベル（％ＢＬ）に対して標準化された各処理群の血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルの平均パーセントとして提示され、結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドがＡｐｏ（ａ）発現の強力な減少を示したことを示す。この強力な影響は、完全ＰＳヌクレオシド間連結部を含むオリゴヌクレオチド及び混成ＰＯ及びＰＳ連結部を含むオリゴヌクレオチドにおいて観察された。
実施例１０１：安定した部分を介して連結されたＧａｌＮＡｃクラスターを含むオリゴヌクレオチドによるアンチセンス阻害
表１１２に列記されるオリゴヌクレオチドを生体内におけるマウスＡＰＯＣ−ＩＩＩ発現の阻害について試験した。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスのそれぞれに、表１１２に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。ＩＳＩＳ ４４０６７０で処理した各マウスは、２、６、２０、または６０ｍｇ／ｋｇの投与を受けた。ＩＳＩＳ ６８０７７２または６９６８４７で処理した各マウスは、０．６、２、６、または２０ｍｇ／ｋｇを受けた。ＩＳＩＳ ６９６８４７のＧａｌＮＡｃ共役基は、安定した部分（容易に切断可能なホスホジエステル含有結合の代わりにホスホロチオエート連結部）を介して連結されている。投与の７２時間後に動物を屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて、肝臓におけるＡＰＯＣ−ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、ＡＰＯＣ−ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルをシクロフィリンｍＲＮＡレベルに対して標準化した。結果は、生理食塩水対照群と比較した各処理群のＡＰＯＣ−ＩＩＩ ｍＲＮＡレベルの平均パーセントとして表１１２に提示される。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドが、共役基を欠くオリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことを示す。さらに、切断可能部分を介してオリゴヌクレオチドに連結されたＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６８０７７２）は、安定した部分を介してオリゴヌクレオチドに連結されたＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ ６９６８４７）よりもさらに強力であった。
ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示した。
実施例１０２：ＧａｌＮＡｃ共役体を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドの肝臓における分布
ＧａｌＮＡｃ共役体を含まないＩＳＩＳ ３５３３８２（表３６を参照のこと）及びＧａｌＮＡｃ共役体を含むＩＳＩＳ ６５５８６１（表３６を参照のこと）の肝臓における分布を評価した。雄Ｂａｌｂ／ｃマウスに、ＩＳＩＳ ３５３３８２または６５５８６１を、表１１３に列記される投与量で１回、皮下注入した。２匹の動物からなった１８ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ ６５５８６１群を除いて、各処理群は、３匹の動物からなった。投与の４８時間後に動物を屠殺して、オリゴヌクレオチドの肝臓における分布を決定した。１細胞あたりのアンチセンスオリゴヌクレオチド分子の数を測定するために、ルテニウム（ＩＩ）トリス−ビピリジン標識（ＭＳＤ ＴＡＧ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を、アンチセンスオリゴヌクレオチドを検出するために用いるオリゴヌクレオチドプローブに共役させた。表１１３に提示される結果は、１細胞あたり１００万オリゴヌクレオチド分子を１単位として表した各処理群のオリゴヌクレオチドの平均濃度である。結果は、等価用量で、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドが、全肝臓及び肝細胞において、ＧａｌＮＡｃ共役体を含まないオリゴヌクレオチドよりも高い濃度で存在したことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役体を含むオリゴヌクレオチドは、非実質肝臓細胞において、ＧａｌＮＡｃ共役体を含まないオリゴヌクレオチドよりも低い濃度で存在した。１細胞あたりの肝細胞及び非実質肝臓細胞におけるＩＳＩＳ ６５５８６１の濃度が同様であった一方で、肝臓は、約８０体積％肝細胞であった。したがって、肝臓内に存在するＩＳＩＳ ６５５８６１オリゴヌクレオチドの大部分が肝細胞内に見られる一方で、肝臓内に存在するＩＳＩＳ ３５３３８２オリゴヌクレオチドの大部分は、非実質肝臓細胞内に見られた。
実施例１０３：ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＡＰＯＣ−ＩＩＩを標的とするオリゴヌクレオチドの生体内における作用持続時間
以下の表１１４に列記されるオリゴヌクレオチドを、単回投与試験においてマウスにおける作用持続時間について試験した。
ＧａｌＮＡｃ３−３ａの構造は、実施例３９に示され、ＧａｌＮＡｃ３−１９ａは、実施例７０に示される。
処理
ヒトＡＰＯＣ−ＩＩＩを発現する雌トランスジェニックマウスのそれぞれに、表１１４に列記されるオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、３匹の動物からなった。投薬前に血液を採取して、ベースライン、ならびに投与後３、７、１４、２１、２８、３５、及び４２日間のレベルを決定した。実施例２０に記載されるように、血漿トリグリセリド及びＡＰＯＣ−ＩＩＩタンパク質レベルを測定した。表１１５における結果は、ベースラインレベルに対して標準化された各処理群の血漿トリグリセリド及びＡＰＯＣ−ＩＩＩレベルの平均パーセントとして提示される。実施例７９の表７１における結果と以下の表１１５における結果の比較は、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部及びホスホロチオエートヌクレオシド間連結部の両方を含むオリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部のみを含む等価オリゴヌクレオチドよりも増加した作用持続時間を示したことを示す。
実施例１０４：５’−ＧａｌＮＡｃ２共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
化合物１２０は市販されており、化合物１２６の合成は実施例４９に記載されている。化合物１２０（１ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．３９ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）、及びＨＯＢｔ（１．６４ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．７５ｍＬ、１０．１ｍｍｏｌ）を添加した。約５分後、アミノヘキサン酸ベンジルエステル（１．３６ｇ、３．４６ｍｍｏｌ）をこの反応物に添加した。３時間後、反応混合物を１００ｍＬの１Ｍ ＮａＨＳＯ４に注ぎ、２×５０ｍＬ酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、４０ｍＬ飽和ＮａＨＣＯ３で３回、ブラインで２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。この生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＥＡ：Ｈｅｘ＝１：１：１）によって精製して、化合物２３１を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２３１（１．３４ｇ、２．４３８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）中に溶解し、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を添加した。室温で２時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮し、トルエン（３×１０ｍＬ）と共蒸発させた。残渣を減圧下で乾燥させて、トリフルオロ酢酸塩として化合物２３２を得た。化合物１６６の合成は、実施例５４に記載される。化合物１６６（３．３９ｇ、５．４０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解した。化合物２３２（１．３ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）の溶液をＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．５５ｍＬ）を添加した。反応物を室温で３０分間撹拌し、その後、水（８０ｍＬ）に注ぎ、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３×８０ｍＬ）、１Ｍ ＮａＨＳＯ４（３×８０ｍＬ）、及びブライン（２×８０ｍＬ）で洗浄し、その後、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物２３３を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。化合物２３３（０．５９ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）をメタノール（２．２ｍＬ）及び酢酸エチル（２．２ｍＬ）中に溶解した。パラジウム炭素（１０重量％Ｐｄ／Ｃ、湿性、０．０７ｇ）を添加し、反応混合物を水素雰囲気下で３時間撹拌した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、濃縮して、カルボン酸を得た。カルボン酸（１．３２ｇ、１．１５ｍｍｏｌ、クラスター遊離酸）をＤＭＦ（３．２ｍＬ）中に溶解した。これに、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．３ｍＬ、１．７３ｍｍｏｌ）及びＰＦＰＴＦＡ（０．３０ｍＬ、１．７３ｍｍｏｌ）を添加した。室温で３０分間撹拌した後、反応混合物を水（４０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。上述のように標準の後処理を完了して、化合物２３４を得た。ＬＣＭＳ及びＮＭＲは、その構造と一致した。実施例４６に記載される一般的手順を用いて、オリゴヌクレオチド２３５を調製した。共役基ＧａｌＮＡｃ２−２４のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ２−２４ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を提供することができる。ＧａｌＮＡｃ２−２４（ＧａｌＮＡｃ２−２４ａ−ＣＭ）の構造は、以下に示される：
実施例１０５：ＧａｌＮＡｃ１−２５共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
化合物１６６の合成は、実施例５４に記載される。実施例４６に記載される一般的手順を用いて、オリゴヌクレオチド２３６を調製した。あるいは、以下に示されるスキームを用いてオリゴヌクレオチド２３６を合成し、実施例１０に記載される手順を用いて、化合物２３８を用いてオリゴヌクレオチド２３６を形成した。
共役基ＧａｌＮＡｃ１−２５のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−２５ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１−２５（ＧａｌＮＡｃ１−２５ａ−ＣＭ）の構造は、以下に示される：
実施例１０６：５’−ＧａｌＮＡｃ２または５’−ＧａｌＮＡｃ３共役体を含むＳＲＢ−１を標的とするオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
表１１６及び１１７に列記されるオリゴヌクレオチドを、用量依存的試験においてマウスにおけるＳＲＢ−１のアンチセンス阻害について試験した。
処理
６週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、２、７、もしくは２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号４４０７６２；または０．２、０．６、２、６、もしくは２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ番号６８６２２１、６８６２２２、もしくは７０８５６１；または生理食塩水を１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。最終投与の７２時間後にマウスを屠殺した。リアルタイムＰＣＲを用いて、肝臓におけるＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを測定した。標準のプロトコルに従って、ＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルをシクロフィリンｍＲＮＡレベルに対して標準化した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、用量依存的様式でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させ、ＥＤ５０結果が、表１１６及び１１７に提示される。以前の研究において、三価ＧａｌＮＡｃ共役オリゴヌクレオチドが二価ＧａｌＮＡｃ共役オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であり、これは、次いで、一価ＧａｌＮＡｃ共役オリゴヌクレオチドよりも著しく強力であったことが示されたが（例えば、Ｋｈｏｒｅｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．１６，５２１６−５２３１（２００８）を参照のこと）、表１１６及び１１７に示されるように、一価、二価、及び三価ＧａｌＮＡｃクラスターを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処理は、同様の力価でＳＲＢ−１ ｍＲＮＡレベルを低下させた。
表の説明文については、実施例９３を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ３−１３ａの構造は、実施例６２に示し、ＧａｌＮＡｃ２−２４ａの構造は、実施例１０４に示した。
表の説明文については、実施例９３を参照されたい。ＧａｌＮＡｃ１−２５ａの構造は、実施例１０５に示した。
実施例７５に記載される手順を用いて、表１１６及び１１７における肝臓中のオリゴヌクレオチドの濃度も評価した。以下の表１１７ａ及び１１７ｂに示される結果は、肝臓組織のオリゴヌクレオチド（μｇ）／ｇ単位のＵＶによって測定された各処理群の平均総アンチセンスオリゴヌクレオチド組織レベルである。結果は、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドがＧａｌＮＡｃ共役基を欠く同一の用量のオリゴヌクレオチドよりも著しく高いレベルで肝臓に蓄積したことを示す。さらに、それらのそれぞれの共役基に１、２、または３個のＧａｌＮＡｃリガンドを含むアンチセンスオリゴヌクレオチドはすべて同様のレベルで肝臓に蓄積した。上記のＫｈｏｒｅｖ ｅｔ ａｌ．の文献参照を考慮すると、これは意外な結果であり、上の表１１６及び１１７に示される活性データと一致する。
実施例１０７：ＧａｌＮＡｃ１−２６またはＧａｌＮＡｃ１−２７共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
ＤＭＦ中ＨＢＴＵ及びＤＩＥＡを用いて、オリゴヌクレオチド２３９を化合物４７（実施例１５を参照のこと）と酸６４（実施例３２を参照のこと）とのカップリングによって合成する。結果として生じたアミド含有化合物をホスフィチル化し、その後、実施例１０に記載される手順を用いて、オリゴヌクレオチドの５’末端に付加する。共役基ＧａｌＮＡｃ１−２６のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−２６ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１−２６（ＧａｌＮＡｃ１−２６ａ−ＣＭ）の構造は、以下に示される：
ＧａｌＮＡｃ１共役基をオリゴヌクレオチドの３’末端に付加するために、実施例７に記載される手順を用いて、化合物４７と６４の反応から形成されたアミドを固体支持体に付加する。その後、実施例９に記載される手順を用いて、オリゴヌクレオチド合成を完了して、オリゴヌクレオチド２４０を形成する。
共役基ＧａｌＮＡｃ１−２７のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−２７ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１−２７（ＧａｌＮＡｃ１−２７ａ−ＣＭ）の構造は、以下に示される：
実施例１０８：生体内におけるＡｐｏ（ａ）を標的とするＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドによる生体内におけるアンチセンス阻害
以下の表１１８に列記されるオリゴヌクレオチドを、マウスにおける単回投与試験において試験した。
ＧａｌＮＡｃ３−７ａの構造は、実施例４８に示される。
処理
ヒトＡｐｏ（ａ）を発現する雄トランスジェニックマウスのそれぞれに、表１１９に列記されるオリゴヌクレオチド及び投与量またはＰＢＳを１回皮下注入した。各処理群は、４匹の動物からなった。投薬の前日に血液を採取して、血漿中のＡｐｏ（ａ）タンパク質のベースラインレベル及び第１の投与後の１週間時点のレベルを決定した。週１回約８週間、さらに血液を採取する。ＥＬＩＳＡを用いて血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルを測定した。表１１９における結果は、ベースラインレベル（％ＢＬ）に対して標準化された各処理群の血漿Ａｐｏ（ａ）タンパク質レベルの平均パーセントとして提示され、結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドがＡｐｏ（ａ）タンパク質の発現を低下させたことを示す。さらに、ＧａｌＮＡｃ共役基を含むオリゴヌクレオチドは、共役基を含まないオリゴヌクレオチドよりもさらに強力なＡｐｏ（ａ）発現の減少を示した。
実施例１０９：ＧａｌＮＡｃ１−２８またはＧａｌＮＡｃ１−２９共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
オリゴヌクレオチド２４１を実施例７１に記載される手順と同様の手順を用いて合成して、ホスホラミダイト中間体を形成し、続いて、実施例１０に記載される手順を用いてオリゴヌクレオチドを合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ１−２８のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−２８ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１−２８（ＧａｌＮＡｃ１−２８ａ−ＣＭ）の構造は、以下に示される：
ＧａｌＮＡｃ１共役基をオリゴヌクレオチドの３’末端に付加するために、実施例７１に記載される手順と同様の手順を用いてヒドロキシル中間体を形成し、その後、実施例７に記載される手順を用いてこれを固体支持体に付加する。その後、実施例９に記載される手順を用いてオリゴヌクレオチド合成を完了させて、オリゴヌクレオチド２４２を形成する。
