RU2748495C2 - Способы и композиции для модулирования экспрессии аполипопротеина (а) - Google Patents

Способы и композиции для модулирования экспрессии аполипопротеина (а) Download PDF

Info

Publication number
RU2748495C2
RU2748495C2 RU2017120536A RU2017120536A RU2748495C2 RU 2748495 C2 RU2748495 C2 RU 2748495C2 RU 2017120536 A RU2017120536 A RU 2017120536A RU 2017120536 A RU2017120536 A RU 2017120536A RU 2748495 C2 RU2748495 C2 RU 2748495C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
apo
compound
isis
modified
nucleic acid
Prior art date
Application number
RU2017120536A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2017120536A (ru
RU2017120536A3 (ru
Inventor
Розанна М. КРУК
Марк Дж. ГРЭХЭМ
Сюзан М. ФРАЙЕР
Original Assignee
Ионис Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ионис Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Ионис Фармасьютикалз, Инк.
Publication of RU2017120536A publication Critical patent/RU2017120536A/ru
Publication of RU2017120536A3 publication Critical patent/RU2017120536A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2748495C2 publication Critical patent/RU2748495C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7115—Nucleic acids or oligonucleotides having modified bases, i.e. other than adenine, guanine, cytosine, uracil or thymine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21007—Plasmin (3.4.21.7), i.e. fibrinolysin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Abstract

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к антисмысловым соединениям, и может быть использовано в медицине. Изобретение позволяет получить антисмысловой олигонуклеотид, который может специфично ингибировать экспрессию аполипопротеина (apo(a)). Изобретение может быть применимо в профилактике или для лечения воспалительных, сердечно-сосудистых и/или метаболических заболеваний, расстройств или иных состояний, ассоциированных с аро (а) или Lp (a). 4 н. и 20 з.п. ф-лы, 13 пр., 65 табл.