共役基ＧａｌＮＡｃ１−２９のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−２９ａ）をオリゴヌクレオチド上に存在する任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。ＧａｌＮＡｃ１−２９（ＧａｌＮＡｃ１−２９ａ−ＣＭ）の構造は、以下に示される：
実施例１１０：ＧａｌＮＡｃ１−３０共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
ＧａｌＮＡｃ１−３０共役基を含むオリゴヌクレオチド２４６（式中、Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは無置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される）を上に示されるように合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ１−３０のＧａｌＮＡｃ１クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ１−３０ａ）を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、Ｙは、切断可能部分の一部である。特定の実施形態において、Ｙは、安定した部分の一部であり、切断可能部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。ＧａｌＮＡｃ１−３０ａの構造は、以下に示される：
実施例１１１：ＧａｌＮＡｃ２−３１またはＧａｌＮＡｃ２−３２共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成
ＧａｌＮＡｃ２−３１共役基を含むオリゴヌクレオチド２５０（式中、Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは無置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される）を上に示されるように合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ２−３１のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ２−３１ａ）を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、切断可能部分の一部である。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、安定した部分の一部であり、切断可能部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。ＧａｌＮＡｃ２−３１ａの構造は、以下に示される：
ＧａｌＮＡｃ２−３２共役体を含むオリゴヌクレオチドの合成は、以下に示される。
ＧａｌＮＡｃ２−３２共役基を含むオリゴヌクレオチド２５２（式中、Ｙが、Ｏ、Ｓ、置換もしくは無置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニル、またはアルキニルから選択される）を上に示されるように合成する。共役基ＧａｌＮＡｃ２−３２のＧａｌＮＡｃ２クラスター部分（ＧａｌＮＡｃ２−３２ａ）を任意の切断可能部分と組み合わせて、さまざまな共役基を得ることができる。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、切断可能部分の一部である。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端に直接隣接したＹ含有基は、安定した部分の一部であり、切断可能部分は、オリゴヌクレオチド上に存在する。ＧａｌＮＡｃ２−３２ａの構造は、以下に示される：
実施例１１２：ＧａｌＮＡｃ１共役体を含む修飾オリゴヌクレオチド
ＳＲＢ−１を標的とする表１２０のオリゴヌクレオチドをＧａｌＮＡｃ１共役基で合成して、ＧａｌＮＡｃリガンドを含有する共役基を含むオリゴヌクレオチドの力価をさらに試験した。
実施例１１３：成長ホルモン受容体を標的とし、ＧａｌＮＡｃクラスターを含むアンチセンスオリゴヌクレオチド
表１２１のオリゴヌクレオチドは、ヒト成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）を標的とするように設計した。
実施例１１４：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒト成長ホルモン受容体のアンチセンス阻害
成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、ＧＨＲ ｍＲＮＡに対するそれらの効果をインビトロで試験した。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、培養条件が類似する一連の実験で試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。１ウェルあたり２０，０００細胞の密度の培養Ｈｅｐ３Ｂ細胞を、エレクトロポレーションにより、４，５００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約２４時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢ(フォワード配列ＣＧＡＧＴＴＣＡＧＴＧＡＧＧＴＧＣＴＣＴＡＴＧＴ、本明細書では配列番号２３２９と呼ぶ;リバース配列ＡＡＧＡＧＣＣＡＴＧＧＡＡＡＧＴＡＧＡＡＡＴＣＴＴＣ、本明細書では配列番号２３３０と呼ぶ；プローブ配列ＴＴＣＣＴＣＡＧＡＴＧＡＧＣＣＡＡＴＴ、本明細書では配列番号２３３１と呼ぶ）を使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
以下の表に示す新設計のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥまたは３−１０−４ＭＯＥギャップマーとして設計された。これらの５−１０−５ＭＯＥギャップマーは２０ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’−デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。３−１０−４ＭＯＥギャップマーは、１７ヌクレオシド長であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’−デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ３個と４個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドと３’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドは２’−ＭＯＥ修飾を有する。ヌクレオシド間連結部は、各ギャップマーの全体を通して、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結部である。各ギャップマーの全体を通してシトシン残基は、すべて、５−メチルシトシンである。「開始部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も３’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示す各ギャップマーは、本明細書において配列番号１（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿０００１６３．４）と呼ぶヒトＧＨＲ ｍＲＮＡまたは本明細書において配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）と呼ぶヒトＧＨＲゲノム配列のどちらかを標的とする。「ｎ／ａ」は、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定遺伝子配列を１００％の相補性では標的としないことを示す。標的遺伝子の配列アライメントが特定の表で示されていない場合は、その表に存在するオリゴヌクレオチドはいずれも標的遺伝子と１００％の相補性で配列しないことを理解されたい。
実施例１１５：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＧＨＲの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＧＨＲ ｍＲＮＡの顕著なインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において、さまざまな用量で試験した。アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養条件が類似する一連の実験で試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、以下の表に指定するとおり、０．６２５μＭ、１．２５μＭ、２．５０μＭ、５．００μＭ、及び１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＧＨＲ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく低減した。
実施例１１６：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＧＨＲの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＧＨＲ ｍＲＮＡの顕著なインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において、さまざまな用量で試験した。類似する培養条件を使用する一連の実験でアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、以下の表に指定するとおり、０．３１２５μＭ、０．６２５μＭ、１．２５μＭ、２．５０μＭ、５．００μＭ、及び１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＧＨＲ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく低減した。
実施例１１７：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＧＨＲの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＧＨＲ ｍＲＮＡの顕著なインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において、さまざまな用量で試験した。類似する培養条件を使用する一連の実験でアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、以下の表に指定するとおり、０．６２５μＭ、１．２５μＭ、２．５０μＭ、５．００μＭ、及び１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＧＨＲ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく低減した。
実施例１１８：ＭＯＥギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＧＨＲの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＧＨＲ ｍＲＮＡの顕著なインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において、さまざまな用量で試験した。類似する培養条件を使用する一連の実験でアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、以下の表に指定するとおり、０．３１２５μＭ、０．６２５μＭ、１．２５μＭ、２．５０μＭ、５．００μＭ、及び１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＧＨＲ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく低減した。
実施例１１９：デオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒト成長ホルモン受容体のアンチセンス阻害
成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）核酸を標的とする追加的アンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、ＧＨＲ ｍＲＮＡに対するそれらの効果をインビトロで試験した。類似する培養条件を使用する一連の実験でアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。１ウェルあたり２０，０００細胞の密度の培養Ｈｅｐ３Ｂ細胞を、エレクトロポレーションにより、５，０００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約２４時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
以下の表に示す新設計のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、デオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔギャップマーとして設計された。デオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔオリゴヌクレオチドは１６ヌクレオシド長であり、前記ヌクレオシドがＭＯＥ糖修飾、(Ｓ)−ｃＥｔ糖修飾またはデオキシ修飾のいずれかを含む。「化学的特徴（ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」欄が各オリゴヌクレオチドの糖修飾を説明する。「ｋ」は(Ｓ)−ｃＥｔ糖修飾を示し、「ｄ」はデオキシリボースを示し、「ｅ」はＭＯＥ修飾を示す。ヌクレオシド間連結部は、各ギャップマーの全体を通して、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結部である。各ギャップマーの全体を通してシトシン残基は、すべて、５−メチルシトシンである。「開始部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も３’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示す各ギャップマーは、本明細書において配列番号１（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿０００１６３．４）と呼ぶヒトＧＨＲ ｍＲＮＡまたは本明細書において配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）と呼ぶヒトＧＨＲゲノム配列のどちらかを標的とする。「ｎ／ａ」は、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定遺伝子配列を１００％の相補性では標的としないことを示す。標的遺伝子の配列アライメントが特定の表で示されていない場合は、その表に存在するオリゴヌクレオチドはいずれも標的遺伝子と１００％の相補性で配列しないことを理解されたい。
実施例１２０：デオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒト成長ホルモン受容体のアンチセンス阻害
成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）核酸を標的とする追加的アンチセンスオリゴヌクレオチドを設計し、ＧＨＲ ｍＲＮＡに対するそれらの効果をインビトロで試験した。類似する培養条件を使用する一連の実験でアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。１ウェルあたり２０，０００細胞の密度の培養Ｈｅｐ３Ｂ細胞を、エレクトロポレーションにより、４，５００ｎＭアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約２４時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
以下の表に示す新設計のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、デオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔギャップマーとして設計された。デオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔオリゴヌクレオチドは１６ヌクレオシド長であり、前記ヌクレオシドがＭＯＥ糖修飾、(Ｓ)−ｃＥｔ糖修飾またはデオキシ修飾のいずれかを含む。「化学的特徴（ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」欄が各オリゴヌクレオチドの糖修飾を説明する。「ｋ」は(Ｓ)−ｃＥｔ糖修飾を示し、「ｄ」はデオキシリボースを示し、「ｅ」はＭＯＥ修飾を示す。ヌクレオシド間連結部は、各ギャップマーの全体を通して、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結部である。各ギャップマーの全体を通してシトシン残基は、すべて、５−メチルシトシンである。「開始部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も３’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示す各ギャップマーは、本明細書において配列番号１（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿０００１６３．４）と呼ぶヒトＧＨＲ ｍＲＮＡまたは本明細書において配列番号２（ヌクレオチド４２４１１００１から４２７１４０００までを切り出したＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿００６５７６．１６）と呼ぶヒトＧＨＲゲノム配列のどちらかを標的とする。「ｎ／ａ」は、そのアンチセンスオリゴヌクレオチドが当該特定遺伝子配列を１００％の相補性では標的としないことを示す。標的遺伝子の配列アライメントが特定の表で示されていない場合は、その表に存在するオリゴヌクレオチドはいずれも標的遺伝子と１００％の相補性で配列しないことを理解されたい。表１７５のオリゴヌクレオチドは、配列番号１及び配列番号２を標的としない代わりに変異遺伝子配列番号４（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＤＲ００６３９５．1）または配列番号７（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＡ３９８２６０．１の相補鎖）を標的とする。
実施例１２１：デオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＧＨＲの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＧＨＲ ｍＲＮＡの顕著なインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において、さまざまな用量で試験した。類似する培養条件を使用する一連の実験でアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、０．６２５μＭ、１．２５μＭ、２．５０μＭ、５．００μＭ、及び１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＧＨＲ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく低減した。