Description

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
Настоящая заявка подается вместе со списком последовательностей в электронном формате. Перечень последовательностей обеспечивается в виде файла под названием BIOL0177WOSEQ.txt, созданного 22 мая 2013, который имеет размер 396 Кб. Информация, содержащаяся в электронном виде в перечне последовательностей, включена в данный документ в виде ссылки во всей своей полноте.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Варианты реализации, описанные в данном документе, обеспечивают способы, соединения и композиции для снижения экспрессии mRNA аполипопротеина (а) и протеина у животного. Подобные способы, соединения и композиции применяются для лечения, профилактики или улучшения сердечно-сосудистых и/или метаболических болезней, расстройств или состояний.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Липопротеины представляют собой глобулярные, мицеллоподобные частицы, которые состоят из неполярного ядра ацилглицеролов и сложных эфиров холестерина, окруженного амфифильным слоем из белков, фосфолипидов и холестерина. Липопротеины разделяют на пять основных категорий на основе их функциональных и физических свойств: хил омикроны, липопротеины очень низкой плотности (VLDL), липопротеиды средней плотности (IDL), липопротеины низкой плотности (LDL) и липопротеины высокой плотности (HDL). Хиломикроны транспортируют пищевые липиды из кишечника в ткани. Все VLDL, IDL и LDL транспортируют триглицериды и холестерин из печени в ткани. HDL транспортируют эндогенный холестерин из тканей в печень.
Липопротеиновые частицы подвергаются непрерывной метаболической обработке и имеют различные свойства и композиции. Плотности липопротеина увеличиваются без увеличения диаметра частиц, так как плотность их внешних слоев меньше, чем таковая у внутреннего ядра. Белковые компоненты липопротеинов известны как аполипопротеины. Среди различных липопротеинов человека по меньшей мере девять аполипопротеинов распределены в значительных количествах.
Частица липопротеина(а) [Lp(a)] была определена почти 50 лет назад и состоит из весьма уникальной частицы LDL, в которой отдельный протеин аполипопротеин В (apo(a)) связан посредством дисульфидной связи с отдельным протеином аполипопротеина (а) [apo(a)]. Протеин apo(a) разделяет высокую степень гомологии с плазминогеном, в частности, в рамках повторяющегося домена 2-го типа двойной петли IV. Уровни циркулирующего Lp(a) обратно пропорциональны количеству варьирующихся повторов двойной петли IV 2-го типа, присутствующих в молекуле, и, так как обе аллели коэкспрессируются у отдельных индивидуумов, могут отображать гетерозиготные профили изоформ в плазме (Kraft et al., Eur J Hum Genet, 1996; 4(2): 74-87). Считается, что этот повторяющийся домен двойной петли в apo(a) может быть ответственным за его про-тромботические и анти-фибринолитические свойства, потенциально повышая атеросклеротическое прогрессирование.
Аро(а) транскрипционно регулируют с помощью IL-6 и в исследованиях с пациентами с ревматоидным артритом, получавшими ингибитор IL-6 (тоцилизумаб), снижают уровни в плазме на 30% после 3-месячного лечения (Schultz et al., PLoS One 2010; 5:e14328).
Apo(a) был показан для преимущественно связанных окисленных фосфолипидов и усиления васкулярного воспаления (Bergmark et al., J Lipid Res 2008; 49:2230-2239; Tsimikas et al., Circulation. 2009; 119(13):1711-1719).
Кроме того, исследования демонстрируют, что частица Lp(a) может также стимулировать эндотелиальную проницаемость, вызывать экспрессию ингибитора активатора плазминогена типа-1 и активировать секрецию макрофагального интерлейкина-8 (Koschinsky и Marcovina, Curr Opin Lipidol 2004; 15:167-174). Важно отметить, что недавние исследования генетической связи показали, что Lp(a) является независимым фактором риска развития инфаркта миокарда, инсульта, заболевания периферических сосудов и аневризмы брюшной аорты (Rifai et al., Clin Chem 2004; 50:1364-71; Erqou et al., JAMA 2009; 302:412-23; Kamstrup et al., Circulation 2008; 117:176-84). Кроме того, в недавнем исследовании Precocious Coronary Artery Disease (PROCARDIS), Clarke et al. (Clarke et al., NEJM (2009) 361; 2518-2528) описаны надежные и независимые связи между ишемической болезнью сердца и концентрацией Lp(a) в плазме. Дополнительно, Solfrizzi et al. предполагают, что увеличение Lp(a) в сыворотке может быть связано с повышенным риском развития болезни Альцгеймера (AD) (Solfrizzi et al., J Neurol Neurosurg Psychiatry 2002, 72:732-736. В настоящее время, в условиях клиники, примеры непрямых ингибиторов apo(a) для лечения сердечно-сосудистых заболеваний содержат аспирин, Niaspan, Mipomersen, Anacetrapib, Epirotirome и Lomitapide, которые снижают в плазме уровни Lp(a) на 18%, 39%, 32%, 36%, 43% и 17%, соответственно. Кроме того, аферез Lp(a) используют в клиническом испытании для снижения apo(a), который содержит частицы Lp(a).
На сегодняшний день терапевтические стратегии для лечения сердечно-сосудистых заболеваний с помощью непосредственно направленных уровней apo(a) были ограничены. Были разработаны рибозимные олигонуклеотиды (патент США 5877022) и антисмысловые олигонуклеотиды (WO 2005/000201; WO 2003/014397; патент США 8138328; Merki et al., J Am Coll Cardiol 2011; 57:1611-1621), но ни одно из соединений, непосредственно нацеленное на apo(a), в настоящее время не используется в клинике.
Таким образом, существует явно выраженная неудовлетворенная медицинская потребность в новых средствах, которые могут эффективно и селективно снижать уровни apo(a) у больных с повышенным риском сердечно-сосудистых осложнений в связи с хронически повышенными уровнями Lp(a) в плазме.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Обеспечиваемое в данном документе представляет собой композиции и способы модулирования экспрессии mRNA apo(a) и протеина. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения apo(a)-специфичный ингибитор уменьшает экспрессию mRNA apo(a) и протеина.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения композиция представляет собой apo(a)-специфичный ингибитор. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения apo(a)-специфичный ингибитор представляет собой нуклеиновую кислоту, протеин или малую молекулу. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения apo(a)-специфичный ингибитор представляет собой антисмысловой олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения apo(a)-специфичный модифицированный олигонуклеотид, который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и содержит нуклеотидную последовательность, содержащую сегмент из по меньшей мере 8 последовательных нуклеотидов, комплементарную равной длине сегмента нуклеиновых оснований от 3901 до 3920 из SEQ ID NO: 1, при том, что последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 80% комплементарна последовательности SEQ ID NO: 1. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения apo(a)-специфичный ингибитор представляет собой модифицированный олигонуклеотид состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 1-130, 133, 134. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения apo(a)-специфичный ингибитор представляет собой модифицированный олигонуклеотид, который состоит из 20 связанных нуклеозидов и имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8 смежных нуклеиновых оснований любой из SEQ ID NO: 58, при том, что модифицированный олигонуклеотид содержит: (а) сегмент разрыва, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; (б) 5'-концевой сегмент, состоящий из пяти связанных нуклеозидов; (в) 3'-концевой сегмент, состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и в котором сегмент зазора расположен между 5'-концевым сегментом и 3'-концевым сегментом, при том, что каждый нуклеозид каждого концевого сегмента содержит 2'-O-метоксиэтилированный сахар, причем каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь, при том, что каждый остаток цитозина представляет собой 5-метилцитозин.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают композицию, которая содержит соединение, описанное в данном документе, или его соль и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляция экспрессии apo(a) происходит в клетке или ткани. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляции происходят в клетке или ткани у животного. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения животное представляет собой человека. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляция представляет собой снижение уровня mRNA apo(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляция представляет собой снижение уровня протеина apo(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения снижают уровни mRNA apo(a) и протеина. Такое уменьшение может происходить в зависимости от времени или дозозависимо.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивает композиции и способы для применения в терапии. Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают композиции и способы для профилактики, лечения, запаздывания, замедления прогрессирования и/или уменьшения интенсивности связанных с apo(a) болезней, расстройств и заболеваний. Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают композиции и способы для профилактики, лечения, запаздывания, замедления прогрессирования и/или уменьшения интенсивности связанных с Lp(a) болезней, расстройств и заболеваний. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения подобные болезни, расстройства и заболевания представляют собой воспалительные, сердечно-сосудистые и/или метаболические болезни, расстройства и состояния. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения композиции и способы терапии содержат введение apo(a)-специфичного ингибитора индивидууму, нуждающемуся в этом. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения apo(a)-специфичный ингибитор представляет собой нуклеиновую кислоту. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения нуклеиновая кислота представляет собой антисмысловое соединение. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловое соединение представляет собой модифицированный олигонуклеотид.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Следует понимать, что и предшествующее общее описание, и последующее подробное описание являются исключительно примерными и пояснительными и не ограничивают настоящее изобретение, как заявлено. В данном документе использование единственного числа содержит множественное число, если специально не указано иное. Как используется в данном описании, использование "или" подразумевает "и/или", если не указано иное. Кроме того, как используют в данном описании, использование "и" подразумевает "и/или", если не указано иное. Кроме того, использование термина "который содержит", а также других форм, таких как "содержит" и "содержится", не ограничено. Кроме того, такие термины, как "элемент" или "компонент" охватывают элементы и компоненты, которые содержат одну единицу, элементы и компоненты, имеющие больше одной субъединицы, если специально не указано иное.
Заголовки разделов, используемых в данном документе, предназначены только для организационных целей и не должны быть истолкованы как описанный предмет изобретения. Все документы или части документов, цитируемые в данном описании, в том числе, но без ограничения ими, патенты, патентные заявки, опубликованные патентные заявки, статьи, книги, монографии и регистрационные номера GENBANK и связанная с ними информация о последовательности, получаемая из таких баз данных, как National Center for Biotechnology Information (NCBI), и другие данные, указанные по всему объему описания, тем самым явно включены в качестве ссылки в частях документа, обсуждаемых в данном документе, а также во всей их полноте.
Определения
Если не предусматривают конкретные определения, используемая номенклатура, связанная и с методиками, и со способами аналитической химии, химии органического синтез, медицинской и фармацевтической химии, описанными в данном документе, является хорошо известной и широко используемой в данной области техники. Стандартные способы могут быть использованы для химического синтеза и химического анализа.
Если не указано иное, следующие термины имеют следующие значения:
"2'-O-метоксиэтил" (либо 2'-МОЕ, МОЕ, 2'-O(CH2)2-OCH3 и 2'-O-(2-метоксиэтил)) соответствует модификации О-метокси-этилом положения 2' фуранозного кольца. 2'-O-метоксиэтилированный сахар представляет собой модифицированный сахар.
"2'-дезоксирибонуклеозид" означает нуклеозид, который содержит 2'-H фуранозильный остаток сахара, как обнаружено в случае встречающихся в природе дезоксирибонуклеозидов (DNA).
"2'-МОЕ нуклеозид" (либо 2'-метоксиэтилнуклеозид) означает нуклеозид, который содержит модифицированный 2'-МОЕ остаток сахара. "2'-O-метоксиэтилнуклеотид" означает нуклеотид, который содержит модифицированный 2'-О-метоксиэтилом остаток сахара.
"3'-фтор-HNA" (либо "F-HNA" или "3'-F-HNA") означает остаток сахара нуклеозида, который имеет следующую структуру:
Figure 00000001
где Bx представляет собой нуклеиновое основание.
"Сайт-мишень 3'" соответствует нуклеотиду нуклеиновой кислоты-мишени, который является комплементарной крайнему 3' нуклеотиду конкретного антисмыслового соединения.
"Сайт-мишень 5'" соответствует нуклеотиду нуклеиновой кислоты-мишени, который является комплементарной крайнему 5' нуклеотиду конкретного антисмыслового соединения.
"5-метилцитозин" означает цитозин, модифицированный метальной группой, присоединенной в положении 5'. 5-метилцитозин представляет собой модифицированное нуклеиновое основание.
"Около" означает в пределах ±10% величины. Например, если указано, что "маркер может быть увеличен на около 50%", подразумевается, что маркер может быть увеличен на 45%-55%.
"Активное фармацевтическое средство" означает вещество или вещества в фармацевтической композиции, которые при введении индивидууму обеспечивают терапевтический эффект. Например, в отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловой олигонуклеотид, направленный на apo(a), представляет собой активное фармацевтическое средство.
"Активная область-мишень" или "область-мишень" означает область, к которой одно или несколько активных антисмысловых соединений являются специфичными. "Активные антисмысловые соединения" означает антисмысловое соединения, которое снижает уровни нуклеиновой кислоты-мишени или уровни протеина.
"Осуществляют параллельно" относится к совместному введению двух средств любым путем, при котором фармакологические эффекты обоих проявляются у пациента в одно и то же время. Одновременное введение не требует, чтобы оба средства могли быть введены в виде отдельной фармацевтической композиции, в той же лекарственной форме или же с помощью того же способа введения. Эффекты обоих средств могут не проявиться в то же время. Эффекты должны быть перекрывающимися только в течение периода времени и не обязательно должны иметь одинаковое протяжение во времени.
"Применение" или "введение" означает обеспечение фармацевтического средства индивидууму и содержит, но без ограничения ими, введение медицинским работником и самостоятельное введение. Введение фармацевтического средства индивидууму может быть непрерывным, хроническим, коротким или периодическим. Введение может быть парентеральным или энтеральным.
"Средство" означает активное вещество, которое при введении животному может обеспечивать терапевтический эффект. "Первое средство" означает терапевтическое соединение по настоящему изобретению. Например, первое средство может быть антисмысловым олигонуклеотидом, специфичным по отношению к apo(a). "Второе средство" означает второе терапевтическое соединение по настоящему изобретению (например, второй антисмысловой олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a)), и/или терапевтическое соединение отличное от apo(a).
"Нейтрализация" или "деинтенсификация" или "уменьшение интенсивности" относится к уменьшению по меньшей мере одного индикатора, признака или симптома ассоциированной болезни, расстройства или заболевания. Тяжесть индикаторов можно определить с помощью субъективных и объективных мер, которые известны специалистам в данной области техники.
"Животное" соответствует человеку или животному, отличному от человека, в том числе, но без ограничения ими, мышам, крысам, кроликам, собакам, кошкам, свиньям и приматам, в том числе, но без ограничения ими, обезьянам и шимпанзе.
"Антитело" соответствует молекуле, которая характеризуется специфичным взаимодействием с антигеном таким способом, где каждое антитело и антиген определено в терминах другого. Антитело может относиться к полной молекуле антитела или любому его фрагменту или области, такой как тяжелая цепь, легкая цепь, область Fab и область Fc.
"Антисмысловая активность" означает заметную или измеримую активность, обусловленную гибридизацией антисмыслового соединения со своей нуклеиновой кислотой-мишенью. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловая активность представляет собой уменьшение количества или экспрессии нуклеиновой кислоты-мишени или протеина, кодируемого такой нуклеиновой кислотой-мишенью.
"Антисмысловое соединение" означает олигомерное соединение, которое способно вступать в гибридизацию с нуклеиновой кислотой-мишенью с помощью водородных связей. Примеры антисмысловых соединений содержат одноцепочечные и двухцепочечные соединения, такие как, антисмысловые олигонуклеотиды, siRNA, shRNA, snoRNA, miRNA и сателлитные повторы. Как используют в данном документе, термин "антисмысловое соединение" охватывает фармацевтически приемлемые производные соединений, описанных в данном документе.
"Антисмысловое ингибирование" означает снижение уровней нуклеиновой кислоты-мишени или уровней протеина-мишени в присутствии антисмыслового соединения, комплементарного нуклеиновой кислоте-мишени по сравнению с уровнями нуклеиновой кислоты-мишени или уровнями протеина-мишени при отсутствии антисмыслового соединения.
"Антисмысловой олигонуклеотид" означает одноцепочечный олигонуклеотид, имеющий последовательность нуклеиновых оснований, которая делает возможной гибридизацию соответствующей области или сегмента нуклеиновой кислоты-мишени. Как используют в данном документе, термин "антисмысловой олигонуклеотид" охватывает фармацевтически приемлемые производные соединений, описанных в данном документе.
"Аро(а)" означает любую нуклеиновую кислоту или белковую последовательность, кодирующую apo(a). Например, в отдельных вариантах реализации настоящего изобретения apo(a) содержит последовательность DNA, кодирующую apo(a), последовательность RNA, транскрибируемую из DNA, кодирующей apo(a) (в том числе геномных DNA, содержащей интроны и экзоны), последовательность mRNA, кодирующую apo(a) или последовательность, кодирующую пептид apo(a).
"Нуклеиновая кислота apo(a)" означает любую нуклеиновую кислоту, которая кодирует apo(a). Например, в отдельных вариантах реализации настоящего изобретения нуклеиновая кислота apo(a) содержит последовательность DNA, кодирующую apo(a), последовательность RNA, транскрибируемую из DNA, кодирующей apo(a) (в том числе геномной DNA, содержащей интроны и экзоны) и последовательность mRNA, кодирующую apo(a).
"mRNA apo(a)" означает mRNA, кодирующую протеин apo(a).
"Протеин apo(a)" означает любую белковую последовательность, кодирующую Аро(а).
"Аро(а)-специфичный ингибитор" соответствует любому средству, способному специфично ингибировать экспрессию нуклеиновой кислоты apo(a) и/или протеина apo(a). Например, apo(a)-специфичный ингибитор содержит нуклеиновые кислоты (в том числе антисмысловые соединения), пептиды, антитела, малые молекулы и другие средства, способные ингибировать экспрессию нуклеиновой кислоты apo(a) и/или протеина apo(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения с помощью специфичного модулирования экспрессии нуклеиновой кислоты apo(a) и/или экспрессии протеина apo(a), apo(a)-специфичный ингибитор может влиять на другие компоненты системы транспорта липидов, в том числе компоненты ниже по потоку. Аналогичным образом, в отдельных вариантах реализации настоящего изобретения apo(a)-специфичные ингибиторы могут влиять на другие молекулярные процессы в организме животного.
"Атеросклероз" означает артериосклероз, затрагивающий большие и средние артерии и характеризующийся наличием жировых отложений. Жировые отложения называются "атеромы" или "бляшки", которые состоят в основном из холестерина и других жиров, кальция и рубцовой ткани, и повреждают оболочку артерий.
"Бициклический сахар" означает фуранозильное кольцо, модифицированное мостиком из двух атомов. Бициклический сахар является модифицированным сахаром.
"Бициклический нуклеозид" (либо BNA) означает нуклеозид, который имеет остаток сахара, содержащий мостик, соединяющий два атома углерода кольца сахара, тем самым образуя бициклическую кольцевую систему. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения мостик соединяет углерод 4' и углерод 2' кольца сахара.
"Структура кэпа" или "концевой остаток кэпа" означает химические модификации, которые содержатся на любом конце антисмыслового соединения.
"Сердечно-сосудистое заболевание" или "сердечно-сосудистое расстройство" относится к группе заболеваний, связанных с сердцем, кровеносными сосудами или циркуляцией. Примеры сердечно-сосудистых болезней содержат, но без ограничения ими, аневризму, стенокардию, аритмию, атеросклероз, болезни сосудов головного мозга (удар), ишемическую болезнь сердца, гипертензию, дислипидемию, гиперлипидемию, гипертриглицеридемию и гиперхолестеринемию.
"Химически индивидуальная область" относится к области антисмыслового соединения, которая является в некотором роде химически отличной от другой области того же антисмыслового соединения. Например, область, которая имеет 2'-O-метоксиэтилнуклеотиды, является химически отличной от области, которая имеет нуклеотиды без модификации 2'-O-метоксиэтилом.
"Гибридное антисмысловое соединение" означает антисмысловое соединение, которое имеет по меньшей мере две химически различные области.
"Холестерин" представляет собой молекулу стерина, обнаруживаемую в клеточных мембранах всех тканей животных. Холестерин должен переноситься в плазме крови животного с помощью липопротеинов, в том числе липопротеинов очень низкой плотности (VLDL), липопротеидов средней плотности (IDL), липопротеинов низкой плотности (LDL) и липопротеинов высокой плотности (HDL). "Холестерин плазмы" соответствует сумме всех липопротеинов (VDL, IDL, LDL, HDL) этерифицированного и/или этерифицированного холестерина, присутствующего в плазме или сыворотке.
"Ингибитор поглощения холестерина" означает средство, которое ингибирует всасывание экзогенного холестерина, полученного из питания.
"Совместное введение" означает введение индивидууму двух или более средств. Два или более средств могут быть в одной фармацевтической композиции или могут быть в виде отдельных фармацевтических композиций. Каждое из двух или более средств может быть введено с помощью одинаковых или различных путей введения. Совместное введение охватывает параллельное или последовательное введение.
"Комплементарность" означает способность к спариванию между нуклеиновыми основаниями первой нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения комплементарность между первой и второй нуклеиновыми кислотами может быть между двумя нитями DNA, между двумя нитями RNA или между нитями DNA и RNA. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения некоторые из нуклеотидов в одной нити совпадают с комплементарным, в соответствии с образованием водородных связей, основанием на другой нити. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения все из нуклеотидов на одной нити совпадают с комплементарными, в соответствии с образованием водородных связей, основаниями другой нити. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения первая нуклеиновая кислота представляет собой антисмысловое соединение, а вторая нуклеиновая кислота представляет собой нуклеиновую кислоту-мишень. В отдельных подобных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловой олигонуклеотид представляет собой первую нуклеиновую кислоту, а нуклеиновая кислота-мишень представляет собой вторую нуклеиновую кислоту.
"Этил с ограниченной конформационной свободой" или "cEt" соответствует бициклическому нуклеозиду, который имеет фуранозный сахар, содержащий мостик метил(метиленокси) (4'-СН(CH3)-O-2') между атомами углерода 4' и 2'.
"Этилнуклеозид с ограниченной конформационной свободой" (либо нуклеозид cEt) означает нуклеозид, который содержит бициклический остаток сахара, содержащий мостик 4'-СН(CH3)-O-2'.
"Смежные нуклеиновые основания" означают нуклеиновые основания в непосредственной близости друг к другу.
"Перекрестно-реагирующий" означает, что олигомерное соединение, специфичное по отношению к одной последовательности нуклеиновой кислоты, может гибридизоваться с другой последовательностью нуклеиновой кислоты. Например, в некоторых случаях антисмысловой олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a) человека, может перекрестно реагировать с apo(a) другого вида. Не смотря на то, что олигомерное соединение перекрестно реагирует с последовательностью нуклеиновой кислоты не так, как это задумано, мишень зависит от степени комплементарности соединения, которую имеет с последовательностью, отличной от последовательности нуклеиновой кислоты-мишени. Чем выше комплементарность между олигомерным соединением и нуклеиновой кислотой, отличной от нуклеиновой кислоты-мишени, более вероятно, что олигомерное соединение будет перекрестно реагировать с нуклеиновой кислотой.
"Лечение" означает способ, который восстанавливает здоровье или предписанное лечение в случае болезни.
"Ишемическая болезнь сердца (CHD)" означает сужение мелких кровеносных сосудов, снабжающих кровь и кислород к сердцу, что часто является результатом атеросклероза.
"Дезоксирибонуклеотид" означает нуклеотид, который имеет водород в 2' положении остатка сахара нуклеотида. Дезоксирибонуклеотиды могут быть модифицированы любым из множества заместителей.
"Сахарный диабет" или "диабет" представляет собой синдром, характеризующийся расстроенным метаболизмом и аномально высоким уровнем сахара в крови (гипергликемией) в результате недостаточного уровня инсулина или снижения чувствительности к инсулину. Характерными симптомами являются чрезмерное производство мочи (полиурия) за счет высоких уровней глюкозы в крови, чрезмерная жажда и повышенное потребления жидкости (полидипсии), которые приводят к компенсированию повышенного мочеиспускания, нарушения зрения, в связи с высокими влияниями глюкозы крови на оптику глаза, необъяснимая потеря веса и вялость.
"Диабетическая дислипидемия" или "диабет 2-го типа с дислипидемией" означает заболевание, которое характеризуется сахарным диабетом 2-го типа, снижением HDL-C, повышенными триглицеридами (ТГ) и повышенными маленькими, плотными частицами LDL.
"Разбавитель" означает ингредиент в композиции, которая испытывает недостаток фармакологической активности, но фармацевтически необходимый или желателен. Например, разбавитель в инъектируемой композиции может представлять собой жидкость, например, солевой раствор.
"Дислипидемия" относится к расстройству липидного и/или липопротеинового метаболизма, в том числе перепроизводства или дефицита липида и/или липопротеина. Дислипидемии могут проявляться с помощью повышения липидов, таких как хиломикрон, холестерин и триглицериды, а также липопротеины, такие как липопротеины низкой плотности (LDL).
"Единица дозирования" означает форму, в которой фармацевтическое средство обеспечивают, например, пилюли, таблетки или другую единицу дозирования, известную в данной области. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения единица дозирования представляет собой пробирку, которая содержит лиофилизированный антисмысловой олигонуклеотид. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения единица дозирования представляет собой пробирку, которая содержит восстановленный антисмысловой олигонуклеотид.
"Доза" означает указанное количество фармацевтического средства, обеспеченного в отдельном введении или в течение определенного периода времени. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения доза может быть введена в виде одного, двух или более болюсов, таблеток или инъекций. Например, в отдельных вариантах реализации настоящего изобретения, если желательно подкожное введение, а желаемая доза требует объем, который не так легко разместить с помощью одной инъекции, то для достижения требуемой дозы могут быть использованы две или более инъекций. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения фармацевтическое средство вводят с помощью инфузии в течение длительного периода времени или непрерывно. Дозы могут быть выражены в качестве количества фармацевтического средства за час, день, неделю или месяц. Дозы могут быть выражены как мг/кг или г/кг.
"Эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" означает количество активного фармацевтического средства, достаточное для осуществления желаемого физиологического результата у индивидуума, нуждающегося в средстве. Эффективное количество может варьироваться между отдельными людьми в зависимости от здоровья и физического состояния человека, которого лечат, таксономической группы лиц, которых лечат, состава композиции, оценки состояния здоровья индивида и других соответствующих факторов.
"Полностью комплементарный" или "100% комплементарный" означает, что каждое нуклеиновое основание из последовательности нуклеиновых оснований первой нуклеиновой кислоты имеет комплементарное ему нуклеиновое основание во второй последовательности нуклеиновых оснований второй нуклеиновой кислоты. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения первая нуклеиновая кислота представляет собой антисмысловое соединение, а вторая нуклеиновая кислота представляет собой нуклеиновую кислоту-мишень.
"Фуранозил" означает структуру, которая содержит 5-членное кольцо, содержащее четыре атома углерода и один атом кислорода.
"Гэпмер" означает гибридное антисмысловое соединение, в котором внутренняя область, имеющая множество нуклеозидов, которые поддерживают расщепление RNазой H, расположено между внешними областями, имеющими один или несколько нуклеозидов, при том, что нуклеозиды содержат внутреннюю область, химически отличную от нуклеозида или нуклеозидов, которые содержат внешние регионы. Внутренняя область может упоминаться как "разрыв", а внешние области могут упоминаться как "концы".
"С увеличенным разрывом" означает гибридное антисмысловое соединение, которое имеет сегмент разрыва из 12 или более смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов, расположенных между и в непосредственной близости к сегментам 5' и 3' конца, которые имеют от одного до шести нуклеозидов.
"Глюкоза" является моносахаридом, который используют с помощью клеток в качестве источника энергии и промежуточного продукта воспаления. "Глюкоза в плазме" соответствует глюкозе, которая присутствует в плазме.
"Высокая плотность липопротеина-C" или "HDL-C" означает уровень холестерина, связанного с частицами липопротеинов высокой плотности. Концентрация HDL-C в сыворотке крови (или плазме), как правило, количественно определяют в мг/дл или нмоль/л. "HDL-C в сыворотке" и "HDL-C в плазме" означает HDL-C в сыворотке крови и плазмы, соответственно.
"Ингибитор HMG-CoA редуктазы" означает средство, которое действует через ингибирование фермента HMG-CoA-редуктазы, такое как аторвастатин, розувастатин, флувастатин, ловастатин, правастатин и симвастатин.
"Гибридизация" означает ренатурацию комплементарных молекул нуклеиновых кислот. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения комплементарные молекулы нуклеиновых кислот содержат антисмысловое соединение и нуклеиновую кислоту-мишень.
"Гиперхолестеринемия" означает заболевание, характеризующееся повышенным уровнем холестерина или циркулирующего (в плазме) холестерина, LDL-холестерина и VLDL-холестерина, в соответствии с рекомендациями Expert Panel Report National Cholesterol Educational Program (NCEP) of Detection, Evaluation of Treatment касательно высокого уровня холестерина у взрослых (смотри, Arch. Int. Med. (1988) 148, 36-39).
"Гиперлипидемия" или "гиперлипемия" является заболеванием, характеризующимся повышенными липидами в сыворотке или циркулирующими липидами (в плазме). Это заболевание проявляет аномально высокую концентрацию жиров. Липидные фракции в циркулирующей крови представляют собой холестерин, липопротеины низкой плотности, липопротеины очень низкой плотности, хиломикроны и триглицериды. Классификация гиперлипидемий по Фредриксону основана на структуре TG и липопротеиновых частицы богатых на холестерин, что измеряют с помощью электрофореза или ультрацентрифугированием и обычно используют для определения основных причин гиперлипидемий, таких как гипертриглицеридемия (Fredrickson и Lee, Circulation, 1965, 31:321-327; Fredrickson et al., New Eng J Med, 1967, 276 (1): 34-42).
"Гипертриглицеридемия" означает заболевание, которое характеризуется повышенными уровнями триглицерида. Этиология содержит первичные (т.е. генетические причины) и вторичные (другие лежащие в основе причины, такие как диабеты, метаболический синдром/инсулинорезистентность, ожирение, отсутствие физической активности, курение, избыток алкоголя и диета с очень высоким содержанием углеводов) факторы или, чаще всего, комбинация обоих (Yuan et al. CMAJ, 2007, 176:1113-1120).
"Идентификация" или "выбор животного с метаболическим или сердечно-сосудистым заболеванием" означает определение или выбор пациента, склонного к, или имеющего, диагнозу метаболического заболевания, сердечно-сосудистого заболевания или метаболического синдрома; или, идентификация или выбор пациента, который имеет любой симптом метаболического заболевания, сердечно-сосудистого заболевания или метаболического синдрома, в том числе, но без ограничения ими, гиперхолестеринемии, гипергликемии, гиперлипидемии, гипертриглицеридемии, инсулинорезистентности, вызванной гипертонии, снижения чувствительности к инсулину, массы тела выше нормальной и/или содержания жира выше нормального или их любую комбинацию. Такая идентификация может быть выполнена любым способом, который включает, но без ограничения ими, стандартные клинические тесты или оценки, такие как измерения холестерина в сыворотке или циркулирующего (в плазме) холестерина, измерения глюкозы в сыворотке или глюкозы, циркулирующей (в плазме) в крови, измерения триглицеридов в сыворотке или триглицеридов, циркулирующих (в плазме) в крови, измерение кровяного давления, измерение содержания жира, измерение массы тела и подобные.
"Улучшенный сердечно-сосудистый результат" означает снижение возникновения неблагоприятных сердечно-сосудистых осложнений или их риска. Примеры неблагоприятных сердечно-сосудистых событий содержат, но без ограничения ими, смерть, повторный инфаркт, инсульт, кардиогенный шок, отек легких, остановку сердца и предсердную аритмию.
"В непосредственной близости" означает отсутствие промежуточных элементов между непосредственно примыкающими элементами, например, между областями, сегментами, нуклеотидами и/или нуклеозидами.
"Повышение HDL" или "рост HDL" означает повышение уровня HDL у животного после введения по меньшей мере одного соединения по настоящему изобретению, по сравнению с уровнем HDL у животного, которому не вводили никакого соединения.
"Индивидуум", "пациент" или "животное" означает человека или отличного от человека животного, выбранного для лечения или терапии.
"Индивидуум, нуждающийся в этом" соответствует человеку или отличному от человека животного, выбранному для лечения или терапии, который нуждается в таком лечении или терапии.
"Индуцирование", "ингибирование", "усиление действия", "повышение", "увеличение", "уменьшение", "снижение" или подобное обозначает количественные различия между двумя состояниями. Например, "количество, эффективное для ингибирования активности или экспрессии apo(a)" означает, что уровень активности или экспрессии apo(a) в обработанном образце будет отличаться от уровня активности или экспрессии apo(a) в необработанном образце. Такие термины применяют к, например, уровням экспрессии и уровням активности.
"Воспалительное заболевание" соответствует болезни, болезненному состоянию, синдрому или другому состоянию, к которому приводит воспаление. Например, ревматоидный артрит и фиброз печени являются воспалительными заболеваниями. Другие примеры воспалительных заболеваний содержат сепсис, ишемию миокарда/реперфузионное повреждение, респираторный дистресс-синдром у взрослых, нефрит, отторжение трансплантата, воспалительное заболевание кишечника, рассеянный склероз, артериосклероз, атеросклероз и васкулит.
"Ингибирование экспрессии или активности" соответствует снижению или блокировке экспрессии или активности RNA или протеина и, необязательно, указывает на полную ликвидацию экспрессии или активности.
"Инсулинорезистентность" определяют как заболевание, в котором нормальные количества инсулина являются недостаточными для получения нормальной инсулиновой реакции от жировых, мышечных и печеночных клеток. Инсулинорезистентность в жировых клетках приводит к гидролизу запасенных триглицеридов, что поднимает свободные жирные кислоты в плазме крови. Инсулинорезистентность в мышцах снижает поглощение глюкозы, в то время как резистентность к инсулину в печени уменьшает хранение глюкозы, причем оба эффекта служат для повышения глюкозы в крови. Высокие уровни инсулина и глюкозы в плазме, в связи с резистентностью к инсулину, часто приводят к метаболическому синдрому и сахарному диабету 2-го типа.
"Чувствительность к инсулину" является мерой того, насколько эффективно индивидуум перерабатывает глюкозу. Индивидуум, имеющий высокую чувствительность к инсулину, перерабатывает глюкозу, тогда как индивидуум с низкой чувствительностью к инсулину перерабатывает глюкозу неэффективно.
"Межнуклеозидная связь" относится к химической связи между нуклеозидами.
"Внутривенное введение" означает введение в вену.
"Связанные нуклеозиды" означают смежные нуклеозиды, которые связаны между собой.
"Гиполипидемия" означает снижение одного или более липидов (например, LDL, VLDL) у пациента. "Гиперлипидемия" означает увеличение липида (например, HDL) у пациента. Гиполипидемия или гиперлипидемия могут наблюдаться при одной или нескольких дозах в течение времени.
"Гиполипидемическая терапия" или "гиполипидемическое средство" означает терапевтический режим, обеспечиваемый пациенту для того, чтобы снизить один или несколько липидов у пациента. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения гиполипидемическую терапию обеспечивают для того, чтобы снизить один или несколько из apo(a), CETP, apoB, общего холестерина, LDL-C, VLDL-C, IDL-C, non-HDL-C, триглицеридов, небольших плотных частиц LDL и Lp(a) у пациента. Примеры гиполипидемической терапии содержат, но без ограничения ими, ингибиторы apoB, статины, фибраты и ингибиторы MTP.
"Липопротеин", такой как VLDL, LDL и HDL, соответствует группе протеинов, обнаруженных в сыворотке, плазме и лимфе и играет важную роль в транспорте липидов. Химическая композиция каждого липопротеина отличается, например, тем, что HDL, по сравнению с липидом, имеет более высокую долю протеина, в то время как VLDL, по сравнению с липидом, имеет меньшую долю протеина.
"Lp(a)" содержит apo(a) и LDL-подобную частицу, которая содержит ароВ. Аро(а) связывается с apoB с помощью дисульфидной связи.
"Липопротеины низкой плотности-холестерин (LDL-С)" означает холестерин, который переносят в частицах липопротеинов низкой плотности. Концентрацию LDL-С в сыворотке (или плазме), как правило, количественно определяют в мг/дл или нмоль/л. "LDL-С в сыворотке" и "LDL-C в плазме" означает LDL-С в сыворотке и в плазме, соответственно.
"Основные факторы риска" соответствуют тем факторам, которые способствуют высокому риску конкретной болезни или заболевания. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения основные факторы риска ишемической болезни сердца содержат, без ограничения, курение, гипертонию, высокий уровень LDL, низкий уровень HDL-C, семейный анамнез заболеваний сердечно-сосудистой системы, возраст и другие факторы, описанные в данном документе.
"Метаболическое расстройство" или "метаболическая болезнь" соответствует заболеванию, которое характеризуется изменением или нарушением метаболической функции. "Метаболический" и "метаболизм" представляют собой термины, хорошо известные в данной области техники и, как правило, содержат целый ряд биохимических процессов, протекающих в живом организме. Нарушения обмена веществ содержат, но без ограничения ими, гипергликемию, преддиабеты, диабеты (1-го типа и 2-го типа), ожирение, инсулинорезистентность, метаболический синдром и дислипидемию вследствие диабета 2-го типа.
"Метаболический синдром" означает заболевание, которое характеризуется кластеризацией липидов и нелипидных сердечно-сосудистых факторов риска метаболического происхождения. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения метаболический синдром определяют присутствием любого из 3 следующих факторов: окружности талии более 102 см у мужчин или больше 88 см у женщин; триглицериды в сыворотке по меньшей мере 150 мг/дл; HDL-C менее 40 мг/дл у мужчин или менее 50 мг/дл у женщин; кровяное давление по меньшей мере 130/85 мм рт.ст.; и уровень глюкозы в крови натощак по меньшей мере 110 мг/дл. Эти детерминанты могут быть легко измерены в клинической практике (JAMA, 2001, 285: 2486-2497).
"Несоответствие" или "некомплементарное нуклеиновое основание" соответствует случаю, когда олигонуклеотид из первой нуклеиновой кислоты не способен образовать пару с соответствующим нуклеиновым основанием второй нуклеиновой кислоты или нуклеиновой кислоты-мишени.
"Смешанная дислипидемия" означает заболевание, которое характеризуется повышенным холестерином и повышенными триглицеридами.
"Модифицированная межнуклеозидная связь" относится к замещению или любому изменению встречающейся в природе межнуклеозидной связи (т.е. фосфодиэфирной межнуклеозидной связи). Например, тиофосфатная связь представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь.
"Модифицированное нуклеиновое основание" соответствует любому нуклеиновому основанию, кроме аденина, цитозина, гуанина, тимидина или урацила. Например, 5-метилцитозин представляет собой модифицированное нуклеиновое основание. "Немодифицированное нуклеиновое основание" означает пуриновые основания аденин (А) и гуанин (G) и пиримидиновые основания тимин (Т), цитозин (С) и урацил (U).
"Модифицированный нуклеозид" означает нуклеозид, который имеет по меньшей мере один модифицированный остаток сахара и/или модифицированное нуклеиновое основание.
"Модифицированный нуклеотид" означает нуклеотид, который имеет по меньшей мере один модифицированный остаток сахара, модифицированную межнуклеозидную связь и/или модифицированное нуклеиновое основание.
"Модифицированный олигонуклеотид" означает олигонуклеотид, который содержит по меньшей мере один модифицированный нуклеотид.
"Модифицированный сахар" соответствует замещению или изменению по сравнению с природным сахаром. Например, модифицированный 2'-O-метоксиэтилом сахар представляет собой модифицированный сахар.
"Нуклеозид MOE" означает нуклеозид, содержащий 2'-замещенный остаток сахара, который содержит MOE в 2'-положении.
"Мотив" означает образец химически индивидуальных областей в антисмысловом соединении.
"Встречающаяся в природе межнуклеозидная связь" означает фосфодиэфирную связь между 3' и 5'.
"Природный остаток сахара" означает сахар, который присутствует в DNA (2'-Н) или RNA (2'-ОН).
"Нуклеиновая кислота" соответствует молекулам, состоящим из мономерных нуклеотидов. Нуклеиновая кислота содержит рибонуклеиновые кислоты (RNA), дезоксирибонуклеиновые кислоты (DNA), одноцепочечные нуклеиновые кислоты (ssDNA), двухцепочечные нуклеиновые кислоты (dsDNA), малые интерферирующие рибонуклеиновые кислоты (siRNA) и microRNA (miRNA). Нуклеиновая кислота может также содержать любую комбинацию этих элементов в одной молекуле.
"Нуклеиновое основание" означает гетероциклический остаток, способный образовывать пару с основанием другой нуклеиновой кислоты.
"Комплементарность нуклеинового основания" соответствует нуклеиновому основанию, которое способно образовывать пару с другой нуклеиновой кислотой. Например, в DNA, аденин (А) комплементарен тимину (Т). Например, в RNA, аденин (А) комплементарен урацилу (U). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения комплементарное нуклеиновое основание относится к нуклеиновому основанию антисмыслового соединения, которое способно образовывать пару оснований с нуклеиновым основанием его нуклеиновой кислоты-мишени. Например, если нуклеиновое основание в определенном положении антисмыслового соединения способно к образованию водородных связей с нуклеиновым основанием в определенном положении нуклеиновой кислоты-мишени, то олигонуклеотид и нуклеиновая кислота-мишень, как полагают, являются комплементарными в этой паре нуклеиновых оснований.
"Последовательность нуклеиновых оснований" означает порядок смежных нуклеиновых оснований, независимых от любого сахара, связи или модификации нуклеинового основания.
"Нуклеозид" означает нуклеиновое основание, связанное с сахаром.
"Миметик нуклеозида" содержит в себе те структуры, которые используют для замены сахара или сахара и основания, и, не обязательно, связь в одной или нескольких позициях олигомерного соединения; например миметики нуклеозидов, которые имеют морфолиновые, циклогексенильные, циклогексильные, тетрагидропиранильные, бициклические или трициклические миметики сахара, такие как не-фуранозные единицы сахара.
"Нуклеотид" означает нуклеозид, который имеет фосфатную группу, ковалентно связанную с сахарной частью нуклеозида.
"Миметик нуклеотида" содержит те структуры, используемые для замены нуклеозида и связь в одном или нескольких положениях олигомерного соединения, такие как, например, пептидные нуклеиновые кислоты или морфолины (морфолины, соединенные -N(H)-C(=O)-O- или другой связью, отличной от фосфодиэфирной).
"Олигомерное соединение" или "олигомер" означает полимер из связанных мономерных субъединиц, которые способны к гибридизации с областью молекулы нуклеиновой кислоты. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения олигомерные соединения представляют собой олигонуклеозиды. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения олигомерные соединения представляют собой олигонуклеотиды. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения олигомерные соединения представляют собой антисмысловые соединения. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения олигомерные соединения представляют собой антисмысловые олигонуклеотиды. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения олигомерные соединения представляют собой гибридные олигонуклеотиды.
"Олигонуклеотид" означает полимер из связанных нуклеозидов, каждый из которых может быть модифицированным или немодифицированным независимо друг от друга.
"Парентеральное введение" означает введение с помощью инъекции или инфузии. Парентеральное введение содержит подкожное введение, внутривенное введение, внутримышечное введение, внутриартериальное введение, внутрибрюшинное введение или внутричерепное введение, например, интратекальное или интрацеребровентрикулярное введение. Введение может быть непрерывным, хроническим, коротким или периодическим.
"Пептид" означает молекулу, образованную путем соединения с помощью амидных связей по меньшей мере двух аминокислот. Пептид относится к полипептидам и протеинам.
"Фармацевтическое средство" означает вещество, которое обеспечивает терапевтический эффект при введении индивидууму. Например, в отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловой олигонуклеотид, направленный на apo(a), представляет собой фармацевтическое средство.
"Фармацевтическая композиция" или "композиция" означает смесь веществ, подходящих для введения индивидууму. Например, фармацевтическая композиция может содержать одно или несколько активных средств и фармацевтический носитель, например, стерильный водный раствор.
"Фармацевтически приемлемый носитель" означает среду или разбавитель, которые не нарушают структуру соединения. Некоторые из таких носителей позволяют фармацевтическим композициям быть составленными в виде, например, таблеток, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, взвесей, суспензий и пастилок для перорального введения пациенту. Некоторые из таких носителей позволяют фармацевтическим композициям быть составленными в виде инъекции, инфузии или инъекции для местного введения. Например, фармацевтически приемлемый носитель может быть стерильным водным раствором.
"Фармацевтически приемлемое производное" охватывает производные соединений, описанных в данном документе, такие как сольваты, гидраты, сложные эфиры, пролекарства, полиморфы, изомеры, меченные изотопами варианты, фармацевтически приемлемые соли и другие производные, известные в данной области техники.
"Фармацевтически приемлемые соли" означает физиологически и фармацевтически приемлемые соли антисмысловых соединений, напр., соли, которые сохраняют желаемую биологическую активность исходного соединения и не придают ему нежелательные токсикологические эффекты. Термин "фармацевтически приемлемая соль" или "соль" содержит соль, полученную из фармацевтически приемлемых нетоксичных кислот или оснований, в том числе неорганических или органических кислот и оснований. "Фармацевтически приемлемые соли" соединений, описанных в данном документе, могут быть получены с помощью способов, хорошо известных в данной области техники. Для обзора фармацевтически приемлемых солей см. Stahl и Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002). Могут быть использованы и хорошо подходят для терапевтического введения людям натриевые соли антисмысловых олигонуклеотидов. Соответственно, в отдельном варианте реализации настоящего изобретения соединения, описанные в данном документе, существуют в форме натриевой соли.
"Тиофосфатная связь" означает связь между нуклеозидами, при том, что фосфодиэфирную связь модифицируют с помощью замены одного из немостиковых атомов кислорода атомом серы. Тиофосфатная связь (P=S) представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь.
"Сегмент" означает определенное количество последовательных (т.е. связанных) нуклеиновых оснований нуклеиновой кислоты. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения часть представляет собой определенное количество последовательных нуклеотидов нуклеиновой кислоты-мишени. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения сегмент представляет собой определенное количество последовательных нуклеотидов антисмыслового соединения.
"Профилактика" или "предотвращение" соответствует запаздыванию или предупреждению начала или развития болезни, расстройства или состояния в течение периода времени от нескольких минут до бесконечности. Профилактика также означает снижение риска развития болезни, расстройства или состояния.
"Пролекарство" означает терапевтическое средство, которое готовят в неактивной форме, превращающейся в активную форму (т.е. лекарственное средстве) в организме или его клетках под действием эндогенных ферментов или других химических веществ или условий.
"Повышение" означает увеличение количества. Например, повышение уровней HDL в плазме означает увеличение количества HDL в плазме.
"Снижение" означает снижение до меньшей степени, размера, количества, или числа. Например, снижение уровня триглицеридов в плазме означает, снижение количества триглицеридов в плазме.
"Область" или "область-мишень" определяют как сегмент нуклеиновой кислоты-мишени, которая имеет по меньшей мере одну идентифицируемую структуру, функцию или характеристику. Например, область мишень может охватывать 3' UTR, 5' UTR, экзон, интрон, переход экзон/интрон, кодирующую область, область инициации трансляции, область терминации трансляции или другую определенную область нуклеиновой кислоты. Структурно определенные области в случае apo(a) могут быть получены с помощью номера доступа из баз данных последовательностей, таких как NCBI, а такая информация содержится в данном документе в виде ссылки. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения область мишень может содержать в себе последовательность от сайта-мишени 5' одного сегмента-мишени в пределах области-мишени до 3' сайта-мишени другого сегмента-мишени в области-мишени.
"Рибонуклеотид" означает нуклеотид, который имеет гидроксильную группу в положении 2' сахарной части нуклеотида. Рибонуклеотиды могут быть модифицированы любым из множества заместителей.
"Второе средство" или "второе терапевтическое средство" означает средство, которое может быть использовано в сочетании с "первым средством". Второе терапевтическое средство может содержать, но без ограничения ими, антисмысловые олигонуклеотиды, специфичные по отношению к apo(a) или apoB. Второе средство может также содержать анти -apo(a) антитела, пептидные ингибиторы apo(a), понижающие уровень холестерина средства, гиполипидемические средства, средства, понижающие глюкозу и противовоспалительные средства.
"Сегменты" определяют как небольшие субфрагменты областей в пределах нуклеиновой кислоты. Например, "сегмент-мишень" означает последовательность нуклеотидов нуклеиновой кислоты-мишени, на которое действуют одно или несколько антисмысловых соединений. "Сайт-мишень 5'" соответствует крайнему 5' нуклеотиду сегмента-мишени. "Сайт-мишень 3'" соответствует крайнему 3' нуклеотиду сегмента-мишени. Кроме того, "начальный сайт" может относиться к крайнему 5' нуклеотиду сегмента-мишени, а "сайт остановки" относится к крайнему 3' нуклеотиду сегмента-мишени. Сегмент-мишень может также начинаться на "начальном сайте" последовательности и заканчиваться на "сайте остановки" другой последовательности.
"Укороченные" или "усеченные" версии антисмысловых олигонуклеотидов или нуклеиновых кислот-мишеней, описанных в данном документе, имеют один, два или несколько удаленных нуклеозидов.
"Побочные эффекты" означают физиологические реакции, относящиеся к лечению, отличные от желаемого эффекта. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения побочные эффекты содержат реакции в месте инъекции, отклонения от нормы печеночной пробы, отклонения от нормы почечной функции, гепатотоксичность, нефротоксичность, отклонения от нормы центральной нервной системы, миопатии и недомогание. Например, увеличенные уровни аминотрансфераз в сыворотке могут указывать на гепатотоксичность или отклонение от нормы функции печени. Например, увеличенный билирубин может указывать на гепатотоксичность или отклонение от нормы функции печени.
"Одноцепочечный олигонуклеотид" означает олигонуклеотид, который не гибридизован с комплементарной цепью.
"Специфично поддающийся гибридизации" относится к антисмысловому соединению, которое имеет достаточную степень комплементарности к нуклеиновой кислоте-мишени, чтобы индуцировать желаемый эффект во время экспонирования минимального влияния, или без влияния, на нуклеиновые кислоты, которые не являются мишенями, в условиях, когда специфичное связывание является желательным, то есть в физиологических условиях в случае in vivo анализов и терапевтических лечений.
"Статин" означает средство, которое ингибирует активность HMG-CoA-редуктазы.
"Подкожное введение" означает введение под кожу.
".Пациент" означает человека или не являющегося человеком животное, выбранное для лечения или терапии.
"Остаток сахара" означает встречающийся в природе остаток сахара или модифицированный остаток сахара нуклеозида.
"Симптом сердечно-сосудистой болезни или расстройства" означает явление, которое возникает из-за, и сопровождает, сердечно-сосудистую болезнь или расстройства и служит его признаком. Например, стенокардия; боль в груди; одышка; сердцебиение; слабость; головокружение; тошнота; потливость; тахикардия; брадикардия; аритмия; мерцательная аритмия; отек нижних конечностей; цианоз; усталость; обморок; онемение лица; онемение конечностей; хромота или спазмы мышц; вздутие живота; или лихорадка являются симптомами сердечно-сосудистой болезни или расстройства.
"Специфичный по отношению к" или "направленный на" означает способ создания и выбора антисмыслового соединения, которое специфично гибридизуется с нуклеиновой кислотой-мишенью и вызывает желаемый эффект.
"Нуклеиновая кислота-мишень," "RNA-мишень" и "транскрипт RNA-мишени", все они относятся к нуклеиновой кислоте, способной быть мишенью антисмысловых соединений.
"Терапевтически эффективное количество" означает количество фармацевтического средства, которое обеспечивает индивидууму терапевтический эффект.
"Терапевтическое изменение образа жизни" означает изменения питания и образа жизни, направленные для снижения жира/массы жировой ткани и/или холестерина. Такое изменение может снизить риск развития сердечных заболеваний и может содержать рекомендации для диетического потребления общего количества ежедневных калорий, жира, насыщенных жиров, полиненасыщенных жиров, мононенасыщенных жиров, углеводов, белков, холестерина, нерастворимых волокон, а также рекомендации по физической активности.
"Лечить" или "лечение" соответствуют введению соединения, описанного в данном документе для влияния на изменение или улучшение в случае болезни, расстройства или состояния.
"Триглицерид" или "TG" означает липид или нейтральный жир, состоящий из глицерина в сочетании с тремя молекулами жирной кислоты.
"Диабет 2-го типа" (также известный как "сахарный диабет 2-го типа", "сахарный диабет, тип 2", "инсулиннезависимый диабет", "NIDDM", "связанный с ожирением диабет" или "диабет зрелого возраста") является метаболическим расстройством, которое в первую очередь характеризуется резистентностью к инсулину, относительной недостаточностью инсулина и гипергликемией.
"Немодифицированный нуклеотид" означает нуклеотид, который состоит из встречающихся в природе нуклеиновых оснований, сахарных остатков и межнуклеозидных связей. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения немодифицированный нуклеотид представляет собой нуклеотид RNA (напр. β-D-рибонуклеозиды) или нуклеотид DNA (напр., β-D-дезоксирибонуклеозид).
"Концевой сегмент" означает один или множество нуклеозидов, модифицированных для того, чтобы предать олигонуклеотиду таких свойств, как, например, усиление ингибиторной активности, увеличенную аффинность связывания в случае нуклеиновой кислоты-мишени или устойчивость к разрушению нуклеазами in vivo.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединения и способы уменьшения экспрессии mRNA apo(a) и протеина. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения соединение представляет собой apo(a)-специфичный ингибитор для лечения, предотвращения или уменьшения интенсивности болезни, связанной с apo(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения соединение представляет собой антисмысловой олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a).
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединения и способы уменьшения уровней Lp(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения соединение представляет собой apo(a)-специфичный ингибитор для лечения, предотвращения или уменьшения интенсивности болезни, связанной с apo(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения соединение представляет собой антисмысловой олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a).
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированный олигонуклеотид состоит из от 15 до 30, от 18 до 24, от 19 до 22, от 13 до 25, от 14 до 25, от 15 до 25 связанных нуклеозидов. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по крайней мере 22, по крайней мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26, по меньшей мере 27, по меньшей мере 28, по меньшей мере 29 или 30 связанных нуклеозидов. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), содержащему по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых кислот, комплементарных сегменту любой из SEQ ID NO: 1-4 эквивалентной длины. Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению сегменту apo(a), который содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, или 20 смежных нуклеиновых оснований, комплементарных сегменту эквивалентной длины любого из сегментов-мишеней, приведенных в Таблицах 3-13 и 28-30. В таблицах, "начальный сайт" относится к крайнему 5' нуклеотиду сегмента-мишени и "сайт остановки" относится к крайнему 3' нуклеотиду сегмента-мишени. Сегмент-мишень может изменяться в диапазоне от начального сайта до сайта остановки каждой последовательности, указанной в таблицах. Кроме того, сегмент-мишень может изменяться в диапазоне от начального сайта одной последовательности до конца в сайте остановки в другой последовательности. Например, как приведено в Таблице 5, сегмент-мишень может изменяться в диапазоне 3901-3920, от начального сайта до сайта остановки SEQ ID NO: 58. В другом примере, как приведено в Таблице 5, сегмент-мишень может изменяться в диапазоне 3900-3923, от начального сайта SEQ ID NO: 57 до сайта остановки SEQ ID NO: 61.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), при том, что последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или 100% комплементарна к любой из SEQ ID NO: 1-4. Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), при том, что последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида на по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или 100% комплементарна любому из сегментов-мишеней, приведенных в Таблицах 3-13 и 28-30.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который содержит последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит сегмент из по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований, комплементарных эквивалентной длине сегмента нуклеиновых оснований от 3901 до 3920 SEQ ID NO: 1, при том, что последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида на по крайней мере 80% комплементарна SEQ ID NO: 1.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который содержит последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19, по меньшей мере 20, по меньшей мере 21, по меньшей мере 22, по меньшей мере 23, по меньшей мере 24, по меньшей мере 25, по меньшей мере 26, по меньшей мере 27, по меньшей мере 28, по меньшей мере 29 или 30 смежных нуклеиновых оснований, комплементарных эквивалентной длине части нуклеиновых оснований от 3900 до 3923 SEQ ID NO: 1, при том, что последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида на по крайней мере 80% комплементарна SEQ ID NO: 1.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), состоящий из 12 до 30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых основания в любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12-130, 133, 134. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8 смежных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12-130, 133, 134.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12-20, 22-33, 35-44, 47-50, 51, 53, 57-62, 65-66, 68, 70-79, 81, 85-86, 89-90, 92-94, 97, 105-110, 103-104, 133-134.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 12-19, 26-30, 32, 35, 38-44, 46-47, 50, 57-58, 61, 64-66, 68, 72-74, 76-77, 92-94, 103-110.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 111, 114-121, 123-129.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 14, 17, 18, 26-28, 39, 71, 106-107.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 14, 26-29, 39-40, 82.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 14, 16-18.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 26-27, 107.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 28-29, 39-40, 47.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 28, 93, 104, 134.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), который состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и который имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 58.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8 смежных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 58.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), при том, что модифицированный олигонуклеотид является одноцепочечным.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), при том, что по меньшей мере одна межнуклеозидная связь является модифицированной межнуклеозидной связью. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), при том, что по меньшей мере один нуклеозид содержит модифицированное нуклеиновое основание. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированное нуклеиновое основание представляет собой 5-метилцитозин.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), при том, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере один модифицированный сахар. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированный сахар представляет собой бициклический сахар. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированный сахар содержит 2'-O-метоксиэтил, этил с ограниченной конформационной свободой, 3'-фтор-HNA или мостик 4'-(CH2)n-O-2', где n составляет 1 или 2.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), при том, что модифицированный олигонуклеотид состоит из от 12 до 30 связанных нуклеозидов и содержит: (а) сегмент разрыва, который состоит из связанных дезоксирибонуклеозидов; (b) 5'-концевой сегмент, который состоит из связанных нуклеозидов; (с) 3'-концевой сегмент, который состоит из связанных нуклеозидов; и при этом сегмент разрыва располагают между 5'-концевым сегментом и 3'-концевым сегментом, при том, что каждый нуклеозид каждого концевого сегмента содержит модифицированный сахар.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), при том, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов и содержит: (а) сегмент разрыва, который состоит из десяти связанных дезоксирибонуклеозидов; (b) 5'-концевой сегмент, который состоит из пяти связанных нуклеозидов; (с) 3'-концевой сегмент, который состоит из пяти связанных нуклеозидов; и при этом сегмент разрыва располагают между 5'-концевым сегментом и 3'-концевым сегментом, причем каждый нуклеозид каждого концевого сегмента содержит 2'-O-метоксиэтилсахар, при том, что каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь и при этом каждый остаток цитозина представляет собой 5-метилцитозин.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), при том, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов и имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8 смежных нуклеиновых оснований любой из SEQ ID NO: 12-130, 133, 134, причем модифицированный олигонуклеотид содержит: (а) сегмент разрыва, который состоит из десяти связанных дезоксирибонуклеозидов; (b) 5'-концевой сегмент, который состоит из пяти связанных нуклеозидов; (с) 3'-концевой сегмент, который состоит из пяти связанных нуклеозидов; и при этом сегмент разрыва располагают между 5'-концевым сегментом и 3'-концевым сегментом, при том, что каждый нуклеозид каждого концевого сегмента содержит 2'-O-метоксиэтилсахар, причем каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь и при этом каждый остаток цитозина представляет собой 5-метилцитозин.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), при том, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов и имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 8 смежных нуклеиновых оснований из SEQ ID NO: 58, при том, что модифицированный олигонуклеотид содержит: (а) сегмент разрыва состоит из десяти связанных дезоксирибонуклеозидов; (b) 5'-концевой сегмент, который состоит из пяти связанных нуклеозидов; (с) 3'-концевой сегмент, который состоит из пяти связанных нуклеозидов; и при этом сегмент разрыва располагают между 5'-концевым сегментом и 3'-концевым сегментом, при том, что каждый нуклеозид каждого концевого сегмента содержит 2'-O-метоксиэтилсахар, причем каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь и при этом каждый остаток цитозина представляет собой 5-метилцитозин.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), при том, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов с последовательность нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 58, при том, что модифицированный олигонуклеотид содержит: (а) сегмент разрыва, который состоит из десяти связанных дезоксирибонуклеозидов; (b) 5'-концевой сегмент, который состоит из пяти связанных нуклеозидов; (с) 3'-концевой сегмент, который состоит из пяти связанных нуклеозидов; и при этом сегмент разрыва располагают между 5'-концевым сегментом и 3'-концевым сегментом, при том, что каждый нуклеозид каждого концевого сегмента содержит 2'-O-метоксиэтилсахар, причем каждая межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную связь и при этом каждый остаток цитозина представляет собой 5-метилцитозин.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения соединение находится в форме соли. В дополнительных вариантах реализации настоящего изобретения соединение дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения соединение, которое содержит модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), или его соль и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают композицию, которая содержит соединение, как описано в данном документе, при том, что степень вязкости соединения составляет менее 40 сантипуаз (спз). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения, как описано в данном документе, являются эффективными в силу того, что имеют вязкость менее чем 40 сП, менее чем 35 сП, менее чем 30 сП, менее чем 25 сП, менее чем 20 сП или менее чем 15 сП, при измерении параметров, как описано в Примере 13.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают композиции и способы для применения в терапии для лечения заболеваний, расстройств или состояний, связанных с apo(a). Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают композиции и способы для применения в терапии для лечения заболеваний, расстройств или состояний, связанных с Lp(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения композиция представляет собой соединение, которое содержит apo(a)-специфичный ингибитор. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения apo(a)-специфичный ингибитор представляет собой нуклеиновую кислоту. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения нуклеиновая кислота представляет собой антисмысловое соединение. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловое соединение представляет собой модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированный олигонуклеотид, специфичный по отношению к apo(a), используют при лечении, предотвращении, замедлении прогрессирования, уменьшении интенсивности сердечно-сосудистого и/или метаболического болезни, расстройства или состояния. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения композиции и способы терапии содержат введение apo(a)-специфичного ингибитора индивидууму, нуждающемуся в этом.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают композиции и способы снижения уровней apo(a). Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают композиции и способы снижения уровней Lp(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения снижение уровней apo(a) в тканях, органе или у пациента улучшает отношение LDL к HDL или отношение TG к HDL.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают композиции и способы предотвращения, лечения, запаздывания, замедления прогрессирования и/или уменьшения интенсивности болезней, расстройств и заболеваний, связанных apo(a), у пациента, нуждающегося в этом. Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают композиции и способы предотвращения, лечения, запаздывания, замедления прогрессирования и/или уменьшения интенсивности болезней, расстройств и заболеваний, связанных Lp(a), у пациента, нуждающегося в этом. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения подобные болезни, расстройства и заболевания содержат воспалительные, сердечно-сосудистые и/или метаболические болезни, расстройства и заболевания. Некоторые такие сердечно-сосудистые болезни, расстройства или заболевания содержат, но без ограничения ими, аневризму (например, аневризму брюшной аорты), стенокардию, аритмию, атеросклероз, болезнь сосудов головного мозга, коронарную болезнь сердца, ишемическую болезнь сердца, дислипидемию, гиперхолестеринемию, гиперлипидемию, гипертензию, гипертриглицеридемию, инфаркт миокарда, заболевание периферических сосудов (например, заболевание периферических артерий, окклюзионную болезнь периферических артерий), ретинальную окклюзию сосудов или инсульт. Некоторые такие метаболические болезни, нарушения или заболевания содержат, но без ограничения ими, гипергликемию, преддиабет, сахарный диабет (тип I и тип II), ожирение, резистентность к инсулину, метаболический синдром и диабетическую дислипидемию. Некоторые такие воспалительные болезни, расстройства или заболевания содержат, но без ограничения ими, коронарную болезнь сердца (CAD), болезнь Альцгеймера и тромбоэмболические болезни, расстройства или заболевания. Некоторые тромбоэмболические болезни, расстройства или заболевания содержат, но без ограничения ими, инсульт, тромбоз (например, венозный тромбоз), инфаркт миокарда и заболевание периферических сосудов.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают способ снижения по меньшей мере одного симптома сердечно-сосудистой болезни, расстройства или заболевания. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения симптомы содержат, но без ограничения ими, стенокардию, боль в груди, одышку, сердцебиение, слабость, головокружение, тошноту, потливость, тахикардию, брадикардию, аритмию, мерцательную аритмию, отеки нижних конечностях, цианоз, усталость, обмороки, онемение лица, онемение конечностей, хромоту или спазмы мышц, вздутие живота и лихорадку.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляция экспрессии apo(a) или Lp(a) происходит в клетке, ткани или органа. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляция происходит в клетке или ткани у животного. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляция представляет собой снижение уровня mRNA apo(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляция представляет собой снижение уровня протеина apo(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения снижают уровни mRNA apo(a) и протеина. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляция представляет собой снижение уровня Lp(a). Такое уменьшение может происходить в зависимости от времени или дозозависимо.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения пациент или животное является человеком.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения соединение вводят парентерально. В дополнительных вариантах реализации настоящего изобретения парентеральное введение является подкожным.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения соединение вводят совместно со вторым средством или терапией. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения второе средство представляет собой глюкозо-понижающее средство. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения второе средство представляет собой LDL, TG или холестерин-понижающее средство. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения второе средство представляет собой противовоспалительное средство. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения второе средство представляет собой лекарственное средство против болезни Альцгеймера. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения второе средство может представлять собой, но без ограничения ими, нестероидное противовоспалительное лекарственное средство (NSAID напр., аспирин), ниацин (напр., Niaspan), никотиновую кислоту, ингибитор apoB (напр., Mipomersen), ингибитор CETP (напр., Anacetrapib), ингибитор apo(a), аналоговый тироидного гормона (напр., Eprotirome), ингибитор HMG-CoA-редуктазы (напр., статин), фибрат (напр., Gemfibrozil) и ингибитор микросомального протеина передачи триглицеридов (напр., Lomitapide). Терапия может представлять собой, но без ограничения им, аферез Lp(a). Средства или терапии могут вводить совместно или параллельно. Средства или терапии могут вводить последовательно или последовательно.
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают использование соединения, направленного на apo(a), для уменьшения уровней apo(a) у животного. Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают использование соединения, направленного на apo(a), для уменьшения уровней Lp(a) у животного. Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают использование соединений, направленных на apo(a), для лечения, профилактики или уменьшения интенсивности болезни, расстройства или заболевания, связанного с apo(a). Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают использование соединений, направленных на apo(a) для лечения, профилактики или уменьшения интенсивности болезни, расстройства или заболевания, связанного с Lp(a).
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают использование соединения, направленного на apo(a), при получении лекарственного препарата для уменьшения уровней apo(a) у животного. Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают использование соединения, направленного на apo(a), при получении лекарственного препарата для уменьшения уровней Lp(a) у животного. Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают использование соединения при получении лекарственного препарата для лечения, профилактики или уменьшения интенсивности болезни, расстройства или заболевания, связанного с apo(a). Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают использование соединения при получении лекарственного препарата для лечения, профилактики или уменьшения интенсивности болезни, расстройства или заболевания, связанного с Lp(a).
Отдельные варианты реализации настоящего изобретения обеспечивают набор для лечения, профилактики или уменьшения интенсивности болезни, расстройства или заболевания, как описано в данном документе, при том, что набор содержит: (i) apo(a)-специфичный ингибитор, как описано в данном документе; и, необязательно, (ii) второе средство или терапию, как описано в данном документе.
Набор по настоящему изобретению может дополнительно содержать инструкции по использованию набора для лечения, профилактики или уменьшения интенсивности болезни, расстройства или заболевания, описанных в данном документе, в виде комбинированной терапии, как описано в данном документе.
Антисмысловые соединения
Олигомерные соединения содержат, но без ограничения ими, олигонуклеотиды, олигонуклеозиды, аналоги олигонуклеотида, миметики олигонуклеотидов, антисмысловые соединения, антисмысловые олигонуклеотиды, рибозимы, microRNA и siRNA. Олигомерное соединение может быть "антисмысловым" к нуклеиновой кислоте-мишени, что означает то, что она способна вступать в гибридизацию нуклеиновой кислоты-мишени с помощью водородных связей.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловое соединение имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая, в направлении от 5' до 3', содержит обратный комплемент сегмента-мишени нуклеиновой кислоты-мишени, на который она направлена. В отдельных подобных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловой олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая, в направлении от 5' до 3', содержит обратный комплемент сегмента-мишени нуклеиновой кислоты-мишени, на который она направлена.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту apo(a), содержит от 12 до 30 субъединиц в длину. Другими словами, подобные антисмысловые соединения содержат от 12 до 30 связанных субъединиц. В дополнительных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловое соединение имеет от 8 до 80, от 10 до 80, от 12 до 50, от 15 до 30, от 18 до 24, от 19 до 22, от 13 до 25, от 14 до 25 или от 15 до 25 связанных субъединиц. В отдельных подобных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения имеют 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 или 80 связанных субъединиц в длину или диапазон определяется любыми двумя из указанных выше значений. В отдельных подобных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения имеют 8 связанных субъединиц в длину. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловое соединение представляет собой антисмысловой олигонуклеотид. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения связанные субъединицы представляют собой нуклеозиды.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловое соединение содержит укороченный или усеченный модифицированный олигонуклеотид. Укороченный или усеченный модифицированный олигонуклеотид может иметь один или несколько нуклеозидов, удаленных от 5' конца (5' усечение), один или несколько нуклеозидов, удаленных от 3' конца (3' усечение) или один или несколько нуклеозидов, удаленных из центральной части. С другой стороны, удаленные нуклеозиды могут быть рассредоточены по всему модифицированному олигонуклеотиду, например, в антисмысловом соединении, имеющем один нуклеозид, удаленный с 5' конца, и один нуклеозид, удаленный с 3' конца.
Когда один дополнительный нуклеозид присутствует в удлиненном олигонуклеотиде, дополнительный нуклеозид может быть расположен в центральной части, на 5' или 3' конце олигонуклеотида. Когда присутствуют два или более дополнительных нуклеозидов, добавленные нуклеозиды могут быть рядом друг с другом, например, в олигонуклеотиде, который имеет два нуклеозида, добавленных к центральной части, к концу 5' (5' присоединение) или, альтернативно, к 3' концу (3' присоединение) олигонуклеотида. С другой стороны, добавленные нуклеозиды могут быть рассредоточены по всему антисмысловому соединению, например, по олигонуклеотиду, который имеет один нуклеозид, добавленный к 5'-концу, и одну субъединицу, добавленную к 3'-концу.
Можно увеличивать или уменьшать длину антисмыслового соединения, такого как антисмысловой олигонуклеотид и/или вводить несовпадающие основания без устранения активности. Например, у Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992), серии антисмысловых олигонуклеотидов из 13-25 нуклеиновых оснований в длину проверяют на их способность индуцировать расщепление RNA-мишени в модели инъекции ооцитов. Антисмысловые олигонуклеотиды из 25 нуклеиновых оснований в длину, с 8 или 11 несовпадающими основаниями у концов антисмысловых олигонуклеотидов, могут направлять специфичное расщепление mRNA-мишени, хоть и в меньшей степени, чем антисмысловые олигонуклеотиды, которые не содержат несоответствия. Аналогичным образом, специфичное к мишени расщепление достигают с помощью антисмысловых олигонуклеотидов с 13 нуклеиновыми основаниями, в том числе с 1 или 3 несоответствиями.
Gautschi et al. (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001) демонстрируют способность олигонуклеотида, который имеет 100% комплементарности к bcl-2 mRNA и имеет 3 несоответствия с bcl-xL mRNA, к снижению экспрессии и bcl-2, и bcl-xL in vitro и in vivo. Кроме того, этот олигонуклеотид проявляет потенциальную противоопухолевую активность in vivo.
Maher и Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988) исследовали серию антисмысловых олигонуклеотидов из 14 спаренных нуклеиновых оснований 28 и 42 нуклеиновых оснований, которые состоят из последовательности из двух или трех спаренных антисмысловых олигонуклеотидов, соответственно, на их способность к задержке трансляции DHFR человека в анализе ретикулоцитов кролика. Каждый из трех антисмысловых олигонуклеотидов из 14 нуклеиновых оснований отдельно может ингибировать трансляцию, хоть и на более скромном уровне, чем антисмысловые олигонуклеотиды из 28 или 42 нуклеиновых оснований.
Мотивы антисмыслового соединения
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения, направленные на нуклеиновую кислоту apo(a), имеют химически модифицированные субъединицы, организованные в паттерны или мотивы, чтобы придать антисмысловым соединениям такие свойства, как усиленную ингибирующую активность, увеличенную аффинность связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью или устойчивость к деградации нуклеазами in vivo.
Гибридные антисмысловые соединения, как правило, содержат по меньшей мере одну область, модифицированную таким образом, чтобы придать повышенную устойчивость к деградации нуклеазами, увеличение клеточного поглощения, увеличение аффинности связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью и/или увеличение ингибирующей активности. Вторая область гибридного антисмыслового соединения может, необязательно, служить в качестве подложки для клеточной эндонуклеазы РНКазы H, которая расщепляет RNA-нити RNA:DNA-дуплекса.
Антисмысловые соединения, которые имеют гэпмерный мотив, представляют собой рассматриваемые гибридные антисмысловые соединения. В гэпмере внутренняя область, которая имеет множество нуклеотидов, поддерживающих расщепление РНКазой H, расположена между внешними регионами, имеющими множество нуклеотидов, которые химически отличаются от нуклеозидов внутренней области. В случае антисмыслового олигонуклеотида, который имеет гэпмерный мотив, сегмент разрыва, как правило, служит в качестве субстрата для расщепления эндонуклеазой, в то время как концевые сегменты содержат модифицированные нуклеозиды. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения области гэпмера дифференцируют по видам остатков сахар, которые входят в каждую отдельную область. Типы остатков сахара, которые используют, чтобы дифференцировать области гэпмера, в некоторых вариантах реализации настоящего изобретения могут содержать β-D-рибонуклеозиды, β-D-деоксирибонуклеозиды, 2'-модифицированные нуклеозиды (подобные 2'-модифицированные нуклеозиды могут содержать 2'-МОЕ и 2'-O-CH3, в частности) и модифицированные бициклическим сахаром нуклеозиды (подобные модифицированные бициклическим сахаром нуклеозиды могут содержать те, которые имеют мостик 4'-(CH2)n-O-2', где n=1 или n=2). Предпочтительно, каждая отдельная область содержит одинаковые остатки сахара. Мотив конец-разрыв-конец часто описывают как "X-Y-Z", где "X" представляет длину 5'-концевой области, "Y" представляет длину области разрыва, a "Z" представляет длину 3'-концевой области. Как используют в данном документе, гэпмер, описанный в виде "X-Y-Z", имеет такую конформацию, что сегмент разрыва располагается в непосредственной близости к каждому 5'-концевому и 3'-концевому сегменту. Таким образом, не существует никаких промежуточных нуклеотидов между 5'-концевым сегментом и сегментом разрыва или сегментом разрыва и 3'-концевым сегментом. Любое из антисмысловых соединений, описанных в данном документе, может иметь гэпмерный мотив. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения X и Z являются одинаковыми; в отличных вариантах реализации настоящего изобретения они являются отличными. В предпочтительных вариантах реализации настоящего изобретения Y имеет от 8 до 15 нуклеотидов. X, Y или Z могут иметь 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или более нуклеотидов. Так, гэпмеры содержат, но без ограничения ими, например, 5-10-5, 4-8-4, 4-12-3, 4-12-4, 3-14-3, 2-13-5, 2-12-2, 2-16-2, 1-18-1, 3-10-3, 2-10-2, 1-10-1, 2-8-2, 6-8-6, 5-8-5, 1-8-1, 2-6-2, 2-13-2, 1-8-2, 2-8-3, 3-10-2, 1-18-2 или 2-18-2.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловое соединение, такое как "концевой" мотив, имеет конформацию конец-разрыв или разрыв-конец, напр. конформацию X-Y или Y-Z, как описано выше в случае конформации гэпмера. Так, конформации концевого мотива содержат, но без ограничения ими, например, 5-10, 8-4, 4-12, 12-4, 3-14, 16-2, 18-1, 10-3, 2-10, 1-10, 8-2, 2-13 или 5-13.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения, направленные на нуклеиновую кислоту apo(a), имеют гэпмерный мотив 5-10-5.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту apo(a), имеет расширенный разрывом мотив.
Нуклеиновые кислоты-мишени, области-мишени и последовательности нуклеотидов
Последовательности нуклеотидов, которые кодируют последовательность-мишень apo(a), содержат, без ограничения, следующие: регистрационный номер GENBANK NM_005577.2, который содержится в данном документе в виде SEQ ID NO: 1; регистрационный номер GENBANK NT_007422.12, усеченный из нуклеотидов от 3230000 до 3380000, который содержится в данном документе в виде SEQ ID NO: 2; регистрационный номер GENBANK NT_025741.15, который усечен из нуклеотидов от 65120000 до 65258000, созданный в данном документе в виде SEQ ID NO: 3; и регистрационный номер GENBANK NM_005577.1, который содержится в данном документе в виде SEQ ID NO: 4.
Понятно, что последовательность, изложенная в каждом № SEQ ID в Примерах, которые содержатся в настоящем документе, не зависит от любых модификаций в остатке сахара, межнуклеозидной связи или нуклеинового основания. Как таковые, антисмысловые соединения, определенные с помощью № SEQ ID, могут содержать, независимо друг от друга, одну или несколько модификаций в остатке сахара, межнуклеозидной связи или нуклеинового основания. Антисмысловые соединения, описанные с помощью Isis Number (номер Isis), означают комбинацию последовательности нуклеиновых оснований и мотива.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения "область-мишень" представляет собой структурно определенную область нуклеиновой кислоты-мишени. Например, область-мишень может охватывать 3' UTR, 5' UTR, экзон, интрон, точка сплайсинга, кодирующую область, область инициации трансляции, область терминации трансляции или другую определенную область нуклеиновой кислоты. Структурно определенные области в случае apo(a) могут быть получены с помощью номера доступа из баз данных последовательностей, таких как NCBI, а такая информация содержится в данном документе в виде ссылки. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения область-мишень может включать в себя последовательность от 5' сайта-мишени одного сегмента-мишени в пределах области-мишени до 3' сайта-мишени другого сегмента-мишени в пределах той же области-мишени.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения "сегмент-мишень" является более малым, субфрагментом области-мишени в пределах нуклеиновой кислоты. Например, сегмент-мишень может быть последовательностью нуклеотидов нуклеиновой кислоты-мишени, на которую направлены одно или несколько антисмысловых соединений. "Сайт-мишень 5'" соответствует крайнему 5' нуклеотиду сегмента-мишени. "Сайт-мишень 3'" соответствует крайнему 3' нуклеотиду сегменту-мишени.
Область-мишень может содержать один или несколько сегментов-мишеней. Несколько сегментов-мишеней в пределах области-мишени могут перекрываться. Альтернативно, они могут не перекрываться. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения сегменты-мишени в пределах области-мишени разделяют не более чем около 300 нуклеотидов. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения сегменты-мишени в пределах области-мишени разделяют с помощью количества нуклеотидов, которое составляет, около, не более чем, не более чем около, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 10 нуклеотидов в нуклеиновой кислоте-мишени, или представляет собой диапазон, который определяют с помощью любых двух из предшествующих значений. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения сегменты-мишени в пределах области-мишени разделяют с помощью не более чем, или не более чем около, 5 нуклеотидов в нуклеиновой кислоте-мишени. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения сегменты-мишени являются смежными. Предполагаемыми являются области-мишени, определенные в диапазоне, который имеет исходную нуклеиновую кислоту, которая представляет собой любой из 5' сайтов-мишеней или 3' сайтов-мишеней, приведенных в данном документе.
Направленное воздействие содержит в себе определение, по меньшей мере, одного сегмента-мишени, к которому антисмысловое соединение гибридизуется таким образом, что возникает желаемый эффект. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения желаемый эффект представляет собой снижение уровней нуклеиновой кислоты-мишени mRNA. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения желаемый эффект представляет собой снижение уровней протеина, кодируемых с помощью нуклеиновой кислоты-мишени, или фенотипическое изменение, связанное с нуклеиновой кислотой-мишенью.
Подходящие сегменты-мишени можно найти в пределах 5' UTR, кодирующей области, в 3' UTR, интрона, экзона, или точке сплайсинга. Сегменты-мишени, которые содержат инициирующий кодон или стоп-кодон, также представляют собой подходящие сегменты-мишени. Подходящий сегмент-мишень может специально исключать определенную структурно определенную область, например, инициирующий кодон или стоп-кодон.
Определение подходящих сегментов-мишеней может содержать сравнение последовательности нуклеиновой кислоты-мишени с другими последовательностями по всему геному. Например, алгоритм BLAST могут использовать для идентификации областей сходства различных нуклеиновых кислот. Это сравнение может предотвратить выбор последовательностей антисмысловых соединений, которые могут гибридизовать неспецифическим путем с отличной от выбранной нуклеиновой кислоты-мишени (т.е., последовательности не-мишени или вне последовательности-мишени).
Возможно изменение в активности (напр., как определено с помощью процентного снижения уровней нуклеиновой кислоты-мишени) антисмысловых соединений в пределах активной области-мишени. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения снижения уровней mRNA apo(a) могут свидетельствовать об ингибировании экспрессии apo(a). Снижения уровней протеина apo(a) могут свидетельствовать об ингибировании экспрессии mRNA-мишени. Кроме того, фенотипические изменения могут свидетельствовать об ингибировании экспрессии apo(a). Например, увеличение уровней HDL, уменьшение уровней LDL, уменьшение уровней холестерина или уменьшение уровней триглицеридов находятся среди фенотипических изменений, которые могут быть оценены в случае ингибирования экспрессии apo(a). Также могут быть оценены другие фенотипические признаки, напр., симптомы, связанные с сердечно-сосудистыми заболеваниями; например, стенокардия; боль в груди; одышка; сердцебиение; слабость; головокружение; тошнота; потливость; тахикардия; брадикардия; аритмия; мерцательная аритмия; отеки на нижних конечностях; цианоз; усталость; обмороки; онемение лица; онемение конечностей; хромота или судороги мышц; вздутие живота; или лихорадка.
Гибридизация
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения гибридизация происходит между антисмысловым соединением, описанным в данном документе, и нуклеиновой кислотой apo(a). Наиболее распространенный механизм гибридизации содержит образование водородной связи (например, уотсонкриковское, хугстиновское или обратное хугстиновское спаривание) между комплементарными нуклеиновыми основаниями молекул нуклеиновых кислот.
Гибридизация может происходить в различных условиях. Жесткие условия являются последовательность-зависимыми и определяются природой и композицией молекул нуклеиновых кислот, которые будут гибридизоваться.
Способы определения того, является ли последовательность специфично гибридизуемой нуклеиновой кислотой-мишенью, хорошо известны в данной области техники (Sambrooke и Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Ed., 2001). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения, обеспечиваемые в данном документе, являются специфически гибридизуемыми нуклеиновой кислотой apo(a).
Комплементарность
Антисмысловое соединение и нуклеиновая кислота-мишень являются комплементарными друг другу, если достаточное количество нуклеиновых оснований антисмыслового соединения может образовывать водородную связь с соответствующими нуклеиновыми основаниями нуклеиновой кислоты-мишени, так, чтобы наблюдался желаемый эффект (например, антисмысловое ингибирование нуклеиновой кислотой-мишенью, такой как нуклеиновая кислота apo(a)).
Некомплементарные нуклеиновые основания между антисмысловым соединением и нуклеиновой кислотой apo(a) можно допустить при условии, что антисмысловое соединение остается в состоянии специфично гибридизоваться с нуклеиновой кислотой-мишенью. Кроме того, антисмысловое соединение может гибридизоваться в одном или нескольких таких сегментах нуклеиновой кислоты apo(a), что промежуточные или смежные сегменты не участвуют в случае гибридизации (например, петлеобразная структура, несоответствие или шпилечная структура).
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения, обеспечиваемые в данном документе, или их определенная часть, являются, или являются по меньшей мере, на 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% комплементарными нуклеиновой кислоте apo(a), области-мишени, сегменту-мишени или определенной ее части. Процент комплементарности антисмыслового соединения с нуклеиновой кислотой-мишенью может быть определен с помощью стандартных способов.
Например, антисмысловое соединение, в котором 18 из 20 нуклеиновых основания антисмыслового соединения являются комплементарными к области-мишени, и, следовательно, могут специфично гибридизоваться, может представлять 90 процентов комплементарности. В этом примере, остальные некомплементарные нуклеиновые кислоты могут быть сгруппированными или рассеянными с комплементарными нуклеиновыми основаниями и не должны быть смежными друг с другом или с комплементарными нуклеиновыми основаниями. Таким образом, антисмысловое соединение, которое представляет собой 18 нуклеиновых оснований в длину, имеющее 4 (четыре) некомплементарные нуклеотидные основания, которые окружены двумя областями с полной комплементарностью с нуклеиновой кислотой-мишенью, будут иметь 77,8% общей комплементарности с нуклеиновой кислотой-мишенью и, таким образом, находятся в пределах объема настоящего изобретения. Процент комплементарности антисмыслового соединения с областью нуклеиновой кислоты-мишени может быть определен обычным способом с использованием программ BLAST (средство поиска основного локального выравнивания) и программ PowerBLAST, известных в данной области техники (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang и Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656). Процент гомологии, идентичность последовательности или комплементарность могут быть определены, например, с помощью программы Gap (Wisconsin Sequence Analysis Package, версия 8 для Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.), используя настройки по умолчанию, которые используют алгоритм Smith и Waterman (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489).
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения, обеспечиваемые в данном документе, или их определенные части являются полностью комплементарными (напр., на 100% комплементарны) нуклеиновой кислоте-мишени или ее определенной части. Например, антисмысловое соединение может быть полностью комплементарным к нуклеиновой кислоте apo(a), или области-мишени, или сегменту-мишени, или его последовательности-мишени. Как используют в данном документе, "полностью комплементарный" означает каждое нуклеиновое основание антисмыслового соединения, способное к точному образованию пары оснований с соответствующими нуклеиновыми основаниями нуклеиновой кислоты-мишени. Например, антисмысловое соединение из 20 нуклеиновых оснований, полностью комплементарных последовательности-мишени, которая имеет длину в 400 нуклеиновых оснований, при условии, что существует соответствующий сегмент нуклеиновой кислоты-мишени из 20 нуклеиновых оснований, который полностью комплементарен антисмысловому соединению. Полностью комплементарный также может быть использован по отношению к определенному сегменту первой и/или второй нуклеиновой кислоты. Например, сегмент из 20 нуклеиновых оснований антисмыслового соединения из 30 нуклеиновых оснований может быть "полностью комплементарным" последовательности-мишени, которая имеет в длину 400 нуклеиновых оснований. Сегмент антисмыслового соединения из 20 нуклеиновых оснований из 30 нуклеиновых оснований полностью комплементарен последовательности-мишени, если последовательность-мишень имеет соответствующий сегмент из 20 нуклеиновых оснований, в котором каждое нуклеиновое основание комплементарно сегменту антисмыслового соединения из 20 нуклеиновых оснований. В то же время, антисмысловое соединение из 30 нуклеиновых оснований может быть полностью, или может быть не полностью, комплементарным последовательности-мишени, в зависимости от того, являются ли также остальные 10 нуклеиновых оснований антисмыслового соединения комплементарными последовательности-мишени.
Расположение некомплементарного нуклеоснования(ий) может быть на 5' конце или 3' конце антисмыслового соединения. С другой стороны, некомплементарный олигонуклеотид(ы) может быть во внутреннем положении антисмыслового соединения. Когда присутствуют две или более некомплементарные нуклеиновые кислоты, то они могут быть смежными (то есть связанными) или несмежными. В отдельном варианте реализации настоящего изобретения некомплементарное нуклеиновое основание расположено в концевом сегменте антисмыслового олигонуклеотида гэпмера.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения, которые имеют, или имеют до, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований в длину, содержат не более 4, не более 3, не более 2 или не более 1 некомплементарного нуклеинового основания(й), по отношению к нуклеиновой кислоте-мишени, такой как нуклеиновая кислота apo(a), или ее определенному сегменту.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения, которые имеют, или имеют до, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований в длину, содержат не более 6, не более 5, не более 4, не более 3, не более 2 или не более 1 некомплементарного нуклеинового основания(й) по отношению к нуклеиновой кислоте-мишени, такой как нуклеиновая кислота apo(a), или ее определенному сегменту.
Антисмысловые соединения, обеспечиваемые в данном документе, также содержат те, которые являются комплементарными к сегменту нуклеиновой кислоты-мишени. Как используют в данном документе, "сегмент" соответствует определенному количеству смежных (т.е. связанных) нуклеиновых оснований в пределах области или сегмента нуклеиновой кислоты-мишени. "Сегмент" может также относиться к определенному количеству смежных нуклеиновых оснований антисмыслового соединения. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения являются комплементарными к сегменту из по меньшей мере 8 нуклеиновых оснований сегмента-мишени. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения являются комплементарными к сегменту из по меньшей мере 12 нуклеиновых оснований сегмента-мишени. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения являются комплементарными к сегменту из по меньшей мере 15 нуклеиновых оснований сегмента-мишени. Также рассматривают антисмысловые соединения, которые являются комплементарными к сегменту сегмента-мишени из по меньшей мере 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более нуклеиновых оснований или в диапазоне, определенном с помощью любых двух из этих значений.
Идентичность
Антисмысловые соединения, обеспечиваемые в данном документе, также могут иметь определенный процент идентичности с конкретной нуклеотидной последовательностью, SEQ ID NO, соединением, представленным с помощью определенного номера Isis, или его сегментом. Как используется в данном документе, антисмысловое соединение является идентичным последовательности, раскрытой в данном описании, если оно имеет такую же способность образовывать пару с нуклеиновым основанием. Например, RNA, которая содержит урацил вместо тимидина в раскрытой последовательности DNA, может быть рассмотрена как идентичная последовательности DNA, так как урацил и тимидин образуют пару с аденином. Также рассматриваются укороченные и удлиненные варианты антисмысловых соединений, описанных в данном документе, а также соединения, которые имеют неидентичные основания по сравнению с антисмысловыми соединениями, обеспечиваемыми в данном документе. Неидентичные основания могут быть смежными друг с другом или распределенными по всему антисмысловому соединению. Процент идентичности антисмыслового соединения рассчитывают в соответствии с количеством оснований, которые имеют одинаковое спаривание оснований по сравнению с последовательностью, с которой она сравнивается.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения или их сегменты на по меньшей мере 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичны одному или нескольким антисмысловым соединениям, SEQ ID NO или их сегментам, раскрытым в данном документе.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения сегмент антисмыслового соединения сравнивают с сегментом нуклеиновой кислоты-мишени эквивалентной длины. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения сегмент из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеиновых оснований сравнивают с сегментом нуклеиновой кислоты-мишени эквивалентной длины.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения часть антисмыслового олигонуклеотида сравнивают с частью нуклеиновой кислоты-мишени эквивалентной длины. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения сегмент из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеиновых оснований сравнивают с сегментом нуклеиновой кислоты-мишени эквивалентной длины.
Модификации
Нуклеозид представляет собой комбинацию основание-сахар. Часть нуклеозида, нуклеиновое основание (также известное как основание), как правило, представляет собой остаток гетероциклического основания. Нуклеотиды представляют собой нуклеозиды, которые дополнительно содержат фосфатную группу, ковалентно связанную с сахарной частью нуклеозида. Для этих нуклеозидов, которые содержат пентофуранозный сахар, фосфатная группа может быть связана с 2', 3' или 5' гидроксильным остатком сахара. Олигонуклеотиды образуют путем ковалентного связывания смежных нуклеозидов друг к другу, чтобы образовать линейный полимерный олигонуклеотид. В структуре олигонуклеотида фосфатные группы, как правило, соответствуют образованию межнуклеозидных связей олигонуклеотида.
Изменения в антисмысловых соединениях охватывают замены или изменения в межнуклеозидных связях, остатках сахара или нуклеиновых основаниях. Модифицированные антисмысловые соединения часто являются более предпочтительными, чем нативные формы, ввиду желательных свойств, таких как, например, повышенное клеточное поглощение, повышенная аффинность к мишени нуклеиновой кислоты, повышенная стабильность в присутствии нуклеаз или увеличение ингибиторной активности.
Химически модифицированные нуклеозиды могут быть также использованы для увеличения аффинности связывания укороченного или усеченного антисмыслового олигонуклеотида с его нуклеиновой кислотой-мишенью. Следовательно, сравнимые результаты зачастую могут быть получены с более короткими антисмысловыми соединениями, которые имеют подобные химически модифицированные нуклеозиды.
Модифицированные межнуклеозидные связи
Встречающаяся в природе межнуклеозидная связь RNA и DNA представляет собой 3'-5' фосфодиэфирную связь. Антисмысловые соединения, которые имеют модифицированные один раз или более, т.е. не встречающиеся в природе, межнуклеозидные связи, часто выбирают из антисмысловых соединений, которые имеют встречающиеся в природе межнуклеозидные связи, из-за таких желательных свойств, как, например, повышенное клеточное поглощение, повышенная аффинность к нуклеиновой кислоте-мишени и увеличенная стабильность в присутствии нуклеаз.
Олигонуклеотиды, которые имеют модифицированные межнуклеозидные связи, содержат межнуклеозидные связи, которые сохраняют атом фосфора, а также межнуклеозидные связи, которые не имеют атом фосфора. Типичные фосфорсодержащие межнуклеозидные связи содержат, но без ограничения ими, фосфодиэфиры, фосфотриэфиры, метилфосфонаты, фосфорамидат и фосфоротиоаты. Способы получения фосфорсодержащих и не фосфорсодержащих связей хорошо известны.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения, направленные на нуклеиновую кислоту apo(a), содержат одну или несколько модифицированных межнуклеозидных связей. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированные межнуклеозидные связи представляют собой тиофосфатные связи. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения каждая межнуклеозидная связь антисмыслового соединения представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.
Модифицированные остатки сахара
Антисмысловые соединения могут необязательно содержать один или несколько нуклеозидов, в которых сахарная группа была модифицирована. Такие модифицированные по сахару нуклеозиды по отношению к антисмысловым соединениям могут придавать повышенную устойчивость к нуклеазе, увеличенную аффинность связывания или некоторое другое полезное биологические свойство. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения нуклеозиды содержат химически модифицированные остатки рибофуранозных колец. Примеры химически модифицированных рибофуранозных колец содержат, без ограничения, добавление замещающих групп (в том числе 5' и 2' замещающих групп), связывание не-геминальных атомов кольца с образованием бициклических нуклеиновых кислот (BNA), замены атома кислорода рибозильного кольца на S, N(R) или (R1)(R2) (каждый R, R1 и R2 независимо представляет собой H, алкил C1-C12 или защитная группа) и их комбинации. Примеры химически модифицированных сахаров содержат замещенный 2'-F-5'-метилнуклеозид (см. международную заявку PCT WO 2008/101157, опубликованную 8/21/08, в случае других раскрытых замещенных 5',2'-бис-нуклеозидов) или замену атома кислорода рибозильного кольца на S с дальнейшей заменой по 2'-положению (см. опубликованную патентную заявку США 2005-0130923, опубликованную 16 июня 2005 г.) или, альтернативно, 5'-замещение BNA (см. международную заявку PCT WO 2007/134181, опубликованную 11/22/07, где LNA замещают, например, 5'-метил- или 5'-винильной группой).
Примеры нуклеозидов, которые имеют измененные сахарные группы, содержат, без ограничения, нуклеозиды, которые содержат 5'-винил, 5'-метил (R или S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3, 2'-OCH2CH3, 2'-OCH2CH2F и 2'-O(CH2)2OCH3 замещающие группы. Заместитель в положении 2' также может быть выбран из аллил, амино, азидо, тио, O-аллил, O-C1-C10 алкил, OCF3, OCH2F, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn) и O-CH2-C(=O)-N(R1)-(CH2)2-N(Rm)(Rn), где каждый Rl, Rm и Rn представляет собой, независимо, H или замещенный или незамещенный алкил C1-C10.
Как используют в данном документе, "бициклические нуклеозиды" соответствуют модифицированным нуклеозидам, которые содержат бициклический остаток сахара. Примеры бициклических нуклеозидов содержат, без ограничения, нуклеозиды, которые содержат мостик между атомами 4' и 2' рибозильных колец. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения, обеспечиваемые в данном документе, содержат один или несколько бициклических нуклеозидов, которые содержат мостик от 4' к 2'. Примеры подобных бициклических нуклеозидов с мостиком от 4' к 2' содержат, но без ограничения одной из формул: 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-СН(CH3)-O-2' и 4'-СН(CH2OCH3)-O-2' (и их аналоги, смотри патент США 7399845, опубликованный 15 июля 2008); 4'-С(CH3)(CH3)-O-2' (и их аналоги, смотри опубликованную международную заявку WO/2009/006478, опубликованную 8 января 2009); 4'-CH2-N(OCH3)-2' (и их аналоги, смотри опубликованную международную заявку WO/2008/150729, опубликованную 11 декабря 2008); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (смотри опубликованную заявку на патент США US 2004-0171570, опубликованную 2 сентября 2004); 4'-CH2-N(R)-O-2', где R представляет собой H, алкил C1-C12 или защищающую группу (смотри патент США 7427672, опубликованный 23 сентября 2008); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (смотри Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); и 4'-CH2-C(=CH2)-2' (и их аналоги, смотри опубликованную международную заявку WO 2008/154401, опубликованную 8 декабря 2008).
Дополнительные сообщения, связанные с бициклическими нуклеозидами, также могут быть найдены в опубликованной литературе (смотри, например: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Elayadi et al., Curr. Opinion Invest. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; и Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; патенты США №№. 6268490; 6525191; 6670461; 6770748; 6794499; 7034133; 7053207; 7399845; 7547684; и 7696345; заявку на патент США № US 2008-0039618; US 2009-0012281; патенты США №№60/989,574; 61/026,995; 61/026,998; 61/056,564; 61/086,231; 61/097,787; и 61/099,844; опубликованные международные заявки PCT WO 1994/014226; WO 2004/106356; WO 2005/021570; WO 2007/134181; WO 2008/150729; WO 2008/154401; и WO 2009/006478. Может быть получен каждый из вышеупомянутых бициклических нуклеозидов, имеющих одну или более стереохимических конфигураций сахара, в том числе, например, α-L-рибофураноза и β-D-рибофураноза (смотри международную PCT заявку PCT/DK98/00393, опубликованную 25 марта 1999 как WO 99/14226).
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения бициклические остатки сахара нуклеозидов BNA, содержат, но без ограничения ими, соединения, которые имеют по меньшей мере один мостик между 4' и 2' положениями пентафуранозильного фрагмента сахара, причем такие мосты независимо содержат от 1 или от 2 до 4 связанных групп, независимо выбранных из -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -С(=O)-, -C(=NRa)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x- и -N(Ra)-;
где:
x представляет собой 0, 1, или 2;
n представляет собой 1, 2, 3, или 4;
каждый Ra и Rb представляют собой, независимо, H, замещающую группу, гидроксил, алкил C1-C12, замещенный алкил C1-C12, алкенил C2-C12, замещенный алкенил C2-C12, алкенил C2-C12, замещенный алкенил C2-C12, арил C5-C20, замещенный арил C5-C20, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, гетероарил, замещенный гетероарил, алициклический радикал C5-C7, замещенный алициклический радикал C5-C7, галоген, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, ацил (C(=O)-H), замещенный ацил, CN, сульфонил (S(=O)2-J1) или сульфоксил (S(=O)-J1); и
каждый J1 и J2 представляет собой, независимо, H, алкил C1-C12, замещенный алкил C1-C12, C2-C12 алкенил, замещенный алкенил C2-C12, алкенил C2-C12, замещенный алкенил C2-C12, арил C5-C20, замещенный арил C5-C20, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, аминоалкил C1-C12, замещенный аминоалкил C1-C12 или защищающая группа.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения мостик бициклического остатка сахара представляет собой -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- или -C(RaRb)-O-N(R)-. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения мостик представляет собой 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2' и 4'-CH2-N(R)-O-2'-, где каждый R представляет собой, независимо, H, защищающую группу или алкил C1-C12.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения бициклические нуклеозиды дополнительно определяют с помощью изомерной конформации. Например, нуклеозид, который содержит оксиметиленовый мостик 4'-2', может существовать в α-L-конформации или в β-D-конформации. Ранее, α-L-метиленокси (4'-CH2-O-2') BNA были включены в антисмысловые олигонуклеотиды, которые демонстрируют антисмысловую активность (Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения бициклические нуклеозиды содержат, но без ограничения ими, (А) α-L-метиленокси (4'-CH2-O-2') BNA, (B) β-D-метиленокси (4'-CH2-О-2') BNA, (C) этиленокси (4'-(CH2)2-O-2') BNA, (D) аминоокси (4'-CH2-O-N(R)-2') BNA, (E) оксиамино (4'-CH2-N(R)-O-2') BNA и (F) метил(метиленокси) (4'-СН(CH3)-O-2') BNA, (G) метилен-тио (4'-CH2-S-2') BNA, (H) метилен-амино (4'-CH2-N(R)-2') BNA, (I) карбоциклический метил (4'-CH2-СН(CH3)-2') BNA и (J) карбоциклический пропилен (4'-(CH2)3-2') BNA, как изображено ниже.
Figure 00000002
Figure 00000003
Figure 00000004
где Bx представляет собой остаток основания и R представляет собой, независимо, H, защищающую группу или алкил C1-C12.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечивают бициклические нуклеозиды, которые имеют Формулу 45:
Figure 00000005
где:
Bx представляет собой остаток гетероциклического основания;
-Qa-Qb-Qc- представляет собой -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=O)-N(Rc)-CH2-, -CH2-O-N(Rc)-, -CH2-N(Rc)-O- или -N(Rc)-O-CH2;
Rc представляет собой C1-C12 алкил или амино защищающую группа; и
каждый Ta и Tb независимо представляет собой H, гидроксил защищающую группу, группу, содержащую сопряженные двойные связи, реакционно-способную фосфорную группу, остаток фосфора или ковалентное присоединение к иммобилизирующему носителю.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечивают бициклические нуклеозиды, которые имеют Формулу II:
Figure 00000006
где:
Bx представляет собой остаток гетероциклического основания;
каждый Ta и Tb независимо представляет собой H, гидроксил защищающую группу, группу, содержащую сопряженные двойные связи, реакционно-способную фосфорную группу, остаток фосфора или ковалентное присоединение к иммобилизирующему носителю;
Za представляет собой алкил C1-C6, алкенил C2-C6, алкенил C2-C6, замещенный алкил C1-C6, замещенный алкенил C2-C6, замещенный алкенил C2-C6, ацил, замещенный ацил, замещенный амид, тиол или замещенный тио.
В отдельном варианте реализации настоящего изобретения каждая из замещенных групп представляет собой, независимо, моно или поли замещенную с замещающими группами, независимо выбранными из галогена, оксо, гидроксил, OJc, NJcJd, SJc, N3, OC(=X)Jc и NJeC(=X)NJcJd, где каждый Jc, Jd и Je независимо представляет собой H, алкил C1-C6 или замещенный алкил C1-C6 и X представляет собой O или NJc.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечивают бициклические нуклеозиды, которые имеют Формулу 46:
Figure 00000007
где:
Bx представляет собой остаток гетероциклического основания;
каждый Ta и Tb независимо представляет собой H, гидроксил защищающую группу, группу, содержащую сопряженные двойные связи, реакционно-способную фосфорную группу, остаток фосфора или ковалентное присоединение к иммобилизирующему носителю;
Zb представляет собой алкил C1-C6, алкенил C2-C6, алкенил C2-C6, замещенный алкил C1-C6, замещенный алкенил C2-C6, замещенный алкенил C2-C6 или замещенный ацил (C(=O)-).
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечивают бициклические нуклеозиды, которые имеют Формулу IV:
Figure 00000008
где:
Bx представляет собой остаток гетероциклического основания;
каждый Ta и Tb независимо представляет собой H, гидроксил защищающую группу, группу, содержащую сопряженные двойные связи, реакционно-способную фосфорную группу, остаток фосфора или ковалентное присоединение к иммобилизирующему носителю;
Rd представляет собой алкил C1-C6, замещенный алкил C1-C6, алкенил C2-C6, замещенный алкенил C2-C6, алкенил C2-C6 или замещенный алкенил C2-C6;
каждый qa, qb, qc и qd независимо представляет собой H, галоген, алкил C1-C6, замещенный алкил C1-C6, алкенил C2-C6, замещенный алкенил C2-C6, алкенил C2-C6 или замещенный алкенил C2-C6, алкоксил C1-C6, замещенный алкоксил C1-C6, ацил, замещенный ацил, аминоалкил C1-C6 или замещенный аминоалкил C1-C6;
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечивают бициклические нуклеозиды, которые имеют Формулу 47:
Figure 00000009
где:
Bx представляет собой остаток гетероциклического основания;
каждый Ta и Tb независимо представляет собой H, гидроксил защищающую группу, группу, содержащую сопряженные двойные связи, реакционно-способную фосфорную группу, остаток фосфора или ковалентное присоединение к иммобилизирующему носителю;
qa, qb, qe и qf независимо каждый представляет собой, водород, галоген, алкил C1-C12, замещенный алкил C1-C12, алкенил C2-C12, замещенный алкенил C2-C12, алкенил C2-C12, замещенный алкенил C2-C12, алкокси C1-C12, замещенный алкокси C1-C12, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk или N(H)C(=S)NJjJk;
или qe и qf вместе представляют собой =C(qg)(qh);
каждый qg и qh представляет собой, H, галоген, алкил C1-C12 или замещенный алкил C1-C12.
Синтез и получение метиленокси (4'-CH2-O-2') мономеров BNA аденина, цитозина, гуанина, 5-метил-цитозина, тимина и урацила, вместе с их олигомеризацией и свойствами узнавания нуклеиновых кислот, были описаны (Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). BNAs, а их получение также описано у WO 98/39352 и WO 99/14226.
Также были получены аналоги метиленокси (4'-CH2-O-2') BNA и 2'-тио-BNA (Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222). Также описано получение заблокированных аналогов нуклеозида, которые содержат дуплексы олигодезоксирибонуклеотида в качестве субстратов для полимераз нуклеиновых кислот (Wengel et al., WO 99/14226). Кроме того, в данной области техники был описан синтез 2'-амино-BNA, нового конформационно ограниченого аналога с высоким сродством к олигонуклеотиду (Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039). Кроме того, были получены 2'-амино- и 2'-метиламино-BNA и ранее сообщалось о термической стабильности их дуплексов с комплементарными цепочками RNA и DNA.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечивают бициклические нуклеозиды, которые имеют Формулу VI:
Figure 00000010
где:
Bx представляет собой остаток гетероциклического основания;
каждый Ta и Tb независимо представляет собой H, гидроксил защищающую группу, группу, содержащую сопряженные двойные связи, реакционно-способную фосфорную группу, остаток фосфора или ковалентное присоединение к иммобилизирующему носителю;
каждый qi, qj, qk и ql независимо представляет собой H, галоген, алкил C1-C12, замещенный алкил C1-C12, алкенил C2-C12, замещенный алкенил C2-C12, алкенил C2-C12, замещенный алкенил C2-C12, алкоксил C1-C12, замещенный алкоксил C1-C12, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk или N(H)C(=S)NJjJk; и
qi и qj или ql и qk вместе представляют собой =C(qg)(qh), где каждый qg и qh независимо представляет собой, H, галоген, алкил C1-C12 или замещенный алкил C1-C12.
Описан карбоциклический бициклический нуклеозид, который имеет мостик 4'-(CH2)3-2' и подобный алкенильный мостик 4'-СН=СН-CH2-2' (Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 и Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740). Также были описаны синтез и получение карбоциклических бициклических нуклеозидов вместе с их олигомеризацией и биохимическими исследованиями (Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26), 8362-8379).
Как используют в данном документе, "4'-2' бициклический нуклеозид" или "от 4' к 2' бициклический нуклеозид" соответствует бициклическому нуклеозиду, который содержит фуранозное кольцо, содержащее мостик, соединяющий два атома углерода в фуранозном кольце, соединяющем атом углерода 2' и атом углерода 4' кольца сахара.
Как используют в данном документе, "моноциклические нуклеозиды" соответствуют нуклеозидам, которые содержат модифицированные остатки сахара, не являющиеся остатками бициклического сахара. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения остаток сахара, или аналог остатка сахара, нуклеозида может быть модифицирован или замещен в любом положении.
Как используют в данном документе, "2'-модифицированный сахар" означает фуранозный сахар, модифицированный в положении 2'. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения подобные модификации содержат заместители, выбранные из: галогенида, который содержит, но без ограничения ими, замещенный и незамещенный алкокси, замещенный и незамещенный тиоалкил, замещенный и незамещенный амино-алкил, замещенный и незамещенный алкил, замещенный и незамещенный аллил и замещенный и незамещенный алкинил. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения 2' модификации выбирают из заместителей, которые содержат, но без ограничения ими: O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nF, O(CH2)nONH2, OCH2C(=O)N(H)CH3 и O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2, где n и m составляют от 1 до около 10. Другие 2'-замещающие группы также могут быть выбраны из: C1-C12 алкила, замещенного алкила, алкенила, алкенила, алкарила, аралкила, O-алкарила или O-аралкила, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, F, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, гетероциклоалкила, гетероциклоалкарила, аминоалкиламино, полиалкиламино, замещенного силила, RNA расщепляющей группы, "репортерной" группы, интеркалятора, группы для улучшения фармакокинетических свойств или группы для улучшения фармакодинамических свойств антисмыслового соединения и других заместителей, имеющих аналогичные свойства. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированные нуклеозиды содержат боковую цепь 2'-МОЕ (Baker et al., J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000). Подобное замещение 2'-MOE было описано как обладающее улучшенной аффинностью связывания, по сравнению с немодифицированными нуклеозидами и другими модифицированными нуклеозидами, такими как 2'- O-метил, O-пропил и O-аминопропил. Также было показано, что олигонуклеотиды, которые имеют заместитель 2'-МОЕ, выступают антисмысловыми ингибиторами экспрессии генов с перспективными возможностями для использования in vivo (Martin, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et al., Chimia, 1996, 50, 168-176; Altmann et al., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; и Altmann et al., Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926).
Как используют в данном документе, "модифицированный тетрагидропираннуклеозид" или "модифицированный нуклеозид ТНР" означает нуклеозид, который имеет шестичленный тетрагидропирановый "сахар", замещенный по пентофуранозильному остатку в обычных нуклеозидах (заменитель сахара). Модифицированные нуклеозиды ТНР содержат, но без ограничения ими, то, что называют в данной области гекситол нуклеиновой кислоты (HNA), анитол нуклеиновой кислоты (ANA), маннит нуклеиновой кислоты (MNA) (смотри Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854), фтор-HNA (F-HNA) или соединения, которые имеют Формулу VII:
Figure 00000011
где независимо в случае каждого из упомянутого по меньшей мере одного тетрагидропираннуклеозида Формулы VII:
Bx представляет собой остаток гетероциклического основания;
каждый Ta и Tb независимо представляют собой межнуклеозидную связующую группу, которая связывает аналог тетрагидропираннуклеозида с антисмысловым соединением или один из Ta и Tb представляет собой межнуклеозидную связующую группу, которая связывает тетрагидропираннуклеозид с антисмысловым соединением, а оставшийся из Ta и Tb представляет собой H, гидроксильную защитную группу, связанную группу, содержащую сопряженные двойные связи или 5' или 3'-концевую группу;
каждый q1, q2, q3, q4, q5, q6 и q7 независимо представляет собой H, алкил C1-C6, замещенный алкил C1-C6, алкенил C2-C6, алкенил замещенный C2-C6, алкенил C2-C6 или замещенный алкенил C2-C6; а каждый из R1 и R2 выбирают из водорода, гидроксила, галогена, замещенного или незамещенного алкокси, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 и CN, где X представляет собой O, S или NJ1 и каждый J1, J2 и J3 независимо представляют собой H или C1-C6 алкил.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечивают модифицированные нуклеозиды ТНР Формулы VII, где каждый q1, q2, q3, q4, q5, q6 и q7 представляет собой H. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения по меньшей мере один из q1, q2, q3, q4, q5, q6 и q7 отличается от H. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения по меньшей мере один из q1, q2, q3, q4, q5, q6 и q7 представляет собой метил. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечивают нуклеозиды ТНР Формулы VII, где один из R1 и R2 представляет собой фтор. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения R1 представляет собой фтор, a R2 представляет собой H; R1 представляет собой метокси, a R2 представляет собой H, R1 представляет собой метоксиэтокси и R2 представляет собой H. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения R1 представляет собой H и R2 представляет собой фтор; R1 представляет собой H и R2 представляет собой метокси, R1 представляет собой H и R2 представляет собой метоксиэтокси.
Как используют в данном документе, "2'-модифицированный" или "2'-замещенный" соответствует нуклеозиду, который содержит сахар, содержащий заместитель в положении 2', отличный от H или OH. 2'-модифицированные нуклеозиды, содержат, но без ограничения ими, бициклические нуклеозиды, при том, что мостик, соединяющий два атома цикла в сахаре, соединяет атом углерода 2' и другой атом углерода цикла сахара; и нуклеозиды и несвязанными 2'-заместителями, такими как аллил, амино, азидо, тио, O-аллил, O-C1-C10 алкил, -OCF3, O-(CH2)2-O-CH3, 2'-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), или O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), где каждый Rm и Rn независимо представляет собой H или замещенный или незамещенный алкил C1-C10. 2'-модифицированные нуклеозиды могут дополнительно содержать другие модификации, например, при других положениях сахара и/или нуклеинового основания.
Как используют в данном документе, "2'-F" соответствует нуклеозиду, который содержит сахар, содержащий группу фтора в положении 2'.
Как используют в данном документе, каждый "2'-ОМе" или "2'-OCH3" или "2'-O-метил" соответствует нуклеозиду, который содержит сахар, содержащий группу -OCH3 в положении 2' кольца сахара.
Как используют в данном документе, каждый "МОЕ" или "2'-МОЕ" или "2'-OCH2CH2OCH3" или "2'-O-метоксиэтил" соответствует нуклеозиду, который содержит сахар, содержащий группу -OCH2CH2OCH3 в положении 2' кольца сахара.
Как используют в данном документе, "олигонуклеотид" соответствует соединению, которое содержит множество связанных нуклеозидов. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения один или несколько нуклеозидов из множества являются модифицированными. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения олигонуклеотид содержит один или несколько рибонуклеозидов (RNA) и/или дезоксирибонуклеозидов (DNA).
Также в данной области техники известны многие другие бициклические и трициклические циклические системы суррогата сахара, которые могут быть использованы для модификации нуклеозидов в случае включения в антисмысловые соединения (смотри, например, обзорную статью: Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854). Такие кольцевые системы могут претерпевать различные дополнительные замены, чтобы повысить активность.
Способы получения модифицированных сахаров хорошо известны специалистам в данной области техники.
В нуклеотидах, которые имеют модифицированные остатки сахара, нуклеотидные фрагменты (природные, модифицированные или их комбинации) поддерживают для гибридизации с соответствующей нуклеиновой кислотой-мишенью.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения содержат один или несколько нуклеозидов, которые имеют модифицированные остатки сахара. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированный остаток сахара представляет собой 2'-МОЕ. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения 2'-МОЕ модифицированные нуклеозиды располагают в гэпмерном мотиве. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированный остаток сахара представляет собой бициклический нуклеозид, который имеет мостиковую группу (4'-СН(CH3)-O-2'). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения (4'-СН(CH3)-O-2') модифицированные нуклеозиды располагают на всех концах гэпмерного мотива. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированный остаток сахара представляет собой cEt. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированные cEt нуклеотиды располагают на всех концах гэпмерного мотива.
Модифицированные нуклеиновые основания
Модификации нуклеинового основания (или основания) или замещения конструктивно отличаются от, но функционально взаимозаменяемы, природных или синтетических немодифицированных нуклеиновых оснований. И природные, и модифицированные нуклеиновые основания способны участвовать в образовании водородной связи. Такие модификации нуклеиновых оснований могут придавать антисмысловым соединениям нуклеазную стабильность, аффинность связывания или другое благоприятное биологическое свойство. Модифицированные нуклеиновые основания содержат синтетические и природные нуклеиновые кислоты, такие как, например, 5-метилцитозин (5-me-С). Некоторые замещения нуклеиновых оснований, в том числе замещения 5-метилцитозина, особенно полезны для увеличения аффинности связывания антисмыслового соединения в случае нуклеиновой кислоты-мишени. Например, замещения 5-метилцитозина, как было показано, увеличивают стабильность дуплекса нуклеиновой кислоты на 0,6-1,2°C (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. и Lebleu, В., eds., Antisense Research и Applications, CRC Press, Boca Raton, 1993, pp. 276-278).
Дополнительные модифицированные нуклеиновые основания содержат 5-гидроксиметилцитозин, ксантин, гипоксантин, 2-аминоаденин, 6-метил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-пропил и другие алкильные производные аденина и гуанина, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2-тиоцитозин, 5-галогенурацил и цитозин, 5-пропинил(-C≡C-CH3) урацил и цитозин и другие алкинильные производные пиримидиновых оснований, 6-азоурацил, цитозин и тимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-галоген, 8-амино-, 8-тиол, 8-тиоалкил, 8-гидроксил и другие 8-замещенные аденины и гуанины, 5-галоген, в частности, 5-бром, 5-трифторметил и другие 5-замещенные урацилы и цитозина, 7-метилгуанин и 7-метиладенин, 2-F-аденин, 2-амино-аденин, 8-азагуанин и 8-азааденин, 7-деазагуанин и 7-деазааденин и 3-деазагуанин и 3-деазааденин.
Остатки гетероциклических оснований могут содержать те, в которых пуриновое или пиримидиновое основание заменяют другими гетероциклами, например, 7-деаза-аденином, 7-деазагуанозином, 2-аминопиридином и 2-пиридоном. Нуклеиновые основания, которые особенно полезны для увеличения аффинности связывания антисмысловых соединений, содержат 5-замещенные пиримидины, 6-азапиримидины и N-2, N-6 и O-6 замещенные пурины, в том числе 2 аминопропиладенин, 5-пропинилурацил и 5-пропинилцитозин.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения, направленные на нуклеиновую кислоту apo(a), содержат один или несколько модифицированных нуклеиновых оснований. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловые соединения с расширенным разрывом, направленные на нуклеиновую кислоту apo(a), содержат одно или несколько модифицированных нуклеиновых оснований. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модифицированное нуклеиновое основание представляет собой 5-метилцитозин. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.
Композиции и способы составления фармацевтических композиций
Антисмысловые олигонуклеотиды могут быть смешаны с фармацевтически приемлемым активным или инертным веществом для получения фармацевтических композиций или составов. Композиции и способы разработки фармацевтических композиций зависят от ряда критериев, в том числе, но без ограничения ими, пути введения, степени заболевания или дозы для введения.
Антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту apo(a), может быть использовано в фармацевтических композициях путем объединения антисмыслового соединения с подходящим фармацевтически приемлемым растворителем или носителем.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения "фармацевтический носитель" или "вспомогательное вещество" представляет собой фармацевтически приемлемый растворитель, суспендирующее средство или любой другой фармакологически инертный носитель для доставки одной или нескольких нуклеиновых кислот в организм животного. Вспомогательное вещество может быть жидким или твердым и может быть выбрано с учетом предполагаемого способа введения с учетом обеспечения желаемого объема, консистенции и т.д., в сочетании с нуклеиновой кислотой и другими компонентами данной фармацевтической композиции. Типичные фармацевтические носители содержат, но без ограничения ими, связующие средства (например, предварительно желатинизированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза и т.п.); наполнители (например, лактоза и другие сахара, микрокристаллическая целлюлоза, пектин, желатин, сульфат кальция, этилцеллюлоза, полиакрилаты или гидрофосфат кальция и т.д.); смазывающие вещества (например, стеарат магния, тальк, диоксид кремния, коллоидный диоксид кремния, стеариновая кислота, стеараты металлов, гидрогенизированные растительные масла, кукурузный крахмал, полиэтиленгликоли, бензоат натрия, ацетат натрия и т.п.); разрыхлители (например, крахмал, натрия крахмала гликолят, и т.д.); и смачивающие средства (например, лаурилсульфат натрия и т.д.).
Фармацевтически приемлемые органические или неорганические наполнители, которые не реагируют вредным образом с нуклеиновыми кислотами, подходящие для парентерального или не парентерального введения, также могут быть использованы при составлении композиций по настоящему изобретению. Подходящие фармацевтически приемлемые носители содержат, но без ограничения ими, воду, солевые растворы, спирты, полиэтиленгликоли, желатин, лактозу, амилозу, стеарат магния, тальк, кремниевую кислоту, вязкий парафин, гидроксиметилцеллюлозу, поливинилпирролидон и тому подобное.
Фармацевтически приемлемый разбавитель содержит фосфатно-солевой буфер (PBS). PBS представляет собой разбавитель, подходящий для использования в композициях, которые должны быть доставлены парентерально. Соответственно, в отдельном варианте реализации настоящего изобретения используемое в способах, описанных в данном документе, представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую соединение, направленное на нуклеиновую кислоту apo(a) и фармацевтически приемлемый разбавитель. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения фармацевтически приемлемый разбавитель представляет собой PBS. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения антисмысловое соединение представляет собой антисмысловой олигонуклеотид.
Фармацевтические композиции, которые содержат антисмысловые соединения, содержат любые фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры или соли таких эфиров, или олигонуклеотид, который при введении животному, в том числе и человеку, способен обеспечить (непосредственно или косвенно) биологически активный метаболит или его остаток. Соответственно, например, раскрытие также демонстрирует также фармацевтически приемлемые соли антисмысловых соединений, пролекарства, фармацевтически приемлемые соли таких пролекарств и другие биоэквиваленты. Подходящие фармацевтически приемлемые соли содержат, но без ограничения ими, соли натрия и калия.
Пролекарство может содержать включение дополнительных нуклеозидов на одном или обоих концах антисмыслового соединения, которые расщепляются эндогенными нуклеазами внутри тела, чтобы сформировать активное антисмысловое соединение.
Конъюгированные антисмысловые соединения
Антисмысловые соединения могут быть ковалентно связаны с одним или несколькими фрагментами или конъюгатами, которые повышают активность, клеточное распределение или клеточное поглощение получаемых антисмысловых олигонуклеотидов. Типичные группы, содержащие сопряженные двойные связи, содержат остатки холестерина и остатки липида. Дополнительные группы, содержащие сопряженные двойные связи содержат углеводы, фосфолипиды, биотин, феназин, фолат, фенантридин, антрахинон, акридин, флуоресцеины, родамины, кумарины и красители.
Антисмысловые соединения также могут быть модифицированы, чтобы иметь одну или несколько стабилизирующих групп, которые, как правило, прикреплены к одному или обоим концам антисмысловых соединений для повышения таких свойств, как, например, нуклеазная стабильность. Группы, относящиеся к стабилизирующим группам, являются кэп-структурами. Эти концевые модификации защищают антисмысловое соединение, которое имеет концевую нуклеиновую кислоту, от экзонуклеазной деградации и может помочь в доставке и/или локализации в клетке. Кэп может присутствовать на 5'-конце (5'-кэп), или на 3'-конце (3'-кэп), или может присутствовать на обоих концах. Кэп-структуры хорошо известны в данной области техники и содержат, например, обратные дезоксикэпы с удаленными азотистыми основаниями. Кроме того, 3' и 5'-стабилизирующие группы, которые могут быть использованы, чтобы ограничить один или оба конца антисмыслового соединения для придания нуклеазной устойчивости содержат те, которые раскрыты в WO 03/004602, опубликованной 16 января 2003.
Клеточная культура и лечение антисмысловыми соединениями
Влияние антисмысловых соединений на уровень, активность или экспрессию нуклеиновых кислот apo(a) может быть исследовано in vitro в различных типах клеток. Типы клеток, используемые для таких анализов, доступны от коммерческих поставщиков (напр. American Type Culture Collection, Манассус, VA; Zen-Bio, Inc., Research Triangle Park, NC; Clonetics Corporation, Волкерсвиль, MD) и их культивируют в соответствии с инструкциями поставщика с использованием коммерчески доступных реагентов (напр., Invitrogen Life Technologies, Карлсбад, СА). Иллюстративные типы клеток, содержат, но без ограничения ими, клетки HepG2, клетки Hep3B, клетки Huh7 (гепатоцеллюлярной карциномы), первичные гепатоциты, клетки А549, фибробласты GM04281 и клетки LLC-MK2.
In Vitro исследование антисмысловых олигонуклеотидов
В данном документе описаны способы обработки клеток антисмысловыми олигонуклеотидами, которые могут быть изменены соответствующим образом для обработки другими антисмысловыми соединениями.
В общем, клетки обрабатывают антисмысловыми олигонуклеотидами, если клетки достигают примерно 60-80% конфлуентности в культуре.
Реагент, обычно используемый для введения антисмысловых олигонуклеотидов в культивируемые клетки, содержит реагент для трансфекции катионного липида LIPOFECTIN® (Invitrogen, Карлсбад, СА). Антисмысловые олигонуклеотиды смешивают с LIPOFECTIN® в OPTI-МЕМ® 1 (Invitrogen, Карлсбад, СА), чтобы достичь желаемой конечной концентрации антисмыслового олигонуклеотида и концентрации LIPOFECTIN®, которая обычно находится в диапазоне от 2 до 12 мкг/мл на 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида.
Другой реагент, используемый для введения антисмысловых олигонуклеотидов в культивируемые клетки, содержит LIPOFECTAMINE 2000® (Invitrogen, Карлсбад, СА). Антисмысловой олигонуклеотид смешивают с LIPOFECTAMINE 2000® в среде с пониженным количеством сыворотки OPTI-MEM® 1 (Invitrogen, Карлсбад, СА), чтобы достичь желаемой концентрации антисмыслового олигонуклеотида и концентрации LIPOFECTAMINE®, которая обычно находится в диапазоне от 2 до 12 мкг/мл на 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида.
Другой реагент, используемый для введения антисмысловых олигонуклеотидов в культивируемые клетки, содержит Cytofectin® (Invitrogen, Карлсбад, СА). Антисмысловой олигонуклеотид смешивают с LIPOFECTAMINE 2000® в среде с пониженным количеством сыворотки OPTI-MEM® 1 (Invitrogen, Карлсбад, СА), чтобы достичь желаемой концентрации антисмыслового олигонуклеотида и концентрации Cytofectin®, которая обычно находится в диапазоне от 2 до 12 мкг/мл на 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида.
Другой реагент, используемый для введения антисмысловых олигонуклеотидов в культивируемые клетки, содержит Oligofectamine™ (Invitrogen Life Technologies, Карлсбад, СА). Антисмысловой олигонуклеотид смешивают с Oligofectamine™ в среде Opti-MEM™-1 с пониженным количеством сыворотки (Invitrogen Life Technologies, Карлсбад, СА), чтобы достичь желаемой концентрации олигонуклеотида с отношением Oligofectamine™ к олигонуклеотиду приблизительно от 0,2 до 0,8 мкл на 100 нМ.
Другой реагент, используемый для введения антисмысловых олигонуклеотидов в культивируемые клетки, содержит FuGENE 6 (Roche Diagnostics Corp., Индианаполис, IN). Антисмысловые олигомерного соединение смешивают с FuGENE 6 в 1 мл бессывороточной среды RPMI, чтобы достичь желаемой концентрации олигонуклеотида к Fugene 6 с соотношением олигомерного соединения от 1 до 4 мкл FuGENE 6 на 100 нМ.
Еще один способ, используемый для введения антисмысловых олигонуклеотидов в культивируемые клетки, содержит электропорацию (Sambrooke и Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001).
Клетки обрабатывают антисмысловыми олигонуклеотидами с помощью обычных способов. Клетки собирают, как правило, через 16-24 часов после обработки антисмысловыми олигонуклеотидами, после чего уровни RNA или протеина нуклеиновых кислот-мишеней измеряют с помощью способов, известных в данной области техники и описанных в данном документе (Sambrooke и Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001). В общем, если обработки проводят в нескольких повторах, данные представляют в виде среднего значения повторных обработок.
Концентрация используемого антисмыслового олигонуклеотида варьируется от клеточной линии к клеточной линии. Способы определения оптимальной концентрации антисмыслового олигонуклеотида для конкретной линии клеток хорошо известны в данной области техники (Sambrooke и Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001). Антисмысловые олигонуклеотиды обычно используют в концентрациях от 1 нМ до 300 нМ при трансфекции LIPOFECTAMINE2000® (Invitrogen, Карлсбад, СА), Lipofectin® (Invitrogen, Карлсбад, СА) или Cytofectin™ (Genlantis, Сан Диего, СА). Антисмысловые олигонуклеотиды используют при более высоких концентрациях в пределах от 625 до 20000 нМ при трансфекции с помощью электропорации.
Выделение RNA
Анализ RNA может быть выполнен на общей клеточной RNA или поли(А)+ mRNA. Способы выделения RNA широко известны в данной области техники (Sambrooke и Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001). Например, RNA может быть получена с использованием TRIZOL® (Invitrogen, Карлсбад, СА) в соответствии с рекомендованными протоколами изготовителя.
Анализ ингибирования целевых уровней или экспрессии
Ингибирование уровней или экспрессия нуклеиновой кислоты apo(a) может быть проанализировано различными способами, известными в данной области техники (Sambrooke и Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 2001). Например, уровни нуклеиновой кислоты-мишени могут быть определены количественно с помощью, напр., нозерн-блоттинга, конкурентной полимеразной цепной реакции (PCR) или количественной PCR в реальном времени. Анализ RNA может быть выполнен на общей клеточной RNA или поли(А)+ mRNA. Способы выделения RNA хорошо известны в данной области техники. Нозерн-блоттинг также является обычным способом в данной области техники. Количественная PCR в реальном времени может быть легко осуществлена с использованием коммерчески доступного ABI PRISM 7600, 7700 или 7900 Sequence Detection System, доступной от РЕ-Applied Biosystems (Фостер Сити, СА) и используется в соответствии с инструкциями изготовителя.
Анализ уровней RNA-мишени с помощью количественной PCR в реальном времени
Количественное определение уровней RNA-мишени может быть достигнуто путем количественной PCR в реальном времени с помощью ABI PRISM® 7600, 7700 или 7900 Sequence Detection System (PE-Applied Biosystems, Фостер Сити, СА) в соответствии с инструкциями производителя. Способы количественной PCR в реальном времени хорошо известны в данной области техники.
Перед PCR в реальном времени, выделенную RNA подвергают реакции обратной транскриптазы (RT), которая производит комплементарную DNA (cDNA), которую затем используют в качестве субстрата для PCR-амплификации в реальном времени. Реакции RT и PCR в реальном времени проводят последовательно в той же лунке для пробы. Реагенты RT и PCR в реальном времени получают от Invitrogen (Карлсбад, СА). Реакции RT и PCR в реальном времени выполняют с помощью способов, хорошо известных специалистам в данной области техники.
Целевые количества гена (или RNA), полученные с помощью PCR в реальном времени, могут быть нормализованы либо с помощью уровня экспрессии гена, экспрессия которого является постоянной, такого как циклоспорин А или GAPDH, либо с помощью количественного определения общего количества RNA с использованием RIBOGREEN® (Invitrogen, Inc. Карлсбад, СА). Экспрессия циклоспорина А или GAPDH может быть определена количественно с помощью PCR в реальном времени, осуществляемом одновременно с мишенью, комбинировано или отдельно. Общее количество RNA определяют количественно с использованием реагента для количественного определения RIBOGREEN® RNA (Invitrogen, Inc. Карлсбад, СА). Способы количественного определения RNA с помощью RIBOGREEN® изложены в Jones, L.J., et al., (Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374). Прибор CYTOFLUOR® 4000 (РЕ Applied Biosystems, Фостер Сити, СА) используют для измерения флуоресценции RIBOGREEN®.
Зонды и праймеры могут быть сконструированы для гибридизации с нуклеиновой кислотой apo(a). Способы конструирования зондов и праймеров PCR в реальном времени хорошо известны в данной области техники и могут включать использование такого программного обеспечения, как PRIMER EXPRESS® Software (Applied Biosystems, Фостер Сити, СА).
Анализ уровней протеина
Антисмысловое ингибирование нуклеиновых кислот apo(a) может быть оценено с помощью измерения уровней протеина apo(a). Уровни протеина apo(a) могут быть оценены или определены количественно различными способами, хорошо известными в данной области техники, такими как иммунопреципитация, вестерн-блоттинг (иммуноблоттинг), иммуноферментный анализ (ELISA), количественные анализы протеина, анализы активности протеина (например, анализы активности каспазы), иммуногистохимия, иммуноцитохимия или сортировка клеток с возбуждением флуоресценции (FACS) (Sambrooke и Russell in Molecular Cloning. A Laboratory Manual. Third Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. 2001). Антитела, направленные на мишень, могут быть выделены и получены из различных источников, таких как каталог антител MSRS (Aerie Corporation, Birmingham, MI), или могут быть получены с помощью обычных моноклональных или поликлональных антител способами генерации, хорошо известными в данной области техники. Антитела, используемые для обнаружения apo(a), являются коммерчески доступными.
In vivo исследование антисмысловых соединений
Антисмысловые соединения, например, антисмысловые олигонуклеотиды, исследуют на животных, чтобы оценить их способность ингибировать экспрессию apo(a) и производить фенотипические изменения. Исследование можно проводить на нормальных животных или на экспериментальных моделях заболеваний. Для введения животным, антисмысловые олигонуклеотиды составлены в фармацевтически приемлемом растворителе, таком как физиологический раствор или фосфатно-солевой буфер. Введение содержит парентеральные пути введения. Расчет дозировки антисмыслового олигонуклеотида и частоты дозирования зависит от таких факторов, как пути введения и масса тела животного. После периода лечения антисмысловыми олигонуклеотидами RNA выделяют из ткани и измеряют изменения экспрессии нуклеиновой кислоты apo(a). Также измеряют изменения уровней протеина apo(a).
Отдельные признаки
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечиваемое в данном документе представляет собой способы лечения индивидуума, который включает введение одной или более фармацевтических композиций, как описано в данном документе. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения индивидуум имеет связанную с apo(a) болезнь. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения индивидуум имеет связанную с Lp(a) болезнь. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения индивидуум имеет воспалительную, сердечно-сосудистую и/или метаболическую болезнь, расстройство или заболевание.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения сердечно-сосудистые болезни, расстройства или заболевания содержат, но без ограничения ими, аневризм (например, аневризм брюшной аорты), стенокардию, аритмию, атеросклероз, болезнь сосудов головного мозга, коронарную болезнь сердца, ишемическую болезнь сердца, дислипидемию, гиперхолестеринемию, гиперлипидемию, гипертензию, гипертриглицеридемию, инфаркт миокарда, заболевание периферических сосудов (например, заболевание периферических артерий), инсульт и тому подобное.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения соединения, направленные на apo(a), описанные в данном документе, модулируют физиологические маркеры или фенотипы сердечно-сосудистой болезни, расстройства или заболевания. Например, введение соединений животным может снизить уровни LDL и холестерина у этих животных по сравнению с необработанными животными. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляция физиологических маркеров или фенотипов может быть связана с ингибированием apo(a) соединениями.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения физиологические маркеры сердечно-сосудистой болезни, расстройства или заболевания могут быть определены количественно. Например, уровни LDL или холестерина могут быть измерены и определены количественно с помощью, например, стандартных исследований липидов. В случае подобных маркеров, в отдельных вариантах реализации настоящего изобретения маркер может быть уменьшен на около 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 99%, или диапазон, определенный любыми двумя из этих значений.
Кроме того, обеспечиваемое в данном документе представляет собой способы предотвращения, лечения или уменьшения интенсивности симптома, связанного с сердечно-сосудистой болезнью, расстройством или заболеванием у пациента, нуждающегося в этом. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечиваемое представляет собой способ снижения темпов наступления симптома, связанного с сердечно-сосудистой болезнью, расстройством или заболеванием. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечиваемое представляет собой способ снижения тяжесть симптома, связанного с сердечно-сосудистой болезнью, расстройством или заболеванием. В подобных вариантах реализации настоящего изобретения способы включают введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения, направленного на нуклеиновую кислоту apo(a).
Сердечно-сосудистую болезнь, расстройство или заболевание можно охарактеризовать многочисленными физическими симптомами. Любой симптом, известный специалистам в данной области техники, связанный с сердечно-сосудистой болезнью, расстройством или заболеванием, может быть предотвращен, вылечен, уменьшен в своей интенсивности или иным образом модулирован с помощью соединений и способов, описанных в данном документе. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения симптом может быть любым из, но без ограничения ими, стенокардии, боли в груди, одышки, сердцебиения, слабости, головокружения, тошноты, потливости, тахикардии, брадикардии, аритмии, фибрилляции предсердий, отека нижних конечностей, цианоза, усталости, обморока, онемения лица, онемения конечностей, хромоты или спазма мышц, вздутия живота или лихорадки.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения метаболические болезни, нарушения или заболевания содержат, но без ограничения ими, гипергликемию, преддиабет, сахарный диабет (тип I и тип II), ожирение, резистентность к инсулину, метаболический синдром и диабетическую дислипидемию.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения соединения направленные на apo(a), описанные в данном документе, модулируют физиологические маркеры или фенотипы метаболической болезни, расстройства или заболевания. Например, введение соединений животным может снизить у животных уровни глюкозы и резистентности к инсулину по сравнению с необработанными животными. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляция физиологических маркеров или фенотипов может быть связана с ингибированием apo(a) соединениями.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения физиологические маркеры метаболической болезни, расстройства или заболевания могут быть определены количественно. Например, уровни глюкозы или резистентности к инсулину могут быть измерены и количественно определены с помощью стандартных исследований, известных в данной области техники. В случае подобных маркеров, в отдельных вариантах реализации настоящего изобретения маркер может быть уменьшен на около 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 99%, или на диапазон, определенный любыми двумя из этих значений. В другом примере, чувствительность к инсулину может быть измерена и количественно определена с помощью стандартных исследований, известных в данной области техники. В случае подобных маркеров, в отдельных вариантах реализации настоящего изобретения маркер может быть увеличен на около 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 99%, или на диапазон, определенный любыми двумя из этих значений.
Кроме того, обеспечиваемое в данном документе представляет собой способы предотвращения, лечения или уменьшения интенсивности симптома, связанного с метаболической болезнью, расстройством или заболеванием у пациента, нуждающегося в этом. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечиваемое представляет собой способ снижения темпов наступления симптома, связанного с метаболической болезнью, расстройством или заболеванием. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечиваемое представляет собой способ снижения тяжесть симптома, связанного с метаболической болезнью, расстройством или заболеванием. В подобных вариантах реализации настоящего изобретения способы включают введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения, направленного на нуклеиновую кислоту apo(a).
Метаболическую болезнь, расстройство или заболевание можно охарактеризовать многочисленными физическими симптомами. Любой симптом, известный специалистам в данной области техники, связанный с метаболической болезнью, расстройством или заболеванием, может быть предотвращен, вылечен, уменьшен в своей интенсивности или иным образом модулирован с помощью соединений и способов, описанных в данном документе. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения симптом может быть любым из, но без ограничения ими, чрезмерного мочеотделения (полиурии), чрезмерной жажды и увеличения потребления жидкости (полидипсии), затуманенного зрения, необъяснимой потери веса и вялости.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения воспалительные болезни, нарушения или заболевания содержат, но без ограничения ими, ишемическую болезнь сердца (CAD), болезнь Альцгеймера и тромбоэмболические болезни, расстройства или заболевания. Некоторые тромбоэмболических болезни, расстройства или заболевания содержат, но без ограничения ими, инсульт, тромбоз, инфаркт миокарда и болезнь периферических сосудов.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения соединения направленные на apo(a), описанные в данном документе, модулируют физиологические маркеры или фенотипы воспалительной болезни, расстройства или заболевания. Например, введение соединений животным может уменьшить уровни воспалительных цитокинов или другие маркеры воспаления у этих животных по сравнению с необработанными животными. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения модуляция физиологических маркеров или фенотипов может быть связана с ингибированием apo(a) соединениями.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения физиологические маркеры воспалительной болезни, расстройства или заболевания могут быть определены количественно. Например, уровни цитокина могут быть измерены и количественно определены с помощью стандартных исследований, известных в данной области техники. В случае подобных маркеров, в отдельных вариантах реализации настоящего изобретения маркер может быть уменьшен на около 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 99%, или на диапазон, определенный любыми двумя из этих значений.
Кроме того, обеспечиваемое в данном документе представляет собой способы предотвращения, лечения или уменьшения интенсивности симптома, связанного с воспалительной болезнью, расстройством или заболеванием у пациента, нуждающегося в этом. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечиваемое представляет собой способ снижения темпов наступления симптома, связанного с воспалительной болезнью, расстройством или заболеванием. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечиваемое представляет собой способ снижения тяжесть симптома, связанного с воспалительной болезнью, расстройством или заболеванием. В подобных вариантах реализации настоящего изобретения способы включают введение индивидууму, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения, направленного на нуклеиновую кислоту apo(a).
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечиваемое представляет собой способы лечения индивидуума со связанными с apo(a) болезнями, расстройствами или состояниями, которые содержат введение терапевтически эффективного количества одной или нескольких фармацевтических композиций, как описано в данном документе. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения индивидуум имеет повышенные уровни apo(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения обеспечиваемое представляет собой способы лечения индивидуума со связанными с Lp(a) болезнями, расстройствами или состояниями, которые содержат введение терапевтически эффективного количества одной или нескольких фармацевтических композиций, как описано в данном документе. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения индивидуум имеет повышенные уровни Lp(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения индивидуум имеет воспалительную, сердечно-сосудистую и/или метаболическую болезнь, расстройство или заболевание. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения введение терапевтически эффективного количества антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту apo(a), сопровождают мониторингом уровней apo(a) или Lp(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения введение терапевтически эффективного количества антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту apo(a), сопровождается мониторингом маркеров воспалительной, сердечно-сосудистой и/или метаболической болезни или другого процесса заболевания, связанного с экспрессией apo(a), для определения индивидуального ответа на антисмысловое соединение. Индивидуальный ответ на введение антисмыслового соединения, специфического по отношению к воздействию apo(a), может быть использован по назначению врача, чтобы определить количество и продолжительность терапевтического вмешательства с соединением.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения введение антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту apo(a), приводит к снижению экспрессии apo(a) на по меньшей мере около 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 99%, или в диапазоне, определенном с помощью любых двух из этих значений. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения apo(a) экспрессия снижают на ≤100 мг/дл, ≤90 мг/дл, ≤80 мг/дл, ≤70 мг/дл, ≤60 мг/дл, ≤50 мг/дл, ≤40 мг/дл, ≤30 мг/дл, ≤20 мг/дл или ≤10 мг/дл.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения введение антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту apo(a), приводит к снижению экспрессии Lp(a) на по меньшей мере около 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 99%, или в диапазоне, определенном с помощью любых двух из этих значений.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения фармацевтические композиции, которые содержит антисмысловое соединение, направленное на apo(a), используют для получения лекарственного препарата для лечения пациента, страдающего, или подверженного, противовоспалительной, сердечно-сосудистой и/или метаболической болезни, расстройству или заболеванию.
Дозировка
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения фармацевтические композиции вводят в соответствии с режимом дозирования (напр., дозой, частотой введения дозы и длительностью), при том, что для достижения желаемого эффекта может быть выбран режим дозирования. Желаемый эффект может быть, например, снижением apo(a) или профилактикой, снижением, уменьшением интенсивности или замедлением прогрессирования болезни или заболевания, связанного с apo(a).
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения переменные схемы дозирования корректируют, чтобы привести к желаемой концентрации фармацевтической композиции у пациента. "Концентрация фармацевтической композиции", как используют по отношению к режиму дозирования, может относиться к соединению, олигонуклеотиду или активному ингредиенту фармацевтической композиции. Например, в отдельных вариантах реализации настоящего изобретения дозу и частоту введения дозы корректируют, чтобы обеспечить концентрацию фармацевтической композиции в ткани или концентрацию фармацевтической композиции в плазме в количестве, достаточном для достижения желаемого эффекта.
Дозирование зависит от тяжести и отзывчивости болезненного состояния, подлежащего лечению, с курсом лечения продолжительностью от нескольких дней до нескольких месяцев, или до тех пор, пока лечение не возымеет эффект или не будет достигнуто уменьшение болезненного состояния. Дозирование зависит также от действенности лекарственного средства и метаболизма. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения доза составляет от 0,01 мкг до 100 мг на кг массы тела или в диапазоне дозирования от 0,001 мг до 1000 мг и может быть дана один раз или более ежедневно, еженедельно, ежемесячно или ежегодно, или даже один раз каждые от 2 до 20 лет. После успешного лечения, это может быть желательно, чтобы пациент подвергался поддерживающей терапии, чтобы предотвратить рецидив болезненного состояния, при том, что олигонуклеотид вводят в поддерживающих дозах, начиная от дозирования 0,01 мкг до 100 мг на кг массы тела, или от 0,001 мг до 1000 мг, один раз или более ежедневно, еженедельно, ежемесячно, ежегодно, один раз от 2 до 20 лет.
Некоторые комплексные терапии
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения первое средство, которое содержит соединение, описанное в данном документе, вводят совместно с одним или несколькими вторичными средствами или терапией. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения подобные вторые средства предназначены для лечения той же болезни, расстройства или заболевания, что и в случае первого средства, описанного в данном документе. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения подобные вторые средства предназначены для лечения болезни, расстройства или заболевания, отличной от случая первого средства, описанного в данном документе. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения первое средство предназначено для лечения нежелательного побочного эффекта второго средства. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения вторые средства вводят совместно с первым средством для лечения нежелательного эффекта первого средства. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения такого второго средства предназначены для лечения нежелательного побочного эффекта, одной или более фармацевтических композиций, как описано в данном документе. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения вторые средства вводят совместно с первым средством для получения комбинированного эффекта. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения вторые средства вводят совместно с первым средством для получения синергического эффекта. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения совместное введение первого и второго средств позволяет использовать более низкие дозировки, чем требовалось бы для достижения терапевтического или профилактического эффекта, если средства вводят в виде независимой терапии.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения одна или несколько композиций, описанных в данном документе, и одно или несколько других фармацевтических средств вводят в одно и тоже время. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения одна или несколько композиций по настоящему изобретению и одно или несколько других фармацевтических средств вводят в разное время. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения одна или несколько композиций, описанных в данном документе, и одно или несколько других фармацевтических средств вводят вместе в одном состав. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения одна или несколько композиций, описанных в данном документе, и одно или несколько других фармацевтических средств вводят раздельно.
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения вторые средства содержат, но без ограничения ими, apo(a)-понижающее средство, Lp(а)-понижающее средство, средство для лечения болезни Альцгеймера, средство уменьшения образование тромбоэмболии, холестерин-понижающее средство, средство, понижающее уровень липидов, отличных от HDL (например, LDL), разрыхлитель HDL, рыбий жир, ниацин, никотиновую кислоту, фибрат, статин, DCCR (соль диазоксидом), глюкозо-понижающее средство, противовоспалительное средство и/или антидиабетическое средство. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения первое средство вводят в комбинации с максимально переносимой дозой второго средства. В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения первое средство вводят пациенту, который не реагирует на максимально переносимую дозу второго средства.
Примеры apo(a)-понижающих средств содержат антисмысловой олигонуклеотид apo(a), отличный от первого средства, ниацина, никотиновой кислоты или антисмыслового олигонуклеотида apoB (напр. Mipomersen). Пример apo(a)-понижающей терапии представляет собой аферез Lp(a).
Примеры сахароснижающих и/или антидиабетических средств содержат, но без ограничения ими, терапевтическое изменение образа жизни, агонист PPAR, ингибитор дипептидилпептидазы (IV), аналог GLP-1, инсулин или аналог инсулина, стимулятор секреции инсулина, ингибитор SGLT2, аналог амилина человека, бигуанид, ингибитор альфа-глюкозидазы, метформин, сульфонилмочевину, розиглитазон, меглитинид, тиазолидиндион, ингибитор альфа-глюкозидазы и тому подобное. Сульфонилмочевина может быть ацетогексамидом, хлорпропамидом, толбутамидом, толазамидом, глимепиридом, глипизидом, глибуридом или гликлазидом. Меглитинид может быть натеглинидом или репаглинидом. Тиазолидиндион может быть пиоглитазоном или розиглитазоном. Альфа-глюкозидаза может быть акарбозой или миглитолом.
Примеры холестериновой или гиполипидемической терапии содержат, но без ограничения ими, терапевтическое изменение образа жизни, статины, секвестранты желчных кислот, ниацин, никотиновую кислоту, ингибиторы CETP и агонистов рецептора, активирующего пролиферацию пероксисомы, таких как фибраты. Статины могут быть аторвастатином, флувастатином, ловастатином, правастатином, розувастатином и симвастатином и тому подобным. Секвестранты желчных кислот могут быть колесевеламомом, холестирамином, колестиполом и тому подобным. Фибраты могут быть гемфиброзилом, фенофибратом, клофибратом и тому подобным. Ингибитор СЕТР может быть антисмысловым олигонуклеотидом CETP или Torcetrapib.
Некоторые выборки лечения
Некоторые пациенты с высокими уровнями Lp(a) имеют значительный риск различных болезней (Lippi et al., Clinica Chimica Acta, 2011, 412:797-801; Solfrizz et al.). У многих пациентов с высокими уровнями Lp(a), современные методы лечения не могут сократить их уровни Lp(a) до безопасных уровней. Аро(а) играет важную роль в образовании Lp(a), а, следовательно, снижение apo(a) может уменьшить Lp(a) и предотвратить, вылечить или облегчить симптомы болезни, связанной с Lp(a).
В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения лечение с помощью соединений и способов, раскрытых в данном документе, указывает на человека и животного с повышенными уровнями apo(a) и/или Lp(a). В отдельных вариантах реализации настоящего изобретения человек имеет повышенные уровни apo(a) ≥30 мг/дл, ≥40 мг/дл, ≥50 мг/дл, ≥60 мг/дл, ≥70 мг/дл, ≥80 мг/дл, ≥90 мг/дл или ≥100 мг/дл.
Некоторые соединения
Выбранные антисмысловые олигонуклеотиды гэпмера из заявки PCT WO 2005/000201 (содержится в данном документ в виде ссылки во всей своей полноте) оценивают (Пример 1), а наиболее высокоактивное соединение, ISIS 144367, используют в качестве эталона для сравнения со недавно создаваемыми антисмысловыми олигонуклеотидами, описанными в данном документе.
Из недавно созданных антисмысловых олигонуклеотидов было найдено около 90, которые являются более высокоактивными, чем контрольное соединение, ISIS 144367, по оценке отдельной дозы в in vitro исследованиях (Примеры 2-3, 5). Из около 90 антисмысловых олигонуклеотидов, около 83 выбирают для in vitro исследования влияния величины многократной дозы, а 64 антисмысловых олигонуклеотидов, как было обнаружено, являются более высокоактивными, чем контрольное соединение (Примеры 4, 6).
Около 32 антисмысловых олигонуклеотидов дополнительно выбирают для in vivo исследований трансгенных мышей с apo(a) человека (Пример 7). Несколько антисмысловых олигонуклеотидов были определены как те, которые являются более высокоактивными, чем контрольное соединение in vivo.
Около 24 антисмысловых олигонуклеотидов дополнительно выбирают для исследования вязкости in vitro (Пример 13). Антисмысловые олигонуклеотиды, которые были вязкими, не принимают участие в дальнейшие исследования.
Около 14 антисмысловых олигонуклеотидов дополнительно выбирают для in vivo исследований переносимости грызунами и фармакокинетических свойств (Примеры 8-10). Исследования показали, что ISIS 494372 является наиболее хорошо переносимым антисмысловым олигонуклеотидом.
ISIS 494283, 494284, 494286, 494301, 494302 и 494372 проверяют на яванских макаках (Примеры 11-12). Исследования показали, что ISIS 494372 является хорошо переносимым и высокоактивным в случае обезьян.
ПРИМЕРЫ
Неограничивающее раскрытие и приведение с помощью ссылки
В то время как были описаны некоторые соединения, композиции и способы, описанные в данном документе, со специфичностью в соответствии с отдельными вариантами реализации настоящего изобретения, следующие примеры служат только для иллюстрации соединений, описанных в данном документе, и не предназначены для их ограничения. Каждая из ссылок, приведенных в настоящей заявке, приведена в данном документе в виде ссылки во всей своей полноте.
Пример 1: Дозозависимое антисмысловое ингибирование аполипопротеина (а) человека (apo(a)) в первичных гепатоцитах человека
Выбранные антисмысловые олигонуклеотиды гэпмера из предыдущей публикации (WO 2005/000201, содержание которой приведено в данном документе в виде ссылки во всей ее полноте) исследуют с помощью анализа с однократным введением в первичных гепатоцитах человека. Клетки получают от Tissue Transformation Technologies (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) и обрабатывают 150 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После периода лечения приблизительно 16 часов, из клеток выделяют RNA и измеряют уровни mRNA apo(a) с помощью количественной PCR в реальном времени. Набор праймер-зонда apo(a) человека hAPO(а)3' (прямая последовательность ACAGCAATCAAACGAAGACACTG, обозначенная в данном документе как SEQ ID NO: 5; обратная последовательность AGCTTATACACAAAAATACCAAAAATGC, обозначенная в данном документе как SEQ ID NO: 6; меченая последовательность TCCCAGCTACCAGCTATGCCAAACCTT, обозначенная в данном документе как SEQ ID NO: No: 7) используют для измерения уровней mRNA. Кроме того, уровни mRNA были также измерены с использованием набора праймер-зонда apo(a) человека hAPO(а)12 т.н. (прямая последовательность CCACAGTGGCCCCGGT, обозначенная в данном документе как SEQ ID NO: 8; обратная последовательность ACAGGGCTTTTCTCAGGTGGT, обозначенная в данном документе как SEQ ID NO: 9; меченая последовательность CCAAGCACAGAGGCTCCTTCTGAACAAG, обозначенная в данном документе как SEQ ID NO: 10). Уровни mRNA apo(a) нормализуют для экспрессии mRNA GAPDH. Результаты представлены в Таблице 1 в виде процента ингибирования apo(a) по отношению к необработанным контрольным клеткам.
Figure 00000012
Figure 00000013
Отдельные антисмысловые олигонуклеотиды отбирают для дальнейшего исследования с помощью анализа эффекта дозы.
Выбранные антисмысловые олигонуклеотиды исследуют в первичных гепатоцитах человека с 25 нМ, 50 нМ, 150 нМ или 300 нМ концентрациями антисмыслового олигонуклеотида, как указано в Таблице 2 ниже. После периода лечения приблизительно 16 часов, из клеток выделяют RNA и измеряют уровни mRNA apo(a) с помощью количественной PCR в реальном времени. Набор праймер-зонда apo(a) человека hAPO(a)3' используют для измерения уровней mRNA. Уровни mRNA apo(a) нормализуют для экспрессии mRNA GAPDH. Результаты представлены в виде процента ингибирования apo(a) по отношению к необработанным контрольным клеткам.
Figure 00000014
ISIS 144367 продемонстрирует более высокую эффективность и зависимость от дозы, чем другие антисмысловые олигонуклеотиды. Следовательно, ISIS 144367 считают контрольным антисмысловым олигонуклеотидом для сравнения специфичной активности недавно разработанных антисмысловых олигонуклеотидов, раскрытых в данном документе.
Пример 2: Антисмысловое ингибирование apo(a) человека в первичных гепатоцитах трансгенных мышей
Не так давно были созданы антисмысловые олигонуклеотиды, специфичные по отношению к нуклеиновой кислоте apo(a), и было исследовано их воздействие на mRNA apo(a) in vitro. Антисмысловые олигонуклеотиды исследуют на специфическую активность в серии параллельных экспериментов, которые имеют одинаковые условия культивирования. В этом исследовании используют первичные гепатоциты от трансгенных мышей с apo(a) человека (Frazer, K.A. et al., Nat. Genet. 1995. 9: 424-431). Гепатоциты при плотности 35000 клеток на лунку трансфецируют с помощью электропорации с 1000 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После периода лечения приблизительно 24 часов, из клеток выделяют RNA и измеряют уровни mRNA apo(a) с помощью количественной PCR в реальном времени. Набор праймер-зонда человека hAPO(а)12 т.н. используют для измерения уровней mRNA. Уровни mRNA apo(a) корректируют в соответствии с общим содержанием RNA, которое измеряют с помощью RIBOGREEN®. Результаты каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах, приведенных ниже. ISIS 144367 используют в качестве контрольного соединения в случае новых антисмысловых олигонуклеотидов, которые также содержатся в исследовании. Результаты представлены в виде процента ингибирования apo(a) по отношению к необработанным контрольным клеткам. В общей сложности при этих условиях культивирования исследуют 1511 гэпмеров. Только те антисмысловые олигонуклеотиды, которые были выбраны для дальнейшего исследования, представлены в таблице ниже, причем каждая таблица представляет отдельный эксперимент.
Недавно разработанные гибридные антисмысловые олигонуклеотиды создают в виде гэпмеров 5-10-5 МОЕ. Гэпмеры имеют 20 нуклеозидов в длину, при том, что центральный сегмент разрыва состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен концевыми сегментами в 5' направлении и в 3' направлении, каждое из которых содержит пять нуклеозидов. Каждый нуклеозид в 5' концевом сегменте и каждый нуклеозид в 3' концевом сегменте имеют модификацию 2'-МОЕ. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой тиофосфатные (P=S) связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозины.
Последовательность-мишень apo(a) содержит несколько повторяющихся последовательностей двойной петли, и, следовательно, антисмысловой олигонуклеотид может быть специфическим к одной или нескольким областям apo(a), в зависимости от того, присутствует ли в олигонуклеотиде-мишени последовательность двойной петли, или нет. "Начальный сайт" указывает на 5'-крайний нуклеозид, к которому направлен гэпмер в последовательности человека. "Сайт остановки" указывает на 3'-крайний нуклеозид, к которому направлен гэпмер в последовательности человека. Антисмысловой олигонуклеотид apo(a) может иметь более одного "начального сайта" или "сайта остановки", в зависимости от того, присутствует или нет повторение двойной петли.
Большинство гэпмеров, приведенных в Таблицах, имеют специфичность со 100% комплементарностью к одной или более области либо mRNA apo(a) человека, обозначенной в данном документе как SEQ ID NO: 1 (регистрационный номер GENBANK NM_005577.2), либо геномной последовательности apo(a) человека, обозначенной в данном документе в виде SEQ ID NO: 2 (регистрационный номер GENBANK NT_007422.12, усеченная из нуклеотидов от 3230000 до 3380000), либо обе. 'н/д' указывает на то, что антисмысловой олигонуклеотид не специфичен к этой конкретной последовательности со 100% комплементарностью.
Figure 00000015
Figure 00000016
Figure 00000017
Figure 00000018
Figure 00000019
Figure 00000020
Figure 00000021
Figure 00000022
Figure 00000023
Figure 00000024
Figure 00000025
Figure 00000026
Figure 00000027
Figure 00000028
Figure 00000029
Figure 00000030
Figure 00000031
Figure 00000032
Пример 3: дозозависимое антисмысловое ингибирование apo(a) в первичных гепатоцитах трансгенных мышей
Гэпмеры из исследований, описанные выше, которые демонстрируют значительное in vitro ингибирование mRNA apo(a), отбирают и исследуют при различных дозах в первичных гепатоцитах трансгенных мышей в серии параллельных исследований с одинаковыми условиями культивирования. Клетки высевают при плотности 35000 на лунку и трансфицируют с помощью электропорации с концентрациями антисмыслового олигонуклеотида 0,0625 мкМ, 0,125 мкМ, 0,25 мкМ, 0,500 мкМ или 1,000 мкМ. После периода лечения приблизительно 16 часов, из клеток выделяют RNA и измеряют уровни mRNA apo(a) с помощью количественной PCR в реальном времени. Набор праймер-зонда apo(a) человека hAPO(a)12 т.н. используют для измерения уровней mRNA. Уровни mRNA apo(a) корректируют в соответствии с общим содержанием RNA, которое измеряют с помощью RIBOGREEN®. Результаты представлены в виде процента ингибирования apo(a) по отношению к необработанным контрольным клеткам.
Результаты каждого из исследований изображены в Таблицах, представленных ниже, при том, что каждая таблица представляет отдельный эксперимент. Также в таблицах представлена половина максимальной ингибирующей концентрации (IC50) каждого олигонуклеотида. В клетках, обработанных антисмысловым олигонуклеотидом, уровни mRNA apo(a) были значительно дозозависимо снижены. Специфическую активность недавно созданных олигонуклеотидов сравнивают с контрольным олигонуклеотидом ISIS 144367.
Figure 00000033
Figure 00000034
Figure 00000035
Figure 00000036
Figure 00000037
Figure 00000038
Figure 00000039
Figure 00000040
Figure 00000041
Figure 00000042
Figure 00000043
Figure 00000044
Как представлено в Таблицах выше,
Figure 00000045
Figure 00000046
Figure 00000047
Figure 00000048
и
Figure 00000049
являются более высокоактивными, чем
Figure 00000050
Пример 4: дозозависимое антисмысловое ингибирование apo(a) в первичных гепатоцитах трансгенных мышей
Высокоактивные гэпмеры из исследований, описанных выше, дополнительно отбирают и исследуют при различных дозах первичных гепатоцитах трансгенных мышей в серии исследований с аналогичными условиями культивирования. Клетки высевают при плотности 35000 на лунку и трансфицируют с использованием электропорации с концентрациями антисмыслового олигонуклеотида 0,049 мкМ, 0,148 мкМ, 0,444 мкМ, 1,333 мкМ или 4,000 мкМ, как указано в Таблицах ниже. После периода лечения приблизительно 16 часов, из клеток выделяют RNA и измеряют уровни mRNA apo(a) с помощью количественной PCR в реальном времени. Набор праймер-зонда apo(a) человека hAPO(a)12 т.н. используют для измерения уровней mRNA. Уровни mRNA apo(a) корректируют в соответствии с общим содержанием RNA, которое измеряют с помощью RIBOGREEN®. Результаты представлены в виде процента ингибирования apo(a) по отношению к необработанным контрольным клеткам.
Результаты каждого из исследований изображены в Таблицах, представленных ниже, при том, что каждая таблица представляет отдельный эксперимент. Также в таблицах представлена половина максимальной ингибирующей концентрации (IC50) каждого олигонуклеотида. В клетках, обработанных антисмысловым олигонуклеотидом, уровни mRNA apo(a) были значительно дозозависимо снижены. Специфическую активность недавно созданных олигонуклеотидов сравнивают с контрольным олигонуклеотидом, ISIS 144367. Как представлено в Таблицах выше,
Figure 00000051
Figure 00000052
Figure 00000053
Figure 00000054
и
Figure 00000055
являются более высокоактивными, чем
Figure 00000056
Figure 00000057
Figure 00000058
Figure 00000059
Figure 00000060
Figure 00000061
Figure 00000062
Figure 00000063
Пример 5: Антисмысловое ингибирование apo(a) человека в первичных гепатоцитах трансгенных мышей
Не так давно были созданы антисмысловые олигонуклеотиды, специфические по отношению к нуклеиновой кислоте apo(a), и было исследовано их воздействие на mRNA apo(a) in vitro. Антисмысловые олигонуклеотиды исследуют в серии экспериментов, которые имеют одинаковые условия культивирования. В этом исследовании используют первичные гепатоциты от трансгенных мышей с apo(a) человека. Гепатоциты при плотности 35000 клеток на лунку трансфецируют с помощью электропорации с 1000 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После периода лечения приблизительно 24 часов, из клеток выделяют RNA и измеряют уровни mRNA apo(a) с помощью количественной PCR в реальном времени. Набор праймер-зонда человека hAPO(a)12 т.н. используют для измерения уровней mRNA. Уровни mRNA apo(a) корректируют в соответствии с общим содержанием RNA, которое измеряют с помощью RIBOGREEN®. Результаты каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах, приведенных ниже. Также в исследованиях для сравнения содержится ISIS 144367. Результаты представлены в виде процента ингибирования apo(a) по отношению к необработанным контрольным клеткам. В общей сложности, при этих условиях культивирования исследуют 231 гэпмеров. Ниже представлены только те антисмысловые олигонуклеотиды, которые были выбраны для дальнейшего исследования.
Недавно разработанные гибридные антисмысловые олигонуклеотиды создают в виде гэпмеров 3-10-4 МОЕ. Гэпмеры имеют 17 нуклеозидов в длину, при том, что центральный сегмент разрыва состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов и окружен концевыми сегментами 5'-направлении и в 3'-направлении, которые содержат три нуклеозида и четыре нуклеозида, соответственно. Каждый нуклеозид в 5' концевом сегменте и каждый нуклеозид в 3' концевом сегменте имеют модификацию 2'-МОЕ. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой тиофосфатные (P=S) связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозины.
Последовательность-мишень apo(a) содержит несколько повторяющихся последовательностей двойной петли, и, следовательно, антисмысловой олигонуклеотид может быть специфическим к одной или нескольким областям apo(a), в зависимости от того, присутствует ли в олигонуклеотиде-мишени последовательность двойной петли, или нет. "Начальный сайт" указывает на 5'-крайний нуклеозид, к которому направлен гэпмер в последовательности человека. "Сайт остановки" указывает на 3'-крайний нуклеозид, к которому направлен гэпмер в последовательности человека. Антисмысловой олигонуклеотид apo(a) может иметь более одного "начального сайта" или "сайта остановки", в зависимости от того, присутствует или нет повторение двойной петли.
Большинство гэпмеров, приведенных в Таблицах, специфичны со 100% комплементарностью ко множеству областей либо mRNA apo(a) человека, обозначенного в данном документе как SEQ ID NO: 1 (регистрационный номер GENBANK NM_005577.2), либо геномной последовательности apo(a) человека, обозначенной в данном документе в виде SEQ ID NO: 2 (регистрационный номер GENBANK NT_007422.12, усеченная из нуклеотидов от 3230000 до 3380000), либо на обе. 'н/д' указывает на то, что антисмысловой олигонуклеотид не специфичен к этой конкретной последовательности со 100% комплементарностью.
Figure 00000064
Figure 00000065
Figure 00000066
Figure 00000067
Figure 00000068
Figure 00000069
Пример 6: дозозависимое антисмысловое ингибирование apo(a) в первичных гепатоцитах трансгенных мышей
Высокоактивные гэпмеры из исследований, описанных выше, дополнительно отбирают и исследуют при различных дозах первичных гепатоцитах трансгенных мышей в серии исследований с аналогичными условиями культивирования. Клетки высевают при плотности 35000 на лунку и трансфицируют с использованием электропорации с концентрациями антисмыслового олигонуклеотида 0,156 мкМ, 0,313 мкМ, 0,625 мкМ, 1,250 мкМ или 2,500 мкМ, как указано в Таблицах ниже. После периода лечения приблизительно 16 часов, из клеток выделяют RNA и измеряют уровни mRNA apo(a) с помощью количественной PCR в реальном времени. Набор праймер-зонда apo(a) человека hAPO(a)12 т.н. используют для измерения уровней mRNA. Уровни mRNA apo(a) корректируют в соответствии с общим содержанием RNA, которое измеряют с помощью RIBOGREEN®. Результаты представлены в виде процента ингибирования apo(a) по отношению к необработанным контрольным клеткам.
Результаты каждого из исследований изображены в Таблицах, представленных ниже, при том, что каждая таблица представляет отдельный эксперимент. Также в таблицах представлена половина максимальной ингибирующей концентрации (IC50) каждого олигонуклеотида.
Figure 00000070
Figure 00000071
Figure 00000072
Figure 00000073
Figure 00000074
В клетках, обработанных антисмысловым олигонуклеотидом, уровни mRNA apo(a) были значительно дозозависимо снижены. Специфическую активность недавно созданных олигонуклеотидов сравнивают с контрольным олигонуклеотидом, ISIS 144367. Как представлено в Таблицах выше, ISIS 510542 (SEQ ID NO: 111), ISIS 510545 (SEQ ID NO: 114), ISIS 510546 (SEQ ID NO: 115), ISIS 510547 (SEQ ID NO: 116), ISIS 510548 (SEQ ID NO: 117), ISIS 510549 (SEQ ID NO: 118), ISIS 510595 (SEQ ID NO: 119), ISIS 510597 (SEQ ID NO: 120), ISIS 510598 (SEQ ID NO: 121), ISIS 510701 (SEQ ID NO: 127), ISIS 510702 (SEQ ID NO: 128), ISIS 510704 (SEQ ID NO: 129), ISIS 512944 (SEQ ID NO: 123), ISIS 512947 (SEQ ID NO: 124), ISIS 512958 (SEQ ID NO: 125) и ISIS 512959 (SEQ ID NO: 126) являются более высокоактивными, чем ISIS 144367 (SEQ ID NO: 11).
Пример 7: эффект in vivo антисмыслового ингибирования apo(a) человека у трансгенных мышей с apo(a) человека
Трансгенные мыши с геном apo(a) человека (Frazer, K.A. et al., Nat. Genet. 1995. 9: 424-431) используют в исследованиях, описанных ниже. Антисмысловые олигонуклеотиды ISIS, которые продемонстрируют статистически значимое ингибирование mRNA apo(a) in vitro, как описано выше, в этой модели оценивают дополнительно.
Исследование 1
Самок трансгенных мышей с apo(a) человека содержат при 12-часовом цикле свет/темнота и кормят ad libitum обычной лабораторной едой. Мышей разделяют на терапевтические группы, которые состоят из 4 мышей каждая. Эти группы получают внутрибрюшинные инъекции ISIS 494159, ISIS 494160, ISIS 494161, ISIS 494162, ISIS 494163, ISIS 494230, ISIS 494243, ISIS 494244, ISIS 494283, ISIS 494284, ISIS 494285, ISIS 494286, ISIS 494301, ISIS 494302, ISIS 494304, ISIS 494466, ISIS 494470, ISIS 494472, ISIS 498239, ISIS 498408, ISIS 498517, ISIS 494158, ISIS 494311, ISIS 494337, ISIS 494372, ISIS 498238, ISIS 498523, ISIS 498525, ISIS 510548, ISIS 512944, ISIS 512947 или ISIS 512958 при дозе 25 мг/кг два раза в неделю в течение 2 недель. Одна группа мышей получает внутрибрюшинные инъекции PBS дважды в неделю в течение 2 недель. Группа PBS служит в качестве контрольной группы. Через два дня после последней дозы, мышей умерщвляют, органы собирают и осуществляют анализы.
Ингибирование mRNA apo(a) человека
Суммарную RNA экстрагируют из печени некоторых из терапевтических групп и количественно определяют mRNA apo(a) человека с помощью RT-PCR. Результаты представлены в Таблице 35, выраженные в виде процента ингибирования mRNA apo(a) по сравнению с контролем PBS.
Figure 00000075
Figure 00000076
Данные демонстрируют значительное ингибирование mRNA apo(a) несколькими олигонуклеотидами ISIS. ISIS 494159 (SEQ ID NO: 14), ISIS 494162 (SEQ ID NO: 17), ISIS 494163 (SEQ ID NO: 18), ISIS 494243 (SEQ ID NO: 106), ISIS 494244 (SEQ ID NO: 107), ISIS 494283 (SEQ ID NO: 26), ISIS 494284 (SEQ ID NO: 27), ISIS 494285 (SEQ ID NO: 28), ISIS 494301 (SEQ ID NO: 39) и ISIS 498408 (SEQ ID NO: 71) являются более высокоактивными, чем контрольное соединение ISIS 144367 (SEQ ID NO: 11).
Ингибирование протеина apo(a) человека
Протеин apo(a) человека в плазме измеряют во всех терапевтических группах с использованием набора Аро(а) ELISA (Mercodia 10-1106-01, Уппсала, Швеция). Результаты представлены в Таблице 36, выраженные в виде процента ингибирования mRNA apo(a) по сравнению с контролем PBS.
Figure 00000077
Figure 00000078
Данные демонстрируют значительное ингибирование mRNA apo(a) несколькими олигонуклеотидами ISIS. ISIS 494159 (SEQ ID NO: 14), ISIS 494244 (SEQ ID NO: 82), ISIS 494283 (SEQ ID NO: 26), ISIS 494284 (SEQ ID NO: 27), ISIS 494285 (SEQ ID NO: 28), ISIS 494286 (SEQ ID NO: 29), ISIS 494301 (SEQ ID NO: 39) и ISIS 494302 (SEQ ID NO: 40) были также высокоактивны, или более высокоактивны, чем контрольное соединение ISIS 144367 (SEQ ID NO: 11).
Исследование 2
ISIS 494159, ISIS 494161, ISIS 494162, ISIS 494163 и ISIS 494243 дополнительно оценивают на этой трансгенной моделе. ISIS 144367 представлен для сравнения.
Лечение
Самцов трансгенных мышей с apo(a) человека разделяют на терапевтические группы, которые состоят из 4 мышей каждая. Эти группы получают внутрибрюшинные инъекции ISIS 144367, ISIS 494159, ISIS 494161, ISIS 494162, ISIS 494163 или ISIS 494243 при дозах 1,5 мг/кг, 5 мг/кг, 15 мг/кг или 50 мг/кг два раза в неделю в течение 2 недель. Одна группа мышей получает внутрибрюшинные инъекции PBS дважды в неделю в течение 2 недель. Группа PBS служит в качестве контрольной группы. Через два дня после последней дозы, мышей умерщвляют, органы собирают и осуществляют анализы.
Ингибирование mRNA apo(a) человека
Суммарную RNA экстрагируют из печени терапевтических групп и количественно определяют mRNA apo(a) человека с помощью RT-PCR. Результаты представлены в Таблице 37, выраженные в виде процента ингибирования mRNA apo(a) по сравнению с контролем PBS.
Figure 00000079
Данные демонстрируют значительное ингибирование mRNA apo(a) несколькими олигонуклеотидами ISIS. ISIS 494159 (SEQ ID NO: 14), ISIS 494161 (SEQ ID NO: 16), 494162 (SEQ ID NO:17) и ISIS 94163 (SEQ ID NO: 18) были более эффективными, чем контрольное соединение ISIS 144367 (SEQ ID NO: 11). Снижение уровней протеина apo(a) человека
Кровь собирают в терапевтических группах, а уровни протеина apo(a) человека количественно определяют с помощью набора Аро(а) ELISA (Mercodia 10-1106-01, Уппсала, Швеция). Результаты представлены в Таблице 38, выраженные в виде снижения уровней протеина apo(a) по сравнению с контролем PBS.
Figure 00000080
Данные демонстрируют значительное снижение уровней протеина apo(a) в плазме с помощью отдельных олигонуклеотидов ISIS. ISIS 494159 (SEQ ID NO: 14), ISIS 494161 (SEQ ID NO: 16), ISIS 494162 (SEQ ID NO: 17) и ISIS 494163 (SEQ ID NO: 18) были более эффективными, чем контрольное соединение ISIS 144367 (SEQ ID NO: 11).
Исследование 3
ISIS 494244, ISIS 494283 и ISIS 494284 дополнительно оценивают на этой трансгенной моделе. ISIS 144367 представлен для сравнения.
Лечение
Самцов трансгенных мышей с apo(a) человека разделяют на терапевтические группы, которые состоят из 4 мышей каждая. Эти группы получают внутрибрюшинные инъекции ISIS 144367, ISIS 494244, ISIS 494283 или ISIS 494284 в дозах 0,75 мг/кг, 2,5 мг/кг, 7,5 мг/кг или 25 мг/кг два раза в неделю в течение 2 недель. Одна группа мышей получает внутрибрюшинные инъекции PBS дважды в неделю в течение 2 недель. Группа PBS служит в качестве контрольной группы. Через два дня после последней дозы, мышей умерщвляют, органы собирают и осуществляют анализы.
Ингибирование mRNA apo(a) человека
Суммарную RNA экстрагируют из печени терапевтических групп и количественно определяют mRNA apo(a) человека с помощью RT-PCR. Результаты представлены в Таблице 39, выраженные в виде процента ингибирования mRNA apo(a) по сравнению с контролем PBS.
Figure 00000081
Данные демонстрируют значительное ингибирование mRNA apo(a) несколькими олигонуклеотидами ISIS. ISIS 494244 (SEQ ID NO: 107), ISIS 494283 (SEQ ID NO: 26) и ISIS 494284 (SEQ ID NO: 27) были более эффективными, чем контрольное соединение ISIS 144367 (SEQ ID NO: 11).
Снижение уровней протеина apo(a) человека
Кровь собирают в терапевтических группах, а уровни протеина apo(a) человека количественно определяют с помощью набора Аро(а) ELISA (Mercodia 10-1106-01, Уппсала, Швеция). Результаты представлены в Таблице 40, выраженные в виде снижения уровней протеина apo(a) по сравнению с контролем PBS.
Figure 00000082
Figure 00000083
Данные демонстрируют значительное снижение уровней протеина apo(a) в плазме с помощью отдельных олигонуклеотидов ISIS. ISIS 494244 (SEQ ID NO: 107), ISIS 494283 (SEQ ID NO: 26) и ISIS 494284 (SEQ ID NO: 27) были более эффективными, чем контрольное соединение ISIS 144367 (SEQ ID NO: 11).
Исследование 4
ISIS 494285, ISIS 494286, ISIS 494301, ISIS 494302 и ISIS 494311 дополнительно оценивают на этой трансгенной моделе.
Лечение
Самцов трансгенных мышей с apo(a) человека разделяют на терапевтические группы, которые состоят из 4 мышей каждая. Эти группы получают внутрибрюшинные инъекции ISIS 494285, ISIS 494286, ISIS 494301, ISIS 494302 или ISIS 494311 в дозах 5 мг/кг, 15 мг/кг, или 50 мг/кг один раз в неделю в течение 2 недель. Одна группа из 3 мышей получает внутрибрюшинные инъекции PBS один раз в неделю в течение 2 недель. Группа PBS служит в качестве контрольной группы. Через два дня после последней дозы, мышей умерщвляют, органы собирают и осуществляют анализы.
Ингибирование mRNA apo(a) человека
Суммарную RNA экстрагируют из печени терапевтических групп и количественно определяют mRNA apo(a) человека с помощью RT-PCR. Результаты представлены в Таблице 41, выраженные в виде процента ингибирования mRNA apo(a) по сравнению с контролем PBS. Данные демонстрируют значительное ингибирование mRNA apo(a) ISIS 494285 (SEQ ID NO: 28), ISIS 494286 (SEQ ID NO: 29), ISIS 494301 (SEQ ID NO: 39), ISIS 494302 (SEQ ID NO: 40) и ISIS 494311 (SEQ ID NO: 47).
Figure 00000084
Figure 00000085
Снижение уровней протеина apo(a) человека
Кровь собирают в терапевтических группах, а уровни протеина apo(a) человека количественно определяют с помощью набора Аро(а) ELISA (Mercodia 10-1106-01, Уппсала, Швеция). Результаты представлены в Таблице 42, выраженные в виде снижения уровней протеина apo(a) по сравнению с контролем PBS. Данные демонстрируют значительное снижение уровней протеина apo(a) в плазме с помощью ISIS 494285, ISIS 494286, ISIS 494301, ISIS 494302 и ISIS 494311.
Figure 00000086
Исследование 5
ISIS 494372, ISIS 498524, ISIS 498581, ISIS 498721 и ISIS 498833 дополнительно оценивают на этой трансгенной моделе.
Лечение
Самцов трансгенных мышей с apo(a) человека разделяют на терапевтические группы, которые состоят из 4 мышей каждая. Эти группы получают внутрибрюшинные инъекции ISIS 494372, ISIS 498524, ISIS 498581, ISIS 498721 или ISIS 498833 в дозах 5 мг/кг, 15 мг/кг или 50 мг/кг один раз в неделю в течение 2 недель. Одна группа из 3 мышей получает внутрибрюшинные инъекции PBS один раз в неделю в течение 2 недель. Группа PBS служит в качестве контрольной группы. Через два дня после последней дозы, мышей умерщвляют, органы собирают и осуществляют анализы.
Ингибирование mRNA apo(a) человека
Суммарную RNA экстрагируют из печени терапевтических групп и количественно определяют mRNA apo(a) человека с помощью RT-PCR. Результаты представлены в Таблице 43, выраженные в виде процента ингибирования mRNA apo(a) по сравнению с контролем PBS. Данные демонстрируют значительное ингибирование mRNA apo(a) ISIS 494372 (SEQ ID NO: 28), ISIS 498524 (SEQ ID NO: 93), ISIS 498581 (SEQ ID NO: 104) и ISIS 498721 (ATGCCTCGATAACTCCGTCC; SEQ ID NO: 134).
Figure 00000087
Снижение уровней протеина apo(a) человека
Кровь собирают в терапевтических группах, а уровни протеина apo(a) человека количественно определяют с помощью набора Аро(а) ELISA (Mercodia 10-1106-01, Уппсала, Швеция). Результаты представлены в Таблице 44, выраженные в виде снижения уровней протеина apo(a) по сравнению с контролем PBS. Данные демонстрируют значительное ингибирование уровней протеин apo(a) в плазме ISIS 494372 (SEQ ID NO: 28), ISIS 498581 (SEQ ID NO: 104) и ISIS 498721 (ATGCCTCGATAACTCCGTCC; SEQ ID NO: 134).
Figure 00000088
Пример 8: Переносимость антисмысловых олигонуклеотидов, направленных на apo(a) человека в моделях грызунов
Антисмысловые олигонуклеотиды гэпмера, направленные на apo(a) человека, отбирают из исследований, описанных выше, для исследований переносимости на мышах CD1 и крысах Sprague Dawley. Грызуны не экспрессируют эндогенные apo(a), а, следовательно, эти исследования изучают переносимость каждого антисмыслового олигонуклеотида человека у животного, а не любых фенотипических изменений, которые могут быть вызваны с помощью ингибирования apo(a) у животного.
Переносимость у мышей CD1: Исследование 1
Мыши CD1® (Charles River, MA) представляют собой мышиную модель, имеющую несколько назначений, часто используемую для исследования безопасности и эффективности. Мышей обрабатывают антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS, выбранными из исследований, описанных выше, и оценивают на изменения уровней различных маркеров химии плазмы.
Лечение
Группам самцов мышей CD1 вводят подкожно два раза в неделю в течение 6 недель 50 мг/кг ISIS 494159, ISIS 494161, ISIS 494162, ISIS 494244, ISIS 494283, ISIS 494284, ISIS 494285, ISIS 494286, ISIS 494301, ISIS 494302, ISIS 494311, ISIS 494337, ISIS 494372 и ISIS 510548. Одной группе шестинедельных мышей CD1 вводят внутрибрюшинные инъекции PBS дважды в неделю в течение 6 недель. Мышей умерщвляют через 48 часов после последней дозы и собирают органы и плазму для дальнейшего анализа.
Маркеры химии плазмы
Чтобы оценить влияние олигонуклеотидов ISIS на функции печени и почек, измеряют плазменные уровни трансаминаз, билирубина, альбумина, креатинина и мочевины с использованием автоматического биохимического анализатора (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилль, NY). Результаты представлены в Таблице 45. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывают изменения в уровнях любого из маркеров функции печени или почек за пределами ожидаемого диапазона в случае антисмысловых олигонуклеотидов, исключают из дальнейших исследований.
Figure 00000089
Массы органов
Массы печени, селезенки и почек измеряют в конце исследования и представляют в Таблице 46. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывают изменения в массах органов за пределами ожидаемого диапазона в случае антисмысловых олигонуклеотидов, исключают из дальнейших исследований.
Figure 00000090
Переносимость у крыс Sprague Dawley
Крысы Sprague-Dawley представляют собой модель, используемую для исследования безопасности и эффективности. Крыс обрабатывают антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS, выбранными из исследований, описанных выше, и оценивают на изменения уровней различных маркеров химии плазмы.
Лечение
Группам самцов крыс Sprague-Dawley вводят подкожно два раза в неделю в течение 8 недель 30 мг/кг ISIS 494159, ISIS 494161, ISIS 494162, ISIS 494244, ISIS 494283, ISIS 494284, ISIS 494285, ISIS 494286, ISIS 494301, ISIS 494302, ISIS 494311, ISIS 494337, ISIS 494372 и ISIS 510548. Одной группе из шести самцов крыс Sprague Dawley вводят PBS подкожно два раза в неделю в течение 8 недель. Крыс умерщвляют через 48 часов после последней дозы и собирают органы и плазму для дальнейшего анализа.
Маркеры химии плазмы
Чтобы оценить влияние олигонуклеотидов ISIS на функции печени и почек, измеряют плазменные уровни трансаминаз, билирубина, альбумина, креатинина и мочевины с использованием автоматического биохимического анализатора (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилль, NY). Результаты представлены в Таблице 47. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывают изменения в уровнях любого из маркеров функции печени или почек за пределами ожидаемого диапазона, в случае антисмысловых олигонуклеотидов исключают из дальнейших исследований.
Figure 00000091
Функция почки
Чтобы оценить влияние олигонуклеотидов ISIS на функцию почек, измеряют уровни общего белка и креатинина в мочевине с использованием автоматического биохимического анализатора (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилль, NY). Результаты представлены в Таблице 48, выраженные в мг/дл.
Figure 00000092
Figure 00000093
Массы органов
Массы печени, селезенки и почек измеряют в конце исследования и представляют в таблице 49. Олигонуклеотиды ISIS, которые вызывают изменения в массах органов за пределами ожидаемого диапазона в случае антисмысловых олигонуклеотидов, исключают из дальнейших исследований.
Figure 00000094
Результаты исследований переносимости на грызунах показали, что, в целом, с учетом того, что все маркеры переносимость экранированы, ISIS 494372 является наиболее хорошо переносимым антисмысловым соединением как в мышиной модели CD1, так и модели крыс Sprague Dawley.
Пример 9: Фармакокинетика антисмыслового олигонуклеотида у мышей CD1
Мышей CD1 обрабатывают олигонуклеотидами ISIS и оценивают концентрации олигонуклеотидов в печени и почках.
Лечение
Группам самцов мышей CD1 вводят подкожно два раза в неделю в течение 6 недель 50 мг/кг ISIS 494283, ISIS 494284, ISIS 494286, ISIS 494301, ISIS 494302 или ISIS 494372. Мышей умерщвляют через 2 дня после последней дозы. Печень собирают для анализа.
Измерение концентрации олигонуклеотида
Измеряют концентрацию общей концентрации олигонуклеотида. Используемый способ является модификацией ранее опубликованных способов (Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999), которая состоит из экстракции фенол-хлороформ (жидкостно-жидкостной), за которой следует твердофазная экстракция. Внутренний стандарт (ISIS 355868, 27-мер 2'-O-метоксиэтил модифицированный тиофосфатный олигонуклеотид, GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT, созданный в данном документе в виде SEQ ID NO: 131) добавляют перед экстракцией. Концентрации образцов ткани рассчитывают с использованием калибровочных кривых с нижним пределом количественного определения (LLOQ) от приблизительно 1,14 мкг/г. Периоды полураспада затем рассчитывают с использованием программного обеспечения WinNonlin (PHARSIGHT).
Результаты представлены в Таблице 50, выраженные в мкг/г печеночной или почечной ткани. Данные демонстрируют, что ISIS 494372 в печени и почках был на приемлемой концентрации.
Figure 00000095
Пример 10: Фармакокинетика антисмыслового олигонуклеотида у крыс Sprague Dawley
Крыс Sprague Dawley обрабатывают олигонуклеотидами ISIS и оценивают концентрации олигонуклеотидов в печени и почках.
Лечение
Группам самцов мышей CD1 вводят подкожно два раза в неделю в течение 3 недель 10 мг/кг ISIS 494283, ISIS 494284, ISIS 494286, ISIS 494301, ISIS 494302 или ISIS 494372. Крыс умерщвляют через 2 дня после последней дозы. Печень собирают для анализа.
Измерение концентрации олигонуклеотида
Измеряют концентрацию общей концентрации олигонуклеотида. Используемый способ является модификацией ранее опубликованных способов (Leeds et al., 1996; Geary et al., 1999), которая состоит из экстракции фенол-хлороформом (жидкостно-жидкостной), за которой следует твердофазная экстракция. Внутренний стандарт (ISIS 355868, 27-мер 2'-O-метоксиэтил модифицированный тиофосфатный олигонуклеотид, GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT, созданный в данном документе в виде SEQ ID NO: 131), добавляют перед экстракцией. Концентрации образцов ткани рассчитывают с использованием калибровочных кривых с нижним пределом количественного определения (LLOQ) от приблизительно 1,14 мкг/г. Периоды полураспада затем рассчитывают с использованием программного обеспечения WinNonlin (PHARSIGHT).
Результаты представлены в Таблице 51, выраженные в мкг/г печеночной или почечной ткани. Данные демонстрируют, что ISIS 494372 в печени и почках был на приемлемой концентрации.
Figure 00000096
Пример 11: эффект антисмысловых олигонуклеотидов ISIS, направленных на apo(a) человека у яванских макак
Макак обрабатывают антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS, выбранными из исследований, описанных выше. В то время, как проводилось данное исследование, геномная последовательность яванских макак не была доступна в базе данных National Center for Biotechnology Information (NCBI); поэтому, перекрестная реактивности с последовательностью гена яванских макак не может быть подтверждена. Вместо этого, последовательности антисмысловых олигонуклеотидов ISIS, используемых у яванских макак, сравнивают с последовательности макаки-резуса на гомологию. Ожидается, что олигонуклеотиды ISIS с гомологией к последовательности макаки-резуса также являются полностью перекрестно-реактивными с последовательностью яванских макак.
Исследуемые антисмысловые олигонуклеотиды человека также являются перекрестно-реактивными с последовательностью mRNA макаки-резуса (ХМ_001098061.1; созданная в данном документе в виде SEQ ID NO: 132). Чем больше взаимодополняемость между олигонуклеотидом человека и последовательностью макаки-резуса, тем более вероятно, что олигонуклеотид человека может перекрестно реагировать с последовательностью макаки-резуса. Начальный сайты и сайт остановки каждого олигонуклеотида с SEQ ID NO: 132 представлены в таблице 52. Каждая из мишеней антисмысловых олигонуклеотидов находится более чем в одной области в SEQ ID NO: 132 и имеют несколько начальных сайтов. "Начальный сайт" указывает на 5'-крайний нуклеозид, к которому направлен гэпмер в последовательности макаки-резуса. 'Несоответствия' указывает на количество нуклеотидов, несоответствующих между последовательностью олигонуклеотида человека и последовательностью макаки-резуса.
Оценивают переносимость антисмыслового олигонуклеотида, а также его фармакокинетический профиль в печени и почках.
Figure 00000097
Figure 00000098
Лечение
Перед исследованием, обезьяны находятся в карантине в течение по крайней мере 30-дневного периода, в течение которого животные наблюдаются ежедневно на предмет общего состояния здоровья. Обезьяны были 2-4-летними и весили от 2 до 4 кг. Каждому из семи групп по четыре рандомизированных самцов яванских макак подкожно вводят олигонуклеотид ISIS или PBS с использованием для дозирования иглы из нержавеющей стали и шприца соответствующего размера в одно из четырех мест на спине обезьян. Инъекции вводят с вращением по часовой стрелке; одно место за дозирования. Обезьянам вводят четыре раза в неделю в течение первой недели (дни 1, 3, 5 и 7) в качестве ударных доз, а впоследствии один раз в неделю в течение 2-12 недель, 40 мг/кг ISIS 494283, ISIS 494284, ISIS 494286, ISIS 494301, ISIS 494302 или ISIS 494372. Контрольной группе из 8 яванских макак PBS вводят подкожно трижды четыре раза в неделю в течение первой недели (дни 1, 3, 5 и 7), а впоследствии несколько раз в неделю в течение 2-12 недель.
За исследуемый период, за обезьянами наблюдают по крайней мере один раз в день на предмет наличия признаков болезни или патологического состояния. Любое животное испытывает более чем кратковременную или легкую боль или патологическое состояние в связи с лечением, травмой или болезнью, которую ветеринар лечит утвержденными анальгетиками или средствами для облегчения боли после консультации с руководителем исследования. Любое животное при плохом состояние здоровья или при возможном состоянии угасания определяют для дальнейшего мониторинга и возможной эвтаназии. Например, одно животное в группе лечения ISIS 494302 было обнаружено умирающим на 56 день и было умерщвлено. Запланированную эвтаназию животных проводят в дни 86 и 87 с помощью обескровливания под глубоким наркозом. Протоколы, описанные в Примере, были одобрены Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
Целевое снижение
Анализ RNA
RNA экстрагируют на 86 день из ткани печени для PCR анализа apo(a) в реальном времени с использованием набора праймера-зонда ABI Hs00916691_m1 (Applied Biosystems, Карлсбад, СА). Результаты представлены в виде процента ингибирования mRNA apo(a) по отношению к контролю PBS. Как показано в таблице 53, обработка антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS приводит к значительному снижению mRNA apo(a) по сравнению с контролем PBS.
Также измеряют уровни mRNA плазминогена, другого протеина, содержащего двойную петлю. Обработка ISIS 494372 не изменяет уровни mRNA плазминогена.
Figure 00000099
Анализ протеина
В разные дни, собирают один мл крови из головной, подкожной или бедренной вены у всех исследуемых обезьян. Образцы крови помещают в пробирки, которые содержат K2-EDTA для разделения плазмы. Чтобы получить плазму, пробирки центрифугируют при 3000 оборотах в минуту в течение 10 мин при комнатной температуре. Уровни протеина Аро(а) изучают с помощью набора Аро(а) ELISA (Mercodia 10-1106-01, Уппсала, Швеция). Результаты представлены в виде процентного изменения уровней от исходного значения. Как показано в Таблице 54, обработка отдельными антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS приводит к значительному снижению уровней протеина apo(a) по сравнению с контролем PBS. В частности, лечение ISIS 494372 снижает уровни протеин apo(a) в плазме яванских макак.
Также в исследуемых группах измеряют уровни протеина apoB. Антисмысловое ингибирование apo(a) не имеет никакого влияния на уровни apoB.
Figure 00000100
Исследования переносимости
Измерения массы тела и органов
Чтобы оценить влияние олигонуклеотидов ISIS на общее состояние здоровья животных, массы тела и органов определяют на 86 день. Массу тела измеряют и представляют в Таблице 55. Массы органов измеряют и данные представляют в Таблице 56. Результаты демонстрируют, что лечение ISIS 494372 хорошо переносится в терминах массы тела и органов обезьян.
Figure 00000101
Figure 00000102
Функция печени
Чтобы оценить влияние олигонуклеотидов ISIS на функции печени, обезьяны голодают в течение ночи перед забором крови. У каждого животного отбирают приблизительно 1,5 мл крови и помещают их в пробирки без антикоагулянта для разделения сыворотки. Пробирки выдерживают при комнатной температуре в течение как минимум 90 мин, а затем центрифугируют при 3000 оборотах в минуту в течение 10 мин при комнатной температуре, чтобы получить сыворотку. Уровни различных маркеров функции печени измеряют с использованием химического анализатора Toshiba 200FR NEO (Toshiba Co., Япония). Измеряют уровни ALT и AST в плазме, а результаты представляют в Таблице 57, выраженные в МЕ/л. Билирубин, маркер функции печени, измеряют аналогичным образом и представляют в Таблице 57, выраженный в мг/дл. Результаты демонстрируют, что лечение ISIS 494372 хорошо переносится в терминах функции печени у обезьян.
Figure 00000103
Анализ уровня C-реактивного белка
Чтобы оценить любой воспалительный эффект олигонуклеотидов ISIS у яванских макак, для анализа берут образцы крови. Обезьяны голодают в течение ночи перед забором крови. У каждого животного отбирают приблизительно 1,5 мл крови и помещают их в пробирки без антикоагулянта для разделения сыворотки. Пробирки выдерживают при комнатной температуре в течение как минимум 90 мин, а затем центрифугируют при 3000 оборотах в минуту в течение 10 мин при комнатной температуре, чтобы получить сыворотку. C-реактивный белок (CRP), который синтезируется в печени и который служит в качестве маркера воспаления, измеряют с использованием химического анализатора Toshiba 200FR NEO (Toshiba Co., Япония). Результаты демонстрируют, что лечение ISIS 494372 не вызывает воспаление у обезьян.
Figure 00000104
Анализ комплемента C3
Чтобы оценить любое воздействие олигонуклеотидов ISIS на путь метаболизма комплемента у яванских макак, образцы крови для анализа отбирают на 84 день (перед использованием препарата) и на 85 день (через 24 часа после использования препарата). У каждого животного отбирают приблизительно 0,5 мл крови и помещают их в пробирки без антикоагулянта для разделения сыворотки. Пробирки выдерживают при комнатной температуре в течение как минимум 90 мин, а затем центрифугируют при 3000 оборотах в минуту в течение 10 мин при комнатной температуре, чтобы получить сыворотку. C3 измеряют с использованием химического анализатора Toshiba 200FR NEO (Toshiba Co., Япония). Результаты демонстрируют, что лечение ISIS 494372 не вызывает никакого влияния на путь метаболизма комплемента у обезьян.
Figure 00000105
Гематология
Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS у яванских макак на гематологические параметры, собирают образцы крови около 0,5 мл крови на 87 день от каждого из имеющихся исследуемых животных в пробирки, содержащие K2-EDTA. Образцы анализируют на количество красных кровяных клеток (RBC), белых кровяных клеток (WBC), а также количество тромбоцитов с использованием анализатора гематологии ADVIA120 (Bayer, USA). Данные представлены в Таблице 60.
Полученные данные свидетельствуют о том, что лечение с помощью ISIS 494372 хорошо переносится в терминах гематологических параметров обезьян.
Figure 00000106
Figure 00000107
Пример 12: Характеристика фармакологической активности ISIS 494372 у яванских макак
Фармакологическую активность ISIS 494372 характеризуют с помощью измерения уровней mRNA apo(a) в печени и apo(a) в плазме у обезьян, которым вводят соединение в течение 13 недель и оставляют для восстановления в течение еще 13 недель.
Лечение
Каждой из пяти групп 14 рандомизированных самцов и самок яванских макак вводят подкожно олигонуклеотид ISIS или PBS с использованием иглы для дозирования из нержавеющей стали и шприца соответствующего размера в одно из четырех мест на спине обезьян. Обезьянам вводят четыре раза в неделю в течение первой недели (дни 1, 3, 5 и 7) в качестве ударных доз, а впоследствии один раз в неделю в течение 2-13 недель в качестве поддерживающих доз, как показано в Таблице ниже. Ударная доза в течение первой недели выражается в мг/кг/дозу, в то время как поддерживающие дозы на 2-13 неделю выражены в мг/кг/неделю.
Figure 00000108
Образцы печени животных берут на промежуточных, конечных этапах и при возвращении к норме после исследования для анализа mRNA apo(a). Кроме того, образцы плазмы собирают в различные дни для измерения уровней протеина apo(a). Это неклиническое исследование проводят в соответствии с United States Food and Drug Administration (FDA) Good Laboratory Practice (GLP) Regulations, CFR 21 часть 58.
Анализ RNA
Образцы печени собирают у обезьян в дни 30, 93 и 182 и замораживают. Если коротко, то часть (0,2 г) замороженной печени гомогенизируют в 2 мл раствора RLT (Qiagen). Полученный лизат наносят на мини-колонки Qiagen RNeasy. После очистки и количественного определения ткани подвергают анализу RT-PCR. Perkin-Elmer ABI Prism 7700 Sequence Detection System, который использует в режиме реального времени флуоресцентной детекции RT-PCR, используют для количественной оценки mRNA apo(a). Анализ основан на мишень-специфическом зонде, меченном флуоресцентным репортером и красителями-гасителями люминисценции на противоположных концах. Зонд подвергают гидролизу с помощью 5'-экзонуклеазной активности полимеразы Taq DNA, что приводит к увеличению эмиссии флуоресценции репортерного красителя, который может быть обнаружен в ходе реакции. Набор зондов (набор зондов ABI Rhesus LPA ID Rh02789275_m1, Applied Biosystems, Карлсбад, CA), специфичный по отношению к положению 1512 последовательности транскрипта mRNA apo(a) макаки-резуса регистрационный номер GENBANK XM_001098061.2 (SEQ ID NO: XXX), используют для измерения уровней экспрессии mRNA apo(a) в печени яванских макак. Экспрессию Аро(а) нормализуют с использованием RIBOGREEN®. Результаты представлены в виде процента ингибирования mRNA apo(a)по отношению к контролю PBS.
Как показано в Таблице 62, лечение ISIS 494372 приводит к дозозависимому снижению mRNA apo(a) по сравнению с контролем PBS. На 30 день, экспрессию печеночного mRNA apo(a) снижают дозозависимо на 74% и 99% в группах дозирования 12 мг/кг/неделю и 40 мг/кг/неделю, соответственно. Эти снижения являются статистически значимыми по однофакторному дисперсионному анализу (критерий множественных сравнений Dunnett's, Р<0,05).
Уровни mRNA apo(a) измеряют во время этапа возвращения к норме. Уровни экспрессии в печени, на 88 день после последней дозы, все еще снижена на 49% и 69% в группах дозирования 12 мг/кг/неделю и 40 мг/кг/неделю, соответственно.
Figure 00000109
Анализ протеина
Приблизительно 20 мкл плазмы анализируют с использованием коммерчески доступного набора apo(a) ELISA (Mercodia 10-1106-01, Уппсала, Швеция). Протокол анализа осуществляют таким образом, как описано производителем. Результаты представлены в Таблицах 63 и 64, как процентное изменение относительно 1 Дня перед использованием концентрации протеин apo(a) в плазме. Статистически значимые различия от исходного значения apo(a) в плазме в 1 День с использованием критерия множественных сравнений Dunnett отмечен звездочкой.
Максимальное снижение протеина apo(a) в плазме наблюдают для всех групп дозирования на 93 День. На этапе возвращения к норме, уровни протеин apo(a) в плазме в группе дозирования 40 мг/кг/неделю составляют 22% и 93% от исходного уровня после 4 и 13 недель (Дни 121 и 182) восстановления, соответственно. Скорость восстановления в группе 12 мг/кг/неделю была такой же, как и в группе 40 мг/кг/неделю.
Figure 00000110
Figure 00000111
Figure 00000112
Пример 13: измерение вязкости антисмысловых олигонуклеотидов ISIS, направленных на apo(a) человека
Вязкость отдельных антисмысловых олигонуклеотидов из исследований, описанных выше, измеряют с целью отсеивания антисмысловых олигонуклеотидов, которые имеют вязкость более 40 сП. Олигонуклеотиды, имеющие вязкость больше, чем 40 сП, могут иметь вязкость меньше оптимальной.
Олигонуклеотиды ISIS (32-35 мг) навешивают в стеклянную пробирку, добавляют 120 мкл воды, а антисмысловой олигонуклеотид растворяют в растворе с помощью нагрева пробирки при 50°C. Часть (75 мкл) предварительно нагретой пробы отмеряют пипеткой в микро-вискозиметр (Cambridge). Температуру микро-вискозиметра устанавливают на 25°C и измеряют вязкость образца. Другую часть (20 мкл) из предварительно нагретого образца отмеряют пипеткой в 10 мл воды для UV чтения при 260 нМ при 85°C (прибор Cary UV). Результаты представлены в Таблице 65 и демонстрируют, что большинство растворов антисмысловых олигонуклеотидов являются оптимальными в их вязкости по критерию, указанному выше. Те, что не были оптимальными, помечают как 'вязкие'. В частности, ISIS 494372 является оптимальной по своей вязкости относительно критерия, указанного выше.
Figure 00000113
Figure 00000114
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ИОНИС ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК.
<120> СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ МОДУЛИРОВАНИЯ ЭКСПРЕССИИ
АПОЛИПОПРОТЕИНА (a)
<130> BIOL0177WO
<150> 61/651,539
<151> 2012-05-24
<160> 132
<170> FastSEQ для Windows версия 4.0
<210> 1
<211> 6489
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 1
aggtaccttt ggggctggct ttctcaagga agcccagctc cctgtgattg agaatgaagt 60
gtgcaatcgc tatgactggg attgggacac actttctggg cactgctggc cagtcccaaa 120
atggaacata aggaagtggt tcttctactt cttttatttc tgaaatcagc agcacctgag 180
caaagccatg tggtccagga ttgctaccat ggtgatggac agagttatcg aggcacgtac 240
tccaccactg tcacaggaag gacctgccaa gcttggtcat ctatgacacc acatcaacat 300
aataggacca cagaaaacta cccaaatgct ggcttgatca tgaactactg caggaatcca 360
gatgctgtgg cagctcctta ttgttatacg agggatcccg gtgtcaggtg ggagtactgc 420
aacctgacgc aatgctcaga cgcagaaggg actgccgtcg cgcctccgac tgttaccccg 480
gttccaagcc tagaggctcc ttccgaacaa gcaccgactg agcaaaggcc tggggtgcag 540
gagtgctacc atggtaatgg acagagttat cgaggcacat actccaccac tgtcacagga 600
agaacctgcc aagcttggtc atctatgaca ccacactcgc atagtcggac cccagaatac 660
tacccaaatg ctggcttgat catgaactac tgcaggaatc cagatgctgt ggcagctcct 720
tattgttata cgagggatcc cggtgtcagg tgggagtact gcaacctgac gcaatgctca 780
gacgcagaag ggactgccgt cgcgcctccg actgttaccc cggttccaag cctagaggct 840
ccttccgaac aagcaccgac tgagcaaagg cctggggtgc aggagtgcta ccatggtaat 900
ggacagagtt atcgaggcac atactccacc actgtcacag gaagaacctg ccaagcttgg 960
tcatctatga caccacactc gcatagtcgg accccagaat actacccaaa tgctggcttg 1020
atcatgaact actgcaggaa tccagatgct gtggcagctc cttattgtta tacgagggat 1080
cccggtgtca ggtgggagta ctgcaacctg acgcaatgct cagacgcaga agggactgcc 1140
gtcgcgcctc cgactgttac cccggttcca agcctagagg ctccttccga acaagcaccg 1200
actgagcaga ggcctggggt gcaggagtgc taccacggta atggacagag ttatcgaggc 1260
acatactcca ccactgtcac tggaagaacc tgccaagctt ggtcatctat gacaccacac 1320
tcgcatagtc ggaccccaga atactaccca aatgctggct tgatcatgaa ctactgcagg 1380
aatccagatg ctgtggcagc tccttattgt tatacgaggg atcccggtgt caggtgggag 1440
tactgcaacc tgacgcaatg ctcagacgca gaagggactg ccgtcgcgcc tccgactgtt 1500
accccggttc caagcctaga ggctccttcc gaacaagcac cgactgagca aaggcctggg 1560
gtgcaggagt gctaccatgg taatggacag agttatcgag gcacatactc caccactgtc 1620
acaggaagaa cctgccaagc ttggtcatct atgacaccac actcgcatag tcggacccca 1680
gaatactacc caaatgctgg cttgatcatg aactactgca ggaatccaga tgctgtggca 1740
gctccttatt gttatacgag ggatcccggt gtcaggtggg agtactgcaa cctgacgcaa 1800
tgctcagacg cagaagggac tgccgtcgcg cctccgactg ttaccccggt tccaagccta 1860
gaggctcctt ccgaacaagc accgactgag caaaggcctg gggtgcagga gtgctaccat 1920
ggtaatggac agagttatcg aggcacatac tccaccactg tcacaggaag aacctgccaa 1980
gcttggtcat ctatgacacc acactcgcat agtcggaccc cagaatacta cccaaatgct 2040
ggcttgatca tgaactactg caggaatcca gatgctgtgg cagctcctta ttgttatacg 2100
agggatcccg gtgtcaggtg ggagtactgc aacctgacgc aatgctcaga cgcagaaggg 2160
actgccgtcg cgcctccgac tgttaccccg gttccaagcc tagaggctcc ttccgaacaa 2220
gcaccgactg agcaaaggcc tggggtgcag gagtgctacc atggtaatgg acagagttat 2280
cgaggcacat actccaccac tgtcacagga agaacctgcc aagcttggtc atctatgaca 2340
ccacactcgc atagtcggac cccagaatac tacccaaatg ctggcttgat catgaactac 2400
tgcaggaatc cagatgctgt ggcagctcct tattgttata cgagggatcc cggtgtcagg 2460
tgggagtact gcaacctgac gcaatgctca gacgcagaag ggactgccgt cgcgcctccg 2520
actgttaccc cggttccaag cctagaggct ccttccgaac aagcaccgac tgagcagagg 2580
cctggggtgc aggagtgcta ccacggtaat ggacagagtt atcgaggcac atactccacc 2640
actgtcactg gaagaacctg ccaagcttgg tcatctatga caccacactc gcatagtcgg 2700
accccagaat actacccaaa tgctggcttg atcatgaact actgcaggaa tccagatcct 2760
gtggcagccc cttattgtta tacgagggat cccagtgtca ggtgggagta ctgcaacctg 2820
acacaatgct cagacgcaga agggactgcc gtcgcgcctc caactattac cccgattcca 2880
agcctagagg ctccttctga acaagcacca actgagcaaa ggcctggggt gcaggagtgc 2940
taccacggaa atggacagag ttatcaaggc acatacttca ttactgtcac aggaagaacc 3000
tgccaagctt ggtcatctat gacaccacac tcgcatagtc ggaccccagc atactaccca 3060
aatgctggct tgatcaagaa ctactgccga aatccagatc ctgtggcagc cccttggtgt 3120
tatacaacag atcccagtgt caggtgggag tactgcaacc tgacacgatg ctcagatgca 3180
gaatggactg ccttcgtccc tccgaatgtt attctggctc caagcctaga ggcttttttt 3240
gaacaagcac tgactgagga aacccccggg gtacaggact gctactacca ttatggacag 3300
agttaccgag gcacatactc caccactgtc acaggaagaa cttgccaagc ttggtcatct 3360
atgacaccac accagcatag tcggacccca gaaaactacc caaatgctgg cctgaccagg 3420
aactactgca ggaatccaga tgctgagatt cgcccttggt gttacaccat ggatcccagt 3480
gtcaggtggg agtactgcaa cctgacacaa tgcctggtga cagaatcaag tgtccttgca 3540
actctcacgg tggtcccaga tccaagcaca gaggcttctt ctgaagaagc accaacggag 3600
caaagccccg gggtccagga ttgctaccat ggtgatggac agagttatcg aggctcattc 3660
tctaccactg tcacaggaag gacatgtcag tcttggtcct ctatgacacc acactggcat 3720
cagaggacaa cagaatatta tccaaatggt ggcctgacca ggaactactg caggaatcca 3780
gatgctgaga ttagtccttg gtgttatacc atggatccca atgtcagatg ggagtactgc 3840
aacctgacac aatgtccagt gacagaatca agtgtccttg cgacgtccac ggctgtttct 3900
gaacaagcac caacggagca aagccccaca gtccaggact gctaccatgg tgatggacag 3960
agttatcgag gctcattctc caccactgtt acaggaagga catgtcagtc ttggtcctct 4020
atgacaccac actggcatca gagaaccaca gaatactacc caaatggtgg cctgaccagg 4080
aactactgca ggaatccaga tgctgagatt cgcccttggt gttataccat ggatcccagt 4140
gtcagatggg agtactgcaa cctgacgcaa tgtccagtga tggaatcaac tctcctcaca 4200
actcccacgg tggtcccagt tccaagcaca gagcttcctt ctgaagaagc accaactgaa 4260
aacagcactg gggtccagga ctgctaccga ggtgatggac agagttatcg aggcacactc 4320
tccaccacta tcacaggaag aacatgtcag tcttggtcgt ctatgacacc acattggcat 4380
cggaggatcc cattatacta tccaaatgct ggcctgacca ggaactactg caggaatcca 4440
gatgctgaga ttcgcccttg gtgttacacc atggatccca gtgtcaggtg ggagtactgc 4500
aacctgacac gatgtccagt gacagaatcg agtgtcctca caactcccac agtggccccg 4560
gttccaagca cagaggctcc ttctgaacaa gcaccacctg agaaaagccc tgtggtccag 4620
gattgctacc atggtgatgg acggagttat cgaggcatat cctccaccac tgtcacagga 4680
aggacctgtc aatcttggtc atctatgata ccacactggc atcagaggac cccagaaaac 4740
tacccaaatg ctggcctgac cgagaactac tgcaggaatc cagattctgg gaaacaaccc 4800
tggtgttaca caaccgatcc gtgtgtgagg tgggagtact gcaatctgac acaatgctca 4860
gaaacagaat caggtgtcct agagactccc actgttgttc cagttccaag catggaggct 4920
cattctgaag cagcaccaac tgagcaaacc cctgtggtcc ggcagtgcta ccatggtaat 4980
ggccagagtt atcgaggcac attctccacc actgtcacag gaaggacatg tcaatcttgg 5040
tcatccatga caccacaccg gcatcagagg accccagaaa actacccaaa tgatggcctg 5100
acaatgaact actgcaggaa tccagatgcc gatacaggcc cttggtgttt taccatggac 5160
cccagcatca ggtgggagta ctgcaacctg acgcgatgct cagacacaga agggactgtg 5220
gtcgctcctc cgactgtcat ccaggttcca agcctagggc ctccttctga acaagactgt 5280
atgtttggga atgggaaagg ataccggggc aagaaggcaa ccactgttac tgggacgcca 5340
tgccaggaat gggctgccca ggagccccat agacacagca cgttcattcc agggacaaat 5400
aaatgggcag gtctggaaaa aaattactgc cgtaaccctg atggtgacat caatggtccc 5460
tggtgctaca caatgaatcc aagaaaactt tttgactact gtgatatccc tctctgtgca 5520
tcctcttcat ttgattgtgg gaagcctcaa gtggagccga agaaatgtcc tggaagcatt 5580
gtaggggggt gtgtggccca cccacattcc tggccctggc aagtcagtct cagaacaagg 5640
tttggaaagc acttctgtgg aggcacctta atatccccag agtgggtgct gactgctgct 5700
cactgcttga agaagtcctc aaggccttca tcctacaagg tcatcctggg tgcacaccaa 5760
gaagtgaacc tcgaatctca tgttcaggaa atagaagtgt ctaggctgtt cttggagccc 5820
acacaagcag atattgcctt gctaaagcta agcaggcctg ccgtcatcac tgacaaagta 5880
atgccagctt gtctgccatc cccagactac atggtcaccg ccaggactga atgttacatc 5940
actggctggg gagaaaccca aggtaccttt gggactggcc ttctcaagga agcccagctc 6000
cttgttattg agaatgaagt gtgcaatcac tataagtata tttgtgctga gcatttggcc 6060
agaggcactg acagttgcca gggtgacagt ggagggcctc tggtttgctt cgagaaggac 6120
aaatacattt tacaaggagt cacttcttgg ggtcttggct gtgcacgccc caataagcct 6180
ggtgtctatg ctcgtgtttc aaggtttgtt acttggattg agggaatgat gagaaataat 6240
taattggacg ggagacagag tgaagcatca acctacttag aagctgaaac gtgggtaagg 6300
atttagcatg ctggaaataa tagacagcaa tcaaacgaag acactgttcc cagctaccag 6360
ctatgccaaa ccttggcatt tttggtattt ttgtgtataa gcttttaagg tctgactgac 6420
aaattctgta ttaaggtgtc atagctatga catttgttaa aaataaactc tgcacttatt 6480
ttgatttga 6489
<210> 2
<211> 150001
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 2
atctttcagc ctctatatta ttttattgtg atttttaatt tccttgaatt ggattttgcc 60
attgtgctaa atcttgatga tcttcatttg tatccgtagt ctgaattata tttctgtcat 120
ttgagttagc tcagtcttgt taagaaccct tgttggaaaa ctggtgcagt tgtttggagg 180
acatatgacc ttctggccat ttgatttatt ggagttctta cgttggttct ttctcatgtc 240
tctgtgtggg tgtttcttta actgcagtgt agattgagta cagccaatag acttcttctt 300
tggaggtttt cacagggcca aggccttgta cagggtcttt atttgtagct gacttcttgt 360
ctttggtttc atagtggggc atgttagcaa aatagttttg ctgttgaagt tttggggtgt 420
gatccatttt ttattttaat gattgtgtat ttcctttata cctaaaacaa gcagaaaacc 480
agtaaaggtc tttgagtctc tgaattcata actccagcat tcatattgct tcctcaggta 540
agtggggttt tcacccagcc cttaagggtg ttagattatt ttttatgtga aattagccag 600
attgtatttc taaacatgat gtaaaacaat aatgacaaaa gttataataa actagccttc 660
ttaccaaatc cacatgtcta atgtgtgtgg gagggtgtta ggcaggggac ctgcagctaa 720
gggagaggca gacaggcccc atggccccaa atctaggata gtatttggta ttggttgatg 780
ggtgagagaa agagagggaa catctgtgca ggatgtggta tcagcacctg gactacatct 840
tagggattcc ttcttcattt ttcagtatgc cctgacaata attatatcta tcagacttac 900
ccccttgacc actggaacac taagactgtt ttgggatctc tgcctgactt tctcagaggt 960
gctggtgagg acattatgag tctggaacct agaaaagcgt tctgactctg ctgactttct 1020
cagaggtgct ggtgaggaca ttatgagtct ggagccctag aaaagcgttc tgactctgcc 1080
actagccaga cagacctgga ctaggcacgt taactctttg tatgacttga ctccaacccc 1140
tcatttgtaa aaccagcatt ttcaagtggt gttttccaca tcagcctttt gcataagctg 1200
tcatttgaag aaaggttttt gtttgtttgt tttttgttta acaaaaaggt taaaaaccac 1260
tggtctagat aattgcaaag tttgctttcc tttttctgtg ctttttctac tatttttaaa 1320
atgtcatcct ccttggtttc ttgatccccc tttctgcact cctgagtctg ggaacactga 1380
ggccaactaa aaggaaactt ggcaaaagag gaacaccttt gggtgtgcca ggctgctccc 1440
agtgttttgc acttataaaa atttaaatgc tgcaaacctc taagacttag atattattgt 1500
tcctatttta caagtgagga acctgaggct cagagaaggt gcaggatggc acagggagac 1560
ctgaattgga accctggttc ccacttactg gctgtcggga cttagaaaag tcatgaactc 1620
tcattgattg ttttcttata tgaaatgggg gctgcagggt tgtcggggga gaaacaataa 1680
gaatgtgcat caagtgtcga gcacgtgcta cgcactccat catggcagct cctactaata 1740
tacagaatag agttgtatct aacatgactc tttcttgcaa gtgacagaaa atccaactta 1800
agatggatta agcaaaaaag gggaattctt gttgagctga aaagtcttta ggctcacatg 1860
atggccccag ggcccaggcc ctgtccagcc atgcagtagg catcatcctt gggcacaaag 1920
gtgagattct tgtggtggca gatgctgtgg cagctcttgc tttgccagga aagactgagg 1980
aaggccactg tccccattaa gtgaacaata gttggccagg tctgagaggt tgaacttggg 2040
tcacaggcct gtccctgaac ccatcactga ttggctccaa cctgcatcag ctattacatg 2100
ctagaggtgg aggcaggacc ccactcatac ccagaagggc aaagggtgga tccctcaaca 2160
ggattatggg atgtagggtg atagactgct gggcagccag aaagcaaaca gatcctctcc 2220
aatacctcaa ctgatgaaag caccaagcta aaatcataag gatctgggtg tgaattctgg 2280
ctctaccatc ttccatgtga cattgggcag ttatttaatc tcttttagcc ttggctttct 2340
tacctgtact aacatataag gtgattgtga tgagcatcat catcgtcaac atcatcatca 2400
ccatccacat tgccaccacc actcccatta tcatcttcat caacatcatc accaccgcca 2460
ccatcaccat tatcattacc accaccgcta tcactattat catcaccctc aacatcatca 2520
ccatcatcac tatcatcacc accaccatca tcgttactac cactaccacc accatcatca 2580
ccacagccac caccaccatc accatcatta ctactcagca ccaccatcat cattccacca 2640
ccatcaccat cattccacca tcaccattat cattaccacc accactgtca ctattatcat 2700
caccctcaac atcatcacca ccaccatcat cattactacc accaccacca ccatcaccat 2760
catcatcatt ctaccaccat caccattatc atcaccatca ccatcaccac cgctatcatc 2820
atgataatca ttatcattac caccaccatt agcattatca ttaccaccac catcactatc 2880
actatcacca tcaccacgac cactaccacc atcaccaaca ccatcattac tacccaccac 2940
caccatcatc atcattccac caccatcaca attattacca ccaccaccat caccaccacc 3000
accaccatca ctatcatcat cagtagacat catataacca gtttgtagct ggcccagagc 3060
ctacttgctg tttcttctgc cccacaacca tccacacatt tctaaccacc atcccccact 3120
aggcttctgc ctcgcctggt ctcacctgca ggtccactga gaaaatgatt ctcagaacac 3180
taactagacc atgaggtgcc acaaaacata actcaggcct gttcatcaat tttctacatg 3240
tcaataatga catcaggtca attggcgttc tcagcctctg agagggaggt caaagttttc 3300
ctgctctccc cttcatgttt ccaggtgttc cctgacttgg atcaaatgca gagtttggag 3360
gtgttgaggc caaggggatt ttccaggtca gtcgtcatcc acaatcaatg gactgatcct 3420
gccgctggac ttaccctgct gccctctccc caaggcccca tcagggaggg cttcaatcct 3480
cttgtcacct gtggcctacc tgccctcaga gatgacatct ctatgtcggc cactggatgg 3540
cagcacctac tcgcagacca catcaacttt cctggcaact tgcggtaggt tttcaccatt 3600
atcaggatgt ttgccttgct caaatagcag attctagaga acggtgctcc ctcacacaac 3660
tatgtagtcc aggtgatgca ccctctgccc gatgcttggt agtcagaaac ttccatcatg 3720
cagctctgcc cagattgagc tgagctggcc tctggagtga ggtgctggga caaacatctt 3780
ccatgctgct catgtcaact ccagatgcag tcaggtttct gaaccaaagt caatgatcta 3840
agtgcagtca aaggctctgg gggaagaaag agagagtgcc tcatctcttg cctgtgccat 3900
gctcgcaaag caaggatttt tgcaaaattc taatgaaagc tgggcttgca aaattagaaa 3960
actggattat ttgtgagaac actgaaacat ccctgggtgt gtccatctgg aaaaacagca 4020
tttcctctgg caattttgca accgttctat ttgaatttgg caaagaaaat aaagcagttt 4080
ttcacaaaag aataaacaca accaggagaa tcttcactct cccaaattgt caaagaagta 4140
taaattagaa aatgaatcag gacaatttca acctgttaga ttagctaata tttaaaaatt 4200
gaacactcat acaagtgtgg tgaagtgatt gttttctagt gacattttac actgtcataa 4260
ccttctagaa aataaattgg cagtgttatt gggagacaga aatatgtcta tataatttat 4320
gggaacttag gctcagaaaa tattaaggaa taagaatgaa ctttatgaac aaagatgtgg 4380
agggttggaa gcaagagggg ggccaacgcg cacggggagg aagcatttgg gcagtgactc 4440
cgcagaccca ggctcaggtt gaactagaca acctccttac acctcagttt ccttaactgt 4500
agagcaggag tgatggaact gcctgtttca taggactgtt gtgaggatga agtgagatac 4560
accacattat aagcttgtgc ctggaaagga taatgcttag taaatgatga ctattctttt 4620
ttattgcaat aaaatgtaca cagcgtaaga gttactattt taaccatttt tgcagggtac 4680
caccaagtgg catttagtac attcacagtg gtgtgcaacc atcatcatat ttccagaata 4740
ttttcctcat ccccaaagga aacctcatgc tcattaatca gtagctctcc tttaaaatat 4800
tagttatgaa gatcatagca ctatacaaaa ctcattatgt aatgttgagt gaaaaaatca 4860
gggtgtgaaa ttttgtgata tgatgtaatt agtgaaagaa gcatacaaaa agtctgaaaa 4920
tataaaaaca atagcaattg catttctcag actctacatt taaacattat tctttatggt 4980
tttaaaagca aagaaaaagg taaagaaaca acaaccaacc gcaaagcacc atgacaaagc 5040
tcagattgtt aaatccaggt ttttggaaca tagactctta tatgacgttt acactctcca 5100
gggttcagag agtctggcag cattgggagc tgccttgtgt tctacagcct cacggacaga 5160
caggaggtcc atcaccactg ctctgttctt ctggagtttc cttgtgaaca tgttgtggac 5220
gtagttacca tttctttcat ctttttaaac acaggtacct ttggggctgg ctttctcaag 5280
gaagcccagc tccctgtgat tgagaatgaa gtgtgcaatc gctatgagtt tctgaatgga 5340
agagtcaaat ccactgagct ctgtgctggg catttggctg gaggcattga cagttgcaag 5400
gtaagaaaag atcaagagac caaagttagt cttgtgctct cctgtctcag tctcagtccc 5460
ttagacttga gtcccaaagt agcgaattca agtaggattt aatcaatgga agaccccagt 5520
ctaagtgttg ctcagaaact ccctagatct gtcccaaatg tatattcaga tcatccaagg 5580
ggacttcttg gggcttgagt tccagatcag cagcaaggga gccataagtg ccataactac 5640
ctcagaccac tcaccctcct ggggtgtccc ggtggccagg gactaaagtg gtgatttttc 5700
tggtagggaa ggaggtagag ggtacaggac agagactaac tgcacacaat atctgagact 5760
ggagctcaga tattgctgat gatcagagtt ggcgtgtctc cccaattgat ttacaactgg 5820
ggcttggata ctgttttaaa cgggaggagc ctcctaacca tcttgacaca accactgacg 5880
tgactacact agagatagac tctttccact taattctacc actcttgctt tacttcatga 5940
gaacgaaaat gtaagattgc accatgaatt catttgcgga aagattgata ctatgctttt 6000
attttatttt attttatttt attttatttt attttatttt attgagactc tcaccccggt 6060
tgaagtgcac tgacgtgatt ttggctcact gcaacttcca cctcctgggt tcaagtgaat 6120
actccagcct ccctagtagc tgggattaca ggtgcccacc accacgcctg gctaattttt 6180
gtatttttag tagagatggg gtttcaccac attggcctgg ctggtctcaa actcctgacc 6240
ttgtgatcca cctgtcttgg cctcccaaag tgctgggatt acagagttga gccaccgcac 6300
tcgaccctat gttttatttt taaaaatatt tatttattta tttaagccac aactactaga 6360
ataggaagga ttgatatttt attaatttta tttggtattt attatttttt tttctttcct 6420
gagacattct tgctctgtca cccaggctgg agtgcagtgg cacattcttg gctcactgca 6480
acctccatct cctgtgttca agcaattcta gtgcctcagc ctacttagta gctgggatga 6540
ctggcatgtg cctccacacc cagctaattt ttgtattttt tgtagagaca gggttttggc 6600
atgttgccca ggcttgtctc aaactcctgg cctcaggtga tccatctgcc gtggcctccc 6660
aaaatgctgg gattataggc atgagccacc accccctcct ggaaggattg atatcttata 6720
acataattta taattacaga aaacatgtga gttcactagg aataaataaa ttttgaagat 6780
aataaaagat tttcacttat gttgtcattt cggcacagtt tggtatagga tgtggagatg 6840
ttaacattta tacctagctt gctcgtaaac taagacctga aagggttgtg tctatcagct 6900
gcacccctgg gtagcgacac aacctcggga aggcctcagc cccctcctcg tacagcactg 6960
cctgttggaa agcttgaggg aggctatgga tgtgcagcac ttggcagagg gtctggtcat 7020
ggaagttacc agcaaatatg agctactttt atgattttat tttatccaaa agaaagagaa 7080
tgaaagaaga ggggaggaaa caagactaat caggaaagat gaaggtctag gggtgaggga 7140
aggagtaagg agacataaag gcaatgtgga gcagctgagg ggggaaatgg ctttcaccac 7200
ttcccagcat ctattgacat tgcactctca aatattttat aagactctat attcaaggta 7260
atgtttgaac cctgctgagc cagtggcatg ggtctctgag agaatcatta acttaatttg 7320
actatctggt ttgtgggtgc gtttactctc atgtaagtca acaatgtcct gggattggga 7380
cacactttct gggcactgct ggccagtccc aaaatggaac ataaggaagt ggttcttcta 7440
cttcttttat ttctgaaatc aggtaagaca tagttttttt aaattataag aattattttt 7500
tctcccacaa tgtagtaaaa atacatatgc catggcttta tgtgcaattc atttaatttt 7560
tgattcatga aattcccagt tcaaaatctt gtatatgatt gaaaaattct taaaaaaata 7620
agtttaattt ccccgtgaag actgtcacgg tgctggaatg aatgggcaga aaaaataatg 7680
gttgattttt ctaatctaaa agagtgtgcc tacatgatgg ccagtctggc tgaaaaataa 7740
atagccattg tagctaacta tgcaaaggat ggctaagctc ttcgcttggt tctcagtttc 7800
attaatttat atcatctctg ttcaggtgcc atgctcccct cactagcaag ttgaaacaat 7860
gaaataactc tttgaatatg tttggttcct tgacctgttc atggagtggg actcagcatt 7920
tctctctttg ttatggcctg agtaaggctt tccatcggta tacatttgct tcttatccct 7980
ggagaaatta tacacatcca tttgccagat gatatacgca tataatgatt caacaaatac 8040
tcagggtatt tgttgagtgg gttaggtccc cacattttta tacatacata cacacataca 8100
caccgtgtgt gattgtgaat gtaagtgtgt gtcctttaca aatactagct tatttagctc 8160
atggtatagg tagggtagca tagtcatccc cattttataa acaaagaaat ctagacttag 8220
gaaaatcatg ttatttgtct cgtgaccaaa ttcccaaatc aaggaaataa agaaacctgg 8280
atttaagcca gatttccaag aaaaaatcta gggctcttct cactttttca tctttgttcc 8340
aacatttgaa aaaataaatc taaacacatt ccaatgtaac tgaagagcag gttaattgtt 8400
tgccacttgc agaatccaat taagaagaga gaagtctggt ataaagaaag tgatttgctt 8460
ccaaagctag cttaggggaa gaaatgcagc agtcctgccg tactacttca ctttaggagc 8520
agaaagtggc acttttaaaa ggcaacagag gaggcgagca aggattcagg ggtccatgct 8580
agcttgggca ccttatccac caggtagttg agcagttgcc tgctggtgcc tttgtgagca 8640
gggtgttgtc ccttgaggca aatctctgga gggtgagagt tttgtagtgg gcatgctttg 8700
gtttataaat cacctgtgaa ctcaggagtt ccatcttgaa gcacatacat agttagatga 8760
acttgccctg cagggagagt ctgatgaaag ggaggtagat gcttgcaatt taatctataa 8820
attaccagat aaaattttac aagttgactt taaagtcaaa cacatttgaa tttagtggaa 8880
gccattcaag aaaatatcaa agaaaataca gagcaggaga agattaagca aagagttttt 8940
tggggaaatt ggtgtctatg tctgtgtgtg tagggagtgc aggggatatg aatattctat 9000
ttcagcccat ggaaactagg atgtagatca ctgtgaactt attcagcagg ctacacccaa 9060
aggctagaac aaacttctct gccacaggat taacatatgt tttaatcgac ctggggggca 9120
cattctctga taagctcttt tggaaagcca ggctttctgt ggacgtgtta tctttccaat 9180
gtgtgctgga atgcccgggg agaggaaaaa gtttctttta cagccatgct cagtgagaag 9240
cggagaaaca tcttctattc acaaattgct aagtctttta cacatgcaaa tatgcataca 9300
cattcacaca ccacagtgag gaagaaattc tcacaccatt aataaaatac atttacttca 9360
gtagcaatat acatctacat tttgcctata atataaaagt atttttccta ttaaaagatt 9420
tgtttaatgt ttcttcacca acaaataaac cctattaaat ccccattgcc atatgagccc 9480
tggaggtgaa tcagagaaac aaaaggattg tggaaaaatc atcaggttaa aaaaagaaaa 9540
attgattctg ttttgggata tttcctagca acatgagctg gggaggggat ctcagcagtg 9600
atgctctatg aagcataata aaatgacaca gttacaggta acttagttaa agggggaaat 9660
aaatggaagt ttcctctttt tgaatatcaa ttgtagcctg ctctgctaca tttcaaaaac 9720
actcttcaaa atgtttaact gaactcactg taggaagcac cttattaatt tattgtgtgt 9780
tttgaagtca cactgtgagc tatagaattt acccaagcac aactcttcct ggaaaagaga 9840
gttcaaatga gaaacagtgc ggggtgaaga catggatatg ggcctaaaat atctatttct 9900
caatgatatt ttgatatatc tatcaagtgc tttttagtgg attaggttca gaatgcatca 9960
gccaatgcct gttcaataat ccagttttcc agcatagagc atattaaatt gaggaaggac 10020
aaagtcacag aggtggggag caggtggact gtggccaagg actttgcatg aaacagtgag 10080
cgtgcatcct cctccttgcc ctgccctcat ggtctgtgta ctctcaggag gtcaggacag 10140
gcctttctga gaatgagaat ctgttcatct gcctttctac tggatacttg tcatcggcat 10200
acaaacacat gttctctgca gtgtgtcatc tttcagaacc tcccctgacc ctgtattccc 10260
tagaagtctc gctgctttca gagccaggct tctctcctgc tgccaccccc actgctcttc 10320
tagtcactct ttaacccact ccatctgcat gtggccccca ccacacccct caaagtggtc 10380
aaggttgtcc tgttgcttaa ttccatggaa gcttggctat cttcatttta ttagcctctt 10440
ttggcctctc accctgtgaa aatcactaca ttttgtgcca gagatggagc tggcatctcc 10500
aggcttggaa gagggctgct gaagctcagc caggtgtcct aaggagcctc aggacagggg 10560
atgctcagta gccttgcaat gggaacacag ctgagcccca cttggccacc ctttgccaca 10620
accaggcaga aagcagcttt tgaacagatt tgttgcctca gatttgatct caaagaaaaa 10680
tcgtgggcag tattggtccc aggttctgct tttttacaat ttcctctgaa atctggatgc 10740
ctatcaacac cttggaaaaa ctgaattctc cccaactaat agtggtgtgt cactgtagta 10800
agcctagtac aaaaatggcc ttctttgtgg aggagcttca tatcctccat tttttttttg 10860
cttaattttt gcccaagatg agaacataat ttagttcact ttttatttat tcccaacatc 10920
atccatgcac caacattttt gtaactaaag gagggaccat tcagaagatg cttatcaact 10980
gtcaaagtga cagtgttaca accaatgcac atattgtaag aaatcaaaca atggcctcca 11040
aggttcattt ctacacaggg attagcagat caacatcaat cttggcaaca cagttgccac 11100
tgatggtgtc ttattttttt tatcatgaca tggcaatcaa gagcaaacat gatttattct 11160
tatttaagat tttatggtta gactaggcag atagctagat atgagcagga ggtggaagcc 11220
cctgagagaa tggaggtctg gagaatctga aaccccagag attacccaag tcctgcatgc 11280
tagacatgag tggaggaggg ggaataccta ggtagaaaag aatgcccctt aagatgccca 11340
gcagtcgctc actgtgcagt taacttttca gaatgctgct agatacatgc tgatagggag 11400
ggaagagggc aaaggagaaa ttcctaagag atacacggtt gcagttagta tacatctgag 11460
tgctatacaa ccttctttgg gtggtggcaa gaagcaatgc agccattacg tagaattcat 11520
atcaaacacc tgtatcacag gtgttaaaga aacaagaaac attgtacttc ttgtattctt 11580
aataatgatt tgcaatattg tctttagtat cactgcaaac ctctataaat atgattttta 11640
aaaagtattt ctttaggttg gaattacttc tacgcattga cttatcttcc tgggtttcat 11700