実施例１２２：デオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔギャップマーによるＨｅｐ３Ｂ細胞におけるヒトＧＨＲの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＧＨＲ ｍＲＮＡの顕著なインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において、さまざまな用量で試験した。類似する培養条件を使用する一連の実験でアンチセンスオリゴヌクレオチドを試験した。各実験に関する結果を以下に示す別々の表に掲載する。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、０．０４μＭ、０．１１μＭ、０．３３μＭ、１．００μＭ、及び３．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＧＨＲ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく低減した。
実施例１２３：ＬＬＣ−ＭＫ２細胞におけるアカゲザルＧＨＲの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＧＨＲ ｍＲＮＡの顕著なインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、ＬＬＣ−ＭＫ２細胞において、アカゲザルＧＨＲ ｍＲＮＡに対する効力を試験した。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、０．１２μＭ、０．３７μＭ、１．１１μＭ、３．３３μＭ、及び１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。プライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＧＨＲ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく低減した。
実施例１２４：カニクイザル初代肝細胞におけるＧＨＲの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＧＨＲ ｍＲＮＡの顕著なインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、カニクイザル初代肝細胞において、ＧＨＲ ｍＲＮＡに対する効力を試験した。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、０．１２μＭ、０．３７μＭ、１．１１μＭ、３．３３μＭ、及び１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。プライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＧＨＲ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく低減した。
実施例１２５：Ｈｅｐ３Ｂ細胞におけるＧＨＲの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＧＨＲ ｍＲＮＡの顕著なインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、Ｈｅｐ３Ｂ細胞において、ＧＨＲ ｍＲＮＡに対する効力を、さまざまな用量で試験した。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、０．１２μＭ、０．３７μＭ、１．１１μＭ、３．３３μＭ、及び１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＧＨＲ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく低減した。
実施例１２６：カニクイザル初代肝細胞におけるＧＨＲの用量依存的アンチセンス阻害
上記の試験から、ＧＨＲ ｍＲＮＡの顕著なインビトロ阻害を呈するギャップマーを選択し、カニクイザル初代肝細胞において、ＧＨＲ ｍＲＮＡに対する効力を、さまざまな用量で試験した。細胞を１ウェルあたり３５，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、０．０４μＭ、０．１２μＭ、０．３７μＭ、１．１１μＭ、３．３３μＭ、及び１０．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。プライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。アンチセンスオリゴヌクレオチド処理細胞ではＧＨＲ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく低減した。
実施例１２７：Ｈｅｐ３Ｂ細胞におけるＧＨＲの用量依存的アンチセンス阻害の比較分析
Ｈｅｐ３Ｂ細胞でのさまざまな用量試験によって、ＵＳ ２００６／０１７８３２５に開示されている特定のアンチセンスオリゴヌクレオチドとＩＳＩＳ ５３２４０１を比較した。本明細書に記載した調査で示された効力に基づいてオリゴヌクレオチドを選択した。細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度でプレーティングし、エレクトロポレーションにより、０．１１μＭ、０．３３μＭ、１．００μＭ、、１．１１μＭ、３．００μＭ、及び９．００μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドでトランスフェクトした。約１６時間の処理期間後に、細胞からＲＮＡを単離し、定量リアルタイムＰＣＲによってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３４３７＿ＭＧＢを使ってｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定される全ＲＮＡ含有量に従ってＧＨＲ ｍＲＮＡレベルを調整した。結果を、無処理対照細胞との比較で、ＧＨＲの阻害パーセントとして表す。
各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も掲載する。結果は、ＩＳＩＳ ５３２４０１がＵＳ ２００６／０１７８３２５の最も強力なオリゴヌクレオチドより著しく強力であることを示す。
実施例１２８：ヒトＧＨＲを標的とする５−１０−５ＭＯＥギャップマーのＣＤ１マウスにおける耐容性
ＣＤ１(登録商標）マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，マサチューセッツ州）は多目的マウスモデルであり、、安全性及び効力の試験にはよく利用されている。このマウスを上述の試験から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、さまざまな血漿中化学マーカーのレベルの変化について評価した。
処理
８週齢〜１０週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週に２回、６週にわたって５０ｍｇ／ｋｇ（１週間当たりの投与量１００ｍｇ／ｋｇ）のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。１つの雄ＣＤ１マウス群には、週２回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にマウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、ビリルビン、クレアチニン及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を表２１３に掲載する。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
血液学的アッセイ
すべてのマウス群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）の測定と分析、ならびにＷＢＣ、ＲＢＣ、及び血小板などのさまざまな血液細胞及び総ヘモグロビン含有量の測定のために、Ａｎｔｅｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓに送った。結果を表２１４に掲載する。血液学的マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
実施例１２９：ヒトＧＨＲを標的とする５−１０−５ＭＯＥギャップマーのＣＤ１マウスにおける耐容性
ＣＤ１(登録商標）マウスを上述の試験から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、さまざまな血漿中化学マーカーのレベルの変化について評価した。
処理
８週齢〜１０週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週に２回、６週にわたって５０ｍｇ／ｋｇ（１週間当たりの投与量１００ｍｇ／ｋｇ）のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。１つの雄ＣＤ１マウス群には、週２回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にマウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、ビリルビン、クレアチニン及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を表２１５に掲載する。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
血液学的アッセイ
すべてのマウス群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）の測定と分析、ならびにＷＢ）、ＲＢＣ、及び血小板などのさまざまな血液細胞及び総ヘモグロビン含有量の測定のために、Ａｎｔｅｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓに送った。結果を表２１６に掲載する。血液学的マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
実施例１３０：ヒトＧＨＲを標的とする３−１０−４ＭＯＥギャップマーのＣＤ１マウスにおける耐容性
ＣＤ１(登録商標）マウスを上述の試験から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、さまざまな血漿中化学マーカーのレベルの変化について評価した。
処理
８週齢〜１０週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週に２回、６週にわたって５０ｍｇ／ｋｇ（１週間当たりの投与量１００ｍｇ／ｋｇ）のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。１つの雄ＣＤ１マウス群には、週２回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にマウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、ビリルビン、クレアチニン及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果が以下の表２１７に提示される。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
血液学的アッセイ
すべてのマウス群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）の測定と分析、ならびにＷＢＣ、ＲＢＣ、及び血小板などのさまざまな血液細胞及び総ヘモグロビン含有量の測定のために、Ａｎｔｅｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓに送った。結果が以下の表２１８に提示される。血液学的マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
実施例１３１：ヒトＧＨＲを標的とするデオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔギャップマーのＣＤ１マウスにおける耐容性
ＣＤ１(登録商標）マウスを上述の試験から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、さまざまな血漿中化学マーカーのレベルの変化について評価した。
処理
８週齢〜１０週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週に２回、６週にわたって２５ｍｇ／ｋｇ（１週間当たりの投与量５０ｍｇ／ｋｇ）のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。１つの雄ＣＤ１マウス群には、週２回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にマウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、ビリルビン、クレアチニン及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果が以下の表２１９に提示される。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
血液学的アッセイ
すべてのマウス群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）の測定と分析、ならびにＷＢＣ、ＲＢＣ、及び血小板などのさまざまな血液細胞及び総ヘモグロビン含有量の測定のために、Ａｎｔｅｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓに送った。結果を表２２０に掲載する。血液学的マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
実施例１３２：ヒトＧＨＲを標的とするデオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔギャップマーのＣＤ１マウスにおける耐容性
ＣＤ１(登録商標）マウスを上述の試験から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、さまざまな血漿中化学マーカーのレベルの変化について評価した。３−１０−４ＭＯＥギャップマーＩＳＩＳ５３９３７６も本試験に含めた。
処理
８週齢〜１０週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週に２回、６週にわたって２５ｍｇ／ｋｇ（１週間当たりの投与量５０ｍｇ／ｋｇ）のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。１つの雄ＣＤ１マウス群には、週２回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にマウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、ビリルビン、クレアチニン及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果が表２２１に提示される。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
血液学的アッセイ
すべてのマウス群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）の測定と分析、ならびにＷＢＣ、ＲＢＣ、及び血小板などのさまざまな血液細胞及び総ヘモグロビン含有量の測定のために、Ａｎｔｅｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓに送った。結果を表２２２に掲載する。血液学的マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
実施例１３３：ヒトＧＨＲを標的とするデオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔギャップマーのＣＤ１マウスにおける耐容性
ＣＤ１(登録商標）マウスを上述の試験から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、さまざまな血漿中化学マーカーのレベルの変化について評価した。
処理
８週齢〜１０週齢の雄ＣＤ１マウスの群に、週に２回、６週にわたって２５ｍｇ／ｋｇ（１週間当たりの投与量５０ｍｇ／ｋｇ）のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。１つの雄ＣＤ１マウス群には、週２回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にマウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、ビリルビン、クレアチニン及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を表２２３に掲載する。肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
血液学的アッセイ
すべてのマウス群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）の測定と分析、ならびにＷＢＣ、ＲＢＣ、及び血小板などのさまざまな血液細胞及び総ヘモグロビン含有量の測定のために、Ａｎｔｅｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓに送った。結果を表２２４に掲載する。血液学的マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
実施例１３４：ヒトＧＨＲを標的とするＭＯＥギャップマーのスプレーグ・ドーリーラットにおける耐容性
スプレーグ・ドーリーラットは多目的マウスモデルであり、、安全性及び効力の試験にはよく利用されている。このラットを上述の試験のＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置し、さまざまな血漿中化学マーカーのレベルの変化について評価した。
処理
雄スプレーグ・ドーリーラットを１２時間明／暗周期で飼育し、Ｐｕｒｉｎａ通常ラット飼料ダイエット５００１を不断給餌した。スプレーグ・ドーリーラット各４匹の群に、週２回、６週にわたって、５０ｍｇ／ｋｇ（１週間当たりの投与量１００ｍｇ／ｋｇ）のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にラットを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
肝臓機能
肝臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼの血漿中レベルを測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）とＡＳＴ（アスパラギン酸トランスアミナーゼ）の血漿中レベルを測定し、結果をＩＵ／Ｌの単位で表して、表２２５に掲載する。同臨床化学分析装置を使用してビリルビンの血漿中レベルも測定した。その結果もｍｇ／ｄＬの単位で表して、表２２５に掲載する。肝臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、血中尿素窒素（ＢＵＮ）及びクレアチニンの血漿中レベルを測定した。結果をｍｇ／ｄＬの単位で表して、表２２６に掲載する。腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
血液学的アッセイ
すべてのラット群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）の測定と分析、ならびにＷＢＣ、ＲＢＣ、及び血小板などのさまざまな血液細胞及び総ヘモグロビン含有量の測定のために、Ａｎｔｅｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓに送った。結果を表２２７に掲載する。血液学的マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
臓器重量