tagccgtacc cgttgtactt tcttccttac cactgtttat ctcaaactct tgagattaaa 11760
gtatgggctc aggagggagc gaggagcttc aggactctca cggacctcca gcacagtgta 11820
gctgccttat ggaaaagtgg ccacactgtt ttctgcactg gtccctgccc ctactattcc 11880
tcactgggca gagcacagcc accctggccc tgcctgaaca ttttagtcag tgttggctct 11940
gtgcttctct ggggaggaaa tccaagagac aacccacagc ccctctgcca tttcagctgc 12000
agcagtacca ccgttaatgc ccttgggctt gagaaagaag ggacctggcc acttccctga 12060
cacctccagc acacagcagg gaaagaattc cagtttctct ttcttgtgag ctttcacctg 12120
ctactcttca ccaggcaagg ctcctggctt gggcccacag tgcaggcacc tcgaactcag 12180
ttgaacattt ccactggctg cactctgtgt ttttgtgggg tgaagctccc agaggtgact 12240
gaaagtcctt ctgccactaa cactgcagtc atactgccct tgctgtactt ggactaggga 12300
aggaaaaaag atcctgagtg ctttactcac accccagtgt gccccagcca ccctatggaa 12360
aagaggccag tgtgtcatcc ctgcaagcac cctgaggccc ctgcccctgc tgcccccaag 12420
ctgtagagcc agaatataaa gctggcagaa aaatgtaaaa aggctagact ggcttagcct 12480
cccagcctac atctttctcc tgtgctggat ccttcctgct cttgaacatc ggactccaag 12540
ttcttcagct gtgggacttg gactgtcttc cttgctcctc agattgcagg tggcctatta 12600
tgggaccttg taatcttgtg agttaatacc acttaataag ctcccctttg tgtgagtata 12660
tctatatcta tagatagata taggtatact cactatatat acacatatat acatatactc 12720
tctctctctc tctctcatat atatatatat ataatctcct attagttctg tccctctaga 12780
gaaccccgac taatacagat tttcatacca gaagtggttc ttgaggaaca gaatattaag 12840
gatggaattc tttcattggt tttgggactt ctggtgttgg ctgattaata tgattagacc 12900
aaaaaatgct aaggactcta cttctaatag tatggagaac actgatagta cttggcctga 12960
attgtttaga gagttatgca aaataaatgc atttgacact actgattcat cacttatgag 13020
aggcaaggag tttagtgact ctatacataa tacctttgac tatatgtgga gaaccaagga 13080
acataatgaa gttggttgat tgctcctaag ttctctggag aaagagatga aagaaaatga 13140
tgatctcagg ggatctgtct cccaccttca gaagcagata ctgagccaca aatctgctaa 13200
gattgccctg aatgagagtt ttaactcctg tagagaaaga gttgaaattg tgaaaaaaca 13260
gagacaagct gttatcatgc gagtagctga tctgcaacaa gaggtgcatg cacagccttg 13320
ccaggtgttt actgttaaag tgagggcatt gactggaaaa aaatgggacc ctggaacttg 13380
gagtggggat gtgtgggaga accctgatga agctgaggac actgagtttg tgaactctga 13440
tgaaactttt ttgccagaag aaacagtttc cccatcccca gtagtggtaa catcccctcc 13500
ctgacccgtg ctgccattag cctttccacc tttgtctgag gatgtaaacc ctgcactgct 13560
tgaggcaaca gtgatggcct tccctgaggc agctgccagg caagataatg ttgattctcc 13620
tcaagaggca cccctaatgc ccctgaatgc ttctagacct ataactaggc taaattcctt 13680
gcgggcccca gaggtgaggt tcagagtgtg acccatgagg aggtgcatta tactctaaaa 13740
gaactgctta agctttctaa tttatattgg cagaaatctg gagaacaggc atgggaatgg 13800
atattaaggg taagggataa tggtggaagg gacatagagt tggatcaagc tgaatttatt 13860
ggtttggccc tactaagtag ggattctgca tttaatgttg cagctcgggg acttagaaaa 13920
ggttctgata gggccgggag cagtggctca cgcctgtaat cccagcacct tgggaggcgg 13980
gggcgggcag atcacgagat caggagattg agacaattct ggctaaaatg gtgaaacccc 14040
atctctgcta aaaatacaaa aattagctgg gcatggtgat gcgtaactgt aatctcatct 14100
acttgggagg ctgaggcaag agaactgctt gaacctgtga ggcagagatt gcagtgagcc 14160
aagatcgccc cactgcattc cagcctggta acagagcaag actccatttc caaaaaaaaa 14220
aaaaaaaaag ttataatagt ttatttgctt ggttagctga aatatggatt aaaagatggt 14280
ccaatgttag tgagctggaa atgccttggt ttaatgtaga ggaagtgatc caaaggctta 14340
gggagattag gatggtggag tggattagtc actttagacc tactcatccc agctgggagg 14400
gtccagaaga tacacccttg gccgaagctt tgtgaaatag atttgtgaga gcagcacctg 14460
tatttttgaa gagcccgtaa ttgctcttct ctgtatgtca gatctaacag taggaaccac 14520
agtcactcaa ctacaaaatt taaatacaat gggaataatt ggatcctgag gtggcagggg 14580
ccaagtgttg gcactgaacc atcaaaggca aggtgggcat aactaccata atagacagca 14640
gaggcaaagc agccatcaga atagtctgac tcatgtagag ctctggcatt ggctaattaa 14700
tcatggtgtt cctagaagtg aaattgatgg gaaacctact gtattcctac ttgatttata 14760
taaacaaaaa actgccaggt agaatggact aaagactaat ctgaattata aaaacagaga 14820
atcatgggcc ctcaatcaat ttccagactc gaacctgtta cagttccaga acccactgaa 14880
tgaaggggag gctggatccc cttgaggaag gacaccacta ggctactgac aacttatgct 14940
gttactcttt ctcccatcct tccctaagga gacctctggc cttttaccag ggtaactgtg 15000
tgtactggag aaagggaagt aatgagacat ttcagaaagt actggacact ggctctgagc 15060
tgacgttgat tccagggtac ccaaaacgtt attgtggttc cccagttaaa gtaggggctt 15120
atggaggtta ggtaattaat ggagttttag ctcatttctg acttacagtg gttccagtgg 15180
gtccctggac ttatcctctg gtcattttcc cagtgccaaa atgcataatt tgtatagaca 15240
tacttattag ctggcagaaa tgccacattg gctccctgac tggtaggatg agggctatta 15300
tggtgggaaa ggccaaacag aagccattag agctgtctct acctagaaaa ataaaaaaat 15360
caaaaacaat atcccatccc tggagggact gaagtgatta gtgtcaccat caaggacttg 15420
aaagacgcag gggtggtgat tcccaccaca tccctgttca actctcccat ttgacctgtg 15480
cagaggacag atggatcttg gaaaatgatg gtggattatt ttaagcttaa ccaagtggtg 15540
actccaattg cagctgctct accagttgtg gttttgttgc ttgagcaaat taacacatct 15600
cctggtgcct ggtatgcagc cattggcttg gcaagtggct ttttctccat tcctgtccat 15660
aagacccacc agaagcaatt tgccttcagc tgacaaggcc agcattatac ctttaccacc 15720
ctacctcagg ggtgtatcaa ctctccagct ttgtgtcata atcttatttg gagagacctt 15780
gctcgctttt cacttccacg agatataaca ctggtccatt acattcatga cattatgatg 15840
attggataca gtgagcaaga agtagcaaac acactgaact tattggtgag acatttgtat 15900
gccagaggat gggaaataaa tccagctaaa atttagggac tttctacctc ggtaaaattt 15960
ctagggttcc agtggcatga gacctatgga gatattcctt ctaaggtgaa gcataacttg 16020
ctgcgtttgg cccctcttac aaccaagaaa gaggcacaat gcctggtggg cctatttgga 16080
ttttggaggc aacacattcc tcgtttgggt gtgttactct ggcccattta tcgagtgacc 16140
tgaaaggctg ccagatttaa gtgcagtcta gaacaaaaga aggctctgaa acaggtccag 16200
gctgctgtga aagctgctct gccatttggg ccacatgacc ccgcagatcc aatggtgctt 16260
gaggtgtcag tggcagatag ggatgctgtt tggagccttt ggcaggcccc cataggtgaa 16320
tcacagtgga gacctctagg attttggagc aaggccctgc cacttctgca gataactact 16380
ctccttttga gagacagcta ttggtctgtt attgggcttt ggtggtaact gaacgtttga 16440
ctgtgggtca taaagtcacc atgctacctg aacctgccta tcatgaactg gttgctttct 16500
gacccatcta gccatgaagt gggtcagcac agcggcattt catcatcaaa ttgaagtggt 16560
gtgtatgtga tcgggcttga gcaggtcctg aaggcacaag taagttacat aaggaagtgg 16620
ctcaaatgcc catgttctcc actcatgcca ccctgccttc cctcccccag cctgcaccaa 16680
tggcctcatg gggagttccc tatgatcagt tgacagagga agggaagact aaggactggt 16740
tcatagatgg ttctgcacga tatgcaggca ccacccgaaa gtggacagct gcagcactat 16800
atccactttc taaatgcatg tgtacacttg tgctaagaaa atatctttat tttatttcct 16860
ttatttttcc tttatcatgt gaccttagat ttatggactt cacatcagca tttaagcatt 16920
taagtgttgt tcatatcagc atttaaatat tgttaacctt atgtaataac ttttggtttg 16980
gggattggtg cgtttctggt tgtatgagga tagttgtatt atattaggca taattatgac 17040
cttattattg tctttatttg aagattatgt atgatttcag gatgtgtgta tgggttcaag 17100
ttgacaagga gttggacttg tgatggttaa tactgtcaac ttgattggat tgaaagatgc 17160
aaagtattaa tctcggttat gtctgtgagg gtgtggcaaa aggagattaa catttgagtc 17220
agtgggctgg gaaggcagac ccacccttaa tctgggtaca caccatctaa tcaagttcca 17280
gtgtggccag attgtaaagc agggagaaaa atgtgaaaag actagactga attagcttcc 17340
cagcctacat ctttctcctg tgccaaatgc ttcctgctct tgaacatcgg actccaagtt 17400
cttcagcgtt gggagttgga ctggctttct tgctcctcag cttgcagagg gcctgttgtg 17460
gaaccttgtg atccgctgag ttaatactac ttaataagat cccctttata tacatataat 17520
atattatatt atatataata tatataatat atattatata taatatatat aatatattat 17580
atattatata taatatatat tatatattat atataatata tattatatat aatatatatt 17640
atatattata tattatatat aatatatatt atatataata tatataaaat atatatatat 17700
cctattagtt ctgtccctct agagaaccct gactaataca atttatgtca ttaatctcat 17760
ttattgattt gtatacattg aaccaacctt atatcccagg aataaaacct acttgattgt 17820
ggtggattag ctttttgatg tactcttgga ttcaattgct ggtattttat tgagaatttt 17880
tgcatctgtg ttcatcaagg atattggctt gaagttttct ttttttgttg ttccatatca 17940
gaatgatgac gacctcatag aatgagttag tctgtcctct tttatctttt ggaattgttt 18000
caggaggctt gatatcagct cttctttata tgactggtat actttggcta ggaatctctc 18060
tggtccaggg gtttttctgg tgtaggtttt taattactga ttcaacttca gaactcatta 18120
ctcattattg agttctaaaa ctcactttca tgtactcttc aaaagactgt cttcttctgt 18180
tgttgagcgg ggtgttctct caaggtcgtt taggtgaagg tggttgctgg tgttcttctg 18240
tatccttact gcttgtcttt ctcttttttt attgactact gaggattaat ggtgatgtgt 18300
ccaactttaa ctctagatta gtctatttct cttttagatt gtaactctgt tttatatatt 18360
ttgaagctct gttgttaggc atgtgtattt ggattgttag gtcttcttga tgatgacctt 18420
tatcattatg taatgtttct tcttatctct ggaagtattc gttgttctga agtctatttg 18480
tgctgatatg aatacagcct tcacagctct attttcacta gtatttgtat atctttttct 18540
cagcttttaa attgagatgt tcagaccatt tgcattaaag tagttgttaa taggattaaa 18600
tttaaatcta ccattaagtt ggttatttct ctttgtccca tttaaacttt gttccttttt 18660
tcatattttt ctgccttcat ttatattgag tttatctcca cgacttactt attaaattaa 18720
tttttaatgg ttttagtatt ttccacaatg tttataatat atactttgat tttttcacat 18780
tccaccttca aatgacagaa ttatactgga tatatagaaa tcttacatca ttgcacttct 18840
ccttcctccc tctcaaaatg ttgtgctatt gctctttgta atagaggctt acttctatta 18900
tgttatagct ctcataatac attgacacta tttttaccct gaataatcag ttgtttttta 18960
aagtgattat gactacaaat attttgaata atttctttat tttaccattt ctggtgctcc 19020
ttatctttta cagtagatcc caatttccat ctggagtcac attctttctg tgaaaaacaa 19080
cctttagcat ttcttatagc acgggactgc tgttgctgtt gtctttcagc ttttctttgt 19140
ctgaagaagt ctttattttg ccttcagttt ttaaaagtga ttttgctgag tatagatact 19200
gggttgagag tttcattcct tgtatcattt taacaatgat gttccattat attccgtttt 19260
gaatagtttc tgactagaaa tctgatcttt gtttctttgt attcaatagt tcctttttct 19320
ctgactgcct ttaagatatt ctcatctttg tttttcaaca gtttgactat aatttgttta 19380
ttattaactt tttgtattta ttctgcttga ggtttcctga gctccttgga tttgcagatt 19440
gttgattttt attgtttttg taaaattcat agccattatc tattctactg ttttgttttt 19500
tttttcactt ctctctctct gtattcttct ttttggactg taagtattca aatgttagat 19560
cattcatatt gcttcataaa ccttatatgc ttcttctgct tttttttttt tgtcaggaac 19620
tctttttttg tatctgtgtt ggtttggata agttctagta gactatgttc aagtttatgg 19680
attattttgt tagttgtgtc taattgactc ctcagtgcat tcagagaatt cttcatctct 19740
gatattataa atctcttcct agcattttca tgttactctt ttctatagtt tccatctctt 19800
tgctgaaatt ctccccctat ccatggatat tgtccacctt taccacaaga ttctttaaca 19860
tattaacata ggtatcatac aaacccaaac tgatagtttc cagatggtgt cttttctgag 19920
tctgtctgtc ttgattgctt tattatttaa cagtgactta tcttccctct tcagcttttg 19980
gtgtgtcttg taattgttta atcaaacact gggtatcata aatggaggaa cagtagagat 20040
tgcagtaaat attatttatg ctttgaaatg ggcacccatc ttctgttgaa aatatgtttt 20100
gtggtcaatt gagtcaacct agtaactggt tgaactgaat ttggcatttg tgcttgttgc 20160
ttttatctta aatgcaccac aggtttaaat tcctccagtg atgggttgct gctatctttt 20220
gcttagagtg gggcctgggg tgtggaagaa ttttctcagt gttcctatct attattagat 20280
tttagcagtc actgcatgcc tgcactacag aggggatatc ttcatacaca taatctaacc 20340
ccattgaaac tgctgtttct tcttaatgaa tgctcaatct ttggtggaaa taaacaaatg 20400
ctgtatctcc tggagccact tcagtcttag tcaggttctg cagggctttg aagggaatgc 20460
attctcagta ttcttgtgcc ttatttggat ggaacttgaa cctgtggtgg gtttggagag 20520
aaagagtagc agacgtctgc tatgttgcaa tgcaggatgc tgggcacaag aaaatttcca 20580
gtctctcctc caaggaaata agatttgatc atctacctat ccctgagaag tgaagggctt 20640
tgcctgcggt gctagatgca aaaccatttt tctcccccca ttgcccagaa acttaaggct 20700
ttggcttttc tgagcagtgg tctagggaat tgtgcaaggt tttcatattt gaccctgaca 20760
gcccatcacc acctacagct tgcagtgcca aatgtatctc cctctgatct ctcctgtcct 20820
gtggtcctca tgaacattaa gaagagattt ctaaaaaaga gcttgcacat gagcatagtt 20880
tctggtgaga agaattctga tatgttaact tcctctaaac ttttaaataa aatatttcta 20940
agaattaaat aaagttctag aatgatatga atctattcct ttggtttttt gcacgtctgt 21000
ctgcctgcta atcaagagaa gagaatggtc gtaattctca gagacttttt cctgtttgtg 21060
tcataaatga cttcacattt ttttctgttc taagaactat tcagcttgat ttcttctgtt 21120
ttaattttag cagcacctga gcaaagccat gtggtccagg attgctacca tggtgatgga 21180
cagagttatc gaggcacgta ctccaccact gtcacaggaa ggacctgcca agcttggtca 21240
tctatgacac cacatcaaca taataggacc acagaaaact acccaaatgc gtatgtcatt 21300
aatcttacag taagcaaaac aaggtccaag taaaatttgt cttagaaaag gtgtgcgtca 21360
agctaacttc ttatgattaa atttttctca cacatagaat gcatggcaaa atgtctgaga 21420
aacattactt tgagcaaaga gtatgataga agagaaatgt taagctggct ctctttcctg 21480
agagtttgat aaaatcagga gaatatctgg cggtggtgag gccacaataa tggaaaatca 21540
gaatgtttag acagagtcag cttcaacaac actcactaaa ggtcaatgtg atctttaccc 21600
cttgaaattc tataattcta atctccaatt cctgaagtga aggttgtgtt ggccttttct 21660
gtcttggctc acaagtaaat gatatgtgca tatctatgga aaggcgaatc tatctttttc 21720
tatatctatg tctattccaa cgggtagaaa caccctgggt cctgagcacc agtggtctga 21780
aggaatacgg gttgccagga agagagaagc aaaggcagga aggcagatga aagtaagaaa 21840
tgagacagat gctaaacaat aaaaagtgcg ggaagataga cagaagctgg ggtctgacca 21900
caccatggcc agtctttcac acataagtga ctaccaaaga caagaaaaaa tgatttccgc 21960
ttgttggaca atagatggta gaggaccaag ggaattgcga gagagagaac aatgagatca 22020
actcaacaga tgcactggtt ttcttcctgg agacccttcc tgcactgaag ggcaggagat 22080
ggagcccaaa aaaaactgta gccatcttgc tgaacagagg agggacattg gagtttggga 22140
ttattcaggt ggctaggatt ttctaggcct gctaacaatg agaacagatt tgtggaggaa 22200
aggagttcta gaaatatgca tagaaatctc ctcgagtcat tggctaaaca tgaagctgca 22260
tgtacacaga aaatagatcc acaagaaagt agggcaaaga acatctacgg aagagcagca 22320
actacaatgg aacagtgagc tcaataaaca tgacagagct caaatagcac taagggatat 22380
tggagtttgg accacacaga ggagagagac ttcactgaac atcttgggca ttcagtagag 22440
acccaggaaa agccatactt taggagtaga attagtatat tcttagaata aaggcagctc 22500
cacacaaaca atagcaaaac tgaaaaggaa gtctccaagc atcagaatga tgtccaagtc 22560
aatgaactgc ctctgagagg aaaactcaac catctttaga ggtaaacatc aaagtcaagt 22620
ggctcagcta tgcagtatcc acagtgtgag gcctaaatat aaaacttgac tacacataga 22680
aaccttttag tgtgacccac aagcaggagg aaaatcagcc aatacaaaca gacccagaag 22740
agacagaaat gattagaatg gcataaaaat ttgacatatc actatataat aattgagttc 22800
taggatttaa gaaaacatga atatagaatg caacagacac cttatccaga gacagtaaga 22860
gtataaagag ccaaatcgaa gaactactaa gagatatgtc ttaaatgaaa aaattactag 22920
atggcctccc catctagtta gacatttcag aagaaaatac caaatgaaaa ataattgcat 22980
agaacctaca gaaccagata cacacataca aaacacacgc atgcatacac acacactcaa 23040
acatgtataa gcttacaaac acacacacac atccacaaat gctgaaaaat gaaatcaacc 23100
gagccacaca gacataaagg aaaacataaa aagatttcct acatgtggga agcaagtcac 23160
agaaaggggg aaggagattg gaacagaaat atatactgaa agcaaggatg gctgaaaatt 23220
ttccaaatat aaagaagatt aaaaaatcac ggactcaaga agctcaatgg atcagaaaaa 23280
taatttctaa aatgacaatt ataggatgcc actgggtaca tagcagttca actgtcagag 23340
ggcaaagaca taatacacag aaaaatctcg taaggaacgg gaaaaacaaa aagctgtgtc 23400
ttgctagagg aacagtgata caagtgacta atgtgttccc atcagaaaca ctgcaacctg 23460
gacacaaaag aataacatta aagtaataaa cgtaagaaag aagagctcaa ctgagaaggc 23520
tacatccagc aataaaatgc cttgaagttc atccatgttg gaggaatgca cattgtgcac 23580
tcccctaaac aaagaaaccg gaaactgtaa gactttggaa tcagcaggct tatgtaacaa 23640
aagaggtgac cctaaggaat taaggagaag aagaatagaa caagaaggga actttctgca 23700
gcctatataa tgaagaacct agcaattggc aaatgtagat gaaaatgcta catgttttct 23760
tgatcaaacg tttatatctt tttaaatgag agttgacgag ttgaagcaaa atgataccaa 23820
tatatttaac tttaccatat gtagaagtaa aaatttgaac atgtagcata aatcatgtag 23880
ggattaattg gaagtgtacc actgtaagtt tcttacctca tgcacgatag tatgtaatac 23940
taataaaagg ttaatgtgtg ggttcaaagg gatattgcaa atcctagagc aatcacaaag 24000
tttttaactc tgaggtttgt tgtataataa caatatttta tgtattcaaa agagggaagc 24060
caaggaagaa aaaaaagtct ttaaagagct ctggctctta gtacatccag ttgctcattg 24120
aatgagcttc ctggaatgga gggtctggga ctgagactag gccacatgtg tagagccact 24180
agagacacaa tgttggatcc ccatggccca taatacattt cccattttct caggcagcca 24240
caggtcatga atgtgaggat actgagaggt tggagcaacg ttcttgggag gcataaggaa 24300
gagcgaatgc ttcaagatcc ccgcagccca aactcctcag ctgctttgcc tcctaattca 24360
ttgttttttg ctcctccata gctgtccgac ctcttcagat ctcttagtct tcctgccatc 24420
ttcctttatg ccatgggacc cactgttctt tcaactcatc ccccagttct ggagtggctg 24480
tggacagcag aggatagact gagagcagga gagaaggtcc tgcccaggaa cccattctag 24540
agatactgca ttctgcctgg gagcaagttt tccagggcag ctttgagaag tcttgcagaa 24600
acaaacctac ttgaccgaca tgatatggga atgacagaca gtaatactat ttgcacaatg 24660
cttttccatg ggaaaggtag agccttttca ctaggttttg agtacatgga gtgtgagagt 24720
tgacctggaa aggttatcct ccttgatgcc atgttttctc tgaagaacta catgttcgtt 24780
gcaactccca cattagaata tgaagtccta ccgagagaga tacggagact agacagatac 24840
agatgcattt gcatgtgaat acacaatccc acaatacaga cgtcaaaacc cataccagtt 24900
attccagaga gatggattgg gcagaaggca gaaggagaat actctgatcg tttttcggcc 24960
acgtgtgtgt gttatctcag tgtttctaag aagcgtttgc tactttagat tttttattta 25020
aaaaaaatag taataatcta ttaagtatga gagatgtgca gagaggatta gtgatcgaga 25080
gccatttttg ctggtggcaa tcatatggta cttttaatgg gaatattaga aaggcaccgg 25140
taatgacctt gttgcagcac aaaggagaga gtgtggggtg cccctgcatg ttgtcccacc 25200
tcttgtgacg tgtatcgttt tggaatttcc agtggcttga tcatgaacta ctgcaggaat 25260
ccagatgctg tggcagctcc ttattgttat acgagggatc ccggtgtcag gtgggagtac 25320
tgcaacctga cgcaatgctc agacgcagaa gggactgccg tcgcgcctcc gactgttacc 25380
ccggttccaa gcctagaggc tccttccgaa caaggtaagg agtctgtggc cagacatcta 25440
cacgcttcga tgctgggatg aaaagccatg gaaattccca ctgatgcagc cgccttcaat 25500
ggtaaacgga tgctcgagtg ttgcctgagt tctaccatgt aggaggaagc ctccgtgcac 25560
tctctggggg agccagcgga gtgatttctg gtgcaacgtg gttgggcttt gtctttagga 25620
tgggcacaaa ccctccaggg ggatcgactt caaaattcac cttgttgtaa aacgggctac 25680
ctcagtgtcc cagccaaaat ttttattgta acatgctgtc aggtgtgtca ctctttccaa 25740
gccagtaagc ttttccgggg atttcttcaa gtagccagca ttcagagcaa tcttcagcat 25800
tgcagattct gagaaatgtg gctctggagc ctgtcaccct cgagaaacct aagagggctg 25860
cattgattcc atgtggccct gggtctatgg agcagtacat gagctcccag tgctctaagg 25920
ctcttcagcc ctaggctttg aagggagtga tttctcagta ttcttaaacc tctttctgat 25980
gacacttgta cctgtgaggg gtctagagag aaagagtagt agactcctac tttactacaa 26040
ttcaggatgc agggcatgag aggattccct ctctcctcca agggaagaag cttttggcgt 26100
gcacacatcc ctgagaagca aagtgtcttt gtcttcagtc agatacatag gaccgttttc 26160
tgccccatgg cccggaagcc aaaggccttg gctttcatga tcaacggtct agggaaacat 26220
gcaaaatttc catgtctgtc ccaaactctg cccccgacag ccaattacca cctgcagccc 26280
gcattgccaa atgcggtgcc gtttgcatga agattcagta gagtttccta gaaaggtgct 26340
acctcgtgag ctcactttcc aatgaggaat ctgatctgtt gtgtttctct aaggtgtcag 26400
gtgaaatatt tccaagaact tactacagtt ctagaatggg aggaatctgt tgctttggtg 26460
tttgtttgtt ggtcggtttt ctcacatcca tctgcctatg gataaggaaa agagaacggt 26520
cgtaattctc atagactcct ttctggttgt gtcacaaatg gcttcacatg tttctctatg 26580
ctcagagata ctcagcttga tttcccgtgt tttcatttca gcaccgactg agcaaaggcc 26640
tggggtgcag gagtgctacc atggtaatgg acagagttat cgaggcacat actccaccac 26700
tgtcacagga agaacctgcc aagcttggtc atctatgaca ccacactcgc atagtcggac 26760
cccagaatac tacccaaatg cgtatgtctt tgttctttac cataagagaa gaaagggcca 26820
agtgaagttt ctgttacaag agatgtgtct caagctgagt tctccgaact caacttgtga 26880
cagatgcaga tggcgtagca aaatgtctca ggatgattgc cttggagcta agggtctgag 26940
agaagggaaa tgttaagctc cctctccttc ctcctagttc tattgagcag aagggaaatc 27000
tggaggtgag gagatcacat tatgaagaaa gtcagaatga caaaggacca gacacttaga 27060
ttacccttcc acaacaccaa ctaaacgtca atggagactt tccagttgga attccgttat 27120
tctggcttcc acttcctgaa gggaaggttg cgtttgcctt ttctctctgg gttcaagagg 27180
aaagaatagg tgcttattta tggacaggtg aattgatctg tttctatatc tacgtatatt 27240
ccgattgtca gaaaaacact cgttcctaag taccagtggc ctgaagggat acaggttccc 27300
agcaagagaa gatccaagga aggaaggcag atgagagtca gcacagagag ggatgctgaa 27360
aagtaaaagg gatgggtgga tggagagaag cccgggtctg accacccaat ggccaatatt 27420
ttggccacaa gcgactacca gagacatgga aaaatggttt ctacatgtgg gacaacagat 27480
ggtagaggac ctagagaatt gagagagggg caatgatggg ctccactccg cagatgcctt 27540
ggctttcttc ctggataccc ttcctgcact gaatagcaag gagatggagc ccaagcagac 27600
tgtagccatc ttgctgaatg gaggagaggg attggagttt gggatgactg tggtagctga 27660
aatttttcta ggtctgctag aaataagaac tggtttgtgt ggaggaaaag agctctacaa 27720
atacgcatag aagtctcctc cagtcgttgg cctgacatga cgctgcctgt gcacaggaaa 27780
tggttccacg agaaagtgtg gcaaagaaca tttactgaga aacagcaagt acaagagcac 27840
aggaagctca ataaagaaga gagagatcac atagcactct gggatactgg agttcttccc 27900
agctagacca gagagtcctc acggagcaca ttgccaattc agtggagacc ccagaacagc 27960
cgtaatttaa aggtacactt agtatattac tagaataaag tcagctgcag acaacccctt 28020
gcacagctgg aaagcaagtg tccaagcatc aaatcggttt ccaatcaatg aagtgcctgt 28080
gagaggaaat ctcaactctc tttagaagta aacaacaaag tcgattgcct cagctatgcg 28140
gtatccgcag agtgagtcct aaatttaaaa tctgactaca tgtagaaaag cgtttcgtgt 28200
gacccatgac caggaaataa atcgggtaat acaaacaggc tcaggaatga gagaaatgat 28260
tagaattgcg tgaaaatttg acatatcagt atgataactg atttcaaata tttaaaaaaa 28320
caacatgcaa gaaagcagat atcatatcaa gagaaattaa cagtacagaa tagccaaatt 28380
aaattaaaga ggtagtataa aaaaagtatg tcttaattga aaaaaattac tgtatggccg 28440
gctgatcaat ttagacgttt cagaggaaaa cattacccaa cacacaattc tagagaacct 28500
acagaatgag ctacacacac acacacacac acacacacac acactgaaaa cacacccata 28560
ctcacacaca cgcagaaact cacaagttct aacacacaca gacacgcgca cccctgaaga 28620
aacagtgaaa tataaaatta agcgagcctc acagacatgt aggaaaatat gaaaagattt 28680
cctgcatgtg ggaagcaagt cacagtaaag agcaagggag tttataatag aaacaaatac 28740
cagaatcaag gatggctgat aacttttcaa ttacgaagaa cattaaaaaa aatcacagaa 28800
tcgtgaaact caagggatca tatagggaat ttcggaaaaa aaacccaacc tgtatgatgt 28860
acttttgtac atcacagttc gaaggtaaca aggcaaagat gtaataagaa gaaacctgtc 28920
acgagaaact ggaggaaaaa gagctgtgtc ttcctacaag tacactgata caaattgcca 28980
atgtgttcac ctcagaaaca ctggaagcca gataccaggg aatattgtta aaatgataat 29040
caggaacaaa aagagatcaa ccgggaatgc tgaatccagc aataaaatgc cttgaaggtc 29100
atccatgtcg gataaatgca tattgtgcac tgccccaaag aaagaaaccg gaaactgtaa 29160
gaattggaaa tcagcaggct tatgtaacaa gagaggtgac ccgaaggaat taggtagaag 29220
aagaattgaa caagaaagga actttctgca gcccacgtaa tgaagaatcc agcaattggc 29280
aaatgtagat agatgtaaat gcaaaatatt ttcttgatca aatttctata tctttgtaaa 29340
tgagagttga ctacttgaaa caaaatgata gcaagatatt taacttcagc atatgtagag 29400
gtaagaattt gaaatggtag cataaatcac gaagggatta attcgaagtg taccgttgta 29460
agtttcttta cctcatgcac gatggtgtgt catattaata aaagggtact gtgcgggttc 29520
gaagggatat tgcaaatcct agagcaatca caaaggtttg aactctgagg tttttggtat 29580
aataagaata gtccatgcat tcaaaagagg gaagccaagg aagaactaga agtctttcaa 29640
gagctcaggc tcttatacat ccagttgctc attgaaccag cttcctggaa tggagggtct 29700
ggggttgaga ctaggccaca agtctagagt ctctagagag acagtgttgg aaccccatgg 29760
cccataatac atttcccatt ttctcaggca gccagaggtc atgaatgtga ggatactggg 29820
aggttggagc aacgttcttg ggaggcataa ggaagagcga atgcttcaag atccccgcag 29880
cccaaactac tcgcctgctt tgccccctaa tgcatttttc tctgctgctc cgtagctgtc 29940
cgacctcttc agatctctta gtccaccctg ccgtcttcct ttatgccatg ggtcccactg 30000
ttctttcaac tcatccccct ttccctcagt cccggagtag ctgcggccag cagagggtag 30060
actgagagca ggagagaagg acctgcctag gaaccccttc tagagatact gcatcctgcc 30120
tgggagcaag ttttccaggg cagctttgag aagtcttgga gaaacaaacc tactaaacct 30180
gacagacagt aatactattt gcacaatgct tttctgtggg aaaggtagag ccttttcact 30240
acgtattgag tacatagagt gtgagggttg acctggaacg gctatcctcc tggatgacgt 30300
gtgttttctg aagaactaca tgttcgttgc aactcccaca ttagaatatg aagtcctacc 30360
gagagagata cggagactag acagatacag atgcatttgc atgtgaatac acaatcccac 30420
aatacagacg tcaaaaccca taccagttat tccagagaga tggattgggc agaaggcaga 30480
aggagaatac tctgatcgtt tttcggccac gtgtgtgtgt tatctcagtg tttctaagaa 30540
gcgtttgcta ctttagattt tttatttaaa aaaatagtaa taatctatta agtatgagag 30600
atgtgcagag aggattagtg atcgagagcc atttttgctg gtggcaatca tatggtactt 30660
ttaatgggaa tattagaaag gcaccggtaa tgaccttgtt gcagcacaaa ggagagagtg 30720
tggggtgccc ctgcatgttg tcccacctct tgtgacgtgt atcgttttgg aatttccagt 30780
ggcttgatca tgaactactg caggaatcca gatgctgtgg cagctcctta ttgttatacg 30840
agggatcccg gtgtcaggtg ggagtactgc aacctgacgc aatgctcaga cgcagaaggg 30900
actgccgtcg cgcctccgac tgttaccccg gttccaagcc tagaggctcc ttccgaacaa 30960
ggtaaggagt ctgtggccag acatctacac gcttcgatgc tgggatgaaa agccatggaa 31020
attcccactg atgcagccgc cttcaatggt aaacggatgc tcgagtgttg cctgagttct 31080
accatgtagg aggaagcctc cgtgcactct ctgggggagc cagcggagtg atttctggtg 31140
caacgtggtt gggctttgtc tttaggatgg gcacaaaccc tccaggggga tcgacttcaa 31200
aattcacctt gttgtaaaac gggctacctc agtgtcccag ccaaaatttt tattgtaaca 31260
tgctgtcagg tgtgtcactc tttccaagcc agtaagcttt tccggggatt tcttcaagta 31320
gccagcattc agagcaatct tcagcattgc agattctgag aaatgtggct ctggagcctg 31380
tcaccctcga gaaacctaag agggctgcat tgattccatg tggccctggg tctatggagc 31440
agtacatgag ctcccagtgc tctaaggctc ttcagcccta ggctttgaag ggagtgattt 31500
ctcagtattc ttaaacctct ttctgatgac acttgtacct gtgaggggtc tagagagaaa 31560
gagtagtaga ctcctacttt actacaattc aggatgcagg gcatgagagg attccctctc 31620
tcctccaagg gaagaagctt ttggcgtgca cacatccctg agaagcaaag tgtctttgtc 31680
ttcagtcaga tacataggac cgttttctgc cccatggccc ggaagccaaa ggccttggct 31740
ttcatgatca acggtctagg gaaacatgca aaatttccat gtctgtccca aactctgccc 31800
ccgacagcca attaccacct gcagcccgca ttgccaaatg cggtgccgtt tgcatgaaga 31860
ttcagtagag tttcctagaa aggtgctacc tcgtgagctc actttccaat gaggaatctg 31920
atctgttgtg tttctctaag gtgtcaggtg aaatatttcc aagaacttac tacagttcta 31980
gaatgggagg aatctgttgc tttggtgttt gtttgttggt cggttttctc acatccatct 32040
gcctatggat aaggaaaaga gaacggtcgt aattctcata gactcctttc tggttgtgtc 32100
acaaatggct tcacatgttt ctctatgctc agagatactc agcttgattt cccgtgtttt 32160
catttcagca ccgactgagc aaaggcctgg ggtgcaggag tgctaccatg gtaatggaca 32220
gagttatcga ggcacatact ccaccactgt cacaggaaga acctgccaag cttggtcatc 32280
tatgacacca cactcgcata gtcggacccc agaatactac ccaaatgcgt atgtctttgt 32340
tctttaccat aagagaagaa agggccaagt gaagtttctg ttacaagaga tgtgtctcaa 32400
gctgagttct ccgaactcaa cttgtgacag atgcagatgg cgtagcaaaa tgtctcagga 32460
tgattgcctt ggagctaagg gtctgagaga agggaaatgt taagctccct ctccttcctc 32520
ctagttctat tgagcagaag ggaaatctgg aggtgaggag atcacattat gaagaaagtc 32580
agaatgacaa aggaccagac acttagatta cccttccaca acaccaacta aacgtcaatg 32640
gagactttcc agttggaatt ccgttattct ggcttccact tcctgaaggg aaggttgcgt 32700
ttgccttttc tctctgggtt caagaggaaa gaataggtgc ttatttatgg acaggtgaat 32760
tgatctgttt ctatatctac gtatattccg attgtcagaa aaacactcgt tcctaagtac 32820
cagtggcctg aagggataca ggttcccagc aagagaagat ccaaggaagg aaggcagatg 32880
agagtcagca cagagaggga tgctgaaaag taaaagggat gggtggatgg agagaagccc 32940
gggtctgacc acccaatggc caatattttg gccacaagcg actaccagag acatggaaaa 33000
atggtttcta catgtgggac aacagatggt agaggaccta gagaattgag agaggggcaa 33060
tgatgggctc cactccgcag atgccttggc tttcttcctg gatacccttc ctgcactgaa 33120
tagcaaggag atggagccca agcagactgt agccatcttg ctgaatggag gagagggatt 33180
ggagtttggg atgactgtgg tagctgaaat ttttctaggt ctgctagaaa taagaactgg 33240
tttgtggagg aaaagagctc tacaaatacg catagaagtc tcctccagtc gttggcctga 33300
catgacgctg cctgtgcaca ggaaatggtt ccacgagaaa gtgtggcaaa gaacatttac 33360
tgagaaacag caagtacaag agcacaggaa gctcaataaa gaagagagag atcacatagc 33420
actctgggat actggagttc ttcccagcta gaccagagag tcctcacgga gcacattgcc 33480
aattcagtgg agaccccaga acagccgtaa tttaaaggta cacttagtat attactagaa 33540
taaagtcagc tgcagacaac cccttgcaca gctggaaagc aagtgtccaa gcatcaaatc 33600
ggtttccaat caatgaagtg cctgtgagag gaaatctcaa ctctctttag aagtaaacaa 33660
caaagtcgat tgcctcagct atgcggtatc cgcagagtga gtcctaaatt taaaatctga 33720
ctacatgtag aaaagcgttt cgtgtgaccc atgaccagga aataaatcgg gtaatacaaa 33780
caggctcagg aatgagagaa atgattagaa ttgcgtgaaa atttgacata tcagtatgat 33840
aactgatttc aaatatttaa aaaaacaaca tgcaagaaag cagatatcat atcaagagaa 33900
attaacagta cagaatagcc aaattaaatt aaagagctag tataaaaaaa gtatgtctta 33960
attgaaaaaa attactgtat ggccggctga tcaatttaga cgtttcagag gaaaacatta 34020
cccaacacac aattctagag aacctacaga atgagctaca cacacacaca cacacacaca 34080
cacaaactga aaacacaccc atactcacac acacgcagaa actcacaagt tctaacacac 34140
acagacacgc gcacccctga agaaacagtg aaatataaaa ttaagcgagc ctcacagaca 34200
tgtaggaaaa tatgaaaaga tttcctgcat gtgggaagca agtcacagta aagagcaagg 34260
gagtttggaa tagaaacaaa taccggaatc aaggatggct gataactttt caattacgaa 34320
gaacattaaa aaaaatcaca gaatcgtgaa actcaaggga tcacataggg aatttcggaa 34380
aaaaaaccca acctgtatga tgtacttttg tacatcacag ttcgaaggta acaaggcaaa 34440
gatataataa gaagaaacct gtcacgagaa actggaggaa aaagagctgt gtcttcctac 34500
aagtacactg atacaaattg ccaatgtgtt cacctcagaa acactggaag ccagatacca 34560
gggaatattg ttaaaatgat aatcaggaac aaaaagagat caaccgggaa tgctgaatcc 34620
agcaataaaa tgccttgaag atcatccatg tcggataaat gcatattgtg cactgcccca 34680
aagaaagaaa ccggaaactg taagaattgg aaatcagcag gcttatgtaa caagagaggt 34740
gacccgaagg aattaggtag aagaagaatt gaacaagaaa ggaactttct gcagcccacg 34800
taatgaagaa tccagcaatt ggcaaatgta gatagatgta aatgcaaaat attttcttga 34860
tcaaatttct atatctttgt aaatgagagt tgactacttg aaacaaaatg atagcaagat 34920
atttaacttc agcatatgta gaggtaagaa tttgaaatgg tagcataaat cacgaaggga 34980
ttaattcgaa gtgtaccgtt gtaagtttct ttacctcatg cacgatggtg tgtcatatta 35040
ataaaagggt actgtgcggg ttcgaaggga tattgcaaat cctagagcaa tcacaaaggt 35100
ttgaactctg aggtttttgg tataataaga atagtccatg cattcaaaag agggaagcca 35160
aggaagaact agaagtcttt caagagctca ggctcttata catccagttg ctcattgaac 35220
cagcttcctg gaatggaggg tctggggttg agactaggcc acaagtctag agtctctaga 35280
gagacagtgt tggaacccca tggcccataa tacatttccc attttctcag gcagccagag 35340
gtcatgaatg tgaggatact gggaggttgg agcaacgttc ttgggaggca taaggaagag 35400
cgaatgcttc aagatccccg cagcccaaac tactcgcctg ctttgccccc taatgcattt 35460
ttctctgctg ctccgtagct gtccgacctc ttcagatctc ttagtccacc ctgccgtctt 35520
cctttatgcc atgggtccca ctgttctttc aactcatccc cctttccctc agtcccggag 35580
tagctgcggc cagcagaggg tagactgaga gcaggagaga aggacctgcc taggaacccc 35640
ttctagagat actgcatcct gcctgggagc aagttttcca gggcagcttt gagaagtctt 35700
ggagaaacaa acctactaaa cctgacagac agtaatacta tttgcacaat gcttttctgt 35760
gggaaaggta gagccttttc actacgtatt gagtacatag agtgtgaggg ttgacctgga 35820
acggctatcc tcctggatga cgtgtgtttt ctgaagaact acatgttcgt tgcaactccc 35880
acattagaat atgaagtcct accgagagag atacggagac tagacagata cagatgcatt 35940
tgcatgtgaa tacacaatcc cacaatacag acgtcaaaac ccataccagt tattccagag 36000
agatggattg ggtaggaggc agaaggagaa tactctgatc gtttttcggc cacgtgtgtg 36060
tgttatctca gtgtttctaa gaagcgtttg ctactttaga ttttttattt aaaaaaaata 36120
gtaataatct attaagtatg agagatgtgc agagaggatt agtgatcgag agccattttt 36180
gctggtggca atcatatggt acttttaatg ggaatattag aaaggcaccg gtaatgacct 36240
tgttgcagca caaaggagag agtgtggggt gcccctgcat gttgtcccac ctcttgtgac 36300
gtgtatcgtt ttggaatttc cagtggcttg atcatgaact actgcaggaa tccagatgct 36360
gtggcagctc cttattgtta tacgagggat cccggtgtca ggtgggagta ctgcaacctg 36420
acgcaatgct cagacgcaga agggactgcc gtcgcgcctc cgactgttac cccggttcca 36480
agcctagagg ctccttccga acaaggtaag gagtctgtgg ccagacatct acacgcttcg 36540
atgctgggat gaaaagccat ggaaattccc actgatgcag ccgccttcaa tggtaaacgg 36600
atgctcgagt gttgccggag ttctgccatg ttgggggaag cctccgtgta ctctctgggg 36660
gagccagcgg agtgatttct ggtgcaactt gggtgggctt tgtctttaga atgggcacaa 36720
accttccagg gtgatgggct tcacaactca cctccttcta aaatgggcta tctcagtgtc 36780
ttagccaaaa tttttattgt aacgtgctgt caggtgtgtg attctttctg tcgcagtaag 36840
cttttctggg gatttcttca agtagccagc agtcagtgca atcttcagca ttgcagattt 36900
caaaaaatgt ggctctggag cctgtcatcc tcgagaaacc taacagggct gcattaattc 36960
catatggtcc tgggtctatg gagcagtata tgagctccca atgctctaag gctcttcagt 37020
cctaggcttt gaagggagtg atttctcagt gttcttaaac ctctttctga tggcacttgt 37080
acctgtgagg ggtctagaga gaaaggttag tagacttctc ctttactgca attcaggatg 37140
cagggcatga gaagattccc tccctcctcc aagggaagaa ggttttggcg tgcacacatc 37200
cttgagaagc aaagtgtctt tgccttcagt cagatatata ggatcgtttt ctgccccatg 37260
gcctggaagc cagaggcctt ggctttcatg atcaacgatc tagggaaaca tgcaaaattt 37320
ccatgtcttt cccctcctct gccctcgaca gccaattacc acctgcatcc tgcattgcca 37380
aatgcagtgc cctttgtatg aacattcagt agagtttcat agaaaggtgc tacttcgtga 37440
gcgcactttg cagtgagaag gagtctgttc tgttctgttt ttctaaggat ttcaggtgaa 37500
atatttccta gaacttacta cagttctaga ttggtaggaa tctgtaggtt tgctgtatgt 37560
tttttggttg gttttctccc atccatctgc ctacaggtaa gggaaagata acgttcgtaa 37620
ttctcataga ctcctttctg gttgtgtcat aaatggcttc acatatttcg ttattctcag 37680
agatactcag tttatttctt gtgttttcat ttcagcaccg actgagcaga ggcctggggt 37740
gcaggagtgc taccacggta atggacagag ttatcgaggc acatactcca ccactgtcac 37800
tggaagaacc tgccaagctt ggtcatctat gacaccacac tcgcatagtc ggaccccaga 37860
atactaccca aatgcgtatg tctttgttct ttaccataag agaagaaagg gccaagtgaa 37920
gtttctgtta caagagatgt gtctcaagct gagttctccg aactcaactt gtgacagatg 37980
cagatggcgt agcaaaatgt ctcaggatga ttgccttgga gctaagggtc tgagagaagg 38040
gaaatgttaa gctccctctc cttcctccta gttctattga gcagaaggga aatctggagg 38100
tgaggagatc acattatgaa gaaagtcaga atgacaaagg accagacact tagattaccc 38160
ttccacaaca ccaactaaac gtcaatggag actttccagt tggaattccg ttattctggc 38220
ttccacttcc tgaagggaag gttgcgtttg ccttttctct ctgggttcaa gaggaaagaa 38280
taggtgctta tttatggaca ggtgaattga tctgtttcta tatctacgta tattccgatt 38340
gtcagaaaaa cactcgttcc taagtaccag tggcctgaag ggatacaggt tcccagcaag 38400
agaagatcca aggaaggaag gcagatgaga gccagcacag agagggatgc tgaaaagtaa 38460
aagggatggg tggatggaga gaagcccggg tctgaccacc caatggccaa tattttggcc 38520
acaagcgact accagagaca tggaaaaatg gtttctacat gtgggacaac agatggtaga 38580
ggacctagag aattgagaga ggggcaatga tgggctccac tccgcagatg ccttggcttt 38640
cttcctggat acccttcctg cactgaatag caaggagatg gagcccaagc agactgtagc 38700
catcttgctg aatggaggag agggattgga gtttgggatg actgtggtag ctgaaatttt 38760
tctaggtctg ctagaaataa gaactggttt gtggaggaaa agagctctac aaatacgcat 38820
agaagtctcc tccagtcgtt ggcctgacat gacgctgcct gtgcacagga aatggttcca 38880
cgagaaagtg tggcaaagaa catttactga gaaacagcaa gtacaagagc acaggaagct 38940
caataaagaa gagagagatc acatagcact ctgggatact ggagttcttc ccagctagac 39000
cagagagtcc tcacggagca cattgccaat tcagtggaga ccccagaaca gccgtaattt 39060
aaaggtacac ttagtatatt actagaataa agtcagctgc agacaacccc ttgcacagct 39120
ggaaagcaag tgtccaagca tcaaatcggt ttccaatcaa tgaagtgcct gtgggaggaa 39180
atctcaactc tctttagaag taaacaacaa agtcgattgc ctcagctatg cggtatccgc 39240
agagtgagtc ctaaatttaa aatctgacta catgtagaaa agcgtttcgt gtgacccatg 39300
accaggaaat aaatcgggta atacaaacag gctcaggaat gagagaaatg attagaattg 39360
cgtgaaaatt tgacatatca gtatgataac tgatttcaaa tatttaaaaa aacaacatgc 39420
aagaaagcag atatcatatc aagagaaatt aacagtacag aatagccaaa ttaaattaaa 39480
gagctagtat aaaaaaagta tgtcttaatt gaaaaaaatt actgtatggc cggctgatca 39540
aattagacgt ttcagaggaa aacattaccc aacacacaat tctagagaac ctacagaatg 39600
agctacacac acacacacac acacacacac acacactgaa aacacaccca tactcacaca 39660
cacgcagaaa ctcacaagtt ctaacacaca cagacacgcg cacccctgaa gaaacagtga 39720
aatataaaat taagcgagcc tcacagacat gtaggaaaat atgaaaagat ttcctgcatg 39780
tgggaagcaa gtcacagtaa agagcaaggg agtttggaat agaaacaaat accggaatca 39840
aggatggctg ataacttttc aattacgaag aacattaaaa aaaatcacag aatcgtgaaa 39900
ctcaagggat catataggga atttcggaaa aaaaacccaa cctgtatgat gtacttttgt 39960
acatcacagt tcgaaggtaa caaggcaaag atataataag aagaaacctg tcacgagaaa 40020
ctggaggaaa aagagctgtg tcttcctaca agtacactga tacaaattgc caatgtgttc 40080
acctcagaaa cactggaagc cagataccag ggaatattgt taaaatgata atcaggaaca 40140
aaaagagatc aaccgggaat gctgaatcca gcaataaaat gccttgaaga tcatccatgt 40200
cggataaatg catattgtgc actgccccaa agaaagaaac cggaaactgt cagaattgga 40260
aatcagcagg cttatgtaac aagagaggtg acccgaagga attaggtaga agaagaattg 40320
aacaagaaag gaactttctg cagcccacgt aatgaagaat ccagcaattg gcaaatgtag 40380
atagatgtaa atgcaaaata ttttcttgat caaatttcta tatctttgta aatgagagtt 40440
gactacttga aacaaaatga tagcaagata tttaacttca gcatatgtag aggtaagaat 40500
ttgaaatggt agcataaatc acgaagggat taattcgaag tgtaccgttg taagtttctt 40560
tacctcatgc acgatggtgt gtcatattaa taaaagggta ctgtgcgggt tcgaagggat 40620
attgcaaatc ctagagcaat cacaaaggtt tgaactctga ggtttttggt ataataagaa 40680
tagtccatgc attcaaaaga gggaagccaa ggaagaacta gaagtctttc aagagctcag 40740
gctcttatac atccagttgc tcattgaacc agcttcctgg aatggagggt ctggggttga 40800
gactaggcca caagtctaga gtctctagag agacagtgtt ggaaccccat ggcccataat 40860
acatttccca ttttctcagg cagccagagg tcatgaatgt gaggatactg ggaggttgga 40920
gcaacgttct tgggaggcat aaggaagagc gaatgcttca agatccccgc agcccaaact 40980
actcgcctgc tttgccccct aatgcatttt tctctgctgc tccgtagctg tccgacctct 41040
tcagatctct tagtccaccc tgccgtcttc ctttatgcca tgggtcccat tgttctttca 41100
actcatcccc ctttccctca gtcccggagt agctgcggcc agcagagggt agactgagag 41160
caggagagaa ggacctgcct aggaacccct tctagagata ctgcatcctg cctgggagca 41220
agttttccag ggcagctttg agaagtcttg gagaaacaaa cctactaaac ctgacagaca 41280
gtaatactat ttgcacaatg cttttctgtg ggaaaggtag agccttttca ctacgtattg 41340
agtacataga gtgtgagggt tgacctggaa cggctatcct cctggatgac gtgcgttttc 41400
tgaagaacta catgttcgtt gcaactccca cattagaata tgaagtccta ccgagagaga 41460
tacggagact agacagatac agatgcattt gcatgtgaat acacaatccc acaatacaga 41520
cgtcaaaacc cataccagtt attccagaga gatggattgg gcagaaggca gaaggagaat 41580
actctgatcg tttttcggcc acgtgtgtgt gttatctcag tgtttctaag aagcgtttgc 41640
tactttagat tttttattta aaaaaaatag taataatcta ttaagtatga gagatgtgca 41700
gagaggatta gtgatcgaga gccatttttg ctggtggcaa tcatatggta cttttaatgg 41760
gaatattaga aaggcaccgg taatgacctt gttgcagcac aaaggagaga gtgtggggtg 41820
cccctgcatg ttgtcccacc tcttgtgacg tgtatcgttt tggaatttcc agtggcttga 41880
tcatgaacta ctgcaggaat ccagatgctg tggcagctcc ttattgttat acgagggatc 41940
ccggtgtcag gtgggagtac tgcaacctga cgcaatgctc agacgcagaa gggactgccg 42000
tcgcgcctcc gactgttacc ccggttccaa gcctagaggc tccttccgaa caaggtaagg 42060
agtctgtggc cagacatcta cacgcttcga tgctgggatg aaaagccatg gaaattccca 42120
ctgatgcagc cgccttcaat ggtaaacgga tgctcgagtg ttgcctgagt tctaccatgt 42180
aggaggaagc ctccgtgcac tctctggggg agccagcgga gtgatttctg gtgcaacgtg 42240
gttgggcttt gtctttagga tgggcacaaa ccctccaggg ggatcgactt caaaattcac 42300
cttgttgtaa aacgggctac ctcagtgtcc cagccaaaat ttttattgta acatgctgtc 42360
aggtgtgtca ctctttccaa gccagtaagc ttttccgggg atttcttcaa gtagccagca 42420
ttcagagcaa tcttcagcat tgcagattct gagaaatgtg gctctggagc ctgtcaccct 42480
cgagaaacct aagagggctg cattgattcc atgtggccct gggtctatgg agcagtacat 42540
gagctcccag tgctctaagg ctcttcagcc ctaggctttg aagggagtga tttctcagta 42600
ttcttaaacc tctttctgat gacacttgta cctgtgaggg gtctagagag aaagagtagt 42660
agactcctac tttactacaa ttcaggatgc agggcatgag aggattccct ctctcctcca 42720
agggaagaag cttttggcgt gcacacatcc ctgagaagca aagtgtcttt gtcttcagtc 42780
agatacatag gaccgttttc tgccccatgg cccggaagcc aaaggccttg gctttcatga 42840
tcaacggtct agggaaacat gcaaaatttc catgtctgtc ccaaactctg cccccgacag 42900
ccaattacca cctgcagccc gcattgccaa atgcggtgcc gtttgcatga agattcagta 42960
gagtttccta gaaaggtgct acctcgtgag ctcactttcc aatgaggaat ctgatctgtt 43020
gtgtttctct aaggtgtcag gtgaaatatt tccaagaact tactacagtt ctagaatggg 43080
aggaatctgt tgctttggtg tttgtttgtt ggtcggtttt ctcacatcca tctgcctatg 43140
gataaggaaa agagaacggt cgtaattctc atagactcct ttctggttgt gtcacaaatg 43200
gcttcacatg tttctctatg ctcagagata ctcagcttga tttcccgtgt tttcatttca 43260
gcaccgactg agcaaaggcc tggggtgcag gagtgctacc atggtaatgg acagagttat 43320
cgaggcacat actccaccac tgtcacagga agaacctgcc aagcttggtc atctatgaca 43380
ccacactcgc atagtcggac cccagaatac tacccaaatg cgtatgtctt tgttctttac 43440
cataagagaa gaaagggcca agtgaagttt ctgttacaag agatgtgtct caagctgagt 43500
tctccgaact caacttgtga cagatgcaga tggcgtagca aaatgtctca ggatgattgc 43560
cttggagcta agggtctgag agaagggaaa tgttaagctc cctctccttc ctcctagttc 43620
tattgagcag aagggaaatc tggaggtgag gagatcacat tatgaagaaa gtcagaatga 43680
caaaggacca gacacttaga ttacccttcc acaacaccaa ctaaacgtca atggagactt 43740
tccagttgga attccgttat tctggcttcc acttcctgaa gggaaggttg cgtttgcctt 43800
ttctctctgg gttcaagagg aaagaatagg tgcttattta tggacaggtg aattgatctg 43860
tttctatatc tacgtatatt ccgattgtca gaaaaacact cgttcctaag taccagtggc 43920
ctgaagggat acaggttccc agcaagagaa gatccaagga aggaaggcag atgagagtca 43980
gcacagagag ggatgctgaa aagtaaaagg gatgggtgga tggagagaag cccgggtctg 44040
accacccaat ggccaatatt ttggccacaa gcgactacca gagacatgga aaaatggttt 44100
ctacatgtgg gacaacagat ggtagaggac ctagagaatt gagagagggg caatgatggg 44160
ctccactccg cagatgcctt ggctttcttc ctggataccc ttcctgcact gaatagcaag 44220
gagatggagc ccaagcagac tgtagccatc ttgctgaatg gaggagaggg attggagttt 44280
gggatgactg tggtagctga aatttttcta ggtctgctag aaataagaac tggtttgtgg 44340
aggaaaagag ctctacaaat acgcatagaa gtctcctcca gtcgttggcc tgacatgacg 44400
ctgcctgtgc acaggaaatg gttccacgag aaagtgtggc aaagaacatt tactgagaaa 44460
cagcaagtac aagagcacag gaagctcaat aaagaagaga gagatcacat agcactctgg 44520
gatactggag ttcttcccag ctagaccaga gagtcctcac ggagcacatt gccaattcag 44580
tggagacccc agaacagccg taatttaaag gtacacttag tatattacta gaataaagtc 44640
agctgcagac aaccccttgc acagctggaa agcaagtgtc caagcatcaa atcggtttcc 44700
aatcaatgaa gtgcctgtga gaggaaatct caactctctt tagaagtaaa caacaaagtc 44760
gattgcctca gctatgcggt atccgcagag tgagtcctaa atttaaaatc tgactacatg 44820
tagaaaagcg tttcgtgtga cccatgacca ggaaataaat cgggtaatac aaacaggctc 44880
aggaatgaga gaaatgatta gaattgcgtg aaaatttgaa atatcagtat gataactgat 44940
ttcaaatatt taaaaaaaca acatgcaaga aagcagatat catatcaaga gaaattaaca 45000
gtacagaata gccaaattaa attaaagagc tagtataaaa aaagtatgtc ttaattgaaa 45060
aaaattactg tatggccggc tgatcaattt agacgtttca gaggaaaaca ttacccaaca 45120
cacaattcta gagaacctac agaatgagct acacacacac acacacacac acacacaaac 45180
tgaaaacaca cccatactca cacacacgca gaaactcaca agttctaaca cacacagaca 45240
cgcgcacccc tgaagaaaca gtgaaatata aaattaagcg agcctcacag acatgtagga 45300
aaatatgaaa agatttcctg catgtgggaa gcaagtcaca gtaaagagca agggagtttg 45360
gaatagaaac aaataccaga atcaaggatg gctgataact tttcaattac gaagaacatt 45420
aaaaaaaatc acagaatcgt gaaactcaag ggatcacata gggaatttcg gaaaaaaaac 45480
ccaacctgta tgatgtactt ttgtacatca cagttcgaag gtaacaaggc aaagatataa 45540
taagaagaaa cctgtcacga gaaactggag gaaaaagagc tgtgtcttcc tacaagtaca 45600
ctgatacaaa ttgccaatgt gttcacctca gaaacactgg aagccagata ccagggaata 45660
ttgttaaaat gataatcagg aacaaaaaga gatcaaccgg gaatgctgaa tccagcaata 45720
aaatgccttg aagatcatcc atgtcggata aatgcatatt gtgcactgcc ccaaagaaag 45780
aaaccggaaa ctgtaagaat tggaaatcag caggcttatg taacaagaga ggtgacccga 45840
aggaattagg tagaagaaga attgaacaag aaaggaactt tctgcagccc acgtaatgaa 45900
gaatccagca attggcaaat gtagatagat gtaaatgcaa aatattttct tgatcaaatt 45960
tctatatctt tgtaaatgag agttgactac ttgaaacaaa atgatagcaa gatatttaac 46020
ttcagcatat gtagaggtaa gaatttgaaa tggtagcata aatcacgaag ggattaattc 46080
gaagtgtacc gttgtaagtt tctttacctc atgcacgatg gtgtgtcata ttaataaaag 46140
ggtactgtgc gggttcgaag ggatattgca aatcctagag caatcacaaa ggtttgaact 46200
ctgaggtttt tggtataata agaatagtcc atgcattcaa aagagggaag ccaaggaaga 46260
actagaagtc tttcaagagc tcaggctctt atacatccag ttgctcattg aaccagcttc 46320
ctggaatgga gggtctgggg ttgagactag gccacaagtc tagagtctct agagagacag 46380
tgttggaacc ccatggccca taatacattt cccattttct caggcagcca gaggtcatga 46440
atgtgaggat actgggaggt tggagcaacg ttcttgggag gcataaggaa gagcgaatgc 46500
ttcaagatcc ccgcagccca aactactcgc ctgctttgcc ccctaatgca tttttctctg 46560
ctgctccgta gctgtccgac ctcttcagat ctcttagtcc accctgccgt cttcctttat 46620
gccatgggtc ccactgttct ttcaactcat ccccctttcc ctcagtcccg gagtagctgc 46680
ggccagcaga gggtagactg agagcaggag agaaggacct gcctaggaac cccttctaga 46740
gatactgcat cctgcctggg agcaagtttt ccagggcagc tttgagaagt cttggagaaa 46800
caaacctact aaacctgaca gacagtaata ctatttgcac aatgcttttc tgtgggaaag 46860
gtagagcctt ttcactacgt attgagtaca tagagtgtga gggttgacct ggaacggcta 46920
tcctcctgga tgacgtgtgt tttctgaaga actacatgtt cgttgcaact cccacattag 46980
aatatgaagt cctaccgaga gagatacgga gactagacag atacagatgc atttgcatgt 47040
gaatacacaa tcccacaata cagacgtcaa aacccatacc agttattcca gagagatgga 47100
ttgggcagaa ggcagaagga gaatactctg atcgtttttc ggccacgtgt gtgtgttatc 47160
tcagtgtttc taagaagcgt ttgctacttt agatttttta tttaaaaaaa atagtaataa 47220
tctattaagt atgagagatg tgcagagagg attagtgatc gagagccatt tttgctggtg 47280
gcaatcatat ggtactttta atgggaatat tagaaaggca ccggtaatga ccttgttgca 47340
gcacaaagga gagagtgtgg ggtgcccctg catgttgtcc cacctcttgt gacgtgtatc 47400
gttttggaat ttccagtggc ttgatcatga actactgcag gaatccagat gctgtggcag 47460
ctccttattg ttatacgagg gatcccggtg tcaggtggga gtactgcaac ctgacgcaat 47520
gctcagacgc agaagggact gccgtcgcgc ctccgactgt taccccggtt ccaagcctag 47580
aggctccttc cgaacaaggt aaggagtctg tggccagaca tctacacgct tcgatgctgg 47640
gatgaaaagc catggaaatt cccactgatg cagccgcctt caatggtaaa cggatgctcg 47700
agtgttgcct gagttctacc atgtaggagg aagcctccgt gcactctctg ggggagccag 47760
cggagtgatt tctggtgcaa cgtggttggg ctttgtcttt aggatgggca caaaccctcc 47820
agggggatcg acttcaaaat tcaccttgtt gtaaaacggg ctacctcagt gtcccagcca 47880
aaatttttat tgtaacatgc tgtcaggtgt gtcactcttt ccaagccagt aagcttttcc 47940
ggggatttct tcaagtagcc agcattcaga gcaatcttca gcattgcaga ttctgagaaa 48000
tgtggctctg gagcctgtca ccctcgagaa acctaagagg gctgcattga ttccatgtgg 48060
ccctgggtct atggagcagt acatgagctc ccagtgctct aaggctcttc agccctaggc 48120
tttgaaggga gtgatttctc agtattctta aacctctttc tgatgacact tgtacctgtg 48180
aggggtctag agagaaagag tagtagactc ctactttact acaattcagg atgcagggca 48240
tgagaggatt ccctctctcc tccaagggaa gaagcttttg gcgtgcacac atccctgaga 48300
agcaaagtgt ctttgtcttc agtcagatac ataggaccgt tttctgcccc atggcccgga 48360
agccaaaggc cttggctttc atgatcaacg gtctagggaa acatgcaaaa tttccatgtc 48420
tgtcccaaac tcttcccccg acagccaatt accacctgca gcccgcattg ccaaatgcgg 48480
tgccgtttgc atgaagattc agtagagttt cctagaaagg tgctacctcg tgagctcact 48540
ttccaatgag gaatctgatc tgttgtgttt ctctaaggtg tcaggtgaaa tatttccaag 48600
aacttactac agttctagaa tgggaggaat ctgttgcttt ggtgtttgtt tgttggtcgg 48660
ttttctcaca tccatctgcc tatggataag gaaaagagaa cggtcgtaat tctcatagac 48720
tcctttctgg ttgtgtcaca aatggcttca catgtttctc tatgctcaga gatactcagc 48780
ttgatttccc gtgttttcat ttcagcaccg actgagcaaa ggcctggggt gcaggagtgc 48840
taccatggta atggacagag ttatcgaggc acatactcca ccactgtcac aggaagaacc 48900
tgccaagctt ggtcatctat gacaccacac tcgcatagtc ggaccccaga atactaccca 48960
aatgcgtatg tctttgttct ttaccataag agaagaaagg gccaagtgaa gtttctgtta 49020
caagagatgt gtctcaagct gagttctccg aactcaactt gtgacagatg cagatggcgt 49080
agcaaaatgt ctcaggatga ttgccttgga gctaagggtc tgagagaagg gaaatgttaa 49140
gctccctctc cttcctccta gttctattga gcagaaggga aatctggagg tgagaagatc 49200
acattatgaa gaaagtcaga atgacaaagg accagacact tagattaccc ttccacaaca 49260
ccaactaaac gtcaatggag actttccagt tggaattccg ttattctggc ttccacttcc 49320
tgaagggaag gttgcgtttg ccttttctct ctgggttcaa gaggaaagaa taggtgctta 49380
tttatggaca ggtgaattga tctgtttcta tatctacgta tattccgatt gtcagaaaaa 49440
cactcgttcc taagtaccag tggcctgaag ggatacaggt tcccagcaag agaagatcca 49500
aggaaggaag gcagatgaga gtcagcacag agagggatgc tgaaaagtaa aagggatggg 49560
tggatggaga gaagcccggg tctgaccacc caatggccaa tattttggcc acaagcgact 49620
accagagaca tggaaaaatg gtttctacat gtgggacaac agatggtaga ggacctagag 49680
aattgagaga ggggcaatga tgggctccac tccgcagatg ccttggcttt cttcctggat 49740
acccttcctg cactgaatag caaggagatg gagcccaagc agactgtagc catcttgctg 49800
aatggaggag agggattgga gtttgggatg actgtggtag ctgaaatttt tctaggtctg 49860
ctagaaataa gaactggttt gtgtggagga aaagagctct acaaatacgc atagaagtct 49920
cctccagtcg ttggcctgac atgacgctgc ctgtgcacag gaaatggttc cacgagaaag 49980
tgtggcaaag aacatttact gagaaacagc aagtacaaga gcacaggaag ctcaataaag 50040
aagagagaga tcacatagca ctctgggata ctggagttct tcccagctag accagagagt 50100
cctcacggag cacattgcca attcagtgga gaccccagaa cagccgtaat ttaaaggtac 50160
acttagtata ttactagaat aaagtcagct gcagacaacc ccttgcacag ctggaaagca 50220
agtgtccaag catcaaatcg gtttccaatc aatgaagtgc ctgtgagagg aaatctcaac 50280
tctctttaga agtaaacaac aaagtcgatt gcctcagcta tgcggtatcc gcagagtgag 50340
tcctaaattt aaaatctgac tacatgtaga aaagcgtttc gtgtgaccca tgaccaggaa 50400
ataaatcggg taatacaaac aggctcagga atgagagaaa tgattagaat tgcgtgaaaa 50460
tttgacatat cagtatgata actgatttca aatatttaaa aaaacaacat gcaagaaagc 50520
agatatcata tcaagagaaa ttaacagtac agaatagcca aattaaatta aagaggtagt 50580
ataaaaaaag tatgtcttaa ttgaaaaaaa ttactgtatg gccggctgat caatttagac 50640
gtttcagagg aaaacattac ccaacacaca attctagaga acctacagaa tgagctacac 50700
acacacacac acacacacac acaaactgaa aacacaccca tactcacaca cacgcagaaa 50760
ctcacaagtt ctaacacaca cagacacgcg cacccctgaa gaaacagtga aatataaaat 50820
taagcgagcc tcacagacat gtaggaaaat atgaaaagat ttcctgcatg tgggaagcaa 50880
gtcacagtaa agagcaaggg agtttggaat agaaacaaat accggaatca aggatggctg 50940
ataacttttc aattacgaag aacattaaaa aaaatcacag aatcgtgaaa ctcaagggat 51000
cacataggga atttcggaaa aaaaacccaa cctgtatgat gtacttttgt acatcacagt 51060
tcgaaggtaa caaggcaaag atataataag aagaaacctg tcacgagaaa ctggaggaaa 51120
aagagctgtg tcttcctaca agtacactga tacaaattgc caatgtgttc acctcagaaa 51180
cactggaagc cagataccag ggaatattgt taaaatgata atcaggaaca aaaagagatc 51240
aaccgggaat gctgaatcca gcaataaaat gccttgaagg tcatccatgt cggataaatg 51300
catattgtgc actgccccaa agaaagaaac cggaaactgt aagaattgga aatcagcagg 51360
cttatgtaac aagagaggtg acccgaagga attaggtaga agaagaattg aacaagaaag 51420
gaactttctg cagcccacgt aatgaagaat ccagcaattg gcaaatgtag atagatgtaa 51480
atgcaaaata ttttcttgat caaatttcta tatctttgta aatgagagtt gactacttga 51540
aacaaaatga tagcaagata tttaacttca gcatatgtag aggtaagaat ttgaaatggt 51600
agcataaatc acgaagggat taattcgaag tgtaccgttg taagtttctt tacctcatgc 51660
acgatggtgt gtcatattaa taaaagggta ctgtgcgggt tcgaagggat attgcaaatc 51720
ctagagcaat cacaaaggtt tgaactctga ggtttttggt ataataagaa tagtccatgc 51780
attcaaaaga gggaagccaa ggaagaacta gaagtctttc aagagctcag gctcttatac 51840
atccagttgc tcattgaacc agcttcctgg aatggagggt ctggggttga gactaggcca 51900
caagtctaga gtctctagag agacagtgtt ggaaccccat ggcccataat acatttccca 51960
ttttctcagg cagccagagg tcatgaatgt gaggatactg ggaggttgga gcaacgttct 52020
tgggaggcat aaggaagagc gaatgcttca agatccccgc agcccaaact actcgcctgc 52080
tttgccccct aatgcatttt tctctgctgc tccgtagctg tccgacctct tcagatctct 52140
tagtccaccc tgccgtcttc ctttatgcca tgggtcccac tgttctttca actcatcccc 52200
ctttccctca gtcccggagt agctgcggcc agcagagggt agactgagag caggagagaa 52260
ggacctgcct aggaacccct tctagagata ctgcatcctg cctgggagca agttttccag 52320
ggcagctttg agaagtcttg gagaaacaaa cctactaaac ctgacagaca gtaatactat 52380
ttgcacaatg cttttctgtg ggaaaggtag agccttttca ctacgtattg agtacataga 52440
gtgtgagggt tgacctggaa cggctatcct cctggatgac gtgcgttttc tgaagaacta 52500
catgttcgtt gcaactccca cattagaata tgaagtccta ccgagagaga tacggagact 52560
agacagatac agatgcattt gcatgtgaat acacaatccc acaatacaga cgtcaaaacc 52620
cataccagtt attccagaga gatggattgg gcagaaggca gaaggagaat actctgatcg 52680
tttttcggcc acgtgtgtgt gttatctcag tgtttctaag aagcgtttgc tactttagat 52740
tttttattta aaaaaaatag taataatcta ttaagtatga gagatgtgca gagaggatta 52800
gtgatcgaga gccatttttg ctggtggcaa tcatatggta cttttaatgg gaatattaga 52860
aaggcaccgg taatgacctt gttgcagcac aaaggagaga gtgtggggtg cccctgcatg 52920
ttgtcccacc tcttgtgacg tgtatcgttt tggaatttcc agtggcttga tcatgaacta 52980
ctgcaggaat ccagatgctg tggcagctcc ttattgttat acgagggatc ccggtgtcag 53040
gtgggagtac tgcaacctga cgcaatgctc agacgcagaa gggactgccg tcgcgcctcc 53100
gactgttacc ccggttccaa gcctagaggc tccttccgaa caaggtaagg agtctgtggc 53160
cagacatcta cacgcttcga tgctgggatg aaaagccatg gaaattccca ctgatgcagc 53220
cgccttcaat ggtaaacgga tgctcgagtg ttgcctgagt tctaccatgt aggaggaagc 53280
ctccgtgcac tctctggggg agccagcgga gtgatttctg gtgcaacgtg gttgggcttt 53340
gtctttagga tgggcacaaa ccctccaggg ggatcgactt caaaattcac cttgttgtaa 53400
aacgggctac ctcagtgtcc cagccaaaat ttttattgta acatgctgtc aggtgtgtca 53460
ctctttccaa gccagtaagc ttttccgggg atttcttcaa gtagccagca ttcagagcaa 53520
tcttcagcat tgcagattct gagaaatgtg gctctggagc ctgtcaccct cgagaaacct 53580
aagagggctg cattgattcc atgtggccct gggtctatgg agcagtacat gagctcccag 53640
tgctctaagg ctcttcagcc ctaggctttg aagggagtga tttctcagta ttcttaaacc 53700
tctttctgat gacacttgta cctgtgaggg gtctagagag aaagagtagt agactcctac 53760
tttactacaa ttcaggatgc agggcatgag aggattccct ctctcctcca agggaagaag 53820
cttttggcgt gcacacatcc ctgagaagca aagtgtcttt gtcttcagtc agatacatag 53880
gaccgttttc tgccccatgg cccggaagcc aaaggccttg gctttcatga tcaacggtct 53940
agggaaacat gcaaaatttc catgtctgtc ccaaactctg cccccgacag ccaattacca 54000
cctgcagccc gcattgccaa atgcggtgcc gtttgcatga agattcagta gagtttccta 54060
gaaaggtgct acctcgtgag ctcactttcc aatgaggaat ctgatctgtt gtgtttctct 54120
aaggtgtcag gtgaaatatt tccaagaact tactacagtt ctagaatggg aggaatctgt 54180
tgctttggtg tttgtttgtt ggtcggtttt ctcacatcca tctgcctatg gataaggaaa 54240
agagaacggt cgtaattctc atagactcct ttctggttgt gtcacaaatg gcttcacatg 54300
tttctctatg ctcagagata ctcagcttga tttcccgtgt tttcatttca gcaccgactg 54360
agcaaaggcc tggggtgcag gagtgctacc atggtaatgg acagagttat cgaggcacat 54420
actccaccac tgtcacagga agaacctgcc aagcttggtc atctatgaca ccacactcgc 54480
atagtcggac cccagaatac tacccaaatg cgtatgtctt tgttctttac cataagagaa 54540
gaaagggcca agtgaagttt ctgttacaag agatgtgtct caagctgagt tctccgaact 54600
caacttgtga cagatgcaga tggcgtagca aaatgtctca ggatgattgc cttggagcta 54660
agggtctgag agaagggaaa tgttaagctc cctctccttc ctcctagttc tattgagcag 54720
aagggaaatc tggaggtgag gagatcacat tatgaagaaa gtcagaatga caaaggacca 54780
gacacttaga ttacccttcc acaacaccaa ctaaacgtca atggagactt tccagttgga 54840
attccgttat tctggcttcc acttcctgaa gggaaggttg cgtttgcctt ttctctctgg 54900
gttcaagagg aaagaatagg tgcttattta tggacaggtg aattgatctg tttctatatc 54960
tacgtatatt ccgattgtca gaaaaacact cgttcctaag taccagtggc ctgaagggat 55020
acaggttccc agcaagagaa gatccaagga aggaaggcag atgagagtca gcacagagag 55080
ggatgctgaa aagtaaaagg gatgggtgga tggagagaag cccgggtctg accacccaat 55140
ggccaatatt ttggccacaa gcgactacca gagacatgga aaaatggttt ctacatgtgg 55200
gacaacagat ggtagaggac ctagagaatt gagagagggg caatgatggg ctccactccg 55260
cagatgcctt ggctttcttc ctggataccc ttcctgcact gaatagcaag gagatggagc 55320
ccaagcagac tgtagccatc ttgctgaatg gaggagaggg attggagttt gggatgactg 55380
tggtagctga aatttttcta ggtctgctag aaataagaac tggtttgtgt ggaggaaaag 55440
agctctacaa atacgcatag aagtctcctc cagtcgttgg cctgacatga cgctgcctgt 55500
gcacaggaaa tggttccacg agaaagtgtg gcaaagaaca tttactgaga aacagcaagt 55560
acaagagcac aggaagctca ataaagaaga gagagatcac atagcactct gggatactgg 55620
agttcttccc agctagacca gagagtcctc acggagcaca ttgccaattc agtggagacc 55680
ccagaacagc cgtaatttaa aggtacactt agaatattac tagaataaag tcagctgcag 55740
acaacccctt gcacagctgg aaagcaagtg tccaagcatc aaatcggttt ccaatcaatg 55800
aagtgcctgt gagaggaaat ctcaactctc tttagaagta aacaacaaag tcgattgcct 55860
cagctatgcg gtatccgcag agtgagtcct aaatttaaaa tctgactaca tgtagaaaag 55920
cgtttcgtgt gacccatgac caggaaataa atcgggtaat acaaacaggc tcaggaatga 55980
gagaaatgat tagaattgcg tgaaaatttg acatatcagt atgataactg atttcaaata 56040
tttaaaaaaa caacatgcaa gaaagcagat atcatatcaa gagaaattaa cagtacagaa 56100
tagccaaatt aaattaaaga gctagtataa aaaaagtatg tcttaattga aaaaaattac 56160
tgtatggccg gctgatcaaa ttagacgttt cagaggaaaa cattacccaa cacacaattt 56220
tagagaacct acagaatgag ctacacacac acacacacac acacacacac acacaaactg 56280
aaaacacacc catactcaca cacacgcaga aactcacaag ttctaacaca cacagacacg 56340
cgcacccctg aagaaacagt gaaatataaa attaagcgag cctcacagac atgtaggaaa 56400
atatgaaaag atttcctgca tgtgggaagc aagtcacagt aaagagcaag ggagtttata 56460
atagaaacaa ataccagaat caaggatggc tgataacttt tcaattacga agaacattaa 56520
aaaaaatcac agaatcgtga aactcaaggg atcatatagg gaatttcgga aaaaaaaccc 56580
aacctgtatg atgtactttt gtacatcaca gttcgaaggt aacaaggcaa agatgtaata 56640
agaagaaacc tgtcacgaga aactggagga aaaagagctg tgtcttccta caagtacact 56700
gatacaaatt gccaatgtgt tcacctcaga aacactggaa gccagatacc agggaatatt 56760
gttaaaatga taatcaggaa caaaaagaga tcaaccggga atgctgaatc cagcaataaa 56820
atgccttgaa ggtcatccat gtcggataaa tgcatattgt gcactgcccc aaagaaagaa 56880
accggaaact gtaagaattg gaaatcagca ggcttatgta acaagagagg tgacccgaag 56940
gaattaggta gaagaagaat tgaacaagaa aggaactttc tgcagcccac gtaatgaaga 57000
atccagcaat tggcaaatgt agatagatgt aaatgcaaaa tattttcttg atcaaatttc 57060
tatatctttg taaatgagag ttgactactt gaaacaaaat gatagcaaga tatttaactt 57120
cagcatatgt agaggtaaga atttgaaatg gtagcataaa tcacgaaggg attaattcga 57180
agtgtaccgt tgtaagtttc tttacctcat gcacgatggt gtgtcatatt aataaaaggg 57240
tactgtgcgg gttcgaaggg atattgcaaa tcctagagca atcacaaagg tttgaactct 57300
gaggtttttg gtataataag aatagtccat gcattcaaaa gagggaagcc aaggaagaac 57360
tagaagtctt tcaagagctc aggctcttat acatccagtt gctcattgaa ccagcttcct 57420
ggaatggagg gtctggggtt gagactaggc cacaagtcta gagtctctag agagacagtg 57480
ttggaacccc atggcccata atacatttcc cattttctca ggcagccaga ggtcatgaat 57540
gtgaggatac tgggaggttg gagcaacgtt cttgggaggc ataaggaaga gcgaatgctt 57600
caagatcccc gcagcccaaa ctactcgcct gctttgcccc ctaatgcatt tttctctgct 57660
gctccgtagc tgtccgacct cttcagatct cttagtccac cctgccgtct tcctttatgc 57720
catgggtccc actgttcttt caactcatcc ccctttccct cagtcccgga gtagctgcgg 57780
ccagcagagg gtagactgag agcaggagag aaggacctgc ctaggaaccc cttctagaga 57840
tactgcatcc tgcctgggag caagttttcc agggcagctt tgagaagtct tggagaaaca 57900
aacctactaa acctgacaga cagtaatact atttgcacaa tgcttttctg tgggaaaggt 57960
agagcctttt cactacgtat tgagtacata gagtgtgagg gttgacctgg aacggctatc 58020
ctcctggatg acgtgcgttt tctgaagaac tacatgttcg ttgcaactcc cacattagaa 58080
tatgaagtcc taccgagaga gatacggaga ctagacagat acagatgcat ttgcatgtga 58140
atacacaatc ccacaataca gacgtcaaaa cccataccag ttattccaga gagatggatt 58200
gggcagaagg cagaaggaga atactctgat cgtttttcgg ccacgtgtgt gtgttatctc 58260
agtgtttcta agaagcgttt gctactttag attttttatt taaaaaaaat agtaataatc 58320
tattaagtat gagagatgtg cagagacgat tagtgatcga gagccatttt tgctggtggc 58380
aatcatatgg tacttttaat gggaatatta gaaaggcacc ggtaatgacc ttgttgcagc 58440
acaaaggaga gagtgtgggg tgcccctgca tgttgtccca cctcttgtga cgtgtatcgt 58500
tttggaattt ccagtggctt gatcatgaac tactgcagga atccagatgc tgtggcagct 58560
ccttattgtt atacgaggga tcccggtgtc aggtgggagt actgcaacct gacgcaatgc 58620
tcagacgcag aagggactgc cgtcgcgcct ccgactgtta ccccggttcc aagcctagag 58680
gctccttccg aacaaggtaa ggagtctgtg gccagacatc tacacgcttc gatgctggga 58740
tgaaaagcca tggaaattcc cactgatgca gccgccttca atggtaaacg gatgctcgag 58800
tgttgcctga gttctaccat gtaggaggaa gcctccgtgc actctctggg ggagccagcg 58860
gagtgatttc tggtgcaacg tggttgggct ttgtctttag gatgggcaca aaccctccag 58920
ggggatcgac ttcaaaattc accttgttgt aaaacgggct acctcagtgt cccagccaaa 58980
atttttattg taacatgctg tcaggtgtgt cactctttcc aagccagtaa gcttttccgg 59040
ggatttcttc aagtagccag cattcagagc aatcttcagc attgcagatt ctgagaaatg 59100
tggctctgga gcctgtcatc ctcgagaaac ctaacagggc tgcattaatt ccatatggtc 59160
ctgggtctat ggagcagtat atgagctccc aatgctctaa ggctcttcag tcctaggctt 59220
tgaagggagt gatttctcag tgttcttaaa cctctttctg atggcacttg tacctgtgag 59280
gggtctagag agaaaggtta gtagacttct cctttactgc aattcaggat gcagggcatg 59340
agaagattcc ctccctcctc caagggaaga aggttttggc gtgcacacat ccttgagaag 59400
caaagtgtct ttgccttcag tcagatatat aggatcgttt tctgccccat ggcctggaag 59460
ccagaggcct tggctttcat gatcaacgat ctagggaaac atgcaaaatt tccatgtctt 59520
tcccctcctc tgccctcgac agccaattac cacctgcatc ctgcattgcc aaatgcagtg 59580
ccctttgtat gaacattcag tagagtttca tagaaaggtg ctacttcgtg agcgcacttt 59640
gcagtgagaa ggagtctgtt ctgttctgtt tttctaagga tttcaggtga aatatttcct 59700
agaacttact acagttctag attggtagga atctgtaggt ttgctgtatg ttttttggtt 59760
ggttttctcc catccatctg cctacaggta agggaaagat aacgttcata attctcatag 59820
actcctttct ggttgtgtca taaatggctt cacatatttc gttattctca gagatactca 59880
gtttatttct tgtgttttca tttcagcacc gactgagcag aggcctgggg tgcaggagtg 59940
ctaccacggt aatggacaga gttatcgagg cacatactcc accactgtca ctggaagaac 60000
ctgccaagct tggtcatcta tgacaccaca ctcgcatagt cggaccccag aatactaccc 60060
aaatgcgtat gtctttgttc tttaccataa gagaataaag ggccaactga agtttctgtg 60120
acaagagaca tgcttcaagc tgagttctcc gaactcaact tgtgtcagat tcagatggtg 60180
tagcaaaatg tctcaggatg atttccttgg agctaagggt ctgagagaag agaaatgtta 60240
agctgcctca ccttcctcct agttttgtgg agcagaaggg aaatgaggag gcgaggagat 60300
caccttatga agaaagtcag aatgacgaac caccaaacac ttagattacc cttgcccaac 60360
acccactaag cgtcaatgaa gactttccag ttggaattcc gttattctga cttccaattc 60420
ctgaagggaa gattgtgttt gccttttctg tctgggctca tgaggaaagt ttatgtgctt 60480
acttatggac aggtgaattg atctgtttct atttctacct gtattccaat agggagaaaa 60540
tctcttggtc ctaagtacca gtggcctgaa aggatagagg ttcccagcaa gagaagatcc 60600
aaggaaggaa ggcagatgag agtcagcaca gagagggatg ctgaaaagta aaagggatgg 60660
gtagatggat agaagccctg gtctgaccac cccatggcca atcatttggc cataatcaac 60720
aaccaaagac atggaaaaat ggtttctaca tgtgggacaa cagatggtag aggacctaga 60780
gaattgagag agggccaatg atgagctcaa ctccatagat gccttggctt tcttcctgga 60840
tacccttcct gcactgaata gcaaggagat ggagctcaag cagcctgtag ccatctagct 60900
gagcagagga gagggattgg agtttgggat gactctggta ttttctaggt ccgctacaaa 60960
taagaactgg tttgtggagg aaaggagctc tacaaatacg catagaagtc tcctccagta 61020
gttggcctca catgacactg catgtgcaca gaaaatggtt ctacagaaag tgtggcaaag 61080
aacatttact gagaaacagc aactacaaga gaacagcaag ctcaattaag aagatagaga 61140
tcacatagca ctctgtgtta ttggagttct taccagctag atgagagagt gctcacggaa 61200
cacattgcca attcagtgga gaccccagaa cagccataat ttcaaagtac aattagtata 61260
ttactagaat aaaggcagct gcagacaacc ccttgcacag ctgaaaagca agtgtccaag 61320
catcaaatgg gtttccaatc aatgaagtgc ctgtgagagg aaatctcaac tctcttcaga 61380
agtaaacaac aaagtcaatt gcctcagcta tgcggtatcc ccagagtgag tcctaaatta 61440
aaaatttgac tacgtgtaga aaagaatttc gtgtgatcca tgaccagaaa ataaatcagg 61500
caatacaaac aggctcagaa atgacatcga taattagaat tgcatgaaaa tttgacatat 61560
cagtatgata actgatttca gatatttaaa aaaagtgcaa caaagcaggt atcatatcaa 61620
gacaaattaa tagtatagaa tagccaaatc aaattaaaga actattatac aaaaagtatg 61680
tcttaaatga agaaattact gtatgtccgc ctgaaaaatt tagatgtttc agaagaaaaa 61740
attaaccaaa aacaattctg cagaacctac agaatgagcc acacacacac acattcaaaa 61800
cacacccata cacacacaca tgcaaaaact cacaagttct aacacacaca caaacacaca 61860
cacacatgca catccctaaa gaaataggga aatataaaat taaccgaccc tcagagacat 61920
gcaggaaaat ataagaagat ttcctgcatg tgggaagcaa gtcacagtaa agagcaaggg 61980
agtttggagt agatacaaat accggaatca cggatggctg ataacttttc aattatgaag 62040
aacgttagaa aaatcacaga ttcatgaaac taaagggatc aaataggaaa tttcgagaaa 62100
aaaaactaca tgatgcactt ctctacatca cagttcaaag gtaacaaggc aaggatataa 62160
gaagaagaaa catctcacga gaaactggag aaaaaagagc tgtgtcttcc tagagtacag 62220
tgatacaaat tgctaatgcg ttcacctcag aaacactgga agccagatac cagggaatat 62280
tattaaaatg ataatgagga acaagaagag atcaaccgag aatgctgaat ccagcaataa 62340
aatgccttga agatcatcca tgttggataa atgcatattg tgcactgccc aaaacaaaga 62400
aactggaaag tgtaagactt tggaatcagc aggcttatgt agcaacagag gtgacccgaa 62460
agaattaggt ataagaagaa tagaagaatt gcatgaaaat ttgacatatg actaagataa 62520
ctatttcaaa tatttaaaaa aagatgaata tgtaataaaa cagataaaat atcaaaagaa 62580
agtaacagta ttgactagcc aaatcaaatt aaagacttag tgtaaaaagc tatgtcttaa 62640
aagaaaaaat tactggatgg ctgcctgatc aatttagaca tttctgaata ggaaactaac 62700
caaaaatcaa ttctacagaa ccaactacac acatatatac acatacaaca cacccataca 62760
cacccacgca aaaactcaca agttcacaca cacacacaca cacacacaac cctcaagaaa 62820
tagtgaaata gaaaaccaac cgaacctcac agacatgttg caaaatagga aaagatttcc 62880
tgcatatggg aagcaagtca cagaaaagag aacgggagat tggaaacaga aacaaatacc 62940
ggaatcaagg atggccgaaa acttttcatt gatcaagaat attaacaaaa tcgcaaaaac 63000
acgaaattca atgcatcaaa taggcgtttc gaaaaaaaga aaaaatctgg tatgatgcac 63060
ttttgtactt cacattttca cggtaagaag acaaagatat aataacaaga aacttcttat 63120
gagaaactgg ggaaaaacaa gctgtttctt gctagaagaa cagtgataca aattgctaat 63180
gcattctcgt caaaaacact ggaagccaga taccgggaat gttattaatg tggtaaacag 63240
gaacaagaag agatcaacca agaatgctaa atccagcaat aaaatgcctt gaagatcatc 63300
catgctgcat aaatgtatgt tgtgcactgc cccaaacaaa gaaaccggaa actgtaagaa 63360
tttggaatca gcaggctgat gtaacaagag aggtgaccca aaggaattag gtagaagaag 63420
aatagtacaa gaagggaact ttctgcagcc catgtaatga agaacccagc aattggcaaa 63480
tgtagatgta aatgcaaaat attttcttga ccaaatttct atatattttt aaatgagcgt 63540
tgactactgg aaacaaaatg atagcaatat atttaatttt agcatatgta gaggtaagaa 63600
tttgaacaag tagcgtaaat catgtaggga ataattagaa gtgtaccatt gtaagtttct 63660
tacctcatgc acaatggtat gtaatattaa taaaatgtta ctgtgtgggt tcaaggagat 63720
attgcaaatc ctagagcaat cacaaagttt tgaactctga ggtatattgt ataataagaa 63780
tattccatgt attcaaaaga gagaagccaa ggaagaaaga aatttgtcac gagtttgggc 63840
tcttagtaca tcctgtagct cattgaacca gcttcctgga atggagggtc tgggattgac 63900
actaggccac atgtatagag tctctagaga gacagtgttt catccccatg gcccgtaata 63960
catttcccat tttctcaggc agccacaggt catgaatgtg aggatagaga gaggttggag 64020
caacgttctt gggaggcata aggaagagca aatgcttcaa gatccccgca gcccaaactc 64080
ctacctgctt tgccccctaa tgcagtgttc ctccgtagct gtccgacctc ttcagatctc 64140
ttagtctacc ctgccatctt cctttatgcc atgggtccca ctgttctttc aactcatccc 64200
cctttccctc agtgcagagt agctgcggcc agcagagggt agactgagag caggagagaa 64260
ggtcctgccc aggaacccat tctagagatg ctgcattctg cctgggagca agttttccag 64320
ggcagctttg agaagtcttg cagaaacaaa cctatttgac ccacatgata tgggaatgac 64380
agaaagtaat acaatttgca cagtgctttt ccatgggaaa agtagagcct tttcgcgagg 64440
ttttgagtac atagagagtg aaggttgacc tggaaaggtt atcctcctgg atcccatgtt 64500
ttttctgaag aactacctgt tagttgcaac ttgcacatta gaatatgaag tcctaccgag 64560
agagatacgg agaactagat aaatacagat acttttgtat gtgaataaac gattccacaa 64620
tacacacatc aaaatccata ccagttattc cagagagatg gattgggcag aaggcagaag 64680
gagaatactc tgatcgtttt ttgcccacgt gtatgtatta tctcagtgtt tctaagaagc 64740
gtttgctact ttagattttt ttttataata ataatctttt aagtatgaga aatgtgcaga 64800
caggattagt gattgagagc catttgtgct tgtggcaatc atatggtact tttatgggaa 64860
tattagaaag gcactggtaa tgaccttgtt gcagcacaaa ggagagggtg tggggtgccc 64920
ctgcatattg tcccacctct tgtgacgtgt atcgttttgg aatttccagt ggcttgatca 64980
tgaactactg caggaatcca gatcctgtgg cagcccctta ttgttatacg agggatccca 65040
gtgtcaggtg ggagtactgc aacctgacac aatgctcaga cgcagaaggg actgccgtcg 65100
cgcctccaac tattaccccg attccaagcc tagaggctcc ttctgaacaa ggtaaggagc 65160
ctgtggccag aaacctacac gtttcgatgc tgggatgaaa agccatggaa attcccactg 65220
atgcagcagc ctccaatggt aaacggatgc tcgagtgttg actgagttct gtcatgtagg 65280
aggaagcctc cgtgcactct ctgggggagc cagcggattg atttctggta caacgttggg 65340
tgggctgtgt ctttagaatt ggcacaaacc ctccagggtg atcgacttca caactcacct 65400
cgttgaaaaa tgggctatct cagtgtctta gccaaaattt ttattgtaac atgctgtcag 65460
atgtgtgact ctttccaagc cagtaagctt ttcctgggac ttcttcaatt agccagcatt 65520
cagtgcaatc ttcagcattg cagattcaga gaaatgtggc tctggagcct gtcacccttg 65580
agaaacaggg ctaacagggt tgcattaatt ccaaatcacc ctggttctat ggagcagtac 65640
atgaactccc aatgatctat gtttcaggac ttcctcagtc ataggtgggc tctgcagccc 65700
taggttttta agtgagtgac tgccccgtgt tctggtggca gttgtacctg tgagcggtct 65760
ggatagaaag agtcggagac ttctgtatta ttgcaactca ggatgtgggt catgagagga 65820
tttcatctct cctgcagggg agtaagctgt tcgcctccac ccatccctga taactgaagt 65880
gtctttgtct gcagtcctag acgaaggact gttgtctctc ccatggccca gaagctgaag 65940
accttgcctt ttgttatgaa acgttcattg ttttcatgtc tgtccgtttc tctgccccta 66000
acacccaatc accatgtatg gcctgtaccc ccaaatgcat cgtgctttgc tgtttgctgc 66060
cccatagtcc tcatgaacat tcagtagaaa ttcccataaa tgtgcttgca cgtgagcaca 66120
gtttccattg agaagccctc tcatttgtcc tttttttcta agcttttatg tgaaatattt 66180
ctaagaactt actacagttc taaagtgtta ggaatttgtt tctttggtgt ttttgtttgt 66240
tggttggttg ttgcttttct caagtccatc tgcctacaaa taaagaaaca agaatgttac 66300
ttgtcatatt ctcctgaggt cataattctc agagactttt ttctggtttg tgccataagt 66360
ggcttcacat gtttgtctct tcttggaaac actcagtttg atttcttttc ttttcatttc 66420
agcaccaact gagcaaaggc ctggggtgca ggagtgctac cacggaaatg gacagagtta 66480
tcaaggcaca tacttcatta ctgtcacagg aagaacctgc caagcttggt catctatgac 66540
accacactcg catagtcgga ccccagcata ctacccaaat gcgtatgtct attttcttta 66600
ccataagtga aggaagggtc agtggaaatt tctgttagta gagtcatgct tcaagctgag 66660
tgttcaggac tcaagttgtc tcagatgaac agtgcatagc aaaatgtctc aggaacattg 66720
tctttgagca aagagtctaa gagaagacaa atgttaatct ggctctcctt cctcctagtt 66780
taatggagca gaaaggtatc tggaggcaag gatatcacat taagaaacaa gtcaagatga 66840
caaatgatga aactcttaga gtacccttcc acaacaccca ctaaggttca atgcagcctt 66900
ttctccttgg aattctatta aactaaactc caattcctga agtgaaggtt ctgttggggt 66960
tttctgtttt ggcttacaag gaaagtatat atgtatatct atggagaggc aaatctatct 67020
ctttctatat ctacgtctat tccaatatgt agaaacacag tcggttctga ccaccagtgg 67080
tctgaaggga tactggttgt tagagaataa aaatggcagg aaggcagatg agagtcagca 67140
aagagagaga tcctgtaaag taaaagggtg gatagatgga cagaagccca ggtctgacca 67200
gcccatggcc aggctttagg ccataagtga caccaaagac atggaaaaat ggtttctaca 67260
tgttggacaa cagacagtag tggaccaaaa gaatagtgac agggggaaca atgagatcaa 67320
ctccatagat accttggctt tcttcctgga ggcccttctt gcactgaaga gcaaggtgat 67380
ggagcccaga tggactgtag ccatcttcct gaatgcagga gagagattgg aatttgggac 67440
tactgtggta gctaggattt tataggcctg ctgagaatga gaatggattt gtggatgaaa 67500
ggagctccag gggcacgcat agtagtctcc tcgaatcttt ggctaaacat gacgttgcat 67560
gtgcccagaa aaaggttcca caagaaagta gagaaaagaa tatatcctga ggaatagcaa 67620
ctgcgattga acagtgagct caataaagag gacagagccc tcatagcatt ctgggatact 67680
ggagttctga ccagctggag gagagacctc actgaacctc ttgggaatac agtagagact 67740
ccagaaaagt catactttag gagtagaatt agtaaatttc tagaaaaaaa ggcagctcta 67800
gacaaaccct ggcaaaactg aaaagcaagt ctccaagcat taaaatcatt tccaagtcaa 67860
ttaactgcct gggagaggaa aaccctcttt agaggtaaac aacaaagtca agtggctcag 67920
ctatgtggtg ttcacagtgt gagttctaaa tttaaaactt gactacacat agagaagctt 67980
ttagtatgaa ccatgaccag gtgaaaaatc agtcaataca aatagaccta gaaatgacag 68040
aaatgattag aatggcaaaa aatttgacat atcaatatgt caactgagtt ttaggtttta 68100
agaaaacatg aatacggaat gaagcagata ccatatcaag agacagtaac agtatagaag 68160
agccaaatta aattaaagaa ctagtataag aaggtatgtc ttaaatgaaa aaattactgg 68220
atgtattccc aatggagtga gatgtttcag aagtaaaaac taactgaaaa acaattttat 68280
accacctaca gaaccagcta cacatacaca aatgacacac acatatacac acatactcac 68340
acatgcacag gcttagaaac atgcacgcac acacacacac acacacacac acacctccac 68400
aaatactaaa aaatgaaatc cactgatcct cacagacagg cgggaaaata taaaaagatt 68460
tcctgcatgt gggtaggaag tcacagaagg agaggaagga gagattgcta caggaacaaa 68520
tactggaagc aaggatagct aaaaactttt caaataagaa gaatattaaa aaccacagat 68580
tcaagaagct gaatgaatca gacagggaat ttccaaaaaa aaaaaaaaaa aaactgtatg 68640
attcactttt gtacatcacc gttcaacagt cagaaggcaa agatataata acaagaaaca 68700
tctcatgaga aactggagga aaaagagctg tgtcttgcta gaagaacagt gatacaaatt 68760
gctaatgcat tctcatcaga aacactggaa cccagttaac aggggatatc attaaaatga 68820
taaactagaa aaaaaagaga tcaaatgaga atgctacatc cagcaataaa atgccttgaa 68880
gatcatccat gttggataaa tgcatattgt gcactgcccc aaataaataa accaaaaact 68940
aataatttgg aatcagcagg cttgtgtaac aagagatgtt gcccaaagaa aattagctag 69000
aagaagaata gttcaagagg agaactttct gcagcccacg taatgaagaa cccagcaaat 69060
ggcaaatgta gatgtaaatg caaaatattt tcttgatcaa atttctatat ctttttaaat 69120
gagagttgac tacttgaagc aaaatgatag caatatattt aactttagca tatgtagagg 69180
taaaaatttg aacatataga ctaaatcatg tggggaataa ttggaagtgt accattgtaa 69240
gtttcttacc ttatccacga tggtatgtaa tattaatgaa aggttgaatt tgtgggtcca 69300
aagggatatt gtaaatccta aagcaatcat aaaattttga attctgaggg atattatata 69360
ataagaattt tccatgtatc caaaagaggg aagccaagga agaaaaagaa gtctttcaag 69420
tactcaagct ctgagcacat ccagttgctc attgaaccag cttcctggaa tggagggtct 69480
gggcttgaga ctaggtcaca tgtgtagagt ctctagagag acagtgttgg atccccatgg 69540
cccataatac atttcccgtt ttcccaggca gccacaggtc acgaatggga ggattctgag 69600
aggttggagc aatgttctta ggaggcataa ggaggagtga atgctctgag atttccccag 69660
cctgaggtcc tccatagctg cccgacctct tcagacctca tagtctgccc agctgtctcc 69720
ctttatgcca tgagtgccac tgttctttca actcatcccc cattccctca gtcccggaat 69780
tgctgtggcc agcagaggat ggactgagag caggagagga agtcctgacc aggaacccat 69840
cctagagata ctgcatcctg cctgaaagct aggtttccag ggcagctttg agaagtcttg 69900
cagaaagaaa cccacttgac ccacctgata cggtatcgac agacaggaat actttttgtg 69960
caatggtttt acatgctgaa catagagcct tttggctaca ttttgagtac attgaatgag 70020
actgctggcc tgggaaggat atcatgctgg atgccatttt tttctctgga gaactatgtg 70080
ttagttccaa ctcgcacatt actatatgaa gtcctacaca gagagatacg gagagctaga 70140
cagatagaga tacttttgta tgtgcataac caattccaca atacacacgt caaaatccat 70200
accagttatt ccagagagat ggattgggca gaaggcagaa ggaggatatt ctgatccctt 70260
tttggccaca tgtatgtata atctcagtgt ttctaggaag tgtgtgctgc attagatttt 70320
ttttctttaa aaaaagtgat aatatattaa gtatgagaaa tgtgcagaga ggattagaga 70380
ttgagagcca tttgtcattg tggcaattgt atggtatctc ttttgggaat atttcaaagg 70440
caccagtaat gaccttgttg tagcaaaata tacagtgttc ctgcatatgt acccattttt 70500
tgtgatgtgt attcttttgg aatttccagt ggcttgatca agaactactg ccgaaatcca 70560
gatcctgtgg cagccccttg gtgttataca acagatccca gtgtcaggtg ggagtactgc 70620
aacctgacac gatgctcaga tgcagaatgg actgccttcg tccctccgaa tgttattctg 70680
gctccaagcc tagaggcttt ttttgaacaa ggtaagaagt tgtgccagac atttacctgc 70740
ttggatgctg ggatgaaaag ccatggatac ccccactgac gcacaaccct tcagtgctac 70800
actggttctc gtgtgttggt tctgggtctg ccatgtggga ggaagcctta gcgcactctc 70860
tgggggagcc agaggtgtga tttttggtgc aacctgtgcg agctgtgtct ttaggatggg 70920
cggaaaccat tctgggtgct cgacttcacc actcccctca ttgtaaaagg ggctatctca 70980
ttgtcctaga caaaattctt attgtaatat gctgtcagat gtgtgtgtct ttccaagcca 71040
gtaaactttt ccagggattt cttcaagtag acagcattca gtgcaatctt cagcattgca 71100
gattccgaga aatgtggctc tagatcctgt tatccttgag aaacctaact gggttgcatt 71160
aattccatat ctccctgggt ctgtggagta gtacatgagc tcccgaagct ctatctctca 71220
ggtctttttc agtccgaggc aggttgtgca gttcttagct ttgaagggag tgattttttc 71280
gtgtgctttt gcctctttct gatggaactt gtacctgcgg ggggtctgga gaaaaagagt 71340
agtagacttt tgctttattg caatgcatta tgctgggcac gagaggattc cctatcttat 71400
tgtaggtgat aagcttttgg cctccactca tccctgagaa gtgaagtgtt gttgcctaca 71460
gttttagctg caggactgtt gtctgcccca tcaccaggag tttaatgctt tcttttttga 71520
gcaatcatct agggacacat gcaaggtttt tatatgtcct tgcctcctcc ccaaaaaacc 71580
attttaatgc ttggagactt gcttttcagc tttgccaaat gcatcaccct ttcttctatg 71640
ctgttccatg tcgtcatgaa cactctgtag agattcctag aaatgagctt ccatgttagt 71700
ggagtttccg atgagaagca atctgatatt tcttttccac taagttttac atgaaatatt 71760
tctaagaact tactacagtt ctagaatggt aggcatctct tactttcgtg tttgtttgtg 71820
tgttttctca tgtccatttg cctattaata aagaatagag aatggttgta aatctcagtg 71880
actctttttt ggtttatgtc ataaatggct tcctgtattt ttctgttcta ggaaataata 71940
agcttgatgt cttctgtttt aatttcagca ctgactgagg aaacccccgg ggtacaggac 72000
tgctactacc attatggaca gagttaccga ggcacatact ccaccactgt cacaggaaga 72060
acttgccaag cttggtcatc tatgacacca caccagcata gtcggacccc agaaaactac 72120
ccaaatgcgt acgtctttgt tctttaccat aagcgaagga agggccaatg gaagtttctg 72180
ttagaagagt catgcttcaa ggtgactgct caggactcaa cttggctcag atgcagagga 72240
acatttcctg tgagcaaaag ttcttagaga agactttgtt tttttgagac agagtcttgc 72300
tttgttgccc aggctggagt gcagtggcat gatctcggct cactgcaagc tccgcctccc 72360
gggttcacac cattctcctg cttcagcctc tctagcagct gggactacag gcacccacca 72420
ccacacccgg ctaatttttt gtatttttag tagagacagg gtttcactgt tctagccagg 72480
atggtcttgg tctcctgacc tcgtgatccg cctgcctcag cctcccaaag tgctgggatt 72540
acaggcgtga gccaccgtgc ctggctgaga agacattttt taagctggct ctccttcctc 72600
ctagttttat ggaagcagaa ggatatatgg agttgagaag atcttattaa taaaacagcc 72660
gggatgacaa atgaccaaag agttagagta tccttctaca acatcggctg agggttaata 72720
caaccttttc accttggaat tctatcattc taagctctag tccctgaagt gaatgttgtg 72780
ttggcctttt gcatcttggg tcacagggaa ttgatacttg cacatctatg gagaggcaaa 72840
tctttttcta tctacttctt tttcaatggg tacaaacaca cttggtcctg agcaccagtg 72900
gtctgaagag atacggtctg cccagaggag aagaacaaag gcaggaaagc agatgagagt 72960
cagcaaaggg gcgatgctga aaagtaaaag gggcgggtag atggacagaa gccatgatct 73020
ggccattcta tggccagtct ttcggccata agtgactacc aaagacacgg caaaacggtt 73080
tccacatgtt gaacaacaga tgctagagga ccaagagtat tgcaagaggg agaaaatgag 73140
atcaacccat caatgccttg gctttcttca aggagaccct tcctgcactg aagagcaagg 73200
agatggagcc caagctgact gtagccatgt tgctgaacag aggagagtga ttggactttg 73260
ggattactca ggtagttagg attttctagc catgctaaga gtaagaatgg acttgtggag 73320
gataggagct ccaggcatag aagtctcctc aagtgttagt ctaaacataa agcagcactt 73380
gcatagaaga ttttccacaa gaaaatatgg caaaaaaaca ccatatattg aggaacaaca 73440
actacaaggg aacagtgagc ttaataaagg tgacagagct cacatagtgc tctggaatat 73500
tggagttttg accagctaga gagaagagac ctcattgaaa atcttgggca ttcagtagag 73560
acctcagaaa agtcagactt tatgagtaga ctttgtatat tcctagaata aaggcagctc 73620
cagaaaaaac ctagcaaagc tgaaaagcaa atctccaagc attaaaatgg tgtcctagtc 73680
aattaactgc cttctagaag aaaactcaac actctttaca ggtgaacaac aaagttaagt 73740
tgctgagcta tgcaatatcc acagtgtgag tcctaaattt ataactttac tacacataaa 73800
aaagcattta gtgtgaacca taaccaggaa aataatcagt caataaaaat agaaccagga 73860
atgatagaaa tgatttaaat ggcatgagaa tttgacatat tagtatcata actgcattgc 73920
tggatttaag aaaacataaa catggaacgt aacagatatc atatcaaggg aaagtaaaag 73980
gataaaagag tcaaatcaaa ttaaaggact attaaaaggt atatcttaaa tgaaaaattc 74040
actggatggt ctcccaatca ggttagttgt ttccagggaa aaaattaact gaaaaataat 74100
tcaatagaat ctacagaaat agctgcacat atatacacac aatggcacac gtgcacacac 74160
ccacacccac acaggtgtga atcctagagc cacacgagca ttgaaacata gagaagtaaa 74220
aattgttcat tgaggaatat gtagcaatgc tcaatgtgtt ttaccctaat aagagctttt 74280
gtgatgtatg attgaaaaac tgacacaact gaagagagaa atagataagc ccacactctg 74340
agttagagat ttccttgatt ctctcactat ggttataaat ctttcccaaa cacaacaggc 74400
tagaacaaat atgcagaaaa ttagacatag tatctttgtt ctcaataaaa acgtcgacct 74460
atttaacatt ataccgaact accgagtaca cattaaagtg tgcatggagc attcactgag 74520
gtgtactcta cacatgacct tccagcaagt ctccatagat ttaaaagaat taaagtcata 74580
cagagtgtgt cactttattc tcccagaata aagtgagata tgaataatga gaagtttgcc 74640
agcttctcaa atatttggga gtcatacggt gcatttcaaa atactctttg ggacaaagaa 74700
aacatcacta aggaatttag aaaagttttg aactgagtaa gaatataaca caatttatcc 74760
aaacttagga gatgcagtga atgtctttag gcttttacat aattttagat gctcttaggg 74820
aaaaacagaa gcatgtaata atcaagattt caaactgcaa ttctcaaagt gtagtctaga 74880
gaaacctgag gacctttgag taccttcaga gacagtccat gaggttaaag gactttgcta 74940
cgtgaaaagt aagatgctat tggccctttt tactttcatt ttccaacaag agaagagggg 75000
agttttccag cagttacata atatgtaatg gcatcatgtc tctgatggct aagaaaatgg 75060
gcaattgttg actttgtgtg ttaaaaaaat tctcagtgtt ggtttcttat actataaata 75120
ttcatcttgt gttttgaaaa agaaaagctc tttggaatcc cctatgaaca aagactttga 75180
cagttgttga tctaagacca cagcttaaat atctacacaa gaaaaaaaaa aaaagcaaat 75240
aagagccaag gaaagcagat ggaaggaagt agtccaaacc agtgacattc agtgaacaag 75300
aaaagagacc aacaagggag taaactcttg aaacagaaag ttgattcttt gaaaagatcc 75360
atatgattga acacagtctg gctaaacaaa tgacagacca atgagggtgc acaaccatca 75420
ccatctggag taacagagga gaggtgccat tactatagca tcttccagtt ctgaaagctg 75480
aaaagaagat tttgagaaca attgtatgtg aataaattca ggaatgttaa tcatgtgggc 75540
caattcctga ggaagacaac aaatcagcaa accagatgct gaatagttag tgtagtcctg 75600
tagagagaca tacagagagg ctgacagaga aatatttgta tgtgcataaa acaatctaca 75660
agacacactt caaaatcaat ctcagttaat ctggaggaac atatttcaca gaaggtggaa 75720
ggagggtatt ctgatcctct tgtacattgt acaacattgt acaatgtaca gagtataatt 75780
gtacaagtac aattgaagtt gtacaagtac aagtgcaact tgcacaatgt acagagtaaa 75840
cattgatgtt tactctcaat tttcttatgg agcacagatg actttggatg tgttacaata 75900
tgaatgataa tttgtctttg agatgttcgc agttgtttag aagttgagga ccatttgtgc 75960
atattatggg acctttagtg aaaatatttc aaagtctctt tttacacttt gttacagcaa 76020
aatgtagagg gcgctaagtg cccttgaatc ttctcccatc tctggtgacc tgtgttgttt 76080
tgaaatttgc agtggcctga ccaggaacta ctgcaggaat ccagatgctg agattcgccc 76140
ttggtgttac accatggatc ccagtgtcag gtgggagtac tgcaacctga cacaatgcct 76200
ggtgacagaa tcaagtgtcc ttgcaactct cacggtggtc ccagatccaa gcacagaggc 76260
ttcttctgaa gaaggtagga agtctatggc cagacaacca caccctagga cgttgggatg 76320
aaaagagttg caaaatctta gtgatataga agccttccat gctcacacaa ttccaagtag 76380
aatgtggact cagggtcagc cactgggaag gaacactcag cgccttctct gggagaacca 76440
gagctgtgat gtttggtacc ctgtgaaagg gtggtatcta taggaagggt gcagaccctc 76500
tagggcactg gacttaccac tcccctggtt attcaaagga tcattttagt gtcttagcca 76560
gaagaatatt ctaacatttt gccaaatttg tgaagattta ccaagctcat gataagcctt 76620
tcatggtatt tcttcaagta gtcagtgttc attgcatctt tggctttgcg gtttcggagg 76680
aatgcggttt ttgagtctgt catccttgag aaacctaata tgacttttct tagttccata 76740
tacttctggg tccaggtagc agtacatagc caacaaatgc tccatcgttc tggcctatct 76800
ccatcttaag ccagtcctgc acaactaggc tttgatggga gggatctctc agtgttcttg 76860
cccctccttc tcatggaaca tatatctgtg ttggtctctg agaagaagag tagtggatat 76920
ctactttgtt gcaatgcaga atcctgggcc aaagatacca gccatccctc caagggaata 76980
aaattttggc cagtagccct ctctgagaga caatttgtct ttgcctacga gtcctagatg 77040
caggaccgct tcctgcccca tcttcaagaa gctgaaggct ttggctttgg aggatcagca 77100
gtctagggaa atgtgtgacg gtttcatgtc tgtccccact gacagtcaat caccacctac 77160
aacctgcaca gcctgatgca tagcagtcta gtttcctgcc ttattctcag gaacacccag 77220
aagatgtcta tattaaagag catgcacatg agtgcaattt tgactgatag gcactctgat 77280
ctttcctttg gtgcctgtgt tttaaaggaa atctttctaa gaactcgtta aagttctaga 77340
atgctatgaa tctttgggtt ttattattgg tatgtccatc tgcctgctag tacagaacag 77400
agcatggtag tctttctcag agacaatgat cctgtttcag tcacagattt cttctgatgc 77460
ttctgtgttc tagaaattac tcagcttgat ttctcctctt tgaatttcag caccaacgga 77520
gcaaagcccc ggggtccagg attgctacca tggtgatgga cagagttatc gaggctcatt 77580
ctctaccact gtcacaggaa ggacatgtca gtcttggtcc tctatgacac cacactggca 77640
tcagaggaca acagaatatt atccaaatgg gtacaacctt gagttttctt caaagacaga 77700
cagcagcccc cttacatttc tcttggaagg gccatgcttc caactaactt cttatgacaa 77760
atttatctca gatctggaat gttgggtaga atgtctcagg cttctttctt caggcacagt 77820
gtctgaaagg agagaaatgt caggccagct ctcttttctc atagttgaca gaagcaggag 77880
gatatttgaa ggtggtgagt tctcatgaat agaaagctca ggacacatgg ccacgtgctt 77940
agaaatagca ccattccaca atgcccacta aagaccaatg caatagttca accagggatt 78000
tctgtcattc taatctccaa gtcctgaagt gaaggttgta ttagccatgt tcatcttggg 78060
caacaaataa aggatatcta tgttgacatc cagatcttcc aatcactttc tcctctaacc 78120
tgtacctggg ttctgagaac aaggtatctg aagagctatg tgttgccagc acatgagggg 78180
caaaagtagg aaggcagctg agagtcagga agtataaaga ttctgaagag ttacacatgc 78240
aggaagatgg acagaaaccc agttcagacc acgtcagcgt ttctgccatg aaggactatc 78300
aaatacatag gaaaagtgtt ttcataggtt ggacaacaga catgacaggc ctgagaaaat 78360
tcagaaaggg aatcaaagga gatcaacctt atcatgtccc tggcatcctt ccttgagacc 78420
cttgaagggc aagcagatgg agcccagctg accacagcag tcttgcttaa ctgaggagag 78480
agactggagt ttgtgatgcc tcaggcatct gacgtattct aggctggcta agaatgagag 78540
gggatttgtg gaggaaagga gctccaagaa tacacaccga agtcttctca aggctttggc 78600
taaatacaaa gctgcgtatg cacaaggaga gttttcacaa agaaagaaca ataaagaaaa 78660
gctactgggg aaagaacaac tgcaagggaa cagtgagctc aatggagatg ctagagctca 78720
catagcactg ggggatattt gagttctgac cactcagagg agagacacct cactgaacat 78780
cttgggcatt cagtagaggt caaagaaagc cataatttgg gagtaggatc ttcggattcc 78840
tagaaataag gtgactccag aaacactcca gcaacccttc ttccaagcca gtctaaaagg 78900
atccaaatga tttccaagta aattaactgc cttccagaaa aaagtaaact caaccctcct 78960
tagaggtaag gaacgaatac aagtttctca gttatatgac atccccagag tgcaacttgc 79020
atttaaaaat ttactagaca caaaagaagt tttcactgtg atccataact gggagaaaaa 79080
tcactcaaca caaataggcc cagaaataat agaaattatg gcattggcaa gaacatttaa 79140
aatgcacctc tgagaactgt gtttcaggaa aatgtcagca aaagctgacc atgagagaaa 79200
tgaatgcata atatcagaaa agaaaagaat tgaagagcca aatggaaatt taaaaactga 79260
gaaaagttat atctgtaatg aggaattcac tggatggcct tataaccagt ttagatatta 79320
tggtaggaaa aggtgaacga gaaaatgatt caattaaagc tagacaaacc acaagacaga 79380
cagacagaca caaatacaca tacacacaat gactgaacca attaatcaac agagcctcaa 79440
ggacatctag gaaaacatcc acacatttaa tatatgtgtt aggcaagtca cagaaagaga 79500
ggaaaaagat aatgtgacag aagttatact tgaagccatg acggctgaca aatttccaaa 79560
catacagaaa atgagaaatt catagtcatg aagctcaatg actcaggtat agatttttaa 79620
agagcaaaac tctgatttac tggggtacat catagttaaa ttgtctgatt tcaaagctaa 79680
gaagaaaaaa agggggttcc tatgaacaaa cattttgaca gttgatctaa gaccacagct 79740
taaatatcta ggcaaggaaa agcaaataag acacaaggaa aggggatgga tggaaatagt 79800
ccaaaccaat gacattcagt gaacaagaaa atagaccaac aaaggagtaa atccatgaaa 79860
cagaaagttg gttctttgaa aagattcatg tgattgacca cagtctggct gaacagatga 79920
cagaccaagg agggagtaca accatcacca tttgaagtaa caggggagag gagccattgc 79980
tataccatac tccaggtctg aaagctgaca agaagatatc aagaaaaact gtatgtgaat 80040
aaattcatga atgtagatca tgtggatcaa ttccttaggt aaacaacaaa tcagcaaacc 80100
agatactgaa tagattgggt actcctatag aaagacatac agatagccag acagagaaac 80160
atttgtacgt gcataaaaca atctacaaga ctcacttcaa aatctctcag ttaatccaaa 80220
gtaacatatt tggcagaagg tggaaggagg gtattctgat cctttcttgt acacattgat 80280
gttttctctc ggttttctta tggagtatag acgagtttgg atgtgttaca ataagaatga 80340
taatctgtct ttgaaatgtt cacagttgtt tagaagttga ggacgatttg tgattgttac 80400
aggaccttta gtgagaatat ttcaaagtca ctttttacca ctttgttaca acaaaatgta 80460
gaggatgtct ggtgcccttg tatcttctcc catctctggt gaactgtatt gttttgtaat 80520
ttgcagtggc ctgaccagga actactgcag gaatccagat gctgagatta gtccttggtg 80580
ttataccatg gatcccaatg tcagatggga gtactgcaac ctgacacaat gtccagtgac 80640
agaatcaagt gtccttgcga cgtccacggc tgtttctgaa caaggtaaga agtctctggc 80700
cagacaacca cacccttgga cgttgggata aaaagagttg caaaatctta gtgatacaga 80760
agccttccat gctgcacggg aatctgaatg tggactcagg gtcagccaat gggaaggaag 80820
cctcagcgcc ttctctgggg gaaccagggc tgagattttt ggcaccccgt gacagggtgg 80880
tgtctttagg aagcgtgcag accttctagg gcactggatt taccactccc ctggttattc 80940
aatagattat ttcagtgtcc tagtgaaaat ggatattcta acatcctgcc aaatttgtga 81000
tgatttacca agctcatcat gagcctttcc tggtatttct tcaagtagac agtactcatt 81060
gcaaacttca gctttacagt ttcagaggaa tgtggttttt gagtctgtca tccttgagaa 81120
acctgatatg actttactta gttccatatc ctcctgggtc taggtaacag tacatagcca 81180
gcaaatgctc tatctccctg tctaccttaa tcttaggcag gtgctgcaca cctaggcttt 81240
gatggaaggg atttcttagt gttcttgccc ctccttctca tggaacacgt atctgtgttg 81300
ctgtttgtga agaagagtag tggatgtcta ctttgttgca atgcaggatc ctgggcccaa 81360
gatttcccgc cgtccctcca agggaataaa attttggcca gtacccctct ctgagagaca 81420
atgtgtcttt gcctggaagt cctagatgga ggaccacttc ctgccccatc ttccagaaac 81480
ttaaggcttt ggctttggag gatcagtgct ctggagaaat gtgtgacggt ttcatgtctg 81540
cccccactga caaccaccac ctacagcctg caccgcctga tgcatggcac tctggtctcc 81600
tgccttgttc tcaggaacac ccaaaagaga tctttgccaa agaacaggca catgagtgca 81660
attttgactg ataggcactc tgatctgtcc tttggtgccc aggttttaaa gaaaatcttt 81720
ctaaaaactc attgaagttc cagaatgcta tgaatctttg agctttgtta ttggcatgtc 81780
catctgccta ctaatgtaga acagagcatg gtcgtcattt tcagagatga tgtcctgttt 81840
ctatcatgga ttttttttct catgcttctg tgttctggaa attactcagt ttgttttctc 81900
ctctttgaat ttcagcacca acggagcaaa gccccacagt ccaggactgc taccatggtg 81960
atggacagag ttatcgaggc tcattctcca ccactgttac aggaaggaca tgtcagtctt 82020
ggtcctctat gacaccacac tggcatcaga gaaccacaga atactaccca aatgggtatg 82080
tctttgagtt ttctcccaag agaaacagcc acccacttaa atttctcctg gaagagccat 82140
gcttccagct aacttcttat gacccaattt ctctcagacc cagaatgttg gacagaatgt 82200
ctcaggcttc ttgctttggg cacagggtct gagaggagag aaatgtcagg ccagctctct 82260
tttctcatag ttgatagaag taggaggata cttggaggtg gtgaggtctc atgaatagaa 82320
agctcagaag aacatatgac catgtgctta gaaatagcac cattccacaa tgcccactaa 82380
agaccagtga aatagttcaa ccagggaatt ctgtcattct aatctccaag ccctggagtg 82440
aaggttgtgt ttgccatgtt tgtcttgggt aacaagtgaa ggatatctat attgacttcg 82500
agatcttccg atcactttct cctctaacct gtataaacac attgggttct gagaacaagg 82560
tgtctgaaaa gctatgtgtt gccagcccat gaggggcaaa aggaggaagg cagctgagag 82620
tcaggaagta tagagatgct gaagagttac acattcagga agatggacag aaacccatgt 82680
ctggctatgc cagcctttct gccatgaagg actatcaaat acatgagaaa acagttttca 82740
caggttggac aacagatatg gtaggcttga gagaactgag aaagggaatc aaaggagatc 82800
aacttcatca ttaacctgtc ttccttcctg gacacagtgt tggattgaag gacaagcaga 82860
tggagcccag ctgaccacag cagtcttgct taactgagga gagagactgg agtctgcgat 82920
gcctcaggca gctgatgtgt tctaggctgg ctaagaatga gaagggattt gtggaagaaa 82980
ggagctccag gaatacacac agaagtctcc tcaaggcttt ggctaaatac aaagctgcgt 83040
atgcacaggg agagttttca taaagaaaga acaacaaaga aaagctactt gggaaagaac 83100
aactgcaggg gaacagtaag ctcaatggag atgccagagc tcacatagca ctgggggata 83160
tttgaattct gaccactcag aggagaaaca cctcactaca ttttgggcat tcagtagaga 83220
ccaaagaaag ctgtattttg ggattgggat catcttattc ctagaatcaa ggtgactcca 83280
gaaaaactcc aacaaccctt cttccaagcc agtctaaaag gatccaaatg atctccaagt 83340
aaattaactg cattccacaa gaaaaaaaaa actcaacccc ccttagaggc aagggacaaa 83400
tacaagttgc tcagttatat ggcattccta ttgcgttact tctatttaaa aatttaatag 83460
agacacaaga agctttcact gtgatacata actgggagaa aaaatcactc aacacaaaca 83520
ggcccagaaa ttatagaatt gatgacattg gtgagaacat ttaaaatgca cctctgagaa 83580
ctgtgtttca ggaaaatgtc agcaaaagct gaccatgaga gaaacaaaag cagaatagca 83640
agagaaaaga aaagaaccgg agagccaaat gaaaattaaa gaactgagaa aaggtacatc 83700
tctaatgaag aactcactgg atggccttat catcacttta gacattacgg taggaaaggt 83760
gacctagaaa ataattcaat aggagctaca caaatcacag gacagacaga cagaccaaca 83820
gacagaaaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca cacacaaaga 83880
ctgaacctat taatcaacag agcctcaagg gcatctagga aaaatccaca catttaatat 83940
atgtgttagg caagtcacag aaggagaaga aaaagatatc atgacagaca ttatacttga 84000
agcgatgatg gctcgcaaca cgccaaatat acagaaaaca agaaactcat agtcaagaag 84060
ctaaatgact caggtataga attttaaaga gcaaaactct atgatttact gggatatatc 84120
atagttaagt tgcctcaatt caaagctaaa aagaaaaaaa gggggttcct atgaacaaca 84180
gctttgacag ctgttgatct aagaccacag cttaaatatc taggcaagga aaagcaaata 84240
aggcacaagg aaagaggatg gaaggaaata gtccaaacca atgacattca gtggaaaaga 84300
aaatagacca acaaaggagt aaatccatga aacagaaagt taggttcttt gaaaagtcta 84360
tatgattggc caaagtctgg ctaaacagat gacagaccaa ggagggagca tatccatcac 84420
catcatgagt aacaggagag agatgccatt gctatagcat cctccaggtg tgaaagctga 84480
gaagtagata ttgagatcaa ctgtatgtaa ataaattcat gaatgtagat catgtggatg 84540
gattgcttag gtaaataaca aatcagcaaa tcaaacactg aatagatcat gcagttttat 84600
agagacttac agacagcctg acagataaac atttgtatgt acgtgaaaca atctccaaga 84660
cacacttcaa aatccctctc ggttaatcca aaggaatgta tttggcagaa ggtagaagga 84720
gggtattctg atcctttctg gtacacattg atgttttctc tcagttttct tataaagcat 84780
agattacttt gaatgtgtta caataagaat cataagctgt ctttgaaatg ttgacagttg 84840
tttagaagtt gaggaccatt tgtgagtgtt atgggacttt agtgagaata tttcaaattt 84900
gcttgtttac actttgttac aagaaaacat agagggtgcc aggtggtgct gtatcttctc 84960
caatctctgg tgacctgtat tgttttggaa tttgcagtgg cctgaccagg aactactgca 85020
ggaatccaga tgctgagatt cgcccttggt gttataccat ggatcccagt gtcagatggg 85080
agtactgcaa cctgacgcaa tgtccagtga tggaatcaac tctcctcaca actcccacgg 85140
tggtcccagt tccaagcaca gagcttcctt ctgaagaagg taagaagcct gcagtcagac 85200
aaccataccc tcggacattg ggataaaaag atttgcaaaa tctttgtgat gcagaaaact 85260
tccatgctgc acaggaagtc gaaggtgaag tcatggacag ccaatgggaa ggaagcttca 85320
gtgccttctc tggggggacc agagctggga tgttgagtgc cttgtgaggg atggtgtctt 85380
taaaaggggc acagaccctc taggacactg gatttatcac ttccctgtta tcaaacgaat 85440
catattagtg tcctagccaa gatggatatt ctaacatcct gccaaacttg tgaagatata 85500
ccaagctcct aagcctgtcc agccctttct tcaagtaggc agtgtttatt gcagtcttca 85560
gctttaccat tttgaaggaa tgccattttt gaggctgttg ttcttgagaa acctaacatg 85620
tcttcattag atccgtattg tcctgagact ttgaagcagt acatagccac caaattgttt 85680
atctccccag cctaccttca tcttgggcat gccttccaca cctaggattt gagggaaggg 85740
atttctcagt gttctcatcc ctgcttctca tggaacattt atctccgttg ttttttgaga 85800
agaagagtag tggatgtcag ctttcttgta atgagggatc ctgggcccaa gattccctgt 85860
ctcccctcct aggctataaa attttggcct gtactccttc tccctgagag gcaatgtgtc 85920
tttacctaca agtcctagat gcaagatcct tttctgcccc acaccccaga atctgaaggc 85980
ttttgctttg gaggagcagt ggtctagtgt gcaagggttt catgtatacc ccccactaac 86040
agccaatcac cacctatagc ctgaacagct tgatgcatgg caccctggtc tcctgccttg 86100
ttctcatgaa cacccagaag aggtgtaagc aaaagaccat tcacatgagt gtaattttga 86160
agtataggca ctctgatctg ttttttgttt gtttctttgt ttgtttgttt tccagggttg 86220
aattaaaata tttatgacta cttattaaat ttctagaatc ctataagtct atttgtattt 86280
ttattctaca tttcaatttg catgctaata tagaagagtg taaattgtta atcctcagat 86340
tattccactt tgtgtgtcat aatttttttc acatttccct tttctaggca atactgagct 86400
tgattttctc ttttaatttc agcaccaact gaaaacagca ctggggtcca ggactgctac 86460
cgaggtgatg gacagagtta tcgaggcaca ctctccacca ctatcacagg aagaacatgt 86520
cagtcttggt cgtctatgac accacattgg catcggagga tcccattata ctatccaaat 86580
gcgtatgtct atcatgttag ccataaaagg aacaatagtc aactaaaatt tctcttagct 86640
ggcccatgct acaagctcac ttcctaggtc caaatttctc atagactcag agtttgtagc 86700
aaaatgtctc aggaaactta cttttgagca aaaggtctga atgaagagaa gttttaggat 86760
tgctatcttt cataacaatt tgatggaagc agcaggatat atggaggtgg tgaagtctca 86820
ttaatgtaaa gctaaggaga tcaaatgacc aaatgctgag acaaagtatc attccacaat 86880
gcccactaaa ggtccatgca gtctttcaac catgcaattc tatcattcta tcctccattc 86940
cctgaagtga aatttgtgtt tgccattttt gacacgaatc agaagtaaca aattcaggct 87000
gggtgcagtg gctcaggcct gtgatcccaa cactttggga ggacaagacg ggcagatcac 87060
cagaggtcag gagttcaaga ccagcctggc taacatggca aaaccccatc tctacgaaaa 87120
attaaaaaat tagccggtca tggtggtggg tacctgtaat tccaactact tgggaggctg 87180
aggcaggaga aacacttgag cctgggattc agagtttgct gtgagccgag aacatgccac 87240
tgcactccag cctgggtgac agagcaagac tcaatctcaa aaaaaaaaaa aaagaagaag 87300
aagaagaaaa gaagaagagg aagaagaaga agaggaagaa gaagaagaag aagaagagga 87360
agaggaagag gaggaggagg aggaggagga agaagaagaa gaagaagaag aagaagaaga 87420
agaagaagaa gaagaagaag aagaagaaga agaagaaaat agaaatgagt gcatatattt 87480
atatatgagt actagcctgt atgaacacac tgggttctaa gcaccagttt tctgaaggga 87540
tatgggttgt caggcagagt aaaagcagga atgcagatga gagtcaggaa gtaaacagat 87600
gtggtgatta aaatgggcag gtacatggac aaaaaaatgc atgtctgaca aaaactggcc 87660
tcttgccata agtgagtatg aataatatgg aaaaactgtt tgcacatgtt gaacagcaga 87720
cagtacaacc tgagatagtt tagaaaggga aacaaataag atcaacccca taattaccct 87780
tcctagactt aagggcaaag agttttaacc aaagcattcc acagcagtct tgctaaactg 87840
gggagagaga ctggagtttt gtttactaat aaaaccgaga ttttctaggt taggtaataa 87900
tgagaaagta tttgtggaga aaaggagctc caggaataca cacagaagtc tcttcaagtc 87960
tctggctgaa cagaaagctg tgtatgcaca gaaagagttt ccagagagaa aggagaacaa 88020
agaacagcta ctggggaaag aacaactgct ggggaacagt gagctcaatg aagatgccag 88080
agctcacata gcactgggag gtatttgagc tctgaccagc ctgaggagag acacttcatt 88140
gaacatcttg ggcattcagc aaagacccca aaaaaccata cttcaggagt agaattaatg 88200
cattcctaga ataaagtcta ctccagaaac accctagaaa agcttagaaa ccaagtctaa 88260
aaagatccaa atgatctcca agtaaattaa ttgcctgtca gaagaaaaca acctcttcag 88320
aggtaaacaa caaaattaaa ttgctcaatt atatagtatg cacaatgtgt ggcatacatt 88380
taaaaatttg ctaaacatac aaaaagcatt tagtgtgacc cataaccagg agaaaaatca 88440
gtcaatacaa atagacccaa aaatgataaa aataacagaa ttggcaagga gatttaaaat 88500
gtatgtatca taattgtgtt caaggattta aagaaagcgt ggacaagaaa taaataaatg 88560
gataatatca acagaaagaa aaattgtaaa aggaccaaat ggagagtcaa gaactgaaaa 88620
aaaagacatc tctttaatga gaaaatcact acatggcctt ataatcatat tagatagtac 88680
agatgataaa gctaactaga aaatattagg gtggtgcaaa ccatagcacg cttatacaaa 88740
gcctgagaag ataaacagag cctcaaggac atctatgaaa atatcaaaat atttaatatt 88800
tgtttaaagc aagtcacaga ggaagggaaa gagatattgg aacagaaaaa atacttgaag 88860
cagtgatggc tgatgacttt ctaaatatgg aaaaaatgat aaactcacat agtcaagaag 88920
ctcaatggat cagatatagg attttaaaaa gtaaagctgt atgatttatt tggacacatc 88980
ataattaaat tgtccataat caaagataga aagtaaaatc ttatttgaag cccaagggaa 89040
aaaacatacc tttacataga gtaacagtga cacaaatgac tgatgccttc tcatcagaaa 89100
caacacaaat cagaaacaat agaataacac ctttagagtg gtaagaagaa aaaaagatca 89160
aatcagaaac aacaaaataa cacgtttaga gtggtaagga ggaaaacaag atcaaatcag 89220
aaacaatgga ataacacctt tagagtgtaa gaaagaaaaa aagatcaaat caggaacaac 89280
agaataacgc cttcagagtg gtaagaagga aaacaagata aaatcagaaa caatgaaata 89340
acacctttag agtagtaaga agaagaaaag atcaggtcag aaaaaatgga ataatatgct 89400
aagaagaaaa aaaaagatca agtcagaaac aatggaataa cacctttaga gtgaaaagaa 89460
ggaaaaaaac ccagcaagct taaacgctat gcacagcaaa caattccact gaaaatgaat 89520
gttacgtaag tacatattct gtcctcctaa aaacaaagaa caaataaaag aatgtttcat 89580
cagcaggatt atgtaataaa agatgtgaaa gaatgctatg taagtagaag aaaaataata 89640
ccatatggga attggcatca aaaccacaaa atactatcaa aacaaaaaaa ctttattgat 89700
aaatttaaca caatatgcaa aagaactata ccatgtatac tacataacat tggtgagaag 89760
aaaattagaa gatctaaata aagacacatc atgcttatag attaaaaaat ccaatgtcac 89820
ttttcacaaa actgatcttt agtttcaacc cacacccaag cagaattcct gcagtctttt 89880
cttgaaaacc taacagaatg tatatgctag aatcaccaag acaatcttta aaaagaataa 89940
aaaacttgga ataaaatcac aagtttgtgg gatagatgca tatggtaata tggaaattct 90000
cataaagaca cagtaatcaa gacatgtggt attggctggg acgcttggct gtaatcctaa 90060
cactttggga ggccaagatg agaggattgc ctgagatgag gagttgcaga caagcctggg 90120
caacatagca agaccctcat ctctacaaat atttaaaaaa attagccagg tttggtgcca 90180
tgtgcctgta gtcccagcta ttcaggaagc tgaggtggga ggatcactgg agcccatgag 90240
gtggaggctg aaatgagcca tgattgtgct actgaacttt agcctgggag acagattaaa 90300
accttccctc tctctctcaa acaaacaaac aaaaaataca tagtattggg caaaacatat 90360
gcaaacaaaa acagaaaagg gtcagcataa atttacatat atggtcaatt tattttcaat 90420
acaggtagca aagcaattta atgaggaaat ttttttccaa aattggtctg aaacaactgg 90480
atagccatag aaaaaaacta taacaaatgt gacgcttgaa tcctactgta tgactcaaat 90540
taaattaatt tgagatagct cttagacctc aatgtaacag ctaattctga ggctgaaata 90600
taagactgct atgaaaaagt atagtatctt ataaccttgg agaaggaaaa attttttgag 90660
ggaagaacca gaaaacacta actgtaaaag aaaacaaatg ataatgtgga cattcattga 90720
ataaaaactt atgctcacca aatatgactg ttaagaaaat aaataagtaa gtaacacact 90780
ggaagaaaaa cactctcatc catatatctg acaaatggcc tgtatccaga gtatagaaac 90840
atttctccca ctcactaatc agaggacaaa caacctaatc aaaatgggca acaggcttga 90900
atagtcattt cttaggagaa gatgcacaca gagccaacaa tcacctgaaa aagtgcacaa 90960
catcttagcc atcaaaaatc aagagttata accctcataa gatgacactg aacatccagt 91020
gtacatggat atcattaaga agacacaata ataagtggtg tcaccgattt ggagctagaa 91080
tgtgccactc tctcatatgc tggtggaagt tcaaaatcat acaacaaatt aaaaaatcag 91140
tctgatgctt tcttataaag ttcgataaat atgcatctat cctacaaacc tgtaattcta 91200
ttcttgaata tttacccccc aaaatgaaaa cataagtcca caaaaatcta tataaatatt 91260
catagcagct ttatgtttta taaactcaaa ataaaaacta tttcaatgtt ttcatcaaaa 91320
gaaaatgaaa actatttaaa tggtttcatc aaaagaaaat gaaaaaagaa tttccagtat 91380
atttatacaa aggaatacta ttcatcaaca aggaacaagt tactgatagt ctcagaagca 91440
tgaacaaacc tcaaaaatat attaaggaaa gaagccagac gtcaaagtgt atagtctgta 91500
tgagtccatt catgtgagtt tatagaaaac acaatttatg gtgaaagaaa ccaatagcat 91560
ttgacactgg ccgtgggaag agggtagcag agattgattg agcagccaca caagggagtt 91620
tctggggtgg tgaaaatgtt ctgcattgtg agggcagtgt gggctacaca agtatatgta 91680
tttatcaaat ctcatccagc tacatttaag atctgtgcat ctcactctat gtgaaaatat 91740
actcaactga aaaacagagc aggtatctgt ttcaggtgct acatcacttg atacgtccag 91800
ttgtgttaaa aaccactgcc taacatcctc aaatggggga tctgggcttg agactaggtc 91860
acatgtgtag agtctctaca gagaccgtgt tggattccca tgctccataa tacgttccaa 91920
gttttctcag acagccacag gtcatgaatg tgaggattct gagaggttgg agcaacgttc 91980
ttgggaggca taatggggaa ggcattctcc aagattcctc cagcctgggg tcttcacctg 92040
ctgtgcctct tactgcattg ttttctgact catccatagc cacttgaccc cttcagatcc 92100
catagtctac ctagccgtct ccctttatgc cttgggtccc gctgttcttt caactcatca 92160
cccattcctt cagtcccaga gtggctgcag ccagcagagg atggactgag agcaggagag 92220
gaggtcgtgc ccatgaaccc atcctagaga agcagcatcc tgcctgggag ctagttttcc 92280
agggaagctt ttataagtcc tgtagaccca aacccacttg ctctaccaga tacagtattt 92340
atagtaatac tattttcatg attattttat attgcaaatg tagagcattt atgctacact 92400
atgagtaaat agagtaaggg ggctggcatg ggaattatat aatcttggat gccacttctt 92460
ccttggggaa atgtatttga gttccaactt acatattact atatagtctt atagagagag 92520
agacaaagag ctagacagac agagatatct ttgtatgtgc attaaaaaat ctaagataca 92580
tatttcaaaa tctgtgtcat ttattctgga ggaaagtatt tggcagaagg tgaaaggaag 92640
atattctgat cctttcttgt acagacatgt attatctcag ttttcataga gagcatatac 92700
tacttttgat gttttaaaac aaaaattata atctgtgatg tgtccacagt tgtttaaaag 92760
ttgaagctga agaccatttg tgcttgtggc aatattattg tggtataatg ggaatatttc 92820
aaaggcactt gttaacactt tgttacagca aaatgtagag ggcgctaagt gcccttgaat 92880
attctcccat ctctggtgac ctgtgttgtt ttgaaatttg cagtggcctg accaggaact 92940
actgcaggaa tccagatgct gagattcgcc cttggtgtta caccatggat cccagtgtca 93000
ggtgggagta ctgcaacctg acacgatgtc cagtgacaga atcgagtgtc ctcacaactc 93060
ccacagtggc cccggttcca agcacagagg ctccttctga acaaggtaag aaatttgtgg 93120
ttagacatct atatactggg atgaaaaacc atggaaaatc ttactgatgc agaagccttc 93180
agtggtacac tggagggttg gttgagggtc tgcaatgtgg aggaaagcct cagcgccctc 93240
tctgggggat ccagaactgt gatttttggc acgctgtgag gaggcagtgt ctttaggaag 93300
ggcacggtgt ctttaggaag ggcacagacc cgccagggca ctggacttac cactcccctg 93360
gttattaaat gggtcatttc agtgtcctag ccaaaatgga tattctaaca gcctgccaaa 93420
tatgtgaaga tttccaagcc aataagcctt tccagtgatt taaagtagac ttttttcatt 93480
gcaatctaca gtttgcagtt tcttaagaac atggcctttg agtatgatat cctagagaaa 93540
cctaaggaga ctgcattatt tttctattgt cctggggctg catagcagga ggtaaccaac 93600
gaatgctgtc tctccctggc ctatctcagt ctttcacagg ctctgttcac ctcagctttg 93660
aagttagaaa tttctaggtg ttcttgcctc ttcttctcat gaaacctgca ttggcagtga 93720
gtctacagaa gaagaggaag agaattctgc tttgttacaa ttcaggactc tgggcactag 93780
aagattccct atctctcctc caagggaata agttgtttgt ctctaaccct ccttgagaaa 93840
caatgagtct ttgcctgcac tcctaaatgt aggatgattt cctgcccaaa ttttcaaaag 93900
attaagcctt ttgccttggt atgagcaatg gtctagggaa atgcgcaagg gtcttgtgtc 93960
ggcccctgac tgaccaccag tcacctccta cagcctgcac caaggaatgc attgcattct 94020
ggtcttctgc cctgtggttc tcatgaaaac cagcagagat tcatatgatg gagctgcaca 94080
tgaatgtaat ttccaatgtc cagcattctc ctctgttctt tatctttaga tttaaaaata 94140
atgtttctat gaacttatta aaattctaga atactatgaa tctactgggt cttttcacat 94200
ccttttgcta ctagtagaaa aaagaatagt aataattttc agaggctact gtccagtatg 94260
tgacataaat tgtctcccat gtttctctgc tcatgcaatt actgagtatg atttatttta 94320
ttttaatttc agcaccacct gagaaaagcc ctgtggtcca ggattgctac catggtgatg 94380
gacggagtta tcgaggcata tcctccacca ctgtcacagg aaggacctgt caatcttggt 94440
catctatgat accacactgg catcagagga ccccagaaaa ctacccaaat gcgtatgtat 94500
ttgattaaaa ccataagagg agcaacagcc aactcaaata ttggttagaa gacccatgct 94560
ttaagctcac ttcctaggga caaatttctc ttagactcac attttggcaa aatgtctcag 94620
gacctttgct tttgagcaaa gagtctaaga gaagagaaat tttaggcctg ctatttttcc 94680
taatagtttt atggaaggag tagaatatac ggaagtggcg aagtcatatt aatgtaaagc 94740
tcagaagata aatgaccaaa gcttaaacac agcaccattc cacaatgccc actaaaaatc 94800
aatgtcatct ttcactcgtg caattctgtc attctaaatt tcaattcccg aaggtttgtt 94860
tgccattttt gtcatgggta ataagtaaaa aaaaaaaaat taagatgtgt atatatatat 94920
atatatatat atatatacac acacacacac acacacaaac atctgaatat ttatatatat 94980
gtctgaatat ttatatactt gtgtataaaa cttatattta aatttttgca taaatttata 95040
tatttttaat atttcattaa aaattatatt gtttcactat gtatgtctga gtatttttat 95100
atattttaat ataacatttt aaatatttat atataaatat tcaggtatgt aactgaatat 95160
tcatttacac acacaaatat atgtgtgcat gtgtgtatat atatatatac ccatatatat 95220
atatatatat atatatacat atatatatat atatatatat gtatatatat atatatatat 95280
atatatacac acacacacac acacacatac atacaggtat aaacacactg ggcctgaagc 95340
accagtggtc tgaaaggaca tgtgttgcca ggacttgaag agcaaaagca ggaaggcgga 95400
tgagagtcag gaggtacaca aacgctgaaa agtaaaatgg acaagtacat ggacaaaaag 95460
caggtataag cataacagcc ttttggaagt aaatgactat aaaatatatg aaaatactgt 95520
tttcacaagt tgcacaacag atagtagtgt attgagataa tttagaacag aaaacaaatg 95580
tgatcaaccc cataagtgtg ctgtatttca tcatggattg aaggaaaaag agatggagcc 95640
caagaagacc acagcagtct tgatgaactg agagacacca gagtttggga ttacaaaggc 95700
agctgggatt ttctacactt ggtaataatg agaaagaatt tgtggagata aagagctaca 95760
gtcatgtacc tagaagtcac ctcagtgtaa tataaatctg catatgcaca gggagtgatt 95820
ccacaatgaa agtaggacaa agaacagcta ctggggaaag aataactaca agggaacaat 95880
gagttcaatg gagatggcag agctcacaaa gcactggggg atatttgagt tcttaccagc 95940
tagaaaagag acctcattgc aaatcttggg cattcagtag agaccccaga aaagccactc 96000
tttggaaaca gagttgatgt attttaagag caaaatctac tccacaaaaa tcctagcaaa 96060
attgaaaagc aagtcagaaa gaccaaaatc ctctcaacat aaattagttg cccatcagaa 96120
gaaagcttaa cctcttcata ggtaaacaat aaaatcaaat tgctcagtta tctggcatcc 96180
acaatatgtg acataaattt aaaaatttac tagacataca agaagcattt agtgtgatcc 96240
ataaccagga gaaaaatcat tcaatacaaa tagacccaga aatgacagaa atgatagaat 96300
tagcaaaaac atttaaaata tacatatgat catttgatct tgtgatcaga tatcacaaga 96360
gaagaaagag atacttgaac agaaaaaatg cctgaagcaa tgatggctga aaactttcca 96420
aatatgaaga aaaaaaagct cacagattca agaaaactaa tcaatcagaa atatgatttt 96480
gaaaagtaaa aatgtatgat ttactttggc aaatcttctt ggttaaattg tctaaaatca 96540
aagaaagcta ggaaaatttt ataagccaga ggaaaaaaga ttgtttatat aaaggaacag 96600
ttacacaaat gactgatgcc ttctcatcag aaacaatgaa agtcagaaac aataaagtaa 96660
catctttaaa gtaatagaag aaaaacccaa gaggtgaggg atcgtggcag acaggaggca 96720
ggactagatt gcagctctgg acagagcagc atgcagaggc tcatattgtg aattttagcc 96780
ccatattgac tgcaagaaca gaccagcaat cctgagagga cccacagacc gtgtgaagga 96840
agcagactgc tcctgcagga taagggagac accccaaata ctgtgagttc cccaactgca 96900
gaagtggaaa agggaggcct tactccctca aacacacccc acaactggag aagctgaaag 96960
tctgtttgca ggagaagttc ccaactttac ctgggcctca gtaaatttag agagctgagc 97020
caagcaaaat ataggggtag aggaagcagc agagaagacc tcagagcttg ctggatcccc 97080
aagcagctca ttcctgcctg gcaccacaga gatccatcag aagtgtggcc aaaggaacag 97140
agggtaaaac tccacatgga ggactgctct acctgaactt tctaacaatt tgaacagggg 97200
gagaagcctc ctggccagaa cttgggggag ggcatgaatc tggtttgcag acttcacagg 97260
tgggggaagg actaaagccc ttttctttca cagctgggag gtggaaagcc tcaggcaagt 97320
tttcaagcct gactttcccc ccacctggaa acagacttgg agctgttgcg gggttggggg 97380
catggtggga gtaagaccag cccttcagtt tgcatgggtg ctgggtgagg cctgtgactg 97440
acagcttccc tccacttccc cgacaactca gatgactcag cagaggcagc cataatcctc 97500
ctaggtacac aactccagtg acctgggaac ttcaccccca caccatacag aagcttcagt 97560
aagacgtgcc caaggaaagt ctgagctcag acacgcctag tcccaccccc aactgatggt 97620
ccttccctac ccaccctggt agcagaagac aaagagcata taatctttgg agttctaggg 97680
cccacccacc tctagtccct ctccacacta gtatagctga tgcaggaggc caaccagcac 97740
aaaaatagag cattaaacca ccaaagctag gaacccctat ggagtccatt gcaccctcct 97800
ccacctccac cagaacaggc actggtatcc acagctgaga gacccataga tggttcacat 97860
cacaggactc tgtacagaca gtccccagta ccagcccaga gctgggtaga cttgctaggt 97920
ggcaagaccc agaagacagg caataatcac tgcagttcag ctcacaggaa gccacatcca 97980
taggaaaaga gggagagtac tacatcaagg gaacacccca tgggataaaa acatctgaac 98040
aacagccttc agccctacct tccctctgac acagtctacc caaatgagaa ggaaccagaa 98100
aaccaaccct ggtaatatga caaaacaagg ctcatcacac tcccagttca ccagcaatgg 98160
atccaaacca agaagaaatc cctgatttac ctgaaagaga attcaggagg ttagttatta 98220
agctaatcag ggagggacca gagaaaggca aagcccaatg caaggaaatc caaaaaaaaa 98280
aaggtataag aagtaaaagg tgaaatattc aacaaaatag atagcttaat aaaaaaacaa 98340
taaaaaattc agtagacttt ggacacacct ttggaaatgt gacatgctct ggaaagtctc 98400
agcaatagaa ctgaacaagt agaaaaaata aattcagagc tcaaagacaa ggacttcaaa 98460
ttaacccaat ccaacaaaga caaagaataa aggataagaa aatatgaaca aagccttcaa 98520
gatgtctggg attatgttaa atgaccaaat ataagaataa tcgtggctcc tgaggaaaaa 98580
gacaatacta aaagcttgga aaacatattt gggggaataa ctggggaaaa cttacctggc 98640
cttgctggac acctagacat gcaaatacaa gaaacacaaa gaacatgtaa atacaagcag 98700
cacaaagaac acctgggaaa ttcatcacaa aaagatctta gcctaggcac attctcatca 98760
ggttatgcaa agttaagacg aaggcaagaa tcttaagagc tgtgagacag aagcaccagg 98820
taatgtataa aggaaaccct atcagattaa cagccagttt ttcagcagga actgtacaag 98880
ctataaagga ttggagccct atcatagcct cctcaaacaa aacaattatc agtcaagaat 98940
tttgtatcca gcgaaagtaa gcatcatata tgaaggaaag atacagtcgt ttttggacaa 99000
acaaatgcta agagaattca ccattaccaa gtcaccacta gaagaactgc taaaaggagc 99060
tctaaatctt gaaacaaatc ctagaaacac atgaaaacag aatctcttta aagcataaat 99120
cacacaggac ctataaaaca aaagtacaag ttaaaaaaca aaaacaaaaa acaaaaccaa 99180
agtacggagg caataaagaa tatgatgaat gcagtggcac ctcacatttc aatgctaaaa 99240
ttgaatctaa atggcctaaa tgctccactt aaaggataca aaaagagttg gtggctggca 99300
agatggctga ataggaacag ctccagtctg ccgctccccg tgagatcaac acatagggtg 99360
ggtcatttct gcatttccaa ccaaggtacc cggctcatct cattgggact ggttagacag 99420
tgggtgcagc ccacagaggg tgacctgaag cagggtgggg tgtcacctca cctgggaagt 99480
ggaaggggtc agggaactcc ctcccctagc caaaggaagc cgtgagggac tgtgccgtga 99540
agaccagtgc attctggcac aaatactatg cttttcccac ggtctttgca acctgaagac 99600
caggagattc ccttgggtgc ctacaccacc agggccctgg atttcaagcc caaaactggg 99660
ctggcatttg ggcagacact aagctagctg caggagtttt ttttcatacc ccagtggtcc 99720
ctggaatgcc agcaagacag aaccattcac ccccgtgaag aaagggctga agccagggag 99780
ctaagtggtc tttctcagtg gatcccaccc ccatggagcc cagcaagcta agctccactg 99840
gcttgaaatt cttgctgcca gcacagcagt ctgaagttga cctgggacgc tcaagcttgg 99900
tgggaggagg ggtatccaca aatactgggg cttgagtagg aggttttccc ctcacagtgt 99960
aagcaaaacc gctaggaagt ttgaactggg cagggtgcac tgcagcttgg caaagccatt 100020
gtagcaagag tgcctctcta gattcctcct ctctgggcag ggcatctctg aaagaaaggc 100080
agcagcccca gtcagaagct tatagataaa actcccatct ccctgggaca gagcaactgg 100140
aggaaggggt ggctgtgagt gcagctccag cagacttagt ttcctgcctg ccagctctga 100200
aaagagcacc agatccccca acacagcact agagctctga taagggacag actgcctcct 100260
caagtgggtc ctggtttcag aagataataa gaaactcctc tgagctaaag gagcatgttc 100320
taacacaatg caaggaagct aagaaccttg aaaaaggtca gaggaattgc taactacagt 100380
aagcagttta gagaagaaca taaatgacct tagggagctg aaaaacacag cacgagaact 100440
tcatgacaca tacacaagta tcaatagcaa aatcgatcaa gtggaagaaa ggatatcaga 100500
gattgaaaat caacttaatg aagtaaagcg tgaaaacaag attaaggaat aaagaatgaa 100560
aaggaatgaa caaatcctcc aagtatggga ctatgtgaaa agattgaacc tacgtttgat 100620
tggtgtacct gaaagtgatg ggagaatgga accaagttgg aaaacactct tcaggatatt 100680
atccaggaga acttccccaa cctagcaaga caggccaaca ttcaaattaa ggaaatacag 100740
agaataccac attcaaattc aggaaataca gagaacacca caaagatact cctcaagaag 100800
agcaacctga agacacataa tcgtcagatt caccaaggtt gaaatgaagg aaaaaaatgt 100860
tgagggcagc cagagagaaa gtttgggtta cccacaaagg gaaccccatc agactaacag 100920
tggatcttcc tgcagaaact ctacaagcca gaagagagtg ggaggccaat attcaacatt 100980
cttttttact attattatac tttaagttct agggtacatg tgcacaaggt gcaggtttgt 101040
tacatatgta tacatgtgcc atgttggtgt gctgcaccca ttaactcttc atttacatta 101100
ggtatatctc ctaatactat ccctccccac tccccccatc ccatgacagg ccccggtgtg 101160
tgatgttccc cactctgtgt ccatgtactc tcattgttca attcccacct atgagtgaga 101220
acattcggtg tttggatttc tgtccttgtg atagtttgct gagaatgatg gtttccagct 101280
tcatccacat ccctacaaag gacatgaagt catccttctt tatggctgca tagtattcca 101340
tggtgtatat gtgccacatt ttcttaatcc agtctaccat tgatggacgt ttgtgttggt 101400
tccaagtctt tgctattgtg aatagtgccg caataaacat atgtgtgcat gtgtctttat 101460
agcagcatga tttataatcc tttagatata tatccagtaa ttgtatggct gtgtcaaatg 101520
gtatttctag ttctaaatcc ttgaggaatc accgcactgt cttccacaat ggttgaacta 101580
gtttacagtc ccaccaccag tgtaaaaatg ttcctatttc tccacatcct ctctagcatc 101640
tgttgtttcc tgacttttta atgatcacca ttctaactgg tatgagatgg tatctcattg 101700
tggttttgat ttgcatttct ctgatggcca gtgatggtga gcactttttc atgtgtctct 101760
tgactgcata aaagttttct tttgagaatt gtctgttaat atcctttgcc aactttttga 101820
tggggttgtt tgattttttt tcttgtaaat ttgtttatgt tctttgtaga ttctggatat 101880
tagccctttg tcagatgggt agattgtaaa aattttctcc cattctgtag cttgcctgtt 101940
cattctgagg gtagtttctt ttgctgtgca gaagctcttt agtttaatta gatcccattg 102000
gtcaattttg gcttttgttg ctattgcttt tggtgattta gtcatgaagt ccttgcccat 102060
gcctatgtcc tgaatggtat tgcttaggtt ttcttctagg gtttatatgg ttttaggtct 102120
aacatttaag tctttaatcc atcttgaatt aatttttata taaggtgtaa ggaagggatc 102180
cagtttcagc tttctacata tggctaggca gttttcccag caccatgtat taaataggga 102240
aacctttccc tatttcttgt ttttgtcagg tttgtcatag atcagatggt tgtagatgtg 102300
tggtattatt tctgagggct ctgttctgtt ccattggtct atatctctgt tttggtacca 102360
gtaccatgct gttttggtta ctgtagcctt gtaatgtagt ttgaagtcag gcagagtgat 102420
gcctccagct ttgctttttt ggcttaggat tgtcttggca atgcatgctc ttttttgttc 102480
catatgaact ttaaagtagt tttttccaat tctgtgaaga aagtcattgg tagcttgatg 102540
gggatggcat tgaatctata aattacctta ggcagtatgg ccattttcac aatattgatt 102600
cttcctatcc atgagcatgg aatgttcttc catttgtttg tgtcctcttt tatttcatta 102660
agcagtggtt tgtagttctc cttgaagagg tccttcccat cccttgtaag ttggattcct 102720
aggtatttta ttctctttga agcaattgtg aatgggagtt catccatgtc cctacaaagg 102780
acatgaagtc atgtatggga atgcttgtga tttttgcaca ttgattttgt atcttgagac 102840
tttgctgaag ttgcttatca gcttaaggag attttggtct gagaagatgg ggttttctaa 102900
atatacaatc atgtcatctg caaacaggga caatttaact tcctcttttc ctaactgaat 102960
accctttatt tccttctcct gcctaattgc cctggccaga acttccaaca ctatgttgaa 103020
taggagtggt gagagagggc atccctgtct tgtgccagtt ttcaaaggga atgcttccag 103080
tttttgccca ttcagtatga tattggctat gggtttgtca taaatagctc ttattatttt 103140
gagatatgtc ccatcaatac atagtttatt gagagttcag catggagagc tgttgaattt 103200
tgtcaaaggc cttttctgca tctattgaga taatcatgtg gtttttgtct ttggttctgt 103260
ttatatgatg gattacattt attgatttgc atatgttgaa ccagccttgc atcccaggga 103320
taaagccaac ttgatcatgg tggataagct ttttgatgtg ctgctggatt cggtttgcca 103380
gtattttatt gaggattttt gcatcaatgt tcatcatgga tgttggtcta aaattctcat 103440
ttttgttgtg tctctgccag gatttggtat caggatgatg ctggcctcat aaaatgagtt 103500
agggaggatt ccctcttttt ctatgattgg aatagtttca gaagaattgg taccagctcc 103560
tctttgtatc tgtggtagaa ttcggctatg aatctctcct ggactttttt tggttggtag 103620
gctcttaatt attgcctcaa tttcagagcc tgttattggt ctattcaagg attcaatttc 103680
tttctggttt agtcttggta gggtgtatgt gtccaggaat ttttccattt cttctagatt 103740
ttctagttta tttgcacaga ggtgtttata atattctctg atggtagttt gtatttctgt 103800
gggattggta gtgatatccc ctttatcatt ttttattgca tctatttgat tcttctctct 103860
tttcttcttt attagtcttg ctagtggtct atcaattttg ttgatctttt caaaaaacca 103920
gctcctggat tcattgatgt tttgaaggtt tttttgtgtc tctatctcct tcagttctgc 103980
tctggtctta gttatttctt gccttctgct agctttttaa tgtgtttgct cttgcttctc 104040
tagttctttt aatggtgatg ttagggtgtc aattttagat ctttcctgct ttctcttgtg 104100
ggcatttagt gctgtaaatc tccccctaca cactgcttta aatgtgtccc agagattctg 104160
gtatgttgtg tctttgttgt cattggtttc aaagaatatc tttatttctg ccttcatttc 104220
gttacatacc cagtagtcac tcaggtgcag gttgttcagt ttccatatag ttgagcagtt 104280
tttaatgagt ttcttaatcc tgagtcctag tttgattgca ctgtggtctg agagacagtt 104340
tgttataatt tctgttcttt tacatttgct gaggaatgcc tcacttccaa ctatctggtc 104400
aatttcagaa taagtgcgat gtggtgctga gaagaatgta tattctgttg atttggggtg 104460
gagagttctg tagatgtcta ttaggtctgc ttggtgcaga gctgagttca attcctggat 104520
atccatgtta actttctgtc tcattgatct gtctaatgtt gacagtgggg tgttaaagtc 104580
tcccattatt attgtgtggg agtctaagtc tctttgtagg tctctaagga cttgctttat 104640
gaatctaggt gctcctgtat tgggtgcata tatatttagg atagttagct cttcttgtta 104700
aattggtccc tttaccatta tgtaatggcc ttctttgtct cttttgatct ttgttagttt 104760
aaagtctgtt ttatcagaga ctaggattgc aacccctgct ttttttgttg ttttccattt 104820
gcttggtaga tcttcctcca tccctttatt ttgagcctat gtgtgtctct gcacgtgaga 104880
tgtgtcttca gaatacagca cactgatgga tcttgactct ttatccaatt ttccagtctg 104940
tgtcttttaa ttggagcatt tagcccattt acatttaagg ttaatatttt tatgtgtgaa 105000
tttgatcctg tcatcatgat gttcgctggt tattttgctc attagttgat gcagtttctt 105060
cctagcatcg atggttttta caatttggca tgtttgtgca gtggctgata ccgattgttt 105120
ctttccatgt ttagtgcttc cttcaggagc tcttgtaagg caggcctggt ggtgacaaaa 105180
tctctcagca tttgcttgtc tgtaaaggat tttatttctc cttcacttat gaagcttagt 105240
ttggctggat atgatattct cagttgaaaa ttcttttctt taagaatgtt gaatattggc 105300
tgccactctc ttctggcttg tagagtttct gctgagagat ctgctgttag tctgatgggc 105360
ttccctttgt gggtaacccg acctttctgg tgaatctgac aattatgtgt cttggagtta 105420
ctcttctcga ggagtatttt tgtggcattc tctgtatttc ctgaatttga atgttggcct 105480
gcctttgtag gttggggaag ttctcctgga taatatcctg aagagtgttt tccaacttgg 105540
ttccattctc ctcgtcactt tcaggtacac caagcagatg tagatttggt cttttcacat 105600
agtcccatat ttattggagg ctttgttcat ttctttttac tccttttttt ctctaaactt 105660
ctcttctcgc ttcatttcat tcatttgatc tttaatcact gatacccttt cttccacttg 105720
attgaatcaa ctactgaaac ttgttcatgt gtcacgtagt tctcgtgcca tggttttcag 105780
ctccattaga tcatttaagg tcttctctat gctgtttatt ttagtctgcc attcatctaa 105840
actttttcaa ggtttttagc ttctttgcaa tgggttcgaa catccttctt tagctcggag 105900
aaatttgtta ttacagatcg tctgaagcct tcttctctca actcatcaaa gtcattctct 105960
gtccagcttt gttctgttgc tcgtgaggag ctgcgttcct tcggaggaga agaggcaccc 106020
tgatttttag aattttcagc tgttctgctc tggtttctcc ccatctttgt ggtttatcta 106080
cctttggttc ttgatgatgg tgatgtacag atggggtttt ggtgtggatg tcttttctgt 106140
ttgttagttt tccttctaac agtcaggacc ctcagctgca ggtctgttgg agtttgctgg 106200
aggtccactc cagtccctgt ttgcctgggt attaccagtg gaggctgcag aacagcaaat 106260
attacagaac agcaaatgtt gctgcctgat tcttcctctg gaagcttcat ctcagagggg 106320
cacccagctg tatgaggtgt cagttggccc ctactgggag gtgtccccca gttaggctac 106380
tcgggggtca cggacccact tgaggaggca gtctgtccat tctcagatct caaactctct 106440
gctgggagaa ccactactct cttcaaagct gtcagacagg gatgtttaag tctgcagaag 106500
tttctgctgc cttttgttca gctatgccct gcccccagag gtggagtcta cagaggcagg 106560
caggtctcct tgagctgtgg tgggctccac ccagtttgag cttcctggtc gctttgttta 106620
cctactcaag tctcagcaat ggcagacgcc cctcccccag ctttgctgcc gccttgcagt 106680
tcggtctcag actactgtgc tagcagttca atctcagact gctgtactag cagtgagcaa 106740
ggctctgtgg gcatgggacc ctctgagcca tgtgcaggat ataatctcct ggtgtgccgt 106800
ttgctaagac cattggaaaa gtgcaatatt agggtgggag tgtcccgatt ttccgggtac 106860
atctgtcatg gcttcccttg gctaggaaag ggaattccct gaccccttac acttcccggg 106920
tgaggcaata tcccgccttg cttcggctca ctctccgtgg gctgcaccca ctgtctgaca 106980
agccccggtg agatgaaccc agtacctcag ctggaaatgc agaaaccacc catcttctgc 107040
tttgctcatg ctgggaactg tggactggag ctgttcctat tcggccatct tgaaacctcc 107100
cctctctcac gatcacaagg tcccacaata ggccgtctgc aggctgagga gcaagaaaag 107160
ccagtctgaa ttccaaaact gaagaaattg gagtctgatg ttcaagggca ggaaacatcc 107220
agtgccaaag aaagatgtag aatattcaac attcttaaag aaaataattt tcaacctaga 107280
atttcatatc cagccaaact aagctttata acaaaggaga agtaaaatcc tttacaaaca 107340
agcaaatgct gaggaatttt gtcaacacca ggcctgcctt acaagaggtc ctgaagaaaa 107400
cactaaatat ggaaaggaaa aaccagtaac agctactgca aaaacatacc aaattgtaaa 107460
caccatcaac actataaaga aactgcatca actaatgggc aaaatagcca gctagcatca 107520
taatgacagg atcaaattca cacataacaa tattaacctt aaatgtaaat gggctaaatg 107580
ccccaattaa aagacacaga ctgggaaatt gaataaagag tcaagaccca ttggtttgct 107640
gtgttcagaa gacccatctc agggtgaaaa gacatacatg ggctcaaaat aaagaaatga 107700
aggaatattt accaagcaaa tggaaagaaa aaaaaagcag cggttgcaat cttagtcttt 107760
gatgaaacag actttaaacc atcaaagatc aaaagagaca aaggagggca ttacctaatg 107820
gtaaaagtat caatgcaaca agaagatctg actgtcctac ttatatatgc acccaataca 107880
ggagcaccca gattaataaa gcaagttctt agagacctac aaagagactt agacttccac 107940
acaaaaatag tgggagactt taacacccca cagccaatat tagatcgacg tgacagaaaa 108000
ttaacaagga tattcaggac gtgaattcag ctctggacca agctgaccta atagacatct 108060
acagaactcg acaccacaaa tcaacagaat atacattctt ctcagcacca cattgcactt 108120
attctaaaat tgaccacata attggaagta aaacacttct cagcaaatgc cgtagaatgg 108180
aaatcataac aaacagtctc tcagaccaaa gtgcaatcaa actagaactc aggattaata 108240
aactcactca aaaccacaca actatatgga aactgaacaa cctgctcctg aattactact 108300
gggtaaataa caaaattaag gcagaagtag ataagttctt agaaaccaaa gagaacaaag 108360
acacaatgtg ccagaatctc tggtacacag ctaaagccat gtttagaggg aaatttatag 108420
cactaaatgc ccacaggaga aagcgggaaa gatctaaaat caacacccta acatcacaat 108480
tcaaagaacc agagaagcaa gagcaaacaa atacaaaagc tagcagaaga caagaaataa 108540
ctaagatcag agcagaactg aaggggataa agacacgaaa accctttaaa aaattaataa 108600
atccaagagc tggttttttg aaaagattaa caaaatacat agaagcctag ccagactaat 108660
aaagaagaaa atagagaaga atcaaataga cacaataaag aataataaag gggatatcac 108720
caatgatgcc acagaaatac aaactaccat cagagaatac tttaaacacc tctatgcaaa 108780
taaaatagaa aatctaaaag aaatggataa attcctggac acatacaccc tcccaagact 108840
aaaccaggaa gaagtcaaat ccctgaatag accaataaca agttctgaaa tcgaggcagt 108900
aattaatagc ttaccaacca aaaaaagccc agaccagagg gattaacagt caaatcctaa 108960
cagaggtaca aagaagagct agtactattc cttctgaaac tattccacac aatagaaaaa 109020
gagggactcc tgcctaactc attttatgag gccagcatca ttctgatacc aaaacctggc 109080
agagacacaa caagaaaaga aaatttcagg ccaacatccc tgatgaacat caatgtgaaa 109140
atcctcaata aaatactggc aaactgaatc cagcagcaca tcaaaaagct tatccaccat 109200
gatcaagttg gcttcatccc tgggatgcaa ggctggttca acatattcaa atcaataaac 109260
ataatccatc acataaacag aaccaatgac aaaaaccgta tgattatcgc aatagacgca 109320
gaaaaggcct ttgataaaat tcaataccca atcatgctaa aaactcttaa taaactaggt 109380
attgatggag catgtctcaa aataataaga gctacttatg acaaatgcat agccaatatc 109440
atactgaatg agcagaagct ggaagcattc cctttgaaaa ccagcacaag acaaggatgc 109500
cctctctcac cactcctatt caacatagta ttggaaattc tgtccagggc aatcaggcaa 109560
gagaaagaaa taaaggtatt caagtgggaa gagagggagt caaattattt ctctttgcag 109620
atgacatgat tgtatattta gaaaactcta tcatctcagc ccaaaatctc cttaagctga 109680
taagcaactt cagcaaagtc tcaggataca aaatcaatgt gcaaaaatca caagcattcc 109740
tatacaccaa taagagacac agagccaaat cctgagtgaa ttcccattca caattgctac 109800
aaagagaata aaatatacct aggaatccaa cttacaaggg atgtgaagga cctcttcaag 109860
gagaactaca aaccactgct caaggaaata agataggaca caaacaaatg gaaaaacatt 109920
ccatgctaat ggattggaag aatcaatatt gtgaaaattg ccatactgcc caaagtgatt 109980
tatagattca atgttatccc catcaagcta ccattgattt cttcacataa ttagaaaaaa 110040
ctactttcaa tttcatatgg aatagaaaaa gggcctgtat atccaagaca acctaagcaa 110100
aaagaacaaa gctggaggca tcatgctatc tgacttcaaa atatactaca aggctacagt 110160
aacaaaaaca gcatggtatg gtactggtac caaaacagat atatagacca atagaacaga 110220
acagaggcct cagaaataac accacacatc tacaactatt ggatctttga caaactggac 110280
aaaaataagc aatggggaaa ggattcccta tttaataaat ggtgttggga aaactggcta 110340
gccatatgca gaaaactgaa actggatccc ttccttacac cttatacaca aattaactca 110400
agatagatta aagaattaaa tgtaagacct aaaaccataa aaaccctaga agacactttg 110460
ggaggccgag gtggatggat cacgaggtca ggagatcgag accatcttgg ctaacacagt 110520
gaaagcccat ctctactaaa aatacaaaaa attagctggg tgtggtcgtg ggcacctgta 110580
gtcccagcta cttgggaggc tgaggcagga gaatggcatg agctgaggag gttgagcttg 110640
cagcaagcca agattgtgcc actgcactcc agcctgggca acagagtgag actccatcaa 110700
aaaaacaaaa acaaaaacaa aaaatcaaac cctagaagaa aacataggca ataccattca 110760
ggacataggc atgggagaag acttcatgac taaaacagca aaaccaatgg caacaaaagc 110820
caaaatttac aaatcagatc taattaaaat aaagagcttc tgcacagcaa aaaactctca 110880
tcagagtgaa aaagcaacct atggagaaaa attctgtggt ctagccatct gacaaagggc 110940
taatgtttag aatgtacaag caacttaaac aaatgtacaa gaaaaaaaaa acaaccccat 111000
caaaaagtgg gcaaaggata tgaacagaca cttctgacag gaagaccttt atgtggctga 111060
caaacatgaa aaaagctcat catcactgtt aattagagaa atgcaaatcg aaaccacaat 111120
gagataccat ctcatgcccg ttagaatggc gatcattaaa aagtcaggaa acaacagatg 111180
ctgaagagga tgtgtggaga aagaggaaca catttacact gttggtggga gtgtaaatta 111240
gttcaaccat tgtggaagac agtgcggtga ttcctcaagg atctagaacc agaagtacca 111300
tttgacccag caatcccatt actgggtata tacccaaagg attataaatc attctacaat 111360
aaagacacat gcacacgtat gtttattgta gcactattca caatagcaaa gacttggaac 111420
caactgaaat gcccatcaat gatagactgg ataaagaaaa tgtggcacat atacactgtg 111480
gaatactatg cagccataaa acaggatgag ttcatgtctt ttgcagggac atggatgaag 111540
ctggaaacca tcattctcag caaactaaca caagaacaga aaaccaaaca ccatatgttc 111600
tcactcataa gtgtgagttg aacaatgaga acacatggac acaggaaggg gaacatcaca 111660
cacaggggcc tgttggggag ttgaggctag gggagggatt ggattaggag aaatacctaa 111720
tgtagatgat gggttgctgg gtgcagcaaa ccaccatgac acgtgtatac ctatgtaaca 111780
aacccacaca ttctacacat gtatctcaga acttaaagta taataataat aagatacaga 111840
actgcagaat gaataagaac tcaccaacca tctgctgcct tcaggagact catttaagac 111900
ataaggactc acataaactt aaagtaaatg ggtggaaata ataataagtg gtgtcactga 111960
tgtggaggta gattataaaa ctcttatcat atgctggtgg aagatcaaaa tgataaaacg 112020
aattaaaaaa tcagtcagat ggtttcttaa aaagttccat caatatgcct ctatcttaca 112080
aacctgcaat tctattcctg aatctttatc ccaaggaaat gaaaaagtaa gtccacaaag 112140
agttctatat gaatatttat aggagcttta tttattataa ttcaaactgt aaaaataatt 112200
tcaatgttca tcaataacaa aatgaaaaaa taatttgcaa cctactggta cacttgaata 112260
ctattcagca ctgagtatct taaatagcat ggatggagct caaaaatata ctcaggaaag 112320
aagccatgta tattctgtat gagttcattt acatgagatc atttacattt cctccaaaag 112380
aggaaaaact aatttctgtt gaaagaaacc aatgtatttg cctctggcag tggtaagggg 112440
gtagcacaga ttaattgggt agggactcaa gagagtttct ggggtcacag aaatgttccg 112500
tgtggtgatg ggagtttggg ctccacaggt ataggtgttg atccaaaatc atcaaaaaaa 112560
caacattgca gatctgtgca tctcactctg tgggaaagta tatctcaact gtaaaaaggg 112620
cagaaattgc ttttaaacgc tcagcctttt agcacatcca gttgcttgga gaaccagctt 112680
actcaaatgg gggtctaggc tggagactag gtcacaggca tagagtctct aaactttccc 112740
atggcacata atacgtttca ggttttctca gagagctgca ggttagtaat ctgaggattc 112800
tgacaagttg ggtcaacgtt cctaggaggc atgaatggga gtgcattctc taagatccct 112860
ccaccccagg gtccttgctt tctgtgcctc ttactccatt gttttctgac tcctctgtag 112920
ccactcgacc tcttcagatc ccattgtcta cccagccatc gccctttatg acttgggtcc 112980
cactgttctt tcatctcatc ctccattccc tcagtttcgg agtggctgcc gctagcagag 113040
gatggactga gagcaggaga ggtggtcctg cccaggaacc catcctagag aaatggcatc 113100
ctgtctggga gctagttttt tagggcaggt tttataagtc ttgtaaagcc agacacactt 113160
gatctacctg gtatgttatt tacagtaata ctattttcat aattgctttt cactctaaaa 113220
gtagagcctt ttagctacac tgtgagtaaa taaaggggct ggcctgggaa tggtatcatg 113280
ttggatgttg tttcttccct gaagtaatat atatcagtta caatttacat gttactgcag 113340
agtcctagag agagacacag agaatgagac agataccaat acatttttat gtgcattaaa 113400
aaaatctaag gccaggcgca gtggctcaca cctgtaatcc cagcactttg ggaggccgag 113460
gtgggtggat cacgaggtca ggagattgag accatcctgg ctaacacggt gaaaccctgt 113520
ctctactaaa aatacaaaaa attagccagg cgtggtggcg ggcgcctgta gtcccagcta 113580
ctcaggagac tgaggcagga gaatggcttg aacccaggag gcagaccttg cagtgagccg 113640
agattgcgcc actgcactcc agtctgggcg acagagcgag actccgtcac aaaaaaaaaa 113700
aaaaatctaa aatgcactct tcaaaatcta tgtcatttat tctggaggaa tgcagttggc 113760
agaaggagga agatattccg aatttttctt gtatacattt atgtatgatc tcagtttttt 113820
tatggatcat agaccaattt tgatatttta aaataaaaat tataatctat cttggaaatt 113880
tacatggttc tttagaactt gaggaccgtt tttgcttttc ggaatattat tgtacctaaa 113940
atgggaatat tacaacgtca ctttttaaca ctttgttata acaaagttta gacagcgctg 114000
ggtgcccctg aattttttcc cgcctcttgt gacctgtgtt gttttggaat ttgcagtggc 114060
ctgaccgaga actactgcag gaatccagat tctgggaaac aaccctggtg ttacacaacc 114120
gatccgtgtg tgaggtggga gtactgcaat ctgacacaat gctcagaaac agaatcaggt 114180
gtcctagaga ctcccactgt tgttccagtt ccaagcatgg aggctcattc tgaagcaggt 114240
aagaagtctg tggccagata tctacacatt tgaacattgg gatgaaaaga gatggaaaat 114300
ctgactgatg cagaagcctt ccatgctaca cagaaacttg agggtatggc aggtggaaag 114360
aagcctcagc actctctctg gtggagcaat ttttggcgca acgtgcgtgg gcggtgactt 114420
caggaatggt gcaaacccac ctgggcactt gacttaccac tcactttgtt atgaaagggg 114480
ttatctcggt gttccagaca aaattccaat tctaacatca ggccaaattt gtgccaaatt 114540
tcacactagt gagtgtttcc aggcatttat taaaatggac agtgttcatt gcaatcttca 114600
gcattgcagt tgctgaggta tgtggccgct gagtttgtca tcctggggaa acctaatatg 114660
atgatattta ttccatctaa tcctggggct atttggcagt aaataccaca gaatacacta 114720
tttctctggc ttatttcagt cttaggtagg ctctgcacac ctatgcttgg aaggcaggaa 114780
tttcttggtg ttcttgtgcc ttcttctcat ggaacgtgca tctttggtgt gtgttgagag 114840
gaagggtagt agacttctgc tttgttgcaa tgcaggatgc tggaacaaga ggattccctg 114900
tctctactgt aagggaataa gattttagcc tccatccttc tctaagaagc aatgtgtctt 114960
tgcctccaag tactagatgc aggaccatga actgccccgt ccaccagaag cttaaggctt 115020
tggcttttca ggagcaatca tctagggaac tgtgcagggt tttcatgtct gtcccctact 115080
gacagccaat caccatacag cctgcataac ctaatccatc atcgtctggt ttcctgcctc 115140
attgttttca tgaacaacca gtagagagcc atacgaaaga gcttgcacat gagtctttgt 115200
tccaattgta agagcactga taggtccttt tcccaccagg ttttgaatat aaaatttcta 115260
agaacttatt aaaatattag aatgttatta atctattgtt tttgcttcag catgtccttc 115320
tgcttgtgag tatactaaag agaacagtca taattctgaa actactgtcc tgtttgtgtc 115380
ataaattgct tcacatgttt ctgcatacta gtagttactc agcttgattt tgtctatttt 115440
cagcaccaac tgagcaaacc cctgtggtcc ggcagtgcta ccatggtaat ggccagagtt 115500
atcgaggcac attctccacc actgtcacag gaaggacatg tcaatcttgg tcatccatga 115560
caccacaccg gcatcagagg accccagaaa actacccaaa tgagtatgtc tttgatgtta 115620
cttgtaagag gagcaacagc caacttaagt tcctcctaga agagccttgc ttcaagctaa 115680
cttgttagga caaatttccc ttagacccag aaggtgtgtc aaaatgtcca gacaactttg 115740
cttttgatca aagagtctga gagaataggt attttaggct tgctatcttt tctaatagtc 115800
tgatggaagc agaaggctac atggagctga tgaggtcttt ttaatataaa gctcaagaga 115860
tcaaatgatc aaatacttag agtgccattc tacaaggctc ataaaagatc aatgcactct 115920
ttcacccatg caattctatc attctaacct cccttctctg aaatgaaggc tttttgccat 115980
ttttgtcatg ggtcacaagt aaataattca catgtatatg agtatatata taaccaggtg 116040
tgtttattca gactagtatg tatatatata catatatatg ttcatataag ttagtattca 116100
tatatatgtt catatatata tgttcataca gactagtatt catatatata tacatatata 116160
tatacacaca catatatata tatatatata tgttctaggg aaacatgcaa ggtttttatg 116220
tctgtccctg actgatgacc aaatacccta tagcctgcac agctgcaagc tgtatagcca 116280
tacaatttgc aggacacaca cacatacaca cacacacaca cacacacaca cactaacata 116340
taatataata taatataata taatataata taatataata taatataatt aatatatata 116400
aacctgtgtg aacacactgg gttctaagct ccagttttct gaagggatat gggttgccag 116460
gagaggaaga gcaaaagcaa gaatgtagat gagaattagg aagtaaacag atatggagat 116520
taaaatgggc aggtacatgg acaaaaaacc aggtctgaca aaaactggct ttctgccata 116580
aatgactata aaagatatta aaaaacactt tccacatgtt ggacaagaga cagtacagga 116640
ctgagataat ttagaaaagg aaatgaatga gcgcaactcc gtaactatta tgactttctt 116700
cctggagaac cttcctggac tgaagggcaa ggaattggag ccaaagccaa ccacagcagt 116760
cttgctgaac tgaggaaaga gactggagtt tgggatagct aagaaaatgt gtattttcta 116820
tgctaggtaa taatgagaaa gaatttgtgg tgaaaaggag ctgaaggaat atgcatggaa 116880
gtctaatata aactgcatat gcacagggag aaattctaca aagtgggaca gagaaccact 116940
actggggaaa ggacaaattc agggaaacag tgagctcaat ggtgacgcca gagctcacgt 117000
agcactgggg gataccgggg ttctgatcag cccgaggaga gacacctcat tgaacatctc 117060
gggcattcag tagagacccc agaaaagtca tactttagga gtaggattta tgccttctta 117120
gaataaagac taccccagaa acaccctagt aaagcttaaa aaccaagtct aaaaggaccc 117180
aaatgatctc caagtaaatt aactgcctga cagaagaaaa ctcaaccatc actggaggta 117240
aataacatga ttacagtgct ctgtaatgtt gcattcacaa ggagtgacat catttaaaaa 117300
tttatgaggc aggaaaaagc aattagtgtg atccataact aggagaaaaa ccagtcaata 117360
caaatagacc aagaaatagt agaaacgatg gaattgacaa agaaattaaa actgtatata 117420
tgataattgt gttcaaagat ttaaagaaaa catgaacatg agggaaacaa atgcagaata 117480
taaaaaaaag caaatgcgta aaacaaccaa atggaaatta aagaactaca aaaaagtata 117540
accttaataa aatactcact ggatggcctt aatattagtt tatacattac agaagaaaaa 117600
gtgaaccaga agataactca atgaaagcca tacaatctgt aagacacaca cacacgcaca 117660
cgcgcgcgcg cgcacacaca cacacacaca gagagagaga gagagagaaa gagagagaga 117720
gaaaggctga aaaaaataaa tagaacctta aggatatcag tgaaaatagc aaaagattta 117780
atatatgggt aaagcaagtc acagaaggac gggaaggaga tattgggaca gaaaaaaata 117840
ctcaaagcaa tgatggctga agactttaca cgtatgaaga aaatgataaa ctcacagtca 117900
agaagctcaa tgaatcagaa atagtatttt taaaagcaaa actctatgat ttacttgggt 117960
acattataga taaatcgtcc aacatcaaag ataacaagga taatcttata agccagagga 118020
aaacaatatc atttacatag agggacagta atgaaagtga ccgatgcctt ctccttggaa 118080
acaatggcat aacatcttta aagtgataaa gagaaataaa aacagatcaa cctaggacga 118140
catgtccagc caaaacaaac aaataaacaa aaaaaccctt taaaataaac gtgatgtaaa 118200
tacgtattct gccacctcca gaggaaacaa gcaaaaaaac aaaagaatgt ttccaaggca 118260
ggcttctgta ttaaaagatt ttaaggaaag ttattcaggt agaagaaaaa taataccaga 118320
tgggaacttt aatccatact aagtaatgaa gagccctgga aatggcaaat ggcaatgtca 118380
atataaaata ctcttattta tctaattttt aaatgtattt aaaggacaat ttgtgatatt 118440
aattaaaata ataggaatat attgttgttt caacgtatgt agtagtaaaa ttcataaaaa 118500
cagtagcaca aataatgcag atgataactg gaagtatact gttaatgagt tttttgcatt 118560
atccatgaag ttatataata ttaatagatg gttgaatgtg atagtttaag gtgggatatt 118620
ataaatccta ggacaaccaa aaaaatttaa actgagagga atggatagta agaggaatag 118680
tccttttatg caaaagaagg aagaaaaaga ggaataaaga atataaaaga tatggtgtaa 118740
acagaaaata catagcatta ttgtagacac aaactgaact accttatgag tatattaaat 118800
ataaaaggat taagcattac aaataaaagg cagagattgt aaattgaata aaaaccacag 118860
ctaagtgtgt tctttttaga ataaatactc tttaagtgta aagatctact ttaaacacca 118920
aaatatgaaa aaggatatat accatgaaaa cctgaatcat aaataagctg gagtggtgat 118980
taatggatgc aggcactcct aaagactaat aagtgaatgt ggtcaaattg aagaaacaaa 119040
agtatatacg tgctcaatgt gcaaaaactt tttctgtata catgctatga tcctttggaa 119100
aattaaagtt ttaaagcaat atcactgaca atagtatcaa aaccaaaaaa tatttagtga 119160
taaatttcac acactatgct caaggactat acaccttgca ctagaaaaca atgttgagga 119220
aagaattaaa agatctaaat atacaccatg cttatagatt aaaagactcc atatcagttc 119280
tcgtgaaatt gatctttgga tgaaacccac acccaagcac tattgcaaca gtcctttttt 119340
ggaaaaaaaa attggaggac ttatatacct taatataaag acttataaaa gtacaggaat 119400
caagacatgt ggtattggcc tggccccttg gctcatgcct gttaccccaa cattttggga 119460
ggctgagtct ggaggatggc ttgagcccag atgttcaaga ccagccttag caacagagtg 119520
agaccctctc tctacaaaaa ataaacaatt agatcgatgt gatgacttgc acatgtagtt 119580
tcagctactc ggaatgctga ggtgagagga ttgcttgact caggaggtct agccatgagt 119640
gagcattgat catgcctctg cattccagcc tggatgatgg aatgagacac tgtctcaaaa 119700
aaaaaaaaaa aaaaggatat gtgttattgg ccaaaaaagt atgcaaacct aaaaagggat 119760
ggcccaccac cagacccaca tacatatatg gtaaatggat tttccgtata gatggcaaag 119820
caattcaatg gagacaaaaa tgttttacaa aatcattctg aaccatttgg atatccatga 119880
tacaaaacaa aagcagaact tgacttttgc ttttcatctc aaattatttt gatatctctt 119940
ccacctaagt gtcagagcta aaactgaacc tgaaatatga aagttccatg aaaaaatata 120000
aaatcttcac aaccttggag aaggcaaact tttttgaggc aggagtctgt aaacactcac 120060
tataaaataa aacaaattat aatgtgggct ttcatgaaaa ctcatgctta ccaaaagtca 120120
ttgttaagaa aataaatagg caagtaacac atgagaagaa aaatgctctc tgtccatata 120180
tctgacaaat ggcttgtgtc cagaatatag gaacatttct cccactcact aaacagagga 120240
caaacaacta atgggcaaca gattgaatag gcatttcttg gggatagata gatgtacaca 120300
tagccaataa gcacctgaaa aaatgtccag tatctcagcc atgaaaaata aagagttata 120360
atcatcatga gatgtcacca aacacccaat ggacatggat attattaaga agacaccaca 120420
gtaactgatg tcactgatgt agagcaagga tgtgaaactc tctcatatgc tggtgaaagt 120480
gcaaaatgat acaaccactt ttgaaatcag tctgatagtt tctccaaaag ttcaataaat 120540
gcacttttac cctacaaacc tgcaatcctg tttgtgaata tttaccccac agaaatggaa 120600
acataagtcc acgaagacat ctccaagaat attcatagca gctttatttt ttataacccc 120660
aaactgtaga caatttcaat gtcaatcaat aagaaaatga ataaataatt tgtgaactag 120720
tcatacaatg gcatactgtt cagcaataaa agggagcatg tttttgatac tctcaaatag 120780
tatggaagat gctcaaaaat attacattaa agaaagatgc cagataacaa aaatgaacat 120840
tatgtatgag tctattgatg taaggttcca gaaaggtaaa actaatttct ggtgaaagaa 120900
accaatatca tttgcctctg gccatgggaa gagagtagca gagattgatt gagcagtaaa 120960
acgaagtttt tttctggggt gatgtaaatg tcctgtattg tgattgaagt gtgagttaca 121020
caagtgtaca tgttcatcag aagtcatcaa actacatcta agatctgtgc atttgactat 121080
acatgaaaat atacctcagt tgaaaataga tcaataacct ccctcatata ctatacttgc 121140
taacacagcc agctgcttgg agaaccagct tgctggaatg gagaatctgg gcttgagact 121200
gggtcacatg tatagagtct ctacagagac aatgttgcat tcccacggta cataatacat 121260
ttcaaggttt ctcagacagc cacatgtcat gaatgtgagg attctgagag gttggagcaa 121320
cattcctggg aggaacgaag gggagcacat tctccaagat cccccaccac cggggtcctc 121380
accggctgtg cttttttttt tttttttctt gacagagtct cgctctgtcg ccaggcagga 121440
gtgtaatggc ccaatctcgg ctgattgcag cctccaactc cagggttcaa gagattctcc 121500
tgcctcagct tcatgagtag ctgggactac agatgtgcgc cactgcgccc agctaatttt 121560
tgtattttta gtagagacgg ggttttgcca tgttggccaa gatggtctcg ctctgttgac 121620
ctcgtgatcc acccgccttg gcttcccaaa gtgctgggat tacaggcgtg agccaaagca 121680
cccagcctgt gcctctcact tactcaattg tttttctgaa ccctccatag ctggtggacc 121740
ttttcagatc ccatagtcta gccagccctc tcactttatg ccttgggtcc cactgttcct 121800
tcatctcatc ccccttctgt cagtcccgca gtggctgtgg ccagtagagg atggactgag 121860
agtaggagag gaggttctgc ccaggaaccc atcctagaga aacagcatcc tgcctgggac 121920
ctagtcttcc aggtcagctt ttataagtct tttagactca aactcacttg acccacctga 121980
agtggtattg acaataatgc tattttcatg gttgtttttc actgtaaatg cagagccttt 122040
tagctacacg actagtacag agagtaaggg aggctggcct gggaatgata tcatcttgga 122100
tggcatttcc tccttggaga aatatatgtt agttccaact cacatgttac tatacagtcc 122160
tgtagaaaga gatacagaga gttagacagg tatagacgca tttgtatatg cataacaatc 122220
tataagacac acatcaaaat ccgtataccg gttcctctag gggtatgtgc ttggcagaag 122280
gtagaaggag ggtattctgg ttcctttctt ttgcacattt atgtatgatc tcagttttta 122340
tatggagcat tgatagggtt tggctatgtc cccacccaaa atctcatctt gacttgtaat 122400
ctctataatc ctgataatcc ccatgtgtca agggcaggac caggtggagg taactggatc 122460
atgggggcag tttctcccag gctgttctca tgacagtgag agagtctcct gagatctgat 122520
ggttttgtaa gtgtctggca tttcccctac ttgcacttac tctgtcctgc cgcctgtgaa 122580
gaaggtgcct gtttctccct tgccttctgc catgactgta aatttccaga ggcctcccca 122640
gcaatgtgga actgtgagtc aattaaaact cttttctttg taacttaccc agtctgtctc 122700
gggtatttcc tcatagcaat gtgagaacgg gctaatacaa gcatatacta cttttgatat 122760
tttaaaataa aaattatcat ctatctttga aaggcatgca caaatgggaa gttgaggaac 122820
atttgtgttg tggcaattgt atgatacctt taatgggaat atttcaaaga cacttgttaa 122880
gactttgtta gaacaaaatg tagagggtgc tggatgtccc tgaatattct tccgcctcct 122940
gtaacttgta ttgctttgga atttccagtg gcctgacaat gaactactgc aggaatccag 123000
atgccgatac aggcccttgg tgttttacca tggaccccag catcaggtgg gagtactgca 123060
acctgacgcg atgctcagac acagaaggga ctgtggtcgc tcctccgact gtcatccagg 123120
ttccaagcct agggcctcct tctgaacaag gtaagaagtc tgtgtcttac cttgtctagc 123180
acatacctct ctatgtgctt ggacaacggg atgaaaagac atgaaaaacc acactgatgc 123240
agaagccttt agtgctacac gggagctcga gtgttggttg aggttctgcc atgaccaagg 123300
aagtctcagt gccgtccctg ggaaagccag agctgtgatt tttggcacaa cttgtgggag 123360
tagtgacttt aggactggcg caaaacctcc agggtgctca acttaaccac tcaccttatt 123420
ctaaaatggg ttatttcagt gtcccagtca aattcctatt ctaacatgct gtcaactgtg 123480
tgattatttc caagccaata agcatttcca gtaatttctt aaaatagtgt tcattgcagt 123540
cttcagcgtt gtggctcctg agggatgtgg cccctgattc tgtcgtccta gagaagcctg 123600
acatgactgc attgattctg tatcgtcctg ggtctatgtg gctgcctggc tgtctgtaat 123660
catctgtttt atttttattt ttttctacag actgtatgtt tgggaatggg aaaggatacc 123720
ggggcaagaa ggcaaccact gttactggga cgccatgcca ggaatgggct gcccaggagc 123780
cccatagaca cagcacgttc attccaggga caaataaatg ggcaggtctg gaaaaaaatg 123840
taagccactt tgatttggac tctttttccc tttgctgaca aatcttttca aacagaagag 123900
gggcagagga aaatactgga aagacttcag gaggctaagc gtaattagcc ttagcatgga 123960
aagtgcaagc agcacaggcc agcaaagccc cacgcgtgtg ggggttctca ggcctcttct 124020
cttttgacat ttctttactg tttccattgt tgggtgctgt ttctcgtttc tagtgcttgt 124080
cctctaagcc aggggtcccc actccagtac tggtactggt actggtactg gaactggtaa 124140
ttatctgtgg cctgttagga actgggctgc acagcaggag gtgagcttcg ggggagcaaa 124200
caaagcttca tctgtatttt ctgctgcttc ccatcactct catagctgcc tgagctctgc 124260
cagctgtcag atcagaggca gcattagatt atcatagcac aaaccctatt gtgaactgca 124320
catgtgagga atctagattg catgctcctt atgagaatct aatgcctgat gatctgtcat 124380
gcttccatca cccccagatg ggaccaccta cttgcaggaa aattagctca gggctcccac 124440
tgattttacc ttatggtgag atgcacattt atttcattat atattacaat gtaataataa 124500
ttgaaataaa gtgcacgata aatggaaggt acttgagtca tcctttaacc atcgccccct 124560
caccccaggt gcacagaaaa attgcctttt atgaaactgg tctctggtgc caaaaaagtt 124620
ggggaaccac actgctctgg gttctagtag tcagagatgc cctctatgag gcttaagtca 124680
gatttttcta gaaaagattt ggatgggcca tcaggtcacc atgagacttc ccttagcctc 124740
atgcattctc tgtgatggtt tactttgggg cctatgaata gggaagactg agatatagga 124800
aaaaccaaag tgtctgtgtt cccccactct cacacccatg taacataaca cttctcacac 124860
cagatatggg gggatttctc ctcacacccc aagcgagtct ccagcagata ccagctgggt 124920
gtcctacaat gtaactcggt cctgacactc tatctggaga cagtgtcaga tcccacaagt 124980
taaggctcag tcctacaaga ctgccccact gcagatgcca atcccaagtt gcaggctgtg 125040
acctgtactt ctgcccagct ggataaagat ctgtttttct atatgaccct ccatgggttt 125100
gattactttg ctagagtggc tcacagaact cagggaaaca cgttactttt atttacccat 125160
ttattataaa agatattaaa aaggatcctg gtgaacagcc aggtggaaga gatgcacagg 125220
gcaaggcacg tgggaagggg ctcagagcct ctatgccctc tccagtgcac cagtccccag 125280
taccctaagt gttcagcaac ccagaagctc tccaagtgca gtcttgttgg gtttttatgg 125340
aggcttcatt acagaggcac agttgattac atcattggcc atcggtgatc ggctcacctt 125400
cggcccctct tccctccctg gaggttggag ggtggggctg aacagttcca accctcaagt 125460
cacatggttg gttcccttgg caaccagccc ctggggctat ccaggaaccc accaagagtt 125520
gcttcattgc agctcccttc acccaggaaa ctccaaggga tttaggagct ctgtgttaag 125580
aactgggggg cagagaccca atatacattt cttattctat cacaatatca caggaagcta 125640
aggatgatac tgcctttgtg tgtcttggct gtggatggtg cataatgcat ggaagtaagc 125700
atttctgaat caacagcaaa caggctttat caggtagaag acccctcagc gccccaggga 125760
caaagctcat caatgatgtc ccactgtcct ctgaggctct agctctaaga cctccagtgg 125820
gtcaagctcc tggagaagtg gcacattctc caaagaccct tcagggtcac cacaccctgg 125880
ttaagggtgt ggcctcataa ctccttttga ctatgactga tggcttacag catagaaaga 125940
aataactttg tcaaaaaata taataatgat agaaaggaag aaggaacgct cccttttgtc 126000
ttctaagaat agatgtgaaa tgtgtgtgcc ttagaatatc ttctccctct cctgctccac 126060
gtgagctgga gcttacatgc ctgcttgttt tcagtactgc cgtaaccctg atggtgacat 126120
caatggtccc tggtgctaca caatgaatcc aagaaaactt tttgactact gtgatatccc 126180
tctctgtggt aagttgcctt ctgttttggt aaggaaactg cttccttaat atggatttgg 126240
aaaaaaaaaa gcaaaaaaaa cagaaaatgg cttttgagct gagtgcttct ggggaggaga 126300
tggctgccct ctccaccaga gcctgctttt catcatggcc accttgaacc tgccctacta 126360
ttggccccat ttgttaggaa aacacccgcc cctcccacca cacacacata aataaaataa 126420
atgtcaaatt cccaaagggc aaacttagag gtgatctaat cagcccggga tagtcccacc 126480
gaacccttct ttgtctagcg tgggatgcat gaaaaacaaa tttagagtca ttatgatgaa 126540
aaactgtcct cttctgcagc tgagaagaaa aaaaaaatac gagcagcagg aaacagctaa 126600
gcatgtaatg cacattgtaa acctcagatg gccatcctag gaaatcaatg aagggtagtg 126660
cagctcttta gccccagatg gcctttctcg taagattact actcatgagt cccattagcg 126720
acattgctta gagactgctt gttaggttcc ttcctcattg ctctgagact cttattggga 126780
gtatgaggct tggatcaggg gaaggggaat tgacattaga tcttaaatga ttggggtaac 126840
aaatccatgg gggaaaaaaa gccacttgta cttgttccct attttcttcc tgctgaccaa 126900
tcaacttgtc tgtccgagtt acagaacacc accctggact tttcttttgt gtaatttggt 126960
tgcttgtggt tgggtctgcc atgtgaaggg accttgagct gggggaagaa ggttggcctc 127020
caagtccact gaagaccagc atcctgagat tgcctgggga ggtggtacag ggcagtgatg 127080
aagatcatgg gagccacact gcccatcgtc acatttgggc cactcctggg gagagcaaga 127140
gggaagaagg agaggttagg gtgataggaa agattctact tggccaatat tattataatg 127200
tggcattgtg gtctctggat ttagtgtgag ttgatagctg acttttttct cgagtgggtg 127260
cttttgttct attttgtcgg tgctattgca gaagcatctt ggtggttcct ctacctcaaa 127320
gtctcttgat ggggtcagtt ccagttctcc gcttctggcc ccatctagta cacgccactg 127380
cctctcactg cctgggctct ctatccttga caggctgcct tgaatttaag cccagtctga 127440
cttacctgcc tcaaacaccc acagtagtgc ctgggactca tgcacctttg actcccatgg 127500
aagggaagtg cagtagcttc ccaggtgcaa ttctgctgtc ctcacccaca ttgaggatgt 127560
atgagaatca ggttcttaga gattggagaa agaaggaaga atgggaacaa gatttcttcc 127620
aatggactgt gaggttcccc accttacttt gatgtaagac aagtgaggtt aaccccaagc 127680
ctggtgagga gggttcccat cagacacttg gaaatcctga ggactgtttc ctgcagaagg 127740
atgtggttgg tgggatattc aggtttgact catgattgag aaagttagag cctctggttg 127800
gagaaagagt ttaataacta tttcatttcc accaacacat tcagtacgaa taataaataa 127860
gtaaaaataa atagaaacat tcagttttat tttgaatagt aggagtaggg tataatttct 127920
gtagttactc ttttagtaca atgatgcatg tttactgtat gtaaggcata ctagcagaaa 127980
ttgagctcag cactagaaaa gatgattgca ttccatgcca tgcttctttt ttacaaaaga 128040
cttctataga tagattctca aaacaaccca cagcaaatga aaagttattt ggaaaactca 128100
ggttccagat tcactggagt gtagaatctc tggttggttg gggaggaatt tcctcttgca 128160
gttgttatta ataattatat gaataattat taactatatt aatatttata gttttgaaga 128220
ccttgaaggg ctggagacaa cagagaagca tttttgaaca ccctctgtag cccctgcact 128280
gttgtaggca ttgatgggtg gtaccaaaga tgggacactt tccctacctc cagagacctt 128340
gtgggcttgc tgcagagaga aggcagggag gaggaaaaga agaatagagg cacatgtgtg 128400
taaattaccc ccacagcagt cagttagtca tgggaggctc cccagaagaa ctgtcctgaa 128460
gctggctgag agaaggcaac atttcaacat aggacagtta tccttgctac ataaaatcac 128520
atacacacat gcacatatgt ccacacacag agactcacat gcaaaagaat cctttgtgcc 128580
tttcagtaaa ctttacatgg tttagaaaga acttatattt ccttgaaagg agagtgtcct 128640
ttgttgttta ctaccacttt ttaaacttag aaagaaaaat ctaaagagtg tttatgattt 128700
taccatttaa tttcaccttt gagatgtgaa aaactagtgc ttggaattcg tcctgaatta 128760
aacgacacaa ttgctaactt ggactcaaat gcgacttctt ttcccacctt gtgccacagc 128820
atcctcttca tttgattgtg ggaagcctca agtggagccg aagaaatgtc ctggaagcat 128880
tgtagggggg tgtgtggccc acccacattc ctggccctgg caagtcagtc tcagaacaag 128940
gtaagaacag gcccagaaac catctatact gtccttccat gtaagcccca caaaaccctt 129000
ctacatttac acagaaccca cacagctgat gcatcaatac ctgcctctct gttttctgaa 129060
ggaggaaaaa atatagaaaa attaaaaaaa gttatattat tataggttct ctacttggaa 129120
aatagccaaa atacaaatct ttttcttgat ctgggcagtt ccatcaaaat ctgtaggcac 129180
agtgatttgc accaagttcc aatacttttg gaaaatattg aagatgctct gagggtttct 129240
atggatatcc attgtctcac tgtcagatga aaagaaaggg aagtttttag aaatgtgaca 129300
ctttgcagtg agggaggaca agagcaaact tacctacagt ctatcacagg cacagatttt 129360
tttttacact tttgtgaatc attgaattca atgccgaggc tattcatcta ttcacaaaca 129420
catgaacaaa ttatgggttg tgatccccat aaatgaagag taatcagtcc gaacccacag 129480
aacctggaca ttttgggtat cgtttcagtg gaacatgcaa ttcgtaagtt cagtttgctt 129540
gggtgtctct taggaagaac acataggaca cagacccatc tgcctgcatg ttttgcttcc 129600
tcatctcctt tctacaccag ggcacctgtg ctcaattgct gttctcctct aaagagactt 129660
ccttctgtaa gtttgtgaaa tgccatcgac aaacctgatc gcatcgcatt tcactctgct 129720
gttgagttga tttttcttta ctttatcgtt tgtaacttct tgctctacag agctttcacc 129780
ttccacatat ttcagattca ttctttccta aactgtgtgg tggtctatgt cctcactgac 129840
tatcaacata ctgccatcat gcacttccta tctctattcc tcttcgttgc aatctggctc 129900
caagtggctc acaccattat tctgatctat caactgccta cacagtccta gaaagtaagt 129960
gagtcaagaa acatccccca aaagtaaact tttcaggtaa gatcagaaga ccctcatgag 130020
tcactgctgc tcaggatcgt atctggctcc ttgaagagtg accttgcata gatcttgtca 130080
taaaaaatga aagagacctt gggaaggtct tgggctggtc acttttgtca gagtccaggg 130140
ctgtggggtg aaagccacag ctatagagct tcattctgga gtcacttagc tttgctctcc 130200
tggggacagg ctgtgcctat tcttgcctca ggcatcaaaa aaagtggcac agatgggccc 130260
ttctgaaaaa tctcactact ggagcacagc tcgaagtttc tactatcctg acgttgggcg 130320
gtagtccttt gctttgggaa tatgaacatg atcaaaactg agtgaacttg tcttcctggc 130380
tttctgtaca atgaagtaga acaaaccatc caatttgacc aaagccttgg catgttttct 130440
ttctaggttt ggaaagcact tctgtggagg caccttaata tccccagagt gggtgctgac 130500
tgctgctcac tgcttgaaga agtacgttta agggaaaact gacatggggt cttatcttca 130560
agactttttt cctccctctc ttcctccatc ccttctttct tcccaccctc cccttccttc 130620
ctccccacct ctcttccttt tctggaagga acactaggaa ccagggaatg catgcagaat 130680
cctgaggcag aatttccagg gcaattggat gagagaggag ggaagtgttt ctagagggaa 130740
tctgcagagg gaagacccag tgcaagtgat tttttggacc tgtataaacc gcaggacaga 130800
gctgttcact accagaggca tcaatctgta ttgcattgct ctagagcaat atctgaggct 130860
gaataattta taaagaaaag agtttaattg gcacatgttt ctgcaggctt tacaggaagc 130920
aggatgctgt catctcctct gcttctgtgt gggcctaagg aagattacaa tcatggtgga 130980
gggcaaagtg ggagcaggca tgtcacatgg ccagagcagg agcaagagac agagagagat 131040
ggggtggggg tgctgcacaa taccaaatga ccagactttg caagaactaa gagtgagagc 131100
tcactgatca ccatgaagat gtggcccaag ccattcaaga gggatgcacc tctatgatcc 131160
aaaccccttt cacaggccat agctccatca ctggggacta cagttgaaca cgagatttag 131220
gtggggacaa atatacaaac tatatcacag tctctgatga aacagattga gaacagacct 131280
taactgtcag tttccagcaa attgtgaatt ttgtttcttg ccactcataa gtcactgatt 131340
ctgggtggcc gagggtgtca gagggacagc gccaagttca tggcacagag gatacctgaa 131400
ggggctggac catatttttc tcttgacatc ctcatctttt ctaggtcctc aaggccttca 131460
tcctacaagg tcatcctggg tgcacaccaa gaagtgaacc tcgaatctca tgttcaggaa 131520
atagaagtgt ctaggctgtt cttggagccc acacaagcag atattgcctt gctaaagcta 131580
agcaggtact cgctcacctg tggtcttcac cccacgctgg tgaagatatt tgctttatgt 131640
ctgggtttta tgggccatgg ccactgcatg gcagtgggga ggaactgtct atcacatgaa 131700
aggctcaagg gctttgggga cagcatcaat cttcaacccc agccctgcca catgttagtt 131760
gtgctcttta aaaaggcaga aggattcgtt tcctcacgtg gaaaaagaga taccctgtta 131820
cccgtaaaac ttacttaatg ttcaccagtt catccacatt catgatcagg gaaaggttgt 131880
tattccaggc taactattct cctttcataa taatatgctg gagagaatca aatgagattg 131940
catttcaaag cgcttgaaaa accaccatat cgagccatgc ttagtgtggg cgcctctaat 132000
cactgctatt caggaggctg acgaggaaga attgcttgag cccaggactt caaggctgta 132060
ggcagctatg attgtgccac tgcactccag gctgggtgac agatcaagac cctgtctcaa 132120
caaaagaaaa gaaaacaaaa caaatgaaca gaaatattcc acaatgtcaa aaaaaaaaaa 132180
aacccacaca acatacaatt tacaaatgca aataataata ttattgttgt cttctttgat 132240
tttctctttc ctggtgaaat tttgttttat taagcctgac aaagtgatac ctttgcttac 132300
atcacttaaa gttagtctat ttggacctag gtgacagtac aatcagctaa gaaacagtat 132360
ttgtaggaga ggcaggtttg ggacaggtga caaggcatgt ggggtgctcg ctgtgctggt 132420
ggctctggaa ggcagggtgt caatgcagac agggatgagc atggcctggt tgggaaggca 132480
tggggcaggc aggagcctga gctgctctcc tgggcctggt cacaagccca tggcagcttc 132540
tctgggtctg tgaactgagg ggtgatgtcc tggaatcctc tgacactcta ggaaggagag 132600
aagggccttt ctggctcagc ctttataaac agtagctgat ctccctcttg ctccccaggg 132660
tcctccccac catcccagca aatgtgcaaa tacaagatct ctgctcctca tggtcctcag 132720
agagctgggg tgttctgatg gcttgaacaa gtcacttagg aaatgtgggg ttttggaggc 132780
attctctgat aggctgatac gttttgagtt tagagttccc accgcacatc cccacacccc 132840
tagagtctag ggcatttagt gctccatgag ggaacctgta gagtgaggac atctgcatca 132900
caggctgggc cttctagtgt ccagaagcag aaagtgtgtc tgcttcaaag ttggtgctaa 132960
tgatgatttt tggtcagaat acggcatttc tcatttccat tcctttatcc ccttgaactt 133020
actaaagtag aatcaggtct aaaaaccaga gttctaatct ttaagagtcc ctgggattct 133080
aaggtatatg aatgtccttg gaaaacaata ccatttagtt catgcaaggt gcttatttcc 133140
catcctcttt catttgatgt ctagcatttt actgcattct taccaccacg gtttagtaac 133200
attcacgagg aggaagtgga ggatccagat ggagcaactt gctctgggca cacaaggcat 133260
ttgcaatttt ataccctctt gatgatgtct cagccagaca ttctgcccag tcatcaatgc 133320
cctcttcaat taatatgaaa ggacacactt ggcatgagat tccaatcgtg cacagaatat 133380
acatgagaag tgtgcctttg tcatccctac tttcaaaggc taaggccacc ctcagtttct 133440
tgcatgcaac tgatgccttt caaatgaaac cttacatctg tgtagtccat aggcaaccac 133500
aggcaaatgt gagggtgaaa cgctgtgttc tacattgttc tgtgtcagtg aagcaaggca 133560
gtgccagctc agagggctct ggggcttcaa ggcagggatg cctggttgta ggtactgcca 133620
cttccagctg ggcagtgaaa cataactgct aatactttcc ttacaggcct gccgtcatca 133680
ctgacaaagt aatgccagct tgtctgccat ccccagacta catggtcacc gccaggactg 133740
aatgttacat cactggctgg ggagaaaccc aaggtgagat caattccatt gcccacgtaa 133800
caaattgttt ttgaccttca gtgcatgtta caaaatgagc attttggaga tagttgtaca 133860
aattcctacc catgaatgtg gtctacccac tcctgacttt gcctggacac ctgtctatgt 133920
ctccataatc agtcttcaag ggacttgggc aaggggagcg gtgccatttc cttgagtctc 133980
tctctttttt gttttcagaa tcttttaatt ttttttgtaa tgattgtatg tttcccttac 134040
aacaaaaaca aacaccagta gaggtctttg agtctcttaa tcataatttc agcattcata 134100
ttgcttcccc aggtaagtgg ggttttgacc cagccctcaa gttaagggtg ttagattatt 134160
tttcatgtga aattagacag actgcgtttc taaacatggt gcaaaacagt aacgacaaaa 134220
gttgtaatta aactattctt cttcccaaat acccacatgt ctaatgtgtg tgtgagggtg 134280
ttaggcaggg gacctgaagc tgggggagag gcagacagtt cccatggccc caagtctagg 134340
atggcatttg gtattggttg atgggtgaga gcaagagagg gaatattttt gtgcatgatg 134400
tggtatcagc acctgtacta cattttatgg attccttctt ctctttgcgg tatgccctga 134460
caataattat atccgtcagc cttaccccct tggcagtagg aaaactgaaa ctgtcttaaa 134520
gtctcagctc tactttctca gaggtgcagg caagggcact gggagtctgg ggccctggaa 134580
aactgttctg actctgccac ttgccagata gacctgaact agacacgtta cctctttgta 134640
ccacttggct ctaatccctt atctgtaaaa ccagcatttt caaatggtgc tttgcacatc 134700
agccttttgc ataagctttg atttgataaa atgttttttg tgtttttaaa aagattaaaa 134760
accacaggtt tagataattt caaagtaggc ttcccttttt ctgtcatttt cctattattt 134820
ttaaaacctc acctccttga ctccttgttc cctttttctg cactgctgag tctgggagca 134880
ctgaggccag gtaaaaggaa acttggcaaa tgaggggcac ctatgggtgt gggaggctgc 134940
tcctggtgtt tgcatatttt aaaatttaaa tgctacaaac cactgtgagt taggtattat 135000
tgttcctatt ttaccattga ggaagctggg gctcagagaa ggtggagggt ggtacagaca 135060
aacctgaatt ggaaccctgg ctcctgccta tgggctgtca ggacttagaa aagtcgtgag 135120
ctctcgctga ttgtttcctc agctgatgtg ggctgcaggg ctgttatggg ggaaataata 135180
agaaagtgca tcaagtgctg agcacatcct aagcactcca tcatggcagc tcctactact 135240
aataaagaat agaattatat ctaacatgat tctttcttgc aagtgacaga aaatccaact 135300
caaattggat taagcaaaac aagggaaatt cttagtgagc tgcaaagttt tcaggctcac 135360
atgatggccc caaatcccag gtcctcccaa tcatggagta ggcactattt gggggcacaa 135420
aggtgacatt cccatggctg cagatgctgt ggtgctgtgg ctgtaccggg aaagaataag 135480
aaaggccact ctcccaatta tgtgaacaat agtctgccca ctctgagaag tcaaacttgg 135540
gtcacagtcc tgcccctgaa cccatcactg actggctctg acctgcacca attgttccat 135600
gttggaggtg aaggcaagac cccactaata cccataaggg gcaaaagtta gatagatcct 135660
tcaagaggat tatgggaggt agggcaaaaa gctgctgggc agccagaaag caaacagagc 135720
ctctatgata cctcaactga tgaaagcatg aagctaaaat cataaggatc tgggtgtgag 135780
ttctggctct cccatcttcc atgtgacatt gggcagttat ttaatctctt ttagcctccg 135840
ctttctcatc ttacatatga gataattgtg aggattaaga ttacacataa tcatcatcat 135900
caccgtccac cactaccacc atcatcccca tcaacatcat cgccaccact atcatcattc 135960
ttactggcac taccatcacc atcaccacca ttccaccacc atcaccaata tcatcactgt 136020
caacatcatt accaccatca ccatcaccac caccatcatc attactacca ctaccactac 136080
taccaccatc accatcacca ccattccacc accatcacca atatcatcac tctcaacatc 136140
atcaccatca ccatcaccac caccatcatc atcattacta ccactaccac tactaccacc 136200
atcaccatca ccactgtccc actactatca gcatgacatc accatcacca ccaccatcat 136260
cattaccacc gctactacca acatcaccat caccacaatt ctactgccat caccattaac 136320
attaccacca ccatcatcac tatcaccatc accaccatca tcaccactgc cattatcact 136380
gccaccatca tcactatcct ctatatttcc tcatctgtat tatcattact accaccatca 136440
ctatcaccac catcgtcacc atcataatca ccatcaacac catctccaat accaccatca 136500
ctgtaaccat catcaccacc accatgatca ctatcaccat catcacaatg atcactgtaa 136560
ccatcattac tacccaccac catcaccact actccaccac catcaccatt atcattacca 136620
tcaccattat caccaccatc atcatcacca gcaccaccat catcaccagc accaccatca 136680
ccatcaccat cattaacacc atcactatca ccattggttt aatcatcacc accatcatca 136740
taaataaaca tcacataacc agggtgtagc tgggtgttga ccccagagcc cactcactgt 136800
ttcctctctc ccacccccat ccacacattt ctaaccacca tcctgcactg ggctcccagt 136860
ctcctctggt ctcacccaca tgtccactga gaaaaggatt ttcagaacac caactagacc 136920
aggaggagcc acatacataa ctcaggcctg cttatcaact ttctacatgt taataatgac 136980
atcagatcaa tgggtgttct cagcttctca gaaggaggtc aaaattctcc ccctctcccc 137040
ttcatgtgtc cagaccttcc cggatttgga tgtaccaagt gcagagtggt gttgaggcca 137100
aggggctcat ccatgtaagt ctcatctgca atcactgggc tgatcccgtg gccctgtctc 137160
cagggcgcca tcagagaggg cttcaatcct caggttacct gtggcccacc ctgccctcag 137220
aggtgccatc tctacattgg ccacgagatg gcagcacata ctcatagact gcattaattt 137280
cccagcaact cctggtgggt tttccctctt atcaggatgt ttgccttgct cagagagcaa 137340
atctgagagc agtgacacct aacttaactt tcagcaaaat attttgagaa gggtgcccct 137400
ttacacatct gtgcagtcca ggtgatgcat cccatgccca atgctcggta gtcaggagga 137460
gcttcctcca tgcagctctg cggaagagac tcttccacgc tgctcatgta aactccagat 137520
tcggtgtcag ttttctgaca ccgaagacaa tgatctaagt gcagtcaagg gctttgggga 137580
aagcaggaga gagtgcctca gttctagcct gtgccatgct tgcaaagttt tgcaaaattc 137640
taatgagagc tgggcttgca acattggaaa cttggattat ttgtgagagc actgagaaat 137700
ccctgggcat gtccatctgg aaaaacagca tttcctctgg cactttagca gaggttctgt 137760
ttcaatttgg cgaaggaaat taagcagttt ttcacaaaag aagaactaca acgaggagaa 137820
ttgtccctag tatttcttct ccctaattgt caaggaagtg taaattagaa aatgaatcag 137880
gacaatttcc acctactatg ttagctaata ttttaaaaat tgaatatcac aagggtgagg 137940
caaagtaatt gttttccagt gacattttcc actgtcacac ccttttagag aataatttgg 138000
caatgttact gtgagataga aatatgtcta tataattatg ggaactgaga cttcagaaag 138060
taataaggaa taagaatgaa atttatgaac aaacatgtgg aaggttggaa gcaagagtgg 138120
ggccaacacg catggggagg aagcatttgg gcagcgactc cgcagaccca gactcaagct 138180
gagctataca acctccttac gcctcagttt cctcaactga agaacaggaa tgacaagtgc 138240
ctgtttcata ggaccgttgt gaggattaag tgagatatac cacattatga gcttgtgcct 138300
ggaaaggttg attcttagta aatgatgact attctttttt attgcaataa aatttataca 138360
acatagagtt actattttaa ccatttttgc aggtaccact gagtggcatt cagtacattc 138420
acaatggtgt gcaaccgtca ccatatttcc aggacatttt tctcatcccc aaaggaaacc 138480
tcatgcccat taagcagtca ctcctcatta aaatattagt tatgaagact gtagcatttt 138540
tttaaaaact catgatataa cattgattga aaaaatcagt ataggaaatt gtgcattatg 138600
atgtaatagt aaaagaagca tataaaaatc tgaaaaaagt atataaaaag aatagcaatt 138660
gtatttctca gactctcttt acattgtaaa aatcattttg atagcttcaa aagaaaagca 138720
aaaagtacac aaacaacaac caaccccaaa gcagcatgac aaagcccaga ttgttgaatc 138780
caggtcttgg gaacataaaa tcttatatga catttgcact ttaatgggtc agagagtcca 138840
gtggcattgg gagctgcctt gtgttctgca gcctcacgga cagacaggag gtccagctcc 138900
actgctctgt tcttctggaa tttcctcgtg aacaagcttt ggcctcagta accatttctt 138960
tcatcttttt aaacacaggt acctttggga ctggccttct caaggaagcc cagctccttg 139020
ttattgagaa tgaagtgtgc aatcactata agtatatttg tgctgagcat ttggccagag 139080
gcactgacag ttgccaggta agaaaagatc aatagatcaa agtcttgtgc tctcccgtct 139140
cagtctcagt cccttagacg tcagtcccaa agtggcaaat tcaggaaggt tttgtcagtg 139200
gaagacccca gtctaagtgt tgctcagaaa ctccccagat ctgtccctga atgcatattc 139260
agatcatcta aggagacgtc ttggggcttg agttccagat ccatagcaag ggagccgtaa 139320
gtgccataac tacctcaggc cactcacctt cctggtgtgt gctggtcacc agtgactgaa 139380
gtggtggctt ttccagtaga gaggaaggta gagggtacag gaccgagaca aattacacac 139440
acttaacaat gatgtccagg ctagcccagt ctaaaggaaa caccaagtta ggaagcaatg 139500
catgcaggat tcacaaggga ttattttttt tcccaggaaa aaactaagtg atgtggtttt 139560
gttgaataga ctttgctaag tacttaagca ctgcagatgc ttgagtaata tgctcataag 139620
ttcctttctg atttgaatta ctgggaaaat gtacatatgg ataagagaag gatggcatcc 139680
catattaaaa ggttggcagc ttaaagctca catgaatttt cccctacctc tgtttagggt 139740
gacagtggag ggcctctggt ttgcttcgag aaggacaaat acattttaca aggagtcact 139800
tcttggggtc ttggctgtgc acgccccaat aagcctggtg tctatgctcg tgtttcaagg 139860
tttgttactt ggattgaggg aatgatgaga aataattaat tggacgggag acagagtgaa 139920
gcatcaacct acttagaagc tgaaacgtgg gtaaggattt agcatgctgg aaataataga 139980
cagcaatcaa acgaagacac tgttcccagc taccagctat gccaaacctt ggcatttttg 140040
gtatttttgt gtataagctt ttaaggtctg actgacaaat tctgtattaa ggtgtcatag 140100
ctatgacatt tgttaaaaat aaactctgca cttattttga tttgaattaa ttttggtttt 140160
ggtcttcaaa attttcatgc tcttttcatc ccatctattt ttatttttat tttttagact 140220
ttacgtcctg gggtacatgt gcagaatgtg caggtttgtt acatagatgt acacgtgcca 140280
tggtagtttg ctgcacccat caacctgtca tctaattcgg tatttctttt agttctatcc 140340
ctcccctagc cctccacccc ttgacaggcc caggtgtgtg atgttgccct ccctgtgtcc 140400
atgtgttctc attgttcaac tcacacttat gagtgagaac atgccgtgtt tgtttttctg 140460
ttcttgtgtt agtttgctga gaatgatagt ttccagcttc atccatgtcc ctgcaaagga 140520
catgaactca tcctttttta tggctgcata gaattccatg gtgtatatgt gccacatttt 140580
atccaatcta acattgatgg gcaattgggt tggttccaac tctttgctat tgtgaatagt 140640
gccacaataa acatacgtgt gcatgtgttt tcatagcaga atgatttata atcctctggg 140700
tatataccca gtaatgggat tgcagggtca aatggtgttt ctggtgctag atctttgagg 140760
aatcaccaca ctgtcttcca caatggttga actaatttat gctcccacca acaatatcaa 140820
ggcattccta tttctccaca tcctctccag catctgttgt ttcctgactt tttaatgatc 140880
gccattctaa ctggcatgag atggtatctc attgtggttt tgatttgcat ttctctaatg 140940
atcagtgatg atgagctttt ctcatatgtt tgttggctgc ataaatgcct tttttggaga 141000
agcatctgtt catatccttt gcccactttt tgatggtgtt gtttttttct ggtaaatttg 141060
tttaagttct ttgtagattc tggatattag ccttttgtca gatggataga tggcaaaaat 141120
tttatcctat tatgtaggtt gcctgttcac tccgatgata gtttcttttg ctgtgcagaa 141180
gctctttggt ttaattagat ctcatttgtc tattttggct tttgttacca ttgcttttag 141240
tgttttagtc atgaagtctt ctcccatgct atgtcctgaa tggtattgcc taagttttct 141300
tccagggttt ttatggtttt aggttttgca tttaagtctt taatccatct tgagttaatt 141360
tttgtataag taatgccctt ctttgtctct tttgatcttt gttggcttaa agtatatttt 141420
atcagagact agaattgcaa tccctgcttt tttttttctt tttgctttcc ttttgcttgg 141480
taaatattct tccatccctt tattttgagc ctatgtatgt ctgcacatga gataggtttc 141540
ctgaatacag cacaccaatg ggtcttgact ctttattcaa tttgccagtc tgtgtctttt 141600
aattgggggc atttagtcca tttacattta aggttaatat tgttatgtgt gaatttgatc 141660
ctgtcattat gatgctagcg ggttattttg cccattagtt gatgcagttt cttcatagtg 141720
tggatggcct ttacaatttg gtagtttttg cagtggctgg taccaattgt tcctttccat 141780
gtttagtgct tcgttcagga gctcttgtga ggcaggcctt gtggtgacaa aatctttcag 141840
catttgcttg tctgtaaagg attttatttc tcctttgctt atgaagctta gtttcgctgg 141900
gtatgaaatt ctgggttgaa aattattttc ttttagaatg ttgaatattg gcccccactc 141960
tcttcgggct tgttgggttt ctgcagagag atccactgtt agtctgattg gcttcccttt 142020
ccgggtaacc caacctttct ctctggctgc ccttagaaat ttttccttca tttcaacctt 142080
ggtgaatctg acgattatgt cttgaggtgg ctcttctcga ggagtatctt tgtggtgttc 142140
tctgtatttc ctgaatttga atgttggtct gtcttgctag gttggggaag ctctccttga 142200
taatatcctg aagagtgttt tccaacttgg ttctattctc cccatcactt tcaggtacat 142260
caatcaaatg tagatttggt cttttcacat agtcccatat ttcttggagc ctttgtttat 142320
tccttttcat tctttatcct ctattcttgt cttcttgctt tatttcatta agttgatctt 142380
caatctctga tatcctttct tttgcttgat cgatttggct attgatactt gtatatgctt 142440
cacaaagttc ttatgctgtg tttttcagtc agatcaggtc atttatgttc ttctctaaac 142500
tggttattct acttagcaat tcatgtaacc ttttttcaag gttcttagct tctttgcatt 142560
gggttagaac atgctgcttt agctcggagg attttgttat tatacacctt atataatagc 142620
ctgatataac tataagattt ttttgtaagc accatcgtaa ccacaaagca aaaacctaaa 142680
gtagatatac aaaagataaa aaggaatcaa agcataccac tagagaaaat cacttaatca 142740
caaataaaga tacgaagagt ggaataaagg aacgaagggt ctacaaaaca accagaaagc 142800
aattaacaaa atggtgatag cagatcttac ctataaataa ttatcttgaa tggaaatgga 142860
ttaaattttc caataaaaag acatacagtg gccaaataga ttaaaaaata agatccaact 142920
atatgatgcc tataacacac tcacttcacc tgtaaggact caaacagact gaaagtaaag 142980
ggatggaaaa aatattctat gcaaatggaa acaagaagat agaggggtag ttatacagat 143040
tgagtatcac taatccaaac atctgaaatc tgaaatactc caaaattaaa aatgtttaag 143100
tgccaacatg atgttcaaag gaaatgttct tcggagcatt ttggattttt gtgtttaggg 143160
atgcaaaaac agtaaatata taatttgtat tagtccattc tcacactgct ataaagaata 143220
ctacaaagag actgagtaat tataaaggaa agatgtttaa ttaactcaga gttccacagg 143280
cttaacagga agcatggcta aggaggccac aggaaactta taatcatggc ggaagatgaa 143340
ggagaagcag gcaccttctt cacaaggtgg caggacggag tgtgagtgtg tgaaggagga 143400
actgtcaaac acttataaaa ccatcagatc ttgtgggaac tcactcactc tcacaagaac 143460
agcataggga aaaccgcccc catgatccaa tcccctccca ctgggctcct cccttgacac 143520
atggggatca tgagggttac aattcacgat gagatttggg tgggacacag ccaaaccata 143580
tcataatgca aacattgcaa aaacaattca aaattcaaaa catttctggt ttcaggcatt 143640
ttggataagg gaaactcaac tcaacatgag gtaaagcaga ctttaagtca aaaactgtaa 143700
aaagagacga agaagaatgt aataataagg agatcagttc attacaaata tatagcaatt 143760
ataaatatat attaatatat atacccaaaa ttgtagtacc tacatatagt aactaaaaca 143820
aacattaata gatctcacag gagagctaca ctgtaatata atcatagtag cacacttgaa 143880
tagctccact ttcactaatg gacagatcat ccagacagag aatcaatatg gaaacacgag 143940
acttaaacta cactttagcc aagtagacct aacagaaata tatagaacat tccatccaac 144000
agcagtagaa tacacattat tctcaagtgc acagggaata ttctccagaa tagatcatat 144060
gttaggtcac aaaactagtc aaaaaatgta agaagattga aatcatatca ggtttttttt 144120
ttagatcata atcgtatgaa actagaaatc aataatgggg gaatattgga aaatccacaa 144180
atagatagaa attaatcaat atgctcctga acaatcaatg agtcgaagaa gatattaaaa 144240
gaggaaattt taaaaaatca agacatgagt tcatgtcctt tgcagggaca tgaatgaagc 144300
tggaaaccat cattctcagc aaactatcat aaggacagaa atccaaacac cgcatgttct 144360
cactcatagg taggaattga acaatgagaa cacttggcca cagggcgggg aacatcacac 144420
accagggctt gtcagggggt gggaagctgg tgaagggata gcattaggag aaatatctaa 144480
tgtaaatgac gagttgatgg gtgcagcaaa ccaacacggc acatgtatac ctatgtaaca 144540
aacctgcacg ttgtgcacat gtaccccaga acttaaagta taataataaa aaaagaaata 144600
tttgtttttg atttatatgc caatcagaca aaatgtgaaa agccctactg aaattaagta 144660
tcaccatgaa agataaattc tggataattt tttcaagttt taacaatgta gctttaattg 144720
gagaaagcta tcatttggaa tgagttaatc tatcctatac taaaataagt cacttgcttt 144780
aaaacataat aaatatgatt ttgaattgaa aacaaaaaca actcaagaca aaggaaaatg 144840
gacacactaa cataccaata atttatagta tgcagcaaaa gtggttttaa gagggaagct 144900
tttaccaata aacacttcca ttaaaaaaga agatctcaaa taagcaacct aagattacac 144960
ctcaacaaac tagacaaaga actaactaac ccaaaagtta gtagaaggaa agaaataata 145020
aagatcacat cagaaatagt aaagactaaa aaactgatac caaaaagaaa taaaactact 145080
agttggtttt caataaaata acaaaattga ccaactttta gctagattaa gaaaaacaga 145140
gaatactcaa ataaaaccag aaagaggaga cattacaata gatactacag aagtacaaac 145200
gatcataaga gactactatg aataattaca tgccaacaaa ttggataact tagaagaaat 145260
ggatgaattc ctagagcaaa aaacctacaa agactgactc agaaagaaat agaaaatctg 145320
aacagaccaa taatgtgtac atgattgtat cagtaataac aagtctccca tcaatgaaaa 145380
ggccaggacc taatggcttc actgctgaag cataccaaac attacaaaga ctaatatcaa 145440
ccctcctcaa actcttctta aaaactaaaa agaaggaatg ctttcacatt cattttatga 145500
ggatagcatt acactgatac taaacacaga aaaataatac gctaataaaa gaacattaca 145560
ggcaatatcc ctgataaaca tatgtgcaaa aatccgcaac aaaatactag aaaactgaat 145620
ccagtagcac tttaaaaaga tcattcacca tgatcaagtg cgatttgttt cacgaatgca 145680
agaatagttc aacttacaca aataaataaa tgaaaggatg gatgataaaa atgtgtatct 145740
atatatatat gttttataca cacacacaca cacacacaca cacacacaca cagaggaata 145800
ttattcagcc ttaatgaaga agaaaatcct gcctttgcat caacctggag gacattataa 145860
taagtgaaat aagccagaca cagaaaggca aatactgtgt gatctcgctt acatatggaa 145920
tctaagaaag tcaaattcct agaaatagag agtagcttag tgattgccag agccgtggaa 145980
gggggaaatg gagagatgtt gatcaaagga tacaactgta tagctttgca agataaatag 146040
gttctggaga tctaatgtgc agaatggtga ctagagttaa taatactgta ttgcatactt 146100
gaaatttgct aaaagagttg atcttaagtg tcctcaccat atacacaaaa gtattatgtg 146160
aggtggtgaa tattttaatt agcttatgat aataatttca cagtgtacat ctatattaag 146220
gcattacatt gtacatctta aatatatata atttttattt gtgaagtgta cctcaataaa 146280
actggaaaaa ataattgaaa agtaatgaaa aaaattaaaa gctattatgt gtcaaatgac 146340
attatcaaga aagtgaaaag caacctactg atgaagcaaa cctattgaca aaggcctggt 146400
gtccagaata tattaagatc tctaggctgg gagcagtggc tcacacctgt aatcccagca 146460
cttggggagg ccaaggtggg aggatcactt gagcctggga gttcgacact gcagtgagct 146520
atgattgggc cactgccctc caggctgcgt gacagagtga gactgccatc tcttaaccca 146580
cttcttattt agaaaaagaa aatatgtagc ttgctgcctg catagtattc ttggggcaaa 146640
tgggaaatga gttaaaaaaa aaaaaaagaa ctcttacaac tcaacaataa aaagaaaaac 146700
aagaacgtga atagacattt tttccaaaaa agatatacaa ataggcaata agtacatgaa 146760
atgatggtca acatcattag tcattaagaa aatgccaata aaatcacaat gaaataagac 146820
ttcatatcca ttaaaatgtc tataatttaa aaaatggaaa ataacaagca tttgtgagga 146880
tgtggagaaa ttagaatcct gtatattgct ggtgggaatg tacagggaaa atggtttggc 146940
cactgtggaa aacaatttga cagttcctta aaatgctaaa catagaatta ccatgtgatc 147000
taacaatttt actcttaggt gtatatatac aagaattgaa aacaagtgcc caaacagata 147060
ccttgcatga gaatgttcat agcagcactg ttacaacagc cacacccaaa tgtcaatcaa 147120
tagatgaggg gataaacaaa ttgtggttta tacagctaca aaaaggaatg aagtactggt 147180
atccgctaca tggctgaaac ttgaaagcaa gggctgggat ggggtcatgg aaagtaccag 147240
cttattgggt actgcattgt gctttggggt catgaaaatg ttttggaact ggatggaggt 147300
ggtggttgcc aatgtgaaca tactaaatac aacgcattgt tcactataag actgctactt 147360
ttcttatgag aatttcactt caattaaaaa ataccttcca tgtatccttt ctaaggatga 147420
tactagaata tttgctttgg caaaatgagg aagtaacttt ttttaaaaag gaagatgtgg 147480
gatccatgaa acgggatcaa atatcagaga ggaaaggggg tcttctggat gacagtccat 147540
ggagatccca caactgcaca gcaggccggc tgtgcaccca ggccacacca gagcagagcc 147600
ggtggttccc gaggagctct ctggaagaaa aacgctagat ggcctgattg gtttgggggc 147660
atattgaaaa ggtatataac tgagaatttg gagtggaatt aggaaacaga cataaaagct 147720
tacagaaaag aaaataatga attctaggga gaaatataaa aggatactac aggcctcagt 147780
tacataaaca ctgaatattt acttaaccaa aattacaata taattacata attattttag 147840
gtacatatgg caaaaggatg tgtgggtgta tgtagtatgt acggtgtgtg aagtgtatgt 147900
gtgtggtatg tggacggtat gtgtatgctg tgtatgccaa taaaatcaca atgaaataag 147960
acttcatatc cattaaaatg tctataattt aaatgtctat aattttaaaa atggaaaaca 148020
cttctcatat ggcaggagca ggagcaaggg tgggggaggt accacacaca cttaaacaac 148080
cagatctcct gagaactcac tatcaggaga acagcacctg gagaaggtgc taaaccattc 148140
atgagttact gccctatgag ccaatcacct cccatcagac cccgcctcca cactaaggat 148200
tacaatttga cttgaaattt gggcatgaac acagatcgaa accatatcaa taggtaatga 148260
ctaaaactga aaaaagaagt accacagtca gaaagttatt tagagagctg aaggtaaatg 148320
ccaataggat cagttgaaag aattggaggt ggccgggtgc ggtggctcag gcctgtaatc 148380
ccagcacttt gggaggcgga ggtgggtgga tcgccctgag gtcaggagtt tgagaccagc 148440
ctggccaaca tggtgaaacc cagtctctac taaaaataca aaaattagcc aggcctggtg 148500
gtggacgccg tagtcccagc tactcaagag gctgaggcag gagaatcgct tgaaccaggg 148560
aggtgaaggt tgcagtgaac cgagatcgtg ccactgcact ccagcctggg tgacagagca 148620
aaactccatc tcaaaaataa atgaaataaa gaattggaag tgtttgcctc tggagagaag 148680
gaaacgcagt aattctgtaa aaacagaact ttttactttt tttctttttt tttttttttt 148740
tgagacagag tctccttctg tcacccaggc tggagtgcag tggtgcagtc ttggctcacc 148800
gcaacctctg cctcttgggt tcaagcaatt cccgtgcctc agcctcccaa gtagctagga 148860
ttacagatat gggctgctat atccagctaa ttttttttta tttttattag agatgaagtt 148920
tcaccatgtt ggccaatctg gtctcaagct cctggactca tgatcctcct gcctcggcct 148980
tccaaattgc tatgattaca ggtgtgagcc accatgcctg gacagaactt tttgactctt 149040
taaactatgt gcatatataa agctgattta aaaaaaacca agtaaaataa ttttaaaatg 149100
ttccaaaaca gattggatgg gtacacactt catcatgagt ggttgaggga gactgggtta 149160
gagatgagga aattccaggg actggggaaa agttaaaatg acaaactgtt cacaattgtt 149220
aactgcaggt tgtgggaaag ttggtaagtt gctacagtgt ttgttccctc tgtaggtttg 149280
catatattta acatttctta aattagcata ataatgaact gtgtaatcag ctgtagagtt 149340
gagggtgtgg agctggcaca ggacagctga gctactggtt taaaataaat gacatttaaa 149400
aaaatggcta tttgtagaat taacagatat aagacaccct gatcaaggga tgataagaaa 149460
ggactccagg gctctgtctc agctgtcttg gcaacacctg gaagacatgg gcctctgcaa 149520
ggtctcatac tttcaggagg tgttgatgaa ggatatggac agatctgaag ctctgggcac 149580
tgcatggtct gagaagagaa gctccggaaa cgcgggagct gagtgcagat gcagaagggc 149640
tgtcatccag cagaggggta ggtgacaact ggcctagcga gtgaccctta tcatggctac 149700
atttgttgat cactttcttt gtatgaggca ctgctgtgat tgcattaaat ttccacttac 149760
ctaaatccaa cgttgtgcac ttgtgaattt ctactcttac aaaaaacaca acggcaacaa 149820
cctcaaacca gtaatctagt caaaaaagca attcccaagg catgacattc agattcatca 149880
gcactcacag agactacagt gattgctgat aacgccaact taatacctgg ccaacagcat 149940
ggatcctgac ctccactttt cttgtgtgtt tacagaacca caaaaaggtg cagtgttttc 150000
a 150001
<210> 3
<211> 138001
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 3
ctctcccaaa ttgtcaaaga agtataaatt agaaaatgaa tcaggacaat ttcaacctgt 60
tagattagct aatatttaaa aattgaacac tcatacaagt gtggtgaagt gattgttttc 120
tagtgacatt ttacactgtc ataaccttct agaaaataaa ttggcagtgt tattgggaga 180
cagaaatatg tctatataat ttatgggaac ttaggctcag aaaatattaa ggaataagaa 240
tgaactttat gaacaaagat gtggagggtt ggaagcaaga ggggggccaa cgcgcacggg 300
gaggaagcat ttgggcagtg actccgcaga cccaggctca ggttgaacta gacaacctcc 360
ttacacctca gtttccttaa ctgtagagca ggagtgatgg aactgcctgt ttcataggac 420
tgttgtgagg atgaagtgag atacaccaca ttataagctt gtgcctggaa aggataatgc 480
ttagtaaatg atgactattc ttttttattg caataaaatg tacacagcgt aagagttact 540
attttaacca tttttgcagg gtaccaccaa gtggcattta gtacattcac agtggtgtgc 600
aaccatcatc atatttccag aatattttcc tcatccccaa aggaaacctc atgctcatta 660
atcagtagct ctcctttaaa atattagtta tgaagatcat agcactatac aaaactcatt 720
atgtaatgtt gagtgaaaaa atcagggtgt gaaattttgt gatatgatgt aattagtgaa 780
agaagcatac aaaaagtctg aaaatataaa aacaatagca attgcatttc tcagactcta 840
catttaaaca ttattcttta tggttttaaa agcaaagaaa aaggtaaaga aacaacaacc 900
aaccgcaaag caccatgaca aagctcagat tgttaaatcc aggtttttgg aacatagact 960
cttatatgac gtttacactc tccagggttc agagagtctg gcagcattgg gagctgcctt 1020
gtgttctaca gcctcacgga cagacaggag gtccatcacc actgctctgt tcttctggag 1080
tttccttgtg aacatgttgt ggacgtagtt accatttctt tcatcttttt aaacacaggt 1140
acctttgggg ctggctttct caaggaagcc cagctccctg tgattgagaa tgaagtgtgc 1200
aatcgctatg agtttctgaa tggaagagtc aaatccactg agctctgtgc tgggcatttg 1260
gctggaggca ttgacagttg caaggtaaga aaagatcaag agaccaaagt tagtcttgtg 1320
ctctcctgtc tcagtctcag tcccttagac ttgagtccca aagtagcgaa ttcaagtagg 1380
atttaatcaa tggaagaccc cagtctaagt gttgctcaga aactccctag atctgtccca 1440
aatgtatatt cagatcatcc aaggggactt cttggggctt gagttccaga tcagcagcaa 1500
gggagccata agtgccataa ctacctcaga ccactcaccc tcctggggtg tcccggtggc 1560
cagggactaa agtggtgatt tttctggtag ggaaggaggt agagggtaca ggacagagac 1620
taactgcaca caatatctga gactggagct cagatattgc tgatgatcag agttggcgtg 1680
tctccccaat tgatttacaa ctggggcttg gatactgttt taaacgggag gagcctccta 1740
accatcttga cacaaccact gacgtgacta cactagagat agactctttc cacttaattc 1800
taccactctt gctttacttc atgagaacga aaatgtaaga ttgcaccatg aattcatttg 1860
cggaaagatt gatactatgc ttttatttta ttttatttta ttttatttta ttttatttta 1920
ttttattgag actctcaccc cggttgaagt gcactgacgt gattttggct cactgcaact 1980
tccacctcct gggttcaagt gaatactcca gcctccctag tagctgggat tacaggtgcc 2040
caccaccacg cctggctaat ttttgtattt ttagtagaga tggggtttca ccacattggc 2100
ctggctggtc tcaaactcct gaccttgtga tccacctgtc ttggcctccc aaagtgctgg 2160
gattacagag ttgagccacc gcactcgacc ctatgtttta tttttaaaaa tatttattta 2220
tttatttaag ccacaactac tagaatagga aggattgata ttttattaat tttatttggt 2280
atttattatt tttttttctt tcctgagaca ttcttgctct gtcacccagg ctggagtgca 2340
gtggcacatt cttggctcac tgcaacctcc atctcctgtg ttcaagcaat tctagtgcct 2400
cagcctactt agtagctggg atgactggca tgtgcctcca cacccagcta atttttgtat 2460
tttttgtaga gacagggttt tggcatgttg cccaggcttg tctcaaactc ctggcctcag 2520
gtgatccatc tgccgtggcc tcccaaaatg ctgggattat aggcatgagc caccaccccc 2580
tcctggaagg attgatatct tataacataa tttataatta cagaaaacat gtgagttcac 2640
taggaataaa taaattttga agataataaa agattttcac ttatgttgtc atttcggcac 2700
agtttggtat aggatgtgga gatgttaaca tttataccta gcttgctcgt aaactaagac 2760
ctgaaagggt tgtgtctatc agctgcaccc ctgggtagcg acacaacctc gggaaggcct 2820
cagccccctc ctcgtacagc actgcctgtt ggaaagcttg agggaggcta tggatgtgca 2880
gcacttggca gagggtctgg tcatggaagt taccagcaaa tatgagctac ttttatgatt 2940
ttattttatc caaaagaaag agaatgaaag aagaggggag gaaacaagac taatcaggaa 3000
agatgaaggt ctaggggtga gggaaggagt aaggagacat aaaggcaatg tggagcagct 3060
gaggggggaa atggctttca ccacttccca gcatctattg acattgcact ctcaaatatt 3120
ttataagact ctatattcaa ggtaatgttt gaaccctgct gagccagtgg catgggtctc 3180
tgagagaatc attaacttaa tttgactatc tggtttgtgg gtgcgtttac tctcatgtaa 3240
gtcaacaatg tcctgggatt gggacacact ttctgggcac tgctggccag tcccaaaatg 3300
gaacataagg aagtggttct tctacttctt ttatttctga aatcaggtaa gacatagttt 3360
ttttaaatta taagaattat tttttctccc acaatgtagt aaaaatacat atgccatggc 3420
tttatgtgca attcatttaa tttttgattc atgaaattcc cagttcaaaa tcttgtatat 3480
gattgaaaaa ttcttaaaaa aataagttta atttccccgt gaagactgtc acggtgctgg 3540
aatgaatggg cagaaaaaat aatggttgat ttttctaatc taaaagagtg tgcctacatg 3600
atggccagtc tggctgaaaa ataaatagcc attgtagcta actatgcaaa ggatggctaa 3660
gctcttcgct tggttctcag tttcattaat ttatatcatc tctgttcagg tgccatgctc 3720
ccctcactag caagttgaaa caatgaaata actctttgaa tatgtttggt tccttgacct 3780
gttcatggag tgggactcag catttctctc tttgttatgg cctgagtaag gctttccatc 3840
ggtatacatt tgcttcttat ccctggagaa attatacaca tccatttgcc agatgatata 3900
cgcatataat gattcaacaa atactcaggg tatttgttga gtgggttagg tccccacatt 3960
tttatacata catacacaca tacacaccgt gtgtgattgt gaatgtaagt gtgtgtcctt 4020
tacaaatact agcttattta gctcatggta taggtagggt agcatagtca tccccatttt 4080
ataaacaaag aaatctagac ttaggaaaat catgttattt gtctcgtgac caaattccca 4140
aatcaaggaa ataaagaaac ctggatttaa gccagatttc caagaaaaaa tctagggctc 4200
ttctcacttt ttcatctttg ttccaacatt tgaaaaaata aatctaaaca cattccaatg 4260
taactgaaga gcaggttaat tgtttgccac ttgcagaatc caattaagaa gagagaagtc 4320
tggtataaag aaagtgattt gcttccaaag ctagcttagg ggaagaaatg cagcagtcct 4380
gccgtactac ttcactttag gagcagaaag tggcactttt aaaaggcaac agaggaggcg 4440
agcaaggatt caggggtcca tgctagcttg ggcaccttat ccaccaggta gttgagcagt 4500
tgcctgctgg tgcctttgtg agcagggtgt tgtcccttga ggcaaatctc tggagggtga 4560
gagttttgta gtgggcatgc tttggtttat aaatcacctg tgaactcagg agttccatct 4620
tgaagcacat acatagttag atgaacttgc cctgcaggga gagtctgatg aaagggaggt 4680
agatgcttgc aatttaatct ataaattacc agataaaatt ttacaagttg actttaaagt 4740
caaacacatt tgaatttagt ggaagccatt caagaaaata tcaaagaaaa tacagagcag 4800
gagaagatta agcaaagagt tttttgggga aattggtgtc tatgtctgtg tgtgtaggga 4860
gtgcagggga tatgaatatt ctatttcagc ccatggaaac taggatgtag atcactgtga 4920
acttattcag caggctacac ccaaaggcta gaacaaactt ctctgccaca ggattaacat 4980
atgttttaat cgacctgggg ggcacattct ctgataagct cttttggaaa gccaggcttt 5040
ctgtggacgt gttatctttc caatgtgtgc tggaatgccc ggggagagga aaaagtttct 5100
tttacagcca tgctcagtga gaagcggaga aacatcttct attcacaaat tgctaagtct 5160
tttacacatg caaatatgca tacacattca cacaccacag tgaggaagaa attctcacac 5220
cattaataaa atacatttac ttcagtagca atatacatct acattttgcc tataatataa 5280
aagtattttt cctattaaaa gatttgttta atgtttcttc accaacaaat aaaccctatt 5340
aaatccccat tgccatatga gccctggagg tgaatcagag aaacaaaagg attgtggaaa 5400
aatcatcagg ttaaaaaaag aaaaattgat tctgttttgg gatatttcct agcaacatga 5460
gctggggagg ggatctcagc agtgatgctc tatgaagcat aataaaatga cacagttaca 5520
ggtaacttag ttaaaggggg aaataaatgg aagtttcctc tttttgaata tcaattgtag 5580
cctgctctgc tacatttcaa aaacactctt caaaatgttt aactgaactc actgtaggaa 5640
gcaccttatt aatttattgt gtgttttgaa gtcacactgt gagctataga atttacccaa 5700
gcacaactct tcctggaaaa gagagttcaa atgagaaaca gtgcggggtg aagacatgga 5760
tatgggccta aaatatctat ttctcaatga tattttgata tatctatcaa gtgcttttta 5820
gtggattagg ttcagaatgc atcagccaat gcctgttcaa taatccagtt ttccagcata 5880
gagcatatta aattgaggaa ggacaaagtc acagaggtgg ggagcaggtg gactgtggcc 5940
aaggactttg catgaaacag tgagcgtgca tcctcctcct tgccctgccc tcatggtctg 6000
tgtactctca ggaggtcagg acaggccttt ctgagaatga gaatctgttc atctgccttt 6060
ctactggata cttgtcatcg gcatacaaac acatgttctc tgcagtgtgt catctttcag 6120
aacctcccct gaccctgtat tccctagaag tctcgctgct ttcagagcca ggcttctctc 6180
ctgctgccac ccccactgct cttctagtca ctctttaacc cactccatct gcatgtggcc 6240
cccaccacac ccctcaaagt ggtcaaggtt gtcctgttgc ttaattccat ggaagcttgg 6300
ctatcttcat tttattagcc tcttttggcc tctcaccctg tgaaaatcac tacattttgt 6360
gccagagatg gagctggcat ctccaggctt ggaagagggc tgctgaagct cagccaggtg 6420
tcctaaggag cctcaggaca ggggatgctc agtagccttg caatgggaac acagctgagc 6480
cccacttggc caccctttgc cacaaccagg cagaaagcag cttttgaaca gatttgttgc 6540
ctcagatttg atctcaaaga aaaatcgtgg gcagtattgg tcccaggttc tgctttttta 6600
caatttcctc tgaaatctgg atgcctatca acaccttgga aaaactgaat tctccccaac 6660
taatagtggt gtgtcactgt agtaagccta gtacaaaaat ggccttcttt gtggaggagc 6720
ttcatatcct ccattttttt tttgcttaat ttttgcccaa gatgagaaca taatttagtt 6780
cactttttat ttattcccaa catcatccat gcaccaacat ttttgtaact aaaggaggga 6840
ccattcagaa gatgcttatc aactgtcaaa gtgacagtgt tacaaccaat gcacatattg 6900
taagaaatca aacaatggcc tccaaggttc atttctacac agggattagc agatcaacat 6960
caatcttggc aacacagttg ccactgatgg tgtcttattt tttttatcat gacatggcaa 7020
tcaagagcaa acatgattta ttcttattta agattttatg gttagactag gcagatagct 7080
agatatgagc aggaggtgga agcccctgag agaatggagg tctggagaat ctgaaacccc 7140
agagattacc caagtcctgc atgctagaca tgagtggagg agggggaata cctaggtaga 7200
aaagaatgcc ccttaagatg cccagcagtc gctcactgtg cagttaactt ttcagaatgc 7260
tgctagatac atgctgatag ggagggaaga gggcaaagga gaaattccta agagatacac 7320
ggttgcagtt agtatacatc tgagtgctat acaaccttct ttgggtggtg gcaagaagca 7380
atgcagccat tacgtagaat tcatatcaaa cacctgtatc acaggtgtta aagaaacaag 7440
aaacattgta cttcttgtat tcttaataat gatttgcaat attgtcttta gtatcactgc 7500
aaacctctat aaatatgatt tttaaaaagt atttctttag gttggaatta cttctacgca 7560
ttgacttatc ttcctgggtt tcattagccg tacccgttgt actttcttcc ttaccactgt 7620
ttatctcaaa ctcttgagat taaagtatgg gctcaggagg gagcgaggag cttcaggact 7680
ctcacggacc tccagcacag tgtagctgcc ttatggaaaa gtggccacac tgttttctgc 7740
actggtccct gcccctacta ttcctcactg ggcagagcac agccaccctg gccctgcctg 7800
aacattttag tcagtgttgg ctctgtgctt ctctggggag gaaatccaag agacaaccca 7860
cagcccctct gccatttcag ctgcagcagt accaccgtta atgcccttgg gcttgagaaa 7920
gaagggacct ggccacttcc ctgacacctc cagcacacag cagggaaaga attccagttt 7980
ctctttcttg tgagctttca cctgctactc ttcaccaggc aaggctcctg gcttgggccc 8040
acagtgcagg cacctcgaac tcagttgaac atttccactg gctgcactct gtgtttttgt 8100
ggggtgaagc tcccagaggt gactgaaagt ccttctgcca ctaacactgc agtcatactg 8160
cccttgctgt acttggacta gggaaggaaa aaagatcctg agtgctttac tcacacccca 8220
gtgtgcccca gccaccctat ggaaaagagg ccagtgtgtc atccctgcaa gcaccctgag 8280
gcccctgccc ctgctgcccc caagctgtag agccagaata taaagctggc agaaaaatgt 8340
aaaaaggcta gactggctta gcctcccagc ctacatcttt ctcctgtgct ggatccttcc 8400
tgctcttgaa catcggactc caagttcttc agctgtggga cttggactgt cttccttgct 8460
cctcagattg caggtggcct attatgggac cttgtaatct tgtgagttaa taccacttaa 8520
taagctcccc tttgtgtgag tatatctata tctatagata gatataggta tactcactat 8580
atatacacat atatacatat actctctctc tctctctctc atatatatat atatataatc 8640
tcctattagt tctgtccctc tagagaaccc cgactaatac agattttcat accagaagtg 8700
gttcttgagg aacagaatat taaggatgga attctttcat tggttttggg acttctggtg 8760
ttggctgatt aatatgatta gaccaaaaaa tgctaaggac tctacttcta atagtatgga 8820
gaacactgat agtacttggc ctgaattgtt tagagagtta tgcaaaataa atgcatttga 8880
cactactgat tcatcactta tgagaggcaa ggagtttagt gactctatac ataatacctt 8940
tgactatatg tggagaacca aggaacataa tgaagttggt tgattgctcc taagttctct 9000
ggagaaagag atgaaagaaa atgatgatct caggggatct gtctcccacc ttcagaagca 9060
gatactgagc cacaaatctg ctaagattgc cctgaatgag agttttaact cctgtagaga 9120
aagagttgaa attgtgaaaa aacagagaca agctgttatc atgcgagtag ctgatctgca 9180
acaagaggtg catgcacagc cttgccaggt gtttactgtt aaagtgaggg cattgactgg 9240
aaaaaaatgg gaccctggaa cttggagtgg ggatgtgtgg gagaaccctg atgaagctga 9300
ggacactgag tttgtgaact ctgatgaaac ttttttgcca gaagaaacag tttccccatc 9360
cccagtagtg gtaacatccc ctccctgacc cgtgctgcca ttagcctttc cacctttgtc 9420
tgaggatgta aaccctgcac tgcttgaggc aacagtgatg gccttccctg aggcagctgc 9480
caggcaagat aatgttgatt ctcctcaaga ggcaccccta atgcccctga atgcttctag 9540
acctataact aggctaaatt ccttgcgggc cccagaggtg aggttcagag tgtgacccat 9600
gaggaggtgc attatactct aaaagaactg cttaagcttt ctaatttata ttggcagaaa 9660
tctggagaac aggcatggga atggatatta agggtaaggg ataatggtgg aagggacata 9720
gagttggatc aagctgaatt tattggtttg gccctactaa gtagggattc tgcatttaat 9780
gttgcagctc ggggacttag aaaaggttct gatagggccg ggagcagtgg ctcacgcctg 9840
taatcccagc accttgggag gcgggggcgg gcagatcacg agatcaggag attgagacaa 9900
ttctggctaa aatggtgaaa ccccatctct gctaaaaata caaaaattag ctgggcatgg 9960
tgatgcgtaa ctgtaatctc atctacttgg gaggctgagg caagagaact gcttgaacct 10020
gtgaggcaga gattgcagtg agccaagatc gccccactgc attccagcct ggtaacagag 10080
caagactcca tttccaaaaa aaaaaaaaaa aaagttataa tagtttattt gcttggttag 10140
ctgaaatatg gattaaaaga tggtccaatg ttagtgagct ggaaatgcct tggtttaatg 10200
tagaggaagt gatccaaagg cttagggaga ttaggatggt ggagtggatt agtcacttta 10260
gacctactca tcccagctgg gagggtccag aagatacacc cttggccgaa gctttgtgaa 10320
atagatttgt gagagcagca cctgtatttt tgaagagccc gtaattgctc ttctctgtat 10380
gtcagatcta acagtaggaa ccacagtcac tcaactacaa aatttaaata caatgggaat 10440
aattggatcc tgaggtggca ggggccaagt gttggcactg aaccatcaaa ggcaaggtgg 10500
gcataactac cataatagac agcagaggca aagcagccat cagaatagtc tgactcatgt 10560
agagctctgg cattggctaa ttaatcatgg tgttcctaga agtgaaattg atgggaaacc 10620
tactgtattc ctacttgatt tatataaaca aaaaactgcc aggtagaatg gactaaagac 10680
taatctgaat tataaaaaca gagaatcatg ggccctcaat caatttccag actcgaacct 10740
gttacagttc cagaacccac tgaatgaagg ggaggctgga tccccttgag gaaggacacc 10800
actaggctac tgacaactta tgctgttact ctttctccca tccttcccta aggagacctc 10860
tggcctttta ccagggtaac tgtgtgtact ggagaaaggg aagtaatgag acatttcaga 10920
aagtactgga cactggctct gagctgacgt tgattccagg gtacccaaaa cgttattgtg 10980
gttccccagt taaagtaggg gcttatggag gttaggtaat taatggagtt ttagctcatt 11040
tctgacttac agtggttcca gtgggtccct ggacttatcc tctggtcatt ttcccagtgc 11100
caaaatgcat aatttgtata gacatactta ttagctggca gaaatgccac attggctccc 11160
tgactggtag gatgagggct attatggtgg gaaaggccaa acagaagcca ttagagctgt 11220
ctctacctag aaaaataaaa aaatcaaaaa caatatccca tccctggagg gactgaagtg 11280
attagtgtca ccatcaagga cttgaaagac gcaggggtgg tgattcccac cacatccctg 11340
ttcaactctc ccatttgacc tgtgcagagg acagatggat cttggaaaat gatggtggat 11400
tattttaagc ttaaccaagt ggtgactcca attgcagctg ctctaccagt tgtggttttg 11460
ttgcttgagc aaattaacac atctcctggt gcctggtatg cagccattgg cttggcaagt 11520
ggctttttct ccattcctgt ccataagacc caccagaagc aatttgcctt cagctgacaa 11580
ggccagcatt atacctttac caccctacct caggggtgta tcaactctcc agctttgtgt 11640
cataatctta tttggagaga ccttgctcgc ttttcacttc cacgagatat aacactggtc 11700
cattacattc atgacattat gatgattgga tacagtgagc aagaagtagc aaacacactg 11760
aacttattgg tgagacattt gtatgccaga ggatgggaaa taaatccagc taaaatttag 11820
ggactttcta cctcggtaaa atttctaggg ttccagtggc atgagaccta tggagatatt 11880
ccttctaagg tgaagcataa cttgctgcgt ttggcccctc ttacaaccaa gaaagaggca 11940
caatgcctgg tgggcctatt tggattttgg aggcaacaca ttcctcgttt gggtgtgtta 12000
ctctggccca tttatcgagt gacctgaaag gctgccagat ttaagtgcag tctagaacaa 12060
aagaaggctc tgaaacaggt ccaggctgct gtgaaagctg ctctgccatt tgggccacat 12120
gaccccgcag atccaatggt gcttgaggtg tcagtggcag atagggatgc tgtttggagc 12180
ctttggcagg cccccatagg tgaatcacag tggagacctc taggattttg gagcaaggcc 12240
ctgccacttc tgcagataac tactctcctt ttgagagaca gctattggtc tgttattggg 12300
ctttggtggt aactgaacgt ttgactgtgg gtcataaagt caccatgcta cctgaacctg 12360
cctatcatga actggttgct ttctgaccca tctagccatg aagtgggtca gcacagcggc 12420
atttcatcat caaattgaag tggtgtgtat gtgatcgggc ttgagcaggt cctgaaggca 12480
caagtaagtt acataaggaa gtggctcaaa tgcccatgtt ctccactcat gccaccctgc 12540
cttccctccc ccagcctgca ccaatggcct catggggagt tccctatgat cagttgacag 12600
aggaagggaa gactaaggac tggttcatag atggttctgc acgatatgca ggcaccaccc 12660
gaaagtggac agctgcagca ctatatccac tttctaaatg catgtgtaca cttgtgctaa 12720
gaaaatatct ttattttatt tcctttattt ttcctttatc atgtgacctt agatttatgg 12780
acttcacatc agcatttaag catttaagtg ttgttcatat cagcatttaa atattgttaa 12840
ccttatgtaa taacttttgg tttggggatt ggtgcgtttc tggttgtatg aggatagttg 12900
tattatatta ggcataatta tgaccttatt attgtcttta tttgaagatt atgtatgatt 12960
tcaggatgtg tgtatgggtt caagttgaca aggagttgga cttgtgatgg ttaatactgt 13020
caacttgatt ggattgaaag atgcaaagta ttaatctcgg ttatgtctgt gagggtgtgg 13080
caaaaggaga ttaacatttg agtcagtggg ctgggaaggc agacccaccc ttaatctggg 13140
tacacaccat ctaatcaagt tccagtgtgg ccagattgta aagcagggag aaaaatgtga 13200
aaagactaga ctgaattagc ttcccagcct acatctttct cctgtgccaa atgcttcctg 13260
ctcttgaaca tcggactcca agttcttcag cgttgggagt tggactggct ttcttgctcc 13320
tcagcttgca gagggcctgt tgtggaacct tgtgatccgc tgagttaata ctacttaata 13380
agatcccctt tatatacata taatatatta tattatatat aatatatata atatatatta 13440
tatataatat atataatata ttatatatta tatataatat atattatata ttatatataa 13500
tatatattat atataatata tattatatat tatatattat atataatata tattatatat 13560
aatatatata aaatatatat atatcctatt agttctgtcc ctctagagaa ccctgactaa 13620
tacaatttat gtcattaatc tcatttattg atttgtatac attgaaccaa ccttatatcc 13680
caggaataaa acctacttga ttgtggtgga ttagcttttt gatgtactct tggattcaat 13740
tgctggtatt ttattgagaa tttttgcatc tgtgttcatc aaggatattg gcttgaagtt 13800
ttcttttttt gttgttccat atcagaatga tgacgacctc atagaatgag ttagtctgtc 13860
ctcttttatc ttttggaatt gtttcaggag gcttgatatc agctcttctt tatatgactg 13920
gtatactttg gctaggaatc tctctggtcc aggggttttt ctggtgtagg tttttaatta 13980
ctgattcaac ttcagaactc attactcatt attgagttct aaaactcact ttcatgtact 14040
cttcaaaaga ctgtcttctt ctgttgttga gcggggtgtt ctctcaaggt cgtttaggtg 14100
aaggtggttg ctggtgttct tctgtatcct tactgcttgt ctttctcttt ttttattgac 14160
tactgaggat taatggtgat gtgtccaact ttaactctag attagtctat ttctctttta 14220
gattgtaact ctgttttata tattttgaag ctctgttgtt aggcatgtgt atttggattg 14280
ttaggtcttc ttgatgatga cctttatcat tatgtaatgt ttcttcttat ctctggaagt 14340
attcgttgtt ctgaagtcta tttgtgctga tatgaataca gccttcacag ctctattttc 14400
actagtattt gtatatcttt ttctcagctt ttaaattgag atgttcagac catttgcatt 14460
aaagtagttg ttaataggat taaatttaaa tctaccatta agttggttat ttctctttgt 14520
cccatttaaa ctttgttcct tttttcatat ttttctgcct tcatttatat tgagtttatc 14580
tccacgactt acttattaaa ttaattttta atggttttag tattttccac aatgtttata 14640
atatatactt tgattttttc acattccacc ttcaaatgac agaattatac tggatatata 14700
gaaatcttac atcattgcac ttctccttcc tccctctcaa aatgttgtgc tattgctctt 14760
tgtaatagag gcttacttct attatgttat agctctcata atacattgac actattttta 14820
ccctgaataa tcagttgttt tttaaagtga ttatgactac aaatattttg aataatttct 14880
ttattttacc atttctggtg ctccttatct tttacagtag atcccaattt ccatctggag 14940
tcacattctt tctgtgaaaa acaaccttta gcatttctta tagcacggga ctgctgttgc 15000
tgttgtcttt cagcttttct ttgtctgaag aagtctttat tttgccttca gtttttaaaa 15060
gtgattttgc tgagtataga tactgggttg agagtttcat tccttgtatc attttaacaa 15120
tgatgttcca ttatattccg ttttgaatag tttctgacta gaaatctgat ctttgtttct 15180
ttgtattcaa tagttccttt ttctctgact gcctttaaga tattctcatc tttgtttttc 15240
aacagtttga ctataatttg tttattatta actttttgta tttattctgc ttgaggtttc 15300
ctgagctcct tggatttgca gattgttgat ttttattgtt tttgtaaaat tcatagccat 15360
tatctattct actgttttgt tttttttttc acttctctct ctctgtattc ttctttttgg 15420
actgtaagta ttcaaatgtt agatcattca tattgcttca taaaccttat atgcttcttc 15480
tgcttttttt tttttgtcag gaactctttt tttgtatctg tgttggtttg gataagttct 15540
agtagactat gttcaagttt atggattatt ttgttagttg tgtctaattg actcctcagt 15600
gcattcagag aattcttcat ctctgatatt ataaatctct tcctagcatt ttcatgttac 15660
tcttttctat agtttccatc tctttgctga aattctcccc ctatccatgg atattgtcca 15720
cctttaccac aagattcttt aacatattaa cataggtatc atacaaaccc aaactgatag 15780
tttccagatg gtgtcttttc tgagtctgtc tgtcttgatt gctttattat ttaacagtga 15840
cttatcttcc ctcttcagct tttggtgtgt cttgtaattg tttaatcaaa cactgggtat 15900
cataaatgga ggaacagtag agattgcagt aaatattatt tatgctttga aatgggcacc 15960
catcttctgt tgaaaatatg ttttgtggtc aattgagtca acctagtaac tggttgaact 16020
gaatttggca tttgtgcttg ttgcttttat cttaaatgca ccacaggttt aaattcctcc 16080
agtgatgggt tgctgctatc ttttgcttag agtggggcct ggggtgtgga agaattttct 16140
cagtgttcct atctattatt agattttagc agtcactgca tgcctgcact acagagggga 16200
tatcttcata cacataatct aaccccattg aaactgctgt ttcttcttaa tgaatgctca 16260
atctttggtg gaaataaaca aatgctgtat ctcctggagc cacttcagtc ttagtcaggt 16320
tctgcagggc tttgaaggga atgcattctc agtattcttg tgccttattt ggatggaact 16380
tgaacctgtg gtgggtttgg agagaaagag tagcagacgt ctgctatgtt gcaatgcagg 16440
atgctgggca caagaaaatt tccagtctct cctccaagga aataagattt gatcatctac 16500
ctatccctga gaagtgaagg gctttgcctg cggtgctaga tgcaaaacca tttttctccc 16560
cccattgccc agaaacttaa ggctttggct tttctgagca gtggtctagg gaattgtgca 16620
aggttttcat atttgaccct gacagcccat caccacctac agcttgcagt gccaaatgta 16680
tctccctctg atctctcctg tcctgtggtc ctcatgaaca ttaagaagag atttctaaaa 16740
aagagcttgc acatgagcat agtttctggt gagaagaatt ctgatatgtt aacttcctct 16800
aaacttttaa ataaaatatt tctaagaatt aaataaagtt ctagaatgat atgaatctat 16860
tcctttggtt ttttgcacgt ctgtctgcct gctaatcaag agaagagaat ggtcgtaatt 16920
ctcagagact ttttcctgtt tgtgtcataa atgacttcac atttttttct gttctaagaa 16980
ctattcagct tgatttcttc tgttttaatt ttagcagcac ctgagcaaag ccatgtggtc 17040
caggattgct accatggtga tggacagagt tatcgaggca cgtactccac cactgtcaca 17100
ggaaggacct gccaagcttg gtcatctatg acaccacatc aacataatag gaccacagaa 17160
aactacccaa atgcgtatgt cattaatctt acagtaagca aaacaaggtc caagtaaaat 17220
ttgtcttaga aaaggtgtgc gtcaagctaa cttcttatga ttaaattttt ctcacacata 17280
gaatgcatgg caaaatgtct gagaaacatt actttgagca aagagtatga tagaagagaa 17340
atgttaagct ggctctcttt cctgagagtt tgataaaatc aggagaatat ctggcggtgg 17400
tgaggccaca ataatggaaa atcagaatgt ttagacagag tcagcttcaa caacactcac 17460
taaaggtcaa tgtgatcttt accccttgaa attctataat tctaatctcc aattcctgaa 17520
gtgaaggttg tgttggcctt ttctgtcttg gctcacaagt aaatgatatg tgcatatcta 17580
tggaaaggcg aatctatctt tttctatatc tatgtctatt ccaacgggta gaaacaccct 17640
gggtcctgag caccagtggt ctgaaggaat acgggttgcc aggaagagag aagcaaaggc 17700
aggaaggcag atgaaagtaa gaaatgagac agatgctaaa caataaaaag tgcgggaaga 17760
tagacagaag ctggggtctg accacaccat ggccagtctt tcacacataa gtgactacca 17820
aagacaagaa aaaatgattt ccgcttgttg gacaatagat ggtagaggac caagggaatt 17880
gcgagagaga gaacaatgag atcaactcaa cagatgcact ggttttcttc ctggagaccc 17940
ttcctgcact gaagggcagg agatggagcc caaaaaaaac tgtagccatc ttgctgaaca 18000
gaggagggac attggagttt gggattattc aggtggctag gattttctag gcctgctaac 18060
aatgagaaca gatttgtgga ggaaaggagt tctagaaata tgcatagaaa tctcctcgag 18120
tcattggcta aacatgaagc tgcatgtaca cagaaaatag atccacaaga aagtagggca 18180
aagaacatct acggaagagc agcaactaca atggaacagt gagctcaata aacatgacag 18240
agctcaaata gcactaaggg atattggagt ttggaccaca cagaggagag agacttcact 18300
gaacatcttg ggcattcagt agagacccag gaaaagccat actttaggag tagaattagt 18360
atattcttag aataaaggca gctccacaca aacaatagca aaactgaaaa ggaagtctcc 18420
aagcatcaga atgatgtcca agtcaatgaa ctgcctctga gaggaaaact caaccatctt 18480
tagaggtaaa catcaaagtc aagtggctca gctatgcagt atccacagtg tgaggcctaa 18540
atataaaact tgactacaca tagaaacctt ttagtgtgac ccacaagcag gaggaaaatc 18600
agccaataca aacagaccca gaagagacag aaatgattag aatggcataa aaatttgaca 18660
tatcactata taataattga gttctaggat ttaagaaaac atgaatatag aatgcaacag 18720
acaccttatc cagagacagt aagagtataa agagccaaat cgaagaacta ctaagagata 18780
tgtcttaaat gaaaaaatta ctagatggcc tccccatcta gttagacatt tcagaagaaa 18840
ataccaaatg aaaaataatt gcatagaacc tacagaacca gatacacaca tacaaaacac 18900
acgcatgcat acacacacac tcaaacatgt ataagcttac aaacacacac acacatccac 18960
aaatgctgaa aaatgaaatc aaccgagcca cacagacata aaggaaaaca taaaaagatt 19020
tcctacatgt gggaagcaag tcacagaaag ggggaaggag attggaacag aaatatatac 19080
tgaaagcaag gatggctgaa aattttccaa atataaagaa gattaaaaaa tcacggactc 19140
aagaagctca atggatcaga aaaataattt ctaaaatgac aattatagga tgccactggg 19200
tacatagcag ttcaactgtc agagggcaaa gacataatac acagaaaaat ctcgtaagga 19260
acgggaaaaa caaaaagctg tgtcttgcta gaggaacagt gatacaagtg actaatgtgt 19320
tcccatcaga aacactgcaa cctggacaca aaagaataac attaaagtaa taaacgtaag 19380
aaagaagagc tcaactgaga aggctacatc cagcaataaa atgccttgaa gttcatccat 19440
gttggaggaa tgcacattgt gcactcccct aaacaaagaa accggaaact gtaagacttt 19500
ggaatcagca ggcttatgta acaaaagagg tgaccctaag gaattaagga gaagaagaat 19560
agaacaagaa gggaactttc tgcagcctat ataatgaaga acctagcaat tggcaaatgt 19620
agatgaaaat gctacatgtt ttcttgatca aacgtttata tctttttaaa tgagagttga 19680
cgagttgaag caaaatgata ccaatatatt taactttacc atatgtagaa gtaaaaattt 19740
gaacatgtag cataaatcat gtagggatta attggaagtg taccactgta agtttcttac 19800
ctcatgcacg atagtatgta atactaataa aaggttaatg tgtgggttca aagggatatt 19860
gcaaatccta gagcaatcac aaagttttta actctgaggt ttgttgtata ataacaatat 19920
tttatgtatt caaaagaggg aagccaagga agaaaaaaaa gtctttaaag agctctggct 19980
cttagtacat ccagttgctc attgaatgag cttcctggaa tggagggtct gggactgaga 20040
ctaggccaca tgtgtagagc cactagagac acaatgttgg atccccatgg cccataatac 20100
atttcccatt ttctcaggca gccacaggtc atgaatgtga ggatactgag aggttggagc 20160
aacgttcttg ggaggcataa ggaagagcga atgcttcaag atccccgcag cccaaactcc 20220
tcagctgctt tgcctcctaa ttcattgttt tttgctcctc catagctgtc cgacctcttc 20280
agatctctta gtcttcctgc catcttcctt tatgccatgg gacccactgt tctttcaact 20340
catcccccag ttctggagtg gctgtggaca gcagaggata gactgagagc aggagagaag 20400
gtcctgccca ggaacccatt ctagagatac tgcattctgc ctgggagcaa gttttccagg 20460
gcagctttga gaagtcttgc agaaacaaac ctacttgacc gacatgatat gggaatgaca 20520
gacagtaata ctatttgcac aatgcttttc catgggaaag gtagagcctt ttcactaggt 20580
tttgagtaca tggagtgtga gagttgacct ggaaaggtta tcctccttga tgccatgttt 20640
tctctgaaga actacatgtt cgttgcaact cccacattag aatatgaagt cctaccgaga 20700
gagatacgga gactagacag atacagatgc atttgcatgt gaatacacaa tcccacaata 20760
cagacgtcaa aacccatacc agttattcca gagagatgga ttgggcagaa ggcagaagga 20820
gaatactctg atcgtttttc ggccacgtgt gtgtgttatc tcagtgtttc taagaagcgt 20880
ttgctacttt agatttttta tttaaaaaaa atagtaataa tctattaagt atgagagatg 20940
tgcagagagg attagtgatc gagagccatt tttgctggtg gcaatcatat ggtactttta 21000
atgggaatat tagaaaggca ccggtaatga ccttgttgca gcacaaagga gagagtgtgg 21060
ggtgcccctg catgttgtcc cacctcttgt gacgtgtatc gttttggaat ttccagtggc 21120
ttgatcatga actactgcag gaatccagat gctgtggcag ctccttattg ttatacgagg 21180
gatcccggtg tcaggtggga gtactgcaac ctgacgcaat gctcagacgc agaagggact 21240
gccgtcgcgc ctccgactgt taccccggtt ccaagcctag aggctccttc cgaacaaggt 21300
aaggagtctg tggccagaca tctacacgct tcgatgctgg gatgaaaagc catggaaatt 21360
cccactgatg cagccgcctt caatggtaaa cggatgctcg agtgttgcct gagttctacc 21420
atgtaggagg aagcctccgt gcactctctg ggggagccag cggagtgatt tctggtgcaa 21480
cgtggttggg ctttgtcttt aggatgggca caaaccctcc agggggatcg acttcaaaat 21540
tcaccttgtt gtaaaacggg ctacctcagt gtcccagcca aaatttttat tgtaacatgc 21600
tgtcaggtgt gtcactcttt ccaagccagt aagcttttcc ggggatttct tcaagtagcc 21660
agcattcaga gcaatcttca gcattgcaga ttctgagaaa tgtggctctg gagcctgtca 21720
ccctcgagaa acctaagagg gctgcattga ttccatgtgg ccctgggtct atggagcagt 21780
acatgagctc ccagtgctct aaggctcttc agccctaggc tttgaaggga gtgatttctc 21840
agtattctta aacctctttc tgatgacact tgtacctgtg aggggtctag agagaaagag 21900
tagtagactc ctactttact acaattcagg atgcagggca tgagaggatt ccctctctcc 21960
tccaagggaa gaagcttttg gcgtgcacac atccctgaga agcaaagtgt ctttgtcttc 22020
agtcagatac ataggaccgt tttctgcccc atggcccgga agccaaaggc cttggctttc 22080
atgatcaacg gtctagggaa acatgcaaaa tttccatgtc tgtcccaaac tctgcccccg 22140
acagccaatt accacctgca gcccgcattg ccaaatgcgg tgccgtttgc atgaagattc 22200
agtagagttt cctagaaagg tgctacctcg tgagctcact ttccaatgag gaatctgatc 22260
tgttgtgttt ctctaaggtg tcaggtgaaa tatttccaag aacttactac agttctagaa 22320
tgggaggaat ctgttgcttt ggtgtttgtt tgttggtcgg ttttctcaca tccatctgcc 22380
tatggataag gaaaagagaa cggtcgtaat tctcatagac tcctttctgg ttgtgtcaca 22440
aatggcttca catgtttctc tatgctcaga gatactcagc ttgatttccc gtgttttcat 22500
ttcagcaccg actgagcaaa ggcctggggt gcaggagtgc taccatggta atggacagag 22560
ttatcgaggc acatactcca ccactgtcac aggaagaacc tgccaagctt ggtcatctat 22620
gacaccacac tcgcatagtc ggaccccaga atactaccca aatgcgtatg tctttgttct 22680
ttaccataag agaagaaagg gccaagtgaa gtttctgtta caagagatgt gtctcaagct 22740
gagttctccg aactcaactt gtgacagatg cagatggcgt agcaaaatgt ctcaggatga 22800
ttgccttgga gctaagggtc tgagagaagg gaaatgttaa gctccctctc cttcctccta 22860
gttctattga gcagaaggga aatctggagg tgaggagatc acattatgaa gaaagtcaga 22920
atgacaaagg accagacact tagattaccc ttccacaaca ccaactaaac gtcaatggag 22980
actttccagt tggaattccg ttattctggc ttccacttcc tgaagggaag gttgcgtttg 23040
ccttttctct ctgggttcaa gaggaaagaa taggtgctta tttatggaca ggtgaattga 23100
tctgtttcta tatctacgta tattccgatt gtcagaaaaa cactcgttcc taagtaccag 23160
tggcctgaag ggatacaggt tcccagcaag agaagatcca aggaaggaag gcagatgaga 23220
gtcagcacag agagggatgc tgaaaagtaa aagggatggg tggatggaga gaagcccggg 23280
tctgaccacc caatggccaa tattttggcc acaagcgact accagagaca tggaaaaatg 23340
gtttctacat gtgggacaac agatggtaga ggacctagag aattgagaga ggggcaatga 23400
tgggctccac tccgcagatg ccttggcttt cttcctggat acccttcctg cactgaatag 23460
caaggagatg gagcccaagc agactgtagc catcttgctg aatggaggag agggattgga 23520
gtttgggatg actgtggtag ctgaaatttt tctaggtctg ctagaaataa gaactggttt 23580
gtgtggagga aaagagctct acaaatacgc atagaagtct cctccagtcg ttggcctgac 23640
atgacgctgc ctgtgcacag gaaatggttc cacgagaaag tgtggcaaag aacatttact 23700
gagaaacagc aagtacaaga gcacaggaag ctcaataaag aagagagaga tcacatagca 23760
ctctgggata ctggagttct tcccagctag accagagagt cctcacggag cacattgcca 23820
attcagtgga gaccccagaa cagccgtaat ttaaaggtac acttagtata ttactagaat 23880
aaagtcagct gcagacaacc ccttgcacag ctggaaagca agtgtccaag catcaaatcg 23940
gtttccaatc aatgaagtgc ctgtgagagg aaatctcaac tctctttaga agtaaacaac 24000
aaagtcgatt gcctcagcta tgcggtatcc gcagagtgag tcctaaattt aaaatctgac 24060
tacatgtaga aaagcgtttc gtgtgaccca tgaccaggaa ataaatcggg taatacaaac 24120
aggctcagga atgagagaaa tgattagaat tgcgtgaaaa tttgacatat cagtatgata 24180
actgatttca aatatttaaa aaaacaacat gcaagaaagc agatatcata tcaagagaaa 24240
ttaacagtac agaatagcca aattaaatta aagaggtagt ataaaaaaag tatgtcttaa 24300
ttgaaaaaaa ttactgtatg gccggctgat caatttagac gtttcagagg aaaacattac 24360
ccaacacaca attctagaga acctacagaa tgagctacac acacacacac acacacacac 24420
acacacactg aaaacacacc catactcaca cacacgcaga aactcacaag ttctaacaca 24480
cacagacacg cgcacccctg aagaaacagt gaaatataaa attaagcgag cctcacagac 24540
atgtaggaaa atatgaaaag atttcctgca tgtgggaagc aagtcacagt aaagagcaag 24600
ggagtttata atagaaacaa ataccagaat caaggatggc tgataacttt tcaattacga 24660
agaacattaa aaaaaatcac agaatcgtga aactcaaggg atcatatagg gaatttcgga 24720
aaaaaaaccc aacctgtatg atgtactttt gtacatcaca gttcgaaggt aacaaggcaa 24780
agatgtaata agaagaaacc tgtcacgaga aactggagga aaaagagctg tgtcttccta 24840
caagtacact gatacaaatt gccaatgtgt tcacctcaga aacactggaa gccagatacc 24900
agggaatatt gttaaaatga taatcaggaa caaaaagaga tcaaccggga atgctgaatc 24960
cagcaataaa atgccttgaa ggtcatccat gtcggataaa tgcatattgt gcactgcccc 25020
aaagaaagaa accggaaact gtaagaattg gaaatcagca ggcttatgta acaagagagg 25080
tgacccgaag gaattaggta gaagaagaat tgaacaagaa aggaactttc tgcagcccac 25140
gtaatgaaga atccagcaat tggcaaatgt agatagatgt aaatgcaaaa tattttcttg 25200
atcaaatttc tatatctttg taaatgagag ttgactactt gaaacaaaat gatagcaaga 25260
tatttaactt cagcatatgt agaggtaaga atttgaaatg gtagcataaa tcacgaaggg 25320
attaattcga agtgtaccgt tgtaagtttc tttacctcat gcacgatggt gtgtcatatt 25380
aataaaaggg tactgtgcgg gttcgaaggg atattgcaaa tcctagagca atcacaaagg 25440
tttgaactct gaggtttttg gtataataag aatagtccat gcattcaaaa gagggaagcc 25500
aaggaagaac tagaagtctt tcaagagctc aggctcttat acatccagtt gctcattgaa 25560
ccagcttcct ggaatggagg gtctggggtt gagactaggc cacaagtcta gagtctctag 25620
agagacagtg ttggaacccc atggcccata atacatttcc cattttctca ggcagccaga 25680
ggtcatgaat gtgaggatac tgggaggttg gagcaacgtt cttgggaggc ataaggaaga 25740
gcgaatgctt caagatcccc gcagcccaaa ctactcgcct gctttgcccc ctaatgcatt 25800
tttctctgct gctccgtagc tgtccgacct cttcagatct cttagtccac cctgccgtct 25860
tcctttatgc catgggtccc actgttcttt caactcatcc ccctttccct cagtcccgga 25920
gtagctgcgg ccagcagagg gtagactgag agcaggagag aaggacctgc ctaggaaccc 25980
cttctagaga tactgcatcc tgcctgggag caagttttcc agggcagctt tgagaagtct 26040
tggagaaaca aacctactaa acctgacaga cagtaatact atttgcacaa tgcttttctg 26100
tgggaaaggt agagcctttt cactacgtat tgagtacata gagtgtgagg gttgacctgg 26160
aacggctatc ctcctggatg acgtgtgttt tctgaagaac tacatgttcg ttgcaactcc 26220
cacattagaa tatgaagtcc taccgagaga gatacggaga ctagacagat acagatgcat 26280
ttgcatgtga atacacaatc ccacaataca gacgtcaaaa cccataccag ttattccaga 26340
gagatggatt gggcagaagg cagaaggaga atactctgat cgtttttcgg ccacgtgtgt 26400
gtgttatctc agtgtttcta agaagcgttt gctactttag attttttatt taaaaaaata 26460
gtaataatct attaagtatg agagatgtgc agagaggatt agtgatcgag agccattttt 26520
gctggtggca atcatatggt acttttaatg ggaatattag aaaggcaccg gtaatgacct 26580
tgttgcagca caaaggagag agtgtggggt gcccctgcat gttgtcccac ctcttgtgac 26640
gtgtatcgtt ttggaatttc cagtggcttg atcatgaact actgcaggaa tccagatgct 26700
gtggcagctc cttattgtta tacgagggat cccggtgtca ggtgggagta ctgcaacctg 26760
acgcaatgct cagacgcaga agggactgcc gtcgcgcctc cgactgttac cccggttcca 26820
agcctagagg ctccttccga acaaggtaag gagtctgtgg ccagacatct acacgcttcg 26880
atgctgggat gaaaagccat ggaaattccc actgatgcag ccgccttcaa tggtaaacgg 26940
atgctcgagt gttgcctgag ttctaccatg taggaggaag cctccgtgca ctctctgggg 27000
gagccagcgg agtgatttct ggtgcaacgt ggttgggctt tgtctttagg atgggcacaa 27060
accctccagg gggatcgact tcaaaattca ccttgttgta aaacgggcta cctcagtgtc 27120
ccagccaaaa tttttattgt aacatgctgt caggtgtgtc actctttcca agccagtaag 27180
cttttccggg gatttcttca agtagccagc attcagagca atcttcagca ttgcagattc 27240
tgagaaatgt ggctctggag cctgtcaccc tcgagaaacc taagagggct gcattgattc 27300
catgtggccc tgggtctatg gagcagtaca tgagctccca gtgctctaag gctcttcagc 27360
cctaggcttt gaagggagtg atttctcagt attcttaaac ctctttctga tgacacttgt 27420
acctgtgagg ggtctagaga gaaagagtag tagactccta ctttactaca attcaggatg 27480
cagggcatga gaggattccc tctctcctcc aagggaagaa gcttttggcg tgcacacatc 27540
cctgagaagc aaagtgtctt tgtcttcagt cagatacata ggaccgtttt ctgccccatg 27600
gcccggaagc caaaggcctt ggctttcatg atcaacggtc tagggaaaca tgcaaaattt 27660
ccatgtctgt cccaaactct gcccccgaca gccaattacc acctgcagcc cgcattgcca 27720
aatgcggtgc cgtttgcatg aagattcagt agagtttcct agaaaggtgc tacctcgtga 27780
gctcactttc caatgaggaa tctgatctgt tgtgtttctc taaggtgtca ggtgaaatat 27840
ttccaagaac ttactacagt tctagaatgg gaggaatctg ttgctttggt gtttgtttgt 27900
tggtcggttt tctcacatcc atctgcctat ggataaggaa aagagaacgg tcgtaattct 27960
catagactcc tttctggttg tgtcacaaat ggcttcacat gtttctctat gctcagagat 28020
actcagcttg atttcccgtg ttttcatttc agcaccgact gagcaaaggc ctggggtgca 28080
ggagtgctac catggtaatg gacagagtta tcgaggcaca tactccacca ctgtcacagg 28140
aagaacctgc caagcttggt catctatgac accacactcg catagtcgga ccccagaata 28200
ctacccaaat gcgtatgtct ttgttcttta ccataagaga agaaagggcc aagtgaagtt 28260
tctgttacaa gagatgtgtc tcaagctgag ttctccgaac tcaacttgtg acagatgcag 28320
atggcgtagc aaaatgtctc aggatgattg ccttggagct aagggtctga gagaagggaa 28380
atgttaagct ccctctcctt cctcctagtt ctattgagca gaagggaaat ctggaggtga 28440
ggagatcaca ttatgaagaa agtcagaatg acaaaggacc agacacttag attacccttc 28500
cacaacacca actaaacgtc aatggagact ttccagttgg aattccgtta ttctggcttc 28560
cacttcctga agggaaggtt gcgtttgcct tttctctctg ggttcaagag gaaagaatag 28620
gtgcttattt atggacaggt gaattgatct gtttctatat ctacgtatat tccgattgtc 28680
agaaaaacac tcgttcctaa gtaccagtgg cctgaaggga tacaggttcc cagcaagaga 28740
agatccaagg aaggaaggca gatgagagtc agcacagaga gggatgctga aaagtaaaag 28800
ggatgggtgg atggagagaa gcccgggtct gaccacccaa tggccaatat tttggccaca 28860
agcgactacc agagacatgg aaaaatggtt tctacatgtg ggacaacaga tggtagagga 28920
cctagagaat tgagagaggg gcaatgatgg gctccactcc gcagatgcct tggctttctt 28980
cctggatacc cttcctgcac tgaatagcaa ggagatggag cccaagcaga ctgtagccat 29040
cttgctgaat ggaggagagg gattggagtt tgggatgact gtggtagctg aaatttttct 29100
aggtctgcta gaaataagaa ctggtttgtg gaggaaaaga gctctacaaa tacgcataga 29160
agtctcctcc agtcgttggc ctgacatgac gctgcctgtg cacaggaaat ggttccacga 29220
gaaagtgtgg caaagaacat ttactgagaa acagcaagta caagagcaca ggaagctcaa 29280
taaagaagag agagatcaca tagcactctg ggatactgga gttcttccca gctagaccag 29340
agagtcctca cggagcacat tgccaattca gtggagaccc cagaacagcc gtaatttaaa 29400
ggtacactta gtatattact agaataaagt cagctgcaga caaccccttg cacagctgga 29460
aagcaagtgt ccaagcatca aatcggtttc caatcaatga agtgcctgtg agaggaaatc 29520
tcaactctct ttagaagtaa acaacaaagt cgattgcctc agctatgcgg tatccgcaga 29580
gtgagtccta aatttaaaat ctgactacat gtagaaaagc gtttcgtgtg acccatgacc 29640
aggaaataaa tcgggtaata caaacaggct caggaatgag agaaatgatt agaattgcgt 29700
gaaaatttga catatcagta tgataactga tttcaaatat ttaaaaaaac aacatgcaag 29760
aaagcagata tcatatcaag agaaattaac agtacagaat agccaaatta aattaaagag 29820
ctagtataaa aaaagtatgt cttaattgaa aaaaattact gtatggccgg ctgatcaatt 29880
tagacgtttc agaggaaaac attacccaac acacaattct agagaaccta cagaatgagc 29940
tacacacaca cacacacaca cacacacaaa ctgaaaacac acccatactc acacacacgc 30000
agaaactcac aagttctaac acacacagac acgcgcaccc ctgaagaaac agtgaaatat 30060
aaaattaagc gagcctcaca gacatgtagg aaaatatgaa aagatttcct gcatgtggga 30120
agcaagtcac agtaaagagc aagggagttt ggaatagaaa caaataccgg aatcaaggat 30180
ggctgataac ttttcaatta cgaagaacat taaaaaaaat cacagaatcg tgaaactcaa 30240
gggatcacat agggaatttc ggaaaaaaaa cccaacctgt atgatgtact tttgtacatc 30300
acagttcgaa ggtaacaagg caaagatata ataagaagaa acctgtcacg agaaactgga 30360
ggaaaaagag ctgtgtcttc ctacaagtac actgatacaa attgccaatg tgttcacctc 30420
agaaacactg gaagccagat accagggaat attgttaaaa tgataatcag gaacaaaaag 30480
agatcaaccg ggaatgctga atccagcaat aaaatgcctt gaagatcatc catgtcggat 30540
aaatgcatat tgtgcactgc cccaaagaaa gaaaccggaa actgtaagaa ttggaaatca 30600
gcaggcttat gtaacaagag aggtgacccg aaggaattag gtagaagaag aattgaacaa 30660
gaaaggaact ttctgcagcc cacgtaatga agaatccagc aattggcaaa tgtagataga 30720
tgtaaatgca aaatattttc ttgatcaaat ttctatatct ttgtaaatga gagttgacta 30780
cttgaaacaa aatgatagca agatatttaa cttcagcata tgtagaggta agaatttgaa 30840
atggtagcat aaatcacgaa gggattaatt cgaagtgtac cgttgtaagt ttctttacct 30900
catgcacgat ggtgtgtcat attaataaaa gggtactgtg cgggttcgaa gggatattgc 30960
aaatcctaga gcaatcacaa aggtttgaac tctgaggttt ttggtataat aagaatagtc 31020
catgcattca aaagagggaa gccaaggaag aactagaagt ctttcaagag ctcaggctct 31080
tatacatcca gttgctcatt gaaccagctt cctggaatgg agggtctggg gttgagacta 31140
ggccacaagt ctagagtctc tagagagaca gtgttggaac cccatggccc ataatacatt 31200
tcccattttc tcaggcagcc agaggtcatg aatgtgagga tactgggagg ttggagcaac 31260
gttcttggga ggcataagga agagcgaatg cttcaagatc cccgcagccc aaactactcg 31320
cctgctttgc cccctaatgc atttttctct gctgctccgt agctgtccga cctcttcaga 31380
tctcttagtc caccctgccg tcttccttta tgccatgggt cccactgttc tttcaactca 31440
tccccctttc cctcagtccc ggagtagctg cggccagcag agggtagact gagagcagga 31500
gagaaggacc tgcctaggaa ccccttctag agatactgca tcctgcctgg gagcaagttt 31560
tccagggcag ctttgagaag tcttggagaa acaaacctac taaacctgac agacagtaat 31620
actatttgca caatgctttt ctgtgggaaa ggtagagcct tttcactacg tattgagtac 31680
atagagtgtg agggttgacc tggaacggct atcctcctgg atgacgtgtg ttttctgaag 31740
aactacatgt tcgttgcaac tcccacatta gaatatgaag tcctaccgag agagatacgg 31800
agactagaca gatacagatg catttgcatg tgaatacaca atcccacaat acagacgtca 31860
aaacccatac cagttattcc agagagatgg attgggtagg aggcagaagg agaatactct 31920
gatcgttttt cggccacgtg tgtgtgttat ctcagtgttt ctaagaagcg tttgctactt 31980
tagatttttt atttaaaaaa aatagtaata atctattaag tatgagagat gtgcagagag 32040
gattagtgat cgagagccat ttttgctggt ggcaatcata tggtactttt aatgggaata 32100
ttagaaaggc accggtaatg accttgttgc agcacaaagg agagagtgtg gggtgcccct 32160
gcatgttgtc ccacctcttg tgacgtgtat cgttttggaa tttccagtgg cttgatcatg 32220
aactactgca ggaatccaga tgctgtggca gctccttatt gttatacgag ggatcccggt 32280
gtcaggtggg agtactgcaa cctgacgcaa tgctcagacg cagaagggac tgccgtcgcg 32340
cctccgactg ttaccccggt tccaagccta gaggctcctt ccgaacaagg taaggagtct 32400
gtggccagac atctacacgc ttcgatgctg ggatgaaaag ccatggaaat tcccactgat 32460
gcagccgcct tcaatggtaa acggatgctc gagtgttgcc ggagttctgc catgttgggg 32520
gaagcctccg tgtactctct gggggagcca gcggagtgat ttctggtgca acttgggtgg 32580
gctttgtctt tagaatgggc acaaaccttc cagggtgatg ggcttcacaa ctcacctcct 32640
tctaaaatgg gctatctcag tgtcttagcc aaaattttta ttgtaacgtg ctgtcaggtg 32700
tgtgattctt tctgtcgcag taagcttttc tggggatttc ttcaagtagc cagcagtcag 32760
tgcaatcttc agcattgcag atttcaaaaa atgtggctct ggagcctgtc atcctcgaga 32820
aacctaacag ggctgcatta attccatatg gtcctgggtc tatggagcag tatatgagct 32880
cccaatgctc taaggctctt cagtcctagg ctttgaaggg agtgatttct cagtgttctt 32940
aaacctcttt ctgatggcac ttgtacctgt gaggggtcta gagagaaagg ttagtagact 33000
tctcctttac tgcaattcag gatgcagggc atgagaagat tccctccctc ctccaaggga 33060
agaaggtttt ggcgtgcaca catccttgag aagcaaagtg tctttgcctt cagtcagata 33120
tataggatcg ttttctgccc catggcctgg aagccagagg ccttggcttt catgatcaac 33180
gatctaggga aacatgcaaa atttccatgt ctttcccctc ctctgccctc gacagccaat 33240
taccacctgc atcctgcatt gccaaatgca gtgccctttg tatgaacatt cagtagagtt 33300
tcatagaaag gtgctacttc gtgagcgcac tttgcagtga gaaggagtct gttctgttct 33360
gtttttctaa ggatttcagg tgaaatattt cctagaactt actacagttc tagattggta 33420
ggaatctgta ggtttgctgt atgttttttg gttggttttc tcccatccat ctgcctacag 33480
gtaagggaaa gataacgttc gtaattctca tagactcctt tctggttgtg tcataaatgg 33540
cttcacatat ttcgttattc tcagagatac tcagtttatt tcttgtgttt tcatttcagc 33600
accgactgag cagaggcctg gggtgcagga gtgctaccac ggtaatggac agagttatcg 33660
aggcacatac tccaccactg tcactggaag aacctgccaa gcttggtcat ctatgacacc 33720
acactcgcat agtcggaccc cagaatacta cccaaatgcg tatgtctttg ttctttacca 33780
taagagaaga aagggccaag tgaagtttct gttacaagag atgtgtctca agctgagttc 33840
tccgaactca acttgtgaca gatgcagatg gcgtagcaaa atgtctcagg atgattgcct 33900
tggagctaag ggtctgagag aagggaaatg ttaagctccc tctccttcct cctagttcta 33960
ttgagcagaa gggaaatctg gaggtgagga gatcacatta tgaagaaagt cagaatgaca 34020
aaggaccaga cacttagatt acccttccac aacaccaact aaacgtcaat ggagactttc 34080
cagttggaat tccgttattc tggcttccac ttcctgaagg gaaggttgcg tttgcctttt 34140
ctctctgggt tcaagaggaa agaataggtg cttatttatg gacaggtgaa ttgatctgtt 34200
tctatatcta cgtatattcc gattgtcaga aaaacactcg ttcctaagta ccagtggcct 34260
gaagggatac aggttcccag caagagaaga tccaaggaag gaaggcagat gagagccagc 34320
acagagaggg atgctgaaaa gtaaaaggga tgggtggatg gagagaagcc cgggtctgac 34380
cacccaatgg ccaatatttt ggccacaagc gactaccaga gacatggaaa aatggtttct 34440
acatgtggga caacagatgg tagaggacct agagaattga gagaggggca atgatgggct 34500
ccactccgca gatgccttgg ctttcttcct ggataccctt cctgcactga atagcaagga 34560
gatggagccc aagcagactg tagccatctt gctgaatgga ggagagggat tggagtttgg 34620
gatgactgtg gtagctgaaa tttttctagg tctgctagaa ataagaactg gtttgtggag 34680
gaaaagagct ctacaaatac gcatagaagt ctcctccagt cgttggcctg acatgacgct 34740
gcctgtgcac aggaaatggt tccacgagaa agtgtggcaa agaacattta ctgagaaaca 34800
gcaagtacaa gagcacagga agctcaataa agaagagaga gatcacatag cactctggga 34860
tactggagtt cttcccagct agaccagaga gtcctcacgg agcacattgc caattcagtg 34920
gagaccccag aacagccgta atttaaaggt acacttagta tattactaga ataaagtcag 34980
ctgcagacaa ccccttgcac agctggaaag caagtgtcca agcatcaaat cggtttccaa 35040
tcaatgaagt gcctgtggga ggaaatctca actctcttta gaagtaaaca acaaagtcga 35100
ttgcctcagc tatgcggtat ccgcagagtg agtcctaaat ttaaaatctg actacatgta 35160
gaaaagcgtt tcgtgtgacc catgaccagg aaataaatcg ggtaatacaa acaggctcag 35220
gaatgagaga aatgattaga attgcgtgaa aatttgacat atcagtatga taactgattt 35280
caaatattta aaaaaacaac atgcaagaaa gcagatatca tatcaagaga aattaacagt 35340
acagaatagc caaattaaat taaagagcta gtataaaaaa agtatgtctt aattgaaaaa 35400
aattactgta tggccggctg atcaaattag acgtttcaga ggaaaacatt acccaacaca 35460
caattctaga gaacctacag aatgagctac acacacacac acacacacac acacacacac 35520
tgaaaacaca cccatactca cacacacgca gaaactcaca agttctaaca cacacagaca 35580
cgcgcacccc tgaagaaaca gtgaaatata aaattaagcg agcctcacag acatgtagga 35640
aaatatgaaa agatttcctg catgtgggaa gcaagtcaca gtaaagagca agggagtttg 35700
gaatagaaac aaataccgga atcaaggatg gctgataact tttcaattac gaagaacatt 35760
aaaaaaaatc acagaatcgt gaaactcaag ggatcatata gggaatttcg gaaaaaaaac 35820
ccaacctgta tgatgtactt ttgtacatca cagttcgaag gtaacaaggc aaagatataa 35880
taagaagaaa cctgtcacga gaaactggag gaaaaagagc tgtgtcttcc tacaagtaca 35940
ctgatacaaa ttgccaatgt gttcacctca gaaacactgg aagccagata ccagggaata 36000
ttgttaaaat gataatcagg aacaaaaaga gatcaaccgg gaatgctgaa tccagcaata 36060
aaatgccttg aagatcatcc atgtcggata aatgcatatt gtgcactgcc ccaaagaaag 36120
aaaccggaaa ctgtcagaat tggaaatcag caggcttatg taacaagaga ggtgacccga 36180
aggaattagg tagaagaaga attgaacaag aaaggaactt tctgcagccc acgtaatgaa 36240
gaatccagca attggcaaat gtagatagat gtaaatgcaa aatattttct tgatcaaatt 36300
tctatatctt tgtaaatgag agttgactac ttgaaacaaa atgatagcaa gatatttaac 36360
ttcagcatat gtagaggtaa gaatttgaaa tggtagcata aatcacgaag ggattaattc 36420
gaagtgtacc gttgtaagtt tctttacctc atgcacgatg gtgtgtcata ttaataaaag 36480
ggtactgtgc gggttcgaag ggatattgca aatcctagag caatcacaaa ggtttgaact 36540
ctgaggtttt tggtataata agaatagtcc atgcattcaa aagagggaag ccaaggaaga 36600
actagaagtc tttcaagagc tcaggctctt atacatccag ttgctcattg aaccagcttc 36660
ctggaatgga gggtctgggg ttgagactag gccacaagtc tagagtctct agagagacag 36720
tgttggaacc ccatggccca taatacattt cccattttct caggcagcca gaggtcatga 36780
atgtgaggat actgggaggt tggagcaacg ttcttgggag gcataaggaa gagcgaatgc 36840
ttcaagatcc ccgcagccca aactactcgc ctgctttgcc ccctaatgca tttttctctg 36900
ctgctccgta gctgtccgac ctcttcagat ctcttagtcc accctgccgt cttcctttat 36960
gccatgggtc ccattgttct ttcaactcat ccccctttcc ctcagtcccg gagtagctgc 37020
ggccagcaga gggtagactg agagcaggag agaaggacct gcctaggaac cccttctaga 37080
gatactgcat cctgcctggg agcaagtttt ccagggcagc tttgagaagt cttggagaaa 37140
caaacctact aaacctgaca gacagtaata ctatttgcac aatgcttttc tgtgggaaag 37200
gtagagcctt ttcactacgt attgagtaca tagagtgtga gggttgacct ggaacggcta 37260
tcctcctgga tgacgtgcgt tttctgaaga actacatgtt cgttgcaact cccacattag 37320
aatatgaagt cctaccgaga gagatacgga gactagacag atacagatgc atttgcatgt 37380
gaatacacaa tcccacaata cagacgtcaa aacccatacc agttattcca gagagatgga 37440
ttgggcagaa ggcagaagga gaatactctg atcgtttttc ggccacgtgt gtgtgttatc 37500
tcagtgtttc taagaagcgt ttgctacttt agatttttta tttaaaaaaa atagtaataa 37560
tctattaagt atgagagatg tgcagagagg attagtgatc gagagccatt tttgctggtg 37620
gcaatcatat ggtactttta atgggaatat tagaaaggca ccggtaatga ccttgttgca 37680
gcacaaagga gagagtgtgg ggtgcccctg catgttgtcc cacctcttgt gacgtgtatc 37740
gttttggaat ttccagtggc ttgatcatga actactgcag gaatccagat gctgtggcag 37800
ctccttattg ttatacgagg gatcccggtg tcaggtggga gtactgcaac ctgacgcaat 37860
gctcagacgc agaagggact gccgtcgcgc ctccgactgt taccccggtt ccaagcctag 37920
aggctccttc cgaacaaggt aaggagtctg tggccagaca tctacacgct tcgatgctgg 37980
gatgaaaagc catggaaatt cccactgatg cagccgcctt caatggtaaa cggatgctcg 38040
agtgttgcct gagttctacc atgtaggagg aagcctccgt gcactctctg ggggagccag 38100
cggagtgatt tctggtgcaa cgtggttggg ctttgtcttt aggatgggca caaaccctcc 38160
agggggatcg acttcaaaat tcaccttgtt gtaaaacggg ctacctcagt gtcccagcca 38220
aaatttttat tgtaacatgc tgtcaggtgt gtcactcttt ccaagccagt aagcttttcc 38280
ggggatttct tcaagtagcc agcattcaga gcaatcttca gcattgcaga ttctgagaaa 38340
tgtggctctg gagcctgtca ccctcgagaa acctaagagg gctgcattga ttccatgtgg 38400
ccctgggtct atggagcagt acatgagctc ccagtgctct aaggctcttc agccctaggc 38460
tttgaaggga gtgatttctc agtattctta aacctctttc tgatgacact tgtacctgtg 38520
aggggtctag agagaaagag tagtagactc ctactttact acaattcagg atgcagggca 38580
tgagaggatt ccctctctcc tccaagggaa gaagcttttg gcgtgcacac atccctgaga 38640
agcaaagtgt ctttgtcttc agtcagatac ataggaccgt tttctgcccc atggcccgga 38700
agccaaaggc cttggctttc atgatcaacg gtctagggaa acatgcaaaa tttccatgtc 38760
tgtcccaaac tctgcccccg acagccaatt accacctgca gcccgcattg ccaaatgcgg 38820
tgccgtttgc atgaagattc agtagagttt cctagaaagg tgctacctcg tgagctcact 38880
ttccaatgag gaatctgatc tgttgtgttt ctctaaggtg tcaggtgaaa tatttccaag 38940
aacttactac agttctagaa tgggaggaat ctgttgcttt ggtgtttgtt tgttggtcgg 39000
ttttctcaca tccatctgcc tatggataag gaaaagagaa cggtcgtaat tctcatagac 39060
tcctttctgg ttgtgtcaca aatggcttca catgtttctc tatgctcaga gatactcagc 39120
ttgatttccc gtgttttcat ttcagcaccg actgagcaaa ggcctggggt gcaggagtgc 39180
taccatggta atggacagag ttatcgaggc acatactcca ccactgtcac aggaagaacc 39240
tgccaagctt ggtcatctat gacaccacac tcgcatagtc ggaccccaga atactaccca 39300
aatgcgtatg tctttgttct ttaccataag agaagaaagg gccaagtgaa gtttctgtta 39360
caagagatgt gtctcaagct gagttctccg aactcaactt gtgacagatg cagatggcgt 39420
agcaaaatgt ctcaggatga ttgccttgga gctaagggtc tgagagaagg gaaatgttaa 39480
gctccctctc cttcctccta gttctattga gcagaaggga aatctggagg tgaggagatc 39540
acattatgaa gaaagtcaga atgacaaagg accagacact tagattaccc ttccacaaca 39600
ccaactaaac gtcaatggag actttccagt tggaattccg ttattctggc ttccacttcc 39660
tgaagggaag gttgcgtttg ccttttctct ctgggttcaa gaggaaagaa taggtgctta 39720
tttatggaca ggtgaattga tctgtttcta tatctacgta tattccgatt gtcagaaaaa 39780
cactcgttcc taagtaccag tggcctgaag ggatacaggt tcccagcaag agaagatcca 39840
aggaaggaag gcagatgaga gtcagcacag agagggatgc tgaaaagtaa aagggatggg 39900
tggatggaga gaagcccggg tctgaccacc caatggccaa tattttggcc acaagcgact 39960
accagagaca tggaaaaatg gtttctacat gtgggacaac agatggtaga ggacctagag 40020
aattgagaga ggggcaatga tgggctccac tccgcagatg ccttggcttt cttcctggat 40080
acccttcctg cactgaatag caaggagatg gagcccaagc agactgtagc catcttgctg 40140
aatggaggag agggattgga gtttgggatg actgtggtag ctgaaatttt tctaggtctg 40200
ctagaaataa gaactggttt gtggaggaaa agagctctac aaatacgcat agaagtctcc 40260
tccagtcgtt ggcctgacat gacgctgcct gtgcacagga aatggttcca cgagaaagtg 40320
tggcaaagaa catttactga gaaacagcaa gtacaagagc acaggaagct caataaagaa 40380
gagagagatc acatagcact ctgggatact ggagttcttc ccagctagac cagagagtcc 40440
tcacggagca cattgccaat tcagtggaga ccccagaaca gccgtaattt aaaggtacac 40500
ttagtatatt actagaataa agtcagctgc agacaacccc ttgcacagct ggaaagcaag 40560
tgtccaagca tcaaatcggt ttccaatcaa tgaagtgcct gtgagaggaa atctcaactc 40620
tctttagaag taaacaacaa agtcgattgc ctcagctatg cggtatccgc agagtgagtc 40680
ctaaatttaa aatctgacta catgtagaaa agcgtttcgt gtgacccatg accaggaaat 40740
aaatcgggta atacaaacag gctcaggaat gagagaaatg attagaattg cgtgaaaatt 40800
tgaaatatca gtatgataac tgatttcaaa tatttaaaaa aacaacatgc aagaaagcag 40860
atatcatatc aagagaaatt aacagtacag aatagccaaa ttaaattaaa gagctagtat 40920
aaaaaaagta tgtcttaatt gaaaaaaatt actgtatggc cggctgatca atttagacgt 40980
ttcagaggaa aacattaccc aacacacaat tctagagaac ctacagaatg agctacacac 41040
acacacacac acacacacac aaactgaaaa cacacccata ctcacacaca cgcagaaact 41100
cacaagttct aacacacaca gacacgcgca cccctgaaga aacagtgaaa tataaaatta 41160
agcgagcctc acagacatgt aggaaaatat gaaaagattt cctgcatgtg ggaagcaagt 41220
cacagtaaag agcaagggag tttggaatag aaacaaatac cagaatcaag gatggctgat 41280
aacttttcaa ttacgaagaa cattaaaaaa aatcacagaa tcgtgaaact caagggatca 41340
catagggaat ttcggaaaaa aaacccaacc tgtatgatgt acttttgtac atcacagttc 41400
gaaggtaaca aggcaaagat ataataagaa gaaacctgtc acgagaaact ggaggaaaaa 41460
gagctgtgtc ttcctacaag tacactgata caaattgcca atgtgttcac ctcagaaaca 41520
ctggaagcca gataccaggg aatattgtta aaatgataat caggaacaaa aagagatcaa 41580
ccgggaatgc tgaatccagc aataaaatgc cttgaagatc atccatgtcg gataaatgca 41640
tattgtgcac tgccccaaag aaagaaaccg gaaactgtaa gaattggaaa tcagcaggct 41700
tatgtaacaa gagaggtgac ccgaaggaat taggtagaag aagaattgaa caagaaagga 41760
actttctgca gcccacgtaa tgaagaatcc agcaattggc aaatgtagat agatgtaaat 41820
gcaaaatatt ttcttgatca aatttctata tctttgtaaa tgagagttga ctacttgaaa 41880
caaaatgata gcaagatatt taacttcagc atatgtagag gtaagaattt gaaatggtag 41940
cataaatcac gaagggatta attcgaagtg taccgttgta agtttcttta cctcatgcac 42000
gatggtgtgt catattaata aaagggtact gtgcgggttc gaagggatat tgcaaatcct 42060
agagcaatca caaaggtttg aactctgagg tttttggtat aataagaata gtccatgcat 42120
tcaaaagagg gaagccaagg aagaactaga agtctttcaa gagctcaggc tcttatacat 42180
ccagttgctc attgaaccag cttcctggaa tggagggtct ggggttgaga ctaggccaca 42240
agtctagagt ctctagagag acagtgttgg aaccccatgg cccataatac atttcccatt 42300
ttctcaggca gccagaggtc atgaatgtga ggatactggg aggttggagc aacgttcttg 42360
ggaggcataa ggaagagcga atgcttcaag atccccgcag cccaaactac tcgcctgctt 42420
tgccccctaa tgcatttttc tctgctgctc cgtagctgtc cgacctcttc agatctctta 42480
gtccaccctg ccgtcttcct ttatgccatg ggtcccactg ttctttcaac tcatccccct 42540
ttccctcagt cccggagtag ctgcggccag cagagggtag actgagagca ggagagaagg 42600
acctgcctag gaaccccttc tagagatact gcatcctgcc tgggagcaag ttttccaggg 42660
cagctttgag aagtcttgga gaaacaaacc tactaaacct gacagacagt aatactattt 42720
gcacaatgct tttctgtggg aaaggtagag ccttttcact acgtattgag tacatagagt 42780
gtgagggttg acctggaacg gctatcctcc tggatgacgt gtgttttctg aagaactaca 42840
tgttcgttgc aactcccaca ttagaatatg aagtcctacc gagagagata cggagactag 42900
acagatacag atgcatttgc atgtgaatac acaatcccac aatacagacg tcaaaaccca 42960
taccagttat tccagagaga tggattgggc agaaggcaga aggagaatac tctgatcgtt 43020
tttcggccac gtgtgtgtgt tatctcagtg tttctaagaa gcgtttgcta ctttagattt 43080
tttatttaaa aaaaatagta ataatctatt aagtatgaga gatgtgcaga gaggattagt 43140
gatcgagagc catttttgct ggtggcaatc atatggtact tttaatggga atattagaaa 43200
ggcaccggta atgaccttgt tgcagcacaa aggagagagt gtggggtgcc cctgcatgtt 43260
gtcccacctc ttgtgacgtg tatcgttttg gaatttccag tggcttgatc atgaactact 43320
gcaggaatcc agatgctgtg gcagctcctt attgttatac gagggatccc ggtgtcaggt 43380
gggagtactg caacctgacg caatgctcag acgcagaagg gactgccgtc gcgcctccga 43440
ctgttacccc ggttccaagc ctagaggctc cttccgaaca aggtaaggag tctgtggcca 43500
gacatctaca cgcttcgatg ctgggatgaa aagccatgga aattcccact gatgcagccg 43560
ccttcaatgg taaacggatg ctcgagtgtt gcctgagttc taccatgtag gaggaagcct 43620
ccgtgcactc tctgggggag ccagcggagt gatttctggt gcaacgtggt tgggctttgt 43680
ctttaggatg ggcacaaacc ctccaggggg atcgacttca aaattcacct tgttgtaaaa 43740
cgggctacct cagtgtccca gccaaaattt ttattgtaac atgctgtcag gtgtgtcact 43800
ctttccaagc cagtaagctt ttccggggat ttcttcaagt agccagcatt cagagcaatc 43860
ttcagcattg cagattctga gaaatgtggc tctggagcct gtcaccctcg agaaacctaa 43920
gagggctgca ttgattccat gtggccctgg gtctatggag cagtacatga gctcccagtg 43980
ctctaaggct cttcagccct aggctttgaa gggagtgatt tctcagtatt cttaaacctc 44040
tttctgatga cacttgtacc tgtgaggggt ctagagagaa agagtagtag actcctactt 44100
tactacaatt caggatgcag ggcatgagag gattccctct ctcctccaag ggaagaagct 44160
tttggcgtgc acacatccct gagaagcaaa gtgtctttgt cttcagtcag atacatagga 44220
ccgttttctg ccccatggcc cggaagccaa aggccttggc tttcatgatc aacggtctag 44280
ggaaacatgc aaaatttcca tgtctgtccc aaactcttcc cccgacagcc aattaccacc 44340
tgcagcccgc attgccaaat gcggtgccgt ttgcatgaag attcagtaga gtttcctaga 44400
aaggtgctac ctcgtgagct cactttccaa tgaggaatct gatctgttgt gtttctctaa 44460
ggtgtcaggt gaaatatttc caagaactta ctacagttct agaatgggag gaatctgttg 44520
ctttggtgtt tgtttgttgg tcggttttct cacatccatc tgcctatgga taaggaaaag 44580
agaacggtcg taattctcat agactccttt ctggttgtgt cacaaatggc ttcacatgtt 44640
tctctatgct cagagatact cagcttgatt tcccgtgttt tcatttcagc accgactgag 44700
caaaggcctg gggtgcagga gtgctaccat ggtaatggac agagttatcg aggcacatac 44760
tccaccactg tcacaggaag aacctgccaa gcttggtcat ctatgacacc acactcgcat 44820
agtcggaccc cagaatacta cccaaatgcg tatgtctttg ttctttacca taagagaaga 44880
aagggccaag tgaagtttct gttacaagag atgtgtctca agctgagttc tccgaactca 44940
acttgtgaca gatgcagatg gcgtagcaaa atgtctcagg atgattgcct tggagctaag 45000
ggtctgagag aagggaaatg ttaagctccc tctccttcct cctagttcta ttgagcagaa 45060
gggaaatctg gaggtgagaa gatcacatta tgaagaaagt cagaatgaca aaggaccaga 45120
cacttagatt acccttccac aacaccaact aaacgtcaat ggagactttc cagttggaat 45180
tccgttattc tggcttccac ttcctgaagg gaaggttgcg tttgcctttt ctctctgggt 45240
tcaagaggaa agaataggtg cttatttatg gacaggtgaa ttgatctgtt tctatatcta 45300
cgtatattcc gattgtcaga aaaacactcg ttcctaagta ccagtggcct gaagggatac 45360
aggttcccag caagagaaga tccaaggaag gaaggcagat gagagtcagc acagagaggg 45420
atgctgaaaa gtaaaaggga tgggtggatg gagagaagcc cgggtctgac cacccaatgg 45480
ccaatatttt ggccacaagc gactaccaga gacatggaaa aatggtttct acatgtggga 45540
caacagatgg tagaggacct agagaattga gagaggggca atgatgggct ccactccgca 45600
gatgccttgg ctttcttcct ggataccctt cctgcactga atagcaagga gatggagccc 45660
aagcagactg tagccatctt gctgaatgga ggagagggat tggagtttgg gatgactgtg 45720
gtagctgaaa tttttctagg tctgctagaa ataagaactg gtttgtgtgg aggaaaagag 45780
ctctacaaat acgcatagaa gtctcctcca gtcgttggcc tgacatgacg ctgcctgtgc 45840
acaggaaatg gttccacgag aaagtgtggc aaagaacatt tactgagaaa cagcaagtac 45900
aagagcacag gaagctcaat aaagaagaga gagatcacat agcactctgg gatactggag 45960
ttcttcccag ctagaccaga gagtcctcac ggagcacatt gccaattcag tggagacccc 46020
agaacagccg taatttaaag gtacacttag tatattacta gaataaagtc agctgcagac 46080
aaccccttgc acagctggaa agcaagtgtc caagcatcaa atcggtttcc aatcaatgaa 46140
gtgcctgtga gaggaaatct caactctctt tagaagtaaa caacaaagtc gattgcctca 46200
gctatgcggt atccgcagag tgagtcctaa atttaaaatc tgactacatg tagaaaagcg 46260
tttcgtgtga cccatgacca ggaaataaat cgggtaatac aaacaggctc aggaatgaga 46320
gaaatgatta gaattgcgtg aaaatttgac atatcagtat gataactgat ttcaaatatt 46380
taaaaaaaca acatgcaaga aagcagatat catatcaaga gaaattaaca gtacagaata 46440
gccaaattaa attaaagagg tagtataaaa aaagtatgtc ttaattgaaa aaaattactg 46500
tatggccggc tgatcaattt agacgtttca gaggaaaaca ttacccaaca cacaattcta 46560
gagaacctac agaatgagct acacacacac acacacacac acacacaaac tgaaaacaca 46620
cccatactca cacacacgca gaaactcaca agttctaaca cacacagaca cgcgcacccc 46680
tgaagaaaca gtgaaatata aaattaagcg agcctcacag acatgtagga aaatatgaaa 46740
agatttcctg catgtgggaa gcaagtcaca gtaaagagca agggagtttg gaatagaaac 46800
aaataccgga atcaaggatg gctgataact tttcaattac gaagaacatt aaaaaaaatc 46860
acagaatcgt gaaactcaag ggatcacata gggaatttcg gaaaaaaaac ccaacctgta 46920
tgatgtactt ttgtacatca cagttcgaag gtaacaaggc aaagatataa taagaagaaa 46980
cctgtcacga gaaactggag gaaaaagagc tgtgtcttcc tacaagtaca ctgatacaaa 47040
ttgccaatgt gttcacctca gaaacactgg aagccagata ccagggaata ttgttaaaat 47100
gataatcagg aacaaaaaga gatcaaccgg gaatgctgaa tccagcaata aaatgccttg 47160
aaggtcatcc atgtcggata aatgcatatt gtgcactgcc ccaaagaaag aaaccggaaa 47220
ctgtaagaat tggaaatcag caggcttatg taacaagaga ggtgacccga aggaattagg 47280
tagaagaaga attgaacaag aaaggaactt tctgcagccc acgtaatgaa gaatccagca 47340
attggcaaat gtagatagat gtaaatgcaa aatattttct tgatcaaatt tctatatctt 47400
tgtaaatgag agttgactac ttgaaacaaa atgatagcaa gatatttaac ttcagcatat 47460
gtagaggtaa gaatttgaaa tggtagcata aatcacgaag ggattaattc gaagtgtacc 47520
gttgtaagtt tctttacctc atgcacgatg gtgtgtcata ttaataaaag ggtactgtgc 47580
gggttcgaag ggatattgca aatcctagag caatcacaaa ggtttgaact ctgaggtttt 47640
tggtataata agaatagtcc atgcattcaa aagagggaag ccaaggaaga actagaagtc 47700
tttcaagagc tcaggctctt atacatccag ttgctcattg aaccagcttc ctggaatgga 47760
gggtctgggg ttgagactag gccacaagtc tagagtctct agagagacag tgttggaacc 47820
ccatggccca taatacattt cccattttct caggcagcca gaggtcatga atgtgaggat 47880
actgggaggt tggagcaacg ttcttgggag gcataaggaa gagcgaatgc ttcaagatcc 47940
ccgcagccca aactactcgc ctgctttgcc ccctaatgca tttttctctg ctgctccgta 48000
gctgtccgac ctcttcagat ctcttagtcc accctgccgt cttcctttat gccatgggtc 48060
ccactgttct ttcaactcat ccccctttcc ctcagtcccg gagtagctgc ggccagcaga 48120
gggtagactg agagcaggag agaaggacct gcctaggaac cccttctaga gatactgcat 48180
cctgcctggg agcaagtttt ccagggcagc tttgagaagt cttggagaaa caaacctact 48240
aaacctgaca gacagtaata ctatttgcac aatgcttttc tgtgggaaag gtagagcctt 48300
ttcactacgt attgagtaca tagagtgtga gggttgacct ggaacggcta tcctcctgga 48360
tgacgtgcgt tttctgaaga actacatgtt cgttgcaact cccacattag aatatgaagt 48420
cctaccgaga gagatacgga gactagacag atacagatgc atttgcatgt gaatacacaa 48480
tcccacaata cagacgtcaa aacccatacc agttattcca gagagatgga ttgggcagaa 48540
ggcagaagga gaatactctg atcgtttttc ggccacgtgt gtgtgttatc tcagtgtttc 48600
taagaagcgt ttgctacttt agatttttta tttaaaaaaa atagtaataa tctattaagt 48660
atgagagatg tgcagagagg attagtgatc gagagccatt tttgctggtg gcaatcatat 48720
ggtactttta atgggaatat tagaaaggca ccggtaatga ccttgttgca gcacaaagga 48780
gagagtgtgg ggtgcccctg catgttgtcc cacctcttgt gacgtgtatc gttttggaat 48840
ttccagtggc ttgatcatga actactgcag gaatccagat gctgtggcag ctccttattg 48900
ttatacgagg gatcccggtg tcaggtggga gtactgcaac ctgacgcaat gctcagacgc 48960
agaagggact gccgtcgcgc ctccgactgt taccccggtt ccaagcctag aggctccttc 49020
cgaacaaggt aaggagtctg tggccagaca tctacacgct tcgatgctgg gatgaaaagc 49080
catggaaatt cccactgatg cagccgcctt caatggtaaa cggatgctcg agtgttgcct 49140
gagttctacc atgtaggagg aagcctccgt gcactctctg ggggagccag cggagtgatt 49200
tctggtgcaa cgtggttggg ctttgtcttt aggatgggca caaaccctcc agggggatcg 49260
acttcaaaat tcaccttgtt gtaaaacggg ctacctcagt gtcccagcca aaatttttat 49320
tgtaacatgc tgtcaggtgt gtcactcttt ccaagccagt aagcttttcc ggggatttct 49380
tcaagtagcc agcattcaga gcaatcttca gcattgcaga ttctgagaaa tgtggctctg 49440
gagcctgtca ccctcgagaa acctaagagg gctgcattga ttccatgtgg ccctgggtct 49500
atggagcagt acatgagctc ccagtgctct aaggctcttc agccctaggc tttgaaggga 49560
gtgatttctc agtattctta aacctctttc tgatgacact tgtacctgtg aggggtctag 49620
agagaaagag tagtagactc ctactttact acaattcagg atgcagggca tgagaggatt 49680
ccctctctcc tccaagggaa gaagcttttg gcgtgcacac atccctgaga agcaaagtgt 49740
ctttgtcttc agtcagatac ataggaccgt tttctgcccc atggcccgga agccaaaggc 49800
cttggctttc atgatcaacg gtctagggaa acatgcaaaa tttccatgtc tgtcccaaac 49860
tctgcccccg acagccaatt accacctgca gcccgcattg ccaaatgcgg tgccgtttgc 49920
atgaagattc agtagagttt cctagaaagg tgctacctcg tgagctcact ttccaatgag 49980
gaatctgatc tgttgtgttt ctctaaggtg tcaggtgaaa tatttccaag aacttactac 50040
agttctagaa tgggaggaat ctgttgcttt ggtgtttgtt tgttggtcgg ttttctcaca 50100
tccatctgcc tatggataag gaaaagagaa cggtcgtaat tctcatagac tcctttctgg 50160
ttgtgtcaca aatggcttca catgtttctc tatgctcaga gatactcagc ttgatttccc 50220
gtgttttcat ttcagcaccg actgagcaaa ggcctggggt gcaggagtgc taccatggta 50280
atggacagag ttatcgaggc acatactcca ccactgtcac aggaagaacc tgccaagctt 50340
ggtcatctat gacaccacac tcgcatagtc ggaccccaga atactaccca aatgcgtatg 50400
tctttgttct ttaccataag agaagaaagg gccaagtgaa gtttctgtta caagagatgt 50460
gtctcaagct gagttctccg aactcaactt gtgacagatg cagatggcgt agcaaaatgt 50520
ctcaggatga ttgccttgga gctaagggtc tgagagaagg gaaatgttaa gctccctctc 50580
cttcctccta gttctattga gcagaaggga aatctggagg tgaggagatc acattatgaa 50640
gaaagtcaga atgacaaagg accagacact tagattaccc ttccacaaca ccaactaaac 50700
gtcaatggag actttccagt tggaattccg ttattctggc ttccacttcc tgaagggaag 50760
gttgcgtttg ccttttctct ctgggttcaa gaggaaagaa taggtgctta tttatggaca 50820
ggtgaattga tctgtttcta tatctacgta tattccgatt gtcagaaaaa cactcgttcc 50880
taagtaccag tggcctgaag ggatacaggt tcccagcaag agaagatcca aggaaggaag 50940
gcagatgaga gtcagcacag agagggatgc tgaaaagtaa aagggatggg tggatggaga 51000
gaagcccggg tctgaccacc caatggccaa tattttggcc acaagcgact accagagaca 51060
tggaaaaatg gtttctacat gtgggacaac agatggtaga ggacctagag aattgagaga 51120
ggggcaatga tgggctccac tccgcagatg ccttggcttt cttcctggat acccttcctg 51180
cactgaatag caaggagatg gagcccaagc agactgtagc catcttgctg aatggaggag 51240
agggattgga gtttgggatg actgtggtag ctgaaatttt tctaggtctg ctagaaataa 51300
gaactggttt gtgtggagga aaagagctct acaaatacgc atagaagtct cctccagtcg 51360
ttggcctgac atgacgctgc ctgtgcacag gaaatggttc cacgagaaag tgtggcaaag 51420
aacatttact gagaaacagc aagtacaaga gcacaggaag ctcaataaag aagagagaga 51480
tcacatagca ctctgggata ctggagttct tcccagctag accagagagt cctcacggag 51540
cacattgcca attcagtgga gaccccagaa cagccgtaat ttaaaggtac acttagaata 51600
ttactagaat aaagtcagct gcagacaacc ccttgcacag ctggaaagca agtgtccaag 51660
catcaaatcg gtttccaatc aatgaagtgc ctgtgagagg aaatctcaac tctctttaga 51720
agtaaacaac aaagtcgatt gcctcagcta tgcggtatcc gcagagtgag tcctaaattt 51780
aaaatctgac tacatgtaga aaagcgtttc gtgtgaccca tgaccaggaa ataaatcggg 51840
taatacaaac aggctcagga atgagagaaa tgattagaat tgcgtgaaaa tttgacatat 51900
cagtatgata actgatttca aatatttaaa aaaacaacat gcaagaaagc agatatcata 51960
tcaagagaaa ttaacagtac agaatagcca aattaaatta aagagctagt ataaaaaaag 52020
tatgtcttaa ttgaaaaaaa ttactgtatg gccggctgat caaattagac gtttcagagg 52080
aaaacattac ccaacacaca attttagaga acctacagaa tgagctacac acacacacac 52140
acacacacac acacacacaa actgaaaaca cacccatact cacacacacg cagaaactca 52200
caagttctaa cacacacaga cacgcgcacc cctgaagaaa cagtgaaata taaaattaag 52260
cgagcctcac agacatgtag gaaaatatga aaagatttcc tgcatgtggg aagcaagtca 52320
cagtaaagag caagggagtt tataatagaa acaaatacca gaatcaagga tggctgataa 52380
cttttcaatt acgaagaaca ttaaaaaaaa tcacagaatc gtgaaactca agggatcata 52440
tagggaattt cggaaaaaaa acccaacctg tatgatgtac ttttgtacat cacagttcga 52500
aggtaacaag gcaaagatgt aataagaaga aacctgtcac gagaaactgg aggaaaaaga 52560
gctgtgtctt cctacaagta cactgataca aattgccaat gtgttcacct cagaaacact 52620
ggaagccaga taccagggaa tattgttaaa atgataatca ggaacaaaaa gagatcaacc 52680
gggaatgctg aatccagcaa taaaatgcct tgaaggtcat ccatgtcgga taaatgcata 52740
ttgtgcactg ccccaaagaa agaaaccgga aactgtaaga attggaaatc agcaggctta 52800
tgtaacaaga gaggtgaccc gaaggaatta ggtagaagaa gaattgaaca agaaaggaac 52860
tttctgcagc ccacgtaatg aagaatccag caattggcaa atgtagatag atgtaaatgc 52920
aaaatatttt cttgatcaaa tttctatatc tttgtaaatg agagttgact acttgaaaca 52980
aaatgatagc aagatattta acttcagcat atgtagaggt aagaatttga aatggtagca 53040
taaatcacga agggattaat tcgaagtgta ccgttgtaag tttctttacc tcatgcacga 53100
tggtgtgtca tattaataaa agggtactgt gcgggttcga agggatattg caaatcctag 53160
agcaatcaca aaggtttgaa ctctgaggtt tttggtataa taagaatagt ccatgcattc 53220
aaaagaggga agccaaggaa gaactagaag tctttcaaga gctcaggctc ttatacatcc 53280
agttgctcat tgaaccagct tcctggaatg gagggtctgg ggttgagact aggccacaag 53340
tctagagtct ctagagagac agtgttggaa ccccatggcc cataatacat ttcccatttt 53400
ctcaggcagc cagaggtcat gaatgtgagg atactgggag gttggagcaa cgttcttggg 53460
aggcataagg aagagcgaat gcttcaagat ccccgcagcc caaactactc gcctgctttg 53520
ccccctaatg catttttctc tgctgctccg tagctgtccg acctcttcag atctcttagt 53580
ccaccctgcc gtcttccttt atgccatggg tcccactgtt ctttcaactc atcccccttt 53640
ccctcagtcc cggagtagct gcggccagca gagggtagac tgagagcagg agagaaggac 53700
ctgcctagga accccttcta gagatactgc atcctgcctg ggagcaagtt ttccagggca 53760
gctttgagaa gtcttggaga aacaaaccta ctaaacctga cagacagtaa tactatttgc 53820
acaatgcttt tctgtgggaa aggtagagcc ttttcactac gtattgagta catagagtgt 53880
gagggttgac ctggaacggc tatcctcctg gatgacgtgc gttttctgaa gaactacatg 53940
ttcgttgcaa ctcccacatt agaatatgaa gtcctaccga gagagatacg gagactagac 54000
agatacagat gcatttgcat gtgaatacac aatcccacaa tacagacgtc aaaacccata 54060
ccagttattc cagagagatg gattgggcag aaggcagaag gagaatactc tgatcgtttt 54120
tcggccacgt gtgtgtgtta tctcagtgtt tctaagaagc gtttgctact ttagattttt 54180
tatttaaaaa aaatagtaat aatctattaa gtatgagaga tgtgcagaga cgattagtga 54240
tcgagagcca tttttgctgg tggcaatcat atggtacttt taatgggaat attagaaagg 54300
caccggtaat gaccttgttg cagcacaaag gagagagtgt ggggtgcccc tgcatgttgt 54360
cccacctctt gtgacgtgta tcgttttgga atttccagtg gcttgatcat gaactactgc 54420
aggaatccag atgctgtggc agctccttat tgttatacga gggatcccgg tgtcaggtgg 54480
gagtactgca acctgacgca atgctcagac gcagaaggga ctgccgtcgc gcctccgact 54540
gttaccccgg ttccaagcct agaggctcct tccgaacaag gtaaggagtc tgtggccaga 54600
catctacacg cttcgatgct gggatgaaaa gccatggaaa ttcccactga tgcagccgcc 54660
ttcaatggta aacggatgct cgagtgttgc ctgagttcta ccatgtagga ggaagcctcc 54720
gtgcactctc tgggggagcc agcggagtga tttctggtgc aacgtggttg ggctttgtct 54780
ttaggatggg cacaaaccct ccagggggat cgacttcaaa attcaccttg ttgtaaaacg 54840
ggctacctca gtgtcccagc caaaattttt attgtaacat gctgtcaggt gtgtcactct 54900
ttccaagcca gtaagctttt ccggggattt cttcaagtag ccagcattca gagcaatctt 54960
cagcattgca gattctgaga aatgtggctc tggagcctgt catcctcgag aaacctaaca 55020
gggctgcatt aattccatat ggtcctgggt ctatggagca gtatatgagc tcccaatgct 55080
ctaaggctct tcagtcctag gctttgaagg gagtgatttc tcagtgttct taaacctctt 55140
tctgatggca cttgtacctg tgaggggtct agagagaaag gttagtagac ttctccttta 55200
ctgcaattca ggatgcaggg catgagaaga ttccctccct cctccaaggg aagaaggttt 55260
tggcgtgcac acatccttga gaagcaaagt gtctttgcct tcagtcagat atataggatc 55320
gttttctgcc ccatggcctg gaagccagag gccttggctt tcatgatcaa cgatctaggg 55380
aaacatgcaa aatttccatg tctttcccct cctctgccct cgacagccaa ttaccacctg 55440
catcctgcat tgccaaatgc agtgcccttt gtatgaacat tcagtagagt ttcatagaaa 55500
ggtgctactt cgtgagcgca ctttgcagtg agaaggagtc tgttctgttc tgtttttcta 55560
aggatttcag gtgaaatatt tcctagaact tactacagtt ctagattggt aggaatctgt 55620
aggtttgctg tatgtttttt ggttggtttt ctcccatcca tctgcctaca ggtaagggaa 55680
agataacgtt cataattctc atagactcct ttctggttgt gtcataaatg gcttcacata 55740
tttcgttatt ctcagagata ctcagtttat ttcttgtgtt ttcatttcag caccgactga 55800
gcagaggcct ggggtgcagg agtgctacca cggtaatgga cagagttatc gaggcacata 55860
ctccaccact gtcactggaa gaacctgcca agcttggtca tctatgacac cacactcgca 55920
tagtcggacc ccagaatact acccaaatgc gtatgtcttt gttctttacc ataagagaat 55980
aaagggccaa ctgaagtttc tgtgacaaga gacatgcttc aagctgagtt ctccgaactc 56040
aacttgtgtc agattcagat ggtgtagcaa aatgtctcag gatgatttcc ttggagctaa 56100
gggtctgaga gaagagaaat gttaagctgc ctcaccttcc tcctagtttt gtggagcaga 56160
agggaaatga ggaggcgagg agatcacctt atgaagaaag tcagaatgac gaaccaccaa 56220
acacttagat tacccttgcc caacacccac taagcgtcaa tgaagacttt ccagttggaa 56280
ttccgttatt ctgacttcca attcctgaag ggaagattgt gtttgccttt tctgtctggg 56340
ctcatgagga aagtttatgt gcttacttat ggacaggtga attgatctgt ttctatttct 56400
acctgtattc caatagggag aaaatctctt ggtcctaagt accagtggcc tgaaaggata 56460
gaggttccca gcaagagaag atccaaggaa ggaaggcaga tgagagtcag cacagagagg 56520
gatgctgaaa agtaaaaggg atgggtagat ggatagaagc cctggtctga ccaccccatg 56580
gccaatcatt tggccataat caacaaccaa agacatggaa aaatggtttc tacatgtggg 56640
acaacagatg gtagaggacc tagagaattg agagagggcc aatgatgagc tcaactccat 56700
agatgccttg gctttcttcc tggataccct tcctgcactg aatagcaagg agatggagct 56760
caagcagcct gtagccatct agctgagcag aggagaggga ttggagtttg ggatgactct 56820
ggtattttct aggtccgcta caaataagaa ctggtttgtg gaggaaagga gctctacaaa 56880
tacgcataga agtctcctcc agtagttggc ctcacatgac actgcatgtg cacagaaaat 56940
ggttctacag aaagtgtggc aaagaacatt tactgagaaa cagcaactac aagagaacag 57000
caagctcaat taagaagata gagatcacat agcactctgt gttattggag ttcttaccag 57060
ctagatgaga gagtgctcac ggaacacatt gccaattcag tggagacccc agaacagcca 57120
taatttcaaa gtacaattag tatattacta gaataaaggc agctgcagac aaccccttgc 57180
acagctgaaa agcaagtgtc caagcatcaa atgggtttcc aatcaatgaa gtgcctgtga 57240
gaggaaatct caactctctt cagaagtaaa caacaaagtc aattgcctca gctatgcggt 57300
atccccagag tgagtcctaa attaaaaatt tgactacgtg tagaaaagaa tttcgtgtga 57360
tccatgacca gaaaataaat caggcaatac aaacaggctc agaaatgaca tcgataatta 57420
gaattgcatg aaaatttgac atatcagtat gataactgat ttcagatatt taaaaaaagt 57480
gcaacaaagc aggtatcata tcaagacaaa ttaatagtat agaatagcca aatcaaatta 57540
aagaactatt atacaaaaag tatgtcttaa atgaagaaat tactgtatgt ccgcctgaaa 57600
aatttagatg tttcagaaga aaaaattaac caaaaacaat tctgcagaac ctacagaatg 57660
agccacacac acacacattc aaaacacacc catacacaca cacatgcaaa aactcacaag 57720
ttctaacaca cacacaaaca cacacacaca tgcacatccc taaagaaata gggaaatata 57780
aaattaaccg accctcagag acatgcagga aaatataaga agatttcctg catgtgggaa 57840
gcaagtcaca gtaaagagca agggagtttg gagtagatac aaataccgga atcacggatg 57900
gctgataact tttcaattat gaagaacgtt agaaaaatca cagattcatg aaactaaagg 57960
gatcaaatag gaaatttcga gaaaaaaaac tacatgatgc acttctctac atcacagttc 58020
aaaggtaaca aggcaaggat ataagaagaa gaaacatctc acgagaaact ggagaaaaaa 58080
gagctgtgtc ttcctagagt acagtgatac aaattgctaa tgcgttcacc tcagaaacac 58140
tggaagccag ataccaggga atattattaa aatgataatg aggaacaaga agagatcaac 58200
cgagaatgct gaatccagca ataaaatgcc ttgaagatca tccatgttgg ataaatgcat 58260
attgtgcact gcccaaaaca aagaaactgg aaagtgtaag actttggaat cagcaggctt 58320
atgtagcaac agaggtgacc cgaaagaatt aggtataaga agaatagaag aattgcatga 58380
aaatttgaca tatgactaag ataactattt caaatattta aaaaaagatg aatatgtaat 58440
aaaacagata aaatatcaaa agaaagtaac agtattgact agccaaatca aattaaagac 58500
ttagtgtaaa aagctatgtc ttaaaagaaa aaattactgg atggctgcct gatcaattta 58560
gacatttctg aataggaaac taaccaaaaa tcaattctac agaaccaact acacacatat 58620
atacacatac aacacaccca tacacaccca cgcaaaaact cacaagttca cacacacaca 58680
cacacacaca caaccctcaa gaaatagtga aatagaaaac caaccgaacc tcacagacat 58740
gttgcaaaat aggaaaagat ttcctgcata tgggaagcaa gtcacagaaa agagaacggg 58800
agattggaaa cagaaacaaa taccggaatc aaggatggcc gaaaactttt cattgatcaa 58860
gaatattaac aaaatcgcaa aaacacgaaa ttcaatgcat caaataggcg tttcgaaaaa 58920
aagaaaaaat ctggtatgat gcacttttgt acttcacatt ttcacggtaa gaagacaaag 58980
atataataac aagaaacttc ttatgagaaa ctggggaaaa acaagctgtt tcttgctaga 59040
agaacagtga tacaaattgc taatgcattc tcgtcaaaaa cactggaagc cagataccgg 59100
gaatgttatt aatgtggtaa acaggaacaa gaagagatca accaagaatg ctaaatccag 59160
caataaaatg ccttgaagat catccatgct gcataaatgt atgttgtgca ctgccccaaa 59220
caaagaaacc ggaaactgta agaatttgga atcagcaggc tgatgtaaca agagaggtga 59280
cccaaaggaa ttaggtagaa gaagaatagt acaagaaggg aactttctgc agcccatgta 59340
atgaagaacc cagcaattgg caaatgtaga tgtaaatgca aaatattttc ttgaccaaat 59400
ttctatatat ttttaaatga gcgttgacta ctggaaacaa aatgatagca atatatttaa 59460
ttttagcata tgtagaggta agaatttgaa caagtagcgt aaatcatgta gggaataatt 59520
agaagtgtac cattgtaagt ttcttacctc atgcacaatg gtatgtaata ttaataaaat 59580
gttactgtgt gggttcaagg agatattgca aatcctagag caatcacaaa gttttgaact 59640
ctgaggtata ttgtataata agaatattcc atgtattcaa aagagagaag ccaaggaaga 59700
aagaaatttg tcacgagttt gggctcttag tacatcctgt agctcattga accagcttcc 59760
tggaatggag ggtctgggat tgacactagg ccacatgtat agagtctcta gagagacagt 59820
gtttcatccc catggcccgt aatacatttc ccattttctc aggcagccac aggtcatgaa 59880
tgtgaggata gagagaggtt ggagcaacgt tcttgggagg cataaggaag agcaaatgct 59940
tcaagatccc cgcagcccaa actcctacct gctttgcccc ctaatgcagt gttcctccgt 60000
agctgtccga cctcttcaga tctcttagtc taccctgcca tcttccttta tgccatgggt 60060
cccactgttc tttcaactca tccccctttc cctcagtgca gagtagctgc ggccagcaga 60120
gggtagactg agagcaggag agaaggtcct gcccaggaac ccattctaga gatgctgcat 60180
tctgcctggg agcaagtttt ccagggcagc tttgagaagt cttgcagaaa caaacctatt 60240
tgacccacat gatatgggaa tgacagaaag taatacaatt tgcacagtgc ttttccatgg 60300
gaaaagtaga gccttttcgc gaggttttga gtacatagag agtgaaggtt gacctggaaa 60360
ggttatcctc ctggatccca tgttttttct gaagaactac ctgttagttg caacttgcac 60420
attagaatat gaagtcctac cgagagagat acggagaact agataaatac agatactttt 60480
gtatgtgaat aaacgattcc acaatacaca catcaaaatc cataccagtt attccagaga 60540
gatggattgg gcagaaggca gaaggagaat actctgatcg ttttttgccc acgtgtatgt 60600
attatctcag tgtttctaag aagcgtttgc tactttagat ttttttttat aataataatc 60660
ttttaagtat gagaaatgtg cagacaggat tagtgattga gagccatttg tgcttgtggc 60720
aatcatatgg tacttttatg ggaatattag aaaggcactg gtaatgacct tgttgcagca 60780
caaaggagag ggtgtggggt gcccctgcat attgtcccac ctcttgtgac gtgtatcgtt 60840
ttggaatttc cagtggcttg atcatgaact actgcaggaa tccagatcct gtggcagccc 60900
cttattgtta tacgagggat cccagtgtca ggtgggagta ctgcaacctg acacaatgct 60960
cagacgcaga agggactgcc gtcgcgcctc caactattac cccgattcca agcctagagg 61020
ctccttctga acaaggtaag gagcctgtgg ccagaaacct acacgtttcg atgctgggat 61080
gaaaagccat ggaaattccc actgatgcag cagcctccaa tggtaaacgg atgctcgagt 61140
gttgactgag ttctgtcatg taggaggaag cctccgtgca ctctctgggg gagccagcgg 61200
attgatttct ggtacaacgt tgggtgggct gtgtctttag aattggcaca aaccctccag 61260
ggtgatcgac ttcacaactc acctcgttga aaaatgggct atctcagtgt cttagccaaa 61320
atttttattg taacatgctg tcagatgtgt gactctttcc aagccagtaa gcttttcctg 61380
ggacttcttc aattagccag cattcagtgc aatcttcagc attgcagatt cagagaaatg 61440
tggctctgga gcctgtcacc cttgagaaac agggctaaca gggttgcatt aattccaaat 61500
caccctggtt ctatggagca gtacatgaac tcccaatgat ctatgtttca ggacttcctc 61560
agtcataggt gggctctgca gccctaggtt tttaagtgag tgactgcccc gtgttctggt 61620
ggcagttgta cctgtgagcg gtctggatag aaagagtcgg agacttctgt attattgcaa 61680
ctcaggatgt gggtcatgag aggatttcat ctctcctgca ggggagtaag ctgttcgcct 61740
ccacccatcc ctgataactg aagtgtcttt gtctgcagtc ctagacgaag gactgttgtc 61800
tctcccatgg cccagaagct gaagaccttg ccttttgtta tgaaacgttc attgttttca 61860
tgtctgtccg tttctctgcc cctaacaccc aatcaccatg tatggcctgt acccccaaat 61920
gcatcgtgct ttgctgtttg ctgccccata gtcctcatga acattcagta gaaattccca 61980
taaatgtgct tgcacgtgag cacagtttcc attgagaagc cctctcattt gtcctttttt 62040
tctaagcttt tatgtgaaat atttctaaga acttactaca gttctaaagt gttaggaatt 62100
tgtttctttg gtgtttttgt ttgttggttg gttgttgctt ttctcaagtc catctgccta 62160
caaataaaga aacaagaatg ttacttgtca tattctcctg aggtcataat tctcagagac 62220
ttttttctgg tttgtgccat aagtggcttc acatgtttgt ctcttcttgg aaacactcag 62280
tttgatttct tttcttttca tttcagcacc aactgagcaa aggcctgggg tgcaggagtg 62340
ctaccacgga aatggacaga gttatcaagg cacatacttc attactgtca caggaagaac 62400
ctgccaagct tggtcatcta tgacaccaca ctcgcatagt cggaccccag catactaccc 62460
aaatgcgtat gtctattttc tttaccataa gtgaaggaag ggtcagtgga aatttctgtt 62520
agtagagtca tgcttcaagc tgagtgttca ggactcaagt tgtctcagat gaacagtgca 62580
tagcaaaatg tctcaggaac attgtctttg agcaaagagt ctaagagaag acaaatgtta 62640
atctggctct ccttcctcct agtttaatgg agcagaaagg tatctggagg caaggatatc 62700
acattaagaa acaagtcaag atgacaaatg atgaaactct tagagtaccc ttccacaaca 62760
cccactaagg ttcaatgcag ccttttctcc ttggaattct attaaactaa actccaattc 62820
ctgaagtgaa ggttctgttg gggttttctg ttttggctta caaggaaagt atatatgtat 62880
atctatggag aggcaaatct atctctttct atatctacgt ctattccaat atgtagaaac 62940
acagtcggtt ctgaccacca gtggtctgaa gggatactgg ttgttagaga ataaaaatgg 63000
caggaaggca gatgagagtc agcaaagaga gagatcctgt aaagtaaaag ggtggataga 63060
tggacagaag cccaggtctg accagcccat ggccaggctt taggccataa gtgacaccaa 63120
agacatggaa aaatggtttc tacatgttgg acaacagaca gtagtggacc aaaagaatag 63180
tgacaggggg aacaatgaga tcaactccat agataccttg gctttcttcc tggaggccct 63240
tcttgcactg aagagcaagg tgatggagcc cagatggact gtagccatct tcctgaatgc 63300
aggagagaga ttggaatttg ggactactgt ggtagctagg attttatagg cctgctgaga 63360
atgagaatgg atttgtggat gaaaggagct ccaggggcac gcatagtagt ctcctcgaat 63420
ctttggctaa acatgacgtt gcatgtgccc agaaaaaggt tccacaagaa agtagagaaa 63480
agaatatatc ctgaggaata gcaactgcga ttgaacagtg agctcaataa agaggacaga 63540
gccctcatag cattctggga tactggagtt ctgaccagct ggaggagaga cctcactgaa 63600
cctcttggga atacagtaga gactccagaa aagtcatact ttaggagtag aattagtaaa 63660
tttctagaaa aaaaggcagc tctagacaaa ccctggcaaa actgaaaagc aagtctccaa 63720
gcattaaaat catttccaag tcaattaact gcctgggaga ggaaaaccct ctttagaggt 63780
aaacaacaaa gtcaagtggc tcagctatgt ggtgttcaca gtgtgagttc taaatttaaa 63840
acttgactac acatagagaa gcttttagta tgaaccatga ccaggtgaaa aatcagtcaa 63900
tacaaataga cctagaaatg acagaaatga ttagaatggc aaaaaatttg acatatcaat 63960
atgtcaactg agttttaggt tttaagaaaa catgaatacg gaatgaagca gataccatat 64020
caagagacag taacagtata gaagagccaa attaaattaa agaactagta taagaaggta 64080
tgtcttaaat gaaaaaatta ctggatgtat tcccaatgga gtgagatgtt tcagaagtaa 64140
aaactaactg aaaaacaatt ttataccacc tacagaacca gctacacata cacaaatgac 64200
acacacatat acacacatac tcacacatgc acaggcttag aaacatgcac gcacacacac 64260
acacacacac acacacacct ccacaaatac taaaaaatga aatccactga tcctcacaga 64320
caggcgggaa aatataaaaa gatttcctgc atgtgggtag gaagtcacag aaggagagga 64380
aggagagatt gctacaggaa caaatactgg aagcaaggat agctaaaaac ttttcaaata 64440
agaagaatat taaaaaccac agattcaaga agctgaatga atcagacagg gaatttccaa 64500