試験終了時に肝臓、心臓、脾臓及び腎臓の重量を測定し、表２２８に掲載する。臓器重量をアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
実施例１３５：ヒトＧＨＲを標的とするデオキシ、ＭＯＥ及び(Ｓ)−ｃＥｔギャップマーのスプレーグ・ドーリーラットにおける耐容性
上記の実施例に記載した試験のＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドでスプレーグ・ドーリーラットを処理し、さまざまな血漿化学マーカーレベルの変化を評価した。
処理
雄スプレーグ・ドーリーラットを１２時間明／暗周期で飼育し、Ｐｕｒｉｎａ通常ラット飼料ダイエット５００１を不断給餌した。スプレーグ・ドーリーラット各４匹の群に、週１回、６週にわたって、５０ｍｇ／ｋｇ（１週間当たりの投与量５０ｍｇ／ｋｇ）のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを皮下注射した。ラットの２群には、週１回、６週にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にラットを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
肝臓機能
肝臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼの血漿中レベルを測定した。ＡＬＴとＡＳＴの血漿中レベルを測定し、結果をＩＵ／Ｌの単位で表して、表２２９に掲載する。同臨床化学分析装置を使用してビリルビンの血漿中レベルも測定した。その結果もｍｇ／ｄＬの単位で表して、表２２９に掲載する。肝臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、血中尿素窒素（ＢＵＮ）及びクレアチニンの血漿中レベルを測定した。結果を表２３０に掲載する。腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
血液学的アッセイ
すべてのラット群から得た血液を、ヘマトクリット（ＨＣＴ）の測定と分析、ならびにＷＢＣ、ＲＢＣ、及び血小板などのさまざまな血液細胞及び総ヘモグロビン含有量の測定のために、Ａｎｔｅｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓに送った。結果を表２３１に掲載する。血液学的マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
臓器重量
試験終了時に肝臓、心臓、脾臓及び腎臓の重量を測定し、表２３２に掲載する。臓器重量をアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させたＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、その後の試験では除外した。
実施例１３６：ヒトＧＨＲを標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの、カニクイザルにおける効果
カニクイザルを、上述の試験から選択したＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで処置した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの効力と耐容性、ならびに肝臓及び腎臓におけるそれらの薬物動態プロファイルを評価した。
この試験を企画した時点で、国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）データベースにカニクイザルゲノム配列がなかったので、カニクイザル遺伝子配列との交差反応性を確認することはできなかった。その代わりに、カニクイザルに使用するＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列を、ホモロジーについて、アカゲザル配列と比較した。アカゲザル配列に対してホモロジーを有するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドはカニクイザル配列とも十分に交差反応性であると予想される。試験したヒトアンチセンスオリゴヌクレオチドはアカゲザルゲノム配列（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＷ＿００１１２０９５８．１、ヌクレオチド４４１００００から４７２００００までを切り出したもの、本明細書では配列番号２３３２と呼ぶ）と交差反応性である。ヒトオリゴヌクレオチドとアカゲザル配列の間の相補性が大きいほど、そのヒトオリゴヌクレオチドがアカゲザル配列と交差反応できる可能性は高くなる。表２３３には、配列番号２３３２に対する各オリゴヌクレオチドの開始部位と終止部位を掲載する。「開始部位」とは、アカゲザル遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。
処理
試験に先だって、サルを隔離し続け、その期間中は全身の健康状態について動物を毎日観察した。サルは２〜４歳で、体重は２〜４ｋｇであった。ランダムに割り当てた雄カニクイザル各５匹の９群に対し、適切な大きさのステンレス製投与針とシリンジを使用して、関節包内領域及び大腿部外側にＩＳＩＳオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを、皮下注射した。最初の１週間はサルに３回（１日目、４日目、及び７日目）にわたって投与し、次に４０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、週１回、１２週にわたって投与した。カニクイザル５匹の対照群に対し、同様の方法でＰＢＳを注射し対照群としての役を果たした。
試験期間中、サルに病気と苦痛の兆候について１日２回観察された。処置、怪我または病気に起因する一瞬の痛みまたは軽い痛み、または苦痛以上の経験をしたいずれの動物に対しても、動物病院スタッフが研究医と相談した後に鎮痛薬や痛みを緩和する薬剤で処理した。病弱または瀕死状態にある動物のいずれに対しても、更なる観察と安楽死の可能性を確認した。８６日目に、ケタミン／キシラジン誘導麻酔及びペントバルビタールナトリウムの投与後放血によって計画した安楽死を実行した。実施例に記載したプロトコルが実験動物委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可された。
肝臓標的の低減
ＲＮＡ分析
８６日目に、ＧＨＲのｍＲＮＡ発現量を測定するためのリアルタイムＰＣＲ分析用に、ＲＮＡを肝臓試、白色脂肪組織（ＷＡＴ）及び腎臓から抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）で標準化し、ＰＢＳ対照と比較した、ｍＲＮＡの変化率（パーセント）として掲載する。「ｎ．ｄ」は、特定のオリゴヌクレオチドのデータが測定されていないことを示す。表２３４に示すとおり、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置は、ＰＢＳ対照との比較で、ＧＨＲ ｍＲＮＡの著しい低減をもたらした。具体的には、ＩＳＩＳ５３２４０１による処置が全組織におけるｍＲＮＡ発現量の著しい減少をもたらした。
タンパク質分析
８５日目に利用可能なすべての動物から約１ｍＬの血液を採取して、ＥＤＴＡのカリウム塩が入っているチューブに入れた。そのチューブを遠心分離（３０００ｒｐｍ、室温で１０分間）することにより、血漿を得た。ＩＧＦ−１及びＧＨの血漿中レベルを測定した。結果を表２３５に掲載する。結果は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる処理が結果的にＩＧＦ−１タンパク質レベルを低減させることを示す。
耐容性試験
体重及び臓器重量の測定
動物の総合的健康に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、体重及び臓器重量を測定した。体重を８４日目に測定し、表２３６に掲載する。臓器重量臓を８６日目に測定し、そのデータも表２３６に掲載する。これらの結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置が体重及び臓器重量に及ぼす効果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲内であったことを示している。具体的には、ＩＳＩＳ ５３２４０１による処置がサルの体重及び臓器重量に関して良好な耐容性を示した。
肝臓機能
肝臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、すべての試験群から血液試料を集めた。大腿静脈穿刺を介して投与の４８時間後に血液試料を採取した。サルを血液採取前に夜間絶食させた。Ｋ２−ＥＤＴＡ抗凝血剤を含有するチューブに血液を採取し、遠心分離して血漿を得た。東芝２００ＦＲ ＮＥＯ化学分析装置（東芝、日本）を使って、さまざまな肝臓機能レベルを測定した。ＡＬＴ、ＡＳＴ及びビリルビンの血漿中レベルを測定した。結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外の肝臓機能に対する影響を有しないことを示す。具体的には、ＩＳＩＳ ５３２４０１による処置がサルの肝臓機能に関して良好な耐容性を示した。
腎臓機能
腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、すべての試験群から血液試料を集めた。大腿静脈穿刺を介して投与の４８時間後に血液試料を採取した。サルを血液採取前に夜間絶食させた。Ｋ２−ＥＤＴＡ抗凝血剤を含有するチューブに血液を採取し、遠心分離して血漿を得た。東芝２００ＦＲ ＮＥＯ化学分析装置（東芝、日本）を使って、ＢＵＮ及びクレアチニンのレベルを測定した。
血漿化学データは、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドのほとんどがアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外のいかなる影響も腎臓機能に対して有しないことを示す。具体的には、ＩＳＩＳ５３２４０１による処置がサルの腎臓機能に関して良好な耐容性を示した。
血液学
カニクイザル中のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドが血液学的パラメーターに及ぼす影響を評価するために、利用可能な試験動物のそれぞれから、血液約１．３ｍＬの血液試料を、Ｋ２−ＥＤＴＡが入っているチューブに集めた。ＡＤＶＩＡ１２０血液分析装置（Ｂａｙｅｒ、米国）を使って、試料を、赤血球（ＲＢＣ）数、白血球（ＷＢＣ）数、個別白血球数、例えば単球、好中球、リンパ球の数、ならびに血小板数、ヘモグロビン含量及びヘマトクリットについて分析した。
このデータは、前記オリゴヌクレオチドが、この用量では、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲から外れる変化を血液学的パラメーターに引き起こさなかったことを示している。具体的には、ＩＳＩＳ５３２４０１による処置がサルの血液学的パラメーターに関して良好な耐容性を示した。
Ｃ反応性タンパク質レベル分析
カニクイザル中のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドに及ぼすなんらかの影響を評価するために、分析用の血液試料を採取した。サルを血液採取前に夜間絶食させた。各動物から約１．５ｍＬの血液を集めて、血清分離用の抗凝血剤を含まないチューブに入れた。そのチューブを最低９０分間、室温に維持し、次いで室温下で１０分間、３０００ｒｐｍで遠心分離し、血清を得た。東芝２００ＦＲ ＮＥＯ化学分析装置（東芝、日本）を使用して、肝臓で合成されて炎症マーカーとして効果があるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を測定した。結果は、ＩＳＩＳ５３２４０１による処理によってサルに炎症が起こらないことを示す。
実施例１３７：ヒトＧＨＲを標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度の測定
４０ｃＰより大きい粘度を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを排除する目的で、上記の実施例に記載した試験から選択したアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度を測定した。４０ｃＰより大きい粘度を有するオリゴヌクレオチドは大き過ぎていずれの対象にも投与することができない。
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド（３２-３５ｍｇ）をガラス製の小型薬瓶に計量し、１２０μＬの水を加えた。アンチセンスオリゴヌクレオチドを５０℃で加熱して溶解し溶液状態にした。予熱した試料の一部（７５μＬ）をマイクロ粘度計（ケンブリッジ）に分注した。マイクロ粘度計の温度を２５℃に設定し、試料の粘度を測定した。８５℃で２６０ｎＭを読み取るＵＶ（Ｃａｒｙ ＵＶ機器）用に、予熱した試料の別の一部（２０μＬ）を１０ｍＬの水に分注した。結果を表２３７に掲載する。結果は、全てのアンチセンスオリゴヌクレオチドが上述基準を下回る粘度にあり、最適であることを示す。
実施例１３８：マウスモデルにおけるＧａｌＮＡｃ３−７との共役ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド対非共役ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果
マウスＧＨＲを標的とし、かつＧａｌＮＡｃ３−７と共役または非共役のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効力と耐容性をＢＡＬＢ／ｃマウスで試験した。ＢＡＬＢ／ｃマウスは多目的マウスモデルであり、安全性及び効力の試験にはよく利用されている。
オリゴヌクレオチドは全て５−１０−５ＭＯＥギャップマー（２０ヌクレオシド長）であり、中央のギャップセグメントは１０個の２’−デオキシヌクレオシドで構成され、５’側と３’側にそれぞれ５個のヌクレオシドを含むウイングセグメントが隣接している。５’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドと３’ウイングセグメント中の各ヌクレオシドは２’−ＭＯＥ修飾を有する。ヌクレオシド間連結部は、各ギャップマーの全体を通して、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）連結部である。各ギャップマーの全体を通してシトシン残基は、すべて、５−メチルシトシンである。「開始部位」とは、マウス遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」とは、ヒト遺伝子配列中で当該ギャップマーの標的になる最も３’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示す各ギャップマーは、本明細書において配列番号２３３３（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号NM_０１０２８４．２）と呼ぶマウスＧＨＲ ｍＲＮＡを標的とする。オリゴヌクレオチドを以下の表に詳述する。
処理
７週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの２群に、４週にわたって、週１０ｍｇ／ｋｇ、週２５ｍｇ／ｋｇまたは週５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ ５６３２２３またはＩＳＩＳ ５６３１７９を皮下注射した。７週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの２群に、４週にわたって、週１ｍｇ／ｋｇ、週５ｍｇ／ｋｇまたは週１０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ ７０６９３７ またはＩＳＩＳ ７３９９４９を皮下注射した。雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの１群に対し、４週にわたってＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にマウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
標的の低減
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効力を評価するために、血漿ＩＧＦ−１レベル及び肝臓におけるＩＧＦ−１とＧＨＲのｍＲＮＡ発現レベル、ならびに脂肪および腎臓組織におけるＧＨＲのｍＲＮＡ発現レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。
結果は、ＧａｌＮＡｃ３−７共役オリゴヌクレオチド、ＩＳＩＳ ７０６９３７とＩＳＩＳ ７３９９４９が同じ配列をもつ親オリゴヌクレオチド、ＩＳＩＳ ５６３２２３とＩＳＩＳ ５６３１７９より、ＧＨＲ肝ｍＲＮＡレベルの減少では７〜８倍、肝臓及び血漿ＩＧＦ―１レベルの減少では６〜８倍強力であった。ＧａｌＮＡｃ３−７共役群が肝臓を特異的に標的としたために、ＧａｌＮＡｃ３−７共役オリゴヌクレオチドを用いて腎臓及び脂肪組織でＧＨＲの発現レベルが減少しなかった。ＧａｌＮＡｃ３−７共役オリゴヌクレオチドによる脂肪及び腎臓における前記減少の喪失はＩＧＦ―１の減少に影響を及ぼさなかった。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＡＵ４８０， Ｂｒｅａ， ＣＡ）を使って、トランスアミナーゼ、ビリルビン、グルコース、コレステロール及びトリグリセリドの血漿中レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドのいずれも肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれかのレベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させなかった。ＧａｌＮＡｃ３−７共役オリゴヌクレオチドは、親のオリゴヌクレオチドのプロファイルよりもわずかに改善した。
この結果は、ＧＨＲ ｍＲＮＡ発現を標的とするオリゴヌクレオチドプロファイルがＧａｌＮＡｃ３−７と共役したときに、親オリゴヌクレオチドと比較して１０倍強力であり、かつ同等または改善された耐容性プロファイルを持つことを示す。
実施例１３９：マウスにおけるヒトＧＨＲを標的とし、かつＧａｌＮＡｃ３−７と共役したＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの耐容性試験
ＩＳＩＳ ７６６７２０を、上記の試験で記載したヒトＧＨＲを標的とする強力かつ耐容性のオリゴヌクレオチド、ＩＳＩＳ ５３２４０１と同じ配列で設計した。ＩＳＩＳ ７６６７２０は、ＧａｌＮＡｃ３−７と共役した混合骨格化学を持つ５−１０−５ＭＯＥギャップマーである。ＧａｌＮＡｃ３−７共役基を持たないＩＳＩＳ ７６６７２０の化学構造は、ｍＣｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅｏ ｍＣｅｏ ｍＣｅｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ ｔｄｓ Ｇｄｓ Ａｄｓ Ａｄｓ Ｔｅｏ Ａｅｏ Ｇｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅ （配列番号７０３）として表示され、完全には以下で表示される：
処理
６週齢の雄ＣＤ−１マウスの群に、６週にわたって、週２５ｍｇ／ｋｇ、週５０ｍｇ／ｋｇまたは週１００ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ７６６７２０を皮下注射した。マウスの１群に、６週（１日目、５日目、１５日目、２２日目、２９日目、３６日目、及び４３日目）にわたって、ＰＢＳを皮下注射した。最後の投薬の４８時間後にマウスを安楽死させ、さらなる分析のために臓器及び血漿を収集した。
血漿中化学マーカー