aaaaaaaaaa aaaaaaactg tatgattcac ttttgtacat caccgttcaa cagtcagaag 64560
gcaaagatat aataacaaga aacatctcat gagaaactgg aggaaaaaga gctgtgtctt 64620
gctagaagaa cagtgataca aattgctaat gcattctcat cagaaacact ggaacccagt 64680
taacagggga tatcattaaa atgataaact agaaaaaaaa gagatcaaat gagaatgcta 64740
catccagcaa taaaatgcct tgaagatcat ccatgttgga taaatgcata ttgtgcactg 64800
ccccaaataa ataaaccaaa aactaataat ttggaatcag caggcttgtg taacaagaga 64860
tgttgcccaa agaaaattag ctagaagaag aatagttcaa gaggagaact ttctgcagcc 64920
cacgtaatga agaacccagc aaatggcaaa tgtagatgta aatgcaaaat attttcttga 64980
tcaaatttct atatcttttt aaatgagagt tgactacttg aagcaaaatg atagcaatat 65040
atttaacttt agcatatgta gaggtaaaaa tttgaacata tagactaaat catgtgggga 65100
ataattggaa gtgtaccatt gtaagtttct taccttatcc acgatggtat gtaatattaa 65160
tgaaaggttg aatttgtggg tccaaaggga tattgtaaat cctaaagcaa tcataaaatt 65220
ttgaattctg agggatatta tataataaga attttccatg tatccaaaag agggaagcca 65280
aggaagaaaa agaagtcttt caagtactca agctctgagc acatccagtt gctcattgaa 65340
ccagcttcct ggaatggagg gtctgggctt gagactaggt cacatgtgta gagtctctag 65400
agagacagtg ttggatcccc atggcccata atacatttcc cgttttccca ggcagccaca 65460
ggtcacgaat gggaggattc tgagaggttg gagcaatgtt cttaggaggc ataaggagga 65520
gtgaatgctc tgagatttcc ccagcctgag gtcctccata gctgcccgac ctcttcagac 65580
ctcatagtct gcccagctgt ctccctttat gccatgagtg ccactgttct ttcaactcat 65640
cccccattcc ctcagtcccg gaattgctgt ggccagcaga ggatggactg agagcaggag 65700
aggaagtcct gaccaggaac ccatcctaga gatactgcat cctgcctgaa agctaggttt 65760
ccagggcagc tttgagaagt cttgcagaaa gaaacccact tgacccacct gatacggtat 65820
cgacagacag gaatactttt tgtgcaatgg ttttacatgc tgaacataga gccttttggc 65880
tacattttga gtacattgaa tgagactgct ggcctgggaa ggatatcatg ctggatgcca 65940
tttttttctc tggagaacta tgtgttagtt ccaactcgca cattactata tgaagtccta 66000
cacagagaga tacggagagc tagacagata gagatacttt tgtatgtgca taaccaattc 66060
cacaatacac acgtcaaaat ccataccagt tattccagag agatggattg ggcagaaggc 66120
agaaggagga tattctgatc cctttttggc cacatgtatg tataatctca gtgtttctag 66180
gaagtgtgtg ctgcattaga ttttttttct ttaaaaaaag tgataatata ttaagtatga 66240
gaaatgtgca gagaggatta gagattgaga gccatttgtc attgtggcaa ttgtatggta 66300
tctcttttgg gaatatttca aaggcaccag taatgacctt gttgtagcaa aatatacagt 66360
gttcctgcat atgtacccat tttttgtgat gtgtattctt ttggaatttc cagtggcttg 66420
atcaagaact actgccgaaa tccagatcct gtggcagccc cttggtgtta tacaacagat 66480
cccagtgtca ggtgggagta ctgcaacctg acacgatgct cagatgcaga atggactgcc 66540
ttcgtccctc cgaatgttat tctggctcca agcctagagg ctttttttga acaaggtaag 66600
aagttgtgcc agacatttac ctgcttggat gctgggatga aaagccatgg atacccccac 66660
tgacgcacaa cccttcagtg ctacactggt tctcgtgtgt tggttctggg tctgccatgt 66720
gggaggaagc cttagcgcac tctctggggg agccagaggt gtgatttttg gtgcaacctg 66780
tgcgagctgt gtctttagga tgggcggaaa ccattctggg tgctcgactt caccactccc 66840
ctcattgtaa aaggggctat ctcattgtcc tagacaaaat tcttattgta atatgctgtc 66900
agatgtgtgt gtctttccaa gccagtaaac ttttccaggg atttcttcaa gtagacagca 66960
ttcagtgcaa tcttcagcat tgcagattcc gagaaatgtg gctctagatc ctgttatcct 67020
tgagaaacct aactgggttg cattaattcc atatctccct gggtctgtgg agtagtacat 67080
gagctcccga agctctatct ctcaggtctt tttcagtccg aggcaggttg tgcagttctt 67140
agctttgaag ggagtgattt tttcgtgtgc ttttgcctct ttctgatgga acttgtacct 67200
gcggggggtc tggagaaaaa gagtagtaga cttttgcttt attgcaatgc attatgctgg 67260
gcacgagagg attccctatc ttattgtagg tgataagctt ttggcctcca ctcatccctg 67320
agaagtgaag tgttgttgcc tacagtttta gctgcaggac tgttgtctgc cccatcacca 67380
ggagtttaat gctttctttt ttgagcaatc atctagggac acatgcaagg tttttatatg 67440
tccttgcctc ctccccaaaa aaccatttta atgcttggag acttgctttt cagctttgcc 67500
aaatgcatca ccctttcttc tatgctgttc catgtcgtca tgaacactct gtagagattc 67560
ctagaaatga gcttccatgt tagtggagtt tccgatgaga agcaatctga tatttctttt 67620
ccactaagtt ttacatgaaa tatttctaag aacttactac agttctagaa tggtaggcat 67680
ctcttacttt cgtgtttgtt tgtgtgtttt ctcatgtcca tttgcctatt aataaagaat 67740
agagaatggt tgtaaatctc agtgactctt ttttggttta tgtcataaat ggcttcctgt 67800
atttttctgt tctaggaaat aataagcttg atgtcttctg ttttaatttc agcactgact 67860
gaggaaaccc ccggggtaca ggactgctac taccattatg gacagagtta ccgaggcaca 67920
tactccacca ctgtcacagg aagaacttgc caagcttggt catctatgac accacaccag 67980
catagtcgga ccccagaaaa ctacccaaat gcgtacgtct ttgttcttta ccataagcga 68040
aggaagggcc aatggaagtt tctgttagaa gagtcatgct tcaaggtgac tgctcaggac 68100
tcaacttggc tcagatgcag aggaacattt cctgtgagca aaagttctta gagaagactt 68160
tgtttttttg agacagagtc ttgctttgtt gcccaggctg gagtgcagtg gcatgatctc 68220
ggctcactgc aagctccgcc tcccgggttc acaccattct cctgcttcag cctctctagc 68280
agctgggact acaggcaccc accaccacac ccggctaatt ttttgtattt ttagtagaga 68340
cagggtttca ctgttctagc caggatggtc ttggtctcct gacctcgtga tccgcctgcc 68400
tcagcctccc aaagtgctgg gattacaggc gtgagccacc gtgcctggct gagaagacat 68460
tttttaagct ggctctcctt cctcctagtt ttatggaagc agaaggatat atggagttga 68520
gaagatctta ttaataaaac agccgggatg acaaatgacc aaagagttag agtatccttc 68580
tacaacatcg gctgagggtt aatacaacct tttcaccttg gaattctatc attctaagct 68640
ctagtccctg aagtgaatgt tgtgttggcc ttttgcatct tgggtcacag ggaattgata 68700
cttgcacatc tatggagagg caaatctttt tctatctact tctttttcaa tgggtacaaa 68760
cacacttggt cctgagcacc agtggtctga agagatacgg tctgcccaga ggagaagaac 68820
aaaggcagga aagcagatga gagtcagcaa aggggcgatg ctgaaaagta aaaggggcgg 68880
gtagatggac agaagccatg atctggccat tctatggcca gtctttcggc cataagtgac 68940
taccaaagac acggcaaaac ggtttccaca tgttgaacaa cagatgctag aggaccaaga 69000
gtattgcaag agggagaaaa tgagatcaac ccatcaatgc cttggctttc ttcaaggaga 69060
cccttcctgc actgaagagc aaggagatgg agcccaagct gactgtagcc atgttgctga 69120
acagaggaga gtgattggac tttgggatta ctcaggtagt taggattttc tagccatgct 69180
aagagtaaga atggacttgt ggaggatagg agctccaggc atagaagtct cctcaagtgt 69240
tagtctaaac ataaagcagc acttgcatag aagattttcc acaagaaaat atggcaaaaa 69300
aacaccatat attgaggaac aacaactaca agggaacagt gagcttaata aaggtgacag 69360
agctcacata gtgctctgga atattggagt tttgaccagc tagagagaag agacctcatt 69420
gaaaatcttg ggcattcagt agagacctca gaaaagtcag actttatgag tagactttgt 69480
atattcctag aataaaggca gctccagaaa aaacctagca aagctgaaaa gcaaatctcc 69540
aagcattaaa atggtgtcct agtcaattaa ctgccttcta gaagaaaact caacactctt 69600
tacaggtgaa caacaaagtt aagttgctga gctatgcaat atccacagtg tgagtcctaa 69660
atttataact ttactacaca taaaaaagca tttagtgtga accataacca ggaaaataat 69720
cagtcaataa aaatagaacc aggaatgata gaaatgattt aaatggcatg agaatttgac 69780
atattagtat cataactgca ttgctggatt taagaaaaca taaacatgga acgtaacaga 69840
tatcatatca agggaaagta aaaggataaa agagtcaaat caaattaaag gactattaaa 69900
aggtatatct taaatgaaaa attcactgga tggtctccca atcaggttag ttgtttccag 69960
ggaaaaaatt aactgaaaaa taattcaata gaatctacag aaatagctgc acatatatac 70020
acacaatggc acacgtgcac acacccacac ccacacaggt gtgaatccta gagccacacg 70080
agcattgaaa catagagaag taaaaattgt tcattgagga atatgtagca atgctcaatg 70140
tgttttaccc taataagagc ttttgtgatg tatgattgaa aaactgacac aactgaagag 70200
agaaatagat aagcccacac tctgagttag agatttcctt gattctctca ctatggttat 70260
aaatctttcc caaacacaac aggctagaac aaatatgcag aaaattagac atagtatctt 70320
tgttctcaat aaaaacgtcg acctatttaa cattataccg aactaccgag tacacattaa 70380
agtgtgcatg gagcattcac tgaggtgtac tctacacatg accttccagc aagtctccat 70440
agatttaaaa gaattaaagt catacagagt gtgtcacttt attctcccag aataaagtga 70500
gatatgaata atgagaagtt tgccagcttc tcaaatattt gggagtcata cggtgcattt 70560
caaaatactc tttgggacaa agaaaacatc actaaggaat ttagaaaagt tttgaactga 70620
gtaagaatat aacacaattt atccaaactt aggagatgca gtgaatgtct ttaggctttt 70680
acataatttt agatgctctt agggaaaaac agaagcatgt aataatcaag atttcaaact 70740
gcaattctca aagtgtagtc tagagaaacc tgaggacctt tgagtacctt cagagacagt 70800
ccatgaggtt aaaggacttt gctacgtgaa aagtaagatg ctattggccc tttttacttt 70860
cattttccaa caagagaaga ggggagtttt ccagcagtta cataatatgt aatggcatca 70920
tgtctctgat ggctaagaaa atgggcaatt gttgactttg tgtgttaaaa aaattctcag 70980
tgttggtttc ttatactata aatattcatc ttgtgttttg aaaaagaaaa gctctttgga 71040
atcccctatg aacaaagact ttgacagttg ttgatctaag accacagctt aaatatctac 71100
acaagaaaaa aaaaaaaagc aaataagagc caaggaaagc agatggaagg aagtagtcca 71160
aaccagtgac attcagtgaa caagaaaaga gaccaacaag ggagtaaact cttgaaacag 71220
aaagttgatt ctttgaaaag atccatatga ttgaacacag tctggctaaa caaatgacag 71280
accaatgagg gtgcacaacc atcaccatct ggagtaacag aggagaggtg ccattactat 71340
agcatcttcc agttctgaaa gctgaaaaga agattttgag aacaattgta tgtgaataaa 71400
ttcaggaatg ttaatcatgt gggccaattc ctgaggaaga caacaaatca gcaaaccaga 71460
tgctgaatag ttagtgtagt cctgtagaga gacatacaga gaggctgaca gagaaatatt 71520
tgtatgtgca taaaacaatc tacaagacac acttcaaaat caatctcagt taatctggag 71580
gaacatattt cacagaaggt ggaaggaggg tattctgatc ctcttgtaca ttgtacaaca 71640
ttgtacaatg tacagagtat aattgtacaa gtacaattga agttgtacaa gtacaagtgc 71700
aacttgcaca atgtacagag taaacattga tgtttactct caattttctt atggagcaca 71760
gatgactttg gatgtgttac aatatgaatg ataatttgtc tttgagatgt tcgcagttgt 71820
ttagaagttg aggaccattt gtgcatatta tgggaccttt agtgaaaata tttcaaagtc 71880
tctttttaca ctttgttaca gcaaaatgta gagggcgcta agtgcccttg aatcttctcc 71940
catctctggt gacctgtgtt gttttgaaat ttgcagtggc ctgaccagga actactgcag 72000
gaatccagat gctgagattc gcccttggtg ttacaccatg gatcccagtg tcaggtggga 72060
gtactgcaac ctgacacaat gcctggtgac agaatcaagt gtccttgcaa ctctcacggt 72120
ggtcccagat ccaagcacag aggcttcttc tgaagaaggt aggaagtcta tggccagaca 72180
accacaccct aggacgttgg gatgaaaaga gttgcaaaat cttagtgata tagaagcctt 72240
ccatgctcac acaattccaa gtagaatgtg gactcagggt cagccactgg gaaggaacac 72300
tcagcgcctt ctctgggaga accagagctg tgatgtttgg taccctgtga aagggtggta 72360
tctataggaa gggtgcagac cctctagggc actggactta ccactcccct ggttattcaa 72420
aggatcattt tagtgtctta gccagaagaa tattctaaca ttttgccaaa tttgtgaaga 72480
tttaccaagc tcatgataag cctttcatgg tatttcttca agtagtcagt gttcattgca 72540
tctttggctt tgcggtttcg gaggaatgcg gtttttgagt ctgtcatcct tgagaaacct 72600
aatatgactt ttcttagttc catatacttc tgggtccagg tagcagtaca tagccaacaa 72660
atgctccatc gttctggcct atctccatct taagccagtc ctgcacaact aggctttgat 72720
gggagggatc tctcagtgtt cttgcccctc cttctcatgg aacatatatc tgtgttggtc 72780
tctgagaaga agagtagtgg atatctactt tgttgcaatg cagaatcctg ggccaaagat 72840
accagccatc cctccaaggg aataaaattt tggccagtag ccctctctga gagacaattt 72900
gtctttgcct acgagtccta gatgcaggac cgcttcctgc cccatcttca agaagctgaa 72960
ggctttggct ttggaggatc agcagtctag ggaaatgtgt gacggtttca tgtctgtccc 73020
cactgacagt caatcaccac ctacaacctg cacagcctga tgcatagcag tctagtttcc 73080
tgccttattc tcaggaacac ccagaagatg tctatattaa agagcatgca catgagtgca 73140
attttgactg ataggcactc tgatctttcc tttggtgcct gtgttttaaa ggaaatcttt 73200
ctaagaactc gttaaagttc tagaatgcta tgaatctttg ggttttatta ttggtatgtc 73260
catctgcctg ctagtacaga acagagcatg gtagtctttc tcagagacaa tgatcctgtt 73320
tcagtcacag atttcttctg atgcttctgt gttctagaaa ttactcagct tgatttctcc 73380
tctttgaatt tcagcaccaa cggagcaaag ccccggggtc caggattgct accatggtga 73440
tggacagagt tatcgaggct cattctctac cactgtcaca ggaaggacat gtcagtcttg 73500
gtcctctatg acaccacact ggcatcagag gacaacagaa tattatccaa atgggtacaa 73560
ccttgagttt tcttcaaaga cagacagcag cccccttaca tttctcttgg aagggccatg 73620
cttccaacta acttcttatg acaaatttat ctcagatctg gaatgttggg tagaatgtct 73680
caggcttctt tcttcaggca cagtgtctga aaggagagaa atgtcaggcc agctctcttt 73740
tctcatagtt gacagaagca ggaggatatt tgaaggtggt gagttctcat gaatagaaag 73800
ctcaggacac atggccacgt gcttagaaat agcaccattc cacaatgccc actaaagacc 73860
aatgcaatag ttcaaccagg gatttctgtc attctaatct ccaagtcctg aagtgaaggt 73920
tgtattagcc atgttcatct tgggcaacaa ataaaggata tctatgttga catccagatc 73980
ttccaatcac tttctcctct aacctgtacc tgggttctga gaacaaggta tctgaagagc 74040
tatgtgttgc cagcacatga ggggcaaaag taggaaggca gctgagagtc aggaagtata 74100
aagattctga agagttacac atgcaggaag atggacagaa acccagttca gaccacgtca 74160
gcgtttctgc catgaaggac tatcaaatac ataggaaaag tgttttcata ggttggacaa 74220
cagacatgac aggcctgaga aaattcagaa agggaatcaa aggagatcaa ccttatcatg 74280
tccctggcat ccttccttga gacccttgaa gggcaagcag atggagccca gctgaccaca 74340
gcagtcttgc ttaactgagg agagagactg gagtttgtga tgcctcaggc atctgacgta 74400
ttctaggctg gctaagaatg agaggggatt tgtggaggaa aggagctcca agaatacaca 74460
ccgaagtctt ctcaaggctt tggctaaata caaagctgcg tatgcacaag gagagttttc 74520
acaaagaaag aacaataaag aaaagctact ggggaaagaa caactgcaag ggaacagtga 74580
gctcaatgga gatgctagag ctcacatagc actgggggat atttgagttc tgaccactca 74640
gaggagagac acctcactga acatcttggg cattcagtag aggtcaaaga aagccataat 74700
ttgggagtag gatcttcgga ttcctagaaa taaggtgact ccagaaacac tccagcaacc 74760
cttcttccaa gccagtctaa aaggatccaa atgatttcca agtaaattaa ctgccttcca 74820
gaaaaaagta aactcaaccc tccttagagg taaggaacga atacaagttt ctcagttata 74880
tgacatcccc agagtgcaac ttgcatttaa aaatttacta gacacaaaag aagttttcac 74940
tgtgatccat aactgggaga aaaatcactc aacacaaata ggcccagaaa taatagaaat 75000
tatggcattg gcaagaacat ttaaaatgca cctctgagaa ctgtgtttca ggaaaatgtc 75060
agcaaaagct gaccatgaga gaaatgaatg cataatatca gaaaagaaaa gaattgaaga 75120
gccaaatgga aatttaaaaa ctgagaaaag ttatatctgt aatgaggaat tcactggatg 75180
gccttataac cagtttagat attatggtag gaaaaggtga acgagaaaat gattcaatta 75240
aagctagaca aaccacaaga cagacagaca gacacaaata cacatacaca caatgactga 75300
accaattaat caacagagcc tcaaggacat ctaggaaaac atccacacat ttaatatatg 75360
tgttaggcaa gtcacagaaa gagaggaaaa agataatgtg acagaagtta tacttgaagc 75420
catgacggct gacaaatttc caaacataca gaaaatgaga aattcatagt catgaagctc 75480
aatgactcag gtatagattt ttaaagagca aaactctgat ttactggggt acatcatagt 75540
taaattgtct gatttcaaag ctaagaagaa aaaaaggggg ttcctatgaa caaacatttt 75600
gacagttgat ctaagaccac agcttaaata tctaggcaag gaaaagcaaa taagacacaa 75660
ggaaagggga tggatggaaa tagtccaaac caatgacatt cagtgaacaa gaaaatagac 75720
caacaaagga gtaaatccat gaaacagaaa gttggttctt tgaaaagatt catgtgattg 75780
accacagtct ggctgaacag atgacagacc aaggagggag tacaaccatc accatttgaa 75840
gtaacagggg agaggagcca ttgctatacc atactccagg tctgaaagct gacaagaaga 75900
tatcaagaaa aactgtatgt gaataaattc atgaatgtag atcatgtgga tcaattcctt 75960
aggtaaacaa caaatcagca aaccagatac tgaatagatt gggtactcct atagaaagac 76020
atacagatag ccagacagag aaacatttgt acgtgcataa aacaatctac aagactcact 76080
tcaaaatctc tcagttaatc caaagtaaca tatttggcag aaggtggaag gagggtattc 76140
tgatcctttc ttgtacacat tgatgttttc tctcggtttt cttatggagt atagacgagt 76200
ttggatgtgt tacaataaga atgataatct gtctttgaaa tgttcacagt tgtttagaag 76260
ttgaggacga tttgtgattg ttacaggacc tttagtgaga atatttcaaa gtcacttttt 76320
accactttgt tacaacaaaa tgtagaggat gtctggtgcc cttgtatctt ctcccatctc 76380
tggtgaactg tattgttttg taatttgcag tggcctgacc aggaactact gcaggaatcc 76440
agatgctgag attagtcctt ggtgttatac catggatccc aatgtcagat gggagtactg 76500
caacctgaca caatgtccag tgacagaatc aagtgtcctt gcgacgtcca cggctgtttc 76560
tgaacaaggt aagaagtctc tggccagaca accacaccct tggacgttgg gataaaaaga 76620
gttgcaaaat cttagtgata cagaagcctt ccatgctgca cgggaatctg aatgtggact 76680
cagggtcagc caatgggaag gaagcctcag cgccttctct gggggaacca gggctgagat 76740
ttttggcacc ccgtgacagg gtggtgtctt taggaagcgt gcagaccttc tagggcactg 76800
gatttaccac tcccctggtt attcaataga ttatttcagt gtcctagtga aaatggatat 76860
tctaacatcc tgccaaattt gtgatgattt accaagctca tcatgagcct ttcctggtat 76920
ttcttcaagt agacagtact cattgcaaac ttcagcttta cagtttcaga ggaatgtggt 76980
ttttgagtct gtcatccttg agaaacctga tatgacttta cttagttcca tatcctcctg 77040
ggtctaggta acagtacata gccagcaaat gctctatctc cctgtctacc ttaatcttag 77100
gcaggtgctg cacacctagg ctttgatgga agggatttct tagtgttctt gcccctcctt 77160
ctcatggaac acgtatctgt gttgctgttt gtgaagaaga gtagtggatg tctactttgt 77220
tgcaatgcag gatcctgggc ccaagatttc ccgccgtccc tccaagggaa taaaattttg 77280
gccagtaccc ctctctgaga gacaatgtgt ctttgcctgg aagtcctaga tggaggacca 77340
cttcctgccc catcttccag aaacttaagg ctttggcttt ggaggatcag tgctctggag 77400
aaatgtgtga cggtttcatg tctgccccca ctgacaacca ccacctacag cctgcaccgc 77460
ctgatgcatg gcactctggt ctcctgcctt gttctcagga acacccaaaa gagatctttg 77520
ccaaagaaca ggcacatgag tgcaattttg actgataggc actctgatct gtcctttggt 77580
gcccaggttt taaagaaaat ctttctaaaa actcattgaa gttccagaat gctatgaatc 77640
tttgagcttt gttattggca tgtccatctg cctactaatg tagaacagag catggtcgtc 77700
attttcagag atgatgtcct gtttctatca tggatttttt ttctcatgct tctgtgttct 77760
ggaaattact cagtttgttt tctcctcttt gaatttcagc accaacggag caaagcccca 77820
cagtccagga ctgctaccat ggtgatggac agagttatcg aggctcattc tccaccactg 77880
ttacaggaag gacatgtcag tcttggtcct ctatgacacc acactggcat cagagaacca 77940
cagaatacta cccaaatggg tatgtctttg agttttctcc caagagaaac agccacccac 78000
ttaaatttct cctggaagag ccatgcttcc agctaacttc ttatgaccca atttctctca 78060
gacccagaat gttggacaga atgtctcagg cttcttgctt tgggcacagg gtctgagagg 78120
agagaaatgt caggccagct ctcttttctc atagttgata gaagtaggag gatacttgga 78180
ggtggtgagg tctcatgaat agaaagctca gaagaacata tgaccatgtg cttagaaata 78240
gcaccattcc acaatgccca ctaaagacca gtgaaatagt tcaaccaggg aattctgtca 78300
ttctaatctc caagccctgg agtgaaggtt gtgtttgcca tgtttgtctt gggtaacaag 78360
tgaaggatat ctatattgac ttcgagatct tccgatcact ttctcctcta acctgtataa 78420
acacattggg ttctgagaac aaggtgtctg aaaagctatg tgttgccagc ccatgagggg 78480
caaaaggagg aaggcagctg agagtcagga agtatagaga tgctgaagag ttacacattc 78540
aggaagatgg acagaaaccc atgtctggct atgccagcct ttctgccatg aaggactatc 78600
aaatacatga gaaaacagtt ttcacaggtt ggacaacaga tatggtaggc ttgagagaac 78660
tgagaaaggg aatcaaagga gatcaacttc atcattaacc tgtcttcctt cctggacaca 78720
gtgttggatt gaaggacaag cagatggagc ccagctgacc acagcagtct tgcttaactg 78780
aggagagaga ctggagtctg cgatgcctca ggcagctgat gtgttctagg ctggctaaga 78840
atgagaaggg atttgtggaa gaaaggagct ccaggaatac acacagaagt ctcctcaagg 78900
ctttggctaa atacaaagct gcgtatgcac agggagagtt ttcataaaga aagaacaaca 78960
aagaaaagct acttgggaaa gaacaactgc aggggaacag taagctcaat ggagatgcca 79020
gagctcacat agcactgggg gatatttgaa ttctgaccac tcagaggaga aacacctcac 79080
tacattttgg gcattcagta gagaccaaag aaagctgtat tttgggattg ggatcatctt 79140
attcctagaa tcaaggtgac tccagaaaaa ctccaacaac ccttcttcca agccagtcta 79200
aaaggatcca aatgatctcc aagtaaatta actgcattcc acaagaaaaa aaaaactcaa 79260
ccccccttag aggcaaggga caaatacaag ttgctcagtt atatggcatt cctattgcgt 79320
tacttctatt taaaaattta atagagacac aagaagcttt cactgtgata cataactggg 79380
agaaaaaatc actcaacaca aacaggccca gaaattatag aattgatgac attggtgaga 79440
acatttaaaa tgcacctctg agaactgtgt ttcaggaaaa tgtcagcaaa agctgaccat 79500
gagagaaaca aaagcagaat agcaagagaa aagaaaagaa ccggagagcc aaatgaaaat 79560
taaagaactg agaaaaggta catctctaat gaagaactca ctggatggcc ttatcatcac 79620
tttagacatt acggtaggaa aggtgaccta gaaaataatt caataggagc tacacaaatc 79680
acaggacaga cagacagacc aacagacaga aacacacaca cacacacaca cacacacaca 79740
cacacacaca cacacacaca aagactgaac ctattaatca acagagcctc aagggcatct 79800
aggaaaaatc cacacattta atatatgtgt taggcaagtc acagaaggag aagaaaaaga 79860
tatcatgaca gacattatac ttgaagcgat gatggctcgc aacacgccaa atatacagaa 79920
aacaagaaac tcatagtcaa gaagctaaat gactcaggta tagaatttta aagagcaaaa 79980
ctctatgatt tactgggata tatcatagtt aagttgcctc aattcaaagc taaaaagaaa 80040
aaaagggggt tcctatgaac aacagctttg acagctgttg atctaagacc acagcttaaa 80100
tatctaggca aggaaaagca aataaggcac aaggaaagag gatggaagga aatagtccaa 80160
accaatgaca ttcagtggaa aagaaaatag accaacaaag gagtaaatcc atgaaacaga 80220
aagttaggtt ctttgaaaag tctatatgat tggccaaagt ctggctaaac agatgacaga 80280
ccaaggaggg agcatatcca tcaccatcat gagtaacagg agagagatgc cattgctata 80340
gcatcctcca ggtgtgaaag ctgagaagta gatattgaga tcaactgtat gtaaataaat 80400
tcatgaatgt agatcatgtg gatggattgc ttaggtaaat aacaaatcag caaatcaaac 80460
actgaataga tcatgcagtt ttatagagac ttacagacag cctgacagat aaacatttgt 80520
atgtacgtga aacaatctcc aagacacact tcaaaatccc tctcggttaa tccaaaggaa 80580
tgtatttggc agaaggtaga aggagggtat tctgatcctt tctggtacac attgatgttt 80640
tctctcagtt ttcttataaa gcatagatta ctttgaatgt gttacaataa gaatcataag 80700
ctgtctttga aatgttgaca gttgtttaga agttgaggac catttgtgag tgttatggga 80760
ctttagtgag aatatttcaa atttgcttgt ttacactttg ttacaagaaa acatagaggg 80820
tgccaggtgg tgctgtatct tctccaatct ctggtgacct gtattgtttt ggaatttgca 80880
gtggcctgac caggaactac tgcaggaatc cagatgctga gattcgccct tggtgttata 80940
ccatggatcc cagtgtcaga tgggagtact gcaacctgac gcaatgtcca gtgatggaat 81000
caactctcct cacaactccc acggtggtcc cagttccaag cacagagctt ccttctgaag 81060
aaggtaagaa gcctgcagtc agacaaccat accctcggac attgggataa aaagatttgc 81120
aaaatctttg tgatgcagaa aacttccatg ctgcacagga agtcgaaggt gaagtcatgg 81180
acagccaatg ggaaggaagc ttcagtgcct tctctggggg gaccagagct gggatgttga 81240
gtgccttgtg agggatggtg tctttaaaag gggcacagac cctctaggac actggattta 81300
tcacttccct gttatcaaac gaatcatatt agtgtcctag ccaagatgga tattctaaca 81360
tcctgccaaa cttgtgaaga tataccaagc tcctaagcct gtccagccct ttcttcaagt 81420
aggcagtgtt tattgcagtc ttcagcttta ccattttgaa ggaatgccat ttttgaggct 81480
gttgttcttg agaaacctaa catgtcttca ttagatccgt attgtcctga gactttgaag 81540
cagtacatag ccaccaaatt gtttatctcc ccagcctacc ttcatcttgg gcatgccttc 81600
cacacctagg atttgaggga agggatttct cagtgttctc atccctgctt ctcatggaac 81660
atttatctcc gttgtttttt gagaagaaga gtagtggatg tcagctttct tgtaatgagg 81720
gatcctgggc ccaagattcc ctgtctcccc tcctaggcta taaaattttg gcctgtactc 81780
cttctccctg agaggcaatg tgtctttacc tacaagtcct agatgcaaga tccttttctg 81840
ccccacaccc cagaatctga aggcttttgc tttggaggag cagtggtcta gtgtgcaagg 81900
gtttcatgta taccccccac taacagccaa tcaccaccta tagcctgaac agcttgatgc 81960
atggcaccct ggtctcctgc cttgttctca tgaacaccca gaagaggtgt aagcaaaaga 82020
ccattcacat gagtgtaatt ttgaagtata ggcactctga tctgtttttt gtttgtttct 82080
ttgtttgttt gttttccagg gttgaattaa aatatttatg actacttatt aaatttctag 82140
aatcctataa gtctatttgt atttttattc tacatttcaa tttgcatgct aatatagaag 82200
agtgtaaatt gttaatcctc agattattcc actttgtgtg tcataatttt tttcacattt 82260
cccttttcta ggcaatactg agcttgattt tctcttttaa tttcagcacc aactgaaaac 82320
agcactgggg tccaggactg ctaccgaggt gatggacaga gttatcgagg cacactctcc 82380
accactatca caggaagaac atgtcagtct tggtcgtcta tgacaccaca ttggcatcgg 82440
aggatcccat tatactatcc aaatgcgtat gtctatcatg ttagccataa aaggaacaat 82500
agtcaactaa aatttctctt agctggccca tgctacaagc tcacttccta ggtccaaatt 82560
tctcatagac tcagagtttg tagcaaaatg tctcaggaaa cttacttttg agcaaaaggt 82620
ctgaatgaag agaagtttta ggattgctat ctttcataac aatttgatgg aagcagcagg 82680
atatatggag gtggtgaagt ctcattaatg taaagctaag gagatcaaat gaccaaatgc 82740
tgagacaaag tatcattcca caatgcccac taaaggtcca tgcagtcttt caaccatgca 82800
attctatcat tctatcctcc attccctgaa gtgaaatttg tgtttgccat ttttgacacg 82860
aatcagaagt aacaaattca ggctgggtgc agtggctcag gcctgtgatc ccaacacttt 82920
gggaggacaa gacgggcaga tcaccagagg tcaggagttc aagaccagcc tggctaacat 82980
ggcaaaaccc catctctacg aaaaattaaa aaattagccg gtcatggtgg tgggtacctg 83040
taattccaac tacttgggag gctgaggcag gagaaacact tgagcctggg attcagagtt 83100
tgctgtgagc cgagaacatg ccactgcact ccagcctggg tgacagagca agactcaatc 83160
tcaaaaaaaa aaaaaaagaa gaagaagaag aaaagaagaa gaggaagaag aagaagagga 83220
agaagaagaa gaagaagaag aggaagagga agaggaggag gaggaggagg aggaagaaga 83280
agaagaagaa gaagaagaag aagaagaaga agaagaagaa gaagaagaag aagaagaaga 83340
aaatagaaat gagtgcatat atttatatat gagtactagc ctgtatgaac acactgggtt 83400
ctaagcacca gttttctgaa gggatatggg ttgtcaggca gagtaaaagc aggaatgcag 83460
atgagagtca ggaagtaaac agatgtggtg attaaaatgg gcaggtacat ggacaaaaaa 83520
atgcatgtct gacaaaaact ggcctcttgc cataagtgag tatgaataat atggaaaaac 83580
tgtttgcaca tgttgaacag cagacagtac aacctgagat agtttagaaa gggaaacaaa 83640
taagatcaac cccataatta cccttcctag acttaagggc aaagagtttt aaccaaagca 83700
ttccacagca gtcttgctaa actggggaga gagactggag ttttgtttac taataaaacc 83760
gagattttct aggttaggta ataatgagaa agtatttgtg gagaaaagga gctccaggaa 83820
tacacacaga agtctcttca agtctctggc tgaacagaaa gctgtgtatg cacagaaaga 83880
gtttccagag agaaaggaga acaaagaaca gctactgggg aaagaacaac tgctggggaa 83940
cagtgagctc aatgaagatg ccagagctca catagcactg ggaggtattt gagctctgac 84000
cagcctgagg agagacactt cattgaacat cttgggcatt cagcaaagac cccaaaaaac 84060
catacttcag gagtagaatt aatgcattcc tagaataaag tctactccag aaacacccta 84120
gaaaagctta gaaaccaagt ctaaaaagat ccaaatgatc tccaagtaaa ttaattgcct 84180
gtcagaagaa aacaacctct tcagaggtaa acaacaaaat taaattgctc aattatatag 84240
tatgcacaat gtgtggcata catttaaaaa tttgctaaac atacaaaaag catttagtgt 84300
gacccataac caggagaaaa atcagtcaat acaaatagac ccaaaaatga taaaaataac 84360
agaattggca aggagattta aaatgtatgt atcataattg tgttcaagga tttaaagaaa 84420
gcgtggacaa gaaataaata aatggataat atcaacagaa agaaaaattg taaaaggacc 84480
aaatggagag tcaagaactg aaaaaaaaga catctcttta atgagaaaat cactacatgg 84540
ccttataatc atattagata gtacagatga taaagctaac tagaaaatat tagggtggtg 84600
caaaccatag cacgcttata caaagcctga gaagataaac agagcctcaa ggacatctat 84660
gaaaatatca aaatatttaa tatttgttta aagcaagtca cagaggaagg gaaagagata 84720
ttggaacaga aaaaatactt gaagcagtga tggctgatga ctttctaaat atggaaaaaa 84780
tgataaactc acatagtcaa gaagctcaat ggatcagata taggatttta aaaagtaaag 84840
ctgtatgatt tatttggaca catcataatt aaattgtcca taatcaaaga tagaaagtaa 84900
aatcttattt gaagcccaag ggaaaaaaca tacctttaca tagagtaaca gtgacacaaa 84960
tgactgatgc cttctcatca gaaacaacac aaatcagaaa caatagaata acacctttag 85020
agtggtaaga agaaaaaaag atcaaatcag aaacaacaaa ataacacgtt tagagtggta 85080
aggaggaaaa caagatcaaa tcagaaacaa tggaataaca cctttagagt gtaagaaaga 85140
aaaaaagatc aaatcaggaa caacagaata acgccttcag agtggtaaga aggaaaacaa 85200
gataaaatca gaaacaatga aataacacct ttagagtagt aagaagaaga aaagatcagg 85260
tcagaaaaaa tggaataata tgctaagaag aaaaaaaaag atcaagtcag aaacaatgga 85320
ataacacctt tagagtgaaa agaaggaaaa aaacccagca agcttaaacg ctatgcacag 85380
caaacaattc cactgaaaat gaatgttacg taagtacata ttctgtcctc ctaaaaacaa 85440
agaacaaata aaagaatgtt tcatcagcag gattatgtaa taaaagatgt gaaagaatgc 85500
tatgtaagta gaagaaaaat aataccatat gggaattggc atcaaaacca caaaatacta 85560
tcaaaacaaa aaaactttat tgataaattt aacacaatat gcaaaagaac tataccatgt 85620
atactacata acattggtga gaagaaaatt agaagatcta aataaagaca catcatgctt 85680
atagattaaa aaatccaatg tcacttttca caaaactgat ctttagtttc aacccacacc 85740
caagcagaat tcctgcagtc ttttcttgaa aacctaacag aatgtatatg ctagaatcac 85800
caagacaatc tttaaaaaga ataaaaaact tggaataaaa tcacaagttt gtgggataga 85860
tgcatatggt aatatggaaa ttctcataaa gacacagtaa tcaagacatg tggtattggc 85920
tgggacgctt ggctgtaatc ctaacacttt gggaggccaa gatgagagga ttgcctgaga 85980
tgaggagttg cagacaagcc tgggcaacat agcaagaccc tcatctctac aaatatttaa 86040
aaaaattagc caggtttggt gccatgtgcc tgtagtccca gctattcagg aagctgaggt 86100
gggaggatca ctggagccca tgaggtggag gctgaaatga gccatgattg tgctactgaa 86160
ctttagcctg ggagacagat taaaaccttc cctctctctc tcaaacaaac aaacaaaaaa 86220
tacatagtat tgggcaaaac atatgcaaac aaaaacagaa aagggtcagc ataaatttac 86280
atatatggtc aatttatttt caatacaggt agcaaagcaa tttaatgagg aaattttttt 86340
ccaaaattgg tctgaaacaa ctggatagcc atagaaaaaa actataacaa atgtgacgct 86400
tgaatcctac tgtatgactc aaattaaatt aatttgagat agctcttaga cctcaatgta 86460
acagctaatt ctgaggctga aatataagac tgctatgaaa aagtatagta tcttataacc 86520
ttggagaagg aaaaattttt tgagggaaga accagaaaac actaactgta aaagaaaaca 86580
aatgataatg tggacattca ttgaataaaa acttatgctc accaaatatg actgttaaga 86640
aaataaataa gtaagtaaca cactggaaga aaaacactct catccatata tctgacaaat 86700
ggcctgtatc cagagtatag aaacatttct cccactcact aatcagagga caaacaacct 86760
aatcaaaatg ggcaacaggc ttgaatagtc atttcttagg agaagatgca cacagagcca 86820
acaatcacct gaaaaagtgc acaacatctt agccatcaaa aatcaagagt tataaccctc 86880
ataagatgac actgaacatc cagtgtacat ggatatcatt aagaagacac aataataagt 86940
ggtgtcaccg atttggagct agaatgtgcc actctctcat atgctggtgg aagttcaaaa 87000
tcatacaaca aattaaaaaa tcagtctgat gctttcttat aaagttcgat aaatatgcat 87060
ctatcctaca aacctgtaat tctattcttg aatatttacc ccccaaaatg aaaacataag 87120
tccacaaaaa tctatataaa tattcatagc agctttatgt tttataaact caaaataaaa 87180
actatttcaa tgttttcatc aaaagaaaat gaaaactatt taaatggttt catcaaaaga 87240
aaatgaaaaa agaatttcca gtatatttat acaaaggaat actattcatc aacaaggaac 87300
aagttactga tagtctcaga agcatgaaca aacctcaaaa atatattaag gaaagaagcc 87360
agacgtcaaa gtgtatagtc tgtatgagtc cattcatgtg agtttataga aaacacaatt 87420
tatggtgaaa gaaaccaata gcatttgaca ctggccgtgg gaagagggta gcagagattg 87480
attgagcagc cacacaaggg agtttctggg gtggtgaaaa tgttctgcat tgtgagggca 87540
gtgtgggcta cacaagtata tgtatttatc aaatctcatc cagctacatt taagatctgt 87600
gcatctcact ctatgtgaaa atatactcaa ctgaaaaaca gagcaggtat ctgtttcagg 87660
tgctacatca cttgatacgt ccagttgtgt taaaaaccac tgcctaacat cctcaaatgg 87720
gggatctggg cttgagacta ggtcacatgt gtagagtctc tacagagacc gtgttggatt 87780
cccatgctcc ataatacgtt ccaagttttc tcagacagcc acaggtcatg aatgtgagga 87840
ttctgagagg ttggagcaac gttcttggga ggcataatgg ggaaggcatt ctccaagatt 87900
cctccagcct ggggtcttca cctgctgtgc ctcttactgc attgttttct gactcatcca 87960
tagccacttg accccttcag atcccatagt ctacctagcc gtctcccttt atgccttggg 88020
tcccgctgtt ctttcaactc atcacccatt ccttcagtcc cagagtggct gcagccagca 88080
gaggatggac tgagagcagg agaggaggtc gtgcccatga acccatccta gagaagcagc 88140
atcctgcctg ggagctagtt ttccagggaa gcttttataa gtcctgtaga cccaaaccca 88200
cttgctctac cagatacagt atttatagta atactatttt catgattatt ttatattgca 88260
aatgtagagc atttatgcta cactatgagt aaatagagta agggggctgg catgggaatt 88320
atataatctt ggatgccact tcttccttgg ggaaatgtat ttgagttcca acttacatat 88380
tactatatag tcttatagag agagagacaa agagctagac agacagagat atctttgtat 88440
gtgcattaaa aaatctaaga tacatatttc aaaatctgtg tcatttattc tggaggaaag 88500
tatttggcag aaggtgaaag gaagatattc tgatcctttc ttgtacagac atgtattatc 88560
tcagttttca tagagagcat atactacttt tgatgtttta aaacaaaaat tataatctgt 88620
gatgtgtcca cagttgttta aaagttgaag ctgaagacca tttgtgcttg tggcaatatt 88680
attgtggtat aatgggaata tttcaaaggc acttgttaac actttgttac agcaaaatgt 88740
agagggcgct aagtgccctt gaatattctc ccatctctgg tgacctgtgt tgttttgaaa 88800
tttgcagtgg cctgaccagg aactactgca ggaatccaga tgctgagatt cgcccttggt 88860
gttacaccat ggatcccagt gtcaggtggg agtactgcaa cctgacacga tgtccagtga 88920
cagaatcgag tgtcctcaca actcccacag tggccccggt tccaagcaca gaggctcctt 88980
ctgaacaagg taagaaattt gtggttagac atctatatac tgggatgaaa aaccatggaa 89040
aatcttactg atgcagaagc cttcagtggt acactggagg gttggttgag ggtctgcaat 89100
gtggaggaaa gcctcagcgc cctctctggg ggatccagaa ctgtgatttt tggcacgctg 89160
tgaggaggca gtgtctttag gaagggcacg gtgtctttag gaagggcaca gacccgccag 89220
ggcactggac ttaccactcc cctggttatt aaatgggtca tttcagtgtc ctagccaaaa 89280
tggatattct aacagcctgc caaatatgtg aagatttcca agccaataag cctttccagt 89340
gatttaaagt agactttttt cattgcaatc tacagtttgc agtttcttaa gaacatggcc 89400
tttgagtatg atatcctaga gaaacctaag gagactgcat tatttttcta ttgtcctggg 89460
gctgcatagc aggaggtaac caacgaatgc tgtctctccc tggcctatct cagtctttca 89520
caggctctgt tcacctcagc tttgaagtta gaaatttcta ggtgttcttg cctcttcttc 89580
tcatgaaacc tgcattggca gtgagtctac agaagaagag gaagagaatt ctgctttgtt 89640
acaattcagg actctgggca ctagaagatt ccctatctct cctccaaggg aataagttgt 89700
ttgtctctaa ccctccttga gaaacaatga gtctttgcct gcactcctaa atgtaggatg 89760
atttcctgcc caaattttca aaagattaag ccttttgcct tggtatgagc aatggtctag 89820
ggaaatgcgc aagggtcttg tgtcggcccc tgactgacca ccagtcacct cctacagcct 89880
gcaccaagga atgcattgca ttctggtctt ctgccctgtg gttctcatga aaaccagcag 89940
agattcatat gatggagctg cacatgaatg taatttccaa tgtccagcat tctcctctgt 90000
tctttatctt tagatttaaa aataatgttt ctatgaactt attaaaattc tagaatacta 90060
tgaatctact gggtcttttc acatcctttt gctactagta gaaaaaagaa tagtaataat 90120
tttcagaggc tactgtccag tatgtgacat aaattgtctc ccatgtttct ctgctcatgc 90180
aattactgag tatgatttat tttattttaa tttcagcacc acctgagaaa agccctgtgg 90240
tccaggattg ctaccatggt gatggacgga gttatcgagg catatcctcc accactgtca 90300
caggaaggac ctgtcaatct tggtcatcta tgataccaca ctggcatcag aggaccccag 90360
aaaactaccc aaatgcgtat gtatttgatt aaaaccataa gaggagcaac agccaactca 90420
aatattggtt agaagaccca tgctttaagc tcacttccta gggacaaatt tctcttagac 90480
tcacattttg gcaaaatgtc tcaggacctt tgcttttgag caaagagtct aagagaagag 90540
aaattttagg cctgctattt ttcctaatag ttttatggaa ggagtagaat atacggaagt 90600
ggcgaagtca tattaatgta aagctcagaa gataaatgac caaagcttaa acacagcacc 90660
attccacaat gcccactaaa aatcaatgtc atctttcact cgtgcaattc tgtcattcta 90720
aatttcaatt cccgaaggtt tgtttgccat ttttgtcatg ggtaataagt aaaaaaaaaa 90780
aaattaagat gtgtatatat atatatatat atatatatat acacacacac acacacacac 90840
aaacatctga atatttatat atatgtctga atatttatat acttgtgtat aaaacttata 90900
tttaaatttt tgcataaatt tatatatttt taatatttca ttaaaaatta tattgtttca 90960
ctatgtatgt ctgagtattt ttatatattt taatataaca ttttaaatat ttatatataa 91020
atattcaggt atgtaactga atattcattt acacacacaa atatatgtgt gcatgtgtgt 91080
atatatatat atacccatat atatatatat atatatatat acatatatat atatatatat 91140
atatgtatat atatatatat atatatatat acacacacac acacacacac atacatacag 91200
gtataaacac actgggcctg aagcaccagt ggtctgaaag gacatgtgtt gccaggactt 91260
gaagagcaaa agcaggaagg cggatgagag tcaggaggta cacaaacgct gaaaagtaaa 91320
atggacaagt acatggacaa aaagcaggta taagcataac agccttttgg aagtaaatga 91380
ctataaaata tatgaaaata ctgttttcac aagttgcaca acagatagta gtgtattgag 91440
ataatttaga acagaaaaca aatgtgatca accccataag tgtgctgtat ttcatcatgg 91500
attgaaggaa aaagagatgg agcccaagaa gaccacagca gtcttgatga actgagagac 91560
accagagttt gggattacaa aggcagctgg gattttctac acttggtaat aatgagaaag 91620
aatttgtgga gataaagagc tacagtcatg tacctagaag tcacctcagt gtaatataaa 91680
tctgcatatg cacagggagt gattccacaa tgaaagtagg acaaagaaca gctactgggg 91740
aaagaataac tacaagggaa caatgagttc aatggagatg gcagagctca caaagcactg 91800
ggggatattt gagttcttac cagctagaaa agagacctca ttgcaaatct tgggcattca 91860
gtagagaccc cagaaaagcc actctttgga aacagagttg atgtatttta agagcaaaat 91920
ctactccaca aaaatcctag caaaattgaa aagcaagtca gaaagaccaa aatcctctca 91980
acataaatta gttgcccatc agaagaaagc ttaacctctt cataggtaaa caataaaatc 92040
aaattgctca gttatctggc atccacaata tgtgacataa atttaaaaat ttactagaca 92100
tacaagaagc atttagtgtg atccataacc aggagaaaaa tcattcaata caaatagacc 92160
cagaaatgac agaaatgata gaattagcaa aaacatttaa aatatacata tgatcatttg 92220
atcttgtgat cagatatcac aagagaagaa agagatactt gaacagaaaa aatgcctgaa 92280
gcaatgatgg ctgaaaactt tccaaatatg aagaaaaaaa agctcacaga ttcaagaaaa 92340
ctaatcaatc agaaatatga ttttgaaaag taaaaatgta tgatttactt tggcaaatct 92400
tcttggttaa attgtctaaa atcaaagaaa gctaggaaaa ttttataagc cagaggaaaa 92460
aagattgttt atataaagga acagttacac aaatgactga tgccttctca tcagaaacaa 92520
tgaaagtcag aaacaataaa gtaacatctt taaagtaata gaagaaaaac ccaagaggtg 92580
agggatcgtg gcagacagga ggcaggacta gattgcagct ctggacagag cagcatgcag 92640
aggctcatat tgtgaatttt agccccatat tgactgcaag aacagaccag caatcctgag 92700
aggacccaca gaccgtgtga aggaagcaga ctgctcctgc aggataaggg agacacccca 92760
aatactgtga gttccccaac tgcagaagtg gaaaagggag gccttactcc ctcaaacaca 92820
ccccacaact ggagaagctg aaagtctgtt tgcaggagaa gttcccaact ttacctgggc 92880
ctcagtaaat ttagagagct gagccaagca aaatataggg gtagaggaag cagcagagaa 92940
gacctcagag cttgctggat ccccaagcag ctcattcctg cctggcacca cagagatcca 93000
tcagaagtgt ggccaaagga acagagggta aaactccaca tggaggactg ctctacctga 93060
actttctaac aatttgaaca gggggagaag cctcctggcc agaacttggg ggagggcatg 93120
aatctggttt gcagacttca caggtggggg aaggactaaa gcccttttct ttcacagctg 93180
ggaggtggaa agcctcaggc aagttttcaa gcctgacttt ccccccacct ggaaacagac 93240
ttggagctgt tgcggggttg ggggcatggt gggagtaaga ccagcccttc agtttgcatg 93300
ggtgctgggt gaggcctgtg actgacagct tccctccact tccccgacaa ctcagatgac 93360
tcagcagagg cagccataat cctcctaggt acacaactcc agtgacctgg gaacttcacc 93420
cccacaccat acagaagctt cagtaagacg tgcccaagga aagtctgagc tcagacacgc 93480
ctagtcccac ccccaactga tggtccttcc ctacccaccc tggtagcaga agacaaagag 93540
catataatct ttggagttct agggcccacc cacctctagt ccctctccac actagtatag 93600
ctgatgcagg aggccaacca gcacaaaaat agagcattaa accaccaaag ctaggaaccc 93660
ctatggagtc cattgcaccc tcctccacct ccaccagaac aggcactggt atccacagct 93720
gagagaccca tagatggttc acatcacagg actctgtaca gacagtcccc agtaccagcc 93780
cagagctggg tagacttgct aggtggcaag acccagaaga caggcaataa tcactgcagt 93840
tcagctcaca ggaagccaca tccataggaa aagagggaga gtactacatc aagggaacac 93900
cccatgggat aaaaacatct gaacaacagc cttcagccct accttccctc tgacacagtc 93960
tacccaaatg agaaggaacc agaaaaccaa ccctggtaat atgacaaaac aaggctcatc 94020
acactcccag ttcaccagca atggatccaa accaagaaga aatccctgat ttacctgaaa 94080
gagaattcag gaggttagtt attaagctaa tcagggaggg accagagaaa ggcaaagccc 94140
aatgcaagga aatccaaaaa aaaaaaggta taagaagtaa aaggtgaaat attcaacaaa 94200
atagatagct taataaaaaa acaataaaaa attcagtaga ctttggacac acctttggaa 94260
atgtgacatg ctctggaaag tctcagcaat agaactgaac aagtagaaaa aataaattca 94320
gagctcaaag acaaggactt caaattaacc caatccaaca aagacaaaga ataaaggata 94380
agaaaatatg aacaaagcct tcaagatgtc tgggattatg ttaaatgacc aaatataaga 94440
ataatcgtgg ctcctgagga aaaagacaat actaaaagct tggaaaacat atttggggga 94500
ataactgggg aaaacttacc tggccttgct ggacacctag acatgcaaat acaagaaaca 94560
caaagaacat gtaaatacaa gcagcacaaa gaacacctgg gaaattcatc acaaaaagat 94620
cttagcctag gcacattctc atcaggttat gcaaagttaa gacgaaggca agaatcttaa 94680
gagctgtgag acagaagcac caggtaatgt ataaaggaaa ccctatcaga ttaacagcca 94740
gtttttcagc aggaactgta caagctataa aggattggag ccctatcata gcctcctcaa 94800
acaaaacaat tatcagtcaa gaattttgta tccagcgaaa gtaagcatca tatatgaagg 94860
aaagatacag tcgtttttgg acaaacaaat gctaagagaa ttcaccatta ccaagtcacc 94920
actagaagaa ctgctaaaag gagctctaaa tcttgaaaca aatcctagaa acacatgaaa 94980
acagaatctc tttaaagcat aaatcacaca ggacctataa aacaaaagta caagttaaaa 95040
aacaaaaaca aaaaacaaaa ccaaagtacg gaggcaataa agaatatgat gaatgcagtg 95100
gcacctcaca tttcaatgct aaaattgaat ctaaatggcc taaatgctcc acttaaagga 95160
tacaaaaaga gttggtggct ggcaagatgg ctgaatagga acagctccag tctgccgctc 95220
cccgtgagat caacacatag ggtgggtcat ttctgcattt ccaaccaagg tacccggctc 95280
atctcattgg gactggttag acagtgggtg cagcccacag agggtgacct gaagcagggt 95340
ggggtgtcac ctcacctggg aagtggaagg ggtcagggaa ctccctcccc tagccaaagg 95400
aagccgtgag ggactgtgcc gtgaagacca gtgcattctg gcacaaatac tatgcttttc 95460
ccacggtctt tgcaacctga agaccaggag attcccttgg gtgcctacac caccagggcc 95520
ctggatttca agcccaaaac tgggctggca tttgggcaga cactaagcta gctgcaggag 95580
ttttttttca taccccagtg gtccctggaa tgccagcaag acagaaccat tcacccccgt 95640
gaagaaaggg ctgaagccag ggagctaagt ggtctttctc agtggatccc acccccatgg 95700
agcccagcaa gctaagctcc actggcttga aattcttgct gccagcacag cagtctgaag 95760
ttgacctggg acgctcaagc ttggtgggag gaggggtatc cacaaatact ggggcttgag 95820
taggaggttt tcccctcaca gtgtaagcaa aaccgctagg aagtttgaac tgggcagggt 95880
gcactgcagc ttggcaaagc cattgtagca agagtgcctc tctagattcc tcctctctgg 95940
gcagggcatc tctgaaagaa aggcagcagc cccagtcaga agcttataga taaaactccc 96000
atctccctgg gacagagcaa ctggaggaag gggtggctgt gagtgcagct ccagcagact 96060
tagtttcctg cctgccagct ctgaaaagag caccagatcc cccaacacag cactagagct 96120
ctgataaggg acagactgcc tcctcaagtg ggtcctggtt tcagaagata ataagaaact 96180
cctctgagct aaaggagcat gttctaacac aatgcaagga agctaagaac cttgaaaaag 96240
gtcagaggaa ttgctaacta cagtaagcag tttagagaag aacataaatg accttaggga 96300
gctgaaaaac acagcacgag aacttcatga cacatacaca agtatcaata gcaaaatcga 96360
tcaagtggaa gaaaggatat cagagattga aaatcaactt aatgaagtaa agcgtgaaaa 96420
caagattaag gaataaagaa tgaaaaggaa tgaacaaatc ctccaagtat gggactatgt 96480
gaaaagattg aacctacgtt tgattggtgt acctgaaagt gatgggagaa tggaaccaag 96540
ttggaaaaca ctcttcagga tattatccag gagaacttcc ccaacctagc aagacaggcc 96600
aacattcaaa ttaaggaaat acagagaata ccacattcaa attcaggaaa tacagagaac 96660
accacaaaga tactcctcaa gaagagcaac ctgaagacac ataatcgtca gattcaccaa 96720
ggttgaaatg aaggaaaaaa atgttgaggg cagccagaga gaaagtttgg gttacccaca 96780
aagggaaccc catcagacta acagtggatc ttcctgcaga aactctacaa gccagaagag 96840
agtgggaggc caatattcaa cattcttttt tactattatt atactttaag ttctagggta 96900
catgtgcaca aggtgcaggt ttgttacata tgtatacatg tgccatgttg gtgtgctgca 96960
cccattaact cttcatttac attaggtata tctcctaata ctatccctcc ccactccccc 97020
catcccatga caggccccgg tgtgtgatgt tccccactct gtgtccatgt actctcattg 97080
ttcaattccc acctatgagt gagaacattc ggtgtttgga tttctgtcct tgtgatagtt 97140
tgctgagaat gatggtttcc agcttcatcc acatccctac aaaggacatg aagtcatcct 97200
tctttatggc tgcatagtat tccatggtgt atatgtgcca cattttctta atccagtcta 97260
ccattgatgg acgtttgtgt tggttccaag tctttgctat tgtgaatagt gccgcaataa 97320
acatatgtgt gcatgtgtct ttatagcagc atgatttata atcctttaga tatatatcca 97380
gtaattgtat ggctgtgtca aatggtattt ctagttctaa atccttgagg aatcaccgca 97440
ctgtcttcca caatggttga actagtttac agtcccacca ccagtgtaaa aatgttccta 97500
tttctccaca tcctctctag catctgttgt ttcctgactt tttaatgatc accattctaa 97560
ctggtatgag atggtatctc attgtggttt tgatttgcat ttctctgatg gccagtgatg 97620
gtgagcactt tttcatgtgt ctcttgactg cataaaagtt ttcttttgag aattgtctgt 97680
taatatcctt tgccaacttt ttgatggggt tgtttgattt tttttcttgt aaatttgttt 97740
atgttctttg tagattctgg atattagccc tttgtcagat gggtagattg taaaaatttt 97800
ctcccattct gtagcttgcc tgttcattct gagggtagtt tcttttgctg tgcagaagct 97860
ctttagttta attagatccc attggtcaat tttggctttt gttgctattg cttttggtga 97920
tttagtcatg aagtccttgc ccatgcctat gtcctgaatg gtattgctta ggttttcttc 97980
tagggtttat atggttttag gtctaacatt taagtcttta atccatcttg aattaatttt 98040
tatataaggt gtaaggaagg gatccagttt cagctttcta catatggcta ggcagttttc 98100
ccagcaccat gtattaaata gggaaacctt tccctatttc ttgtttttgt caggtttgtc 98160
atagatcaga tggttgtaga tgtgtggtat tatttctgag ggctctgttc tgttccattg 98220
gtctatatct ctgttttggt accagtacca tgctgttttg gttactgtag ccttgtaatg 98280
tagtttgaag tcaggcagag tgatgcctcc agctttgctt ttttggctta ggattgtctt 98340
ggcaatgcat gctctttttt gttccatatg aactttaaag tagttttttc caattctgtg 98400
aagaaagtca ttggtagctt gatggggatg gcattgaatc tataaattac cttaggcagt 98460
atggccattt tcacaatatt gattcttcct atccatgagc atggaatgtt cttccatttg 98520
tttgtgtcct cttttatttc attaagcagt ggtttgtagt tctccttgaa gaggtccttc 98580
ccatcccttg taagttggat tcctaggtat tttattctct ttgaagcaat tgtgaatggg 98640
agttcatcca tgtccctaca aaggacatga agtcatgtat gggaatgctt gtgatttttg 98700
cacattgatt ttgtatcttg agactttgct gaagttgctt atcagcttaa ggagattttg 98760
gtctgagaag atggggtttt ctaaatatac aatcatgtca tctgcaaaca gggacaattt 98820
aacttcctct tttcctaact gaataccctt tatttccttc tcctgcctaa ttgccctggc 98880
cagaacttcc aacactatgt tgaataggag tggtgagaga gggcatccct gtcttgtgcc 98940
agttttcaaa gggaatgctt ccagtttttg cccattcagt atgatattgg ctatgggttt 99000
gtcataaata gctcttatta ttttgagata tgtcccatca atacatagtt tattgagagt 99060
tcagcatgga gagctgttga attttgtcaa aggccttttc tgcatctatt gagataatca 99120
tgtggttttt gtctttggtt ctgtttatat gatggattac atttattgat ttgcatatgt 99180
tgaaccagcc ttgcatccca gggataaagc caacttgatc atggtggata agctttttga 99240
tgtgctgctg gattcggttt gccagtattt tattgaggat ttttgcatca atgttcatca 99300
tggatgttgg tctaaaattc tcatttttgt tgtgtctctg ccaggatttg gtatcaggat 99360
gatgctggcc tcataaaatg agttagggag gattccctct ttttctatga ttggaatagt 99420
ttcagaagaa ttggtaccag ctcctctttg tatctgtggt agaattcggc tatgaatctc 99480
tcctggactt tttttggttg gtaggctctt aattattgcc tcaatttcag agcctgttat 99540
tggtctattc aaggattcaa tttctttctg gtttagtctt ggtagggtgt atgtgtccag 99600
gaatttttcc atttcttcta gattttctag tttatttgca cagaggtgtt tataatattc 99660
tctgatggta gtttgtattt ctgtgggatt ggtagtgata tcccctttat cattttttat 99720
tgcatctatt tgattcttct ctcttttctt ctttattagt cttgctagtg gtctatcaat 99780
tttgttgatc ttttcaaaaa accagctcct ggattcattg atgttttgaa ggtttttttg 99840
tgtctctatc tccttcagtt ctgctctggt cttagttatt tcttgccttc tgctagcttt 99900
ttaatgtgtt tgctcttgct tctctagttc ttttaatggt gatgttaggg tgtcaatttt 99960
agatctttcc tgctttctct tgtgggcatt tagtgctgta aatctccccc tacacactgc 100020
tttaaatgtg tcccagagat tctggtatgt tgtgtctttg ttgtcattgg tttcaaagaa 100080
tatctttatt tctgccttca tttcgttaca tacccagtag tcactcaggt gcaggttgtt 100140
cagtttccat atagttgagc agtttttaat gagtttctta atcctgagtc ctagtttgat 100200
tgcactgtgg tctgagagac agtttgttat aatttctgtt cttttacatt tgctgaggaa 100260
tgcctcactt ccaactatct ggtcaatttc agaataagtg cgatgtggtg ctgagaagaa 100320
tgtatattct gttgatttgg ggtggagagt tctgtagatg tctattaggt ctgcttggtg 100380
cagagctgag ttcaattcct ggatatccat gttaactttc tgtctcattg atctgtctaa 100440
tgttgacagt ggggtgttaa agtctcccat tattattgtg tgggagtcta agtctctttg 100500
taggtctcta aggacttgct ttatgaatct aggtgctcct gtattgggtg catatatatt 100560
taggatagtt agctcttctt gttaaattgg tccctttacc attatgtaat ggccttcttt 100620
gtctcttttg atctttgtta gtttaaagtc tgttttatca gagactagga ttgcaacccc 100680
tgcttttttt gttgttttcc atttgcttgg tagatcttcc tccatccctt tattttgagc 100740
ctatgtgtgt ctctgcacgt gagatgtgtc ttcagaatac agcacactga tggatcttga 100800
ctctttatcc aattttccag tctgtgtctt ttaattggag catttagccc atttacattt 100860
aaggttaata tttttatgtg tgaatttgat cctgtcatca tgatgttcgc tggttatttt 100920
gctcattagt tgatgcagtt tcttcctagc atcgatggtt tttacaattt ggcatgtttg 100980
tgcagtggct gataccgatt gtttctttcc atgtttagtg cttccttcag gagctcttgt 101040
aaggcaggcc tggtggtgac aaaatctctc agcatttgct tgtctgtaaa ggattttatt 101100
tctccttcac ttatgaagct tagtttggct ggatatgata ttctcagttg aaaattcttt 101160
tctttaagaa tgttgaatat tggctgccac tctcttctgg cttgtagagt ttctgctgag 101220
agatctgctg ttagtctgat gggcttccct ttgtgggtaa cccgaccttt ctggtgaatc 101280
tgacaattat gtgtcttgga gttactcttc tcgaggagta tttttgtggc attctctgta 101340
tttcctgaat ttgaatgttg gcctgccttt gtaggttggg gaagttctcc tggataatat 101400
cctgaagagt gttttccaac ttggttccat tctcctcgtc actttcaggt acaccaagca 101460
gatgtagatt tggtcttttc acatagtccc atatttattg gaggctttgt tcatttcttt 101520
ttactccttt ttttctctaa acttctcttc tcgcttcatt tcattcattt gatctttaat 101580
cactgatacc ctttcttcca cttgattgaa tcaactactg aaacttgttc atgtgtcacg 101640
tagttctcgt gccatggttt tcagctccat tagatcattt aaggtcttct ctatgctgtt 101700
tattttagtc tgccattcat ctaaactttt tcaaggtttt tagcttcttt gcaatgggtt 101760
cgaacatcct tctttagctc ggagaaattt gttattacag atcgtctgaa gccttcttct 101820
ctcaactcat caaagtcatt ctctgtccag ctttgttctg ttgctcgtga ggagctgcgt 101880
tccttcggag gagaagaggc accctgattt ttagaatttt cagctgttct gctctggttt 101940
ctccccatct ttgtggttta tctacctttg gttcttgatg atggtgatgt acagatgggg 102000
ttttggtgtg gatgtctttt ctgtttgtta gttttccttc taacagtcag gaccctcagc 102060
tgcaggtctg ttggagtttg ctggaggtcc actccagtcc ctgtttgcct gggtattacc 102120
agtggaggct gcagaacagc aaatattaca gaacagcaaa tgttgctgcc tgattcttcc 102180
tctggaagct tcatctcaga ggggcaccca gctgtatgag gtgtcagttg gcccctactg 102240
ggaggtgtcc cccagttagg ctactcgggg gtcacggacc cacttgagga ggcagtctgt 102300
ccattctcag atctcaaact ctctgctggg agaaccacta ctctcttcaa agctgtcaga 102360
cagggatgtt taagtctgca gaagtttctg ctgccttttg ttcagctatg ccctgccccc 102420
agaggtggag tctacagagg caggcaggtc tccttgagct gtggtgggct ccacccagtt 102480
tgagcttcct ggtcgctttg tttacctact caagtctcag caatggcaga cgcccctccc 102540
ccagctttgc tgccgccttg cagttcggtc tcagactact gtgctagcag ttcaatctca 102600
gactgctgta ctagcagtga gcaaggctct gtgggcatgg gaccctctga gccatgtgca 102660
ggatataatc tcctggtgtg ccgtttgcta agaccattgg aaaagtgcaa tattagggtg 102720
ggagtgtccc gattttccgg gtacatctgt catggcttcc cttggctagg aaagggaatt 102780
ccctgacccc ttacacttcc cgggtgaggc aatatcccgc cttgcttcgg ctcactctcc 102840
gtgggctgca cccactgtct gacaagcccc ggtgagatga acccagtacc tcagctggaa 102900
atgcagaaac cacccatctt ctgctttgct catgctggga actgtggact ggagctgttc 102960
ctattcggcc atcttgaaac ctcccctctc tcacgatcac aaggtcccac aataggccgt 103020
ctgcaggctg aggagcaaga aaagccagtc tgaattccaa aactgaagaa attggagtct 103080
gatgttcaag ggcaggaaac atccagtgcc aaagaaagat gtagaatatt caacattctt 103140
aaagaaaata attttcaacc tagaatttca tatccagcca aactaagctt tataacaaag 103200
gagaagtaaa atcctttaca aacaagcaaa tgctgaggaa ttttgtcaac accaggcctg 103260
ccttacaaga ggtcctgaag aaaacactaa atatggaaag gaaaaaccag taacagctac 103320
tgcaaaaaca taccaaattg taaacaccat caacactata aagaaactgc atcaactaat 103380
gggcaaaata gccagctagc atcataatga caggatcaaa ttcacacata acaatattaa 103440
ccttaaatgt aaatgggcta aatgccccaa ttaaaagaca cagactggga aattgaataa 103500
agagtcaaga cccattggtt tgctgtgttc agaagaccca tctcagggtg aaaagacata 103560
catgggctca aaataaagaa atgaaggaat atttaccaag caaatggaaa gaaaaaaaaa 103620
gcagcggttg caatcttagt ctttgatgaa acagacttta aaccatcaaa gatcaaaaga 103680
gacaaaggag ggcattacct aatggtaaaa gtatcaatgc aacaagaaga tctgactgtc 103740
ctacttatat atgcacccaa tacaggagca cccagattaa taaagcaagt tcttagagac 103800
ctacaaagag acttagactt ccacacaaaa atagtgggag actttaacac cccacagcca 103860
atattagatc gacgtgacag aaaattaaca aggatattca ggacgtgaat tcagctctgg 103920
accaagctga cctaatagac atctacagaa ctcgacacca caaatcaaca gaatatacat 103980
tcttctcagc accacattgc acttattcta aaattgacca cataattgga agtaaaacac 104040
ttctcagcaa atgccgtaga atggaaatca taacaaacag tctctcagac caaagtgcaa 104100
tcaaactaga actcaggatt aataaactca ctcaaaacca cacaactata tggaaactga 104160
acaacctgct cctgaattac tactgggtaa ataacaaaat taaggcagaa gtagataagt 104220
tcttagaaac caaagagaac aaagacacaa tgtgccagaa tctctggtac acagctaaag 104280
ccatgtttag agggaaattt atagcactaa atgcccacag gagaaagcgg gaaagatcta 104340
aaatcaacac cctaacatca caattcaaag aaccagagaa gcaagagcaa acaaatacaa 104400
aagctagcag aagacaagaa ataactaaga tcagagcaga actgaagggg ataaagacac 104460
gaaaaccctt taaaaaatta ataaatccaa gagctggttt tttgaaaaga ttaacaaaat 104520
acatagaagc ctagccagac taataaagaa gaaaatagag aagaatcaaa tagacacaat 104580
aaagaataat aaaggggata tcaccaatga tgccacagaa atacaaacta ccatcagaga 104640
atactttaaa cacctctatg caaataaaat agaaaatcta aaagaaatgg ataaattcct 104700
ggacacatac accctcccaa gactaaacca ggaagaagtc aaatccctga atagaccaat 104760
aacaagttct gaaatcgagg cagtaattaa tagcttacca accaaaaaaa gcccagacca 104820
gagggattaa cagtcaaatc ctaacagagg tacaaagaag agctagtact attccttctg 104880
aaactattcc acacaataga aaaagaggga ctcctgccta actcatttta tgaggccagc 104940
atcattctga taccaaaacc tggcagagac acaacaagaa aagaaaattt caggccaaca 105000
tccctgatga acatcaatgt gaaaatcctc aataaaatac tggcaaactg aatccagcag 105060
cacatcaaaa agcttatcca ccatgatcaa gttggcttca tccctgggat gcaaggctgg 105120
ttcaacatat tcaaatcaat aaacataatc catcacataa acagaaccaa tgacaaaaac 105180
cgtatgatta tcgcaataga cgcagaaaag gcctttgata aaattcaata cccaatcatg 105240
ctaaaaactc ttaataaact aggtattgat ggagcatgtc tcaaaataat aagagctact 105300
tatgacaaat gcatagccaa tatcatactg aatgagcaga agctggaagc attccctttg 105360
aaaaccagca caagacaagg atgccctctc tcaccactcc tattcaacat agtattggaa 105420
attctgtcca gggcaatcag gcaagagaaa gaaataaagg tattcaagtg ggaagagagg 105480
gagtcaaatt atttctcttt gcagatgaca tgattgtata tttagaaaac tctatcatct 105540
cagcccaaaa tctccttaag ctgataagca acttcagcaa agtctcagga tacaaaatca 105600
atgtgcaaaa atcacaagca ttcctataca ccaataagag acacagagcc aaatcctgag 105660
tgaattccca ttcacaattg ctacaaagag aataaaatat acctaggaat ccaacttaca 105720
agggatgtga aggacctctt caaggagaac tacaaaccac tgctcaagga aataagatag 105780
gacacaaaca aatggaaaaa cattccatgc taatggattg gaagaatcaa tattgtgaaa 105840
attgccatac tgcccaaagt gatttataga ttcaatgtta tccccatcaa gctaccattg 105900
atttcttcac ataattagaa aaaactactt tcaatttcat atggaataga aaaagggcct 105960
gtatatccaa gacaacctaa gcaaaaagaa caaagctgga ggcatcatgc tatctgactt 106020
caaaatatac tacaaggcta cagtaacaaa aacagcatgg tatggtactg gtaccaaaac 106080
agatatatag accaatagaa cagaacagag gcctcagaaa taacaccaca catctacaac 106140
tattggatct ttgacaaact ggacaaaaat aagcaatggg gaaaggattc cctatttaat 106200
aaatggtgtt gggaaaactg gctagccata tgcagaaaac tgaaactgga tcccttcctt 106260
acaccttata cacaaattaa ctcaagatag attaaagaat taaatgtaag acctaaaacc 106320
ataaaaaccc tagaagacac tttgggaggc cgaggtggat ggatcacgag gtcaggagat 106380
cgagaccatc ttggctaaca cagtgaaagc ccatctctac taaaaataca aaaaattagc 106440
tgggtgtggt cgtgggcacc tgtagtccca gctacttggg aggctgaggc aggagaatgg 106500
catgagctga ggaggttgag cttgcagcaa gccaagattg tgccactgca ctccagcctg 106560
ggcaacagag tgagactcca tcaaaaaaac aaaaacaaaa acaaaaaatc aaaccctaga 106620
agaaaacata ggcaatacca ttcaggacat aggcatggga gaagacttca tgactaaaac 106680
agcaaaacca atggcaacaa aagccaaaat ttacaaatca gatctaatta aaataaagag 106740
cttctgcaca gcaaaaaact ctcatcagag tgaaaaagca acctatggag aaaaattctg 106800
tggtctagcc atctgacaaa gggctaatgt ttagaatgta caagcaactt aaacaaatgt 106860
acaagaaaaa aaaaacaacc ccatcaaaaa gtgggcaaag gatatgaaca gacacttctg 106920
acaggaagac ctttatgtgg ctgacaaaca tgaaaaaagc tcatcatcac tgttaattag 106980
agaaatgcaa atcgaaacca caatgagata ccatctcatg cccgttagaa tggcgatcat 107040
taaaaagtca ggaaacaaca gatgctgaag aggatgtgtg gagaaagagg aacacattta 107100
cactgttggt gggagtgtaa attagttcaa ccattgtgga agacagtgcg gtgattcctc 107160
aaggatctag aaccagaagt accatttgac ccagcaatcc cattactggg tatataccca 107220
aaggattata aatcattcta caataaagac acatgcacac gtatgtttat tgtagcacta 107280
ttcacaatag caaagacttg gaaccaactg aaatgcccat caatgataga ctggataaag 107340
aaaatgtggc acatatacac tgtggaatac tatgcagcca taaaacagga tgagttcatg 107400
tcttttgcag ggacatggat gaagctggaa accatcattc tcagcaaact aacacaagaa 107460
cagaaaacca aacaccatat gttctcactc ataagtgtga gttgaacaat gagaacacat 107520
ggacacagga aggggaacat cacacacagg ggcctgttgg ggagttgagg ctaggggagg 107580
gattggatta ggagaaatac ctaatgtaga tgatgggttg ctgggtgcag caaaccacca 107640
tgacacgtgt atacctatgt aacaaaccca cacattctac acatgtatct cagaacttaa 107700
agtataataa taataagata cagaactgca gaatgaataa gaactcacca accatctgct 107760
gccttcagga gactcattta agacataagg actcacataa acttaaagta aatgggtgga 107820
aataataata agtggtgtca ctgatgtgga ggtagattat aaaactctta tcatatgctg 107880
gtggaagatc aaaatgataa aacgaattaa aaaatcagtc agatggtttc ttaaaaagtt 107940
ccatcaatat gcctctatct tacaaacctg caattctatt cctgaatctt tatcccaagg 108000
aaatgaaaaa gtaagtccac aaagagttct atatgaatat ttataggagc tttatttatt 108060
ataattcaaa ctgtaaaaat aatttcaatg ttcatcaata acaaaatgaa aaaataattt 108120
gcaacctact ggtacacttg aatactattc agcactgagt atcttaaata gcatggatgg 108180
agctcaaaaa tatactcagg aaagaagcca tgtatattct gtatgagttc atttacatga 108240
gatcatttac atttcctcca aaagaggaaa aactaatttc tgttgaaaga aaccaatgta 108300
tttgcctctg gcagtggtaa gggggtagca cagattaatt gggtagggac tcaagagagt 108360
ttctggggtc acagaaatgt tccgtgtggt gatgggagtt tgggctccac aggtataggt 108420
gttgatccaa aatcatcaaa aaaacaacat tgcagatctg tgcatctcac tctgtgggaa 108480
agtatatctc aactgtaaaa agggcagaaa ttgcttttaa acgctcagcc ttttagcaca 108540
tccagttgct tggagaacca gcttactcaa atgggggtct aggctggaga ctaggtcaca 108600
ggcatagagt ctctaaactt tcccatggca cataatacgt ttcaggtttt ctcagagagc 108660
tgcaggttag taatctgagg attctgacaa gttgggtcaa cgttcctagg aggcatgaat 108720
gggagtgcat tctctaagat ccctccaccc cagggtcctt gctttctgtg cctcttactc 108780
cattgttttc tgactcctct gtagccactc gacctcttca gatcccattg tctacccagc 108840
catcgccctt tatgacttgg gtcccactgt tctttcatct catcctccat tccctcagtt 108900
tcggagtggc tgccgctagc agaggatgga ctgagagcag gagaggtggt cctgcccagg 108960
aacccatcct agagaaatgg catcctgtct gggagctagt tttttagggc aggttttata 109020
agtcttgtaa agccagacac acttgatcta cctggtatgt tatttacagt aatactattt 109080
tcataattgc ttttcactct aaaagtagag ccttttagct acactgtgag taaataaagg 109140
ggctggcctg ggaatggtat catgttggat gttgtttctt ccctgaagta atatatatca 109200
gttacaattt acatgttact gcagagtcct agagagagac acagagaatg agacagatac 109260
caatacattt ttatgtgcat taaaaaaatc taaggccagg cgcagtggct cacacctgta 109320
atcccagcac tttgggaggc cgaggtgggt ggatcacgag gtcaggagat tgagaccatc 109380
ctggctaaca cggtgaaacc ctgtctctac taaaaataca aaaaattagc caggcgtggt 109440
ggcgggcgcc tgtagtccca gctactcagg agactgaggc aggagaatgg cttgaaccca 109500
ggaggcagac cttgcagtga gccgagattg cgccactgca ctccagtctg ggcgacagag 109560
cgagactccg tcacaaaaaa aaaaaaaaat ctaaaatgca ctcttcaaaa tctatgtcat 109620
ttattctgga ggaatgcagt tggcagaagg aggaagatat tccgaatttt tcttgtatac 109680
atttatgtat gatctcagtt tttttatgga tcatagacca attttgatat tttaaaataa 109740
aaattataat ctatcttgga aatttacatg gttctttaga acttgaggac cgtttttgct 109800
tttcggaata ttattgtacc taaaatggga atattacaac gtcacttttt aacactttgt 109860
tataacaaag tttagacagc gctgggtgcc cctgaatttt ttcccgcctc ttgtgacctg 109920
tgttgttttg gaatttgcag tggcctgacc gagaactact gcaggaatcc agattctggg 109980
aaacaaccct ggtgttacac aaccgatccg tgtgtgaggt gggagtactg caatctgaca 110040
caatgctcag aaacagaatc aggtgtccta gagactccca ctgttgttcc agttccaagc 110100
atggaggctc attctgaagc aggtaagaag tctgtggcca gatatctaca catttgaaca 110160
ttgggatgaa aagagatgga aaatctgact gatgcagaag ccttccatgc tacacagaaa 110220
cttgagggta tggcaggtgg aaagaagcct cagcactctc tctggtggag caatttttgg 110280
cgcaacgtgc gtgggcggtg acttcaggaa tggtgcaaac ccacctgggc acttgactta 110340
ccactcactt tgttatgaaa ggggttatct cggtgttcca gacaaaattc caattctaac 110400
atcaggccaa atttgtgcca aatttcacac tagtgagtgt ttccaggcat ttattaaaat 110460
ggacagtgtt cattgcaatc ttcagcattg cagttgctga ggtatgtggc cgctgagttt 110520
gtcatcctgg ggaaacctaa tatgatgata tttattccat ctaatcctgg ggctatttgg 110580
cagtaaatac cacagaatac actatttctc tggcttattt cagtcttagg taggctctgc 110640
acacctatgc ttggaaggca ggaatttctt ggtgttcttg tgccttcttc tcatggaacg 110700
tgcatctttg gtgtgtgttg agaggaaggg tagtagactt ctgctttgtt gcaatgcagg 110760
atgctggaac aagaggattc cctgtctcta ctgtaaggga ataagatttt agcctccatc 110820
cttctctaag aagcaatgtg tctttgcctc caagtactag atgcaggacc atgaactgcc 110880
ccgtccacca gaagcttaag gctttggctt ttcaggagca atcatctagg gaactgtgca 110940
gggttttcat gtctgtcccc tactgacagc caatcaccat acagcctgca taacctaatc 111000
catcatcgtc tggtttcctg cctcattgtt ttcatgaaca accagtagag agccatacga 111060
aagagcttgc acatgagtct ttgttccaat tgtaagagca ctgataggtc cttttcccac 111120
caggttttga atataaaatt tctaagaact tattaaaata ttagaatgtt attaatctat 111180
tgtttttgct tcagcatgtc cttctgcttg tgagtatact aaagagaaca gtcataattc 111240
tgaaactact gtcctgtttg tgtcataaat tgcttcacat gtttctgcat actagtagtt 111300
actcagcttg attttgtcta ttttcagcac caactgagca aacccctgtg gtccggcagt 111360
gctaccatgg taatggccag agttatcgag gcacattctc caccactgtc acaggaagga 111420
catgtcaatc ttggtcatcc atgacaccac accggcatca gaggacccca gaaaactacc 111480
caaatgagta tgtctttgat gttacttgta agaggagcaa cagccaactt aagttcctcc 111540
tagaagagcc ttgcttcaag ctaacttgtt aggacaaatt tcccttagac ccagaaggtg 111600
tgtcaaaatg tccagacaac tttgcttttg atcaaagagt ctgagagaat aggtatttta 111660
ggcttgctat cttttctaat agtctgatgg aagcagaagg ctacatggag ctgatgaggt 111720
ctttttaata taaagctcaa gagatcaaat gatcaaatac ttagagtgcc attctacaag 111780
gctcataaaa gatcaatgca ctctttcacc catgcaattc tatcattcta acctcccttc 111840
tctgaaatga aggctttttg ccatttttgt catgggtcac aagtaaataa ttcacatgta 111900
tatgagtata tatataacca ggtgtgttta ttcagactag tatgtatata tatacatata 111960
tatgttcata taagttagta ttcatatata tgttcatata tatatgttca tacagactag 112020
tattcatata tatatacata tatatataca cacacatata tatatatata tatatgttct 112080
agggaaacat gcaaggtttt tatgtctgtc cctgactgat gaccaaatac cctatagcct 112140
gcacagctgc aagctgtata gccatacaat ttgcaggaca cacacacata cacacacaca 112200
cacacacaca cacacactaa catataatat aatataatat aatataatat aatataatat 112260
aatataatat aattaatata tataaacctg tgtgaacaca ctgggttcta agctccagtt 112320
ttctgaaggg atatgggttg ccaggagagg aagagcaaaa gcaagaatgt agatgagaat 112380
taggaagtaa acagatatgg agattaaaat gggcaggtac atggacaaaa aaccaggtct 112440
gacaaaaact ggctttctgc cataaatgac tataaaagat attaaaaaac actttccaca 112500
tgttggacaa gagacagtac aggactgaga taatttagaa aaggaaatga atgagcgcaa 112560
ctccgtaact attatgactt tcttcctgga gaaccttcct ggactgaagg gcaaggaatt 112620
ggagccaaag ccaaccacag cagtcttgct gaactgagga aagagactgg agtttgggat 112680
agctaagaaa atgtgtattt tctatgctag gtaataatga gaaagaattt gtggtgaaaa 112740
ggagctgaag gaatatgcat ggaagtctaa tataaactgc atatgcacag ggagaaattc 112800
tacaaagtgg gacagagaac cactactggg gaaaggacaa attcagggaa acagtgagct 112860
caatggtgac gccagagctc acgtagcact gggggatacc ggggttctga tcagcccgag 112920
gagagacacc tcattgaaca tctcgggcat tcagtagaga ccccagaaaa gtcatacttt 112980
aggagtagga tttatgcctt cttagaataa agactacccc agaaacaccc tagtaaagct 113040
taaaaaccaa gtctaaaagg acccaaatga tctccaagta aattaactgc ctgacagaag 113100
aaaactcaac catcactgga ggtaaataac atgattacag tgctctgtaa tgttgcattc 113160
acaaggagtg acatcattta aaaatttatg aggcaggaaa aagcaattag tgtgatccat 113220
aactaggaga aaaaccagtc aatacaaata gaccaagaaa tagtagaaac gatggaattg 113280
acaaagaaat taaaactgta tatatgataa ttgtgttcaa agatttaaag aaaacatgaa 113340
catgagggaa acaaatgcag aatataaaaa aaagcaaatg cgtaaaacaa ccaaatggaa 113400
attaaagaac tacaaaaaag tataacctta ataaaatact cactggatgg ccttaatatt 113460
agtttataca ttacagaaga aaaagtgaac cagaagataa ctcaatgaaa gccatacaat 113520
ctgtaagaca cacacacacg cacacgcgcg cgcgcgcaca cacacacaca cacagagaga 113580
gagagagaga gaaagagaga gagagaaagg ctgaaaaaaa taaatagaac cttaaggata 113640
tcagtgaaaa tagcaaaaga tttaatatat gggtaaagca agtcacagaa ggacgggaag 113700
gagatattgg gacagaaaaa aatactcaaa gcaatgatgg ctgaagactt tacacgtatg 113760
aagaaaatga taaactcaca gtcaagaagc tcaatgaatc agaaatagta tttttaaaag 113820
caaaactcta tgatttactt gggtacatta tagataaatc gtccaacatc aaagataaca 113880
aggataatct tataagccag aggaaaacaa tatcatttac atagagggac agtaatgaaa 113940
gtgaccgatg ccttctcctt ggaaacaatg gcataacatc tttaaagtga taaagagaaa 114000
taaaaacaga tcaacctagg acgacatgtc cagccaaaac aaacaaataa acaaaaaaac 114060
cctttaaaat aaacgtgatg taaatacgta ttctgccacc tccagaggaa acaagcaaaa 114120
aaacaaaaga atgtttccaa ggcaggcttc tgtattaaaa gattttaagg aaagttattc 114180
aggtagaaga aaaataatac cagatgggaa ctttaatcca tactaagtaa tgaagagccc 114240
tggaaatggc aaatggcaat gtcaatataa aatactctta tttatctaat ttttaaatgt 114300
atttaaagga caatttgtga tattaattaa aataatagga atatattgtt gtttcaacgt 114360
atgtagtagt aaaattcata aaaacagtag cacaaataat gcagatgata actggaagta 114420
tactgttaat gagttttttg cattatccat gaagttatat aatattaata gatggttgaa 114480
tgtgatagtt taaggtggga tattataaat cctaggacaa ccaaaaaaat ttaaactgag 114540
aggaatggat agtaagagga atagtccttt tatgcaaaag aaggaagaaa aagaggaata 114600
aagaatataa aagatatggt gtaaacagaa aatacatagc attattgtag acacaaactg 114660
aactacctta tgagtatatt aaatataaaa ggattaagca ttacaaataa aaggcagaga 114720
ttgtaaattg aataaaaacc acagctaagt gtgttctttt tagaataaat actctttaag 114780
tgtaaagatc tactttaaac accaaaatat gaaaaaggat atataccatg aaaacctgaa 114840
tcataaataa gctggagtgg tgattaatgg atgcaggcac tcctaaagac taataagtga 114900
atgtggtcaa attgaagaaa caaaagtata tacgtgctca atgtgcaaaa actttttctg 114960
tatacatgct atgatccttt ggaaaattaa agttttaaag caatatcact gacaatagta 115020
tcaaaaccaa aaaatattta gtgataaatt tcacacacta tgctcaagga ctatacacct 115080
tgcactagaa aacaatgttg aggaaagaat taaaagatct aaatatacac catgcttata 115140
gattaaaaga ctccatatca gttctcgtga aattgatctt tggatgaaac ccacacccaa 115200
gcactattgc aacagtcctt ttttggaaaa aaaaattgga ggacttatat accttaatat 115260
aaagacttat aaaagtacag gaatcaagac atgtggtatt ggcctggccc cttggctcat 115320
gcctgttacc ccaacatttt gggaggctga gtctggagga tggcttgagc ccagatgttc 115380
aagaccagcc ttagcaacag agtgagaccc tctctctaca aaaaataaac aattagatcg 115440
atgtgatgac ttgcacatgt agtttcagct actcggaatg ctgaggtgag aggattgctt 115500
gactcaggag gtctagccat gagtgagcat tgatcatgcc tctgcattcc agcctggatg 115560
atggaatgag acactgtctc aaaaaaaaaa aaaaaaaagg atatgtgtta ttggccaaaa 115620
aagtatgcaa acctaaaaag ggatggccca ccaccagacc cacatacata tatggtaaat 115680
ggattttccg tatagatggc aaagcaattc aatggagaca aaaatgtttt acaaaatcat 115740
tctgaaccat ttggatatcc atgatacaaa acaaaagcag aacttgactt ttgcttttca 115800
tctcaaatta ttttgatatc tcttccacct aagtgtcaga gctaaaactg aacctgaaat 115860
atgaaagttc catgaaaaaa tataaaatct tcacaacctt ggagaaggca aacttttttg 115920
aggcaggagt ctgtaaacac tcactataaa ataaaacaaa ttataatgtg ggctttcatg 115980
aaaactcatg cttaccaaaa gtcattgtta agaaaataaa taggcaagta acacatgaga 116040
agaaaaatgc tctctgtcca tatatctgac aaatggcttg tgtccagaat ataggaacat 116100
ttctcccact cactaaacag aggacaaaca actaatgggc aacagattga ataggcattt 116160
cttggggata gatagatgta cacatagcca ataagcacct gaaaaaatgt ccagtatctc 116220
agccatgaaa aataaagagt tataatcatc atgagatgtc accaaacacc caatggacat 116280
ggatattatt aagaagacac cacagtaact gatgtcactg atgtagagca aggatgtgaa 116340
actctctcat atgctggtga aagtgcaaaa tgatacaacc acttttgaaa tcagtctgat 116400
agtttctcca aaagttcaat aaatgcactt ttaccctaca aacctgcaat cctgtttgtg 116460
aatatttacc ccacagaaat ggaaacataa gtccacgaag acatctccaa gaatattcat 116520
agcagcttta ttttttataa ccccaaactg tagacaattt caatgtcaat caataagaaa 116580
atgaataaat aatttgtgaa ctagtcatac aatggcatac tgttcagcaa taaaagggag 116640
catgtttttg atactctcaa atagtatgga agatgctcaa aaatattaca ttaaagaaag 116700
atgccagata acaaaaatga acattatgta tgagtctatt gatgtaaggt tccagaaagg 116760
taaaactaat ttctggtgaa agaaaccaat atcatttgcc tctggccatg ggaagagagt 116820
agcagagatt gattgagcag taaaacgaag tttttttctg gggtgatgta aatgtcctgt 116880
attgtgattg aagtgtgagt tacacaagtg tacatgttca tcagaagtca tcaaactaca 116940
tctaagatct gtgcatttga ctatacatga aaatatacct cagttgaaaa tagatcaata 117000
acctccctca tatactatac ttgctaacac agccagctgc ttggagaacc agcttgctgg 117060
aatggagaat ctgggcttga gactgggtca catgtataga gtctctacag agacaatgtt 117120
gcattcccac ggtacataat acatttcaag gtttctcaga cagccacatg tcatgaatgt 117180
gaggattctg agaggttgga gcaacattcc tgggaggaac gaaggggagc acattctcca 117240
agatccccca ccaccggggt cctcaccggc tgtgcttttt tttttttttt tcttgacaga 117300
gtctcgctct gtcgccaggc aggagtgtaa tggcccaatc tcggctgatt gcagcctcca 117360
actccagggt tcaagagatt ctcctgcctc agcttcatga gtagctggga ctacagatgt 117420
gcgccactgc gcccagctaa tttttgtatt tttagtagag acggggtttt gccatgttgg 117480
ccaagatggt ctcgctctgt tgacctcgtg atccacccgc cttggcttcc caaagtgctg 117540
ggattacagg cgtgagccaa agcacccagc ctgtgcctct cacttactca attgtttttc 117600
tgaaccctcc atagctggtg gaccttttca gatcccatag tctagccagc cctctcactt 117660
tatgccttgg gtcccactgt tccttcatct catccccctt ctgtcagtcc cgcagtggct 117720
gtggccagta gaggatggac tgagagtagg agaggaggtt ctgcccagga acccatccta 117780
gagaaacagc atcctgcctg ggacctagtc ttccaggtca gcttttataa gtcttttaga 117840
ctcaaactca cttgacccac ctgaagtggt attgacaata atgctatttt catggttgtt 117900
tttcactgta aatgcagagc cttttagcta cacgactagt acagagagta agggaggctg 117960
gcctgggaat gatatcatct tggatggcat ttcctccttg gagaaatata tgttagttcc 118020
aactcacatg ttactataca gtcctgtaga aagagataca gagagttaga caggtataga 118080
cgcatttgta tatgcataac aatctataag acacacatca aaatccgtat accggttcct 118140
ctaggggtat gtgcttggca gaaggtagaa ggagggtatt ctggttcctt tcttttgcac 118200
atttatgtat gatctcagtt tttatatgga gcattgatag ggtttggcta tgtccccacc 118260
caaaatctca tcttgacttg taatctctat aatcctgata atccccatgt gtcaagggca 118320
ggaccaggtg gaggtaactg gatcatgggg gcagtttctc ccaggctgtt ctcatgacag 118380
tgagagagtc tcctgagatc tgatggtttt gtaagtgtct ggcatttccc ctacttgcac 118440
ttactctgtc ctgccgcctg tgaagaaggt gcctgtttct cccttgcctt ctgccatgac 118500
tgtaaatttc cagaggcctc cccagcaatg tggaactgtg agtcaattaa aactcttttc 118560
tttgtaactt acccagtctg tctcgggtat ttcctcatag caatgtgaga acgggctaat 118620
acaagcatat actacttttg atattttaaa ataaaaatta tcatctatct ttgaaaggca 118680
tgcacaaatg ggaagttgag gaacatttgt gttgtggcaa ttgtatgata cctttaatgg 118740
gaatatttca aagacacttg ttaagacttt gttagaacaa aatgtagagg gtgctggatg 118800
tccctgaata ttcttccgcc tcctgtaact tgtattgctt tggaatttcc agtggcctga 118860
caatgaacta ctgcaggaat ccagatgccg atacaggccc ttggtgtttt accatggacc 118920
ccagcatcag gtgggagtac tgcaacctga cgcgatgctc agacacagaa gggactgtgg 118980
tcgctcctcc gactgtcatc caggttccaa gcctagggcc tccttctgaa caaggtaaga 119040
agtctgtgtc ttaccttgtc tagcacatac ctctctatgt gcttggacaa cgggatgaaa 119100
agacatgaaa aaccacactg atgcagaagc ctttagtgct acacgggagc tcgagtgttg 119160
gttgaggttc tgccatgacc aaggaagtct cagtgccgtc cctgggaaag ccagagctgt 119220
gatttttggc acaacttgtg ggagtagtga ctttaggact ggcgcaaaac ctccagggtg 119280
ctcaacttaa ccactcacct tattctaaaa tgggttattt cagtgtccca gtcaaattcc 119340
tattctaaca tgctgtcaac tgtgtgatta tttccaagcc aataagcatt tccagtaatt 119400
tcttaaaata gtgttcattg cagtcttcag cgttgtggct cctgagggat gtggcccctg 119460
attctgtcgt cctagagaag cctgacatga ctgcattgat tctgtatcgt cctgggtcta 119520
tgtggctgcc tggctgtctg taatcatctg ttttattttt atttttttct acagactgta 119580
tgtttgggaa tgggaaagga taccggggca agaaggcaac cactgttact gggacgccat 119640
gccaggaatg ggctgcccag gagccccata gacacagcac gttcattcca gggacaaata 119700
aatgggcagg tctggaaaaa aatgtaagcc actttgattt ggactctttt tccctttgct 119760
gacaaatctt ttcaaacaga agaggggcag aggaaaatac tggaaagact tcaggaggct 119820
aagcgtaatt agccttagca tggaaagtgc aagcagcaca ggccagcaaa gccccacgcg 119880
tgtgggggtt ctcaggcctc ttctcttttg acatttcttt actgtttcca ttgttgggtg 119940
ctgtttctcg tttctagtgc ttgtcctcta agccaggggt ccccactcca gtactggtac 120000
tggtactggt actggaactg gtaattatct gtggcctgtt aggaactggg ctgcacagca 120060
ggaggtgagc ttcgggggag caaacaaagc ttcatctgta ttttctgctg cttcccatca 120120
ctctcatagc tgcctgagct ctgccagctg tcagatcaga ggcagcatta gattatcata 120180
gcacaaaccc tattgtgaac tgcacatgtg aggaatctag attgcatgct ccttatgaga 120240
atctaatgcc tgatgatctg tcatgcttcc atcaccccca gatgggacca cctacttgca 120300
ggaaaattag ctcagggctc ccactgattt taccttatgg tgagatgcac atttatttca 120360
ttatatatta caatgtaata ataattgaaa taaagtgcac gataaatgga aggtacttga 120420
gtcatccttt aaccatcgcc ccctcacccc aggtgcacag aaaaattgcc ttttatgaaa 120480
ctggtctctg gtgccaaaaa agttggggaa ccacactgct ctgggttcta gtagtcagag 120540
atgccctcta tgaggcttaa gtcagatttt tctagaaaag atttggatgg gccatcaggt 120600
caccatgaga cttcccttag cctcatgcat tctctgtgat ggtttacttt ggggcctatg 120660
aatagggaag actgagatat aggaaaaacc aaagtgtctg tgttccccca ctctcacacc 120720
catgtaacat aacacttctc acaccagata tggggggatt tctcctcaca ccccaagcga 120780
gtctccagca gataccagct gggtgtccta caatgtaact cggtcctgac actctatctg 120840
gagacagtgt cagatcccac aagttaaggc tcagtcctac aagactgccc cactgcagat 120900
gccaatccca agttgcaggc tgtgacctgt acttctgccc agctggataa agatctgttt 120960
ttctatatga ccctccatgg gtttgattac tttgctagag tggctcacag aactcaggga 121020
aacacgttac ttttatttac ccatttatta taaaagatat taaaaaggat cctggtgaac 121080
agccaggtgg aagagatgca cagggcaagg cacgtgggaa ggggctcaga gcctctatgc 121140
cctctccagt gcaccagtcc ccagtaccct aagtgttcag caacccagaa gctctccaag 121200
tgcagtcttg ttgggttttt atggaggctt cattacagag gcacagttga ttacatcatt 121260
ggccatcggt gatcggctca ccttcggccc ctcttccctc cctggaggtt ggagggtggg 121320
gctgaacagt tccaaccctc aagtcacatg gttggttccc ttggcaacca gcccctgggg 121380
ctatccagga acccaccaag agttgcttca ttgcagctcc cttcacccag gaaactccaa 121440
gggatttagg agctctgtgt taagaactgg ggggcagaga cccaatatac atttcttatt 121500
ctatcacaat atcacaggaa gctaaggatg atactgcctt tgtgtgtctt ggctgtggat 121560
ggtgcataat gcatggaagt aagcatttct gaatcaacag caaacaggct ttatcaggta 121620
gaagacccct cagcgcccca gggacaaagc tcatcaatga tgtcccactg tcctctgagg 121680
ctctagctct aagacctcca gtgggtcaag ctcctggaga agtggcacat tctccaaaga 121740
cccttcaggg tcaccacacc ctggttaagg gtgtggcctc ataactcctt ttgactatga 121800
ctgatggctt acagcataga aagaaataac tttgtcaaaa aatataataa tgatagaaag 121860
gaagaaggaa cgctcccttt tgtcttctaa gaatagatgt gaaatgtgtg tgccttagaa 121920
tatcttctcc ctctcctgct ccacgtgagc tggagcttac atgcctgctt gttttcagta 121980
ctgccgtaac cctgatggtg acatcaatgg tccctggtgc tacacaatga atccaagaaa 122040
actttttgac tactgtgata tccctctctg tggtaagttg ccttctgttt tggtaaggaa 122100
actgcttcct taatatggat ttggaaaaaa aaaagcaaaa aaaacagaaa atggcttttg 122160
agctgagtgc ttctggggag gagatggctg ccctctccac cagagcctgc ttttcatcat 122220
ggccaccttg aacctgccct actattggcc ccatttgtta ggaaaacacc cgcccctccc 122280
accacacaca cataaataaa ataaatgtca aattcccaaa gggcaaactt agaggtgatc 122340
taatcagccc gggatagtcc caccgaaccc ttctttgtct agcgtgggat gcatgaaaaa 122400
caaatttaga gtcattatga tgaaaaactg tcctcttctg cagctgagaa gaaaaaaaaa 122460
atacgagcag caggaaacag ctaagcatgt aatgcacatt gtaaacctca gatggccatc 122520
ctaggaaatc aatgaagggt agtgcagctc tttagcccca gatggccttt ctcgtaagat 122580
tactactcat gagtcccatt agcgacattg cttagagact gcttgttagg ttccttcctc 122640
attgctctga gactcttatt gggagtatga ggcttggatc aggggaaggg gaattgacat 122700
tagatcttaa atgattgggg taacaaatcc atgggggaaa aaaagccact tgtacttgtt 122760
ccctattttc ttcctgctga ccaatcaact tgtctgtccg agttacagaa caccaccctg 122820
gacttttctt ttgtgtaatt tggttgcttg tggttgggtc tgccatgtga agggaccttg 122880
agctggggga agaaggttgg cctccaagtc cactgaagac cagcatcctg agattgcctg 122940
gggaggtggt acagggcagt gatgaagatc atgggagcca cactgcccat cgtcacattt 123000
gggccactcc tggggagagc aagagggaag aaggagaggt tagggtgata ggaaagattc 123060
tacttggcca atattattat aatgtggcat tgtggtctct ggatttagtg tgagttgata 123120
gctgactttt ttctcgagtg ggtgcttttg ttctattttg tcggtgctat tgcagaagca 123180
tcttggtggt tcctctacct caaagtctct tgatggggtc agttccagtt ctccgcttct 123240
ggccccatct agtacacgcc actgcctctc actgcctggg ctctctatcc ttgacaggct 123300
gccttgaatt taagcccagt ctgacttacc tgcctcaaac acccacagta gtgcctggga 123360
ctcatgcacc tttgactccc atggaaggga agtgcagtag cttcccaggt gcaattctgc 123420
tgtcctcacc cacattgagg atgtatgaga atcaggttct tagagattgg agaaagaagg 123480
aagaatggga acaagatttc ttccaatgga ctgtgaggtt ccccacctta ctttgatgta 123540
agacaagtga ggttaacccc aagcctggtg aggagggttc ccatcagaca cttggaaatc 123600
ctgaggactg tttcctgcag aaggatgtgg ttggtgggat attcaggttt gactcatgat 123660
tgagaaagtt agagcctctg gttggagaaa gagtttaata actatttcat ttccaccaac 123720
acattcagta cgaataataa ataagtaaaa ataaatagaa acattcagtt ttattttgaa 123780
tagtaggagt agggtataat ttctgtagtt actcttttag tacaatgatg catgtttact 123840
gtatgtaagg catactagca gaaattgagc tcagcactag aaaagatgat tgcattccat 123900
gccatgcttc ttttttacaa aagacttcta tagatagatt ctcaaaacaa cccacagcaa 123960
atgaaaagtt atttggaaaa ctcaggttcc agattcactg gagtgtagaa tctctggttg 124020
gttggggagg aatttcctct tgcagttgtt attaataatt atatgaataa ttattaacta 124080
tattaatatt tatagttttg aagaccttga agggctggag acaacagaga agcatttttg 124140
aacaccctct gtagcccctg cactgttgta ggcattgatg ggtggtacca aagatgggac 124200
actttcccta cctccagaga ccttgtgggc ttgctgcaga gagaaggcag ggaggaggaa 124260
aagaagaata gaggcacatg tgtgtaaatt acccccacag cagtcagtta gtcatgggag 124320
gctccccaga agaactgtcc tgaagctggc tgagagaagg caacatttca acataggaca 124380
gttatccttg ctacataaaa tcacatacac acatgcacat atgtccacac acagagactc 124440
acatgcaaaa gaatcctttg tgcctttcag taaactttac atggtttaga aagaacttat 124500
atttccttga aaggagagtg tcctttgttg tttactacca ctttttaaac ttagaaagaa 124560
aaatctaaag agtgtttatg attttaccat ttaatttcac ctttgagatg tgaaaaacta 124620
gtgcttggaa ttcgtcctga attaaacgac acaattgcta acttggactc aaatgcgact 124680
tcttttccca ccttgtgcca cagcatcctc ttcatttgat tgtgggaagc ctcaagtgga 124740
gccgaagaaa tgtcctggaa gcattgtagg ggggtgtgtg gcccacccac attcctggcc 124800
ctggcaagtc agtctcagaa caaggtaaga acaggcccag aaaccatcta tactgtcctt 124860
ccatgtaagc cccacaaaac ccttctacat ttacacagaa cccacacagc tgatgcatca 124920
atacctgcct ctctgttttc tgaaggagga aaaaatatag aaaaattaaa aaaagttata 124980
ttattatagg ttctctactt ggaaaatagc caaaatacaa atctttttct tgatctgggc 125040
agttccatca aaatctgtag gcacagtgat ttgcaccaag ttccaatact tttggaaaat 125100
attgaagatg ctctgagggt ttctatggat atccattgtc tcactgtcag atgaaaagaa 125160
agggaagttt ttagaaatgt gacactttgc agtgagggag gacaagagca aacttaccta 125220
cagtctatca caggcacaga ttttttttta cacttttgtg aatcattgaa ttcaatgccg 125280
aggctattca tctattcaca aacacatgaa caaattatgg gttgtgatcc ccataaatga 125340
agagtaatca gtccgaaccc acagaacctg gacattttgg gtatcgtttc agtggaacat 125400
gcaattcgta agttcagttt gcttgggtgt ctcttaggaa gaacacatag gacacagacc 125460
catctgcctg catgttttgc ttcctcatct cctttctaca ccagggcacc tgtgctcaat 125520
tgctgttctc ctctaaagag acttccttct gtaagtttgt gaaatgccat cgacaaacct 125580
gatcgcatcg catttcactc tgctgttgag ttgatttttc tttactttat cgtttgtaac 125640
ttcttgctct acagagcttt caccttccac atatttcaga ttcattcttt cctaaactgt 125700
gtggtggtct atgtcctcac tgactatcaa catactgcca tcatgcactt cctatctcta 125760
ttcctcttcg ttgcaatctg gctccaagtg gctcacacca ttattctgat ctatcaactg 125820
cctacacagt cctagaaagt aagtgagtca agaaacatcc cccaaaagta aacttttcag 125880
gtaagatcag aagaccctca tgagtcactg ctgctcagga tcgtatctgg ctccttgaag 125940
agtgaccttg catagatctt gtcataaaaa atgaaagaga ccttgggaag gtcttgggct 126000
ggtcactttt gtcagagtcc agggctgtgg ggtgaaagcc acagctatag agcttcattc 126060
tggagtcact tagctttgct ctcctgggga caggctgtgc ctattcttgc ctcaggcatc 126120
aaaaaaagtg gcacagatgg gcccttctga aaaatctcac tactggagca cagctcgaag 126180
tttctactat cctgacgttg ggcggtagtc ctttgctttg ggaatatgaa catgatcaaa 126240
actgagtgaa cttgtcttcc tggctttctg tacaatgaag tagaacaaac catccaattt 126300
gaccaaagcc ttggcatgtt ttctttctag gtttggaaag cacttctgtg gaggcacctt 126360
aatatcccca gagtgggtgc tgactgctgc tcactgcttg aagaagtacg tttaagggaa 126420
aactgacatg gggtcttatc ttcaagactt ttttcctccc tctcttcctc catcccttct 126480
ttcttcccac cctccccttc cttcctcccc acctctcttc cttttctgga aggaacacta 126540
ggaaccaggg aatgcatgca gaatcctgag gcagaatttc cagggcaatt ggatgagaga 126600
ggagggaagt gtttctagag ggaatctgca gagggaagac ccagtgcaag tgattttttg 126660
gacctgtata aaccgcagga cagagctgtt cactaccaga ggcatcaatc tgtattgcat 126720
tgctctagag caatatctga ggctgaataa tttataaaga aaagagttta attggcacat 126780
gtttctgcag gctttacagg aagcaggatg ctgtcatctc ctctgcttct gtgtgggcct 126840
aaggaagatt acaatcatgg tggagggcaa agtgggagca ggcatgtcac atggccagag 126900
caggagcaag agacagagag agatggggtg ggggtgctgc acaataccaa atgaccagac 126960
tttgcaagaa ctaagagtga gagctcactg atcaccatga agatgtggcc caagccattc 127020
aagagggatg cacctctatg atccaaaccc ctttcacagg ccatagctcc atcactgggg 127080
actacagttg aacacgagat ttaggtgggg acaaatatac aaactatatc acagtctctg 127140
atgaaacaga ttgagaacag accttaactg tcagtttcca gcaaattgtg aattttgttt 127200
cttgccactc ataagtcact gattctgggt ggccgagggt gtcagaggga cagcgccaag 127260
ttcatggcac agaggatacc tgaaggggct ggaccatatt tttctcttga catcctcatc 127320
ttttctaggt cctcaaggcc ttcatcctac aaggtcatcc tgggtgcaca ccaagaagtg 127380
aacctcgaat ctcatgttca ggaaatagaa gtgtctaggc tgttcttgga gcccacacaa 127440
gcagatattg ccttgctaaa gctaagcagg tactcgctca cctgtggtct tcaccccacg 127500
ctggtgaaga tatttgcttt atgtctgggt tttatgggcc atggccactg catggcagtg 127560
gggaggaact gtctatcaca tgaaaggctc aagggctttg gggacagcat caatcttcaa 127620
ccccagccct gccacatgtt agttgtgctc tttaaaaagg cagaaggatt cgtttcctca 127680
cgtggaaaaa gagataccct gttacccgta aaacttactt aatgttcacc agttcatcca 127740
cattcatgat cagggaaagg ttgttattcc aggctaacta ttctcctttc ataataatat 127800
gctggagaga atcaaatgag attgcatttc aaagcgcttg aaaaaccacc atatcgagcc 127860
atgcttagtg tgggcgcctc taatcactgc tattcaggag gctgacgagg aagaattgct 127920
tgagcccagg acttcaaggc tgtaggcagc tatgattgtg ccactgcact ccaggctggg 127980
tgacagatca agaccctgtc tcaacaaaag aaaagaaaac aaaacaaatg aacagaaata 128040
ttccacaatg tcaaaaaaaa aaaaaaccca cacaacatac aatttacaaa tgcaaataat 128100
aatattattg ttgtcttctt tgattttctc tttcctggtg aaattttgtt ttattaagcc 128160
tgacaaagtg atacctttgc ttacatcact taaagttagt ctatttggac ctaggtgaca 128220
gtacaatcag ctaagaaaca gtatttgtag gagaggcagg tttgggacag gtgacaaggc 128280
atgtggggtg ctcgctgtgc tggtggctct ggaaggcagg gtgtcaatgc agacagggat 128340
gagcatggcc tggttgggaa ggcatggggc aggcaggagc ctgagctgct ctcctgggcc 128400
tggtcacaag cccatggcag cttctctggg tctgtgaact gaggggtgat gtcctggaat 128460
cctctgacac tctaggaagg agagaagggc ctttctggct cagcctttat aaacagtagc 128520
tgatctccct cttgctcccc agggtcctcc ccaccatccc agcaaatgtg caaatacaag 128580
atctctgctc ctcatggtcc tcagagagct ggggtgttct gatggcttga acaagtcact 128640
taggaaatgt ggggttttgg aggcattctc tgataggctg atacgttttg agtttagagt 128700
tcccaccgca catccccaca cccctagagt ctagggcatt tagtgctcca tgagggaacc 128760
tgtagagtga ggacatctgc atcacaggct gggccttcta gtgtccagaa gcagaaagtg 128820
tgtctgcttc aaagttggtg ctaatgatga tttttggtca gaatacggca tttctcattt 128880
ccattccttt atccccttga acttactaaa gtagaatcag gtctaaaaac cagagttcta 128940
atctttaaga gtccctggga ttctaaggta tatgaatgtc cttggaaaac aataccattt 129000
agttcatgca aggtgcttat ttcccatcct ctttcatttg atgtctagca ttttactgca 129060
ttcttaccac cacggtttag taacattcac gaggaggaag tggaggatcc agatggagca 129120
acttgctctg ggcacacaag gcatttgcaa ttttataccc tcttgatgat gtctcagcca 129180
gacattctgc ccagtcatca atgccctctt caattaatat gaaaggacac acttggcatg 129240
agattccaat cgtgcacaga atatacatga gaagtgtgcc tttgtcatcc ctactttcaa 129300
aggctaaggc caccctcagt ttcttgcatg caactgatgc ctttcaaatg aaaccttaca 129360
tctgtgtagt ccataggcaa ccacaggcaa atgtgagggt gaaacgctgt gttctacatt 129420
gttctgtgtc agtgaagcaa ggcagtgcca gctcagaggg ctctggggct tcaaggcagg 129480
gatgcctggt tgtaggtact gccacttcca gctgggcagt gaaacataac tgctaatact 129540
ttccttacag gcctgccgtc atcactgaca aagtaatgcc agcttgtctg ccatccccag 129600
actacatggt caccgccagg actgaatgtt acatcactgg ctggggagaa acccaaggtg 129660
agatcaattc cattgcccac gtaacaaatt gtttttgacc ttcagtgcat gttacaaaat 129720
gagcattttg gagatagttg tacaaattcc tacccatgaa tgtggtctac ccactcctga 129780
ctttgcctgg acacctgtct atgtctccat aatcagtctt caagggactt gggcaagggg 129840
agcggtgcca tttccttgag tctctctctt ttttgttttc agaatctttt aatttttttt 129900
gtaatgattg tatgtttccc ttacaacaaa aacaaacacc agtagaggtc tttgagtctc 129960
ttaatcataa tttcagcatt catattgctt ccccaggtaa gtggggtttt gacccagccc 130020
tcaagttaag ggtgttagat tatttttcat gtgaaattag acagactgcg tttctaaaca 130080
tggtgcaaaa cagtaacgac aaaagttgta attaaactat tcttcttccc aaatacccac 130140
atgtctaatg tgtgtgtgag ggtgttaggc aggggacctg aagctggggg agaggcagac 130200
agttcccatg gccccaagtc taggatggca tttggtattg gttgatgggt gagagcaaga 130260
gagggaatat ttttgtgcat gatgtggtat cagcacctgt actacatttt atggattcct 130320
tcttctcttt gcggtatgcc ctgacaataa ttatatccgt cagccttacc cccttggcag 130380
taggaaaact gaaactgtct taaagtctca gctctacttt ctcagaggtg caggcaaggg 130440
cactgggagt ctggggccct ggaaaactgt tctgactctg ccacttgcca gatagacctg 130500
aactagacac gttacctctt tgtaccactt ggctctaatc ccttatctgt aaaaccagca 130560
ttttcaaatg gtgctttgca catcagcctt ttgcataagc tttgatttga taaaatgttt 130620
tttgtgtttt taaaaagatt aaaaaccaca ggtttagata atttcaaagt aggcttccct 130680
ttttctgtca ttttcctatt atttttaaaa cctcacctcc ttgactcctt gttccctttt 130740
tctgcactgc tgagtctggg agcactgagg ccaggtaaaa ggaaacttgg caaatgaggg 130800
gcacctatgg gtgtgggagg ctgctcctgg tgtttgcata ttttaaaatt taaatgctac 130860
aaaccactgt gagttaggta ttattgttcc tattttacca ttgaggaagc tggggctcag 130920
agaaggtgga gggtggtaca gacaaacctg aattggaacc ctggctcctg cctatgggct 130980
gtcaggactt agaaaagtcg tgagctctcg ctgattgttt cctcagctga tgtgggctgc 131040
agggctgtta tgggggaaat aataagaaag tgcatcaagt gctgagcaca tcctaagcac 131100
tccatcatgg cagctcctac tactaataaa gaatagaatt atatctaaca tgattctttc 131160
ttgcaagtga cagaaaatcc aactcaaatt ggattaagca aaacaaggga aattcttagt 131220
gagctgcaaa gttttcaggc tcacatgatg gccccaaatc ccaggtcctc ccaatcatgg 131280
agtaggcact atttgggggc acaaaggtga cattcccatg gctgcagatg ctgtggtgct 131340
gtggctgtac cgggaaagaa taagaaaggc cactctccca attatgtgaa caatagtctg 131400
cccactctga gaagtcaaac ttgggtcaca gtcctgcccc tgaacccatc actgactggc 131460
tctgacctgc accaattgtt ccatgttgga ggtgaaggca agaccccact aatacccata 131520
aggggcaaaa gttagataga tccttcaaga ggattatggg aggtagggca aaaagctgct 131580
gggcagccag aaagcaaaca gagcctctat gatacctcaa ctgatgaaag catgaagcta 131640
aaatcataag gatctgggtg tgagttctgg ctctcccatc ttccatgtga cattgggcag 131700
ttatttaatc tcttttagcc tccgctttct catcttacat atgagataat tgtgaggatt 131760
aagattacac ataatcatca tcatcaccgt ccaccactac caccatcatc cccatcaaca 131820
tcatcgccac cactatcatc attcttactg gcactaccat caccatcacc accattccac 131880
caccatcacc aatatcatca ctgtcaacat cattaccacc atcaccatca ccaccaccat 131940
catcattact accactacca ctactaccac catcaccatc accaccattc caccaccatc 132000
accaatatca tcactctcaa catcatcacc atcaccatca ccaccaccat catcatcatt 132060
actaccacta ccactactac caccatcacc atcaccactg tcccactact atcagcatga 132120
catcaccatc accaccacca tcatcattac caccgctact accaacatca ccatcaccac 132180
aattctactg ccatcaccat taacattacc accaccatca tcactatcac catcaccacc 132240
atcatcacca ctgccattat cactgccacc atcatcacta tcctctatat ttcctcatct 132300
gtattatcat tactaccacc atcactatca ccaccatcgt caccatcata atcaccatca 132360
acaccatctc caataccacc atcactgtaa ccatcatcac caccaccatg atcactatca 132420
ccatcatcac aatgatcact gtaaccatca ttactaccca ccaccatcac cactactcca 132480
ccaccatcac cattatcatt accatcacca ttatcaccac catcatcatc accagcacca 132540
ccatcatcac cagcaccacc atcaccatca ccatcattaa caccatcact atcaccattg 132600
gtttaatcat caccaccatc atcataaata aacatcacat aaccagggtg tagctgggtg 132660
ttgaccccag agcccactca ctgtttcctc tctcccaccc ccatccacac atttctaacc 132720
accatcctgc actgggctcc cagtctcctc tggtctcacc cacatgtcca ctgagaaaag 132780
gattttcaga acaccaacta gaccaggagg agccacatac ataactcagg cctgcttatc 132840
aactttctac atgttaataa tgacatcaga tcaatgggtg ttctcagctt ctcagaagga 132900
ggtcaaaatt ctccccctct ccccttcatg tgtccagacc ttcccggatt tggatgtacc 132960
aagtgcagag tggtgttgag gccaaggggc tcatccatgt aagtctcatc tgcaatcact 133020
gggctgatcc cgtggccctg tctccagggc gccatcagag agggcttcaa tcctcaggtt 133080
acctgtggcc caccctgccc tcagaggtgc catctctaca ttggccacga gatggcagca 133140
catactcata gactgcatta atttcccagc aactcctggt gggttttccc tcttatcagg 133200
atgtttgcct tgctcagaga gcaaatctga gagcagtgac acctaactta actttcagca 133260
aaatattttg agaagggtgc ccctttacac atctgtgcag tccaggtgat gcatcccatg 133320
cccaatgctc ggtagtcagg aggagcttcc tccatgcagc tctgcggaag agactcttcc 133380
acgctgctca tgtaaactcc agattcggtg tcagttttct gacaccgaag acaatgatct 133440
aagtgcagtc aagggctttg gggaaagcag gagagagtgc ctcagttcta gcctgtgcca 133500
tgcttgcaaa gttttgcaaa attctaatga gagctgggct tgcaacattg gaaacttgga 133560
ttatttgtga gagcactgag aaatccctgg gcatgtccat ctggaaaaac agcatttcct 133620
ctggcacttt agcagaggtt ctgtttcaat ttggcgaagg aaattaagca gtttttcaca 133680
aaagaagaac tacaacgagg agaattgtcc ctagtatttc ttctccctaa ttgtcaagga 133740
agtgtaaatt agaaaatgaa tcaggacaat ttccacctac tatgttagct aatattttaa 133800
aaattgaata tcacaagggt gaggcaaagt aattgttttc cagtgacatt ttccactgtc 133860
acaccctttt agagaataat ttggcaatgt tactgtgaga tagaaatatg tctatataat 133920
tatgggaact gagacttcag aaagtaataa ggaataagaa tgaaatttat gaacaaacat 133980
gtggaaggtt ggaagcaaga gtggggccaa cacgcatggg gaggaagcat ttgggcagcg 134040
actccgcaga cccagactca agctgagcta tacaacctcc ttacgcctca gtttcctcaa 134100
ctgaagaaca ggaatgacaa gtgcctgttt cataggaccg ttgtgaggat taagtgagat 134160
ataccacatt atgagcttgt gcctggaaag gttgattctt agtaaatgat gactattctt 134220
ttttattgca ataaaattta tacaacatag agttactatt ttaaccattt ttgcaggtac 134280
cactgagtgg cattcagtac attcacaatg gtgtgcaacc gtcaccatat ttccaggaca 134340
tttttctcat ccccaaagga aacctcatgc ccattaagca gtcactcctc attaaaatat 134400
tagttatgaa gactgtagca tttttttaaa aactcatgat ataacattga ttgaaaaaat 134460
cagtatagga aattgtgcat tatgatgtaa tagtaaaaga agcatataaa aatctgaaaa 134520
aagtatataa aaagaatagc aattgtattt ctcagactct ctttacattg taaaaatcat 134580
tttgatagct tcaaaagaaa agcaaaaagt acacaaacaa caaccaaccc caaagcagca 134640
tgacaaagcc cagattgttg aatccaggtc ttgggaacat aaaatcttat atgacatttg 134700
cactttaatg ggtcagagag tccagtggca ttgggagctg ccttgtgttc tgcagcctca 134760
cggacagaca ggaggtccag ctccactgct ctgttcttct ggaatttcct cgtgaacaag 134820
ctttggcctc agtaaccatt tctttcatct ttttaaacac aggtaccttt gggactggcc 134880
ttctcaagga agcccagctc cttgttattg agaatgaagt gtgcaatcac tataagtata 134940
tttgtgctga gcatttggcc agaggcactg acagttgcca ggtaagaaaa gatcaataga 135000
tcaaagtctt gtgctctccc gtctcagtct cagtccctta gacgtcagtc ccaaagtggc 135060
aaattcagga aggttttgtc agtggaagac cccagtctaa gtgttgctca gaaactcccc 135120
agatctgtcc ctgaatgcat attcagatca tctaaggaga cgtcttgggg cttgagttcc 135180
agatccatag caagggagcc gtaagtgcca taactacctc aggccactca ccttcctggt 135240
gtgtgctggt caccagtgac tgaagtggtg gcttttccag tagagaggaa ggtagagggt 135300
acaggaccga gacaaattac acacacttaa caatgatgtc caggctagcc cagtctaaag 135360
gaaacaccaa gttaggaagc aatgcatgca ggattcacaa gggattattt tttttcccag 135420
gaaaaaacta agtgatgtgg ttttgttgaa tagactttgc taagtactta agcactgcag 135480
atgcttgagt aatatgctca taagttcctt tctgatttga attactggga aaatgtacat 135540
atggataaga gaaggatggc atcccatatt aaaaggttgg cagcttaaag ctcacatgaa 135600
ttttccccta cctctgttta gggtgacagt ggagggcctc tggtttgctt cgagaaggac 135660
aaatacattt tacaaggagt cacttcttgg ggtcttggct gtgcacgccc caataagcct 135720
ggtgtctatg ctcgtgtttc aaggtttgtt acttggattg agggaatgat gagaaataat 135780
taattggacg ggagacagag tgaagcatca acctacttag aagctgaaac gtgggtaagg 135840
atttagcatg ctggaaataa tagacagcaa tcaaacgaag acactgttcc cagctaccag 135900
ctatgccaaa ccttggcatt tttggtattt ttgtgtataa gcttttaagg tctgactgac 135960
aaattctgta ttaaggtgtc atagctatga catttgttaa aaataaactc tgcacttatt 136020
ttgatttgaa ttaattttgg ttttggtctt caaaattttc atgctctttt catcccatct 136080
atttttattt ttatttttta gactttacgt cctggggtac atgtgcagaa tgtgcaggtt 136140
tgttacatag atgtacacgt gccatggtag tttgctgcac ccatcaacct gtcatctaat 136200
tcggtatttc ttttagttct atccctcccc tagccctcca ccccttgaca ggcccaggtg 136260
tgtgatgttg ccctccctgt gtccatgtgt tctcattgtt caactcacac ttatgagtga 136320
gaacatgccg tgtttgtttt tctgttcttg tgttagtttg ctgagaatga tagtttccag 136380
cttcatccat gtccctgcaa aggacatgaa ctcatccttt tttatggctg catagaattc 136440
catggtgtat atgtgccaca ttttatccaa tctaacattg atgggcaatt gggttggttc 136500
caactctttg ctattgtgaa tagtgccaca ataaacatac gtgtgcatgt gttttcatag 136560
cagaatgatt tataatcctc tgggtatata cccagtaatg ggattgcagg gtcaaatggt 136620
gtttctggtg ctagatcttt gaggaatcac cacactgtct tccacaatgg ttgaactaat 136680
ttatgctccc accaacaata tcaaggcatt cctatttctc cacatcctct ccagcatctg 136740
ttgtttcctg actttttaat gatcgccatt ctaactggca tgagatggta tctcattgtg 136800
gttttgattt gcatttctct aatgatcagt gatgatgagc ttttctcata tgtttgttgg 136860
ctgcataaat gccttttttg gagaagcatc tgttcatatc ctttgcccac tttttgatgg 136920
tgttgttttt ttctggtaaa tttgtttaag ttctttgtag attctggata ttagcctttt 136980
gtcagatgga tagatggcaa aaattttatc ctattatgta ggttgcctgt tcactccgat 137040
gatagtttct tttgctgtgc agaagctctt tggtttaatt agatctcatt tgtctatttt 137100
ggcttttgtt accattgctt ttagtgtttt agtcatgaag tcttctccca tgctatgtcc 137160
tgaatggtat tgcctaagtt ttcttccagg gtttttatgg ttttaggttt tgcatttaag 137220
tctttaatcc atcttgagtt aatttttgta taagtaatgc ccttctttgt ctcttttgat 137280
ctttgttggc ttaaagtata ttttatcaga gactagaatt gcaatccctg cttttttttt 137340
tctttttgct ttccttttgc ttggtaaata ttcttccatc cctttatttt gagcctatgt 137400
atgtctgcac atgagatagg tttcctgaat acagcacacc aatgggtctt gactctttat 137460
tcaatttgcc agtctgtgtc ttttaattgg gggcatttag tccatttaca tttaaggtta 137520
atattgttat gtgtgaattt gatcctgtca ttatgatgct agcgggttat tttgcccatt 137580
agttgatgca gtttcttcat agtgtggatg gcctttacaa tttggtagtt tttgcagtgg 137640
ctggtaccaa ttgttccttt ccatgtttag tgcttcgttc aggagctctt gtgaggcagg 137700
ccttgtggtg acaaaatctt tcagcatttg cttgtctgta aaggatttta tttctccttt 137760
gcttatgaag cttagtttcg ctgggtatga aattctgggt tgaaaattat tttcttttag 137820
aatgttgaat attggccccc actctcttcg ggcttgttgg gtttctgcag agagatccac 137880
tgttagtctg attggcttcc ctttccgggt aacccaacct ttctctctgg ctgcccttag 137940
aaatttttcc ttcatttcaa ccttggtgaa tctgacgatt atgtcttgag gtggctcttc 138000
t 138001
<210> 4
<211> 13938
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 4
ctgggattgg gacacacttt ctggacactg ctggccagtc ccaaaatgga acataaggaa 60
gtggttcttc tacttctttt atttctgaaa tcagcagcac ctgagcaaag ccatgtggtc 120
caggattgct accatggtga tggacagagt tatcgaggca cgtactccac cactgtcaca 180
ggaaggacct gccaagcttg gtcatctatg acaccacatc aacataatag gaccacagaa 240
aactacccaa atgctggctt gatcatgaac tactgcagga atccagatgc tgtggcagct 300
ccttattgtt atacgaggga tcccggtgtc aggtgggagt actgcaacct gacgcaatgc 360
tcagacgcag aagggactgc cgtcgcgcct ccgactgtta ccccggttcc aagcctagag 420
gctccttccg aacaagcacc gactgagcaa aggcctgggg tgcaggagtg ctaccatggt 480
aatggacaga gttatcgagg cacatactcc accactgtca caggaagaac ctgccaagct 540
tggtcatcta tgacaccaca ctcgcatagt cggaccccag aatactaccc aaatgctggc 600
ttgatcatga actactgcag gaatccagat gctgtggcag ctccttattg ttatacgagg 660
gatcccggtg tcaggtggga gtactgcaac ctgacgcaat gctcagacgc agaagggact 720
gccgtcgcgc ctccgactgt taccccggtt ccaagcctag aggctccttc cgaacaagca 780
ccgactgagc aaaggcctgg ggtgcaggag tgctaccatg gtaatggaca gagttatcga 840
ggcacatact ccaccactgt cacaggaaga acctgccaag cttggtcatc tatgacacca 900
cactcgcata gtcggacccc agaatactac ccaaatgctg gcttgatcat gaactactgc 960
aggaatccag atgctgtggc agctccttat tgttatacga gggatcccgg tgtcaggtgg 1020
gagtactgca acctgacgca atgctcagac gcagaaggga ctgccgtcgc gcctccgact 1080
gttaccccgg ttccaagcct agaggctcct tccgaacaag caccgactga gcaaaggcct 1140
ggggtgcagg agtgctacca tggtaatgga cagagttatc gaggcacata ctccaccact 1200
gtcacaggaa gaacctgcca agcttggtca tctatgacac cacactcgca tagtcggacc 1260
ccagaatact acccaaatgc tggcttgatc atgaactact gcaggaatcc agatgctgtg 1320
gcagctcctt attgttatac gagggatccc ggtgtcaggt gggagtactg caacctgacg 1380
caatgctcag acgcagaagg gactgccgtc gcgcctccga ctgttacccc ggttccaagc 1440
ctagaggctc cttccgaaca agcaccgact gagcaaaggc ctggggtgca ggagtgctac 1500
catggtaatg gacagagtta tcgaggcaca tactccacca ctgtcacagg aagaacctgc 1560
caagcttggt catctatgac accacactcg catagtcgga ccccagaata ctacccaaat 1620
gctggcttga tcatgaacta ctgcaggaat ccagatgctg tggcagctcc ttattgttat 1680
acgagggatc ccggtgtcag gtgggagtac tgcaacctga cgcaatgctc agacgcagaa 1740
gggactgccg tcgcgcctcc gactgttacc ccggttccaa gcctagaggc tccttccgaa 1800
caagcaccga ctgagcaaag gcctggggtg caggagtgct accatggtaa tggacagagt 1860
tatcgaggca catactccac cactgtcaca ggaagaacct gccaagcttg gtcatctatg 1920
acaccacact cgcatagtcg gaccccagaa tactacccaa atgctggctt gatcatgaac 1980
tactgcagga atccagatgc tgtggcagct ccttattgtt atacgaggga tcccggtgtc 2040
aggtgggagt actgcaacct gacgcaatgc tcagacgcag aagggactgc cgtcgcgcct 2100
ccgactgtta ccccggttcc aagcctagag gctccttccg aacaagcacc gactgagcaa 2160
aggcctgggg tgcaggagtg ctaccatggt aatggacaga gttatcgagg cacatactcc 2220
accactgtca caggaagaac ctgccaagct tggtcatcta tgacaccaca ctcgcatagt 2280
cggaccccag aatactaccc aaatgctggc ttgatcatga actactgcag gaatccagat 2340
gctgtggcag ctccttattg ttatacgagg gatcccggtg tcaggtggga gtactgcaac 2400
ctgacgcaat gctcagacgc agaagggact gccgtcgcgc ctccgactgt taccccggtt 2460
ccaagcctag aggctccttc cgaacaagca ccgactgagc aaaggcctgg ggtgcaggag 2520
tgctaccatg gtaatggaca gagttatcga ggcacatact ccaccactgt cacaggaaga 2580
acctgccaag cttggtcatc tatgacacca cactcgcata gtcggacccc agaatactac 2640
ccaaatgctg gcttgatcat gaactactgc aggaatccag atgctgtggc agctccttat 2700
tgttatacga gggatcccgg tgtcaggtgg gagtactgca acctgacgca atgctcagac 2760
gcagaaggga ctgccgtcgc gcctccgact gttaccccgg ttccaagcct agaggctcct 2820
tccgaacaag caccgactga gcaaaggcct ggggtgcagg agtgctacca tggtaatgga 2880
cagagttatc gaggcacata ctccaccact gtcacaggaa gaacctgcca agcttggtca 2940
tctatgacac cacactcgca tagtcggacc ccagaatact acccaaatgc tggcttgatc 3000
atgaactact gcaggaatcc agatgctgtg gcagctcctt attgttatac gagggatccc 3060
ggtgtcaggt gggagtactg caacctgacg caatgctcag acgcagaagg gactgccgtc 3120
gcgcctccga ctgttacccc ggttccaagc ctagaggctc cttccgaaca agcaccgact 3180
gagcaaaggc ctggggtgca ggagtgctac catggtaatg gacagagtta tcgaggcaca 3240
tactccacca ctgtcacagg aagaacctgc caagcttggt catctatgac accacactcg 3300
catagtcgga ccccagaata ctacccaaat gctggcttga tcatgaacta ctgcaggaat 3360
ccagatgctg tggcagctcc ttattgttat acgagggatc ccggtgtcag gtgggagtac 3420
tgcaacctga cgcaatgctc agacgcagaa gggactgccg tcgcgcctcc gactgttacc 3480
ccggttccaa gcctagaggc tccttccgaa caagcaccga ctgagcaaag gcctggggtg 3540
caggagtgct accatggtaa tggacagagt tatcgaggca catactccac cactgtcaca 3600
ggaagaacct gccaagcttg gtcatctatg acaccacact cgcatagtcg gaccccagaa 3660
tactacccaa atgctggctt gatcatgaac tactgcagga atccagatgc tgtggcagct 3720
ccttattgtt atacgaggga tcccggtgtc aggtgggagt actgcaacct gacgcaatgc 3780
tcagacgcag aagggactgc cgtcgcgcct ccgactgtta ccccggttcc aagcctagag 3840
gctccttccg aacaagcacc gactgagcaa aggcctgggg tgcaggagtg ctaccatggt 3900
aatggacaga gttatcgagg cacatactcc accactgtca caggaagaac ctgccaagct 3960
tggtcatcta tgacaccaca ctcgcatagt cggaccccag aatactaccc aaatgctggc 4020
ttgatcatga actactgcag gaatccagat gctgtggcag ctccttattg ttatacgagg 4080
gatcccggtg tcaggtggga gtactgcaac ctgacgcaat gctcagacgc agaagggact 4140
gccgtcgcgc ctccgactgt taccccggtt ccaagcctag aggctccttc cgaacaagca 4200
ccgactgagc aaaggcctgg ggtgcaggag tgctaccatg gtaatggaca gagttatcga 4260
ggcacatact ccaccactgt cacaggaaga acctgccaag cttggtcatc tatgacacca 4320
cactcgcata gtcggacccc agaatactac ccaaatgctg gcttgatcat gaactactgc 4380
aggaatccag atgctgtggc agctccttat tgttatacga gggatcccgg tgtcaggtgg 4440
gagtactgca acctgacgca atgctcagac gcagaaggga ctgccgtcgc gcctccgact 4500
gttaccccgg ttccaagcct agaggctcct tccgaacaag caccgactga gcaaaggcct 4560
ggggtgcagg agtgctacca tggtaatgga cagagttatc gaggcacata ctccaccact 4620
gtcacaggaa gaacctgcca agcttggtca tctatgacac cacactcgca tagtcggacc 4680
ccagaatact acccaaatgc tggcttgatc atgaactact gcaggaatcc agatgctgtg 4740
gcagctcctt attgttatac gagggatccc ggtgtcaggt gggagtactg caacctgacg 4800
caatgctcag acgcagaagg gactgccgtc gcgcctccga ctgttacccc ggttccaagc 4860
ctagaggctc cttccgaaca agcaccgact gagcaaaggc ctggggtgca ggagtgctac 4920
catggtaatg gacagagtta tcgaggcaca tactccacca ctgtcacagg aagaacctgc 4980
caagcttggt catctatgac accacactcg catagtcgga ccccagaata ctacccaaat 5040
gctggcttga tcatgaacta ctgcaggaat ccagatgctg tggcagctcc ttattgttat 5100
acgagggatc ccggtgtcag gtgggagtac tgcaacctga cgcaatgctc agacgcagaa 5160
gggactgccg tcgcgcctcc gactgttacc ccggttccaa gcctagaggc tccttccgaa 5220
caagcaccga ctgagcaaag gcctggggtg caggagtgct accatggtaa tggacagagt 5280
tatcgaggca catactccac cactgtcaca ggaagaacct gccaagcttg gtcatctatg 5340
acaccacact cgcatagtcg gaccccagaa tactacccaa atgctggctt gatcatgaac 5400
tactgcagga atccagatgc tgtggcagct ccttattgtt atacgaggga tcccggtgtc 5460
aggtgggagt actgcaacct gacgcaatgc tcagacgcag aagggactgc cgtcgcgcct 5520
ccgactgtta ccccggttcc aagcctagag gctccttccg aacaagcacc gactgagcaa 5580
aggcctgggg tgcaggagtg ctaccatggt aatggacaga gttatcgagg cacatactcc 5640
accactgtca caggaagaac ctgccaagct tggtcatcta tgacaccaca ctcgcatagt 5700
cggaccccag aatactaccc aaatgctggc ttgatcatga actactgcag gaatccagat 5760
gctgtggcag ctccttattg ttatacgagg gatcccggtg tcaggtggga gtactgcaac 5820
ctgacgcaat gctcagacgc agaagggact gccgtcgcgc ctccgactgt taccccggtt 5880
ccaagcctag aggctccttc cgaacaagca ccgactgagc aaaggcctgg ggtgcaggag 5940
tgctaccatg gtaatggaca gagttatcga ggcacatact ccaccactgt cacaggaaga 6000
acctgccaag cttggtcatc tatgacacca cactcgcata gtcggacccc agaatactac 6060
ccaaatgctg gcttgatcat gaactactgc aggaatccag atgctgtggc agctccttat 6120
tgttatacga gggatcccgg tgtcaggtgg gagtactgca acctgacgca atgctcagac 6180
gcagaaggga ctgccgtcgc gcctccgact gttaccccgg ttccaagcct agaggctcct 6240
tccgaacaag caccgactga gcaaaggcct ggggtgcagg agtgctacca tggtaatgga 6300
cagagttatc gaggcacata ctccaccact gtcacaggaa gaacctgcca agcttggtca 6360
tctatgacac cacactcgca tagtcggacc ccagaatact acccaaatgc tggcttgatc 6420
atgaactact gcaggaatcc agatgctgtg gcagctcctt attgttatac gagggatccc 6480
ggtgtcaggt gggagtactg caacctgacg caatgctcag acgcagaagg gactgccgtc 6540
gcgcctccga ctgttacccc ggttccaagc ctagaggctc cttccgaaca agcaccgact 6600
gagcaaaggc ctggggtgca ggagtgctac catggtaatg gacagagtta tcgaggcaca 6660
tactccacca ctgtcacagg aagaacctgc caagcttggt catctatgac accacactcg 6720
catagtcgga ccccagaata ctacccaaat gctggcttga tcatgaacta ctgcaggaat 6780
ccagatgctg tggcagctcc ttattgttat acgagggatc ccggtgtcag gtgggagtac 6840
tgcaacctga cgcaatgctc agacgcagaa gggactgccg tcgcgcctcc gactgttacc 6900
ccggttccaa gcctagaggc tccttccgaa caagcaccga ctgagcaaag gcctggggtg 6960
caggagtgct accatggtaa tggacagagt tatcgaggca catactccac cactgtcaca 7020
ggaagaacct gccaagcttg gtcatctatg acaccacact cgcatagtcg gaccccagaa 7080
tactacccaa atgctggctt gatcatgaac tactgcagga atccagatgc tgtggcagct 7140
ccttattgtt atacgaggga tcccggtgtc aggtgggagt actgcaacct gacgcaatgc 7200
tcagacgcag aagggactgc cgtcgcgcct ccgactgtta ccccggttcc aagcctagag 7260
gctccttccg aacaagcacc gactgagcaa aggcctgggg tgcaggagtg ctaccatggt 7320
aatggacaga gttatcgagg cacatactcc accactgtca caggaagaac ctgccaagct 7380
tggtcatcta tgacaccaca ctcgcatagt cggaccccag aatactaccc aaatgctggc 7440
ttgatcatga actactgcag gaatccagat gctgtggcag ctccttattg ttatacgagg 7500
gatcccggtg tcaggtggga gtactgcaac ctgacgcaat gctcagacgc agaagggact 7560
gccgtcgcgc ctccgactgt taccccggtt ccaagcctag aggctccttc cgaacaagca 7620
ccgactgagc aaaggcctgg ggtgcaggag tgctaccatg gtaatggaca gagttatcga 7680
ggcacatact ccaccactgt cacaggaaga acctgccaag cttggtcatc tatgacacca 7740
cactcgcata gtcggacccc agaatactac ccaaatgctg gcttgatcat gaactactgc 7800
aggaatccag atgctgtggc agctccttat tgttatacga gggatcccgg tgtcaggtgg 7860
gagtactgca acctgacgca atgctcagac gcagaaggga ctgccgtcgc gcctccgact 7920
gttaccccgg ttccaagcct agaggctcct tccgaacaag caccgactga gcagaggcct 7980
ggggtgcagg agtgctacca cggtaatgga cagagttatc gaggcacata ctccaccact 8040
gtcactggaa gaacctgcca agcttggtca tctatgacac cacactcgca tagtcggacc 8100
ccagaatact acccaaatgc tggcttgatc atgaactact gcaggaatcc agatgctgtg 8160
gcagctcctt attgttatac gagggatccc ggtgtcaggt gggagtactg caacctgacg 8220
caatgctcag acgcagaagg gactgccgtc gcgcctccga ctgttacccc ggttccaagc 8280
ctagaggctc cttccgaaca agcaccgact gagcaaaggc ctggggtgca ggagtgctac 8340
catggtaatg gacagagtta tcgaggcaca tactccacca ctgtcacagg aagaacctgc 8400
caagcttggt catctatgac accacactcg catagtcgga ccccagaata ctacccaaat 8460
gctggcttga tcatgaacta ctgcaggaat ccagatgctg tggcagctcc ttattgttat 8520
acgagggatc ccggtgtcag gtgggagtac tgcaacctga cgcaatgctc agacgcagaa 8580
gggactgccg tcgcgcctcc gactgttacc ccggttccaa gcctagaggc tccttccgaa 8640
caagcaccga ctgagcaaag gcctggggtg caggagtgct accatggtaa tggacagagt 8700
tatcgaggca catactccac cactgtcaca ggaagaacct gccaagcttg gtcatctatg 8760
acaccacact cgcatagtcg gaccccagaa tactacccaa atgctggctt gatcatgaac 8820
tactgcagga atccagatgc tgtggcagct ccttattgtt atacgaggga tcccggtgtc 8880
aggtgggagt actgcaacct gacgcaatgc tcagacgcag aagggactgc cgtcgcgcct 8940
ccgactgtta ccccggttcc aagcctagag gctccttccg aacaagcacc gactgagcag 9000
aggcctgggg tgcaggagtg ctaccacggt aatggacaga gttatcgagg cacatactcc 9060
accactgtca ctggaagaac ctgccaagct tggtcatcta tgacaccaca ctcgcatagt 9120
cggaccccag aatactaccc aaatgctggc ttgatcatga actactgcag gaatccagat 9180
gctgtggcag ctccttattg ttatacgagg gatcccggtg tcaggtggga gtactgcaac 9240
ctgacgcaat gctcagacgc agaagggact gccgtcgcgc ctccgactgt taccccggtt 9300
ccaagcctag aggctccttc cgaacaagca ccgactgagc agaggcctgg ggtgcaggag 9360
tgctaccacg gtaatggaca gagttatcga ggcacatact ccaccactgt cactggaaga 9420
acctgccaag cttggtcatc tatgacacca cactcgcata gtcggacccc agaatactac 9480
ccaaatgctg gcttgatcat gaactactgc aggaatccag atgctgtggc agctccttat 9540
tgttatacga gggatcccgg tgtcaggtgg gagtactgca acctgacgca atgctcagac 9600
gcagaaggga ctgccgtcgc gcctccgact gttaccccgg ttccaagcct agaggctcct 9660
tccgaacaag caccgactga gcagaggcct ggggtgcagg agtgctacca cggtaatgga 9720
cagagttatc gaggcacata ctccaccact gtcactggaa gaacctgcca agcttggtca 9780
tctatgacac cacactcgca tagtcggacc ccagaatact acccaaatgc tggcttgatc 9840
atgaactact gcaggaatcc agatgctgtg gcagctcctt attgttatac gagggatccc 9900
ggtgtcaggt gggagtactg caacctgacg caatgctcag acgcagaagg gactgccgtc 9960
gcgcctccga ctgttacccc ggttccaagc ctagaggctc cttccgaaca agcaccgact 10020
gagcagaggc ctggggtgca ggagtgctac cacggtaatg gacagagtta tcgaggcaca 10080
tactccacca ctgtcactgg aagaacctgc caagcttggt catctatgac accacactcg 10140
catagtcgga ccccagaata ctacccaaat gctggcttga tcatgaacta ctgcaggaat 10200
ccagatcctg tggcagcccc ttattgttat acgagggatc ccagtgtcag gtgggagtac 10260
tgcaacctga cacaatgctc agacgcagaa gggactgccg tcgcgcctcc aactattacc 10320
ccgattccaa gcctagaggc tccttctgaa caagcaccaa ctgagcaaag gcctggggtg 10380
caggagtgct accacggaaa tggacagagt tatcaaggca catacttcat tactgtcaca 10440
ggaagaacct gccaagcttg gtcatctatg acaccacact cgcatagtcg gaccccagca 10500
tactacccaa atgctggctt gatcaagaac tactgccgaa atccagatcc tgtggcagcc 10560
ccttggtgtt atacaacaga tcccagtgtc aggtgggagt actgcaacct gacacgatgc 10620
tcagatgcag aatggactgc cttcgtccct ccgaatgtta ttctggctcc aagcctagag 10680
gctttttttg aacaagcact gactgaggaa acccccgggg tacaggactg ctactaccat 10740
tatggacaga gttaccgagg cacatactcc accactgtca caggaagaac ttgccaagct 10800
tggtcatcta tgacaccaca ccagcatagt cggaccccag aaaactaccc aaatgctggc 10860
ctgaccagga actactgcag gaatccagat gctgagattc gcccttggtg ttacaccatg 10920
gatcccagtg tcaggtggga gtactgcaac ctgacacaat gcctggtgac agaatcaagt 10980
gtccttgcaa ctctcacggt ggtcccagat ccaagcacag aggcttcttc tgaagaagca 11040
ccaacggagc aaagccccgg ggtccaggat tgctaccatg gtgatggaca gagttatcga 11100
ggctcattct ctaccactgt cacaggaagg acatgtcagt cttggtcctc tatgacacca 11160
cactggcatc agaggacaac agaatattat ccaaatggtg gcctgaccag gaactactgc 11220
aggaatccag atgctgagat tagtccttgg tgttatacca tggatcccaa tgtcagatgg 11280
gagtactgca acctgacaca atgtccagtg acagaatcaa gtgtccttgc gacgtccacg 11340
gctgtttctg aacaagcacc aacggagcaa agccccacag tccaggactg ctaccatggt 11400
gatggacaga gttatcgagg ctcattctcc accactgtta caggaaggac atgtcagtct 11460
tggtcctcta tgacaccaca ctggcatcag agaaccacag aatactaccc aaatggtggc 11520
ctgaccagga actactgcag gaatccagat gctgagattc gcccttggtg ttataccatg 11580
gatcccagtg tcagatggga gtactgcaac ctgacgcaat gtccagtgat ggaatcaact 11640
ctcctcacaa ctcccacggt ggtcccagtt ccaagcacag agcttccttc tgaagaagca 11700
ccaactgaaa acagcactgg ggtccaggac tgctaccgag gtgatggaca gagttatcga 11760
ggcacactct ccaccactat cacaggaaga acatgtcagt cttggtcgtc tatgacacca 11820
cattggcatc ggaggatccc attatactat ccaaatgctg gcctgaccag gaactactgc 11880
aggaatccag atgctgagat tcgcccttgg tgttacacca tggatcccag tgtcaggtgg 11940
gagtactgca acctgacacg atgtccagtg acagaatcga gtgtcctcac aactcccaca 12000
gtggccccgg ttccaagcac agaggctcct tctgaacaag caccacctga gaaaagccct 12060
gtggtccagg attgctacca tggtgatgga cggagttatc gaggcatatc ctccaccact 12120
gtcacaggaa ggacctgtca atcttggtca tctatgatac cacactggca tcagaggacc 12180
ccagaaaact acccaaatgc tggcctgacc gagaactact gcaggaatcc agattctggg 12240
aaacaaccct ggtgttacac aaccgatccg tgtgtgaggt gggagtactg caatctgaca 12300
caatgctcag aaacagaatc aggtgtccta gagactccca ctgttgttcc agttccaagc 12360
atggaggctc attctgaagc agcaccaact gagcaaaccc ctgtggtccg gcagtgctac 12420
catggtaatg gccagagtta tcgaggcaca ttctccacca ctgtcacagg aaggacatgt 12480
caatcttggt catccatgac accacaccgg catcagagga ccccagaaaa ctacccaaat 12540
gatggcctga caatgaacta ctgcaggaat ccagatgccg atacaggccc ttggtgtttt 12600
accatggacc ccagcatcag gtgggagtac tgcaacctga cgcgatgctc agacacagaa 12660
gggactgtgg tcgctcctcc gactgtcatc caggttccaa gcctagggcc tccttctgaa 12720
caagactgta tgtttgggaa tgggaaagga taccggggca agaaggcaac cactgttact 12780
gggacgccat gccaggaatg ggctgcccag gagccccata gacacagcac gttcattcca 12840
gggacaaata aatgggcagg tctggaaaaa aattactgcc gtaaccctga tggtgacatc 12900
aatggtccct ggtgctacac aatgaatcca agaaaacttt ttgactactg tgatatccct 12960
ctctgtgcat cctcttcatt tgattgtggg aagcctcaag tggagccgaa gaaatgtcct 13020
ggaagcattg taggggggtg tgtggcccac ccacattcct ggccctggca agtcagtctc 13080
agaacaaggt ttggaaagca cttctgtgga ggcaccttaa tatccccaga gtgggtgctg 13140
actgctgctc actgcttgaa gaagtcctca aggccttcat cctacaaggt catcctgggt 13200
gcacaccaag aagtgaacct cgaatctcat gttcaggaaa tagaagtgtc taggctgttc 13260
ttggagccca cacaagcaga tattgccttg ctaaagctaa gcaggcctgc cgtcatcact 13320
gacaaagtaa tgccagcttg tctgccatcc ccagactaca tggtcaccgc caggactgaa 13380
tgttacatca ctggctgggg agaaacccaa ggtacctttg ggactggcct tctcaaggaa 13440
gcccagctcc ttgttattga gaatgaagtg tgcaatcact ataagtatat ttgtgctgag 13500
catttggcca gaggcactga cagttgccag ggtgacagtg gagggcctct ggtttgcttc 13560
gagaaggaca aatacatttt acaaggagtc acttcttggg gtcttggctg tgcacgcccc 13620
aataagcctg gtgtctatgc tcgtgtttca aggtttgtta cttggattga gggaatgatg 13680
agaaataatt aattggacgg gagacagagt gaagcatcaa cctacttaga agctgaaacg 13740
tgggtaagga tttagcatgc tggaaataat agacagcaat caaacgaaga cactgttccc 13800
agctaccagc tatgccaaac cttggcattt ttggtatttt tgtgtataag cttttaaggt 13860
ctgactgaca aattctgtat taaggtgtca tagctatgac atttgttaaa aataaactct 13920
gcacttattt tgatttga 13938
<210> 5
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Праймер
<400> 5
acagcaatca aacgaagaca ctg 23
<210> 6
<211> 28
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Праймер
<400> 6
agcttataca caaaaatacc aaaaatgc 28
<210> 7
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Зонд
<400> 7
tcccagctac cagctatgcc aaacctt 27
<210> 8
<211> 16
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Праймер
<400> 8
ccacagtggc cccggt 16
<210> 9
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Праймер
<400> 9
acagggcttt tctcaggtgg t 21
<210> 10
<211> 28
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Зонд
<400> 10
ccaagcacag aggctccttc tgaacaag 28
<210> 11
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 11
ggcaggtcct tcctgtgaca 20
<210> 12
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 12
cctgtgacag tggtggagta 20
<210> 13
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 13
tcctgtgaca gtggtggagt 20
<210> 14
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 14
cttcctgtga cagtggtgga 20
<210> 15
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 15
ccttcctgtg acagtggtgg 20
<210> 16
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 16
tccttcctgt gacagtggtg 20
<210> 17
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 17
gtccttcctg tgacagtggt 20
<210> 18
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 18
ggtccttcct gtgacagtgg 20
<210> 19
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 19
aggtccttcc tgtgacagtg 20
<210> 20
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 20
caggtccttc ctgtgacagt 20
<210> 21
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 21
gcaggtcctt cctgtgacag 20
<210> 22
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 22
tggcaggtcc ttcctgtgac 20
<210> 23
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 23
ttggcaggtc cttcctgtga 20
<210> 24
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 24
cttggcaggt ccttcctgtg 20
<210> 25
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 25
gcttggcagg tccttcctgt 20
<210> 26
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 26
tcttcctgtg acagtggtgg 20
<210> 27
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 27
ttcttcctgt gacagtggtg 20
<210> 28
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 28
gttcttcctg tgacagtggt 20
<210> 29
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 29
ggttcttcct gtgacagtgg 20
<210> 30
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 30
aggttcttcc tgtgacagtg 20
<210> 31
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 31
caggttcttc ctgtgacagt 20
<210> 32
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 32
tggcaggttc ttcctgtgac 20
<210> 33
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 33
ttggcaggtt cttcctgtga 20
<210> 34
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 34
cttggcaggt tcttcctgtg 20
<210> 35
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 35
agcttggcag gttcttcctg 20
<210> 36
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 36
actatgcgag tgtggtgtca 20
<210> 37
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 37
gactatgcga gtgtggtgtc 20
<210> 38
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 38
cgactatgcg agtgtggtgt 20
<210> 39
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 39
ccgactatgc gagtgtggtg 20
<210> 40
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 40
tccgactatg cgagtgtggt 20
<210> 41
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 41
gtccgactat gcgagtgtgg 20
<210> 42
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 42
ggtccgacta tgcgagtgtg 20
<210> 43
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 43
gggtccgact atgcgagtgt 20
<210> 44
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 44
ctgctcagtc ggtgcttgtt 20
<210> 45
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 45
cctctgctca gtcggtgctt 20
<210> 46
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 46
gcctctgctc agtcggtgct 20
<210> 47
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 47
cttccagtga cagtggtgga 20
<210> 48
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 48
ttcttccagt gacagtggtg 20
<210> 49
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 49
gttcttccag tgacagtggt 20
<210> 50
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 50
ggttcttcca gtgacagtgg 20
<210> 51
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 51
gaccttaaaa gcttatacac 20
<210> 52
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 52
gtcagacctt aaaagcttat 20
<210> 53
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 53
tgtcagtcag accttaaaag 20
<210> 54
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 54
gaatttgtca gtcagacctt 20
<210> 55
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 55
agaatttgtc agtcagacct 20
<210> 56
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 56
ccttaataca gaatttgtca 20
<210> 57
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 57
gctccgttgg tgcttgttca 20
<210> 58
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 58
tgctccgttg gtgcttgttc 20
<210> 59
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 59
ttgctccgtt ggtgcttgtt 20
<210> 60
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 60
tttgctccgt tggtgcttgt 20
<210> 61
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 61
ctttgctccg ttggtgcttg 20
<210> 62
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 62
tcctgtaaca gtggtggaga 20
<210> 63
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 63
ttcctgtaac agtggtggag 20
<210> 64
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 64
cttcctgtaa cagtggtgga 20
<210> 65
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 65
ccttcctgta acagtggtgg 20
<210> 66
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 66
tccttcctgt aacagtggtg 20
<210> 67
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 67
gtccttcctg taacagtggt 20
<210> 68
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 68
tgtccttcct gtaacagtgg 20
<210> 69
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 69
tggagccaga ataacattcg 20
<210> 70
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 70
cctctaggct tggagccaga 20
<210> 71
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 71
agttcttcct gtgacagtgg 20
<210> 72
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 72
gtccgactat gctggtgtgg 20
<210> 73
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 73
ggtccgacta tgctggtgtg 20
<210> 74
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 74
gggtccgact atgctggtgt 20
<210> 75
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 75
cctctaggct tggaatcggg 20
<210> 76
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 76
gttcagaagg agcctctagg 20
<210> 77
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 77
tgttcagaag gagcctctag 20
<210> 78
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 78
gcttgttcag aaggagcctc 20
<210> 79
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 79
tgcttgttca gaaggagcct 20
<210> 80
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 80
gtgcttgttc agaaggagcc 20
<210> 81
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 81
ggtgcttgtt cagaaggagc 20
<210> 82
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 82
tggtgcttgt tcagaaggag 20
<210> 83
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 83
gctcagttgg tgcttgttca 20
<210> 84
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 84
tgctcagttg gtgcttgttc 20
<210> 85
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 85
gcttggatct gggaccaccg 20
<210> 86
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 86
gcctccatgc ttggaactgg 20
<210> 87
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 87
gctcagttgg tgctgcttca 20
<210> 88
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 88
cctcgataac tctggccatt 20
<210> 89
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 89
tcctgtgaca gtggtggaga 20
<210> 90
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 90
gtaggttgat gcttcactct 20
<210> 91
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 91
cgtttgattg ctgtctatta 20
<210> 92
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 92
ctctgtgctt ggatctggga 20
<210> 93
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 93
cctctgtgct tggatctggg 20
<210> 94
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 94
gcctctgtgc ttggatctgg 20
<210> 95
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 95
agaagcctct gtgcttggat 20
<210> 96
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 96
ttcagaagaa gcctctgtgc 20
<210> 97
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 97
gctccgttgg tgcttcttca 20
<210> 98
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 98
tttgctccgt tggtgcttct 20
<210> 99
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 99
gctttgctcc gttggtgctt 20
<210> 100
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 100
ggctttgctc cgttggtgct 20
<210> 101
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 101
gggctttgct ccgttggtgc 20
<210> 102
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 102
ccttcctgtg acagtggtag 20
<210> 103
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 103
tccttcctgt gacagtggta 20
<210> 104
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 104
tgtccttcct gtgacagtgg 20
<210> 105
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 105
cctctaggct tggaaccggg 20
<210> 106
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 106
tgcttgttcg gaaggagcct 20
<210> 107
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 107
gtgcttgttc ggaaggagcc 20
<210> 108
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 108
gcttggaact gggaccaccg 20
<210> 109
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 109
ctgtgcttgg aactgggacc 20
<210> 110
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 110
ctctgtgctt ggaactggga 20
<210> 111
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 111
cctgtgacag tggtgga 17
<210> 112
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 112
tcctgtgaca gtggtgg 17
<210> 113
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 113
ttcctgtgac agtggtg 17
<210> 114
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 114
cttcctgtga cagtggt 17
<210> 115
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 115
ccttcctgtg acagtgg 17
<210> 116
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 116
tccttcctgt gacagtg 17
<210> 117
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 117
gtccttcctg tgacagt 17
<210> 118
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 118
ggtccttcct gtgacag 17
<210> 119
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 119
ccgactatgc gagtgtg 17
<210> 120
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 120
gtccgactat gcgagtg 17
<210> 121
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 121
ggtccgacta tgcgagt 17
<210> 122
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 122
gtcagacctt aaaagct 17
<210> 123
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 123
aagcctctgt gcttgga 17
<210> 124
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 124
agcctctgtg cttggat 17
<210> 125
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 125
gcctctgtgc ttggatc 17
<210> 126
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 126
gctccgttgg tgcttct 17
<210> 127
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 127
ctctgtgctt ggaactg 17
<210> 128
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 128
tgcctcgata actctgt 17
<210> 129
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 129
tgtgcctcga taactct 17
<210> 130
<211> 17
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 130
gctcagttgg tgctgct 17
<210> 131
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический олигонуклеотид
<400> 131
gcgtttgctc ttcttcttgc gtttttt 27
<210> 132
<211> 3987
<212> ДНК
<213> Macaca mulatta
<400> 132
atgtatcgtt ttggaatttc cagtggcttg atcaggaact actgcaggaa tccagatcct 60
gtggcagccc cttattgtta tacgatggat cccaatgtca ggtgggagta ctgcaacctg 120
acacaatgct cagatgcaga agggactgcc gtcgcacctc cgaatgtcac cctggttcca 180
agcctagagg ctccttccga acaatcaccg actgagcaaa ggcctggggt gcaggagtgc 240
taccacggta atggacagag ttatcgaggc acatacttca ccactgtgac aggaagaacc 300
tgccaagctt ggtcatctat gacaccgcac tctcatagtc ggaccccgga aaactaccca 360
aatggtggct tgatcaggaa ctactgcagg aatccagatc ctgtggcagc cccttattgt 420
tataccatgg atcccaatgt caggtgggag tactgcaacc taacacaatg ctcagacgca 480
gaagggattg ccgtcacacc tctgactgtt accccggttc caagcctaga ggctccttcc 540
aagcaagcac caactgagca aaggcctggt gtccaggagt gctaccatgg taatggacag 600
agttatcgag gcacatactt caccactgtg acaggaagaa cctgccaagc ttggtcatct 660
atgacaccac attctcatag tcgtacccca gaaaactacc caaatggcag tccgacctct 720
tcagatctct tagtctaccc tgccgtcttc cttgatgcca tgggtcccac tgttctttca 780
actcatccgc tttccctcag tcccggagtg gctgcgacca gcagaggata tattgagagc 840
aagagagaag caccgactga gcaaaggcct ggggtgcagg agtgctacca cggtaatgga 900
cagagttatc gaggcacata cttcaccact gtgacaggaa gaacctgcca agcttggtca 960
tctatgacac cgcactctca tagtcggacc ccggaaaact acccaaatgg tggcttgatc 1020
aggaactact gcaggaatcc agatcctgtg gcagcccctt attgttatac catggatccc 1080
agtgtcaggt gggagtactg caacctgaca caatgctcag acgcagaagg gactgccgtc 1140
gcacctccga atgtcacccc ggttccaagc ctagaggctc cttctgagca agcaccaact 1200
gagcaaaggc ttggggtgca ggagtgctac cacagtaatg gacagagtta tcgaggcaca 1260
tacttcacca ctgtgacagg aagaacctgc caagcttggt catctatgac accacactct 1320
catagtcgga ccccagaaaa ctacccaaat gctggcttgg tcaagaacta ctgccgaaat 1380
ccagatcctg tggcagcccc ttggtgttat acaacggatc ccagtgtcag gtgggagtac 1440
tgcaacctga cacgatgctc agatgcagaa gggactgctg tcgtgcctcc aaatattatt 1500
ccggttccaa gcctagaggc ttttcttgaa caagaaccga ctgaggaaac ccccggggta 1560
caggagtgct actaccatta tggacagagt tatagaggca catactccac cactgttaca 1620
ggaagaactt gccaagcttg gtcatctatg acaccacacc agcatagtcg gaccccaaaa 1680
aactatccaa atgctggcct gaccaggaac tactgcagga atccagatgc tgagattcgc 1740
ccttggtgtt ataccatgga tcccagtgtc aggtgggagt actgcaacct gacacaatgt 1800
ctggtgacag aatcaagtgt ccttgaaact ctcacagtgg tcccagatcc aagcacacag 1860
gcttcttctg aagaagcacc aacggagcaa agtcccgagg tccaggactg ctaccatggt 1920
gatggacaga gttatcgagg ctcattctcc accactgtca caggaaggac atgtcagtct 1980
tggtcctcta tgacaccaca ctggcatcag aggacaacag aatattatcc agatggtggc 2040
ctgaccagga actactgcag gaatccagat gctgagattc gcccttggtg ttataccatg 2100
gatcccagtg tcaggtggga gtactgcaac ctgacacaat gtccagtgac agaatcaagt 2160
gtcctcgcaa cgtccatggc tgtttctgaa caagcaccaa tggagcaaag ccccggggtc 2220
caggactgct accatggtga tggacagagt tatcgaggtt cattctccac cactgtcaca 2280
ggaaggacat gtcagtcttg gtcctctatg acaccacact ggcatcagag gaccatagaa 2340
tactacccaa atggtggcct gaccaagaac tactgcagga atccagatgc tgagattcgc 2400
ccttggtgtt ataccatgga tcccagagtc agatgggagt actgcaacct gacacaatgt 2460
gtggtgatgg aatcaagtgt ccttgcaact cccatggtgg tcccagttcc aagcagagag 2520
gttccttctg aagaagcacc aactgaaaac agccctgggg tccaggactg ctaccaaggt 2580
gatggacaga gttatcgagg cacattctcc accactatca caggaagaac atgtcagtct 2640
tggttgtcta tgacaccaca tcggcatcgg aggatcccat tacgctatcc aaatgctggc 2700
ctgaccagga actattgcag aaatccagat gctgagattc gcccttggtg ttacaccatg 2760
gatcccagtg tcaggtggga gtactgcaac ctgacacaat gtccagtgac agaatcaagt 2820
gtcctcacaa ctcccacggt ggtcccggtt ccaagcacag aggctccttc tgaacaagca 2880
ccacctgaga aaagccctgt ggtccaggat tgctaccatg gtgatggaca gagttatcga 2940
ggcacatcct ccaccactgt cacaggaagg aactgtcagt cttggtcatc tatgatacca 3000
cactggcatc agaggacccc agaaaactac ccaaatgctg gcctgaccag gaactactgc 3060
aggaatccag attctgggaa acaaccctgg tgttacacga ctgatccatg tgtgaggtgg 3120
gagtactgca acctgacaca atgctcagaa acagaatcag gtgtcctaga gactcccact 3180
gttgttccgg ttccaagcat ggaagctcat tctgaagcag caccaactga gcaaacccct 3240
gtggtccagc agtgctacca tggtaatgga cagagttatc gaggcacatt ctccaccact 3300
gtcacaggaa ggacatgtca atcttggtca tccatgacac cacaccagca taagaggacc 3360
ccggaaaacc acccaaatga tggcttgaca atgaactact gcaggaatcc agatgctgac 3420
acaggccctt ggtgttttac catggacccc agcgtcaggc gggagtactg caacctgacg 3480
cgatgctcag acacagaagg gactgtggtc acacctccga ctgttatccc ggttccaagc 3540
ctagaggctc cttctgaaca agtgcttgga attcatcctg aattaaacga cacaattgct 3600
aacttggact caaaggtgaa ttctttccca ccttgtgcca cagcatcctc ttcatttgat 3660
tgtgggaagc ctcaagtgga gccaaagaaa tgtcctggaa gcattgtagg tgggtgtgtg 3720
gcccacccac attcctggcc ctggcaagtc agtcttagaa caaggtttgg aaagcacttc 3780
tgtggaggca ccttaatatc cccagagtgg gtgctgactg ctgcttgctg cttggagacg 3840
ttctcaaggc cttccttcta caaggtcatc ctgggtgcac accaagaagt gaatctcgaa 3900
tctcatgttc aagaaataga agtgtctagg ttgttcttgg agcccatagg agcagatatt 3960
gccttgctaa agctaagcag gtactaa 3987
ggttcttcca gtgacagtgg 20
<---