肝臓機能及び腎臓機能に対するＩＳＩＳ７６６７２０の効果を評価するために、自動臨床化学分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ，ニューヨーク州メルビル）を使って、トランスアミナーゼ、ビリルビン、クレアチニン及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を以下の表に掲載する。ＩＳＩＳ７６６７２０は、肝臓機能マーカーまたは腎臓機能マーカーのいずれのレベルもアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させることはなく、非常に耐容性であると見なされた。
体重及び臓器重量
試験終了時に体重及び臓器重量を測定した。結果を以下の表に掲載する。ＩＳＩＳ ７６６７２０は、重量をアンチセンスオリゴヌクレオチドに予想される範囲外にまで変化させることはなく、非常に耐容性であると見なされた。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１の核酸塩基３０〜５１、６３〜８２、１０３〜１１８、１４３〜１５９、１６４〜１９７、２０６〜２５９、３６１〜３８８、５５４〜５８５、６２５〜７００、７３６〜７７６、８６２〜８８７、９２３〜９７３、９７８〜９９６、１１２７〜１１４２、１１７０〜１１９５、１３１７〜１３４７、１３６０〜１３８３、１４１８〜１４４９、１４９２〜１５０７、１５２４〜１５４８、１５９７〜１６３４、１６４１〜１６６０、１６８３〜１６９８、１７４４〜１７６８、１８２７〜１８６０、１９４９〜２００２、２０７２〜２０９２、２０９５〜２１１０、２３０６〜２３２１、２６６５〜２６８３、２６８５〜２７１９、２７３９〜２７７０、２８５９〜２８８０、２９４１〜２９６０、２９６３〜２９７８、３０３７〜３０５２、３２０５〜３２５２、３３０６〜３３３２、３３７１〜３３８６、３５１８〜３５４２、３９７５〜３９９０、４０４１〜４０８７、４４１８〜４４４６、４５２８〜４５４６、７２３１〜７２４６、７５７０〜７５８５、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１１８０８、１２２１４〜１２２２９、１２４７４〜１２４８９、１２９０５〜１２９２０、１３４００〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４５４０〜１４５５５、１５２６４〜１５２７９、１５８４９〜１５８６４、１６５３０〜１６５４５、１７３７７〜１７３９２、１７５８１〜１７５９６、１７９４３〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８６５１、１９２５６〜１９２７１、１９８１４〜１９８２９、２０３６５〜２０３８０、２０９７９〜２０９９４、２１５６６〜２１５８１、２２１５０〜２２１６５、２２８０３〜２２８１８、２９０４９〜２９０６４、２９５５４〜２９５６９、３０２４５〜３０２６０、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３０９３０、３１４６８〜３１４８３、３２３６６〜３２３８１、３２８９７〜３２９１２、３３１８７〜３３２０２、３３７８０〜３３７９５、３４４０７〜３４４２２、３４８４６〜３４８６１、３５６６９〜３５６８４、３６３１２〜３６３２７、３６８１２〜３６８２７、３７５０４〜３７５１９、３８８４１〜３８８５６、４０２５０〜４０２６５、４０７０６〜４０７２１、４０９２２〜４０９３７、４１４２４〜４１４３９、４１９９９〜４２０１４、４２４８１〜４２４９６、４２７００〜４２７１５、４３２９１〜４３３０６、４３５００〜４３５１５、４３９４７〜４３９６２、４４４４８〜４４４６３、４５１６２〜４５１７７、４６０１０〜４６０２５、４６４７６〜４６４９１、４７４４７〜４７４６２、４７７５２〜４７７６７、４８００１〜４８０１６、４８４２３〜４８４３８、５０１９５〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５１１０４〜５１１１９、５１７５６〜５１７７１、５２０１５〜５２０３０、５２２３０〜５２２４５、５２５８８〜５２６０３、５３５３２〜５３５４７、または５４６４５〜５４６６０内で相補的な８〜８０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、前記化合物。
［態様２］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１の核酸塩基３０〜５１、６３〜８２、１０３〜１１８、１４３〜１５９、１６４〜１９７、２０６〜２５９、３６１〜３８８、５５４〜５８５、６２５〜７００、７３６〜７７６、８６２〜８８７、９２３〜９７３、９７８〜９９６、１１２７〜１１４２、１１７０〜１１９５、１３１７〜１３４７、１３６０〜１３８３、１４１８〜１４４９、１４９２〜１５０７、１５２４〜１５４８、１５９７〜１６３４、１６４１〜１６６０、１６８３〜１６９８、１７４４〜１７６８、１８２７〜１８６０、１９４９〜２００２、２０７２〜２０９２、２０９５〜２１１０、２３０６〜２３２１、２６６５〜２６８３、２６８５〜２７１９、２７３９〜２７７０、２８５９〜２８８０、２９４１〜２９６０、２９６３〜２９７８、３０３７〜３０５２、３２０５〜３２５２、３３０６〜３３３２、３３７１〜３３８６、３５１８〜３５４２、３９７５〜３９９０、４０４１〜４０８７、４４１８〜４４４６、４５２８〜４５４６、７２３１〜７２４６、７５７０〜７５８５、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１１８０８、１２２１４〜１２２２９、１２４７４〜１２４８９、１２９０５〜１２９２０、１３４００〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４５４０〜１４５５５、１５２６４〜１５２７９、１５８４９〜１５８６４、１６５３０〜１６５４５、１７３７７〜１７３９２、１７５８１〜１７５９６、１７９４３〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８６５１、１９２５６〜１９２７１、１９８１４〜１９８２９、２０３６５〜２０３８０、２０９７９〜２０９９４、２１５６６〜２１５８１、２２１５０〜２２１６５、２２８０３〜２２８１８、２９０４９〜２９０６４、２９５５４〜２９５６９、３０２４５〜３０２６０、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３０９３０、３１４６８〜３１４８３、３２３６６〜３２３８１、３２８９７〜３２９１２、３３１８７〜３３２０２、３３７８０〜３３７９５、３４４０７〜３４４２２、３４８４６〜３４８６１、３５６６９〜３５６８４、３６３１２〜３６３２７、３６８１２〜３６８２７、３７５０４〜３７５１９、３８８４１〜３８８５６、４０２５０〜４０２６５、４０７０６〜４０７２１、４０９２２〜４０９３７、４１４２４〜４１４３９、４１９９９〜４２０１４、４２４８１〜４２４９６、４２７００〜４２７１５、４３２９１〜４３３０６、４３５００〜４３５１５、４３９４７〜４３９６２、４４４４８〜４４４６３、４５１６２〜４５１７７、４６０１０〜４６０２５、４６４７６〜４６４９１、４７４４７〜４７４６２、４７７５２〜４７７６７、４８００１〜４８０１６、４８４２３〜４８４３８、５０１９５〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５１１０４〜５１１１９、５１７５６〜５１７７１、５２０１５〜５２０３０、５２２３０〜５２２４５、５２５８８〜５２６０３、５３５３２〜５３５４７、または５４６４５〜５４６６０のうちの長さが等しい部分に１００％相補的な少なくとも８個の連続する核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する８〜８０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、前記化合物。
［態様３］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号２の核酸塩基２５７１〜２５８６、２８６７〜３０５９、３０９７〜３１１６、３３４１〜３６９５、４０２４〜４０３９、４４４６〜４８９４、５３９２〜５８１７、６１２８〜６２６５、６４９９〜６８９０、７２３１〜７２４６、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１０６６０〜１０６７９、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１２２２９、１２４６９〜１２９２０、１３３５１〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４３６１〜１４５５５、１４９６５〜１５２７９、１５８４９〜１６００１、１６２５３〜１６２７２、１６４４７〜１６５４５、１７１３０〜１７１４９、１７３７７〜１７６６９、１７９２７〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８７７３、１９６６１〜１９９１８、２０２８８〜２０４７０、２０９７９〜２０９９４、２１２１５〜２１６０６、２１８２０〜２１８３７、２２１５０〜２２１６５、２２５１８〜２２５３６、２２８０３〜２２８１８、２６４９４〜２６５２２、２９０４９〜２９０６９、２９３２３〜２９４８９、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３１１９１、３１４６８〜３１４８３、３２３６３〜３２３８２、３２８２７〜３３２０２、３３６３５〜３３７９５、３４１３８〜３４１５７、３４４０７〜３４４２２、３４８４５〜３４８６４、３５４６６〜３５４８５、３５６６９〜３５６８４、３６０２３〜３６０４２、３６２６６〜３６３２７、３６７２１〜３６８２７、３７０３２〜３７１３０、３７２７６〜３７２９５、３７５０４〜３７６７５、３８０９４〜３８１１８、３８８４１〜３８８５６、３９７１６〜４０５３８、４０７０６〜４０９３７、４１１６４〜４１１８３、４１３４２〜４１４３９、４２１４１〜４２１６４、４２７００〜４２７６０、４３１７３〜４３５３７、４３７６５〜４６０２５、４６４７６〜４６５３２、４８４２３〜４８４３８、５００７２〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５０７１９〜５１２３４、５１７４７〜５１７９７、５２０１５〜５２１４３、５２２３０〜５２２４５、５２５７３〜５２６５２、５３４６６〜５４６６０、５４８８６〜５４９０１、６３７５１〜６４６６２、６４８８２〜６５０９９、６５３６３〜６５３７８、６５６００〜６５６１５、６５９８８〜６６１８３、６６５６６〜６６５８１、６６９７８〜６７０８０、６７２５１〜６７２７０、６７６６２〜６７９２９、６８７２７〜６８７４２、６９２０３〜６９２４２、６９５６５〜６９６２０、６９８８９〜７０１４５、７０３５２〜７０５８４、７０９２５〜７１０７１、７１３１４〜７１３２９、７１６１７〜７１７６９、７２１０７〜７２２４１、７２５８４〜７２６７０、７３０６１〜７３０７６、７３３５０〜７３３６９、７３６８９〜７３７２３、７４１０７〜７４１３１、７４３１７〜７４５５７、７４９４７〜７５００９、７５１９２〜７５２０７、７５９７９〜７６０６６、７６４１０〜７７０９５、７７２９２〜７７３０７、７７６３８〜７７８６９、７８１２２〜７８３２６、７９００６〜７９０２１、７９４７８〜７９５０５、８０２７７〜８０２９２、８０５７５〜８０９３９、８１２０７〜８１２２２、８１５２４〜８１５４３、８１７６１〜８１７７６、８２２３３〜８２２４８、８２７３８〜８３１９８、８３３３０〜８３４１６、８３８８４〜８４０６３、８４３８１〜８５９６４、８６２２０〜８６３９２、８６５５４〜８６６５５、８６９０１〜８６９２０、８７１８１〜８７２６２、８８０６３〜８８０８２、８８２９３〜８８３０８、８８６０５〜８８９６７、８９１６０〜８９１７５、８９９４０〜９０２５５、９０４７３〜９０５２８、９１０７３〜９１０８８、９１２７３〜９１２９２、９１６４７〜９１６６２、９１９３０〜９２１２６、９２３５６〜９２３７１、９３１９０〜９３４４３、９３７６２〜９４１１１、９４３７４〜９４３８９、９４５８１〜９４６５３、９４８３９〜９４８５８、９５２９２〜９５５８３、９５８２９〜９５８４４、９６１３７〜９６５０３、９６７９３〜９７０１３、９７５３９〜９７５５４、９７８００〜９７８８９、９８１３２〜９８１５１、９８６２４〜９８６７２、９８８１０〜９９１１５、９９２５８〜９９２７３、９９４７８〜９９５０３、９９７９１〜９９８５８、１００２８１〜１００３００、１００４０６〜１００４２１、１００７４２〜１００８２８、１０１０８０〜１０１１０３、１０１２４２〜１０１３２０、１０１７８８〜１０１９０６、１０２５４９〜１０２５６８、１０３５６６〜１０３６２５、１０４０６７〜１０４０８６、１０４２７７〜１０４８５８、１０５２５５〜１０５２７４、１０６１４７〜１０６３６４、１０６６３２〜１０６６４７、１０６９６４〜１０７７３５、１０８５１４〜１０８７８８、１０９３３６〜１０９５０５、１０９８４９〜１０９８６４、１１０４０３〜１１０４４２、１１０７０１〜１１０９７４、１１１２０３〜１１１３２２、１１２０３０〜１１２０４９、１１２４９９〜１１２５１４、１１２８４２〜１１２８６１、１１３０２８〜１１３０５６、１１３６４６〜１１３６６５、１１３８９６〜１１３９１１、１１４４４６〜１１４４６５、１１５０８７〜１１５１０６、１１９２６９〜１１９２８４、１１９６５９〜１１９７０３、１２０３７６〜１２０４９７、１２０７３８〜１２０８４５、１２１２０９〜１２１２２８、１２１８２３〜１２２０１３、１２２１８０〜１２２１９９、１２２５８８〜１２２７７０、１２３０３１〜１２３０５０、１２３１５２〜１２３１６７、１２３６７１〜１２４０５５、１２４４１３〜１２４６０８、１２５１７８〜１２５１９７、１２５５３３〜１２５６１６、１２６３５７〜１２６４３４、１２６７３６〜１２６７５１、１２６９９８〜１２７２３６、１２７４５４〜１２７６８２、１２８４６７〜１２８４８２、１２８８１３〜１２９１１１、１２９９７６〜１３００１３、１３０３０８〜１３０３２３、１３１０３６〜１３１０５６、１３１２８６〜１３１３０５、１３１６７６〜１３１６９１、１３２１７１〜１３２５１７、１３３１６８〜１３３２４１、１３３５２２〜１３３８７７、１３４０８６〜１３４１０１、１３４２４０〜１３４２５９、１３４４４１〜１３４６１７、１３５０１５〜１３５０３０、１３５４３１〜１３５５１９、１３５８１８〜１３５８７４、１３６１１１〜１３６１３０、１３６２８２〜１３６５９５、１３６９９６〜１３７１５２、１３７３７２〜１３７３８７、１３７７５０〜１３７７６５、１３８０４８〜１３８０６７、１３８７８２〜１３９８４０、１４０３４３〜１４０３５８、１４０５９３〜１４０７０１、１４１１１６〜１４１１３１、１４１５９１〜１４１７１９、１４２１１３〜１４２３４２、１４３０２１〜１４３０４８、１４３１８５〜１４３４８６、１４３８３６〜１４４１０９、１４４５５８〜１４４６５０、１４４９９０〜１４５０７８、１４５４２８〜１４５５２５、１４５９３７〜１４５９５２、１４６２３５〜１４６３８６、１４７０２８〜１４７０４３、１４７２５９〜１４７２８４、１４７６７１〜１４７６８６、１４８０５９〜１４８１５４、１４８５６４〜１４８５７９、１４８９０４〜１４９０８４、１４９４９１〜１４９５０６、１４９７８７〜１４９８７７、１５０２３６〜１５０２５１、１５０５８８〜１５１１３９、１５１３７３〜１５１６５９、１５２２０１〜１５２３８８、１５２５４９〜１５２７７１、１５３００１〜１５３０２６、１５３３４９〜１５３３６４、１５３８３１〜１５４１１２、１５４１７１〜１５４１８６、１５４５０２〜１５４５２１、１５４７２４〜１５４８２８、１５５２８３〜１５５３０４、１５５５９１〜１５５６１６、１５５８８９〜１５５９９２、１５６２３３〜１５６６１２、１５６８４７〜１５６９０７、１５７１９８〜１５７２２３、１５７３３０〜１５７３４９、１５７５５２〜１５７５６７、１５７９２７〜１５８０２９、１５８５４２〜１５８６３１、１５９２１６〜１５９２６７、１５９５３９〜１５９７９３、１６０３５２〜１６０４２９、１６０８１２〜１６０８２７、１６１２４８〜１６１２６７、１６１４６１〜１６１６０７、１６１８２１〜１６１９６９、１６２０６４〜１６２０８３、１６２１３２〜１６２１４７、１６２５３１〜１６２７７０、１６３０１９〜１６３５５７、１６４８３９〜１６５０５９、１６５４１９〜１６５５７５、１６５８５６〜１６５８７５、１６６２４１〜１６６４５０、１６６８３７〜１６６８５２、１６７１０７〜１６７１２２、１６８００４〜１６８０１９、１６８７６０〜１６８８２３、１６９０６２〜１６９０９２、１６９１３４〜１６９１５３、１６９６０１〜１６９７１１、１７００８１〜１７０２９１、１７０４０７〜１７０４２６、１７０７０３〜１７０８１４、１７１０２１〜１７１０３６、１７１２０７〜１７１２２６、１７１４３１〜１７１５６８、１７１９２６〜１７１９４５、１７２４４７〜１７２４６２、１７２７３３〜１７２９５６、１７３０４５〜１７３７５６、１７４１２２〜１７４８８５、１７５０１４〜１７７８３０、１７８８９５〜１８０５３９、１８１５１４〜１８７６４４、１８７８５７〜１８９９０４、１９０１０９〜１９４１５９、１９４４２５〜１９５７２３、１９６５３６〜１９６８７３、１９７３２６〜１９７９６１、１９８１４５〜１９８１７０、１９８３０７〜１９８３８１、１９８７１５〜１９９００７、１９９５０６〜１９９５６３、１９９８１６〜１９９８３８、２００２４９〜２００６３５、２０１２５８〜２０１８６１、２０２０７９〜２０２０９４、２０２３８２〜２０２７１７、２０３０９８〜２０３９３４、２０４１８１〜２０４７４０、２０５５４９〜２０５９１５、２０６４１２〜２０６７６４、２０７５１０〜２０７５３２、２０９９９９〜２１００１４、２１０１８９〜２１０２９６、２１０５０２〜２１０５８３、２１０９２０〜２１１４１８、２１１８３６〜２１２２２３、２１２６０６〜２１２８１６、２１３０２５〜２１３０４４、２１３４２５〜２１３４４０、２１３８２５〜２１３９３３、２１４４７９〜２１４４９８、２１４６２２〜２１４６４７、２１４８８４〜２１４９５１、２１５４４６〜２１５５０８、２１５９３２〜２１５９５１、２１６１９２〜２１７５９５、２１８１３２〜２１８２４８、２１８５２６〜２１８５４１、２１８７３４〜２１２１９０３７、２１９３４２〜２１９６３３、２１９８８６〜２２０７０５、２２１０４４〜２２１０５９、２２１４８３〜２２１６０７、２２１９４７〜２２１９６２、２２２５６９〜２２２５８４、２２２９１４〜２２２９９８、２２３４３６〜２２３４５１、２２３９４８〜２２４１２２、２２４４０９〜２２４４３０、２２４７１７〜２２４７６９、２２５１３３〜２２５１４８、２２５４３６〜２２５７６１、２２６７８５〜２２６８９８、２２７０２５〜２２７０４０、２２７２１８〜２２７２５１、２２７４８５〜２２７５００、２２７９１４〜２２８８３７、２２９１７４〜２２９１８９、２２９４２３〜２２９４３８、２２９６１５〜２２９６４０、２３００４２〜２３００５７、２３０３１３〜２３０５９５、２３１２１８〜２３１３４５、２３１８１７〜２３２０３７、２３２０８８〜２３２４０８、２３２８２３〜２３２８４８、２３２８８４〜２３２８９９、２３３２１０〜２３３２２５、２３３６２３〜２３３６４６、２３４４４７〜２３４４６６、２３４８７６〜２３４９１８、２３５２５８〜２３５３２８、２３５７７０〜２３５７８５、２３６０７１〜２３６２１３、２３６６８４〜２３７１９６、２３７５８５〜２３７６９８、２３７９４９〜２３７５５７、２４４８７３〜２４４８９７、２４５３１９〜２４５３３４、２４５７０１〜２４５７８０、２４６１５２〜２４６５２３、２４６９３６〜２４７０３１、２４７２０３〜２４７２４０、２４７４３１〜２４７４５０、２４７６４４〜２４７６５