Claims (42)

1. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, специфично ингибирующее экспрессию нуклеиновой кислоты аполипопротеина (a) (apo(a)) и/или протеина apo(a), причем соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, состоящий из от 16 до 30 связанных нуклеозидов и имеет последовательность нуклеиновых оснований, содержащую:
по меньшей мере 16 смежных нуклеиновых оснований нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 58, причем модифицированный олигонуклеотид означает олигонуклеотид, содержащий по меньшей мере один модифицированный остаток сахара, модифицированную межнуклеозидную связь и/или модифицированное нуклеиновое основание.
2. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из от 18 до 24, от 19 до 22, от 15 до 25 или от 16 до 20 связанных нуклеозидов.
3. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит сегмент из по меньшей мере 16, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 смежных нуклеиновых оснований, комплементарных сегменту SEQ ID NO: 1 эквивалентной длины.
4. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 1, отличающееся тем, что последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида на по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или 100% комплементарна SEQ ID NO: 1.
5. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид является одноцепочечным.
6. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 1, отличающееся тем, что по меньшей мере одна межнуклеозидная связь представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь.
7. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 6, отличающееся тем, что по меньшей мере одна межнуклеозидная связь представляет собой тиофосфатную межнуклеозидную связь.
8. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере один модифицированный сахар.
9. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 8, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный сахар представляет собой бициклический сахар.
10. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 8, отличающееся тем, что по меньшей мере один модифицированный сахар содержит 2’-O-метоксиэтил, этил c ограниченной конформационной свободой, 3’-фтор-HNA или мостик 4’- (CH2)n-O-2’, при том, что n составляет 1 или 2.
11. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 1, отличающееся тем, что по меньшей мере один нуклеозид содержит модифицированное нуклеиновое основание.
12. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 11, отличающееся тем, что модифицированное нуклеиновое основание представляет собой 5-метилцитозин.
13. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 1, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит:
сегмент разрыва, который состоит из связанных дезоксинуклеозидов;
5’-концевой сегмент, состоящий из связанных нуклеозидов;
3’-концевой сегмент, состоящий из связанных нуклеозидов;
при том, что сегмент разрыва расположен между 5’-концевым сегментом и 3’-концевым сегментом и каждый нуклеозид каждого концевого сегмента содержит модифицированный сахар.
14. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 13, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов и содержит:
сегмент разрыва, который состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов;
5’-концевой сегмент, состоящий из пяти связанных нуклеозидов;
3’-концевой сегмент, состоящий из пяти связанных нуклеозидов;
при том, что сегмент разрыва расположен между 5’-концевым сегментом и 3’-концевым сегментом, при этом каждый нуклеозид каждого концевого сегмента содержит 2’-O-метоксиэтилсахар.
15. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 13, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов.
16. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 1, где модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или 20 смежных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 58.
17. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 1, где модифицированный олигонуклеотид состоит из от 18 до 24 связанных нуклеозидов и где последовательность нуклеиновых оснований содержит по меньшей мере 18 смежных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 58.
18. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, специфично ингибирующее экспрессию нуклеиновой кислоты аполипопротеина (a) (apo(a)) и/или протеина apo(a), причем соединение содержит модифицированный олигонуклеотид, который состоит из 20 связанных нуклеозидов и имеет последовательность нуклеиновых оснований, которая содержит по меньшей мере 15 смежных нуклеиновых оснований нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 58, отличающееся тем, что модифицированный олигонуклеотид содержит:
сегмент разрыва, который состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов;
5’-концевой сегмент, состоящий из пяти связанных нуклеозидов;
3’-концевой сегмент, состоящий из пяти связанных нуклеозидов;
при том, что сегмент разрыва расположен между 5’-концевым сегментом и 3’-концевым сегментом, каждый нуклеозид каждого концевого сегмента содержит 2’-O-метоксиэтилсахар, каждый остаток цитозина представляет собой 5-метилцитозин,
причем модифицированный олигонуклеотид означает олигонуклеотид, который содержит по меньшей мере один модифицированный остаток сахара, модифицированную межнуклеозидную связь и/или модифицированное нуклеиновое основание.
19. Соединение, или его фармацевтически приемлемая соль, по п. 18, где модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 58, где модифицированный олигонуклеотид содержит:
сегмент разрыва, который состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов;
5’-концевой сегмент, состоящий из пяти связанных нуклеозидов;
3’-концевой сегмент, состоящий из пяти связанных нуклеозидов;
при том, что сегмент разрыва расположен между 5’-концевым сегментом и 3’-концевым сегментом, каждый нуклеозид каждого концевого сегмента содержит 2’-O-метоксиэтилсахар, каждый остаток цитозина представляет собой 5-метилцитозин.
20. Фармацевтическая композиция для лечения, предотвращения или замедления прогрессирования болезни, связанной с повышенным аполипопротеином (a) (apo(a)) и/или повышенным липопротеином (a) (Lp(a)), которая содержит терапевтически эффективное количество соединения по любому из предшествующих пунктов, или его фармацевтически приемлемой соли, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
21. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-19 в терапии болезни, связанной с повышенным аполипопротеином (a) (apo(a)) и/или повышенным липопротеином (a) (Lp(a)).
22. Применение по п. 21, где терапия представляет собой лечение, предотвращение или замедление прогрессирования болезни, связанной повышенным аполипопротеином (a) (apo(a)) и/или повышенным липопротеином (a) (Lp(a)).
23. Применение по п. 22, где болезнь представляет собой воспалительную, сердечно-сосудистую или метаболическую болезнь, расстройство или состояние.
24. Применение по п. 23, где болезнь представляет собой стенокардию.
RU2017120536A 2012-05-24 2013-05-23 Способы и композиции для модулирования экспрессии аполипопротеина (а) RU2748495C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261651539P 2012-05-24 2012-05-24
US61/651,539 2012-05-24

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014148708A Division RU2624028C2 (ru) 2012-05-24 2013-05-23 Способы и композиции для модулирования экспрессии аполипопротеина (а)

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017120536A RU2017120536A (ru) 2018-11-14
RU2017120536A3 RU2017120536A3 (ru) 2020-10-30
RU2748495C2 true RU2748495C2 (ru) 2021-05-26

Family

ID=49624530

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014148708A RU2624028C2 (ru) 2012-05-24 2013-05-23 Способы и композиции для модулирования экспрессии аполипопротеина (а)
RU2017120536A RU2748495C2 (ru) 2012-05-24 2013-05-23 Способы и композиции для модулирования экспрессии аполипопротеина (а)

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014148708A RU2624028C2 (ru) 2012-05-24 2013-05-23 Способы и композиции для модулирования экспрессии аполипопротеина (а)

Country Status (22)

Country Link
US (3) US20150152411A1 (ru)
EP (3) EP3822352A3 (ru)
JP (3) JP6082809B2 (ru)
KR (3) KR101810841B1 (ru)
CN (2) CN108359668A (ru)
AU (4) AU2013266196A1 (ru)
CA (2) CA3185392A1 (ru)
CY (1) CY1123367T1 (ru)
DK (1) DK2855500T3 (ru)
ES (1) ES2820548T3 (ru)
HK (1) HK1208870A1 (ru)
HR (1) HRP20201426T1 (ru)
HU (1) HUE051680T2 (ru)
IL (2) IL235746B (ru)
LT (1) LT2855500T (ru)
MX (1) MX360639B (ru)
NZ (1) NZ631071A (ru)
PL (1) PL2855500T3 (ru)
PT (1) PT2855500T (ru)
RU (2) RU2624028C2 (ru)
SI (1) SI2855500T1 (ru)
WO (1) WO2013177468A2 (ru)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013173789A2 (en) 2012-05-17 2013-11-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide compositions
KR20200123263A (ko) * 2013-02-14 2020-10-28 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 지질단백질 리파제 결핍 (lpld) 모집단에서 아포지질단백질 c-iii (apociii) 발현의 조절
CN105378085B (zh) 2013-05-01 2019-02-15 Ionis制药公司 用于调节hbv和ttr表达的组合物和方法
MX2016014102A (es) 2014-05-01 2017-05-03 Ionis Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para modular la expresion de similar a la angiopoyetina tipo 3.
WO2015179693A1 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds and their use
CN107427532B (zh) * 2015-04-16 2021-06-04 Ionis制药公司 用于调节c9orf72表达的组合物
JOP20210043A1 (ar) * 2015-10-01 2017-06-16 Arrowhead Pharmaceuticals Inc تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa
US10557137B2 (en) 2015-11-06 2020-02-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulating apolipoprotein (a) expression
WO2017079745A1 (en) 2015-11-06 2017-05-11 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugated antisense compounds for use in therapy
WO2018067900A1 (en) 2016-10-06 2018-04-12 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Method of conjugating oligomeric compounds
AU2017368050A1 (en) 2016-11-29 2019-06-20 Puretech Lyt, Inc. Exosomes for delivery of therapeutic agents
WO2020095274A1 (en) 2018-11-09 2020-05-14 Novartis Ag Method for reducing the risk of a cardiovascular event with conjugated antisense compounds targeting apo(a)
AU2019403447B2 (en) 2018-12-21 2023-07-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of HSD17B13 expression
CA3232191A1 (en) * 2021-09-18 2023-03-23 Chong Li Lpa inhibitor and use thereof
TW202345865A (zh) * 2022-01-24 2023-12-01 大陸商上海舶望製藥有限公司 抑制LPA(Apo(a))蛋白表達的組合物和方法
CN114703184A (zh) * 2022-03-11 2022-07-05 厦门甘宝利生物医药有限公司 Lpa抑制剂及其用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010006215A1 (en) * 2008-07-09 2010-01-14 Celera Corporation Genetic polymorphisms associated with cardiovascular diseases, methods of detection and uses thereof
US20110039910A1 (en) * 2003-06-02 2011-02-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein (a) expression
RU2461378C2 (ru) * 2006-12-22 2012-09-20 Алькон, Инк. Применение гена сывороточного амилоида а для диагностики и лечения глаукомы и идентификации антиглаукомных агентов

Family Cites Families (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2699808A (en) 1944-10-06 1955-01-18 Mark W Lowe Apparatus for peeling tomatoes
US2699508A (en) 1951-12-21 1955-01-11 Selectronics Inc Method of mounting and construction of mounting for low frequency piezoelectric crystals
JPH08504559A (ja) 1992-12-14 1996-05-14 ハネウエル・インコーポレーテッド 個別に制御される冗長巻線を有するモータシステム
US5599706A (en) 1994-09-23 1997-02-04 Stinchcomb; Dan T. Ribozymes targeted to apo(a) mRNA
US5656408A (en) 1996-04-29 1997-08-12 Xerox Corporation Coated carrier particles
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
NZ503765A (en) 1997-09-12 2002-04-26 Exiqon As Bi-cyclic and tri-cyclic nucleotide analogues
DE69926729T2 (de) * 1998-01-08 2006-06-08 Aventis Pharmaceuticals Inc. Transgenes kaninchen, dass ein funktionelles menschliches lipoprotein(a) exprimiert
CA2372085C (en) 1999-05-04 2009-10-27 Exiqon A/S L-ribo-lna analogues
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
JP2005504020A (ja) 2001-07-03 2005-02-10 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド ヌクレアーゼ耐性キメラオリゴヌクレオチド
US7227014B2 (en) * 2001-08-07 2007-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of apolipoprotein (a) expression
WO2003014397A1 (en) 2001-08-09 2003-02-20 Biomedlab Corporation Probe for detection of enteric virus detection kit and method for enteric virus with the same
JP2004121152A (ja) * 2002-10-04 2004-04-22 Japan Science & Technology Agency リポタンパク（ａ）とアテローム硬化症との関係
AU2003291753B2 (en) 2002-11-05 2010-07-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
AU2003290596B2 (en) 2002-11-05 2011-05-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
US7482117B2 (en) 2002-12-20 2009-01-27 Celera Corporation Genetic polymorphisms associated with myocardial infarction, methods of detection and uses thereof
AU2003224132A1 (en) * 2003-04-24 2004-11-19 Galapagos Genomics N.V. Effective sirna knock-down constructs
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
ATE555118T1 (de) 2003-08-28 2012-05-15 Takeshi Imanishi Neue synthetische nukleidsäuren vom typ mit quervernetzter n-o-bindung
EP1677822B1 (en) 2003-09-18 2014-04-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-thionucleosides and oligomeric compounds
US20050244851A1 (en) * 2004-01-13 2005-11-03 Affymetrix, Inc. Methods of analysis of alternative splicing in human
CN101151035A (zh) * 2004-12-02 2008-03-26 Isis制药公司 用于治疗炎性肠病的治疗性反义寡核苷酸组合物
EP1984381B1 (en) 2006-01-27 2010-09-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
JP5825754B2 (ja) * 2006-05-05 2015-12-02 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド Ａｐｏｂの発現を調節するための化合物および方法
ES2389737T3 (es) 2006-05-11 2012-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en 5'
JP4798093B2 (ja) 2006-08-04 2011-10-19 日産自動車株式会社 流体改質装置及びこれを用いた流体改質方法
DK2410053T4 (da) 2006-10-18 2020-08-31 Ionis Pharmaceuticals Inc Antisense-forbindelser
US8093222B2 (en) 2006-11-27 2012-01-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia
WO2008098129A2 (en) * 2007-02-07 2008-08-14 Indiana University Research And Technology Corporation Materials and methods for detecting and treating peritoneal ovarian tumor dissemination involving tissue transglutaminase
EP2125852B1 (en) 2007-02-15 2016-04-06 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5'-substituted-2'-f modified nucleosides and oligomeric compounds prepared therefrom
CA2688321A1 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
WO2008154401A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
ATE538127T1 (de) 2007-07-05 2012-01-15 Isis Pharmaceuticals Inc 6-disubstituierte bicyclische nukleinsäureanaloga
CN101619346B (zh) * 2008-07-04 2014-02-19 上海交通大学医学院附属瑞金医院 人冠心病易感基因-脂蛋白a基因拷贝数变异检测方法和试剂盒
EP2352830B1 (en) * 2008-10-03 2019-01-16 CuRNA, Inc. Treatment of apolipoprotein-a1 related diseases by inhibition of natural antisense transcript to apolipoprotein-a1
US9778706B2 (en) 2012-02-24 2017-10-03 Blackberry Limited Peekable user interface on a portable electronic device
WO2013173789A2 (en) 2012-05-17 2013-11-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide compositions
US9984408B1 (en) 2012-05-30 2018-05-29 Amazon Technologies, Inc. Method, medium, and system for live video cooperative shopping
CN105378085B (zh) * 2013-05-01 2019-02-15 Ionis制药公司 用于调节hbv和ttr表达的组合物和方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110039910A1 (en) * 2003-06-02 2011-02-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of apolipoprotein (a) expression
RU2461378C2 (ru) * 2006-12-22 2012-09-20 Алькон, Инк. Применение гена сывороточного амилоида а для диагностики и лечения глаукомы и идентификации антиглаукомных агентов
WO2010006215A1 (en) * 2008-07-09 2010-01-14 Celera Corporation Genetic polymorphisms associated with cardiovascular diseases, methods of detection and uses thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KOORNNEEF A. et al., Apolipoprotein B knockdown by AAV-delivered shRNA lowers plasma cholesterol in mice, Mol. Ther., 2011, v.19, n.4, p.731-740. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU2017120536A (ru) 2018-11-14
MX2014014339A (es) 2015-02-05
EP3825403A2 (en) 2021-05-26
CA2874480A1 (en) 2013-11-28
IL264288B2 (en) 2023-03-01
JP6934895B2 (ja) 2021-09-15
ES2820548T3 (es) 2021-04-21
IL264288A (en) 2019-02-28
JP6472820B2 (ja) 2019-02-20
WO2013177468A3 (en) 2014-01-30
US20150152411A1 (en) 2015-06-04
KR20170142997A (ko) 2017-12-28
US10472629B2 (en) 2019-11-12
CN108359668A (zh) 2018-08-03
AU2018236699B2 (en) 2020-11-26
JP6082809B2 (ja) 2017-02-15
EP2855500B1 (en) 2020-07-01
HUE051680T2 (hu) 2021-03-29
AU2018236699C1 (en) 2021-03-25
JP2017093461A (ja) 2017-06-01
EP2855500A2 (en) 2015-04-08
AU2017200277A1 (en) 2017-02-09
EP2855500A4 (en) 2015-12-16
IL264288B (en) 2022-11-01
EP3822352A2 (en) 2021-05-19
CY1123367T1 (el) 2021-12-31
US20170121710A1 (en) 2017-05-04
KR20190084354A (ko) 2019-07-16
KR101810841B1 (ko) 2017-12-21
JP2019071902A (ja) 2019-05-16
HK1208870A1 (en) 2016-03-18
SI2855500T1 (sl) 2020-10-30
RU2014148708A (ru) 2016-07-20
WO2013177468A2 (en) 2013-11-28
IL235746A0 (en) 2015-02-01
RU2624028C2 (ru) 2017-06-30
JP2015522255A (ja) 2015-08-06
AU2013266196A1 (en) 2014-11-20
RU2017120536A3 (ru) 2020-10-30
MX360639B (es) 2018-11-12
EP3825403A3 (en) 2021-09-08
HRP20201426T1 (hr) 2020-11-27
EP3822352A3 (en) 2021-11-03
AU2020281071A1 (en) 2021-01-07
AU2018236699A1 (en) 2018-10-18
PT2855500T (pt) 2020-09-24
NZ631071A (en) 2017-02-24
CN104302654B (zh) 2018-03-27
IL235746B (en) 2019-02-28
US9885045B2 (en) 2018-02-06
CN104302654A (zh) 2015-01-21
PL2855500T3 (pl) 2020-11-30
CA3185392A1 (en) 2013-11-28
KR20210016066A (ko) 2021-02-10
US20180237776A1 (en) 2018-08-23
AU2017200277B2 (en) 2018-10-18
LT2855500T (lt) 2020-11-10
CA2874480C (en) 2023-03-14
KR20150013507A (ko) 2015-02-05
DK2855500T3 (da) 2020-09-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018236699B2 (en) Methods and compositions for modulating apolipoprotein(a) expression
AU2018267625B2 (en) COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING APOLIPOPROTEIN (a) EXPRESSION
AU2020203573B2 (en) Oligonucleotides for inducing paternal UBE3A expression
AU2017200759B2 (en) Modulation of androgen receptor expression
RU2748426C2 (ru) Композиции для модуляции экспрессии c90rf72
AU2018203564A1 (en) Antisense modulation of gccr expression
KR102236784B1 (ko) 성장 호르몬 수용체의 조절인자
KR20220113743A (ko) 병태 및 질환의 치료를 위한 안티센스 올리고머
DK2809400T3 (en) COMBINATION THERAPY INCLUDING A GROWTH HORMON VARIANT AND AN OIGONUCLEOTIDE BINDING TO THE GROWTH HORMON RECEPTOR
TW202227102A (zh) 治療脂肪肝病之方法
KR102657351B1 (ko) 아포지질단백질 (a) 발현을 조절하는 방법들 및 조성물들
NZ715825B2 (en) Combination therapy for treatment of acromegaly