９、２４８２２３〜２４８３６３、２４８６９４〜２４８７６２、２４９４９４〜２４９５０９、２５０００１〜２５００２０、２５０６９３〜２５０７０８、２５１２１４〜２５１２３３、２５１６０１〜２５１６３７、２５１９５０〜２５２０６０、２５２６６５〜２５２６８０、２５２８３８〜２５２８６３、２５３１４０〜２５３１６６、２５３５９４〜２５３８１９、２５４０３６〜２５４０８３、２５４２４６〜２５４３４５、２５４６４１〜２５４６６０、２５４９０５〜２５４９２０、２５５３９７〜２５５４２２、２５５６１８〜２５５６３３、２５５９９２〜２５６７０４、２５７０１８〜２５７０９２、２５７３１７〜２５７３３２、２５７８１８〜２５９３０５、２５９５００〜２５９５１５、２６１２９４〜２６１６５６、２６２０２１〜２６２０３６、２６２４５３〜２６２７７９、２６３３３８〜２６６５１８、２６６８６１〜２６７１３１、２６７３７５〜２６８０５１、２６８３６６〜２６９４４７、２７００３８〜２７１８５０、２７１９５０〜２７１９６９、２７２６３１〜２７４１４５、２７４２０５〜２７５７４７、２７５８０８〜２７６６３６、２７６９３２〜２７７０６４、２７７３９１〜２７８３８０、２７８９３２〜２７９０６３、２７９３０３〜２８１００１、２８１５８７〜２８１６１０、２８２２２９〜２８３６６８、２９００３５〜２９０４７４、２９０９２４〜２９２５５０、２９２８６０〜２９４４０８、２９５４７５〜２９７０１２、２９７５８７〜２９８１１５、２９８１６１〜２９８４１８、２９８４８９〜２９８７３８、２９９０８２〜２９９１８７、２９９２７６〜２９９６６９、２９９７２３〜２９９７４９、２９９７８８〜３００５０４、または３００８３５〜３０１２９５内で相補的な８〜８０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、前記化合物。
［態様４］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号２の核酸塩基２５７１〜２５８６、２８６７〜３０５９、３０９７〜３１１６、３３４１〜３６９５、４０２４〜４０３９、４４４６〜４８９４、５３９２〜５８１７、６１２８〜６２６５、６４９９〜６８９０、７２３１〜７２４６、８３９５〜８４１０、９１５３〜９１６８、９５５４〜９５６９、９９３１〜９９４６、１０５４９〜１０５６４、１０６６０〜１０６７９、１１０２０〜１１０３５、１１７９３〜１２２２９、１２４６９〜１２９２０、１３３５１〜１３４１５、１３７１７〜１３７３２、１４１４９〜１４１６４、１４３６１〜１４５５５、１４９６５〜１５２７９、１５８４９〜１６００１、１６２５３〜１６２７２、１６４４７〜１６５４５、１７１３０〜１７１４９、１７３７７〜１７６６９、１７９２７〜１７９５８、１８３５３〜１８３６８、１８６３６〜１８７７３、１９６６１〜１９９１８、２０２８８〜２０４７０、２０９７９〜２０９９４、２１２１５〜２１６０６、２１８２０〜２１８３７、２２１５０〜２２１６５、２２５１８〜２２５３６、２２８０３〜２２８１８、２６４９４〜２６５２２、２９０４９〜２９０６９、２９３２３〜２９４８９、３０５５０〜３０５６５、３０９１５〜３１１９１、３１４６８〜３１４８３、３２３６３〜３２３８２、３２８２７〜３３２０２、３３６３５〜３３７９５、３４１３８〜３４１５７、３４４０７〜３４４２２、３４８４５〜３４８６４、３５４６６〜３５４８５、３５６６９〜３５６８４、３６０２３〜３６０４２、３６２６６〜３６３２７、３６７２１〜３６８２７、３７０３２〜３７１３０、３７２７６〜３７２９５、３７５０４〜３７６７５、３８０９４〜３８１１８、３８８４１〜３８８５６、３９７１６〜４０５３８、４０７０６〜４０９３７、４１１６４〜４１１８３、４１３４２〜４１４３９、４２１４１〜４２１６４、４２７００〜４２７６０、４３１７３〜４３５３７、４３７６５〜４６０２５、４６４７６〜４６５３２、４８４２３〜４８４３８、５００７２〜５０２１０、５０４７０〜５０４８５、５０７１９〜５１２３４、５１７４７〜５１７９７、５２０１５〜５２１４３、５２２３０〜５２２４５、５２５７３〜５２６５２、５３４６６〜５４６６０、５４８８６〜５４９０１、６３７５１〜６４６６２、６４８８２〜６５０９９、６５３６３〜６５３７８、６５６００〜６５６１５、６５９８８〜６６１８３、６６５６６〜６６５８１、６６９７８〜６７０８０、６７２５１〜６７２７０、６７６６２〜６７９２９、６８７２７〜６８７４２、６９２０３〜６９２４２、６９５６５〜６９６２０、６９８８９〜７０１４５、７０３５２〜７０５８４、７０９２５〜７１０７１、７１３１４〜７１３２９、７１６１７〜７１７６９、７２１０７〜７２２４１、７２５８４〜７２６７０、７３０６１〜７３０７６、７３３５０〜７３３６９、７３６８９〜７３７２３、７４１０７〜７４１３１、７４３１７〜７４５５７、７４９４７〜７５００９、７５１９２〜７５２０７、７５９７９〜７６０６６、７６４１０〜７７０９５、７７２９２〜７７３０７、７７６３８〜７７８６９、７８１２２〜７８３２６、７９００６〜７９０２１、７９４７８〜７９５０５、８０２７７〜８０２９２、８０５７５〜８０９３９、８１２０７〜８１２２２、８１５２４〜８１５４３、８１７６１〜８１７７６、８２２３３〜８２２４８、８２７３８〜８３１９８、８３３３０〜８３４１６、８３８８４〜８４０６３、８４３８１〜８５９６４、８６２２０〜８６３９２、８６５５４〜８６６５５、８６９０１〜８６９２０、８７１８１〜８７２６２、８８０６３〜８８０８２、８８２９３〜８８３０８、８８６０５〜８８９６７、８９１６０〜８９１７５、８９９４０〜９０２５５、９０４７３〜９０５２８、９１０７３〜９１０８８、９１２７３〜９１２９２、９１６４７〜９１６６２、９１９３０〜９２１２６、９２３５６〜９２３７１、９３１９０〜９３４４３、９３７６２〜９４１１１、９４３７４〜９４３８９、９４５８１〜９４６５３、９４８３９〜９４８５８、９５２９２〜９５５８３、９５８２９〜９５８４４、９６１３７〜９６５０３、９６７９３〜９７０１３、９７５３９〜９７５５４、９７８００〜９７８８９、９８１３２〜９８１５１、９８６２４〜９８６７２、９８８１０〜９９１１５、９９２５８〜９９２７３、９９４７８〜９９５０３、９９７９１〜９９８５８、１００２８１〜１００３００、１００４０６〜１００４２１、１００７４２〜１００８２８、１０１０８０〜１０１１０３、１０１２４２〜１０１３２０、１０１７８８〜１０１９０６、１０２５４９〜１０２５６８、１０３５６６〜１０３６２５、１０４０６７〜１０４０８６、１０４２７７〜１０４８５８、１０５２５５〜１０５２７４、１０６１４７〜１０６３６４、１０６６３２〜１０６６４７、１０６９６４〜１０７７３５、１０８５１４〜１０８７８８、１０９３３６〜１０９５０５、１０９８４９〜１０９８６４、１１０４０３〜１１０４４２、１１０７０１〜１１０９７４、１１１２０３〜１１１３２２、１１２０３０〜１１２０４９、１１２４９９〜１１２５１４、１１２８４２〜１１２８６１、１１３０２８〜１１３０５６、１１３６４６〜１１３６６５、１１３８９６〜１１３９１１、１１４４４６〜１１４４６５、１１５０８７〜１１５１０６、１１９２６９〜１１９２８４、１１９６５９〜１１９７０３、１２０３７６〜１２０４９７、１２０７３８〜１２０８４５、１２１２０９〜１２１２２８、１２１８２３〜１２２０１３、１２２１８０〜１２２１９９、１２２５８８〜１２２７７０、１２３０３１〜１２３０５０、１２３１５２〜１２３１６７、１２３６７１〜１２４０５５、１２４４１３〜１２４６０８、１２５１７８〜１２５１９７、１２５５３３〜１２５６１６、１２６３５７〜１２６４３４、１２６７３６〜１２６７５１、１２６９９８〜１２７２３６、１２７４５４〜１２７６８２、１２８４６７〜１２８４８２、１２８８１３〜１２９１１１、１２９９７６〜１３００１３、１３０３０８〜１３０３２３、１３１０３６〜１３１０５６、１３１２８６〜１３１３０５、１３１６７６〜１３１６９１、１３２１７１〜１３２５１７、１３３１６８〜１３３２４１、１３３５２２〜１３３８７７、１３４０８６〜１３４１０１、１３４２４０〜１３４２５９、１３４４４１〜１３４６１７、１３５０１５〜１３５０３０、１３５４３１〜１３５５１９、１３５８１８〜１３５８７４、１３６１１１〜１３６１３０、１３６２８２〜１３６５９５、１３６９９６〜１３７１５２、１３７３７２〜１３７３８７、１３７７５０〜１３７７６５、１３８０４８〜１３８０６７、１３８７８２〜１３９８４０、１４０３４３〜１４０３５８、１４０５９３〜１４０７０１、１４１１１６〜１４１１３１、１４１５９１〜１４１７１９、１４２１１３〜１４２３４２、１４３０２１〜１４３０４８、１４３１８５〜１４３４８６、１４３８３６〜１４４１０９、１４４５５８〜１４４６５０、１４４９９０〜１４５０７８、１４５４２８〜１４５５２５、１４５９３７〜１４５９５２、１４６２３５〜１４６３８６、１４７０２８〜１４７０４３、１４７２５９〜１４７２８４、１４７６７１〜１４７６８６、１４８０５９〜１４８１５４、１４８５６４〜１４８５７９、１４８９０４〜１４９０８４、１４９４９１〜１４９５０６、１４９７８７〜１４９８７７、１５０２３６〜１５０２５１、１５０５８８〜１５１１３９、１５１３７３〜１５１６５９、１５２２０１〜１５２３８８、１５２５４９〜１５２７７１、１５３００１〜１５３０２６、１５３３４９〜１５３３６４、１５３８３１〜１５４１１２、１５４１７１〜１５４１８６、１５４５０２〜１５４５２１、１５４７２４〜１５４８２８、１５５２８３〜１５５３０４、１５５５９１〜１５５６１６、１５５８８９〜１５５９９２、１５６２３３〜１５６６１２、１５６８４７〜１５６９０７、１５７１９８〜１５７２２３、１５７３３０〜１５７３４９、１５７５５２〜１５７５６７、１５７９２７〜１５８０２９、１５８５４２〜１５８６３１、１５９２１６〜１５９２６７、１５９５３９〜１５９７９３、１６０３５２〜１６０４２９、１６０８１２〜１６０８２７、１６１２４８〜１６１２６７、１６１４６１〜１６１６０７、１６１８２１〜１６１９６９、１６２０６４〜１６２０８３、１６２１３２〜１６２１４７、１６２５３１〜１６２７７０、１６３０１９〜１６３５５７、１６４８３９〜１６５０５９、１６５４１９〜１６５５７５、１６５８５６〜１６５８７５、１６６２４１〜１６６４５０、１６６８３７〜１６６８５２、１６７１０７〜１６７１２２、１６８００４〜１６８０１９、１６８７６０〜１６８８２３、１６９０６２〜１６９０９２、１６９１３４〜１６９１５３、１６９６０１〜１６９７１１、１７００８１〜１７０２９１、１７０４０７〜１７０４２６、１７０７０３〜１７０８１４、１７１０２１〜１７１０３６、１７１２０７〜１７１２２６、１７１４３１〜１７１５６８、１７１９２６〜１７１９４５、１７２４４７〜１７２４６２、１７２７３３〜１７２９５６、１７３０４５〜１７３７５６、１７４１２２〜１７４８８５、１７５０１４〜１７７８３０、１７８８９５〜１８０５３９、１８１５１４〜１８７６４４、１８７８５７〜１８９９０４、１９０１０９〜１９４１５９、１９４４２５〜１９５７２３、１９６５３６〜１９６８７３、１９７３２６〜１９７９６１、１９８１４５〜１９８１７０、１９８３０７〜１９８３８１、１９８７１５〜１９９００７、１９９５０６〜１９９５６３、１９９８１６〜１９９８３８、２００２４９〜２００６３５、２０１２５８〜２０１８６１、２０２０７９〜２０２０９４、２０２３８２〜２０２７１７、２０３０９８〜２０３９３４、２０４１８１〜２０４７４０、２０５５４９〜２０５９１５、２０６４１２〜２０６７６４、２０７５１０〜２０７５３２、２０９９９９〜２１００１４、２１０１８９〜２１０２９６、２１０５０２〜２１０５８３、２１０９２０〜２１１４１８、２１１８３６〜２１２２２３、２１２６０６〜２１２８１６、２１３０２５〜２１３０４４、２１３４２５〜２１３４４０、２１３８２５〜２１３９３３、２１４４７９〜２１４４９８、２１４６２２〜２１４６４７、２１４８８４〜２１４９５１、２１５４４６〜２１５５０８、２１５９３２〜２１５９５１、２１６１９２〜２１７５９５、２１８１３２〜２１８２４８、２１８５２６〜２１８５４１、２１８７３４〜２１２１９０３７、２１９３４２〜２１９６３３、２１９８８６〜２２０７０５、２２１０４４〜２２１０５９、２２１４８３〜２２１６０７、２２１９４７〜２２１９６２、２２２５６９〜２２２５８４、２２２９１４〜２２２９９８、２２３４３６〜２２３４５１、２２３９４８〜２２４１２２、２２４４０９〜２２４４３０、２２４７１７〜２２４７６９、２２５１３３〜２２５１４８、２２５４３６〜２２５７６１、２２６７８５〜２２６８９８、２２７０２５〜２２７０４０、２２７２１８〜２２７２５１、２２７４８５〜２２７５００、２２７９１４〜２２８８３７、２２９１７４〜２２９１８９、２２９４２３〜２２９４３８、２２９６１５〜２２９６４０、２３００４２〜２３００５７、２３０３１３〜２３０５９５、２３１２１８〜２３１３４５、２３１８１７〜２３２０３７、２３２０８８〜２３２４０８、２３２８２３〜２３２８４８、２３２８８４〜２３２８９９、２３３２１０〜２３３２２５、２３３６２３〜２３３６４６、２３４４４７〜２３４４６６、２３４８７６〜２３４９１８、２３５２５８〜２３５３２８、２３５７７０〜２３５７８５、２３６０７１〜２３６２１３、２３６６８４〜２３７１９６、２３７５８５〜２３７６９８、２３７９４９〜２３７５５７、２４４８７３〜２４４８９７、２４５３１９〜２４５３３４、２４５７０１〜２４５７８０、２４６１５２〜２４６５２３、２４６９３６〜２４７０３１、２４７２０３〜２４７２４０、２４７４３１〜２４７４５０、２４７６４４〜２４７６５

９、２４８２２３〜２４８３６３、２４８６９４〜２４８７６２、２４９４９４〜２４９５０９、２５０００１〜２５００２０、２５０６９３〜２５０７０８、２５１２１４〜２５１２３３、２５１６０１〜２５１６３７、２５１９５０〜２５２０６０、２５２６６５〜２５２６８０、２５２８３８〜２５２８６３、２５３１４０〜２５３１６６、２５３５９４〜２５３８１９、２５４０３６〜２５４０８３、２５４２４６〜２５４３４５、２５４６４１〜２５４６６０、２５４９０５〜２５４９２０、２５５３９７〜２５５４２２、２５５６１８〜２５５６３３、２５５９９２〜２５６７０４、２５７０１８〜２５７０９２、２５７３１７〜２５７３３２、２５７８１８〜２５９３０５、２５９５００〜２５９５１５、２６１２９４〜２６１６５６、２６２０２１〜２６２０３６、２６２４５３〜２６２７７９、２６３３３８〜２６６５１８、２６６８６１〜２６７１３１、２６７３７５〜２６８０５１、２６８３６６〜２６９４４７、２７００３８〜２７１８５０、２７１９５０〜２７１９６９、２７２６３１〜２７４１４５、２７４２０５〜２７５７４７、２７５８０８〜２７６６３６、２７６９３２〜２７７０６４、２７７３９１〜２７８３８０、２７８９３２〜２７９０６３、２７９３０３〜２８１００１、２８１５８７〜２８１６１０、２８２２２９〜２８３６６８、２９００３５〜２９０４７４、２９０９２４〜２９２５５０、２９２８６０〜２９４４０８、２９５４７５〜２９７０１２、２９７５８７〜２９８１１５、２９８１６１〜２９８４１８、２９８４８９〜２９８７３８、２９９０８２〜２９９１８７、２９９２７６〜２９９６６９、２９９７２３〜２９９７４９、２９９７８８〜３００５０４、または３００８３５〜３０１２９５のうちの長さが等しい部分に１００％相補的な少なくとも８個の連続する核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する８〜８０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列は、配列番号２に対して少なくとも８５％、９０％、９５％、または１００％相補的である、前記化合物。
［態様５］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドがＧＨＲ核酸のイントロンを標的とする、前記化合物。
［態様６］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号２のヌクレオチド７２１０７〜７２１２６、１５３００４〜１５３０１９、１５３９２１〜１５３９４０、１５５５９７〜１５５６１２、１５５５９４〜１５５６１３、１５９２５２〜１５９２６７、２１３４２５〜２１３４４０、または２４８２３４〜２４８２４９内で相補的な８〜８０個の連結されたヌクレオシドからなる、前記化合物。
［態様７］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号４７９、７０３、９１８、１８００、１９０４、２１２２、２１２７、及び２１９４のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する８〜８０個の連結されたヌクレオシドからなる、前記化合物。
［態様８］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号４７９、７０３、９１８、１８００、１９０４、２１２２、２１２７、及び２１９４のいずれか一つを含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
［態様９］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号２０〜２２９５の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも８個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
［態様１０］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号２０〜２２９５の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも９個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
［態様１１］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号２０〜２２９５の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも１０個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
［態様１２］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号２０〜２２９５の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも１１個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
［態様１３］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号２０〜２２９５の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
［態様１４］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号２０〜２２９５の核酸塩基配列を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
［態様１５］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが配列番号２０〜２２９５の核酸塩基配列からなる、前記化合物。
［態様１６］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号４７９、７０３、９１８、１８００、１９０４、２１２２、２１２７及び２１９４のいずれか一つの少なくとも８核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する、前記化合物。
［態様１７］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号４７９、７０３、または９１８に記載された配列からなる核酸塩基配列を有する２０個の連結されたヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドが、
１０個の連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
５個の連結されたヌクレオシドからなる５'ウイングセグメント、及び
５個の連結されたヌクレオシドからなる３'ウイングセグメント
を含み、前記ギャップセグメントは前記５'ウイングセグメントと前記３'ウイングセグメントの間に配置されており、前記５'ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２'−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、前記３'ウイングセグメントの各ヌクレオシドは２'−Ｏ−メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、かつ、各シトシンは５−メチルシトシンである、前記化合物。
［態様１８］修飾オリゴヌクレオチドと共役基とを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１８００、１９０４、２１２２、２１２７、または２１９４に記載された配列からなる核酸塩基配列を有する１６個の連結されたヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドは各ヌクレオシドがＭＯＥ糖修飾、(Ｓ)−ｃＥｔ糖修飾またはデオキシ修飾のいずれかを有することを含み、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、各シトシンは５−メチルシトシンである、前記化合物。
［態様１９］前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１または配列番号２に少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または１００％相補的である、態様１〜１８のいずれか一に記載の化合物。
［態様２０］前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間連結部、少なくとも１つの修飾糖、または少なくとも１つの修飾核酸塩基を含む、態様１〜１９のいずれか一に記載の化合物。
［態様２１］前記修飾ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートヌクレオシド間連結部である、態様２０に記載の化合物。
［態様２２］前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、態様２０に記載の化合物。
［態様２３］前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも２つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、態様２０に記載の化合物。
［態様２４］前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも３つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、態様２０に記載の化合物。
［態様２５］前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも４つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、態様２０に記載の化合物。
［態様２６］前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも５つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、態様２０に記載の化合物。
［態様２７］前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも６つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、態様２０に記載の化合物。
［態様２８］前記修飾オリゴヌクレオチドが、少なくとも７つのホスホジエステルヌクレオシド間連結部を含む、態様２０に記載の化合物。
［態様２９］前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部が、ホスホジエステルヌクレオシド間連結部及びホスホロチオエートヌクレオシド間連結部から選択される、態様２２〜２８のいずれか一に記載の化合物。
［態様３０］前記修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結部がホスホロチオエートヌクレオシド間連結部を含むである、態様２０に記載の化合物。
［態様３１］前記修飾糖が二環式糖である、態様２０〜３０のいずれか一に記載の化合物。
［態様３２］前記二環式糖が、４'−（ＣＨ２）−Ｏ−２'（ＬＮＡ）、４'−（ＣＨ２）２−Ｏ−２'（ＥＮＡ）、及び４'−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２'（ｃＥｔ）からなる群より選択される、態様３１に記載の化合物。
［態様３３］前記修飾糖が２'−Ｏ−メトキシエチルである、態様２０〜３０のいずれか一に記載の化合物。
［態様３４］前記修飾核酸塩基が５−メチルシトシンである、態様２０〜３３のいずれか一に記載の化合物。
［態様３５］前記修飾オリゴヌクレオチドが
（ａ）連結されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメント、
（ｂ）連結されたヌクレオシドからなる５'ウイングセグメント、及び
（ｃ）連結されたヌクレオシドからなる３'ウイングセグメント；
を含み、前記ギャップセグメントが前記５'ウイングセグメント及び前記３'ウイングセグメントに直接隣り合うように、前記５'ウイングセグメントと前記３'ウイングセグメントの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドが修飾糖を含む、態様１〜３４のいずれか一に記載の化合物。
［態様３６］前記修飾オリゴヌクレオチドが、ＭＯＥ糖修飾、(Ｓ)−ｃＥｔ糖修飾またはデオキシ修飾のいずれかを含むヌクレオシドからなり、各ヌクレオシド間連結部はホスホロチオエート連結部であり、各シトシンは５−メチルシトシンである、態様１〜３４のいずれか一に記載の化合物。
［態様３７］一本鎖である、態様１〜３６のいずれか一に記載の化合物。
［態様３８］二本鎖である、態様１〜３６のいずれか一に記載の化合物。
［態様３９］リボヌクレオチドを含む、態様１〜３８のいずれか一に記載の化合物。
［態様４０］デオキシリボヌクレオチドを含む、態様１〜３８のいずれか一に記載の化合物。
［態様４１］前記修飾オリゴヌクレオチドが１０〜３０個の連結されたヌクレオシドからなる、態様１〜４０のいずれか一に記載の化合物。
［態様４２］前記修飾オリゴヌクレオチドが１２〜３０個の連結されたヌクレオシドからなる、態様１〜４０のいずれか一に記載の化合物。
［態様４３］前記修飾オリゴヌクレオチドが１５〜３０個の連結されたヌクレオシドからなる、態様１〜４０のいずれか一に記載の化合物。
［態様４４］IＳＩＳ ５２３７２３、ＩＳＩＳ ５３２２５４、ＩＳＩＳ ５３２４０１、ＩＳＩＳ ５４１７６７、ＩＳＩＳ ５４１８７５、ＩＳＩＳ ５４２１１２、ＩＳＩＳ ５４２１１８、またはＩＳＩＳ ５４２１８５と共役基とからなる化合物。
［態様４５］前記共役基が前記修飾オリゴヌクレオチドの５'端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結されている、態様１〜４４のいずれか一に記載の化合物。
［態様４６］前記共役基が前記修飾オリゴヌクレオチドの３'端で前記修飾オリゴヌクレオチドに連結されている、態様１〜４４のいずれか一に記載の化合物。
［態様４７］前記共役基が厳密に１つのリガンドを含む、態様１〜４６のいずれか一に記載の化合物。
［態様４８］前記共役基が厳密に２つのリガンドを含む、態様１〜４６のいずれか一に記載の化合物。
［態様４９］前記共役基が３つ以上のリガンドを含む、態様１〜４６のいずれか一に記載の化合物。
［態様５０］前記共役基が厳密に３つのリガンドを含む、態様１〜４６のいずれか一に記載の化合物。
［態様５１］各リガンドが多糖、修飾多糖、マンノース、ガラクトース、マンノース誘導体、ガラクトース誘導体、Ｄ−マンノピラノース、Ｌ−マンノピラノース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−キシロフラノース、Ｌ−キシロフラノース、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、α−Ｄ−マンノフラノース、β−Ｄ−マンノフラノース、α−Ｄ−マンノピラノース、β−Ｄ−マンノピラノース、α−Ｄ−グルコピラノース、β−Ｄ−グルコピラノース、α−Ｄ−グルコフラノース、β−Ｄ−グルコフラノース、α−Ｄ−フルクトフラノース、α−Ｄ−フルクトピラノース、α−Ｄ−ガラクトピラノース、β−Ｄ−ガラクトピラノース、α−Ｄ−ガラクトフラノース、β−Ｄ−ガラクトフラノース、グルコサミン、シアル酸、α−Ｄ−ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、２−アミノ−３−Ｏ−［（Ｒ）−１−カルボキシエチル］−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノース、２−デオキシ−２−メチルアミノ−Ｌ−グルコピラノース、４，６−ジデオキシ−４−ホルムアミド−２，３−ジ−Ｏ−メチル−Ｄ−マンノピラノース、２−デオキシ−２−スルホアミノ−Ｄ−グルコピラノース、Ｎ−グリコロイル−α−ノイラミン酸、５−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース、メチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−チオ−６−Ｏ−トリチル−α−Ｄ−グルコピラノシド、４−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノース、エチル３，４，６，７−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−１，５−ジチオ−α−Ｄ−グルコ−ヘプトピラノシド、２，５−アンヒドロ−Ｄ−アロノニトリル、リボース、Ｄ−リボース、Ｄ−４−チオリボース、Ｌ−リボース、Ｌ−４−チオリボースのなかから選択される、態様４７〜５０のいずれか一に記載の化合物。
［態様５２］各リガンドがＮ−アセチルガラクトサミンである、態様５１に記載の化合物。
［態様５３］前記共役基が、
を含む、態様１〜４６のいずれか一に記載の化合物。
［態様５４］前記共役基が
を含む、態様１〜４６のいずれか一に記載の化合物。
［態様５５］前記共役基が
を含む、態様１〜４６のいずれか一に記載の化合物。
［態様５６］前記共役基が
を含む、態様１〜４６のいずれか一に記載の化合物。
［態様５７］前記共役基が
を含む、態様１〜４６のいずれか一に記載の化合物。
［態様５８］前記共役基が少なくとも１つのリン連結基または中性連結基を含む、態様４６〜５２のいずれか一に記載の化合物。
［態様５９］前記共役基が
［式中、
ｎは１〜１２であり、かつ
ｍは１〜１２である］
のなかから選択される構造を含む、態様１〜５２のいずれか一に記載の化合物。
［態様６０］前記共役基が
［式中、
Ｌは、リン連結基または中性連結基のどちらかであり、
Ｚ１は、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ２であり、
Ｚ２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アルキであり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アルキであり、かつ
各ｍ１は、独立して、０〜２０であって、各テザーにつき少なくとも１つのｍ１は０より大きい］
のなかから選択される構造を有するテザーを有する、態様１〜５２のいずれか一に記載の化合物。
［態様６１］前記共役基が、
［式中、
Ｚ２は、ＨまたはＣＨ３であり、かつ
各ｍ１は、独立して、０〜２０であって、各テザーにつき少なくとも１つのｍ１は０より大きい］
のなかから選択される構造を有するテザーを有する、態様６０に記載の化合物。
［態様６２］前記共役基が
［式中、
ｎは１〜１２であり、かつ
ｍは１〜１２である］
のなかから選択される構造を有するテザーを有する、態様４５〜５２のいずれか一に記載の化合物。
［態様６３］前記共役基が、前記修飾オリゴヌクレオチドに共有結合で取り付けられている、態様１〜６２のいずれか一に記載の化合物。
［態様６４］式：
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、態様１〜６３のいずれか一に記載の化合物。
［態様６５］式：
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、
各ｎは独立して０または１であり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、態様１〜６３のいずれか一に記載の化合物。
［態様６６］式：
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、態様１〜６３のいずれか一に記載の化合物。
［態様６７］式：
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、態様１〜６３のいずれか一に記載の化合物。
［態様６８］式：
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｃは前記共役リンカーであり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、態様１〜６３のいずれか一に記載の化合物。
［態様６９］式：
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、態様１〜６３のいずれか一に記載の化合物。
［態様７０］式：
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｂは前記切断可能部分であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、態様１〜６３のいずれか一に記載の化合物。
［態様７１］式：
［式中、
Ａは前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｄは前記分岐基であり、
各Ｅはテザーであり、
各Ｆはリガンドであり、かつ
ｑは１と５の間の整数である］
によって表される構造を有する、態様１〜６３のいずれか一に記載の化合物。
［態様７２］前記共役リンカーが
。［式中、
各Ｌは、独立して、リン連結基または中性連結基であり、かつ
各ｎは、独立して、１〜２０である］
のなかから選択される構造を有する、態様６４〜７１のいずれか一に記載の化合物。
［態様７３］前記共役リンカーが
のなかから選択される構造を有する、態様６４〜７２のいずれか一に記載の化合物。
［態様７４］前記共役リンカーが以下の構造を有する、態様６４〜７２のいずれか一に記載の化合物：
。
［態様７５］前記共役リンカーが
のなかから選択される構造を有する、態様６４〜７２のいずれか一に記載の化合物。
［態様７６］前記共役リンカーが
のなかから選択される構造を有する、態様６４〜７２のいずれか一に記載の化合物。
［態様７７］前記共役リンカーが
のなかから選択される構造を有する、態様６４〜７２のいずれか一に記載の化合物。
［態様７８］前記共役リンカーがピロリジンを含む、態様６４〜７７のいずれか一に記載の化合物。
［態様７９］前記共役リンカーがピロリジンを含まない、態様６４〜７７のいずれか一に記載の化合物。
［態様８０］前記共役リンカーがＰＥＧを含む、態様６４〜７９のいずれか一に記載の化合物。
［態様８１］前記共役リンカーがアミドを含む、態様６４〜８０のいずれか一に記載の化合物。
［態様８２］前記共役リンカーが少なくとも２つのアミドを含む、態様６４〜８０のいずれか一に記載の化合物。
［態様８３］前記共役リンカーがアミドを含まない、態様６４〜８０のいずれか一に記載の化合物。
［態様８４］前記共役リンカーがポリアミドを含む、態様６４〜８３のいずれか一に記載の化合物。
［態様８５］前記共役リンカーがアミンを含む、態様６４〜８４のいずれか一に記載の化合物。
［態様８６］前記共役リンカーが１つ以上のジスルフィド結合を含む、態様６４〜８５のいずれか一に記載の化合物。
［態様８７］前記共役リンカーがタンパク質結合部分を含む、態様６４〜８６のいずれか一に記載の化合物。
［態様８８］前記タンパク質結合部分が脂質を含む、態様８７に記載の化合物。
［態様８９］前記タンパク質結合部分が、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１−ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３−ビス−Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３−プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３−（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３−（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）、ビタミン（例えば葉酸、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビオチン、ピリドキサール）、ペプチド、炭水化物（例えば単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、多糖）、エンドソーム溶解成分、ステロイド（例えばウバオール、ヘシゲニン（ｈｅｃｉｇｅｎｉｎ）、ジオスゲニン）、テルペン（例えばトリテルペン、例えばサルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸）、またはカチオン性脂質のなかから選択される、態様８７に記載の化合物。
［態様９０］前記タンパク質結合部分が、Ｃ１６〜Ｃ２２長鎖飽和または不飽和脂肪酸、コレステロール、コール酸、ビタミンＥ、アダマンタンまたは１−ペンタフルオロプロピルのなかから選択される、態様８７に記載の化合物。
［態様９１］前記共役リンカーが
［式中、各ｎは、独立して、１〜２０であり、かつｐは１〜６である］のなかから選択される構造を有する、態様６７〜９３のいずれか一に記載の化合物。
［態様９２］前記共役リンカーが
［式中、各ｎは、独立して、１〜２０である］
のなかから選択される構造を有する、態様６４〜９１のいずれか一に記載の化合物。
［態様９３］前記共役リンカーが
のなかから選択される構造を有する、態様６４〜９２のいずれか一に記載の化合物。
［態様９４］前記共役リンカーが
［式中、ｎは１〜２０である］
のなかから選択される構造を有する、態様６４〜９２のいずれか一に記載の化合物。
［態様９５］前記共役リンカーが
のなかから選択される構造を有する、態様６４〜９２のいずれか一に記載の化合物。
［態様９６］前記共役リンカーが
［式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である］
のなかから選択される構造を有する、態様６４〜９２のいずれか一に記載の化合物。
［態様９７］前記共役リンカーが以下の構造を有する、態様６４〜９２のいずれか一に記載の化合物：
。
［態様９８］前記分岐基が以下の構造のうちの一つを有する、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
各Ａ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝ＯまたはＮＨであり、かつ
各ｎは、独立して、１〜２０である］。
［態様９９］前記分岐基が以下の構造のうちの一つを有する、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
各Ａ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、Ｃ＝ＯまたはＮＨであり、かつ
各ｎは、独立して、１〜２０である］。
［態様１００］前記分岐基が以下の構造を有する、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物：
。
［態様１０１］前記分岐基が以下の構造を有する、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物：
。
［態様１０２］前記分岐基が以下の構造を有する、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物：
。
［態様１０３］前記分岐基が以下の構造を有する、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物：
。
［態様１０４］前記分岐基がエーテルを含む、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物。
［態様１０５］前記分岐基が以下の構造を有する、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物：
［各ｎは、独立して、１〜２０であり、かつｍは２〜６である］。
［態様１０６］前記分岐基が以下の構造を有する、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物：
。
［態様１０７］前記分岐基が以下の構造を有する、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物：
。
［態様１０８］前記分岐基が
［式中、各ｊは１〜３の整数であり、かつ各ｎは１〜２０の整数である］
を含む、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物。
［態様１０９］前記分岐基が
を含む、態様６４〜９７のいずれか一に記載の化合物。
［態様１１０］各テザーが
［式中、
Ｌは、リン連結基及び中性連結基から選択され、
Ｚ１は、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−Ｒ２であり、
Ｚ２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アルキであり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ６アルキであり、かつ
各ｍ１は、独立して、０〜２０であって、各テザーにつき少なくとも１つのｍ１は０より大きい］
のなかから選択される、態様６４〜１０９のいずれか一に記載の化合物。
［態様１１１］各テザーが
［式中、
Ｚ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
各ｍ２は、独立して、０〜２０であって、各テザーにつき少なくとも１つのｍ２は０より大きい］
のなかから選択される、態様６４〜１０９のいずれか一に記載の化合物。
［態様１１２］各テザーが
［式中、
ｎは１〜１２であり、かつ
ｍは１〜１２である］
のなかから選択される、態様６４〜１０９のいずれか一に記載の化合物。
［態様１１３］少なくとも１つのテザーがエチレングリコールを含む、態様６４〜１０９のいずれか一に記載の化合物。
［態様１１４］少なくとも１つのテザーがアミドを含む、態様６４〜１０９または１１１のいずれか一に記載の化合物。
［態様１１５］少なくとも１つのテザーがポリアミドを含む、態様６４〜１０９または１１１のいずれか一に記載の化合物。
［態様１１６］少なくとも１つのテザーがアミンを含む、態様６４〜１０９または１１１のいずれか一に記載の化合物。
［態様１１７］少なくとも２つのテザーが互いに異なる、態様６４〜１０９または１１１のいずれか一に記載の化合物。
［態様１１８］すべての前記テザーが互いに同じである、態様６４〜１０９または１１１のいずれか一に記載の化合物。
［態様１１９］各テザーが
［式中、
各ｎは、独立して、１〜２０であり、かつ
各ｐは１〜約６である］
のなかから選択される、態様６４〜１０９のいずれか一に記載の化合物。
［態様１２０］各テザーが
のなかから選択される、態様６４〜１０９のいずれか一に記載の化合物。
［態様１２１］各テザーが以下の構造を有する、態様６４〜１０９のいずれか一に記載の化合物：
［式中、各ｎは、独立して、１〜２０である］。
［態様１２２］各テザーが以下の構造を有する、態様６４〜１０９のいずれか一に記載の化合物：
。
［態様１２３］前記テザーが、
［式中、各ｎは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、または７である］
のなかから選択される構造を有する、態様６４〜１０９のいずれか一に記載の化合物。
［態様１２４］前記テザーが：
から選択される構造を有する、態様６４〜１０９のいずれか一に記載の化合物。
［態様１２５］前記リガンドがガラクトースである、態様１２１〜１２4のいずれか一に記載の化合物。
［態様１２６］前記リガンドがマンノース−６−ホスフェートである、態様１２１〜１２4のいずれか一に記載の化合物。
［態様１２７］各リガンドが、
［式中、各Ｒ１はＯＨ及びＮＨＣＯＯＨから選択される］
のなかから選択される、態様１２１〜１２４のいずれか一に記載の化合物。
［態様１２８］各リガンドが、
のなかから選択される、態様１２１〜１２４のいずれか一に記載の化合物。
［態様１２９］各リガンドが以下の構造を有する、態様１２１〜１２４のいずれか一に記載の化合物：
。
［態様１３０］各リガンドが以下の構造を有する、態様１２１〜１２４のいずれか一に記載の共役アンチセンス化合物：
。
［態様１３１］前記共役基が細胞ターゲティング部分を含む、態様１〜１３０のいずれか一に記載の化合物。
［態様１３２］前記共役基が以下の構造を有する細胞ターゲティング部分を含む、態様１３１に記載の化合物：
［式中、各ｎは、独立して、１〜２０である］。
［態様１３３］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１３４］前記細胞ターゲティング部分が
［式中、各ｎは、独立して、１〜２０である］を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１３５］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１３６］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１３７］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１３８］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１３９］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１４０］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１４１］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１４２］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１４３］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１４４］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１４５］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１４６］前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、態様１３１に記載の化合物：
［態様１４７］前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、態様１３１に記載の化合物：
［態様１４８］前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、態様１３１に記載の化合物：
［態様１４９］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１５０］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１５１］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１５２］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１５３］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１５４］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１５５］前記細胞ターゲティング部分が
を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１５６］前記細胞ターゲティング部分が
［式中、各Ｙは、Ｏ、Ｓ、置換または無置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニルまたはアルキニルから選択される］を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１５７］前記共役基が
［式中、各Ｙは、Ｏ、Ｓ、置換または無置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニルまたはアルキニルから選択される］を含む、態様１３１に記載の化合物。
［態様１５８］前記細胞ターゲティング部分が以下の構造を有する、態様１３１に記載の化合物：
［式中、各Ｙは、Ｏ、Ｓ、置換または無置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アミノ、置換アミノ、アジド、アルケニルまたはアルキニルから選択される］。
［態様１５９］前記共役基が
を含む、態様１〜１５８のいずれか一に記載の化合物。
［態様１６０］前記共役基が
を含む、態様１〜１５９のいずれか一に記載の化合物。
［態様１６１］前記共役基が
を含む、態様１〜１６０のいずれか一に記載の化合物。
［態様１６２］前記共役基が
を含む、態様１〜１６１のいずれか一に記載の化合物。
［態様１６３］前記共役基が、ホスホジエステル、アミド、またはエステルから選択される切断可能部分を含む、態様１〜１６２のいずれか一に記載の化合物。
［態様１６４］前記共役基がホスホジエステル切断可能部分を含む、態様１〜１６３のいずれか一に記載の化合物。
［態様１６５］前記共役基が切断可能部分を含まず、かつ前記共役基が前記共役基と前記オリゴヌクレオチドとの間にホスホロチオエート連結部を含む、態様１〜１６４のいずれか一に記載の化合物。
［態様１６６］前記共役基がアミド切断可能部分を含む、態様１〜１６５のいずれか一に記載の化合物。
［態様１６７］前記共役基がエステル切断可能部分を含む、態様１〜１６６のいずれか一に記載の化合物。
［態様１６８］以下の構造を有する、態様１〜１６７のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
各ｎは、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１６９］以下の構造を有する、態様１〜１６８のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
各ｎは、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１７０］以下の構造を有する、態様１〜１６９のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
各ｎは、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３であり、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｚは、Ｈまたは連結された固体支持体であり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１７１］以下の構造を有する、態様１〜１７０のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
各ｎは、独立して、１〜２０であり、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、
Ｚは、Ｈまたは連結された固体支持体であり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１７２］以下の構造を有する、態様１〜１７１のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１７３］以下の構造を有する、態様１〜１７２のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１７４］以下の構造を有する、態様１〜１７３のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１７５］以下の構造を有する、態様１〜１７４のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１７６］以下の構造を有する、態様１〜１７５のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１７７］以下の構造を有する、態様１〜１７６のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１７８］以下の構造を有する、態様１〜１７７のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１７９］以下の構造を有する、態様１〜１７８のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１８０］以下の構造を有する、態様１〜１７９のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１８１］以下の構造を有する、態様１〜１８０のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１８２］以下の構造を有する、態様１〜１８１のいずれか一に記載の化合物：
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］。
［態様１８３］前記共役基が
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］
を含む、態様１〜１８２のいずれか一に記載の化合物。
［態様１８４］前記共役基が
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］
を含む、態様１〜１８３のいずれか一に記載の化合物。
［態様１８５］前記共役基が
［式中、
Ｑ１３は、ＨまたはＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、
Ａは、前記修飾オリゴヌクレオチドであり、かつ
Ｂｘは、複素環式塩基部分である］
を含む、態様１〜１８４のいずれか一に記載の化合物：
［態様１８６］Ｂｘが、アデニン、グアニン、チミン、ウラシル、またはシトシンもしくは５−メチルシトシンのなかから選択される、態様１〜１８５のいずれか一に記載の化合物。
［態様１８７］Ｂｘがアデニンである、態様１〜１８６のいずれか一に記載の化合物。
［態様１８８］Ｂｘがチミンである、態様１〜１８７のいずれか一に記載の化合物。
［態様１８９］Ｑ１３がＯ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３である、態様１〜１８８のいずれか一に記載の化合物。
［態様１９０］Ｑ１３がＨである、態様１〜１８９のいずれか一に記載の化合物。
［態様１９１］ 以下の式に従った共役基と修飾オリゴヌクレオチドとからなる化合物：：
ｍＣｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅｓ ｍＣｅｓ ｍＣｅｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ａｄｓ Ａｄｓ Ｔｅｓ Ａｅｓ Ｇｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅ
［式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５'−メチルシトシン、
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン、
ｅ＝２'−Ｏ−メトキシエチル修飾ヌクレオシド、
ｄ＝２'−デオキシヌクレオシド、かつ
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間連結部］。
［態様１９２］以下の式に従った共役基と修飾オリゴヌクレオチドとからなる化合物：
［態様１９３］以下の式に従った共役基と修飾オリゴヌクレオチドとからなる化合物：
［態様１９４］以下の式に従った共役基と修飾オリゴヌクレオチドとからなる化合物：
［態様１９５］態様１〜１９４のいずれか一に記載の化合物またはそれらの塩かつ少なくとも１つの薬剤的に許容される担体または希釈剤を含む組成物。
［態様１９６］態様１〜１９５のいずれか一に記載の化合物を含むプロドラッグ。
［態様１９７］態様１〜１９６のいずれか一に記載の化合物またはそれらの塩かつ少なくとも１つの薬剤的に許容される担体または希釈剤を含む組成物。
［態様１９８］態様１〜１９７のいずれか一に記載の化合物または組成物を含むプロドラッグ。
［態様１９９］態様１〜１９８のいずれか一に記載の化合物または組成物を動物に投与することを含む方法。
［態様２００］前記動物はヒトである、態様１９８に記載の方法。
［態様２０１］ヒトの過剰な成長ホルモンと関連する疾患の処置方法であって、態様１〜２００のいずれか一に記載の化合物または組成物の治療的有効量を前記ヒトに投与し、それによって過剰な成長ホルモンと関連する前記疾患を処置することを含む、前記処置方法。
［態様２０２］過剰な成長ホルモンと関連する前記疾患が先端巨大症である、態様２００に記載の方法。
［態様２０３］前記治療がＩＧＦ-１レベルを低減させる、態様２００に記載の方法。
［態様２０４］ヒトの過剰な成長ホルモンと関連する疾患の防止方法であって、態様１〜２０３のいずれか一に記載の化合物または組成物の治療的有効量を前記ヒトに投与し、それによって過剰な成長ホルモンと関連する前記疾患を防止することを含む、前記防止方法。
［態様２０５］過剰な成長ホルモンと関連する前記疾患が先端巨大症である、態様２０３に記載の方法。
［態様２０６］前記化合物または組成物及び第２薬剤を同時投与することを含む、態様１９８〜２０４のいずれか一に記載の方法。
［態様２０７］前記化合物または組成物及び前記第２薬剤が同時に投与される、態様２０５に記載の方法。
［態様２０８］ヒトの成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）レベルを低減させる方法であって、態様１〜２０７のいずれか一に記載の化合物または組成物の治療的有効量を前記ヒトに投与し、それによって前記ヒトのＧＨＲレベルを低減させることを含む、前記方法。
［態様２０９］前記ヒトが過剰な成長ホルモンと関連する疾患を有する、態様２０７に記載の方法。
［態様２１０］過剰な成長ホルモンと関連する前記疾患が先端巨大症である、態様２０７に記載の方法。
［態様２１１］前記化合物または組成物及び第２薬剤を同時投与することを含む、態様２０６〜２０９のいずれか一に記載の方法。
［態様２１２］前記化合物または組成物及び前記第２薬剤が同時に投与される、態様２１０に記載の方法。
［態様２１３］過剰な成長ホルモンと関連する疾患を処置し、防止し、または改善するための、態様１〜２１２のいずれか一に記載の化合物または組成物の使用。
［態様２１４］過剰な成長ホルモンと関連する前記疾患が先端巨大症である、態様２１２に記載の使用。

Claims (5)

  1. 以下の式に従った共役基と修飾オリゴヌクレオチドとからなる化合物：
  2. 請求項１に記載の化合物又はそれらの塩、及び少なくとも１つの薬剤的に許容される担体又は希釈剤を含む、医薬組成物。
  3. 動物に投与するための、場合により該動物はヒトである、請求項１に記載の化合物、又は請求項２に記載の医薬組成物。
  4. ヒトの過剰な成長ホルモンと関連する疾患を処置するための、請求項１に記載の化合物、又は請求項２に記載の医薬組成物であって、
    該処置が、該化合物、又は該医薬組成物の治療的有効量をヒトに投与し、それによって過剰な成長ホルモンと関連する疾患を処置することを含み、場合により、
    （ａ）過剰な成長ホルモンと関連する疾患が先端巨大症である、及び／又は
    （ｂ）該処置がＩＧＦ−１レベルを低減させる、
    前記化合物、又は前記医薬組成物。
  5. ヒトの成長ホルモン受容体（ＧＨＲ）レベルを低減させるための、請求項１に記載の化合物、又は請求項２に記載の医薬組成物であって、
    ＧＨＲレベルの低減が、該化合物、又は該医薬組成物の治療的有効量をヒトに投与し、それによって前記ヒトのＧＨＲレベルを低減させることを含み、場合により、
    （ａ）ヒトが過剰な成長ホルモンと関連する疾患を有する、及び／又は
    （ｂ）過剰な成長ホルモンと関連する疾患が先端巨大症である、
    前記化合物、又は前記医薬組成物。
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